(57)【要約】  本発明は、分離されたアウレオバシジウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）酵母菌株ＹＢＣＡ５の生物学的防除剤としての使用に関する。ＹＢＣＡ５を使用して植物病原性細菌および真菌を生物学的防除するためのプロセスおよび組成物も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
分離されたアウレオバシジウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）酵母菌株ＹＢＣＡ５（ＣＢＳ受理番号１４１８８０）。
【請求項２】
ＹＢＣＡ５および農学的に許容可能な担体を含む組成物。
【請求項３】
ＹＢＣＡ５は、生殖に適した細胞の形態で存在する、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
ＹＢＣＡ５生菌の濃度は、固体組成物について約１×１０３〜約１×１０１４、好ましくは約１×１０５〜約１×１０１１、好ましくは約１×１０６〜約１×１０９、好ましくは約１×１０７〜約１×１０８、好ましくは約２×１０７〜約２×１０８ＣＦＵ、好ましくは約２×１０９〜約２×１０１０ＣＦＵ／グラムの範囲であり、かつ液体組成物について約１×１０７〜約１×１０８ＣＦＵ／ミリリットルの範囲であり、好ましくは固体組成物について約２×１０１０ＣＦＵ／グラムおよび液体組成物について約２×１０７ＣＦＵ／ミリリットルである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
少なくとも１種の農学的に許容可能なアジュバントをさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
植物またはその一部上においてシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌を防除する方法であって、前記植物またはその一部をＹＢＣＡ５または請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物と接触させることを含む方法。
【請求項７】
シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌の少なくとも１種の菌株は、Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）、Ｐ．アミグダリア（Ｐ．ａｍｙｇｄａｌｉａ）、Ｐ．アベルラナエ（Ｐ．ａｖｅｌｌａｎａｅ）、Ｐ．カリカパパヤエ（Ｐ．ｃａｒｉｃａｐａｐａｙａｅ）、Ｐ．シコリイ（Ｐ．ｃｉｃｈｏｒｉｉ）、Ｐ．コロナファシエンス（Ｐ．ｃｏｒｏｎａｆａｃｉｅｎｓ）、Ｐ．フィクセレクタエ（Ｐ．ｆｉｃｕｓｅｒｅｃｔａｅ）、Ｐ．ヘリアンティ（Ｐ．ｈｅｌｉａｎｔｈｉ）、Ｐ．レミアエ（Ｐ．ｌｅｍｉａｅ）、Ｐ．サバスタノイ（Ｐ．ｓａｖａｓｔａｎｏｉ）およびＰ．ビリディフラバ（Ｐ．ｖｉｒｉｄｉｆｌａｖａ）もしくはその病原型またはそれらの組合せからなる群から選択される細菌の菌株であり、好ましくは、前記少なくとも１種の菌株は、Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）またはその病原型であり、より好ましくは、前記少なくとも１種の菌株は、Ｐ．シリンガエｐｖ．アクチニジアエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅ）（Ｐｓａ）である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記植物またはその一部は、農業的に重要な蔓作物および農業的に重要な果樹ならびにその栽培品種および生産物からなる群から選択される農業的に重要な植物、その栽培品種またはその生産物であり、好ましくは、前記農業的に重要な果樹またはその栽培品種は、オリーブの樹木、リンゴの樹木、西洋ナシの樹木、柑橘類の樹木、バナナの樹木、パイナップルの樹木、モモの樹木、アンズの樹木、チェリーの樹木、クルミの樹木およびハシバミの樹木から選択され、かつ前記その生産物は、それぞれオリーブ、リンゴ、西洋ナシ、柑橘類、バナナ、パイナップル、モモ、アンズ、チェリー、クルミおよびハシバミであり、好ましくは、前記農業的に重要な蔓作物またはその栽培品種は、ジャガイモの蔓作物、ビートルートの蔓作物、マメの蔓作物、エンドウマメの蔓作物、トマトの蔓作物、キュウリの蔓作物、メロンの蔓作物、ベリーの蔓作物、ブドウの蔓作物およびキウイフルーツの蔓作物から選択され、かつ前記その生産物は、それぞれジャガイモ、ビートルート、マメ、エンドウマメ、トマト、キュウリ、メロン、ベリー、ブドウおよびキウイフルーツであり、好ましくは、前記農業的に重要な蔦作物は、キウイフルーツの蔦作物またはその栽培品種であり、かつ前記生産物は、キウイフルーツである、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
前記キウイフルーツの蔦作物は、グリーンの果肉のキウイフルーツ（アクチニジア・キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ））、ゴールデンキウイフルーツ（Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ））、チャイニーズエッググーズベリー（Ａ．コリアケア（Ａ．ｃｏｒｉａｃｅａ））、ベビーキウイフルーツ（Ａ．アルグータ（Ａ．ａｒｇｕｔａ））、アークティックキウイフルーツ（Ａ．コロミクタ（Ａ．ｋｏｌｏｍｉｋｔａ））、レッドキウイフルーツ（Ａ．メラナンドラ（Ａ．ｍｅｌａｎａｎｄｒａ）、Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ））、シルバーバイン（Ａ．ポリガマ（Ａ．ｐｏｌｙｇａｍａ））およびパープルキウイフルーツ（Ａ．プルプレア（Ａ．ｐｕｒｐｕｒｅａ））またはその栽培品種の種からなる群から選択され、好ましくは、前記キウイフルーツは、Ａ．キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）およびＡ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の種またはその栽培品種からなる群から選択され、好ましくは、前記キウイフルーツは、Ａ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の種であり、好ましくは、前記キウイフルーツは、Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス・プランク（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  Ｐｌａｎｃｈ）であり、好ましくは、前記栽培品種は、「Ｈａｙｗａｒｄ」、「Ｈｏｒｔ１６Ａ」または「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」品種の栽培品種である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
キウイフルーツ植物またはその一部上においてＰ．シリンガエｐｖ．アクチニジアエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅ）（Ｐｓａ）を防除するための方法であって、前記キウイフルーツ植物またはその一部をＹＢＣＡ５または請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物と共にＡ．キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）もしくはＡ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）またはその栽培品種の種に接触させることを含む方法。
【請求項１１】
シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）によって感染されたかまたはそれに感染されやすい、好ましくはＰｓａに感染されたか、好ましくはそれに感染されやすいキウイフルーツ植物の収量を増大させるための方法であって、前記キウイフルーツ植物またはその一部にＹＢＣＡ５または請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物を施用することを含む方法。
【請求項１２】
植物またはその一部上において少なくとも１種の植物病原性真菌を防除する方法であって、前記植物またはその一部をＹＢＣＡ５または請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物と接触させることを含む方法。
【請求項１３】
植物病原性真菌によって感染されたかまたはそれに感染されやすい果実または野菜植物の収量を増大させるための方法であって、前記果実もしくは野菜植物またはその一部にＹＢＣＡ５または請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物を施用することと、前記植物またはその一部を成長させることとを含む方法。
【請求項１４】
植物またはその一部上、好ましくはキウイフルーツ植物またはその一部上においてシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌を防除するための、ＹＢＣＡ５または請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項１５】
果実もしくは野菜植物またはその一部上において植物病原性真菌を防除するための、ＹＢＣＡ５または請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項１６】
Ｐｓａで感染されたかまたはそれに感染されやすいキウイフルーツ植物またはその一部の収量を増大させるための、ＹＢＣＡ５または請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項１７】
植物病原性真菌によって感染されたかまたはそれに感染されやすい果実もしくは野菜植物またはその一部の収量を増大させるための、ＹＢＣＡ５または請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項１８】
植物またはその一部上においてシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌を防除することにおいて使用されるかまたはそのために使用される場合のＹＢＣＡ５または請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
キウイフルーツ植物またはその一部上においてＰｓａを防除することにおいて使用されるかまたはそのために使用される場合のＹＢＣＡ５または請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
キウイフルーツ植物またはその一部上において植物病原性を防除することにおいて使用されるかまたはそのために使用される場合のＹＢＣＡ５または請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）で感染されたかまたはそれに感染されやすいキウイフルーツ植物またはその一部の収量を増大させることにおいて使用されるかまたはそのために使用される場合のＹＢＣＡ５または請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
Ｐｓａで感染されたかまたはそれに感染されやすいキウイフルーツ植物またはその一部の収量を増大させることにおいて使用されるかまたはそのために使用される場合のＹＢＣＡ５または請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
植物病原性真菌によって感染されたかまたはそれに感染されやすい果実もしくは野菜植物またはその一部の収量を増大させることにおいて使用されるかまたはそのために使用される場合のＹＢＣＡ５または請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
請求項７〜１３のいずれか一項に記載の方法または請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の使用により、ＹＢＣＡ５または請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物で処理された少なくとも１種の植物またはその一部。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、酵母を使用して植物病原性細菌および真菌を生物学的防除する方法に関する。より詳細には、本発明は、生物学的防除活性を有する新規な酵母菌株と、この菌株を使用して果実または野菜植物上で植物病原性細菌および真菌の生存、成長および／または増殖を抑制する方法とに関する。
【背景技術】
【０００２】
植物の病気は、近代農業にとって大きい経済的コストを意味する。現代の農業システムでは、多くの場合、広い面積全体で１種類または数種類の作物または植物を成長させることが必要である。そのような生態学的に不安定なシステムは、病気の影響を受けやすい。
【０００３】
植物に病気を起こさせる細菌および真菌などの病原体を防除することは、従来、化学的農薬を使用して実施されてきた。しかしながら、化学物質を使用することは、多くの不利益を受ける。病原体は、経時的に化学物質に対する耐性を獲得することが可能であり、農薬抵抗性が一層強い個体群を作り出している。化合物の残留物は、環境災害も招き得、かつ健康問題を引き起こし得る。具体的には、植物上ならびに食品およびワイン中への化学物質の残留物と、人の健康および環境へのその影響とに対して消費者の関心が高まっている。
【０００４】
生物学的防除は、植物の病気を防除するための代替手段を意味し、化学物質に対する依存性を抑制する。そのような「天然の」方法がより広く一般的に受容されるようになり、化学的な防除方法よりも効果が高くかつ持続可能であり得る。
【０００５】
シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）は、グラム陰性で好気性のガンマプロテオ細菌の属であり、シュードモナス科（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）に属する。その属は、１９１の分類学的に認められた種を含み、そのうちの多くは、植物病原体である。シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）の中でも、Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）は、繁殖力の強い植物病原体であり、５０種を超える異なる病原型（ｐｖ．）として存在し、それらの多くは、高度の宿主植物特異性を示す。多くの他のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種も植物病原体として作用し得、他のメンバーの中でもとりわけＰ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）亜群がある。例えば、Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）病原型によって起きる商業的に重要な病気としては、石果の細菌性イモチ病、トマトの細菌性斑点病およびエンドウマメの胴枯れ病が挙げられる。
【０００６】
シュードモナス・シリンガエｐｖ．アクチニジアエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅ）（Ｐｓａ）は、キウイフルーツに影響を及ぼす深刻な細菌性疾患である。Ｐｓａは、最初に２０１０年１１月初旬にニュージーランドで記録され、２０１３年７月１８日には果樹園のキウイフルーツのヘクタールの７５％が何らかのＰｓａ感染を受けていた。ニュージーランドのキウイフルーツ産業にＰｓａが与えた直接的なコストは、２０１３年〜２０１８年で３億１千万ドル〜４億１千万ドルであり、長期的には開発の喪失によりその倍を超えると推定される。
【０００７】
多くの細菌性植物疾患と同様に、防除の選択肢は限られている。現在使用されている主な解決策は、作物衛生学、化学物質をベースとした処理、例えば銅ベースの製剤および／または植物防御機能誘発剤、例えばアシベンゾラル−Ｓ−メチル（Ａｃｔｉｇａｒｄ／Ｂｉｏｎ、Ｓｙｎｇｅｎｔａ）ならびに抗生物質、例えば硫酸ストレプトマイシンおよびカスガマイシンである。しかしながら、それらの製剤の使用が厳しく規制されており、それを使用することができるのは、（例えば、ニュージーランドでは）成長期である。加えて、いくつかの主要な輸出地域では、それらの製剤のいくつかの使用が禁止されており、例えばヨーロッパでは園芸にストレプトマイシンを使用することは許可されていない。
【０００８】
２０１２年のシーズンにおいて、ニュージーランドでは、Ｐｓａに対してキウイフルーツを保護する目的で散布に１千３百万ドルが費やされたと推定された。これは、化学物質のコストのみである。他の管理コストは、この推定に含まれていない。ニュージーランド以外でも、Ｐｓａは、ヨーロッパ（イタリア／フランス）、南アフリカならびに潜在的に中国および韓国でも重大な問題となっている。
【０００９】
ボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）および最近同定されたＢ．シュードシネレア（Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｃｉｎｅｒｅａ）は、植物病原性真菌（テレモルフ・ボトリオチニア・フケリアナ（ｔｅｌｅｍｏｒｐｈ  Ｂｏｔｒｙｏｔｉｎｉａ  ｆｕｃｋｅｌｉａｎａ）であり、灰色かび病（ボトリチス（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）胴枯れ病）の病原体である。ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）に起因する全世界での作物損失の推定のいくつかは、ヨーロッパで年間１００〜１０００億ユーロ程度である（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｓｃｏｐｅ．ｃｎｓ．ｆｒ）。ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）は、ブドウの房腐れ病の病原でもあり、ニュージーランドのワイン産業のみでも年間１千８００万ドルの損害の原因となっていると推定される。ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）の防除は、殺真菌剤によるものであった。病原性細菌を防除する目的で化学物質による処理を用いた場合と同様に、この方法は、多くのブドウ園で殺真菌剤への耐性が広まり、農薬残留物を低減することに対する消費者圧力が存在するために持続可能でない。
【００１０】
果実での褐色腐敗病は、モニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）真菌が原因である。モニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）は、チェリー、プラム、モモ、アンズ、イチゴ、キイチゴ、リンゴおよび西洋ナシを含め、バラ科（Ｆａｍｉｌｙ  Ｒｏｓａｃｅａｅ）における多くの経済的に重要な作物の病原体である。モニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）は、ツツジ科（Ｆａｍｉｌｙ  Ｅｒｉｃａｃｅａｅ）に属する多くの顕花植物の病原体でもある。モニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）によってもたらされる損害は、多くの場合、作物および貴重な観賞用の花に対する大きい損失の原因となり得る。モニリニア（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ）属は、約３０の分類記載種を含む。
【００１１】
重要なことに、植物病原性真菌の影響に起因する収入損失は、世界中におけるこれらの病原体による経済的影響全体の一部のみである。ボトリチス（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）の場合と同様に、経済的に重要な作物におけるモニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）およびスクレロティニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｐｐ．）の防除も、従来、殺真菌剤によるものであった。いくつかの推定では、病気を有する１つのみの作物に対するボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）の化学的防除のコストは、単独で７億８千万ドルに達し得、処理された植物は、顕著な生産損失をさらにもたらすと考えられる（Ｇｅｎｅｓｃｏｐｅ，２００２）；（Ｌａｌｕｋ，Ｋｒｉｓｔｉｎ  ａｎｄ  Ｔｅｓｆａｙｅ  Ｍｅｎｇｉｓｔｅ；２０１０，ｉｎ  Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  Ｂｏｏｋ  ２０１０，Ｖｏｌ．８）。
【００１２】
したがって、上で述べてきたように経済的、健康的および環境的な多くの理由から、化学物質をベースとする処理、植物防御機能誘発剤および抗生物質を使用することには限度がある。したがって、これらの病気を持続可能に管理することを目的とした、化学物質をベースとする処理と同様のコスト、健康および環境的な問題点を有さない新規な生物学的防除の解決方法が必要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的は、少なくとも１種の酵母生物学的防除剤、および／または少なくとも１種の酵母生物学的防除剤を含む組成物、および／または少なくとも１種の植物もしくはその一部上でシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌、好ましくはシュードモナス・シリンガエｐｖ．アクチニジアエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅ）（Ｐｓａ）を防除するためのそのような薬剤および／またはそのような組成物を使用する方法を提供すること、ならびに／あるいは少なくとも人々に有用な選択肢を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
１つの態様では、本発明は、分離されたアウレオバシジウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）酵母菌株ＹＢＣＡ５（ＣＢＳ受理番号１４１８８０）に関する。
【００１５】
別の態様では、本発明は、分離されたアウレオバシジウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）酵母菌株ＹＢＣＡ５（ＣＢＳ受理番号１４１８８０）および農学的に許容可能な担体を含む組成物に関する。
【００１６】
別の態様では、本発明は、分離されたアウレオバシジウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）酵母菌株ＹＢＣＡ５（ＣＢＳ受理番号１４１８８０）および農学的に許容可能な担体から実質的になる組成物に関する。
【００１７】
別の態様では、本発明は、植物またはその一部上においてシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌を防除する方法であって、植物またはその一部をＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物と接触させることを含む方法に関する。
【００１８】
別の態様では、本発明は、植物またはその一部上においてシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌を防除するためのＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物の使用に関する。
【００１９】
別の態様では、本発明は、植物またはその一部上においてシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌を防除することおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物に関する。
【００２０】
別の態様では、本発明は、キウイフルーツ植物またはその一部上においてＰ．シリンガエｐｖ．アクチニジアエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅ）（Ｐｓａ）を防除するための方法であって、キウイフルーツ植物またはその一部をＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物と接触させることを含む方法に関する。
【００２１】
別の態様では、本発明は、Ｐｓａに感染されたかまたはそれに感染されやすいキウイフルーツ植物の収量を増大させるための方法であって、キウイフルーツ植物またはその一部にＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物を施用することと、キウイフルーツ植物またはその一部を成長させることとを含む方法に関する。
【００２２】
別の態様では、本発明は、キウイフルーツ植物またはその一部上においてＰｓａを防除するためのＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物の使用に関する。
【００２３】
別の態様では、本発明は、Ｐｓａに感染されたかまたはそれに感染されやすいキウイフルーツ植物の収量を増大させるためのＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物の使用に関する。
【００２４】
別の態様では、本発明は、キウイフルーツ植物またはその一部上においてＰｓａを防除することおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物に関する。
【００２５】
別の態様では、本発明は、Ｐｓａに感染されたかまたはそれに感染されやすいキウイフルーツ植物の収量を増大させることおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物に関する。
【００２６】
別の態様では、本発明は、植物またはその一部上において少なくとも１種の植物病原性真菌を防除する方法であって、植物またはその一部をＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物と接触させることを含む方法に関する。
【００２７】
別の態様では、本発明は、植物病原性真菌に感染されたかまたはそれに感染されやすい果実または野菜植物の収量を増大させるための方法であって、果実もしくは野菜植物またはその一部ＹＢＣＡ５にＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物を施用することと、植物またはその一部を成長させることとを含む方法に関する。
【００２８】
別の態様では、本発明は、果実もしくは野菜植物またはその一部上において植物病原性真菌を防除するためのＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物の使用に関する。
【００２９】
別の態様では、本発明は、植物病原性真菌に感染されたかまたはそれに感染されやすい果実もしくは野菜植物またはその一部の収量を増大させるためのＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物の使用に関する。
【００３０】
別の態様では、本発明は、植物またはその一部上において少なくとも１種の植物病原性真菌を防除することおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物に関する。
【００３１】
別の態様では、本発明は、果実もしくは野菜植物またはその一部上において少なくとも１種の植物病原性真菌を防除することおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物に関する。
【００３２】
別の態様では、本発明は、少なくとも１種の植物病原性真菌に感染されやすい果実または野菜植物の収量を増大させることおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物に関する。
【００３３】
別の態様では、本発明は、ＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物を用いて処理された少なくとも１種の植物またはその一部に関する。
【００３４】
別の態様では、本発明は、ＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物を用いて処理された少なくとも１種の果実もしくは野菜植物またはその一部に関する。
【００３５】
別の態様では、本発明は、ＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物を用いて処理された少なくとも１種の植物またはその一部に関する。いくつかの実施態様では、植物は、果実もしくは野菜植物またはその一部である。１つの実施態様では、植物は、キウイフルーツの蔓作物、チェリーの樹木またはブドウの蔓作物である。
【００３６】
本発明のある種の態様の様々な実施形態を上に述べてきたが、本発明は、それらに限定されない。上に言及された本発明の態様の追加の実施形態は、詳細な説明でさらに記述され、かつ本出願の特許請求の範囲に示される。
【００３７】
本発明の他の態様および実施形態は、以下の記述から明らかになり得、それらの記述は、添付の図面を参照しながら単に例として挙げられる。
【００３８】
本明細書に開示された数の範囲の参照（例えば、１〜１０）は、その範囲内のすべての有理数（例えば、１、１．１、２、３、３．９、４、５、６、６．５、７、８、９および１０）およびまたその範囲内の有理数の任意の範囲（例えば、２〜８、１．５〜５．５および３．１〜４．７）の参照を組み入れ、したがって、本明細書に明示的に開示されたすべての範囲のすべての「部分範囲」が本明細書で明示的に開示されることが意図されている。これらは、具体的に意図されていることの単なる例であり、表明された最低値と最高値との間の数値の可能なすべての組合せが同様に本出願で明示的に述べられていると考えられる。
【００３９】
ここで、単なる例を挙げ、図面を参照しながら本発明を記述する。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】水溶性の顆粒製剤（ＹＢＣＡ５顆粒）と比較した（Ｐｓａを２種の用量（５×１０６／液滴および２×１０５／１０ｕＬ（液滴））で接種）、新たに発酵させたＹＢＣＡ５の各種の濃度を用いて処理した鉢植えの「Ｈａｙｗａｒｄ」幼苗でのＰｓａ発病度（葉のネクローシスの平均面積）である。葉の片面あたりそれぞれの用量のＰｓの３滴の１０ｕＬ液滴を使用した。Ｐｓａを接種（２０１４年９月１８日）する８日前および１日前に処理を施し、２８日後に評価した。
【図２】未処理物（Ｎｉｌ）と比較した、鉢植えのキウイフルーツ植物（「Ｈａｙｗａｒｄ」）におけるＰｓａによる葉の病斑の発病度に及ぼすアウレオバシジウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）の各種の分離株の効果（２０１６年４月）である。
【図３】Ｔｅ  Ｐｕｋｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｏｒｃｈａｒｄにおいて天然のＰｓａ接種物に曝露させ、３０日の期間中に４回にわたって処理を施された鉢植えの「Ｈａｙｗａｒｄ」植物における葉のＰｓａネクローシスの罹患率である。葉のネクローシスの評価は、最初の処理を施してから４４日目に実施した。
【図４】ＹＢＣＡ５の有効性の圃場試験である。Ｎｉｌは、未処理の対照植物において観察された斑点病の罹患率である。栽培業者標準は、Ａｃｔｉｇａｒｄおよび銅を用いて処理した植物において観察されたＰｓａ斑点病の罹患率である。「低」および「高」は、それらの植物に対して施用したＹＢＣＡ４およびＹＢＣＡ５のそれぞれの量を示す。圃場は、Ｍａｋｅｔｕであった。キウイフルーツの品種は、「Ｈａｙｗａｒｄ」であった。すべての処理は、蕾のふくらみから開花直前までに施した。６〜１２日の間隔を空けて合計で５回の散布処理を実施した。図４〜８のそれぞれにおいて、「高」の量は、２×１０７細胞／ｍＬであり、「低」の量は、１×１０７細胞／ｍＬである。
【図５】ＹＢＣＡ５の有効性の圃場試験である。Ｎｉｌは、未処理の対照植物において観察された傷の罹患率である。栽培業者標準は、Ａｃｔｉｇａｒｄおよび銅を用いて処理した植物において観察されたＰｓａ斑点病の罹患率である。「低」および「高」は、それらの植物に対して施用したＹＢＣＡ４およびＹＢＣＡ５のそれぞれの量を示す。圃場は、Ｍａｋｅｔｕであった。キウイフルーツの品種は、「Ｈａｙｗａｒｄ」であった。すべての処理は、蕾のふくらみから開花直前までに施した。６〜１２日の間隔を空けて合計で５回の散布処理を実施した。
【図６】葉のネクローシスの平均発病度を示すＹＢＣＡ５の有効性の圃場試験である。キウイフルーツの品種は、「Ｈａｙｗａｒｄ」であった。栽培業者標準は、銅＋抗生物質である。Ｍａｋｅｔｕの２つのサイトにおいて、蕾のふくらみから第一開花まで処理を施した。それぞれ７〜１４日の間隔を空けて６回の処理（散布）を施した。
【図７】芽の褐変の平均発病度を示すＹＢＣＡ５の有効性の圃場試験である。キウイフルーツの品種は、「Ｈａｙｗａｒｄ」であった。栽培業者標準は、銅＋抗生物質である。Ｍａｋｅｔｕの２つのサイトにおいて、蕾のふくらみから第一開花まで処理を施した。それぞれ７〜１４日の間隔を空けて６回の処理（散布）を施した。
【図８】収量（新鮮重量／乾物／果実／ｍ２）の平均増加を示すＹＢＣＡ５の有効性の圃場試験である。キウイフルーツの品種は、「Ｈａｙｗａｒｄ」であった。栽培業者標準は、銅＋抗生物質である。蕾のふくらみから第一開花まで、一度は開花中、一度は着果後に処理を施した。それぞれ７〜１４日の間隔を空けて全部で７回の処理（散布）を施した。新鮮重量、乾物、果実／ｍ２（Ｇｏｌｄ３）および果実／ｍ２（「Ｈａｙｗａｒｄ」）のそれぞれのカテゴリーにおいて、グラフ上の棒は、左から右に順に無処理、栽培業者の標準処理（銅および抗生物質）およびＹＢＣＡ５を表す。
【図９】実験室ベースのアッセイ（アッセイ１）における、殺真菌剤イプロジン（Ｒｏｖｒａｌ（登録商標）Ａｑｕａｆｌｏ）と比較した、チェリー（「Ｓｗｅｅｔ  Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ」）の、モニリニア（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ）による果実腐敗の罹患率に及ぼすＹＢＣＡ５の効果（２０１６年１月〜２月）である。
【図１０】実験室ベースのアッセイ（アッセイ２）における、殺真菌剤イプロジンと比較した、チェリー（「Ｓｗｅｅｔ  Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ」）の、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）による果実腐敗の罹患率に及ぼすＹＢＣＡ５の効果（２０１６年１月〜２月）である。
【図１１】実験室ベースのアッセイ（アッセイ３）における、殺真菌剤キャプタンと比較した、チェリー（「Ｓｗｅｅｔ  Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ」）の、モニリニア（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ）による果実腐敗の罹患率に及ぼすＹＢＣＡ５の効果（２０１６年２月〜３月）である。
【図１２】実験室ベースのアッセイ（アッセイ２）における、殺真菌剤キャプタンと比較した、チェリー（「Ｓｗｅｅｔ  Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ」）の、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）による果実腐敗の罹患率に及ぼすＹＢＣＡ５の効果（２０１６年２月〜３月）である。
【図１３】実験室ベースのアッセイ（アッセイ５）における、殺真菌剤キャプタンと比較した、食用のブドウ（「Ａｕｔｕｍｎ  Ｋｉｎｇ」）のボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）による腐敗の発病度に及ぼすＹＢＣＡ５の効果（２０１５年１０月〜１１月）である。データは、２種のボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）分離株の平均値である。
【図１４】植物病原性真菌感染による、収穫後のキウイフルーツ腐敗の発病度に及ぼすＹＢＣＡ５の効果である。傷をつけた「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」キウイフルーツの、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）、コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）またはホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）を接種し、６日間インキュベーションした後の病変サイズ（ｍｍ）。ＬＳＤ（５％）＝３．４８２、Ｐｆｒ≦０．００１。
【図１５】植物病原性真菌感染による、収穫後のキウイフルーツ腐敗の発病度に及ぼすＹＢＣＡ５の効果である。傷をつけた「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」キウイフルーツの、クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）を接種し、７日間インキュベーションした後の病変サイズ（ｍｍ）。ＬＳＤ（５％）＝１．９４５、Ｐｆｒ≦０．００１。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
定義
本発明をより良く規定するため、および本発明の実施における当業者のための指針として以下の定義を提供する。
【００４２】
特に断らない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が関わる関連する技術分野の当業者に理解されているのと同じ意味を有するものと理解されたい。
【００４３】
植物学、微生物学、分子生物学および生化学における一般的な用語の定義の例は、Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｌａｎｔｓ，Ｒａｖｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，（２００５）；Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｔａｉｚ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ，（２０１０）；Ｂｏｔａｎｙ：Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｌａｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｄ．Ｍａｕｓｅｔｈ，Ｊｏｎｅｓ＆Ｂａｒｔｌｅｔｔ  Ｌｅａｒｎｉｎｇ，（２００３）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅｒａｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃ．Ａ．Ｒｅｄｄｙ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ＡＳＭ  Ｐｒｅｓｓ，（２００８）；Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２ｎｄ  ｅｄ．，Ｊｏｓｈｕａ  Ｌｅｄｅｒｂｕｒｇ，（ｅｄ．），Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，（２０００）；Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｂｙ  Ｃｌｉｆｆｓ  Ｎｏｔｅｓ，Ｉ．Ｅｄｗａｒｄ  Ａｌｃａｍｏ，Ｗｉｌｅｙ（１９９６）；Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２ｄ  ｅｄ．）（１９９４）；Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ  １１ｔｈ  ｅｄ．，Ｂｒｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｅａｒｓｏｎ  Ｐｒｅｎｔｉｃｅ  Ｈａｌｌ，（２００６）；Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｆｕｎｇｉ：Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｍｕｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，（２００４）；Ｇｅｎｅｓ  ＩＸ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ  Ｌｅｗｉｎ，Ｊｏｎｅｓ＆Ｂａｒｔｌｅｔｔ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，（２００７）；Ｔｈｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｋｅｎｄｒｅｗ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｔｄ．，（１９９４）；およびＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ａ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，Ｒｏｂｅｒｔ  Ａ．Ｍｅｙｅｒｓ（ｅｄ．）、ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，（１９９５）に見出すことができる。
【００４４】
また、本発明の実施は、例えば、以下の文献に記述されているような当技術分野で公知の標準的な植物学、微生物学、分子生物学および生化学のプロトコルおよび手順を使用して実施することが可能であると考えられる：Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｊ．Ｆ．Ｔ．Ｓｐｅｎｃｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，（２００４）；Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｐ．Ｄ．Ｓｈａｒｍａ，Ａｌｐｈａ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，（２００５）；Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｒ．Ｌｅａｄｂｅｔｔｅｒ，Ｇｕｌｆ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、（２００５）ならびに他の一般的に入手可能である、本開示が関わる技術分野の関連する参考資料（これらは、すべて参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【００４５】
「植物」という用語には、本明細書で使用するとき、植物のライフサイクルのすべてのステージからの植物および植物のすべての部分全体が包含され、それらの例を非限定的に挙げれば、例えば、栄養および生殖細胞および組織、むかご、種子、胚、果実、苗条、茎、葉、葉鞘および葉身、花序、根、花やく、小舌、柵状組織、葉肉、表皮、葉耳、内えい、外花えいならびに分げつなどである。
【００４６】
「キウイフルーツ」という用語は、本明細書では、アクチニジア（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ）属からのすべての市場出荷の熟した果実の一般名として使用される。最も一般的なキウイフルーツは、アクチニジア・キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）からのグリーンの果肉のキウイフルーツである。一般的に食用に供される他の種としては、以下のものが挙げられる：ゴールデンキウイフルーツ（Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ））、チャイニーズエッググーズベリー（Ａ．コリアケア（Ａ．ｃｏｒｉａｃｅａ））、ベビーキウイフルーツ（Ａ．アルグータ（Ａ．ａｒｇｕｔａ））、アークティックキウイフルーツ（Ａ．コロミクタ（Ａ．ｋｏｌｏｍｉｋｔａ））、レッドキウイフルーツ（Ａ．メラナンドラ（Ａ．ｍｅｌａｎａｎｄｒａ）；Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ），）、シルバーバイン（Ａ．ポリガマ（Ａ．ｐｏｌｙｇａｍａ））およびパープルキウイフルーツ（Ａ．プルプレア（Ａ．ｐｕｒｐｕｒｅａ））。
【００４７】
「生物学的防除剤」という用語は、本明細書で使用するとき、１種または複数の植物病原体の拮抗物質として作用する薬剤を指す。拮抗物質は、いくつかの形態を取ることができる。１つの形態では、生物学的防除剤は、利用可能な栄養素および／または宿主植物の空間について病原体を克服することができる。別の形態では、生物学的防除剤は、病原体にとって望ましくない環境を作ることができる。したがって、拮抗物質の作用機構としては、抗生作用、菌寄生、栄養素の競合および物理的な排除などが挙げられるが、それらに限定されない。
【００４８】
「防除する」、「防除」、「生態的防除」または「生物学的防除」という用語は、本明細書では相互に置き換え可能に使用され、１種または複数の微生物によるかまたはそれらを介して達成される病原体の接種量または病害活性の抑制を指す。一般的に理解されているのは、植物病原性細菌または真菌、特に植物病原性のシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）、コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）、ホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、モニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）およびスクレロティニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｐｐ．）による感染の予防または抑制、特にそのような感染の速度または程度の抑制であり、それは、細菌または真菌の生存、成長および／または増殖を抑制することを含む。治療的処理も想定される。
【００４９】
「統計的に有意な」という用語は、本明細書で使用するとき、ある結果または関係が偶然の機会以外のものによって引き起こされる可能性を指す。当技術分野で公知でありかつ使用されている統計的仮説の検証を使用して、結果が統計的に有意であることを照明することができる。統計的仮説の検証により、当技術分野で公知の「Ｐ値」が得られ、それは、測定された結果が偶然の機会のみに基づいている確率を表す。有意水準が５％（０．０５）以下であれば、統計的に有意であるとみなすことが当技術分野で一般的に受け入れられていると考えられる。
【００５０】
「有効量」という用語は、本明細書で使用するとき、植物内および／または上において植物病原性細菌または真菌感染から保護するか、それを遅らせるか、低減するか、安定化させるか、改良するか、または処理するのに有効な量を意味する。
【００５１】
「果実または野菜植物の収量を増大させる」および「キウイフルーツ植物の収量を増大させる」という用語は、本明細書で使用するとき、収穫可能な果実および／またはキウイフルーツの生産速度の増大、収穫可能な果実および／またはキウイフルーツの合計数の増大（果実および／またはキウイフルーツの絶対数の増大または病気症状を呈するものを減らすことにより販売可能な果実の数が増大することを含む）ならびに本発明により処理された果実植物もしくは野菜植物またはキウイフルーツ植物で生産される個々の果実および／またはキウイフルーツのサイズの何らかの増大であることを一般的に意味する。増大は、一般的に、本発明の菌株または組成物を用いて処理していない対応する植物と比較することにより決められる。
【００５２】
「農学的に許容可能なアジュバント」という用語は、本明細書で使用するとき、農業分野において農業的な配合物中で有用な添加物であると一般的にみなされているかまたは農業的な処理を用いて実施される化合物または物質を指す。
【００５３】
「追加の活性薬剤」という用語は、本明細書で使用するとき、本発明において有用な酵母による植物病原性のシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌または植物病原性真菌のボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）、コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）、ホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、モニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）およびスクレロティニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｐｐ．）の（本明細書で定義されたような）防除に寄与することが可能であるか、または植物病原性細菌および真菌によって引き起こされる植物の病気の防除において本発明で有用な酵母の効果を増強することが可能な任意の化合物または物質を意味する。
【００５４】
「配合剤」という用語は、本明細書で使用するとき、（本明細書で定義されたような）植物に対する本発明の組成物または本発明において使用するための組成物の製造、取り扱い、貯蔵、輸送、施用および／または持続性を容易にするかまたは最適化する任意の化合物または物質を指すが、それらに限定されない。
【００５５】
「農学的に許容可能な担体」という用語は、当技術分野で一般的に理解されているのと同じように本明細書で使用される。好ましい農学的に許容可能な担体は、水であるが、それに限定されない。
【００５６】
「含む」という用語は、本明細書で使用するとき、「少なくとも部分的になる」ことを意味する。本明細書において、「含む」という用語を含むそれぞれの記述を解釈する場合、この文言の後に続くものと別の特性も存在する可能性がある。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」などの関連する用語も同様に解釈されるべきである。
【００５７】
本発明は、一般的に、新規なアウレオバシジウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）酵母菌株ＹＢＣＡ５ならびにＹＢＣＡ５および農学的に許容可能な担体を含む組成物に関する。いくつかの実施態様では、組成物は、農学的に許容可能なアジュバントも含む。本発明の新規な菌株および組成物は、植物病原性細菌および植物病原性真菌、特にシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌ならびにボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）、スクレロティニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｐｐ．）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）、コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）、ホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）およびモニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）真菌によって起きる植物の病気を生態的防除するのに有用である。本発明は、植物またはその一部上において、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）、スクレロティニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｐｐ．）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）、コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）、ホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）およびモニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）真菌からなる群から選択される植物病原性細菌および／または真菌を、植物またはその一部をＹＢＣＡ５と接触させることによって防除する方法にも関する。
【００５８】
本出願人らは、植物上においてシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌および植物病原性真菌を防除するのに有効な分離された酵母菌株ＹＢＣＡ５ならびにＹＢＣＡ５および農学的に許容可能な担体を含む組成物を初めて提供するものである。いくつかの実施態様では、ＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物はまた、農学的に許容可能なアジュバントと共に配合され得る。本出願人らは、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌を生物学的に防除するために酵母、Ａ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）を使用する方法も初めて提供するものである。具体的には、本出願人らは、Ａ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）酵母の菌株またはＡ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）酵母の菌株を含む組成物が、果実または野菜植物、特に果実または野菜の蔓作物、特にキウイフルーツの蔓作物上においてシュードモナス・シリンガエｐｖ．アクチニジアエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅ）（Ｐｓａ）の生存、成長および／または増殖を抑制するのに有効であることを初めて示すものである。
【００５９】
理論に束縛されることを望むものではないが、本出願人らは、本発明の酵母菌株および組成物の有効性が、１種または複数の抗菌性化合物を排出するかまたは植物の防御メカニズムを誘発することにより、Ｐｓａおよび／または植物病原性真菌を競合的に排除する酵母菌株の能力またはそれらの組合せに関連すると考えている。特定の作用機構とは無関係に、本発明者らは、驚くべきことに、ＹＢＣＡ５が、キウイフルーツの蔓作物におけるＰｓａ病を処理するため、チェリーおよびブドウにおけるボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）およびモニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）の感染を処理するため、リンゴおよびキウイフルーツにおけるアルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）、コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）、ホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）を処理するために効果的であることを見出した。
【００６０】
ＹＢＣＡ５は、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌および植物病原性真菌に対する特に効果的な生物学的防除剤である。ＹＢＣＡ５は、配合および施用プロトコルで生存し、処理された植物に迅速に定着し、処理された植物およびその一部上においてシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌および植物病原性真菌の増殖を抑制する能力を示す。ＹＢＣＡ５は、異なる程度において、キウイフルーツの蔓作物におけるＰ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）細菌、特にＰ．シリンガエｐｖ．アクチニジアエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅ）（Ｐｓａ）細菌の防除ならびにボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）、スクレロティニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｐｐ．）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）、コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）、ホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）およびモニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）による収穫後の果実の腐敗の抑制および／または防除に特に有効であることを示した。
【００６１】
ＹＢＣＡ５および組成物
したがって、１つの態様では、本発明は、分離されたアウレオバシジウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）酵母菌株ＹＢＣＡ５（ＣＢＳ受理番号１４１８８０）に関する。
【００６２】
本発明の特定の分離されたＡ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）菌株ＹＢＣＡ５は、特許手続の目的で、Ｂｕｄａｐｅｓｔ  Ｔｒｅａｔｙ  ａｔ  Ｃｅｎｔｒａａｌｂｕｒｅａｕ  ｖｏｏｒ  Ｓｃｈｉｍｍｅｌｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＣＢＳ）（Ｕｐｐｓａｌａｌａａｎ  ８，３５８４，ＣＴ  Ｕｔｒｅｃｈｔ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）に従って２０１６年９月２６日に受託された。この分離物は、ＣＢＳ受理番号１４１８８０を付与された。
【００６３】
分離されたＡ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）酵母菌株ＹＢＣＡ５は、ドチデアレス目（Ｄｏｔｈｉｄｅａｌｅｓ）、アウレオバシジアケアエ科（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉａｃｅａｅ）、アウレオバシジウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属の単細胞の真菌である。細胞は、広範囲の形態変化を示す。ポテトデキストロース寒天上で培養したＡ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）は、滑らかで薄桃色の酵母様のコロニーを産生する。時間を経たコロニーは、厚膜胞子の産生のためにいくぶん黒ずむ。Ａ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）の一次分生子は、単細胞であり、ガラスのように透明であり、滑らかであり、楕円体であり、形状およびサイズが可変である。Ａ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）の分生子柄は、未分化であり、挿入型もしくは末端型であるか、または短い側枝として出ている。内生分生子は、Ａ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）の挿入型細胞により産生される。菌糸は、薄膜でガラスのように透明かつ滑らかであり、横行性の隔壁を有する。増殖は、１０〜３５℃で起こり、最適な増殖温度は、２２〜２５℃である。
【００６４】
別の態様では、本発明は、ＹＢＣＡ５（ＣＢＳ受理番号１４１８８０）および農学的に許容可能な担体を含む組成物に関する。
【００６５】
別の態様では、本発明は、ＹＢＣＡ５（ＣＢＳ受理番号１４１８８０）および農学的に許容可能な担体から実質的になる組成物に関する。
【００６６】
１つの実施態様では、農学的に許容可能な担体は、水である。
【００６７】
この場合にも、理論に束縛されることを望むのものではないが、生物学的防除剤として使用した場合、ＹＢＣＡ５は、生殖に適した生存形態にあるはずであると本発明者らは考えている。ほとんどの目的では、ＹＢＣＡ５を生殖に適した生菌の形態で組成物中に組み入れることが好ましい。乾燥させた細胞としてＹＢＣＡ５を組成物中に組み入れることが好ましい。
【００６８】
本発明の組成物中での細胞濃度は、組成物を施用する用途に依存するであろう。特定の施用のために細胞濃度を最適化することは、当技術分野の技量の範囲に入ると考えられる。
【００６９】
いくつかの実施態様では、本発明の組成物におけるＹＢＣＡ５生菌の濃度は、固体組成物について約１×１０３〜約１×１０１４、好ましくは約１×１０５〜約１×１０１１、好ましくは約１×１０６〜約１×１０９、好ましくは約１×１０７〜約１×１０８、好ましくは約２×１０７〜約２×１０８ＣＦＵ、好ましくは約２×１０９〜約２×１０１０ＣＦＵ／グラムの範囲であり、かつ液体組成物について約１×１０７〜約１×１０８ＣＦＵ／ミリリットルの範囲である。
【００７０】
いくつかの実施態様では、本発明の組成物におけるＹＢＣＡ５生菌の濃度は、固体組成物について１×１０３〜約１×１０１４、好ましくは１×１０５〜約１×１０１１、好ましくは１×１０６〜約１×１０９、好ましくは１×１０７〜約１×１０８、好ましくは２×１０７〜約２×１０８ＣＦＵ、好ましくは２×１０９〜約２×１０１０ＣＦＵ／グラムの範囲であり、かつ液体組成物について１×１０７〜約１×１０８ＣＦＵ／ミリリットルの範囲である。
【００７１】
いくつかの実施態様では、本発明の組成物におけるＹＢＣＡ５生菌の濃度は、固体組成物について約１×１０３〜１×１０１４、好ましくは約１×１０５〜１×１０１１、好ましくは約１×１０６〜１×１０９、好ましくは約１×１０７〜１×１０８、好ましくは約２×１０７〜２×１０８ＣＦＵ、好ましくは約２×１０９〜２×１０１０ＣＦＵ／グラムの範囲であり、かつ液体組成物について約１×１０７〜１×１０８ＣＦＵ／ミリリットルの範囲である。
【００７２】
いくつかの実施態様では、本発明の組成物におけるＹＢＣＡ５生菌の濃度は、固体組成物について１×１０３〜１×１０１４、好ましくは１×１０５〜１×１０１１、好ましくは１×１０６〜１×１０９、好ましくは１×１０７〜１×１０８、好ましくは２×１０７〜２×１０８ＣＦＵ、好ましくは約２×１０９〜２×１０１０ＣＦＵ／グラムの範囲であり、かつ液体組成物について１×１０７〜１×１０８ＣＦＵ／ミリリットルの範囲である。
【００７３】
いくつかの実施態様では、本発明の組成物におけるＹＢＣＡ５生菌の濃度は、固体組成物について約２×１０１０ＣＦＵ／グラムおよび液体組成物について約２×１０７ＣＦＵ／ミリリットルである。
【００７４】
いくつかの実施態様では、本発明の組成物におけるＹＢＣＡ５生菌の濃度は、固体組成物について少なくとも２×１０１０ＣＦＵ／グラムおよび液体組成物について少なくとも２×１０７ＣＦＵ／ミリリットルであり、好ましくは、本発明の組成物におけるＹＢＣＡ５生菌の濃度は、固体組成物について２×１０１０ＣＦＵ／グラムおよび液体組成物について２×１０７ＣＦＵ／ミリリットルである。
【００７５】
本発明の組成物は、ＹＢＣＡ５を含むかまたはＹＢＣＡ５から実質的になり得る。
【００７６】
本発明の組成物における生物学的防除剤として有効なＹＢＣＡ５の濃度は、以下の条件に応じて変化する：植物の生理学的条件において使用される酵母の形態；病原体感染のタイプ、濃度および程度；温度；季節；湿度；土壌のタイプ；栽培期におけるステージ；植物の齢；施用される通常の農薬および殺真菌剤の量とタイプ；ならびに植物に対する手入れ（例えば、限定されないが、剪定）。本発明の組成物中にＹＢＣＡ５を配合する場合または本発明の方法において使用するための組成物では、それらすべての因子が考慮され得る。
【００７７】
本発明において使用するためのＹＢＣＡ５は、当技術分野において公知である、本明細書の実施例に記載したような標準的な液体発酵法を使用して調製することができる。増殖は、一般的に、バイオリアクター中、好気性条件下、増殖に適した温度およびｐＨで実施する。典型的な増殖温度は、１０〜３０℃、好ましくは１５〜２８℃、好ましくは２５℃である。約３６〜３８℃の範囲内に最適な増殖温度を有する酵母は、人の健康に危害を与える可能性があるために好ましくない。増殖培地のｐＨは、通常、やや酸性から中性のｐＨ４．０〜７．０であり、好ましくは６．０である。
【００７８】
増殖培地は、アウレオバシジウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）種の培養に適した任意の公知である従来技術の培地であり得る。１つの実施態様では、増殖培地は、ポテトデキストロース寒天（ＰＤＡ）である。他の好適な増殖培地としては、以下のものが挙げられる：Ｍａｌｔ  Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ  Ａｇａｒ；糖蜜および尿素を含む独自の液体ブロス培地；ならびに糖、尿素、酵母抽出物およびリン酸モノアンモニウム（ＭＡＰ）を含む独自の液体増殖培地。
【００７９】
ＹＢＣＡ５の細胞は、慣用される濾過法もしくは沈降法、例えば遠心分離を使用して収集され得、または連続遠心分離を使用して乾燥状態で収集され得る。細胞は、直ちに使用され得るか、または冷蔵条件（１℃〜７℃、好ましくは２℃）で貯蔵され得るか、または乾燥され得る。細胞を乾燥させて乾燥酵母顆粒として配合することが好ましい。例えば、流動床乾燥機を使用して細胞を乾燥させ得るが、それに限定されない。乾燥酵母顆粒は、少なくとも９０％の固形分、好ましくは少なくとも９５％の固形分、好ましくは約９６％の固形分を含むことが好ましい。細胞が少なくとも２年の棚持ち期間を有することが好ましい。１つの実施態様では、その細胞を冷蔵条件下で保存して、棚持ち期間が少なくとも６ヶ月、好ましくは少なくとも１年、好ましくは少なくとも２年である。冷蔵条件は、１０℃以下であるが、０℃より高いことが好ましい。好ましくは、冷蔵条件は、以下のものからなる群から選択される：１℃、２℃、３℃、４℃、５℃、６℃、７℃、８℃、９℃および１０℃または約１℃〜約１０℃などの温度内での変動。
【００８０】
１つの実施態様では、組成物は、農学的に許容可能なアジュバントを含む。１つの実施態様では、農学的に許容可能なアジュバントは、追加の活性薬剤および配合剤からなる群から選択される。
【００８１】
１つの実施態様では、農学的に許容可能なアジュバントは、１種または複数の追加の活性薬剤である。１つの実施態様では、農学的に許容可能なアジュバントは、１種または複数の配合剤である。
【００８２】
１つの実施態様では、組成物は、１種または複数の追加の活性薬剤と１種または複数の配合剤との組合せを含む。いくつかの実施態様では、組成物は、予備調製された組成物として配合されるか、または濃縮された形態である。いくつかの実施態様では、組成物は、固体または液体の配合物を含む。
【００８３】
１つの実施態様では、本発明の組成物は、１種または複数の農学的に許容可能なアジュバントを含む。１つの実施態様では、農学的に許容可能なアジュバントは、追加の活性薬剤および配合剤の群から選択される。１種または複数の農学的に許容可能なアジュバントは、追加の活性薬剤であることが好ましい。１種または複数の農学的に許容可能なアジュバントは、配合剤であることが好ましい。
【００８４】
１つの実施態様では、本発明の組成物は、１種または複数の追加の活性薬剤と１種または複数の配合剤との組合せを含む。
【００８５】
いくつかの場合、本発明の組成物中に１種または複数の追加の活性薬剤を含めることも望ましく、そのような追加の活性薬剤は、これらに限定されないが、植物病原性のシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌または植物病原性真菌、例えばボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）、スクレロティニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｐｐ．）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）、コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）、ホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）およびモニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）を防除（例えば、処理および／または予防）することに寄与し得る。
【００８６】
本発明において使用するのに好適な追加の活性薬剤は、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）、特に直接的にＰｓａまたは植物病原性真菌、例えばボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）、スクレロティニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｐｐ．）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）、コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）、ホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）およびモニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）（ただし、それらに限定されない）を防除することが可能であるか、またはシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）、特にＰｓａを防除するためのＹＢＣＡ５の生態的防除効果を強化することが可能であり得る。追加の活性薬剤は、本発明の組成物もしくは本発明において有用な組成物中に直接含まれ得るか、または本発明の方法に従って適切であるように同時もしくは順次に別々に施用され得る。
【００８７】
好適な追加の活性薬剤としては、植物防御機能誘発剤に限定されないが、以下のものが挙げられる：アシベンゾラル−Ｓ−メチル（Ａｃｔｉｇａｒｄ／Ｂｉｏｎ、Ｓｙｎｇｅｎｔａ）、アゼライン酸、ピペコリン酸、ジャスモン酸、Ｓｅａｗｅｅｄ  Ｍｉｘ、Ｌｅｍａ  ｏｉｌ、Ｆｏｏｄｃｏａｔ（ＤＯＭＣＡ）、Ｆｕｎｇｉｃｏｖｅｒ（ｂｉｏＤＵＲＡＣＡＬ  ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａ）およびイブプロフェン、拮抗性微生物、カルシウム、カリウムまたはナトリウム塩を含む無機塩、ウロン酸を含めた刺激剤、アムナン（ａｍｎｎａｎ）およびβ１−３グルカン、抗生物質ならびに他の抗菌性および抗真菌性の化合物（小さい有機および無機分子を含む）。
【００８８】
非限定に例を挙げれば、本発明の組成物または本発明において使用するための組成物に含めることが可能な１つの追加の活性薬剤は、植物防御機能誘発剤のアシベンゾラル−Ｓ−メチル（Ａｃｔｉｇａｒｄ／Ｂｉｏｎ、Ｓｙｎｇｅｎｔａ）である。Ａｃｔｉｇａｒｄは、ユニークな作用機構を有する植物活性化剤であり、ほとんどの植物種に見出される天然の全身獲得抵抗反応を刺激する。葉面散布を介して施用すると、Ａｃｔｉｇａｒｄは、目標の病原体に対して直接的な活性を有さないが、宿主植物抵抗性を誘発することにより、キウイフルーツにおけるＰｓａ症状を抑制することに役立つ。Ａｃｔｉｇａｒｄは、水分散性顆粒の形態の５００ｇ／ｋｇのアシベンゾラル−Ｓ−メチルを含む組成物である。
【００８９】
１つの実施態様では、本発明の組成物は、１種または複数の配合剤を含む。
【００９０】
１つの実施態様では、本発明の組成物は、１種または複数の追加の活性薬剤と１種または複数の配合剤との組合せを含む。
【００９１】
１つの実施態様では、本発明の組成物は、固体または液体の配合剤として配合される。
【００９２】
１つの実施態様では、本発明の組成物は、１種または複数の固体または液体の配合剤を含み得る。当技術分野において公知の任意の好適な配合剤を使用することができる。好適な配合剤の選択は、当業者の技量の範囲内であると考えられる。例えば、好適な配合剤は、本発明の組成物または植物もしくはその一部上で本発明において使用するための組成物の製造、取り扱い、貯蔵、輸送、施用および／または持続性を容易にするかまたは最適化する化合物または他の物質であり得るが、それらに限定されない。
【００９３】
配合剤は、これらに限定されないが、生産設備からの輸送中、サイトでの貯蔵または最終処理混合物の調製中における、本発明の組成物または本発明において使用するための組成物に含まれる酵母の生物学的防除活性の保存および保持などの特定の用途のために個別に適合され得る。配合剤は、植物上への付着および持続ならびに植物組織中への浸透を容易にするなどの他の目的で使用することもできるが、それらに限定されない。適切な配合物は、固体、液体、単独、組合せなどであり得る。特に適切な配合剤としては、界面活性剤、分散剤、保存剤、濡れ剤、乳化剤、湿潤剤、固着剤、展着剤、安定剤、浸透剤、粘着剤、ｐＨ緩衝剤および栄養素などが挙げられ、単独でまたは当業者によって決めることが可能な各種の組合せで使用される。
【００９４】
本発明の組成物は、直ちに使用できるように予備調製された組成物として提供され得るか、または濃縮された固体もしくは液体の形態で供給され得る。
【００９５】
１つの実施態様では、組成物は、固体または液体の配合を有する予備調製された組成物である。１つの実施態様では、予備調製された組成物は、粉末、ペレット、顆粒およびプリルから選択される固体の配合物である。１つの実施態様では、予備調製された組成物は、液体の配合物である。
【００９６】
本発明の組成物または本発明において使用するための組成物は、予備調製された形態または濃縮された形態で提供することができる。乾燥された形態で提供される場合、予備調製された組成物は、粉末、顆粒、ペレットまたはプリルとして提供することができるが、それらに限定されない。乾燥された形態の場合、組成物中のＹＢＣＡ５は、脱水、乾燥および／またはカプセル化された形態であることが好ましい。いくつかの実施態様では、脱水、乾燥および／またはカプセル化された形態は、例えば凍結防止剤などの当技術分野で公知の追加の保護剤を含む。
【００９７】
１つの実施態様では、ＹＢＣＡ５を顆粒の形態で提供することができる。例えば、ＹＢＣＡ５を、少なくとも０．５×１０１０ＣＦＵ／ｇｍ、好ましくは１×１０１０ＣＦＵ／ｇｍ、好ましくは２×１０１０ＣＦＵ／ｇｍを有する顆粒で提供することができる。予備調製された組成物が液体、特に水性の形態で提供される場合、組成物を分散液、懸濁液、スラリー、クリーム、ペーストまたはゲルとして提供することができるが、それらに限定されない。予備調製された形態が噴霧に適しており、および／または噴霧するために適合させた水性の液体の形態として提供されることが好ましい。１つの実施態様では、予備調製された液体の形態を、果実、野菜、種子または植物（植物の切り枝を含む）に接種するための浸漬液としてそれ自体使用することもできる。
【００９８】
本発明の予備調製された組成物では、ＹＢＣＡ５は、植物、特にキウイフルーツの蔓作物に使用するように配合される。例えば、酵母を、散布施用を可能とする農学的に許容可能な担体液体、肥料、誘発剤、アジュバント、濡れ剤または必要に応じて他の任意の適切な添加剤と混合する。本発明に従って使用するための予備調製された組成物では、ＹＢＣＡ５を、散布施用を可能にする農学的に許容可能な担体液体、肥料、誘発剤、アジュバント、濡れ剤または必要に応じて他の任意の適切な添加剤と混合することもできる。
【００９９】
本発明の予備調製された組成物中へのＹＢＣＡ５の配合および植物またはその一部に対して施用するための予備調製された組成物の最終的な形態は、当技術分野の技量の範囲内であると考えられる。例えば、組成物の最終的な形態を、例えば水などの農学的に許容可能な担体を用いて配合して、散布剤、発泡剤、灌液、注射剤、ゲル剤、浸漬液またはペーストを形成するが、それらに限定されない。１つの実施態様では、本発明の組成物を、植物またはその一部に散布法、浸漬法、なすり付け法もしくはブラシ法またはそれらの組合せによって施用することができる。組成物を水性の懸濁液または分散液として配合して、キウイフルーツの蔓作物、チェリーの樹木および／または果実、ならびにブドウの蔓作物、および／または果実、および／または野菜に対してスプレーまたはミスト散布することが好ましい。
【０１００】
１つの実施態様では、本発明の組成物は、濃縮された形態である。１つの実施態様では、濃縮された形態は、ケーキ、粉末、顆粒、ペレットおよびプリルから選択される固体の形態である。１つの実施態様では、濃縮された形態は、液体配合物である。
【０１０１】
本発明の組成物を濃縮された形態で提供する場合、植物またはその一部に対して直ちに施用できるような組成物を作成するには、使用者による追加の配合物が必要となる可能性がある。例えば、濃縮された形態のものを、植物に施用するための最終組成物を形成するための各種の配合剤と混合することができる。好ましい配合剤は、水または水性溶液であり、その中に組成物の濃縮された形態の適切な量を溶解させるか（例えば、顆粒または粉末）、または希釈する（例えば、液体懸濁液または分散液）ことにより、植物に施用するための最終的な組成物を得る。
【０１０２】
ＹＢＣＡ５を脱水して濃縮された形態にし、植物に施用するための組成物を液体の形態にする場合、当技術分野で公知のように再水和させることが必要となるであろう。再水和は、酵母を再水和させるための当技術分野で公知の一般的な注意に従って実施され得、例えば、再水和は、２０〜２５℃の温度で実施することが有利であるが、ただし、それに限定されない。
【０１０３】
方法  −  シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）
別の態様では、本発明は、植物またはその一部上においてシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌を防除する方法であって、植物またはその一部を、ＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物と接触させることを含む方法に関する。
【０１０４】
別の態様では、本発明は、植物またはその一部上においてシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌を防除するためのＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物の使用に関する。
【０１０５】
１つの実施態様では、方法または使用は、植物またはその一部をＹＢＣＡ５の生殖に適した細胞と接触させることを含む。
【０１０６】
いくつかの実施態様では、本発明の組成物におけるＹＢＣＡ５生菌の濃度は、固体組成物について約１×１０３〜約１×１０１４、好ましくは約１×１０５〜約１×１０１１、好ましくは約１×１０６〜約１×１０９、好ましくは約１×１０７〜約１×１０８、好ましくは約２×１０７〜約２×１０８ＣＦＵ、好ましくは約２×１０９〜約２×１０１０ＣＦＵ／グラムの範囲であり、かつ液体組成物について約１×１０７〜約１×１０８ＣＦＵ／ミリリットルの範囲である。
【０１０７】
いくつかの実施態様では、本発明の組成物におけるＹＢＣＡ５生菌の濃度は、固体組成物について１×１０３〜約１×１０１４、好ましくは１×１０５〜約１×１０１１、好ましくは１×１０６〜約１×１０９、好ましくは１×１０７〜約１×１０８、好ましくは２×１０７〜約２×１０８ＣＦＵ、好ましくは２×１０９〜約２×１０１０ＣＦＵ／グラムの範囲であり、かつ液体組成物について１×１０７〜約１×１０８ＣＦＵ／ミリリットルの範囲である。
【０１０８】
いくつかの実施態様では、本発明の組成物におけるＹＢＣＡ５生菌の濃度は、固体組成物について約１×１０３〜１×１０１４、好ましくは約１×１０５〜１×１０１１、好ましくは約１×１０６〜１×１０９、好ましくは約１×１０７〜１×１０８、好ましくは約２×１０７〜２×１０８ＣＦＵ、好ましくは約２×１０９〜２×１０１０ＣＦＵ／グラムの範囲であり、かつ液体組成物について約１×１０７〜１×１０８ＣＦＵ／ミリリットルの範囲である。
【０１０９】
いくつかの実施態様では、本発明の組成物におけるＹＢＣＡ５生菌の濃度は、固体組成物について１×１０３〜１×１０１４、好ましくは１×１０５〜１×１０１１、好ましくは１×１０６〜１×１０９、好ましくは１×１０７〜１×１０８、好ましくは２×１０７〜２×１０８ＣＦＵ、好ましくは約２×１０９〜２×１０１０ＣＦＵ／グラムの範囲であり、かつ液体組成物について１×１０７〜１×１０８ＣＦＵ／ミリリットルの範囲である。
【０１１０】
いくつかの実施態様では、本発明の組成物におけるＹＢＣＡ５生菌の濃度は、固体組成物について約２×１０１０ＣＦＵ／グラムおよび液体組成物について約２×１０７ＣＦＵ／ミリリットルである。
【０１１１】
いくつかの実施態様では、本発明の組成物におけるＹＢＣＡ５生菌の濃度は、固体組成物について少なくとも２×１０１０ＣＦＵ／グラムおよび液体組成物について少なくとも２×１０７ＣＦＵ／ミリリットルであり、好ましくは、本発明の組成物におけるＹＢＣＡ５生菌の濃度は、固体組成物について２×１０１０ＣＦＵ／グラムおよび液体組成物について２×１０７ＣＦＵ／ミリリットルである。
【０１１２】
１つの実施態様では、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）の少なくとも１つの菌株は、以下のものからなる群から選択される：Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）、Ｐ．アミグダリア（Ｐ．ａｍｙｇｄａｌｉａ）、Ｐ．アベルラナエ（Ｐ．ａｖｅｌｌａｎａｅ）、Ｐ．カリカパパヤエ（Ｐ．ｃａｒｉｃａｐａｐａｙａｅ）、Ｐ．シコリイ（Ｐ．ｃｉｃｈｏｒｉｉ）、Ｐ．コロナファシエンス（Ｐ．ｃｏｒｏｎａｆａｃｉｅｎｓ）、Ｐ．フィクセレクタエ（Ｐ．ｆｉｃｕｓｅｒｅｃｔａｅ）、Ｐ．ヘリアンティ（Ｐ．ｈｅｌｉａｎｔｈｉ）、Ｐ．レミアエ（Ｐ．ｌｅｍｉａｅ）、Ｐ．サバスタノイ（Ｐ．ｓａｖａｓｔａｎｏｉ）およびＰ．ビリディフラバ（Ｐ．ｖｉｒｉｄｉｆｌａｖａ）もしくはその病原型またはそれらの組合せ。少なくとも１つの菌株がＰ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）またはその病原型であることが好ましく、少なくとも１つの菌株がＰ．シリンガエｐｖ．アクチニジアエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅ）（Ｐｓａ）であることがより好ましい。
【０１１３】
１つの実施態様では、植物またはその一部は、以下の群から選択される：単子葉植物、双子葉植物、一年生、二年生および多年生植物、野菜植物および収穫後の野菜、果実植物もしくは樹木もしくは収穫後の果実、着花植物もしくは樹木もしくは収穫した花、穀物用植物、油質植物、タンパク質植物、リグニン質植物および観賞用植物。
【０１１４】
１つの実施態様では、植物またはその一部は、農業的に重要な蔓作物、農業的に重要な野菜および農業的に重要な果実植物ならびにその栽培品種および生産物からなる群から選択される農業的に重要な植物、栽培品種またはその生産物である。好ましくは、農業的に重要な蔦作物は、キウイフルーツの蔦作物または栽培品種であり、かつ生産物は、キウイフルーツである。
【０１１５】
１つの実施態様では、キウイフルーツの蔦作物は、以下の種からなる群から選択される：グリーンの果肉のキウイフルーツ（Ａ．キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ））、ゴールデンキウイフルーツ（Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ））、チャイニーズエッググーズベリー（Ａ．コリアケア（Ａ．ｃｏｒｉａｃｅａ））、ベビーキウイフルーツ（Ａ．アルグータ（Ａ．ａｒｇｕｔａ））、アークティックキウイフルーツ（Ａ．コロミクタ（Ａ．ｋｏｌｏｍｉｋｔａ））、レッドキウイフルーツ（Ａ．メラナンドラ（Ａ．ｍｅｌａｎａｎｄｒａ）、Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ））、シルバーバイン（Ａ．ポリガマ（Ａ．ｐｏｌｙｇａｍａ））およびパープルキウイフルーツ（Ａ．プルプレア（Ａ．ｐｕｒｐｕｒｅａ））またはその栽培品種。キウイフルーツは、Ａ．キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）およびＡ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の種またはその栽培品種からなる群から選択されることが好ましい。キウイフルーツは、Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の種であることが好ましい。キウイフルーツは、Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス・プランク（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  Ｐｌａｎｃｈ）であることが好ましい。栽培品種は、「Ｈａｙｗａｒｄ」または「Ｈｏｒｔ１６Ａ」または「ｚｅｓｙ００２」（略式には「Ｇｏｌｄ３」または「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」として知られる）であることが好ましい。
【０１１６】
１つの実施態様では、栽培品種は、Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス・プランク（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  Ｐｌａｎｃｈ）、「Ｈｏｒｔ１６Ａ」である。１つの実施態様では、栽培品種は、米国植物特許第１１０６６号明細書（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示された「Ｈｏｒｔ１６Ａ」である。
【０１１７】
１つの実施態様では、栽培品種は、Ａ．キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）「Ｈａｙｗａｒｄ」である。１つの実施態様では、栽培品種は、米国植物特許第６８１５号明細書（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示された「Ｈａｙｗａｒｄ」である。
【０１１８】
１つの実施態様では、栽培品種は、Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス・プランク（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  Ｐｌａｎｃｈ）「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」である。１つの実施態様では、栽培品種は、Ｗａｎｇ，２０１１およびＬｉ，ｅｔ  ａｌ，２０１５（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示された「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」である。
【０１１９】
別の態様では、本発明は、植物またはその一部上においてシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌を防除することおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物に関する。
【０１２０】
シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌を防除するため、および／またはキウイフルーツ植物の収量を増大させるためのＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物の使用は、本発明の方法に従い、本明細書に記述されているように実施される。例えば、ＹＢＣＡ５および組成物は、本発明に従い、本明細書に記述されているように調製され得、配合され得、植物またはその一部、特にキウイフルーツ植物またはその一部に施用され得る。
【０１２１】
別の態様では、本発明は、植物またはその一部上において少なくとも１種の植物病原性真菌を防除する方法であって、植物またはその一部をＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物と接触させることを含む方法に関する。
【０１２２】
別の態様では、本発明は、植物病原性真菌に感染されやすい果実または野菜植物の収量を増大させるための方法であって、果実もしくは野菜植物またはその一部にＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物を施用することと、植物またはその一部を成長させることとを含む方法に関する。１つの実施態様では、組成物は、ＹＢＣＡ５から実質的になる。
【０１２３】
１つの実施態様では、少なくとも植物病原性真菌は、以下のものからなる群から選択される：ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）、モニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）、スクレロティニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｐｐ．）、コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）、クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、ホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）およびペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）。
【０１２４】
１つの実施態様では、植物またはその一部は、以下の群から選択される：単子葉植物、双子葉植物、一年生、二年生および多年生植物、野菜植物および収穫後の野菜、果実植物もしくは樹木もしくは収穫後の果実、着花植物もしくは樹木もしくは収穫した花、穀物用植物、油質植物、タンパク質植物、リグニン質植物および観賞用植物。
【０１２５】
１つの実施態様では、植物またはその一部は、農業的に重要な蔓作物および農業的に重要な果樹、農業的に重要な野菜ならびにその栽培品種および生産物からなる群から選択される農業的に重要な植物、その栽培品種またはその生産物である。１つの実施態様では、農業的に重要な蔦作物は、キウイフルーツの蔦作物またはその栽培品種であり、かつ生産物は、キウイフルーツである。
【０１２６】
１つの実施態様では、植物またはその一部は、果実もしくは野菜植物またはその一部であり、方法は、果実もしくは野菜植物またはその一部をＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物と接触させることを含む。いくつかの実施態様では、果実または野菜植物は、チェリーの樹木またはブドウの蔦作物である。いくつかの実施態様では、果実植物は、リンゴの樹木である。
【０１２７】
１つの実施態様では、チェリーの樹木は、スモモ属（Ｐｒｕｎｕｓ  ｓｐｐ．）またはその栽培品種、好ましくはＰ．アビウム（Ｐ．ａｖｉｕｍ）またはその栽培品種である。Ｐ．アビウム（Ｐ．ａｖｉｕｍ）は、「Ｓｗｅｅｔ  Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ」品種であることが好ましい。１つの実施態様では、その一部は、花もしくはその一部または果実もしくはその一部である。１つの実施態様では、果実は、チェリーである。
【０１２８】
１つの実施態様では、ブドウの蔦作物は、ブドウ属（Ｖｉｎｕｓ  ｓｐｐ．）またはその栽培品種、好ましくはＶ．ヴィニフェラ（Ｖ．ｖｉｎｉｆｅｒａ）またはその栽培品種である。Ｖ．ヴィニフェラ（Ｖ．ｖｉｎｉｆｅｒａ）は、「Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  Ｓｅｅｄｌｅｓｓ」品種であることが好ましい。１つの実施態様では、その一部は、花もしくはその一部または果実もしくはその一部である。１つの実施態様では、果実は、ブドウである。
【０１２９】
１つの実施態様では、リンゴの樹木は、リンゴ属（Ｍａｌｕｓ  ｓｐｐ．）またはその栽培品種、好ましくはＭ．プミラ（Ｍ．ｐｕｍｉｌａ）またはその栽培品種である。Ｍ．プミラ（Ｍ．ｐｕｍｉｌａ）またはその栽培品種は、「Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｒｏｓｅ」品種であることが好ましい。１つの実施態様では、その一部は、花もしくはその一部または果実もしくはその一部である。１つの実施態様では、果実は、リンゴである。
【０１３０】
Ｐｓａの防除
別の態様では、本発明は、キウイフルーツ植物またはその一部上においてＰ．シリンガエｐｖ．アクチニジアエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅ）（Ｐｓａ）を防除するための方法であって、キウイフルーツ植物またはその一部をＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物と接触させることを含む方法に関する。
【０１３１】
別の態様では、本発明は、Ｐｓａに感染されたかまたはそれに感染されやすいキウイフルーツ植物の収量を増大させるための方法であって、キウイフルーツ植物またはその一部にＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物を施用することと、キウイフルーツ植物またはその一部を成長させることとを含む方法に関する。
【０１３２】
別の態様では、本発明は、キウイフルーツ植物またはその一部上においてＰｓａを防除するためのＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物の使用に関する。
【０１３３】
別の態様では、本発明は、Ｐｓａに感染されたかまたはそれに感染されやすいキウイフルーツ植物の収量を増大させるためのＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物の使用に関する。
【０１３４】
１つの実施態様では、組成物は、実質的にＹＢＣＡ５からなる。
【０１３５】
１つの実施態様では、キウイフルーツ植物は、Ａ．キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）またはＡ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の種またはその栽培品種、好ましくはＡ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の種またはその栽培品種である。１つの実施態様では、キウイフルーツ植物は、「Ｈｏｒｔ１６Ａ」である。
【０１３６】
１つの実施態様では、栽培品種は、Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」である。１つの実施態様では、栽培品種は、Ｗａｎｇ，２０１１およびＬｉ，ｅｔ  ａｌ，２０１５（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示された「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」である。
【０１３７】
１つの実施態様では、植物またはその一部を、Ｐｓａを防除するのに十分な時間接触させる。
【０１３８】
１つの実施態様では、接触は、植物またはその一部の種子、葉、茎、花、果実、幹および／または根に施用することにより、ＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含むかもしくはそれから実質的になる組成物を植物またはその一部に施用することを含む。好ましくは、施用法は、散布法、ミスト散布法、浸漬法、ドリップ法、散粉法またはスプリンクラー法である。施用は、一度のみであり得るか、または必要に応じて繰り返され得る。ここで、当業者の適切な判断に従って様々な時点および／または植物のライフサイクルの様々なステージで施用されることも想定される。
【０１３９】
ＹＢＣＡ５は、当業者による判断に従って適切な時点および植物の発育の適切なステージで施用され得る。例えば、ＹＢＣＡ５は、蕾のふくらみから開花まで、開花している間および開花後／着果期に施用され得るが、それらに限定されない。
【０１４０】
１つの実施態様では、施用は、葉の表面上、および／または花上、および／または果実上、および／または野菜上への散布により実施する。
【０１４１】
１つの実施態様では、根への施用は、通常の方法で施用する前に地上散布法、機械的鋤込み法によるか、または肥沃化剤または肥料と混合することにより実施する。
【０１４２】
１つの実施態様では、植物またはその一部は、以下のものから選択される：単子葉植物、双子葉植物、一年生、二年生および多年生植物、野菜植物および収穫後の野菜、果実植物もしくは樹木もしくは収穫後の果実、着花植物もしくは樹木もしくは収穫した花、穀物用植物、油質植物、タンパク質植物、リグニン質植物および観賞用植物。
【０１４３】
１つの実施態様では、植物またはその一部は、以下のものから選択される農業的に重要な作物植物、栽培品種またはその生産物である：トウモロコシ植物、タバコ植物、コムギ植物、サトウキビ植物、セイヨウアブラナ植物、オオムギ植物、イネ植物、モロコシ植物、キビ植物、ダイズ植物、レタス植物およびキャベツ植物。
【０１４４】
１つの実施態様では、植物またはその一部は、農業的に重要な蔓作物および農業的に重要な果樹ならびにその栽培品種および生産物からなる群から選択される農業的に重要な植物、その栽培品種またはその生産物である。農業的に重要な果樹またはその栽培品種は、オリーブの樹木、リンゴの樹木、西洋ナシの樹木、柑橘類の樹木、バナナの樹木、パイナップルの樹木、モモの樹木、アンズの樹木、チェリーの樹木、クルミの樹木およびハシバミの樹木から選択することが好ましく、かつ生産物は、それぞれオリーブ、リンゴ、西洋ナシ、柑橘類、バナナ、パイナップル、モモ、アンズ、チェリー、クルミおよびハシバミである。農業的に重要な蔓作物またはその栽培品種は、ジャガイモの蔓作物、ビートルートの蔓作物、マメの蔓作物、エンドウマメの蔓作物、トマトの蔓作物、キュウリの蔓作物、メロンの蔓作物、ベリーの蔓作物、ブドウの蔓作物およびキウイフルーツの蔓作物から選択することが好ましく、かつ生産物は、それぞれジャガイモ、ビートルート、マメ、エンドウマメ、トマト、キュウリ、メロン、ベリー、ブドウおよびキウイフルーツである。好ましくは、農業的に重要な蔦作物は、キウイフルーツの蔦作物またはその栽培品種であり、かつ生産物は、キウイフルーツである。
【０１４５】
キウイフルーツは、ツツジ目（Ｅｒｉｃａｌｅｓ）、マタタビ科（Ａｃｔｉｎｉｄｉａｃｅａｅ）の植物の仲間である。１つの実施態様では、キウイフルーツの蔦作物は、以下の種からなる群から選択される：ファジイキウイフルーツ（Ａ．キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ））、ゴールデンキウイフルーツ（Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ））、チャイニーズエッググーズベリー（Ａ．コリアケア（Ａ．ｃｏｒｉａｃｅａ））、ベビーキウイフルーツ（Ａ．アルグータ（Ａ．ａｒｇｕｔａ））、アークティックキウイフルーツ（Ａ．コロミクタ（Ａ．ｋｏｌｏｍｉｋｔａ））、レッドキウイフルーツ（Ａ．メラナンドラ（Ａ．ｍｅｌａｎａｎｄｒａ）、Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ））、シルバーバイン（Ａ．ポリガマ（Ａ．ｐｏｌｙｇａｍａ））およびパープルキウイフルーツ（Ａ．プルプレア（Ａ．ｐｕｒｐｕｒｅａ））またはその栽培品種。キウイフルーツは、Ａ．キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）、Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の種またはその栽培品種からなる群から選択されることが好ましい。キウイフルーツは、Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の種であることが好ましい。キウイフルーツは、Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス・プランク（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  Ｐｌａｎｃｈ）であることが好ましい。好ましくは、栽培品種は、「Ｈａｙｗａｒｄ」、または「Ｈｏｒｔ  １６Ａ」、または「Ｚｅｓｙ００２」、または「Ｚｅｓｙ００４」、または「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」品種の栽培品種である。
【０１４６】
１つの実施態様では、栽培品種は、Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス・プランク（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  Ｐｌａｎｃｈ）、「Ｈｏｒｔ  １６Ａ」である。１つの実施態様では、栽培品種は、米国植物特許第１１０６６号明細書（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示された「Ｈｏｒｔ  １６Ａ」である。
【０１４７】
１つの実施態様では、栽培品種は、Ａ．キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）「Ｈａｙｗａｒｄ」である。１つの実施態様では、栽培品種は、米国植物特許第６８１５号明細書（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示された「Ｈａｙｗａｒｄ」である。
【０１４８】
１つの実施態様では、栽培品種は、Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」である。１つの実施態様では、栽培品種は、Ｗａｎｇ，２０１１およびＬｉ，ｅｔ  ａｌ，２０１５（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示された「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」である。
【０１４９】
別の態様では、本発明は、キウイフルーツ植物またはその一部上においてＰｓａを防除することおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物に関する。
【０１５０】
別の態様では、本発明は、Ｐｓａに感染されたかまたはそれに感染されやすいキウイフルーツ植物の収量を増大させることおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物に関する。
【０１５１】
Ｐｓａを防除するため、および／またはキウイフルーツ植物の収量を増大させるためのＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物の使用は、本発明の方法に従い、本明細書に記述されているように実施される。例えば、ＹＢＣＡ５および組成物は、本発明に従い、本明細書に記述されているように調製され得、配合され得、植物またはその一部、特にキウイフルーツ植物またはその一部に施用され得る。
【０１５２】
別の態様では、本発明は、ＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物を用いて処理された少なくとも１種の植物またはその一部に関する。いくつかの実施態様では、植物は、果実もしくは野菜植物またはその一部である。１つの実施態様では、植物は、キウイフルーツの蔓作物、チェリーの樹木またはブドウの蔓作物である。
【０１５３】
植物病原性真菌の防除
別の態様では、本発明は、植物またはその一部上において少なくとも１種の植物病原性真菌を防除する方法であって、植物またはその一部をＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物と接触させることを含む方法に関する。
【０１５４】
別の態様では、本発明は、植物病原性真菌に感染されやすい果実または野菜植物の収量を増大させるための方法であって、果実もしくは野菜植物またはその一部にＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物を施用することと、植物またはその一部を成長させることとを含む方法に関する。
【０１５５】
別の態様では、本発明は、果実もしくは野菜植物またはその一部上において植物病原性真菌を防除するためのＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物の使用に関する。
【０１５６】
別の態様では、本発明は、植物病原性真菌に感染されやすい果実もしくは野菜植物またはその一部の収量を増大させるためのＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物の使用に関する。
【０１５７】
別の態様では、本発明は、植物またはその一部上において少なくとも１種の植物病原性真菌を防除することおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物に関する。
【０１５８】
別の態様では、本発明は、果実もしくは野菜植物またはその一部上において少なくとも１種の植物病原性真菌を防除することおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物に関する。
【０１５９】
別の態様では、本発明は、少なくとも１種の植物病原性真菌に感染されやすい果実または野菜植物の収量を増大させることおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物に関する。
【０１６０】
以下の実施形態は、具体的には、ＹＢＣＡ５の使用またはＹＢＣＡ５を含むかもしくはそれから実質的になる組成物の使用に関連する、植物病原性真菌を防除するため、および／または植物病原性真菌に感染されやすい植物もしくはその一部または果実もしくは野菜植物またはその一部の収量を増大させるための本発明のその態様についても想定される。
【０１６１】
１つの実施態様では、植物病原性真菌は、以下のものからなる群から選択される：ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）、モニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）、スクレロティニア属（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｐｐ．）、コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）、クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、ホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）およびペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）。
【０１６２】
１つの実施態様では、植物またはその一部は、以下の群から選択される：単子葉植物、双子葉植物、一年生、二年生および多年生植物、野菜植物および収穫後の野菜、果実植物もしくは樹木もしくは収穫後の果実、着花植物もしくは樹木もしくは収穫した花、穀物用植物、油質植物、タンパク質植物、リグニン質植物および観賞用植物。
【０１６３】
１つの実施態様では、植物またはその一部は、農業的に重要な蔓作物および農業的に重要な果樹、農業的に重要な野菜ならびにその栽培品種および生産物からなる群から選択される農業的に重要な植物、その栽培品種またはその生産物である。１つの実施態様では、農業的に重要な蔦作物は、キウイフルーツの蔦作物またはその栽培品種であり、かつ生産物は、キウイフルーツである。
【０１６４】
１つの実施態様では、植物またはその一部は、果実もしくは野菜植物またはその一部であり、方法は、果実もしくは野菜植物またはその一部をＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物と接触させることを含む。いくつかの実施態様では、果実または野菜植物は、チェリーの樹木またはブドウの蔦作物である。いくつかの実施態様では、果実植物は、リンゴの樹木である。
【０１６５】
１つの実施態様では、チェリーの樹木は、スモモ属（Ｐｒｕｎｕｓ  ｓｐｐ．）またはその栽培品種、好ましくはＰ．アビウム（Ｐ．ａｖｉｕｍ）またはその栽培品種である。Ｐ．アビウム（Ｐ．ａｖｉｕｍ）は、「Ｓｗｅｅｔ  Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ」品種であることが好ましい。１つの実施態様では、その一部は、花もしくはその一部または果実もしくはその一部である。１つの実施態様では、果実は、チェリーである。
【０１６６】
１つの実施態様では、ブドウの蔦作物は、ブドウ属（Ｖｉｎｕｓ  ｓｐｐ．）またはその栽培品種、好ましくはＶ．ヴィニフェラ（Ｖ．ｖｉｎｉｆｅｒａ）またはその栽培品種である。Ｖ．ヴィニフェラ（Ｖ．ｖｉｎｉｆｅｒａ）は、「Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  Ｓｅｅｄｌｅｓｓ」品種であることが好ましい。１つの実施態様では、その一部は、花もしくはその一部または果実もしくはその一部である。１つの実施態様では、果実は、ブドウである。
【０１６７】
１つの実施態様では、リンゴの樹木は、リンゴ属（Ｍａｌｕｓ  ｓｐｐ．）またはその栽培品種、好ましくはＭ．プミラ（Ｍ．ｐｕｍｉｌａ）またはその栽培品種である。Ｍ．プミラ（Ｍ．ｐｕｍｉｌａ）は、「Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｒｏｓｅ」品種であることが好ましい。１つの実施態様では、その一部は、花もしくはその一部または果実もしくはその一部である。１つの実施態様では、果実は、リンゴである。
【０１６８】
別の態様では、本発明は、ＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物を用いて処理された少なくとも１種の植物またはその一部に関する。
【０１６９】
別の態様では、本発明は、ＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含む組成物を用いて処理された少なくとも１種の果実もしくは野菜植物またはその一部に関する。
【０１７０】
１つの実施態様では、組成物は、ＹＢＣＡ５から実質的になる。
【０１７１】
植物病原性真菌を防除するため、および／または植物もしくはその一部または果実もしくは野菜植物またはその一部の収量を増大させるためのＹＢＣＡ５またはＹＢＣＡ５を含むかもしくはそれから実質的になる組成物の使用は、本明細書に記述されている本発明の方法および使用に従って実施される。例えば、ＹＢＣＡ５および組成物は、本明細書に記述されている本発明に従い、調製され、配合され、植物またはその一部、特に果実もしくは野菜植物またはその一部、特にチェリーの樹木またはブドウの蔦作物に施用することができる。
【０１７２】
ここで、以下の実施例を参照することにより、本発明の各種の態様を非限定的に説明する。
【実施例】
【０１７３】
実施例１  −  生態的防除活性を有する酵母の同定
酵母のスクリーニング
ＹＢＣＡ５は、２０００年代初めに中央Ｏｔａｇｏ産のアンズ（「Ｃｌｕｔｈａ  Ｇｏｌｄ」）から以下のように分離された。収穫直後のフレッシュなアンズを−２０℃で一晩冷凍してから、２０℃で最大５日間にわたってインキュベートした。選択されたアンズの表面上で増殖させた酵母または酵母様のコロニーを、酵母増殖に適した一般的な培地上で標準プロトコルを使用して分離した。
【０１７４】
実施例２  −  シュードモナス・シリンガエｖａｒ．アクチニジアエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｖａｒ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅ）（Ｐｓａ）の酵母生態的防除
一般的な手順
植物ベースのスクリーニングアッセイは、Ｒｕａｋｕｒａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｒｅ（Ｈａｍｉｌｔｏｎ）およびＴｅ  Ｐｕｋｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｏｒｃｈａｒｄ（Ｔｅ  Ｐｕｋｅ，Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ）において実験室およびガラス温室で実施した。Ｐｌａｎｔ  ａｎｄ  Ｆｏｏｄ（ＰＦＲ）アッセイは、生物学的防除剤（ＢＣＡ）、特にＹＢＣＡ５およびＰＦＲ独自の他の酵母菌株の葉面散布に焦点を当てている。
【０１７５】
Ｚｅｓｐｒｉアッセイ２６  −  ＹＢＣＡ５の供与量率
このアッセイの目的は、Ｐｓａに対するその有効性について、いくつかの供与量率において、新たに発酵させたＹＢＣＡ５をＹＢＣＡ５の配合および乾燥させた調製物と比較することであった。
【０１７６】
植物材料
Ｚｅｓｐｒｉアッセイ２６は、１Ｌのポット内で成長させた組織培養したＡ．キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）「Ｈａｙｗａｒｄ」植物を使用し、ＲｕａｋｕｒａにあるＰＣ１ガラス温室で実施した。植物は、高さ３０〜５０ｃｍであり、それぞれが処理時に植物１本あたり少なくとも４〜５枚の使用可能な葉を有し、１つの処理あたり１０本の植物で反復試験を実施した。
【０１７７】
酵母調製物
フレッシュに発酵させたＹＢＣＡ５は、１０Ｌのバイオリアクター（Ｌａｂｆｏｒｓ）中において滅菌液体培地（４％糖蜜および１．２ｇ／Ｌの尿素）を使用して３日間酵母を発酵させることによって得られた。その発酵液を遠心分離器（Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＣ−５Ｃ）（ローター番号ＳＬＣ−４０００、ローターコード３３）中において５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離にかけると、上清を廃棄した後に細胞濃縮物のウェットペレットが得られた。ウェットペレットのサブサンプルを再懸濁させ、血球計算器を利用して細胞密度を計算し、適切に希釈することにより、６×１０６、１．２５×１０７、２．５×１０７および５．０×１０７ＣＦＵ／ｍＬの最終散布濃度とした。
【０１７８】
ＹＢＣＡ５の顆粒は、１０Ｌ発酵槽内での先の発酵から得られたウェットペレットをほぼ３０％（ｗ／ｗ）のコーンスターチと混合して、硬くて生地状の粘稠物を形成し、スチール製のメッシュ（穴径３ｍｍ）を通してそれを押出成形し、層流フード（２０〜２５℃）中で一晩乾燥させて乾燥顆粒を形成することにより調製した。
【０１７９】
ＹＢＣＡ５の乾燥顆粒中のＣＦＵの数は、０．２ｇの顆粒を２０ｍＬのＰＢＳＴｗ中に完全に溶解させることにより計算した。この菌株の系列希釈（１０−６まで）を実施して、それぞれの希釈液の１０μＬの液滴を３滴、ＭＹＡ上へ移植させた。それぞれの液滴から増殖させた酵母コロニーの数を２５℃で２４時間インキュベーションした後にカウントし、続いてさらに２４時間にわたり冷蔵庫（４〜６℃）中でインキュベーションした。適切な量の顆粒を５００ｍＬの水中に量り込んで、２．５×１０７ＣＦＵ／ｍＬの散布濃度に調製した。
【０１８０】
Ｐｓａ接種調製物
２０１０年に、Ｔｅ  Ｐｕｋｅ地区に植えられていた感染されたアクチニジア・キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の「Ｈｏｒｔ１６Ａ」キウイフルーツの蔦作物から分離されたＰｓａ培養菌（分離コード１０６２７、生物型３）を、本報告に含まれるすべての穿刺接種および噴霧接種アッセイで使用した（Ｖａｎｎｅｓｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。Ｐｓａ接種物は、このＰｓａ菌株をＫｉｎｇ’ｓ  Ｂ（ＫＢ）培地上で２〜３日間にわたって増殖させ、滅菌蒸留水（ＳＤＷ）を用いてプレートを洗浄して、接種物の菌株の懸濁液を作成することによって細菌を回収することによって調製し、それは、目視によりｃ．＞１×１０９ＣＦＵ／ｍＬであると判断された。このＰｓａ菌株のサブサンプルを系列的に希釈し、１０μＬの液滴をフレッシュなＫＢ培地の上に置くと、２日間のインキュベーション後にＣＦＵ／ｍＬの数をカウントすることが可能であった。ガラス温室（Ｒｕａｋｕｒａ）内での液滴接種を容易とするために、Ｐｓａ接種物（標準溶液ｃ．×１０９ＣＦＵ／ｍＬ）の光学濃度を、分光光度計（６００ｎｍ）を用いて求め、次いであらかじめ作られた検量線に基づいてその溶液を滅菌ＰＢＳで希釈し、その結果、５×１０８ＣＦＵ／ｍＬおよび２×１０７ＣＦＵ／ｍＬの懸濁液を得た。次いで、アジュバントのＤｕ−Ｗｅｔｔをその懸濁液に添加して０．０３％（ｖ／ｖ）の最終濃度を得た。
【０１８１】
葉の噴霧接種アッセイ
２０１４年９月１１日および１８日に、新たに発酵させたＹＢＣＡ５の濃縮物および顆粒調製物のそれぞれの散布処理を、２種の用量のＰｓａを用いる接種の７日前および１日前（ｄｂｉ）にガラス温室中でポット内において成長させたそれぞれの植物の全部の葉に流れ落ちるまで施用し、植物をスプレー隔離小屋内で自然乾燥させた。乾燥したら、その散布処理した植物をガラス温室に戻した。二回目のＹＢＣＡ５散布処理の翌日、２０１４年９月１９日に４枚または５枚の選択した葉（最も古い葉および最も若い葉を除く）のそれぞれの葉の裏側上、中央脈の両側に対称的にＰｓａをピペットで量り取って（１０μＬ）接種した。次いで、Ｐｓａを接種した後、植物をＰＦＲ  Ｒｕａｋｕｒａでの隔離用ガラス温室中の高湿度テント内において最長３週間入れてから、Ｐｓａ発病度について評価付けした。
【０１８２】
Ｐｓａ症状の測定
Ｐｓａの液滴接種の２１日後に、それぞれの接種ポイントについて、Ｐｓａにより生じたネクローシスの面積（ｍｍ２）を目視で評価した。一貫性を確保する目的のため、スタッフ二人のみで通常の発病度スコアのクロスチェックにより、Ｐｓａによる葉の発病度の評価を実施した。
【０１８３】
統計的分析
すべてのデータは、ＧｅｎＳｔａｔを使用し、自然対数変換法に従って解析した。生データの平均を与え、統計的差異は、対数変換解析に基づく。
【０１８４】
ＫＲＩＰ−ＢＣＡアッセイ３９
このアッセイの目的は、アウレオバシジウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）の各種の分離株の発酵、配合およびＰｓａに対する有効性をＹＢＣＡ５と比較して調べることであった。
【０１８５】
植物材料
ＫＲＩＰ−ＢＣＡアッセイ３９は、１．５Ｌのポット内で成長させた組織培養したＡ．キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）「Ｈａｙｗａｒｄ」植物を使用し、ＲｕａｋｕｒａにあるＰＣ１ガラス温室で実施した。植物は、高さ３０〜５０ｃｍであり、それぞれが処理時に植物１本あたり少なくとも４〜５枚の使用可能な葉を有し、１つの処理あたり１０本の植物で反復試験を実施した。
【０１８６】
酵母調製物
ＹＢＣＡ５の顆粒は、１０Ｌのバイオリアクター（Ｌａｂｆｏｒｓ）中において滅菌液体培地（４％糖蜜および１．２ｇ／Ｌの尿素）を使用して３日間酵母を発酵させることにより調製した。その発酵液を遠心分離器（Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＣ−５Ｃ）（ローター番号ＳＬＣ−４０００、ローターコード３３）中において５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離にかけると、上清を廃棄した後に細胞濃縮物のウェットペレットが得られた。このウェットペレットをほぼ３０％（ｗ／ｗ）のコーンスターチと混合して、硬くて生地状の粘稠物を形成し、これを、スチール製のメッシュ（穴径３ｍｍ）を通して押出成形し、層流フード（２０〜２５℃）中で一晩乾燥させて乾燥顆粒を形成した。
【０１８７】
菌株保存コレクションから選択した１２種のＡ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）分離株をフラスコ培養液（５００ｍＬの三角フラスコ中、２００ｍＬの４％糖蜜、１．２ｇ／Ｌの尿素の滅菌液体培地）中で３日間発酵させた。１ｍＬの発酵液をサブサンプリングすることによって生存可能なコロニー形成単位（ＣＦＵ）の数を求め、０．０５Ｍのリン酸緩衝生理食塩液＋０．０５％のＴｗｅｅｎ８０（ＰＢＳＴｗ）中での希釈系列（１０−７まで）を実施した。それぞれの希釈について１０μＬの液滴を３滴、Ｍａｌｔ  Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ  Ａｇａｒ（ＭＹＡ）上へ移植させた。このそれぞれの液滴から増殖させた酵母コロニーの数を２５℃で２４時間インキュベーションした後にカウントし、続けてさらに２４時間にわたり冷蔵庫（４〜６℃）中でインキュベーションした。次いで、その発酵液を、上でＹＢＣＡ５について記述したように加工して、乾燥させた配合顆粒を形成した。
【０１８８】
それぞれのＡ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）分離株の乾燥顆粒中のＣＦＵの数は、０．２ｇの顆粒を２０ｍＬのＰＢＳＴｗ中に完全に溶解させることにより計算した。この菌株の系列希釈（１０−６まで）を実施して、それぞれの希釈液の１０μＬの液滴を３滴、ＭＹＡ上へ移植させた。このそれぞれの液滴から増殖させた酵母コロニーの数を２５℃で２４時間インキュベーションした後にカウントし、続けてさらに２４時間にわたり冷蔵庫（４〜６℃）中でインキュベーションした。散布施用のための組成物は、適切な量の顆粒を５００ｍＬの水中に量り込むことにより調製した。
【０１８９】
Ｐｓａ接種調製物
２０１０年に、Ｔｅ  Ｐｕｋｅ地区に植えられていた感染されたアクチニジア・キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の「Ｈｏｒｔ１６Ａ」キウイフルーツの蔦作物から分離されたＰｓａ培養菌（分離コード１０６２７、生物型３）を、本報告に含まれるすべての穿刺接種および噴霧接種アッセイで使用した（Ｖａｎｎｅｓｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。Ｐｓａ接種物は、このＰｓａ菌株をＫｉｎｇ’ｓ  Ｂ（ＫＢ）培地上で２〜３日間にわたって増殖させ、滅菌蒸留水（ＳＤＷ）を用いてプレートを洗浄して、接種物の菌株の懸濁液を作成することによって細菌を回収することによって調製し、それは、目視によりｃ．＞１×１０９ＣＦＵ／ｍＬであると判断された。このＰｓａ菌株のサブサンプルを系列的に希釈し、１０μＬの液滴をフレッシュなＫＢ培地の上に置くと、２日間のインキュベーション後にＣＦＵ／ｍＬの数をカウントすることが可能となった。  ガラス温室（Ｒｕａｋｕｒａ）内での液滴接種を容易とするために、Ｐｓａ接種物（標準溶液ｃ．×１０９ＣＦＵ／ｍＬ）の光学濃度を、分光光度計（６００ｎｍ）を用いて求め、次いであらかじめ作られた検量線に基づいてその溶液を滅菌ＰＢＳで希釈して、その結果、１×１０８ＣＦＵ／ｍＬの懸濁液を得た。次いで、アジュバントのＤｕ−Ｗｅｔｔをその懸濁液に添加して０．０３％（ｖ／ｖ）の最終濃度を得た。
【０１９０】
葉の噴霧接種アッセイ
２０１６年５月９日に、Ａ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）分離株およびＹＢＣＡ５それぞれの散布処理を、Ｐｓａ（１×１０８ＣＦＵ／ｍＬ）を用いる接種の７日前（ｄｂｉ）にガラス温室中でポット内において成長させたそれぞれの植物の全部の葉に流れ落ちるまで施用した。ＹＢＣＡ５を含むすべてのＡ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）処理を２×１０７ＣＦＵ／ｍＬの最終濃度で実施し、植物をスプレー隔離小屋内で自然乾燥させた。乾燥したら、その散布処理した植物をガラス温室に戻した。散布処理の７日後、２０１６年５月１６日に４枚または５枚の選択した葉（最も古い葉および最も若い葉を除く）のそれぞれの葉の裏側上、中央脈の両側に対称的にＰｓａの接種用量をピペットで量り込んだ（１０μＬ）。次いで、Ｐｓａを接種した後、植物をＰＦＲ  Ｒｕａｋｕｒａでの隔離用ガラス温室中の高湿度テント内に最長３週間入れてから、Ｐｓａ発病度について評価付けした。
【０１９１】
Ｐｓａ症状の測定
Ｐｓａの液滴接種の２１日後、それぞれの接種ポイントについて、Ｐｓａにより生じたネクローシスの面積（ｍｍ２）を目視で評価した。一貫性を確保する目的のため、スタッフ二人のみで通常の発病度スコアのクロスチェックにより、Ｐｓａによる葉の発病度の評価を実施した。
【０１９２】
統計的分析
すべてのデータは、ＧｅｎＳｔａｔを使用し、自然対数変換法に従って解析した。生データの平均を与え、統計的差異は、対数変換解析に基づく。
【０１９３】
結果  −  供与量率アッセイ
図１は、ＹＢＣＡ５が「Ｈａｙｗａｒｄ」キウイフルーツの葉上においてＰｓａ症状の発病度を抑制するのに極めて有効であることを示す。この実験で使用したすべての供与量率において、未処理物での防除と比較して葉のネクローシスの発病度を有意に（Ｐ＜０．００１）抑制した。ＹＢＣＡ５の顆粒調製物でも、新たに発酵させたＹＢＣＡ５と比較して有効性に差がなかった。
【０１９４】
結果  −  発酵および配合
１２種のフラスコで成長させたＡ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）分離株での発酵収量は、１．３×１０８ＣＦＵ／ｍＬ〜２．３×１０９ＣＦＵ／ｍＬの範囲であり、フラスコで成長させたＹＢＣＡ５での発酵収量は、３．３×１０８ＣＦＵ／ｍＬであり（表１）、これは、いくつかの分離株ではＹＢＣＡ５と比較してより高い発酵収量を得ることが可能であるが、他のものではより低い発酵収量となることを示唆する。
【０１９５】
ＹＢＣＡ５（１０Ｌ発酵からの）の乾燥顆粒でのＣＦＵ／ｇの数は、２．３×１０１０であり、１２種のＡ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）の分離株では、乾燥顆粒でのＣＦＵ／ｇの数は、３．１×１０９ＣＦＵ／ｇという低い値から２．０×１０１０ＣＦＵ／ｇの範囲であり（表１）、これは、ほとんどのＡ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）分離株が、ＹＢＣＡ５よりも生存可能なＣＦＵ／ｇの収量が低いことを示唆する。
【０１９６】
１ｍＬの発酵液体あたりの顆粒中のＣＦＵの数を比較すると（ＹＢＣＡ５の１０Ｌ発酵と、１２種のＡ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）分離株のフラスコ培養とのより直接的な比較が可能となる）、ＹＢＣＡ５は、最高の収量（４×１０８ＣＦＵ／ｍＬ）を有するが、他のＡ．プルランス（Ａ．ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）分離株では、それは、４．２×１０７ＣＦＵ／ｍＬという低い値から２．４×１０８ＣＦＵ／ｍＬの範囲であったことが示される（表１）。
【０１９７】
【表１】
2019531719.tif 000002
【０１９８】
結果  −  葉の液滴接種アッセイ  −  有効性（ＫＲＩＰ−ＢＣＡ  ３９）
Ｎｉｌ（濡れ剤のみ）処理では、その平均Ｐｓａ病変面積は、５７ｍｍ２であった（図２）。１つの分離株（ＭＳＢ８−６−２）は、Ｎｉｌ対照と比較してＰｓａ発病度を有意に抑制しなかった（病変サイズ＝５４ｍｍ２）（Ｐ＞０．０５）。ＹＢＣＡ５は、Ｐｓａ病変面積を４３ｍｍ２まで有意に抑制した（有効性＝２５％）。このアッセイでは、アウレオバシジウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）分離株の全部は、鉢植えのキウイフルーツ植物のＰｓａ発病度を有意に抑制する能力を有さず、Ｐｓａに対する有効性は、選択された分離株に依存することが示された。
【０１９９】
Ｚｅｓｐｒｉアッセイ３１
このアッセイの目的は、研究果樹園における天然のＰｓａ接種物に曝露された鉢植えの植物上においてＰｓａを防除するために、ＹＢＣＡ５を単独で施用した場合と、銅またはＡｃｔｉｇａｒｄと組み合わせて施用した場合との有効性を比較することであった。
【０２００】
植物材料
このアッセイは、Ｔｅ  Ｐｕｋｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｏｒｃｈａｒｄのシェードハウス構造物（Ｂｌｏｃｋ  ２０）中で実施した。その植物は、１．５Ｌのポット内で成長させた組織培養したＡ．キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）「Ｈａｙｗａｒｄ」植物を使用し、Ｒｕａｋｕｒａのガラス温室でもともと成長させたものであった。その植物の背丈が２５ｃｍになったら、それらを２．５Ｌのポットに鉢替えして、Ｒｕａｋｕｒａのシェードハウスに移し、２０１５年１０月３０日にドリッパー灌漑につなぎ込んだ。２０１５年１１月３日の処理の時点では、それぞれの植物は、植物１本あたり少なくとも４枚の使用可能な葉を有し、１つの処理あたり１５本の植物で反復試験を実施した。処理および葉への散布日を表２に示す。
【０２０１】
【表２】
2019531719.tif 000003
【０２０２】
酵母調製物
ＹＢＣＡ５の顆粒は、１０Ｌのバイオリアクター（Ｌａｂｆｏｒｓ）中において滅菌液体培地（４％糖蜜および１．２ｇ／Ｌの尿素）を使用して３日間酵母を発酵させることにより調製した。その発酵液を遠心分離器（Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＣ−５Ｃ）（ローター番号ＳＬＣ−４０００、ローターコード３３）中において５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離にかけると、上清を廃棄した後に細胞濃縮物のウェットペレットが得られた。このウェットペレットをほぼ３０％（ｗ／ｗ）のコーンスターチと混合して、硬くて生地状の粘稠物を形成し、これを、スチール製のメッシュ（穴径３ｍｍ）を通して押出成形し、層流フード（２０〜２５℃）中で一晩乾燥させて乾燥顆粒を形成した。
【０２０３】
すべてのＹＢＣＡ５処理は、２×１０７ＣＦＵ／ｍＬの最終濃度で施用し、植物は自然乾燥させた。調製した最終容積は、処理される植物のサイズに応じて５００ｍＬ〜１リットルの範囲であった。
【０２０４】
Ｐｓａ接種調製物
このプロジェクトの目的は、Ｔｅ  Ｐｕｋｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｏｒｃｈａｒｄ（Ｂｌｏｃｋ  ２０）で鉢植えの植物にＰｓａ接種物を曝露させることであった。このブロックは、Ｐｓａの既往歴を有する成熟したキウイフルーツの蔓作物で囲まれ、それにより時間が経つとこのアッセイのための接種物が得られた。
【０２０５】
葉への散布
２０１６年１１月３日にＲｕａｋｕｒａで第一の散布処理を施し、その後、１０〜１４日の間隔を空けた。（詳細は、上の表２に記述されている）。すべての処理は、手持ちポンプ式の噴霧器を使用し、流れ落ちる寸前まで施用した。水酸化銅（Ｋｏｃｉｄｅ  Ｏｐｔｉ）は、０．７ｇ／Ｌで施し、Ａｃｔｉｇａｒｄは、０．１ｇ／Ｌで施した。ＹＢＣＡ５は、濡れ剤／粘着剤アジュバント、Ｎｕ−Ｆｉｌｍ（２５０ｕＬ／５００ｍＬ）を用いて施用した。
【０２０６】
病気の評価は、２０１５年１２月１７日に、処理したすべての葉について、葉のネクローシスの面積パーセントを評価することにより実施した。
【０２０７】
結果  −  アッセイ  Ｚｅｓｐｒｉ  ３１
何らの処理も施さない場合（Ｎｕ−フィルムのみ、対照）、Ｐｓａによる葉の病斑罹患率は、６６％であり、これは、Ｋｏｃｉｄｅ  Ｏｐｔｉ（１８％）、ＹＢＣＡ５（３５％）、ＹＢＣＡ５およびＫｏｃｉｄｅ  Ｏｐｔｉ（複合プログラムＩ）（１５％）、ＹＢＣＡ５およびＡｃｔｉｇａｒｄ（複合プログラムＩＩ）（２２％）では有意に抑制された（図３）。
【０２０８】
このアッセイでは、ＹＢＣＡ５は、シェード構造物の下の鉢植え植物上で天然のＰｓａ接種物に曝露させた場合のＰｓａ斑点病の罹患率を有意に抑制することが示された（Ｐ＜０．０５）。病気の防除レベルは、Ｋｏｃｉｄｅ  Ｏｐｔｉをベースとするプログラムほど有効ではなかったものの、このアッセイでは、ＹＢＣＡ５は、銅ベースの製剤およびＡｃｔｉｇａｒｄと組み合わせると、銅のみの処理に比べて有効性に有意な低下なしに満足のいくレベルとすることが可能であることが示された。
【０２０９】
実施例３  −  植物病原性真菌の酵母による生態的防除
モニリニア・フルクチコラ（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｆｒｕｃｔｉｃｏｌａ）およびボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）のＹＢＣＡ５による生態的防除
方法
果実ベースのスクリーニングアッセイをＰｌａｎｔ  ａｎｄ  Ｆｏｏｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｒｕａｋｕｒａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｒｅ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ、Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ）（ＰＦＲ）の実験室において実施した。ＰＦＲアッセイでは、ＹＢＣＡ５および殺真菌剤防除剤の浸漬処理施用に焦点を当てた。
【０２１０】
果実材料（アッセイ１〜４）
モニリニア・フルクチコラ（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｆｒｕｃｔｉｃｏｌａ）およびボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）に対する果実についての果実ベースのアッセイ１および２のために、２０１６年１月８日にＣｅｎｔｒａｌ  ＯｔａｇｏのＰＦＲ  Ｃｌｙｄｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｏｒｃｈａｒｄで収穫成熟ステージにおいて摘果し、そこから調達したスイートチェリー（プルヌス・アビウム（Ｐｒｕｎｕｓ  ａｖｉｕｍ）「Ｓｗｅｅｔ  Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ」）に関する接種アッセイを実施した。果実ベースのアッセイ３および４のために２０１６年１月１３日に第二の収穫を実施した。
【０２１１】
次いで、それぞれのチェリーを二重洗浄プロセスにかけた。洗浄１は、ロータリーシェーカー（１１０ｒｐｍ）中において水道水中での１０分間からなり、その後、５分間にわたりＳＤＷ中で洗浄した（洗浄２）。すべてのチェリーを、滅菌したプラスチック製のミートトレー中の滅菌した黒色のプラスチック製のグリッド上に２枚の滅菌したペーパータオルと共に載せ、層流フード中で自然乾燥させた。それぞれのチェリーを処理液中に６０秒間浸漬させ、上に述べたように再び自然乾燥させた。４０ｍＬの脱イオン水をそのペーパータオルに添加して高い相対湿度を確保し、次いでプラスチックバッグ内に密封し、２３℃で２４時間（アッセイ１）および４８時間（アッセイ２）インキュベートして、その果実の表面上にＹＢＣＡ５処理が定着できるようにした。
【０２１２】
アッセイ５  果実材料
果実アッセイを、ばらばらにされた白色の食用ブドウの果粒（「Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｓｅｅｄｌｅｓｓ」  −  アッセイ５）について実施し、これは、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａからの輸入品であり、Ｈａｍｉｌｔｏｎの地方スーパーマーケットで入手した。それぞれの果粒は、３〜４ｍｍの小果柄を残して房から切り離してから二重洗浄プロセスにかけた。洗浄１は、ロータリーシェーカー（１１０ｒｐｍ）中において水道水中での１０分間からなり、その後、５分間にわたりＳＤＷ中で洗浄した（洗浄２）。すべての果粒を、滅菌したプラスチック製のミートトレー中の滅菌した黒色のプラスチック製のグリッド上に２枚の滅菌したペーパータオルと共に載せ、層流フード中で自然乾燥させた。それぞれの果粒に、細かいサンドペーパー（等級Ｐ２２０）を使用して軽く傷をつけてから、処理液に６０秒間浸漬させ、再び自然乾燥させた。
【０２１３】
ＹＢＣＡ５調製物（アッセイ１〜５）
ＹＢＣＡ５の顆粒は、１０Ｌのバイオリアクター（Ｌａｂｆｏｒｓ）中において滅菌液体培地（４％糖蜜および１．２ｇ／Ｌの尿素）を使用して３日間酵母を発酵させることにより調製した。その発酵液を遠心分離器（Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＣ−５Ｃ）（ローター番号ＳＬＣ−４０００、ローターコード３３）中において５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離にかけると、上清を廃棄した後に細胞濃縮物のウェットペレットが得られた。このウェットペレットをほぼ３０％（ｗ／ｗ）のコーンスターチと混合して、硬くて生地状の粘稠物を形成し、これを、スチール製のメッシュ（穴径３ｍｍ）を通して押出成形し、層流フード（２０〜２５℃）中で一晩乾燥させて乾燥顆粒を形成した。
【０２１４】
ＹＢＣＡ５処理剤は、冷蔵庫で５〜７℃で貯蔵したその水分散性顆粒から調製し、懸濁液は、１リットルの脱イオン水あたり１ｇ添加し（最終濃度＝２×１０７ＣＦＵ／ｍＬ）、穏やかに撹拌して懸濁液を形成した。すべての細胞が懸濁液中に均等に分散され、留まっているようにするために、濡れ剤（Ｎｕ−Ｆｉｌｍ）を１リットルあたり０．５ｍＬの量で添加した。
【０２１５】
殺真菌剤（アッセイ１〜５）
アッセイ１および２のために、５００ｇ／Ｌを含む液状懸濁液を０．８５ｍＬ／Ｌの推奨フィールドレート（石果におけるモニリニア（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ）に対する推奨フィールドレート０．７５ｍＬ／Ｌと、ベリー果実におけるボトリチス（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）に対する推奨フィールドレート１．０ｍＬ／Ｌとの平均値）で調製した。濡れ剤は、使用しなかった。
【０２１６】
アッセイ３および４のために、Ｃａｐｔａｎ  Ｆｌｏ（Ｎｕｆａｒｍ，ＮＺ製）（キャプタンを６００ｇ／Ｌ含む）から、キャプタンの液状懸濁液を、１６０ｍＬ／リットルの石果で使用する場合の推奨フィールドレートで調製した。濡れ剤は、使用しなかった。
【０２１７】
モニリニア（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ）接種用調製物（アッセイ１および３）
モニリニア・フルクチコラ（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｆｒｕｃｔｉｃｏｌａ）培養菌（分離コードＭＦＧＱ３）（これは、もともと１９９８年にＨａｍｉｌｔｏｎ地区に植えられていた感染されたモモの樹木から分離されたものである）を、このセクションに含まれる噴霧接種アッセイのために使用した（Ｒｕａｋｕｒａベースのアッセイ）。モニリニア（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ）接種物は、このモニリニア（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ）の菌株をＰＤＡ（Ｄｉｆｃｏ（Ｆｏｒｔ  Ｒｉｃｈａｒｄ））培地上で７日間成長させ、そのプレートを、ＳＤＷプラスＴｗｅｅｎ８０（０．０５％）を用いて洗浄して分生子を収集して、接種物の菌株懸濁液を作成することにより調製した。次いで、この菌株懸濁液を、（菌糸体の断片を除去するために）７０μｍの細胞濾過器を使用して濾過し、血球計算器を使用して濃度を測定してから、ＳＤＷ＋Ｔｗ８０（０．０５％）を用いて希釈することにより、最終濃度の１×１０４分生子／ｍＬとした。
【０２１８】
ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）接種用調製物（アッセイ２および４）
ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）培養菌（分離コード０９−２）（これは、もともと２０００年代にＢａｙ  ｏｆ  Ｐｌｅｎｔｙ地区に植えられていた感染されたキウイフルーツから分離されたものである）を、チェリーに対する、このセクションに含まれる噴霧接種アッセイのために使用した。ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）接種物は、このボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）の菌株をＰＤＡ（ＤＩＦＣＯ（Ｆｏｒｔ  Ｒｉｃｈａｒｄ））培地上で５〜７日間成長させ、そのプレートを、ＳＤＷプラスＴｗｅｅｎ８０（０．０５％）を用いて洗浄して分生子を収集して、接種物の菌株懸濁液を作成することにより調製した。次いで、この菌株懸濁液を、菌糸体の断片を除去するために細胞濾過器（７０μｍメッシュ）を使用して濾過し、血球計算器を使用して濃度を測定してから、ＳＤＷ＋Ｔｗ８０（０．０１％ｖ／ｖ）を用いて希釈することにより、最終濃度の１×１０５分生子／ｍＬとした。
【０２１９】
ボトリチス（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）接種用調製物（アッセイ５）
２種のボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）培養菌（分離コード１８９および５４７）（これらは、もともと２０１０年にＡｕｃｋｌａｎｄ地区で感染されたトマトから分離されたものである）を、このアッセイに含まれる液滴接種アッセイのために使用した。１つの分離株は、２種の一般的に使用される殺真菌剤（ジカルボキシイミドおよびカルベンダジム）に感受性があったが、もう１つの分離株は、それらと同一の殺真菌剤のそれぞれに対する耐性を有した。
【０２２０】
ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）接種物は、このボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）のそれぞれの分離株をＰＤＡ（ＤＩＦＣＯ（Ｆｏｒｔ  Ｒｉｃｈａｒｄ））培地上で５〜７日間成長させ、そのプレートを、ＳＤＷプラスＴｗｅｅｎ８０（０．０１％）を用いて洗浄して分生子を収集して、接種物の菌株懸濁液を作成することにより調製した。次いで、この菌株懸濁液を、菌糸体の断片を除去するために細胞濾過器（７０μｍメッシュ、Ｆａｌｃｏｎ）を使用して濾過し、血球計算器を使用してその濃度を測定し、１０μＬの液滴のそれぞれの中に２００個の分生子があるのと均等な所望の濃度（２×１０４分生子／ｍＬ）に調節した。傷をつけた果粒の表面に分生子の懸濁液が確実に留まっているようにするために、ガラススライドの上にパラフィンワックスを、そのパラフィンワックス層の上を１ｍＬのピペットチップの底で軽くたたきながら、１〜２ｍｍの厚みの層を塗りつけることにより、傷をつけた表面の周りにパラフィンの「ワックスの堤防」を構築してから、その「パラフィンワックスリング」を傷つけた表面上に移した。これにより、直径５〜６ｍｍのパラフィンワックスのリング（「堤防」）が効率的に作られ、それが分生子の懸濁液を保持し、それが丸い果粒の表面から転がり落ちるのを防止した。次いで、傷つけて処理した果粒に対し、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）分生子の懸濁液を、１０μＬの液滴を用いて接種した。
【０２２１】
病原体を接種した後、トレー内のすべての接種した果実試料を実験台上において２３℃（アッセイ１〜４）または２１℃（アッセイ５）の温度でプラスチックバッグ内に４８時間密封した。すべてのチェリーおよび果粒のアッセイにおいて、プラスチック製のグリッドの底に２枚の滅菌したペーパータオルを置き、その上に果粒を横たえてから４０ｍＬＳＤＷを用いて湿り気を与え、それぞれのトレーを清浄なプラスチックバッグ内に入れ、次いでシールして、最初の７２時間にわたり高い相対湿度を維持した。その後、バッグを開き、（トレーのそれぞれの両端が十分な空気の流れに確実に開かれているようにするために）トレー上で折り重ねて、相対湿度が１５時間（夕方の午後５時から翌朝の午前８時まで）にわたって徐々に低下するようにし、その後、それらを再びシールした。インキュベーションチャンバー内で相対湿度を交替させるこのプロセスは、実験の継続時間にわたって繰り返し、この方法は、菌糸体の過度の成長を避けることが示された。５日のインキュベーション後、典型的なモニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）またはボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）の症状を有する果実を記録して、それぞれの反復トレーから取り除いた。腐敗を毎日記録し、モニリニア属（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｓｐｐ．）またはボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）の腐敗の累積罹患率（％）を１３日後（アッセイ１および２）、１６日後（アッセイ３および４）および９日後（アッセイ５）に計算した。アッセイ５では、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）感染の発病度は、それぞれの処理について、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）の分生子柄で覆われた果粒表面の比率を目視で評価することにより求めた。
【０２２２】
リンゴにおけるＹＢＣＡ５によるコレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）およびペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）の生態的防除
リンゴアッセイ６および７
リンゴ果実（「Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｒｏｓｅ」）は、Ｈａｗｋｅｓ  Ｂａｙにある有機果樹園から入手し、１０Ｌのバケツにおいて水道水で洗浄した。次いで、リンゴをバイオハザードフード内で４５分後に裏返し、約１．５時間にわたって乾燥させてから、エタノールをしみこませたティッシューでぬぐい、再度自然乾燥させた。次いで、リンゴを、プラスチック製のクラムシェル型コンテナーの底に敷いた湿らせたペーパータオル上に１つのコンテナーあたりリンゴ２個ずつ置いた。アッセイ６および７では、それぞれの処理に１０個のリンゴでの反復試験を実施した。
【０２２３】
５種の処理を実施した：Ｎｉｌ対照（０．０５％のＴｗｅｅｎ８０）、殺真菌剤（０．５ｍＬ／ＬのＰｒｏｌｉｆｉｃ（５００ｇ／Ｌのカルベンダジムを含む））、病原体の２４時間前にＹＢＣＡ５を１×１０７ＣＦＵ／ｍＬで施用、病原体の２時間前にＹＢＣＡ５を１×１０７ＣＦＵ／ｍＬで施用、および病原体のみ（アッセイ６ではコレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）、アッセイ７ではペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．））。ＹＢＣＡ５の顆粒は、１０Ｌのバイオリアクター（Ｌａｂｆｏｒｓ）中において滅菌液体培地（４％糖蜜および１．２ｇ／Ｌの尿素）を使用して３日間酵母を発酵させることにより調製した。その発酵液を遠心分離器（Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＣ−５Ｃ）（ローター番号ＳＬＣ−４０００、ローターコード３３）中において５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離にかけると、上清を廃棄した後に細胞濃縮物のウェットペレットが得られた。このウェットペレットをほぼ３０％（ｗ／ｗ）のコーンスターチと混合して、硬くて生地状の粘稠物を形成し、これを、スチール製のメッシュ（穴径３ｍｍ）を通して押出成形し、層流フード（２０〜２５℃）中で一晩乾燥させて乾燥顆粒を形成した。
【０２２４】
ＹＢＣＡ５処理剤は、冷蔵庫で５〜７℃で貯蔵したその水分散性顆粒から調製し、懸濁液は、１リットルの脱イオン水あたり０．５ｇ添加し（最終濃度＝１×１０７ＣＦＵ／ｍＬ）、穏やかに撹拌して懸濁液を形成した。
【０２２５】
病原体胞子の懸濁液は、ＰＤＡの上で成長させたコレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）およびペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）の培養菌から調製した。ＰＤＡペトリ皿から培養菌の１／３を取り出し、３０ｍＬのＳＤＷ（０．０５％のＴｗｅｅｎ８０入り）を入れた５０ｍＬのＦａｌｃｏｎチューブ内に移した。これを１分間激しく振盪させて、胞子を懸濁液中に取り込ませ、次いで７０μの細胞濾過器を通して、菌糸体の断片をすべて取り除いた。血球計算器を用いて胞子濃度を計算し、希釈して最終濃度の１×１０５胞子数／ｍＬとした。
【０２２６】
リンゴを洗浄し、調製した日（第１日）にリンゴの側面に小さい傷（直径３ｍｍ、深さ２〜３ｍｍ）をつけ、処理３の番号を付けた。ＹＢＣＡ５懸濁液の１０μＬアリコートをその傷に加え、傷を十分に覆うようにした。その翌日（第２日）にさらに４箇所に傷をつけ、処理１、２、４および５の番号を付けた。それぞれの傷にそれぞれの溶液の１０μＬアリコートを加えることにより、処理１、２および４を傷に対して実施した。２時間後、アッセイ６では１０μＬアリコートのコレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）をそれぞれの傷に加え（処理２、３、４および５）、アッセイ７では１０μＬアリコートのペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）をそれぞれの傷に加える（処理２、３、４および５）ことにより、病原体を適用した。３０ｍＬの追加のＳＤＷをクラムシェル型コンテナー内のペーパータオルに加えて、相対湿度を維持し、そのコンテナーをＳａｎｙｏインキュベーター内において２３℃で１〜２週間インキュベートして腐敗を進ませた。
【０２２７】
８日後にデジタルキャリパーを使用して腐敗の病変直径を測定した。それぞれの測定において、傷の直径から３ｍｍを引き算することにより病変サイズを補正し、次いでＧｅｎｓｔａｔを使用してＡＮＯＶＡを実施して、最小有意差に基づく処理差のための試験を行った。
【０２２８】
実験計画
チェリーアッセイ（アッセイ１〜４）は、一反復あたり１０個のチェリーからなり、乱塊レイアウト法でそれぞれの処理あたり６回の反復（アッセイ１および２）および８回の反復（アッセイ３および４）を実施した。
【０２２９】
ブドウ果粒アッセイ（アッセイ５）は、一反復あたり５個の果粒からなり、乱塊レイアウト法でそれぞれの処理あたり４回の反復を実施した。
【０２３０】
統計的分析
データは、乱塊実験計画法および分散分析法を用い、ＧｅｎＳｔａｔ，１３ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎを使用して解析した。平均の果実感染（％罹患率）は、対数変換して、分散を平坦化させ、解析の正規分布仮説により良く適合するようにした。生データの平均値および最小有意差（ＬＳＤ）を提示するが、すべての統計的比較は、対数解析に基づくものである。
【０２３１】
チェリー接種アッセイの結果
アッセイ１
図９は、チェリーにおけるモニリニア（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ）果実腐敗に対するＹＢＣＡ５の効果をまとめている。モニリニア（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ）果実腐敗の罹患率は、Ｎｉｌ処理では５０％であり、ＹＢＣＡ５（３４％）およびイプロジン処理（２２％）では、モニリニア（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ）の罹患率がより低く、これらは、Ｎｉｌ処理と比較して有意な抑制ではなかった（図９）。
【０２３２】
アッセイ２
図１０は、チェリーにおけるボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）果実腐敗に対するＹＢＣＡ５の効果をまとめている。ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）果実腐敗の罹患率は、無処理では３５％であり、これは、ＹＢＣＡ５（２４％）およびイプロジン処理（２２％）において有意に抑制されなかった（Ｐ＞０．０５）（図１０）。
【０２３３】
アッセイ３
図１１は、別のアッセイ（アッセイ３）でのチェリーにおけるモニリニア（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ）果実腐敗に対するＹＢＣＡ５の効果をまとめている。モニリニア（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ）果実腐敗の罹患率は、無処理では８８％であり、これは、ＹＢＣＡ５（５９％）によっても有意に抑制されなかった（Ｐ＞０．０５）。キャプタン殺真菌剤処理（１２％）は、Ｎｉｌ処理と比較してモニリニア（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ）果実腐敗の罹患率を有意に抑制した（Ｐ＜０．００１）（図１１）。
【０２３４】
アッセイ４
図１２は、別のアッセイでのチェリーにおけるボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）果実腐敗に対するＹＢＣＡ５の効果をまとめている。ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）果実腐敗の罹患率は、無処理では６７％であり、これは、ＹＢＣＡ５（４９％）およびキャプタン処理（４３％）では有意に抑制されなかった（Ｐ＞０．０５）（図１２）。
【０２３５】
ブドウ接種アッセイの結果
アッセイ５
図１３は、別のアッセイ（アッセイ５）での食用のブドウにおけるボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）果実腐敗に対するＹＢＣＡ５の効果をまとめている。ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）果実腐敗の罹患率は、無処理で３０％であり、これは、ＹＢＣＡ５（７％）およびキャプタン処理（１０％）によって有意に抑制された（Ｐ＜０．００１）（図１３）。
【０２３６】
他の病気の処理  −  リンゴアッセイ６および７でのリンゴの結果
アッセイ６
未処理のコレトトリカム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ）対照における平均病変サイズは、１０．１ｍｍであり、これは、殺真菌剤および２つのＹＢＣＡ５処理で有意に抑制された（Ｐ＜０．０５）（表３）。
【０２３７】
病原体に接触させる２４時間前にＹＢＣＡ５を施用すると、病原体に接触させる２時間前に施用するよりも良好な保護作用が得られる。
【０２３８】
【表３】
2019531719.tif 000004
【０２３９】
アッセイ７：
未処理のペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）対照における平均病変サイズは、１５．２ｍｍであり、これは、殺真菌剤および２つのＹＢＣＡ５処理で有意に抑制された（Ｐ＜０．０５）（表４）。上記のアッセイと同様に、病原体に接触させる２４時間前にＹＢＣＡ５を施用すると、病原体に接触させる２時間前に施用するよりも有意に良好な保護作用が得られる。
【０２４０】
【表４】
2019531719.tif 000005
【０２４１】
アッセイ８：「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」キウイフルーツにおける植物病原性真菌による収穫後の腐敗
中国からの最も重要な輸出栽培品種は、「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」であり、この赤黄色の果肉の栽培品種は、以下の一連の貯蔵時病原体の攻撃を受ける：ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）、ホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）、コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）、クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）およびボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）。
【０２４２】
本発明者らは、特に以下の一連の果実の貯蔵時の真菌性病原体に対する傷の保護として施用したＹＢＣＡ５の有効性を検討した：ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）、ホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）、コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）、クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）およびボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）。
【０２４３】
予備試験を実施して、何らの処理もしない傷をつけた後の果実を腐敗させるのに必要なそれぞれの病原体の濃度を明らかにした。
【０２４４】
方法
キウイフルーツ「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」ベースのスクリーニングアッセイ（アッセイ８および９）をＰｌａｎｔ  ａｎｄ  Ｆｏｏｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｒｕａｋｕｒａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｒｅ（Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ）（ＰＦＲ）の実験室で実施した。ＰＦＲアッセイでは、ＹＢＣＡ５処理の傷への施用に焦点を当て、市場で実施されている生物学的防除処理および殺真菌剤を比較対照として使用した。
【０２４５】
果実材料（アッセイ８）
果実ベースのアッセイ８および９のための「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」キウイフルーツは、２０１７年４月１２日にＰＦＲ  Ｒｉｗａｋａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｏｒｃｈａｒｄ（Ｍｏｔｕｅｋａ）から入手した。ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）、ホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）、コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）、クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）およびボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）の接種アッセイは、収穫成熟ステージで摘果した「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」キウイフルーツについて実施した。
【０２４６】
１℃の冷蔵貯蔵庫から取り出した後、それぞれの果実を三重洗浄プロセスにかけた。洗浄１は、７０％エタノール中３０秒間からなり、次いでロータリーシェーカー（８０ｒｐｍ）上において水道水で１０分間洗浄し（洗浄２）、続けてＳＤＷ中で５分間の最後の洗浄をした（洗浄３）。すべての果実を、滅菌したプラスチック製のミートトレー中の滅菌した黒色のプラスチック製のグリッド上に２枚の滅菌したペーパータオルと共に載せ、層流フード中で一晩自然乾燥させた。
【０２４７】
それぞれの果実に、滅菌したステンレス鋼製のスパイク（深さ４ｍｍ×幅３ｍｍ）を用いて側面に傷をつけた傷つけ処理の直後にその傷内にそれぞれの処理懸濁液１０μＬをピペットで量り込み、自然乾燥させた。
【０２４８】
処理物および比率の詳細は、次表に記載した。
【０２４９】
【表５】
2019531719.tif 000006
【０２５０】
アッセイ８および９のために、２枚の滅菌したペーパータオルをＰｌｉｘカットアウトの底に敷き、４０ｍＬのＳＤＷを用いて湿らせ、それぞれの果実を使い捨てのランチボックス（Ｐｌｉｘ  Ｅｘｔｒａ  Ｄｅｅｐ  ４５／４５、果実の移動を防ぐ、５個のＰｌｉｘ果実カットアウトを含む）内に置き、密封してから大型の（４０Ｌ）プラスチック容器内に入れ、それを閉じて、最初の２４時間にわたり高い相対湿度が保持できるように実験台上において２４℃でインキュベートした。２４時間後にそのＰｌｉｘランチボックスを容器から取り出し、それぞれの真菌病原体の１０ｕＬの懸濁液を、処理された傷内にピペットで量り込んだ。すべてのランチボックスを再び密封し、大型プラスチック容器内に置き戻し、次の４８時間にわたり高い相対湿度に保った。この時間が過ぎたら、Ｐｌｉｘランチボックスを大型プラスチック容器から取り出し、Ｐｌｉｘボックスの蓋と本体との間にピンを差し込んで、空気が幾分か循環し、１５時間（夕方の午後５時から翌朝午前８時まで）にわたって相対湿度が下がることができるようにし、その後、それらを再び密封した。インキュベーションチャンバー内で相対湿度を交替させるこのプロセスは、実験の継続時間にわたって繰り返し、この方法は、菌糸体の過度の成長を避けることが示された。６日後（アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）、ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）、ホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）、コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．））および７日後（クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．））に、それぞれの処理について果実の軸方向で病変の長さ（ｍｍ）を測定することにより、真菌腐敗の発病度を評価した。データは、平均病変長さから最初の傷の幅（３ｍｍ）を引き算して表した。
【０２５１】
ＹＢＣＡ５調製物（アッセイ８および９）
ＹＢＣＡ５の顆粒は、１０Ｌのバイオリアクター（Ｌａｂｆｏｒｓ）中において滅菌液体培地（４％糖蜜および１．２ｇ／Ｌの尿素）を使用して３日間酵母を発酵させることにより調製した。その発酵液を遠心分離器（Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＣ−５Ｃ）（ローター番号ＳＬＣ−４０００、ローターコード３３）中において５０００ｒｐｍで１５分間遠心分離にかけると、上清を廃棄した後に細胞濃縮物のウェットペレットが得られた。このウェットペレットをほぼ３０％（ｗ／ｗ）のコーンスターチと混合して、硬くて生地状の粘稠物を形成し、これを、スチール製のメッシュ（穴径３ｍｍ）を通して押出成形し、層流フード（２０〜２５℃）中で一晩乾燥させて乾燥顆粒を形成した。
【０２５２】
ＹＢＣＡ５処理剤は、冷蔵庫で５〜７℃で貯蔵したその水分散性顆粒から調製し、懸濁液は、１リットルの脱イオン水あたり０．５ｇ添加し（最終濃度＝１×１０７ＣＦＵ／ｍＬ）、穏やかに撹拌して懸濁液を形成した。
【０２５３】
貯蔵時病原体の調製物
アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）接種用調製物（アッセイ８）
アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）の培養菌（分離コード＝「アルテルナリア属ｅｘチェリー（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｅｘ  ｃｈｅｒｒｙ）（これは、もともと２０１６年にＣｅｎｔｒａｌ  Ｏｔａｇｏからの感染されたチェリー果実から分離されたものである）をこのアッセイの有傷接種の一部のために使用した。アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）接種物は、このアルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｐｐ．）の菌株をＯａｔ  Ｍｅａｌ  Ａｇａｒ培地上で２１日間成長させ、そのプレートを、ＳＤＷプラスＴｗｅｅｎ８０（０．０５％）を用いて洗浄して分生子を収集して、接種物の菌株懸濁液を作成することにより調製した。次いで、この菌株懸濁液を、（菌糸体の断片を除去するために）７０μｍの細胞濾過器を使用して濾過し、血球計算器を使用して濃度を測定してから、ＳＤＷ＋Ｔｗ８０（０．０５％）を用いて希釈することにより、最終濃度の２×１０４分生子／ｍＬとした。
【０２５４】
ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）接種用調製物（アッセイ８）
ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）培養菌（分離コード０９−２）（これは、もともと２０００年代にＢａｙ  ｏｆ  Ｐｌｅｎｔｙ地区に植えられていた感染されたキウイフルーツから分離されたものである）を、チェリーに対する、このセクションに含まれる噴霧接種アッセイのために使用した。ボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）接種物は、このボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）の菌株をＯａｔ  Ｍｅａｌ  Ａｇａｒ培地上で１２日間成長させ、そのプレートを、ＳＤＷプラスＴｗｅｅｎ８０（０．０５％）を用いて洗浄して分生子を収集して、接種物の菌株懸濁液を作成することにより調製した。次いで、この菌株懸濁液を、菌糸体の断片を除去するために７０μｍの細胞濾過器（７０μｍメッシュ）を使用して濾過し、血球計算器を使用して濃度を測定してから、ＳＤＷ＋Ｔｗ８０（０．０１％ｖ／ｖ）を用いて希釈することにより、最終濃度の１×１０５分生子／ｍＬとした。
【０２５５】
コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）接種用調製物（アッセイ８）
コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）培養菌（分離コード＝‘ｅｘ  Ｇ３）（これは、もともと２０１７年にＲｕａｋｕｒａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｏｒｃｈａｒｄからの感染されたＧｏｌｄ３キウイフルーツから分離されたものである）をこのアッセイの有傷接種の一部のために使用した。コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）接種物は、このコレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）の菌株をＰＤＡ（Ｄｉｆｃｏ（Ｆｏｒｔ  Ｒｉｃｈａｒｄ））培地上で２１日間成長させ、そのプレートを、ＳＤＷプラスＴｗｅｅｎ８０（０．０５％）を用いて洗浄して分生子を収集して、接種物の菌株懸濁液を作成することにより調製した。次いで、この菌株懸濁液を、（菌糸体の断片を除去するために）７０μｍの細胞濾過器を使用して濾過し、血球計算器を使用して濃度を測定してから、ＳＤＷ＋Ｔｗ８０（０．０５％）を用いて希釈することにより、最終濃度の２×１０４分生子／ｍＬとした。
【０２５６】
ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）接種用調製物（アッセイ８）
ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）培養菌（分離コード＝「ペニシリムｅｘレモン（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｅｘ  ｌｅｍｏｎ）」）（これは、もともと２０１７年にスーパーマーケットからの感染されたレモン果実から分離されたものである）をこのアッセイの有傷接種の一部のために使用した。ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）接種物は、このペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）の菌株をＰＤＡ（Ｄｉｆｃｏ（Ｆｏｒｔ  Ｒｉｃｈａｒｄ））培地上で１２日間成長させ、そのプレートを、ＳＤＷプラスＴｗｅｅｎ８０（０．０５％）を用いて洗浄して分生子を収集して、接種物の菌株懸濁液を作成することにより調製した。次いで、この菌株懸濁液を、（菌糸体の断片を除去するために）７０μｍの細胞濾過器を使用して濾過し、血球計算器を使用して濃度を測定してから、ＳＤＷ＋Ｔｗ８０（０．０５％）を用いて希釈することにより、最終濃度の２×１０４分生子／ｍＬとした。
【０２５７】
ホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）接種用調製物（アッセイ８）
ホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）培養菌（分離コード＝「ホモプシスｅｘ  Ｇ３」（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｅｘ  Ｇ３）（これは、もともと２０１７年にＲｕａｋｕｒａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｏｒｃｈａｒｄからの感染されたＧｏｌｄ３キウイフルーツから分離されたものである）をこのアッセイの有傷接種の一部のために使用した。ホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）接種物は、このホモプシス属（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）の菌株をＰＤＡ（Ｄｉｆｃｏ（Ｆｏｒｔ  Ｒｉｃｈａｒｄ））培地上で２１日間成長させ、そのプレートを、ＳＤＷプラスＴｗｅｅｎ８０（０．０５％）を用いて洗浄して分生子を収集して、接種物の菌株懸濁液を作成することにより調製した。次いで、この菌株懸濁液を、（菌糸体の断片を除去するために）７０μｍの細胞濾過器を使用して濾過し、血球計算器を使用して濃度を測定してから、ＳＤＷ＋Ｔｗ８０（０．０５％）を用いて希釈することにより、最終濃度の２×１０４分生子／ｍＬとした。
【０２５８】
クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）接種用調製物（アッセイ９のみ）
クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）培養菌（分離コード＝「クリプトスポリオプシスｅｘ  Ｇ３」（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｅｘ  Ｇ３））（これは、もともとＴｅ  Ｐｕｋｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｏｒｃｈａｒｄからの感染されたＧｏｌｄ３キウイフルーツから分離されたものである）をアッセイ９の有傷接種のために使用した。クリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）接種物は、このクリプトスポリオプシス属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ  ｓｐｐ．）の菌株をＰＤＡ（Ｄｉｆｃｏ（Ｆｏｒｔ  Ｒｉｃｈａｒｄ））培地上で２８日間成長させ、そのプレートを、ＳＤＷプラスＴｗｅｅｎ８０（０．０５％）を用いて洗浄して分生子を収集して、接種物の菌株懸濁液を作成することにより調製した。次いで、この菌株懸濁液を、（菌糸体の断片を除去するために）７０μｍの細胞濾過器を使用して濾過し、血球計算器を使用して濃度を測定してから、ＳＤＷ＋Ｔｗ８０（０．０５％）を用いて希釈することにより、最終濃度の２×１０４分生子／ｍＬとした。
【０２５９】
アッセイ８および９における病原体接種後、すべての接種された果実試料は、使い捨てのランチボックス（Ｐｌｉｘ  Ｅｘｔｒａ  Ｄｅｅｐ  ４５／４５、果実の移動を防ぐ、５個のＰｌｉｘ果実カットアウトを含む）内に置き、Ｐｌｉｘカットアウトの底に置いた２枚の滅菌したペーパータオルに４０ｍＬのＳＤＷを添加し、次いで大型の（４０Ｌ）プラスチック容器内に置き、それを閉じて、最初の４８時間にわたり高い相対湿度が保持できるように天然光および蛍光灯下において２４℃で最大３日間、実験台上でインキュベートした。４８時間が過ぎたら、Ｐｌｉｘランチボックスをその容器から取り出し、蓋と本体との間にピンを差し込んで、空気が循環し、１５時間（夕方の午後５時から翌朝午前８時まで）にわたって相対湿度が下がることができるようにし、その後、それらを再び密封した。インキュベーションチャンバー内で相対湿度を交替させるこのプロセスは、実験の継続時間にわたって繰り返し、この方法は、菌糸体の過度の成長を避けることが示された。６〜７日後、それぞれの処理について果実の軸方向で病変の長さ（ｍｍ）を測定することにより、真菌腐敗感染の発病度を評価した。データは、平均病変長さから最初の傷の幅（３ｍｍ）を引き算して表した。
【０２６０】
実験計画
キウイフルーツ「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」のアッセイ８は、一反復あたり４個の「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」キウイフルーツからなり、乱塊レイアウト法でそれぞれの処理あたり５回の反復を実施した。合計して２２回の処理が存在し、それは、Ｎｉｌ（傷つけなし、処理なし）で病原体接種なしの対照実験と、Ｎｉｌ（傷つけてから、ＳＤＷ＋Ｔｗ８０）で病原体接種なしの対照実験とを含んだ。
【０２６１】
アッセイ９において
キウイフルーツ「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」のアッセイ９は、一反復あたり４個の「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」キウイフルーツからなり、乱塊レイアウト法でそれぞれの処理あたり４回の反復を実施した。合計して５回の処理が存在し、それは、Ｎｉｌ（傷つけなし、処理なし）で病原体接種なしの対照実験と、Ｎｉｌ（傷つけてから、ＳＤＷ＋Ｔｗ８０）で病原体接種なしの対照実験とを含んだ。
【０２６２】
統計的分析
データは、乱塊実験計画法および分散分析法を用い、ＧｅｎＳｔａｔ、１３ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎを使用して解析した。平均病変直径は、データ変換して分散を平坦化させる必要はなく生データの平均値および最小有意差（ＬＳＤ）を示す。
【０２６３】
結果
アッセイ８
果実にアルテルナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）、コレトトリカム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ）、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）およびホモプシス（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ）を接種した場合、ＹＢＣＡ５で処理した果実は、「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」果実中にＲｏｖｒａｌ  Ａｑｕａｆｌｏ処理、Ｓｅｒｅｎａｄｅ  Ｏｐｔｉ処理および未処理の対照よりも有意に小さい病変のみを有した。果実にボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）を接種した場合、ＹＢＣＡ５で処理した果実は、Ｒｏｖｒａｌ  Ａｑｕａｆｌｏよりも有意に小さい病変を有さなかったが、Ｓｅｒｅｎａｄｅ  Ｏｐｔｉ処理および未処理の対照より有意に小さかった。
【０２６４】
果実にボトリチス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｓｐｐ．）およびペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．）を接種した場合、Ｒｏｖｒａｌ  Ａｑｕａｆｌｏで処理した果実は、未処理の対照より有意に小さい病変を有した。果実にホモプシス（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ）を接種した場合、Ｓｅｒｅｎａｄｅ  Ｏｐｔｉで処理した果実は、未処理の対照より有意に小さい病変を有した（図１４）。
【０２６５】
アッセイ９では、ＹＢＣＡ５で処理した果実はまた、果実にクリプトスポリオプシス（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ）を接種した場合、Ｒｏｖｒａｌ  Ａｑｕａｆｌｏ処理、Ｓｅｒｅｎａｄｅ  Ｏｐｔｉ処理および未処理の対照よりも「Ｈｏｎｇｙａｎｇ」果実における病変が有意に小さかった（図１５）。
【０２６６】
考察
傷つけた部位に病原体を導入する２４時間前にＹＢＣＡ５をそれと同じ傷に定着させると、ＹＢＣＡ５は、一連の収穫後のキウイフルーツの果実への病原体に対して活性を有することが示された。傷つけ法は、いくつかのバイオ農薬の活性を示すための実験手法として良好に機能する。
【０２６７】
全体として、Ｒｏｖｒａｌ  Ａｑｕａｆｌｏは、これらの実験では効果が低かったため、この農薬は、傷保護アッセイおよび本研究に使用した病原体に対して適していない可能性がある。
【０２６８】
Ｓｅｒｅｎａｄｅ  Ｏｐｔｉは、これらのアッセイでは効果が低かったため、このバイオ農薬は、これらのアッセイにおいて使用された病原体に対する、傷をつけた果実の傷保護剤として適していない可能性がある。
【０２６９】
実施例５  −  圃場におけるＰＳＡの酵母による生態的防除
要約
【０２７０】
【表６】
2019531719.tif 000007
【０２７１】
試験方法：すべての植物に対して蕾のほころび時に銅を施用し、次いで処理グループに酵母処理を施した一方、対照は、それぞれ処理を施さないかまたは栽培業者標準処理であった。
【０２７２】
圃場試験、２０１５〜１６年
方法
２０１５年の春に、連続２シーズンにわたる実験をする目的で２つの圃場試験サイトを設定した。２つの「Ｈａｙｗａｒｄ」ブロック（ブロックＢおよびＣとして表記）をＭａｋｅｔｕ（Ｂａｙ  ｏｆ  Ｐｌｅｎｔｙ）の近くの別々の果樹園に置いた。ブロックＣは、２０１４〜１５年での試験と同じ果樹園であったが、ブロック内の別の地区を使用した。すべてのブロック内の蔓植物は、１柱間あたり１本の蔓としてパーゴラ状に整枝した。その蔓作物は、試験の開始時、一般的に健全に見えたが、栽培者によると２〜３年前にかなり重度のＰｓａ病にかかっていた。
【０２７３】
乱塊計画法のレイアウトに従って個々の蔓作物に散布処理を施した（１つの処理あたり８回の反復）。その処理は、以下の通りであった：
１．Ｎｉｌ  −  成長期中にＰｓａ防除剤を施用せず。
２．栽培業者標準  −  銅ベースの葉面散布プログラム、１回の抗生物質散布を含む。
３．ＹＢＣＡ５  −  酵母ベースの葉面散布プログラム（２×１０７ＣＦＵ／ｍＬ）。
【０２７４】
表５のスケジュールに従って栽培業者標準における散布施用およびＹＢＣＡ５処理を施した。一般的な農業用アジュバントを栽培業者標準（０．０４％Ｄｕ−Ｗｅｔｔ（登録商標））およびＹＢＣＡ５施用（０．０３％Ｎｕ−Ｆｉｌｍ−１７（登録商標））に添加した。
【０２７５】
【表７】
2019531719.tif 000008
【０２７６】
ＹＢＣＡ５酵母は、液体発酵により産生させたものであり、次の３つの生産設備から入手した：ＰＦＲ（Ｒｕａｋｕｒａ）、ＡｇＲｅｓｅａｒｃｈ（Ｌｉｎｃｏｌｎ）およびＣａｌｌａｇｈａｎ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ（Ｌｏｗｅｒ  Ｈｕｔｔ）。遠心分離後の濃縮された酵母ペレットをＲｕａｋｕｒａの実験室に送り、それを不活性な担体と混合し、押出成形して顆粒とし、それを層流フード中で一晩風乾させた。２０ｍＬの０．０５％のＴｗｅｅｎ８０を用いて変性したリン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳＴｗ）中に０．２ｇの試料を溶解させることにより、コロニー形成単位の数／ｇを計算した。これを系列的に希釈し、それぞれの希釈液の１０μＬの液滴を、クロラムフェニコールを用いて変性したＭａｌｔ  Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ  Ａｇａｒを入れたペトリ皿に移し込んだ。ペトリ皿を２５℃で２４時間、次いで４〜６℃でさらに２４時間インキュベートしてからコロニーの数をカウントした。顆粒におけるＹＢＣＡ５の濃度は、２．１×１０１０ＣＦＵ／ｇであった。すべての顆粒は、冷蔵庫（４〜６℃）中の密閉したコンテナー内で貯蔵し、１００ｇ／１００Ｌの割合で量り取って目標散布濃度の２×１０７ＣＦＵ／ｍＬとした。
【０２７７】
Ｐｓａ病の評価は、２０１５年１１月１１日に開花直前の「Ｈａｙｗａｒｄ」ブロックにおいて実施し、それは、葉についてＰｓａの病斑の発病度（ネクローシスを発症した葉の面積％）を目視で評価された。評価は、主コルドンから第二および第三のワイヤアウト間にある葉について実施した。評価は、試験区の端から一段（すなわち１ｍ）離れたところから開始し、２５葉を１セットとして評価付けした。このプロセスをさらに一段下がった試験区で繰り返した。次いで、これを他の側の蔓植物でも繰り返して、それぞれの試験区内で２５葉を４セット（合計＝１００葉）として評価付けを行った。上記と同様に、１試験区あたり１００個の蕾について蕾の褐変の発病度の評価付けも行った。
【０２７８】
データは、Ｐｓａ罹患率（Ｐｓａ病斑を有する葉の比率／褐色の萼片を有する蕾の比率に基づく）および平均Ｐｓａ発病度（壊死した葉の面積の平均％／蕾上の褐変した萼片の平均数）として表した。データの対数変換を行い、Ｇｅｎｓｔａｔ（ｖｅｒ．１６）を使用したＡＮＯＶＡにより解析して、処理差の判定を行った。生データは、対数変換したデータをベースにして示される統計的差異で表す。解析は、サイト×処理の何らかの有意差のある相互作用をチェックしてから、両方の果樹園サイトからのデータを組み合わせることによっても実施した。
【０２７９】
結果
斑点病（ネクローシス）を有する葉の罹患率および発病度ならびに同様に蕾の症状を解析することから、有意差のある処理×果樹園の相互作用が存在しないことが示唆されたため、それにより、２つの果樹園（ブロックＢおよびＣ）の平均としてデータを提示する。
【０２８０】
Ｎｉｌ対照は、５０％の、ネクローシスを有する葉の罹患率の平均値を有し、これは、Ｋｏｃｉｄｅ  Ｏｐｔｉおよび２種のＹＢＣＡ５処理（表６）により有意に抑制された（Ｐ＜０．０５）。ＹＢＣＡ５の有効性は、３３％であった。栽培業者の標準処理（Ｋｏｃｉｄｅ  Ｏｐｔｉ＋Ｋａｓｕｍｉｎ）は、７４％の有効性を有し、ネクローシスを有する葉の罹患率では、ＹＢＣＡ５およびＫｏｃｉｄｅ  Ｏｐｔｉ処理と比較してさらに有意な抑制が得られた。
【０２８１】
Ｎｉｌ対照では、斑点病の平均発病度がわずか０．２４％であった（表６）。しかしながら、それでもなお葉のネクローシスの平均発病度について、２つのＹＢＣＡ５処理を含めたそれぞれの処理において、Ｎｉｌ対照と比較して有意な抑制が存在した（Ｐ＜０．０５）。ＹＢＣＡ５の平均有効性は、５８％であり、それと比較して、栽培業者標準およびＫｏｃｉｄｅ  Ｏｐｔｉ処理は、それぞれ９１％および７３％の有効性を有した。
【０２８２】
Ｎｉｌ対照における壊死萼片を有する花の蕾の罹患率は、６１％であり、これは、それぞれの処理によって有意に抑制された（Ｐ＜０．０５）（表６）。２種のＹＢＣＡ５処理は、ネクローシスを有する蕾の罹患率が３９％および３７％であり、３８％の平均有効性であった。栽培業者標準処理は、それぞれの他の処理と比較して有意に低い（Ｐ＜０．０５）蕾のネクローシス（１３％）を有した（有効性、７９％）。Ｋｏｃｉｄｅ  Ｏｐｔｉ処理は、４０％の有効性を有した。
【０２８３】
蕾のネクローシスの平均発病度（壊死萼片の数／蕾）は、Ｎｉｌ対照では１．２９であり、ネクローシスを有する蕾の罹患率と同等であり、これは、それぞれの処理によって有意に抑制され（Ｐ＜０．０５）、栽培業者標準処理（０．２１、有効性＝８４％）が最大の抑制を与えた（表６）。ＹＢＣＡ５処理の平均有効性は、４６％であり、これは、Ｋｏｃｉｄｅ  Ｏｐｔｉ処理（有効性３８％）と同等であった。
【０２８４】
【表８】
2019531719.tif 000009
【０２８５】
圃場試験、２０１６〜１７年
方法
冬の数ヶ月間中、栽培業者は、その標準的なＫｏｃｉｄｅ  Ｏｐｔｉ冬期散布プログラムを実行し、春には上記と同じ処理を同じ蔓作物に実施した。栽培業者がＫｏｃｉｄｅ  Ｏｐｔｉを試験ブロック全体にわたって蕾のふくらみ始めの頃（２０１６年１０月２日）に施用することで散布施用が開始され、表７にまとめたスケジュールがそれに続いたが、ここで、Ｎｉｌ対照試験区では、散布施用を実施しなかった。これら２つの圃場試験では、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）処理も続けられた。
【０２８６】
このシーズンに使用したＹＢＣＡ５酵母顆粒は、生産会社のｅ−ｎｅｍａ  ＧｍｂＨにより液体発酵および流動床乾燥でプレコマーシャルバッチ（ＹＢＣＡ５  ｅ−ｎｅｍａ−２）として生産されたものである。ＹＢＣＡ５の顆粒は、２０１６年９月２３日にＮｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄに輸入され、処理で必要となるまで気密コンテナー中において４〜６℃で保存された。その顆粒は、２０１６年９月２６日に３×１０１０の平均ＣＦＵ／ｇを有したが、２０１６年１１月２日に生存度試験をしたときに２．６×１０１０であった。
【０２８７】
このシーズンのＹＢＣＡ５の散布量は、ほぼ実用量の５０ｇ／１００Ｌ（最小濃度の１×１０７ＣＦＵ／ｍＬを達成するために）に設定したが、顆粒中での実際の生存度での調節を行わなかったため、実際の撒布量は、１．２５〜１．５×１０７ＣＦＵ／ｍＬであったことが示唆される。葉および蕾での病気の評価は、上述の先のシーズンで記述したのと同様に実施した。
【０２８８】
【表９】
2019531719.tif 000010
【０２８９】
花の蕾におけるＰｓａ病の評価は、「Ｈａｙｗａｒｄ」ブロックで２０１６年１１月１１日に開花直前に実施したが、上記と同様に１試験区あたり１００個の蕾について蕾の褐変の発病度を目視で評価した。葉について、２０１６年１１月１８日にこれらの試験区においてＰｓａ病斑の発病度（ネクローシスを有する葉の面積％）を評価した。先に記したように、評価は、主コルドンから第二および第三のワイヤアウト間にある葉について実施した。評価は、試験区の端から一段（すなわち１ｍ）離れたところから開始し、２５葉を１セットとして評価付けした。このプロセスをさらに一段下がった試験区で繰り返した。次いで、これを他の側の蔓植物でも繰り返して、それぞれの試験区内で２５葉を４セット（合計＝１００葉）として評価付けを行った。
【０２９０】
結果
この圃場試験での第二年目において、Ｎｉｌ対照における斑点病の罹患率は、３１％であり、これは、２つのＹＢＣＡ５処理によって有意に抑制された（表８）。ＹＢＣＡのみの処理での有効性は、４２％であった。殺菌剤Ｋａｓｕｍｉｎを含む栽培業者の標準処理では、ＹＢＣＡ５処理と比較して斑点病の罹患率においてさらに有意な抑制を与えた（有効性＝７４％）。
【０２９１】
Ｎｉｌ対照における斑点病の平均発病度は、０．１９％であったが、ＹＢＣＡ５処理では、Ｎｉｌ対照と比較して有意に抑制された（表８）。ＹＢＣＡのみの処理での有効性は、５３％であった。栽培業者の標準処理ではさらなる抑制があったが、ただし、この場合、栽培業者標準とＹＢＣＡ５処理との間で互いに有意な差はなかった。
【０２９２】
Ｎｉｌ対照では、蕾のネクローシス罹患率は、１８％であり、ネクローシスの発病度は、０．２７であった。２つのＹＢＣＡ５処理は、Ｎｉｌ対照と比較して蕾罹患率および発病度を有意に抑制した（ＹＢＣＡ５単独の有効性は、それぞれ５６％および５９％であった）。栽培業者標準では、ＹＢＣＡ５処理よりも病気が少なかったが、それらは有意な差ではなかった。
【０２９３】
【表１０】
2019531719.tif 000011
【０２９４】
結論：
ＹＢＣＡ５処理は、「Ｈａｙｗａｒｄ」の蔓作物において、斑点病および蕾の褐変の罹患率および発病度における有意な抑制を示した。
【０２９５】
ここまでの記述は、例示のためにのみ提供されたものであり、使用される物質および方法の両方における当業者に公知の変形形態が想定されることを理解されたい。
【０２９６】
例を挙げ、特定の実施形態を参照しながら本発明を説明してきたが、本発明の範囲から逸脱することなく修正形態および／または改良形態がなされ得ることを理解されたい。
【０２９７】
さらに、本発明の特徴または態様がＭａｒｋｕｓｈグループの用語で記述される場合、当業者は、それによりＭａｒｋｕｓｈグループの任意の個々のメンバーまたはメンバーのサブグループの用語でも本発明が記述されることを認識するであろう。
【０２９８】
本明細書において特許明細書、他の外部文献または他の情報源を参照する場合、これは、一般的に、本発明の特徴を論じるための文脈を与えることを目的とする。具体的にそうでないと断らない限り、そのような外部文献を参照することは、そのような文献またはそのような情報源が、いかなる管轄においても、従来技術であるかまたは当技術分野における共通の一般知識の一部であることを許容すると解釈してはならない。
【数１−１】
2019531719.tif 000012
【数１−２】
2019531719.tif 000013
【数１−３】
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【０２９９】
付番した以下の段落は、本発明の特定の態様を定義するものである：
１．分離されたアウレオバシジウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）酵母菌株ＹＢＣＡ５（ＣＢＳ受理番号１４１８８０）。
２．ＹＢＣＡ５および農学的に許容可能な担体を含む組成物。
３．ＹＢＣＡ５および農学的に許容可能な担体から実質的になる組成物。
４．ＹＢＣＡ５は、生殖に適した細胞の形態で存在する、段落２または段落３に記載の組成物。
５．ＹＢＣＡ５生菌の濃度は、固体組成物について約１×１０３〜約１×１０１４、好ましくは約１×１０５〜約１×１０１１、好ましくは約１×１０６〜約１×１０９、好ましくは約１×１０７〜約１×１０８、好ましくは約２×１０７〜約２×１０８ＣＦＵ、好ましくは約２×１０９〜約２×１０１０ＣＦＵ／グラムの範囲であり、かつ液体組成物について約１×１０７〜約１×１０８ＣＦＵ／ミリリットルの範囲である、段落２〜４のいずれか一項に記載の組成物。
６．農学的に許容可能な担体は、水である、段落２〜５のいずれか一項に記載の組成物。
７．少なくとも１種の農学的に許容可能なアジュバントをさらに含む、段落２〜６のいずれか一項に記載の組成物。
８．農学的に許容可能なアジュバントは、追加の活性薬剤および配合剤からなる群から選択される、段落２〜７のいずれか一項に記載の組成物。
９．農学的に許容可能なアジュバントは、１種または複数の追加の活性薬剤である、段落２〜７のいずれか一項に記載の組成物。
１０．農学的に許容可能なアジュバントは、１種または複数の配合剤である、段落２〜７のいずれか一項に記載の組成物。
１１．農学的に許容可能なアジュバントは、追加の活性薬剤と１種または複数の配合剤との組合せを含む、段落２〜７のいずれか一項に記載の組成物。
１２．組成物は、固体または液体の配合物として配合されている、段落２〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
１３．組成物は、予備調製された組成物であるか、または組成物は、濃縮された形態である、段落２〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
１４．植物またはその一部上においてシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌を防除する方法であって、植物またはその一部をＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物と接触させることを含む方法。
１５．少なくとも１種のシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌の菌株は、Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）、Ｐ．アミグダリア（Ｐ．ａｍｙｇｄａｌｉａ）、Ｐ．アベルラナエ（Ｐ．ａｖｅｌｌａｎａｅ）、Ｐ．カリカパパヤエ（Ｐ．ｃａｒｉｃａｐａｐａｙａｅ）、Ｐ．シコリイ（Ｐ．ｃｉｃｈｏｒｉｉ）、Ｐ．コロナファシエンス（Ｐ．ｃｏｒｏｎａｆａｃｉｅｎｓ）、Ｐ．フィクセレクタエ（Ｐ．ｆｉｃｕｓｅｒｅｃｔａｅ）、Ｐ．ヘリアンティ（Ｐ．ｈｅｌｉａｎｔｈｉ）、Ｐ．レミアエ（Ｐ．ｌｅｍｉａｅ）、Ｐ．サバスタノイ（Ｐ．ｓａｖａｓｔａｎｏｉ）およびＰ．ビリディフラバ（Ｐ．ｖｉｒｉｄｉｆｌａｖａ）もしくはその病原型またはそれらの組合せからなる群から選択される細菌の菌株であり、好ましくは、少なくとも１種の菌株は、Ｐ．シリンガエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）またはその病原型であり、より好ましくは、少なくとも１種の菌株は、Ｐ．シリンガエｐｖ．アクチニジアエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅ）（Ｐｓａ）である、段落１４に記載の方法。
１６．植物またはその一部は、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌、好ましくはＰｓａ細菌を防除するのに十分な時間にわたって接触される、段落１４または１５に記載の方法。
１７．接触は、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌、好ましくはＰｓａ細菌の生存、成長および／または増殖を十分に抑制するのに十分な時間にわたるものである、段落１６に記載の方法。
１８．接触は、ＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物を植物の葉、茎、花、果実、幹および／もしくは根またはその一部に施用することを含む、段落１４〜１７のいずれか一項に記載の方法。
１９．施用は、散粉法、散布法、ドリップ法、スプリンクラー法もしくは混合法またはそれらの組合せを含む、段落１８に記載の方法。
２０．根への施用は、地上散布法、機械的鋤込み法または肥沃化剤もしくは肥料との、前記肥沃化剤もしくは肥料を施用する前の混合法による、段落１８に記載の方法。
２１．植物またはその一部は、単子葉植物、双子葉植物、一年生、二年生および多年生植物、野菜植物および収穫後の野菜、果実植物もしくは樹木もしくは収穫後の果実、着花植物もしくは樹木もしくは収穫した花、穀物用植物、油質植物、タンパク質植物、リグニン質植物および観賞用植物の群から選択される、段落１４〜２０のいずれか一項に記載の方法。
２２．植物またはその一部は、農業的に重要な蔓作物および農業的に重要な果樹ならびにその栽培品種および生産物からなる群から選択される農業的に重要な植物、その栽培品種またはその生産物であり、好ましくは、農業的に重要な果樹またはその栽培品種は、オリーブの樹木、リンゴの樹木、西洋ナシの樹木、柑橘類の樹木、バナナの樹木、パイナップルの樹木、モモの樹木、アンズの樹木、チェリーの樹木、クルミの樹木およびハシバミの樹木から選択され、かつその生産物は、それぞれオリーブ、リンゴ、西洋ナシ、柑橘類、バナナ、パイナップル、モモ、アンズ、チェリー、クルミおよびハシバミであり、好ましくは、農業的に重要な蔓作物またはその栽培品種は、ジャガイモの蔓作物、ビートルートの蔓作物、マメの蔓作物、エンドウマメの蔓作物、トマトの蔓作物、キュウリの蔓作物、メロンの蔓作物、ベリーの蔓作物、ブドウの蔓作物およびキウイフルーツの蔓作物から選択され、かつその生産物は、それぞれジャガイモ、ビートルート、マメ、エンドウマメ、トマト、キュウリ、メロン、ベリー、ブドウおよびキウイフルーツであり、好ましくは、農業的に重要な蔦作物は、キウイフルーツの蔦作物またはその栽培品種であり、かつ生産物は、キウイフルーツである、段落１４〜２１のいずれか一項に記載の方法。
２３．キウイフルーツの蔦作物は、ファジイキウイフルーツ（アクチニジア・デリキオサ（Ａｃｔｉｎｉｄｉａ  ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）Ａ．キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ））、ゴールデンキウイフルーツ（Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ））、チャイニーズエッググーズベリー（Ａ．コリアケア（Ａ．ｃｏｒｉａｃｅａ））、ベビーキウイフルーツ（Ａ．アルグータ（Ａ．ａｒｇｕｔａ））、アークティックキウイフルーツ（Ａ．コロミクタ（Ａ．ｋｏｌｏｍｉｋｔａ））、レッドキウイフルーツ（Ａ．メラナンドラ（Ａ．ｍｅｌａｎａｎｄｒａ）、Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ））、シルバーバイン（Ａ．ポリガマ（Ａ．ｐｏｌｙｇａｍａ））およびパープルキウイフルーツ（Ａ．プルプレア（Ａ．ｐｕｒｐｕｒｅａ））またはその栽培品種の種からなる群から選択され、好ましくは、キウイフルーツは、Ａ．キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）およびＡ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の種またはその栽培品種からなる群から選択され、好ましくは、キウイフルーツは、Ａ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の種であり、好ましくは、キウイフルーツは、Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス・プランク（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  Ｐｌａｎｃｈ）であり、好ましくは、栽培品種は、「Ｈａｙｗａｒｄ」または「Ｈｏｒｔ１６Ａ」栽培品種である、段落２２に記載の方法。
２４．栽培品種は、Ａ．キネンシスｖａｒ．キネンシス・プランク（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  Ｐｌａｎｃｈ）の「Ｈｏｒｔ１６Ａ」である、段落２３に記載の方法。
２５．栽培品種は、Ａ．キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）の「Ｈａｙｗａｒｄ」である、段落２３に記載の方法。
２６．植物またはその一部は、トウモロコシ植物、タバコ植物、コムギ植物、サトウキビ植物、セイヨウアブラナ植物、オオムギ植物、イネ植物、モロコシ植物、キビ植物、ダイズ植物、レタス植物およびキャベツ植物から選択される農業的に重要な作物植物、栽培品種またはその生産物である、段落１２〜２５のいずれか一項に記載の方法。
２７．キウイフルーツ植物またはその一部上においてＰ．シリンガエｐｖ．アクチニジアエ（Ｐ．ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．ａｃｔｉｎｉｄｉａｅ）（Ｐｓａ）を防除するための方法であって、キウイフルーツ植物またはその一部をＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物と共にＡ．キネンシスｖａｒ．デリキオサ（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ）またはＡ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の種またはその栽培品種、好ましくはＡ．キネンシスｖａｒ．キネンシス（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）の種またはその栽培品種と接触させることを含み、好ましくは、キウイフルーツ植物は、「Ｈｏｒｔ１６Ａ」または「Ｈａｙｗａｒｄ」である、方法。
２８．シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）によって感染されたかまたはそれに感染されやすい、好ましくはＰｓａで感染されたか、好ましくは感染されやすいキウイフルーツ植物の収量を増大させるための方法であって、ＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物をキウイフルーツ植物またはその一部に施用することを含む方法。
２９．植物またはその一部上において少なくとも１種の植物病原性真菌を防除する方法であって、植物またはその一部をＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物と接触させることを含む方法。
３０．植物病原性真菌によって感染されたかまたはそれに感染されやすい果実または野菜植物の収量を増大させるための方法であって、ＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物を果実もしくは野菜植物またはその一部に施用することと、植物またはその一部を成長させることとを含む方法。
３１．植物またはその一部上においてシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌を防除するためのＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物の使用。
３２．キウイフルーツ植物またはその一部上においてＰｓａを防除するためのＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物の使用。
３３．果実もしくは野菜植物またはその一部上において植物病原性真菌を防除するためのＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物の使用。
３４．Ｐｓａで感染されたかまたはそれに感染されやすいキウイフルーツ植物またはその一部の収量を増大させるためのＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物の使用。
３５．植物病原性真菌によって感染されたかまたはそれに感染されやすい果実もしくは野菜植物またはその一部の収量を増大させるためのＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物の使用。
３６．植物またはその一部上においてシュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）細菌を防除することおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
３７．キウイフルーツ植物またはその一部上においてＰｓａを防除することおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
３８．キウイフルーツ植物またはその一部上において植物病原性を防除することおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
３９．シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｐ．）で感染されたかまたはそれに感染されやすいキウイフルーツ植物またはその一部の収量を増大させることおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
４０．Ｐｓａで感染されたかまたはそれに感染されやすいキウイフルーツ植物またはその一部の収量を増大させることおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
４１．植物病原性真菌によって感染されたかまたはそれに感染されやすい果実もしくは野菜植物またはその一部の収量を増大させることおいて使用されるかまたは使用される場合のＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
４２．段落１４〜３０のいずれか一項に記載の方法または段落３１〜３５のいずれか一項に記載の使用により、ＹＢＣＡ５または段落２〜１３のいずれか一項に記載の組成物で処理された少なくとも１種の植物またはその一部。
【０３００】
本発明の分離されたアウレオバシジウム・プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）酵母菌株ＹＢＣＡ５およびＹＢＣＡ５を含むかまたはそれから実質的になる組成物は、植物病原性細菌および真菌の防除における用途を見出す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【国際調査報告】
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