(57)【要約】がんおよび感染症等の疾患を処置するための、アデノウイルスベクターおよびＴ細胞等の遺伝子改変組成物が開示されている。また、がんおよび感染症等の疾患の処置において、遺伝子改変組成物を作製し、使用する方法が開示されている。一局面では、（ａ）少なくとも１つの操作された受容体、および（ｂ）少なくとも１つの染色体外アデノウイルスゲノムを含む、細胞が提供され、ここで上記アデノウイルスゲノムが、アデノウイルス遺伝子の領域中に少なくとも１つの欠失を有し、上記操作された受容体をコードする。
2019508027.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）少なくとも１つの操作された受容体、および
（ｂ）少なくとも１つの染色体外アデノウイルスゲノムを含む、
細胞であって、ここで
前記アデノウイルスゲノムが、アデノウイルス遺伝子の領域中に少なくとも１つの欠失を有し、前記操作された受容体をコードする、細胞。
【請求項２】
前記操作された受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、もしくはＢ細胞受容体（ＢＣＲ）、またはそれらの誘導体である、請求項１に記載の細胞。
【請求項３】
前記操作された受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項１および２に記載の細胞。
【請求項４】
前記ＣＡＲが第一世代ＣＡＲである、請求項２および３に記載の細胞。
【請求項５】
前記ＣＡＲが第二世代ＣＡＲである、請求項２および３に記載の細胞。
【請求項６】
前記ＣＡＲが第三世代ＣＡＲである、請求項２および３に記載の細胞。
【請求項７】
前記ＣＡＲが、細胞外部分、膜貫通部分、および細胞内部分を含む、請求項２から６のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項８】
前記細胞内部分が、少なくとも１つのＴ細胞共刺激ドメインを含む、請求項７に記載の細胞。
【請求項９】
前記Ｔ細胞共刺激ドメインが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＴＮＦＲＳ９（４−１ＢＢ）、ＴＮＦＲＳＦ４（ＯＸ４０）、ＴＮＦＲＳＦ８（ＣＤ３０）、ＣＤ４０ＬＧ（ＣＤ４０Ｌ）、ＩＣＯＳ、ＩＴＧＢ２（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＫＬＲＣ２（ＮＫＧ２Ｃ）、ＴＮＦＲＳ１８（ＧＩＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＨＶＥＭ）、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項８に記載の細胞。
【請求項１０】
前記操作された受容体が標的に結合する、請求項１から９のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１１】
前記結合が、ＭＨＣ非依存性である、請求項１０に記載の細胞。
【請求項１２】
前記結合が、ＭＨＣ依存性である、請求項１０に記載の細胞。
【請求項１３】
前記結合が、疾患関連標的に特異的である、請求項１０から１２に記載の細胞。
【請求項１４】
前記疾患が、がんである、請求項１３に記載の細胞。
【請求項１５】
前記がんが、固形腫瘍である、請求項１４に記載の細胞。
【請求項１６】
前記がんが、液性腫瘍である、請求項１４に記載の細胞。
【請求項１７】
前記受容体が、標的抗原に結合する、請求項１から１６のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１８】
前記標的抗原が、腫瘍細胞ネオ抗原、腫瘍ネオエピトープ、腫瘍特異的抗原、腫瘍関連抗原、組織特異的抗原、細菌抗原、ウイルス抗原、酵母抗原、真菌抗原、原生動物抗原、寄生生物抗原、マイトジェン、またはそれらの組み合わせである、請求項１７に記載の細胞。
【請求項１９】
前記標的抗原が、がん胎児抗原（ＣＥＡ）、ヒト上皮増殖因子受容体１（ＨＥＲ１）、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ヒト上皮増殖因子受容体３（ＨＥＲ３）、ヒト上皮増殖因子受容体４（ＨＥＲ４）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ムチン１（ＭＵＣ１）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＳＭＡ、Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ、葉酸受容体アルファ、ＷＴ１、ｐ５３、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＢＡＧＥ、ＤＡＭ−６、−１０、ＧＡＧＥ−１、−２、−８、ＧＡＧＥ−３、−４、−５、−６、−７Ｂ、ＮＡ８８−Ａ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＲＴ−１、ＭＣ１Ｒ、Ｇｐ１００、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＡＲＴ−４、ＣＡＭＥＬ、Ｃｙｐ−Ｂ、ＢＲＣＡ１、ＢＲＡＣＨＹＵＲＹ（ＴＩＶＳ７−２、多型）、ＢＲＡＣＨＹＵＲＹ（ＩＶＳ７  Ｔ／Ｃ多型）、Ｔ  ＢＲＡＣＨＹＵＲＹ、Ｔ、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、ＭＵＣ１（ＶＮＴＲ多型）、ＭＵＣ１ｃ、ＭＵＣ１ｎ、ＭＵＣ２、ＰＲＡＭＥ、Ｐ１５、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−３、ＡＦＰ、β−カテニン／ｍ、カスパーゼ−８／ｍ、ＣＤＫ−４／ｍ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇ２５０、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン／ｍ、ＲＡＧＥ、ＳＡＲＴ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、７０７−ＡＰ、アネキシンＩＩ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＴＰＩ／ｍｂｃｒ−ａｂｌ、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、もしくはＴＥＬ／ＡＭＬ１、もしくはそれらの修飾バリアント、スプライスバリアント、機能的エピトープ、エピトープアゴニスト、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１７から１８のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２０】
前記受容体が、腫瘍関連細胞に結合する、請求項１から１９のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２１】
前記腫瘍関連細胞が、線維芽細胞、がん幹細胞、周皮細胞、および間質細胞からなる群より選択される、請求項２０に記載の細胞。
【請求項２２】
二次受容体をさらに含む、請求項１から２１のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２３】
前記二次受容体が、コクサッキーアデノウイルス受容体である、請求項２２に記載の細胞。
【請求項２４】
前記染色体外アデノウイルスゲノムが、アデノウイルス血清型５（Ａｄ５）である、請求項１から２３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２５】
アデノウイルス遺伝子の領域中の前記欠失が、初期領域１（Ｅ１）遺伝子の領域中の欠失、初期領域２ｂ（Ｅ２ｂ）遺伝子中の欠失、初期領域３（Ｅ３）遺伝子中の欠失、またはそれらの組み合わせである、請求項１から２４のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２６】
アデノウイルス遺伝子の領域中の前記欠失が、初期領域２ｂ（Ｅ２ｂ）遺伝子の領域中の欠失である、請求項１から２５のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２７】
アデノウイルス遺伝子の領域中の前記欠失が、初期領域１（Ｅ１）遺伝子、初期領域２ｂ（Ｅ２ｂ）遺伝子、および初期領域３（Ｅ３）遺伝子中の欠失である、請求項１から２６のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２８】
外因性遺伝子をさらに含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２９】
前記外因性遺伝子が、自殺遺伝子、サイトカイン遺伝子、抗血管新生遺伝子、代謝遺伝子、または低酸素遺伝子を含むリストから選択される、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３０】
内因性遺伝子欠失をさらに含む、請求項１から２９のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３１】
免疫細胞である、請求項１から３０のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３２】
前記免疫細胞がＴ細胞である、請求項３１に記載の細胞。
【請求項３３】
前記Ｔ細胞が、エフェクター（ＴＥＦＦ）細胞、エフェクターメモリー（ＴＥＭ）細胞、セントラルメモリー（ＴＣＭ）、Ｔメモリー幹（ＴＳＣＭ）、ナイーブ（ＴＮ）、またはＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋である、請求項３２に記載の細胞。
【請求項３４】
霊長類細胞である、請求項１から３３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３５】
ヒト細胞である、請求項１から３４のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３６】
ｅｘ  ｖｉｖｏで増大される、請求項１から３５のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３７】
医薬組成物に製剤化される、請求項１から３６のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３８】
それを必要とする被験体を処置するための併用療法の一部である、請求項１から３７のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項３９】
前記操作された受容体が、それを必要とする前記被験体のゲノムに組み込まれている、請求項１から３８のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項４０】
細胞を調製する方法であって、細胞を、少なくとも１つの外因性受容体配列を含む少なくとも１つの操作された染色体外ベクターとｅｘ  ｖｉｖｏで接触させるステップを含む、方法。
【請求項４１】
前記染色体外ベクターが、アデノウイルスベクターである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記アデノウイルスベクターが、アデノウイルス血清型５（Ａｄ５）である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記ベクターが、少なくとも１つの遺伝子欠失を有する、請求項４０から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記欠失が、初期領域１（Ｅ１）遺伝子および初期領域３（Ｅ３）遺伝子の領域中の欠失である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記欠失が、初期領域２ｂ（Ｅ２ｂ）遺伝子中の欠失、初期領域３（Ｅ３）遺伝子中の欠失、またはそれらの組み合わせである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記ベクターが、初期領域１（Ｅ１）遺伝子、初期領域２ｂ（Ｅ２ｂ）遺伝子、および初期領域３（Ｅ３）遺伝子中の欠失を含有する、請求項４０から４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記ベクターが、中空ベクターではない、請求項４０から４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記外因性受容体の前に、少なくとも１つの二次受容体を導入するステップをさらに含む、請求項４０から４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記二次受容体が、コクサッキーアデノウイルス受容体である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記外因性受容体配列が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、もしくはＢ細胞受容体（ＢＣＲ）、またはそれらの誘導体を含むリストから選択される、請求項４０から４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記外因性受容体配列が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記ベクターが、第２の外因性遺伝子配列をさらに含む、請求項４０から５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記外因性遺伝子配列が、自殺遺伝子、サイトカイン遺伝子、抗血管新生遺伝子、代謝遺伝子、および低酸素遺伝子からなる群より選択される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記第２の外因性遺伝子配列が、誘導可能な自殺遺伝子配列を含む、請求項４０から５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記誘導可能な自殺遺伝子配列が、誘導可能なカスパーゼ９遺伝子配列、またはＥＧＦ受容体Ｒ配列の部分である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記外因性受容体配列が、少なくとも１つのベクターを用いて前記細胞内に導入される、請求項４０から５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記細胞が、ｅｘ  ｖｉｖｏで活性化されている、請求項４０から５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記活性化が、前記外因性受容体配列が導入される前に生じる、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記活性化が、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ２８、少なくとも１つのサイトカイン、またはそれらの任意の組み合わせで実施される、請求項５７から５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記サイトカインが、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン−７（ＩＬ−７）、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）、インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記細胞を増大させるステップをさらに含む、請求項４０から６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記細胞が、それを必要とする被験体に対して自系である、請求項４０から６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記細胞が、それを必要とする被験体に対して同種異系である、請求項４０から６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
それを必要とする前記被験体が、前記アデノウイルスベクターに対して既存免疫を有する、請求項６２から６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記細胞が、医薬品および医薬部外品の製造管理および品質管理規則（ＧＭＰ）準拠の試薬である、請求項４０から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記試薬が、がんを処置するための併用療法の一部である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
請求項１から３９のいずれか一項に記載の細胞、または請求項４０から６６のいずれか一項により調製された細胞を含む医薬組成物。
【請求項６８】
状態の処置を必要とする被験体において状態を処置する方法であって、治療有効量の請求項６７に記載の医薬組成物を被験体に投与するステップを含む、方法。
【請求項６９】
前記医薬組成物が、静脈内投与される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記医薬組成物が、腫瘍に局所投与される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７１】
１つもしくは複数の追加の治療剤を投与するステップ、または１つもしくは複数の追加の療法で前記被験体を処置するステップをさらに含む、請求項６８から７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
１つまたは複数の追加の療法での前記被験体の処置が、移植を含む、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
１つまたは複数の追加の療法での前記被験体の処置が、免疫療法を含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記医薬組成物が、前記被験体に対して自系である、請求項６８から７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記医薬組成物が、前記被験体に対して同種異系である、請求項６８から７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
操作されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の集団を含む医薬組成物を、前記被験体に投与するステップをさらに含む、請求項６８から７５のいずれかに記載の方法。
【請求項７７】
前記操作されたＮＫ細胞が、ＫＩＲ（キラー細胞阻害受容体）の発現を本質的に欠如するように改変されている１つまたは複数のＮＫ細胞、高親和性ＣＤ１６バリアントを発現するように改変されている１つまたは複数のＮＫ細胞、および１つまたは複数のＣＡＲ（キメラ抗原受容体）を発現するように改変されている１つまたは複数のＮＫ細胞、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記操作されたＮＫ細胞が、前記ＫＩＲの発現を本質的に欠如するように改変されている１つまたは複数のＮＫ細胞を含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記操作されたＮＫ細胞が、高親和性ＣＤ１６バリアントを発現するように改変されている１つまたは複数のＮＫ細胞を含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
前記操作されたＮＫ細胞が、１つまたは複数のＣＡＲを発現するように改変されている１つまたは複数のＮＫ細胞を含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項８１】
前記ＣＡＲが、腫瘍ネオ抗原、腫瘍ネオエピトープ、ＨＰＶ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＷＴ１、ｐ５３、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＢＡＧＥ、ＤＡＭ−６、ＤＡＭ−１０、葉酸受容体アルファ、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７Ｂ、ＮＡ８８−Ａ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＲＴ−１、ＭＣ１Ｒ、Ｇｐ１００、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＡＲＴ−４、ＣＡＭＥＬ、ＣＥＡ、Ｃｙｐ−Ｂ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ＢＲＣＡ１、Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ、Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ（ＴＩＶＳ７−２、多型）、Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ（ＩＶＳ７  Ｔ／Ｃ多型）、Ｔ  Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ、Ｔ、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１（ＶＮＴＲ多型）、ＭＵＣ１ｃ、ＭＵＣ１ｎ、ＭＵＣ２、ＰＲＡＭＥ、Ｐ１５、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−３、ＡＦＰ、β−カテニン／ｍ、カスパーゼ−８／ｍ、ＣＤＫ−４／ｍ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇ２５０、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン／ｍ、ＲＡＧＥ、ＳＡＲＴ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、７０７−ＡＰ、アネキシンＩＩ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＴＰｌ／ｍｂｃｒ−ａｂｌ、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、またはそれらの任意の組み合わせに対するＣＡＲである、請求項７７または８０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
この出願は、２０１６年１月１５日に出願された米国仮特許出願第６２／２７９，２７５号（この全体の内容は、参考として援用される）の利益を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、Ｔ細胞に基づく免疫治療薬、および免疫療法、例えば、がんの処置においてその治療薬を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
がんに対する治療剤としてＴ細胞を使用することは、腫瘍特異的細胞を、ｅｘ  ｖｉｖｏで生成し増大させ、患者に再注入することができるという前提に基づく。Ｗａｎｇ，ＸおよびＲｉｖｉｅｒｅ，Ｉ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．、２０１５年、２２巻、８５〜９４頁。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、単一分子であり、Ｔ細胞および他の免疫細胞の特異性および機能を向け直す（ｒｅｄｉｒｅｃｔ）、抗原の組換え受容体である。キメラ抗原受容体をがん免疫療法に使用するためには、腫瘍標的化Ｔ細胞を迅速に生成して、能動的免疫化の障壁を回避することが基本的な前提である。細胞中で発現されると、ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、患者中で即時的および長期的な効果を発揮することができる。
【０００４】
レトロウイルスおよびレンチウイルスは、Ｔ細胞へのＣＡＲ形質導入の原則的な機序を残している。初期の遺伝子療法治験には、幹細胞の挿入変異誘発に関連する重度の合併症が観察されたにも関わらず、レトロウイルスは、最終的に分化したＴ細胞に広く使用されており、そのような合併症を起こさない。しかしながら、初期データによると、より分化が進んだ対応物と比較して、より未成熟なメモリーＴ細胞またはセントラルメモリーＴ細胞が患者中で増殖し、より長期間にわたって存続する可能性がより高いことが示唆されている。レトロウイルスおよびレンチウイルスとは異なり、アデノウイルスゲノムは、染色体外で維持されるため、宿主ゲノムの挿入部位依存的影響が回避され、アデノウイルス形質導入の利益は、Ｔ細胞療法プラットフォームに及ぶ。本発明の目的は、初代細胞に挿入変異誘発のリスクをもたらさずに、導入遺伝子を安全に送達する必要性に対処することである。
【０００５】
参照による援用
本明細書中の刊行物、特許、および特許出願は全て、あたかも個々の刊行物、特許、または特許出願が、具体的かつ個々に参照により援用されていると示されているかの如く同程度に、参照により援用される。本明細書の用語と援用された文献の用語が矛盾する場合は、本明細書の用語が優先する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｗａｎｇ，ＸおよびＲｉｖｉｅｒｅ，Ｉ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．（２０１５年）２２巻、８５〜９４頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
種々の態様では、本開示は、（ａ）少なくとも１つの操作された受容体、および（ｂ）少なくとも１つの染色体外アデノウイルスゲノムを含む、細胞を提供し、ここでアデノウイルスゲノムが、アデノウイルス遺伝子の領域に少なくとも１つの欠失を有し、操作された受容体をコードする。
【０００８】
一部の態様では、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、もしくはＢ細胞受容体（ＢＣＲ）、またはそれらの誘導体である。他の態様では、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一部の態様では、ＣＡＲは、第一世代ＣＡＲである。他の態様では、ＣＡＲは、第二世代ＣＡＲである。さらに他の態様では、ＣＡＲは、第三世代ＣＡＲである。
【０００９】
一部の態様では、ＣＡＲは、細胞外部分、膜貫通部分、および細胞内部分を含む。一部の態様では、細胞内部分は、少なくとも１つのＴ細胞共刺激ドメインを含む。一部の態様では、Ｔ細胞共刺激ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＴＮＦＲＳ９（４−１ＢＢ）、ＴＮＦＲＳＦ４（ＯＸ４０）、ＴＮＦＲＳＦ８（ＣＤ３０）、ＣＤ４０ＬＧ（ＣＤ４０Ｌ）、ＩＣＯＳ、ＩＴＧＢ２（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＫＬＲＣ２（ＮＫＧ２Ｃ）、ＴＮＦＲＳ１８（ＧＩＴＲ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＨＶＥＭ）、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【００１０】
一部の態様では、操作された受容体は、標的に結合する。一部の態様では、結合は、ＭＨＣ非依存性である。
【００１１】
他の態様では、結合は、ＭＨＣ依存性である。一部の態様では、結合は、疾患関連標的に特異的である。一部の態様では、疾患はがんである。さらなる態様では、がんは、固形腫瘍である。他の態様では、がんは、液性腫瘍である。
【００１２】
一部の態様では、受容体は、標的抗原に結合する。一部の態様では、標的抗原は、腫瘍細胞ネオ抗原、腫瘍ネオエピトープ、腫瘍特異的抗原、腫瘍関連抗原、組織特異的抗原、細菌抗原、ウイルス抗原、酵母抗原、真菌抗原、原生動物抗原、寄生生物抗原、マイトジェン、またはそれらの組み合わせである。
【００１３】
さらなる態様では、標的抗原は、がん胎児抗原（ＣＥＡ）、ヒト上皮増殖因子受容体１（ＨＥＲ１）、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ヒト上皮増殖因子受容体３（ＨＥＲ３）、ヒト上皮増殖因子受容体４（ＨＥＲ４）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ムチン１（ＭＵＣ１）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＳＭＡ、Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ、葉酸受容体アルファ、ＷＴ１、ｐ５３、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＢＡＧＥ、ＤＡＭ−６、−１０、ＧＡＧＥ−１、−２、−８、ＧＡＧＥ−３、−４、−５、−６、−７Ｂ、ＮＡ８８−Ａ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＲＴ−１、ＭＣ１Ｒ、Ｇｐ１００、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＡＲＴ−４、ＣＡＭＥＬ、Ｃｙｐ−Ｂ、ＢＲＣＡ１、ＢＲＡＣＨＹＵＲＹ（ＴＩＶＳ７−２、多型）、ＢＲＡＣＨＹＵＲＹ（ＩＶＳ７  Ｔ／Ｃ多型）、Ｔ  ＢＲＡＣＨＹＵＲＹ、Ｔ、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、ＭＵＣ１（ＶＮＴＲ多型）、ＭＵＣ１ｃ、ＭＵＣ１ｎ、ＭＵＣ２、ＰＲＡＭＥ、Ｐ１５、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−３、ＡＦＰ、β−カテニン／ｍ、カスパーゼ−８／ｍ、ＣＤＫ−４／ｍ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇ２５０、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン／ｍ、ＲＡＧＥ、ＳＡＲＴ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、７０７−ＡＰ、アネキシンＩＩ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＴＰＩ／ｍｂｃｒ−ａｂｌ、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、もしくはＴＥＬ／ＡＭＬ１、もしくはそれらの修飾バリアント、スプライスバリアント、機能的エピトープ、エピトープアゴニスト、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【００１４】
一部の態様では、受容体は、腫瘍関連細胞に結合する。一部の態様では、腫瘍関連細胞は、線維芽細胞、がん幹細胞、周皮細胞、および間質細胞からなる群より選択される。
【００１５】
さらなる態様では、細胞は、二次受容体をさらに含む。一部の態様では、二次受容体は、コクサッキーアデノウイルス受容体である。一部の態様では、染色体外アデノウイルスゲノムは、アデノウイルス血清型５（Ａｄ５）である。
【００１６】
一部の態様では、アデノウイルス遺伝子の領域中の欠失は、初期領域１（Ｅ１）遺伝子の領域中の欠失、初期領域２ｂ（Ｅ２ｂ）遺伝子中の欠失、初期領域３（Ｅ３）遺伝子中の欠失、またはそれらの組み合わせである。一部の態様では、アデノウイルス遺伝子の領域中の欠失は、初期領域２ｂ（Ｅ２ｂ）遺伝子の領域中の欠失である。一部の態様では、アデノウイルス遺伝子の領域中の欠失は、初期領域１（Ｅ１）遺伝子、初期領域２ｂ（Ｅ２ｂ）遺伝子、および初期領域３（Ｅ３）遺伝子中の欠失である。
【００１７】
さらなる態様では、細胞は、外因性遺伝子をさらに含む。一部の態様では、外因性遺伝子は、自殺遺伝子、サイトカイン遺伝子、抗血管新生遺伝子、代謝遺伝子、または低酸素遺伝子を含むリストから選択される。一部の態様では、細胞は、内因性遺伝子欠失をさらに含む。
【００１８】
一部の態様では、細胞は、免疫細胞である。一部の態様では、免疫細胞は、Ｔ細胞である。さらなる態様では、Ｔ細胞は、エフェクター（ＴＥＦＦ）細胞、エフェクターメモリー（ＴＥＭ）細胞、セントラルメモリー（ＴＣＭ）、Ｔメモリー幹（ＴＳＣＭ）、ナイーブ（ＴＮ）、またはＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋である。一部の態様では、細胞は、霊長類細胞である。さらなる態様では、細胞は、ヒト細胞である。
【００１９】
一部の態様では、細胞は、ｅｘ  ｖｉｖｏで増大される。一部の態様では、細胞は、医薬組成物へと製剤化される。一部の態様では、細胞は、それを必要とする被験体を処置するための併用療法の一部である。一部の態様では、操作された受容体は、それを必要とする被験体のゲノムに組み込まれる。
【００２０】
種々の態様では、本開示は、細胞を調製するための方法であって、細胞を、少なくとも１つの外因性受容体配列を含む少なくとも１つの操作された染色体外ベクターとｅｘ  ｖｉｖｏで接触させることを含む方法を提供する。一部の態様では、染色体外ベクターは、アデノウイルスベクターである。一部の態様では、アデノウイルスベクターは、アデノウイルス血清型５（Ａｄ５）である。一部の態様では、ベクターは、少なくとも１つの遺伝子欠失を有する。
【００２１】
一部の態様では、欠失は、初期領域１（Ｅ１）遺伝子および初期領域３（Ｅ３）遺伝子の領域中の欠失である。一部の態様では、欠失は、初期領域２ｂ（Ｅ２ｂ）遺伝子中の欠失、初期領域３（Ｅ３）遺伝子中の欠失、またはそれらの組み合わせである。他の態様では、ベクターは、初期領域１（Ｅ１）遺伝子、初期領域２ｂ（Ｅ２ｂ）遺伝子、および初期領域３（Ｅ３）遺伝子中に欠失を含有する。
【００２２】
一部の態様では、ベクターは、中空ベクター（ｇｕｔｔｅｄ  ｖｅｃｔｏｒ）ではない。さらなる態様では、本方法は、外因性受容体の前に、少なくとも１つの二次受容体を導入することをさらに含む。一部の態様では、二次受容体は、コクサッキーアデノウイルス受容体である。一部の態様では、外因性受容体配列は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、もしくはＢ細胞受容体（ＢＣＲ）、またはそれらの誘導体を含むリストから選択される。
【００２３】
他の態様では、外因性受容体配列は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする。一部の態様では、ベクターは、第２の外因性遺伝子配列をさらに含む。一部の態様では、外因性遺伝子配列は、自殺遺伝子、サイトカイン遺伝子、抗血管新生遺伝子、代謝遺伝子、および低酸素遺伝子からなる群より選択される。
【００２４】
一部の態様では、第２の外因性遺伝子配列は、誘導可能な自殺遺伝子配列を含む。さらなる態様では、誘導可能な自殺遺伝子配列は、誘導可能なカスパーゼ９遺伝子配列、またはＥＧＦ受容体Ｒ配列の部分である。
【００２５】
一部の態様では、外因性受容体配列は、少なくとも１つのベクターを用いて細胞内に導入される。一部の態様では、細胞は、ｅｘ  ｖｉｖｏで活性化される。他の態様では、活性化は、外因性受容体配列が導入される前に生じる。一部の態様では、活性化は、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ２８、少なくとも１つのサイトカイン、またはそれらの任意の組み合わせを用いて実施される。
【００２６】
さらなる態様では、サイトカインは、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン−７（ＩＬ−７）、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）、インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【００２７】
一部の態様では、本方法は、細胞を増大させることをさらに含む。一部の態様では、細胞は、それを必要とする被験体に対して自系である。他の態様では、細胞は、それを必要とする被験体に対して同種異系である。一部の態様では、それを必要とする被験体は、アデノウイルスベクターに対して既存免疫を有する。
【００２８】
一部の態様では、細胞は、医薬品および医薬部外品の製造管理および品質管理規則（ＧＭＰ）準拠の試薬である。一部の態様では、試薬は、がんを処置するための併用療法の一部である。
【００２９】
種々の態様では、本開示は、上記の記載のいずれか１つの細胞または上記に記載の方法のいずれか１つにより調製された細胞を含む医薬組成物を提供する。
【００３０】
種々の態様では、本開示は、それを必要とする被験体の状態を処置するための方法であって、治療有効量の上記に記載の医薬組成物を被験体に投与することを含む方法を提供する。一部の態様では、医薬組成物は、静脈内投与される。他の態様では、医薬組成物は、腫瘍に局所投与される。一部の態様では、本方法は、１つもしくは複数の追加の治療剤を投与すること、または１つもしくは複数の追加の療法で被験体を処置することをさらに含む。
【００３１】
一部の態様では、１つまたは複数の追加の療法での被験体の処置は、移植を含む。他の態様では、１つまたは複数の追加の療法での被験体の処置は、免疫療法を含む。一部の態様では、医薬組成物は、被験体に対して自系である。他の態様では、医薬組成物は、被験体に対して同種異系である。
【００３２】
一部の態様では、本方法は、操作されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の集団を含む医薬組成物を被験体に投与することをさらに含む。一部の態様では、操作されたＮＫ細胞は、ＫＩＲ（キラー細胞阻害受容体）の発現を本質的に欠如するように改変されている１つまたは複数のＮＫ細胞、高親和性ＣＤ１６バリアントを発現するように改変されている１つまたは複数のＮＫ細胞、および１つまたは複数のＣＡＲ（キメラ抗原受容体）を発現するように改変されている１つまたは複数のＮＫ細胞、またはそれらの任意の組み合わせを含む。一部の態様では、操作されたＮＫ細胞は、ＫＩＲ発現を本質的に欠如するように改変されている１つまたは複数のＮＫ細胞を含む。
【００３３】
他の態様では、操作されたＮＫ細胞は、高親和性ＣＤ１６バリアントを発現するように改変されている１つまたは複数のＮＫ細胞を含む。一部の態様では、操作されたＮＫ細胞は、１つまたは複数のＣＡＲを発現するように改変されている１つまたは複数のＮＫ細胞を含む。一部の態様では、ＣＡＲは、腫瘍ネオ抗原、腫瘍ネオエピトープ、ＨＰＶ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＷＴ１、ｐ５３、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＢＡＧＥ、ＤＡＭ−６、ＤＡＭ−１０、葉酸受容体アルファ、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７Ｂ、ＮＡ８８−Ａ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＲＴ−１、ＭＣ１Ｒ、Ｇｐ１００、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＡＲＴ−４、ＣＡＭＥＬ、ＣＥＡ、Ｃｙｐ−Ｂ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ＢＲＣＡ１、Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ、Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ（ＴＩＶＳ７−２、多型）、Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ（ＩＶＳ７  Ｔ／Ｃ多型）、Ｔ  Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ、Ｔ、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１（ＶＮＴＲ多型）、ＭＵＣ１ｃ、ＭＵＣ１ｎ、ＭＵＣ２、ＰＲＡＭＥ、Ｐ１５、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−３、ＡＦＰ、β−カテニン／ｍ、カスパーゼ−８／ｍ、ＣＤＫ−４／ｍ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇ２５０、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン／ｍ、ＲＡＧＥ、ＳＡＲＴ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、７０７−ＡＰ、アネキシンＩＩ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＴＰｌ／ｍｂｃｒ−ａｂｌ、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、またはそれらの任意の組み合わせに対するＣＡＲである。
【００３４】
本明細書に記載の方法および／または組成物の状況で考察されている実施形態は、本明細書に記載の任意の他の方法または組成物に関連して用いることができる。したがって、１つの方法または組成物に関する実施形態は、他の方法および組成物にも同様に適用することができる。
【００３５】
他の目的、特性、および利点は、以下の詳細な説明から明白になるだろう。しかしながら、当業者であれば、本発明の趣旨および範囲内の種々の変更および改変は、本明細書の詳細な説明から明白になるため、詳細な説明および特定の例は、特定の実施形態を示すものであるが、例示のために提示されているに過ぎないことが理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１Ａ】図１は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞およびＣＡＲナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の製造および産生案を概略的に示す。図１Ａは、Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］プラットフォームを使用した、ＣＡＲ  Ｔ細胞の製造および産生案を概略的に示す。洗浄したアフェレーシス収集患者産物からＴ細胞を選択し、ＣＤ３／２８  ＤｙｎａｂｅａｄｓおよびＣｌｉｎＥｘＶｉｖｏ磁性粒子コンセントレータ（ＭＰＣ）を使用して活性化する。活性化したＴ細胞を、ＣＡＲ  Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］に基づくベクターで形質導入する。形質導入されたＣＡＲ  Ｔ細胞を、細胞バイオリアクターで増大させる。ＭＰＣを使用して、ＣＤ３／２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓを細胞から除去する。このプロセスが終わったら、ＣＡＲ  Ｔ細胞を注入のために製剤化する。
【００３７】
【図１Ｂ】図１は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞およびＣＡＲナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の製造および産生案を概略的に示す。図１Ｂは、Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］プラットフォームを使用した、ＣＡＲ  ＮＫ細胞の製造および産生案を概略的に示す。活性化したＮＫ細胞を、ＣＡＲ  Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］に基づくベクターで形質導入する。形質導入されたＣＡＲ−ＮＫ細胞を、細胞バイオリアクターで増大させる。このプロセスが終わったら、ＣＡＲ−ＮＫ細胞を注入のために製剤化する。
【００３８】
【図２】図２は、ＣＡＲに基づくＡｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］プラットフォームキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をトランスフェクションした後のＣＡＲ  Ｔ細胞発現での表示が、各々が機能を示す３つの領域で構成されていることを示す。ＣＡＲの細胞外領域は、一般的に一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）で構成されている。その標的は、特異的に構築された抗体の融合された可変重鎖および軽鎖に由来する。ＣＡＲの膜貫通領域は、「スペーサー」を介してｓｃＦｖに接続されており、細胞外抗体部分の可撓性および安定発現をもたらす。通常はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）−ＣＤ３複合体のＣＤ３ζ鎖に由来する、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ  Ｔ細胞の活性化を媒介する。
【００３９】
【図３】図３は、Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］プラットフォームに挿入するための種々のＣＡＲベクターの概略図を示す。図３Ａは、ＣＤ３−ゼータシグナル伝達ドメインを含有する第一世代ＣＡＲを示す。図３Ｂは、ＣＤ２８およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインをコードする２つの考え得る第二世代ＣＡＲ、ならびに４−１ＢＢおよびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインをコードする第２のベクターを示す。図３Ｃは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、およびＣＤ３ゼータをコードする２つの考え得る第三世代ＣＡＲ、ならびにＣＤ２８、ＯＸ４０、およびＣＤ３ゼータをコードする第２のＣＡＲを示す。図３Ｄは、カスパーゼ−９自殺遺伝子をコードするマルチシストロンＣＡＲ、および第三世代ＣＡＲを示す。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
本明細書で使用される場合、別様の指定がない限り、冠詞「ａ」は、明示的にそうではないと示されていない限り、１つまたは複数を意味する。本明細書で使用される場合、別様の指定がない限り、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」等の用語は、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を意味する。本明細書で使用される場合、別様の指定がない限り、用語「または」は、接続的であってもよく、または離接的であってもよい。本明細書で使用される場合、別様の指定がない限り、任意の実施形態は、任意の他の実施形態と組み合わせることができる。本明細書で使用される場合、語句「少なくとも１つの」は、「少なくとも１つの」を意味していてもよく、または「複数の」を意味していてもよい。
【００４１】
本明細書で使用される場合、別様の指定がない限り、本明細書中の一部の発明実施形態は、数値範囲を企図する。本発明の様々な態様は、範囲の形式で示すことができる。範囲の形式での記載は、便宜性および簡潔性のために過ぎず、本発明の範囲に対する柔軟性を欠く限定として解釈されるべきでないことが理解されるべきである。したがって、範囲の記載は、考え得る部分範囲ならびにその範囲内の個々の数値を、あたかも明示的に記述されているかの如く、全て具体的に開示しているとみなされるべきである。例えば、１から６まで等の範囲の記載は、１から３まで、１から４まで、１から５まで、２から４まで、２から６まで、３から６まで等の部分範囲、ならびにその範囲内の個々の数値、例えば、１、２、３、４、５、および６を具体的に開示しているとみなされるべきである。これは、範囲の幅に関わらず、適用される。範囲が存在する場合、範囲は、範囲の終点、またはそれらに由来する任意の範囲を含む。
【００４２】
用語「活性化」およびその文法的等価物は、本明細書で使用される場合、それにより細胞が休止状態から活性状態に移行するプロセスを指すことができる。このプロセスは、抗原に対する応答、遊走、および／または機能的に活性な状態への表現型変化または遺伝子変化を含むことができる。例えば、用語「活性化」は、Ｔ細胞活性化の段階的プロセスを指すことができる。例えば、Ｔ細胞は、完全に活性化されるためには、少なくとも２つのシグナルを必要とする場合がある。第１のシグナルは、ＴＣＲが抗原−ＭＨＣ複合体と係合した後で生じる場合があり、第２のシグナルは、共刺激分子（例えば、表２に示されている共刺激分子）の係合により生じる場合がある。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでは、抗ＣＤ３は第１のシグナルを模倣することができ、抗ＣＤ２８は第２のシグナルを模倣することができる。例えば、操作されたＴ細胞は、発現されたＣＡＲにより活性化することができる。Ｔ細胞活性化またはＴ細胞誘発（Ｔ  ｃｅｌｌ  ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ）は、本明細書で使用される場合、検出可能な細胞増殖、サイトカイン産生、および／または検出可能なエフェクター機能を誘導するのに十分な程度に刺激されているＴ細胞の状態を指すことができる。
【００４３】
用語「アデノウイルス」または「Ａｄ」は、アデノウイルス科に由来する無エンベロープＤＮＡウイルスの群を指す。こうしたウイルスは、ヒト宿主に加えて、これらに限定されないが、トリ、ウシ、ブタ、およびイヌ種に見出すことができる。ある特定の態様では、Ｅ２ｂ欠失ウイルスベクター、または本明細書に記載されているような他の欠失を含有するベクターの基盤として、アデノウイルス科の４つの属のいずれかに由来する任意のアデノウイルス（例えば、Ａｖｉａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ、Ｍａｓｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ、Ａｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ、およびＳｉａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）の使用が企図される。加えて、各々の種には、幾つかの血清型が見出される。また、Ａｄは、これらに限定されないが、同種性（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）または異種性ＤＮＡ配列の遺伝子変異、欠失、または転位を含む、こうしたウイルス血清型のいずれかの遺伝子誘導体に関する。
【００４４】
用語「抗原」または「Ａｇ」およびその文法的等価物は、本明細書で使用される場合、免疫応答を誘起する分子を指すことができる。この免疫応答は、抗体産生または特定の免疫適格細胞の活性化のいずれかまたは両方に関与することができる。当業者であれば、事実上全てのタンパク質またはペプチドを含むあらゆる巨大分子が、抗原としての役目を果たすことができることを理解するだろう。用語「免疫グロブリン」または「Ｉｇ」は、本明細書で使用される場合、抗体として機能するタンパク質のクラスを指すことができる。Ｂ細胞により発現される抗体は、キメラ抗原受容体または抗原受容体と呼ばれることがある。このクラスのタンパク質に含まれる５つのメンバーは、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥであり、これらの中で、最も一般的な循環抗体は、ＩｇＧである。ＩｇＧは、凝集反応、補体結合、および他の抗体応答が最も効率的な免疫グロブリンであり、細菌およびウイルスに対する防御に重要である。例えば、腫瘍細胞抗原は、ＣＡＲにより認識され得る。
【００４５】
用語「自系」およびその文法的等価物は、本明細書で使用される場合、同一の生物に由来することを指すことができる。例えば、試料（例えば、細胞）を取り出し、処理し、後に同じ被験体（例えば、患者）に戻すことができる。自系プロセスは、ドナーおよびレシピエントが異なる被験体である同種異系プロセスと区別される。
【００４６】
「ヘルパーアデノウイルス」または「ヘルパーウイルス」は、特定の宿主細胞では提供することができないウイルス機能を提供することができるＡｄを指す（宿主は、Ｅ１タンパク質等のＡｄ遺伝子産物を提供することができる）。このウイルスは、第２のウイルスまたはヘルパー依存性ウイルス（例えば、中空もしくはガットレスウイルス、またはＥ２ｂもしくは本明細書に記載されているような他の領域等の特定の領域が欠失されているウイルス）に欠如している機能（例えば、タンパク質）を、トランスで供給するために使用される。第１の複製不全ウイルスは、第２のヘルパー依存性ウイルスを「支援」し、それにより細胞中での第２のウイルスゲノムの産生を可能にすると言われる。
【００４７】
用語「アデノウイルス５ヌル（Ａｄ５−ヌル）」は、本明細書で使用される場合、発現される異種性核酸配列を一切含有しない非複製性Ａｄを指す。
【００４８】
用語「第一世代アデノウイルス」は、本明細書で使用される場合、初期領域１（Ｅ１）が欠失されているＡｄを指す。また、さらなる場合では、非必須の初期領域３（Ｅ３）が欠失されていてもよい。
【００４９】
用語「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」は、本明細書で使用される場合、Ｔ細胞により発現されると、人工受容体により決定付けられる特異性により標的細胞を死滅させるようにＴ細胞を向け直す、操作された分子を指す。最も一般的には、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、マウス、ヒト化、または完全ヒトモノクローナル抗体に由来する。
【００５０】
用語「エピトープ」およびその文法的等価物は、本明細書で使用される場合、抗体、Ｂ細胞、Ｔ細胞、または操作された細胞により認識され得る抗原の一部を指すことができる。例えば、エピトープは、ＴＣＲにより認識されるがんエピトープであってもよい。また、抗原内の複数のエピトープを認識することができる。また、エピトープは、変異していてもよい。
【００５１】
用語「操作された」およびその文法的等価物は、本明細書で使用される場合、核酸、例えば生物のゲノム内の核酸の１つまたは複数の変更を指すことができる。用語「操作された」は、遺伝子の変更、追加、および／または欠失を指すことができる。また、操作された細胞は、追加、欠失、および／または変更された遺伝子を有する細胞を指すことができる。
【００５２】
用語「細胞」または「操作された細胞」およびそれらの文法的等価物は、本明細書で使用される場合、ヒトまたは非ヒト動物由来の細胞を指すことができる。また、操作された細胞は、ある特定の態様では、ＣＡＲ発現細胞を指すことができる。
【００５３】
用語「医薬品および医薬部外品の製造管理および品質管理規則」（ＧＭＰ）およびその文法的等価物は、本明細書で使用される場合、ＦＤＡに準拠して安全であり、有効であり、または純粋である製品を指すことができる。また、ＧＭＰは、場合によっては「ｃＧＭＰ」と呼ばれる場合がある。「ｃ」は、「現行」の略である。製品の製造業者は、ＧＭＰ製品の規則に従うために、最新の技術およびシステムを用いることができる。ＧＭＰ準拠製品は、研究の設定ではなく、臨床の設定で利用することができる。
【００５４】
用語「中空」または「ガットレス」は、本明細書で使用される場合、ウイルスコード領域が全て欠失されているアデノウイルスベクターを指す。
【００５５】
用語「トランスフェクション」は、本明細書で使用される場合、外来性の核酸を真核細胞に導入することを指す。トランスフェクションは、リン酸カルシウム−ＤＮＡ共沈、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介性トランスフェクション、ポリブレン媒介性トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リポソーム融合、リポフェクション、プロトプラスト融合、レトロウイルス感染、および遺伝子銃を含む、当技術分野で公知の様々な手段により達成することができる。
【００５６】
用語「安定なトランスフェクション」または「安定的にトランスフェクトされる」は、外来性の核酸、ＤＮＡ、またはＲＮＡを、トランスフェクトされる細胞のゲノムに導入および組み込むことを指す。用語「安定なトランスフェクタント」は、外来性のＤＮＡがゲノムＤＮＡに安定的に組み込まれている細胞を指す。
【００５７】
用語「レポーター遺伝子」は、レポーター分子（酵素を含む）をコードするヌクレオチド配列を示す。「レポーター分子」は、これらに限定されないが、酵素に基づく検出アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ、ならびに酵素に基づく組織化学アッセイ）、蛍光系、放射性系、および発光系を含む、様々な検出系のいずれでも検出可能である。一実施形態では、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）β−ガラクトシダーゼ遺伝子（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｐｉｓｔａｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．から入手可能）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、Ｃａｌｉｆ．から商業的に入手可能）、ヒト胎盤アルカリホスファターゼ遺伝子、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）遺伝子、または当技術分野で公知の他のレポーター遺伝子を用いることができる。
【００５８】
本明細書で使用される場合、用語「核酸分子コード化」、「ＤＮＡ配列コード化」、および「ＤＮＡコード化」は、デオキシリボ核酸の鎖に沿ったデオキシリボヌクレオチドの順序または配列を指す。こうしたデオキシリボヌクレオチドの順序は、ポリペプチド（タンパク質）鎖に沿ったアミノ酸の順序を決定する。したがって、核酸配列は、アミノ酸配列をコードする。
【００５９】
用語「異種性核酸配列」は、本明細書で使用される場合、天然ではライゲーションされていないか、または天然では異なる位置にライゲーションされている核酸配列にライゲーションされているか、またはライゲーションされるように操作されているヌクレオチド配列を指す。異種性核酸は、それが導入される細胞に天然で見出されるヌクレオチド配列を含んでいてもよく、または異種性核酸は、天然に存在する配列に対して幾つかの改変を含有していてもよい。
【００６０】
用語「導入遺伝子」は、試験被験体の細胞またはゲノムに導入されている、天然もしくは異種性の核酸配列、または融合された同種性もしくは異種性核酸配列のいずれでもよい、任意の遺伝子コード領域を指す。本発明では、導入遺伝子は、対象の細胞に導入遺伝子を導入するために使用される任意のウイルスベクターに担持される。
【００６１】
用語「第二世代アデノウイルス」は、本明細書で使用される場合、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、およびある特定の実施形態ではＥ４  ＤＮＡ遺伝子配列の全てまたは一部がウイルスから欠失（除去）されているＡｄを指す。
【００６２】
用語「被験体」は、本明細書で使用される場合、任意の動物、例えば哺乳動物または有袋動物を指す。被験体としては、これらに限定されないが、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、アカゲザルまたは他のタイプのマカクザル）、マウス、ブタ、ウマ、ロバ、ウシ、ヒツジ、ラット、および任意の種類の家禽が挙げられる。
【００６３】
用語「末梢血リンパ球」（ＰＢＬ）およびその文法的等価物は、本明細書で使用される場合、血液（例えば、末梢血）中を循環するリンパ球を指すことができる。末梢血リンパ球は、器官に局在化されないリンパ球を指すことができる。末梢血リンパ球は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができる。
【００６４】
用語「レシピエント」およびその文法的等価物は、本明細書で使用される場合、ヒトまたは非ヒト動物を指すことができる。また、レシピエントは、それを必要とする場合がある。
【００６５】
用語「Ｔ細胞」およびその文法的等価物は、本明細書で使用される場合、由来が任意のＴ細胞を指すことができる。例えば、Ｔ細胞は、初代Ｔ細胞、例えば、自系Ｔ細胞、細胞株等であってもよい。また、Ｔ細胞は、ヒトであってもよく、または非ヒトであってもよい。
【００６６】
用語「Ｔ細胞活性化」または「Ｔ細胞誘発」およびその文法的等価物は、本明細書で使用される場合、検出可能な細胞増殖、サイトカイン産生、および／または検出可能なエフェクター機能を誘導するのに十分な程度に刺激されているＴ細胞の状態を指すことができる。本発明の状況では、「十分なＴ細胞活性化」は、Ｔ細胞細胞傷害性の誘発と類似する。Ｔ細胞活性化は、当技術分野で公知の種々のアッセイを使用して測定することができる。アッセイは、サイトカイン分泌を測定するためのＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、細胞内サイトカイン発現（ＣＤ１０７）を測定するためのフローサイトメトリーアッセイ、増殖を測定するためのフローサイトメトリーアッセイ、および標的細胞消失を決定するための細胞傷害性アッセイ（５１Ｃｒ放出アッセイ）であってもよい。アッセイでは、典型的には、対照（非操作細胞）を使用して操作された細胞（ＣＡＲ  Ｔ）が比較され、対照と比較した、操作された細胞の相対的活性化が決定される。加えて、アッセイでは、標的抗原を発現しない標的細胞と共にインキュベートまたは接触させた、操作された細胞と比較してもよい。例えば、比較は、ＣＤ１９を発現しない標的細胞と共にインキュベートしたＣＤ１９−ＣＡＲ  Ｔ細胞であってもよい。
【００６７】
用語「配列」およびその文法的等価物は、本明細書で使用される場合、ＤＮＡまたはＲＮＡであってもよく、線形、環状、または分岐であってもよく、一本鎖または二本鎖のいずれであってもよいヌクレオチド配列を指すことができる。配列は、変異していてもよい。配列は、任意の長さであってもよく、例えば、長さが２個〜１，０００，０００個の間、またはそれよりも多くのヌクレオチド（またはその間のもしくはそれよりも大きな任意の整数値）、例えば、約１００個〜約１０，０００個の間のヌクレオチド、または約２００個〜約５００個の間のヌクレオチドであってもよい。
【００６８】
組成物および方法
本明細書には、治療適用のために細胞および核酸を遺伝子改変するのに有用な組成物および方法が開示されている。全体にわたって記載されている組成物および方法は、腫瘍特異的ＣＡＲを発現させるために、核酸媒介性遺伝子操作プロセスを使用することができる。有効な養子細胞移入に基づく免疫療法（ＡＣＴ）は、がん（例えば、転移がん）患者の処置に有用であり得る。例えば、非ウイルス法またはウイルス法を使用して自系末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を改変して、がん細胞に特有な抗原を認識し、本開示の組成物および方法で使用することができるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現させることができる。ある特定の態様は、ヒトまたはヒト化キメラ抗原受容体（図１）を使用して、がんを含むがそれに限定されない、免疫療法用の組成物および方法に関する。このキメラ抗原受容体には、ヒトまたはヒト化キメラ抗原受容体構築物が使用される。ヒトまたはヒト化キメラ抗原受容体は、ＣＤ８もしくはＣＤ２８膜貫通部分またはそれらの機能的等価物、および共刺激ドメインに融合されている、Ｔ細胞活性化をコントロールするシグナル伝達領域と組み合わされていてもよい。
【００６９】
細胞は、その免疫および抗腫瘍効力を維持し、さらに、がんを処置するために患者へと投与することができる条件下で成長および増大させることができる。また、細胞は、患者に投与されるとその性能が向上し得る条件下で成長および増大させることができる。細胞は選択することができる。例えば、細胞を増大および操作する前に、様々な非限定的な方法により、細胞の供給源を被験体から得ることができる。細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位に由来する組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含む、幾つかの非限定的な供給源から得ることができる。例えば、任意のＴ細胞株を使用することができる。あるいは、細胞は、健常ドナー由来であってもよく、がんと診断された患者由来であってもよく、または感染症と診断された患者由来であってもよい。別の実施形態では、細胞は、異なる表現型特徴を示す細胞の混合集団の一部であってもよい。また、細胞株は、以前に記載されている方法に従って、形質転換されたＴ細胞から得ることができる。また、細胞は、細胞療法バンクから得ることができる。本明細書に記載の方法のいずれかにより、免疫抑制処置に耐性の改変細胞を得ることができる。また、改変前に、望ましい細胞集団を選択することができる。また、改変後に、操作された細胞集団を選択することができる。操作された細胞は、自家移植に使用することができる。あるいは、細胞は、同種移植に使用することができる。一部の場合では、細胞は、その試料ががん関連標的配列を特定するために使用された同じ患者に投与される。他の場合では、細胞は、その試料ががん関連標的配列を特定するために使用された患者とは異なる患者に投与される。
【００７０】
１つまたは複数のサイトカインを細胞に導入することができる。サイトカインを利用して、移入された細胞（養子移入された腫瘍特異的細胞を含む）を追加刺激（ｂｏｏｓｔ）して、腫瘍微細環境内で増大させることができる。一部の場合には、ＩＬ−２を使用して、本明細書に記載の細胞の増大を促進することができる。ＩＬ−１５等のサイトカインも用いることができる。また、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、およびＬ−２１、またはそれらの任意の組み合わせ等の、免疫療法の分野における他の関連サイトカインを利用することができる。一部の場合では、組換えサイトカインが使用される。
【００７１】
これら組成物および方法は、がん療法に多数の利点を提供することができる。特定の態様では、Ｔ細胞を改変して、細胞を、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）の存在または活性に実質的に非依存性にするための方法を提供することができる。
【００７２】
さらなる態様では、操作されたキメラ抗原受容体をコードする、本明細書に記載のポリ核酸を提供することができる。
【００７３】
またさらなる態様では、細胞を作製するための方法を提供することができる。
【００７４】
ある特定の態様では、それを必要とする患者を、本明細書に記載の細胞で処置するための方法を提供することができる。
【００７５】
細胞工学
導入遺伝子配列をコードする核酸、例えばＤＮＡは、細胞の染色体にランダムに挿入されてもよい。ランダム組込みは、核酸、例えばＤＮＡを細胞に導入するための任意の方法により生じ得る。例えば、その方法は、これらに限定されないが、エレクトロポレーション、ソノポレーション（ｓｏｎｏｐｏｒａｔｉｏｎ）、遺伝子銃の使用、リポトランスフェクション、リン酸カルシウムトランスフェクション、デンドリマーの使用、マイクロインジェクション、ならびにアデノウイルス、ＡＡＶ、およびレトロウイルスベクターを含むウイルスベクターの使用、ならびに／またはグループＩＩリボザイムであってもよい。
【００７６】
また、導入遺伝子をコードするＤＮＡは、レポーター遺伝子の活性化により導入遺伝子またはその発現産物の存在を検出することができるように、レポーター遺伝子を含むように設計することができる。上記で開示されているもの等の、任意のレポーター遺伝子を使用することができる。レポーター遺伝子が活性化されている細胞を細胞培養物中で選択することにより、導入遺伝子を含有する細胞を選択することができる。
【００７７】
挿入しようとする導入遺伝子は、ポリ核酸から切除して二本鎖切断領域に挿入することができるように、ゲノムの標的化された二本鎖切断部位と類似した操作部位により隣接されてもよい。
【００７８】
導入遺伝子をコードするＤＮＡは、エレクトロポレーションにより細胞に導入することができる。また、ＤＮＡは、リポフェクション、感染、または形質転換により細胞に導入することができる。エレクトロポレーションおよび／またはリポフェクションを使用して、初代細胞をトランスフェクトすることができる。エレクトロポレーションおよび／またはリポフェクションを使用して、初代造血細胞をトランスフェクトすることができる。また、ＤＮＡは、相同組換えを使用せずに細胞ゲノムに導入することができる。一部の場合では、ＤＮＡは、ゲノムの標的化された二本鎖切断領域に相補的な操作部位により隣接されていてもよい。一部の場合では、ＤＮＡをポリ核酸から切除して、相同組換えを行わずに二本鎖切断領域に挿入することができる。
【００７９】
ＣＡＲの発現は、発現アッセイ、例えばｑＰＣＲにより、またはＲＮＡのレベルを測定することにより確認することができる。発現レベルは、コピー数の指標にもなり得る。例えば、発現レベルが非常に高い場合、１つよりも多くのコピーのＣＡＲがゲノムに組み込まれたことを示している場合がある。あるいは、発現が高いことは、導入遺伝子が、高度に転写される領域に、例えば高度に発現されるプロモーターの近くに組み込まれたことを示している場合がある。また、発現は、ウエスタンブロッティング等により、タンパク質レベルを測定することにより確認することができる。
【００８０】
一部の場合では、免疫グロブリンアルファ鎖およびベータ鎖をコードする核酸を含む導入遺伝子構築物を、シグナル伝達複合体を含む別の導入遺伝子構築物と同時発現させる。一部の場合では、免疫グロブリン導入遺伝子およびシグナル伝達複合体導入遺伝子は、同じ発現ベクターに存在していてもよい。一部の場合では、免疫グロブリン導入遺伝子およびシグナル伝達複合体導入遺伝子は、異なる発現ベクターに存在していてもよい。後者の場合には、２つの発現ベクターを、同時にまたは順次にのいずれかで、細胞に導入することができる。一部の場合では、ベクターの導入前に、細胞を活性化させる。一部の場合では、細胞は、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８を使用して活性化される。一部の場合では、細胞を活性化するためにサイトカインも使用される。
【００８１】
一部の場合では、ＣＡＲおよびシグナル伝達複合体を含む導入遺伝子をコードするベクターは、２つの異なる方法を使用して導入してもよい。一部の場合では、１つのベクターはウイルスで導入され、別のベクターは非ウイルス的に導入される。一部の場合では、１つのベクターはランダムに導入され、第２のベクターは標的化技法を使用して導入される。一部の場合では、ベクターは、ゲノムの二本鎖切断を修復することができる。
【００８２】
導入遺伝子は、内因性遺伝子を発現させるために、例えば導入遺伝子が無い場合よりも高いレベルで過剰発現させるために有用であり得る。加えて、導入遺伝子は、バックグラウンド、つまり導入遺伝子でトランスフェクトされていない細胞よりも高いレベルで外因性遺伝子を発現させるために使用することができる。また、導入遺伝子は、他のタイプの遺伝子、例えばドミナントネガティブ遺伝子を包含することができる。
【００８３】
導入遺伝子は、導入遺伝子の産物を産生する様式で、生物、細胞、組織、または器官に配置することができる。ポリ核酸は、導入遺伝子を含むことができる。
【００８４】
Ｔ細胞は、１つまたは複数の導入遺伝子を含むことができる。１つまたは複数の導入遺伝子は、抗原の少なくとも１つのエピトープ（例えば、がんエピトープ）を認識および結合するか、または抗原の変異エピトープに結合するＣＡＲタンパク質を発現することができる。ＣＡＲは、機能性ＣＡＲであってもよい。また、Ｔ細胞は、１つまたは複数のＣＡＲを含んでいてもよい。また、Ｔ細胞は、単一のＣＡＲおよび二次的な操作された受容体を含んでいてもよい。
【００８５】
本機能性ＣＡＲタンパク質は、任意の提示されているエピトープに向けることができる。また、本機能性ＣＡＲ融合タンパク質は、抗原を標的とするために、ペプチドに基づくかまたはペプチドに誘導される機能を有していてもよい。本機能性ＣＡＲは連結されていてもよく、例えば、本機能性ＴＣＲは、２Ａ配列と連結されていてもよい。また、本機能性ＣＡＲは、２Ａ配列と連結されていてもよい。また、本機能性ＣＡＲは、哺乳動物成分を含有していてもよい。例えば、本機能性ＣＡＲは、マウス定常領域を含有していてもよい。また、本機能性ＣＡＲは、一部の場合では、ヒト定常領域を含有していてもよい。ペプチドに誘導される機能は、原理的には、ペプチド配列をＣＡＲに導入し、そうしたペプチド配列を有する腫瘍を標的とすることにより達成することができる。こうしたペプチドは、ファージディスプレイまたは合成ペプチドライブラリーに由来していてもよい（例えば、Ａｒａｐ，  Ｗ．ら、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｂｙ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｏ  Ｔｕｍｏｒ  Ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ  ｉｎ  ａ  Ｍｏｕｓｅ  Ｍｏｄｅｌ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７９巻、３７７〜３８０頁（１９９８年）；Ｓｃｏｔｔ，  Ｃ．  Ｐ．ら、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｂａｃｋｂｏｎｅ  ｃｙｃｌｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ」、８巻：８０１〜８１５頁（２００１年）を参照）。特に、乳癌、前立腺癌、および結腸癌に特異的なペプチド、ならびに新生血管構造に特異的なペプチドは、既に単離が成功しており、それらを使用することができる（Ｓａｍｏｙｌｏｖａ，  Ｔ．  Ｉ．ら、「Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：  Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ  Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ」、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、６巻（１号）：９〜１７頁（９）（２００６年））。本機能性ＣＡＲタンパク質は、変異がんエピトープまたは変異がん抗原に向けることができる。
【００８６】
使用することができ、特に企図される導入遺伝子としては、本明細書に開示されている遺伝子、例えばＣＡＲ遺伝子と、ある同一性および／または相同性を示す遺伝子が挙げられる。したがって、遺伝子が、少なくともまたは少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の相同性（核酸またはタンパク質レベルで）を示す場合、その遺伝子を導入遺伝子として使用することができることが企図される。また、少なくともまたは少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性（核酸またはタンパク質レベルで）を示す遺伝子を、導入遺伝子として使用することができることが企図される。一部の場合では、導入遺伝子は、機能性であってもよい。
【００８７】
導入遺伝子は、細胞に組み込まれてもよい。例えば、導入遺伝子は、生物の生殖系列に組み込むことができる。導入遺伝子は、細胞に挿入されると、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）のコピーである相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）セグメント、またはゲノムＤＮＡ（イントロンを含むかまたは含まない）の元の領域にある遺伝子自体のいずれかであり得る。タンパク質Ｘの導入遺伝子は、タンパク質Ｘをコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子を指すことができる。本明細書で使用される場合、一部の場合では、タンパク質Ｘをコードする導入遺伝子は、タンパク質Ｘのアミノ酸配列の１００％または約１００％をコードする導入遺伝子であってもよい。他の場合には、タンパク質Ｘをコードする導入遺伝子は、タンパク質Ｘのアミノ酸配列の少なくともまたは少なくとも約９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、または１％をコードする導入遺伝子であってもよい。導入遺伝子の発現は、最終的には、機能性タンパク質、例えば、部分的に、完全に、または過度に機能性のタンパク質をもたらすことができる。上記で考察されているように、部分配列が発現される場合、最終的な結果は、非機能性タンパク質またはドミナントネガティブタンパク質であり得る。また、非機能性タンパク質またはドミナントネガティブタンパク質は、機能性（内因性または外因性）タンパク質と競合することができる。また、導入遺伝子は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、またはマイクロＲＮＡ）をコードしていてもよい。一部の場合では、導入遺伝子がｍＲＮＡをコードする場合、ｍＲＮＡは、次いでポリペプチド（例えば、タンパク質）へと翻訳される場合がある。したがって、導入遺伝子はタンパク質コードすることができることが企図される。導入遺伝子は、一部の場合では、タンパク質またはタンパク質の部分をコードしていてもよい。加えて、タンパク質は、野生型ポリペプチドと比較して、１つまたは複数の変異（例えば、欠失、挿入、アミノ酸置換、または再配列）を有していてもよい。タンパク質は、天然ポリペプチドであってもよく、または人工ポリペプチド（例えば、組換えポリペプチド）であってもよい。導入遺伝子は、２つまたはそれよりも多くのポリペプチドにより形成される融合タンパク質をコードしていてもよい。Ｔ細胞は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個、またはそれよりも多くの導入遺伝子を含んでいてもよく、または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個、またはそれよりも多くの導入遺伝子を含んでいてもよい。例えば、Ｔ細胞は、ＣＡＲ遺伝子を含む１つまたは複数の導入遺伝子を含んでいてもよい。
【００８８】
Ｔ細胞は、１つまたは複数の破壊された遺伝子および１つまたは複数の導入遺伝子を含んでいてもよい。例えば、発現が破壊された１つまたは複数の遺伝子は、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＶＩＳＴＡのいずれか１つ、および／またはそれらの任意の組み合わせを含んでいてもよい。例えば、種々の組み合わせを例示するために過ぎないが、発現が破壊された１つまたは複数の遺伝子は、ＰＤ−１を含んでいてもよく、１つまたは複数の導入遺伝子は、ＴＣＲを含む。また、別の例では、発現が破壊された１つまたは複数の遺伝子はＣＴＬＡ−４を含んでいてもよく、１つまたは複数の導入遺伝子はＴＣＲを含む。
【００８９】
Ｔ細胞は、１つまたは複数の抑制された遺伝子および１つまたは複数の導入遺伝子を含んでいてもよい。例えば、発現が抑制された１つまたは複数の遺伝子は、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＶＩＳＴＡのいずれか１つ、および／またはそれらの任意の組み合わせを含んでいてもよい。例えば、種々の組み合わせを例示するために過ぎないが、発現が抑制された１つまたは複数の遺伝子は、ＰＤ−１を含んでいてもよく、１つまたは複数の導入遺伝子は、ＣＡＲを含む。また、別の例では、発現が抑制された１つまたは複数の遺伝子は、ＣＴＬＡ−４を含んでいてもよく、１つまたは複数の導入遺伝子は、任意の操作された受容体を含んでいてもよい。
【００９０】
導入遺伝子は、自殺遺伝子であってもよい。がん患者の多くの有効な処置で証明されたように、ＣＡＲ  Ｔに応答した目標腫瘍退縮には、毒性が伴う場合がある。一部の場合では、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、標的化された抗原が腫瘍と正常組織とで共通している場合、それらを区別することができない場合がある（「オンターゲット／オフ腫瘍（ｏｎ−ｔａｒｇｅｔ／ｏｆｆ−ｔｕｍｏｒ）」毒性）。他の場合では、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）として公知である、免疫系の全身性摂動が生じる場合がある。ＣＲＳは、全身性炎症反応症候群またはサイトカインストームを含んでいてもよく、これは、ＣＡＲ  Ｔ細胞の迅速なｉｎ  ｖｉｖｏ増大の結果であり得る。ＣＲＳは、重度の場合には多臓器不全に結び付く場合がある発熱および低血圧を特徴とする状態である。一部の場合では、毒性は、注入されたＣＡＲ  Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ増大と相関する場合があり、それにより、免疫系の全般的な摂動が引き起こされ、ＴＮＦアルファおよびＩＬ−６等の炎症促進性サイトカイン（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ）が高レベルで放出される場合がある。
【００９１】
一部の場合では、例えば、受容体をコードするｍＲＮＡのエレクトロポレーション後にＣＡＲが一過性に発現されるように、正常組織と共通する抗原を標的とするＣＡＲ  Ｔ細胞を生成することができる。加えて、重度のオンターゲット毒性がある場合にＣＡＲ  Ｔ細胞の劇的な消失を可能にすることができる安全スイッチを含めることにより、ＣＡＲ  Ｔ細胞をさらに操作するための著しい努力がなされている。ＣＡＲを、誘導可能なカスパーゼ−９遺伝子（二量体化の化学誘導因子により活性化される）または短縮型のＥＧＦ受容体Ｒ（モノクローナル抗体セツキシマブにより活性化される）等の安全スイッチと組み合わせたベクターを使用することができる。
【００９２】
ＣＡＲ  Ｔ細胞は、自殺遺伝子導入遺伝子をコードしていてもよい。また、導入遺伝子は、ＣＡＲ受容体または別の類似受容体を含んでいてもよい。自殺遺伝子は、ＣＡＲ  Ｔ細胞の消失を誘導することができる。自殺遺伝子は、ＣＡＲ  Ｔ細胞のアポトーシスを誘導する任意の遺伝子であってもよい。自殺遺伝子は、アデノウイルスベクター導入遺伝子内に、ＣＡＲと共にコードされていてもよい。
【００９３】
１つまたは複数の導入遺伝子は、異なる種に由来していてもよい。例えば、１つまたは複数の導入遺伝子は、ヒト遺伝子、マウス遺伝子、ラット遺伝子、ブタ遺伝子、ウシ遺伝子、イヌ遺伝子、ネコ遺伝子、サル遺伝子、チンパンジー遺伝子、またはそれらの任意の組み合わせを含んでいてもよい。例えば、導入遺伝子は、ヒト由来であり、ヒト遺伝子配列を有していてもよい。１つまたは複数の導入遺伝子は、ヒト遺伝子を含んでいてもよい。一部の場合では、１つまたは複数の導入遺伝子は、アデノウイルス遺伝子ではない。
【００９４】
上述されているように、導入遺伝子は、ランダムな様式でまたは部位特異的な様式で、Ｔ細胞ゲノムに挿入することができる。例えば、導入遺伝子は、Ｔ細胞ゲノムのランダムな遺伝子座に挿入することができる。こうした導入遺伝子は、ゲノムのいかなる場所に挿入されたとしても、機能性、例えば完全に機能性であり得る。例えば、導入遺伝子はそれ自体のプロモーターをコードしていてもよく、または内因性プロモーターのコントロール下の位置に挿入されていてもよい。あるいは、導入遺伝子は、遺伝子のイントロンもしくは遺伝子のエクソン等の遺伝子、プロモーター、または非コード領域に挿入することができる。挿入が、遺伝子、例えば内因性免疫チェックポイントを破壊するように、導入遺伝子を挿入してもよい。
【００９５】
場合によっては、導入遺伝子の１つよりも多くのコピーを、ゲノム中の１つよりも多くのランダムな遺伝子座に挿入してもよい。例えば、複数のコピーを、ゲノムのランダムな遺伝子座に挿入してもよい。これにより、導入遺伝子が一度にランダムに挿入された場合よりも、全体的な発現を増加させることができる。あるいは、１コピーの導入遺伝子を遺伝子に挿入し、別のコピーの導入遺伝子を、異なる遺伝子に挿入してもよい。導入遺伝子は、Ｔ細胞ゲノムの特定の遺伝子座に挿入することができるように標的化することができる。
【００９６】
導入遺伝子の発現は、１つまたは複数のプロモーターによりコントロールすることができる。プロモーターは、遍在性、構成性（関連遺伝子の連続的な転写を可能にする制御されていないプロモーター）、組織特異的プロモーター、または誘導可能なプロモーターであってもよい。プロモーターに隣接してまたはその付近に挿入されている導入遺伝子の発現を制御することができる。例えば、導入遺伝子は、遍在性プロモーターの付近または隣に挿入してもよい。幾つかの遍在性プロモーターは、ＣＡＧＧＳプロモーター、ｈＣＭＶプロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、またはＲＯＳＡ２６プロモーターであってもよい。
【００９７】
プロモーターは、内因性であってもよく、または外因性であってもよい。例えば、１つまたは複数の導入遺伝子は、内因性または外因性ＲＯＳＡ２６プロモーターに隣接してまたはその付近に挿入されていてもよい。さらに、プロモーターは、Ｔ細胞に特異的であってもよい。例えば、１つまたは複数の導入遺伝子は、ブタＲＯＳＡ２６プロモーターに隣接してまたはその付近に挿入されていてもよい。
【００９８】
組織特異的プロモーターまたは細胞特異的なプロモーターを使用して、発現の位置をコントロールすることができる。例えば、１つまたは複数の導入遺伝子は、組織特異的プロモーターに隣接してまたはその付近に挿入されていてもよい。組織特異的プロモーターは、ＦＡＢＰプロモーター、Ｌｃｋプロモーター、ＣａｍＫＩＩプロモーター、ＣＤ１９プロモーター、ケラチンプロモーター、アルブミンプロモーター、ａＰ２プロモーター、インスリンプロモーター、ＭＣＫプロモーター、ＭｙＨＣプロモーター、ＷＡＰプロモーター、またはＣｏｌ２Ａプロモーターであってもよい。
【００９９】
組織特異的プロモーターまたは細胞特異的なプロモーターを使用して、発現の位置をコントロールすることができる。例えば、１つまたは複数の導入遺伝子は、組織特異的プロモーターに隣接してまたはその付近に挿入されていてもよい。組織特異的プロモーターは、ＦＡＢＰプロモーター、Ｌｃｋプロモーター、ＣａｍＫＩＩプロモーター、ＣＤ１９プロモーター、ケラチンプロモーター、アルブミンプロモーター、ａＰ２プロモーター、インスリンプロモーター、ＭＣＫプロモーター、ＭｙＨＣプロモーター、ＷＡＰプロモーター、またはＣｏｌ２Ａプロモーターであってもよい。
【０１００】
誘導可能なプロモーターを同様に使用することができる。こうした誘導可能なプロモーターは、誘導剤の添加または除去により、所望される場合、スイッチをオンおよびオフすることができる。誘導可能なプロモーターは、これらに限定されないが、Ｌａｃ、ｔａｃ、ｔｒｃ、ｔｒｐ、ａｒａＢＡＤ、ｐｈｏＡ、ｒｅｃＡ、ｐｒｏＵ、ｃｓｔ−１、ｔｅｔＡ、ｃａｄＡ、ｎａｒ、ＰＬ、ｃｓｐＡ、Ｔ７、ＶＨＢ、Ｍｘ、および／またはＴｒｅｘであってもよいことが企図される。
【０１０１】
操作された受容体
これらに限定されないが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、もしくはＢ細胞受容体（ＢＣＲ）、またはそれらの誘導体を含む、操作された受容体を、本明細書に記載の細胞、組成物、または方法に使用することができる。
【０１０２】
ある特定の態様では、キメラ抗原受容体は、細胞外抗原認識ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＴ細胞活性化をコントロールするシグナル伝達領域で構成されていてもよい。細胞外抗原認識ドメインは、マウス、ヒト化、または完全ヒトモノクローナル抗体に由来していてもよい。具体的には、細胞外抗原認識ドメインは、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の形態でクローニングされており、ヒンジおよび膜貫通ドメインを介してＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の細胞内シグナル伝達分子および少なくとも１つの共刺激分子に接合されている、モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖の可変領域で構成されている。一部の場合では、共刺激ドメインは使用されない。
【０１０３】
ＣＡＲは、真核細胞、例えば哺乳動物細胞の原形質膜に存在し、好適な哺乳動物細胞としては、これらに限定されないが、細胞傷害性細胞、Ｔリンパ球、幹細胞、幹細胞の子孫、前駆細胞、前駆細胞の子孫、およびＮＫ細胞が挙げられる。真核細胞の原形質膜に存在する場合、ＣＡＲは、その結合標的の存在下で活性であり得る。標的は、膜上に発現される場合がある。また、標的は、可溶性であってもよい（例えば、細胞に結合されていなくてもよい）。標的は、標的細胞等の細胞の表面に存在していてもよい。標的は、脂質二分子層等の固体表面に提示されていてもよい。標的は、可溶性抗原等、可溶性であってもよい。標的は、抗原であってもよい。抗原は、標的細胞等の細胞の表面に存在していてもよい。抗原は、脂質二分子層等の固体表面に提示されていてもよい。一部の場合では、標的は、抗原のエピトープであってもよい。
【０１０４】
細胞外結合領域。ある特定の態様では、キメラ抗原受容体は、細胞外抗原認識ドメインを有していてもよい。一実施形態では、細胞外抗原認識ドメインは、完全にヒトであってもよい。他の場合では、細胞外抗原認識ドメインは、ヒト化されていてもよい。他の場合では、細胞外抗原認識ドメインは、マウスであってもよい。一部の場合では、細胞外抗原認識ドメインは、非ヒトであってもよい。抗原に結合するために使用される部分は、３つの一般的なカテゴリー：抗体に由来する一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ライブラリーから選択される抗原結合領域断片（Ｆａｂ）、またはそれらの同族受容体と係合する天然リガンドに分類することができる。結合領域は、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、または天然リガンド、ならびにそれらの誘導体のいずれかを包含することができる。
【０１０５】
その抗原特異性を決定するＣＡＲの部分は、ｓｃＦｖであってもよい。ｓｃＦｖは、任意の相補性標的に結合することができる。使用されるｓｃＦｖは、可変領域の配列が公知である抗体に由来していてもよい。使用されるｓｃＦｖは、利用可能なマウスハイブリドーマから得られる抗体配列に由来していてもよい。使用されるｓｃＦｖは、腫瘍細胞または初代細胞の全エクソーム配列決定から得ることができる。
【０１０６】
遺伝子操作を用いることにより、ｓｃＦｖを様々なやり方で改変することができる。一部の場合では、ｓｃＦｖは、その標的に対してより高い親和性を選択することができるように、変異させることができる。一部の場合では、その標的に対するｓｃＦｖの親和性は、正常組織では低レベルで発現される場合のある標的について最適化することができる。この最適化を実施して、潜在的な毒性を最小限に抑えることができる。他の場合では、その可溶性形態対応物よりも、標的の膜結合形態に対してより高い親和性を有するｓｃＦｖをクローニングすることが望ましい場合がある。また、幾つかの標的は、様々なレベルの可溶性形態で検出される場合があり、それらの標的化は、意図しない毒性を引き起こす場合があるため、この改変が実施される場合がある。
【０１０７】
ヒンジまたはスペーサー。ある特定の態様では、本明細書で使用されるＣＡＲは、ヒンジを含んでいてもよい。ヒンジは、スペーサーと呼ばれる場合もある。ある特定の態様では、ヒンジは、ｓｃＦｖに可撓性を提供するために使用されるＣＡＲの部分であると考えることができる。一部の場合では、特に、ｓｃＦｖを検出するための抗体が機能性でない場合または利用可能でない場合、ヒンジを使用して、細胞の細胞表面にあるＣＡＲを検出することができる。例えば、免疫グロブリンに由来するヒンジの長さは、ｓｃＦｖが標的としている標的上のエピトープの位置に依存して、最適化を必要とする場合がある。
【０１０８】
一部の場合では、ヒンジは、免疫グロブリンに属していなくともよく、その代わりに、ＣＤ８アルファ分子の天然ヒンジ等の別の分子に属していてもよい。ＣＤ８アルファヒンジは、ＣＤ８共受容体およびＭＨＣ分子の相互作用に役割を果たすことが公知であるシステインおよびプロリン残基を含有していてもよい。システインおよびプロリン残基は、ＣＡＲの性能に影響を及ぼす場合がある。
【０１０９】
ＣＡＲヒンジは、サイズが調整可能であってもよく、ＣＡＲ  Ｔ細胞と標的細胞との間の直交シナプス距離（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ  ｓｙｎａｐｓｅ  ｄｉｓｔａｎｃｅ）の正規化を、ある程度まで補うことができる。また、Ｔ細胞と標的細胞との間の免疫学的シナプス（ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｙｎａｐｓｅ）のこの地理的位置関係（ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ）は、ＣＡＲのヒンジが短い場合でさえ、細胞表面標的分子の膜遠位エピトープを、シグナル伝達のためのシナプス距離（ｓｙｎａｐｓｅ  ｄｉｓｔａｎｃｅ）に近づけることができないため、ＣＡＲが機能的に架橋することができない距離を規定する。同様に、シグナル伝達出力が、ヒンジの長いＣＡＲの状況でのみ観察される膜近位ＣＡＲ標的抗原エピトープが記載されている。ヒンジは、使用される一本鎖可変断片領域に応じて調整することができる。ヒンジは任意の長さであってもよい。
【０１１０】
膜貫通領域。ある特定の態様では、膜貫通モチーフは、細胞の原形質膜にＣＡＲを係留することができる。ＣＤ２８の天然膜貫通部分を、ＣＡＲに使用することができる。また、他の場合では、ＣＤ８アルファの天然膜貫通部分を、ＣＡＲに使用することができる。
【０１１１】
細胞内シグナル伝達領域。本明細書で使用されるＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、ＣＡＲが配置されている免疫細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化の要因であってもよい。ＣＡＲは、Ｔ細胞のエフェクター機能を誘導することができ、例えば、細胞融解活性であってもよく、またはサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であってもよい。したがって、用語「シグナル伝達ドメイン」は、エフェクター機能シグナルを形質導入し、特別な機能を実施するように細胞を誘導するタンパク質の部分を指すことができる。通常はシグナル伝達ドメイン全体を用いることができるが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。一部の場合では、細胞内シグナル伝達ドメインの短縮部分が使用される。したがって、一部の場合では、用語シグナル伝達ドメインは、エフェクター機能シグナルを形質導入するのに十分な、細胞内シグナル伝達ドメインの任意の短縮部分を含むことが意図されている。ＣＡＲに使用されるシグナル伝達ドメインの好ましい例としては、協同して作用して標的−受容体の係合後にシグナル伝達を開始するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）および共受容体の細胞質配列、ならびにそれら配列の任意の誘導体またはバリアントおよび同じ機能的能力を有する任意の合成配列が挙げられる。
【０１１２】
ある特定の態様では、ＣＡＲの設計は、ゼータ鎖（第一世代ＣＡＲ）を、単一の共刺激ドメイン（例えば、ＣＤ２８または４−１ＢＢ）のいずれかに単に組み込むこと（第二世代）、または２つの共刺激エンドドメイン（ＣＤ２８／ＯＸ４０またはＣＤ２８／４−１ＢＢ）を組み込むこと（第三世代）を含んでいてもよい。これらシグナル伝達部分は、ＣＤ８等の共受容体と共に、キナーゼ経路の下流活性化をもたらし、遺伝子転写および機能性細胞応答を支持する。ＣＡＲの共刺激エンドドメインは、ＣＤ２８（ホスファチジルイノシトール−４，５−ビスホスフェート３−キナーゼ）または４−１ＢＢ／ＯＸ４０（ＴＮＦ受容体関連因子アダプタタンパク質）経路、ならびにＭＡＰＫおよびＡｋｔ活性化のいずれかと関連する近位シグナル伝達タンパク質を活性化することができる。
【０１１３】
一部の場合では、シグナル伝達ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）として公知であるシグナル伝達モチーフを含有していてもよい。細胞質シグナル伝達配列を含有するＩＴＡＭの例としては、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。しかしながら、好ましい実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖に由来する。
【０１１４】
１つまたは複数のＩＴＡＭモチーフを含有するＴ細胞シグナル伝達ドメインの例は、Ｔ細胞受容体Ｔ３ゼータ鎖またはＣＤ２４７としても公知であるＣＤ３ゼータドメインである。このドメインは、Ｔ細胞受容体−ＣＤ３複合体の一部であり、幾つかの細胞内シグナル伝達経路に対する抗原認識を、Ｔ細胞の主要エフェクター活性化に結び付ける重要な役割を果たす。本明細書で使用される場合、ＣＤ３ゼータは、主に、ヒトＣＤ３ゼータ、および実質的に同一の配列を有するタンパク質を含む、ＳｗｉｓｓｐｒｏｔエントリーＰ２０９６３として公知であるそのアイソフォームに向けられる。この場合も、キメラ抗原受容体の一部として、完全なＴ細胞受容体Ｔ３ゼータ鎖が必要とされる訳ではなく、ある特定の態様では、その任意の機能性等価物を含む、Ｔ細胞受容体Ｔ３ゼータ鎖のシグナル伝達ドメインを含むその任意の誘導体が、本方法に好適である。
【０１１５】
一部の場合では、ＣＡＲにより生成されるシグナルは、二次または共刺激シグナルと組み合わせることができる。共刺激シグナル伝達ドメインに関しては、幾つかの考え得る共刺激シグナル伝達ドメインを含むように、キメラ抗原受容体様複合体を設計してもよい。当技術分野で周知のように、ナイーブＴ細胞の場合、Ｔ細胞を十分に活性化して細胞傷害性Ｔ細胞を誘導するには、Ｔ細胞受容体の係合だけでは十分ではない。十分に生産的なＴ細胞活性化には、第２の共刺激シグナルが必要である。Ｔ細胞活性化の共刺激を提供することが報告されている幾つかの受容体としては、これらに限定されないが、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２、ＣＤ５、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、および４−１ＢＢが挙げられる。これら共刺激分子により利用されるシグナル伝達経路は、主要Ｔ細胞受容体活性化シグナルと相乗的に作用するという共通の性質を共有する。これら共刺激シグナル伝達領域は、１つまたは複数のＩＴＡＭモチーフ、例えばＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインに由来する主要エフェクター活性化シグナルと相乗的であり、Ｔ細胞活性化の要件を満たすことができるシグナルを提供する。
【０１１６】
ある特定の態様では、キメラ抗原受容体様複合体に共刺激ドメインを付加することにより、操作された細胞の効力および持続性を増強することができる。
【０１１７】
別の実施形態では、Ｔ細胞シグナル伝達ドメインおよび共刺激ドメインを互いに融合させて、それによりシグナル伝達領域を構成する。
【０１１８】
ＣＡＲ機能。一部の場合では、ＣＡＲは、細胞の原形質膜に存在し、その標的との結合により活性化されると、ＣＡＲの結合ドメインが結合する抗原をその細胞表面に発現する標的に対して、その細胞による細胞傷害活性をもたらすことができる。例えば、一部の場合では、細胞は、細胞傷害性細胞（例えば、ＮＫ細胞または細胞傷害性Ｔリンパ球）であってもよく、本開示のＣＡＲは、細胞の原形質膜に存在し、その標的との結合により活性化されると、ＣＡＲの結合ドメインが結合する抗原をその細胞表面に発現する標的細胞に対する、細胞傷害性細胞の細胞傷害活性を増加させることができる。例えば、一部の場合では、細胞は、ＮＫ細胞またはＴリンパ球であってもよく、本開示のＣＡＲは、細胞の原形質膜に存在し、その標的との結合により活性化されると、細胞の細胞傷害活性を、結合標的の非存在下での細胞の細胞傷害活性と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または１０倍を超えて増加させることができる。
【０１１９】
一部の場合では、ＣＡＲは、その標的との結合により活性化されると、増殖および増大（細胞分裂の増加または抗アポトーシスの応答のいずれかによる）等の、他のＣＡＲ活性化関連事象をもたらすことができる。一部の場合では、ＣＡＲは、その標的との結合により活性化されると、細胞内シグナル伝達調節、細胞分化、または細胞死等の、他のＣＡＲ活性化関連事象をもたらすことができる。
【０１２０】
また、結合領域は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含んでいてもよい。例示的なＣＡＲの細胞外ドメインまたは外部ドメインは、モノクローナル抗体の抗原結合部位に由来するｓｃＦｖで構成されており、したがってＶＨドメインおよびＶＬドメインが連結されている。ｓｃＦｖは、可撓性膜貫通ドメインに、次いでＣＤ３ゼータに由来するもの等のチロシンに基づく活性化モチーフを含んでいてもよい１つまたは複数のエンドドメインに連結されている。いわゆる第二世代および第三世代ＣＡＲには、Ｔ細胞生存および増殖を増強する役目を果たす、ＣＤ２８およびＣＤ１３７（４−１ＢＢ）等の共刺激分子に由来する追加の活性化ドメインが含まれていた。
【０１２１】
幾つかの最近の進歩では、一部の場合で抗腫瘍Ｔ細胞応答を誘発する腫瘍特異的変異を特定することに関心が集中している。例えば、そうした内因性変異は、全エクソーム配列決定手法を使用して特定することができる。Ｔｒａｎ  Ｅら、「Ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｍｕｔａｔｉｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＣＤ４＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ａ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃａｎｃｅｒ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４４巻：６４１〜６４４頁（２０１４年）。したがって、ＣＡＲは、腫瘍特異的変異を標的とするｓｃＦｖで構成されていてもよい。
【０１２２】
方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、全エクソーム配列決定）を使用して、がん患者から得られた試料からがん関連標的配列を特定することができる。さらに、方法は、標的配列を認識する第１のＴ細胞から、ＴＣＲ導入遺伝子を特定することができる。がん関連標的配列およびＴＣＲ導入遺伝子は、同じ患者または異なる患者の試料から得られたものであってもよい。がん関連標的配列をＣＡＲ導入遺伝子にコードして、ＣＡＲを、標的配列に対して特異的にすることができる。方法は、Ｔ細胞の膜を横切るＣＡＲ導入遺伝子を含む核酸を有効に送達することができる。一部の場合では、第１および第２のＴ細胞は、同じ患者から得られたものであってもよい。他の場合では、第１および第２のＴ細胞は、異なる患者から得られたものであってもよい。他の場合では、第１および第２のＴ細胞は、異なる患者から得られたものであってもよい。本方法は、非ウイルス組込み系またはウイルス組込み系を使用して、ＣＡＲ導入遺伝子を安全かつ効率的にＴ細胞のゲノムに組み込むことにより、操作されたＴ細胞中でＣＡＲ導入遺伝子を安定的に発現することができる、操作されたＴ細胞を生成することができる。
【０１２３】
がん標的
ある特定の態様では、細胞または操作された受容体は、標的抗原に結合することができる。操作された細胞は、抗原を標的とすることができる。また、操作された細胞は、エピトープを標的とすることができる。
【０１２４】
標的抗原は、腫瘍細胞ネオ抗原、腫瘍ネオエピトープ、腫瘍特異的抗原、腫瘍関連抗原、組織特異的抗原、細菌抗原、ウイルス抗原、酵母抗原、真菌抗原、原生動物抗原、寄生生物抗原、マイトジェン、またはそれらの組み合わせであってもよい。抗原は、腫瘍細胞抗原であってもよい。エピトープは、腫瘍細胞エピトープであってもよい。そのような腫瘍細胞エピトープは、変異より生じた腫瘍に由来する抗原、共通の腫瘍特異的抗原、分化抗原、および腫瘍で過剰発現される抗原等の、幅広く様々な腫瘍抗原に由来していてもよい。そうした抗原は、幾つか例を挙げると、例えば、ネオ抗原、ネオ抗原エピトープ、葉酸受容体アルファ、ＷＴ１、ｐ５３、Ｂｒａｃｈｙｕｒｙ、ｂｒａｃｈｙｕｒｙ（ＴＩＶＳ７−２、多型）、ｂｒａｃｈｙｕｒｙ（ＩＶＳ７  Ｔ／Ｃ多型）、Ｔ  ｂｒａｃｈｙｕｒｙ、Ｔ、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、ＨＰＶ  Ｅ６、ＨＰＶ  Ｅ７、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＢＡＧＥ、ＤＡＭ−６、−１０、ＧＡＧＥ−１、−２、−８、ＧＡＧＥ−３、−４、−５、−６、−７Ｂ、ＮＡ８８−Ａ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＲＴ−１、ＭＣ１Ｒ、Ｇｐ１００、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＳＴＥＡＰ、ＰＡＰ、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＡＲＴ−４、ＣＡＭＥＬ、Ｃｙｐ−Ｂ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ１（ＶＮＴＲ多型）、ＭＵＣ１−ｃ、ＭＵＣ１−ｎ、ＭＵＣ２、ＰＲＡＭＥ、Ｐ１５、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−３、ＷＴ１、ＡＦＰ、β−カテニン／ｍ、カスパーゼ−８／ｍ、ＣＤＫ−４／ｍ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧｎＴ−Ｖ、Ｇ２５０、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＵＭ−１、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ミオシン／ｍ、ＲＡＧＥ、ＳＡＲＴ−２、ＴＲＰ−２／ＩＮＴ２、７０７−ＡＰ、アネキシンＩＩ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＴＰＩ／ｍｂｃｒ−ａｂｌ、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、がん胎児抗原（ＣＥＡ）、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ヒト上皮増殖因子受容体３（ＨＥＲ３）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ＭＵＣ１、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、アルファ−アクチニン−４、ＡＲＴＣ１、ＣＡＲ−ＡＢＬ融合タンパク質（ｂ３ａ２）、Ｂ−ＲＡＦ、ＣＡＳＰ−５、ＣＡＳＰ−８、ベータ−カテニン、Ｃｄｃ２７、ＣＤＫ４、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＯＡ−１、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＥＦＴＵＤ２、伸長因子２、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１融合タンパク質、ＦＬＴ３−ＩＴＤ、ＦＮ１、ＧＰＮＭＢ、ＬＤＬＲ−フコシルトランスフェラーゼ融合タンパク質、ＨＬＡ−Ａ２ｄ、ＨＬＡ−Ａｌ  ｌｄ、ｈｓｐ７０−２、ＫＩＡＡＯ２０５、ＭＡＲＴ２、ＭＥ１、ＭＵＭ−１ｆ、ＭＵＭ−２、ＭＵＭ−３、ｎｅｏ−ＰＡＰ、ミオシンＩ型、ＮＦＹＣ、ＯＧＴ、ＯＳ−９、ｐ５３、ｐｍｌ−ＲＡＲａｌｐｈａ融合タンパク質、ＰＲＤＸ５、ＰＴＰＲＫ、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、ＲＢＡＦ６００、ＳＩＲＴ２、ＳＮＲＰＤ１、ＳＹＴ−ＳＳＸ１−または−ＳＳＸ２融合タンパク���、ＴＧＦ−ｂｅｔａＲＩＩ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＢＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−１、２、８、Ｇａｇｅ３、４、５、６、７、ＧｎＴＶｆ、ＨＥＲＶ−Ｋ−ＭＥＬ、ＫＫ−ＬＣ−１、ＫＭ−ＨＮ−１、ＬＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａｌ２、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ムチンｋ、ＮＡ−８８、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−２、ＳＡＧＥ、Ｓｐ１７、ＳＳＸ−２、ＳＳＸ−４、ＴＡＧ−１、ＴＡＧ−２、ＴＲＡＧ−３、ＴＲＰ２−ＩＮＴ２ｇ、ＸＡＧＥ−１ｂ、ｇｐ１００／Ｐｍｅｌ１７、カリクレイン４、マンマグロビン−Ａ、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ＮＹ−ＢＲ−１、ＯＡ１、ＰＳＡ、ＲＡＢ３８／ＮＹ−ＭＥＬ−１、ＴＲＰ−１／ｇｐ７５、ＴＲＰ−２、チロシナーゼ、アディポフィリン、ＡＩＭ−２、ＡＬＤＨ１Ａ１、ＢＣＬＸ（Ｌ）、ＢＣＭＡ、ＢＩＮＧ−４、ＣＰＳＦ、サイクリンＤ１、ＤＫＫ１、ＥＮＡＨ（ｈＭｅｎａ）、ＥＰ−ＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、ＥＺＨ２、ＦＧＦ５、Ｇ２５０／ＭＮ／ＣＡＩＸ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＩＬ１３Ｒａｌｐｈａ２、腸カルボキシルエステラーゼ、アルファフェトプロテイン、Ｍ−ＣＳＦＴ、ＭＣＳＰ、ｍｄｍ−２、ＭＭＰ−２、ＭＵＣ１、ｐ５３、ＰＢＦ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ−１、ＲＧＳ５、ＲＮＦ４３、ＲＵ２ＡＳ、セセルニン（ｓｅｃｅｒｎｉｎ）１、ＳＯＸ１０、ＳＴＥＡＰ１、サバイビン、テロメラーゼ、ＶＥＧＦ、ＢＲＣＡ１、もしくはそれらの修飾バリアント、スプライスバリアント、機能性エピトープ、エピトープアゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせに由来していてもよい。腫瘍関連抗原は、通常は宿主により発現されない抗原であってもよく、それらは、変異しているか、短縮されているか、ミスフォールドされているか、そうでなければ宿主により通常発現される分子の異常な顕在化で有り得、通常発現される分子と同一であるが、異常に高いレベルで発現されるものであってもよく、または異常な状況または環境で発現されるものであってもよい。腫瘍関連抗原は、例えば、タンパク質またはタンパク質断片、複合糖質、ガングリオシド、ハプテン、核酸、他の生体分子、またはそれらの任意の組み合わせであってもよい。
【０１２５】
追加の標的
エピトープは、間質エピトープであってもよい。そのようなエピトープは、腫瘍微細環境の間質上にあってもよい。抗原は、間質抗原であってもよい。そのような抗原は、腫瘍微細環境の間質上にあってもよい。そうした抗原およびそうしたエピトープは、幾つか例を挙げると、例えば、腫瘍内皮細胞、腫瘍血管、腫瘍線維芽細胞、腫瘍周皮細胞、腫瘍間質、および／または腫瘍間葉細胞上に存在していてもよい。こうした抗原は、例えば、ＣＤ３４、ＭＣＳＰ、ＦＡＰ、ＣＤ３１、ＰＣＮＡ、ＣＤ１１７、ＣＤ４０、ＭＭＰ４、および／またはテネイシンを含んでいてもよい。
【０１２６】
さらに、発現に必要とされるものではないが、外因性配列としては、転写または翻訳調節配列、例えばプロモーター、エンハンサー、インスレーター、内部リボソーム進入部位、２Ａペプチドをコードする配列、および／またはポリアデニル化シグナルも挙げることができる。
【０１２７】
一部の場合では、外因性配列（例えば、導入遺伝子）は、目的のタンパク質と、その融合パートナーとしての膜タンパク質の細胞外ドメインとの融合物を含み、融合タンパク質が、細胞の表面に配置される。一部の場合では、導入遺伝子はＣＡＲをコードし、ＣＡＲコード配列は、ＴＣＲが発現されるようにセーフハーバー（ｓａｆｅ  ｈａｒｂｏｒ）に挿入される。一部の場合では、ＣＡＲコード配列は、ＰＤ１および／またはＣＴＬＡ−４遺伝子座に挿入される。他の場合では、ＣＡＲは、ランダム挿入の場合、レンチウイルスで細胞に送達され、ＰＤ１−またはＣＴＬＡ−４特異的ヌクレアーゼは、ｍＲＮＡとして供給することができる。一部の場合では、ＣＡＲは、セーフハーバー（例えば、ＡＡＶＳ１、ＣＣＲ５、アルブミン、またはＨＰＲＴ）に特異的なヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡと共に、レトロウイルス、ＡＡＶ、またはアデノウイルス等のウイルスベクター系により送達される。また、細胞は、ＰＤ１および／またはＣＴＬＡ−４特異的ヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡで処理してもよい。一部の場合では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドは、ＨＰＲＴ特異的ヌクレアーゼおよびＰＤ１−またはＣＴＬＡ−４特異的ヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡと共に、ウイルス送達系により供給される。ある特定の態様において本方法および組成物と共に使用することができるＣＡＲとしては、第一世代、第二世代、および第三世代の設計を含む、こうしたキメラタンパク質の全てのタイプが挙げられる。抗体由来の特異性ドメインを含むＣＡＲが特に有用であり得るが、受容体、リガンド、および操作されたポリペプチドに由来する特異性ドメインも想定することができる。細胞間シグナル伝達ドメインは、ゼータ等のＴＣＲ鎖、ならびにγおよびＥ鎖等のＣＤ３複合体の他のメンバーに由来していてもよい。一部の場合では、ＣＡＲは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４−１ＢＢとしても公知である）、またはＣＤ１３４に由来する細胞間ドメイン等の追加の共刺激ドメインを含んでいてもよい。またさらなる場合では、２つのタイプの共刺激ドメインを、同時に使用することができる（例えば、ＣＤ３ゼータをＣＤ２８＋ＣＤ１３７と共に使用する）。
【０１２８】
一部の場合では、操作された細胞は、ＣＤ４５ＲＯ（−）、ＣＣＲ７（＋）、ＣＤ４５ＲＡ（＋）、ＣＤ６２Ｌ＋（Ｌ−セレクチン）、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、および／またはＩＬ−７Ｒα＋で構成される幹メモリーＴＳＣＭ細胞であってもよい。また、幹メモリー細胞（ｓｔｅｍ  ｍｅｍｏｒｙ  ｃｅｌｌ）は、ＣＤ９５、ＩＬ−２Ｒβ、ＣＸＣＲ３、および／またはＬＦＡ−１を発現し、幹メモリー細胞に特有な多数の機能的属性を示すことができる。また、操作された細胞は、Ｌ−セレクチンおよびＣＣＲ７を含むセントラルメモリーＴＣＭ細胞であってもよく、セントラルメモリー細胞は、例えば、ＩＬ−２を分泌することができるが、ＩＦＮγまたはＩＬ−４を分泌することはできない。また、操作された細胞は、Ｌ−セレクチンまたはＣＣＲ７を含むエフェクターメモリーＴＥＭ細胞であってもよく、例えば、ＩＦＮγおよびＩＬ−４等のエフェクターサイトカインを産生することができる。
【０１２９】
細胞膜内へのベクターの送達
ヌクレアーゼおよび転写因子、それらをコードするポリヌクレオチド、ならびに／または本明細書に記載のタンパク質および／もしくはポリヌクレオチドを含む任意の導入遺伝子ポリヌクレオチドおよび組成物は、任意の好適な手段により標的細胞に送達することができる。
【０１３０】
ベクター系。幾つかのウイルスに基づくシステムが、哺乳動物細胞への遺伝子移入用に開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系の便利なプラットフォームを提供する。選択した遺伝子を、ベクターに挿入し、当技術分野で公知の技法を使用して、レトロウイルス粒子にパッケージングすることができる。レンチウイルス等のレトロウイルスに由来するベクターは、導入遺伝子の長期的で安定した組込み、および娘細胞でのその伝播を可能にするため、長期遺伝子移入を達成するための好適なツールである。レンチウイルスベクターは、非増殖性細胞に形質導入することができるという点で、マウス白血病ウイルス等のオンコレトロウイルスに由来するベクターよりも、さらなる利点がある。また、レンチウイルスベクターには、免疫原性が低いというさらなる利点がある。アデノウイルスベクターは、標的細胞のゲノムに組み込まれないため、負の組込み関連事象が回避されるという利点を有する。
【０１３１】
第一世代またはＥｌ欠失アデノウイルスベクターＡｄ５［Ｅ１−］は、導入遺伝子が、遺伝子のＥｌ領域のみを置換するように構築されている。例えば、野生型Ａｄ５ゲノムの約９０％は、ベクターに保持される。Ａｄ５［Ｅ１−］ベクターは、複製能力が低く、Ａｄ５  Ｅｌ遺伝子を発現しない細胞に感染した後で感染性ウイルスを産生することができない。組換えＡｄ５［Ｅ１−］ベクターは、ヒト細胞（例えば、２９３細胞、しかしながら他の適切な細胞も使用することができる）中で伝播し、Ａｄ５［Ｅ１−］ベクター複製およびパッケージングが可能である。Ａｄ５［Ｅ１−］ベクターは、幾つかの肯定的な属性を有する。その１つは、スケールアップおよびｃＧＭＰ生産が比較的容易であることである。加えて、Ａｄ５ベクターは、組込みを起こさず、それらのゲノムはエピソーム性のままであり得る。一般的に、宿主ゲノムに組み込まれないベクターの場合、レトロウイルスおよびレンチウイルスに基づく系とは対照的に、挿入変異誘発および／または生殖系列伝播のリスクは、たとえあったとしても非常に低い。従来のＡｄ５［Ｅ１−］ベクターは、ほぼ７ｋｂの収容能力を有する。
【０１３２】
Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］プラットフォームは、複数遺伝子の包含を可能にすることができる拡張クローニング能力を有する（Ｈａｒｔｉｇａｎ−Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒら、２００２年、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ、３４６巻、２２４〜２４６頁）。Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］ベクターは、Ａｄ５［Ｅ１−］ベクターの能力が７ｋｂであることと比較して、最大約１２ｋｂの遺伝子収容能力を有し、必要に応じて複数遺伝子のための空間を提供する。一部の実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１ｋｂよりも大きなインサートが、Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］ベクター等のＡｄ５ベクターに導入される。Ｅ２ｂ領域の欠失は、有利な免疫特性をＡｄ５ベクターに付与し、Ａｄウイルスタンパク質に対する免疫応答を最小限に抑えつつ、導入遺伝子抗原を標的とするための強力な免疫応答を引き出すことが多い。
【０１３３】
ある特定の態様は、欠失Ｅ２ｂ遺伝子産物を発現する細胞株を利用するＥ２ｂ欠失アデノウイルスベクターの使用を企図し得る。また、ある特定の態様は、そのようなパッケージング細胞株、例えば、ＨＥＫ−２０３細胞株に由来するＥ．Ｃ７（正式にはＣ−７と呼ばれる）を提供することができる。Ａｍａｌｆｉｔａｎｏら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、１９９６年、９３巻、３３５２〜３３５６頁；Ａｍａｌｆｉｔａｎｏら、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ、１９９７年、４巻、２５８〜２６３頁。
【０１３４】
Ｅ．Ｃ７または類似の好適な細胞中で、Ｅ２ｂ遺伝子産物、ＤＮＡポリメラーゼ、および末端タンパク質前駆体（ｐｒｅ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ）を、Ｅｌ遺伝子産物と共に構成的に発現させることができる。Ａｄゲノムに由来する遺伝子セグメントの産生細胞株への移入は、収容能力の増加、および複製可能なＡｄを生成する能力の低下等の利点を有する場合があり、複製可能なＡｄの生成には、２つまたはそれよりも多くの独立した組換え事象が必要であり得る。使用されるＥｌ、Ａｄ  ＤＮＡポリメラーゼ、および／または末端タンパク質前駆体発現細胞株は、夾雑ヘルパーウイルスを必要とせずに、ほぼ１３ｋｂの収容能力を有するアデノウイルスベクターの伝播を可能にすることができる。Ｍｉｔａｎｉら、１９９５年、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、９２巻、３８５４頁；Ｈｏｄｇｅｓら、２０００年、Ｊ  Ｇｅｎｅ  Ｍｅｄ、２巻、２５０〜２５９頁。
【０１３５】
ある特定の場合では、ウイルスライフサイクルに重要な遺伝子を欠失させると（例えば、Ｅ２ｂ遺伝子）、Ａｄの複製または他のウイルス遺伝子タンパク質発現のさらなる障害が生じる。これは、ウイルスに感染した細胞の免疫認識を低下させ、外来導入遺伝子発現の持続時間延長を可能にすることができる。
【０１３６】
本明細書に記載されているような転写因子およびヌクレアーゼは、例えば、１つまたは複数のタンパク質をコードする配列を含有するベクターを使用して送達することができる。ポリヌクレオチドをコードする導入遺伝子を同様に送達することができる。これらに限定されないが、プラスミドベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルスベクター等を含む、任意のベクター系を使用することができる。さらに、こうしたベクターはいずれも、１つまたは複数の転写因子、ヌクレアーゼ、および／または導入遺伝子を含むことができる。
【０１３７】
従来のウイルス系および非ウイルス系遺伝子移入法を使用して、操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ分子、ＴＡＬＥＮ分子、トランスポゾンに基づく分子、ＺＥＮ分子、メガヌクレアーゼ分子、もしくはＭｅｇａ−ＴＡＬ分子をコードする核酸、および／または導入遺伝子を、細胞（例えば、哺乳動物細胞）および標的組織に導入することができる。また、そのような方法を使用して、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ分子、ＴＡＬＥＮ分子、トランスポゾンに基づく分子、ＺＥＮ分子、メガヌクレアーゼ分子、もしくはＭｅｇａ−ＴＡＬ分子をコードする核酸、および／または導入遺伝子を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞に投与することができる。一部の例では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ分子、ＴＡＬＥＮ分子、トランスポゾンに基づく分子、ＺＥＮ分子、メガヌクレアーゼ分子、もしくはＭｅｇａ−ＴＡＬ分子をコードする核酸、および／または導入遺伝子を、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ免疫療法で使用するために投与することができる。非ウイルスベクター送達系としては、ＤＮＡプラスミド、ネイキッド核酸、およびリポソームまたはポロキサマー等の送達ビヒクルと複合体化された核酸を挙げることができる。ウイルスベクター送達系としては、細胞への送達後にエピソーム性であるかかまたは組み込まれたゲノムを有するＤＮＡおよびＲＮＡウイルスを挙げることができる。
【０１３８】
核酸を非ウイルス送達するための方法としては、エレクトロポレーション、リポフェクション、ヌクレオフェクション、金ナノ粒子送達法、マイクロインジェクション、遺伝子銃、ビロソーム、リポソーム、免疫リポソーム、ポリカチオンまたは脂質：核酸コンジュゲート、ネイキッドＤＮＡ、ｍＲＮＡ、人工ビリオン、およびＤＮＡの薬剤増強性取込みが挙げられる。例えば、Ｓｏｎｉｔｒｏｎ  ２０００系（Ｒｉｃｈ−Ｍａｒ）を使用したソノポレーションも、核酸の送達に使用することができる。
【０１３９】
また、操作されたＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ分子、ＴＡＬＥＮ分子、トランスポゾンに基づく分子、ＺＥＮ分子、メガヌクレアーゼ分子、もしくはＭｅｇａ−ＴＡＬ分子をコードする核酸、トランスポゾン、および／または導入遺伝子を含有するウイルスベクターおよび非ウイルスベクターを含むベクターを、細胞形質導入用の生物にｉｎ  ｖｉｖｏで直接投与してもよい。あるいは、ネイキッドＤＮＡまたはｍＲＮＡを投与してもよい。投与は、これらに限定されないが、注射、注入、局所適用、およびエレクトロポレーションを含む、分子を導入して最終的に血液または組織細胞と接触させるために通常使用される経路のいずれかによる。１つよりも多くの経路を使用して、特定の組成物を投与してもよい。薬学的に許容される担体は、部分的には、投与しようとする特定の組成物より、ならびに組成物を投与するために使用される特定の方法により決定される。
【０１４０】
ベクターを使用して、遺伝子、例えば導入遺伝子または目的の遺伝子の部分を発現させることができる。遺伝子の部分または遺伝子は、任意の方法を使用することにより挿入することができる。例えば、方法は、制限酵素に基づく技法であってもよい。
【０１４１】
ベクターは、下記に記載されているように、全身性投与（例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、または頭蓋内注入）または局所適用で個々の患者に投与することにより、ｉｎ  ｖｉｖｏで送達することができる。あるいは、ベクターを、個々の患者から外植した細胞（例えば、リンパ球、Ｔ細胞、骨髄穿刺液、組織生検材料）等の細胞にｅｘ  ｖｉｖｏで送達し、その後、通常は、ベクターを取り込んだ細胞を選択した後で、そうした細胞を患者に再移植してもよい。選択前または選択後に、細胞を増大させてもよい。
【０１４２】
好適な細胞
細胞を増大および遺伝子改変する前に、細胞の供給源を、被験体から得ることができる。一部の場合では、Ｔ細胞を得ることができる。Ｔ細胞は、ＰＢＭＣ、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、および感染部位に由来する組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含む、幾つかの供給源から得ることができる。
【０１４３】
ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離等の、当業者に公知の任意の数の技法を使用して、被験体から収集した１単位の血液から得ることができる。一実施形態では、アフェレーシスにより、個体の循環血液に由来する細胞を得る。アフェレーシス産物は、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球細胞、赤血球細胞、および血小板を含有する、リンパ球を含んでいてもよい。一実施形態では、アフェレーシスにより収集された細胞を洗浄して血漿画分を除去し、その後の処理ステップのために適切な緩衝液または媒体に細胞を入れてもよい。
【０１４４】
使用されるＣＡＲ  Ｔ産物のＴ細胞サブセットの組成は、非常に不均質であり得る。好ましい実施形態では、使用される細胞は、大部分が、不均質な割合のＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞で構成されている場合がある。ＣＤ４およびＣＤ８細胞は、循環エフェクターＴ細胞の表現型特徴を有する場合がある。また、ＣＤ４およびＣＤ８細胞は、エフェクターメモリー細胞の表現型特徴を有する場合がある。別の実施形態では、細胞は、セントラルメモリー細胞であってもよい。
【０１４５】
好適な細胞としては、これらに限定されないが、真核および原核細胞および／または細胞株を挙げることができる。そのような細胞またはそのような細胞から生成された細胞株の非限定的な例としては、ＣＯＳ、ＣＨＯ（例えば、ＣＨＯ−Ｓ、ＣＨＯ−Ｋ１、ＣＨＯ−ＤＧ４４、ＣＨＯ−ＤＵＸＢ１１、ＣＨＯ−ＤＵＫＸ、ＣＨＯＫ１ＳＶ）、ＶＥＲＯ、ＭＤＣＫ、ＷＩ３８、Ｖ７９、Ｂ１４ＡＦ２８−Ｇ３、ＢＨＫ、ＨａＫ、ＮＳＯ、ＳＰ２／０−Ａｇ１４、ＨｅＬａ、ＨＥＫ２９３（例えば、ＨＥＫ２９３−Ｆ、ＨＥＫ２９３−Ｈ、ＨＥＫ２９３−Ｔ）、およびｐｅｒＣ６細胞、ならびにＳｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｕｇｉｐｅｒｄａ（Ｓｆ）等の昆虫細胞、またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ、およびＳｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ等の真菌細胞が挙げられる。一部の場合では、細胞株は、ＣＨＯ−Ｋ１、ＭＤＣＫ、またはＨＥＫ２９３細胞株である。一部の場合では、好適な初代細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）、およびこれらに限定されないが、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、単球、ナチュラルキラーＴ細胞、単球前駆細胞、造血幹細胞、または非多能性幹細胞等の他の血液細胞サブセットが挙げられる。一部の場合では、細胞は、ＣＤ３＋  Ｔ細胞、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、または任意の他のタイプのＴ細胞等の、腫瘍浸潤細胞（ＴＩＬ）等の任意のＴ細胞を含む任意の免疫細胞であってもよい。また、Ｔ細胞としては、メモリーＴ細胞、メモリー幹Ｔ細胞、またはエフェクターＴ細胞を挙げることができる。
【０１４６】
また、Ｔ細胞は、バルク集団から選択してもよく、例えば、全血からＴ細胞を選択してもよい。また、Ｔ細胞は、バルク集団から増大させてもよい。また、Ｔ細胞は、特定の集団および表現型に偏っていてもよい。例えば、Ｔ細胞は、表現型的に、ＣＤ４５ＲＯ（−）、ＣＣＲ７（＋）、ＣＤ４５ＲＡ（＋）、ＣＤ６２Ｌ（＋）、ＣＤ２７（＋）、ＣＤ２８（＋）、および／またはＩＬ−７Ｒα（＋）を含むように偏っていてもよい。
【０１４７】
ＣＤ４５ＲＯ（−）、ＣＣＲ７（＋）、ＣＤ４５ＲＡ（＋）、ＣＤ６２Ｌ（＋）、ＣＤ２７（＋）、ＣＤ２８（＋）、および／またはＩＬ−７Ｒα（＋）を含むリストから選択される１つまたは複数のマーカーを含む好適な細胞を選択することができる。
【０１４８】
また、好適な細胞としては、例として、胚幹細胞、人工多能性幹細胞、造血幹細胞、ニューロン幹細胞、および間葉系幹細胞等の幹細胞が挙げられる。好適な細胞は、ヒト細胞、非ヒト細胞、および／またはマウス細胞等の、任意の数の初代細胞を含んでいてもよい。好適な細胞は、前駆細胞であってもよい。好適な細胞は、処置しようとする被験体（例えば、患者）に由来していてもよい。好適な細胞は、ヒトドナーに由来していてもよい。
【０１４９】
好適な細胞は、ＣＤ４５ＲＯ（−）、ＣＣＲ７（＋）、ＣＤ４５ＲＡ（＋）、ＣＤ６２Ｌ＋（Ｌ−セレクチン）、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、およびＩＬ−７Ｒα＋で構成される幹メモリーＴＳＣＭ細胞であってもよく、また、幹メモリー細胞は、ＣＤ９５、ＩＬ−２Ｒβ、ＣＸＣＲ３、およびＬＦＡ−１を発現することができ、幹メモリー細胞に特有な多数の機能的属性を示すことができる。
【０１５０】
好適な細胞は、Ｌ−セレクチンおよびＣＣＲ７を含むセントラルメモリーＴＣＭ細胞であってもよく、セントラルメモリー細胞は、例えば、ＩＬ−２を分泌することができるが、ＩＦＮγまたはＩＬ−４を分泌することはできない。また、好適な細胞は、Ｌ−セレクチンまたはＣＣＲ７を含むエフェクターメモリーＴＥＭ細胞であってもよく、例えば、ＩＦＮγおよびＩＬ−４等のエフェクターサイトカインを産生することができる。
【０１５１】
好適な細胞を獲得するための方法は、細胞を選択することを含んでいてもよい。一部の場合では、細胞は、細胞を選択することができるマーカーを含んでいてもよい。例えば、そのようなマーカーは、ＧＦＰ、耐性遺伝子、細胞表面マーカー、または内因性タグを含んでいてもよい。細胞は、任意の内因性マーカーを使用して選択することができる。好適な細胞は、任意の技術を使用して選択することができる。そのような技術は、フローサイトメトリーおよび／または磁気カラムを含んでいてもよい。選択された細胞は、その後被験体に注入することができる。また、選択された細胞を増大して、数を増やしてもよい。選択された細胞を、注入前に増大してもよい。
【０１５２】
医薬組成物および製剤
全体にわたって記載されている組成物は、医薬品に製剤化することができ、それを必要とするヒトまたは哺乳動物を処置するために、または疾患（例えば、がん）を診断するために使用することができる。そうした医薬は、１つまたは複数の化学療法剤または化学療法化合物と共に、１つまたは複数のＴ細胞（例えば、操作されたＴ細胞）により、ヒトまたは哺乳動物に同時投与することができる。
【０１５３】
ＣＡＲ  Ｔ細胞の集団は、当業者に公知の技法を使用して被験体に投与するために製剤化することができる。ＣＡＲ  Ｔ細胞の集団を含む製剤は、薬学的に許容される賦形剤を含んでいてもよい。製剤に含まれる賦形剤は、例えば、使用されるＴ細胞の部分集団および投与形式に応じて、様々な目的を有することになる。一般的に使用される賦形剤の例としては、限定ではないが、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、注射用水、グリセロール、エタノール、およびそれらの組み合わせ、安定化剤、可溶化剤、および界面活性剤、緩衝剤、および保存剤、張度剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ  ａｇｅｎｔ）、増量剤、および滑沢剤が挙げられた。ＣＡＲ  Ｔ細胞の集団を含む製剤は、動物血清等の、任意の非ヒト成分の非存在下で調製および培養されていてもよい。製剤は、ＣＡＲ  Ｔ細胞の１つの集団、またはＣＡＲ  Ｔ細胞の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、もしくはそれよりも多くの集団等の、１つよりも多くの集団を含んでいてもよい。
【０１５４】
ＣＡＲ  Ｔ細胞の集団を含む製剤は、当業者に公知の形式および技法を使用して、被験体に投与することができる。例示的な形式としては、これに限定されないが、静脈内注射が挙げられる。他の形式としては、限定ではないが、腫瘍内、皮内、皮下（Ｓ．Ｃ．、ｓ．ｑ．、ｓｕｂ−Ｑ、Ｈｙｐｏ）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）、動脈内、髄内、心臓内、関節内（関節）、滑液包内（滑液区域）、頭蓋内、脊髄内、および髄腔内（髄液）が挙げられる。製剤の非経口注射または注入に有用な任意の公知のデバイスを使用して、そのような投与を実行することができる。
【０１５５】
被験体に投与される、ＣＡＲ  Ｔ細胞の集団を含む製剤は、特定の適応症または疾患の処置および／または予防に有効な個数のＣＡＲ  Ｔ細胞を含む。したがって、治療有効集団のＣＡＲ  Ｔ細胞が被験体に投与される。一般的に、約１×１０４個〜約１×１０１０個の間のＣＡＲ  Ｔ細胞を含む製剤が投与される。ほとんどの場合、製剤は、約１×１０５個〜約１×１０９個の間のＣＡＲ  Ｔ細胞、約５×１０５個から約５×１０８個のＣＡＲ  Ｔ細胞、または約１×１０６個から約１×１０７個のＣＡＲ  Ｔ細胞を含むことになる。しかしながら、被験体に投与されるＣＡＲ  Ｔ細胞の個数は、がんの位置、源、正体、範囲、および重症度、処置しようとする個体の年齢および状態等に応じて、幅広い範囲で変動するであろう。使用する適切な投与量は、最終的には、医師により決定されることになる。
【０１５６】
ＣＡＲ  Ｔ細胞の投与前、投与と同時に、または投与後に、腫瘍標的化分子が被験体に投与される。腫瘍標的化分子は、腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原と会合することにより、被験体中の標的細胞に結合する。腫瘍標的化分子は、当業者に公知の技法を使用して被験体に投与するために製剤化することができる。腫瘍標的化分子の製剤は、薬学的に許容される賦形剤を含んでいてもよい。一般的に使用される賦形剤の例はとしては、限定ではないが、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、注射用水、グリセロール、エタノール、およびそれらの組み合わせ、安定化剤、可溶化剤、および界面活性剤、緩衝剤、および保存剤、張度剤、増量剤、および滑沢剤が挙げられる。
【０１５７】
腫瘍標的化分子は、当業者に公知の形式および技法を使用して、被験体に投与することができる。例示的な形式としては、これらに限定されないが、静脈内、腹腔内、および腫瘍内注射が挙げられる。他の形式としては、限定ではないが、皮内、皮下（Ｓ．Ｃ．、ｓ．ｑ．、ｓｕｂ−Ｑ、Ｈｙｐｏ）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、動脈内、髄内、心臓内、関節内（関節）、滑液包内（滑液区域）、頭蓋内、脊髄内、および髄腔内（髄液）が挙げられる。製剤の非経口注射または注入に有用な任意の公知のデバイスを使用して、そのような投与を実行することができる。
【０１５８】
腫瘍標的化分子を含む製剤は、特定の適応症または疾患の処置および／または予防に有効な量で被験体に投与される。一般的に、少なくとも約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重の腫瘍標的化分子を含む製剤が、処置を必要とする被験体に投与される。ほとんどの場合、投与量は、投与経路、症状等を考慮して、１日約１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ体重までのタグ付きタンパク質である。使用する適切な投与量は、医師により決定されることになる。
【０１５９】
一実施形態では、キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞媒介性免疫応答を刺激するために使用される。Ｔ細胞媒介性免疫応答は、Ｔ細胞の活性化に関与する免疫応答である。活性化された抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞は、例えば、腫瘍抗原を提示するがん細胞等の、外来性抗原のエピトープをそれらの表面に提示する標的細胞のアポトーシスを誘導することができる。
【０１６０】
別の実施形態では、キメラ抗原受容体は、哺乳動物に抗腫瘍免疫を提供するために使用される。被験体は、Ｔ細胞媒介性免疫応答により、抗腫瘍免疫を発生させることになる。
【０１６１】
がんを有する被験体を処置する方法であって、処置を必要とする被験体に、腫瘍標的化分子の１つまたは複数の製剤を投与するステップであって、それら分子ががん細胞に結合する、ステップ、および１つまたは複数の治療有効集団のＣＡＲ  Ｔ細胞を投与するステップであって、ＣＡＲ  Ｔ細胞が、腫瘍標的化分子に結合し、がん細胞死を誘導する、ステップを含む方法を提供することができる。
【０１６２】
別の実施形態は、がんを有する被験体を処置する方法であって、処置を必要とする被験体に、１つまたは複数の治療有効集団のＣＡＲ  Ｔ細胞を投与するステップであって、ＣＡＲ  Ｔ細胞が、がん細胞に結合し、それによりがん細胞死を誘導する、ステップを含む方法に関する。
【０１６３】
ＣＡＲ  Ｔ細胞を含む製剤および腫瘍標的化分子と組み合わせたＣＡＲ  Ｔ細胞を含む製剤の投与頻度は両方とも、処置しようとする疾患、ＣＡＲ  Ｔ細胞および腫瘍標的化分子を含む構成要素、および投与形式を含む要因に応じて様々となる。各製剤は、独立して、１日４回、１日３回、１日２回、または１日１回、２日に１回、３日に１回、４日に１回、５日に１回、６日に１回、１週間に１回、８日に１回、９日に１回、１０日に１回、２週に１回、月１回、および２か月に１回、投与することができる。
【０１６４】
「化学療法剤」または「化学療法化合物」およびそれらの文法的等価物は、本明細書で使用される場合、がんの処置に有用な化学化合物であり得る。本開示のＴ細胞と組み合わせて使用することができる化学療法がん薬剤としては、これらに限定されないが、有糸分裂阻害剤（ビンカアルカロイド）が挙げられる。有糸分裂阻害剤としては、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、およびＮａｖｅｌｂｉｎｅ（商標）（ビノレルビン、５’−ノルアンヒドロブラスチン（５’−ｎｏｒａｎｈｙｄｒｏｂｌａｓｔｉｎｅ））が挙げられる。さらに他の実施形態では、化学療法がん薬剤としては、カンプトテシン化合物等のトポイソメラーゼＩ阻害剤が挙げられる。本明細書で使用される場合、「カンプトテシン化合物」としては、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（商標）（イリノテカンＨＣＬ）、Ｈｙｃａｍｔｉｎ（商標）（トポテカンＨＣＬ）、およびカンプトテシンおよびその類似体に由来する他の化合物が挙げられる。本明細書で開示されている方法および組成物に使用することができる別のカテゴリーの化学療法がん薬剤は、エトポシド、テニポシド、およびミトポドジド（ｍｉｔｏｐｏｄｏｚｉｄｅ）等のポドフィロトキシン誘導体である。本開示は、腫瘍細胞の遺伝物質をアルキル化する、アルキル化剤として公知である他の化学療法がん薬剤をさらに包含する。それらとしては、限定ではないが、シスプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、トリメチレンチオホスホルアミド、カルムスチン、ブスルファン、クロラムブシル、ベルスチン（ｂｅｌｕｓｔｉｎｅ）、ウラシルマスタード、クロマファジン（ｃｈｌｏｍａｐｈａｚｉｎ）、およびダカルバジンが挙げられる。本開示は、化学療法剤としての代謝拮抗剤を包含する。そうしたタイプの薬剤の例としては、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル、メトトレキセート、メルカプトプリン、アザチオプリム（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｍｅ）、およびプロカルバジンが挙げられる。本明細書で開示されている方法および組成物に使用することができる追加のカテゴリーの化学療法がん薬剤としては、抗生物質が挙げられる。例としては、限定ではないが、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ミトラマイシン、マイトマイシン、マイトマイシンＣ（ｍｙｔｏｍｙｃｉｎ  Ｃ）、およびダウノマイシンが挙げられる。こうした化合物には、商業的に入手可能な多数のリポソーム製剤がある。本開示は、限定ではないが、抗腫瘍抗体、ダカルバジン、アザシチジン、アムサクリン、メルファラン、イホスファミド、およびミトキサントロンを含む、他の化学療法がん薬剤をさらに包含する。
【０１６５】
本明細書で開示されている細胞は、細胞傷害性薬剤／抗腫瘍剤および抗血管新生剤を含む他の抗腫瘍薬剤と組み合わせて投与することができる。細胞傷害性薬剤／抗腫瘍剤は、がん細胞を攻撃し死滅させる薬剤として定義することができる。幾つかの細胞傷害性薬剤／抗腫瘍剤は、例えば、シス−プラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、トリメチレンチオホスホルアミド、カルムスチン、ブスルファン、クロラムブシル、ベルスチン、ウラシルマスタード、クロマファジン、およびダカバジン（ｄａｃａｂａｚｉｎｅ）等の、腫瘍細胞の遺伝物質をアルキル化するアルキル化剤であってもよい。他の細胞傷害性薬剤／抗腫瘍剤は、腫瘍細胞の代謝拮抗剤、例えば、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル、メトトレキセート、メルカプトプイリン（ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｉｒｉｎｅ）、アザチオプリム、およびプロカルバジンであってもよい。他の細胞傷害性薬剤／抗腫瘍剤は、抗生物質、例えばドキソルビシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ミトラマイシン、マイトマイシン、マイトマイシンＣ、およびダウノマイシンであってもよい。こうした化合物には、商業的に入手可能な多数のリポソーム製剤がある。さらに他の細胞傷害性薬剤／抗腫瘍剤は、有糸分裂阻害剤（ビンカアルカロイド）であってもよい。有糸分裂阻害剤としては、ビンクリスチン、ビンブラスチン、およびエトポシドが挙げられる。その他の細胞傷害性薬剤／抗腫瘍剤としては、タキソールおよびその誘導体、Ｌ−アスパラギナーゼ、抗腫瘍抗体、ダカルバジン、アザシチジン、アムサクリン、メルファラン、ＶＭ−２６、イホスファミド、ミトキサントロン、およびビンデシンが挙げられる。
【０１６６】
抗血管新生剤も使用することができる。本開示の方法および組成物で使用するための好適な抗血管新生剤としては、ヒト化およびキメラ抗体を含む抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦアプタマー、およびアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられる。血管新生の他の阻害剤としては、アンギオスタチン、エンドスタチン、インターフェロン、インターロイキン１（αおよびβを含む）、インターロイキン１２、レチノイン酸、ならびに組織メタロプロテアーゼ阻害物質−１および−２（ＴＩＭＰ−１および−２）が挙げられる。また、抗血管新生活性を有するトポイソメラーゼＩＩ阻害剤であるラゾキサン等のトポイソメラーゼを含む、小分子を使用することができる。
【０１６７】
本開示のＴ細胞と組み合わせて使用することができる他の抗がん剤としては、これらに限定されないが、アシビシン；アクラルビシン；塩酸アコダゾール；アクロニン；アドゼレシン；アルデスロイキン；アルトレタミン；アンボマイシン；酢酸アメタントロン；アミノグルテチミド；アムサクリン；アナストロゾール；アントラマイシン；アスパラギナーゼ；アスペルリン（ａｓｐｅｒｌｉｎ）；アバスチン；アザシチジン；アゼテパ；アゾトマイシン；バチマスタット；ベンゾデパ；ビカルタミド；塩酸ビサントレン；ジメシル酸ビスナフィド（ｂｉｓｎａｆｉｄｅ  ｄｉｍｅｓｙｌａｔｅ）；ビセレシン；硫酸ブレオマイシン；ブレキナルナトリウム；ブロピリミン；ブスルファン；カクチノマイシン；カルステロン；カラセミド；カルベチマー（ｃａｒｂｅｔｉｍｅｒ）；カルボプラチン；カルムスチン；塩酸カルビシン；カルゼレシン；セデフィンゴール；クロラムブシル；シロレマイシン（ｃｉｒｏｌｅｍｙｃｉｎ）；シスプラチン；クラドリビン；メシル酸クリスナトール（ｃｒｉｓｎａｔｏｌ  ｍｅｓｙｌａｔｅ）；シクロホスファミド；シタラビン；ダカルバジン；ダクチノマイシン；塩酸ダウノルビシン；デシタビン；デキソルマプラチン（ｄｅｘｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）；デザグアニン；メシル酸デザグアニン；ジアジクオン；ドセタキセル；ドキソルビシン；塩酸ドキソルビシン；ドロロキシフェン；クエン酸ドロロキシフェン；プロピオン酸ドロモスタノロン；ズアゾマイシン（ｄｕａｚｏｍｙｃｉｎ）；エダトレキセート；塩酸エフロルニチン；エルサミトルシン（ｅｌｓａｍｉｔｒｕｃｉｎ）；エンロプラチン（ｅｎｌｏｐｌａｔｉｎ）；エンプロメート（ｅｎｐｒｏｍａｔｅ）；エピプロピジン（ｅｐｉｐｒｏｐｉｄｉｎｅ）；塩酸エピルビシン；エルブロゾール（ｅｒｂｕｌｏｚｏｌｅ）；塩酸エソルビシン；エストラムスチン；リン酸エストラムスチンナトリウム；エタニダゾール；エトポシド；リン酸エトポシド；エトプリン；塩酸ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フロクスウリジン；リン酸フルダラビン；フルオロウラシル；フルロシタビン；ホスキドン（ｆｏｓｑｕｉｄｏｎｅ）；ホストリエシンナトリウム；ゲムシタビン；塩酸ゲムシタビン；ヒドロキシ尿素；塩酸イダルビシン；イホスファミド；イルモホシン；インターロイキンＩＩ（組換えインターロイキンＩＩまたはｒＩＬ２を含む）；インターフェロンアルファ−２ａ；インターフェロンアルファ−２ｂ；インターフェロンアルファ−ｎ１；インターフェロンアルファ−ｎ３；インターフェロンベータ−Ｉ；インターフェロンガンマ−Ｉｂ；イプロプラチン（ｉｐｒｏｐｌａｔｉｎ）；塩酸イリノテカン；酢酸ランレオチド；レトロゾール；酢酸ロイプロリド；塩酸リアロゾール；ロメトレキソールナトリウム；ロムスチン；塩酸ロソキサントロン；マソプロコール；マイタンシン；塩酸メクロレタミン；酢酸メゲストロール；酢酸メレンゲストロール；メルファラン；メノガリル；メルカプトプリン；メトトレキセート；メトトレキセートナトリウム；メトプリン；メツレデパ；ミチンドミド（ｍｉｔｉｎｄｏｍｉｄｅ）；ミトカルシン（ｍｉｔｏｃａｒｃｉｎ）；ミトクロミン（ｍｉｔｏｃｒｏｍｉｎ）��ミトギリン（ｍｉｔｏｇｉｌｌｉｎ）；ミトマルシン（ｍｉｔｏｍａｌｃｉｎ）；マイトマイシン；ミトスペル（ｍｉｔｏｓｐｅｒ）；ミトタン；塩酸ミトキサントロン；ミコフェノール酸；ノコダゾール；ノガラマイシン；オルマプラチン（ｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）；オキシスラン（ｏｘｉｓｕｒａｎ）；パクリタキセル；ペグアスパルガーゼ；ペリオマイシン（ｐｅｌｉｏｍｙｃｉｎ）；ペンタムスチン；硫酸ペプロマイシン；ペルホスファミド；ピポブロマン；ピポスルファン；塩酸ピロキサントロン（ｐｉｒｏｘａｎｔｒｏｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；プリカマイシン；プロメスタン；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニムスチン；塩酸プロカルバジン；ピューロマイシン；塩酸ピューロマイシン；ピラゾフリン（ｐｙｒａｚｏｆｕｒｉｎ）；リボプリン（ｒｉｂｏｐｒｉｎｅ）；ログレチミド（ｒｏｇｌｅｔｉｍｉｄｅ）；サフィンゴール；塩酸サフィンゴール；セムスチン；シムトラゼン；スパルホサートナトリウム（ｓｐａｒｆｏｓａｔｅ  ｓｏｄｉｕｍ）；スパルソマイシン；塩酸スピロゲルマニウム；スピロムスチン；スピロプラチン；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；スロフェヌル（ｓｕｌｏｆｅｎｕｒ）；タリソマイシン（ｔａｌｉｓｏｍｙｃｉｎ）；テコガランナトリウム（ｔｅｃｏｇａｌａｎ  ｓｏｄｉｕｍ）；テガフール；塩酸テロキサントロン；テモポルフィン；テニポシド；テロキシロン；テストラクトン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チアゾフリン；チラパザミン；クエン酸トレミフェン；酢酸トレストロン；リン酸トリシリビン（ｔｒｉｃｉｒｉｂｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）；トリメトレキセート；グルクロン酸トリメトレキセート；トリプトレリン；塩酸ツブロゾール（ｔｕｂｕｌｏｚｏｌｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ウラシルマスタード；ウレデパ；バプレオチド（ｖａｐｒｅｏｔｉｄｅ）；ベルテポルフィン；硫酸ビンブラスチン；硫酸ビンクリスチン；ビンデシン；硫酸ビンデシン；硫酸ビネピジン（ｖｉｎｅｐｉｄｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）；硫酸ビングリシネート（ｖｉｎｇｌｙｃｉｎａｔｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）；硫酸ビンロイロシン（ｖｉｎｌｅｕｒｏｓｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）；酒石酸ビノレルビン；硫酸ビンロシジン（ｖｉｎｒｏｓｉｄｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）；硫酸ビンゾリジン（ｖｉｎｚｏｌｉｄｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）；ボロゾール；ゼニプラチン（ｚｅｎｉｐｌａｔｉｎ）；ジノスタチン；塩酸ゾルビシンが挙げられる。他の抗がん薬としては、これらに限定されないが、２０−ｅｐｉ−１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３；５−エチニルウラシル；アビラテロン；アクラルビシン；アシルフルベン；アデシペノール；アドゼレシン；アルデスロイキン；ＡＬＬ−ＴＫアンタゴニスト；アルトレタミン；アンバムスチン；アミドックス；アミホスチン；アミノレブリン酸；アムルビシン；アムサクリン；アナグレリド；アナストロゾール；アンドログラホリド（ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ）；血管新生阻害剤；アンタゴニストＤ；アンタゴニストＧ；アンタレリクス（ａｎｔａｒｅｌｉｘ）；抗背方化形態形成タンパク質−１（ａｎｔｉ−ｄｏｒｓａｌｉｚｉｎｇ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔ���ｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１）；抗アンドロゲン薬、前立腺癌；抗エストロゲン薬；アンチネオプラストン；アンチセンスオリゴヌクレオチド；アフィジコリングリシネート；アポトーシス遺伝子調節因子；アポトーシス制御因子；アプリン酸；ａｒａ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ；アルギニンデアミナーゼ；アスラクリン（ａｓｕｌａｃｒｉｎｅ）；アタメスタン（ａｔａｍｅｓｔａｎｅ）；アトリムスチン（ａｔｒｉｍｕｓｔｉｎｅ）；アキシナスタチン（ａｘｉｎａｓｔａｔｉｎ）１；アキシナスタチン２；アキシナスタチン３；アザセトロン；アザトキシン；アザチロシン；バッカチンＩＩＩ誘導体；バラノール；バチマスタット；ＣＡＲ／ＡＢＬアンタゴニスト；ベンゾクロリン（ｂｅｎｚｏｃｈｌｏｒｉｎ）；ベンゾイルスタウロスポリン；ベータラクタム誘導体；ベータ−アレチン；ベタクラマイシンＢ；ベツリン酸；ｂＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド；ビサントレン；ビスアジリジニルスペルミン（ｂｉｓａｚｉｒｉｄｉｎｙｌｓｐｅｒｍｉｎｅ）；ビスナフィド；ビストラテン（ｂｉｓｔｒａｔｅｎｅ）Ａ；ビセレシン；ブレフレート（ｂｒｅｆｌａｔｅ）；ブロピリミン；ブドチタン（ｂｕｄｏｔｉｔａｎｅ）；ブチオニンスルホキシミン；カルシポトリオール；カルホスチンＣ；カンプトテシン誘導体；カナリアポックスＩＬ−２；カペシタビン；カルボキサミド−アミノ−トリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；ＣａＲｅｓｔ  Ｍ３；ＣＡＲＮ７００；軟骨由来阻害剤；カルゼレシン；カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）；カスタノスペルミン；セクロピンＢ；セトロレリクス；クロリン；クロロキノキサリンスルホンアミド；シカプロスト；シス−ポルフィリン；クラドリビン；クロミフェン類似体；クロトリマゾール；コリスマイシンＡ；コリスマイシンＢ；コンブレタスタチンＡ４；コンブレタスタチン類似体；コナゲニン（ｃｏｎａｇｅｎｉｎ）；クランベシジン（ｃｒａｍｂｅｓｃｉｄｉｎ）８１６；クリスナトール（ｃｒｉｓｎａｔｏｌ）；クリプトフィシン８；クリプトフィシンＡ誘導体；クラシンＡ；シクロペンタアントラキノン；シクロプラタム（ｃｙｃｌｏｐｌａｔａｍ）；シペマイシン；シタラビンオクホスフェート；細胞溶解因子；シトスタチン；ダクリキシマブ（ｄａｃｌｉｘｉｍａｂ）；デシタビン；デヒドロジデムニン（ｄｅｈｙｄｒｏｄｉｄｅｍｎｉｎ）Ｂ；デスロレリン（ｄｅｓｌｏｒｅｌｉｎ）；デキサメタゾン；デキシホスファミド（ｄｅｘｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；デクスラゾキサン；デクスベラパミル；ジアジクオン；ジデムニンＢ；ジドックス；ジエチルノルスペルミン；ジヒドロ−５−アザシチジン；ジヒドロタキソール、９−；ジオキサマイシン；ジフェニルスピロムスチン；ドセタキセル；ドコサノール；ドラセトロン；ドキシフルリジン；ドロロキシフェン；ドロナビノール；デュオカルマイシンＳＡ；エブセレン；エコムスチン（ｅｃｏｍｕｓｔｉｎｅ）；エデルホシン（ｅｄｅｌｆｏｓｉｎｅ）；エドレコロマブ；エフロルニチン；エレメン（ｅｌｅｍｅｎｅ）；エミテフル（ｅｍｉｔｅｆｕｒ）；エピルビシン；エプリステリド；エストラムスチン類似体；エストロゲンアゴニスト；エストロゲンアンタゴニスト；エタニダゾール；リン酸エトポシド；エキセメスタン；ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フィルグラスチム；フィナステリド；フラボピリドール；フレゼラスチン；フルアステロン；フルダラビン；塩酸フルオロダウノルシン（ｆｌｕｏｒｏｄａｕｎｏｒｕｎｉｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；ホルフェニメックス（ｆｏｒｆｅｎｉｍｅｘ）；ホルメスタン；ホストリエシン；フォテムスチン；ガドリニウムテキサフィリン（ｇａｄｏｌｉｎｉｕｍ  ｔｅｘａｐｈｙｒｉｎ）；硝酸ガリウム；ガロシタビン；ガニレリクス；ゼラチナーゼ阻害剤；ゲムシタビン；グルタチオン阻害剤；ヘプスルファム；ヘレグリン；ヘキサメチレンビスアセトアミド；ヒペリシン；イバンドロン酸；イダルビシン；イドキシフェン；イドラマントン（ｉｄｒａｍａｎｔｏｎｅ）；イルモホシン（ｉｌｍｏｆｏｓｉｎｅ）；イロマスタット；イミダゾアクリドン；イミキモド；免疫賦活ペプチド；インスリン様増殖因子−１受容体阻害剤；インターフェロンアゴニスト；インターフェロン；インターロイキン；イオベングアン（ｉｏｂｅｎｇｕａｎｅ）；ヨードドキソルビシン（ｉｏｄｏｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）；イポメアノール（ｉｐｏｍｅａｎｏｌ）、４−；イロプラクト（ｉｒｏｐｌａｃｔ）；イルソグラジン；イソベンガゾール；イソホモハリコンドリンＢ；イタセトロン；ジャスプラキノリド；カハラリド（ｋａｈａｌａｌｉｄｅ）Ｆ；三酢酸ラメラリン−Ｎ（ｌａｍｅｌｌａｒｉｎ−Ｎ  ｔｒｉａｃｅｔａｔｅ）；ランレオチド；レイナマイシン；レノグラスチム；硫酸レンチナン；レプトルスタチン；レトロゾール；白血病阻害因子；白血球アルファインターフェロン；ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン；リュープロレリン；レバミソール；リアロゾール（ｌｉａｒｏｚｏｌｅ）；直鎖ポリアミン類似体；親油性二糖ペプチド；親油性白金化合物；リッソクリナミド（ｌｉｓｓｏｃｌｉｎａｍｉｄｅ）７；ロバプラチン；ロンブリシン（ｌｏｍｂｒｉｃｉｎｅ）；ロメトレキソール（ｌｏｍｅｔｒｅｘｏｌ）；ロニダミン；ロソキサントロン；ロバスタチン；ロキソリビン；ルルトテカン；ルテチウムテキサフィリン；リソフィリン（ｌｙｓｏｆｙｌｌｉｎｅ）；細胞溶解ペプチド；マイタンシン；マンノスタチンＡ；マリマスタット；マソプロコール；マスピン；マトリライシン阻害剤；マトリクスメタロプロテイナーゼ阻害剤；メノガリル；メルバロン
；メテレリン；メチオニナーゼ；メトクロプラミド；ＭＩＦ阻害剤；ミフェプリストン；ミルテホシン；ミリモスチム；ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ；ミトグアゾン；ミトラクトール；マイトマイシン類似体；ミトナフィド；マイトトキシン線維芽細胞増殖因子−サポリン；ミトキサントロン；モファロテン；モルグラモスチム；モノクローナル抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロピン；モノホスホリルリピドＡ＋ミオバクテリウム（ｍｙｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）細胞壁ｓｋ；モピダモール；多剤耐性遺伝子阻害剤；外発性腫瘍抑制因子１に基づく療法；マスタード抗がん剤；ミカペルオキシドＢ；ミコバクテリア細胞壁抽出物；ミリアポロン；Ｎ−アセチルジナリン；Ｎ−置換ベンズアミド；ナファレリン；ナグレスチップ（ｎａｇｒｅｓｔｉｐ）；ナロキソン＋ペンタゾシン；ナパビン（ｎａｐａｖｉｎ）；ナフテルピン；ナルトグラスチム；ネダプラチン；ネモルビシン；ネリドロン酸（ｎｅｒｉｄｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）；中性エンドペプチダーゼ；ニルタミド；ニサマイシン；一酸化窒素調節因子；窒素酸化物抗酸化剤；ニトルリン（ｎｉｔｒｕｌｌｙｎ）；Ｏ６−ベンジルグアニン；オクトレオチド；オキセノン；オリゴヌクレオチド；オナプリストン；オンダンセトロン；オンダンセトロン；オラシン（ｏｒａｃｉｎ）；経口サイトカイン誘導剤；オルマプラチン；オサテロン；オキサリプラチン；オキサウノマイシン（ｏｘａｕｎｏｍｙｃｉｎ）；パクリタキセル；パクリタキセル類似体；パクリタキセル誘導体；パラウアミン（ｐａｌａｕａｍｉｎｅ）；パルミトイルリゾキシン；パミドロン酸；パナキシトリオール；パノミフェン；パラバクチン；パゼリプチン；ペグアスパルガーゼ；ペルデシン；ポリ硫酸ペントサンナトリウム；ペントスタチン；ペントロゾール（ｐｅｎｔｒｏｚｏｌｅ）；ペルフルブロン；ペルホスファミド；ペリリルアルコール；フェナジノマイシン；フェニルアセテート；ホスファターゼ阻害剤；ピシバニール；塩酸ピロカルピン；ピラルビシン；ピリトレキシム；プラセチン（ｐｌａｃｅｔｉｎ）Ａ；プラセチンＢ；プラスミノーゲン活性化因子阻害剤；白金錯体；白金化合物；白金−トリアミン錯体；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニゾン；プロピルビス−アクリドン；プロスタグランジンＪ２；プロテアソーム阻害剤；プロテインＡに基づく免疫調節因子；プロテインキナーゼＣ阻害剤；プロテインキナーゼＣ阻害剤、微細藻類；プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤；プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤；プルプリン；ピラゾロアクリジン；ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート；ｒａｆアンタゴニスト；ラルチトレキセド；ラモセトロン；ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；ｒａｓ阻害剤；ｒａｓ−ＧＡＰ阻害剤；脱メチル化レテリプチン（ｒｅｔｅｌｌｉｐｔｉｎｅ  ｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ）；レニウムＲｅ１８６エチドロネート；リゾキシン；リボザイム；ＲＩＩレチンアミド；ログレチミド；ロヒツキン（ｒｏｈｉｔｕｋｉｎｅ）；ロムルチド；ロキニメックス；ルビギノン（ｒｕｂｉｇｉｎｏｎｅ）Ｂ１；ルボキシル（ｒｕｂｏｘｙｌ）；サフィンゴール；サイントピン（ｓａｉｎｔｏ��ｉｎ）；ＳａｒＣＮＵ；サルコフィトール（ｓａｒｃｏｐｈｙｔｏｌ）Ａ；サルグラモスチム；Ｓｄｉ  １模倣剤；セムスチン；セネッセンス由来阻害剤１；センスオリゴヌクレオチド；シグナル伝達阻害剤；シグナル伝達調節因子；単鎖抗原結合タンパク質；シゾフィラン；ソブゾキサン；ボロカプテイトナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｂｏｒｏｃａｐｔａｔｅ）；フェニル酢酸ナトリウム；ソルベロール（ｓｏｌｖｅｒｏｌ）；ソマトメジン結合タンパク質；ソネルミン；スパルホス酸（ｓｐａｒｆｏｓｉｃ  ａｃｉｄ）；スピカマイシン（ｓｐｉｃａｍｙｃｉｎ）Ｄ；スピロムスチン；スプレノペンチン（ｓｐｌｅｎｏｐｅｎｔｉｎ）；スポンギスタチン１；スクアラミン；幹細胞阻害剤；幹細胞分裂阻害剤；スチピアミド（ｓｔｉｐｉａｍｉｄｅ）；ストロメライシン阻害剤；スルフィノシン；超活性血管作用性腸ペプチドアンタゴニスト；スラジスタ（ｓｕｒａｄｉｓｔａ）；スラミン；スワインソニン；合成グリコサミノグリカン；タリムスチン（ｔａｌｌｉｍｕｓｔｉｎｅ）；タモキシフェンメチオジド；タウロムスチン；タザロテン；テコガランナトリウム；テガフール；テルラピリリウム（ｔｅｌｌｕｒａｐｙｒｙｌｉｕｍ）；テロメラーゼ阻害剤；テモポルフィン；テモゾロミド；テニポシド；テトラクロロデカオキシド；テトラゾミン；タリブラスチン（ｔｈａｌｉｂｌａｓｔｉｎｅ）；チオコラリン；トロンボポエチン；トロンボポエチン模倣体；サイマルファシン；サイモポイエチン受容体アゴニスト；チモトリナン（ｔｈｙｍｏｔｒｉｎａｎ）；甲状腺刺激ホルモン；エチルエチオプルプリンスズ（ｔｉｎ  ｅｔｈｙｌ  ｅｔｉｏｐｕｒｐｕｒｉｎ）；チラパザミン；二塩化チタノセン；トプセンチン；トレミフェン；全能性幹細胞因子；翻訳阻害剤；トレチノイン；トリアセチルウリジン；トリシリビン；トリメトレキセート；トリプトレリン；トロピセトロン；ツロステリド（ｔｕｒｏｓｔｅｒｉｄｅ）；チロシンキナーゼ阻害剤；チルホスチン；ＵＢＣ阻害剤；ウベニメクス；尿生殖洞由来成長阻害因子；ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト；バプレオチド；バリオリン（ｖａｒｉｏｌｉｎ）Ｂ；ベクター系、赤血球遺伝子療法；ベラレソール；ベラミン；ベルジン；ベルテポルフィン；ビノレルビン；ビンキサルチン；ビタキシン；ボロゾール；ザノテロン；ゼニプラチン；ジラスコルブ；およびジノスタチンスチマラマーが挙げられる。一実施形態では、抗がん薬は、５−フルオロウラシル、タキソール、またはロイコボリンである。
【０１６８】
一部の場合、例えば、がんを処置するための組成物、製剤、および方法では、投与される組成物または製剤の単位投与量は、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００ｍｇであってもよい。一部の場合では、投与される組成物または製剤の合計量は、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００ｇであってもよい。
【０１６９】
一部の場合では、Ｔ細胞を含む医薬組成物であって、単独でまたは薬学的に許容される担体もしくは賦形剤と共に、任意の経路により投与することができ、そのような投与が、単一投与量および複数投与量の両方で実施することができる医薬組成物が提供される。より詳しくは、医薬組成物は、錠剤、カプセル剤、ロゼンジ剤、トローチ剤、ハンドキャンディー（ｈａｎｄ  ｃａｎｄｙ）、散剤、スプレー、水性懸濁剤、注射溶液剤、エリキシル剤、およびシロップ剤等の形態の種々の薬学的に許容される不活性担体と組み合わせることができる。そのような担体としては、固形希釈剤または充填剤（ｆｉｌｌｅｒ）、無菌水性媒体、および種々の無毒性有機溶媒等が挙げられる。さらに、そのような経口医薬製剤は、そのような目的のために一般的に用いられるタイプの種々の作用物質により、適切に甘くするおよび／または矯味矯臭をすることができる。
【０１７０】
例えば、細胞は、これらに限定されないが、抗ウイルス療法、シドホビル、およびインターロイキン−２、またはシタラビン（ＡＲＡ−Ｃとしても公知である）等の薬剤による処置を含む、任意の数の関連処置モダリティと併せて（例えば、その前に、同時に、またはその後に）患者に投与することができる。一部の場合では、操作された細胞は、化学療法、放射線、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキセート、ミコフェノレート、およびＦＫ５０６等の免疫抑制剤、ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、もしくは他の抗体療法等の抗体または他の免疫除去剤（ｉｍｍｕｎｏａｂｌａｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）、シトキシン（ｃｙｔｏｘｉｎ）、フルダリビン（ｆｌｕｄａｒｉｂｉｎｅ）、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコプリエノール酸（ｍｙｃｏｐｌｉｅｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、サイトカイン、および照射と組み合わせて使用することができる。また、操作された細胞組成物は、フルダラビン、外照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミド等の化学療法剤、またはＯＫＴ３もしくはＣＡＭＰＡＴＨ等の抗体のいずれかを使用した骨髄移植、Ｔ細胞除去療法と併せて（例えば、その前に、同時に、またはその後に）患者に投与してもよい。
【０１７１】
一部の場合では、操作された細胞組成物は、ＣＤ２０と反応する薬剤、例えばリツキサン等の、Ｂ細胞除去療法後に投与してもよい。例えば、被験体は、高用量の化学療法による標準的処置を受けた後で、末梢血幹細胞移植を受けることができる。ある特定の実施形態では、移植後、被験体は、操作された細胞、例えば、増大させた操作された細胞の注入を受けることができる。加えて、増大させた操作された細胞は、手術前にまたは手術後に投与することができる。特定の態様では、本明細書に記載されている方法のいずれか１つにより得られる操作された細胞は、宿主対移植片（ＨｖＧ）拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）に対して、それを必要とする患者を処置するために使用することができる。
【０１７２】
したがって、宿主対移植片（ＨｖＧ）拒絶および移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）に対して、それを必要とする患者を処置するための方法であって、不活化ＴＣＲアルファおよび／またはＴＣＲベータ遺伝子を含む有効量の操作された細胞を患者に投与することにより患者を処置することを含む方法を提供することができる。
【０１７３】
併用療法
本明細書に記載されているようなＣＡＲ  Ｔ細胞免疫療法組成物を含む組成物は、医薬品に製剤化することができ、それを必要とするヒトまたは哺乳動物を処置するために、または疾患、例えば、がんを診断するために使用することができる。こうした医薬は、ヒトまたは哺乳動物に、１つまたは複数の追加のワクチンまたは他のがん療法と共に同時投与することができる。
【０１７４】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞
ある特定の実施形態では、天然または操作されたＮＫ細胞を提供して、本明細書に記載されているような細胞免疫療法と組み合わせて、それを必要とする被験体に投与してもよい。
【０１７５】
免疫系は、感染症および疾患からの防御に各々がそれ自体特徴的な役割を有する免疫細胞の多様なファミリーが複雑に絡み合ったものである。こうした免疫細胞の中には、体内の最初の防御線としてのナチュラルキラー細胞、つまりＮＫ細胞がある。ＮＫ細胞は、以前の曝露または他の支持分子による活性化を必要とせず、がんまたはウイルスに感染した細胞等の異常細胞を迅速に探し出して破壊する先天性の能力を有する。Ｔ細胞等の適応免疫細胞とは対照的に、ＮＫ細胞は、細胞に基づく「既製（ｏｆｆ−ｔｈｅ−ｓｈｅｌｆ）」の処置として第１相治験で利用されており、がんに対する腫瘍死滅能力を有することが示されている。
【０１７６】
ａＮＫ細胞。天然ＮＫ細胞に加えて、疾患細胞がＮＫ細胞の死滅機能を回避するために活用することが多い、キラー細胞阻害受容体（ＫＩＲ）を発現しない患者に投与するためのＮＫ細胞を提供することができる。この独特な活性化ＮＫ細胞、つまりａＮＫ細胞は、こうした阻害受容体を欠如するが、疾患細胞の選択的標的化および死滅を可能にする広範な範囲の活性化受容体を保持している。また、ａＮＫ細胞は、より大きなペイロード（ｐａｙ  ｌｏａｄ）のグランザイムおよびパーフォリン含有顆粒を運搬することができ、それにより、遥かにより大きなペイロードの致死性酵素を複数の標的に送達することが可能になる。
【０１７７】
ｔａＮＫ細胞。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）技術は、現在開発中の最も新しいがん療法手法の１つである。ＣＡＲは、免疫エフェクター細胞が、特定の表面抗原を提示するがん細胞を標的とすることを可能にするタンパク質であり（標的活性化ナチュラルキラー（ｔａｒｇｅｔ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｋｉｌｌｅｒ））、ａＮＫ細胞が、がんに見出される標的タンパク質に対する１つまたは複数のＣＡＲで操作されるプラットフォームであり、その後幅広い範囲のＣＡＲと共に組み込まれる。この戦略は、特に拡張可能性（ｓｃａｌａｂｉｌｉｔｙ）、品質管理、および一貫性の点で、自系Ｔ細胞等の、患者またはドナー起源のエフェクター細胞を使用する他のＣＡＲ手法に対して多数の利点を有する。
【０１７８】
がん細胞死滅の多くは、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害）に依存し、ＡＤＣＣでは、エフェクター免疫細胞が抗体に付着し、次いでその抗体が標的がん細胞に結合し、それによりエフェクター細胞によるがん死滅が促進される。ＮＫ細胞は、体内におけるＡＤＣＣの重要なエフェクター細胞であり、抗体に結合する特殊な受容体（ＣＤ１６）を利用する。
【０１７９】
ｈａＮＫ細胞。研究によると、「低親和性」ＣＤ１６を有する患者と比較して、より好ましい治療転帰（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｏｕｔｃｏｍｅ）と強い相関性を示すＣＤ１６の「高親和性」バリアントを均一に発現するのは、ヒト人口の２０％に過ぎないことが示されている。加えて、多くのがん患者は、化学療法、疾患自体、または他の要因により免疫系が著しく弱体化されている。
【０１８０】
ある特定の態様では、ｈａＮＫ細胞は、高親和性ＣＤ１６を発現するように改変されている。そのため、ｈａＮＫ細胞は、がん細胞に向けられる広範な抗体の治療効力を強化することができる。
【０１８１】
共刺激分子
その結果生じるＣＡＲ  Ｔ細胞またはＣＡＲ  ＮＫ細胞免疫療法組成物の免疫原性を増強するために、抗原特異的ＣＡＲ  Ｔ細胞またはＣＡＲ  ＮＫ細胞の生成中に、共刺激分子を培養に組み込むことができる。また、共刺激ドメインを、キメラ抗原受容体様複合体と融合させて、操作された細胞に導入してもよい。免疫応答の開始には、ＡＰＣによりナイーブＴ細胞を活性化するための少なくとも２つのシグナルが必要とされる（Ｄａｍｌｅら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８巻：１９８５〜９２頁（１９９２年）；Ｇｕｉｎａｎら、Ｂｌｏｏｄ  ８４巻：３２６１〜８２頁（１９９４年）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ３８巻：Ｓ４０〜４４頁（１９９６年）；Ｈｏｄｇｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ３９巻：５８００〜０７頁（１９９９年））。抗原特異的な第１のシグナルは、ペプチド／主要組織適合複合体（ＭＨＣ）によりＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を介して送達され、Ｔ細胞の細胞周期を開始させる。サイトカインを産生および増殖させるために、第２のまたは共刺激シグナルを送達することができる。
【０１８２】
特化した抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面に通常見出される少なくとも３つの異なる分子：Ｂ７−１（ＣＤ８０）、ＩＣＡＭ−１（ＣＤ５４）、およびＬＦＡ−３（ヒトＣＤ５８）が、Ｔ細胞活性化に重要な第２のシグナルを提供可能であると報告されている（Ｄａｍｌｅら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８巻：１９８５〜９２頁（１９９２年）；Ｇｕｉｎａｎら、Ｂｌｏｏｄ  ８４巻：３２６１〜８２頁（１９９４年）；Ｗｉｎｇｒｅｎら、Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５巻：２３５〜５３頁（１９９５年）；Ｐａｒｒａら、Ｓｃａｎｄ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３８巻：５０８〜１４頁（１９９３年）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ６９０巻：２２５〜３０頁（１９９３年）；Ｐａｒｒａら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５８巻：６３７〜４２頁（１９９７年）；Ｓｐｅｒｌｉｎｇら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５７巻：３９０９〜１７頁（１９９６年）；Ｄｕｂｅｙら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５５巻：４５〜５７頁（１９９５年）；Ｃａｖａｌｌｏら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２５巻：１１５４〜６２頁（１９９５年））。
【０１８３】
こうした共刺激分子は、異なるＴ細胞リガンドを有する。Ｂ７−１は、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４分子と相互作用し、ＩＣＡＭ−１は、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８（ＬＦＡ−１β２インテグリン）複合体と相互作用し、ＬＦＡ−３は、ＣＤ２（ＬＦＡ−２）分子と相互作用する。したがって、好ましい実施形態では、標的抗原または抗原性エピトープに対するキメラ抗原受容体と融合されると、その結果生じる操作された細胞の免疫原性を増強するＢ７−１、ＩＣＡＭ−１、およびＬＦＡ−３をそれぞれ含有する組換えアデノウイルスベクターを有することが望ましいであろう。実施例３に示されている表２には、キメラ抗原受容体と融合させて、本開示の操作された細胞を生成することができる共刺激ドメインの非限定的な例が提供されている。
【０１８４】
免疫経路チェックポイント調節因子
ある特定の実施形態では、免疫経路チェックポイント阻害剤を、本明細書で開示されているようなＣＡＲ  Ｔ細胞免疫療法を含む組成物と組み合わせる。ある特定の実施形態では、患者は、本明細書に記載のワクチンまたは医薬組成物と併せて、免疫経路チェックポイント阻害剤を受容した。さらなる実施形態では、組成物は、１つまたは複数の免疫経路チェックポイント調節因子と共に投与される。活性化シグナルと阻害シグナルとのバランスにより、Ｔリンパ球と疾患細胞との相互作用が制御され、Ｔ細胞応答は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）により抗原が認識されることにより開始される。阻害経路およびシグナルは、免疫経路チェックポイントと呼ばれる。通常の状況では、免疫経路チェックポイントは、自己免疫のコントロールおよび予防に重要な役割を果たし、また、病原性感染に応答して組織損傷から保護する。
【０１８５】
ある特定の実施形態では、がんおよび感染症を予防および／または処置するための免疫経路チェックポイント阻害経路を調節するための、ＣＡＲ  Ｔ細胞免疫療法組成物を含む併用免疫療法が提供される。一部の実施形態では、調節は、遺伝子またはタンパク質の発現または活性を増加させることであってもよい。一部の実施形態では、調節は、遺伝子またはタンパク質の発現または活性を減少させることであってもよい。一部の実施形態では、調節は、遺伝子またはタンパク質のファミリーに影響を及ぼすことができる。
【０１８６】
一般的に、免疫阻害経路は、リガンド−受容体相互作用により開始される。疾患の場合、疾患は、被験体の免疫耐性を誘導するための機序としての免疫チェックポイント経路を乗っ取ることができることは今や明らかである。
【０１８７】
所与の疾患による被験体の免疫耐性または免疫阻害経路の誘導は、免疫阻害経路の１つまたは複数を調節することが公知であるｓｉＲＮＡ；アンチセンス；小分子；模倣体；リガンド、受容体、もしくはタンパク質の組換え形態、または抗体（Ｉｇ融合タンパク質であってもよい）等の分子組成物により遮断することができる。例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）およびプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）等の免疫チェックポイントタンパク質の遮断剤による予備的臨床所見は、抗腫瘍免疫の増強に有望であることを示している。
【０１８８】
疾患細胞は、複数の阻害性リガンドを発現することができ、疾患浸潤性リンパ球は、複数の阻害受容体を発現するため、免疫経路チェックポイントタンパク質の二重または三重の遮断は、抗疾患免疫を増強することができる。本明細書で提供されているような併用免疫療法は、以下の免疫チェックポイントタンパク質の１つまたは複数を標的とする免疫経路チェックポイント調節因子を含む１つまたは複数の組成物を含むことができる：ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ４、Ｂ７ＲＰ１、ＩＣＯＳ、Ｂ７ＲＰＩ、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６としても公知である）、Ｂ７−Ｈ４（Ｂ７−Ｓ１、Ｂ７ｘ、およびＶＣＴＮ１としても公知である）、ＢＴＬＡ（ＣＤ２７２としても公知である）、ＨＶＥＭ、ＫＩＲ、ＴＣＲ、ＬＡＧ３（ＣＤ２２３としても公知である）、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ７０、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＴＩＭ３（ＨＡＶｃｒ２としても公知である）、ＧＡＬ９、Ａ２ａＲ、およびアデノシン。
【０１８９】
一部の実施形態では、分子組成物は、ｓｉＲＮＡを含む。一部の実施形態では、分子組成物は、小分子を含む。一部の実施形態では、分子組成物は、リガンドの組換え形態を含む。一部の実施形態では、分子組成物は、受容体の組換え形態を含む。一部の実施形態では、分子組成物は、抗体を含む。一部の実施形態では、併用療法は、１つよりも多くの分子組成物および／または１つよりも多くのタイプの分子組成物を含む。また、当業者であれば理解するだろうが、免疫チェックポイント阻害経路の将来発見されるタンパク質も、本開示により包含されることが想定される。
【０１９０】
一部の実施形態では、併用免疫療法は、ＣＴＬＡ４を調節するための分子組成物を含む。一部の実施形態では、併用免疫療法は、ＰＤ１を調節するための分子組成物を含む。一部の実施形態では、併用免疫療法は、ＰＤＬ１を調節するための分子組成物を含む。一部の実施形態では、併用免疫療法は、ＬＡＧ３を調節するための分子組成物を含む。一部の実施形態では、併用免疫療法は、Ｂ７−Ｈ３を調節するための分子組成物を含む。一部の実施形態では、併用免疫療法は、Ｂ７−Ｈ４を調節するための分子組成物を含む。一部の実施形態では、併用免疫療法は、ＴＩＭ３を調節するための分子組成物を含む。一部の実施形態では、調節は、発現の増加または増強である。他の実施形態では、調節は、発現の減少または非存在である。
【０１９１】
２つの非制限的な例示的免疫経路チェックポイント阻害剤としては、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原−４（ＣＴＬＡ−４）およびプログラム細胞死タンパク質−１（ＰＤ１）が挙げられる。ＣＴＬＡ−４は、Ｔ細胞で排他的に発現される場合があり、Ｔ細胞活性化の初期段階を制御する。ＣＴＬＡ−４は、Ｔ細胞活性を阻害するシグナル伝達をもたらす場合がある共刺激性Ｔ細胞受容体ＣＤ２８と相互作用する。ＴＣＲ抗原認識が生じると、ＣＤ２８シグナル伝達は、ＴＣＲシグナル伝達を増強して、一部の場合では、活性化Ｔ細胞をもたらす場合があり、ＣＴＬＡ−４は、ＣＤ２８のシグナル伝達活性を阻害する。本開示は、がんおよび感染症を予防および／または処置するための抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体と組み合わせた、本明細書で提供されている免疫療法を提供する。本開示は、がんおよび感染症を予防および／または処置するためのＣＴＬＡ−４分子組成物と組み合わせた、本明細書で提供されているワクチンまたは免疫療法を提供する。
【０１９２】
プログラム死細胞タンパク質リガンド−１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｇａｎｄ−１）（ＰＤＬ１）は、Ｂ７ファミリーのメンバーであり、種々の組織および細胞型に分布している。ＰＤＬ１は、ＰＤ１阻害性Ｔ細胞活性化およびＣＴＬ媒介性溶解と相互作用する場合がある。ＰＤＬ１の著しい発現が、種々のヒト腫瘍で示されており、ＰＤＬ１発現は、腫瘍が宿主抗腫瘍免疫応答を回避する重要な機序の１つである。プログラム死リガンド１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−ｌｉｇａｎｄ  １）（ＰＤＬ１）およびプログラム細胞死タンパク質−１（ＰＤ１）は、免疫経路チェックポイントとして相互作用する。この相互作用は、抗腫瘍免疫応答の鈍化およびその後の腫瘍進行をもたらす主要な耐性機序であり得る。ＰＤ１は、活性化Ｔ細胞上に存在し、ＰＤ１の主要リガンドであるＰＤＬ１は、腫瘍細胞および抗原提示細胞（ＡＰＣ）ならびにＢ細胞を含む他の細胞上でも発現されることが多い。ＰＤＬ１は、Ｔ細胞上のＰＤ１と相互作用して、Ｔ細胞活性化および細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）媒介性溶解を阻害する。本開示は、がんおよび感染症を予防および／または処置するための抗ＰＤ１または抗ＰＤＬ１モノクローナル抗体と組み合わせた、本明細書で提供されている免疫療法を提供する。
【０１９３】
ある特定の実施形態は、がんおよび感染症を予防および／または処置するためのＰＤ１または抗ＰＤＬ１分子組成物と組み合わせた、本明細書で提供されている免疫療法を提供することができる。ある特定の実施形態は、がんおよび感染症を予防および／または処置するための抗ＣＴＬＡ−４および抗ＰＤ１モノクローナル抗体と組み合わせた、本明細書で提供されている免疫療法を提供することができる。ある特定の実施形態は、抗ＣＴＬＡ−４および抗ＰＤＬ１モノクローナル抗体と組み合わせた、本明細書で提供されている免疫療法を提供することができる。ある特定の実施形態は、がんおよび感染症を処置するための抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ１、抗ＰＤＬ１モノクローナル抗体またはそれらの組み合わせと組み合わせた、本明細書で提供されているワクチンまたは免疫療法を提供することができる。
【０１９４】
免疫経路チェックポイント分子は、Ｔ細胞により発現され得る。免疫経路チェックポイント分子は、免疫応答を下方調節または阻害するための「ブレーキ」としての役割を有効に果たすことができる。免疫経路チェックポイント分子としては、これらに限定されないが、プログラム死１（ＰＤ１またはＰＤ−１、ＰＤＣＤ１またはＣＤ２７９としても公知である。受託番号：ＮＭ＿００５０１８）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４、ＣＤ１５２としても公知である。ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＦ４１４１２０．１）、ＬＡＧ３（ＣＤ２２３としても公知である。受託番号：ＮＭ＿００２２８６．５）、Ｔｉｍ３（Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体２（ＨＡＶＣＲ２）としても公知である。ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＪＸ０４９９７９．１）、ＢおよびＴリンパ球関連（ＢＴＬＡ）（ＣＤ２７２として公知である。受託番号：ＮＭ＿１８１７８０．３）、ＢＹ５５（ＣＤ１６０としても公知である。ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＣＲ５４１８８８．１）、ＴＩＧＩＴ（ＩＶＳＴＭ３としても公知である。受託番号：ＮＭ＿１７３７９９）、ＬＡＩＲ１（ＣＤ３０５としても公知である。ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＣＲ５４２０５１．１）、ＳＩＧＬＥＣＩＯ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＡＹ３５８３３７．１）、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（ＣＤ２４４としても公知である。受託番号：ＮＭ＿００１１６６６６４．１）、免疫細胞を直接的に阻害するＰＰＰ２ＣＡ、ＰＰＰ２ＣＢ、ＰＴＰＮ６、ＰＴＰＮ２２、ＣＤ９６、ＣＲＴＡＭ、ＳＩＧＬＥＣ７、ＳＩＧＬＥＣ９、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＣＡＳＰ８、ＣＡＳＰ１０、ＣＡＳＰ３、ＣＡＳＰ６、ＣＡＳＰ７、ＦＡＤＤ、ＦＡＳ、ＴＧＦＢＲＩＩ、ＴＧＦＲＢＲＩ、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ４、ＳＭＡＤ１０、ＳＫＩ、ＳＫＩＬ、ＴＧＩＦｌ、ＩＬＩＯＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＨＭＯＸ２、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＥＩＦ２ＡＫ４、ＣＳＫ、ＰＡＧ１、ＳＩＴ１、ＦＯＸＰ３、ＰＲＤＭ１、ＢＡＴＦ、ＧＵＣＹ１Ａ２、ＧＵＣＹ１Ａ３、ＧＵＣＹ１Ｂ２、ＧＵＣＹ１Ｂ３が挙げられる。例えば、ＰＤ１は、ＣＡＲ  Ｔ細胞免疫療法組成物と組み合わせて、それを必要とする患者を処置することができる。
【０１９５】
標的とすることができる追加の免疫経路チェックポイントは、アデノシンＡ２ａ受容体（ＡＤＯＲＡ）、ＣＤ２７６、Ｖ−ｓｅｔドメイン含有Ｔ細胞活性化阻害剤１（ＶＴＣＮ１）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ１（ＩＤＯ１）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体、３ドメイン長細胞質テール（ｔｈｒｅｅ  ｄｏｍａｉｎｓ，  ｌｏｎｇ  ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  ｔａｉｌ）、１（ＫＩＲ３ＤＬ１）、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリン抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、サイトカイン誘導可能ＳＨ２含有タンパク質（ＣＩＳＨ）、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ１（ＨＰＲＴ）、アデノ随伴ウイルス組込み部位１（ＡＡＶＳ１）、またはケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）受容体５（遺伝子／偽遺伝子）（ＣＣＲ５）、またはそれらの任意の組み合わせであってもよい。
【０１９６】
表１は、網羅的ではないが、本明細書に記載のようなＣＡＲ  Ｔ細胞免疫療法組成物の効率を向上させるために不活化することができる例示的な免疫経路チェックポイント遺伝子を示す。免疫経路チェックポイント遺伝子は、表１に列挙されているような遺伝子、および共阻害受容体機能、細胞死、サイトカインシグナル伝達、アルギニントリプトファン欠乏、ＴＣＲシグナル伝達、Ｔ−ｒｅｇ抑制の誘導、消耗またはアネルギーをコントロールする転写因子、または低酸素媒介性耐性に関与する他のものから選択することができる。
【表１】
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【０１９７】
アデノウイルスに基づく組成物および免疫経路チェックポイント調節因子の組み合わせは、いずれか一方の薬剤のみの場合と比較して、処置される患者の疾患の感染、進行、または症状の低減をもたらすことができる。別の実施形態では、アデノウイルスに基づく組成物および免疫経路チェックポイント調節因子の組み合わせは、いずれか一方の薬剤のみの場合と比較して、処置される患者の全生存の向上をもたらすことができる。一部の場合では、アデノウイルスに基づく組成物および免疫経路チェックポイント調節因子の組み合わせは、いずれか一方の薬剤のみの場合と比較して、処置される患者の疾患特異的Ｔ細胞応答の頻度または強度を増加させることができる。
【０１９８】
また、ある特定の実施形態は、ＣＡＲ  Ｔ細胞免疫療法組成物の性能を向上させるための、免疫経路チェックポイント阻害の使用を提供することができる。ある免疫経路チェックポイント阻害剤は、ＣＡＲ  Ｔ細胞免疫療法組成物の投与時に投与してもよい。また、ある免疫経路チェックポイント阻害剤は、ＣＡＲ  Ｔ細胞免疫療法組成物の投与後に投与してもよい。免疫経路チェックポイント阻害は、アデノウイルスワクチン投与と同時に生じてもよい。免疫経路チェックポイント阻害は、ワクチン接種の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０、または６０分後に生じてもよい。また、免疫経路チェックポイント阻害は、ＣＡＲ  Ｔ細胞免疫療法組成物の投与の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４時間後に生じてもよい。一部の場合では、免疫阻害は、ワクチン接種の１、２、３、４、５、６、または７日後に生じてもよい。免疫経路チェックポイント阻害は、ＣＡＲ  Ｔ細胞免疫療法組成物の投与前または投与後の任意の時点で生じてもよい。
【０１９９】
別の態様では、抗原および免疫経路チェックポイント調節因子をコードする１つまたは複数の核酸を含むワクチンが関与する方法が提供される。例えば、免疫経路チェックポイントタンパク質、ＰＤ１またはＰＤＬ１の下方制御から利益を得ると考えられる状態を有し、例えば、被験体の細胞にその天然結合パートナーを有する被験体を処置するための方法が提供される。
【０２００】
免疫経路チェックポイント調節因子は、任意の抗原をコードする１つまたは複数の核酸を含むＣＡＲ  Ｔ細胞免疫療法組成物と組み合わせることができる。例えば、抗原は、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、もしくはそれらの任意の組み合わせの抗原またはエピトープ、または本明細書に記載の任意の抗原等の腫瘍抗原であってもよい。
【０２０１】
免疫経路チェックポイント調節因子は、ワクチン等のＣＡＲ  Ｔ細胞免疫療法組成物と組み合わせると、相乗効果をもたらすことができる。また、免疫経路チェックポイント調節因子は、ＣＡＲ  Ｔ細胞免疫療法組成物と組み合わせると、有益な効果をもたらすことができる。
【０２０２】
使用方法
細胞は、本明細書に記載のようにヒトから抽出することができる。細胞は、ｅｘ  ｖｉｖｏで遺伝的に変更し、それに応じて使用することができる。そうした細胞は、細胞に基づく療法に使用することができる。そうした細胞は、レシピエント（例えば、ヒト）の疾患を処置するために使用することができる。例えば、そうした細胞は、がんを処置するために使用することができる。
【０２０３】
本明細書には、レシピエントの疾患（例えば、がん）を処置するための方法であって、操作された細胞を含む１つまたは複数の細胞（器官および／または組織を含む）をレシピエントに移植することを含む方法が記載されている。本明細書で開示されている方法は、これらに限定されないが、がん、心血管疾患、肺疾患、肝臓疾患、皮膚疾患、または神経学的疾患を含む疾患の処置または予防に使用することができる。
【０２０４】
一実施形態では、リンパ球注入を使用して、がんを有するかまたはがんを有するリスクのある患者を処置するための、キメラ抗原受容体様複合体を発現する遺伝子改変Ｔ細胞を投与するための方法を提供することができる。好ましくは、処置には自系リンパ球注入が使用される。処置を必要とする患者から自系末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を収集し、本明細書に記載されており、当技術分野で公知である方法を使用して、Ｔ細胞を活性化および増大し、その後患者に注入して戻す。ＣＡＲ  Ｔ細胞の集団を、投与のために製剤化することができ、被験体への投与には、当業者に公知の技法が使用される。あるいは、同種異系リンパ球注入を使用してもよい。
【０２０５】
一部の場合では、操作された細胞の集団は、当業者に公知の技法を使用して被験体に投与するために製剤化することができる。操作された細胞の集団を含む製剤は、薬学的に許容される賦形剤を含む。製剤に含まれる賦形剤は、例えば、使用されるＴ細胞の部分集団および投与形式に応じて、様々な目的を有することになる。一般的に使用される賦形剤の例としては、限定ではないが、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、注射用水、グリセロール、エタノール、およびそれらの組み合わせ、安定化剤、可溶化剤、および界面活性剤、緩衝剤、および保存剤、張度剤、増量剤、および滑沢剤を挙げることができた。操作された細胞の集団を含む製剤は、動物血清等の任意の非ヒト成分の非存在下で調製および培養されていてもよい。
【０２０６】
製剤は、操作された細胞の１つの集団、または操作された細胞の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、もしくはそれよりも多くの集団等の、１つよりも多くの集団を含んでいてもよい。操作された細胞の集団を含む製剤は、当業者に公知の形式および技法を使用して、被験体に投与することができる。例示的な形式としては、これに限定されないが、静脈内注射が挙げられる。他の形式としては、限定ではないが、腫瘍内、皮内、皮下（Ｓ．Ｃ．、ｓ．ｑ．、ｓｕｂ−Ｑ、Ｈｙｐｏ）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）、動脈内、髄内、心臓内、関節内（関節）、滑液包内（滑液区域）、頭蓋内、脊髄内、および髄腔内（髄液）が挙げられる。製剤の非経口注射または注入に有用な任意の公知なデバイスを使用して、そのような投与を実行することができる。
【０２０７】
被験体に投与される、操作された細胞の集団を含む製剤は、特定の適応症または疾患の処置および／または予防に有効な個数の操作された細胞を含むことができる。したがって、治療有効集団の操作された細胞を被験体に投与することができる。
【０２０８】
一般的に、約１×１０４〜約１×１０１０個の間の操作された細胞を含む製剤を投与することができる。ほとんどの場合、製剤は、約１×１０５個〜約１×１０９個の間の操作された細胞、約５×１０５個から約５×１０８個の操作された細胞、または約１×１０６個から約１×１０７個の操作された細胞を含むことになる。しかしながら、被験体に投与される操作された細胞の個数は、がんの位置、起源、正体、範囲、および重症度、処置しようとする個体の年齢および状態に応じて、幅広い範囲で変動する場合がある。使用する適切な投与量は、最終的には医師により決定することができる。
【０２０９】
操作された細胞の投与前、投与と同時に、または投与後に、腫瘍標的化分子を被験体に投与することができる。腫瘍標的化分子は、腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原と会合することにより、被験体の標的細胞に結合し得る。腫瘍標的化分子は、当業者に公知の技法を使用して被験体に投与するために製剤化することができる。腫瘍標的化分子の製剤は、薬学的に許容される賦形剤を含んでいてもよい。一般的に使用される賦形剤の例としては、限定ではないが、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、注射用水、グリセロール、エタノール、およびそれらの組み合わせ、安定化剤、可溶化剤、および界面活性剤、緩衝剤、および保存剤、張度剤、増量剤、および滑沢剤が挙げられる。腫瘍標的化分子は、当業者に公知の方式および技法を使用して、被験体に投与することができる。例示的な方式としては、これらに限定されないが、静脈内、腹腔内、および腫瘍内注射が挙げられる。他の方式としては、限定ではないが、皮内、皮下（Ｓ．Ｃ．、ｓ．ｑ．、ｓｕｂ−Ｑ、Ｈｙｐｏ）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、動脈内、髄内、心臓内、関節内（関節）、滑液包内（滑液区域）、頭蓋内、脊髄内、および髄腔内（髄液）が挙げられる。製剤の非経口注射または注入に有用な任意の公知のデバイスを使用して、そのような投与を実行することができる。
【０２１０】
腫瘍標的化分子を含む製剤は、特定の適応症または疾患の処置および／または予防に有効な量で被験体に投与される。一般的に、少なくとも約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重の腫瘍標的化分子を含む製剤が、処置を必要とする被験体に投与される。ほとんどの場合、投与量は、投与経路、症状等を考慮して、１日約１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ体重までのタグ付きタンパク質である。使用する適切な投与量は、医師により決定することができる。
【０２１１】
移植は、任意のタイプの移植によるもであってもよい。部位としては、これらに限定されないが、肝臓被膜下空間、脾臓被膜下の空間、腎被膜下空間、網、胃、または腸の粘膜下組織、小腸、静脈嚢（ｖｅｎｏｕｓ  ｓａｃ）、精巣、脳、脾臓、または角膜の血管セグメントを挙げることができる。例えば、移植は、被膜下移植であってもよい。また、移植は、筋肉内移植であってもよい。移植は、門脈内移植であってもよい。
【０２１２】
移植は、ヒトに由来する１つまたは複数の細胞の移植であってもよい。例えば、１つまたは複数の細胞は、脳、心臓、肺、目、胃、膵臓、腎臓、肝臓、腸、子宮、膀胱、皮膚、毛髪、爪、耳、腺、鼻、口、唇、脾臓、歯茎、歯、舌、唾液腺、扁桃腺、咽頭、食道、大腸、小腸、直腸、肛門、甲状腺、胸腺、骨、軟骨、腱、靭帯、腎上体、骨格筋、平滑筋、血管、血液、脊髄、気管、尿管、尿道、視床下部、下垂体、幽門、副腎、卵巣、卵管、子宮、膣、乳腺、精巣、精嚢、陰茎、リンパ、リンパ節、またはリンパ管であってもよい器官に由来していてもよい。また、１つまたは複数の細胞は、脳、心臓、肝臓、皮膚、腸、肺、腎臓、目、小腸、または膵臓に由来していてもよい。また、１つまたは複数の細胞は、膵臓、腎臓、目、肝臓、小腸、肺、または心臓に由来していてもよい。１つまたは複数の細胞は、膵臓に由来していてもよい。１つまたは複数の細胞は、膵島細胞、例えば、膵臓β細胞であってもよい。１つまたは複数の細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、リンパ球、単球、またはマクロファージ等の任意の血液細胞であってもよい。１つまたは複数の細胞は、リンパ球、Ｂ細胞、またはＴ細胞等の任意の免疫細胞であってもよい。
【０２１３】
また、本明細書で開示されている方法は、１つまたは複数の細胞を移植することを含み、１つまたは複数の細胞は、任意のタイプの細胞であってもよい。例えば、１つまたは複数の細胞は、上皮細胞、線維芽細胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｃｅｌｌ）、神経細胞、ケラチノサイト、造血細胞、メラノサイト、軟骨細胞、リンパ球（ＢおよびＴ）、マクロファージ、単球、単核細胞、心筋細胞（ｃａｒｄｉａｃ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌ）、他の筋肉細胞、顆粒膜細胞、卵丘細胞、表皮細胞、内皮細胞、膵島細胞、血液細胞、血液前駆細胞、骨細胞（ｂｏｎｅ  ｃｅｌｌ）、骨前駆細胞、神経幹細胞、原始幹細胞（ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ）、肝細胞、ケラチノサイト、臍静脈内皮細胞、大動脈内皮細胞、微小血管内皮細胞、線維芽細胞、肝臓星細胞、大動脈平滑筋細胞、心筋細胞（ｃａｒｄｉａｃ  ｍｙｏｃｙｔｅ）、ニューロン、クッパー細胞、平滑筋細胞、シュワン細胞、および上皮細胞、赤血球、血小板、好中球、リンパ球、単球、好酸球、好塩基球、脂肪細胞、軟骨細胞、膵島細胞、甲状腺細胞、副甲状腺細胞、耳下腺細胞、腫瘍細胞、膠細胞、星状細胞、赤血球細胞、白血球細胞、マクロファージ、上皮細胞、体細胞、下垂体細胞、副腎細胞、有毛細胞、膀胱細胞、腎臓細胞、網膜細胞、桿体細胞、錐体細胞、心臓細胞、ペースメーカー細胞（ｐａｃｅｍａｋｅｒ  ｃｅｌｌ）、脾臓細胞、抗原提示細胞、メモリー細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、形質細胞、筋肉細胞、卵巣細胞、子宮細胞、前立腺細胞、膣上皮細胞、精子細胞、睾丸細胞、生殖細胞、卵細胞、ライディッヒ細胞、周細管細胞（ｐｅｒｉｔｕｂｕｌａｒ  ｃｅｌｌ）、セルトリ細胞、ルテイン細胞、子宮頚部細胞（ｃｅｒｖｉｃａｌ  ｃｅｌｌ）、子宮内膜細胞、乳腺細胞、濾胞細胞、粘液細胞、線毛細胞、非角化上皮細胞、角化上皮細胞、肺細胞、杯細胞、円柱上皮細胞、ドーパミン作動性細胞、扁平上皮細胞、骨細胞（ｏｓｔｅｏｃｙｔｅ）、骨芽細胞、破骨細胞、ドーパミン作動性細胞、胚幹細胞、線維芽細胞、および胎児線維芽細胞であってもよい。さらに、１つまたは複数の細胞は、これらに限定されないが、膵臓α細胞、膵臓β細胞、膵臓δ細胞、膵臓Ｆ細胞（例えば、ＰＰ細胞）、または膵臓ε細胞を含む、膵島細胞および／または細胞クラスター等であってもよい。１つの場合では、１つまたは複数の細胞は、膵臓α細胞であってもよい。別の場合では、１つまたは複数の細胞は、膵臓β細胞であってもよい。
【０２１４】
ドナーは、これらに限定されないが、胎児、新生児、若年、および成体を含む、任意の発達段階にあってもよい。例えば、ドナーＴ細胞は、成人から単離してもよい。ドナーヒトＴ細胞は、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１歳未満であってもよい。例えば、Ｔ細胞は、６歳未満のヒトから単離してもよい。また、Ｔ細胞は、３歳未満のヒトから単離してもよい。ドナーは、１０歳よりも年上であってもよい。
【０２１５】
本明細書で開示されている方法は、移植することを含んでいてもよい。移植は、自家移植、同種移植、異種移植、または任意の他の移植であってもよい。例えば、移植は異種移植であってもよい。また、移植は、同種移植であってもよい。
【０２１６】
「異種移植」およびその文法的等価物は、本明細書で使用される場合、レシピエントに細胞、組織、または器官を移植、埋込み、または注入することを含み、レシピエントおよびドナーが異なる種である、任意の手順を包含することができる。本明細書に記載されている、細胞、器官、および／または組織の移植は、ヒトへの異種移植に使用することができる。異種移植としては、これらに限定されないが、血管化異種移植（ｖａｓｃｕｌａｒｉｚｅｄ  ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）、部分的血管化異種移植、非血管化異種移植、異種ドレシング（ｘｅｎｏｄｒｅｓｓｉｎｇ）、異種バンデージ（ｘｅｎｏｂａｎｄａｇｅ）、および異種構造物（ｘｅｎｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）が挙げられる。
【０２１７】
「同種移植」およびその文法的等価物（例えば、同種異系移植）は、本明細書で使用される場合、レシピエントに細胞、組織、または器官を移植、埋込み、または注入することを含み、レシピエントおよびドナーが同じ種であるが異なる個体である、任意の手順を包含することができる。本明細書に記載されている、細胞、器官、および／または組織の移植は、ヒトへの同種移植に使用することができる。同種移植としては、これらに限定されないが、血管化同種移植、部分的血管化同種移植、非血管化同種移植、同種ドレシング（ａｌｌｏｄｒｅｓｓｉｎｇ）、同種バンデージ（ａｌｌｏｂａｎｄａｇｅ）、および同種構造物（ａｌｌｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）が挙げられる。
【０２１８】
「自家移植」およびその文法的等価物（例えば、自系移植）は、本明細書で使用される場合、レシピエントに細胞、組織、または器官を移植、埋込み、または注入することを含み、レシピエントおよびドナーが同じ個体である、任意の手順を包含することができる。本明細書に記載されている、細胞、器官、および／または組織の移植は、ヒトへの自家移植に使用することができる。自家移植としては、これらに限定されないが、血管化自家移植、部分的血管化自家移植、非血管化自家移植、自家ドレシング（ａｕｔｏｄｒｅｓｓｉｎｇ）、自家バンデージ（ａｕｔｏｂａｎｄａｇｅ）、および自家構造物（ａｕｔｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）が挙げられる。
【０２１９】
１つまたは複数の野生型細胞をレシピエントに移植した場合と比較して、処置（例えば、本明細書で開示されている処置のいずれか）後の移植拒絶反応を改善することができる。例えば、移植拒絶反応は、超急性拒絶反応であってもよい。また、移植拒絶反応は、急性拒絶反応であってもよい。他のタイプの拒絶反応としては、慢性拒絶反応を挙げることができる。また、移植拒絶反応は、細胞媒介性拒絶反応またはＴ細胞媒介性拒絶反応であってもよい。また、移植拒絶反応は、ナチュラルキラー細胞媒介性拒絶反応であってもよい。
【０２２０】
「改善する」およびその文法的等価物は、本明細書で使用される場合、当業者により認識される任意の改善を意味することができる。例えば、移植の改善は、超急性拒絶反応を軽減することを意味していてもよい。これは、望ましくない効果または症状を減少、軽減、または消失させることを包含することができる。
【０２２１】
移植後、移植された細胞は、レシピエント中で機能性であり得る。一部の場合では、機能性であることにより、移植が成功したか否かを決定することができる。例えば、移植された細胞は、少なくともまたは少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０日間、またはそれよりも長期間にわたって、機能性であってもよい。これは、移植が成功したことを示す場合がある。また、これは、移植された細胞、組織、および／または器官の拒絶反応がないことを示す場合がある。
【０２２２】
ある特定の場合では、移植された細胞は、少なくとも１日間にわたって機能性であり得る。また、移植された細胞は、少なくとも７日間にわたって機能性であり得る。移植された細胞は、少なくとも１４日間にわたって機能性であり得る。移植された細胞は、少なくとも２１日間にわたって機能性であり得る。移植された細胞は、少なくとも２８日間にわたって機能性であり得る。移植された細胞は、少なくとも６０日間にわたって機能性であり得る。
【０２２３】
移植が成功したことを示す別の指標は、レシピエントが免疫抑制療法を必要としない日数であってもよい。例えば、本明細書で提供されている処置（例えば、移植）後、レシピエントは、少なくともまたは少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０日間、またはそれよりも長期間にわたって、免疫抑制療法を必要としない場合がある。これは、移植が成功したことを示す場合がある。また、これは、移植された細胞、組織、および／または器官の拒絶反応がないことを示す場合がある。
【０２２４】
一部の場合では、レシピエントは、少なくとも１日間にわたって免疫抑制療法を必要としなくてもよい。また、レシピエントは、少なくとも７日間にわたって免疫抑制療法を必要としなくてもよい。レシピエントは、少なくとも１４日間にわたって免疫抑制療法を必要としなくてもよい。レシピエントは、少なくとも２１日間にわたって免疫抑制療法を必要としなくてもよい。レシピエントは、少なくとも２８日間にわたって免疫抑制療法を必要としなくてもよい。レシピエントは、少なくとも６０日間にわたって免疫抑制療法を必要としなくてもよい。さらに、レシピエントは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０年間、またはそれよりも長期間にわたって、免疫抑制療法を必要としなくてもよい。
【０２２５】
移植が成功したことを示す別の指標は、レシピエントが、低減された免疫抑制療法を必要とする日数であってもよい。例えば、本明細書で提供されている処置後、レシピエントは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０日間、またはそれよりも長期間にわたって、低減された免疫抑制療法を必要としてもよい。これは、移植が成功したことを示す場合がある。また、これは、移植された細胞、組織、および／または器官の拒絶反応がないかまたは最小限であることを示す場合がある。
【０２２６】
例えば、レシピエントは、少なくとも１日間にわたって、低減された免疫抑制療法を必要としてもよい。また、レシピエントは、少なくとも７日間にわたって、低減された免疫抑制療法を必要としてもよい。レシピエントは、少なくとも１４日間にわたって、低減された免疫抑制療法を必要としてもよい。レシピエントは、少なくとも２１日間にわたって、低減された免疫抑制療法を必要としてもよい。レシピエントは、少なくとも２８日間にわたって、低減された免疫抑制療法を必要としてもよい。レシピエントは、少なくとも６０日間にわたって、低減された免疫抑制療法を必要としてもよい。さらに、レシピエントは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０年間、またはそれよりも長期間にわたって、低減された免疫抑制療法を必要としてもよい。
【０２２７】
「低減された」およびその文法的等価物は、本明細書で使用される場合、１つまたは複数の野生型の細胞をレシピエントに移植した場合に必要とされる免疫抑制療法と比較して、免疫抑制療法がより少ないことを指すことができる。
【０２２８】
免疫抑制療法は、免疫系を抑制する任意の処置を含むことができる。免疫抑制療法は、レシピエントの移植拒絶反応を緩和するか、最小限に抑えるか、またはなくすことを支援することができる。例えば、免疫抑制療法は、免疫抑制薬を含むことができる。移植前、移植中、および／または移植後に使用することができる免疫抑制薬としては、これらに限定されないが、ＭＭＦ（ミコフェノール酸モフェチル（セルセプト））、ＡＴＧ（抗胸腺細胞グロブリン）、抗ＣＤ１５４（ＣＤ４ＯＬ）、抗ＣＤ４０（２Ｃ１０、ＡＳＫＰ１２４０、ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０１）、アレムツズマブ（キャンパス）、抗ＣＤ２０（リツキシマブ）、抗ＩＬ−６Ｒ抗体（トシリズマブ、アクテムラ）、抗ＩＬ−６抗体（サリルマブ、オロキズマブ（ｏｌｏｋｉｚｕｍａｂ））、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ（アバタセプト／オレンシア）、ベラセプト（ＬＥＡ２９Ｙ）、シロリムス（ラピミューン（Ｒａｐｉｍｕｎｅ））、エベロリムス、タクロリムス（プログラフ）、ダクリズマブ（ゼナパックス）、バシリキシマブ（シムレクト）、インフリキシマブ（レミケード）、シクロスポリン、デオキシスパガリン、可溶性補体受容体１、コブラ毒因子、コンプスタチン、抗Ｃ５抗体（エクリズマブ／ソリリス）、メチルプレドニゾロン、ＦＴＹ７２０、エベロリムス、レフルノミド、抗ＩＬ−２Ｒ−Ａｂ、ラパマイシン、抗ＣＸＣＲ３抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＯＸ４０抗体、および抗ＣＤ１２２抗体が挙げられる。さらに、１つまたは１つよりも多くの免疫抑制剤／薬を、一緒にまたは順次、使用してもよい。１つまたは１つよりも多くの免疫抑制剤／薬を、誘導療法または維持療法に使用することができる。同じまたは異なる薬物を、誘導および維持段階中に使用することができる。一部の場合では、ダクリズマブ（ゼナパックス）を、誘導療法に使用することができ、タクロリムス（プログラフ）およびシロリムス（ラピミューン）を維持療法に使用することができる。また、ダクリズマブ（ゼナパックス）を、誘導療法に使用することができ、低用量タクロリムス（プログラフ）および低用量シロリムス（ラピミューン）を維持療法に使用することができる。また、免疫抑制は、これらに限定されないが、全身照射、胸腺照射、および完全および／または部分的脾臓摘出を含む、非薬物レジメンを使用して達成することができる。また、こうした技法は、１つまたは複数の免疫抑制薬と組み合わせて使用することができる。
【０２２９】
また、ｅｘ  ｖｉｖｏ細胞トランスフェクションを、診断、研究、または遺伝子治療に使用することができる（例えば、トランスフェクト細胞を宿主生物に再注入することにより）。一部の場合では、対象生物から細胞を単離し、核酸（例えば、遺伝子またはｃＤＮＡ）をトランスフェクトし、対象生物（例えば、患者）に再注入する。
【０２３０】
移植前、移植後、および／または移植中、細胞（例えば、操作された細胞または操作された初代Ｔ細胞）は、機能性であり得る。例えば、移植された細胞は、移植後、少なくともまたは少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、６、２７、２８、２９、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００日間にわたって機能性であり得る。移植された細胞は、移植後、少なくともまたは少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２か月間にわたって、機能性であり得る。移植された細胞は、移植後、少なくともまたは少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、または３０年間にわたって、機能性であり得る。一部の場合では、移植された細胞は、最大でレシピエントの生涯にわたって機能性であり得る。
【０２３１】
さらに、移植された細胞は、その通常の意図されている作用の１００％で機能してもよい。また、移植された細胞は、その通常の意図されている作用の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％で機能してもよい。
【０２３２】
移植された細胞は、その通常の意図されている作用の１００％を超えて機能してもよい。例えば、移植された細胞は、その通常の意図されている作用の１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００％、またはそれよりも高い％で機能してもよい。
【実施例】
【０２３３】
以下の実験例を参照して、本発明をさらに詳細に説明する。こうした例は、例示のために提供されているに過ぎず、別様の指示がない限り、限定は意図されていない。したがって、本発明は、以下の例に限定されるとはいかなる点でも解釈されるべきではなく、むしろ本明細書で提供されている教示の結果として自明となる、ありとあらゆるバリエーションを包含すると解釈されるべきである。
【０２３４】
（実施例１）
ＣＥＡ特異的ＣＡＲ  Ｔ細胞の生成および機能的特徴付け
この例では、ＣＥＡ特異的ＣＡＲの生成およびヒトＴ細胞でのその機能的発現が説明される。特に、ＣＤ２８／ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを担持するＣＥＡ特異的ＣＡＲを設計し、機能性を評価するものとする。
【０２３５】
ベクター設計。Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］を、以前に記載されていように構築および産生した。培養したヒト結腸がん細胞で免疫化したＢＡＬＢ／ｃマウスからＣＥＡハイブリドーマを生成することになる。ハイブリドーマからｓｃＦｖ  ＣＥＡを単離し、その後、ヒトＩｇＧ１−ＣＨ２ＣＨ３ドメイン、ＣＤ２８共刺激エンドドメイン、およびＣＤ３ζ鎖とインフレームで、Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］骨格にクローニングすることになる（Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］−ＣＥＡ．ＣＡＲ）。
【０２３６】
ウイルス上清の産生。アデノウイルスを産生するために、好適なパッケージング細胞（Ｅ．Ｃ７細胞）を、１培養皿当たり１．２×１０６個の細胞で１０ｃｍの培養皿に播種した。２４時間後、細胞に、トランスフェクション試薬（例えば、ＦｕＧＥＮＥ  ９  ＰｒｏｍｅｇａまたはＸ−ｔｒｅｍｅ  ｇｅｎｅ９  Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用して、１０μｇのアデノウイルスベクターＤＮＡをトランスフェクトし、３７．０℃で７２時間インキュベートした。その後、これら細胞の順化培地（ウイルス上清）を、超遠心分離（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で精製し、高力価のウイルス上清を単離することになる。
【０２３７】
Ｔ細胞中でのＡｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］−ＣＥＡ．ＣＡＲの発現。ＣＥＡ特異的Ｔ細胞を生成するために、初代ヒトＴ細胞を、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離し、活性化することになる。特に、ヒトＴ細胞エキスパンダービーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、ＰＢＭＣ材料からＣＤ３＋細胞を選択し、１００ＩＵ  ｍｌ−１のｒｈ−ＩＬ−２を有する２４ウエルプレートで、１ウエル当たり１．５×１０６個のＣＤ３＋細胞を活性化することになる。４８時間後、０．２×１０６〜０．５×１０６個の活性化ＣＤ３＋細胞を、０．５ｍｌの回収したレトロウイルス上清、およびｒｈ−ＩＬ−２（最終、１００ＩＵ  ｍｌ−１）を補充した０．５ｍｌの培地に再懸濁し、Ｒｅｔｒｏｎｅｃｔｉｎ（Ｔａｋａｒａ）をコーティングしたプレートに移すことになる。プレートを、４３０ｇで９０分間遠心分離した。形質導入の４８時間後、細胞を収集し、１００ＩＵ  ｍｌ−１のｒｈ−ＩＬ−２を有する２４ウエルプレートに０．５×１０６個／ｍｌで再播種することになる。
【０２３８】
Ｔ細胞中のＡｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］−ＣＥＡ．ＣＡＲの検出。コンジュゲートされたＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、およびＣＣＲ７ｍＡｂ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］−ＣＥＡ．ＣＡＲを発現するＴリンパ球を特定することになる。ヒトＩｇＧ１−ＣＨ２ＣＨ３断片を認識する抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を使用して、Ｔリンパ球でのＣＡＲ発現を評価した。分析は、ＢＤＦＡＣｓ  ＣｅｌｌＱｕｅｓｔＰｒｏソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＦＡＣｓＣａｌｉｂｅｒフローサイトメーターで実施することになる。
【０２３９】
細胞および細胞株。下記に記載されているアッセイでは全て、エフェクター細胞、標的細胞、および陰性対照細胞を使用する。エフェクター細胞は、概して、Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］−ＣＥＡ．ＣＡＲで形質導入されたＴ細胞を指す。標的細胞は、概して、ＣＡＲが向けられている標的（ＣＥＡ抗原）を天然で発現する腫瘍細胞である。陰性対照細胞は、概して、ＣＡＲが向けられている標的（ＣＥＡ陰性）を発現しない細胞である。
【０２４０】
（実施例２）
Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］−ＣＥＡ．ＣＡＲを発現するＴ細胞の機能的特徴付け
細胞内ＩＦＮ−γ染色
この例では、細胞内ＩＦＮ−γ染色による、Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］−ＣＥＡ．ＣＡＲを発現するＴ細胞の機能的特徴付けが説明される。形質導入されたＴ細胞の潜在的細胞傷害性効果を評価するために、異なる細胞傷害性アッセイを実施することになる。Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］−ＣＥＡ．ＣＡＲ発現Ｔ細胞が、ヒト結腸癌細胞を認識する能力、およびその後それらの活性化を試験した。概して、ＣＡＲを発現するＴ細胞の活性化は、同族抗原（例えば、ＣＥＡ）での刺激後に、ＩＦＮ−ガンマ（または同等なサイトカイン）産生により測定することができる。１×１０５個のＣＡＲ形質導入Ｔ細胞を、ＣＡＲの同族抗原を発現する１×１０５個のＣＥＡ＋腫瘍細胞と共に（この例では、抗ＣＥＡ特異的ＣＡＲをＣＥＡ＋腫瘍細胞と共に）インキュベートすることになる。１μｌ  ｍｌ−１のＧｏｌｇｉｐｌｕｇ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の存在下で３７℃にて１６時間インキュベーションした後、細胞を洗浄し、ＣＤ３、ＣＤ８に対する抗体（両方ともＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および好適な生／死色素（ＩＲ色素、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色した。その後、ＩＦＮ−ガンマの細胞内レベルを、製造業者の指針に従って、Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＩＦＮ−ガンマに対する抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用し、フローサイトメトリーにより単一細胞ベースで決定した。ＩＦＮ−ガンマ＋ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセントを、ヒトＩｇＧ１−ＣＨ２ＣＨ３断片を認識する抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）により測定した、Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］−ＣＥＡ．ＣＡＲ  ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度で補正することにより、データを正規化した。
【０２４１】
ＥＬＩＳＡ。さらに、Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］−ＣＥＡ．ＣＡＲで形質導入され、ＣＥＡ＋細胞およびＣＥＡ−（対照細胞）で刺激したＴ細胞の培養上清中のＩＦＮ−γレベルを、ＥＬＩＳＡを使用して測定した。
【０２４２】
５１クロム放出アッセイ細胞傷害性アッセイ。形質導入されたＴ細胞の潜在的細胞傷害性効果を評価するために、異なる細胞傷害性アッセイを実施することになる。細胞媒介性細胞傷害に関する５１クロム放出アッセイでは、標的細胞を、１００μＣｕの５１Ｃｒで一晩標識し、３０：１〜０．３：１の間の範囲の５つの異なるエフェクター対標的比（Ｅ：Ｔ）で形質導入されたＴ細胞と共に、４〜５時間インキュベートすることになる。比溶解（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｌｙｓｉｓ）のパーセントを、以下のように算出することになる：（実験ｃｐｍ−基底ｃｐｍ）／（最大ｃｐｍ−基底ｃｐｍ）×１００。最大溶解は、５％トリトンの存在下で決定され、基底溶解は、エフェクター細胞の非存在下で決定される。
【０２４３】
ＣＭＴＭＲ細胞傷害性アッセイ。別の細胞傷害性アッセイでは、ＣＥＡ陰性対照細胞を、１．５×１０６細胞／ｍＬの濃度で培地に懸濁し、蛍光色素５−（および−６）−（（（４−クロロメチル）ベンゾイル）アミノ）テトラメチルローダミン（ＣＭＴＭＲ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、５μＭの濃度で添加する。細胞を混合し、次いで３７℃にて３０分間インキュベーションする。その後、細胞を洗浄し、細胞傷害性培地に懸濁した。次に、ＣＥＡ陰性対照細胞を、３７℃にて６０分間インキュベートする。その後、細胞を２回洗浄し、細胞傷害性培地に懸濁する。標的細胞（ＣＥＡ＋）を、１×１０６細胞／ｍＬでＰＢＳ＋０．１％ＢＳＡに懸濁する。蛍光色素カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、１μＭの濃度でこの細胞懸濁液に添加する。細胞を、３７℃にて１０分間インキュベートする。インキュベーション後、細胞懸濁液の容積と等しい容積のＦＢＳを添加することにより、標識反応を停止させ、細胞を室温で２分間インキュベートする。その後、細胞を洗浄し、細胞傷害性培地に懸濁する。
【０２４４】
その後、エフェクターＴ細胞（Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］−ＣＥＡ．ＣＡＲ）を洗浄し、５×１０＾６細胞／ｍＬで細胞傷害性培地に懸濁する。全ての実験にて、Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］−ＣＥＡ．ＣＡＲ  Ｔ細胞の細胞傷害を、陰性対照ＣＡＲ  Ｔ（Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］−ＣＤ１９．ＣＡＲ）で形質導入された同じ患者に由来する陰性対照エフェクターＴ細胞または形質導入されていない細胞の細胞傷害と比較する。エフェクターＴ細胞および陰性対照エフェクターＴ細胞については、培養物を、無菌５ｍＬ試験チューブ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）内に、以下のＴ細胞：標的細胞比：１０：１、３：１、および１：１で二連で設定する。標的細胞は、ＣＥＡ＋患者に由来する５０，０００個の細胞になる。また、各培養物は、５０，０００個の陰性対照細胞を含有する。加えて、標的細胞＋陰性対照細胞のみを含有するチューブを設定する。培養物を３７℃にて４時間インキュベートする。インキュベーション直後に、７ＡＡＤ（７−アミノアクチノマイシンＤ）（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を、製造業者の推奨に従って添加し、フローサイトメトリー取得を、ＢＤ  ＦａｃｓＣａｎｔｏ  ＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で実施することになる。分析は、ＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅｓｔａｒ，Ｉｎｃ．、Ａｓｈｌａｎｄ、ＯＲ）で実施した。分析は、７ＡＡＤ陰性（生）細胞をゲート制御し、標的生細胞および陰性対照生細胞のパーセントを、各Ｔ細胞＋標的細胞培養物毎に決定する。標的生細胞のパーセントを陰性対照生細胞のパーセントで除算することにより、各Ｔ細胞＋標的細胞培養物毎に、標的細胞の生存パーセントを決定する。
【０２４５】
各Ｔ細胞＋標的細胞培養物中の標的細胞の生存パーセントを、標的細胞および陰性対照細胞のみを含有し、エフェクターＴ細胞を一切含有しないチューブ中の、標的細胞パーセント：陰性対照細胞パーセントの比で除算することにより、補正された標的細胞生存パーセントを算出した。この補正は、開始細胞数の変動および自然な標的細胞死を考慮するために必要である。細胞傷害は、標的細胞の細胞傷害パーセント＝１００−補正された標的細胞生存パーセントとして算出されることになる。エフェクター：標的比は全て、細胞傷害を二連で決定し、結果を平均することになる。
【０２４６】
増殖アッセイ。標的細胞（ＣＥＡ＋）への曝露後のＡｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］−ＣＥＡ．ＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖を、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル希釈アッセイで決定する（Ｈｕｄｅｃｅｋ  Ｍ、Ｌｕｐｏ−Ｓｔａｎｇｈｅｌｌｉｎｉ  ＭＴ、Ｋｏｓａｓｉｈ  ＰＬ、Ｓｏｍｍｅｒｍｅｙｅｒ  Ｄ、Ｊｅｎｓｅｎ  ＭＣ、Ｒａｄｅｒ  Ｃら）。
【０２４７】
形質導入の１週間後、対照（Ａｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］−ＣＤ１９．ＣＡＲ）およびＡｄ５［Ｅ１−，Ｅ２ｂ−］−ＣＥＡ．ＣＡＲ＋  Ｔリンパ球を、１．５μｍｏｌ／Ｌのカルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標識し、照射された腫瘍標的（ＣＥＡ陽性株およびＣＥＡ陰性株）と共に、５：１のエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比で播種した。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞でのＣＦＳＥ希釈を、共培養の４日目にフローサイトメトリーにより測定することになる。
【０２４８】
（実施例３）
ＣＥＡ特異的ＣＡＲ  Ｔ細胞の臨床増大
この例では、ＣＥＡ特異的ＣＡＲ  Ｔ細胞の臨床増大を説明する。多数の形質導入されたＴ細胞を生成するために、迅速増大プロトコール（ＲＥＰ）を使用して、細胞を増殖するよう誘導する。Ｔ細胞は、ＲＥＰで使用する前に、抗ＣＤ３、抗ＣＤ２８、およびＩＬ−２と共に培養を開始し、上記で詳述されているように培養を開始した後の２日目に形質導入を行うことになる。細胞を、７５ｃｍ２フラスコ中で３７℃および５％ＣＯ２にて培養することになる。培養物で維持することになる残りの期間にわたって２日毎に、細胞を計数し、０．５×１０６細胞／ｍＬの濃度で、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ−２を有する新鮮なＴ細胞培地に懸濁することになる。
【０２４９】
表２に示されている任意の分子を含む共刺激ドメインが、その結果生じるＣＥＡ特異的ＣＡＲ  Ｔ細胞の免疫原性を増強するために、上述のＣＥＡベクターに含まれている。
【表２】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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