(57)【要約】  ホモサレート、サリチル酸オクチル、またはそれらの組み合わせでＭＳ患者を治療する方法を開示する。【選択図】図１
2019524734.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
多発性硬化症（ＭＳ）患者を治療する方法であって、
（ａ）少なくとも１つのＭＳの症状を示すＭＳ患者を特定するステップ、および
（ｂ）ホモサレート、サリチル酸オクチル、およびホモサレートとサリチル酸オクチルの組み合わせからなる群より選択される有効量の組成物で患者を治療するステップであり、症状の発生が減少するか、または症状の進行が遅くなるかまたは停止するステップ
を含む方法。
【請求項２】
前記症状が麻痺である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記治療が毎日行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記治療が少なくとも３０日の期間である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記組成物が経口投与で送達される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記組成物が局所投与で送達される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記組成物が非経口投与で送達される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
多発性硬化症（ＭＳ）の患者予備群を治療する方法であって、
（ａ）ＭＳ患者予備群を特定するステップ、および
（ｂ）ホモサレート、サリチル酸オクチル、およびホモサレートとサリチル酸オクチルの組み合わせからなる群より選択される有効量の組成物で患者を治療することであり、症状の発生が減少するか、または症状の進行が遅くなるかまたは停止するステップ
を含む方法。
【請求項９】
前記症状が筋力低下／しびれである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記治療が毎日行われる、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記治療が少なくとも３０日間の期間である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物が経口投与で送達される、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物が局所投与で送達される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記組成物が非経口投与で送達される、請求項８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年７月１５日出願の米国仮特許出願第６２／３６２，９５１号の利益を主張し、これはあらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
中枢神経系に影響を及ぼす最も一般的な自己免疫疾患である多発性硬化症（ＭＳ）は、脳および脊髄の神経細胞の絶縁被覆が損傷している脱髄疾患である。この疾患は、神経系の一部が伝達する能力に影響を及ぼし、身体的、精神的、そして時には精神医学的問題を引き起こす。例えば、ＭＳ患者は、片目の失明または複視のような視覚障害をしばしば有する。患者はまた、筋力低下、感覚障害、および調整障害を示す。
【０００３】
ＭＳ進行の根底にあるメカニズムは、免疫系による破壊またはミエリン産生細胞の不全のいずれかであると考えられている。この疾患の原因はわかっていないが、遺伝学やウイルス感染などの環境要因が含まれる場合がある。ＭＳは通常、患者の症状の分析および補助的な医学的検査の結果に基づいて診断される。
【０００４】
残念なことに、多発性硬化症の治療法は知られていない。現在の治療は、発作後の症状を改善し、新たな発作を防ぐことを試みている。ＭＳを治療するために使用される薬は中程度の効果しかなく、副作用があり、耐容性が低い可能性がある。理学療法は、患者の機能能力の助けになる。良い選択肢がないため、多くの患者は証明されていない代替治療を受けている。平均余命は、健常人に比べて５〜１０年短い（２）。
【発明の概要】
【０００５】
当技術分野で必要とされているのは、有効なＭＳ治療のための新しい治療用化合物である。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】図１は、日焼け止め剤の局所適用がマウスをＥＡＥ進行から保護することを示す実験を開示する。マウスは、日焼け止め剤、ＮＢＵＶＢまたはその両方を局所投与された。全実験期間中（０日目〜２８日目）、ＥＡＥ後の各マウスを毎日採点して、データを平均値として表す。Ｎ＝１０〜１２／群。
【図２Ａ】図２Ａ〜Ｂは、ＥＡＥに対する特定の日焼け止め成分の効果を示す１組のグラフである。日焼け止め成分（アボベンゾンおよびオキシベンゾン）は、マウスにおけるＥＡＥ重症度を部分的に抑制する。図２Ａは、さまざまな日焼け止め成分の分析である。アボベンゾンとオキシベンゾンはマウスのＥＡＥ重症度を部分的に抑制する。ＥＡＥの間（０日目〜３０日目）、毎日局所投与することによってマウスを日焼け止め成分（アボベンゾン、オキシベンゾンまたは組み合わせ）で処理した。日焼け止めスプレーを陽性対照として使用した。各マウスを毎日採点し、データを平均値として表す。Ｎ＝１０〜１２／群。
【図２Ｂ】図２Ｂは、異なる日焼け止め成分を投与したマウスの体重を示す。ＥＡＥの間（０日目〜３０日目）、毎日局所投与することによってマウスを日焼け止め成分（アボベンゾン、オキシベンゾンまたは組み合わせ）で処理した。日焼け止めスプレーを陽性対照として使用した。実験中、各マウスの体重を毎週測定し、データを平均値として表す。Ｎ＝１０〜１２／群。
【図３Ａ】図３Ａ〜Ｂは、ＥＡＥに対する日焼け止め成分の効果を示す１組のグラフである。図３Ａは、日焼け止め成分（ホモサレートおよびサリチル酸オクチル）は、マウスにおいてＥＡＥ発症を劇的に抑制することを示す。ＥＡＥの間（０日目〜３０日目）、毎日局所投与することによってマウスを日焼け止め成分（ホモサレート、サリチル酸オクチルまたは組み合わせ）で処理した。日焼け止めスプレーを陽性対照として使用した。マウスを毎日採点し、データを平均値として表す。Ｎ＝１１〜１２／群。
【図３Ｂ】図３Ｂは、異なる日焼け止め成分を投与されたマウスの体重を示す。ＥＡＥの間（０日目〜３０日目）、毎日局所投与することによってマウスを日焼け止め成分（ホモサレート、サリチル酸オクチルまたは組み合わせ）で処理した。日焼け止めスプレーを陽性対照として使用した。マウスの体重を毎週測定し、データを平均値として表す。Ｎ＝１１〜１２／群。
【図４Ａ】図４Ａ〜Ｃは、ＣＯＰＰＥＲＴＯＮＥ  ＳＰＬＡＹ日焼け止め剤（ＳＳ）の局所適用がＥＡＥを完全に遮断することを示す。図４Ａは、ＮＢＵＶＢ前の日焼け止め剤の局所適用である。平均スコアをＥＡＥ導入後に毎日記録した。データを平均±ＳＥＭとして表す。
【図４Ｂ】体重を毎週測定した。データを平均±ＳＤとして表す。
【図４Ｃ】ＮＢＵＶＢを含む、または含まない日焼け止め剤の局所適用は、ＥＡＥ発症を完全に阻止した。免疫処理後、平均スコアを毎日測定した。データを平均±ＳＥＭとして表す。図４Ａ、４Ｂおよび４Ｃの全ての処理群は、対照群と統計的に異なっていた（ｎ＝１２、ｐ＜０．０５）。
【図５Ａ】図５Ａ〜Ｂは、市販の日焼け止め製剤がＥＡＥを差別的に遮断する一方、遮光下では遮断しないことを示す。図５Ａでは、６つの異なる日焼け止め剤を毎日局所投与し、平均スコアを記録した。データを平均値として表す。
【図５Ｂ】ＥＡＥに対する完全な遮光の影響を決定した。凡例に示すように、処理したマウスを様々な期間、遮光下で維持した。平均スコアを毎日測定した。データを平均値として表す。ＢＡＮＡＮＡ  ＢＯＡＴ  ＫＩＤＳおよびＣｏＴＺ  ＦＡＣＥを除くパネルＡのすべて処理群は、対照と統計的に異なっていた（ｎ＝１２、Ｐ＜０．０５）。パネルＢ群の間で統計的な差異は見られなかった（ｎ＝１２）。
【図６Ａ】図６Ａ〜Ｄは、ＣＯＰＰＥＲＴＯＮＥスプレー日焼け止め剤（ＳＳ）によるＥＡＥの抑制が時間および用量の両方に依存することを示す。図６Ａは、ＣＯＰＰＥＲＴＯＮＥスプレー日焼け止め剤の投与時間に関連した疾患スコアである。平均スコアを毎日測定した。実験の間（３０日目）、様々な開始処理時間を設け、マウスを毎日２００μｌのＳＳで局所処理した。前処理：処理は免疫処理の７日前に開始した。免疫処理：免疫処理の時点で処理を開始した。発症：動物が最初に１．０以上のスコアを示したときに処理を開始した。
【図６Ｂ】体重を毎週測定した。
【図６Ｃ】ＣＯＰＰＥＲＴＯＮＥスプレー日焼け止め剤によるＥＡＥの用量依存的抑制を示す。
【図６Ｄ】体重を毎週測定した。データは、図６Ａおよび６Ｃでは平均±ＳＥＭとして、図６Ｂおよび６Ｄでは、平均±ＳＤとして表す。前処理および免疫処理は、パネルＡおよびＢにおいて対照群と有意に異なっていた（ｎ＝１２、ｐ＜０．０５）。２つの最高レベルのＳＳ（５０および１００μｌ）は、パネルＣおよびＤにおいて対照と有意に異なっていた（ｎ＝１２、ｐ＜０．０５）。
【図７Ａ】図７Ａ〜Ｄは、有効な日焼け止め剤の２つの成分（ホモサレートおよびサリチル酸オクチル）がＥＡＥを有意に抑制することを示す。他の２つの成分（アボベンゾンとオキシベンゾン）はＥＡＥを抑制することができない。図７Ａおよび７Ｂでは、マウスを毎日局所的に（２５μｌのＤＭＳＯ中、１２％アボベンゾン、１６％オキシベンゾンまたは組み合わせ）の溶液で処理した。日焼け止め剤（ＣＯＰＰＥＲＴＯＮＥ  ＳＰＲＡＹ）（１００μｌ）を陽性対照として使用した。図７Ａでは、実験中、各マウスを毎日採点した。
【図７Ｂ】毎週体重を測定した。図７Ａおよび７Ｂでは、全ての群が日焼け止め剤群と有意に異なっていた（ｎ＝１２、ｐ＜０．０５）。
【図７Ｃ】図７Ｃおよび７Ｄでは、マウスを２つの成分（３０μｌホモサレート（１．５ｇ／ｋｇ）、１０μｌサリチル酸オクチル（０．５ｇ／ｋｇ）およびそれらの組み合わせ）で局所的に処理した。ＣＯＰＰＥＲＴＯＮＥ  ＳＰＲＡＹ日焼け止め剤２００μｌを陽性対照として使用した。図７Ｃは平均スコアを記録し他。データを平均値として表す。
【図７Ｄ】体重を記録した。図７Ｃおよび７Ｄにおいて、サリチル酸オクチル単独を除くすべての処理群は対照群と有意に異なっていた（ｐ＜０．０５）。
【図８Ａ】図８Ａ〜Ｄは、ホモサレート（ＨＳ）およびサリチル酸オクチル（ＯＳ）によるＥＡＥの用量依存的抑制を示す。図８Ａおよび８Ｂでは、マウスを様々な用量（１０、２０および３０μｌ、または０．５、１．０、１．５ｇ／ｋｇ）のホモサレートまたはサリチル酸オクチルで局所的に処理した。図８Ａでは平均スコアを記録した。全ての処理群が対照と有意に異なっていた（ｐ＜０．０５）。
【図８Ｂ】体重を記録した。ホモサレート０．５ｇ／ｋｇを除く全ての処理は、対照と有意に異なっていた（ｐ＜０．０５）。
【図８Ｃ】図８Ｃおよび８Ｄにおいて、マウスを様々な時点において、ホモサレート（３０μｌまたは１．５ｇ／ｋｇ）で局所処理した。図８Ｃでは、毎日の平均スコアを記録した。
【図８Ｄ】体重を記録した。データを平均値として表す。８Ｃおよび８Ｄにおいて、毎日および２日ごとのホモサレートの平均スコアは、対照より有意に低かった（ｐ＜０．０５）。
【図９Ａ】試験した日焼け止め剤のすべてが、マウスをＥＡＥの発症から保護することを示している。
【図９Ｂ】試験した日焼け止め剤のすべてが、マウスをＥＡＥの発症から保護することを示している。
【図９Ｃ】試験した日焼け止め剤のすべてが、マウスをＥＡＥの発症から保護することを示している。
【図１０Ａ−Ｆ】試験した日焼け止め剤のすべてがマウスをＥＡＥの発症から保護することを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
用語
用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、無制限（open-ended）の用語であり、「を含むがこれに限定されない」という意味に解釈されるべきである。これらの用語は、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」というより限定的な用語を包含する。
【０００８】
単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は複数形の言及を含む。同様に、用語「ａ」（または「ａｎ」）、「１つ以上」および「少なくとも１つ」は互換的に使用することができる。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「によって特徴付けられる（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ  ｂｙ）」、および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」は、互換的に使用することができる。
【０００９】
他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に具体的に記載された刊行物および特許文書のそれぞれは、刊行物に報告され、本発明に関連して使用され得る化学物質、機器、統計分析および方法論の記載および開示を含むあらゆる目的のためにその全体が参考として援用される。本明細書中に引用された全ての参考文献は、当業者の技術水準を示すものとして解釈されるべきである。本明細書中のいかなるものも、本発明が先行発明のためにそのような開示に先行する権利がないことの承認として解釈されるべきではない。
【００１０】
本明細書において「有効量」は、未処理の患者と比較して疾患の症状を改善するのに必要とされる量を指す。疾患の治療的処理のために本発明を実施するために使用される活性化合物の有効量は、投与方法、対象の年齢、体重、および一般的な健康状態に応じて変わる。最終的には、主治医または獣医師が適切な量と投与計画を決定する。そのような量は「有効」量と呼ばれる。
【００１１】
本明細書において、特に明記しない限りまたは文脈から明らかでない限り、用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、当技術分野における通常の許容範囲内、例えば平均の２標準偏差以内と理解される。文脈から他に明らかでない限り、本明細書に提供される全ての数値は用語「約（ａｂｏｕｔ）」によって修飾される。
【００１２】
本明細書で使用される用語「多発性硬化症」または「ＭＳ」は、脳および脊髄の軸索の周囲のミエリン鞘が損傷し、脱髄および瘢痕化ならびに広範囲の臨床的徴候および症状をもたらす神経系に影響を及ぼす炎症性疾患を指す。ＭＳは、再発／寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）、二次進行型ＭＳ、一次進行型ＭＳ、および進行性再発型ＭＳを含む様々な疾患サブタイプに分類することができる。再発寛解型サブタイプは、予測不可能な再発とそれに続く数ヶ月から数年の比較的静かな期間（寛解）を特徴とし、新たな疾患活動性の徴候は見られない。再発寛解型サブタイプは通常、臨床的に孤立した症候群（ＣＩＳ）から始まる。ＣＩＳでは、患者は脱髄を示唆する発作を起こすことがある。多くの場合、ＣＩＳはＭＳの発症を示す。
【００１３】
多発性硬化症の診断は、確立された臨床症状に基づいて確立することができ、臨床症状は当業者に周知である。一の実施形態において、本発明は、症状の発生を軽減することによって、または症状の進行を遅らせるもしくは失速させることによってＭＳを治療するための組成物を開示する。
【００１４】
多発性硬化症の臨床症状としては、視力障害、浮動性めまい、回転性めまい、感覚機能障害、脱力感、協調障害、バランス喪失、疲労、疼痛、神経認知障害、精神的健康障害、膀胱機能障害、腸の機能不全、性的機能不全、熱感受性が挙げられ得る。
【００１５】
用語「多発性硬化症」はまた、中枢神経系のニューロンの脱髄によって現れる他の任意の自己免疫疾患も指す。ＭＳの発症時に現れる最初の症状は、「ＭＳ関連症状」と呼ばれることがある。ＥＡＥ誘発動物（ＭＳの動物モデル）におけるＭＳの症状は、典型的には動物の尾の衰弱および機能不全、それに続くその後足の衰弱および最後にその前足の衰弱であり得る。ヒトでは、そのような最初のＭＳ関連症状は、典型的には、複視、顔面しびれ、顔面衰弱、回転性めまい、吐き気、嘔吐性運動失調、腕の衰弱等であり得る。
【００１６】
本明細書で使用される用語「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、多発性硬化症の望ましくない症状のいくつかを改善すること、それらが起こる前のそのような徴候の現れの防止、疾患の進行を遅らせるかまたは完全に予防すること（再発エピソード間のより長い期間、症状の悪化の減速または予防などによって明らかになるように）、寛解期間の開始を促進すること、進行性−慢性期の病期（一次期と二次期の両方）で生じる不可逆的な損傷を遅らせること、進行期の開始を遅らせること、または上記のうちの２つ以上の組み合わせを指す。
【００１７】
本明細書で使用される用語「患者」または「対象」は、哺乳動物対象（霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス等）を指し、好ましくは多発性硬化症に関連する状態を有すると疑われるか、罹患しやすいか、または罹患する可能性があるヒト対象を指す。一の実施形態において、本方法は、例えば上述のような任意の症状を伴う、多発性硬化症を患っている患者を治療するために使用することができる。別の実施形態において、本方法は、予備群の患者が多発性硬化症を発症するのを防ぐためにも使用され得る。
【００１８】
本明細書で使用される用語「患者予備群」は、ＭＳを発症しているかまたは発症する危険がある任意のヒトまたは対象を指す。
【００１９】
本明細書で使用される用語「診断すること（ｄｉａｇｎｏｓｉｎｇ）」または「診断（ｄｉａｇｎｏｓｉｓ）」は、疾患または障害を検出すること、またはＭＳなどの疾患または障害の病期または程度を決定することを指す。用語「診断（ｄｉａｇｎｏｓｉｓ）」はまた、ＭＳを治療するための薬物療法の治療効果を決定すること、またはＭＳの薬物療法に対する反応のパターンを予測することを包含する。診断方法は独立して、または他の診断および／または特定の疾患または障害（例えばＭＳ）に関して医学分野で知られている病期分類方法と組み合わせて使用され得る。
【００２０】
本明細書で使用される用語「薬学的に許容される」は、治療の必要性に照らして過度に有害な副作用なしに、本明細書に記載の治療を達成するための対象への投与に適した化合物または組成物または担体を指す。
【００２１】
本明細書で使用される用語「治療有効量」または「薬学的に適切な投与量」は、対象、組織または細胞の生物学的または医学的応答を引き出す化合物の量または投与量を指し、それは研究者、獣医師、医師または他の臨床医によって求められる。
【００２２】
本明細書において、「薬学的に許容される担体」は、あらゆる乾燥粉末、溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤、吸収遅延剤などを含む。薬学的に許容される担体は、本発明の方法において化合物を投与する目的のために有用な材料であり、これらは、好ましくは非毒性であり、固体、液体、または気体材料であってもよく、あるいは不活性であり薬学的に許容され、そして本発明の化合物と適合性がある材料である。この様な材料の例としては、これらに限定されないが、ラクトース、グルコースおよびスクロース等の糖；これらに限定されないが、コーンスターチおよびポテトスターチ等のスターチ；これらに限定されないが、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース等のセルロースおよびその誘導体；トラガント末；麦芽;ゼラチン;タルク; これらに限定されないが、カカオバターおよび坐剤ワックス等の賦形剤；これらに限定されないが、ラッカセイ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油等の油；プロピレングリコールなどのグリコール類；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル等であるがこれらに限定されないエステル；寒天；これらに限定されないが、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム等の緩衝剤；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張食塩水；リンガー液；エチルアルコール、およびリン酸緩衝液、ならびに、これらに限定されないが、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム等の非毒性適合性潤滑剤、ならびに着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および芳香剤、防腐剤および酸化防止剤が、組成物中に存在してもよい。そのような担体のさらなる例として、さまざまなラクトース、マンニトール、トウモロコシ油などの油、ＰＢＳなどの緩衝液、食塩水、ポリエチレングリコール、グリセリン、ポリプロピレングリコール、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミドなどのアミド、アルブミンなどのタンパク質、Ｔｗｅｅｎ８０のような洗剤、グルコースなどの単糖類およびオリゴ糖類、ラクトース、シクロデキストリンおよびデンプンを挙げることができる。
【００２３】
本明細書で使用される用語「投与すること(administering)」または「投与(administration)」は、治療または予防されるべき疾患または状態に罹患しているかまたはその危険性がある対象に本発明の化合物または医薬組成物を提供することを指す。
【００２４】
本明細書で使用される用語「全身送達」は、本発明の化合物を全身的に送達することができる任意の適切な投与方法を指す。一の実施形態において、全身送達は経口投与、非経口投与、鼻腔内投与、吸入器投与、舌下投与、直腸内投与、槽内投与、経皮投与、膣内投与、腹腔内投与、局所投与（粉末、軟膏または滴下による）、頬投与、あるいは経口または経鼻スプレー投与からなる群より選択し得る。本明細書で使用される用語「非経口」は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下および関節内への注射および注入を含む投与様式を指す。
【００２５】
一の実施形態において、本組成物または製剤は局所投与することができる。
【００２６】
本明細書で使用される用語「局所投与」は、対象の皮膚または粘膜組織の表面上へ本発明の組成物またはキットの成分の局所的な投与を指す。局所投与は局所効果を強調し、そして物質はその活動が望まれるところに直接適用される。しかしながら、時には、局所という用語は、必ずしも物質の標的効果を含むことなく、身体の局所領域または身体部分の表面に適用されると定義され、むしろ適用場所に基づく分類の変形とすることができる。
【００２７】
本発明の方法
【００２８】
本発明は、多発性硬化症の進行を予防または抑制するために、サリチル酸オクチルおよび／またはホモサレート、またはサリチル酸オクチルおよびホモサレートの少なくとも１つを含む組成物を使用する方法を含む。以下の実施例は、本出願人らが、市販の日焼け止め製剤が、ＭＳのマウスモデルであるＥＡＥマウスにおけるＥＡＥの発生率を減少または防止することを観察したことを示す。具体的には、本出願人らは、多発性硬化症（ＭＳ）患者またはＭＳ患者予備群をホモサレート、サリチル酸オクチルおよびホモサレートとサリチル酸オクチルの組合せからなる群より選択される組成物で処理すると実験的自己免疫性脳脊髄炎の発症を予防でき、したがってＭＳを治療することを証明する。サリチル酸オクチルおよびホモサレートを含む日焼け止め剤の使用とは対照的に、本発明の方法は少なくとも３０日間、好ましくは少なくとも６０または９０日間、前記組成物を毎日使用することを必要とする。さらに、本発明の好ましい投与形態は、局所的日焼け止め剤投与とは対照的な、吸入による経口投与または非経口投与である。
【００２９】
本発明の方法は、ＭＳを発症する危険性がある一群の対象（例えば、ヒト）を診断し、そしてＭＳ患者またはＭＳの少なくとも１つの症状を示すＭＳ患者予備群を特定する工程を含む。
【００３０】
ＭＳ症状の治療に適した対象または患者の同定は、いわゆるＳｃｈｕｍａｃｈｅｒおよびＰｏｓｅｒの基準（Compston A, Coles A,October 2008, Multiple sclerosis. Lancet 372 (9648):1502-17; Trojano M, Paoliceili D, (2001) The differential diagnosis of multiple sclerosis: classification and clinical features of relapsing and progressive neurological syndromes. Neurol, Sci. 22 (Suppl 2):S98-102; Poser CM, Brinar VV (2004) Diagnostic criteria for multiple sclerosis: an historical review. Clin Neurol Neurosurg 108(3):147-58）、または臨床病理学的データ、実験室データ、およびＭＳ病変の時間的空間的多発性の放射線学的データによる実証に焦点を当てたＭｃＤｏｎａｌｄ基準（Compston A, Coles A, October 2008, Multiple sclerosis. Lancet 372(9648):1502-17; McDonald Wl, Compston A, Edan G et al, (2001) Recommended diagnostic criteria for multiple sclerosis: guidelines from the International Panel on the diagnosis of multiple sclerosis. Ann. Neurol. 50(1):121-7; Polman CH, Reingold SC, Edan G et al, (2005) Diagnostic criteria for multiple sclerosis:2005 revisions to the "McDonald Criteria". Ann. Neurol, 58(6):840-6）等の臨床医によって広く使用されている標準化された診断基準に基づいて行うことができる。
【００３１】
ＭＳ用に最も一般的に使用されている診断ツールは、ニューロイメージング、脳脊髄液の分析および誘発電位である。陽性診断では、脳と脊椎の磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で脱髄領域（病変またはプラーク）が認められる。造影剤としてＭＳを有する患者に投与されたガドリニウムは、典型的にはこれらの「ホットスポット」または病変に局在し、そしてＭＲＩの使用により容易に同定され得る。病変のＭＲＩは、ＭＳを診断する最も効率的な方法の１つである。新しい病変の発生を測定することも、ＭＳの進行を監視するための重要かつ効率的な方法である。
【００３２】
あるいは、ＭＳは他の既知の方法で診断することができる。例えば、ＭＳ患者は、これらの神経経路の脱髄に起因する視神経（視覚および感覚誘発電位を用いて検査され得る）および感覚神経の刺激に対してあまり活発に反応しない可能性がある(Gronseth GS, Ashman EJ, (2000) Practice parameter: the usefulness of evoked potentials in identifying clinically silent lesions in patients with suspected multiple sclerosis (an evidence-based review): Report of the Quality Standards Subcommittee of the American Academy of Neurology. Neurology 54(9):1720-5)。中枢神経系の慢性炎症は脳脊髄液の分析によって証明することができる。脳脊髄液は、ＭＳ患者の７５〜８５％に存在するオリゴクローナルバンドで試験される(McDonald Wl, Compston A, Edan G et al, (2001) Recommended diagnostic criteria for multiple sclerosis: guidelines from the International Panel on the diagnosis of multiple sclerosis. Ann. Neurol.50(1):121-7; Link H, Huang YM, (2008) Oligoclonal bands in multiple sclerosis cerebrospinal fluid: an update on methodology and clinical usefulness. J. Neuroimmunol. 180(1-2):17-28)。
【００３３】
一の実施形態において、ＭＳ患者またはＭＳ患者予備群を診断する方法は、ＭＳ症状の重症度のピークの減少、および／または累積疾患指数（ＣＤＩ）の減少を伴う、ＭＳ症状の発症の遅延のうちの１つまたは複数を有する対象を診断または特定するステップを含み得る。
【００３４】
患者のＭＳ症状が監視され、その症状の軽減または遅延が検出される。最も好ましくは、対象における新しい病変の発生はＭＲＩで定期的に（すなわち半年ごとに）監視される。監視され得るさらなる症状には、感覚の変化（感覚低下および感覚異常）、筋力低下、筋肉のけいれん、または移動の障害；協調とバランスの障害（運動失調）；言語障害（構音障害）または飲み込み障害（嚥下障害）、視覚障害（眼振、視神経炎、または複視）、疲労、急性または慢性の痛み、および膀胱と腸の障害からなる群より選択されるものが含まれる。さまざまな程度の認知障害およびうつ病または不安定な気分の感情的症状もまた一般的である。障害の進行および症状の重症度に関する一般的な臨床的尺度の１つは、総合障害度尺度、またはＥＤＳＳである。
【００３５】
一の実施形態において、患者の症状は視覚障害、浮動性めまい、回転性めまい、感覚機能障害、衰弱、調整に関する問題、バランスの崩れ、疲労、疼痛、神経認知障害、精神障害、膀胱機能障害、腸の機能不全、性的機能不全、熱感受性、筋力低下／しびれ、および／または麻痺を含み得る。
【００３６】
一の特定の実施形態において、患者の症状は麻痺を含む。
【００３７】
別の実施形態において、患者の症状は筋力低下／しびれを含む。
【００３８】
ＥＡＥ（実験的自己免疫性脳脊髄炎、あるいは実験的アレルギー性脳脊髄炎）は、有用な治療薬の開発に成功している中枢神経系（ＣＮＳ）の脳炎症および脱髄疾患の動物モデルである。マウスモデルは、多発性硬化症および急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）を含むヒトＣＮＳ脱髄疾患の動物モデルとして広く研究されている。
【００３９】
日焼け止め剤中に見られる成分を比較した後、本出願人らは、成分中のいくつかの可能性のある違いを確認し、次いで有効な日焼け止め剤中の４つの活性成分：アボベンゾン、オキシベンゾン、ホモサレートおよびサリチル酸オクチルに絞り込んだ。本出願人らは、疾患の誘発後にこれらの４つの化合物のそれぞれでＥＡＥマウスを処理し、そして疾患の進行をモニターした。アボベンゾンおよびオキシベンゾンは疾患の進行をわずかに抑制したが、ホモサレートおよびサリチル酸オクチルはほぼ完全にＥＡＥ発症を予防した。
【００４０】
一の実施形態において、本発明は、ＭＳ患者またはＭＳ患者予備群を特定するステップ、および、サリチル酸オクチル、ホモサレートおよびサリチル酸オクチルとホモサレートの混合物からなる群より選択される有効量の化合物によって患者を治療するステップを含む、ＭＳ患者を治療する方法であり、ＭＳ症状が軽減または消失する方法である。以下に開示するように、サリチル酸オクチル、ホモサレート、またはサリチル酸オクチルとホモサレートの混合物の量は、日焼け止め剤を使用する個人に適用される量とは異なる。
【００４１】
別の実施形態において、疾患の症状の進行は遅くなるか停止する。
【００４２】
一の実施形態において、ＭＳ患者またはＭＳ患者予備群を特定するステップは、上述したような任意の特定方法および／または当業者に知られている任意の他の方法を含み得る。
【００４３】
例えば、ＭＳ患者またはＭＳ患者予備群に典型的な症状の１つを監視することによって、ＭＳ患者またはＭＳ患者予備群を特定することができる。
【００４４】
一の実施形態において、視覚障害、浮動性めまい、回転性めまい、感覚機能障害、衰弱、調整に関する問題、バランスの崩れ、疲労、疼痛、神経認知障害、精神障害、膀胱機能障害、腸の機能不全、性的機能不全、熱感受性、筋力低下／しびれ、および／または麻痺を含む１つまたは複数の症状を監視することができる。
【００４５】
特定の一の実施形態において、監視する症状は麻痺を含む。
【００４６】
特定の一の実施形態において、監視する症状は麻痺である。
【００４７】
別の実施形態において、監視する症状は筋力低下／しびれを含む。
【００４８】
別の実施形態において、監視する症状は筋力低下/しびれである。
【００４９】
一の実施形態において、本願は、患者における多発性硬化症の進行を予防または抑制するために、サリチル酸オクチルおよびホモサレートの少なくとも１つを含む組成物または製剤を使用する。
【００５０】
一の実施形態において、本出願は、患者の多発性硬化症の進行を治療、予防または抑制するための唯一の活性化合物として、サリチル酸オクチルおよびホモサレートの少なくとも１つを含み得る。
【００５１】
別の実施形態において、本出願は、患者の多発性硬化症の進行を治療、予防または抑制するための、サリチル酸オクチルおよびホモサレートの少なくとも１つを他の活性化合物と共に含み得る。
【００５２】
一の実施形態において、標的患者は、哺乳動物対象（霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウスなど）、またはヒトであり得る。一の実施形態において、患者は好ましくはヒトである。
【００５３】
一の実施形態において、ヒト対象の患者は、多発性硬化症に関連する状態を有すると疑われるか、罹患しやすいか、または罹患する可能性がある。
【００５４】
一の実施形態において、本出願は、ＭＳ患者またはＭＳ患者予備群を特定するステップを含む。例えば、本出願のためのＭＳ患者またはＭＳ患者予備群は、視覚障害、浮動性めまい、回転性めまい、感覚機能障害、衰弱、調整に関する問題、バランスの崩れ、疲労、疼痛、神経認知障害、精神障害、膀胱機能障害、腸の機能不全、性的機能不全、熱感受性、筋力低下／しびれ、および／または麻痺を含む１つまたは複数の症状を監視することによって特定され得る。
【００５５】
一の実施形態において、ＭＳ患者またはＭＳ患者予備群を特定するステップは、麻痺または筋力低下／しびれの症状を監視することによるものである。
【００５６】
一の実施形態において、ＭＳ患者またはＭＳ患者予備群を特定するステップは、麻痺の症状を監視することによるものである。
【００５７】
一の実施形態において、ＭＳ患者またはＭＳ患者予備群を特定するステップは、筋力低下／しびれの症状を監視することによるものである。
【００５８】
一の実施形態において、治療の評価を目的として、治療プロセス中に患者の症状をモニターし続けることができる。例えば、麻痺または筋力低下／しびれなどの患者の症状を治療中にモニターして、患者の治療を評価することができる。一例として、治療の成功は、治療後にＭＳ症状の発生が減少するか、または症状の進行が遅くなるかまたは停止したときに示される。
【００５９】
ＭＳ患者またはＭＳ患者予備群が特定された後、ＭＳ患者またはＭＳ患者予備群は、ホモサレート、サリチル酸オクチル、およびホモサレートとサリチル酸オクチルの組合せからなる群より選択される物質を含む治療有効量の組成物または製剤で治療される。
【００６０】
一の実施形態において、ホモサレート、サリチル酸オクチル、およびホモサレートとサリチル酸オクチルの組合せからなる群より選択される物質が、本出願で使用される唯一の活性物質である。したがって、ＭＳ患者またはＭＳ患者予備群は、ホモサレート、サリチル酸オクチル、およびホモサレートとサリチル酸オクチルの組合せからなる群より選択される治療有効量の物質で治療される。
【００６１】
別の実施形態において、ホモサレート、サリチル酸オクチル、およびホモサレートとサリチル酸オクチルの組合せからなる群より選択される物質を活性物質の１つとして使用し得る。したがって、ＭＳ患者またはＭＳ患者予備群は、ホモサレート、サリチル酸オクチル、およびホモサレートとサリチル酸オクチルの組み合わせからなる群より選択される物質を含む治療有効量の組成物または製剤で治療される。
【００６２】
組成物または製剤はさらに、任意の薬学的に許容される担体、薬学的に許容される無菌の水溶液または非水溶液、分散剤、懸濁剤もしくは乳剤、防腐剤などの補助剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤、または他の必要な物質を含み得る。
【００６３】
一の実施形態において、組成物または製剤は、固体剤形または液体剤形のいずれかである。
【００６４】
液体剤形は、薬学的に許容される乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤を含み得る。活性化合物に加えて、液体剤形は、例えば水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、ならびにソルビタンの脂肪酸エステルおよびそれらの混合物などの当技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤を含み得る。
【００６５】
固体剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒剤を含み得る。特定の実施形態において、固体剤形は、１％から９５％（ｗ／ｗ）の本発明の化合物を含み得る。特定の実施形態において、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩は、５％から７０％（ｗ／ｗ）の範囲で固体剤形中に存在し得る。そのような固体剤形では、活性化合物は、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム、および／または、ａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸等の充填剤または増量剤、ｂ）カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよびアラビアゴム等の結合剤、ｃ）グリセロール等の湿潤剤、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ポテトまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム等の崩壊剤、ｅ）パラフィン等の溶解遅延剤、ｆ）４級アンモニウム化合物等の吸収促進剤、ｇ）セチルアルコールおよびグリセロールモノステアレート等の湿潤剤、ｈ）カオリンおよびベントナイト粘土等の吸収剤、ｉ）潤滑剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびそれらの混合物等の少なくとも1つの不活性な薬学的に許容される担体と混合し得る。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、剤形は緩衝剤も含み得る。
【００６６】
本明細書に記載の化合物および製剤の局所投与用の剤形には、散剤、スプレー剤、軟膏剤、および吸入剤が含まれる。活性化合物は、滅菌条件下で薬学的に許容される担体および必要とされ得る任意の必要な防腐剤、緩衝剤または噴射剤と混合し得る。眼科用製剤、眼軟膏剤、粉末剤および液剤もまた本発明の範囲内であると考えられる。
【００６７】
本発明の化合物はまた、徐放形態によって、または徐放薬物送達システムによって投与し得る。
【００６８】
一の実施形態において、化合物、組成物および製剤は、経口投与、非経口投与、鼻腔内投与、吸入器投与、舌下投与、直腸内投与、槽内投与、経皮投与、膣内投与、腹腔内投与、局所投与（粉末、軟膏または滴下により）、頬投与、あるいは経口または経鼻スプレー投与からなる群より選択し得る。
【００６９】
一の実施形態において、化合物、組成物および製剤は、経口、非経口または局所的方法によって投与し得る。
【００７０】
一の実施形態において、化合物、組成物および製剤は局所投与することができる。
【００７１】
いくつかの実施形態において、ホモサレートおよび／またはサリチル酸オクチルに関する本発明の用量は、少なくとも約０．１ｇ／ｋｇ体重である。他の実施形態において、ホモサレートおよび／またはサリチル酸オクチルに関する本発明の用量は、少なくとも約０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５、０．５、０．５５、０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、０．９５、１．０、１．０５、１．１、１．１５、１．２、１．２５、１．３、１．３５、１．４、１．４５、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５または１５ｇ／ｋｇ体重である。さらなる実施形態において、ホモサレートおよび／またはサリチル酸オクチルに関する本発明の用量は、約０．５〜約１５ｇ／ｋｇ体重の間である。他の実施形態において、ホモサレートおよび／またはサリチル酸オクチルに関する本発明の用量は、約０．５〜１４、１〜１０、２〜１０、１〜８、１〜５または０．５〜２ｇ／ｋｇ体重である。
【００７２】
一の実施形態において、ホモサレートおよび／またはサリチル酸オクチルは、上述のように組成物または製剤中の唯一の活性成分として投与される。例えば、ホモサレートおよび／またはサリチル酸オクチルの組成物は、ＭＳ患者または予備群の患者に投与し得る。ホモサレートおよび／またはサリチル酸オクチルの組成は、任意の薬学的に許容される担体、薬学的に許容される無菌の水溶液または非水溶液、分散剤、懸濁液または乳濁液、防腐剤などの補助剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤、または他の必要な物質等の、他の成分と組み合わせることができる。
【００７３】
一の実施形態において、本出願人らは、ホモサレートおよび／またはサリチル酸オクチルを、ＭＳを治療するための複数の活性成分のうちの１つとして投与することができると考える。例えば、本出願人らは、ホモサレートおよび／またはサリチル酸オクチルが、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）阻害剤等の、他のＭＳ治療プロトコルと共に使用され得ることを想定している。
【００７４】
一の実施形態において、ＭＳを治療するために上述の化合物、組成物および製剤を使用する方法は用量依存的である。例えば、ＭＳのより良い治療を達成するために、０．８、０．８５、０．９、０．９５、１．０、１．０５、１．１、１．１５、１．２、１．２５、１．３、１．３５、１．４、１．４５、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５または１５ｇ／ｋｇ体重の、ホモサレートおよび／またはサリチル酸オクチルのいずれかを、ＭＳ患者またはＭＳ患者予備群に投与し得る。
【００７５】
好ましくは、１．０、１．０５、１．１、１．１５、１．２、１．２５、１．３、１．３５、１．４、１．４５、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５または１５ｇ／ｋｇ体重のホモサレートおよび／またはサリチル酸オクチルを、ＭＳ患者またはＭＳ患者予備群に投与し得る。
【００７６】
図８Ａ、８Ｂ、８Ｃおよび８Ｄは、ホモサレート（ＨＳ）およびサリチル酸オクチル（ＯＳ）によるＥＡＥの用量依存的抑制を示す。図８Ａおよび８Ｂ：マウスを様々な用量（１０、２０および３０μｌまたは０．５、１．０、１．５ｇ／ｋｇ）のホモサレートまたはサリチル酸オクチルで局所的に処理した。平均スコア（図８Ａ）および体重（図８Ｂ）を記録した。図８Ｃおよび８Ｄ、マウスを様々な時点においてホモサレート（３０μｌまたは１．５ｇ／ｋｇ）で局所的に処理した。毎日の平均スコア（図８Ｃ）および体重（図８Ｄ）を記録した。データを平均値として表す。図８Ａでは、全ての処理群が対照と有意に異なっていた（ｐ＜０．０５）。図８Ｂでは、ホモサレート０．５ｇ／ｋｇを除く全ての処理群が対照と有意に異なっており（ｐ＜０．０５）；図８Ｃおよび８Ｄでは、毎日および２日ごとのホモサレートの平均スコアが対照よりも有意に低かった（ｐ＜０．０５）。
【００７７】
好ましい患者
本発明の好ましい患者は、以下の自律神経症状、視覚症状、運動症状、または感覚症状のうちの少なくとも１つを示すＭＳ患者である：敏感さの喪失またはチクチクするような感覚の変化、しびれ、筋力低下、非常に顕著な反射神経、筋肉のけいれん、または移動の障害；協調とバランスの障害（運動失調）；言語または飲み込み障害、視覚障害（眼振、視神経炎、または複視）、疲労感、急性または慢性の痛み、膀胱と腸の障害、思考の混乱、うつ病や不安定な気分などの感情的な障害、ウートフ現象（通常よりも高い温度にさらされることによる症状の悪化）またはレルミット徴候（首を曲げたときに背中を走る電気感覚）。
【００７８】
従来のＭＳモニタリングルーブリックを使用することによって治療結果を測定することも望まれ得る。例えば、身体障害および重症度は、総合障害度尺度（ＥＤＳＳ）または多発性硬化症機能評価によって測定することができる。磁気共鳴はまた、神経系における新しい病変の減少を示すためにも使用され得る。
【００７９】
「症状」の定義は、これらすべてのパラメータを含む。
【００８０】
本発明の別の好ましい患者は、ＭＳを発症する危険性がある患者、または「患者予備群」である。
【００８１】
好ましい患者は、小児科患者、高齢者患者または成人患者であり得る。好ましい患者は男性でも女性でもよい。
【００８２】
好ましい治療用組成物
本発明の方法は、患者を、サリチル酸オクチル、ホモサレートまたはこれらの組み合わせに暴露するすることを必要とする。
【００８３】
サリチル酸オクチル；サリチル酸２−エチルヘキシル；２−エチルヘキシル−２−ヒドロキシベンゾエート；サリチル酸エチルヘキシル；２−エチルヘキシルエステルサリチル酸；サリチル酸２−エチルヘキシルエステル；２−ヒドロキシ−安息香酸２−エチルヘキシルエステル；２−ヒドロキシ−安息香酸２−エチルヘキシルエステル；２−ヒドロキシ−２−エチルヘキシルエステル安息香酸；またはオクチサレートは、サリチル酸と２−エチルヘキサノロフテンとの縮合によって形成されるエステルであり、日焼け止めや化粧品の成分として使用され、太陽からのＵＶＢ（紫外線）を吸収する。それは一般的にわずかな花の匂いを伴う無色の油性液体として見出される。サリチル酸オクチルは、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＭＦＧ  Ｃｏｒｐ．から入手することができる。（ニューブランズウィック、ＮＪ）。
【００８４】
分子のサリチル酸部分は紫外線を吸収して、日光への暴露の有害な影響から皮膚を保護する。エチルヘキサノール部分は脂肪アルコールであり、皮膚軟化および油様（耐水性）特性を付加する。
【００８５】
【化１】
2019524734.tif 000003
【００８６】
ホモサレート、すなわち３，３，５−トリメチルシクロヘキシル２−ヒドロベンゾエートは、サリチル酸とシクロヘキサノールの誘導体である３，３，５−トリメチルシクロヘキサノールから形成されるエステルである。この化合物は、米国の日焼け止め剤の４５％に含まれており、化学ＵＶフィルターとして使用されることもある。分子のサリチル酸部分は、２９５ｎｍから３１５ｎｍまでの波長を持つ紫外線を吸収し、日焼けによるダメージから肌を守る。疎水性シクロヘキサノール部分は、それが水中に溶解するのを防止するグリース性を提供する。
【００８７】
ホモサレートは、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＭＦＧ  Ｃｏｒｐ．から入手することができる。（ニューブランズウィック、ＮＪ）。
【００８８】
ホモサレートの式を以下に示す。
【００８９】
【化２】
2019524734.tif 000004
【００９０】
好ましい投与方法
化合物は様々な投与形態で患者に導入し得る。好ましい投与は、局所投与、静脈内投与、経口投与、非経口投与、または吸入による投与であり得る。他の投与様式もまた本発明の範囲内となるだろう。
【００９１】
以下の実施例は、ホモサレートについては１日あたり１．５ｇ／ｋｇ、サリチル酸オクチルについては１日あたり０．５ｇ／ｋｇのマウスモデルにおける有効局所投与量を開示している。対応するヒト用量は、０．１〜５ｇ／体重１ｋｇの範囲であろう。ホモサレートについては、０．１〜２ｇ／ｋｇ体重、サリチル酸オクチルについては０．１〜１ｇ／ｋｇ体重の有効用量範囲と予測される。
【００９２】
経口投与、吸入投与または非経口投与量は、一般的には局所投与量と同様であろう。
【００９３】
好ましい用量は、化合物の有効全身濃度を達成するであろう。
【００９４】
（実施例１）
材料と方法
動物と食事。Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウス（８〜９週齢）に、標準的な実験室用飼料固形飼料５００８（Ｐｕｒｉｎａ  Ｍｉｌｌｓ、リッチモンド、ＩＮ）を与え、生化学部門の動物施設で飼育した。マウスを１２時間の明暗サイクルに曝した。すべての手順は、ウィスコンシン大学マディソン校の農学および生命科学学部の研究動物資源委員会によって承認された。異なる処理をするためにマウスを無作為に群に分けた（１２匹のマウス／群）。
【００９５】
日焼け止めと有効成分の処理
日焼け止め剤またはＮＢＵＶＢ放射線を受けるためにマウスの背中を剃毛した。以下の日焼け止めクリームまたはスプレーを我々の研究で使用した（付録Ａ参照）。１．Ｃｏｐｐｅｒｔｏｎｅスプレー（ＳＰＦ５０、ＭＳＤ  Ｃｏｎｓｕｍｅｒ  Ｃａｒｅ，Ｉｎｃ．、メンフィス、ＴＮ）；２．Ｃｏｐｐｅｒｔｏｎｅ  ｗａｔｅｒ  ｂａｂｉｅｓ（ＳＰＦ５０、ＭＳＤ  Ｃｏｎｓｕｍｅｒ  Ｃａｒｅ，Ｉｎｃ．、メンフィス、ＴＮ）；３．Ｈａｗａｉｉａｎ  Ｔｒｏｐｉｃ（ＳＰＦ５０、Ｅｎｅｒｇｉｚｅｒ  Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃａｒｅ，ＬＬＣ、シェルトン、ＣＴ）；４．Ｋｉｓｓ  ｍｙ  ｆａｃｅ（ＳＰＦ５０、Ｋｉｓｓ  Ｍｙ  Ｆａｃｅ，ＬＬＣ、ガーディナー、ＮＹ）；５．Ｂｌｕｅ  Ｌｉｚａｒｄ  Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ  Ｓｕｎｓｃｒｅｅｎ（ＳＰＦ３０、Ｃｒｏｗｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ジョンソン、ＴＮ）；６．Ｂａｎａｎａ  Ｂｏａｔ  Ｋｉｄｓ（ＳＰＦ５０、Ｅｎｅｒｇｉｚｅｒ  Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃａｒｅ，ＬＬＣ、シェルトン、ＣＴ）；７．ＣｏＴＺ  Ｆａｃｅ（ＳＰＦ４０、ＣｏＴＺ  Ｓｋｉｎｃａｒｅ、ウエストノーリトン、ＰＡ）。実験スケジュールに応じて、日焼け止めを手で塗って剃毛した皮膚を毎日覆った。４つの主な活性成分（アボベンゾン；オキシベンゾン；ホモサレート；サリチル酸オクチル）は、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＭＦＧ  Ｃｏｒｐ．から購入した。（ニューブランズウィック、ＮＪ）。各マウスの皮膚に局所投与された各成分の総用量は、日焼け止め剤中の成分の量に等しかった。
【００９６】
ナローバンドＵＶＢ（ＮＢＵＶＢ）処理
ＮＢＵＶＢ処理のために、４つのＴＬ２０Ｗ／０１  ＵＶＢ  ３１１ナローバンド２Ｆｔ電球（３１１ｎｍ〜３１３ｎｍを中心とする波長、Ａｍｊｏ  Ｃｏｒｐ、ウエストチェスター、ＯＨ）のセットを使用した。３０２ｎｍセンサーを備えたＵＶ放射計（ＵＶＰ  ＬＬＣ、アップランド、ＣＡ）を用いて放射出力を測定した。免疫処理前７日目から免疫処理後３０日目まで毎日マウスにＵＶを照射するためにマウスを１６室のプレキシガラスケージに入れた。実験中の不均一なＵＶ照射を避けるために、各マウスを異なるチャンバー内でローテーションさせた。
【００９７】
ＥＡＥの誘導
この実験では、マウスをミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質ペプチド（ＭＯＧ）35-55により免疫処理した。ＭＯＧ35-55キット（ＥＫ−２１１０）は、Ｈｏｏｋｅ  ｌａｂ（ローレンス、ＭＡ）から購入した。各マウスを、２０μｌのＭＯＧ35-55／ＣＦＡエマルジョンの皮下注射および滅菌ＰＢＳで希釈した２００ｎｇの百日咳毒素（Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の腹腔内注射により免疫処理を行った。２回目の百日咳毒素追加注射を４８時間後に行った。以下の尺度を用いて、各マウスを毎日、ＥＡＥの臨床徴候についてスコア付けした。０、臨床疾患なし。１、尾の緊張の損失。２、非定常歩行。３、後肢麻痺。４、前肢麻痺。５、死。
【００９８】
統計分析
臨床徴候が現れて少なくとも２日間継続した最初の日を平均することによって発症を判断した。実験全体の間、臨床スコアを平均することによって平均重症度を決定した。ＣＤＩ（臨床疾患指数）は、各動物における臨床スコアを合計し、群あたりのマウスの数で割ることによって計算した。発生率については両側フィッシャーの正確確率検定、臨床スコアについてはマンホイットニーのノンパラメトリックｕ検定、その他すべての測定値については対応のないスチューデントｔ検定を用いて統計解析を行った。Ｐ＜０．０５の値を統計学的に有意と見なした。
【００９９】
結果
焼け止め剤は異なるレベルで保護するが、図９Ａ、９Ｂ、９Ｃ、１０Ａ、１０Ｂ、１０Ｃ、１０Ｄ、１０Ｅ、および１０Ｆは、ＥＡＥの発症からのマウスに対する様々な日焼け止め剤の保護効果を示す。個々の日焼け止め成分の試験は、ホモサレートおよびサリチル酸オクチル成分が保護を提供することを実証する。
【０１００】
図１によると、我々のデータは、日焼け止め剤の局所適用がマウスをＥＡＥ進行から保護することを実証している。マウスは、ＭＯＧ35-55／ＣＦＡエマルジョンで免疫処理した後に、日焼け止め剤、ＮＢＵＶＢまたは両方の局所投与を受けた。実験全体を通して、各マウスをＥＡＥ後に毎日採点した。データは平均値、Ｎ＝１０〜１２／群として表す。
【０１０１】
図２Ａおよび２Ｂを参照して、異なる日焼け止め成分を分析した。アボベンゾンとオキシベンゾンはマウスのＥＡＥ重症度を部分的に抑制する。マウスを毎日の局所投与により、日焼け止めの成分（アボベンゾン、オキシベンゾン、またはそれらの組み合わせ）で処理した（０日目〜３０日目）。日焼け止めスプレー２００μｌも陽性対照として使用した。各マウスを毎日採点し、実験中（３０日間）毎週体重を測定した。データは平均値、Ｎ＝１０〜１２／群として表す。
【０１０２】
図３Ａおよび３Ｂによると、日焼け止め成分（ホモサレートおよびサリチル酸オクチル）は、体重に影響を与えることなく、マウスにおけるＥＡＥ発生を劇的に抑制する。ＥＡＥの間（０日目〜３０日目）、毎日局所投与することによって、マウスに日焼け止め剤の成分（ホモサレート、サリチル酸オクチルまたは組み合わせ）を投与した。１日２００μｌの日焼け止めスプレーを陽性対照として使用した。マウスを毎日採点し、毎週体重を測定した。データは平均値、Ｎ＝１０〜１２／群として表す。
【０１０３】
以下の表１は、ＥＡＥマウスに対する異なる日焼け止め成分の効果をまとめたものである。
【０１０４】
【表１】
2019524734.tif 000005
【０１０５】
（実施例２）
日焼け止め剤中に見いだされるサレート誘導体は、マウスにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎を阻止する。
【０１０６】
要約
紫外線（ＵＶ）は、マウスの実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ、ＭＳの動物モデル）を抑制し、赤道地域におけるＭＳの発生率の低下の原因となる可能性がある。
【０１０７】
この概念をさらに試験するために、我々は市販の日焼け止め製剤をマウスに適用してからＵＶに曝した。驚くべきことに、いくつかの日焼け止め製剤はＵＶなしでＥＡＥを遮断した。さらに、様々な日焼け止め製剤は、ＥＡＥを抑制する可変能力を有していた。最も効果的な薬剤の成分を調べることにより、ホモサレートとサリチル酸オクチルがＥＡＥの抑制に関与する成分であることがわかった。したがって、サレートはＭＳの進行を止めるのに役立つ可能性があり、自己免疫疾患を制御するメカニズムへの新しい洞察を提供するかもしれない。
【０１０８】
意義
【０１０９】
多発性硬化症（ＭＳ）は、管理が難しく治癒しない自己免疫疾患である。我々は、ある種の特定の日焼け止め製剤が、広く使用されているＭＳの動物モデルである実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の発症を予防できることを発見した。日焼け止め製剤中のサレートエステルは、ＥＡＥを予防する原因であることが判明した。このことは、サレートエステルがＭＳの症状の予防に価値があることを示唆している。
【０１１０】
序論
【０１１１】
多発性硬化症（ＭＳ）は中枢神経系（ＣＮＳ）の慢性炎症性自己免疫疾患であり、世界中で２５０万人が罹患している（１）。１９７４年に、ＡｇｒａｎｏｆｆとＧｏｌｄｂｅｒｇは、ＭＳの発生率が両半球における日光曝露に反比例することを観察した（２）。Ｇｏｌｄｂｅｒｇは、日光への曝露によって引き起こされるビタミンＤ産生の増加がＭＳの発生率の低下の原因である可能性を示唆した（３）。しかし、より最近の結果ではこの仮説の通りではなく、代わりに３００−３１５ナノメートルのＵＶＢ光のナローバンド（ＮＢＵＶＢ）がＭＳの動物モデルである実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）を抑制することが示されている（４）。このナローバンドの光は７−デヒドロコレステロールからのビタミンＤの合成を引き起こさない（５）。我々の研究の過程で、我々はＮＢＵＶＢによるＥＡＥの抑制を防ぐのではないかと予測し、市販の日焼け止め剤を使用した。予想外にも、いくつかの日焼け止め剤自体がＵＶなしでＥＡＥを完全に防いだ。さらに、市販の日焼け止め製剤は、ＥＡＥを抑制するそれらの能力において大きく異なっていた。製剤の成分を調べることにより、我々は２つの成分がＥＡＥの抑制に関与していることを見出した。これらの２つの成分はサリチル酸エステル、すなわちホモサレートおよびサリチル酸オクチルである。我々は今これらの調査結果を報告する。
【０１１２】
結果
【０１１３】
日焼け止め剤（Ｃｏｐｐｅｒｔｏｎｅスプレー）の局所適用は、ＥＡＥの発症を完全に抑制した。
【０１１４】
マウスをＮＢＵＶＢで処理した場合、平均疾患重症度は以前の研究と同様に劇的に減少した（図４Ａ）。ＮＢＵＶＢより前の日焼け止め剤適用は、ＮＢＵＶＢによる抑制を妨げなかった（図４Ａおよび４Ｃ）。これらの動物において観察された体重変化は、疾患の結果において一貫していた（図４Ｂ）。驚くべきことに、日焼け止め自体の局所投与は完全にＥＡＥを防止した（図４Ｃ）。
【０１１５】
市販の日焼け止め剤は、ＥＡＥを抑制するそれらの能力において著しく異なる。
【０１１６】
６つのブランドの日焼け止め剤をＥＡＥで試験したところ、４つのブランド（ＨＡＷＡＩＩＡＮ  ＴＲＯＰＩＣ、ＣＯＰＰＥＲＴＯＮＥ、ＫＩＳＳ  ＭＹ  ＦＡＣＥ、ＢＬＵＥ  ＬＩＺＡＲＤ）のみが有意な抑制を生じ（図５Ａ）、残りの２つのブランドの日焼け止め剤（ＢＡＮＡＮＡ  ＢＯＡＴ、ＣＯＴＺ  ＦＡＣＥ）は効果がなかった（図５Ａ）。日焼け止め剤の効果が単に全波長の全遮断を妨げなかった、ということを確実にするために、遮光下（７〜３０日）での試験を行ったが、それがいつ開始されたかにかかわらずＥＡＥに影響を及ぼさなかった（図５Ｂ）。興味深いことに、追加の試験は、免疫処理時に日焼け止め剤の適用が必要であることを示した（図６Ａ）。免疫処理前またはその時点で日焼け止め剤による処理を受けているマウスでは、体重はわずかではあるが有意に高かった（図６Ｂ）。日焼け止め剤による疾患の抑制は用量依存的であり（図６Ｃ）、体重の増加は疾患の改善と相関していた（図６Ｄ）。
【０１１７】
ホモサレートおよびサリチル酸オクチルが、ＥＡＥ抑制を引き起こした成分であった；アボベンゾンおよびオキシベンゾンはＥＡＥのほんのわずかな抑制をもたらした。
【０１１８】
３０μｌのホモサレート（１．５ｇ／ｋｇ）および１０μｌのサリチル酸オクチル（０．５ｇ／ｋｇ）の用量が、Ｃｏｐｐｅｒｔｏｎスプレー日焼け止め剤によって送達される量であると計算された。この量をマウスに適用した。陽性対照として、２００μｌの日焼け止めスプレー（ホモサレート１５％、サリチル酸オクチル５％を含有）をＥＡＥマウスに適用した。結果は、ホモサレートのみ、およびホモサレートとサリチル酸オクチルの組み合わせが、ＥＡＥの重症度を劇的に抑制することを示した（図７Ｃおよび表１）。０．５ｇ／ｋｇの用量のサリチル酸オクチルは中程度の抑制を生じたが、統計的有意性には達しなかった（図７Ｃおよび表１）。疾患の程度は体重に反映されていた（図７Ｄ）。他の２つの成分（アボベンゾンおよびオキシベンゾン）およびその組み合わせは、ＥＡＥの有意な抑制をほとんどまたは全く生じず（図７Ａ）、体重の有意な変化を生じなかった（図７Ｂ）。
【０１１９】
ホモサレートとサリチル酸オクチルの抑制は用量依存的であった。３つの異なる投与量（０．５、１．０、１．５ｇ／ｋｇ）で試験したとき、ホモサレートおよびサリチル酸オクチルは両方とも用量依存的なＥＡＥの抑制を示した（図８Ａ）。ホモサレートの最低用量を除いて、全ての治療は体重を増加させた（図８Ｂ）。ホモサレートを毎日よりも少ない頻度で適用した場合、その有効性は減少した（図８Ｃおよび８Ｄ）。
【０１２０】
考察
【０１２１】
ＵＶ、特にナローバンドＵＶはＥＡＥを抑制できるため、日焼け止めクリームがＵＶなしでもＥＡＥの発症を予防できることを発見したのは驚くべきことであった。詳細に調べると、すべての日焼け止め製剤がこの性質を有するわけではないことが明らかになった。さらに、光が完全になくなってもＥＡＥに影響はなかった。したがって、我々は有効な日焼け止め製剤の成分に注目した。有効な日焼け止め製剤によるＥＡＥの抑制は、２つのサレートエステル、すなわちホモサレートおよびサリチル酸オクチルに起因していた。直接試験したところ、両方のサレートはＥＡＥの抑制において約１．５ｇ／ｋｇで同等に有効であった。これらの化合物は、ＵＶを遮断または吸収することによって作用していない可能性がある。マウスを完全に光の当たらない状態に保つだけでは、ＥＡＥの発症には影響しなかった。さらに、日焼け止め剤として有効ないくつかの日焼け止め剤はＥＡＥを抑制しない。サレートエステルを含む日焼け止め剤だけが効果的であり、サレート自体は明らかにＥＡＥを防止する。ホモサレートとサリチル酸オクチルの唯一の悪影響は、一時的な軽度の皮膚刺激である。ＥＡＥを完全に遮断した１．５ｇ／ｋｇのホモサレートの局所投与量は、未発表の急性経皮毒性を下回っている（ウサギではＬＤ５０＞５ｇ／ｋｇ）。
【０１２２】
ホモサレートおよびサリチル酸オクチルの局所投与によるＥＡＥの完全な抑制は新規の発見である。サリチル酸塩はよく知られている非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）である（６）。ホモサレートの抗炎症作用は、マウスの耳浮腫試験を用いた別の研究でも実証されている（７）。関連化合物である、アスピリン（アセチルサリチル酸、ＡＳＡ）は、伝統的な抗炎症薬である（８）。アスピリンとＭＳの関係は１９６１年に研究されたが、対照群と処理群との間に有意差はなかった（９）。アスピリンとＭＳの開発に関する直接的な研究はない。シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）阻害は、ＮＳＡＩＤの主要なメカニズムである（１０）。ＣＯＸ−２はＭＳ病変で観察されている（１１）。最近、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）阻害剤がＥＡＥの有意な抑制を示した（１２、１３）。どのようにしてサレートがＥＡＥを予防するかについての説明ができないのは明らかである。しかし、この所見はメカニズムだけでなくＭＳの治療への新しいアプローチを探る明確な機会を提示する。
【０１２３】
材料および方法
動物の管理。Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（バーハーバー、ＭＥ）から購入した雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（８〜１０週齢）に標準実験用飼料５００８（Ｐｕｒｉｎａ  Ｍｉｌｌｓ、リッチモンド、ＩＮ）を与えた。マウスを１２時間の明暗サイクルに曝した。一実験において、動物を常に暗所に置いた。すべての手順は、ウィスコンシン大学マディソン校の農学および生命科学学部の施設内動物管理使用委員会によって承認された。
【０１２４】
ＥＡＥ誘導
【０１２５】
マウスをＭＯＧ35-55キット（ＥＫ−２１１０、Ｈｏｏｋｅ  ｌａｂ（ローレンス、ＭＡ）から購入）により免疫処理した。各マウスを、２０μｌのＭＯＧ35-55／ＣＦＡエマルジョンの皮下注射および無菌ＰＢＳで希釈した２００ｎｇの百日咳毒素（Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の腹腔内注射により免疫処理した（１４）。４８時間後に２回目の百日咳毒素追加注射を行った。以下の尺度を用いて、各マウスを毎日、ＥＡＥの臨床徴候についてスコア付けした（１５）：０、臨床疾患なし。１、尾の緊張の損失。２、非定常歩行。３、後肢麻痺。４、前肢麻痺。５、死。
【０１２６】
日焼け止め剤および有効成分による処理
【０１２７】
マウスの剃毛した背中の皮膚に毎日局所適用した日焼け止めクリームまたはスプレーを以下に示す（表２）。１．ＢＡＮＡＮＡ  ＢＯＡＴ  ＫＩＤＳ（ＳＰＦ５０、Ｅｎｅｒｇｉｚｅｒ  Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃａｒｅ，ＬＬＣ、シェルトン、ＣＴ）；２．ＢＬＵＥ  ＬＩＺＡＲＤ  ＡＵＳＴＲＡＬＩＡＮ  ＳＵＮＳＣＲＥＥＮ（ＳＰＦ３０、Ｃｒｏｗｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ジョンソン、ＴＮ）；３．ＣＯＰＰＥＲＴＯＮＥ  ＳＰＲＡＹ（ＳＰＦ５０、ＭＳＤ  Ｃｏｎｓｕｍｅｒ  Ｃａｒｅ，Ｉｎｃ．、メンフィス、ＴＮ）；４．ＣＯＴＺ  ＦＡＣＥ（ＳＰＦ４０、ＣｏＴＺ  Ｓｋｉｎｃａｒｅ、ウエストノーリトン、ＰＡ）；５．ＨＡＷＡＩＩＡＮ  ＴＲＯＰＩＣ（ＳＰＦ５０、Ｅｎｅｒｇｉｚｅｒ  Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃａｒｅ，ＬＬＣ、シェルトン、ＣＴ）；６．ＫＩＳＳ  ＭＹ  ＦＡＣＥ（ＳＰＦ５０、Ｋｉｓｓ  Ｍｙ  Ｆａｃｅ，ＬＬＣ、ガーディナー、ＮＹ）。各日焼け止め剤を剃毛した皮膚を覆うように毎日適用した（１００〜２００μＬ）。アボベンゾン、オキシベンゾン、ホモサレート、およびサリチル酸オクチルは、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＭＦＧ  Ｃｏｒｐ．から購入した（ニューブランズウィック、ＮＪ）。アボベンゾンおよびオキシベンゾンはＤＭＳＯで溶解した。ホモサレートとサリチル酸オクチルは直接適用した。各マウスの皮膚に局所投与した各成分の総用量は、それぞれの日焼け止め剤によって提供された量に等しかった。
【０１２８】
【表２】
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【０１２９】
ナローバンドＵＶＢ（ＮＢＵＶＢ）処理
【０１３０】
ＮＢＵＶＢ処理のために、４つのＴＬ２０Ｗ／０１  ＵＶＢ  ３１１ナローバンド２ｆｔ電球（３１１−３１３ｎｍを中心とする波長、Ａｍｊｏ  Ｃｏｒｐ、ウエストチェスター、ＯＨ）のセットを毎日、１０ＫＪ／ｍ2で使用した（１４）。３０２ｎｍセンサーを備えたＵＶ放射計（ＵＶＰ  ＬＬＣ、アップランド、ＣＡ）を用いて放射出力を測定した。１６室のプレキシガラスケージを毎日のＵＶ照射に使用した。各室に１匹のマウスを入れた。各マウスが等しい光曝露を受けるようにマウスを異なるチャンバー内でローテーションさせた。免疫処理と同じ日に開始し、免疫処理後３０日まで続けてマウスにＵＶを照射した。
【０１３１】
参考文献
1. Compston A & Coles A (2002) Multiple sclerosis. Lancet (London, England) 359(9313):1221-1231.
2. Agranoff BW & Goldberg D (1974) Diet and the geographical distribution of multiple sclerosis. Lancet (London, England) 2(7888):1061-1066.
3. Goldberg P (1974) Multiple sclerosis: vitamin D and calcium as environmental determinants of prevalence. International Journal of Environmental Studies 6(1):19-27.
4. Wang Y, et al. (2013) Suppression of experimental autoimmune encephalomyelitis by 300-315nm ultraviolet light. Archives of biochemistry and biophysics 536(1):81-86.
5. MacLaughlin JA, Anderson RR, & Holick MF (1982) Spectral character of sunlight modulates photosynthesis of previtamin D3 and its photoisomers in human skin. Science (New York, N.Y.) 216(4549):1001-1003.
6. Paulus HE & Whitehouse MW (1973) Nonsteroid anti-inflammatory agents. Annual review of pharmacology 13:107-125.
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10. Farah AE & Rosenberg F (1980) Potential therapeutic applications of aspirin and other cyclo-oxygenase inhibitors. British journal of clinical pharmacology 10 Suppl 2:261s-278s.
11. Rose JW, Hill KE, Watt HE, & Carlson NG (2004) Inflammatory cell expression of cyclooxygenase-2 in the multiple sclerosis lesion. Journal of neuroimmunology 149(1-2):40-49.
12. Miyamoto K, et al. (2006) Selective COX-2 inhibitor celecoxib prevents experimental autoimmune encephalomyelitis through COX-2-independent pathway. Brain: a journal of neurology 129(Pt 8):1984-1992.
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14. Wang Y, Marling SJ, Martino VM, Prahl JM, & Deluca HF (2016) The absence of 25-hydroxyvitamin D3-1alpha-hydroxylase potentiates the suppression of EAE in mice by ultraviolet light. The Journal of steroid biochemistry and molecular biology.
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【図１】
2019524734.tif 000007
【図２Ａ】
2019524734.tif 000008
【図２Ｂ】
2019524734.tif 000009
【図３Ａ】
2019524734.tif 000010
【図３Ｂ】
2019524734.tif 000011
【図４Ａ】
2019524734.tif 000012
【図４Ｂ】
2019524734.tif 000013
【図４Ｃ】
2019524734.tif 000014
【図５Ａ】
2019524734.tif 000015
【図５Ｂ】
2019524734.tif 000016
【図６Ａ】
2019524734.tif 000017
【図６Ｂ】
2019524734.tif 000018
【図６Ｃ】
2019524734.tif 000019
【図６Ｄ】
2019524734.tif 000020
【図７Ａ】
2019524734.tif 000021
【図７Ｂ】
2019524734.tif 000022
【図７Ｃ】
2019524734.tif 000023
【図７Ｄ】
2019524734.tif 000024
【図８Ａ】
2019524734.tif 000025
【図８Ｂ】
2019524734.tif 000026
【図８Ｃ】
2019524734.tif 000027
【図８Ｄ】
2019524734.tif 000028
【図９Ａ】
2019524734.tif 000029
【図９Ｂ】
2019524734.tif 000030
【図９Ｃ】
2019524734.tif 000031
【図１０Ａ−Ｆ】
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【国際調査報告】
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