(57)【要約】  本明細書において、抗ＲＧＭａ抗体及びこれらの抗体を使用して、脊髄損傷を処置する方法であって、軸索再生、機能回復、又はこれらの両方を促進するステップを含む方法、及び脊髄損傷から生じる神経障害性疼痛を含む疼痛を処置する方法が開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする対象における脊髄損傷を処置する方法であって、治療有効量の抗ＲＧＭａ（Ｒｅｐｕｌｓｉｖｅ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ａ）モノクローナル抗体を投与するステップを含み、抗体が、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＶＨ  ＣＤＲ）１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含む可変重鎖；並びに
ｂ．配列番号４のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＶＬ  ＣＤＲ）１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、及び配列番号６及び配列番号７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む可変軽鎖
を含む方法。
【請求項２】
脊髄損傷後の、軸索再生、機能回復、又はこれらの両方を促進するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
脊髄損傷から生じる疼痛を処置するステップを含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
疼痛が、神経障害性疼痛である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
脊髄損傷が、圧迫損傷、挫傷、又は衝撃損傷である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
抗体が、脊髄損傷後８時間未満に投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
抗ＲＧＭａモノクローナル抗体が、全身投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
抗ＲＧＭａモノクローナル抗体が、静脈内（ＩＶ）投与される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号６のアミノ酸配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
可変重鎖が、配列番号８のアミノ酸配列を含み、可変軽鎖が、配列番号９のアミノ酸配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
可変重鎖が、配列番号８のアミノ酸配列を含み、可変軽鎖が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
抗ＲＧＭａモノクローナル抗体が、ヒト抗体である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
抗体が、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、及び配列番号１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む定常領域を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
抗ＲＧＭａモノクローナル抗体が、配列番号１４からなるアミノ酸配列を含む定常領域を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
抗体が、配列番号１６の重鎖配列及び配列番号１５の軽鎖配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
抗ＲＧＭａモノクローナル抗体が、ＲＧＭａのＮ末端領域に位置するＲＧＭａエピトープ、好ましくは、配列番号１８のアミノ酸内のＲＧＭａエピトープ、より好ましくは、配列番号１９のアミノ酸内のＲＧＭａエピトープに結合する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる、２０１６年６月１日に出願された、米国特許出願第６２／３４４，２３３号の利益を主張する。
【０００２】
配列表
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して、ＡＳＣＩＩフォーマットにおいて、電子的に提出され、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる配列表を含有する。２０１７年５月２５日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、「ＡＢＶ１２３０３ＷＯＯ１＿ＳＥＱ−ＬＩＳＴ．ｔｘｔ」と名付けられ、２８，６７２バイトのサイズである。
【０００３】
本発明は、抗ＲＧＭａ抗体及びこれらの抗体を使用して、脊髄損傷及び／又は脊髄損傷又は他の原因から生じる神経障害性疼痛を含む疼痛を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
脊髄損傷（ＳＣＩ）とは、個人及び社会に多大な負担となる、深刻な状態である。臨床ケアの進歩にもかかわらず、現在のところ、主要なＳＣＩに有効な処置は存在しない。初期の外傷後、アポトーシス、虚血症、興奮毒性、及び阻害性分子の上方調節を含む、分子的イベント及び変性イベントのカスケードが生じる。ニューロンの死及び軸索再生の阻害は、損傷後における神経学的回復を制限する。損傷したＣＮＳの軸索は、再生能が制限されており、損傷脊髄の内因性機構及び阻害性環境に起因して、損傷部位から退行する、又は続発性の軸索変成を経ることが多い。
【０００５】
ＳＣＩは、医学的必要の大きさを特徴とする医学的徴候を表し、世界中における、１００万人当たりの症例発生数は、毎年１５〜４０例である。ＳＣＩの最も一般的な原因は、自動車事故、労働事故、運動競技／反動事故、転倒、及び暴力を含む。米国において、毎年推定１２，０００例の新たなＳＣＩ症例が生じている。
【０００６】
大半の脊髄損傷は、挫傷又は圧迫損傷であり、通例、一次損傷に、二次損傷機構（例えば、サイトカイン及びケモカインのような炎症性メディエーター）が後続し、これは、初期の損傷を悪化させ、場合によって、１０倍を超える、病変面積の著明な拡大を結果としてもたらす。
【０００７】
多くのＳＣＩは、脊髄が、切断されるのではなく、圧迫された結果である。脊髄への傷害は、椎骨、神経及び血管の損傷を結果としてもたらすことが多い。出血、脳脊髄液の蓄積、及び腫脹が、脊髄の内部において、又は脊髄の外部であるが、脊柱管の内部において発生する。周囲の骨及び髄膜構造からの圧力は、脊髄をさらに損ないうる。さらに、加えて、脊髄の浮腫自体も、続発性の組織喪失を加速化させうる。機械的な一次損傷が、過剰な興奮性神経伝達物質の蓄積；浮腫の形成；細胞内カルシウムの増大を含む、電解質のシフト；遊離基、とりわけ、酸化剤遊離基の産生；の産生；エイコサノイドの産生を含む二次損傷機構のカスケードを誘発するという、重要な証拠が存在する。したがって、ある特定のＳＣＩは、２ステップの過程として考えられうる。一次損傷は、脊柱への衝撃、圧迫又は他の何らかの傷害から生じる機械的損傷である。二次損傷は、細胞／分子反応が、組織の破壊を引き起こす、細胞的損傷及び生化学的損傷である。
【０００８】
ＳＣＩの後において発生する炎症反応は、二次損傷への主要な寄与因子のうちの１つである。神経膠細胞（小膠細胞及び星状膠細胞）及びマクロファージは、ＳＣＩの後における炎症反応の経過において、鍵となる役割を果たす。二次損傷を別として、反応性の神経膠細胞及びマクロファージは、ＣＮＳにおける軸索再生の不全に寄与する。反応性の星状膠細胞は、例えば、ＣＮＳ内の軸索の成長の阻害において強力な影響を及ぼす、プロテオグリカンを合成する。小膠細胞及びマクロファージはまた、軸索の成長の阻害にも寄与する。
【０００９】
ＳＣＩは、神経障害性疼痛を発症する危険性が最高度である疾患の中にあり、罹患率は５０％に上る。神経障害性疼痛は、ＳＣＩの最も消耗性の帰結のうちの１つである。炎症は、二次損傷及び軸索反発を誘導することにより、ＳＣＩの後における機能的な喪失に寄与するだけでなく、また、神経障害性疼痛の発生にも寄与する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
ある特定の動物モデル（例えば、脊髄の片側切断）は、臨床的脊髄損傷の大部分と典型的に関連する、著明な外傷を誘導しない場合がある。さらに、これらのモデルにおいて、脊髄浮腫は、最小限である可能性が高い。それ自体として、これらのモデルは、臨床的脊髄損傷の大部分を表さない場合がある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
（要旨）
一態様において、本開示は、それを必要とする対象における脊髄損傷を処置する方法を提示する。ある特定の実施形態において、脊髄損傷は、圧迫損傷、挫傷、又は衝撃損傷である。
【００１２】
別の態様において、本開示は、脊髄損傷を有する対象における、軸索再生、機能回復、又はこれらの両方を促進する方法を提示する。ある特定の実施形態において、機能回復は、神経行動学的試験により評価される。ある特定の実施形態において、脊髄損傷は、圧迫損傷、挫傷、又は衝撃損傷である。
【００１３】
さらに別の態様において、本開示は、それを必要とする対象における疼痛を処置する方法を提示する。ある特定の実施形態において、疼痛は、脊髄損傷から生じる神経障害性疼痛のような神経障害性疼痛である。ある特定の実施形態において、脊髄損傷は、圧迫損傷、挫傷、又は衝撃損傷である。
【００１４】
本明細書で開示された方法は、治療有効量の、ＲＧＭａ（Ｒｅｐｕｌｓｉｖｅ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ａ）に特異的に結合する抗体又はこの抗原結合性断片を投与するステップを含み、抗体又は抗原結合性断片は、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＶＨ  ＣＤＲ）１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含む可変重鎖；並びに
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＶＬ  ＣＤＲ）１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、及び配列番号６及び配列番号７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む可変軽鎖
を含む。ある特定の実施形態において、ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。他のある特定の実施形態において、ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号７のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、可変重鎖は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、可変軽鎖は、配列番号９のアミノ酸配列を含む。他のある特定の実施形態において、可変重鎖は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、可変軽鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、抗体は、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、及び配列番号１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む定常領域を含む。ある特定の実施形態において、抗体は、配列番号１６の重鎖配列及び配列番号１５の軽鎖配列を含む。
【００１５】
ある特定の実施形態において、抗体は、ヒト抗体、免疫グロブリン分子、ジスルフィド連結Ｆｖ、モノクローナル抗体、アフィニティー成熟抗体、ｓｃＦｖ、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ダイアボディー、ヒト化抗体、多特異性抗体、Ｆａｂ、二重特異性抗体、ＤＶＤ、Ｆａｂ’、二特異性抗体、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖからなる群から選択される。ある特定の実施形態において、抗体は、ヒト抗体である。
【００１６】
ある特定の実施形態において、抗体は、モノクローナル抗体である。
【００１７】
ある特定の実施形態において、抗体又はこの抗原結合性断片は、全身投与される。ある特定の実施形態において、抗体又はこの抗原結合性断片は、静脈内投与される。
【００１８】
ある特定の実施形態において、抗体は、脊髄損傷から２４時間以内に投与される。
【００１９】
本開示は、ＲＧＭａが、臨床的に関与性の衝撃−圧迫ＳＣＩの後のラットの、複数の細胞型において、上方調節されることを裏付ける。重要なことであるが、本開示はまた、ＲＧＭａが、脊髄損傷の後のヒトにおいても同様に上方調節されることも裏付ける。阻害性ＲＧＭａを中和するため、臨床的に関与性である、急性胸部ＳＣＩについてのラットモデルにおいて、ヒト抗ＲＧＭａモノクローナル抗体が、毎週全身投与され、血清中、ＣＳＦ中、及び病変部位近傍の組織内において検出された。抗ＲＧＭａ抗体により処置されたラットは、オープンフィールド運動における神経行動的回復の改善、ラダーウォークにおけるフットフォールエラーの減少、及び歩行パラメータの改善を示した。ＲＧＭａの中和は、アポトーシスの緩和を介して、ニューロンの生存を促進した。さらに、この戦略は、順行性トレーシングにより裏付けられた通り、下降する皮質脊髄路における軸索再生の可塑性を増強した。興味深いことに、ＲＧＭａの中和はまた、神経障害性疼痛応答も緩和し、活性化小膠細胞の減少及び病変に対して尾側である後角における、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）の発現の低減と関連した。
【００２０】
本開示は、抗ＲＧＭａ抗体の全身投与が、極めて重度の、非ヒト霊長動物（ＮＨＰ）胸部ＳＣＩ半圧迫モデルにおいて、神経運動機能を改善したことを裏付ける。抗ＲＧＭａ抗体の全身投与後において、全体的な神経運動機能の有意な改善が観察された。
【００２１】
これらの知見は、ＳＣＩの後であり、特に、挫傷又は圧迫損傷の後に、阻害性ＲＧＭａを中和することの治療的可能性を示す。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１Ａ】ラット脊髄におけるＲＧＭａ発現を描示する図である。ニューロン内のＲＧＭａを示す図である。ＲＧＭａは、損傷の後、脊髄において上方調節される。損傷の後、病変周囲ニューロンは、ＲＧＭａを発現させる。
【図１Ｂ】ラット脊髄におけるＲＧＭａ発現を描示する図である。希突起膠細胞内のＲＧＭａを示す図である。正常ラット脊髄及び損傷ラット脊髄において、希突起膠細胞は、ＲＧＭａを発現させる。
【図１Ｃ】ラット脊髄におけるＲＧＭａ発現を描示する図である。星状膠細胞内のＲＧＭａ及び小膠細胞内のＲＧＭａを示す図である。ＳＣＩの後、ＲＧＭａは、星状膠細胞により、病変部位内及び病変部位の周囲の、ＣＳＰＧに富む瘢痕領域内において発現する。
【図１Ｄ】活性化した小膠細胞及びマクロファージもまた、ＲＧＭａを発現させることを示す図である。
【図２Ａ】成人ヒト脊髄内のＲＧＭａ発現を描示する図である。非損傷ヒト脊髄内のＲＧＭａ（低拡大率）を示す図である。非損傷ヒト脊髄内において、ＲＧＭａは、低レベルにおいて発現する。
【図２Ｂ】成人ヒト脊髄内のＲＧＭａ発現を描示する図である。図２Ａにおいて、「Ｂ」と表示された、高拡大率の枠囲い領域を示す図である。非損傷ヒト脊髄内において、ＲＧＭａは、低レベルにおいて発現する。
【図２Ｃ】成人ヒト脊髄内のＲＧＭａ発現を描示する図である。図２Ａにおいて、「Ｃ」と表示された、高拡大率の枠囲い領域を示す図である。非損傷ヒト脊髄内において、ＲＧＭａは、低レベルにおいて発現する。
【図２Ｄ】成人ヒト脊髄内のＲＧＭａ発現を描示する図である。損傷の３日後における、損傷ヒト脊髄内のＲＧＭａ（低拡大率）を示す図である。損傷ヒト脊髄内（損傷の３日後）において、ＲＧＭａ発現は、上方調節されている。
【図２Ｅ】成人ヒト脊髄内のＲＧＭａ発現を描示する図である。図２Ｄにおいて、「Ｅ」と表示された、高拡大率の枠囲い領域を示す図である。損傷ヒト脊髄内（損傷の３日後）において、ＲＧＭａ発現は、上方調節されている。
【図２Ｆ】成人ヒト脊髄内のＲＧＭａ発現を描示する図である。図２Ｄにおいて、「Ｆ」と表示された、高拡大率の枠囲い領域を示す図である。損傷ヒト脊髄内（損傷の３日後）において、ＲＧＭａ発現は、上方調節されている。
【図３Ａ】マウス皮質ニューロン内のＲＧＭａ発現を描示する図である。マウス皮質ニューロン溶解物中のＲＧＭａを示すウェスタンブロットを描示する図である。
【図３Ｂ】マウス皮質ニューロン内のＲＧＭａ発現を描示する図である。培養マウス初代皮質ニューロン内の、ＲＧＭａの免疫染色を描示する図である。
【図３Ｃ】マウス皮質ニューロン内のＲＧＭａ発現を描示する図である。ＲＧＭａ及びｈＩｇＧ、ＡＥ１２−１、又はＡＥ１２−１−Ｙを伴うインキュベーション後におけるマウス皮質ニューロンを示す図である。
【図４Ａ】研究デザインを示す概略図である。
【図４Ｂ】ＳＣＩの６週間後に採取されたＣＳＦ中の抗体濃度を示すグラフである。
【図４Ｃ】ＳＣＩの９週間後に得られた血清中の抗体濃度を示すグラフである。
【図４Ｄ】抗ヒトＩｇＧによる、ラット脊髄の免疫染色を描示する図である。ヒトＩｇＧ（赤）は、血管近傍（ＲＥＣＡ−１、緑）及び瘢痕組織内（ＣＳＰＧ、緑）において検出された。
【図５Ａ】ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける、ＳＣＩ後の機能回復を描示する図である。オープンフィールドＢＢＢ（Ｂａｓｓｏ、Ｂｅａｔｔｉｅ  ａｎｄ  Ｂｒｅｓｎａｈａｎ）運動試験におけるスコアを示す折れ線グラフである。モノクローナル抗体であるＡＥ１２−１により処置されたラットは、ＢＢＢにおいて、ｈＩｇＧ対照及びＰＢＳ対照と比べて有意な改善を示した。
【図５Ｂ】ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける、ＳＣＩ後の機能回復を描示する図である。運動サブスコアを示す折れ線グラフである。ＡＥ１２−１及びＡＥ１２−１Ｙにより処置されたラットは、対照と比べて、高運動サブスコアを示したが、これは、統計学的に有意ではなかった。
【図５Ｃ】ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける、ＳＣＩ後の機能回復を描示する図である。ラダーウォークにおける、後肢フットフォールエラーを示す折れ線グラフである。ＡＥ１２−１により処置されたラットは、ＳＣＩの３週間後のラダーウォークにおいて、ＰＢＳ対照と比較して、有意に少数の後肢フットフォールエラーを示し、６週間後において、エラーの低減への傾向を示した。
【図５Ｄ】ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける、ＳＣＩ後の機能回復を描示する図である。後肢による歩進の成功百分率を示す棒グラフである。ＳＣＩの６週間後、ＡＥ１２−１により処置されたラットは、対照と比較して有意に大きな、後肢による歩進の成功百分率を示した。
【図６Ａ】ＳＣＩ前のラット及びＳＣＩの６週間後の各群に由来するＣａｔＷａｌｋから得られた、代表的なフットプリントを示す図である。
【図６Ｂ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける、規則性指数、後肢の歩幅長、後肢の振出し速度、及び後肢の強度値を示す、一連の棒グラフである。いずれのモノクローナル抗体により処置されたラットも、対照群と比べて、規則性指数の有意な改善を示した。モノクローナル抗体により処置されたラットは、後肢の歩幅長及び振出し速度の改善への傾向を示した。ＡＥ１２−１を注射されたラットは、対照と比べた、有意に高度な後肢の強度値を示した。
【図７Ａ】ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおけるニューロンの生存を描示する図である。ＳＣＩの９週間後における損傷脊髄の矢状断面についての、低拡大率の画像である。
【図７Ｂ】ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおけるニューロンの生存を描示する図である。ＳＣＩの９週間後における、温存された病変周囲ニューロンの数を示す棒グラフである。モノクローナル抗体であるＡＥ１２−１又はＡＥ１２−１Ｙを投与されたラットは、ｈＩｇＧ及びＰＢＳを施されたラットと比較して、有意に高度な、病変周囲ニューロンの温存を示す。
【図７Ｃ】ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおけるニューロンの生存を描示する図である。ＳＣＩの７時間後におけるニューロンの免疫染色を描示する図である。ＮｅｕＮ（緑）及びＴＵＮＥＬ（赤）による二重標識化は、アポトーシス性ニューロン（矢印）を同定した。
【図７Ｄ】ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおけるニューロンの生存を描示する図である。ＳＣＩの７時間後において、切片１つ当たりにおいてカウントされた、ＮｅｕＮ＋／ＴＵＮＥＬ＋細胞の平均数を示す棒グラフである。切片１つ当たりにおいてカウントされた、ＮｅｕＮ＋／ＴＵＮＥＬ＋細胞の平均数は、ＰＢＳ媒体を投与されたラットより、ＡＥ１２−１により処置されたラットにおいて、有意に小さかった。
【図８Ａ】ＳＣＩ後に、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける軸索再生を描示する図である。ＢＤＡによる順行性軸索トレーシング後における脊髄についての、低拡大率の画像を描示する図である。
【図８Ｂ】ＳＣＩ後に、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける軸索再生を描示する図である。ＢＤＡ標識化ＣＳＴ線維の平均最大長を示す棒グラフである。ＢＤＡ標識化ＣＳＴ線維の平均最大長は、ＡＥ１２−１及びＡＥ１２−１Ｙによる処置の後で増大した。
【図８Ｃ】ＳＣＩ後に、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける軸索再生を描示する図である。切片１つ当たりの軸索の平均数を示す棒グラフである。定量化された、切片１つ当たりの軸索の平均数は、モノクローナル抗体により処置された損傷ラットより大きな軸索数を示す。
【図８Ｄ】ＳＣＩ後に、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける軸索再生を描示する図である。ＳＣＩの４又は６週間後における、ＢＤＡ標識化ＣＳＴ線維の平均最大長を示す棒グラフである。ＡＥ１２−１Ｙにより処置された損傷ラットにおける平均軸索長は、６週間後において、４週間後と比較して有意に大きかった。
【図８Ｅ】ＳＣＩ後に、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける軸索再生を描示する図である。ＳＣＩの４又は６週間後における、切片１つ当たりの軸索の平均数を示す棒グラフである。ＡＥ１２−１Ｙにより処置された損傷ラットにおける平均軸索長は、６週間後において、４週間後と比較して有意に大きかった。
【図９Ａ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける神経障害性疼痛及び炎症反応を描示する図である。２ｇのｖｏｎ  Ｆｒｅｙ式モノフィラメントに対する、有害反応の百分率を描示する棒グラフである。
【図９Ｂ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける神経障害性疼痛及び炎症反応を描示する図である。４ｇのｖｏｎ  Ｆｒｅｙ式モノフィラメントに対する、有害反応の百分率を描示する棒グラフである。ＳＣＩの６週間後、ＡＥ１２−１により処置されたラットは、４ｇ刺激に対する、対照と比べた、有意に少数の有害反応を示した。
【図９Ｃ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける神経障害性疼痛及び炎症反応を描示する図である。侵害皮膚に応答するテールフリック待ち時間を描示する棒グラフである。ＳＣＩの２及び６週間後、モノクローナル抗体により処置されたラットは、侵害皮膚加熱に応答した尾の引込みの、対照と比べた低減を示した。
【図９Ｄ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける神経障害性疼痛及び炎症反応を描示する図である。Ｔ１０の病変に対して尾側における、Ｉｂａ−１＋小膠細胞を描示する図である。Ｔ１０水準の、対照の後角において、正常脊髄と比較して、有意により多くのＩｂａ−１＋細胞がカウントされた。
【図９Ｅ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける神経障害性疼痛及び炎症反応を描示する図である。Ｔ１０水準におけるＩｂａ−１＋小膠細胞を描示する図である。Ｔ１０水準の、対照の後角において、正常脊髄と比較して、有意により多くのＩｂａ−１＋細胞がカウントされた。
【図９Ｆ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける神経障害性疼痛及び炎症反応を描示する図である。Ｔ１０の病変に対して吻側における、Ｉｂａ−１＋小膠細胞を描示する図である。
【図９Ｇ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける神経障害性疼痛及び炎症反応を描示する図である。Ｔ１０水準におけるＣＧＲＰ＋細胞を描示する図である。ＣＧＲＰ＋面積パーセントは、ＡＥ１２−１及びＡＥ１２−１Ｙにより処置されたラットにおいて、対照と比べて有意に低減された。
【図１０Ａ】脊髄損傷後の成体ラットにおける、ＲＧＭａの発現を描示する図である。正常な無傷の脊髄内及びＳＣＩの１週間後における、前角灰白質内のＲＧＭａの免疫染色を描示する図である。ＲＧＭａ＋面積％の定量化は、ＳＣＩ後の成体ラット脊髄における、ＲＧＭａの発現の有意な上方調節を示す。
【図１０Ｂ】脊髄損傷後の成体ラットにおける、ＲＧＭａの発現を描示する図である。ＳＣＩ後のＥＤ−１＋領域における、ＲＧＭａの発現を描示する図である。ＲＧＭａの発現は、ＳＣＩ後のＥＤ−１＋領域において明らかである。
【図１０Ｃ】脊髄損傷後の成体ラットにおける、ＲＧＭａの発現を描示する図である。正常な無傷の脊髄の脊髄白質における希突起膠細胞（ＣＣ１）内の、ＲＧＭａの発現を示す、高拡大率の画像を描示する図である。
【図１１Ａ】成人ヒト脊髄のニューロンにおける、ＲＧＭａ及びネオゲニンの発現を描示する図である。正常な成人ヒト脊髄における前角ニューロン内の、ＲＧＭａの発現を描示する図である。
【図１１Ｂ】成人ヒト脊髄のニューロンにおける、ＲＧＭａ及びネオゲニンの発現を描示する図である。ＲＧＭａペプチドにより前吸着させたＲＧＭａ抗体であって、染色の特異性を示すＲＧＭａ抗体により染色された隣接切片を描示する図である。
【図１１Ｃ】成人ヒト脊髄のニューロンにおける、ＲＧＭａ及びネオゲニンの発現を描示する図である。正常な成人ヒト脊髄における前角ニューロン内の、ネオゲニンの発現を描示する図である。
【図１１Ｄ】成人ヒト脊髄のニューロンにおける、ＲＧＭａ及びネオゲニンの発現を描示する図である。隣接する陰性対照切片を描示する図である。
【図１２Ａ】ＲＧＭａ受容体であるネオゲニンの発現を描示する図である。ネオゲニンの発現を示す、成体ラットの脳溶解物についてのウェスタンブロットを描示する図である。
【図１２Ｂ】ＲＧＭａ受容体であるネオゲニンの発現を描示する図である。ネオゲニン（赤）を発現させる、培養マウス皮質ニューロン（インビトロにおいて３日後；Ｆ−アクチン、緑）を描示する図である。
【図１３】ＳＣＩ前並びにＳＣＩの４及び６週間後における、ラットの体重を描示する図である。ラットの体重は、群間において、有意に変動しなかった。処置は、ラットの体重を変更しなかった。
【図１４Ａ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける空洞症を描示する図である。モノクローナル抗体によるＲＧＭａの中和は、空洞症において、有意差を結果としてもたらさない。
【図１４Ｂ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける空洞症を描示する図である。モノクローナル抗体によるＲＧＭａの中和は、空洞症において、有意差を結果としてもたらさない。
【図１５Ａ】アストログリオーシス及び瘢痕化に対する、抗ＲＧＭａ抗体の効果を描示する図である。ＳＣＩの９週間後における、病変と隣接する、ＧＦＡＰの免疫反応性を描示する図である。
【図１５Ｂ】アストログリオーシス及び瘢痕化に対する、抗ＲＧＭａ抗体の効果を描示する図である。病変に対して吻側における、ＧＦＡＰ＋面積％の定量化を描示する図である。ＧＦＡＰ＋面積％の定量化は、ＳＣＩの９週間後の、ＡＥ１２−１Ｙ処置されたラットの、病変に対して吻側における、アストログリオーシスの有意な軽減を示す。
【図１５Ｃ】アストログリオーシス及び瘢痕化に対する、抗ＲＧＭａ抗体の効果を描示する図である。病変部位における、ＣＳＰＧ＋面積％を描示する図である。ＡＥ１２−１及びＡＥ１２−１Ｙにより処置されたラットは、病変部位における、ＣＳＰＧ＋面積％の低減への傾向を示す。
【図１６Ａ】ＢＤＡによるＣＳＴの標識化を描示する図である。横断方向において示された、Ｃ４レベルにおける背側ＣＳＴについてのＢＤＡ染色を描示する図である。
【図１６Ｂ】ＢＤＡによるＣＳＴの標識化を描示する図である。病変に対して、矢状方向に３ｍｍ吻側において、ＢＤＡ標識化ＣＳＴ軸索が、背側ＣＳＴ線維路内に束ねられていることを描示する図である。
【図１７Ａ】５ＨＴ線維を描示する図である。病変に対して尾側の、５ＨＴ免疫反応性線維（矢印）を描示する図である。
【図１７Ｂ】５ＨＴ線維を描示する図である。尾側の累進的な距離へと区間分けされた、病変に対して尾側の、５ＨＴ＋軸索の平均値数の定量化を描示する図である。病変に対して尾側の５ＨＴ＋軸索は、尾側の累進的な距離へと区間分けされた。ＡＥ１２−１により処置されたラットにおいて、有意に多数の５ＨＴ＋線維が現れ、ＡＥ１２−１Ｙを注射されたラットは、多数の５ＨＴ標識化軸索への傾向を示した。
【図１８Ａ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける小膠細胞及びマクロファージを描示する図である。病変に対して尾側における、Ｉｂａ−１免疫反応性を描示する図である。
【図１８Ｂ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ヒトＩｇＧ、又はＰＢＳにより処置されたラットにおける小膠細胞及びマクロファージを描示する図である。病変部位に対して吻側又は尾側における、Ｉｂａ−１＋面積％を描示する図である。Ｔ８における病変に隣接して、病変部位に対して吻側又は尾側における、Ｉｂａ−１＋面積％の、群間の有意差は見られなかった。
【図１９Ａ】ＳＣＩ後における、個別の対照動物についての、神経運動スコアのグラフ表示（及び推定中央値曲線）である。
【図１９Ｂ】ＳＣＩ後における、ＩＶ  ＡＥ−１２−１−Ｙ−ＱＬ処置を施された個別の動物についての、神経運動スコアのグラフ表示（及び推定中央値曲線）である。
【図２０Ａ】ＳＣＩ後の、対照群及びＩＶ  ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ処置群におけるＦＡ（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  ａｎｉｓｏｔｒｏｐｙ）により評価された、病変外領域内の組織完全性を描示する棒グラフである。静脈内ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬは、損傷外領域内の、ＩｇＧ対照群と比較して大きな組織完全性の保存を裏付けた。
【図２０Ｂ】ＳＣＩ後の、対照群及びＩＶ  ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ処置群における磁化移動率（ＭＴＲ）により評価された、病変外領域内の組織完全性を描示する棒グラフである。静脈内ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬは、損傷外領域内の、ＩｇＧ対照群と比較して大きな組織完全性の保存を裏付けた。
【図２１Ａ】個別の神経運動スコア（ＮＭＳ）及び個別のＦＡ値の間の相関を描示する図である。ＦＡ値は一般に、神経運動機能の改善と共に増大する。
【図２１Ｂ】個別の神経運動スコア（ＮＭＳ）及び個別のＭＴＲ値の間の相関を描示する図である。ＭＴＲ値は一般に、神経運動機能の改善と共に増大する。
【図２２Ａ】脊髄切片についての組織病理学的解析を描示する棒グラフである。吻側レベルにおける、ＲＧＭａの発現を描示する図である。
【図２２Ｂ】脊髄切片についての組織病理学的解析を描示する棒グラフである。吻側レベルにおけるイオン化カルシウム結合アダプター分子１（ＩＢＡ）発現を描示する図である。
【図２２Ｃ】脊髄切片についての組織病理学的解析を描示する棒グラフである。吻側レベルにおける、ミエリンのワイル染色を描示する図である。
【図２２Ｄ】脊髄切片についての組織病理学的解析を描示する棒グラフである。尾側レベルにおける、ＲＧＭａの発現を描示する図である。
【図２２Ｅ】脊髄切片についての組織病理学的解析を描示する棒グラフである。尾側レベルにおけるイオン化カルシウム結合アダプター分子１（ＩＢＡ）発現を描示する図である。
【図２２Ｆ】脊髄切片についての組織病理学的解析を描示する棒グラフである。尾側レベルにおける、ミエリンのワイル染色を描示する図である。
【図２３Ａ】ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ又はＩｇＧにより処置されたラットにおける、ＳＣＩ後の機能回復を描示する図である。オープンフィールドＢＢＢ（Ｂａｓｓｏ、Ｂｅａｔｔｉｅ  ａｎｄ  Ｂｒｅｓｎａｈａｎ）運動試験におけるスコアを示す折れ線グラフである。
【図２３Ｂ】ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ又はＩｇＧにより処置されたラットにおける、ＳＣＩ後の機能回復を描示する図である。運動サブスコアを示す折れ線グラフである。
【図２４Ａ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ又はＩｇＧにより処置されたラットにおける、規則性指数を示す、一連の棒グラフである。
【図２４Ｂ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ又はＩｇＧにより処置されたラットにおける、後肢の歩幅長を示す、一連の棒グラフである。
【図２４Ｃ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ又はＩｇＧにより処置されたラットにおける、後肢の振出し速度を示す、一連の棒グラフである。
【図２４Ｄ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ又はＩｇＧにより処置されたラットにおける、後肢の強度値を示す、一連の棒グラフである。
【図２５Ａ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ又はＩｇＧにより処置されたラットにおける神経障害性疼痛及び炎症反応を描示する図である。２ｇのｖｏｎ  Ｆｒｅｙ式モノフィラメントに対する、有害反応の百分率を描示する棒グラフである。
【図２５Ｂ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ又はＩｇＧにより処置されたラットにおける神経障害性疼痛及び炎症反応を描示する図である。４ｇのｖｏｎ  Ｆｒｅｙ式モノフィラメントに対する、有害反応の百分率を描示する棒グラフである。
【図２５Ｃ】ＳＣＩ後の、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ又はＩｇＧにより処置されたラットにおける神経障害性疼痛及び炎症反応を描示する図である。侵害皮膚に応答するテールフリック待ち時間を描示する棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本明細書では、それを必要とする患者へと、治療有効量の１つ以上の抗ＲＧＭａ抗体を投与することにより、脊髄損傷を処置する方法、脊髄損傷後の軸索再生を促進する方法、脊髄損傷後の機能回復を促進する方法、及び脊髄損傷から生じる神経障害性疼痛を含む疼痛を処置する方法が提示される。
【００２４】
１．定義
そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書で使用された、全ての技術用語及び科学用語は、当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。齟齬が生じる場合は、定義を含む本文献に従う。本発明の実施又は試験においては、本明細書において記載される方法及び材料と同様又は同等な方法及び材料も使用しうるが、下記においては、好ましい方法及び材料について記載される。本明細書において言及される、全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照によりそれらの全体において組み込まれる。本明細書において開示される材料、方法、及び例は、例示的なものであるに過ぎず、限定を意図するものではない。
【００２５】
本明細書において使用される「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ））」、「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｅ（ｓ））」「〜を有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「〜を有する（ｈａｓ）」、「〜でありうる（ｃａｎ）」、「〜を含有する（ｃｏｎｔａｉｎ（ｓ））」という用語は、さらなる行為又は構造の可能性を除外しない、オープンエンドな移行句、移行用語、又は移行語である。単数形の「ある（ａ）」、「ある（ａｎ）」、及び「その」は、文脈により、そうでないことが明らかに指示されない限りにおいて、複数の指示対象を含む。本開示はまた、特に明示されているのであれ、そうでないのであれ、本明細書において提示された実施形態又は要素「を含み」、これら「からなり」、これら「から本質的になる」、他の実施形態も想定する。
【００２６】
本明細書において使用された「約」は、標準値からの約±１０％の変動を指す場合がある。このような変動は、それに対して、特に言及されるのであれ、そうでないのであれ、本明細書において提示された、所与の任意の値に常に含まれることを理解されたい。
【００２７】
本明細書において、「アフィニティー成熟抗体」とは、抗体の、標的抗原に対するアフィニティー（すなわち、ＫＤ、ｋｄ又はｋａ）の、変更を有さない親抗体と比較した改善を結果としてもたらす、１つ以上のＣＤＲにおける、１つ以上の変更を伴う抗体を指すように使用される。例示的なアフィニティー成熟抗体は、標的抗原に対する、ナノモル又はピコモル単位のアフィニティーを有する。当技術分野において、アフィニティー成熟抗体を作製する様々な手順であって、バイオディスプレイを使用して調製された、組換え抗体ライブラリーのスクリーニングを含む手順が公知である。例えば、Ｍａｒｋｓら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９〜７８３（１９９２）は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのシャッフリングによるアフィニティー成熟について記載している。ＣＤＲ残基及び／又はフレームワーク残基に対するランダム突然変異誘発は、Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９１：３８０９〜３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ、１６９：１４７〜１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５：１９９４〜２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４（７）：３３１０〜３３１９（１９９５）；及びＨａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２６：８８９〜８９６（１９９２）により記載されている。選択的突然変異誘発位置及び接触位置又は超変異位置における、活性を増強するアミノ酸残基による選択的突然変異は、米国特許第６，９１４，１２８Ｂ１号において記載されている。
【００２８】
本明細書において使用された「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」及び「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」とは、モノクローナル抗体、多特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体（完全ヒト化抗体又は部分的ヒト化抗体）、鳥類（例えば、アヒル又はガチョウ）抗体、サメ抗体、クジラ抗体、及び非霊長動物（例えば、ウシ、ブタ、ラクダ、リャマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット、マウスなど）抗体又は非ヒト霊長動物（例えば、サル、チンパンジーなど）抗体を含む哺乳動物抗体のようであるがこれらに限定されない動物抗体、組換え抗体、キメラ抗体、単鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド連結型Ｆｖ（「ｓｄＦｖ」）、及び抗イディオタイプ（「抗Ｉｄ」）抗体、二重ドメイン抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）又は三重可変ドメイン（ＴＶＤ）抗体（二重可変ドメイン免疫グロブリン及びそれらを作り出すための方法について、それらの各々の内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｗｕ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２５（１１）：１２９０〜１２９７（２００７）及びＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００１／０５８９５６号において記載されている）、並びに上記のうちのいずれかの、機能的に活性なエピトープ結合性断片を指す。特に、抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫活性断片、すなわち、解析物結合性部位を含有する分子を含む。免疫グロブリン分子は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスの分子でありうる。簡潔さのために、本明細書において、解析物に対する抗体は、「抗解析物抗体」、又は、単に、「解析物抗体」（例えば、抗ＲＧＭａ抗体又はＲＧＭａ抗体）と称されることが多い。
【００２９】
本明細書において使用された「抗体断片」とは、抗原結合性部位又は可変領域を含む、無傷抗体の部分を指す。部分は、無傷抗体のＦｃ領域の重鎖定常ドメイン（すなわち、抗体のアイソタイプに応じて、ＣＨ２、ＣＨ３又はＣＨ４）を含まない。抗体断片の例は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ’−ＳＨ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ダイアボディー、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、１つの軽鎖可変ドメインだけを含有する単鎖ポリペプチド、軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含有する単鎖ポリペプチド、１つの重鎖可変領域だけを含有する単鎖ポリペプチド、及び重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含有する単鎖ポリペプチドを含むがこれらに限定されない。
【００３０】
本明細書において、「二特異性抗体」とは、クァドローマ技術（Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３０５（５９３４）：５３７〜５４０（１９８３）を参照されたい）、２つの異なるモノクローナル抗体の化学的コンジュゲーション（Ｓｔａｅｒｚら、Ｎａｔｕｒｅ、３１４（６０１２）：６２８〜６３１（１９８５）を参照されたい）、又はＦｃ領域内の突然変異であって、複数の異なる免疫グロブリン分子種であり、それらのうちの１つだけが機能的な二特異性抗体である、免疫グロブリン分子種を結果としてもたらす突然変異を導入する、ＫＩＨ（ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ）法若しくは同様の手法（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０（１４）：６４４４〜６４４８（１９９３）を参照されたい）により作出された全長抗体を指すように使用される。二特異性抗体は、その２つの結合性アーム（ＨＣ／ＬＣの１つの対）のうちの１つにおける、１つの抗原（又はエピトープ）に結合し、その第２のアーム（ＨＣ／ＬＣの異なる対）における、異なる抗原（又はエピトープ）に結合する。この定義により、二特異性抗体は、２つの顕著に異なる抗原結合性アーム（特異性及びＣＤＲ配列の両方）を有し、それが結合する各抗原について一価である。
【００３１】
本明細書において、「ＣＤＲ」とは、抗体の可変配列内の「相補性決定領域」を指すように使用される。重鎖及び軽鎖の可変領域の各々において、３つずつのＣＤＲが存在し、これらは、可変領域の各々について、「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」、及び「ＣＤＲ３」と名指されている。本明細書において使用された「ＣＤＲセット」という用語は、単一の可変領域において生じる、３つのＣＤＲの群であって、抗原に結合するＣＤＲの群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムに従い、異なる形で規定されている。Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９８７）及び（１９９１））により記載されているシステムは、抗体の任意の可変領域へと適用可能である、明確な残基番号付けシステムを提示するだけではなく、また、３つのＣＤＲを規定する、正確な残基の境界も提示している。これらのＣＤＲは、「ＫａｂａｔによるＣＤＲ」と称されうる。Ｃｈｏｔｈｉａら（Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１〜９１７（１９８７）；並びにＣｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７７〜８８３（１９８９））は、ＫａｂａｔによるＣＤＲ内の、ある特定の部分が、アミノ酸配列のレベルにおいて、大きな多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一なペプチド骨格のコンフォメーションを取ることを見出した。これらの部分は、「Ｌ」及び「Ｈ」が、それぞれ、軽鎖領域及び重鎖領域を名指す、「Ｌ１」、「Ｌ２」、及び「Ｌ３」、又は「Ｈ１」、「Ｈ２」、及び「Ｈ３」と名指された。これらの領域は、「Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ」と称される場合があり、これらは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複する境界を有する。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複するＣＤＲを規定する他の境界について、Ｐａｄｌａｎ、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．、９：１３３〜１３９（１９９５）；並びにＭａｃＣａｌｌｕｍ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６２（５）：７３２〜７４５（１９９６）により記載されている。さらに他のＣＤＲの境界の定義は、本明細書のシステムの定義に厳密に従わない場合もあり、特定の残基若しくは残基群なお又は全ＣＤＲが、抗原への結合に、著明な影響を及ぼさないという予測又は実験による知見に照らして、短くなる場合もあり、長くなる場合もあるが、それでも、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと重複する。本明細書において使用された方法は、これらのシステムのうちのいずれに従い規定されたＣＤＲも活用しうるが、ある特定の実施形態は、Ｋａｂａｔより規定されたＣＤＲ又はＣｈｏｔｈｉａにより規定されたＣＤＲを使用する。
【００３２】
本明細書において使用された抗体の「誘導体」とは、純正抗体又は親抗体と比較した場合、そのアミノ酸配列に対する１つ以上の修飾を有する抗体を指す場合があり、修飾ドメイン構造を呈示しうる。誘導体は、天然抗体内で見出された、典型的なドメイン構成のほか、標的（抗原）に、特異的に結合することが可能なアミノ酸配列を採用することがなおも可能でありうる。抗体誘導体の典型的な例は、他のポリペプチドへとカップリングさせた抗体、再配列された抗体ドメイン又は抗体の断片である。誘導体はまた、少なくとも１つのさらなる化合物、例えば、タンパク質ドメインも含むことが可能であり、前記タンパク質ドメインは、共有結合又は非共有結合により連結されている。連結は、当技術分野で公知の方法に従う遺伝子融合に基づきうる。本発明に従い援用された抗体を含む融合タンパク質内に存在するさらなるドメインは、ペプチドリンカーであると有利な、可撓性のリンカーにより連結されることが好ましい場合があり、この場合、前記ペプチドリンカーは、さらなるタンパク質ドメインのＣ末端及び抗体のＮ末端又はこの逆の間の距離にわたるのに十分な長さである、複数の、親水性で、ペプチド結合されたアミノ酸を含む。抗体は、生物学的活性に適するコンフォメーションを有する、又は例えば、固体支持体、生物学的活性物質（例えば、サイトカイン又は成長ホルモン）、化学的薬剤、ペプチド、タンパク質若しくは薬物に選択的に結合するエフェクター分子へと連結されうる。
【００３３】
本明細書において、「二重特異性抗体」とは、その２つの結合性アーム（ＨＣ／ＬＣの対）の各々において、２つの異なる抗原（又はエピトープ）に結合しうる全長抗体（ＰＣＴ公開第ＷＯ０２／０２７７３号を参照されたい）を指すように使用される。したがって、二重特異性結合タンパク質は、同一な特異性及び同一なＣＤＲ配列を伴う、２つの同一な抗原結合性アームを有し、それが結合する各抗原について二価である。
【００３４】
本明細書において、「二重可変ドメイン」とは、二価結合性タンパク質（２つの抗原結合性部位）、四価結合性タンパク質（４つの抗原結合性部位）、又は多価結合性タンパク質でありうる結合性タンパク質上の、２つ以上の抗原結合性部位を指すように使用される。ＤＶＤは、単一特異性、すなわち、１つの抗原（又は１つの特異性エピトープ）に結合することが可能な場合もあり、多特異性、すなわち、２つ以上の抗原（すなわち、同じ標的抗原分子の２つ以上のエピトープ又は異なる標的抗原２つ以上のエピトープ）に結合することが可能な場合もある。好ましいＤＶＤ結合性タンパク質は、２つの重鎖ＤＶＤポリペプチド及び２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含み、「ＤＶＤ免疫グロブリン」又は「ＤＶＤ−Ｉｇ」と称される。したがって、このようなＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質は、テトラマーであり、ＩｇＧ分子と類似するが、ＩｇＧ分子より多くの抗原結合性部位をもたらす。したがって、テトラマーＤＶＤ−Ｉｇ分子の各半分は、ＩｇＧ分子の半分と類似し、重鎖ＤＶＤポリペプチド及び軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むが、単一の抗原結合性ドメインをもたらす、ＩｇＧ分子の重鎖及び軽鎖の対と異なり、ＤＶＤ−Ｉｇの重鎖及び軽鎖の対は、２つ以上の抗原結合性部位をもたらす。
【００３５】
ＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質の各抗原結合性部位は、ドナー（「親」）モノクローナル抗体に由来しうるので、抗原結合性部位１つ当たり、合計６つのＣＤＲであって、抗原への結合に関与するＣＤＲを伴う、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含みうる。したがって、２つの異なるエピトープ（すなわち、２つの異なる抗原分子の、２つの異なるエピトープ又は同じ抗原分子の、２つの異なるエピトープ）に結合するＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質は、第１の親モノクローナル抗体に由来する抗原結合性部位及び第２の親モノクローナル抗体の抗原結合性部位を含む。
【００３６】
ＤＶＤ−Ｉｇ結合性分子のデザイン、発現、及び特徴付けについての記載は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００７／０２４７１５号、米国特許第７，６１２，１８１号、及びＷｕら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．、２５：１２９０〜１２９７（２００７）においてなされている。このようなＤＶＤ−Ｉｇ分子の好ましい例は、構造式：ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ［式中、ＶＤ１は、第１の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の重鎖可変ドメインであり、Ｃは、重鎖定常ドメインであり、Ｘ１は、それがＣＨ１ではないことを条件として、リンカーであり、Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、ｎは、０又は１であるが、好ましくは１である］を含む重鎖；及び構造式：ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ［式中、ＶＤ１は、第１の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは、軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１は、それがＣＨ１ではないことを条件として、リンカーであり、Ｘ２は、Ｆｃ領域を含まず、ｎは、０又は１であるが、好ましくは１である］を含む軽鎖を含む。このようなＤＶＤ−Ｉｇは、２つのこのような重鎖及び２つのこのような軽鎖を含むことが可能であり、この場合、各鎖は、可変領域の間に介在する定常領域を伴わずに、タンデムにより連結された可変ドメインを含み、重鎖及び軽鎖は、会合して、タンデムの機能的抗原結合性部位を形成し、重鎖及び軽鎖の対は、重鎖及び軽鎖の別の対と会合して、４つの機能的な抗原結合性部位を伴う、テトラマーの結合性タンパク質を形成しうる。別の例では、ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、各々が可変領域の間に介在する定常領域を伴わずに、タンデムにより連結された３つの可変ドメイン（ＶＤ１、ＶＤ２、ＶＤ３）を含む重鎖及び軽鎖を含むことが可能であり、この場合、重鎖及び軽鎖の対は、会合して、３つの抗原結合性部位を形成することが可能であり、重鎖及び軽鎖の対は、重鎖及び軽鎖の別の対と会合して、６つの抗原結合性部位を伴う、テトラマーの結合性タンパク質を形成しうる。
【００３７】
ある実施形態において、本発明に従うＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質は、その親モノクローナル抗体が結合する、同じ標的分子に結合するだけでなく、また、その親モノクローナル抗体のうちの１つ以上の、１つ以上の所望の特性も保有する。例えば、このようなさらなる特性は、親モノクローナル抗体のうちの１つ以上の抗体パラメータである。その親モノクローナル抗体のうちの１つ以上に由来するＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質に寄与しうる抗体パラメータは、抗原特異性、抗原アフィニティー、効力、生物学的機能、エピトープの認識、タンパク質の安定性、タンパク質の可溶性、作製効率、免疫原性、薬物動態、バイオアベイラビリティー、組織との交差反応性、及びオーソログ抗原への結合を含むがこれらに限定されない。
【００３８】
ＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質は、ＲＧＭａの少なくとも１つのエピトープに結合する。ＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質の非限定的な例は、ＲＧＭａの１つ以上のエピトープに結合するＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質、ヒトＲＧＭａのエピトープ及び別の種（例えば、マウス）のＲＧＭａのエピトープに結合するＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質、及びヒトＲＧＭａのエピトープ及び別の標的分子（例えば、ＶＥＧＦＲ２又はＶＥＧＦＲ１）のエピトープに結合するＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質を含む。
【００３９】
「エピトープ」、又は「エピトープ」、又は「目的のエピトープ」とは、認識され、その特異的結合パートナー上の相補的な部位に結合しうる、任意の分子上の部位を指す。分子及び特異的結合パートナーは、特異的結合対の一部である。例えば、エピトープは、ポリペプチド、タンパク質、ハプテン、炭水化物抗原（糖脂質、糖タンパク質又はリポ多糖のようであるがこれらに限定されない）、又は多糖の上にありうる。その特異的結合パートナーは、抗体でありうるがこれに限定されない。
【００４０】
本明細書において使用された「フレームワーク」（ＦＲ）又は「フレームワーク配列」とは、ＣＤＲを除いた、可変領域の残りの配列を意味しうる。ＣＤＲ配列の正確な定義は、異なるシステム（例えば、上記を参照されたい）により決定されうるため、フレームワーク配列の意味は、これに応じて異なる解釈を受ける。６つのＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３並びに重鎖のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３）はまた、軽鎖上及び重鎖上のフレームワーク領域を、各鎖上の４つの部分領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４）へも分割するが、ここで、ＣＤＲ１は、ＦＲ１及びＦＲ２の間に位置し、ＣＤＲ２は、ＦＲ２及びＦＲ３の間に位置し、ＣＤＲ３は、ＦＲ３及びＦＲ４の間に位置する。特定の部分領域を、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、又はＦＲ４と指定しない、他の場合に言及されたフレームワーク領域は、単一の、自然発生の免疫グロブリン鎖の可変領域内の、ＦＲの組合せを表す。本明細書において使用されたＦＲは、４つの部分領域のうちの１つを表し、ＦＲは、フレームワーク領域を構成する、４つの部分領域のうちの２つ以上を表す。
【００４１】
当技術分野において公知の技法を使用して、非ヒト抗体をヒト化するのに、重鎖及び軽鎖の「アクセプター」フレームワーク配列（又は、単に、「アクセプター」配列）として使用されうる、ヒト重鎖及びヒト軽鎖のＦＲ配列は、当技術分野において公知である。一実施形態において、ヒト重鎖及びヒト軽鎖のアクセプター配列は、Ｖ−ｂａｓｅ又は国際的なＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（登録商標）（ＩＭＧＴ（登録商標））情報システムのような、一般に公開されているデータベースにおいて列挙されたフレームワーク配列から選択される。
【００４２】
本明細書において使用された「機能的な抗原結合性部位」とは、標的抗原に結合することが可能な、結合性タンパク質（例えば、抗体）上の部位を意味しうる。抗原結合性部位の抗原結合アフィニティーは、抗原結合性部位が由来する、親の結合性タンパク質、例えば、親抗体ほど強くはない場合があるが、抗原に結合する能力は、タンパク質、例えば、抗原に結合する抗体を査定するための、公知の様々な方法のうちのいずれか１つを使用して測定可能でなければならない。さらに、多価タンパク質、例えば、本明細書の多価抗体の抗原結合性部位の各々の抗原結合アフィニティーは、定量的に同じである必要はない。
【００４３】
本明細書において使用された「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含みうる。本明細書において記載されたヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロにおける、ランダム突然変異誘発若しくは部位特異的突然変異誘発、又はインビボにおける、体細胞突然変異により導入された突然変異）を含みうる。しかし、本明細書において使用された「ヒト抗体」という用語は、マウスのような、別の哺乳動物の種の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列へとグラフトされた抗体を含むように意図されていない。
【００４４】
本明細書において、「ヒト化抗体」は、非ヒト種（例えば、マウス）に由来する重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨ配列及び／又はＶＬ配列のうちの少なくとも一部が、より「ヒト様」となるように、すなわち、ヒト生殖細胞系列の可変配列とより類似するように変更された抗体について記載するように使用される。「ヒト化抗体」とは、目的の抗原に免疫特異的に結合し、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域及び非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗体又はこの変異体、誘導体、類似体、若しくは断片である。ＣＤＲの文脈において、本明細書で使用された「実質的に」という用語は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一なアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のＣＤＲ領域に対応し、フレームワーク領域の全て又は実質的に全てが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である、少なくとも１つであり、典型的に２つである、可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆｖ）の実質的に全てを含む。ある実施形態において、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的に、ヒト免疫グロブリンのＦｃのうちの少なくとも一部も含む。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖のほか、重鎖のうちの、少なくとも可変ドメインを含有する。抗体はまた、重鎖のＣＨ１領域、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域、及びＣＨ４領域も含みうる。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖だけを含有する。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖だけを含有する。具体的な実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメイン及び／又はヒト化重鎖だけを含有する。
【００４５】
ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む、免疫グロブリンの任意のクラス、並びに、限定なしに述べると、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む、任意のアイソタイプから選択されうる。ヒト化抗体は、１つを超えるクラス又はアイソタイプに由来する配列を含むことが可能であり、特定の定常ドメインは、当技術分野で周知の技法を使用して、所望のエフェクター機能を最適化するように選択されうる。
【００４６】
ヒト化抗体のフレームワーク領域及びＣＤＲは、親配列に正確に対応する必要がない、例えば、ドナー抗体ＣＤＲ又はコンセンサスフレームワークは、この部位におけるＣＤＲ残基又はフレームワーク残基が、ドナー抗体又はコンセンサスフレームワークに対応しないように、少なくとも１つのアミノ酸残基の置換、挿入、及び／又は欠失により突然変異誘発されうる。しかし、好ましい実施形態において、このような突然変異は、広範にわたる突然変異ではない。通例、ヒト化抗体残基のうちの、少なくとも８０％、好ましくは、少なくとも８５％、より好ましくは、少なくとも９０％であり、最も好ましくは、少なくとも９５％は、親のＦＲ配列及びＣＤＲ配列の残基に対応する。本明細書で使用された「コンセンサスフレームワーク」という用語は、コンセンサスの免疫グロブリン配列内のフレームワーク領域を指す。本明細書で使用された「コンセンサスの免疫グロブリン配列」という用語は、類縁の免疫グロブリン配列のファミリーにおいて、最も高頻度で発生するアミノ酸（又はヌクレオチド）から形成された配列（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ、「Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ」（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、１９８７）を参照されたい）を指す。したがって、「コンセンサスの免疫グロブリン配列」は、「コンセンサスフレームワーク領域」及び／又は「コンセンサスＣＤＲ」を含みうる。免疫グロブリンのファミリーにおいて、コンセンサス配列内の各位置は、ファミリー内のこの位置において、最も高頻度で発生するアミノ酸により占有されている。２つのアミノ酸が、同等に高頻度で発生する場合、いずれもが、コンセンサス配列内に含まれうる。
【００４７】
「連結配列」又は「連結ペプチド配列」とは、１つ以上の、目的のポリペプチド配列（例えば、全長配列、配列断片など）へと接続された、天然又は人工のポリペプチド配列を指す。「接続された」という用語は、連結配列の、目的のポリペプチド配列への接合を指す。このようなポリペプチド配列は、１つ以上のペプチド結合により接合することが好ましい。連結配列は、約４〜約５０アミノ酸の長さを有しうる。好ましくは、連結配列の長さは、約６〜約３０アミノ酸である。天然の連結配列は、人工の連結配列を創出するように、アミノ酸の置換、付加、又は欠失により修飾されうる。例示的な連結配列は、以下を含むがこれらに限定されない：（ｉ）ＨＨＨＨＨＨ（配列番号２０）のアミノ酸配列を有する、６×Ｈｉｓタグ（配列番号２０）のようなヒスチジン（Ｈｉｓ）タグは、ポリペプチド及び目的の抗体の単離及び精製を容易とする連結配列として有用である；（ｉｉ）Ｈｉｓタグなどのエンテロキナーゼ切断部位は、タンパク質及び目的の抗体の単離及び精製において使用される。エンテロキナーゼ切断部位は、Ｈｉｓタグと併せて、タンパク質及び目的の抗体の単離及び精製において使用されることが多い。当技術分野において、多様なエンテロキナーゼ切断部位が公知である。エンテロキナーゼ切断部位の例は、ＤＤＤＤＫ（配列番号２１）のアミノ酸配列及びその誘導体（例えば、ＡＤＤＤＤＫ（配列番号２２）など）を含むがこれらに限定されない；（ｉｉｉ）その他の配列も、単鎖可変領域断片の軽鎖可変領域及び／又は重鎖可変領域を連結又は接続するのに使用されうる。他の連結配列の例は、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３〜４２６（１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ８５：５８７９〜５８８３（１９８８）；及びＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２〜５５４（１９９０）において見出されうる。連結配列また、薬物の接合又は固体支持体への接合のような、さらなる機能のためにも修飾することができる。本開示の文脈において、モノクローナル抗体は、例えば、Ｈｉｓタグ、エンテロキナーゼ切断部位、又はこれらの両方のような連結配列を含有しうる。
【００４８】
本明細書において、「多価結合性タンパク質」とは、２つ以上の抗原結合性部位（本明細書において、「抗原結合性ドメイン」ともまた称される）を含む結合性タンパク質を指すように使用される。多価結合性タンパク質は、３つ以上の抗原結合性部位を有するように操作されていることが好ましく、一般に、自然発生の抗体ではない。「多特異性結合性タンパク質」という用語は、２つ以上の、類縁又は非類縁の標的に結合しうる結合性タンパク質であって、同じ標的分子の、２つ以上の異なるエピトープへの結合が可能な結合性タンパク質を含む結合性タンパク質を指す。
【００４９】
「組換え抗体（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」及び「組換え抗体（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」とは、組換え法により、１つ以上のモノクローナル抗体の全部又は一部をコードする核酸配列を、適切な発現ベクターへとクローニングし、その後、抗体を、適切な宿主細胞において発現させるステップを含む、１つ以上のステップにより調製された抗体を指す。用語は、組換えにより作製されたモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体（完全ヒト化抗体又は部分的ヒト化抗体）、抗体断片から形成された多特異性構造又は多価構造、二官能性抗体、ヘテロコンジュゲートＡｂ、ＤＶＤ−Ｉｇ、及び本明細書の（ｉ）において記載された他の抗体（二重可変ドメイン免疫グロブリン及びそれらを作り出すための方法について、Ｗｕ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２５：１２９０〜１２９７（２００７）において記載されている）を含むがこれらに限定されない。本明細書において使用された「二官能性抗体」という用語は、１つの抗原性部位に対する特異性を有する第１のアーム及び異なる抗原性部位に対する特異性を有する第２のアームを含む抗体を指す、すなわち、二官能性抗体は、二重特異性を有する。
【００５０】
本明細書において使用された「特異的結合」又は「特異的に結合すること」とは、抗体、タンパク質、又はペプチドの、第２の化学的分子種との相互作用を指す場合があり、この場合、相互作用は、化学的分子種上の特定の構造（例えば、抗原性決定基又はエピトープ）の存在に依存する、例えば、抗体は、タンパク質一般ではなく、特異的なタンパク質構造を認識し、これに結合する。抗体が、エピトープ「Ａ」に対して特異的である場合、エピトープＡを含有する分子（又は遊離のＡ、非標識化Ａ）の、標識化「Ａ」及び抗体を含有する反応物中の存在は、抗体に結合した標識化Ａの量を低減する。
【００５１】
本明細書において、「〜を処置する」、「〜を処置すること」又は「処置」は各々、疾患、又はこのような用語が適用される、このような疾患の、１つ以上の症状を阻止、緩和すること、又はこれらの進行を阻害することについて記載するのに、互換的に使用される。処置は、急性的に実施することもでき、慢性的に実施することもできる。用語はまた、疾患への罹患の前に、疾患又はこのような疾患と関連する症状の重症度を軽減することも指す。罹患の前における、疾患の重症度のこのような低減は、本明細書において記載された抗体又は医薬組成物の、投与時において疾患に罹患していない対象への投与を指す。「処置」及び「治療的に」とは、「〜を処置すること」が、上記において規定される通りである場合の、処置する行為を指す。
【００５２】
本明細書において、「変異体」は、アミノ酸の挿入、欠失、又は保存的置換により、アミノ酸配列が異なるが、少なくとも１つの生物学的活性を保持するペプチド又はポリペプチドについて記載するのに使用される。「生物学的活性」の代表例は、特異的抗体が結合する能力又は免疫反応を促進する能力を含む。変異体はまた、少なくとも１つの生物学的活性を保持するアミノ酸配列を伴う基準タンパク質と実質的に同一なアミノ酸配列を伴うタンパク質について記載するのにも使用される。当技術分野において、アミノ酸の保存的置換、すなわち、アミノ酸を、類似の特性（例えば、親水性、帯電の程度及び帯電領域の分布）を有する、異なるアミノ酸により置き換えることは、典型的に、小さな変化を伴うこととして認識されている。当技術分野において理解された通り、これらの小さな変化は、部分的に、アミノ酸の疎水性指数を検討することにより同定されうる（Ｋｙｔｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５〜１３２（１９８２））。アミノ酸の疎水性指数は、その疎水性及び電荷の検討に基づく。当技術分野において、同様の疎水性指数を有するアミノ酸は、置換される場合があるが、なおも、タンパク質の機能を保持することが公知である。一態様において、±２の疎水性指数を有するアミノ酸は、置換される。アミノ酸の親水性もまた、生物学的機能を保持するタンパク質を結果としてもたらす置換を明らかにするのに使用されうる。ペプチドの文脈における、アミノ酸の親水性についての検討は、このペプチドの局所平均親水性の最大値であって、抗原性及び免疫原性とよく相関することが報告されている、有用な尺度である、局所平均親水性の最大値の計算を可能とする（参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第４，５５４，１０１号）。同様の親水性値を有するアミノ酸による置換は、生物学的活性、例えば、当技術分野において理解された免疫原性を保持するペプチドを結果としてもたらしうる。置換は、互いから±２以内の親水性値を有するアミノ酸により実施されうる。アミノ酸の疎水性指数及び親水性値のいずれも、このアミノ酸の特定の側鎖の影響を受ける。生物学的機能と適合性であるアミノ酸置換は、疎水性、親水性、電荷、サイズ、及び他の特性により明らかにされる通り、アミノ酸の相対的類似性に依存し、特に、これらのアミノ酸の側鎖に依存すると理解されることは、この観察と符合する。「変異体」はまた、抗原的に反応性の抗ＲＧＭａ抗体の断片であって、アミノ酸配列内の、対応する抗ＲＧＭａ抗体の断片と異なるが、なおも抗原的に反応性であり、ＲＧＭａとの結合について、対応する抗ＲＧＭａ抗体の断片と競合しうる断片を指すようにも使用されうる。「変異体」はまた、タンパク質分解、リン酸化、又は他の翻訳後修飾によるような、異なる形でプロセシングされているが、その抗原反応性を保持する、ポリペプチド又はその断片について記載するようにも使用されうる。
【００５３】
本明細書において、数値範囲を列挙するために、それらの間に介在する各数であって、同じ精度を伴う各数が特に想定される。例えば、６〜９の範囲について、６及び９に加えて、７及び８の数も想定され、６．０〜７．０の範囲について、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、及び７．０の数が、特に想定される。
【００５４】
２．抗ＲＧＭａ抗体
本明細書では、それを必要とする患者へと、１つ以上の抗ＲＧＭａ抗体を投与することにより、脊髄損傷を処置する方法、脊髄損傷後の軸索再生を促進する方法、脊髄損傷後の機能回復を促進する方法、及び脊髄損傷から生じる神経障害性疼痛を含む疼痛を処置する方法が提示される。本明細書において記載された方法における使用のための抗ＲＧＭａ抗体は、「ＲＧＭｃ」（Ｒｅｐｕｌｓｉｖｅ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｃ）との反応性を最小化又は消失させながら、ＲＧＭａに結合する。ＲＧＭａに対する抗体は、ＲＧＭｃと交差反応することが多く、静脈内の高用量は、肝細胞内の鉄蓄積を結果としてもたらしうるため、本明細書に記載された抗体の、ＲＧＭａへの特異的結合は、治療的利益をもたらす。さらに、これらの抗体の高選択性は、処置のために、大きな治療用量域又は治療用量範囲をもたらす。
【００５５】
ａ．ＲＧＭａ認識抗体
本明細書において記載された方法において使用されうる抗体は、ＲＧＭａに結合する抗体、この断片又は変異体である。このような抗体は、例えば、その全ての内容が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１３１１２９２２において記載されている。抗体は、抗ＲＧＭａ抗体の断片又はこの変異体若しくは誘導体でありうる。抗体は、ポリクローナル抗体の場合もあり、モノクローナル抗体の場合もある。抗体は、キメラ抗体、単鎖抗体、アフィニティー成熟抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体若しくはＦａｂ断片のような抗体断片、又はこれらの混合物でありうる。抗体断片又は誘導体は、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片又はｓｃＦｖ断片を含みうる。抗体誘導体は、ペプチド模倣体により作製されうる。さらに、単鎖抗体の作製について記載された技法は、単鎖抗体を作製するようにも適合させうる。
【００５６】
ヒト抗体は、ファージディスプレイ技術に由来する場合もあり、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現させるトランスジェニックマウスに由来する場合もある。ヒト抗体は、ヒトのインビボにおける免疫反応の結果として作出及び単離されうる。例えば、Ｆｕｎａｒｏら、ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２００８（８）：８５を参照されたい。したがって、抗体は、動物レパートリーの産物ではなく、ヒトレパートリーの産物でありうる。ヒト由来であるため、自己抗原に対する反応性の危険性は、最小化されうる。代替的に、ヒト抗ＲＧＭａ抗体を選択及び単離するのに、標準的な酵母ディスプレイライブラリー及びディスプレイ技術も使用されうる。例えば、ナイーブヒト単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）のライブラリーは、ヒト抗ＲＧＭａ抗体を選択するのに使用されうる。トランスジェニック動物は、ヒト抗体を発現させるのに使用されうる。
【００５７】
ヒト化抗体は、所望の抗原に結合する非ヒト種抗体であって、非ヒト種に由来する、１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）及びヒト免疫グロブリン分子に由来するフレームワーク領域を有する非ヒト種抗体に由来する抗体分子でありうる。
【００５８】
抗体は、ＲＧＭａに特異的に結合しうる。ある特定の実施形態において、抗ＲＧＭａ抗体は、ＲＧＭａのＮ末端領域に位置するエピトープに結合する。
【００５９】
抗体は、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、又はこの断片若しくは変異体に結合しうる。抗体は、上記において記載したＲＧＭａポリペプチド又は変異体において存在するエピトープを認識し、これに特異的に結合しうる。エピトープは、配列番号１７（全長ヒトＲＧＭａ）、配列番号１８（配列番号１７のアミノ酸４７〜１６８に対応する、ヒトＲＧＭａの断片）、配列番号１９（ヒトＲＧＭａの断片）、又はこれらの変異体であることが可能であり、これらの配列は、下記：
【００６０】
【化１】
2019517480.tif 000002
【００６１】
【化２】
2019517480.tif 000003
【００６２】
【化３】
2019517480.tif 000004
に提示される。
【００６３】
ある特定の実施形態において、ＲＧＭａ特異的ＲＧＭａ抗体は、配列番号１、２、３、４、５、及び６；配列番号１、２、３、４、５、及び７；配列番号１、２、３、及び９；配列番号１、２、３、及び１０；配列番号４、５、６、及び８；配列番号４、５、７、及び８；配列番号８及び９；配列番号８及び１０；配列番号１、２、３、及び１５；配列番号４、５、６、及び１６；配列番号４、５、７、及び１６；又は配列番号１５及び１６を含みうる。
【００６４】
既往のデータは、ＡＥ１２−１のエピトープが、ＲＧＭａのＮ末端領域内に位置することを示唆した。ある特定の実施形態において、抗体は、ヒトＲＧＭａのアミノ酸４７〜１６８内のＲＧＭａエピトープに結合する。ある特定の実施形態において、抗体は、配列番号１８に明示されたアミノ酸内のＲＧＭａエピトープに結合する。ある特定の実施形態において、抗体は、ヒトＲＧＭａのアミノ酸４７〜６９内のＲＧＭａエピトープに結合する。ある特定の実施形態において、抗体は、配列番号１９に明示されたアミノ酸内のＲＧＭａエピトープに結合する。
【００６５】
（１）抗体の構造
（ａ）重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲ
抗体は、ＲＧＭａ（配列番号１７）、配列番号１８、配列番号１９、これらの断片、又は変異体に免疫特異的に結合することが可能であり、表１に示された可変重鎖及び／又は可変軽鎖を含む。抗体は、ＲＧＭａ、これらの断片、誘導体、又は変異体に免疫特異的に結合することが可能であり、これらもまた表１に示された、重鎖ＣＤＲ配列又は軽鎖ＣＤＲ配列のうちの１つ以上を含む。抗体の軽鎖は、カッパ鎖又はラムダ鎖でありうる。例えば、表１を参照されたい。表１に示された抗体を作り出すための方法は、その内容が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１３／１１２９２２において記載されている。
【００６６】
【表１】
2019517480.tif 000005
【００６７】
抗体又はこの変異体若しくは誘導体は、配列番号１〜１０又は１５〜１６のうちの１つ以上と９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、又は５０％を超えて同一な、１つ以上のアミノ酸配列を含有しうる。抗体又はこの変異体若しくは誘導体は、配列番号１〜１０又は１５〜１６のうちの１つ以上と９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、又は５０％を超えて同一な、１つ以上の核酸配列によりコードされうる。ポリペプチドの同一性及び相同性は、例えば、報告：Ｗｉｌｂｕｒ，Ｗ．Ｊ．及びＬｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８０、７２６〜７３０（１９８３）において記載されているアルゴリズムにより決定されうる。
【００６８】
抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹの分子クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又は分子サブクラスでありうる。例えば、抗体は、以下の定常領域配列：
【００６９】
【化４】
2019517480.tif 000006
を有するＩｇＧ１分子でありうる。
【００７０】
配列番号１１内の上記定常領域は、２３４及び２３５位において、野生型定常領域配列の、２つの突然変異を含有する。詳細には、これらの突然変異は、２３４及び２３５位の各々における、ロイシンからアラニンへの変化（これらは、「ＬＬＡＡ」突然変異と称される）である。これらの突然変異は、上記において、太字及び下線により示されている。これらの突然変異の目的は、エフェクター機能を消失させることである。
【００７１】
代替的に、ＩｇＧ１分子は、１つ以上の突然変異を含有する、上記の定常領域配列（配列番号１１）を有しうる。例えば、配列番号１１の定常領域配列は、下記の表２に示された、アミノ酸２５０における突然変異であって、トレオニンを、グルタミンにより置きかえた突然変異（配列番号１２）、アミノ酸４２８における突然変異であって、メチオニンを、ロイシンにより置きかえた突然変異（配列番号１３）又はアミノ酸２５０における突然変異であって、トレオニンを、グルタミンにより置きかえた突然変異及びアミノ酸４２８における突然変異であって、メチオニンを、ロイシンにより置きかえた突然変異（配列番号１４）を含有しうる。
【００７２】
【表２】
2019517480.tif 000007
【００７３】
代替的に、ＩｇＧ１分子は、ＡＥ１２−１−Ｙ（ＶＨ）ＣＤＲＨ１（配列番号１）、ＡＥ１２−１−Ｙ（ＶＨ）ＣＤＲＨ２（配列番号２）、ＡＥ１２−１−Ｙ（ＶＨ）ＣＤＲＨ３（配列番号３）を含む重鎖並びにＡＥ１２−１−Ｙ（ＶＬ）ＣＤＲＬ１（配列番号４）、ＡＥ１２−１−Ｙ（ＶＬ）ＣＤＲＬ２（配列番号５）及びＡＥ１２−１−Ｙ（ＶＬ）ＣＤＲＬ３（配列番号７）を含む軽鎖並びに下記の表３に示された配列番号１４の定常配列を含有しうる（この抗体は、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬと称され、配列番号１５の軽鎖配列及び配列番号１６の重鎖配列を有する）。
【００７４】
【表３】
2019517480.tif 000008
【００７５】
３．医薬組成物
抗体は、医薬組成物中の成分でありうる。医薬組成物はまた、薬学的に許容される担体も含有しうる。本明細書において記載された抗体を含む医薬組成物は、脊髄損傷の処置、特に、軸索再生、機能回復、又はこれらの両方の促進における使用のための医薬組成物である。本明細書において記載された抗体を含む医薬組成物はまた、脊髄損傷から生じる神経障害性疼痛を含むがこれらに限定されない疼痛の処置における使用のための医薬組成物でもある。具体的な実施形態において、組成物は、本明細書において記載された、１つ以上の抗体を含む。これらの実施形態に従い、組成物は、担体、希釈剤又は賦形剤もさらに含みうる。
【００７６】
本明細書において記載された抗体は、対象への投与に適する医薬組成物へと組み込まれうる。医薬組成物は、本明細書において記載された抗体（例えば、ＡＥ−１２−１、ＡＥ−１２−１−Ｙ、又はＡＥ−１２−１−Ｙ−ＱＬのような抗体）及び薬学的に許容される担体を含むことが典型的である。本明細書で使用された「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合性である、任意で全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延薬剤などを含む。薬学的に許容される担体の例は、水、生理食塩液、リン酸緩衝生理食塩液、デキストロース、グリセロール、エタノールなどのうちの１つ以上のほか、これらの組合せを含む。多くの場合に、組成物中に、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールのようなポリアルコール、又は塩化ナトリウムを含むことが好ましい。薬学的に許容される担体は、抗体の保管寿命又は有効性を増強する、保湿剤又は乳化剤、保存剤又は緩衝剤のような、少量の補助物質もさらに含みうる。
【００７７】
さらなる実施形態において、医薬組成物は、脊髄損傷を処置する、又は脊髄損傷から生じる神経障害性疼痛を含むがこれらに限定されない疼痛を処置するための、少なくとも１つのさらなる治療剤を含む。
【００７８】
多様な送達システム、例えば、リポソーム内、マイクロ粒子内、マイクロカプセル内、抗体又は抗体断片を発現させることが可能な組換え細胞内の封入、受容体媒介型エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ及びＷｕ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６２：４４２９〜４４３２（１９８７）を参照されたい）、レトロウイルス又は他のベクターの一部としての核酸の構築などが公知であり、本明細書において記載された、１つ以上の抗体又は本明細書において記載された、１つ以上の抗体の組合せを投与するのに使用されうる。予防剤又は治療剤を投与する方法は、非経口投与（例えば、皮内投与、筋内投与、腹腔内投与、静脈内投与、髄腔内投与及び皮下投与）、硬膜外投与、腫瘍内投与、及び経粘膜投与（例えば、鼻腔内経路及び経口経路）を含むがこれらに限定されない。加えて、例えば、吸入器又は噴霧器、及びエアゾール化剤を伴う製剤の使用による肺内投与も援用されうる。例えば、それらの各々が、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる、米国特許第６，０１９，９６８号；同第５，９８５，３２０号；同第５，９８５，３０９号；同第５，９３４，２７２号；同第５，８７４，０６４号；同第５，８５５，９１３号；同第５，２９０，５４０号；及び同第４，８８０，０７８号；並びにＰＣＴ公開第ＷＯ９２／１９２４４号；同第ＷＯ９７／３２５７２号；同第ＷＯ９７／４４０１３号；同第ＷＯ９８／３１３４６号；及び同第ＷＯ９９／６６９０３号を参照されたい。一実施形態において、本明細書において記載された抗体、組合せ治療、又は本明細書において記載された組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ（登録商標）肺内薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ．）を使用して投与される。具体的な実施形態において、本明細書において記載された抗体による予防剤又は治療剤は、筋内投与、静脈内投与、腫瘍内投与、経口投与、鼻腔内投与、肺内投与、又は皮下投与される。予防剤又は治療剤は、任意の簡便な経路、例えば、注入又はボーラス注射により投与される場合もあり、上皮層又は皮膚粘膜層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜及び腸粘膜など）を通した吸収により投与される場合もあり、他の生物学的に活性薬剤と併せて投与される場合もある。投与は、全身投与の場合もあり、局所投与の場合もある。
【００７９】
具体的な実施形態において、本明細書において記載された抗体を、処置を必要とする領域へと、局所投与することが所望される場合があり、これは、限定を目的とせずに述べると、例えば、局所注入により達成される場合もあり、注射により達成される場合もあり、膜及びサイラスティック膜、ポリマー、線維性マトリックス（例えば、Ｔｉｓｓｕｅｌ（登録商標））、又はコラーゲンマトリックスのようなマトリックスを含む、多孔性材料又は非多孔性材料の植込みである植込みにより達成される場合もある。一実施形態において、有効量の、本明細書において記載された、１つ以上の抗体は、障害又はその症状を、防止、処置、管理、及び／又は改善するように、対象の罹患領域へと、局所投与される。別の実施形態において、有効量の、本明細書において記載された、１つ以上の抗体は、障害又はその１つ以上の症状を、防止、処置、管理、及び／又は改善するように、有効量の、本明細書において記載された抗体以外の、１つ以上の治療（例えば、１つ以上の予防剤又は治療剤）と組み合わせて、対象の罹患領域へと、局所投与される。
【００８０】
ある特定の実施形態において、髄腔内投与は、処置選択肢として除外されうる（例えば、損傷の早期において、浮腫がＣＳＦ流を妨げる場合）。
【００８１】
医薬組成物は、その意図された投与経路に適合性となるように製剤化される。投与経路の例は、非経口投与、例えば、静脈内投与、髄腔内投与、皮内投与、皮下投与、経口投与、鼻腔内（例えば、吸入）投与、経皮（例えば、局所）投与、経粘膜投与、及び直腸内投与を含むがこれらに限定されない。具体的な実施形態において、組成物は、規定の手順に従い、ヒトへの静脈内投与、皮下投与、筋内投与、経口投与、鼻腔内投与、又は局所投与に適合させた医薬組成物として製剤化される。典型的に、静脈内投与のための組成物は、滅菌等張性の水性緩衝液中の溶液である。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤及び注射部位における疼痛を和らげるように、リグノカインのような局所麻酔剤も含みうる。
【００８２】
本明細書において記載された方法は、注射（例えば、ボーラス注射又は持続的注入による）による非経口投与のために製剤化された組成物の投与を含みうる。注射用の製剤は、保存剤を添加した単位剤形（例えば、アンプル内又は複数回投与用容器内の）において提示されうる。組成物は、油性媒体中又は水性媒体中の懸濁液、溶液又はエマルジョンのような形態を取ることが可能であり、懸濁剤、安定化剤及び／又は分散剤のような製剤化剤を含有しうる。代替的に、有効成分は、使用の前の、適切な媒体（例えば、滅菌の発熱物質非含有水）による再構成のための粉末形態でありうる。本明細書において記載された方法は加えて、デポ調製物として製剤化された組成物を投与する方法も含みうる。このような長時間作用型製剤は、植込み（例えば、皮下、髄腔内又は筋内の植込み）により投与される場合もあり、筋内注射により投与される場合もある。したがって、例えば、組成物は、適切なポリマー性材料又は疎水性材料（例えば、許容可能な油中のエマルジョンとして）として製剤化される場合もあり、イオン交換樹脂として製剤化される場合もあり、難溶性の誘導体として（例えば、難溶性の塩として）製剤化される場合もある。
【００８３】
本明細書において記載された方法は、中性形態又は塩形態として製剤化された組成物の投与を包摂する。薬学的に許容される塩は、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するアニオンのようなアニオンにより形成された塩、及びナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するカチオンのようなカチオンにより形成された塩を含む。
【００８４】
一般に、組成物の成分は、例えば、活性薬剤の数量を指し示すアンプル又は小袋のような、密封された容器内の、凍結乾燥された乾燥粉末又は水分非含有の濃縮物として、個別に供給される場合もあり、単位剤形内に併せて混合されて供給される場合もある。投与方式が、注入である場合、組成物は、医薬グレードの滅菌水又は滅菌生理食塩液を含有する注入ボトルにより分注されうる。投与方式が、注射である場合、投与前に、成分が混合されうるように、注射用の滅菌水又は生理食塩液のアンプルが用意されうる。
【００８５】
特に、本明細書において記載された方法はまた、本明細書において記載された抗体又は医薬組成物のうちの１つ以上が、抗体の数量を指し示すアンプル又は小袋のような、密封された容器内にパッケージングされることも想定する。一実施形態において、本明細書において記載された抗体又は医薬組成物のうちの１つ以上は、密封された容器内の、凍結乾燥された乾燥粉末又は水分非含有の濃縮物として供給され、対象への投与に適切な濃度へと再構成されうる（例えば、水又は生理食塩液により）。一実施形態において、本明細書において記載された抗体又は医薬組成物のうちの１つ以上は、密封された容器内の、凍結乾燥された乾燥粉末として、少なくとも５ｍｇ、例えば、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、又は少なくとも１００ｍｇの単位投与量において供給される。凍結乾燥させた、本明細書において記載された抗体又は医薬組成物は、その元の容器内、２℃〜８℃の間において保管されるものとし、本明細書において記載された抗体又は医薬組成物は、再構成の後１週間以内、例えば、５日間以内、７２時間以内、４８時間以内、２４時間以内、１２時間以内、６時間以内、５時間以内、３時間以内、又は１時間以内に投与されるものとする。代替的な実施形態において、本明細書において記載された抗体又は医薬組成物のうちの１つ以上は、抗体の数量及び濃度を指し示す、密封された容器内の液体形態において供給される。さらなる実施形態において、投与される組成物の液体形態は、密封された容器内、少なくとも０．２５ｍｇ／ｍｌ、例えば、少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７５ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも１００ｍｇ／ｍｌにおいて供給される。液体形態は、その元の容器内、２℃〜８℃の間において保管されるものとする。
【００８６】
本明細書において記載された抗体は、非経口投与に適する医薬組成物へと組み込まれうる。一態様において、抗体は、０．１〜５００ｍｇ／ｍｌの抗体を含有する注射用溶液として調製される。注射用溶液は、フリントバイアル内若しくはアンバーバイアル内、アンプル内又はプレフィルドシリンジ内の液体又は凍結乾燥剤形から構成されうる。緩衝液は、ｐＨ５．０〜７．０（最適には、ｐＨ６．０）において、最適には、５〜１０ｍＭである、Ｌ−ヒスチジン（１〜５０ｍＭ）でありうる。他の適切な緩衝液は、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム又はリン酸カリウムを含むがこれらに限定されない。塩化ナトリウムは、溶液の等張性を、０〜３００ｍＭの濃度（液体剤形で、最適には、１５０ｍＭ）で修飾するのに使用されうる。凍結保護剤、主に、０〜１０％のスクロース（最適には、０．５〜１．０％）は、凍結乾燥剤形用に組み入れられうる。他の適切な凍結保護剤は、トレハロース及びラクトースを含む。増量剤、主に、１〜１０％のマンニトール（最適には、２〜４％）は、凍結乾燥剤形用に組み入れられうる。安定化剤、主に、１〜５０ｍＭのＬ−メチオニン（最適には、５〜１０ｍＭ）は、液体剤形及び凍結乾燥剤形のいずれにおいても使用されうる。他の適切な増量剤は、グリシン、アルギニンを含み、０〜０．０５％のポリソルベート−８０（最適には、０．００５〜０．０１％）として組み入れられうる。さらなる界面活性剤は、ポリソルベート２０界面活性剤及びＢＲＩＪ界面活性剤を含むがこれらに限定されない。本明細書において記載された抗体を含む医薬組成物であって、非経口投与のための注射用溶液として調製された医薬組成物は、抗体の吸収又は分散を増大させるのに使用されるアジュバントのようなアジュバントとして有用な薬剤をさらに含みうる。特に、有用なアジュバントは、Ｈｙｌｅｎｅｘ（登録商標）（組換えヒトヒアルロニダーゼ）のようなヒアルロニダーゼである。ヒアルロニダーゼの、注射用溶液中の添加は、非経口投与、特に、皮下投与の後におけるヒトバイオアベイラビリティーを改善する。ヒアルロニダーゼの、注射用溶液中の添加はまた、疼痛及び不快感を軽減し、注射部位反応の発生を最小としながら、注射部位容量の増大（すなわち、１ｍｌを超える）も可能とする（参照により本明細書に組み込まれる、国際出願公開第ＷＯ０４／０７８１４０号及び米国特許出願公開第ＵＳ２００６１０４９６８号を参照されたい）。
【００８７】
本明細書において記載された組成物は、様々な形態でありうる。これらは、例えば、溶液（例えば、注射用溶液及び注入用溶液）、分散液又は懸濁液、錠剤、丸剤、粉末、リポソーム及び坐剤のような、液体剤形、半固体剤形及び固体剤形を含む。好ましい形態は、意図された投与方式及び治療適用に依存する。組成物は、他の抗体によるヒトの受動免疫化に使用された組成物と同様の組成物のような注射用溶液又は注入用溶液の形態でありうる。一実施形態において、抗体は、静脈内注入又は静脈内注射により投与される。別の実施形態において、抗体は、筋内注射又は皮下注射により投与される。
【００８８】
治療用組成物は典型的に、製造条件及び保管条件下において、滅菌かつ安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散、リポソーム、又は高薬物濃度に適する、他の秩序構造として製剤化されうる。滅菌注射用溶液は、活性化合物（すなわち、結合性タンパク質、例えば、本明細書において記載された抗体）を、要請された量において、適切な溶媒中に、要請に応じて、１つの、上記において列挙された成分又はこれらの組合せと共に組み込むことに続く、濾過滅菌により調製されうる。一般に、分散液は、活性化合物を、基礎分散媒及び上記において列挙された成分に由来する、要請された他の成分を含有する滅菌媒体へと組み込むことにより調製される。滅菌注射用溶液を調製するための、滅菌の凍結乾燥粉末の場合、調製法は、あらかじめ滅菌濾過されたその溶液に由来する、任意のさらなる所望の成分を加えた、有効成分の粉末をもたらす真空乾燥法及び噴霧乾燥法を含む。溶液の適正な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングを用いることにより維持される場合もあり、分散液の場合には、要請された粒子サイズを維持することにより維持される場合もあり、界面活性剤を用いることにより維持される場合もある。注射用組成物の持続吸収は、組成物中に、吸収を遅延させる試薬、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを組み入れることによりもたらされうる。
【００８９】
本明細書において記載された抗体は、当技術分野で公知の様々な方法により投与されうる。例えば、経路／投与方式は、皮下注射、静脈内注射又は静脈内注入でありうる。当業者により察知される通り、経路及び／又は投与方式は、所望の結果に応じて変動する。ある特定の実施形態において、活性化合物は、急速な放出に対して、化合物を保護する担体であって、インプラント、経皮パッチ、及びマイクロ封入送達系を含む制御放出製剤のような担体により調製されうる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸のような、生体分解性の生体適合性ポリマーは、使用されうる。このような製剤を調製するための多くの方法は特許化されている、又は当業者に一般に公知である。例えば、「Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９７８を参照されたい。
【００９０】
ある特定の実施形態において、本明細書において記載された抗体は、例えば、不活性の希釈剤又は同化可能な可食担体と共に経口投与されうる。抗体（及び、所望の場合、他の成分）はまた、ハードシェルゼラチンカプセル内又はソフトシェルゼラチンカプセル内に封入される場合もあり、錠剤へと圧縮される場合もあり、対象の食餌へと、直接組み込まれる場合もある。経口治療用投与のために、抗体は、賦形剤と共に組み込まれ、服用可能な錠剤、口腔用錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウェハーなどの形態において使用されうる。本明細書において記載された抗体を、非経口投与以外により投与するために、抗体を、その不活化を防止する材料によりコーティングする、又は抗体を、これと共に共投与することが必要でありうる。
【００９１】
補充の活性化合物もまた、組成物へと組み込まれうる。ある特定の実施形態において、本明細書において記載された抗体は、本明細書において記載された障害又は疾患を処置するために有用な、１つ以上のさらなる治療剤と共に共製剤化及び／又は共投与される。例えば、本明細書において記載された抗ＲＧＭａ抗体は、他の標的に結合する、１つ以上のさらなる抗体（例えば、他の可溶性抗原に結合する、又は細胞表面分子に結合する抗体）と共に共製剤化及び／又は共投与されうる。さらに、本明細書において記載された、１つ以上の抗体は、前出の治療剤のうちの２つ以上と組み合わせて使用されうる。このような組合せ療法は、低投与量の治療剤の投与を活用することが可能であり、これにより、多様な単剤療法と関連する、可能な毒性又は合併症を回避しうるので有利である。
【００９２】
ある特定の実施形態において、本明細書において記載された抗体は、当技術分野で公知の半減期延長媒体へと連結される。このような媒体は、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコール、及びデキストランを含むがこれらに限定されない。このような媒体は、例えば、参照により任意の目的で本明細書に組み込まれる、米国特許出願第０９／４２８，０８２号及びＰＣＴ出願公開第ＷＯ９９／２５０４４号において記載されている。
【００９３】
本明細書において記載された抗体は、単独で使用される場合もあり、１つ以上のさらなる薬剤、例えば、治療剤（例えば、低分子又は生物学的薬剤）と組み合わせて使用される場合もあり、前記さらなる薬剤は、その意図された目的のために、当業者に選択されることを理解されたい。
【００９４】
組合せが、それらの意図された目的に有用な組合せであることもさらに理解されたい。上記において明示された薬剤は、例示的な目的のための薬剤であり、限定的であることは意図されない。組合せは、抗体及び下記のリストから選択される、少なくとも１つのさらなる薬剤を含みうる。組合せが、形成された組成物が、その意図された機能を実施しうるような組合せである場合、組合せはまた、１つを超えるさらなる薬剤、例えば、２つ又は３つのさらなる薬剤も含みうる。
【００９５】
医薬組成物は、「治療有効量」又は「予防有効量」の抗体を含みうる。「治療有効量」とは、所望の治療結果を達成するのに必要な投与量において、必要な期間にわたり有効な量を指す。抗体の治療有効量は、当業者により決定され、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、並びに個体において所望の応答を誘発する抗体の能力のような因子に従い変動しうる。治療有効量はまた、存在する場合、抗体の毒性作用又は有害な作用が、治療的に有益な効果により凌駕される量でもある。「予防有効量」とは、所望の治療結果を達成するのに必要な投与量において、必要な期間にわたり有効な量を指す。典型的に、予防的用量は、疾患の前又は早期の対象において使用されるので、予防有効量は、治療有効量未満である。
【００９６】
投与量レジメンは、最適の所望の応答（例えば、治療応答又は予防応答）をもたらすように調整されうる。例えば、単一のボーラスが、投与される場合もあり、複数の分割された用量が、時間経過にわたり投与される場合もあり、治療状況の要求により指し示されるのに応じて、用量が、低減される場合もあり、増大される場合もある。とりわけ、投与の容易さ及び投与量の均一性のために、非経口組成物を、単位剤形において製剤化することが有利である。本明細書において使用された単位剤形とは、哺乳動物の処置対象のための単位投与量として適する、物理的に個別の単位を指し、各単位は、要請された医薬担体と共に、所望の治療的効果をもたらすように計算された、所定数量の活性化合物を含有する。単位剤形のための仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特徴及び達成される特定の治療的又は予防的効果並びに（ｂ）個体における感受性を処置するために、このような活性化合物を配合させる技術分野において固有の限定により指定され、これらに直接依存する。
【００９７】
抗体の治療有効量又は予防有効量のための、例示的な非限定的範囲は、０．１〜２００ｍｇ／ｋｇの間、例えば、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの間、５〜５０ｍｇ／ｋｇの間、又は１０〜２５ｍｇ／ｋｇの間の用量である。抗体の治療有効量又は予防有効量は、１〜２００ｍｇ／ｋｇ、１０〜２００ｍｇ／ｋｇ、２０〜２００ｍｇ／ｋｇ、５０〜２００ｍｇ／ｋｇ、７５〜２００ｍｇ／ｋｇ、１００〜２００ｍｇ／ｋｇ、１５０〜２００ｍｇ／ｋｇ、５０〜１００ｍｇ／ｋｇ、５〜１０ｍｇ／ｋｇ、又は１〜１０ｍｇ／ｋｇの間でありうる。投与量値は、緩和される状態の種類及び重症度と共に変動しうることに注目されたい。さらに、抗体用量は、当業者により決定され、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、並びに個体において所望の応答を誘発する抗体の能力のような因子にも従い変動しうる。用量はまた、存在する場合、抗体の毒性作用又は有害な作用が、治療的に有益な効果により凌駕される量でもある。任意の特定の対象について、時間経過にわたり、個別の必要及び組成物を投与する、又は組成物の投与を監督する担当者の職業的判断に従い、特定の投与量レジメンを調整すべきであり、本明細書において明示された投与量範囲は、例示的なものであるに過ぎず、特許請求された組成物の範囲又は実施を限定することを意図するものではないことをさらに理解されたい。
【００９８】
４．処置法
ａ．脊髄損傷（ＳＣＩ）
任意の対象において、対象が、脊髄損傷を有する、又は脊髄損傷を有する危険性があるのかどうかについて、評価を行うことができる。評価は、防止的治療、維持的治療、又はモジュレーティング治療のような、適切な治療コースを指し示しうる。したがって、本明細書では、治療有効量の、本明細書において記載された抗体（例えば、抗体であるＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、又はＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬのような）のうちの１つ以上を投与することにより、脊髄損傷を処置、防止、モジュレート、又は緩和する方法が提示される。抗体は、それを必要とする対象へと投与されうる。抗体は、治療有効量において投与されうる。
【００９９】
一実施形態において、脊髄損傷の原因は、自動車事故、転倒、暴力、運動競技による損傷、血管障害、腫瘍、感染性疾患、脊椎症、医原性損傷（とりわけ、脊髄内注射及び硬膜外カテーテル留置の後における）、骨粗鬆症に続発する椎骨骨折、又は発達障害である。
【０１００】
ある特定の実施形態において、脊髄損傷は、例えば、鈍力による外傷、圧迫、ヘルニアなどから生じうる。ある特定の実施形態において、脊髄は、完全に切断されている。他のある特定の実施形態において、脊髄は、損傷し、例えば、部分的に切断されているが、完全に切断されてはいない。他の実施形態において、脊髄は、例えば、脊柱の骨構造への損傷、１つ以上の椎骨の、他の椎骨と比べた変位、隣接する組織の炎症又は腫脹などを通して圧迫される。
【０１０１】
脊髄損傷は、四肢麻痺（ｔｅｔｒａｐｌｅｇｉａ）（旧称：四肢麻痺（ｑｕａｄｒｉｐｌｅｇｉａ））及び対麻痺として公知の状態を含む。したがって、本明細書において提示された脊髄損傷の処置法についての一部の実施形態は、四肢麻痺（ｔｅｔｒａｐｌｅｇｉｃ）患者又は対麻痺患者の処置を含む。
【０１０２】
四肢麻痺（ｔｅｔｒａｐｌｅｇｉａ）とは、脊柱管内の神経要素の損傷に起因する、脊髄の頸部における、運動機能及び／又は感覚機能の障害又は喪失を特徴とする、頸部領域内の脊髄に対する損傷を指す。四肢麻痺（ｔｅｔｒａｐｌｅｇｉａ）は、腕のほか、体幹、脚部及び骨盤内臓器における機能障害を結果としてもたらす。四肢麻痺（ｔｅｔｒａｐｌｅｇｉａ）は、神経管の外部の末梢神経に対する、腕神経叢の病変又は損傷を含まない。
【０１０３】
対麻痺は、脊柱管内の神経要素の損傷に続発する、脊髄の胸部、腰部又は仙骨部（頸部ではない）における、運動機能及び／又は感覚機能の障害又は喪失を指す。対麻痺により、腕の機能は温存されるが、損傷のレベルに応じて、体幹、脚部及び骨盤内臓器は、罹患しうる。用語は、馬尾及び脊髄円錐の損傷を指すのに使用されるが、神経管の外部の末梢神経に対する、腰仙骨神経叢の病変又は損傷を指すのには使用されない。
【０１０４】
一実施形態において、脊髄損傷は、頸椎のうちの１つ以上における損傷である。別の実施形態において、脊髄損傷は、胸椎のうちの１つ以上における損傷である。別の実施形態において、脊髄損傷は、腰椎のうちの１つ以上における損傷である。別の実施形態において、脊髄損傷は、仙椎のうちの１つ以上における損傷である。ある特定の実施形態において、脊髄損傷は、椎骨であるＣ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６若しくはＣ７；又は椎骨であるＴ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４、Ｔ５、Ｔ６、Ｔ７、Ｔ８、Ｔ９、Ｔ１０、Ｔ１１若しくはＴ１２；又は椎骨であるＬ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４若しくはＬ５である。他のある特定の実施形態において、脊髄損傷は、Ｃ１〜Ｃ２の間；Ｃ２〜Ｃ３の間；Ｃ３〜Ｃ４の間；Ｃ４〜Ｃ５の間；Ｃ５〜Ｃ６の間；Ｃ６〜Ｃ７の間；Ｃ７〜Ｔ１の間；Ｔ１〜Ｔ２の間；Ｔ２〜Ｔ３の間；Ｔ３〜Ｔ４の間；Ｔ４〜Ｔ５の間；Ｔ５〜Ｔ６の間；Ｔ６〜Ｔ７の間；Ｔ７〜Ｔ８の間；Ｔ８〜Ｔ９の間；Ｔ９〜Ｔ１０の間；Ｔ１０〜Ｔ１１の間；Ｔ１１〜Ｔ１２の間；Ｔ１２〜Ｌ１の間；Ｌ１〜Ｌ２の間；Ｌ２〜Ｌ３の間；Ｌ３〜Ｌ４の間；又はＬ４〜Ｌ５の間の脊柱から出ている脊髄神経根への損傷である。ある特定の実施形態において、損傷は、頸髄に対する損傷である。他の実施形態において、損傷は、胸髄に対する損傷である。他の実施形態において、脊髄損傷は、腰仙髄に対する損傷である。他のある特定の実施形態において、脊髄損傷は、円錐に対する損傷である。他のある特定の実施形態において、ＣＮＳ損傷は、馬尾内の１つ以上の神経に対する損傷である。別の実施形態において、脊髄損傷は、後頭部における損傷である。
【０１０５】
一般に、投与される抗体の投与量は、患者の年齢、体重、身長、性別、全般的な治療状態及び治療の既往歴のような因子に応じて変動する。投与量レジメンは、最適の所望の応答（例えば、治療応答又は予防応答）をもたらすように調整されうる。例えば、単一のボーラスが、投与される場合もあり、複数の分割された用量が、時間経過にわたり投与される場合もあり、治療状況の要求により指し示されるのに応じて、用量が、比例的に低減される場合もあり、増大される場合もある。とりわけ、投与の容易さ及び投与量の均一性のために、非経口組成物を、単位剤形において製剤化することが有利である。本明細書において使用された単位剤形とは、哺乳動物の被験対象のための単位投与量として適する、物理的に個別の単位を指し、各単位は、要請された医薬担体と共に、所望の治療的効果をもたらすように計算された、所定数量の活性化合物を含有する。本発明の単位剤形のための仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特徴及び達成される特定の治療的又は予防的効果並びに（ｂ）個体における感受性を処置するために、このような活性化合物を配合させる技術分野において固有の限定により指定され、これらに直接依存する。
【０１０６】
投与量値は、緩和される状態の種類及び重症度と共に変動しうることに注目されたい。任意の特定の対象について、時間経過にわたり、個別の必要及び組成物を投与する、又は組成物の投与を監督する担当者の職業的判断に従い、特定の投与量レジメンを調整すべきであり、本明細書において明示された投与量範囲は、例示的なものであるに過ぎず、特許請求された組成物の範囲又は実施を限定することを意図するものではないことをさらに理解されたい。
【０１０７】
抗体の患者への投与は、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、筋内投与、皮下投与、胸膜内投与、髄腔内投与、眼内投与、ガラス体内投与、領域内カテーテルを通した灌流による投与、又は直接的な病変内注射による投与でありうる。治療的タンパク質を、注射により投与する場合、投与は、持続的注入による場合もあり、単回又は複数回のボーラスによる場合もある。静脈内注射は、抗体が急速に分布するときの循環の完全さのために、有用な投与方式をもたらす。抗体は、例えば、不活性の希釈剤又は同化可能な可食担体と共に経口投与されうる。抗体及び他の成分は、所望の場合、ハードシェルゼラチンカプセル内又はソフトシェルゼラチンカプセル内に封入される場合もあり、錠剤、口腔用錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウェハーなどへと圧縮される場合もある。
【０１０８】
抗ＲＧＭａ抗体は、単回、又は反復的に、非経口により施される、投与１回当たりのタンパク質２０ミリグラム〜２グラムのような低タンパク質用量において投与されうる。代替的に、抗体は、投与１回当たりのタンパク質２０〜１０００ミリグラム、又は投与１回当たりのタンパク質２０〜５００ミリグラム、又は投与１回当たりのタンパク質２０〜１００ミリグラムの用量において投与されうる。
【０１０９】
抗ＲＧＭａ抗体は、脊髄損傷後の多様な時点であって、脊髄損傷後２４時間未満を含むがこれらに限定されない時点において投与されうる。ある特定の実施形態において、抗ＲＧＭａ抗体は、対象へと、脊髄損傷後、１時間未満、２時間未満、３時間未満、４時間未満、５時間未満、６時間未満、７時間未満、８時間未満、９時間未満、１０時間未満、１１時間未満、１２時間未満、１３時間未満、１４時間未満、１５時間未満、１６時間未満、１７時間未満、１８時間未満、１９時間未満、２０時間未満、２１時間未満、２２時間未満、又は２３時間未満に投与される。ある特定の実施形態において、抗ＲＧＭａ抗体は、対象へと、脊髄損傷後約１、約１．５、約２、約２．５、約３、約３．５、約４、約４．５、約５、約５．５、約６、約６．５、約７、約７．５、約８、約８．５、約９、約９．５、約１０、約１０．５、約１１、約１１．５、又は１２時間後に投与される。
【０１１０】
抗ＲＧＭａ抗体は、単独で投与される場合もあり、リポソームへとコンジュゲートさせ、抗体が、混合物中において、薬学的に許容される担体と組み合わされた、薬学的に有用な組成物を調製する公知の方法に従い製剤化される場合もある。「薬学的に許容される担体」は、レシピエントである患者により忍容されうる。滅菌リン酸緩衝生理食塩液は、薬学的に許容される担体の１つの例である。当業者に、他の適する担体が周知である。例えば、「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ」、１９版（１９９５）を参照されたい。
【０１１１】
治療を目的として、抗体は、患者へと、薬学的に許容される担体中、治療有効量において投与される。「治療有効量」とは、生理学的に重要な量である。抗体は、その存在が、レシピエントである患者の生理学の、検出可能な変化を結果としてもたらす場合に、生理学的に重要である。この文脈において、抗体は、その存在が、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞からの、インターフェロンγ（ＩＮＦ−γ）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、ＩＬ−４及び／又はＩＬ−１７の分泌の減少を結果としてもたらす場合に、生理学的に重要でありうる。薬剤は、その存在が、例えば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）内の増殖反応及び／又は炎症促進性サイトカインの発現の低減を結果としてもたらす場合に、生理学的に重要である。
【０１１２】
治療的適用における、抗体の作用の持続を制御するのに、さらなる処置法も援用される。制御放出調製物は、抗体を複合体化させる、又は抗体に吸着するポリマーの使用により調製されうる。例えば、生体適合性ポリマーは、ポリ（エチレン−ｃｏ−酢酸ビニル）のマトリックス及びステアリン酸二量体及びセバシン酸のポリ無水物コポリマーのマトリックスを含む（Ｓｈｅｒｗｏｏｄら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：１４４６（１９９２））。このようなマトリックスからの抗体の放出速度は、タンパク質の分子量、マトリックス中の抗体量、及び分散させた粒子のサイズに依存する（Ｓａｌｔｚｍａｎら、Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．、５５：１６３（１９８９）；Ｓｈｅｒｗｏｏｄら、前出）。他の固体剤形は、「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ」、１９版（１９９５）において記載されている。
【０１１３】
（１）神経学的回復
神経学的回復は、フランケル分類、運動スコア、及びＡＩＳ（ＡＳＩＡ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｐｉｎａｌ  Ｉｎｊｕｒｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  Ｓｃａｌｅ）を含むがこれらに限定されない、利用可能な尺度を使用して評価されうる。ＡＩＳとは、運動神経及び感覚神経の完全性を評価する臨床ツールである。
【０１１４】
一部の実施形態において、ＳＣＩの１つ以上の症状の改善、又はＳＣＩの１つ以上の症状の進行の軽減は、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｐｉｎａｌ  Ｃｏｒｄ  Ｉｎｊｕｒｙに従い評価される。ＡＳＩＡにより公表されているＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｐｉｎａｌ  Ｃｏｒｄ  Ｉｎｊｕｒｙは、神経機能についての、全身的な運動検査及び感覚検査に基づき、ＳＣＩのレベル及び広がりについて記載する、広く受容されたシステムである。その開示が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれる、「Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｓｐｉｎａｌ  Ｃｏｒｄ  Ｉｎｊｕｒｙ」、Ｊ  Ｓｐｉｎａｌ  Ｃｏｒｄ  Ｍｅｄ．３４（６）：５３５〜４６（２０１１）を参照されたい。
【０１１５】
（２）機能回復
機能回復は、神経学的回復と共に達成される場合もあり、これと独立に達成される場合もある。機能回復は、ＳＣＩＭ（Ｓｐｉｎａｌ  Ｃｏｒｄ  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  Ｍｅａｓｕｒｅ）、ＦＩＭ（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  Ｍｅａｓｕｒｅ）、ＷＩＳＣＩ（Ｗａｌｋｉｎｇ  Ｉｎｄｅｘ  ｆｏｒ  Ｓｐｉｎａｌ  Ｃｏｒｄ  Ｉｎｊｕｒｙ）、ＭＢＩ（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｂａｒｔｈｅｌ  Ｉｎｄｅｘ）、ＱＩＦ（Ｑｕａｄｒｉｐｌｅｇｉａ  Ｉｎｄｅｘ  ｏｆ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ）、Ｌｏｎｄｏｎ  Ｈａｎｄｉｃａｐ  ｓｃａｌｅ、及びＳｈｏｒｔ  Ｆｏｒｍ  ３６を含むがこれらに限定されない、利用可能な尺度を使用して評価されうる。例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｋ．ら、「Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｃｏｖｅｒｙ  Ｍｅａｓｕｒｅｓ  ｆｏｒ  Ｓｐｉｎａｌ  Ｃｏｒｄ  Ｉｎｊｕｒｙ：Ａｎ  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ−Ｂａｓｅｄ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ」、Ｊ．Ｓｐｉｎａｌ  Ｃｏｒｄ  Ｍｅｄ．、３１、１３３〜１４４（２００８）を参照されたい。他の実施形態において、機能回復は、オープンフィールドＢＢＢ（Ｂａｓｓｏ、Ｂｅａｔｔｉｅ  ａｎｄ  Ｂｒｅｓｎａｈａｎ）運動試験、歩行解析、ラダーウォーク解析、及び／又は組合せ行動学的スコア（ＣＢＳ）を形成する試験を使用して評価されうる。
【０１１６】
ｂ．疼痛
任意の対象において、対象が、侵害性疼痛、神経障害性疼痛又はこれらの組合せを含む、任意の種類の、急性又は慢性の、疼痛状態又は疼痛障害を有する、又はこれらを経る危険性があるのかどうかについて評価を行うことができる。このような疼痛状態又は疼痛障害は、術後疼痛、骨関節炎疼痛、炎症に起因する疼痛、関節リウマチ疼痛、筋骨格系疼痛、火傷性疼痛（日焼けを含む）、眼痛、歯科状態と関連する疼痛（虫歯及び歯肉炎のような）、産後疼痛、骨折、ヘルペス、ＨＩＶ、外傷性神経損傷、脳卒中、虚血症後疼痛、線維筋痛症、反射性交感神経性ジストロフィー、複合性局所疼痛症候群、脊髄損傷、座骨神経痛、幻肢疼痛、糖尿病性神経障害、痛覚過敏及びがんを含みうるがこれらに限定されない。評価は、防止的治療、維持的治療、又はモジュレーティング治療のような、適切な治療コースを指し示しうる。したがって、本明細書では、治療有効量の、本明細書において記載された抗体（例えば、抗体であるＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、又はＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬのような）のうちの１つ以上を投与することにより、脊髄損傷を処置、防止、モジュレート、又は緩和する方法が提示される。抗体は、それを必要とする対象へと投与されうる。抗体は、治療有効量において投与されうる。
【０１１７】
一般に、投与される抗体の投与量は、患者の年齢、体重、身長、性別、全般的な治療状態及び治療の既往歴のような因子に応じて変動する。投与量レジメンは、最適の所望の応答（例えば、治療応答又は予防応答）をもたらすように調整されうる。例えば、単一のボーラスが、投与される場合もあり、複数の分割された用量が、時間経過にわたり投与される場合もあり、治療状況の要求により指し示されるのに応じて、用量が、比例的に低減される場合もあり、増大される場合もある。とりわけ、投与の容易さ及び投与量の均一性のために、非経口組成物を、単位剤形において製剤化することが有利である。本明細書において使用された単位剤形とは、哺乳動物の被験対象のための単位投与量として適する、物理的に個別の単位を指し、各単位は、要請された医薬担体と共に、所望の治療的効果をもたらすように計算された、所定数量の活性化合物を含有する。本発明の単位剤形のための仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特徴及び達成される特定の治療的又は予防的効果並びに（ｂ）個体における感受性を処置するために、このような活性化合物を配合させる技術分野において固有の限定により指定され、これらに直接依存する。
【０１１８】
投与量値は、緩和される状態の種類及び重症度と共に変動しうることに注目されたい。任意の特定の対象について、時間経過にわたり、個別の必要及び組成物を投与する、又は組成物の投与を監督する担当者の職業的判断に従い、特定の投与量レジメンを調整すべきであり、本明細書において明示された投与量範囲は、例示的なものであるに過ぎず、特許請求された組成物の範囲又は実施を限定することを意図するものではないことをさらに理解されたい。
【０１１９】
抗体の患者への投与は、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、筋内投与、皮下投与、胸膜内投与、髄腔内投与、眼内投与、ガラス体内投与、領域内カテーテルを通した灌流による投与、又は直接的な病変内注射による投与でありうる。治療的タンパク質を、注射により投与する場合、投与は、持続的注入による場合もあり、単回又は複数回のボーラスによる場合もある。静脈内注射は、抗体が急速に分布するときの循環の完全さのために、有用な投与方式をもたらす。抗体は、例えば、不活性の希釈剤又は同化可能な可食担体と共に経口投与されうる。抗体及び他の成分は、所望の場合、ハードシェルゼラチンカプセル内又はソフトシェルゼラチンカプセル内に封入される場合もあり、錠剤、口腔用錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウェハーなどへと圧縮される場合もある。
【０１２０】
抗ＲＧＭａ抗体は、単回、又は反復的に、非経口により施される、投与１回当たりのタンパク質２０ミリグラム〜２グラムのような低タンパク質用量において投与されうる。代替的に、抗体は、投与１回当たりのタンパク質２０〜１０００ミリグラム、又は投与１回当たりのタンパク質２０〜５００ミリグラム、又は投与１回当たりのタンパク質２０〜１００ミリグラムの用量において投与されうる。
【０１２１】
抗ＲＧＭａ抗体は、神経障害性疼痛を発症する危険性が存在する、脊髄損傷後の多様な時点であって、脊髄損傷後２４時間未満を含むがこれらに限定されない時点において投与されうる。ある特定の実施形態において、抗ＲＧＭａ抗体は、対象へと、脊髄損傷後１時間未満、２時間未満、３時間未満、４時間未満、５時間未満、６時間未満、７時間未満、８時間未満、９時間未満、１０時間未満、１１時間未満、１２時間未満、１３時間未満、１４時間未満、１５時間未満、１６時間未満、１７時間未満、１８時間未満、１９時間未満、２０時間未満、２１時間未満、２２時間未満、又は２３時間未満に投与される。ある特定の実施形態において、抗ＲＧＭａ抗体は、対象へと、脊髄損傷後約１、約１．５、約２、約２．５、約３、約３．５、約４、約４．５、約５、約５．５、約６、約６．５、約７、約７．５、約８、約８．５、約９、約９．５、約１０、約１０．５、約１１、約１１．５、又は１２時間後に投与される。
【０１２２】
抗体は、単独で投与される場合もあり、リポソームへとコンジュゲートさせ、抗体が、混合物中において、薬学的に許容される担体と組み合わされた、薬学的に有用な組成物を調製する公知の方法に従い製剤化される場合もある。「薬学的に許容される担体」は、レシピエントである患者により忍容されうる。滅菌リン酸緩衝生理食塩液は、薬学的に許容される担体の１つの例である。当業者に、他の適する担体が周知である。例えば、「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ」、１９版（１９９５）を参照されたい。
【０１２３】
治療を目的として、抗体は、患者へと、薬学的に許容される担体中、治療有効量において投与される。「治療有効量」とは、生理学的に重要な量である。抗体は、その存在が、レシピエントである患者の生理学の、検出可能な変化を結果としてもたらす場合に、生理学的に重要である。この文脈において、抗体は、その存在が、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞からの、インターフェロンγ（ＩＮＦ−γ）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、ＩＬ−４及び／又はＩＬ−１７の分泌の減少を結果としてもたらす場合に、生理学的に重要でありうる。薬剤は、その存在が、例えば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）内の増殖反応及び／又は炎症促進性サイトカインの発現の低減を結果としてもたらす場合に、生理学的に重要である。
【０１２４】
治療的適用における、抗体の作用の持続を制御するのに、さらなる処置法も援用される。制御放出調製物は、抗体を複合体化させる、又は抗体に吸着するポリマーの使用により調製されうる。例えば、生体適合性ポリマーは、ポリ（エチレン−ｃｏ−酢酸ビニル）のマトリックス及びステアリン酸二量体及びセバシン酸のポリ無水物コポリマーのマトリックスを含む（Ｓｈｅｒｗｏｏｄら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：１４４６（１９９２））。このようなマトリックスからの抗体の放出速度は、タンパク質の分子量、マトリックス中の抗体量、及び分散させた粒子のサイズに依存する（Ｓａｌｔｚｍａｎら、Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．、５５：１６３（１９８９）；Ｓｈｅｒｗｏｏｄら、前出）。他の固体剤形は、「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ」、１９版（１９９５）において記載されている。
【０１２５】
（１）神経障害性疼痛
本明細書において使用された「神経障害性疼痛」という用語は、神経、脊髄、又は脳への損傷から生じ、神経過敏を伴うことが多い疼痛を指す。神経障害性疼痛の例は、慢性腰痛、関節炎と関連する疼痛、がん関連疼痛、帯状疱疹性神経痛、幻肢疼痛、中枢性疼痛、オピオイド抵抗性神経障害性疼痛、骨損傷疼痛、及び分娩時の疼痛を含む。他の
神経障害性疼痛の例は、術後疼痛（ｐｏｓｔ−ｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｐａｉｎ）、群発頭痛、歯痛、術後疼痛（ｓｕｒｇｉｃａｌ  ｐａｉｎ）、重度の火傷、例えば、ＩＩＩ度の火傷から生じる疼痛、産後疼痛、狭心症性疼痛、膀胱炎を含む、尿生殖路関連疼痛を含む。
【０１２６】
神経障害性疼痛は、侵害性疼痛から識別されうる。侵害性機構を伴う疼痛は通例、持続期間が、組織修復期間に限定され、一般に、利用可能な鎮痛剤又はオピオイドにより緩和される（Ｍｙｅｒｓ（１９９５）、Ｒｅｇｉｏｎａｌ  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ、２０：１７３）。神経障害性疼痛は、典型的に、長期持続性又は慢性であり、初期の急性組織損傷の数日後又は数ヶ月後に発症することが多い。神経障害性疼痛は、遷延性で自発性の疼痛のほか、刺激に対しては有痛であり、通常は無痛である異痛を伴いうる。神経障害性疼痛はまた、ピン刺激のような、通例、些少な有痛刺激に対して、応答が強められる痛覚過敏も特徴としうる。侵害性疼痛と異なり、神経障害性疼痛は一般に、オピオイド療法に対して抵抗性である（Ｍｙｅｒｓ、前出、１９９５）。したがって、本明細書で開示された抗体は、神経障害性疼痛を処置するのに使用されうる。
【０１２７】
本明細書において使用された「侵害性疼痛」という用語は、無傷のニューロン経路を介して伝達された疼痛、すなわち、身体への損傷により引き起こされた疼痛を指す。侵害性疼痛は、体性感覚及び正常な疼痛機能を含み、対象に、組織損傷の切迫を知らせる。侵害性経路は、対象を保護するために存在する（例えば、火傷に応答して経験された疼痛）。侵害性疼痛は、骨痛、内臓痛、及び軟部組織と関連する疼痛を含む。
【実施例】
【０１２８】
５．実施例
本発明は、以下の非限定的な例により例示された、複数の態様を有する。
実施例１のための一般的方法
研究デザインの概要を、図４Ａに描示する。成体雌ウイスターラットに、プレトレーニングし、次いで、公表されているプロトコールに従い、改変動脈瘤クリップにより、Ｔ８において、２０ｇの力により、１分間にわたり、クリップによる衝撃−圧迫性ＳＣＩをもたらした。略述すると、クリップの下側ブレードを、硬膜外で腹側近傍の脊髄に通し、クリップアプリケーターにより、クリップを開放に保持した。次いで、クリップを、アプリケーターから放離して、双方向的な衝撃力をもたらすのに続き、持続的な背側−腹側圧迫をもたらした。これは、ヒト病態を反映する、臨床的に関与性のＳＣＩモデルである。急性衝撃に続く、遷延性圧迫の組合せは、ヒトにおける最も一般的なＳＣＩ機構であり、急性クリップ圧迫モデルは、この衝撃−圧迫損傷を刺激しうる。
【０１２９】
クリップによる衝撃−圧迫の直後に、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、ｈＩｇＧアイソタイプ対照、又はＰＢＳ媒体の局所脊髄内注射及び全身静脈内注射（２０ｍｇ／ｋｇ）を、ＳＣＩの６週間後まで、毎週１回施した。
【０１３０】
［実施例１．１］
ＳＣＩの後の、ラット脊髄及びヒト脊髄における、ＲＧＭａの発現
方法：ラット組織切片を、免疫組織化学染色のために調製し、一次抗体により、４℃において、一晩にわたりインキュベートした。以下の一次抗体：ニューロンに対するＮｅｕＮ（１：５００、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ）、星状膠細胞に対するＧＦＡＰ（１：２００、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、Ｉｂａ−１（１：１０００、活性化マクロファージ／小膠細胞に対する；和光純薬株式会社）、コンドロイチン硫酸プロテオグリカンに対するＣＳ５６（１：５００、Ｓｉｇｍａ）、感覚線維に対するカルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）（１：１０００、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、セロトニン作動性線維に対する５ＨＴ（１：３０００、ＩｍｍｕｎｏＳｔａｒ）、及びヒトＩｇＧ抗体を検出するｈＩｇＧ（１：５００、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用した。切片を、ブロッキング溶液中において希釈された一次抗体と共に、一晩にわたりインキュベートし、洗浄し、蛍光コンジュゲート二次抗体と共にインキュベートした。
【０１３１】
ヒト組織切片を、染色のために調製し、ブロッキング溶液中において希釈された一次抗体（１：２００のＲＧＭａ、Ａｂｃａｍ；又は１：１００のネオゲニン、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）と共に、一晩にわたりインキュベートした。切片を洗浄し、ビオチニル化抗マウス二次抗体（１：５００、Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）と共にインキュベートし、洗浄し、アビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ複合体と共にインキュベートした。ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）（Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ  Ｅｌｉｔｅ  ＡＢＣ  Ｋｉｔ  Ｓｔａｎｄａｒｄ、Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、色原体として適用した。
【０１３２】
結果：ＲＧＭａは、ラット脊髄のクリップによる衝撃−圧迫損傷の後で上方調節された（図１、図１０）。二重標識免疫染色により示された通り、ＲＧＭａは、正常ラット脊髄内のニューロン（ＲＧＭａ＋／ＮｅｕＮ＋）及び希突起膠細胞（ＲＧＭａ＋／ＣＣ１＋）により主として発現した（図１Ａ及び１Ｂ）。損傷の１週間後における定量化は、ＲＧＭａの発現の１５倍の増大を示した（図１０Ａ）。ＳＣＩの後、ＲＧＭａは、ニューロン（図１Ａ）、希突起膠細胞（図１Ｂ、図１０Ｃ）、ＧＦＡＰ標識化により示された通り、星状膠細胞（図１Ｃ）、Ｉｂａ−１（図１Ｃ）及びＥＤ−１（図１０Ｂ）より示された通り、活性化小膠細胞及び活性化マクロファージ、並びに病変部位内及び病変部位の周囲の、ＣＳＰＧに富む瘢痕領域内（図１Ｃ）において発現した。
【０１３３】
非損傷ヒト脊髄において、ＲＧＭａは、灰白質中間帯内のニューロン（図２Ａ及び２Ｂ）及び脊柱内の希突起膠細胞（図２Ｃ）の免疫染色により示された通り、ニューロン内、低レベルにおいて発現した。ＳＣＩ３日後の損傷ヒト脊髄において、ＲＧＭａの発現は、ニューロン、軸索、希突起膠細胞、及びミエリンに富む白質領域において上方調節された（図２Ｄ〜２Ｆ）。さらに、ＲＧＭａ受容体ネオゲニンは、ラット脊髄（データは示さない）及びヒト脊髄のいずれにおいても、ニューロンを介して発現し、また、損傷の後に上方調節もされた（図１１）。
【０１３４】
［実施例１．２］
インビトロにおける、抗ＲＧＭａ抗体の、神経突起の伸長に対する効果
方法：神経突起の伸長アッセイのために、Ｅ１８マウス皮質ニューロンを、ポリ−Ｌ−リシンによりコーティングされたカバーガラススリップ上に播種し、ラミニン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；１０ｍｇ／ｍｌ）及びＲＧＭａタンパク質（５ｍｇ／ｍｌ）により処理し、対照抗体（ｈＩｇＧ）又は抗ＲＧＭａ（１ｍｇ／ｍｌ）と共に、３７℃において、２４時間にわたりインキュベートした。神経突起の伸長解析のために、皮質細胞を、βＩＩＩ−チューブリン（Ｓｉｇｍａ；１：５００）により免疫染色した。ウェスタンブロットのために、マウス皮質ニューロンを、ＲＩＰＡ緩衝液中に溶解させ、１０％アクリルアミドゲル上にロードしてから、ニトロセルロース膜へと移した。ブロットを、抗ＲＧＭａ抗体（ＡＥ１２−１及びＡＥ１２−１−Ｙ）及び抗ネオゲニン（Ｅ２０；Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ；１０ｍｇ／ｍｌ）によりプロービングした。
【０１３５】
結果：マウス皮質ニューロン溶解物についてのウェスタンブロットにおいて、ＡＥ１２−１及びＡＥ１２−１−Ｙのいずれも、５０ｋＤａのバンドを特異的に検出した（図３Ａ）。ＡＥ１２−１−Ｙによる免疫染色が示した通り、培養マウス初代皮質ニューロンもまた、ＲＧＭａを発現させることを示した（図３Ｂ、ＡＥ１２−１による免疫染色は示さない）。抗ＲＧＭａ抗体は、インビトロにおいて、神経突起の伸長を促進する。ラミニン上及び阻害性ＲＧＭａ上に播種された培養胚性マウス皮質ニューロンが、ｈＩｇＧと共にインキュベートした場合、神経突起の最小限の伸長を示したのに対し、ＡＥ１２−１  ＲＧＭａ抗体及びＡＥ１２−１−Ｙ  ＲＧＭａ抗体を伴うインキュベーションは、ラミニン単独上に播種された細胞と比較して、より大幅の神経突起の伸長を結果としてもたらした。ウェスタンブロットにおいて、ネオゲニン受容体は、２００ｋＤａのバンドとして検出され、ネオゲニンもまた、培養マウス皮質ニューロンを介して発現した（図１２）。
【０１３６】
［実施例１．３］
血清、ＣＳＦ、及び脊髄における抗ＲＧＭａ抗体の検出
方法：ＳＣＩの６週間後、腰椎穿刺（ＬＰ）を介して、脳脊髄液（ＣＳＦ）を採取した。ＳＣＩの９週間後、最終回の抗体投与の３週間後に、血清を回収し、ラットを灌流した。ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、抗体の、ＡＥ１２−１、ＡＥ１２−１−Ｙ、及びｈＩｇＧにより処置されたラットに由来するＣＳＦ試料中濃度及び血清試料中濃度を決定した。
【０１３７】
結果：抗体の、ＡＥ１２−１を注射されたラットのＣＳＦ中濃度は、０．２５〜８．２０μｇ／ｍｌの範囲であり、ＡＥ１２−１−Ｙについて、抗体濃度の範囲は、０．３３〜６．７７μｇ／ｍｌであった（図４Ｂ）。抗体を、ＳＣＩの直後における、初回の脊髄内注射の後、静脈内注射したので、比較すると、抗体の血清中濃度は、大幅に大きく、ＣＳＦ中濃度の約１０倍であった（図４Ｃ）。さらに、最終回投与の３週間後、抗体の血清中濃度は、高濃度を維持した。ヒト抗体は、抗ヒトＩｇＧを伴う、ラット脊髄組織の免疫染色により、損傷ラット脊髄内において検出された。ヒトＩｇＧの免疫反応性は、ＡＥ１２−１（又はＡＥ１２−１−Ｙ、図に示さない）又はｈＩｇＧ対照抗体を注射されたラットに由来する組織において検出されたが、ＰＢＳ媒体対照の場合は検出されなかった（図４Ｄ）。ヒトＩｇＧの染色は、血管の近傍及び病変部位の近傍のＣＳＰＧ陽性瘢痕組織内において明らかであった（図４Ｄ）。ＡＥ１２−１又はＡＥ１２−１−Ｙ又はｈＩｇＧを注射された組織内の染色に、差異は見られなかった。
【０１３８】
［実施例１．４］
抗ＲＧＭａ抗体は、機能回復を促進する。
方法：プレトレーニングのために、損傷の前に機能試験を実施して、ベースラインの評価スコアを得、ＳＣＩの１日後に再度実施し、次いで、６週間にわたり、毎週実施した。ＢＢＢ運動評価スケール、運動サブスコア、及び水平方向ラダーウォーク試験を使用して、神経学的回復を、毎週モニタリングした。
【０１３９】
０（後肢の動きなし）〜２１（正常運動）の範囲にわたる、ＢＢＢ（Ｂａｓｓｏ、Ｂｅａｔｔｉｅ  ａｎｄ  Ｂｒｅｓｎａｈａｎ）運動評価スケールを使用して、運動機能を査定した。運動サブスコアを使用して、トウクリアランス、主要な足の位置、及び不安定性の非存在のような、さらなる尺度を評価した。
【０１４０】
ラダーウォーク解析を使用して、微細な運動機能を評価した。ＳＣＩ後において毎週、ＢＢＢスコアが＞１１であるラットを、水平方向ラダーウォーク装置に取り付け、３回の試行を記録した。記録を、スローモーションにおいて解析し、後肢１本当たりのフットフォールの総数を、各試行についてスコア付けし、平均した。後肢を引きずる損傷ラットは、フットフォールが最大であるとスコア付けされ、これは、後肢１本当たりのフットフォール６であった。非損傷ラットは、横断１回当たりのフットフォール０又は、場合によって、フットフォール１であった。
【０１４１】
運動機能をさらに解明するために、ＣａｔＷａｌｋシステム（Ｎｏｌｄｕｓ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｗａｇｅｎｉｎｇｅｎ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、歩行解析を実施した。ベースラインの計算による歩行評価は、ＳＣＩ操作の前に得、ＳＣＩの６週間後における評価と比較した。ＣａｔＷａｌｋ解析システムについて、他の箇所において詳細に記載されている。Ｈａｍｅｒｓ  ＦＰ、Ｌａｎｋｈｏｒｓｔ  ＡＪ、ｖａｎ  Ｌａａｒ  ＴＪ、Ｖｅｌｄｈｕｉｓ  ＷＢ、及びＧｉｓｐｅｎ  ＷＨ、「Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｇａｉｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｏｖｅｒｇｒｏｕｎｄ  ｌｏｃｏｍｏｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ：ｉｔｓ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ  ｃｏｎｔｕｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓｅｃｔｉｏｎ  ｉｎｊｕｒｉｅｓ」、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ、２００１；１８（２）：１８７〜２０１を参照されたい。
【０１４２】
結果：ＡＥ１２−１による急性処置は、ＳＣＩの１週間後という早期におけるＢＢＢの、ＰＢＳ又はｈＩｇＧ対照と比較して有意な回復を示し、これは、試験期間中、維持された（図５Ａ）。これに対し、ＡＥ１２−１−Ｙは、ＳＣＩの６週間後における、ＢＢＢにおける改善の、対照と比べて（ＰＢＳの９．９と対比した１２．６）、統計学的有意差を伴う遅延を示した（図５Ａ）。ＡＥ１２−１及びＡＥ１２−１−Ｙの回復プロファイルの差異は、ＡＥ１２−１の長い半減期に起因しうる。また、ＡＥ１２−１及びＡＥ１２−１−Ｙのいずれも、対照と比較して、高運動サブスコアへの傾向を示した（図５Ｂ）。
【０１４３】
ラダーウォーク試験において、フットフォールエラーをスコア付けすると、高スコアは、協調運動の不良を反映する。ラダーウォーク試験は、ＡＥ１２−１又はＡＥ１２−１−Ｙにより処置されたラットにおけるフットフォールエラーの低減への傾向を示し、ＳＣＩの３週間後における、ＡＥ１２−１についての統計学的有意差を伴い（ｐ＜０．０５）、４、５、及び６週目においても、有意性に近づいた（ｐ＝０．０６７、ｐ＝０．０８９、ｐ＝０．０７）（図５Ｃ）。ＳＣＩの６週間後、ＡＥ１２−１及びＡＥ１２−１−Ｙにより処置されたラットのいずれも、対照（ｈＩｇＧ：４１％、ＰＢＳ：２９％）と比較して、後肢による歩進の高成功百分率（６８．４％及び６４．２％）を示した（図５Ｄ）。
【０１４４】
神経行動学的機能におけるＲＧＭａの中和効果をさらに特徴付けるために、ＳＣＩ及び処置の６週間後において、ＣａｔＷａｌｋシステムを使用して、歩行解析を実施した（図６）。ＡＥ１２−１及びＡＥ１２−１−Ｙにより処置されたラットのいずれも、規則性指数の、対照群と比べて有意な改善を示し、良好な脚間協調運動を反映した（ＡＥ１２−１：８９．３％；ＡＥ１２−１−Ｙ：８８．３％；ｈＩｇＧ：６５．８％；ＰＢＳ：６３．４％）（図６）。ＡＥ１２−１及びＡＥ１２−１−Ｙにより処置されたラットはまた、後肢の歩幅長及び振出し速度の改善であって、ＳＣＩ前の値に近づく改善への傾向も示したが、これは、統計学的有意性には近づかなかった。興味深いことに、後足がガラス製の歩行路と接触する平均値強度は、ＡＥ１２−１により処置されたラットにおいて、対照と比較して有意に増大した（図６）。加えて、ＡＥ１２−１又はＡＥ１２−１−Ｙによる処置は、ラットの体重を変更しなかった（図１３）。
【０１４５】
［実施例１．５］
抗ＲＧＭａ抗体は、ニューロンの生存を促進する。
方法：ＳＣＩの９週間後（すなわち、ＡＥ１２−１又はＡＥ１２−１−Ｙによる処置の６週間後）、病変周囲ニューロンを、ニューロンマーカーであるＮｅｕＮにより定量化した。
【０１４６】
２つ群のラットを損傷させ、ＡＥ１２−１又はＰＢＳを注射する（全く上記において記載した通りに、脊髄内注射及び静脈内注射の両方）、別個の実験を実施した。これらのラットは、ＳＣＩ／注射の７時間後に屠殺した。ＮｅｕＮ染色及びＴＵＮＥＬ染色による二重標識化を実施した。
【０１４７】
結果：６週間にわたる、ＲＧＭａ抗体による処置は、病変周囲ニューロンの数を、対照と比較して、約１．５倍に増大させた（図７Ａ及び７Ｂ）。
【０１４８】
ニューロンの温存が、損傷の後にアポトーシスを経るニューロンが少数であることに起因するのかどうかを決定するために、ニューロンの細胞死を、ＳＣＩ／注射後７時間の時点において評価した。ＡＥ１２−１により処置されたラットにおいて、対照と比べて有意に少数のＮｅｕＮ／ＴＵＮＥＬ陽性ニューロン（２倍の差異）が見られた（図７Ｃ及び７Ｄ）。空洞症の百分率又は空洞の容積において、群間の有意差は見られなかった（図１４Ａ及び１４Ｂ）。
【０１４９】
［実施例１．６］
ＲＧＭａ抗体は、アストログリオーシスを軽減し、ＣＳＰＧの発現を低減する。
方法：病変部位に対して、吻側及び尾側の領域内のＧＦＡＰ陽性面積％を定量化した。ＧＦＡＰ免疫反応性を定量化するために、最大面積の空洞症を含有する、各脊髄内３つずつの、一連の切片系列（１６０μｍ間隔）を、定量化のために使用した。ＣＳＰＧの免疫反応性も、同様に定量化した。
【０１５０】
結果：ＡＥ１２−１−Ｙにより処置されたラットにおいて、病変の吻側におけるアストログリオーシスの有意な軽減が観察された（図１５Ａ及び１５Ｂ）。ＡＥ１２−１及びＡＥ１２−１−Ｙにより処置されたラットの病変部位の近傍において、ＣＳＰＧ発現の低減への傾向が見られた（図１５Ｃ）。
【０１５１】
［実施例１．７］
抗ＲＧＭａ抗体は、軸索再生を促進する。
方法：皮質脊髄路（ＣＳＴ）に由来する軸索を視覚化するため、ビオチニル化デキストランアミン（ＢＤＡ）による順行性軸索トレーシングを、ＳＣＩの６週間後の、機能的評価の完了後に実施した。ＢＤＡを、感覚運動皮質（ＳＭＣ）へと注射して、ＣＳＴを順行的に標識化した。脊髄の背側面及び腹側面の両方を同時に圧迫する衝撃−圧迫損傷についてのＳＣＩモデルは、灰白質及び隣接する白質の中心性空洞症を結果としてもたらし、背側ＣＳＴ内の全てのＣＳＴ軸索を重症化させ、軟膜下白質の縁辺部だけを温存して残す。各脊髄の吻側セグメント内の背側ＣＳＴのＢＤＡ染色の強度を定量化し、比を使用して、ＢＤＡ標識化線維のカウントを標準化し、ＢＤＡ標識化の、効率動物間のばらつきを補正した。尾側セグメントを、任意のＢＤＡ標識化線維の存在について検討した。
【０１５２】
別個の実験において、上記において記載した通りに、ラットを損傷させ、ＡＥ１２−１−Ｙを注射し、次いで、ＳＣＩの４週間後又は６週間後に、ＢＤＡを注射した。注射の３週間後、上記において記載した通りに、ラットを屠殺し、ＢＤＡ標識化軸索の数及びそれらの長さを定量化した。
【０１５３】
結果：ＡＥ１２−１又はＡＥ１２−１−Ｙによる処置は、病変部位に対して尾側において、ＢＤＡ標識化ＣＳＴ線維を示した（図８Ａ）。これらの線維は、病変の吻側又は非損傷ラットにおいて、ＢＤＡ標識化ＣＳＴ線維と異なり、高度に不規則な形状を示し、これらは、典型的に長く、直線状であった（図１６）。ＡＥ１２−１又はＡＥ１２−１−Ｙを注射されたラットにおいて、ＢＤＡ標識化ＣＳＴ線維の数及び平均最大長のいずれも増大した（図８Ｃ及び８Ｄ）。これに対し、対照ラットの病変部位に対して尾側において、ＢＤＡ線維は、観察されなかった。６週間後において、４週間後と比較して、より多くのＢＤＡ標識化再生ＣＳＴ線維が見られ、ＢＤＡ標識化線維は、６週間後において、有意に長かった（図８Ｅ及び８Ｆ）ことから、ＡＥ１２−１又はＡＥ１２−１−Ｙによる処置後における、ＣＳＴ軸索の再生が指し示される。下降性のセロトニン作動性経路の解析の、ＡＥ１２−１により処置されたラットの、病変部位に対して尾側において、対照と比べて有意に多数の５ＨＴ＋セロトニン作動性線維が観察された（図１７）。ＡＥ１２−１−Ｙを注射されたラットは、５ＨＴ標識化軸索数の増大への傾向を示したが、大きな標準誤差に反映されている通り、ＡＥ１２−１−Ｙ群において、５ＨＴ線維カウント数の有意なばらつきが見られた（図１７）。
【０１５４】
［実施例１．８］
抗ＲＧＭａ抗体は、神経障害性疼痛を緩和する。
方法：神経障害性疼痛について調べるために、機械的異痛を、ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ式フィラメントにより評価し、テールフリック試験を、温熱性痛覚過敏のために使用した。全ての試験は、処置に対して盲検とされた、２名の独立の試験者により実施した。
【０１５５】
ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ式フィラメント（Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ）を使用して、ＳＣＩの２及び６週間後において、機械的異痛を評価した。フィラメントを使用して、通常非侵害性である機械的刺激に対する皮膚感受性を評価し、Ｔａｋａｈａｓｈｉ（２００３）により記載されている通り、皮節へと適用して、機械的異痛を、ＳＣＩのレベルにおいて決定した。各時点において、２ｇ及び４ｇのフィラメントを使用した。
【０１５６】
テールフリック試験により、侵害性皮膚加熱に応答した、尾の引込みまでの待ち時間を記録することにより、温熱性の痛覚過敏を査定した。自動式鎮痛効果測定装置（ＩＩＴＣ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗｏｏｄｌａｎｄ  Ｈｉｌｌｓ、ＣＡ）を使用して、光のビームを、尾の先端から４ｃｍの背側表面へと適用した。
【０１５７】
結果：興味深いことに、ＡＥ１２−１又はＡＥ１２−１−Ｙによる処置は、機械的異痛及び温熱性痛覚過敏のレベルを軽減した。ＳＣＩの６週間後、ＡＥ１２−１を投与されたラットは、４ｇのｖｏｎＦｒｅｙ式刺激に対して、対照と比較して、有意に少数の有害反応を示した（図９Ａ及び９Ｂ）。ＡＥ１２−１又はＡＥ１２−１−Ｙにより処置されたラットは、熱刺激に対する尾の引込みまでの待ち時間の、対照と比較した低減を示した（図９Ｃ）。病変部位に対して吻側又は尾側において、Ｉｂａ−１＋染色に百分率面積の有意差は見出されなかった（図１８）。図１８Ａにおいて示される通り、定量化は、全てのＩｂａ−１免疫染色細胞である、活性化小膠細胞及び活性化マクロファージを含んだので、この定量化は、両方の細胞型を反映した。しかし、Ｉｂａ−１＋マクロファージは、病変部位に対して吻側又は尾側において、形状的に容易に識別しうるので、病変に対して尾側における活性化小膠細胞を、特異的に定量化することができた。この解析において、Ｉｂａ−１＋小膠細胞だけをカウントした（図９Ｄ）。統計学的に有意ではないが、ＡＥ１２−１又はＡＥ１２−１−Ｙ処置されたラットのＴ１０の後角において、対照と比べて少数のＩｂａ−１＋小膠細胞が見られた。逆に、損傷対照の後角において、正常脊髄と比較して、有意に多くのＩｂａ−１＋細胞がカウントされた（図９Ｅ）。脊髄のＣ４の後角におけるＩｂａ−１＋小膠細胞について、群間の有意差は見られなかった（図９Ｆ）、Ｔ１０の病変に対して尾側において見られた差異が強調される（図９Ｅ）。さらに、対照ラットは、後角において、ＡＥ１２−１又はＡＥ１２−１−Ｙ処置されたラットと比較して、有意に多くのＣＧＲＰ＋免疫反応性線維を示した（図９Ｇ）ことから、ＲＧＭａ中和の、損傷レベルに対して尾側の後角に入る、疼痛求心性神経の可塑性に対する、肯定的な効果が示唆される。
【０１５８】
［実施例２］
成体の雄アフリカグリーンモンキーを、３つの処置群（群１つ当たりのｎ＝８）へと無作為化した。各動物に、血管アクセスポート（ＶＡＰ）及びマイクロ注入ポンプ（Ａｚｌｅｔ）を植え込んだ。ＶＡＰ／ポンプの植込み後、上記において一般に記載した通り、動物を、Ｔ９／１０における、７６０ｇの力により、５又は３０分間にわたる、クリップによる半圧迫性ＳＣＩ下に置いた。
【０１５９】
静脈内群の動物を、クリップによる衝撃−圧迫の７５分間後から、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ（２５ｍｇ／ｋｇ）により処置した。ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬによる処置を、２週間ごと１回ずつ、ＳＣＩ後２４週間にわたり継続した。加えて、静脈内群の動物に、持続的髄腔内注入により、対照ＩｇＧ抗体も施した。
【０１６０】
髄腔内群の動物のために、ＳＣＩの４時間後における、植込み時の、初期の溶出時と共に、マイクロ注入ポンプを活性化させた。ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ（１５０μｇ／ｋｇ／日）は、４カ月間にわたり、持続的に注入した。加えて、髄腔内群の動物に、上記において記載した通り、静脈内において、対照ＩｇＧ抗体も施した。
【０１６１】
対照群の動物に、対照ＩｇＧ抗体を、静脈内において施したほか、持続的髄腔内注入によっても施した。
【０１６２】
機能的な評価は、手術の前並びにＳＣＩの１、２、４、８、１２、１６、２０、及び２４週間後に実施した。神経運動スコアは、既に記載した通りに得た。略述すると、評価スケールは、表４において示される通り、０〜２０の範囲にわたる。
【０１６３】
【表４】
2019517480.tif 000009
2019517480.tif 000010
【０１６４】
神経運動スコアは、スコア付けされる各挙動を例示するビデオテープを使用して得た。スコアラーも、３カ月間ごとに、対照ビデオにより検定して、一貫性を確認した。
【０１６５】
Ｅｍａｘは、サルに到達することが可能な、最大神経運動スコアとして規定される。ＥＴ５０とは、サルが、Ｅｍａｘ（すなわち、最大レベルの回復）の半分に到達する時間として規定される。データは、下記の表５及び表６に提示する。対照群に由来する６匹の動物及び各処置群に由来する７匹の動物を、解析に組み入れた。
【０１６６】
【表５】
2019517480.tif 000011
【０１６７】
【表６】
2019517480.tif 000012
【０１６８】
観察された神経運動スコアは、各個別の動物について、図１９Ａ及び１９Ｂに、グラフにより表す。推定中央値曲線を作成した。
【０１６９】
この、非ヒト霊長動物における、ＳＣＩについての、重度の胸部半圧迫モデルにおいて、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬによる慢性静脈内処置は、盲検による神経運動スコア付け解析に基づき、６カ月間にわたる、有益な回復効果を裏付けた。ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬによる静脈内処置に伴う、これらの明確に規定された改善は、ラットＳＣＩモデルにおいて見られた改善と同等な大きさであった。
【０１７０】
ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬの持続的髄腔内注入も、神経運動スコアにおける、対照と比較した数値的改善を示したが、差異は小さく、統計学的に有意ではなかった。ＣＳＦ中及び血清中の、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬへの、２４時間＋と予測された曝露を裏付けた、非損傷非ヒト霊長動物における髄腔内パイロット研究と異なり、ＳＣＩを経た動物は、ＳＣＩの２４時間後において、血清中又はＣＳＦ中の薬物曝露を、事実上有さなかったが、これは、ＳＣＩ後における、重度の脊髄浮腫及びＣＳＦ流の閉塞に帰せられる可能性が高い。
【０１７１】
脊髄についてのＭＲＩ解析はさらに、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬによる静脈内処置の有効性を裏書きする。Ｔ２における損傷閾値（Ｔ２ｉｎｊｕｒｙ）は、Ｔ２について重み付けされた画像強度であって、損傷分布の確率密度が、正常白質分布の確率密度より大きくなる画像強度として規定された。ヒストグラムベースの自動式セグメンテーション法を使用して、Ｔ２について重み付けされた胸部ＭＲスキャンの各スライス内の損傷白質を規定した。正常（病変外）白質及び病変白質の領域を、代表的な、Ｔ２について重み付けされた走査の１０のスライス内において規定した。ボクセル強度についてのヒストグラムを、各組織について構築し、ガウス関数により当てはめた。２４週齢のＳＣＩ胸髄損傷の病変白質及び病変外白質についての、Ｔ２により規定された領域に基づき、静脈内ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬは、磁化移動率（ＭＴＲ）及びＦＡ（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  ａｎｉｓｏｔｒｏｐｙ）により定量化される通り、ＩｇＧ対照群及び髄腔内ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ群と比較して、より大きな、損傷外領域内の組織完全性の保存を裏付けた。データのグラフ表示は、図２０Ａ及び２０Ｂにおいてなされている。これらの結果は、非ヒト霊長動物におけるＳＣＩの、損傷の７５分後における、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬの静脈内投与による処置が、病変外脊髄組織の組織完全性を、ＩｇＧ対照又はＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬの髄腔内投与により観察された程度より大きな程度において保存することを示唆する。
【０１７２】
さらに、神経運動スコア値は、病変外白質のＭＴＲ値及びＦＡ値と正に相関したが、これは、微細構造における完全性を反映する。図２１Ａ及び２１Ｂにおいて示される通り、ＭＴＲ値及びＦＡ値は一般に、神経運動機能の改善と共に増大する。
【０１７３】
まとめると、（ｉ）ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬによる静脈内処置の２４週間後に、対照群と比較して、病変外白質内のＭＴＲ及びＦＡの有意な増大が見られたことから、病変外白質内の、処置による構造的／機能的な改善（又はさらなる二次損傷の回避）が示唆される。これに対し、病変白質内の、いかなるイメージング評価項目においても、対照及びＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬにより処置された群の間において、有意な変化は検出されず；（ｉｉ）病変外白質のＦＡ又はＭＴＲ及び神経運動スコアであるＥｍａｘの間において、正の相関が見られたことから、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬを伴う静脈内処置による、病変外白質内の改善を意味する高ＭＴＲ値及び高ＦＡ値が、神経運動機能の改善と関連したことが示唆される。
【０１７４】
脊髄切片についての組織病理学的解析は、ＲＧＭａの発現の有意差を明らかにしたが、活性化小膠細胞についてのマーカー（イオン化カルシウム結合アダプター分子１；ＩＢＡ）又はミエリンのワイル染色の有意差は明らかにしなかった。図２２Ａ及び２２Ｄにおいて示される通り、吻側及び尾側におけるＲＧＭＡ発現は、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬによる静脈内処置の後において、有意に減少した。
【０１７５】
［実施例３］
実施例１と同様に、ラットにプレトレーニングし、次いで、公表されたプロトコールに従う改変動脈瘤クリップにより、脊髄レベルＴ８において、２０ｇの力により、１分間にわたり、クリップによる衝撃−圧迫ＳＣＩをもたらした。ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ（２５ｍｇ／ｋｇ）又はｈＩｇＧアイソタイプ対照（２５ｍｇ／ｋｇ）を、尾静脈を介して、急性（損傷の５分以内に）又はＳＣＩの３時間後若しくはＳＣＩの２４時間後において静脈内投与し、次いで、６週間にわたり毎週静脈内投与した。研究には、５つの群：ｉ）急性ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ（損傷の５分以内に注射された）、ｉｉ）急性ｈＩｇＧ（損傷の５分以内に注射された）、ｉｉｉ）３時間後におけるＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ、ｉｖ）２４時間後におけるＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ、及びｖ）２４時間後におけるｈＩｇＧが存在した。全てのラットに、ＳＣＩ後６週間にわたり、毎週尾静脈注射を施した。
【０１７６】
方法：ＳＣＩの１日後において、ＢＢＢ（Ｂａｓｓｏ、Ｂｅａｔｔｉｅ  ａｎｄ  Ｂｒｅｓｎａｈａｎ）運動評価スケールを使用して、運動機能を査定し、次いで、ＳＣＩ後９週間にわたり、毎週査定した。運動機能をさらに解明するために、ＣａｔＷａｌｋシステム（Ｎｏｌｄｕｓ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｗａｇｅｎｉｎｇｅｎ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して、歩行解析を実施した。以下の歩行パラメータ：ａ）脚間協調運動の尺度となる比率である、規則性指数。健常動物において、規則性指数は、１００％である；ｂ）同じ足の継起的な配置の間の距離である、歩幅長；ｃ）振出しの間の平均値速度である、振出し速度；及びｄ）足により、ガラス製のプレートに対して及ぼされた平均値圧力についての尺度であり、足及びガラス製のプレートの間の接触の程度に依存する、足強度について検討した。機械的異痛及び温熱性痛覚過敏は、上記において記載した通りに評価した。
【０１７７】
結果：急性ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ群内のラットは、ＳＣＩ後の時間経過を通して、対照群（急性ｈＩｇＧ）と比べて、有意な高ＢＢＢスコアを有した（図２３Ａ）。損傷３時間後の、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬにより処置されたラットにおいて、回復の改善への傾向が見られた。ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ群における、急性及び３時間後のスコアはまた、他の群と比較して、未だプラトーに達してもいない。急性ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ群は、損傷の８及び９週間後において、対照群と比べて、有意な高運動サブスコアを示す（図２３Ｂ）。
【０１７８】
ＳＣＩの８週間後、急性及び３時間後において、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ群は、対照と比べて、有意な高規則性指数スコアを有していた（図２４Ａ）。規則性指数とは、脚間協調運動の尺度である。健常で協調性が完全な動物において、値は、１００％である。
【０１７９】
ＳＣＩの８週間後において、ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬにより処置されたラットは、全ての時間窓間隔において、より大きな歩幅長を示し、差異は、急性及び２４時間後のＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ群において、２４時間後のＩｇＧ対照と比較して、統計学的に有意であった（図２４Ｂ）。歩幅長とは、同じ足の継起的な配置の間の距離であり、これは、ＳＣＩの後に減少する。
【０１８０】
全ての処置群は、高振出し速度を示したが、これは、いずれの対照群に対しても、統計学的に有意であった（図２４Ｃ）。振出し速度とは、振出し相の間の足の速度であり、これは、ＳＣＩの後に減少する。
【０１８１】
ＳＣＩの８週間後において、急性ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ群は、後肢強度について、ＳＣＩ前の値への傾向を示したが、これは、対照に対して、統計学的に有意ではなかった（図２４Ｄ）。後肢強度とは、後肢による体重支持の尺度である。
【０１８２】
急性及び３時間後のＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ群は、ＳＣＩの９週間後において、２ｇフィラメントにより、対照と比較して、少数の有害反応を示し、ＳＣＩの６及び９週間後において、４ｇフィラメントにより、対照と比較して、少数の有害反応を示したが、機械的異痛レベルにおいて、有意な群間差は見られなかった（図２５Ａ及び２５Ｂ）。
【０１８３】
ＳＣＩ及び注射の６週間後、急性ＡＥ１２−１−Ｙ−ＱＬ群は、熱刺激に対する引込みまでの待ち時間の、急性ＩｇＧ対照と比較して有意な増大を示した（図２５Ｃ）。この効果は、ＳＣＩの９週間後において維持された。
【０１８４】
６．例示的実施形態
以下の例示的実施形態が提示される。
【０１８５】
１．それを必要とする対象における脊髄損傷を処置する方法であって、治療有効量の、ＲＧＭａ（Ｒｅｐｕｌｓｉｖｅ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ａ）に特異的に結合する抗体又はこの抗原結合性断片を投与するステップを含み、抗体又は抗原結合性断片が、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＶＨ  ＣＤＲ）１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含む可変重鎖；並びに（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＶＬ  ＣＤＲ）１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、及び配列番号６及び配列番号７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む可変軽鎖を含む方法。
【０１８６】
２．脊髄損傷を有する対象における、軸索再生、機能回復、又はこれらの両方を促進する方法であって、治療有効量の、ＲＧＭａ（Ｒｅｐｕｌｓｉｖｅ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ａ）に特異的に結合する抗体又はこの抗原結合性断片を投与するステップを含み、抗体又は抗原結合性断片が、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＶＨ  ＣＤＲ）１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含む可変重鎖；並びに（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＶＬ  ＣＤＲ）１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、及び配列番号６及び配列番号７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む可変軽鎖を含む方法。
【０１８７】
３．機能回復が、神経行動学的試験により評価される、実施形態２の方法。
【０１８８】
４．脊髄損傷が、圧迫損傷又は衝撃損傷である、実施形態１〜３のうちのいずれか１つの方法。
【０１８９】
５．抗体が、脊髄損傷から２４時間以内に投与される、実施形態１〜４のうちのいずれか１つの方法。
【０１９０】
６．それを必要とする対象における疼痛を処置する方法であって、治療有効量の、ＲＧＭａ（Ｒｅｐｕｌｓｉｖｅ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ａ）に特異的に結合する抗体又はこの抗原結合性断片を投与するステップを含み、抗体又は抗原結合性断片が、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＶＨ  ＣＤＲ）１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含む可変重鎖；並びに（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＶＬ  ＣＤＲ）１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、及び配列番号６及び配列番号７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む可変軽鎖を含む方法。
【０１９１】
７．疼痛が、神経障害性疼痛である、実施形態６の方法。
【０１９２】
８．神経障害性疼痛が、脊髄損傷から生じる、実施形態７の方法。
【０１９３】
９．抗体が、脊髄損傷から２４時間以内に投与される、実施形態８の方法。
【０１９４】
１０．神経障害性疼痛が、化学療法から生じる、実施形態７の方法。
【０１９５】
１１．神経障害性疼痛が、ヘルペス後神経痛である、実施形態７の方法。
【０１９６】
１２．抗体又はこの抗原結合性断片が、全身投与される、実施形態１〜１１のうちのいずれか１つの方法。
【０１９７】
１３．抗体又はこの抗原結合性断片が、静脈内（ＩＶ）投与される、実施形態１〜１２のうちのいずれか１つの方法。
【０１９８】
１４．ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号６のアミノ酸配列を含む、実施形態１〜１３のうちのいずれか１つの方法。
【０１９９】
１５．ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号７のアミノ酸配列を含む、実施形態１〜１３のうちのいずれか１つの方法。
【０２００】
１６．可変重鎖が、配列番号８のアミノ酸配列を含み、可変軽鎖が、配列番号９のアミノ酸配列を含む、実施形態１〜１３のうちのいずれか１つの方法。
【０２０１】
１７．可変重鎖が、配列番号８のアミノ酸配列を含み、可変軽鎖が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、実施形態１〜１３のうちのいずれか１つの方法。
【０２０２】
１８．抗体が、ヒト抗体、免疫グロブリン分子、ジスルフィド連結Ｆｖ、モノクローナル抗体、アフィニティー成熟抗体、ｓｃＦｖ、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ダイアボディー、ヒト化抗体、多特異性抗体、Ｆａｂ、二重特異性抗体、ＤＶＤ、Ｆａｂ’、二特異性抗体、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖからなる群から選択される、実施形態１〜１７のうちのいずれか１つの方法。
【０２０３】
１９．抗体が、ヒト抗体である、実施形態１８の方法。
【０２０４】
２０．抗体が、モノクローナル抗体である、実施形態１８の方法。
【０２０５】
２１．抗体が、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、及び配列番号１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む定常領域を含む、実施形態１〜１３のうちのいずれか１つの方法。
【０２０６】
２２．抗体が、配列番号１６の重鎖配列及び配列番号１５の軽鎖配列を含む、実施形態１〜１３のうちのいずれか１つの方法。
【０２０７】
前出の詳細な記載並びに付属の実施例及び例示的実施形態は、例示的なものであるに過ぎず、付属の特許請求の範囲及びこれらの同等物だけにより規定された、本発明の範囲に対する限定として理解されないものとすることが理解される。
【０２０８】
当業者に、開示された実施形態に対する多様な変化及び改変は明らかである。限定なしに述べると、化学的構造、置換基、誘導体、中間体、合成、組成物、製剤、又は本発明の使用法に関する変化及び改変を含む、このような変化及び改変は、その精神及び範囲から逸脱しない限りにおいて、施されうる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図９Ｅ】
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【図９Ｆ】
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【図９Ｇ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２２Ｃ】
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【図２２Ｄ】
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【図２２Ｅ】
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【図２２Ｆ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ】
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【図２４Ｄ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２５Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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