(57)【要約】  処理溶液を送達するための方法は、バイオプロセス容器の中に濃縮処理溶液を提供するステップを含み、濃縮処理溶液は第１のサイトで製造される。また、方法は、濃縮処理溶液と、第１のサイトとは異なる第２のサイトのバイオリアクタ内で製造された生体高分子含有溶液とを結合するステップを同じく含む。いくつかの実施例では、処理溶液は、バイオリアクタ内で培養された細胞の産物を処理するための緩衝剤である。方法を実施するためのシステム及び薬剤製造施設が同じく提供される。
2019524125.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
処理溶液を送達するためのシステムであって、
第１のサイトで製造された濃縮処理溶液を含むバイオプロセス容器と、
前記第１のサイトとは異なる第２のサイトに少なくとも１つの処理ユニットを有する処理エリアと、
前記バイオプロセス容器を前記少なくとも１つの処理ユニットに接続するパイプであって、前記バイオプロセス容器から前記少なくとも１つの処理ユニットへの前記濃縮処理溶液の流れを許容し、それにより前記濃縮処理溶液と、前記少なくとも１つの処理ユニット内で製造された生体高分子含有溶液とを結合するバルブを有するパイプと
を備え、前記処理溶液が緩衝剤及び培地のうちの少なくとも１つである、システム。
【請求項２】
前記少なくとも１つの処理ユニットに接続されたコントローラを更に備え、
前記濃縮処理溶液が、前記処理溶液が必要であることが前記コントローラによって決定され、前記決定が前記第２のサイトから前記第１のサイトへ通信されると、前記決定に基づいて提供される、請求項１に記載のシステム。
【請求項３】
前記システムが、前記生体高分子含有溶液との結合に先立って前記濃縮処理溶液を希釈するように構成される、請求項１又は請求項２に記載のシステム。
【請求項４】
前記処理溶液が、トリス、トリス塩基、トリシン、ＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ、ＰＩＰＥＳ、ＴＡＰＳ、ビシン、ＢＥＳ、ＴＥＳ、カコジラート、ＭＥＳ、アセテート、ＭＫＰ、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、グリシンアミド、アセトアミドグリシン、酢酸、クエン酸、グリシン、グリシングリシナート、リン酸ナトリウム、エタノール、塩酸、水酸化ナトリウム、塩化グアニジニウム、塩酸グアニジン、塩化ナトリウム及びこれらの任意の組合せのうちの１つである、請求項１から３までのいずれかに記載のシステム。
【請求項５】
前記バイオプロセス容器が、前記処理溶液を接触させるための内部層、及び前記内部層を支持するように構成された外部層を含む、請求項１から４までのいずれかに記載のシステム。
【請求項６】
前記処理溶液のバイオバーデンを決定するように構成されたコントローラを更に備える、請求項１及び３から５までのいずれかに記載のシステム。
【請求項７】
希釈液サプライを備え、
前記バイオプロセス容器からの前記濃縮処理溶液、及び前記希釈液サプライからの水及び緩衝剤のうちの少なくとも１つがインライン処理溶液希釈システムの入口に加えられ、それにより希釈された処理溶液が得られる、請求項１から６までのいずれかに記載のシステム。
【請求項８】
処理溶液を送達するための方法であって、
バイオプロセス容器の中に濃縮処理溶液を提供するステップであって、第１のサイトで前記濃縮処理溶液が製造される、ステップと、
前記濃縮処理溶液と、前記第１のサイトとは異なる第２のサイトのバイオリアクタ内で製造された生体高分子含有溶液とを結合するステップと
を含み、前記処理溶液が緩衝剤及び培地のうちの少なくとも１つである、方法。
【請求項９】
前記濃縮処理溶液が、前記濃縮処理溶液が必要であることが決定され、且つ、前記決定が前記第２のサイトから前記第１のサイトへ通信されることに基づいて提供される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記生体高分子含有溶液との結合に先立って前記濃縮処理溶液を希釈するステップを更に含む、請求項８又は請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記処理溶液が、トリス、トリス塩基、トリシン、ＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ、ＰＩＰＥＳ、ＴＡＰＳ、ビシン、ＢＥＳ、ＴＥＳ、カコジラート、ＭＥＳ、アセテート、ＭＫＰ、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、グリシンアミド、アセトアミドグリシン、酢酸、クエン酸、グリシン、グリシングリシナート、リン酸ナトリウム、エタノール、塩酸、水酸化ナトリウム、塩化グアニジニウム、塩酸グアニジン、塩化ナトリウム及びこれらの任意の組合せのうちの１つである、請求項８から１０までのいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記バイオプロセス容器が、産物接触のための内部層、及び前記内部層を支持するように構成された外部層を備える、請求項８から１１までのいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記処理溶液のバイオバーデンを決定するステップを更に含む、請求項８から１２までのいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記処理溶液を含む前記バイオプロセス容器を前記第１のサイトから前記第２のサイトへ輸送するステップを更に含む、請求項８から１３までのいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
薬剤製造施設であって、
濃縮処理溶液を含むように構成された少なくとも１つのバイオプロセス容器を受け取ることができる緩衝剤貯蔵エリアと、
少なくとも１つの処理ユニットを有する処理エリアと、
前記緩衝剤貯蔵エリアを前記処理エリアから分離する壁と、
前記緩衝剤貯蔵エリア内に第１の端部を有し、また、前記処理エリア内に第２の端部を有する少なくとも１つのパイプであって、前記第１の端部が、前記少なくとも１つのバイオプロセス容器のうちの少なくとも１つのバイオプロセス容器に接続するように構成され、また、前記第２の端部が、前記少なくとも１つの処理ユニットのうちの少なくとも１つの処理ユニットに接続するように構成されるパイプと
を備える薬剤製造施設。
【請求項１６】
前記少なくとも１つのパイプがバルブを有する、請求項１５に記載の薬剤製造施設。
【請求項１７】
前記少なくとも１つのバイオプロセス容器が、前記処理溶液を接触させるための内部層、及び前記内部層を支持するように構成された外部層を含む、請求項１５又は請求項１６に記載の薬剤製造施設。
【請求項１８】
前記緩衝剤貯蔵エリア内のプラットホームを更に備え、前記プラットホームが、前記少なくとも１つのバイオプロセス容器を支持するように構成され、
前記少なくとも１つのバイオプロセス容器が複数のバイオプロセス容器を含み、
前記プラットホームが、前記複数のバイオプロセス容器のうちの少なくとも１つのバイオプロセス容器を支持するように構成された第１のレベル、及び前記複数のバイオプロセス容器のうちの少なくとも１つのバイオプロセス容器を支持するように構成された第２のレベルを有し、
前記プラットホームが、ユーザによる、フォークリフトを使用した前記プラットホーム上への前記複数のバイオプロセス容器のうちの１つのバイオプロセス容器の据付けを許容するように構成され、また、前記プラットホームが、ユーザによる、前記フォークリフトを使用した前記プラットホームからのそれぞれの前記バイオプロセス容器の除去を許容するように構成される、請求項１５から１７までのいずれかに記載の薬剤製造施設。
【請求項１９】
前記プラットホームに沿って間隔を隔てた複数の入口を更に備え、個々の入口が前記少なくとも１つのパイプに接続され、また、個々の入口が、前記複数のバイオプロセス容器のうちの１つのバイオプロセス容器の出口に接続されるように構成される、請求項１８に記載の薬剤製造施設。
【請求項２０】
前記処理エリアがクリーンルーム環境として構成される、請求項１５から１９までのいずれかに記載の薬剤製造施設。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１６年８月２日に出願した米国仮特許出願第６２／３７０，０４１号の優先権の利益を主張するものであり、この米国仮特許出願は、あらゆる目的のために、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。
【０００２】
本開示は、バイオリアクタ内で培養された細胞の産物を処理するための溶液、例えば、緩衝剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
バイオリアクタは、大量の所望のバイオ製品を製造するために使用されている。バイオ製品を製造するためにバイオリアクタ内で細胞を増殖させた後、バイオ製品を単離し、濃縮するための後続するステップが実施される。これらの処理ステップには、無菌状態を維持し、バイオ製品がその活性を保持していることを保証するために、高価な処理溶液を大量に必要とし得る。バイオ製品を処理するための溶液を製造するためのより費用有効性の高い方法が必要である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１１−０３１２０８７Ａ１号明細書
【特許文献２】米国特許第６，７０３，１９９号
【特許文献３】米国特許第５，２７２，０７１号
【特許文献４】ＷＯ０１／９６５８４
【特許文献５】ＷＯ０１／２９０５８
【特許文献６】米国特許第６，３２６，１９３号
【特許文献７】米国特許第５，６３３，１６２号
【特許文献８】米国公開第２０１３／０２８０７９７号
【特許文献９】米国公開第２０１２／００７７４２９号
【特許文献１０】米国公開第２００９／０３０５６２６号
【特許文献１１】米国特許第８，２９８，０５４号
【特許文献１２】米国特許第７，６２９，１６７号
【特許文献１３】米国特許第５，６５６，４９１号
【特許文献１４】米国特許出願公開第２０１６／００９７０７４号明細書
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｂａｔｚｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．  １９：５０８１  （１９９１）
【非特許文献２】Ｏｈｔｓｕｋａら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６０：２６０５〜２６０８ページ（１９８５）
【非特許文献３】Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉら、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１〜９８ページ（１９９４）
【非特許文献４】Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｓｃａｌｅ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｕｗｅ  Ｇｏｔｔｓｃｈａｌｋ  ２０１１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  ＩＳＢＮ：  １１１８２１０７４３
【非特許文献５】Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｖｏｌ  １  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ、Ｇ．  Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ  ２０１３  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｍｅｄｉａ
【非特許文献６】Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ、Ｇａｒｙ  Ｃ．  Ｈｏｗａｒｄ  ２０００  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ
【非特許文献７】Ｈｏｄｇｅｓらの「Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｆｏｕｒｉｅｒ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍ  Ｒａｍａｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｆｏｒｅｎｓｉｃ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｌｌｉｃｉｔ  Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ｅｘｐｌｏｓｉｖｅｓ，」、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ  ４６：３０３〜３０７頁（１９９０）
【非特許文献８】Ｒｏｄｇｅｒらの「Ｔｈｅ  Ｉｎ−Ｓｉｔｕ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｌｉｐｓｔｉｃｋｓ  ｂｙ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｒａｍａｎ  Ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ，」、Ａｎａｌｙｓｔ  １８２３〜１８２６頁（１９９８）
【非特許文献９】Ｔｈｏｍａｓらの「Ｒａｍａｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｆｏｒｅｎｓｉｃ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｂｌａｃｋ／Ｇｒｅｙ  ａｎｄ  Ｂｌｕｅ  Ｃｏｔｔｏｎ  Ｆｉｂｒｅｓ  Ｐａｒｔ  １：  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｖａｒｙｉｎｇ  Ｌａｓｅｒ  Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ，」、Ｆｏｒｅｎｓｉｃ  Ｓｃｉ．  Ｉｎｔ．  １５２：１８９〜１９７頁（２００５）
【非特許文献１０】Ｓｕｚｕｋｉらの「Ｉｎ  Ｓｉｔｕ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｕｔｏｍｏｔｉｖｅ  Ｐａｉｎｔ  Ｐｉｇｍｅｎｔｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ｌｉｎｅ  Ｓｅｇｍｅｎｔ  Ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ  Ｒａｍａｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ：  Ｉ．  Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｏｐｃｏａｔ  Ｐｉｇｍｅｎｔｓ，」、Ｊ．  Ｆｏｒｅｎｓｉｃ  Ｓｃｉ．  ４６：１０５３〜１０６９頁（２００１）
【非特許文献１１】Ｍａｚｚｅｌｌａらの「Ｒａｍａｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ  ｏｆ  Ｂｌｕｅ  Ｇｅｌ  Ｐｅｎ  Ｉｎｋｓ，」、Ｆｏｒｅｎｓｉｃ  Ｓｃｉ．  Ｉｎｔ．  １５２：２４１〜２４７頁（２００５）
【非特許文献１２】Ｇｒａｓｓｅｌｌｉらの「Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｒａｍａｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ，」、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  （１９８１）
【非特許文献１３】Ｙａｎらの「Ｓｕｒｆａｃｅ−Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｒａｍａｎ  Ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｐｏｒｔａｂｌｅ  Ｒａｍａｎ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ｔｕｎａｂｌｅ  Ｓｅｎｓｏｒ，」、Ｓｅｎｓｏｒｓ  ａｎｄ  Ａｃｔｕａｔｏｒｓ  Ｂ．  ６  （２００７）
【非特許文献１４】Ｅｃｋｅｎｒｏｄｅらの「Ｐｏｒｔａｂｌｅ  Ｒａｍａｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｆｏｒ  Ｆｉｅｌｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ，」、Ｆｏｒｅｎｓｉｃ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ３：（２００１）
【非特許文献１５】Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、Ｊｕｌｉａｎ  Ｗｈｉｔｅｌｅｇｇｅ、２００８年、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ
【非特許文献１６】Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ａｎｄ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｕｓｉｎｇ  Ｔａｎｄｅｍ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｋｉｎｔｅｒ、２００５年、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ
【非特許文献１７】Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｕｓｉｎｇ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、Ｇｕｏｄｏｎｇ  Ｃｈｅｎ、２０１４年、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｍｅｄｉａ
【非特許文献１８】Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  （２０１１）  Ｅｄ．  Ｍｏｈａｍｅｄ  Ａｌ−Ｒｕｂｅａｉ；  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ
【非特許文献１９】Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１２６〜１１３６ページ、２００５
【非特許文献２０】Ｌｅａｄｅｒら、「Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：  ａ  ｓｕｍｍａｒｙ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ」、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２００８、７：２１〜３９ページ
【非特許文献２１】Ｆａｎら、Ｐｈａｒｍ．  Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ．  （２０１３）；  １（５）：４８７〜５０２ページ
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本開示の一態様は、処理溶液を送達するためのシステムに関し、システムは、第１のサイトで製造された濃縮処理溶液を含むバイオプロセス容器と、第１のサイトとは異なる第２のサイトに少なくとも１つの処理ユニットを有する処理エリアと、バイオプロセス容器を少なくとも１つの処理ユニットに接続するパイプであって、バイオプロセス容器から少なくとも１つの処理ユニットへの濃縮処理溶液の流れを許容し、それにより濃縮処理溶液と、少なくとも１つの処理ユニット内で製造された生体高分子含有溶液とを結合させるバルブを有するパイプとを備え、処理溶液は、緩衝剤及び培地のうちの少なくとも１つである。
【０００７】
いくつかの実施例では、システムは、少なくとも１つの処理ユニットに接続されたコントローラを更に含み、濃縮処理溶液は、処理溶液が必要であることがコントローラによって決定され、その決定が第２のサイトから第１のサイトへ通信されると、それに基づいて提供される。
【０００８】
いくつかの実施例では、システムは、生体高分子含有溶液との結合に先立って濃縮処理溶液を希釈するように構成される。
【０００９】
いくつかの実施例では、処理溶液は、トリス、トリス塩基、トリシン、ＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ、ＰＩＰＥＳ、ＴＡＰＳ、ビシン、ＢＥＳ、ＴＥＳ、カコジラート、ＭＥＳ、アセテート、ＭＫＰ、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、グリシンアミド、アセトアミドグリシン、酢酸、クエン酸、グリシン、グリシングリシナート、リン酸ナトリウム、エタノール、塩酸、水酸化ナトリウム、塩化グアニジニウム、塩酸グアニジン、塩化ナトリウム及び／又はこれらの任意の組合せである。
【００１０】
いくつかの実施例では、バイオプロセス容器は、処理溶液を接触させるための内部層、及び内部層を支持するように構成された外部層を含む。
【００１１】
いくつかの実施例では、内部層はポリエチレンであり、また、外部層は、ポリエチレン、ＥＶＯＨ、ナイロン及びＰＶＤＣのブレンドである。
【００１２】
いくつかの実施例では、システムは、処理溶液のバイオバーデンを決定するように構成されたコントローラを含む。
【００１３】
いくつかの実施例では、システムは希釈液サプライを含み、バイオプロセス容器からの濃縮処理溶液及び希釈液サプライからの水及び／又は緩衝剤がインライン処理溶液希釈システムの入口に加えられ、それにより希釈された処理溶液が得られる。
【００１４】
いくつかの実施例では、少なくとも１つの処理ユニットは、複数のバイオリアクタを更に含む。
【００１５】
いくつかの実施例では、システムは複数のバイオプロセス容器を含む。
【００１６】
いくつかの実施例では、処理溶液は緩衝剤である。
【００１７】
本開示の別の態様は、処理溶液を送達するための方法に関し、方法は、バイオプロセス容器の中に濃縮処理溶液を提供するステップであって、第１のサイトで濃縮処理溶液が製造されるステップと、濃縮処理溶液と、第１のサイトとは異なる第２のサイトのバイオリアクタ内で製造された生体高分子含有溶液とを結合するステップとを含み、処理溶液は、緩衝剤及び培地のうちの少なくとも１つである。
【００１８】
いくつかの実施例では、濃縮処理溶液は、濃縮処理溶液が必要であることが決定され、且つ、その決定が第２のサイトから第１のサイトへ通信されることに基づいて提供される。
【００１９】
いくつかの実施例では、方法は、生体高分子含有溶液との結合に先立って濃縮処理溶液を希釈するステップを含む。
【００２０】
いくつかの実施例では、処理溶液は、トリス、トリス塩基、トリシン、ＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ、ＰＩＰＥＳ、ＴＡＰＳ、ビシン、ＢＥＳ、ＴＥＳ、カコジラート、ＭＥＳ、アセテート、ＭＫＰ、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、グリシンアミド、アセトアミドグリシン、酢酸、クエン酸、グリシン、グリシングリシナート、リン酸ナトリウム、エタノール、塩酸、水酸化ナトリウム、塩化グアニジニウム、塩酸グアニジン、塩化ナトリウム及び／又はこれらの任意の組合せである。
【００２１】
いくつかの実施例では、バイオプロセス容器は、産物接触のための内部層、及び内部層を支持するように構成された外部層を備える。
【００２２】
いくつかの実施例では、内部層はポリエチレンであり、また、外部層は、ポリエチレン、ＥＶＯＨ、ナイロン及びＰＶＤＣのブレンドである。
【００２３】
いくつかの実施例では、方法は、処理溶液のバイオバーデンを決定するステップを含む。いくつかの実施例では、バイオバーデンは、高速検出アッセイで決定される。
【００２４】
いくつかの実施例では、方法は、バイオプロセス容器からの濃縮処理溶液及び希釈液サプライからの水及び／又は緩衝剤をインライン処理溶液希釈システムの入口に加え、それにより希釈された処理溶液を得るステップを含む。
【００２５】
いくつかの実施例では、方法は、処理溶液を含むバイオプロセス容器を第１のサイトから第２のサイトへ輸送するステップを含む。
【００２６】
いくつかの実施例では、方法は、バイオ処理溶液をバイオプロセス容器の出口を介して供給し、それにより生体高分子の精製を容易にするステップを含む。
【００２７】
本開示の別の態様は、濃縮処理溶液を含むように構成された少なくとも１つのバイオプロセス容器を受け取ることができる緩衝剤貯蔵エリアと、少なくとも１つの処理ユニットを有する処理エリアと、緩衝剤貯蔵エリアを処理エリアから分離する壁と、緩衝剤貯蔵エリア内に第１の端部を有し、また、処理エリア内に第２の端部を有する少なくとも１つのパイプであって、第１の端部は、少なくとも１つのバイオプロセス容器のうちの少なくとも１つのバイオプロセス容器に接続するように構成され、また、第２の端部は、少なくとも１つの処理ユニットのうちの少なくとも１つの処理ユニットに接続するように構成されるパイプとを備える薬剤製造施設に関している。
【００２８】
いくつかの実施例では、少なくとも１つのパイプはバルブを有する。
【００２９】
いくつかの実施例では、少なくとも１つのバイオプロセス容器は、処理溶液を接触させるための内部層、及び内部層を支持するように構成された外部層を含む。
【００３０】
いくつかの実施例では、特許請求の薬剤製造施設は、緩衝剤貯蔵エリア内のプラットホームを更に含み、プラットホームは、少なくとも１つのバイオプロセス容器を支持するように構成され、少なくとも１つのバイオプロセス容器は複数のバイオプロセス容器を含み、プラットホームは、複数のバイオプロセス容器のうちの少なくとも１つのバイオプロセス容器を支持するように構成された第１のレベル、及び複数のバイオプロセス容器のうちの少なくとも１つのバイオプロセス容器を支持するように構成された第２のレベルを有し、プラットホームは、ユーザによる、フォークリフトを使用したプラットホーム上への複数のバイオプロセス容器のうちの１つのバイオプロセス容器の据付けを許容するように構成され、また、プラットホームは、ユーザによる、フォークリフトを使用したプラットホームからのそれぞれのバイオプロセス容器の除去を許容するように構成される。
【００３１】
いくつかの実施例では、薬剤製造施設は、プラットホームに沿って間隔を隔てた複数の入口を更に含み、個々の入口は少なくとも１つのパイプに接続され、また、個々の入口は、複数のバイオプロセス容器のうちの１つのバイオプロセス容器の出口に接続されるように構成される。
【００３２】
いくつかの実施例では、処理エリアは、クリーンルーム環境として構成される。
【００３３】
一態様では、本発明は、方法、例えばバイオリアクタ処理溶液を送達する方法、又は生体高分子含有溶液を形成する方法を提供する。方法は、濃縮処理溶液を提供するステップ（例えば受け取るステップ）と、濃縮処理溶液と、例えばバイオリアクタ内で製造された生体高分子含有溶液とを結合し、それにより生体高分子含有溶液を形成するステップとを含む。
【００３４】
実施例では、濃縮処理溶液は、少なくとも２０リットルの単位、約２０リットルから２０００リットルの単位、例えば７５リットル、１００リットル、１２５リットル、２５０リットル、５００リットル、１０００リットル、１２５０リットル、１５００リットル、１７５０リットル、１８２５リットル、１９００リットル又は２０００リットルの単位で提供される。
【００３５】
実施例では、生体高分子含有溶液は、以下の「治療製品及び例示的な産物、例えば二重特異性分子」という名称の表からの生体高分子を含む。
【００３６】
実施例では、生体高分子は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ：Ｃｈｉｎｅｓｅ  ｈａｍｓｔｅｒ  ｏｖａｒｙ）細胞でできている。一実施例では、細胞は、ＣＨＯ−Ｋ１細胞、ＣＨＯ−Ｋ１  ＳＶ細胞、ＤＧ４４  ＣＨＯ細胞、ＤＵＸＢ１１  ＣＨＯ細胞、ＣＨＯＳ、ＣＨＯ  ＧＳノックアウト細胞、ＣＨＯ  ＦＵＴ８  ＧＳノックアウト細胞、ＣＨＯＺＮ又はＣＨＯ誘導細胞である。ＣＨＯ  ＧＳノックアウト細胞（例えばＧＳＫＯ細胞）は、例えばＣＨＯ−Ｋ１ＳＶ  ＧＳである。
【００３７】
実施例では、処理溶液は、１つ又は複数のバイオプロセス容器の中に提供される。
【００３８】
実施例では、処理溶液は、１つ又は複数のバイオプロセス容器の中に提供され、且つ、単一の希釈のために使用される。
【００３９】
実施例では、方法は、パラメータのための値を提供するステップと、任意選択でその値を基準に対して比較するステップとを含む。
【００４０】
実施例では、評価は第１のサイトで実施され、また、バイオリアクタは第２のサイトに配置される。
【００４１】
実施例では、評価はバイオリアクタのサイトで実施される。
【００４２】
実施例では、方法は、生体高分子含有溶液との結合に先立って濃縮処理溶液を希釈するステップを含む。
【００４３】
実施例では、処理溶液は、第１のサイトで出荷又は製造され、また、バイオリアクタは第２のサイトに配置される。
【００４４】
実施例では、処理溶液は、緩衝剤、例えばトリス、トリシン、ＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ、ＰＩＰＥＳ、ＴＡＰＳ、ビシン、ＢＥＳ、ＴＥＳ、カコジラート、ＭＥＳ、アセテート、ＭＫＰ、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、グリシンアミド及びアセトアミドグリシン又は酢酸或いは類似を含む。
【００４５】
実施例では、バイオプロセス容器は、産物接触のための内部層及び外部層を備える。
【００４６】
実施例では、内部層はポリエチレンである。
【００４７】
実施例では、外部層は、ポリエチレン、ＥＶＯＨ、ナイロン及び／又はＰＶＤＣのブレンドである。
【００４８】
いくつかの実施例では、方法は、処理溶液のバイオバーデンを決定するステップを含む。
【００４９】
実施例では、方法は、処理溶液サプライからの濃縮バイオ処理溶液（濃縮処理溶液）及び水／緩衝剤サプライからの水又は緩衝剤をインラインバイオ処理溶液希釈システムの入口に加え、それにより希釈されたバイオ処理溶液を得るステップを含む。
【００５０】
実施例では、方法は、バイオ処理溶液をバイオプロセス容器の出口を介して供給し、それにより生体高分子の精製を容易にするステップを含む。
【００５１】
また、本発明によれば、バイオ処理溶液を送達するためのシステムが同じく提供される。システムは、第１のサイトで製造された濃縮処理溶液を提供することと、濃縮生体高分子含有溶液と、第２のサイトのバイオリアクタ内で製造された生体高分子含有溶液とを結合することとを含む。
【００５２】
実施例では、濃縮バイオ処理溶液は、濃縮バイオ処理溶液が必要であることが決定され、且つ、その決定が第２のサイトから第１のサイトへ通信されることに基づいて提供される。
【００５３】
本発明の利点は、とりわけ、下流側処理溶液の製造をバイオリアクタ内の生物学の生産から切り離す能力である。これは、バイオプロセス容器（「ＢＰＣ：ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ  ｃｏｎｔａｉｎｅｒｓ」ａｋａ緩衝剤バッグ又はトート）に貯蔵された緩衝剤濃縮物の使用と相俟って、生物学製造とは離れた場所でのプロセス中間物の製造の準備を許容する。これは生産コストを低減する。延長された安定時間は、ＧＭＰペーパワークの精査及びリリースを許容する。したがってＧＭＰエラー又は品質試験の失敗の影響を受けた製造過程の中間物を拒絶することができ、したがって生物学製造に対する危険を取り除くことができる。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】バイオリアクタ準備エリアの従来技術による配置を示す略図である。
【図２】本開示による緩衝剤準備配置の一実施例を示す略図である。
【図３】本開示による方法の一実施例を示すブロック図である。
【図４Ａ】バイオプロセス容器の外部層の一実施例を示す斜視図である。
【図４Ｂ】その側面図である。
【図４Ｃ】その背面図である。
【図４Ｄ】その側面図である。
【図４Ｅ】その正面図である。
【図４Ｆ】その上面図である。
【図５】バイオプロセス容器の外部層の別の実施例を示す側面図である。
【図６Ａ】プラットホームの一実施例を示す正面図である。
【図６Ｂ】その側面図である。
【図７Ａ】薬剤製造施設における緩衝剤貯蔵エリアの一実施例を示す側面図である。
【図７Ｂ】その正面図である。
【図７Ｃ】その上面図である。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
本発明は、バイオリアクタを含む大規模発現ベッセルの生物学的産物を濃縮し、精製するための費用有効性の高い処理溶液を提供する。
【００５６】
生物学的生産は、典型的には２つの主生産ステージを含む。第１のステージは生物学的産物製造ステージであり、生物学的産物、典型的にはポリペプチド又はタンパク質などの生体高分子が製造される。生体高分子は、典型的には、微生物発酵作用、生体内変化又は哺乳動物細胞培養を使用して合成される。バイオリアクタ発現システムは、例えば米国特許出願公開第２０１１−０３１２０８７  Ａ１号明細書に記載されている。
【００５７】
第２のステップは、生物学的産物を精製するステップを含み、製品が不純物、例えば細胞残骸、不要な生体高分子、ＤＮＡ培地成分及び異化代謝産物から分離される。第２のステップには、可能な範囲まで生物学的産物の望ましい活性を維持する大量の生物学的適合性溶液が必要である場合があり、生物学的産物と生物学的適合性がない場合、不純物を選択的に除去するために多くの下流側処理ステージ（ユニット操作）が実行される。これらのユニット操作の間、サイズ排除濾過、クロマトグラフィー、ｐＨ不活性化、再折り畳み、接線流濾過、等々を含む多くの技術が使用される。これらのユニット操作を容易にするために、標的分子の物理化学的環境（例えばｐＨ、導電率）を変える多くの異なる水溶液（緩衝剤）が使用される。
【００５８】
図１は、バイオリアクタ準備エリア１０の従来技術による配置を示したものである。緩衝剤準備ベッセル１２を有する緩衝剤準備エリアは、緩衝剤保持タンク１４及び携帯型トート１６を有する緩衝剤貯蔵エリアの物理的に近傍に位置している。また、緩衝剤準備エリアの緩衝剤準備ベッセル１２も、クロマトグラフィーコラム１８などの下流側処理ユニットを有する下流側処理エリアの物理的に近傍に位置している。パイプ２０は、緩衝剤準備ベッセル１２を緩衝剤保持タンク１４及び携帯型トート１６に接続している。別のパイプ２２は、緩衝剤保持タンク１４を下流側処理エリア内の下流側処理ユニット１８に接続している。更に別のパイプ２４は、携帯型トート１６を下流側処理エリア内の下流側処理ユニット１８に接続している。この配置は、高価で、且つ、時間を消費する配置であり、長いリード試験及び／又はＧＭＰ記録（バッチ記録）の精査及びリリースが完了する前に、製造過程材料が使用されることになる。緩衝剤の備蓄は、大量のＧＭＰ処理空間を占有する。
【００５９】
一方、図２は、本開示による、処理溶液を送達するためのシステム１００の一実施例を示したものである。図に示されているように、システム１００は、第２のサイト１０８における下流側処理エリア１０６とは全く異なる緩衝剤準備エリア１０２を第１のサイト１０４に含む。いくつかの実施例では、第１のサイト１０４はキャンパス又は建物であり、また、第２のサイト１０８は、第１のサイト１０４のキャンパス又は建物とは全く異なるキャンパス又は建物である。緩衝剤準備エリア１０２及び下流側処理エリア１０６は、１つのより大きいエリア、例えば工場又は製造サイト内であってもよく、溶液の安定性又は活性に悪影響を及ぼすことなく濃縮溶液を下流側処理エリアに送達することができる限り、近接している必要はない。溶液のスケジューリング、調合及び引渡しを実施して、それらの意図された使用時に、又はその直前に溶液を準備することができる。更に、本開示による配置によれば、バイオリアクタを含む高い値の位置で準備することが好ましいと思われる下流側処理溶液を低い値の位置で実施することができる。また、この配置は、バイオリアクタのサイトにおける貯蔵空間を小さくする。
【００６０】
図２では、緩衝剤準備エリア１０２は、少なくとも２つの緩衝剤準備ベッセルを含み、それぞれ１１０で示されている。緩衝剤準備ベッセル１１０は、少なくとも１つのパイプ（又は少なくとも１つのマニホルド）１１２によって、緩衝剤貯蔵エリア１１６内のそれぞれ１１４で示されているいくつかの貯蔵タンク（又はトート）に接続されている。また、緩衝剤貯蔵エリア１１６は、既に充填済みで、且つ、マニホルドから切り離された少なくとも１つのトート１１４を同じく含み、したがって第２のサイト１０８への輸送の準備が整っている。
【００６１】
緩衝剤準備ベッセル１１０は処理溶液を製造するのに有用である。いくつかの実施例では、処理溶液は、トリス、トリシン、ＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ、ＰＩＰＥＳ、ＴＡＰＳ、ビシン、ＢＥＳ、ＴＥＳ、カコジラート、ＭＥＳ、アセテート、ＭＫＰ、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、グリシンアミド及びアセトアミドグリシン又は酢酸、或いは表６〜９に示されている緩衝剤などの緩衝剤である。
【００６２】
個々のトート１１４は、濃縮処理溶液を接触させるための内部層即ちライナー１１８、及び内部層を支持する外部層即ちボディ１２０を含む。いくつかの実施例では、内部層１１８はポリエチレンでできている。いくつかの実施例では、外部層１２０は、ポリエチレン、エチレンビニルアルコール（ＥＶＯＨ）、ナイロン及びポリ塩化ビニリデン（ＰＶＤＣ）のブレンドである。いくつかの実施例では、個々のトート１１４はプラスチックでできている。いくつかの実施例では、個々のトート１１４は、ガンマ放射によって殺菌することができる。
【００６３】
いくつかの実施例では、個々のトート１１４は、トート内に含まれている処理溶液の一カ月間の保存可能期間を保証するように構成される。いくつかの実施例では、個々のトート１１４は、トート内に含まれている処理溶液の三カ月間の保存可能期間を保証するように構成される。いくつかの実施例では、個々のトート１１４は、トート内に含まれている処理溶液の六カ月間の保存可能期間を保証するように構成される。いくつかの実施例では、個々のトート１１４は、トート内に含まれている処理溶液の一年間の保存可能期間を保証するように構成される。
【００６４】
いくつかの実施例では、個々のトート１１４は、１，０００リットル（Ｌ）の体積を有する。いくつかの実施例では、個々のトート１１４は、画定された形状をトート１１４の側壁に外部支持を必要とすることなく保持することができる剛直な外部層１２０を有する。
【００６５】
緩衝剤貯蔵エリア１１６では、ユーザは、パレットなどの出荷構造の上に１つ又は複数のトート１１４を置く。一実施例では、パレット上に支持されたパッケージ済みトートは、１２２ｃｍ（４フィート）×１２２ｃｍ（４フィート）×１２２ｃｍ（４フィート）の立方体の出荷ユニット１２２を形成する。ユーザは、１つ又は複数の出荷ユニット１２２をトラックなどの車両１２４に積み込む。ユーザは、第１の施設（第１のサイト）１０４の緩衝剤貯蔵エリア１１６から、矢印Ａに沿って、下流側処理エリア１０６を収容している第２の施設（第２のサイト）１０８まで車両１２４を運転する。
【００６６】
第２の施設１０８では、ユーザは、車両１２４から矢印Ｂに沿って出荷ユニット１２２を下ろす。次に、ユーザは、第２のサイト１０８内の第２の緩衝剤貯蔵エリア１２６にトート１１４を置く。
【００６７】
第２の施設１０８は、下流側処理エリア１３０内に配置された少なくとも１つのバイオリアクタ１２８を含む。いくつかの実施例では、下流側処理エリア１３０はクリーンルームである。図に示されている実施例では、それぞれ１３２で示されている２つのパイプは、第２の緩衝剤貯蔵エリア１２６内に配置されたトート（バイオプロセス容器）１１４を下流側処理エリア１３０内に配置されたバイオリアクタ１２８に接続している。図に示されているように、個々のパイプ１３２は、第２の緩衝剤貯蔵エリア１２６を下流側処理エリア１３０から分離している下流側処理エリア１３０の壁１３６の中、又は壁１３６に隣接して位置決めされたバルブ１３４を含む。壁１３６の中、又は壁１３６に隣接するパイプ１３２及びバルブ１３４により、濃縮処理溶液をバイオプロセス容器１１４からバイオリアクタ１２８へ流すことができ、それにより濃縮処理溶液と、バイオリアクタ１２８内で製造された生体高分子含有溶液とを結合することができる。
【００６８】
上で言及したように、壁１３６は、クリーンルームとして形成される下流側処理エリア１３０を、必ずしもクリーンルームである必要はない第２の貯蔵エリア１２６から分離している。バルブ１３４は、バルブへの１つ又は複数のトート１１４のクリーンルーム迎合接続を許容し、バイオリアクタ１２８を汚染する危険を最小化する。
【００６９】
いくつかの実施例では、個々のバルブ１３４は、第２のサイト１０８の天井から垂れ下がっている。
【００７０】
下流側処理エリア１０６に処理溶液が必要である場合、パイプ１３２を介して下流側処理エリア１０６内の下流側処理ユニット１２８へ処理溶液がポンプ供給されるか、さもなければトート１１４から移動される。
【００７１】
いくつかの実施例では、第２のサイト１０８は、１つ又は複数のトート１１４への接続が可能な複数のバイオリアクタ１２８（又は他の下流側処理ユニット）を含む。いくつかの実施例では、１つのトート１１４のみが使用される。
【００７２】
いくつかの実施例では、第２のサイト１０８は、１つ又は複数のバイオリアクタ１２８に現在接続されている少なくとも１つのトート１１４、並びに１つ又は複数のバイオリアクタ１２８に未だ接続されていない少なくとも１つのトート１１４を含む。これは、第２のサイト１０４のユーザがトート１１４内に含まれている処理溶液のバックアップサプライを有することを保証する。
【００７３】
バイオリアクタ１２８はコントローラ１４０に接続されている。いくつかの実施例では、コントローラ１４０は、第２のサイト１０８の１つ又は複数のバイオリアクタ１２８が１つ又は複数のトート１１４内に含まれている処理溶液を必要としていることを決定するように構成される。コントローラ１４０は、次に、この決定を第１のサイト１０４内のコントローラ１４２に通信する。この決定のこの通信により、第２のサイト１０８における処理溶液の不足が防止される。
【００７４】
いくつかの実施例では、コントローラ１４０は、処理溶液のバイオバーデンを決定するように構成される。例えばバイオバーデンは、高速検出アッセイで決定することができる。いくつかの実施例では、バイオバーデンは、Ｒａｍａｎ分光写真術高速検出アッセイで決定される。
【００７５】
システム１００は、生体高分子含有溶液との結合に先立って濃縮処理溶液を希釈するように構成される。これは、システム１００による、バイオリアクタ１２８に提供される溶液のｐＨなどのパラメータの調整を許容する。システム１００は、トート１１４の形態の処理溶液サプライを含む。また、システム１００は希釈液サプライ１４４を同じく含む。いくつかの実施例では、希釈液は水及び／又は緩衝剤であってもよい。トート１１４からの濃縮処理溶液及び希釈液サプライ１４４からの水又は緩衝剤は、パイプ１３２に沿ったインライン処理溶液希釈システム１４６の入口に加えられ、それにより、バイオリアクタ１２８の入口に提供される希釈された処理溶液が得られる。
【００７６】
図２には１つのバイオリアクタ１２８しか示されていない。本開示の範囲を逸脱することなく、もっと多くのバイオリアクタを第２のサイト１０８に含むことも可能である。いくつかの実施例では、第２のサイト１０８内のバイオリアクタ１２８は精製のために有用である。いくつかの実施例では、第２のサイト１０８内のバイオリアクタ１２８は、少なくとも１つのクロマトグラフィーコラムを含む。
【００７７】
次に図３を参照すると、本開示は、処理溶液を送達するための方法３００を提供する。図３では、処理溶液を送達するための方法３００の例示的な一実施例は、３０２で、第１のサイトで濃縮処理溶液を製造するステップを含む。いくつかの実施例では、処理溶液は緩衝剤である。
【００７８】
いくつかの実施例では、緩衝剤は、トリス、トリシン、ＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ、ＰＩＰＥＳ、ＴＡＰＳ、ビシン、ＢＥＳ、ＴＥＳ、カコジラート、ＭＥＳ、アセテート、ＭＫＰ、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、グリシンアミド及びアセトアミドグリシン又は酢酸、或いは表６〜９に示されている緩衝剤である。
【００７９】
いくつかの実施例では、３０４で方法３００は、処理溶液のバイオバーデンを決定する。ステップ３０４は、図２のコントローラ１４０などのコントローラによってその全体又は一部を実施することができる。ステップ３０４で方法３００は、処理溶液が品質規格に合致していることを決定する。これは、ユーザによる、バイオリアクタ（又は他の下流側処理ユニット）からの製品が汚染される危険の低減を許容する。任意のバイオバーデン試験方法を実現することができる。いくつかの実施例では、バイオバーデンは、高速検出アッセイで決定することができる。いくつかの実施例では、バイオバーデンは、Ｒａｍａｎ分光写真術高速検出アッセイで決定される。いくつかの実施例では、バイオバーデン試験は、処理溶液製造サイト又は処理溶液が使用される第２のサイトのいずれかで実施されるインライン試験又はアットライン試験であってもよい。
【００８０】
３０６で方法３００は、濃縮処理溶液が第２のサイトで必要であることを決定する。３０８で方法は、この決定を第２のサイトから第１のサイトへ通信する。ステップ３０６におけるこの決定は、第２のサイトのバイオリアクタに接続されている、図２に示されているコントローラ１４０などのコントローラによって実施することができる。次に、この決定に基づいて濃縮処理溶液が第２のサイト１０８に提供される。
【００８１】
３１０で方法３００は、第１のサイトで製造された濃縮処理溶液をバイオプロセス容器の中に提供する。いくつかの実施例では、ステップ３１０は、処理溶液を含む１つ又は複数のバイオプロセス容器を第１のサイトから第２のサイトへ輸送するステップを含む。
【００８２】
いくつかの実施例では、バイオプロセス容器は、プロセス溶液を接触させるための内部層及び外部層を含む。いくつかの実施例では、内部層はポリエチレンである。いくつかの実施例では、外部層は、ポリエチレン、ＥＶＯＨ、ナイロン及びＰＶＤＣのブレンドである。
【００８３】
３１２で方法３００は、生体高分子含有溶液との結合に先立って濃縮処理溶液を希釈するステップを含む。例えばいくつかの実施例では、方法３００のステップ３１２は、処理溶液サプライからの濃縮処理溶液及び水／緩衝剤サプライからの水又は緩衝剤をインライン処理溶液希釈システムの入口に加え、それにより希釈された処理溶液を得るステップを含む。
【００８４】
３１４で方法３００は、濃縮処理溶液と、第１のサイトとは異なる第２のサイトのバイオリアクタ内で製造された生体高分子含有溶液とを結合する。
【００８５】
本開示の構成、システム及び方法は、拡張された安定データを提供し、且つ、プロセス中間物の長期間にわたる貯蔵を許容する。これは、オペレータによる、生物学的産物を処理するために使用される中間物の製造からの生物学的産物の製造の切り離しを許容する。本開示の他の利点は、本開示によれば、生物学製造のサイトから離れたサイトで濃縮緩衝剤溶液を製造することができることである。低い値の製造施設で濃縮緩衝剤を製造することができ、したがってバイオリアクタによって占有される高い値の製造施設における空間を解放する。生産コストの低減に加えて、延長された安定時間は、ＧＭＰペーパワークの精査及びリリースを許容する。ＧＭＰエラー又は品質試験の失敗、等々の影響を受けたプロセス中間物を拒絶することができ、したがって生物学製造に対する危険を取り除くことができる。
【００８６】
遠隔準備エリアからＢＰＣ中に供給される濃縮緩衝剤、インライン希釈及び緩衝剤溶液のための長期満了時間が相俟った使用により、危険を負った緩衝剤サプライ戦略がより安価になり、且つ、危険がより少なくなる。
【００８７】
本開示のシステム及び方法は、様々なバイオプロセス容器を使用することができる。図４Ａ〜４Ｆは、バイオプロセス容器の一実施例の４００で一括して示されている外部層を示したものである。外部層４００は、内部層内に緩衝剤を含むためのバッグなどの内部層を支持するために使用することができる。バイオプロセス容器の外部層４００の下部端は、フォークリフトによって持ち上げることができる部分を含む。図４Ａは、バイオプロセス容器の斜視図を示したものである。
【００８８】
図４Ｂでは、バイオプロセス容器は１２６４ミリメートルの全体高さＣを有している。図４Ｃは、バイオプロセス容器の外部層４００に蓋が固着されると１２８７ミリメートルの高さＤを有するバイオプロセス容器の別の面を示したものである。
【００８９】
バイオプロセス容器の下部端はフォークリフトによる係合が可能であり、凹所４０８、４１０を画定するベース部分４０２、４０４、４０６を含む。凹所４０８、４１０の各々は１３５ミリメートルの高さＥを有している。第１の凹所４０８は３１０ミリメートルの幅Ｆを有している。第２の凹所４１０は３１０ミリメートルの幅Ｈを有している。第１のベース部分４０２は１６０ミリメートルの幅Ｇを有している。第２のベース部分４０４は１８０ミリメートルの幅Ｉを有している。
【００９０】
図４Ｆでは、バイオプロセス容器の外部層４００の上面図は、１１４０ミリメートルの長さＪ及び１１４０ミリメートルの幅Ｋを有している。バイオプロセス容器の外部層４００の内部体積は、内部長さＬ及び内部幅Ｍによって画定される。内部長さＬは１０５６ミリメートルであり、また、内部幅Ｍは１０３８ミリメートルである。
【００９１】
ポート４１２は、プロセス溶液をバイオプロセス容器から分配するためにバイオプロセス容器の外部層４００の中に画定されている。ポート４１２は９７ミリメートルの直径Ｒを有している。ポート４１２は、バイオプロセス容器の外部層４００の第１の内部表面４１４から、１７１ミリメートルである寸法Ｑだけオフセットしている。ポート４１２は、バイオプロセス容器の外部層４００の第２の内部表面４１６から、１８１ミリメートルである寸法Ｓだけオフセットしている。ポート４１２は、第１の外部表面４１８から、２２２ミリメートルである寸法Ｐだけオフセットしている。ポート４１２は、第２の外部表面４２０から、２２２ミリメートルである寸法Ｏだけオフセットしている。
【００９２】
いくつかの実施例では、バイオプロセス容器の内部層（バッグ）は、外部層４００のポート４１２を貫通してねじ止めされる出口配管を含む。
【００９３】
図５は、バイオプロセス容器の５００で一括して示されている外部層の別の実施例を示したものである。図５では、バイオ処理ユニットの外部層５００は、５９３ミリメートルの高さＵ及び１１４０ミリメートルの幅Ｖを有している。バイオ処理ユニットの外部層５００及び外部層５００に固着される蓋の高さＴは６１７ミリメートルである。
【００９４】
いくつかの実施例では、バイオプロセス容器は追跡システムを含む。例えばいくつかの実施例では、バイオプロセス容器は、出荷受取りの間、バイオプロセス容器の追跡及び管理を容易にするためにバイオプロセス容器の外部層４００に貼り付けられたＲＦＩＤタグ４２２（図４Ａ）を含む。複数のバイオプロセス容器の上にそれぞれのＲＦＩＤタグ４２２を含むことにより、ユーザは、バイオプロセス容器の在庫管理をより容易に管理することができ、また、バイオプロセス容器に含まれている処理溶液の品質をより容易に監視することができる。
【００９５】
図６Ａは、バイオプロセス容器６０２を支持して緩衝剤貯蔵エリア６０４を編成するための、６００で一括して示されているプラットホームの一実施例の正面図を示したものである。プラットホーム６００は、少なくとも１つのバイオプロセス容器６０２を支持するように構成されている。このプラットホーム６００を使用して、図２の緩衝剤貯蔵エリア１２６などの緩衝剤貯蔵エリアの他の実施例におけるバイオプロセス容器を支持することができる。
【００９６】
プラットホーム６００は、少なくとも１つのバイオプロセス容器６０２を支持するように構成された第１のレベル６０６、及び少なくとも１つのバイオプロセス容器６０２を支持するように構成された第２のレベル６０８を有している。プラットホーム６００は、ユーザによる、フォークリフトを使用したプラットホーム６００上へのバイオプロセス容器６０２の据付けを許容するように構成されている。また、プラットホーム６００は、ユーザによる、フォークリフトを使用したプラットホーム６００からのそれぞれのバイオプロセス容器６０２の除去を許容するように構成されている。
【００９７】
第１のレベル６０６は、６１ｃｍ（２フィート）である高さＡＡだけ地面からオフセットしている。プラットホームは、それぞれ６１０で示されている、５．１ｃｍ（２インチ）の高さＡＢを有する脚によって支持されている。それぞれ６１２で示されている支柱は、脚６１０から上に向かって伸びており、また、第１のレベル６０６及び第２のレベル６０８を支持している。
【００９８】
図６Ａでは、バイオプロセス容器６０２の下部部分は、２つの凹所６２０、６２２を画定している３つのベース部分６１４、６１６、６１８を含む。凹所６２０、６２２は、プラットホーム６００の正面からそれぞれのバイオプロセス容器６０２にアクセスすることにより、ユーザによる、個々のバイオプロセス容器６０２を持ち上げるためのフォークリフトの操作を許容する。
【００９９】
凹所６２０、６２２は、１３．５ｃｍ（５・５／１６インチ）の高さＡＣを有している。第１のベース部分６１４は、１８．１ｃｍ（７・１／８インチ）の幅ＡＤを有している。第２のベース部分６１６は、４９．１ｃｍ（１フィート７・５／１６インチ）の距離ＡＥだけバイオプロセス容器６０２の側面からオフセットしている。第２のベース部分６１６は、１５．９ｃｍ（６・１／４インチ）の幅ＡＦを有している。第３のベース部分６１８は、９５．９ｃｍ（３フィート１・３／４インチ）の距離ＡＧだけバイオプロセス容器６０２の側面からオフセットしている。第３のベース部分６１８は、１８．１ｃｍ（７・１／８インチ）の幅ＡＨを有している。
【０１００】
個々のバイオプロセス容器６０２は、１２９．５ｃｍ（４フィート３インチ）の高さＡＩ及び１１４ｃｍ（３フィート８・７／８インチ）の幅ＡＪを有している。プラットホーム６００の第２のレベル６０８上のバイオプロセス容器６０２と緩衝剤貯蔵エリア６０４の天井との間のクリアランスＡＫは１６．５ｃｍ（６．５インチ）である。プラットホーム６００の第２のレベル６０８上のバイオプロセス容器６０２の上部縁６２６の全体の高さＡＬは、地面６２８から３４８ｃｍ（１１フィート５インチ）である。天井６２４の高さＡＭは、地面６２８から３６４．５ｃｍ（１１フィート１１．５インチ）である。
【０１０１】
第１のレベル６０６上のバイオプロセス容器６０２は、支柱６１２と支柱６１２の間に位置決めされており、したがってバイオプロセス容器６０２と、これらの支柱６１２のうちの少なくとも１つとの間には７．６ｃｍ（３インチ）のクリアランスＡＮが存在している。第２のレベル６０８の下部表面６３０と、第１のレベル６０６上に位置決めされているバイオプロセス容器６０２の上部表面６３２の間には、１６．２ｃｍ（６・３／８インチ）のクリアランスＡＯが存在している。
【０１０２】
図６Ｂは、図６Ａのプラットホーム６００の側面図を示したものである。図６Ｂは、バイオプロセス容器が１１４ｃｍ（３フィート８・７／８インチ）の奥行きＡＰを有していることを示している。
【０１０３】
本開示の一態様は、濃縮処理溶液を含むように構成された少なくとも１つのバイオプロセス容器を受け取ることができる緩衝剤貯蔵エリアと、少なくとも１つの処理ユニットを受け取ることができる処理エリアと、緩衝剤貯蔵エリアを処理エリアから分離する壁とを有する薬剤製造施設に関している。施設は、緩衝剤貯蔵エリア内に第１の端部を有し、また、処理エリア内に第２の端部を有する少なくとも１つのパイプを同じく含む。第１の端部は、少なくとも１つのバイオプロセス容器に接続するように構成され、また、第２の端部は、少なくとも１つの処理ユニットに接続するように構成される。いくつかの実施例では、処理エリアはクリーンルーム環境として構成される。
【０１０４】
図７Ａは、薬剤製造施設に含めることができる、一括して７００で示されている緩衝剤貯蔵エリアを示したものである。緩衝剤貯蔵エリア７００は、複数のバイオプロセス容器７０４を支持するためのプラットホーム７０２を含む。
【０１０５】
個々のバイオプロセス容器７０４は、処理溶液を接触させるための内部層、及び内部層を支持するように構成された外部層を含む。個々のバイオプロセス容器７０４は、本明細書において示され、且つ、説明されている実施例のうちの任意の実施例のバイオプロセス容器であってもよい。
【０１０６】
図７Ａは、プラットホームに隣接するユーザ歩道７０８からユーザ７０６がバイオプロセス容器７０４にアクセスすることができる様子を示している。
【０１０７】
薬剤施設は、緩衝剤貯蔵エリア７００内に第１の端部を有し、また、本明細書における様々な実施例に関連して説明されている処理エリアなどの処理エリア内に第２の端部を有する少なくとも１つのパイプを含む。個々のパイプの第１の端部は、少なくとも１つのバイオプロセス容器７０４に接続するように構成され、また、第２の端部は、処理エリア内の少なくとも１つの処理ユニットに接続するように構成される。図２に関連して説明したように、個々のパイプはバルブを含むことができる。
【０１０８】
図７Ｂは、緩衝剤貯蔵エリア７００が、プラットホーム７０２の長さに沿って間隔を隔てた、それぞれ７１０で示されている複数の入口を含むことを示している。個々の入口７１０はパイプに接続されている。個々の入口７１０は、バイオプロセス容器の出口に接続されるように構成されている。入口７１０及びパイプは、バイオプロセス容器７０４のうちの１つ又は複数から処理エリア内の処理ユニットへの緩衝剤の流れを許容する。
【０１０９】
もう一度補足的に図７Ａを参照すると、プラットホーム７０２は、緩衝剤貯蔵エリア７００の床７１６と天井７１８の間のプラットホーム７０２の第１のレベル７１２上、及びプラットホームの第２のレベル７１４上でバイオプロセス容器７０４を支持している。プラットホーム７０２は、ユーザ７０６による、緩衝剤貯蔵エリア７００の空間を有効に使用する方法、及びユーザによる、フォークリフトを使用したプラットホーム７０２上へのバイオプロセス容器７０４の据付け、及びプラットホーム７０２からのバイオプロセス容器７０４の除去を許容する方法でのバイオプロセス容器７０４の編成を許容する。
【０１１０】
バイオプロセス容器７０４が、個々のバイオプロセス容器７０４に貼り付けられたバーコード又はＲＦＩＤタグなどの追跡システムを含む実施例では、ユーザ歩道７０８は、ユーザによる、バイオプロセス容器７０４の在庫管理を実施するため、或いはバイオプロセス容器７０４の経年などの情報収集のためのバイオ処理ユニットへの容易なアクセスを許容する。
【０１１１】
また、ユーザ歩道７０８は、ユーザ７０６による、入口７１０へのバイオプロセス容器７０４のうちの１つのポートの接続を同じく許容し、したがってそのバイオプロセス容器７０４からのプロセス溶液は、バイオプロセス容器７０４から入口７１０及びパイプを通って処理エリア内の１つ又は複数の処理ユニットへ流れることができる。
【０１１２】
図７Ｃの上面図は、歩道７０８が９１．４ｃｍ（３フィート）の幅ＢＡを有していることを示している。
【０１１３】
歩道７０８は、２つの階段７２０、７２２に接続されている。歩道７０８及び第１の階段７２０は、それぞれ９１．４ｃｍ（３フィート）の幅ＢＡを有している。第２の階段７２２は、７６．２ｃｍ（２．５フィート）の幅ＢＢを有している。歩道７０８は、後方の壁７２４から１５．２ｃｍ（６インチ）の距離ＢＣ１、及び個々のプラットホーム７０２から１５．２ｃｍ（６インチ）の距離ＢＣ２で位置決めされている。歩道７０８は、側壁７２６から５３．３ｃｍ（１フィート９インチ）の距離ＢＤで位置決めされている。
【０１１４】
プラットホーム７０２は、それぞれ７２８で示されている脚を含む。側壁７２６に最も近い脚７２８は、側壁７２６から６４．１ｃｍ（２フィート１．２５インチ）の距離ＢＥにその中心を有している。
【０１１５】
入口７１０は間隔を隔てており、第１の入口７１０は、側壁７２６から３２７．７ｃｍ（１０．７５フィート）の距離ＢＦであり、第２の入口７１０は、第１の入口７１０から３２０ｃｍ（１０．５フィート）の距離ＢＧであり、第３の入口は、第２の入口７１０から２８７ｃｍ（９フィート５インチ）の距離ＢＨであり、第４の入口７１０は、第３の入口７１０から３０４．８ｃｍ（１０フィート）の距離ＢＩであり、また、第５の入口７１０は、第４の入口７１０から３０９．９ｃｍ（１０フィート２インチ）の距離ＢＪである。
【０１１６】
２つのプラットホーム７０２は緩衝剤貯蔵エリア７００内に含まれている。個々のプラットホーム７０２は、幅７．６ｃｍ（３インチ）及び高さ５．１ｃｍ（２インチ）の断面を有するフレーム部材７３０を含む。プラットホーム７０２は、１８４．５ｃｍ（６フィート５／８インチ）の距離ＢＫだけ間隔を隔てている。
【０１１７】
建屋支持支柱７３２、７３４、７３６は、床７１６と天井７１８の間を延在している。第１の支持支柱７３２と第２の支持支柱７３４の間の距離ＢＬは、８２９．３ｃｍ（２７フィート２．５インチ）である。第２の支持支柱７３４と第３の支持支柱７３６の間の距離ＢＭは、８２９．３ｃｍ（２７フィート２．５インチ）である。第２の支持支柱７３４の幅ＢＮは、１１６．８ｃｍ（３フィート１０インチ）である。第２の支持支柱の面７３８は、プラットホーム７０２の前縁から２００．７ｃｍ（６フィート７インチ）の距離ＢＯである。
【０１１８】
図４Ａ〜７Ｃに関連して考察されている寸法は例示的なものであり、特定の施設に適合させるために変更することができる。
【０１１９】
定義
別途規定しない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載される方法及び材料と類似又は均等な任意の方法及び材料が、本開示の実施又は試験において使用され得るが、好ましい材料及び方法は、本明細書に記載される。本開示の記載及び請求項において、以下の用語は、ある規定が提供される場合、どのように用語が規定されるかに応じて使用される。
【０１２０】
本明細書に使用される用語は特定の実施態様を記載する目的のためだけに使用され、限定されることを意図するものではないことも理解される。
【０１２１】
文字「１つ（ａ）」及び「１つ（ａｎ）」は、文字の１つ又は１つを超える（即ち、少なくとも１つ）の文法上の対象を指すため、本明細書に使用される。例示として、「１つの細胞」は、１つの細胞又は１つを超える細胞を意味し得る。
【０１２２】
本明細書で使用するように、「処理溶液」は、上流側処理及び下流側処理に使用される溶液を含む、生物学生産プロセスに使用される緩衝剤又は培地を意味している。
【０１２３】
本明細書で使用するように、下流側処理薬品（ＤＰＡ：ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）は、バイオリアクタの産物又は関連する成分、例えば標的分子に対して実施される下流側処理操作のためにバイオリアクタ内で培養された細胞に対して作用する１つ又は複数の合成分を含有する生物学的適合性溶液である。適切なＤＰＡの実例は、例えばＨＢＳＳ、ＰＢＳ、トリス、酢酸又は類似などの緩衝食塩水溶液を含む。したがって本明細書において使用されているＤＰＡは、細胞の増殖及び分裂を実際にサポートする培地とは全く異なっている。本開示のＤＰＡは、細胞増殖及び／又は分裂をサポートすることなく生理学的に等価な物理化学的環境を提供する。
【０１２４】
ＤＰＡは、生物学生産のための下流側処理に広く使用されており、これまでのところ、製造バッチに一時的に緊密に結合されるＧＭＰ方式で製造されている。時間及びコストの追加に加えて、これは、長いリード試験及び／又はＧＭＰ記録（バッチ記録）の精査及びリリースが完了する前に、製造過程材料が使用されることになり、製造過程材料は、そういうものとして「危険を代償にして」使用されている。リリースされていない材料の使用は、製品品質を危うくし得るプロセス中間物を使用した後にＧＭＰエラーが明らかになり得る可能性を危うくし、これらは、計器較正エラー、等々を含み得る。この方法が使用されているのは、緩衝剤は、日々の日付による割り当てられた使用を有し得ること、また、緩衝剤の備蓄は大量のＧＭＰ処理空間を占有することによるものである。
【０１２５】
本明細書で使用するように、「バイオバーデン」という用語は、組成物（例えば固体又は液体）の中及び／又は物品の表面（例えば外部表面及び／又は内部表面）に存在する生物学的汚染物質の自己複製の水準を意味している。例えばバイオバーデンは、クロマットを含有している組成物中に存在する生物学的汚染物質の自己複製を意味することができ、「バイオバーデン」という用語は当分野で知られており、また、組成物（例えば固体又は液体）の中及び／又は物品の表面（例えば外部表面及び／又は内部表面）に存在する生物学的汚染物質の自己複製の水準を意味している。他の実例では、バイオバーデンは、クロマトグラフィーコラムの内部表面及び／又はクロマトグラフィーコラム内のクロマトグラフィー樹脂内の生物学的汚染物質（例えばクロマトグラフィーコラムの内部表面の生物学的汚染物質、及びクロマトグラフィーコラム内のパックされたクロマトグラフィー樹脂中の生物学的汚染物質）の自己複製を意味することができる。また、バイオバーデンは、液体（例えば本明細書において説明されている任意の方法又はプロセスに使用される緩衝剤）内に存在する生物学的汚染物質の自己複製を意味することも可能である。生物学的汚染物質の自己複製の非制限の実例は、細菌（例えばグラム陽性又はグラム陰性細菌、或いは細菌胞子）、マイコバクテリア、ウイルス（例えばベシウイルス、カシェ渓谷ウイルス、パルボウイルス、ヘルペスウイルス及びブンヤウイルス）、寄生虫、菌類、酵母菌及び原生動物門であってもよい。
【０１２６】
本明細書で使用するように、用語「内因性」は、生物、細胞、組織若しくは系からの又は内部で天然で産生される任意の物質を指す。
【０１２７】
本明細書で使用するように、用語「外来性」は、生物、細胞、組織若しくは系に導入される又は外部で産生される任意の物質を指す。したがって「外来性核酸」は、生物、細胞、組織若しくは系に導入される又は外部で産生される核酸を指す。一実施例では、外来性核酸の配列は、外来性核酸が導入される、生物、細胞、組織若しくは系の内部で、天然で産生されない、又は天然で見出すことができない。一実施例では、外来性核酸の配列は、非天然で生じる配列である、又は非天然で生じる産物をコードする。
【０１２８】
本明細書で使用するように、用語「異種性」は、異なる種からの生物、細胞、組織若しくは系に導入される場合、１つの種からの任意の物質を指す。
【０１２９】
本明細書で使用するように、用語「核酸」、「ポリヌクレオチド」又は「核酸分子」は、交換可能に使用され、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）若しくはリボ核酸（ＲＮＡ）、又はＤＮＡ若しくはそのＲＮＡ、及びそのポリマーの単一若しくは二本鎖形態のいずれかの組合せを指す。用語「核酸」には、遺伝子、ｃＤＮＡ、又はｍＲＮＡが含まれるが、限定されない。一実施例では、核酸分子は、合成（例えば、化学的な合成又は人工）又は組換えである。特に限定されない限り、用語は、参照核酸として類似の結合特性を有する及び天然で又は非天然で生じるヌクレオチドと類似する様式で代謝される、天然ヌクレオチドの類似体又は誘導体を含有する分子を包含する。別途示されない限り、特定の核酸配列はまた、保存的に修飾されたそのバリアント（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰ、及び相補的な配列並びに明示的に示される配列を暗示的に包含する。特に、縮重コドン置換は、第三の位置の１つ又は複数の選択された（又は全ての）コドンが、混合された塩基及び／又はデオキシイノシン残基で置換された、配列を生成させることによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．  １９：５０８１  （１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６０：２６０５〜２６０８ページ（１９８５）；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉら、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１〜９８ページ（１９９４））。
【０１３０】
本明細書で使用するように、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、ペプチド結合によって又はペプチド結合以外の手段によって共有結合的に連結されるアミノ酸残基を含む化合物を指すように使用される。タンパク質又はペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならない、タンパク質の又はペプチドの配列に含まれ得るアミノの最大数に限界は設定されない。一実施例では、タンパク質は、１つを超える、例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれを超える、ポリペプチドを含み得、各ポリペプチドは、共有結合性の又は非共有結合性の結合／相互作用のいずれかによって他と関連する。ポリペプチドには、ペプチド結合によって又はペプチド結合以外の手段によって互いに結合される２つ又はそれを超えるアミノ酸を含む任意のペプチド又はタンパク質が含まれる。本明細書で使用するように、用語は、短鎖（これは、ペプチド、オリゴペプチド及びオリゴマーなどとも当技術分野において一般に呼ばれる）及び長鎖（これは、多くのタイプが存在するタンパク質と当技術分野において一般に呼ばれる）の両方を指す。「ポリペプチド」には、例えば、生物学的に活性な断片、実質的に相同的なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドのバリアント、修飾されたポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質がとりわけ含まれる。
【０１３１】
本明細書で使用するように、「産物」は、産物を産生させるため修飾又は操作されている細胞によって産生される（例えば、発現される）、分子、例えば、タンパク質、核酸、ポリペプチド、又は任意のそのハイブリッドを指す。一実施例では、産物は、天然で生じる産物又は非天然で生じる産物、例えば、合成製品である。一実施例では、産物の一部は、天然で生じるが、産物の別の部分は、非天然で生じる。一実施例では、産物は、ポリペプチド、例えば、組換えポリペプチドである。一実施例では、産物は、診断上の又は前臨床使用のため適切である。別の実施例では、産物は、治療使用のため、例えば、疾患の処置のため適切である。一実施例では、産物は、表１又は表２から選択される。一実施例では、修飾された又は操作された細胞は、発現を制御する又は産物をコードする外来性核酸を含む。他の実施例では、修飾された又は操作された細胞は、例えば、核酸ではなく、細胞における産物の発現又は構築を制御する、他の分子を含む。
【０１３２】
一実施例では、細胞の修飾は、内因性核酸配列、例えば、内因性遺伝子の発現を制御する又は変更する、例えば、増加させる、核酸配列を含む外来性核酸の導入を含む。そのような実施例では、修飾された細胞は、細胞によって天然で又は内因性に発現される内因性ポリペプチド産物を産生するが、修飾は、未修飾細胞と比較して、例えば、内因性産物又はポリペプチドの質と比較して、産物の産生及び／又は産物の質を増加させる。
【０１３３】
別の実施例では、細胞の修飾は、本明細書に記載されるような、組換えポリペプチドをコードする外来性核酸の導入を含む。そのような実施例では、修飾された細胞は、天然で生じ得る又は非天然で生じ得る組換えポリペプチド産物を産生する。そのような実施例では、修飾された細胞は、細胞によって内因性にも発現され得る又はされ得ない、組換えポリペプチド産物を産生する。組換えポリペプチド産物が細胞によって内因性にも発現される実施例では、修飾は、未修飾細胞と比較して、例えば、内因性産物又はポリペプチドの質と比較して、産物の産生及び／又は産物の質を増加させる。
【０１３４】
本明細書で使用するように、「組換えポリペプチド」又は「組換えタンパク質」は、本明細書に記載される細胞によって産生され得るポリペプチドを指す。組換えポリペプチドは、ポリペプチドをコードする配列の少なくとも１つのヌクレオチド又はポリペプチドの発現を制御する配列の少なくとも１つのヌクレオチドが、（細胞の又は前駆細胞の）遺伝的な操作によって形成されたものである。例えば、少なくとも１つのヌクレオチドは、変更され、例えば、それは細胞に導入され又はそれは遺伝的に操作された再構成の産物である。一実施例では、組換えポリペプチドの配列は、ポリペプチド又はタンパク質の天然で生じるアイソフォームと異なっていない。一実施例では、組換えポリペプチドのアミノ酸配列は、ポリペプチド又はタンパク質の天然で生じるアイソフォームの配列と異なる。一実施例では、組換えポリペプチド及び細胞は、同じ種からのものである。一実施例では、組換えポリペプチドは、細胞に対して内因性であり、換言すれば、細胞は、第一の種からのものであり、組換えポリペプチドは、その第一の種に対してネイティブである。一実施例では、組換えポリペプチドのアミノ酸配列は、細胞の内因性ゲノムによってコードされるポリペプチドと同じ又は実質的に同じ、又は１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％以下で異なる。一実施例では、組換えポリペプチド及び細胞は、異なる種からのものであり、例えば、組換えポリペプチドは、ヒトポリペプチドであり、細胞は、非ヒト、例えば、げっ歯類、例えば、ＣＨＯ、又は昆虫細胞である。一実施例では、組換えポリペプチドは、細胞に対して外来性であり、換言すれば、細胞は、第一の種からのものであり、組換えポリペプチドは、第二の種からのものである。一実施例では、ポリペプチドは、合成ポリペプチドである。一実施例では、ポリペプチドは、非天然で生じる供給源から由来する。一実施例では、組換えポリペプチドは、ヒトポリペプチド又はタンパク質の天然で生じるアイソフォームとアミノ酸配列において異ならない、ヒトポリペプチド又はタンパク質である。一実施例では、組換えポリペプチドは、ヒトポリペプチド又はタンパク質の天然で生じるアイソフォームと、１、２、３、４、５、１０、１５又は２０アミノ酸残基以下で異なる。一実施例では、組換えポリペプチドは、ヒトポリペプチドの天然で生じるアイソフォームと、そのアミノ酸残基の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又は１５％以下まで異なる。
【０１３５】
用語として「獲得」又は「獲得すること」が、本明細書に使用され、物理的な実体又は値を「直接的に獲得すること」又は「間接的に獲得すること」とは、物理的な実体、又は値、例えば、数的な値の保持を得ることを指す。「直接的に獲得すること」は、物理的な実体又は値を取得するため、プロセスを実施すること（例えば、合成又は分析方法を実施すること）を意味する。「間接的に獲得すること」は、別のパーティー又は供給源（例えば、物理的な実体又は値を直接的に獲得した第三者の研究室）から物理的な実体又は値を受けいれることを指す。物理的な実体を直接的に獲得することには、身体物質、例えば、出発原料における物理的な変化を含むプロセスを実施することが含まれる。例示的な変化には、物理的な実体を２つ又はそれを超える出発原料から作製すること、物質を剪断すること又は断片化すること、物質を分離すること又は精製すること、２つ又はそれを超える分離した実体を混合物に組み合わせること、共有結合又は非共有結合を破壊すること又は形成することを含む化学反応を実施することが含まれる。値を直接的に獲得することには、サンプル又は別の物質における物理的な変化を含むプロセスを実施すること、例えば、物質、例えば、サンプル、分析物、又は試薬における物理的な変化を含む分析用プロセスを実施すること（時々、本明細書で「物理的な分析」と呼ばれる）、分析方法、例えば、物質、例えば、分析物、又は断片又は他のその誘導体を別の物質から分離するステップ又は精製するステップ；分析物、又は断片又は他のその誘導体を、別の物質、例えば、緩衝剤、溶媒、又は反応物と組み合わせるステップ；又は分析物、又は断片又は他のその誘導体の構造を、例えば、分析物の第一と第二の原子の間で、共有又は非共有結合を破壊又は形成することによって、変化させるステップ；又は試薬、又は断片又は他のその誘導体の構造を、例えば、試薬の第一と第二の原子の間で、共有又は非共有結合を破壊又は形成することによって、変化させるステップの１つ又は複数を含む方法を実施することが含まれる。
【０１３６】
用語として「サンプルを獲得すること」が、本明細書に使用され、サンプルを「直接的に獲得すること」又は「間接的に獲得すること」とは、サンプル、例えば、組織サンプル又は核酸サンプルの保持を得ることを指す。「サンプルを直接的に獲得すること」は、サンプルを取得するため、プロセスを実施すること（例えば、物理的な方法、例えば、手術又は抽出を実施すること）を意味する。「サンプルを間接的に獲得すること」は、別のパーティー又は供給源（例えば、サンプルを直接的に獲得した第三者の研究室）からサンプルを受けいれることを指す。サンプルを直接的に獲得することには、身体物質、例えば、出発原料、例えば、組織、例えば、ヒト患者における組織又は患者から以前に単離されていた組織における物理的な変化を含むプロセスを実施することが含まれる。例示的な変化には、物理的な実体を出発原料から作製すること、組織から摘出すること又は擦過すること；物質（例えば、サンプル組織又は核酸サンプル）を分離すること又は精製すること；２つ又はそれを超える実体を混合物に組み合わせること；共有結合又は非共有結合を破壊すること又は形成することを含む化学反応を実施することが含まれる。サンプルを直接的に獲得することには、例えば、上記のような、サンプル又は別の物質における物理的な変化を含むプロセスを実施することが含まれる。
【０１３７】
各及び全ての特許、特許出願、及び本明細書に引用された文献の開示は、参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる。本発明は特定の態様を参照して開示されているが、本発明の他の態様及びバリエーションが、真の本発明の精神及び範囲を逸脱することなく、他の当業者によって考案され得ることは明らかである。添付の特許請求の範囲は、全てのそのような態様及び均等物バリエーションを含むと解釈されることを意図している。
【０１３８】
クロマトグラフィー及び分光学技法
処理溶液は、更に精製し、或いは溶液の純度を評価するために、クロマトグラフ及び／又は分光学的方法と共に使用することができる。ここで説明される方法に使用するのに適した１次元（１Ｄ：１−ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ）クロマトグラフィーの方法は当業者に知られており、例えばアフィニティクロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、逆位相クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィーを含む。いくつかの実施例では、１次元クロマトグラフィー方法はＨＰＬＣ逆位相クロマトグラフィーである。クロマトグラフィーは、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ：ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ：ｇａｓ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、キャピラリー電気泳動、イオン移動度を含むことができる。同じく、例えばＰｒｏｃｅｓｓ  Ｓｃａｌｅ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｕｗｅ  Ｇｏｔｔｓｃｈａｌｋ  ２０１１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  ＩＳＢＮ：  １１１８２１０７４３、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｖｏｌ  １  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ、Ｇ．  Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ  ２０１３  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｍｅｄｉａ、Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ、Ｇａｒｙ  Ｃ．  Ｈｏｗａｒｄ  ２０００  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい。
【０１３９】
追加の例示的なクロマトグラフ方法は、それらに限定されないが、Ｓｔｒｏｎｇ  Ａｎｉｏｎ  Ｅｘｃｈａｎｇｅクロマトグラフィー（ＳＡＸ）、液体クロマトグラフィー（ＬＣ：ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、超高性能液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ：ｕｌｔｒａ  ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ：ｔｈｉｎ  ｌａｙｅｒ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、アミドコラムクロマトグラフィー及びそれらの組合せを含む。例示的な質量分析法（ＭＳ：ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）は、それらに限定されないが、タンデムＭＳ、ＬＣ−ＭＳ、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ、マトリックス支援レーザ脱着電離質量分析法（ＭＡＬＤＩ−ＭＳ：ｍａｔｒｉｘ  ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｌａｓｅｒ  ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｉｏｎｉｓａｔｉｏｎ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、フーリエ変換質量分析法（ＦＴＭＳ：Ｆｏｕｒｉｅｒ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、質量分析法を使用したイオン移動度分離（ＩＭＳ−ＭＳ：ｉｏｎ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）、電子移動解離（ＥＴＤ−ＭＳ：ｅｌｅｃｔｒｏｎ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ−ＭＳ）及びそれらの組合せを含む。例示的な電気泳動方法は、それらに限定されないが、キャピラリー電気泳動（ＣＥ：ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）、ＣＥ−ＭＳ、ゲル電気泳動、アガロースゲル電気泳動、アクリルアミドゲル電気泳動、特定のグリカン構造を認識する抗体を使用したウェスタンブロッティングが後続するＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：ＳＤＳ−ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ  ｇｅｌ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）、及びそれらの組合せを含む。例示的な核磁気共鳴（ＮＭＲ：ｎｕｃｌｅａｒ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）は、それらに限定されないが、１次元ＮＭＲ（１Ｄ−ＮＭＲ）、２次元ＮＭＲ（２Ｄ−ＮＭＲ）、相関分光学磁気−角度回転ＮＭＲ（ＣＯＳＹ−ＮＭＲ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ  ｍａｇｎｅｔｉｃ−ａｎｇｌｅ  ｓｐｉｎｎｉｎｇ  ＮＭＲ）、総相関分光学ＮＭＲ（ＴＯＣＳＹ−ＮＭＲ：ｔｏｔａｌ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ  ＮＭＲ）、ヘテロ核単量子コヒーレンスＮＭＲ（ＨＳＱＣ−ＮＭＲ：ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  ｓｉｎｇｌｅ−ｑｕａｎｔｕｍ  ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ  ＮＭＲ）、ヘテロ核多量子コヒーレンス（ＨＭＱＣ−ＮＭＲ：ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｑｕａｎｔｕｍ  ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）、回転核オーバーハウザー効果分光学ＮＭＲ（ＲＯＥＳＹ−ＮＭＲ：ｒｏｔａｔｉｏｎａｌ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｏｖｅｒｈａｕｓｅｒ  ｅｆｆｅｃｔ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ  ＮＭＲ）、核オーバーハウザー効果分光学（ＮＯＥＳＹ−ＮＭＲ：ｎｕｃｌｅａｒ  ｏｖｅｒｈａｕｓｅｒ  ｅｆｆｅｃｔ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）及びそれらの組合せを含む。
【０１４０】
適切な分光学的技法は、例えばＲａｍａｎ分光学を含む。Ｒａｍａｎ分光学は、法科学の異なる分野の間で人気が高まっている技法である。今日のその使用のいくつかの実例は、医薬品（Ｈｏｄｇｅｓらの「Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｆｏｕｒｉｅｒ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍ  Ｒａｍａｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｆｏｒｅｎｓｉｃ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｌｌｉｃｉｔ  Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ｅｘｐｌｏｓｉｖｅｓ，」、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ  ４６：３０３〜３０７頁（１９９０））、棒口紅（Ｒｏｄｇｅｒらの「Ｔｈｅ  Ｉｎ−Ｓｉｔｕ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｌｉｐｓｔｉｃｋｓ  ｂｙ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｒａｍａｎ  Ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ，」、Ａｎａｌｙｓｔ  １８２３〜１８２６頁（１９９８））、及び繊維（Ｔｈｏｍａｓらの「Ｒａｍａｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｆｏｒｅｎｓｉｃ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｂｌａｃｋ／Ｇｒｅｙ  ａｎｄ  Ｂｌｕｅ  Ｃｏｔｔｏｎ  Ｆｉｂｒｅｓ  Ｐａｒｔ  １：  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｖａｒｙｉｎｇ  Ｌａｓｅｒ  Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ，」、Ｆｏｒｅｎｓｉｃ  Ｓｃｉ．  Ｉｎｔ．  １５２：１８９〜１９７頁（２００５））、並びに塗料（Ｓｕｚｕｋｉらの「Ｉｎ  Ｓｉｔｕ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｕｔｏｍｏｔｉｖｅ  Ｐａｉｎｔ  Ｐｉｇｍｅｎｔｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ｌｉｎｅ  Ｓｅｇｍｅｎｔ  Ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ  Ｒａｍａｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ：  Ｉ．  Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｏｐｃｏａｔ  Ｐｉｇｍｅｎｔｓ，」、Ｊ．  Ｆｏｒｅｎｓｉｃ  Ｓｃｉ．  ４６：１０５３〜１０６９頁（２００１））及びインク（Ｍａｚｚｅｌｌａらの「Ｒａｍａｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ  ｏｆ  Ｂｌｕｅ  Ｇｅｌ  Ｐｅｎ  Ｉｎｋｓ，」、Ｆｏｒｅｎｓｉｃ  Ｓｃｉ．  Ｉｎｔ．  １５２：２４１〜２４７頁（２００５））分析の識別を含む。Ｒａｍａｎ分光学の基礎をなしている理論は、固体サンプル、液体サンプル又はガスサンプルによる低強度非破壊レーザ光の非弾性散乱に基づいている。サンプルを準備する必要はほとんどないか、或いは全くなく、また、試験済み材料の必要な量は、数ピコグラム又はフェムトリットル（それぞれ１０−１２グラム又は１０−１５リットル）程度であり得る。典型的なＲａｍａｎスペクトルはいくつかの狭帯域からなり、材料の固有振動シグネチャを提供する（Ｇｒａｓｓｅｌｌｉらの「Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｒａｍａｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ，」、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  （１９８１））。別のタイプの振動分光学である赤外線（ＩＲ）吸収分光学とは異なり、Ｒａｍａｎ分光学は、水による干渉をほとんど示さず（Ｇｒａｓｓｅｌｌｉらの「Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｒａｍａｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ，」、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８１））、それは、Ｒａｍａｎ分光学を体液及びそれらの痕跡を分析するための重要な技法にしている。固有Ｒａｍａｎ分光学的測定はサンプルを損傷しない。ステ��ン及びスワブを現場で試験することができ、またＤＮＡ分析のために研究室で更に使用するために依然として利用することができ、それは、法アプリケーションにとって極めて重要である。携帯型Ｒａｍａｎ分光計の設計は今や現実的であり（Ｙａｎらの「Ｓｕｒｆａｃｅ−Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｒａｍａｎ  Ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｐｏｒｔａｂｌｅ  Ｒａｍａｎ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ｔｕｎａｂｌｅ  Ｓｅｎｓｏｒ，」、Ｓｅｎｓｏｒｓ  ａｎｄ  Ａｃｔｕａｔｏｒｓ  Ｂ．  ６  （２００７）、Ｅｃｋｅｎｒｏｄｅらの「Ｐｏｒｔａｂｌｅ  Ｒａｍａｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｆｏｒ  Ｆｉｅｌｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ，」、Ｆｏｒｅｎｓｉｃ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ３：（２００１））、犯罪現場で識別する能力をもたらすことになる。
【０１４１】
本開示と共に使用するために適したタイプのＲａｍａｎ分光学は、それらに限定されないが、従来のＲａｍａｎ分光学、Ｒａｍａｎマイクロ分光学、それらに限定されないが、チップ強化Ｒａｍａｎ分光学、表面強化Ｒａｍａｎ分光学（ＳＥＲＳ：ｓｕｒｆａｃｅ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｒａｍａｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）及び表面強化共鳴Ｒａｍａｎ分光学（ＳＥＲＲＳ：ｓｕｒｆａｃｅ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｒａｍａｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）を含む近距離場Ｒａｍａｎ分光学、コヒーレント反ストークスＲａｍａｎ分光学（ＣＡＲＳ：ｃｏｈｅｒｅｎｔ  ａｎｔｉ−Ｓｔｏｋｅｓ  Ｒａｍａｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）、等々を含む。ストークスＲａｍａｎ分光学及び反ストークスＲａｍａｎ分光学の両方を使用することができる。
【０１４２】
いくつかの実施例では、本明細書において説明されているクロマトグラフ方法又は分光学的方法を使用して、１つ又は複数のバイオ処理中間物に対して高速非侵略的試験が実施される。いくつかの実施例では、Ｒａｍｏｎ分光学を使用して高速試験が実施される。
【０１４３】
質量分析法
本明細書において説明されている方法に使用するために適した質量分析法方法は当業者に知られており、例えばエレクトロスプレー電離ＭＳ、マトリックス支援レーザ脱着／電離ＭＳ、飛行時間ＭＳ、フーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴ＭＳ、四重極飛行時間ＭＳ、線形四重極、四重極イオントラップＭＳ、オービトラップ、円筒状イオントラップ、３次元イオントラップ、四重極質量フィルタ、タンデム質量分析法を含む。いくつかの実施例では、質量分析法はタンデム質量分析法である。同じく、例えばＰｒｏｔｅｉｎ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、Ｊｕｌｉａｎ  Ｗｈｉｔｅｌｅｇｇｅ、２００８年、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ａｎｄ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｕｓｉｎｇ  Ｔａｎｄｅｍ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｋｉｎｔｅｒ、２００５年、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｕｓｉｎｇ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ、Ｇｕｏｄｏｎｇ  Ｃｈｅｎ、２０１４年、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｍｅｄｉａを参照されたい。
【０１４４】
製造パラメータ
本明細書において説明されている方法は、糖タンパク質調製物を製造する際に、予め選択済み１つ又は複数のグリカン特性を得ることができるよう、糖タンパク質調製物のための１つ又は複数の製造パラメータを決定するステップ及び／又は選択するステップを含む。グリコシル化に対する様々な製造パラメータの効果に関する情報を使用することにより、所望のグリカン特性と積極的に相関する糖タンパク質調製物の製造に先立って製造パラメータを選択することができる。本明細書において使用されているように、製造パラメータは、製造プロセスにおけるパラメータ又は要素である。選択することができる製造パラメータは、例えば、糖タンパク質調製物を製造するために使用される細胞又は細胞系、培養培地、培養プロセス又はバイオリアクタ変数（例えばバッチ、フェッド−バッチ又は灌流）、精製プロセス及び糖タンパク質調製物の調合を含む。
【０１４５】
一次製造パラメータは、１）宿主のタイプ、２）宿主の遺伝学、３）培地タイプ、４）発酵プラットホーム、５）精製ステップ、６）調合を含む。本明細書において使用されている二次製造パラメータは、一次製造パラメータの各々内で調整可能又は変更可能な製造パラメータである。実例は、所望のグリカン特性に基づく宿主サブクローンの選択、構成的又は誘導可能な宿主遺伝子レベルの調整、新規な遺伝子又はプロモーターエレメントの導入、培地添加剤（例えば表ＩＶの部分リスト）、生理化学的増殖特性、増殖ベッセルタイプ（例えばバイオリアクタタイプ、Ｔフラスコ）、細胞密度、細胞周期、所望のグリカンタイプを使用した製品の濃縮（例えばレクチン又は抗体介在濃縮、イオン交換クロマトグラフィー、ＣＥ又は同様の方法による）、又は当業者には明らかである同様の二次製造パラメータを含む。
【０１４６】
培地及び緩衝剤
本明細書において説明されている方法は、所望の１つ又は複数のグリカン特性に対する積極的な相関を有する培地成分を決定するステップ及び／又は選択するステップ、及び／又はその濃度を決定するステップ及び／又は選択するステップを含むことができる。培地成分は、培地の変化が存在すると、培養状態に応じて糖タンパク質製造の進行中に加えることができ、或いは糖タンパク質の製造が進行している間、管理することができる。培地成分は、培養のために直接加えられる成分、並びに細胞培養の副産物である成分を含む。
【０１４７】
培地成分は、例えば緩衝剤、アミノ酸含有成分、ビタミン含有成分、塩含有成分、ミネラル含有成分、血清含有成分、炭素源含有成分、脂質含有成分、核酸含有成分、ホルモン含有成分、微量元素含有成分、アンモニア含有成分、共同因子含有成分、インジケータ含有成分、微小分子含有成分、加水分解物含有成分及び酵素モジュレータ含有成分を含む。
【０１４８】
以下の表１は、選択することができる様々な培地成分の実例を提供したものである。
【０１４９】
【表１】
2019524125.tif 000003
【０１５０】
例示的な緩衝剤は、トリス、トリシン、ＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ、ＰＩＰＥＳ、ＴＡＰＳ、ビシン、ＢＥＳ、ＴＥＳ、カコジラート、ＭＥＳ、アセテート、ＭＫＰ、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、グリシンアミド及びアセトアミドグリシンを含む。
【０１５１】
任意選択で存在するミネラルは、ビスマス、ホウ素、カルシウム、塩素、クロム、コバルト、銅、フッ素、ヨウ素、鉄、マグネシウム、マンガン、モリブデン、ニッケル、リン、カリウム、ルビジウム、セレン、ケイ素、ナトリウム、ストロンチウム、硫黄、テルル、チタン、タングステン、バナジウム及び亜鉛を含む。例示的な塩及びミネラルは、ＣａＣｌ２（無水）、ＣｕＳＯ４  ５Ｈ２Ｏ、Ｆｅ（ＮＯ３）．９Ｈ２Ｏ、ＫＣｌ、ＫＮＯ３、ＫＨ２ＰＯ４、ＭｇＳＯ４（無水）、ＮａＣｌ、ＮａＨ２ＰＯ４Ｈ２Ｏ、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＳＥ３（無水）、ＺｎＳＯ４．７Ｈ２Ｏ；リノール酸、リポ酸、Ｄ−グルコース、ヒポキサンチン２Ｎａ、フェノールレッド、プトレシン２ＨＣｌ、ピルビン酸ナトリウム、チミジン、ピルビン酸、コハク酸ナトリウム、コハク酸、コハク酸．Ｎａ六水和物、グルタチオン（還元）、パラ−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、リノレン酸メチル、バクトペプトンＧ、アデノシン、シチジン、グアノシン、２’−デオキシアデノシンＨＣｌ、２’−デオキシシチジンＨＣｌ、２’−デオキシグアノシン及びウリジンを含む。所望のグリカン特性が減少したフコシル化である場合、製造パラメータは、マンガン、例えば約０．１μＭから５０μＭの濃度で存在するマンガンの存在下で、細胞、例えばＣＨＯ細胞、例えばｄｈｆｒ不足ＣＨＯ細胞を培養することを含むことができる。減少したフコシル化は、例えば細胞（例えばＣＨＯ細胞、例えばｄｈｆｒ不足ＣＨＯ細胞）を約３５０ｍＯｓｍから５００ｍＯｓｍの浸透圧重量モル濃度で培養することによって得ることも可能である。浸透圧重量モル濃度は、培地に塩を加えるか、或いは製造中に蒸発が生じる際の副産物として塩を生成させることによって調整することができる。
【０１５２】
また、製造パラメータは生理化学的パラメータを含むことも可能である。このような条件は、温度、ｐＨ、浸透圧重量モル濃度、剪断力又は撹拌速度、酸化、スパージレート（ｓｐｕｒｇｅ  ｒａｔｅ）、増殖ベッセル、接線流、ＤＯ、ＣＯ２、窒素、フェッドバッチ、酸化還元、細胞密度及び供給戦略を含むことができる。選択することができる生理化学的パラメータの実例は、以下の表２に提供されている。
【０１５３】
【表２】
2019524125.tif 000004
【０１５４】
システムは、所望の１つ又は複数のグリカン特性とのその相関に少なくとも部分的に基づいて選択することができる。細胞は、例えばバッチ、フェッド−バッチ、灌流又は連続培養として増殖させることができる。選択することができる製造パラメータは、例えば、培地が採取される時期（培養時間中の初期、中間又は後期）及び頻度を含む培地の追加又は除去、細胞培養が撹拌される速度の増減、細胞が培養される温度の増減、培養密度が調整されるように培地の追加又は除去、細胞培養が開始され、或いは停止される時間の選択、及び細胞培養パラメータが変更される時間の選択を含む。このようなパラメータは、バッチ、フェッド−バッチ、灌流及び連続培養条件のうちの任意の条件に対して選択することができる。広範囲にわたるフラスコ、ビン、リアクタ及びコントローラは、製造を許容し、また、細胞培養システムのスケールアップを許容する。
【０１５５】
追加の製造パラメータは当業者に知られており、例えばＡｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  （２０１１）  Ｅｄ．  Ｍｏｈａｍｅｄ  Ａｌ−Ｒｕｂｅａｉ；  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇを参照されたい。
【０１５６】
製品及びそれらをコード化する核酸
本明細書においては、製品を製造することができる細胞又は細胞系を識別し、選択し、或いは作るための方法が提供される。本開示によって包含される製品は、それらに限定されないが、例えば細胞中で発現されることによって製造することができる、分子、核酸、ポリペプチド（例えば組換えポリペプチド、例えば抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体）又はそれらの混成を含む。いくつかの実施例では、細胞は、製品を製造するために工作又は修正される。そのような修飾には、産物の産生を制御する又はもたらす分子を導入することが含まれる。例えば、細胞は、ポリペプチド、例えば、組換えポリペプチドをコードする外来性核酸を導入することによって修飾され、細胞は、ポリペプチド、例えば、組換えポリペプチドの産生、例えば、発現及び分泌に適切な条件下で培養される。
【０１５７】
実施例では、本明細書に記載される方法によって同定される、選択される、又は生成される細胞又は細胞系は、医学的な状態、障害又は疾患の処置に有用な、産物、例えば、組換えポリペプチドを産生する。医学的な状態、障害又は疾患の例には、代謝病又は障害（例えば、代謝酵素欠損）、内分泌障害（例えば、ホルモン欠損）、止血（ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ）、血栓症、造血障害、肺障害、胃腸障害、免疫調節（例えば、免疫不全）、不妊症、移植、がん、及び感染性疾患が含まれるが、限定されない。
【０１５８】
いくつかの実施例では、産物は、外来性タンパク質、例えば、細胞によって天然で発現されないタンパク質である。産物は、例えば、薬物スクリーニングのため有用な治療タンパク質又は診断上のタンパク質であり得る。治療又は診断上のタンパク質は、抗体分子、例えば、抗体又は抗体断片、融合タンパク質、ホルモン、サイトカイン、成長因子、酵素、糖タンパク質、リポタンパク質、レポータータンパク質、治療ペプチド、又はこれらの任意の構造上の及び／又は機能的な断片又はハイブリッドであり得る。
【０１５９】
一実施例では、産物、例えば、組換えポリペプチドは、抗体分子である。本明細書に包含される産物は、診断及び治療抗体分子を含む。診断抗体分子には、イメージング技術のため有用な、抗体、例えば、モノクローナル抗体又はその抗体断片が含まれる。治療抗体分子は、例えば、疾患又は障害の処置又は予防のため、対象への投与に適切である。
【０１６０】
抗体分子は、タンパク質、又は抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子から由来するポリペプチド配列である。一実施例では、抗体分子は、完全長抗体又は抗体断片である。抗体及びマルチフォーマットタンパク質は、ポリクローナル又はモノクローナル、複数又は単一鎖、又はインタクトな免疫グロブリンであり得、天然供給源から又は組換え供給源から由来し得る。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であり得る。一実施例では、抗体は、モノクローナル抗体である。抗体は、ヒト又はヒト化抗体であり得る。一実施例では、抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、又はＩｇＥ抗体である。一実施例では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４抗体である。
【０１６１】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の少なくとも一部、又はその組換えバリアントを指す、並びに抗原結合ドメイン、例えば、抗原などの標的に対する抗体断片の認識及び特異的な結合を付与するため十分であるインタクトな抗体の抗原性決定可変領域を指す。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、ｓｃＦｖ抗体断片、直鎖状抗体、単一ドメイン抗体、例えば、ｓｄＡｂ（ＶＬ又はＶＨのいずれか）、ラクダ科（ｃａｍｅｌｉｄ）ＶＨＨドメイン、及び抗体断片から形成される多重特異的抗体、例えば、ヒンジ領域でのジスルフィド架橋によって連結される２つのＦａｂ断片を含む二価断片、及び抗体の単離されたＣＤＲ又は他のエピトープ結合断片が含まれるが、限定されない。抗原結合断片はまた、単一ドメイン抗体、マキシボディ（ｍａｘｉｂｏｄｙ）、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ（ｉｎｔｒａｂｏｄｙ）、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ及びｂｉｓ−ｓｃＦｖに組み込むことができる（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１２６〜１１３６ページ、２００５を参照されたい）。抗原結合断片はまた、ポリペプチド、例えば、フィブロネクチンタイプＩＩＩ（Ｆｎ３）に基づく足場にグラフトされ得る（フィブロネクチンポリペプチドミニボディを記載する、米国特許第６，７０３，１９９号を参照されたい）。
【０１６２】
本明細書に記載される方法又は細胞において産生される、例示的な産物、例えば、ポリペプチド、例えば、組換えポリペプチドは、以下の表３及び４に提供される。
【０１６３】
【表３】
2019524125.tif 000005
【表３−２】
2019524125.tif 000006
【表３−３】
2019524125.tif 000007
【０１６４】
別の実施例では、産物は、二重特異性分子、例えば、二重特異性抗体である。本明細書に記載の二重特異性分子は、２つ又はそれを超える別個の抗原又は標的に結合することができる分子を含む。一実施例では、二重特異性分子は、抗体断片を含む。一実施例では、二重特異性分子は、二重特異性抗体、二重特異性抗体融合タンパク質、又は二重特異性抗体コンジュゲート、Ｂｉ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｅｎｇａｇｅｒ（ＢｉＴＥ）分子、Ｄｕａｌ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｒｅ−Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ（ＤＡＲＴ）分子、Ｄｕａｌ  Ａｃｔｉｏｎ  Ｆａｂ（ＤＡＦ）分子、ナノボディ、又は２つの別個の抗原を認識する又は結合する能力を有する分子をもたらす抗体断片の他の配置を含む。
【０１６５】
【表４】
2019524125.tif 000008
【表４−２】
2019524125.tif 000009
【表４−３】
2019524125.tif 000010
【表４−４】
2019524125.tif 000011
【０１６６】
他の例示的な又は診断上のタンパク質には、Ｌｅａｄｅｒら、「Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：  ａ  ｓｕｍｍａｒｙ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ」、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２００８、７：２１〜３９ページ（本明細書に参照によって組み込まれる）の表１〜１０に記載される任意のタンパク質；又は本明細書に記載される組換えポリペプチドの任意のコンジュゲート、バリアント、類似体、又は機能的な断片が含まれるが、限定されない。
【０１６７】
他の組換え産物には、非抗体足場又は代替タンパク質足場、例えば、ＤＡＲＰｉｎ、アフィボディ及びアドネクチンが含まれるが、限定されない。そのような非抗体足場又は代替タンパク質足場は、１つ又は２つ、又はそれを超える、例えば、１、２、３、４、又は５又はそれを超える、異なる標的又は抗原を認識する又は結合するため操作され得る。
【０１６８】
本明細書に記載される、産物、例えば、ポリペプチド、例えば、組換えポリペプチドをコードする核酸、例えば、外来性核酸も本明細書において提供される。所望の組換えポリペプチドをコードする核酸配列は、例えば、標準技術を使用して、所望の核酸配列、例えば、遺伝子を発現する細胞のライブラリーをスクリーニングすることによる、同じものを含むことが公知のベクターから核酸配列を誘導することによる、又は同じものを含有している細胞及び組織から直接的に単離することによる、当技術分野において公知である組換え方法を使用して取得することができる。或いは、組換えポリペプチドをコードする核酸は、クローン化というよりも合成的に産生することができる。組換えＤＮＡ技術及びテクノロジーは、当技術分野において高度に進歩しており、確立している。したがって、本明細書に記載される組換えポリペプチドのアミノ酸配列の知識を有する当業者は、組換えポリペプチドをコードするであろう核酸配列を容易に想定又は生成させることができる。
【０１６９】
いくつかの実施例では、外来性核酸は、宿主細胞によって内因性に発現される産物の発現を制御する。そのような実施例では、外来性核酸は、内因性産物（本明細書で「内因性産物トランス活性化配列」とも呼ばれる）の発現を増加させる、１つ又は複数の核酸配列を含む。例えば、内因性産物の発現を増加させる核酸配列は、構成的に活性なプロモーター又は、例えば、所望の部位での転写を増加させる、例えば、所望の内因性遺伝子産物の発現を増加させる、より強力なプロモーターを含む。内因性産物トランス活性化配列を含む外来性核酸の導入後、前記外来性核酸は、内因性産物トランス活性化配列が、所望の内因性産物のトランス活性化又は発現を増加するように、例えば、内因性産物をコードするゲノム配列に対して近位である事前に選択した位置で、細胞の染色体ゲノムに組み込まれる。内因性産物の発現を増加させるため、細胞を修飾する、例えば、外来性核酸を導入する、他の方法は、例えば、参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第５，２７２，０７１号に記載されている。
【０１７０】
本明細書に記載される産物の発現は、組換えポリペプチド又はその部分をコードする核酸をプロモーターに作動可能に連結すること、及び構築物を発現ベクターに組み込むことによって典型的に達成される。ベクターは、真核生物又は原核生物に複製及び組み込むため適切であり得る。典型的なクローニングベクターは、所望の核酸配列の発現の制御のため有用な、他の制御エレメント、例えば、転写及び翻訳ターミネーター、開始配列、及びプロモーターを含有する。
【０１７１】
産物、例えば、組換えポリペプチドをコードする又は内因性産物の発現を制御することができる核酸配列を含む、本明細書に記載される核酸配列は、いくつかのタイプのベクターにクローン化することができる。例えば、核酸は、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス、及びコスミドを含むが、限定されないベクターにクローン化することができる。特に対象とするベクターには、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクター（ｐｒｏｂｅ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｖｅｃｔｏｒ）、及びシークエンシングベクターが含まれる。実施例では、発現ベクターは、ウイルスベクターの形態で細胞に提供され得る。ウイルスベクターテクノロジーは、当技術分野において周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、２０１２、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、ｖｏｌｕｍｅｓ  １〜４、  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ）、及び他のウイルス学及び分子生物学マニュアルに記載されている。ベクターとして有用であるウイルスは、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス、及びレンチウイルスを含むが、限定されない。一般に、適切なベクターは、少なくとも１つの生物において機能的な複製起点、プロモーター配列、簡便な制限酵素部位、及び１つ又は複数の選択可能なマーカーを含有する（例えば、ＷＯ０１／９６５８４；ＷＯ０１／２９０５８；及び米国特許第６，３２６，１９３号）。ウイルスから由来するベクターは、長期の遺伝子移動を達成させるための適切なツールである、というのも、それらは、導入遺伝子の長期の安定な組込み及び娘細胞におけるその伝播を可能にするからである。
【０１７２】
ベクターはまた、例えば、分泌を促進させるためのシグナル配列、ポリアデニル化シグナル及び転写ターミネーター（例えば、ウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）遺伝子由来）、エピソーム複製及び原核生物における複製を可能にするエレメント（例えば、ＳＶ４０起源及びＣｏｌＥ１又は当技術分野において公知である他のもの）及び／又は選択を可能にするエレメント、例えば、選択マーカー又はレポーター遺伝子を含み得る。
【０１７３】
一実施例では、ポリペプチド、例えば、組換えポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクターは、ポリペプチド、例えば、組換えポリペプチドの発現のため転写開始を可能にするポリメラーゼの動員に関わるプロモーター配列を更に含む。一実施例では、本明細書に記載される方法のため適切なプロモーター配列は、多量の転写を駆動し、それ故、標的外来性ｍＲＮＡの大量のコピーを送達する、エンハンサーと通例では関連する。一実施例では、プロモーターは、両方とも、それらの同名のウイルス又はそれから由来するプロモーターから由来する、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）主要初期プロモーター（Ｘｉａ、Ｂｒｉｎｇｍａｎｎら  ２００６）及びＳＶ４０プロモーター（Ｃｈｅｒｎａｊｏｖｓｋｙ、Ｍｏｒｙら  １９８４）を含む。いくつかの他の頻度の低いウイルスプロモーターは、ラウス肉腫ウイルス末端反復配列  （ＲＳＶ−ＬＴＲ）及びモロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）ＬＴＲ（Ｐａｐａｄａｋｉｓ、Ｎｉｃｋｌｉｎら  ２００４）を含む発現ベクターに含める際に転写を駆動するため首尾よく利用されている。別の実施例では、特異的な内因性哺乳動物プロモーターを、対象とする遺伝子の構成的な転写を駆動するため利用することができる（Ｐｏｎｔｉｌｌｅｒ、Ｇｒｏｓｓら  ２００８）。ＣＨＯ特異的チャイニーズハムスター伸長因子１−アルファ（ＣＨＥＦ１α）プロモーターは、ウイルスベース配列を代替する高い収量を提供する（Ｄｅｅｒ、Ａｌｌｉｓｏｎ  ２００４）。プロモーターに加えて、本明細書に記載されるベクターは、上記のようなエンハンサー領域（転写の割合を上方制御する転写因子を動員することができる、コアプロモーターに対して近位である、特異的なヌクレオチドモチーフ領域）を更に含む（Ｒｉｅｔｈｏｖｅｎ  ２０１０）。これらの領域は、プロモーター配列と類似して、ウイルスから由来することが多く、プロモーター配列内に包含され、例えば、ｈＣＭＶ及びＳＶ４０エンハンサー配列である又はアデノウイルス由来配列などに追加的に含まれ得る（Ｇａｉｌｌｅｔ、Ｇｉｌｂｅｒｔら  ２００７）。
【０１７４】
一実施例では、本明細書に記載される、産物、例えば、ポリペプチド、例えば、組換えポリペプチドを含むベクターは、選択マーカーをコードする核酸配列を更に含む。一実施例では、選択可能なマーカーは、グルタミン合成酵素（ＧＳ）；ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）、例えば、メトトレキセート（ＭＴＸ）に対する耐性を付与する酵素；又は抗生物質マーカー、例えば、抗生物質、例えば、ハイグロマイシン、ネオマイシン（Ｇ４１８）、ゼオシン、ピューロマイシン、又はブラストサイジンに対する耐性を付与する酵素を含む。別の実施例では、選択マーカーは、Ｓｅｌｅｘｉｓ選択系（例えば、ＳＵＲＥテクノロジープラットホーム（商標）及びＳｅｌｅｘｉｓ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ（商標）、Ｓｅｌｅｘｉｓ  ＳＡから市販される）又はＣａｔａｌａｎｔ選択系を含む又はそれに適合する。
【０１７５】
一実施例では、本明細書に記載される組換え産物をコードする核酸配列を含むベクターは、細胞を同定することに有用である選択マーカーを含む又は細胞は、本明細書に記載される組換え産物をコードする核酸を含む。別の実施例では、選択マーカーは、本明細書に記載されるように、組換え産物をコードする核酸配列のゲノムへの組込みを含む細胞（単数又は複数）を同定することに有用である。組換えタンパク質をコードする核酸配列が組み込まれている細胞（単数又は複数）の同定は、産物を安定的に発現する細胞又は細胞系の選択及び操作のため有用であり得る。
【０１７６】
使用のため適切なベクターは、市販されており、Ｌｏｎｚａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｉｎｃから利用可能である、ＧＳ発現系（商標）、ＧＳ  Ｘｃｅｅｄ（商標）遺伝子発現系、又はＰｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶテクノロジーに関連するベクター、例えば、参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる、Ｆａｎら、Ｐｈａｒｍ．  Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ．  （２０１３）；  １（５）：４８７〜５０２ページに記載されるようなベクターを含む。ＧＳ発現ベクターは、ＧＳ遺伝子、又はその機能的な断片（例えば、ＧＳミニ遺伝子）、及び１つ又は複数、例えば、１、２、若しくは３、又はそれを超える、対象とする遺伝子、例えば、本明細書に記載される組換えポリペプチドをコードする核酸の発現のための効率の高い転写カセットを含む。ＧＳミニ遺伝子は、ゲノムＣＨＯ  ＧＳ遺伝子のイントロン６を含む、例えば、からなる。一実施例では、ＧＳベクターは、ＳＶ４０Ｌプロモーター及び１つ又は２つのｐｏｌｙＡシグナルと作動可能に連結しているＧＳ遺伝子を含む。別の実施例では、ＧＳベクターは、ＳＶ４０Ｅプロモーター、ＳＶ４０スプライシング及びポリアデニル化シグナルと作動可能に連結しているＧＳ遺伝子を含む。そのような実施例では、例えば、対象とする遺伝子の発現のための転写カセット又は本明細書に記載される組換えポリペプチドには、第一のイントロンを含む、ｈＣＭＶ−ＭＩＥ遺伝子からのｈＣＭＶ−ＭＩＥプロモーター及び５’非翻訳配列が含まれる。他のベクターは、例えば、他の選択マーカーが、本明細書に記載される発現ベクターにおけるＧＳ遺伝子に関して置換された、ＧＳ発現ベクターに基づいて構築することができる。
【０１７７】
本明細書に記載される方法における使用のため適切なベクターには、他の市販のベクター、例えば、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｚｅｏ、ｐｃＤＮＡ３．１／ＣＡＴ、ｐｃＤＮＡ３．３ＴＯＰＯ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、以前はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）；ｐＴａｒｇｅｔ、ＨａｌｏＴａｇ（Ｐｒｏｍｅｇａ）；ｐＵＣ５７（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）；ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）；ｐＣＭＶ６（Ｏｒｉｇｅｎｅ）；ｐＥＥ１２又はｐＥＥ１４（Ｌｏｎｚａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）、又はｐＢＫ−ＣＭＶ／ｐＣＭＶ−３Ｔａｇ−７／ｐＣＭＶ−Ｔａｇ２Ｂ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）が含まれるが、限定されない。
【０１７８】
細胞及び細胞培養
実施例では、細胞は、哺乳動物細胞である。他の実施例では、細胞は、哺乳動物細胞以外の細胞である。一実施例では、細胞は、マウス、ラット、チャイニーズハムスター、シリアンハムスター、サル、類人猿（ａｐｅ）、イヌ、ウマ、フェレット、又はネコである。実施例では、細胞は、哺乳動物細胞、例えば、ヒト細胞又はげっ歯類細胞、例えば、ハムスター細胞、マウス細胞、又はラット細胞である。別の実施例では、細胞は、カモ、オウム、魚、昆虫、植物、真菌、又は酵母からの細胞である。一実施例では、細胞は、古細菌である。一実施例では、細胞は、アクチノバクテリア、例えば、結核菌の種である。
【０１７９】
一実施例では、細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。一実施例では、細胞は、ＣＨＯ−Ｋ１細胞、ＣＨＯ−Ｋ１  ＳＶ細胞、ＤＧ４４  ＣＨＯ細胞、ＤＵＸＢ１１  ＣＨＯ細胞、ＣＨＯＳ、ＣＨＯ  ＧＳノックアウト細胞、ＣＨＯ  ＦＵＴ８  ＧＳノックアウト細胞、ＣＨＯＺＮ、又はＣＨＯ−由来細胞である。ＣＨＯ  ＧＳノックアウト細胞（例えば、ＧＳＫＯ細胞）は、例えば、ＣＨＯ−Ｋ１ＳＶ  ＧＳノックアウト細胞（Ｌｏｎｚａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｉｎｃ．）である。ＣＨＯ  ＦＵＴ８ノックアウト細胞は、例えば、Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ１  ＳＶ（Ｌｏｎｚａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｉｎｃ．）である。
【０１８０】
別の実施例では、細胞は、ＨｅＩａ、ＨＥＫ２９３、ＨＴ１０８０、Ｈ９、ＨｅｐＧ２、ＭＣＦ７、Ｊｕｒｋａｔ、ＮＩＨ３Ｔ３、ＰＣ１２、ＰＥＲ．Ｃ６、ＢＨＫ（ベビーハムスター腎臓細胞）、ＶＥＲＯ、ＳＰ２／０、ＮＳ０、ＹＢ２／０、Ｙ０、ＥＢ６６、Ｃ１２７、Ｌ  ｃｅｌｌ、ＣＯＳ、例えば、ＣＯＳ１及びＣＯＳ７、ＱＣ１−３、ＣＨＯＫ１、ＣＨＯＫ１ＳＶ、Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ  ＣＨＯＫ１ＳＶ、ＣＨＯ  ＧＳノックアウト、ＣＨＯＫ１ＳＶ  ＧＳ−ＫＯ、ＣＨＯＳ、ＣＨＯ  ＤＧ４４、ＣＨＯ  ＤＸＢ１１、及びＣＨＯＺＮ、又はそれから由来する任意の細胞である。一実施例では、細胞は、幹細胞である。一実施例では、細胞は、本明細書に記載される任意の細胞の分化型である。一実施例では、細胞は、培養における任意の初代細胞から由来する細胞である。
【０１８１】
一実施例では、細胞は、組換えポリペプチドをコードする、例えば、組換えポリペプチド、例えば、表５又は３から選択される組換えポリペプチドを発現する外来性核酸を含む、本明細書に記載される、いずれか１つの細胞である。
【０１８２】
一実施例では、細胞培養は、バッチ培養、フェッド−バッチ培養、ドロー及び充填培養（ｄｒａｗ  ａｎｄ  ｆｉｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ）、又は連続培養として実施される。一実施例では、細胞培養は、浮遊培養である。一実施例では、細胞又は細胞培養は、組換えポリペプチドの発現のためインビボに配置され、例えば、モデル生物又はヒト対象に配置される。
【０１８３】
一実施例では、培養培地は、血清非含有である。無血清及び無タンパク質培地は、市販されている、例えば、Ｌｏｎｚａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ。
【０１８４】
哺乳動物細胞系のため適切な培地及び培養方法は、一例を挙げると、米国特許第５，６３３，１６２号に記載されるように、当分野において周知である。研究室でのフラスコ又は低密度細胞培養のための及び特定の細胞タイプの必要性に適合される標準的な細胞培養培地の例は、一例を挙げると：Ｒｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ研究所（ＲＰＭＩ）１６４０培地（Ｍｏｒｒｅ、Ｇ．、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、１９９、ｐ．  ５１９  ｆ．  １９６７）、Ｌ−１５培地（Ｌｅｉｂｏｖｉｔｚ、Ａ．ら、Ａｍｅｒ．  Ｊ．  ｏｆ  Ｈｙｇｉｅｎｅ、７８、１ｐ．  １７３  ｆｆ、１９６３）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、イーグル最小必須培地（ＭＥＭ）、ハムＦ１２培地（Ｈａｍ、Ｒ．ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃ．５３、ｐ２８８  ｆｆ．  １９６５）又はアルブミン、トランスフェリン及びレシチンを欠くＩｓｃｏｖｅｓの改変ＤＭＥＭ（Ｉｓｃｏｖｅｓら、Ｊ．  Ｅｘｐ．  ｍｅｄ．  １、ｐ．  ９２３  ｆｆ．、１９７８）である。一例を挙げると、ハムのＦ１０又はＦ１２培地は、特にＣＨＯ細胞培養のため設計された。特にＣＨＯ細胞培養に適合させた他の培地は、ＥＰ−４８１７９１に記載される。そのような培養培地がウシ胎児血清（ＦＢＳ、ウシ胎児血清ＦＣＳとも称される）を添加されてもよいことが公知であり、後者は多量のホルモン及び成長因子の天然の供給源を提供する。哺乳動物細胞の細胞培養は、現在では日常的な操作であり、科学のテキストブック及びマニュアル中によりよく記載され、例えば、Ｒ．  Ｉａｎ  Ｆｒｅｓｎｅｙ、Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  ｃｅｌｌｓ、ａ  ｍａｎｕａｌ、４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ／Ｎ．Ｙ．、２０００に詳細に論じられている。
【０１８５】
他の適切な培養方法は、当業者に公知であり、利用される組換えポリペプチド産物及び宿主細胞に依存し得る。細胞によって発現される組換えポリペプチドの発現及び産生のため適切な条件を決定又は至適化することは、当業者の能力の範囲内である。
【０１８６】
一態様では、細胞又は細胞系は、産物、例えば、組換えポリペプチドをコードする、外来性核酸を含む。一実施例では、細胞又は細胞系は、産物、例えば、治療又は診断上の産物を発現する。所望の  ポリペプチド又はタンパク質を発現させるため細胞を遺伝的に修飾する又は操作するための方法は、当技術分野において周知であり、例えば、トランスフェクション、トランスダクション（例えば、ウイルストランスダクション）、又はエレクトロポレーションを含む。
【０１８７】
本明細書に記載される外来性核酸又はベクターなどの核酸を宿主細胞に導入するための物理的方法には、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、微粒子銃、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどが含まれる。ベクター及び／又は外来性核酸を含む細胞を産生するための方法は、当技術分野において周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、２０１２、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、ｖｏｌｕｍｅｓ  １〜４、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ）を参照されたい。
【０１８８】
本明細書に記載される外来性核酸又はベクターなどの核酸を宿主細胞に導入するための化学的方法には、コロイド性分散系、例えば、高分子複合体（ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ）、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、及び水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル、及びリポソームを含む、脂質ベース系が含まれる。インビトロ及びインビボで送達ビヒクルとして使用するための例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜ベシクル）である。核酸の最新の標的化された送達の他の方法が、利用可能であり、例えば、標的化されたナノ粒子又は他の適切なサブミクロンサイズの送達系でのポリヌクレオチドの送達である。
【０１８９】
実施例では、外来性核酸の宿主細胞の核酸、例えば、宿主細胞のゲノム又は染色体核酸への組込みが、所望される。外来性核酸の宿主細胞のゲノムへの組込みが起こっているかどうかを決定するための方法には、ＧＳ／ＭＳＸ選択方法が含まれ得る。ＧＳ／ＭＳＸ選択方法は、細胞からのタンパク質の高レベル発現に関して選択するため、組換えＧＳ遺伝子によるグルタミン栄養要求性の補完性を使用する。簡潔に述べると、ＧＳ／ＭＳＸ選択方法は、組換えポリペプチド産物をコードする外来性核酸を含むベクターにおけるグルタミン合成酵素をコードする核酸を含めることを含む。メチオニンスルホキシイミン（ＭＳＸ）の投与により、組換えポリペプチド及びＧＳの両方をコードする外来性核酸がゲノムに安定的に組み込まれた細胞が選択される。ＧＳはいくつかの宿主細胞、例えば、ＣＨＯ細胞によって内因性に発現され得るので、ＭＳＸでの選択の濃度及び持続時間は、組換えポリペプチド産物の宿主ゲノムへの安定的な組込みを有する高産生細胞を同定するため、最適化され得る。ＧＳ選択及びその系は、参照することによってその全体が本明細書に組み込まれる、Ｆａｎら、Ｐｈａｒｍ．  Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ．  （２０１３）；  １（５）：４８７〜５０２ページに更に記載されるようなベクターを含む。
【０１９０】
外来性核酸が宿主細胞ゲノムに安定的に組み込まれている細胞を同定する及び選択するための他の方法には、外来性核酸にレポーター遺伝子を含めること及び細胞におけるレポーター遺伝子の存在の評価、及び外来性核酸のＰＣＲ分析及び検出が含まれるが、限定されない。
【０１９１】
一実施例では、本明細書に記載される方法を使用して選択される、同定される、又は生成される細胞は、安定的な発現、例えば、組換えポリペプチドをコードする外来性核酸の組込みのための選択方法のみを使用して選択される細胞よりも高い収量のタンパク質産物を産生することが可能である。一実施例では、本明細書に記載される方法を使用して選択される、同定される、又は生成される細胞は、タンパク質分解の阻害剤と接触されていなかった細胞、又は安定的な発現、例えば、組換えポリペプチドをコードする外来性核酸の組込みのための選択のみされた細胞と比較して、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、又は１０倍又はそれを超える産物、例えば、組換えポリペプチドを産生する。
【０１９２】
細胞系及び組換えポリペプチド産生のための方法
哺乳動物及び微生物選択系の両方における当技術分野における現在の最新技術は、ＲＮＡへのＤＮＡの転写のレベルで選択圧を適用することである。対象とする遺伝子は、対象とする遺伝子の高発現をもたらす可能性が高い、選択マーカーを高レベルで発現させる選択マーカーに厳密に連結される。高レベルで選択マーカーを発現する細胞は、生存及び増殖することができ、発現しないものは、生存及び増殖する可能性が低く、例えば、アポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｅ）及び／又は死亡する。このような方法で、細胞の集団は、選択マーカーを発現する細胞に関して富化され得ることから、対象とする遺伝子が高レベルであることが含意され得る。この方法は、直接的なタンパク質の発現について非常に成功することが証明されている。実施例では、本明細書に記載されるプロセスは、実質的に純粋なタンパク質産物を提供する。本明細書で使用するように、「実質的に純粋」は、実質的に発熱性物質非含有、実質的に核酸非含有、及び／又は実質的にポリメラーゼ、リボソームタンパク質、及びシャペロンタンパク質などの宿主細胞からの内因性細胞タンパク質酵素及び成分非含有であることを意味する。実質的に純粋なタンパク質産物は、例えば、２５％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、又は１％未満の夾雑内因性タンパク質、核酸、又は宿主細胞からの他の高分子を含有する。
【０１９３】
方法及びシステムは、当分野で確立されている、製品を回収し、且つ、精製するための方法と共に使用することができる。組換えポリペプチド産物を回収するために、物理的又は化学的或いは物理化学的方法が使用される。組換えポリペプチド産物を回収するため、物理的な又は化学的な又は物理化学的な方法が使用される。物理的な又は化学的な又は物理化学的な方法は、濾過方法、遠心分離方法、超遠心方法、抽出方法、凍結乾燥方法、沈殿方法、結晶化方法、クロマトグラフィー方法又はその２つ若しくはそれを超える方法の組合せであり得る。一実施例では、クロマトグラフィー方法は、１つ又は複数のサイズ排除クロマトグラフィー（又はゲル濾過）、イオン交換クロマトグラフィー、例えば、陰イオン若しくは陽イオン交換クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、疎水的相互作用クロマトグラフィー、及び／又は多モードのクロマトグラフィーを含む。
【０１９４】
本明細書において説明されているデバイス、施設及び方法は、原核細胞系及び／又は真核細胞系を含む任意の所望の細胞系を培養するのに適している。更に、実施例では、デバイス、施設及び方法は、懸濁細胞又は付着依存性（粘着）細胞を培養するのに適しており、また、ポリペプチド産物、核酸産物（例えばＤＮＡ又はＲＮＡ）などの薬剤及びバイオ薬剤製品、或いは細胞治療及び／又はウイルス治療に使用されるような細胞及び／又はウイルスの製造のために構成された製造操作のために適している。実施例では、細胞は、組換え治療製品又は診断製品などの製品を発現し、或いは製造する。以下でより詳細に説明されるように、細胞によって製造される製品の実例は、それらに限定されないが、抗体分子（例えばモノクローナル抗体、二重特異性抗体）、抗体模倣体（とりわけ抗原に結合するが、例えばＤＡＲＰｉｎ、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｙ）、アドネクチン（ａｄｎｅｃｔｉｎ）又はＩｇＮＡＲなどの抗体に構造的に関連していないポリペプチド分子）、融合タンパク質（例えばＦｃ融合タンパク質、キメラサイトカイン）、他の組換えタンパク質（例えばグリコシル化タンパク質、酵素、ホルモン）、ウイルス治療薬（例えば抗がん腫瘍退縮性ウイルス、遺伝子治療のためのウイルスベクター、及びウイルス免疫治療薬）、細胞治療薬（例えば多能性幹細胞、間葉系幹細胞及び成体幹細胞）、ワクチン又は脂質カプセル封入粒子（例えばエキソソーム、ウイルス様粒子）、ＲＮＡ（例えばｓｉＲＮＡなど）又はＤＮＡ（例えばプラスミドＤＮＡなど）、抗生物質又はアミノ酸を含む。実施例では、デバイス、施設及び方法を使用してバイオシミラーを製造することができる。
【０１９５】
言及したように、実施例では、デバイス、施設及び方法によれば、真核細胞、例えば哺乳動物細胞、或いは例えば酵母菌細胞又は糸状菌類細胞などの下等（ｌｏｗｅｒ）真核細胞、或いはグラム陽性細胞又はグラム陰性細胞及び／又は真核細胞又は原核細胞の産物、例えば大量方式で真核細胞によって合成されたタンパク質、ペプチド、抗生物質、アミノ酸、核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡなど）などの原核細胞を製造することができる。本明細書において別途言及されていない限り、デバイス、施設及び方法は、それらに限定されないが、ベンチスケール容量、パイロットスケール容量及び全製造スケール容量を含む任意の所望の体積即ち製造容量を含むことができる。
【０１９６】
更に、本明細書において別途言及されていない限り、デバイス、施設及び方法は、それらに限定されないが、かき混ぜタンク、エアリフト、繊維、超極細繊維、中空繊維、セラミックマトリックス、流動床バイオリアクタ、固定床バイオリアクタ及び／又は噴出床バイオリアクタを含む任意の適切なリアクタを含むことができる。本明細書において使用されているように、「リアクタ」は、発酵槽ユニット又は発酵ユニット、或いは任意の他のリアクタベッセルを含むことができ、また、「リアクタ」という用語は、「発酵槽」と交換可能に使用されている。例えばいくつかの態様では、一実例バイオリアクタユニットは、栄養物及び／又は炭素源の供給、適切なガス（例えば酸素）の注入、発酵培地又は細胞培養培地の入口流及び出口流、気体相及び液体相の分離、温度の維持、酸素レベル及びＣＯ２レベルの維持、ｐＨレベルの維持、撹拌（例えばかき混ぜ）及び／又は洗浄／殺菌のうちの１つ又は複数、或いは全てを実施することができる。発酵ユニットなどの実例リアクタユニットは、ユニット内に複数のリアクタを含むことができ、例えばユニットは、１個、２個、３個、４個、５個、１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、６０個、７０個、８０個、９０個又は１００個、或いはそれ以上のバイオリアクタを個々のユニット中に有することができ、及び／又は施設は、単一のリアクタ又は複数のリアクタを施設内に有する複数のユニットを含むことができる。様々な実施例では、バイオリアクタは、バッチ、セミフェッドバッチ、フェッドバッチ、灌流及び／又は連続発酵プロセスのために適切であり得る。任意の適切なリアクタ径を使用することができる。実施例では、バイオリアクタは、約１００ｍＬと約５０，０００Ｌの間の体積を有することができる。非制限の実例は、１００ｍＬ、２５０ｍＬ、５００ｍＬ、７５０ｍＬ、１リットル、２リットル、３リットル、４リットル、５リットル、６リットル、７リットル、８リットル、９リットル、１０リットル、１５リットル、２０リットル、２５リットル、３０リットル、４０リットル、５０リットル、６０リットル、７０リットル、８０リットル、９０リットル、１００リットル、１５０リットル、２００リットル、２５０リットル、３００リットル、３５０リットル、４００リットル、４５０リットル、５００リットル、５５０リットル、６００リットル、６５０リットル、７００リットル、７５０リットル、８００リットル、８５０リットル、９００リットル、９５０リットル、１０００リットル、１５００リットル、２０００リットル、２５００リットル、３０００リットル、３５００リットル、４０００リットル、４５００リットル、５０００リットル、６０００リットル、７０００リットル、８０００リットル、９０００リットル、１０，０００リットル、１５，０００リットル、２０，０００リットル及び／又は５０，０００リットルの体積を含む。更に、適切なリアクタは、マルチユース、シングルユース、使い捨て又は非使い捨てであってもよく、また、ステンレス鋼（例えば３１６Ｌ又は任意の他の適切なステンレス鋼）及びインコネル、プラスチック及び／又はガラスなどの金属合金を含む任意の適切な材料で形成することができる。
【０１９７】
実施例では、本明細書において別途言及されていない限り、本明細書において説明されているデバイス、施設及び方法は、このような産物の分離、精製及び単離のための操作及び／又は機器などの言及されていない任意の適切なユニット操作及び／又は機器を含むことも可能である。従来の現場組立て施設、モジュラー施設、移動施設及び仮施設、又は任意の他の適切な建造物、施設及び／又はレイアウトなどの任意の適切な施設及び環境を使用することができる。例えばいくつかの実施例では、モジュラークリーンルームを使用することができる。更に、別途言及されていない限り、本明細書において説明されているデバイス、システム及び方法は、単一の場所又は施設に収容することができ、及び／又は単一の場所又は施設で実施することができ、或いは別法として、個別の、即ち複数の場所及び／又は施設に収容することができ、及び／又は複数の場所又は施設で実施することも可能である。
【０１９８】
非制限の実例として、また、非制限で、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれている、米国公開第２０１３／０２８０７９７号、米国公開第２０１２／００７７４２９号、米国公開第２００９／０３０５６２６号、及び米国特許第８，２９８，０５４号、米国特許第７，６２９，１６７号及び米国特許第５，６５６，４９１号は、適切であり得る実例施設、機器及び／又はシステムを記述している。
【０１９９】
実施例では、細胞は、真核細胞、例えば、哺乳動物細胞である。哺乳動物細胞は、例えば、ヒト又はげっ歯類又はウシの細胞系又は細胞株であってもよい。そのような細胞、細胞系又は細胞株の例は、例えば、マウス骨髄腫（ＮＳＯ）細胞系、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系、ＨＴ１０８０、Ｈ９、ＨｅｐＧ２、ＭＣＦ７、ＭＤＢＫ  Ｊｕｒｋａｔ、ＮＩＨ３Ｔ３、ＰＣ１２、ＢＨＫ（ベビーハムスター腎臓細胞）、ＶＥＲＯ、ＳＰ２／０、ＹＢ２／０、Ｙ０、Ｃ１２７、Ｌ細胞、ＣＯＳ、例えば、ＣＯＳ１及びＣＯＳ７、ＱＣ１−３、ＨＥＫ−２９３、ＶＥＲＯ、ＰＥＲ．Ｃ６、ＨｅＬＡ、ＥＢ１、ＥＢ２、ＥＢ３、腫瘍溶解細胞系又はハイブリドーマ細胞系である。好ましくは、哺乳動物細胞は、ＣＨＯ細胞系である。一実施例では、細胞はＣＨＯ細胞である。一実施例では、細胞は、ＣＨＯ−Ｋ１細胞、ＣＨＯ−Ｋ１  ＳＶ細胞、ＤＧ４４  ＣＨＯ細胞、ＤＵＸＢ１１  ＣＨＯ細胞、ＣＨＯＳ、ＣＨＯ  ＧＳノックアウト細胞、ＣＨＯ  ＦＵＴ８  ＧＳノックアウト細胞、ＣＨＯＺＮ、又はＣＨＯ由来細胞である。ＣＨＯ  ＧＳノックアウト細胞（例えば、ＧＳＫＯ細胞）は、例えば、ＣＨＯ−Ｋ１  ＳＶ  ＧＳノックアウト細胞である。ＣＨＯ  ＦＵＴ８ノックアウト細胞は、例えば、Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ１  ＳＶ（Ｌｏｎｚａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｉｎｃ．）である。真核細胞は、例えば、ＥＢｘ（登録商標）細胞、ＥＢ１４、ＥＢ２４、ＥＢ２６、ＥＢ６６、又はＥＢｖｌ３などの、鳥類の細胞、細胞系又は細胞株であってもよい。
【０２００】
一実施例では、真核細胞は、幹細胞である。幹細胞は、例えば、胚性幹細胞（ＥＳＣ）、成体幹細胞、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、組織特異的幹細胞（例えば、造血幹細胞）及び間葉系幹細胞（ＭＳＣ）などの多能性幹細胞であってもよい。
【０２０１】
一実施例では、細胞は、本明細書に記載の細胞のいずれかの分化した形態である。一実施例では、細胞は、培養物中の任意の一次細胞に由来する細胞である。
【０２０２】
実施例では、細胞は、ヒト肝細胞、動物肝細胞、又は非実質細胞などの肝細胞である。例えば、細胞は、播種可能な代謝条件付きヒト肝細胞、播種可能な誘導条件付きヒト肝細胞、播種可能なＱｕａｌｙｓｔ  Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  Ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ（商標）ヒト肝細胞、懸濁条件付きヒト肝細胞（１０ドナー及び２０ドナーのプールされた肝細胞を含む）、ヒト肝臓クッパー細胞、ヒト肝臓星細胞、イヌ肝細胞（単一の、及びプールされたビーグル犬肝細胞を含む）、マウス肝細胞（ＣＤ−１及びＣ５７ＢＩ／６肝細胞を含む）、ラット肝細胞（Ｓｐｒａｑｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ、Ｗｉｓｔａｒ  Ｈａｎ、及びＷｉｓｔａｒ肝細胞を含む）、サル肝細胞（カニクイザル及びアカゲザル肝細胞を含む）、ネコ肝細胞（家庭用短毛種の肝細胞を含む）、並びにウサギ肝細胞（Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  Ｗｈｉｔｅの肝細胞を含む）であってもよい。例示的な肝細胞は、Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｓ、ＬＬＣ、６  Ｄａｖｉｓ  Ｄｒｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ、Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ、ＵＳＡ  ２７７０９から市販されている。
【０２０３】
一実施例では、真核細胞は、例えば、酵母細胞（例えば、Ｐｉｃｈｉａ属（例えば、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ、Ｐｉｃｈｉａ  ｋｌｕｙｖｅｒｉ、及びＰｉｃｈｉａ  ａｎｇｕｓｔａ）、Ｋｏｍａｇａｔａｅｌｌａ属（例えば、Ｋｏｍａｇａｔａｅｌｌａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｋｏｍａｇａｔａｅｌｌａ  ｐｓｅｕｄｏｐａｓｔｏｒｉｓ若しくはＫｏｍａｇａｔａｅｌｌａ  ｐｈａｆｆｉｉ）、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓａｅ、ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｋｌｕｙｖｅｒｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｕｖａｒｕｍ）、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属（例えば、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｍａｒｘｉａｎｕｓ）、Ｃａｎｄｉｄａ属（例えば、Ｃａｎｄｉｄａ  ｕｔｉｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｃａｃａｏｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｂｏｉｄｉｎｉｉ）、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ属（例えば、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ、Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、又はＳｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅなどの下等真核細胞である。好ましいのは、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓである。Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ株の例は、Ｘ３３、ＧＳ１１５、ＫＭ７１、ＫＭ７１Ｈ、及びＣＢＳ７４３５である。
【０２０４】
一実施例では、真核細胞は、真菌細胞（例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ（Ａ．ｎｉｇｅｒ、Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａ．ｏｒｙｚａｅ、Ａ．ｎｉｄｕｌａなど）、Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ（Ａ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍなど）、Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ（Ｃ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍなど）、Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ（Ｃ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅなど）、Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ（Ｃ．ｍｉｌｉｔａｒｉｓなど）、Ｃｏｒｙｎａｓｃｕｓ、Ｃｔｅｎｏｍｙｃｅｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ（Ｆ．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍなど）、Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａ（Ｇ．ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａなど）、Ｈｙｐｏｃｒｅａ（Ｈ．ｊｅｃｏｒｉｎａなど）、Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ（Ｍ．ｏｒｚｙａｅなど）、Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ（Ｍ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅなど）、Ｎｅｃｔｒｉａ（Ｎ．ｈｅａｍａｔｏｃｏｃｃａなど）、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ（Ｎ．ｃｒａｓｓａなど）、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｕｍ（Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅなど）、Ｔｈｉｅｌａｖｉａ（Ｔ．ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ、Ｔ．ｈｅｔｅｒｏｔｈａｌｌｉｃａなど）、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ（Ｔ．ｒｅｅｓｅｉなど）、又はＶｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ（Ｖ．ｄａｈｌｉａなど））である。
【０２０５】
一実施例では、真核細胞は、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ９、Ｍｉｍｉｃ（商標）Ｓｆ９、Ｓｆ２１、Ｈｉｇｈ  Ｆｉｖｅ（商標）（ＢＴ１−ＴＮ−５Ｂ１−４）、若しくはＢＴ１−Ｅａ８８細胞）、藻類細胞（例えば、Ａｍｐｈｏｒａ、Ｂａｃｉｌｌａｒｉｏｐｈｙｃｅａｅ、Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ、Ｃｙａｎｏｐｈｙｔａ（シアノバクテリア）、Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ、Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ、若しくはＯｃｈｒｏｍｏｎａｓ属のもの）、又は植物細胞（例えば、単子葉植物（例えば、トウモロコシ、コメ、コムギ、若しくはセタリア属）、又は双子葉植物（例えば、キャッサバ、ジャガイモ、ダイズ、トマト、タバコ、アルファルファ、Ｐｈｙｓｃｏｍｉｔｒｅｌｌａ  ｐａｔｅｎｓ若しくはＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）に由来する細胞）である。
【０２０６】
一実施例では、細胞は、細菌又は原核細胞である。
【０２０７】
実施例では、原核細胞は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ又はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓなどのグラム陽性細胞である。使用することができるＢａｃｉｌｌｕｓは、例えば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｂ．ｎａｔｔｏ、又はＢ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍである。実施例では、細胞は、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ３ＮＡ及びＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ  １６８などのＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓである。Ｂａｃｉｌｌｕｓは、例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｓｔｏｃｋ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ５５６、４８４  Ｗｅｓｔ  １２ｔｈ  Ａｖｅｎｕｅ、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  ＯＨ  ４３２１０−１２１４から取得可能である。
【０２０８】
一実施例では、原核細胞は、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐ．又は例えば、ＴＧ１、ＴＧ２、Ｗ３１１０、ＤＨ１、ＤＨＢ４、ＤＨ５ａ、ＨＭＳ１７４、ＨＭＳ１７４（ＤＥ３）、ＮＭ５３３、Ｃ６００、ＨＢ１０１、ＪＭ１０９、ＭＣ４１００、ＸＬ１−Ｂｌｕｅ及びＯｒｉｇａｍｉなどのＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、並びに例えば、ＢＬ−２１若しくはＢＬ−２１（ＤＥ３）などの大腸菌Ｂ株に由来するものなどのグラム陰性細胞であり、これらは全て市販されている。
【０２０９】
好適な宿主細胞は、例えば、ＤＳＭＺ（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ａｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ、Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）又はＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）などの菌株保存機関から市販されている。
【０２１０】
実施例では、培養細胞を使用して、治療的使用のためのタンパク質、例えば、抗体、例えば、モノクローナル抗体、及び／又は組換えタンパク質を産生させる。実施例では、培養細胞は、ペプチド、アミノ酸、脂肪酸又は他の有用な生化学的中間体若しくは代謝物を産生する。例えば、実施例では、約４０００ダルトン〜約１４０，０００ダルトンを超える分子量を有する分子を産生させることができる。実施例では、これらの分子は、一定範囲の複雑性を有し、グリコシル化などの翻訳後改変を含んでもよい。
【０２１１】
実施例では、タンパク質は、例えば、ＢＯＴＯＸ、Ｍｙｏｂｌｏｃ、Ｎｅｕｒｏｂｌｏｃ、Ｄｙｓｐｏｒｔ（又は他の血清型のボツリヌス神経毒）、アルグルコシダーゼアルファ、ダプトマイシン、ＹＨ−１６、絨毛性性腺刺激ホルモンアルファ、フィルグラスチム、セトロレリックス、インターロイキン−２、アルデスロイキン、テセロイキン（ｔｅｃｅｌｅｕｌｉｎ）、デニロイキンジフィトックス、インターフェロンアルファ−ｎ３（注射剤）、インターフェロンアルファ−ｎｌ、ＤＬ−８２３４、インターフェロン、Ｓｕｎｔｏｒｙ（ガンマ−１ａ）、インターフェロンガンマ、サイモシンアルファ１、タソネルミン、ＤｉｇｉＦａｂ、ＶｅｐｅｒａＴＡｂ、ＥｃｈｉＴＡｂ、ＣｒｏＦａｂ、ネシリチド、アバタセプト、アレファセプト、Ｒｅｂｉｆ、エプトテルミナルファ、テリパラチド（骨粗鬆症）、カルシトニン注射（骨疾患）、カルシトニン（経鼻、骨粗鬆症）、エタネルセプト、ヘモグロビングルタマー２５０（ウシ）、ドロトレコギンアルファ、コラゲナーゼ、カルペリチド、組換えヒト上皮増殖因子（局所用ゲル、創傷治癒）、ＤＷＰ４０１、ダルベポエチンアルファ、エポエチンオメガ、エポエチンベータ、エポエチンアルファ、デシルジン、レピルジン、ビバリルジン、ノナコグアルファ、Ｍｏｎｏｎｉｎｅ、エプタコグアルファ（活性化）、組換え第ＶＩＩＩ因子＋ＶＷＦ、レコンビナート、組換え第ＶＩＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子（組換え体）、Ａｌｐｈｎｍａｔｅ、オクトコグアルファ、第ＶＩＩＩ因子、パリフェルミン、Ｉｎｄｉｋｉｎａｓｅ、テネクテプラーゼ、アルテプラーゼ、パミテプラーゼ、レテプラーゼ、ナテプラーゼ、モンテプラーゼ、フォリトロピンアルファ、ｒＦＳＨ、ｈｐＦＳＨ、ミカファンギン、ペグフィルグラスチム、レノグラスチム、ナルトグラスチム、セルモレリン、グルカゴン、エキセナチド、プラムリンチド、イニグルセラーゼ、ガルスルファーゼ、Ｌｅｕｃｏｔｒｏｐｉｎ、モルグラモスチム、トリプトレリンアセテート、ヒストレリン（皮下埋込み体、Ｈｙｄｒｏｎ）、デスロレリン、ヒストレリン、ナファレリン、ロイプロリド徐放型デポー剤（ＡＴＲＩＧＥＬ）、ロイプロリド埋込み型（ＤＵＲＯＳ）、ゴセレリン、Ｅｕｔｒｏｐｉｎ、ＫＰ−１０２プログラム、ソマトロピン、メセカルミン（成長不全）、エンフュービルタイド（ｅｎｌｆａｖｉｒｔｉｄｅ）、Ｏｒｇ−３３４０８、インスリングラルギン、インスリングルリジン、インスリン（吸入薬）、インスリンリスプロ、インスリンデテミル、インスリン（口腔、ＲａｐｉｄＭｉｓｔ）、メカセルミンリンファバート、アナキンラ、セルモロイキン、９９ｍＴｃ−アプシタイド注射剤、ミエロイド、Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ、酢酸グラチラマー、Ｇｅｐｏｎ、サルグラモスチム、オプレルベキン、ヒト白血球由来アルファインターフェロン、Ｂｉｌｉｖｅ、インスリン（組換え体）、組換えヒトインスリン、インスリンアスパルト、メカセルミン（ｍｅｃａｓｅｎｉｎ）、Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ、インターフェロン−アルファ２、Ａｌｆａｆｅｒｏｎｅ、インターフェロンアルファコン−１、インターフェロンアルファ、Ａｖｏｎｅｘの組換えヒト黄体形成ホルモン、ドルナーゼアルファ、トラフェルミン、ジコノタイド、タルチレリン、ジボテルミンアルファ、アトシバン、ベカプレルミン、エプチフィバチド、Ｚｅｍａｉｒａ、ＣＴＣ−１１１、Ｓｈａｎｖａｃ−Ｂ、ＨＰＶワクチン（四価）、オクトレオチド、ランレオチド、アンセスチム、アガルシダーゼベータ、アガルシダーゼアルファ、ラロニダーゼ、プレザチド銅酢酸（局所用ゲル）、ラスブリカーゼ、ラニビズマブ、Ａｃｔｉｍｍｕｎｅ、ＰＥＧ−イントロン、Ｔｒｉｃｏｍｉｎ、組換えハウスダストダニアレルギー脱感作注射剤、組換えヒト副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）１〜８４（ｓｃ、骨粗鬆症）、エポエチンデルタ、トランスジェニックアンチトロンビンＩＩＩ、Ｇｒａｎｄｉｔｒｏｐｉｎ、Ｖｉｔｒａｓｅ、組換えインスリン、インターフェロン−アルファ（経口トローチ剤）、ＧＥＭ−２１Ｓ、バプレオチド、イズルスルファーゼ、オマパトリラト（ｏｍｎａｐａｔｒｉｌａｔ）、組換え血清アルブミン、セルトリズマブペゴール、グルカルピダーゼ、ヒト組換えＣ１エステラーゼ阻害剤（血管浮腫）、ラノテプラーゼ、組換えヒト成長ホルモン、エンフュービルタイド（針を用いない注射剤、Ｂｉｏｊｅｃｔｏｒ  ２０００）、ＶＧＶ−１、インターフェロン（アルファ）、ルシナクタント、アビプタジル（吸入薬、肺疾患）、イカチバント、エカランチド、オミガナン、Ａｕｒｏｇｒａｂ、酢酸ペキシガナン、ＡＤＩ−ＰＥＧ−２０、ＬＤＩ−２００、デガレリクス、シントレデキンベスドトクス、Ｆａｖｌｄ、ＭＤＸ−１３７９、ＩＳＡｔｘ−２４７、リラグルチド、テリパラチド（骨粗鬆症）、チファコギン、ＡＡ４５００、Ｔ４Ｎ５リポソームローション、カツマキソマブ、ＤＷＰ４１３、ＡＲＴ−１２３、Ｃｈｒｙｓａｌｉｎ、デスモテプラーゼ、アメジプラーゼ、コリフォリトロピンアルファ、ＴＨ−９５０７、テズグルチド、Ｄｉａｍｙｄ、ＤＷＰ−４１２、成長ホルモン（徐放型注射剤）、組換えＧ−ＣＳＦ、インスリン（吸入薬、ＡＩＲ）、インスリン（吸入薬、Ｔｅｃｈｎｏｓｐｈｅｒｅ）、インスリン（吸入薬、ＡＥＲｘ）、ＲＧＮ−３０３、ＤｉａＰｅｐ２７７、インターフェロンベータ（Ｃ型肝炎ウイルス感染（ＨＣＶ））、インターフェロンアルファ−ｎ３（経口薬）、ベラタセプト、経皮インスリンパッチ、ＡＭＧ−５３１、ＭＢＰ−８２９８、Ｘｅｒｅｃｅｐｔ、オペバカン、ＡＩＤＳＶＡＸ、ＧＶ−１００１、ＬｙｍｐｈｏＳｃａｎ、ランピルナーゼ、Ｌｉｐｏｘｙｓａｎ、ラスプルチド、ＭＰ５２（ベータ型リン酸三カルシウム担体、骨再生）、メラノーマワクチン、シプリューセル−Ｔ、ＣＴＰ−３７、Ｉｎｓｅｇｉａ、ビテスペン、ヒトトロンビン（凍結型、手術による出血）、トロンビン、ＴｒａｎｓＭＩＤ、アルフィメプラーゼ、Ｐｕｒｉｃａｓｅ、テルリプレシン（静脈内、肝腎症候群）、ＥＵＲ−１００８Ｍ、組換えＦＧＦ−Ｉ（注入型、血管疾患）、ＢＤＭ−Ｅ、ロチガプチド、ＥＴＣ−２１６、Ｐ−１１３、ＭＢＩ−５９４ＡＮ、デュラマイシン（吸入型、嚢胞性線維症）、ＳＣＶ−０７、ＯＰＩ−４５、Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ、Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ、ＡＢＴ−５１０、ボーマン−バーク型阻害物質濃縮剤、ＸＭＰ−６２９、９９ｍＴｃ−Ｈｙｎｉｃ−Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ、カハラリドＦ、Ｃ��ＣＥ−９９０８、テベレリクス（徐放型）、オザレリクス、ロミデプシン、ＢＡＹ−５０４７９８、インターロイキン４、ＰＲＸ−３２１、Ｐｅｐｓｃａｎ、イボクタデキン、ｒｈラクトフェリン、ＴＲＵ−０１５、ＩＬ−２１、ＡＴＮ−１６１、シレンジタイド、Ａｌｂｕｆｅｒｏｎ、Ｂｉｐｈａｓｉｘ、ＩＲＸ−２、オメガインターフェロン、ＰＣＫ−３１４５、ＣＡＰ−２３２、パシレオチド、ｈｕＮ９０１−ＤＭＩ、卵巣がんの免疫治療用ワクチン、ＳＢ−２４９５５３、Ｏｎｃｏｖａｘ−ＣＬ、ＯｎｃｏＶａｘ−Ｐ、ＢＬＰ−２５、ＣｅｒＶａｘ−１６、マルチエピトープペプチドメラノーマワクチン（ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００、チロシナーゼ）、ネミフィチド、ｒＡＡＴ（吸入型）、ｒＡＡＴ（皮膚科薬）、ＣＧＲＰ（吸入型、喘息）、ペグスネルセプト、サイモシンベータ４、プリチデプシン、ＧＴＰ−２００、ラモプラニン、ＧＲＡＳＰＡ、ＯＢＩ−１、ＡＣ−１００、サケカルシトニン（経口薬、エリゲン）、カルシトニン（経口薬、骨粗鬆症）、エキサモレリン、カプロモレリン、Ｃａｒｄｅｖａ、ベラフェルミン、１３１Ｉ−ＴＭ−６０１、ＫＫ−２２０、Ｔ−１０、ウラリチド、デペレスタット、ヘマタイド、Ｃｈｒｙｓａｌｉｎ（局所用）、ｒＮＡＰｃ２、組換え第ＶＩＩＩ因子（ＰＥＧ化リポソーム）、ｂＦＧＦ、ＰＥＧ化組換えスタフィロキナーゼ変異体、Ｖ−１０１５３、ＳｏｎｏＬｙｓｉｓ  Ｐｒｏｌｙｓｅ、ＮｅｕｒｏＶａｘ、ＣＺＥＮ−００２、膵島新生治療、ｒＧＬＰ−１、ＢＩＭ−５１０７７、ＬＹ−５４８８０６、エキセナチド（制御放出型、Ｍｅｄｉｓｏｒｂ）、ＡＶＥ−００１０、ＧＡ−ＧＣＢ、アボレリン、ＡＣＭ−９６０４、酢酸リナクロチド、ＣＥＴｉ−１、Ｈｅｍｏｓｐａｎ、ＶＡＬ（注射剤）、速効型インスリン（注射剤、Ｖｉａｄｅｌ）、鼻内型インスリン、インスリン（吸入型）、インスリン（経口薬、エリゲン）、組換えメチオニルヒトレプチン、ピトラキンラ（皮下注射剤、湿疹）、ピトラキンラ（吸入型乾燥粉末、喘息）、Ｍｕｌｔｉｋｉｎｅ、ＲＧ−１０６８、ＭＭ−０９３、ＮＢＩ−６０２４、ＡＴ−００１、ＰＩ−０８２４、Ｏｒｇ−３９１４１、Ｃｐｎ１０（自己免疫疾患／炎症）、タラクトフェリン（局所型）、ｒＥＶ−１３１（眼科用）、ｒＥＶ−１３１（呼吸器疾患）、経口型組換えヒトインスリン（糖尿病）、ＲＰＩ−７８Ｍ、オプレルベキン（経口薬）、ＣＹＴ−９９００７  ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、ＤＴＹ−００１、バラテグラスト、インターフェロンアルファ−ｎ３（局所用）、ＩＲＸ−３、ＲＤＰ−５８、Ｔａｕｆｅｒｏｎ、胆汁酸塩刺激リパーゼ、Ｍｅｒｉｓｐａｓｅ、アルカリホスファターゼ、ＥＰ−２１０４Ｒ、Ｍｅｌａｎｏｔａｎ−ＩＩ、ブレメラノチド、ＡＴＬ−１０４、組換えヒトマイクロプラスミン、ＡＸ−２００、ＳＥＭＡＸ、ＡＣＶ−１、Ｘｅｎ−２１７４、ＣＪＣ−１００８、ダイノルフィンＡ、ＳＩ−６６０３、ＬＡＢ  ＧＨＲＨ、ＡＥＲ−００２、ＢＧＣ−７２８、マラリアワクチン（ビロソーム、ＰｅｖｉＰＲＯ）、ＡＬＴＵ−１３５、パルボウイルスＢ１９ワクチン、インフルエンザワクチン（組換えノイラミインダーゼ）、マラリア／ＨＢＶワクチン、炭疽病ワクチン、Ｖａｃｃ−５ｑ、Ｖａｃｃ−４��、ＨＩＶワクチン（経口薬）、ＨＰＶワクチン、
Ｔａｔ  Ｔｏｘｏｉｄ、ＹＳＰＳＬ、ＣＨＳ−１３３４０、ＰＴＨ（１−３４）リポソームクリーム（Ｎｏｖａｓｏｍｅ）、Ｏｓｔａｂｏｌｉｎ−Ｃ、ＰＴＨアナログ（局所型、乾癬）、ＭＢＲＩ−９３．０２、ＭＴＢ７２Ｆワクチン（結核）、ＭＶＡ−Ａｇ８５Ａワクチン（結核）、ＦＡＲＡ０４、ＢＡ−２１０、組換え疫病ＦＩＶワクチン、ＡＧ−７０２、ＯｘＳＯＤｒｏｌ、ｒＢｅｔＶ１、Ｄｅｒ−ｐ１／Ｄｅｒ−ｐ２／Ｄｅｒ−ｐ７アレルゲン標的化ワクチン（イエダニアレルギー）、ＰＲ１ペプチド抗原（白血病）、突然変異体ｒａｓワクチン、ＨＰＶ−１６  Ｅ７リポペプチドワクチン、ラビリンチンワクチン（腺癌）、ＣＭＬワクチン、ＷＴ１ペプチドワクチン（がん）、ＩＤＤ−５、ＣＤＸ−１１０、Ｐｅｎｔｒｙｓ、Ｎｏｒｅｌｉｎ、ＣｙｔｏＦａｂ、Ｐ−９８０８、ＶＴ−１１１、イクロカプチド、テルベルミン（皮膚科用、糖尿病性足部潰瘍）、ルピントリビル、レティキュロース、ｒＧＲＦ、ＨＡ、アルファ−ガラクトシダーゼＡ、ＡＣＥ−０１１、ＡＬＴＵ−１４０、ＣＧＸ−１１６０、アンジオテンシン治療用ワクチン、Ｄ−４Ｆ、ＥＴＣ−６４２、ＡＰＰ−０１８、ｒｈＭＢＬ、ＳＣＶ−０７（経口薬、結核）、ＤＲＦ−７２９５、ＡＢＴ−８２８、ＥｒｂＢ２特異的免疫毒素（抗がん剤）、ＤＴ３ＳＳＩＬ−３、ＴＳＴ−１００８８、ＰＲＯ−１７６２、Ｃｏｍｂｏｔｏｘ、コレシストキニン−Ｂ／ガストリン受容体結合ペプチド、１１１Ｉｎ−ｈＥＧＦ、ＡＥ−３７、トラスニズマブ−ＤＭ１、アンタゴニストＧ、ＩＬ−１２（組換え）、ＰＭ−０２７３４、ＩＭＰ−３２１、ｒｈＩＧＦ−ＢＰ３、ＢＬＸ−８８３、ＣＵＶ−１６４７（局所型）、Ｌ−１９をベースとする放射線免疫治療薬（がん）、Ｒｅ−１８８−Ｐ−２０４５、ＡＭＧ−３８６、ＤＣ／１５４０／ＫＬＨワクチン（がん）、ＶＸ−００１、ＡＶＥ−９６３３、ＡＣ−９３０１、ＮＹ−ＥＳＯ−１ワクチン（ペプチド）、ＮＡ１７．Ａ２ペプチド、メラノーマワクチン（パルス抗原治療薬）、前立腺がんワクチン、ＣＢＰ−５０１、組換えヒトラクトフェリン（ドライアイ）、ＦＸ−０６、ＡＰ−２１４、ＷＡＰ−８２９４Ａ（注射剤）、ＡＣＰ−ＨＩＰ、ＳＵＮ−１１０３１、ペプチドＹＹ［３−３６］（肥満、鼻内型）、ＦＧＬＬ、アタシセプト、ＢＲ３−Ｆｃ、ＢＮ−００３、ＢＡ−０５８、ヒト副甲状腺ホルモン１−３４（経鼻型、骨粗鬆症）、Ｆ−１８−ＣＣＲ１、ＡＴ−１００１（セリアック病／糖尿病）、ＪＰＤ−００３、ＰＴＨ（７−３４）リポソームクリーム（Ｎｏｖａｓｏｍｅ）、デュラマイシン（眼科用、ドライアイ）、ＣＡＢ−２、ＣＴＣＥ−０２１４、グリコペグ化（ＧｌｙｃｏＰＥＧｙｌａｔｅｄ）エリスロポエチン、ＥＰＯ−Ｆｃ、ＣＮＴＯ−５２８、ＡＭＧ−１１４、ＪＲ−０１３、第ＸＩＩＩ因子、アミノカンディン、ＰＮ−９５１、７１６１５５、ＳＵＮ−Ｅ７００１、ＴＨ−０３１８、ＢＡＹ−７３−７９７７、テベレリクス（即放型）、ＥＰ−５１２１６、ｈＧＨ（制御放出型、Ｂｉｏｓｐｈｅｒｅ）、ＯＧＰ−Ｉ、シフュービルタイド、ＴＶ−４７１０、ＡＬＧ−８８９、Ｏｒｇ−４１２５９、ｒｈＣＣ１０、Ｆ−９９１、チモペンチン（肺疾患）、ｒ（ｍ）ＣＲＰ、肝臓選択性イ��スリン、スバリン、Ｌ１９−ＩＬ−２融合タンパク質、ｅｌａｆｉｎ、ＮＭＫ−１５０、ＡＬＴＵ−１３９、ＥＮ−１２２００４、ｒｈＴＰＯ、トロンボポエチン受容体アゴニスト（血小板減少症）、ＡＬ−１０８、ＡＬ−２０８、神経成長因子アンタゴニスト（疼痛）、ＳＬＶ−３１７、ＣＧＸ−１００７、ＩＮＮＯ−１０５、経口型テリパラチド（エリゲン）、ＧＥＭ−ＯＳ１、ＡＣ−１６２３５２、ＰＲＸ−３０２、ＬＦｎ−ｐ２４融合ワクチン（Ｔｈｅｒａｐｏｒｅ）、ＥＰ−１０４３、肺炎連鎖球菌小児ワクチン、マラリアワクチン、Ｂ群髄膜炎菌ワクチン、新生児Ｂ群連鎖球菌ワクチン、炭疽病ワクチン、ＨＣＶワクチン（ｇｐＥ１＋ｇｐＥ２＋ＭＦ−５９）、中耳炎治療薬、ＨＣＶワクチン（コア抗原＋ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ）、ｈＰＴＨ（１−３４）（経皮型、ＶｉａＤｅｒｍ）、７６８９７４、ＳＹＮ−１０１、ＰＧＮ−００５２、アビスクミン、ＢＩＭ−２３１９０、結核ワクチン、マルチエピトープチロシナーゼペプチド、がんワクチン、エンカスチム、ＡＰＣ−８０２４、ＧＩ−５００５、ＡＣＣ−００１、ＴＴＳ−ＣＤ３、血管標的化ＴＮＦ（固形腫瘍）、デスモプレシン（口腔制御放出型）、オネルセプト、及びＴＰ−９２０１である。
【０２１２】
いくつかの実施例では、ポリペプチドは、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ）、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標））、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（商標）／ＭＡＢ  ＴＨＥＲＡ（商標））、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（商標））、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標））、ペグリルグラスチム（ＮＥＵＬＡＳＴＡ（商標））、又はバイオシミラー及びバイオベターを含む任意の他の好適なポリペプチドである。
【０２１３】
他の好適なポリペプチドは、以下の表５、及び米国特許出願公開第２０１６／００９７０７４号の表１に列挙されるものである。
【０２１４】
【表５】
2019524125.tif 000012
【表５−２】
2019524125.tif 000013
【表５−３】
2019524125.tif 000014
【表５−４】
2019524125.tif 000015
【表５−５】
2019524125.tif 000016
【表５−６】
2019524125.tif 000017
【０２１５】
実施例では、ポリペプチドは、ホルモン、血液凝固／凝集因子、サイトカイン／増殖因子、抗体分子、融合タンパク質、タンパク質ワクチン、又は表３に示されたペプチドである。
【０２１６】
実施例では、タンパク質は、多特異的タンパク質、例えば、表４に示された二重特異性抗体である。
【実施例】
【０２１７】
本開示のシステム及び方法を、以下の実験例を参照することにより更に詳細に説明する。これらの例は、単に例示目的のために提供され、別途特定しない限り、限定されることを意図していない。したがって、本開示は、以下の例に限定されるものとして決して解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書において提供される教示の結果として明らかとなる、あらゆるバリエーションを包含すると解釈されるべきである。
【０２１８】
更に記載されなくとも、当業者は、先行する記載及び以下の例示的な例を使用して、本開示の化合物を作製し、利用し、請求項に記載される方法を実施することができると考えられる。以下の例は、本開示の様々な態様を具体的に示しており、残りの開示をいかなる点においても限定するものとして解釈されない。
【０２１９】
（例１）
本開示による生物製剤を処理するための処理溶液成分
表６〜９は、バイオリアクタ中で調製される１つの生物製剤のための本開示による処理溶液の成分、成分濃度及び緩衝剤要件を列挙する。表７〜９における緩衝剤Ａ〜Ｌは、表６において同定される緩衝剤Ａ〜Ｌに対応する。
【０２２０】
バイオプロセス容器を使用して、以下の緩衝剤を含有させることができる：トリス、トリス塩基、Ｔｒｉｃｉｎｅ、ＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ、ＰＩＰＥＳ、ＴＡＰＳ、ビシン、ＢＥＳ、ＴＥＳ、カコジレート、ＭＥＳ、アセテート、ＭＫＰ、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、グリシンアミド、アセトアミドグリシン、酢酸、クエン酸、グリシン、グリシングリシネート、リン酸ナトリウム、エタノール、塩酸、水酸化ナトリウム、塩化グアニジニウム、塩酸グアニジン、塩化ナトリウム、又はこれらの緩衝剤のいずれか若しくは他の緩衝剤の組合せ。
【０２２１】
トリスは、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンとしても公知である。ＨＥＰＥＳは、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸としても公知である。トリス塩基は、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール、ＴＨＡＭ、トリス塩基、及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、Ｔｒｏｍｅｔａｍｏｌとしても公知である。ＭＯＰＳは、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸としても公知である。ＰＩＰＥＳは、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）としても公知である。ＴＡＰＳは、［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］プロパンスルホン酸としても公知である。ＢＥＳは、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）タウリンとしても公知である。ＴＥＳは、２−［（２−ヒドロキシ−１，１−ビス（ヒドロキシメチル）エチル）アミノ］エタンスルホン酸、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸、及びＴＥＳ遊離酸としても公知である。ＭＥＳは、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸としても公知である。ＭＫＰは、リン酸一カリウムとしても公知である。ＡＤＡは、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノ二酢酸、Ｎ−（カルバモイルメチル）イミノ二酢酸としても公知である。ＡＣＥＳは、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸としても公知である。
【０２２２】
【表６】
2019524125.tif 000018
【０２２３】
【表７】
2019524125.tif 000019
【０２２４】
【表８】
2019524125.tif 000020
【０２２５】
【表９】
2019524125.tif 000021
【０２２６】
本開示は、以下の特許請求の範囲で更に説明される。
【図１】
2019524125.tif 000022
【図２】
2019524125.tif 000023
【図３】
2019524125.tif 000024
【図４Ａ】
2019524125.tif 000025
【図４Ｂ】
2019524125.tif 000026
【図４Ｃ】
2019524125.tif 000027
【図４Ｄ】
2019524125.tif 000028
【図４Ｅ】
2019524125.tif 000029
【図４Ｆ】
2019524125.tif 000030
【図５】
2019524125.tif 000031
【図６Ａ】
2019524125.tif 000032
【図６Ｂ】
2019524125.tif 000033
【図７Ａ】
2019524125.tif 000034
【図７Ｂ】
2019524125.tif 000035
【図７Ｃ】
2019524125.tif 000036
【国際調査報告】
2019524125.tif 000037
2019524125.tif 000038
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