(57)【要約】  本発明は、ウルソデオキシコール酸（ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ、ＵＤＣＡ）を含有する視覚障害の予防または治療用組成物に関する。  より詳細には、本発明は、ウルソデオキシコール酸を水可溶化して（ａｑｕｅｏｕｓ  ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅｄ  ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、経口投与、眼球内注射、または点眼液投与が可能であり、黄斑変性、緑内障及び糖尿病性網膜疾患等の視覚障害を起こす疾患の予防または治療効果に優れた薬学組成物に関する。【選択図】    図７ｃ
2019532082.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ウルソデオキシコール酸（ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ、ＵＤＣＡ）；
（ｂ）水可溶性澱粉転化物；及び
（ｃ）水を有効成分として含み、
すべてのｐＨ値において透明な（ｃｌｅａｒ）水溶液状態である、水可溶化されたウルソデオキシコール酸を含む、視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項２】
前記組成物は、眼球内注射用（ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）であって、前記ＵＤＣＡは、眼球内注射により網膜まで伝達されることができ、注射された後に眼球内での皮膚刺激または炎症を起こさない請求項１に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項３】
前記ＵＤＣＡの１回眼球内注射量は、０．１〜１．５ｍｇ／ｍＬ濃度で５０〜１００μＬである請求項２に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項４】
前記組成物は、経口投与用（ｏｒａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）であって、前記ＵＤＣＡを血液に運搬し、以後血液網膜関門（ｂｌｏｏｄ−ｒｅｔｉｎａｌ  ｂａｒｒｉｅｒ）を横切って眼球内まで治療的活性量で伝達する請求項１に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項５】
前記組成物のＵＤＣＡの１日経口投与量は、５〜３０ｍｇ／ｋｇである請求項４に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項６】
前記組成物を２０日以上及び１日１回以上投与する請求項４に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項７】
前記組成物は静脈注射用であって、直接血液に投与され、血管を塞ぐことなく皮膚刺激（ｓｋｉｎ  ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎ）を起こさない請求項１に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項８】
前記組成物は、点眼剤で投与される請求項１に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項９】
前記視覚障害疾患は、黄斑変性、緑内障及び糖尿病性網膜疾患からなる群より選択される請求項１から８のいずれか１項に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項１０】
前記視覚障害疾患は、黄斑変性である請求項１から８のいずれか１項に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項１１】
前記視覚障害疾患は、湿性（ｗｅｔ−ｔｙｐｅ）加齢性（ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ）黄斑変性である請求項１から８のいずれか１項に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項１２】
前記組成物は、脈絡膜新生血管の発現抑制、網膜機能の回復促進、及び血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）の発現量調節機能のうちの１種以上の機能をする請求項１から８のいずれか１項に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項１３】
前記ＵＤＣＡは、可溶性ＵＤＣＡ、水可溶性ＵＤＣＡ誘導体、ＵＤＣＡ塩、及びアミンとコンジュゲートされたＵＤＣＡから選択されるＵＤＣＡであって水可溶化されたものである請求項１から８のいずれか１項に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項１４】
前記ＵＤＣＡは、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、タウロウルソデオキシコール酸（ｔＵＤＣＡ）及びグリコウルソデオキシコール酸（ｇＵＤＣＡ）から選択される１種以上のＵＤＣＡであって水可溶化されたものである請求項１から８のいずれか１項に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項１５】
前記ＵＤＣＡは、治療的活性量で存在する請求項１から８のいずれか１項に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物
【請求項１６】
前記ＵＤＣＡは、組成物の総重量に対して０．０１〜５重量部で含まれる請求項１から８のいずれか１項に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項１７】
前記ＵＤＣＡは、組成物の総重量に対して０．０４〜０．１６重量部で含まれる請求項１１に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項１８】
前記水可溶性澱粉転化物は、マルトデキストリンであり、
前記マルトデキストリンは、組成物の総重量に対して１〜７０重量部で含まれる請求項１から８のいずれか１項に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項１９】
前記組成物のｐＨ値は、３〜９であり、
前記水可溶性澱粉転化物は、マルトデキストリンであり、
前記ＵＤＣＡに対するマルトデキストリンの最小重量比は、１：１６〜１：３０である請求項１から８のいずれか１項に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項２０】
前記組成物のｐＨ値は、６．５〜８であり、
前記水可溶性澱粉転化物は、マルトデキストリンであり、
前記ＵＤＣＡに対するマルトデキストリンの最小重量比は、１：１３〜１：３０である請求項１から８のいずれか１項に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項２１】
前記水可溶性澱粉転化物は、マルトデキストリン、デキストリン、液体グルコース、コーンシロップ固形分、可溶性澱粉、デキストラン、グアーガム、ペクチン及び可溶性非澱粉多糖類のうちの１種以上である請求項１から８のいずれか１項に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項２２】
前記組成物は、シロップ、クリーム、ペーストまたは乾燥した製剤である請求項１から８のいずれか１項に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項２３】
前記組成物は、黄斑変性疾患治療剤と併用投与される請求項１から８のいずれか１項に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項２４】
前記黄斑変性疾患治療剤は、抗−血管内皮細胞成長因子抗体（ａｎｔｉ−ＶＥＧＦ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）である請求項２３に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【請求項２５】
前記黄斑変性疾患治療剤は、眼球内注射用である請求項２３に記載の視覚障害疾患の予防または治療用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウルソデオキシコール酸（ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ、以下、ＵＤＣＡとも称する）を含有する視覚障害の予防または治療用組成物に関する。より詳細には、本発明は、ウルソデオキシコール酸を水可溶化して（ａｑｕｅｏｕｓ  ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅｄ  ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、経口投与、眼球内注射、静脈注射または点眼液投与が可能であり、黄斑変性、緑内障及び糖尿病性網膜疾患等の視覚障害を起こす疾患の予防または治療効果に優れた薬学組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
黄斑変性、緑内障及び糖尿病性網膜疾患は、眼の健康を脅威する３大失明疾患と知られている。失明の主な原因は、高齢化による加齢性眼疾患であり、特に、以前２００６年イギリスで行われた研究によると、３大失明疾患の失明全体に占める割合は約７４％に至る。
【０００３】
緑内障は、４０代以上では大人２％が患者であるくらいよくあり、眼球内部の圧力が非正常的に高くなって視神経が障害され、視力が低下する疾患である。緑内障は、心血管疾患や糖尿病に関連する「原発性緑内障」と、白内障、ぶどう膜炎または眼手術の合併症による「続発性緑内障」とに分けられる。症状がほとんどなく、ただ正常人に比べて視野が狭くて暗く見える。緑内障もはっきりとした初期症状がないため、放置しやすく、視神経が損傷してしまうと薬物や手術でも回復方法がないので、予防及び早期発見が病気の進行を遅らせる解決策である。
【０００４】
糖尿病性網膜疾患は、網膜の抹消血管に循環障害が起こって発生する合併症であって、糖尿病発病後１５〜２０年が経過するとほとんどすべての患者から発病する。糖尿病性網膜疾患は非増殖性と増殖性とに区分される。糖尿病性網膜症の８０％にあたる非増殖性は、網膜の毛細管が裂け、漏れた血液が網膜内部に流れ込んで色の区別が困難となり、夜に物体を区分しにくくなる疾患である。増殖性は、血管の酸素不足により新しい血管ができ、糖尿病の影響により血管が裂けやすくなって眼球内の出血により網膜剥離を誘発して深刻な視力損傷を引き起こす。また新しい血管の横に繊維性組職が増殖し、以後この組職が収縮して平らなはずの網膜がしわになり、再出血によって視力を完全に失うこともある。現在レーザ治療（網膜光凝固術）と手術的治療（硝子体切除術）があるが、糖尿病性網膜症は、網膜に全般的な損傷を引き起こすので治療が成功的であっても視力回復に満足できない場合が多い。
【０００５】
黄斑変性は、３大失明の原因疾患のうちの５７．２％を占め、最も高く（２００６年イギリス眼科学会誌）、網膜の中心部に位置する黄斑に加齢による退行性変化により機能異常が生じて、視力喪失まで発生する可能性がある危険な疾患である。全世界的に６５歳以上の人口で発病が増加し、７５歳以上では約３０％の有病率を示すほど、年寄り層では頻繁な疾病である。韓国の場合、最近、老齢化、コンピュータ使用等環境変化により、患者が２０１３年には１４万名（２００９〜２０１３年の約４０％増加、国民健康保険審査評価院集計）となり、有病率が４０歳以上では６．４％、６５才以上では１６．５％に至るほど（２００８年〜２０１２年、２０１２国民健康栄養調査）急速に増加している。
【０００６】
黄斑変性または加齢性黄斑変性は、臨床的に二つの類型に分けられるが、その一つは、乾性黄斑変性（ｄｒｙ、ａｔｒｏｐｈｉｃ、ｎｏｎ−ｅｘｕｄａｔｉｖｅ  ｔｙｐｅ）であり、他の一つは湿性黄斑変性（ｗｅｔ、ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ、ｅｘｕｄａｔｉｖｅ  ｔｙｐｅ）である。この中、深刻な視力喪失は概して湿性黄斑変性から生じるが、この疾患による失明の２０％は乾性黄斑変性からも生じる。乾性または非滲出性黄斑変性は網膜にドルーゼンや網膜色素上皮の萎縮等の病変が生じた場合をいい、黄斑にある視細胞が徐徐に萎縮して時間が経過するほど視力が漸次低下し、湿性の形態に発展する可能性がある。湿性または滲出性黄斑変性は、網膜の下に脈絡膜新生血管が生え、血管からの出血及び滲出等によりひどい視力損傷を誘発し、発病後一定期間が経ると失明を引き起こす可能性がある。
【０００７】
この黄斑変性疾患の原因としては、老化以外に喫煙、高血圧、コレステロール、肥満、動脈硬化、家族歴等が挙げられ、またマラリア治療剤のクロロキン（ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）を含んだ他の疾病の治療剤の副作用により発病することもある。しかし、いまだに正確な原因が分からず、結局黄斑に関連した細胞の自然死（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）が主原因とされる。
【０００８】
現在黄斑変性の治療方法としては、乾性黄斑変性の場合は根本的な治療剤がなく、ただ抗酸化剤の服用など対症療法のみで満足している状態であって、病気の進行をよりさらに予防したり、治療したりすることはできない。また、湿性黄斑変性の場合にも黄斑関連細胞の細胞自然死（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を抑制する完治法はなく、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）の活性を阻害する抗体治療剤の眼球内注射方法、新生血管の種類、位置に応じて局所レーザの治療、光力学療法等を単独で処置するか、眼球内抗体治療剤注射と併用して、視力損傷を防止し、視力回復を試みている状態である。
【０００９】
黄斑変性に対するＦＤＡから承認された治療方法としては、ビスダイン薬物治療（Ｖｉｓｕｄｙｎｅ  ｄｒｕｇ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）、抗−血管内皮細胞成長因子抗体（ａｎｔｉ−ＶＥＧＦ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ）のルセンティス（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））またはアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））の眼球内注射（Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、マクジェン（Ｍａｃｕｇｅｎ（登録商標））、埋め込み型望遠レンズ（ｉｍｐｌａｎｔａｂｌｅ  ｔｅｌｅｓｃｏｐｅ）等がある。  
【００１０】
ビスダイン薬物治療の場合は、最初の湿性黄斑変性治療剤として開発された。しかし治療に対する臨床試験結果では、治療後１年ではビスダイン投与群が偽薬群に比べて統計学的に有意の効果を示したが（ビスダイン８６％、偽薬６７％）、治療後２年ではそれ以上の有意差がないほど効果の低い短所があった（ビスダイン７９％、偽薬７２％）。
【００１１】
マクジェンは、眼での血管内皮細胞成長因子の作用を阻害する物質であって６週ごとに１回、眼に注入する。臨床試験では、対照群の２２％に対比して治療を受けた患者の３３％が視力を維持するかあるいは向上する効果を示し、実際に老化により発病する黄斑変性患者の視力損傷率を下げる効果を有する。しかし、マクジェンは、視力維持及び向上効果がルセンティス（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））やアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））よりも低い短所がある。また、治療を受けた患者の１％未満では網膜剥離、内眼球炎等の深刻な副作用が発生し、患者の４０％が眼に浮遊物が飛んでいるように見える症状や眼に不快感等の副作用を訴えている。
【００１２】
抗体治療剤であるルセンティス（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））の場合、２００６年６月にＦＤＡの承認を受けており、湿性黄斑変性に対してビジュダインやマクジェンよりもより効果的な方法である。
【００１３】
ルセンティス（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））は血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）の作用を阻害する機能を有し、４週ごとに１回、眼球内注射することになる。ルセンティスは４０％の視力回復及び９０％の視力維持効果を示すが、一般的に眼球内注射（Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）は患者に恐怖感及び不便感を与える。
【００１４】
また他の抗体治療剤であるアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））も２０１１年１１月にＦＤＡの承認を受けており、ルセンティスのように湿性（加齢性）黄斑変性での血管内皮細胞成長因子の活性を阻害する機能を有する治療剤である。初期３ヵ月間は毎月眼球内注射し、その後は８週ごとに１回眼球内注射することになる。アイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））は治療効果がルセンティスと同様でありながら、眼球内注射の回数を減らしたことに長所がある。しかしアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））も眼球内注射方法（Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）であるため、ルセンティス（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））と同じく注射時に患者に恐怖感や不便感を与える短所があった。
【００１５】
２０１０年７月に承認された埋め込み型望遠レンズは、黄斑変性が深刻に進行された患者の損傷を受けた中央部の視力を向上させるために、網膜に像が拡大されるようにする補助装置であって黄斑変性自体の進行を阻むか改善することはできない。
【００１６】
上述した黄斑変性の治療方法等はそれぞれの短所及び副作用とともに患者及び当該国に相当な治療費用を発生させる。韓国の場合にも保健福祉部が黄斑変性治療剤の使用回数の増加及び代替投与に対する健康保険適用を拡大する内容の「療養給与の適用基準及び方法に関する詳細事項（薬剤）」改正案を設け、２０１４年１１月１日から黄斑変性治療剤（ルセンティス（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、アイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））の保険恵沢を従来１０回から１４回に増やした。国家健康保険財政面から見ると、１４万名の患者一人当たり１４回ずつ注入する場合、健康保険支援金は患者当たり１、４００万ウォンずつ、総患者数対比約２兆ウォンの費用が所要されることを意味する。
【００１７】
このような高コスト及び眼球内注射の恐怖感や不便感を与える従来の抗−血管内皮細胞成長因子抗体治療剤の短所を克服するための一環として低分子合成化合物を開発し始めたが、胆汁酸の一種であるウルソデオキシコール酸（ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ、ＵＤＣＡ）、またはＵＤＣＡの生体内代謝物であるタウロウルソデオキシコール酸（ｔａｕｒｏｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ、ｔＵＤＣＡ）を用いて湿性（滲出性または加齢性）黄斑変性を治療しようとする努力が行われてきた。
【００１８】
全世界的に何人かの科学者によりＵＤＣＡやｔＵＤＣＡが網膜変性動物モデルにおいて網膜細胞を保護し、治療できるという例がある。しかし、使用された薬物製剤及び薬物伝達方法を人体に適用できるか、すなわち産業上利用可能性があるのかが問題であった。窮極的に、どのように人体の眼球内まで容易に、副作用なく治療的活性量で伝達し、かつ患者の便利性を高めることができるかが問題であった。
【００１９】
先ず、ＵＤＣＡ／ｔＵＤＣＡを水に溶かして眼球内注射（Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）する方法を考慮することができる。しかし、ＵＤＣＡが水にほとんど溶けない化学的特性のため、現在まで眼球内注射剤として成功した例はない。その理由は、ＵＤＣＡ結晶体がｐＫａ５．１であって、針状（ｎｅｅｄｌｅ  ｆｏｒｍ）でありながら水にほとんど不溶性であるので、所望する濃度で水に均一に溶解されにくいからである。若しＵＤＣＡが水に均一に溶解されていないと、一部残っている結晶形ＵＤＣＡのために眼球に触れると吸収されずに涙によっても流れにくく、その部位に留まって痛くなり、かえって炎症を起こすことがある。このため、眼球に安全でありながら、眼球内注射の後にも眼球内で炎症を起こさず、網膜の異常反応を起こさない眼球内注射用ＵＤＣＡ薬物製剤は今までなかった。
【００２０】
胆汁酸の皮下注射方法も試みられたことがある。アメリカのエモリー大学校のボウトライト博士は、マウスの網膜退化をｔＵＤＣＡの使用により沮止する実験を行い、結果的にｔＵＤＣＡが網膜退化を大きく抑制できることを見せた（非特許文献１）。しかしこのときの薬物伝達方式は、ｔＵＤＣＡを炭酸ナトリウム緩衝液（ｓｏｄｉｕｍ  ｃａｒｂｏｎａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒ）に溶かし、またマウスの眼球に近い襟首付近（ａｔ  ｔｈｅ  ｎａｐｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｅｃｋ）に皮下注射する方法（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）であった。ＵＤＣＡの代わりにＵＤＣＡの水溶性代謝物であるｔＵＤＣＡを用いた理由は、ＵＤＣＡよりも水に対する溶解度がより高いからである（ＵＤＣＡ溶解度；２０ｍｇ／Ｌ；ｔＵＤＣＡ溶解度；２００ｍｇ／Ｌ）。しかし、この結晶形ｔＵＤＣＡもほとんど水に溶けず、但しＤＭＳＯという溶媒に先に溶解させ、これをＰＢＳ（ｐＨ７．２）溶液と１：４で混合すれば約２００ｍｇ／Ｌまで溶解させることができるが、溶液の安定性維持期間が１日程度であるという短所がある。また、結晶形ｔＵＤＣＡは、親水性の強いＵＤＣＡのタウリン代謝物であるため人体内の細胞膜の通過が難しく、強酸性（ｐＨ：１以下）であるため製剤することが困難である。すなわち、炭酸ナトリウム緩衝液に溶かしても一定時間後にｔＵＤＣＡが沈殿するので１日以上安定性を維持しにくく、薬剤に製剤する場合、薬剤の安定性が不足する。たとえ水に低濃度で溶解させることができても、皮下注射後に人体内で沈殿せず安全であるという吸収・分布・代謝・排泄に対する薬学的安定性の資料がなく、またマウスのように襟首付近に皮下注射をしなければならないが、いまだに人体の目や眼球内の治療のために襟首への皮下注射は、知られていないので危ない。ＴＵＤＣＡは、ＵＤＣＡに比べて製造コストが高くて高価であり、毒性、副作用あるいは作用機序が明らかではない新物質などの理由から、ｔＵＤＣＡを眼球内注射製剤に製品化するには多くの問題点があった。
【００２１】
胆汁酸の腹腔注射方法も試みられたことがある。ソウル大学校医科大学のウセジュン博士は、ＵＤＣＡ及びｔＵＤＣＡを炭酸ナトリウム緩衝液（ｓｏｄｉｕｍ  ｃａｒｂｏｎａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒ）に溶解させてマウスの腹腔に注射し、ＵＤＣＡ／ｔＵＤＣＡの脈絡膜内新生血管の発現を抑制する効果を動物実験により見出した（非特許文献２）。上記腹腔に注射する方法も人体に適用できないという短所がある。腹腔注射は人体にほとんど使用していない薬物伝達方式であるからである。
【００２２】
また他の方法として、従来の結晶形ＵＤＣＡ製剤（錠剤、カプセル剤）を容易に経口投与し、血液内に伝達して眼球まで伝達可能な方法を考案できるが、現在まで結晶形ＵＤＣＡ製剤の経口投与により黄斑変性の治療に有効な濃度のＵＤＣＡを血液網膜関門（ｂｌｏｏｄ−ｒｅｔｉｎａｌ  ｂａｒｒｉｅｒ；ＢＲＢ）を横切って眼球内まで伝達した場合はなかった。
【００２３】
その理由は、先ずＵＤＣＡは分子特性上、置換体のない疎水性面と水酸基を含む親水性面とをともに有する平面の両親媒性分子であり、胆汁酸（ｂｉｌｅ  ａｃｉｄ）の一種である異なる二つの水酸基を有する胆汁酸（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−ｂｉｌｅ  ａｃｉｄｓ）のように陽子形態（ｐｒｏｔｏｎａｔｅｄ  ｆｏｒｍ）で存在するので、実質的に水にほとんど溶けない特性を有しているからである（溶解度：５３μＭ）。また他の理由は、ＵＤＣＡが腸肝循環物質（ｅｎｔｅｒｏ−ｈｅｐａｔｉｃ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）に分類されており、経口服用時に十二指腸付近で少し溶解され、主に小腸を介して肝に９５％以上吸収され、再び小腸に流れ込み、肝の一次通過クリアランス（ｈｅｐａｔｉｃ  ｆｉｒｓｔ−ｐａｓｓ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ）が高いため、経口投与された場合には吸収された薬物の全量が門脈を介して肝に灌流されながら除去されるので血液を介して全身循環に入り込む量は非常に少ない。すなわち、血液に大量伝達される機会がほとんどない。したがって、従来結晶形ＵＤＣＡ製剤を経口投与で血液に過量伝達するためには特殊な製剤や方法の考案が必要である。また、網膜血管は、選択的透過性を有した血液網膜関門（ｂｌｏｏｄ−ｒｅｔｉｎａｌ  ｂａｒｒｉｅｒ；ＢＲＢ）という構造を有し、網膜神経細胞を外部物質から保護する。すなわち、ＢＲＢ構造は、血液とともに流れている毒性物質が容易に網膜内に入り込み神経組職を破壊することを抑制し、神経細胞を保護するための選択的バリアである。ＢＲＢ構造は２つの部分に分けられるが、内部ＢＲＢ（ｉｎｎｅｒ  ＢＲＢ）は、網膜内の血管内皮細胞との密着連接（ｔｉｇｈｔ  ｊｕｎｃｔｉｏｎｓ）が網膜の神経を外部の毒性物質から保護する役割を果たし、外部ＢＲＢ（ｏｕｔｅｒ  ＢＲＢ）の網膜色素上皮細胞（ｒｅｔｉｎａｌ  ｐｉｇｍｅｎｔ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ、ＲＰＥ）は、漏れ（ｌｅａｋｙ）脈絡膜血管から網膜内への物質移動を選択的に遮断しながら網膜を保護する役割を果たしている。したがって、血液内だけではなく血液網膜関門を横切って眼球内まで容易に胆汁酸を運搬できる経口用ＵＤＣＡ製剤はまだ開発されていない。
【００２４】
点眼剤形態も考慮できるが、上記結晶形ウルソデオキシコール酸（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅＵＤＣＡ）は、皮膚刺激薬（ｓｋｉｎ  ｉｒｒｉｔａｎｔ）に分類されており、ｐＫａが５．０付近であって水中で酸性を示し、眼球や目もとに接触すると痛くて有害になることもあるので点眼剤としての開発に深刻な短所がある。すなわち、結晶形ウルソデオキシコール酸はその結晶構造の形態が非常に尖った針状構造であり、眼球に接触する場合に角膜や目もとの組職の間、穴や傷がある部分に入り込み、眼のｐＨが７．４であるのでよく溶けずに涙でも流れにくくその部位に留まって痛くなり、かえって炎症を起こすこともあるので、特殊な製剤や方法がない限り点眼剤としての直接的な使用は適切ではない。
【００２５】
静脈注射も考慮できるが、点眼剤形態と同様にＵＤＣＡが水にほとんど不溶性であり、血液のｐＨ７．０付近では沈殿して単一分子形態で水に均一に溶解させることができないため、血液内に投与するとき、血管を塞ぐことや、炎症を起こることがあるので危険であり、特殊な静脈注射の製剤化及び方法を考案しない限り静脈注射剤としての直接的な使用は適切ではない。
【００２６】
したがって、結晶形ＵＤＣＡを眼球内まで副作用なく容易に治療的活性量で運搬することができ、人体に適用可能な薬物伝達方法、すなわち患者への便宜性を高めながらも治療効果があって産業的に利用可能な胆汁酸の薬物製剤は今までなかった。仮に経口投与だけで血液網膜関門を横切って眼球内まで治療に有効な濃度のＵＤＣＡ／ｔＵＤＣＡを副作用なく伝達し、従来の抗体治療剤であるルセンティス（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））やアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））と同等の治療効果を奏する胆汁酸製剤であれば、眼球内注射による多くの短所を除去し、患者の便宜性増進及び視力改善効果面において最上の治療剤となることができる。
【００２７】
上記の先行研究結果に照らして見ると、網膜機能の退行を防ぐために効果のあるＵＤＣＡやｔＵＤＣＡを効率的に網膜に伝達するためには、これら胆汁酸の化学的特性である強酸性や針状構造による痛みを解決し、水によく溶解されながらも沈殿されない高濃度の安定した製剤を作って、眼球の硝子体内に直接注射するか、経口投与または眼球に点眼剤、静脈注射形態に投与する方法を考慮することができる。この中で、最も好適な薬学的製剤は、患者に恐怖感や苦痛を与えないように非浸湿的に使用できる経口投与製剤である。すなわち、経口投与だけでも治療的活性量のＵＤＣＡ／ｔＵＤＣＡを血液に到達させて、血液網膜関門（ｂｌｏｏｄ−ｒｅｔｉｎａ  ｂａｒｒｉｅｒ）を横切って眼球内網膜まで運搬して網膜を保護できるようにするものである。今までＵＤＣＡ／ｔＵＤＣＡを、上記のように眼球内注射するか、経口投与で血液網膜関門を横切って眼球内まで運搬して網膜を保護し、視覚障害疾患を予防または治療しようとする試みはなかった。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２８】
本発明の目的は、その化学的特性が皮膚刺激薬に分類されており、強酸性でありながらも針状結晶構造及び水に不溶性であるために眼球に直接接触するとき、痛みを与えることがあり、眼球内注射時に網膜に異常反応を起こすことがある人体に有害な結晶形ＵＤＣＡの問題点を解決することである。すなわち、本発明の目的は、眼球内注射剤または点眼剤として使用できるように、ＵＤＣＡを水（ｗａｔｅｒ）に清浄水溶液形態で水可溶化して黄斑変性、緑内障及び糖尿病性網膜疾患等の視覚障害疾患の予防または治療用組成物として提供することである。
【００２９】
本発明の他の目的は、親水性（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ）及び親油性（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ）をともに有する固有の化学的性質のため、水にほとんど溶けず、少量溶解されてもミセル形態に凝集している結晶形ＵＤＣＡの問題点を解決することである。すなわち、本発明の他の目的は、涙のｐＨの７．４付近や人体内のすべてのｐＨ範囲において分子間凝集現象が防止され、眼球内注射時に眼球組職内で沈殿が発生せず、網膜に異常反応を起こさないように、ＵＤＣＡを水に清浄水溶液形態で水可溶化して黄斑変性、緑内障及び糖尿病性網膜疾患等の視覚障害疾患の予防または治療用組成物として提供することである。
【００３０】
本発明のまた他の目的は、経口服用時に、その化学的特性上、腸肝循環物質（ｅｎｔｅｒｏｈｅｐａｔｉｃ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）に分類されており、肝の一次通過クリアランス（ｈｅｐａｔｉｃ  ｆｉｒｓｔ−ｐａｓｓ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ）が高いため血液及び眼球内までＵＤＣＡを高濃度で運搬することができなかった結晶形ＵＤＣＡの問題点を解決することである。すなわち、本発明のまた他の目的は、経口投与だけでも血漿及び血液網膜関門を横切って眼球内まで治療的活性量を運搬できるように、ＵＤＣＡを水に清浄水溶液形態で水可溶化して黄斑変性、緑内障及び糖尿病性網膜疾患等の視覚障害疾患の予防または治療用組成物として提供することである。
【００３１】
したがって、本発明の目的は、患者に眼球内注射による苦痛や恐怖を無くし、患者便宜性をより高めるために、経口投与だけでも治療的活性量で眼球内吸収度を大きく高めた、水可溶化されたＵＤＣＡを黄斑変性、緑内障及び糖尿病性網膜疾患などの視覚障害疾患の予防または治療用組成物として提供することである。
【００３２】
本発明のまた他の目的は、眼球内注射や経口投与だけでもＵＤＣＡ／ｔＵＤＣＡを炎症や副作用なく効率的に眼球内まで伝達して脈絡膜新生血管を阻害するだけでなく網膜機能の回復を促進して血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）の発現を阻害できるように、ＵＤＣＡを水に清浄水溶液形態で水可溶化して視覚障害疾患の予防及び治療用組成物として提供することである。
【００３３】
本発明のまた他の目的は、親水性（ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ）及び親油性（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ）をともに有する固有の化学的性質を有したＵＤＣＡ結晶体の分子間凝集現象を防止し、点眼剤及び眼球内注射剤の製造時に水相部（親水性）と油相部（親油性）との混合及び剤形化が容易であり、時間が経過しても沈殿現象のない薬剤安定性に優れた視覚障害疾患の予防または治療用組成物を提供することである。
【００３４】
本発明のまた他の目的は、従来の加齢性黄斑変性疾患治療剤である、例えばタンパク質抗体ルセンティス（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））やアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））の眼球内注射時に併用投与して、またはビジューダイン薬物治療と並行して黄斑変性疾患の予防または治療にシナジー効果を付与することができる黄斑変性疾患の予防または治療用組成物を提供することである。
【００３５】
本発明の他の目的及び利点は、下記の発明の詳細な説明、特許請求の範囲及び図面を介してより明確になる。
【課題を解決するための手段】
【００３６】
本発明の一側面によれば、（ａ）ウルソデオキシコール酸（ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ、ＵＤＣＡ）；（ｂ）水可溶性澱粉転化物；及び（ｃ）水を有効成分として含み、すべてのｐＨ値に対して透明な（ｃｌｅａｒ）水溶液状態である、水可溶化されたウルソデオキシコール酸を含有する視覚障害疾患の予防または治療用組成物が提供される。
【００３７】
本発明の一実施例によれば、上記組成物は、眼球内注射用（Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）であって、上記ＵＤＣＡは眼球内注射により網膜まで伝達されることができ、注射された後に眼球内で皮膚刺激または炎症を起こさない。
【００３８】
本発明の一実施例によれば、上記組成物のＵＤＣＡの１回眼球内注射量は、０．１〜１．５ｍｇ／ｍＬ濃度で５０〜１００μＬになることができる。
【００３９】
本発明の一実施例によれば、上記組成物は、経口投与用（Ｏｒａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）であって、ＵＤＣＡを血液に運搬し、以後血液網膜関門（ｂｌｏｏｄ−ｒｅｔｉｎａｌ  ｂａｒｒｉｅｒ）を横切って眼球内まで治療的活性量で伝達することができる。
【００４０】
本発明の一実施例によれば、上記組成物のＵＤＣＡの１日経口投与量は、５〜３０ｍｇ／ｋｇになることができる。
【００４１】
本発明の一実施例によれば、上記組成物を２０日以上、そして１日１回以上経口投与することができる。
【００４２】
本発明の一実施例によれば、上記組成物のＵＤＣＡは、経口投与後に５〜１０分の間に眼球内に分布し始めて、一定時間、すなわち約１時間ほどまで留まってから消失（ｗａｓｈ−ｏｕｔ）されることができる。
【００４３】
本発明の一実施例によれば、上記組成物を静脈注射用で直接血液に投与しても血管を塞ぐことなく皮膚刺激（ｓｋｉｎ  ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎ）を起こさない。
【００４４】
本発明の一実施例によれば、上記組成物は点眼剤で投与されることができる。
【００４５】
本発明の一実施例によれば、上記点眼剤で投与した組成物のＵＤＣＡは、目もとや眼球周りに皮膚刺激及び異常反応を起こさずに眼球外部から眼球内まで運搬されることができる。
【００４６】
本発明の一実施例によれば、上記組成物のＵＤＣＡの１回点眼量は、０．１〜２．０ｍｇ／ｍＬ濃度で３０〜５０μＬになることができる。
【００４７】
本発明の一実施例によれば、上記組成物のＵＤＣＡの１日適正点眼回数は、１回〜１０回であるが、回数に制限がないことを特徴とする。
【００４８】
本発明の一実施例によれば、上記視覚障害疾患は、黄斑変性、緑内障及び糖尿病性網膜疾患からなる群より選択されることができる。
【００４９】
本発明の一実施例によれば、上記視覚障害疾患は、黄斑変性であることができる。
【００５０】
本発明の一実施例によれば、上記視覚障害疾患は、湿性（ｗｅｔ−ｔｙｐｅ）加齢性（ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ）黄斑変性であることができる。
【００５１】
本発明の一実施例によれば、上記組成物は、脈絡膜新生血管の阻害、網膜機能の回復促進、及び血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）の発現量の調整機能のうちの１種以上の機能を果たすことができる。
【００５２】
本発明の一実施例によれば、上記ＵＤＣＡは可溶性ＵＤＣＡ、水可溶性ＵＤＣＡ誘導体、ＵＤＣＡ塩、及びアミンとコンジュゲートされたＵＤＣＡから選択されるＵＤＣＡであって水可溶化されたものであることができる。
【００５３】
本発明の一実施例によれば、上記ＵＤＣＡはウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、タウロウルソデオキシコール酸（ｔＵＤＣＡ）及びグリコウルソデオキシコール酸（ｇＵＤＣＡ）から選択される１種以上のＵＤＣＡであって水可溶化されたものであることができる。
【００５４】
本発明の一実施例によれば、上記ＵＤＣＡは治療的活性量で存在することができる。
【００５５】
本発明の一実施例によれば、上記ＵＤＣＡは組成物の総重量に対して０．０１〜５重量部で含まれることができる。
【００５６】
本発明の一実施例によれば、上記ＵＤＣＡは、組成物の総重量に対して０．０４〜０．１６重量部で含まれることができる。
【００５７】
本発明の一実施例によれば、上記水可溶性澱粉転化物はマルトデキストリンであり、上記マルトデキストリンは組成物の総重量に対して１〜７０重量部で含まれることができる。
【００５８】
本発明の一実施例によれば、上記組成物のｐＨ値は３〜９であり、上記水可溶性澱粉転化物はマルトデキストリンであり、上記ＵＤＣＡに対するマルトデキストリンの最小重量比は１：１６〜１：３０であることができる。
【００５９】
本発明の一実施例によれば、上記組成物のｐＨ値は６．５〜８であり、上記水可溶性澱粉転化物はマルトデキストリンであり、上記ＵＤＣＡに対するマルトデキストリンの最小重量比は１：１３〜１：３０であることができる。
【００６０】
本発明の一実施例によれば、上記水可溶性澱粉転化物はマルトデキストリン、デキストリン、液体グルコース、コーンシロップ固形分、可溶性澱粉、デキストラン、グアーガム、ペクチン及び可溶性非澱粉多糖類のうちの１種以上であることができる。
【００６１】
本発明の一実施例によれば、上記組成物はシロップ、クリーム、ペーストまたは乾燥された製剤であることができる。
【００６２】
本発明の一実施例によれば、上記組成物は、黄斑変性疾患治療剤と併用投与することができる。
【００６３】
本発明の一実施例によれば、上記黄斑変性疾患治療剤は、抗−血管内皮細胞成長因子の抗体であることができる。
【００６４】
本発明の一実施例によれば、上記黄斑変性疾患治療剤は、眼球内注射用であることができる。
【発明の効果】
【００６５】
本発明の一実施例に係る視覚障害疾患の予防または治療用組成物は、水に清浄水溶液形態で水可溶化されたＵＤＣＡ製剤形態であるので、従来の結晶形ＵＤＣＡが有した根本的な問題点である皮膚刺激や眼に接触時に痛みを起こす問題を解決できるという利点がある。
【００６６】
本発明の一実施例に係る視覚障害疾患の予防または治療用組成物は、ＵＤＣＡが単一分子形態で水に高濃度で水可溶化されて一定期間安定した状態を維持するので、従来の結晶形ＵＤＣＡの分子間凝集現象による限界のために不可能であった眼球内注射剤を提供できるという利点がある。
【００６７】
本発明の一実施例に係る視覚障害疾患の予防または治療用組成物は、従来の結晶形ＵＤＣＡ製剤（錠剤、カプセル）の特性である腸肝循環物質に分類される限界のために血液内に高濃度でＵＤＣＡを運搬できなかった問題を解決した高濃度で水可溶化されたＵＤＣＡ製剤形態であるので、経口投与時は血液に運搬されて血液網膜関門を横切って眼球内まで治療的活性量のＵＤＣＡを伝達できるという利点がある。したがって、本発明によれば、経口投与だけでも治療に有効な十分量のＵＤＣＡを眼球内まで伝達できるので、患者に眼球内注射による苦痛や恐怖を与えずに患者に対する便宜性を高めることができる。
【００６８】
本発明の一実施例に係る視覚障害疾患の予防または治療用組成物は、眼球内注射時に網膜に異常反応を起こさずによく吸収されて脈絡膜新生血管を阻害し、網膜機能の回復を促進し、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）の発現量を調節して視覚障害疾患を予防または治療することができるという利点がある。
【００６９】
本発明の一実施例に係る視覚障害疾患の予防または治療用組成物は、従来の結晶形ＵＤＣＡの短所であった眼に対する痛みを解決し、眼球に対する点眼剤としても用いることができるという利点がある。このため、患者に眼球内注射による苦痛や恐怖を与えずに患者に対する便宜性を高めることができる。
【００７０】
本発明の一実施例に係る視覚障害疾患の予防または治療用組成物を用いると、ＵＤＣＡの眼に対する異物感やひりひりする不便感がほとんどなく、ｐＨの変化にも沈殿されないＵＤＣＡ製剤の安定性を高めた視覚障害疾患の予防または治療用点眼剤及び眼球内注射剤を提供することができる。
【００７１】
本発明の一実施例によれば、ＵＤＣＡまたはＵＤＣＡの生体内代謝物であるｔＵＤＣＡやｇＵＤＣＡを眼球内まで網膜の異常反応を起こさずに効果的に伝達できる黄斑変性疾患予防または治療用組成物を提供することができる。
【００７２】
本発明の一実施例によれば、本発明に係る黄斑変性疾患の予防または治療用組成物は、従来の眼球内注射剤であるタンパク質抗体治療剤のルセンティス（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））やアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））と同等またはそれ以上に黄斑変性疾患の予防または治療効果を達成できるという利点がある。
【００７３】
また、本発明の一実施例によれば、本発明に係る黄斑変性疾患の予防または治療用組成物は、従来の黄斑変性治療剤とともに投与され、黄斑変性疾患治療効果に対するシナジー効果を有することができる。
【００７４】
本発明の一実施例によれば、本発明に係る黄斑変性疾患の予防または治療用組成物は、眼球内注射以外にも経口投与または点眼液によっても黄斑変性疾患予防または治療効果を達成でき、経口投与及び点眼液方式により黄斑変性の治療に対する患者の便宜性を極大化することができるという利点がある。
【００７５】
本発明の一実施例によれば、本発明に係る黄斑変性疾患の予防または治療用組成物は、低分子化学合成物であるため、高コストの抗体新薬対比製造が容易であり、生産コストが低くて安い価格で治療剤を供給できるという利点がある。
【００７６】
したがって、本発明によれば、黄斑変性、緑内障及び糖尿病性網膜疾患等の視覚障害を起こす疾患をルセンティス（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））やアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））等の抗体治療剤対比低コストで効果的な予防または治療が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】本発明の実施例３で製造されたＵＤＣＡ溶液のｐＨ値に応じる清浄水溶液生成の可否を示した図である。
【図２】本発明の実施例４で製造されたＵＤＣＡ溶液のｐＨ値に応じる清浄水溶液生成の可否を示した図である。
【図３】本発明の実施例５で製造されたＵＤＣＡ溶液のｐＨ値に応じる清浄水溶液生成の可否を示した図である。
【図４】本発明の実施例６で製造されたＵＤＣＡ溶液のｐＨ値に応じる清浄水溶液生成の可否を示した図である。
【図５】本発明の実施例７で製造されたＵＤＣＡ溶液のｐＨ値に応じる清浄水溶液生成の可否を示した図である。
【図６】本発明に係る組成物の眼球内注射による脈絡膜新生血管阻害効能を確認するための、レーザにより誘導された脈絡膜新生血管生成の動物モデル（ＣＮＶｍｏｕｓｅ）においての効力試験の全体的な実験方法を示した模式図であって、マウスの網膜をレーザで損傷を与え、同日から対照群としてＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ）とアイリーア（１０ｍｇ／ｍＬ）を両眼にそれぞれ２μＬを注射し、水可溶化されたウルソデオキシコール酸であるＹＳＢ２０１−１（０．３９ｍｇ／ｍＬ、実施例８）、ＹＳＢ２０１−２（０．７８ｍｇ／ｍＬ、実施例９）、及びＹＳＢ２０１−３（１．５６ｍｇ／ｍＬ、実施例１０）を両眼に２μＬをそれぞれ２日間隔で３日間注射した。
【図７】図７ａから図７ｆは、本発明の実施例に係るＹＳＢ２０１−１（実施例８）〜ＹＳＢ２０１−３（実施例１０）または従来のＶＥＧＦ抗体治療剤であるアイリーア（（Ｅｙｌｅａ（登録商標）、対照群）を眼球内注射した後、レーザで誘発された脈絡膜損傷（新生血管生成）の減少を比べて示した蛍光写真及び蛍光程度を数値化したグラフである。
【図８】図８ａから図８ｆは、本発明の実施例に係るＹＳＢ２０１−１（実施例８）〜ＹＳＢ２０１−３（実施例１０）または従来のＶＥＧＧ抗体治療剤であるアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標）、対照群）を眼球内注射した後、レーザで誘発された脈絡膜損傷（新生血管生成）の減少程度を示す網膜断層撮影写真及び網膜損傷部位（ＣＮＶ  ｌｅｓｉｏｎｓ）の大きさを数値化したグラフである。
【図９】図９ａから図９ｇは、レーザで損傷されたマウスの網膜に本発明の実施例に係るＹＳＢ２０１−１（実施例８）〜ＹＳＢ２０１−３（実施例１０）をそれぞれ３回、またはアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標）、対照群）を１回眼球内注射を実施し、１５日後に暗順応された状態で単一白色光による網膜電位図を測定して比べたグラフである。
【図１０】レーザで網膜が損傷されたマウスに本発明の実施例に係るＹＳＢ２０１−１（実施例８）〜ＹＳＢ２０１−３（実施例１０）及びアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標）、対照群）をそれぞれ眼球内注射した後、レーザで損傷された脈絡膜及び網膜においての血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）の発現程度に及ぶ影響を測定した結果を示したものである。
【図１１】本発明に係る組成物の経口投与による脈絡膜新生血管の阻害効能を確認するために、レーザで誘導された脈絡膜新生血管の形成の動物モデルにおいての効力試験の全体的な実験方法を示した模式図であって、マウス網膜をレーザで損傷を与える１０日前から、対照群であるオリーブ油（ｏｌｉｖｅ  ｏｉｌ）と水可溶化されたウルソデオキシコール酸であるＹＳＢ２０１−４（１２５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、実施例１１）、及びＹＳＢ２０１−５（２５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、実施例１２）とをそれぞれ１日１回ずつ経口投与を始め、レーザ損傷後１０日経過後まで経口投与した。
【図１２】図１２ａから１２ｄは、本発明の実施例に係るＹＳＢ２０１−４（実施例１１）及びＹＳＢ２０１−５（実施例１２）の経口投与による、レーザで誘発された脈絡膜損傷（新生血管生成）の減少を比べて示す蛍光写真及び蛍光程度を数値化したグラフである。
【図１３】図１３ａから１３ｄは、本発明の実施例に係るＹＳＢ２０１−４（実施例１１）及びＹＳＢ２０１−５（実施例１２）の経口投与による、レーザで誘発された脈絡膜損傷（新生血管生成）の減少程度を示す網膜断層撮影写真及び網膜損傷部位（ＣＮＶ  ｌｅｓｉｏｎｓ）の大きさを数値化したグラフである。
【図１４】図１４ａから１４ｅは、本発明の実施例に係るオリーブ油（ｏｌｉｖｅ  ｏｉｌ）、ＹＳＢ２０１−４（実施例１１）及びＹＳＢ２０１−５（実施例１２）を、マウス眼球がレーザで損傷される１０日前からそれぞれ１日１回経口投与し、レーザ損傷後に再び１０日間経口投与した後、レーザによる網膜損傷１５日目暗順応された状態で単一白色光による網膜電位図を測定して比べたグラフである。
【図１５】レーザで損傷されたマウスの脈絡膜及び網膜において、本発明の実施例に係るＹＳＢ２０１−４（実施例１１）またはＹＳＢ２０１−５（実施例１２）の経口投与が血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）の発現程度に及ぶ影響を測定したデータを示す図である。
【図１６】ＹＳＢ２０１の経口投与後、血漿に運搬された胆汁酸（ｂｉｌｅ  ａｃｉｄｓ）の時間に応じる変化量を示す薬動学（ＰＫ）データである。
【図１７】ＹＳＢ２０１の経口投与後、血漿に運搬された胆汁酸（ｂｉｌｅ  ａｃｉｄｓ）の時間に応じる変化量を示す薬動学（ＰＫ）データである。
【図１８】図１８ａ、図１８ｂは、ＹＳＢ２０１の経口投与後に眼球内まで運搬された胆汁酸の時間に応じる変化量を示す薬動学（ＰＫ）データである。図１８ｂにおいてＵＤＣＡ系列の胆汁酸（ＵＤＣＡｔｙｐｅ  ｂｉｌｅ  ａｃｉｄｓ）は、細胞保護効果を有したＵＤＣＡ及びこの生体内代謝体物であるｔＵＤＣＡ、ｇＵＤＣＡの濃度を合計したものを意味し、界面活性剤の機能をする胆汁酸（ｏｔｈｅｒ  ｂｉｌｅ  ａｃｉｄｓ）は、上記  ３種類の胆汁酸を除いた他の胆汁酸の濃度を合計したものを意味する。
【図１９】ＹＳＢ２０１の経口投与後に眼球内まで運搬された胆汁酸の時間に応じる変化量を示す薬動学（ＰＫ）データである。
【図２０】ＹＳＢ２０１の経口投与後に胃に運搬された胆汁酸の時間に応じる変化量を示す薬動学（ＰＫ）データである。
【図２１】ＹＳＢ２０１の経口投与後に胃に運搬された胆汁酸の時間に応じる変化量を示す薬動学（ＰＫ）データである。
【図２２】ＹＳＢ２０１の経口投与後に血漿に運搬されたＵＤＣＡ及びＵＤＣＡの代謝物、すなわちＵＤＣＡ、ｔＵＤＣＡ、ｇＵＤＣＡの濃度を合計したもの及びその他の胆汁酸の濃度を合計したものの時間に応じる変化量を示す薬動学（ＰＫ）データである。
【図２３】ＹＳＢ２０１の経口投与後に眼球内まで運搬されたＵＤＣＡ及びＵＤＣＡの代謝物、すなわちＵＤＣＡ、ｔＵＤＣＡ及びｇＵＤＣＡの濃度を合計したもの及びその他の胆汁酸の濃度を合計したものの時間に応じる変化量を示す薬動学（ＰＫ）データである。
【図２４】ＹＳＢ２０１の経口投与後に胃に運搬されたＵＤＣＡ及びＵＤＣＡの代謝物、すなわちＵＤＣＡ、ｔＵＤＣＡ及びｇＵＤＣＡの濃度を合計したもの及びその他の胆汁酸の濃度を合計したものの時間に応じる変化量を示す薬動学（ＰＫ）データである。
【発明を実施するための形態】
【００７８】
本発明をより容易に理解するために、便宜上特定用語を本願で定義する。本願で別に定義しない限り、本発明で使用した科学用語及び技術用語は、当該技術分野において通常の知識を有した者に通常理解されている意味を有するものとする。また、文脈上特に指定しない限り、単数形態の用語はそれの複数形態も含むものであり、複数形態の用語はそれの単数形態も含むものとして理解されるべきである。
【００７９】
本発明で使用する用語「治療」とは、本発明の組成物の投与により視覚障害疾患の症状が悪化せず、または好転したり、有利に変更されるすべての行為を意味する。
【００８０】
本発明で使用する用語「有効成分として含む」または「治療的活性量で含む」とは、視覚障害疾患の予防または治療用組成物、眼球内注射剤用組成物、経口服用剤、点眼剤及び静脈注射剤として効果を奏することができる程度、例えば、予防効果、治療効果などを奏することができる程度に含有することを意味する。
【００８１】
本発明で使用する用語「予防」とは、視覚障害疾患発病の前から薬物を処置し、発病後に経口服用させた後に治療される状態に関連したパラメータ、例えば症状の程度を少なくとも低減させるすべての行為を意味する。
【００８２】
本発明で使用する用語「透明な（ｃｌｅａｒ）水溶液」または「清浄水溶液」とは、目視で沈殿物が実質的にない溶液状態を意味する。
【００８３】
本発明で使用する用語「視覚障害疾患」は、黄斑変性、緑内障及び糖尿病性網膜疾患を含む。
【００８４】
本発明の一側面によれば、（ａ）ウルソデオキシコール酸（ｕｒｓｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ、ＵＤＣＡ）；（ｂ）水可溶性澱粉転化物；及び（ｃ）水を有効成分として含み、すべてのｐＨ値に対して透明な（ｃｌｅａｒ）水溶液状態である、水可溶化されたウルソデオキシコール酸を含有する、視覚障害疾患の予防または治療用組成物が提供される。
【００８５】
ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）は、親水性胆汁酸であり、経口投与が可能であり、人体内の総胆汁酸の単に約３％程度の低い濃度であるが、通常人間の胆汁に存在し、アメリカのＦＤＡで原発性胆汁うっ滞性肝硬変症治療剤として承認された唯一の薬物である。
【００８６】
ＵＤＣＡの薬理作用には、抗酸化作用、抗炎症作用、抗細胞死滅抑制作用等がある。これら効果は、視覚障害疾患の治療に非常に重要な機序であり、ＵＤＣＡが単一分子として役割をするときより明らかに示される。したがって、これらの効果のある物質をどのように人体の眼球内までよく吸収及び伝達できるかが問題である。結晶形ＵＤＣＡが皮膚刺激薬に分類されており、親水性及び親油性をともに有する両親媒性分子であるため水にほとんど溶けなく、少量溶けても二量体（ｄｉｍｅｒｓ）、四量体（ｔｅｔｒａｍｅｒｓ）あるいはミセル（ｍｉｃｅｌｌ）形態を有し、ＵＤＣＡ単一分子として作用しにくいので、本発明の組成物は、ＵＤＣＡ結晶体を水に高濃度で可溶化させ、単一分子として機能することができるようにした。
【００８７】
上記水可溶化されたウルソデオキシコール酸（ａｑｕｅｏｕｓ  ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅｄＵＤＣＡ）は、ＵＤＣＡがマルトデキストリンとともに水（ｗａｔｅｒ）に安定化して、結果的に純粋ＵＤＣＡ分子の水溶性溶解度が３，０００倍以上増加した。水可溶化されたウルソデオキシコール酸は、分子特性上両親媒性の特性を有する非イオン性分子であり、水溶液に単一分子形態で溶解されているため、濃度差による速い分散速度で細胞間、細胞内での拡散はもちろん受動的機序によって生体内に吸収されるのでＵＤＣＡの吸収率が画期的に増加する。結論的に、水に６０ｇ／Ｌまで高濃度で溶けているＵＤＣＡを主成分として含んでいる水可溶化されたＵＤＣＡは最も理想的な多機能性薬物であって、眼球内注射、経口投与、静脈注射または点眼剤として黄斑変性等の視覚障害疾患を予防または治療することができる。
【００８８】
本発明の組成物は、これに限定されないが、上記組成物内のＵＤＣＡの溶解度が結晶形ＵＤＣＡの水に対する溶解度の約３，０００倍以上（０．１５Ｍ対０．０５ｍＭ）になることができ、ｔＵＤＣＡに比べて、約３００倍以上（０．１５Ｍ対０．４５ｍＭ）になることができる。これにより、本出願人は水可溶化されたＵＤＣＡを用いて本発明を完成することになった。
【００８９】
本発明の一実施例によれば、上記組成物は、眼球内注射用（Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）であって、上記組成物のＵＤＣＡは、眼球内注射により網膜まで伝達されることができ、注射後に眼球内での皮膚刺激または炎症を起こさない。
【００９０】
本発明の一実施例によれば、本発明の眼球内注射用組成物は、網膜の脈絡膜新生血管を著しく阻害し、網膜細胞の再生を促進して血管内皮細胞成長因子タンパク質の発現を遺伝子レベルで下向き調節することができる。本発明の眼球内注射剤に関連した実施例の実験結果及び図７ａ〜図１０によれば、上記組成物をマウスの眼球に注射したとき、現在標準的な黄斑変性治療剤として使用されているＶＥＧＦ抗体注射剤のアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））と同等またはそれ以上の効果があることが明確に確認された。
【００９１】
本発明の一実施例によれば、組成物のＵＤＣＡの１回注射量は、０．１〜１．５ｍｇ／ｍＬの濃度で５０〜１００μＬになることができる。これに限定されないが、眼球内に１回注射するＵＤＣＡの濃度は、０．１〜３．０ｍｇ／ｍＬになることができ、０．１〜１．５ｍｇ／ｍＬがより好ましいことがある。上記１回注射剤のＵＤＣＡ濃度が０．１以上であると効果がより確実に示され、１．５ｍｇ／ｍＬを超過する場合は、効果が１．５ｍｇ／ｍＬでの効果と実質的に同一であるので、経済的に効率的な量を提供することができる。人体の眼球の場合、これに限定されないが、１日１回注射する量は、５０〜１００μＬが好適である。
【００９２】
本発明の一実施例によれば、上記組成物は、経口投与用（Ｏｒａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）であって、ＵＤＣＡを血液に運搬し、以後血液網膜関門（ｂｌｏｏｄ−ｒｅｔｉｎａｌ  ｂａｒｒｉｅｒ）を横切って眼球内まで治療的活性量で伝達することができる。
【００９３】
従来の結晶形ＵＤＣＡ製剤形態の錠剤やカプセル製剤で経口投与時、総投与量対比約３０〜６０％は非イオン受動拡散により空腸及び回腸に沿って吸収され、結晶形ＵＤＣＡは不溶性であるため、結腸で少量（攝取用量の２０％）のみ能動輸送機序により回腸に吸収される。ＵＤＣＡが肝細胞により吸収されると、ｔＵＤＣＡ及びｇＵＤＣＡでコンジュゲーションされることができ、ＵＤＣＡと結合したｔＵＤＣＡ及びｇＵＤＣＡは、人間から分泌された胆汁酸により肝の一次通過クリアランスによって排泄されるため、経口投与後のＵＤＣＡの血液内の濃度は非常に低くなる。このため、従来のＵＤＣＡ製剤で眼球内までＵＤＣＡを運搬して黄斑変性等の視覚障害疾患の予防または治療用組成物として提供された例はない。
【００９４】
これとは異なって、本発明の一実施例によれば、上記組成物をマウスに経口投与時（１２５ｍｇ／Ｋｇ、実施例１１）のＰＫ分析（ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｓｔｕｄｙ）結果、従来の結晶形ＵＤＣＡ剤形（錠剤、カプセル剤）とは異なって、血液内のＵＤＣＡの最高血中濃度は３６．５６±３．３０μｇ／ｍＬであって１２．７倍増加しており、Ｔｍａｘは５分であって４８倍速くなったので、従来製剤対比同じ用量の経口投与でも血液内高濃度のＵＤＣＡを達成することができ、黄斑変性等の視覚障害疾患の予防または治療効果を達成することができる。
【００９５】
本発明の一実施例によれば、本発明の経口投与用組成物は、網膜の脈絡膜新生血管を著しく阻害し、網膜細胞の再生を促進して血管内皮細胞成長因子タンパク質の発現を遺伝子レベルで下向き調節することができる。本発明の経口投与に関連した実施例の実験結果及び図１２ａ〜図１５によれば、上記組成物をマウスの眼球に経口投与したとき、対照群に比べて著しい効果を示すことが明確に確認された。
【００９６】
本発明の一実施例によれば、上記組成物のＵＤＣＡの１日経口投与量は、５〜３０ｍｇ／ｋｇになることができる。上記ＵＤＣＡの１日経口投与量が５ｍｇ／ｋｇ以上であると効果がより確実に示され、３０ｍｇ／ｋｇを超過する場合は、３０ｍｇ／ｋｇでの効果と実質的に同一であるので、経済的に効率的な量を提供することができる。これに限定されないが、上記組成物のＵＤＣＡの１日経口投与量は、１０〜３０ｍｇ／ｋｇ、１５〜３０ｍｇ／ｋｇ、２０〜３０ｍｇ／ｋｇ、２５〜３０ｍｇ／ｋｇ、５〜２５ｍｇ／ｋｇ、１０〜２５ｍｇ／ｋｇ、１５〜２５ｍｇ／ｋｇ、２０〜２５ｍｇ／ｋｇ、５〜２０ｍｇ／ｋｇ、１０〜２０ｍｇ／ｋｇ、１５〜２０ｍｇ／ｋｇ、５〜１５ｍｇ／ｋｇ、１０〜１５ｍｇ／ｋｇになることができる。これに限定されないが、ＵＤＣＡの経口投与の間隔は、症状に応じて、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日間隔で投与することができる。また、上記投与量は、人体に好適であるが、これに限定することではない。
【００９７】
本発明の一実施例によれば、上記組成物を２０日以上、そして１日１回以上経口投与することができる。しかし、これに限定されない。
【００９８】
本発明の一実施例によれば、上記組成物のＵＤＣＡは、経口投与後に５〜１０分の間に眼球内に分布し始め、一定時間すなわち約１時間にわたって留まってから消失（ｗａｓｈ−ｏｕｔ）されることができる。
【００９９】
本発明の一実施例によれば、上記組成物は静脈注射用であって、直接血液に投与されて血管を塞ぐことなく、皮膚刺激（ｓｋｉｎ  ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎ）を起こさない。
【０１００】
本発明の一実施例によれば、上記組成物は点眼剤として投与されることができる。
【０１０１】
本発明の一実施例によれば、上記点眼剤として投与された組成物のＵＤＣＡは、目もとや眼球周りに皮膚刺激や異常反応を起こさずに眼球外部から眼球内まで運搬されることができる。
【０１０２】
本発明の一実施例によれば、上記組成物のＵＤＣＡの１回点眼量を、０．１ｍｇ／ｍｌ〜２．０ｍｇ／ｍｌ濃度で３０〜５０μＬとすることができる。これに限定されないが、眼球内への１回点眼剤のＵＤＣＡの濃度を、０．１ｍｇ／ｍＬ〜２．０ｍｇ／ｍＬとすることができ、０．１ｍｇ／ｍＬ〜１．５ｍｇ／ｍＬがより好ましい。上記１回点眼剤のＵＤＣＡ濃度が０．１ｍｇ／ｍＬ以上であると効果がより確実に示され、２．０ｍｇ／ｍＬを超過する場合、その効果は２．０ｍｇ／ｍＬでの効果と実質的に同一であるので、経済的に効率的な量を提供することができる。
【０１０３】
本発明の一実施例によれば、上記組成物のＵＤＣＡの１日適正点眼回数は、１回〜１０回であるが、回数に制限されないことを特徴とする。
【０１０４】
本発明の一実施例に係る点眼剤はキレート剤を含むことができ、これに限定されないが、キレート剤は、金属イオンをキレート化する化合物であれば特に制限はない。例えば、エデト酸（エチレンジアミン四酢酸）、エデト酸一ナトリウム、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、エデト酸四ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸三カリウム、エデト酸四カリウム等のエデト酸またはその塩；クエン酸、クエン酸一ナトリウム、クエン酸二ナトリウム、クエン酸三ナトリウム、クエン酸一カリウム、クエン酸二カリウム、クエン酸三カリウム等のクエン酸またはその塩；メタりん酸、メタりん酸ナトリウム、メタりん酸カリウム等のメタりん酸またはその塩；ピロりん酸、ピロりん酸四ナトリウム、ピロりん酸四カリウム等のピロりん酸またはその塩；ポリりん酸、ポリりん酸ナトリウム、ポリりん酸カリウム等のポリりん酸またはその塩；りんご酸一ナトリウム、りんご酸二ナトリウム、りんご酸一カリウム、りんご酸二カリウム等のりんご酸またはその塩；酒石酸ナトリウム、酒石酸カリウム、酒石酸カリウムナトリウム等の酒石酸またはその塩；フィチン酸ナトリウム、フィチン酸カリウム等のフィチン酸またはその塩等が挙げられる。
【０１０５】
また、上記エデト酸、クエン酸、メタりん酸、ピロりん酸、ポリりん酸、りんご酸、酒石酸、フィチン酸及びこれらの塩には、それぞれの独立体またはこれらの塩の水化物及び有機溶媒化物も含まれることにする。
【０１０６】
本発明において好ましいキレート剤は、エデト酸、エデト酸の塩（エデト酸塩）、クエン酸、クエン酸の塩（クエン酸塩）、メタりん酸、メタりん酸の塩（メタりん酸塩）、ポリりん酸、ポリりん酸の塩（ポリりん酸塩）であり、エデト酸のナトリウム塩（エデト酸二ナトリウム水化物等の水化物を含む）、クエン酸（クエン酸１水化物等の水化物を含む）、メタりん酸のナトリウム塩（メタりん酸ナトリウム）、ポリりん酸のナトリウム塩（ポリりん酸ナトリウム）がより好ましい場合がある。
【０１０７】
上記点眼剤は、防腐剤をさらに含むことができる。これに限定されないが、ベンザルコニウム塩化物、ベンゼトニウム塩化物、クロルヘキシジングルコン酸塩、パラベン、ソルビン酸、クロロブタノール、ホウ酸、亜塩素酸塩等が挙げられ、ベンザルコニウム塩化物がより好ましい。
【０１０８】
上記点眼剤には、汎用の技術を用いて、必要によって薬学的に許容される添加剤を添加することができ、例えば、りん酸ナトリウム、りん酸水素ナトリウム、りん酸２水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、ε−アミノカプロン酸等の緩衝化剤；塩化ナトリウム、塩化カリウム、濃グリセリン等の等張化剤；ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の界面活性剤等を必要により選択して添加することができる。
【０１０９】
本発明の一実施例によれば、上記視覚障害疾患は黄斑変性、緑内障及び糖尿病性網膜疾患からなる群より選択されることができる。
【０１１０】
本発明の一実施例によれば、上記視覚障害疾患は黄斑変性であることができる。
【０１１１】
本発明の一実施例によれば、上記視覚障害疾患は、湿性（ｗｅｔ−ｔｙｐｅ）加齢性（ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ）黄斑変性であることができる。
【０１１２】
本発明の一実施例によれば、上記組成物は脈絡膜新生血管の阻害、網膜機能の回復促進、及び血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）の発現量調節機能のうちの１種以上の機能を果たすことができる。
【０１１３】
本発明の一実施例によれば、上記ＵＤＣＡは可溶性ＵＤＣＡ、水可溶性ＵＤＣＡ誘導体、ＵＤＣＡ塩、及びアミンとコンジュゲートされたＵＤＣＡから選択されるＵＤＣＡであって、水可溶化されたものであることができる。また、これに限定されないが、ＵＤＣＡの水可溶性金属塩及び水可溶性Ｏ−スルホン化胆汁酸も可溶性ＵＤＣＡ塩に含まれることができる。
【０１１４】
本発明の一実施例によれば、上記ＵＤＣＡはウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、タウロウルソデオキシコール酸（ｔＵＤＣＡ）及びグリコウルソデオキシコール酸（ｇＵＤＣＡ）から選択される１種以上のＵＤＣＡであって、水可溶化されたものであることができる。上記タウロウルソデオキシコール酸（ｔＵＤＣＡ）及びグリコウルソデオキシコール酸（ｇＵＤＣＡ）は、ＵＤＣＡの生体内代謝物、すなわち誘導体であって、ｔＵＤＣＡはタウリンとコンジュゲートされたＵＤＣＡ誘導体であり、ｇＵＤＣＡはグリシンとコンジュゲートされたウルソデオキシコール酸誘導体を意味する。
【０１１５】
本発明の一実施例によれば、上記ＵＤＣＡは、治療的活性量で存在することができる。上記治療的活性量で存在するとは、視覚障害疾患の予防または治療用組成物、眼球内注射剤用組成物、経口服用剤及び点眼剤として効果を奏することができる程度、例えば、予防効果、治療効果等を奏することができる程度で含有することを意味する。
【０１１６】
本発明の一実施例によれば、上記ＵＤＣＡは組成物の総重量に対して０．０１〜５重量部で含まれることができる。これに限定されないが、上記組成物の総重量に対してＵＤＣＡが０．０１重量部未満であると視覚障害疾患の予防または治療効果が微々たるものになることがあり、５重量部を超過すると清浄水溶液としての製造ができない場合がある。これに限定されないが、清浄水溶液にならず白く濁って沈殿が生じる場合、眼球内注射剤、経口投与剤、及び点眼剤としての使用が困難となる場合がある。沈殿が生じると、ＵＤＣＡが水に溶けずに結晶形ＵＤＣＡで存在することがあり、これを点眼剤や眼球内注射剤として使用すると、結晶形ＵＤＣＡにより皮膚刺激を起こす可能性が大きい。清浄水溶液に製造することは、特に眼球内注射剤、点眼剤、及び静脈注射剤の製造時に皮膚刺激の問題を起こす結晶形ＵＤＣＡをすべて除去するためである。
【０１１７】
これに限定されないが、ＵＤＣＡは、組成物の総重量に対して０．０１〜５重量部、０．１〜５重量部、１〜５重量部、２〜５重量部、３〜５重量部、４〜５重量部、０．０１〜３重量部、０．１〜３重量部、１〜３重量部、２〜３重量部、０．０１〜２．５重量部、０．１〜２．５重量部、１〜２．５重量部で含まれることができる。眼球内注射用の場合、組成物の総重量に対してＵＤＣＡの含量は、０．０５〜０．２重量部が好ましく、０．０４〜０．１６重量部がより好ましく、０．０４〜０．０７重量部がさらに好ましい。経口投与用の場合は、組成物の総重量に対してＵＤＣＡの含量は、０．１〜２．５重量部が好ましく、１〜２．５重量部がより好ましい。
【０１１８】
本発明の一実施例によれば、上記水可溶性澱粉転化物はマルトデキストリンであり、上記マルトデキストリンは組成物の総重量に対して１〜７０重量部で含まれることができる。これに限定されないが、マルトデキストリンが１重量部未満であるとＵＤＣＡを有効量で水に溶解させることができず、視覚障害の予防または治療効果が微々たるものになることがあり、７０重量部を超過すると沈殿が生じてＵＤＣＡやマルトデキストリンが水溶液から析出され、これにより眼に皮膚刺激が発生することがある。
【０１１９】
これに限定されないが、上記マルトデキストリンは組成物の総重量に対して１〜６０重量部、５〜６０重量部、１０〜６０重量部、２０〜６０重量部、３０〜６０重量部、４０〜６０重量部、５０〜６０重量部、１〜５０重量部、５〜５０重量部、１０〜５０重量部、２０〜５０重量部、３０〜５０重量部、４０〜５０重量部、１〜４０重量部、５〜４０重量部、１０〜４０重量部、２０〜４０重量部、３０〜４０重量部、１〜３０重量部、５〜３０重量部、１０〜３０重量部、２０〜３０重量部、１〜２０重量部、５〜２０重量部、１０〜２０重量部、１〜１０重量部、５〜１０重量部で含まれることができる。
【０１２０】
本発明の一実施例によれば、上記水可溶性澱粉化合物はマルトデキストリンであり、上記ＵＤＣＡに対するマルトデキストリンの最小重量比は、１：３０になることができ、これに限定されないが、１：２５、１：２０、１：１５、１：１２、１：６になることができる。上記組成物に使用される高分子量の水可溶性澱粉転化物の量は、選択されたウルソデオキシコール酸の所望の濃度及び本願に記載のｐＨ範囲で可溶性を有する量と定義することができる。上記マルトデキストリンの最小量は、ｔＵＤＣＡ及びｇＵＤＣＡの場合にも同様に適用できる。
【０１２１】
本発明の一実施例によれば、上記ｐＨ値は３〜９であり、上記水可溶性澱粉転化物はマルトデキストリンであり、上記ＵＤＣＡに対するマルトデキストリンの最小重量比は１：１６〜１：３０であることを特徴とする、視覚障害疾患の予防または治療用組成物が提供される。これに限定されないが、上記ＵＤＣＡに対するマルトデキストリンの最小重量比は、１：１６〜１：２０、１：１６〜１：２５、１：１６〜１：３０、１：２０〜１：２５、１：２０〜１：３０、１：２５〜１：３０になることができる。
【０１２２】
これに限定されないが、ｐＨ値が３以上６未満で、ＵＤＣＡに対するマルトデキストリンの最小重量比が１：１〜１：１５である場合は、沈殿が生じて清浄水溶液にならないことがある。
【０１２３】
本発明の一実施例によれば、上記ｐＨ値は６〜９であり、上記水可溶性澱粉転化物はマルトデキストリンであり、上記ＵＤＣＡに対するマルトデキストリンの最小重量比は１：１３〜１：３０であることを特徴とする、視覚障害疾患の予防または治療用組成物が提供される。
【０１２４】
本発明の上記水可溶性澱粉転化物は、各種ｐＨ条件下で澱粉の部分または不完全加水分解により直接得られた炭水化物を含む。非制限的な例には、マルトデキストリン、デキストリン、液体葡萄糖、コーンシロップ固形物（液体葡萄糖の乾燥粉末）を挙げることができる。上記コーンシロップ固形物は、Ｍａｌｔｒｉｎ  Ｍ２００を使用することができ、マルトデキストリンは、Ｍａｌｔｒｉｎ  Ｍ７００を使用することができ、これに限定されないが、アメリカのアイオワ州のマスカティン所在のＧｒａｉｎ  Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社の商品名ＧＰＣで製造されたものを使用することができる。
【０１２５】
澱粉転化物が重合体からなる場合、この重合体は少なくとも１つの還元端部と少なくとも１つの非還元端部とを有することができ、直鎖または分岐鎖であることができる。また、分子量は、約１００質量単位以上、または１０６質量単位以上であることができる。これに限定されないが、高分子量の水可溶性澱粉転化物は、分子量１０５質量単位以上を有することができる。
【０１２６】
本発明の一実施例によれば、さらに可溶性非澱粉多糖類を含むことができる。上記水可溶性非澱粉多糖類は、各種加水分解または合成機序により各種ｐＨ条件下で得られることができる。非制限的な例には、デキストラン、グアーガム、ペクチン、難消化性の可溶性繊維等が挙げられる。重合体からなる場合、当該重合体は少なくとも１つの還元端部と少なくとも１つの非還元端部とを有する。上記重合体は、直鎖または分岐鎖であることができる。本発明の多糖類の分子量は、約１００質量単位以上、または１０６質量単位以上であることができる。これに限定されないが、分子量は、１０５質量単位以上が好ましい。上記組成物は、水可溶性澱粉転化物及び／または可溶性非澱粉多糖類の配合物を含む水性溶液の組成物が提供されることができる。
【０１２７】
本発明の一実施例によれば、組成物の沈殿を防止するために必要とされるＵＤＣＡに対する液体葡萄糖（例えば、コーンシロップ）の最小重量比は、約１：２５（すなわち、水  １００ｍＬ中のＵＤＣＡ５００ｍｇ当たり約１２．５ｇ、水２００ｍＬ中のＵＤＣＡ１ｇ当たり約２５ｇ）になることができるが、これに限定されない。
【０１２８】
また、本発明の組成物の投与形態において、沈殿を防止するために必要とされる液体葡萄糖の乾燥粉末（コーンシロップ固形物、例えば、Ｍａｌｔｒｉｎ  Ｍ２００）の最小量は、水１００ｍＬ中のＵＤＣＡ１ｇ当たり約３０ｇになり、水２００ｍＬ中のウルソデオキシコール酸２ｇ当たり約６０ｇになることができるが、これに限定されない。
【０１２９】
本発明の一実施例に係る組成物の投与形態において、沈殿を防止するために必要とされる可溶性非澱粉多糖類の最小量は、水１００ｍＬ中のウルソデオキシコール酸５００ｍｇ当たりグアーガム約５０ｇになることができ、水１００ｍＬ中のウルソデオキシコール酸５００ｍｇ当たりペクチン８０ｇになることができる。但し、高分子量水可溶性澱粉転化物または可溶性非澱粉多糖類の最小必要量は、主として濃度よりも溶液製剤においてのＵＤＣＡの絶対量により決定されることができる。
【０１３０】
本発明の組成物は、経口投与用として製剤化する場合、食物繊維をさらに含むことができる。食物繊維の非制限的な例には、グアーガム、ペクチン、サイリウム（ｐｓｙｌｌｉｕｍ）、エンバクゴム、豆繊維、エンバクふすま、トウモロコシ皮、セルロース及び小麦ふすまが挙げられるが、これに限定されない。
【０１３１】
本発明の組成物は、乳化剤及び懸濁剤をさらに含むことができる。乳化剤の非制限的な例には、グアーガム、ペクチン、アカシア、カラギーナン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポビドン、トラガカントゴム、キサンタンガム及びソルビタンエステルが挙げられる。
【０１３２】
本発明の組成物は、薬学的に許容可能な添加剤をさらに含むことができ、薬学的に許容可能な添加剤には、澱粉、ゼラチン化澱粉、未結晶セルロース、乳糖、ポビドン、コロイダルシリコンジオキシド、りん酸水素カルシウム、ラクトース、マンニトール、飴、アラビアゴム、プレゼラチン化澱粉、トウモロコシ澱粉、粉末セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、オパドライ、澱粉グリコール酸ナトリウム、カルナバワックス、合成珪酸アルミニウム、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸カルシウム、白糖、デキストロース、ソルビトール及びタルクなどを用いることができる。本発明に係る薬学的に許容可能な添加剤は、上記組成物に対して０．１〜９０重量％含まれることが好ましいが、これに限定されない。また、本発明の組成物は、実際の臨床投与時に非経口の様々な剤形で投与可能であり、製剤化する場合は、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤等の希釈剤または賦形剤を用いて調剤することができる。非経口投与のための製剤には、滅菌した水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤、注射剤が含まれることができる。
【０１３３】
本発明の一実施例によれば、上記組成物のｐＨは、１〜１０であり、上記ｐＨ値において上記組成物は溶解された透明な（ｃｌｅａｒ）水溶液状態であることが可能である。上記組成物は、水に可溶化されることができ、上記ｐＨでは沈殿せずに清浄水溶液の状態であることができる。すなわち、上記組成物は、数ヵ月（１，２，３，４，５，６，７，８，９，１０，１１または１２ヵ月）以後にもＵＤＣＡが沈殿せずに清浄水溶液の状態であることができる。上記化合物を沈殿させない選択されたｐＨ範囲は、これに限定されないが、約ｐＨ１〜ｐＨ１０の間になることができ、約ｐＨ３〜ｐＨ９が好ましく、これに限定されないが、ｐＨ６〜８がより好ましく、ｐＨ６．５〜８がさらに好ましい。また、上記ｐＨを維持するために必要な場合は、酸、塩基及び緩衝剤を含むことができる。上記ｐＨ調整物質としては、これに限定されないが、ＨＣｌ、Ｈ３ＰＯ４、Ｈ２ＳＯ４、ＨＮＯ３、ＣＨ３ＣＯＯＨ、クエン酸、りんご酸、酒石酸、乳酸（ｌａｃｔｉｃ  ａｃｉｄ）、りん酸塩、エデト酸（ｅｉｄｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）及びアルカリ類が挙げられる。これらｐＨ調整物質の性質及び使用方式は、本分野においてよく知られている。上記ｐＨ範囲は、投与方法に応じて様々な剤形が製剤から溶液状態に維持され、眼球に注射または経口投与により血液内に吸収されるのに十分な水系で得られる任意の下位セット（ｓｕｂｓｅｔ）のｐＨレベルである。よって、上記組成物は、本願に係る組成物が口腔、胃及び腸において優勢なｐＨレベルで沈殿されることなく溶液状態にある剤形として使用されることができる。
【０１３４】
本発明の一部の実施例に係るＵＤＣＡは、酸性条件下で一般的に不溶性であるにもかかわらず、遊離状態で酸性条件下で溶解されたまま存在することになる。上記組成物には、剤形に添加される場合に可溶性を維持する形態の組成物がさらに含まれることができる。また、上記組成物は眼球内注射剤、経口投与剤、点眼剤または静脈注射剤の形態で黄斑変性疾患等の視覚障害の予防及び治療用組成物を提供するために透明で安定した溶液を提供することができる。
【０１３５】
本発明の一実施例によれば上記組成物は、シロップ、クリーム、ペーストまたは乾燥した製剤であることができる。上記シロップは、これに限定されないが、一般的なシロップまたは濃厚なシロップであることができる。
【０１３６】
本発明の一実施例によれば、上記組成物は、乾燥して粉末形態に製剤化することができる。上記粉末形態の組成物は、保管及び取り扱いが容易であり、所望の形態の剤形の組成物に製造するとき容易であるとの利点がある。
【０１３７】
本発明の一実施例によれば、上記組成物は、他の黄斑変性疾患治療剤と併用投与することができる。
【０１３８】
本発明の一実施例によれば、上記他の黄斑変性疾患治療剤は、抗−血管内皮細胞成長因子抗体であることができる。上記黄斑変性疾患治療剤は、これに限定されないが、アイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））、アバスチン（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、マクジェン（Ｍａｃｕｇｅｎ（登録商標））、ルセンティス（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））またはこれらの組み合わせであることができる。また、上記組成物は、これに限定されないが、ビスダイン（Ｖｉｓｕｄｙｎｅ）薬物治療と併用投与することができる。
【０１３９】
本発明の一実施例によれば、上記黄斑変性疾患治療剤は、眼球内注射用であることができる。
【０１４０】
本願は、黄斑変性疾患の遺伝学、生化学及び細胞生物学の現行の認識に対する広範囲な情報を含むが、これからの研究はこれらの認識の側面が不正確であることや不完全であることを明かされる場合もありうる。したがって、通常の技術者であれば、本発明の一部または全部が取られようとも、特定モデルや作用機序に制限されないことを理解できるであろう。
【０１４１】
本発明の他の側面によれば、その他の等価または代案的な組成物及び方法が使用されることができる。例えば、多数の化合物が水可溶化されたウルソデオキシコール酸とともに投与可能であると説明したが、それ以外の他の化合物も含まれることができる。
【０１４２】
薬剤の投与は、水可溶化されたウルソデオキシコール酸（ａｑｕｅｏｕｓ  ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅｄ  ＵＤＣＡ）組成物の投与と同一時刻に行われることができ、またはこれら二つは同一または重複する時間周期（例えば、同一時間、同一日時または同一週）で簡単に投与することができる。
【０１４３】
以下、実施例により本発明をより詳細に説明する。
【実施例】
【０１４４】
材料及び方法
＜委託試験処＞
１）黄斑変性動物モデルの製作及び薬動学動物実験−仁済大学校釜山白病院／眼科疾患Ｔ２Ｂ基盤構築センター
２）薬動学分析−仁済大学校薬学大学
＜黄斑変性試験動物モデルの製作＞
１）すべての動物は、実験室環境に適応するように約７日間の順化期間を有した。
【０１４５】
２）疾病や傷などの臨床症状を示さずに適切な体重を有する動物を選択して試験に使用し、一番最近に測定された体重に基づいて対照群及び投与群を無作為に配置した。
【０１４６】
３）すべての実験期間の間にマウスは、３匹ずつマウス用ケージ（ｃａｇｅ）に収容して飼育した。
【０１４７】
４）動物室の環境は、温度１９〜２０℃、湿度４０〜６０％、照度１５０〜３００Ｌｕｘに一定にした。
【０１４８】
５）Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｏｒｉｅｎｔ  Ｂｉｏ、Ｋｏｒｅａ）を１週間に環境に適応させた後、７週齢のマウスにＩｍａｇｅ−Ｇｕｉｄｅｄ  Ｌａｓｅｒ（Ｐｈｏｅｎｉｘ、ＵＳＡ）を用いて視神経を主として３、６、９、１２時方向にレーザを照射し、このときのレーザ条件は５３２ｎｍ、１００ｍｓ／７０ｍｓ、２００ｍＷであり、スポット（ｓｐｏｔ）の大きさは５０μｍであった。
【０１４９】
＜黄斑変性治療効果の分析方法＞
レーザ誘発性脈絡膜新生血管生成（Ｌａｓｅｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ、ＣＮＶ）マウスモデルに対する試験物質の脈絡膜新生血管生成阻害効果及び網膜細胞機能の回復効果を確認するために、下記の方法を行った。
【０１５０】
１）基底部フルオレセイン血管造影法（Ｆｕｎｄｕｓ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  Ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ、ＦＦＡ）
ＣＮＶマウスの両眼を散瞳させ、１％フルオレセイン（Ｓｉｇｍａ、ＵＳＡ）を腹腔に注射して血管を染色した。マウスを痲酔し、フルオレセイン注射して５分後にレーザで誘導された新生血管をＭｉｃｒｏｎ  ＩＶ  ｉｍａｇｅ装備を使用して撮影した。網膜損傷部位（ＣＮＶ  ｌｅｓｉｏｎ）は、Ｉｍａｇｅ  Ｊ  ｐｒｏｇｒａｍを用いて補正された総蛍光度（ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ  ｔｏｔａｌ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ、ＣＴＦ）を算出して示し、このときＣＴＦを求める式は、下記の通りである。
【０１５１】
＊ＣＴＦ＝総濃度（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ｄｅｎｓｉｔｙ）−［選択された損傷部位の面積（Ａｒｅａ  ｏｆ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｌｅｓｉｏｎ）×バックグラウンド・リーディングの平均蛍光度（Ｍｅａｎ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｏｆ  ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ  ｒｅａｄｉｎｇｓ）］
【０１５２】
２）光干渉性断層撮影技術（Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ、  ＯＣＴ）
ＣＮＶマウスの両眼を散瞳させマウスを痲酔した後に、レーザで誘導された新生血管をＩｍａｇｅ  ｇｕｉｄｅｄ  ＯＣＴ装備を使用して網膜断層を撮影した。散瞳させたマウスをＯＣＴ機械の前に位置させ、ｂｒｉｇｈｔ−ｆｉｅｌｄ  ｌｉｖｅ  ｆｕｎｄｕｓ  ｉｍａｇｅを見ながらガイド線をＣＮＶの中央に位置させて形成されたそれぞれの脈絡膜新生血管をスキャンした。
【０１５３】
３）網膜電位図検査（Ｅｌｅｃｔｒｏｒｅｔｉｎｏｇｒａｐｈｙ、ＥＲＧ）
試験前に暗順応を２４時間の間に行い、暗室（ｄａｒｋ  ｒｏｏｍ）ですべての試験を行った。網膜の機能を評価するために散瞳後にマウスをケタミン（３０ｍｇ／ｋｇ）及びキシラジンヒドロクロライド（２．５ｍｇ／ｋｇ）混合物を腹腔に注射して全身痲酔し、電極をそれぞれ肌、しっぽそして角膜に接触させて網膜電位図検査を行った。単一白色光で網膜を刺激し反応値を得て、Ａ  ｗａｖｅの谷からＢ  ｗａｖｅの頂点まで定めた振幅を測定し、これを網膜機能の指標として評価した。
【０１５４】
４）ウェスタンブロットの分析（Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ）
レーザ損傷１５日目にマウスを安楽死した後に眼球を摘出して鞏膜、角膜及び水晶体を除去し、脈絡膜と網膜層とを分離した。脈絡膜と網膜をＰＢＳで２回洗浄した後、Ｐｒｏ−ＰＲＥＰ（ｉＮｔＲＯＮ、Ｋｏｒｅａ）を入れて組職を均質化しタンパク質を抽出し、抽出したタンパク質はＢＣＡ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ）を用いて定量し、２０μｇのタンパク質をウェスタンブロット（Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔ）に用いた。５％脱脂乳（ｓｋｉｍ  ｍｉｌｋ）に１時間ブロッキング（ｂｌｏｃｋｉｎｇ）した後、１次抗体（ｐｒｉｍａｒｙ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）は、１：１０００でＴＢＳ−Ｔで希釈し、４℃でオーバーナイト（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）させた。ＴＢＳ−Ｔで洗浄（ｗａｓｈｉｎｇ）した後、３％脱脂乳で２次抗体（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）を１：５０００に希釈し、室温で１時間処理後、Ｃｈｅｍｉ  Ｉｍａｇｅ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて検出（ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）した。
【０１５５】
＜水可溶化されたＵＤＣＡの薬物動態学分析方法＞
薬動学研究（Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  Ｓｔｕｄｙ）のために試験物質ＹＳＢ２０１−４をＣ５７ＢＬ／６マウスモデルに経口投与した後、時間経過による薬物成分の血漿及び生体機関内で移行される薬動学的推移を分析した。
【０１５６】
１）試験法
（１）試験物質をマウスモデルに経口投与した後、各時間ごとに血液及び各種組職の試料を採取し、有機溶媒を用いて生体組職内の薬物成分を抽出して、その濃度をＨＰＬＣ蛍光検出器を介して定量分析した。試料採取は、経口投与後の０、５、１０、３０分後及び１、２、４、１０、２４、４８、７２時間後に実施し、各時間ごとに４匹マウスから血液及び生体試料を採取した。試験群と同様に節食及び食餌をした対照群の場合は０、４、１０、２４、４８、７２時間後に血液及び生体試料を採取した。
【０１５７】
（２）有機溶媒を用いて生体試料内の試験物質成分を抽出し、その回収率（ｒｅｃｏｖｅｒｙ、％）を計算することにより好適な抽出法を定立した。様々な生体組職においての胆汁酸系列成分を特異的に定量分析するために酵素反応及び蛍光検出を用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）機器試験法を検証した。
【０１５８】
（３）血液及び生体組職内の薬物成分の濃度分析結果を薬物動態分析プログラムであるＷｉｎＮｏｎＬｉｎに適用させて経口投与後の薬動学パラメータ（ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ）を計算し、ＹＳＢ２０１−４製剤のＰＫプロファイルを確認した。
【０１５９】
（４）ＩＡＣＵＣ：仁済大学校釜山白病院インダング生命医学研究院の動物実験室は２０１４年食品医薬品安全処から認証を得ており、本試験計画は、仁済大学校医科大学ＩＡＣＵＣ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  ＵｓｅＣｏｍｍｉｔｔｅｅ）審議を経て行われた（ＩＡＣＵＣ  Ｎｏ．ＩＪＵＢＰＨ＿２０１６−００１−０２）。
【０１６０】
２）試験試薬及び装備
（１）試験物質としてＹＳＢ２０１−４を用いた。
（２）標準物質として用いた様々な胆汁酸は、ｇＵＤＣＡ、ｔＵＤＣＡ、ＵＤＣＡ、ＧＣＡ（Ｇｌｙｃｏｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｈｙｄｒａｔｅ）、ＴＣＡ（Ｔａｕｒｏｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ  ｈｙｄｒａｔｅ）、ＣＡ（Ｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ＧＣＤＣＡ（Ｇｌｙｃｏｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ＴＣＤＣＡ（Ｔａｕｒｏｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ＧＤＣＡ（Ｇｌｙｃｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ＴＤＣＡ（Ｔａｕｒｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ＣＤＣＡ（Ｃｈｅｎｏｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ＤＣＡ（Ｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ＧＬＣＡ（Ｇｌｙｃｏｌｉｔｈｏｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ）、ＴＬＣＡ（Ｔａｕｒｏｌｉｔｈｏｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、及びＬＣＡ（Ｌｉｔｈｏｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）であってアメリカシグマアルドリッチ社（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）から購買した。
【０１６１】
（３）分析装備は、アメリカ  Ｗａｔｅｒ社の２６９５Ａｌｌｉａｎｃｅ  ＨＰＬＣ（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）機器であり、日本ＪＡＳＣＯ社のＢｉｌｅＰａｋ  ＩＩ  ｃｏｌｕｍｎ（４．６１２５ｍｍ、ＪＡＳＣＯ、Ｊａｐａｎ）及びＥｎｚｙｍｅＰａｋ  ３α−ＨＳＤ  ｃｏｌｕｍｎ（４．６３５ｍｍ、ＪＡＳＣＯ、Ｊａｐａｎ）を共に用いた。
【０１６２】
３）薬物投与方法−経口投与
経口投与直前の１２時間節食させた後に測定した体重に基づいて個体別投与液量を換算して使い捨て注射器にゾンデを装着して経口投与し、経口投与後４時間以後からは固形飼料を再供給した。
【０１６３】
４）実験動物
試験系は、マウスＣ５７ＢＬ／６の３６匹（めす）を用い、体重の範囲１６〜１８ｇのマウスが分譲され、７日間順化させた後に実験に用いた。最初の投与のとき全体平均体重の±２０％内外の動物を用いた。購入処は（株）コアテック（京畿道平沢、韓国）である。動物室の環境は、温度１９〜２５℃、湿度４０〜６０％、照度１５０−３００Ｌｕｘにし、動物室及び飼育ケージ（ｃａｇｅ）の掃除は仁済大学校釜山白病院インダング生命医学研究院の標準作業指針書に従って実施した。
【０１６４】
５）群の構成及び投与計画
対照群及び試験群の構成及び投与計画は、表１に示す通りである。
【０１６５】
【表１】
2019532082.tif 000003
【０１６６】
６）試料分析方法
マウスの血液及び生体試料の分析のために、日本ＪＡＳＣＯ社の胆汁酸分析システムを用いた。Ｗａｔｅｒｓ社のＡｌｌｉａｎｃｅ  ＨＰＬＣシステム（Ｗａｔｅｒｓ（登録商標）２６９５  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ＨＰＬＣ  システム）を構築して蛍光検出器（ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ：３４５ｎｍ、ｅｍｉｓｓｉｏｎ：４７０ｎｍ）を介して胆汁酸物質の濃度を定量分析できるようにセッティングし、ＨＰＬＣ実験条件は、表２の通りである。
【０１６７】
【表２】
2019532082.tif 000004
【０１６８】
７）資料及び統計処理  
試験結果をＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ  ２０１０を用いて整理し、血中濃度分析結果に対してＰｈａｒｓｉｇｈｔ  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ７．０プログラム（Ｃｅｒｔａｒａ、ＵＳＡ）を用いて追加的な薬動学的分析を行った。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５．０を用いて、ｐ＜０．０５値を統計的に有意値として統計処理し、グラフを作成した。
【０１６９】
１．水可溶化されたＵＤＣＡ清浄水溶液試験物質の製造
（実施例１）ＵＤＣＡに対するマルトデキストリンの含量比が１：６の清浄水溶液
自然そのままのＵＤＣＡ及び低い葡萄糖当量を有した水可溶性澱粉を含む水可溶化されたＵＤＣＡの透明な清浄水溶液の原液（ｓｔｏｃｋ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を製造した。
【０１７０】
具体的には、水酸化ナトリウムペレット６．７ｇを精製水４００ｍＬに溶解させた。その後、ＵＤＣＡ６０ｇを室温で攪拌下で上記水酸化ナトリウム溶液に溶解させた。次いで上記透明な溶液にマルトデキストリン３６０ｇを少しずつ添加して撹拌した。次いで高い処理量で超音波分解（７５０Ｗ、２ＯｋＨｚ）を実施しながら得られた透明な溶液に防腐剤を薬剤学的剤形に適した量で添加し、ＨＣｌの滴加によりｐＨを調整した。精製水を添加して総１，０００ｍＬに調整した。必要によって、上記透明な溶液を適した濾過装置により濾過した。この濾過は原料からの不純物の除去や滅菌のために重要であるが、溶液が既に透明であるので、粒状物を除去するためではない。
【０１７１】
表３に示すように、上記製造されたウルソデオキシコール酸溶液は、ｐＨ１０．３、９．２、６．７では目視で沈殿せず清浄水溶液を形成したが、ｐＨ５．４では沈殿を形成した。
【０１７２】
（実施例２）ＵＤＣＡに対するマルトデキストリンの含量比が１：１２の清浄水溶液
自然そのままのＵＤＣＡ及び低い葡萄糖当量を有した水可溶性澱粉を含む水可溶化されたＵＤＣＡの透明な清浄水溶液の原液（ｓｔｏｃｋ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を製造した。
【０１７３】
具体的には、ＵＤＣＡ６０ｇ当たり高分子量水可溶性澱粉転化物の１つとしてマルトデキストリン７２０ｇを用いたことを除いては、実施例１と同様に製造した。
【０１７４】
表３に示すように、上記製造されたＵＤＣＡ溶液は、ｐＨ９．６、７．３、６．５、６．１では目視で沈殿せず清浄水溶液を形成したが、ｐＨ５．５では沈殿を形成した。
【０１７５】
（実施例３）ＵＤＣＡに対するマルトデキストリンの含量比が１：１５の清浄水溶液
自然そのままのＵＤＣＡ及び低い葡萄糖当量を有した水可溶性澱粉を含む水可溶化されたＵＤＣＡの透明な清浄水溶液の原液（ｓｔｏｃｋ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を製造した。
【０１７６】
具体的には、ＵＤＣＡ５０ｇ当たり高分子量水可溶性澱粉転化物の１つとしてマルトデキストリン７５０ｇを用いたことを除いては、実施例１と同様に製造した。このとき水酸化ナトリウムペレット５．７ｇを精製水４００ｍＬに溶解させた後に用いた。
【０１７７】
表３に示すように、上記製造されたウルソデオキシコール酸溶液は、ｐＨ９．５、８．９、７．９、７．１、６．０では目視で沈殿せず清浄水溶液を形成した。しかし、ｐＨ５．５では沈殿を形成した。図１は、各ｐＨ値でのＵＤＣＡ溶液をテストチューブに入れて清浄水溶液生成の可否を写真で示したものである。
【０１７８】
（実施例４）ＵＤＣＡに対するマルトデキストリンの含量比が１：２０の清浄水溶液
自然そのままのＵＤＣＡ及び低い葡萄糖当量を有した水可溶性澱粉を含む水可溶化されたＵＤＣＡの透明な清浄水溶液の原液（ｓｔｏｃｋ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を製造した。
【０１７９】
具体的には、ＵＤＣＡ１７．５ｇ当たり高分子量水可溶性澱粉転化物の１つとしてマルトデキストリン３５０ｇを用いたことを除いては、実施例１と同様に製造した。このとき水酸化ナトリウムペレット２．０ｇを精製水４００ｍＬに溶解させた後に用いた。  
【０１８０】
表３に示すように、上記製造されたＵＤＣＡ溶液は、ｐＨ９．４、７．１、６．１、５．５では目視で沈殿せず清浄水溶液を形成した。しかし、ｐＨ５．１では沈殿を形成した。
【０１８１】
図２は、各ｐＨ値でのＵＤＣＡ溶液をテストチューブに入れて清浄水溶液生成の可否を写真で示したものである。
【０１８２】
（実施例５）ＵＤＣＡに対するマルトデキストリンの含量比が１：２５の清浄水溶液
自然そのままのＵＤＣＡ及び低い葡萄糖当量を有した水可溶性澱粉を含む水可溶化されたＵＤＣＡの透明な清浄水溶液の原液（ｓｔｏｃｋ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を製造した。
【０１８３】
具体的には、ＵＤＣＡ１４ｇ当たり高分子量水可溶性澱粉転化物の１つとしてマルトデキストリン３５０ｇを用いたことを除いては、実施例１と同様に製造した。このとき水酸化ナトリウムペレット１．７ｇを精製水４００ｍＬに溶解させた後に用いた。
【０１８４】
表３に示すように、上記製造されたＵＤＣＡ溶液は、ｐＨ９．６、６．１、５．１では目視で沈殿せず清浄水溶液を形成した。しかし、ｐＨ４．０では沈殿を形成した。図３は各ｐＨ値でのＵＤＣＡ溶液をテストチューブに入れて清浄水溶液生成の可否を写真で示したものである。
【０１８５】
（実施例６）ＵＤＣＡに対するマルトデキストリンの含量比が１：３０の清浄水溶液
自然そのままのＵＤＣＡ及び低い葡萄糖当量を有した水可溶性澱粉を含む水可溶化されたＵＤＣＡの透明な清浄水溶液の原液（ｓｔｏｃｋ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を製造した。
【０１８６】
具体的には、ＵＤＣＡ２５ｇ当たり高分子量水可溶性澱粉転化物の１つとしてマルトデキストリン７５０ｇを用いたことを除いては、実施例１と同様に製造した。このとき水酸化ナトリウムペレット２．８ｇを精製水４００ｍＬに溶解させた後に用いた。
【０１８７】
表３に示すように、上記製造されたＵＤＣＡ溶液は、ｐＨ９．０、８．０、７．０、６．０、５．１、４．１、２．９では目視で沈殿せず清浄水溶液を形成した。図４は、各ｐＨ値でのＵＤＣＡ溶液をテストチューブに入れて清浄水溶液生成の可否を写真で示したものである。
【０１８８】
（実施例７）ＵＤＣＡ／ｔＵＤＣＡ／ｇＵＤＣＡを含有し、マルトデキストリンに対する含量比が１：３０の清浄水溶液
ＵＤＣＡ及びＵＤＣＡ誘導体を含有し、低い葡萄糖当量を有した水可溶性澱粉を含む水可溶化されたＵＤＣＡの透明な清浄水溶液の原液（ｓｔｏｃｋ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を製造した。
【０１８９】
具体的には、水酸化ナトリウムペレット０．３ｇを精製水５００ｍＬに溶解させた。その後、ＵＤＣＡ１．０ｇ、ｔＵＤＣＡ０．５ｇ、ｇＵＤＣＡ０．５ｇを室温で攪拌下で上記水酸化ナトリウム溶液に溶解させた。次いで、上記透明な溶液にマルトデキストリン６０ｇを少しずつ添加して撹拌した。次いで高い処理量で超音波分解（７５０Ｗ、２ＯｋＨｚ）を実施しながら得られた透明な溶液に防腐剤を薬剤学的剤形に適した量で添加し、ＨＣｌの滴加によりｐＨを調整した。精製水を添加して総１，０００ｍＬに調整した。
【０１９０】
表３に示すように、上記製造されたＵＤＣＡ溶液は、ｐＨ１０．２、９．０、８．１、７．１、６．１、５．１、４．１、２．９では目視で沈殿せず清浄水溶液を形成した。
【０１９１】
図５は、各ｐＨ値での上記ＵＤＣＡ溶液をテストチューブに入れて清浄水溶液生成の可否を写真で示したものである。
【０１９２】
【表３】
2019532082.tif 000005
【０１９３】
（実施例８−１２）水可溶化されたＵＤＣＡ清浄水溶液ＹＳＢ２０１−１、ＹＳＢ２０１−２、ＹＳＢ２０１−３、ＹＳＢ２０１−４、ＹＳＢ２０１−５
ＹＳＢ２０１の原液（ｓｔｏｃｋ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）は、先ず４００ｍＬＮａＯＨ（２．７ｇ）溶液中にＵＤＣＡ（２５ｇ）を溶解させて準備した。その後、得られた透明な溶液に、激しい攪拌下でマルトデキストリン７４５ｇを少しずつ添加した。次いで、高い処理量で超音波分解（７５０Ｗ、２ＯｋＨｚ）を実施しながらＨＣｌの滴加によりｐＨを６．８に調整した。次いで、この得られた溶液に医薬用水（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｇｒａｄｅ  ｗａｔｅｒ）を加えて体積を１．０Ｌに調整した。上記ＹＳＢ２０１の原液（ｓｔｏｃｋ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を所望のＵＤＣＡ濃度となるように医薬用水で希釈し、無菌条件下で０．２μｍフィルターウェア濾過装置を用いて濾過滅菌処理してＹＳＢ２０１−１（実施例８）、ＹＳＢ２０１−２（実施例９）、ＹＳＢ２０１−３（実施例１０）、ＹＳＢ２０１−４（実施例１１）、ＹＳＢ２０１−５（実施例１２）の試験物質を製造した。上記濾過は、滅菌のために重要であるが、溶液が既に透明であるので粒状物を除去するためではない。
【０１９４】
【表４】
2019532082.tif 000006
【０１９５】
（比較例）陽性対照群アイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））の製造
眼球内投与群の陽性対照群アイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））は、ＰＢＳを用いて１０ｍｇ／ｍｌに製造した。
以下、すべての試験物質は、４℃で保管した。
【０１９６】
２．眼球内注射による試験物質ＹＳＢ２０１（実施例８−実施例１０）の脈絡膜新生血管阻害の有効性評価
目的：本試験は、マウスの脈絡膜にレーザを照射し、加齢性黄斑変性の特徴である脈絡膜新生血管を誘導する、Ｌａｓｅｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ（ＣＮＶ）ｍｏｕｓｅモデルを作り、試験物質ＹＳＢ２０１を眼球内注射して脈絡膜新生血管阻害効能を確認するためのものである（図６参照）。
【０１９７】
２−１．試験物質の眼球内注射
投与された試験物質の種類、眼球内投与量及び濃度は、表５に示した。投与に使用されたマウスは、Ｃ５７ＢＬ／６めす３６匹を用い、体重の範囲１６〜１８ｇ／マウスが分譲され６日間順化した後に実験に用いた。最初投与時に全体平均体重の±２０％内外の動物を用いた。
【０１９８】
散瞳剤［トロペリン点眼剤、韓美薬品（株）］を両眼に点眼し、１０分間散瞳させた後にケタミン（３０ｍｇ／ｋｇ）及びキシラジンヒドロクロライド（２．５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射してマウスを痲酔し、試験物質は、Ｕｌｔｒａ−Ｍｉｃｒｏ  Ｐｕｍｐ（１００μＬのガラスシリンジに物質を充填し、連結された３５ｇａｕｇｅのシリンジ）を用いてマウスの両眼にそれぞれ２μＬずつ、二日に１回、総３回注射（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）した。
【０１９９】
【表５】
2019532082.tif 000007
【０２００】
２−１−１．基底部フルオレセイン血管造影法（Ｆｕｎｄｕｓ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  Ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ、ＦＦＡ）
図７ａ〜図７ｅは、レーザ損傷１４日後にフルオレセイン（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）を注射して生成された脈絡膜新生血管及び投与された物質に応じる脈絡膜新生血管阻害効果を蛍光で示したものであり、図７ｆは、これを数値化し、バックグラウンド（ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ）を補正するためにＣＴＦを算出して２×１０６を超える値を除いた後にグラフに示したものである。陽性対照群のアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））は、各眼球に２μＬずつ１回注射し、試験物質のＹＳＢ２０１は、レーザ損傷（ｌａｓｅｒ  ｉｎｊｕｒｙ）後の１日目、３日目、６日目に各眼球に２μＬずつ注射した。
【０２０１】
試験結果、脈絡膜新生血管の減少効果は、ＹＳＢ２０１及びアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））を投与した群から示された。特に試験物質ＹＳＢ２０１−１（実施例８、図７ｃ）、ＹＳＢ２０１−２（実施例９、図７ｄ）及びアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標）、図７ｂ）は、脈絡膜新生血管を統計的に有意に阻害した（ｐ＜０００１）。
【０２０２】
２−１−２．光干渉性断層撮影技術（Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ、ＯＣＴ）
図８ａ〜図８ｅは、脈絡膜新生血管を観察するために網膜を断層撮映した写真であり、図８ｆは、網膜損傷部位（ＣＮＶ  ｌｅｓｉｏｎ）の大きさを数値化したグラフである。
【０２０３】
試験結果、すべてのマウスから、レーザ損傷１４日後に網膜断面で脈絡膜新生血管を観察でき、ＹＳＢ２０１（実施例８〜実施例１０）を眼球内に直接投与したグループでは対照群（Ｖｅｈｉｃｌｅ、ＰＢＳ投与）のグループよりも小さいサイズの網膜損傷部位（ＣＮＶ  ｌｅｓｉｏｎ）が観察された。特に試験物質ＹＳＢ２０１−１（実施例８、図８ｃ）、ＹＳＢ２０１−２（実施例９、図８ｄ）、及びアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標）、図８ｂ）は、脈絡膜新生血管を統計的に有意に抑制した（ｐ＜０００１）。
【０２０４】
２−１−３．網膜電位図検査（Ｅｌｅｃｔｒｏｒｅｔｉｎｏｇｒａｐｈｙ、ＥＲＧ）
図９ａ〜図９ｆは、レーザ損傷１５日後、眼球内投与群を暗順応させ、網膜の光に対する反応の程度を測定した試験結果である。
【０２０５】
実験結果、レーザ損傷１５日後、ＣＮＶにより網膜の機能が低下して白色光に対する反応の程度が減少することを確認したが、ＹＳＢ２０１（実施例８〜実施例１０、図９ｄ〜図９ｆ）及びアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標）、図９ｃ）を眼球内に投与したグループでは網膜機能の回復によりＥＲＧ反応が増加することを示した。ＹＳＢ２０１−３の場合、ＥＲＧ反応がＰＢＳ投与群に比べて高い状態を示したが、個体間の差により統計的に有意ではなかった。
【０２０６】
２−１−４．ウェスタンブロット分析（Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ）
図１０は、レーザ損傷１５日後の眼球内投与群の脈絡膜及び網膜においての血管内皮細胞成長因子（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ、ＶＥＧＦ）のタンパク質の発現程度をウェスタンブロット（Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔ）により分析した結果である。
【０２０７】
試験結果、正常グループに比べてＰＢＳを眼球内投与したグループでは、ＶＥＧＦの発現が大きく増加したが、ＹＳＢ２０１（実施例８〜実施例１０）及びアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））を眼球内投与したグループではＶＥＧＦの発現が減少した。詳細には、アイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））で処理したグループではＶＥＧＦ発現量が正常グループのＰＢＳ投与群よりは減少したが、ＹＳＢ２０１投与群（実施例８〜実施例１０）に比べては大きく減少しなかった。これは、アイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））がタンパク質抗体の特性上脈絡膜及び網膜細胞から分泌されるＶＥＧＦ活動を阻害（ｂｌｏｃｋｉｎｇ）する役割をするだけで、これとは別に脈絡膜及び網膜細胞内のＶＥＧＦ発現の増大を抑制することはできないということを意味する。すなわちアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））は、細胞内のＶＥＧＦ発現を遺伝子レベルで源泉的かつ持続的に抑制することはできないという短所がある。
【０２０８】
これに対して、ＹＳＢ２０１投与群（実施例８〜実施例１０）の場合は、脈絡膜及び網膜細胞内でＶＥＧＦ発現量がアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））よりも著しく減少したことが分かるが、これは、アイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））の作用機序とは異なって、ＹＳＢ２０１（実施例８〜実施例１０）の場合は脈絡膜及び網膜細胞内のＶＥＧＦ発現を遺伝子レベルで下向き調節（ｄｏｗｎ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）するので、新生血管生成を源泉的かつ持続的に阻害することができることを示す。
【０２０９】
３．経口投与によるＹＳＢ２０１（実施例１１及び実施例１２）の脈絡膜新生血管阻害有効性の評価
目的：本試験は、マウスの脈絡膜にレーザを照射して加齢性黄斑変性の特徴である脈絡膜新生血管を誘導するＣＮＶマウスモデルを作り、試験物質ＹＳＢ２０１（実施例１１及び実施例１２）を経口投与してＵＤＣＡが血液網膜関門を横切って眼球内まで到逹して脈絡膜新生血管の発現を抑制する効能を有するかどうかを確認するためのものである（図１１参照）。
【０２１０】
３−１．試験物質の経口投与
投与された試験物質の種類、投与量及び濃度を表６に示した。投与に用いられたマウスは、Ｃ５７ＢＬ／６めす２４匹を用い、体重の範囲１６〜１８ｇのマウスが分譲され、６日間順化した後に実験に用いた。最初投与時に全体平均体重の±２０％内外の動物を用いた。
【０２１１】
投与直前に測定したマウスの体重に基づいて個体ごとに投与液の量を換算し、使い捨て注射器にゾンデ（ｓｏｎｄｅ）を装着して経口投与した。
【０２１２】
レーザ損傷処理の１０日前から１日１回午前１１時〜午後２時の間に経口投与した。  レーザ損傷後にも１０日間、１日１回、午前１１時〜午後２時の間に経口投与し、１５日目にマウスを安楽死して測定試料を準備した。
【０２１３】
【表６】
2019532082.tif 000008
【０２１４】
３−１−１．基底部フルオレセイン血管造影法（Ｆｕｎｄｕｓ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  Ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ、ＦＦＡ）
図１２ａ〜図１２ｃは、レーザ損傷１３日後、フルオレセイン（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）を注射し、生成された脈絡膜新生血管及び投与された物質による新生血管阻害効果を示す写真であり、図１２ｄは、これを数値化し、バックグラウンド（ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ）を補正するためにＣＴＦを算出して２×１０６を超える値を除いてグラフに示したものである。
【０２１５】
試験結果、ＹＳＢ２０１（実施例１０及び実施例１１）を経口投与したグループが、オリーブオイルを投与した対照群（ｖｅｈｉｃｌｅ）グループに比べて網膜損傷部位（ＣＮＶ  ｌｅｓｉｏｎ）が大きく減少した状態を示し、ＹＳＢ２０１−４（１２５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、実施例１１）が最も高い効能を示した（ｐ＜０．０１）。ＹＳＢ２０１−５（２５０ｍｇ／Ｋｇ）は、対照群グループよりも網膜損傷部位（ＣＮＶ  ｌｅｓｉｏｎ）が減少した傾向を示したが、統計的に有意ではなかった。
【０２１６】
３−１−２．光干渉性断層撮影技術（Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ、ＯＣＴ）
図１３ａ〜図１３ｃは、脈絡膜新生血管を観察するために網膜を断層撮影した写真であり、図１３ｄは、網膜損傷部位（ＣＮＶ  ｌｅｓｉｏｎ）の大きさを数値化したグラフである。
【０２１７】
実験結果、すべてのマウスからは、レーザ損傷（ｌａｓｅｒ  ｉｎｊｕｒｙ）１３日後の網膜断面で脈絡膜新生血管を観察でき、ＹＳＢ２０１−４（実施例１１）を経口投与したグループでは対照群（ｖｅｈｉｃｌｅ、ｏｌｉｖｅ  ｏｉｌ投与）グループよりも著しく小さいサイズの網膜損傷部位（ＣＮＶ  ｌｅｓｉｏｎ）を観察できた。
【０２１８】
３−１−３．網膜電位図検査（Ｅｌｅｃｔｒｏｒｅｔｉｎｏｇｒａｐｈｙ、ＥＲＧ）
図１４ａ〜図１４ｅは、レーザ損傷１４日後、経口投与群を暗順応させ、網膜の光に対する反応の程度を測定した試験結果である。
【０２１９】
試験結果、レーザ損傷１５日後、ＣＮＶにより網膜の機能が低下して白色光に対する反応の程度が減少したが、ＹＳＢ２０１−４（実施例１１、図１４ｃ）を経口投与したグループでは、ＥＲＧ反応が増加して正常対照群の約７３％まで回復したことが示され、これは、統計的に有意（ｐ＜０．０５）であった。ＹＳＢ２０１−５（実施例１２、図１４ｄ）も対照群に比べてＥＲＧ反応が増加したＢ−ｗａｖｅ値を示したが、統計的に有意ではなかった。
【０２２０】
３−１−４．ウェスタンブロット分析（Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ）
図１５は、レーザ損傷１４日後、経口投与群の脈絡膜及び網膜においての血管内皮細胞成長因子（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ、ＶＥＧＦ）の発現程度をウェスタンブロットで分析したものである。
【０２２１】
実験結果、経口投与しなかったＣＮＶマウス及びオリーブオイル（ｏｌｉｖｅ  ｏｉｌ）を経口投与したマウスの眼球では、ＶＥＧＦタンパク質発現量が増加したが、ＹＳＢ２０１−４（実施例１１）を経口投与した群では、ＶＥＧＦタンパク質の発現量が著しく減少したことが分かる。
【０２２２】
（脈絡膜新生血管阻害効能の分析結論及び考察）
本試験は、水可溶化されたＵＤＣＡ（ＹＳＢ２０１）清浄水溶液の黄斑変性治療剤としての可能性を確認するためのものであって、マウスの脈絡膜にレーザを照射し、湿性黄斑変性の特徴である脈絡膜新生血管を誘導するＣＮＶマウスモデルを活用してＹＳＢ２０１の新生血管阻害効能を確認した。
【０２２３】
マウスのブルック膜（Ｂｒｕｃｈ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）にレーザを照射して部分的に破壊させて脈絡膜新生血管を誘導した。試験は、レーザを照射する９日前から、１日にＹＳＢ２０１−４（実施例１１）を１２５ｍｇ／Ｋｇ、ＹＳＢ２０１−５（実施例１２）を２５０ｍｇ／Ｋｇの用量で経口投与して黄斑変性の予防及び治療効能を確認する試験と、ＹＳＢ２０１を眼球内注射で直接投与して黄斑変性治療剤としての可能性を確認する試験とに分けて行われた。
【０２２４】
眼球内注射試験結果、ＹＳＢ２０１−１（実施例８）及びＹＳＢ２０１−２（実施例９）は、陽性対照群であるアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））と同程度に脈絡膜新生血管を阻害でき、眼球内注射による網膜の異常反応は観察されなかった。網膜断層撮影により実際のＣＮＶの状態を確認したとき、ＰＢＳのみ注射したグループでは網膜浮腫が見える程度にＣＮＶが形成された個体も観察され、部分的な網膜機能低下（ｒｅｔｉｎａ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）も発見された。しかし、かえってＹＳＢ２０１投与群においては薬物により網膜損傷部位（ＣＮＶ  ｌｅｓｉｏｎ）が減少し、ＥＲＧ試験でもＹＳＢ２０１−１（実施例８）及びＹＳＢ２０１−２（実施例９）は、網膜機能の低下を抑制することが確認された。網膜から抽出したタンパク質を用いたウェスタンブロットスタディ（ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔ  ｓｔｕｄｙ）では、陽性対照群であるアイリーア（Ｅｙｌｅａ（登録商標））のＶＥＧＦタンパク質発現抑制能がＹＳＢ２０１に比べて劣ることが観察された。
【０２２５】
経口投与試験の結果、ＹＳＢ２０１−４（１２５ｍｇ／ｍｌ、実施例１１）の場合は脈絡膜新生血管を阻害する効能を有することが確認され、ＹＳＢ２０１−４（実施例１１）はＹＳＢ２０１−５（実施例１２）の濃度対比半分であったにもかかわらず網膜損傷部位（ＣＮＶ  ｌｅｓｉｏｎ）をより強く阻害することを示した。マウス網膜機能を検査するために行った網膜電位図検査結果、ＣＮＶマウスにおいて網膜疾患の代表的な所見である振幅の減少が起こった。網膜電位図は、ａ波とｂ波とに分けられるが、ａ波（受容体電位）は、光の刺激により視細胞で生成される陰電位波であって視細胞の機能を反映すると考えられる。ｂ波（ミュラー細胞電位）は、視細胞の情報伝達過程においてミュラー細胞から生成される急激な陽電位波で示された。正常の網膜においては、ａ波が陰電位であり、ｂ波が陽電位で示されるので、この２つの波の電位差で網膜の機能を判断することができる。臨床的黄斑変性においては、ａ波及びｂ波が消失せず振幅が減少することに知られている。
【０２２６】
ＹＳＢ２０１−４（実施例１１）が最も優れた効能を示し、ＶＥＧＦの発現も効果的に減少させた。レーザ損傷（Ｌａｓｅｒ  ｉｎｊｕｒｙ）１３日目にフルオレセイン（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ）を腹腔内に注射して蛍光造影法により確認した結果、網膜損傷部位（ＣＮＶ  ｌｅｓｉｏｎ）は、ＹＳＢ２０１を投与した群で有意的に減少したことが確認できた。
【０２２７】
結論的に、ＹＳＢ２０１は、経口投与及び網膜に直接投与した場合に効果的にＶＥＧＦ  タンパク質の発現を抑制し、ＣＮＶを減少させる効果がある。
【０２２８】
４．水可溶化されたＵＤＣＡ清浄水溶液の血漿及び眼球内薬動学分析
目的：試験物質ＹＳＢ２０１−４（１２５ｍｇ／ｋｇ、実施例１１）をＣ５７ＢＬ／６  マウスモデルに経口投与した後、時間の経過に応じて薬物成分が血漿に運搬され、順次に血液網膜関門を横切って眼球内まで治療的活性量で運搬されるかどうかを、さらに他の生体組職内に移行される薬動学的推移を分析する試験である。
【０２２９】
４−１．薬動学分析の結果
４−１−１．血漿（ｐｌｓｍａ）サンプルの分析
ＹＳＢ２０１−４（１２５ｍｇ／ｋｇ、実施例１１）を経口投与した後に血漿サンプルを分析した。試験結果、試験群マウス１、２、３、４グループの血液内のＵＤＣＡの濃度は、経口投与直後の５〜１０分の間に最高血中濃度［３６．５３±３．３２（ｓｔａｎｄａｒｄ  ｅｒｒｏｒ  ｖａｌｕｅ）］μｇ／ｍＬに到逹した。４時間後からは血中ＵＤＣＡの濃度の消失する程度が減少する傾向にあることが示された（図１６及び図１７）。
【０２３０】
４−１−２．血漿内薬物動態の分析（Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｄａｔａ  ａｎａｌｙｓｉｓ）
ＹＳＢ２０１−４（１２５ｍｇ／ｋｇ、実施例１１）の経口投与薬物に対して薬動学的モデリングを行い、主な薬動パラメータを計算した（表７）。試験結果、最大血中濃度に到逹する時間が５分〜１０分の間に示され、半減期が約１．５〜２時間に推定される。
【０２３１】
【表７】
2019532082.tif 000009
【０２３２】
４−２−１．眼球組職内サンプルの分析
ＹＳＢ２０１−４（１２５ｍｇ／ｋｇ、実施例１１）の経口投与後に眼球組職内のサンプルを分析した。試験群マウス（１、２、３、４群）（ｎ＝４）の眼球（ｅｙｅｓ）内の胆汁酸の薬動学分析結果、ＵＤＣＡは、Ｔｍａｘ０．１時間で眼球内の最高濃度８．０５±３．６６μｇ／ｇｔｉｓｓｕｅを示した。
【０２３３】
時間の経過に応じてＵＤＣＡの生体内代謝体であって細胞保護効果のあるｔＵＤＣＡも眼球内に伝達されたが、Ｔｍａｘ１．３８時間で６．５１±２、４７μｇ／ｇｔｉｓｓｕｅを示した（表８、図１８ａ、１８ｂ及び図１９）。
【０２３４】
【表８】
2019532082.tif 000010
【０２３５】
図１８ａ、図１８ｂ及び図１９に示された結果は、ＹＳＢ２０１−４（実施例１１）を経口投与すると、水可溶化されたＵＤＣＡが胃から迅速に血液に吸収され、血液網膜関門を横切って眼球内まで伝達され、また眼球内でも２時間にわたって留まりながら効果的に作用できることを意味する。また、ＵＤＣＡ濃度は、Ｔｍａｘ以後に漸次消失するが、この生体内の代謝産物であるｔＵＤＣＡが再び４時間の間に運搬され留まりながら細胞保護作用をすることになり、漸次消失して眼球内に残らないことになる。したがって、すべての胆汁酸が眼球内で４時間にわたって留まる間に、細胞保護機能（ｃｙｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）をするＵＤＣＡ系列胆汁酸（ＵＤＣＡ、ＴＵＤＣＡ、ＧＵＤＣＡ）の濃度の合計は界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）の機能をする他の胆汁酸（例としてＴＣＡ、ＣＡ）の濃度の合計よりも常に高かったが、これは細胞保護機能が常に界面活性剤の機能を抑制し、網膜細胞を保護できることを示す。
【０２３６】
したがって、ＹＳＢ２０１−４（実施例１１）の経口投与は、ＵＤＣＡ及びＵＤＣＡ系列の胆汁酸を高い濃度で眼球内まで伝達し、脈絡膜新生血管を阻害すると共に損傷した網膜細胞の機能を効果的に回復させることができることを示す。
【０２３７】
４−３−１．胃組織サンプルの分析
４−１−１と同じ分析条件下で試験群マウスの胃を均一に破砕し、抽出過程を経た後に分析した。次の結果に示すように、試験製剤を経口投与した後、試験群マウス１、２、３、４の胃でのＵＤＣＡの量が５分後から急激に増加し、４時間後に消失された（図２０及び図２１）。
【０２３８】
４−４−１．各組職サンプルの薬物動態分析（Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｄａｔａ  ａｎａｌｙｓｉｓ）
ＹＳＢ２０１−４（１２５ｍｇ／ｋｇ、実施例１１）の経口投与後にマウス試験群１、２、３、４の血漿、眼球及び胃腸関係組職（肝、胃、小腸、大腸）内のＵＤＣＡ濃度に対する薬動学分析をともに実施した（表９）。ＵＤＣＡ分布図は、血漿内のＵＤＣＡＣｍａｘの約０．２倍程度が眼球内のＣｍａｘであり、約１．６倍〜２８倍が肝及び胃のＣｍａｘであった。血漿内のＴｍａｘが０．０８３時間で速い理由は、肝及び胃での速いＴｍａｘ（０．１時間、０．７１時間）によることであると判明された（表９）。
【０２３９】
【表９】
2019532082.tif 000011
【０２４０】
４−５−１．ＵＤＣＡ系列胆汁酸及びそれ以外の他の胆汁酸の変化
血漿、眼球組職及び胃組織ではすべて類似にＵＤＣＡ及びＵＤＣＡ系列の胆汁酸、すなわちＹＳＢ２０１が経口投与された後、生体内代謝により生成されたｔＵＤＣＡ及びｇＵＤＣＡの総胆汁酸量が急激に増加し、この量は他の総胆汁酸の量に比べて著しく高かった（図２２〜図２４）。
【０２４１】
（薬動学分析の結論及び考察）
水可溶化されたＵＤＣＡ清浄水溶液（ＹＳＢ２０１）の経口投与により、血漿にＵＤＣＡを高濃度で運搬することができ、順次に血液網膜関門を横切って眼球内まで治療的活性量のＵＤＣＡを運搬することができた。また、眼球内のＵＤＣＡもすぐ消失せず、２時間にわたって留まりながら効能を発揮し、順次にＵＤＣＡの代謝物であるｔＵＤＣＡが眼球内に運搬されて４時間にわたって留まりながら効能を持続させたので、ＹＳＢ２０１の経口投与による黄斑変性の予防及び治療に有効性のあることが判明された。
【０２４２】
以上の説明により、本発明が属する技術分野の当業者は本発明がその技術的思想や必須的特徴を変更することなく他の具体的な形態で実施できることを理解できよう。これに関連して、以上で説明した実施例はすべての面で例示的なものであって限定的なものではないことを理解しなければならない。本発明の範囲は、上記詳細な説明よりも後述する特許請求の範囲の意味及び範囲そしてその等価概念から導出されるすべての変更または変形された形態が本発明の範囲に含まれるものとして解釈されるべきである。
【図１】
2019532082.tif 000012
【図２】
2019532082.tif 000013
【図３】
2019532082.tif 000014
【図４】
2019532082.tif 000015
【図５】
2019532082.tif 000016
【図６】
2019532082.tif 000017
【図７ａ】
2019532082.tif 000018
【図７ｂ】
2019532082.tif 000019
【図７ｃ】
2019532082.tif 000020
【図７ｄ】
2019532082.tif 000021
【図７ｅ】
2019532082.tif 000022
【図７ｆ】
2019532082.tif 000023
【図８ａ】
2019532082.tif 000024
【図８ｂ】
2019532082.tif 000025
【図８ｃ】
2019532082.tif 000026
【図８ｄ】
2019532082.tif 000027
【図８ｅ】
2019532082.tif 000028
【図８ｆ】
2019532082.tif 000029
【図９ａ】
2019532082.tif 000030
【図９ｂ】
2019532082.tif 000031
【図９ｃ】
2019532082.tif 000032
【図９ｄ】
2019532082.tif 000033
【図９ｅ】
2019532082.tif 000034
【図９ｆ】
2019532082.tif 000035
【図９ｇ】
2019532082.tif 000036
【図１０】
2019532082.tif 000037
【図１１】
2019532082.tif 000038
【図１２ａ】
2019532082.tif 000039
【図１２ｂ】
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【図１２ｃ】
2019532082.tif 000041
【図１２ｄ】
2019532082.tif 000042
【図１３ａ】
2019532082.tif 000043
【図１３ｂ】
2019532082.tif 000044
【図１３ｃ】
2019532082.tif 000045
【図１３ｄ】
2019532082.tif 000046
【図１４ａ】
2019532082.tif 000047
【図１４ｂ】
2019532082.tif 000048
【図１４ｃ】
2019532082.tif 000049
【図１４ｄ】
2019532082.tif 000050
【図１４ｅ】
2019532082.tif 000051
【図１５】
2019532082.tif 000052
【図１６】
2019532082.tif 000053
【図１７】
2019532082.tif 000054
【図１８ａ】
2019532082.tif 000055
【図１８ｂ】
2019532082.tif 000056
【図１９】
2019532082.tif 000057
【図２０】
2019532082.tif 000058
【図２１】
2019532082.tif 000059
【図２２】
2019532082.tif 000060
【図２３】
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【図２４】
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【国際調査報告】
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