(57)【要約】  腎髄質外層カリウムチャネル（ＲＯＭＫ）阻害剤としての医薬的に許容される塩、具体的にはＬ−酒石酸塩、ならびにその結晶形Ｉおよび結晶形ＩＩが提供される。ＲＯＭＫ阻害剤の医薬的に許容される塩、具体的にはＬ−酒石酸塩は改善された生物学的利用能および安定性を有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドの医薬的に許容される塩、好ましくは酸付加塩。
【請求項２】
酒石酸塩、塩酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、リンゴ酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、および臭化水素酸塩からなる群より、好ましくは、Ｌ−酒石酸塩およびリンゴ酸塩より選択される、請求項１に記載の塩。
【請求項３】
式（Ｉ）：
【化１】
2019517494.tif 000010
で示される（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドのＬ−酒石酸塩。
【請求項４】
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドを、Ｌ−酒石酸と反応させる工程を含む、請求項３に記載の式（Ｉ）の化合物の製造方法。
【請求項５】
請求項３に記載の式（Ｉ）の化合物の結晶形Ｉであって、そのＸ線粉末回折スペクトルがＣｕ−Ｋα照射を用いて得られ、それが回折角の２θ角で表され、ここで３.４９、１０.２２、１２.２７、１３.６９、１５.４６、１６.９８、１８.０４、１９.４５、２３.９５、および２９.４４の回折角の２θ角に特性ピークがあり、各特性ピークの２θ角の誤差範囲が±０.２であることを特徴とする、式（Ｉ）の化合物の結晶形Ｉ。
【請求項６】
請求項５に記載の式（Ｉ）の化合物の結晶形Ｉの製造方法であって、次の工程：
１）式（Ｉ）の化合物のいずれかの結晶形または非晶形を加えるか、あるいはＬ−酒石酸および（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドを溶媒に添加して溶かし、結晶を沈殿させる工程であって、ここで、溶媒は炭素数３以下のアルコール、および該アルコールと水の混合溶媒からなる群より選択される工程；および
２）結晶を濾過し、次にそれを洗浄して乾燥させる工程
を含む、該製造方法。
【請求項７】
工程１）での溶媒がメタノール、エタノール、イソプロパノール、あるいは上記した１または複数のいずれかの溶媒の水溶液であることを特徴とする、請求項６に記載の製造方法。
【請求項８】
請求項３に記載の式（Ｉ）の化合物の結晶形ＩＩであって、そのＸ線粉末回折スペクトルがＣｕ−Ｋα照射を用いて得られ、それが回折角の２θ角で表され、ここで３.８８、１３.００、１７.２５、２５.４２、および２７.７９の回折角の２θ角に特性ピークがあり、各特性ピークの２θ角の誤差範囲が±０.２であることを特徴とする、式（Ｉ）の化合物の結晶形ＩＩ。
【請求項９】
請求項８に記載の結晶形ＩＩの製造方法であって、次の工程：
１）式（Ｉ）の化合物のいずれかの結晶形または非晶形を加えるか、あるいはＬ−酒石酸および（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドを溶媒に添加して溶かし、結晶を沈殿させる工程であって、ここで、溶媒はイソプロパノール／テトラヒドロフラン／水の混合溶媒である工程；および
２）結晶を濾過し、次にそれを洗浄して乾燥させる工程
を含む、該製造方法。
【請求項１０】
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドのリンゴ酸に対する化学割合が１：１であり、その具体的な構造が式（Ｉ’）：
【化２】
2019517494.tif 000011
で示されることを特徴とする、請求項２に記載の塩。
【請求項１１】
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドのリンゴ酸に対する化学割合が１：０.５であり、その具体的な構造が式（Ｉ’’）：
【化３】
2019517494.tif 000012
で示されることを特徴とする、請求項２に記載の塩。
【請求項１２】
請求項１０に記載の式（Ｉ’）の化合物の結晶形１であって、そのＸ線粉末回折スペクトルがＣｕ−Ｋα照射を用いて得られ、それが回折角の２θ角で表され、ここで６.８５、９.７６、１１.８１、１２.４８、１３.５２、１４.２３、１５.２９、１７.５５、１７.８９、１９.６５、２０.２５、２２.６８（３.９２）、２３.５０、２４.２７、２７.８３、および２８.５９の回折角の２θ角に特性ピークがあり、各特性ピークの２θ角の誤差範囲が±０.２であることを特徴とする、式（Ｉ’）の化合物の結晶形１。
【請求項１３】
請求項１２に記載の結晶形１の製造方法であって、次の製造方法：
（１）式（Ｉ’）の化合物の遊離形態をリンゴ酸と、溶媒または混合溶媒中で反応させ、つづいて攪拌、沈殿、濾過および乾燥に付し、所望の結晶形１を得て、ここで溶媒はアルコール溶媒であり、混合溶媒はアルコールと水の混合溶媒であり、アルコール溶媒は、好ましくは、メタノールであり、アルコールと水の混合溶媒は、好ましくは、メタノールと水の混合溶媒である、方法；および
（２）式（Ｉ’）の化合物を溶媒に加え、つづいてパルプ化、濾過、および乾燥に付し、所望の結晶形１を得、ここで溶媒はアルコールと水の混合溶媒であり、アルコール溶媒は、好ましくは、メタノール、エタノールまたはイソプロパノールであり、アルコールと水の混合溶媒は、好ましくは、メタノールと水の混合溶媒、またはエタノールと水の混合溶媒である、方法
より選択されることを特徴とする、該製造方法。
【請求項１４】
請求項１０に記載の式（Ｉ’）の化合物の結晶形２であって、そのＸ線粉末回折スペクトルがＣｕ−Ｋα照射を用いて得られ、それが回折角の２θ角で表され、ここで９.３４、１０.６１（８.３３）、１２.２４、１２.７８、１３.８３、１４.２６、１５.５２、１７.８３、１８.８３、１９.８６、２０.５５、２１.７２、２２.３１、２２.６２、２３.４２、２４.７８、２５.０３、２５.２７、２５.７８、２６.０２、２６.７６、２７.９９、３０.７２、３１.１９、３４.４１、３６.６８、３９.８７、および４１.２５の回折角の２θ角に特性ピークがあり、各特性ピークの２θ角の誤差範囲が±０.２であることを特徴とする、式（Ｉ’）の化合物の結晶形２。
【請求項１５】
請求項１４に記載の結晶形２の製造方法であって、次の製造方法：
（１）式（Ｉ’）の化合物の遊離形態をリンゴ酸と、溶媒または混合溶媒中で反応させ、つづいて攪拌、沈殿、濾過および乾燥に付し、所望の結晶形２を得、ここで溶媒はアルコール溶媒およびニトリル溶媒からなる群より選択され、混合溶媒はニトリルと水の混合溶媒およびニトリルとエーテルの混合溶媒からなる群より選択され、好ましくはアルコール溶媒がメタノールまたはエタノールであり、ニトリル溶媒がアセトニトリルであり、エーテル溶媒がテトラヒドロフランである、方法；および
（２）式（Ｉ’）の化合物を溶媒に加え、つづいてパルプ化、濾過、および乾燥に付し、所望の結晶形２を得、ここで溶媒はアルコール溶媒、ニトリル溶媒およびケトン溶媒からなる群より選択され、溶媒はアルコール溶媒、およびニトリル溶媒からなる群より選択され、混合溶媒はニトリルと水の混合溶媒、およびニトリルとエーテルの混合溶媒からなる群より選択され、好ましくはアルコール溶媒がメタノールまたはエタノールであり、ニトリル溶媒がアセトニトリルであり、エーテル溶媒がテトラヒドロフランである、方法
より選択されることを特徴とする、該製造方法。
【請求項１６】
請求項１０に記載の式（Ｉ’）の化合物の結晶形３であって、そのＸ線粉末回折スペクトルがＣｕ−Ｋα照射を用いて得られ、それが回折角の２θ角で表され、ここで９.３４、１０.６３、１２.７９、１４.２２、１５.５０、１８.８６、１９.９３、および２５.１６の回折角の２θ角に特性ピークがあり、各特性ピークの２θ角の誤差範囲が±０.２であることを特徴とする、式（Ｉ’）の化合物の結晶形３。
【請求項１７】
請求項１６に記載の結晶形３の製造方法であって、次の製造方法：
（１）式（Ｉ’）の化合物の遊離形態をリンゴ酸と、溶媒または混合溶媒中で反応させ、つづいて攪拌、沈殿、濾過および乾燥に付し、所望の結晶形３を得、ここで溶媒はアルコール溶媒およびケトン溶媒からなる群より選択され、混合溶媒はアルコールと水の混合溶媒からなる群より選択され、アルコール溶媒が好ましくはイソプロパノールであり、ケトン溶媒がアセトンであり、アルコールと水の混合溶媒が好ましくはイソプロパノールおよび水の混合溶媒である、方法；および
（２）式（Ｉ’）の化合物を溶媒に加え、つづいてパルプ化、濾過、および乾燥に付し、所望の結晶形３を得、ここで溶媒はアルコール溶媒、およびケトン溶媒からなる群より選択され、混合溶媒はアルコールと水の混合溶媒であり、アルコール溶媒が好ましくはイソプロパノールであり、ケトン溶媒がアセトンであり、アルコールと水の混合溶媒が好ましくはイソプロパノールおよび水の混合溶媒である、方法
より選択されることを特徴とする、該製造方法。
【請求項１８】
請求項１１に記載の式（Ｉ’’）の化合物の結晶形Ａであって、そのＸ線粉末回折スペクトルがＣｕ−Ｋα照射を用いて得られ、それが回折角の２θ角で表され、ここで９.９５、１２.１２、１２.６８、１３.５６、１４.７３、１５.３２、１６.２０、１７.２７、１８.７４、２０.００、２１.５７、２２.８２、２３.２２、２４.３５、２４.６３、２５.４２、２７.１３、２８.１５、３０.０１、３０.３０、３２.９２、および３４.９７の回折角の２θ角に特性ピークがあり、各特性ピークの２θ角の誤差範囲が±０.２であることを特徴とする、式（Ｉ’’）の化合物の結晶形Ａ。
【請求項１９】
請求項１８に記載の結晶形Ａの製造方法であって、次の製造方法：
（１）式（Ｉ’’）の化合物の遊離形態をリンゴ酸と、溶媒または混合溶媒中で反応させ、つづいて攪拌、沈殿、濾過および乾燥に付し、所望の結晶形Ａを得、ここで溶媒はアルコール溶媒であり、混合溶媒はアルコールと水の混合溶媒であり、アルコール溶媒が好ましくはイソプロパノールであり、アルコールと水の混合溶媒が好ましくはイソプロパノールおよび水の混合溶媒である、方法；および
（２）式（Ｉ’’）の化合物を溶媒に加え、つづいてパルプ化、濾過、および乾燥に付し、所望の結晶形Ａを得て、ここで溶媒はアルコール溶媒であり、混合溶媒はアルコールと水の混合溶媒であり、アルコール溶媒が好ましくはイソプロパノールであり、アルコールと水の混合溶媒が好ましくはイソプロパノールおよび水の混合溶媒である、方法
より選択されることを特徴とする、該製造方法。
【請求項２０】
請求項１〜３、および１０〜１１のいずれか一項に記載の塩、または請求項５、８、１２、１４、１６、および１８のいずれか一項に記載の結晶形と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項２１】
腎髄質外層カリウムチャネル（ＲＯＭＫ）阻害剤と関連付けられる疾患の治療または予防用の医薬の製造における、請求項１〜３、および請求項１０〜１１のいずれか一項に記載の塩、または請求項５、８、１２、１４、１６、および１８のいずれか一項に記載の結晶形、あるいは請求項２０に記載の医薬組成物の使用。
【請求項２２】
疾患が高血圧または心不全である、請求項２１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドの医薬的に許容される塩に関する。
【背景技術】
【０００２】
腎臓の塩再吸収機能の向上は高血圧症となる危険性を増大させ得る。対照的に、腎再吸収機能の阻害は尿の排泄を促進し、それは利尿作用および降圧作用をもたらし得る。一般的な利尿薬は、アメリカ合衆国において最初に使用される降圧薬であって、主にＮａ＋−Ｃｌ−輸送体に作用する、チアジド系利尿薬である。ループ利尿薬は腎機能に障害のある患者にとってより効果的であり、該利尿薬はＮａ＋−Ｋ＋−２Ｃｌ−の輸送体タンパク質を通して一の役割を果たす。しかしながら、該薬物は共に、心血管疾患の死亡率および罹患率を増大させる危険性のある、低カリウム血症（症状：虚弱、疲労、筋痙攣、便秘および不整脈などの心調律異常）を惹起し得る。
【０００３】
腎髄質外層カリウム（ＲＯＭＫ）チャネルは内向き整流性カリウムチャネル１．１（Ｋｉｒ１．１）としても知られている。ＲＯＭＫイオンチャネルは、腎臓の太い上行脚（ＴＡＬ）の頂端膜の透過性を通してＮａ＋−Ｋ＋−２Ｃｌ−共輸送体タンパク質ＮＫＣＣ２（ＮａＣｌ輸送体と関与する）と共働し、Ｎａ＋の再吸収を制御し得る。ＲＯＭＫが腎分泌チャネルと直に関連していることが判明した。ＲＯＭＫ遺伝子をマウスにて不活性化させると、ＴＡＬおよびＣＣＤ３５−ｐｓイオンチャネルの喪失、ならびにＴＡＬにおいて他のＫ＋チャネルの喪失がある。バーター症候群は、腎臓における塩の大量喪失、低カリウム血症、および低血圧により特徴付けられる常染色体劣性疾患である。バーター症候群は、主に、ＲＯＭＫまたはＮａ＋−Ｋ＋−２Ｃｌ−共輸送体タンパク質における変異によって惹起される。その違いは、ＲＯＭＫの変異によって惹起されるバーター症候群の低カリウム血症が、Ｎａ＋−Ｋ＋−２Ｃｌ−共輸送体タンパク質の変異によって惹起される症状と比べて、ずっと軽いということである。要約すれば、ＲＯＭＫ機能の阻害は、効果的に、Ｎａ＋−Ｋ＋−２Ｃｌ−共輸送体タンパク質の塩再吸収機能を阻害し、尿の排泄を促進し、それにより低カリウム血症を引き起こすことなく、利尿および降圧作用を生じさせ得る。
【０００４】
本出願人によって先に出願され、出典明示によりそのすべてが本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１６０９１０４２は、次式：
【化１】
2019517494.tif 000002
で示され、その化学名が（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドである、化合物を含む、一連の腎髄質外層カリウム（ＲＯＭＫ）チャネル阻害剤を開示する。他のＲＯＭＫ阻害剤と比べて、この化合物には極性基が付加されており、該化合物は、ＲＯＭＫ阻害剤活性を維持しながら、ＣｌｏｇＰを下げ、ｈＥＲＧ選択性を強化して安全性を改善する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、該化合物は生物学的利用能および安定性の乏しい遊離塩基の形態で存在する。従って、低生物学的利用能および低安定性の課題を解決するために開発して適切な形態を見出す必要がある。その上、医薬的に活性な成分の結晶構造が、薬物の化学安定性に影響を及ぼすことも多い。異なる結晶化条件および貯蔵条件は化合物の結晶構造に変化をもたらし、それに付随して時に他の結晶形を生成させうる。一般に、非晶質の薬剤は、規則正しい結晶構造を有さず、薬剤の安定性が乏しく、結晶がより細かく、濾過が困難、凝集しやすい、流動性に乏しいなどの別の欠点を有することが多い。従って、上記した化合物の種々の特性を改善することが必要不可欠である。高純度および良好な化学安定性のある新規な結晶形を見出す必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドの医薬的に許容される塩、特に酸付加塩を提供する。塩の形成後に、その生物学的利用能および安定性は大きく改善され得る。
【０００７】
好ましい実施態様において、その塩は、酒石酸塩、塩酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、リンゴ酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、および臭化水素酸塩からなる群より選択することができ、Ｌ−酒石酸塩およびリンゴ酸塩が最も好ましい。
【０００８】
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドのＬ−酒石酸塩、すなわち、次式（Ｉ）：
【化２】
2019517494.tif 000003
で示される化合物は、（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドをＬ−酒石酸と反応させることで得ることができる。（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドの塩酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、リンゴ酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩および臭化水素酸塩は同様の方法を用いて製造され得る。式（ＩＩ）の化合物の溶解性は低いため、該化合物の溶解性をさらに上げるために、本出願人は式（ＩＩ）の化合物について塩形成の研究を行い、それで該化合物と、酒石酸、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、リン酸、クエン酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、臭化水素酸または乳酸との塩形成を検討した。該化合物の溶解性は塩形成後に大きく改善された。塩が結晶を形成するのが容易であるかどうかなども検討された。それはＲＯＭＫ関連の疾患の治療において重要な研究意義を有する。塩形成のプロセスの間に、出願人は、乳酸と式（ＩＩ）の化合物との間の反応で塩が形成されないこと、フマル酸塩を形成する場合に、フマル酸の式（ＩＩ）の化合物に対する割合、および結晶形を調整することが困難であること、硫酸塩およびクエン酸塩が明らかに吸湿性であること、リン酸塩の結晶形が込み入っており、それらは同時に存在し、結果として分離するのが困難であること、およびマレイン酸の結晶形にて多数の型があることを見出した。
【０００９】
式（Ｉ）の化合物の一連の結晶性生成物を、種々異なる結晶化条件下で得、その得られた結晶性生成物についてＸ線回折および示差走査熱量（ＤＳＣ）測定を行った。安定した結晶形（結晶形Ｉと称される）が本発明の結晶化条件下で得られうることを見出した。本願の結晶形ＩのＤＳＣスペクトルは、約２１８.４２℃で融解吸熱ピークを示す。Ｘ線粉末回折スペクトル（Ｃｕ−Ｋα照射を用いることで得られ、回折角の２θ角で表される）を図１に示し、そこでは３.４９、１０.２２、１２.２７、１３.６９、１５.４６、１６.９８、１８.０４、１９.４５、２３.９５および２９.４４の回折角の２θ角に特性ピークがあり、ここで各特性ピークの２θ角の誤差範囲は±０.２である。
【００１０】
本発明はまた、（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドの酒石酸塩の結晶形Ｉの製造方法であって、次の工程：
１）Ｌ−酒石酸を適量の溶媒に加え、加熱下で溶かし、次に結晶形または非晶質形のいずれかの（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドを添加し、塩を形成させる工程、ここで、溶媒は炭素数３以下のアルコール、およびアルコールと水の混合溶媒からなる群より選択され；および
２）結晶を濾過し、次にそれを洗浄して乾燥させる工程
を含む、方法を提供する。
【００１１】
好ましい実施態様において、工程１）の溶媒は、メタノール、エタノール、イソプロパノールまたはアルコールの水溶液であり、ここで単一溶媒はメタノールであることが好ましい。
【００１２】
本発明の実施態様において、好ましい混合有機溶媒はエタノール／水の混合溶媒であり、その２つの割合は特に限定されない。本発明の好ましい実施態様において、その２つの容量割合は９：１である。
【００１３】
式（Ｉ）の化合物の結晶形ＩＩは、もう一つ別の結晶化条件下で得ることができ、そのＸ線粉末回折スペクトルはＣｕ−Ｋα照射を用いることで得られ、それは回折角の２θ角で表され、ここで３.８８、１３.００、１７.２５、２５.４２および２７.７９の回折角の２θ角に特性ピークがあり、各特性ピークの２θ角の誤差範囲が±０.２であることを特徴とする。
【００１４】
結晶形ＩＩの製造方法は、次の工程：
１）式（Ｉ）の化合物のいずれかの結晶形または非晶質形を加えるか、またはＬ−酒石酸および（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドを溶媒に添加して溶かし、結晶を沈殿させる工程であって、ここで、溶媒はイソプロパノール／テトラヒドロフラン／水の混合溶媒である工程；および
２）結晶を濾過し、次にそれを洗浄して乾燥させる工程
を含み得る。
【００１５】
結晶化方法は、特に限定されるものではなく、慣用的な再結晶プロセスによって実施され得る。例えば、材料、すなわち、式（Ｉ）の化合物を加熱しながら有機溶媒に溶かし、次に該溶液をゆっくりと冷却し、結晶を沈殿させることができる。結晶化の終了後、濾過および乾燥を介して所望の結晶を得ることができる。特に、濾過で得られた結晶は、通常、約３０〜１００℃、好ましくは４０〜６０℃の加熱条件で、減圧下にある真空にて乾燥させ、再結晶用溶媒を除去する。
【００１６】
本発明はまた、（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドのリンゴ酸に対する化学割合が１：１であり、その具体的構造が式（Ｉ’）：
【化３】
2019517494.tif 000004
にて示されることを特徴とする、リンゴ酸塩を提供する。
【００１７】
本発明はさらには、（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドのリンゴ酸に対する化学割合が１：０.５であり、その具体的構造が式（Ｉ’’）：
【化４】
2019517494.tif 000005
にて示されることを特徴とする、リンゴ酸塩を提供する。
【００１８】
好ましくは、式（Ｉ’）の化合物の結晶形１は、そのＸ線粉末回折スペクトルが、Ｃｕ−Ｋα照射を用いることで得られ、それは回折角の２θ角で表され、ここで６.８５、９.７６、１１.８１、１２.４８、１３.５２、１４.２３、１５.２９、１７.５５、１７.８９、１９.６５、２０.２５、２２.６８（３.９２）、２３.５０、２４.２７、２７.８３および２８.５９の回折角の２θ角に特性ピークがあり、各特性ピークの２θ角の誤差範囲が±０.２であることを特徴とする。
【００１９】
本発明はまた、式（Ｉ’）の化合物の結晶形１の製造方法であって、次の製造方法：
（１）式（Ｉ’）の化合物の遊離形態をリンゴ酸と、溶媒または混合溶媒中で反応させ、つづいて攪拌、沈殿、濾過および乾燥に付し、所望の結晶形１を得、ここで溶媒はアルコール溶媒であり、混合溶媒はアルコールと水の混合溶媒であり、アルコール溶媒は、好ましくは、メタノールであり、アルコールと水の混合溶媒は、好ましくは、メタノールと水の混合溶媒である、方法；および
（２）式（Ｉ’）の化合物を溶媒に加え、つづいてパルプ化（pulping）、濾過、および乾燥に付し、所望の結晶形１を得、ここで溶媒はアルコールと水の混合溶媒であり、アルコール溶媒は、好ましくは、メタノール、エタノールまたはイソプロパノールであり、アルコールと水の混合溶媒は、好ましくは、メタノールと水の混合溶媒、またはエタノールと水の混合溶媒である、方法
より選択されることを特徴とする、方法を提供する。
【００２０】
好ましくは、式（Ｉ’）の化合物の結晶形２は、そのＸ線粉末回折スペクトルが、Ｃｕ−Ｋα照射を用いて得られ、それは回折角の２θ角で表され、ここで９.３４、１０.６１（８.３３）、１２.２４、１２.７８、１３.８３、１４.２６、１５.５２、１７.８３、１８.８３、１９.８６、２０.５５、２１.７２、２２.３１、２２.６２、２３.４２、２４.７８、２５.０３、２５.２７、２５.７８、２６.０２、２６.７６、２７.９９、３０.７２、３１.１９、３４.４１、３６.６８、３９.８７および４１.２５の回折角の２θ角に特性ピークがあり、各特性ピークの２θ角の誤差範囲が±０.２であることを特徴とする。
【００２１】
本発明はまた、式（Ｉ’）の化合物の結晶形２の製造方法であって、次の製造方法：
（１）式（Ｉ’）の化合物の遊離形態をリンゴ酸と、溶媒または混合溶媒中で反応させ、つづいて攪拌、沈殿、濾過および乾燥に付し、所望の結晶形２を得；ここで溶媒はアルコール溶媒およびニトリル溶媒からなる群より選択され、混合溶媒はニトリルと水の混合溶媒、およびニトリルとエーテルの混合溶媒からなる群より選択され、好ましくは、アルコール溶媒は、メタノールまたはエタノールであり、ニトリル溶媒はアセトニトリルであり、エーテル溶媒はテトラヒドロフランである、方法；および
（２）式（Ｉ’）の化合物を溶媒に加え、つづいてパルプ化、濾過、および乾燥に付し、所望の結晶形２を得；ここで溶媒はアルコール溶媒、ニトリル溶媒、およびケトン溶媒からなる群より選択され、溶媒はアルコール溶媒、およびニトリル溶媒からなる群より選択され、混合溶媒はニトリルと水の混合溶媒、ニトリルとエーテルの混合溶媒からなる群より選択され、好ましくは、アルコール溶媒が、メタノール、またはエタノールであり、ニトリル溶媒がアセトニトリルであり、エーテル溶媒がテトラヒドロフランである、方法
より選択されることを特徴とする、方法を提供する。
【００２２】
好ましくは、式（Ｉ’）の化合物の結晶形３は、そのＸ線粉末回折スペクトルが、Ｃｕ−Ｋα照射を用いて得られ、それは回折角の２θ角で表され、ここで９.３４、１０.６３、１２.７９、１４.２２、１５.５０、１８.８６、１９.９３、および２５.１６の回折角の２θ角に特性ピークがあり、各特性ピークの２θ角の誤差範囲が±０.２であることを特徴とする。
【００２３】
本発明はまた、式（Ｉ’）の化合物の結晶形３の製造方法であって、次の製造方法：
（１）式（Ｉ’）の化合物の遊離形態をリンゴ酸と、溶媒または混合溶媒中で反応させ、つづいて攪拌、沈殿、濾過および乾燥に付し、所望の結晶形３を得；ここで溶媒はアルコール溶媒およびケトン溶媒からなる群より選択され、混合溶媒はアルコールと水の混合溶媒からなる群より選択され、アルコール溶媒は、好ましくは、イソプロパノールであり、ケトン溶媒はアセトンであり、アルコールと水の混合溶媒は、イソプロパノールと水の混合溶媒である、方法；および
（２）式（Ｉ’）の化合物を溶媒に加え、つづいてパルプ化、濾過、および乾燥に付し、所望の結晶形３を得；ここで溶媒はアルコール溶媒、およびケトン溶媒からなる群より選択され、混合溶媒はアルコールと水の混合溶媒であり、アルコール溶媒が、好ましくはイソプロパノールであり、ケトン溶媒がアセトンであり、アルコールと水の混合溶媒が、好ましくは、イソプロパノールと水の混合溶媒である、方法
より選択されることを特徴とする、方法を提供する。
【００２４】
好ましくは、式（Ｉ’’）の化合物の結晶形Ａは、そのＸ線粉末回折スペクトルが、Ｃｕ−Ｋα照射を用いて得られ、それは回折角の２θ角で表され、ここで９.９５、１２.１２、１２.６８、１３.５６、１４.７３、１５.３２、１６.２０、１７.２７、１８.７４、２０.００、２１.５７、２２.８２、２３.２２、２４.３５、２４.６３、２５.４２、２７.１３、２８.１５、３０.０１、３０.３０、３２.９２、および３４.９７の回折角の２θ角に特性ピークがあり、各特性ピークの２θ角の誤差範囲が±０.２であることを特徴とする。
【００２５】
本発明はまた、式（Ｉ’’）の化合物の結晶形Ａの製造方法であって、次の製造方法：
（１）式（Ｉ’’）の化合物の遊離形態をリンゴ酸と、溶媒または混合溶媒中で反応させ、つづいて攪拌、沈殿、濾過および乾燥に付し、所望の結晶形Ａを得；ここで溶媒はアルコール溶媒であり、混合溶媒はアルコールと水の混合溶媒であり、アルコール溶媒は、好ましくは、イソプロパノールであり、アルコールと水の混合溶媒は、好ましくは、イソプロパノールと水の混合溶媒である、方法；および
（２）式（Ｉ’’）の化合物を溶媒に加え、つづいてパルプ化、濾過、および乾燥に付し、所望の結晶形Ａを得；ここで溶媒はアルコール溶媒であり、混合溶媒はアルコールと水の混合溶媒であり、アルコール溶媒が、好ましくはイソプロパノールであり、アルコールと水の混合溶媒が、好ましくは、イソプロパノールと水の混合溶媒である、方法
より選択されることを特徴とする、方法を提供する。
【００２６】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の結晶形ＩおよびＩＩ、式（Ｉ’）の化合物の結晶形１、２および３、または式（Ｉ’’）の化合物の結晶形Ａである塩、および医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物に関する。
【００２７】
本発明は、さらには、腎髄質外層カリウムチャネル（ＲＯＭＫ）阻害剤と関連付けられる疾患を治療または予防するための医薬の製造における、式（Ｉ）の化合物の結晶形ＩおよびＩＩ、式（Ｉ’）の化合物の結晶形１、２および３、または式（Ｉ’’）の化合物の結晶形Ａである塩、あるいは医薬組成物の使用に関する。
【００２８】
本発明の疾患は、高血圧症および心不全からなる群より選択される。
【００２９】
研究結果は、本発明に従って製造された式（Ｉ）の化合物の結晶形Ｉが、光照射、高温および高湿の条件下で安定していることを示す。結晶形Ｉは、粉砕、圧力および加熱の条件下でも安定しており、製造、運送および貯蔵の医療ニーズと合致する。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】式（Ｉ）の化合物の結晶形ＩのＸＲＰＤ（Ｘ線粉末回折）スペクトルを示す。
【図２】式（Ｉ）の化合物の結晶形ＩのＤＳＣスペクトルを示す。
【図３】式（Ｉ）の化合物の結晶形ＩＩのＸＲＰＤスペクトルを示す。
【図４】式（Ｉ）の化合物の結晶形ＩＩのＤＳＣスペクトルを示す。
【図５】式（Ｉ’）の化合物の結晶形１のＸＲＰＤスペクトルを示す。
【図６】式（Ｉ’）の化合物の結晶形１のＤＳＣ−ＴＧＡスペクトルを示す。
【図７】式（Ｉ’）の化合物の結晶形２のＸＲＰＤスペクトルを示す。
【図８】式（Ｉ’）の化合物の結晶形２のＤＳＣ−ＴＧＡスペクトルを示す。
【図９】式（Ｉ’）の化合物の結晶形３のＸＲＰＤスペクトルを示す。
【図１０】式（Ｉ’’）の化合物の結晶形ＡのＸＲＰＤスペクトルを示す。
【図１１】式（Ｉ’’）の化合物の結晶形ＡのＤＳＣ−ＴＧＡスペクトルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
次に実施例を用いて本発明を詳細に記載する。本発明の実施例は、本発明の技術的解決法を記載することを意図するに過ぎず、本発明の範囲を限定するものとして考慮されるべきではない。
【００３２】
実験において使用される試験装置
１．ＤＳＣスペクトル
装置型：メトラー・トレド（Mettler Toledo）ＤＳＣ１  ＳＴＡＲｅ（Staree）システム
パージガス：窒素
加熱速度：１０.０℃／分
温度範囲：４０−３５０℃
２．Ｘ線回折スペクトル
装置型：ブルカー（Bruker）Ｄ８フォーカス  Ｘ線粉末回折装置
光線：単色Ｃｕ−Ｋα線（λ＝１.５４０６）
スキャンモード：θ／２θ；スキャン範囲：２−４０°
電圧：４０ＫＶ；電流：４０ｍＡ
【００３３】
実施例１
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミドの合成
【化５】
2019517494.tif 000006
【００３４】
工程１
５−ブロモ−４−メトキシピコリン酸
５−ブロモ−４−メトキシピコリン酸メチル１ａ（２５０ｍｇ、１.０１ミリモル）をメタノール、テトラヒドロフランおよび水（Ｖ：Ｖ：Ｖ＝３：３：１）の混合溶媒（１０ｍＬ）に溶かし、水酸化ナトリウム（１００ｍｇ、２.５ミリモル）を加え、該混合物を２時間攪拌した。反応溶液を減圧下で濃縮し、水（１０ｍＬ）を添加した。２Ｍ塩酸を滴下して加えることにより反応溶液をｐＨ２に調整し、酢酸エチル（２０ｍＬｘ３）で抽出した。有機相をＮａＣｌ飽和溶液（１５ｍＬｘ２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させて濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗表記化合物の５−ブロモ−４−メトキシピコリン酸１ｂ（２００ｍｇ、白色の固体）を得、それをさらに精製することなく次の工程に用いた。
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）：［Ｍ−１］＋＝２２９.９
【００３５】
工程２
４−（５−ブロモ−４−メトキシピコリンアミド）ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチル
粗５−ブロモ−４−メトキシピコリン酸１ｂ（１５０ｍｇ、０.６５ミリモル）、４−アミノピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチル（１３０ｍｇ、０.６５ミリモル）、１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（１９０ｍｇ、１ミリモル）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２０ｍｇ、０.１３ミリモル）およびトリエチルアミン（０.１５ｍＬ、１ミリモル）をＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶かした。反応混合物を５０℃までの加温に供し、６時間攪拌した。該反応溶液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を薄層クロマトグラフィーに付し、展開溶媒としてｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルを用いて精製し、表記化合物の４−（５−ブロモ−４−メトキシピコリンアミド）ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチル１ｃ（６０ｍｇ、明黄色の油）を収率：２２.４％で得た。
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）：［Ｍ＋１］＋＝４１４.１
【００３６】
工程３
４−（５−シアノ−４−メトキシピコリンアミド）ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチル
４−（５−ブロモ−４−メトキシピコリンアミド）ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチル１ｃ（６０ｍｇ、０.１５ミリモル）、シアン化亜鉛（２６ｍｇ、０.２２ミリモル）およびテトラ（フェニルホスフィン）パラジウム（１８ｍｇ、０.０１５ミリモル）をＮ,Ｎ−ジメチルアセトアミド（１.５ｍＬ）に溶かした。マイクロ波の下、１３５℃で４０分間にわたって反応を実施した。反応溶液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を薄層クロマトグラフィーに付し、展開溶媒としてｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルを用いて精製し、表記化合物の４−（５−シアノ−４−メトキシピコリンアミド）ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチル１ｄ（３２ｍｇ、無色の油）を収率：６１.５％で得た。
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）：［Ｍ＋１］＋＝３６１.２
【００３７】
工程４
５−シアノ−４−メトキシ−Ｎ−（ピペリジン−４−イル）ピコリンアミド
４−（５−シアノ−４−メトキシピコリンアミド）ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチル１ｄ（３２ｍｇ、０.０９ミリモル）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶かし、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を添加した。反応混合物を１.５時間攪拌した。反応溶液を減圧下で濃縮し、メタノール（１５ｍＬ）を加えた。炭酸水素ナトリウム飽和溶液を滴下して加えることで、その反応溶液をｐＨ８に調整し、次に減圧下で濃縮した。得られた残渣を薄層クロマトグラフィーに付し、展開溶媒としてジクロロメタンおよびメタノールを用いて精製し、表記化合物の５−シアノ−４−メトキシ−Ｎ−（ピペリジン−４−イル）ピコリンアミド１ｅ（２３ｍｇ、白色ペースト）を、収率：１００％で得た。
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）：［Ｍ＋１］＋＝２６１.１
【００３８】
工程５
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド
（Ｒ）−４−メチル−５−（オキシラン−２−イル）イソベンゾフラン−１（３Ｈ）−オン（２５ｍｇ、０.０９ミリモル、特許出願「ＷＯ２０１０１２９３７９」に開示の方法に従って製造）および５−シアノ−４−メトキシ−Ｎ−（ピペリジン−４−イル）ピコリンアミド１ｅ（２３ｍｇ、０.０９ミリモル）をアセトニトリル（５ｍＬ）に溶かした。反応混合物を攪拌し、加熱して１５時間還流させた。反応溶液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を薄層クロマトグラフィーに付し、展開溶媒としてジクロロメタンおよびメタノールを用いて精製し、表記化合物の（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド  １（４.５ｍｇ、明黄色の固体）を、収率：１１.３％で得た。
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）：［Ｍ＋１］＋＝４５０.２
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｄ６−ＤＭＳＯ）：  δ  ＝８.８８（s，１Ｈ）、８.７５（ｄ，１Ｈ）、７.７７（s，１Ｈ）、７.７１−７.６９（ｍ，２Ｈ）、５.４３−５.４０（ｍ，２Ｈ）、５.３５（s，１Ｈ）、５.０８（s，１Ｈ）、４.０９（s，３Ｈ）、３.７８（s，１Ｈ）、２.９５（s，３Ｈ）、２.３８（s，１Ｈ）、２.２７（s，３Ｈ）、２.２５（s，２Ｈ）、１.７２（s，４Ｈ）  ｐｐｍ
【００３９】
実施例２．  酒石酸塩の結晶形１の製造
Ｌ−酒石酸（０.４ｇ、２.６６ミリモル）を５０ｍｌの反応フラスコに加え、メタノール（３０ｍｌ）を添加し、次に該混合物を７０℃に加熱して溶解させた。（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド（１.０ｇ、２.２２ミリモル）（実施例１の方法に従って製造）を添加し、７０℃で２４時間にわたって反応を実施した。該混合物を室温に冷却し、濾過して乾燥させ、固体（１.２２ｇ）を収率：９１.７％で得た。結晶サンプルのＸ線回折スペクトルを図１に示す。約３.４９（２５.２７）、１０.２２（８.６５）、１２.２７（７.２１）、１３.６９（６.４７）、１５.４６（５.７３）、１６.９８（５.２２）、１８.０４（４.９１）、１９.４５（４.５６）、２０.８９（４.２５）、２３.９５（３.７１）、２５.６３（３.４７）、２６.７１（３.３４）、および２９.４４（３.０３）に特性ピークがある。図２にて、２１８.４２℃にシャープな溶融吸熱ピークのある、ＤＳＣスペクトルを示す。その結晶形は結晶形Ｉであると定められた。
【００４０】
実施例３．  酒石酸塩の結晶形ＩＩの製造
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド（１.０ｇ、２.２２ミリモル）（実施例１の方法に従って製造）およびＬ−酒石酸（０.４ｇ、２.６６ミリモル）を５０ｍｌの反応フラスコに入れ、イソプロパノール／テトラヒドロフラン／水（Ｖ：Ｖ：Ｖ＝２０：１０：１、３０ｍｌ）を添加し、該混合物を７０℃で２４時間加熱した。該混合物を室温に冷却し、濾過し、乾燥させて固体（１.１５ｇ）を収率：８６.５％で得た。該結晶サンプルのＸ線回折スペクトルを図３に示す。約３.８８（２２.７８）、１３.００（６.８０）、１７.２５（５.１４）、２５.４２（３.５０）、および２７.７９（３.２１）に特性ピークがある。１９１.０９℃に広範囲に及ぶ溶融吸熱ピークのあるＤＳＣスペクトルを図４に示す。該結晶形は結晶形ＩＩであると定められた。
【００４１】
実施例４．  酒石酸塩の結晶形Ｉの製造
Ｌ−酒石酸（０.４ｇ、２.６６ミリモル）を５０ｍｌの反応フラスコに入れ、エタノール／水（Ｖ：Ｖ＝９：１、３０ｍｌ）を添加し、次に該混合物を７０℃に加熱して溶解させた。（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド（１.０ｇ、２.２２ミリモル）（実施例１の方法に従って製造））を添加し、次に反応を７０℃で２４時間実施させた。該混合物を室温に冷却し、濾過し、乾燥させて固体（１.２４ｇ）を、収率：９３.２％で得た。Ｘ線回折スペクトルおよびＤＳＣスペクトルを研究して比較した後、該生成物は結晶形Ｉと同定された。
【００４２】
実施例５．  酒石酸塩の結晶形Ｉの製造
Ｌ−酒石酸（０.４ｇ、２.６６ミリモル）を５０ｍｌの反応フラスコに入れ、エタノール／水（Ｖ：Ｖ＝１９：１、３０ｍｌ）を加え、次に該混合物を７０℃に加熱して溶解させた。（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド（１.０ｇ、２.２２ミリモル）（実施例１の方法に従って製造））を添加し、次に反応を７０℃で２４時間実施させた。該混合物を室温に冷却し、濾過し、乾燥させて固体（１.２０ｇ）を、収率：９０.２％で得た。Ｘ線回折スペクトルおよびＤＳＣスペクトルを研究して比較した後、該生成物は結晶形Ｉと同定された。
【００４３】
実施例６．  マレイン酸塩の製造
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド（６００ｍｇ、１.３２ミリモル）をエタノール（２０ｍｌ）に加えた。７０℃に加熱し、１時間攪拌した後でも、混合物は透明にならなかった。マレイン酸（１８６ｍｇ、１.６ミリモル）を添加すると、該溶液は速やかに透明になった。該混合物を７０℃で１８時間攪拌し、少量の固体が沈殿した。混合物を自然に室温まで冷却し、２時間後には大量の固体が沈殿した。反応溶液を濾過した。濾過ケーキをエタノール（２ｍＬｘ２）で濯ぎ、集め、真空下で乾燥させて表記化合物（６００ｍｇ、白色の固体）を、収率：７９％で得た。
１Ｈ  ＮＭＲ核磁気データは、塩での主要成分のマレイン酸に対するモル比が１：１であることを示した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ２.００（ｄ，４Ｈ）、２.３３（ｂｒｓ，３Ｈ）、３.１７（ｂｒｓ，３Ｈ）、３.４４（ｂｒｓ，１Ｈ）、３.５９（ｂｒｓ，１Ｈ）、３.７４（ｂｒｓ，１Ｈ）、４.１１（s，４Ｈ）、４.３７（ｂｒｓ，１Ｈ）、５.２８−５.５２（ｍ，３Ｈ）、６.０２（s，２Ｈ）、６.３５（ｂｒｓ，１Ｈ）、７.６３−７.８９（ｍ，３Ｈ）、８.９３（s，１Ｈ）、９.１１（ｂｒｓ，１Ｈ）、９.５８（ｂｒｓ，１Ｈ）
【００４４】
実施例７．  塩酸塩の製造
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド（１００ｍｇ、０.２２ミリモル）をエタノール（３ｍｌ）に溶かしたが、７０℃で３０分間加熱した後でも完全には溶解しなかった。１２Ｍの濃塩酸（０.０２ｍＬ、０.２９ミリモル）を上記の溶液に滴下して加えたが、有意な変化はなかった。該溶液を７０℃に加熱し、１７時間攪拌し、次に白色の粉末が溶液中に現れた。熱い状態のうちに、その反応溶液を濾過した。濾過ケーキをエタノール（２ｍＬｘ２）で洗浄し、集め、真空下で乾燥させて表記化合物（８５ｍｇ、白色の固体）を、収率：７９％で得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １.９１−２.１９（ｍ，４Ｈ）、２.３２−２.４０（ｍ，３Ｈ）、３.０７−３.２９（ｍ，３Ｈ）、３.４１−３.５６（ｍ，１Ｈ）、３.７６（ｂｒｓ，１Ｈ）、３.９８−４.２０（ｍ，４Ｈ）、５.３７−５.４９（ｍ，２Ｈ）、５.５５（ｄ，１Ｈ）、６.４３（ｄ，１Ｈ）、７.７１−７.８２（ｍ，３Ｈ）、８.８６−８.９３（ｍ，１Ｈ）、９.０８（ｄ，１Ｈ）、１０.２７（ｂｒｓ，１Ｈ）
【００４５】
実施例８．  硫酸塩の製造
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド（１５０ｍｇ、０.３３ミリモル）を、ジクロロメタン（８ｍＬ）とイソプロパノール（４ｍＬ）の混合溶液に溶かすが、完全には溶解しなかった。濃硫酸（４２ｍｇ、０.４３ミリモル）を上記の溶液に滴下して加え、それを室温（１６℃）で４時間攪拌し、次にメチルtert−ブチルエーテル（４ｍｌ）を添加した。該反応溶液を氷浴中にて冷却し、固体を沈殿させ、ついで濾過した。濾過ケーキを集め、真空下で乾燥させ、表記化合物（１５３ｍｇ、白色の固体）を、収率：８５％で得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １.８９−２.１８（ｍ，４Ｈ）、２.３０−２.４０（ｍ，３Ｈ）、３.０７−３.３０（ｍ，３Ｈ）、３.４５（ｂｒｓ，１Ｈ）、３.６６（ｄ，１Ｈ）、３.７５−３.８５（ｍ，１Ｈ）、３.９７−４.１９（ｍ，３Ｈ）、５.３１−５.５３（ｍ，３Ｈ）、６.２８−６.４８（ｍ，１Ｈ）、７.７１−７.８３（ｍ，３Ｈ）、８.８３−８.９６（ｍ，１Ｈ）、９.１０（ｄ，１Ｈ）、９.５１（ｂｒｓ，１Ｈ）
【００４６】
実施例９．  クエン酸塩の製造
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド（１６１ｍｇ、０.３６ミリモル）をイソプロパノール（５ｍｌ）に溶かすが、完全には溶解しなかった。クエン酸（８９ｍｇ、０.４６ミリモル）を上記の溶液に添加した。加熱して１６時間還流させ、攪拌した後であっても該材料は完全には溶解せず、多量の粉末状の固体が存在した。該混合物を濾過し、濾過ケーキを集め、真空下で乾燥させた。固体を粉砕し、十分に混合して表記化合物（１５０ｍｇ、白色の固体）を、収率：６５％で得た。
１Ｈ  ＮＭＲ核磁気データは、塩での主要成分のクエン酸に対するモル比が１：１であることを示した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １.８３（ｂｒｓ，４Ｈ）、２.３０（s，３Ｈ）、２.５２−２.６５（ｍ，３Ｈ）、２.６７（ｂｒｓ，１Ｈ）、２.７０−２.８２（ｍ，２Ｈ）、３.２１（ｂｒｓ，２Ｈ）、３.３２（ｂｒｓ，１Ｈ）、３.６９−３.８２（ｍ，１Ｈ）、３.９２（ｂｒｓ，１Ｈ）、４.１０（s，３Ｈ）、４.３４（ｂｒｓ，１Ｈ）、５.１９（ｄ，１Ｈ）、５.３５−５.４７（ｍ，２Ｈ）、７.６８−７.７４（ｍ，２Ｈ）、７.７８（s，１Ｈ）、８.８５（ｄ，１Ｈ）、８.９０（s，１Ｈ）
【００４７】
実施例１０．  リン酸塩の製造
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド（１００ｍｇ、０.２２ミリモル）をイソプロパノール（３ｍＬ）に溶かしたが、７０℃で３０分間加熱した後でも完全には溶解しなかった。リン酸（３３ｍｇ、０.２９ミリモル）を上記の溶液に滴下して加え、次に固体を濃縮して溶液中に沈殿させた。混合物を７０℃に加熱して１６時間攪拌し、溶液中の固体は粉末状であった。混合物を冷却することなく濾過し、濾過ケーキを集め、イソプロパノール（２ｍＬｘ２）で洗浄し、表記化合物（１１０ｍｇ、白色の固体）を、収率：９１％で得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １.８２（ｂｒｓ，４Ｈ）、２.２９（s，３Ｈ）、２.５０−２.７８（ｍ，４Ｈ）、３.１８（ｂｒｓ，２Ｈ）、３.８８（ｂｒｓ，１Ｈ）、４.０３−４.１６（ｍ，３Ｈ）、５.１９（ｄ，１Ｈ）、５.３４−５.４６（ｍ，２Ｈ）、７.６８−７.７４（ｍ，２Ｈ）、７.７８（s，１Ｈ）、８.８２（ｄ，１Ｈ）、８.９０（s，１Ｈ）
【００４８】
実施例１１．  フマル酸塩の製造
方法１．  （Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド（１５２ｍｇ、０.３８ミリモル）をジクロロメタン（６ｍＬ）およびメタノール（３ｍＬ）の混合溶液に溶かした。フマル酸（５１ｍｇ、０.４４ミリモル）をエタノール（１.５ｍＬ）に溶かし、次に上記の溶液に滴下して加えた。該溶液を４０℃に加熱し、１８時間攪拌し、次に氷浴にて冷却し、固体は沈殿しなかった。メチルtert−ブチルエーテル（６ｍＬ）を該反応溶液に添加したが、それでも固体は沈殿しなかった。さらにメチルtert−ブチルエーテル（６ｍＬ）を添加し、固体が沈殿するようにした。混合物を減圧下で濾過し、表記化合物（１６５ｍｇ、白色の固体）を、収率：７７％で得た。
１Ｈ  ＮＭＲ核磁気データは、塩での主要成分のフマル酸に対するモル比が１：０.５であることを示した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １.６４−１.８０（ｍ，４Ｈ）、２.２０−２.３６（ｍ，６Ｈ）、２.４１−２.４８（ｍ，１Ｈ）、２.５２−２.６０（ｍ，１Ｈ）、３.００（ｄ，２Ｈ）、３.１７（s，１Ｈ）、３.８０（ｂｒｓ，１Ｈ）、４.１０（s，３Ｈ）、５.１０（ｄｄ，１Ｈ）、５.３４−５.４５（ｍ，２Ｈ）、６.５９（s，１Ｈ）、７.６５−７.７２（ｍ，２Ｈ）、７.７８（s，１Ｈ）、８.７６（ｄ，１Ｈ）、８.８９（s，１Ｈ）
【００４９】
方法２．  （Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド（１００ｍｇ、０.２２ミリモル）およびフマル酸（３１ｍｇ、０.２６ミリモル）をジオキサン（１ｍＬ）およびアセトニトリル（０.５ｍＬ）の混合溶媒に溶かした。７０℃に加熱し、１８時間攪拌すると、反応溶液は透明になった。反応混合物を室温（２０℃）に冷却すると固体が沈殿した。混合物を減圧下で濾過し、表記化合物（７０ｍｇ、白色の固体）を、収率：５６％で得た。
１Ｈ  ＮＭＲ核磁気データは、塩での主要成分のフマル酸に対するモル比が１：１であることを示した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １.７６（ｂｒｓ，４Ｈ）、２.２５−２.３８（ｍ，６Ｈ）、２.５４−２.６２（ｍ，１Ｈ）、３.０４（ｄ，２Ｈ） ３.８１（ｂｒｓ，１Ｈ）、４.１０（s，３Ｈ）、５.１２（ｄｄ，１Ｈ）、５.３４−５.４７（ｍ，２Ｈ）、６.６０（s，２Ｈ）、７.６４−７.７４（ｍ，２Ｈ）、７.７８（s，１Ｈ）、８.７７（ｄ，１Ｈ）、８.８９（s，１Ｈ）
【００５０】
実施例１２．  コハク酸塩の製造
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド（５０ｍｇ、０.１１ミリモル）およびコハク酸（１５ｍｇ、０.１３ミリモル）をメタノール（１.５ｍＬ）に溶かした。６０℃に４時間加熱しても該材料は完全に溶けなかった。混合物を自然に室温（１９℃）に冷却し、１８時間攪拌し、次に濾過した。濾過ケーキをメタノール（１ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて表記化合物（５０ｍｇ、白色の固体）を、収率：８１％で得た。
【００５１】
実施例１３．  リンゴ酸塩の結晶形１の製造
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド（５０ｍｇ、０.１１ミリモル）をメタノール（１.５ｍＬ）および水（０.１５ｍＬ）の混合溶液に加え、次にリンゴ酸（１７ｍｇ、０.１３ミリモル）を添加した。５０℃に加熱し、４時間攪拌しても、該混合物は透明にならなかった。該混合物を自然に室温にまで冷却し、１６時間攪拌した。反応溶液を濾過し、濾過ケーキをエタノール（５ｍＬｘ２）で濯ぎ、集め、真空下で乾燥させて表記化合物（４０ｍｇ、白色の固体）を、収率：６７％で得た。
【００５２】
該サンプルは、６.８５（１２.９）、９.７６（９.０６）、１１.８１（７.４９）、１２.４８（７.０９）、１３.５２（６.５４）、１４.２３（６.２２）、１５.２９（５.７９）、１５.９４（５.５６）、１７.５５（５.０５）、１７.８９（４.９６）、１９.６５（４.５１）、２０.２５（４.３８）、２１.５０（４.１３）、２２.６８（３.９２）、２３.５０（３.７８）、２４.２７（３.６６）、２５.２２（３.５３）、２６.１８（３.４０）、２７.８３（３.２０）、２８.５９（３.１２）、３４.８８（２.５７）、および３５.８４（２.５０）に特性ピークがある。そのＸ線粉末回折スペクトル（ＸＲＰＤスペクトル）を図５に示す。１３７.６５℃にシャープな溶融吸熱ピークのある、ＤＳＣ−ＴＧＡスペクトルを図６に示す。その結晶形は結晶形１であると定められた。
【００５３】
実施例１４．  リンゴ酸塩の結晶形２の製造
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド（５０ｍｇ、０.１１ミリモル）をアセトニトリル（１.５ｍＬ）および脱イオン水（０.１５ｍＬ）の混合溶液に加え、次にリンゴ酸（１７ｍｇ、０.１３ミリモル）を添加した。５０℃に加熱し、４時間攪拌すると、該混合物は透明になった。該混合物を自然に室温まで冷却し、１６時間攪拌し、固体を沈殿させた。反応溶液を濾過し、濾過ケーキを集め、真空下で乾燥させ、表記化合物（４０ｍｇ、白色の固体）を、収率：６７％で得た。
１Ｈ  ＮＭＲ核磁気データは、塩での主要成分のリンゴ酸に対するモル比が１：１であることを示した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １.６７−１.９１（ｍ，４Ｈ）、２.２９（s，３Ｈ）、２.３９−２.４４（ｍ，２Ｈ）、２.５７（ｄｄ，２Ｈ）、２.６２−２.７７（ｍ，２Ｈ）、３.１０−３.２３（ｍ，２Ｈ）、３.８３−３.９５（ｍ，１Ｈ）、４.０４−４.１７（ｍ，４Ｈ）、５.１８（ｄｄ，１Ｈ）、５.３３−５.４９（ｍ，２Ｈ）、７.６７−７.７４（ｍ，２Ｈ）、７.７８（s，１Ｈ）、８.８３（ｄ，１Ｈ）、８.９０（s，１Ｈ）
【００５４】
該サンプルは、７.３０（１２.００）、９.３４（９.４６）、１０.６１（８.３３）、１２.２４（７.２３）、１２.７８（６.９２）、１３.８３（６.４０）、１４.２６（６.２１）、１５.５２（５.７１）、１６.３３（５.４２）、１７.８３（４.９７）、１８.８３（４.７１）、１９.８６（４.４７）、２０.５５（４.３２）、２１.７２（４.０９）、２２.３１（３.９８）、２２.６２（３.９３）、２３.４２（３.８０）、２４.７８（３.５９）、２５.０３（３.５５）、２５.２７（３.５２）、２５.７８（３.４５）、２６.０２（３.４２）、２６.７６（３.３３）、２７.１０（３.２９）、２７.９９（３.１９）、３０.０１（２.９８）、３０.７２（２.９１）、３１.１９（２.８７）、３２.４１（２.７６）、３３.２３（２.６９）、３３.８３（２.６５）、３４.４１（２.６０）、３５.４８（２.５３）、３６.６８（２.４５）、３８.２０（２.３５）、３８.９２（２.３１）、３９.８７（２.２６）、４１.２５（２.１９）、４１.９４（２.１５）、４２.３８（２.１３）、４４.２５（２.０５）、および４５.７２（１.９８）に特性ピークがある。そのＸ線粉末回折スペクトル（ＸＲＰＤスペクトル）を図７に示す。１８７.９０℃にシャープな溶融吸熱ピークのある、ＤＳＣ−ＴＧＡスペクトルを図８に示す。その結晶形は結晶形２であると定められた。
【００５５】
実施例１５．  リンゴ酸塩の結晶形３の製造
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド（５０ｍｇ、０.１１ミリモル）をイソプロパノール（１.５ｍＬ）に加え、次にリンゴ酸（１７ｍｇ、０.１３ミリモル）を添加した。６０℃に加熱し、４時間攪拌しても混合物は透明にならなかった。該混合物を自然に室温まで冷却し、１６時間攪拌し、コロイド状固体を沈殿させた。反応混合物を濾過し、濾過ケーキをイソプロパノール（１ｍＬｘ１）で濯ぎ、集め、真空下で乾燥させ、表記化合物（５０ｍｇ、白色の固体）を、収率：８０％で得た。
【００５６】
該サンプルは、７.０７（１２.４９）、９.３４（９.４７）、１０.６３（８.３１）、１２.７９（９.９２）、１４.２２（６.２２）、１５.５０（５.７１）、１７.８４（４.９７）、１８.８６（４.７０）、１９.９３（４.４５）、２２.５６（３.９４）、２３.５１（３.７８）、２５.１６（３.５４）、および３０.９０（２.８９）に特性ピークがある。１８６.１９℃にシャープな溶融吸熱ピークのある、そのＸ線粉末回折スペクトル（ＸＲＰＤスペクトル）を図９に示す。その結晶形は結晶形３であると定められた。
【００５７】
実施例１６．  リンゴ酸塩の結晶形Ａの製造
（Ｒ）−５−シアノ−Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−（４−メチル−１−オキソ−１,３−ジヒドロイソベンゾフラン−５−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）−４−メトキシピコリンアミド（５０ｍｇ、０.１１ミリモル）をイソプロパノール（１.５ｍＬ）と水（１.５ｍＬ）の混合溶液に加え、次にリンゴ酸（１７ｍｇ、０.１３ミリモル）を加えた。５０℃に加熱し、４時間攪拌しても混合物は透明にならなかった。該混合物を自然に室温まで冷却し、１６時間攪拌した。反応溶液を濾過し、濾過ケーキをエタノール（５ｍＬｘ２）で濯ぎ、集め、真空下で乾燥させ、表記化合物（４０ｍｇ、白色の固体）を、収率：６７％で得た。
１Ｈ  ＮＭＲ核磁気データは、塩での主要成分のリンゴ酸に対するモル割合が１：０.５であることを示した。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １.７３（ｂｒｓ，１Ｈ）、１.７８（ｂｒｓ，３Ｈ）、２.２９（s，３Ｈ）、２.３３−２.４４（ｍ，２Ｈ）、２.５５（ｄｄ，２Ｈ）、２.６０−２.６８（ｍ，１Ｈ）、３.０９（ｂｒｓ，２Ｈ）、３.８６（ｂｒｓ，１Ｈ）、４.００−４.１６（ｍ，４Ｈ）、５.１４（ｄ，１Ｈ）、５.３３−５.４６（ｍ，２Ｈ）、７.６６−７.７４（ｍ，２Ｈ）、７.７８（s，１Ｈ）、８.８０（ｄ，１Ｈ）、８.８９（s，１Ｈ）
【００５８】
該サンプルは、７.３６（１２.００）、９.９５（８.８８）、１２.１２（７.３０）、１２.６８（６.９７）、１３.５６（６.５３）、１４.７３（６.０１）、１５.３２（５.７８）、１６.２０（５.４７）、１７.２７（５.１３）、１８.７４（４.７３）、２０.００（４.４４）、２１.５７（４.１２）、２２.２１（４.００）、２２.８２（３.８９）、２３.２２（３.８３）、２４.３５（３.６５）、２４.６３（３.６１）、２５.４２（３.５０）、２６.５７（３.３５）、２７.１３（３.２８）、２８.１５（３.１７）、２９.４５（３.０３）、３０.０１（２.９８）、３０.３０（２.９５）、３１.０９（２.８７）、３２.９２（２.７２）、３４.０１（２.６３）、３４.９７（２.５６）、３８.１７（２.３６）、４０.３３（２.２４）、および４３.１９（２.０９）に特性ピークがある。そのＸ線粉末回折スペクトル（ＸＲＰＤスペクトル）を図１０に示す。１４４.７９℃にシャープな溶融吸熱ピークのある、ＤＳＣ−ＴＧＡスペクトルを図１１に示す。その結晶形は結晶形Ａであると定められた。
【００５９】
実施例１７
実施例２にて製造された式（Ｉ）の化合物の結晶形Ｉのサンプル、および実施例３にて製造された結晶形ＩＩのサンプルを、各々、大気中で平らに広げ、光照射（４５００Ｌｕｘ）、加熱（４０℃、６０℃）および高湿度（ＲＨ７５％、ＲＨ９０％）の条件下での安定性を試験した。サンプリングを第５日および第１０日に行った。ＨＰＬＣにより検出された際の純度を表１に示す。
【００６０】
表１．  式（Ｉ）の化合物の結晶形ＩおよびＩＩのサンプルの安定性比較
【表１】
2019517494.tif 000007
【００６１】
安定性実験の結果は、式（Ｉ）の化合物の結晶形Ｉのサンプル、および結晶形ＩＩのサンプルが、各々、光照射、高温および高湿の条件下にて大気中で平らに広げられた場合に、前者の安定性が後者のそれよりも有意に優れていることを示した。
【００６２】
実施例１８
実施例２の方法に従って製造された式（Ｉ）の化合物の結晶形Ｉを粉砕し、加熱して打錠した。結果は結晶形が安定していることを示した。詳細な実験データを下記の表２に示す。
【００６３】
表２．  式（Ｉ）の化合物の結晶形Ｉの特有な安定性研究
【表１】
2019517494.tif 000008
【００６４】
実施例１９．  本発明のリンゴ酸塩の結晶形２および遊離形態のラットにおけるファーマコキネティクスアッセイ
ＳＤラットを試験動物として用いた。本発明のリンゴ酸塩の結晶形２および遊離形態を胃内投与した後に、薬物の血漿中濃度を異なる時点でＬＣ／ＭＳ／ＭＳ方法により測定した。本発明のリンゴ酸塩の結晶形２および遊離形態のファーマコキネティクス行動および特性をＳＤラットにて研究して評価した。
【００６５】
サンプル：本発明のリンゴ酸塩の結晶形２および遊離形態（実施例１の生成物）を、実施例１４および１の方法に従って、製造した。
試験動物：SINO-BRITSH SIPPR／BK LAB. ANIMAL LTD.,COから、証明書番号：SCXK（Shanghai） 2008-0016で購入した、半数が雄で、半数が雌の８匹の健康なＳＤラットを２つの群に分けた。
試験化合物の製造：試験化合物を０.５％ＣＭＣ−Ｎａに加え、超音波により経口投与用の０.５ｍｇ／ｍＬの均質な懸濁液を製造した。
【００６６】
投与：断食して一夜経過した後、半数が雄で、半数が雌の８匹の健康なＳＤラットに、試験化合物を１０ｍＬ／ｋｇの投与容量で胃内投与した。
【００６７】
方法：
断食して一夜経過した後、半数が雄で、半数が雌の８匹の健康なＳＤラットに、試験化合物を胃内投与した。投与前に、ならびに投与した０.５、１、２、４、６、８、１２、および２４時間後に、頸静脈穿刺によって血液サンプル（０.１ｍＬ）を採取し、ヘパリンナトリウムを抗凝血剤として用いた。血液サンプルを３,５００ｒｐｍで１０分間にわたって遠心分離に付し、血漿を分離し、それを−２０℃で貯蔵した。胃内投与した後の、ＳＤラットの血漿中の試験化合物の含量をＬＣ／ＭＳ／ＭＳ方法により測定した。
【００６８】
実験結果
表３．  ＳＤラットにおけるファーマコキネティクスアッセイの結果
（経口投与：５.０ｍｇ／ｋｇ）
【表１】
2019517494.tif 000009
表中、Ｔ１／２は半減期をいい、ＡＵＣｌａｓｔは曲線下面積（０→ｔ）をいい、Ｃｌ／Ｆはクリアランスをいい、およびＶｚ／Ｆは見かけ上の分布容積をいう。
【００６９】
実験結果：
表３の結果から、遊離形態と比較して、本発明のリンゴ酸の結晶形２は、半減期が長く、クリアランスが低く、照射線量が高いことが分かり、それは本発明のリンゴ酸塩の結晶形２が良好なファーマコキネティクス特性を有することを示すものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2019517494.tif 000018
【図７】
2019517494.tif 000019
【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
2019517494.tif 000023
【国際調査報告】
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