(57)【要約】本発明は、皮膚を美白するための化合物、組成物、及び方法に関する。本発明の化合物、組成物、及び方法は一般に、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物、及びその化学的類似体を含む。皮膚美白用途に加えて、本発明の化合物、組成物、及び方法は、メラノサイトの活性を調節する、メラノサイトのアポトーシスを誘導する、アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズする、色素沈着過剰障害によって引き起こされる色素沈着過剰を改善する、ならびにメラニン産生、メラノソーム生合成、及びメラノソーム転送を調節するために使用することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＩ）：
【化７９】
2019513818.tif 000080
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１の少なくとも１つはメチルである）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物。
【請求項２】
【化８０】
2019513818.tif 000081
及び
【化８１】
2019513818.tif 000082
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式（ＩＩＩ）：
【化８２】
2019513818.tif 000083
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０の少なくとも１つはメチルである）
あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品的にもしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物。
【請求項４】
次式である、請求項３に記載の化合物：
【化８３】
2019513818.tif 000084
【請求項５】
式（ＩＩ）：
【化８４】
2019513818.tif 000085
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、
皮膚を美白するための化合物。
【請求項６】
【化８５】
2019513818.tif 000086
、
【化８６】
2019513818.tif 000087
及び
【化８７】
2019513818.tif 000088
からなる群から選択される、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
式（ＩＩＩ）：
【化８８】
2019513818.tif 000089
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、
皮膚を美白するための化合物。
【請求項８】
【化８９】
2019513818.tif 000090
及び
【化９０】
2019513818.tif 000091
から成る群から選択される、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
式（ＩＩ）：
【化９１】
2019513818.tif 000092
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、
メラノサイトのアポトーシスを誘導するための化合物。
【請求項１０】
【化９２】
2019513818.tif 000093
、
【化９３】
2019513818.tif 000094
及び
【化９４】
2019513818.tif 000095
からなる群から選択される、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
式（ＩＩＩ）：
【化９５】
2019513818.tif 000096
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、
メラノサイトのアポトーシスを誘導するための化合物。
【請求項１２】
【化９６】
2019513818.tif 000097
及び
【化９７】
2019513818.tif 000098
からなる群から選択される、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
式（ＩＩ）：
【化９８】
2019513818.tif 000099
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、
アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための化合物。
【請求項１４】
【化９９】
2019513818.tif 000100
、
【化１００】
2019513818.tif 000101
及び
【化１０１】
2019513818.tif 000102
からなる群から選択される、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
式（ＩＩＩ）：
【化１０２】
2019513818.tif 000103
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、
アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための化合物。
【請求項１６】
【化１０３】
2019513818.tif 000104
及び
【化１０４】
2019513818.tif 000105
からなる群から選択される、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
式（ＩＩ）：
【化１０５】
2019513818.tif 000106
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物と、
化粧品または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、または担体とを含む、組成物。
【請求項１８】
前記化合物が、
【化１０６】
2019513818.tif 000107
、
【化１０７】
2019513818.tif 000108
及び
【化１０８】
2019513818.tif 000109
からなる群から選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
式（ＩＩＩ）：
【化１０９】
2019513818.tif 000110
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物と、
化粧品または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、または担体とを含む、組成物。
【請求項２０】
前記化合物が、
【化１１０】
2019513818.tif 000111
及び
【化１１１】
2019513818.tif 000112
からなる群から選択される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
被験体において皮膚を美白するための方法であって、式（ＩＩ）：
【化１１２】
2019513818.tif 000113
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
【請求項２２】
前記化合物が、
【化１１３】
2019513818.tif 000114
、
【化１１４】
2019513818.tif 000115
及び
【化１１５】
2019513818.tif 000116
からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
被験体において皮膚を美白するための方法であって、式（ＩＩＩ）：
【化１１６】
2019513818.tif 000117
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
【請求項２４】
前記化合物が、
【化１１７】
2019513818.tif 000118
及び
【化１１８】
2019513818.tif 000119
からなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
被験体においてメラノサイトのアポトーシスを誘導するための方法であって、式（ＩＩ）：
【化１１９】
2019513818.tif 000120
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
【請求項２６】
前記化合物が、
【化１２０】
2019513818.tif 000121
、
【化１２１】
2019513818.tif 000122
及び
【化１２２】
2019513818.tif 000123
からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
被験体においてメラノサイトのアポトーシスを誘導するための方法であって、式（ＩＩＩ）：
【化１２３】
2019513818.tif 000124
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
【請求項２８】
前記化合物が、
【化１２４】
2019513818.tif 000125
及び
【化１２５】
2019513818.tif 000126
からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
被験体においてアリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための方法であって、式（ＩＩ）：
【化１２６】
2019513818.tif 000127
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
【請求項３０】
前記化合物が、
【化１２７】
2019513818.tif 000128
、
【化１２８】
2019513818.tif 000129
及び
【化１２９】
2019513818.tif 000130
からなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
被験体においてアリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための方法であって、式（ＩＩＩ）：
【化１３０】
2019513818.tif 000131
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
【請求項３２】
前記化合物が、
【化１３１】
2019513818.tif 000132
及び
【化１３２】
2019513818.tif 000133
からなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本発明は、２０１６年３月１０日に出願された米国特許仮出願第６２／３０６，４６８号の利益を主張するものである。その出願の全内容は参照により組み込まれる。
【０００２】
本発明は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体に関する。本発明は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物ならびにＭａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体を含む組成物を含む。本発明の化合物（その類似体を含む）及び組成物を使用する方法も企図される。
【背景技術】
【０００３】
世界中の人々は、アンチエイジング効果を得ること、日焼けによる損傷を治すこと、及びある種の美の文化的基準を満たすことなどの幾つもの美容上の目標を達成するために、皮膚美白剤を使用する。市販される多くの皮膚美白製品は、様々な程度に効果があるものの、有害な成分を含有し、その中にはがんに関連しているものもある。よって、現在市場に出回っている皮膚美白剤より高いレベルの安全性及び／または効力を示す新規な皮膚美白剤及び製剤が必要とされている。
【０００４】
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａは、ヒトの皮膚の常在菌叢によく見られる脂肪親和性酵母の一属である。Ｍａｌａｓｓｅｚｉａは、黒なまず（癜風）、脂漏性皮膚炎、及びアトピー性皮膚炎を含めた幾つもの皮膚疾患の原因である。
【０００５】
黒なまずは、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａの異常増殖によって引き起こされる非伝染性の皮膚疾患であり、局所的に色素沈着レベルを変化させる。Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母は、メラニン及びトリプトファン由来のインドール色素を合成するための２つの代謝経路を有する。このインドール色素はＭａｌａｓｓｅｚｉａのトリプトファン代謝産物であるマラセジンを含み、これは、メラノサイトのアポトーシスを誘発し、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａの異常増殖に特徴的な色素脱失に寄与する。
【０００６】
本明細書に開示する発明は、マラセジンを含めたＭａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物、及びその化学的類似体を、安全かつ有効な皮膚美白組成物のベースとして利用する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の一実施形態は、皮膚を美白するための化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩である。
【０００８】
本発明の別の実施形態は、メラノサイトのアポトーシスを誘導するための化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩である。
【０００９】
本発明のさらなる実施形態は、メラノサイトの活性を調節するための化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩である。
【００１０】
本発明の追加的な実施形態は、アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩である。
【００１１】
本発明の別の実施形態は、色素沈着過剰障害によって引き起こされる色素沈着過剰を改善するための化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩である。
【００１２】
本発明のさらなる実施形態は、メラニン産生を調節するための化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩である。
【００１３】
本発明の追加的な実施形態は、メラノソーム生合成を調節するための化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩である。
【００１４】
本発明の別の実施形態は、メラノソーム転送を調節するための化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩である。
【００１５】
本発明のさらなる実施形態は、組成物である。該組成物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母と、化粧品的または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、または担体とを含む。
【００１６】
本発明の追加的な実施形態は、組成物である。該組成物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母から単離されたまたは単離可能な化合物と、化粧品的または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、または担体とを含む。
【００１７】
本発明の別の実施形態は、組成物である。該組成物は、類似体を含めた本明細書に開示する化合物のいずれかと、化粧品的または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、または担体とを含む。
【００１８】
本発明のさらなる実施形態は、被験体において皮膚を美白するための方法である。該方法は、本明細書に開示する化合物または組成物のいずれかに被験体を接触させることを含む。
【００１９】
本発明の追加的な実施形態は、被験体においてメラノサイトのアポトーシスを誘導するための方法である。該方法は、本明細書に開示する化合物または組成物のいずれかに被験体を接触させることを含む。
【００２０】
本発明の別の実施形態は、被験体においてメラノサイトの活性を調節するための方法である。該方法は、本明細書に開示する化合物または組成物のいずれかに被験体を接触させることを含む。
【００２１】
本発明のさらなる実施形態は、被験体においてアリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための方法である。該方法は、本明細書に開示する化合物または組成物のいずれかに被験体を接触させることを含む。
【００２２】
本発明の追加的な実施形態は、色素沈着過剰障害によって引き起こされる色素沈着過剰の改善を必要とする被験体において色素沈着過剰障害によって引き起こされる色素沈着過剰を改善するための方法である。該方法は、本明細書に開示する化合物または組成物のいずれかに被験体を接触させることを含む。
【００２３】
本発明の別の実施形態は、被験体においてメラニン産生を調節するための方法である。該方法は、本明細書に開示する化合物または組成物のいずれかに被験体を接触させることを含む。
【００２４】
本発明のさらなる実施形態は、被験体においてメラノソーム生合成を調節するための方法である。該方法は、本明細書に開示する化合物または組成物のいずれかに被験体を接触させることを含む。
【００２５】
本発明の追加的な実施形態は、被験体においてメラノソーム転送を調節するための方法である。該方法は、本明細書に開示する化合物または組成物のいずれかに被験体を接触させることを含む。
【００２６】
本発明の別の実施形態は、化合物である。該化合物は、式（ＩＩ）：
【化１】
2019513818.tif 000002
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択され、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１の少なくとも１つはメチルである）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する。
【００２７】
本発明のさらなる実施形態は、化合物である。該化合物は、式（ＩＩＩ）：
【化２】
2019513818.tif 000003
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択され、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０の少なくとも１つはメチルである）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する。
【００２８】
本発明の追加的な実施形態は、皮膚を美白するための化合物である。該化合物は、式（ＩＩ）：
【化３】
2019513818.tif 000004
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する。
【００２９】
本発明の別の実施形態は、皮膚を美白するための化合物である。該化合物は、式（ＩＩＩ）：
【化４】
2019513818.tif 000005
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する。
【００３０】
本発明のさらなる実施形態は、メラノサイトのアポトーシスを誘導するための化合物である。該化合物は、式（ＩＩ）：
【化５】
2019513818.tif 000006
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する。
【００３１】
本発明の追加的な実施形態は、メラノサイトのアポトーシスを誘導するための化合物である。該化合物は、式（ＩＩＩ）：
【化６】
2019513818.tif 000007
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する。
【００３２】
本発明の別の実施形態は、アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための化合物である。該化合物は、式（ＩＩ）：
【化７】
2019513818.tif 000008
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する。
【００３３】
本発明のさらなる実施形態は、アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための化合物である。該化合物は、式（ＩＩＩ）：
【化８】
2019513818.tif 000009
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する。
【００３４】
本発明の追加的な実施形態は、組成物である。該組成物は、式（ＩＩ）：
【化９】
2019513818.tif 000010
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物と、化粧品的または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、または担体とを含む。
【００３５】
本発明の別の実施形態は、組成物である。該組成物は、式（ＩＩＩ）：
【化１０】
2019513818.tif 000011
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物と、化粧品的または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、または担体とを含む。
【００３６】
本発明のさらなる実施形態は、被験体において皮膚を美白するための方法である。該方法は、式（ＩＩ）：
【化１１】
2019513818.tif 000012
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を被験体に接触させることを含む。
【００３７】
本発明の追加的な実施形態は、被験体において皮膚を美白するための方法である。該方法は、式（ＩＩＩ）：
【化１２】
2019513818.tif 000013
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を被験体に接触させることを含む。
【００３８】
本発明の別の実施形態は、被験体においてメラノサイトのアポトーシスを誘導するための方法である。該方法は、式（ＩＩ）：
【化１３】
2019513818.tif 000014
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を被験体に接触させることを含む。
【００３９】
本発明のさらなる実施形態は、被験体においてメラノサイトのアポトーシスを誘導するための方法である。該方法は、式（ＩＩＩ）：
【化１４】
2019513818.tif 000015
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を被験体に接触させることを含む。
【００４０】
本発明の別の実施形態は、被験体においてアリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための方法である。該方法は、式（ＩＩ）：
【化１５】
2019513818.tif 000016
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を被験体に接触させることを含む。
【００４１】
本発明のさらなる実施形態は、被験体においてアリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための方法である。該方法は、式（ＩＩＩ）：
【化１６】
2019513818.tif 000017
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を被験体に接触させることを含む。
【００４２】
本特許または特許出願書類は、カラーで仕上げた少なくとも１枚の図面を含有する。カラーで仕上げた図面を有する本特許または特許出願の公報のコピーは、申請及び必要な手数料の支払いに応じて当局によって提供される。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１Ａ】皮膚の構成要素の層の概略図である。挿入図は、表皮及び真皮からなる細胞の構造を示す。
【図１Ｂ】色素脱失を引き起こす薬剤の潜在的な作用機序を示す概略図である。
【図２Ａ】マラセジン及びマラセジン誘導体（マラセジン及びインドロ［３，２−ｂ］カルバゾール）の一連の合成スキームである。
【図２Ｂ】マラセジン誘導体（化合物Ｉ及びＩＶ）の一連の合成スキームである。
【図２Ｃ】マラセジン誘導体（化合物ＩＩ）の一連の合成スキームである。
【図３Ａ】図３Ａは、ＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞における本発明のある種の化合物についてのアネキシンＶ誘導のＥＣ５０値を示す総括表である。図３Ｂ〜３Ｍは、様々な濃度の例示化合物に曝露した後にアネキシンＶで標識されたＭｅＷｏ（図３Ｂ〜３Ｇ）細胞またはＷＭ１１５（図３Ｈ〜３Ｍ）細胞の百分率を示す線グラフである。
【図３Ｂ−Ｄ】図３Ａは、ＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞における本発明のある種の化合物についてのアネキシンＶ誘導のＥＣ５０値を示す総括表である。図３Ｂ〜３Ｍは、様々な濃度の例示化合物に曝露した後にアネキシンＶで標識されたＭｅＷｏ（図３Ｂ〜３Ｇ）細胞またはＷＭ１１５（図３Ｈ〜３Ｍ）細胞の百分率を示す線グラフである。
【図３Ｅ−Ｇ】図３Ａは、ＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞における本発明のある種の化合物についてのアネキシンＶ誘導のＥＣ５０値を示す総括表である。図３Ｂ〜３Ｍは、様々な濃度の例示化合物に曝露した後にアネキシンＶで標識されたＭｅＷｏ（図３Ｂ〜３Ｇ）細胞またはＷＭ１１５（図３Ｈ〜３Ｍ）細胞の百分率を示す線グラフである。
【図３Ｈ−Ｊ】図３Ａは、ＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞における本発明のある種の化合物についてのアネキシンＶ誘導のＥＣ５０値を示す総括表である。図３Ｂ〜３Ｍは、様々な濃度の例示化合物に曝露した後にアネキシンＶで標識されたＭｅＷｏ（図３Ｂ〜３Ｇ）細胞またはＷＭ１１５（図３Ｈ〜３Ｍ）細胞の百分率を示す線グラフである。
【図３Ｋ−Ｍ】図３Ａは、ＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞における本発明のある種の化合物についてのアネキシンＶ誘導のＥＣ５０値を示す総括表である。図３Ｂ〜３Ｍは、様々な濃度の例示化合物に曝露した後にアネキシンＶで標識されたＭｅＷｏ（図３Ｂ〜３Ｇ）細胞またはＷＭ１１５（図３Ｈ〜３Ｍ）細胞の百分率を示す線グラフである。
【図４Ａ】図４Ａ〜４Ｄは、様々な濃度の例示化合物に６、２４、４８、及び７２時間曝露した後のＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞における相対アネキシンＶレベル（％）を示す表である。図４Ｅ〜４Ｊは、図４Ａ〜４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図４Ｋ及び４Ｌは、示した濃度の例示化合物に６時間曝露した後にアネキシンＶで標識されたＭｅＷｏ（図４Ｋ）細胞及びＷＭ１１５（図４Ｌ）細胞の百分率を示すヒストグラムである。
【図４Ｂ】図４Ａ〜４Ｄは、様々な濃度の例示化合物に６、２４、４８、及び７２時間曝露した後のＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞における相対アネキシンＶレベル（％）を示す表である。図４Ｅ〜４Ｊは、図４Ａ〜４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図４Ｋ及び４Ｌは、示した濃度の例示化合物に６時間曝露した後にアネキシンＶで標識されたＭｅＷｏ（図４Ｋ）細胞及びＷＭ１１５（図４Ｌ）細胞の百分率を示すヒストグラムである。
【図４Ｃ】図４Ａ〜４Ｄは、様々な濃度の例示化合物に６、２４、４８、及び７２時間曝露した後のＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞における相対アネキシンＶレベル（％）を示す表である。図４Ｅ〜４Ｊは、図４Ａ〜４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図４Ｋ及び４Ｌは、示した濃度の例示化合物に６時間曝露した後にアネキシンＶで標識されたＭｅＷｏ（図４Ｋ）細胞及びＷＭ１１５（図４Ｌ）細胞の百分率を示すヒストグラムである。
【図４Ｄ】図４Ａ〜４Ｄは、様々な濃度の例示化合物に６、２４、４８、及び７２時間曝露した後のＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞における相対アネキシンＶレベル（％）を示す表である。図４Ｅ〜４Ｊは、図４Ａ〜４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図４Ｋ及び４Ｌは、示した濃度の例示化合物に６時間曝露した後にアネキシンＶで標識されたＭｅＷｏ（図４Ｋ）細胞及びＷＭ１１５（図４Ｌ）細胞の百分率を示すヒストグラムである。
【図４Ｅ−Ｇ】図４Ａ〜４Ｄは、様々な濃度の例示化合物に６、２４、４８、及び７２時間曝露した後のＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞における相対アネキシンＶレベル（％）を示す表である。図４Ｅ〜４Ｊは、図４Ａ〜４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図４Ｋ及び４Ｌは、示した濃度の例示化合物に６時間曝露した後にアネキシンＶで標識されたＭｅＷｏ（図４Ｋ）細胞及びＷＭ１１５（図４Ｌ）細胞の百分率を示すヒストグラムである。
【図４Ｈ−Ｊ】図４Ａ〜４Ｄは、様々な濃度の例示化合物に６、２４、４８、及び７２時間曝露した後のＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞における相対アネキシンＶレベル（％）を示す表である。図４Ｅ〜４Ｊは、図４Ａ〜４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図４Ｋ及び４Ｌは、示した濃度の例示化合物に６時間曝露した後にアネキシンＶで標識されたＭｅＷｏ（図４Ｋ）細胞及びＷＭ１１５（図４Ｌ）細胞の百分率を示すヒストグラムである。
【図４Ｋ】図４Ａ〜４Ｄは、様々な濃度の例示化合物に６、２４、４８、及び７２時間曝露した後のＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞における相対アネキシンＶレベル（％）を示す表である。図４Ｅ〜４Ｊは、図４Ａ〜４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図４Ｋ及び４Ｌは、示した濃度の例示化合物に６時間曝露した後にアネキシンＶで標識されたＭｅＷｏ（図４Ｋ）細胞及びＷＭ１１５（図４Ｌ）細胞の百分率を示すヒストグラムである。
【図４Ｌ】図４Ａ〜４Ｄは、様々な濃度の例示化合物に６、２４、４８、及び７２時間曝露した後のＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞における相対アネキシンＶレベル（％）を示す表である。図４Ｅ〜４Ｊは、図４Ａ〜４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図４Ｋ及び４Ｌは、示した濃度の例示化合物に６時間曝露した後にアネキシンＶで標識されたＭｅＷｏ（図４Ｋ）細胞及びＷＭ１１５（図４Ｌ）細胞の百分率を示すヒストグラムである。
【図５】図５Ａ〜５Ｋは、様々な濃度のＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８８、ＤＭＳＯ、及びスタウロスポリンで６時間処置した後のＭｅＷｏの細胞形態を示す顕微鏡写真である。
【図６】図６Ａ〜６Ｋは、様々な濃度のＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８８、ＤＭＳＯ、及びスタウロスポリンで２４時間処置した後のＭｅＷｏの細胞形態を示す顕微鏡写真である。
【図７】図７Ａ〜７Ｋは、様々な濃度のＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８８、ＤＭＳＯ、及びスタウロスポリンで４８時間処置した後のＭｅＷｏの細胞形態を示す顕微鏡写真である。
【図８】図８Ａ〜８Ｋは、様々な濃度のＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８８、ＤＭＳＯ、及びスタウロスポリンで７２時間処置した後のＭｅＷｏの細胞形態を示す顕微鏡写真である。
【図９】図９Ａ〜９Ｋは、様々な濃度のＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８８、ＤＭＳＯ、及びスタウロスポリンで６時間処置した後のＷＭ１１５の細胞形態を示す顕微鏡写真である。
【図１０】図１０Ａ〜１０Ｋは、様々な濃度のＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８８、ＤＭＳＯ、及びスタウロスポリンで２４時間処置した後のＷＭ１１５の細胞形態を示す顕微鏡写真である。
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｋは、様々な濃度のＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８８、ＤＭＳＯ、及びスタウロスポリンで４８時間処置した後のＷＭ１１５の細胞形態を示す顕微鏡写真である。
【図１２】図１２Ａ〜１２Ｋは、様々な濃度のＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８８、ＤＭＳＯ、及びスタウロスポリンで７２時間処置した後のＷＭ１１５の細胞形態を示す顕微鏡写真である。
【図１３Ａ】図１３Ａ〜１３Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１３Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１３Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１３Ｃ）、またはスタウロスポリン（図１３Ｄ）で６、２４、４８、及び７２時間処置した後に残存するＭｅＷｏ及びＷＭ１１５生細胞の百分率を示す表である。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用してアッセイした。図１３Ｅ〜１３Ｊは、図１３Ａ〜１３Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１３Ｋは、例示濃度のマラセジン、インドロカルバゾール、化合物ＩＩ、及びスタウロスポリンに２４、４８、及び７２時間曝露した後のＭｅＷｏ及びＷＭ１１５生細胞の百分率を比較する総括表である。
【図１３Ｂ】図１３Ａ〜１３Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１３Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１３Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１３Ｃ）、またはスタウロスポリン（図１３Ｄ）で６、２４、４８、及び７２時間処置した後に残存するＭｅＷｏ及びＷＭ１１５生細胞の百分率を示す表である。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用してアッセイした。図１３Ｅ〜１３Ｊは、図１３Ａ〜１３Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１３Ｋは、例示濃度のマラセジン、インドロカルバゾール、化合物ＩＩ、及びスタウロスポリンに２４、４８、及び７２時間曝露した後のＭｅＷｏ及びＷＭ１１５生細胞の百分率を比較する総括表である。
【図１３Ｃ】図１３Ａ〜１３Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１３Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１３Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１３Ｃ）、またはスタウロスポリン（図１３Ｄ）で６、２４、４８、及び７２時間処置した後に残存するＭｅＷｏ及びＷＭ１１５生細胞の百分率を示す表である。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用してアッセイした。図１３Ｅ〜１３Ｊは、図１３Ａ〜１３Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１３Ｋは、例示濃度のマラセジン、インドロカルバゾール、化合物ＩＩ、及びスタウロスポリンに２４、４８、及び７２時間曝露した後のＭｅＷｏ及びＷＭ１１５生細胞の百分率を比較する総括表である。
【図１３Ｄ】図１３Ａ〜１３Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１３Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１３Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１３Ｃ）、またはスタウロスポリン（図１３Ｄ）で６、２４、４８、及び７２時間処置した後に残存するＭｅＷｏ及びＷＭ１１５生細胞の百分率を示す表である。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用してアッセイした。図１３Ｅ〜１３Ｊは、図１３Ａ〜１３Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１３Ｋは、例示濃度のマラセジン、インドロカルバゾール、化合物ＩＩ、及びスタウロスポリンに２４、４８、及び７２時間曝露した後のＭｅＷｏ及びＷＭ１１５生細胞の百分率を比較する総括表である。
【図１３Ｅ−Ｇ】図１３Ａ〜１３Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１３Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１３Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１３Ｃ）、またはスタウロスポリン（図１３Ｄ）で６、２４、４８、及び７２時間処置した後に残存するＭｅＷｏ及びＷＭ１１５生細胞の百分率を示す表である。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用してアッセイした。図１３Ｅ〜１３Ｊは、図１３Ａ〜１３Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１３Ｋは、例示濃度のマラセジン、インドロカルバゾール、化合物ＩＩ、及びスタウロスポリンに２４、４８、及び７２時間曝露した後のＭｅＷｏ及びＷＭ１１５生細胞の百分率を比較する総括表である。
【図１３Ｈ−Ｊ】図１３Ａ〜１３Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１３Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１３Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１３Ｃ）、またはスタウロスポリン（図１３Ｄ）で６、２４、４８、及び７２時間処置した後に残存するＭｅＷｏ及びＷＭ１１５生細胞の百分率を示す表である。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用してアッセイした。図１３Ｅ〜１３Ｊは、図１３Ａ〜１３Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１３Ｋは、例示濃度のマラセジン、インドロカルバゾール、化合物ＩＩ、及びスタウロスポリンに２４、４８、及び７２時間曝露した後のＭｅＷｏ及びＷＭ１１５生細胞の百分率を比較する総括表である。
【図１３Ｋ】図１３Ａ〜１３Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１３Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１３Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１３Ｃ）、またはスタウロスポリン（図１３Ｄ）で６、２４、４８、及び７２時間処置した後に残存するＭｅＷｏ及びＷＭ１１５生細胞の百分率を示す表である。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用してアッセイした。図１３Ｅ〜１３Ｊは、図１３Ａ〜１３Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１３Ｋは、例示濃度のマラセジン、インドロカルバゾール、化合物ＩＩ、及びスタウロスポリンに２４、４８、及び７２時間曝露した後のＭｅＷｏ及びＷＭ１１５生細胞の百分率を比較する総括表である。
【図１４Ａ】図１４Ａ〜１４Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１４Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１４Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１４Ｃ）、またはスタウロスポリン（図１４Ｄ）で６、２４、４８、及び７２時間処置した後の、ＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞からの乳酸脱水素酵素（「ＬＤＨ」）放出レベルを示す表である。図１４Ｅ〜１４Ｊは、図１４Ａ〜１４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１４Ｋ及び１４Ｌは、ＭｅＷｏ（図１４Ｋ）及びＷＭ１１５（図１４Ｌ）細胞を例示濃度のマラセジン、カルバゾール、化合物ＩＩ、及びスタウロスポリンに２４時間曝露した後の乳酸脱水素酵素レベルを示すヒストグラムである。
【図１４Ｂ】図１４Ａ〜１４Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１４Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１４Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１４Ｃ）、またはスタウロスポリン（図１４Ｄ）で６、２４、４８、及び７２時間処置した後の、ＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞からの乳酸脱水素酵素（「ＬＤＨ」）放出レベルを示す表である。図１４Ｅ〜１４Ｊは、図１４Ａ〜１４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１４Ｋ及び１４Ｌは、ＭｅＷｏ（図１４Ｋ）及びＷＭ１１５（図１４Ｌ）細胞を例示濃度のマラセジン、カルバゾール、化合物ＩＩ、及びスタウロスポリンに２４時間曝露した後の乳酸脱水素酵素レベルを示すヒストグラムである。
【図１４Ｃ】図１４Ａ〜１４Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１４Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１４Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１４Ｃ）、またはスタウロスポリン（図１４Ｄ）で６、２４、４８、及び７２時間処置した後の、ＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞からの乳酸脱水素酵素（「ＬＤＨ」）放出レベルを示す表である。図１４Ｅ〜１４Ｊは、図１４Ａ〜１４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１４Ｋ及び１４Ｌは、ＭｅＷｏ（図１４Ｋ）及びＷＭ１１５（図１４Ｌ）細胞を例示濃度のマラセジン、カルバゾール、化合物ＩＩ、及びスタウロスポリンに２４時間曝露した後の乳酸脱水素酵素レベルを示すヒストグラムである。
【図１４Ｄ】図１４Ａ〜１４Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１４Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１４Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１４Ｃ）、またはスタウロスポリン（図１４Ｄ）で６、２４、４８、及び７２時間処置した後の、ＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞からの乳酸脱水素酵素（「ＬＤＨ」）放出レベルを示す表である。図１４Ｅ〜１４Ｊは、図１４Ａ〜１４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１４Ｋ及び１４Ｌは、ＭｅＷｏ（図１４Ｋ）及びＷＭ１１５（図１４Ｌ）細胞を例示濃度のマラセジン、カルバゾール、化合物ＩＩ、及びスタウロスポリンに２４時間曝露した後の乳酸脱水素酵素レベルを示すヒストグラムである。
【図１４Ｅ−Ｇ】図１４Ａ〜１４Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１４Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１４Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１４Ｃ）、またはスタウロスポリン（図１４Ｄ）で６、２４、４８、及び７２時間処置した後の、ＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞からの乳酸脱水素酵素（「ＬＤＨ」）放出レベルを示す表である。図１４Ｅ〜１４Ｊは、図１４Ａ〜１４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１４Ｋ及び１４Ｌは、ＭｅＷｏ（図１４Ｋ）及びＷＭ１１５（図１４Ｌ）細胞を例示濃度のマラセジン、カルバゾール、化合物ＩＩ、及びスタウロスポリンに２４時間曝露した後の乳酸脱水素酵素レベルを示すヒストグラムである。
【図１４Ｈ−Ｊ】図１４Ａ〜１４Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１４Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１４Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１４Ｃ）、またはスタウロスポリン（図１４Ｄ）で６、２４、４８、及び７２時間処置した後の、ＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞からの乳酸脱水素酵素（「ＬＤＨ」）放出レベルを示す表である。図１４Ｅ〜１４Ｊは、図１４Ａ〜１４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１４Ｋ及び１４Ｌは、ＭｅＷｏ（図１４Ｋ）及びＷＭ１１５（図１４Ｌ）細胞を例示濃度のマラセジン、カルバゾール、化合物ＩＩ、及びスタウロスポリンに２４時間曝露した後の乳酸脱水素酵素レベルを示すヒストグラムである。
【図１４Ｋ】図１４Ａ〜１４Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１４Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１４Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１４Ｃ）、またはスタウロスポリン（図１４Ｄ）で６、２４、４８、及び７２時間処置した後の、ＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞からの乳酸脱水素酵素（「ＬＤＨ」）放出レベルを示す表である。図１４Ｅ〜１４Ｊは、図１４Ａ〜１４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１４Ｋ及び１４Ｌは、ＭｅＷｏ（図１４Ｋ）及びＷＭ１１５（図１４Ｌ）細胞を例示濃度のマラセジン、カルバゾール、化合物ＩＩ、及びスタウロスポリンに２４時間曝露した後の乳酸脱水素酵素レベルを示すヒストグラムである。
【図１４Ｌ】図１４Ａ〜１４Ｄは、様々な濃度のＣＶ−８６８４（図１４Ａ）、ＣＶ−８６８５（図１４Ｂ）、ＣＶ−８６８８（図１４Ｃ）、またはスタウロスポリン（図１４Ｄ）で６、２４、４８、及び７２時間処置した後の、ＭｅＷｏ及びＷＭ１１５細胞からの乳酸脱水素酵素（「ＬＤＨ」）放出レベルを示す表である。図１４Ｅ〜１４Ｊは、図１４Ａ〜１４Ｄからの結果を示すヒストグラムである。図１４Ｋ及び１４Ｌは、ＭｅＷｏ（図１４Ｋ）及びＷＭ１１５（図１４Ｌ）細胞を例示濃度のマラセジン、カルバゾール、化合物ＩＩ、及びスタウロスポリンに２４時間曝露した後の乳酸脱水素酵素レベルを示すヒストグラムである。
【図１５Ａ】様々な濃度のオメプラゾールに曝露したときの、ＡｈＲ応答性ルシフェラーゼレポーター遺伝子プラスミドを安定にトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞におけるアリール炭化水素受容体（「ＡｈＲ」）活性化の生データ及び線グラフを示す図である。
【図１５Ｂ】様々な濃度のＣＶ−８６８４に曝露したときの、ＡｈＲ応答性ルシフェラーゼレポーター遺伝子プラスミドを安定にトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞におけるアリール炭化水素受容体（「ＡｈＲ」）活性化の生データ及び線グラフを示す図である。
【図１５Ｃ】様々な濃度のＣＶ−８６８５に曝露したときの、ＡｈＲ応答性ルシフェラーゼレポーター遺伝子プラスミドを安定にトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞におけるアリール炭化水素受容体（「ＡｈＲ」）活性化の生データ及び線グラフを示す図である。
【図１５Ｄ】様々な濃度のＣＶ−８６８６に曝露したときの、ＡｈＲ応答性ルシフェラーゼレポーター遺伝子プラスミドを安定にトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞におけるアリール炭化水素受容体（「ＡｈＲ」）活性化の生データ及び線グラフを示す図である。
【図１５Ｅ】様々な濃度のＣＶ−８６８８に曝露したときの、ＡｈＲ応答性ルシフェラーゼレポーター遺伝子プラスミドを安定にトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞におけるアリール炭化水素受容体（「ＡｈＲ」）活性化の生データ及び線グラフを示す図である。
【図１５Ｆ】各被験化合物のＥＣ５０値を示す。
【図１６Ａ−Ｅ】図１６Ａ〜１６Ｋは、非処置（図１６Ａ）、滅菌脱イオン水（図１６Ｂ）、１％コウジ酸（図１６Ｃ）、０．２％ＤＭＳＯ（図１６Ｄ）、０．０５％ＤＭＳＯ（図１６Ｅ）、２００μＭ  ＣＶ−８６８４（図１６Ｆ）、５０μＭ  ＣＶ−８６８４（図１６Ｇ）、２００μＭ  ＣＶ−８６８６（図１６Ｈ）、５０μＭ  ＣＶ−８６８６（図１６Ｉ）、２００μＭ  ＣＶ−８６８８（図１６Ｊ）、及び５０μＭ  ＣＶ−８６８８（図１６Ｋ）に曝露した後０日目または７日目のいずれかのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）マトリックスの写真である。
【図１６Ｆ−Ｋ】図１６Ａ〜１６Ｋは、非処置（図１６Ａ）、滅菌脱イオン水（図１６Ｂ）、１％コウジ酸（図１６Ｃ）、０．２％ＤＭＳＯ（図１６Ｄ）、０．０５％ＤＭＳＯ（図１６Ｅ）、２００μＭ  ＣＶ−８６８４（図１６Ｆ）、５０μＭ  ＣＶ−８６８４（図１６Ｇ）、２００μＭ  ＣＶ−８６８６（図１６Ｈ）、５０μＭ  ＣＶ−８６８６（図１６Ｉ）、２００μＭ  ＣＶ−８６８８（図１６Ｊ）、及び５０μＭ  ＣＶ−８６８８（図１６Ｋ）に曝露した後０日目または７日目のいずれかのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）マトリックスの写真である。
【図１７Ａ−Ｅ】図１７Ａ〜１７Ｋは、非処置（図１７Ａ）、滅菌脱イオン水（図１７Ｂ）、１％コウジ酸（図１７Ｃ）、０．２％ＤＭＳＯ（図１７Ｄ）、０．０５％ＤＭＳＯ（図１７Ｅ）、２００μＭ  ＣＶ−８６８４（図１７Ｆ）、５０μＭ  ＣＶ−８６８４（図１７Ｇ）、２００μＭ  ＣＶ−８６８６（図１７Ｈ）、５０μＭ  ＣＶ−８６８６（図１７Ｉ）、２００μＭ  ＣＶ−８６８８（図１７Ｊ）、及び５０μＭ  ＣＶ−８６８８（図１７Ｋ）に曝露した後０日目または７日目のいずれかのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）マトリックスの１５倍の顕微鏡写真である。
【図１７Ｆ−Ｋ】図１７Ａ〜１７Ｋは、非処置（図１７Ａ）、滅菌脱イオン水（図１７Ｂ）、１％コウジ酸（図１７Ｃ）、０．２％ＤＭＳＯ（図１７Ｄ）、０．０５％ＤＭＳＯ（図１７Ｅ）、２００μＭ  ＣＶ−８６８４（図１７Ｆ）、５０μＭ  ＣＶ−８６８４（図１７Ｇ）、２００μＭ  ＣＶ−８６８６（図１７Ｈ）、５０μＭ  ＣＶ−８６８６（図１７Ｉ）、２００μＭ  ＣＶ−８６８８（図１７Ｊ）、及び５０μＭ  ＣＶ−８６８８（図１７Ｋ）に曝露した後０日目または７日目のいずれかのＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）マトリックスの１５倍の顕微鏡写真である。
【図１８】１８Ａ〜１８Ｆは、非処置（図１８Ａ）、ＤＭＳＯ（図１８Ｂ）、フェニルチオ尿素（「ＰＴＵ」）（図１８Ｃ）、ならびに２．５μＭの化合物ＩＩ（図１８Ｄ）、５μＭの化合物ＩＩ（図１８Ｅ）、及び１０μＭの化合物ＩＩ（図１８Ｆ）に曝露したゼブラフィッシュの写真である。赤い矢印は正常なメラノサイトを示す。
【図１９】図１９Ａ〜１９Ｆは、非処置（図１９Ａ）、ＤＭＳＯ（図１９Ｂ）、フェニルチオ尿素（「ＰＴＵ」）（図１９Ｃ）、ならびに０．３μＭの化合物ＩＩ（図１９Ｄ）、１μＭの化合物ＩＩ（図１９Ｅ）、及び３μＭの化合物ＩＩ（図１９Ｆ）に曝露したゼブラフィッシュの写真である。赤い矢印は正常なメラノサイトを示す。黄色い矢印は異常に小さいメラノサイトを示す。
【図２０】例示条件に曝露した後に皮膚の色素沈着が減少したゼブラフィッシュの数及び割合（％）を示す総括表である。最後の６列は、様々な濃度の化合物ＩＩの効果を示す。
【図２１】図２１Ａ〜２１Ｅは、非処置（図２１Ａ）、ＤＭＳＯ（図２１Ｂ）、ＰＴＵ（図２１Ｃ）、０．５μＭ（図２１Ｄ）、及び１．５μＭ（図２１Ｅ）で処置したゼブラフィッシュの写真である。下方のパネルは、配色が反転した領域を含む。
【図２２Ａ】図２１Ａ〜２１Ｅで例証したゼブラフィッシュの胚の写真からの色素を有するピクセル／ｍｍ３によって測定した色素沈着密度を示すヒストグラムである。
【図２２Ｂ】図２１Ａ〜２１Ｅで例証したゼブラフィッシュの胚の写真からの総ピクセル数を示すヒストグラムである。
【図２３Ａ】ＤＭＳＯ中のＣＶ−８６８４の質量スペクトルである。
【図２３Ｂ】ＲＰＭＩ培地中のＣＶ−８６８４の質量スペクトルである。
【図２３Ｃ】ＤＭＥＭ中のＣＶ−８６８４の質量スペクトルである。
【図２３Ｄ】ＤＭＳＯ中のＣＶ−８６８６の質量スペクトルである。
【図２３Ｅ】ＲＰＭＩ培地中のＣＶ−８６８６の質量スペクトルである。
【図２３Ｆ】ＤＭＥＭ中のＣＶ−８６８６の質量スペクトルである。
【図２３Ｇ】ＤＭＳＯ中のＣＶ−８６８８の質量スペクトルである。
【図２３Ｈ】ＲＰＭＩ培地中のＣＶ−８６８の質量スペクトルである。
【図２３Ｉ】ＤＭＥＭ中のＣＶ−８６８８の質量スペクトルである。
【図２３Ｊ】２時間のインキュベーションの後に例示溶媒中に残存する試験化合物の割合（％）を示す総括表である。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
本発明の一実施形態は、皮膚を美白するための化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩である。
【００４５】
本明細書で使用される場合、「化合物」という用語は、１個または複数の化学結合によって連結された２個以上の原子を指す。本発明では、化学結合には、共有結合、イオン結合、水素結合、及びファンデルワールス相互作用が含まれるが、これらに限定されない。本発明の共有結合には、単結合、二重結合、及び三重結合が含まれる。本発明の化合物には、有機分子が含まれるが、これらに限定されない。
【００４６】
本発明の有機化合物／分子には、官能基を有するまたは有さない直鎖状、分岐状、及び環状炭化水素が含まれる。「Ｃｘ〜ｙ」という用語は、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアルコキシなどの化学的部分とともに使用されるとき、鎖中にｘ〜ｙ個の炭素を含有する基を含むことを意味する。例えば、「Ｃｘ〜ｙアルキル」という用語は、トリフルオロメチル及び２，２，２−トリフルオロエチルなどのハロアルキル基を含めた、鎖中にｘ〜ｙ個の炭素を含有する直鎖アルキル基及び分岐鎖アルキル基を含む置換または非置換の飽和炭化水素基を意味する。「Ｃｘ〜ｙアルケニル」及び「Ｃｘ〜ｙアルキニル」という用語は、長さ及び置換可能性は上述のアルキルと同様であるが、少なくとも１個の二重または三重結合をそれぞれ含有する、置換または非置換の不飽和脂肪族基を指す。
【００４７】
「脂肪族」という用語は、本明細書で使用される場合、芳香族環を含有しない、炭素及び水素原子から構成される基を意味する。したがって、脂肪族基には、アルキル、アルケニル、アルキニル、及びカルボシクリル基が含まれる。
【００４８】
「アルキル」という用語は、直鎖アルキル基及び分岐鎖アルキル基を含めた、環構造を有さない飽和脂肪族基である基を意味する。
【００４９】
「アルケニル」という用語は、本明細書で使用される場合、少なくとも１個の二重結合を含有する脂肪族基を意味する。
【００５０】
「アルキニル」という用語は、本明細書で使用される場合、少なくとも１個の三重結合を含有する脂肪族基を意味する。
【００５１】
本明細書で使用される場合、「芳香族化合物」、「芳香族」、または「芳香族環」を含有する化合物は、アリールまたはヘテロアリール化合物である。「アリール」という用語には、本明細書で使用される場合、環の各原子が炭素である、置換または非置換の単環芳香族基が含まれる。好ましくは、環は３〜８員環であり、より好ましくは６員環である。「アリール」という用語には、２個以上の環式環を有する多環式環系も含まれ、多環式環系では、２個以上の炭素が隣接している２個の環に共通しており、その環のうちの少なくとも１個が芳香族であり、例えば、他方の環式環が、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、及び／またはヘテロシクリルであり得る。アリール基には、ベンゼン、ナフタレン、フェナントレン、フェノール、アニリンなどが含まれる。「ヘテロアリール」という用語には、少なくとも１個のヘテロ原子、好ましくは１〜４個のヘテロ原子、より好ましくは１〜２個のヘテロ原子を含む、置換または非置換の芳香族単環構造、好ましくは３〜８員環、より好ましくは５〜７員環、さらにより好ましくは５〜６員環が含まれる。「ヘテロアリール」という用語には、２個以上の環式環を有する多環式環系も含まれ、多環式環系では、２個以上の炭素が隣接している２個の環に共通しており、その環のうちの少なくとも１個がヘテロ芳香族であり、例えば、他方の環式環が、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、及び／またはヘテロシクリルであり得る。ヘテロアリール基には、例えば、ピロール、フラン、チオフェン、インドール、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、及びピリミジンなどが含まれる。好ましくは、本発明のある種の化合物は、少なくとも１個の、好ましくは２個のインドール基、ならびに少なくとも１個のアルデヒド基を含む。
【００５２】
「置換された」という用語は、骨格の１個または複数の炭素上の水素原子に置き換わる少なくとも１個の置換基を有する部分を意味する。「置換」または「〜で置換された」には、かかる置換が被置換原子及び置換基の許容原子価に従うこと、ならびにこの置換によって安定な化合物が生じること、例えば、それによって転位、環化、脱離などの転換が自然に生じないという暗黙の条件が含まれることが理解されよう。許容できる置換基は、適正な有機化合物について１個または複数であってもよく、同一でも異なっていてもよい。
【００５３】
本明細書で使用される場合、「皮膚を美白する」およびその文法上の変化形は、一般に、実際のまたは知覚されるすべての皮膚の色素沈着の減少を指す。皮膚を美白する方法は、年齢、日光曝露、または色素沈着過剰障害に起因する皮膚の色素沈着過剰領域の色素沈着を低減させるために使用されてきた。本発明の化合物及び組成物を、例えば被験体の皮膚に適用すると、色素沈着を低減させることができ、その結果、皮膚が前記適用前よりも明るくまたは白く見える。皮膚の色素沈着は幾つもの方式で評価することができ、そうした方式には、例えば、ｖｏｎ  Ｌｕｓｃｈａｎの色彩スケール（ｖｏｎ  Ｌｕｓｃｈａｎ  ｃｈｒｏｍａｔｉｃ  ｓｃａｌｅ）、フィッツパトリック皮膚分類テスト（Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８）、及びＴａｙｌｏｒの色素沈着過剰スケール（Ｔａｙｌｏｒ  Ｈｙｐｅｒｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ  Ｓｃａｌｅ）（Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）を使用する視覚的評価、ならびに反射分光光度法（Ｚｏｎｉｏｓ，ｅｔ  ａｌ．，２００１）が含まれるが、これらに限定されない。例えば、フィッツパトリック皮膚分類テストは、６タイプの皮膚（Ｉ〜ＶＩ）を含み、「美白される」という用語が本明細書で使用される場合、タイプＶ以下になるタイプＶＩの皮膚は「美白され」ている。以降でさらに論じるように、皮膚の美白は、幾つもの現象によって生じる可能性があり、これらの現象には、メラノサイトの活性の調節、メラノサイトのアポトーシスの誘導、アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）のアゴニズム、またはメラニン産生、メラノソーム生合成、もしくはメラノソーム転送の調節が含まれるが、これらに限定されない。
【００５４】
本発明のある種の化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生されるか、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母から単離されるまたは単離可能である。Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ属の酵母であり、これらには、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｇｌｏｂｏｓａ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｒｅｓｔｒｉｃｔａ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｓｙｍｐｏｄｉａｌｉｓ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｓｌｏｏｆｆｉａｅ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｏｂｔｕｓａ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｐａｃｈｙｄｅｒｍａｔｉｓ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｄｅｒｍａｔｉｓ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｎａｎａ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｙａｍａｔｏｅｎｓｉｓ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｅｑｕｉｎｅ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｃａｐｒａｅ、及びＭａｌａｓｓｅｚｉａ  ｃｕｎｉｃｕｌｉが含まれるが、これらに限定されない。（Ｇｕｅｈｏ，ｅｔ  ａｌ．，１９９６；Ｇａｉｔａｎｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母は、正常なヒト皮膚細菌叢の一部であり、典型的には病原性の影響を生じない。しかし、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母は、これらに限定されないが、癜風（黒色癜風と白色癜風の両方の種類）、脂漏性皮膚炎、ふけ、アトピー性皮膚炎、マラセチア毛包炎、乾癬、ならびに融合性細網状乳頭腫症を含めた、幾つもの疾患を引き起こすことがある。（Ｇａｉｔａｎｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【００５５】
本明細書で使用される場合、「化学的類似体」という用語は、親化合物に構造的に関連し、異なる官能基または置換基を含有する化合物を指す。例えば、本発明の親化合物はマラセジンであり、マラセジンの化学的類似体は、マラセジンとは異なるある種の官能基及び置換基を含有する。本発明の化学的類似体は、化粧品としての使用に適した薬物動態プロファイルを含めた、所与の親化合物に優る著しい利点を有することができる。幾つかの実施形態では、化学的類似体は、親分子から１つまたは複数の化学反応によって生成される。他の実施形態では、親化合物に由来しない代替合成スキームを使用して、本発明の化学的類似体を生成することができる。
【００５６】
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母が、その生活環の間に、本発明の化合物を適正な増殖条件下で合成する、分泌する、蓄積する、または他の方法で生成するならば、本発明の化合物は、「Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される」。Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母は、その増殖培地に補充されたものに応じて異なる化合物を分泌する。（Ｎａｚｚａｒｏ−Ｐｏｒｒｏ，ｅｔ  ａｌ．，１９７８）。本発明は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって任意の増殖条件下で産生された任意の化合物を含むが、好ましい化合物には、例えば、マラセジン及びその化学的類似体が含まれる。
【００５７】
この実施形態の一態様では、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物は、式（Ｉ）の構造を有する：
【化１７】
2019513818.tif 000018
【００５８】
この実施形態の別の態様では、該化合物は、マラセジンの化学的類似体である。
【００５９】
マラセジンは、本発明のＭａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の一例である。マラセジンは、２−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）−１Ｈ−インドール−３−カルバルデヒドとしても知られ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒから最初に単離されたトリプトファン代謝産物である。マラセジンは、細胞増殖、分化、及び遺伝子発現に関与する受容体であるアリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）の公知のアゴニストである。（Ｗｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。マラセジンはまた、初代ヒトメラノサイトにおいてアポトーシスを誘導する。（Ｋｒａｍｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，２００５）。最近、マラセジンのある種の化学的類似体がＷｉｎｓｔｏｎ−ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ及び共同研究者らによって合成され、彼らによって該類似体のＡｈＲアゴニスト活性が調査された。（Ｗｉｎｓｔｏｎ−ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【００６０】
本発明の別の実施形態は、メラノサイトのアポトーシスを誘導するための化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩である。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「メラノサイト」という用語は、通常、チロシナーゼを合成し、メラノソーム内で色素であるメラニンを合成する、表皮の樹状細胞を指す。本発明のメラノサイトは、ある種の遺伝子の上方制御を示す。これらの遺伝子には、以下：チロシナーゼ（眼皮膚白皮症ＩＡ）、小眼球症関連転写因子、α−２−マクログロブリン、チロシナーゼ関連タンパク質１、溶質キャリアファミリー１６、ＧＳ３９５５タンパク質、ｖ−ｋｉｔ  Ｈａｒｄｙ−Ｚｕｃｋｅｒｍａｎ４ネコ肉腫ウイルス、眼白子症１、ＲａｇＤタンパク質、グリコゲニン２、Ｇタンパク質共役型受容体、ファミリーＣ、眼皮膚白皮症ＩＩ、ｄｅｌｅｔｅｄ  ｉｎ  ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  ｃａｎｃｅｒ  １、ｍｅｌａｎ−Ａ、ＳＲＹ−ｂｏｘ  １０、ＡＴＰアーゼ、クラスＶ、タイプ１０Ｃ、マトリックスメタロプロテアーゼ１、潜在型トランスフォーミング増殖因子βｂ、ＡＴＰ結合カセット、サブファミリーＣ、ヒドロキシプロスタグランジンデヒドロゲナーゼ１５、膜貫通７スーパーファミリーメンバー１、グルタミニルペプチドシクロトランスフェラーゼ、及びＬｅｅ及び共同研究者らに同定されている他の遺伝子のうちの１種または複数が含まれるが、これらに限定されない。（Ｌｅｅ，ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【００６２】
メラノサイトは、他の多くの細胞型と同様に、プログラム細胞死、すなわちアポトーシスを起こす。メラノサイトのアポトーシス経路は当業者には公知であり（Ｗａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，２０１４）、アポトーシス経路はＥｌｍｏｒｅによって全般的に概説されている（Ｅｌｍｏｒｅ，２００７）。本発明の化合物または組成物は、例えば、メラノサイトにおいて、ある種のアポトーシス促進性シグナル伝達経路の活性化を引き起こすか、ある種の抗アポトーシス経路の抑制を引き起こすことによって、メラノサイトのアポトーシスを「誘導する」。本発明の化合物または組成物は、経路のシグナル伝達分子と直接相互作用することによって、または典型的には経路内で機能しない１つまたは複数の中間分子との直接相互作用を介して経路の分子と間接的に相互作用することによって、アポトーシスに関連する経路を直接活性化／抑制できることが想定される。
【００６３】
この実施形態の一態様では、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物は、式（Ｉ）の構造を有する：
【化１８】
2019513818.tif 000019
【００６４】
この実施形態の別の態様では、該化合物は、マラセジンの化学的類似体である。
【００６５】
本発明のさらなる実施形態は、メラノサイトの活性を調節するための化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩である。
【００６６】
メラノサイトの活性は、本発明において企図される幾つもの方式で調節することができ、これらには、メラノサイトのアポトーシスを誘導すること、またはメラノサイトの遺伝子発現、細胞運動性、細胞増殖、メラニン産生、メラノソーム生合成、もしくはメラノソーム転送を変化させることが含まれるが、これらに限定されない。
【００６７】
この実施形態の一態様では、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物は、式（Ｉ）の構造を有する：
【化１９】
2019513818.tif 000020
【００６８】
この実施形態の別の態様では、該化合物は、マラセジンの化学的類似体である。
【００６９】
本発明の追加的な実施形態は、アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩である。
【００７０】
本明細書で使用される場合、「アゴニスト」、「アゴナイズする」という用語、及びその文法上の変化形は、１つまたは複数の生物活性をトリガーする（例えば、開始するまたは促進する）、部分的もしくは完全に高める、刺激する、または活性化する分子を指す。本発明のアゴニストには、天然に存在する物質だけでなく、合成物質も含まれる。
【００７１】
本発明のアリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）は、本明細書に記載される通りの被験体に天然に存在する任意のアリール炭化水素受容体である。アリール炭化水素受容体は、当業者には公知である。（Ｎｏａｋｅｓ、２０１５）。アリール炭化水素受容体のアゴニストには、キヌレニン、キヌレン酸、シンナバリン酸、及び６−ホルミルインドロ［３，２−ｂ］カルバゾール（ＦＩＣＺ）などのトリプトファン関連化合物が含まれるが、これらに限定されない。マラセジンは、アリール炭化水素受容体のアゴニストとしても公知である。（Ｗｉｌｌｅ，ｅｔ  ａｌ．，２００１）。
【００７２】
この実施形態の一態様では、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物は、式（Ｉ）の構造を有する：
【化２０】
2019513818.tif 000021
【００７３】
この実施形態の別の態様では、該化合物は、マラセジンの化学的類似体である。
【００７４】
本発明の別の実施形態は、色素沈着過剰障害によって引き起こされる色素沈着過剰を改善するための化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩である。
【００７５】
本明細書で使用される場合、本発明の化合物、組成物、及び方法を使用して、例えば、色素沈着過剰障害によって影響を受けた領域における色素沈着過剰のレベルを低減させること、さらなる色素沈着過剰を遅延させること、またはさらなる色素沈着過剰が生じることを防止することによって、色素沈着過剰障害によって引き起こされる色素沈着過剰を改善することができる。しかし、どの被験体も特定の投薬プロトコル、レジメン、またはプロセスに応答し得るわけではないので、色素沈着過剰障害によって引き起こされる色素沈着過剰の改善は、ありとあらゆる被験体または被験体集団において所望の生理的応答または結果が実現されることを求めているのではない。したがって、所与の被験体または被験体集団は、投薬に応答しないまたは不適切に応答する可能性があるが、他の被験体または被験体集団は応答する可能性があり、したがって自分の色素沈着過剰障害の改善を感じることができる。
【００７６】
本明細書で使用される場合、「色素沈着過剰」という用語は、実際のまたは知覚される過度に暗色の皮膚障害である。この皮膚障害は、例えば、年齢、過剰な日光曝露、または暗色の皮膚領域をもたらす疾患もしくは状態が原因で現実化し得る。暗色の皮膚領域は、暗色の斑点、痣、または比較的大きい領域の形態であり得る。この皮膚障害は、例えば個人による知覚によって、自分の皮膚の色調が暗すぎると知覚される。個人は、皮膚の色合いを明るくしようという美容上の望みを抱く可能性がある。
【００７７】
色素沈着過剰障害は、色素沈着過剰が一次症状である障害だけでなく、色素沈着過剰が二次的症状として生じる障害でもある。本発明の色素沈着過剰障害には、先天性色素沈着過剰障害及び後天性色素沈着過剰障害が含まれるが、これらに限定されない。本発明の先天性色素沈着過剰障害には、表皮色素沈着過剰（母斑細胞性母斑、スピッツ母斑、及び扁平母斑）、真皮色素沈着過剰（青色母斑、太田母斑、真皮黒皮症、伊藤母斑、及び蒙古斑）、雀卵斑、網状肢端色素沈着症、先端色素沈着症／肢端色素沈着症、及び多発性黒子症候群（汎発性黒子症候群、レオパード症候群、遺伝性パターン化黒子症（ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ  ｐａｔｔｅｒｎｅｄ  ｌｅｎｔｉｇｉｎｏｓｉｓ）、カーニー複合、ポイツ−ジェガーズ症候群、Ｌａｕｇｉｅｒ−Ｈｕｎｚｉｋｅｒ−Ｂａｒａｎ症候群、及びクロンカイト−カナダ症候群）に関与するものが含まれるが、これらに限定されない。（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。本発明の後天性色素沈着過剰障害には、老人性色素斑／黒子、肝斑／褐色斑、リール黒皮症、口唇の黒色斑、陰茎／外陰部黒皮症、顔面毛包性紅斑黒皮症（北村）、紫外線に誘導される色素沈着（日焼け及び光線性花弁状色素斑）、炎症後色素沈着（摩擦黒皮症及び色素異常性固定紅斑）、化学的／薬物に誘導される色素沈着（ポリ塩化ビフェニル、ヒ素、５−ＦＵ、ブレオマイシン、シクロホスファミド、メトトレキサート、クロルプロマジン、フェニトイン、テトラサイクリン、及びクロロキン）、色素分界線条、及び異物の沈着（カロチン、銀、金、水銀、ビスマス、及び刺青など）が含まれるが、これらに限定されない。全身性障害に関連する色素沈着過剰には、代謝／酵素障害（血色素症、ウィルソン病、ゴーシェ病、ニーマンピック病、アミロイドーシス、組織黒変症、黒色表皮腫、及び晩発性皮膚ポルフィリン症）、内分泌障害（アジソン病、クッシング症候群、及び甲状腺機能亢進症）、栄養障害（ペラグラ、ビタミンＢ１２欠乏症、葉酸欠乏症、浮浪者病、及び色素性痒疹）、肥満細胞症、膠原病、肝機能障害、及び腎機能障害が含まれる。色素沈着過剰は、感染性疾患（麻疹、梅毒、及びＭａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒ）及び症候群（フォンレックリングハウゼン病、ソトス症候群、ＰＯＥＭＳ症候群、ネーゲリ症候群、カントゥ症候群、マクキューン・オールブライト症候群、ワトソン症候群、及びブルーム症候群）にも関連し得る。（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【００７８】
この実施形態の一態様では、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物は、式（Ｉ）の構造を有する：
【化２１】
2019513818.tif 000022
【００７９】
この実施形態の別の態様では、該化合物は、マラセジンの化学的類似体である。
【００８０】
本発明のさらなる実施形態は、メラニン産生を調節するための化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩である。
【００８１】
メラニンは、皮膚及び毛髪に色を与える、天然に産生される色素である。皮膚の概略図を図１Ａに示す。メラニンは、メラノサイトによって、メラノソームとして公知の小器官内で産生される。本発明の化合物または組成物は、例えば、メラノソーム生合成を調節し、メラニン合成を酵素レベルで直接的または間接的に阻害することによって、被験体においてメラニン産生を調節する。
【００８２】
メラノソーム生合成は、４段階で行われる。段階Ｉは、本質的に着色されていない液胞であるプレメラノソームによって特徴付けられる。段階ＩＩで、プレメラノソームは、段階ＩＩＩでメラニンが沈着する条線を作り出す。段階ＩＶによって、メラニン含有量が豊富な成熟メラノソームとなる。本発明の化合物及び組成物は、通常これらの段階のいずれかまたはすべてを促進する生物学的プロセスを阻害するまたは減弱させることによって、メラノソーム生合成を調節する。（Ｗａｓｍｅｉｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【００８３】
メラニン合成は主に、３種の酵素、すなわち、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質１、及びドーパクローム異性化酵素を必要とする。これらの酵素の細胞内輸送に影響を及ぼす追加的な因子には、ＢＬＯＣ−１、ＯＡ１、及びＳＬＣ４５Ａ２が含まれるが、これらに限定されない。本発明の化合物及び組成物は、例えば、これらの酵素または因子のいずれかの活性を阻害するまたは減弱させることによって、メラニン産生を調節することができる。（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【００８４】
メラノソームが形成され、メラニンが合成されると、メラノソームは、表皮のメラノサイトから皮膚及び毛髪のケラチノサイトへ転送される必要がある。メラノソームは、メラノサイトの核の近くに生じ、微小管及びアクチン線維に沿ってメラノサイトの周辺部に輸送される。本発明の化合物及び組成物は、メラノソームの核周囲領域からメラノサイト周辺部への、そして隣接するケラチノサイト内への輸送をもたらす生物学的プロセスのいずれかを妨げることによって、メラノソーム転送を調節する。メラニン合成、メラニン輸送、及びメラノサイトアポトーシスの概略図を図１Ｂに示す。
【００８５】
この実施形態の一態様では、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物は、式（Ｉ）の構造を有する：
【化２２】
2019513818.tif 000023
【００８６】
この実施形態の別の態様では、該化合物は、マラセジンの化学的類似体である。
【００８７】
本発明の追加的な実施形態は、メラノソーム生合成を調節するための化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩である。
【００８８】
この実施形態の一態様では、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物は、式（Ｉ）の構造を有する：
【化２３】
2019513818.tif 000024
【００８９】
この実施形態の別の態様では、該化合物は、マラセジンの化学的類似体である。
【００９０】
本発明の別の実施形態は、メラノソーム転送を調節するための化合物である。該化合物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物の化学的類似体、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩である。
【００９１】
この実施形態の一態様では、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される化合物は、式（Ｉ）の構造を有する：
【化２４】
2019513818.tif 000025
【００９２】
この実施形態の別の態様では、該化合物は、マラセジンの化学的類似体である。
【００９３】
本発明のさらなる実施形態は、組成物である。該組成物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母と、化粧品的または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、または担体とを含む。
【００９４】
本発明の追加的な実施形態は、組成物である。該組成物は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母から単離されたまたは単離可能な化合物と、化粧品的または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、または担体とを含む。
【００９５】
本発明のＭａｌａｓｓｅｚｉａ酵母から単離された化合物は、単離前にＭａｌａｓｓｅｚｉａ酵母に必ず存在するか、またはＭａｌａｓｓｅｚｉａ酵母によって産生される。したがって、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母から単離された化合物は、実際の酵母細胞から得られる。細胞材料から化合物を抽出する標準プロトコルは当業者には公知である。
【００９６】
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ酵母から単離可能な化合物は、実際の酵母細胞から得る必要がない。その代わりに、合成反応を使用して、実際の酵母細胞を介在させることなく酵母中で産生される化合物を生成することができる。有機合成反応は当業者には周知であり、これに関して使用することができる。
【００９７】
本発明の別の実施形態は、組成物である。該組成物は、類似体を含めた、本明細書に開示する化合物のいずれかと、化粧品的または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、または担体とを含む。
【００９８】
本発明のさらなる実施形態は、被験体において皮膚を美白する方法である。該方法は、本明細書に開示する化合物または組成物のいずれかを被験体に接触させることを含む。
【００９９】
本明細書で使用される場合、「接触する」という用語及びその文法上の変化形は、２つ以上の材料を、それらが相互作用できるように十分近くに近づけることを指す。よって、例示目的に過ぎないが、本発明の化合物は、例えば、メラノサイトの表面上の受容体と相互作用することによって、メラノサイトに接触することができる。同様に、本発明の組成物は、例えば、被験体の皮膚に直接適用されることによって、ヒト被験体に接触することができる。
【０１００】
本明細書で使用される場合、「被験体」は、哺乳類の細胞、組織、有機体、またはそれらの集団を意味する。本発明の被験体は、好ましくは、ヒト細胞、ヒト組織、及びヒトを含めたヒトであるが、そのほかに、霊長類、農場の動物、家畜、実験動物などが含まれる。農業用動物の幾つかの例には、ウシ、ブタ、ウマ、ヤギなどが含まれる。家畜の幾つかの例には、イヌ、ネコなどが含まれる。実験動物の幾つかの実施例には、霊長類、ラット、マウス、ウサギ、モルモットなどが含まれる。
【０１０１】
本発明の追加的な実施形態は、被験体においてメラノサイトのアポトーシスを誘導するための方法である。該方法は、本明細書に開示する化合物または組成物のいずれかを被験体に接触させることを含む。
【０１０２】
本発明の別の実施形態は、被験体においてメラノサイトの活性を調節するための方法である。該方法は、本明細書に開示する化合物または組成物のいずれかを被験体に接触させることを含む。
【０１０３】
本発明のさらなる実施形態は、アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための方法である。該方法は、本明細書に開示する化合物または組成物のいずれかを被験体に接触させることを含む。
【０１０４】
本発明の追加的な実施形態は、色素沈着過剰障害によって引き起こされる色素沈着過剰の改善を必要とする被験体において、色素沈着過剰障害によって引き起こされる色素沈着過剰を改善するための方法である。該方法は、本明細書に開示する化合物または組成物のいずれかを被験体に接触させることを含む。
【０１０５】
本明細書で使用される場合、色素沈着過剰障害によって引き起こされる色素沈着過剰の改善を「必要とする」被験体には、実際に改善を必要とする被験体または改善の必要性を知覚する被験体が含まれる。
【０１０６】
本発明の別の実施形態は、被験体においてメラニン産生を調節するための方法である。該方法は、本明細書に開示する化合物または組成物のいずれかを被験体に接触させることを含む。
【０１０７】
本発明のさらなる実施形態は、被験体においてメラノソーム生合成を調節するための方法である。該方法は、本明細書に開示する化合物または組成物のいずれかを被験体に接触させることを含む。
【０１０８】
本発明の追加的な実施形態は、被験体においてメラノソーム転送を調節するための方法である。該方法は、本明細書に開示する化合物または組成物のいずれかを被験体に接触させることを含む。
【０１０９】
本発明の別の実施形態は、化合物である。該化合物は、式（ＩＩ）：
【化２５】
2019513818.tif 000026
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択され、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１の少なくとも１つはメチルである）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する。
【０１１０】
この実施形態の一態様では、該化合物は、以下からなる群から選択される：
【化２６】
2019513818.tif 000027
及び
【化２７】
2019513818.tif 000028
【０１１１】
本発明のさらなる実施形態は、化合物である。該化合物は、式（ＩＩＩ）：
【化２８】
2019513818.tif 000029
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択され、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０の少なくとも１つはメチルである）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する。
【０１１２】
この実施形態の一態様では、該化合物は、以下である：
【化２９】
2019513818.tif 000030
【０１１３】
本発明の追加的な実施形態は、皮膚を美白するための化合物である。該化合物は、式（ＩＩ）：
【化３０】
2019513818.tif 000031
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する。
【０１１４】
この実施形態の一態様では、該化合物は、以下からなる群から選択される：
【化３１】
2019513818.tif 000032
、
【化３２】
2019513818.tif 000033
及び
【化３３】
2019513818.tif 000034
【０１１５】
本発明の別の実施形態は、皮膚を美白するための化合物である。該化合物は、式（ＩＩＩ）：
【化３４】
2019513818.tif 000035
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する。
【０１１６】
この実施形態の一態様では、該化合物は、以下からなる群から選択される：
【化３５】
2019513818.tif 000036
及び
【化３６】
2019513818.tif 000037
【０１１７】
本発明のさらなる実施形態は、メラノサイトのアポトーシスを誘導するための化合物である。該化合物は、式（ＩＩ）：
【化３７】
2019513818.tif 000038
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する。
【０１１８】
この実施形態の一態様では、該化合物は、以下からなる群から選択される：
【化３８】
2019513818.tif 000039
、
【化３９】
2019513818.tif 000040
及び
【化４０】
2019513818.tif 000041
【０１１９】
本発明の追加的な実施形態は、メラノサイトのアポトーシスを誘導するための化合物である。該化合物は、式（ＩＩＩ）：
【化４１】
2019513818.tif 000042
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する。
【０１２０】
この実施形態の一態様では、該化合物は、以下からなる群から選択される：
【化４２】
2019513818.tif 000043
及び
【化４３】
2019513818.tif 000044
【０１２１】
本発明の別の実施形態は、アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための化合物である。該化合物は、式（ＩＩ）：
【化４４】
2019513818.tif 000045
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する。
【０１２２】
この実施形態の一態様では、該化合物は、以下からなる群から選択される：
【化４５】
2019513818.tif 000046
、
【化４６】
2019513818.tif 000047
及び
【化４７】
2019513818.tif 000048
【０１２３】
本発明のさらなる実施形態は、アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための化合物である。該化合物は、式（ＩＩＩ）：
【化４８】
2019513818.tif 000049
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する。
【０１２４】
この実施形態の一態様では、該化合物は、以下からなる群から選択される：
【化４９】
2019513818.tif 000050
及び
【化５０】
2019513818.tif 000051
【０１２５】
本発明の追加的な実施形態は、組成物である。該組成物は、式（ＩＩ）：
【化５１】
2019513818.tif 000052
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物と、化粧品的または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、または担体とを含む。
【０１２６】
この実施形態の一態様では、該化合物は、以下からなる群から選択される：
【化５２】
2019513818.tif 000053
、
【化５３】
2019513818.tif 000054
及び
【化５４】
2019513818.tif 000055
【０１２７】
本発明の別の実施形態は、組成物である。該組成物は、式（ＩＩＩ）：
【化５５】
2019513818.tif 000056
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物と、化粧品的または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、または担体とを含む。
【０１２８】
この実施形態の一態様では、該化合物は、以下からなる群から選択される：
【化５６】
2019513818.tif 000057
及び
【化５７】
2019513818.tif 000058
【０１２９】
本発明のさらなる実施形態は、被験体において皮膚を美白するための方法である。該方法は、式（ＩＩ）：
【化５８】
2019513818.tif 000059
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を被験体に接触させることを含む。
【０１３０】
この実施形態の一態様では、該化合物は、以下からなる群から選択される：
【化５９】
2019513818.tif 000060
、
【化６０】
2019513818.tif 000061
及び
【化６１】
2019513818.tif 000062
【０１３１】
本発明の追加的な実施形態は、被験体において皮膚を美白するための方法である。該方法は、式（ＩＩＩ）：
【化６２】
2019513818.tif 000063
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を被験体に接触させることを含む。
【０１３２】
この実施形態の一態様では、該化合物は、以下からなる群から選択される：
【化６３】
2019513818.tif 000064
及び
【化６４】
2019513818.tif 000065
【０１３３】
本発明の別の実施形態は、被験体においてメラノサイトのアポトーシスを誘導するための方法である。該方法は、式（ＩＩ）：
【化６５】
2019513818.tif 000066
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を被験体に接触させることを含む。
【０１３４】
この実施形態の一態様では、該化合物は、以下からなる群から選択される：
【化６６】
2019513818.tif 000067
、
【化６７】
2019513818.tif 000068
及び
【化６８】
2019513818.tif 000069
【０１３５】
本発明のさらなる実施形態は、被験体においてメラノサイトのアポトーシスを誘導するための方法である。該方法は、式（ＩＩＩ）：
【化６９】
2019513818.tif 000070
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を被験体に接触させることを含む。
【０１３６】
この実施形態の一態様では、該化合物は、以下からなる群から選択される：
【化７０】
2019513818.tif 000071
及び
【化７１】
2019513818.tif 000072
【０１３７】
本発明の追加的な実施形態は、被験体においてアリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための方法である。該方法は、式（ＩＩ）：
【化７２】
2019513818.tif 000073
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を被験体に接触させることを含む。
【０１３８】
この実施形態の一態様では、該化合物は、以下からなる群から選択される：
【化７３】
2019513818.tif 000074
、
【化７４】
2019513818.tif 000075
及び
【化７５】
2019513818.tif 000076
【０１３９】
本発明の別の実施形態は、被験体においてアリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための方法である。該方法は、式（ＩＩＩ）：
【化７６】
2019513818.tif 000077
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を被験体に接触させることを含む。
【０１４０】
この実施形態の一態様では、該化合物は、以下からなる群から選択される：
【化７７】
2019513818.tif 000078
及び
【化７８】
2019513818.tif 000079
【０１４１】
本明細書で使用される場合、「組成物」という用語は、本発明の化合物を含む実体だけでなく、本発明の化合物を他の成分と組み合わせて直接的または間接的に得られる任意の実体を意味する。本発明の組成物は、例えば、インビトロまたはインビボでの研究試薬として使用することができる。本発明の組成物は、美容効果のためにヒトまたは非ヒト被験体の皮膚に直接適用することもできる。
【０１４２】
本発明の組成物は、経口摂取用もしくは非経口用の任意の所望の有効な様式で、または腹腔内、皮下、局所、皮内、吸入、肺内、直腸内、膣内、舌下、筋肉内、静脈内、動脈内、髄腔内、もしくはリンパ管内投与などの他の任意の適正な投与様式で投与されてもよい。さらに、本発明の組成物は、他の組成物とともに投与されてもよい。本発明の組成物は、所望であれば、カプセル封入されてもよく、または他の方法で胃または他の分泌物から保護されてもよい。
【０１４３】
本発明の組成物は、１種または複数の活性成分を、１種または複数の化粧品的または薬学的に許容される担体、ならびに任意選択で１種または複数の他の化合物、成分、及び／または材料との混合物で含む。選択される投与経路にかかわらず、本発明の化合物及び組成物は、当業者に公知の慣例的な方法で化粧品的または薬学的に許容される剤形に製剤化される。
【０１４４】
化粧品的または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、及び担体は、当技術分野で周知であり、過度の毒性、不適合性、不安定性、刺激作用、アレルギー反応などを伴うことなくヒト及び非ヒトの組織に接触させるのに適した材料を含む。化粧品的または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、及び担体には、例えば、化粧品または医薬品の局所、経口、腹膜、または皮下投与に慣例的に使用可能な任意の実質的に非毒性の物質であって、本発明の化合物及び組成物が、ヒトまたは非ヒト被験体に適用、摂取、注射されたときに、または他の方法で投与されたときに、安定で生物学的に利用可能のままである物質を含む。局所投与に適した化粧品的または薬学的に許容される担体は、当業者には公知であり、これらには、化粧品的または薬学的に許容される液体、クリーム、油、ローション、軟膏、ゲル、または固体、例えば、慣例的な化粧用ナイトクリーム、ファンデーションクリーム、日焼け止めローション、日焼け止め、ハンドローション、顔用化粧品及び顔用化粧下地、マスクなどが含まれる。選択された剤形及び意図される投与経路に適した担体は当技術分野で周知であり、選択された剤形及び投与方法に許容される担体は、当技術分野における通常の技量を使用して決定することができる。
【０１４５】
本発明の組成物は、香水、エストロゲン、ビタミンＡ、Ｃ、及びＥ、α−ハイドロキシ酸またはα−ケト酸、例えば、ピルビン酸、乳酸、またはグリコール酸、ラノリン、ワセリン、アロエベラ、メチルまたはプロピルパラベン、色素などを含めた、化粧品において慣例的な他の成分を含有することができる。非限定的な本発明の化粧品的または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、及び担体は、糖（例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール、及びソルビトール）、デンプン、セルロース調製物、リン酸カルシウム（例えば、リン酸二カルシウム、リン酸三カルシウム、及びリン酸水素カルシウム）、クエン酸ナトリウム、水、水溶液（例えば、生理食塩水、塩化ナトリウム注射液、リンガー液、デキストロース注射液、デキストロースと塩化ナトリウムとの注射液、乳酸加リンガー液）、アルコール（例えば、エチルアルコール、プロピルアルコール、及びベンジルアルコール）、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及びポリエチレングリコール）、有機エステル（例えば、オレイン酸エチル、及びトリグリセリド）、生分解性ポリマー（例えば、ポリラクチド−ポリグリコリド、ポリ（オルトエステル）、及びポリ（酸無水物））、弾性マトリックス、リポソーム、ミクロスフェア、油（例えば、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、ゴマ油、綿実油、及び落花生油）、カカオ脂、ワックス（例えば、座薬用ワックス）、パラフィン、シリコーン、タルク、サリチレートなどを含む。
【０１４６】
本発明の組成物は、任意選択で、化粧品組成物に一般に使用される追加成分及び／または材料を含有してもよい。これらの成分及び材料は当技術分野で周知であり、これらには、例えば、（１）充填剤または増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸；（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、スクロース、及びアラビアゴム；（３）保湿剤、例えば、グリセロール；（４）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のシリケート、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び炭酸ナトリウム；（５）溶解遅延剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｒｅｔａｒｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、例えば、パラフィン；（６）吸収促進剤、例えば、第四級アンモニウム化合物；（７）湿潤剤、例えば、セチルアルコール、及びモノステアリン酸グリセロール；（８）吸収剤、例えば、カオリン、及びベントナイトクレー；（９）滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体のポリエチレングリコール、及びラウリル硫酸ナトリウム；（１０）懸濁化剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、及びトラガカント；（１１）緩衝剤；（１２）賦形剤、例えば、ラクトース、乳糖、ポリエチレングリコール、動物性及び植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、カカオ脂、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク、サリチレート、酸化亜鉛、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、ならびにポリアミド粉末；（１３）不活性希釈剤、例えば、水、または他の溶媒；（１４）防腐剤；（１５）界面活性剤；（１６）分散剤；（１７）制御放出剤または吸収遅延剤、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、生分解性ポリマー、リポソーム、ミクロスフェア、モノステアリン酸アルミニウム、ゼラチン、及びワックス；（１８）不透明剤；（１９）アジュバント；（２０）湿潤剤；（２１）乳化剤及び懸濁化剤；（２２）可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、及びソルビタンの脂肪酸エステル；（２３）噴射剤、例えば、クロロフルオロ炭化水素、及び揮発性非置換炭化水素、例えば、ブタン、及びプロパン；（２４）酸化防止剤；（２５）意図される受容者の血液と同じ浸透圧を製剤に与えるための薬剤、例えば、糖及び塩化ナトリウム；（２６）増粘剤；（２７）コーティング材料、例えば、レシチン；ならびに（２８）甘味料、香味剤、着色料、香料、及び保存料が��まれる。かかる成分または材料のそれぞれは、製剤の他の成分と適合性があり、かつ被験体に有害でないという意味で、「許容される」ものでなければならない。選択される剤形及び意図される投与経路に適した成分及び材料は当技術分野で周知であり、選択される剤形及び投与方法に許容される成分及び材料は、当技術分野における通常の技量を使用して決定することができる。
【０１４７】
経口投与に適した本発明の組成物は、カプセル剤、カシェ剤、丸剤、錠剤、散剤、顆粒剤、液剤、または水性もしくは非水性液体中の懸濁剤、水中油型もしくは油中水型液体エマルション、エリキシル剤もしくはシロップ剤、香錠、ボーラス剤、舐剤、またはペースト剤の形態であり得る。これらの製剤は、当技術分野で公知の方法によって、例えば、慣例的なパンコーティング、混合、顆粒化、または凍結乾燥プロセスによって調製することができる。
【０１４８】
経口投与用の固体剤形（カプセル剤、錠剤、丸剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤など）は、例えば、活性成分（複数可）を、１種もしくは複数の化粧品的または薬学的に許容される担体、ならびに任意選択で１種もしくは複数の充填剤、増量剤、結合剤、保湿剤、崩壊剤、溶解遅延剤、吸収促進剤、湿潤剤、吸収剤、滑沢剤、及び／または着色料と混合することによって調製することができる。同様のタイプの固体組成物は、適切な賦形剤を使用して、軟質及び硬質充填ゼラチンカプセル剤中の充填剤として用いてもよい。錠剤は、任意選択で１種または複数の副成分とともに、圧縮または成型によって作製されてもよい。圧縮錠剤は、適切な結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤、界面活性剤、または分散剤を使用して調製されてもよい。成型錠剤は、適切な機械で成型することによって作製されてもよい。錠剤、ならびにカプセル剤、丸剤、及び顆粒剤などの他の固体剤形は、任意選択で、刻み目を入れるか、または腸溶コーティング及び化粧品処方分野で周知の他のコーティングなどのコーティング及びシェルとともに調製されてもよい。これらはまた、その中の活性成分の持続放出または放出制御をもたらすように製剤化されてもよい。これらは、例えば、細菌保持フィルターを通す濾過によって滅菌されてもよい。これらの組成物はまた、任意選択で不透明剤を含有してもよく、胃腸管の特定の部分において、任意選択で遅延した様式で、活性成分だけを、または活性成分を優先的に放出するような組成のものであってもよい。活性成分は、マイクロカプセル化された形態であることもできる。
【０１４９】
経口投与用の液体剤形には、化粧品または薬学的に許容されるエマルション、マイクロエマルション、液剤、懸濁剤、シロップ剤、及びエリキシル剤が含まれる。液体剤形は、当技術分野で一般に使用される適切な不活性希釈剤を含有してもよい。不活性希釈剤の他に、経口組成物は、アジュバント、例えば、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤、甘味料、香味料、着色料、香料、及び保存料も含んでもよい。懸濁液は、懸濁化剤を含有してもよい。
【０１５０】
直腸内または膣内投与用の本発明の組成物は、坐剤で提供されてもよく、それは、室温では固体であるが体温では液体であり、したがって直腸腔または膣腔で融解し、活性化合物を放出する１種または複数の適切な非刺激性の担体と、１種または複数の活性成分（複数可）を混合することによって調製されてもよい。膣内投与に適した本発明の組成物には、当技術分野で適正として公知であるような化粧品または薬学的に許容される担体を含有する、腟坐剤、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤、またはスプレー剤も含まれる。
【０１５１】
局所または経皮投与用の剤形には、散剤、スプレー剤、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、液剤、貼付剤、滴下剤、エマルション、懸濁剤、エアロゾル剤、及び吸入剤が含まれる。任意の所望の慣例的なビヒクル、助剤、及び任意選択でさらなる活性成分が、製剤に添加されてもよい。
【０１５２】
好ましい助剤は、防腐剤、酸化防止剤、安定化剤、可溶化剤、ビタミン、着色剤、臭気改善剤（ｏｄｏｕｒ  ｉｍｐｒｏｖｅｒ）、皮膜形成剤、増粘剤、及び保湿剤を含む群に由来する。
【０１５３】
液剤及びエマルションは、溶媒、可溶化剤、及び乳化剤などの慣例的なビヒクル、例えば、水、エタノール、イソプロパノール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチルグリコール、油、特に、綿実油、落花生油、メイズ（トウモロコシ）油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油、グリセロール脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール、ならびにソルビタンの脂肪酸エステル、またはこれらの物質の混合物を含むことができる。
【０１５４】
エマルションは、様々な形態で存在してもよい。よって、それらは、例えば、油中水（Ｗ／Ｏ）型もしくは水中油（Ｏ／Ｗ）型、または多重エマルション、例えば水中油中水（Ｗ／Ｏ／Ｗ）型のエマルションまたはマイクロエマルションであることができる。
【０１５５】
本発明による組成物はまた、乳化剤を含まない、分散調製物の形態であってもよい。それらは、例えば、水分散体またはピッカリングエマルションであり得る。
【０１５６】
懸濁剤は、慣例的なビヒクル、例えば、液体希釈剤（例えば、水、エタノール、またはプロピレングリコール）、懸濁媒体（例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールエステル及びポリオキシエチレンソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、及びトラガカント）、またはこれらの物質の混合物を含んでもよい。
【０１５７】
ペースト剤、軟膏剤、ゲル剤、及びクリーム剤は、慣例的なビヒクル、例えば、動物性及び植物性脂肪、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク、及び酸化亜鉛、またはこれらの物質の混合物を含んでもよい。
【０１５８】
フェイスオイル及びボディオイルは、慣例的なビヒクル、例えば、合成油（脂肪酸エステル、脂肪アルコール、シリコーン油など）、天然油（植物油及び油性植物エキス、パラフィン油、ラノリン油など）、またはこれらの物質の混合物を含んでもよい。
【０１５９】
スプレー剤は、慣例的な噴射剤、例えば、クロロフルオロカーボン、プロパン／ブタン、またはジメチルエーテルを含んでもよい。
【０１６０】
非経口投与に適した本発明の組成物は、１種または複数の化合物を、１種または複数の化粧品または薬学的に許容される滅菌した等張性の水性もしくは非水性の溶液、分散体、懸濁液、もしくは乳濁液、または使用する直前に滅菌注射用溶液もしくは分散体に入れて再構成することができる滅菌粉末と組み合わせて含み、それらは、適切な酸化防止剤、緩衝剤、意図される受容者の血液と同じ浸透圧を製剤に与える溶質、または懸濁化剤もしくは増粘剤を含有してもよい。適度な流動性は、例えば、コーティング材料の使用によって、分散体の場合には必要とされる粒子径を維持することによって、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。これらの組成物は、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などの適切なアジュバントも含有してもよい。等張化剤を含むことが望ましいこともある。加えて、吸収を遅延させる薬剤の含有によって、注射用化粧品剤形の持続的吸収をもたらしてもよい。
【０１６１】
ある場合には、効果を延ばすために、皮下または筋肉内注射からのその吸収を遅延させることが望ましい。これは、水溶性に乏しい結晶質または非晶質の懸濁液の使用によって行ってもよい。
【０１６２】
そのときの活性薬剤／薬物の吸収速度はその溶解速度に依存し、それはさらに結晶の大きさ及び結晶形に依存し得る。代替的に、非経口投与された組成物の遅延吸収は、活性組成物を油性ビヒクルに溶解または懸濁させることによって行ってもよい。注射用デポー剤形は、生分解性ポリマー中に活性成分のマイクロカプセルマトリクスを形成することによって作製されてもよい。活性成分対ポリマーの比率及び用いる特定のポリマーの性質に応じて、活性成分の放出速度を制御することができる。デポー注射用製剤は、リポソームまたは体組織と適合性のあるマイクロエマルション中に薬物を封入することによっても調製することができる。注射用材料は、例えば、細菌保持フィルターを通す濾過によって、滅菌することができる。
【０１６３】
本発明の組成物は、単位用量または複数用量の密封容器、例えば、アンプル及びバイアルで提供されてもよく、使用直前に滅菌液体担体、例えば注射用水を添加することのみが必要とされる凍結乾燥状態で保管されてもよい。即席の注射溶液及び懸濁液は、上述のタイプの滅菌粉末、顆粒、及び錠剤から調製されてもよい。
【０１６４】
本発明において、「結晶形」という用語は、化合物の結晶構造を意味する。化合物は、１つまたは複数の結晶形で存在してもよく、それらには、異なる構造的、物理的、薬理学的、または化学的特性があり得る。核生成、成長速度論、凝集、及び破壊の差異を使用して、異なる結晶形を得ることができる。核生成は、相転移エネルギー障壁が克服されたときに生じ、それによって粒子を過飽和溶液から形成させる。結晶成長は、結晶の既存の表面の上に化学物質が堆積することによって生じる結晶粒子の拡大である。核生成及び成長の相対速度が、形成される結晶の粒度分布を決定する。核生成及び成長の熱力学的駆動力は両方とも過飽和であり、それは熱力学的平衡からの逸脱として定義される。凝集は、２つ以上の粒子（例えば、結晶）がくっつき合って、より大きい結晶構造を形成することによって、より大きい粒子を形成することである。
【０１６５】
「水和物」という用語は、本明細書で使用される場合、分子複合体中に水を含有する固体または半固体形態の化学物質を意味する。水は、一般に、該化学物質に対して化学量論量である。
【０１６６】
本明細書で使用される場合、「化粧品または薬学的に許容される塩」は、本明細書に開示される化合物が、その酸または塩基塩を作ることによって修飾されている、該化合物の誘導体を指す。化粧品または薬学的に許容される塩には、アミンなどの塩基残基の無機または有機酸塩、カルボン酸などの酸残基のアルカリまたは有機塩などが含まれるが、これらに限定されない。例えば、かかる塩には、アンモニア、Ｌ−アルギニン、ベタイン、ベネタミン、ベンザチン、水酸化カルシウム、コリン、デアノール、ジエタノールアミン（２，２’−イミノビス（エタノール））、ジエチルアミン、２−（ジエチルアミノ）−エタノール、２−アミノエタノール、エチレンジアミン、Ｎ−エチル−グルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ−イミダゾール、リジン、水酸化マグネシウム、４−（２−ヒドロキシエチル）−モルホリン、ピペラジン、水酸化カリウム、１−（２−ヒドロキシ−エチル）−ピロリジン、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン（２，２’，２”−ニトリロトリス（エタノール））、トロメタミン、水酸化亜鉛、酢酸、２．２−ジクロロ−酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、２，５−ジヒドロキシ安息香酸、４−アセトアミド−安息香酸、（＋）−ショウノウ酸、（＋）−ショウノウ−１０−スルホン酸、炭酸、桂皮酸、クエン酸、シクラミン酸、デカン酸、ドデシル硫酸、エタン−１，２−二スルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、エチレンジアミン四酢酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタクル酸、ゲンチシン酸、Ｄ−グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、Ｄ−グルクロン酸、グルタミン酸、グルタンチン酸（ｇｌｕｔａｎｔｉｃ  ａｃｉｄ）、グルタル酸、２−オキソ−グルタル酸、グリセロ−リン酸、グリシン、グリコール酸、ヘキサン酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、イソ酪酸、ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、リジン、マレイン酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ガラクタル酸、ナフタレン−１，５−二スルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オクタン酸、オレイン酸、オロト酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸（エンボン酸）、リン酸、プロピオン酸、（−）−Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、及びウンデシレン酸からの塩が含まれる。さらなる化粧品または薬学的に許容される塩は、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、亜鉛などのような金属からの陽イオンで形成することができる。
【０１６７】
本発明の化粧品または薬学的に許容される塩は、塩基部分または酸部分を含有する本明細書に開示される化合物から、慣例的な化学的方法によって合成することができる。一般に、かかる塩は、遊離酸型または遊離塩基型のこれらの化合物を、水中、あるいはエーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、もしくはアセトニトリル、またはこれらの混合物のような有機希釈剤中で、十分な量の適正な塩基または酸と反応させることによって調製することができる。
【０１６８】
本発明の化合物及び組成物は、化粧品組成物または薬学的組成物に含まれることがあると想定される。
【０１６９】
本明細書に使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定することを意図するものではない。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈から明らかにそうでないことが示されていない限り、複数の指示物を含む。
【０１７０】
本明細書において数値範囲が列挙される場合、同じ精度で各数値がその間に存在することが明確に企図される。例えば、６〜９という範囲の場合、６及び９に加えて７及び８の数値が企図され、６．０〜７．０の範囲の場合、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、及び７．０の数値が明確に企図される。
【０１７１】
以下の実施例は、本発明の方法をさらに例示するために提供される。これらの実施例は例示に過ぎず、本発明の範囲を限定することを意図するものでは決してない。
【実施例】
【０１７２】
実施例１
材料及び方法
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａによって産生される化合物の単離
マラセジンは、例えばＷｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．２００１に概説される手順を使用して単離する。以下にそのプロトコルを簡潔に概説する。
【０１７３】
培地
Ｔｗｅｅｎ８０（３０ｍＬ）、シクロヘキシミド（０．５ｇ）、クロラムフェニコール（０．０５ｇ）、寒天（２０ｇ）、及び１０００ｍＬの混合物にするのに十分な量の水からなる培地を滅菌し、滅菌濾過した０．３％Ｌ−トリプトファンを０．３ｇ％の濃度で５０℃にて混合する。１０ｃｍペトリ皿に１０ｍＬずつ注入し、０．１ＭのＨＣｌを使用してｐＨを５．５に調整する。
【０１７４】
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒの培養及びＭ．ｆｕｒｆｕｒにより産生される化合物の単離
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ  ｆｕｒｆｕｒを上述の培地に綿棒で塗り付け、３０℃で１４日間培養する。ペトリ皿の内容物をピューレ状にし、酢酸エチルで１２時間抽出する。抽出物をグラスウールで濾過し、蒸発乾固させ、メタノールに溶解する。次いで、この抽出物を、溶離液としてメタノールを用いるＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０でのクロマトグラフィーによって分画する。トルエン：ギ酸エチル：ギ酸（１０：５：３）を用いる分取薄層クロマトグラフィーによってさらに分離を行う。主要なゾーンを水と酢酸エチルに分配する。画分を対象の活性について分析する。ＨＰＬＣによって対象の画分から化合物を単離する。
【０１７５】
マラセジン及びマラセジンの化学的類似体の合成
マラセジンは、Ｗｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．２００１に記載のプロトコルに従って合成する。マラセジンの化学的類似体は、新規の合成プロトコル、ならびにＷｉｎｓｔｏｎ−ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．２０１４に記載されるプロトコルに従って合成する。
【０１７６】
スクリーニングプロトコル
当業者に公知のスクリーニングプロトコルと新規スクリーニング方法を両方使用して、有効な皮膚美白化合物を評価する。例えば、後述の通りのチロシナーゼバイオアッセイによってマラセジン及びそれらの化学的類似体を評価する。この他に、アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）結合アッセイなどの、インビトロでの細胞モデル及びインビボでの組織モデルの両方を含むスクリーニングプロトコルを利用する。
【０１７７】
チロシナーゼバイオアッセイ
チロシナーゼバイオアッセイは、Ｗｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．２００１に記載される通りに実施する。簡潔には、Ｌ−ＤＯＰＡをチロシナーゼ酵素と混合する。吸光度を１分間にわたって測定することによって、ドーパキノンの形成が示される。例えば、上で論じた画分を使用する場合、これらの画分をＤＭＳＯに溶解し、チロシナーゼ反応物に直接添加し、純粋なＤＭＳＯを対照とする。チロシナーゼ阻害活性を、対照と比較した吸光度の上昇の低減として測定する。
【０１７８】
アリール炭化水素受容体結合アッセイ
ＡｈＲ結合アッセイは、例えば、Ｓｏｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，２００２に記載されるプロトコルに従って実施する。簡潔には、ヒト及びマウスＡｈＲを、例えば、ＴｎＴ  Ｑｕｉｃｋ−ｃｏｕｐｌｅｄ  Ｒｅｔｉｃｕｌｏｃｙｔｅ  Ｌｙｓａｔｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ反応（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用してインビトロで発現させる。受容体リガンド結合試験には、Ｋａｒｃｈｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，１９９９に記載される通りのショ糖密度勾配沈降速度法を利用する。
【０１７９】
ＥＲＯＤアッセイ
本発明の化合物、組成物及び製剤はまた、当業者に公知のエトキシレゾルフィン−Ｏ−デエチラーゼ（ＥＲＯＤ）アッセイ（Ｄｏｎａｔｏ，ｅｔ  ａｌ．，１９９３；Ｗｈｙｔｅ，ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｗｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）を使用して評価する。
【０１８０】
メラノサイトアポトーシスアッセイ
候補化合物をメラノサイトでのアポトーシス誘導活性について評価する。ヒト表皮メラノサイトを、Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＨＭＧＳ）を補充したＭｅｄｉｕｍ２５４（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）またはＤｅｒｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）で培養する。ヒトメラノサイト増殖培地の追加成分には、インスリン（５μｇ／ｍＬ）、アスコルビン酸（５０μｇ／ｍＬ）、Ｌ−グルタミン（６ｍＭ）、エピネフリン（１．０μＭ）、及び塩化カルシウム（０．２ｍＭ）が含まれ得るが、これらに限定されない。ヒトメラノサイト培養物は、５％ＣＯ２中３７℃で維持した。
【０１８１】
候補化合物をＤＭＳＯで希釈し、メラノサイト培養物中に直接混合する。同量の純粋ＤＭＳＯを対照として使用する。当業者に公知の細胞毒性アッセイを、製造業者の使用説明書に従って実施する。本発明で使用する細胞毒性アッセイには、ＣｅｌｌＴｏｘ（商標）Ｇｒｅｅｎ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ、Ａｐｏ−ＯＮＥ蛍光カスパーゼアッセイ、ＡｐｏＴｏｘ−Ｇｌｏ（商標）アッセイ、及びＣａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）が含まれるが、これらに限定されない。蛍光検出は、Ｋｒａｍｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，２００５に記載されるものを含めた、当業者に公知の標準的なＦＡＣＳまたは顕微鏡アッセイを使用して行われる。
【０１８２】
アネキシンＶについてのＦＡＣＳ分析、及びカスパーゼ−９発現についてのウェスタンブロットを含めた、アポトーシスを評価する追加的手段を使用する。ウェスタンブロット法は当業者に公知の方法に従って実施する。
【０１８３】
マウス異種移植アッセイ
ヒト皮膚のマウス異種移植モデルは、当技術分野で公知のプロトコルに従って生成する。（Ｂｌａｃｋ，ｅｔ  ａｌ．，１９８５；Ｍａｎｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９７３；Ｒｅｅｄ，ｅｔ  ａｌ．，１９７３；Ｐｌｅｎａｔ，ｅｔ  ａｌ．，１９９２；Ｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｏｔｕｌａｋｏｗｓｋｉ，ｅｔ  ａｌ．，１９９４）。マウス異種移植モデルを確立した後、これを本発明の化合物に曝露させ、対照と比較したときの色素沈着の変化を観察する。皮膚の色素沈着の変化を当業者に公知の様々な色素沈着スケールを使用して評価する。これらには、フィッツパトリック皮膚分類テスト及びＴａｙｌｏｒの色素沈着過剰スケール（Ｔａｙｌｏｒ，ｅｔ  ａｌ．，２００５）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８４】
ヒトアッセイ
本発明の化合物、組成物及び製剤を、ヒトに、例えば、ヒトの皮膚に適用し、対照物質と比較する。皮膚の色素沈着の変化を、フィッツパトリック皮膚分類テスト及びＴａｙｌｏｒの色素沈着過剰スケールを含めた（これらに限定されない）当業者に公知の様々な色素沈着スケールを使用して評価する。
【０１８５】
実施例２
マラセジン及びその類似体の生化学的標的
本発明の化合物及び組成物は、例えば、マラセジンに匹敵するチロシナーゼ阻害及びＡｈＲアゴニスト活性を示すと予想される。本発明の化合物及び組成物は、例えば、マラセジンと比較して効力の高いチロシナーゼ阻害及び強力なＡｈＲアゴニズムを示すと予想される。同様に、本発明の化合物及び組成物のあるものは、マラセジンより効果が低いチロシナーゼ阻害剤及びＡｈＲアゴニストであると予想される。かかる化合物、組成物、及び製剤は、より効力の高い化合物と比較して、より好都合な毒性プロファイルを有することができる。
【０１８６】
実施例３
インビトロでの有効性
本発明の化合物及び組成物は、マラセジンと少なくとも同程度に高い効力でメラノサイトのアポトーシスを誘導し、メラノサイトの活性、メラニン産生、メラノソーム生合成及び／またはメラノソーム転送を調節すると予想される。また、本発明の化合物及び組成物のあるものは、これらの生物学的プロセスへの影響力がマラセジンより弱くなることが企図される。かかる化合物及び組成物は、より効力の高い種類と比較して、より好都合な毒性プロファイルを有することができる。
【０１８７】
実施例４
インビボでの有効性
本発明の化合物及び組成物は、皮膚の美白、及び色素沈着過剰障害によって引き起こされる色素沈着過剰の改善に対して、マラセジンと少なくとも同程度に有効であると予想される。さらに、本発明の化合物及び組成物は、例えば半減期及び吸収に関して、好都合な薬物動態プロファイルを示すと予想される。ある種の化合物は長い半減期を示す一方で、他の化合物は短い半減期を示すこととなる。同様に、ある種の化合物は異なる吸収プロファイルを示すと見込まれ、ある化合物は完全に吸収されるのに時間がかかり、他の化合物は完全に吸収される時間が短くなることとなる。
【０１８８】
実施例５
マラセジン及びマラセジン誘導体の合成
マラセジン（「ＣＶ−８６８４」）及びその環化誘導体であるインドロ［３，２−ｂ］カルバゾール（「ＣＶ−８６８５」）は、図２Ａに示すスキームに従って合成した。
【０１８９】
ｔｅｒｔ−ブチル（２−ヨード−フェニル）カルバメート、化合物１の合成
２−ヨード−アニリン（２５．０ｇ、０．１１４ｍｏｌ）を含むテトラヒドロフラン（２５０ｍＬ）の０℃の溶液に、ＬｉＨＭＤＳ（２５１．０ｍＬ、ＴＨＦ中１Ｍ、０．２５１ｍｏｌ）を、内部温度を５℃未満に維持しながら、４０分間にわたってゆっくりと添加した。０℃で３０分間撹拌した後、無水ＢＯＣ（２７．０ｇ、０．１２５ｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）中溶液を、内部温度を５℃未満に維持しながら、４０分間にわたってゆっくりと添加した。反応混合物を周囲温度まで温め、１時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ（２５０ｍＬ）を添加して反応物をクエンチした。有機層を分離し、水（１５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた水層を酢酸エチルで抽出し（２×１５０ｍＬ）、この層を分離した。酢酸エチル層を最初の有機層と合わせ、減圧濃縮すると、褐色油状物として得られた。この粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（０〜５％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物１を淡黄色液体として得た（２９．０ｇ、８０％）。
【０１９０】
化合物２の合成
ヨウ化銅（０．９５ｇ、１０％ｍｏｌ）及びＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）４（１．７５ｇ、５％ｍｏｌ）を、化合物１（１６．０ｇ、０．０５ｍｏｌ）及びプロパルギルメチルエーテル（４．２５ｇ、０．０６ｍｏｌ）を含む脱気したトリエチルアミン（２００ｍＬ）の溶液に周囲温度で添加した。周囲温度で２時間にわたって撹拌した後、反応が完了した（１０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによってモニタリングした）。反応混合物を酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し、反応混合物を水、飽和ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水した。溶媒を濾過し、減圧濃縮すると、褐色油状物として得られた。この粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物２を淡黄色液体として得た（１３．０ｇ、９９％）。
【０１９１】
化合物３の合成
オーブンで乾燥させたフラスコに、ＰｔＣｌ２（０．２６ｇ、０．００１ｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（１．６ｇ、０．０１５ｍｏｌ）、インドール（２．３２ｇ、０．０２ｍｏｌ）、及び化合物２（２．６ｇ、０．０１ｍｏｌ）を含むジオキサン（１２０ｍＬ）を添加した。このフラスコを窒素で脱気し、密封し、１００℃に一晩加熱した。反応が完了した後（１０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによってモニタリングした）、溶媒を減圧留去した。反応混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、反応混合物を水、飽和ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水した。溶媒を濾過し、減圧濃縮すると、褐色油状物として得られた。
【０１９２】
別のバッチの化合物２（２．６ｇ、０．０１ｍｏｌ）を使用して、反応を繰り返した。両方のバッチの粗製化合物を合わせ、カラムクロマトグラフィー（１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物３を淡褐色固体として得た（３．８ｇ、５５％）。
【０１９３】
化合物４の合成
化合物３（３．８ｇ、０．０１０９ｍｏｌ）を含む、メタノール（１５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との混合物の溶液に、炭酸カリウム（４．６ｇ、０．０３２９ｍｏｌ）を周囲温度で添加した。得られた懸濁液を一晩加熱還流した。反応が完了した後（２０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによってモニタリングした）、反応混合物を周囲温度まで冷却し、溶媒を減圧濃縮した。残留物を酢酸エチル（２００ｍＬ）に溶解し、水及びブラインで洗浄し、次いで脱水し（硫酸ナトリウム）、濾過し、溶媒を減圧濃縮すると、褐色固体として得られた。この粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物４を橙色固体として得た（２．２ｇ、８１％）。
【０１９４】
化合物マラセジン（ＣＶ−８６８４）の合成
０℃、アルゴン下の乾燥済み１００ｍＬ二口丸底フラスコに、ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）を添加した。内部温度を５℃未満に維持しながら、ＰＯＣｌ３（０．７５ｇ、０．００４８ｍｏｌ）を１０分間にわたってゆっくりと添加した。０℃で３０分間撹拌した後、内部温度を５℃未満に維持しながら、化合物４（１．０ｇ、０．００４ｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中溶液を１０分間にわたってゆっくりと添加した。得られた混合物を、周囲温度で一晩撹拌した。反応が完了した後（２０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによってモニタリングした）、反応混合物を重炭酸ナトリウム飽和水溶液（１５０ｍＬ）に注入し、１時間撹拌した。得られた混合物を酢酸エチルで抽出した（２×１００ｍＬ）。有機層を合わせ、水、飽和ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水した。溶媒を濾過し、減圧濃縮すると、褐色固体として得られた。この粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（０〜２０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物マラセジン（ＣＶ−８６８４）を淡桃色固体として得た（０．８２ｇ、７４％）。
【０１９５】
ＨＰＬＣ純度：９７．８％（面積％）。１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃスペクトルは構造に一致。ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１８Ｈ１５Ｎ２Ｏ  （Ｍ  ＋  Ｈ）＋に対する計算値：２７５、実測値：２７５．２
【０１９６】
化合物インドロ［３，２−ｂ］カルバゾール（ＣＶ−８６８５）の合成
濃塩酸（０．２５ｍＬ）を、マラセジン（０．７５ｇ）のテトラヒドロフラン（１２０ｍＬ）中溶液に周囲温度で添加した。得られた混合物を、一晩加熱還流した。反応が完了した後（４０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによってモニタリングした）、反応混合物を周囲温度まで冷却し、１時間撹拌した。固体を濾過し、テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させると、インドロ［３，２−ｂ］カルバゾール（ＣＶ−８６８５）の淡黄色固体（０．５５ｇ、７８％）が得られた。
【０１９７】
ＨＰＬＣ純度：９６．２２％（面積％）。１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃスペクトルは構造に一致。ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１８Ｈ１３Ｎ２  （Ｍ  ＋  Ｈ）＋に対する計算値：２５７、実測値：２５７．５。
【０１９８】
化合物Ｉ（「ＣＶ−８６８６」）及び化合物ＩＶ（「ＣＶ−８６８７」）は、図２Ｂに示すスキームに従って合成した。
【０１９９】
化合物５の合成
オーブンで乾燥させたフラスコに、ＰｔＣｌ２（１．０ｇ、０．００３８ｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（６．１ｇ、０．０５７ｍｏｌ）、６−メチルインドール（１０．０ｇ、０．０７６ｍｏｌ）、及び化合物２（１０．０ｇ、０．０３８ｍｏｌ）を含むジオキサン（２５０ｍＬ）を添加した。このフラスコを窒素で脱気し、密封し、１００℃に一晩加熱した。反応が完了した後（１０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによってモニタリングした）、溶媒を減圧留去した。反応混合物を酢酸エチル（４００ｍＬ）で希釈し、反応混合物を水、飽和ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水した。溶媒を濾過し、減圧濃縮すると、褐色油状物として得られた。この粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物５を淡褐色固体として得た（６．５ｇ、４７％）。
【０２００】
化合物６の合成
化合物５（６．５ｇ、０．０１８ｍｏｌ）を含む、メタノール（１５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）との混合物の溶液に、炭酸カリウム（７．４ｇ、０．０５４ｍｏｌ）を周囲温度で添加した。得られた懸濁液を一晩加熱還流した。反応が完了した後（２０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによってモニタリングした）、反応混合物を周囲温度まで冷却し、溶媒を減圧濃縮した。残留物を酢酸エチル（２００ｍＬ）に溶解し、水及びブラインで洗浄し、次いで脱水し（硫酸ナトリウム）、濾過し、溶媒を減圧濃縮すると、褐色固体として得られた。この粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物６を橙色固体として得た（３．３ｇ、７２％）。
【０２０１】
化合物Ｉ（ＣＶ−８６８６）の合成
０℃、アルゴン下の乾燥済み１００ｍＬ二口丸底フラスコに、ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）を添加した。内部温度を５℃未満に維持しながら、ＰＯＣｌ３（０．６ｇ、０．００３８ｍｏｌ）を１０分間にわたってゆっくりと添加した。０℃で３０分間撹拌した後、内部温度を５℃未満に維持しながら、化合物６（１．０ｇ、０．００３８ｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中溶液を１０分間にわたってゆっくりと添加した。得られた混合物を、周囲温度で一晩撹拌した。反応が完了した後（２０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによってモニタリングした）、反応混合物を重炭酸ナトリウム飽和水溶液（１５０ｍＬ）に注入し、１時間撹拌した。得られた混合物を酢酸エチルで抽出した（２×１００ｍＬ）。有機層を合わせ、水、飽和ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水した。溶媒を濾過し、減圧濃縮すると、褐色固体として得られた。この粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（０〜２０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物Ｉ（ＣＶ−８６８６）を淡桃色固体として得た（０．８４ｇ、７５％）。
【０２０２】
ＨＰＬＣ純度：９７．０１％（面積％）。１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃスペクトルは構造に一致。ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１９Ｈ１７Ｎ２Ｏ  （Ｍ  ＋  Ｈ）＋に対する計算値：２８９、実測値：２８９．１
【０２０３】
化合物ＩＶ（ＣＶ−８６８７）の合成
濃塩酸（０．３ｍＬ）を、化合物Ｉ（１．０ｇ）のテトラヒドロフラン（１２５ｍＬ）中溶液に周囲温度で添加した。得られた混合物を、一晩加熱還流した。反応が完了した後（４０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによってモニタリングした）、反応混合物を周囲温度まで冷却し、１時間撹拌した。固体を濾過し、テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させると、化合物ＩＶ（ＣＶ−８６８７）の淡黄色固体が得られた（０．８４ｇ、８９％）。
【０２０４】
ＨＰＬＣ純度：９８．４％（面積％）。１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃスペクトルは構造に一致。ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１９Ｈ１５Ｎ２  （Ｍ  ＋  Ｈ）＋に対する計算値：２７１、実測値：２７１．３。
【０２０５】
化合物ＩＩ（「ＣＶ−８６８８」）は、図２Ｃに示すスキームに従って合成した。
【０２０６】
化合物７の合成
ヨウ化銅（０．５３ｇ、１０％ｍｏｌ）及びＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）４（１．０ｇ、５％ｍｏｌ）を、化合物１（９．０ｇ、０．０３ｍｏｌ）及び３−メトキシ−１−ブチン（２．８ｇ、０．０３５ｍｏｌ）を含む脱気したトリエチルアミン（１５０ｍＬ）の溶液に周囲温度で添加した。周囲温度で２時間にわたって撹拌した後、反応が完了した（１０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによってモニタリングした）。反応混合物を酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し、反応混合物を水、飽和ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水した。溶媒を濾過し、減圧濃縮すると、褐色油状物として得られた。この粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物７を淡黄色液体として得た（７．０ｇ、９０％）。
【０２０７】
化合物８の合成
オーブンで乾燥させたフラスコに、ＰｔＣｌ２（０．６８ｇ、０．００２５ｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（４．０ｇ、０．０３８ｍｏｌ）、インドール（６．０ｇ、０．０５ｍｏｌ）、及び化合物７（１０．０ｇ、０．０２５ｍｏｌ）を含むジオキサン（２５０ｍＬ）を添加した。このフラスコを窒素で脱気し、密封し、１００℃に一晩加熱した。反応が完了した後（１０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによってモニタリングした）、溶媒を減圧留去した。この反応混合物を酢酸エチル（４００ｍＬ）で希釈し、反応混合物を水、飽和ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水した。溶媒を濾過し、減圧濃縮すると、褐色油状物として得られた。この粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物８を淡褐色固体として得た（３．５ｇ、７７％）。
【０２０８】
化合物９の合成
化合物８（３．３ｇ、０．００９１ｍｏｌ）を含む、メタノール（７５ｍＬ）と水（２５ｍＬ）との混合物の溶液に、炭酸カリウム（３．８ｇ、０．０２７ｍｏｌ）を周囲温度で添加した。得られた懸濁液を、一晩加熱還流した。反応が完了した後（２０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによってモニタリングした）、反応混合物を周囲温度まで冷却し、溶媒を減圧濃縮した。残留物を酢酸エチル（２００ｍＬ）に溶解し、水及びブラインで洗浄し、次いで脱水し（硫酸ナトリウム）、濾過し、溶媒を減圧濃縮すると、褐色固体として得られた。この粗製化合物をカラムクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。化合物９を橙色固体として得た（２．１ｇ、８８％）。
【０２０９】
化合物ＩＩ（ＣＶ−８６８８）の合成
０℃、アルゴン下の乾燥済み１００ｍＬ二口丸底フラスコに、ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）を添加した。内部温度を５℃未満に維持しながら、ＰＯＣｌ３（０．７６ｇ、０．００５ｍｏｌ）を１０分間にわたってゆっくりと添加した。０℃で３０分間撹拌した後、内部温度を５℃未満に維持しながら、化合物９（１．３ｇ、０．００５ｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中溶液を１０分間にわたってゆっくりと添加した。得られた混合物を、周囲温度で一晩撹拌した。反応が完了した後（２０％酢酸エチル／ヘキサンを使用するＴＬＣによってモニタリングした）、反応混合物を重炭酸ナトリウム飽和水溶液（１５０ｍＬ）に注入し、１時間撹拌した。得られた混合物を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、水、飽和ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水した。溶媒を濾過し、減圧濃縮すると、褐色固体として得られた。この粗製化合物をクロロホルム（２５ｍＬ）で結晶化した。化合物ＩＩ（ＣＶ−８６８８）を淡桃色固体として得た（０．８１ｇ、５３％）。
【０２１０】
ＨＰＬＣ純度：９８．９４％（面積％）。１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃスペクトルは構造に一致。ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１９Ｈ１７Ｎ２Ｏ  （Ｍ  ＋  Ｈ）＋に対する計算値：２８９、実測値：２８９．０。
【０２１１】
実施例６
細胞形態
様々な処置後の典型的な細胞形態を、図５Ａ〜５Ｋ、６Ａ〜６Ｋ、７Ａ〜７Ｋ、８Ａ〜８Ｋ、９Ａ〜９Ｋ、１０Ａ〜１０Ｋ、１１Ａ〜１１Ｋ、及び１２Ａ〜１２Ｋに示す。細胞株は両方とも、１００μＭのＣＶ−８６８４及びＣＶ−８６８８、ならびにスタウロスポリンの６時間の処置によって、形態に有意な影響を受けた。ＣＶ−８６８５は１００μＭでＷＭ１１５のみに影響を及ぼすことがわかった。
【０２１２】
実施例７
マラセジン及びマラセジン誘導体のアポトーシス誘導活性−予備アネキシンＶアッセイ
材料及び試薬
アネキシンＶ−ＦＩＴＣアッセイキットはＢｅｙｏｔｉｍｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから購入し、ＲＰＭＩ１６４０培地及びダルベッコ改変イーグル培地（「ＤＭＥＭ」）はＧｉｂｃｏから購入し、ウシ胎仔血清（「ＦＢＳ」）はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入し、安定化抗菌抗真菌溶液（１００×）はＳｉｇｍａから購入し、０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡ（１×）、フェノールレッドはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。
【０２１３】
細胞培養
ＭｅＷｏ（ＡＴＣＣ（登録商標）  ＨＴＢ−６５（商標））及びＷＭ１１５（ＡＴＣＣ（登録商標）  ＣＲＬ−１６７５）細胞はＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から購入し、ＭｅＷｏは１０％ＦＢＳ補充ＤＭＥＭにて、ＷＭ１１５は１０％ＦＢＳ（１０％ＦＢＳ、１％安定化抗菌抗真菌溶液）補充ＲＰＭＩ１６４０にて維持した。
【０２１４】
試験概要
アポトーシスの中間段階では、ホスファチジルセリン（「ＰＳ」）は細胞膜の内葉から外葉に転送され、ＰＳが細胞外環境に曝されるため、そこでＰＳを検出することができる。蛍光が強いアネキシンＶコンジュゲートは、ＰＳの外在化を試験するための迅速かつ信頼性の高い検出方法となる。
【０２１５】
最初の一連の試験の間に、ＭｅＷｏ及びＷＭ１１５の両細胞を、１００μＭから３倍希釈によって調製した１０用量の試験化合物で処置した。スタウロスポリンは、陽性対照として使用した。６時間の処置後、アネキシンＶアッセイを使用して細胞アポトーシスを評価した。評価した試験化合物は、ＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５、ＣＶ−８６８６、ＣＶ−８６８７及びＣＶ−８６８８であった。
【０２１６】
アッセイの手順
細胞播種のために、細胞を回収し、Ｃｏｕｎｔｅｓｓ（登録商標）セルカウンターを使用して細胞数を決定した。次いで、所望の密度まで細胞を培養液で希釈した。３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ３７１２−透明底プレート）の必要数のウェルに、１ウェル当たり４０μＬの細胞懸濁液を添加した。最終細胞密度は６，０００細胞／ウェルであった。プレーティング後、プレートを３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。
【０２１７】
化合物ソースプレートの調製のために、各試験化合物をＤＭＳＯで溶解し、１０ｍＭストックを得た。ＥＶＯ２００（商標）リキッドハンドラー（ＴＥＣＡＮ）を使用して３倍段階希釈を実施して、１０種類の濃度の試験化合物を生成した。０．１％ＤＭＳＯをビヒクル（陰性）対照として用いた。次いで、化合物ソースプレートを、１，０００ＲＰＭで、１分間室温で回転させ、プレートシェーカーを使用して２分間振盪した。
【０２１８】
化合物処置のために、リキッドハンドラーＥｃｈｏ５５０（ＬａｂＣｙｔｅ  Ｉｎｃ．）を使用して、化合物４０ｎＬを化合物ソースプレートから３８４ウェル培養プレートに移した。６時間インキュベートした後、検出のためにプレートをインキュベーターから取り出した。
【０２１９】
予備アネキシンＶアッセイのために、プレートをインキュベーターから取り出し、室温で１５分間平衡化させた。次いで、培養液を除去した。アネキシンＶ−ＦＩＴＣとＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２とを予め混合した色素ワーキング溶液２０μＬを各ウェルに添加した。次いで、細胞を室温で２０分間インキュベートした。プレートを密封し、１，０００ＲＰＭで１分間遠心分離して気泡を除去した。その後、プレートをＡｃｕｍｅｎ  ｅＸ３プレートリーダーを使用して読み取った。相対活性を次式に従って算出した：活性（％）＝１００％×（カウント数アネキシンＶ／カウント数全細胞）。ＥＣ５０は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ｖ．５．０１）を使用して算出した。
【０２２０】
結果
上の予備スクリーニングでは、ＣＶ−８６８８がＭｅＷｏ細胞のアネキシンＶ染色を顕著に上昇させ、ＥＣ５０は９０８．５７ｎＭであった。陽性対照であるスタウロスポリンは、いずれの細胞株でもアネキシンＶ染色を大幅に上昇させた。（図３Ａ〜３Ｍ）。
【０２２１】
実施例８
マラセジン及びマラセジン誘導体のアポトーシス誘導活性−アネキシンＶアッセイを使用した追加評価
試験概要
試験化合物がアポトーシスに及ぼす影響をさらに調査するために、ＭｅＷｏ及びＷＭ１１５の両細胞で、アポトーシスの様々な段階を包含する多重読み取りを行った。細胞型は両方とも、３用量（１００μＭ、１０μＭ及び１μＭ）の試験化合物で処置した。スタウロスポリンは、陽性対照として使用した。所望の処置期間（６、２４、４８または７２時間）後、試験化合物に曝露した後のアネキシンＶ結合を示す細胞の百分率を測定することによってアポトーシスを評価した。評価した試験化合物は、ＣＶ−８６８４、ＣＶ−８６８５及びＣＶ−８６８８であった。
【０２２２】
アッセイの手順
細胞播種は、次の点を除いて上で論じた通り実施した。最終細胞密度は、６時間及び２４時間で検出する場合は４，０００細胞／ウェルであったのに対し、４８時間及び７２時間で検出する場合は２，０００細胞／ウェルを使用した。各時点で、３８４ウェル透明底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ３７１２）及び白底プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ３５７０）を準備した。上で論じた通りにプレートをインキュベートした。
【０２２３】
化合物ソースプレート調製のために、各試験化合物をＤＭＳＯで溶解し、１０ｍＭストックを得た。１ｍＭ及び０．１ｍＭに１０倍希釈して、２種類の濃度を追加的に生成した。スタウロスポリンを陽性対照として使用し、１％ＤＭＳＯを溶媒（陰性）対照として用いた。この化合物ソースプレートを、１，０００ＲＰＭで１分間、室温で回転させ、プレートシェーカーを使用して２分間振盪した。
【０２２４】
Ｅｃｈｏ５５０リキッドハンドラーを使用して、試験化合物４００ｎＬを化合物ソースプレートから３８４ウェル培養プレートに移した。６、２４、４８及び７２時間後、検出のためにプレートをインキュベーターから取り出した。
【０２２５】
アネキシンＶアッセイのために、プレートをインキュベーターから取り出し、室温で１５分間平衡化させた。培養液を除去し、細胞をＰＢＳで２回洗浄した。予め混合したアネキシンＶ−ＦＩＴＣ色素ワーキング溶液２０μＬを、各ウェルに添加した。細胞を室温で２０分間インキュベートした。プレートをＡｃｕｍｅｎ  ｅＸ３を使用して読み取り、ＦＩＴＣ陽性細胞数を数えた。相対活性を次式に従って算出した：相対活性（％）＝１００％×（カウント数試料／カウント数ビヒクル）。
【０２２６】
結果
ＣＶ−８６８４は、６時間の処置後、最も高い試験濃度でＭｅＷｏ及びＷＭ１１５の両細胞にアポトーシスを誘導した。ＣＶ−８６８５は、２４時間の処置でＷＭ１１５に対して誘導効果を示したのに対して、両方の細胞型にアポトーシスを誘発するには４８時間かかることがわかった。最後に、ＣＶ−８６８８は、６時間以内の処置で両方の細胞型に用量依存的に誘導効果を示した。（図４Ａ〜４Ｌ）。
【０２２７】
実施例９
マラセジン及びマラセジン誘導体への曝露後の細胞生存率−ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ
アッセイの手順
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）２．０アッセイはＰｒｏｍｅｇａから購入した。細胞播種、化合物ソースプレートの調製、及び試験化合物への細胞の曝露は、実施例８に記載した通りに実施した。
【０２２８】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイのために、プレートをインキュベーターから取り出し、室温で１５分間平衡化させた。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬は、実験前に解凍して室温に平衡化させた。次いで、検出のために、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬４０μＬを各ウェルに（培養液に対し１：１の比で）添加した。次いで、プレートを室温で３０分間インキュベートし、ＥｎＳｐｉｒｅ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）プレートリーダーを使用して読み取った。残存活性を次式により算出した：残存活性（％）＝１００％×（輝度試料−輝度バックグラウンド）／（輝度溶媒−輝度バックグラウンド）。
【０２２９】
結果
ＣＶ−８６８４は、両方の被験細胞株の細胞生存率に用量依存的な阻害を示したが、その阻害効果は、ＭｅＷｏ細胞の方に効力が高いことがわかった。ＣＶ−８６８５は、２４時間の処置後にのみ、ＷＭ１１５の細胞生存率に用量依存的な阻害効果を示した。ＣＶ−８６８８は、両細胞型の生存性を用量依存的に阻害した。陽性対照であるスタウロスポリンは、２４時間の処置後、両細胞株の細胞生存率に１００％の阻害を発揮した。（図１３Ａ〜１３Ｋ）。
【０２３０】
実施例１０
マラセジン及びマラセジン誘導体の細胞毒性−乳酸脱水素酵素放出アッセイ
試験概要
ＬＤＨアッセイは、損傷細胞から培地中へ放出された乳酸脱水素酵素（「ＬＤＨ」）を、細胞毒性及び細胞崩壊のバイオマーカーとして定量的に測定する。
【０２３１】
アッセイの手順
ＣｙｔｏＴｏｘ−ＯＮＥ（商標）Ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ  ＡｓｓａｙをＰｒｏｍｅｇａから購入した。細胞播種、化合物ソースプレートの調製、及び試験化合物への細胞の曝露は、実施例８に記載した通りに実施した。
【０２３２】
ＬＤＨ放出アッセイのために、プレートをインキュベーターから取り出し、室温で１５分間平衡化させた。次いで、プレートを、１，０００ＲＰＭで１分間遠心分離した。細胞培養液２０μＬを、新しい３８４ウェル黒底プレート中へ移した。次いで、ＣｙｔｏＴＯＸ−ＯＮＥ（商標）２０μＬを各ウェル中に添加して、室温で１０分間インキュベートした。その後、停止溶液１０μＬを各ウェルへ添加した後、プレートを５００ｒｐｍで１分間振盪した。プレートをＥｎＳｐｉｒｅ上で、５６０ｎｍの励起波長及び５９０ｎｍの発光波長を使用して読み取った。相対活性を次式に従って算出した：相対活性（％）＝１００％×（輝度試料−輝度バックグラウンド）／（輝度溶媒−輝度バックグラウンド）。
【０２３３】
結果
ＣＶ−８６８４は、７２時間のインキュベーション後、いずれの細胞株にも有意な放出を誘導しなかった。ＣＶ−８６８５は、２４時間の処置後、ＷＭ１１５細胞からのＬＤＨ放出に対し用量依存的な誘導効果を示したが、ＭｅＷｏ細胞に対しては誘導効果を示さなかった。ＣＶ−８６８８は最も高い試験濃度でＬＤＨ放出を誘導した。（図１４Ａ〜１４Ｌ）。
【０２３４】
実施例１１
マラセジン及びマラセジン誘導体のアリール炭化水素受容体活性化能
アッセイの手順
ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−Ｌｕｃ細胞はＰｈａｒｍａｒｏｎから購入し、Ｏｎｅ−ＧｌｏルシフェラーゼアッセイシステムはＰｒｏｍｅｇａから購入し、ＤＭＥＭはＨｙｃｌｏｎｅから購入し、ペニシリン／ストレプトマイシンはＳｏｌａｂｉｏから購入した。
【０２３５】
安定にトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞用の培養液は、ＤＭＥＭに高グルコース及びＬ−グルタミン、ならびに１０％ＦＢＳを補充することによって調製した。
【０２３６】
ＨｅｐＧ２−ＡｈＲ−Ｌｕｃ細胞を、Ｔ−７５フラスコ内で、３７℃、５％ＣＯ２、及び９５％の相対湿度で培養した。細胞を、剥離及び分割前に８０〜９０％のコンフルエンスに到達させた。
【０２３７】
培養細胞を５ｍＬのＰＢＳですすいだ。ＰＢＳを吸引によって除去し、１．５ｍＬのトリプシンをフラスコに添加し、３７℃でおよそ５分間、または細胞が剥離して浮き上がるまで、細胞をインキュベートした。過剰な血清含有培地を添加することによって、トリプシンを不活性化させた。
【０２３８】
細胞懸濁液を円錐管に移し、１２０ｇで１０分間遠心分離して、細胞をペレット化した。細胞を適度な密度で播種培地中に再懸濁させた。４０μＬの細胞を３８４ウェル培養プレートに移した（５×１０３細胞／ウェル）。プレートを３７℃のインキュベーター内に２４時間置いた。
【０２３９】
その後、試験化合物のストック溶液及びオメプラゾール陽性対照を調製した。Ｅｃｈｏ５５０を使用して化合物溶液４０ｎＬをアッセイプレート中に移した。次いで、このプレートを化合物処置のためにインキュベーター内に戻した。
【０２４０】
後で、処置から２４時間後に、プレートをインキュベーターから取り出し、周囲温度で冷却させた。培養液のものと等しいＯｎｅ−Ｇｌｏ試薬３０μＬを各ウェルに添加した。細胞を少なくとも３分間溶解させ、次いでルミノメーター内で測定した。
【０２４１】
ＸＬｆｉｔの非線形回帰解析を使用して用量反応をグラフ化し、ＥＣ５０値も算出した。
【０２４２】
結果
ＡｈＲ−ルシフェラーゼアッセイの結果を図１５Ａ〜１５Ｆに示す。
【０２４３】
実施例１２
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）アッセイ
試験概要
この試験の目的は、後続試験の用量選択のために、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）Ｓｋｉｎ  Ｍｏｄｅｌに対する被験物の潜在的な皮膚刺激性を反復曝露後に評価することである。毒性は、被験物で処置した組織におけるＭＴＴ（３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）の、陰性／溶媒対照で処置した組織と比較した相対的な変換率を測定することによって決定する。
【０２４４】
ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ａｓｈｌａｎｄ，ＭＡ）によって提供されるＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）Ｓｋｉｎ  Ｍｏｄｅｌを本試験に使用する。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）の組織は、高度に分化した多層のヒト表皮モデルを形成するように培養された、正常なヒト由来の表皮ケラチノサイト（ＮＨＥＫ）及びメラノサイト（ＮＨＭ）からなる。共培養物中のＮＨＭは自発的なメラニン形成を起こして、組織に様々なレベルの色素沈着をもたらす。培養物は細胞培養挿入物上の気液界面で増殖し、それによって皮膚モジュレーターを局所投与することができる。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）モデルは、インビボに似た形態学的及び超微細構造的特性を示す。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織の基底細胞層に局在するＮＨＭは樹状であり、自発的にメラニン顆粒を産生し、それは次第に組織の層を占めていく。よって、該検査システムは、陰性対照と比較してメラニン産生を阻害し得るまたは刺激し得る材料をスクリーニングするために使用することができる。
【０２４５】
本試験の実験デザインは、可能であれば、無希釈の被験物（及び／または必要に応じて投薬溶液）のｐＨの決定、及び反復曝露後の相対的な組織生存率を決定するための決定的アッセイからなる。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）Ｓｋｉｎ  Ｍｏｄｅｌを合計７日間被験物に曝露する。４８時間（前回の処置から４８±２時間の時間内）毎に被験物をＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）Ｓｋｉｎ  Ｍｏｄｅｌに局所的に適用する。被験物の毒性は、対照及び被験物で処置した組織におけるＭＴＴのＮＡＤ（Ｐ）Ｈ依存性ミクロソーム酵素還元によって（及び、それほどではないがＭＴＴのコハク酸脱水素酵素還元によって）決定する。（Ｂｅｒｒｉｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。データは、相対的生存の形態（陰性対照と比較したＭＴＴ変換率）で示される。
【０２４６】
材料
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ）及びＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）Ｓｋｉｎ  Ｍｏｄｅｌ（ＭＥＬ−３００−Ａ）は、Ｍａｔ  Ｔｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって供給された。１％コウジ酸（滅菌脱イオン水中に調製されたもの）及びＭＴＴ（３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）は、Ｓｉｇｍａによって供給された。２ｍＭのＬ−グルタミンを含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（ＭＴＴ添加培地）は、Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌによって供給された。イソプロパノールは、Ａｌｄｒｉｃｈによって供給された。Ｃａ＋＋及びＭｇ＋＋を含まない滅菌ダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＣＭＦ−ＤＰＢＳ）は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎによって供給された（または同等のもの）。滅菌脱イオン水は、Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌによって供給された（または同等のもの）。ＤＭＳＯは、ＣｉＶｅｎｔｉ  Ｃｈｅｍによって供給された。
【０２４７】
アッセイの手順
被験物は、一般に、無希釈で検査するか、またはスポンサーの指示通りに検査する（プロトコル添付書１を参照されたい）。１０マイクロリットル（１０μＬ）または２５μＬの各被験物を、組織上に直接、上部表面を覆うように適用する。被験物の性質（液体、ゲル、クリーム、フォームなど）に応じて、被験物を組織の表面上に広げることができる投与装置、メッシュまたは他の補助具の使用が必要な場合があり得る。
【０２４８】
投薬期間中は、適正な量のＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ（または溶解性検査の間に決定された代替の溶媒）を使用して、各被験物を少なくとも２００倍に希釈する。ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭで新たに希釈したものを投薬毎に調製する。投薬溶液の調製のために実施するべき最終希釈は、上の溶解性評価から決定し、試験の手引書に記録する。
【０２４９】
ＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ中０．５％（ｖ／ｖ）として希釈したＤＭＳＯをビヒクル対照として使用し、被験物及びアッセイ対照に使用したのと同じ手順に基づいて組織上に投薬する（１０μＬ及び２５μＬの用量）。
【０２５０】
被験物は、７日間の試験中、４８時間（前回の処置から４８±２時間の時間内）毎にＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織に局所的に適用する。１０及び２５マイクロリットルの各被験物をそれぞれ各組織に適用する。２５マイクロリットルの陽性及び陰性対照をそれぞれ各組織に適用する。
【０２５１】
可能であれば、無希釈の液体被験物（及び／または必要に応じて投薬溶液）のｐＨを決定する。ｐＨは、ｐＨ試験紙（例えば、推定するために０〜１４のｐＨ範囲を有するもの、及び／またはより正確な値を決定するために５〜１０のｐＨ範囲を有するもの）を使用して決定される。範囲が狭い方のｐＨ試験紙の典型的なｐＨ増分は、およそ０．３〜０．５ｐＨ単位である。ｐＨ試験紙の最大増分は１．０ｐＨ単位である。
【０２５２】
決定的アッセイは、陰性対照及び陽性対照を含む。アッセイ陰性対照に指定したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、２５μＬの滅菌脱イオン水で処置する。アッセイ陽性対照に指定した組織への投薬には、２５マイクロリットルの１％コウジ酸（滅菌脱イオン水中に調製し、調製時に濾過する）を使用する。１％コウジ酸は、調製してから２時間以内に使用するまで、アルミ箔で覆った管の中に保管する。陰性及び陽性対照の曝露時間は、被験物に対して使用される時間と同じである。
【０２５３】
各被験物がＭＴＴを直接還元する能力を評価することが必要である。ＭＴＴ溶液１．０ｍｇ／ｍＬを、後述の通りのＭＴＴ添加培地中に調製する。およそ２５μＬの被験物をＭＴＴ溶液１ｍＬに添加し、混合物を暗所中３７℃±１℃で１〜３時間インキュベートする。陰性対照である滅菌脱イオン水２５μＬを、同時に検査する。ＭＴＴ溶液の色が青／紫に変わるならば、被験物はＭＴＴを還元したと推定される。水不溶性の被験材料は、被験物と培地の界面でのみ直接的な還元（暗色化）を示し得る。
【０２５４】
被験物（複数可）に対するＭＴＴ直接還元検査は、以前に無関係な試験で実施されていた可能性がある。このような場合は、そのＭＴＴ直接還元検査の結果をここに示す試験に使用してもよく、その当初の試験を参照文献とする。
【０２５５】
組織の曝露：培養を開始してから少なくとも１６時間後に、デジタルカメラを使用して２種のＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織（０日目での非処置とみなす）の写真を撮り、アッセイの時間ゼロでの組織の色素沈着の度合いの視覚的評価の助けとする。組織の画像を収集するために使用した正確な手順を試験の手引書及び報告書に明記する。ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をＣＭＦ−ＤＰＢＳですすぎ、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去する。すすいだ後、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を適正なＭＴＴ含有ウェルに移し、ＭＴＴアッセイの項に記載する通りにＭＴＴアッセイで処理する。
【０２５６】
培養を開始してから少なくとも１６時間後に、予め温めた新たなＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ０．９ｍＬを含有する新しい６ウェルプレート上に組織を移す。試験は７日間にわたって行われる。２種の組織を、１日目、及び４８時間（前回の処置から４８±２時間の時間内）毎に、１０及び２５マイクロリットルの各被験物でそれぞれ局所的に処置する。培地は毎日（前回の再供給から２４±２時間の時間内）新しくする。すなわち、組織を、予め温めた新たなＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ０．９ｍＬを含有する新しい６ウェルプレート上に移す。
【０２５７】
２種の組織を、１日目、及び４８時間（前回の処置から４８±２時間の時間内）毎に、２５μＬの陽性及び陰性対照でそれぞれ局所的に処置する。培地は毎日（前回の再供給から２４±２時間の時間内）新しくする。すなわち、組織を、予め温めた新たなＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ０．９ｍＬを含有する新しい６ウェルプレート上に移す。組織を、空気中５±１％ＣＯ２の加湿雰囲気中３７±１℃（標準的な培養物条件）で適正な曝露時間インキュベートする。
【０２５８】
投薬期間中、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、最初にＣＭＦ−ＤＰＢＳ約５００μＬを使用して約３回穏やかにすすいで、残留する被験物をすべて除去する。次いで、組織を、予め温めた新たなＥＰＩ−１００−ＬＬＭＭ０．９ｍＬを含有する新しい６ウェルプレート上に移し、組織に適正な被験物、陰性、または陽性対照を投薬する。組織を、空気中５±１％ＣＯ２の加湿雰囲気中３７±１℃（標準的な培養物条件）で適正な曝露時間インキュベートする。正確なすすぎ手順を試験の手引書に記録する。
【０２５９】
７日間の試験の終了時に、デジタルカメラを使用して陰性または陽性対照及び各被験物を投薬したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織の写真を撮り、アッセイ終了時（７日目）の組織の色素沈着の度合いの視覚的評価の助けとする。組織の画像を収集するために使用した正確な手順を試験の手引書及び報告書に明記する。次いで、以下に示す通りにＭＴＴ還元による組織の生存率を決定する。
【０２６０】
ＭＴＴアッセイ：ＰＢＳ中に調製したＭＴＴの１０倍ストック（バッチ調製時に濾過したもの）を、使用前２時間以内に解凍し、温かいＭＴＴ添加培地で希釈して、１．０ｍｇ／ｍＬの溶液を生成する。予めラベルを貼った２４ウェルプレートの各指定ウェルにＭＴＴ溶液３００μＬを添加する。
【０２６１】
曝露時間後に、ＭＴＴアッセイ用に指定した各ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織をＣＭＦ−ＤＰＢＳですすぎ、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去する。すすいだ後、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を適正なＭＴＴ含有ウェルに移す。２４ウェルプレートを、標準条件で３±０．１時間インキュベートする。
【０２６２】
３±０．１時間後、ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）組織を、滅菌吸収紙上で水分を吸い取って乾燥させ、過剰な液体を除去し、各指定ウェルにイソプロパノール２．０ｍＬを含有する、予めラベルを貼った２４ウェルプレートに移す。このプレートをパラフィルムで覆い、最後に曝露したものが回収されるまで冷蔵庫（２〜８℃）内で保管する。必要であれば、ＭＴＴを抽出する前に、プレートを冷蔵庫内に一晩（または最後に曝露したものが回収されてから最大２４時間後）保管してもよい。次いで、プレートを室温で少なくとも２時間振盪する。抽出期間の終了時に、細胞培養挿入物内の液体を、細胞培養挿入物を取り出したウェル内にデカントする。抽出溶液を混合し、２００μＬを９６ウェルプレートの適正なウェルに移す。２００μＬのイソプロパノールを、ブランクと指定したウェルに添加する。各ウェルの５５０ｎｍでの吸光度（ＯＤ５５０）をＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｖｍａｘプレートリーダー（ＡＵＴＯＭＩＸ機能付）で測定する。
【０２６３】
被験物がＭＴＴを還元することが示される場合、すすぎ後に組織に結合したままである被験物のみが、偽のＭＴＴ還元シグナルをもたらすことになり、問題を呈する。残留している可能性のある被験物がＭＴＴを直接還元するように作用していないことを実証するために、決定的アッセイで機能チェックを実施して、被験材料が組織に結合しておらず、偽のＭＴＴ還元シグナルを生じないことを示す。
【０２６４】
残留被験物がＭＴＴを直接還元するように作用しているかどうかを決定するために、凍結によって死滅した対照組織を使用する。凍結死滅組織は、ＩＩＶＳにて、非処置のＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）／ＥｐｉＤｅｒｍ（商標）（メラノサイトを含まないＭｅｌａｎｏｄｅｒｍ（商標））組織を−２０℃の冷凍庫内に少なくとも一晩入れ、室温に解凍し、次いで再凍結することによって調製される。組織は、死滅した後、冷凍庫内で無期限に保管することができる。凍結死滅組織は、ＭａｔＴｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから既に調製済みのもの入手し、使用するまで−２０℃の冷凍庫内に保管することができる。残留被験物の還元について検査するために、通常の様式で死滅組織を被験物で処置する。すべてのアッセイ手順は、生存組織と同様に実施する。死滅組織中に残留するＮＡＤＨ及び関連する酵素からの少量のＭＴＴ還元が予想されるために、滅菌脱イオン水で処置した少なくとも１つの死滅対照（陰性死滅対照）を並行して検査する。
【０２６５】
被験物で処置した死滅対照にＭＴＴ還元がほとんどまたは全く観察されなければ、被験物で処置した生存組織に観察されるＭＴＴ還元は生細胞に起因し得る。処置した死滅対照に容易に検出できるＭＴＴ還元があるならば（処置した生存組織の量に対して）、化学還元の理由を説明する追加措置を講じなければならないか、またはこの被験物はこのシステムでは検査できないとみなすことができる。死滅対照からのＯＤ５５０値は、後述の通りに分析する。
【０２６６】
吸光度の生データを取り込み、プリントファイルとして保存し、Ｅｘｃｅｌのスプレッドシートにインポートする。ブランクウェルの平均ＯＤ５５０値を算出する。陰性対照（複数可）の補正平均ＯＤ５５０値は、これらの平均ＯＤ５５０値からブランクウェルの平均ＯＤ５５０値を引くことによって求められる。個々の被験物に曝露したもの及び陽性対照に曝露したものの補正ＯＤ５５０値は、それぞれからブランクウェルの平均ＯＤ５５０値を引くことによって求められる。すべての計算は、Ｅｘｃｅｌのスプレッドシートを使用して実施する。論じたアルゴリズムは、処置群レベルでの最終的なエンドポイント分析を算出するために実施されるが、同じ計算を個々の反復試験に適用することができる。
補正した被験物曝露ＯＤ５５０＝被験物曝露ＯＤ５５０−ブランク平均ＯＤ５５０
【０２６７】
死滅対照（ＫＣ）が使用されるならば、被験物残留物によって直接還元されたＭＴＴの量を補正するために、以下の追加的な計算を実施する。陰性対照で処置した死滅対照の生ＯＤ５５０値を、各被験物で処置した死滅対照の生ＯＤ５５０値から引いて、被験物で処置した死滅対照の純ＯＤ５５０値を求める。
各被験物ＫＣの純ＯＤ５５０＝被験物ＫＣの生ＯＤ５５０−陰性対照ＫＣの生ＯＤ５５０
【０２６８】
純ＯＤ５５０値は、被験物残留物による特定の曝露時間での直接還元が原因で還元されたＭＴＴの量を表す。一般に、純ＯＤ５５０値が０．１５０より大きいならば、このＭＴＴ還元の正味量を、処置した生存組織の補正ＯＤ５５０値から引いて、最終補正ＯＤ５５０値を得る。次いで、これらの最終補正ＯＤ５５０値を使用して対照に対する割合での生存率（％）を求める。
最終補正ＯＤ５５０＝補正被験物ＯＤ５５０（生存）−純ＯＤ５５０被験物（ＫＣ）
【０２６９】
最後に、以下の対照に対する割合（％）の算出を行う：
生存率（％）＝［（被験物または陽性対照の最終補正ＯＤ５５０）／（陰性対照の補正平均ＯＤ５５０）］×１００
【０２７０】
結果
ＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）アッセイの結果を図１６Ａ〜１６Ｋに示す。マラセジン、化合物Ｉ、及び化合物ＩＩで処置した組織から、実験の７日目での色素沈着の低減が実証された。図１７Ａ〜１７Ｋは、例示処置に曝露したＭｅｌａｎｏＤｅｒｍ（商標）試料の１５倍の倍率の画像を示す。
【０２７１】
実施例１３
ゼブラフィッシュアッセイ
アッセイの手順
化合物：化合物は、試験依頼者（Ｓｔｕｄｙ  Ｓｐｏｎｓｏｒ）によって、水／ＰＢＳまたはＤＭＳＯ中で最大可溶性濃度のマスターストック（ＭＳ）溶液として提供される。
【０２７２】
胚を採取する標準手順：ＰｈｙｌｏｎｉｘのＡＢ系統ゼブラフィッシュを、自然交配によって、またはＭａｓｓ  Ｅｍｂｒｙｏ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＭＥＰＳ，Ａｑｕａｔｉｃ  Ｈａｂｉｔａｔｓ）を使用して生成する。雌のゼブラフィッシュ一匹当たりおよそ５０匹のゼブラフィッシュを生成する。ゼブラフィッシュは、魚用水中２８℃で維持する。ゼブラフィッシュを清浄にし（死んだゼブラフィッシュを取り除く）、発生段階によって分類する。ゼブラフィッシュは付着した卵黄嚢から栄養を受けるため、受精後（ｄｐｆ）６日間は給餌を必要としない。
【０２７３】
化合物の溶解性：マスターストック（ＭＳ）（最大濃度を使用する）を純粋なＤＭＳＯで希釈して、サブストック溶液（ＳＳ）、すなわち、１０、５０、１００、２００、３００ｍＭなどにする。Ｐｈｙｌｏｎｉｘによって供給される魚用水［脱イオン水１リットル当たり２００ｍｇのＩｎｓｔａｎｔ  Ｏｃｅａｎ  Ｓｅａ  Ｓａｌｔ（Ａｑｕａｒｉｕｍ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）；２．５ｍｇ／リットルのＮｅｕｔｒａｌ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ（Ｓｅａｃｈｅｍ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．）でｐＨ６．６〜７．０に維持する；導電性８５０〜９５０μＳ］を、検査容器に４ｍｌ／容器ずつ分注する。
【０２７４】
検査化合物溶液（ＴＳ）を生成するために、各ＳＳ４μｌを魚用水に直接添加する。例：１０ｍＭのＳＳ４μｌを魚用水に添加すると１０μＭのＴＳが生成する；最終ＤＭＳＯ濃度は０．１％である。代替的に、同じ最終ＴＳ及びＤＭＳＯ濃度を得るために、ＳＳ１０μｌを１０ｍｌ／容器の魚用水に添加することができる。最大１％のＤＭＳＯを許容するアッセイでは、ＳＳ４０μｌを使用して１００μＭのＴＳを生成することができる。１０ｍｌの魚用水を使用するならば、同じ最終ＴＳ及びＤＭＳＯ濃度を得るために、ＳＳの容量を比例して増加させなければならない。この溶液を、各アッセイで特定された期間、２８℃でインキュベートし、沈殿物の有無に関して毎日視覚的に検査する。
【０２７５】
最大許容濃度（ＭＴＣ）：ＭＴＣ（ＬＣ１０）は、化合物の致死率の標準的基準として使用され、１０種の化合物濃度を使用して決定される。化合物の最大可溶性濃度を決定した後、試験依頼者によって１０種の濃度が選択される。
【０２７６】
卵膜を有する（ｃｈｏｒｉｏｎａｔｅｄ）約２ｄｐｆのＰｈｙｌｏｎｉｘ野生型ＡＢゼブラフィッシュ３０匹を、４ｍｌ／ウェルの魚用水及び化合物の溶解性に応じて０．１〜１％の濃度範囲のＤＭＳＯを含有する６ウェルマイクロプレートのウェル中に分配する。
【０２７７】
１０濃度（すなわち、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、５、１０、５０、１００、及び５００μＭ（または化合物の溶解性によって許容される濃度まで）を最初に検査する。必要であれば、さらにそれより高い（最大２０００μＭ）または低い（最低０．００１μＭ）の濃度を検査する。
【０２７８】
ゼブラフィッシュを各濃度の試験化合物とともに２８℃で３日間、暗所でインキュベートする。非処置及び０．１〜１％のＤＭＳＯで処置したゼブラフィッシュを、アッセイ及びビヒクル対照として使用する。致死率（％）を算出するために、処置後に、死んだゼブラフィッシュの数を毎日数え、取り除く。５ｄｐｆで、死んだ動物を数えて致死率（％）を算出する（＝死んだゼブラフィッシュの総数／３０）。死んだゼブラフィッシュが崩壊した場合、死んだゼブラフィッシュの数は、生きたゼブラフィッシュの数を数えることによって推論されることに注意されたい。
【０２７９】
ＭＴＣを推定するために、ＥＸＣＥＬソフトウェアを使用して濃度に対する致死率（％）をプロットすることによって、致死率曲線を生成する。ＭＴＣの平均及びＳＤを得るために、実験を３回実施する。
【０２８０】
ゼブラフィッシュの皮膚の色素沈着に及ぼす化合物の効果を視覚的に評価する：黄色素胞、虹色素胞、及び黒色素胞（メラノサイト）を含むゼブラフィッシュの皮膚色素細胞は、神経堤細胞に由来する。ゼブラフィッシュでは、分化した皮膚色素前駆細胞は、約２４ｈｐｆで色素を発現する。この試験の焦点は、皮膚の表面上の黒色色素、メラニンを発現するメラノサイトである。メラノサイトは、最初に黒色の小さい斑として背側頭部領域に現れる。ゼブラフィッシュが発育するにつれて、斑の数は増加し、融合して、尾部領域まで延びた帯を形成する。対照的に、突然変異体であるアルビノのゼブラフィッシュは、希薄な皮膚の色素沈着を示す。化合物を２ｄｐｆで投与し、化合物が、５ｄｐｆまでに完了する胚の色素沈着の連続的なプロセスを停止させるかどうかを評価する。３種の濃度、すなわち、ＭＴＣ、５０％ＭＴＣ、及び２５％ＭＴＣを各化合物について検査する。
【０２８１】
自己孵化した２ｄｐｆのＰｈｙｌｏｎｉｘ野生型ＡＢゼブラフィッシュ３０匹を各化合物濃度で３日間処置する。非処置及び０．１％ＤＭＳＯで処置したゼブラフィッシュを対照として使用する。陽性対照：フェニルチオ尿素（ＰＴＵ、０．０３％）。
【０２８２】
手術用光学顕微鏡を使用して、ゼブラフィッシュを毎日視覚的に検査する。化合物及びＰＴＵで処置したゼブラフィッシュを、非処置及びビヒクルで処置した対照ゼブラフィッシュと比較する。色素沈着の減少を示すゼブラフィッシュの数を毎日数え、検査動物の割合（％）として表す。代表的な画像を示す。色素沈着を減少させるのに最適な化合物濃度及び処置時間を特定するために、時間（ｄｐｆ）に対する皮膚沈着の減少を示すゼブラフィッシュの割合（％）をプロットすることによって反応速度曲線を生成する。フィッシャーの直接確率検定を使用して、化合物の効果が有意であるかどうか決定する（Ｐ＜０．０５）。
【０２８３】
ゼブラフィッシュの皮膚の色素沈着に及ぼす化合物の効果の追加的な視覚的評価を、０．１、１、及び３μＭで処置した後に実施する。自己孵化した２ｄｐｆのＰｈｙｌｏｎｉｘ野生型ＡＢゼブラフィッシュ３０匹を各化合物濃度で３日間処置する。非処置及び０．１％ＤＭＳＯで処置したゼブラフィッシュを対照として使用する。陽性対照：フェニルチオ尿素（ＰＴＵ、０．００３％）。手術用光学顕微鏡を使用して、ゼブラフィッシュを毎日視覚的に検査する。化合物及びＰＴＵで処置したゼブラフィッシュを、非処置及びビヒクルで処置した対照ゼブラフィッシュと比較する。
【０２８４】
５ｄｐｆに、色素沈着の減少を示すゼブラフィッシュの数を数え、検査動物の割合（％）として表す。代表的な画像を示す。色素沈着を減少させるのに最適な化合物濃度及び処置時間を特定するために、濃度に対する皮膚沈着の減少を示すゼブラフィッシュの割合（％）をプロットすることによって反応速度曲線を生成する。フィッシャーの直接確率検定を使用して、化合物の効果が有意であるかどうか決定する（Ｐ＜０．０５）。
【０２８５】
ゼブラフィッシュの皮膚の色素沈着に及ぼす化合物の効果を定量化する：視覚的評価からの結果に基づいて、最適な条件（濃度、化合物処置時間）を使用して、ゼブラフィッシュの皮膚の色素沈着に及ぼす化合物の効果を定量化する。
【０２８６】
視覚的評価からの結果によって決定された最適な段階のＰｈｙｌｏｎｉｘ野生型ＡＢゼブラフィッシュ２０匹を、最適な化合物濃度で処置する。非処置及び０．１％ＤＭＳＯで処置したゼブラフィッシュを対照として使用する。陽性対照：フェニルチオ尿素（ＰＴＵ、０．０３％）。
【０２８７】
ＳＰＯＴカメラを２倍で使用して、背側から見たゼブラフィッシュ全体の画像を取り込む。Ａｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐの選択機能を使用して、背側の頭部及び躯幹部領域を関心領域（ＲＯＩ）として定義する。ＲＯＩ内の黒色の皮膚の色素沈着を、Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐの強調表示機能を使用して強調表示する。総色素シグナル（ＰＳ）（単位：ピクセル）を、Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐのヒストグラム機能を使用して決定する。
【０２８８】
化合物がゼブラフィッシュの成長に影響を及ぼすならば、体長（Ｌ）及び躯幹部の幅（Ｗ）が小さくなり、それによってＲＯＩ面積及び最終ＰＳが影響を受ける。したがって、最終シグナル（ＦＳ）の測定値を、ＦＳ＝ＰＳ／Ｌ×Ｗを使用して正規化する。
【０２８９】
非処置及びビヒクルで処置したゼブラフィッシュは、同様のＦＳを示して、ビヒクルが影響を及ぼさないことを実証すると予想される。ＰＴＵで処置したゼブラフィッシュは、低いＦＳを示して、アッセイを確証すると予想される。化合物で処置したゼブラフィッシュを、ビヒクルで処置した対照ゼブラフィッシュと比較する。
【０２９０】
化合物の効果が有意であるかどうか（Ｐ＜０．０５）を決定するために、スチューデントのｔ検定を使用して、化合物で処置したゼブラフィッシュの平均ＦＳをビヒクルで処置したゼブラフィッシュの平均ＦＳと比較する。
【０２９１】
ゼブラフィッシュの皮膚の色素沈着に及ぼす化合物の効果の追加的な定量化を、０．５及び１．５μＭの化合物濃度で処置した後に実施する。
【０２９２】
２ｄｐｆのＰｈｙｌｏｎｉｘ野生型ＡＢゼブラフィッシュ２０匹を、０．５及び１．５μＭの化合物濃度で処置する。非処置及び０．１％ＤＭＳＯで処置したゼブラフィッシュを対照として使用する。陽性対照：フェニルチオ尿素（ＰＴＵ、０．００３％）。
【０２９３】
ＳＰＯＴカメラを２倍で使用して、背側から見たゼブラフィッシュ全体の画像を取り込む。Ａｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐの選択機能を使用して、背側の頭部及び躯幹部領域を関心領域（ＲＯＩ）として定義する。ＲＯＩ内の黒色の皮膚の色素沈着を、Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐの強調表示機能を使用して強調表示する。総色素シグナル（ＰＳ）（単位：ピクセル）を、Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐのヒストグラム機能を使用して決定する。
【０２９４】
化合物がゼブラフィッシュの成長に影響を及ぼすならば、体長（Ｌ）が短く、躯幹部の幅（Ｗ）が小さくなり、それによってＲＯＩ面積及び最終ＰＳが影響を受ける。したがって、最終シグナル（ＦＳ）の測定値を、ＦＳ＝ＰＳ／Ｌ×Ｗを使用して正規化する。
【０２９５】
非処置及びビヒクルで処置したゼブラフィッシュは、同様のＦＳを示して、ビヒクルが影響を及ぼさないことが確認されると予想される。ＰＴＵで処置したゼブラフィッシュは、低いＦＳを示して、アッセイを確証すると予想される。化合物で処置したゼブラフィッシュを、ビヒクルで処置した対照ゼブラフィッシュと比較する。
【０２９６】
化合物の効果が有意であるかどうか（Ｐ＜０．０５）を決定するために、スチューデントのｔ検定を使用して、化合物で処置したゼブラフィッシュの平均ＦＳをビヒクルで処置したゼブラフィッシュの平均ＦＳと比較する。
【０２９７】
結果
化合物ＩＩに曝露したゼブラフィッシュについての視覚的評価の結果を図１８Ａ〜１８Ｆ及び１９Ａ〜１９Ｆに示す。試験の視覚的評価部分からの結果を総括した表を図２０に示す。
【０２９８】
化合物ＩＩに曝露したゼブラフィッシュについての関心領域の定量的評価及び結果を図２１Ａ〜２１Ｅ及び図２２Ａ〜２２Ｂに示す。
【０２９９】
実施例１４
ＤＭＳＯ及び細胞培養液中でのマラセジン及びマラセジン誘導体の安定性
被験化合物をＤＭＳＯ及び培養液中１００μＭで調製した。この溶液を室温で２時間インキュベートし、ＬＣ−ＭＳを使用して分析した。ピーク面積を使用して、溶媒中に残存する化合物を評価した。
【０３００】
結果
ＬＣ−ＭＳの結果を図２３Ａ〜２３Ｊに示す。この結果から、２時間のインキュベーションの後に化合物が培養液中で安定であることが示される。
【０３０１】
文献
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【０３０２】
本出願に引用されるすべての文献は、本明細書において全体が引用されるように、援用により本明細書に組み込まれる。
【０３０３】
本発明の例示的実施形態をここに説明してきたが、本発明は説明されたこれらの実施形態に限定されず、当業者であれば、本発明の範囲または趣旨から逸脱することなく他の様々な変更または改変を為し得ることが理解されるべきである。
【図１Ａ】
2019513818.tif 000134
【図１Ｂ】
2019513818.tif 000135
【図２Ａ】
2019513818.tif 000136
【図２Ｂ】
2019513818.tif 000137
【図２Ｃ】
2019513818.tif 000138
【図３Ａ】
2019513818.tif 000139
【図３Ｂ−Ｄ】
2019513818.tif 000140
【図３Ｅ−Ｇ】
2019513818.tif 000141
【図３Ｈ−Ｊ】
2019513818.tif 000142
【図３Ｋ−Ｍ】
2019513818.tif 000143
【図４Ａ】
2019513818.tif 000144
【図４Ｂ】
2019513818.tif 000145
【図４Ｃ】
2019513818.tif 000146
【図４Ｄ】
2019513818.tif 000147
【図４Ｅ−Ｇ】
2019513818.tif 000148
【図４Ｈ−Ｊ】
2019513818.tif 000149
【図４Ｋ】
2019513818.tif 000150
【図４Ｌ】
2019513818.tif 000151
【図５】
2019513818.tif 000152
【図６】
2019513818.tif 000153
【図７】
2019513818.tif 000154
【図８】
2019513818.tif 000155
【図９】
2019513818.tif 000156
【図１０】
2019513818.tif 000157
【図１１】
2019513818.tif 000158
【図１２】
2019513818.tif 000159
【図１３Ａ】
2019513818.tif 000160
【図１３Ｂ】
2019513818.tif 000161
【図１３Ｃ】
2019513818.tif 000162
【図１３Ｄ】
2019513818.tif 000163
【図１３Ｅ−Ｇ】
2019513818.tif 000164
【図１３Ｈ−Ｊ】
2019513818.tif 000165
【図１３Ｋ】
2019513818.tif 000166
【図１４Ａ】
2019513818.tif 000167
【図１４Ｂ】
2019513818.tif 000168
【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
2019513818.tif 000170
【図１４Ｅ−Ｇ】
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【図１４Ｈ−Ｊ】
2019513818.tif 000172
【図１４Ｋ】
2019513818.tif 000173
【図１４Ｌ】
2019513818.tif 000174
【図１５Ａ】
2019513818.tif 000175
【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
2019513818.tif 000177
【図１５Ｄ】
2019513818.tif 000178
【図１５Ｅ】
2019513818.tif 000179
【図１５Ｆ】
2019513818.tif 000180
【図１６Ａ−Ｅ】
2019513818.tif 000181
【図１６Ｆ−Ｋ】
2019513818.tif 000182
【図１７Ａ−Ｅ】
2019513818.tif 000183
【図１７Ｆ−Ｋ】
2019513818.tif 000184
【図１８】
2019513818.tif 000185
【図１９】
2019513818.tif 000186
【図２０】
2019513818.tif 000187
【図２１】
2019513818.tif 000188
【図２２Ａ】
2019513818.tif 000189
【図２２Ｂ】
2019513818.tif 000190
【図２３Ａ】
2019513818.tif 000191
【図２３Ｂ】
2019513818.tif 000192
【図２３Ｃ】
2019513818.tif 000193
【図２３Ｄ】
2019513818.tif 000194
【図２３Ｅ】
2019513818.tif 000195
【図２３Ｆ】
2019513818.tif 000196
【図２３Ｇ】
2019513818.tif 000197
【図２３Ｈ】
2019513818.tif 000198
【図２３Ｉ】
2019513818.tif 000199
【図２３Ｊ】
2019513818.tif 000200
【手続補正書】
【提出日】平成30年11月5日(2018.11.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＩ）：
【化７９】
2019513818.tif 000201
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１の少なくとも１つはメチルである）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物。
【請求項２】
【化８０】
2019513818.tif 000202
及び
【化８１】
2019513818.tif 000203
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式（ＩＩＩ）：
【化８２】
2019513818.tif 000204
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０の少なくとも１つはメチルである）
あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品的にもしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物。
【請求項４】
次式である、請求項３に記載の化合物：
【化８３】
2019513818.tif 000205
【請求項５】
被験体において皮膚を美白するための組成物であって、前記組成物が化合物を含み、前記化合物が、式（ＩＩ）：
【化８４】
2019513818.tif 000206
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、組成物。
【請求項６】
前記化合物が、
【化８５】
2019513818.tif 000207
、
【化８６】
2019513818.tif 000208
及び
【化８７】
2019513818.tif 000209
からなる群から選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
皮膚を美白するための組成物であって、前記組成物が化合物を含み、前記化合物が、式（ＩＩＩ）：
【化８８】
2019513818.tif 000210
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、組成物。
【請求項８】
前記化合物が、
【化８９】
2019513818.tif 000211
及び
【化９０】
2019513818.tif 000212
から成る群から選択される、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
被験体においてメラノサイトのアポトーシスを誘導するための組成物であって、前記組成物が化合物を含み、前記化合物が、式（ＩＩ）：
【化９１】
2019513818.tif 000213
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、組成物。
【請求項１０】
前記化合物が、
【化９２】
2019513818.tif 000214
、
【化９３】
2019513818.tif 000215
及び
【化９４】
2019513818.tif 000216
からなる群から選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
メラノサイトのアポトーシスを誘導するための組成物であって、前記組成物が化合物を含み、前記化合物が、式（ＩＩＩ）：
【化９５】
2019513818.tif 000217
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、組成物。
【請求項１２】
前記化合物が、
【化９６】
2019513818.tif 000218
及び
【化９７】
2019513818.tif 000219
からなる群から選択される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための組成物であって、前記組成物が化合物を含み、前記化合物が、式（ＩＩ）：
【化９８】
2019513818.tif 000220
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、組成物。
【請求項１４】
前記化合物が、
【化９９】
2019513818.tif 000221
、
【化１００】
2019513818.tif 000222
及び
【化１０１】
2019513818.tif 000223
からなる群から選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための組成物であって、前記組成物が化合物を含み、前記化合物が、式（ＩＩＩ）：
【化１０２】
2019513818.tif 000224
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、組成物。
【請求項１６】
前記化合物が、
【化１０３】
2019513818.tif 000225
及び
【化１０４】
2019513818.tif 000226
からなる群から選択される、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
式（ＩＩ）：
【化１０５】
2019513818.tif 000227
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物と、
化粧品または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、または担体とを含む、組成物。
【請求項１８】
前記化合物が、
【化１０６】
2019513818.tif 000228
、
【化１０７】
2019513818.tif 000229
及び
【化１０８】
2019513818.tif 000230
からなる群から選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
式（ＩＩＩ）：
【化１０９】
2019513818.tif 000231
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物と、
化粧品または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、または担体とを含む、組成物。
【請求項２０】
前記化合物が、
【化１１０】
2019513818.tif 000232
及び
【化１１１】
2019513818.tif 000233
からなる群から選択される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
被験体において皮膚を美白するための方法（医療行為を除く）であって、式（ＩＩ）：
【化１１２】
2019513818.tif 000234
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
【請求項２２】
前記化合物が、
【化１１３】
2019513818.tif 000235
、
【化１１４】
2019513818.tif 000236
及び
【化１１５】
2019513818.tif 000237
からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
被験体において皮膚を美白するための方法（医療行為を除く）であって、式（ＩＩＩ）：
【化１１６】
2019513818.tif 000238
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
【請求項２４】
前記化合物が、
【化１１７】
2019513818.tif 000239
及び
【化１１８】
2019513818.tif 000240
からなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
被験体においてメラノサイトのアポトーシスを誘導するための方法（医療行為を除く）であって、式（ＩＩ）：
【化１１９】
2019513818.tif 000241
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
【請求項２６】
前記化合物が、
【化１２０】
2019513818.tif 000242
、
【化１２１】
2019513818.tif 000243
及び
【化１２２】
2019513818.tif 000244
からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
被験体においてメラノサイトのアポトーシスを誘導するための方法（医療行為を除く）であって、式（ＩＩＩ）：
【化１２３】
2019513818.tif 000245
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
【請求項２８】
前記化合物が、
【化１２４】
2019513818.tif 000246
及び
【化１２５】
2019513818.tif 000247
からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
被験体においてアリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための方法（医療行為を除く）であって、式（ＩＩ）：
【化１２６】
2019513818.tif 000248
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
【請求項３０】
前記化合物が、
【化１２７】
2019513818.tif 000249
、
【化１２８】
2019513818.tif 000250
及び
【化１２９】
2019513818.tif 000251
からなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
被験体においてアリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための方法（医療行為を除く）であって、式（ＩＩＩ）：
【化１３０】
2019513818.tif 000252
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
【請求項３２】
前記化合物が、
【化１３１】
2019513818.tif 000253
及び
【化１３２】
2019513818.tif 000254
からなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記被験体が、式（ＩＩ）の構造を有する化合物の薬学的に許容される塩と接触される、請求項２１に記載の方法。
【請求項３４】
前記被験体が、式（ＩＩ）の構造を有する化合物の化粧品的に許容される塩と接触される、請求項２１に記載の方法。
【請求項３５】
前記被験体が、式（ＩＩ）の構造を有する化合物の薬学的に許容される塩と接触される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３６】
前記被験体が、式（ＩＩ）の構造を有する化合物の化粧品的に許容される塩と接触される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３７】
前記被験体が、式（ＩＩ）の構造を有する化合物の薬学的に許容される塩と接触される、請求項５に記載の組成物。
【請求項３８】
前記被験体が、式（ＩＩ）の構造を有する化合物の化粧品的に許容される塩と接触される、請求項５に記載の組成物。
【請求項３９】
前記被験体が、式（ＩＩ）の構造を有する化合物の薬学的に許容される塩と接触される、請求項９に記載の組成物。
【請求項４０】
前記被験体が、式（ＩＩ）の構造を有する化合物の化粧品的に許容される塩と接触される、請求項９に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
本発明のさらなる実施形態は、被験体においてアリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための方法である。該方法は、式（ＩＩＩ）：
【化１６】
2019513818.tif 000255
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）、あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を被験体に接触させることを含む。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
式（ＩＩ）：
【化７９】
2019513818.tif 000256
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１の少なくとも１つはメチルである）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物。
（項目２）
【化８０】
2019513818.tif 000257
及び
【化８１】
2019513818.tif 000258
からなる群から選択される、項目１に記載の化合物。
（項目３）
式（ＩＩＩ）：
【化８２】
2019513818.tif 000259
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０の少なくとも１つはメチルである）
あるいはその結晶形態、水和物、または化粧品的にもしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物。
（項目４）
次式である、項目３に記載の化合物：
【化８３】
2019513818.tif 000260
（項目５）
式（ＩＩ）：
【化８４】
2019513818.tif 000261
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、
皮膚を美白するための化合物。
（項目６）
【化８５】
2019513818.tif 000262
、
【化８６】
2019513818.tif 000263
及び
【化８７】
2019513818.tif 000264
からなる群から選択される、項目５に記載の化合物。
（項目７）
式（ＩＩＩ）：
【化８８】
2019513818.tif 000265
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、
皮膚を美白するための化合物。
（項目８）
【化８９】
2019513818.tif 000266
及び
【化９０】
2019513818.tif 000267
から成る群から選択される、項目７に記載の化合物。
（項目９）
式（ＩＩ）：
【化９１】
2019513818.tif 000268
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、
メラノサイトのアポトーシスを誘導するための化合物。
（項目１０）
【化９２】
2019513818.tif 000269
、
【化９３】
2019513818.tif 000270
及び
【化９４】
2019513818.tif 000271
からなる群から選択される、項目９に記載の化合物。
（項目１１）
式（ＩＩＩ）：
【化９５】
2019513818.tif 000272
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、
メラノサイトのアポトーシスを誘導するための化合物。
（項目１２）
【化９６】
2019513818.tif 000273
及び
【化９７】
2019513818.tif 000274
からなる群から選択される、項目１１に記載の化合物。
（項目１３）
式（ＩＩ）：
【化９８】
2019513818.tif 000275
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、
アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための化合物。
（項目１４）
【化９９】
2019513818.tif 000276
、
【化１００】
2019513818.tif 000277
及び
【化１０１】
2019513818.tif 000278
からなる群から選択される、項目１３に記載の化合物。
（項目１５）
式（ＩＩＩ）：
【化１０２】
2019513818.tif 000279
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する、
アリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための化合物。
（項目１６）
【化１０３】
2019513818.tif 000280
及び
【化１０４】
2019513818.tif 000281
からなる群から選択される、項目１５に記載の化合物。
（項目１７）
式（ＩＩ）：
【化１０５】
2019513818.tif 000282
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物と、
化粧品または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、または担体とを含む、組成物。
（項目１８）
前記化合物が、
【化１０６】
2019513818.tif 000283
、
【化１０７】
2019513818.tif 000284
及び
【化１０８】
2019513818.tif 000285
からなる群から選択される、項目１７に記載の組成物。
（項目１９）
式（ＩＩＩ）：
【化１０９】
2019513818.tif 000286
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物と、
化粧品または薬学的に許容されるビヒクル、希釈剤、または担体とを含む、組成物。
（項目２０）
前記化合物が、
【化１１０】
2019513818.tif 000287
及び
【化１１１】
2019513818.tif 000288
からなる群から選択される、項目１９に記載の組成物。
（項目２１）
被験体において皮膚を美白するための方法であって、式（ＩＩ）：
【化１１２】
2019513818.tif 000289
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
（項目２２）
前記化合物が、
【化１１３】
2019513818.tif 000290
、
【化１１４】
2019513818.tif 000291
及び
【化１１５】
2019513818.tif 000292
からなる群から選択される、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
被験体において皮膚を美白するための方法であって、式（ＩＩＩ）：
【化１１６】
2019513818.tif 000293
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
（項目２４）
前記化合物が、
【化１１７】
2019513818.tif 000294
及び
【化１１８】
2019513818.tif 000295
からなる群から選択される、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
被験体においてメラノサイトのアポトーシスを誘導するための方法であって、式（ＩＩ）：
【化１１９】
2019513818.tif 000296
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
（項目２６）
前記化合物が、
【化１２０】
2019513818.tif 000297
、
【化１２１】
2019513818.tif 000298
及び
【化１２２】
2019513818.tif 000299
からなる群から選択される、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
被験体においてメラノサイトのアポトーシスを誘導するための方法であって、式（ＩＩＩ）：
【化１２３】
2019513818.tif 000300
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
（項目２８）
前記化合物が、
【化１２４】
2019513818.tif 000301
及び
【化１２５】
2019513818.tif 000302
からなる群から選択される、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
被験体においてアリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための方法であって、式（ＩＩ）：
【化１２６】
2019513818.tif 000303
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
（項目３０）
前記化合物が、
【化１２７】
2019513818.tif 000304
、
【化１２８】
2019513818.tif 000305
及び
【化１２９】
2019513818.tif 000306
からなる群から選択される、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
被験体においてアリール炭化水素受容体（ＡｈＲ）をアゴナイズするための方法であって、式（ＩＩＩ）：
【化１３０】
2019513818.tif 000307
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立に、水素及びメチルからなる群から選択される）
あるいはその結晶形、水和物、または化粧品的もしくは薬学的に許容される塩の構造を有する化合物を前記被験体に接触させることを含む、方法。
（項目３２）
前記化合物が、
【化１３１】
2019513818.tif 000308
及び
【化１３２】
2019513818.tif 000309
からなる群から選択される、項目３１に記載の方法。
【国際調査報告】
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