(57)【要約】  本開示は、一般に、抗ＰＤ−１抗体などの抗体を含むナノ粒子に関する。他の態様は、そのようなナノ粒子を作製および使用する方法を含む。一実施形態では、ナノ粒子は、ジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコール（ＰＬＡ−ＰＥＧ）コポリマーと、化学療法剤と、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）標的化リガンドとを含む。【図１】2019508408.tif 000019
2019508408.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療剤およびジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーを含む治療用ナノ粒子（前記治療用ナノ粒子は、約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む）と、
抗ＰＤ−１抗体である免疫チェックポイント阻害剤と
を含む治療用組成物。
【請求項２】
抗ＰＤ−１抗体が、治療剤と共に治療用ナノ粒子にカプセル化されている、請求項１に記載の治療用組成物。
【請求項３】
抗ＰＤ抗体が、ナノ粒子の表面にコンジュゲートしている、請求項１に記載の治療用組成物。
【請求項４】
治療剤が化学療法剤である、請求項１に記載の治療用組成物。
【請求項５】
治療用ナノ粒子が標的化リガンドを含む、請求項１に記載の治療用組成物。
【請求項６】
標的化リガンドが、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）標的化リガンドである、請求項５に記載の治療用組成物。
【請求項７】
ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが、約１５ｋＤａ〜約３０ｋＤａの数平均分子量のポリ（乳酸）と約４ｋＤａ〜約６ｋＤａの数平均分子量のポリ（エチレン）グリコールとを有する、請求項１に記載の治療用組成物。
【請求項８】
がんの患者を処置する方法であって、
ａ）治療剤およびジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーを含む治療用ナノ粒子（前記治療用ナノ粒子は、約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む）と、
ｂ）免疫チェックポイント阻害剤と
を投与することを含む方法。
【請求項９】
免疫チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ−１抗体である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
治療用ナノ粒子が、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）標的化リガンドを含む、請求項８から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
治療剤と、
約０．２〜約２０重量パーセントの抗体と、
約５０〜約９９．７５重量パーセントのジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーと
を含む治療用ナノ粒子（前記治療用ナノ粒子は、約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む）。
【請求項１２】
約２〜約５重量パーセントの抗体を含む、請求項１１に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１３】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項１１に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１４】
抗体が抗ＰＤ−１抗体である、請求項１１に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１５】
抗体が疎水性の対イオンと会合している、請求項１１に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１６】
ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーが、約１５ｋＤａ〜約２０ｋＤａの数平均分子量のポリ（乳酸）と約４ｋＤａ〜約６ｋＤａの数平均分子量のポリ（エチレン）グリコールとを有する、請求項１１に記載の治療用ナノ粒子。
【請求項１７】
それを必要とする患者において抗腫瘍応答を増強する方法であって、
それを必要とする患者に、治療有効量の治療用ナノ粒子と免疫チェックポイント阻害剤とを併用することを含む方法。
【請求項１８】
治療用ナノ粒子が、治療剤およびジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーを含み、約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
免疫チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ−１抗体である、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
治療剤およびジブロックポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーと前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）標的化リガンドとを含む治療用ナノ粒子を含む医薬組成物であって、前記治療用ナノ粒子は、約１０〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含み、前記組成物は凍結乾燥されている、医薬組成物。
【請求項２１】
抗ＰＤ−１抗体をさらに含む、請求項２０に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
【背景技術】
【０００２】
患者へのある種の薬物を送達する（例えば、特定の組織もしくは細胞型を標的とするか、または正常組織ではなく特定の患部組織を標的とする）か、または薬物の放出を制御する系は、有益であると長い間認識されてきた。
【０００３】
例えば、活性薬物を含み、かつ例えば、特定の組織もしくは細胞型を標的とするか、または正常組織ではなく特定の患部組織を標的とする治療法は、標的とされていない体の組織における薬物の量を低減し得る。周囲の非がん組織を死滅させることなしに細胞毒性用量の薬物ががん細胞に送達されることが望ましい状態、例えば、がんを処置するときに、これは特に重要である。抗がん療法においては一般的である、望ましくなく、時には生命を危うくする副作用を、有効な薬物標的化は低減し得る。さらに、このような治療法は、薬物がその他の治療法では到達することができないある種の組織に到達することを可能にし得る。
【０００４】
制御放出および／または標的療法を実現する治療法はまた、有効量の薬物を送達できなければならないが、これは他のナノ粒子送達系において公知の制限である。例えば、ナノ粒子のサイズを、有利な送達特性を有するのに十分に小さく保つ一方で、各ナノ粒子と会合する適当な量の薬物を有するナノ粒子系を調製することは挑戦であり得る。
【０００５】
チェックポイント阻害剤の治療送達は、がんの有望な処置を実現する。こうした治療剤には、効率的で無毒性の送達方法が必要となる。しかし、分解されないように抗体完全性を保つことを含め、このクラスの薬剤の送達にはかなりの難題が立ちはだかる。そのような抗体を含むナノ粒子製剤では、往々にして、望ましくない特性、例えば、バースト放出プロファイルおよび抗体の分解が妨げとなる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、ナノ粒子治療法、および抗体を送達し、その間抗体の有効性および効力も保つことができるようなナノ粒子を作製する方法が求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本明細書では、治療用ナノ粒子および抗ＰＤ−１抗体が患者に投与される、治療剤を含む治療用かつ／または薬学的に許容できるポリマーナノ粒子を記載する。一部の実施形態では、ナノ粒子には、治療剤（例えばドセタキセル）がカプセル化され、治療用ナノ粒子および抗ＰＤ−１抗体は、処置のために並行して患者に投与される。一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体および治療剤（例えばドセタキセル）は、ナノ粒子内にカプセル化される。一部の実施形態では、治療用ナノ粒子および抗ＰＤ−１抗体は、扁平非小細胞肺がんの患者に（並行して、またはナノ粒子内の抗ＰＤ−１抗体および治療剤と共に）投与される。一部の実施形態では、治療用ナノ粒子は、疎水性の対イオン剤も含む。
【０００８】
企図されるナノ粒子は、チェックポイント阻害剤として働く抗体を含み得る。例えば、企図されるナノ粒子は、抗ＰＤ−１抗体を含み得る。ナノ粒子には、疎水性の対イオン剤が組み込まれている場合もあると理解すべきである。また、抗体は、ナノ粒子内にカプセル化されている場合もあり、またはナノ粒子に結合している場合もあり、または治療用ナノ粒子と並行して投与される場合もあると理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】開示されているナノ粒子を形成するためのエマルジョンプロセスについてのフローチャートである。
【図２Ａ】開示されているエマルジョンプロセスについての流れ図である。
【図２Ｂ】開示されているエマルジョンプロセスについての流れ図である。
【図３】アイソタイプ対照（１０ｍｇ／ｋｇ  ｑ４ｄ  ｉｐ）、抗ＰＤ−１（１０ｍｇ／ｋｇ  ｑ４ｄ  ｉｐ）、ドセタキセルナノ粒子（１０ｍｇ／ｋｇ  ｑ４ｄ  ｉｐ）、およびドセタキセルナノ粒子＋抗ＰＤ−１で処置開始後の経時的な平均腫瘍体積を示すスパイダープロットである。
【図４】抗ＰＤ−１で処置した個々のマウスの腫瘍成長を示すスパイダープロットである。
【図５】ドセタキセルナノ粒子で処置した個々のマウスの腫瘍成長を示すスパイダープロットである。
【図６】抗ＰＤ−１およびドセタキセルナノ粒子で処置した個々のマウスの腫瘍成長を示すスパイダープロットである。
【図７】反復有効性研究における、アイソタイプ対照（１０ｍｇ／ｋｇ  ｑ４ｄ  ｉｐ）、抗ＰＤ−１（１０ｍｇ／ｋｇ  ｑ４ｄ  ｉｐ）、ドセタキセルナノ粒子（１０ｍｇ／ｋｇ  ｑ４ｄ  ｉｐ）、およびドセタキセルナノ粒子＋抗ＰＤ−１で処置開始後の経時的な平均腫瘍体積を示すスパイダープロットである。
【図８】体重に対して処置の有意な効果がなかったことを示すスパイダープロットである。
【図９】アイソタイプ対照（１０ｍｇ／ｋｇ  ｉｖ  ｑ４ｄ）、抗ＰＤ−１（１０ｍｇ／ｋｇ  ｉｖ  ｑ４ｄ）、ドセタキセル（ｔａｘｏｔｅｒｅ  −  ２．５ｍｇ／ｋｇ  ｉｖ  ｑ４ｄ）、およびドセタキセル（ｔａｘｏｔｅｒｅ）＋抗ＰＤ−１で処置開始後の経時的な平均腫瘍体積を示すデータのスパイダープロットである。
【図１０】体重に対して処置の有意な効果がなかったことを示すスパイダープロットである。
【図１１】アイソタイプで処置した個々のマウスの腫瘍成長を示すスパイダープロットである。
【図１２】抗ＰＤ−１で処置した個々のマウスの腫瘍成長（反復研究）を示すスパイダープロットである。
【図１３】ドセタキセルナノ粒子で処置した個々のマウスの腫瘍成長（反復研究）を示すスパイダープロットである。
【図１４】抗ＰＤ−１およびドセタキセルナノ粒子で処置した個々のマウスの腫瘍成長（反復研究）を示すスパイダープロットである。
【図１５】ドセタキセルで処置した個々のマウスの腫瘍成長を示すスパイダープロットである。
【図１６】抗ＰＤ−１およびドセタキセルで処置した個々のマウスの腫瘍成長を示すスパイダープロットである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本明細書では、少なくとも１種の治療剤（例えば、ドセタキセル、またはドセタキセルおよび抗ＰＤ−１抗体）を含むポリマーナノ粒子、ならびにそのような治療用ナノ粒子を作製および使用する方法を記載する。一部の実施形態では、開示されるナノ粒子は、チェックポイント阻害剤である抗ＰＤ−１抗体などの抗体を含む。一部の実施形態では、治療用ナノ粒子には、治療剤（例えばドセタキセル）がカプセル化され、ナノ粒子は、患者、例えば、扁平非小細胞肺がんの患者に、抗ＰＤ−１抗体と並行して投与される（または併用される）。一部の実施形態では、疎水性酸（例えば、脂肪酸および／または胆汁酸）を、開示されるナノ粒子に含める（すなわち、ドープする）および／またはナノ粒子調製プロセスに含めることで、改善された薬物添加量を含むナノ粒子を得ることができる。さらに、ある特定の実施形態では、疎水性酸を含む、かつ／またはその存在下で調製されているナノ粒子は、改善された制御放出特性を示し得る。例えば、開示されるナノ粒子は、疎水性酸なしで調製されたナノ粒子に比べて、抗体治療剤をよりゆっくりと放出し得る。
【００１１】
本明細書では、抗ＰＤ−１抗体、例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、イピリムマブなどの抗体を含むナノ粒子が企図される。
【００１２】
また別の態様では、薬学的に許容できる組成物を提供する。薬学的に許容できる組成物は、本明細書に記載のとおりの複数の治療用ナノ粒子と、薬学的に許容できる賦形剤とを含み得る。一部の実施形態では、医薬組成物は、治療剤（例えばドセタキセル）および抗ＰＤ−１抗体がカプセル化されているナノ粒子を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ナノ粒子にカプセル化されていない。一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ナノ粒子にカプセル化されている。
【００１３】
さらに別の態様では、それを必要とするがん患者を処置する方法を提供する。この方法は、患者に、本明細書に記載のとおりの治療用ナノ粒子を含む治療有効量の組成物を投与することを含む。一部の実施形態では、組成物は、少なくとも１種の治療剤（例えば、ドセタキセル、またはドセタキセルおよび抗ＰＤ−１抗体）がカプセル化されている治療用ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、少なくとも１種の治療剤（例えばドセタキセル）がカプセル化されている治療用ナノ粒子を含み、抗ＰＤ−１抗体と並行して投与される。
【００１４】
理論に束縛されるものではないが、疎水性酸（例えば、脂肪酸および／または胆汁酸）を含む開示されるナノ粒子製剤は、治療剤と酸との間に、疎水性イオン対（ＨＩＰ）または疎水性の対イオンが形成されることで、かなり改善された製剤特性（例えば、薬物添加量および／または放出プロファイル）を備えると考えられる。本明細書において使用する場合、ＨＩＰとは、クーロン引力によってまとまった、逆の電荷を帯びた一対のイオンである。一部の実施形態では、ナノ粒子内の抗体は、疎水性の対イオン剤と会合している場合がある。用語「イオン剤」または「イオン対」は、１：１の比に限定されず、それよりも、互いに引き寄せられる、いずれかの比の、逆の電荷のイオンを指すと理解すべきである。例えば、８の負電荷を有する治療剤または抗体は、陽電荷を帯びた８個の分子と「対をなす」ことができる。あるいは、８の陽電荷を有する治療剤または抗体は、８の負電荷と「対をなす」ことができる。したがって、本明細書において使用する場合、「イオン対」とは、クーロン引力によってまとまった、逆の電荷を帯びた一対のイオンである。本明細書で企図されるイオン対形成によって、例えば、薬物添加量が増加しているナノ粒子を得ることができる。例えば一部の実施形態では、水溶液への治療剤の溶解性が低下するために、ナノ粒子からの治療剤または抗体の放出をより緩徐にすることもできる。さらに、治療剤または抗体を大きい疎水性の対イオンと複合させることで、治療剤のポリマーマトリックス内での拡散を緩やかにすることもできる。有利なことに、イオン対形成は、疎水性基の治療剤または抗体への共有結合によるコンジュゲーションを必要とせずに起こる。
【００１５】
本明細書において開示されているナノ粒子は、１種、２種、３種またはそれ超の生体適合性および／または生分解性ポリマーを含み得る。例えば、企図されるナノ粒子は、約３５〜約９９．７５重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９９．７５重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９９．５重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９９重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９８重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９７重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９６重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９５重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９４重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９３重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９２重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９１重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約９０重量パーセント、一部の実施形態では、約５０〜約８５重量パーセント、一部の実施形態では、約６０〜約８５重量パーセント、一部の実施形態では、約６５〜約８５重量パーセント、および一部の実施形態では、約５０〜約８０重量パーセントの生分解性ポリマーおよびポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）を含む１種または複数のブロックコポリマー、ならびに約０〜約５０重量パーセントの生分解性ホモポリマーを含み得る。
【００１６】
一部の実施形態では、開示されているナノ粒子は、約０．２〜約３５重量パーセント、約０．２〜約２０重量パーセント、約０．２〜約１０重量パーセント、約０．２〜約５重量パーセント、約０．５〜約５重量パーセント、約０．７５〜約５重量パーセント、約１〜約５重量パーセント、約２〜約５重量パーセント、約３〜約５重量パーセント、約１〜約２０重量パーセント、約２〜約２０重量パーセント、約５〜約２０重量パーセント、約１〜約１５重量パーセント、約２〜約１５重量パーセント、約３〜約１５重量パーセント、約４〜約１５重量パーセント、約５〜約１５重量パーセント、約１〜約１０重量パーセント、約２〜約１０重量パーセント、約３〜約１０重量パーセント、約４〜約１０重量パーセント、約５〜約１０重量パーセント、約１０〜約３０重量パーセント、または約１５〜約２５重量パーセントの治療剤を含み得る。
【００１７】
ある特定の実施形態では、開示されるナノ粒子は、疎水性酸（例えば、脂肪酸および／もしくは胆汁酸）を含む、かつ／または疎水性酸を含む方法によって調製される。そのようなナノ粒子は、疎水性酸なしの方法によって調製されたナノ粒子より高い薬物添加量を備え得る。例えば、疎水性酸を含む方法によって調製された開示されるナノ粒子の（例えば重量による）薬物添加量は、疎水性酸なしの方法によって調製された開示されるナノ粒子より約２倍〜約１０倍高い、またはなおより高い場合もある。一部の実施形態では、疎水性酸を含む第１の方法によって調製された開示されるナノ粒子の（重量による）薬物添加量は、疎水性酸を含まないことを除き、第１の方法と同一である第２の方法によって調製された開示されるナノ粒子より少なくとも約２倍高い、少なくとも約３倍高い、少なくとも約４倍高い、少なくとも約５倍高い、または少なくとも約１０倍高い場合がある。
【００１８】
適切ないかなる疎水性酸も企図される。一部の実施形態では、疎水性酸は、カルボン酸（例えば、モノカルボン酸、ジカルボン酸、トリカルボン酸など）、スルフィン酸、スルフェン酸、またはスルホン酸である場合がある。場合によって、企図される疎水性酸には、２種以上の酸の混合物を含み得る。場合によって、疎水性酸の塩を製剤中に使用してもよい。
【００１９】
例えば、開示されるカルボン酸は、脂肪族カルボン酸（例えば、環式または非環式、分岐または非分岐炭化水素鎖を有するカルボン酸）である場合がある。開示されるカルボン酸は、一部の実施形態では、これらに限定されないが、ハロゲン（すなわち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩ）、スルホニル、ニトロ、およびオキソを含めた１つまたは複数の官能基で置換されていてもよい。ある特定の実施形態では、開示されるカルボン酸は、非置換であってもよい。
【００２０】
例示的なカルボン酸としては、置換または非置換の脂肪酸（例えば、Ｃ６〜Ｃ５０脂肪酸）が挙げられる。一部の例において、脂肪酸は、Ｃ１０〜Ｃ２０脂肪酸である場合がある。他の例では、脂肪酸は、Ｃ１５〜Ｃ２０脂肪酸である場合がある。脂肪酸は、場合によって、飽和である場合もある。他の実施形態では、脂肪酸は、不飽和である場合もある。例えば、脂肪酸は、一価不飽和脂肪酸または多価不飽和脂肪酸である場合がある。一部の実施形態では、不飽和脂肪酸基の二重結合は、シス配座である場合がある。一部の実施形態では、不飽和脂肪酸の二重結合は、トランス配座である場合がある。不飽和脂肪酸には、これらに限定されないが、オメガ３、オメガ６、およびオメガ９脂肪酸が含まれる。
【００２１】
飽和脂肪酸の非限定的な例としては、カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸、トリデカン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、ノナデカン酸、アラキジン酸、ヘンエイコサン酸、ベヘン酸、トリコサン酸、リグノセリン酸、ペンタコサン酸、セロチン酸、ヘプタコサン酸、モンタン酸、ノナコサン酸、メリシン酸、ヘナトリアコンタン酸（ｈｅｎａｔｒｉａｃｏｎｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）、ラッセル酸、プシリン酸（ｐｓｙｌｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ゲジン酸（ｇｅｄｄｉｃ  ａｃｉｄ）、セロプラスチン酸（ｃｅｒｏｐｌａｓｔｉｃ  ａｃｉｄ）、ヘキサトリアコンタン酸、およびこれらの組合せが挙げられる。
【００２２】
不飽和脂肪酸の非限定的な例としては、ヘキサデカトリエン酸、アルファ−リノレン酸、ステアリドン酸、エイコサトリエン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸、ヘンエイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、テトラコサペンタエン酸、テトラコサヘキサエン酸、リノール酸、ガンマ−リノレン酸、エイコサジエン酸、ジホモ−ガンマ−リノレン酸、アラキドン酸、ドコサジエン酸、アドレン酸（ａｄｒｅｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ドコサペンタエン酸、テトラコサテトラエン酸、テトラコサペンタエン酸、オレイン酸、エイコセン酸、ミード酸、エルカ酸、ネルボン酸、ルーメン酸、α−カレンド酸、β−カレンド酸、ジャカル酸、α−エレオステアリン酸、β−エレオステアリン酸、カタルプ酸、プニカ酸、ルメレン酸（ｒｕｍｅｌｅｎｉｃ  ａｃｉｄ）、α−パリナリン酸、β−パリナリン酸、ボセオペンタエン酸、ピノレン酸、ポドカルピン酸、パルミトレイン酸、バクセン酸、ガドレイン酸、エルカ酸、およびこれらの組合せが挙げられる。
【００２３】
疎水性酸の他の非限定的な例としては、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、パモ酸、ケイ皮酸、フェニル酢酸、およびこれらの組合せなどの、芳香族酸が挙げられる。
【００２４】
一部の実施形態では、疎水性酸は、胆汁酸である場合がある。胆汁酸の非限定的な例としては、ケノデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、デオキシコール酸、ハイコール酸（ｈｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ベータ−ムリコール酸、コール酸、アミノ酸抱合胆汁酸、およびこれらの組合せが挙げられる。アミノ酸抱合胆汁酸は、任意の適切なアミノ酸に抱合されていてもよい。一部の実施形態では、アミノ酸抱合胆汁酸は、グリシン抱合胆汁酸またはタウリン抱合胆汁酸である。
【００２５】
場合によって、企図される酸は、分子量が約１０００Ｄａ未満、一部の実施形態では、約５００Ｄａ未満、一部の実施形態では、約４００Ｄａ未満、一部の実施形態では、約３００Ｄａ未満、一部の実施形態では、約２５０Ｄａ未満、一部の実施形態では、約２００Ｄａ未満、一部の実施形態では、約１５０Ｄａ未満である場合がある。場合によって、酸は、約１００Ｄａ〜約１０００Ｄａの間、一部の実施形態では、約２００Ｄａ〜約８００Ｄａの間、一部の実施形態では、約２００Ｄａ〜約６００Ｄａの間、一部の実施形態では、約１００Ｄａ〜約３００Ｄａの間、一部の実施形態では、約２００Ｄａ〜約４００Ｄａの間、一部の実施形態では、約３００Ｄａ〜約５００Ｄａの間の分子量を有することがある。
【００２６】
一部の実施形態では、疎水性酸は、少なくとも部分的に、酸の強度に基づいて選択することができる。例えば、疎水性酸は、２５℃で求められる水中での酸解離定数（ｐＫａ）が、約−５〜約７、一部の実施形態では、約−３〜約５、一部の実施形態では、約−３〜約４、一部の実施形態では、約−３〜約３．５、一部の実施形態では、約−３〜約３、一部の実施形態では、約−３〜約２、一部の実施形態では、約−３〜約１、一部の実施形態では、約−３〜約０．５、一部の実施形態では、約−０．５〜約０．５、一部の実施形態では、約１〜約７、一部の実施形態では、約２〜約７、一部の実施形態では、約３〜約７、一部の実施形態では、約４〜約６、一部の実施形態では、約４〜約５．５、一部の実施形態では、約４〜約５、一部の実施形態では、約４．５〜約５である場合がある。一部の実施形態では、酸は、２５℃で求められるｐＫａが、約７未満、約５未満、約３．５未満、約３未満、約２未満、約１未満、または約０未満である場合がある。
【００２７】
一部の実施形態では、企図される疎水性酸は、例えば、最終的な治療用ナノ粒子における治療用ナノ粒子の特性を改善するのに有利である相転移温度を有する場合がある。例えば、酸は、約３００℃未満、場合によって、約１００℃未満、場合によって、約５０℃未満である融点を有することがある。ある特定の実施形態では、酸は、約５℃〜約２５℃の間、場合によって、約１５℃〜約５０℃の間、場合によって、約３０℃〜約１００℃の間、場合によって、約７５℃〜約１５０℃の間、場合によって、約１２５℃〜約２００℃の間、場合によって、約１５０℃〜約２５０℃の間、場合によって、約２００℃〜約３００℃の間の融点を有することがある。場合によって、酸は、約１５℃未満、場合によって、約１０℃未満、または場合によって、約０℃未満の融点を有することがある。ある特定の実施形態では、酸は、約−３０℃〜約０℃の間、または場合によって、約−２０℃〜約−１０℃の間の融点を有することがある。
【００２８】
例えば、本明細書で開示される方法およびナノ粒子において使用する酸は、少なくとも部分的に、酸を含む溶媒への抗体治療剤の溶解度に基づいて選択することができる。例えば、一部の実施形態では、酸を含む溶媒に溶解した抗ＰＤ−１抗体治療剤は、約７００ｍｇ／ｍＬ〜約９００ｍｇ／ｍＬの間、約６００ｍｇ／ｍＬ〜約８００ｍｇ／ｍＬの間、約５００ｍｇ／ｍＬ〜約７００ｍｇ／ｍＬ〜約８００ｍｇ／ｍＬの間、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、約１２５ｍｇ／ｍＬ〜約１７５ｍｇ／ｍＬの間、約１５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの間、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬの間の溶解度を有する場合がある。一部の実施形態では、酸を含む溶媒に溶解した抗体治療剤は、約１０ｍｇ／ｍＬを超える、約５０ｍｇ／ｍＬを超える、または約１００ｍｇ／ｍＬを超える溶解度を有する場合がある。一部の実施形態では、疎水性酸を含む溶媒に溶解した抗体治療剤（例えば、治療剤と溶媒と疎水性酸とからなる第１の溶液）は、抗体治療剤が、疎水性酸を含有しない溶媒（例えば、治療剤と溶媒とからなる第２の溶液）に溶解している場合の、少なくとも約２倍高い、一部の実施形態では、少なくとも約５倍高い、一部の実施形態では、少なくとも約１０倍高い、一部の実施形態では、少なくとも約２０倍高い、一部の実施形態では、約２倍〜約２０倍高い、または一部の実施形態では、約１０倍〜約２０倍高い溶解度を有する場合がある。
【００２９】
場合によって、薬剤溶液（すなわち抗体治療剤溶液）中の酸の濃度は、約１重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約２重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約３重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約４重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約５重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約６重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約８重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１０重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１２重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１４重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１６重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１重量パーセント〜約５重量パーセントの間、一部の実施形態では、約３重量パーセント〜約９重量パーセントの間、一部の実施形態では、約６重量パーセント〜約１２重量パーセントの間、一部の実施形態では、約９重量パーセント〜約１５重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１２重量パーセント〜約１８重量パーセントの間、および一部の実施形態では、約１５重量パーセント〜約２１重量パーセントの間でよい。ある特定の実施形態では、薬剤溶液中の疎水性酸の濃度は、少なくとも約１重量パーセント、一部の実施形態では、少なくとも約２重量パーセント、一部の実施形態では、少なくとも約３重量パーセント、一部の実施形態では、少なくとも約５重量パーセント、一部の実施形態では、少なくとも約１０重量パーセント、一部の実施形態では、少なくとも約１５重量パーセント、および一部の実施形態では、少なくとも約２０重量パーセントでよい。
【００３０】
ある特定の実施形態では、疎水性酸は、２５℃で求められる溶解度が、水１００ｍＬあたり約２ｇ未満、一部の実施形態では、水１００ｍＬあたり約１ｇ未満、一部の実施形態では、水１００ｍＬあたり約１００ｍｇ未満、一部の実施形態では、水１００ｍＬあたり約１０ｍｇ未満、および一部の実施形態では、水１００ｍＬあたり約１ｍｇ未満となり得る。他の実施形態では、酸は、２５℃で求められる溶解度が、水１００ｍＬあたり約１ｍｇ〜水１００ｍＬあたり約２ｇの間、一部の実施形態では、水１００ｍＬあたり約１ｍｇ〜水１００ｍＬあたり約１ｇの間、一部の実施形態では、水１００ｍＬあたり約１ｍｇ〜水１００ｍＬあたり約５００ｍｇの間、および一部の実施形態では、水１００ｍＬあたり約１ｍｇ〜水１００ｍＬあたり約１００ｍｇの間となり得る。一部の実施形態では、疎水性酸は、２５℃において水に本質的に不溶性でよい。
【００３１】
一部の実施形態では、開示されるナノ粒子は、ナノ粒子を調製する際に、疎水性酸が本質的に使用されていなくてもよい。他の実施形態では、開示されるナノ粒子は疎水性酸を含んでもよい。例えば、一部の実施形態では、酸の、開示されるナノ粒子中の含有量は、約０．０５重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約０．５重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約２重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約３重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約５重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約７重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１０重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１５重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約２０重量パーセント〜約３０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約０．０５重量パーセント〜約０．５重量パーセントの間、一部の実施形態では、約０．０５重量パーセント〜約５重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１重量パーセント〜約５重量パーセントの間、一部の実施形態では、約３重量パーセント〜約１０重量パーセントの間、一部の実施形態では、約５重量パーセント〜約１５重量パーセントの間、一部の実施形態では、約１０重量パーセント〜約２０重量パーセントの間でよい。
【００３２】
一部の実施形態では、開示されるナノ粒子は、例えば、室温（例えば２５℃）および／または３７℃のリン酸緩衝溶液に入れたとき、（例えば、約１分〜約３０分、約１分〜約２５分、約５分〜約３０分、約５分〜約１時間、約１時間、または約２４時間かけて、）約２％未満、約５％未満、約１０％未満、約１５％未満、約２０％未満、約２５％未満、約３０％未満、もしくは４０％未満の抗生物質治療剤しか実質的に直ちに放出しない。ある特定の実施形態では、抗生物質治療剤を含むナノ粒子は、例えば２５℃および／または３７℃の水溶液（例えばリン酸緩衝溶液）に入れたとき、抗生物質治療剤の約０．０１〜約５０％、一部の実施形態では約０．０１〜約２５％、一部の実施形態では約０．０１〜約１５％、一部の実施形態では約０．０１〜約１０％、一部の実施形態では約１〜約４０％、一部の実施形態では約５〜約４０％、および一部の実施形態では約１０〜約４０％が約１時間かけて放出されるのに実質的に相当する速度で、抗生物質治療剤を放出し得る。一部の実施形態では、抗生物質治療剤を含むナノ粒子は、水溶液（例えば、リン酸緩衝溶液）中に、例えば、２５℃にて、および／または３７℃にて置かれたとき、抗生物質治療剤の約１０〜約７０％、一部の実施形態では、約１０〜約４５％、一部の実施形態では、約１０〜約３５％、または一部の実施形態では、約１０〜約２５％が約４時間にわたり放出されることに実質的に相当する速度で、ポリミキシン／コリスチン抗生物質治療剤を放出し得る。
【００３３】
一部の実施形態では、開示されているナノ粒子は、リン酸緩衝溶液中に３７℃にて置かれたとき、抗体治療剤を、例えば、少なくとも約１分間、少なくとも約１時間、またはそれ超の間実質的に保持し得る。
【００３４】
一部の実施形態では、開示されるナノ粒子は、例えば、室温（例えば２５℃）および／または３７℃のリン酸緩衝溶液に入れたとき、（例えば、約１分〜約３０分、約１分〜約２５分、約５分〜約３０分、約５分〜約１時間、約１時間、または約２４時間かけて、）約２％未満、約５％未満、約１０％未満、約１５％未満、約２０％未満、約２５％未満、約３０％未満、もしくは４０％未満の治療剤、または治療剤−疎水性の対イオン剤、例えばエンドリソソーム破壊剤、イオン対しか実質的に放出しない。ある特定の実施形態では、治療剤を含むナノ粒子は、例えば、２５℃および／または３７℃の水溶液（例えばリン酸緩衝液）に入れたとき、治療剤の約０．０１〜約５０％、一部の実施形態では約０．０１〜約２５％、一部の実施形態では約０．０１〜約１５％、一部の実施形態では約０．０１〜約１０％、一部の実施形態では約１〜約４０％、一部の実施形態では約５〜約４０％、一部の実施形態では約１０〜約４０％が約１時間かけて放出されるのに実質的に相当する速度で、治療剤を放出し得る。一部の実施形態では、治療剤を含むナノ粒子は、２５℃および／または３７℃の水溶液（例えばリン酸緩衝溶液）に入れたとき、治療剤の約１０〜約７０％、一部の実施形態では約１０〜約４５％、一部の実施形態では約１０〜約３５％、または一部の実施形態では約１０〜約２５％が約４時間かけて放出されるのに実質的に相当する速度で、治療剤を放出し得る。
【００３５】
一部の実施形態では、開示されるナノ粒子は、３７℃のリン酸緩衝溶液に入れたとき、治療剤を、例えば、少なくとも約１分間、少なくとも約１時間、またはそれ超の間実質的に保持し得る。
【００３６】
一部の実施形態では、抗体治療剤、または抗ＰＤ−１抗体は、別の治療剤がカプセル化されている治療用ナノ粒子と併せて投与される。第２の治療剤は、抗体に加え、ナノ粒子内にカプセル化されている場合もある。他の実施形態では、第２の治療剤は、ナノ粒子内にカプセル化され、抗体は、ナノ粒子に結合しているかまたはナノ粒子のリガンドに結合している。他の実施形態では、治療剤は、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ミトキサントロン、ゲムシタビン（ｇｅｍｚａｒ）、ダウノルビシン、プロカルバジン、マイトマイシン、シタラビン、エトポシド、メトトレキセート、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ブレオマイシン、パクリタキセル（ｔａｘｏｌ）、ドセタキセル（ｔａｘｏｔｅｒｅ）、アルデスロイキン、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クラドリビン、カンプトテシン、ＣＰＴ−１１、１０−ヒドロキシ−７−エチルカンプトテシン（ＳＮ３８）、ダカルバジン、Ｓ−Ｉカペシタビン、ｆｔｏｒａｆｕｒ、５’デオキシフルロウリジン、ＵＦＴ、エニルウラシル、デオキシシチジン、５−アザシトシン、５−アザデオキシシトシン、アロプリノール、２−クロロアデノシン、トリメトレキセート、アミノプテリン、メチレン−１０−デアザアミノプテリン（ＭＤＡＭ）、オキサプラチン（ｏｘａｐｌａｔｉｎ）、ピコプラチン、テトラプラチン（ｔｅｔｒａｐｌａｔｉｎ）、サトラプラチン、白金−ＤＡＣＨ、オルマプラチン（ｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）、ＣＩ−９７３、ＪＭ−２１６、およびこれらの類似体、エピルビシン、リン酸エトポシド、９−アミノカンプトテシン、１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン、カレニテシン（ｋａｒｅｎｉｔｅｃｉｎ）、９−ニトロカンプトテシン、ＴＡＳ１０３、ビンデシン、Ｌ−フェニルアラニンマスタード、イホスファミドメホスファミド（ｉｆｏｓｐｈａｍｉｄｅｍｅｆｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ペルホスファミド（ｐｅｒｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、トロホスファミド（ｔｒｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）  カルムスチン、セムスチン、エポチロンＡ〜Ｅ、ｔｏｍｕｄｅｘ、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アムサクリン、リン酸エトポシド、カレニテシン（ｋａｒｅｎｉｔｅｃｉｎ）、アシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、アマンタジン、リマンタジン、ラミブジン、ジドブジン、ベバシズマブ、トラスツズマブ、リツキシマブ、および５−フルオロウラシル、メトトレキセート、ブデソニド、シロリムス  ビンクリスチン、およびこれらの組合せなどの化学療法剤からなる群から選択され、または治療剤は、ｓｉＲＮＡである場合もある。
【００３７】
一実施形態では、開示されている治療用ナノ粒子は、標的化リガンド、例えば、低分子量リガンドを含み得る。ある特定の実施形態では、低分子量リガンドはポリマーにコンジュゲートしており、ナノ粒子は、特定の比のリガンドがコンジュゲートしたポリマー（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧ−リガンド）と非官能化ポリマー（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧ）とを含む。有効量のリガンドが、疾患または障害、例えば、がんの処置のためのナノ粒子と会合するように、ナノ粒子は、最適化された比のこれらの２種のポリマーを有することができる。例えば、リガンド密度の増加は、標的結合（細胞結合／標的取込み）を増加させ、ナノ粒子を「標的特異的」とし得る。代わりに、ナノ粒子における非官能化ポリマー（例えば、非官能化ＰＬＧＡ−ＰＥＧコポリマー）のある特定の濃度は、炎症および／または免疫原性（すなわち、免疫応答を誘発する能力）を制御し、かつナノ粒子が、疾患または障害の処置のために適した循環半減期を有することを可能とする。さらに、非官能化ポリマーは、一部の実施形態では、細網内皮系（ＲＥＳ）を介した循環器系からのクリアランスの速度を低下し得る。このように、非官能化ポリマーは、投与によって粒子が体内を移動することを可能とし得る特徴を有するナノ粒子を提供し得る。一部の実施形態では、非官能化ポリマーは、それ以外の場合では高濃度になってしまうリガンドを相殺することができる。リガンドが高濃度であったなら、対象によるクリアランスが加速され、標的細胞への送達が低下してしまっていた可能性がある。
【００３８】
一部の実施形態では、本明細書において開示されているナノ粒子は、ナノ粒子の全ポリマー組成物（すなわち、官能化＋非官能化ポリマー）の概ね０．１〜５０モルパーセント、例えば、０．１〜３０モルパーセント、例えば、０．１〜２０モルパーセント、例えば、０．１〜１０モルパーセントを構成する、リガンドにコンジュゲートした官能化ポリマーを含み得る。別の実施形態では、１種または複数の低分子量リガンドとコンジュゲート（すなわち、共有結合（例えば、リンカー（例えば、アルキレンリンカー）を介した）または結合）したポリマーを含むナノ粒子が本明細書においてまた開示され、総ポリマーに対する低分子量リガンドの重量パーセントは、約０．００１〜５、例えば、約０．００１〜２、例えば、約０．００１〜１である。
【００３９】
一部の実施形態では、開示されているナノ粒子は、生物学的実体、例えば、特定の膜成分もしくは細胞表面受容体と効率的に結合するか、そうでなければ会合することができる場合がある。ペプチド、リガンド、タンパク質、抗体、またはナノボディを使用して、ナノ粒子を標的化することもできると理解すべきである。（例えば、特定の組織もしくは細胞型への、正常組織ではなく特定の患部組織などへの）治療剤の標的化は、組織特異的疾患、例えば、固形腫瘍がん（例えば、前立腺がん）の処置のために望ましい。例えば、細胞毒性抗がん剤の全身的送達と対照的に、本明細書において開示されているナノ粒子は、この薬剤が健康な細胞を死滅させることを実質的に防止し得る。さらに、開示されているナノ粒子は、（開示されているナノ粒子または製剤を伴わずに投与された有効量の薬剤と比較して）薬剤のより低い用量の投与を可能としてもよく、これは伝統的な化学療法と一般に関連する望ましくない副作用を低減し得る。
【００４０】
一般に、「ナノ粒子」は、１０００ｎｍ未満、例えば、約１０ｎｍ〜約２００ｎｍの直径を有する任意の粒子を指す。開示されている治療用ナノ粒子は、約６０〜約１２０ｎｍ、または約７０〜約１２０ｎｍ、または約８０〜約１２０ｎｍ、または約９０〜約１２０ｎｍ、または約１００〜約１２０ｎｍ、または約６０〜約１３０ｎｍ、または約７０〜約１３０ｎｍ、または約８０〜約１３０ｎｍ、または約９０〜約１３０ｎｍ、または約１００〜約１３０ｎｍ、または約１１０〜約１３０ｎｍ、または約６０〜約１４０ｎｍ、または約７０〜約１４０ｎｍ、または約８０〜約１４０ｎｍ、または約９０〜約１４０ｎｍ、または約１００〜約１４０ｎｍ、または約１１０〜約１４０ｎｍ、または約６０〜約１５０ｎｍ、または約７０〜約１５０ｎｍ、または約８０〜約１５０ｎｍ、または約９０〜約１５０ｎｍ、または約１００〜約１５０ｎｍ、または約１１０〜約１５０ｎｍ、または約１２０〜約１５０ｎｍの直径を有するナノ粒子を含み得る。開示されるナノ粒子は、特定のサイズで形成させることができ、これによって、取込み経路、循環時間、標的化、内部移行、および／またはクリアランスが決定され得ると理解すべきである。
【００４１】
ポリマー
一部の実施形態では、ナノ粒子は、ポリマーのマトリックスと、抗ＰＤ−１抗体を含めた上記の治療剤などの治療剤とを、場合により疎水性の対イオン剤と一緒に、例えば、エンドリソソーム破壊剤などの疎水性の対イオン剤とのイオン対として含んでいてもよい。一部の実施形態では、治療剤および／または標的化部分（すなわち、低分子量リガンド）は、ポリマーマトリックスの少なくとも一部と会合させることができる。例えば、一部の実施形態では、標的化部分（例えば、リガンド）は、ポリマーマトリックスの表面と共有結合的に会合させることができる。一部の実施形態では、共有結合的会合は、リンカーによって媒介される。治療剤は、ポリマーマトリックスの表面と会合するか、ポリマーマトリックス内にカプセル化されるか、ポリマーマトリックスによって囲まれるか、かつ／またはポリマーマトリックスにわたって分散し得る。
【００４２】
多種多様のポリマーおよびそこから粒子を形成する方法は、薬物送達の当技術分野において公知である。一部の実施形態では、本開示は、少なくとも２つの巨大分子を有するナノ粒子を対象とし、第１の巨大分子は、低分子量リガンド（例えば、標的化部分）に結合した第１のポリマーを含み、第２の巨大分子は、標的化部分に結合していない第２のポリマーを含む。ナノ粒子は、１種または複数のさらなる非官能化ポリマーを場合により含むことができる。
【００４３】
任意の適切なポリマーを、開示されているナノ粒子において使用することができる。ポリマーは、天然または非天然（合成）のポリマーでよい。ポリマーは、２種またはそれ超のモノマーを含むホモポリマーまたはコポリマーでよい。配列に関して、コポリマーは、ランダム、ブロックでよいか、またはランダムおよびブロック配列の組合せを含むことができる。典型的には、ポリマーは、有機ポリマーである。
【００４４】
用語「ポリマー」は、本明細書において使用する場合、当技術分野で使用されるようなその通常の意味を与えられ、すなわち、分子構造は、共有結合によって連結した１つまたは複数の繰り返し単位（モノマー）を含む。繰り返し単位は、全て同一であり得るか、または場合によって、ポリマー内に存在する２種以上のタイプの繰り返し単位があり得る。場合によって、ポリマーは、生物学的に由来するもの、すなわち、生体ポリマーでよい。非限定的な例には、ペプチドまたはタンパク質が含まれる。場合によって、さらなる部分、例えば、生物学的部分、例えば、下記に記載したものがまた、ポリマー中に存在し得る。２種以上のタイプの繰り返し単位がポリマー内に存在する場合、ポリマーは、「コポリマー」と言われる。ポリマーを用いる任意の実施形態では、用いられるポリマーは、場合によって、コポリマーであり得ることを理解すべきである。コポリマーを形成する繰り返し単位は、任意の様式で配置し得る。例えば、繰り返し単位は、ランダムな順序で、交互の順序で、またはブロックコポリマーとして配置してもよく、すなわち、それぞれが第１の繰り返し単位（例えば、第１のブロック）を含む１つまたは複数の領域、およびそれぞれが第２の繰り返し単位（例えば、第２のブロック）を含む１つまたは複数の領域などを含む。ブロックコポリマーは、２つ（ジブロックコポリマー）、３つ（トリブロックコポリマー）、またはそれ超の数の別個のブロックを有し得る。
【００４５】
開示されている粒子は、コポリマーを含むことができ、これは一部の実施形態では、通常、２種またはそれ超のポリマーが一緒の共有結合によって互いに会合している、２種またはそれ超のポリマー（例えば、本明細書に記載されているもの）を説明する。このように、コポリマーは、第１のポリマーおよび第２のポリマーを含んでいてもよく、これらは一緒にコンジュゲートされて、ブロックコポリマーを形成し、第１のポリマーは、ブロックコポリマーの第１のブロックでよく、第２のポリマーは、ブロックコポリマーの第２のブロックでよい。当然ながら、ブロックコポリマーは、場合によって、ポリマーの複数のブロックを含有してもよく、「ブロックコポリマー」は、本明細書において使用する場合、単一の第１のブロックおよび単一の第２のブロックのみを有するブロックコポリマーのみに限定されないことを当業者は理解する。例えば、ブロックコポリマーは、第１のポリマーを含む第１のブロック、第２のポリマーを含む第２のブロック、および第３のポリマーまたは第１のポリマーなどを含む第３のブロックを含み得る。場合によって、ブロックコポリマーは、任意の数の第１のポリマーの第１のブロック、および第２のポリマーの第２のブロック（およびある特定の場合では、第３のブロック、第４のブロックなど）を含有することができる。さらに、ブロックコポリマーはまた、場合によって、他のブロックコポリマーから形成することができることに留意すべきである。例えば、第１のブロックコポリマーは、別のポリマー（ホモポリマー、生体ポリマー、別のブロックコポリマーなどでよい）にコンジュゲートして複数のタイプのブロックを含有する新規なブロックコポリマーを形成し、かつ／または他の部分（例えば、非ポリマー部分）にコンジュゲートし得る。
【００４６】
一部の実施形態では、ポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポリマー）は、両親媒性でよく、すなわち、親水性部分および疎水性部分、または相対的に親水性部分および相対的に疎水性部分を有する。親水性ポリマーは、一般に水を引きつけるものでよく、疎水性ポリマーは、一般に水をはねかえすものでよい。親水性または疎水性ポリマーは、例えば、ポリマーの試料を調製し、水とのその接触角を測定する（典型的には、ポリマーは、６０°未満の接触角を有し、一方、疎水性ポリマーは、約６０°超の接触角を有する）ことによって同定することができる。場合によって、２種またはそれ超のポリマーの親水性は、互いに対して測定してもよく、すなわち、第１のポリマーは、第２のポリマーより親水性であり得る。例えば、第１のポリマーは、第２のポリマーより小さな接触角を有し得る。
【００４７】
一組の実施形態では、本明細書において企図されるポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポリマー）は、生体適合性ポリマー、すなわち、典型的には、生きている対象中に挿入または注射されたとき、例えば、Ｔ細胞応答によるかなりの炎症および／または免疫系によるポリマーの急性拒絶を伴わずに有害な応答を惹起しないポリマーを含む。したがって、本明細書において企図される治療用粒子は、非免疫原性であり得る。非免疫原性という用語は、本明細書において使用する場合、循環抗体、Ｔ細胞、もしくは反応性免疫細胞を通常引き起こさないか、または最小レベルのみを引き起こし、個体においてそれ自体に対する免疫応答を通常引き起こさない、その天然状態における内在性成長因子を指す。
【００４８】
生体適合性は典型的には、免疫系の少なくとも一部による材料の急性拒絶を指し、すなわち、対象中に植え込んだ非生体適合性材料が、対象において十分に重大であり得る免疫応答を誘発し、免疫系による材料の拒絶は、適当に制御することができず、材料を対象から除去しなくてはならないような程度であることが多い。生体適合性を決定するための１つの単純な試験は、ポリマーを細胞へとｉｎ  ｖｉｔｒｏで曝露させることでよい。生体適合性ポリマーは、典型的には中程度の濃度で、例えば、５０マイクログラム／１０６個の細胞の濃度でかなりの細胞死をもたらさないポリマーである。例えば、生体適合性ポリマーは、細胞、例えば、線維芽細胞または上皮細胞に曝露したとき、たとえこのような細胞によって貪食されるか、そうでなければ取り込まれるかしても、約２０％未満の細胞死をもたらし得る。様々な実施形態において有用であり得る生体適合性ポリマーの非限定的な例には、ポリジオキサノン（ＰＤＯ）、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリヒドロキシブチレート、ポリ（グリセロールセバシン酸）、ポリグリコリド（すなわち、ポリ（グリコール）酸）（ＰＧＡ）、ポリラクチド（すなわち、ポリ（乳）酸）（ＰＬＡ）、ポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸（ＰＬＧＡ）、ポリカプロラクトン、またはこれらおよび／もしくは他のポリマーを含めたコポリマーまたは誘導体が含まれる。
【００４９】
ある特定の実施形態では、企図される生体適合性ポリマーは、生分解性でよく、すなわち、ポリマーは、生理学的環境内、例えば、体内で、化学的および／または生物学的に分解することができる。本明細書において使用する場合、「生分解性」ポリマーは、細胞中に導入されるとき、細胞の機構によって（生物学的に分解可能）、および／または化学プロセス、例えば、加水分解によって（化学的に分解可能）、細胞に対してかなりの毒性効果を伴わずに細胞が再使用または処分することができる成分へと分解されるものである。一実施形態では、生分解性ポリマーおよびこれらの分解副生成物は、生体適合性であり得る。
【００５０】
本明細書において開示されている粒子は、ＰＥＧを含有してもよいか、またはしなくてもよい。さらに、ある特定の実施形態は、ポリ（エステル−エーテル）を含有するコポリマー、例えば、エステル結合（例えば、Ｒ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ’結合）およびエーテル結合（例えば、Ｒ−Ｏ−Ｒ’結合）によって結合した繰り返し単位を有するポリマーを対象とすることができる。一部の実施形態では、生分解性ポリマー、例えば、カルボン酸基を含有する加水分解性ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）繰り返し単位とコンジュゲートして、ポリ（エステル−エーテル）を形成し得る。ポリ（エチレングリコール）繰り返し単位を含有するポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポリマー）はまた、「ペグ化」ポリマーと称することができる。
【００５１】
例えば、企図されるポリマーは、（例えば、対象内で）水への曝露によって自発的に加水分解するものでよいか、またはポリマーは、（例えば、約３７℃の温度での）熱への曝露によって分解し得る。ポリマーの分解は、使用するポリマーまたはコポリマーによって様々な速度で起こり得る。例えば、ポリマーの半減期（ポリマーの５０％がモノマーおよび／または他の非ポリマー部分に分解することができる時間）は、ポリマーによって数日、数週間、数カ月、または数年程度であり得る。ポリマーは、例えば、酵素活性または細胞の機構によって、場合によって、例えば、リゾチーム（例えば、相対的に低ｐＨを有する）への曝露によって、生物学的に分解し得る。場合によって、ポリマーは、細胞に対して有意な毒性効果を伴わずに、細胞が再使用するか、または処分することができる、モノマーおよび／または他の非ポリマー部分に分解し得る（例えば、ポリラクチドは加水分解して、乳酸を形成し得、ポリグリコリドは加水分解して、グリコール酸などを形成し得る）。
【００５２】
一部の実施形態では、ポリマーは、本明細書において「ＰＬＧＡ」と集団的に称される、乳酸およびグリコール酸単位を含むコポリマー、例えば、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）；ならびに本明細書において「ＰＧＡ」と称される、グリコール酸単位、ならびに本明細書において「ＰＬＡ」と集団的に称される、乳酸単位、例えば、ポリ−Ｌ−乳酸、ポリ−Ｄ−乳酸、ポリ−Ｄ，Ｌ−乳酸、ポリ−Ｌ−ラクチド、ポリ−Ｄ−ラクチド、およびポリ−Ｄ，Ｌ−ラクチドを含むホモポリマーを含めた、ポリエステルであり得る。一部の実施形態では、例示的なポリエステルには、例えば、ポリヒドロキシ酸；ラクチドおよびグリコリドのペグ化ポリマーおよびコポリマー（例えば、ペグ化ＰＬＡ、ペグ化ＰＧＡ、ペグ化ＰＬＧＡ、およびその誘導体）が含まれる。一部の実施形態では、ポリエステルは、例えば、ポリ無水物、ポリ（オルトエステル）、ペグ化ポリ（オルトエステル）、ポリ（カプロラクトン）、ペグ化ポリ（カプロラクトン）、ポリリシン、ペグ化ポリリシン、ポリ（エチレンイミン）、ペグ化ポリ（エチレンイミン）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リシン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）、ポリ［α−（４−アミノブチル）−Ｌ−グリコール酸］、およびその誘導体を含む。
【００５３】
一部の実施形態では、ポリマーは、ＰＬＧＡであり得る。ＰＬＧＡは、乳酸およびグリコール酸の生体適合性および生分解性コポリマーであり、様々な形態のＰＬＧＡは、乳酸：グリコール酸の比によって特性決定することができる。乳酸は、Ｌ−乳酸、Ｄ−乳酸、またはＤ，Ｌ−乳酸でよい。ＰＬＧＡの分解速度は、乳酸−グリコール酸の比を変化させることによって調節することができる。一部の実施形態では、ＰＬＧＡは、概ね８５：１５、概ね７５：２５、概ね６０：４０、概ね５０：５０、概ね４０：６０、概ね２５：７５、または概ね１５：８５の乳酸：グリコール酸比によって特性決定することができる。一部の実施形態では、粒子のポリマー（例えば、ＰＬＧＡブロックコポリマーまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧブロックコポリマー）中の乳酸のグリコール酸モノマーに対する比を選択して、様々なパラメータ、例えば、水の取込み、治療剤の放出および／またはポリマー分解の反応速度について最適化し得る。
【００５４】
一部の実施形態では、ポリマーは、１種または複数のアクリルポリマーであり得る。ある特定の実施形態では、アクリルポリマーは、例えば、アクリル酸およびメタクリル酸コポリマー、メタクリル酸メチルコポリマー、メタクリル酸エトキシエチル、メタクリル酸シアノエチル、メタクリル酸アミノアルキルコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、メタクリル酸アルキルアミドコポリマー、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリアクリルアミド、メタクリル酸アミノアルキルコポリマー、メタクリル酸グリシジルコポリマー、ポリシアノアクリレート、および上記のポリマーの１つまたは複数を含む組合せを含む。アクリルポリマーは、低含量の第四級アンモニウム基を有するアクリル酸およびメタクリル酸エステルの完全に重合されたコポリマーを含み得る。
【００５５】
一部の実施形態では、ポリマーは、カチオン性ポリマーでよい。一般に、カチオン性ポリマーは、負に帯電している核酸鎖（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはその誘導体）を凝縮および／または保護することができる。アミン含有ポリマー、例えば、ポリ（リシン）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、およびポリ（アミドアミン）デンドリマーは、一部の実施形態では、開示されている粒子における使用のために企図される。
【００５６】
一部の実施形態では、ポリマーは、カチオン性側鎖を担持する分解性ポリエステルでよい。これらのポリエステルの例には、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リシン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）が含まれる。
【００５７】
例えば、ＰＥＧがリガンドにコンジュゲートしていないとき、ＰＥＧは、終端しており、末端基を含んでいてもよいことが企図されている。例えば、ＰＥＧは、ヒドロキシル、メトキシもしくは他のアルコキシル基、メチルもしくは他のアルキル基、アリール基、カルボン酸、アミン、アミド、アセチル基、グアニジノ基、またはイミダゾールで終端し得る。他の企図される末端基には、アジド、アルキン、マレイミド、アルデヒド、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、アルコキシアミン、またはチオール部分が含まれる。
【００５８】
当業者は、例えば、開環重合技術（ＲＯＭＰ）などによって、ポリマーをアミンで終端しているＰＥＧ基に反応させるＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）およびＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）を使用することによって、ポリマーをペグ化するための方法および技術について知っている。
【００５９】
一実施形態では、ポリマーの分子量（または、例えば、コポリマーの異なるブロックの分子量の比）は、本明細書に開示されている有効な処置のために最適化することができる。例えば、ポリマーの分子量は、粒子分解速度（例えば、生分解性ポリマーの分子量を調節することができるとき）、溶解度、水の取込み、および薬物放出動態に影響を与えてもよい。例えば、ポリマーの分子量（または、例えば、コポリマーの異なるブロックの分子量の比）は、粒子が合理的な期間（数時間から１〜２週間、３〜４週間、５〜６週間、７〜８週間などの範囲）内で、処置される対象において生分解するように調節することができる。
【００６０】
開示されている粒子は、例えば、ＰＥＧおよびＰＬ（Ｇ）Ａのジブロックコポリマーを含むことができ、例えば、ＰＥＧ部分は、約１，０００〜２０，０００、例えば、約２，０００〜２０，０００、例えば、約２〜約１０，０００の数平均分子量を有してもよく、ＰＬ（Ｇ）Ａ部分は、約５，０００〜約２０，０００、または約５，０００〜１００，０００、例えば、約２０，０００〜７０，０００、例えば、約１５，０００〜５０，０００の数平均分子量を有してもよい。
【００６１】
例えば、約１０〜約９９重量パーセントのポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、または約２０〜約８０重量パーセント、約４０〜約８０重量パーセント、もしくは約３０〜約５０重量パーセント、もしくは約７０〜約９０重量パーセントのポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーまたはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーを含む例示的な治療用ナノ粒子が本明細書において開示される。例示的なポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約１０〜約２０ｋＤａ、約１５〜約２０ｋＤａ、または約１０〜約２５ｋＤａの数平均分子量のポリ（乳）酸および約４〜約６、または約２ｋＤａ〜約１０ｋＤａの数平均分子量のポリ（エチレン）グリコールを含むことができる。
【００６２】
一部の実施形態では、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーは、約０．６〜約０．９５、一部の実施形態では、約０．７〜約０．９、一部の実施形態では、約０．６〜約０．８、一部の実施形態では、約０．７〜約０．８、一部の実施形態では、約０．７５〜約０．８５、一部の実施形態では、約０．８〜約０．９、および一部の実施形態では、約０．８５〜約０．９５の数平均分子量比率のポリ（乳）酸を有し得る。ポリ（乳）酸の数平均分子量比率は、コポリマーのポリ（乳）酸成分の数平均分子量を、ポリ（乳）酸成分の数平均分子量およびポリ（エチレン）グリコール成分の数平均分子量の合計で除することによって計算し得ることを理解すべきである。
【００６３】
開示されているナノ粒子は、約１〜約５０重量パーセントのポリ（乳）酸またはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸（ＰＥＧを含まない）を場合により含んでいてもよいか、または約１〜約５０重量パーセント、もしくは約１０〜約５０重量パーセントもしくは約３０〜約５０重量パーセントのポリ（乳）酸もしくはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸を場合により含んでいてもよい。例えば、ポリ（乳）酸またはポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸は、約５〜約１５ｋＤａ、または約５〜約１２ｋＤａの数平均分子量を有し得る。例示的なＰＬＡは、約５〜約１０ｋＤａの数平均分子量を有し得る。例示的なＰＬＧＡは、約８〜約１２ｋＤａの数平均分子量を有し得る。
【００６４】
治療用ナノ粒子は、一部の実施形態では、約１０〜約３０重量パーセント、一部の実施形態では、約１０〜約２５重量パーセント、一部の実施形態では、約１０〜約２０重量パーセント、一部の実施形態では、約１０〜約１５重量パーセント、一部の実施形態では、約１５〜約２０重量パーセント、一部の実施形態では、約１５〜約２５重量パーセント、一部の実施形態では、約２０〜約２５重量パーセント、一部の実施形態では、約２０〜約３０重量パーセント、または一部の実施形態では、約２５〜約３０重量パーセントのポリ（エチレン）グリコールを含有してもよく、ポリ（エチレン）グリコールは、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、ポリ（乳）酸−ｃｏ−ポリ（グリコール）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマー、またはポリ（エチレン）グリコールホモポリマーとして存在し得る。ある特定の実施形態では、ナノ粒子のポリマーは、脂質にコンジュゲートすることができる。ポリマーは、例えば、脂質末端ＰＥＧでよい。
【００６５】
標的化部分
一部の実施形態では、任意選択の標的化部分、すなわち、生物学的実体、例えば、膜成分、細胞表面受容体、抗原などに結合するか、そうでなければ会合することができる部分を含み得るナノ粒子が本明細書において提供される。粒子の表面上に存在する標的化部分は、粒子が特定の標的化部位、例えば、腫瘍、疾患部位、組織、器官、細胞のタイプなどにおいて局在化することを可能とし得る。したがって、ナノ粒子は、「標的特異的」であり得る。次いで、薬物または他のペイロードは、場合によって、粒子から放出され、特定の標的化部位と局所的に相互作用することを可能とし得る。
【００６６】
一実施形態では、開示されているナノ粒子は、低分子量リガンドである標的化部分を含む。用語「結合」または「結合すること」は、本明細書において使用する場合、典型的には、これらに限定されないが、生化学的、生理的、および／または化学的相互作用を含めた特異的または非特異的な結合または相互作用による、相互親和性または結合能力を示す、対応する分子の対またはその部分の間の相互作用を指す。「生物学的結合」は、タンパク質、核酸、糖タンパク質、炭水化物、ホルモンなどを含めた分子の対の間に起こる相互作用のタイプを定義する。用語「結合パートナー」は、特定の分子と結合することができる分子を指す。「特異的結合」は、他の同様の生物学的実体に対してより実質的により高い程度まで結合パートナー（または限定された数の結合パートナー）に結合するか、認識することができる分子、例えば、ポリヌクレオチドを指す。一組の実施形態では、標的化部分は、約１マイクロモル未満、少なくとも約１０マイクロモル、または少なくとも約１００マイクロモルの親和性（解離定数によって測定すると）を有する。
【００６７】
例えば、標的化部は、粒子が、使用する標的化部分によって、対象の体内の腫瘍（例えば、固形腫瘍）、疾患の部位、組織、器官、あるタイプの細胞などへと局在化することをもたらし得る。例えば、低分子量リガンドは、固形腫瘍、例えば、乳房腫瘍もしくは前立腺腫瘍またはがん細胞に局在化し得る。対象は、ヒトまたはヒトではない動物であり得る。対象の例には、これらに限定されないが、哺乳動物、例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ロバ、ウサギ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラット、マウス、モルモット、ハムスター、霊長類、ヒトなどが含まれる。
【００６８】
企図される標的化部分は、低分子を含み得る。ある特定の実施形態では、用語「低分子」は、天然に生じたか、または人工的に創出した（例えば、化学合成による）、相対的に低分子量を有し、かつタンパク質、ポリペプチド、または核酸でない有機化合物を指す。低分子は典型的には、複数の炭素−炭素結合を有する。ある特定の実施形態では、低分子は、サイズが約２０００ｇ／ｍｏｌ未満である。一部の実施形態では、低分子は、約１５００ｇ／ｍｏｌ未満または約１０００ｇ／ｍｏｌ未満である。一部の実施形態では、低分子は、約８００ｇ／ｍｏｌ未満または約５００ｇ／ｍｏｌ未満、例えば、約１００ｇ／ｍｏｌ〜約６００ｇ／ｍｏｌ、または約２００ｇ／ｍｏｌ〜約５００ｇ／ｍｏｌである。
【００６９】
一部の実施形態では、低分子量リガンドは、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶのもの：
【００７０】
【化１】
2019508408.tif 000003
およびエナンチオマー、立体異性体、回転異性体、互変異性体、ジアステレオマー、またはそのラセミ化合物であり、
式中、ｍおよびｎは、それぞれ独立に、０、１、２または３であり、ｐは、０または１であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、およびＲ５は、それぞれ独立に、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ１〜１０−アルキル、Ｃ１〜６−アルキル、またはＣ１〜４−アルキル）、置換もしくは非置換アリール（例えば、フェニルまたはピリジニル）、および任意のこれらの組合せからなる群から選択され、Ｒ３は、ＨまたはＣ１〜６−アルキル（例えば、ＣＨ３）である。
【００７１】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶの化合物について、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４またはＲ５は、ナノ粒子への結合点、例えば、開示されているナノ粒子の一部を形成するポリマー、例えば、ＰＥＧへの結合点を含む。結合点は、共有結合、イオン結合、水素結合、化学的吸着および物理的吸着を含めた吸着によって形成される結合、ファンデルワールス結合によって形成される結合、または分散力によって形成し得る。例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、またはＲ５が、アニリンまたはＣ１〜６−アルキル−ＮＨ２基と定義されている場合、これらの官能基の任意の水素（例えば、アミノ水素）は、除去することができ、低分子量リガンドが、ナノ粒子のポリマーマトリックス（例えば、ポリマーマトリックスのＰＥＧ−ブロック）に共有結合している。本明細書において使用する場合、用語「共有結合」は、少なくとも一対の電子を共有することによって形成される２個の原子の間の結合を指す。
【００７２】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、およびＲ５は、それぞれ独立に、Ｃ１〜６−アルキルもしくはフェニル、またはＣ１〜６−アルキルもしくはフェニルの任意の組合せであり、これらはＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２、またはＣＯ２Ｈで１回または複数回独立に置換されており、アルキル基は、Ｎ（Ｈ）、Ｓ、またはＯによって中断し得る。別の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、およびＲ５は、それぞれ独立に、ＣＨ２−Ｐｈ、（ＣＨ２）２−ＳＨ、ＣＨ２−ＳＨ、（ＣＨ２）２Ｃ（Ｈ）（ＮＨ２）ＣＯ２Ｈ、ＣＨ２Ｃ（Ｈ）（ＮＨ２）ＣＯ２Ｈ、ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、（ＣＨ２）２Ｃ（Ｈ）（ＳＨ）ＣＯ２Ｈ、ＣＨ２−Ｎ（Ｈ）−Ｐｈ、Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ、またはＯ−（ＣＨ２）２−Ｐｈであり、各Ｐｈは、独立に、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＯ２Ｈ、またはＳＨで１回または複数回置換し得る。これらの式について、ＮＨ２、ＯＨまたはＳＨ基は、ナノ粒子（例えば、−Ｎ（Ｈ）−ＰＥＧ、−Ｏ−ＰＥＧ、または−Ｓ−ＰＥＧ）への共有結合点としての役割を果たす。
【００７３】
例示的なリガンドは、
【００７４】
【化２】
2019508408.tif 000004
およびエナンチオマー、立体異性体、回転異性体、互変異性体、ジアステレオマー、またはそのラセミ化合物を含み、式中、ＮＨ２、ＯＨ、またはＳＨ基は、ナノ粒子（例えば、−Ｎ（Ｈ）−ＰＥＧ、−Ｏ−ＰＥＧ、もしくは−Ｓ−ＰＥＧ）への共有結合点としての役割を果たすか、または
【００７５】
【化３】
2019508408.tif 000005
は、ナノ粒子への結合点を示し、式中、ｎは、１、２、３、４、５、または６であり、Ｒは、ＮＨ２、ＳＨ、ＯＨ、もしくはＣＯ２Ｈで置換されているＮＨ２、ＳＨ、ＯＨ、ＣＯ２Ｈ、Ｃ１〜６−アルキル、およびＮＨ２、ＳＨ、ＯＨ、もしくはＣＯ２Ｈで置換されているフェニルからなる群から独立に選択され、Ｒは、ナノ粒子（例えば、−Ｎ（Ｈ）−ＰＥＧ、−Ｓ−ＰＥＧ、−Ｏ−ＰＥＧ、またはＣＯ２−ＰＥＧ）への共有結合点としての役割を果たす。これらの化合物は、ＮＨ２、ＳＨ、ＯＨ、もしくはＣＯ２Ｈで置換されているＮＨ２、ＳＨ、ＯＨ、ＣＯ２Ｈ、Ｃ１〜６−アルキル、またはＮＨ２、ＳＨ、ＯＨ、もしくはＣＯ２Ｈで置換されているフェニルでさらに置換されていてもよく、これらの官能基はまた、ナノ粒子への共有結合点としての役割を果たすことができる。
【００７６】
一部の実施形態では、固形腫瘍、例えば、前立腺または乳がん腫瘍と関連する細胞を標的とするために使用し得る低分子標的化部分は、ＰＳＭＡペプチダーゼ阻害剤、例えば、２−ＰＭＰＡ、ＧＰＩ５２３２、ＶＡ−０３３、フェニルアルキルホスホンアミデートならびに／またはその類似体および誘導体を含む。一部の実施形態では、前立腺がん腫瘍と関連する細胞を標的とするために使用し得る低分子標的化部分は、チオールおよびインドールチオール誘導体、例えば、２−ＭＰＰＡおよび３−（２−メルカプトエチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸誘導体を含む。一部の実施形態では、前立腺がん腫瘍と関連する細胞を標的とするために使用し得る低分子標的化部分は、ヒドロキサメート誘導体を含む。一部の実施形態では、前立腺がん腫瘍と関連する細胞を標的とするために使用し得る低分子標的化部分は、ＰＢＤＡおよび尿素をベースとする阻害剤、例えば、ＺＪ４３、ＺＪ１１、ＺＪ１７、ＺＪ３８ならびに／またはその類似体および誘導体、アンドロゲン受容体標的化剤（ＡＲＴＡ）、ポリアミン、例えば、プトレシン、スペルミン、およびスペルミジン、ＮＡＡＧペプチダーゼまたはＮＡＡＬＡＤアーゼとしてもまた公知である酵素グルタミン酸カルボキシラーゼＩＩ（ＧＣＰＩＩ）の阻害剤を含む。
【００７７】
一部の実施形態では、企図されるリガンドは、固形腫瘍の処置のために線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）を標的とし得る低分子ＤＰＰＩＶ阻害剤である場合もある。スルホンアミド（アセトゾールアミド（Ａｃｅｔｏｚｏｌａｍｉｄｅ）他）リガンドは、ｃｃＲＣＣ（明細胞腎細胞癌）および他の固形腫瘍の処置のためにＧ２５０抗原を標的とし得る。リガンドが、神経膠芽腫および固形腫瘍の処置のためにクロロトキシン受容体を標的とし得るクロロトキシンを含む場合もある。低分子は、白血病、リンパ腫、および血管新生の上向調節の処置のために、ＣＸＣＲ４およびマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）を標的とし得る。
【００７８】
別の実施形態では、標的化部分は、葉酸受容体またはｔｏｌｌ受容体を標的とするリガンドでよい。別の実施形態では、標的化部分は、ホレート、葉酸、低分子、抗体、およびナノボディである。
【００７９】
標的化部分は、標的化抗体を含み得る。ＥｐＣＡＭ（ＣＤ３２６）、ＩＧＦ−Ｒ、メソテリン、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ抗原（ＣＤ１７４）、ＣａｎＡｇ（ＭＵＣ１、ＰＥＭ、ＣＡ２４２、ＣＤ２０５）、ＮＣＡＭ（ＣＤ５６）、Ｃｒｉｐｔｏ、メラノトランスフェリン（Ｐ９７）、糖タンパク質ＮＭＢ（ＣＧ５６９７２）、ＣＤ７０（ＣＤ２７リガンド）、５Ｔ４（栄養芽細胞糖タンパク質）、ＣＤ５７、ＣＤ２０６、ＣＤ４４、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＧＤ２、ＣＤ４０、フィブロネクチンＥＤ−Ｂ、エンドグリン（ＣＤ１０５）、テネイシンＣ、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ＨＥＲ３、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ５２、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＣＳ１（ＣＤ３１９、ＣＲＡＣＣ）、ＴＡＧ−７２、ＣＤ２、ＣＤ６４、ＲＯＢＯ４、ＤＬＬ４、Ｔｉｅ２、および／またはＢ７−Ｈ３を標的とする抗体が企図される。例えば、テネイシンＣ標的化抗体を用いてテネイシンＣを標的とすると、神経膠腫および癌腫を処置することができる。ヘレグリンまたはＨＥＲ３標的化抗体を用いてＨＥＲ３を標的とすると、固形腫瘍を処置することができる。ＣＤ３３抗体は、ＡＭＬ処置のためにＣＤ３３を標的とし得る。例えば、ＥｐＣＡＭ（ＣＤ３２６）、ＩＧＦ−Ｒ、メソテリン、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ抗原（ＣＤ１７４）、ＣａｎＡｇ（ＭＵＣ１、ＰＥＭ、ＣＡ２４２、ＣＤ２０５）、ＮＣＡＭ（ＣＤ５６）、およびＣｒｉｐｔｏを標的とする抗体は、固形腫瘍の処置に使用することができる。メラノトランスフェリン（Ｐ９７）を標的とする抗体は、原発性および転移性黒色腫の処置に使用することができる。ＣＤ３０は、抗体を用いて、ホジキンおよびＡＬＣリンパ腫の処置のための標的とすることができる。ＣＤ７４は、抗体を用いて、多発性骨髄腫、ＮＨＬ、またはＣＬＬの処置のための標的とすることができる。Ａｆｆｙｍａｘペプチドは、固形腫瘍の処置のために、ＴＲＡＩＬ  Ｒ２を標的とすることができる。Ｄｙａｘ  Ｌｉｔｔなどのペプチドは、固形腫瘍の処置のために、ｃ−Ｍｅｔを標的とすることができる。他のペプチドおよび低分子リガンドは、固形腫瘍の処置のために、ＥｐｈＡ２およびＥｐｈＢ２を標的とすることができる。
【００８０】
例えば、企図される標的化部分は、核酸、アプタマー、ポリペプチド、糖タンパク質、炭水化物、または脂質を含み得る。例えば、標的化部分は、細胞型特異的マーカーに結合する核酸標的化部分（例えば、アプタマー、例えば、Ａ１０アプタマー）でよい。一般に、アプタマーは、特定の標的、例えば、ポリペプチドに結合するオリゴヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはその類似体もしくは誘導体）である。一部の実施形態では、標的化部分は、細胞表面受容体のための天然または合成リガンド、例えば、成長因子、ホルモン、ＬＤＬ、トランスフェリンなどでよい。標的化部分は抗体でよく、この用語は抗体フラグメントを含むものとする。抗体の特徴的部分である単鎖標的化部分は、例えば、手順、例えば、ファージディスプレイを使用して同定することができる。
【００８１】
標的化部分は、約５０残基までの長さを有する標的化ペプチドまたは標的化ペプチド模倣物であり得る。例えば、標的化部分は、アミノ酸配列ＡＫＥＲＣ、ＣＲＥＫＡ、ＡＲＹＬＱＫＬＮ、またはＡＸＹＬＺＺＬＮを有してもよく、ＸおよびＺは、可変のアミノ酸、またはその保存的バリアントもしくはペプチド模倣物である。特定の実施形態では、標的化部分は、アミノ酸配列ＡＫＥＲＣ、ＣＲＥＫＡ、ＡＲＹＬＱＫＬＮ、またはＡＸＹＬＺＺＬＮを含むペプチドであり、ＸおよびＺは、可変のアミノ酸であり、２０個未満、５０個未満または１００個未満の残基の長さを有する。ＣＲＥＫＡ（Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｇｌｕ  Ｌｙｓ  Ａｌａ）ペプチドもしくはそのペプチド模倣物、またはオクタペプチドＡＸＹＬＺＺＬＮはまた、コラーゲンＩＶに結合するか、もしくはコラーゲンＩＶと複合体を形成するか、または組織基底膜（例えば、血管の基底膜）を標的とする、標的化部分、およびペプチド、またはその保存的バリアントもしくはペプチド模倣物として企図される。例示的な標的化部分は、ＩＣＡＭ（細胞間接着分子、例えば、ＩＣＡＭ−１）を標的とするペプチドを含む。ペプチドをベースとする他の標的化部分は、Ａｆｆｙｍａｘ、Ｄｙａｘ  Ｌｉｔｔ、ＹＳＡ／ＳＷＬ、ＮＧＲペプチドおよびベスタチン類似体、オクトレオチド、ＣＣＫおよびガストリン類似体、リュープロリドおよび類似体、ＧＬＰ１／エクセナチド、レクチン、ならびにＭｅｒｃａｔｏｒとなる場合がある。これら標的化リガンドは、ＴＲＡＩＬ  Ｒ２、ｃ−Ｍｅｔ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＢ２、アミノペプチダーゼＮ（ＣＤ１３）、ＶＬＡ−４（α４β１インテグリン）、ＣＸＣＲ４、メラノコルチン受容体（ＭＣ１Ｒ）、ソマトスタチン受容体、コレシストキニン受容体、ＧｎＲＨ受容体、ＧＬＰ１受容体、Ｅ−セレクチン、ＩＬ−１１受容体、トロンボスポンジン−１受容体、エンドスタチン、ＣＤ７９、およびＣＤ７４を標的とし得ると理解すべきである。
【００８２】
本明細書において開示されている標的化部分は、一部の実施形態では、開示されているポリマーまたはコポリマー（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧ）にコンジュゲートすることができ、このようなポリマーコンジュゲートは、開示されているナノ粒子の一部を形成し得る。
【００８３】
一部の実施形態では、治療用ナノ粒子は、ポリマー−薬物コンジュゲートを含み得る。例えば、薬物は、開示されているポリマーまたはコポリマー（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧ）にコンジュゲートしていてもよく、このようなポリマー−薬物コンジュゲートは、開示されているナノ粒子の一部を形成し得る。例えば、開示されている治療用ナノ粒子は、約０．２〜約３０重量パーセントのＰＬＡ−ＰＥＧまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧを場合により含んでいてもよく、ＰＥＧは、薬物（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧ−薬物）で官能化されている。
【００８４】
開示されているポリマーコンジュゲート（例えば、ポリマー−リガンドコンジュゲート）は、任意の適切なコンジュゲーション技術を使用して形成し得る。例えば、２種の化合物、例えば、標的化部分または薬物および生体適合性ポリマー（例えば、生体適合性ポリマーおよびポリ（エチレングリコール））は、ＥＤＣ−ＮＨＳ化学反応（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド）などの技術、またはチオール、アミン、または同様に官能化されたポリエーテルの１つの末端にコンジュゲートすることができるマレイミドもしくはカルボン酸が関与する反応を使用して一緒にコンジュゲートし得る。ポリマー−標的化部分コンジュゲートまたはポリマー−薬物コンジュゲートを形成させる標的化部分または薬物およびポリマーのコンジュゲーションは、これらに限定されないが、ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、アセトンなどなどの有機溶媒中で行うことができる。特定の反応条件は、単に通例の実験法を使用して当業者が決定することができる。
【００８５】
別の組の実施形態では、コンジュゲーション反応は、カルボン酸官能基（例えば、ポリ（エステル−エーテル）化合物）を含むポリマーと、アミンを含むポリマーまたは他の部分（例えば、標的化部分または薬物）とを反応させることによって行い得る。例えば、標的化部分、例えば、低分子量リガンド、または薬物、例えば、ダサチニブは、アミンと反応して、アミン含有部分を形成してもよく、これは次いで、ポリマーのカルボン酸にコンジュゲートすることができる。このような反応は、単一ステップの反応として起こり得、すなわち、コンジュゲーションは、中間体、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドまたはマレイミドを使用することなく行われる。一部の実施形態では、薬物は、アミン含有リンカーと反応して、アミン含有薬物を形成してもよく、次いで、これは上記のようなポリマーのカルボン酸にコンジュゲートすることができる。アミン含有部分およびカルボン酸末端ポリマー（例えば、ポリ（エステル−エーテル）化合物）の間のコンジュゲーション反応は、一組の実施形態では、（これらに限定されないが）ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、テトラヒドロフラン、アセトン、ホルムアミド、ジメチルホルムアミド、ピリジン、ジオキサン、またはジメチルスルホキシドなどの有機溶媒に可溶化したアミン含有部分を、カルボン酸末端ポリマーを含有する溶液に加えることによって達成し得る。カルボン酸末端ポリマーは、これらに限定されないが、ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、またはアセトンなどの有機溶媒中に含有し得る。アミン含有部分およびカルボン酸末端ポリマーの間の反応は、場合によって、自発的に起こり得る。コンジュゲートしていない反応物は、このような反応の後に洗い流してもよく、ポリマーは、溶媒、例えば、エチルエーテル、ヘキサン、メタノール、またはエタノール中で沈殿し得る。ある特定の実施形態では、コンジュゲートは、ポリマーのアルコール含有部分およびカルボン酸官能基の間に形成してもよく、これはアミンおよびカルボン酸のコンジュゲートについて上で記載したのと同様に達成することができる。
【００８６】
一部の実施形態では、ナノ粒子が、２種の異なるタイプのリガンドを含む場合もあると理解すべきである。例えば、ナノ粒子が、低分子リガンドと核酸型リガンドとを含む場合がある。一部の実施形態では、ナノ粒子が、３種の異なるタイプのリガンドを含む場合もある。一部の実施形態では、ナノ粒子が、多数の異なるタイプのリガンドを含む場合もある。開示されるナノ粒子は、任意の数の異なるリガンドを含んでもよいと理解すべきである。
【００８７】
ナノ粒子の調製
本開示の別の態様は、開示されているナノ粒子を作製する系および方法を対象とする。異なる比の２種またはそれ超の異なるポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポリマー）を使用し、かつポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポリマー）から粒子を生成する一部の実施形態では、粒子の特性は制御される。例えば、１種のポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポリマー）は、低分子量リガンドを含んでいてもよく、一方、別のポリマー（例えば、コポリマー、例えば、ブロックコポリマー）は、その生体適合性および／または生成した粒子の免疫原性を制御するその能力のために選択し得る。
【００８８】
開示されるナノ粒子は、例えば、糖を含有する場合もある溶液中において、室温で、または２５℃で、少なくとも約３日間、約４日間、または少なくとも約５日間安定し得る（例えば、実質的にすべての活性薬剤を保持し得る）。
【００８９】
一部の実施形態では、開示されるナノ粒子は、脂肪アルコールも含む場合があり、これによって、薬物放出の速度は増大し得る。例えば、開示されるナノ粒子は、セチルアルコール、オクタノール、ステアリルアルコール、アラキジルアルコール、ドコソナール（ｄｏｃｏｓｏｎａｌ）、オクタソナール（ｏｃｔａｓｏｎａｌ）などのＣ８〜Ｃ３０アルコールを含む場合がある。
【００９０】
ナノ粒子は、制御放出特性を備える場合もあり、例えば、ある量のポリミキシン／コリスチン抗生物質治療剤を、長期間かけて、例えば、１日、１週間、またはより長時間かけて、患者、例えば患者の特定の部位に送達し得る場合がある。
【００９１】
一部の実施形態では、開示されるナノ粒子または開示されるナノ粒子を含む組成物が対象または患者に投与された後、患者におけるポリミキシン／コリスチン抗生物質治療剤のピーク血漿濃度（Ｃｍａｘ）は、（例えば、ナノ粒子の一部としてではなく）単独で投与した場合の治療剤のＣｍａｘに比べて、実質的に高い。
【００９２】
別の実施形態では、治療剤を含む開示されるナノ粒子は、対象に投与されたとき、治療剤のｔｍａｘが、単独で投与された治療剤のｔｍａｘに比べて、実質的により長くなり得る。
【００９３】
このような粒子のライブラリーも形成することができる。例えば、粒子内の２種（またはそれ超）のポリマーの比を様々にすることにより、これらのライブラリーは、スクリーニング試験、高スループットアッセイなどに有用となり得る。ライブラリー内の実体は、上記のものなどの特性により様々にすることができ、場合によって、粒子の２つ以上の特性を、ライブラリー内で様々にすることもできる。したがって、一実施形態は、違った特性を備えるポリマーを異なる比率で有するナノ粒子のライブラリーを対象とする。ライブラリーは、任意の適切な比のポリマーを含んでよい。
【００９４】
一部の実施形態では、生体適合性ポリマーは、疎水性ポリマーである。生体適合性ポリマーの非限定的な例としては、ポリラクチド、ポリグリコリド、および／またはポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）が挙げられる。
【００９５】
異なる実施形態では、本開示は、１）ポリマーマトリックスと、２）場合により、ポリマーマトリックスを取り囲むかまたはポリマーマトリックス内に分散して粒子の連続または不連続のシェルを形成する両親媒性化合物または層と、３）ポリマーマトリックスの一部を形成し得る非官能化ポリマーと、４）場合により、ポリマーマトリックスの一部を形成し得るポリマーに共有結合している、ＰＳＭＡなどの標的タンパク質コンジュゲートに結合する低分子量リガンドとを含むナノ粒子を提供する。例えば、両親媒性層は、ナノ粒子への透水を低減し、それによって、薬物カプセル化効率を向上させ、薬物放出を緩徐にし得る。
【００９６】
本明細書において使用する場合、用語「両親媒性」とは、分子が、極性部分と非極性部分の両方を有する特性を指す。多くの場合、両親媒性化合物は、極性の頭部が、長い疎水性の尾部に結合している。一部の実施形態では、極性部分は、水に可溶性であり、非極性部分は、水に不溶性である。加えて、極性部分は、正の形式電荷または負の形式電荷のいずれかを有する場合がある。代わりに、極性部分は、正と負両方の形式電荷を有し、双性イオンまたは分子内塩である場合もある。一部の実施形態では、両親媒性化合物は、これらに限定されないが、親水性と疎水性両方の部分を有する以下、天然由来の脂質、界面活性剤、または合成された化合物のうちの１種または複数である場合がある。
【００９７】
両親媒性化合物の具体的な例としては、これらに限定されないが、０．０１〜６０の間（脂質重量／ポリマー重量）、最も好ましくは、０．１〜３０の間（脂質重量／ポリマー重量）の比で組み込まれた、１，２ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジアラキドイルホスファチジルコリン（ＤＡＰＣ）、ジベヘノイルホスファチジルコリン（ＤＢＰＣ）、ジトリコサノイルホスファチジルコリン（ＤＴＰＣ）、およびジリグノセロイルファチジルコリン（ＤＬＰＣ）などのリン脂質が挙げられる。使用することができるリン脂質には、これらに限定されないが、ホスファチジン酸、飽和および不飽和両方の脂質を有するホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジル誘導体、カルジオリピン、およびβ−アシル−ｙ−アルキルリン脂質が含まれる。リン脂質の例としては、これらに限定されないが、ホスファチジルコリン、例えば、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジペンタデカノイルホスファチジルコリン、ジラウロイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジアラキドイルホスファチジルコリン（ＤＡＰＣ）、ジベヘノイルホスファチジルコリン（ＤＢＰＣ）、ジトリコサノイルホスファチジルコリン（ＤＴＰＣ）、ジリグノセロイルファチジルコリン（ＤＬＰＣ）；およびホスファチジルエタノールアミン、例えば、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミンまたは１−ヘキサデシル−２−パルミトイルグリセロホスホエタノールアミンが挙げられる。非対称のアシル鎖を有する（例えば、一方のアシル鎖が６炭素であり、もう一方のアシル鎖が１２炭素である）合成リン脂質を使用してもよい。
【００９８】
特定の実施形態では、両親媒性層の形成に使用することができる両親媒性成分は、レシチン、詳細には、ホスファチジルコリンである。レシチンは、両親媒性の脂質であり、そのため、大抵は水性であるその周囲に面している親水性（極性）の頭部と、互いに面している疎水性の尾部とを有するリン脂質二重層を形成する。レシチンは、例えば大豆から入手可能である天然の脂質であるという利点を有し、他の送達デバイスにおける使用について既にＦＤＡ承認を取得している。加えて、レシチンなどの脂質の混合物は、１種の単一純粋脂質より有利である。
【００９９】
ある特定の実施形態では、開示されるナノ粒子は、層がリン脂質二重層ではないが、ナノ粒子の周りまたはナノ粒子内に単一の連続または不連続層として存在するという意味で、両親媒性の単層を有する。この両親媒性層は、ポリマーシェルの外側を取り囲むか、またはナノ粒子を構成するポリマー内に分散しているなどして、ポリマーマトリックスにある程度近接して位置しているという意味で、ナノ粒子と「会合」している。
【０１００】
一組の実施形態では、１種または複数のポリマーを含む溶液を提供し、この溶液をポリマー非溶媒と接触させ、粒子を生成させることによって、粒子が形成される。溶液は、ポリマー非溶媒と混和性または不混和性であり得る。例えば、水混和性液体、例えば、アセトニトリルは、ポリマーを含有してもよく、例えば、アセトニトリルを水中に制御された速度で注ぐことによって、アセトニトリルが水、ポリマー非溶媒と接触すると、粒子が形成される。溶液内に含有されるポリマーは、ポリマー非溶媒との接触によって、沈殿し、粒子、例えば、ナノ粒子を形成し得る。２種の液体は、周囲温度および周囲圧力で、一方が他方中で少なくとも１０重量％のレベルまで可溶性でないとき、互いに「不混和性」または混和性でないと言われる。典型的には、有機溶液（例えば、ジクロロメタン、アセトニトリル、クロロホルム、テトラヒドロフラン、アセトン、ホルムアミド、ジメチルホルムアミド、ピリジン、ジオキサン、ジメチルスルホキシドなど）および水性液体（例えば、水、または溶解した塩もしくは他の種を含有する水、細胞もしくは生体媒体、エタノールなど）は、互いに関して不混和性である。例えば、第１の溶液を、第２の溶液中に注いでもよい（適切な速度またはスピードで）。場合によって、例えば、第１の溶液が、不混和性の第２の液体に接触するにつれ、粒子、例えば、ナノ粒子が形成し得、例えば、接触によるポリマーの沈殿は、第１の溶液が第２の液体中に注がれる間、ポリマーがナノ粒子の形成をもたらし、場合によって、例えば、導入の速度が相対的に遅い速度で注意深く制御および維持されるとき、ナノ粒子を形成し得る。このような粒子形成の制御は、通例の実験法のみを使用して当業者が容易に最適化することができる。
【０１０１】
表面機能性、表面電荷、サイズ、ゼータ（ζ）電位、疎水性、免疫原性を制御する能力などの特性は、開示されているプロセスを使用して高度に制御し得る。例えば、粒子のライブラリーを合成、およびスクリーニングして、粒子が、粒子の表面上に存在する特定の密度の部分（例えば、低分子量リガンド）を有することを可能とする、特定の比のポリマーを有する粒子を同定し得る。これによって、過度の程度の労力を伴わずに、１つまたは複数の特定の特性、例えば、特定のサイズおよび特定の表面密度の部分を有する粒子を調製することを可能とする。したがって、ある特定の実施形態は、このようなライブラリーを使用したスクリーニング技術、およびこのようなライブラリーを使用して同定された任意の粒子を対象とする。さらに、同定は、任意の適切な方法によって行い得る。例えば、同定は直接的もしくは間接的でよいか、または定量的にもしくは定性的に進行し得る。
【０１０２】
一部の実施形態では、既に形成されたナノ粒子は、リガンド−官能化ポリマーコンジュゲートを生成するために記載されたものと類似の手順を使用して、標的化部分で官能化される。例えば、第１のコポリマー（ＰＬＧＡ−ＰＥＧ、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）およびポリ（エチレングリコール））を治療剤と混合して、粒子を形成させる。次いで、粒子を低分子量リガンドと会合させて、がんの処置のために使用することができるナノ粒子を形成させる。粒子は、ナノ粒子のリガンド表面密度を制御し、それによってナノ粒子の治療の特徴を変化させるために、様々な量の低分子量リガンドと会合させることができる。さらに、例えば、パラメータ、例えば、分子量、ＰＥＧの分子量、およびナノ粒子の表面電荷を制御することによって、非常に正確に制御された粒子を得てもよい。
【０１０３】
別の実施形態では、ナノエマルジョンプロセス、例えば、図１、２Ａ、および２Ｂにおいて表すプロセスを提供する。例えば、治療剤（例えば、ダサチニブ）、第１のポリマー（例えば、どちらもリガンドに場合により結合し得るＰＬＡ−ＰＥＧまたはＰＬＧＡ−ＰＥＧなどのジブロックコポリマー）、および任意選択の第２のポリマー（例えば、（ＰＬ（Ｇ）Ａ−ＰＥＧまたはＰＬＡ）を、有機溶液と合わせて、第１の有機相を形成することができる。このような第１の相は、約１〜約５０重量％の固体、約５〜約５０重量％の固体、約５〜約４０重量％の固体、約１〜約１５重量％の固体、または約１０〜約３０重量％の固体を含み得る。第１の有機相は、第１の水溶液と合わせて、第２の相を形成し得る。有機溶液は、例えば、トルエン、メチルエチルケトン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、イソプロピルアルコール、酢酸イソプロピル、ジメチルホルムアミド、塩化メチレン、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトン、ベンジルアルコール、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｓｐａｎ８０など、およびこれらの組合せを含むことができる。ある実施形態では、有機相は、ベンジルアルコール、酢酸エチル、およびこれらの組合せを含み得る。第２の相は、約０．１〜５０重量％、約１〜５０重量％、約５〜４０重量％、または約１〜１５重量％の固体でよい。水溶液は、コール酸ナトリウム、酢酸エチル、ポリ酢酸ビニルおよびベンジルアルコールの１つまたは複数と組み合わせてもよい水であり得る。一部の実施形態では、水相のｐＨは、治療剤のｐＫａおよび／またはエンドリソソーム破壊剤などの疎水性の対イオン剤のｐＫａに基づいて選択することができる。
【０１０４】
例えば、油または有機相は、非溶媒（水）と部分的にのみ混和性である溶媒を使用し得る。したがって、十分に低い比で混合したとき、および／または有機溶媒で事前飽和された水を使用するとき、油相は液体のままである。例えば、高エネルギー分散システム、例えば、ホモジナイザーまたはソニケーターを使用して、油相を、水溶液に乳化し、液滴として、ナノ粒子に剪断し得る。エマルジョンの水性部分は、場合によっては「水相」としても公知であるが、これはコール酸ナトリウムからなり、酢酸エチルおよびベンジルアルコールで事前飽和されている界面活性剤溶液でよい。一部の例では、有機相（例えば、第１の有機相）が、治療剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体などの抗体）を含む場合がある。加えて、ある特定の実施形態では、水溶液（例えば、第１の水溶液）が、エンドリソソーム破壊剤などの、実質的に疎水性の対イオン剤を含む場合もある。他の実施形態では、治療剤と、エンドリソソーム破壊剤などの実質的に疎水性の対イオン剤の両方を、有機相に溶解させることができる。
【０１０５】
第２の相を乳化して、例えば、１つまたは２つの乳化ステップにおいてエマルジョン相を形成することを行い得る。例えば、一次エマルジョンを調製し、次いで、乳化して、微細エマルジョンを形成し得る。例えば、単純な混合、高圧ホモジナイザー、プローブソニケーター、撹拌棒、またはローターステーターホモジナイザーを使用して、一次エマルジョンを形成することができる。例えば、プローブソニケーターまたは高圧ホモジナイザーの使用によって、例えば、ホモジナイザーを通す１、２、３、またはそれ超のパスを使用することによって、一次エマルジョンを微細エマルジョンに形成し得る。例えば、高圧ホモジナイザーが使用されるとき、使用される圧力は、約３０〜約６０ｐｓｉ、約４０〜約５０ｐｓｉ、約１０００〜約８０００ｐｓｉ、約２０００〜約４０００ｐｓｉ、約４０００〜約８０００ｐｓｉ、または約４０００〜約５０００ｐｓｉ、例えば、約２０００、２５００、４０００または５０００ｐｓｉであり得る。
【０１０６】
場合によって、エマルジョンにおける液滴の表面対体積比が非常に高いことを特徴とし得る微細エマルジョン条件を選択して、治療剤および疎水性の塩基の溶解度を最大にしてもよい。ある特定の実施形態では、微細エマルジョン条件下で、溶解した成分の平衡が、非常に迅速に、すなわち、ナノ粒子の凝固より急速に起こり得る。
【０１０７】
一部の実施形態では、治療剤は、第２の相を乳化する前に、第２の相において合わせることができる。別の例では、治療剤を、別個の不混和性の溶液に溶解させ、次いでこれを、乳化の際に、第２の相に送ることができる。
【０１０８】
溶媒の抽出を完了し、粒子を凝固するために、溶媒蒸発または希釈を必要とし得る。抽出の反応速度およびよりスケーラブルなプロセスのより良好な制御のために、水性クエンチによる溶媒希釈を使用し得る。例えば、エマルジョンは、有機溶媒の全てを溶解するのに十分な濃度まで冷水に希釈して、クエンチされた相を形成することができる。一部の実施形態では、クエンチを約５℃またはそれ未満の温度で少なくとも部分的に行い得る。例えば、クエンチにおいて使用される水は、室温未満（例えば、約０〜約１０℃、または約０〜約５℃）である温度であり得る。ある特定の実施形態では、エマルジョン相をクエンチするのに有利なｐＨを有するクエンチは、例えば、ナノ粒子の特性、例えば、放出プロファイルを改善するか、またはナノ粒子のパラメータ、例えば、薬物添加量を改善することによって選択し得る。クエンチのｐＨは、例えば、酸もしくは塩基滴定によって、または緩衝液の適当な選択によって調節し得る。一部の実施形態では、クエンチのｐＨは、治療剤に基づいて選択することができる。
【０１０９】
一部の実施形態では、ナノ粒子形成プロセスにおいて使用する水溶液（例えば、限定はしないが、水相、エマルジョン相、クエンチ、およびクエンチされた相を含める）のｐＨは、独立に選択することができ、約１〜約３の間、一部の実施形態では、約２〜約４の間、一部の実施形態では、約３〜約５の間、一部の実施形態では、約４〜約６の間、一部の実施形態では、約５〜約７の間、一部の実施形態では、約６〜約８の間、一部の実施形態では、約７〜約９の間、および一部の実施形態では、約８〜約１０の間でよい。ある特定の実施形態では、ナノ粒子形成プロセスにおいて使用する水溶液のｐＨは、約３〜約４の間、一部の実施形態では、約４〜約５の間、一部の実施形態では、約５〜約６の間、一部の実施形態では、約６〜約７の間、一部の実施形態では、約７〜約８の間、一部の実施形態では、約８〜約９の間でよい。
【０１１０】
一部の実施形態では、この段階において治療剤の全ては粒子中にカプセル化されておらず、薬物可溶化剤をクエンチされた相に加え、可溶化した相を形成させる。薬物可溶化剤は、例えば、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｔｗｅｅｎ２０、ポリビニルピロリドン、シクロデキストラン、ドデシル硫酸ナトリウム、コール酸ナトリウム、ジエチルニトロサミン、酢酸ナトリウム、尿素、グリセリン、プロピレングリコール、グリコフロール、ポリ（エチレン）グリコール、ビス（ポリオキシエチレングリコールドデシル）エーテル、安息香酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、またはこれらの組合せであり得る。例えば、Ｔｗｅｅｎ−８０をクエンチしたナノ粒子懸濁液に加えて、遊離薬物を可溶化し、薬物結晶の形成を防止し得る。一部の実施形態では、薬物可溶化剤の治療剤分子に対する比は、約２００：１〜約１０：１であり、または一部の実施形態では、約１００：１〜約１０：１である。
【０１１１】
可溶化した相を濾過して、ナノ粒子を回収し得る。例えば、限外濾過膜を使用して、ナノ粒子懸濁液を濃縮し、有機溶媒、遊離薬物（すなわち、カプセル化されていない治療剤）、薬物可溶化剤、および他の処理助剤（界面活性剤）を実質的に排除し得る。例示的な濾過は、タンジェンシャルフロー濾過系を使用して行い得る。例えば、溶質、ミセル、および有機溶媒が通過することを可能とする一方で、ナノ粒子を保持するのに適切な孔径を有する膜を使用することによって、ナノ粒子は、選択的に分離することができる。約３００〜５００ｋＤａ（約５〜２５ｎｍ）の分画分子量を有する例示的な膜を使用し得る。
【０１１２】
一定容量アプローチを使用してダイアフィルトレーションを行ってもよく、これは濾液が懸濁液から除去されるのと同じ速度で、ダイア濾液（冷たい脱イオン水、例えば、約０〜約５℃、または０〜約１０℃）を、供給懸濁液に加えてもよいことを意味する。一部の実施形態では、フィルタリングは、約０〜約５℃、または０〜約１０℃の第１の温度、および約２０〜約３０℃、または１５〜約３５℃の第２の温度を使用した第１のフィルタリングを含み得る。一部の実施形態では、フィルタリングは、約１〜約３０、場合によって、約１〜約１５、または場合によって、１〜約６ダイア容量を処理することを含み得る。例えば、フィルタリングは、約０〜約５℃にて、約１〜約３０、または場合によって、約１〜約６ダイア容量を処理し、約２０〜約３０℃にて、少なくとも１ダイア容量（例えば、約１〜約１５、約１〜約３、または約１〜約２ダイア容量）を処理することを含み得る。一部の実施形態では、フィルタリングは、異なる別個の温度にて異なるダイア容量を処理することを含む。
【０１１３】
ナノ粒子懸濁液を精製および濃縮した後、粒子は、例えば、約０．２μｍのデプスプレフィルターを使用した、１つ、２つまたはそれ超の無菌化および／またはデプスフィルターを通して通過させ得る。例えば、除菌濾過ステップは、制御された速度で濾過トレインを使用して治療用ナノ粒子をフィルタリングすることを含み得る。一部の実施形態では、濾過トレインは、デプスフィルターおよび無菌フィルターを含み得る。
【０１１４】
ナノ粒子を調製する別の実施形態では、治療剤とポリマー（例えば、コポリマー、および場合によりリガンドを有するコポリマー）の混合物から構成される有機相が形成される。この有機相を、界面活性剤およびいくらかの溶解した溶媒から構成される水相と、概ね１：５の比（油相：水相）で混合する。一次エマルジョンは、単純に混合しながら、またはローターステーターホモジナイザーの使用によって、２つの相の組合せによって形成される。次いで、一次エマルジョンを、高圧ホモジナイザーの使用によって、微細エマルジョンに形成する。次いで、混合しながら脱イオン水を加えて、微細エマルジョンをクエンチする。一部の実施形態では、クエンチ：エマルジョン比は、約２：１〜約４０：１、または一部の実施形態では、約５：１〜約１５：１でよい。一部の実施形態では、クエンチ：エマルジョン比は、概ね８．５：１である。次いで、クエンチにＴｗｅｅｎ（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０）の溶液を加えて、Ｔｗｅｅｎを全体で概ね２％を達成する。これは、カプセル化されていない遊離の核酸を溶解させるのに役立つ。次いで、遠心分離または限外濾過／ダイアフィルトレーションのいずれかによってナノ粒子を単離する。
【０１１５】
製剤の調製において使用されるポリマーおよび治療剤の量は、最終製剤と異なる場合もあると理解される。例えば、治療剤のいくらかは、ナノ粒子に完全には組み込まれず、そのような遊離治療剤は、例えば、濾別される場合もある。例えば、一実施形態では、第１の有機溶液中に約１１重量パーセント理論添加量の治療剤を含有する第１の有機溶液、約８９重量パーセントのポリマー（例えば、ポリマーは、ポリマーにコンジュゲートされた約２．５モルパーセントの標的化部分と、約９７．５モルパーセントのＰＬＡ−ＰＥＧとを含む場合がある）を含有する第２の有機溶液を、例えば、約２重量パーセントの治療剤と、約９７．５重量パーセントのポリマー（ポリマーは、ポリマーにコンジュゲートされた約１．２５モルパーセントの標的化部分と、約９８．７５モルパーセントのＰＬＡ−ＰＥＧ％とを含む場合がある）とを含む最終ナノ粒子となる製剤の調製において使用することができる。このようなプロセスは、約１〜約２０重量パーセントの治療剤、例えば、約１、約２、約３、約４、約５、約８、約１０、または約１５重量パーセントの治療剤を含む、患者への投与に適する最終ナノ粒子を提供することができる。
【０１１６】
治療剤
本発明のある特定の態様では、治療用ナノ粒子は、抗ＰＤ−１抗体、またはＰＤ−１のアゴニストおよび／もしくはアンタゴニストとして働くことにより、ＰＤ−１によって調節される免疫応答をモジュレ−トし得る抗体をカプセル化し、取り囲み、またはそれに接続もしくは連結されている。ＰＤ−１は、活性化誘導アポトーシスを受けるＴ細胞株において当初同定された、５０〜５５ｋＤａのＩ型膜貫通受容体である。ＰＤ−１は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびマクロファージ上に発現される。ＰＤ−１は、活性化したＴ細胞、Ｂ細胞、および単球上に発現される。実験データからは、中枢および末梢免疫応答の下向調節におけるＰＤ−１のそのリガンドとの相互作用が示唆される。詳細には、野生型Ｔ細胞の増殖は、ＰＤ−Ｌ１の存在下で阻害されるが、ＰＤ−１欠損Ｔ細胞の増殖は阻害されない。
【０１１７】
本開示で使用する用語「抗体」とは、免疫グロブリンまたはその断片もしくは誘導体を指し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏのどちらで産生されるかにかかわらず、抗原結合部位を含む任意のポリペプチドを包含する。この用語は、これらに限定されないが、ポリクローナル、モノクローナル、単一特異性、多特異性、非特異性、ヒト化、単鎖、キメラ、合成、組換え、ハイブリッド、変異、および移植抗体を包含する。抗体という用語は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、および抗原を結合する機能、すなわち、ＰＤ−１を特異的に結合する能力を保持する他の抗体断片などの抗体断片も包含する。通常、このような断片は、抗原結合ドメインを含むことになる。
【０１１８】
一般に、抗体は、例えば、伝統的なハイブリドーマ技術（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５〜４９９）、組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号）、または抗体ライブラリーを用いて実施されるファージディスプレイ（Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４〜６２８；Ｍａｒｋｓら（１９９１）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１〜５９７）を使用して作製することができる。他の抗体産生技術については、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｈａｒｌｏｗら編、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、１９８８も参照されたい。
【０１１９】
異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元立体配置は、当業者でよく知られている。免疫グロブリンとしても知られるインタクト抗体は、通常、それぞれ概ね２５ｋＤａの２本の軽（Ｌ）鎖と、それぞれ概ね５０ｋＤａの２本の重（Ｈ）鎖とから構成された、四量体グリコシル化タンパク質である。λ鎖およびκ鎖と呼ばれる２つのタイプの軽鎖が、抗体中に見出される。免疫グロブリンは、重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、およびＭの５つの主要なクラスに割り振ることができ、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分けることができる。
【０１２０】
抗ＰＤ−１抗体を含む治療用ナノ粒子は、ＰＤ−１と関連した、免疫応答の下向調節をモジュレ−トし得る。抗体を含む開示される治療用ナノ粒子は、その使用方法に応じて、ＰＤ−１のアゴニストまたはアンタゴニストのいずれかとして働き得る。抗体は、哺乳動物、特にヒトにおける、医学的障害の予防、診断、または処置に使用することができる。抗体をＰＤ−１またはＰＤ−１発現細胞の単離に使用することもできる。さらに、抗体を使用して、異常なＰＤ−１発現もしくは機能と関連する障害のリスクもしくは疑いがある、または障害を有する対象を処置することができる。
【０１２１】
がん成長およびウイルス感染の場合では、ＰＤ−１シグナル伝達の活性化によって、免疫寛容が促進される結果、がんまたはウイルス感染細胞が免疫監視を免れ、がんの転移またはウイルス量が増加する。ＰＤ−１が介在する細胞シグナル伝達を治療剤によって阻害することで、Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびＮＫ細胞を含めた免疫細胞を活性化し、したがって、がん細胞増殖またはウイルス感染を阻害する免疫細胞機能を強化し、免疫監視および免疫記憶機能を回復させて、そうしたヒト疾患を処置することができる。
【０１２２】
医薬製剤
本明細書において開示されているナノ粒子は、別の態様によれば、薬学的に許容できる担体と合わさり、医薬組成物を形成し得る。当業者が理解するように、担体は、下記のような投与経路、標的組織の場所、送達される薬物、薬物の送達の時間経過などに基づいて選択し得る。
【０１２３】
医薬組成物は、経口および非経口経路を含めた当技術分野において公知の任意の手段によって患者に投与することができる。用語「患者」は、本明細書において使用する場合、ヒト、ならびに例えば、哺乳動物、鳥、爬虫類、両生類、および魚を含めた非ヒトを指す。例えば、非ヒトは、哺乳動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、霊長類、またはブタ）であり得る。ある特定の実施形態では、非経口経路が、消化管において見出される消化酵素との接触を回避するために望ましい。このような実施形態によると、本発明の組成物は、注射（例えば、静脈内、皮下または筋内、腹腔内注射）、直腸、経膣的、局所的（散剤、クリーム剤、軟膏剤、もしくは点眼剤によるなど）によって、または吸入（スプレーによるなど）によって投与し得る。
【０１２４】
特定の実施形態では、ナノ粒子は、それを必要とする対象に全身的に、例えば、ＩＶ注入または注射によって投与される。
【０１２５】
注射可能な調製物、例えば、無菌の注射可能な水性または油性懸濁液は、適切な分散化剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して公知技術によって製剤化し得る。無菌の注射可能な調製物はまた、無毒性の非経口的に許容できる希釈剤または溶媒中の無菌の注射可能な溶液、懸濁液、またはエマルジョン、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液でよい。用いることができる許容できるビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、および等張食塩液がある。さらに、無菌の不揮発性油は、溶媒または懸濁媒として従来用いられる。この目的のために、合成のモノまたはジグリセリドを含めた任意の刺激の少ない不揮発性油を用いることができる。さらに、脂肪酸、例えば、オレイン酸は、注射剤の調製において使用される。一実施形態では、本発明のコンジュゲートを、１％（ｗ／ｖ）のカルボキシメチルセルロースナトリウムおよび０．１％（ｖ／ｖ）のＴＷＥＥＮ（商標）８０を含む担体液に懸濁させる。注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通す濾過によって、または使用前に滅菌水もしくは他の無菌の注射可能な媒体に溶解もしくは分散させることができる無菌の固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことによって、無菌化することができる。
【０１２６】
経口投与のための固体剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒剤を含む。このような固体剤形において、カプセル化されたか、またはカプセル化されていないコンジュゲートを、少なくとも１種の不活性な薬学的に許容できる添加剤または担体、例えば、クエン酸ナトリウムまたは第二リン酸カルシウム、ならびに／または（ａ）充填剤もしくは増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、およびケイ酸、（ｂ）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、およびアカシア、（ｃ）保湿剤、例えば、グリセロール、（ｄ）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のシリケート、および炭酸ナトリウム、（ｅ）溶解遅延剤、例えば、パラフィン、（ｆ）吸収促進剤、例えば、第四級アンモニウム化合物、（ｇ）湿潤剤、例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール、（ｈ）吸収剤、例えば、カオリンおよびベントナイトクレイ、ならびに（ｉ）滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびこれらの混合物と混合する。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合、剤形はまた、緩衝剤を含む。
【０１２７】
治療剤を含有するナノ粒子の正確な投与量は、処置される患者を考慮して個々の医師によって選択され、一般に、投与量および投与は、有効量の治療剤ナノ粒子を処置される患者に提供するように調節されることを認識されたい。本明細書において使用する場合、治療剤を含有するナノ粒子の「有効量」は、所望の生物学的応答を引き出すのに必要な量を指す。当業者が理解するように、治療剤を含有するナノ粒子の有効量は、所望の生物学的エンドポイント、送達される薬物、標的組織、投与経路などの要因によって変わり得る。例えば、治療剤を含有するナノ粒子の有効量は、所望の期間にわたり所望の量の腫瘍サイズの低減をもたらす量であり得る。考慮し得るさらなる要因は、病態の重症度；処置される患者の年齢、体重および性別；食事、投与の時間および頻度；薬物の組合せ；反応感受性；ならびに治療に対する耐性／応答を含む。
【０１２８】
ナノ粒子は、投与の容易さおよび投与量の均一性のために投与量単位形態で製剤化し得る。「投与量単位形態」という表現は、本明細書において使用する場合、処置される患者に適当なナノ粒子の物理的個別単位を指す。しかし、組成物の一日の総使用量は、正しい医学的判断の範囲内で主治医によって決められることが理解される。任意のナノ粒子について、治療有効用量は、細胞培養アッセイにおいて、または動物モデル、通常、マウス、ウサギ、イヌ、もしくはブタにおいて最初に推定することができる。動物モデルをまた使用して、望ましい濃度範囲および投与経路を達成する。次いで、このような情報を使用して、ヒトにおける投与のための有用な用量および経路を決定することができる。ナノ粒子の治療有効性および毒性、例えば、ＥＤ５０（用量は集団の５０％において治療的に有効である）およびＬＤ５０（用量は集団の５０％まで致死的である）は、細胞培養物または実験動物において標準的な医薬手順によって決定することができる。毒性効果の治療効果に対する用量比は治療指数であり、これは、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表すことができる。大きな治療指数を示す医薬組成物は、一部の実施形態では有用であり得る。細胞培養アッセイおよび動物試験から得たデータは、ヒト使用のための投与量範囲の配合において使用することができる。
【０１２９】
ある実施形態では、本明細書において開示されている組成物は、約１０ｐｐｍ未満のパラジウム、または約８ｐｐｍ未満、または約６ｐｐｍ未満のパラジウムを含み得る。例えば、ポリマーコンジュゲートを有するナノ粒子を含む組成物が本明細書において提供され、組成物は、約１０ｐｐｍ未満のパラジウムを有する。
【０１３０】
一部の実施形態では、本明細書において開示されているナノ粒子を含む冷凍に適した組成物が企図され、冷凍に適した溶液、例えば、糖、例えば、単糖類、二糖類、もしくは多糖類、例えば、スクロースおよび／もしくはトレハロース、ならびに／または塩および／もしくはシクロデキストリン溶液を、ナノ粒子懸濁液に加える。糖（例えば、スクロースまたはトレハロース）は、例えば、粒子が冷凍によって凝集することを防止する凍結防止剤として作用し得る。例えば、複数の開示されているナノ粒子、スクロース、イオン性ハロゲン化物、および水を含むナノ粒子製剤であり、ナノ粒子／スクロース／水／イオン性ハロゲン化物は、約３〜４０％／１０〜４０％／２０〜９５％／０．１〜１０％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）または約５〜１０％／１０〜１５％／８０〜９０％／１〜１０％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）が本明細書において提供される。例えば、このような溶液は、本明細書に開示されているナノ粒子、約５重量％〜約２０重量％のスクロースおよび約１０〜１００ｍＭの濃度のイオン性ハロゲン化物、例えば、塩化ナトリウムを含み得る。別の例では、複数の開示されているナノ粒子、トレハロース、シクロデキストリン、および水を含むナノ粒子製剤が本明細書において提供され、ナノ粒子／トレハロース／水／シクロデキストリンは、約３〜４０％／１〜２５％／２０〜９５％／１〜２５％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）または約５〜１０％／１〜２５％／８０〜９０％／１０〜１５％（ｗ／ｗ／ｗ／ｗ）である。
【０１３１】
例えば、企図される溶液は、本明細書に開示されているナノ粒子、約１重量％〜約２５重量％の二糖類、例えば、トレハロースもしくはスクロース（例えば、約５重量％〜約２５重量％のトレハロースもしくはスクロース、例えば、約１０重量％のトレハロースもしくはスクロース、または約１５重量％のトレハロースもしくはスクロース、例えば、約５重量％のスクロース）、および約１重量％〜約２５重量％の濃度のシクロデキストリン、例えば、β−シクロデキストリン（例えば、約５重量％〜約２０重量％、例えば、１０重量％もしくは約２０重量％、または約１５重量％〜約２０重量％のシクロデキストリン）を含み得る。企図される製剤は、複数の開示されているナノ粒子（例えば、ＰＬＡ−ＰＥＧおよび活性剤を有するナノ粒子）、および約２重量％〜約１５重量％（または約４重量％〜約６重量％、例えば、約５重量％）のスクロースおよび約５重量％〜約２０重量％（例えば、約７重量パーセント〜約１２重量％、例えば、約１０重量％）のシクロデキストリン、例えば、ＨＰｂＣＤを含み得る。
【０１３２】
本開示は、復元されたとき、最小量の大きな凝集体を有する凍結乾燥した医薬組成物に部分的に関する。このような大きな凝集体は、約０．５μｍ超、約１μｍ超、または約１０μｍ超のサイズを有してもよく、復元された溶液中で望ましくないことがあり得る。凝集体サイズは、参照により本明細書に組み込まれている米国薬局方の３２＜７８８＞において示されるものを含めた種々の技術を使用して測定することができる。ＵＳＰ３２＜７８８＞において概略が述べられている試験は、光遮蔽粒子計数試験、顕微鏡粒子計数試験、レーザー回折、および単一粒子光学検知を含む。一実施形態では、所与の試料中の粒径は、レーザー回折および／または単一粒子光学検知を使用して測定される。
【０１３３】
光遮蔽粒子計数試験によるＵＳＰ３２＜７８８＞は、懸濁液中の粒径のサンプリングのためのガイドラインを規定する。１００ｍＬと等しい、またはこれ未満を有する溶液について、存在する粒子の平均数が、容器毎に≧１０μｍである６０００個および容器毎に≧２５μｍである６００個を超えない場合、調製は試験に準拠する。
【０１３４】
ＵＳＰ３２＜７８８＞において概略が述べられているように、顕微鏡粒子計数試験は、接眼マイクロメーターを有する１００±１０×の拡大率に調節した双眼顕微鏡を使用して粒子量を決定するためのガイドラインを規定する。接眼マイクロメーターは、１００×の拡大率で見たとき、１０μｍおよび２５μｍを表す黒の基準円を有する象限に分割された円からなる円形直径グラティキュールである。直線状スケールは、グラティキュールの下に提供される。１０μｍおよび２５μｍに関する粒子の数を視覚的に符合させる。１００ｍＬと等しい、またはこれ未満を有する溶液について、存在する粒子の平均数が、容器毎に≧１０μｍである３０００個、および容器毎に≧２５μｍである３００個を超えない場合、調製は試験に準拠する。
【０１３５】
一部の実施形態では、開示されている組成物の復元による１０ｍＬの水性試料は、１ｍｌ毎に６００個未満の１０ミクロンと等しい、もしくはこれ超のサイズを有する粒子；および／または１ｍｌ毎に６０個未満の２５ミクロンと等しい、もしくはこれ超のサイズを有する粒子を含む。
【０１３６】
動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、粒径を測定し得るが、これはブラウン運動に依存し、そのためこの技術は、いくつかのより大きな粒子を検出し得ない。レーザー回折は、粒子および懸濁培地の間の屈折率における差異に依存する。この技術は、サブミクロンからミリメートル範囲にて粒子を検出することができる。相対的に少（例えば、約１〜５重量％）量のより大きな粒子を、ナノ粒子懸濁液中で決定することができる。単一粒子光学検知（ＳＰＯＳ）は、約０．５μｍの個々の粒子を計数する希薄な懸濁液の光遮蔽を使用する。測定した試料の粒子濃度を知ることによって、凝集体の重量パーセントまたは凝集体濃度（粒子／ｍＬ）を計算することができる。
【０１３７】
凝集体の形成は、粒子の表面の脱水によって凍結乾燥の間に起こり得る。この脱水は、凍結乾燥の前に懸濁液中で凍結保護剤、例えば、二糖類を使用することによって回避することができる。適切な二糖類は、スクロース、ラクツロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、またはセロビオース、および／またはこれらの混合物を含む。他の企図される二糖類は、コウジビオース、ニゲロース、イソマルトース、β，β−トレハロース、α，β−トレハロース、ソホロース、ラミナリビオース、ゲンチオビオース、ツラノース、マルツロース、パラチノーゼ、ゲンチオビオース、マンノビオース、メリビオース、メリビウオース（ｍｅｌｉｂｉｕｌｏｓｅ）、ルチノース、ルチヌノース（ｒｕｔｉｎｕｌｏｓｅ）、およびキシロビオースを含む。復元は、開始懸濁液と比較したときの等しいＤＬＳサイズ分布を示す。しかし、レーザー回折は、いくらかの復元された溶液中でサイズが＞１０μｍの粒子を検出することができる。さらに、ＳＰＯＳはまた、ＦＤＡガイドラインの濃度超の濃度（＞１０μｍの粒子について１０４〜１０５個の粒子／ｍＬ）で＞１０μｍサイズの粒子を検出し得る。
【０１３８】
一部の実施形態では、１種または複数のイオン性ハロゲン化塩は、糖、例えば、スクロース、トレハロースまたはこれらの混合物に対するさらなる凍結保護剤として使用し得る。糖は、二糖類、単糖類、三糖類、および／または多糖類を含んでいてもよく、かつ他の添加剤、例えば、グリセロールおよび／または界面活性剤を含んでいてもよい。場合により、シクロデキストリンを、さらなる凍結保護剤として含んでいてもよい。シクロデキストリンは、イオン性ハロゲン化塩の代わりに加え得る。代わりに、シクロデキストリンを、イオン性ハロゲン化塩に加え得る。
【０１３９】
適切なイオン性ハロゲン化塩は、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩化亜鉛、またはこれらの混合物を含み得る。さらなる適切なイオン性ハロゲン化塩は、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化アンモニウム、臭化ナトリウム、臭化カルシウム、臭化亜鉛、臭化カリウム、臭化マグネシウム、臭化アンモニウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カルシウム、ヨウ化亜鉛、ヨウ化カリウム、ヨウ化マグネシウム、またはヨウ化アンモニウム、および／またはこれらの混合物を含む。一実施形態では、約１〜約１５重量パーセントのスクロースを、イオン性ハロゲン化塩と共に使用し得る。一実施形態では、凍結乾燥した医薬組成物は、約１０〜約１００ｍＭの塩化ナトリウムを含み得る。別の実施形態では、凍結乾燥した医薬組成物は、約１００〜約５００ｍＭの二価のイオン性塩化物塩、例えば、塩化カルシウムまたは塩化亜鉛を含み得る。さらに別の実施形態では、凍結乾燥される懸濁液は、シクロデキストリンをさらに含み得、例えば、約１〜約２５重量パーセントのシクロデキストリンを使用し得る。
【０１４０】
適切なシクロデキストリンは、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、またはこれらの混合物を含み得る。本明細書において開示されている組成物における使用のために企図される例示的なシクロデキストリンには、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰｂＣＤ）、ヒドロキシエチル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、メチル−β−シクロデキストリン、ジメチル−β−シクロデキストリン、カルボキシメチル−β−シクロデキストリン、カルボキシメチルエチル−β−シクロデキストリン、ジエチル−β−シクロデキストリン、トリ−Ｏ−アルキル−β−シクロデキストリン、グルコシル−β−シクロデキストリン、およびマルトシル−β−シクロデキストリンが含まれる。一実施形態では、約１〜約２５重量パーセントのトレハロース（例えば、約１０重量％〜約１５重量％、例えば、５〜約２０重量％）を、シクロデキストリンと共に使用し得る。一実施形態では、凍結乾燥した医薬組成物は、約１〜約２５重量パーセントのβ−シクロデキストリンを含み得る。例示的な組成物は、ＰＬＡ−ＰＥＧ、活性／治療剤、約４％〜約６％（例えば、約５重量パーセント）のスクロース、および約８〜約１２重量パーセント（例えば、約１０重量％）のＨＰｂＣＤを含むナノ粒子を含み得る。
【０１４１】
一態様では、開示されているナノ粒子を含む凍結乾燥した医薬組成物を提供し、１００ｍＬ未満または約１００ｍＬの水性媒体中で約５０ｍｇ／ｍＬのナノ粒子濃度での凍結乾燥した医薬組成物の復元によって、非経口投与に適した復元された組成物は、６０００個未満、例えば、３０００個未満の１０ミクロンと等しい、もしくはこれ超の微粒子；および／または６００個未満、例えば、３００個未満の２５ミクロンと等しい、もしくはこれ超の微粒子を含む。
【０１４２】
微粒子の数は、例えば、光遮蔽粒子計数試験によるＵＳＰ３２＜７８８＞、顕微鏡粒子計数試験によるＵＳＰ３２＜７８８＞、レーザー回折、および単一粒子光学検知などの手段によって決定することができる。
【０１４３】
ある態様では、それぞれが疎水性ポリマーセグメントおよび親水性ポリマーセグメント；活性剤；糖；ならびにシクロデキストリンを有するコポリマーを含む複数種の治療用粒子を含む、復元による非経口使用に適した医薬組成物を提供する。
【０１４４】
例えば、コポリマーは、ポリ（乳）酸−ブロック−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーであり得る。復元によって、１００ｍＬの水性試料は、６０００個未満の１０ミクロンと等しい、もしくはこれ超のサイズを有する粒子；および６００個未満の２５ミクロンと等しい、もしくはこれ超のサイズを有する粒子を含み得る。
【０１４５】
二糖類およびイオン性ハロゲン化塩を加えるステップは、約５〜約１５重量パーセントのスクロースまたは約５〜約２０重量パーセントのトレハロース（例えば、約１０〜約２０重量パーセントのトレハロース）、および約１０〜約５００ｍＭのイオン性ハロゲン化塩を加えることを含み得る。イオン性ハロゲン化塩は、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、および塩化亜鉛、またはこれらの混合物から選択し得る。ある実施形態では、約１〜約２５重量パーセントのシクロデキストリンをまた加える。
【０１４６】
別の実施形態では、二糖類およびシクロデキストリンを加えるステップは、約５〜約１５重量パーセントのスクロースまたは約５〜約２０重量パーセントのトレハロース（例えば、約１０〜約２０重量パーセントのトレハロース）、および約１〜約２５重量パーセントのシクロデキストリンを加えることを含み得る。ある実施形態では、約１０〜約１５重量パーセントのシクロデキストリンを加える。シクロデキストリンは、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、またはこれらの混合物から選択し得る。
【０１４７】
別の態様では、糖および塩を凍結乾燥した製剤に加え、復元によるナノ粒子の凝集を防止することを含む、医薬ナノ粒子組成物中で粒子の実質的な凝集を防止する方法を提供する。ある実施形態では、シクロデキストリンをまた、凍結乾燥した製剤に加える。さらに別の態様では、糖およびシクロデキストリンを凍結乾燥した製剤に加えて、復元によるナノ粒子の凝集を防止することを含む、医薬ナノ粒子組成物中の粒子の実質的な凝集を防止する方法を提供する。
【０１４８】
企図される凍結乾燥した組成物は、約４０ｍｇ／ｍＬ超の治療用粒子濃度を有し得る。非経口投与に適した製剤は、１０ｍＬの用量中に１０ミクロン超のサイズを有する約６００個未満の粒子を有し得る。凍結乾燥は、組成物を約−４０℃超、または例えば、約−３０℃未満の温度で冷凍し、冷凍した組成物を形成させ、冷凍した組成物を乾燥させ、凍結乾燥した組成物を形成することを含み得る。乾燥のステップは、約５０ｍＴｏｒｒで約−２５〜約−３４℃、または約−３０〜約−３４℃の温度にて起こり得る。
【０１４９】
処置方法
一部の実施形態では、標的化ナノ粒子は、疾患、障害、および／または状態を処置し、緩和し、回復させ、軽減し、その発生を遅延させ、その進行を阻害し、その重症度を低減し、かつ／またはその１つもしくは複数の症状または特色の発生率を低減するのに使用することができる。一部の実施形態では、標的化ナノ粒子は、固形腫瘍、例えば、がんおよび／またはがん細胞の処置に使用することができる。一部の実施形態では、ＥＧＦＲを発現する細胞が標的とされる。一部の実施形態では、ＥＧＦＲを発現する他のがん細胞の固形腫瘍が標的とされる。ある特定の実施形態では、標的化ナノ粒子は、がん細胞の表面上、または前立腺もしくは非前立腺固形腫瘍の新生血管を含めた、それを必要とする対象の腫瘍新生血管においてＰＳＭＡが発現される、いずれかのがんの処置に使用することができる。ＰＳＭＡに関連した適応症の例としては、これらに限定されないが、前立腺がん、乳がん、非小細胞肺がん、結腸直腸癌、および神経膠芽腫が挙げられる。
【０１５０】
用語「がん」は、前悪性および悪性のがんを含む。がんには、これらに限定されないが、血液（例えば、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ芽球性白血病、マントル細胞リンパ腫）、前立腺、胃がん、結腸直腸がん、皮膚がん、例えば、黒色腫または基底細胞癌、肺がん（例えば、非小細胞肺がん）、乳がん、頭頸部のがん、気管支がん、膵臓がん、膀胱がん、脳または中枢神経系がん、末梢神経系がん、食道がん、口腔または咽頭のがん、肝臓がん（例えば、肝細胞癌）、腎臓がん（例えば、腎細胞癌）、睾丸がん、胆道がん、小腸または虫垂がん、胃腸間質腫瘍、唾液腺がん、甲状腺がん、副腎がん、骨肉腫、軟骨肉腫、血液系組織のがんなどが含まれる。「がん細胞」は、対象内に単独で存在する腫瘍（すなわち、固形腫瘍）の形（例えば、白血病細胞）である場合もあり、またはがん由来の細胞株である場合もある。
【０１５１】
本発明の一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体を含有する治療用ナノ粒子は、扁平非小細胞肺がんの処置において使用される。ある特定の実施形態では、発明の標的化粒子の「治療有効量」とは、扁平非小細胞肺がんを処置し、緩和し、回復させ、軽減し、その発生を遅延させ、その進行を阻害し、その重症度を低減し、かつ／またはその１つもしくは複数の症状または特色の発生率を低減するのに有効な量である。
【０１５２】
がんは、様々な身体症状を伴うことがある。がんの症状は、一般に、腫瘍の種類および場所に応じて決まる。例えば、肺がんは、咳、息切れ、および胸痛を引き起こすことがあり、結腸がんは、多くの場合、下痢、便秘、および血便を引き起こす。しかし、少数であるが例を挙げると、発熱、悪寒、寝汗、咳、呼吸困難、体重減少、食欲減退、食欲不振症、悪心、嘔吐、下痢、貧血、黄疸、肝腫大、喀血、疲労、倦怠、認知機能障害、うつ病、ホルモンの乱れ、好中球減少症、疼痛、非治癒性のただれ、リンパ節の肥大、末梢神経障害、および性機能不全といった症状が、往々にして、多くのがんと一般に関連付けられる。
【０１５３】
一態様では、がん（例えば、白血病）を処置する方法が提供される。感染症、炎症、遺伝性障害などの他の処置方法は、本明細書で開示するとおりに実現することができると理解すべきである。一部の実施形態では、がんの処置は、それを必要とする対象に治療有効量の発明の標的化粒子を、所望の結果を得るのに必要となるような量で、そのような時間をかけて投与することを含む。ある特定の実施形態では、発明の標的化粒子の「治療有効量」とは、がんを処置し、緩和し、回復させ、軽減し、その発生を遅延させ、その進行を阻害し、その重症度を低減し、かつ／またはその１つもしくは複数の症状または特色の発生率を低減するのに有効な量である。
【０１５４】
一態様では、がん（例えば、白血病）に罹患している対象に発明の組成物を投与する方法が提供される。一部の実施形態では、所望の結果（すなわち、がんの処置）を得るのに必要となるような量で、そのような時間をかけて、対象に粒子を投与することができる。ある特定の実施形態では、発明の標的化粒子の「治療有効量」とは、がんを処置し、緩和し、回復させ、軽減し、その発生を遅延させ、その進行を阻害し、その重症度を低減し、かつ／またはその１つもしくは複数の症状または特色の発生率を低減するのに有効な量である。
【０１５５】
発明の治療プロトコルは、健康な個体（すなわち、がんのいずれの症状も示していない、かつ／またはがんと診断されたことがない対象）に、治療有効量の発明の標的化粒子を投与することを含む。例えば、健康な個体は、がんの発病および／またはがんの症状の発症より前に、発明の標的化粒子で「免疫化」することもでき、リスクがある個体（例えば、がんの家族歴を有する患者、がんの発病と関連する１つまたは複数の遺伝子変異を有する患者、がんの発病と関連する遺伝的多型を有する患者、がんの発病と関連するウイルスに感染した患者、がんの発病と関連する習慣および／または生活様式を有する患者など）は、がんの症状の発症と実質的に同時（例えば、その４８時間以内、２４時間以内、または１２時間以内）に処置することができる。当然のことながら、がんを有することがわかっている個体は、いつでも発明の処置を受けることができる。
【０１５６】
他の実施形態では、開示されるナノ粒子を使用して、がん細胞、例えば、骨髄性白血病がん細胞の成長を阻害することができる。本明細書において使用する場合、「がん細胞の成長を阻害する」または「がん細胞の成長を阻害すること」という用語は、がん細胞成長の速度が、未処置対照がん細胞の観察または予想された成長速度と比べて低減されるような、がん細胞増殖および／もしくは遊走の速度のいずれかの緩慢化、がん細胞増殖および／もしくは遊走の抑止、またはがん細胞の死滅を指す。「増殖を阻害する」という用語は、がん細胞または腫瘍のサイズの縮小または消失、ならびにその転移の可能性の低減も指す場合がある。細胞レベルでのこのような阻害が、患者において、がんのサイズを縮小し、その成長を阻止し、その侵襲性を低減し、またはその転移を予防もしくは阻害し得ることが好ましい。がん細胞成長が阻害されているかどうかは、適切な様々な徴候のいずれかによって、当業者が容易に判定することができる。
【０１５７】
がん細胞成長の阻害は、例えば、がん細胞の細胞周期の特定の期における停止、例えば、細胞周期のＧ２／Ｍ期における停止によって証明することができる。がん細胞成長の阻害は、がん細胞または腫瘍サイズの直接的または間接的測定によって証明することもできる。ヒトがん患者では、このような測定は、一般に、磁気共鳴画像診断、コンピュータ体軸断層撮影、Ｘ線などの、周知の画像診断法を使用してなされる。がん細胞成長は、循環している癌胎児性抗原、前立腺特異的抗原、またはがん細胞成長と互いに関係付けられる他のがん特異的抗原のレベルを決定することなどにより、間接的に判定することもできる。がん成長の阻害は、一般に、対象の生存期間の延長および／または健康および幸福の増進とも互いに関係付けられる。
【０１５８】
一部の実施形態では、治療用ナノ粒子は、抗ＰＤ−１抗体などの別の治療剤と並行して投与されるか、または併用される。
【０１５９】
本明細書では、活性剤を含む、本明細書で開示するナノ粒子を患者に投与する方法であって、患者への投与の際、このようなナノ粒子が、薬剤単独の投与（すなわち、開示されるナノ粒子としてでない）に比べて、分布体積を実質的に縮小し、かつ／または遊離Ｃｍａｘを実質的に低減する方法も提供される。
【０１６０】
「Ｄｒｕｇ  Ｌｏａｄｅｄ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｍａｋｉｎｇ  ａｎｄ  Ｕｓｉｎｇ  Ｓａｍｅ」と題された２０１２年６月２６日発行の米国特許第８，２０６，７４７号は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【実施例】
【０１６１】
本発明について、ここまでは大まかに述べており、以下の実施例を参照することで、これについてより容易に理解されるところとなるが、実施例は、本発明のある特定の態様および実施形態を説明する目的で含めているにすぎず、本発明を一切限定するものでない。
【０１６２】
（実施例１）
低分子量ＰＳＭＡリガンド（ＧＬ２）の合成
【０１６３】
【化４】
2019508408.tif 000006
５ｇ（１０．６７ｍｍｏｌ）の出発化合物を１５０ｍＬの無水ＤＭＦに溶解させた。この溶液に、臭化アリル（６．３ｍＬ、７２ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１．４７ｇ、１０．６７ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を２時間撹拌し、溶媒を除去し、粗材料をＡｃＯＥｔに溶解させ、ｐＨが中性になるまでＨ２Ｏで洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４（無水）で乾燥させ、蒸発にかけて、５．１５ｇ（９５％）の材料を得た。（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ２０：１でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．９、出発時の化合物Ｒｆ＝０．１、ニンヒドリンおよびＵＶ光で明らかにした。）
【０１６４】
【化５】
2019508408.tif 000007
化合物（５．１５ｇ、１０．１３ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（５０ｍＬ）溶液に、Ｅｔ２ＮＨ（２０ｍＬ、０．１９ｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で４０分間撹拌した。溶媒を除去し、化合物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ  ３：２）によって精製して、２．６ｇ（９０％）を得た。（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  １０：１でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４、ニンヒドリンで明らかにした（化合物は青紫の色調を有する。）1H-NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 5.95-5.85 (m, 1H, - CH2CHCH2),
5.36-5.24 (m, 2H, -CH2CHCH2), 4.62-4.60 (m, 3H, -CH2CHCH2,
NHBoc), 3.46 (t, 1H, CH(Lys)), 3.11-3.07 (m, 2H, CH2NHBoc),
1.79 (bs, 2H, NH2), 1.79-1.43 (m, 6H,3CH2(Lys)),
1.43 (s, 9H, Boc).
【０１６５】
【化６】
2019508408.tif 000008
グルタミン酸ジアリル（３．９６ｇ、１５ｍｍｏｌ）およびトリホスゲン（１．４７ｇ、４．９５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１４３ｍＬ）に溶かした−７８℃の撹拌した溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（２８ｍＬ）中のＥｔ３Ｎ（６．４ｍＬ、４６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温に温め、１．５時間撹拌した。次いで、ＣＨ２Ｃｌ２溶液（３６ｍＬ）中のリシン誘導体（２．６ｇ、９．０９ｍｍｏｌ）を−７８℃で加え、反応液を室温で１２時間撹拌した。溶液をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、Ｈ２Ｏで２回洗浄し、ＭｇＳＯ４（無水）で乾燥させ、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ  ３：１→２：１→ＡｃＯＥｔ）によって精製して、４ｇ（８２％）を得た（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ２０：１でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．３、ニンヒドリンで明らかにした）。1H-NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 5.97-5.84 (m, 3H, 3-CH2CHCH2),
5.50 (bt, 2H, 2NHウレア), 5.36-5.20 (m, 6H, 3-CH2CHCH2),
4.81 (bs, 1H, NHBoc), 4.68-4.40 (m, 8H,3-CH2CHCH2,
CH(Lys), CH(glu)), 3.09-3.05 (m, 2H, CH2NHBoc),
2.52-2.39 (m, 2H, CH2(glu.)), 2.25-2.14および2.02-1.92
(2m, 2H, CH2(glu.)), 1.87-1.64 (m, 4H, 2CH2(Lys)),
1.51- 1.35 (m, 2H, CH2(Lys)), 1.44 (s, 9H, Boc).
【０１６６】
【化７】
2019508408.tif 000009
化合物（４ｇ、７．４２ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）溶液に、０℃でＴＦＡ（９ｍＬ）を加えた。反応液を室温で１時間撹拌した。完全に乾燥するまで減圧下で溶媒を除去して、４．１ｇ（定量的）を得た。（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ２０：１でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．１、ニンヒドリンで明らかにした。）1H-NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 6.27-6.16 (2d, 2H, 2NHウレア), 5.96-5.82 (m, 3H, 3-CH2CHCH2),
5.35-5.20 (m, 6H, 3-CH2CHCH2), 4.61-4.55 (m, 6H,
3-CH2CHCH2), 4.46-4.41 (m, 2H, CH(Lys), CH(glu)),
2.99 (m, 2H, CH2NHBoc), 2.46 (m, 2H, CH2(glu.)),
2.23-2.11および2.01-1.88 2H, CH2(glu.)),
1.88-1.67 (m, 4H, 2CH2(Lys)), 1.45 (m, 2H, CH2(Lys)).
【０１６７】
【化８】
2019508408.tif 000010
アルゴン下の化合物（２ｇ、３．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（無水）（６２ｍＬ）溶液に、０℃でＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．７ｇ、０．６ｍｍｏｌ）およびモルホリン（５．４ｍＬ、６０．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１時間撹拌した。溶媒を除去した。粗生成物をＣＨ２Ｃｌ２で２回洗浄し、次いでＨ２Ｏに溶解させた。この溶液に、ｐＨが極めて塩基性になるまで、ＮａＯＨの希釈溶液（０．０１Ｎ）を加えた。減圧下で溶媒を除去した。固体を再びＣＨ２Ｃｌ２、ＡｃＯＥｔ、およびＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２（１：１）の混合物で洗浄し、Ｈ２Ｏに溶解させ、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲ−１２０  Ｈ＋樹脂で中和した。溶媒を蒸発させ、化合物をＭｅＯＨで沈殿させて、１ｇ（８７％）のＧＬ２を得た。1H-NMR (D2O, 300 MHz) δ 4.07 (m, 2H, CH(Lys), CH(glu)),
2.98 (m, 2H, CH2NH2), 2.36 (m, 2H, CH2(glu.)),
2.08-2.00 (m, 1H, CH2(glu)), 1.93-1.60 (m, 5H, CH2(glu.),
2CH2(Lys)), 1.41 (m, 2H, CH2(Lys)). 質量ESI: 320.47 [M + H+], 342.42 [M + Na+].
【０１６８】
（実施例２）
低分子量ＰＳＭＡリガンド（ＧＬ１）の合成
【０１６９】
【化９】
2019508408.tif 000011
１３０ｍｇ（０．２５８ｍｍｏｌ）の出発化合物を３ｍＬのＤＭＦ（無水）に溶解させた。この溶液に、臭化アリル（１５０μＬ、１．７２ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（４１ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を１時間撹拌し、溶媒を除去し、粗生成物をＡｃＯＥｔに溶解させ、ｐＨが中性になるまでＨ２Ｏで洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４（無水）で乾燥させ、蒸発にかけて、１３０ｍｇ（９３％）を得た。（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ２０：１でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．９、出発時の化合物Ｒｆ＝０．１、ニンヒドリンおよびＵＶ光で明らかにした。）1H-NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 7.81-7.05 (12H, 芳香環), 6.81 (bs, 1H, NHFmoc), 5.93-5.81 (m, 1H, -CH2CHCH2),
5.35-5.24 (m, 2H, -CH2CHCH2), 5.00 (bd, 1H, NHboc),
4.61-4.53 (m, 5H, -CH2CHCH2, CH2(Fmoc)
CH(フェニルアラニン)), 4.28 (t, 1H, CH(Fmoc)),
3.12-2.98 (m, 2H, CH2(フェニルアラニン), 1.44
(s, 9H, Boc).
【０１７０】
【化１０】
2019508408.tif 000012
化合物（１２０ｍｇ、０．２２１ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）溶液に、０℃でＴＦＡ（１ｍＬ）を加えた。反応液を室温で１時間撹拌した。減圧下で溶媒を除去し、水を加え、再び除去し、ＣＨ２Ｃｌ２を加え、完全に乾燥するまで再び除去して、１２０ｍｇ（定量的）を得た。（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ２０：１でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．１、ニンヒドリンおよびＵＶ光で明らかにした。）1H-NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 7.80-7.00 (13H, 芳香環, NHFmoc), 5.90-5.75 (m, 1H, -CH2CHCH2),
5.35-5.19 (m, 3H, -CH2CHCH2, NHboc),
4.70-4.40 (2m, 5H, -CH2CHCH2, CH2(Fmoc),
CH(フェニルアラニン)), 4.20 (t, 1H, CH(Fmoc)),
3.40-3.05 (m, 2H, CH2(フェニルアラニン)).
【０１７１】
【化１１】
2019508408.tif 000013
グルタミン酸ジアリル（１１０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）およびトリホスゲン（４３ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）に溶かした−７８℃の撹拌した溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（０．８ｍＬ）中のＥｔ３Ｎ（１８０μＬ、１．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温に温め、１．５時間撹拌した。次いで、ＣＨ２Ｃｌ２溶液（１ｍＬ）中のフェニルアラニン誘導体（１４０ｍｇ、０．２５１ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（７０μＬ、０．５ｍｍｏｌ）を−７８℃で加え、反応液を室温で１２時間撹拌した。溶液をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、Ｈ２Ｏで２回洗浄し、ＭｇＳＯ４（無水）で乾燥させ、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ  ３：１）によって精製して、１００ｍｇ（５７％）を得た（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ２０：１でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．３、ニンヒドリンおよびＵＶ光で明らかにした。）1H-NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 7.80-6.95 (13H, 芳香環, NHFmoc), 5.98-5.82 (m, 3H, 3-CH2CHCH2),
5.54 (bd, 1H, NHウレア), 5.43-5.19 (m, 7H, 3-CH2CHCH2,
NHウレア), 4.85-4.78 (m, 1H, CH(フェニルアラニン)), 4.67-4.50 (m, 9H, 3-CH2CHCH2, CH2(Fmoc),
CH(glu.)), 4.28 (t, 1H, CH(Fmoc)), 3.05 (d, 2H, CH2(フェニルアラニン)), 2.53-2.33 (m, 2H, CH2(glu.)), 2.25-2.11および1.98-1.80 (2m, 2H, CH2(glu.)).
【０１７２】
【化１２】
2019508408.tif 000014
出発材料（６０ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（１ｍＬ）溶液に、Ｅｔ２ＮＨ（１ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で４０分間撹拌した。溶媒を除去し、化合物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ  ２：１）によって精製して、３５ｍｇ（８５％）を得た。（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  １０：１でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．５、出発時の化合物Ｒｆ＝０．７５、ニンヒドリン（化合物は青紫の色調を有する）およびＵＶ光で明らかにした。）1H-NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 6.85および6.55 (2d,
4H, 芳香環), 5.98-5.82 (m, 3H, 3-CH2CHCH2),
5.56 (bd, 1H, NHウレア), 5.44-5.18 (m, 7H, 3-CH2CHCH2,
NHウレア), 4.79-4.72 (m,1H, CH(フェニルアラニン)), 4.65-4.49 (m, 7H, 3-CH2CHCH2, CH(glu.)),
3.64 (bs, 2H, NH2), 3.02-2.89 (m,2H, CH2(フェニルアラニン)), 2.49-2.31 (m, 2H, CH2(glu.)), 2.20-2.09および1.91-1.78 (2m, 2H, CH2(glu.)).
【０１７３】
【化１３】
2019508408.tif 000015
アルゴン下の化合物（５０ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（無水、１．５ｍＬ）溶液に、０℃でＰｄ（ＰＰｈ３）４（２１ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）およびモルホリン（１５４μＬ、１．７７ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１時間撹拌した。溶媒を除去した。粗材料をＣＨ２Ｃｌ２で２回洗浄し、Ｈ２Ｏに溶解させた。この溶液に、ｐＨが極めて塩基性になるまで、ＮａＯＨの希釈溶液（０．０１Ｎ）を加えた。減圧下で溶媒を除去した。固体を再びＣＨ２Ｃｌ２、ＡｃＯＥｔ、およびＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２（１：１）の混合物で洗浄し、Ｈ２Ｏに溶解させ、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲ−１２０  Ｈ＋樹脂で中和した。溶媒を蒸発させ、化合物をＭｅＯＨで沈殿させて、２５ｍｇ（６７％）のＧＬ１を得た。1H-NMR (D2O, 300 MHz) δ 7.08および6.79 (2d,
4H, 芳香環), 4.21 (m, 1H, CH(フェニルアラニン)), 3.90 (m, 1H, CH(glu.)), 2.99および2.82
(2dd, 2H, CH2(フェニルアラニン)), 2.22-2.11
(m, 2H, CH2(glu.)), 2.05-1.70 (2m, 2H, CH2(glu.)).
13C-NMR (D2O, 75 MHz) δ 176.8, 174.5, 173.9 (3 COO). 153.3 (NHCONH), 138.8 (H2N-C(Ph)),
124.5, 122.9, 110.9 (芳香環), 51.3 (CH(フェニルアラニン)), 49.8 (CH(glu.)), 31.8 (CH2(フェニルアラニン)), 28.4および23.6 (2CH2-glu.)). 質量ESI: 354.19 [M + H+], 376.23 [M + Na+].
【０１７４】
（実施例３）
ＰＬＡ−ＰＥＧの調製
合成は、以下に示すとおり、ｄ，ｌ−ラクチドの、マクロ開始剤としてのα−ヒドロキシ−ω−メトキシポリ（エチレングリコール）との開環重合によって遂行し、２−エチルヘキサン酸スズ（ＩＩ）を触媒として使用して高温で実施する（ＰＥＧ  Ｍｎ≒５，０００Ｄａ、ＰＬＡ  Ｍｎ≒１６，０００Ｄａ、ＰＥＧ−ＰＬＡ  Ｍｎ≒２１，０００Ｄａ）。
【０１７５】
【化１４】
2019508408.tif 000016
【０１７６】
ポリマーは、ポリマーをジクロロメタンに溶解させ、それをヘキサンとジエチルエーテルの混合物中で沈殿させることにより精製する。このステップから回収されたポリマーを、オーブンで乾燥させることになる。
【０１７７】
（実施例４）
ＰＬＡ−ＰＥＧ−リガンド調製
合成は、ジメチルホルムアミド中でＦＭＯＣ、ＢＯＣリシンを臭化アリルおよび炭酸カリウムと反応させた後、アセトニトリル中にてジエチルアミンで処理することによる、ＦＭＯＣ、ＢＯＣリシンの、ＦＭＯＣ、ＢＯＣ、アリルリシンへの変換から始める。次いで、ＢＯＣ、アリルリシンをトリホスゲンおよびグルタミン酸ジアリルと反応させた後、塩化メチレン中にてトリフルオロ酢酸で処理して、化合物「ＧＬ２Ｐ」を形成する。
【０１７８】
次いで、ヒドロキシル−ＰＥＧ−カルボン酸をＥＤＣおよびＮＨＳと共に加えることにより、ＧＬ２Ｐ中のリシンの側鎖アミンをペグ化する。ＧＬ２ＰのＰＥＧへのコンジュゲーションは、アミド結合を介している。得られるその化合物の構造を、「ＨＯ−ＰＥＧ−ＧＬ２Ｐ」と名付ける。ペグ化に続いて、ｄ，ｌ−ラクチドの、開始剤としてのＨＯ−ＰＥＧ−ＧＬ２Ｐ中のヒドロキシル基との開環重合（ＲＯＰ）を利用して、ポリラクチドブロックポリマーを、エステル結合を介してＨＯ−ＰＥＧ−ＧＬ２Ｐに結合させて、「ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬ２Ｐ」を得る。２−エチルヘキサン酸スズ（ＩＩ）を、開環重合の触媒として使用する。
【０１７９】
最後に、ジクロロメタン中でモルホリンおよび（触媒としての）テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムを使用し、ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬ２Ｐ上のアリル基を除去して、最終生成物であるＰＬＡ−ＰＥＧ−リガンドを得る。最終化合物を、３０／７０％（ｖ／ｖ）のジエチルエーテル／ヘキサンに沈殿させることにより精製する。
【０１８０】
（実施例５）
ナノ粒子調製−ナノ沈殿
ナノ粒子は、ＧＬ１、ＧＬ２、またはいずれかの所望のリガンドを使用して調製することができる。ＰＳＭＡ結合に不可欠でない領域に位置した遊離アミノ基を有する、尿素をベースとするＰＳＭＡ阻害剤ＧＬ２を、スキーム１に示す手順に従って、市販品として入手可能な出発材料であるＢｏｃ−Ｐｈｅ（４ＮＨＦｍｏｃ）−ＯＨおよびジアリルグルタミン酸（ｄｉａｌｌｙｌ  ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ）から合成する。ナノ沈殿を使用してナノ粒子を形成する。ポリマーリガンドコンジュゲートを、薬物、および粒子取込みを追跡するための他の薬剤と共に、水と混和性の有機溶媒に、溶解させる。追加の非官能化ポリマーを含めて、リガンド表面密度を調節してもよい。ポリマー溶液を水相に分散させ、得られる粒子を、濾過によって回収する。粒子は、乾燥させてもよいし、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞取込みまたはｉｎ  ｖｉｖｏでの抗前立腺腫瘍活性について直ちに試験してもよい。
【０１８１】
【化１５】
2019508408.tif 000017
【０１８２】
（実施例６）
ナノ粒子調製−エマルジョンプロセス
２％のポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）−ポリ（エチレングリコール）ジブロックコポリマー（ＰＬＧＡ−ＰＥＧ、４５ｋＤａ〜５ｋＤａ）、２％のポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（ＰＬＡ、８．５ｋＤａ）、および１％のドセタキセル（ＤＴＸＬ）を含み、ドセタキセルは、以下の構造：
【０１８３】
【化１６】
2019508408.tif 000018
を有する、５％の固体（ｗｔ％）から構成される有機層を形成する。
【０１８４】
有機溶媒は、酢酸エチル（ＥＡ）およびベンジルアルコール（ＢＡ）であり、ＢＡが有機相の２０％（ｗｔ％）を構成する。ＢＡは、ドセタキセルを可溶化するために部分的に使用している。有機相を、水中に０．５％のコール酸ナトリウムと２％のＢＡと４％のＥＡ（ｗｔ％）とから構成されている水相と、概ね１：５の比（油相：水相）で混合する。２つの相を、単純に混合しながら、またはローターステーターホモジナイザーを使用して混ぜ合わせることにより、一次エマルジョンを形成する。次いで、プローブソニケーターまたは高圧ホモジナイザーを使用して、一次エマルジョンを微細エマルジョンに形成する。
【０１８５】
次いで、微細エマルジョンを、脱イオン水である冷えたクエンチ（０〜５℃）に混合しながら加えることによりクエンチする。クエンチ：エマルジョン比は、概ね８．５：１である。次いで、クエンチにＴｗｅｅｎ８０の２５％（ｗｔ％）溶液を加えて、Ｔｗｅｅｎ８０を全体で概ね２％とする。次いで、遠心分離または限外濾過／ダイアフィルトレーションのいずれかによってナノ粒子を単離する。ナノ粒子懸濁液は、次いで、１０ｗｔ％スクロースなどの凍結保護物質と共に凍結させてもよい。
【０１８６】
（実施例７）
ＰＳＭＡ標的化ドセタキセルナノ粒子調製−エマルジョンプロセス
以下の実施例８に記載する研究に関連して使用するための、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）標的化ドセタキセルナノ粒子を、エマルジョンプロセスによって調製した。最初のステップでは、有機溶媒（５．５３ｋｇの酢酸エチルおよび１．４７ｋｇのベンジルアルコール）の存在下で、２．３４ｋｇ（２３．４％）の実施例３のＰＬＡ−ＰＥＧ（１６ｋＤａ〜５ｋＤａ）を０．０６ｋｇ（０．６％）の実施例４のＰＬＡ−ＰＥＧ−ＧＬ２（１６ｋＤａ〜５ｋＤａ）および６％のドセタキセルと混合することにより、３０％の固体（ｗｔ％）を含む有機相を形成した。ベンジルアルコールは、ドセタキセルを可溶化するために部分的に使用した。
【０１８７】
次のステップでは、有機相を水相と、概ね１：２の重量比（有機相：水相）で混合した。水相は、０．２ｋｇのコール酸ナトリウム、０．４ｋｇのベンジルアルコール、および０．８ｋｇの酢酸エチル（ｗｔ％）を水（１８．６ｋｇ）中に混合することにより形成した。
【０１８８】
オーバーヘッドバッチ高剪断ミキサーを利用して２つの相を組み合わせることにより、一次エマルジョンを形成した。高圧ホモジナイザーを使用して、一次エマルジョンを微細エマルジョンに形成した。
【０１８９】
次いで、微細エマルジョンを、冷えた（０〜５℃）脱イオン水に混合しながら加えることによりクエンチした。クエンチ：エマルジョン比は、概ね１０：１とした。次いで、クエンチに３５％のＴｗｅｅｎ８０（１５ｋｇ）水溶液（ｗｔ％）を加えて、カプセル化されていないドセタキセルを全て溶解させた。
【０１９０】
得られるナノ粒子を、限外濾過／ダイアフィルトレーションによって単離および濃縮した。ナノ粒子懸濁液に、凍結保護物質／凍結乾燥保護物質（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）として役立つスクロースおよびヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを、最終懸濁液が５ｗｔ％のスクロースおよび７．５％のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを含有する結果となる量で加えた。ナノ粒子懸濁液を、０．２ミクロンの滅菌グレードフィルターを終点とする濾過トレインに通した。ナノ粒子懸濁液をガラスバイアルに充填し、凍結乾燥し、栓をし、蓋締めによって密閉した。
【０１９１】
（実施例８）
ｉｎ  ｖｉｖｏドセタキセルナノ粒子研究
ｉｎ  ｖｉｖｏマウス同系異種移植片研究を行って、チェックポイント阻害剤、抗ＰＤ−１、および実施例７のＰＳＭＡ標的化ドセタキセルポリマーナノ粒子の複合活性を評価した。皮下マウス結腸ＣＴ−２６腫瘍を有する６〜８週齢のメスＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて研究を進めた。
【０１９２】
腫瘍のサイズが概ね１００ｍｍ３に達したとき、
ｉ）アイソタイプ対照（クローン２Ａ３、１０ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）、
ｉｉ）マウス抗ＰＤ−１（クローンＲＭＰ１〜１４、１０ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）、
ｉｉｉ）ドセタキセルナノ粒子（実施例７  １０ｍｇ／ｋｇ  ｉｖ）、
ｉｖ）ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ、２．５ｍｇ／ｋｇ  ｉｖ）、
ｖ）４日毎のスケジュール（ｑ４ｄ）で合計５用量が同時投与される抗ＰＤ−１と組み合わせたドセタキセルナノ粒子（実施例７）、または
ｖｉ）４日毎のスケジュール（ｑ４ｄ）で合計５用量が同時投与される抗ＰＤ−１とドセタキセル
のいずれかでマウスを処置した。
【０１９３】
データを、処置群あたり１０匹のマウスでの平均およびＳＥＭとしてグラフ化した。データから、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ）を抗ＰＤ−１と組み合わせて十分に耐容性のある用量で試験したとき、複合活性がなかったことが示された（図９）。しかし、実施した研究では、抗ＰＤ−１をドセタキセルナノ粒子と組み合わせることで、ＣＴ２６マウス異種移植片モデルにおいて抗腫瘍応答が増強され、結果として、２２日目に、単一薬剤処置での４７〜６６％の腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）に比べて、８８％の腫瘍成長阻害、および２例の完全な退縮が実現されたことが示された（図３）。
【０１９４】
均等物
当業者は、単に通例の実験法を使用して、本明細書に記載されている本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識するか、確認することができる。このような均等物は、下記の特許請求の範囲によって包含されるものとする。
【０１９５】
参照による組込み
本明細書において引用した全ての特許、公開された特許出願、ウェブサイト、および他の参照文献の全内容は、参照によりその全体が明確に本明細書において組み込まれている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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