(57)【要約】  本発明は、Ｐ２Ｘ７受容体（Ｐ２Ｘ７）アンタゴニスト特性を有する式（Ｉ）の新規置換フェノキシおよびベンジルオキシピペリジン化合物、これらの化合物を含む医薬組成物、これらの化合物を調製する化学的方法および動物の、特にヒトのＰ２Ｘ７受容体活性に関連する疾患治療または予防でのそれらの使用に関する。  【化１】2019524750.tif 000057
2019524750.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式（Ｉ）：
【化１】
2019524750.tif 000049
の化合物またはその薬学的に許容可能な塩であって、その任意の立体化学的異性体型を含み、式中、
ｎは０または１であり；
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ４アルキル（ヒドロキシルまたはハロゲンで置換されてもよい）、好ましくは、メチル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチルであり；
それぞれのＲ２、Ｒ３およびＲ４は、独立に、水素、ハロゲンであるか、またはＲ２、Ｒ３およびＲ４の内の少なくとも１つが水素ではないという条件下で、前記Ｒ２とＲ４基は一緒に窒素原子を含有する６員ヘテロ環を形成し；
ぞれぞれのＲ５およびＲ６は、Ｒ５およびＲ６の少なくとも１つがハロゲンであるという条件下で、水素またはハロゲンである
【請求項２】
任意の立体化学的異性体型を含む、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容可能なその塩であって、式中、
ｎは０または１であり；
Ｒ１はメチル、またはジフルオロメチルであり；
それぞれのＲ２、Ｒ３およびＲ４は、独立に、水素、フッ素、塩素であるか、またはＲ２、Ｒ３およびＲ４の内の少なくとも１つが水素ではないという条件下で、前記Ｒ２とＲ４基は一緒に窒素原子を含有する６員ヘテロ環を形成し；
ぞれぞれのＲ５およびＲ６は、Ｒ５およびＲ６の少なくとも１つがハロゲンであるという条件下で、水素、フッ素または塩素である。
【請求項３】
任意の立体化学的異性体型を含む、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容可能なその塩であって、式中、
ｎは０または１であり；
Ｒ１はメチル、またはジフルオロメチルであり；
ぞれぞれのＲ２、Ｒ３，およびＲ４は、Ｒ２、Ｒ３，およびＲ４の内の少なくとも１つが水素ではないという条件下で、水素、フッ素または塩素であり、
ぞれぞれのＲ５およびＲ６は、Ｒ５およびＲ６の少なくとも１つがハロゲンであるという条件下で、水素、フッ素または塩素である。
【請求項４】
任意の立体化学的異性体型を含む、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容可能なその塩であって、式中、
ｎは０または１であり；
Ｒ１はメチル、またはジフルオロメチルであり；
Ｒ３は水素であり、前記Ｒ２およびＲ４基は一緒に６員ヘテロ環を形成し、前記６員ヘテロ環はフェニル基と一緒にキノリン環を形成する。
【請求項５】
任意の立体化学的異性体型を含む、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容可能なその塩であって、下記の群から選択される。
【表１】
2019524750.tif 000050
【表２】
2019524750.tif 000051
【表３】
2019524750.tif 000052
【表４】
2019524750.tif 000053
【請求項６】
請求項１で定められる式（Ｉ）の化合物の調製方法であって、
ｉ）式（ＩＩ）：
【化２】
2019524750.tif 000054
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ５およびＲ６の意味は上記で定義された通りである。）の化合物を、式（ＩＩＩ）：
【化３】
2019524750.tif 000055
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の意味は上記で定義された通りである。）の化合物または式（ＩＩＩａ）：
【化４】
2019524750.tif 000056
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は上記で定義された通りであり、Ｗは好適な脱離基である。）の化合物と反応させるステップ、
および、必要に応じ、前記得られた式（Ｉ）の化合物をその付加塩に変換するステップ、および／またはその立体化学的異性体型を調製するステップ、を含む、方法。
【請求項７】
任意の立体化学的異性体型を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容可能なその塩、および薬学的に許容可能な希釈剤および／またはキャリアを含む医薬製剤。
【請求項８】
任意の立体化学的異性体型を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容可能なその塩の薬物としての使用。
【請求項９】
Ｐ２Ｘ７受容体媒介状態または疾患から選択される状態または疾患の予防および／または治療における使用のための、請求項１〜５のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項１０】
神経変性障害、認知障害、精神障害、神経障害性疼痛、慢性疼痛、筋肉・骨格組織の炎症過程、胃腸系障害、泌尿生殖器系障害、眼疾患の予防および／または治療における使用のための、請求項９に記載の式（Ｉ）の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｐ２Ｘ７受容体（Ｐ２Ｘ７）アンタゴニスト特性を有する式（Ｉ）の新規置換フェノキシおよびベンジルオキシピペリジン化合物、これらの化合物を含む医薬組成物、これらの化合物を調製する化学的方法および動物の、特にヒトのＰ２Ｘ７受容体活性に関連する疾患治療または予防でのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｐ２Ｘ７は、Ｐ２Ｘイオンチャネル型受容体のファミリーに属する。Ｐ２Ｘ７は、細胞外ヌクレオチド、特に、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）により活性化される。Ｐ２Ｘ７は、特定の局在化（特に、ＣＮＳおよび免疫担当細胞）により、これを活性化するのに高濃度のＡＴＰを必要とすることにより（ｍＭ域内において）、および長期または反復刺激時に大きな気孔を形成する能力により、その他のＰ２Ｘファミリーメンバーとは区別される。Ｐ２Ｘ７は、リガンド開口型イオンチャネルであり、種々の細胞型上に存在し、ほとんどのものは、炎症性過程および／または免疫過程に、特に、マクロファージ、マスト細胞およびリンパ球（ＴおよびＢ）に関与することが知られている。細胞外ヌクレオチド、例えば、ＡＴＰによるＰ２Ｘ７受容体の活性化は、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の放出および巨細胞形成（マクロファージ／ミクログリア細胞）、脱顆粒（マスト細胞）およびＬ−セレクチン排出（リンパ球）を生じる。Ｐ２Ｘ７受容体はまた、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、ケラチノサイト、唾液腺腺房細胞（耳下腺細胞）、肝細胞、赤血球、赤白血病細胞、単球、線維芽細胞、骨髄細胞、ニューロン、および腎臓糸球体間質細胞上にも存在する。Ｐ２Ｘ７受容体は、神経系の痛みセンサーとしても知られる。Ｐ２Ｘ７欠損マウスを使った実験で、これらのマウスが、アジュバント誘導炎症性疼痛および神経部分結紮誘導神経障害性疼痛の両方の発生から保護されたことから、Ｐ２Ｘ７の痛みの発生における役割が実証されている。また、Ｐ２Ｘ７またはＩＬ−１βなどのその下流側エフェクターが、アルツハイマー病などのいくつかの神経障害の病態生理学に関与しているという証拠も増えてきた（Ｊ．Ｉ．Ｄｉａｚ−Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｉｎｇ  ２０１２，１８１６−１８２８：Ｉｎ  ｖｉｖｏ  Ｐ２Ｘ７  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｒｅｄｕｃｅｓ  Ａβ  ｐｌａｑｕｅｓ  ｉｎ  ＡＤ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ＧＳＫ３β）。Ｐ２Ｘ７は、シナプス後のおよび／またはシナプス前のニューロンおよびグリアに対するその活性化により、ＣＮＳ内の神経伝達において重要な役割を有すると考えられている。インサイツハイブリダイゼーションを用いて、Ｐ２Ｘ７受容体ｍＲＮＡは、ラットの脳全体にわたり広く分布しているというデータが明らかになった。特に高いＰ２Ｘ７  ｍＲＮＡ発現は、前嗅核、大脳皮質、梨状葉皮質（Ｐｉｒ）、外側中隔核（ＬＳ）、ＣＡ１、ＣＡ３、ＣＡ４の海馬錐体細胞層、橋核、外側楔状束核、および前庭神経内側核で認められた。Ｐ２Ｘ７ハイブリダイゼーションシグナルはまた、三叉神経運動核、顔面神経核、舌下神経核、および脊髄の前角でも観察された。
【０００３】
したがって、種々の病態の治療にＰ２Ｘ７アンタゴニストを使用するための治療根拠が存在する。これらの状態には、限定されないが、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、脊髄損傷、脳虚血、頭部外傷、髄膜炎、睡眠障害、気分不安障害、ＨＩＶ誘導神経炎症、および慢性神経障害性および炎症性疼痛などのＣＮＳに関連する疾患が挙げられる。さらに、限定されないが、関節リウマチ、変形性膝関節炎、乾癬、アレルギー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、気道過敏性、敗血性ショック、気管支炎、糸球体腎炎、過敏性腸症候群、脂肪性肝疾患、肝線維症、皮膚損傷、肺気腫、筋ジストロフィー、繊維化、アテローム性動脈硬化症、火傷、クローン病、潰瘍性大腸炎、加齢黄斑変性、悪性細胞の増殖および転移、シェーグレン症候群、骨髄芽球性白血病、糖尿病、骨粗鬆症、虚血性心疾患を含む末梢炎症性疾患および自己免疫疾患は、全て、Ｐ２Ｘ７受容体の関与が結びつけられている疾患例である。Ｐ２Ｘ７の臨床的重要性を考慮すると、Ｐ２Ｘ７受容体機能を調節する化合物の特定は、新しい治療薬の開発に向けた魅力的な手段である。
【０００４】
Ｐ２Ｘ７阻害剤は、Ｐ２Ｘ７受容体のベンズアミド阻害剤および炎症性疾患の治療でのその使用について開示しているＷＯ２００４／０９９１４６（特許文献１）などの種々の特許出願に記載されている。
【０００５】
ＷＯ２００９／１０８５５１（特許文献２）は、ヘテロアリールアミド類似体およびＰ２Ｘ７受容体媒介状態でのそれらの使用について開示している。
【０００６】
ＷＯ２００９／１３２０００（特許文献３）は、キノリンおよびイソキノリン置換Ｐ２Ｘ７受容体アンタゴニストおよびＰ２Ｘ７受容体媒介状態でのそれらの使用について開示している。
【０００７】
ＷＯ２０１５／１１９０１８（特許文献４）は、Ｐ２Ｘ７受容体アンタゴニストとしてのチアゾールおよびオキサゾール誘導体およびＰ２Ｘ７受容体媒介状態でのそれらの使用について開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第２００４／０９９１４６号
【特許文献２】国際公開第２００９／１０８５５１号
【特許文献３】国際公開第２００９／１３２０００号
【特許文献４】国際公開第２０１５／１１９０１８号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかし、Ｐ２Ｘ７を効率的にアンタゴナイズでき、Ｐ２Ｘ７媒介症状の部位である脳を含む異なる標的器官に送達できる化合物に対するまだ満たされない必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
このような化合物が本明細書で提供される。本発明の各種実施形態が以降で提示される。
【００１１】
本発明は、任意の立体化学的異性体型を含む、次式（Ｉ）のチアゾール化合物：
【００１２】
【化１】
2019524750.tif 000003
またはその薬学的に許容可能な塩に関し、式中、ｎは０または１であり；
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ４アルキル（ヒドロキシルまたはハロゲンで置換されてもよい）、好ましくは、メチル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチルであり；
それぞれのＲ２、Ｒ３およびＲ４は、独立に、水素、ハロゲンであるか、またはＲ２、Ｒ３およびＲ４の内の少なくとも１つが水素ではないという条件下で、Ｒ２とＲ４基は一緒に窒素原子を含有する６員ヘテロ環を形成し；
ぞれぞれのＲ５およびＲ６は、Ｒ５およびＲ６の少なくとも１つがハロゲンであるという条件下で、水素またはハロゲンである。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】パッチクランプ法におけるＢｚＡＴＰ単独およびＢｚＡＴＰに濃度を順次高めた本発明の化合物を加えた場合のプレインキュベーション期間を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
前述の定義で使用される場合、同義で用いられる用語の「ハロ」、「ハロゲン」および「ハライド」は、置換基フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを意味する。
【００１５】
上記で使用される用語の「立体化学的異性体型」は、式（Ｉ）の化合物が有し得る全ての可能な異性体型として定義される。別義が言及または示されない限り、化合物の化学的表記は、全ての可能な立体化学的異性体型の混合物を意味し、前記混合物は、基本的分子構造の全てのジアステレオマーおよびエナンチオマーを含む。より具体的には、不斉中心は、ＲまたはＳ立体配置を有し得、二価の環状（部分）飽和ラジカルの置換基は、シスまたはトランス立体配置を有し得る。
【００１６】
式（Ｉ）の化合物の立体化学的異性体型は、本発明の範囲内に包含されることが明白に意図されている。
【００１７】
式（Ｉ）およびその調製に使用される中間体の化合物の絶対立体化学的配置は、例えば、Ｘ線回折などのよく知られた方法を用いて当業者により容易に決定され得る。
【００１８】
さらに、式（Ｉ）およびその調製に用いられるいくつかの中間体は、多型を示し得る。本発明は、本明細書で前述の状態の治療に有用な特性を有するいずれの多形をも包含することを理解されたい。
【００１９】
本明細書で前述の薬学的に許容可能な塩は、式（Ｉ）の化合物が形成可能な治療的に活性な非毒性酸付加塩を含むことを意図している。これらの薬学的に許容可能酸付加塩は、好都合にも、塩基型をこのような適切な酸で処理することにより得ることができる。適切な酸には、例えば、ハロゲン化水素酸、例えば、塩酸または臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸；または例えば、酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸（すなわち、エタン二酸）、マロン酸、コハク酸（すなわち、ブタン二酸）、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、パモ酸などの有機酸が含まれる。
【００２０】
逆に、前記塩型は、適切な塩基で処理して、遊離塩基型に変換できる。
【００２１】
式（Ｉ）の化合物は、非溶媒和型および溶媒和型の両方で存在し得る。本明細書で使われる場合、用語の「溶媒和物」は、本発明の化合物および１つまたは複数の薬学的に許容可能な溶媒分子、例えば、水またはエタノールを含む分子会合物をいう。用語の「水和物」は、前記溶媒が水の場合に使用される。
【００２２】
本発明の好ましい実施形態は、上記で定義の式（Ｉ）の化合物に関し、式中、
ｎは０または１であり；
Ｒ１はメチル、またはジフルオロメチルであり；
それぞれのＲ２、Ｒ３およびＲ４は、独立に、水素、フッ素、塩素であるか、またはＲ２、Ｒ３およびＲ４の内の少なくとも１つが水素ではないという条件下で、Ｒ２とＲ４基は一緒に窒素原子を含有する６員ヘテロ環を形成し；
ぞれぞれのＲ５およびＲ６は、Ｒ５およびＲ６の少なくとも１つがハロゲンであるという条件下で、水素、フッ素または塩素である。
【００２３】
別の本発明の実施形態は、上記で定義の式（Ｉ）の化合物に関し、式中；
ｎは０または１であり；
Ｒ１はメチル、またはジフルオロメチルであり；
ぞれぞれのＲ２、Ｒ３，およびＲ４は、Ｒ２、Ｒ３，およびＲ４の内の少なくとも１つが水素ではないという条件下で、独立に、水素、フッ素、塩素である。
ぞれぞれのＲ５およびＲ６は、Ｒ５およびＲ６の少なくとも１つがハロゲンであるという条件下で、水素、フッ素または塩素である。
【００２４】
別の本発明の実施形態は、上記で定義の式（Ｉ）の化合物に関し、式中；
ｎは０または１であり；
Ｒ１はメチル、またはジフルオロメチルであり；
Ｒ３は水素であり、Ｒ２およびＲ４基は一緒に６員ヘテロ環を形成し、６員ヘテロ環はフェニル基と一緒にキノリン環を形成する。
【００２５】
最も好ましくは、本発明による式（Ｉ）の化合物は、下記からなる群より選択される。
【００２６】
【表１】
2019524750.tif 000004
【００２７】
【表２】
2019524750.tif 000005
【００２８】
【表３】
2019524750.tif 000006
【００２９】
【表４】
2019524750.tif 000007
【００３０】
式（Ｉ）の化合物は、一般に、式（ＩＩ）：
【００３１】
【化２】
2019524750.tif 000008
（式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ５およびＲ６の意味は上記で定義された通りである。）の化合物を、式（ＩＩＩ）：
【００３２】
【化３】
2019524750.tif 000009
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の意味は上記で定義された通りである。）の化合物または
式（ＩＩＩａ）：
【００３３】
【化４】
2019524750.tif 000010
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は上記で定義された通りであり、Ｗは好適な脱離基である。）の化合物と反応させて、必要に応じ、得られた式（Ｉ）の化合物をその付加塩に変換する、および／またはその立体化学的異性体型を調製することにより作製できる。
【００３４】
式（ＩＩ）の化合物と式（ＩＩＩ）の化合物との反応は、少なくとも１種の反応に不活性な溶媒中で、および必要に応じ、少なくとも１種の好適なカップリング試薬および／またはその好適な塩基の存在下で、実施され得る。有効量の反応促進剤を加えることにより、式（ＩＩＩ）のカルボン酸を活性化するのが好都合であり得る。このような反応促進剤の非限定例には、カルボニルジイミダゾール、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドまたは１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド、ヒドロキシベンゾトリアゾール、ベンゾトリアゾリルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、テトラピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、ブロモトリピロリジーノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、またはＤ．Ｈｕｄｓｏｎ，（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９８８），５３，６１７）により記載のものなどのこれらの機能性誘導体が挙げられる。
【００３５】
式（ＩＩＩａ）の化合物中のＷは、例えば、ハロ、例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨードなどの適切な脱離基であり、またはいくつかの事例では、Ｗはまた、スルホニルオキシ基、例えば、メタンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、ベンゼンスルホニルオキシなどの反応性脱離基であってもよい。式（ＩＩ）の化合物と式（ＩＩＩ）の化合物との反応は、例えば、アセトニトリル、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンまたはＤＭＦなどの反応に不活性な溶媒中で、および必要に応じ、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムまたはトリエチルアミンなどの好適な塩基の存在下で、実施され得る。撹拌により、反応速度を高め得る。好都合にも、反応は、室温〜反応混合物の還流温度の範囲の温度で実施し得る。
【００３６】
式（ＩＩＩ）および（ＩＩＩａ）の化合物は当技術分野において既知であり、または実施例で報告される方法に従い調製できる。
【００３７】
式（ＩＩ）の化合物は、次のスキームに従って調製できる。
【００３８】
【化５】
2019524750.tif 000011
【００３９】
一級アミン（ＩＩ）は、窒素−水素結合形成反応の、それぞれのニトリル誘導体（ＩＶ）の還元により得ることができる。このような反応の非限定例としては、下記との反応が含まれる：
−触媒としての、ニッケル、白金、パラジウムおよびコバルトまたはラネーニッケル、酸化白金、酸化パラジウムまたはラネーコバルトなどのその誘導体などの存在下での水素または水素源；
−水素化物リチウムアルミニウム、水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ）、水素化ホウ素またはその機能性誘導体などの水素化物。
【００４０】
反応は、メタノール、テトラヒドロフラン、酢酸、ジエチルエーテル、トルエンまたはメタノール性アンモニア溶液などの好適な溶媒中、−７８℃〜室温の温度で実施され得る。
【００４１】
Ｒ１、Ｒ５およびＲ６が式（Ｉ）で定義されている、式（ＩＶ）の化合物は、ＴＭＳＣＮなどのシアン化物（Ｖ）またはその機能性誘導体の存在下で、ＡｃＯＨまたはＭｅＣＮなどの溶媒中、好ましくは０℃〜室温の温度で、アルデヒド（ＶＩ）から、それぞれのヘテロシクリル中間体（ＶＩＩ）とのストレッカー縮合反応により調製できる。
【００４２】
【化６】
2019524750.tif 000012
【００４３】
あるいは、式（ＩＩ）の化合物は、上記の２段階法により調製することもできる。ニッケル（ＩＩ）クロリド六水和物またはコバルト（ＩＩ）クロリド六水和物およびＢｏｃ２Ｏの存在下、ＭｅＯＨなどの溶媒中、好ましくは０℃〜室温の温度で、式（ＩＶ）の化合物と、還元剤、好ましくはホウ化水素ナトリウムとの反応により、式（ＶＩＩＩ）のＢｏｃ保護一級アミンが得られる。好適な酸、好ましくはＴＦＡによる脱保護により、化合物（ＩＩ）が得られる。
【００４４】
式（ＶＩ）の化合物の例は、次のスキームで表される。
【００４５】
【化７】
2019524750.tif 000013
【００４６】
撹拌により、ストレッカー縮合反応の反応速度を高め得る。出発材料およびいくつかの中間体は既知の化合物であり、市販品として入手可能であるか、または当該技術分野において既知の従来の反応の手順により調製できる。
【００４７】
前記方法は、場合により、キラル助剤ベースの合成法（炭水化物、キラルアミン、または環状ケチミンを用いて）および／または触媒の不斉ストレッカー合成法（グアニジン、キラルシッフ塩基またはＢＩＮＯＬ系触媒）を用いる不斉反応を含む。
【００４８】
上記の方法で調製した式（Ｉ）の化合物は、エナンチオマーのラセミ混合物の形で合成され得る。このラセミ混合物は、当該技術分野で既知の分離方法で相互に分離できる。ラセミ体として得られるこれらの式（Ｉ）化合物は、好適なキラル酸との反応により、対応するジアステレオマー塩型に変換し得る。前記ジアステレオマー塩型は、その後、例えば、選択的または分別再結晶により分離され、アルカリによりそこからエナンチオマーが遊離する。式（Ｉ）の化合物のエナンチオマー型を分離する別の方法には、キラル固定相を用いた液体クロマトグラフィーが含まれる。前記の純粋な立体化学的異性体型はまた、反応が立体特異的に起こる限りにおいて、対応する適切な出発材料の純粋な立体化学的異性体型から誘導し得る。特定の立体異性体が望まれる場合、前記化合物は立体特異的調製方法により合成されるのが好ましい。これらの方法は、鏡像異性的に純粋な出発材料を用いるのが好都合である。
【００４９】
式（Ｉ）の化合物、薬学的に許容可能な塩およびその立体異性体は、薬理学的実施例で示されるようなＰ２Ｘ７受容体拮抗性特性を有する。当該分野で既知の、式（Ｉ）を式（Ｉ）の他の化合物に変換する基変換反応の他の例を次に示す：カルボン酸エステルの対応するカルボン酸またはアルコールへの加水分解；アミドの対応するカルボン酸またはアミンへの加水分解；アルコールのエステルおよびエーテルへの変換；一級アミンの、二級または三級アミンへの変換；二重結合の水素添加による対応する単結合への変換。出発材料およびいくつかの中間体は既知の化合物であり、市販品として入手可能であるか、または当該技術分野において既知の従来の反応の手順により調製できる。上記の方法で調製した式（Ｉ）の化合物は、エナンチオマーのラセミ混合物の形で合成され得る。このラセミ混合物は、当該技術分野で既知の分離方法で相互に分離できる。ラセミ体として得られるこれらの式（Ｉ）化合物は、好適なキラル酸との反応により、対応するジアステレオマー塩型に変換し得る。前記ジアステレオマー塩型は、その後、例えば、選択的または分別再結晶により分離され、アルカリによりそこからエナンチオマーが遊離する。式（Ｉ）の化合物のエナンチオマー型を分離する別の方法には、キラル固定相を用いた液体クロマトグラフィーが含まれる。前記の純粋な立体化学的異性体型はまた、反応が立体特異的に起こる限りにおいて、対応する適切な出発材料の純粋な立体化学的異性体型から誘導し得る。特定の立体異性体が望まれる場合、前記化合物は立体特異的調製方法により合成されるのが好ましい。これらの方法は、鏡像異性的に純粋な出発材料を用いるのが好都合である。本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物および出発材料および／または中間体の調製では、反応条件の影響を受けやすい特定の基を保護することが有用な場合がある。本発明の化合物の調製で実施される反応および保護される官能基に応じた、任意選択の保護の有用性、および好適な保護剤の選択の評価は、当業者の一般的な知識の範囲内のものである。任意選択の保護基の除去は、従来技術に従って実施される。有機化学における保護基の使用に対する全般的文献としては、Ｔｈｅｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ  “Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＩＩ  Ｅｄ．，１９９１を参照されたい。
【００５０】
式（Ｉ）の化合物の塩の調製は、既知の方法により実施される。このように、式（Ｉ）の本化合物は、医薬、特にＰ２Ｘ７受容体、特にＰ２Ｘ７受容体アンタゴニスト活性により媒介される状態または疾患の治療における医薬として有用である。さらに、本化合物は、Ｐ２Ｘ７受容体活性、特にＰ２Ｘ７受容体アンタゴニスト活性により媒介される状態または疾患の治療のための医薬の製造に使用し得る。
【００５１】
本発明はまた、Ｐ２Ｘ７受容体媒介状態または疾患から選択される状態または疾患の治療のための薬物の製造のための式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容可能なその塩の使用も提供する。ある実施形態では、本発明は、Ｐ２Ｘ７受容体媒介状態または疾患から選択される状態または疾患の治療における医薬としての使用のための、またはその治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物を提供する。さらに、本発明はまた、哺乳動物対象の、Ｐ２Ｘ７受容体活性により媒介される状態の治療の方法を提供し、該方法は、このような治療を必要としている哺乳動物に治療有効量の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容可能なその塩を投与することを含む。上記の作用機序を考慮すると、本発明の化合物は、アルツハイマー病およびその他の認知症状態、例えば、レビー小体、前頭側頭型認知症およびタウオパチー；筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、パーキンソン病およびその他のパーキンソン症候群；ＨＩＶ誘発性神経炎症；本態性振戦；その他の脊髄小脳変性症およびシャルコー・マリー・トゥース病などの種々の起源の神経変性障害の治療に有用である。本発明の化合物はまた、単純部分発作、複雑部分発作、二次性全般化発作を含み、欠神発作、ミオクローヌス発作、間代性てんかん発作、強直性発作、強直間代発作および弛緩性発作をさらに含む、てんかんなどの神経学的状態の治療にも有用である。
【００５２】
本発明の化合物はまた、認知障害および精神障害の治療にも有用である。精神障害には、限定されないが、大うつ病、気分変調症、躁病、双極性障害（双極性障害Ｉ型、双極性障害ＩＩ型など）、気分循環性障害、急速交代型、日内交代型、躁病、軽躁病、統合失調症、統合失調症様障害、統合失調感情障害、人格障害、多動性の伴うまたは伴わない注意障害、妄想性障害、短期精神病、共有精神病性障害、一般身体疾患による精神病性障害、物質誘発性精神病性障害または特定不能の精神病性障害、全般性不安障害などの不安障害、パニック障害、外傷後ストレス障害、衝動制御障害、恐怖症、解離状態、さらに、喫煙、薬物依存およびアルコール中毒が挙げられる。特に、双極性障害、精神障害、不安症および依存症。
【００５３】
本発明の化合物は、神経障害性疼痛の予防または治療に有用である。神経障害性疼痛症候群には、限定されないが、糖尿病性神経障害；坐骨神経痛；非特異的腰痛；多発性硬化症疼痛；線維筋痛症；ＨＩＶ関連神経障害；神経痛、例えば、帯状疱疹後神経痛および三叉神経痛、モートン神経痛、灼熱痛；および身体外傷、肢切断、幻肢、癌、毒素または慢性炎症状態から生じた疼痛；中枢性疼痛、例えば、視床症候群で観察される疼痛；中枢および末梢混合型の疼痛、例えば、反射性交感神経性ジストロフィーとも呼ばれる複合性局所疼痛症候群（ＣＲＰＳ）が挙げられる。
【００５４】
本発明の化合物はまた、慢性疼痛の治療にも有用である。慢性疼痛には、限定されないが、炎症または炎症性の関連状態、変形性膝関節炎、関節リウマチ、急性傷害または外傷が原因の慢性疼痛、上背部痛または腰痛（全身的、局所的または原発的な脊椎疾患、例えば、神経根症から生じた）、骨痛（変形性関節症、骨粗鬆症、骨転移または未知の理由による）、骨盤痛、脊髄傷害関連疼痛、心臓性胸痛、非心臓性胸痛、中枢性脳卒中後疼痛、筋筋膜痛、鎌状赤血球疼痛、癌性疼痛、ファブリー病、ＡＩＤＳ疼痛、老人性疼痛、または頭痛、顎関節症候群、痛風、繊維化または胸郭出口症候群、特に、関節リウマチおよび変形性関節症によって引き起こされる疼痛が挙げられる。
【００５５】
本発明の化合物はまた、急性傷害により引き起こされる急性疼痛、疾病、スポーツ医学傷害、手根管症候群、熱傷、筋骨格捻挫、および筋挫傷、筋腱挫傷、頸腕部疼痛症候群、消化不良、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、月経困難症、子宮内膜症または手術（直視下心臓手術またはバイパス手術など）、術後疼痛、腎結石疼痛、胆嚢疼痛、胆石疼痛、陣痛または歯痛の治療に有用である。
【００５６】
本発明の化合物はまた、片頭痛、緊張型頭痛、変容性片頭痛または進化性頭痛、群発頭痛、ならびに二次頭痛障害、例えば、感染症、代謝障害またはその他の全身性疾病に由来する頭痛、および上述原発性および二次頭痛の悪化に由来するその他の急性頭痛、発作性片側頭痛などの頭痛の治療に有用である。
【００５７】
本発明の化合物はまた、めまい、耳鳴り、筋痙攣、および、限定されないが、心臓血管疾患（心不整脈、心臓梗塞または狭心症、高血圧、心臓虚血、脳虚血など）、内分泌障害（末端肥大症または尿崩症など）、障害の病態生理学が過度のまたは分泌過剰のあるいは適切でない内在性物質（例えば、カテコールアミン、ホルモンまたは増殖因子）の細胞分泌を伴う疾患を含むその他の障害などの疾患の治療にも有用である。
【００５８】
本発明の化合物はまた、炎症性肝疾患、例えば、慢性Ｂ型ウイルス性肝炎、慢性Ｃ型ウイルス性肝炎、アルコール性肝障害、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎、肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎および肝移植拒絶反応などの肝疾患の選択的治療にも有用である。
【００５９】
本発明の化合物は全ての体組織に影響する炎症過程を阻害する。したがって、筋肉・骨格組織の炎症過程の治療に有用であり、次記に例を記載するが全ての当該障害を網羅するものではない：強直性脊椎炎、頸部の関節炎、線維筋痛症、痛風、若年性関節リウマチ、腰仙骨関節炎変形性関節症、変形性関節症、骨粗鬆症、乾癬性関節炎、リウマチ性疾患などの関節炎状態；皮膚および関連組織に影響を与える障害：湿疹、乾癬、皮膚炎および日焼けなどの炎症状態；呼吸系の障害：喘息、アレルギー性鼻炎および呼吸促迫症候群、喘息および気管支炎などの炎症を伴う肺障害；慢性閉塞性肺疾患；免疫および内分泌系障害：結節性動脈周囲炎、甲状腺炎、再生不良性貧血、強皮症、重症筋無力症、多発性硬化症およびその他の脱髄疾患、脳脊髄炎、サルコイドーシス、腎炎症候群、ベーチェット症候群、多発性筋炎、歯肉炎。
【００６０】
本発明の化合物はまた、胃腸（ＧＩ）管障害、例えば、限定されないが、潰瘍性大腸炎、クローン病、回腸炎、直腸炎、セリアック病、腸疾患、顕微鏡的またはコラーゲン大腸炎、好酸球性胃腸炎、または直腸結腸切除術後のおよび回腸吻合後に生じる回腸嚢炎、および幽門痙攣、神経性消化不良、痙性結腸、大腸痙攣、痙攣性腸、腸神経症、機能性大腸炎、粘液結腸炎、下痢性腸炎および機能性消化不良などの腹痛および／または腹部不快感に関連する任意の障害を含む過敏性腸症候群を含む炎症性大腸疾患の治療に有用であるが、また、萎縮性胃炎、胃炎性バリアロホルム、潰瘍性大腸炎、消化性潰瘍、胸やけ、および、例えば、ヘリコバクター・ピロリ、胃食道逆流症、糖尿病性胃不全麻痺などの胃不全麻痺によるＧＩ管へのその他の損傷；および非潰瘍性胃腸障害（ＮＵＤ）；嘔吐、下痢、および内臓炎症などのその他の機能性腸障害の治療にも有用である。
【００６１】
本発明の化合物はまた、過活動膀胱、前立腺炎（慢性細菌性前立腺炎および慢性非細菌性前立腺炎）、前立腺痛、間質性膀胱炎、尿失禁および前立腺肥大、付属器炎、骨盤炎症、バルトリン腺炎および腟炎などの尿生殖器の障害の治療にも有用である。特に、過活動膀胱および尿失禁。
【００６２】
本発明の化合物はまた、網膜炎、網膜症、ぶどう膜炎および眼組織に対する急性傷害、加齢黄斑変性または緑内障、結膜炎などの眼疾患の治療にも有用である。
【００６３】
本発明の化合物はまた、サブタイプの制限型およびむちゃ食い／排出型を含む神経性食欲不振症などの摂食障害；サブタイプの排出型および非排出型を含む神経性過食症；肥満症；過食症；気晴らし食い症候群；および特定不能の摂食障害の治療にも有用である。
【００６４】
本発明の化合物はまた、アレルギー性皮膚炎、気道過敏性、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支炎、敗血性ショック、シェーグレン症候群、糸球体腎炎、アテローム性動脈硬化症、悪性細胞の増殖と転移、骨髄芽球性白血病、糖尿病、髄膜炎、骨粗鬆症、熱傷、虚血性心疾患、脳卒中、末梢血管疾患、静脈瘤、緑内障の治療にも有用である。
【００６５】
本明細書で使用される場合、用語の、「治療すること」および「治療」は、このような用語が適用される疾患、障害または状態の進展、もしくはこのような疾患、障害または状態の１つまたは複数の症状の逆転、軽減、阻害、または予防を含む、治癒的、対症療法的および予防的処置を意味する。
【００６６】
さらに、本発明は、少なくとも１種の薬学的に許容可能なキャリアおよび治療有効量の式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００６７】
本発明の医薬組成物を調製するために、有効成分としての有効量の塩基または酸付加塩型の特定の化合物が、少なくとも１種の薬学的に許容可能なキャリアと均質な混合物に混合され、このキャリアは、投与にとって望ましい剤形に応じて、多種多様の形態を取り得る。これらの医薬組成物は、好ましくは、経口投与、直腸投与、経皮投与または非経口注入に好適する単一の剤形であることが望ましい。
【００６８】
例えば、経口剤形の組成物の調製では、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤および液剤などの経口液体製剤の場合には、例えば、水、グリコール、油、アルコールなどの任意の通常の液体医薬キャリアを使用し得、または粉剤、丸薬、カプセル剤および錠剤の場合には、デンプン、糖類、カオリン、潤滑剤、結合物質、崩壊剤などの固体医薬キャリアを使用し得る。錠剤およびカプセル剤は、投与におけるそれらの容易さのために、最も都合のよい経口単位剤形であり、この場合、固形の医薬キャリアを当然用いる。非経口注入組成物では、医薬キャリアは主に、滅菌水を含むことになるが、その他の成分も有効成分の溶解度を改善するために含め得る。
【００６９】
注入可能な液剤は、例えば、食塩水、グルコース溶液またはこれらの混合物を含む医薬キャリアを用いて調製し得る。注射可能な懸濁液を調製することもでき、その場合、適切な液体キャリア、懸濁化剤などを用い得る。経皮投与に好適する組成物では、医薬キャリアは、必要に応じ、浸透促進剤および／または好適な湿潤剤を、必要に応じ、皮膚に大きな有害作用を生じない少量の好適な添加剤と組み合わせて含み得る。前記添加剤は、有効成分の皮膚への投与を容易にするようにおよび／または目的の組成物の調製を助けるように選択し得る。これらの局所適用組成物は、種々の手段、例えば、経皮貼付剤、スポットオンまたは軟膏として、投与し得る。式（Ｉ）の化合物の付加塩は、対応する塩基型に比べてこれらの水溶性が増加しているために、当然ながら水性組成物の製剤としてより好適する。
【００７０】
投与を容易にするために、また投薬量を一様にするために、本発明の医薬組成物を投与単位剤形として処方することが特に有利である。
【００７１】
本明細書で使用される場合、「投与単位剤形」は、単位投与量として好適する物理的に別々の単位を意味し、各単位は、必要な医薬キャリアと組み合わせた目的の治療効果を生ずるように計算された所定の量の有効成分を含有する。このような投与単位剤形の例は、錠剤（分割錠または被覆錠剤を含む）、カプセル剤、丸薬、粉剤小包、ウエハ、注入可能な液剤または懸濁剤、茶さじ量、大さじ量など、およびこれらの複数個の分割物である。
【００７２】
経口投与の場合、本発明の医薬組成物は、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）、充填剤（例えば、ラクトース、結晶セルロース、またはリン酸水素カルシウムなど）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、またはシリカなど）、崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウムなど）、または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容可能な賦形剤およびキャリアを用いて従来の手段により調製された固体投与剤形、例えば、錠剤（飲み込み型および咀嚼型の両方）、カプセル剤またはジェルカプセル剤の形態を取り得る。このような錠剤はまた、当該技術分野において周知の方法により被覆し得る。
【００７３】
経口投与用の液体製剤は、例えば、液剤、シロップ剤、もしくは懸濁剤の形態をとることが可能であり、またはそれらの製剤は、使用前に水および／または別の適切な液体キャリアを用いて混合するための乾燥製品として処方し得る。このような液体製剤は、必要に応じ、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたは水素化食用油脂）、乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）、非水性キャリア（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール）、甘味料、香味料、マスキング剤および防腐剤（例えば、メチルもしくはプロピル−ｐ−ヒドロキシ安息香酸またはソルビン酸）などのその他の薬学的に許容可能な添加剤を用いて、従来の方法により調製し得る。
【００７４】
本発明の医薬組成物で有用な薬学的に許容可能な甘味料は、好ましくは少なくとも１種の高甘味度甘味料、例えば、アスパルテーム、アセスルファムカリウム、シクラミン酸ナトリウム、アリターム、ジヒドロカルコン甘味料、モネリン、ステビオシドスクラロース（４，１’，６’−トリクロロ−４，１’，６’−トリデオキシガラクトスクロース）または、好ましくはサッカリン、ナトリウムまたはカルシウムサッカリン、および場合により、少なくとも１種のバルク甘味料、例えば、ソルビトール、マンニトール、フルクトース、ショ糖、マルトース、イソマルト、グルコース、水素添加グルコースシロップ、キシリトール、カラメルまたは蜂蜜を含む。高甘味度甘味料は、低濃度で使用されるのは好都合である。例えば、ナトリウムサッカリンの場合では、前記濃度は、最終製剤の約０．０４％〜０．１％（重量／体積）の範囲であり得る。バルク甘味料は、約１０％〜約３５％、好ましくは約１０％〜約１５％（重量／体積）の範囲のより高い濃度で効果的に使用できる。低投与量配合で苦味成分をマスクできる薬学的に許容可能な香味料は、サクランボ、ラズベリー、カシスまたはストロベリー香味料を含むのが好ましい。２種の香味料の組み合わせが非常に良好な結果を生じ得る。高投与量配合では、より強力な薬学的に許容可能な香味料、例えば、カラメルチョコレート、ミントクール、ファンタジーなどが必要となり得る。
【００７５】
それぞれの香味料は、最終組成物中に、約０．０５％〜１％（重量／体積）の範囲の濃度で存在し得る。前記強力香味料の組み合わせが使用されるのが好都合である。製剤の環境下で、何らの変化を受けないまたは味覚および／または色の消失がない香味料が使用されるのが好ましい。
【００７６】
式（Ｉ）の化合物は、注入による非経口投与、都合よく静脈内、筋肉内または皮下注射のための、例えば、ボーラス注入または連続的な静脈内注入のための投与用として処方し得る。注入用の製剤は、単位剤形、例えば、アンプル、または防腐剤を添加した複数回投与用容器で提供し得る。製剤は、懸濁液、溶液または油もしくは水ビークル中の乳剤などの形態を取ってよく、等張化剤、懸濁剤、安定化剤および／または分散剤などの製剤化剤を含めてもよい。あるいは、有効成分は、好適なビークル、例えば、無菌の発熱性物質非含有水を使用前に用いて混合するための粉末形態で存在してもよい。
【００７７】
式（Ｉ）の化合物は、例えば、ココアバターおよび／または他のグリセリドなどの従来の座薬基剤を含む、座薬または停留浣腸剤などの直腸用組成物として処方してもよい。
【００７８】
リガンド開口型イオンチャネルの媒介と関連する疾患の治療の当業者なら、以降で提示する試験結果から、式（Ｉ）の化合物の治療有効量を容易に決定するであろう。一般に、治療有効量は、約０．００１ｍｇ／（治療患者のｋｇ体重）〜約５０ｍｇ／（治療患者のｋｇ体重）、より好ましくは、約０．０１ｍｇ／（治療患者のｋｇ体重）〜約１０ｍｇ／（治療患者のｋｇ体重）となるであろうということが意図されている。治療有効量を、２つ以上の分割用量の形で、その日全体を通して適切な間隔で投与するのが適切であり得る。前記分割用量は、例えば、単位剤形当たり、約０．１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、より具体的には、約１〜約５００ｍｇの有効成分を含む単位剤形として、処方し得る。
【００７９】
本明細書で使用される場合、化合物の「治療有効量」は、個体または動物に投与した場合、個体または動物中に充分に高レベルのその化合物をもたらし、識別可能なＰ２Ｘ７受容体アンタゴニスト反応を生じる化合物の量である。
【００８０】
正確な投与量および投与頻度は、当業者によく知られているように、使用される特定の式（Ｉ）の化合物、治療される特定の状態、治療される状態の重症度、特定の患者の年齢、体重および全身健康状態ならびにその患者が服用しているその他の薬物に依存する。さらに、前記「治療有効量」は、治療された患者の反応に応じておよび／または本発明の化合物の処方医師の評価に応じて、減少または増加され得る。したがって、上述の効果的な毎日の量の範囲は、ガイドラインにすぎない。
【００８１】
命名法および構造
一般に、本出願で使われる命名法は、ＣｈｅｍＳｋｅｔｃｈ（登録商標）（ＡＣＤＬａｂｓ）に基づいており、ＩＵＰＡＣ系統的命名法に従って生成される。本明細書で示す化学構造は、ＩＳＩＳ（登録商標）バージョン２．２を用いて作成した。特に指示がない限り、本明細書の構造中の炭素、酸素、硫黄、または窒素原子上に現れるいずれの開放原子価も水素原子の存在を示す。窒素含有ヘテロアリール環が窒素原子上の開放原子価で示され、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３などの変数がヘテロアリール環上で示される場合、このような変数は、開放原子価の窒素に結合または連結してよい。キラル中心が構造中に存在するが、キラル中心に関する特定の立体化学が示されない場合、そのキラル中心に関連する両方のエナンチオマーがその構造により包含される。本明細書で示される構造が複数の互変異性型で存在し得る場合、全てのこのような互変異性体がその構造により包含される。本明細書で、構造中に表される原子は、このような原子の全ての天然の同位体を包含することが意図されている。したがって、例えば、本明細書で表される水素原子は、重水素およびトリチウムを含むことが意図され、炭素原子は、１３Ｃおよび１４Ｃ同位体を含むことが意図されている。
【００８２】
略語
以降のスキームおよび実施例の記載で使用され得る略語は下記の通りである。
ＡｃＯＨ：酢酸
Ａｎｈ：無水
ＡｃＯＮａ：酢酸ナトリウム
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブチルカーボネート
Ｂｏｃ２Ｏ：ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート
ＣＣ：カラムクロマトグラフィー
ＤＡＳＴ：ジエチルアミノサルファートリフルオリド
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＥＡ：ジエチルアミン
ＤＩＡＤ：ジイソプロピルアゾジカルボキシレート
ＤＩＢＡＬ：ジイソブチルアルミニウムヒドリド
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ：ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
ＥＳＩ：エレクトロスプレーイオン化
ＨＢＴＵ：Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ｈ：時間
Ｈｒｓ：時間
Ｍ：モル
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
ＭｅＯＨ：メタノール
Ｍｉｎ：分
Ｎｉ−Ｒａｎｅｙ：ラネーニッケル
ＮＭＲ：核磁気共鳴
ｒｔ：室温
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＴＭＳＣＮ：トリメチルシリルシアニド
ＵＰＬＣ−ＭＳ：超高速液体クロマトグラフィー−質量分析計
ＸＰｈｏｓ：４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン
【００８３】
実験
次の実施例は、本発明を例示するものである。明示的に別義が示されない限り、全ての詳細事項（特にパーセンテージおよび量）は重量基準である。
【００８４】
合成実施例
Ａ．中間体１ｂ〜１ｄの合成
【００８５】
【表５】
2019524750.tif 000014
【００８６】
塩化スルフリル（１．２３ｍＬ、１５．２ｍｍｏｌ、１．０１当量）を、エチル  ４，４−ジフルオロアセトアセテート（２．５ｇ、１５．０ｍｍｏｌ、１当量）に窒素雰囲気下、０℃で滴加し、室温で一晩撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、氷／水混合物（２０ｍＬ）に注ぎ込んだ。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥後、濾過および留去して３．２ｇの粗製２−クロロ−４，４−ジフルオロアセトアセテートを黄色油として得た。粗製物をエタノール（１０ｍＬ）中に溶解し、チオ尿素（３．２ｇ、３０ｍｍｏｌ、２当量）で処理し、マイクロ波反応器中、１００℃で１時間加熱した。その後、溶媒を減圧下で除去し、残留物をＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）の間で分配した。有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥後、濾過、留去した。粗製物をジエチルエーテルで処理し、濾過後減圧下で乾燥して、１．３７ｇ（収率４１％）の中間体１ｂを黄色固体として得た。
【００８７】
【表６】
2019524750.tif 000015
【００８８】
中間体１ｂ（１．３７ｇ、６．１６ｍｍｏｌ、１当量）をジオキサン（３５ｍＬ）中に溶解し、亜硝酸イソアミル（２．２４ｍＬ、１６．６４ｍｍｏｌ、２．７当量）を加え、反応混合物を８０℃で１時間加熱した。溶媒を減圧下で留去し、残留物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／石油エーテル  １０／９０）で精製して中間体１ｃ（１．０２ｇ、収率８０％）を黄色固体として得た。
【００８９】
【表７】
2019524750.tif 000016
【００９０】
中間体１ｃ（０．７５８ｇ、３．６６ｍｍｏｌ、１当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＣＭ（１８．５ｍＬ）中に溶解し、−７５℃に冷却した。ＤＣＭ中１Ｍのジイソブチルアルミニウムヒドリド（４．１ｍＬ、４．１ｍｍｏｌ、１．１２当量）を滴加し、反応混合物を−７０℃で撹拌した。１．５時間後、ＤＣＭ中１Ｍのジイソブチルアルミニウムヒドリド（２．５ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ、０．６８当量）を滴加し、反応混合物を−７０℃でさらに１時間撹拌した。反応物を０℃に温め、水（０．２６４ｍＬ）、１５％ＮａＯＨ（０．２６４ｍＬ）および水（０．６６ｍＬ）をこの順序で処理した。その後、これを０℃で５分間撹拌した後、室温で３０分間攪拌した。水（０．２４ｍＬ）、続けて１５％ＮａＯＨ（０．１３０ｍＬ）を順次加え、室温で沈殿物が形成されるまで反応物を撹拌した。混合物を濾過した後、溶媒を濃縮した。残留物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／石油エーテル  ８０／２０  →  １００％ＤＣＭ）で精製して中間体１ｄ（純度  約７０％）を含有する黄色油（０．３４ｍｇ、収率４０％）を得て、これをそのまま使用した。
【００９１】
Ｂ．中間体：α−アミノニトリルの合成
出発材料
出発材料として使用した下記の全ての、置換４−フェニルオキシピペリジンまたは４−ベンジルオキシピペリジン誘導体および４−メチル−１，３−チアゾール−５−カルバルデヒドを化学薬品提供者から購入した。
【００９２】
【表８】
2019524750.tif 000017
【００９３】
一般的手順
４−置換ピペリジン誘導体の塩酸塩（１当量）を２〜３ｍＬのＤＣＭに懸濁し、ＴＥＡ（１．１〜２当量）を加えた。混合物を数分間撹拌し、溶媒をロータリーエバポレーターで蒸発させ、残留物を４０℃で１５分間、真空乾燥した。塩酸塩不含アミン（１当量）、チアゾリルアルデヒド（１８０〜３００ｍｇ、１．２〜１．５当量）、およびＡｃＯＮａ（３．５当量）を氷酢酸（５〜８ｍＬ）に溶解した。混合物をアルゴン下、室温で３時間攪拌した後、０℃に冷却した。ＴＭＳＣＮ（３〜１２当量）を滴加し、混合物を室温まで暖め、１〜３日間撹拌した。その間に、ＬＣ−ＭＳ分析の結果から必要があれば、ＴＭＳＣＮ（３〜６当量）を加え（ＴＭＳＣＮが１２当量になるまで）、反応物を２４時間撹拌した。その後、溶媒を４０〜４５℃でロータリーエバポレーターを用いて蒸発させた。ＮａＨＣＯ３の飽和溶液（２０〜５０ｍＬ）を残留物に加えた。必要に応じ、ｐＨを８に高めるために、固体ＮａＨＣＯ３および水を加えた。混合物をＤＣＭで抽出した（５ｍＬｘ３〜５）。合わせた有機相を乾燥し（無水Ｎａ２ＳＯ４）、留去した。粗製物を、ヘキサン／アセトン混合物（０→３０％）を用いてフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２）で精製し、純粋なα−アミノニトリル（２８〜６８％収率）を得た。
【００９４】
この手順を用いて、中間体Ａ００１８＿４２＿０１（収率５４％）、Ａ００１８＿４２＿０２（収率５５％）、Ａ００１８＿４２＿０３（収率５５％）、Ａ００１８＿４２＿０４（収率４２％）、Ａ００１８＿４２＿０５（収率６３％）、Ａ００１８＿４２＿０６（収率５０％）、Ａ００１８＿４１＿０１（収率４５％）、Ａ００１８＿４１＿０２（収率６０％）、Ａ００１８＿４１＿０３（収率４６％）、Ａ００１８＿４１＿０４（収率６８％）、Ａ００１８＿４１＿０５（収率６５％）、Ａ００１８＿４１＿０６（収率４３％）、Ａ００ＦＦ＿４２＿０４（収率３０％）、Ａ００ＦＦ＿４２＿０５（収率５６％）、Ａ００ＦＦ＿４２＿０６（収率３６％）、Ａ００ＦＦ＿４１＿０１（収率３１％）、Ａ００ＦＦ＿４１＿０２（収率５７％）、Ａ００ＦＦ＿４１＿０３（収率５３％）、Ａ００ＦＦ＿４１＿０４（収率５３％）、Ａ００ＦＦ＿４１＿０５（収率２８％）を、４−メチル−１，３−チアゾール−５−カルバルデヒドまたは、それぞれ、４−ジフルオロメチル−１，３−チアゾール−５−カルバルデヒドおよび４−（４−フルオロベンジルオキシピペリジン）、４−（４−クロロベンジルオキシピペリジン）、４−（３−フルオロベンジルオキシピペリジン）、４−（２−フルオロベンジルオキシピペリジン）、４−（３，５−ジフルオロベンジルオキシピペリジン）、４−（３，４−ジフルオロベンジルオキシピペリジン）、４−（４−フルオロフェニルオキシピペリジン）、４−（４−クロロフェニルオキシピペリジン）、４−（３−フルオロフェニルオキシピペリジン）、４−（２−フルオロフェニルオキシピペリジン）、４−（３，５−ジフルオロフェニルオキシピペリジン）または４−（３，４−ジフルオロフェニルオキシピペリジン）から調製した。
【００９５】
【表９】
2019524750.tif 000018
【００９６】
Ｃ．ジアミンの調製（一般的手順）
シアン化物誘導体（１００〜２７０ｍｇ、１当量）をアルゴン雰囲気下で乾燥ＤＣＭ中に溶解し、氷塩中で冷却した。ＤＣＭ中の１ＭのＤＩＢＡＬ（３当量）の溶液をゆっくりと添加し（３０分毎に１当量ずつを何度かに分けて）、混合物をさらに１時間撹拌した。この溶液（０℃）に、水（１ｍＬ）を滴加し、混合物を沈殿物の形成が完了するまで撹拌した。ＤＣＭを減圧下で除去し、残留物をＡｃＯＥｔ中に懸濁した。得られた固体を濾過し、ＡｃＯＥｔで４〜６回洗浄した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、留去して油状残留物を得て、減圧下、３８〜４０℃で１時間以上乾燥した。粗生成物（６８〜９７％収率）を追加の精製をすることなく次の合成ステップで使用した。
【００９７】
この手順を用いて、
中間体Ａ００１７＿５９＿０１（収率９４％）を、Ａ００１８＿４２＿０１から出発して調製した；
中間体Ａ００１７＿５９＿０２（収率８３％）を、Ａ００１８＿４２＿０２から出発して調製した；
中間体Ａ００１７＿５９＿０３（収率８７％）を、Ａ００１８＿４２＿０３から出発して調製した；
中間体Ａ００１７＿５９＿０４（収率９７％）を、Ａ００１８＿４２＿０４から出発して調製した；
中間体Ａ００１７＿５９＿０５（収率６５％）を、Ａ００１８＿４２＿０５から出発して調製した；
中間体Ａ００１７＿５９＿０６（収率８８％）を、Ａ００１８＿４２＿０６から出発して調製した；
中間体Ａ００１７＿５８＿０１（収率６２％）を、Ａ００１８＿４１＿０１から出発して調製した；
中間体Ａ００１７＿５８＿０２（収率９５％）を、Ａ００１８＿４１＿０２から出発して調製した；
中間体Ａ００１７＿５８＿０３（収率６７％）を、Ａ００１８＿４１＿０３から出発して調製した；
中間体Ａ００１７＿５８＿０４（収率８９％）を、Ａ００１８＿４１＿０４から出発して調製した；
中間体Ａ００１７＿５８＿０５（収率８０％）を、Ａ００１８＿４１＿０５から出発して調製した；
中間体Ａ００１７＿５８＿０６（収率９５％）を、Ａ００１８＿４１＿０６から出発して調製した；
中間体Ａ００ＦＦ＿５９＿０４（収率８７％）を、Ａ００ＦＦ＿４２＿０４から出発して調製した；
中間体Ａ００ＦＦ＿５９＿０５（収率８１％）を、Ａ００ＦＦ＿４２＿０５から出発して調製した；
中間体Ａ００ＦＦ＿５９＿０６（収率８０％）を、Ａ００ＦＦ＿４２＿０６から出発して調製した；
中間体Ａ００ＦＦ＿５８＿０１（収率８９％）を、Ａ００ＦＦ＿４１＿０１から出発して調製した；
中間体Ａ００ＦＦ＿５８＿０２（収率９４％）を、Ａ００ＦＦ＿４１＿０２から出発して調製した；
中間体Ａ００ＦＦ＿５８＿０３（収率８８％）を、Ａ００ＦＦ＿４１＿０３から出発して調製した；
中間体Ａ００ＦＦ＿５８＿０４（収率９２％）を、Ａ００ＦＦ＿４１＿０４から出発して調製した；
中間体Ａ００ＦＦ＿５８＿０５（収率９３％）を、Ａ００ＦＦ＿４１＿０５から出発して調製した。
【００９８】
【表１０】
2019524750.tif 000019
【００９９】
Ｄ．最終化合物の合成のための一般的手順
化合物１〜３８の調製
カルボン酸（２５〜１１５ｍｇ、１当量）、ＨＡＴＵ（１．１当量）またはＥＤＣｌ（１当量）／ＨＯＢｔ（１当量）およびＤＩＰＥＡ（２〜３当量）の無水ＤＭＦまたはＤＣＭ（１〜２ｍＬ）中混合物を、アルゴン雰囲気下で１０〜３０分間撹拌した。その後、粗製アミン（１当量）の無水ＤＣＭまたはＤＭＦ（１〜３ｍＬ）中の溶液を加え、反応混合物を一晩撹拌した。水および飽和ＮａＨＣＯ３を加え、生成物をＤＣＭで４〜６回抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、留去した。生成物をＦＣＣ（ＳｉＯ２、ＤＣＭ→ＡｃＯＥｔ→０〜１０ＭｅＯＨ／ＡｃＯＥｔ）またはＳＦＣ（５〜１０％ＭｅＯＨ／ｓｃＣＯ２）により精製し、目的の生成物を含む画分を留去し、高真空下で１６〜７２時間乾燥した。収率８〜７１％。
【０１００】
この手順を用いて、
化合物１（収率１９％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５９＿０１から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
化合物２（収率１９％）を、ＤＭＦ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５９＿０２から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
化合物３（収率２３％）を、ＤＣＭ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＥＤＣｌ／ＨＯＢｔおよびＡ００１７＿５９＿０３から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
化合物４（収率３０％）を、ＤＭＦ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５９＿０４から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
化合物５（収率１６％）を、ＤＭＦ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５９＿０５から出発し、ＦＣＣに続けてＳＦＣで精製して調製した；
化合物６（収率１２〜１８％）を、ＤＣＭまたはＤＭＦ＋ＤＣＭ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＥＤＣｌ／ＨＯＢｔまたはＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５９＿０６から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
化合物７（収率１６％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５８＿０１から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
化合物８（収率１３〜１６％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭまたはＤＭＦ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５８＿０２から出発し、ＳＦＣに続けてＦＣＣで精製して調製した；
化合物９（収率４８％）を、ＤＭＦ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５８＿０３から出発し、ＦＣＣで精製して調製した；
化合物１０（収率１２％）を、ＤＭＦ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５８＿０４から出発し、ＦＣＣで精製して調製した；
化合物１１（収率８％）を、ＤＭＦ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５８＿０５から出発し、ＦＣＣに続けてＳＦＣで精製して調製した；
化合物１２（収率２９％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５８＿０６から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
化合物１３（収率２８％）を、ＤＣＭ中のキノリン−５−カルボン酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５９＿０１から出発し、ＦＣＣで精製して調製した；
化合物１４（収率２５％）を、ＤＭＦ中のキノリン−５−カルボン酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５９＿０２から出発し、ＦＣＣで精製して調製した；
化合物１５（収率３２％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中のキノリン−５−カルボン酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５９＿０３から出発し、ＦＣＣで精製して調製した；
化合物１６（収率３１％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中のキノリン−５−カルボン酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５９＿０４から出発し、ＦＣＣで精製して調製した；
化合物１７（収率２９％）を、ＤＭＦ中のキノリン−５−カルボン酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５９＿０５から出発し、ＦＣＣで精製して調製した；
化合物１８（収率２０％）を、ＤＣＭ中のキノリン−５−カルボン酸、ＥＤＣｌ／ＨＯＢｔおよびＡ００１７＿５９＿０６から出発し、ＦＣＣで精製して調製した；
化合物１９（収率２８％）を、ＤＭＦ中のキノリン−５−カルボン酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５８＿０１から出発し、ＦＣＣで精製して調製した；
化合物２０（収率２７％）を、ＤＭＦ中のキノリン−５−カルボン酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５８＿０２から出発し、ＦＣＣで精製して調製した；
化合物２１（収率７１％）を、ＤＭＦ中のキノリン−５−カルボン酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５８＿０３から出発し、ＦＣＣで精製して調製した；
化合物２２（収率２５％）を、ＤＭＦ中のキノリン−５−カルボン酸、ＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５８＿０４から出発し、ＦＣＣで精製して調製した；
化合物２３（収率１５％）を、ＤＣＭ中のキノリン−５−カルボン酸、ＥＤＣｌ／ＨＯＢｔおよびＡ００１７＿５８＿０５から出発し、ＦＣＣで精製して調製した；
化合物２４（収率１７〜２７％）を、ＤＣＭまたはＤＭＦ＋ＤＣＭ中のキノリン−５−カルボン酸、ＥＤＣｌ／ＨＯＢｔまたはＨＡＴＵおよびＡ００１７＿５８＿０６から出発し、ＦＣＣで精製して調製した；
化合物２５（収率３０％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＨＡＴＵおよびＡ００ＦＦ＿５９＿０４から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
化合物２６（収率１９％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＨＡＴＵおよびＡ００ＦＦ＿５９＿０５から出発し、二つのＦＣＣで精製して調製した；
化合物２７（収率２６％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＨＡＴＵおよびＡ００ＦＦ＿５９＿０６から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
化合物２８（収率１９％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＨＡＴＵおよびＡ００ＦＦ＿５８＿０２から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
化合物２９（収率２２％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＨＡＴＵおよびＡ００ＦＦ＿５８＿０３から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
化合物３０（収率３０％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＨＡＴＵおよびＡ００ＦＦ＿５８＿０４から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
化合物３１（収率２９％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中の２−クロロ−６−フルオロ安息香酸、ＨＡＴＵおよびＡ００ＦＦ＿５８＿０５から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
化合物３２（収率３０％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中のキノリン−５−カルボン酸、ＨＡＴＵおよびＡ００ＦＦ＿５９＿０４から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
化合物３３（収率３１％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中のキノリン−５−カルボン酸、ＨＡＴＵおよびＡ００ＦＦ＿５９＿０５から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
化合物３４（収率３４％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中のキノリン−５−カルボン酸、ＨＡＴＵおよびＡ００ＦＦ＿５８＿０１から出発し、ＦＣＣに続けてＳＦＣで精製して調製した；
化合物３５（収率１９％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中のキノリン−５−カルボン酸、ＨＡＴＵおよびＡ００ＦＦ＿５８＿０２から出発し、ＳＦＣに続けてＦＣＣで精製して調製した；
化合物３６（収率２２％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中のキノリン−５−カルボン酸、ＨＡＴＵおよびＡ００ＦＦ＿５８＿０３から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
化合物３７（収率２２％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中のキノリン−５−カルボン酸、ＨＡＴＵおよびＡ００ＦＦ＿５８＿０４から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
化合物３８（収率３５％）を、ＤＭＦ＋ＤＣＭ中のキノリン−５−カルボン酸、ＨＡＴＵおよびＡ００ＦＦ＿５８＿０５から出発し、ＳＦＣで精製して調製した；
【０１０１】
表１１−１８は、実施例１に記載した実験手順に従って調製および試験した最終化合物を示す。
【０１０２】
【表１１】
2019524750.tif 000020
【０１０３】
【表１２】
2019524750.tif 000021
【０１０４】
【表１３】
2019524750.tif 000022
【０１０５】
【表１４】
2019524750.tif 000023
【０１０６】
【表１５】
2019524750.tif 000024
【０１０７】
【表１６】
2019524750.tif 000025
【０１０８】
【表１７】
2019524750.tif 000026
【０１０９】
【表１８】
2019524750.tif 000027
【０１１０】
精製システム
フラッシュクロマトグラフィー（ＦＣＣ）
ＦＣＣ分離は、紫外検出器を備えた、Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ  ｐｕｒｉＦｌａｓｈ（登録商標）４３０、Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ  ｐｕｒｉＦｌａｓｈ（登録商標）４５０またはＩｎｔｅｒｃｈｉｍ  ｐｕｒｉＦｌａｓｈ（登録商標）４２５０−２５０で実施した。シリカカラムのタイプ：Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ  ｐｕｒｉＦｌａｓｈ（登録商標）ＳｉＨＰ（高性能シリカ）５０μｍ、４〜２５ｇ。
【０１１１】
超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）；
ＦＣＣ分離は、フォトダイオードおよびＭＳ  ＱＤａ検出器を備えたＷａｔｅｒｓ  Ｐｒｅｐ１００ｑ  ＳＦＣ  Ｓｙｓｔｅｍで実施した。シリカカラムのタイプ：Ｖｉｒｉｄｉｓ  Ｐｒｅｐ  Ｓｉｌｉｃａ  ２−ＥＰ（２−エチルピリジン）ＯＢＤ、１９ｘ１００ｍｍ、５μｍ。使用した方法：溶媒（Ａ）ＣＯ２、溶媒（Ｂ）メタノール；勾配条件：５％〜１０％のＢを８分間；ＡＢＰＲ  １２０バール；Ｔ＝４０℃。
【０１１２】
分析
ＬＣＭＳの一般的手順
ＨＰＬＣ測定を、脱ガス装置を有するクォータナリポンプ、オートサンプラー、カラムオーブン（２５℃に設定）、ダイオードアレー検出器ＤＡＤ（通常、２００ｎｍの波長を使用）およびカラムＫｉｎｅｔｅｘ  ＸＢ  Ｃｌ８  ４．６ｘ５０ｍｍ  ２．６μｍを備えたＤｉｏｎｅｘ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ３０００モジュールを用いて実施した。溶離液の流量は０．５ｍＬ／分であった。２種の移動相、移動相Ａ：水（ミリＱ）中０．１％ギ酸溶液；移動相Ｂ：アセトニトリル（ＨＰＬＣ  Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ）中０．１％ギ酸溶液、を使用し、これらを用いて、２０％Ｂ→８０％の勾配条件で６．７分、８０％Ｂで１．３分保持、８０Ｂ％→９５％の勾配条件で０．３分、９５％Ｂで保持および→２０％Ｂの勾配条件で０．５分の条件で実施し、また、カラムを再平衡化するために、これらの条件で２分保持する。１．０μＬの注入量を使用した。カラムからの流れをＭＳ分光計に分割した。ＭＳ検出器（ＨＣＴ  Ｂｒｕｋｅｒ）をエレクトロスプレーイオン化源用として構成した。質量スペクトルを、１００〜１０００Ｄａを走査することにより取得した。キャピラリーニードル電圧はポジティブイオン化モードでは４ｋＶで、イオン源温度は３６５℃に維持した。窒素を噴霧ガスとして使用し、ガス流量は９．０ｌ／分であった。データ取得は、Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｂｒｕｋｅｒプログラムを使って実施した。
【０１１３】
ＬＣＭＳ法による保持時間（Ｒｔ）分、［Ｍ＋Ｈ］＋ピーク
【０１１４】
【表１９】
2019524750.tif 000028
【０１１５】
ＮＭＲ特性評価
１Ｈ  ＮＭＲおよび１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルを、ＣＤＣｌ３またはＣＤ３ＯＤを溶媒として用いて、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＩＩＩ  ＨＤ  ４００ＭＨｚ分光計で記録した。化学シフト（δ）は、ＣＨＣｌ３では７．２６ｐｐｍおよびＣＨＤ２ＯＤでは３．３１ｐｐｍに帰属される１Ｈ  ＮＭＲ用に選択された完全には重水素化されていない溶媒の残留シグナルに対して、またはＣＨＣｌ３では７７．１６ｐｐｍおよびＣＤ３ＯＤでは４９．００ｐｐｍに帰属される１３Ｃ  ＮＭＲ用に選択された重水素化溶媒のシグナルに対して、１００万分率（ｐｐｍ）で報告される。
【０１１６】
【表２０】
2019524750.tif 000029
【０１１７】
【表２１】
2019524750.tif 000030
【０１１８】
【表２２】
2019524750.tif 000031
【０１１９】
【表２３】
2019524750.tif 000032
【０１２０】
【表２４】
2019524750.tif 000033
【０１２１】
【表２５】
2019524750.tif 000034
【０１２２】
【表２６】
2019524750.tif 000035
【０１２３】
【表２７】
2019524750.tif 000036
【０１２４】
【表２８】
2019524750.tif 000037
【０１２５】
【表２９】
2019524750.tif 000038
【０１２６】
【表３０】
2019524750.tif 000039
【０１２７】
【表３１】
2019524750.tif 000040
【０１２８】
【表３２】
2019524750.tif 000041
【０１２９】
【表３３】
2019524750.tif 000042
【０１３０】
【表３４】
2019524750.tif 000043
【０１３１】
薬理学的実施例
本発明の化合物は、自動化パッチクランプによるヒトＰ２Ｘ７チャネルアッセイに対し活性であることが明らかになった。
【０１３２】
Ｐ２Ｘ７チャネルの遮断を直接モニターするために、電気生理学的アッセイを開発し、ＱＰａｔｃｈ  １６Ｘ自動化電気生理学的測定器で実施した。
【０１３３】
Ｐ２Ｘ７チャネルを発現しているＨＥＫ−２９３細胞を改良ＥＭＥＭ中で培養した。
【０１３４】
実験の７２時間前に、５百万個の細胞をＴ２２５フラスコに播種した。実験直前に細胞を２回洗浄し、トリプシン−ＥＤＴＡを用いてフラスコから剥離し、懸濁溶液に再懸濁し、ＱＰａｔｃｈ  １６Ｘ上に置いた。
【０１３５】
−２０℃で保存した化合物（１００％ＤＭＳＯ中の２０ｍＭ）を実験の日に調製した（１００％ＤＭＳＯ中の１：２０の第１の希釈を行って１ｍＭストック溶液を調製し、その後、外液＋系列希釈１：１０として１マイクロモル溶液を調製した）。
【０１３６】
標準的ホールセル電圧クランプ実験を室温で実施した。これらの実験では、マルチホール技術を使用し、データを２ＫＨｚでサンプリングした。
【０１３７】
細胞内液には、（ｍＭ）１３５  ＣｓＦ、１０  ＮａＣｌ、１  ＥＧＴＡ、１０  ＨＥＰＥＳ、（ＣｓＯＨでｐＨ７．２にする）、一方、細胞外液には、（ｍＭ）１４５  ＮａＣｌ、４  ＫＣｌ、０．５  ＭｇＣｌ２、１  ＣａＣｌ２、１０  ＨＥＰＥＳ、１０  Ｇｌｃ（ＮａＯＨでｐＨ７．４にする）を含めた。
【０１３８】
ホールセル配置でシールおよび流路を確立後、細胞を−８０ｍＶで保持した。Ｐ２ＸＲ７電流を、１００マイクロモルのＢｚＡＴＰ単独（４回）を適用して誘導し、その後、調査対象化合物の漸増濃度（１、１０、１００および１０００ｎＭ）の存在下で誘導した。
【０１３９】
図に示すように、プレインキュベーションの５〜８は、目的の化合物の漸増濃度を含む（１、１０、１００および１０００ｎＭ）。
【０１４０】
漸増濃度調査化合物の非存在または存在下でのＢｚＡＴＰにより誘導された最大内向き電流を測定し、正規化した。潜在的調節効果を対照の％として測定し、また、次の式を用いて、用量反応曲線データの当てはめにより決定したＩＣ５０として測定した。
【０１４１】
【数１】
2019524750.tif 000044
【０１４２】
式中、
Ｘ：濃度のｌｏｇ
Ｙ：正規化反応、１００％から０％まで、Ｘが増加すると減少する。
ＬｏｇＩＣ５０：Ｘと同じｌｏｇ単位
ヒルスロープ：勾配係数またはＨＳ、無単位
【０１４３】
【表３５】
2019524750.tif 000045
【０１４４】
Ｓｃｒｅｅｎ  Ｑｕｅｓｔ（登録商標）Ｆｌｕｏ−８  Ｎｏ  Ｗａｓｈ  Ｃａｌｃｉｕｍ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔを用いて、本発明の化合物が、ラットＰ２Ｘ７阻害剤であることが明らかになった。
【０１４５】
Ｓｃｒｅｅｎ  Ｑｕｅｓｔ（登録商標）Ｆｌｕｏ−８  Ｎｏ  Ｗａｓｈ  Ｃａｌｃｉｕｍ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（ＡＡｔ  Ｂｉｏｑｕｅｓｔ（登録商標））を用いて、その受容体を安定して遺伝子導入したＨＥＫ−２９３細胞でＣａ２＋流入を測定した。簡単に説明すると、細胞内で、Ｆｌｕｏ−８の親油性ブロック基が非特異的細胞エステラーゼにより切断されると、細胞内にとどまる負電荷蛍光染料が生じる。その蛍光はカルシウムに結合すると増大する。ＨＥＫ−２９３／Ｐ２Ｘ７細胞がＢｚＡＴＰに刺激されると、Ｃａ２＋は細胞に入り、Ｆｌｕｏ−８  ＮＷの蛍光が増大する。染料吸収スペクトルは、アルゴンレーザー源による４８８ｎｍでの励起と一致し、その発光波長は５１５〜５７５ｎｍの範囲であった。
【０１４６】
化合物を規定通りに試験するために、安定してラットＰ２Ｘ７Ｒを遺伝子導入したＨＥＫ−２９３細胞を、３８４ウェルプレートを用いて、解凍後の反応のレベルに応じて、１００００、１５０００または２００００個の細胞／ウェルで増殖培地中、一晩播種した。２４時間後、培地を除去し、細胞に、Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋不含タイロード０．３ｍＭ中で調製した２０μＬ／ｗのＦｌｕｏ−８  ＮＷを室温で１時間プリロードした
【０１４７】
本発明の化合物を次の８種の濃度で同じプレート中で試験した（各濃度で４回繰り返した）：１０−３．１６−１−０．３１６−０．１−０．０３１６−０．０１および０．００３１６μＭ。
【０１４８】
ＦＬＩＰＲＴＥＴＲＡを用いて、次の方法により化合物を試験した：
・最初に、ＦＬＩＰＲＴＥＴＲＡに１０μＬの３ｘ試験化合物（タイロード緩衝液０．３ｍＭ（Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋不含）＋ＤＭＳＯ  ０．５％の最終濃度）を注入
・５分間の培養
・第２の注入として、ＦＬＩＰＲＴＥＴＲＡに約ＥＣ８０の１５μＬの３ｘＢｚＡＴＰ（タイロード緩衝液０．３ｍＭ（Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋不含）＋ＢＳＡ  ０．０００３％の最終濃度）を注入
・３分間の蛍光記録
【０１４９】
１つのプレートと次のプレートとの間で、チップを水に続けて１００％ＤＭＳＯで、さらに最後に水で徹底的に洗浄し、チップ内の持ち越し汚染を回避した。
【０１５０】
試験化合物の効果を基準アンタゴニストに対するパーセント抑制として測定し、ＩＣ５０値をそれに応じて計算した。
【０１５１】
【表３６】
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【０１５２】
本発明の化合物は、表３７に記載のように、意外にも、国際公開第２０１５／１１８０１９号に極めて近い実施例の場合より強力であることが明らかになった。
【０１５３】
【表３７】
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【０１５４】
ヒト肝臓ミクロソームを用いた試験化合物の代謝安定性のインビトロ評価
ヒト（マウス）肝臓ミクロソーム試験システム
テスト化合物濃度：１μＭ
試験時点：０、５、１０、３０および６０分
最終タンパク質濃度：１ｍｇ／ｍＬ
繰り返し数：２回
リン酸カリウム緩衝液：ｐＨ７．４、１００ｍＭ
評価項目：試験化合物の残留％、半減期、Ｃｌｉｎｔ、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによるバイオアナリシス
【０１５５】
試験化合物の調製と希釈
試験化合物の１０ｍＭのストック溶液をＤＭＳＯ中で調製し、水：アセトニトリル（１：１）で１ｍＭの濃度に希釈した。１００μＭの作用濃度を、水：アセトニトリル（１：１）でさらに希釈することにより調製した。
【０１５６】
ｐＨ７．４のリン酸カリウム緩衝液の調製
１００ｍＬのミリＱ水をＫ２ＨＰＯ４（１．３９８ｇ）およびＫＨ２ＰＯ４（０．２７ｇ）に加え、最終ｐＨ７．４を得る。
【０１５７】
アッセイ手順：
プレインキュベーション混合物：２．５μＬの試験化合物＋７５μＬの３．３３ｍｇ／ｍＬの肝臓ミクロソーム＋８５μＬの１００ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（３７℃で１０分間プレインキュベート）
補助因子なしの６０分：３２．５μＬのプレインキュベーション混合物＋１７．５μＬの１００ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（３７℃で６０分インキュベート）
０分試料：１６．２５μＬのプレインキュベーション混合物＋２００μＬの内部標準含有アセトニトリル＋８．７５μＬの補助因子インキュベーション混合物＜６２μＬの補助因子（２．５ｍＭ）＋残りのインキュベーション混合物（３７℃で６０分インキュベート）
【０１５８】
試料調製：２５μＬのインキュベーション混合物＋２００μＬの内部標準含有アセトニトリル＋ボルテックスを１２００ｒｐｍで５分＋遠心分離を４０００ｒｐｍで１０分。上清を水で２倍に希釈し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳに注入する。
【０１５９】
バイオアナリシス：ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ方法：ＬＣ一般的勾配条件を用い、詳細は報告書に示す。
【０１６０】
計算：試験物質の残留％＝［試験時点（分）でのピーク面積／０分でのピーク面積］＊１００；Ｋｅ１：Ｌｏｇ％残留量対時間（分）のプロットから得た傾斜；半減期：ｔ１／２（分）＝０．６９３／Ｋｅ１；
固有クリアランス（μＬ／分／ｍｇ）＝ＡＢＳ（Ｋｅ１／タンパク質濃度）＊１０００；
【０１６１】
本発明の実施例は、表３８に記載のように、意外にも、ヒト肝臓マイクロソーム安定性試験において、国際公開第２０１５／１１８０１９号の極めて類似の化合物より２〜４倍安定であることが明らかになった。
【０１６２】
【表３８】
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【図１】
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【国際調査報告】
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