(57)【要約】  前立腺の６回膜貫通上皮抗原２（ＳＴＥＡＰ２）として知られるタンパク質は、前立腺癌において高度に発現され、他の前立腺癌関連遺伝子の発現と関連する。本発明は、ヒトＳＴＥＡＰ２に結合する新規全長ヒトＩｇＧ抗体（単一特異性抗体）を提供する。本発明はまた、ＳＴＥＡＰ２およびＣＤ３の両方に結合し、ＳＴＥＡＰ２発現腫瘍の存在下でＣＤ３複合体を介してＴ細胞を活性化する新規な二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）を提供する。特定の実施形態によれば、本発明は、ヒトおよびサルのＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、ヒトＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する第２の抗原結合分子とを含む二重特異性抗原結合分子を提供する。特定の実施形態において、本発明の二重特異性抗原結合分子は、ＳＴＥＡＰ２を発現する腫瘍の増殖を阻害することができる。本発明の二重特異性抗原結合分子は、上方制御または誘導されたＳＴＥＡＰ２標的化免疫応答が望ましいおよび／または治療的に有益である前立腺疾患および障害の治療に有用である。例えば、本発明の二重特異性抗体は、去勢抵抗性前立腺癌を含む前立腺癌の治療に有用である。本発明はまた、インビボで腫瘍増殖を阻害する抗ＳＴＥＡＰ２抗体薬物複合体を含む。【選択図】図１
2019532056.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその抗原結合断片と細胞傷害性薬剤とを含む抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）であって、前記抗体または抗原結合断片および前記細胞傷害性薬剤がリンカーを介して共有結合する、抗体−薬物複合体。
【請求項２】
本明細書に記載のインビトロＦＡＣＳ結合アッセイにより測定した約５０ｎＭ未満のＥＣ５０で、ヒト前立腺の６回膜貫通上皮抗原２（ＳＴＥＡＰ２）発現細胞に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
ヒトＳＴＥＡＰ２発現細胞によって内在化される、請求項２に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
前記抗体が完全ヒト型である、請求項３に記載の単離された抗体。
【請求項５】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＳＴＥＡＰ２への結合について、表１に記載のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む参照抗体と競合する、請求項２〜４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項６】
前記参照抗体が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／５８、７４／５８、８２／５８、９０／５８、９８／５８、１０６／１１４、１２２／１３０、１３８／１４６、１５４／１６２、１７０／１７８、１８６／１９４、２０２／２１０、２１８／２２６、２３４／２４２、２５０／２５８、２６６／２７４、２８２／２９０、２９８／３０６、３１４／３２２、３３０／３３８、３４６／３５４、３６２／３７０、および３７８／３８６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、請求項５に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項７】
前記抗体またはその抗原結合断片が、表１に記載のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む参照抗体と同じ、ヒトＳＴＥＡＰ２上のエピトープに結合する、請求項２〜６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項８】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／５８、７４／５８、８２／５８、９０／５８、９８／５８、１０６／１１４、１２２／１３０、１３８／１４６、１５４／１６２、１７０／１７８、１８６／１９４、２０２／２１０、２１８／２２６、２３４／２４２、２５０／２５８、２６６／２７４、２８２／２９０、２９８／３０６、３１４／３２２、３３０／３３８、３４６／３５４、３６２／３７０、および３７８／３８６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む参照抗体と同じ、ヒトＳＴＥＡＰ２上のエピトープに結合する、請求項７に記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項９】
ヒトＳＴＥＡＰ２に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が、（ａ）表１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、（ｂ）表１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲと、を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１０】
前記抗体または抗原結合断片が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／５８、７４／５８、８２／５８、９０／５８、９８／５８、１０６／１１４、１２２／１３０、１３８／１４６、１５４／１６２、１７０／１７８、１８６／１９４、２０２／２１０、２１８／２２６、２３４／２４２、２５０／２５８、２６６／２７４、２８２／２９０、２９８／３０６、３１４／３２２、３３０／３３８、３４６／３５４、３６２／３７０、および３７８／３８６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対の重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含む、請求項９に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項１１】
前記抗体または抗原結合断片が、それぞれ、配列番号４−６−８−１２−１４−１６、２０−２２−２４−２８−３０−３２、３６−３８−４０−４４−４６−４８、５２−５４−５６−６０−６２−６４、６８−７０−７２−６０−６２−６４、７６−７８−８０−６０−６２−６４、８４−８６−８８−６０−６２−６４、９２−９４−９６−６０−６２−６４、１００−１０２−１０４−６０−６２−６４、１０８−１１０−１１２−１１６−１１８−１２０、１２４−１２６−１２８−１３２−１３４−１３６、１４０−１４２−１４４−１４８−１５０−１５２、１５６−１５８−１６０−１６４−１６６−１６８、１７２−１７４−１７６−１８０−１８２−１８４、１８８−１９０−１９２−１９６−１９８−２００、２０４−２０６−２０８−２１２−２１４−２１６、２２０−２２２−２２４−２２８−２３０−２３２、２３６−２３８−２４０−２４４−２４６−２４８、２５２−２５４−２５６−２６０−２６２−２６４、２６８−２７０−２７２−２７６−２７８−２８０、２８４−２８６−２８８−２９２−２９４−２９６、３００−３０２−３０４−３０８−３１０−３１２、３１６−３１８−３２０−３２４−３２６−３２８、３３２−３３４−３３６−３４０−３４２−３４４、３４８−３５０−３５２−３５６−３５８−３６０、３６４−３６６−３６８−３７２−３７４−３７６、および３８０−３８２−３８４−３８８−３９０−３９２からなる群から選択されるＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３ドメインを含む、請求項１０に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項１２】
ヒトＳＴＥＡＰ２に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、７４、８２、９０、９８、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、および３７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、および３８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１３】
前記抗体または抗原結合断片が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／５８、７４／５８、８２／５８、９０／５８、９８／５８、１０６／１１４、１２２／１３０、１３８／１４６、１５４／１６２、１７０／１７８、１８６／１９４、２０２／２１０、２１８／２２６、２３４／２４２、２５０／２５８、２６６／２７４、２８２／２９０、２９８／３０６、３１４／３２２、３３０／３３８、３４６／３５４、３６２／３７０、および３７８／３８６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、請求項１２に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項１４】
前記抗ＳＴＥＡＰ２抗体または抗原結合断片が、請求項２〜１３のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片である、請求項１に記載のＡＤＣ。
【請求項１５】
前記細胞傷害性薬剤が、アウリスタチン、メイタンシノイド、ツブリシン、トマイマイシン誘導体、またはドラスタチン誘導体から選択される、請求項１または１４に記載のＡＤＣ。
【請求項１６】
前記細胞傷害性薬剤が、ＭＭＡＥもしくはＭＭＡＦから選択されるアウリスタチン、またはＤＭ１もしくはＤＭ４から選択されるメイタンシノイドである、請求項１または１４に記載のＡＤＣ。
【請求項１７】
前記細胞傷害性薬剤が、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の構造を有するメイタンシノイドである、請求項１または１４に記載のＡＤＣ。
【請求項１８】
前記メイタンシノイドが、
【化１】
2019532056.tif 000067
である、請求項１７に記載のＡＤＣ。
【請求項１９】
前記メイタンシノイドが、
【化２】
2019532056.tif 000068
である、請求項１７に記載のＡＤＣ。
【請求項２０】
抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片と次式とを含み、
【化３】
2019532056.tif 000069
式中、
【化４】
2019532056.tif 000070
が、前記抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片への結合である、請求項１または１４に記載のＡＤＣ。
【請求項２１】
抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片と次式とを含み、
【化５】
2019532056.tif 000071
式中、
【化６】
2019532056.tif 000072
が、前記抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片への結合である、請求項１または１４に記載のＡＤＣ。
【請求項２２】
抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片と次式とを含み、
【化７】
2019532056.tif 000073
式中、
【化８】
2019532056.tif 000074
が、前記抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片への結合である、請求項１または１４に記載のＡＤＣ。
【請求項２３】
結合が、システイン残基の硫黄成分を介して前記抗体またはその断片と接触する、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項２４】
抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片と、
【化９】
2019532056.tif 000075
それらの混合物と、を含み、
式中、
【化１０】
2019532056.tif 000076
が、前記抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片への結合である、請求項１または１４に記載のＡＤＣ。
【請求項２５】
前記結合が、リジン残基の窒素成分を介して前記抗体またはその断片と接触する、請求項２４記載のＡＤＣ。
【請求項２６】
前記ＡＤＣが、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片につき１〜４つの細胞傷害性薬剤を含む、請求項１または１４〜２５のいずれか一項に記載のＡＤＣ。
【請求項２７】
請求項１または１４〜２６のいずれか一項に記載の抗体−薬物複合体、および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む薬学的組成物。
【請求項２８】
ヒトＣＤ３に結合する第１の抗原結合ドメインおよびヒトＳＴＥＡＰ２に結合する第２の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗原結合分子であって、前記第２の抗原結合ドメインが、請求項２〜１３のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片に由来する、二重特異性抗原結合分子。
【請求項２９】
ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、ヒトＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインと、を含む二重特異性抗原結合分子。
【請求項３０】
前記第１の抗原結合ドメインが、ヒトＣＤ３を発現するヒト細胞およびカニクイザルＣＤ３を発現するカニクイザル細胞に結合する、請求項２８または請求項２９に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項３１】
前記第２の抗原結合ドメインが、ヒトＳＴＥＡＰ２を発現するヒト細胞に結合する、請求項２８または請求項２９に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項３２】
前記第１の抗原結合ドメインおよび前記第２の抗原結合ドメインのそれぞれが完全ヒト型である、請求項２８〜３１のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項３３】
前記抗原結合分子が、ヒトＣＤ３とヒトＳＴＥＡＰ２の両方に結合し、ＳＴＡＰ２発現細胞のＴ細胞媒介性細胞死滅を誘導する、請求項２８または請求項２９に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項３４】
前記抗原結合分子が、ヒト前立腺癌異種移植片を保有する免疫無防備状態マウスにおける腫瘍増殖を阻害する、請求項２８または請求項２９に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項３５】
二重特異性抗体またはその二重特異性抗原結合断片である、請求項２８〜３４のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項３６】
ヒトＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する前記第２の抗原結合ドメインが、配列番号２、１８、３４、５０、６６、７４、８２、９０、９８、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、および３７８からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）由来の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）と、配列番号１０、２６、４２、５８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、および３８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）由来の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）と、を含む、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項３７】
ヒトＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する前記第２の抗原結合ドメインが、３つの重鎖相補性決定領域（Ａ２−ＨＣＤＲ１、Ａ２−ＨＣＤＲ２、およびＡ２−ＨＣＤＲ３）と、３つの軽鎖相補性決定領域（Ａ２−ＬＣＤＲ１、Ａ２−ＬＣＤＲ２、およびＡ２−ＬＣＤＲ３）と、を含み、Ａ２−ＨＣＤＲ１が、配列番号４、２０、３６、５２、６８、７６、８４、９２、１００、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、および３８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＨＣＤＲ２が配列番号６、２２、３８、５４、７０、７８、８６、９４、１０２、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、および３８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＨＣＤＲ３が配列番号８、２４、４０、５６、７２、８０、８８、９６、１０４、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１８２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、および３８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＬＣＤＲ１が配列番号１２、２８、４４、６０、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３７２、および３８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＬＣＤＲ２が配列番号１４、３０、４６、６２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３７４、および３９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＬＣＤＲ３が配列番号１６、３２、４８、６４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３７６、および３９２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項３８】
ヒトＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する前記第２の抗原結合ドメインが、配列番号２５０／２５８からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対の重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含む、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項３９】
ヒトＣＤ３に特異的に結合する前記第１の抗原結合ドメインが、表９、表１１、または表１５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）由来の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）と、表１、表９、表１２、または表１７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）由来の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）と、を含む、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項４０】
ヒトＣＤ３に特異的に結合する前記第１の抗原結合ドメインが、配列番号１７３０、１７６２、および１８６６からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）由来の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）と、配列番号２５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）由来の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）と、を含む、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項４１】
ヒトＣＤ３に特異的に結合する前記第１の抗原結合ドメインが、３つの重鎖相補性決定領域（Ａ１−ＨＣＤＲ１、Ａ１−ＨＣＤＲ２、およびＡ１−ＨＣＤＲ３）と、３つの軽鎖相補性決定領域（Ａ１−ＬＣＤＲ１、Ａ１−ＬＣＤＲ２、およびＡ１−ＬＣＤＲ３）と、を含み、
Ａ１−ＨＣＤＲ１は配列番号１７３２、１７６４、および１８６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＨＣＤＲ２は配列番号１７３４、１７６６、および１８７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＨＣＤＲ３は配列番号１７３６、１７６８、および１８７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ１は配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ２は配列番号２６２のアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ３は配列番号２６４のアミノ酸配列を含む、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項４２】
ヒトＣＤ３に特異的に結合する前記第１の抗原結合ドメインが、配列番号１７３０／２５８、１７６２／２５８、および１８６６／２５８からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対の重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含む、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項４３】
ヒトＣＤ３に特異的に結合する前記第１の抗原結合ドメインが、３つの重鎖相補性決定領域（Ａ１−ＨＣＤＲ１、Ａ１−ＨＣＤＲ２、およびＡ１−ＨＣＤＲ３）と、３つの軽鎖相補性決定領域（Ａ１−ＬＣＤＲ１、Ａ１−ＬＣＤＲ２、およびＡ１−ＬＣＤＲ３）と、を含み、ヒトＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する前記第２の抗原結合ドメインが、３つの重鎖相補性決定領域（Ａ２−ＨＣＤＲ１、Ａ２−ＨＣＤＲ２、およびＡ２−ＨＣＤＲ３）と、３つの軽鎖相補性決定領域（Ａ２−ＬＣＤＲ１、Ａ２−ＬＣＤＲ２、およびＡ２−ＬＣＤＲ３）と、を含み、
Ａ１−ＨＣＤＲ１は配列番号１７３２、１７６４、および１８６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＨＣＤＲ２は配列番号１７３４、１７６６、および１８７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＨＣＤＲ３は配列番号１７３６、１７６８、および１８７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ１は配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ２は配列番号２６２のアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ３は配列番号２６４のアミノ酸配列を含み、
Ａ２−ＨＣＤＲ１は配列番号２５２のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＨＣＤＲ２は配列番号２５４のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＨＣＤＲ３は配列番号２５６のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＬＣＤＲ１は配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＬＣＤＲ２は配列番号２６２のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＬＣＤＲ３は配列番号２６４のアミノ酸配列を含む、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項４４】
ヒトＣＤ３に特異的に結合する前記第１の抗原結合ドメインが、ＦＲ１（配列番号１９０３）、ＦＲ２（配列番号１９０４）、ＦＲ３（配列番号１９０５）、およびＦＲ４（配列番号１９０６）から選択されるアミノ酸配列を有する可変ドメインフレームワーク領域を含む重鎖を含む、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項４５】
ヒトＣＤ３に特異的に結合する前記第１の抗原結合ドメインが、配列番号１９０７−１９０８−１９０９１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３を含むＨＣＶＲを含む、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項４６】
前記第２の抗原結合ドメインが、ヒトＳＴＥＡＰ２への結合について、３つの重鎖相補性決定領域（Ａ２−ＨＣＤＲ１、Ａ２−ＨＣＤＲ２、およびＡ２−ＨＣＤＲ３）と、３つの軽鎖相補性決定領域（Ａ２−ＬＣＤＲ１、Ａ２−ＬＣＤＲ２、およびＡ２−ＬＣＤＲ３）と、を含む参照抗原結合タンパク質と競合し、Ａ２−ＨＣＤＲ１は配列番号２５２のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＨＣＤＲ２は配列番号２５４のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＨＣＤＲ３は配列番号２５６のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＬＣＤＲ１は配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＬＣＤＲ２は配列番号２６２のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＬＣＤＲ３は配列番号２６４のアミノ酸配列を含む、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項４７】
前記第２の抗原結合ドメインが、ヒトＳＴＥＡＰ２への結合について、配列番号２５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、配列番号２５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、を含む参照抗原結合タンパク質と競合する、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項４８】
前記第１の抗原結合ドメインが、ヒトＣＤ３への結合について、３つの重鎖相補性決定領域（Ａ１−ＨＣＤＲ１、Ａ１−ＨＣＤＲ２、およびＡ１−ＨＣＤＲ３）と、３つの軽鎖相補性決定領域（Ａ１−ＬＣＤＲ１、Ａ１−ＬＣＤＲ２、およびＡ１−ＬＣＤＲ３）と、を含む参照抗原結合タンパク質と競合し、Ａ１−ＨＣＤＲ１は配列番号１７３２、１７６４、および１８６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＨＣＤＲ２は配列番号１７３４、１７６６、および１８７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＨＣＤＲ３は配列番号１７３６、１７６８、および１８７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ１は配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ２は配列番号２６２のアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ３は配列番号２６４のアミノ酸配列を含む、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項４９】
前記第１の抗原結合ドメインが、ヒトＣＤ３への結合について、配列番号１７３０、１７６２、および１８６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、配列番号２５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、を含む参照抗原結合タンパク質と競合する、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項５０】
前記第１の抗原結合ドメインが、ヒトＣＤ３への結合について、配列番号１７３０、１７６２、および１８６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、配列番号２５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、を含む参照抗原結合タンパク質と競合し、前記第２の抗原結合ドメインが、ヒトＳＴＥＡＰ２への結合について、配列番号２５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、配列番号２５８のアミノ酸を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、を含む参照抗原結合タンパク質と競合する、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子。
【請求項５１】
請求項２〜１３のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または請求項２８から５０のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子、および薬学的に許容される担体もしくは希釈剤、を含む薬学的組成物。
【請求項５２】
対象において癌を治療する方法であって、前記対象に請求項５１に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
【請求項５３】
前記癌が、前立腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、肺癌、結腸癌、腎臓癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、子宮癌、および卵巣癌からなる群から選択される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記癌が前立腺癌、任意選択で去勢抵抗性前立腺癌である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
ＳＴＥＡＰ２の発現に関連する疾患または障害の治療における、請求項２７または請求項５１に記載の薬学的組成物の使用。
【請求項５６】
前記疾患または障害が癌である、請求項５５に記載の使用。
【請求項５７】
医療で使用するための、請求項２〜１３のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合断片、または請求項２８〜５０のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子を含む化合物。
【請求項５８】
前立腺癌の治療に使用するための化合物であって、請求項２〜１３のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合断片、または請求項２８〜５０のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子を含む、化合物。
【請求項５９】
癌の治療に使用するための薬剤の製造のための、請求項２〜１３のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合断片、または請求項２８〜５０のいずれか一項に記載の二重特異性抗原結合分子の使用であって、任意選択で前記癌が前立腺癌である、使用。
【請求項６０】
医療で使用するための請求項１または１４〜２６のいずれか一項に記載のＡＤＣを含む化合物。
【請求項６１】
前立腺癌の治療に使用するための化合物であって、請求項１または１４〜２６のいずれか一項に記載のＡＤＣを含む、化合物。
【請求項６２】
癌の治療に使用するための薬剤の製造のための、請求項１または１４〜２６のいずれか一項に記載のＡＤＣの使用であって、任意選択で前記癌が前立腺癌である、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表の参照
この出願は、２０１７年９月２２日に作成され、７３９，９６４バイトを含むファイル１０２９６ＷＯ０１−Ｓｅｑｕｅｎｃｅ．ｔｘｔとしてコンピュータ可読形式で提出された配列表を参照により組み入れる。
【０００２】
本発明は、前立腺の６回膜貫通上皮抗原２（ＳＴＥＡＰ２）に特異的な抗体およびその抗原結合断片、ならびにそれらの使用方法に関する。本発明はまた、ＳＴＥＡＰ２およびＣＤ３を結合する二重特異性抗原結合分子、ならびにそれらの使用方法に関する。本発明はさらに、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片および治療薬（例えば細胞傷害性薬剤）を含む抗体−薬物複合体に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＳＴＥＡＰ−２、メタロレダクターゼＳＴＥＡＰ２、前立腺癌関連タンパク質１、転移性前立腺癌において上方制御されるタンパク質、６回膜貫通前立腺タンパク質１（ＳＴＡＭＰ１）、および０９８Ｐ４Ｂ６としても知られる前立腺の６回膜貫通上皮抗原２（ＳＴＥＡＰ２）は、正常および悪性の前立腺細胞において上方制御された内在性６回膜貫通のタンパク質である。ゴルジ複合体と原形質膜との間のシャトルとして機能するＳＴＥＡＰ２は、鉄および銅を還元して細胞へのそれらの移入を促進するメタロレダクターゼである。ＳＴＥＡＰ２は主に前立腺の上皮細胞に局在している。ＳＴＥＡＰ２はまた、正常な心臓、脳、膵臓、卵巣、骨格筋、乳腺、精巣、子宮、腎臓、肺、気管、結腸、および肝臓において発現される。ＳＴＥＡＰ２は、前立腺腫瘍、膀胱腫瘍、子宮頸腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、腎臓腫瘍、乳腫瘍、膵臓腫瘍、胃腫瘍、子宮腫瘍、および卵巣腫瘍を含む癌性組織において過剰発現される（非特許文献１、特許文献１、特許文献２）。
【０００４】
ＣＤ３は、Ｔ細胞受容体複合体（ＴＣＲ）と共にＴ細胞上に発現されるホモ二量体またはヘテロ二量体抗原であり、Ｔ細胞活性化に必要とされる。機能的ＣＤ３は、４つの異なる鎖：イプシロン、ゼータ、デルタ、およびガンマのうちの２つの二量体会合から形成される。ＣＤ３の二量体配置は、ガンマ／イプシロン、デルタ／イプシロン、およびゼータ／ゼータを含む。ＣＤ３に対する抗体はＴ細胞上でＣＤ３をクラスター化し、それによってペプチド負荷ＭＨＣ分子によるＴＣＲの関与と同様の方法でＴ細胞活性化を引き起こすことが示されている。したがって、抗ＣＤ３抗体はＴ細胞の活性化を含む治療目的のために提案されている。さらに、ＣＤ３および標的抗原に結合することができる二重特異性抗体は、標的抗原を発現する組織および細胞に対するＴ細胞免疫応答を標的とすることを含む治療的使用のために提案されている。
【０００５】
抗体−薬物複合体を含むＳＴＥＡＰ２を標的とする抗原結合分子、ならびにＳＴＥＡＰ２およびＣＤ３の両方に結合する二重特異性抗原結合分子は、ＳＴＥＡＰ２を発現する細胞を特異的に標的化しＴ細胞媒介的に死滅することが望まれる治療設定において有用である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】Ｃｈａｌｌｉｔａ−Ｅｉｄ−Ｐ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，２００３，ＷＯ０３／０８７３０６
【特許文献２】Ｅｍｔａｇｅ，Ｐ．Ｃ．Ｒ．，２００５，ＷＯ２００５／０７９４９０
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｇｏｍｅｓ，Ｉ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０：５７３−５８７
【発明の概要】
【０００８】
第１の態様において、本発明は、ヒトＳＴＥＡＰ２に結合する抗体およびその抗原結合断片を提供する。本発明のこの態様による抗体は、とりわけ、ＳＴＥＡＰ２を発現する細胞を標的とするのに有用である。本発明はまた、ヒトＳＴＥＡＰ２およびヒトＣＤ３に結合する二重特異性抗体およびその抗原結合断片を提供する。本発明のこの態様による二重特異性抗体は、例えばＳＴＥＡＰ２を発現する細胞のＴ細胞媒介性死滅が有益または望ましい状況下で、とりわけ、ＣＤ３を発現するＴ細胞を標的とし、Ｔ細胞活性化を刺激するのに有用である。例えば、二重特異性抗体はＣＤ３媒介性Ｔ細胞活性化を前立腺腫瘍細胞のような特異的ＳＴＥＡＰ２発現細胞に誘導することができる。
【０００９】
本発明の例示的な抗ＳＴＥＡＰ２抗体を本明細書の表１および表２に列挙する。表１は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列識別子、ならびに例示的な抗ＳＴＥＡＰ２抗体の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）および軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を示す。表２は、例示的な抗ＳＴＥＡＰ２のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３をコードする核酸分子の配列識別子を示す。
【００１０】
本発明は、表１に列挙されたＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００１１】
本発明はまた、表１に列挙されたＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＶＲ、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００１２】
本発明はまた、表１に列挙されたＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかと対形成した、表１に列挙されたＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかを含む、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲのアミノ酸配列対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。ある特定の実施形態によると、本発明は、表１に列挙された例示的な抗ＳＴＥＡＰ２抗体のいずれかに含有されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。特定の実施形態において、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対は、配列番号２５０／２５８（例えば、Ｈ２Ｍ１１１６２Ｎ）からなる群から選択される。
【００１３】
本発明はまた、表１に列挙されたＨＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００１４】
本発明はまた、表１に列挙されたＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００１５】
本発明はまた、表１に列挙されたＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００１６】
本発明はまた、表１に列挙されたＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００１７】
本発明はまた、表１に列挙されたＬＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００１８】
本発明はまた、表１に列挙されたＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００１９】
本発明はまた、表１に列挙されたＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかと対形成した表１に列挙されたＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかを含むＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列対（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。ある特定の実施形態によると、本発明は、表１に列挙された例示的な抗ＳＴＥＡＰ２抗体のいずれかに含有されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。特定の実施形態において、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対は、配列番号２５６／２６４（例えば、Ｈ２Ｍ１１１６２Ｎ）からなる群から選択される。
【００２０】
本発明はまた、表１に列挙された例示的な抗ＳＴＥＡＰ２抗体のいずれかに含有される６つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。特定の実施形態において、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットは、配列番号２５２−２５４−２５６−２６０−２６２−２６４（例えば、Ｈ２Ｍ１１１６２Ｎ）からなる群から選択される。
【００２１】
関連する実施形態において、本発明は、表１に列挙された例示的な抗ＳＴＥＡＰ２抗体のいずれかによって定義されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対内に含有される６つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）を含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。例えば、本発明は、配列番号２５０／２５８（例えば、Ｈ２Ｍ１１１６２Ｎ）からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対内に含有されるＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットを含む、抗体またはその抗原結合断片を含む。ＨＣＶＲアミノ酸配列およびＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するための方法および技術は、当技術分野において周知であり、それらを使用して、本明細書に開示される特定のＨＣＶＲアミノ酸配列および／またはＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定することができる。ＣＤＲの境界を同定するために使用可能な例示的な規則には、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、およびＡｂＭ定義が含まれる。一般的には、Ｋａｂａｔ定義は配列の可変性に基づいており、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は構造ループ領域の位置に基づいており、ＡｂＭ定義はＫａｂａｔのアプローチとＣｈｏｔｈｉａのアプローチの間の折衷案である。例えば、Ｋａｂａｔ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８（１９９７）、およびＭａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：９２６８−９２７２（１９８９）を参照されたい。抗体内のＣＤＲ配列を同定するために、公開データベースも利用可能である。
【００２２】
本発明はまた、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその一部をコードする核酸分子を提供する。例えば、本発明は、表１に列挙されたＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されたＨＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。
【００２３】
本発明はまた、表１に列挙されたＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されたＬＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。
【００２４】
本発明はまた、表１に列挙されたＨＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されたＨＣＤＲ１核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。
【００２５】
本発明はまた、表１に列挙されたＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されたＨＣＤＲ２核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。
【００２６】
本発明はまた、表１に列挙されたＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されたＨＣＤＲ３核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。
【００２７】
本発明はまた、表１に列挙されたＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されたＬＣＤＲ１核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。
【００２８】
本発明はまた、表１に列挙されたＬＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されたＬＣＤＲ２核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。
【００２９】
本発明はまた、表１に列挙されたＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されたＬＣＤＲ３核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。
【００３０】
本発明はまた、ＨＣＶＲが、３つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３アミノ酸配列セットが、表１に列挙された例示的な抗ＳＴＥＡＰ２抗体のいずれかによって定義されるとおりである、ＨＣＶＲをコードする核酸分子を提供する。
【００３１】
本発明は、ＬＣＶＲが、３つのＣＤＲのセット（すなわち、ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）を含み、ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットが、表１に列挙された例示的な抗ＳＴＥＡＰ２抗体のいずれかによって定義されるとおりである、ＬＣＶＲをコードする核酸分子を提供する。
【００３２】
本発明はまた、ＨＣＶＲが表１に列挙されたＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含み、ＬＣＶＲが表１に列挙されたＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含む、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの両方をコードする核酸分子を提供する。特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されたＨＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、表２に列挙されたＬＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、を含む。本発明のこの態様による特定の実施形態において、核酸分子は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲが両方とも、表１に列挙された同じ抗ＳＴＥＡＰ２抗体に由来する、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲをコードする。
【００３３】
本発明はまた、抗ＳＴＥＡＰ２抗体の重鎖可変領域または軽鎖可変領域を含むポリペプチドを発現できる組換え発現ベクターを提供する。例えば、本発明は、上述の核酸分子、すなわち表１に記載のＨＣＶＲ配列、ＬＣＶＲ配列、および／またはＣＤＲ配列のいずれかをコードする核酸分子のいずれかを含む組換え発現ベクターを含む。本発明の範囲内にはまた、このようなベクターが導入された宿主細胞、ならびに抗体または抗体断片の産生を可能にする条件下で宿主細胞を培養することによって抗体またはその一部を産生する方法と、そのように産生された抗体および抗体断片を回収する方法とが含まれる。
【００３４】
本発明は、改変グリコシル化パターンを有する抗ＳＴＥＡＰ２抗体を含む。いくつかの実施形態において、望ましくないグリコシル化部位を除去するための修飾、または例えば抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）機能を増大させるためのフコース部分を欠失している抗体は有用であり得る（Ｓｈｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）ＪＢＣ  ２７７：２６７３３を参照）。他の応用において、ガラクトシル化の修飾は、補体依存性細胞障害作用（ＣＤＣ）を修飾するために行うことができる。
【００３５】
別の態様において、本発明は、ＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する組換えヒト抗体またはその断片と薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物を提供する。別の関連する態様において、本発明は、抗ＳＴＥＡＰ２抗体と第２の治療薬との組み合わせである組成物を特徴とする。一実施形態において、第２の治療薬は、抗ＳＴＥＡＰ２抗体と有利に組み合わされる任意の薬剤である。本発明の抗ＳＴＥＡＰ２抗体を包含する追加の併用療法および併用製剤は、本明細書の他の箇所に開示されている。
【００３６】
別の態様において、本発明は、本発明の抗ＳＴＥＡＰ２抗体を用いてＳＴＥＡＰ２を発現する腫瘍細胞を標的化し／死滅させるための治療方法を提供し、その治療方法は本発明の抗ＳＴＥＡＰ２抗体を含む治療有効量の薬学的組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む。場合によっては、抗ＳＴＥＡＰ２抗体（またはその抗原結合断片）は、前立腺癌を治療するために使用することができ、またはＡＤＣＣを増加させる改変Ｆｃドメイン（例えば、Ｓｈｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）ＪＢＣ  ２７７：２６７３３を参照）、放射免疫療法、抗体−薬物複合体、または腫瘍切除の効率を高めるための他の方法を含むがこれらに限定されない方法で細胞障害性を高めるために修飾されてよい。
【００３７】
本発明はまた、ＳＴＥＡＰ２発現細胞に関連またはＳＴＥＡＰ２発現細胞によって引き起こされる疾患または障害（例えば、癌）の治療のための薬剤の製造における本発明の抗ＳＴＥＡＰ２抗体の使用を含む。一態様において、本発明は、医療に使用するための、本明細書に開示されている抗ＳＴＥＡＰ２抗体もしくは抗原結合断片、またはＳＴＥＡＰ２×ＣＤ３二重特異性抗体を含む化合物に関する。一態様において、本発明は、医療に使用するための、本明細書に開示されている抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を含む化合物に関する。
【００３８】
さらに別の態様において、本発明は、例えばイメージング試薬などの診断用途のための単一特異性抗ＳＴＥＡＰ２抗体を提供する。
【００３９】
さらに別の態様において、本発明は、本発明の抗ＣＤ３抗体または抗体の抗原結合部分を使用してＴ細胞活性化を刺激するための治療方法を提供し、その治療方法は抗体を含む治療有効量の薬学的組成物を投与することを含む。
【００４０】
別の態様において、本発明は、ＦＡＣＳ分析により測定した５０ｎＭ未満のＥＣ５０でＳＴＥＡＰ２発現Ｃ４−２細胞に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。別の態様において、本発明は、ＳＴＥＡＰ２発現Ｃ４−２細胞に結合し、それによって内在化される単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００４１】
本発明はさらに、ヒトＳＴＥＡＰ２への結合について、表１に記載のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む参照抗体と競合する抗体または抗原結合断片を提供する。別の態様において、本発明は、ヒトＳＴＥＡＰ２への結合について、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／５８、７４／５８、８２／５８、９０／５８、９８／５８、１０６／１１４、１２２／１３０、１３８／１４６、１５４／１６２、１７０／１７８、１８６／１９４、２０２／２１０、２１８／２２６、２３４／２４２、２５０／２５８、２６６／２７４、２８２／２９０、２９８／３０６、３１４／３２２、３３０／３３８、３４６／３５４、３６２／３７０、および３７８／３８６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む参照抗体と競合する抗体または抗原結合断片を提供する。
【００４２】
本発明はさらに、表１に記載のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む参照抗体としてヒトＳＴＥＡＰ２上の同じエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。別の態様において、抗体または抗原結合断片は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／５８、７４／５８、８２／５８、９０／５８、９８／５８、１０６／１１４、１２２／１３０、１３８／１４６、１５４／１６２、１７０／１７８、１８６／１９４、２０２／２１０、２１８／２２６、２３４／２４２、２５０／２５８、２６６／２７４、２８２／２９０、２９８／３０６、３１４／３２２、３３０／３３８、３４６／３５４、３６２／３７０、および３７８／３８６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む参照抗体としてヒトＳＴＥＡＰ２上の同じエピトープに結合する。
【００４３】
本発明はさらに、ヒトＳＴＥＡＰ２に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片を提供し、抗体または抗原結合断片は、表１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）、および表１に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む。別の態様において、単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／５８、７４／５８、８２／５８、９０／５８、９８／５８、１０６／１１４、１２２／１３０、１３８／１４６、１５４／１６２、１７０／１７８、１８６／１９４、２０２／２１０、２１８／２２６、２３４／２４２、２５０／２５８、２６６／２７４、２８２／２９０、２９８／３０６、３１４／３２２、３３０／３３８、３４６／３５４、３６２／３７０、および３７８／３８６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対の重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含む。さらに別の態様において、単離された抗体または抗原結合断片は、それぞれ、配列番号４−６−８−１２−１４−１６、２０−２２−２４−２８−３０−３２、３６−３８−４０−４４−４６−４８、５２−５４−５６−６０−６２−６４、６８−７０−７２−６０−６２−６４、７６−７８−８０−６０−６２−６４、８４−８６−８８−６０−６２−６４、９２−９４−９６−６０−６２−６４、１００−１０２−１０４−６０−６２−６４、１０８−１１０−１１２−１１６−１１８−１２０、１２４−１２６−１２８−１３２−１３４−１３６、１４０−１４２−１４４−１４８−１５０−１５２、１５６−１５８−１６０−１６４−１６６−１６８、１７２−１７４−１７６−１８０−１８２−１８４、１８８−１９０−１９２−１９６−１９８−２００、２０４−２０６−２０８−２１２−２１４−２１６、２２０−２２２−２２４−２２８−２３０−２３２、２３６−２３８−２４０−２４４−２４６−２４８、２５２−２５４−２５６−２６０−２６２−２６４、２６８−２７０−２７２−２７６−２７８−２８０、２８４−２８６−２８８−２９２−２９４−２９６、３００−３０２−３０４−３０８−３１０−３１２、３１６−３１８−３２０−３２４−３２６−３２８、３３２−３３４−３３６−３４０−３４２−３４４、３４８−３５０−３５２−３５６−３５８−３６０、３６４−３６６−３６８−３７２−３７４−３７６、および３８０−３８２−３８４−３８８−３９０−３９２からなる群から選択されるＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３ドメインを含む。
【００４４】
別の態様において、本発明は、ヒトＳＴＥＡＰ２に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片を提供し、抗体または抗原結合断片は、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、７４、８２、９０、９８、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、および３７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６，２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、および３８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）とを含む。さらなる態様において、単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／５８、７４／５８、８２／５８、９０／５８、９８／５８、１０６／１１４、１２２／１３０、１３８／１４６、１５４／１６２、１７０／１７８、１８６／１９４、２０２／２１０、２１８／２２６、２３４／２４２、２５０／２５８、２６６／２７４、２８２／２９０、２９８／３０６、３１４／３２２、３３０／３３８、３４６／３５４、３６２／３７０、および３７８／３８６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、請求項１０に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【００４５】
別の態様によると、本発明は、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその抗原結合断片と治療薬（例えば細胞傷害性薬剤）とを含む抗体−薬物複合体を提供する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合断片および細胞傷害性薬剤は、本明細書で論じるように、リンカーを介して共有結合している。様々な実施形態において、抗ＳＴＥＡＰ２抗体または抗原結合断片は、本明細書に記載の抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片のいずれかであり得る。
【００４６】
いくつかの実施形態において、細胞傷害性薬剤は、アウリスタチン、メイタンシノイド、ツブリシン、トマイマイシン誘導体、またはドラスタチン誘導体から選択される。場合によっては、細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥもしくはＭＭＡＦから選択されるアウリスタチン、またはＤＭ１もしくはＤＭ４から選択されるメイタンシノイドである。いくつかの実施形態において、細胞傷害性薬剤は、本明細書で論じるように、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の構造を有するメイタンシノイドである。
【００４７】
いくつかの実施形態において、細胞傷害性薬剤は、以下の構造を有するメイタンシノイドである。
【化１】
2019532056.tif 000003
【００４８】
いくつかの実施形態において、細胞傷害性薬剤は、以下の構造を有するメイタンシノイドである。
【化２】
2019532056.tif 000004
【００４９】
いくつかの実施形態において、抗体−薬物複合体は抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片、および次式を含み、
【化３】
2019532056.tif 000005
式中、
【化４】
2019532056.tif 000006
は抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片への結合である。
【００５０】
いくつかの実施形態において、抗体−薬物複合体は抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片、および次式を含み、
【化５】
2019532056.tif 000007
式中、
【化６】
2019532056.tif 000008
は抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片への結合である。
【００５１】
いくつかの実施形態において、抗体−薬物複合体は抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片、および次式を含み、
【化７】
2019532056.tif 000009
式中、
【化８】
2019532056.tif 000010
は抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片への結合である。
【００５２】
いくつかの実施形態において、結合は、システイン残基の硫黄成分を介して抗体またはその断片と接触する。
【００５３】
いくつかの実施形態において、抗体−薬物複合体は抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片と、
【化９】
2019532056.tif 000011
それらの混合物とを含み、
式中、
【化１０】
2019532056.tif 000012
が、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片への結合である。
【００５４】
いくつかの実施形態において、結合は、リジン残基の窒素成分を介して抗体またはその断片と接触する。
【００５５】
上記または本明細書で論じられる抗体−薬物複合体の様々な実施形態のいずれかにおいて、抗体−薬物複合体は、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片あたり１〜４つの細胞傷害性薬剤を含むことができる。
【００５６】
別の態様によると、本発明は、ＳＴＥＡＰ２およびＣＤ３に結合する二重特異性抗原結合分子（例えば抗体）を提供する。そのような二重特異性抗原結合分子はまた、本明細書において「抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３二重特異性分子」、「抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性分子」、または「ＳＴＥＡＰ２×ＣＤ３ｂｓＡｂ」とも呼ばれる。抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３二重特異性分子はＳＴＥＡＰ２（例えば前立腺腫瘍）を発現する細胞（例えば腫瘍細胞）を標的化するのに有用であり、二重特異性分子の抗ＣＤ３部分はＴ細胞を活性化するのに有用である。腫瘍細胞上のＳＴＥＡＰ２およびＴ細胞上のＣＤ３の同時結合は、活性化Ｔ細胞によって標的腫瘍細胞を直接死滅させる（細胞溶解）を促進する。したがって、本発明の抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３二重特異性分子は、とりわけ、ＳＴＥＡＰ２発現腫瘍（例えば、前立腺癌）に関連するかまたはそれによって引き起こされる疾患および障害を治療するために有用である。
【００５７】
本発明のこの態様による二重特異性抗原結合分子は、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメイン、およびＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む。本発明は、各抗原結合ドメインが軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と対をなす重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３二重特異性分子（例えば、二重特異性抗体）を含む。本発明の特定の例示的実施形態において、抗ＣＤ３抗原結合ドメインおよび抗ＳＴＥＡＰ２抗原結合ドメインがそれぞれ共通のＬＣＶＲと対をなす異なる別個のＨＣＶＲを含む。例えば、本明細書の実施例４に示すように、第１の抗原結合ドメインが抗ＳＴＥＡＰ２抗体（例えば、抗ＳＴＥＡＰ２抗原結合ドメインに含まれるものと同じＬＣＶＲ）に由来するＬＣＶＲと対をなす抗ＣＤ３抗体に由来するＨＣＶＲを含む、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、第２の抗原結合ドメインが抗ＳＴＥＡＰ２抗体に由来するＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む、ＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインと、を含む、二重特異性抗体が構築された。言い換えれば、本明細書に開示される例示的な分子において、抗ＣＤ３抗体由来のＨＣＶＲと抗ＳＴＥＡＰ２抗体由来のＬＣＶＲとの対合は、ＣＤ３に特異的に結合する（しかしＳＴＥＡＰ２には結合しない）抗原結合ドメインを生成する。このような実施形態において、第１および第２の抗原結合ドメインは、異なる抗ＣＤ３および抗ＳＴＥＡＰ２のＨＣＶＲを含むが、共通の抗ＳＴＥＡＰ２のＬＣＶＲを共有する。他の実施形態において、二重特異性抗原結合分子は異なる抗ＣＤ３および抗ＳＴＥＡＰ２ＨＣＶＲを含むが、共通のＬＣＶＲを共有する。このＬＣＶＲのアミノ酸配列は、例えば配列番号１８９０に示されており、対応するＣＤＲのアミノ酸配列（すなわちＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）は配列番号１８９２、１８９４、および１８９６にそれぞれ示される。遺伝子改変マウスを使用して、２つの異なるヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメントのうちの１つに由来する可変ドメインを含む同一の軽鎖と会合する２つの異なる重鎖を含む完全ヒト型二重特異性抗原結合分子を産生することができる。あるいは、可変重鎖を１つの共通の軽鎖と対にし、宿主細胞中で組換えで発現させてもよい。このように、本発明の抗体は、単一の再編成された軽鎖と会合した免疫グロブリン重鎖を含み得る。いくつかの実施形態において、軽鎖は、ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメントまたはＶκ３−２０遺伝子セグメントに由来する可変ドメインを含む。他の実施形態において、軽鎖は、ヒトＪκ５またはヒトＪκ１遺伝子セグメントと再編成されたヒトＶκ１−３９遺伝子セグメントに由来する可変ドメインを含む。
【００５８】
本発明は、抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性分子を提供し、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、２０１４年３月２７日公開の米国特許公開第２０１４／００８８２９５号および２０１６年７月２９日出願のＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０４４７３２に記載のとおり、ＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれか、ＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれか、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対のいずれか、重鎖ＣＤＲ１−ＣＤＲ２−ＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれか、または軽鎖ＣＤＲ１−ＣＤＲ２−ＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかを含む。
【００５９】
さらに、本発明は、抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性分子を提供し、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは本明細書の表９、１１、および１５に記載のＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかを含む。ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインはまた、本明細書の表１、９、１２、および１７に記載のＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかを含んでもよい。特定の実施形態によると、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、本明細書の表９、１１、１２、１５、および１７に記載のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対のいずれかを含む。本発明はまた、抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性分子を提供し、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、本明細書の表９、１１、および１５に記載の重鎖ＣＤＲ１−ＣＤＲ２−ＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれか、および／または本明細書の表１、９、１２、および１７に記載の軽鎖ＣＤＲ１−ＣＤＲ２−ＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかを含む。
【００６０】
特定の実施形態によると、本発明は、抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性分子を提供し、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、本明細書の表９、１１、および１５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。
【００６１】
本発明はまた、抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性分子を提供し、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、本明細書の表１、９、１２、および１７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。
【００６２】
本発明はまた、抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性分子を提供し、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、本明細書の表９、１１、１２、１５、および１７に記載のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）アミノ酸配列対を含む。
【００６３】
本発明はまた、抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性分子を提供し、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、本明細書の表９、１１、および１５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）ドメイン、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、本明細書の表１、９、１２、および１７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、を含む。
【００６４】
特定の実施形態において、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、本明細書の表９、１１、１２、１５、および１７に記載のＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対を含む。
【００６５】
本発明はまた、抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子を提供し、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、本明細書の表９、１１、および１５に記載のアミノ酸を有する重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、表９、１１、および１５に記載のアミノ酸を有する重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、表９、１１、および１５に記載のアミノ酸を有する重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、本明細書の表１、９、１２、および１７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、本明細書の表１、９、１２、および１７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、本明細書の表１、９、１２、および１７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、を含む。
【００６６】
本発明の特定の非限定的で例示的な抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子は、本明細書の表９、１１、１２、１５、および１７に記載のアミノ酸配列をそれぞれ有する、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３ドメインを含む、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを含む。
【００６７】
本発明はさらに、二重特異性抗原結合分子を提供し、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、表９、表１１、または表１５に記載のアミノ酸を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）由来の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）と、表１、表９、表１２、または表１７に記載のアミノ酸配列配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）由来の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）とを含む。
【００６８】
別の態様において、本発明は、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１７３０、１７６２、および１８６６からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）由来の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）と、配列番号２５８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）由来の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）とを含む、二重特異性抗原結合分子を提供する。
【００６９】
本発明はさらに、二重特異性抗原結合分子を提供し、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインが、３つの重鎖相補性決定領域（Ａ１−ＨＣＤＲ１、Ａ１−ＨＣＤＲ２、およびＡ１−ＨＣＤＲ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（Ａ１−ＬＣＤＲ１、Ａ１−ＬＣＤＲ２、およびＡ１−ＬＣＤＲ３）とを含み、Ａ１−ＨＣＤＲ１は配列番号１７３２、１７６４、および１８６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＨＣＤＲ２は配列番号１７３４、１７６６、および１８７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＨＣＤＲ３は配列番号１７３６、１７６８、および１８７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ１は配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ２は配列番号２６２のアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ３は配列番号２６４のアミノ酸配列を含む。
【００７０】
さらなる態様において、本発明は、二重特異性抗原結合分子を提供し、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１７３０／２５８、１７６２／２５８、および１８６６／２５８からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対の重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含む。
【００７１】
別の態様において、本発明は抗原結合分子を提供し、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインが、３つの重鎖相補性決定領域（Ａ１−ＨＣＤＲ１、Ａ１−ＨＣＤＲ２、およびＡ１−ＨＣＤＲ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（Ａ１−ＬＣＤＲ１、Ａ１−ＬＣＤＲ２、およびＡ１−ＬＣＤＲ３）とを含み、ヒトＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインが、３つの重鎖相補性決定領域（Ａ２−ＨＣＤＲ１、Ａ２−ＨＣＤＲ２、およびＡ２−ＨＣＤＲ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（Ａ２−ＬＣＤＲ１、Ａ２−ＬＣＤＲ２、およびＡ２−ＬＣＤＲ３）とを含み、Ａ１−ＨＣＤＲ１は、配列番号１７３２、１７６４、および１８６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＨＣＤＲ２は、配列番号１７３４、１７６６、および１８７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＨＣＤＲ３は、配列番号１７３６、１７６８、および１８７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ１は配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ２は配列番号２６２のアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ３は配列番号２６４のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＨＣＤＲ１は配列番号２５２のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＨＣＤＲ２は配列番号２５４のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＨＣＤＲ３は配列番号２５６のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＬＣＤＲ１は配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＬＣＤＲ２は配列番号２６２のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＬＣＤＲ３は配列番号２６４のアミノ酸配列を含む。
【００７２】
本発明の特定の非限定的で例示的な抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子は、ＦＲ１（配列番号１９０３）、ＦＲ２（配列番号１９０４）、ＦＲ３（配列番号１９０５）、およびＦＲ４（配列番号１９０６）から選択されるアミノ酸配列を有する可変ドメインフレームワーク領域を含む重鎖を含むＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインを含む。
【００７３】
さらなる実施形態において、本発明の例示的な抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子は、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインが配列番号１９０７−１９０８−１９０９のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３を含むＨＣＶＲを含む、二重特異性抗原結合分子を含む。
【００７４】
本発明はまた、抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性分子を提供し、ＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２、１８、３４、５０、６６、７４、８２、９０、９８、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、および３７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。
【００７５】
本発明はまた、抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性分子を提供し、ＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号１０、２６、４２、５８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、および３８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。
【００７６】
本発明はまた、抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性分子を提供し、ＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２５０／２５８のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列対を含む。
【００７７】
本発明はまた、抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性分子を提供し、ＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２５６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、配列番号２６４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列とを含む。
【００７８】
特定の実施形態において、ＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２５６／２６４からなる群から選択されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対を含む。
【００７９】
ＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号４、２０、３６、５２、６８、７６、８４、９２、１００、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、および３８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、配列番号６、２２、３８、５４、７０、７８、８６、９４、１０２、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、および３８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、配列番号８、２４、４０、５６、７２、８０、８８、９６、１０４、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１８２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、および３８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、配列番号１２、２８、４４、６０、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３７２、および３８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、配列番号１４、３０、４６、６２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３７４、および３９０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、配列番号１６、３２、４８、６４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３７６、および３９２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）ドメイン、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、を含む。
【００８０】
本発明の特定の非限定的で例示的な抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子は、配列番号２５２−２５４−２５６−２６０−２６２−２６４からなる群から選択されるアミノ酸配列をそれぞれ有する、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３を含む、ＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む。
【００８１】
関連する実施形態において、本発明は、ＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号２５０／２５８からなる群から選択される重鎖および軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）配列内に含有される重鎖および軽鎖ＣＤＲドメインを含む、抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子を含む。
【００８２】
別の態様において、本発明は、ヒトＣＤ３に結合する第１の抗原結合ドメインおよびヒトＳＴＥＡＰ２に結合する第２の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗原結合分子を提供し、第２の抗原結合ドメインは、本発明の抗ＳＴＥＡＰ２抗体のいずれか１つの抗体または抗結合断片に由来する。さらなる態様において、本発明は、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメイン、およびヒトＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗原結合分子を提供する。
【００８３】
本発明はさらに、ヒトＣＤ３を発現するヒト細胞およびカニクイザルＣＤ３を発現するカニクイザル細胞に結合する二重特異性抗原結合分子を提供する。別の態様において、二重特異性抗原結合分子は、ヒトＳＴＥＡＰ２を発現しているヒト細胞に結合する。
【００８４】
別の態様において、本発明は、ヒト前立腺癌異種移植を保有する免疫無防備状態のマウスにおける腫瘍増殖を阻害する二重特異性抗原結合分子を提供する。
【００８５】
特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ３抗体、その抗体結合断片および二重特異性抗体は、生殖系列配列と親抗体配列との間の相違に基づいて段階的に親のアミノ酸残基を置き換えることによって作製された。
【００８６】
いくつかの実施形態において、本発明は、二重特異性抗原結合分子を提供し、第２の抗原結合ドメインは、ヒトＳＴＥＡＰ２への結合について、３つの重鎖相補性決定領域（Ａ２−ＨＣＤＲ１、Ａ２−ＨＣＤＲ２、およびＡ２−ＨＣＤＲ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（Ａ２−ＬＣＤＲ１、Ａ２−ＬＣＤＲ２、およびＡ２−ＬＣＤＲ３）とを含む参照抗原結合タンパク質と競合し、Ａ２−ＨＣＤＲ１は配列番号２５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＨＣＤＲ２は配列番号２５４のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＨＣＤＲ３は、配列番号２５６のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＬＣＤＲ１は、配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＬＣＤＲ２は配列番号２６２のアミノ酸配列を含み、Ａ２−ＬＣＤＲ３は配列番号２６４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本発明は、二重特異性抗原結合分子を提供し、第２の抗原結合ドメインは、ヒトＳＴＥＡＰ２への結合について、配列番号２５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、配列番号２５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）とを含む参照抗原結合タンパク質と競合する。
【００８７】
いくつかの実施形態において、本発明は二重特異性抗原結合分子を提供し、第１の抗原結合ドメインが、ヒトＣＤ３への結合について、３つの重鎖相補性決定領域（Ａ１−ＨＣＤＲ１、Ａ１−ＨＣＤＲ２、およびＡ１−ＨＣＤＲ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（Ａ１−ＬＣＤＲ１、Ａ１−ＬＣＤＲ２、およびＡ１−ＬＣＤＲ３）とを含む参照抗原結合タンパク質と競合し、Ａ１−ＨＣＤＲ１は配列番号１７３２、１７６４、および１８６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＨＣＤＲ２は配列番号１７３４、１７６６、および１８７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＨＣＤＲ３は配列番号１７３６、１７６８、および１８７２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ１は配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ２は配列番号２６２のアミノ酸配列を含み、Ａ１−ＬＣＤＲ３は、配列番号２６４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本発明は二重特異性抗原結合分子を提供し、第１の抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ３への結合について、配列番号１７３０、１７６２、および１８６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、配列番号２５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）とを含む参照抗原結合タンパク質と競合する。
【００８８】
いくつかの実施形態において、本発明は、二重特異性抗原結合分子を提供し、第１の抗原結合ドメインが、ヒトＣＤ３への結合について、配列番号１７３０、１７６２、および１８６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、配列番号２５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）とを含む参照抗原結合タンパク質と競合し、第２の抗原結合ドメインは、ヒトＳＴＥＡＰ２への結合について、配列番号２５０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、配列番号２５８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）とを含む参照抗原結合タンパク質と競合する。
【００８９】
一態様において、本発明は、抗ＳＴＥＡＰ２抗原結合分子または抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３二重特異性抗原結合分子および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む薬学的組成物を提供する。本発明はさらに、抗ＳＴＥＡＰ２抗原結合分子または抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３二重特異性抗原結合分子および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む薬学的組成物を対象に投与することを含む、対象における癌の治療方法を提供する。いくつかの態様において、癌は前立腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、肺癌、結腸癌、腎臓癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、子宮癌、および卵巣癌からなる群から選択れる。場合によっては、癌は前立腺癌である。場合によっては、前立腺癌は去勢抵抗性前立腺癌である。
【００９０】
別の態様において、本発明は、本明細書に開示の抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲまたはＣＤＲ配列のいずれかをコードする核酸分子を提供し、本明細書の表２、１０、１３、１４、１６、および１８に記載のポリヌクレオチド配列を含む核酸分子、ならびに表２、１０、１３、１４、１６、および１８に記載のポリヌクレオチド配列のうちの２つ以上をその機能的組み合わせまたは配置のいずれかで含む核酸分子を包含する。本発明の核酸を保有する組換え発現ベクター、およびそのようなベクターが導入された宿主細胞もまた、抗体の産生を可能にする条件下で宿主細胞を培養することによって、および産生された抗体を回収することによって、抗体を産生する方法と同様に本発明に含まれる。
【００９１】
本発明は、ＣＤ３とＳＴＥＡＰ２に結合する二重特異性抗原結合分子を形成するために、ＣＤ３に特異的に結合する前述の抗原結合ドメインのいずれかが、ＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する前述の抗原結合ドメインのいずれかと組み合わされ、連結され、あるいは関連付けられる、抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子を含む。
【００９２】
本発明は、改変グリコシル化パターンを有する抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子を含む。いくつかの用途において、望ましくないグリコシル化部位を除去するための修飾、または例えば抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）機能を増大させるためのフコース部分を欠失している抗体は有用であり得る（Ｓｈｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）ＪＢＣ  ２７７：２６７３３を参照）。他の応用において、ガラクトシル化の修飾は、補体依存性細胞障害作用（ＣＤＣ）を修飾するために行うことができる。
【００９３】
別の態様において、本発明は、本明細書に開示の抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子と薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物を提供する。関連する態様において、本発明は、抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子と第２の治療薬との組み合わせである組成物を特徴とする。一実施形態において、第２の治療薬は、抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子と有利に組み合わされる任意の薬剤である。抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子と有利に組み合わせることができる例示的な薬剤は、本明細書の他所に詳細に論じられている。
【００９４】
さらに別の態様において、本発明は、本発明の抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子を用いてＳＴＥＡＰ２を発現する腫瘍細胞を標的化し／死滅させるための治療方法を提供し、その治療方法は、本発明の抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子を含む治療有効量の薬学的組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む。
【００９５】
本発明はまた、ＳＴＥＡＰ２発現細胞に関連するかまたはそれによって引き起こされる疾患または障害の治療のための薬剤の製造における本発明の抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子の使用を含む。
【００９６】
他の実施形態は、後述の詳細な説明の再検討から明らかとなることになっている。
【図面の簡単な説明】
【００９７】
【図１】移植後１３日目に１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、または４０ｍｇ／ｋｇ用量でＨ１Ｈ７８１４Ｎ−７を投与したＳＴＥＡＰ２陽性前立腺癌異種移植モデル（Ｃ４−２細胞を移植したＳＣＩＤマウス）における、Ｈ１Ｈ７８１４Ｎ−７の有効性を示す。
【図２】移植後１４日目に２０ｍｇ／ｋｇ用量でＨ１Ｈ７８１４Ｎ−７を投与したＳＴＥＡＰ２陽性前立腺癌異種移植モデル（Ｃ４−２細胞を移植したＳＣＩＤマウス）における、Ｈ１Ｈ７８１４Ｎ−７の有効性を示す。
【図３】移植後１７日目に１５０μｇ／ｋｇ用量でＨ１Ｈ７８１４Ｎ−７を投与したＳＴＥＡＰ２陽性前立腺癌異種移植モデル（Ｃ４−２細胞を移植したＳＣＩＤマウス）における、Ｈ１Ｈ７８１４Ｎ−７の有効性を示す。
【図４】移植後２９日目に２．５ｍｇ／ｋｇ用量で（ＤＡＲ３．６ＴＶ）Ｈ１Ｈ７８１４Ｎ−６０を投与したＳＴＥＡＰ２陽性前立腺癌異種移植モデル（Ｃ４−２細胞を移植したＳＣＩＤマウス）における、Ｈ１Ｈ７８１４Ｎ−６０の有効性を示す。
【図５】ジャーカット細胞に対するＳＴＥＡＰ２xＣＤ３二重特異性抗体の結合を示す。
【図６】ＳＴＥＡＰ２／１キメラ構築物を発現するように操作されたヒト前立腺癌細胞株（ＰＣ３）へのＳＴＥＡＰ２×ＣＤ３二重特異性抗体の結合を示す。
【図７】カニクイザルＴ細胞に対するＳＴＥＡＰ２xＣＤ３二重特異性抗体の結合を示す。
【図８】カニクイザルＴ細胞に対するＳＴＥＡＰ２xＣＤ３二重特異性抗体の結合を示す。
【図９】ＳＴＥＡＰ２xＣＤ３二重特異性抗体によるヒトＰＢＭＣ増殖の誘導を示す。
【図１０】ＳＴＥＡＰ２×ＣＤ３二重特異性抗体によるカニクイザルＰＢＭＣ増殖の誘導を示す。
【図１１】ヒトＰＢＭＣの存在下での代表的なＳＴＥＡＰ２×ＣＤ３二重特異性抗体による細胞傷害性アッセイにおけるＣ４−２細胞（ＳＴＥＡＰ２保有標的細胞）の枯渇を示す。
【図１２】代表的なＳＴＥＡＰ２×ＣＤ３二重特異性抗体によるヒトＴ細胞の活性化を示し、図１１に示す観察された標的細胞溶解と相関する。
【発明を実施するための形態】
【００９８】
本発明を説明する前に、本発明は、特定の方法および説明される実験条件が変わり得るので、このような方法および条件に制限されないことは理解されることになっている。本明細書で使用する用語は、特定の実施形態のみを説明するためのものであり、本発明の範囲が添付の特許請求の範囲によってのみ制限されるので、制限することを企図するものではないことも理解されることになっている。
【００９９】
別段の定義がない限り、本明細書で使用する技術用語および科学用語は全て、本発明の属する技術分野の当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で使用される場合、用語「約」は、特定の列挙された数値に関して使用されるとき、その値が列挙された値から１％以下だけ変動し得ることを意味する。例えば、本発明で使用する場合、表現「約１００」は、９９および１０１、ならびにその間の全値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）を含む。
【０１００】
本明細書に説明されるものと類似のまたは等価の任意の方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、好ましい方法および材料をこれから説明する。本明細書で言及される特許、出願、および非特許刊行物は全て、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１０１】
定義
本明細書で用いられる「ＣＤ３」という表現は、多分子Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の一部としてＴ細胞上に発現され、４つの受容体鎖すなわちＣＤ３−イプシロン、ＣＤ３−デルタ、ＣＤ３−ゼータ、ＣＤ３−ガンマのうち２つの会合から形成されるホモ二量体またはヘテロ二量体からなる抗原を指す。ヒトＣＤ３−イプシロンは、配列番号１８９７に記載のアミノ酸配列を含み、ヒトＣＤ３−デルタは、配列番号１８９８に記載のアミノ酸配列を含む。本明細書におけるタンパク質、ポリペプチド、およびタンパク質断片への全ての言及は、非ヒト種由来であると明確に特定されない限り、それぞれのタンパク質、ポリペプチド、またはタンパク質断片のヒト型を指すことを意図している。したがって、表現「ＣＤ３」は、非ヒト種、例えば「マウスＣＤ３」、「サルＣＤ３」などに由来するものとして特定されない限り、ヒトＣＤ３を意味する。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、「ＣＤ３に結合する抗体」または「抗ＣＤ３抗体」は、単一のＣＤ３サブユニット（例えば、イプシロン、デルタ、ガンマ、またはゼータ）を特異的に認識する抗体およびその抗原結合断片、ならびに２つのＣＤ３サブユニットの二量体複合体を特異的に認識する抗体およびその抗原結合断片（例えば、ガンマ／イプシロン、デルタ／イプシロン、およびゼータ／ゼータＣＤ３二量体）を含む。本発明の抗体および抗原結合断片は、可溶性ＣＤ３および／または細胞表面発現ＣＤ３に結合することができる。可溶性ＣＤ３には、天然ＣＤ３タンパク質、ならびに膜貫通ドメインを欠くかまたは細胞膜と会合していない、例えば単量体および二量体ＣＤ３構築物などの組換えＣＤ３タンパク質変異体が含まれる。
【０１０３】
本明細書で使用される場合、表現「細胞表面発現ＣＤ３」は、インビトロまたはインビボで細胞表面上に発現される１つ以上のＣＤ３タンパク質（複数可）を意味し、ＣＤ３タンパク質の少なくとも一部は細胞膜の細胞外側に曝され、抗体の抗原結合部分に接近可能である。「細胞表面発現ＣＤ３」としては、細胞膜内の機能的Ｔ細胞受容体の中に含まれるＣＤ３タンパク質が挙げられる。「細胞表面発現ＣＤ３」という表現は、細胞の表面上のホモ二量体またはヘテロ二量体の一部として発現されるＣＤ３タンパク質（例えば、ガンマ／イプシロン、デルタ／イプシロン、およびゼータ／ゼータＣＤ３二量体）を含む。「細胞表面発現ＣＤ３」という表現はまた、他のＣＤ３鎖型なしで、細胞の表面上にそれ自体で発現するＣＤ３鎖（例えば、ＣＤ３−イプシロン、ＣＤ３−デルタ、またはＣＤ３−ガンマ）も含む。あるいは、「細胞表面発現ＣＤ３」は、通常その表面にヒトＣＤ３を発現しないがその表面にＣＤ３を発現するように人工的に操作されている細胞の表面上に発現されるＣＤ３タンパク質を含むかまたはそれからなることができる。あるいは、「細胞表面発現ＣＤ３」は、通常その表面にヒトＣＤ３を発現しないがその表面にＣＤ３を発現するように人工的に操作されている細胞の表面上に発現されるＣＤ３タンパク質を含むかまたはそれからなることができる。
【０１０４】
本明細書で使用される「ＳＴＥＡＰ２」という表現は、前立腺の６回膜貫通上皮抗原２を指す。ＳＴＥＡＰ２は、前立腺上皮細胞において高発現される、内在性６回膜貫通型タンパク質であり、前立腺癌の細胞表面マーカーである。例えば、ＳＴＥＡＰ２は、ＬＮＣａＰ前立腺細胞株において有意なレベルで発現することが見出された。（Ｐｏｒｋｋａ，ｅｔ  ａｌ．Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００２，８２：１５７３−１５８２）。ＳＴＥＡＰ２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ：Ｑ８ＮＦＴ２．３）は、ヒトの染色体領域７ｑ２１に位置するＳＴＥＡＰ２遺伝子によってコードされる４９０アミノ酸タンパク質である。例えば、配列番号１８９９に記載のヒトＳＴＥＡＰ２のアミノ酸配列を参照のこと。
【０１０５】
本明細書で使用される場合、「ＳＴＥＡＰ２に結合する抗体」または「抗ＳＴＥＡＰ２抗体」は、ＳＴＥＡＰ２を特異的に認識する抗体およびその抗原結合断片を含む。
【０１０６】
用語「抗原結合分子」は、抗体および抗体の抗原結合断片を含み、例えば二重特異性抗体を含む。
【０１０７】
本発明で使用する場合、「抗体」という用語は、特定の抗原（例えばＳＴＥＡＰ２またはＣＤ３）に特異的に結合するかまたはそれと相互作用する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、任意の抗原結合分子または分子複合体を意味する。用語「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互連結された４本のポリペプチド鎖、２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子、ならびにそれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略される）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略される）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が点在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域へとさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる。本発明の異なる実施形態において、抗ＳＴＥＡＰ２抗体または抗ＣＤ３抗体（またはその抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよく、または天然にもしくは人工的に修飾されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ以上のＣＤＲの並列分析に基づいて定義され得る。
【０１０８】
本発明で使用する場合、「抗体」という用語は、完全抗体分子の抗原結合断片も含む。抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」という用語、およびこれらに類するものは、本明細書で使用する場合、天然の、酵素処理で入手可能な、合成の、または遺伝子操作された、抗原を特異的に結合して複合体を形成するポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗体結合断片は、例えば、抗体可変ドメインおよび場合により定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現に関連するタンパク質消化技術または組換え遺伝子操作技術などの任意の適切な標準的技術を用いて、完全抗体分子から誘導され得る。このようなＤＮＡは既知であり、および／または例えば市販の供給源、ＤＮＡライブラリー（例えばファージ−抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能であるか、または合成することができる。ＤＮＡは、例えば、１つ以上の可変ドメインおよび／もしくは定常ドメインを適切な配置変更と配置し、またはコドンを導入し、システイン残基を生成し、アミノ酸を修飾、付加もしくは欠失などするために、化学的にまたは分子生物学技術を用いて配列決定および操作され得る。
【０１０９】
抗体結合断片の非限定例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）Ｆｄ断片、（ｉｖ）Ｆｖ断片、（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、（ｖｉ）ｄＡｂ断片、および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））を模倣するアミノ酸残基、または拘束ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドからなる最小認識単位が挙げられる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小型モジュール型免疫医薬品（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の操作された分子も、本明細書で使用する「抗原結合断片」という表現に包含される。
【０１１０】
抗体の抗原結合断片は、典型的には、少なくとも１つの可変ドメインを含むことになっている。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成物であり得、概して、１つ以上のフレームワーク配列に隣接しているかまたは１つ以上のフレームワーク配列と共にインフレームである少なくとも１つのＣＤＲを含む。ＶＬドメインと結合したＶＨドメインを有する抗体結合断片において、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、任意の適切な配置で互いに対して配置され得る。例えば、可変領域は二量体であり、ＶＨ−ＶＨ、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＬ二量体を含んでもよい。あるいは、抗体の抗原結合断片は、単量体のＶＨドメインまたはＶＬドメインを含有し得る。
【０１１１】
ある特定の実施形態において、抗体の抗原結合断片は、少なくとも１つの定常ドメインへ共有結合した少なくとも１つの可変ドメインを含有し得る。本発明の抗体の抗原結合断片内に見出すことができる可変および定常ドメインの非限定的で例示的な構成としては、（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１、（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２、（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３、（ｉｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２、（ｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３、（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３、（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ、（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１、（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２、（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３、（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２、（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３、（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３、および（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬが挙げられる。先に列挙した例示的な立体配置のいずれかを含む、可変ドメインおよび定常ドメインの任意の立体配置において、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接連結されていてもよく、または完全もしくは部分的ヒンジ領域もしくはリンカー領域によって連結されていてもよい。ヒンジ領域は、単一のポリペプチド分子において隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメイン間の可撓性または半可撓性の結合をもたらす少なくとも２つの（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０またはそれより多数の）アミノ酸からなり得る。そのうえ、本発明の抗体の抗原結合断片は、互いとのおよび／または１つ以上の単量体ＶＨドメインもしくはＶＬドメインとの非共有結合において、先に列挙した可変ドメイン立体配置および定常ドメイン立体配置のいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含み得る。
【０１１２】
完全抗体分子と同様に、抗体結合断片は、単一特異性または多重特異性（例えば、二重特異性）であり得る。抗体の多重特異性抗原結合断片は、典型的には、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含むことになっており、各可変ドメインは、別個の抗原へまたは同じ抗原上の異なるエピトープへ特異的に結合することができる。本明細書に開示される例示的な二重特異性抗体フォーマットを含む任意の多重特異性抗体フォーマットは、当該技術分野で利用可能な通例の技術を使用して、本発明の抗体の抗原結合断片との関連で使用に適合し得る。
【０１１３】
本発明の抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介して機能し得る。「補体依存性細胞傷害」（ＣＤＣ）は、補体の存在下における本発明の抗体による抗原発現細胞の溶解を指す。「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」（ＡＤＣＣ）は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が標的細胞上の結合抗体を認識し、それによってそれによって標的細胞の溶解をもたらす、細胞媒介性反応を指す。ＣＤＣおよびＡＤＣＣは、当技術分野において周知であり利用可能なアッセイを用いて測定することができる。（例えば、米国特許第５，５００，３６２号および第５，８２１，３３７号、ならびにＣｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６を参照のこと）。抗体の定常領域は、補体を固定して細胞依存性細胞傷害性を媒介する抗体の能力において重要である。したがって、抗体のアイソタイプは、その抗体が細胞毒性を媒介することが望ましいかどうかに基づいて選択されてよい。
【０１１４】
特定の実施形態において、本発明の抗ＳＴＥＡＰ２単一特異性抗体または抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３二重特異性抗体はヒト抗体である。「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用する場合、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むよう企図される。本発明のヒト抗体は、例えば、ＣＤＲ、特にＣＤＲ３における、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的変異誘発によってまたはインビボでの体細胞突変異によって導入された変異）によってコードされないアミノ酸残基を含み得る。しかしながら、「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用する場合、別の哺乳類種（例えば、マウス）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列へと移植された抗体を含むことを意図するものではない。
【０１１５】
本発明の抗体は、いくつかの実施形態において、組換えヒト抗体であり得る。本明細書で使用される用語「組換えヒト抗体」は、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現される抗体など組換え手段によって調製、発現、作成または単離される全てのヒト抗体（後述）、組換え型コンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（後述）、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えばマウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５）、またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段によって調製、発現、生成、または単離された抗体を含むことを意図する。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する。特定の実施形態において、しかしながら、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニック動物が使用される場合は、インビボ体細胞突然変異誘発）を受け、したがって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し関連してはいるが、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然には存在し得ない配列である。
【０１１６】
ヒト抗体は、ヒンジの不均一性に関連する２つの形態で存在することができる。一形態において、免疫グロブリン分子は、二量体が鎖間重鎖ジスルフィド結合によって一緒に保持されている約１５０〜１６０ｋＤａの安定な四本鎖構築物を含む。第２の形態において、二量体は鎖間ジスルフィド結合を介して連結されておらず、共有結合した軽鎖と重鎖からなる約７５〜８０ｋＤａの分子が形成される（半抗体）。これらの形態は、親和性精製後でさえも分離することが極めて困難であった。
【０１１７】
様々な無傷のＩｇＧアイソタイプにおける第２の形態の出現頻度は、抗体のヒンジ領域アイソタイプに関連する構造上の相違によるが、それに限定されない。ヒトＩｇＧ４ヒンジのヒンジ領域における単一アミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１ヒンジを用いて典型的に観察されるレベルまで第２の形態の出現を有意に減少させることができる（Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３０：１０５）。本発明は、ヒンジ、ＣＨ２またはＣＨ３領域に１つ以上の変異を有する抗体を包含し、例えば産生において、所望の抗体形態の収率を改善するのに望ましい場合がある。
【０１１８】
本発明の抗体は単離された抗体であり得る。本明細書で使用される「単離された抗体」は、同定された抗体、およびその天然環境の少なくとも１つの成分から分離および／または回収された抗体を意味する。例えば、生物の少なくとも１つの成分から、または抗体が天然に存在するかもしくは天然に産生される組織または細胞から分離または除去された抗体は、本発明の目的のための「単離された抗体」である。単離された抗体はまた、組換え細胞内の原位置の抗体を含む。単離された抗体は、少なくとも１つの精製または単離工程を受けた抗体である。特定の実施形態によると、単離された抗体は他の細胞性物質および／または化学物質を実質的に含まなくてもよい。
【０１１９】
本発明はまた、ＳＴＥＡＰ２に結合するワンアーム抗体も含む。本明細書中で使用される場合、「ワンアーム抗体」とは、単一の抗体重鎖および単一の抗体軽鎖を含む抗原結合分子を意味する。本発明のワンアーム抗体は、表１に記載のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲまたはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかを含み得る。
【０１２０】
本明細書に開示する抗ＳＴＥＡＰ２または抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３抗体は、対応する生殖系列配列と比較して、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインのフレームワーク領域および／またはＣＤＲ領域に１つ以上のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含み得る。このような変異は、本明細書中に開示するアミノ酸配列を、例えば公共の抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列と比較することによって容易に確認することができる。本発明は、本明細書に開示するアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体およびその抗原結合断片を含み、１つ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸は、抗体が由来した生殖系列配列の対応する残基（複数可）へ、または別のヒト生殖系列配列の対応する残基（複数可）へ、または対応する生殖系列残基（複数可）の保存的アミノ酸置換へ変異する（このような配列変化はまとめて、「生殖系列変異」と本明細書で呼ばれる）。当業者は、本明細書に開示する重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列から出発して、１つ以上の個々の生殖系列変異またはこれらの組み合わせを含む多数の抗体および抗体結合断片を容易に産生することができる。ある特定の実施形態において、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基は全て、抗体が由来した元の生殖系列配列において認められる残基へと変異し戻される。他の実施形態において、ある特定の残基のみが元の生殖系列配列へと変異し戻され、例えば、変異した残基はＦＲ１の最初の８個のアミノ酸内に、もしくは変異した残基はＦＲ４の最後の８個のアミノ酸内に認められ、または変異した残基は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２もしくはＣＤＲ３内にのみ認められる。他の実施形態において、フレームワークおよび／またはＣＤＲ残基（複数可）の１つ以上は、異なる生殖系列配列（すなわち、抗体が本来由来した生殖系列配列とは異なる生殖系列配列）の対応する残基（複数可）へ変異する。さらに、本発明の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に２つ以上の生殖系列変異の任意の組み合わせを含有してもよく、例えば、ある特定の個々の残基は、特定の生殖系列配列の対応する残基へ変異するのに対し、元の生殖系列配列とは異なるある特定の他の残基は、維持され、または異なる生殖系列配列の対応する残基へ変異する。いったん得られれば、１つ以上の生殖系列変異を含有する抗体および抗体結合断片は、結合特異性の改善、結合親和性の増大、アンタゴニストまたはアゴニストの生物学的特性の改善または増強（場合によって）、免疫原性の低下などの１つ以上の所望の特性について容易に試験することができる。この一般的な方法で得られた抗体および抗体結合断片は、本発明の範囲内に包含される。
【０１２１】
本発明はまた、１つ以上の保存的置換を有する本明細書に開示するＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかの変異体を含む抗ＳＴＥＡＰ２または抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３抗体を含む。例えば、本発明は、本明細書の表１に記載または本明細書の表９、１１、１２、１５、および１７に記載したように、例えば、ＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかに対して１０個以下、８個以下、６個以下または４個以下などの保存的アミノ酸置換を有する、ＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＳＴＥＡＰ２または抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３抗体を含む。
【０１２２】
「エピトープ」という用語は、パラトープとして既知の抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原は２つ以上のエピトープを有してもよい。したがって、異なる抗体は、抗原上の異なる領域へ結合し得、異なる生物学的効果を有し得る。エピトープは、立体配座または線状のいずれでもよい。立体配座エピトープは、直鎖状ポリペプチド鎖の異なるセグメントから空間的に並置されたアミノ酸によって産生される。直鎖状エピトープは、ポリペプチド鎖中の隣接するアミノ酸残基によって産生されるものである。特定の状況において、エピトープは、抗原上の糖類、ホスホリル基、またはスルホニル基の部分を含み得る。
【０１２３】
「実質的な同一性」または「実質的に同一である」という用語は、核酸またはその断片を指す場合、別の核酸（またはその相補鎖）との適切なヌクレオチド挿入または欠失と最適に整列した場合、以下に考察するように、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴまたはＧａｐなど、配列同一性の任意の周知のアルゴリズムによって測定される場合に、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９５％、より好ましくは少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％のヌクレオチド配列同一性があることを示す。参照核酸分子と実質的な同一性を有する核酸分子は、ある特定の場合において、参照核酸分子によってコードされるポリペプチドと同じまたは実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることができる。
【０１２４】
ポリペプチドへ適用される場合、「実質的な類似性」または「実質的に類似の」という用語は、２つのペプチド配列が、既定のギャップ重みを用いてプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適に整列した場合、少なくとも９５％の配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも９８％または９９％の配列同一性を共有する。好ましくは、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換だけ異なる。「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を備えた側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基によって置換されたものである。概して、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変化させないことになっている。２つ以上のアミノ酸配列が保存的置換だけ互いに異なる場合、配列同一性の割合または類似性の程度は、置換の保存的性質を補正するために上向きに調整してもよい。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７−３３１を参照されたい。類似の化学的特性を備えた側鎖を有するアミノ酸の基の例としては、（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン、（２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン、（３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン、（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン、（５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン、（６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに（７）含硫側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換基は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸およびアスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置換とは、参照により本明細書に組み込まれるＧｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３−１４４５に開示されるＰＡＭ２５０対数尤度行列において正値を有する任意の変化である。「適度に保存的な」置換とは、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて負以外の値を有する任意の変化である。
【０１２５】
ポリペプチドに対する配列類似性は、配列同一性とも呼ばれ、典型的には配列分析ソフトウェアを用いて測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む種々の置換、欠失および他の修飾へ割り当てられた類似の測定値を用いて類似の配列と一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、異なる種の生物由来の相同ポリペプチドのような密接に関連するポリペプチド間の、または野生型タンパク質とその変異タンパク質の間の配列相同性または配列同一性を決定するための既定パラメータと共に使用することができるＧａｐおよびＢｅｓｔｆｉｔなどのプログラムを含有する。例えば、ＧＣＧ第６．１版を参照されたい。ポリペプチド配列は、ＧＣＧ第６．１版におけるプログラムである、既定パラメータまたは推奨パラメータを備えたＦＡＳＴＡを使用して比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、問い合わせ配列と検索配列の間の最良重複の領域の整列およびパーセント配列同一性を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）上述）。本発明の配列を、異なる生物由来の多数の配列を含有するデータベースと比較する場合の別の好ましいアルゴリズムは、既定パラメータを用いるコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、それぞれ参照により本明細書に組み入れられる、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０およびＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−４０２を参照のこと。
【０１２６】
生殖系列変異
本明細書に開示する抗ＣＤ３抗体は、対応する生殖系列配列と比較して、重鎖可変ドメインのフレームワーク領域および／またはＣＤＲ領域に１つ以上のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含む。
【０１２７】
本発明はまた、本明細書に開示するアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体およびその抗原結合断片を含み、１つ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸は、抗体が由来した生殖系列配列の対応する残基（複数可）へ、または別のヒト生殖系列配列の対応する残基（複数可）へ、または対応する生殖系列残基（複数可）の保存的アミノ酸置換へ変異し（このような配列変化はまとめて、「生殖系列変異」と本明細書で呼ばれる）、ＣＤ３抗原への検出可能な結合が弱いまたはない。ＣＤ３を認識するいくつかのそのような例示的抗体は、本明細書の表１２および１８に記載されている。
【０１２８】
さらに、本発明の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に２つ以上の生殖系列変異の任意の組み合わせを含有してもよく、例えば、ある特定の個々の残基は、特定の生殖系列配列の対応する残基へ変異するのに対し、元の生殖系列配列とは異なるある特定の他の残基は、維持され、または異なる生殖系列配列の対応する残基へ変異する。いったん得られれば、１つ以上の生殖系列変異を含む抗体および抗体結合断片を、結合特異性の向上、結合親和性の弱さまたは低下、薬物動態学的特性の向上または増強、免疫原性の低下などの１つ以上の所望の特性に関して試験することができる。本開示の指針を考慮してこの一般的な方法で得られた抗体および抗原結合断片は、本発明の範囲内に包含される。
【０１２９】
本発明はまた、１つ以上の保存的置換を有する本明細書に開示するＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかの変異体を含む抗ＣＤ３抗体を含む。例えば、本発明は、本明細書の表１、９、１１、１２、１５、および１７に記載のＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかに対して、例えば１０個以下、８個以下、６個以下または４個以下などの保存的アミノ酸置換を有するＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３抗体を含む。本発明の抗体および二重特異性抗原結合分子は、個々の抗原結合ドメインが由来した対応する生殖系列配列と比較して、重鎖および軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域に１つ以上のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含むが、ＣＤ３抗原への所望の弱から検出不可能な結合を維持または改善する。「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を備えた側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基によって置換されたものである。一般に、保存的アミノ酸置換はタンパク質の機能的特性を実質的に変化させない、すなわち、アミノ酸置換が、抗ＣＤ３結合分子の場合における所望の弱から検出不可能な結合親和性を維持または改善する。類似の化学的特性を備えた側鎖を有するアミノ酸の基の例としては、（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン、（２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン、（３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン、（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン、（５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン、（６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに（７）含硫側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換基は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸およびアスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置換とは、参照により本明細書に組み込まれるＧｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３−１４４５に開示されるＰＡＭ２５０対数尤度行列において正値を有する任意の変化である。「適度に保存的な」置換とは、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて負以外の値を有する任意の変化である。
【０１３０】
本発明はまた、本明細書に開示されるＨＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかと実質的に同一であるＨＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗原結合ドメインを含む抗原結合分子を含むが、ＣＤ３抗原への所望の弱い親和性を維持または改善する。アミノ酸配列意味する場合、「実質的な同一性」または「実質的に同一の」という用語は、２つのアミノ酸配列が、既定のギャップ重みを用いてプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適に整列した場合、少なくとも９５％の配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも９８％、または９９％の配列同一性を共有する。好ましくは、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換だけ異なる。２つ以上のアミノ酸配列が保存的置換だけ互いに異なる場合、配列同一性の割合または類似性の程度は、置換の保存的性質を補正するために上向きに調整してもよい。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７−３３１を参照のこと。
【０１３１】
ポリペプチドに対する配列類似性は、配列同一性とも呼ばれ、典型的には配列分析ソフトウェアを用いて測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む種々の置換、欠失および他の修飾へ割り当てられた類似の測定値を用いて類似の配列と一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、異なる種の生物由来の相同ポリペプチドのような密接に関連するポリペプチド間の、または野生型タンパク質とその変異タンパク質の間の配列相同性または配列同一性を決定するための既定パラメータと共に使用することができるＧａｐおよびＢｅｓｔｆｉｔなどのプログラムを含有する。例えば、ＧＣＧ第６．１版を参照されたい。ポリペプチド配列は、ＧＣＧ第６．１版におけるプログラムである、既定パラメータまたは推奨パラメータを備えたＦＡＳＴＡを使用して比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、問い合わせ配列と検索配列の間の最良重複の領域の整列およびパーセント配列同一性を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）上述）。本発明の配列を、異なる生物由来の多数の配列を含有するデータベースと比較する場合の別の好ましいアルゴリズムは、既定パラメータを用いるコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０およびＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−４０２を参照のこと。
【０１３２】
いったん得られれば、１つ以上の生殖系列変異を含む抗原結合ドメインを、１つ以上のインビトロアッセイを利用して結合親和性の低下について試験した。特定の抗原を認識する抗体は、典型的には、抗原に対する高い（すなわち強い）結合親和性について試験することによってそれらの目的がスクリーニングされるが、本発明の抗体は弱い結合または検出不可能な結合を示す。この一般的な方法で得られた１つ以上の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗原結合分子もまた本発明の範囲内に含まれ、結合活性駆動腫瘍療法として有利であることが見出された。
【０１３３】
予想外の利益、例えば、改善された薬物動態特性および患者に対する低毒性が、本明細書に記載の方法から実現され得る。
【０１３４】
抗体の結合特性
本明細書で使用される場合、抗体、免疫グロブリン、抗体結合断片、またはＦｃ含有タンパク質のいずれかが、例えば、細胞表面タンパク質またはその断片などの所定の抗原へ結合する文脈における用語「結合」は、典型的には、最低２つの実体または抗体−抗原相互作用などの分子構造間の相互作用または会合を指す。
【０１３５】
例えば、結合親和性は、リガンドとして抗原を、分析物（または抗リガンド）として抗体、Ｉｇ、抗体結合断片、またはＦｃ含有タンパク質を使用して、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ３０００機器における表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術により決定される場合、典型的には約１０−７Ｍ以下、例えば約１０−８Ｍ以下、例えば約１０−９Ｍ以下のＫＤ値に対応する。蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）結合アッセイなどの細胞ベースの結合戦略もまた日常的に使用されており、ＦＡＣＳデータは放射性リガンド競合結合およびＳＰＲ（Ｂｅｎｅｄｉｃｔ、ＣＡ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ１９９７，２０１（２）：２２３−３１；Ｇｅｕｉｊｅｎ，ＣＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２００５，３０２（１−２）：６８−７７）などの他の方法とよく相関する。
【０１３６】
したがって、本発明の抗体または抗原結合タンパク質は、非特異的抗原（例：ＢＳＡ、カゼイン）へ結合するその親和性よりも少なくとも１０倍低いＫＤ値に対応する親和性を有する所定の抗原または細胞表面分子に結合する。本発明によると、非特異的抗原よりも１０倍以下の低いＫＤ値に対応する抗体の親和性は、検出不可能な結合と見なすことができるが、そのような抗体は、本発明の二重特異性抗体を産生するための第２の抗原結合アームと対をなすことができる。
【０１３７】
用語「ＫＤ」（Ｍ）は、特定の抗体−抗原相互作用の解離平衡定数、または抗原に結合する抗体もしくは抗体結合断片の解離平衡定数を指す。ＫＤと結合親和性との間には逆の関係があり、したがって、ＫＤ値が小さいほど、親和性は高い、すなわちより強い。したがって、「より高い親和性」または「より強い親和性」という用語は、相互作用を形成するより高い能力、つまりより小さいＫＤ値に関し、逆に「より低い親和性」または「より弱い親和性」という用語は、相互作用を形するより低い能力、つまりより大きなＫＤ値に関する。状況によっては、他の相互作用パートナー分子（例えば抗原Ｙ）に対する分子（例えば抗体）の結合親和性と比較して、その相互作用パートナー分子（例えば抗原Ｘ）に対する特定の分子（例えば抗体）のより高い結合親和性（またはＫＤ）は、より大きなＫＤ値（より低い、またはより弱い、親和性）をより小さなＫＤ（より高い、またはより強い、親和性）で割ることによって決定される結合比として表され、例えば、場合によって５倍または１０倍高い結合親和性として表される。
【０１３８】
用語「ｋｄ」（ｓｅｃ−１または１／ｓ）は、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度定数、または抗体もしくは抗体結合断片の解離速度定数を指す。その値はｋｏｆｆ値とも呼ばれる。
【０１３９】
用語「ｋａ」（Ｍ−１×ｓｅｃ−１または１／Ｍ）は、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度定数、または抗体もしくは抗体結合断片の会合速度定数を指す。
【０１４０】
用語「ＫＡ」（Ｍ−１または１／Ｍ）は、特定の抗体−抗原相互作用の会合平衡定数、または抗体もしくは抗体結合断片の会合平衡定数を指す。会合平衡定数は、ｋａをｋｄで割ることによって得られる。
【０１４１】
「ＥＣ５０」または「ＥＣ５０」という用語は、最大半量の有効濃度を指し、特定の曝露時間後にベースラインと最大値との間の中間で応答を誘導する抗体の濃度を含む。ＥＣ５０は本質的に、その最大効果の５０％が観察される抗体の濃度を表す。特定の実施形態において、ＥＣ５０値は、例えばＦＡＣＳ結合アッセイによって決定された場合に、ＣＤ３または腫瘍関連抗原を発現する細胞に最大半量の結合を与える本発明の抗体の濃度に等しい。したがって、低下したまたは弱い結合は、ＥＣ５０の増加、または最大半量の有効濃度値で観察される。
【０１４２】
一実施形態において、結合の低下は、最大半量の標的細胞への結合を可能にするＥＣ５０抗体濃度の増加として定義することができる。
【０１４３】
別の実施形態において、ＥＣ５０値は、Ｔ細胞細胞傷害活性による標的細胞の最大半量の枯渇を誘発する本発明の抗体の濃度を表す。したがって、細胞傷害活性の増加（例えば、Ｔ細胞媒介性腫瘍細胞死滅）は、ＥＣ５０の低下、または最大有効濃度値の半分で観察される。
【０１４４】
二重特異性抗原結合分子
本発明の抗体は、単一特異性、二重特異性または多重特異性であり得る。多重特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であり得るか、または２つ以上の標的ポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含有し得る。例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９、Ｋｕｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８−２４４を参照されたい。本発明の抗ＳＴＥＡＰ２単一特異性抗体または抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、別の機能性分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質に連結するか、またはそれと同時発現させることができる。例えば、抗体またはその断片は、別の抗体または抗体断片などの１つ以上の他の分子実体に（例えば、化学結合、遺伝的融合、非共有結合性会合などにより）機能的に連結されて、第２のまたは追加の結合特異性を有する二重特異性または多重特異性抗体を生成することができる。
【０１４５】
本明細書の「抗ＣＤ３抗体」または「抗ＳＴＥＡＰ２抗体」という表現の使用は、単一特異性の抗ＣＤ３抗体または抗ＳＴＥＡＰ２抗体、ならびにＣＤ３結合アームおよびＳＴＥＡＰ２結合アームを含む二重特異性抗体の両方を含むことを意図する。したがって、本発明は、免疫グロブリンの一方のアームがヒトＣＤ３に結合し、免疫グロブリンの他方のアームがヒトＳＴＥＡＰ２に特異的である二重特異性抗体を含む。ＣＤ３結合アームは、本明細書の表１、９、１１、１２、１５、および１７に記載の、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲまたはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかを含み得る。
【０１４６】
特定の実施形態において、ＣＤ３結合アームはヒトＣＤ３に結合し、ヒトＴ細胞活性化を誘導する。特定の実施形態において、ＣＤ３結合アームはヒトＣＤ３に弱く結合し、ヒトＴ細胞活性化を誘導する。他の実施形態において、ＣＤ３結合アームはヒトＣＤ３に弱く結合し、二重特異性抗体または多重特異性抗体との関連で腫瘍関連抗原発現細胞死滅を誘導する。他の実施形態において、ＣＤ３結合アームはヒトおよびカニクイザル（サル）ＣＤ３と弱く結合または会合するが、それでも結合相互作用は当技術分野で既知のインビトロアッセイでは検出できない。ＳＴＥＡＰ２結合アームは、本明細書の表１に記載のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲまたはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかを含み得る。
【０１４７】
特定の例示的な実施形態によると、本発明はＣＤ３およびＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する二重特異性抗原結合分子を含む。そのような分子は、本明細書において、例えば、「抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２」、または「抗ＣＤ３×ＳＴＥＡＰ２」もしくは「ＣＤ３×ＳＴＥＡＰ２」二重特異性分子、または他の同様の用語（例えば、抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３）と称することができる。
【０１４８】
本発明で使用する場合、「ＳＴＥＡＰ２」という用語は、非ヒト種由来であると特定されない限り、ヒトＳＴＥＡＰ２タンパク質を指す（例えば、「マウスＳＴＥＡＰ２」、「サルＳＴＥＡＰ２」など）。ヒトＳＴＥＡＰ２タンパク質は、配列番号１８９９に示されるアミノ酸配列を有する。
【０１４９】
ＣＤ３およびＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する前述の二重特異性抗原結合分子は、インビトロ親和性結合アッセイで測定される場合に、約４０ｎＭ超のＫＤを示す弱い結合親和性でＣＤ３に結合する、抗ＣＤ３抗原結合分子を含むことができる。場合によっては、ＣＤ３結合アームは、約１００ｎＭ超、約２００ｎＭ超、約３００ｎＭ超、約４００ｎＭ超、約５００ｎＭ超、または約１μＭ超のＫＤまたはＥＣ５０で、ＣＤ３と結合する。（例えば、表面プラズモン共鳴アッセイにおける尺度として）。いくつかの場合において、第１の抗原結合ドメインはＣＤ３に特異的に結合する（例えば、弱いまたは測定不可能な親和性でヒトＣＤ３およびカニクイザルＣＤ３のいずれかまたは両方）。
【０１５０】
本明細書で使用される場合、表現「抗原結合分子」は、単独で、または特定の抗原に特異的に結合する、１つ以上のさらなるＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域（ＦＲ）と組み合わせて少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むまたはそれからなるタンパク質、ポリペプチド、または分子複合体を意味する。特定の実施形態において、抗原結合分子は、それらの用語が本明細書の他所で定義されているように、抗体または抗体の断片である。
【０１５１】
本明細書で使用される場合、表現「二重特異性抗原結合分子」は、少なくとも第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインを含むタンパク質、ポリペプチドまたは分子複合体を意味する。二重特異性抗原結合分子内の各抗原結合ドメインは、単独で、または１つ以上の追加のＣＤＲおよび／またはＦＲと組み合わせて、特定の抗原に特異的に結合する少なくとも１つのＣＤＲを含む。本発明の文脈において、第１の抗原結合ドメインは第１の抗原（例えばＣＤ３）に特異的に結合し、第２の抗原結合ドメインは第２の異なる抗原（例えばＳＴＥＡＰ２）に特異的に結合する。
【０１５２】
本発明の特定の例示的実施形態において、二重特異性抗原結合分子は二重特異性抗体である。二重特異性抗体の各抗原結合ドメインは、重鎖可変ドメイン（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変ドメイン（ＬＣＶＲ）を含む。第１および第２の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗原結合分子（例えば、二重特異性抗体）の文脈において、第１の抗原結合ドメインのＣＤＲは接頭辞「Ａ１」を付けて指定され、第２の抗原結合ドメインのＣＤＲは接頭辞「Ａ２」を付けて指定され得る。したがって、第１の抗原結合ドメインのＣＤＲは、本明細書においてＡ１−ＨＣＤＲ１、Ａ１−ＨＣＤＲ２、およびＡ１−ＨＣＤＲ３と呼ばれてもよく、第２の抗原結合ドメインのＣＤＲは、本明細書においてＡ２−ＨＣＤＲ１、Ａ２−ＨＣＤＲ２、およびＡ２−ＨＣＤＲ３と呼ばれてもよい。
【０１５３】
第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインは、互いに直接的または間接的に結合して、本発明の二重特異性抗原結合分子を形成し得る。あるいは、第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインは、それぞれ別々の多量体化ドメインに連結されていてもよい。１つの多量体化ドメインと別の多量体化ドメインとの会合は、２つの抗原結合ドメイン間の会合を促進し、それによって二重特異性抗原結合分子を形成する。本明細書で使用される場合、「多量体化ドメイン」は、同一または類似の構造または構成の第２の多量体化ドメインと会合する能力を有する任意の高分子、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、またはアミノ酸である。例えば、多量体化ドメインは、免疫グロブリンＣＨ３ドメインを含むポリペプチドであってもよい。多量体化成分の非限定的な例は、免疫グロブリンのＦｃ部分（ＣＨ２−ＣＨ３ドメインを含む）、例えばアイソタイプＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４から選択されるＩｇＧのＦｃドメイン、ならびに各アイソタイプ群内のアロタイプである。
【０１５４】
本発明の二重特異性抗原結合分子は、典型的には２つの多量体化ドメイン、例えば、それぞれ別々の抗体重鎖の一部である２つのＦｃドメインを含む。第１および第２の多量体化ドメインは、例えば、ＩｇＧ１／ＩｇＧ１、ＩｇＧ２／ＩｇＧ２、ＩｇＧ４／ＩｇＧ４などの同じＩｇＧアイソタイプであり得る。あるいは、第１および第２の多量体化ドメインは、例えば、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４などの異なるＩｇＧアイソタイプのものであり得る。
【０１５５】
特定の実施形態において、多量体化ドメインは、Ｆｃ断片または少なくとも１つのシステイン残基を含有する長さが１〜約２００アミノ酸のアミノ酸配列である。他の実施形態において、多量体化ドメインはシステイン残基、または短いシステイン含有ペプチドである。他の多量体化ドメインには、ロイシンジッパー、ヘリックスループヘリックス、またはコイルドコイルモチーフを含むかまたはそれらからなるペプチドまたはポリペプチドが含まれる。
【０１５６】
任意の二重特異性抗体フォーマットまたは技術を使用して、本発明の二重特異性抗原結合分子を作製することができる。例えば、第１の抗原結合特異性を有する抗体またはその断片は、第２の抗原結合性を有する他の抗体または抗体断片などの１つ以上の他の分子実体に（例えば、化学結合、遺伝的融合、非共有結合などにより）機能的に連結されて、二重特異性抗原結合分子を生成することができる。本発明の文脈において使用できる特定の例示的な二重特異性フォーマットには、例えば、ｓｃＦｖ系フォーマットまたはダイアボディ二重特異性フォーマット、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ融合、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）−Ｉｇ、Ｑｕａｄｒｏｍａ、ノブズ−イントゥ−ホールズ（ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ）、共通の軽鎖（例えば、ノブズ−イントゥ−ホールズを備えた共通の軽鎖など）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ボディ、ロイシンジッパー、Ｄｕｏｂｏｄｙ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用型Ｆａｂ（ＤＡＦ）−ＩｇＧ、およびＭａｂ２二重特異性フォーマットが含まれるが、これらに限定されない（上述のフォーマットの総説については、例えば、Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１２，ｍＡｂｓ  ４：６，１−１１、およびそこに引用されている参考文献を参照されたい）。
【０１５７】
本発明の二重特異性抗原結合分子との関連で、多量体化ドメイン、例えば、Ｆｃドメインは、野生型の、天然に存在するＦｃドメインと比較して、１つ以上のアミノ酸変化（例えば、挿入、欠失または置換）を含んでもよい。例えば、本発明は、ＦｃとＦｃＲｎとの間の修飾された結合相互作用（例えば、増強または減少）を有する改変Ｆｃドメインをもたらす、Ｆｃドメイン中の１つ以上の修飾を含む二重特異性抗原結合分子を含む。一実施形態において、二重特異性抗原結合分子は、ＣＨ２またはＣＨ３領域に修飾を含み、この修飾は酸性環境（例えば、ｐＨ範囲約５．５〜約６．０のエンドソーム内）において、ＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性を高める。そのようなＦｃ修飾の非限定的な例には、例えば、２５０位（例えば、ＥまたはＱ）、２５０位および４２８位（例えば、ＬまたはＦ）、２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／ＷまたはＴ）、２５４位（例えば、ＳまたはＴ）、および２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤまたはＴ）での修飾、または４２８位および／または４３３位（例えばＬ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱまたはＫ）および／または４３４位（例えばＨ／ＦまたはＹ）での修飾、あるいは２５０位および／または４２８位の修飾、あるいは３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、および４３４位での修飾が含まれる。一実施形態において、修飾は４２８Ｌ（例えばＭ４２８Ｌ）および４３４Ｓ（例えばＮ４３４Ｓ）の修飾、４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、および３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）の修飾、４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）および４３４（例えば、４３４Ｙ）の修飾、２５２、２５４、および２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）の修飾、２５０Ｑおよび４２８Ｌの修飾（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）、３０７および／または３０８の修飾（例えば、３０８Ｆまたは３０８Ｐ）を含む。
【０１５８】
本発明はまた、第１のＣＨ３ドメインおよび第２のＩｇＣＨ３ドメインを含む二重特異性抗原結合分子を含み、第１および第２のＩｇＣＨ３ドメインは、少なくとも１つのアミノ酸ほど互いに異なっており、少なくとも１つのアミノ酸の相違は、アミノ酸の相違を欠失する二重特異性抗体と比較して、プロテインＡへの二重特異性抗体の結合を低減させる。一実施形態において、第１のＩｇＣＨ３ドメインはプロテインＡを結合し、第２のＩｇＣＨ３ドメインはＨ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴエクソン番号付けによる、ＥＵ番号付けではＨ４３５Ｒ）などのプロテインＡ結合を低減または消失させる変異を含有する。第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによるものであり、ＥＵではＹ４３６Ｆ）をさらに含み得る。例えば、米国特許第８，５８６，７１３号を参照のこと。第２のＣＨ３内に認められ得るさらなる修飾には、ＩｇＧ１抗体の場合、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによるものであり、ＥＵによるＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、およびＶ４２２Ｉ）、ＩｇＧ２抗体の場合、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴであって、ＥＵによるＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、およびＶ４２２Ｉ）、ならびにＩｇＧ４抗体の場合、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによるものであり、ＥＵによるＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、およびＶ４２２Ｉ）が含まれる。
【０１５９】
特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、２つ以上の免疫グロブリンアイソタイプに由来するＦｃ配列を組み合わせたキメラであり得る。例えば、キメラＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４のＣＨ２領域に由来するＣＨ２配列の一部または全部、およびヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４に由来するＣＨ３配列の一部または全部を含むことができる。キメラＦｃドメインはまた、キメラヒンジ領域を含み得る。例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域、ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域、またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「下部ヒンジ」配列と組み合わせた、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域、ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域、またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「上部ヒンジ」配列を含むことができる。本明細書に記載の抗原結合分子のいずれかに含まれ得るキメラＦｃドメインの特定の例は、Ｎ末端からＣ末端に、［ＩｇＧ４ＣＨ１］−［ＩｇＧ４上方ヒンジ］−［ＩｇＧ２下方ヒンジ］−［ＩｇＧ４ＣＨ２］−［ＩｇＧ４ＣＨ３］を含む。本明細書に記載の抗原結合分子のいずれかに含まれ得るキメラＦｃドメインの別の例は、Ｎ末端からＣ末端に、［ＩｇＧ１ＣＨ１］−［ＩｇＧ１上方ヒンジ］−［ＩｇＧ２下方ヒンジ］−［ＩｇＧ４ＣＨ２］−［ＩｇＧ１ＣＨ３］を含む。本発明の抗原結合分子のいずれかに含まれ得るキメラＦｃドメインのこれらおよび他の例は、２０１４年８月２８日に公開された米国特許公開第２０１４／０２４３５０４号に記載されており、その全体が本明細書に組み込まれる。これらの一般的な構造配置を有するキメラＦｃドメイン、およびその変異体は、Ｆｃ受容体結合を変えてしまうことができ、そのことがＦｃエフェクター機能に影響を及ぼす。
【０１６０】
特定の実施形態において、本発明は、重鎖定常領域（ＣＨ）領域が、配列番号１９１１、配列番号１９１２、配列番号１９１３、配列番号１９１４、配列番号１９１５、配列番号１９１６、配列番号１９１７、配列番号１９１８、配列番号１９１９、または配列番号１９２０のいずれか一つと少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む抗体重鎖を提供する。いくつかの実施形態において、重鎖定常領域（ＣＨ）領域は、配列番号１９１１、配列番号１９１２、配列番号１９１３、配列番号１９１４、配列番号１９１５、配列番号１９１６、配列番号１９１７、配列番号１９１８、配列番号１９１９および配列番号１９２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１６１】
他の実施形態において、本発明は、Ｆｃドメインが、配列番号１９２１、配列番号１９２２、配列番号１９２３、配列番号１９２４、配列番号１９２５、配列番号１９２６、配列番号１９２７、配列番号１９２８、配列番号１９２９、または配列番号１９３０のいずれか１つと少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む、抗体重鎖を提供する。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、配列番号１９２１、配列番号１９２２、配列番号１９２３、配列番号１９２４、配列番号１９２５、配列番号１９２６、配列番号１９２７、配列番号１９２８、配列番号１９２９、および配列番号１９３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１６２】
配列変異体
本明細書の抗体および二重特異性抗原結合分子は、個々の抗原結合ドメインが由来した対応する生殖系列配列と比較して、重鎖および軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域に１つ以上のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含み得る。このような変異は、本明細書中に開示するアミノ酸配列を、例えば公共の抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列と比較することによって容易に確認することができる。本発明の抗原結合分子は、本明細書に開示する例示的なアミノ酸配列のいずれかに由来する抗原結合ドメインを含んでもよく、１つ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸は、抗体が由来した生殖系列配列の対応する残基（複数可）へ、または別のヒト生殖系列配列の対応する残基（複数可）へ、または対応する生殖系列残基（複数可）の保存的アミノ酸置換へ変異する（このような配列変化はまとめて、「生殖系列変異」と本明細書で呼ばれる）。当業者は、本明細書に開示する重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列から出発して、１つ以上の個々の生殖系列変異またはこれらの組み合わせを含む多数の抗体および抗体結合断片を容易に産生することができる。特定の実施形態において、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基は全て、抗原結合ドメインが由来した元の生殖系列配列において認められる残基へと戻り変異する。他の実施形態において、ある特定の残基のみが元の生殖系列配列へと変異し戻され、例えば、変異した残基はＦＲ１の最初の８個のアミノ酸内に、もしくは変異した残基はＦＲ４の最後の８個のアミノ酸内に認められ、または変異した残基は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２もしくはＣＤＲ３内にのみ認められる。他の実施形態において、フレームワークおよび／またはＣＤＲ残基（複数可）の１つ以上は、異なる生殖系列配列（すなわち、抗原結合ドメインが本来由来した生殖系列配列とは異なる生殖系列配列）の対応する残基（複数可）へ変異する。さらに、抗原結合ドメインは、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に２つ以上の生殖系列変異のいずれかの組み合わせを含有してもよく、例えば、特定の個々の残基は、特定の生殖系列配列の対応する残基へ変異するのに対し、元の生殖系列配列とは異なるある特定の他の残基は維持され、または異なる生殖系列配列の対応する残基へ変異する。いったん得られれば、１つ以上の生殖系列変異を含有する抗原結合ドメインは、結合特異性の改善、結合親和性の増大、アンタゴニストまたはアゴニストの生物学的特性の改善または増強（場合によって）、免疫原性の低下などの１つ以上の所望の特性について容易に試験することができる。この一般的な方法で得られた１つ以上の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗原結合分子は、本発明の範囲内に包含される。
【０１６３】
本発明はまた、一方または両方の抗原結合ドメインが、１つ以上の保存的置換を有する本明細書に開示するＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかの変異体を含む、抗原結合分子を含む。例えば、本発明は、本明細書に開示するＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかに対して、例えば１０個以下、８個以下、６個以下、または４個以下などの保存的アミノ酸置換を有するＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗原結合ドメインを含む抗原結合分子を含む。「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を備えた側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基によって置換されたものである。概して、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変化させないことになっている。類似の化学的特性を備えた側鎖を有するアミノ酸の基の例としては、（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン、（２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン、（３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン、（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン、（５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン、（６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに（７）含硫側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換基は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸およびアスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置換とは、参照により本明細書に組み込まれるＧｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３−１４４５に開示されるＰＡＭ２５０対数尤度行列において正値を有する任意の変化である。「適度に保存的な」置換とは、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて負以外の値を有する任意の変化である。
【０１６４】
本発明はまた、本明細書に開示するＨＣＶＲアミノ酸配列、ＬＣＶＲアミノ酸配列、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかと実質的に同一であるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗原結合ドメインを含む抗原結合分子を含む。アミノ酸配列意味する場合、「実質的な同一性」または「実質的に同一の」という用語は、２つのアミノ酸配列が、既定のギャップ重みを用いてプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適に整列した場合、少なくとも９５％の配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも９８％、または９９％の配列同一性を共有する。好ましくは、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換だけ異なる。２つ以上のアミノ酸配列が保存的置換だけ互いに異なる場合、配列同一性の割合または類似性の程度は、置換の保存的性質を補正するために上向きに調整してもよい。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７−３３１を参照されたい。
【０１６５】
ポリペプチドに対する配列類似性は、配列同一性とも呼ばれ、典型的には配列分析ソフトウェアを用いて測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む種々の置換、欠失および他の修飾へ割り当てられた類似の測定値を用いて類似の配列と一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、異なる種の生物由来の相同ポリペプチドのような密接に関連するポリペプチド間の、または野生型タンパク質とその変異タンパク質の間の配列相同性または配列同一性を決定するための既定パラメータと共に使用することができるＧａｐおよびＢｅｓｔｆｉｔなどのプログラムを含有する。例えば、ＧＣＧ第６．１版を参照されたい。ポリペプチド配列は、ＧＣＧ第６．１版におけるプログラムである、既定パラメータまたは推奨パラメータを備えたＦＡＳＴＡを使用して比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、問い合わせ配列と検索配列の間の最良重複の領域の整列およびパーセント配列同一性を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）上述）。本発明の配列を、異なる生物由来の多数の配列を含有するデータベースと比較する場合の別の好ましいアルゴリズムは、既定パラメータを用いるコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、それぞれ参照により本明細書に組み入れられる、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０およびＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−４０２を参照のこと。
【０１６６】
ｐＨ依存的結合
本発明は、ｐＨ依存的の結合特性を有する抗ＳＴＥＡＰ２抗体、および抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子を含む。例えば、本発明の抗ＳＴＥＡＰ２抗体は、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＳＴＥＡＰ２への結合の低下を示し得る。あるいは、本発明の抗ＳＴＥＡＰ２抗体は、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＳＴＥＡＰ２への増強された結合を示し得る。「酸性ｐＨ」という表現は、約６．２未満、例えば、約６．０、５．９５、５、９、５．８５、５．８、５．７５、５．７、５．６５、５．６、５．５５、５．５、５．４５、５．４、５．３５、５．３、５．２５、５．２、５．１５、５．１、５．０５、５．０以下のｐＨ値を含む。本明細書で使用される場合、表現「中性ｐＨ」は、約７．０〜約７．４のｐＨを意味する。「中性ｐＨ」という表現は、約７．０、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３、７．３５、および７．４のｐＨ値を含む。
【０１６７】
場合によっては、「中性ｐＨと比較して、酸性ｐＨで．．．結合の低下」は、中性ｐＨでその抗原に結合する抗体のＫＤ値に対する酸性ｐＨでその抗原に結合する抗体のＫＤ値の比に関して、表される。（またはその逆）。例えば、抗体またはその抗原結合断片が約３．０以上の酸性／中性ＫＤ比を示す場合、本発明の目的のために、抗体またはその抗原結合断片は「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨではＳＴＥＡＰ２への結合の低下」を示すと見なされ得る。特定の例示的実施形態において、本発明の抗体または抗原結合断片の酸性／中性ＫＤ比は、約３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１０．５、１１．０、１１．５、１２．０、１２．５、１３．０、１３．５、１４．０、１４．５、１５．０、２０．０、２５．０、３０．０、４０．０、５０．０、６０．０、７０．０、１００．０以上であり得る。
【０１６８】
ｐＨ依存性結合特性を有する抗体は、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで特定の抗原への結合の低下（または増強）について抗体の集団をスクリーニングすることによって得ることができる。さらに、アミノ酸レベルでの抗原結合ドメインの修飾は、ｐＨ依存的特徴を有する抗体を産生し得る。例えば、抗原結合ドメイン（例えばＣＤＲ内）の１つ以上のアミノ酸をヒスチジン残基で置換することにより、中性ｐＨに対して酸性ｐＨで抗原結合が低下した抗体を得ることができる。
【０１６９】
Ｆｃ変異体を含む抗体
本発明の特定の実施形態によると、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで、ＦｃＲｎ受容体への抗体結合を増強または減少させる１つ以上の突然変異を含むＦｃドメインを含む、抗ＳＴＥＡＰ２抗体二重特異性抗原結合分子、および抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子が提供される。例えば、本発明は、ＦｃドメインのＣＨ２またはＣＨ３領域に変異を含む抗体を含み、変異（複数可）は、酸性環境においてＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性を増加させる（例えば、ｐＨが約５．５〜約６．０の範囲のエンドソームにおいて）。そのような突然変異は、動物に投与したときに抗体の血清半減期の増加をもたらし得る。そのようなＦｃ修飾の非限定的な例には、例えば、２５０位（例えば、ＥまたはＱ）、２５０位および４２８位（例えば、ＬまたはＦ）、２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／ＷまたはＴ）、２５４位（例えば、ＳまたはＴ）、および２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤまたはＴ）での修飾、または４２８位および／または４３３位（例えばＨ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱまたはＫ）および／または４３４位（例えばＨ／ＦまたはＹ）での修飾、あるいは２５０位および／または４２８位の修飾、あるいは３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、および４３４位での修飾が含まれる。一実施形態において、修飾は４２８Ｌ（例えばＭ４２８Ｌ）および４３４Ｓ（例えばＮ４３４Ｓ）の修飾、４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、および３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）の修飾、４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）および４３４（例えば、４３４Ｙ）の修飾、２５２、２５４、および２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）の修飾、２５０Ｑおよび４２８Ｌの修飾（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）、３０７および／または３０８の修飾（例えば、３０８Ｆまたは３０８Ｐ）を含む。
【０１７０】
例えば、本発明は、２５０Ｑおよび２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ２４８Ｌ）、２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ）、４２８Ｌのおよび４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ）、ならびに４３３Ｋおよび４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）からなる群から選択される、１つ以上の変異対または変異群を含むＦｃドメインを含む、抗ＳＴＥＡＰ２抗体、および抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子を含む。前述のＦｃドメイン変異、および本明細書に開示される抗体可変ドメイン内の他の変異の全ての可能な組み合わせは、本発明の範囲内で企図される。
【０１７１】
抗体および二重特異性抗原結合分子の生物学的特性
本発明は、ヒトＳＴＥＡＰ２に高い親和性（例えば、ナノモル以下のＫＤ値）で結合する抗体およびその抗原結合断片を含む。
【０１７２】
本発明はまた、ヒト前立腺癌異種移植片を保有する免疫無防備状態マウスにおいて腫瘍増殖を阻害する抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子を含む。（例えば、実施例５参照のこと）。
【０１７３】
本発明は、ヒトＣＤ３に高親和性で結合する抗体およびその抗原結合断片を含む。本発明はまた、治療状況および所望される特定の標的化特性に応じて、中程度または低い親和性でヒトＣＤ３に結合する抗体およびその抗原結合断片を含む。例えば、一方のアームがＣＤ３と結合し、別のアームが標的抗原（例えば、ＳＴＥＡＰ２）と結合する二重特異性抗原結合分子の状況下では、標的抗原結合アームが標的抗原に高い親和性で結合することが望ましいが、抗ＣＤ３アームは中程度または低い親和性でのみＣＤ３に結合する。このようにして、標的抗原を発現する細胞への抗原結合分子の優先的標的化は、一般的／非標的化ＣＤ３結合およびそれに付随する結果として生じる有害な副作用を回避しながら達成され得る。
【０１７４】
本発明は、ヒトＣＤ３およびヒトＳＴＥＡＰ２に同時に結合することができる二重特異性抗原結合分子（例えば、二重特異性抗体）を含む。ＣＤ３を発現する細胞と相互作用する結合アームは、適切なインビトロ結合アッセイで測定した場合に、弱から検出不可能な結合を有し得る。二重特異性抗原結合分子がＣＤ３および／またはＳＴＥＡＰ２を発現する細胞と結合する程度は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって評価することができる。
【０１７５】
本発明はまた、実施例２に記載のＦＡＣＳ結合アッセイまたは実質的に類似のアッセイを用いて測定した場合に、約１ｎＭ〜５０ｎＭのＥＣ５０値で、ＳＴＥＡＰ２発現細胞および細胞株（例えば、ＣＡ−２細胞）に結合する抗体、その抗原結合断片、およびその二重特異性抗体を含む。特定の実施形態において、実施例２に記載のＦＡＣＳ結合アッセイまたは実質的に類似のアッセイを用いて測定した場合に、抗体、その抗体結合断片、およびその二重特異性抗体は、約５０ｎＭ、約４０ｎＭ、約３０ｎＭ、約２０ｎＭのＥＣ５０値で、約１５ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満のＥＣ５０値で、ＳＴＥＡＰ２発現細胞および細胞株（例えば、ＣＡ−２細胞）に結合する。
【０１７６】
本発明は、弱い（すなわち低い）親和性またはさらに検出不可能な親和性でヒトＣＤ３に結合する抗体、その抗体結合断片、およびその二重特異性抗体を含む。特定の実施形態によると、本発明は、表面プラズモン共鳴による測定で約１１ｎＭを超えるＫＤでヒトＣＤ３に結合する（例えば３７℃で）抗体および抗体の抗原結合断片を含む。特定の実施形態において、本発明の抗体または抗原結合断片は、表面プラズモン共鳴（例えば、ｍＡｂ捕捉または抗原捕捉フォーマット）または実質的に類似のアッセイにより測定して、約１５ｎＭ超、約２０ｎＭ超、約２５ｎＭ超、約３０ｎＭ超、約３５超ｎＭ、約４０ｎＭ超、約４５ｎＭ超、約５０ｎＭ超、約５５ｎＭ超、約６０ｎＭ超、約６５ｎＭ超、約７０ｎＭ超、約７５ｎＭ超、少なくとも８０ｎＭ、約９０ｎＭ超、約１００ｎＭ超、約１１０ｎＭ超、少なくとも１２０ｎＭ、約１３０ｎＭ超、約１４０ｎＭ超、約１５０ｎＭ超、少なくとも１６０ｎＭ、約１７０ｎＭ超、約１８０ｎＭ超、約１９０ｎＭ超、約２００ｎＭ超、約２５０ｎＭ超、約３００ｎＭ超、約４００ｎＭ超、約５００ｎＭ超、もしくは約１μＭ超のＫＤで、または検出可能な親和性なしでＣＤ３に結合する。
【０１７７】
本発明は、弱い（すなわち低い）親和性またはさらに検出不可能な親和性でサル（すなわちカニクイザル）ＣＤ３に結合する抗体、その抗体結合断片、およびその二重特異性抗体を含む。
【０１７８】
本発明は、本明細書の実施例３または実質的に類似のアッセイにより規定されるアッセイ形式により測定される場合に、ヒトＳＴＥＡＰ２発現細胞（例えば、ＣＡ−２細胞）に結合し、それによって内在化される抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子を含む。本発明は、ヒトＳＴＥＡＰ２への結合に特異的な抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子を含む。特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子は、本明細書の実施例３により定義されるアッセイ形式または実質的に類似のアッセイにより測定した場合、ＨＥＫ２９３細胞において一過性に発現されるＳＴＥＡＰ−２に結合する。特定の実施形態において、本発明の抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子は、本明細書の実施例３によって定義されるアッセイ形式または実質的に類似のアッセイにより測定した場合に、ＨＥＫ２９３細胞において一過性に発現されるヒトＳＴＥＡＰ１、ヒトＳＴＥＡＰ２、またはヒトＳＴＥＡＰ４に結合しない。
【０１７９】
本発明は、Ｃ４−２腫瘍増殖を阻害することができる抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子を含む（例えば、実施例５を参照のこと）。例えば、特定の実施形態によると、抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子が提供され、例えば、本明細書の実施例５に記載のとおり、腫瘍移植後４６日目の測定で標準的なキャリパー測定方法を用いて対象において検出された場合、単回投与例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇまたは約０．０１ｍｇ／ｋｇ用量）は、アイソタイプ対照二重特異性抗体を投与した動物と比較して、腫瘍サイズの減少をもたらす。
【０１８０】
本発明はまた、インビボＳＴＥＡＰ２陽性前立腺癌異種移植モデルにおいて腫瘍増殖を阻害する抗ＳＴＥＡＰ２抗体薬物複合体を含む（例えば、実施例７、または実質的に類似のアッセイを参照のこと）。特定の実施形態において、腫瘍移植後１３日目に投与された１０、２０、または４０ｍｇ／ｋｇの単回投与がインビボＳＴＥＡＰ２陽性前立腺癌異種移植モデルにおけるＣ４−２腫瘍増殖を阻害する、化合物７との抗ＳＴＥＡＰ２抗体薬物複合体が提供される。特定の実施形態において、移植後１４日目に投与される５ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇの単回投与がインビボＳＴＥＡＰ２陽性前立腺癌異種移植モデルにおいてＣ４−２腫瘍増殖を阻害する、化合物７との抗ＳＴＥＡＰ２抗体薬物複合体が提供される。特定の実施形態において、移植後１７日目に投与された１５０μｇ／ｋｇの単回投与がインビボＳＴＥＡＰ２陽性前立腺癌異種移植モデルにおいてＣ４−２腫瘍増殖を阻害する、化合物７との抗ＳＴＥＡＰ２抗体薬物複合体が提供される。他の実施形態において、移植後２９日目に投与された少なくとも２．５ｍｇ／ｋｇの単回投与がインビボＳＴＥＡＰ２陽性前立腺癌異種移植モデルにおいてＣ４−２腫瘍増殖を阻害する、化合物６０との抗ＳＴＥＡＰ２抗体薬物複合体が提供される。
【０１８１】
エピトープマッピングおよび関連技術
本発明の抗原結合分子が抗体が結合するＣＤ３および／またはＳＴＥＡＰ２上のエピトープは、３つ以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれより多数）のＣＤ３またはＳＴＥＡＰ２タンパク質のアミノ酸の単一連続配列からなってもよい。あるいは、エピトープは、ＣＤ３またはＳＴＥＡＰ２の複数の非連続アミノ酸（またはアミノ酸配列）からなっていてもよい。本発明の抗体は、単一のＣＤ３鎖内に含まれるアミノ酸（例えば、ＣＤ３−イプシロン、ＣＤ３−デルタ、またはＣＤ３−ガンマ）と相互作用し得るか、または２つ以上の異なるＣＤ３鎖上のアミノ酸と相互作用し得る。本発明で使用する場合、「エピトープ」という用語は、パラトープとして既知の抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原は２つ以上のエピトープを有してもよい。したがって、異なる抗体は、抗原上の異なる領域へ結合し得、異なる生物学的効果を有し得る。エピトープは、立体配座または線状のいずれでもよい。立体配座エピトープは、直鎖状ポリペプチド鎖の異なるセグメントから空間的に並置されたアミノ酸によって産生される。直鎖状エピトープは、ポリペプチド鎖中の隣接するアミノ酸残基によって産生されるものである。特定の状況において、エピトープは、抗原上の糖類、ホスホリル基、またはスルホニル基の部分を含み得る。
【０１８２】
当業者に既知の種々の技術を用いて、抗体の抗原結合ドメインがポリペプチドまたはタンパク質内にある「１つ以上のアミノ酸と相互作用する」かどうかを判定することができる。例示的な技術としては、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ．，ＮＹ）に記載されている日常的なクロスブロッキングアッセイ、アラニンスキャニング突然変異分析、ペプチドブロット分析（Ｒｅｉｎｅｋｅ，２００４，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２４８：４４３−４６３）、およびペプチド切断分析が挙げられる。加えて、エピトープ切除、エピトープ抽出、および抗原の化学修飾などの方法を採用することができる（Ｔｏｍｅｒ（２０００）Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．９：４８７−４９６）。抗体の抗原結合ドメインが相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために用いることができる別の方法は、質量分析によって検出される水素／重水素交換である。一般的にいえば、水素／重水素交換法は、関心対象のタンパク質を重水素標識した後、抗体を重水素標識タンパク質へ結合させることを包含する。次に、タンパク質／抗体複合体を水に移して、抗体によって保護されている残基（重水素標識されたままである）を除く全ての残基で水素−重水素交換を生じさせる。抗体の解離後、標的タンパク質をプロテアーゼ切断および質量分析へ供し、それにより、抗体が相互作用する特異的アミノ酸に対応する重水素標識残基を明らかにする。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６７（２）：２５２−２５９、Ｅｎｇｅｎ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ−２６５Ａを参照されたい。抗原／抗体複合体のＸ線結晶解析もまた、エピトープマッピング目的に使用してもよい。
【０１８３】
本発明はさらに、本明細書に記載の特定の例示的な抗体のいずれかと同じエピトープに結合する抗ＳＴＥＡＰ２抗体（本明細書の表１に記載のアミノ酸配列のいずれかを含む抗体）を含む。同様に、本発明はまた、ＳＴＥＡＰ２への結合について本明細書に記載の特定の例示的な抗体のいずれかと競合する抗ＳＴＥＡＰ２抗体（本明細書の表１に記載のアミノ酸配列のいずれかを含む抗体）を含む。
【０１８４】
本発明はまた、低いまたは検出可能な結合親和性でヒトＣＤ３および／またはカニクイザルＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、ヒトＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む二重特異性抗原結合分子を含み、第１の抗原結合ドメインは、本明細書に記載の特定の例示的なＣＤ３特異的抗原結合ドメインのいずれかと同じＣＤ３上のエピトープに結合し、および／または第２の抗原結合ドメインは、本明細書に記載の特定の例示的なＳＴＥＡＰ２特異的抗原結合ドメインのいずれかと同じＳＴＥＡＰ２上の同じエピトープに結合する。
【０１８５】
同様に、本発明はまた、ヒトＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメイン、およびヒトＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗原結合分子を含み、第１の抗原結合ドメインは、ＣＤ３への結合について、本明細書に記載の特定の例示的なＣＤ３特異的抗原結合ドメインのいずれかと競合し、および／または第２の抗原結合ドメインは、ＳＴＥＡＰ２への結合について、本明細書に記載の特定の例示的なＳＴＥＡＰ２特異的抗原結合ドメインのいずれかと競合する。
【０１８６】
特定の抗原結合分子（例えば、抗体）またはその抗原結合ドメインが、本発明の参照抗原結合分子と同じエピトープに結合するか、または結合するために本発明の参照抗原結合分子と競合するかどうかは、当技術分野で既知の常法を用いて容易に判定できる。例えば、試験抗体が本発明の参照二重特異性抗原結合分子と同じＳＴＥＡＰ２（またはＣＤ３）上のエピトープに結合するかどうかを決定するために、参照二重特異性分子は最初にＳＴＥＡＰ２タンパク質（またはＣＤ３タンパク質）に結合させた。次に、ＳＴＥＡＰ２（またはＣＤ３）分子へ結合する試験抗体の能力を評価する。試験抗体が参照二重特異性抗原結合分子と飽和結合後にＳＴＥＡＰ２（またはＣＤ３）に結合することができる場合、試験抗体は参照二重特異性抗原とは異なるＳＴＥＡＰ２（またはＣＤ３）のエピトープに結合すると結論付けることができる。その一方で、試験抗体が、参照二重特異性抗原結合分子に飽和結合後にＳＴＥＡＰ２（またはＣＤ３）分子へ結合できない場合、試験抗体は、本発明の参照二重特異性抗原結合分子によって結合したエピトープと同じＳＴＥＡＰ２（またはＣＤ３）のエピトープへ結合してもよい。次に、試験抗体の結合の観察された欠失が、実際に、参照二重特異性抗原結合分子と同じエピトープへの結合によるものであるか、それとも立体遮断（または別の現象）が、観察された結合の欠失の原因であるのかを確認するために、さらなる通例の実験（例えば、ペプチド変異および結合分析）を実施することができる。この種の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、Ｂｉａｃｏｒｅ、フローサイトメトリー、または当該技術分野で利用可能な任意の他の定量的もしくは定性的な抗体結合アッセイを用いて行うことができる。本発明の特定の実施形態によると、例えば、１倍、５倍、１０倍、２０倍、または１００倍過剰量の一方の抗原結合タンパク質が、競合結合アッセイでの測定で少なくとも５０％、しかし、好ましくは７５％、９０％、またはさらに９９％他方の結合を阻害する場合、２つの抗原結合タンパク質は、同一（または重複）エピトープに結合する。（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９０：５０：１４９５−１５０２を参照のこと）あるいは、一方の抗原結合タンパク質の結合を低減または排除する抗原における本質的に全てのアミノ酸変異が、もう一方の結合を低減または排除する場合、２つの抗原結合タンパク質は同じエピトープと結合すると見なされる。一方の抗原結合タンパク質の結合を減少または排除するアミノ酸変異のサブセットのみが他方の結合を減少または排除する場合、２つの抗原結合タンパク質は「重複エピトープ」を有するとみなされる。
【０１８７】
抗体またはその抗原結合ドメインが、結合について、参照抗原結合分子と競合するかどうかを決定するために、上述の結合方法を２つの方向性で実施する。第１の方向性おいて、参照抗原結合分子を飽和条件下でＳＴＥＡＰ２タンパク質（またはＣＤ３タンパク質）へ結合させた後、ＳＴＥＡＰ２（またはＣＤ３）分子への試験抗体の結合を評価する。第２の方向性において、試験抗体を飽和条件下でＳＴＥＡＰ２（またはＣＤ３）分子に結合させた後、参照抗原結合分子のＳＴＥＡＰ２（またはＣＤ３）分子への結合を評価する。両方向において、第１の（飽和）抗原結合分子のみがＳＴＥＡＰ２（またはＣＤ３）分子に結合することができる場合、試験抗体および参照抗原結合分子は、ＳＴＥＡＰ２（またはＣＤ３）への結合について、競合すると結論される。当業者によって認識されるように、参照抗原結合分子との結合について競合する抗体は、必ずしも参照抗体と同一のエピトープへ結合するわけではないが、重複しているまたは隣接しているエピトープに結合することによって、参照抗体の結合を立体的に遮断し得る。
【０１８８】
抗原結合ドメインの調製と二重特異性分子の構築
特定の抗原に特異的な抗原結合ドメインは、当技術分野で既知の任意の抗体産生技術によって調製することができる。いったん得られれば、２つの異なる抗原（例えばＣＤ３およびＳＴＥＡＰ２）に特異的な２つの異なる抗原結合ドメインを互いに適切に配置して、常法を用いて本発明の二重特異性抗原結合分子を産生することができる。（本発明の二重特異性抗原結合分子を構築するために使用できる例示的な二重特異性抗体フォーマットの考察は、本明細書の他所に提供される）。特定の実施形態において、本発明の多重特異性抗原結合分子の１つ以上の個々の構成要素（例えば、重鎖および軽鎖）は、キメラ抗体、ヒト化抗体または完全ヒト型抗体に由来する。そのような抗体を作製するための方法は当技術分野において周知である。例えば、本発明の二重特異性抗原結合分子の１つ以上の重鎖および／または軽鎖は、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（商標）技術を用いて調製することができる。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（商標）技術（または任意の他のヒト抗体産生技術）を使用して、特定の抗原（例えば、ＣＤ３またはＳＴＥＡＰ２）に対する高親和性キメラ抗体が、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有して最初に単離される。抗体を、親和性、選択性、エピトープなどを含む望ましい特徴について特徴付けし選択する。マウス定常領域は、所望のヒト定常領域と置換されて、本発明の二重特異性抗原結合分子に組み込まれ得る完全ヒト型重鎖および／または軽鎖を産生する。
【０１８９】
遺伝子操作された動物は、ヒト二重特異性抗原結合分子を作製するために使用し得る。例えば、内因性マウス免疫グロブリン軽鎖可変配列を再編成および発現することができない、遺伝子改変マウスを使うことができ、マウスは、内在性マウスカッパ遺伝子座のマウスカッパ定常遺伝子に作動可能に連結されているヒト免疫グロブリン配列によってコードされる１つまたは２つのヒト軽鎖可変ドメインのみを発現する。そのような遺伝子改変マウスを使用して、２つの異なるヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメントのうちの１つに由来する可変ドメインを含む同一の軽鎖と会合する２つの異なる重鎖を含む完全ヒト型二重特異性抗原結合分子を産生することできる。（例えば、ＵＳ２０１１／０１９５４５４を参照のこと）。完全ヒト型とは、抗体またはその抗原結合断片もしくは免疫グロブリンドメインの各ポリペプチドの全長にわたるヒト配列に由来するＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列を含む、抗体、またはその抗原結合断片もしくは免疫グロブリンドメインを指す。いくつかの例において、完全ヒト型配列は、ヒトに対して内因性のタンパク質に由来する。他の例において、完全ヒト型タンパク質またはタンパク質配列は、各成分配列がヒト配列に由来するキメラ配列を含む。いずれの理論にも縛られないが、キメラタンパク質またはキメラ配列は、一般に、例えば任意の野生型ヒト免疫グロブリン領域またはドメインと比較して、成分配列の接合部における免疫原性エピトープの生成を最小にするように設計される。
【０１９０】
生物学的等価物
本発明は、本明細書に開示の例示的な分子のものとは異なるが、ＣＤ３および／またはＳＴＥＡＰ２に結合する能力を保持するアミノ酸配列を有する抗原結合分子を包含する。このような変異体抗体は、親配列と比較してアミノ酸の１つ以上の付加、欠失、または置換を含むが、説明された二重特異性抗原結合分子の生物学的活性とは本質的に等価である生物学的活性を呈する。
【０１９１】
本発明は、本明細書に記載の例示的な抗原結合分子のいずれかと生物学的に等価な抗原結合分子を含む。２つの抗原結合タンパク質または抗体は、例えば、それらが類似の実験条件下で単回用量または複数回用量のいずれかで同じモル用量で投与された場合に、吸収速度および吸収の程度が有意差を示さない医薬的等価物または医薬的選択肢である場合、生物学的等価物とみなされる。これらの吸収の程度は等価であるが吸収速度は等価ではなく、吸収速度におけるこのような差が意図的、かつ標識に反映されているので生物学的に等価とみなされ得る場合、いくつかの抗原結合タンパク質は、等価物または薬学的選択肢とみなされることになっており、例えば長期使用に及ぼす有効な身体薬剤濃度の達成に必須ではなく、試験した特定の薬剤製品にとって医学的に有意ではないとみなされる。
【０１９２】
一実施形態において、２つの抗原結合タンパク質は、これらの安全性、純度、または効力において臨床的に有意性のある差がない場合、生物学的に等価である。
【０１９３】
一実施形態において、２つの抗原結合タンパク質は、免疫原性の臨床的に有意な変化または有効性の減退を含む有害作用のリスクの期待される上昇なしで参照製品と生物製品の間での切り替えなしで持続される療法と比較して、患者が１回以上切り替えられることができる場合、生物学的に等価である。
【０１９４】
一実施形態において、２つの抗原結合タンパク質は、これらが両方とも、条件または使用条件についての共通の機序または作用機序によって、このような機序が既知である程度まで作用する場合、生物学的に等価である。
【０１９５】
生物学的等価性は、インビボおよびインビトロの方法によって実証され得る。生物学的等価性測定法には、例えば、（ａ）抗体またはその代謝産物の濃度が血液、血漿、血清または他の生物学的流体中で時間の関数として測定される、ヒトまたは他の哺乳類におけるインビボでの試験、（ｂ）ヒト生物学的利用能データと相関した、このデータを合理的に予測しているインビトロ試験、（ｃ）抗体（またはその標的）の適切な急性薬理学的効果が時間の関数として測定されるヒトまたは他の哺乳類におけるインビボ試験、および（ｄ）抗原結合タンパク質の安全性、効能、または生物学的利用能もしくは生物学的等価性を確立する、十分に管理された臨床試験が含まれる。
【０１９６】
本明細書に示す例示的な二重特異性抗原結合分子の生物学的に等価な変異体は、例えば、残基もしくは配列の種々の置換を生じること、または生物活性に必要とされない末端もしくは内部の残基もしくは配列を欠失することによって構築され得る。例えば、生物学的活性にとって必須ではないシステイン残基は、再生の際の不必要または不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止するために、欠失または他のアミノ酸で置換することができる。他の文脈において、生物学的等価な抗原結合タンパク質は、分子のグリコシル化特性を修飾するアミノ酸変化、例えばグリコシル化を排除または除去する変異を含む、本明細書に記載の例示的な二重特異性抗原結合分子の変異体を含み得る。
【０１９７】
種の選択性および種の交差反応性
本発明の特定の実施形態によると、ヒトＣＤ３に結合するが他の種由来のＣＤ３には結合しない抗原結合分子が提供される。ヒトＳＴＥＡＰ２に結合するが他種由来のＳＴＥＡＰ２には結合しない抗原結合分子もまた提供される。本発明はまた、ヒトＣＤ３および１つ以上の非ヒト種由来のＣＤ３に結合する抗原結合分子、および／またはヒトＳＴＥＡＰ２および１つ以上の非ヒト種由来のＳＴＥＡＰ２に結合する抗原結合分子を含む。
【０１９８】
本発明の特定の例示的な実施形態によると、ヒトＣＤ３および／またはヒトＳＴＥＡＰ２に結合し、場合によってはマウス、ラット、モルモット、ハムスター、スナネズミ、ブタ、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、カニクイザル、マーモセット、アカゲザルまたはチンパンジーＣＤ３および／またはＳＴＥＡＰ２のうちの１つ以上に結合または結合しない抗原結合分子が提供される。例えば、本発明の特定の例示的な実施形態において、ヒトＣＤ３およびカニクイザルＣＤ３に結合する第１の抗原結合ドメインと、ヒトＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む二重特異性抗原結合分子を提供する。
【０１９９】
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）
本発明は、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、免疫抑制剤または放射性同位元素などの治療用部分に複合体化した抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその抗原結合断片を含む抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を提供する。一般論として、ＡＤＣは、Ａ−［Ｌ−Ｐ］ｙを含み、式中、Ａは抗原結合分子、例えば抗ＳＴＥＡＰ２抗体、またはその断片（例えば、表１に列挙されたＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかから選択される少なくとも１つのＨＣＤＲ３を含む断片）であり、Ｌはリンカーであり、Ｐはペイロードまたは治療部分（例えば、細胞傷害性薬剤）であり、ｙは１〜３０の整数である。様々な実施形態において、ＡＤＣは、表１に記載の配列番号（例えば、配列番号２および１０）のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲ、または特異的ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対（例えば、配列番号２／１０）を含む抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその抗原結合断片を含む。場合によっては、抗ＳＴＥＡＰ２抗体または断片は、表１に記載の配列番号（例えば、配列番号４−６−８−１２−１４−１６）のアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む。場合によっては、抗ＳＴＥＡＰ２抗体または断片は、表１に記載の配列番号（例えば、配列番号２および１０）のアミノ酸配列、または特異的なアミノ酸配列対（例えば、配列番号２／１０）を有するＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む。
【０２００】
細胞傷害性薬剤は、細胞の増殖、生存能力、または伝播に有害な任意の薬剤を含む。本発明の抗原結合分子または抗体は、本明細書で「ペイロード」と呼ばれるこれらの細胞傷害性薬剤を標的細胞に送達する。ＡＤＣを形成するための適切な細胞傷害性薬剤および化学療法剤の例は当技術分野において既知である。
【０２０１】
本発明のこの態様に従って、抗ＳＴＥＡＰ２抗体に結合されることができる適切な細胞傷害性薬剤および化学療法剤の例には、例えば、１−（２クロロエチル）−１，２−ジメタンスルホニルヒドラジド、１，８−ジヒドロキシ−ビシクロ［７．３．１］トリデカ−４，９−ジエン−２，６−ジイン−１３−オン、１−デヒドロテストステロン、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、９−アミノカンプトテシン、アクチノマイシンＤ、アマニチン、アミノプテリン、アングイジン、アントラサイクリン、アントラマイシン（ＡＭＣ）、アウリスタチン（モノメチルアウリスタチンＥまたはモノメチルアウリスタチンＦ）、ブレオマイシン、ブスルファン、酪酸、カリケアマイシン、カンプトテシン、カルミノマイシン、カルムスチン、セマドチン、シスプラチン、コルヒチン、コンブレタスタチン、シクロホスファミド、シタラビン、サイトカラシンＢ、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デカルバジン、ジアセトキシペンチルドキソルビシン、ジブロモマンニトール、ジヒドロキシアントラシンジオン、ジソラゾール、ドラスタチン、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、エキノマイシン、エリューテロビン、エメチン、エポチロン、ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ、エストラムスチン、エチジウムブロミド、エトポシド、フルオロウラシル、ゲルダナマイシン、グラミシジンＤ、グルココルチコイド、イリノテカン、レプトマイシン、ロイロシン、リドカイン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メイタンシノイド、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、メソプテリン、メトトレキサート、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、Ｎ８−アセチルスペルミジン、ポドフィロトキシン、プロカイン、プロプラノロール、プテリジン、ピューロマイシン、リゾキシン、ストレプトゾトシン、タリソマイシン、タキソール、テノポシド、テトラカイン、チオエパクロラムブシル、トマイマイシン、トポテカン、ツブリシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、上記いずれかの誘導体が含まれる。
【０２０２】
特定の実施形態によると、抗ＳＴＥＡＰ２抗体に結合される細胞傷害性薬剤は、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）などのアウリスタチン、ＴＵＢ−ＯＨまたはＴＵＢ−ＯＭＯＭなどのツブリシン、トマイマイシン誘導体、ドラスタチン誘導体、またはＤＭ１もしくはＤＭ４のようなメイタンシノイドである。いくつかの実施形態において、細胞傷害性薬剤は、式（Ｉ）の化合物の立体異性体を含む、式（Ｉ）の構造を有するメイタンシノイドである。
【化１１】
2019532056.tif 000013
式中、Ａはアリーレンまたはヘテロアリーレンである。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、Ａは、置換されていてもよいベンゼン、ピリジン、ナフタレン、またはキノロンの二価の基である。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、Ａはアリーレンである。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、Ａは、
【化１２】
2019532056.tif 000014
であり、
式中、
Ｒ１は、各出現時に独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルカリール、アラルキル、ハロ、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシル、シアノ、ニトロ、
【化１３】
2019532056.tif 000015
またはアジドであり、
式中、ＲＡはアルキルまたはヘテロアルキルであり、
ｎは０〜４の整数であり、
ｍは０〜３の整数であり、
ｐは０〜６の整数であり、
ｑは０〜５の整数である。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物は、
【化１４】
2019532056.tif 000016
【化１５】
2019532056.tif 000017
【化１６】
2019532056.tif 000018
からなる群から選択される。
【０２０７】
一実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【化１７】
2019532056.tif 000019
である。
【０２０８】
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）のメイタンシノイドは、以下の式（ＩＡ）に示すように、リンカーを介して抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその抗原結合断片に結合される。
【化１８】
2019532056.tif 000020
式中、
Ａは、式（Ｉ）に関連して上述したように、アリーレンまたはヘテロアリーレンであり、
Ｌはリンカーであり、
ＢＡは抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその抗原結合断片であり、
ｋは１〜３０の整数である。
【０２０９】
様々な実施形態において、Ｌは、次式であり、
【化１９】
2019532056.tif 000021
式中、
ＳＰはスペーサーであり、
【化２０】
2019532056.tif 000022
は、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片への１つ以上の結合であり、
ＡＡ１はアミノ酸であり、
ＡＡ２はアミノ酸である。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、ＡＡ１−ＡＡ２は、バリン−シトルリン、シトルリン−バリン、リジン−フェニルアラニン、フェニルアラニン−リジン、バリン−アスパラギン、アスパラギン−バリン、スレオニン−アスパラギン、アスパラギン−スレオニン、セリン−アスパラギン、アスパラギン−セリン、フェニルアラニン−アスパラギン、アスパラギン−フェニルアラニン、ロイシン−アスパラギン、アスパラギン−ロイシン、イソロイシン−アスパラギン、アスパラギン−イソロイシン、グリシン−アスパラギン、アスパラギン−グリシン、グルタミン酸−アスパラギン、アスパラギン−グルタミン酸、シトルリン−アスパラギン、アスパラギン−シトルリン、アラニン−アスパラギン、またはアスパラギン−アラニンである。
【０２１１】
いくつかの実施形態において、ＳＰは、
【化２１】
2019532056.tif 000023
であり、
式中、
【化２２】
2019532056.tif 000024
は、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片への結合であり、
ｂは２〜８の整数である。
【０２１２】
他の実施形態において、Ｌは、
【化２３】
2019532056.tif 000025
であり、
式中、
【化２４】
2019532056.tif 000026
は、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片への結合であり、
ｂは２〜８の整数である。
【０２１３】
一実施形態において、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその抗原結合断片に結合するリンカーを含む式（ＩＡ）の化合物は、次式であり、
【化２５】
2019532056.tif 000027
式中、
【化２６】
2019532056.tif 000028
は、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片への結合である。場合によっては、この部分は「化合物１０」と呼ばれる。
【０２１４】
一実施形態において、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその抗原結合断片に結合するリンカーを含む式（ＩＡ）の化合物は、次式であり、
【化２７】
2019532056.tif 000029
式中、
【化２８】
2019532056.tif 000030
は、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片への結合である。場合によっては、この部分は「化合物６０」と呼ばれる。
【０２１５】
いくつかの実施形態において、細胞傷害性薬剤は、式（ＩＩ）の化合物の立体異性体を含む、式（ＩＩ）の構造を有するメイタンシノイドである。
【化２９】
2019532056.tif 000031
式中、
Ａ３ａは、アミノ酸、２−２０個のアミノ酸を有するペプチド、アルキル、アルキニル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、−ＣＲ５Ｒ６−、−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨｘ）ｐ１−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（ＣＨｘ）ｐ１−、−（ＣＨｘ）ｐ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨｘ）ｐ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−（Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−）ｐ３−、−（（ＣＨ２）ｐ２−Ｏ−）ｐ３−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−、−Ｓ−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｓ−Ｃ（＝Ｓ）−Ｓ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＲ４−、−Ｎ（Ｒ４）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ８）−、−Ｎ（Ｒ４）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｒ４）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ４）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ４）−Ｃ（＝Ｏ）−、または−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ４−であり、アルキル、アルキニル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、およびヘテロシクリルは置換されていてもよく、
ｐ１、ｐ２、およびｐ３は、それぞれ独立して０、または１〜１００の整数であり、
ｘは０、１または２であり、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８は、それぞれ独立してＨ、または置換もしくは非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルであり、
Ｒ４ａは、置換または非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルである。
【０２１６】
いくつかの実施形態において、式（ＩＩ）の化合物は、
【化３０】
2019532056.tif 000032
からなる群から選択される。
【０２１７】
一実施形態において、式（ＩＩ）の化合物は、
【化３１】
2019532056.tif 000033
である。
【０２１８】
いくつかの実施形態において、式（ＩＩ）のメイタンシノイドは、以下の式（ＩＩＡ）に示すように、リンカーを介して抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその抗原結合断片に結合される。
【化３２】
2019532056.tif 000034
式中、
ＢＡは抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその抗原結合断片であり、
ａは１〜３０の整数であり、
Ｚ２は、以下の構造式−Ｚ２Ａ−Ｚ２Ｂ−Ｚ２Ｃ−Ｚ２Ｄによって表され、式中、Ｚ２Ａ、Ｚ２Ｂ、Ｚ２Ｃ、およびＺ２Ｄは、それぞれ独立して不在であるか、アミノ酸、２〜２０個のアミノ酸を有するペプチド、アルキル、アルキニル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、−ＣＲ５Ｒ６−、−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨｘ）ｐ１、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（ＣＨｘ）ｐ１、−（ＣＨｘ）ｐ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨｘ）ｐ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−（Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−）ｐ３−、−（（ＣＨ２）ｐ２）−Ｏ−）ｐ３−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−Ｓ−、−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−、−Ｓ−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｓ−Ｃ（＝Ｓ）−Ｓ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＲ４−、−Ｎ（Ｒ４）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ８）−、−Ｎ（Ｒ４）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｒ４）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ４）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ４）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ４）、−Ｏ−Ｃ（＝Ｓ）−Ｎ（Ｒ４）−、−Ｃ（＝Ｓ）−Ｎ（Ｒ４）−、−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、
【化３３】
2019532056.tif 000035
であり、
Ａは天然もしくは非天然アミノ酸、または２〜２０個のアミノ酸を含むペプチドであり、
Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＲ５Ｒ６−、−ＮＲ４−であり、
Ｘはアリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、またはヘテロシクリルであり、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、およびヘテロシクリルは置換されていてもよく、
式中、Ａ１、Ａ３、およびＲ１は、それぞれ独立して、アミノ酸、２−２０個のアミノ酸を有するペプチド、アルキル、アルキニル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、−ＣＲ５Ｒ６−、−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨｘ）ｐ１−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（ＣＨｘ）ｐ１−、−（ＣＨｘ）ｐ１−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨｘ）ｐ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−（Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−）ｐ３−、−（（ＣＨ２）ｐ２−Ｏ−）ｐ３−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−Ｓ−、−Ｓ−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−、−Ｓ−Ｃ（＝Ｓ）−Ｓ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＲ４−、−Ｎ（Ｒ４）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ８）−、−Ｎ（Ｒ４）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｒ４）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ４）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ４）−Ｃ（＝Ｏ）−、または−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ４−であり、アルキル、アルキニル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、およびヘテロシクリルは置換されていてもよく、
Ｒ１７は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１８、およびＣＲ５Ｒ６からなる群から選択され、
Ｒ１８は、Ｈ、アルキル、アルキニル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、およびアシルからなる群から選択され、アルキル、アルキニル、アルケニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、およびアシルは置換されていてもよく、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８は、それぞれ独立してＨ、または置換もしくは非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルであり、
Ｒ４ａは、置換または非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルであり、
ｐ１、ｐ２、およびｐ３は、それぞれ独立して０、または１〜１００の整数であり、
ｘは０、１または２である。
【０２１９】
式（ＩＩＡ）のいくつかの実施形態において、Ａは、バリン−シトルリン、シトルリン−バリン、リジン−フェニルアラニン、フェニルアラニン−リジン、バリン−アスパラギン、アスパラギン−バリン、スレオニン−アスパラギン、アスパラギン−スレオニン、セリン−アスパラギン、アスパラギン−セリン、フェニルアラニン−アスパラギン、アスパラギン−フェニルアラニン、ロイシン−アスパラギン、アスパラギン−ロイシン、イソロイシン−アスパラギン、アスパラギン−イソロイシン、グリシン−アスパラギン、アスパラギン−グリシン、グルタミン酸−アスパラギン、アスパラギン−グルタミン酸、シトルリン−アスパラギン、アスパラギン−シトルリン、アラニン−アスパラギン、およびアスパラギン−アラニンからなる群から選択されるペプチドである。
【０２２０】
一実施形態において、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその抗原結合断片に結合する式（ＩＩＡ）の化合物は、次式であり、
【化３４】
2019532056.tif 000036
式中、
【化３５】
2019532056.tif 000037
は、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片への結合である。場合によっては、この部分は「化合物７」と呼ばれる。
【０２２１】
いくつかの実施形態において、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片に結合される細胞傷害性薬剤は、ＤＭ１の純粋な、または実質的に純粋なジアステレオマーであり、
【化３６】
2019532056.tif 000038
ｙは１〜０の整数である。
【０２２２】
別の実施形態において、ＡＤＣは「Ａ−［Ｌ−Ｐ］ｙ」構造を含み、式中、Ａは抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその抗原結合断片であり、［Ｌ−Ｐ］は、
【化３７】
2019532056.tif 000039
それらの混合物であり、
式中、ｙは１〜３０の整数であり、
【化３８】
2019532056.tif 000040
は、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片への結合である。
【０２２３】
他のメイタンシノイド誘導体は、ＷＯ２０１４／１４５０９０、ＷＯ２０１６／１６０６１５、およびＷＯ２０１５／０３１３９６に論じられており、それぞれその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、抗ＳＴＥＡＰ２抗体またはその断片に結合される細胞傷害性薬剤は、ＭＭＡＥまたはＭＭＡＦである。
【０２２５】
当技術分野において既知の他の細胞傷害性薬剤が本発明の範囲内で企図され、例えば、リシン、Ｃ．ディフィシル毒素、シュードモナス外毒素、ジフテリア毒素、ボツリヌス毒素、ブリオジン、サポリン、ヤマゴボウ毒素（すなわち、フィトラカトキシンおよびフィトラクゲゲニン）、ならびにＳａｐｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．＆Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２０１３，１３８：４５２−４６９に記載のものなどのタンパク質毒素を含む。
【０２２６】
細胞傷害性薬剤（「ペイロード」）は、ペイロード化合物をタンパク質分子（すなわち抗体）に共有結合する化学リンカーを介して、本発明の抗ＳＴＥＡＰ２抗原結合分子または抗体につながれ得る。特異的リンカーの例示的な実施形態は上述した。より一般的には、本明細書で使用される場合、用語「リンカー」は、結合剤（例えば、抗体またはその抗原結合断片）を本明細書に記載のペイロード化合物と連結、接続、または結合する任意の二価基または部分を指す。一般に、本明細書に記載の抗体複合体に適した結合剤リンカーは、抗体の循環半減期を利用するのに十分安定であり、同時に、抗原媒介による複合体の内在化後にそのペイロードを放出することができるものである。リンカーは切断可能または切断不可能であり得る。切断可能なリンカーは、内在化に続く細胞内代謝、例えば加水分解、還元、または酵素反応による切断によって切断されるリンカーである。切断不可能なリンカーは、内在化後の抗体のリソソーム分解を介して結合ペイロードを放出するリンカーである。適切なリンカーとしては、酸不安定リンカー、加水分解不安定リンカー、酵素的に切断可能なリンカー、還元不安定的リンカー、自己犠牲的リンカー、および非切断可能リンカーが挙げられるが、これらに限定されない。適切なリンカーとしては、ペプチド、グルクロニド、スクシンイミド−チオエーテル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）単位、ヒドラゾン、ｍａｌ−カプロイル単位、ジペプチド単位、バリン−シトルリン単位、およびパラ−アミノベンジル（ＰＡＢ）単位であるかまたはそれらを含むものも挙げられるが、それらに限定されない。場合によっては、リンカーは、リジン残基もしくはシステイン残基を介して（例えば、抗体もしくは断片のジスルフィド基の開裂を介して、または抗体もしくは断片に組み込まれたシステイン残基を介して）、抗体または抗原結合断片に結合することができる。場合によっては、リンカーは、トランスグルタミナーゼ媒介結合を介して誘導されるものを含む、グルタミン残基を介して抗体または断片に結合することができる。
【０２２７】
本発明の文脈において使用できる例示的なリンカーとしては、例えば、ＭＣ（６−マレイミドカプロイル）、ＭＣＣ（マレイミドメチルシクロヘキサン−１−カルボキシレート）、ＭＰ（マレイミドプロパノイル）、ｖａｌ−ｃｉｔ（バリン−シトルリン）、ｖａｌ−ａｌａ（バリン−アラニン）、ａｌａ−ｐｈｅ（アラニン−フェニルアラニン）、ｐｈｅ−ｌｙｓ（フェニルアラニン−リジン）、プロテアーゼ切断可能なリンカーのジペプチド部位、ＰＡＢ（ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル）、ＳＰＰ（Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート）、ＳＭＣＣ（Ｎ−スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート）、ＳＩＡＢ（Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨード−アセチル）アミノベンゾエート）、ならびにそれらの変異体および組み合わせを含むまたはからなるリンカーが挙げられる。本発明の文脈において使用できるリンカーのさらなる例は、例えば、米国特許第７，７５４，６８１号およびＤｕｃｒｙ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ．Ｃｈｅｍ．，２０１０，２１：５−１３、およびそこに引用される参考文献に開示され、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。場合によっては、リンカーは、Ｊｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１２，２０：３４６５−３４６９、およびＷｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１６，２４：２６９７−２７０６に記載されているような自己犠牲スペーサーであるかまたはそれを含む。
【０２２８】
ペイロードは、抗体または抗原結合分子内の特定のアミノ酸での結合を介して抗ＳＴＥＡＰ２抗体または抗原結合断片に連結され得る。本発明のこの態様の文脈において使用できる例示的なアミノ酸結合としては、例えば、リジン（例えば、米国特許第５，２０８，０２０号、ＵＳ２０１０／０１２９３１４、Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，２００８，１９：３５８−３６１、ＷＯ２００５／０８９８０８、米国特許第５，７１４，５８６号、ＵＳ２０１３／０１０１５４６、およびＵＳ２０１２／０５８５５９２参照）、システイン（例えば、ＵＳ２００７／０２５８９８７、ＷＯ２０１３／０５５９９３、ＷＯ２０１３／０５５９９０、ＷＯ２０１３／０５３８７３、ＷＯ２０１３／０５３８７２、ＷＯ２０１１／１３０５９８、ＵＳ２０１３／０１０１５４６、および米国特許第７，７５０，１１６号参照）、セレノシステイン（例えば、ＷＯ２００８／１２２０３９、およびＨｏｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，２００８，１０５：１２４５１−１２４５６参照）、ホルミルグリシン（例えば、Ｃａｒｒｉｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００７，３：３２１−３２２；Ａｇａｒｗａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，２０１３，１１０：４６−５１，およびＲａｂｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２０１２，１０：１０５２−１０６７参照）、非天然アミノ酸（例えば、ＷＯ２０１３／０６８８７４、およびＷＯ２０１２／１６６５５９）、ならびに酸性アミノ酸（例えば、ＷＯ２０１２／０５９８２参照）が挙げられる。リンカーはまた、炭水化物への結合（例えば、ＵＳ２００８／０３０５４９７、およびＲｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｏｏｄ  ＆  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００１，１３：１２７−１３０を参照のこと）およびジスルフィドリンカーを介して抗原結合タンパク質に結合されることもできる。（例えば、ＷＯ２０１３／０８５９２５、ＷＯ２０１０／０１０３２４、ＷＯ２０１１／０１８６１１、およびＳｈａｕｎａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００６，２：３１２−３１３を参照のこと）。
【０２２９】
薬物対抗体比（ＤＡＲ）は、抗体または抗原結合断片に結合した薬物の平均数であり、ＡＤＣの有効性、効力、および薬物動態に重要な影響を及ぼす。様々な実施形態において、ＤＡＲは、抗体１個あたり１、２、３、４、５、６、７、または８個の薬物分子である。いくつかの実施形態において、ＤＡＲは１〜４である。特定の実施形態において、ＤＡＲは２〜４である。場合によっては、ＤＡＲは２〜３である。場合によっては、ＤＡＲは３〜４である。いくつかの実施形態において、ＤＡＲは１〜１０、１〜２０、または１〜３０（すなわち、抗体またはその抗原結合断片あたり１〜３０の薬物分子）である。
【０２３０】
治療用製剤および投与
本発明は、本発明の抗原結合分子を含む薬学的組成物を提供する。本発明の薬学的組成物は、適切な担体、賦形剤、および改善された移動、送達、耐性などをもたらす他の薬剤と共に製剤化される。多くの適切な製剤は、製薬化学者全員に既知の処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡにおいて認めることができる。これらの製剤には、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、ベシクル（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡなど）を含有する脂質（カチオン性またはアニオン性）、ＤＮＡ複合体、無水吸収ペースト、水中油エマルションおよび油中水エマルション、エマルションカーボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、ならびにカーボワックスを含有する半固体混合物が含まれる。Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．”Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ（１９９８）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  ５２：２３８−３１１も参照されたい。
【０２３１】
患者に投与される抗原結合分子の用量は、患者の年齢および大きさ、標的疾患、病態、投与経路などに応じて変わり得る。好ましい用量は、典型的には体重または体表面積に従って計算される。本発明の二重特異性抗原結合分子が成人患者の治療目的に使用される場合、本発明の二重特異性抗原結合分子を通常約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の単回投与で、より好ましくは約０．０２〜約７、約０．０３〜約５、または約０．０５〜約３ｍｇ／ｋｇ体重の単回投与で静脈内投与することが有利であり得る。容態の重症度に応じて、治療の頻度および期間を調整することができる。二重特異性抗原結合分子を投与するための有効投与量およびスケジュールは経験的に決定され、例えば、患者の経過を定期的な評価によってモニターし、それに応じて用量を調整することができる。さらに、投与量の種間スケーリングは、当技術分野において周知の方法を用いて実施することができる（例えば、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．８：１３５１）。
【０２３２】
種々の送達系は既知であり、本発明の薬学的組成物を投与するために使用することができ、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルにおける封入、変異ウイルスを発現することのできる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシスである（例えば、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照されたい）。導入方法には、皮内経路、経皮経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路、皮下経路、鼻腔内経路、硬膜外経路および経口経路が含まれるが、これらに限定されない。組成物は、例えば、注入もしくはボーラス注射による、上皮もしくは粘膜皮膚の裏打ち（例えば、口腔粘膜、直腸および腸の粘膜など）を通じての吸収による任意の簡便な経路によって投与され得、他の生物学的に活性のある薬剤と共に投与され得る。投与は全身または局所であり得る。
【０２３３】
本発明の医薬組成物は、標準的な針および注射器を用いて皮下にまたは静脈内に送達することができる。加えて、皮下送達に関して、ペン送達装置は、本発明の医薬組成物を送達する上での適用を容易に有する。このようなペン送達装置は、再利用可能または使い捨て可能であり得る。再利用可能なペン送達装置は、概して、医薬組成物を含有する交換可能なカートリッジを使用する。いったん、カートリッジ内の薬学的組成物が全て投与され、カートリッジが空になると、この空のカートリッジは容易に廃棄することができ、薬学的組成物を含有する新しいカートリッジと容易に交換することができる。次に、ペン送達装置は再利用することができる。使い捨てのペン送達装置において、交換可能なカートリッジはない。むしろ、使い捨てペン送達装置は、この装置内の貯蔵器の中に保持された医薬組成物が事前に充填されている。いったん、貯蔵器が医薬組成物に関して空になると、装置全体が廃棄される。
【０２３４】
数多くの再利用可能なペン送達装置および自動注射送達装置は、本発明の医薬組成物の皮下送達における応用を有する。例としては、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ  Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．，Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ，ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ｐｅｎ（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｂｅｒｇｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ  ＭＩＸ  ７５／２５（商標）ｐｅｎ、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ｐｅｎ、ＨＵＭＡＬＩＮ  ７０／３０（商標）ｐｅｎ（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ，ＩＩおよびＩＩＩ  （Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ  ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、  ＢＤ（商標）ｐｅｎ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ，Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられるが、これらに限定されず、ほんの数種類しか挙げていない。本発明の薬学的組成物の皮下送達での用途を有する使い捨てペン送達装置の例としては、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）自動注射器（Ａｍｇｅｎ，Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）およびＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｓ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ  ＩＬ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３５】
特定の状況において、薬学的組成物は徐放系で送達することができる。一実施形態において、ポンプを使用することができる（Ｌａｎｇｅｒ，ｓｕｐｒａ；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１を参照のこと。）他の実施形態において、ポリマー材料を使用することができる。Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ  （ｅｄｓ．），１９７４，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａを参照されたい。さらに別の実施形態において、徐放系を組成物の標的の近傍に配置することができ、それによって全身用量のほんの一部のみが必要となる。（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，１９８４，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８を参照のこと）他の徐放系は、Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：１５２７−１５３３による総説で論じられている。
【０２３６】
注射可能な調製物には、静脈内注射、皮下注射、皮内注射および筋肉内注射、点滴注入などのための剤形が含まれ得る。これらの注射可能な調製物は、公的に既知の方法によって調製され得る。例えば、注射可能な調製物は、例えば、注射用に従来通り使用される滅菌水性媒体または油性媒体中に上述の抗体またはその塩を溶解、懸濁または乳化させることによって調製され得る。注射用水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコース含有等張液、および他の補助剤などがあり、これらは、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（水素化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０モル）付加物）］などの適切な可溶化剤と組み合わせて使用してよい。油性媒体として、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが使用され、ベンジルベンゾエート、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と組み合わせて使用してよい。このように調製された注射は、好ましくは適切なアンプルに充填される。
【０２３７】
有利なことに、先に説明した経口または非経口での使用のための医薬組成物は、有効成分の用量に適合するのに適した単位用量の剤形へと調製される。このような単位用量の剤形には、例えば、錠剤、ピル、カプセル、注射（アンプル）、坐薬などが含まれる。前述の含有される抗体の量は概して、単位用量の剤形あたり約５〜約５００ｍｇであり、特に注射の形態では、前述の抗体は、約５〜約１００ｍｇで、他の剤形については約１０〜約２５０ｍｇで含有されることが好ましい。
【０２３８】
抗原結合分子の治療的使用
本発明は、抗ＳＴＥＡＰ２抗体もしくはその抗原結合断片、またはＣＤ３およびＳＴＥＡＰ２に特異的に結合する二重特異性抗原結合分子を含む治療用組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む方法を含む。治療用組成物は、本明細書に開示される抗体または二重特異性抗原結合分子のいずれかと薬学的に許容される担体または希釈剤とを含み得る。本明細書で使用される場合、「それを必要とする対象」という表現は、癌の１つ以上の症状または徴候を示すヒトまたは非ヒト動物（例えば、腫瘍を発現する対象または本明細書で後述される癌のいずれかを患う対象）、あるいは、そうでなければＳＴＥＡＰ２活性の阻害もしくは減少またはＳＴＥＡＰ２＋細胞（例えば、前立腺癌細胞）の枯渇から利益を得る者を意味する。
【０２３９】
本発明の抗体および二重特異性抗原結合分子（およびそれを含む治療用組成物）は、とりわけ、免疫応答の刺激、活性化および／または標的化が有益である任意の疾患または障害の治療に有用である。特に、本発明の抗ＳＴＥＡＰ２抗体または抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子は、ＳＴＥＡＰ２発現または活性またはＳＴＥＡＰ２＋細胞の増殖に関連するかまたはそれによって媒介される任意の疾患または障害の治療、予防および／または改善に使用され得る。本発明の治療方法が達成される作用機序は、エフェクター細胞の存在下で、例えばＣＤＣ、アポトーシス、ＡＤＣＣ、食作用、またはこれらメカニズムの２つ以上の組み合わせによるＳＴＥＡＰ２を発現する細胞の死滅を含む。本発明の二重特異性抗原結合分子を用いて阻害または死滅させることができるＳＴＥＡＰ２を発現する細胞には、例えば前立腺腫瘍細胞が含まれる。
【０２４０】
本発明の抗原結合分子は、例えば、前立腺、膀胱、子宮頸部、肺、結腸、腎臓、乳房、膵臓、胃、子宮、および／または卵巣に発生する原発性および／または転移性腫瘍を治療するために使用され得る。特定の実施形態において、本発明の二重特異性抗原結合分子は、前立腺癌、膀胱癌、子宮頸癌、肺癌、結腸癌、腎臓癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、子宮癌、および卵巣癌のうちの１つ以上の癌の治療に使用される。本発明の特定の実施形態によると、抗ＳＴＥＡＰ２抗体または抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、去勢抵抗性前立腺癌に罹患している患者を治療するのに有用である。本発明の他の関連実施形態によると、本明細書に開示の抗ＳＴＥＡＰ２抗体または抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子を、去勢抵抗性前立腺癌に罹患している患者に投与することを含む方法が提供される。腫瘍スキャニングなどの当技術分野において既知の分析的／診断的方法を使用して、患者が去勢抵抗性の腫瘍を抱えているかどうかを確かめることができる。
【０２４１】
本発明はまた、対象における残存癌を治療するための方法も含む。本明細書で使用される場合、用語「残存癌」は、抗癌療法による治療後の対象における１つ以上の癌性細胞の存在または持続を意味する。
【０２４２】
特定の態様によると、本発明は、対象が前立腺癌（例えば、去勢抵抗性前立腺癌）であると判定された後、本明細書の他所に記載の抗ＳＴＥＡＰ２または二重特異性抗原結合分子のうちの１つ以上を対象に投与することを含む、ＳＴＥＡＰ２発現に関連する疾患または障害（例えば前立腺癌）の治療方法を提供する。例えば、本発明は、対象がホルモン療法（例えば、抗アンドロゲン療法）を受けた１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、または４週間、２ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、８ヶ月、１年、またはそれ以上後に、抗ＳＴＥＡＰ２抗体または抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子を患者に投与することを含む前立腺癌の治療方法を含む。
【０２４３】
併用療法と製剤
本発明は、本明細書に記載の例示的な抗体および二重特異性抗原結合分子のいずれかを含む薬学的組成物を１つ以上の追加の治療薬と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。本発明の抗原結合分子と組み合わせてまたは併用投与することができる例示的な追加の治療薬には、例えば、ＥＧＦＲアンタゴニスト（例えば、抗ＥＧＦＲ抗体［例えば、セツキシマブまたはパニツムマブ］またはＥＧＦＲの小分子阻害剤[例えば、ゲフィチニブまたはエルロチニブ]）、Ｈｅｒ２／ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、またはＥｒｂＢ４などの他のＥＧＦＲファミリーメンバーのアンタゴニスト（例えば抗ＥｒｂＢ２、抗ＥｒｂＢ３、もしくは抗ＥｒｂＢ４抗体、またはＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、またはＥｒｂＢ４活性の小分子阻害剤）、ＥＧＦＲｖＩＩＩのアンタゴニスト（例えば、ＥＧＦＲｖＩＩＩに特異的に結合する抗体）、ｃＭＥＴアンタゴニスト（例えば、抗ｃＭＥＴ抗体）、ＩＧＦ１Ｒアンタゴニスト（例えば、抗ＩＧＦ１Ｒ抗体）、Ｂ−ｒａｆ阻害剤（例えば、ベムラフェニブ、ソラフェニブ、ＧＤＣ−０８７９、ＰＬＸ−４７２０）、ＰＤＧＦＲ−α阻害剤（例えば、抗ＰＤＧＦＲ−α抗体）、ＰＤＧＦＲ−β阻害剤（例えば、抗ＰＤＧＦＲ−β抗体）、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えばＶＥＧＦトラップ、例えばＵＳ７，０８７，４１１（本明細書では「ＶＥＧＦ阻害融合タンパク質」とも呼ばれる）を参照のこと）、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ベバシズマブ）、ＶＥＧＦ受容体の小分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、またはパゾパニブ））、ＤＬＬ４アンタゴニスト（例えば、ＵＳ２００９／０１４２３５４に開示されている抗ＤＬＬ４抗体、例えばＲＥＧＮ４２１）、Ａｎｇ２アンタゴニスト（例えば、ＵＳ２０１１／００２７２８６に開示されている抗Ａｎｇ２抗体、例えばＨ１Ｈ６８５Ｐ）、ＦＯＬＨ１（ＰＳＭＡ）アンタゴニスト、ＰＲＬＲアンタゴニスト（例えば抗ＰＲＬＲ抗体）、ＳＴＥＡＰ１またはＳＴＥＡＰ２アンタゴニスト（例えば抗ＳＴＥＡＰ１抗体または抗ＳＴＥＡＰ２抗体）、ＴＭＰＲＳＳ２アンタゴニスト（例えば、抗ＴＭＰＲＳＳ２抗体）、ＭＳＬＮアンタゴニスト（例えば、抗ＭＳＬＮ抗体）、ＣＡ９アンタゴニスト（例えば、抗ＣＡ９抗体）、ウロプラキンアンタゴニスト（例えば、抗ウロプラキン抗体）など、が含まれる。本発明の抗原結合分子と組み合わせて有益に投与され得る他の薬剤は、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８などのサイトカイン、またはそれらの受容体それぞれに結合する、低分子サイトカイン阻害剤および抗体を含む、サイトカイン阻害剤を含む。本発明の薬学的組成物（例えば、本明細書に開示の抗ＣＤ３／抗ＳＴＥＡＰ２二重特異性抗原結合分子を含む薬学的組成物）はまた、「ＩＣＥ」：イホスファミド（例えば、Ｉｆｅｘ（登録商標））、カルボプラチン（例えば、Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、エトポシド（例えば、Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（登録商標）、Ｔｏｐｏｓａｒ（登録商標）、ＶｅＰｅｓｉｄ（登録商標）、ＶＰ−１６）、「ＤＨＡＰ」：デキサメタゾン（例えば、Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商��））、シタラビン（例えば、Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標）、シトシンアラビノシド、ａｒａ−Ｃ）、シスプラチン（例えば、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）−ＡＱ）、および「ＥＳＨＡＰ」：エトポシド（例えば、Ｅｔｏｐｏｆｏｓ（登録商標）、Ｔｏｐｏｓａｒ（登録商標）、ＶｅＰｅｓｉｄ（登録商標）、ＶＰ−１６）、メチルプレドニゾロン（例えば、Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標））、高用量シタラビン、シスプラチン（例えば、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）−ＡＱ）から選択される１つ以上の治療用組み合わせを含む治療計画の一部として投与され得る。
【０２４４】
本発明はまた、本明細書に記載の抗原結合分子のいずれか、およびＶＥＧＦ、Ａｎｇ２、ＤＬＬ４、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ｃＭｅｔ、ＩＧＦ１Ｒ、Ｂ−ｒａｆ、ＰＤＧＦＲ−α、ＰＤＧＦＲ−β、ＦＯＬＨ１（ＰＳＭＡ）、ＰＲＬＲ、ＳＴＥＡＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＴＭＰＲＳＳ２、ＭＳＬＮ、ＣＡ９、ウロプラキンのうちの１つ以上の阻害剤、または前述のサイトカインのいずれかを含む治療組合せを含み、その阻害剤は、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ペプチボディ、ナノボディもしくは抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ'）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、またはダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、および最小認識ユニット）である。本発明の抗原結合分子は、抗ウイルス薬、抗生物質、鎮痛薬、コルチコステロイドおよび／またはＮＳＡＩＤと組み合わせて投与および／または同時製剤することもできる。本発明の抗原結合分子はまた、放射線治療および／または従来の化学療法も含む治療計画の一部として投与してもよい。
【０２４５】
追加の治療活性成分は（複数可）、本発明の抗原結合分子の投与の直前、同時に、または直後に投与してもよい。（本開示の目的のために、このような投与計画は、追加の治療活性成分と「組み合わせて」抗原結合分子を投与することと見なされる。
【０２４６】
本発明には、本発明の抗原結合分子が、本明細書の他所に記載の追加の治療活性成分（複数可）の１つ以上と同時製剤された薬学的組成物が含まれる。
【０２４７】
投与様式
本発明の特定の実施形態によると、複数用量の抗原結合分子（例えば、ＳＴＥＡＰ２およびＣＤ３に特異的に結合する抗ＳＴＥＡＰ２抗体または二重特異性抗原結合分子）を所定の期間にわたって対象に投与することができる。本発明のこの態様による方法は、本発明の抗原結合分子の複数回用量を対象へ連続的に投与することを含む。本明細書で使用する場合、「連続的に投与すること」は、抗原結合分子の各用量が、異なる時点、例えば、所定の間隔（例えば、数時間、数日間、数週間または数か月間）によって分けられた異なる日に対象へ投与されることを意味する。本発明には、抗原結合分子の単回の初回用量と、それに続く抗原結合分子の１回以上の２次用量、次いで場合により抗原結合分子の１回以上の３次用量を患者へ連続的に投与することを含む方法が含まれる。
【０２４８】
「１次用量」、「２次用量」、および「３次用量」という用語は、本発明の抗原結合分子の投与の時系列を指す。したがって、「１次用量」とは、治療様式の開始時に投与される用量（「ベースライン用量」とも呼ばれる）であり、「２次用量」とは、１次用量後に投与される用量であり、「３次用量」とは、２次用量後に投与される用量である。１次用量、２次用量、および３次用量は全て、同じ量の抗原結合分子を含有し得るが、概して、投与頻度に関して互いに異なり得る。しかし、特定の実施形態において、１次用量、２次用量および／または３次用量に含有される抗原結合分子の量は、治療経過の間、互いに異なる（例えば、適宜上下に調整される）。ある特定の実施形態において、２回以上（例えば、２回、３回、４回、または５回）の用量が、「負荷用量」として治療様式の開始時に投与された後、その後の用量が、それより低い頻度ベースで投与される（例えば、維持用量」）。
【０２４９】
本発明のある例示的な実施形態において、各２次用量および／または３次用量は、直前の用量の１〜２６（例えば、１、１と１／２、２、２と１／２、３、３と１／２、４、４と１／２、５、５と１／２、６、６と１／２、７、７と１／２、８、８と１／２、９、９と１／２、１０、１０と１／２、１１、１１と１／２、１２、１２と１／２、１３、１３と１／２、１４、１４と１／２、１５、１５と１／２、１６、１６と１／２、１７、１７と１／２、１８、１８と１／２、１９、１９と１／２、２０、２０と１／２、２１、２１と１／２、２２、２２と１／２、２３、２３と１／２、２４、２４と１／２、２５、２５と１／２、２６、２６と１／２、またはそれ以上）週間後に投与される。「直前の用量」という句は、本明細書で使用する場合、一連の複数回投与において、抗原結合分子の用量を意味し、これは、介入用量のない直後の用量の投与の前に患者へ投与される。
【０２５０】
本発明のこの態様による方法は、抗原結合分子（例えば、ＳＴＥＡＰ２およびＣＤ３に特異的に結合する抗ＳＴＥＡＰ２抗体または二重特異性抗原結合分子）の２次用量および／または３次用量の任意の回数を患者へ投与することを含んでよい。例えば、ある特定の実施形態において、単回の２次用量のみが患者へ投与される。他の実施形態において、２回以上（例えば、２，３、４、５、６、７、８回またはそれ以上）の２次用量が患者へ投与される。同様に、ある特定の実施形態において、単回の３次用量のみが患者へ投与される。他の実施形態において、２回以上（例えば、２，３、４、５、６、７、８またはそれより多数）の３次用量が患者へ投与される。
【０２５１】
複数の２次用量を含む実施形態において、各２次用量は他の２次用量と同じ頻度で投与されてもよい。例えば、各２次用量は、直前の用量の１〜２週間後に患者に投与されてもよい。同様に、複数の３次用量を含む実施形態において、各３次用量は他の３次用量と同じ頻度で投与されてもよい。例えば、各３次用量は、直前の用量の２〜４週間後に患者に投与されてもよい。あるいは、２次用量および／または３次用量が患者へ投与される頻度は、治療計画の経過にわたって変動し得る。投与頻度はまた、臨床検査後の個々の患者の必要性に応じて、医師によって治療過程の間に調整され得る。
【０２５２】
抗体の診断上の使用
本発明の抗ＳＴＥＡＰ２抗体はまた、例えば診断目的のために、サンプル中のＳＴＥＡＰ２、またはＳＴＥＡＰ２発現細胞を検出および／または測定するために使用してもよい。例えば、抗ＳＴＥＡＰ２抗体、またはその断片を使用して、ＳＴＥＡＰ２の異常な発現（例えば、過剰発現、過少発現、発現欠如など）を特徴とする病態または疾患を診断してよい。ＳＴＥＡＰ２についての例示的な診断アッセイは、例えば、患者から得られたサンプルを本発明の抗ＳＴＥＡＰ２抗体と接触させることを含んでよく、抗ＳＴＥＡＰ２抗体は検出可能な標識またはレポーター分子で標識されている。あるいは、標識されていない抗ＳＴＥＡＰ２抗体は、それ自体が検出可能に標識された２次抗体との組み合わせで診断用途に使用することができる。検出可能な標識またはレポーター分子は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓもしくは１２５Ｉなどの放射性同位体、フルオレセインイソチオシアナートもしくはローダミンなどの蛍光部分もしくは化学発光部分、またはアルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼなどの酵素であり得る。本発明の抗ＳＴＥＡＰ２抗体の別の例示的な診断用途は、８９Ｚｒ−デスフェリオキサミン標識などの、対象において腫瘍細胞の非侵襲的識別および追跡の目的のための８９Ｚｒ−標識抗体（例えば、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージング）を含む。（例えば、Ｔａｖａｒｅ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１６  Ｊａｎ  １；７６（１）：７３−８２、およびＡｚａｄ，ＢＢ．ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２０１６  Ｍａｒ  １５；７（１１）：１２３４４−５８）サンプル中のＳＴＥＡＰ２を検出または測定するために使用することのできる特定の例示的アッセイには、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、および蛍光標示式細胞分取器（ＦＡＣＳ）が含まれる。
【０２５３】
本発明によるＳＴＥＡＰ２診断アッセイにおいて使用することのできるサンプルには、正常条件または病理学的条件下で、検出可能な量のＳＴＥＡＰ２タンパク質またはその断片を含有する、患者から得ることのできる任意の組織または体液サンプルが含まれる。一般に、健常な患者（例えば、異常なＳＴＥＡＰ２レベルまたは活性と関連した疾患または病態に罹患していない患者）から得られた特定のサンプル中のＳＴＥＡＰ２のレベルを測定し、ＳＴＥＡＰ２のベースラインレベルまたは標準レベルをまず確立する。次いで、このＳＴＥＡＰ２のベースラインレベルを、ＳＴＥＡＰ２に関連する疾患（例えば、ＳＴＥＡＰ２発現細胞を含む腫瘍）または病態を有することが疑われる個体から得られたサンプルにおいて測定されたＳＴＥＡＰ２のレベルと比較することができる。
【実施例】
【０２５４】
以下の実施例は、本発明の方法および組成物をどのように作製および使用するかに関する完全な開示および説明を当業者に提供するために提示されており、本発明者らが本発明とみなすことの範囲を制限するよう企図するものではない。使用される数値（例えば、量、温度など）に関して正確性を確保するための努力はしたが、いくつかの実験上の誤差および偏差が考慮されるべきである。別段の記載がない限り、部分は重量部分であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧またはそれに近い圧力である。
【０２５５】
実施例１：抗ＳＴＥＡＰ２抗体の産生
抗ＳＴＥＡＰ２抗体は、遺伝子改変マウスをヒトＳＴＥＡＰ２抗原で免疫することによって、またはヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパ軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含む遺伝子操作マウスをヒトＳＴＥＡＰ２抗原で免疫することによって得た。
【０２５６】
遺伝子改変マウスをｈＳＴＥＡＰ２抗原（配列番号１８９９）で免疫した。免疫後、各マウスから脾細胞を採取して、（１）マウス骨髄腫細胞と融合してそれらの生存率を維持し、ハイブリドーマ細胞を形成してＳＴＥＰ特異性についてスクリーニングし、または（２）反応性抗体（抗原陽性Ｂ細胞）に結合して同定する選別試薬としてヒトＳＴＥＡＰ２断片を用いて、Ｂ細胞を選別した（ＵＳ２００７／０２８０９４５Ａ１に記載の通り）。
【０２５７】
ヒト可変領域およびマウス定常領域を有するＳＴＥＡＰ２に対するキメラ抗体が最初に単離された。抗体を、親和性、選択性などを含む望ましい特徴について特徴付けし選択する。必要ならば、マウス定常領域を所望のヒト定常領域、例えば野生型または改変ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常領域と置き換えて、完全ヒト型抗ＳＴＥＡＰ２抗体を産生した。選択した定常領域は特異的用途に応じて変化し得るが、高親和性抗原結合特徴および標的特異性特徴は可変領域に存在する。Ｈ１Ｈ１１２４３ＮおよびＨ１Ｍ７８０４Ｎなどの抗体名表示は、完全ヒト型抗体「Ｈ１Ｈ」またはキメラヒト可変／マウス定常領域抗体「Ｈ１Ｍ」を表す。ハイブリドーマ法によって同定された抗体は、「Ｎ」または「Ｎ２」で終わる抗体ＩＤ番号で示され、Ｂ細胞選別法によって同定された抗体は、「Ｐ」または「Ｐ２」で終わる抗体ＩＤ番号で示される。
【０２５８】
本実施例の方法に従って産生された例示的な抗ＳＴＥＡＰ２抗体の特定の生物学的特性を、以下に示す実施例において詳細に説明する。
【０２５９】
抗ＳＴＥＡＰ２抗体の重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸配列および核酸配列
表１は、選択された本発明の抗ＳＴＥＡＰ２抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域ならびにＣＤＲのアミノ酸配列識別子を示す。対応する核酸配列識別子を表２に示す。
【表１】
2019532056.tif 000041
【表２】
2019532056.tif 000042
【０２６０】
実施例２：抗ヒトＳＴＥＡＰ２抗体はＦＡＣＳを介してＳＴＥＡＰ２発現細胞株に選択的に結合する。
抗ＳＴＥＡＰ２抗体がヒト前立腺の６回膜貫通上皮抗原２（ＳＴＥＡＰ２）を内因的に発現する細胞株に選択的に結合する能力を、ＦＡＣＳ分析によって決定した。
【０２６１】
手短に言うと、１×１０５個の細胞を、抗体希釈緩衝液中、氷上で３０分間、１０μｇ／ｍｌの抗ＳＴＥＡＰ２抗体、またはアイソタイプ対照抗体と共にインキュベートした。抗体希釈緩衝液で１回洗浄した後、細胞を１０μｇ／ｍｌのＰＥ結合抗ヒトまたは抗マウスＦｃ２次抗体と共に氷上で３０分間インキュベートした。さらに１回洗浄した後、サンプルをＣｙｔｏｆｉｘ（１％ホルムアルデヒド）と共に２０分間インキュベートした。最後の１回の洗浄後、サンプルをＰａｌｌ９６ウェル濾過ブロックを通して濾過し、Ｈｙｐｅｒｃｙｔ（登録商標）サイトメーターで泳動し、ＦｏｒｅＣｙｔ（商標）（ＩｎｔｅｌｌｉＣｙｔ、Ａｌｂｕｑｕｅｒｑｕｅ，ＮＭ）で分析した。平均蛍光強度（ＭＦＩ）は、無染色レベル（バックグラウンド）を超える倍率変化として表した。１００〜３００ｎＭの抗体濃度でバックグラウンドを上回る平均倍率を決定した。細胞結合ＥＣ５０決定に関して、ｍＡｂ濃度は３００ｎＭ〜５ｐＭの範囲であり、ＥＣ５０値は１２点応答曲線（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）上の４パラメータロジスティック方程式から決定した。
【０２６２】
表３Ａおよび３Ｂ：ＳＴＥＡＰ２発現細胞株およびＳＴＥＡＰ２陰性細胞株に対する抗ＳＴＥＡＰ２抗体のＦＡＣＳ結合特性
【表３】
2019532056.tif 000043
【表４】
2019532056.tif 000044
【０２６３】
表３Ａおよび３Ｂの結果が示すように、いくつかの抗ＳＴＥＡＰ２抗体は、ＦＡＣＳによって、低ｎＭのＥＣ５０で、バックグラウンドの５０倍を超えるレベルで高ＳＴＥＡＰ２発現Ｃ４−２前立腺腺癌細胞株に特異的に結合した。いくつかの抗ＳＴＥＡＰ２抗体はまた、低ＳＴＥＡＰ２発現ＨＥＫ２９３細胞に弱く結合した。無視できる結合は、ＳＴＥＡＰ２陰性ＦＡＤＵ、ＳＫ−ＢＲ−３、およびＲａｊｉ細胞上のほとんどの抗ＳＴＥＡＰ２抗体について観察された。本実施例は、本発明のいくつかの抗ＳＴＥＡＰ２抗体が高発現ＳＴＥＡＰ２細胞株に特異的かつ選択的に結合する能力を示す。
【０２６４】
実施例３：抗ヒトＳＴＥＡＰ２抗体は強力な内在化およびヒトＳＴＥＡＰ２に対する特異性を示す。
本発明の抗ＳＴＥＡＰ２抗体がＳＴＥＡＰ２発現細胞株に選択的に結合する能力は記載されている（実施例２−ＦＡＣＳ結合参照）。次に、本発明の抗ＳＴＥＡＰ２抗体の内在化特性もまた評価した。
【０２６５】
手短に言うと、２０,０００個のＣ４−２細胞をＰＤＬ被覆９６ウェルプレートに播種した。翌日、細胞を抗ヒトＳＴＥＡＰ２抗体（１０μｇ／ｍｌ）と共に氷上で３０分間インキュベートした後、ＰＢＳで２回洗浄した。次いで細胞を、アレクサ４８８結合抗ｈＦｃＦａｂ２次抗体と共に氷上で３０分間インキュベートし、続いてさらに２回ＰＢＳ洗浄した。抗体を、内在化緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）中で、３７℃で１時間内在化させるか、または４℃に維持した。細胞を４％ホルムアルデヒド中で固定し、核をＤＲＡＱ５（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）で染色し、画像をＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓｍｉｃｒｏＸＬ（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ）で取得した。
【０２６６】
総結合強度および小胞内に内在化した抗体の強度の定性的視覚評価を実施し、以下の基準に従って採点した。−（内在化または結合なし）、＋（弱い内在化または結合）、＋＋（中程度の内在化）、または＋＋＋（堅牢な内在化または結合）。
【０２６７】
表４の結果が示すように、いくつかの抗体は、Ｃ４−２細胞株に対して強力な内在化能力を示した。一般に、頑強な内在化は最高レベルの総結合強度と相関していた。
【０２６８】
次いで、選択されたＳＴＥＡＰ２抗体を他のヒト（ｈ）ＳＴＥＡＰファミリーメンバー（ＳＴＥＡＰ１、ＳＴＥＡＰ３、およびＳＴＥＡＰ４）への結合について試験した。抗ＳＴＥＡＰ２抗体特異性を評価するために、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）に融合したｈＳＴＥＡＰ１、ｈＳＴＥＡＰ２、ｈＳＴＥＡＰ３、またはｈＳＴＥＡＰ４を発現するプラスミド構築物を方法論に基づくリポフェクタミン２０００により一時的にＨＥＫ２９３細胞に導入した。４８時間後、一過性にトランスフェクトした細胞を抗ＳＴＥＡＰ２抗体で染色し、内在化アッセイについて上記したように画像化した。抗ＳＴＥＡＰ２抗体を結合したＧＦＰ陽性細胞を含むウェルを陽性（＋）と記録し、抗ＳＴＥＡＰ２抗体を結合しなかったウェルを陰性（−）と記録した。試験した全ての抗体は、ｈＳＴＥＡＰ２−ＧＦＰ陽性細胞に結合したが、ＳＴＥＡＰ１−ＧＦＰ、ＳＴＥＡＰ３−ＧＦＰ、またはＳＴＥＡＰ４−ＧＦＰ陽性細胞には結合せず、ヒトＳＴＥＡＰ２への結合の特異性を確認した。結果を表５に要約する。
【０２６９】
要約すると、本発明のいくつかの抗ＳＴＥＡＰ２抗体は強力な内在化能力を示し、ヒトＳＴＥＡＰ２に対する特異的な結合剤である。
【表５】
2019532056.tif 000045
【表６】
2019532056.tif 000046
【０２７０】
実施例４：ＳＴＥＡＰ２およびＣＤ３に結合する二重特異性抗体の産生
本発明は、ＣＤ３およびＳＴＥＡＰ２に結合する二重特異性抗原結合分子を提供し、そのような二重特異性抗原結合分子はまた、本明細書において「抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３または抗ＳＴＥＡＰ２×ＣＤ３二重特異性分子」とも呼ばれる。抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３二重特異性分子の抗ＳＴＥＡＰ２部分は、前立腺の６回膜貫通上皮抗原２（ＳＴＥＡＰ２）（ＳＴＥＡＰ２）を発現する腫瘍細胞を標的とするのに有用であり、二重特異性分子の抗ＣＤ３部分は、Ｔ細胞の活性化に有用である。腫瘍細胞上のＳＴＥＡＰ２およびＴ細胞上のＣＤ３の同時結合は、活性化Ｔ細胞によって標的腫瘍細胞を直接死滅させる（細胞溶解）を促進する。
【０２７１】
抗ＳＴＥＡＰ２特異的結合ドメインおよび抗ＣＤ３特異的結合ドメインを含む二重特異性抗体を、標準的な分子クローニング方法論によって組換えで構築してＣＨＯ細胞中で発現させ、抗ＳＴＥＡＰ２特異的結合ドメインおよび抗ＣＤ３特異的結合ドメインがそれぞれ共通のＬＣＶＲと対をなす異なる別個のＨＣＶＲを含む。例示された二重特異性抗体では、抗ＣＤ３抗体由来の重鎖、抗ＳＴＥＡＰ２抗体由来の重鎖、および抗ＳＴＥＡＰ２抗体由来の共通軽鎖を利用して分子を構築し、ＣＨＯ細胞中で発現させた。場合によっては、二重特異性抗体は、抗ＣＤ３抗体由来の重鎖、抗ＳＴＥＡＰ２抗体由来の重鎖、および抗ＣＤ３抗体由来の軽鎖、または無差別であり、あるいはＶκ１−３９ＪＫ５もしくはＶκ３−２０ＪＫ１など様々な重鎖アームと効果的に対をなすことが知られている抗体軽鎖を利用して構築され得る。
【０２７２】
以下の実施例に記載の二重特異性抗体は、ヒト可溶性ヘテロ二量体ｈＣＤ３ε/δタンパク質（本明細書の実施例１２に記載）およびヒトＳＴＥＡＰ２（上記実施例１〜２参照）への様々な結合親和性を有する抗ＣＤ３結合アームからなる。２０１４年８月２８日に公開された米国特許出願公開ＵＳ２０１４０２４３５０４Ａ１に記載の、改変（キメラ）ＩｇＧ４Ｆｃドメインを有する例示的な二重特異性抗体を製造した。
【０２７３】
構築した様々な抗ＳＴＥＡＰ２×ＣＤ３二重特異性抗体の抗原結合ドメインの構成部分の要約を表６に示す。
【表７】
2019532056.tif 000047
【０２７４】
表６に挙げた軽鎖は、二重特異性抗体のＣＤ３およびＳＴＥＡＰ２標的化アームの両方に共通していた。表１および２は、本実施例の二重特異性抗体を構築するための抗ＳＴＥＡＰ２アーム（すなわち、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲはＨ２Ｍ１１１６２Ｎに由来する）の様々な重鎖可変領域、およびそれらの対応するＣＤＲについて、アミノ酸識別子および核酸配列識別子をそれぞれ示す。表１５および１６は、本実施例の二重特異性抗体の抗ＣＤ３アームの様々な重鎖可変領域、およびそれらの対応するＣＤＲについて、アミノ酸識別子および核酸配列識別子をそれぞれ示す。
【０２７５】
実施例５：抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３二重特異性抗体はインビボで強力な抗腫瘍効果を示す。
インビボでの例示的な抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３二重特異性抗体の有効性を決定するために、前立腺癌異種移植片を保有する免疫無防備状態のマウスにおいて試験を行った。
【０２７６】
ヒト腫瘍異種移植片モデルにおける抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３二重特異性抗体の有効性
ヒト腫瘍異種移植片試験における抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３二重特異性のインビボでの有効性を評価するために、ＮＯＤｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）に、内因的にＳＴＥＡＰ２を発現するヒト前立腺癌Ｃ４−２細胞（ＭＤ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｈｏｕｓｔｏｎ  ＴＸ）と共に、ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ、ＲｅａｃｈＢｉｏ  ＬＬＣ．，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を同時移植した。
【０２７７】
手短に言うと、５．０×１０６個のＣ４−２細胞を、マトリゲルマトリックス（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）の５０：５０混合物中の１．２５×１０６個のヒトＰＢＭＣと共に、雄性ＮＳＧマウスの右側副に皮下（ｓ．ｃ．）同時移植した。マウスを移植日（即時治療モデル）に抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３二重特異性ＢＳＳＴＥＡＰ２／ＣＤ３−００１、ＢＳＳＴＥＡＰ２／ＣＤ３−００２、またはＢＳＳＴＥＡＰ２／ＣＤ３−００３、またはアイソタイプ対照を０．１または０．０１ｍｇ／ｋｇの投与量（Ｎ＝５マウス／群）で腹腔内（ｉ．ｐ．）処置した。
【０２７８】
キャリパーを使用して腫瘍サイズを週２回測定し、腫瘍体積を体積＝（長さ×幅２）／２として計算した。データは、腫瘍移植後４６日目の試験終点における腫瘍サイズ（ｍｍ３）として示される（表７）。
【表８】
2019532056.tif 000048
【０２７９】
表７の結果が示すように、腫瘍サイズを試験終点で測定した場合、ＢＳＳＴＥＡＰ２／ＣＤ３−００１、ＢＳＳＴＥＡＰ２／ＣＤ３−００２、およびＢＳＳＴＥＡＰ２／ＣＤ３−００３は、アイソタイプ対照と比較して腫瘍増殖を有意に抑制した。重要なことに、抗ＳＴＥＡＰ２／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、最低用量０．１ｍｇ／ｋｇでさえもＣ４−２腫瘍増殖を阻害するのに有効であった。
【０２８０】
実施例６：複合体の調製および特徴付け
全てのモノクローナル抗体をＣＨＯ細胞中で発現させ、プロテインＡにより精製した。アイソタイプ対照もまた同様にして調整した。非結合アイソタイプ対照抗体は、腫瘍学とは無関係の免疫学的抗原に由来した。
【０２８１】
５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５中の抗体（１０ｍｇ／ｍｌ）を１ｍＭジチオトレイトールで３７℃で３０分間処理した。ゲル濾過（Ｇ−２５、ｐＨ４．５酢酸ナトリウム）後、ＤＭＳＯ（１０ｍｇ／ｍｌ）中のマレイミドリンカーペイロード誘導体化合物７（１．２当量／ＳＨ基）を還元抗体に加え、混合物を１ＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）でｐＨ７．０に調整した。化合物７、および化合物を製造する方法は、２０１４年９月１８日に公開されたＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１４／１４５０９０に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。１時間後、反応を過剰のＮ−エチルマレイミドでクエンチした。複合体をサイズ排除クロマトグラフィーにより精製し、滅菌濾過した。タンパク質およびリンカーのペイロード濃度は、ＵＶスペクトル分析によって決定した。サイズ排除ＨＰＬＣは、使用した全ての複合体が＞９５％の単量体であることを立証し、ＲＰ−ＨＰＬＣは＜０．５％の非結合リンカーペイロードがあることを立証した。収量は、タンパク質力価決定に基づいて表８に報告されている。Ｈａｍｂｌｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００４  １０  ７０６３に従って、リンカーペイロード負荷値について、全ての複合抗体をＵＶによって分析した。結果を表８に要約する。
【０２８２】
化合物６０を含む複合体は、同様の方法を用いて調製することができる。化合物６０、およびその化合物の製造方法は、２０１６年１０月６日に公開されたＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１６／１６０６１５（実施例２０）に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。化合物６０は、メイタンシン−Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン−（３−メトキシ−４−アミノ）ベンズアミド−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−Ｃａｐ−Ｍａｌである。
【表９】
2019532056.tif 000049
【０２８３】
実施例７：抗ＳＴＥＡＰ２抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は、インビボＳＴＥＡＰ２陽性前立腺癌異種移植モデルにおける腫瘍増殖の強力な阻害剤である。
Ａ．化合物７に結合した抗ＳＴＥＡＰ２抗体のインビボ有効性を決定するために、ＳＴＥＡＰ２陽性前立腺癌異種移植片を保有する免疫無防備状態のマウスにおいて研究を行った。
【０２８４】
これらの試験のために、雄性ＳＣＩＤマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ，Ｈｕｄｓｏｎ  ＮＹ）に、ＳＴＥＡＰ２を内因的に発現するＣ４−２細胞を移植した。腫瘍が２００〜２５０ｍｍ３の平均体積に達したら（約１３〜１７日目）、マウスを処置群に無作為化し、抗ＳＴＥＡＰ２結合抗体、非結合結合抗体、またはビヒクルのいずれかを投与した。これらのインビボ試験では、抗体を１回投与し、次いでビヒクル単独を投与したコホートにおいて約１５００〜２０００ｍｍ３の平均腫瘍サイズが達成されるまで（約４０〜５０日）腫瘍をモニターした。有効性を示した処置群は、より長期間（８０〜１１０日）維持された。
【０２８５】
最初の試験において、化合物７に結合した例示的な抗ＳＴＥＡＰ２抗体を、Ｃ４−２腫瘍体積の減少における有効性について調べた。移植後１３日目に、マウスに１０、２０、または４０ｍｇ／ｋｇの抗ＳＴＥＡＰ２および対照ＡＤＣを単回投与した。図１に要約されるように、Ｈ１Ｈ７８４１Ｎ−７（ＤＡＲ２．９２）は試験した全ての用量で腫瘍増殖を強力に阻害した。最高用量（４０ｍｇ／ｋｇ）では、Ｈ１Ｈ７８４Ｎ−７は腫瘍サイズを効率的に縮小させたが、非結合対照抗体（４０ｍｇ／ｋｇ）も腫瘍体積に対して効果を示した。調べた全ての用量にわたって、Ｈ１Ｈ７８４Ｎ−７は、対照複合抗体よりも強力に腫瘍サイズを縮小させた。
【０２８６】
第２の試験では、移植後１４日目にＳＴＥＡＰ２  ＡＤＣを５ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇで、対照抗体を２０ｍｇ／ｋｇで投与した。図２に要約されるように、Ｈ１Ｈ７８４１Ｎ−７（ＤＡＲ２．９２）は、先の実験におけるように２０ｍｇ／ｋｇの用量で腫瘍増殖を強力に阻害したが、５ｍｇ／ｋｇの用量では有効性の低下を示した。２０ｍｇ／ｋｇ用量の対照抗体はビヒクル対照に対して差を示さなかった。
【０２８７】
さらなる試験において、Ｈ１Ｈ７８４１Ｎ−７（ＤＡＲ２．７）および対照抗体を、ＡＤＣ薬物：抗体比（「ＤＡＲ」）に基づいて、薬物等価物μｇ／ｋｇで投与した。移植後１７日目に投与量は１５０μｇ／ｋｇであった（図３）。Ｈ１Ｈ７８４１Ｎ−７は１５０μｇ／ｋｇの用量で腫瘍増殖を強力に阻害し、移植後４２日および注射後２５日までに腫瘍退縮を示した。この時点で、腫瘍増殖は反発し始めました。この用量での対照抗体による腫瘍増殖はビヒクル対照と変わらなかった。
【０２８８】
Ｂ．類似の試験において、雄性ＳＣＩＤマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ，Ｈｕｄｓｏｎ  ＮＹ）に、ＳＴＥＡＰ２を内因的に発現するＣ４−２細胞を移植した。化合物６０に結合した例示的な抗ＳＴＥＡＰ２（Ｈ１Ｈ７８１４Ｎ）抗体を、Ｃ４−２腫瘍退縮における有効性について調べた。移植後２９日目に、マウスに抗ＳＴＥＡＰ２ＡＤＣ、アイソタイプ対照ＡＤＣ（無関係な抗原に結合する）、またはビヒクル（ＰＢＳ）を２．５ｍｇ／ｋｇで単回投与した。腫瘍体積および体重を、注射後０日目（注射日）、ならびに注射後４、６、８、１２、１４、および２０日目に記録した。図４に要約されるように、Ｈ１Ｈ７８１４Ｎ−６０（ＤＡＲ３．６）は試験した用量で腫瘍増殖を強く阻害し、注射後２０日まで（移植後４９日）の腫瘍退縮を示した。試験ＡＤＣについての体重の変化率は、体重の変化率が、（Ｈ１Ｈ７８１４Ｎ−６０の投与後）１４日目までに−４．０２％から−１１．５５％で観察された対照Ａｂ−ＡＤＣで処置されたマウスと比較して、１４日目までに−２．０１％以下であった。
【０２８９】
実施例８：抗ＣＤ３抗体の産生
抗ＣＤ３抗体は、ヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパ軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含む遺伝子操作マウスを、ＣＤ３を発現する細胞またはＣＤ３をコードするＤＮＡで免疫することによって得た。抗体の免疫応答を、ＣＤ３特異的イムノアッセイによってモニターした。所望の免疫応答が達成されたとき、脾細胞を収集し、マウス骨髄腫細胞と融合させて、それらの生存率を維持し、ハイブリドーマ細胞株を形成した。ハイブリドーマ細胞株をスクリーニングおよび選択して、ＣＤ３特異的抗体を産生する細胞株を同定した。この技術を用いて、いくつかの抗ＣＤ３キメラ抗体（すなわち、ヒト可変ドメインとマウス定常ドメインとを有する抗体）を得た。さらに、ＵＳ２００７／０２８０９４５Ａ１に記載されるように、いくつかの完全ヒト型抗ＣＤ３抗体を骨髄腫細胞に融合させることなく抗原陽性Ｂ細胞から直接単離した。
【０２９０】
本実施例の方法に従って産生された例示的な抗ＣＤ３抗体の特定の生物学的特性を、以下に示す実施例において詳細に説明する。
【０２９１】
実施例９：重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列および核酸配列
表９は、本発明の選択された抗ＣＤ３抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域ならびにＣＤＲのアミノ酸配列識別子を示す。対応する核酸配列識別子を表１０に示す。本明細書に開示の抗ＣＤ３抗体を作製する方法はまた、２０１４年３月２７日に公開された米国特許公開第２０１４／００８８２９５号に見出すことができる。
【表１０】
2019532056.tif 000050
【表１１】
2019532056.tif 000051
【表１２】
2019532056.tif 000052
【表１３】
2019532056.tif 000053
【表１４】
2019532056.tif 000054
【表１５】
2019532056.tif 000055
【０２９２】
抗体は、以下の命名法：Ｆｃ接頭辞（例えば、「Ｈ１Ｈ」、「Ｈ１Ｍ」、「Ｈ２Ｍ」など）、続いて数値識別子（例えば、表１に示すように、「２７１２」、「２６９２」など）、続いて「Ｐ」、「Ｎ」、または「Ｂ」の接尾辞により、本明細書で典型的に参照される。したがって、この命名法によれば、抗体は、本明細書では、例えば、「Ｈ１Ｈ２７１２Ｎ」、「Ｈ１Ｍ２６９２Ｎ」、「Ｈ２Ｍ２６８９Ｎ」などと言及され得る。本明細書に使用される抗体名のＨ１Ｈ、Ｈ１Ｍ、およびＨ２Ｍの接頭辞は、抗体の特定のＦｃ領域アイソタイプを示す。例えば、「Ｈ１Ｈ」抗体はヒトＩｇＧ１Ｆｃを有し、「Ｈ１Ｍ」抗体はマウスＩｇＧ１Ｆｃを有し、「Ｈ２Ｍ」抗体はマウスＩｇＧ２Ｆｃを有する（抗体名の最初の「Ｈ」によって示されるように全ての可変領域は完全ヒト型である）。当業者によって理解されているように、特定のＦｃアイソタイプを有する抗体は、異なるＦｃアイソタイプを有する抗体へ変換することができる（例えば、マウスＩｇＧ１  Ｆｃを有する抗体は、ヒトＩｇＧ４を有する抗体へ変換することができる、など）が、いずれの事象においても、表１に示す数値識別子によって示される可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は同じままであることになっており、結合特性はＦｃドメインの性質にかかわらず、同一または実質的に類似であると期待される。
【０２９３】
表１１および１２は、本発明の抗ＳＴＥＡＰ２×ＣＤ３二重特異性抗体に有用な追加の抗ＣＤ３ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの重鎖可変領域（表１３）および軽鎖可変領域（表１４）のアミノ酸配列識別子、ならびにそれらの対応するＣＤＲを示す。
【表１６】
2019532056.tif 000056
【表１７】
2019532056.tif 000057
【０２９４】
ＣＤ３−ＶＨ−ＦおよびＣＤ３−ＶＬ−Ｆの重鎖および軽鎖可変領域は、ＷＯ２００４／１０６３８０に記載の「Ｌ２Ｋ」と命名された抗ＣＤ３抗体に由来した。
【０２９５】
さらに、表１３および１４は、本発明の抗ＳＴＥＡＰ２×抗ＣＤ３二重特異性抗体に有用な追加の抗ＣＤ３ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの重鎖可変領域（表１３）および軽鎖可変領域（表１４）をコードするヌクレオチド配列の配列識別子、ならびにそれらの対応するＣＤＲを示す。
【表１８】
2019532056.tif 000058
【表１９】
2019532056.tif 000059
【０２９６】
以下の実施例にて使用される対照構築物
比較の目的で、種々の対照構築物（抗ＣＤ３抗体）を以下の実験に含めた。すなわち、カタログ番号ＣＲＬ−８００１でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能なヒトＴ細胞表面抗原に対するマウスモノクローナル抗体「ＯＫＴ−３」、およびヒトＴリンパ球細胞上のＴ３複合体のイプシロン鎖に対して反応性である、例えば、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（Ｃａｔ．Ｎｏ．３０２９１４）またはＢＤ  Ｐｈａｒｍａｇｅｎ，Ｃａｔ．５５０５２から入手可能な市販のマウスモノクローナル抗体「ＳＰ３４」。
【０２９７】
実施例１０：さらなる抗ＣＤ３抗体の産生
以下の手順は、抗原としてＣＤ３（Ｔ細胞コレセプター）を特異的に認識する抗体を同定することを目的とした。
【０２９８】
抗ＣＤ３抗体のプールは、遺伝子改変マウスに由来した。手短に言うと、マウスをＣＤ３抗原で免疫し、多様なレパートリーの高親和性抗原特異的抗体を発現させるために多様なヒトＶＨ再編成を含むＢ細胞を産生した。表１５〜１８に記載の抗体は、ＶＫ１−３９ＪＫ５の同じ軽鎖配列（配列番号１８９０に記載のＬＣＶＲ）を有する。
【０２９９】
産生された抗体を、インビトロ結合アッセイにおいてヒトおよびカニクイザルＣＤ３抗原に対する親和性について試験し、他のいくつかの中でも特に、例えば、ＣＤ３−ＶＨ−Ｐ（配列番号１８８２に記載のＨＣＶＲ）と命名された１つのＣＤ３抗体が同定され、ジャーカット細胞およびカニクイザルＴ細胞のＦＡＣＳ滴定において決定されるように、１〜４０ｎＭの親和性のＥＣ５０を有するヒトおよびカニクイザルＣＤ３の両方にそれぞれ結合することが見出された。例えば、実施例１２および２０１６年７月２９日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０４４７３２に概説されているＦＡＣＳ結合実験を参照されたい。
【０３００】
続いてＣＤ３−ＶＨ−Ｐの生殖系列アミノ酸残基を同定し、「ＣＤ３−ＶＨ−Ｇ」と命名された抗体を生殖系列フレームワークのみを含むように操作した。生殖系列配列とＣＤ３−ＶＨ−Ｐ配列との間の相違に基づいて段階的な方法でアミノ酸残基を置換するために、他の抗体誘導体を周知の分子クローニング技術によって操作した。各抗体誘導体は、「ＣＤ３−ＶＨ−Ｇ」番号表示を与えられる。表１５を参照されたい。
【０３０１】
ＦＡＣＳアッセイで見られるように、ＣＤ３−ＶＨ−Ｇおよびいくつかの他の操作された抗体はそれらの結合親和性を保持したが、二重特異性フォーマットにおけるいくつかの抗ＣＤ３抗体は、１００ｎＭ超のＥＣ５０などの弱から測定不可能な結合親和性で、ヒトまたはカニクイザルＣＤ３にインビトロで結合する。続いて、例示的な抗ＣＤ３抗体を含む二重特異性抗体として、結合親和性、結合動態、ならびに毒性および薬物動態（ｐＫ）プロファイルを解明する他の生物学的特性をさらに調べ、本実施例の方法に従って産生した。
【０３０２】
実施例１１：重鎖および軽鎖可変領域（ＣＤＲのアミノ酸配列および核酸配列）
表１５は、選択された本発明の抗ＣＤ３抗体の重鎖可変領域およびＣＤＲのアミノ酸配列識別子を示す。対応する核酸配列識別子を表１６に示す。
【０３０３】
アミノ酸配列および核酸配列は、各抗体重鎖配列について決定された。生殖系列配列（配列番号１９１０）に由来する各抗体重鎖には、一貫した命名法のために「Ｇ」番号表示を割り当てた。表１５は、操作された本発明の抗ＣＤ３抗体の重鎖可変領域およびＣＤＲのアミノ酸配列識別子を示す。対応する核酸配列識別子を表１６に示す。軽鎖可変領域およびＣＤＲのアミノ酸識別子および核酸配列識別子もまた、それぞれ下記の表１７および１８に同定されている。
【表２０】
2019532056.tif 000060
【表２１】
2019532056.tif 000061
【表２２】
2019532056.tif 000062
【表２３】
2019532056.tif 000063
【０３０４】
「ＣＤ３−Ｌ２Ｋ」と命名された対照１抗体は、既知の抗ＣＤ３抗体（すなわち、ＷＯ２００４／１０６３８０に記載の抗ＣＤ３抗体「Ｌ２Ｋ」）に基づいて構築された。
【０３０５】
本明細書の実施例において言及されるアイソタイプ対照抗体は、無関係の抗原、すなわちＦｅｌＤ１抗原と相互作用するアイソタイプ適合（改変ＩｇＧ４）抗体である。
【０３０６】
実施例１２：ヒトモノクローナル抗ＣＤ３抗体に関するインビトロおよびインビボ試験
ヒトモノクローナル抗ＣＤ３抗体に関するインビボおよびインビトロ試験を、２０１４年３月２７日に公開された米国特許公開第２０１４／００８８２９５号および２０１６年７月２９日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０４４７３２に記載のとおり実施した。
【０３０７】
本発明のいくつかのヒトモノクローナル抗ＣＤ３抗体は、抗体捕捉フォーマットまたは抗原捕捉フォーマットのいずれかで、高い親和性で可溶性ヘテロ二量体ＣＤ３タンパク質に結合する。可溶性ヘテロ二量体ＣＤ３タンパク質（ｈＣＤ３−イプシロン／ｈＣＤ３−デルタ；配列番号１９００／１９０１）は、ヒトＦｃタグ（ｈＦｃΔＡｄｐ／ｈＦｃ；配列番号１９３１／１９３２）またはマウスＦｃタグ（ｍＦｃΔＡｄｐ／ｍＦｃ；配列番号１９３３／１９３４）のいずれかを用いて調製した。ヘテロ二量体ＣＤ３タンパク質は、Ｄａｖｉｓら（ＵＳ２０１０／０３３１５２７）に記載の方法を用いて精製した。
【０３０８】
本発明のいくつかのヒトモノクローナル抗ＣＤ３抗体は、ヒトＴ細胞に結合し、Ｔ細胞増殖を誘導した。本発明のいくつかのヒトモノクローナル抗ＣＤ３抗体はＣＤ２＋ＣＤ４＋サルＴ細胞に結合し、それらの増殖を誘導した。いくつかのヒトモノクローナル抗ＣＤ３抗体は、カルセインベースのＵ９３７死滅アッセイにおいて、Ｆｃ／ＦｃＲ相互作用を介した再指向性のＴ細胞媒介性死滅を支持した。観察された死滅は、隣接するＴ細胞上のＣＤ３のクラスター化をもたらすＵ９３７細胞上のＦｃ受容体との抗体のＦｃ結合に依存すると考えられ、非特異的ヒトＩｇＧの添加によってスケルチされた（データは示さず）。
【０３０９】
実施例１３：ヒトＳＴＥＡＰ２ｘＣＤ３二重特異性抗体に関するインビトロ試験
ジャーカット細胞、ＰＣ３＿ＳＴＥＡＰ２／１細胞、およびカニクイザルＴ細胞に対するＦＡＣＳ結合滴定：フローサイトメトリー分析を利用して、ジャーカットＴ細胞、ＰＣ３＿ＳＴＥＡＰ２／１キメラＴ細胞、およびカニクイザルＴ細胞へのＳＴＥＡＰ２ｘＣＤ３二重特異性抗体の結合を決定した後、フィコエリトリン（ＰＥ）標識した抗ヒト（ＩｇＧ）抗体で検出した。手短に言うと、２×１０５細胞／ウェルを、６６．６ｎＭ〜０．００１ｎＭの範囲のＳＴＥＡＰ２×ＣＤ３二重特異性抗体または対照抗体（ＳＴＥＡＰ２またはヒトもしくはカニクイザルＣＤ３に対して交差反応性を有さないネコ抗原に結合するヒトＩｇＧ１抗体）の段階希釈を用いて４℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を１％濾過ＦＢＳを含有する冷ＰＢＳで２回洗浄し、ＰＥ結合抗ヒト２次抗体を細胞に添加して、さらに３０分間インキュベートした。抗体または２次抗体のみを含有しないウェルを対照として使用した。インキュベーション後、細胞を洗浄し、１％濾過したＦＢＳを含有する２００μＬの冷ＰＢＳに再懸濁し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩでフローサイトメトリーにより分析した。
【表２４】
2019532056.tif 000064
【０３１０】
ジャーカット細胞は、ヒトＣＤ３を発現するＴ細胞リンパ芽球細胞株に由来する。試験した全ての二重特異性抗体（表１９および図５）は、１．４１Ｅ−０８Ｍ〜６．１５Ｅ−１０Ｍの範囲のＥＣ５０でジャーカット細胞に結合した。ヒト前立腺癌細胞系であるＰＣ３細胞は、ＳＴＥＡＰ２／１キメラ構築物を発現するように操作された。いくつかの二重特異性抗体がＰＣ３＿ＳＴＥＡＰ２／１細胞に結合し、ＥＣ５０は７．９１Ｅ−０８Ｍ〜３．４４Ｅ−０９Ｍの範囲であった（表１９および図６）。
【０３１１】
精製カニクイザルＴ細胞の表面へのＳＴＥＡＰ２×ＣＤ３二重特異性抗体の結合もまた試験した。いくつかの二重特異性抗体は、１．７３Ｅ−０８Ｍ〜７．２７Ｅ−０９Ｍの範囲のＥＣ５０に結合した。対照抗体はいずれの細胞株にも結合しなかった。表１９および図７および８を参照されたい。
【０３１２】
Ｔ細胞増殖アッセイ：解凍したヒトまたは新たに単離したサルのＰＢＭＣ（５００００細胞／ウェル）を、完全培地（１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍのＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、２９２μｇ／ｍＬのＬ−グルタミンを補充したＲＰＭＩ）の、ＳＴＥＡＰ２×ＣＤ３二重特異性またはアイソタイプ対照の３倍（ヒト、濃度範囲：５Ｅ−１０Ｍ〜２．８２Ｅ−１５Ｍ；カニクイザル、濃度範囲：１Ｅ−０９Ｍ〜４．５７Ｅ−１３Ｍ）の段階希釈、および固定濃度（ヒト：２００ｎｇ／ｍＬ、カニクイザル：５００ｎｇ／ｍＬ）の市販の抗ＣＤ２８抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３０２９１４）を用いて、３７℃で７２時間、白色平底９６ウェルプレートでインキュベートした。単離されたサルのＰＢＭＣは２人のドナーからのものであった（ｍｋ８７８１Ｍまたはｍｋ９３８１Ｍとして同定される）。インキュベーション後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号７５７３）を添加し、細胞生存率の読み取り値としての発光を、ＶＩＣＴＯＲ  Ｘ５マルチラベルプレートリーダーを使用して測定した。細胞力価は、刺激細胞の発光を非刺激細胞のベースライン発光で割ることによって計算した。
【０３１３】
全てのαＳＴＥＡＰ２×αＣＤ３二重特異性抗体は、共刺激性抗ＣＤ２８抗体の存在下でヒトＰＢＭＣ増殖を誘導する（表２０および図９参照）。ＰＢＭＣを、二重特異性抗体または対照抗体の段階希釈および固定濃度の抗ＣＤ２８を用いて７２時間インキュベートし、細胞生存率を発光アッセイにおいて測定して生細胞を検出した。増殖を、二重特異性抗体刺激細胞の発光を抗体なしの細胞と比較することによって測定した。ＥＣ５０値（最大半量の増殖を生じさせるのに必要な抗体の濃度として定義される）は、３．６８Ｅ−１３Ｍ〜１．６０Ｅ−１０Ｍの範囲であった。対照的に、対照抗体は同じ条件下で活性を示さなかった。
【表２５】
2019532056.tif 000065
【０３１４】
二重特異性抗体ＢＳＳＴＥＡＰ２／ＣＤ３−００１０およびＢＳＳＴＥＡＰ２／ＣＤ３−０１１もまた、それぞれ７Ｅ−１３および３．６Ｅ−１２のＥＣ５０を示すカニクイザルＰＢＭＣ増殖（ドナーｍｋ８７８１Ｍ）を誘導した。ＢＳＳＴＥＡＰ２／ＣＤ３−００４活性はドナー依存的であった。２つのさらなる二重特異性抗体、ＢＳＳＴＥＡＰ２／ＣＤ３−００１およびＢＳＳＴＥＡＰ２／ＣＤ３−００６は、試験した全てのドナーにおいて頑強なカニクイザルＰＢＭＣ増殖を誘導した。ドナーｍｋ９３８１Ｍを用いたＥＣ５０値は、それぞれ４．６Ｅ−１２Ｍおよび１．５３Ｅ−１１Ｍであった（表２０および図１０参照）。
【０３１５】
ＢＳＳＴＥＡＰ２／ＣＤ３−００７およびＢＳＳＴＥＡＰ２／ＣＤ３−００８活性はドナー依存的であった。対照的に、ＢＳＳＴＥＡＰ２／ＣＤ３−００５、ＢＳＳＴＥＡＰ２／ＣＤ３−００９、およびアイソタイプ対照は活性を示さなかった。
【０３１６】
抗ＳＴＥＡＰ２×ＣＤ３二重特異性抗体およびヒトＴ細胞の存在下でＣ４−２細胞を標的とする細胞傷害性アッセイ：フローサイトメトリーによるＳＴＥＡＰ２保有標的細胞の特異的死滅をモニターするために、Ｃ４−２細胞を１μＭの蛍光追跡色素Ｖｉｏｌｅｔ  Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｋｅｒ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓキット、＃Ｃ３４５５７）で標識した。標識後、細胞を３７℃で一晩播種した。別に、ヒトＰＢＭＣを１×１０６細胞／ｍＬで補充ＲＰＭＩ培地に播種し、付着マクロファージ、樹状細胞、およびいくつかの単球を枯渇させることによってリンパ球を濃縮するために３７℃で一晩インキュベートした。翌日、標的細胞を、接着性細胞除去ナイーブＰＢＭＣ（エフェクター／標的細胞４：１の比率）、および段階希釈したＳＴＥＡＰ２×ＣＤ３二重特異性抗体またはＩｇＧ１対照抗体（ＳＴＥＡＰ２に結合しない）（濃度範囲：６６．７ｎＭ〜０．２５ρＭ）と共に３７℃で４８時間インキュベートした。無酵素胞解離緩衝液を用いて細胞を細胞培養プレートから取り出し、ＦＡＣＳにより分析した。ＦＡＣＳ分析のために、細胞を死／生の遠赤細胞トラッカー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色した。ＦＡＣＳ分析の直前に、５×１０５個の計数ビーズを各ウェルに加えた。各サンプルにつき１×１０５個のビーズを集めた。殺傷の特異性を評価するために、細胞を生きたバイオレット標識集団にゲートした。生きている集団の割合を記録し、正規化された生存率の計算に使用した。
【０３１７】
Ｔ細胞活性化は、細胞をＣＤ２およびＣＤ６９に直接結合した抗体と共にインキュベートし、全Ｔ細胞（ＣＤ２＋）のうち活性化された（ＣＤ６９＋）Ｔ細胞の割合を報告することによって評価された。いくつかの抗ＳＴＥＡＰ２×ＣＤ３二重特異性抗体を、ナイーブＴ細胞を誘導してヒトＳＴＥＡＰ２を発現する標的細胞を殺滅するそれらの能力について試験した（表２１および図１１参照）。試験した全ての抗体は、ヒトＴ細胞にＣ４−２細胞（ＬｎＣａｐ細胞由来のヒト前立腺腺癌サブライン）を枯渇させるよう活性化および誘導した。標的細胞の死滅は二重特異性抗体の存在下でのみ観察され、Ｃ４−２細胞はｐＭ  ＥＣ５０で用量依存的に枯渇した。さらに、観察された標的細胞溶解は、ｐＭ  ＥＣ５０を有する、ＣＤ２＋Ｔ細胞上のＣＤ６９細胞の上方制御と関連していた（表２１および図１２参照）。
【表２６】
2019532056.tif 000066
【０３１８】
本発明は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されるべきではない。実際、本明細書に記載されたものに加えて本発明の様々な修飾は、前述の記載から当業者には明らかである。そのような修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されている。
【図１】
2019532056.tif 000077
【図２】
2019532056.tif 000078
【図３】
2019532056.tif 000079
【図４】
2019532056.tif 000080
【図５】
2019532056.tif 000081
【図６】
2019532056.tif 000082
【図７】
2019532056.tif 000083
【図８】
2019532056.tif 000084
【図９】
2019532056.tif 000085
【図１０】
2019532056.tif 000086
【図１１】
2019532056.tif 000087
【図１２】
2019532056.tif 000088
【配列表】
2019532056000001.app
【国際調査報告】
2019532056.tif 000089
2019532056.tif 000090
2019532056.tif 000091
2019532056.tif 000092
2019532056.tif 000093
2019532056.tif 000094
2019532056.tif 000095
2019532056.tif 000096
2019532056.tif 000097