(57)【要約】  本願発明は、一般的には、免疫修飾因子として有用な、PD-1タンパク質/PD-L1タンパク質およびCD80タンパク質/PD-L1タンパク質相互作用に対する阻害剤に関する。本明細書において提供するものは、化合物、前記化合物を含む組成物およびその使用方法である。本願発明は、さらに、様々な疾患、例えばがんおよび感染症の治療に有用である明細書に関する少なくとも１つの化合物を含む医薬組成物に関する。2019524705.tif 000182
2019524705.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I):
【化１】
2019524705.tif 000164
[式中、
mは、0、1または2であり；
R1は、水素、ハロC1-C4アルキル、ヒドロキシC1-C4アルキル、-(CH2)nXおよび-(CH2)nArから選択され；ここで、
nは、1、2、3または4であり；
Xは、水素、-CH3、-CF3、C1-C4アルコキシ、-N(CH3)2、C3-C6シクロアルキル、CN、-CO2Rg、-C(O)NH2、
【化２】
2019524705.tif 000165
モルホリニル、テトラヒドロピラニル、ヒドロキシ基で所望により置換されていてもよいピロリドニルならびにC1-C4アルキル、カルボキシ、ヒドロキシおよびC1-C4アルコキシカルボニルから独立して選択される1または2つの基で所望により置換されていてもよいピペリジニルから選択される；ここでRgは、水素およびC1-C4アルキルから選択される；
Arは、ベンゾジオキサニル、インダゾリル、イソキノリニル、イソオキサゾリル、ナフチル、オキサジアゾリル、フェニル、ピリジニル、ピリミジニルおよびキノリニルから選択される；ここで各環は、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C4アルコキシカルボニルアミノ、C1-C4アルキル、C1-C4アルキルカルボニル、C1-C4アルキルスルホニル、アミド、アミドC1-C4アルキル、-(CH2)qCO2C1-C4アルキル、-(CH2)qOH、カルボキシ、シアノ、ホルミル、ハロ、ハロC1-C4アルキル、ハロC1-C4アルコキシ、ニトロ、1つのシアノ基で所望により置換されていてもよいフェニル、1つのハロ基で所望により置換されていてもよいフェニルオキシ、フェニルカルボニル、ピロールおよびテトラヒドロピランから独立して選択される1、2、3または4つの置換基で所望により置換されていてもよく、ここでqは0、1、2、3または4である；
R2は、
【化３】
2019524705.tif 000166
から選択され；ここで、
Rnは、水素、C1-C3アルキル、ハロおよびハロC1-C3アルキルから選択され；
Yは、水素、C1-C3アルコキシ、C1-C3アルキル、シアノおよびハロから選択され；
R5は、フェニルであるか、あるいは単環式または二環式の不飽和ヘテロサイクル(5〜10個の原子を含有しており、該原子の1〜4個は、窒素、酸素および硫黄から独立して選択される)であり；該フェニル基および該単環式基または該二環式基は、C1-C3アルキル、シアノ、ホルミル、ハロ、ハロC1-C3アルコキシ、ハロC1-C3アルキル、ヒドロキシ、オキソ、-L-(CH2)m'NRcRd、-L-(CH2)m'OH、
【化４】
2019524705.tif 000167
から独立して選択される1、2、3、4または5つの置換基で所望により置換されていてもよく；ここで、
Lは、結合、-CH2-、-NHC(O)-、-C(O)NH-および-O-から選択されるが；但し、Lがヘテロサイクル中の窒素原子を介して親分子部分に結合している場合、Lは-CH2-であり；
m'は、1、2、3または4であるが；但し、m'が1である場合、Lは炭素原子を介して親分子部分に結合している結合であり；
tは、0、1、2または3であり；
zは、1、2または3であり；
各Rzは、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C4アルコキシカルボニルC1-C4アルキル、C1-C4アルキル、C1-C4アルキルアミド、C1-C4アルキルアミノ、C1-C4アルキルカルボニル、アミド、カルボキシ、カルボキシC1-C4アルキル、シアノ、ジ(C1-C4アルキル)アミド、ジ(C1-C4アルキル)アミノ、ハロ、ハロC1-C4アルコキシ、ハロC1-C4アルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシC1-C4アルキル、-NRcRd、(NRcRd)C1-C4アルキル、-NReRf、(NReRf)C1-C4アルキル、フェニルおよびフェニルC1-C4アルキルから独立して選択され；ここで、ReおよびRfは、それらが結合している原子と一緒になって、モルホリンおよび
【化５】
2019524705.tif 000168
から選択される環を形成しており；
RcおよびRdは、水素、C2-C4アルケニルカルボニル、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C6アルキル、C1-C4アルキルカルボニル、アミドC1-C4アルキル、アミノC1-C4アルキル、アリールC1-C4アルキル、C3-C10シクロアルキル、(C3-C10シクロアルキル)C1-C4アルキル、ハロC1-C4アルキルカルボニル、ヘテロアリールC1-C4アルキルおよびヒドロキシC1-C4アルキルから独立して選択され；ここで、該アミドC1-C4アルキル、該アミノC1-C4アルキル、該アリールC1-C4アルキル、該(C3-C10シクロアルキル)C1-C4アルキルおよび該ヘテロアリールC1-C4アルキルのアルキル部分は、カルボキシおよびヒドロキシから独立して選択される1または2つの基で所望により置換されていてもよく；ここで、該ヒドロキシC1-C4アルキルのアルキル部分は、カルボキシおよびヒドロキシから独立して選択される1または2つの基で所望により置換されていてもよく；および、ここで、該アリールC1-C4アルキルのアリール部分、該C3-C10シクロアルキル、該(C3-C10シクロアルキル)C1-C4アルキルのシクロアルキル部分および該ヘテロアリールC1-C4アルキルのヘテロアリール部分は、各々、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C4アルキルおよびハロから独立して選択される1、2または3つの基で所望により置換されていてもよい；
Qは、S、Oおよび-NRpから選択され；ここでRpは、水素、C1-C4アルキル、C1-C4アルキルアミドC1-C4アルキル、C1-C4アルキルアミノC1-C4アルキル、アミドC1-C4アルキル、アミノC1-C4アルキル、ジ(C1-C4アルキル)アミドC1-C4アルキル、ジ(C1-C4アルキル)アミノC1-C3アルキル、ヒドロキシC1-C4アルキル、ピリジニルおよびメトキシで所望により置換されていてもよいフェニルから選択されるが；但し、R2が
【化６】
2019524705.tif 000169
である場合、R5はフェニル以外である；および
R6は、水素であるか、またはR5およびR6が、それらに結合している原子と一緒になって5または6員不飽和環(窒素、酸素および硫黄から独立して選択される1または2個のヘテロ原子を含有する)を形成しており；ここで、該環は、C1-C3アルキル、シアノ、ホルミル、ハロ、ハロC1-C3アルキル、ヒドロキシ、オキソ、-L-(CH2)nNRcRd、-L-(CH2)nOHから独立して選択される1または2つの置換基で所望により置換されていてもよく；
各R3は、C2-C4アルケニル、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルキル、シアノ、ハロおよびハロC1-C4アルキルから独立して選択され；および
R4は、-(CH2)pCHO、-(CH2)n'OHおよび-(CH2)n'NRqR8から選択され、ここで、
pは、0、1、2または3であり；
n'は、1、2、3または4であり；
Rqは、水素、C1-C4アルキルおよびベンジルから選択され；および
R8は、
【化７】
2019524705.tif 000170
から選択され；ここで、
sは、0、1または2であり；
zは、1、2または3であり；
Rjは、C1-C3アルキル、C1-C3アルキルスルホニルC1-C3アルキル、C1-C3アルキルスルホキシルC1-C3アルキルおよびC1-C3アルキルスルファニルC1-C3アルキルから選択される；
Rwは、-CO2Hまたは-CONH2であり、
R9は、水素、ベンジルおよびメチルから選択され；
各R9'は、水素、エチルおよびメチルから独立して選択され；
R10は、水素、C1-C3アルキルおよびベンジルから選択され；および
R11は、C2-C4アルケニルおよびC1-C4アルキルから選択されるか；または
R8およびRqは、それらに結合している窒素原子と一緒になって、
【化８】
2019524705.tif 000171
から選択される環を形成しており；ここで、
sは、0、1または2であり；
zは、1、2または3であり；
Q'は、CHR13'、S、O、-N(CH2)2OHおよびNCH3から選択され；
R12は、水素、-CO2H、ヒドロキシC1-C4アルキルおよび-C(O)NHSO2R16から選択され；ここで、R16は、トリフルオロメチル、シクロプロピル、C1-C4アルキル、ジメチルアミノ、4-メチルピペラジニルおよびメチル基で置換されたイミダゾリルから選択され；
R13は、水素、ヒドロキシC1-C4アルキルおよび-CO2Hから選択され；
R13'は、水素、ヒドロキシC1-C3アルキルおよび-CO2Hから選択され；および
R14は、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C3アルキル、カルボキシ、ハロ、ヒドロキシ、ヒドロキシC1-C4アルキルおよび-NRc'Rd'から選択され；ここで、Rc'およびRd'は、水素、C1-C4アルコキシカルボニルおよびC1-C4アルキルカルボニルから独立して選択される]
の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
R1が-(CH2)nArであり、式中、nは1であり、かつArはシアノで所望により置換されていてもよいピリジニルである、請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
mが1であり、かつR3がハロである、請求項2記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４】
R2が、
【化９】
2019524705.tif 000172
から選択され、
式中、
Rnは水素であり；
Yはメチルであり；
R5は、フェニルであるか、あるいは単環式または二環式の不飽和ヘテロサイクル(5〜10個の原子を含有しており、該原子の1〜4個は、窒素、酸素および硫黄から独立して選択される)であり；該フェニル基および該単環式基または二環式基は、C1-C3アルキル、シアノ、ホルミル、ハロ、ハロC1-C3アルコキシ、ハロC1-C3アルキル、ヒドロキシ、オキソ、-L-(CH2)m'NRcRd、-L-(CH2)m'OH、
【化１０】
2019524705.tif 000173
から独立して選択される1、2または3つの置換基で所望により置換されていてもよく；ここで、
Lは、結合、-CH2-および-O-から選択され；
m'は、1、2、3または4であり；但し、m'が1である場合、Lは炭素原子を介して親分子部分に結合している結合である；
tは、0または1であり；
zは、2または3であり；
Rzはヒドロキシであり；および
RcおよびRdは、各々メチルである；ならびに
R6は水素である、
請求項3記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項５】
R4が、-(CH2)pCHO、-(CH2)n'OHおよび-(CH2)n'NRqR8から選択され、
式中、
pは0であり；
n'は1であり；
Rqは水素であり；および
R8は、
【化１１】
2019524705.tif 000174
から選択され；ここで、
sは1であり；
zは2であり；
R9は、水素、ベンジルおよびメチルから選択され；
各R9'は、水素、エチルおよびメチルから独立して選択され；および
R10は、水素、C1-C3アルキルおよびベンジルから選択されるか；または、
R8およびRqは、それらに結合している窒素原子と一緒になって、
【化１２】
2019524705.tif 000175
である環を形成しており；ここで、
sは、0、1または2であり；
zは、1、2または3であり；
R14は、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C3アルキル、カルボキシおよびヒドロキシから選択される、
請求項3記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項６】
式(I)：
【化１３】
2019524705.tif 000176
[式中、
mは1であり；
R1は-(CH2)nArであり；ここで、
nは1であり、
Arはシアノで所望により置換されていてもよいピリジニルであり；
R2は、
【化１４】
2019524705.tif 000177
から選択され、ここで、
Rnは水素であり；
YはC1-C3アルキルであり；
R5は、フェニルであるか、あるいは単環式または二環式の不飽和ヘテロサイクル(5〜10個の原子を含有しており、該原子の1〜4個は、窒素、酸素および硫黄から独立して選択される)であり；該フェニル基および該単環式基または二環式基は、C1-C3アルキル、シアノ、ホルミル、ハロ、ハロC1-C3アルコキシ、ハロC1-C3アルキル、ヒドロキシ、オキソ、-L-(CH2)m'NRcRd、-L-(CH2)m'OH、
【化１５】
2019524705.tif 000178
から独立して選択される1、2、3、4または5つの置換基で所望により置換されていてもよく；ここで、
Lは、結合、-CH2-および-O-から選択されるが；但し、Lがヘテロサイクル内の窒素原子を介して親分子部分に結合している場合、Lは-CH2-であり；
m'は、1、2、3または4であるが；但し、m'が1である場合、Lは炭素原子を介して親分子部分に結合している結合であり；
tは、0、1、2または3であり；
zは、1、2または3であり；
Rzはヒドロキシであり；
RcおよびRdは、C1-C6アルキルであるが；但し、R2が、
【化１６】
2019524705.tif 000179
である場合、R5はフェニル以外であり；
R6は水素であり；
R3はハロであり；および
R4は、-(CH2)pCHO、-(CH2)n'OHおよび-(CH2)n'NRqR8から選択され、ここで、
pは0であり；
n'は1であり；
Rqは水素であり；および
R8は、
【化１７】
2019524705.tif 000180
から選択され；ここで、
sは1であり；
zは2であり；
R9は、水素、ベンジルおよびメチルから選択される；
各R9'は、水素、エチルおよびメチルから独立して選択され；および
R10は、水素、C1-C3アルキルおよびベンジルから選択されるか；または
R8およびRqは、それらに結合している窒素原子と一緒になって、
【化１８】
2019524705.tif 000181
である環を形成しており；ここで、
sは、1または2であり；
zは、2または3であり；および
R14は、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C3アルキル、カルボキシ、ハロおよびヒドロキシから選択される]
の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項７】
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノリン-7-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノリン-3-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノリン-3-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸；
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノリン-2-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-2-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(イソキノリン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(イソキノリン-7-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(イソキノリン-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(R)-2-((4-((3-(7-ブロモキノキサリン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(R)-2-((4-((3-(ベンゾ[d]チアゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(R)-2-((4-((3-(ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(R)-2-((4-((3-(ベンゾフラン-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(S)-2-((4-((3-(ベンゾフラン-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-5-グアニジノペンタン酸；
2-((4-((3-(ベンゾフラン-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-2-メチルプロパン酸；
2-((4-((3-(ベンゾ[d]オキサゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-2-メチルプロパン酸；
(R)-2-((4-((3-(ベンゾ[d]オキサゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
2-((4-((3-(ベンゾフラン-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-2-メチルプロパン酸；
(R)-2-((4-((3-(ベンゾフラン-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(S)-1-(4-((3-(ベンゾフラン-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)-2-メチルピロリジン-2-カルボン酸；
(R)-2-((4-((3-(ベンゾ[d]チアゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
2-((4-((3-(ベンゾ[d]チアゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-2-メチルプロパン酸；
(S)-1-(4-((3-(ベンゾ[d]チアゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)-2-メチルピロリジン-2-カルボン酸；
(R)-2-((4-((3-(1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシプロパン酸；
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシプロパン酸；
2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-2-メチルプロパン酸；
2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-2-メチルプロパン酸；
(R)-5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(2-(2-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)エチル)ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル；
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(2-(2-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)エチル)ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(2-(2-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)エチル)ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸；
(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(6-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)ピリジン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸；
(R)-5-((4-クロロ-2-(ヒドロキシメチル)-5-((3-(6-(3-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)ピリジン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル；
(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸；
(R)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸；
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシプロパン酸；
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(S)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(S)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸；
(S)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシプロパン酸；
5-((4-クロロ-5-((3-(3-クロロ-2-(3-(ピペリジン-1-イル)プロポキシ)ピリジン-4-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-(((1,3-ジヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル)アミノ)メチル)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル；
(R)-5-((4-クロロ-5-((3-(3-クロロ-4-(3-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)ピリジン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-(((1,3-ジヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル)アミノ)メチル)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル；
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(4-((S)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)ブチル)-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-4-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
5-((4-クロロ-5-((3-(3-クロロ-4-(3-ヒドロキシプロポキシ)ピリジン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-(((1,3-ジヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル)アミノ)メチル)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル；
(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((5-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-4-メチルピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸；
5-((4-クロロ-2-(((2-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)エチル)アミノ)メチル)-5-((3-(4-(((2-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)エチル)アミノ)メチル)-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-1-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル；
5-((4-クロロ-2-(((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)メチル)-5-((3-(4-(((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)メチル)-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-1-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル；
(R)-5-((4-クロロ-2-(((1,3-ジヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル)アミノ)メチル)-5-((5-(3-(3-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-4-メチルピリジン-3-イル)メトキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル；
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(4-(((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)メチル)-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-1-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(4-ホルミル-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-1-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸；
(S)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；
(R)-5-((4-クロロ-2-(((1-ヒドロキシ-2-(ヒドロキシメチル)ブタン-2-イル)アミノ)メチル)-5-((4-(3-(3-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル；
(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-メチル-4-(2-メチル-3-(3-(ピペリジン-1-イル)プロポキシ)フェニル)ピリジン-2-イル)メトキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸；
(S)-1-(4-((3-(ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸；
(S)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-メチル-4-(2-メチル-3-(3-(ピペリジン-1-イル)プロポキシ)フェニル)ピリジン-2-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸；および
5-((4-クロロ-2-(((1-ヒドロキシ-2-(ヒドロキシメチル)ブタン-2-イル)アミノ)メチル)-5-((3-メチル-4-(2-メチル-3-(3-(ピペリジン-1-イル)プロポキシ)フェニル)ピリジン-2-イル)メトキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル；
から選択される化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項８】
請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩、ならびに医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項９】
治療上有効な量の請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を、対象に投与することを特徴とする、その必要のある患者における免疫応答を増強、刺激、調節および/または増加させる方法。
【請求項１０】
別の薬剤を、請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩の前、後または同時に投与することを更に特徴とする、請求項9記載の方法。
【請求項１１】
別の薬剤が、抗菌剤、抗ウイルス剤、細胞毒性剤、遺伝子発現修飾因子剤および／または免疫応答修飾剤である、請求項10記載の方法。
【請求項１２】
治療上有効な量の請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を、対象に投与することを特徴とする、その必要のある対象における癌細胞の成長、増殖または転移を阻害する方法。
【請求項１３】
癌が、メラノーマ、腎臓細胞癌、扁平上皮性非小細胞肺癌(NSCLC)、非扁平上皮性NSCLC、結腸直腸癌、去勢抵抗性前立腺癌、卵巣癌、胃癌、肝細胞癌、膵臓癌、頭頸部の扁平上皮癌、胃腸管系癌および乳癌、ならびに血液学的悪性癌から選択される、請求項12記載の方法。
【請求項１４】
治療上有効な量の請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を、患者に投与することを特徴とする、その必要のある対象における感染症を治療する方法。
【請求項１５】
感染症がウイルスを原因とする、請求項14記載の方法。
【請求項１６】
ウイルスが、HIV、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、D型肝炎、ヘルペスウイルス、パピローマウイルスおよびインフルエンザから選択される、請求項10記載の方法。
【請求項１７】
治療上有効な量の請求項1記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を、患者に投与することを特徴とする、その必要がある対象における敗血症ショックを治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
(関連出願の相互参照)
本願は、2016年7月8日付け出願の米国仮特許出願番号62/359,971に関して優先権を主張するものであり、その内容を本明細書に組み込むものとする。
【０００２】
本発明は、一般に、PD-1/PD-L1のタンパク質／タンパク質の相互作用およびCD80/PD-L1タンパク質/タンパク質の相互作用の阻害剤として有用な化合物に関する。本発明では、本願化合物、前記化合物を含む組成物およびその使用方法が提供される。本発明は、さらには、がんおよび感染症を含む種々の疾患の治療に有用な本発明に係る少なくとも１つの化合物を含む医薬組成物に関する。
【０００３】
プログラム細胞死(Programmed death)-1(CD279)は、プログラム細胞死-リガンド1(PD-L1, CD274, B7-H1)またはPD-L2(CD273, B7-DC)のそのいずれかのリガンドと結合した場合に、T細胞受容体からのシグナルの活性化を抑制することが知られているT細胞上にある受容体である(Sharpeら, Nat. Imm. 2007)。PD-1を発現するT細胞がそのリガンドを発現する細胞と接触すると、抗原刺激に応答する機能活性、例えば増殖、サイトカイン分泌および細胞傷害活性が減少する。PD-1／PD-リガンドの相互作用は、感染または腫瘍を治療中または自己免疫寛容を発達させる間に、免疫応答をダウンレギュレートする(Keir Me, Butte MJ, Freeman GJ ら, PD-1 and its ligands in tolerance and immunity. Annu. Rev. Immunol. 2008；26：Epub)。腫瘍または慢性感染症中に出現するような慢性抗原刺激により、PD-1が高レベルで発現し、かつ慢性抗原に対する活性に関してT細胞が機能不全となる(KimおよびAhmed, Curr Opin Imm, 2010を参照のこと)。このことは「T細胞消耗」と称される。B細胞もまた、PD-1／PD-リガンド抑制および「消耗」を提示する。
【０００４】
PD-L1は、CD80と相互作用することが示されている(Butte MJ et al, Immunity ;27：111-122(2007))。免疫細胞を発現する際のPD-L1/CD80の相互作用は、阻害作用であることが示されている。この相互作用を遮断することにより、阻害作用が無効となることが示されている(Paterson AM, et al., J Immunol., 187：1097-1105(2011)；Yang J, et al. J Immunol. Aug 1;187(3)：1113-9(2011))。
【０００５】
PD-L1に対する抗体を用いてPD-1／PD-L1相互作用を遮断することにより、多くの系においてT細胞の活性化が回復かつ増幅することが明らかにされた。進行がんの患者は、PD-L1に対するモノクローナル抗体を用いる治療より恩恵を受ける(Brahmerら, New Engl J Med 2012)。腫瘍および慢性感染の前臨床動物実験は、モノクローナル抗体によるPD-1／PD-L1経路の遮断により、免疫応答が強化されて、組織学的に明確に異なる様々な腫瘍に対して治療的免疫応答をもたらし得ることを示した(Dong H, Chen L., B7-H1 pathway and its role in the Evasion of tumor immunity, J Mol Med. 2003；81(5)：281-287；Dong H, Strome SE, Salamoa DRら, Tumor-associated B7-H1 promotes T-cell apoptosis：a potential mechanism of immune evasion, Nat. Med. 2002; 8 (8)：793-800)。
【０００６】
PD-1／PD-L1の相互作用の干渉は、慢性の感染系におけるT細胞活性の強化も示す。マウスの慢性リンパ球脈路髄膜炎ウイルス感染では、PD-L1の遮断によるウイルスクリアランスの改善および免疫力の回復も示した(Barber DL, Wherry EJ, Masopust Dら, Restoring function in exhausted CD8 T cells during chronic viral infection)Nature. 2006；439(7077)：682-687)。HIV-1に感染したヒト化マウスは、ウイルス血症に対する保護の強化およびCD4+T細胞のウイルス枯渇の低下を示す(Palmerら, J. Immunol 2013)。PD-L1に対するモノクローナル抗体を介するPD-1／PD-L1の遮断により、HIV患者(Day, Nature 2006；Petrovas, J. Exp. Med. 2006；Trautman, Nature Med. 2006；D'Souza, J.Immunol. 2007；Zhang, Blood 2007；Kaufmann, Nature Imm. 2007；Kasu, J. Immunol. 2010；Porichis, Blood 2011)、HCV患者(Golden-Mason, J. Virol. 2007；Jeung, J. Leuk. Biol. 2007；Urbani, J. Hepatol. 2008；Nakamoto, PLoS Path. 2009；Nakamoto, Gastroenterology 2008)またはHBV患者(Boni,J. Virol. 2007；Fisicaro, Gastro. 2010；Fisicaro et al., Gastroenterology, 2012；Boni et al., Gastro., 2012；Penna et al., JHep, 2012；Raziorrough, Hepatology 2009；Liang, World J Gastro. 2010；Zhang, Gastro. 2008)由来のT細胞に対するインビトロでの抗原特異的機能性が回復し得る。
【０００７】
PD-L1/CD80の相互作用の遮断は、免疫を刺激することも示されている(Yang J., et al., J Immunol. Aug 1;187(3)：1113-9(2011))。PD-L1/CD80相互作用の遮断により生じる免疫刺激は、別のPD-1/PD-L1またはPD-1/PD-L2相互作用の遮断物質との併用により増強されることが示された。
【０００８】
免疫細胞表現型の変化は、敗血症ショックにおける重要なファクターであると仮説が立てられている(Hotchkiss, et al., Nat Rev Immunol(2013))。これらには、PD-1およびPD-L1のレベル増加ならびにT細胞アポトーシスが含まれる(Guignant, et al, Crit. Care(2011))。PD-L1に対する抗体は、免疫細胞アポトーシスを低減させ得る(Zhang et al, Crit. Care(2011))。さらに、PD-1発現欠損マウスは、野性型マウスより、敗血症ショックの症状に対して耐性が高い(Yang J., et al.. J Immunol. Aug 1;187(3)：1113-9(2011))。これらの研究から、抗体を用いるPD-L1相互作用の遮断が、不適切な免疫応答を抑制し、疾患症状を緩和することができることが明らかになった。
【０００９】
慢性抗原に対する免疫応答の強化に加えて、PD-1／PD-L1経路の遮断は、ワクチン接種(慢性感染症と関連した治療的ワクチン接種を含む)に対する応答を強化することも明らかとなった(S. J. Ha, S. N. Mueller, E. J. Wherry et al., Enhancing therapeutic vaccination by blocking PD-１-mediated inhibitory signals during chronic infection, The Journal of Experimental Medicine，vol.205, No.3, pp.543-555, 2008；A. C. Finnefrock, A. Tang, F. Li et al., "PD-1 blockade in rhesus macaques：impact on chronic infection and prophylactic vaccination," The Journal of Immunology, vol.182, No.2, pp.980-987, 2009；M. -Y. Song, S. -H. Park, H. J. Nam, D. -H. Choi and Y.-C. Sung, Enhancement of vaccine-induced primary and memory CD8+ t-cell responses by soluble PD-1, The Journal of Immunotherapy, vol.34, No.3, pp.297-306, 2011)。
【００１０】
PD-1経路は、慢性感染および腫瘍疾患の間に慢性的抗原刺激から生じるT細胞消耗における重要な阻害分子である。PD-L1タンパク質を標的としたPD-1／PD-L1相互作用の遮断は、インビトロおよびインビボにおける抗原特異的T細胞免疫機能を回復させること、例えば腫瘍または慢性感染時におけるワクチン接種に対する応答を増強させることが示されている。
【００１１】
従って、PD-L1とPD-1またはCD80いずれかとの相互作用を遮断する薬剤が望まれる。
【００１２】
我々は、PD-L1とPD-1およびCD80との相互作用の阻害剤としての活性を有しており、これにより治療目的として投与して癌または感染症において免疫力を増強させるために有用であり得る有力な化合物(治療用ワクチンを含む)を見出した。薬剤親和性(drugability)にとって重要な、所望の安定性、生物学的利用能、治療指数および毒性値を有する医薬として有用であるこれらの化合物を提供する。
【００１３】
本発明は、式(I)の化合物および／またはその医薬的に許容される塩；ならびに医薬的に許容される担体を含む医薬組成物も提供する。
【００１４】
本発明は、PD-L1と他のタンパク質、例えばPD-1およびB7-1(CD80)との相互作用を含めたPD-L1の活性に関連する疾患または障害を治療する方法であって、治療が必要な患者に、式(I)の化合物および／またはその医薬的に許容される塩を投与することを特徴とする方法も提供する。
【００１５】
本発明は、式(I)の化合物および／またはその塩を製造するための方法および中間体も提供する。
【００１６】
本発明は、治療に使用するための、式(I)の化合物および／またはその医薬的に許容される塩も提供する。
【００１７】
本発明は、癌および感染症などのPD-L1に関連した症状の治療または予防のための医薬品の製造における式(I)の化合物および／またはその医薬的に許容される塩の使用も提供する。
【００１８】
式(I)の化合物および式(I)の化合物を含む組成物は、種々の感染症および癌の治療、予防または治癒において使用されてもよい。これらの化合物を含む医薬組成物は、癌および感染症などの種々の治療領域における疾患または障害の進行の治療、予防または遅延において有用である。
【００１９】
本発明のこれらの特徴および他の特徴は、本開示が続くにつれて拡張された形態で示される。
【００２０】
第一態様において、本発明は、式(I)：
【化１】
2019524705.tif 000003
[式中、
mは、0、1または2であり；
R1は、水素、ハロC1-C4アルキル、ヒドロキシC1-C4アルキル、-(CH2)nXおよび-(CH2)nArから選択され；ここで、
nは、1、2、3または4であり；
Xは、水素、-CH3、-CF3、C1-C4アルコキシ、-N(CH3)2、C3-C6シクロアルキル、CN、-CO2Rg、-C(O)NH2、
【化２】
2019524705.tif 000004
モルホリニル、テトラヒドロピラニル、ヒドロキシ基で所望により置換されていてもよいピロリドニルならびにC1-C4アルキル、カルボキシ、ヒドロキシおよびC1-C4アルコキシカルボニルから独立して選択される1または2つの基で所望により置換されていてもよいピペリジニルから選択される；ここでRgは、水素およびC1-C4アルキルから選択される；
Arは、ベンゾジオキサニル、インダゾリル、イソキノリニル、イソオキサゾリル、ナフチル、オキサジアゾリル、フェニル、ピリジニル、ピリミジニルおよびキノリニルから選択される；ここで各環は、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C4アルコキシカルボニルアミノ、C1-C4アルキル、C1-C4アルキルカルボニル、C1-C4アルキルスルホニル、アミド、アミドC1-C4アルキル、-(CH2)qCO2C1-C4アルキル、-(CH2)qOH、カルボキシ、シアノ、ホルミル、ハロ、ハロC1-C4アルキル、ハロC1-C4アルコキシ、ニトロ、1つのシアノ基で所望により置換されていてもよいフェニル、1つのハロ基で所望により置換されていてもよいフェニルオキシ、フェニルカルボニル、ピロールおよびテトラヒドロピランから独立して選択される1、2、3または4つの置換基で所望により置換されていてもよく、ここでqは0、1、2、3または4である；
R2は、
【化３】
2019524705.tif 000005
から選択され；ここで、
Rnは、水素、C1-C3アルキル、ハロおよびハロC1-C3アルキルから選択され；
Yは、水素、C1-C3アルコキシ、C1-C3アルキル、シアノおよびハロから選択され；
R5は、フェニルであるか、あるいは単環式または二環式の不飽和ヘテロサイクル(5〜10個の原子を含有しており、該原子の1〜4個は、窒素、酸素および硫黄から独立して選択される)であり；該フェニル基および該単環式基または該二環式基は、C1-C3アルキル、シアノ、ホルミル、ハロ、ハロC1-C3アルコキシ、ハロC1-C3アルキル、ヒドロキシ、オキソ、-L-(CH2)m'NRcRd、-L-(CH2)m'OH、
【化４】
2019524705.tif 000006
から独立して選択される1、2、3、4または5つの置換基で所望により置換されていてもよく；ここで、
Lは、結合、-CH2-、-NHC(O)-、-C(O)NH-および-O-から選択されるが；但し、Lがヘテロサイクル中の窒素原子を介して親分子部分に結合している場合、Lは-CH2-であり；
m'は、1、2、3または4であるが；但し、m'が1である場合、Lは炭素原子を介して親分子部分に結合している結合であり；
tは、0、1、2または3であり；
zは、1、2または3であり；
各Rzは、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C4アルコキシカルボニルC1-C4アルキル、C1-C4アルキル、C1-C4アルキルアミド、C1-C4アルキルアミノ、C1-C4アルキルカルボニル、アミド、カルボキシ、カルボキシC1-C4アルキル、シアノ、ジ(C1-C4アルキル)アミド、ジ(C1-C4アルキル)アミノ、ハロ、ハロC1-C4アルコキシ、ハロC1-C4アルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシC1-C4アルキル、-NRcRd、(NRcRd)C1-C4アルキル、-NReRf、(NReRf)C1-C4アルキル、フェニルおよびフェニルC1-C4アルキルから独立して選択され；ここで、ReおよびRfは、それらが結合している原子と一緒になって、モルホリンおよび
【化５】
2019524705.tif 000007
から選択される環を形成しており；
RcおよびRdは、水素、C2-C4アルケニルカルボニル、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C6アルキル、C1-C4アルキルカルボニル、アミドC1-C4アルキル、アミノC1-C4アルキル、アリールC1-C4アルキル、C3-C10シクロアルキル、(C3-C10シクロアルキル)C1-C4アルキル、ハロC1-C4アルキルカルボニル、ヘテロアリールC1-C4アルキルおよびヒドロキシC1-C4アルキルから独立して選択され；ここで、該アミドC1-C4アルキル、該アミノC1-C4アルキル、該アリールC1-C4アルキル、該(C3-C10シクロアルキル)C1-C4アルキルおよび該ヘテロアリールC1-C4アルキルのアルキル部分は、カルボキシおよびヒドロキシから独立して選択される1または2つの基で所望により置換されていてもよく；ここで、該ヒドロキシC1-C4アルキルのアルキル部分は、カルボキシおよびヒドロキシから独立して選択される1または2つの基で所望により置換されていてもよく；および、ここで、該アリールC1-C4アルキルのアリール部分、該C3-C10シクロアルキル、該(C3-C10シクロアルキル)C1-C4アルキルのシクロアルキル部分および該ヘテロアリールC1-C4アルキルのヘテロアリール部分は、各々、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C4アルキルおよびハロから独立して選択される1、2または3つの基で所望により置換されていてもよい；
Qは、S、Oおよび-NRpから選択され；ここでRpは、水素、C1-C4アルキル、C1-C4アルキルアミドC1-C4アルキル、C1-C4アルキルアミノC1-C4アルキル、アミドC1-C4アルキル、アミノC1-C4アルキル、ジ(C1-C4アルキル)アミドC1-C4アルキル、ジ(C1-C4アルキル)アミノC1-C3アルキル、ヒドロキシC1-C4アルキル、ピリジニルおよびメトキシで所望により置換されていてもよいフェニルから選択されるが；但し、R2が
【化６】
2019524705.tif 000008
である場合、R5はフェニル以外である；および
R6は、水素であるか、またはR5およびR6が、それらに結合している原子と一緒になって5または6員不飽和環(窒素、酸素および硫黄から独立して選択される1または2個のヘテロ原子を含有する)を形成しており；ここで、該環は、C1-C3アルキル、シアノ、ホルミル、ハロ、ハロC1-C3アルキル、ヒドロキシ、オキソ、-L-(CH2)nNRcRd、-L-(CH2)nOHから独立して選択される1または2つの置換基で所望により置換されていてもよく；
各R3は、C2-C4アルケニル、C1-C4アルコキシ、C1-C4アルキル、シアノ、ハロおよびハロC1-C4アルキルから独立して選択され；および
R4は、-(CH2)pCHO、-(CH2)n'OHおよび-(CH2)n'NRqR8から選択され、ここで、
pは、0、1、2または3であり；
n'は、1、2、3または4であり；
Rqは、水素、C1-C4アルキルおよびベンジルから選択され；および
R8は、
【化７】
2019524705.tif 000009
から選択され；ここで、
sは、0、1または2であり；
zは、1、2または3であり；
Rjは、C1-C3アルキル、C1-C3アルキルスルホニルC1-C3アルキル、C1-C3アルキルスルホキシルC1-C3アルキルおよびC1-C3アルキルスルファニルC1-C3アルキルから選択される；
Rwは、-CO2Hまたは-CONH2であり、
R9は、水素、ベンジルおよびメチルから選択され；
各R9'は、水素、エチルおよびメチルから独立して選択され；
R10は、水素、C1-C3アルキルおよびベンジルから選択され；および
R11は、C2-C4アルケニルおよびC1-C4アルキルから選択されるか；または
R8およびRqは、それらに結合している窒素原子と一緒になって、
【化８】
2019524705.tif 000010
から選択される環を形成しており；ここで、
sは、0、1または2であり；
zは、1、2または3であり；
Q'は、CHR13'、S、O、-N(CH2)2OHおよびNCH3から選択され；
R12は、水素、-CO2H、ヒドロキシC1-C4アルキルおよび-C(O)NHSO2R16から選択され；ここで、R16は、トリフルオロメチル、シクロプロピル、C1-C4アルキル、ジメチルアミノ、4-メチルピペラジニルおよびメチル基で置換されたイミダゾリルから選択され；
R13は、水素、ヒドロキシC1-C4アルキルおよび-CO2Hから選択され；
R13'は、水素、ヒドロキシC1-C3アルキルおよび-CO2Hから選択され；および
R14は、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C3アルキル、カルボキシ、ハロ、ヒドロキシ、ヒドロキシC1-C4アルキルおよび-NRc'Rd'から選択され；ここで、Rc'およびRd'は、水素、C1-C4アルコキシカルボニルおよびC1-C4アルキルカルボニルから独立して選択される]
の化合物またはその医薬的に許容される塩を提供するものである。
【００２１】
第一態様の第一実施形態において、本開示内容は、R1が-(CH2)nArであり、式中、nが1であり、かつArがシアノで所望により置換されていてもよいピリジニルである式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩を提供するものである。
【００２２】
第一態様の第二実施形態において、本開示内容は、R1が-(CH2)nArであり、式中、nが1であり、かつArがシアノで所望により置換されていてもよいピリジニルであり；mが1であり；かつR3がハロである、式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩を提供するものである。
【００２３】
第三実施形態において、本開示内容は、
R1が-(CH2)nArであり(式中、nが1であり；Arがシアノで所望により置換されていてもよいピリジニルである)；
mが1であり；
R3がハロであり；
R2が、
【化９】
2019524705.tif 000011
から選択され、
式中、
Rnは水素であり；
Yはメチルであり；
R5は、フェニルであるか、あるいは単環式または二環式の不飽和ヘテロサイクル(5〜10個の原子を含有しており、該原子の1〜4個は、窒素、酸素および硫黄から独立して選択される)であり；該フェニル基および該単環式基または二環式基は、C1-C3アルキル、シアノ、ホルミル、ハロ、ハロC1-C3アルコキシ、ハロC1-C3アルキル、ヒドロキシ、オキソ、-L-(CH2)m'NRcRd、-L-(CH2)m'OH、
【化１０】
2019524705.tif 000012
から独立して選択される1、2または3つの置換基で所望により置換されていてもよく；ここで、
Lは、結合、-CH2-および-O-から選択され；
m'は、1、2、3または4であり；但し、m'が1である場合、Lは炭素原子を介して親分子部分に結合している結合である；
tは、0または1であり；
zは、2または3であり；
Rzは、ヒドロキシであり；
RcおよびRdは、各々メチルであり；および
R6は水素である、
式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩を提供するものである。
【００２４】
第一態様の第四実施形態において、本開示内容は、
R1が-(CH2)nArであり(式中、nが1であり；Arがシアノで所望により置換されていてもよいピリジニルである)；
mが1であり；
R3がハロであり；
R4が、-(CH2)pCHO、-(CH2)n'OHおよび-(CH2)n'NRqR8から選択され、
式中、
pは0であり；
n'は1であり；
Rqは水素であり；および
R8は、
【化１１】
2019524705.tif 000013
から選択され；ここで、
sは1であり；
zは2であり；
R9は、水素、ベンジルおよびメチルから選択され；
各R9'は、水素、エチルおよびメチルから独立して選択され；および
R10は、水素、C1-C3アルキルおよびベンジルから選択されるか；または、
R8およびRqは、それらに結合している窒素原子と一緒になって、
【化１２】
2019524705.tif 000014
である環を形成しており；ここで、
sは、0、1または2であり；
zは、1、2または3であり；
R14は、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C3アルキル、カルボキシおよびヒドロキシから選択される、式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩を提供するものである。
【００２５】
第二態様において、本開示内容は、式(I)：
【化１３】
2019524705.tif 000015
[式中、
mは1であり；
R1は-(CH2)nArであり；ここで、
nは、1であり、
Arは、シアノで所望により置換されていてもよいピリジニルであり；
R2は、
【化１４】
2019524705.tif 000016
から選択され、ここで、
Rnは水素であり；
YはC1-C3アルキルであり；
R5は、フェニルであるか、あるいは単環式または二環式の不飽和ヘテロサイクル(5〜10個の原子を含有しており、該原子の1〜4個は、窒素、酸素および硫黄から独立して選択される)であり；該フェニル基および該単環式基または二環式基は、C1-C3アルキル、シアノ、ホルミル、ハロ、ハロC1-C3アルコキシ、ハロC1-C3アルキル、ヒドロキシ、オキソ、-L-(CH2)m'NRcRd、-L-(CH2)m'OH、
【化１５】
2019524705.tif 000017
から独立して選択される1、2、3、4または5つの置換基で所望により置換されていてもよく；ここで、
Lは、結合、-CH2-および-O-から選択されるが；但し、Lがヘテロサイクル内の窒素原子を介して親分子部分に結合している場合、Lは-CH2-であり；
m'は、1、2、3または4であるが；但し、m'が1である場合、Lは炭素原子を介して親分子部分に結合している結合であり；
tは、0、1、2または3であり；
zは、1、2または3であり；
Rzはヒドロキシであり；
RcおよびRdは、C1-C6アルキルであるが；但し、R2が、
【化１６】
2019524705.tif 000018
である場合、R5はフェニル以外であり；
R6は水素であり；
R3はハロであり；および
R4は、-(CH2)pCHO、-(CH2)n'OHおよび-(CH2)n'NRqR8から選択され、ここで、
pは0であり；
n'は1であり；
Rqは水素であり；および
R8は、
【化１７】
2019524705.tif 000019
から選択され；ここで、
sは1であり；
zは2であり；
R9は、水素、ベンジルおよびメチルから選択される；
各R9'は、水素、エチルおよびメチルから独立して選択され；および
R10は、水素、C1-C3アルキルおよびベンジルから選択されるか；または
R8およびRqは、それらに結合している窒素原子と一緒になって、
【化１８】
2019524705.tif 000020
である環を形成しており；ここで、
sは1または2であり；
zは2または3であり；および
R14は、C1-C4アルコキシカルボニル、C1-C3アルキル、カルボキシ、ハロおよびヒドロキシから選択される、
化合物またはその医薬的に許容される塩を提供するものである。
【００２６】
第三態様において、本明細書は、式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩、および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００２７】
第四態様において、本明細書は、治療上有効な量の式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩を対象に投与することを特徴とする、それが必要な対象において、免疫応答を増強、刺激、調節および/または増加させる方法を提供する。第四態様の第一実施形態において、前記方法は、式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩の前、後または同時に投与することを更に特徴とする。第四態様の第二実施形態において、別の薬剤とは、抗菌剤、抗ウイルス剤、遺伝子発現修飾剤、細胞毒性剤および／または免疫応答修飾剤である。
【００２８】
第五態様において、本明細書は、治療上有効な量の式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩を対象に投与することを特徴とする、治療の必要のある対象における癌細胞の成長、増殖または転移を阻害する方法を提供する。第五態様の第一実施形態において、癌は、メラノーマ、腎臓細胞癌、扁平上皮性非小細胞肺癌(NSCLC)、非扁平上皮性NSCLC、結腸直腸癌、去勢抵抗性前立腺癌、卵巣癌、胃癌、肝細胞癌、膵臓癌、頭頸部の扁平上皮癌、食道癌、胃腸管系癌および乳癌、ならびに血液学的悪性腫瘍から選択される。
【００２９】
第六態様において、本明細書は、治療上有効な量の式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩を対象に投与することを特徴とする、治療の必要がある対象における感染症を治療する方法を提供する。第六態様の第一実施形態において、感染症は、ウイルスが原因である。第五態様の第二実施形態において、ウイルスは、HIV、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、D型肝炎、ヘルペスウイルス、パピローマウイルスおよびインフルエンザから選択される。
【００３０】
第七態様において、本明細書は、対象における敗血症ショックを治療する方法を提供するものであって、治療上有効な量の式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩を対象に投与することを特徴とする方法を提供する。
【００３１】
第八態様において、本明細書は、対象におけるPD-L1と、PD-1および／またはCD80との相互作用を遮断する方法を提供するものであって、前記方法は、治療上有効な量の式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩を対象に投与することを特徴とする。
【００３２】
本発明の特徴および利点は、以下の詳細な記載を読むことで、当業者によりさらに容易に理解され得る。別の実施態様との関連において、明確な理由を目的として、その前後に記載される本発明の特定の特徴も組み合わせて、一の実施態様を形成してもよいと理解されるべきである。反対に、単独の実施態様中に簡潔な根拠として記載された本発明の様々な特徴を組み合わせて、それらのサブコンビネーションを形成してもよい。本明細書において、例として特定された実施態様または好ましい実施態様は、例示目的であって限定するものではないことが意図される。
【００３３】
本明細書において他に特に記載のない限り、単数形の言及には複数の言及もまた含まれうる。例えば、「a」および「an」は、１かまたは１以上のいずれかを示しうる。
【００３４】
本明細書にて使用されるような、「化合物またはその医薬的に許容される塩」なる語は、少なくとも１つの化合物、その少なくとも１つの化合物の塩、またはそれらの組み合わせをいう。例えば、式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩は、式(I)の化合物；式(I)の2つの化合物；式(I)の化合物の塩；式(I)の化合物と1または複数の式(I)の化合物の塩；および2またはそれ以上の式(I)の化合物の塩を包含する。
【００３５】
別段の記載が無ければ、原子価が満たされていないいずれのヘテロ原子も、その原子価を満たすのに十分な水素原子を有すると考える。
【００３６】
本明細書の全体を通して、基およびそれらの置換基は、安定な部分および化合物を提供するように当業者により選択されうる。
【００３７】
本発明を説明するために用いられる様々な用語の定義を以下に記載する。これらの定義は、本明細書の全体を通して(それらが他に特定の場合に限定されない限り)、個別またはより大きな基の一部としてのいずれかで用いられる用語に適用される。本明細書に記載の定義は、引用により本明細書に援用されるいずれの特許、特許出願および/または特許出願公開に記載された定義よりも優先される。
【００３８】
本明細書において使用される用語「C2-C4アルケニル」は、1〜4個の炭素原子および1または2つの二重結合を含有する直鎖または分枝鎖の炭化水素から得られる基を言う。
【００３９】
本明細書において使用される用語「C2-C4アルケニルカルボニル」は、カルボニル基を介して親分子部分に結合したC2-C4アルケニル基を言う。
【００４０】
本明細書において使用される用語「C1-C4アルコキシ」は、酸素原子を介して親分子部分に結合したC1-C4アルキル基を言う。
【００４１】
本明細書において使用される用語「C1-C4アルコキシカルボニル」は、カルボニル基を介して親分子部分に結合したC1-C4アルコキシ基を言う。
【００４２】
本明細書において使用される用語「C1-C4アルコキシカルボニルC1-C4アルキル」は、C1-C4アルキル基を介して親分子部分に結合したC1-C4アルコキシカルボニル基をいう。
【００４３】
本明細書において使用される用語「C1-C4アルコキシカルボニルアミノ」は、-NH基を介して親分子部分に結合したC1-C4アルコキシカルボニル基をいう。
【００４４】
本明細書において使用される用語「C1-C3アルキル」は、1〜3個の炭素原子を含有する直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素から得られる基をいう。
【００４５】
本明細書において使用される用語「C1-C4アルキル」は、1〜4個の炭素原子を含有する直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素から得られる基を言う。
【００４６】
本明細書において使用される用語「C1-C6アルキル」は、1〜6個の炭素原子を含有する直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素から得られる基を言う。
【００４７】
本明細書において使用される用語「C1-C4アルキルアミド」は、-C(O)NHR(式中、RがC1-C4アルキル基である)を言う。
【００４８】
本明細書において使用される用語「C1-C4アルキルアミドC1-4アルキル」は、C1-C4アルキル基を介して親分子部分に結合したC1-C4アルキルアミド基をいう。
【００４９】
本明細書において使用される用語「C1-C4アルキルアミノ」は、-NHR(式中、RがC1-C4アルキル基である)を言う。
【００５０】
本明細書において使用される用語「C1-C4アルキルアミノC1-4アルキル」は、C1-C4アルキル基を介して親分子部分に結合したC1-C4アルキルアミノ基をいう。
【００５１】
本明細書において使用される用語「C1-C4アルキルカルボニル」は、カルボニル基を介して親分子部分に結合したC1-C4アルキル基を言う。
【００５２】
本明細書において使用される用語「C1-C3アルキルスルファニル」は、硫黄原子を介して親分子部分に結合したC1-C3アルキル基をいう。
【００５３】
本明細書において使用される用語「C1-C3アルキルスルファニルC1-C3アルキル」は、C1-C3アルキル基を介して親分子部分に結合したC1-C3アルキルスルファニルをいう。
【００５４】
本明細書において使用される用語「C1-C3アルキルスルホニル」は、スルホニル基を介して親分子部分に結合したC1-C4アルキル基をいう。
【００５５】
本明細書において使用される用語「C1-C4アルキルスルホニル」は、スルホニル基を介して親分子部分に結合したC1-C4アルキル基いう。
【００５６】
本明細書において使用される用語「C1-C3アルキルスルホニルC1-C3アルキル」は、C1-C3アルキル基を介して親分子部分に結合したC1-C3アルキルスルホニル基をいう。
【００５７】
本明細書において使用される用語「C1-C3アルキルスルホキシル」は、スルホキシル基を介して親分子部分に結合したC1-C3アルキル基をいう。
【００５８】
本明細書において使用される用語「C1-C3アルキルスルホキシルC1-C3アルキル」は、C1-C3アルキル基を介して親分子部分に結合したC1-C3アルキルスルホキシル基をいう。
本明細書において使用される用語「アミド」は、-C(O)NH2をいう。
【００５９】
本明細書において使用される用語「アミドC1-C4アルキル」は、C1-C4アルキル基を介して親分子部分に結合したアミド基をいう。
本明細書において使用される用語「アミノC1-C4アルキル」は、C1-C4アルキル基を介して親分子部分に結合したアミノ基をいう。
【００６０】
本明細書において使用される用語「アリール」は、フェニル基または二環式縮合環系(1つの環または両方の環がフェニル基である)をいう。二環式縮合環系は、4〜6員の芳香族または非芳香族炭素環式環に縮合されたフェニル基からなる。本発明のアリール基は、基中のあらゆる適切な炭素原子を介して親分子に結合され得る。アリール基の代表的な例は、インダニル、インデニル、ナフチル、フェニルおよびテトラヒドロナフチルを包含するが、これに限定するものではない。
【００６１】
本明細書において使用される用語「アリールC1-C4アルキル」は、C1-C4アルキル基を介して親分子部分に結合したアリール基である。
【００６２】
本明細書において使用される用語「カルボニル」は、-C(O)-をいう。
【００６３】
本明細書において使用される用語「カルボキシ」は、-CO2Hをいう。
【００６４】
本明細書において使用される用語「カルボキシC1-C4アルキル」は、C1-C4アルキル基を介して親分子部分に結合したカルボキシ基をいう。
【００６５】
本明細書において使用される用語「シアノ」は、-CNをいう。
【００６６】
本明細書において使用される用語「C3-C6シクロアルキル」は、3〜6個の炭素原子およびゼロ個のヘテロ原子を有する飽和単環式炭化水素環系をいう。 
【００６７】
本明細書において使用される用語「C3-C10シクロアルキル」は、3〜10個の炭素原子およびゼロ個のヘテロ原子を有する飽和単環式系、炭化水素環系をいう。
【００６８】
本明細書において使用される用語「(C3-C10シクロアルキル)C1-C4アルキル」は、C1-C4アルキル基を介して親分子部分に結合したC3-C10シクロアルキル基をいう。 
【００６９】
本明細書において使用される用語「ジ(C1-C4アルキル)アミド」は、RがC1-C4アルキル基である-C(O)NR2をいう。2つのR基は、同一であっても、または異なっていてもよい。
【００７０】
本明細書において使用される用語「ジ(C1-C4アルキル)アミドC1-C4アルキル」は、C1-C4アルキル基を介して親分子部分に結合したジ(C1-C4アルキル)アミド基をいう。
【００７１】
本明細書において使用される用語「ジ(C1-C4アルキル)アミノ」は、RがC1-C4アルキル基である-NR2をいう。2つのR基は、同一であっても、または異なっていてもよい。 
【００７２】
本明細書において使用される用語「ジ(C1-C4アルキル)アミノC1-C4アルキル」は、C1-C4アルキル基を介して親分子部分に結合したジ(C1-C4アルキル)アミノをいう。
【００７３】
本明細書において使用される用語「ジメチルアミノ」は、-N(CH3)2をいう。
【００７４】
本明細書において使用される用語「ホルミル」は、-C(O)Hをいう。
【００７５】
本明細書において使用される用語「ハロ」および「ハロゲン」は、F、Cl、BrまたはIをいう。
【００７６】
本明細書において使用される用語「ハロC1-C3アルキル」は、1、2または3つのハロゲン原子で置換されたC1-C3アルキル基をいう。
【００７７】
本明細書において使用される用語「ハロC1-C4アルコキシ」は、酸素原子を介して親分子部分に結合したハロC1-C4アルキル基をいう。
【００７８】
本明細書において使用される用語「ハロC1-C4アルキル」は、1、2または3つのハロゲン原子で置換されたC1-C4アルキル基をいう。
【００７９】
本明細書において使用される用語「ハロC1-C4アルキルカルボニル」は、カルボニル基を介して親分子部分に結合したハロC1-C4アルキル基をいう。
【００８０】
本明細書において使用される用語「ヘテロアリール」は、窒素、酸素および硫黄から独立して選択された1、2または3個のヘテロ原子を含有する5または6員の芳香族環をいう。用語「ヘテロアリール」には、ヘテロアリール環が、別の単環式ヘテロアリール基またはフェニル基と縮合されている二環式基も包含される。
【００８１】
本明細書において使用される用語「ヘテロアリールC1-C4アルキル」は、C1-C4アルキル基を介して親分子部分に結合したヘテロアリール基をいう。
【００８２】
本明細書において使用される用語「ヒドロキシ」は、-OHをいう。 
【００８３】
本明細書において使用される用語「ヒドロキシC1-C4アルキル」は、C1-C4アルキル基を介して親分子部分に結合したヒドロキシ基をいう。 
【００８４】
本明細書において使用される用語「(NRcRd)C1-C4アルキル」は、C1-C4アルキル基を介して親分子部分に結合したNRcRd基をいう。 
【００８５】
本明細書において使用される用語「(NReRf)C1-C4アルキル」は、C1-C4アルキル基を介して親分子部分に結合したNRcRd基をいう。 
【００８６】
本明細書において使用される用語「ニトロ」は、-NO2をいう。 
【００８７】
本明細書において使用される用語「オキソ」は、=Oをいう。 
本明細書において使用される用語「フェニルC1-C4アルキル」は、C1-C4アルキル基を介して親分子部分に結合したフェニル基をいう。
【００８８】
本明細書において使用される用語「フェニルカルボニル」は、カルボニル基を介して親分子部分に結合したフェニル基をいう。
【００８９】
本明細書において使用される用語「フェニルオキシ」は、酸素原子を介して親分子部分に結合したフェニル基をいう。
【００９０】
本明細書において使用される用語「スルホニル」は、-SO2-をいう。
【００９１】
本明細書において使用される用語「スルホキシl」は、-SO-をいう。
【００９２】
本明細書で用いる用語「医薬的に許容される」とは、適切な医学的判断の範囲内で、妥当な利益/リスク比に見合って、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応または別の問題が無いか、あるいは合併症を伴わずにヒトおよび動物の組織に接触して用いるのに適している、化合物、物質、組成物および/または剤形を意味する。
【００９３】
式Iの化合物は、本発明の範囲内にある塩を形成し得る。別段の記載が無い限り、本願化合物に関する言及は、1以上のその塩に関する参照を包含すると理解される。用語「塩」は、無機および／または有機酸および塩基と形成される酸性塩および／または塩基性塩を意味する。さらに、用語「塩」は、例えば、式(I)の化合物が、塩基性部分(例えば、アミンまたはピリジンもしくはイミダゾール環)および酸性部分(例えばカルボン酸)の両方を含有する場合には、両性イオン(内塩)を含みうる。医薬的に許容される(すなわち、無毒性で生理学的に許容される)塩は、例えば、カチオンが塩の毒性または生物活性に大きく関与しない許容される金属塩およびアミン塩などが好ましい。しかしながら、他の塩は、例えば、製造中に用いることができる単離または精製工程において有用であり得るので、本発明の範囲であると考えられる。式(I)の化合物の塩は、例えば、媒体(例えば、塩を沈殿させるもの)または水性媒質中で、式(I)の化合物を、ある量の(例えば、同量の)酸または塩基と反応させて、その後凍結乾燥させることにより形成されうる。
【００９４】
酸付加塩の例として、酢酸塩(例えば、酢酸またはトリハロ酢酸、例えばトリフルオロ酢酸と形成されるもの)、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩(camphorate)、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩(塩酸と形成される塩)、臭化水素酸塩(臭化水素と形成される塩)、ヨウ化水素酸塩、マレイン酸塩(マレイン酸と形成される塩)、2-ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩(メタンスルホン酸と形成される塩)、2-ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、3-フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩(例えば、硫酸と形成されるもの)、スルホン酸塩(例えば、本明細書に記載のもの)、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、例えばトシル酸塩、ウンデカン酸塩などが挙げられる。
【００９５】
塩基性付加塩の例として、アンモニウム塩、アルカリ金属塩、例えばナトリウム塩、リチウム塩、およびカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばカルシウム塩およびマグネシウム塩；バリウム塩、亜鉛塩およびアルミニウム塩；有機塩基(例えば、有機アミン)、例えばトリアルキルアミン、例えばトリエチルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、N-ベンジル-β-フェネチルアミン、1-エフェナミン、N,N'-ジベンジルエチレン-ジアミン、デヒドロアビエチルアミン、N-エチルピペリジン、ベンジルアミン、ジシクロヘキシルアミンまたは同様の医薬的に許容されるアミン類との塩ならびにアミノ酸(例えば、アルギニン、リジンなど)との塩が挙げられる。塩基性窒素含有基は、物質、例えば、ハロゲン化低級アルキル(例えば、メチル、エチル、プロピルおよびブチルの塩化物、臭化物およびヨウ化物)、硫酸ジアルキル(例えば、硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ブチル、および硫酸ジアミル)、長鎖ハロゲン化物(例えば、デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルの塩化物、臭化物およびヨウ化物)、ハロゲン化アラルキル(例えば、臭化ベンジルおよびフェネチル)などで四級化されうる。好ましい塩には、一塩酸塩、硫酸水素塩、メタンスルホン酸塩、リン酸塩または硝酸塩が含まれる。
【００９６】
様々な形態のプロドラッグが当分野において周知であり、以下：
a)The Practice of Medicinal Chemistry, Camille G. Wermuth et al., Ch 31,(Academic Press, 1996);
b)Design of Prodrugs, edited by H. Bundgaard,(Elsevier, 1985)；
c)A Textbook of Drug Design and Development, P. Krogsgaard-Larson and H. Bundgaard, eds. Ch 5, pgs 113-191(Harwood Academic Publishers, 1991)；および
d)Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Bernard Testa and Joachim M. Mayer,(Wiley-VCH, 2003)
に記載されている。
【００９７】
加えて、式(I)の化合物は、製造後に単離および精製して、重量で99％以上の式(I)の化合物(「実質的に純粋な」)を含む組成物を得て、次いでそれを本明細書に記載のとおりに用いるかまたは製剤化され得る。そのような「実質的に純粋な」式(I)の化合物も、本発明の一部として本明細書に含まれる。
【００９８】
「安定な化合物」および「安定な構造」とは、反応混合物から有用な純度への単離、および有効な治療薬への製剤化に耐えるのに十分強い化合物を示すことを意図する。本発明は安定な化合物を具体化するものと意図される。
【００９９】
「治療上有効な量」は、PD-1/PD-L1タンパク質/タンパク質および／またはCD80/PD-L1 タンパク質/タンパク質の相互作用物を阻害するのに有効な、あるいは癌または感染症、例えばHIVまたはB型肝炎、C型肝炎およびD型肝炎を治療または予防するのに有効な、本発明の化合物単独の量か、特許請求された化合物を組み合わせた量か、あるいは他の活性成分と組み合わされた本発明の化合物の量を包含することを意図する。
【０１００】
本明細書で用いる「治療する」または「治療」には、哺乳動物、とりわけヒトにおける疾患状態の治療が含まれ、ならびに：(a) 哺乳動物での疾患状態が生じるのを予防すること、特に哺乳動物が疾患状態に罹りやすいが、まだ罹患していると診断されていない場合における予防;(b)疾患状態の抑制、すなわち、その進行を抑止すること;および/または(c)疾患状態を軽減すること、すなわち、疾患状態の退行をもたらすこと、が含まれる。
【０１０１】
本発明の化合物とは、本発明の化合物に出現する原子の全ての同位体を含むことを意図する。同位体には、原子番号が同一であるが質量数が異なる原子が含まれる。一般的な例として、限定されることなく、水素の同位体にはジュウテリウム(D)およびトリチウム(T)が含まれる。炭素の同位体としては13Cおよび14Cが挙げられる。同位体で標識された本発明の化合物は、一般に、当業者に公知の通常の技法によるか、または本明細書に記載されたものと類似した方法によって、他で用いられる非標識試薬の代わりに適切な同位体-標識試薬を用いて製造することができる。例えば、メチル(-CH3)は、重水素化メチル基、例えば-CD3を包含する。
【０１０２】
式(I)で示される化合物および／またはその医薬的に許容される塩は、治療される症状に適する任意の手段により投与され得るが、これは部位特異的治療の必要性に応じて、あるいは送達される式(I)の化合物の量に応じて変化し得る。また、本発明には、式(I)の化合物またはその医薬的に許容される塩;ならびに1つ以上の無毒の医薬的に許容される担体および/または希釈剤および/またはアジュバント(本明細書においてまとめて「担体」物質と称される)、さらに、必要に応じて他の活性成分を含有する医薬組成物の類が包含される。該式(I)の化合物は、いずれの適切な経路によっても、好ましくはそのような経路に適応した医薬組成物の形態で、目的の処置に対して有効な量で投与されうる。本発明の化合物および組成物は、例えば、通常の医薬的に許容される担体、アジュバントおよびビヒクルを含む用量単位剤形で、経口、粘膜、直腸または非経口(parentally)(血管内、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、および胸骨内を含む)で投与されてもよい。例えば、該医薬担体は、マンニトールもしくはラクトースおよび微結晶セルロースの混合物を含んでよい。該混合物は、別の成分、例えば、滑沢剤(例えば、ステアリン酸マグネシウム)および崩壊剤(例えばクロスポビドン)を含んでもよい。該担体混合物は、ゼラチンカプセルに詰められるか、または錠剤として圧縮されてもよい。該医薬組成物は、例えば、経口剤形または点滴として投与されてもよい。
【０１０３】
経口投与の場合、該医薬組成物は、例えば、錠剤、カプセル剤、液体カプセル剤、懸濁剤または液剤の形態であってもよい。該医薬組成物は、好ましくは、特定の量の活性成分を含む用量単位の形態で製造される。例えば、該医薬組成物は、約0.1〜1000 mg、好ましくは約0.25〜250 mg、およびさらに好ましくは約0.5〜100 mgの範囲の量の活性成分を含有する錠剤またはカプセル剤として提供されてもよい。ヒトまたは他の哺乳動物に対する適切な1日用量は、患者の症状および他の因子に応じて幅広く変化させてもよいが、ルーチンな方法を用いて決定することができる。
【０１０４】
本明細書において意図されるいずれの医薬組成物も、例えば、あらゆる許容可能で適切な経口製剤によって経口で送達され得る。経口製剤の例としては、限定はされないが、例えば、錠剤、トローチ剤、ドロップ剤(lozenge)、水性もしくは油性懸濁剤、分散性粉末剤もしくは顆粒剤、エマルジョン剤、硬もしくは軟カプセル剤、液体カプセル剤、シロップ剤およびエリキシル剤が挙げられる。経口投与用の医薬組成物は、経口投与用の医薬組成物の製造において当業者に公知のいずれの方法に拠っても製造され得る。医薬的に服用しやすい(palatable)製剤を提供するために、本発明による医薬組成物は、甘味剤、香味剤、着色剤、粘滑剤、抗酸化剤または保存剤から選択される少なくとも1つの剤を含み得る。
【０１０５】
錠剤は、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物および／または少なくとも1つのその医薬的に許容される塩と錠剤の製造に適した少なくとも1つの無毒の医薬的に許容される賦形剤を混合することによって製造され得る。賦形剤の例としては、限定はされないが、例えば、不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、およびリン酸ナトリウムなど；造粒剤および崩壊剤、例えば、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、コーンスターチおよびアルギン酸など;結合剤、例えば、デンプン、ゼラチン、ポリビニル-ピロリドンおよびアラビアゴム(acacia)など;ならびに、滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸およびタルクなどが挙げられる。加えて、錠剤は、コーティングされないか、あるいは不快な味の薬剤の嫌な味をマスクするか、または消化管での活性成分の崩壊および吸収を遅延させることによって活性成分の効果を長時間持続させるために公知の技法によってコーティングされてもよい。水溶性矯味物質の例としては、限定はされないが、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロースが挙げられる。時間遅延物質(time delay material)の例としては、限定はされないが、エチルセルロースおよび酢酸酪酸セルロースが挙げられる。
【０１０６】
硬ゼラチンカプセル剤は、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物および／または少なくとも1つのその医薬的に許容される塩と少なくとも1つの不活性固体希釈剤(例えば炭酸カルシウム;リン酸カルシウム;およびカオリンなど)を混合することによって製造され得る。
【０１０７】
軟ゼラチンカプセル剤は、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物および／または少なくとも1つのその医薬的に許容される塩を、少なくとも1つの水溶性担体(例えば、ポリエチレングリコールなど);および少なくとも1つの油性媒体(例えば、ラッカセイ油、流動パラフィンおよびオリーブ油など)と混合することによって製造され得る。
【０１０８】
水性懸濁剤は、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物および／または少なくとも1つのその医薬的に許容される塩を水性懸濁剤の製造に適した少なくとも1つの賦形剤と混合することによって製造され得る。水性懸濁剤の製造に適した賦形剤の例としては、限定はされないが、例えば、懸濁化剤(例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム(gum tragacanth)、およびアカシアガムなど);崩壊剤または湿潤剤(例えば、天然のリン脂質(例えば、レシチン)など);アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物(例えば、ポリオキシエチレンステアレートなど);エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物(例えば、ヘプタデカエチレン-オキシセタノール(oxycetanol)など);エチレンオキシドと部分エステル(脂肪酸およびヘキシトールに由来)との縮合生成物(例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエートなど);および、エチレンオキシドと部分エステル(脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来)との縮合生成物(例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエートなど)が挙げられる。水性懸濁剤はまた、少なくとも1つの保存剤(例えば、p-ヒドロキシ安息香酸エチルおよびp-ヒドロキシ安息香酸n-プロピルなど);少なくとも1つの着色剤;少なくとも1つの香味剤;および/または、少なくとも1つの甘味剤(限定はされないが、例えば、スクロース、サッカリン、およびアスパルテーム)を含むことができる。
【０１０９】
油性懸濁剤は、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物および／または少なくとも1つのその医薬的に許容される塩を、植物油(例えば、ラッカセイ油;オリーブ油;ゴマ油;およびヤシ油など);または鉱物油(例えば、流動パラフィンなど)のいずれかの中に懸濁させることによって製造することができる。油性懸濁剤はまた、少なくとも1つの増粘剤、例えば、蜜ロウ;固形パラフィン;およびセチルアルコールなどを含むことができる。風味のよい(palatable)油性懸濁剤を提供するために、すでに上述した甘味剤のうちの少なくとも1つ、および/または少なくとも1つの香味剤を、該油性懸濁剤に加えることができる。油性懸濁剤はさらに、限定はされないが、例えば、抗酸化剤(例えば、ブチルヒドロキシアニソール、およびα-トコフェロールなど)を含めた少なくとも1つの保存剤を含むことができる。
【０１１０】
分散性散剤および顆粒剤を、例えば、少なくとも1つの式(I)の化合物および／または少なくとも1つのその医薬的に許容される塩と、少なくとも1つの分散剤および/または湿潤剤;少なくとも1つの懸濁化剤;ならびに/あるいは少なくとも1つの保存剤とを混合することによって製造することができる。適切な分散剤、湿潤剤および懸濁化剤は、すでに上述したものである。保存剤の例としては、限定はされないが、例えば、抗酸化剤(例えば、アスコルビン酸)が挙げられる。加えて、分散性散剤および顆粒剤はまた、少なくとも1つの賦形剤(限定はされないが、例えば、甘味剤;香味剤;および着色剤)を含むことができる。
【０１１１】
少なくとも1つの式(I)の化合物および／または少なくとも1つのその医薬的に許容される塩の乳剤は、例えば、水中油型乳剤として製造され得る。式(I)の化合物を含有する乳剤の油性相は、公知の方法で公知の成分から構成されうる。該油相は、限定はされないが、例えば、植物油(例えば、オリーブ油およびラッカセイ油など);鉱物油(例えば、流動パラフィンなど);およびそれらの混合物によって製造され得る。該相は、単に乳化剤のみを含有してもよいが、少なくとも1つの乳化剤と脂肪もしくは油または脂肪と油の両者との混合物を含有してもよい。適切な乳化剤としては、限定はされないが、例えば、天然のリン脂質(例えば、大豆レシチン);脂肪酸およびヘキシトール無水物由来のエステルまたは部分エステル(例えば、ソルビタンモノオレエートなど);および部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物(例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなど)が挙げられる。好ましくは、親水性乳化剤は、安定剤として作用する親油性乳化剤を一緒に含まれる。また、油および脂肪の両方が含まれることが好ましい。安定剤の有無にかかわらず、乳化剤はいわゆる乳化ワックスを形成し、該ワックスは油および脂肪と一緒に、クリーム製剤の油性分散相を形成するいわゆる乳化軟膏基剤を形成する。乳剤はまた、甘味剤、香味剤、保存剤、および/または抗酸化剤を含むこともできる。本発明の製剤における使用に適切な乳化剤および乳化安定剤には、Tween 60、Span 80、セトステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、グリセリルモノステアレート、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリルジステアレートが、単独で、またはワックスもしくは当分野で周知の他の物質と共に含まれる。
【０１１２】
式(I)の化合物および／または少なくとも1つのその医薬的に許容される塩はまた、例えば、静脈内、皮下および/または筋肉内に、いずれの医薬的に許容される適切な注射可能な形態によっても投与され得る。注射可能な形態の例としては、限定はされないが、例えば、許容可能なビヒクルおよび溶媒(例えば、水、リンガー液および生理食塩水など)を含有する無菌の水溶液;無菌の水中油型マイクロエマルション;および水性もしくは油性の懸濁液が挙げられる。
【０１１３】
非経口投与用の製剤は、水性または非水性の等張で無菌の注射液剤または懸濁剤の形態であってもよい。これらの液剤および懸濁剤は、無菌の粉末または顆粒から、経口投与用の製剤での使用において言及した担体または希釈剤のうちの1つ以上を用いて、他の適切な分散剤もしくは湿潤剤および懸濁化剤を用いることによって、製造されうる。該化合物は、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、トウモロコシ油、綿実油、ラッカセイ油、ゴマ油、ベンジルアルコール、塩化ナトリウム、トラガカントガム(tragacanth gum)、および/または様々な緩衝剤中に溶解されうる。他のアジュバントおよび投与様式が、製薬分野において広く周知である。また、該活性成分を、適切な担体(生理食塩水、ブドウ糖(dextrose)または水を含む)との組成物、あるいはシクロデキストリン(すなわち、Captisol)、共溶媒可溶化剤(すなわち、プロピレングリコール)またはミセル可溶化剤(すなわち、Tween 80)との組成物として、注射により投与してもよい。
【０１１４】
無菌の注射製剤は、無毒の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の無菌の注射可能な溶液または懸濁液(例えば、1,3-ブタンジオール中の溶液)であってもよい。許容されるビヒクルおよび溶媒の中で用いてもよいものは、水、リンガー液、および生理食塩水である。加えて、無菌の固定油が、溶媒または懸濁化媒質として通常用いられる。この目的のために、いずれの刺激の少ない固定油(合成モノ-またはジグリセリドが含まれる)を用いてもよい。さらに、脂肪酸(例えば、オレイン酸など)が注射剤の製造で用いられる。
【０１１５】
無菌の注射可能な水中油型マイクロエマルションは、例えば、1)少なくとも1つの式(I)の化合物を油性相(例えば、大豆油およびレシチンの混合物など)中に溶解させること;2)油相を含む式(I)を水とグリセロールの混合物と合わせること;そして、3)該混合物(combination)を処理してマイクロエマルションを形成させることによって製造され得る。
【０１１６】
無菌の水性もしくは油性の懸濁剤は、当分野で既に公知の方法に従って製造され得る。例えば、無菌の水性の液剤または懸濁剤は、無毒の非経口的に許容される希釈剤または溶媒(例えば、1,3-ブタンジオールなど)を用いて製造され得て;無菌の油性の懸濁剤は、無菌で無毒の許容される溶媒または懸濁化媒質(例えば、無菌の固定油(例えば、合成モノ-またはジグリセリド);および脂肪酸(例えばオレイン酸など)など)を用いて製造され得る。
【０１１７】
本発明の医薬組成物で使用してもよい医薬的に許容される担体、アジュバント、およびビヒクルとしては、限定はされないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、自己乳化型ドラッグデリバリーシステム(SEDDS)(例えば、d-α-トコフェロールポリエチレングリコール 1000 コハク酸塩)、医薬剤形で用いる界面活性剤(例えば、Tween、クレモフォール界面活性剤(BASF)を含むポリエトキシ(polyethoxylated)ヒマシ油、または他の同様のポリマーデリバリーマトリックス)、血清タンパク質(例えばヒト血清アルブミン)、緩衝物質(例えば、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム)、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質(例えば、プロタミン硫酸塩、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸塩、ワックス、ポリエチレン-ポリオキシプロピレン-ブロック重合体、ポリエチレングリコール)および羊毛脂が挙げられる。シクロデキストリン(例えば、α-、β-、およびγ-シクロデキストリン)または化学修飾誘導体(例えば、2-および3-ヒドロキシプロピル-シクロデキストリンを含むヒドロキシアルキルシクロデキストリン)、あるいは他の可溶化誘導体もまた、本明細書に記載の式の化合物の送達を高めるために有利に用いられ得る。
【０１１８】
本発明の医薬的に活性な化合物は、ヒトおよび他の哺乳動物を含む患者に投与するための薬剤を製造する薬学の通常の方法に従って加工され得る。該医薬組成物は、通常の製薬工程(例えば、滅菌)で処理されてよく、ならびに/あるいは通常のアジュバント(例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤など)を含んでもよい。加えて、錠剤および丸薬は、腸溶コーティングを用いて製造され得る。そのような組成物はまた、アジュバント(例えば、湿潤剤、甘味剤、香味剤、および芳香剤)を含有してもよい。
【０１１９】
投与する化合物の量、ならびに本発明の化合物および/または組成物を用いた疾患状態の治療のための投与レジメンは、対象の年齢、体重、性別および病状、疾患の種類、疾患の重篤性、投与経路および投与頻度、ならびに用いる特定の化合物を含む様々な因子に依存する。従って、該投与レジメンは大きく変化させてもよいが、標準的な方法を用いてルーチン的に決定することができる。1日用量は、約0.001〜約100 mg/kg体重、好ましくは約0.0025〜50 mg/kg体重、最も好ましくは約0.005〜10 mg/kg体重が適切でありうる。1日用量を、1日あたり1〜4回で投与することができる。他の投与計画は、週に1回、および2日に1回の投与のサイクルを包含する。
【０１２０】
治療目的で、本発明の活性化合物は、通常、指定された投与経路に適する1つ以上のアジュバントと組み合わされる。経口投与の場合、該化合物を、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、セルロースアルキルエステル、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウム塩およびカルシウム塩、ゼラチン、アカシアガム、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドンおよび/またはポリビニルアルコールと混合した後、投与しやすいように錠剤化するかまたはカプセルに包んでもよい。そのようなカプセルまたは錠剤には、ヒドロキシプロピルメチルセルロース中に活性化合物が分散した状態で提供することができるような、徐放性製剤が含まれうる。
【０１２１】
本発明の医薬組成物は、少なくとも1つの式(I)の化合物および/または少なくとも1つのその医薬的に許容される塩、ならびに、適宜、いずれかの医薬的に許容される担体、アジュバント、またはビヒクルから選択されるさらなる物質(agent)を含有する。本発明の別の組成物は、本明細書に記載の式(I)の化合物またはそのプロドラッグ、ならびに医薬的に許容される担体、アジュバントまたはビヒクルを含有する。
【０１２２】
本発明の化合物は、PD-1／PD-L1タンパク質／タンパク質の相互作用を阻害して、PD-L1の遮断をもたらす。PD-L1の遮断により、ヒトを含む哺乳動物における癌細胞および感染性疾患に対する免疫応答が増強され得る。
【０１２３】
一態様において、本発明は、インビボにおける対象の治療であって、癌性腫瘍の成長が阻害されるように、式(I)の化合物またはその塩を用いて治療することに関する。式(I)の化合物またはその塩は、癌性腫瘍の増殖を阻害するのに、単独で使用されてもよい。あるいはまた、式(I)の化合物またはその塩は、下記に示されるような、他の免疫原性剤または標準的な癌治療剤と合わせて使用されてもよい。
【０１２４】
一の実施態様にて、本発明は、対象における腫瘍細胞の成長を阻害する方法であって、治療上有効な量の式(I)の化合物またはその塩を該対象に投与することを特徴とする、方法を提供する。
【０１２５】
一の実施態様にて、癌を治療する方法であって、その治療を必要とする患者に、治療上有効な量の式(I)の化合物またはその塩を投与することを含む方法が提供される。癌の例としては、本発明の化合物を用いてその成長が阻害され得る疾患が含まれ、典型的には、免疫療法に応答する癌を包含する。限定するものではないが、治療するのに好ましい癌の例として、黒色腫(例、転移性悪性黒色腫)、腎癌(例、明細胞癌)、前立腺癌(例、ホルモン不応性前立腺腺癌)、乳癌、大腸癌および肺癌(例、非小細胞性肺癌)が挙げられる。さらに、本発明は、本発明の化合物を用いてその成長が阻害され得る、難治性または再発性悪性腫瘍を包含する。
【０１２６】
本発明の方法を用いて治療することのできる他の癌の例として、骨肉腫、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、頚癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性または急性白血病(急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病を含む)、小児充実性腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または尿道癌、腎盂癌、中枢神経系(CNS)腫瘍、原発性CNSリンパ腫、腫瘍血管形成、脊髄軸腫瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、扁平上皮癌、有棘細胞癌、T細胞リンパ腫、環境誘発性癌(アスベストにより誘発される癌を含む)およびこれら癌の組み合わせが挙げられる。本発明は、転移癌、特にPD-L1を発現する転移癌を治療するのにも有用である(Iwaiら、(2005)Int. Immunol. 17：133-144)。
【０１２７】
所望により、式(I)の化合物またはその塩は、他の免疫原性剤、例えば癌細胞、精製された腫瘍抗原(組換えタンパク質、ペプチドおよび炭水化物分子を含む)、細胞および免疫刺激性サイトカイン類をコードする遺伝子でトランスフェクトされた細胞などと組み合わせてもよい(Heら(2004)J. Immunol. 173：4919-28)。限定するものではないが、使用可能な腫瘍ワクチンの例として、黒色腫抗原のペプチド、例えば、gp100のペプチド、MAGE抗原、Trp-2、MART1および／またはチロシナーゼ、またはサイトカインGM-CSFを発現するようにトランスフェクトされた腫瘍細胞が挙げられる。ヒトでは、黒色腫などのある種の腫瘍は、免疫原性であることが明らかにされた。PD-L1を遮断することでT細胞活性化の閾値を上げることにより、腫瘍応答が宿主にて活性されることが期待されると考えられる。
【０１２８】
PD-L1遮断はワクチン接種のプロトコルと組み合わせることができる。腫瘍に対して多数の実験的なワクチン接種方法が考案されてきた(Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring：60-62；Logothetis, C., 2000, ASCO Educational Book Spring：300-302；Khayat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring：414-428；Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring：730-738を参照のこと；さらにまたRestifo, N.およびSznol, M., Cancer Vaccines, Ch. 61, pp.3023-3043 in DeVita, V.ら(編), 1997, Cancer：Principles and Practice of Oncology. 第5版を参照のこと)。これらの方法の一つにおいて、自己または同種腫瘍細胞を用いてワクチンが調製される。これらの細胞ワクチンは、腫瘍細胞を形質導入してGM-CSFを発現させると、最も効果的であることが分かった。GM-CSFは腫瘍ワクチンのための抗原提示の強力なアクチベーターであることが分かった(Dranoffら(1993)Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90：3539-43)。
【０１２９】
種々の腫瘍において遺伝子発現および大規模な遺伝子発現パターンの実験を行うことにより、いわゆる腫瘍特異的抗原を定義するに至った(Rosenberg, S A(1999)Immunity 10：281-7)。多くの場合、これらの腫瘍特異的抗原は、腫瘍細胞において、および腫瘍が生じる細胞において発現される分化抗原、例えば、メラニン細胞抗原gp100、MAGE抗原およびTrp-2である。さらに重要なことは、これらの抗原の多くが、宿主において見出される腫瘍特異的T細胞の標的であることが明らかにされ得たことである。腫瘍において発現された組換えタンパク質および／またはペプチドに対して免疫応答を惹起させるために、PD-1遮断をそれらのタンパク質のコレクションと併用してもよい。これらのタンパク質は、通常は免疫系により自己抗原と見なされるため、それらに対して耐性がある。腫瘍抗原はまた、タンパク質テロメラーゼを含んでもよく、テロメラーゼは染色体のテロメアの合成に必要とされ、ヒトの癌の85％以上で発現され、かつ限定数の体細胞組織のみにおいて発現している(Kim, Nら、(1994)Science 266：2011-2013)。(これらの体細胞組織は種々の手段により免疫攻撃から保護され得る)。腫瘍抗原は、タンパク質の配列を改変するか、無関係の2つの配列の間で融合タンパク質(すなわち、フィラデルフィア染色体におけるbcr-abl)またはＢ細胞腫瘍から由来のイディオタイプを創造する体細胞変異を理由とする癌細胞にて発現される「ネオ抗原」であってもよい。
【０１３０】
他の腫瘍ワクチンは、ヒトパピローマウイルス(HPV)、肝炎ウイルス(HBV、HDVおよびHCV)およびカポジ肉腫関連ヘルペスウイルス(Kappsis Herpes Sarcoma Virus(KHSV))などのヒトの癌に関連するウイルスからのタンパク質を含んでもよい。PD-L1遮断と一緒に使用されてもよい別の形態の腫瘍特異的抗原は、腫瘍組織それ自体から単離されたヒートショックタンパク質(HSP)の精製物である。これらのヒートショックタンパク質は腫瘍細胞からのタンパク質の断片を含有しており、これらのHSPは、腫瘍免疫を惹起するために抗原提示細胞へと極めて効率的に送達される(Sout, R & Srivastava, P(1995)Science 269：1585-1588；Tamura, Y.ら(1997)Science 278：117-120)。
【０１３１】
樹状細胞(DC)は、抗原特異的応答を刺激するのに使用できる強力な抗原提示細胞である。DCはエクスビボにて産生でき、種々のタンパク質およびペプチド抗原ならびに腫瘍細胞抽出物を担持できる(Nestle, F.ら(1998)Nature Medicine 4：328-332)。DCはまた、これらの腫瘍抗原を同様に発現するように、遺伝的手段によっても形質導入され得る。DCは、免疫化の目的で腫瘍細胞に直接融合されてもいる(Kugler, A.ら(2000)Nature Medicine 6：332-336)。ワクチン接種の方法として、DCのワクチン接種をPD-1遮断と効果的に組み合わせて、より強力な抗腫瘍応答を作動させることができる。
【０１３２】
PD-L1遮断を、標準的がん治療と組み合わせることができる。PD-L1遮断は、化学療法レジメンと効果的に組み合わせてもよい。これらの場合には、投与される化学療法剤の用量を減らすことが可能である(Mokyr, M.ら(1998)Cancer Research 58：5301-5304)。かかる組み合わせの一例は、本発明の化合物と黒色腫の治療用のダカルバジンとの組み合わせである。そのような組み合わせの別の例は、本発明の化合物を、黒色腫の治療用のインターロイキン-2(IL-2)と組み合わせることである。PD-L1の遮断と化学療法とを併用することの背後にある科学的論拠は、多くの化学療法化合物の細胞傷害性作用の結果である細胞死が抗原提示経路において高レベルの腫瘍抗原をもたらすことである。細胞死を通してPD-L1遮断と相乗作用をもたらす可能性のある他の組み合わせ治療は、放射線治療、手術およびホルモン枯渇療法である。これらの各プロトコルは、腫瘍抗原の供給源を宿主中に作り出す。血管形成阻害剤をPD-L1遮断と組み合わせてもよい。血管形成の阻害により、腫瘍細胞死をもたらし、宿主抗原提示経路に腫瘍抗原を供給することができる。
【０１３３】
本発明の化合物はまた、FcアルファまたはFcガンマ受容体発現エフェクター細胞を腫瘍細胞の標的とさせる、二重特異性化合物と組み合わせて使用され得る(例えば、米国特許第5,922,845号および第5,837,243号を参照のこと)。二重特異性化合物は、２つの別個の抗原を標的とするのに使用され得る。例えば、抗Fc受容体／抗腫瘍抗原(例、Her-2/neu)の二重特異性化合物を用いて、マクロファージを腫瘍部位に向かわせる。この標的設定は、腫瘍特異的応答をさらに効果的に活性化し得る。これらの応答のT細胞アーム(T cell arm)は、PD-1遮断を使用することにより増大される。あるいは、腫瘍細胞と結合する二重特異性化合物および樹状細胞特異的細胞表面マーカーを用いることにより抗原をDCに直接送達してもよい。
【０１３４】
腫瘍は、多種多様な作用機序により宿主の免疫監視機構を回避する。これらの作用機序の多くは、腫瘍により発現され、かつ免疫抑制的であるタンパク質を不活化することにより解消され得る。これらには、特にTGF-β(Kehrl, J.ら(1986)J. Exp. Med. 163：1037-1050)、IL-10(Howard, M. & O Garra, A.(1992)Immunology Today 13：198-200)およびFasリガンド(Hahne, M.ら(1996)Science 274：1363-1365)が挙げられる。これらの各タンパク質に結合し、かつ遮断する阻害剤を、本発明の化合物と組み合わせて用いて、免疫抑制物質の作用を減弱させて、宿主による腫瘍免疫応答を有利に作動させてもよい。
【０１３５】
宿主免疫応答を活性化する化合物は、抗-PD-L1遮断物質と組み合わせて使用されてもよい。これらには、DC機能および抗原提示を活性化する樹状細胞表面にある分子が挙げられる。抗-CD40化合物は、T細胞ヘルパー活性を事実上代理することができ(Ridge, J.ら(1998)Nature 393：474-478)、またPD-L1遮断物質と組み合わせて用いることができる(Ito, N.ら(2000)Immunobiology 201(5)527-40)。T細胞副刺激分子、例えばCTLA-4(例、米国特許第5,811,097号)、OX-40(Weinberg, A.ら(2000)Immunol 164：2160-2169)、4-1BB(Melero, I.ら(1997)Nature Medicine 3：682-685(1997)およびICOS(Hutloff, A.ら(1999)Nature 397：262-266)などを活性化する化合物もまた、T細胞活性化のレベル増大のために提供し得る。
【０１３６】
現在のところ、造血起源の種々の腫瘍を治療するために骨髄移植が用いられている。移植片対宿主拒絶反応はこの治療の結果であるが、治療的利点が移植片対腫瘍応答により得られ得る。PD-L1遮断を用いて、ドナーの移植腫瘍特異的T細胞の効果を増大させることができる。
【０１３７】
特定の毒素または病原体に暴露された患者を治療するのに本発明の別の方法が用いられる。従って、本発明のもう一つ別の態様は、一の対象にて感染性疾患を治療する方法であって、該対象に治療上有効な量の式(I)の化合物またはその塩を投与することを含む方法を提供する。
【０１３８】
上記される腫瘍への適用と同様にして、式(I)の化合物またはその塩は、単独で、あるいはアジュバントとして、ワクチンと組み合わせて、病原体、トキシンおよび自己抗原に対する免疫応答を刺激するのに使用され得る。この治療方法が特に有用である可能性のある病原体の例として、これまでに効果的なワクチンのなかった病原体、または従来のワクチンがそれほど効果的ではない病原体が挙げられる。これらの病原体には、限定されるものではないが、HIV、(A型、B型またはC型)肝炎、インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア、マラリア、リーシュマニア、スタフィロコッカス・アウレウス、シュードモナス・エルギノーサが挙げられる。PD-L1遮断は、感染中に抗原が改変する作用物質(例えば、HIV)による確立された感染に対して特に有用である。これらの新規なエピトープは、投与の際に異物として認識され、かくしてPD-1を介するネガティブシグナルにより弱められない強いT細胞応答を惹起する。
【０１３９】
本発明の方法により治療可能な感染症を引き起こす病原性ウイルスのいくつかの例として、HIV、肝炎ウイルス(A型、B型およびC型)、ヘルペスウイルス(例えば、VZV、HSV-1、HAV-6、HHv-7、HHV-8、HSV-2、CMV、エプスタイン・バーウイルス)、アデノウイルス、インフルエンザウイルス、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コロナウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ムンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、HTLVウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、モルスクム(molluscum)ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、JCウイルスおよびアルボウイルス性脳炎ウイルスが挙げられる。
【０１４０】
本発明の方法により治療可能な感染症を引き起こす病原菌のいくつかの例として、クラミジア、リケッチアバクテリア、マイコバクテリア、ブドウ球菌、レンサ球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌および淋菌、クレブシエラ、プロテウス、セラチア、シュードモナス、レジオネラ、ジフテリア、サルモネラ、桿菌、コレラ、破傷風、ボツリヌス、炭疽、ペスト、レストスピラおよびライム病菌が挙げられる。
【０１４１】
本発明の方法により治療可能な感染症を引き起こす病原性真菌のいくつかの例として、カンジダ(アルビカンス、クルセイ、グラブラタ、トロピカリス等)、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、アスペルギルス(フミガーツス、ニガー等)、ムコラ-レス属(ムコール、アブシジア、リゾプス)、スポロスリックス・シェンキー、ブラストミセス・デルマチチジス、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス、コクシジオイデス・イミチスおよびヒストプラスマ・カプスラーツムが挙げられる。
【０１４２】
本発明の方法により治療可能な感染症を引き起こす病原寄生虫のいくつかの例として、赤痢アメーバ、大腸バランチジウム、ネグレリア-フォーレリ、アカントアメーバ・スピーシーズ、ランブル鞭毛虫、クリプトスポリジウム・スピーシーズ、ニューモシスチス・カリニ、プラスモディウム・ビバックス、バベシア・ミクロチ、トリパノソーマ・ブルセイ、トリパノソーマ・クルージ、リシューマニア・ドノバン、トキソプラズマ・ゴンディおよびブラジル鉤虫が挙げられる。上記した方法のいずれにおいても、PD-L1遮断は、サイトカイン(例、インターフェロン、GM-CSF、G-CSF、IL-2)治療などの免疫療法、あるいは二重特異性抗体療法(腫瘍抗原の提示の強化を提供する)(例えば、Holliger(1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90：6444-6448；Poljak(1994)Structure 2：1121-1123を参照のこと)、ワクチンまたは遺伝子発現修飾する薬剤と組み合わせることができる。
【０１４３】
本発明の化合物は、自己免疫応答を惹起かつ増幅し得る。実際に、腫瘍細胞およびペプチドワクチンを用いる抗腫瘍応答の誘発は、多くの抗腫瘍応答が、抗自己反応性(van Elsasらの前掲にて、抗-CTLA-4+GM-CSF修飾B16黒色腫において観察される脱色素)；Trp-2ワクチンを接種したマウスにおける脱色素(Overwijk, W.ら(1999)Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96：2982-2987)；TRAMP腫瘍細胞ワクチンにより惹起される自己免疫前立腺炎(Hurwitz, A.(2000)前掲)、黒色腫ペプチド抗原ワクチン接種およびヒト臨床実験において観察される白斑(Rosenberg, S.A and White, D E(1996)J. Immunother Emphasis Tumor Immunol 19(1)：81-4)に関与していることが判っている。
【０１４４】
従って、ワクチン接種プロトコルを設計するために、抗-PD-1遮断を種々の自己タンパク質と併用して、疾患の治療のためにこれらの自己タンパク質に拮抗する免疫応答を、効果的に惹起させることも可能である。例えば、アルツハイマー病は、脳内でアミロイドが沈着するエイ・ベータ(アミロイドβ)ペプチド(A.beta.peptide)の不適切な蓄積と関与しており；アミロイドに対する抗体反応は、これらのアミロイド沈着を一掃できる(Schenkら, (1999)Nature 400：173-177)。
【０１４５】
他の自己タンパク質を、標的、例えば、アレルギーおよび喘息を治療するためにIgEおよび関節リウマチを治療するためにTNFαとして使用してもよい。最後に、種々のホルモンに対する抗体反応は、式(I)の化合物またはその塩を使用することで誘発され得る。避妊のためには、生殖ホルモンに対する中和抗体を用いてもよい。特定の腫瘍の増殖に必要とされるホルモンおよび他の可溶性因子に応答する中和抗体は、可能性のあるワクチン接種標的であると考えることもできる。
【０１４６】
抗-PD-L1抗体の使用について上記した方法と類似する方法は、治療的自己免疫応答を誘発させるために使用して、他の自己抗原、例えばアルツハイマー病におけるアミロイド沈着物(例えば、エイ・ベータ)、サイトカイン類(例えば、TNFアルファ)およびIgEが不適切に蓄積した患者を治療することができる。
【０１４７】
本発明の化合物は、式(I)の化合物またはその塩を、目的とする抗原(例えば、ワクチン)と一緒に共投与することにより、抗原特異的免疫応答を刺激するために使用してもよい。従って、もう一つ別の態様において、本発明は、対象における抗原に対する免疫応答を強化する方法であって、該対象における抗原に対する免疫応答が強化されるように、(ｉ)抗原；および(ii)式(I)の化合物またはその塩を該対象に投与することを特徴とする方法を提供する。抗原は、例えば、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原または病原体由来の抗原であり得る。上記抗原の非限定的な例として、上記した腫瘍抗原(または腫瘍ワクチン)または上記した抗原（例えば、ウイルス、細菌または他の病原体から由来の抗原など）などが挙げられる。
【０１４８】
上記されるように、本発明の化合物は、１または複数の他の治療剤、例えば、細胞傷害剤、放射性毒剤または免疫抑制剤と一緒に共投与され得る。本発明の化合物は、他の治療剤を投与する前、後または同時に投与することができるか、あるいは他の既知の治療法、例えば抗がん治療法、例えば放射線療法と併せて共投与され得る。かかる治療剤は、単独では患者に対して毒性または準毒性(subtoxic)レベルで有効であるに過ぎない抗腫瘍剤、特にドキソルビシン(アドリアマイシン)、シスプラチン、硫酸ブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブシル、デカルバジンおよびシクロホスファミドヒドロキシウレアなどのが挙げられる。シスプラチンは、４週間毎に1回100 mg／用量で静脈内投与され、アドリアマイシンは21日毎に1回60〜75 mg/mlの用量で静脈内投与される。式(I)の化合物またはその塩と、化学療法剤との共投与は、ヒト腫瘍細胞に細胞傷害的効果をもたらす異なる機構を介して作用する2種の抗がん剤を提供する。かかる共投与は、薬物に対する耐性の発生が原因であるか、または腫瘍細胞が抗体と反応しなくなる抗原性変化が原因である問題を解決しうる。
【０１４９】
また、式(I)の化合物またはその塩および使用説明書を含むキットも本発明の範囲内にある。該キットは、少なくとも１つの追加の試薬をさらに含み得る。キットは、典型的にはそのキットの中身の目的とする用途を表示するラベルを含む。ラベルなる用語は、そのキット上に、またはキットと一緒に供給される、そうでなければ該キットに付随するいずれの文書または記録材も包含する。
【０１５０】
上記の他の治療剤が、本発明の化合物と併用して使用される場合、それは、例えば、Physicians' Desk Refernece(PDR)に示されるそれらの量で使用されてもよく、あるいは当業者が決定してもよい。本発明の方法において、そのような他の治療剤は、本発明の化合物を投与する前に、投与すると同時に、あるいは投与した後に投与され得る。
【０１５１】
一の実施態様において、式(I)の化合物は、PD-1／PD-L1のホモジニアス時間分解蛍光(HTRF)結合アッセイにより測定された場合に、PD-1／PD-L1の相互作用を10μM以下の、例えば0.01〜10μMのIC50値で阻害する。好ましくは、式(I)の化合物は、PD-1／PD-L1の相互作用を、1μMまたはそれ以下、例えば0.01〜1μMのIC50値で阻害する。
【実施例】
【０１５２】
本発明は、以下の実施例においてさらに規定される。以下の実施例は、単なる例示として提供されることを理解すべきである。上記の説明および実施例から、当業者は、本発明の本質的な特徴を解明することができ、その精神および範囲から逸脱することなく、種々の変形および修飾を施し、本発明を種々の使用および条件に適合させることができる。その結果、本発明は、下記の例示としての実施例に限定されるものではなく、むしろ添付の特許請求の範囲によって規定される。
【０１５３】
本明細書において使用される略語は当業者に知られている。例としては次のものである：テトラヒドロフランとしてTHF；ジクロロメタンとしてDCM；N,N-ジメチルホルムアミドとしてDMF；ジメチルスルホキシドとしてDMSO；トリフルオロ酢酸としてTFA；酢酸としてAcOH；アセトニトリルとしてACNまたはMeCN；メタノールとしてMeOH；酢酸アンモニアとしてNH4OAc；ジイソプロピルアゾジカルボキシレートとしてDIAD；時間としてh；分としてmin；1,2-ジクロロエタンとしてDCE；エタノールとしてEtOH；保持時間または室温(文脈による)としてrtまたはRT；および、ジイソプロピルエチルアミンとしてDIPEA。
【０１５４】
一般的スキーム1、2および3は、実施例の製造に用い得る幾つかの方法を示す。クロルカップリングパートナー、臭化物およびボロン酸(またはボロン酸エステル)は、相互交換可能であることが理解されよう。
【化１９】
2019524705.tif 000021
【０１５５】
【化２０】
2019524705.tif 000022
【０１５６】
【化２１】
2019524705.tif 000023
【０１５７】
(実験方法)
中間体：(2-メチル-3-(キノリン-7-イル)フェニル)メタノール
【化２２】
2019524705.tif 000024
密封管に、THF(75 mL)、水(18 mL)、キノリン-7-ボロン酸(500 mg, 2.89 mmol)、(3-ブロモ-2-メチルフェニル)メタノール(0.581 g, 2.89 mmol)、リン酸三カリウム(1.53 g, 7.23 mmol)および第2世代 XPhosプレ触媒(0.068 g, 0.087 mmol)を加えた。混合物を、脱気/窒素によりx3フラッシュして、次いで室温で2日間攪拌した。粗製反応混合物を、DCMで希釈して、水、ブラインで洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥させて、濾過して、蒸発させた。粗生成物を、25〜80% 酢酸エチル/ヘキサンを用いてシリカゲルで精製して、(2-メチル-3-(キノリン-7-イル)フェニル)メタノール[0.42g (57%収率)]を黄色の固体として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 8.94(dd, J=4.2, 1.7 Hz, 1H), 8.42(d, J=8.3 Hz, 1H), 8.04(d, J=8.3 Hz, 1H), 7.88(s, 1H), 7.62-7.51(m, 2H), 7.47(d, J=7.1 Hz, 1H), 7.33-7.26(m, 1H), 7.25-7.19(m, 1H), 5.15(t, J=5.1 Hz, 1H), 4.59(d, J=4.6 Hz, 2H), 2.17(s, 3H).
【０１５８】
中間体：5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((2-メチル-3-(キノリン-7-イル)ベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド
【化２３】
2019524705.tif 000025
ジイソプロピルアゾジカルボキシレート(184 mg, 0.911 mmol)/THF(12mL)を、THF(12mL)中の(2-メチル-3-(キノリン-7-イル)フェニル)メタノール(206.5 mg, 0.828 mmol)、5-クロロ-2,4-ジヒドロキシベンズアルデヒド(157 mg, 0.911 mmol)およびトリフェニルホスフィン(239 mg, 0.911 mmol)溶液に、0℃で滴加した。得られる混合物を、攪拌して、終夜室温に到達させた。反応混合物を濃縮して、次いで10〜80% 酢酸エチル/ヘキサンを用いてシリカゲルで精製して、5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((2-メチル-3-(キノリン-7-イル)ベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド[280mgs(71%収率)]を黄色の固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて、島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7 μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸)(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。LCMS Rt(保持時間)=1.059 min., m/z 404.2(M+H).
1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 10.06(s, 1H), 8.96(dd, J=4.3, 1.7 Hz, 1H), 8.88(m, 2H), 8.45(dd, J=8.4, 0.8 Hz, 1H), 8.08(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.95-7.89(m, 1H), 7.73(s, 1H), 7.63-7.56(m, 2H), 7.43-7.34(m, 1H), 6.90(s, 1H), 5.38(s, 2H), 2.29(s, 3H).
【０１５９】
中間体：5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノリン-7-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化２４】
2019524705.tif 000026
小さな丸底フラスコ(RBF)に、炭酸セシウム(452 mg, 1.387 mmol)、5-(クロロメチル)ニコチノニトリル(212 mg, 1.387 mmol)、5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((2-メチル-3-(キノリン-7-イル)ベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド(280 mg, 0.693 mmol)およびDMF(10 mL)を加えた。混合物を、室温で終夜攪拌した。粗製混合物を、10mL DCMで希釈して、0.1M HCl水溶液を4滴用いて中和して、抽出して、水、ブラインで洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、濾過して、蒸発させた。得られる固体を、冷(0℃)ジエチルエーテルでトリチュレートして、5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノリン-7-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル[179mg (37%収率)]を黄色の固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて、島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Warters BEH 1.7μm C18, 2 x 50mm column, 1 mL/分の流量で、3分間において0〜100%Bのグラジエント(B=95% HPLCグレードのアセトニトリル/10 mM 酢酸アンモニア/5% HPLCグレードの水)(A=95% HPLCグレードの水/10 mM 酢酸アンモニア/5% HPLCグレードのアセトニトリル)を用いた後、0.5分間保持した。LCMS Rt=2.07min., m/z 520.3(M+H)．1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 10.23(s, 1H), 9.03(d, J=2.6 Hz, 2H), 8.95(d, J=2.9 Hz, 1H), 8.54(s, 1H), 8.44(d, J=8.1 Hz, 1H), 8.08(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.97-7.88(m, 1H), 7.74(s, 1H), 7.63-7.54(m, 3H), 7.38(d, J=4.0 Hz, 2H), 7.28(s, 1H), 5.50(s, 1H), 5.46(s, 1H), 2.30(s, 3H).
【０１６０】
実施例1001：(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノリン-7-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化２５】
2019524705.tif 000027
スクリューキャップバイアルに、5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノリン-7-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(40 mg, 0.077 mmol)、(R)-2-アミノ-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸(27.5 mg, 0.231 mmol)、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(48.9 mg, 0.231 mmol)およびDMF(3 mL)を加えた。バイアルのキャップを閉めて、混合物を、室温で終夜振盪した。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、35分間かけて20〜85%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は4.5 mg(10%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は99%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.03(s, 1H), 8.98(s, 1H), 8.93(d, J=4.0 Hz, 1H), 8.49(s, 1H), 8.44(d, J=8.4 Hz, 1H), 8.07(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.91(s, 1H), 7.62-7.55(m, 3H), 7.52(m, 1H), 7.39-7.32(m, 2H), 7.13(s, 1H), 5.37(s, 2H), 5.33(s, 2H), 4.04(m, 2H), 3.75-3.69(m, 1H), 3.60-3.52(m, 1H), 2.28(s, 3H), 1.26(s, 3H).
【０１６１】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.58 min；ESI-MS(+)m/z=623.4(M+H), ESI-MS(-)m/z=621.3(M-H). 
分析条件2：保持時間=2.66 min；ESI-MS(+)m/z=623.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=621.5(M-H).  
【０１６２】
以下の実施例を、実施例1001と同様の方法で製造した：
中間体：(2-メチル-3-(キノリン-3-イル)フェニル)メタノール
【化２６】
2019524705.tif 000028
粗生成物を、25〜80%酢酸エチル/ヘキサンを用いてシリカゲル上で精製して、(2-メチル-3-(キノリン-3-イル)フェニル)メタノール[0.48g(99%収率)]を黄色の固体として得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ  8.85(d, J=2.2 Hz, 1H), 8.30(d, J=2.0 Hz, 1H), 8.06(dd, J=14.2, 8.3 Hz, 2H), 7.83-7.76(m, 1H), 7.70-7.62(m, 1H), 7.50(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.36-7.30(m, 1H), 7.29-7.21(m, 1H), 5.17(t, J=5.4 Hz, 1H), 4.60(d, J=5.4 Hz, 2H), 2.18(s, 3H).
【０１６３】
中間体：5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((2-メチル-3-(キノリン-3-イル)ベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド
【化２７】
2019524705.tif 000029
粗生成物を、10〜80%酢酸エチル/ヘキサンを用いてシリカゲル上で精製して、5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((2-メチル-3-(キノリン-3-イル)ベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド[0.21g(74%収率)]を黄色の固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて、島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸)(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。LCMS Rt(保持時間)=1.125min., m/z 403.9(M+H)．1H NMR(400MHz, CDCl3) δ  11.44(s, 1H), 9.72(s, 1H), 8.93(d, J=2.2 Hz, 1H), 8.18(d, J=8.6 Hz, 1H), 8.12(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.88(d, J=8.3 Hz, 1H), 7.77(m, 1H), 7.65-7.55(m, 3H), 7.40-7.36(m, 1H), 6.66(s, 1H), 5.26(s, 2H), 2.33(s, 3H).
【０１６４】
中間体：5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノリン-3-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化２８】
2019524705.tif 000030
5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノリン-3-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル[115mg (38%収率)]を黄色の固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸)(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。
LCMS Rt=1.140min., m/z 520.1(M+H).
【０１６５】
実施例1002：(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノリン-3-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化２９】
2019524705.tif 000031
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて40〜80%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は、7.8 mg(16%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は99%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.02(s, 1H), 8.98(s, 1H), 8.86(s, 1H), 8.48(s, 1H), 8.34(s, 1H), 8.12-8.03(m, 2H), 7.82(t, J=7.7 Hz, 1H), 7.67(t, J=7.7 Hz, 1H), 7.60-7.52(m, 2H), 7.42-7.33(m, 2H), 7.12(s, 1H), 5.35(m, 4H), 4.03(s, 2H), 3.71-3.69(m, 1H), 3.59-3.53(m, 1H), 2.29(s, 3H), 1.25(s, 3H).
【０１６６】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
【０１６７】
分析条件1：保持時間=1.60 min；ESI-MS(+)m/z=623.4(M+H), ESI-MS(-)m/z=621.4(M-H). 
分析条件2：保持時間=2.71 min；ESI-MS(+)m/z=623.4(M+H), ESI-MS(-)m/z=621.3(M-H). 
【０１６８】
実施例1003：(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノリン-3-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸
【化３０】
2019524705.tif 000032
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、30分間かけて25〜85%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は、4.8 mg(10%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は99%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 8.99(d, J=5.1 Hz, 2H), 8.86(s, 1H), 8.46(s, 1H), 8.35(s, 1H), 8.12-8.03(m, 2H), 7.82(t, J=7.7 Hz, 1H), 7.67(t, J=7.3 Hz, 1H), 7.61-7.55(m, 1H), 7.53(s, 1H), 7.43-7.35(m, 2H), 7.14(s, 1H), 5.36(s, 2H), 5.32(s, 2H), 4.04(d, J=12.8 Hz, 1H), 3.88(t, J=6.4 Hz, 1H), 3.26-3.17(m, 1H), 2.99(m, 1H), 2.25(m, 1H), 2.29(s, 3H), 1.96-1.87(m, 1H), 1.68(d, J=9.9 Hz, 1H), 1.54(m, 3H), 1.36(m, 1H).
【０１６９】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.69 min；ESI-MS(+)m/z=633.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=631.4(M-H). 
分析条件2：保持時間=2.75 min；ESI-MS(+)m/z=633.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=631.4(M-H). 
【０１７０】
中間体：(2-メチル-3-(キノリン-2-イル)フェニル)メタノール
【化３１】
2019524705.tif 000033
粗生成物を、25〜80%酢酸エチル/ヘキサンを用いてシリカゲル上で精製して、(2-メチル-3-(キノリン-2-イル)フェニル)メタノール [0.77g(85%収率)]を黄色の固体として得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ  8.23(d, J=8.3 Hz, 1H), 8.18(d, J=8.6 Hz, 1H), 7.89(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.76(m, 1H), 7.71-7.64(m, 1H), 7.62-7.54(m, 1H), 7.48(m, 1H), 7.46-7.41(m, 1H), 7.39-7.31(m, 1H), 4.80(d, J=5.6 Hz, 2H), 2.34(s, 3H).
【０１７１】
5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((2-メチル-3-(キノリン-2-イル)ベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド
【化３２】
2019524705.tif 000034
粗生成物を、10〜70% 酢酸エチル/ヘキサンを用いるシリカゲル上で精製して、5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((2-メチル-3-(キノリン-2-イル)ベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド [0.14g(25%収率)]を黄色の固体として得た。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 10.05(s, 1H), 8.48(d, J=8.4 Hz, 1H), 8.09-8.02(m, 2H), 7.82(m, 1H), 7.73(s, 1H), 7.68-7.64(m, 2H), 7.62-7.61(m, 1H), 7.49(dd, J=7.6, 1.1 Hz, 1H), 7.45-7.38(m, 1H), 6.90(s, 1H), 5.39(s, 2H), 2.33(s, 3H).
【０１７２】
中間体：5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノリン-2-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化３３】
2019524705.tif 000035
5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノリン-3-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル[82mg(46%収率)]を肌色の固体としてを得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸)(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。LCMS Rt=1.134min., m/z 520.0(M+H)．1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 10.25(s, 1H), 9.05(d, J=1.7 Hz, 2H), 8.57(m, 1H), 8.48(d, J=8.4 Hz, 1H), 8.10-8.02(m, 2H), 7.82(m, 1H), 7.78-7.73(m, 1H), 7.71-7.62(m, 3H), 7.51(dd, J=7.6, 1.1 Hz, 1H), 7.44-7.37(m, 1H), 7.32(s, 1H), 5.55-5.46(m, 4H), 2.40-2.33(m, 3H).
【０１７３】
実施例1004：(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノリン-2-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化３４】
2019524705.tif 000036
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて30〜80% Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は、16.1 mg(60%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は98%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.03(d, J=14.3 Hz, 2H), 8.52(s, 1H), 8.47(d, J=8.4 Hz, 1H), 8.05(t, J=7.3 Hz, 2H), 7.81(t, J=7.5 Hz, 1H), 7.70-7.63(m, 2H), 7.61-7.55(m, 2H), 7.48(d, J=7.3 Hz, 1H), 7.40-7.33(m, 1H), 7.16(s, 1H), 5.37(m, 4H), 3.96(s, 2H), 3.62(m, 1H), 3.53(m, 1H), 2.34(s, 3H), 1.24(s, 3H).
【０１７４】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.60 min；ESI-MS(+)m/z=623.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=621.4(M-H)．
分析条件2：保持時間=2.82 min；ESI-MS(+)m/z=623.4(M+H), ESI-MS(-)m/z=621.4(M-H)．
【０１７５】
中間体：(2-メチル-3-(キノリン-6-イル)フェニル)メタノール
【化３５】
2019524705.tif 000037
粗生成物を、10〜70% 酢酸エチル/ヘキサンを用いるシリカゲル上で精製して、(2-メチル-3-(キノリン-6-イル)フェニル)メタノール[0.28g(39%収率)]を黄色の固体として得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 8.96(dd, J=4.3, 1.6 Hz, 1H), 8.23-8.12(m, 2H), 7.74(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.69(dd, J=8.8, 2.0 Hz, 1H), 7.46(dt, J=8.1, 3.9 Hz, 2H), 7.36-7.29(m, 2H), 4.82(d, J=5.6 Hz, 2H), 2.29(s, 3H).
【０１７６】
中間体：5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((2-メチル-3-(キノリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド
【化３６】
2019524705.tif 000038
粗生成物を、10〜70% 酢酸エチル/ヘキサンを用いるシリカゲル上で精製して、5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((2-メチル-3-(キノリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド[0.160g(45%収率)]を黄色の固体として得た。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 10.05(s, 1H), 8.95(dd, J=4.3, 1.7 Hz, 1H), 8.44(dd, J=8.6, 1.0 Hz, 1H), 8.10(d, J=8.7 Hz, 1H), 7.95(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.77-7.68(m, 2H), 7.62-7.55(m, 2H), 7.42-7.36(m, 2H), 6.90(s, 1H), 5.37(s, 2H), 2.27(s, 3H).
【０１７７】
中間体：5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノリン-6-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化３７】
2019524705.tif 000039
5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノリン-6-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル[165mg(65%収率)]を橙色の固体として得た。
LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/ Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5 分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸)(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。
LCMS Rt=1.090min., m/z 520.0(M+H)．1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 10.25(s, 1H), 9.05(m, 2H), 8.95(dd, J=4.2, 1.7 Hz, 1H), 8.57(t, J=2.0 Hz, 1H), 8.48-8.41(m, 1H), 8.11(d, J=8.7 Hz, 1H), 7.96(d, J=1.9 Hz, 1H), 7.79-7.72(m, 2H), 7.63-7.56(m, 2H), 7.42-7.36(m, 2H), 7.32(s, 1H), 5.52(s, 2H), 5.47(s, 2H), 2.30(s, 3H).
【０１７８】
実施例1005：(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化３８】
2019524705.tif 000040
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて25〜65% Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は、16.0 mg(33%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は99%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.03(d, J=15.4 Hz, 2H), 8.94(d, J=4.0 Hz, 1H), 8.51(s, 1H), 8.43(d, J=8.4 Hz, 1H), 8.10(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.98-7.90(m, 1H), 7.74(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.63-7.51(m, 3H), 7.40-7.29(m, 2H), 7.15(s, 1H), 5.36(m, 4H), 3.97(s, 2H), 3.66-3.50(m, 2H), 2.29(s, 3H), 1.24(s, 3H).
【０１７９】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.54 min；ESI-MS(+)m/z=623.4(M+H), ESI-MS(-)m/z=621.4(M-H).
分析条件2：保持時間=2.82 min；ESI-MS(+)m/z=623.4(M+H), ESI-MS(-)m/z=621.4(M-H).
【０１８０】
中間体：(2-メチル-3-(キノキサリン-2-イル)フェニル)メタノール
【化３９】
2019524705.tif 000041
粗生成物を、20〜80% 酢酸エチル/ヘキサンを用いるシリカゲル上で精製して、(2-メチル-3-(キノキサリン-2-イル)フェニル)メタノール [0.69g(79%収率)]を黄色の固体として得た。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.08(s, 1H), 8.21-8.10(m, 2H), 7.95-7.85(m, 2H), 7.61-7.57(m, 1H), 7.47(dd, J=7.6, 1.1 Hz, 1H), 7.42-7.35(m, 1H), 5.24(t, J=5.4 Hz, 1H), 4.63(d, J=5.4 Hz, 2H), 2.28(s, 3H).
【０１８１】
中間体：5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-2-イル)ベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド
【化４０】
2019524705.tif 000042
粗生成物を、10〜70% 酢酸エチル/ヘキサンを用いるシリカゲル上で精製して、5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-2-イル)ベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド [0.360g(17%収率)]を黄色の固体として得た。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 10.05(s, 1H), 9.12(s, 1H), 8.15(m, 2H), 7.92(m, 2H), 7.71(m, 2H), 7.47(m, 2H), 6.87(s, 1H), 5.40(s, 2H), 2.38(s, 3H).
【０１８２】
中間体：5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノキサリン-2-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化４１】
2019524705.tif 000043
5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノキサリン-2-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル [341mg(99%収率)]を黄色の固体として得た。
LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸)(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。
LCMS Rt=1.384min., m/z 521.0(M+H)．1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 10.25(s, 1H), 9.14(s, 1H), 9.05(dd, J=9.7, 2.0 Hz, 2H), 8.62-8.55(m, 1H), 8.22-8.13(m, 2H), 7.96-7.90(m, 2H), 7.75(s, 1H), 7.71(d, J=7.3 Hz, 1H), 7.58-7.57(m, 1H), 7.46(t, J=7.6 Hz, 1H), 7.37(s, 1H), 5.55(m, 4H), 2.41(s, 3H).
【０１８３】
実施例1006：(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-2-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化４２】
2019524705.tif 000044
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて25〜65% Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は、4.3 mg(9.4%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は95%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.11(s, 1H), 9.02(d, J=15.8 Hz, 2H), 8.51(s, 1H), 8.22-8.11(m, 2H), 7.99-7.87(m, 2H), 7.65(d, J=7.7 Hz, 1H), 7.59(d, J=7.3 Hz, 1H), 7.56(s, 1H), 7.42(t, J=7.7 Hz, 1H), 7.14(s, 1H), 5.37(m, 4H), 3.94(s, 2H), 3.65-3.49(m, 2H), 2.39(s, 3H), 1.22(s, 3H).
【０１８４】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.50 min；ESI-MS(+)m/z=624.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=622.4(M-H)．
分析条件2：保持時間=2.77 min；ESI-MS(+)m/z=624.4(M+H), ESI-MS(-)m/z=622.4(M-H). 
【０１８５】
中間体：(3-(イソキノリン-3-イル)-2-メチルフェニル)メタノール
【化４３】
2019524705.tif 000045
粗生成物を、25〜80%酢酸エチル/ヘキサンを用いてシリカゲル上で精製して、(3-(イソキノリン-3-イル)-2-メチルフェニル)メタノール [0.69g(99%収率)]を黄色の固体として得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 9.40(s, 1H), 8.17(d, J=7.8 Hz, 1H), 8.02(d, J=7.8 Hz, 1H), 7.89(s, 1H), 7.82(m, 1H), 7.75-7.68(m, 1H), 7.52-7.44(m, 1H), 7.37-7.25(m, 2H), 5.18(t, J=5.4 Hz, 1H), 4.60(d, J=5.4 Hz, 2H), 2.22(s, 3H).
【０１８６】
中間体：5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((3-(イソキノリン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド
【化４４】
2019524705.tif 000046
粗生成物を、10〜70% 酢酸エチル/ヘキサンを用いるシリカゲル上で精製して、5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((3-(イソキノリン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド[0.407g (33%収率)]を黄色の固体として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.05(s, 1H), 9.41(s, 1H), 8.50(br. s., 1H), 8.18(d, J=8.3 Hz, 1H), 8.04(d, J=8.5 Hz, 1H), 7.93(s, 1H), 7.83(t, J=7.4 Hz, 1H), 7.76-7.69(m, 1H), 7.57(d, J=6.8 Hz, 1H), 7.48(d, J=6.8 Hz, 1H), 7.41-7.35(m, 1H), 6.89(s, 1H), 5.37(s, 2H), 2.31(s, 3H).
【０１８７】
中間体：5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(イソキノリン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化４５】
2019524705.tif 000047
5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(イソキノリン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル[86mg(25%収率)]を褐色固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸)(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。LCMS Rt=1.109min., m/z 520.1(M+H).
【０１８８】
実施例1007：(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(イソキノリン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化４６】
2019524705.tif 000048
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、20分間かけて20〜100% Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は、7.2 mg(17%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は100%であった。 1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.41(s, 1H), 9.05(s, 1H), 9.02(s, 1H), 8.52(s, 1H), 8.19(d, J=8.1 Hz, 1H), 8.04(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.93(s, 1H), 7.83(t, J=7.5 Hz, 1H), 7.73(t, J=7.5 Hz, 1H), 7.60-7.54(m, 2H), 7.47(d, J=7.7 Hz, 1H), 7.35(t, J=7.5 Hz, 1H), 7.16(s, 1H), 5.36(m, 4H), 3.98(s, 2H), 3.66-3.60(m, 1H), 3.55(m, 1H), 2.34(s, 3H), 1.24(s, 3H).
【０１８９】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.59 min；ESI-MS(+)m/z=623.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=621.4(M-H)．
分析条件2：保持時間=2.84 min；ESI-MS(+)m/z=623.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=621.5(M-H)．
【０１９０】
中間体：(3-(イソキノリン-7-イル)-2-メチルフェニル)メタノール
【化４７】
2019524705.tif 000049
粗生成物を、25〜80%酢酸エチル/ヘキサンを用いてシリカゲル上で精製して、(3-(イソキノリン-7-イル)-2-メチルフェニル)メタノール [0.51g(72%収率)]を黄色の固体として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 9.36(s, 1H), 8.54(d, J=5.9 Hz, 1H), 8.04(m, 2H), 7.89(d, J=5.9 Hz, 1H), 7.75(dd, J=8.6, 1.7 Hz, 1H), 7.48(d, J=7.3 Hz, 1H), 7.31(t, J=7.5 Hz, 1H), 7.27-7.15(m, 1H), 4.59(m, 2H), 2.16(s, 3H).
【０１９１】
中間体：5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((3-(イソキノリン-7-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド
【化４８】
2019524705.tif 000050
粗生成物を、10〜80%酢酸エチル/ヘキサンを用いてシリカゲル上で精製して、5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((3-(イソキノリン-7-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド [0.299g(41%収率)]を黄色の固体として得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.04(s, 1H), 9.38(s, 1H), 8.54(d, J=5.8 Hz, 1H), 8.11-8.03(m, 2H), 7.90(d, J=5.5 Hz, 1H), 7.76(d, J=7.5 Hz, 1H), 7.71(m, 1H), 7.57(d, J=7.0 Hz, 1H), 7.42-7.32(m, 2H), 6.87(s, 1H), 5.36(s, 2H), 2.26(s, 3H).
【０１９２】
中間体：5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(イソキノリン-7-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化４９】
2019524705.tif 000051
5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(イソキノリン-7-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル [319mg(83%収率)]を褐色固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸)(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。
LCMS Rt=1.065min., m/z 520.2(M+H).
【０１９３】
実施例1008：(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(イソキノリン-7-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化５０】
2019524705.tif 000052
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、20分間かけて20〜70% Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は、2 mg(10%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は99%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.38(s, 1H), 9.02(m, 2H), 8.59-8.47(m, 2H), 8.12-8.01(m, 2H), 7.90(d, J=5.5 Hz, 1H), 7.76(d, J=7.7 Hz, 1H), 7.62-7.48(m, 2H), 7.35(m, 2H), 7.15(s, 1H), 5.37(s, 2H), 5.34(s, 2H), 3.98(br. s., 2H), 3.63(m, 2H), 2.28(s, 3H), 1.24(s, 3H).
【０１９４】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であって；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.53 min；ESI-MS(+)m/z=623.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=621.5(M-H)．
分析条件2：保持時間=2.68 min；ESI-MS(+)m/z=623.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=621.5(M-H)．
【０１９５】
中間体：(3-(イソキノリン-6-イル)-2-メチルフェニル)メタノール
【化５１】
2019524705.tif 000053
粗生成物を、10〜80%酢酸エチル/ヘキサンを用いてシリカゲル上で精製して、(3-(イソキノリン-6-イル)-2-メチルフェニル)メタノール[0.333g(42%収率)]を黄色の固体として得た。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.37(s, 1H), 8.54(d, J=5.7 Hz, 1H), 8.19(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.91-7.83(m, 2H), 7.64(dd, J=8.4, 1.4 Hz, 1H), 7.48(d, J=7.4 Hz, 1H), 7.31(t, J=7.6 Hz, 1H), 7.22(d, J=7.4 Hz, 1H), 5.20(t, J=5.3 Hz, 1H), 4.59(d, J=5.0 Hz, 2H), 2.16(s, 3H).
【０１９６】
中間体：5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((3-(イソキノリン-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド
【化５２】
2019524705.tif 000054
粗生成物を、10〜80%酢酸エチル/ヘキサンを用いてシリカゲル上で精製して、5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((3-(イソキノリン-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド [0.158g(31%収率)]を黄色の固体として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.04(s, 1H), 9.38(s, 1H), 8.55(d, J=5.8 Hz, 1H), 8.21(d, J=8.8 Hz, 1H), 7.92(s, 1H), 7.89(d, J=6.0 Hz, 1H), 7.72(s, 1H), 7.66(d, J=7.0 Hz, 1H), 7.58(d, J=7.3 Hz, 1H), 7.43-7.32(m, 2H), 6.89(s, 1H), 5.36(s, 2H), 2.25(s, 3H).
【０１９７】
中間体：5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(イソキノリン-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化５３】
2019524705.tif 000055
5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(イソキノリン-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリルを得た[136mg(67%収率)]を橙色の固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸)(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。
LCMS Rt=1.065min., m/z 520.0(M+H).
【０１９８】
実施例1009：(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(イソキノリン-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化５４】
2019524705.tif 000056
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、20分間かけて20〜70% Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより更に精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて45〜85%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は、1.3 mg(3%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は100%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.37(s, 1H), 9.01(m, 2H), 8.55(d, J=5.9 Hz, 1H), 8.50(s, 1H), 8.21(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.93-7.86(m, 2H), 7.66(d, J=7.7 Hz, 1H), 7.56(d, J=6.2 Hz, 1H), 7.49(s, 1H), 7.37-7.30(m, 2H), 7.13(s, 1H), 5.36(s, 2H), 5.31(s, 2H), 3.94-3.86(m, 2H), 3.53-3.46(m, 2H), 2.27(s, 3H), 1.17(s, 3H).
【０１９９】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.52 min；ESI-MS(+)m/z=623.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=621.5(M-H)．
分析条件2：保持時間=2.64 min；ESI-MS(+)m/z=623.1(M+H), ESI-MS(-)m/z=621.5(M-H)．
【０２００】
中間体：7-ブロモ-2-クロロキノキサリン
【化５５】
2019524705.tif 000057
キノキサリン-2-オール(10 g, 68.4 mmol)および酢酸(500 mL, 68.4 mmol)を含有する丸底フラスコ(RBF)に、窒素下において、臭素(3.60 mL, 69.9 mmol)をゆっくりと滴加した。この添加が完了した時に、赤色の混合物を、室温で1.5時間攪拌した。得られる粗生成物を濾過して、固体を、1Lの水で洗い、1時間風乾させた。固体を、DMSO(10mL)中に移して、水(100mL)を加えた。得られる淡黄色固体を、濾過して、真空下で乾燥させて、7-ブロモキノキサリン-2-オール[12.69g(74%)]を得た。
LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2 x 50mm column, 0.8mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=1000% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸)(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、1分間保持した。
LCMS Rt=0.859min., m/z 226.9(M+H). 1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 12.39(br.s., 1H), 8.19(s, 1H), 7.74-7.68(m, 1H), 7.46(m, 2H).
【０２０１】
RBFに、7-ブロモキノキサリン-2-オール(7.3 g, 32.4 mmol)およびホスホリルトリクロリド(36.3 mL, 389 mmol)を加えた。反応混合物を、90℃で2.5時間攪拌した。粗生成物を、0℃に冷却して、次いで60分間かけて氷水(500mL)中にゆっくりと抽出した。得られる混合物を、酢酸エチルで希釈して、抽出した。有機層を、ブラインで洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥させて、濾過して、濃縮した。粗生成物を、30〜90% DCM/ヘキサンを用いるシリカゲルで精製して、7-ブロモ-2-クロロキノキサリン[5.4g(66.4%)]を白色固体として得た。
LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2 x 50mm column, 0.8mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=1000% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸)(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、1分間保持した。
【０２０２】
LCMS Rt=1.275min., m/z 244.8(M+H). 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 9.06(s, 1H), 8.35(d, J=2.3 Hz, 1H), 8.14-8.09(m, 1H), 8.09-8.04(m, 1H).
【０２０３】
中間体：(3-(7-ブロモキノキサリン-2-イル)-2-メチルフェニル)メタノール
【化５６】
2019524705.tif 000058
粗生成物を、以下の方法を用いるprepHPLCにより精製した：メタノール/水/トリフルオロ酢酸を用いるShimadzu 分取HPLC、ここで溶媒Aは10% メタノール/90% 水/0.1% トリフルオロ酢酸であり、溶媒Bは、10% 水/90% メタノール/0.1% トリフルオロ酢酸であって、Waters Sunfire 5μm C18 19 x 100mm column, 30 mL/minの流量で、15分間かけて30〜100%Bのグラジエント、7分間保持して、(3-(7-ブロモキノキサリン-2-イル)-2-メチルフェニル)メタノール[0.204g(73%収率)]を白色固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Phenomenex Luna 3μm C18, 2 x 30mm column, 1mL/分の流量で、2.0分間において0〜100%Bのグラジエント(B=90% HPLCグレードのアセトニトリル/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードの水)(A=90% HPLCグレードの水/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードのアセトニトリル)を用いた後、1分間保持した。LCMS Rt=1.593min., m/z 329.2(M+H)；1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.12(d, J=2.4 Hz, 1H), 8.36(d, J=2.4 Hz, 1H), 8.11(dd, J=8.9, 2.4 Hz, 1H), 8.06-8.00(m, 1H), 7.59(d, J=7.4 Hz, 1H), 7.47(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.43-7.35(m, 1H), 5.26(m, 1H), 4.62(d, J=5.4 Hz, 2H), 2.27(s, 3H).
【０２０４】
中間体：4-((3-(7-ブロモキノキサリン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド
【化５７】
2019524705.tif 000059
粗生成物を、エタノール(10mL)でトリチュレートして、次いで濾過して、4-((3-(7-ブロモキノキサリン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド[160mgs(38%収率)]を淡褐色固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸),(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。
LCMS Rt=1.562min., m/z 484.8(M+H).
【０２０５】
中間体：5-((5-((3-(7-ブロモキノキサリン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化５８】
2019524705.tif 000060
5-((5-((3-(7-ブロモキノキサリン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリルを得た [115mg(41%収率)]を橙色の固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸),(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。
LCMS Rt=1.529min., m/z 600.9(M+H).
【０２０６】
実施例1010：(R)-2-((4-((3-(7-ブロモキノキサリン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化５９】
2019524705.tif 000061
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、20 mL/分の流量で、15分間かけて40〜80%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。物質を、以下の条件を用いて分取LC/MSにより更に精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、20分間かけて50〜90%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は3.4 mg(7%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は97%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.16(s, 1H), 9.02(m, 2H), 8.51(s, 1H), 8.38(s, 1H), 8.17-8.10(m, 1H), 8.05(d, J=9.2 Hz, 1H), 7.66(d, J=7.3 Hz, 1H), 7.60(d, J=7.7 Hz, 1H), 7.56(s, 1H), 7.43(t, J=7.7 Hz, 1H), 7.15(s, 1H), 5.37(s, 4H), 4.03-3.86(m, 3H), 3.65-3.50(m, 2H), 2.40(s, 3H), 1.23(s, 3H).
【０２０７】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、1.0 mL/分の流量で、50℃の温度、220 nmのUV波長にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、1.0 mL/分の流量で、50℃の温度、220 nmのUV波長にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.76 min；ESI-MS(+)m/z=702.4(M+H), ESI-MS(-)m/z=700.4(M-H).
分析条件2：保持時間=2.88 min；ESI-MS(+)m/z=702.4(M+H), ESI-MS(-)m/z=700.4(M-H).
【０２０８】
中間体：(3-(ベンゾ[d]チアゾール-6-イル)-2-メチルフェニル)メタノール
【化６０】
2019524705.tif 000062
粗生成物を、10〜60% 酢酸エチル/ヘキサンを用いるシリカゲル上で精製して、(3-(ベンゾ[d]チアゾール-6-イル)-2-メチルフェニル)メタノール[0.577g(95%収率)]を黄色の固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸),(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。LCMS Rt=1.044min., m/z 256.5(M+H)．1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 9.03(s, 1H), 8.18(d, J=8.6 Hz, 1H), 7.88(d, J=1.2 Hz, 1H), 7.51-7.41(m, 2H), 7.33-7.28(m, 1H), 7.25(m, 1H), 4.81(d, J=5.6 Hz, 2H), 2.27(s, 3H).
【０２０９】
中間体：4-((3-(ベンゾ[d]チアゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド
【化６１】
2019524705.tif 000063
粗生成物を、10〜80%酢酸エチル/ヘキサンを用いてシリカゲル上で精製して、4-((3-(ベンゾ[d]チアゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド[0.500g(32%収率)]を、白色固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸)(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。
LCMS Rt=1.439min., m/z 409.9(M+H). 1H NMR(400MHz, CDCl3) δ  11.46(s, 1H), 9.74-9.68(m, 1H), 9.05(s, 1H), 8.20(d, J=8.3 Hz, 1H), 7.91(d, J=1.5 Hz, 1H), 7.59-7.47(m, 3H), 7.36-7.30(m, 2H), 5.24(s, 2H), 2.28(s, 3H).
【０２１０】
中間体：5-((5-((3-(ベンゾ[d]チアゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化６２】
2019524705.tif 000064
5-((5-((3-(7-ブロモキノキサリン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリルを得た[260mg(61%収率)]を橙色の固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸)(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。LCMS Rt=1.405min., m/z 526.0(M+H)．1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 10.25(s, 1H), 9.44(s, 1H), 9.05(m, 2H), 8.60-8.53(m, 1H), 8.17(dd, J=4.9, 3.3 Hz, 2H), 7.75(s, 1H), 7.58(dd, J=6.9, 2.1 Hz, 1H), 7.50(dd, J=8.4, 1.7 Hz, 1H), 7.39-7.34(m, 2H), 7.31(s, 1H), 5.51(s, 2H), 5.46(s, 2H), 2.28(s, 3H).
【０２１１】
実施例1011：(R)-2-((4-((3-(ベンゾ[d]チアゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化６３】
2019524705.tif 000065
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、25分間かけて20〜60% Bのグラジエントを用いた後、7分間100% Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は16 mg(35%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は100%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.43(s, 1H), 9.03(m, 2H), 8.51(s, 1H), 8.21-8.10(m, 2H), 7.57(s, 1H), 7.55-7.45(m, 2H), 7.35-7.27(m, 2H), 7.15(s, 1H), 5.43-5.25(m, 4H), 3.98(s, 2H), 3.68-3.54(m, 2H),  2.26(s, 3H), 1.24(s, 3H).
【０２１２】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、1.0 mL/分の流量で、50℃の温度、220 nmのUV波長にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、1.0 mL/分の流量で、50℃の温度、220 nmのUV波長にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.59 min；ESI-MS(+)m/z=629.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=627.7(M-H)．
分析条件2：保持時間=2.68 min；ESI-MS(+)m/z=629.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=627.7(M-H)．
【０２１３】
中間体：(3-(ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルフェニル)メタノール
【化６４】
2019524705.tif 000066
粗生成物を、10〜60% 酢酸エチル/ヘキサンを用いるシリカゲル上で精製して、(3-(ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルフェニル)メタノール [0.461g(74%収率)]を黄色の固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5 分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸),(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。LCMS Rt=1.005min., m/z 240.1(M+H)；1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 8.16(s, 1H), 7.71(d, J=1.5 Hz, 1H), 7.63(d, J=8.3 Hz, 1H), 7.44(d, J=7.3 Hz, 1H), 7.33(dd, J=8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.30(m, 1H), 7.24(m, 1H), 4.80(d, J=5.4 Hz, 2H), 2.25(s, 3H).
【０２１４】
中間体：4-((3-(ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド
【化６５】
2019524705.tif 000067
粗生成物を、0〜70%の酢酸エチル/ヘキサンを用いるシリカゲル上で精製して、4-((3-(ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド[0.320g(40%収率)]を、白色固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸)(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。LCMS Rt=1.400min., m/z 394.3(M+H). 1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 11.45(s, 1H), 9.72(s, 1H), 8.17(s, 1H), 7.75(d, J=1.5 Hz, 1H), 7.65(d, J=8.8 Hz, 1H), 7.57(s, 1H), 7.54-7.48(m, 1H), 7.40-7.29(m, 3H), 5.24(s, 2H), 2.26(s, 3H).
【０２１５】
中間体：5-((5-((3-(ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化６６】
2019524705.tif 000068
5-((5-((3-(ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル[412mg(80%収率)]を橙色の固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸)(A=100% HPLCグレード水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。LCMS Rt=1.387min., m/z 510.2(M+H)．1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 10.25(s, 1H), 9.05(m, 2H), 8.82(s, 1H), 8.57(s, 1H), 7.86(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.75(m, 2H), 7.56(d, J=6.1 Hz, 1H), 7.42-7.28(m, 4H), 5.51(s, 2H), 5.45(s, 2H), 2.26(s, 3H).
【０２１６】
実施例1012：(R)-2-((4-((3-(ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化６７】
2019524705.tif 000069
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、25分間かけて20〜80%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は16 mg(33%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は100%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.02(m, 2H), 8.81(s, 1H), 8.51(s, 1H), 7.85(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.72(s, 1H), 7.57(s, 1H), 7.51(d, J=7.0 Hz, 1H), 7.38(d, J=8.8 Hz, 1H), 7.30(q, J=7.9 Hz, 2H), 7.14(s, 1H), 5.37(s, 2H), 5.32(s, 2H), 3.98(s, 2H), 3.67-3.60(m, 1H), 3.55(m, 1H), 2.24(s, 3H), 1.25(s, 3H).
【０２１７】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、1.0 mL/分の流量で、50℃の温度、220 nmのUV波長にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、1.0 mL/分の流量で、50℃の温度、220 nmのUV波長にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.55 min；ESI-MS(+)m/z=613.1(M+H), ESI-MS(-)m/z=611.2(M-H).
分析条件2：保持時間=2.61 min；ESI-MS(+)m/z=613.0(M+H), ESI-MS(-)m/z=611.1(M-H)．
【０２１８】
中間体：(3-(ベンゾフラン-5-イル)-2-メチルフェニル)メタノール
【化６８】
2019524705.tif 000070
粗生成物を、10〜60%酢酸エチル/ヘキサンを用いてシリカゲル上で精製して、(3-(ベンゾフラン-5-イル)-2-メチルフェニル)メタノール[(55%収率) 1.03g]を黄色固体として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.68(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.55(d, J=8.6 Hz, 1H), 7.51(d, J=1.5 Hz, 1H), 7.44-7.40(dd, J=1.5,  8.6 Hz, 1H), 7.33-7.28(m, 1H), 7.28-7.25(m, 1H), 7.24-7.21(m, 1H), 6.83(dd, J=2.1, 0.9 Hz, 1H), 4.80(br. s., 2H), 2.27(s, 3H).
【０２１９】
中間体：4-((3-(ベンゾフラン-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド
【化６９】
2019524705.tif 000071
粗生成物を、0〜50% 酢酸エチル/ヘキサンを用いてシリカゲル上で精製して、4-((3-(ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド[0.215g(41%収率)]を白色固体として得た。LC/MSデータを、以下の条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+/-)において220nmで得た：Phenomenex Luna 3μm C18, 2 x 30mm column, 1 mL/分の流量で、2分間において0〜100%Bのグラジエント(B=95% HPLCグレードのアセトニトリル/10mM 酢酸アンモニア/5% HPLCグレードの水),(A=95% HPLCグレードの水/10mM 酢酸アンモニア/5% HPLCグレードのアセトニトリル)を用いた後、1分間保持した。
LCMS Rt=2.17min., m/z 391.31(M-H)．1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 11.18(s, 1H), 10.05(s, 1H), 8.06(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.72(s, 1H), 7.68(d, J=8.3 Hz, 1H), 7.58(d, J=1.7 Hz, 1H), 7.52(d, J=7.1 Hz, 1H), 7.37-7.21(m, 2H), 7.04-6.99(m, 1H), 6.88(s, 1H), 5.34(s, 2H), 2.23(s, 3H).
【０２２０】
中間体：5-((5-((3-(ベンゾフラン-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化７０】
2019524705.tif 000072
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm column, 移動相A； 5：95 アセトニトリル/水(10mM 酢酸アンモニアを含む)および移動相B；95：5 アセトニトリル/水(10mM 酢酸アンモニアを含む)を、20 mL/minの流量で、15分間かけて55〜95%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。溶媒をエバポレートして、5-((5-((3-(ベンゾフラン-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル[240mgs(82%収率)]を得た。
【０２２１】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：カラム：Warters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；温度：50℃；グラジエント：0%B、3分間かけて0〜100% B、次いで0.5分100%Bで保持した；流量：1 mL/min；検出：220 nmのUV。
インジェクション2の条件：カラム：Warters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；温度：50℃；グラジエント：0%B、3分間かけて0〜100% B、次いで0.5分100%Bで保持した；流量：0.5 mL/min；検出：220 nmのUV.
分析条件1：保持時間=2.41 min；ESI-MS(+)m/z=509.0(M+H)
分析条件2：保持時間=3.21 min；ESI-MS(+)m/z=509.2(M+H)
1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 10.25(s, 1H), 9.08-8.91(m, 2H), 8.57(s, 1H), 8.06(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.75(s, 1H), 7.68(d, J=8.5 Hz, 1H), 7.62-7.57(m, 1H), 7.54(d, J=7.1 Hz, 1H), 7.41-7.22(m, 4H), 7.01(d, J=1.4 Hz, 1H), 5.51(s, 2H), 5.45(s, 2H), 2.26(s, 3H).
【０２２２】
実施例1013：(R)-2-((4-((3-(ベンゾフラン-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化７１】
2019524705.tif 000073
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm，ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて45〜85%Bのグラジエントを用いた後、5分100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は10 mg(28%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は100%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.03(m, 2H), 8.52(s, 1H), 8.05(s, 1H), 7.67(d, J=7.3 Hz, 1H), 7.57(m, 2H), 7.48(m, 1H), 7.26(m, 3H), 7.14(s, 1H), 7.01(s, 1H), 5.43-5.25(m, 4H), 4.04-3.87(m, 2H), 3.71-3.51(m, 2H), 2.24(s, 3H), 1.24(s, 3H).
【０２２３】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm, ここで移動相Aは5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、1.0 mL/分の流量で、50℃の温度、220nm のUV波長にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100% Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、1.0 mL/分の流量で、50℃の温度、220 nmのUV波長にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100% Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.88 min；ESI-MS(+)m/z=612.9(M+H).
分析条件2：保持時間=3.35 min；ESI-MS(+)m/z=612.0(M+H).
【０２２４】
実施例1014：(S)-2-((4-((3-(ベンゾフラン-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-5-グアニジノペンタン酸
【化７２】
2019524705.tif 000074
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて25〜65% Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は24 mg(58%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は96%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.05-8.95(m, J=8.1 Hz, 2H), 8.46(s, 1H), 8.05(s, 1H), 7.66(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.58(s, 1H), 7.49(d, J=7.0 Hz, 1H), 7.39(s, 1H), 7.32-7.19(m, 3H), 7.10(s, 1H), 7.01(s, 1H), 5.33(s, 2H), 5.26(s, 2H), 3.73(d, J=13.6 Hz, 1H), 3.66-3.58(m, 1H), 3.16-3.03(m, 1H), 3.03-2.94(m, 1H), 2.94-2.85(m, 1H), 2.24(s, 3H), 1.62-1.40(m, 4H).
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、50℃の温度、1.0 mL/分の流量、220 nmのUV波長にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、1.0 mL/分の流量、220 nmのUV波長にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.73 min；ESI-MS(+)m/z=668.0(M+H).
分析条件2：保持時間=3.29 min；ESI-MS(+)m/z=668.1(M+H).
【０２２５】
実施例1015：2-((4-((3-(ベンゾフラン-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-2-メチルプロパン酸
【化７３】
2019524705.tif 000075
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて45〜85%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は11.5 mg(33%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は100%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.04(m, 2H), 8.53(s, 1H), 8.06(s, 1H), 7.67(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.58(m, 2H), 7.50(d, J=7.0 Hz, 1H), 7.32-7.21(m, 3H), 7.15(s, 1H), 7.01(s, 1H), 5.35(s, 2H), 5.33(s, 2H), 3.90(s, 2H), 2.25(s, 3H), 1.28(m, 6H).
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
【０２２６】
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3.5分間かけて0〜100%Bのグラジエント、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3.5分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.90 min；ESI-MS(+)m/z=596.0(M+H), ESI-MS(-)m/z=594.2(M-H)．
分析条件2：保持時間=3.35 min；ESI-MS(+)m/z=596.0(M+H), ESI-MS(-)m/z=594.2(M-H)．
【０２２７】
中間体：(3-(ベンゾ[d]オキサゾール-6-イル)-2-メチルフェニル)メタノール
【化７４】
2019524705.tif 000076
粗生成物を、10〜60% 酢酸エチル/ヘキサンを用いるシリカゲル上で精製して、(3-(ベンゾ[d]オキサゾール-6-イル)-2-メチルフェニル)メタノール [(55%収率) 0.470g]を橙色の固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸)(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。
LCMS Rt=0.987 min., m/z 240.1(M+H)．1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 8.15(s, 1H), 7.82(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.52(d, J=1.2 Hz, 1H), 7.47-7.42(m, 1H), 7.34-7.28(m, 2H), 7.25(d, J=1.2 Hz, 1H), 4.80(s, 2H), 2.25(s, 3H).
【０２２８】
中間体：4-((3-(ベンゾ[d]オキサゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド
【化７５】
2019524705.tif 000077
粗生成物を、0〜50% 酢酸エチル/ヘキサンを用いるシリカゲル上で精製して、4-((3-(ベンゾ[d]オキサゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド [0.190g(34%収率)]を白色固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Phenomenex Luna 3μm C18, 2 x 30mm column, 1 mL/分の流量で、2分間において0〜100%Bのグラジエント(B=90% HPLCグレードのアセトニトリル/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードの水),(A=90% HPLCグレードの水/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードのアセトニトリル)を用いた後、1分間維持した。LCMS Rt=1.973min., m/z 394.3(M-H)．1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 11.18(br. s., 1H), 10.05(s, 1H), 8.81(s, 1H), 7.88(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.75(d, J=1.0 Hz, 1H), 7.72(s, 1H), 7.55(d, J=6.1 Hz, 1H), 7.40-7.29(m, 3H), 6.89(s, 1H), 5.35(s, 2H), 2.24(s, 3H).
【０２２９】
中間体：5-((5-((3-(ベンゾ[d]オキサゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化７６】
2019524705.tif 000078
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm column、移動相A, 5：95 メタノール/水(10mM 酢酸アンモニアを含む)および移動相B, 95：5 メタノール/水(10mM 酢酸アンモニアを含む)を用いて、20 mL/minの流量で、15分間かけて60〜100%Bのグラジエントを用いた後、10分間100%Bで保持した。溶媒をエバポレートして、5-((5-((3-(ベンゾ[d]オキサゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル[271mgs(72%収率)]を得た。
【０２３０】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：カラム：Warters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であって；温度：50℃；グラジエント：0%B, 3分間かけて0〜100% B、次いで0.5分100%Bで保持；流量：1 mL/min；検出：220 nmのUV. 
インジェクション2の条件：カラム：Warters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相B：95：5 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であって；温度：50℃；グラジエント：0%B, 3分間かけて0〜100% B、次いで0.5分間100% Bで保持した；流量：0.5 mL/min；検出：220 nmのUV.
分析条件1：保持時間=2.12 min；ESI-MS(+)m/z=510.1(M+H)
分析条件2：保持時間=2.98 min；ESI-MS(+)m/z=510.1(M+H)
1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 10.25(s, 1H), 9.04(m, 2H), 8.80(s, 1H), 8.56(s, 1H), 7.88(d, J=8.2 Hz, 1H), 7.78-7.73(m, 2H), 7.57(dd, J=7.2, 1.5 Hz, 1H), 7.40-7.28(m, 4H), 5.51(s, 2H), 5.45(s, 2H), 2.27(s, 3H).
【０２３１】
実施例1016：2-((4-((3-(ベンゾ[d]オキサゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-2-メチルプロパン酸
【化７７】
2019524705.tif 000079
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて25〜65% Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は、12.4 mg(36%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は100%であった。 1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.03(m, 2H), 8.80(s, 1H), 8.53(s, 1H), 7.88(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.75(s, 1H), 7.58(s, 1H), 7.53(d, J=7.0 Hz, 1H), 7.41-7.26(m, 3H), 7.15(s, 1H), 5.34(m, 4H), 3.88(s, 2H), 2.26(s, 3H), 1.27(s, 6H).
【０２３２】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、1.0 mL/分の流量で、50℃の温度、220 nmのUV波長にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエント、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、1.0 mL/分の流量で、50℃の温度、220 nmのUV波長にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.54 min；ESI-MS(+)m/z=597.2(M+H), ESI-MS(-)m/z=595.2(M-H)．
分析条件2：保持時間=2.57 min；ESI-MS(+)m/z=597.2(M+H), ESI-MS(-)m/z=595.3(M-H). 
【０２３３】
実施例1017：(R)-2-((4-((3-(ベンゾ[d]オキサゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化７８】
2019524705.tif 000080
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、20分間かけて10〜100%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は、20.3 mg(61%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は100%であった。 1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.03(s, 1H), 8.99(s, 1H), 8.76(s, 1H), 8.49(s, 1H), 7.87(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.72(s, 1H), 7.57(s, 1H), 7.50(d, J=7.0 Hz, 1H), 7.38-7.26(m, 3H), 7.12(s, 1H), 5.37(s, 2H), 5.31(s, 2H), 4.02(s, 2H), 3.68(m, 1H), 3.54(m, 1H), 2.24(s, 3H), 1.26(s, 3H).
【０２３４】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3.5分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3.5分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.70 min；ESI-MS(+)m/z=613.1(M+H), ESI-MS(-)m/z=611.1(M-H)．
分析条件2：保持時間=3.27 min；ESI-MS(+)m/z=613.2(M+H), ESI-MS(-)m/z=611.0(M-H)．
【０２３５】
中間体：(3-(ベンゾフラン-6-イル)-2-メチルフェニル)メタノール
【化７９】
2019524705.tif 000081
粗生成物を、10〜60% 酢酸エチル/ヘキサンを用いるシリカゲル上で精製して、(3-(ベンゾフラン-6-イル)-2-メチルフェニル)メタノール [(56%収率) 0.486g]を白色泡状物として得た。1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.67(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.63(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.45(s, 1H), 7.44-7.40(m, 1H), 7.33-7.28(m, 1H), 7.25(s, 1H), 7.19(dd, J=7.9, 1.3 Hz, 1H), 6.83(dd, J=2.1, 0.9 Hz, 1H), 4.80(br. s., 2H), 2.27(s, 3H).
【０２３６】
中間体：4-((3-(ベンゾフラン-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド
【化８０】
2019524705.tif 000082
粗生成物を、10〜60% 酢酸エチル/ヘキサンを用いるシリカゲル上で精製して、4-((3-(ベンゾフラン-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド[(60%収率) 0.603g]を、白色固体として得た。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 10.05(s, 1H), 8.05(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.74-7.71(m, 2H), 7.57-7.51(m, 2H), 7.37-7.28(m, 2H), 7.22(m, 1H), 7.03(dd, J=2.2, 0.9 Hz, 1H), 6.91-6.86(m, 1H), 5.34(s, 2H), 2.25(s, 3H).
【０２３７】
中間体：5-((5-((3-(ベンゾフラン-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化８１】
2019524705.tif 000083
5-((5-((3-(ベンゾフラン-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル[493mg(75%収率)]を、黄色の粉末として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸),(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)、0.5分間保持した。LCMS Rt=1.509min., m/z 509.15(M+H). 1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 10.25(s, 1H), 9.09-8.97(m, 2H), 8.56(t, J=2.0 Hz, 1H), 8.05(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.81-7.70(m, 2H), 7.60-7.51(m, 2H), 7.37-7.29(m, 3H), 7.22(dd, J=7.9, 1.4 Hz, 1H), 7.03(dd, J=2.2, 0.9 Hz, 1H), 5.51(s, 2H), 5.41(s, 2H), 2.27(s, 3H).
【０２３８】
実施例1018：2-((4-((3-(ベンゾフラン-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-2-メチルプロパン酸
【化８２】
2019524705.tif 000084
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて20〜60%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は4.9 mg(11%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は98%である。1H NMR(500MHz, DMSO-δ) δ 9.02(d, J=15.4 Hz, 2H), 8.51(br. s., 1H), 8.02(br. s., 1H), 7.73(d, J=7.7 Hz, 1H), 7.58(s, 1H), 7.53(br. s., 1H), 7.48(m, 1H), 7.32-7.24(m, 2H), 7.20(d, J=7.7 Hz, 1H), 7.13(br. s., 1H), 7.02(br. s., 1H), 5.33(m, 4H), 3.92(s, 2H), 2.25(s, 3H), 1.27(s, 6H).
【０２３９】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.85 min；ESI-MS(+)m/z=596.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=594.6(M-H)．
分析条件2：保持時間=2.86 min；ESI-MS(+)m/z=596.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=594.6(M-H)．
【０２４０】
実施例1019：(R)-2-((4-((3-(ベンゾフラン-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化８３】
2019524705.tif 000085
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて10〜50%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。物質を、以下の条件を用いて分取LC/MSにより更に精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて45〜85%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は8.2 mg(18%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は98%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.03(s, 1H), 8.98(s, 1H), 8.50(s, 1H), 8.01(s, 1H), 7.72(d, J=7.9 Hz, 1H), 7.55(s, 1H), 7.51(s, 1H), 7.47(d, J=6.1 Hz, 1H), 7.32-7.22(m, 2H), 7.18(d, J=7.9 Hz, 1H), 7.12(s, 1H), 7.00(s, 1H), 5.36(s, 2H), 5.29(s, 2H), 3.99(br. s., 2H), 3.88(m, 1H), 3.56(m, 1 H), 2.24(s, 3H), 1.24(s, 3H).
【０２４１】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.81 min；ESI-MS(+)m/z=612.6(M+H), ESI-MS(-)m/z=610.6(M-H)．
分析条件2：保持時間=2.85 min；ESI-MS(+)m/z=612.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=610.5(M-H). 
【０２４２】
実施例1020：(S)-1-(4-((3-(ベンゾフラン-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)-2-メチルピロリジン-2-カルボン酸
【化８４】
2019524705.tif 000086
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて20〜60%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。物質を、以下の条件を用いて分取LC/MSにより更に精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて40〜80%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は7.3 mg(15%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は96%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.03-8.95(m, 2H), 8.45(s, 1H), 8.01(s, 1H), 7.72(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.52(s, 1H), 7.48(d, J=6.2 Hz, 1H), 7.42(s, 1H), 7.32-7.23(m, 2H), 7.19(d, J=7.7 Hz, 1H), 7.12(s, 1H), 7.00(s, 1H), 5.38(s, 2H), 5.27(s, 2H), 3.82(br. s., 2H), 2.90-2.77(m, 2H), 2.25(s, 3H), 2.16(m, 1H), 1.79-1.59(m, 3H), 1.30(s, 3H).
【０２４３】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.95 min；ESI-MS(+)m/z=622.6(M+H)．
分析条件2：保持時間=2.90 min；ESI-MS(+)m/z=622.6(M+H).
【０２４４】
中間体：(3-(ベンゾ[d]チアゾール-5-イル)-2-メチルフェニル)メタノール
【化８５】
2019524705.tif 000087
粗生成物を、10〜60% 酢酸エチル/ヘキサンを用いるシリカゲル上で精製して、(3-(ベンゾ[d]チアゾール-5-イル)-2-メチルフェニル)メタノール[(98%収率) 0.71g]を白色固体として得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 9.06(s, 1H), 8.07(d, J=1.2 Hz, 1H), 8.01(d, J=8.3 Hz, 1H), 7.45(dd, J=7.1, 1.5 Hz, 1H), 7.41(dd, J=8.3, 1.7 Hz, 1H), 7.34-7.28(m, 2H), 4.81(d, J=5.6 Hz, 2H), 2.31-2.25(s, 3H).
【０２４５】
中間体：4-((3-(ベンゾ[d]チアゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド
【化８６】
2019524705.tif 000088
粗生成物を、0〜60% 酢酸エチル/ヘキサンを用いるシリカゲル上で精製して、4-((3-(ベンゾ[d]チアゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド[0.234g (21%収率)]を黄色の粉末として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Phenomenex Luna 3μm C18, 2 x 30mm column, 1 mL/分の流量で、2分間において0〜100%Bのグラジエント(B=90% HPLCグレードのアセトニトリル/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードの水), (A=90% HPLCグレードの水/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードのアセトニトリル)を用いた後、1分間保持した。
LCMS Rt=2.053min., m/z 410.3(M+H)．1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 10.05(s, 1H), 9.47(s, 1H), 8.26(d, J=8.4 Hz, 1H), 8.01(d, J=1.4 Hz, 1H), 7.73(s, 1H), 7.55(dd, J=7.2, 1.7 Hz, 1H), 7.45(dd, J=8.3, 1.7 Hz, 1H), 7.40-7.31(m, 2H), 6.89(s, 1H), 5.36(s, 2H), 2.26(s, 3H).
【０２４６】
中間体：5-((5-((3-(ベンゾ[d]チアゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化８７】
2019524705.tif 000089
5-((5-((3-(ベンゾ[d]チアゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル[(81%収率) 231mg]を黄色の固体として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Phenomenex Luna 3μm C18, 2 x 30mm column, 1 mL/分の流量で、2分間において0〜100%Bのグラジエント(B=90% HPLCグレードのアセトニトリル/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードの水),(A=90% HPLCグレードの水/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードのアセトニトリル)を用いた後、1分間保持した。LCMS Rt=2.037min., m/z 526.3(M+H)．1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 10.25(s, 1H), 9.47(s, 1H), 9.05(m, 2H), 8.57(t, J=2.0 Hz, 1H), 8.26(d, J=8.4 Hz, 1H), 8.02(d, J=1.3 Hz, 1H), 7.75(s, 1H), 7.62-7.54(m, 1H), 7.47(dd, J=8.3, 1.7 Hz, 1H), 7.38-7.35(m, 2H), 7.30(s, 1H), 5.51(s, 2H), 5.46(s, 2H), 2.29(s, 3H).
【０２４７】
実施例1021：(R)-2-((4-((3-(ベンゾ[d]チアゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化８８】
2019524705.tif 000090
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて20〜60%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は5.8 mg(12%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は99%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.45(s, 1H), 9.04(s, 1H), 8.99(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.24(d, J=8.1 Hz, 1H), 8.00(s, 1H), 7.56-7.49(m, 2H), 7.44(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.31(m, 2H), 7.13(s, 1H), 5.37(s, 2H), 5.31(s, 2H), 3.97(s, 2H), 3.62(m, 1H), 3.54(m, 1H), 2.26(s, 3H), 1.24(s, 3H).
【０２４８】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.62 min；ESI-MS(+)m/z=629.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=627.5(M-H)．
分析条件2：保持時間=2.65 min；ESI-MS(+)m/z=629.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=627.5(M-H). 
【０２４９】
実施例1022：2-((4-((3-(ベンゾ[d]チアゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-2-メチルプロパン酸
【化８９】
2019524705.tif 000091
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて30〜70%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は3.8 mg(8%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は100%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.46(s, 1H), 9.04(s, 1H), 9.01(s, 1H), 8.53(s, 1H), 8.25(d, J=8.1 Hz, 1H), 8.00(s, 1H), 7.58(s, 1H), 7.56-7.49(m, 1H), 7.44(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.32(m, 2H), 7.14(s, 1H), 5.34(m, 4H), 3.90(s, 2H), 2.27(s, 3H), 1.27(s, 6H).
【０２５０】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.65 min；ESI-MS(+)m/z=613.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=611.5(M-H)．
分析条件2：保持時間=2.65 min；ESI-MS(+)m/z=613.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=611.5(M-H). 
【０２５１】
実施例1023：(S)-1-(4-((3-(ベンゾ[d]チアゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)-2-メチルピロリジン-2-カルボン酸
【化９０】
2019524705.tif 000092
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて25〜65% Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は9.7 mg(20%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は100%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.45(s, 1H), 9.00(m, 2H), 8.45(s, 1H), 8.24(d, J=8.4 Hz, 1H), 8.00(s, 1H), 7.56-7.48(m, 1H), 7.44(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.41(s, 1H), 7.33-7.28(m, 2H), 7.13(s, 1H), 5.38(s, 2H), 5.28(s, 2H), 3.85-3.74(m, 2H), 2.82(m, 2H), 2.26(s, 3H), 2.21-2.12(m, 1H), 1.79-1.60(m, 3H), 1.29(s, 3H).
【０２５２】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.78 min；ESI-MS(+)m/z=639.6(M+H), ESI-MS(-)m/z=637.6(M-H)．
分析条件2：保持時間=2.68 min；ESI-MS(+)m/z=639.6(M+H), ESI-MS(-)m/z=637.5(M-H)．
【０２５３】
中間体：5-((5-((3-(1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化９１】
2019524705.tif 000093
小さな密封管に、5-ブロモ-1H-ベンゾイミダゾール(22.79 mg, 0.116 mmol)、ジオキサン(1446μl)、水(482 μl)、5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(50 mg, 0.096 mmol)、炭酸セシウム(94 mg, 0.289 mmol)および[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(2.82 mg, 3.86 μmol)を加えた。バイアルを密封して、混合物を、脱気し/窒素でx3フラッシュした。混合物を、90℃で終夜加熱した。混合物を冷却して、ほぼ乾固するまで濃縮して、アセトニトリル(4mL)中に移して、アセトニトリル/水/0.1% トリフルオロ酢酸を用いてXTERRA 5μ C18 19x100mm columnを備えたShimadzu 分取HPLCで精製して(ここで、溶媒Aは、10% アセトニトリル/90% 水/0.1% トリフルオロ酢酸であり、溶媒Bは、10% 水/90% アセトニトリル/0.1% トリフルオロ酢酸であって、25 mL/minの流量で、15分間かけて30〜100%Bのグラジエントを用いた後、10分間保持した)、5-((5-((3-(1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル,TFA塩[(36%収率) 21.4mg]を得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Phenomenex Luna 3μm C18, 2 x 30mm column, 1 mL/分の流量で、2分間かけて0〜100%Bのグラジエント(B=90% HPLCグレードのアセトニトリル/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードの水),(A=90% HPLCグレードの水/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードのアセトニトリル)を用いた後、1分間保持した。LCMS Rt=1.472min., m/z 509.4(M+H).
【０２５４】
実施例1024：(R)-2-((4-((3-(1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化９２】
2019524705.tif 000094
バイアルに、DMF(1 mL)、酢酸(0.111 mL)、5-((5-((3-(1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル,TFA(21.4 mg, 0.034 mmol)、2-メチル-D-セリン(12.28 mg, 0.103 mmol)およびボラン-2-ピコリン複合体(5.51 mg, 0.052 mmol)を加えた。バイアルのキャップを閉めて、混合物を終夜室温で振盪した。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、20 mL/分の流量で、15分間かけて15〜55%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は7 mg(33%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は98%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.04(s, 1H), 9.00(s, 1H), 8.52(s, 1H), 8.26(s, 1H), 7.66(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.56(s, 1H), 7.53-7.43(m, 2H), 7.27(m, 2H), 7.18-7.09(m, 2H), 5.37(s, 2H), 5.31(s, 2H), 3.99(s, 2H),  3.64(m, 1 H), 3.57(m, 1H), 2.25(s, 3H), 1.25(s, 3H).
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.31 min；ESI-MS(+)m/z=612.6(M+H), ESI-MS(-)m/z=610.6(M-H)．
分析条件2：保持時間=2.32 min；ESI-MS(+)m/z=612.5(M+H), ESI-MS(-)m/z=610.5(M-H)．
【０２５５】
中間体：2-(5-ブロモ-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-1-イル)-N,N-ジメチルエタンアミンおよび2-(6-ブロモ-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-1-イル)-N,N-ジメチルエタンアミン
【化９３】
2019524705.tif 000095
RBFに、DMSO(3 mL)、2-クロロ-N,N-ジメチルエタンアミン・HCl塩(219 mg, 1.523 mmol)および5-ブロモ-1H-ベンゾイミダゾール(250 mg, 1.269 mmol)を加えた。混合物を、0℃に冷却して、粉末無水水酸化ナトリウム(228 mg, 5.71 mmol)を加えた。RBFを密封して、混合物を、室温まで温めて、終夜攪拌した。粗製混合物を、水(10mL)で希釈して、6g Waters HLBカートリッジを通した。このカートリッジを、追加の水(30mL x2)で洗った。生成物を、メタノール(60mL)で溶出して、次いでエバポレートして、1：1の2-(5-ブロモ-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-1-イル)-N,N-ジメチルエタンアミンと2-(6-ブロモ-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-1-イル)-N,N-ジメチルエタンアミンの混合物[351.6mg (93%収率)]を得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2 x 50mm column, 0.8mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸),(A=100% HPLCグレード水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、1分間保持した。LCMS Rt=0.694min., m/z 267.9 & 269.9(M+H). 1H NMR(500MHz, CDCl3) δ 7.98(m, 1H), 7.94(d, J=1.7 Hz, 0.5H), 7.66(m, 0.5H), 7.56(d, J=1.7 Hz, 0.5H), 7.42-7.35(m, 1H), 7.27(m, 0.5H), 4.21(m, 2H), 2.71(m, 2H), 2.33-2.25(m, 6H).
【０２５６】
中間体：5-((4-クロロ-5-((3-(1-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル および5-((4-クロロ-5-((3-(1-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化９４】
2019524705.tif 000096
密封管に、THF(3614 μl)、水(1205 μl)、1：1の2-(5-ブロモ-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-1-イル)-N,N-ジメチルエタンアミンおよび2-(6-ブロモ-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-1-イル)-N,N-ジメチルエタンアミン(110 mg, 0.370 mmol)の混合物、5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(120 mg, 0.231 mmol)、リン酸カリウム塩(147 mg, 0.694 mmol)および第二世代Xphosプレ触媒(14.56mg, 0.019 mmol)を加えた。この容器を密封して、混合物を脱気/窒素を用いてフラッシュして、次いで終夜75℃で加熱した。粗製反応混合物を、1：1 DMF/メタノール(8 mL)中に取り、アセトニトリル/水/0.1% トリフルオロ酢酸を用いるXTERRA 5μ C18 30x100mm columnを備えたShimadzu 分取HPLCを用いて精製して(この場合、溶媒Aは、10% アセトニトリル/90% 水/0.1%トリフルオロ酢酸であり、溶媒Bは、10% 水/90% アセトニトリル/0.1% トリフルオロ酢酸であって、40 mL/minの流量で、15分間かけて20〜100%Bのグラジエントを用いた後、10分間保持した)、1：1の5-((4-クロロ-5-((3-(1-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル, 2TFAおよび5-((4-クロロ-5-((3-(1-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル,2TFAの混合物(98.7mg)を得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Waters Aquity BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50mm column, 0.8 mL/分の流量で、1.5分間において2〜98%Bのグラジエント(B=100% HPLCグレードのアセトニトリル/0.05% トリフルオロ酢酸),(A=100% HPLCグレードの水/0.05% トリフルオロ酢酸)を用いた後、0.5分間保持した。
LCMS Rt=0.964min., m/z 580.30(M+H).
【０２５７】
実施例1025：(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシプロパン酸および(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシプロパン酸
【化９５】
2019524705.tif 000097
バイアルに、DMF(1 mL)、酢酸(0.100 mL)、ボラン-2-ピコリン複合体(3.97 mg, 0.037 mmol)、D-セリン(7.80 mg, 0.074 mmol)および1：1の5-((4-クロロ-5-((3-(1-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル,2TFAおよび5-((4-クロロ-5-((3-(1-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル,2TFAの混合物に加えた。バイアルのキャップを閉めて、混合物を、終夜室温で振盪した。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、20 mL/分の流量で、20分間かけて45〜85%Bのグラジエント、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させて、1：1の位置異性体混合物[5.3mg(31%収率, 98%純度)]を得た。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.02(m, 2H), 8.52(br. s., 1H), 8.30-8.23(m, 1H), 7.73-7.65(m, 1H), 7.58-7.52(m, 1H), 7.50(m, 2H), 7.35-7.25(m, 2H), 7.20(d, J=7.3 Hz, 0.5H), 7.15(m, 1.5H), 5.42-5.33(m, 2H), 5.29(br. s., 2H), 4.36(m, 2H), 4.02-3.89(m, 2H), 3.63(m, 2H), 3.07(m, 1H), 2.71-2.62(m, 2H), 2.31-2.12(m, 9H).
【０２５８】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3.5分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3.5分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.30 min；ESI-MS(+)m/z=669.1(M+H), ESI-MS(-)m/z=667.2(M-H)．
分析条件2：保持時間=2.89 min；ESI-MS(+)m/z=669.1(M+H), ESI-MS(-)m/z=667.2(M-H)．
【０２５９】
実施例1026：2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-6-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-2-メチルプロパン酸および2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-2-メチルプロパン酸
【化９６】
2019524705.tif 000098
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、25分間かけて10〜50%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させて、1：1の位置異性体混合物[4.2mg(25%収率, 97%純度)]を得た。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.03(m, 2H), 8.53(s, 1H), 8.30-8.23(m, 1H), 7.73-7.66(m, 1H), 7.61-7.52(m, 2H), 7.49(m, 1H), 7.35-7.26(m, 2H), 7.22-7.11(m, 2H), 5.34(m, 4H), 4.41-4.32(m, 2H), 3.88(s, 2H), 2.73-2.62(m, 2H), 2.36-2.05(m, 9H), 1.26(s, 6H).
【０２６０】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3.5分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 メタノール：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3.5分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.49 min；ESI-MS(+)m/z=667.7(M+H), ESI-MS(-)m/z=665.7(M-H)．
分析条件2：保持時間=2.43 min；ESI-MS(+)m/z=667.8(M+H), ESI-MS(-)m/z=665.3(M-H)．
【０２６１】
中間体：(R)-1-(2-(5-ブロモベンゾ[d]オキサゾール-2-イル)エチル)ピロリジン-3-オール
【化９７】
2019524705.tif 000099
2-アミノ-4-ブロモフェノール(980 mg, 5.21 mmol)/ジクロロメタン(DCM)(20 mL)を、室温で、3-クロロプロピオニルクロリド(0.500 mL, 5.21 mmol)を滴加した。ピンク色の混合物を、室温で、1.5時間攪拌した。この生成物混合物に、DCM(5mL)および0.5等量(0.250mL, 2.61mmol)の3-クロロプロピオニルクロリドを加えた。攪拌を30分間続けた。粗生成物に、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(5mL)を攪拌しながら加えた。混合物を、5分間攪拌して、次いで分液漏斗に移した。生成物を抽出して、ブラインで洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥させて、濾過して、蒸発させて、N-(5-ブロモ-2-ヒドロキシフェニル)-3-クロロプロパンアミド[1.46g(99%収率)]を得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Phenomenex Luna 3μm C18, 2 x 30mm column, 1 mL/分の流量で、2分間において0〜100%Bのグラジエント(B=90% HPLCグレードのアセトニトリル/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードの水),(A=90% HPLCグレードの水/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードのアセトニトリル)を用いた後、1分間保持した。LCMS Rt=1.737min., m/z 280.1 & 282.1(M+H). 1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 10.19(br. s., 1H), 9.40(s, 1H), 8.12(d, J=2.2 Hz, 1H), 7.08(dd, J=8.5, 2.2 Hz, 1H), 6.82(d, J=8.5 Hz, 1H), 3.85(t, J=6.2 Hz, 2H), 2.93(t, J=6.2 Hz, 2H).
【０２６２】
小さな密封管に、N-(5-ブロモ-2-ヒドロキシフェニル)-3-クロロプロパンアミド(153 mg, 0.55 mmol)およびポリリン酸(5 mL)を加えた。この管を密封して、混合物を、4時間130℃で加熱した。混合物を、0℃に冷却して、冷水酸化アンモニウムをpH7まで滴下した。生成物を、酢酸エチル(30mL)で希釈して、抽出して、1.5M リン酸カリウム塩(15mL)、水、ブラインで洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥させて、エバポレートして、1：1の混合物の5-ブロモ-2-(2-クロロエチル)ベンゾ[d]オキサゾールおよび5-ブロモ-2-ビニルベンゾ[d]オキサゾール[100.6mg (70%収率)]を得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Phenomenex Luna 3μm C18, 2 x 30mm column, 1mL/分の流量で、2分間において0〜100%Bのグラジエント(B=90% HPLCグレードのアセトニトリル/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードの水),(A=90% HPLCグレードの水/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードのアセトニトリル)を用いた後、1分間保持した。LCMS Rt=1.750min., クロロエチル生成物についてm/z 259.9 & 261.9(M+H). 1H NMR(500MHz, CDCl3) δ 7.85(m, 1H), 7.46(m, 1H), 7.40(m, 1H), 6.75(dd, J=17.5, 11.2 Hz, 0.5H), 6.50(d, J=17.5 Hz, 0.5H), 5.91(d, J=11.2 Hz, 0.5H), 4.01(t, J=6.9 Hz, 1H), 3.42(t, J=6.9 Hz, 1H).
1：1の5-ブロモ-2-(2-クロロエチル)ベンゾ[d]オキサゾール(50mgs, 0.192mmol)および5-ブロモ-2-ビニルベンゾ[d]オキサゾール(50mg, 0.223mmol)の混合物に、DMF(5 mL)、炭酸セシウム(300 mg, 0.921 mmol)および(R)-ピロリジン-3-オール塩酸塩(85 mg, 0.691 mmol)を加えた。混合物を、50℃で20時間攪拌した。混合物を冷却して、分液漏斗に移した。粗生成物に、水(10mL)および酢酸エチル(25mL)を加えて、生成物を抽出して、ブラインで洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥させて、濾過して、蒸発させて、(R)-1-(2-(5-ブロモベンゾ[d]オキサゾール-2-イル)エチル)ピロリジン-3-オール[60.8mg (85%収率)]を得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Phenomenex Luna 3μm C18, 2 x 30mm column, 1mL/分の流量で、2分間において0〜100%Bのグラジエント(B=90% HPLCグレードのアセトニトリル/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードの水),(A=90% HPLCグレードの水/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードのアセトニトリル)を用いた後、1分間保持した。
LCMS Rt=1.218min., m/z 312.1(M+H). 1H NMR(500MHz, CDCl3) δ 7.73(m, 1H), 7.40-7.34(m, 1H), 7.34-7.29(m, 1H), 4.30(m, 1H), 3.08(m, 2H), 2.97(m, 2H), 2.77(m, 1H), 2.71-2.57(m, 2H), 2.37(m, 1H), 2.10(m, 1H), 1.70(m, 1H).
【０２６３】
実施例1027：(R)-5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(2-(2-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)エチル)ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化９８】
2019524705.tif 000100
密封管に、5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(79 mg, 0.152 mmol)、THF(4.5 mL)、水(1.5mL)、(R)-1-(2-(5-ブロモベンゾ[d]オキサゾール-2-イル)エチル)ピロリジン-3-オール(84 mg, 0.228 mmol)、リン酸三カリウム塩(64.6 mg, 0.305 mmol)および第二世代XPhosプレ触媒(5.99 mg, 7.61 μmol)を加えた。容器を密封して、混合物を、脱気/窒素によりフラッシュして、次いで終夜75℃で加熱した。反応混合物を冷却して、油状物にまで濃縮して、酢酸エチルで希釈して、水、ブラインで洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、濾過して、蒸発させた。粗製反応混合物を、1：1のDMF/メタノール(8 mL)中に取り、アセトニトリル/水/トリフルオロ酢酸を用いるWaters XTERRA 5μm C18 30x100mm columnを備えたShimadzu 分取HPLCを用いて精製して(この場合、溶媒Aは、10% アセトニトリル/90% 水/0.1% トリフルオロ酢酸であり、溶媒Bは、10% 水/90% アセトニトリル/0.1% トリフルオロ酢酸であって、25 mL/minの流量で、10分間かけて20〜100% Bのグラジエントを用いた後、10分間保持した)、(R)-5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(2-(2-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)エチル)ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル,TFA[55.7mgs (48%収率)]を得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Phenomenex Luna 3μm C18, 2 x 30mm column, 1mL/分の流量で、2分間において0〜100%Bのグラジエント(B=90% HPLCグレードのアセトニトリル/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードの水),(A=90% HPLCグレードの水/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードのアセトニトリル)を用いた後、1分間保持した。
LCMS rt=1.547min., m/z 623.3(M+H)．1H NMR(500MHz, THF-d8) δ 10.29(m, 
1H), 8.95(s, 1H), 8.90(s, 1H), 8.33(s, 1H), 7.82(m, 1H), 7.63-7.56(m, 1H), 7.55-7.41(m, 1H), 7.31-7.18(m, 3H), 7.04(m, 1H), 6.95-6.84(m, 1H), 5.36(m, 4H), 4.51-4.46(m, 1H),  3.76(m, 1H), 3.63-3.51(m, 4H), 3.05(t, J=7.2 Hz, 1H), 2.88(s, 1H), 2.77(s, 1H), 2.30(m, 4H), 1.73(m, 1H).
【０２６４】
実施例1028：(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(2-(2-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)エチル)ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化９９】
2019524705.tif 000101
バイアルに、DMF(1.3 mL)、酢酸(0.130 mL)、(R)-5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(2-(2-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)エチル)ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル,TFA(48.6 mg, 0.066 mmol)、2-メチル-D-セリン(19.63 mg, 0.165 mmol)およびボロラン-2-ピコリン複合体(8.46 mg, 0.079 mmol)を加えた。バイアルを密封して、混合物を、室温で終夜振盪した。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて20〜60%Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は7.5 mg(16%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は100%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.03(s, 1H), 9.00(s, 1H), 8.50(s, 1H), 7.73(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.58(s, 1H), 7.55(s, 1H), 7.49(d, J=7.0 Hz, 1H), 7.33-7.23(m, 3H), 7.13(s, 1H), 5.36(s, 2H), 5.30(s, 2H), 4.22-4.13(m, 1H), 3.94(s, 2H), 3.61-3.58(m, 1H), 3.52-3.50(m, 1H), 3.16-3.08(m, 2H), 2.96-2.87(m, 2H), 2.80-2.73(m, 1H), 2.62(m, 1H), 2.50(m, 1H), 2.36(m, 1H), 2.23(s, 3H), 2.00-1.91(m, 1H), 1.51(m, 1H), 1.22(s, 3H).
【０２６５】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.43 min；ESI-MS(+)m/z=726.0(M+H), ESI-MS(-)m/z=724.0(M-H)．
分析条件2：保持時間=1.33 min；ESI-MS(+)m/z=725.9(M+H), ESI-MS(-)m/z=724.0(M-H)．
【０２６６】
実施例1029：(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(2-(2-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)エチル)ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸
【化１００】
2019524705.tif 000102
実施例1029を、実施例1028と同様の方法で製造した。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm column、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、25分間かけて15〜65% Bのグラジエントを用いた後、5分間100% Bで保持した。物質を、以下の条件を用いて更に精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)アセトニトリル：水(0.1% TFAを含む)であって、20 mL/分の流量で、20分間かけて15〜55% Bのグラジエントを用いた後、5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は、2TFA塩として3.2 mgであり、LCMS分析によるその推定純度は96%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.01(m, 2H), 8.46(s, 1H), 7.74(d, J=8.2 Hz, 1H), 7.60(d, J=1.2 Hz, 1H), 7.52(d, J=7.3 Hz, 1H), 7.44(s, 1H), 7.34-7.25(m, 3H), 7.14(s, 1H), 5.35(s, 2H), 5.28(s, 2H), 4.18(br. s., 1H), 3.80(d, J=14.0 Hz, 1H), 3.63(d, J=14.0 Hz, 1H), 3.13(m, 4H), 2.98-2.87(m, 3H), 2.79(dd, J=9.8, 6.1 Hz, 1H), 2.65(m, 1H), 2.38(dd, J=9.5, 3.7 Hz, 1H), 2.33-2.27(m, 1H), 2.25(s, 3H), 1.95(m, 1H), 1.86-1.68(m, 2H), 1.50(m, 4H), 1.41-1.34(m, 1H).
【０２６７】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)であって、50℃の温度で、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.468 min；ESI-MS(+)m/z=736.1(M+H)
分析条件2：保持時間=1.398 min；ESI-MS(+)m/z=736.1(M+H)
【０２６８】
中間体：3-((6-ブロモピリジン-2-イル)オキシ)プロパン-1-オール
【化１０１】
2019524705.tif 000103
DMF(30 mL)の中の2,6-ジブロモピリジン(4.27 g, 18.03 mmol)および5等量の1,3-プロパンジオール(6.47 mL, 90 mmol)の溶液に、0℃で、少量ずつ60% 水素化ナトリウム/鉱油(1.081 g, 27.0 mmol)を滴加した。反応混合物を、10分間0℃で攪拌して、氷浴を外して、混合物を、2時間室温で攪拌した。反応混合物を、0℃に再度冷却して、次いでブライン(5mL)を用いてクエンチした。生成物を、酢酸エチル(50mL x 3)で抽出して、セライト/硫酸ナトリウムのプラグに通して、窒素ストリーム下にて終夜蒸発させた。生成物を、0〜70% 酢酸エチル/ヘキサンを用いてシリカゲル上で精製して、3-((6-ブロモピリジン-2-イル)オキシ)プロパン-1-オール [(38%収率)(2.13g)]を無色油状物として得た。LC/MSデータを、以下の条件を用いて、220nmでShimadzu分析用LCMS(ESI+)にて得た：Phenomenex Luna 3μm C18, 2 x 30mm column, 1mL/分の流量で、2分間において0〜100%Bのグラジエント(B=90% HPLCグレードのアセトニトリル/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードの水),(A=90% HPLCグレードの水/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードのアセトニトリル)を用いた後、1分間保持した。LCMS Rt=1.219 min., m/z 233.95(M+H), 95%純度.  1 NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.43(t, J=8.2 Hz, 1H), 7.07(dd, J=8.2, 0.6 Hz, 1H), 6.69(dd, J=8.2, 0.6 Hz, 1H), 4.49(t, J=6.0 Hz, 2H), 3.76(q, J=5.9 Hz, 2H), 2.11-1.92(m, 2H).
【０２６９】
中間体：(R)-1-(3-((6-ブロモピリジン-2-イル)オキシ)プロピル)ピロリジン-3-オール 
【化１０２】
2019524705.tif 000104
シンチレーションバイアルに、3-((6-ブロモピリジン-2-イル)オキシ)プロパン-1-オール(100 mg, 0.431 mmol)、DCM(2 mL)およびトリエチルアミン(0.066 mL, 0.474 mmol)を加えた。溶液を、0℃に冷却して、塩化メタンスルホニル(0.033 mL, 0.431 mmol)を加えた。バイアルをキャップして、氷浴を除去して、混合物を終夜室温で攪拌した。バイアルを、Buchi rotovapに移して、溶媒を除去して、粗生成物の3-((6-ブロモピリジン-2-イル)オキシ)プロピルメタンスルホネートを、褐色油状物として得た。単離した褐色油に、DMF(10 mL)、6当量の(R)-ピロリジン-3-オール塩酸塩(320 mg, 2.59 mmol)、5等量のヨウ化ナトリウム(323 mg, 2.155 mmol)および10等量の炭酸カリウム(596 mg, 4.31 mmol)を加えた。バイアルのキャップを閉めて、混合物を、7時間55℃で攪拌した。混合物を、室温に冷却して、水(10 mL)で希釈して、Warters 6g HLB 抽出カートリッジを通した。このカートリッジを、更なる水(20 mL)を用いてフラッシュして、生成物をメタノール(20mL)で溶出した。メタノール溶液を、次いでBiotage 5g SCX-2カートリッジに通過させた。SCX カートリッジを、メタノール(20mL)でフラッシュした。目的とする生成物を、2M アンモニア/メタノール(50mL)で溶出した。揮発性物質を、窒素流下において蒸発させて、(R)-1-(3-((6-ブロモピリジン-2-イル)オキシ)プロピル)ピロリジン-3-オール[60mg (44%収率)]を、淡黄色油状物として得た。LC/MSデータを、以下の設定条件を用いる島津製の分析用LCMS(ESI+)において220nmで得た：Phenomenex Luna 3μm C18, 2 x 30mm column, 1mL/分の流量で、2分間において0〜100%Bのグラジエント(B=90% HPLCグレードのアセトニトリル/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードの水),(A=90% HPLCグレードの水/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードのアセトニトリル)を用いた後、1分間保持した。LCMS Rt=1.059 min., m/z 302.95(M+H), 90% 純度。1H NMR(500MHz, CDCl3) δ 7.41(t, J=7.6 Hz, 1H), 7.04(d, J=7.6 Hz, 1H), 6.67(d, J=7.6 Hz, 1H), 4.41-4.30(m, 3H), 2.93(m, 1H), 2.73(d, J=10.1 Hz, 1H), 2.65-2.59(m, 2H), 2.52(dd, J=10.0, 5.1 Hz, 1H), 2.33-2.25(m, 1H), 2.20(m, 1H), 2.02-1.92(m, 2H), 1.80-1.70(m, 1H).
【０２７０】
中間体：(R)-5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(6-(3-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)ピリジン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化１０３】
2019524705.tif 000105
密封管に、5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(52.5 mg, 0.101 mmol)、THF(6 mL)、水(2.000 mL)、(R)-1-(3-((6-ブロモピリジン-2-イル)オキシ)プロピル)ピロリジン-3-オール(27.7 mg, 0.092 mmol)、リン酸三カリウム塩(48.8 mg, 0.230 mmol)および第二世代X-Phosプレ触媒(3.62 mg, 4.60 μmol)を加えた。容器を密封して、混合物を、脱気/窒素でフラッシュして、次いで終夜80℃で加熱した。混合物を冷却して、揮発性物質を、窒素下において除去した。得られる油状固体を、DCM中に取り、水、ブラインで洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、濾過して、窒素下においてエバポレートして、(R)-5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(6-(3-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)ピリジン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(66.6mg)(83%)を黄色固体として得た。
LC/MSデータを、以下の設定条件を用いて島津製の分析用LC/Micromass Platform LC(ESI+)において220nmで得た：Phenomenex Luna 3μm C18, 2 x 30mm column, 1mL/分の流量で、2分間において0〜100%Bのグラジエント(B=90% HPLCグレードのアセトニトリル/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードの水),(A=90% HPLCグレードの水/0.1% トリフルオロ酢酸/10% HPLCグレードのアセトニトリル)を用いた後、1分間保持した。LCMS Rt=1.480min., m/z 614.25(M+H). 1H NMR(500MHz, CDCl3) δ 10.29(s, 1H), 8.91(m, 2H), 8.09(m, 1H), 7.94(s, 1H), 7.66(dd, J=8.4, 7.3 Hz, 1H), 7.50-7.39(m, 2H), 7.33(m, 1H), 6.97(m, 1H), 6.73(dd, J=8.3, 0.7 Hz, 1H), 6.65(s, 1H), 5.29-5.22(m, 4H), 4.39(t, J=6.5 Hz, 2H), 4.32(m, 1H), 2.93(m, 1H), 2.73(m, 1H), 2.64(t, J=7.3 Hz, 2H), 2.50(m, 1H), 2.40(s, 3H), 2.28(m, 1H), 2.23-2.12(m, 1H), 2.04-1.94(m, 2H), 1.73(m, 1H).
【０２７１】
実施例1030：(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(6-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)ピリジン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸
【化１０４】
2019524705.tif 000106
バイアルに、(R)-5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(6-(3-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)ピリジン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(34 mg, 0.055 mmol)、L-ピペコリン酸(10.74 mg, 0.083 mmol)、DMF(1 mL)、AcOH(0.111 mL)およびボラン-2-ピコリン複合体(11.86 mg, 0.111 mmol)を加えた。バイアルのキャップを閉めて、混合物を、終夜室温で振盪した。粗生成物を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、30分間かけて20〜75% Bのグラジエントを用いた後、5分間保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(6-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)ピリジン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸の収量は、4.4 mg(10.4%)であり、LCMS分析によるその推定純度は95.5%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.00(m, 2H), 8.46(s, 1H), 7.79(t, J=7.8 Hz, 1H), 7.54(d, J=7.3 Hz, 1H), 7.44(s, 1H), 7.40-7.35(m, 1H), 7.34-7.27(m, 1H), 7.12(s, 1H), 7.06(d, J=7.3 Hz, 1H), 6.79(d, J=8.2 Hz, 1H), 5.34(s, 2H), 5.28(s, 2H), 4.29(t, J=6.7 Hz, 2H), 4.21-4.10(m, 1H), 3.77(d, J=13.7 Hz, 1H), 3.06(m, 1H), 2.87(m, 1H), 2.69(m, 1H), 2.48(m, 1H), 2.33(s, 3H), 2.29(m, 2H), 2.22(m, 1H), 2.03-1.89(m, 2H), 1.89-1.82(m, 6H), 1.49(m, 4H), 1.34(m, 1H).
【０２７２】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；移動相Bは、95：5 アセトニトル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)であって、50℃の温度、220 nm のUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.358 min；ESI-MS(+)m/z=727.1(M+H)
分析条件2：保持時間=1.383 min；ESI-MS(+)m/z=727.1(M+H)
【０２７３】
実施例1031：(R)-5-((4-クロロ-2-(ヒドロキシメチル)-5-((3-(6-(3-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)ピリジン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化１０５】
2019524705.tif 000107
実施例1031を、実施例1030の反応混合物から単離した。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、30分間かけて20〜75%Bのグラジエントを用いた後、5分間保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は、4.6 mg(11%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は95%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 8.96(m, 2H), 8.38(s, 1H), 7.85-7.69(m, 1H), 7.49(d, J=7.0 Hz, 1H), 7.42-7.30(m, 2H), 7.30-7.21(m, 1H), 7.11-6.97(m, 2H), 6.78(d, J=7.9 Hz, 1H), 5.32(s, 2H), 5.25(s, 2H), 4.47(s, 2H), 4.27(m, 2H), 3.88(m, 1 H), 2.70(m, 1H), 2.43(m, 1H), 2.31(m 4H), 1.95(m 1H), 1.86(m, 5 H), 1.51(m, 1 H).
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、220 nmのUV波長、1.0 mL/分の流量にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)であって、50℃の温度、1.0 mL/分の流量、220 nm のUV波長にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.599 min；ESI-MS(+)m/z=616.1(M+H)
分析条件2：保持時間=1.598 min；ESI-MS(+)m/z=616.1(M+H)
【０２７４】
中間体：(2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)フェニル)メタノール 
【化１０６】
2019524705.tif 000108
(2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)フェニル)メタノールを、第2世代XPhosプレ触媒および0.5 M リン酸三カリウム/THF水溶液を用いて、室温で、6-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)キノキサリンおよび(3-ブロモ-2-メチルフェニル)メタノールのカップリングにより得た。
1H NMR(400MHz, クロロホルム-d) δ 8.93-8.89(m, 2H), 8.18(d, J=8.5 Hz, 1H), 8.07(d, J=2.0 Hz, 1H), 7.78(dd, J=8.7, 1.9 Hz, 1H), 7.51(dd, J=7.2, 1.6 Hz, 1H), 7.39-7.31(m, 2H), 4.85(d, J=5.5 Hz, 2H), 2.33(s, 3H), 1.72(t, J=5.6 Hz, 1H).
【０２７５】
中間体：5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド
【化１０７】
2019524705.tif 000109
5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンズアルデヒドを、ジイソプロピルアゾジカルボキシレートおよびトリフェニルホスフィン/THFを用いる、(2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)フェニル)メタノールおよび5-クロロ-2,4-ジヒドロキシベンズアルデヒドの反応から得た。1H NMR(400MHz, クロロホルム-d) δ 11.47(s, 1H), 9.77-9.71(m, 1H), 8.95-8.88(m, 2H), 8.20(d, J=8.5 Hz, 1H), 8.09(d, J=1.8 Hz, 1H), 7.80(dd, J=8.7, 1.9 Hz, 1H),  7.62-7.55(m, 2H), 7.44-7.35(m, 2H), 6.68(s, 1H), 5.27(m, 2H), 2.34(s, 3H).
【０２７６】
中間体：5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化１０８】
2019524705.tif 000110
5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリルを、炭酸セシウム/DMFを用いる5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンズアルデヒドおよび5-(クロロメチル)ニコチノニトリルとの反応から得た。
【０２７７】
実施例1032：(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸
【化１０９】
2019524705.tif 000111
(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸を、TFAおよび水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム/DMFを用いて、5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリルおよび(S)-ピペリジン-2-カルボン酸の反応から得た。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって；グラジエント：15分間かけて25〜65%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。
1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.01(d, J=2.7 Hz, 4H), 8.47(s, 1H), 8.19(d, J=8.5 Hz, 1H), 8.03(d, J=1.2 Hz, 1H), 7.87(dd, J=8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.62-7.57(m, 1H), 7.44(s, 1H), 7.41-7.35(m, 2H), 7.15(s, 1H), 5.40-5.34(m, 2H), 5.32(s, 2H), 3.79(d, J=13.7 Hz, 1H), 3.62(d, J=14.0 Hz, 1H), 3.14(dd, J=7.3, 4.3 Hz, 1H), 2.93-2.85(m, 1H)2.34-2.24(m, 4H),  1.84-1.68(m, 2H), 1.49(br. s., 3H), 1.37(br. s., 1H).
【０２７８】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：カラム：Warters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であって；温度：50℃；グラジエント：0%B、3分間かけて0〜100% B、次いで0.5分間100% Bで保持；流量：1 mL/min；検出：220 nmのUV。
インジェクション2の条件：カラム：Warters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相B：95：5 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；温度：50℃；グラジエント：0%B、3分間かけて0〜100%B、次いで0.5分間100%Bで保持；流量：0.5 mL/min；検出：220 nmのUV。
LCMS(インジェクション1の条件：アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む))
Rt(保持時間)=1.65min, ESI m/z 634(M+1), 632(M-1).
LCMS(インジェクション2の条件：メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む))
Rt=2.52min, ESI m/z 634(M+1), 632(M-1).
【０２７９】
実施例1033：(R)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸
【化１１０】
2019524705.tif 000112
(R)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸を、実施例1001と同様の方法において、5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリルおよび(R)-ピペリジン-2-カルボン酸から得た。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり；グラジエント：15分間かけて25〜65%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.01(d, J=2.7 Hz, 4H), 8.47(s, 1H), 8.19(d, J=8.9 Hz, 1H), 8.02(s, 1H), 7.87(d, J=8.5 Hz, 1H), 7.61-7.57(m, 1H), 7.44(s, 1H), 7.42-7.35(m, 2H), 7.15(s, 1H), 5.40-5.30(m, 4H), 3.79(d, J=13.7 Hz, 1H), 3.62(d, J=13.7 Hz, 1H), 3.14(dd, J=7.3, 4.0 Hz, 1H), 2.93-2.85(m, 1H), 2.34-2.25(m, 4H), 1.85-1.68(m, 2H), 1.49(br. s., 3H), 1.37(br. s., 1H).
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：カラム：Warters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；温度：50℃；グラジエント：0%B、3分間かけて0〜100% B、次いで0.5分間100% Bで保持；流量：1 mL/min；検出：220 nmのUV。
インジェクション2の条件：カラム：Warters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；温度：50℃；グラジエント：0%B、3分間かけて0〜100% B、次いで0.5分間100% Bで保持；流量：0.5 mL/min；検出：220 nmのUV。
LCMS(インジェクション1の条件：アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む))
Rt=1.60min, ESI m/z 634(M+1), 632(M-1).
LCMS(インジェクション2の条件：メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む))
Rt=2.52min, ESI m/z 634(M+1), 632(M-1).
【０２８０】
実施例1034：(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシプロパン酸
【化１１１】
2019524705.tif 000113
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシプロパン酸を、実施例1001と同様の方法により、5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリルおよび(R)-2-アミノ-3-ヒドロキシプロパン酸から得た。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：15分間かけて20〜60%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.07-8.99(m, 4H), 8.54(s, 1H), 8.20(d, J=8.5 Hz, 1H), 8.03(d, J=1.5 Hz, 1H), 7.87(dd, J=8.5, 1.8 Hz, 1H), 7.59(d, J=6.7 Hz, 1H), 7.55(s, 1H), 7.42-7.35(m, 2H), 7.18(s, 1H), 5.43-5.33(m, 4H), 4.07-3.98(m, 2H), 3.74(dd, J=11.3, 4.3 Hz, 1H), 3.67-3.61(m, 1H), 3.22-3.17(m, 1H), 2.32(s, 3H).
【０２８１】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：カラム：Warters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；温度：50℃；グラジエント：0%B、3分間かけて0〜100%B、次いで0.5分間100%Bで保持；流量：1 mL/min；検出：220 nmのUV。
インジェクション2の条件：カラム：Warters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；温度：50℃；グラジエント：0%B、3分間かけて0〜100%B、次いで0.5分間100% Bで保持；流量：0.5 mL/min；検出：220 nmのUV。
LCMS(インジェクション1の条件：アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む))
Rt=1.73min, ESI m/z 610(M+1), 608(M-1).
LCMS(インジェクション2の条件：メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む))
Rt=2.47min, ESI m/z 610(M+1), 608(M-1).
【０２８２】
実施例1035：(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化１１２】
2019524705.tif 000114
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸を、実施例1001と同様の方法において、5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリルおよび(R)-2-アミノ-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸から得た。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：15分間かけて15〜55%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.04(d, J=1.5 Hz, 1H), 9.03-8.98(m, 3H), 8.52(s, 1H), 8.19(d, J=8.8 Hz, 1H), 8.02(d, J=1.2 Hz, 1H),  7.86(dd, J=8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.60-7.54(m, 2H), 7.42-7.34(m, 2H), 7.16(s, 1H), 5.36(d, J=11.6 Hz, 4H), 3.95(s, 2H), 3.63-3.58(m, 1H), 3.53(d, J=11.3 Hz, 1H), 2.31(s, 3H), 1.23(s, 3H).
【０２８３】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：カラム：Warters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；温度：50℃；グラジエント：0%B、3分間かけて0〜100%B、次いで0.5分間100% Bで保持；流量：1 mL/min；検出：220 nmのUV。
インジェクション2の条件：カラム：Warters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；温度：50℃；グラジエント：0%B、3分間かけて0〜100%B、次いで0.5分間100% Bで保持；流量：0.5 mL/min；検出：220 nmのUV。
LCMS(インジェクション1の条件：アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む))
Rt=1.54min, ESI m/z 624(M+1), 622(M-1).
LCMS(インジェクション2の条件：メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む))
Rt=2.50min, ESI m/z 624(M+1), 622(M-1).
【０２８４】
実施例1036：(S)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸 
【化１１３】
2019524705.tif 000115
(S)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸を、実施例1001と同様の方法において、5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(キノキサリン-6-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリルおよび(S)-2-アミノ-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸から得た。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：15分間かけて15〜55%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.04(d, J=1.5 Hz, 1H), 9.03-8.99(m, 3H), 8.52(s, 1H), 8.19(d, J=8.5 Hz, 1H), 8.02(d, J=1.5 Hz, 1H), 7.86(dd, J=8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.59-7.55(m, 2H), 7.41-7.34(m, 2H), 7.16(s, 1H), 5.36(d, J=11.6 Hz, 4H), 3.95(s, 2H), 3.63-3.59(m, 1H), 3.53(d, J=11.3 Hz, 1H), 2.31(s, 3H), 1.24(s, 3H).
【０２８５】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：カラム：Warters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；温度：50℃；グラジエント：0%B、3分間かけて0〜100%B、次いで0.5分間100% Bで保持；流量：1 mL/min；検出：220 nmのUV。
インジェクション2の条件：カラム：Warters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；温度：50℃；グラジエント：0%B、3分間かけて0〜100%B、次いで0.5分間100% Bで保持；流量：0.5 mL/min；検出：220 nmのUV。
LCMS(インジェクション1 条件：アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む))
Rt=1.62min, ESI m/z 624(M+1), 622(M-1).
LCMS(インジェクション2 条件：メタノール：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む))
Rt=2.50min, ESI m/z 624(M+1), 622(M-1).
【０２８６】
中間体：3-ブロモ-1-(3-クロロプロピル)ピリジン-2(1H)-オンおよび3-ブロモ-1-(3-ブロモプロピル)ピリジン-2(1H)-オン
【化１１４】
2019524705.tif 000116
3-ブロモピリジン-2(1H)-オン(500 mg, 2.87 mmol)/DMF(13 mL)の溶液に、K2CO3(794 mg, 5.75 mmol)を加えた。反応混合物を、室温で1時間攪拌して、1-ブロモ-3-クロロプロパン(0.283 mL, 2.87 mmol)を加えて、反応混合物を、50℃で19時間攪拌した。溶媒を除去した。残留物を、DCMに溶解した。有機層を水、ブラインで洗い、MgSO4上で乾燥させて、次いで濃縮した。粗生成物を、EtOAc/DCM(0〜50%)のグラジエントを用いて溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、標的化合物の混合物(352mg, 49%)を得た。1H NMR(500MHz, クロロホルム-d) δ 7.77(dd, J=7.3, 1.9 Hz, 1H), 7.39-7.35(m, 1H), 6.11(t, J=6.9 Hz,1H), 4.22-4.15(m, 2H), 3.61-3.54(m, 1.5H), 3.42(t, J=6.1 Hz, 0.5H), 2.41-2.35(m, 0.5H), 2.30(dt, J=12.4, 6.4 Hz, 1.5H). 1H NMR スペクトルに基づくと：3-ブロモ-1-(3-クロロプロピル)ピリジン-2(1H)-オンは75%であり、3-ブロモ-1-(3-ブロモプロピル)ピリジン-2(1H)-オン(76)は25%であった。
【０２８７】
中間体：5-((4-クロロ-5-((3-(1-(3-クロロプロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化１１５】
2019524705.tif 000117
5-((4-クロロ-5-((3-(1-(3-クロロプロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリルを、第2世代 XPhosプレ触媒および0.5M リン酸三カリウム水溶液/THFを用いて、3-ブロモ-1-(3-クロロプロピル)ピリジン-2(1H)-オンおよび3-ブロモ-1-(3-ブロモプロピル)ピリジン-2(1H)-オンの混合物を、5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリルとのカップリングにより得た。1H NMR(500MHz, クロロホルム-d) δ 10.32-10.27(m, 1H), 8.97(d, J=2.0 Hz, 1H),  8.88(d, J=1.9 Hz, 1H), 8.19(t, J=2.0 Hz, 1H), 7.92(s, 1H), 7.46(dd, J=6.8, 2.0 Hz, 1H), 7.40(dd, J=6.8, 2.0 Hz, 1H), 7.38-7.35(m, 1H), 7.27-7.22(m, 1H), 7.22-7.18(m, 1H), 6.45(s, 1H), 6.34(t, J=6.8 Hz, 1H), 5.27(d, J=6.0 Hz, 2H), 5.17(s, 2H), 4.24-4.17(m, 2H), 3.61(t, J=6.1 Hz, 2H), 2.33-2.25(m, 5H).
【０２８８】
中間体：(R)-5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(1-(3-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化１１６】
2019524705.tif 000118
DMF(8 mL)中の5-((4-クロロ-5-((3-(1-(3-クロロプロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(304mg, 0.540 mmol)(77)、(R)-ピロリジン-3-オール,HCl(100 mg, 0.811 mmol)およびK2CO3(112 mg, 0.811 mmol)、ヨウ化ナトリウム(81 mg, 0.540 mmol)の攪拌した混合物を、60℃で6時間加熱した。溶媒を除去した。残留物を、EtOAcおよび水に分配した。水相を、酢酸エチルで１回抽出した。有機抽出物を合わせて、ブラインで洗い、次いで硫酸ナトリウム上で乾燥させた。乾燥剤を濾去して、溶媒を真空除去した。得られる残留物を、シリカゲルでのカラムクロマトグラフィーにより精製して(Biotage 25s, 0〜20% MeOH/DCM)、標的化合物(145 mg)を得た。1H NMR(500MHz, クロロホルム-d) δ 10.29(s, 1H), 8.98(d, J=2.0 Hz, 1H), 8.87(d, J=1.9 Hz, 1H), 8.22(t, J=2.0 Hz, 1H), 7.91(s, 1H), 7.47-7.46(m, 1H), 7.39-7.34(m, 2H), 7.26-7.17(m, 2H), 6.46-6.44(m, 1H), 6.32-6.28(m, 1H),5.37(br, s 2H), 5.16(s, 2H), 4.34(ddt, J=7.0, 4.7, 2.1 Hz, 1H), 4.12(t, J=6.9 Hz, 2H), 2.91(td, J=8.6, 4.8 Hz, 1H), 2.72(d, J=9.9 Hz, 1H), 2.55-2.47(m, 3H), 2.31-2.24(m, 4H), 2.22-2.14(m, 1H), 2.05-1.96(m, 2H), 1.75(dt, J=13.5, 6.7 Hz, 1H).
【０２８９】
実施例1037：(S)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸 
【化１１７】
2019524705.tif 000119
2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸を、ボラン-2-ピコリン複合体および酢酸/MeOHを用いて、(R)-5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(1-(3-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリルおよび(S)-2-アミノ-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸のカップリングにより得た。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：20分間かけて5〜45%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.04(d, J=1.8 Hz, 1H), 9.00(d, J=1.8 Hz, 1H), 8.51(s, 1H), 7.73(dd, J=6.8, 2.0 Hz, 1H), 7.54(s, 1H), 7.43(d, J=7.3 Hz, 1H), 7.35(dd, J=6.6, 1.8 Hz, 1H), 7.22(t, J=7.7 Hz, 1H), 7.13(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.07(s, 1H), 6.32(t, J=6.8 Hz, 1H), 5.34(s, 2H), 5.28(s, 2H), 4.17(br. s., 1H), 4.01-3.94(m, 4H),, 2.72-2.65(m, 1H), 2.57-2.53(m, 2H), 2.45-2.35(m, 3H), 2.29(dd, J=9.5, 3.3 Hz, 1H),2.16-212(m,1H), 2.14(s, 3H), 2.00-1.92(m, 1H), 1.85-1.75(m, 2H), 1.53(dd, J=8.4, 4.8 Hz, 1H), 1.23(s, 3H).
【０２９０】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：カラム：Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；温度：50℃；グラジエント：3分間かけて0〜100%B、次いで0.75分間100% Bで保持；流量：1.0 mL/min；検出：220 nmのUV。
インジェクション2の条件：カラム：Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；温度：50℃；グラジエント：3分間かけて0〜100% B、次いで0.75分間100% Bで保持；流量：1.0 mL/min；検出：220 nmのUV。
LCMS(インジェクション1 条件：アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む))
Rt=1.185min, ESI m/z 716(M+1), 714(M-1).
LCMS(インジェクション2 条件：アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む))
Rt=1.182min, ESI m/z 716(M+1), 714(M-1).
【０２９１】
実施例1038：(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化１１８】
2019524705.tif 000120
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸を、実施例1006と同様の方法において、(R)-5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(1-(3-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリルおよび(R)-2-アミノ-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸との反応により得た。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：20分間かけて5〜45%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.04(d, J=1.8 Hz, 1H), 9.00(d, J=1.8 Hz, 1H), 8.50(s, 1H), 7.73(dd, J=6.8, 2.0 Hz, 1H), 7.54(s, 1H), 7.43(d, J=7.0 Hz, 1H), 7.35(dd, J=6.6, 2.2 Hz, 1H), 7.22(t, J=7.7 Hz, 1H), 7.12(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.07(s, 1H), 6.32(t, J=6.8 Hz, 1H), 5.34(s, 2H), 5.28(s, 2H), 4.17(br. s., 1H), 4.01-3.94(m, 4H), 2.69(dd, J=9.5, 6.2 Hz, 1H), 2.56-2.53(m, 2H), 2.43-2.36(m, 3H), 2.28(dd, J=9.5, 3.7 Hz, 1H), 2.16-2.11(m, 1H), 2.14(s, 3H),  2.01-1.93(m, 1H), 1.85-1.75(m, 2H), 1.58-1.49(m, 1H), 1.23(s, 3H).
【０２９２】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：カラム：Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；温度：50℃；グラジエント：3分間かけて0〜100% B、次いで0.75分間100% Bで保持；流量：1.0 mL/min；検出：220 nmのUV。インジェクション2の条件：カラム：Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；温度：50℃；グラジエント：3分間かけて0〜100% B、次いで0.75分間100% Bで保持；流量：1.0 mL/min；検出：220 nmのUV。
LCMS(インジェクション1の条件：アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む))
Rt=1.203min, ESI m/z 716(M+1), 714(M-1).
LCMS(インジェクション2の条件：アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む))
Rt=1.158min, ESI m/z 716(M+1), 714(M-1).
【０２９３】
実施例1039：(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸
【化１１９】
2019524705.tif 000121
(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸を、実施例1006と同様の方法において、(R)-5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(1-(3-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリルおよび(S)-ピペリジン-2-カルボン酸から得た。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：20分間かけて10〜50%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.01(s, 2H), 8.46(s, 1H), 7.74(d, J=4.8 Hz, 1H), 7.47-7.42(m, 2H), 7.37-7.34(m, 1H), 7.23(t, J=7.5 Hz, 1H), 7.13(d, J=7.3 Hz, 1H), 7.07(s, 1H), 6.32(t, J=6.8 Hz, 1H), 5.33(s, 2H), 5.25(s, 2H), 4.17(br. s., 1H), 4.02-3.95(m, 2H), 3.85(d, J=13.6 Hz, 1H), 3.68(d, J=13.6 Hz, 1H), 3.19-3.11(m, 1H), 2.95-2.87(m,1H),  2.69(dd, J=9.7, 6.4 Hz, 1H), 2.55(m, 2H), 2.45-2.36(m, 3H), 2.32-2.26(m, 1H), 2.14(s, 3H), 2.01-1.93(m, 1H), 1.82(t, J=6.6 Hz, 3H), 1.75-1.64(m,1H), 1.50(br. s., 4H), 1.37(br. s., 1H).
【０２９４】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：カラム：Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；温度：50℃；グラジエント：3分間かけて0〜100% B、次いで0.75分間100% Bで保持；流量：1.0 mL/min；検出：220 nmのUV。
インジェクション2の条件：カラム：Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；温度：50℃；グラジエント：3分間かけて0〜100% B、次いで0.75分間100% Bで保持；流量：1.0 mL/min；検出：220 nmのUV。
LCMS(インジェクション1の条件：アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む))
Rt=1.218min, ESI m/z 726(M+1), 724(M-1).
LCMS(インジェクション2の条件：アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む))
Rt=1.218min, ESI m/z 726(M+1), 724(M-1).
【０２９５】
実施例1040：(S)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシプロパン酸
【化１２０】
2019524705.tif 000122
(S)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシプロパン酸を、実施例1006と同様の方法において、(R)-5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(1-(3-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロピル)-2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-3-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリルおよび(S)-2-アミノ-3-ヒドロキシプロパン酸から得た。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：15分間かけて15〜50%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.04(d, J=1.5 Hz, 1H), 9.01(d, J=1.8 Hz, 1H), 8.51(s, 1H), 7.73(dd, J=6.6, 1.8 Hz, 1H), 7.51(s, 1H), 7.43(d, J=7.7 Hz, 1H), 7.35(dd, J=6.8, 2.0 Hz, 1H), 7.23(t, J=7.5 Hz, 1H), 7.13(d, J=7.7 Hz, 1H), 7.08(s, 1H), 6.32(t, J=6.8 Hz, 1H), 5.34(d, J=7.3 Hz, 2H), 5.27(s, 2H), 4.17(br. s., 1H), 4.05-3.94(m, 4H), 3.73-3.67(m, 1H), 3.64-3.58(m, 1H), 3.17-3.12(m, 1H), 2.75-2.67(m, 1H), 2.59-2.53(m, 1H), 2.46-2.38(m, 3H), 2.30(dd, J=9.5, 3.7 Hz, 1H), 2.14(s, 3H), 2.00-1.92(m, 1H), 1.82(t, J=7.2 Hz, 2H), 1.58-1.50(br, s, H).
【０２９６】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：カラム：Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)；温度：50℃；グラジエント：3分間かけて0〜100% B、次いで0.75分間100% Bで保持；流量：1.0 mL/min；検出：220 nmのUV。
インジェクション2の条件：カラム：Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；温度：50℃；グラジエント：3分間かけて0〜100% B、次いで0.75分間100% Bで保持；流量：1.0 mL/min；検出：220 nmのUV。
LCMS(インジェクション1の条件：アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む))
Rt=1.161min, ESI m/z 702(M+1), 700(M-1).
LCMS(インジェクション2の条件：アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む))
Rt=1.158min, ESI m/z 702(M+1), 700(M-1).
【０２９７】
実施例1041：(S)-1-(4-((3-(ベンゾ[d]オキサゾール-5-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸
【化１２１】
2019524705.tif 000123
小さな密封管に、THF(2 mL)、水(0.667 mL)、5-ブロモベンゾオキサゾール(13.16 mg, 0.066 mmol)、(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸(35 mg, 0.055 mmol)、リン酸三カリウム塩(23.51 mg, 0.111 mmol)および第二世代XPhosプレ触媒(2.179 mg, 2.77 μmol)を加えた。容器を密封して、混合物を、脱気/窒素でフラッシュして、次いで75℃で終夜加熱した。
【０２９８】
粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて25〜65%Bのグラジエント、次いで5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより更に精製した：Waters XBridge 5μm C18, 19 x 200 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり、移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、20 mL/分の流量で、15分間かけて25〜65% Bのグラジエント、次いで5分間100%Bで保持した。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。生成物の収量は4.2 mg(12%収率)であり、LCMS分析によるその推定純度は95%であった。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 8.93(m, 2H), 8.71(s, 1H), 8.37(s, 1H), 7.78(m, 1H), 7.73(s, 1H), 7.51-7.46(m, 1H), 7.44-7.32(m, 1H), 7.30-7.11(m, 2H), 7.03(m, 1H), 6.54(m, 1H), 5.28(m, 2H), 5.17(m, 2H), 3.71(d, J=13.7 Hz, 1H), 3.49(d, J=13.7 Hz, 1H), 3.04-2.97(m, 1H), 2.89-2.80(m, 1H), 2.25-2.18(m, 4H), 1.70(m, 2H), 1.43(m, 3H), 1.34-1.23(m, 1H)．
【０２９９】
2つの分析用LC/MSインジェクションを用いて、最終純度を決定した。
インジェクション1の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(10 mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であって、50℃の温度、1.0 mL/分の流量、220 nmのUV波長にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
インジェクション2の条件：Waters Acquity UPLC BEH 1.7μm C18, 2.1 x 50 mm、ここで移動相Aは、5：95 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)であり；移動相Bは、95：5 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)であって、50℃の温度、1.0 mL/分の流量、220 nmのUV波長にて、3分間かけて0〜100%Bのグラジエントを用いた後、0.75分間100%Bで保持した。
分析条件1：保持時間=1.696 min；ESI-MS(+)m/z=623.0(M+H)
分析条件2：保持時間=1.874 min；ESI-MS(+)m/z=623.1(M+H)
【０３００】
実施例2001〜2016を、以下に記載した通りに製造して、これらの実施例に用いたHPLC LC/MS条件を下記に列挙した：
LC/MS条件A：
カラム=Waters Aquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm
開始%B=2；最終%B=98
グラジエント時間=1.5 min；停止時間=2または2.5 min
流量=0.8 mL/min；波長=220 nmまたは254 nm
溶媒A=100% 水/0.05 % TFA 
溶媒B=100% ACN/0.05 % TFA,(ACN=アセトニトリル)
オーブン温度=40℃
LC/MS条件B：
カラム=Phenomenex-Luna C18, 2.0 X 50 mm, 3 μm
開始%B=0；最終%B=100
グラジエント時間=4 min；停止時間=5または6 min
流量=0.8 mL/min；波長=220 nmまたは254 nm
溶媒A=5% ACN/95% 水/10 mM NH4OAc
溶媒B=95% ACN/5% 水/10 mM NH4OAc
オーブン温度=40℃
LC/MS条件C：
カラム=ACQUITY UPLC BEH, C18 2.1 X 50 mm, 1.7μ
開始%B=0；最終%B=100
グラジエント時間=2 min；停止時間=3 min
流量=0.8 mL/min；波長=220 nmまたは254 nm
溶媒A=10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA
溶媒B=90% MeOH/10% H2O/0.1% TFA
オーブン温度=40℃
LC/MS条件D：
カラム=Waters Aquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm
開始%B=2；最終%B=98
グラジエント時間=1.5 min；停止時間=1.6 min
流量=0.8 mL/min；波長=220 nmまたは254 nm
溶媒A=100% 水/0.05 % TFA 
溶媒B=100% ACN/0.05 % TFA 
オーブン温度=50℃
LC/MS条件E：
カラム=Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm
開始%B=0；最終%B=100
グラジエント時間=3 min；停止時間=3.75 min
流量=1.0 mL/min；波長=220 nm
溶媒A=5% ACN/95% 水/10 mM NH4OAc
溶媒B=95% ACN/5% 水/10 mM NH4OAc
オーブン温度=50℃
LC/MS条件F：
カラム=Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 μm
開始%B=0；最終%B=100
グラジエント時間=3 min；停止時間=3.75 min
流量=1.0 mL/min；波長=220 nm
溶媒A=5% ACN/95% 水/0.1% TFA
溶媒B=95% ACN/5% 水/0.1% TFA
オーブン温度=50℃
【０３０１】
中間体：5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)ベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド
【化１２２】
2019524705.tif 000124
新たに蒸留した無水THF(250 mL)中の(2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)フェニル)メタノール(8.0 g, 32.2 mmol)、5-クロロ-2,4-ジヒドロキシベンズアルデヒド(5.56 g, 32.2 mmol)およびトリフェニルホスフィン(11.4 g, 43.5 mmol)の磁力を利用して攪拌した溶液を、氷/水浴中で冷却して、ゆっくりと(30分間かけて)DIAD(ジイソプロピルアゾジカルボキシレート, 8.0 mL, 41.1 mmol)を用いて処理した。この反応溶液を、アルゴンでフラッシュして、密封して、ゆっくりと室温まで温めながら終夜攪拌した。反応溶液を、粘性油状物となるまで真空蒸発させて、次いでCH2Cl2/hexに溶かして、120 g Teledyne Isco Silica Flash Columnの上部に重層して、12 以上のcoln vols(カラム容量)の100%ヘキサン〜40% EtOAc/ヘキサンのグラジエントを用いてBiotageで精製した。生成物を含有する画分を、真空蒸発させて、高真空下で乾燥させて、純粋な標題化合物[5.5 g(42%)]を白色固体として得た：1H NMR(500MHz, クロロホルム-d) δ  11.43(s, 1H), 9.71(s, 1H), 7.80(d, J=7.5 Hz, 1H), 7.60-7.47(m, 2H), 7.25(t, J=7.5 Hz, 1H), 6.61(s, 1H), 5.19(s, 2H), 2.59(s, 3H), 1.39(s, 12H).
【０３０２】
中間体：5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル 
【化１２３】
2019524705.tif 000125
5-クロロ-2-ヒドロキシ-4-((2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)ベンジル)オキシ)ベンズアルデヒド(2.76 g, 6.85 mmol)/無水DMF(40 mL)の磁力を利用して攪拌した溶液を、5-(クロロメチル)ニコチノニトリル(1.26 g, 8.26 mmol)、炭酸セシウム(3.35 g, 10.28 mmol)を加えた。反応溶液に、N2を十分フラッシュして、しっかりとキャップを閉めて、75℃の油浴に置いた。2.75時間の後に、この反応溶液を冷却して、EtOAc(200 mL)および水(150 mL)に分配した。水層を、別のEtOAc(200 mL)で抽出した。有機層を合わせて、ブライン(2 x 50 mL)で洗い、Na2SO4上で乾燥させて、濾過して、真空蒸発させた。残留物を、CH2Cl2(15 mL)に溶解して、80 g Teledyne Isco Silica Flash Columnの上部に重層して、8以上のカラム容量の100% CH2Cl2〜25% EtOAc/CH2Cl2のグラジエントを用いてBiotageで精製した。生成物を含有する画分を、真空蒸発して、次いで高真空で乾燥させて、純粋な標題化合物[1.92 g(54%)]をオフホワイトの固体として得た：1H NMR(500MHz, クロロホルム-d) δ  10.29(s, 1H), 8.91(dd, J=11.7, 2.1 Hz, 2H), 8.07(t, J=2.1 Hz, 1H), 7.93(s, 1H), 7.81(dd, J=7.5, 1.2 Hz, 1H), 7.47(d, J=6.6 Hz, 1H), 7.24(t, J=7.6 Hz, 1H), 6.57(s, 1H), 5.24(s, 2H), 5.19(s, 2H), 2.60(s, 3H), 1.39(s, 12H).
【０３０３】
中間体：4-ブロモ-3-クロロ-2-(3-(ピペリジン-1-イル)プロポキシ)ピリジン 
【化１２４】
2019524705.tif 000126
水素化ナトリウム(74.1 mg, 3.09 mmol)/無水DMF(5 mL)の懸濁液に、連続的なアルゴンのフラッシュ下において、3-(ピペリジン-1-イル)プロパン-1-オール(440 mg, 3.07 mmol)をゆっくりと加えた。この反応を、10分間攪拌して、次いで固体の4-ブロモ-2,3-ジクロロピリジン(655 mg, 2.89 mmol)を用いた後、1分間かけて少量ずつ処理した。この反応を、室温で3時間攪拌して、0.45 uMフリットに通して濾過して、150 mL/minで、30分間かけて10% 溶媒B〜100% 溶媒Bのグラジエントを用いるSunfire C18 10uM 50x300 mm columnを備えた逆相Prep HPLCにより濾過して(溶媒Aは10% MeOH/90% 水(0.1% TFAを含む)であり、溶媒Bは90% MeOHおよび10% 水(0.1% TFAを含む)である)、220 nMで検出して、純粋な標題化合物(151.5 mg, 9%)をTFA塩として得た；1H NMR(500MHz, クロロホルム-d) δ  7.86(d, J=5.3 Hz, 1H), 7.21(d, J=5.3 Hz, 1H), 4.47(t, J=5.7 Hz, 2H), 3.79(br d, J=11.7 Hz, 2H), 3.37-3.25(m, 2H), 2.83-2.67(m, 2H), 2.39-2.25(m, 2H), 2.04-1.89(m, 5H), 1.56-1.40(m, 1H)
【０３０４】
中間体：5-((4-クロロ-5-((3-(3-クロロ-2-(3-(ピペリジン-1-イル)プロポキシ)ピリジン-4-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル 
【化１２５】
2019524705.tif 000127
4-ブロモ-3-クロロ-2-(3-(ピペリジン-1-イル)プロポキシ)ピリジン, 2 TFA(86.3 mg, 0.154 mmol)および5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(90 mg, 0.173 mmol)/無水THF(7 mL)の溶液に、水中で0.5Mリン酸三カリウム塩(0.8 mL, 0.400 mmol)を加えた。この反応を、アルゴンで十分フラッシュして、次いで、2nd 世代X-phosプレ触媒(17 mg, 0.022 mmol)を用いて処理した。得られる混合物を、再度アルゴンでフラッシュして、しっかりとキャップをして、室温で3.5日間攪拌した。溶媒を、穏やかなN2流下において除去して、残留物を、水(100 mL)およびEtOAc(75mL)に分配した。有機層を、ブライン(40 mL)で抽出して、Na2SO4上で乾燥させて、濾過して、溶媒を真空除去して、表題化合物を得て、粗製物として使用する。LC/MS条件A：ret time 1.104 min；m/e=645,(ret time=保持時間).
【０３０５】
中間体：3-((2,3-ジクロロピリジン-4-イル)オキシ)プロパン-1-オール
【化１２６】
2019524705.tif 000128
アルゴン下において無水プロパン-1,3-ジオール(4 g, 52.6 mmol)に、水素化ナトリウム(68 mg, 2.75 mmol)を加えた。反応溶液(非常に温かい)を、N2下においてフラッシュして、次いで4-ブロモ-2,3-ジクロロピリジン(500 mg, 2.204 mmol)、無水THF(5 mL)で処理した。反応溶液を、アルゴンでフラッシュして、しっかりとキャップを閉めて、室温で2日間攪拌した。反応溶液を、1N HCl(1 mL)を含有する水(150 mL)に注ぎ入れて、EtOAc(200 mL)を用いて分配した。層を分離して、有機層を、水(23 x 70 mL)、ブライン(75 mL)で洗い、Na2SO4上で乾燥させて、溶媒を真空除去した。粗製物質を、CH2Cl2に溶かして、80 g Teledyne Isco Silica Flash Columnの上部に重層して、9カラム以上の容量の100% CH2Cl2〜100% EtOAc/ヘキサンのグラジエントを用いるBiotageで精製した。生成物を含有する画分を合わせて、真空蒸発させて、高真空下で乾燥させて、純粋な標題化合物(210 mg, 43%)を白色固体として得た。LC/MS条件A：ret time 0.860 min；m/e=222；1H NMR(500MHz, クロロホルム-d) δ 8.17(d, J=5.5 Hz, 1H), 6.84(d, J=5.6 Hz, 1H), 4.29(t, J=6.0 Hz, 2H), 3.92(t, J=5.8 Hz, 2H), 2.14(quin, J=5.9 Hz, 2H).
【０３０６】
中間体：5-((4-クロロ-5-((3-(3-クロロ-4-(3-ヒドロキシプロポキシ)ピリジン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル 
【化１２７】
2019524705.tif 000129
5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(400 mg, 0.771 mmol)および3-((2,3-ジクロロピリジン-4-イル)オキシ)プロパン-1-オール(175 mg, 0.788 mmol)/無水THF(30 mL)の溶液に、0.5 M リン酸三カリウム塩/水(3.9 mL, 1.950 mmol)を加えた。反応溶液を、アルゴンでフラッシュして、次いで2nd世代X-phosプレ触媒(60 mg, 0.076 mmol)で処理した。得られる混合物を、再度、アルゴンで十分フラッシュして、しっかりとキャップをして、65℃の油浴に18時間置いた。溶媒を、穏やかなN2のストリーム下において、大部分を除去して、残留物を、EtOAc(100 mL)および水(40 mL)に分配した。水層を、EtOAc(50 mL)で抽出して、有機層を合わせて、ブライン(15 mL)で洗い、Na2SO4上で乾燥させて、濾過して、溶媒を真空除去した。粗製物質を、CH2Cl2に溶かして、40 g Teledyne Isco Silica Flash Columnの上部に重層して、8以上のカラム容量の100% CH2Cl2〜100% EtOAcのグラジエント、次いで5以上のカラム容量の100% EtOAc〜20% MeOH/EtOAcのグラジエントを用いるBiotageで精製した。生成物を含有する画分を合わせて、真空蒸発させて、高真空下で乾燥させて、純粋な標題化合物(300 mg, 67%)を得た。LC/MS条件A：ret time 1.002 min；m/e=578；1H NMR(500MHz, クロロホルム-d) δ  10.29(s, 1H), 8.92(d, J=1.5 Hz, 2H), 8.47(d, J=5.6 Hz, 1H), 8.11(t, J=1.8 Hz, 1H), 7.93(s, 1H), 7.49(d, J=7.3 Hz, 1H), 7.40-7.32(m, 1H), 7.30(s, 1H), 6.95(d, J=5.6 Hz, 1H), 6.55(s, 1H), 5.33(s, 2H), 5.15(s, 2H), 4.35(br t, J=4.9 Hz, 2H), 3.95(br s, 2H), 2.23-2.15(m, 5H).
【０３０７】
中間体：5-((5-((3-(4-(3-ブロモプロポキシ)-3-クロロピリジン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル 
【化１２８】
2019524705.tif 000130
CH2Cl2(5 mL)中の5-((4-クロロ-5-((3-(3-クロロ-4-(3-ヒドロキシプロポキシ)ピリジン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(182 mg, 0.315 mmol)およびトリフェニルホスフィン(98.3 mg, 0.375 mmol)の磁力を利用して攪拌された溶液に、連続的なアルゴンフラッシュによるアルゴン下にて、固体の四臭化炭素(123 mg, 0.371 mmol)を加えた。反応溶液を、アルゴンで十分にフラッシュして、しっかりとキャップを閉めて、室温で4時間攪拌した。反応溶液を、40 g Teledyne Isco Silica Flash Columnの上部に直接重層して、11以上のcol volsにて100% CH2Cl2〜100% EtOAcのグラジエントを用いるBiotageで精製した。生成物を含有する画分を合わせて、真空蒸発させて、高真空下で乾燥させて、純粋な標題化合物(88.5 mg, 44%)を得た。LC/MS条件B：ret time 3.68 min；m/e=640
1H NMR(500MHz, クロロホルム-d) δ 10.29(s, 1H), 8.93(m, 2H), 8.48(d, J=5.5 Hz, 1H), 8.11(t, J=2.1 Hz, 1H), 7.94(s, 1H), 7.51-7.46(m, 1H), 7.37-7.33(m, 1H), 7.31-7.29(m, 1H), 6.95(d, J=5.6 Hz, 1H), 6.56(s, 1H), 5.33(s, 2H), 5.16(s, 2H), 4.34(t, J=5.6 Hz, 2H), 3.69(t, J=6.3 Hz, 2H), 2.47(quin, J=6.0 Hz, 2H), 2.19(s, 3H).
【０３０８】
中間体：(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸  
【化１２９】
2019524705.tif 000131
DCE(15 mL)およびEtOH(15 mL)の混合液中の5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)ベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(1.2 g, 2.313 mmol)および(R)-2-アミノ-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸(0.551 g, 4.63 mmol)の混合液に、酢酸(0.265 mL, 4.63 mmol)および4A モレキュラ・シーブス(100 mg)を加えた。得られる混合物を、室温で5時間攪拌して、次いで、40時間かけてシアノ水素化ホウ素ナトリウム(4.63 mL, 4.63 mmol)を用いて滴加処理した。反応混合物を濾過して、濾液を濃縮して(<20℃の浴)、残留物を、150 mL/minで、30分間かけて15% 溶媒B〜100% 溶媒Bのグラジエントを用いるSunfire C18 10uM 50x100 mm columnを備えた逆相Prep HPLCにより精製して(溶媒Aは5% CH3CN/95% 水(10 mM NH4OAcを含む)であり、溶媒Bは95% CH3CN/5% 水(10 mM NH4Oacを含む)である)、220 nMで検出して、純粋な標題化合物(220 mg, 15%)を得た。LC/MS条件C：ret time 2.120 min, m/e=622；1H NMR(400MHz, メタノール-d4) δ 8.96(d, J=6.3 Hz, 1H), 8.89(d, J=6.0 Hz, 1H), 8.39(d, J=12.5 Hz, 1H), 7.69(dd, J=7.5, 1.3 Hz, 1H), 7.55(d, J=1.0 Hz, 1H), 7.49-7.38(m, 1H), 7.30-7.24(m, 1H), 7.18(dt, J=14.9, 7.5 Hz, 1H), 7.03-6.90(m, 1H), 5.35(d, J=2.3 Hz, 2H), 5.26(s, 2H), 4.22(s, 2H), 3.92(d, J=11.8 Hz, 1H), 3.72(d, J=12.0 Hz, 1H), 2.61-2.32(m, 3H), 1.44(s, 3H), 1.38(s, 6H).
【０３０９】
中間体：2-ブロモ-1,3-ジメチル-5,6,7,8-テトラヒドロピラゾロ[1,2-a]ピリダジン-4-イウムブロミド
【化１３０】
2019524705.tif 000132
耐圧ビン(150 mL)に、4-ブロモ-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール(2.29 g, 13.08 mmol)、炭酸カリウム(4 g, 28.9 mmol)および無水アセトニトリル(70 mL)を加えた。反応溶液を、N2でフラッシュして、次いで1,4-ジブロモブタン(22 g, 102 mmol)で処理した。反応溶液にキャップして、室温で18時間攪拌した。反応溶液を、次いで50〜55℃で5時間加熱して、室温に冷却して、濾過して、おだやかなN2ストリーム下において溶媒を留去した。残留物を、CH2Cl2(40 mL)でトリチュレートして、固体を濾過により回収して、純粋な標題化合物(2.6 g, 64%)を白色固体として得た。
1H NMR(500MHz, クロロホルム-d) δ 4.60(br s, 4H), 2.54(s, 6H), 2.39(dt, J=6.4, 3.0 Hz, 4H)
【０３１０】
中間体：(R)-1-(4-(4-ブロモ-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-1-イル)ブチル)ピロリジン-3-オール
【化１３１】
2019524705.tif 000133
N2下において、乾燥した反応バイアルに、2-ブロモ-1,3-ジメチル-5,6,7,8-テトラヒドロピラゾロ[1,2-a]ピリダジン-4-イウムブロミド(400 mg, 1.290 mmol)、(R)-ピロリジン-3-オール,HCl(200 mg, 1.618 mmol)、無水DMSO(2 mL)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(530 μl, 3.03 mmol)を加えた。この反応バイアルに、Arでフラッシュして、しっかりとキャップを閉めて、135℃の油浴中に10.5時間置いた。反応溶液を、メタノール(2 mL)で希釈して、150 mL/minで、30分間かけて10% 溶媒B〜100% 溶媒Bのグラジエントを用いるSunfire C18 10uM 50x300 mm columnを用いる逆相Prep HPLCにより精製して(溶媒Aは5% CH3CN/95% 水(10 mM NH4OAcを含む)であり、溶媒Bは95% CH3CNおよび5% 水(10 mM NH4OAcを含む)である)、220 nMで検出して、純粋な標題化合物(140.5 mg, 33%)を褐色固体として得た。LC/MS条件A：ret time 0.769 min, m/e=316
【０３１１】
中間体：4-((5-ブロモ-4-メチルピリジン-3-イル)メトキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド
【化１３２】
2019524705.tif 000134
無水THF(20 mL)中の(5-ブロモ-4-メチルピリジン-3-イル)メタノール(418 mg, 2.069 mmol)、5-クロロ-2,4-ジヒドロキシベンズアルデヒド(400 mg, 2.318 mmol)、トリフェニルホスフィン(600 mg, 2.288 mmol)の混合物に、連続的なアルゴンフラッシュ下において、5分間かけてシリンジからDIAD(450 μl, 2.314 mmol)を加えた。反応混合物(rxn)にしっかりとキャップを閉めて、室温で18時間攪拌した。大部分の溶媒をおだやかなN2ストリーム下において留去した。残留物を、CH2Cl2(25 mL)および水(30 mlit)の混合物に再度溶解して、大部分の溶媒をおだやかなN2ストリーム下において除去した。残留物を、冷MeOH(20 μL)を用いてトリチュレートして、固体を濾取して、表題化合物(263.2 mg, 36%)を褐色固体として得た。LC/MS条件A：ret time 1.144 min, m/e=356
1H NMR(500MHz, クロロホルム-d) δ  11.45(s, 1H), 9.74(s, 1H), 8.74(s, 1H), 8.57(s, 1H), 7.58(s, 1H), 6.64(s, 1H), 5.19(s, 2H), 2.50(s, 3H)
【０３１２】
中間体：5-((5-((5-ブロモ-4-メチルピリジン-3-イル)メトキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化１３３】
2019524705.tif 000135
無水DMF(1.1 mL)中の4-((5-ブロモ-4-メチルピリジン-3-イル)メトキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド(253 mg, 0.709 mmol)および5-(クロロメチル)ニコチノニトリル(130 mg, 0.852 mmol)の溶液に、炭酸セシウム(278 mg, 0.853 mmol)を加えた。この反応溶液を、N2を用いて十分フラッシュして、しっかりとキャップを閉めて、65℃の油浴中に3時間置いた。ピペットにより反応溶液に、水(14 mL)を加えて、固体を濾去して、Et2O(10 mL)で洗い、高真空下にて乾燥させて、表題化合物(380 mg, quant)を淡褐色の固体として得た。LC/MS条件A：ret time 1.174 min, m/e=472；1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ  10.24(s, 1H), 9.04(dd, J=6.2, 2.1 Hz, 2H), 8.74(s, 1H), 8.62(s, 1H), 8.56(t, J=2.0 Hz, 1H), 7.75(s, 1H), 7.31(s, 1H), 5.49(d, J=1.7 Hz, 4H), 2.46(s, 3H).
【０３１３】
中間体：2-(3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルフェニル)-4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン
【化１３４】
2019524705.tif 000136
オーブン乾燥した150 mL耐圧ビンに、2-(3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルフェニル)-4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン(5.30 g, 17.2 mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-オクタメチル-2,2'-ビ(1,3,2-ジオキサボロラン)(7.3 g, 28.7 mmol)および酢酸カリウム(5.3 g, 54.0 mmol)を入れた。ジオキサン(100 mL)を加えて、10分間アルゴンでバブリングし、 [1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロパラジウム(II)(825 mg, 1.128 mmol)を加えた。反応溶液を密封して、80℃の油浴中で21時間加熱した。この反応溶液を、水(300 mL)およびEtOAc(250L)で処理して、Celiteに通して濾過して、若干暗色の固体を除去した。Celiteを、酢酸エチル(300 mL)で洗った。層を分配した。有機層を、ブラインで洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥させて、暗色油状物の固体となるまで蒸発させた。CH2Cl2/ヘキサンに溶かして330 g Teledyne Isco Silica Flash Columnの上部に重層して、11を超えるcol volsにて100%ヘキサン〜100% CH2Cl2のグラジエントを用いるBiotageで精製した。生成物を含有する画分を、真空蒸発させて、高真空下にて乾燥させて、純粋な標題化合物[4.36 g(71%)]を白色固体として得た。1H NMR(500MHz, クロロホルム-d) δ 7.38(d, J=7.3 Hz, 1H), 7.16(t, J=7.8 Hz, 1H), 6.94(d, J=8.1 Hz, 1H), 4.11(t, J=5.7 Hz, 2H), 3.66(t, J=6.5 Hz, 2H), 2.44(s, 3H), 2.36(quin, J=6.1 Hz, 2H), 1.37(s, 12H).
【０３１４】
中間体：5-((5-((5-(3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルフェニル)-4-メチルピリジン-3-イル)メトキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化１３５】
2019524705.tif 000137
THF(30 mL)中の5-((5-((5-ブロモ-4-メチルピリジン-3-イル)メトキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(335 mg, 0.709 mmol)および2-(3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルフェニル)-4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン(275 mg, 0.774 mmol)の溶液に、リン酸三カリウム塩(3.54 mL, 1.770 mmol)を加えた。反応溶液を、アルゴンで十分にフラッシュして、次いで第二世代X-Phosプレ触媒(53 mg, 0.067 mmol)を用いて処理した。反応溶液を、再度アルゴンで十分にフラッシュして、しっかりとキャップを閉めて、室温で2.5時間攪拌した。反応を、次いで、45℃で油浴中に45分間置いて、次いで終夜室温で18時間攪拌した。更なる触媒(12 mg, 0.015 mmol)を加えて、アルゴンで十分にフラッシュして、40℃の油浴中に3.5時間置いた。反応溶液をEtOAc(110 mL)で希釈し、水(1 x 15 mL)、ブライン(1 x 15 mL)で洗い、Na2SO4上で乾燥させて、濾過して、溶媒真空で留去して、表題化合物(340 mg, 77%)を得た。LC/MS条件A：ret time 1.155 min, m/e=620
【０３１５】
中間体：1-(3-(ヒドロキシメチル)-2-メチルフェニル)-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-4-カルバルデヒド
【化１３６】
2019524705.tif 000138
乾燥した反応バイアルに、(2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)フェニル)メタノール(1.02 g, 4.11 mmol)、3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-4-カルバルデヒド(510 mg, 4.11 mmol)、酢酸銅(II)(0.747 g, 4.11 mmol)およびピリジン(3 mL)を加えた。反応溶液を空気でフラッシュして、しっかりとキャップを閉めて、42時間攪拌しながら60℃の砂浴に置いた。溶媒を、おだやかなN2ストリーム下において大部分を除去して、得られる残留物にCH2Cl2(10 mL)を加えた。反応溶液を、再度空気でフラッシュして、室温で7日間攪拌した。固体沈殿物を、濾去して、濾液を80 g Teledyne Isco Silica Flash Columnの上部に重層して、10以上のカラム容量の100%ヘキサン〜70% EtOAc/ヘキサンのグラジエントを用いてBiotageで精製した。生成物を含有する画分を合わせて、真空蒸発させて、表題化合物(149 mg, 15%)を得た。LC/MS条件A：ret time 0.744 min, m/e=245.
【０３１６】
中間体：1-(3-((2-クロロ-4-ホルミル-5-ヒドロキシフェノキシ)メチル)-2-メチルフェニル)-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-4-カルバルデヒド
【化１３７】
2019524705.tif 000139
THF(6 mL)中の1-(3-(ヒドロキシメチル)-2-メチルフェニル)-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-4-カルバルデヒド(149 mg, 0.610 mmol)、5-クロロ-2,4-ジヒドロキシベンズアルデヒド(210 mg, 1.217 mmol)およびトリフェニルホスフィン(192 mg, 0.732 mmol)の溶液に、連続的なアルゴン流下において、4〜5分間かけてDIAD(0.192 mL, 0.989 mmol)を加えた。添加が完了した後に、この反応にしっかりとキャップして、室温で数時間攪拌した。溶媒を、おだやかなN2ストリーム下において蒸発させた。残留物を、CH2Cl2(7 mL)に溶解して、40g Teledyne Isco Silica Flash Columnの上部に重層して、15以上のカラム容量にて100% ヘキサン〜100% EtOAcの直線的グラジエントを用いてBiotageで精製した。生成物を含有する画分を合わせて、真空蒸発させて、表題化合物(140 mg, 55%)を得た。LC/MS条件A：ret time 1.189 min, m/e=399；1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ  11.17(s, 1H), 10.05(s, 1H), 9.98(s, 1H), 7.73(s, 1H), 7.69(d, J=7.6 Hz, 1H), 7.48-7.43(m, 1H), 7.38(d, J=7.6 Hz, 1H), 6.87(s, 1H), 5.37(s, 2H), 2.42(s, 3H), 2.29(s, 3H), 1.97(s, 3H)
【０３１７】
中間体：5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(4-ホルミル-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-1-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル 
【化１３８】
2019524705.tif 000140
1-(3-((2-クロロ-4-ホルミル-5-ヒドロキシフェノキシ)メチル)-2-メチルフェニル)-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-4-カルバルデヒド(122 mg, 0.306 mmol)および5-(クロロメチル)ニコチノニトリル(56 mg, 0.367 mmol)/無水DMF(550 μL)の溶液に、炭酸セシウム(120 mg, 0.368 mmol)およびヨウ化ナトリウム(5 mg, 0.033 mmol)を加えた。反応溶液を、アルゴンで十分にフラッシュして、しっかりとキャップを閉めて、65℃の油浴中に3時間置いた。反応溶液をEtOAc(125 mL)で希釈して、有機層を、水(3 x 20 mL)、ブラインで抽出して(1 x 20 mL)、Na2SO4上で乾燥させて、真空で溶媒を留去して、表題化合物(63.3 mg, 40%)を得た。LC/MS条件A：ret time 1.195 min, m/e=515.
【０３１８】
中間体：(R)-1-((3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-4-イル)メチル)ピロリジン-3-オール  
【化１３９】
2019524705.tif 000141
EtOH(5 mL)中の3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-4-カルバルデヒド(0.3 g, 2.417 mmol)および(R)-ピロリジン-3-オール, HCl(0.597 g, 4.83 mmol)の混合物に、酢酸(0.277 mL, 4.83 mmol)および4A モレキュラ・シーブス(100 mg)を加えた。反応溶液を、N2でフラッシュして、しっかりとキャップを閉めて、室温で2時間攪拌した。反応溶液を、次いでシアノ水素化ホウ素ナトリウム(4.83 mL, 4.83 mmol)で処理して、N2でフラッシュして、キャップを閉めて、室温で6時間攪拌した。この反応溶液を、MeOH(100 mL)で希釈して、再度N2でフラッシュして、キャップを閉めて、室温で18時間攪拌した。反応混合物を、濾過して、濾液を、150 mL/minで、220 nMでの検出により、30分間かけて10% 溶媒B〜100% 溶媒Bのグラジエントを用いるSunfire C18 10uM 50x300 mm columnを用いる逆相Prep HPLCにより精製して(溶媒Aは5% CH3CN/95% 水(10 mM NH4OAcを含む)であり、溶媒Bは95% CH3CNおよび5% 水(10 mM NH4OAcを含む)である)、純粋な標題化合物(280 mg, 33%)を白色固体として得た。LC/MS条件C：ret time 0.504 min, m/e=196.  1H NMR(500MHz, クロロホルム-d) δ 4.46(tt, J=5.6, 1.4 Hz, 1H), 3.90-3.78(m, 2H), 3.41(ddd, J=10.1, 8.4, 5.3 Hz, 1H), 3.23(d, J=11.1 Hz, 1H), 2.82(dd, J=11.2, 5.7 Hz, 1H), 2.71-2.63(m, 1H), 2.30(s, 6H), 2.06-1.98(m, 2H). 
【０３１９】
実施例2001：5-((4-クロロ-5-((3-(3-クロロ-2-(3-(ピペリジン-1-イル)プロポキシ)ピリジン-4-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-(((1,3-ジヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル)アミノ)メチル)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化１４０】
2019524705.tif 000142
DCE(0.8 mL)およびエタノール(0.7 mL)中の5-((4-クロロ-5-((3-(3-クロロ-2-(3-(ピペリジン-1-イル)プロポキシ)ピリジン-4-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(40 mg, 0.062 mmol)および2-アミノ-2-メチルプロパン-1,3-ジオール(27 mg, 0.257 mmol)の溶液に、酢酸(14 μl, 0.245 mmol)を加えて、4A モレキュラーシーブを活性化した。反応溶液を、アルゴン下にてフラッシュして、室温で25分間攪拌して、次いでTHF中で1M シアノ水素化ホウ素ナトリウム(0.22 mL, 0.220 mmol)を、シリンジにより3時間かけてゆっくりと滴加した。添加が完了した後に、この反応溶液を、室温で3時間を攪拌した。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させて、純粋な標題化合物(21.6 mg, 46%)を得た。
LC/MS条件E：ret time 1.59 min；m/e=734(M+H)+.
LC/MS条件F：ret time 1.41 min；m/e=734(M+H)+.
【０３２０】
実施例2002：(R)-5-((4-クロロ-5-((3-(3-クロロ-4-(3-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)ピリジン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-(((1,3-ジヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル)アミノ)メチル)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化１４１】
2019524705.tif 000143
DCE(0.8 mL)およびエタノール(0.7 mL)の混合液中の5-((5-((3-(4-(3-ブロモプロポキシ)-3-クロロピリジン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(46.5 mg, 0.073 mmol)および2-アミノ-2-メチルプロパン-1,3-ジオール(25 mg, 0.238 mmol)に、酢酸(12 μl, 0.210 mmol)を加えて、4Aモレキュラーシーブを活性化した。反応溶液を、アルゴン下において短くフラッシュして、室温で25分間攪拌して、次いでTHF中(220 μL, 0.220 mmol)で1.0Mのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを用いて3時間ゆっくりと処置した。添加が完了した後に、反応溶液を、室温でさらに3時間攪拌した。溶媒を、N2ストリーム下において大部分を除去して、残留物を、MeOH(1.5 mL)に再溶解した。得られる溶液を、(R)-ピロリジン-3-オール,HCl(120 mg, 0.971 mmol)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(210 μL, 1.202 mmol)で処理して、18時間攪拌しながら65℃の砂浴に置いた。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製して、純粋な標題化合物(37.4 mg, 67%)を得た：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)であり；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：20分間かけて10〜50%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。
LC/MS条件E：ret time 1.18 min；m/e=736(M+H)+.
LC/MS条件F：ret time 1.15 min；m/e=736(M+H)+.
【０３２１】
実施例2003：(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(1-(4-((S)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)ブチル)-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-4-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化１４２】
2019524705.tif 000144
THF(6 mL)中の(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸(35 mg, 0.056 mmol)および(R)-1-(4-(4-ブロモ-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-1-イル)ブチル)ピロリジン-3-オール(20 mg, 0.063 mmol)の溶液に、水(0.4 mL, 0.200 mmol)中で0.5Mのリン酸三カリウム塩を加えた。反応溶液を、Arを用いて十分フラッシュして、次いで第二世代X-phosプレ触媒(5 mg, 6.35 μmol)を用いて処理した。反応溶液を、再度アルゴンにより十分フラッシュして、しっかりとキャップを閉めて、65時間攪拌しながら60℃の油浴中に置いた。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製して、純粋な標題化合物(5.8 mg, 14%)を得た：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：20分間かけて10〜50%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。
LC/MS条件E：ret time 1.36 min；m/e=731(M+H)+.
LC/MS条件F：ret time 1.23 min；m/e=731(M+H)+.
【０３２２】
実施例2004：5-((4-クロロ-5-((3-(3-クロロ-4-(3-ヒドロキシプロポキシ)ピリジン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-(((1,3-ジヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル)アミノ)メチル)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化１４３】
2019524705.tif 000145
DCE(0.8 mL)およびEtOH(0.5 mL)混合液中の5-((4-クロロ-5-((3-(3-クロロ-4-(3-ヒドロキシプロポキシ)ピリジン-2-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(23 mg, 0.040 mmol)および2-アミノ-2-メチルプロパン-1,3-ジオール(25 mg, 0.238 mmol)の溶液に、酢酸(10 μl, 0.175 mmol)を加えて、4A モレキュラーシーブを活性化した。反応溶液を、アルゴンを用いて短くフラッシュして、室温で20分間攪拌して、次いでTHF中(160 μl, 0.160 mmol)で1M シアノ水素化ホウ素ナトリウムを用いて2時間かけて滴加した。添加が完了した後に、この反応溶液を、室温で18時間攪拌した。粗製物質を、以下の条件を用いて分取LC/MSにより精製して、純粋な標題化合物(19.5 mg, 74%)を得た：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：20分間かけて10〜50%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。
LC/MS条件E：ret time 1.53 min；m/e=667(M+H)+.
LC/MS条件F：ret time 1.32 min；m/e=667(M+H)+.
【０３２３】
実施例2005：(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((5-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-4-メチルピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸
【化１４４】
2019524705.tif 000146
DCE(800 μL)およびEtOH(500 μL)の混合液中の5-((5-((5-(3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルフェニル)-4-メチルピリジン-3-イル)メトキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(52 mg, 0.084 mmol)およびL-ピペコリン酸(33 mg, 0.256 mmol)の溶液に、酢酸(19 μL, 0.332 mmol)および4A モレキュラーシーブを加えた。この反応を、N2を用いて短くフラッシュして、キャップを閉めて、室温で45分間攪拌して、次いで2時間かけて1.0M シアノ水素化ホウ素ナトリウム/THF(250 μL, 0.250 mmol)を滴加した。添加が完了した後に、反応溶液を、室温で終夜攪拌した。溶媒を、N2ストリーム下において大部分を除去して、残留物をMeOH(1.5 mL)に再溶解した。得られる溶液を、(R)-3-ヒドロキシピロリジン塩酸塩(155 mg, 1.254 mmol)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(350 μL, 2.004 mmol)で処理して、3.5時間攪拌しながら65℃の砂浴中においた。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：23分間かけて10〜50%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより更に精製して、純粋な標題化合物(14.2 mg, 14%)をTFA塩として得た：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；グラジエント：20分間かけて5〜40%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。
LC/MS条件E：ret time 1.24 min；m/e=740(M+H)+.
LC/MS条件F：ret time 1.08 min；m/e=740(M+H)+.
【０３２４】
実施例2006：5-((4-クロロ-2-(((2-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)エチル)アミノ)メチル)-5-((3-(4-(((2-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)エチル)アミノ)メチル)-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-1-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化１４５】
2019524705.tif 000147
DCE(900 μL)およびEtOH(600 μL)の混合液中の5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(4-ホルミル-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-1-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(22.8 mg, 0.044 mmol)の溶液に、(3R)-1-(2-アミノエチル)-3-ピロリジノール(43 mg, 0.330 mmol)、酢酸(8 μL, 0.140 mmol)および4Aモレキュラーシーブを加えた。この反応溶液を、N2を用いて短くフラッシュして、しっかりとキャップして、室温で1時間攪拌して、次いで5時間かけて1.0M シアノ水素化ホウ素ナトリウム/THF(270 μL, 0.270 mmol)を滴加した。添加が完了した後に、この反応溶液を、終夜室温で攪拌した。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製して、純粋な標題化合物(2.9 mg, 8%)を得た：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：18分間かけて5〜35%B、次いで3分100% Bで保持；流量：20 mL/min。
LC/MS条件E：ret time 1.18 min；m/e=743(M+H)+.
LC/MS条件F：ret time 0.907 min；m/e=743(M+H)+.
【０３２５】
実施例2007：5-((4-クロロ-2-(((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)メチル)-5-((3-(4-(((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)メチル)-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-1-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化１４６】
2019524705.tif 000148
DCE(900 μL)およびEtOH(600 μL)の混合物中の5-((4-クロロ-2-ホルミル-5-((3-(4-ホルミル-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-1-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(22.8 mg, 0.044 mmol)および(R)-3-ヒドロキシピロリジン塩酸塩(40 mg, 0.324 mmol)の溶液に、酢酸(5.2 μL, 0.091 mmol)、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(13 μL, 0.074 mmol)および4A モレキュラーシーブを加えた。反応溶液を、N2を用いて短くフラッシュして、室温で2時間攪拌して、次いで3.5時間かけて1.0M シアノ水素化ホウ素ナトリウム/THF(270 μL, 0.270 mmol)を滴加した。添加が完了した後に、この反応溶液を、室温で終夜攪拌した。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製して、純粋な標題化合物(8.0 mg, 26%)を得た：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：20分間かけて8〜48% B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。
LC/MS条件E：ret time 1.23 min；m/e=657(M+H)+.
LC/MS条件F：ret time 1.22 min；m/e=657(M+H)+.
【０３２６】
実施例2008：(R)-5-((4-クロロ-2-(((1,3-ジヒドロキシ-2-メチルプロパン-2-イル)アミノ)メチル)-5-((5-(3-(3-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-4-メチルピリジン-3-イル)メトキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化１４７】
2019524705.tif 000149
DCE(800 μL)およびエタノール(500 μL)の混合物中の5-((5-((5-(3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルフェニル)-4-メチルピリジン-3-イル)メトキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(20.4 mg, 0.033 mmol)および2-アミノ-2-メチル-1,3-プロパンジオール(10.4 mg, 0.099 mmol)の溶液に、酢酸(7.5 μL, 0.131 mmol)および活性化4Aモレキュラーシーブを加えた。反応溶液を、室温で30分間攪拌して、次いで30分間かけて1.0M シアノ水素化ホウ素ナトリウム/THF(115 μL, 0.115 mmol)を滴加した。添加が完了した後に、反応溶液を、終夜室温で攪拌した。溶媒を、N2流下において大部分を除去して、残留物をMeOH(1.5 mL)に溶解した。得られる溶液を、(R)-3-ヒドロキシピロリジン塩酸塩(74 mg, 0.599 mmol)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(185 μL, 1.059 mmol)で処理して、N2を用いて短くフラッシュして、キャップを閉めて、4.5時間攪拌しながら65℃で砂浴に置いて、次いで36時間45℃にて砂浴に置いた。粗製物質を、以下の条件を用いて分取LC/MSにより精製して、表題化合物(7.2 mg, 29%)を得た：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：25分間かけて5〜55%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。
LC/MS条件E：ret time 1.31 min；m/e=716(M+H)+.
LC/MS条件F：ret time 1.18 min；m/e=716(M+H)+.
【０３２７】
実施例2009：(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(4-(((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)メチル)-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-1-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化１４８】
2019524705.tif 000150
(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸(90 mg, 0.145 mmol)、(R)-1-((3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-4-イル)メチル)ピロリジン-3-オール,2AcOH(63 mg, 0.200 mmol)、2,2'-ビピリジン(23 mg, 0.147 mmol)および酢酸銅(II)(40 mg, 0.220 mmol)の混合物に、ピリジン(1 mL)を加えた。反応溶液にキャップして、空気存在下において終夜室温で攪拌した。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；グラジエント：25分間かけて5〜45%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより更に精製して、純粋な標題化合物(1.3 mg, 1.2%)を得た：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：15分間かけて10〜50%B、次いで3分間100% Bで保持；流量：20 mL/min。
LC/MS条件E：ret time 1.04 min；m/e=689(M+H)+.
LC/MS条件F：ret time 1.16 min；m/e=689(M+H)+.
【０３２８】
実施例2010：(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-(4-ホルミル-3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-1-イル)-2-メチルベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化１４９】
2019524705.tif 000151
CH2Cl2(2 mL)中の(R)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((2-メチル-3-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)ベンジル)オキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸(32.5 mg, 0.052 mmol)、3,5-ジメチル-1H-ピラゾール-4-カルバルデヒド(11.9 mg, 0.096 mmol)の混合液に、ピリジン(32 μl, 0.396 mmol)、次いで固体酢酸銅(II)(16 mg, 0.088 mmol)を加えた。反応溶液を、O2でフラッシュして、密封して、室温で6日間攪拌した。粗製物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製して、表題化合物(1 mg, 2%)を得た：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：20分間かけて15〜55% B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。物質を、以下の条件を用いて分取LC/MSにより更に精製して：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：20分間かけて15〜55%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。
LC/MS条件E：ret time 1.47 min；m/e=618(M+H)+.
LC/MS条件F：ret time 1.57 min；m/e=618(M+H)+.
【０３２９】
中間体：4-((4-ブロモ-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド
【化１５０】
2019524705.tif 000152
THF(20 mL)中の(4-ブロモ-3-メチルピリジン-2-イル)メタノール(560 mg, 2.77 mmol)、5-クロロ-2,4-ジヒドロキシベンズアルデヒド(478 mg, 2.77 mmol)およびトリフェニルホスフィン(800 mg, 3.05 mmol)の混合物は、連続的なN2フラッシュにより冷却されたが(濁った黄色混合物)、DIAD(450 μl, 2.314 mmol)をシリンジにより2分間かけて添加した。この懸濁液は、DIADを加えたことで透明な橙色溶液となり、〜10 min後に幾らかの沈殿物が観察された。この反応混合物を、N2下にて密封して、室温で終夜攪拌した。最初の生成物を、反応混合物の濾過により回収して、白色固体(0.277g)として得た。濾液を、N2流で乾燥させて、冷MeOHを用いてトリチュレートして、次いで濾過して、第二の生成物を、約〜0.2gのオフホワイト色の固体(全量0.47g, 45%)として得た。1H NMR(400MHz, クロロホルム-d) δ 11.37(s, 1H), 9.69(s, 1H), 8.24(d, J=5.3 Hz, 1H), 7.53(d, J=5.3 Hz, 1H), 7.52(s, 1H), 6.76(s, 1H), 5.38(s, 2H), 2.54(s, 3H). LC/MS条件D：ret time 1.01 min, m/e=356
【０３３０】
中間体：5-((5-((4-ブロモ-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル 
【化１５１】
2019524705.tif 000153
DMF(6 mL)中の4-((4-ブロモ-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)-5-クロロ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド(0.277 g, 0.777 mmol)、5-(クロロメチル)ニコチノニトリル(0.142 g, 0.932 mmol)、ヨウ化ナトリウム(0.012 g, 0.078 mmol)および炭酸セシウム(0.304 g, 0.932 mmol)の混合物を、75℃で窒素下において、3時間攪拌した。反応混合物を、室温に冷却して、氷水(50 ml)に注ぎ入れた。混合物を、次いで2時間攪拌して、濾取して、生成物の5-((5-((4-ブロモ-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(0.3 g, 0.597 mmol, 77 %収率)を、オフホワイトの固体として得た。
1H NMR(400MHz, クロロホルム-d) δ 10.25(s, 1H), 8.96(d, J=2.0 Hz, 1H), 8.92(d, J=1.8 Hz, 1H), 8.20(d, J=5.3 Hz, 1H), 8.11(t, J=2.0 Hz, 1H), 7.86(s, 1H), 7.55(d, J=5.3 Hz, 1H), 7.08(s, 1H), 5.48(s, 2H), 5.21(s, 2H), 2.60(s, 3H). LC/MS条件D：ret time 1.07 min, m/e=472
【０３３１】
中間体：5-((5-((4-(3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルフェニル)-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化１５２】
2019524705.tif 000154
クロロ(2-ジシクロヘキシルホスフィノ-2',4',6'-トリイソプロピル-1,1'-ビフェニル)[2-(2'-アミノ-1,1'-ビフェニル)]パラジウム(II)(0.025 g, 0.032 mmol)を、THF(15 mL)中の2-(3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルフェニル)-4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン(0.225 g, 0.635 mmol)およびリン酸三カリウム塩(3.17 mL, 1.587 mmol)の混合物(触媒を加える前に10分間N2でフラッシュした)に加えた。得られる混合物を、rtで18時間攪拌した。反応混合物を、EtOAc/炭酸水素ナトリウム水溶液に分配した。水層を、EtOAc(3 x 20 ml)で抽出した。合わせた有機層を、炭酸水素ナトリウム水溶液(2 x 20 ml)およびブライン(20 ml)で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥させて、濾過して、真空濃縮して、粗生成物(0.5 g)を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー(Biotage Horizon System；RediSepRf 40 g column；EtOAc/ヘキサン, グラジエント：0%〜100%)により精製して、5-((5-((4-(3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルフェニル)-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(0.3 g, 0.459 mmol, 72.3 %収率)を白色固体として得た。1H NMR(400MHz, クロロホルム-d) δ 10.27(s, 1H), 8.99(d, J=2.3 Hz, 1H), 8.92(d, J=2.0 Hz, 1H), 8.44(d, J=4.8 Hz, 1H), 8.15(t, J=2.1 Hz, 1H), 7.86(s, 1H), 7.27(s, 1H), 7.24-7.18(m, 1H), 7.11(d, J=5.0 Hz, 1H), 6.91(d, J=8.0 Hz, 1H), 6.67(d, J=7.0 Hz, 1H), 5.60-5.45(m, 2H), 5.27(s, 2H), 4.17(td, J=5.8, 3.3 Hz, 2H), 3.65(t, J=6.4 Hz, 2H), 2.39(dd, J=6.3, 5.8 Hz, 2H), 2.24(s, 3H), 1.86(s, 3H). LC/MS条件D：ret time 1.08 min；m/e=620
【０３３２】
実施例2011：(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸
【化１５３】
2019524705.tif 000155
ClCH2CH2Cl(5 mL)およびEtOH(5 mL)中の5-((5-((4-(3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルフェニル)-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(0.1 g, 0.161 mmol)、(S)-ピペリジン-2-カルボン酸(0.042 g, 0.322 mmol)、酢酸(0.018 mL, 0.322 mmol)および少量の4A MS(モレキュラ・シーブス)の混合物を、室温で2時間攪拌した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(THF中で1.0 M)(0.322 mL, 0.322 mmol)を加えて、得られる反応混合物を、室温で1日間攪拌した。反応混合物を、N2を用いて終夜フラッシュして、2時間吸引乾燥した。残留物を、DMF(4 ml)に溶解して、濾過して、濾液を2等分に分けて、その片方を次工程に付した。もう片方の部分を使用して、実施例2014を製造した。中間体の溶液に、(R)-ピロリジン-3-オール,HCl(0.100 g, 0.805 mmol)およびDIPEA(ジイソプロピルエチルアミン, 0.141 mL, 0.805 mmol)を加えた。得られる反応混合物を、60℃で6時間攪拌した。反応混合物を濾過して、濾液を以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：15分間かけて15〜55% B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより更に精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；グラジエント：15分間かけて10〜50%B、次いで3分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させて、(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸をTFA塩(6.6 mg, 5.4%)として得た。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 8.99(s, 2H), 8.46-8.37(m, 2H), 7.39(s, 1H), 7.28-7.18(m, 1H), 7.12(br. s., 2H), 7.01(d, J=8.4 Hz, 1H), 6.68(d, J=7.3 Hz, 1H), 5.40(s, 2H), 5.29(s, 2H), 4.20(br. s., 1H), 4.13-4.00(m, 2H), 3.74(dd, J=14.3, 5.5 Hz, 1H), 3.57(dd, J=14.1, 5.3 Hz, 1H), 3.13(br. s., 1H), 2.88(d, J=11.7 Hz, 1H), 2.78-2.69(m, 1H), 2.66-2.56(m, 3H), 2.46(d, J=6.2 Hz, 1H), 2.40-2.33(m, 1H), 2.30-2.19(m, 1H), 2.11(s, 3H), 2.02-1.93(m, 1H), 1.92(s, 5H), 1.81(s, 3H), 1.78(br. s., 2H), 1.60-1.32(m, 5H). LC/MS条件E：ret time 1.25 min；m/e=740.1.
【０３３３】
実施例2012：(S)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化１５４】
2019524705.tif 000156
5-((5-((4-(3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルフェニル)-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(120mg, 0.193 mmol)、(S)-2-アミノ-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸(46.0 mg, 0.387 mmol)、酢酸(0.022 mL, 0.387 mmol)および数滴の4A MS/ClCH2CH2Cl(2 mL)およびEtOH(2 mL)の混合物を、室温で2時間攪拌した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(0.322 mL, 0.322 mmol)を加えて、得られる反応混合物を、室温で3日間攪拌した。反応混合物を、濾過して、濾液を、濃縮して、2時間真空ポンプ乾燥した。残留物を、DMF(4 ml)に溶解した。この物質の半分を、次工程に付した。もう一方の部分を、実施例2015に用いた。DMF(2ml)中の中間体の溶液に、 (R)-ピロリジン-3-オール,HCl(47.8 mg, 0.387 mmol)およびDIPEA(0.141 mL, 0.805 mmol)を加えた。得られる反応混合物を、60℃で6時間攪拌した。反応混合物を濾過して、濾液を以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：Waters xbridge c-18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：15分間かけて0〜30%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。物質を、以下の条件を用いて分取LC/MSにより更に精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：20分間かけて10〜50%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させて、(S)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((4-(3-(3-((R)-3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸(4.9 mg, 収率3.4%)を得た。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.05-8.97(m, 1H), 8.48-8.37(m, 1H), 7.48(s, 1H), 7.28-7.22(m, 1H), 7.17-7.10(m, 2H), 7.02(d, J=7.7 Hz, 1H), 6.68(d, J=7.3 Hz, 1H), 5.41(d, J=2.9 Hz, 2H), 5.32(s, 2H), 4.20(br. s., 1H), 4.13-4.02(m, 3H), 3.85(s, 3H), 3.59-3.44(m, 3H), 2.80-2.68(m, 1H), 2.66-2.56(m, 3H), 2.37(dd, J=9.5, 4.0 Hz, 3H), 2.11(s, 3H), 2.03-1.93(m, 2H), 1.83(s, 3H), 1.57(d, J=2.9 Hz, 1H), 1.22(s, 3H). LC/MS条件E：ret time 1.13 min；m/e=730.0.
【０３３４】
実施例2013：(R)-5-((4-クロロ-2-(((1-ヒドロキシ-2-(ヒドロキシメチル)ブタン-2-イル)アミノ)メチル)-5-((4-(3-(3-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化１５５】
2019524705.tif 000157
ClCH2CH2Cl(2 mL)およびEtOH(2 mL)中の5-((5-((4-(3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルフェニル)-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)-4-クロロ-2-ホルミルフェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(80mg, 0.129 mmol)、2-アミノ-2-エチルプロパン-1,3-ジオール(30.7 mg, 0.258 mmol)、酢酸(0.015 mL, 0.258 mmol)および少量の4A MSの混合物を、室温で2時間攪拌した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム(0.322 mL, 0.322 mmol)を加えて、得られる反応混合物を、室温で24時間攪拌した。反応混合物を、N2で終夜フラッシュして、2時間吸引乾燥した。残留物を、DMF(4 ml)に溶解して、濾過して、濾液を2等分して、片方を、次工程に付した。もう一方を、実施例2016の合成に使用した。中間体の溶液に、(R)-ピロリジン-3-オール,HCl(0.100 g, 0.805 mmol)およびDIPEA(0.141 mL, 0.805 mmol)を加えた。得られる反応混合物を、60℃で6時間攪拌した。反応混合物を、濾過して、濾液を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；グラジエント：20分間かけて5〜40%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させて、(R)-5-((4-クロロ-2-(((1-ヒドロキシ-2-(ヒドロキシメチル)ブタン-2-イル)アミノ)メチル)-5-((4-(3-(3-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)プロポキシ)-2-メチルフェニル)-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(15.2 mg, 収率15%)をTFA塩として得た。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 8.99(br. s., 2H), 8.47-8.34(m, 2H), 7.39(s, 1H), 7.25(t, J=7.9 Hz, 1H), 7.16-7.09(m, 2H), 7.01(d, J=8.1 Hz, 1H), 6.68(d, J=7.3 Hz, 1H), 5.39(d, J=3.7 Hz, 2H), 5.30(s, 2H), 4.20(br. s., 1H), 4.12-3.97(m, 2H), 3.61(s, 1H), 2.79-2.56(m, 4H), 2.49-2.31(m, 2H), 2.11(s, 3H), 2.04-1.94(m, 1H), 1.83(s, 3H), 1.57(d, J=4.4 Hz, 1H), 1.36(q, J=7.2 Hz, 2H), 0.77(t, J=7.5 Hz, 3H). LC/MS条件E：ret time 1.17 min；m/e=730.1.
【０３３５】
実施例2014：(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-メチル-4-(2-メチル-3-(3-(ピペリジン-1-イル)プロポキシ)フェニル)ピリジン-2-イル)メトキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸
【化１５６】
2019524705.tif 000158
DMF(2 mL)中の(S)-1-(4-((4-(3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルフェニル)-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸(実施例2011からの中間体)(60 mg, 0.038 mmol)、ピペリジン(32.0 mg, 0.376 mmol)およびDIPEA(0.066 mL, 0.376 mmol)の混合物を、60℃で、窒素下において6時間攪拌した。反応混合物を、濾過して、濾液を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：20 分間かけて20〜60%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させた。物質を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより更に精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(0.1%トリフルオロ酢酸を含む)；グラジエント：15分間かけて10〜50%B、次いで3分100% Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させて、(S)-1-(5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-メチル-4-(2-メチル-3-(3-(ピペリジン-1-イル)プロポキシ)フェニル)ピリジン-2-イル)メトキシ)ベンジル)ピペリジン-2-カルボン酸(7.1 mg, 収率15%)をTFA塩として得た。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.02(s, 2H), 8.48-8.38(m, 2H), 7.51(s, 1H), 7.34-7.19(m, 2H), 7.14(d, J=4.8 Hz, 1H), 7.04(d, J=8.4 Hz, 1H), 6.72(d, J=7.7 Hz, 1H), 5.45(d, J=4.0 Hz, 2H), 5.37(br. s., 2H), 4.21(br. s., 2H), 4.17-4.06(m, 2H), 3.88(br. s., 1H), 3.31-3.19(m, 1H), 2.85(br. s., 1H), 2.28-2.17(m, 2H), 2.12(s, 3H), 1.86(d, J=4.4 Hz, 3H), 1.67(br. s., 10H)．LC/MS条件E：ret time 1.12 min；m/e=738.3.
【０３３６】
実施例2015：(S)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-メチル-4-(2-メチル-3-(3-(ピペリジン-1-イル)プロポキシ)フェニル)ピリジン-2-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸
【化１５７】
2019524705.tif 000159
DMF(2 mL)中の(S)-2-((4-((4-(3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルフェニル)-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)-5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸(65mg, 0.025 mmol)(実施例2012からの中間体)の溶液に、ピペリジン(21.40 mg, 0.251 mmol)を加えた。得られる反応混合物を、60℃で6時間攪拌した。反応混合物を濾過して、濾液を以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：Warters xbridge c-18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：15分間かけて10〜50%B、次いで5分100% Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させて、(S)-2-((5-クロロ-2-((5-シアノピリジン-3-イル)メトキシ)-4-((3-メチル-4-(2-メチル-3-(3-(ピペリジン-1-イル)プロポキシ)フェニル)ピリジン-2-イル)メトキシ)ベンジル)アミノ)-3-ヒドロキシ-2-メチルプロパン酸(14.8 mg, 収率78%)を得た。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9.00(d, J=14.3 Hz, 1H), 8.51-8.36(m, 1H), 7.49(s, 1H), 7.25(t, J=7.9 Hz, 1H), 7.16(s, 1H), 7.13(d, J=4.8 Hz, 1H), 7.01(d, J=8.1 Hz, 1H), 6.68(d, J=7.3 Hz, 1H), 5.41(br. s., 2H), 5.32(s, 2H), 4.12-4.02(m, 2H), 3.88(br. s., 2H), 3.64-3.46(m, 2H), 2.47(t, J=7.2 Hz, 3H), 2.38(d, J=5.1 Hz, 6H), 2.11(s, 4H), 1.82(s, 4H), 1.51(d, J=4.8 Hz, 5H), 1.40(d, J=4.8 Hz, 3H), 1.23(s, 4H)．LC/MS条件E：ret time 1.10 min；m/e=728.1.
【０３３７】
実施例2016：5-((4-クロロ-2-(((1-ヒドロキシ-2-(ヒドロキシメチル)ブタン-2-イル)アミノ)メチル)-5-((3-メチル-4-(2-メチル-3-(3-(ピペリジン-1-イル)プロポキシ)フェニル)ピリジン-2-イル)メトキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル
【化１５８】
2019524705.tif 000160
DMF(2 mL)中の5-((5-((4-(3-(3-ブロモプロポキシ)-2-メチルフェニル)-3-メチルピリジン-2-イル)メトキシ)-4-クロロ-2-(((1-ヒドロキシ-2-(ヒドロキシメチル)ブタン-2-イル)アミノ)メチル)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(実施例2013からの中間体)(42mg, 0.022 mmol)、ピペリジン(18.77 mg, 0.220 mmol)およびDIPEA(0.038 mL, 0.220 mmol)の混合物を、60℃で窒素下において4時間攪拌した。LCMSにより、目的の生成物が示された。反応混合物を、濾過して、濾液を、以下の条件を用いる分取LC/MSにより精製した：カラム：XBridge C18, 19 x 200 mm, 5μm粒子；移動相A：5：95 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；移動相B：95：5 アセトニトリル：水(10mM 酢酸アンモニアを含む)；グラジエント：20分間かけて10〜50%B、次いで5分間100%Bで保持；流量：20 mL/min。目的とする生成物を含有する画分を合わせて、遠心蒸発により乾燥させて、5-((4-クロロ-2-(((1-ヒドロキシ-2-(ヒドロキシメチル)ブタン-2-イル)アミノ)メチル)-5-((3-メチル-4-(2-メチル-3-(3-(ピペリジン-1-イル)プロポキシ)フェニル)ピリジン-2-イル)メトキシ)フェノキシ)メチル)ニコチノニトリル(15.5 mg, 収率92%)を得た。1H NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 8.99(br. s., 1H), 8.46-8.33(m, 1H), 7.39(s, 1H), 7.25(t, J=7.9 Hz, 1H), 7.16-7.09(m, 2H), 7.02(d, J=8.4 Hz, 1H), 6.68(d, J=7.7 Hz, 1H), 5.45-5.35(m, 2H), 5.30(s, 2H), 4.15-3.99(m, 2H), 3.61(s, 1H), 3.31(s, 1H), 2.46(t, J=7.0 Hz, 2H), 2.37(br. s., 3H), 2.12(s, 3H), 1.92(s, 5H), 1.83(s, 3H), 1.51(d, J=5.1 Hz, 4H), 1.45-1.30(m, 4H), 0.77(t, J=7.5 Hz, 3H)．LC/MS条件E：ret time 1.11 min；m/e=728.2.
【０３３８】
生物学的アッセイ
式(I)の化合物のPD-L1と結合する能力を、PD-1/PD-L1ホモジニアス時間分解蛍光(HTRF)結合アッセイを用いて試験した。
【０３３９】
ホモジニアス時間分解蛍光(HTRF)結合アッセイ
PD-1およびPD-L1の相互作用を、2つのタンパク質の可溶性の精製済細胞外ドメイン調製物を用いて評価できる。PD-1およびPD-L1タンパク質の細胞外ドメインは、検出タグを含む融合タンパク質として発現され、このタグはPD-1に対しては免疫グロブリン(PD-1-Ig)のFc部分であって、それはPD-L1に対しては6つのヒスチジンモチーフ(PD-L1-His)である。全ての結合試験を、0.1%(with)子ウシアルブミンを加えたdPBSおよび0.05%(v/v)Tween-20からなるHTRFアッセイ緩衝液で行なった。h/PD-L1-His結合アッセイについて、阻害剤を、15分間、アッセイ緩衝液(4 μl)中でPD-L1-His(10 nM 最終)と共にプレインキュベートして、その後PD-1-Ig(20 nM 最終)/アッセイ緩衝液(1 μl)を添加して、さらに15分間インキュベートした。HTRF検出を、ユーロピウムクリプテート標識した抗Ig(1 nM 最終)およびアロフィコシアニン(APC)標識した抗-His(20 nM 最終)を用いて達成した。抗体を、HTRF検出緩衝液で希釈して、5μlを、結合反応の上に分注した。反応混合物を、30分間平衡化して、生じるシグナル(665nm/620nm比)を、EnVision 蛍光光度計を用いて取得した。追加の結合アッセイを、ヒトタンパク質PD-1-Ig/PD-L2-His(20 & 5 nM, 各々)およびCD80-His/PD-L1-Ig(100 & 10 nM, 各々)との間で実証した。
【０３４０】
組み換えタンパク質：イムノグロブリンG(Ig)エピトープタグ[hPD-1(25-167)-3S-IG]のC末端ヒトFcドメインを含むヒトPD-1(25-167)およびC末端His エピトープタグ[hPD-L1(18-239)-TVMV-His]を含むヒトPD-L1(18-239)を、HEK293T細胞内で発現させて、タンパク質Aアフィニティークロマトグラフィー、そしてサイズ排除クロマトグラフィーにより順に精製した。ヒトPD-L2-HisおよびCD80-Hisは、販売会社から得た。
【０３４１】
組み換えタンパク質ヒトPD-1-Igの配列：
【化１５９】
2019524705.tif 000161
(配列番号：1)
組み換えタンパク質ヒトPD-L1-Hisの配列：
【化１６０】
2019524705.tif 000162
(配列番号：2)
【０３４２】
以下の表は、PD-1/PD-L1ホモジニアス時間分解蛍光(HTRF)結合アッセイにおいて計測された本明細書の代表的な化合物についてのIC50値を列挙するものである。その値の範囲は以下の通りである：A=0.001〜0.010μM；B=0.011〜0.150μM；C=0.151〜10μM。
【表１】
2019524705.tif 000163
【０３４３】
式(I)の化合物は、PD-1/PD-L1相互作用の阻害剤としての活性を有しており、そのためPD-1/PD-L1相互作用に関連のある疾患または障害の治療に使用され得る。PD-1/PD-L1相互作用の阻害により、本明細書の化合物を用いて、感染症、例えばHIV、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎またはD型肝炎および癌を治療することができる。
【配列表】
2019524705000001.app
【国際調査報告】
2019524705.tif 000183
2019524705.tif 000184
2019524705.tif 000185