(57)【要約】  その必要がある対象における癌を治療するための方法が開示される。癌は、食道癌、子宮癌、肝癌、または肝内胆管癌とすることができる。方法は、対象に、有効量の抗Ｄｋｋ−１抗体またはその抗原結合断片を投与するステップを含み、対象は、ベータ−カテニンタンパク質の恒常的に活性化している突然変異を有することが決定される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
その必要がある対象において癌を治療するための方法であって、
前記対象に、有効量の抗Ｄｋｋ−１抗体またはその抗原結合断片を投与するステップを含み、
前記対象は、ベータ−カテニンタンパク質（配列番号２）の恒常的に活性化している突然変異を有することが決定され、
前記癌は、食道癌、子宮癌、肝癌、または肝内胆管癌である方法。
【請求項２】
癌に罹患している対象を治療するための方法であって、
前記対象から癌細胞のサンプルを得るステップ；
前記サンプルにおけるベータ−カテニンタンパク質の配列を決定するステップ；および
ベータ−カテニンタンパク質の配列（配列番号２）が恒常的に活性化している突然変異を含む場合、前記対象に、有効量の抗Ｄｋｋ−１抗体またはその抗原結合断片を投与するステップを含み、
前記癌は、食道癌、子宮癌、肝癌、または肝内胆管癌である方法。
【請求項３】
その必要がある対象において癌を治療するための方法であって、
前記対象に、有効量の抗Ｄｋｋ−１抗体またはその抗原結合断片を投与するステップを含み、
前記対象は、ベータ−カテニンタンパク質（配列番号２）の恒常的に活性化している突然変異を有し、
前記癌は、食道癌、子宮癌、肝癌、または肝内胆管癌である方法。
【請求項４】
有効量の化学療法剤を投与するステップをさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記化学療法剤は、タキサン、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル、ゲムシタビン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、フルオロウラシル、カペシタビン、もしくはテガフールまたはその任意の機能的なアナログである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗Ｄｋｋ−１抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲは、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲは、ＣＤＲ  ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号６のアミノ配列を有し、ＬＣＤＲ２は、配列番号７のアミノ配列を有し、ＬＣＤＲ３は、配列番号８のアミノ配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号９のアミノ配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号１０のアミノ配列を有し、ＨＣＤＲ３は、配列番号１１のアミノ配列を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ＬＣＶＲは、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＶＲは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ＬＣＶＲおよび前記ＨＣＶＲは、（ｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲおよび配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ；（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲおよび配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ；（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲおよび配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ；（ｉｖ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲおよび配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
前記ＬＣＶＲは、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＶＲは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗Ｄｋｋ−１抗体は、ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖、ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖、ならびにｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖からなる群から選択される重鎖および軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗Ｄｋｋ−１抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記対象は、ヒトである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記突然変異は、エクソン３（配列番号４）の欠失を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記突然変異は、エクソン２、３、および４（配列番号３、４、および５）の欠失を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記突然変異は、エクソン３（配列番号４）内に欠失を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記突然変異は、配列番号２のタンパク質のアミノ酸配列内の任意のサブ配列の欠失であり、前記サブ配列は、Ｓｅｒ３３、Ｓｅｒ３７、Ｔｈｒ４１、およびＳｅｒ４５から選択される少なくとも１つの残基を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記突然変異は、配列番号２のタンパク質のＳｅｒ３３、Ｓｅｒ３７、Ｔｈｒ４１、およびＳｅｒ４５から選択されるアミノ酸残基のいずれか１つの突然変異である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記突然変異は、表１に列挙される配列番号２のタンパク質におけるアミノ酸残基の突然変異のいずれか１つである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
その必要がある対象において癌を治療するための方法であって、
前記対象に、有効量の抗Ｄｋｋ−１抗体またはその抗原結合断片を投与するステップを含み、前記対象は、ベータ−カテニンタンパク質（配列番号２）の恒常的に活性化している突然変異を有することが決定され、
前記癌は、胃癌である方法。
【請求項２０】
有効量の化学療法剤を投与するステップをさらに含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記化学療法剤は、タキサン、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル、ゲムシタビン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、フルオロウラシル、カペシタビン、もしくはテガフールまたはその任意の機能的なアナログである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗Ｄｋｋ−１抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲは、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲは、ＣＤＲ  ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号６のアミノ配列を有し、ＬＣＤＲ２は、配列番号７のアミノ配列を有し、ＬＣＤＲ３は、配列番号８のアミノ配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号９のアミノ配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号１０のアミノ配列を有し、ＨＣＤＲ３は、配列番号１１のアミノ配列を有する、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＬＣＶＲは、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＶＲは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＬＣＶＲおよび前記ＨＣＶＲは、（ｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲおよび配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ；（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲおよび配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ；（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲおよび配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ；（ｉｖ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲおよび配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＬＣＶＲは、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＶＲは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗Ｄｋｋ−１抗体は、ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖、ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖、ならびにｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖からなる群から選択される重鎖および軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗Ｄｋｋ−１抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記対象は、ヒトである、請求項１９〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記突然変異は、エクソン３（配列番号４）の欠失を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項３０】
前記突然変異は、エクソン２、３、および４（配列番号３、４、および５）の欠失を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記突然変異は、エクソン３（配列番号４）内に欠失を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項３２】
前記突然変異は、配列番号２のタンパク質のアミノ酸配列内の任意のサブ配列の欠失であり、前記サブ配列は、Ｓｅｒ３３、Ｓｅｒ３７、Ｔｈｒ４１、およびＳｅｒ４５から選択される少なくとも１つの残基を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項３３】
前記突然変異は、配列番号２のタンパク質のＳｅｒ３３、Ｓｅｒ３７、Ｔｈｒ４１、およびＳｅｒ４５から選択されるアミノ酸残基のいずれか１つの突然変異である、請求項１９に記載の方法。
【請求項３４】
前記突然変異は、表１に列挙される配列番号２のタンパク質におけるアミノ酸残基の突然変異のいずれか１つである、請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年１０月２６日に提出された米国仮特許出願第６２／４１３，１９８号明細書の利益を主張する。上記の出願の全教示は、参照によって本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
癌は、公衆衛生にとって重大な脅威であり続けており、予後が不良で、多くの型に利用可能な治療が限られている。癌、特に食道癌、子宮癌、肝癌、および肝内胆管癌または胆管癌を治療する際に効能を増加させることができる療法の深刻な、未だ対処されていない必要がある。本出願は、そのような療法を提供する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本発明は、治療を必要とする対象において癌（たとえば食道腺癌）を治療するための方法に関する。
【０００４】
したがって、一態様では、本発明は、その必要がある対象において癌を治療するための方法である。癌は、食道癌、子宮癌、肝癌、または肝内胆管癌とすることができる。その代わりに、癌は、胃癌とすることができる。方法は、対象に、治療有効量の抗Ｄｋｋ−１抗体またはその抗原結合断片を投与するステップを含み、対象は、ベータ−カテニンタンパク質（配列番号２）の恒常的に活性化している突然変異を有することが決定される。
【０００５】
別の態様では、本発明は、癌に罹患している対象を治療するための方法である。癌は、食道癌、子宮癌、肝癌、または肝内胆管癌とすることができる。その代わりに、癌は、胃癌とすることができる。方法は、対象から新生物細胞のサンプルを得るステップ；サンプルにおけるベータ−カテニンタンパク質の配列を決定するステップ；およびベータ−カテニンタンパク質の配列（配列番号２）が恒常的に活性化している突然変異を含む場合、対象に、治療有効量の抗Ｄｋｋ−１抗体またはその抗原結合断片を投与するステップを含む。
【０００６】
さらに別の態様では、本発明は、その必要がある対象において癌を治療するための方法である。癌は、食道癌、子宮癌、肝癌、または肝内胆管癌とすることができる。その代わりに、癌は、胃癌とすることができる。方法は、対象に、治療有効量の抗Ｄｋｋ−１抗体またはその抗原結合断片を投与するステップを含み、対象は、ベータ−カテニンタンパク質（配列番号２）の恒常的に活性化している突然変異を有する。
【０００７】
前述のものは、添付の図面において例証されるように、本発明の例となる実施形態についての以下のより詳細な説明から明らかになるであろう。図面は、必ずしも一定の縮尺ではなく、それよりも、本発明の実施形態を説明することに重点を置いている。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】ＤＫＮ−０１療法を受けている患者におけるＣＴＮＮＢ１（ベータ−カテニン）タンパク質突然変異データの分析を示す表を示す図である。
【図２Ａ】食道癌に罹患しており、かつパクリタキセルおよびＤＫＮ−０１の併用療法を命じられた患者１０５−０２３における病変サイズの変化を示す（サイズのパーセントで）プロットを示す図である。患者１０５−０２３は、ＣＴＮＮＢ１（ベータカテニン）遺伝子のエクソン２〜４の欠失を有することが示された。
【図２Ｂ】研究の最初およびサイクル１０での患者１０５−０２３の標的病変の断層撮影画像を示す図である。
【図３Ａ−３Ｆ】ヒトＣＴＮＮＢ１遺伝子の配列を示す図である。
【図４Ａ−４Ｄ】ベータ−カテニンタンパク質の突然変異の例を示す表１をまとめて示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明の例となる実施形態の説明が続く。
【００１０】
Ｄｉｃｋｋｏｐｆ−１（Ｄｋｋ−１）は、古典的Ｗｎｔ／β−カテニンシグナル伝達経路の天然の阻害剤として作用するタンパク質である。Ｗｎｔ経路は、細胞成長、細胞増殖、幹細胞維持、細胞分化、細胞極性、骨発生、および成人組織恒常性維持などのような多くの生物学的プロセスに影響を及ぼす。
【００１１】
古典的Ｗｎｔ／β−カテニンシグナル伝達経路において、細胞外Ｗｎｔリガンドは、その関連する受容体「Ｆｒｉｚｚｌｅｄ」に結合し、膜貫通リポタンパク質ＬＰＲ５およびＬＰＲ６（低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質５および６）共受容体をさらに動員する。Ｗｎｔ／Ｆｒｉｚｚｌｅｄ／ＬＰＲ５／６複合体の形成は、β−カテニンタンパク質、ＣＴＮＮＢ１遺伝子の遺伝子産物によって媒介されるものを含めて、いくつかの細胞内シグナル伝達カスケードを引き起こす。特に、Ｗｎｔ／Ｆｒｉｚｚｌｅｄ／ＬＰＲ５／６複合体の形成は、ベータ−カテニンリン酸化の阻害により、ベータ−カテニンの細胞質内レベルの安定化をもたらす。リン酸化ベータ−カテニンは細胞質において分解されるが、非リン酸化ベータ−カテニンは核に移動し、そこで、成長因子の中でも、たとえばサイクリンＤ１、ｃ−ｍｙｃ、ｃ−ｊｕｎ、シクロオキシゲナーゼ−２、マトリックスメタロプロテアーゼ−７、血管内皮成長因子、およびサバイビンの標的遺伝子発現を増強する。Ｗｎｔ／Ｆｒｉｚｚｌｅｄ／ＬＰＲ５／６複合体からのシグナルがない限り、ベータ−カテニンは、グリコゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）およびカゼインキナーゼＩ（ＣＫＩ）などのような細胞内キナーゼによってリン酸化される。Ｗｎｔ／Ｆｒｉｚｚｌｅｄ／ＬＰＲ５／６複合体からのシグナルの伝達は、このリン酸化を阻害する。
【００１２】
細胞外Ｄｋｋ−１は、ＬＰＲ５／６共受容体に結合し、Ｗｎｔリガンド結合を妨げる。これは、ベータ−カテニンリン酸化および続くその分解の再開をもたらし、したがって、古典的Ｗｎｔシグナル伝達経路を阻害する。
【００１３】
ヒトＣＴＮＮＢ１のヌクレオチド配列およびゲノム（染色体）座標についてはＵＲＬ「ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｅｎｅ／１４９９」を参照。手短に言えば、ＣＴＮＮＢ１遺伝子のゲノム（染色体）座標は、ｃｈｒ３：４１，２４０，９４２−４１，２８１，９３９である。座標はすべて、ｂｕｉｌｄ  ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９からのものである。ＣＴＮＮＢ１のヌクレオチド配列は、配列番号１（大文字によって示すエクソンを含む）において提供される。ベータ−カテニンまたはベータ−カテニンタンパク質と本明細書において呼ばれるヒトＣＮＮＴＢ１遺伝子の遺伝子産物は、配列番号２によって提供される配列を有するタンパク質（ＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｐ３５２２２）である。配列番号２においてアミノ酸残基１〜４（エクソン２）、５〜８１（エクソン３）、および８２〜１６５（エクソン４）に対応するエクソン２、３、および４が特に興味深い。エクソン２〜４のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号３、４、および５によって提供される。
【００１４】
本明細書において使用されるように、「ベータ−カテニンタンパク質の恒常的に活性化している突然変異」は、野生型タンパク質と比較した場合に、機能的に細胞核にシグナルを伝達することができるベータ−カテニンの細胞レベルの上昇をもたらす、ベータ−カテニンのアミノ酸配列の突然変異を指す。ベータ−カテニンの恒常的に活性化している突然変異の例は、Ｗｎｔ／Ｆｒｉｚｚｌｅｄ／ＬＰＲ５／６複合体の非存在下においてＧＳＫ３−ベータキナーゼおよび／またはカゼインキナーゼＩによってリン酸化することが結果としてできない突然変異を含む。そのような突然変異の例は、エクソン２〜４の欠失、エクソン３のまたはエクソン３内の欠失、ならびに配列番号２のＳｅｒ３３、Ｓｅｒ３７、Ｔｈｒ４１、およびＳｅｒ４５などのような、Ｗｎｔ／Ｆｒｉｚｚｌｅｄ／ＬＰＲ５／６複合体の非存在下においてリン酸化されるセリン残基およびトレオニン残基の突然変異を含む。
【００１５】
様々な実施形態では、ベータ−カテニンタンパク質の突然変異は、表１に列挙され、図４Ａ〜４Ｄにおいて示される突然変異から選択される。
【００１６】
当業者らが認識するように、本明細書において使用される「食道癌」は、食道および食道胃接合部の癌を指す。当技術分野において一般に使用されるように、食道癌は、食道扁平上皮癌（ＥＳＣＣ）および食道腺癌（ＥＡＣ）を含む。一般に、ＥＳＣＣは、扁平上皮細胞において生じる癌を指し、これらの細胞は、器官のおよそ上部２／３の食道を裏打ちしている。ＥＡＣは、腺細胞において生じる癌を指し、腺細胞は、典型的に食道の下部１／３の扁平上皮細胞の領域に取って代わるものである（たとえばバレット食道において）。そのため、本明細書において使用される食道腺癌は、食道および食道胃接合部の腺癌を指す。
【００１７】
「子宮癌」は、子宮の組織から現われる任意の型の癌である。子宮癌は、いくつかの型の癌を指すことができ、子宮頸癌（子宮の下の方の部分から起こる）は、最も一般的な型である。
【００１８】
肝臓癌および原発性肝臓癌としても知られている「肝癌」は、肝臓において発病する癌である。他のところから肝臓に広がった癌は、肝転移として知られており、肝臓において発病するものよりも一般的である。原発性肝癌は、世界的には、６番目に頻発する癌であり（６％）、癌による死亡の主な原因の２番目にあたる（９％）。
【００１９】
「肝内胆管癌」または胆管癌は、肝臓から小腸の中に胆汁を流す胆管において生じる突然変異した上皮細胞（または上皮分化の特徴を示す細胞）から構成される癌の形態である。肝内胆管癌の割合は、過去数十年間にわたって、世界中で高くなっている。肝内胆管癌は、原発性腫瘍およびあらゆる転移の両方を外科手術によって完全に摘出することができない限り、不治で、急速に致命的となる癌であると考えられる。可能性として治効のある治療は、外科手術以外は存在しないが、ほとんどの人々は、診察時には進行期の疾患を有しており、診断の時には手術不可能となる。
【００２０】
胃癌とも呼ばれる「胃癌」は、胃において発病する癌である。胃の癌の約９０％〜９５％は、腺癌である。胃癌または胃癌という用語が使用される場合、それは、ほとんどいつも腺癌を指す。これらの癌は、胃の最も内側の裏打ちを形成する細胞（粘膜として知られている）から発生する。
【００２１】
用語「有効量」は、示される障害を予防的にまたは治療的に治療するのに有効である、治療剤、たとえば抗体の量を意味する。「有効量」はまた、標的障害を治療するのに治療的にまたは予防的に十分な、治療剤の組み合わせの量を指してもよい。有効量は、患者の年齢、性別、および体重、患者の現在の医学的状態、ならびに治療されている食道癌の性質に依存するであろう。当業者らは、これらのおよび他の因子に依存して適切な投薬量を決定することができるであろう。
【００２２】
今や、ある癌に罹患しており、かつベータ−カテニンタンパク質（配列番号２）内に恒常的に活性化している突然変異を有する癌患者は、そのような突然変異を有していない患者よりも抗Ｄｋｋ−１抗体療法に反応することが予想されることが発見された。したがって、本発明は、治療を必要とする対象において癌（たとえば食道癌、子宮癌、肝癌、および肝内胆管癌）を治療するための方法であって、有効量の抗Ｄｋｋ−１抗体またはその抗原結合断片を投与するステップを含み、対象は、ベータ−カテニンタンパク質（配列番号２）の恒常的に活性化している突然変異を有することが決定される方法に関する。
【００２３】
Ｄｋｋ−１抗体
Ｄｋｋ−１抗体は、以前に記載された（たとえば、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第８，１４８，４９８号明細書および米国特許第７，４４６，１８１号明細書を参照）。本明細書において開示されるＤｋｋ−１抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むヒトＤｋｋ−１に結合するヒト改変抗体またはその断片に関する。本発明のＤｋｋ−１抗体は、多くの望ましい特性を持つ治療的に有用なＤｋｋ−１アンタゴニストである。たとえば、Ｄｋｋ−１抗体は、骨芽細胞の活性のマーカーであるアルカリホスファターゼのＤｋｋ−１媒介性の阻害を遮断し、様々な型の癌（たとえば非小細胞肺癌）を治療する。
【００２４】
完全長抗体は、天然に存在するように、ジスルフィド結合によって相互に連結された２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子である。それぞれの鎖のアミノ末端部分は、そこに含有される相補性決定領域（ＣＤＲ）を介して抗原認識を主として担う約１００〜１１０のアミノ酸の可変領域を含む。それぞれの鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主として担う定常領域を決定づける。
【００２５】
ＣＤＲの間には、フレームワーク領域（「ＦＲ」）と名付けられた、より保存された領域が挟まっている。それぞれの軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）は、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端まで以下の順：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で並んでいる。軽鎖の３つのＣＤＲは、「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３」と呼ばれ、重鎖の３つのＣＤＲは、「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３」と呼ばれる。ＣＤＲは、抗原と特異的な相互作用を形成する残基のほとんどを含有する。ＬＣＶＲ領域およびＨＣＶＲ領域内のＣＤＲアミノ酸残基の番号付けおよび位置決めは、よく知られているＫａｂａｔ番号付け規則に従う。
【００２６】
軽鎖は、カッパまたはラムダとして分類され、当技術分野において知られているように特定の定常領域によって特徴付けられる。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンとして分類され、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥとして抗体のアイソタイプを決定づける。ＩｇＧ抗体は、サブクラス、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４にさらに分けることができる。それぞれの重鎖のタイプは、当技術分野においてよく知られている配列を有する特定の定常領域によって特徴付けられる。
【００２７】
本明細書において使用されるように、用語「モノクローナル抗体」（Ｍａｂ）は、抗体が産生される方法ではなく、たとえば任意の真核生物、原核生物、またはファージクローンを含む単一のコピーまたはクローンに由来する抗体を指す。本発明のＭａｂは、好ましくは、均一のまたは実質的に均一の集団で存在する。完全Ｍａｂは、２つの重鎖および２つの軽鎖を含有する。
【００２８】
他に指定のない限り、用語「Ｄｋｋ−１抗体」は、完全長抗体およびＤｋｋ−１抗体の抗原結合断片の両方を包含する。
【００２９】
そのようなモノクローナル抗体の「抗原結合断片」は、たとえばＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）2断片、および単鎖Ｆｖ断片を含む。モノクローナル抗体およびその抗原結合断片は、たとえば組換え技術、ファージディスプレー技術、合成技術、たとえばＣＤＲグラフティング、もしくはそのような技術の組み合わせまたは当技術分野において知られている他の技術によって産生することができる。たとえば、マウスは、ヒトＤＫＫ−１またはその断片により免疫化することができ、結果として生じる抗体は、回収し、精製することができ、それらが本明細書において開示される抗体化合物に類似するまたはそれと同じ結合特性および機能的な特性を持つかどうかの決定は、当技術分野において知られている方法によって判断することができる。抗原結合断片もまた、従来の方法によって調製することができる。抗体および抗原結合断片を産生するおよび精製する方法は、当技術分野においてよく知られており、たとえばＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，ｃｈａｐｔｅｒｓ５−８  ａｎｄ  １５，ＩＳＢＮ  ０−８７９６９−３１４−２において見つけることができる。
【００３０】
本明細書において開示されるモノクローナルＤｋｋ−１抗体は、非ヒト抗体に由来するＣＤＲを囲む、実質的にヒトまたは完全にヒトであるフレームワーク領域を含むよう改変される。そのようなヒト改変抗体の「抗原結合断片」は、たとえばＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）2断片、および単鎖Ｆｖ断片を含む。「フレームワーク領域」または「フレームワーク配列」は、フレームワーク領域１〜４のいずれか１つを指す。本明細書において開示される抗体によって包含されるヒト改変抗体およびその抗原結合断片は、任意の１つまたはそれ以上のフレームワーク領域１〜４が実質的にまたは完全にヒトである、すなわち、実質的にまたは完全にヒトのフレームワーク領域１〜４の個々の考え得る組み合わせのいずれかが存在する分子を含む。たとえば、これは、フレームワーク領域１およびフレームワーク領域２、フレームワーク領域１およびフレームワーク領域３、フレームワーク領域１、２、および３などが実質的にまたは完全にヒトである分子を含む。実質的にヒトのフレームワークは、知られているヒト生殖細胞系列フレームワーク配列と少なくとも約８０％の配列同一性を有するものである。好ましくは、実質的にヒトのフレームワークは、知られているヒト生殖細胞系列フレームワーク配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、または約９９％の配列同一性を有する。
【００３１】
本明細書において開示される抗体に加えて類似する機能的な特性を示すヒト改変抗体は、いくつかの様々な方法を使用して生成することができる。本明細書において開示される特異的な抗体化合物は、さらなる抗体化合物を調製するための鋳型または親抗体化合物として使用することができる。１つのアプローチでは、親抗体化合物ＣＤＲは、親抗体化合物フレームワークと高い配列同一性を有するヒトフレームワークの中に移植される。新たなフレームワークの配列同一性は、一般に、親抗体化合物における対応するフレームワークの配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％同一になるであろう。この移植は、親抗体の結合親和性と比較して、結合親和性の低下をもたらすかもしれない。この場合には、フレームワークは、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：２８６９によって開示される特定の基準に基づいて、ある位置で親フレームワークに復帰突然変異させることができる。マウス抗体をヒト化するのに有用な方法を記載するさらなる参考文献は、米国特許第４，８１６，３９７号明細書；米国特許第５，２２５，５３９明細書および米国特許第５，６９３，７６１号明細書；Ｌｅｖｉｔｔ（１９８３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６８：５９５−６２０において記載されるコンピュータープログラムＡＢＭＯＤおよびＥＮＣＡＤ；ならびにＷｉｎｔｅｒおよび共同研究者らの方法（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；およびＶｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６）を含む。復帰突然変異を考慮するべき残基を同定する方法は、当技術分野において知られている（たとえば米国特許第８，１４８，４９８号明細書を参照）。
【００３２】
本明細書において提供される方法は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含むＤｋｋ−１抗体の使用であって、ＬＣＶＲは、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＶＲは、ＣＤＲ  ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号６のアミノ配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号９のアミノ配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号１０のアミノ配列を有する使用に関する。
【００３３】
一実施形態では、Ｄｋｋ−１抗体は、配列番号６のアミノ配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号７のアミノ配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号８のアミノ配列を有するＬＣＤＲ３、配列番号９のアミノ配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ配列を有するＨＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ配列を有するＨＣＤＲ３を含む。
【００３４】
別の実施形態では、Ｄｋｋ−１抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲおよび配列番号１３のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む。特定の実施形態では、ＬＣＶＲは、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＶＲは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。
【００３５】
さらなる実施形態では、Ｄｋｋ−１抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）および配列番号２３のアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）を含む。それぞれ配列番号２２および配列番号２３のＨＣアミノ酸配列およびＬＣアミノ酸配列を含むＤｋｋ−１抗体またはその抗原結合断片は、本明細書においてＤＫＮ−０１と呼ばれる。特に、ＤＫＮ−０１は、分子／実験式Ｃ6394Ｈ9810Ｎ1698Ｏ2012Ｓ42および１４４０１５ダルトンの分子量（未変化）を有する。
【００３６】
ある実施形態では、本明細書において開示されるＤｋｋ−１抗体は、配列番号２７において示される配列を含むヒトＤｋｋ−１に対して中和活性を有するＩｇＧ4抗体またはその断片である。たとえば、古典的Ｗｎｔシグナル伝達は、骨芽細胞の分化および活性にとって重大である。ＢＭＰ−４と結合したＷｎｔ−３ａは、多能性マウスＣ２Ｃ１２細胞を、骨芽細胞の活性のマーカーであるアルカリホスファターゼ（「ＡＰ」）の測定可能なエンドポイントを有する骨芽細胞に分化するように誘発する。Ｄｋｋ−１は、古典的Ｗｎｔシグナル伝達の阻害剤であり、分化およびＡＰの産生を阻害する。中和Ｄｋｋ−１抗体は、ＡＰのＤｋｋ−１媒介性の阻害を予防する。Ｄｋｋ−１阻害活性を遮断する抗体は、ＡＰ活性の損失を予防する（米国特許第８，１４８，４９８号明細書を参照）。特定の実施形態では、中和活性を持つＤｋｋ−１抗体は、ＤＫＮ−０１であり、これはＩｇＧ4抗体である。
【００３７】
本明細書において開示されるＤｋｋ−１抗体は、米国特許第８，１４８，４９８号明細書において記載されるように、Ｄｋｋ−１（たとえばヒトＤｋｋ−１、配列番号２７）に対して高い親和性（Ｋｄ）を持つ。たとえば、本発明のＤｋｋ−１抗体は、３７℃で０．５×１０-12Ｍおよび３．０×１０-11Ｍの間のＫｄを持つ。
【００３８】
投与のモード
本発明の方法または組成物において使用されるＤｋｋ−１抗体および化学療法剤は、非経口、経口、経皮、舌下、頬、直腸、鼻内、気管支内、または肺内投与のために製剤することができる。
【００３９】
非経口投与については、本発明の方法または組成物において使用される化合物は、注射もしくは注入、たとえば静脈内、筋肉内、もしくは皮下注射もしくは注入のためにまたはボーラス投与および／もしくは注入（たとえば連続注入）における投与のために製剤することができる。任意選択で、懸濁化剤、安定化剤、および／または分散剤などのような他の調合剤を含有する油性または水性ビヒクル中の懸濁剤、水剤、またはエマルションを使用することができる。
【００４０】
経口投与については、化合物は、結合剤（たとえばポリビニルピロリドンもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；増量剤（たとえばラクトース、結晶セルロース、もしくはリン酸カルシウム）；潤滑剤（たとえばステアリン酸マグネシウム、滑石、もしくはシリカ）；崩壊薬（たとえばデンプングリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（たとえばラウリル硫酸ナトリウム）などのような薬学的に許容され得る賦形剤と共に従来の手段によって調製される錠剤またはカプセルの形態とすることができる。所望の場合、錠剤は、適した方法を使用してコーティングすることができる。経口投与のための液体調製物は、水剤、シロップ、または懸濁剤の形態を取ることができる。液体調製物は、懸濁化剤（たとえばソルビトールシロップ、メチルセルロース、または硬化食用脂）；乳化剤（たとえばレシチンまたはアラビアゴム）；非水性ビヒクル（たとえば扁桃油、油性エステル、またはエチルアルコール）；および保存剤（たとえばメチルもしくはプロピルｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）などのような薬学的に許容され得る添加剤と共に従来の手段によって調製することができる。
【００４１】
頬投与については、本発明の方法または組成物において使用される化合物は、従来のやり方で製剤される錠剤またはロゼンジの形態を取ることができる。
【００４２】
直腸投与については、本発明の方法または組成物において使用される化合物は、坐剤の形態を取ることができる。
【００４３】
舌下投与については、錠剤は、従来の方式で製剤することができる。
【００４４】
鼻内、気管支内、または肺内投与については、従来の製剤を用いることができる。
【００４５】
さらに、本発明の方法または組成物において使用される化合物は、徐放性調製物で製剤することができる。たとえば、化合物は、活性薬剤化合物に持続性の特性および／または制御放出特性を提供するのに適したポリマーまたは疎水性材料と共に製剤することができる。そのため、本発明の方法において使用される化合物は、たとえば注射による微粒子の形態でまたは移植によるオブラートもしくはディスクの形態で投与することができる。制御放出薬剤調製物を製剤する様々な方法は、当技術分野において知られている。
【００４６】
化合物またはその薬学的に許容され得る塩または本明細書において記載される方法を実施するのに有用な本発明の１つまたはそれ以上の化合物（もしくはその薬学的な塩）を含む組成物の投与は、継続的、一時間ごと、毎日４回、毎日３回、毎日２回、毎日１回、一日おきに１回、毎週２回、毎週１回、２週間おきに１回、月に１回、または２か月おきにもしくはそれ以上で１回、またはいくつかの他の断続的な投薬レジメンとすることができる。
【００４７】
化合物または本発明の１つもしくはそれ以上の化合物（もしくはその薬学的な塩）を含む組成物の投与の例は、末梢の投与を含む。末梢の投与の例は、経口、皮下、腹腔内、筋肉内、静脈内、直腸、経皮、または鼻内形態の投与を含む。
【００４８】
本明細書において使用されるように、末梢の投与は、頭蓋内投与を除外する、化合物または本発明の化合物を含む組成物の投与の形態をすべて含む。末梢の投与の例は、経口、非経口（たとえば筋肉内、腹腔内、静脈内もしくは皮下注射、長期にわたる放出、緩効性移植片、デポー、およびその他同種のもの）、経鼻、膣、直腸、舌下、または経皮パッチ適用を含む局所投与ルート、ならびにその他同種のものを含むがこれらに限定されない。
【００４９】
併用療法
本明細書において開示されるＤｋｋ−１抗体は、第２の量の化学療法剤（時に、本明細書において「第２の薬剤」と呼ばれる）と組み合わせて食道癌を治療するために使用することができる。そのような併用投与は、Ｄｋｋ−１抗体および第２の薬剤を含む単一の投薬形態によるものとすることができ、そのような単一の投薬形態は、錠剤、カプセル、スプレー、吸入パウダー、注射用の液剤、またはその他同種のものを含む。併用投与は、単一の投薬形態に加えて、さらなる第２の薬剤（たとえば化学療法剤）を含むことができる。その代わりに、併用投与は、２つの異なる投薬形態の投与によるものとすることができ、一方の投薬形態は、Ｄｋｋ−１抗体を含有し、他方の投薬形態は、第２の量の化学療法剤を含む。この事例では、投薬形態は、同じであってもよいまたは異なっていてもよい。併用療法を限定することを望むものではないが、以下のものが、用いられてもよい、ある併用療法を例証する。必要とされる第２の量の化学療法剤以上のさらなる化学療法剤を本明細書において記載される方法において用いることができることが理解される。
【００５０】
第２の量の化学療法剤（時に、本明細書において第２の薬剤と呼ばれる）は、Ｄｋｋ−１抗体の投与の前に、それと同時に、またはその後に投与することができる。したがって、Ｄｋｋ−１抗体および第２の薬剤は、単一の製剤において一緒に投与することができるまたは別個の製剤において、たとえば同時にまたは連続してまたはその両方で投与することができる。たとえば、Ｄｋｋ−１抗体および第２の薬剤が、別個の組成物において連続して投与される場合、Ｄｋｋ−１抗体は、化学療法剤の前にまたはその後に投与することができる。Ｄｋｋ−１抗体および第２の量の化学療法剤の投与の間の時間は、化学療法剤の性質に依存するであろう。ある実施形態では、Ｄｋｋ−１抗体は、化学療法剤に先行するまたはすぐにもしくは当業者によって適切であるとみなされる時間の後、化学療法剤の後に続けることができる。
【００５１】
そのうえ、Ｄｋｋ−１抗体および第２の量の化学療法剤は、類似する投薬スケジュールで投与されても、投与されなくてもよい。たとえば、Ｄｋｋ−１抗体および化学療法剤は、Ｄｋｋ−１抗体が化学療法剤よりも高い頻度で投与されるまたは化学療法剤がＤｋｋ−１抗体よりも高い頻度で投与されるように、異なる半減期を有してもよいおよび／または異なる時間尺度で作用してもよい。たとえば、Ｄｋｋ−１抗体および化学療法剤は、ある日、一緒に投与することができ（たとえば単一の投薬でまたは連続して）、設定した日数の後に、化学療法剤（または異なる化学療法薬）のみの投与が続く。治療剤の投与の間の日数は、それぞれの薬剤の安全性および薬力学的効果に従って適切に決定することができる。Ｄｋｋ−１抗体または化学療法剤は、急性的にまたは慢性的に投与することができる。
【００５２】
本明細書において使用されるように、「有効量」は、標的障害を治療するのに治療的にまたは予防的に十分な治療剤または治療剤の組み合わせの量を指す。有効量は、患者の年齢、性別、および体重、患者の現在の医学的状態、ならびに治療されている食道癌の性質に依存するであろう。当業者らは、これらのおよび他の因子に依存して適切な投薬量を決定することができるであろう。
【００５３】
Ｄｋｋ−１抗体についての１回の投与当たりの適した用量は、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９７５ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０２５ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１０７５ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１１２５ｍｇ、約１１５０ｍｇ、約１１７５ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２２５ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１２７５ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３２５ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１３７５ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４２５ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１４７５ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１５２５ｍｇ、約１５５０ｍｇ、約１５７５ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１６２５ｍｇ、約１６５０ｍｇ、約１６７５ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１７２５ｍｇ、約１７５０ｍｇ、約１７７５ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１８２５ｍｇ、約１８５０ｍｇ、約１８７５ｍｇ、約１９００ｍｇ、約１９２５ｍｇ、約１９５０ｍｇ、約１９７５ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２０２５ｍｇ、約２０５０ｍｇ、約２０７５ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２１２５ｍｇ、約２１５０ｍｇ、約２１７５ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２２２５ｍｇ、約２２５０ｍｇ、約２２７５ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２３２５ｍｇ、約２３５０ｍｇ、約２３７５ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２４２５ｍｇ、約２４５０ｍｇ、約２４７５ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２５２５ｍｇ、約２５５０ｍｇ、約２５７５ｍｇ、約２６００ｍｇ、または約３，０００ｍｇまたはそれ以上の用量を含む。それぞれの適した用量は、当業者によって適切であるとみなされる期間にわたって投与することができる。たとえば、それぞれの適した用量は、約３０分間かつ約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、または約８時間以内の期間にわたって投与することができる。特定の実施形態では、Ｄｋｋ−１抗体に適した用量は、約３０分間かつ約２時間以内の期間にわたって投与される約１５０ｍｇとすることができる。Ｄｋｋ−１抗体に適した別の用量は、約３０分間かつ約２時間以内の期間にわたって投与される約３００ｍｇとすることができる。
【００５４】
第２の量の化学療法剤についての１回の投与当たりの適した用量は、ラベル上に見つけられる推奨される投薬に基づいて決定することができる。第２の量の化学療法剤がパクリタキセルである場合、約８ｍｇ／ｍ2、１０ｍｇ／ｍ2、約１５ｍｇ／ｍ2、約２０ｍｇ／ｍ2、約２５ｍｇ／ｍ2、約３０ｍｇ／ｍ2、約３５ｍｇ／ｍ2、約４０ｍｇ／ｍ2、約４５ｍｇ／ｍ2、約５０ｍｇ／ｍ2、約５５ｍｇ／ｍ2、約６０ｍｇ／ｍ2、約６５ｍｇ／ｍ2、約７０ｍｇ／ｍ2、約７５ｍｇ／ｍ2、約８０ｍｇ／ｍ2、約８５ｍｇ／ｍ2、約９０ｍｇ／ｍ2、約９５ｍｇ／ｍ2、約１００ｍｇ／ｍ2、約１０５ｍｇ／ｍ2、約１１０ｍｇ／ｍ2、約１２０ｍｇ／ｍ2、約１３０ｍｇ／ｍ2、約１４０ｍｇ／ｍ2、約１５０ｍｇ／ｍ2、約１６０ｍｇ／ｍ2、約１７０ｍｇ／ｍ2、約１８０ｍｇ／ｍ2、約１９０ｍｇ／ｍ2、約２００ｍｇ／ｍ2、約２２５ｍｇ／ｍ2、約２５０ｍｇ／ｍ2、約２７５ｍｇ／ｍ2、約３００ｍｇ／ｍ2、約６００ｍｇ／ｍ2、または約８００ｍｇ／ｍ2の用量またはそれ以上が使用される。たとえば、パクリタキセルの１回の投与当たりの適した用量は、約１時間の期間にわたって約８０ｍｇ／ｍ2である。
【００５５】
有効量は、第１の量のＤｋｋ−１抗体（またはその薬学的に許容され得る塩、水和物、もしくは溶媒和化合物）および第２の量の少なくとも１つの化学療法剤を同時投与することによって、本発明の方法または組成物において実現することができる。一実施形態では、Ｄｋｋ−１抗体および化学療法剤は、それぞれ、それぞれの有効量（たとえば、それぞれ、単独で投与された場合に治療的に有効となり得る量で）で投与される。別の実施形態では、Ｄｋｋ−１抗体および化学療法剤は、それぞれ、単独では治療効果をもたらさない量（治療量以下の用量）で投与される。さらに別の実施形態では、Ｄｋｋ−１抗体は、有効量で投与することができるが、化学療法剤は、治療量以下の用量で投与される。さらに別の実施形態では、Ｄｋｋ−１抗体は、治療量以下の用量で投与することができるが、化学療法剤は、有効量で投与される。
【００５６】
本明細書において使用されるように、用語「対象」は、哺乳動物、好ましくはヒトを指すが、また、獣医の治療を必要とする動物、たとえばコンパニオンアニマル（たとえばイヌ、ネコ、およびその他同種のもの）、家畜（たとえばウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、およびその他同種のもの）、ならびに実験動物（たとえばラット、マウス、モルモット、およびその他同種のもの）を意味することもできる。
【００５７】
本明細書において使用されるように「治療すること」は、治療されている癌に関する臨床的な徴候の進行を遅延させること、阻害すること、または予防することを部分的にまたは実質的に実現することを含む。たとえば、「治療すること」は、たとえばコンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、胸部Ｘ線検査、およびＣＴ／ポジトロン断層撮影（ＣＴ／ＰＥＴ）スキャンを含む、当技術分野において知られている標準的な画像法によって検出され、当技術分野において知られているガイドラインおよび方法に従って評価されるように、腫瘍成長の低下またはさらなる成長の予防を含む。たとえば、治療に対する応答は、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｉｎ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ（ＲＥＣＩＳＴ）（Ｒｅｖｉｓｅｄ  ＲＥＣＩＳＴ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｖｅｒｓｉｏｎ  １．１；Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４５（２）：２２８−４７，２００９を参照）を通して評価することができる。したがって、いくつかの実施形態では、「治療」することは、すべての標的病変の消失としてＲＥＣＩＳＴガイドラインに従って定義される完全奏効（ＣＲ）またはベースライン径和を基準とし、標的病変の径の和の少なくとも３０％の減少として定義される部分奏効（ＰＲ）を指す。治療に対する腫瘍応答を評価するための他の手段は、腫瘍マーカーの評価およびパフォーマンスステータスの評価を含む（たとえばクレアチニンクリアランスの判断；Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ  ａｎｄ  Ｇａｕｌｔ，Ｎｅｐｈｒｏｎ．１６：３１−４１，１９７６を参照）。
【００５８】
医薬組成物
本明細書において開示されるＤｋｋ−１抗体および化学療法剤は、投与に適した医薬組成物の中に組み込むことができる。そのような組成物は、典型的に、抗体または１つもしくはそれ以上の化学療法剤またはその両方および薬学的に許容され得るキャリヤを含む。本明細書において使用されるように、用語「薬学的に許容され得るキャリヤ」は、医薬の投与と適合性である任意のおよびすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤、ならびにその他同種のものを含むことが意図される。薬学的に活性な物質のためのそのような媒体および作用物質の使用は、当技術分野においてよく知られている。任意の従来の媒体または作用物質が活性化合物と不適合性である場合を除いて、その組成物における使用が、企図される。
【００５９】
本発明の医薬組成物は、投与のその意図されるルートと適合性となるように製剤される。投与のルートの例は、非経口、たとえば静脈内、皮内、皮下、経口（たとえば吸入）、経皮（局所）、経粘膜、および直腸投与を含む。非経口、皮内、または皮下適用のために使用される水剤または懸濁剤は、以下の構成成分を含むことができる：注射用水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶剤などのような滅菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどのような抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどのような酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸などのようなキレート剤；酢酸、クエン酸、またはリン酸などのようなバッファー、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどのような張性の調節のための作用物質。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどのような、酸または塩基により調節することができる。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチックから作製されるアンプル、使い捨ての注射器、または複数用量のバイアル中に密封することができる。
【００６０】
注射用の使用に適した医薬組成物は、滅菌水性水剤（水溶性）または分散剤および滅菌注射用水剤または分散剤の即時調製のための滅菌パウダーを含む。静脈内投与については、適したキャリヤは、生理的食塩水、静菌性の水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ）、またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含む。すべての場合において、組成物は、滅菌されていなければならず、容易な注射針通過が見られる程度まで流動性であるべきである。それは、製造および保存の条件下で安定していなければならず、細菌および真菌などのような微生物の混入作用から保護されなければならない。キャリヤは、たとえば水、エタノール、ポリオール（たとえばグリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール、ならびにその他同種のもの）、ならびにその適した混合物を含有する溶媒または分散媒とすることができる。適切な流動性は、たとえば、レシチンなどのようなコーティングの使用によって、分散剤の場合には、必要とされる粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。微生物の作用の予防は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、たとえばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール、およびその他同種のものによって実現することができる。多くの場合において、組成物において、等張剤、たとえば糖、マンニトールなどのような多価アルコール、ソルビトール、および塩化ナトリウムを含むことは好ましいであろう。注射用の組成物の長期間の吸収は、吸収を遅延させる作用物質、たとえばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物中に含むことによって、もたらすことができる。
【００６１】
滅菌注射用水剤は、必要に応じて、上記に列挙される成分のうちの１つまたはその組み合わせと共に、適切な溶剤中に、必要とされる量で、活性化合物（たとえばＤｋｋ−１抗体）を組み込み、その後、ろ過滅菌することによって、調製される。一般に、分散剤は、塩基性分散媒および上記に列挙されるものからの必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクルの中に、活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用水剤の調製のための滅菌パウダーの場合には、調製の好ましい方法は、活性成分および任意のさらなる所望の成分のパウダーをそのあらかじめ滅菌ろ過された水剤から産出する真空乾燥および凍結乾燥である。
【００６２】
経口組成物は、一般に、不活性希釈剤または食用のキャリヤを含む。それらは、ゼラチンカプセル中に密封することができるまたは錠剤の中に圧縮することができる。経口治療投与の目的のために、活性化合物は、賦形剤と共に組み込み、錠剤、トローチ、またはカプセルの形態で使用することができる。経口組成物はまた、口腔洗浄薬としての使用のために、液体キャリヤを使用して調製することができ、液体キャリヤ中の化合物は、経口的に適用され、すばやくすすがれ、吐かれるまたは飲み込まれる。薬学的に適合性の結合剤および／または補助材料は、組成物の一部として含むことができる。錠剤、丸剤、カプセル、トローチ、およびその他同種のものは、類似する性質の以下の成分または化合物のいずれかを含有することができる：結晶セルロース、トラガカントゴム、もしくはゼラチンなどのようなバインダー；デンプンもしくはラクトースなどのような賦形剤、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、もしくはコーンスターチなどのような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムもしくはＳｔｅｒｏｔｅｓなどのような潤滑剤；コロイド状二酸化ケイ素などのような滑剤；スクロースもしくはサッカリンなどのような甘味剤；またはペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジ矯味剤などのような調味料。
【００６３】
吸入による投与については、化合物は、適した噴射剤、たとえば二酸化炭素などのようなガスを含有する加圧容器もしくはディスペンサーまたはネブライザーからのエアロゾル噴霧剤の形態で送達される。
【００６４】
全身投与はまた、経粘膜または経皮手段によるものとすることもできる。経粘膜または経皮投与については、透過する障壁に適切な浸透剤が、製剤中に使用される。そのような浸透剤は、当技術分野において一般に知られており、たとえば、経粘膜投与については、洗浄剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、経鼻噴霧剤または坐剤の使用を通して達成することができる。
【００６５】
経皮投与については、活性化合物は、当技術分野において一般に知られている外用薬、軟膏剤、ゲル、またはクリームの中に製剤される。
【００６６】
化合物はまた、坐剤（たとえば、カカオバターおよび他のグリセリドなどのような従来の坐剤基剤と共に）または直腸送達のための保持浣腸剤の形態で調製することができる。
【００６７】
一実施形態において、活性化合物は、移植片およびマイクロカプセル化された送達系を含む放出制御製剤などのような、身体からの急速な排除から化合物を防御し得るキャリヤと共に調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などのような、生分解性で生体適合性のポリマーを、使用することができる。そのような製剤の調製のための方法は、当業者らに明らかであろう。材料はまた、Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｎｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から市販で得ることができる。リポソーム懸濁剤（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体により感染細胞を標的にするリポソームを含む）もまた、薬学的に許容され得るキャリヤとして使用することができる。これらは、たとえば、米国特許第４，５２２，８１１号明細書において記載されるように、当業者らに知られている方法に従って調製することができる。
【００６８】
投与の容易性および投薬量の均一性のために投薬単位形態で経口または非経口組成物を製剤することはとりわけ有利である。本明細書において使用される投薬単位形態は、治療されることになっている対象に対する単一の投薬に適した物理的に個別の単位を指し、それぞれの単位は、必要とされる医薬キャリヤと関連して、所望の治療効果をもたらすように計算された所定の量の活性化合物を含有する。本発明の投薬単位形態についての規格は、活性化合物の特有の特徴および実現されるべき特定の治療効果ならびに個人の治療のためにそのような活性化合物を合成することについての当技術分野における固有の制限によって必然的に決められ、それらに直接、依存する。
【００６９】
本発明が、その例となる実施形態への参照により特に示され、記載されたが、添付の請求項によって包含される本発明の範囲から逸脱することなく、形式および詳細における様々な変更がその中でなされてもよいことが当業者らによって理解されるであろう。
【実施例】
【００７０】
実施例１−ＣＴＮＮＢ１遺伝子の恒常的に活性化している突然変異の検出
生検サンプルは、ベータ−カテニン遺伝子の配列の決定のために患者から得ることができる。遺伝子配列決定は、当業者の理解し得る範囲内に十分にあり、Ｂｏｕｌｄｅｒ、ＣＯのＡｒｃｈｅｒＤＸ，Ｉｎｃ．から入手可能なＡｒｃｈｅｒ（登録商標）ＶａｒｉａｎｔＰｌｅｘ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒ  ｋｉｔおよびＳａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡのＩｌｌｕｍｉｎａ，Ｉｎｃ（Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ  Ｈｅａｄｑｕａｒｔｅｒｓ）から入手可能なものなどのような次世代シークエンシングプラットフォームなどのような市販で入手可能な製品を使用して達成することができる。比較は、遺伝子の、たとえばＮＣＢＩデータベースの公的に入手可能な遺伝子配列に対して行うことができる。
【００７１】
実施例２−ベータ−カテニンタンパク質の恒常的に活性化している突然変異の検出
ベータ−カテニンのリン酸化ステータスは、ベータ−カテニンのリン酸化形態を認識する抗体によりウエスタンブロット分析によって決定することができる。ベータ−カテニンの安定化および活性化は、細胞タンパク質レベルにおける増加を実証するウエスタンブロットによっておよびベータ−カテニンの核局在を実証する免疫蛍光によって決定することができる。下流ベータ−カテニン標的遺伝子または外因性ベータ−カテニンレポーター遺伝子構築物の発現の測定は、ベータ−カテニンの活性化ステータスを決定するために利用することができる。
【００７２】
実施例３−ＤＫＮ−０１療法を受けている患者におけるＣＴＮＮＢ１突然変異データ
パクリタキセル／ＤＫＮ−０１併用療法の臨床研究
患者は、第１相非ランダム化、用量漸増、非盲検、多施設研究として設計された併用ＤＫＮ−０１／パクリタキセル（登録商標）療法の臨床試験のために選択した。
【００７３】
組織学的に確認された再発性または転移性食道または食道胃接合部腺癌を有する患者を選択した。表１で報告するそれぞれの患者を、２８日間の治療サイクルに置いた：１〜１５日目に３００ｍｇのＤＫＮ−０１抗体；１、８、１５、および２２日目に８０ｍｇ／ｍ2のパクリタキセル（登録商標）。
【００７４】
ＤＫＮ−０１は、中断を伴うことなく最低３０分間かつ最大２時間以内にわたって静脈内に（ＩＶ）投与した。パクリタキセル（登録商標）は、標準的な診療に従ってそれぞれのサイクルの１、８、１５、および２２日目に１時間ＩＶ投与した。パクリタキセルについての標準的なケアであるプレメディケイションは投与前に行った。投与の順序：パクリタキセルについてのプレメディケイション、ＤＫＮ−０１、パクリタキセル。両方の薬剤を送達する場合、１および１５日目にＤＫＮ−０１を最初に、その後、パクリタキセルを投与した。
【００７５】
研究の開始前に収集した生検サンプルは、遺伝子発現分析を受けた。
【００７６】
放射線による腫瘍判断を実行した。最低、胸部、腹部、および骨盤のコンピューター断層撮影法（ＣＴ）によるスキャンを、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｉｎ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ（ＲＥＣＩＳＴ）によって定義されるようにＸ線画像診断で測定可能な１つまたはそれ以上の転移性腫瘍の証拠資料と共に腫瘍判断のために行った。実行可能な場合は常に、研究の全体にわたって好ましい画像診断様式は、ＣＴ／ＰＥＴスキャンとした。ベースラインのＸ線腫瘍判断は、サイクル１の１日目の前に２８日以内に行い、続く腫瘍判断は、偶数サイクルの後に毎回実行した。
【００７７】
以下の応答についての基準を使用した：
【００７８】
完全奏効（ＣＲ）：すべての病変の消失。あらゆる病的なリンパ節が、＜１０ｍｍまでの短軸の低下を有した。腫瘍マーカーの結果を標準化した。
【００７９】
部分奏効（ＰＲ）：ベースライン径和を基準として、病変の径の和の少なくとも３０％の減少。
【００８０】
進行性疾患（ＰＤ）：研究で最も小さな和（ベースラインの和が最も小さい場合、ベースラインの和を含む）を基準として、病変の径の和の少なくとも２０％の増加。２０％の相対的な増加に加えて、和は、少なくとも５ｍｍの絶対的な増加を実証した。１つまたはそれ以上の新たな病変の出現もまた、進行と考えられた。
【００８１】
安定した疾患（ＳＤ）：研究の間の最も小さな径和を基準としてＰＲとみなすのに十分な収縮もＰＤとみなすのに十分な増加もない。
【００８２】
結果分析
ベータ−カテニン突然変異の分析を、上記に記載される方法に従って、パクリタキセル（登録商標）およびＤＫＮ−０１の併用療法にかけた患者に対して実行した。結果を図１に示す。わかるように、エクソン２〜４、Ｓ４５Ｆ、およびＴ４１Ｉの欠失から結果として生じるベータ−カテニン突然変異が、部分奏効または少なくとも安定した疾患を示す患者において見つけられる。
【００８３】
このデータは、ベータ−カテニンの活性化突然変異が、抗Ｄｋｋ−１抗体投与に対する治療応答についてのバイオマーカー予測因子となることを実証する。
【００８４】
実施例４−患者１０５−０２３の事例研究：β−カテニン活性化突然変異は食道癌療法におけるＤＫＮ−０１感受性についてのバイオマーカーとなる
図１に示されるように、ＧＥＪ腺癌悪性疾患に罹患している患者１０５−０２３は腫瘍容積の最も高い低下を示した。患者１０５−０２３に関係する臨床データをさらに分析した。
【００８５】
患者１０５−０２３は、１４回の２８日間治療サイクルの過程にわたって７３％の腫瘍後退を経験した。結果を図２Ａおよび図２Ｂに示す。図２Ａは、治療のサイクルの数の関数として患者１０５−０２３における腫瘍容積のプロットを示す（サイクルは開始日によって表わされる）。患者１０５−０２３は、最初の１０サイクルについて２８日間のサイクルの間に１および１５日目に３００ｍｇのＤＫＮ−０１をならびに８０ｍｇ／ｍ2のパクリタキセルを毎週受けた。サイクル１０の間に、パクリタキセルを中断したが、応答は深さを増し続けた。図２Ｂは、ベースラインからサイクル１０までの患者１０５−０２３における原発性病変のサイズの低下を実証するコンピューター断層撮影法による画像である。矢印は原発性病変を表わす。
【００８６】
データからわかるように、患者１０５−０２３は、サイクル１０においてパクリタキセルを中断し、ＤＫＮ−０１単独療法に対する深まる応答を有し続けた。この患者の腫瘍由来の生検サンプルの遺伝子分析（Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｉｎｃ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡから市販で入手可能なＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）Ｐａｎｅｌを用いることによって実施例１において記載される方法を使用して実行した）は、恒常的な活性化をもたらすβ−カテニンエクソン２〜４の欠失の存在を示した。
【００８７】
このデータは、ベータ−カテニンの活性化突然変異が、抗Ｄｋｋ−１抗体投与に対する治療応答についてのバイオマーカー予測因子となるという発見をさらに支持する。
【００８８】
配列
ＣＴＮＮＢ１のゲノムＤＮＡ配列−配列番号１
配列番号１は、図３Ａ〜３Ｆにおいて示されるが、染色体座標ｃｈｒ３：４１，２４０，９４２−４１，２８１，９３９を有するヒトＣＴＮＮＢ１遺伝子の配列を示す。座標はすべて、ｂｕｉｌｄ  ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９からのものである。５’ＵＴＲおよび３’ＵＴＲのエクソンは含まれない。大文字はエクソンであり、小文字はイントロンである。エクソン２、３、および４に下線を引き、上部に記す。
【００８９】
ベータ−カテニンタンパク質のアミノ酸配列−配列番号２
下記の配列番号２は、ヒトベータ−カテニン、７８１アミノ酸タンパク質ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｄａｔａｂａｓｅ  ＩＤ−Ｐ３５２２２（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｐ３５２２２）のアミノ酸配列である。エクソン２、３、および４に下線を引き、上部に記す。
【化１】
2019533693.tif 000002
【００９０】
ベータ−カテニンタンパク質のエクソン
アミノ酸番号の範囲は、転写物のスプライシングのために配列番号１において印をつけたエクソンに正確には対応しない。たとえば、アミノ酸＃５についてのコドンの第１の塩基「Ｇ」は、エクソン２にあり、第２および第３の塩基「ＣＴ」は、エクソン３にある。
【００９１】
エクソン３の強調した残基（太字で下線を引いた）は、突然変異したまたは欠失した場合にベータ−カテニンを安定化するＧＳＫ３ＢおよびＣＫ１αのリン酸化部位を示す）：Ｓ３３、Ｓ３７、Ｔ４１、Ｓ４５。（ｄｅ  Ｌａ  Ｃｏｓｔｅ  Ａ，Ｒｏｍａｇｎｏｌｏ  Ｂ，Ｂｉｌｌｕａｒｔ  Ｐ，Ｒｅｎａｒｄ  ＣＡ，Ｂｕｅｎｄｉａ  ＭＡ，Ｓｏｕｂｒａｎｅ  Ｏ，ｅｔ  ａｌ．（１９９８）．Ｓｏｍａｔｉｃ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｅｔａ−ｃａｔｅｎｉｎ  ｇｅｎｅ  ａｒｅ  ｆｒｅｑｕｅｎｔ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ９５：８８４７−８８５１；およびＸｕ  Ｗ，＆Ｋｉｍｅｌｍａｎ  Ｄ（２００７）．Ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ  ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｆｒｏｍ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｂｅｔａ−ｃａｔｅｎｉｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐａｒｔｎｅｒｓ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ  １２０：３３３７−３３４４を参照）。
エクソン１（非コード）
エクソン２−配列番号３（配列番号２のアミノ酸１〜４）
ＭＡＴＱ（配列番号３）
エクソン３−配列番号４（配列番号２のアミノ酸５〜８１）
【化２】
2019533693.tif 000003
エクソン４−配列番号５（配列番号２のアミノ酸８２〜１６５）
【化３】
2019533693.tif 000004
【００９２】
ＬＣＤＲ１
Ｈｉｓ  Ａｌａ  Ｓｅｒ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ａｓｎ  Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｈｉｓ（配列番号６）
【００９３】
ＬＣＤＲ２
Ｔｙｒ  Ｘａａ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｘａａ  Ｇｌｎ（配列番号７）
２位のＸａａは、ＧｌｙまたはＡｌａであり、６位のＸａａは、ＩｌｅまたはＧｌｕである。
【００９４】
ＬＣＤＲ３
Ｇｌｎ  Ｇｌｎ  Ｓｅｒ  Ｘａａ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｐｒｏ  Ｌｅｕ  Ｈｉｓ（配列番号８）
４位のＸａａは、ＧｌｕまたはＡｌａである。
【００９５】
ＨＣＤＲ１
Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｔｈｒ  Ｐｈｅ  Ｓｅｒ  Ｓｅｒ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｍｅｔ  Ｓｅｒ（配列番号９）
【００９６】
ＨＣＤＲ２
Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｓｅｒ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｐｈｅ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ａｓｐ  Ｓｅｒ  Ｖａｌ  Ｌｙｓ（配列番号１０）
【００９７】
ＨＣＤＲ３
Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｘａａ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｐｈｅ  Ａｓｐ  Ｉｌｅ（配列番号１１）
４位のＸａａは、ＨｉｓまたはＡｓｎである。
【００９８】
ＬＣＶＲ
【化４】
2019533693.tif 000005
５１位のＸａａは、ＧｌｙまたはＡｌａであり、５５位のＸａａは、ＩｌｅまたはＧｌｕであり、９２位のＸａａは、ＧｌｕまたはＡｌａである。
【００９９】
ＨＣＶＲ
【化５】
2019533693.tif 000006
１０２位のＸａａは、ＨｉｓまたはＡｓｎである。
【０１００】
ＬＣＶＲ
【化６】
2019533693.tif 000007
【０１０１】
ＨＣＶＲ
【化７】
2019533693.tif 000008
【０１０２】
ＬＣＶＲ
【化８】
2019533693.tif 000009
【０１０３】
ＨＣＶＲ
【化９】
2019533693.tif 000010
【０１０４】
ＬＣＶＲ
【化１０】
2019533693.tif 000011
【０１０５】
ＬＣＶＲ
【化１１】
2019533693.tif 000012
【０１０６】
ＨＣ
【化１２】
2019533693.tif 000013
【０１０７】
ＬＣ
【化１３】
2019533693.tif 000014
【０１０８】
ＨＣ
【化１４】
2019533693.tif 000015
【０１０９】
ＬＣ
【化１５】
2019533693.tif 000016
【０１１０】
ＨＣ
【化１６】
2019533693.tif 000017
【０１１１】
ＬＣ
【化１７】
2019533693.tif 000018
【０１１２】
ＬＣ
【化１８】
2019533693.tif 000019
【０１１３】
ヒトＤｋｋ−１アミノ酸配列
【化１９】
2019533693.tif 000020
【図１】
2019533693.tif 000021
【図２】
2019533693.tif 000022
【図３Ａ】
2019533693.tif 000023
【図３Ｂ】
2019533693.tif 000024
【図３Ｃ】
2019533693.tif 000025
【図３Ｄ】
2019533693.tif 000026
【図３Ｅ】
2019533693.tif 000027
【図３Ｆ】
2019533693.tif 000028
【図４Ａ】
2019533693.tif 000029
【図４Ｂ】
2019533693.tif 000030
【図４Ｃ】
2019533693.tif 000031
【図４Ｄ】
2019533693.tif 000032
【配列表】
2019533693000001.app
【国際調査報告】
2019533693.tif 000033
2019533693.tif 000034
2019533693.tif 000035
2019533693.tif 000036
2019533693.tif 000037
2019533693.tif 000038