(57)【要約】  本発明は、１以上の疾患に含まれる１以上の遺伝子発現を調節するための抗体コンジュゲート及びＬＮＡ−改変型オリゴヌクレオチオドに関する。加えて本発明は、１以上の疾患に含まれる１つ以上の遺伝子発現を調節するための抗体コンジュゲート及び／またはＬＮＡ−改変型オリゴヌクレオチオドを備える組成物並びにキットに関する。さらに本発明は、細胞を接触させて１以上の遺伝子発現を調節することによって１以上の対象疾患を予防および／または治療する方法、および／または対象疾患に組成物およびキットを投与する方法に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ＳＭＣ１抗体を含む抗体コンジュゲートであって、前記抗体が、リンカーを介して細胞毒性分子にコンジュゲーションされており、前記抗体が、ＳＭＣ１の細胞外Ｃ末端領域の１つまたは複数のエピトープに結合する、抗体コンジュゲート。
【請求項２】
前記抗体が、ＳＭＣ１の残基８０５〜１２３３を含むＳＭＣ１の細胞外Ｃ末端領域のエピトープに結合する、請求項１に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項３】
前記エピトープが、表１に挙げられた配列からなる群から選択される、請求項１に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項４】
前記エピトープが、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３からなる群から選択される、請求項１に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項５】
前記抗体が、モノクローナルまたはポリクローナルである、請求項１に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項６】
前記細胞毒性分子が、カリケアマイシン、マイタンシノイド類、オーリスタチン類、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、ビンカアルカロイド類、エトポシド、テ二ポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシンＤ、メトトレキサート、アドリアマイシン（ａｄｒｉａｍｉｃｉｎ）、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他のインターカレート剤、核酸分解酵素などの酵素およびその断片、抗生剤、ならびに毒素、例えば細菌、真菌、植物、または動物起源の小分子毒素や酵素活性のある毒素など、ならびにそれらの類似体、ホモログ、断片、および／またはバリアント、１−ジヒドロテストステロン、グルココルチコイド類、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、リシン、ＣＣ−１０６５、デュオカルマイシン類、ジフテリア毒素、毒液（例えば、蛇類、両生類、爬虫類、魚類、無脊椎動物などに由来）、ならびにそれらの類似体、ホモログ、断片、および／またはバリアント、ビスマス−２１３、アスタチン−２１１、ラジウム−２２３、イットリウム−９０、ヨウ素−１３１、サマリウム−１５３、ストロンチウム−８９、ルテチウム−１７７、ホルミウム−１６６、レニウム−１８６、レニウム−１８８、銅−６７、プロメチウム−１４９、金−１９９、ロジウム−１０５、臭素−７７、インジウム−１１１、ヨウ素−１２３、およびヨウ素−１２５からなる群から選択される、請求項ｌに記載の抗体コンジュゲート。
【請求項７】
前記抗体コンジュゲートが、ＳＭＣ１を表面に発現する細胞に特異的に結合する、請求項１に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項８】
１つまたは複数のＬＮＡを含むＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドであって、ＳＭＣ１をコードするｍＲＮＡに相補的であり、ＳＭＣ１をコードする前記ｍＲＮＡに結合して、ＳＭＣ１をコードする前記ｍＲＮＡをＲＮＡサイレンシング機構による分解の標的とする、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチド。
【請求項９】
前記ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの長さが、約５から約５０ヌクレオチドである、請求項８に記載のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
前記ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの配列が、５’ＧＴＡＴＧＧＴＴＡＡＴＧＧＣＴＧ３’（配列番号２９）および５’ＡＴＧＣＣＡＧＣＣＡＡＡＴＴＧＣ３’（配列番号３０）からなる群から選択される、請求項８に記載のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
前記ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチド中のＬＮＡの数が、約１から約２５である、請求項８に記載のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチド。
【請求項１２】
配列番号２９および配列番号３０のヌクレオチドのうち１つまたは複数が、ＬＮＡである、請求項８に記載のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチド。
【請求項１３】
対象の疾患を予防および／または治療するための組成物であって、
抗ＳＭＣ１抗体を含む抗体コンジュゲートであって、前記抗体が、リンカーを介して細胞毒性分子にコンジュゲーションされており、前記抗体が、ＳＭＣ１の細胞外Ｃ末端領域の１つまたは複数のエピトープに結合する、抗体コンジュゲート；および、
１つまたは複数のＬＮＡを含むＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドであって、ＳＭＣ１をコードするｍＲＮＡに相補的であり、ＳＭＣ１をコードする前記ｍＲＮＡに結合して、ＳＭＣ１をコードする前記ｍＲＮＡをＲＮＡサイレンシング機構による分解の標的とする、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチド
を含む組成物。
【請求項１４】
前記抗体が、ＳＭＣ１の残基８０５〜１２３３を含むＳＭＣ１の細胞外Ｃ末端領域のエピトープに結合する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記エピトープが、表１に挙げられた配列からなる群から選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
前記エピトープが、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３からなる群から選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１７】
前記抗体が、モノクローナルまたはポリクローナルである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１８】
前記細胞毒性分子が、カリケアマイシン、マイタンシノイド類、オーリスタチン類、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、ビンカアルカロイド類、エトポシド、テ二ポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシンＤ、メトトレキサート、アドリアマイシン（ａｄｒｉａｍｉｃｉｎ）、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他のインターカレート剤、核酸分解酵素などの酵素およびその断片、抗生剤、ならびに毒素、例えば細菌、真菌、植物、または動物起源の小分子毒素や酵素活性のある毒素など、ならびにそれらの類似体、ホモログ、断片、および／またはバリアント、１−ジヒドロテストステロン、グルココルチコイド類、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、リシン、ＣＣ−１０６５、デュオカルマイシン類、ジフテリア毒素、毒液（例えば、蛇類、両生類、爬虫類、魚類、無脊椎動物などに由来）、ならびにそれらの類似体、ホモログ、断片、および／またはバリアント、ビスマス−２１３、アスタチン−２１１、ラジウム−２２３、イットリウム−９０、ヨウ素−１３１、サマリウム−１５３、ストロンチウム−８９、ルテチウム−１７７、ホルミウム−１６６、レニウム−１８６、レニウム−１８８、銅−６７、プロメチウム−１４９、金−１９９、ロジウム−１０５、臭素−７７、インジウム−１１１、ヨウ素−１２３、およびヨウ素−１２５からなる群から選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１９】
前記抗体コンジュゲートが、ＳＭＣ１を表面に発現する細胞に特異的に結合する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの長さが、約５から約５０ヌクレオチドである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの配列が、５’ＧＴＡＴＧＧＴＴＡＡＴＧＧＣＴＧ３’（配列番号２９）および５’ＡＴＧＣＣＡＧＣＣＡＡＡＴＴＧＣ３’（配列番号３０）からなる群から選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２２】
前記ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチド中のＬＮＡの数が、約１から約２５である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２３】
配列番号２９および配列番号３０のヌクレオチドのうち１つまたは複数が、ＬＮＡである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２４】
前記予防および／または治療することが、ＳＭＣ１  ｍＲＮＡおよびＳＭＣ１タンパク質の発現を調節することによって達成される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記疾患が、乳がん（例えばトリプルネガティブ乳がん）、乳腺癌、膵臓腺癌、肺癌、前立腺がん、ホルモン不応性前立腺がん、悪性固形腫瘍、例えば、結腸癌、非小細胞肺がん（例えば非小細胞肺がん）、未分化星状細胞腫、神経膠腫、神経膠芽腫（例えば、多形神経膠芽腫）、膀胱癌、肉腫、卵巣がん、直腸血管外皮腫、膵臓癌、急性骨髄性白血病、大腸、中皮腫、胃、膵臓、卵巣のがん、メラノーマ、膵臓がん、結腸がんや、膀胱がんなどからなる群から選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２６】
請求項１３に記載の組成物を含む、対象の疾患を予防および／または治療するためのキット。
【請求項２７】
前記疾患が、乳がん（例えばトリプルネガティブ乳がん）、乳腺癌、膵臓腺癌、肺癌、前立腺がん、ホルモン不応性前立腺がん、悪性固形腫瘍、例えば、結腸癌、非小細胞肺がん（例えば非小細胞肺がん）、未分化星状細胞腫、神経膠腫、神経膠芽腫（例えば、多形神経膠芽腫）、膀胱癌、肉腫、卵巣がん、直腸血管外皮腫、膵臓癌、急性骨髄性白血病、大腸、中皮腫、胃、膵臓、卵巣のがん、メラノーマ、膵臓がん、結腸がんや、膀胱がんなどからなる群から選択される請求項２６に記載のキット。
【請求項２８】
対象の疾患を予防および／または治療する方法であって、
前記対象の前記疾患の第１の評価を実施すること、
請求項１３〜２５に記載の組成物を提供すること、
ある期間の間に前記組成物を前記対象に投与すること、
前記ある期間の後、前記対象の前記疾患の第２の評価を実施することであって、前記疾患の前記第２の評価が、ある期間の間に前記組成物を前記対象に投与した後の前記対象における前記疾患の予防および／または治療を標示すること、
それによって、前記対象の前記疾患を予防および／または治療すること、
を含む方法。
【請求項２９】
前記細胞が、腫瘍細胞、がん細胞、腫瘍幹細胞、がん幹細胞、またはそれらの組合せである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗体コンジュゲートが、前記細胞によって取り込まれる、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記細胞毒性分子が、前記細胞の成長を阻止するか、または前記細胞を殺傷するかのどちらかである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドが、細胞による前記ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの取り込みを可能にする融合性のまたは脂質生成性の構成成分を用いて製剤化される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３３】
前記細胞が、ＳＭＣ１  ｍＲＮＡを過剰発現する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドが、前記ＳＭＣ１のｍＲＮＡに相補的であり、前記ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドが、前記ＳＭＣ１  ｍＲＮＡに結合して、ＲＮＡサイレンシング機構によって発現を調節する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記対象が哺乳類であり、前記哺乳類がヒトであるかヒト以外である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３６】
１つまたは複数の追加の治療剤を提供することをさらに含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３７】
前記１つまたは複数の追加の治療剤がＰＡＲＰ阻害剤である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記１つまたは複数のＰＡＲＰ阻害剤が、ニラパリブ（ＭＫ−４８２７）、イニパリブ（ＢＳＩ２０１）、タラゾパリブ（ＢＭＮ−６７３）、ベリパリブ（ＡＢＴ−８８８）、オラパリブ（ＡＺＤ−２２８１）、ルカパリブ（ＡＧ０１４６９９、ＰＦ−０１３６７３３８）、ＣＥＰ９７２２、Ｅ７０１６、ＢＧＢ−２９０、および３−アミノベンズアミドからなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記１つまたは複数の追加の治療剤が白金ベース薬である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
前記１つまたは複数の白金ベース薬が、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、フェナントリプラチン、ピコプラチン、およびサトラプラチンからなる群から選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記１つまたは複数の追加の治療剤が、請求項１３〜２５に記載の組成物の効果を増強する、請求項３６〜４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記組成物中の前記抗体コンジュゲートの濃度が、約１ｎＭから約２５０ｍＭまでに及ぶ、請求項２８に記載の方法。
【請求項４３】
前記組成物中の前記ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの濃度が、約１ｎＭから約２５０ｍＭまでに及ぶ、請求項２８に記載の方法。
【請求項４４】
試料の状態を診断する方法であって、
細胞懸濁液、組織、生検、またはそれらの組合せである、試料を提供すること、
抗ＳＭＣ抗体を提供すること、
前記ＳＭＣ１抗体を使用して、前記試料の免疫組織化学染色を実施すること、
前記試料におけるＳＭＣ１の細胞局在を決定することであって、ＳＭＣ１が核のみに局在することが、前記試料の正常な状態を標示し、ＳＭＣ１が核、細胞質膜、および形質膜に局在することが、前記試料の異常な状態を標示すること、
を含む方法。
【請求項４５】
前記試料の異常な状態が、疾患の存在を標示する、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記疾患が、乳がん（例えばトリプルネガティブ乳がん）、乳腺癌、膵臓腺癌、肺癌、前立腺がん、ホルモン不応性前立腺がん、悪性固形腫瘍、例えば、結腸癌、非小細胞肺がん（例えば非小細胞肺がん）、未分化星状細胞腫、神経膠腫、神経膠芽腫（例えば、多形神経膠芽腫）、膀胱癌、肉腫、卵巣がん、直腸血管外皮腫、膵臓癌、急性骨髄性白血病、大腸、中皮腫、胃、膵臓、卵巣のがん、メラノーマ、膵臓がん、結腸がんや、膀胱がんなどからなる群から選択される、請求項４５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権および関連出願との相互参照
この出願は、参照によりその全体を本明細書に組み込まれる２０１６年３月２９日出願の米国仮特許出願第６２／３１４，８５０号の利益を請求するものである。
【０００２】
電子書式の配列表
本願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩテキストファイルとして電子配列表と併せて出願されている。電子配列表は、ＶＡＬＫＹ００１ＷＯＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔと題されたファイルとして提出されており、このファイルは、２０１７年３月２９日に作成されて最終保存され、２７，２６４バイトのサイズである。電子配列表の情報は、参照によりその全体を本明細書に組み込まれている。
【技術背景】
【０００３】
分野
本開示は、染色体構造維持−１（ＳＭＣ１）の発現の調節に関連する。いくつかの本開示の実施形態は、がんにおけるＳＭＣ１発現の調節に関する。
【０００４】
関連技術の記載
がんなどの疾患状態を直接的に引き起こすか、関与するか、または悪化させるかのいずれかの、望まない遺伝子発現を調節するために、分子的な戦略が開発されている。そのような戦略は、有害な標的遺伝子のメッセンジャーＲＮＡに配列上相補的なオリゴヌクレオチドを用いて遺伝子発現を阻害すること、および／またはがんなどの疾患状態に関連する１つまたは複数のタンパク質の機能を調節する抗体を使用することを含む。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第５，０９８，８９０号明細書
【特許文献２】国際公開第９１／０９３２６０号
【特許文献３】国際公開第９２／０１９２５２号
【特許文献４】国際公開第９２／０２０３４８号
【特許文献５】国際公開第９２／０２２３０３号
【特許文献６】米国特許第５，０８７，６１７号明細書
【特許文献７】国際公開第２０１４／１３４４５７号
【特許文献８】国際公開第２００９／０９７３９７号
【特許文献９】米国特許第９，１５６，８５４号明細書
【特許文献１０】米国特許第９，３８８，４０８号明細書
【特許文献１１】米国特許第４，８０６，４６３号明細書
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｒａｔａｊｃｚａｋら、「Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ」、８９巻、１７１０〜１７１４頁、１９９２年
【非特許文献２】Ｍｅｌａｎｉら、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．」、５１巻、２８９７〜２９０１頁、１９９１年
【非特許文献３】Ｓｚｃｙｌｉｃｋら、「Ｓｃｉｅｎｃｅ」、２５３巻、５６２〜５６５頁、１９９１年
【非特許文献４】Ｗａｎｇら、「ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ．」、１５巻、９０頁、２０１５年３月４日、ｄｏｉ：１０．１１８６／ｓ１２８８５−０１５−１０８５−４．
【非特許文献５】ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｏｏｋｓ／ＮＢＫ１１４６４／
【非特許文献６】ｓｃｒｉｐｐｓ．ｅｄｕ／ｂａｒａｎ／ｉｍａｇｅｓ／ｇｒｐｍｔｇｐｄｆ／Ｓｅｌｌａ＿Ｍａｙ＿１４．ｐｄｆ
【非特許文献７】ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｍｃ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ＰＭＣ４３６５０９３／
【非特許文献８】ｎａｔｕｒｅ．ｃｏｍ／ｎｃｈｅｍ／ｊｏｕｒｎａｌ／ｖ８／ｎ２／ｆｕｌｌ／ｎｃｈｅｍ．２４１５．ｈｔｍｌ
【非特許文献９】ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ．ｅｄｕ／ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ／ｍａｃｍｉｌｌａｎ／ｇｒｏｕｐ−ｍｅｅｔｉｎｇｓ／ＣＬ＿Ａｎｔｉｂｏｄｙ‐Ｄｒｕｇ‐Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ．ｐｄｆ
【非特許文献１０】Ｍｏｌｌｅｇａａｒｄら、「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」、９１巻（９）、３８９２〜３８９５頁、１９９４年
【非特許文献１１】ＰｅｙｍａｎおよびＵｌｍａｎｎ、「Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ」、９０巻、５４３〜５８４頁、１９９０年
【非特許文献１２】Ｃｒｏｏｋｅ、「Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃａｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．」、３２巻、３２９〜３７６頁、１９９２年
【非特許文献１３】ＺａｍｅｃｎｉｋおよびＳｔｅｐｈｅｎｓｏｎ、「Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．」、７５巻、２８０〜２８４頁、１９７４年
【非特許文献１４】Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、「Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」、第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、２００５年
【非特許文献１５】Ｌｉら、「Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．」、３１巻、５号、６０１〜６０８頁、２０１０年
【発明の概要】
【０００７】
実施形態によっては、抗ＳＭＣ１抗体を含む抗体コンジュゲートが提供される。抗体コンジュゲートの実施形態によっては、抗体は、リンカーを介して細胞毒性分子にコンジュゲーションされており、ここでは、抗体は、ＳＭＣ１の細胞外Ｃ末端領域の１つまたは複数のエピトープに結合するものである。抗体コンジュゲートの実施形態によっては、抗体は、ＳＭＣ１の残基８０５〜１２３３を含むＳＭＣ１の細胞外Ｃ末端領域のエピトープに結合する。抗体コンジュゲートの実施形態によっては、エピトープは、表１に挙げられている配列からなる群から選択される。抗体コンジュゲートの実施形態によっては、エピトープは、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３からなる群から選択される。抗体コンジュゲートの実施形態によっては、抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルである。抗体コンジュゲートの実施形態によっては、細胞毒性分子は、カリケアマイシン、マイタンシノイド類、オーリスタチン類、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、ビンカアルカロイド類、エトポシド、テ二ポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシンＤ、メトトレキサート、アドリアマイシン（ａｄｒｉａｍｉｃｉｎ）、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他のインターカレート剤、核酸分解酵素などの酵素およびその断片、抗生剤、ならびに毒素、例えば細菌、真菌、植物、または動物起源の小分子毒素や酵素活性のある毒素など、ならびにそれらの類似体、ホモログ、断片、および／またはバリアント、１−ジヒドロテストステロン、グルココルチコイド類、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、リシン、ＣＣ−１０６５、デュオカルマイシン類、ジフテリア毒素、毒液（例えば、蛇類、両生類、爬虫類、魚類、無脊椎動物などに由来）、ならびにそれらの類似体、ホモログ、断片、および／またはバリアント、ビスマス−２１３、アスタチン−２１１、ラジウム−２２３、イットリウム−９０、ヨウ素−１３１、サマリウム−１５３、ストロンチウム−８９、ルテチウム−１７７、ホルミウム−１６６、レニウム−１８６、レニウム−１８８、銅−６７、プロメチウム−１４９、金−１９９、ロジウム−１０５、臭素−７７、インジウム−１１１、ヨウ素−１２３、およびヨウ素−１２５からなる群から選択される。実施形態によっては、抗体コンジュゲートは、ＳＭＣ１を表面に発現する細胞に特異的に結合する。
【０００８】
実施形態によっては、１つまたは複数のＬＮＡを含むＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドが提供される。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ＳＭＣ１をコードするｍＲＮＡに相補的であり、そこでは、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ＳＭＣ１をコードするｍＲＮＡに結合して、そのＳＭＣ１をコードするｍＲＮＡをＲＮＡサイレンシング機構による分解の標的とする。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの長さは、約５から約５０ヌクレオチドである。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの配列は、５’ＧＴＡＴＧＧＴＴＡＡＴＧＧＣＴＧ３’（配列番号２９）および５’ＡＴＧＣＣＡＧＣＣＡＡＡＴＴＧＣ３’（配列番号３０）からなる群から選択される。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチド中のＬＮＡの数は、約１から約２５である。実施形態によっては、配列番号２９および配列番号３０のヌクレオチドのうち１つまたは複数は、ＬＮＡである。実施形態によっては、対象の疾患を予防および／または治療するための組成物が提供される。実施形態によっては、組成物は、抗ＳＭＣ１抗体と１つまたは複数のＬＮＡを含むＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとを含む抗体コンジュゲートを含み、そこでは、抗体は、リンカーを介して細胞毒性分子にコンジュゲーションされ、その抗体は、ＳＭＣ１の細胞外Ｃ末端領域の１つまたは複数のエピトープに結合し、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ＳＭＣ１をコードするｍＲＮＡに相補的であり、そのＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ＳＭＣ１をコードするｍＲＮＡに結合して、ＳＭＣ１をコードするｍＲＮＡをＲＮＡサイレンシング機構による分解の標的とする。組成物の実施形態によっては、抗体は、ＳＭＣ１の残基８０５〜１２３３を含むＳＭＣ１の細胞外Ｃ末端領域のエピトープに結合する。組成物の実施形態によっては、エピトープは、表１に挙げられた配列からなる群から選択される。組成物の実施形態によっては、エピトープは、配列番号１１、配列番号１２、および配列番号１３からなる群から選択される。組成物の実施形態によっては、抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルである。組成物の実施形態によっては、細胞毒性分子は、カリケアマイシン、マイタンシノイド類、オーリスタチン類、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、ビンカアルカロイド類、エトポシド、テ二ポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシンＤ、メトトレキサート、アドリアマイシン（ａｄｒｉａｍｉｃｉｎ）、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他のインターカレート剤、核酸分解酵素などの酵素およびその断片、抗生剤、ならびに毒素、例えば細菌、真菌、植物、または動物起源の小分子毒素や酵素活性のある毒素など、ならびにそれらの類似体、ホモログ、断片、および／またはバリアント、１−ジヒドロテストステロン、グルココルチコイド類、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、リシン、ＣＣ−１０６５、デュオカルマイシン類、ジフテリア毒素、毒液（例えば、蛇類、両生類、爬虫類、魚類、無脊椎動物などに由来）、ならびにそれらの類似体、ホモログ、断片、および／またはバリアント、ビスマス−２１３、アスタチン−２１１、ラジウム−２２３、イットリウム−９０、ヨウ素−１３１、サマリウム−１５３、ストロンチウム−８９、ルテチウム−１７７、ホルミウム−１６６、レニウム−１８６、レニウム−１８８、銅−６７、プロメチウム−１４９、金−１９９、ロジウム−１０５、臭素−７７、インジウム−１１ｌ、ヨウ素−１２３、およびヨウ素−１２５からなる群から選択される。組成物の実施形態によっては、抗体コンジュゲートは、ＳＭＣ１を表面に発現する細胞に特異的に結合する。組成物の実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの長さは、約５から約５０ヌクレオチドである。組成物の実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの配列は、５’ＧＴＡＴＧＧＴＴＡＡＴＧＧＣＴＧ３’（配列番号２９）および５’ＡＴＧＣＣＡＧＣＣＡＡＡＴＴＧＣ３’（配列番号３０）からなる群から選択される。組成物の実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチド中のＬＮＡの数は、約１から約２５である。組成物の実施形態によっては、配列番号２９および配列番号３０のヌクレオチドのうち１つまたは複数は、ＬＮＡである。組成物の実施形態によっては、予防および／または治療することは、ＳＭＣ１  ｍＲＮＡおよびＳＭＣ１タンパク質の発現を調節することによって達成される。組成物の実施形態によっては、疾患は、乳がん（例えばトリプルネガティブ乳がん）、乳腺癌、膵臓腺癌、肺癌、前立腺がん、ホルモン不応性前立腺がん、悪性固形腫瘍、例えば、結腸癌、非小細胞肺がん（例えば非小細胞肺がん）、未分化星状細胞腫、神経膠腫、神経膠芽腫（例えば、多形神経膠芽腫）、膀胱癌、肉腫、卵巣がん、直腸血管外皮腫、膵臓癌、急性骨髄性白血病、大腸、中皮腫、胃、膵臓、卵巣のがん、メラノーマ、膵臓がん、結腸がんや、膀胱がんなどからなる群から選択される。
【０００９】
実施形態によっては、対象の疾患を予防および／または治療するためのキットが提供される。実施形態によっては、キットは、本明細書に記載される組成物のいずれかを含む。キットの実施形態によっては、疾患は、乳がん（例えばトリプルネガティブ乳がん）、乳腺癌、膵臓腺癌、肺癌、前立腺がん、ホルモン不応性前立腺がん、悪性固形腫瘍、例えば、結腸癌、非小細胞肺がん（例えば非小細胞肺がん）、未分化星状細胞腫、神経膠腫、神経膠芽腫（例えば、多形神経膠芽腫）、膀胱癌、肉腫、卵巣がん、直腸血管外皮腫、膵臓癌、急性骨髄性白血病、大腸、中皮腫、胃、膵臓、卵巣のがん、メラノーマ、膵臓がん、結腸がんや、膀胱がんなどからなる群から選択される。
【００１０】
実施形態によっては、対象の疾患を予防および／または治療する方法が提供される。実施形態によっては、本方法は、対象の疾患の第１の評価を実施すること、本明細書に記載される組成物のいずれかを提供すること、本明細書に記載される組成物のいずれかを対象にある期間の間投与すること、上記期間の後に対象の疾患の第２の評価を実施することであって、上記疾患の第２の評価が、本明細書に記載される組成物のいずれかを対象にある期間の間投与した後の、対象における疾患の予防および／または治療を標示すること、それによって、対象の疾患を予防および／または治療することを含む。本方法の実施形態によっては、細胞は、腫瘍細胞、がん細胞、腫瘍幹細胞、がん幹細胞、またはそれらの組合せである。本方法の実施形態によっては、抗体コンジュゲートは、細胞によって取り込まれる。本方法の実施形態によっては、細胞毒性分子は、細胞の成長を阻止するか、または細胞を殺傷するかのどちらかである。本方法の実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、細胞によるＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの取り込みを可能にする融合性のまたは脂質生成性の構成成分を用いて製剤化される。本方法の実施形態によっては、細胞は、ＳＭＣ１  ｍＲＮＡを過剰発現する。本方法の実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ＳＭＣ１のｍＲＮＡに相補的であり、そこでは、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ＳＭＣ１  ｍＲＮＡに結合して、ＲＮＡサイレンシング機構によって発現を調節する。本方法の実施形態によっては、対象は、哺乳類であり、その際に、哺乳類は、ヒトであるかまたはヒト以外である。実施形態によっては、本方法は、１つまたは複数の追加の治療剤を提供することをさらに含む。本方法の実施形態によっては、１つまたは複数の追加の治療剤は、ＰＡＲＰ阻害剤である。本方法の実施形態によっては、１つまたは複数のＰＡＲＰ阻害剤は、ニラパリブ（ＭＫ−４８２７）、イニパリブ（ＢＳＩ２０１）、タラゾパリブ（ＢＭＮ−６７３）、ベリパリブ（ＡＢＴ−８８８）、オラパリブ（ＡＺＤ−２２８１）、ルカパリブ（ＡＧ０１４６９９、ＰＦ−０１３６７３３８）、ＣＥＰ９７２２、Ｅ７０１６、ＢＧＢ−２９０、および３−アミノベンズアミドからなる群から選択される。本方法の実施形態によっては、１つまたは複数の追加の治療剤は、白金ベース薬である。本方法の実施形態によっては、１つまたは複数の白金ベース薬は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、フェナントリプラチン、ピコプラチン、およびサトラプラチンからなる群から選択される。本方法の実施形態によっては、１つまたは複数の追加の治療剤は、本明細書に記載される組成物のいずれかの効果を増強する。本方法の実施形態によっては、本明細書に記載される組成物のいずれかの抗体コンジュゲートの濃度は、約１ｎＭから約２５０ｍＭまでに及ぶ。本方法の実施形態によっては、本明細書に記載される組成物のいずれかのＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの濃度は、約１ｎＭから約２５０ｍＭまでに及ぶ。
【００１１】
実施形態によっては、試料の状態を診断する方法が提供される。実施形態によっては、本方法は、細胞懸濁液、組織、生検、またはそれらの組合せである試料を提供すること、抗ＳＭＣ抗体を提供すること、ＳＭＣ１抗体を使用して試料の免疫組織化学染色を実施すること、試料におけるＳＭＣ１の細胞局在を決定すること、その際に、ＳＭＣ１が核のみに局在することが、試料の正常な状態を標示し、ＳＭＣ１が核、細胞質膜、および形質膜に局在することが、試料の異常な状態を標示することを含む。診断の方法の実施形態によっては，試料の異常な状態は、疾患の存在を標示する。診断の方法の実施形態によっては、疾患は、乳がん（例えばトリプルネガティブ乳がん）、乳腺癌、膵臓腺癌、肺癌、前立腺がん、ホルモン不応性前立腺がん、悪性固形腫瘍、例えば、結腸癌、非小細胞肺がん（例えば非小細胞肺がん）、未分化星状細胞腫、神経膠腫、神経膠芽腫（例えば、多形神経膠芽腫）、膀胱癌、肉腫、卵巣がん、直腸血管外皮腫、膵臓癌、急性骨髄性白血病、大腸、中皮腫、胃、膵臓、卵巣のがん、メラノーマ、膵臓がん、結腸がんや、膀胱がんなどからなる群から選択される。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】染色体構造維持−１（ＳＭＣ１）の結合パートナーの図式の一実施形態を示す図である。
【図２】ヒトＳＭＣ１のアミノ酸配列の一実施形態を示す図である。
【図３】残基１〜８０４で表されるＮ末端ヒトＳＭＣ１のアミノ酸配列の一実施形態を示す図である。
【図４】残基８０５〜１２３３で表されるＣ末端ヒトＳＭＣ１のアミノ酸配列の一実施形態を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
がんなどの疾患状態を直接的に引き起こすか、関与するか、または悪化させるかのいずれかの、望まない遺伝子発現を調節するために、ヌクレオチドベースの分子的な戦略が開発されている。そのような戦略の１つは、有害な標的遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）に配列上相補的なオリゴヌクレオチドを用いて、遺伝子発現を阻害することを含む。ｍＲＮＡは、コード（センス）ＤＮＡ鎖のコピーである。センス鎖にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドとよばれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドがｍＲＮＡに結合することによって、翻訳過程が干渉を受け、結果として遺伝子発現が干渉を受ける。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、様々な癌遺伝子または癌原遺伝子の活性を標的とし下方制御することによる、抗がん剤として使用されてきた。例えば、参照によりその全体を組み込まれている、特許文献１(MYB antisense for treating hematologic neoplasms, including use in bone marrow purging)；特許文献２(ABL antisense for treating myeloproliferative disorders)；特許文献３および非特許文献１(KIT for inhibiting malignant hematopoietic cell proliferation)；特許文献４および非特許文献２(MYB antisense for inhibiting proliferation of colon cancer cells)；特許文献５および非特許文献３(BCR-ABL antisense for inhibiting leukemia cell proliferation)；および特許文献６(Bone marrow purging and in vivo therapy using antisense oligonucleotides to a variety of oncogenes or proto-oncogenes)を参照されたい。
【００１４】
具体的には、１本鎖および２本鎖のオリゴヌクレオチドならびにそれらの類似体を含む様々なオリゴヌクレオチドが検討されてきた。ｉｎ  ｖｉｖｏでの適用で有用なものとするため、オリゴヌクレオチドは、細胞膜を貫通する能力を含めてある種の特性を有するもので、細胞内外のヌクレアーゼに良好な耐性を有するもので、標的に対し高い親和性および特異性を有するもので、好ましくはＲＮＡｓｅＨなどの内在性酵素をリクルートする能力を有するものでなければならない。潜在的な治療適用の多くに通底するオリゴヌクレオチドの重要な特性の１つは、相補的な１本鎖核酸を特異的に認識してそれにハイブリダイズする能力であり、それは、ワトソン−クリック水素結合（Ａ−ＴおよびＧ−Ｃ）またはフーグスティーン／逆フーグスティーンモードなどの他の水素結合スキームのどちらかを採用する。親和性および特異性は、特定のオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーション特性を特徴付けるのに一般に採用される特性である。親和性とは、オリゴヌクレオチドのその相補的な標的への結合強度の大きさ［二重鎖の熱安定性（Ｔｍ）として表現される］である。二重鎖の各ヌクレオチド塩基対は、熱安定性をもたらし、それゆえに、オリゴヌクレオチドのサイズ（核酸塩基数）の増加に伴って親和性が増加する。特異性とは、全体的に相補的な標的配列とミスマッチな標的配列とをオリゴヌクレオチドが区別する能力の大きさである。言い換えれば、特異性とは、標的中のミスマッチな核酸塩基対に伴う親和性の喪失の大きさである。
【００１５】
ロックド核酸（ＬＮＡ）は、高親和性かつ生物安定性のあるＲＮＡ類似体であり、その中では、通常は可撓性のあるリボース糖の環が、メチレン２’−Ｏ，４’−Ｃ結合を通じて剛直な立体配座で固定されている。この固定された立体配座は、有効なＲＮＡ結合分子の設計に実質的な利点をもたらし、１本鎖ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドが、他の化学に基づくオリゴヌクレオチド、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、および他のアンチセンスＲＮＡに比べて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで標的のｍＲＮＡの発現を下方制御する際に優れた有効性を持つことを可能にする。ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドを価値ある治療プラットフォームにすることを可能にする特長としては、限定されないが、前例のないＲＮＡ結合親和性、低分子のＲＮＡおよびＤＮＡの標的の検出、優れた特異性、単ヌクレオチドの識別、ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏでの高い安定性を結果として生じるエクソヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼに対する耐性、二重鎖の熱安定性の増加、安全性、および製造の容易さが挙げられる。
【００１６】
染色体構造維持−１（ＳＭＣ１）
ヒトＳＭＣ１Ａ（本明細書ではＳＭＣ１と称する）は、十分に説明されているコヒーシン複合体の構造構成成分であり、有糸分裂における姉妹染色分体の分配に密接に関与する。ＳＭＣ１の過剰発現は、ヒトにおける後期の結腸直腸がんの予後不良の予測因子であるものと考えられている。参照によりその全体を本明細書に組み込まれる非特許文献４を参照されたい。ヒトＳＭＣ１は、コヒーシン複合体の一員であり（図ｌ）、ＳＭＣ３、Ｒａｄ２１、ＳＣＣ１／ＳＣＣ２と共に、染色体の維持、ＤＮＡの修復、および遺伝子の発現に関与することが知られている。ＳＭＣ１は、ＢＲＣＡ１に結合し、それらは共に、ＤＮＡ損傷応答および細胞周期チェックポイント誘導性ＤＮＡ修復の制御に関与する。正常細胞では、ＳＭＣ１は、核タンパク質として記載される。ＳＭＣ１−ＳＭＣ３ヘテロ２量体は、さらに高次の複合体の必須部分を構成し、上記複合体は、クロマチンおよびＤＮＡの動力学に関与する。
【００１７】
ＳＭＣ１は、腫瘍細胞、がん細胞、腫瘍幹細胞、およびがん幹細胞で、正常細胞に比べて差次的に過剰発現される。例えば、ＳＭＣ１の差次的な発現および変異は、結腸、急性骨髄性白血病、神経膠腫、および肺を含めて多くのがんで報告されている。さらに、免疫細胞化学、フローサイトメトリー、および細胞分画による研究では、ＳＭＣ１は、正常細胞で大部分が核に局在するのに対し、腫瘍細胞、がん細胞、腫瘍幹細胞、およびがん幹細胞（例えばトリプルネガティブ乳がん）では核、細胞質、および細胞表面での局在が示されており、このことは、ＳＭＣ１の過剰発現が、がんにおいて発癌の役割を担い得ることを示唆する。例えば、肺がん細胞株（Ａｍ１０１０）をＳＭＣ１のエピトープ（配列番号１１）に対するモノクローナル抗体で染色することによって、Ａｍ１０１０細胞におけるＳＭＣの表面局在が示された（実施例２を参照）。
【００１８】
本開示は、疾患におけるＳＭＣ１に対する抗ＳＭＣ１抗体およびＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの治療適用に関する。本開示は、ＳＭＣ１の発現を調節し、それによって、望まない細胞成長を伴う疾患（例えば、腫瘍およびがん）を予防および／または治療する、抗ＳＭＣ１抗体およびＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドを提供する。また、本開示は、ＳＭＣ１の発現を調節するための抗体および／またはＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドを含む組成物およびキットを提供する。また、提供されるのは、望まない細胞成長に伴うＳＭＣ１の発現を調節するための抗体および／またはＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドを含む組成物およびキットを、それを必要とする対象に投与することを含む、１つまたは複数の疾患を予防および／または治療する方法である。実施形態によっては、本明細書に記載されるＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ＳＭＣ１  ｍＲＮＡを、１つまたは複数のＲＮＡ分解およびサイレンシング機構（例えばＲＮＡｉ）を介した分解の標的とする。実施形態によっては、本明細書に記載される抗ＳＭＣ１抗体は、ＳＭＣ１タンパク質を、１つまたは複数のタンパク質分解機構（例えばプロテアソーム分解）を介した分解の標的とする。
【００１９】
本開示は、ヒトＳＭＣ１（およびその対立遺伝子性バリアント、スプライシングバリアント、タンパク質バリアント、変異体、多型バリアント、および他のバリアント）ならびにヒトのがんに関連するものの、１つまたは複数の疾患に関与する１つまたは複数の遺伝子の発現を調節するための抗体コンジュゲートおよびロックド核酸オリゴヌクレオチド、１つまたは複数の疾患に関与する１つまたは複数の遺伝子の発現を調節するための抗体コンジュゲートおよび／またはロックド核酸オリゴヌクレオチドを含む組成物およびキット、細胞を接触させることならびに／または組成物およびキットを対象に投与することにより１つまたは複数の遺伝子の発現を調節することによって、対象の１つまたは複数の疾患を予防および／または治療する方法、ならびに試料の状態を診断する方法が、他のヒト遺伝子および他のヒト疾患に、ならびに他の動物の遺伝子および疾患のために拡大されることができることを、当業者は認識されたい。他の遺伝子の非限定的な例としては、癌遺伝子、腫瘍抑制遺伝子、ＤＮＡ修復遺伝子、組織マトリックスタンパク質をコードする遺伝子、輸送体をコードする遺伝子、シグナル伝達タンパク質をコードする遺伝子、細胞の成長および分化のタンパク質をコードする遺伝子、生化学反応に関与するタンパク質をコードする遺伝子、遺伝子発現の制御に関与するタンパク質をコードする遺伝子などが挙げられる。他の疾患の非限定的な例としては、生化学的疾患、代謝性疾患、遺伝性疾患、寄生虫性疾患、先天性疾患、細菌性疾患、ウイルス性疾患、自己免疫疾患、アレルギー、喘息、セリアック病、クローン病、大腸炎、心疾患、感染性疾患、肝臓疾患、神経疾患などが挙げられる。
【００２０】
ＳＭＣ１エピトープと抗ＳＭＣ１抗体コンジュゲート
ＳＭＣ１は、腫瘍細胞、がん細胞、腫瘍幹細胞、およびがん幹細胞で、正常細胞に比べて差次的に過剰発現される。ＳＭＣ１は、正常細胞では大部分が核に局在するのに対し、腫瘍細胞、がん細胞、腫瘍幹細胞、およびがん幹細胞では核、細胞質、および細胞表面に局在する。
【００２１】
実施形態によっては、本開示は、１つまたは複数のＳＭＣ１エピトープに関連する。ＳＭＣ１の長さ（配列番号２６；図２）は、１２３３アミノ酸である。残基１〜８０４（配列番号２７；図３）は、細胞内ドメインおよび膜貫通ドメインを含む。Ｎ末端ドメイン（複数可）の結合パートナーは、ＳＭＣ１を細胞内で形質膜に繋留する。ＳＭＣ１のアミノ酸残基８０５〜１２３３（配列番号２８；図４）は、腫瘍細胞、がん細胞、腫瘍幹細胞、およびがん幹細胞の細胞表面で細胞外にある。
【００２２】
ＳＭＣ１の残基１〜８０４（配列番号２７）は、ＳＭＣ１の細胞内領域および膜貫通領域を表す。そのため、実施形態によっては、１つまたは複数のＳＭＣ１エピトープは、ＳＭＣ１の細胞内領域および／または膜貫通領域に由来する。ＳＭＣ１エピトープは、ＳＭＣ１の細胞内領域および／または膜貫通領域に由来する。実施形態によっては、１つまたは複数のエピトープは、ＳＭＣ１のアミノ酸残基１〜８０４（配列番号２７）に由来する。ＳＭＣ１の残基８０５〜１２３３（配列番号２８）は、腫瘍細胞、がん細胞、腫瘍幹細胞、およびがん幹細胞におけるＳＭＣ１の細胞外（細胞表面）領域を表す。そのため、実施形態によっては、１つまたは複数のＳＭＣ１エピトープは、細胞外にあるおよび／または細胞表面に露出されているＳＭＣ１の領域に由来する。実施形態によっては、１つまたは複数のエピトープは、ＳＭＣ１のアミノ酸残基８０５〜１２３３（配列番号２８）に由来する。
【００２３】
実施形態によっては、エピトープの非限定的な例としては、表１に示される配列が挙げられる。
【００２４】
【表１】
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【００２５】
好適な実施形態では、１つまたは複数のＳＭＣ１エピトープは、細胞外にあるおよび／または細胞表面に露出されているＳＭＣ１の領域、すなわちＳＭＣ１のアミノ酸残基８０５〜１２３３（配列番号２８）に由来する。実施形態によっては、エピトープのサイズは、約５アミノ酸から約３５アミノ酸までに及ぶ。実施形態によっては、エピトープのサイズは、約５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜３５アミノ酸の範囲である。実施形態によっては、エピトープのサイズは、約５、１０、１５、２０、２５、３０、もしくは３５アミノ酸、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内である。実施形態によっては、エピトープのサイズは、１２アミノ酸である。実施形態によっては、エピトープは、配列番号１１のものである。実施形態によっては、エピトープは、配列番号１２のものである。実施形態によっては、エピトープは、配列番号１３のものである。好適な実施形態では、エピトープは、配列番号１１のものである。
【００２６】
実施形態によっては、表１に示されるエピトープのうち１つまたは複数の、１つまたは複数のバリアントが想定される。実施形態によっては、エピトープのバリアントは、表１に挙げられたエピトープのうち１つまたは複数と、少なくとも７０％の配列同一性を共有する。実施形態によっては、エピトープのバリアントは、表１に挙げられたエピトープのうち１つまたは複数と、約７０％以上の配列同一性を共有する。実施形態によっては、エピトープのバリアントは、表１に挙げられたエピトープのうち１つまたは複数と、少なくとも９９％超の配列同一性を共有する。実施形態によっては、エピトープのバリアントは、表１に挙げられたエピトープのうち１つまたは複数と、約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは９９％超の配列同一性を共有するか、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内にある。
【００２７】
本明細書に述べられるように、ＳＭＣ１は、腫瘍細胞、がん細胞、腫瘍幹細胞、およびがん幹細胞で、正常細胞に比べて差次的に過剰発現される。さらに、免疫細胞化学、フローサイトメトリー、および細胞分画による研究では、ＳＭＣ１が、正常細胞では大部分が核に局在するのに対し、腫瘍細胞、がん細胞、腫瘍幹細胞、およびがん幹細胞では核、細胞質、および細胞表面での局在が示されている。そのため、実施形態によっては、本明細書に提供される抗体コンジュゲートは、細胞表面にＳＭＣ１の発現を有する細胞に特異的に結合する。実施形態によっては、本明細書に提供される抗体コンジュゲートは、細胞表面にＳＭＣ１の発現を有する腫瘍細胞および腫瘍幹細胞に特異的に結合する。実施形態によっては、本明細書に提供される抗体コンジュゲートは、細胞表面にＳＭＣ１の発現を有するがん細胞およびがん幹細胞に特異的に結合する。
【００２８】
実施形態によっては、本開示は、本明細書に開示される１つまたは複数のＳＭＣ１エピトープ（例えば表１）およびそれらのバリアントに対する１つまたは複数の抗体に関連する。実施形態によっては、１つまたは複数の抗体は、モノクローナルである。実施形態によっては、１つまたは複数の抗体は、ポリクローナルである。実施形態によっては、１つまたは複数の抗体は、ＳＭＣ１の残基１〜８０４（配列番号２７）中のエピトープに結合する。実施形態によっては、１つまたは複数の抗体は、ＳＭＣ１の残基８０５〜１２３３（配列番号２８）中のエピトープに結合する。実施形態によっては、１つまたは複数の抗体は、ＳＭＣ１の残基１〜８０４（配列番号２７）およびＳＭＣ１の残基８０５〜１２３３（配列番号２８）中のエピトープに結合する。実施形態によっては、ＳＭＣ１の残基１〜８０４（配列番号２７）中のエピトープに結合する１つまたは複数の抗体は、モノクローナルである。実施形態によっては、ＳＭＣ１の残基１〜８０４（配列番号２７）中のエピトープに結合する１つまたは複数の抗体は、ポリクローナルである。実施形態によっては、ＳＭＣ１の残基８０５〜１２３３（配列番号２８）中のエピトープに結合する１つまたは複数の抗体は、モノクローナルである。実施形態によっては、ＳＭＣ１の残基８０５〜１２３３（配列番号２８）中のエピトープに結合する１つまたは複数の抗体は、ポリクローナルである。
【００２９】
実施形態によっては、１つまたは複数の抗体は、配列番号ｌｌのエピトープに結合する。実施形態によっては、１つまたは複数の抗体は、配列番号１２のエピトープに結合する。実施形態によっては、１つまたは複数の抗体は、配列番号１３のエピトープに結合する。実施形態によっては、配列番号１１のエピトープに結合する１つまたは複数の抗体は、ポリクローナルである。好適な実施形態では、配列番号１１のエピトープに結合する１つまたは複数の抗体は、モノクローナルである。実施形態によっては、配列番号１３のエピトープに結合する１つまたは複数の抗体は、モノクローナルである。好適な実施形態では、配列番号１３のエピトープに結合する１つまたは複数の抗体は、ポリクローナルである。
【００３０】
実施形態によっては、抗体は、ヒト由来である。実施形態によっては、抗体は、ヒト以外の種由来である。実施形態によっては、ヒト以外の種由来の抗体のタンパク質配列は、ヒトにおいて天然に生産された抗体バリアントとの類似性を増加させるために改変されてきたものである。実施形態によっては、抗体は、ヒト化抗体である。実施形態によっては、１つまたは複数の抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、またはそれらの組合せである。実施形態によっては、抗体は、単鎖抗体、標的エピトープに特異的に結合する抗体断片、モノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、標的エピトープに特異的に結合するモノクローナル抗体断片、キメラ抗体、標的エピトープに特異的に結合するキメラ抗体断片、二重特異性抗体、ドメイン抗体、または標的エピトープに特異的に結合するドメイン抗体断片である。代替的な実施形態では、結合部分（エピトープに特異的に結合する部分）は、抗体ではなく、標的エピトープを細胞表面に発現する細胞に細胞毒性のペイロードを送達するのに充分な結合親和性および特異性を示す、ペプチド、ポリペプチド、アプタマーなどである。
【００３１】
実施形態によっては、本明細書に開示される抗体のうち１つまたは複数の、１つまたは複数のバリアントが想定される。実施形態によっては、抗体バリアントは、表１に挙げられたエピトープに結合する１つまたは複数の抗体と、少なくとも７０％の配列同一性を共有する。同一性は、抗体配列全体に関連するか、または抗体配列の準部分（例えば、１つまたは複数のＣＤＲ）に関連するかのどちらかである。実施形態によっては、抗体バリアントは、約７０％以上の配列同一性を共有する。実施形態によっては、抗体バリアントは、少なくとも９９％超の配列同一性を共有する。実施形態によっては、抗体バリアントは、約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは９９％超の配列同一性を共有するか、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内にある。
【００３２】
本明細書に使用される際に、「ＫＤ」とは、１つまたは複数の抗体および／またはそれらのバリアントの、１つまたは複数のエピトープおよび／またはそれらのバリアントとの結合親和性を指す。実施形態によっては、ＫＤの値は、約１０−７Ｍから約１０−１０Ｍまでに及ぶ。実施形態によっては、ＫＤの値は、約１０−１０Ｍから約１０−１３Ｍまでに及ぶ。実施形態によっては、ＫＤの値は、約１０−６、１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０、１０−１１、１０−１２、１０−１３、もしくは１０−１４Ｍ、または前述の値のうち定められた任意の範囲内である。
【００３３】
実施形態によっては、本明細書に提供される１つまたは複数の抗体は、リンカーを介して細胞毒性分子にコンジュゲーションされる（本明細書では抗体コンジュゲートと称する）。
【００３４】
実施形態によっては、細胞毒性分子は、細胞毒性剤、化学療法剤、細胞毒性薬、毒素、放射性核種などである。細胞毒性分子は、細胞に有害であり、細胞の成長を阻止するか、細胞を殺傷するか、１つまたは複数の治療剤またはそれらの組合せによる殺傷に感受性となるようにそれらの生化学および／または生理を変えるか、のいずれかとなり得る。実施形態によっては、細胞毒性分子は、細胞の１つまたは複数の機能を予防および／または阻害する。実施形態によっては、細胞毒性分子は、細胞中の構造線維の破綻のうち１つまたは複数によって細胞死を引き起こし、それによって回復不能なＤＮＡ損傷、アポトーシス、オートファジー、ネクロ―シス、ネクロプトーシス、ピロトーシス、またはカスパーゼ非依存性の細胞死を引き起こすことができる。
【００３５】
細胞毒性分子の非限定的な例としては、カリケアマイシン、マイタンシノイド類、オーリスタチン類、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、ビンカアルカロイド類、エトポシド、テ二ポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシンＤ、メトトレキサート、アドリアマイシン（ａｄｒｉａｍｉｃｉｎ）、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他のインターカレート剤、核酸分解酵素などの酵素およびその断片、抗生剤、ならびに毒素、例えば細菌、真菌、植物、または動物起源の小分子毒素や酵素活性のある毒素など、ならびにそれらの類似体、ホモログ、断片、および／またはバリアント、１−ジヒドロテストステロン、グルココルチコイド類、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、リシン、ＣＣ−１０６５、デュオカルマイシン類、ジフテリア毒素、毒液（例えば、蛇類、両生類、爬虫類、魚類、無脊椎動物などに由来）、ならびにそれらの類似体、ホモログ、断片、および／またはバリアントが挙げられる。
【００３６】
実施形態によっては、抗体コンジュゲートは、１つまたは複数の放射性核種を、例えば、参照によりその全体を組み込まれる非特許文献５に記載されるようなものを含む。実施形態によっては、抗体コンジュゲートは、アルファ線放出放射性核種を含む。実施形態によっては、抗体コンジュゲートは、ベータ線放出放射性核種を含む。実施形態によっては、抗体コンジュゲートは、オージェ電子放出放射性核種を含む。実施形態によっては、抗体コンジュゲートは、アルファ線放出放射性核種とベータ線放出放射性核種との組合せを含む。実施形態によっては、抗体コンジュゲートは、アルファ線放出放射性核種とオージェ電子放出放射性核種との組合せを含む。実施形態によっては、抗体コンジュゲートは、ベータ線放出放射性核種とオージェ電子放出放射性核種との組合せを含む。実施形態によっては、抗体コンジュゲートは、アルファ線放出放射性核種とベータ線放出放射性核種とオージェ電子放出放射性核種との組合せを含む。
【００３７】
アルファ線放出放射性核種の非限定的な例としては、ビスマス−２１３、アスタチン−２１１、およびラジウム−２２３が挙げられる。ベータ線放出放射性核種の非限定的な例としては、イットリウム−９０、ヨウ素−１３１、サマリウム−１５３、およびストロンチウム−８９が挙げられる。ベータ線放出放射性核種の非限定的な例としては、ルテチウム−１７７、ホルミウム−１６６、レニウム−１８６、レニウム−１８８、銅−６７、プロメチウム−１４９、金−１９９、およびロジウム−１０５が挙げられる。オージェ電子放出放射性核種の非限定的な例としては、臭素−７７、インジウム−１１１、ヨウ素−１２３、およびヨウ素−１２５が挙げられる。
【００３８】
実施形態によっては、抗体当たりコンジュゲーションされる細胞毒性分子の数は、約１から約１００までに及び得る。実施形態によっては、抗体当たりコンジュゲーションされる細胞毒性分子の数は、約１００から約１０００までに及び得る。実施形態によっては、抗体当たりコンジュゲーションされる細胞毒性分子の数は、約ｌ、２、５、１０、１５、２０、２５、３０、２５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、２００、２５０、５００、７５０、もしくは１０００、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内である。他の実施形態では、標的結合剤（例えば抗体）分子当たりに結合される細胞毒性化合物分子の数は、２８０ｎｍと２５２ｎｍでの吸光度の比を測定することによって、分光学的に決定することができる。平均約０．５〜約２０個の細胞毒性化合物／抗体分子（複数可）を、公知の方法によって連結することができる（例えば、本明細書に参照により組み込まれる特許文献７を参照されたい）。一実施形態では、コンジュゲート内の標的結合剤当たりに連結される細胞毒性化合物の数の平均は、約０．５から約１０、約０．５から２（例えば０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、もしくは２．１）、約２から約８（例えば、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、もしくは８．１）、約２．５から約７、約３から約５、約２．５から約５．０（例えば、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９、約４．０、約４．１、約４．２、約４．３、約４．４、約４．５、約４．６、約４．７、約４．８、約４．９、約５．０）、約２．５から約４．０、約３．０から約４．０、約３．２から約４．２、または約４．５から５．５（例えば、約４．５、約４．６、約４．７、約４．８、約４．９、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、もしくは約５．５）、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内である。
【００３９】
腫瘍細胞、腫瘍幹細胞、がん細胞、および／またはがん幹細胞によって、ＳＭＣ１が表面に特異的に発現されると、本明細書に開示される抗体コンジュゲートは、腫瘍細胞、腫瘍幹細胞、がん細胞、および／またはがん幹細胞によって特異的に結合されて取り込まれる。こうして、本明細書に開示される抗体コンジュゲートは、正常細胞を温存する一方で、様々な組織学的タイプの腫瘍細胞、腫瘍幹細胞、がん細胞、および／またはがん幹細胞を特異的におよび選択的に殺傷する。腫瘍／がんの組織学的タイプの非限定的な例としては、癌、肉腫、骨髄腫、白血病、リンパ腫、および混合タイプが挙げられる。
【００４０】
実施形態によっては、本明細書に開示される抗体コンジュゲートは、様々な組織学的タイプの腫瘍細胞を特異的におよび選択的に殺傷する。実施形態によっては、本明細書に開示される抗体コンジュゲートは、様々な組織学的タイプの腫瘍幹細胞を特異的におよび選択的に殺傷する。実施形態によっては、本明細書に開示される抗体コンジュゲートは、様々な組織学的タイプのがん細胞を特異的におよび選択的に殺傷する。実施形態によっては、本明細書に開示される抗体コンジュゲートは、様々な組織学的タイプのがん幹細胞を特異的におよび選択的に殺傷する。
【００４１】
実施形態によっては、本抗体コンジュゲートは、抗体を細胞毒性分子に連結する１つまたは複数のリンカーを含む。実施形態によっては、リンカーは、抗体上のシステイン残基に付加される。実施形態によっては、リンカーは、抗体上のリジン残基に付加される。実施形態によっては、リンカーは、抗体上のシステイン残基およびリジン残基の組合せに付加される。
【００４２】
実施形態によっては、リンカーは、切断可能であり、それによって、抗体と細胞毒性分子との分離が可能になる。実施形態によっては、リンカーは、細胞内で切断される。実施形態によっては、リンカーは、細胞外で切断される。実施形態によっては、リンカーは、細胞内と細胞外の両方で切断される。実施形態によっては、リンカーは、細胞外で部分的に切断され、細胞内で部分的に切断される。実施形態によっては、リンカーは、細胞外で部分的に切断され、細胞内で完全に切断される。実施形態によっては、リンカーの最初の切断は、細胞外で起こり、最後の切断は、細胞内で起こる。実施形態によっては、リンカーは、切断不能である。
【００４３】
切断可能なリンカーの非限定的な例としては、ヒドラゾンリンカー、ジスルフィドベースのリンカー、およびペプチドリンカーが挙げられる。実施形態によっては、ジスルフィドベースのリンカーは、腫瘍細胞の内部で選択的に壊される。実施形態によっては、細胞内のチオール濃度が高いために、ジスルフィドベースのリンカーは、細胞内で選択的に壊される。実施形態によっては、ペプチドリンカーは、細胞内で細胞内酵素によって選択的に壊される。切断不能なリンカーの非限定的な例としては、チオエーテルリンカーおよびＰＥＧ４Ｍａｌリンカーが挙げられる。
【００４４】
当業者が認識することがあるように、抗体コンジュゲートを生成するためのこの開示の範囲内には、他のリンカーのタイプ、コンジュゲーション化学、抗体のコンジュゲーション部位などもある。非限定的な例は、参照によりその全体を本明細書に組み込まれる、特許文献７、特許文献８、特許文献９および特許文献１０、非特許文献６、非特許文献７、非特許文献８、非特許文献９、に開示されている。
【００４５】
実施形態によっては、本明細書に記載される抗ＳＭＣ１抗体コンジュゲートは、がん細胞およびがん幹細胞の細胞表面に発現されるＳＭＣ１に優先的に結合する。がん細胞およびがん幹細胞の表面のＳＭＣ１に結合された抗ＳＭＣ１抗体コンジュゲートは、当該技術分野に公知の１つまたは複数のタンパク質の取り込みおよび分解の機構によって、取り込まれて分解される。非限定的な例としては、受容体媒介型エンドサイトーシス、クラスリン媒介型エンドサイトーシス、カベオラでのエンドサイトーシス、ポトサイトーシス、マクロピノサイトーシス、ＡＴＰ動力型輸送、および食作用が挙げられる。細胞表面から取り込まれたＳＭＣ１は、ひとたび細胞の中に入ると、１つまたは複数の細胞プロテアーゼによって、および当該技術分野に公知の１つまたは複数のタンパク質分解機構によって、細胞内で分解される。プロテアーゼの非限定的な例としては、システインプロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、スレオニンプロテアーゼ、アスパラギン酸プロテアーゼ、グルタミン酸プロテアーゼ、メタロプロテアーゼ、およびアスパラギンペプチドリアーゼが挙げられる。タンパク質分解機構の非限定的な例としては、プロテアソーム、ユビキチン、ＳＵＭＯ化、およびオートファジーが挙げられる。ＳＭＣ１が分解する結果、がん細胞およびがん幹細胞ではＳＭＣ１の発現の下方制御が生じる。
【００４６】
抗体コンジュゲートの有効性は、抗ＳＭＣ１抗体コンジュゲートによりＳＭＣ１の発現の減少を定量することによって測定することができる。タンパク質発現の定量は、ウェスタンブロッティング、フローサイトメトリー、または当該技術分野に周知の他のツールを使用して実施される。
【００４７】
実施形態によっては、抗体コンジュゲートの有効性は、約７５％から約１００％に及ぶ。抗体コンジュゲートの有効性は、約５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは約１００％か、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内に及ぶ。言い換えれば、ＳＭＣ１の発現は、抗体コンジュゲートによって、約７５％から約１００％減少する。実施形態によっては、ＳＭＣ１の発現は、抗体コンジュゲートによって、約５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは約１００％か、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内に減少する。
【００４８】
実施形態によっては、非特異的な効果（オフターゲット効果またはバイスタンダー効果）は、約１０％未満である。実施形態によっては、非特異的な効果（オフターゲット効果またはバイスタンダー効果）は、約０％から約１０％までに及ぶ。実施形態によっては、非特異的な効果（オフターゲット効果またはバイスタンダー効果）は、約０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０％、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内である。
【００４９】
ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチド
本明細書に使用される際に、用語「ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチド」は、１つまたは複数のＬＮＡモノマーを用いて全体的にまたは部分的にのどちらかで改変された、任意のオリゴヌクレオチドを含む。本発明の好適な実施形態によれば、ＬＮＡ改変型アンチセンスオリゴヌクレオチドは、疾患の原因および／または増悪に関与する遺伝子のｍＲＮＡに特異的となるように設計される。実施形態によっては、このことは、疾患の原因および／もしくは増悪に関与する遺伝子（複数可）の発現を低減もしくは阻害することによって、ならびに／または通常は低く発現されるもしくは発現されない遺伝子（複数可）の発現を誘導もしくは増加させることによって、達成され、それらの発現は、疾患を軽減および／または治癒することがある。そのようなアプローチは、例えば、参照によりその全体を本明細書に組み込まれる非特許文献９に記載されており、その非限定的な例としては、標的遺伝子の天然のリプレッサーをコードする遺伝子のｍＲＮＡに対してアンチセンスオリゴヌクレオチドを向けることによって；標的ｍＲＮＡ中の相補的な配列に結合することにより標的ｍＲＮＡの半減期および発現の増加を引き起こすように、アンチセンスオリゴヌクレオチドを設計することによって；またはｄｓＤＮＡに鎖侵襲して、下流遺伝子の転写のための開始点として機能することが可能な複合体を形成できるオリゴヌクレオチドを使用することによって、標的遺伝子の発現の調節、誘導、または増加が達成され得ることが挙げられる。
【００５０】
実施形態によっては、本明細書に記載されるＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ＳＭＣ１  ｍＲＮＡを、１つまたは複数のＲＮＡ分解およびサイレンシング機構［例えば、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ｐｉｗｉ相互作用ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）、および反復配列関連低分子干渉ＲＮＡ（ｒａｓｉＲＮＡ）に基づくＲＮＡｉ］による分解の標的とする。
【００５１】
腫瘍細胞および／またはがん細胞中のＳＭＣ１  ｍＲＮＡのレベルは、正常細胞に比べて約１．５倍から約１５００倍高い。腫瘍細胞および／またはがん細胞は、正常細胞に比べてさらに多くのＳＭＣ１  ｍＲＮＡを発現する際に、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドが正常細胞を温存する一方でがん細胞を選択的に殺傷するように、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの用量および／または量を適量設定することができる。それゆえ、実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、約１ｎＭから約２５０ｍＭの濃度で使用される。ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、約１ｎＭから約２５０ｍＭの濃度で腫瘍細胞および／またはがん細胞に毒性である。
【００５２】
実施形態によっては、ロックド核酸（ＬＮＡｓ）を含む１つまたは複数のオリゴヌクレオチドが、例えば、参照によりその全体を本明細書に組み込まれる特許文献１０に開示されているように提供される。実施形態によっては、１つまたは複数のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡに対するアンチセンス配列を含む。実施形態によっては、１つまたは複数のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡに対するアンチセンス配列から実質的に成る。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡに対するアンチセンス配列から成る。実施形態によっては、１つまたは複数のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、生理的条件下で内在性の成熟ｍＲＮＡにハイブリダイズするように、ｍＲＮＡ配列に相補的である。
【００５３】
実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ＳＭＣ１のｍＲＮＡに相補的である。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、コヒーシン複合体のタンパク質をコードする１つまたは複数の他の遺伝子のｍＲＮＡに相補的である。例えば、実施形態によっては、１つまたは複数の他の遺伝子は、コヒーシン複合体のＳＭＣ２およびＳＭＣ３、多剤輸送体遺伝子（例えばＭＤＲ−１、ＭＤＲ−２、もしくはＭＧＲ−２）、またはそれらの組合せである。実施形態によっては、特定の遺伝子（複数可）、例えばヒトまたは哺乳類の疾患に関与する遺伝子を有効に調節できる、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドが採用される。例えば、実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、例として乳房、卵巣、中皮腫、結腸、急性骨髄性白血病、神経膠腫、多形神経膠芽腫、および肺がんなどのがん原因遺伝子に特異的であり、例として乳房、卵巣、中皮腫、結腸、急性骨髄性白血病、神経膠腫、多形神経膠芽腫、および肺がんなどのがん原因遺伝子の発現を調節する。
【００５４】
実施形態によっては、疾患は、遺伝性のもしくは後天性のどちらかの遺伝子障害によって引き起こされるか、または正常な遺伝子産物が病態生理学的な過程に関与するというものである。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、タンパク質をコードする遺伝子に対してもタンパク質をコードしない遺伝子に対しても使用されることがある。タンパク質をコードしない遺伝子の例としては、リボソームＲＮＡ、転移ＲＮＡ、核内低分子ＲＮＡ、細胞質低分子ＲＮＡ、テロメラーゼＲＮＡをコードする遺伝子が挙げられる。他のタイプのＲＮＡもまた、この開示の範囲内にあり、その非限定的な例としては、タンパク質合成に関与するＲＮＡ、転写後修飾に関与するＲＮＡ、ＤＮＡ複製に関与するＲＮＡ、制御ＲＮＡ、および寄生ＲＮＡが挙げられる。
【００５５】
実施形態によっては、１つまたは複数のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドが、他の遺伝子由来のｍＲＮＡにハイブリダイズしないように、その１つまたは複数のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、１遺伝子のｍＲＮＡに特異的かつユニークである。実施形態によっては、１つまたは複数のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡに完全に（すなわち１００％）相補的である。実施形態によっては、１つまたは複数のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡに部分的に相補的である。例えば、実施形態によっては、１つまたは複数のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡに約７５％から約９９％相補的である。実施形態によっては、１つまたは複数のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡに少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％相補的であるか、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内にある。優れた特異性と単ヌクレオチドの違いを区別する能力とがあることから、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、その標的に１００％相補的である必要はない。それゆえ、１つまたは複数のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡに約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％相補的であるか、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内にある。
【００５６】
実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの長さは、約５から約５０ヌクレオチドまでに及ぶ。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、約５から１０ヌクレオチドの長さである。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、約１０から２０ヌクレオチドの長さである。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、約２０から３０ヌクレオチドの長さである。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、約３０から４０ヌクレオチドの長さである。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、約４０から５０ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、もしくは５０ヌクレオチドの長さであるか、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内にある。
【００５７】
実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチド中のＬＮＡのパーセントは、約０．０２％から約５０％までに及ぶ。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチド中のＬＮＡのパーセントは、約０．０２、０．０５、０．ｌ、０．２、０．５、ｌ、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、もしくは５０％、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内である。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ｎ位、ｎ＋ｌ位、ｎ＋２位、…ｎ＋ｍ位、またはそれらの組合せにＬＮＡを含み、ここで、ｎは、最初のヌクレオチドの位置であり、ｍは、最後のヌクレオチドの位置である。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、最大で１０個のＬＮＡを含む。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、１０個以下のＬＮＡを含む。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、最大で１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個のＬＮＡを含む。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、最大で５個の連続したＬＮＡを含む。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、５個以下の連続したＬＮＡを含む。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、最大で５個、４個、３個、または２個の連続したＬＮＡを含む。実施形態によっては、ＬＮＡは、５’端に位置する。実施形態によっては、ＬＮＡは、５’端および内部に位置する。実施形態によっては、ＬＮＡは、３’端に位置する。実施形態によっては、ＬＮＡは、３’端および内部に位置する。実施形態によっては、ＬＮＡは、５’端および３’端に位置する。実施形態によっては、ＬＮＡは、５’端および３’端および内部に位置する。
【００５８】
実施形態によっては、ＳＭＣ１  ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、５’ＧＴＡＴＧＧＴＴＡＡＴＧＧＣＴＧ３’（配列番号２９）である。実施形態によっては、ＳＭＣ１  ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、５’ＡＴＧＣＣＡＧＣＣＡＡＡＴＴＧＣ３’（配列番号３０）である。実施形態によっては、配列番号２９中のヌクレオチドのうち１つまたは複数は、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号３０中のヌクレオチドのうち１つまたは複数は、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号２９中の任意の位置の１つまたは複数のヌクレオチドは、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号３０中の任意の位置の１つまたは複数のヌクレオチドは、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号２９中の１ヌクレオチドおよび配列番号３０中の１ヌクレオチドは、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号２９中の２ヌクレオチドおよび配列番号３０中の２ヌクレオチドは、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号２９中の３ヌクレオチドおよび配列番号３０中の３ヌクレオチドは、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号２９中の４ヌクレオチドおよび配列番号３０中の４ヌクレオチドは、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号２９中の５ヌクレオチドおよび配列番号３０中の５ヌクレオチドは、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号２９中の６ヌクレオチドおよび配列番号３０中の６ヌクレオチドは、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号２９中の７ヌクレオチドおよび配列番号３０中の７ヌクレオチドは、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号２９中の８ヌクレオチドおよび配列番号３０中の８ヌクレオチドは、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号２９中の９ヌクレオチドおよび配列番号３０中の９ヌクレオチドは、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号２９中の１０ヌクレオチドおよび配列番号３０中の１０ヌクレオチドは、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号２９中の１１ヌクレオチドおよび配列番号３０中の１１ヌクレオチドは、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号２９中の１２ヌクレオチドおよび配列番号３０中の１２ヌクレオチドは、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号２９中の１３ヌクレオチドおよび配列番号３０中の１３ヌクレオチドは、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号２９中の１４ヌクレオチドおよび配列番号３０中の１４ヌクレオチドは、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号２９中の１５ヌクレオチドおよび配列番号３０中の１５ヌクレオチドは、ＬＮＡである。実施形態によっては、配列番号２９中の１６ヌクレオチドおよび配列番号３０中の１６ヌクレオチドは、ＬＮＡである。
【００５９】
実施形態によっては、本明細書に記載されるＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の非ロックド核酸を含む。実施形態によっては、非ロックドヌクレオチドのうち少なくとも１つは、２’デオキシである。実施形態によっては、非ロックドヌクレオチドのうち少なくとも１つは、２’Ｏ−アルキルである。実施形態によっては、非ロックドヌクレオチドのうち少なくとも１つは、２’ハロである。実施形態によっては、非ロックドヌクレオチドのうち少なくとも１つは、２’デオキシ、２’Ｏ−アルキル、２’ハロ、またはそれらの組合せである。実施形態によっては、非ロックドヌクレオチドの全ては、２’デオキシ、２’Ｏ−アルキル、もしくは２’ハロのいずれか、またはそれらの組合せである。好適な実施形態では、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ヘアピン構造、へリックス構造、シュードノット構造、ステムループ構造、または他の二次構造、三次構造、もしくは四次構造を形成しないように設計される。好適な実施形態では、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、その一次構造を維持する。
【００６０】
実施形態によっては、標的遺伝子は、１本鎖または２本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡとし得る。しかし、１本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡの標的が好適である。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドが向けられる標的としては、標的遺伝子の対立遺伝子形、およびスプライシングバリアントを含めた対応のｍＲＮＡが挙げられることが理解される。標的ポリヌクレオチドの配列に関する知識をもたらす、アンチセンスオリゴヌクレオチドに用いる具体的な配列を選択するために、文献中にガイダンスがあり、例えば、参照によりその全体を組み込まれる、非特許文献１１；非特許文献１２；ならびに非特許文献１３がある。アンチセンス化合物の配列は、Ｇ−Ｃ含有量が少なくとも６０％となるように選択されてもよい。いくつかのｍＲＮＡの標的は、５’キャップ部位、ｆＲＮＡプライマー結合部位、開始コドン部位、ｍＲＮＡスプライシングドナー部位、およびｍＲＮＡスプライシングアクセプター部位、例えば、参照によりその全体を組み込まれるＧｏｏｄｃｈｉｌｄら、特許文献１１を含む。
【００６１】
標的ポリヌクレオチドがｍＲＮＡ転写物を含む場合では、転写物の任意の部分に相補的でありハイブリダイゼーション可能なオリゴヌクレオチドは、原理上は、翻訳を阻害するのに有効であり、本明細書に記載される効果を誘導することが可能である。理論に拘束される訳ではないが、開始コドンの部位でまたはその近くでｍＲＮＡを遮断することによって、翻訳が最も効果的に阻害されるものと考えられる。それゆえ、実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡ転写物の５’領域に相補的である。他の実施形態では、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、開始コドン（転写物の翻訳部分の５’端にある最初のコドン）または開始コドンに隣接するコドンを含む、ｍＲＮＡ転写物の５’領域に相補的である。
【００６２】
ｍＲＮＡ転写物のコード領域に、特に開始コドンを含む領域に相補的なＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドが好適となり得る一方で、ｍＲＮＡの非翻訳部分に相補的なＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドも設計できることを当業者は認識されたい。例えば、実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、５’非翻訳領域、３’非翻訳領域、またはそれらの組合せに含有されるか、またはその内部に延びているｍＲＮＡ配列に相補的である。理論に拘束される訳ではないが、３’非翻訳領域に相補的なＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡの半減期を調節するのに特に有用であることがあり、それによって、その発現／翻訳を制御できる可能性がある。
【００６３】
実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、前駆体ｍＲＮＡおよび／または成熟ｍＲＮＡの任意の部分から設計することができ、そのような部分としては、以下に限定されないが、キャップ、５’非翻訳領域、コード配列、イントロン、エクソン、３’非翻訳領域、および／またはポリＡ尾部が挙げられる。実施形態によっては、１つまたは複数のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ヒトＳＭＣ１  ｍＲＮＡの前駆体ｍＲＮＡおよび／または成熟ｍＲＮＡの任意の部分に対して設計される。
【００６４】
組成物
実施形態によっては、対象の１つまたは複数の疾患を予防および／または治療するための組成物が提供される。実施形態によっては、組成物は、本明細書に開示される１つまたは複数の抗体コンジュゲートを含む。実施形態によっては、組成物は、本明細書に開示される１つまたは複数のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドを含む。実施形態によっては、組成物は、本明細書に開示される１つまたは複数の抗体コンジュゲートとＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとの組合せを含む。本明細書に提供される抗体コンジュゲートの任意の実施形態を、本明細書に提供されるＬＮＡ改変型ヌクレオチドの任意の実施形態に組み合わせることができることを、当業者は理解されたい。
【００６５】
実施形態によっては、対象の１つまたは複数の疾患を予防および／または治療する方法が提供される。実施形態によっては、本方法は、本明細書に開示される１つまたは複数の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。実施形態によっては、本方法は、本明細書に開示される１つまたは複数の抗体コンジュゲートを投与することを含む。実施形態によっては、本方法は、本明細書に開示される１つまたは複数のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドを投与することを含む。実施形態によっては、本方法は、本明細書に開示される１つまたは複数の抗体コンジュゲートとＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとの組合せを投与することを含む。
【００６６】
実施形態によっては、１つまたは複数の疾患はがんである。実施形態によっては、腫瘍および／またはがんは、以下挙げられるがこれらに限定されない、乳がん（例えばトリプルネガティブ乳がん）、乳腺癌、膵臓腺癌、肺癌、前立腺がん、ホルモン不応性前立腺がん、悪性固形腫瘍、例えば、結腸癌、非小細胞肺がん（例えば非小細胞肺がん）、未分化星状細胞腫、神経膠腫、神経膠芽腫（例えば、多形神経膠芽腫）、膀胱癌、肉腫、卵巣がん、直腸血管外皮腫、膵臓癌、進行がん、急性骨髄性白血病、大腸、中皮腫、胃、膵臓、卵巣のがん、メラノーマ、膵臓がん、結腸がん、および膀胱がんのうち１つまたは複数から選択されてもよい。
【００６７】
実施形態によっては、組成物中の抗体コンジュゲートの濃度は、約１ｎＭから約１ｍＭまでに及ぶ。実施形態によっては、組成物中の抗体コンジュゲートの濃度は、約１ｍＭから約２５０ｍＭまでに及ぶ。実施形態によっては、組成物中の抗体コンジュゲートの濃度は、約１ｎＭ、１００ｎＭ、５００ｎＭ、１μＭ、１００μＭ、５００μＭ、１ｍＭ、１００ｍＭ、もしくは２５０ｍＭ、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内である。
【００６８】
実施形態によっては、組成物中のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの濃度は、約１ｎＭから約１ｍＭまでに及ぶ。実施形態によっては、組成物中のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの濃度は、約１ｍＭから約２５０ｍＭまでに及ぶ。実施形態によっては、組成物中のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの濃度は、約１ｎＭ、１００ｎＭ、５００ｎＭ、１μＭ、１００μＭ、５００μＭ、１ｍＭ、１００ｍＭ、もしくは２５０ｍＭ、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内である。
【００６９】
抗体コンジュゲートとＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとの組合せを含む組成物の実施形態によっては、抗体の濃度は、約１ｎＭから約１ｍＭまでに及び、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの濃度は、約１ｎＭから約１ｍＭまでに及ぶ。抗体コンジュゲートとＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとの組合せを含む組成物の実施形態によっては、抗体の濃度は、約１ｍＭから約２５０ｍＭまでに及び、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの濃度は、約１ｍＭから約２５０ｍＭまでに及ぶ。抗体コンジュゲートとＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとの組合せを含む組成物の実施形態によっては、組成物中の抗体コンジュゲートの濃度は、約１ｎＭ、１００ｎＭ、５００ｎＭ、１μＭ、１００μＭ、５００μＭ、１ｍＭ、１００ｍＭ、もしくは２５０ｍＭ、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内であり、組成物中のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの濃度は、約１ｎＭ、１００ｎＭ、５００ｎＭ、１μＭ、１００μＭ、５００μＭ、１ｍＭ、１００ｍＭ、もしくは２５０ｍＭ、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内である。
【００７０】
実施形態によっては、本方法は、抗体および／または抗体−薬剤コンジュゲートを約１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇの用量で投与することを含む。実施形態によっては、本方法は、約１０ｍｇ／ｋｇから約５００ｍｇ／ｋｇの用量で抗体および／または抗体−薬剤コンジュゲートを投与することを含む。実施形態によっては、本方法は、抗体および／または抗体−薬剤コンジュゲートを、約ｌ、５、１０、５０、１００、２００、３５０、３００、３５０、４００、４５０、もしくは５００ｍｇ／ｋｇ、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内の用量で投与することを含む。
【００７１】
実施形態によっては、本方法は、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドを約１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇの用量で投与することを含む。実施形態によっては、本方法は、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドを約１０ｍｇ／ｋｇから約５００ｍｇ／ｋｇの用量で投与することを含む。実施形態によっては、本方法は、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドを、約１、５、１０、５０、１００、２００、３５０、３００、３５０、４００、４５０、もしくは５００ｍｇ／ｋｇ、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内の用量で投与することを含む。
【００７２】
実施形態によっては、本方法は、約１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇの用量の抗体−薬剤コンジュゲートと、約１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇの用量のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとの組合せを投与することを含む。実施形態によっては、本方法は、約１０ｍｇ／ｋｇから約５００ｍｇ／ｋｇの用量の抗体−薬剤コンジュゲートと、約１０ｍｇ／ｋｇから約５００ｍｇ／ｋｇの用量のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとの組合せを投与することを含む。実施形態によっては、本方法は、約１、５、１０、５０、１００、２００、３５０、３００、３５０、４００、４５０、もしくは５００ｍｇ／ｋｇ、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内の用量の抗体−薬剤コンジュゲートと、約１、５、１０、５０、１００、２００、３５０、３００、３５０、４００、４５０もしくは５００ｍｇ／ｋｇ、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内の用量のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとの組合せを投与することを含む。
【００７３】
実施形態によっては、１つまたは複数のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、巨大分子アセンブリに含まれる。非限定的な例としては、細胞および／または患者に送達するために製剤化されたリポソーム、ナノ粒子、およびミセルが挙げられる。実施形態によっては、巨大分子アセンブリは、細胞膜の貫通を開始するための１つまたは複数の融合性のおよび／または親油性の分子を含む。非限定的な例は、例えば、参照によりその全体を本明細書に組み込まれる特許文献１０に記載されている。あるいは、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、細胞送達を達成するために、親油性基を含むことがある。非限定的な例は、参照によりその全体を本明細書に組み込まれる特許文献１０に記載されている。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドを特定の細胞、臓器および／または組織に標的させるための親水性基をさらに含む。例えば、実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、糖部分（例えばマンノース−６−リン酸）および／またはアミノ糖（例えばＮ−アセチルグルコサミン）にコンジュゲーションされる。
【００７４】
実施形態によっては、本明細書に記載される抗体コンジュゲートおよびＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、意図された医薬のおよび／または治療の適用に適切な形態で調製された組成物として製剤化される。実施形態によっては、そのような組成物は、ヒトおよび／または動物に害を与えうるパイロジェンならびに他の不純物を含まない。医薬のおよび／または治療の適用のために製剤化される組成物の非限定的な例としては、コロイド分散系、巨大分子複合体、ナノカプセル、ナノ粒子、マイクロスフェア、ビーズ、および脂質ベース系が挙げられ、脂質ベース系としては、油中水エマルジョン、脂肪エマルジョン、ミセル、混合ミセル、およびリポソーム（すなわち、人工膜小胞）が挙げられる。静脈内でのＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの送達に適した商業的に利用可能な脂肪エマルジョンの非限定的な例としては、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ、ＬｉｐｏｓｙｎＩＩ、ＬｉｐｏｓｙｎＩＩＩ、Ｎｕｔｒｉｌｉｐｉｄなどが挙げられる。他の非限定的な例は、参照によりその全体を本明細書に組み込まれる特許文献１０に開示されている。
【００７５】
実施形態によっては、本組成物の送達は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏである。実施形態によっては、本組成物の送達は、ｉｎ  ｖｉｖｏである。実施形態によっては、本組成物の構成成分は共投与される。実施形態によっては、本組成物の構成成分は、別々におよび逐次的に投与される。
【００７６】
多くの場合、腫瘍および／またはがんが発達する前には、がんに関する遺伝子に影響する複数の異常が積み重なる。これらの場合では、異なる遺伝子に特異的なＬＮＡ改変型アンチセンスオリゴヌクレオチドの組合せが、同時にまたは別々に投与されることがある。実施形態によっては、いくつかのＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドが、組み合わされて使用される。例えば、いくつかの異なるＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドのカクテルが使用される。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、同じ遺伝子の異なる領域に対して設計される。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、異なる遺伝子に対して設計され、その際に、その異なる遺伝子は、疾患に関連付けられる関連遺伝子のファミリー、疾患と大きく相関する一連の非関連かつ多様な遺伝子、一連の共制御された遺伝子、生化学またはシグナル伝達経路のタンパク質をコードする一連の遺伝子を表す。例えば、このカクテルは、ＩｇＥおよびＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩα）をコードするｍＲＮＡに対するＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドを含むことがある。
【００７７】
実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドのカクテルは、約２種から約１００，０００種のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドを含む。実施形態によっては、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドのカクテルは、同じＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの２つ以上のコピーを含む。実施形態によっては、全てのＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドがユニークである。実施形態によっては、カクテル中の全てのＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドが、１種の遺伝子に対するものである。実施形態によっては、カクテル中のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、２種以上の遺伝子に対するものである。実施形態によっては、カクテル中のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドが２種以上の遺伝子に対するものである際に、遺伝子当たり少なくとも１種のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドが存在する。実施形態によっては、異なるＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドが、同時にまたは別々に、個別にまたはセットでのどちらかで、投与されることがある。
【００７８】
実施形態によっては、本組成物中のＳＭＣ１  ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、５’ＧＴＡＴＧＧＴＴＡＡＴＧＧＣＴＧ３’（配列番号２９）である。実施形態によっては、本組成物中のＳＭＣ１  ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、５’ＡＴＧＣＣＡＧＣＣＡＡＡＴＴＧＣ３’（配列番号３０）である。実施形態によっては、本組成物中のＳＭＣ１  ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドのカクテルは、５’ＧＴＡＴＧＧＴＴＡＡＴＧＧＣＴＧ３’（配列番号２９）および５’ＡＴＧＣＣＡＧＣＣＡＡＡＴＴＧＣ３’（配列番号３０）を含む。
【００７９】
実施形態によっては、本組成物は、液体、固体、または準固体の剤形として提供される。非限定的な例としては、カプセル、錠剤、膣坐剤、坐剤、挿入剤、オブラート、咀嚼錠、バッカル錠、舌下錠、速溶解錠、発泡錠、顆粒、ペレット、ビーズ、丸剤、サシェ、スプリンクル、フィルム、軟膏、クリーム、ゲル、ドライシロップ、再構成可能な固体、懸濁液、エマルジョン、菱形剤、トローチ、留置剤、粉末、倍散剤、プレートレット、またはストリップが挙げられる。経口投与に用いる組成物は、経口摂取に適した任意の剤形、例えば、エリキシル、懸濁液、シロップ、エマルジョン、アンプルなどの液体組成物；ゲル、ガム、ドロップ、粉末、顆粒、丸剤、糖衣錠、フィルムコーティング錠、カプセル、パッケージング剤などの固体組成物とすることができる。また、想定されるのは、ゲルコーティング組成物などの持続放出性組成物、マルチコーティング組成物、局所放出性組成物である。
【００８０】
実施形態によっては、本組成物は、即時放出、パルス放出、制御放出、延長放出、調節放出、遅延放出、標的放出、または標的遅延放出に用いるために製剤化することができる。
【００８１】
本明細書の組成物の投与経路は、状況および需要に基づき、当業者が決定することができる。いくつかの非限定的な投与経路が可能であり、そのようなものとしては、非経口、皮下、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、膣内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、子宮頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎内、網膜内、脊髄内、滑液嚢内、胸腔内、子宮内、膀胱内、病巣内、ボーラス、膣，直腸，頬側，舌下，鼻腔内、または経皮が挙げられる。
【００８２】
実施形態によっては、本明細書に提供される組成物は、活性成分、不活性成分、賦形剤、添加剤、および／または医薬的に許容可能な担体を含む。添加剤の例としては、天然のポリマー化合物、無機塩、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、界面活性剤、増粘剤、コーティング剤、ｐＨ調整剤、抗酸化剤、着香剤、保存剤、および着色剤が特に挙げられる。他の医薬的に許容可能な担体の例としては、水、アルコール、エマルジョンなどの液体担体、およびゲル、粉末などの固体担体が挙げられる。医薬的に許容可能な担体としては、ヒトへの投与に適した組成物などの医薬を製剤化する際の使用のために許容可能な１つまたは複数の溶媒、緩衝液、溶液、分散媒、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張の吸収遅延剤などが挙げられよう。参照によりその全体を本明細書に組み込まれる非特許文献１４に開示されているものなど、標準的な医薬製剤の技法および成分を使用することができる。本組成物は、送達ビヒクルを安定にして標的細胞による取込みを可能とするために、適切な塩および緩衝液を含むことがある。本発明の水性組成物は、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチド（例えば、リポソーム、ナノ粒子、または他の複合体）を含む有効量の送達ビヒクルを含み、そのビヒクルは、医薬的に許容可能な担体または水性媒体中に溶解または分散されている。他の賦形剤としては、水溶性ポリマー、不水溶性ポリマー、疎水性素材、親水性素材、ワックス、崩壊剤、超崩壊剤、希釈剤、結合剤などが挙げられる。
【００８３】
実施形態によっては、静脈内投与に用いる組成物は、塩化ナトリウム、デキストロース、および滅菌水のうち１つまたは複数を含む、賦形剤および医薬的に許容可能な担体を含む。本組成物は、水性の等張の滅菌注射溶液を含み得るが、その溶液は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および目的のレシピエントの血液と製剤とを等張にする溶質、ならびに懸濁液剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、および保存剤を含み得る水性および非水性の滅菌懸濁液のうち、１つまたは複数を含み得る。
【００８４】
実施形態によっては、本組成物は、静脈内注入によって投与される。本組成物は、単位用量または多回用量の密封容器、例えばアンプルおよび／またはバイアルなどで提供することができる。注射溶液および懸濁液は、滅菌された粉末、顆粒、および／または錠剤から調製することができる。実施形態によっては、投与される組成物は、本明細書に提供される経路のうち１つまたは複数を介して送達するための医薬製剤として製剤化することができる。
【００８５】
本明細書に使用される際に、用語「対象」または「患者」は、任意の脊椎動物を指し、そのようなものとしては、限定されないが、ヒトおよび他の霊長類（例えば、チンパンジーおよび他の類人猿ならびにサル種）、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、およびウマ）、家庭内哺乳類（例えば、イヌおよびネコ）、実験動物（例えば、マウス、ラットや、モルモットなどの齧歯類）、および鳥類（例えば、飼いならされた鳥類、野生鳥類、および競技用の鳥類、例として、ニワトリ、シチメンチョウ、および他の家禽類、アヒル、カモなど）が挙げられる。実施形態によっては、対象は哺乳類である。実施形態によっては、対象はヒトである。
【００８６】
実施形態によっては、対象は、抗体コンジュゲートの投薬を毎日充分に受けて、対象に有効なさらには安全な濃度を達成する。実施形態によっては、対象は、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの投薬を毎日充分に受けて、対象に有効なさらには安全な濃度を達成する。実施形態によっては、対象は、抗体コンジュゲートおよびＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドを含む組成物の投薬を毎日充分に受けて、対象に有効なさらには安全な抗体コンジュゲートおよびＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの濃度を達成する。当業者は、患者の特有の状況および需要に合うように、適切な投薬量および投与スケジュールを容易に導き出すことができるはずである。
【００８７】
実施形態によっては、対象は、雄または雌である。実施形態によっては、対象は、未処置であり、以前に抗がん治療を受けたことがない。実施形態によっては、患者は、最初は抗がん治療に応答性があり、その結果、がんに初期の退縮があった可能性がある。しかし、がんは、抗がん治療に抵抗性となり、その結果、再発した可能性がある。実施形態によっては、再発は、治療の中断に起因して起こることもあり、その場合、再発したがんは以前に投与された抗がん治療に感受性があることもないこともある。実施形態によっては、対象は、最初は第１選択の抗がん治療レジメンを用いて治療されていたが、その後、第１選択肢の抗がん剤に対する抵抗性の発達や、第１選択肢の抗がん剤の有害作用などのために、異なる抗がん治療レジメンを用いて治療されていた可能性がある。実施形態によっては、対象は、約１か月から約１０年の間、疾患に罹っている。
【００８８】
本明細書の組成物の投与の頻度は、患者の薬剤服用順守、副作用などの様々なパラメーターに応じて変わり得るものであり、例えば、毎日、毎週、隔週、毎月、隔月、または当該技術分野に公知のようなものがある。組成物は、毎日、毎週、隔週、毎月、隔月、所望よりもさらに少ない頻度、または多い頻度で、投与することができる。
【００８９】
投与は、毎日、または週に１回、２回、３回、４回、５回、６回もしくはそれ以上、または必要とされる頻度よりも多いもしくは少ないものとすることができる。投与は、単回用量として、または１日用量を１日当たり２包、３包、４包、またはそれ以上で与えられるように分割用量として、提供することができる。
【００９０】
実施形態によっては、対象は、１つまたは複数の追加の治療剤を、抗体コンジュゲートおよびＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドと組み合わせて投与される。実施形態によっては、追加の治療剤は、抗がん治療剤である。実施形態によっては、追加の抗がん治療剤は、ＰＡＲＰ阻害剤を含む。ＰＡＲＰ阻害剤の非限定的な例としては、ニラパリブ（ＭＫ−４８２７）、イニパリブ（ＢＳＩ２０１）、タラゾパリブ（ＢＭＮ−６７３）、ベリパリブ（ＡＢＴ−８８８）、オラパリブ（ＡＺＤ−２２８１）、ルカパリブ（ＡＧ０１４６９９、ＰＦ−０１３６７３３８）、ＣＥＰ９７２２、Ｅ７０１６、ＢＧＢ−２９０、および３−アミノベンズアミドが挙げられる。ＰＡＲＰ阻害剤の量および用量は、当該技術分野に周知である。例えば、ＰＡＲＰ阻害剤の量の実施形態によっては、投与されるのは、１日当たり約０．５ｍｇから約１２００ｍｇである。実施形態によっては、ＰＡＲＰ阻害剤は、約０．００７５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００９１】
実施形態によっては、追加の抗がん治療剤は、白金ベースの抗がん薬が使用されることを含む。非限定的な例の白金ベースの抗がん薬としては、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、フェナントリプラチン、ピコプラチン、およびサトラプラチンが挙げられる。白金ベース薬の量および用量は、当該技術分野に周知である。実施形態によっては、対象は、当該技術分野に周知の１つまたは複数の追加の治療剤（例えば、他の抗がん剤、抗炎症薬など）を投与される。実施形態によっては、追加の治療剤は、当該技術分野に周知であり、実施形態によっては、政府機関（例えばＦＤＡ、ＥＭＥＡなど）によって、治療での使用および／または臨床試験での使用に認可される。用量投与、投与経路、既知のがんのタイプに対する有効性、副作用／有害作用、作用機構なども、当該技術分野に周知であることがある。他の実施形態では、追加の治療剤は、（例えば、限定することなく、実験室および／またはヒト臨床試験でのｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｅｘ  ｖｉｖｏで）抗がん効果を有するものと考えられるものの、がんの治療に用いるために未だに政府機関によって認可されない、化合物である。
【００９２】
他の治療剤の共投与は、他の治療剤を、同時に、または互いに約１分、５分、１５分、３０分、４５分、もしくは６０分以内に、または前述の値によって定められる任意の範囲以内に、投与することを含むことがある。共投与は、本組成物および他の治療剤を、互いに約１時間以内から約６時間以内に、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内に、投与することを含むことがある。
【００９３】
実施形態によっては、対象が抗体コンジュゲートとＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとの組合せを投与された際に、相加効果が観察される。実施形態によっては、対象が抗体コンジュゲートとＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとの組合せを投与された際に、相乗効果が観察される。追加的に１つまたは複数の追加の治療剤と組み合わされた際に、抗体コンジュゲートとＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとの組合せの効果は、さらに増強される。実施形態によっては、さらにいっそうの増強は相加的である。実施形態によっては、さらにいっそうの増強は相乗的である。
【００９４】
相加効果は、組合せの効果が個々の効果の和に等しい（例えば、抗体コンジュゲートとＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとの組合せの効果が、抗体コンジュゲートおよびＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの個々の効果の和に等しい）際に観察される。相乗効果は、相加効果よりも大きい。相乗効果は、組合せの効果が個々の効果の和に等しい（例えば、抗体コンジュゲートとＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとの組合せの効果が、抗体コンジュゲートおよびＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの個々の効果の和よりも大きい）際に観察される。相加効果、相乗効果、またはその両方が、ヒト患者、ヒトでない患者、患者でないヒトボランティア、ｉｎ  ｖｉｖｏモデル、ｅｘ  ｖｉｖｏモデル、ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルなどで起こり得る。
【００９５】
相乗効果は、約＞１倍から約１００倍までに及び得る。実施形態によっては、相乗効果は、約２倍から約２０倍である。実施形態によっては、相乗効果は、約２０倍から約１００倍である。実施形態によっては、相乗効果は、＞１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、もしくは１００倍、または前述の値のうち任意の２つによって定められる範囲内である。
【００９６】
キットおよび診断
本明細書に開示される組成物のいずれも、診断、予防および／または治療のキットのうち１つまたは複数として提供することができる。実施形態によっては、１つまたは複数のキットは、１つまたは複数のがんの診断のためのものである。実施形態によっては、１つまたは複数のキットは、１つまたは複数のがんの予防のためのものである。実施形態によっては、１つまたは複数のキットは、１つまたは複数のがんの治療のためのものである。実施形態によっては、１つまたは複数のキットは、１つまたは複数のがんの診断、予防および／または治療のためのものである。実施形態によっては、１つまたは複数のがんは、ＳＭＣ１の過剰発現に関連する。
【００９７】
本明細書に開示される組合せの構成成分が共投与に適するようにキットの構成成分を提供することは、本開示の範囲内にある。
【００９８】
１つまたは複数のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドと組み合わせて使用される１つまたは複数の抗体コンジュゲートを含むキットが提供される。本キット中の本組成物の構成成分は、例えば、別々の容器で、または区分されているびんもしくは区分されているホイルパケットの別々の区画で（例えば、錠剤、カプセルなどのパッケージングに使用されるブリスターパック）、別々に提供することができる。実施形態によっては、本キットは、異なる剤形を例えば経口でおよび静脈内で投与することに、構成成分を異なる投薬間隔で投与することに、および／または構成成分の力価を互いに対し測定することに適する。本キットは、典型的には、投与のための指示書を含み、投薬遵守を確実に行うための記憶の助けとなるものが追加的に提供されることがある。
【００９９】
実施形態によっては、キット中の本組成物の構成成分は、溶解された形態、溶解されていない形態、またはそれらの組合せで提供されてもよい。例えば、抗体コンジュゲートは、溶解された形態であってもよく、ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、溶解されていない形態であってもよく、またはその逆であってもよい。溶解されていない状態で存在する場合、その溶解されていない構成成分は、特定の化学量論的な量で溶解された形態で存在する別の構成成分に、使用前に組み合わされてもよい。全ての構成成分が溶解されていない形態で存在する場合、それらの構成成分は、そのままで（例えば経口的に）投与されるか、または投与（例えば静脈内に）の前に溶媒（例えば水）中に溶解されるかのどちらかとすることができる。
【０１００】
本明細書に提供される抗体コンジュゲートおよびＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの実施形態のいずれも、診断のための方法に使用することができる。実施形態によっては、診断のための方法は、限定されないが、試料の状態の評価、疾患の存在の評価などを含む。実施形態によっては、試料は、細胞懸濁液、組織、生検、血液、尿、血漿、リンパ液、唾液、喀痰、脳脊髄液などである。実施形態によっては、試料の状態を診断するための方法は、本明細書に提供される抗体コンジュゲートの実施形態を使用する。実施形態によっては、試料の状態を診断するための方法は、本明細書に提供されるＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの実施形態を使用する。実施形態によっては、試料の状態を診断するための方法は、本明細書に提供される抗体コンジュゲートの実施形態およびＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの実施形態を使用する。
【０１０１】
実施形態によっては、診断のための試料の状態の評価は、免疫組織化学染色、フローサイトメトリー、免疫蛍光法など、当該技術分野に周知の方法を使用して実施される。例えば、実施形態によっては、評価は、試料におけるＳＭＣ１の細胞局在を決定するために実施される。ＳＭＣ１が核のみに局在することは、試料の正常な状態を標示する。これに対し、ＳＭＣ１が核、細胞質膜、および形質膜に局在することは、試料の異常な状態を標示する。実施形態によっては、試料の異常な状態は、腫瘍の存在を標示する。実施形態によっては、試料の異常な状態は、がんの存在を標示する。実施形態によっては、試料の異常な状態は、腫瘍、がん、またはそれらの組合せの存在を標示する。実施形態によっては、試料の異常な状態は、他の疾患状態の存在を標示する。実施形態によっては、本組成物の送達をｉｎ  ｖｉｔｒｏとｉｎ  ｖｉｖｏの両方で使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断ならびにｉｎ  ｖｉｖｏ診断を実施することができる。例えば、実施形態によっては、ｉｎ  ｖｉｖｏで投与される組成物は、当該技術分野に公知の手法および方法（例えばＣＴスキャン、ＰＥＴスキャンなど）を使用したｉｎ  ｖｉｖｏ診断を可能にする放射性核種にコンジュゲーションされた、抗体コンジュゲートを含み得る。
【０１０２】
実施形態によっては、１つまたは複数のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドによる（例えばＲＮＡ分解およびサイレンシングによる）遺伝子の発現の調節は、当該技術分野に周知のアッセイによって決定することができる。非限定的な例としては、ＲＴ−ＰＣＲ、ｑＰＣＲ、リアルタイムＰＣＲ、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションなどが挙げられる。
【０１０３】
以下の実施例は、非限定的であり、当業者によって想定される他のバリアントは、この開示の範囲内に含まれる。
【実施例】
【０１０４】
実施例１−ＳＭＣ１エピトープに対する抗体の生成
ジニトロフェニル−Ｓ−グルタチオン（ＤＮＰ−ＳＧ）アフィニティ樹脂を使用して、ＳＭＣ１を精製する。マウス、ラット、および／またはウサギに精製ＳＭＣ１を接種して（リポソーム調製物として、またはタンパク質としてのどちらかで）、ＳＭＣ１エピトープに対するポリクローナル抗体および／またはモノクローナル抗体を生成する。マウス、ラット、および／またはウサギにＳＭＣ１のペプチド断片（合成されるか、またはＳＭＣ１の酵素分解によって生成されるかのどちらか）を接種して、ＳＭＣ１エピトープに対するポリクローナル抗体および／またはモノクローナル抗体を生成する。ＳＭＣ１エピトープの非限定的な例は、表１に挙げられている。
【０１０５】
実施例２−肺がん細胞におけるＳＭＣ１の局在
参照によりその全体を本明細書に組み込まれる非特許文献１５に記載されている、肺がん細胞株Ａｍ１０１０のおよそ５０，０００個の細胞を、滅菌カバーガラス上で一晩インキュベーションし、標準的な組織培養条件下で、ＳＭＣ１のエピトープ（配列番号１１）に対する抗ＳＭＣ１モノクローナル抗体を１：１００の希釈率で４時間添加した。標準的な組織培養緩衝液を使用したが、この緩衝液は、細胞を透過処理するための試薬（複数可）を含有しなかった［典型的には、細胞を透過処理するために、界面活性洗剤（例えばＴｒｉｔｏｎ  Ｘ１００）が標準組織培養緩衝液に添加されることになる］。その後、細胞を滅菌ＰＢＳで３回洗浄した。次いで、１：１０ヤギ血清を用いて細胞を１時間ブロッキングし、抗マウスＦＩＴＣコンジュゲート抗体を１：５００で１時間用いた。次いで、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、蛍光光学顕微鏡によってイメージングした。「抗体なし」の対照では、シグナルが観察されなかった。これに対し、抗ＳＭＣ１モノクローナル抗体では、細胞膜全体を画定する強いシグナルが観察された。これらのデータは、肺がん細胞株Ａｍ１０１０の非透過処理細胞では、細胞表面でＳＭＣ１が発現することを示唆した。また、肺がん細胞株Ａｍ１０１０の透過処理細胞を用いて染色実験を実施したところ、配列番号１１のエピトープに対する抗ＳＭＣ１モノクローナル抗体では、細胞表面だけではなく核の染色が示された。
【０１０６】
実施例３−乳がん細胞におけるＳＭＣ１の局在
トリプルネガティブ乳がん患者の約７５検体を調製し検討することによって、ＳＭＣ１の局在を決定する。免疫組織化学染色は、商業的に利用可能な抗体ならびに本明細書に開示される抗体を使用し、タンパク質の全長および活性化部分をそれぞれ染色して実施する。免疫組織化学スライドを、乳がんの病理学に専門性を持つ２名の無関係の病理学者が解釈する。その結果は、解釈する病理学者の間で高度な一致を有した。細胞質および膜でのＳＭＣ１タンパク質の存在が、全てのトリプルネガティブ乳がん細胞に観察される。これに対して、ＳＭＣ１は、周囲の健康な間質細胞および上皮細胞の核に限局する。このように、ＳＭＣ１は、悪性の乳房細胞の細胞質中および膜上に局在するが、良性の乳房細胞には局在しない。ＦＡＣＳ解析も使用して、表面でのＳＭＣ１の局在を確かめる。
【０１０７】
実施例４−神経膠芽腫細胞におけるＳＭＣ１の局在
多形神経膠芽腫患者由来の約７５検体を調製し検討することによって、神経膠芽腫細胞におけるＳＭＣ１の局在を決定する。免疫組織化学染色を、ＳＭＣ１の全長に沿ったエピトープに結合する抗ＳＭＣ１ポリクローナル抗体を使用して実施する。免疫組織化学染色スライドを、脳がんの病理学に専門性を持つ２名の無関係の病理学者が解釈する。細胞質および膜でのＳＭＣ１タンパク質の存在が、全ての神経膠芽腫細胞に観察される。これに対して、ＳＭＣ１は、周囲の健康な間質細胞および上皮細胞の核に限局する。このように、ＳＭＣ１は、神経膠芽腫細胞の細胞質中および膜上に局在する。この結果は、解釈する病理学者の間で高度に一致する。ＦＡＣＳ解析も使用して、表面でのＳＭＣ１の局在を確かめる。
【０１０８】
実施例５−悪性細胞に対する選択的な細胞毒性
ＳＭＣ１は、十分に説明されているコヒーシン複合体の構造構成成分であり、有糸分裂における姉妹染色分体の分配に密接に関与する。そのため、悪性細胞でＳＭＣ１の発現を低減することは、おそらくは悪性細胞にとっては健康な細胞よりも毒性となる。一連の細胞毒性実験を、脳がん細胞、肺がん細胞、卵巣がん細胞、および中皮腫細胞を用いて実施する。ＨＵＶＥＣ細胞を対照として使用する。当該技術分野に周知のＭＴＴアッセイおよびＬＤＨアッセイを実施する。ＲＮＡレベルを低減する際のＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドの有効性を、当該技術分野に周知のアッセイ（例えば、ＲＴ−ＰＣＲ、ルシフェラーゼアッセイなど）によって決定する。抗ＳＭＣ１モノクローナル抗体コンジュゲートおよびＳＭＣ１  ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドを使用してＳＭＣ１を標的とすることによって、健康な正常細胞が無傷である一方で、悪性の細胞集団に細胞死がもたらされる。抗ＳＭＣ１モノクローナル抗体コンジュゲートおよびＳＭＣ１  ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドは、健康な細胞を無傷のままとする一方で、悪性の細胞に対して選択的な細胞毒性を示す。
【０１０９】
実施例６−ＰＡＲＰ阻害剤およびシスプラチンとの相乗性
悪性の細胞でＳＭＣ１を低減することによってシスプラチンおよびＰＡＲＰ阻害剤の細胞毒性がおそらくは増強されるという仮説に基づいて、一連の細胞毒性実験を、乳がん細胞、脳がん細胞、肺がん細胞、卵巣がん細胞、および中皮腫細胞を用いて実施する。抗ＳＭＣ１モノクローナル抗体コンジュゲート、ＳＭＣ１  ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチド、ＰＡＲＰ阻害剤、およびシスプラチンの組合せが細胞に及ぼす効果を、ＭＴＴアッセイおよびＬＤＨアッセイを使用して試験する。抗ＳＭＣ１モノクローナル抗体コンジュゲート、ＳＭＣ１  ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチド、ＰＡＲＰ阻害剤、およびシスプラチンの組合せによって、悪性の細胞集団に細胞死の増加がもたらされた。
【０１１０】
実施例７−がん幹細胞集団の優先的な殺傷
がんは、がん幹細胞集団によって維持されることが知られている。がん幹細胞が、抗がん療法に対し最初に完全な応答を示したとしても、がんは不可避的に再発し、その際に通常はさらに高侵襲性の特長を伴う。がん幹細胞集団を標的とすることによって、そのようながんを予防および／または排除し得るものと仮定される。それゆえ、一連の実験は、乳がん細胞、脳がん細胞、肺がん細胞、および卵巣がん細胞について、それらの幹細胞集団を単離し、その幹細胞集団を抗ＳＭＣ１モノクローナル抗体コンジュゲートとＳＭＣ１  ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとの組合せに曝露することによって実施する。抗ＳＭＣ１モノクローナル抗体コンジュゲートとＳＭＣ１  ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとの組合せでは、悪性のがん幹細胞集団での細胞死の増加が観察される。このように、がん幹細胞集団は、抗ＳＭＣ１モノクローナル抗体コンジュゲートおよびＳＭＣ１  ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドによって、優先的に標的とされて殺傷される。
【０１１１】
実施例８−ＳＭＣ１はがん細胞株で過剰発現される
ＲＮＡおよびタンパク質レベルでのＳＭＣ１の発現を、がん細胞株において評価する。腫瘍形成性のない細胞株を対照として使用する。定量的ＲＴ−ＰＣＲによって評価されたＳＭＣ１のｍＲＮＡの発現は、腫瘍形成性のない細胞株に比べて、がん細胞株では約１．５倍から約１５倍高い。ＳＭＣ１タンパク質の発現を、本明細書に開示される抗ＳＭＣ１抗体を使用するウェスタンブロッティングによって評価する。ウェスタンブロットの濃度測定分析では、腫瘍形成性のない細胞株に比べて、がん細胞株では約１．５倍から約１５倍のＳＭＣ１タンパク質の発現の増加を示す。
【０１１２】
実施例９−がん細胞株に対するＳＭＣ１  ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとＰＡＲＰ阻害剤との相乗効果
本明細書に開示されるＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドおよび１つまたは複数のＰＡＲＰ阻害剤を使用した、ＳＭＣ１  ｍＲＮＡの発現の抑制（公知のＲＮＡ分解およびサイレンシング機構による）の組合せががん細胞株に及ぼす効果を評価する。ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドのみおよびＰＡＲＰ阻害剤のみの効果も、公知の標準的な細胞成長アッセイを使用して評価する。ＨＵＶＥＣ細胞を対照として使用する。ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドとＰＡＲＰ阻害剤とを組み合わせる結果、ＰＡＲＰ阻害剤に対するがん細胞株の鋭敏化がもたらされ、それゆえ、供試された細胞株に対するＰＡＲＰ阻害剤のＩＣ５０は、約５倍から約５０倍低減される。
【０１１３】
実施例１０−ＳＭＣ１の発現が細胞遊走に及ぼす効果
ＳＭＣ１の発現の調節ががん細胞株の細胞遊走に及ぼす効果を評価する。ＳＭＣ１を過剰発現するがん細胞株は、効率良く遊走する。ＳＭＣ１の発現を抑制するためにリポソーム中のＳＭＣ１  ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドを用いて、ＳＭＣ１を過剰発現するがん細胞株をトランスフェクションする。ＳＭＣ１の発現を抑制する結果、がん細胞株の遊走の効率は、トランスフェクションされていないがん細胞に比べて低下する。遊走効率は、約１．５倍から約１５倍減少する。
【０１１４】
実施例１１−ＳＭＣ１の発現がビメンチンおよびＥ−カドヘリンに及ぼす効果
ＳＭＣ１の発現の抑制ががん細胞株のビメンチンおよびＥ−カドヘリンに及ぼす効果を評価する。ビメンチンは、上皮間葉転換を制御し、ビメンチンの発現は、腫瘍細胞の運動性および転移の亢進に関連がある。Ｅ−カドヘリンは、基底膜の上皮の表現型を維持するために必要である。ＳＭＣ１の発現を抑制するためにリポソーム中のＳＭＣ１  ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドを用いて、ＳＭＣ１を過剰発現する細胞株をトランスフェクションする。ＳＭＣ１の発現を抑制する結果、約１．５倍から約１５０倍のビメンチンの発現の抑制とＥ−カドヘリンの発現の増強とがもたらされる。
【０１１５】
実施例１２−ＳＭＣ１がコロニー形成に及ぼす効果
ＳＭＣ１の発現の調節が腫瘍形成性細胞株のコロニー形成活性に及ぼす効果を調べる。ＳＭＣ１の発現を抑制するためにリポソーム中のＳＭＣ１  ＬＮＡ改変型オリゴヌクレオチドを用いて、ＳＭＣ１を過剰発現する細胞株をトランスフェクションする。適切な対照を使用する。ＳＭＣ１の枯渇によって、約１０％から約９０％のコロニー形成および足場非依存性成長の減少が引き起こされる。ＴＵＮＥＬアッセイを使用して決定すると、ＳＭＣ１の枯渇によって、約５％から約７５％の腫瘍形成性細胞株のアポトーシスが引き起こされる。
【０１１６】
本明細書に使用される際に、項目の見出しは、構成上の目的のために過ぎず、どのような形であれ、記載される主題を限定するものとして解釈されることはない。この出願に引用される全ての文献および類似の資料は、以下に限定されないが、特許、特許出願、記事、書籍、論文、およびインターネットのウェブページを含めて、参照によりその全体を明示的に組み込まれる。組み込まれた参考文献の用語の定義が、本願の教示に示される定義とは異なるように思われる際に、本願の教示に示される定義は、考慮に入れるものとする。僅かなおよび軽微な逸脱が本明細書中の本願の教示の範囲内にあるものとなるように、本願の教示で議論される温度、濃度、時間などの前には、含意された「約」があることを認識されたい。
【０１１７】
この出願では、別段に特定の明示のない限り、単数の使用は、複数を含む。また、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、および「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の使用は、制限することを意図するものではない。
【０１１８】
この明細書および特許請求の範囲で使用される際に、特段にその内容が明確に指示しない限り、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、複数の言及を含む。
【０１１９】
この開示は、ある種の実施形態および実施例の状況にあるとはいえ、本開示が、具体的に開示される実施形態を超えて、他の代替の実施形態ならびに／または実施形態およびそれらの明らかな改変および等価物の使用に広がることを、当業者は理解するものとなる。さらに、実施形態のいくつかのバリエーションが示されて詳細に記載されている一方で、この開示の範囲内にある他の改変は、この開示に基づいて当業者に容易に明らかとなろう。また、実施形態の特定の特長および態様の様々な組合せまたは準組合せがなされ、本開示の範囲内にやはり含まれ得ることも想定される。開示された実施形態の様々な特長および態様が、本開示の様々なモードまたは実施形態を形成するために、互いに組み合わされ得るか、または置き換えられ得ることが理解されるべきである。それゆえ、本明細書に開示される本開示の範囲は、上に記載された具体的に開示された実施形態によって限定されるべきではないことが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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