(57)【要約】  食品および飲料製品などにおける甘味料および香味改質剤として有用なグリコシル化ステビオール配糖体組成物の製造方法は、ステビオール配糖体組成物の酵素−触媒されたグリコシル化の前、間および／または後の塩基性条件の使用によって向上される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
出発ステビオール配糖体組成物、グルコース供与体およびシクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼをグリコシル化ステビオール配糖体組成物を生産するのに効果的な時間の間７．５超過〜１０以下のｐＨを有する水性媒体中で接触させる段階で含む、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の製造方法。
【請求項２】
前記出発ステビオール配糖体組成物が、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＭ（Ｘ）、ステビオシド、ステビオールビオシド、ルブソシドおよびズルコシドＡからなる群より選択される１種以上のステビオール配糖体で構成される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記出発ステビオール配糖体組成物が、乾燥重量基準で少なくとも約５０％レバウジオシドＢで構成される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記出発ステビオール配糖体組成物が、乾燥重量基準で少なくとも約５０％レバウジオシドＡで構成される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記出発ステビオール配糖体組成物が、乾燥重量基準で少なくとも約５０％ステビオシドで構成される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記出発ステビオール配糖体組成物が、乾燥重量基準で少なくとも約１０％ステビオールビオシドで構成される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記グルコース供与体がオリゴ糖、シクロデキストリンおよび多糖類からなる群より選択される、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記グルコース供与体が、澱粉、デキストリン、液化澱粉およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記ｐＨが、約８〜約９である、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼが、バチルスステアロサーモフィラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルスマセランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍａｃｅｒａｎｓ）、バチルスサーキュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチルスアルカロフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｃａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルスハロフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、サーモアナエロバクター（Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ）菌株またはサーモアナエロビュム（Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂｉｕｍ）菌株から得られるか、由来されるシクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼである、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼが、サーモアナエロバクター属（Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．）の菌株から得られるか、由来されるシクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼである、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼが、非−好アルカリ性シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼである、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
接触が、約２０℃〜約９５℃の温度で行われる、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
接触が、約１時間〜約２５０時間の間行われる、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記水性媒体が、緩衝された水性媒体である、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
グリコシル化ステビオール配糖体組成物をグルコース間の結合を切断することのできる少なくとも１つの酵素と接触させる追加段階を含む、請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
前記接触段階が、出発ステビオール配糖体組成物に存在するステビオール配糖体のグリコシル化ステビオール配糖体への転換率６０％〜８５％または６５％〜８０％を達成するのに効果的な条件下で行われる、請求項１〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
ａ）出発ステビオール配糖体組成物を塩基性水性媒体または塩基性樹脂と接触させ、塩基−処理されたステビオール配糖体組成物を得る段階およびｂ）前記塩基−処理されたステビオール配糖体組成物、グルコース供与体およびシクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼをグリコシル化ステビオール配糖体組成物を生産するのに效果的な時間の間水性媒体中で接触させる段階を含む、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の製造方法。
【請求項１９】
前記出発ステビオール配糖体組成物が、７．５〜１４のｐＨを有する塩基性水性媒体と接触される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
段階ａ）が、２０℃〜１００℃の温度で行われる、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
段階ａ）が０．５時間〜２５０時間または１時間〜２５０時間の間行われる、請求項１８〜２０のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
出発ステビオール配糖体組成物が、レバウジオシドＡまたはステビオシド中、少なくとも１つで構成される、請求項１８〜２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
段階ａ）が、レバウジオシドＡが存在する場合、その少なくとも一部分をレバウジオシドＢに転換させ、ステビオシドが存在する場合、その少なくとも一部分をステビオールビオシドに転換させるのに効果的な条件下で行われる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記グリコシル化ステビオール配糖体組成物を、グルコース間の結合を切断することのできる少なくとも１つの酵素と接触させる追加段階を含む、請求項１８〜２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
グリコシル化ステビオール配糖体組成物を、塩基性水性媒体または塩基性樹脂と接触させる段階を含む、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の１つ以上の官能特性を向上させる、方法。
【請求項２６】
前記グリコシル化ステビオール配糖体組成物が、塩基性水性媒体と接触し、前記塩基性水性媒体が、７．５〜１４または８〜１４のｐＨを有する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記接触段階が、２０℃〜１００℃の温度で行われる、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記グリコシル化ステビオール配糖体組成物が、グリコシル化レバウジオシドＡまたはグリコシル化ステビオシド中、少なくとも１つで構成される、請求項２５〜２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
前記接触段階が、グリコシル化レバウジオシドＡが存在する場合、その少なくとも一部分をグリコシル化レバウジオシドＢに転換させ、グリコシル化ステビオシドが存在する場合、その少なくとも一部分をグリコシル化ステビオールビオシドに転換させるのに効果的な条件下で行われる、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
請求項１〜２９のいずれかに記載の方法によって得られるグリコシル化ステビオール配糖体組成物。
【請求項３１】
ａ）グリコシル化ステビオール配糖体組成物とｂ）レバウジオシドＢの総乾燥重量基準で、ａ）グリコシル化ステビオール配糖体組成物およびｂ）２〜８重量％のレバウジオシドＢで構成される、甘味料組成物。
【請求項３２】
前記グリコシル化ステビオール配糖体組成物が、請求項１〜２９のいずれかに記載の方法によって得られる、請求項３１に記載の甘味料組成物。
【請求項３３】
ａ）第１グリコシル化ステビオール配糖体組成物およびｂ）請求項１８〜２４のいずれかに記載の方法によって得られる第２グリコシル化ステビオール配糖体組成物で構成される、甘味料組成物。
【請求項３４】
第１グリコシル化ステビオール配糖体組成物が、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法によって得られる、請求項３３に記載の甘味料組成物。
【請求項３５】
ａ）第１ステビオール配糖体組成物およびｂ）第２グリコシル化ステビオール配糖体組成物の総乾燥重量基準で、ａ）６５〜９５重量％の第１ステビオール配糖体組成物およびｂ）５〜３５重量％の第２グリコシル化ステビオール配糖体組成物で構成される、請求項３３または３４に記載の甘味料組成物。
【請求項３６】
ａ）第１グリコシル化ステビオール配糖体組成物およびｂ）請求項２５〜２８のいずれかに記載の方法によって得られる第２グリコシル化ステビオール配糖体組成物で構成される、甘味料組成物。
【請求項３７】
第１グリコシル化ステビオール配糖体組成物が、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法によって得られる、請求項３６に記載の甘味料組成物。
【請求項３８】
ａ）第１ステビオール配糖体組成物とｂ）第２グリコシル化ステビオール配糖体組成物の総乾燥重量基準で、ａ）５０〜９５重量％の第１グリコシル化ステビオール配糖体組成物およびｂ）５〜５０重量％の第２グリコシル化ステビオール配糖体組成物で構成される、請求項３６または３７に記載の甘味料組成物。
【請求項３９】
グリコシル化ステビオール配糖体組成物であって、グリコシル化レバウジオシドＢ、グリコシル化ステビオールビオシド、ステビオールビオシドおよびレバウジオシドＢが各々存在し、グリコシル化レバウジオシドＢ、グリコシル化ステビオールビオシド、ステビオールビオシドおよびレバウジオシドＢがともに、乾燥重量基準で、前記グリコシル化ステビオール配糖体組成物の５〜５０％または１０〜２５％を占める、グリコシル化ステビオール配糖体組成物。
【請求項４０】
グリコシル化ステビオール配糖体組成物であって、グリコシル化レバウジオシドＢおよびグリコシル化ステビオールビオシドがともに、乾燥重量基準で、上記グリコシル化ステビオール配糖体組成物の２〜２５％または５〜１５％を占める、グリコシル化ステビオール配糖体組成物。
【請求項４１】
ｉ）ａ）請求項１〜２９のいずれかに記載の方法によって得られるグリコシル化ステビオール配糖体組成物、ｂ）請求項３１〜３８のいずれかに記載の甘味料組成物またはｃ）請求項３９または４０のグリコシル化ステビオール配糖体組成物中、少なくとも１つ、およびｉｉ）少なくとも１つの追加的な食品、飲料、化粧品または医薬成分を含む食品、飲料製品、化粧品または医薬品。
【請求項４２】
ｉ）ａ）請求項１〜２９のいずれかに記載の方法によって得られるグリコシル化ステビオール配糖体組成物、ｂ）請求項３１〜３８のいずれかに記載の甘味料組成物またはｃ）請求項３９または４０のグリコシル化ステビオール配糖体組成物中、少なくとも１つ、およびｉｉ）少なくとも１つの追加的な食品、飲料、化粧品または医薬成分を配合する段階を含む食品、飲料製品、化粧品または医薬品の製造方法。
【請求項４３】
食品、飲料製品、化粧品または医薬品におけるａ）請求項１〜２９のいずれかに記載の方法によって得られるグリコシル化ステビオール配糖体組成物、ｂ）請求項３１〜３８のいずれかに記載の甘味料組成物またはｃ）請求項３９または４０のグリコシル化ステビオール配糖体組成物中、少なくとも１つの用途。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
【０００２】
本出願は、２０１６年６月６日付で出願された米国仮特許出願第６２／３４６，１４８号に対する優先権を主張し、その全体開示内容は、すべての目的のために参考として本明細書に組み込まれる。
【０００３】
本発明は、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の向上された製造方法、これによって得られるグリコシル化ステビオール配糖体組成物、このようなグリコシル化ステビオール配糖体組成物を含む甘味料およびブレンド、ならびに食品および飲料などの食用製品における甘味料および香味改質剤としてのこのようなグリコシル化ステビオール配糖体の用途に関する。
【背景技術】
【０００４】
最近、天然産物に基づく高強度甘味料の開発にかなりの関心があった。このような甘味料は、食品および飲料製品において糖を代替することができ、これによって潜在的に、このような製品の糖を低下させ、また可能にはカロリー含有量も低下させることができる。ステビア（Ｓｔｅｖｉａ）植物の葉から抽出および単離されたステビオール配糖体は、大部分のこのような化合物が糖（スクロース）より何倍も甘いため、重要な研究および商業的関心の対象であった。ステビア植物のより古い品種は、少量のレバウジオシドＡおよび他の微量のステビオール配糖体とともに、主要なステビオール配糖体成分としてステビオシドを含有する。ステビオシドは、スクロースより約１００倍〜３００倍も甘いが、その味の質は、レバウジオシドＡの味の質より著しく劣るものと見なされる。したがって、非常に高いレベルのレバウジオシドＡを有するステビア植物の新品種および高度に純粋な（９５％＋）レバウジオシドＡを得るためのステビア葉の加工方式が開発された。しかしながら、高度に精製されたレバウジオシドＡであっても、全的にスクロースに匹敵される味プロファイルを有さない。したがって、精製されたレバウジオシドＡのみを使用し、低糖食品および飲料を調製することは、かなりの挑戦課題として残されている。
【０００５】
ステビオール配糖体は、中心ステビオール（テルペノイド）部分に結合したグルコース分子を有することを特徴とする。以前、アルファ−グルコシルトランスフェラーゼを１種以上のステビオール配糖体、および澱粉またはシクロデキストリンなどのグルコース供与体を含有する水溶液上で反応し得るようにし、１つ以上のグルコース単位が上記グルコース供与体からステビオール配糖体（ら）へ転移させることによって、ステビオシドおよびレバウジオシドＡなどの天然発生ステビオール配糖体を変形させ得ることが発見された。これによって得られる反応産物は、一般に「グリコシル化ステビオール配糖体」と称され、出発ステビオール配糖体（ら）と比較して変形された／向上された官能特性を有することができる。グリコシル化（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）またはグリコシル転移（ｔｒａｎｓｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）を伴うものと見なされ得る、このような反応の例は、米国特許第４，２１９，５７１号および米国公開特許第２００７／００８２１０２号に記載されている。
【０００６】
しかしながら、ステビオール配糖体グリコシル化技術のさらなる向上が好ましいであろう。例えば、このような反応で得られるグリコシル化ステビオール配糖体（ら）の収率は、低い傾向がある。さらに、公知された方法を用いて製造されたグリコシル化ステビオール配糖体の香味および味は、おそらく出発ステビオール配糖体（ら）の香味および味よりも優れているが、スクロースの有する官能特性と顕著に異なるという点で依然として完全に理想的ではない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の様々な非限定的な例示的様態は、以下のように要約することができる：
様態１：出発ステビオール配糖体組成物、グルコース供与体およびシクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼをグリコシル化ステビオール配糖体組成物を生産するのに効果的な時間の間７．５超過〜１０以下のｐＨを有する水性媒体中で接触させる段階で構成されるか、これから本質的になるか、これからなる、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の製造方法。
【０００８】
様態２：上記出発ステビオール配糖体組成物が、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＭ（Ｘ）、ステビオシド、ステビオールビオシド、ルブソシドおよびズルコシドＡからなる群より選択される１種以上のステビオール配糖体で構成されるか、これから本質的になるか、これからなる、様態１に記載の方法。
【０００９】
様態３：上記出発ステビオール配糖体組成物が、乾燥重量基準で少なくとも約５０％レバウジオシドＢで構成される、様態１に記載の方法。
【００１０】
様態４：上記出発ステビオール配糖体組成物が、乾燥重量基準で少なくとも約５０％レバウジオシドＡで構成される、様態１に記載の方法。
【００１１】
様態５：上記出発ステビオール配糖体組成物が、乾燥重量基準で少なくとも約５０％ステビオシドで構成される、様態１に記載の方法。
【００１２】
様態６：上記出発ステビオール配糖体組成物が、乾燥重量基準で少なくとも約１０％ステビオールビオシドで構成される、様態１に記載の方法。
【００１３】
様態７：上記グルコース供与体がオリゴ糖、シクロデキストリンおよび多糖類からなる群より選択される、様態１〜６のいずれかに記載の方法。
【００１４】
様態８：上記グルコース供与体が、澱粉、デキストリン、液化澱粉およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、様態１〜６のいずれかに記載の方法。
【００１５】
様態９：上記ｐＨが、約８〜約９である、様態１〜８のいずれかに記載の方法。
【００１６】
様態１０：上記シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼが、バチルスステアロサーモフィラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルスマセランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍａｃｅｒａｎｓ）、バチルスサーキュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチルスアルカロフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｃａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルスハロフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、サーモアナエロバクター（Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ）菌株またはサーモアナエロビュム（Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂｉｕｍ）菌株から得られるか、由来されるシクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼである、様態１〜９のいずれかに記載の方法。
【００１７】
様態１１：上記シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼが、サーモアナエロバクター属（Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．）の菌株から得られるか、由来されるシクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼである、様態１〜９のいずれかに記載の方法。
【００１８】
様態１２：上記シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼが、非−好アルカリ性シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼである、様態１〜９のいずれかに記載の方法。
【００１９】
様態１３：上記接触が、約２０℃〜約９５℃の温度で行われる、様態１〜１２のいずれかに記載の方法。
【００２０】
様態１４：接触が、約１時間〜約２５０時間の間行われる、様態１〜１３のいずれかに記載の方法。
【００２１】
様態１５：上記水性媒体が、緩衝された水性媒体である、様態１〜１４のいずれかに記載の方法。
【００２２】
様態１６：グリコシル化ステビオール配糖体組成物をグルコース間の結合を切断することのできる少なくとも１つの酵素と接触させる追加段階を含む、様態１〜１５のいずれかに記載の方法。
【００２３】
様態１７：上記接触段階が、出発ステビオール配糖体組成物に存在するステビオール配糖体のグリコシル化ステビオール配糖体への転換率６０％〜８５％または６５％〜８０％を達成するのに効果的な条件下で行われる、様態１〜１６のいずれかに記載の方法。
【００２４】
様態１８：ａ）出発ステビオール配糖体組成物を塩基性水性媒体または塩基性樹脂と接触させ、塩基−処理されたステビオール配糖体組成物を得る段階およびｂ）上記塩基−処理されたステビオール配糖体組成物、グルコース供与体およびシクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼをグリコシル化ステビオール配糖体組成物を生産するのに效果的な時間の間水性媒体中で接触させる段階を含むか、このような段階から本質的になるか、このような段階からなる、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の製造方法。
【００２５】
様態１９：様態１８において、上記出発ステビオール配糖体組成物が、７．５〜１４のｐＨを有する塩基性水性媒体と接触される、様態１８に記載の方法。
【００２６】
様態２０：段階ａ）が、２０℃〜１００℃の温度で行われる、様態１８または１９に記載の方法。
【００２７】
様態２１：段階ａ）が０．５時間〜２５０時間または１時間〜２５０時間の間行われる、様態１８〜２０のいずれかに記載の方法。
【００２８】
様態２２：出発ステビオール配糖体組成物が、レバウジオシドＡまたはステビオシド中、少なくとも１つを含むか、これから本質的になるか、これからなる、様態１８〜２１のいずれかに記載の方法。
【００２９】
様態２３：様態２２において、段階ａ）が、レバウジオシドＡが存在する場合、その少なくとも一部分をレバウジオシドＢに転換させ、ステビオシドが存在する場合、その少なくとも一部分をステビオールビオシドに転換させるのに効果的な条件下で行われる、方法。
【００３０】
様態２４：グリコシル化ステビオール配糖体組成物を、グルコース間の結合を切断することのできる少なくとも１つの酵素と接触させる追加段階を含む、様態１８〜２３のいずれかに記載の方法。
【００３１】
様態２５：グリコシル化ステビオール配糖体組成物を、塩基性水性媒体または塩基性樹脂と接触させる段階を含むか、これから本質的になるか、これからなる、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の１つ以上の官能特性を向上させる、方法。
【００３２】
様態２６：上記グリコシル化ステビオール配糖体組成物が、塩基性水性媒体と接触し、上記塩基性水性媒体が、７．５〜１４または８〜１４のｐＨを有する、様態２５に記載の方法。
【００３３】
様態２７：上記接触段階が、２０℃〜１００℃の温度で行われる、様態２５または２６に記載の方法。
【００３４】
様態２８：上記グリコシル化ステビオール配糖体組成物が、グリコシル化レバウジオシドＡまたはグリコシル化ステビオシド中、少なくとも１つで構成されるか、これから本質的になるか、これからなる、様態２５〜２７のいずれかに記載の方法。
【００３５】
様態２９：上記接触段階が、グリコシル化レバウジオシドＡが存在する場合、その少なくとも一部分をグリコシル化レバウジオシドＢに転換させ、グリコシル化ステビオシドが存在する場合、その少なくとも一部分をグリコシル化ステビオールビオシドに転換させるのに効果的な条件下で行われる、様態２８に記載の方法。
【００３６】
様態３０：様態１〜２９のいずれかの方法によって得られるグリコシル化ステビオール配糖体組成物。
【００３７】
様態３１：ａ）グリコシル化ステビオール配糖体組成物とｂ）レバウジオシドＢの総乾燥重量基準で、ａ）グリコシル化ステビオール配糖体組成物およびｂ）２〜８重量％のレバウジオシドＢで構成されるか、これから本質的になるか、これからなる、甘味料組成物。
【００３８】
様態３２：上記グリコシル化ステビオール配糖体組成物が、様態１〜２９のいずれかの方法によって得られる、様態３１に記載の甘味料組成物。
【００３９】
様態３３：ａ）第１グリコシル化ステビオール配糖体組成物およびｂ）様態１８〜２４のいずれかの方法によって得られる第２グリコシル化ステビオール配糖体組成物で構成されるか、これから本質的になるか、これからなる、甘味料組成物。
【００４０】
様態３４：第１グリコシル化ステビオール配糖体組成物が、様態１〜１７のいずれかの方法によって得られる、様態３３に記載の甘味料組成物。
【００４１】
様態３５：ａ）第１ステビオール配糖体組成物およびｂ）第２グリコシル化ステビオール配糖体組成物の総乾燥重量基準で、ａ）６５〜９５重量％の第１ステビオール配糖体組成物およびｂ）５〜３５重量％の第２グリコシル化ステビオール配糖体組成物で構成されるか、これらから本質的になるか、これらからなる、様態３３または３４に記載の甘味料組成物。
【００４２】
様態３６：ａ）第１グリコシル化ステビオール配糖体組成物およびｂ）様態２５〜２８のいずれかの方法によって得られる第２グリコシル化ステビオール配糖体組成物で構成されるか、これらから本質的になるか、これらからなる、甘味料組成物。
【００４３】
様態３７：上記第１グリコシル化ステビオール配糖体組成物が、様態１〜１７のいずれかの方法によって得られる、様態３６に記載の甘味料組成物。
【００４４】
様態３８：ａ）第１ステビオール配糖体組成物とｂ）第２グリコシル化ステビオール配糖体組成物の総乾燥重量基準で、ａ）５０〜９５重量％の第１グリコシル化ステビオール配糖体組成物およびｂ）５〜５０重量％の第２グリコシル化ステビオール配糖体組成物で構成されるか、これらから本質的になるか、これらからなる、様態３６または３７に記載の甘味料組成物。
【００４５】
様態３９：グリコシル化ステビオール配糖体組成物であって、グリコシル化レバウジオシドＢ、グリコシル化ステビオールビオシド、ステビオールビオシドおよびレバウジオシドＢが各々存在し、グリコシル化レバウジオシドＢ、グリコシル化ステビオールビオシド、ステビオールビオシドおよびレバウジオシドＢがともに、乾燥重量基準で、上記グリコシル化ステビオール配糖体組成物の５〜５０％または１０〜２５％を占める、グリコシル化ステビオール配糖体組成物。
【００４６】
様態４０：グリコシル化ステビオール配糖体組成物であって、グリコシル化レバウジオシドＢおよびグリコシル化ステビオールビオシドがともに、乾燥重量基準で、上記グリコシル化ステビオール配糖体組成物の２〜２５％または５〜１５％を占める、グリコシル化ステビオール配糖体組成物。
【００４７】
様態４１：ｉ）ａ）様態１〜２９のいずれかの方法によって得られるグリコシル化ステビオール配糖体組成物、ｂ）様態３１〜３８のいずれかの甘味料組成物またはｃ）様態３９または４０のグリコシル化ステビオール配糖体組成物中、少なくとも１つ、およびｉｉ）少なくとも１つの追加的な食品、飲料、化粧品または医薬成分を含むか、これらから本質的になるか、これらからなる、食品、飲料製品、化粧品または医薬品。
【００４８】
様態４２：ｉ）ａ）様態１〜２９のいずれかの方法によって得られるグリコシル化ステビオール配糖体組成物、ｂ）様態３１〜３８のいずれかの甘味料組成物またはｃ）様態３９または４０のグリコシル化ステビオール配糖体組成物中、少なくとも１つ、およびｉｉ）少なくとも１つの追加的な食品、飲料、化粧品または医薬成分を配合する段階を含むか、これから本質的になるか，これからなる、食品、飲料製品、化粧品または医薬品の製造方法。
【００４９】
様態４３：食品、飲料製品、化粧品または医薬品におけるａ）様態１〜２９のいずれかの方法によって得られるグリコシル化ステビオール配糖体組成物、ｂ）様態３１〜３８のいずれかの甘味料組成物またはｃ）様態３９または４０のグリコシル化ステビオール配糖体組成物中、少なくとも１つの用途。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】図１は、本発明による様々な方法およびこのような方法が、どのように互いに関連して実施され得るかを図式的に例示するプロセスフロー図である。
【図２】図２〜図８は、本明細書の実施例において、さらに説明される様々なステビオール配糖体およびグリコシル化ステビオール配糖体組成物のＬＣ−ＭＳクロマトグラムである。
【図３】図２〜図８は、本明細書の実施例において、さらに説明される様々なステビオール配糖体およびグリコシル化ステビオール配糖体組成物のＬＣ−ＭＳクロマトグラムである。
【図４】図２〜図８は、本明細書の実施例において、さらに説明される様々なステビオール配糖体およびグリコシル化ステビオール配糖体組成物のＬＣ−ＭＳクロマトグラムである。
【図５】図２〜図８は、本明細書の実施例において、さらに説明される様々なステビオール配糖体およびグリコシル化ステビオール配糖体組成物のＬＣ−ＭＳクロマトグラムである。
【図６】図２〜図８は、本明細書の実施例において、さらに説明される様々なステビオール配糖体およびグリコシル化ステビオール配糖体組成物のＬＣ−ＭＳクロマトグラムである。
【図７】図２〜図８は、本明細書の実施例において、さらに説明される様々なステビオール配糖体およびグリコシル化ステビオール配糖体組成物のＬＣ−ＭＳクロマトグラムである。
【図８】図２〜図８は、本明細書の実施例において、さらに説明される様々なステビオール配糖体およびグリコシル化ステビオール配糖体組成物のＬＣ−ＭＳクロマトグラムである。
【図９】図９は、本明細書の実施例に説明される特定の検査性能データを得ることに関連して使用される検査サンプル評価形態のフォーマットを示す。
【発明を実施するための形態】
【００５１】
本明細書で使用される「ステビオール配糖体」という語句は、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＭ（時には、レバウジオシドＸとも称される）、ルブソシド、ズルコシドまたはステビオシドなどのステビア植物に見出されるステビオール配糖体化合物（ステビオール配糖体）を意味する。天然発生ステビオール配糖体において、ステビオールグルコース単位は、ベータ形態で結合している。
【００５２】
本明細書で使用される「グリコシル化ステビオール配糖体」とは、１つ以上の位置でグリコシル化ステビオール配糖体（例えば、１つ、２つ、３つまたはそれ以上のグルコース部分が共有配糖体結合を介し、ステビオール配糖体に付加される）を意味する。特に、グリコシル化ステビオール配糖体は、１つ以上のグルコース部分またはアルファ１−４結合されたグルコース重合体（例えば、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラオース）が、母体ステビオール配糖体上の糖部分への１−４結合によって母体ステビオール配糖体分子に導入されているステビオール配糖体である。グリコシル化ステビオール配糖体において、酵素的グリコシル化反応によって付加されるグルコース単位（ら）は、アルファ形態で結合している。したがって、グリコシル化ステビオール配糖体は、天然発生ステビオール配糖体と異なる構造を有する。
【００５３】
本明細書で使用される「グリコシル化ステビオール配糖体組成物（ら）」という語句は、１つ以上のグリコシル化ステビオール配糖体を含むが、グリコシル化ステビオール配糖体以外の１つ以上の物質（例えば、未反応のステビオール配糖体（ら）および／または未反応のグルコース供与体および／またはグルコース供与体から得られる炭水化物の産物など）をさらに含むことのできる組成物を意味するものである。
【００５４】
本発明は、一般に、実施形態Ａ、実施形態Ｂおよび実施形態Ｃと称され、以下でより詳細に説明される少なくとも３つの主要な実施形態に対応する方法を含む。このような主要な実施形態は、独立的に、または互いに組み合わせて実施することができる。
実施形態Ａ
【００５５】
実施形態Ａは、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の製造方法であって、出発ステビオール配糖体組成物、グルコース供与体およびシクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼをグリコシル化ステビオール配糖体組成物を生産するのに効果的な時間の間７．５超過〜１０以下のｐＨを有する水性媒体中で接触させる段階を含む方法を伴う。このような条件下でグリコシル化を実施することは、低いｐＨ値におけるＣＧＴアーゼ−触媒グリコシル化と比較し、以下の利点中、１つ以上を提供することが発見されている：グリコシル化ステビオール配糖体収率の増加、味が向上されたグリコシル化ステビオール配糖体組成物および／または甘味が増加されたグリコシル化ステビオール配糖体組成物。
出発ステビオール配糖体組成物
【００５６】
出発ステビオール配糖体組成物は、天然ステビオール配糖体（すなわち、ステビア植物の葉から天然に発見されるステビオール配糖体）および／または非−天然ステビオール配糖体（すなわち、ステビア葉または他の天然供給源に発見されないステビオール配糖体）であり得る１つ以上のステビオール配糖体を含むことができる。出発ステビオール配糖体組成物は、向上を必要とするものと確認される１つ以上の属性、特に、１つ以上の官能特性を有する組成物として特徴づけることができる。例えば、向上を必要とする属性は、苦味、甘味後味、甘味強度、甘草香味、渋味およびこれらの組み合わせからなる群より選択することができる。出発ステビオール配糖体組成物は、ステビオール配糖体以外の１つ以上の物質、特に、ステビオール配糖体とともに、ステビア植物質中に存在する非−ステビオール配糖体、ステビア植物物質から得られるか、または製造される抽出物あるいは合成的に製造されるステビオール配糖体組成物中、１つ以上を含むことができる。しかし、本発明の様々な有利な実施形態において、出発ステビオール配糖体組成物は、乾燥固体基準で、全部で少なくとも５０重量％、少なくとも６０重量％、少なくとも７０重量％、少なくとも８０重量％、少なくとも９０重量％、少なくとも９５重量％または少なくとも９９重量％ステビオール配糖体（ら）で構成される。
【００５７】
出発ステビオール配糖体組成物に使用するのに適した例示的なステビオール配糖体は、ステビオシド、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＸ（Ｍ）、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＯ、ズルコシドＡ、ステビオールビオシド、ルブソシドおよびこれらの組み合わせからなる群より選択することができる。出発ステビオール配糖体組成物は、ステビア植物の公知された品種（天然および雑種）のいずれかを含むステビア植物の葉由来のステビオール配糖体の抽出物であり得る。このような抽出物は、一般にステビオシドおよびレバウジオシドＡが典型的に最も豊富に存在するステビオール配糖体である（抽出物が得られるステビア植物の品種に応じて）異なるステビオール配糖体の混合物である。一実施形態において、出発ステビオール配糖体組成物は、乾燥重量基準で、１０〜７０％ステビオシドおよび２０〜７０％レバウジオシドＡを含むことができ、ここで、ステビオシドおよびレバウジオシドＡの総量は、乾燥重量基準で７０％以上であり、他のステビオール配糖体が任意に存在し、乾燥重量基準で９０％以上または９５％以上の総ステビオール配糖体含量を提供することができる。例えば、出発ステビオール配糖体組成物は、（乾燥重量基準で）２８〜３０％ステビオシド、５０〜５５％レバウジオシドＡ、９〜１２％レバウジオシドＣ、１〜３％レバウジオシドＦおよび他のステビオール配糖体で構成され、総ステビオール配糖体含量が少なくとも９０％または少なくとも９５％になる抽出物であり得る。別の実施形態において、出発ステビオール配糖体組成物は、（乾燥重量基準で）２５〜３０％ステビオシド、５５〜６５％レバウジオシドＡおよび他のステビオール配糖体で構成され、総ステビオール配糖体含量が少なくとも９５％になる抽出物であり得る。さらに別の実施形態において、出発ステビオール配糖体組成物は、（乾燥重量基準で）５５〜６５％レバウジオシドＡ、２０〜３０％ステビオシドおよび総３〜８％のレバウジオシドＣとズルコシドＡで構成され、少なくとも９０％の総ステビオール配糖体含量を有する抽出物であり得る。代替的に、ステビオール配糖体の比率が異なるのみならず、ステビオシド、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＸ（Ｍ）、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＯ、ズルコシドＡ、ステビオールビオシドまたはルブソシドなどの高度に精製された（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％純粋な）ステビオール配糖体を有するステビア抽出物を使用することができる。
【００５８】
例えば、出発ステビオール配糖体組成物は、乾燥重量基準で、少なくとも約５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％レバウジオシドＢで構成され得る。他の実施形態において、出発ステビオール配糖体組成物は、乾燥重量基準で、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％レバウジオシドＡで構成され得る。さらなる実施形態において、出発ステビオール配糖体組成物は、乾燥重量基準で、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％ステビオシドで構成され得る。追加の実施形態によって、出発ステビオール配糖体組成物は、乾燥重量基準で、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％ステビオールビオシドで構成され得る。
【００５９】
出発ステビオール配糖体組成物として使用するのにも適しているのは、本発明の実施形態Ｂにしたがって塩基−処理されたステビオール配糖体組成物である。
グルコース供与体
【００６０】
本発明で使用するのに適しているグルコース供与体は、実質的に１つ以上のグルコース単位を切断し、出発ステビオール配糖体組成物に存在するステビオール配糖体分子に転移されるようにするＣＧＴアーゼの存在下で反応され得るグルコースのオリゴマー、重合体および環状形態のいずれかを含む。適切なグルコース供与体には、例えば、非限定的に、澱粉（小麦、トウモロコシ、ジャガイモ、タピオカおよびサゴ（ｓａｇｏ）などの異なる供給源由来の澱粉を含む）、液化澱粉（例えば、酸および／またはアミラーゼなどの酵素によって触媒される部分的加水分解を受けた澱粉を含む）、デキストリン（マルトデキストリンを含む）、シクロデキストリンなどおよびこれらの組み合わせが含まれる。有利な一実施形態において、グルコース供与体は、約０．５〜約１０のデキストロース当量（ＤＥ）値を有するマルトデキストリンである。
【００６１】
本発明の一実施形態において、適切なグルコース供与体組成物は、澱粉または他の適切な多糖類を、多糖類を液化させるのに効果的な条件下でアミラーゼとＣＧＴアーゼの混合物で処理して製造される。例えば、澱粉と水を配合して澱粉懸濁液を形成することができ、これにα−アミラーゼおよびＣＧＴアーゼを添加する。次いで、生成された混合物を、澱粉を液化（これによってその分子量の低下およびそのＤＥ値の増加をもたらす）させるのに効果的な時間（例えば、約０．２時間〜約６時間）に適切な温度（例えば、約５０℃〜約９０℃または約７０℃〜約９０℃）でインキュベートすることができる。その後、アミラーゼを低いｐＨ熱処理などの任意の適切な方法によって不活性化させ、グルコース供与体組成物を生成した後、これを出発ステビオール配糖体組成物およびＣＧＴアーゼの追加部分と配合し、グリコシル化条件に適用する。
【００６２】
本発明の様々な実施形態において、約０．５：１〜約２：１のグルコース供与体対ステビオール配糖体の重量比（乾燥重量基準）を提供するのに効果的な量のグルコース供与体がグリコシル化反応で使用される。他の実施形態において、グルコース供与体：ステビオール配糖体の重量比は、１：１〜２：１または１．５：１〜２：１であり得る。
ＣＧＴアーゼ
【００６３】
シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ（ＣＧＴアーゼ）は、ステビオール配糖体へのグルコース単位添加を触媒することのできる当業界に公知されている酵素のいずれかであり得る。異なるＣＧＴアーゼ酵素の組み合わせを利用することができる。ＣＧＴアーゼは、中温性、高温性、好アルカリ性および好塩性バチルスによって生産することができる。適切なＣＧＴアーゼ酵素は、例えば、バチルスステアロサーモフィラス、バチルスマセランス、バチルスサーキュランス、バチルスアルカロフィルスおよび／またはバチルスハロフィルスからならびにサーモアナエロバクターまたはサーモアナエロビュムの菌株から培養され得るか、由来され得る。このようなＣＧＴアーゼの例には、例えば、上記で言及した微生物の種から由来した天然または組み換え酵素であるものが含まれる。例えば、滅菌された培養培地に適切なバチルス種を接種させた後、接種された培地を約２０℃〜約９０℃の温度で約１２〜４８時間、好ましくは、通気および攪拌しながら培養し、得られた培養液を濾過してバチルス細胞を分離させ、例えば、限外濾過を使用して無細胞透過液をさらに濃縮させることによって、ＣＧＴアーゼを生成することができる。このような酵素は、澱粉を液化させてグリコシル化反応に使用するのに適したグルコース供与体を提供するために１つ以上のアミラーゼとともに使用することもできる。ＣＧＴアーゼ酵素（ら）は、無細胞培養液、濃縮された液体無細胞培養液、噴霧乾燥された、または凍結乾燥された無細胞培養液または高純度タンパク質の形態であり得る。遊離酵素のみならず、固定された酵素製剤を使用することができる。本発明の一実施形態において、ＣＧＴアーゼは（例えば、ゲル補足、吸着または共有結合によって）適切な支持体に固定される。適切なＣＧＴアーゼは、選択された微生物（例えば、サーモアナエロバクターの種または菌株）由来のＣＧＴアーゼを単離させ、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）などの適切な宿主微生物内にクローニングし、ここでＣＧＴアーゼを発現させる手順にしたがって生産することもできる。適切なＣＧＴアーゼは、例えば、ノボザイムズ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）およびアマノ（Ａｍａｎｏ）などの商業的供給源から入手することができる。
【００６４】
本発明の一実施形態において、ＣＧＴアーゼ酵素は、非−好アルカリ性有機体（すなわち、９以上のｐＨで最適な成長を示す有機体を意味するものと理解される好アルカリ性有機体ではない有機体）から培養されるか、由来される。したがって、本発明の好ましい実施形態のＣＧＴアーゼ酵素は、９未満のｐＨで最適な成長を示す有機体から培養されるか、由来される。特定の実施形態において、ＣＧＴアーゼ酵素は、サーモアナエロバクター属ＡＴＣＣ５３６２７などのサーモアナエロバクターの菌株から培養されるか、由来される。したがって、好ましくは、ノボザイムズによって商標名Ｔｏｒｕｚｙｍ(登録商標)３．０Ｌで市販されるＣＧＴアーゼ酵素などのサーモアナエロバクターＣＧＴアーゼが本発明のグリコシル化反応で使用される。本発明の特定の実施形態において、出発ステビオール配糖体組成物のグリコシル化は、ジェンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）受託番号Ｚ３５４８４を有するＣＧＴアーゼのアミノ酸序列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一のアミノ酸序列を有するＣＧＴアーゼを使用して行われる（参照：Ｊｏｅｒｇｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ａ  ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｌｅ  ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ  ｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｇｅｎｅ  ｆｒｏｍ  Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．ＡＴＣＣ  ５３６２７  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ″Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．１９，１０２７−１０３１（１９９７））。
【００６５】
Ｔｏｒｕｚｙｍ(登録商標)３．０ＬＣＧＴアーゼなどのサーモアナエロバクターＣＧＴアーゼを使用したステビオシドのグリコシル化に関する以前に公開された文献は、グリコシル化のための最適のｐＨが約５．５であり、ｐＨが７に増加される場合にステビオシドの転換率の顕著な低下があることを明確に示した（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  「Ｔｒａｎｓｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ  ｔｏ  ｉｍｐｒｏｖｅ  ｔｈｅ  ｅｄｕｌｃｏｒａｎｔ  ｑｕａｌｉｔｙ  ｂｙ  ｌｏｗｅｒ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｃｏｒｎｓｔａｒｃｈ  ｈｙｄｒｏｌｙｚａｔｅ  ａｎｄ  ＣＧＴａｓｅ」  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．  １３８，  ２０１３  ２０６４−２０６９）。類似した最適のｐＨは、文献［「Ｒｅｇｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ  ｔｏ  α−ａｒｂｕｔｉｎ  ｂｙ  ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ  ｇｌｕｃａｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｆｒｏｍ  Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｅｎｇ．  Ｊ．  ７９，２０１３，１８７−１９３」］で報告されたように、ほぼ５．５のｐＨが複数の基質とこのような酵素に最適であることを示したマシュー（Ｍａｔｈｅｗ）などによって明らかになった。さらに、澱粉からシクロデキストリンを生産するために使用される場合、Ｔｏｒｕｚｙｍ(登録商標)３．０Ｌは、５の最適作動ｐＨを有し、ｐＨが、ｐＨ６〜１０に増加される場合に活性が低下することが明らかになった。したがって、ステビオール配糖体のグリコシル化を含み、広範囲な反応にわたってＴｏｒｕｚｙｍ(登録商標)３．０ＬなどのＣＧＴアーゼに対して予想される最適ｐＨは、５〜６範囲にあることが立証された。したがって、ステビオール配糖体組成物のグリコシル化を７．５超過〜１０以下のｐＨを有する水性媒体中でＴｏｒｕｚｙｍ(登録商標)３．０ＬなどのＣＧＴアーゼおよびグルコース供与体の存在下で行うことによって、実際に特定の利益が達成されるという本発明者の調査結果は予期せぬことであり、当業界の従来知識に基づいて適正に予想できないことである。このような利益には、収率の向上（すなわち、所定の期間内のグリコシル化ステビオール配糖体収率の増加）、味の質の向上（すなわち、得られるグリコシル化ステビオール配糖体組成物はより優れた官能特性を有する）および／またはグリコシル化程度の向上（すなわち、より高い数のグルコース部分が出発ステビオール配糖体（ら）に添加されるグリコシル化ステビオール配糖体組成物の生産）を含むことができるが、これらに限定されない。
【００６６】
本発明の様々な実施形態において、グリコシル化反応で用いられるＣＧＴアーゼの量は、グルコース供与体のグラム当たり、約０．０２〜約１０単位のＣＧＴアーゼ（固体基準）であり得る。
グリコシル化条件
【００６７】
上記で言及したように、出発ステビオール配糖体組成物のグリコシル化は、出発ステビオール配糖体組成物を水性媒体中で少なくとも１つのＣＧＴアーゼの存在下でグルコース供与体と接触させることによって行われる。２４時間以内に得られるグリコシル化された産物の収率は、弱塩基性ｐＨ、例えば、７．５を超過するが、１０以下であるｐＨ、８〜１０のｐＨ、８〜９のｐＨまたは約８．５のｐＨを有する水性媒体を提供することによって顕著に増加され得ることが発見された。このような結果は、特に、使用されるＣＧＴアーゼがＴｏｒｕｚｙｍ(登録商標)３．０Ｌなどの非−好アルカリ性ＣＧＴアーゼの場合に弱酸性であるｐＨ値（例えば、５．５〜６．５のｐＨ）でステビオール配糖体のＣＧＴアーゼ−触媒されたグリコシル化を行うことが通常的であったため、驚くべきことであった。水性媒体のｐＨは、任意の適切な塩基または適切な塩基の組み合わせを用いて所望の値に調整することができる；適切な塩基には、弱塩基のみならず、強塩基を含むことができる。塩基は、無機塩基（例えば、アルカリ金属水酸化物、炭酸塩または重炭酸塩）または有機塩基（例えば、有機アミン、有機酸の共役塩基）であり得る。一実施形態において、塩基または塩基らは、水性媒体中で可溶化される。水性媒体は、選択された塩基性ｐＨで緩衝されていてもよく、緩衝されていなくてもよい。本発明の一実施形態において、水性媒体に所望のｐＨを付与するのに必要な塩基の少なくとも一部分は、出発ステビオール配糖体組成物を本明細書の他の部分で説明する本発明の実施形態Ｂにしたがって塩基−処理することによって得られる反応産物中に存在する塩基によって供給される。すなわち、塩基−処理されたステビオール配糖体組成物は、本発明の実施形態Ａにおける出発ステビオール配糖体組成物として使用することができる。
【００６８】
水性媒体は、水で構成されるが、水以外の１種以上の溶媒でさらに構成されることも可能である。典型的に、このような追加溶媒（ら）は、存在する場合、水と混和性であり、水の量に比べて比較的少量で存在する（例えば、水以外の溶媒の量は、水と溶媒の総重量基準で２０重量％未満、１０重量％未満または５重量％未満であり得る）。特定の実施形態において、水性媒体は、水以外にいかなる溶媒も含有しない。
【００６９】
グリコシル化反応が行われる温度は、重要であるとは考えられないが、典型的にグリコシル化は、室温（例えば、２０℃）〜約９５℃の温度範囲内で実施される。一実施形態において、グリコシル化反応温度は、約４５℃〜約７０℃である。別の実施形態において、グリコシル化反応温度は、約４５℃〜約５５℃である。反応物の接触は、出発ステビオール配糖体のグリコシル化ステビオール配糖体への所望の転換を達成するのに効果的な期間に実施される。例えば、本発明の特定の実施形態において、出発ステビオール配糖体の６０％〜８５％または６５％〜８０％転換率が達成される；転換程度は、ＨＰＬＣおよび／またはＬＣ−ＭＳ分析方法によって容易にモニタリングすることができる。（グリコシル化反応産物として得られる）グリコシル化ステビオール配糖体組成物中のグリコシル化ステビオール配糖体の含量および未反応のステビオール配糖体の含量は、日本国厚生労働省によって２００９年に公開された食品添加物などの規格基準（Ｊａｐａｎ’ｓ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｆｏｒ  Ｆｏｏｄ  Ａｄｄｄｉｔｉｖｅｓ）第８版の２５７〜２５８頁に記載されている手順にしたがって測定することができる。
【００７０】
一般に、温度、ＣＧＴアーゼの活性、出発ステビオール配糖体組成物の組成、酵素濃度および他の要因によって、１時間〜２５０時間または１時間〜１６８時間の反応時間が適切であり得る。一実施形態において、反応時間は、約１２〜約２４時間である。出発ステビオール配糖体組成物がステビオシドを含む場合、例えば、得られる反応混合物は、１３−Ｏ−ソホロシル部分の１９−Ｏ−グルコシル単位と末端グルコシル単位両方でモノ−グリコシル化、ジ−グリコシル化、トリ−グリコシル化およびさらに高度にグリコシル化された産物の比較的複雑な混合物であり得る。
【００７１】
特定の実施形態によれば、グリコシル化反応は、出発物質に存在するステビオール配糖体の部分的転換のみを達成するのに効果的な条件下で実施される。例えば、一旦、出発ステビオール配糖体の約６０〜８５％が反応され（すなわち、１つ以上のグルコース部分でグリコシル化され）、約１５〜４０％の未反応の出発ステビオール配糖体が反応混合物中に残ることになると（ここで、グリコシル化ステビオール配糖体＋未反応のステビオール配糖体の総量＝１００％）、グリコシル化反応が中断され得る。別の実施形態によって、グリコシル化は、出発ステビオール配糖体の約６５〜８０％が反応され（すなわち、１つ以上のグルコース部分でグリコシル化され）、約２０〜３５％の未反応の出発ステビオール配糖体が反応混合物中に残るまで（ここで、グリコシル化ステビオール配糖体＋未反応のステビオール配糖体の総量＝１００％）行われる。
【００７２】
本発明の様々な実施形態において、グリコシル化反応は、水（約８〜約８．４の初期ｐＨ）中で約４〜約６重量％出発ステビオール配糖体組成物および約８〜約１２重量％デキストリン（デキストリン対出発ステビオール配糖体の重量比は、約１．５：１〜約２．５：１である）を用いて行うことができる。上記混合物を約４０℃〜約６０℃で約０．５〜約３０時間ＣＧＴアーゼとともにインキュベートし、所望のグリコシル化ステビオール配糖体を含有する反応産物を得る。次いで、酵素を不活性化させ、吸着樹脂、炭素濾過およびイオン交換を用いて反応産物を精製する。
【００７３】
一旦、所望の転換程度が達成されると（これは、標準高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）または液体クロマトグラフィー−質量分光法（ＬＣ−ＭＳ）技術を用いて測定することができる）、反応産物をさらに処理するか、加工することができる。例えば、ＣＧＴアーゼを（例えば、反応産物をＣＧＴアーゼがさらなるグリコシル化を触媒する能力に関し、不活性化するのに効果的な温度まで加熱する熱処理によって）不活性化させることができる。他の実施形態において、反応産物を本明細書で説明する実施形態Ｃにしたがって塩基でさらに処理することができる。別の実施形態において、グリコシル化ステビオール配糖体組成物を追加的な異なる種類の酵素、特に、アミラーゼまたはグルコース間の結合を切断することのできる他の酵素（例えば、バチルスズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｓｕｂｔｉｌｉｓ）から由来されたマルトジェニックアミラーゼなどのマルトジェニックアミラーゼ）で処理することができる。例えば、α−アミラーゼをグリコシル化反応産物と配合することができ、生成された混合物を約５５℃〜約９５℃で約６〜２４時間インキュベートした後、（例えば、低いｐＨで加熱を用いて）α−アミラーゼを不活性化させることができる。別の実施形態において、マルトジェニックアミラーゼなどのアミラーゼをグリコシル化反応産物と配合し、生成された混合物を約２５℃〜約４０℃で約１２時間〜約３６時間インキュベートする。このようなさらなる酵素的処理は、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の組成プロファイルを変更する作用をし、これによって可能には組成物の味プロファイルのさらなる向上をもたらす。グリコシル化ステビオール配糖体組成物はまた、または代替的に本明細書（例えば、「グリコシル化ステビオール配糖体組成物の精製」と題する段落）に記載されたさらなる加工段階中、１つ以上に適用することができる。
実施形態Ｂ
【００７４】
本発明の実施形態Ｂは、ａ）出発ステビオール配糖体組成物を塩基性水性媒体または塩基性樹脂と接触させ、塩基−処理されたステビオール配糖体組成物を得る段階およびｂ）上記塩基−処理されたステビオール配糖体組成物、グルコース供与体およびシクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼを、グリコシル化ステビオール配糖体組成物を生産するのに効果的な時間の間水性媒体中で接触させる段階を含む、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の製造方法を提供する。実施形態Ｂは、実施形態Ａおよび実施形態Ｃの一方またはこれらの両方と組み合わせて実施することができるが、代替的に、単独でまたはグリコシル化ステビオール配糖体分野に公知された他の加工段階と組み合わせて実施することができる。出発ステビオール配糖体組成物を本明細書に説明された方式で塩基処理することによって、ステビオール配糖体組成物から得られるグリコシル化ステビオール配糖体組成物の味は、異臭（ｏｆｆ−ｆｌａｖｏｒ）、苦味、長続きする後味などの減少（これによってグリコシル化ステビオール配糖体組成物の味をスクロースとさらに類似するように作る）によって、および／またはグリコシル化ステビオール配糖体組成物の甘味強度の増加によって向上することができる。
【００７５】
出発ステビオール配糖体組成物は、実施形態Ａと関連して上記で言及した出発ステビオール配糖体組成物のいずれかに該当し得る。しかし、実施形態Ｂの特定の様態において、出発ステビオール配糖体組成物は、レバウジオシドＡおよびステビオシド中、少なくとも１つ、またはレバウジオシドＡとステビオシドの両方を含有する。レバウジオシドＡおよびステビオシドの一方または両方は、出発ステビオール配糖体組成物中に優勢に（≧５０重量％、≧６０重量％、≧７０重量％、≧８０重量％、≧９０重量％）存在するステビオール配糖体（ら）であり得る。例えば、レバウジオシドＡおよびステビオシドは、ともに出発ステビオール配糖体組成物中に存在するステビオール配糖体の≧５０重量％、≧６０重量％、≧７０重量％、≧８０重量％、≧９０重量％を占めることができる。
【００７６】
塩基性水性媒体のｐＨは、本発明の様々な実施形態において、７．５超過、少なくとも８または少なくとも９および１４以下であり得る。例えば、塩基性水性媒体は、８〜１４、９〜１４または約１０〜約１４のｐＨを有することができる。水性媒体のｐＨは、任意の適切な塩基または適切な塩基の組み合わせを用いて所望の値に調整することができる；適切な塩基は、弱塩基のみならず、強塩基を含むことができる。塩基は、無機塩基（例えば、アルカリ金属水酸化物、炭酸塩または重炭酸塩）または有機塩基であり得る。一実施形態において、塩基または塩基らは、水性媒体中で可溶化される。水性媒体は、選択された塩基性ｐＨで緩衝されていてもよく、緩衝されていなくてもよい。
【００７７】
出発ステビオール配糖体組成物が、塩基性樹脂と接触する本発明の実施形態において、塩基性樹脂を例えば、塩基性官能基（１級、２級および／または３級アミノ基または４級アンモニウム基など）が結合した弱塩基性または（好ましくは）強塩基性重合体樹脂（例えば、架橋ポリスチレン）と接触させる。スルホン酸基がトリメチルアンモニウムなどの４級アンモニウム陽イオンを含有する架橋ポリスチレンスルホネート（例えば、ジビニルベンゼンで架橋され、スルホン化されたポリスチレン）は、１種類の強塩基性樹脂を構成する。ポリエチレンアミンは、適切な弱塩基性樹脂の一例である。出発ステビオール配糖体組成物は、塩基性樹脂と接触する場合に水性媒体に溶解することができる。
【００７８】
出発ステビオール配糖体組成物の塩基処理が行われる温度は、重要であるとは考えられないが、典型的に処理は、室温（例えば、２０℃）〜約１００℃の温度範囲内で実施される。例えば、塩基処理温度は、約４０℃〜約６０℃であり得る。塩基処理は、出発ステビオール配糖体の所望の転換を達成するのに効果的な時間に行われ、これは可能には個々のステビオール配糖体から１つ以上のグルコース単位を除去（特に、Ｃ−１９位置でグルコース単位を除去）し、それによってステビオールの配糖体の少なくとも部分的に他のステビオール配糖体に転換することを伴う。例えば、レバウジオシドＡが出発ステビオール配糖体組成物中に存在する場合、レバウジオシドＡの少なくとも一部分は、レバウジオシドＢに転換することができ、ステビオシドが存在する場合、ステビオシドの少なくとも一部分は、ステビオールビオシドに転換することができる。報告によると、レバウジオシドＢおよびステビオールビオシドは、各々レバウジオシドＡおよびステビオシドより甘味が少なく、ステビオールビオシドは、特に、悪い味プロファイルおよび低い甘味強度を有するものと特徴づけることができる。しかしながら、これらの化合物（レバウジオシドＢおよびステビオールビオシド）のグリコシル化産物は、現在予想外に各々「母体」ステビオール配糖体（レバウジオシドＡおよびステビオシド）のグリコシル化で得られるグリコシル化産物よりも甘いことが明らかになった。
【００７９】
一般に、温度、ｐＨ、塩基濃度、塩基の同一性および他の要因によって１時間〜１６８時間の反応時間が適切であり得る。本発明の特定の実施形態において、水酸化ナトリウムを用いて水性媒体のｐＨを約１３〜約１４に調整し、混合物を約４０℃〜約６０℃で約１８〜約３０時間加熱する。
【００８０】
これによって得られる塩基−処理されたステビオール配糖体組成物を、その後にＣＧＴアーゼの存在下で適切なグルコース供与体と反応させ、グリコシル化する。グリコシル化の前に、塩基−処理されたステビオール配糖体組成物を任意に中和／酸性化、沈殿などのような１つ以上の加工または精製段階に適用することができる。適切なグルコース供与体およびＣＧＴアーゼは、実施形態Ａに関連して以前に説明したもののいずれかであり得る。グリコシル化の条件は、上述したものと同じであってもよい。本発明の様々な様態において、水性媒体のｐＨは、７．５超過（実施形態Ａによって）であってもよい。しかし、他の様態において、水性媒体のｐＨは、７．５以下（例えば、５．５〜７．５または５．５〜６．５）である。これによって反応産物として得られるグリコシル化ステビオール配糖体組成物を、その後に本明細書の他の部分に説明されるか、当業界に公知されているように１つ以上のさらなる加工および／または精製段階に適用し、消耗性組成物の成分として使用するのに適した最終産物を提供することができる。
実施形態Ｃ
【００８１】
本発明はまた、グリコシル化ステビオール配糖体組成物を塩基性水性媒体または塩基性樹脂と接触させる段階を含む、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の１つ以上の官能特性を向上させる方法を提供する。上記方法は、任意のグリコシル化ステビオール配糖体組成物、すなわち、ステビオール配糖体組成物をグリコシル化反応させて得られる任意の組成物を用いて実施することができる。例えば、グリコシル化ステビオール配糖体組成物は、実施形態Ａにしたがって製造されたグリコシル化ステビオール配糖体組成物または本発明の実施形態Ｂにしたがって製造された塩基−処理されたステビオール配糖体組成物のグリコシル化によって製造されたグリコシル化ステビオール配糖体組成物であり得る。代替的に、塩基−処理されるグリコシル化ステビオール配糖体組成物は、当業界に公知されている任意の他のグリコシル化方法を用いて製造することができる。本明細書で説明する方式で加工することによって、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の味は、異臭、苦味、長続きする後味などの減少（これによってグリコシル化ステビオール配糖体組成物の味をスクロースとさらに類似するようになる）によって、および／またはグリコシル化ステビオール配糖体組成物の甘味強度の増加によって向上することができる。
【００８２】
塩基性水性媒体のｐＨは、本発明の様々な実施形態において、７．５超過、少なくとも８または少なくとも９または少なくとも１０および１４以下であり得る。例えば、塩基性水性媒体は、８〜１４または８．５〜１２または９〜１１または約１０のｐＨを有することができる。水性媒体のｐＨは、任意の適切な塩基または適切な塩基の組み合わせを用いて所望の値に調整することができる；適切な塩基は、弱塩基のみならず、強塩基を含むことができる。塩基は、無機塩基（例えば、アルカリ金属水酸化物、炭酸塩または重炭酸塩）または有機塩基であり得る。一実施形態において、塩基または塩基らは、水性媒体中で可溶化される。水性媒体は、選択された塩基性ｐＨで緩衝されていてもよく、緩衝されていなくてもよい。
【００８３】
グリコシル化ステビオール配糖体組成物が塩基性樹脂と接触する本発明の実施形態において、塩基性樹脂は、例えば、塩基性官能基（１級、２級および／または３級アミノ基または４級アンモニウム基など）が結合した弱塩基性または強塩基性重合体樹脂（例えば、架橋ポリスチレン）と接触させる。スルホン酸基がトリメチルアンモニウムなどの４級アンモニウム陽イオンを含有する架橋ポリスチレンスルホネート（例えば、ジビニルベンゼンで架橋され、スルホン化されたポリスチレン）は、１種類の強塩基性樹脂を構成する。ポリエチレンアミンは、適切な弱塩基性樹脂の一例である。グリコシル化ステビオール配糖体組成物は、塩基性樹脂と接触する場合に水性媒体に溶解することができる。
【００８４】
グリコシル化ステビオール配糖体組成物の塩基処理が行われる温度は、重要であるとは考えられないが、典型的に処理は、室温（例えば、２０℃）〜約１００℃の温度範囲内で実施される。例えば、温度は、約４０℃〜約６０℃または５０℃であり得る。塩基処理は、出発グリコシル化ステビオール配糖体の所望の転換を達成するのに効果的な時間に行われ、これは可能には、グリコシル化レバウジオシドＡまたはグリコシル化ステビオシドの各々グリコシル化レバウジオシドＢまたはグリコシル化ステビオールビオシドへの転換および／またはグリコシル化ステビオール配糖体生成物上に添加されたグルコース鎖の短縮を伴うものと考えられる。一般に、温度、ｐＨ、塩基濃度、塩基の同一性および他の要因によって１時間〜１６８時間の反応時間（例えば、約１２時間〜約３６時間または約１８〜約３０時間）が適切であり得る。例えば、水酸化ナトリウムが塩基として使用され、水性媒体が約９〜約１１のｐＨを有する場合、反応温度は、約４０℃〜約６０℃であり、反応時間は、約１８〜約３０時間であり得る。
【００８５】
これによって反応産物として得られるグリコシル化ステビオール配糖体組成物を、その後に本明細書の他の部分に説明されるか、当業界に公知されているように１つ以上のさらなる加工および／または精製段階に適用し、消耗性組成物の成分として使用するのに適した最終産物を提供することができる。
グリコシル化ステビオール配糖体組成物の精製
【００８６】
本発明の実施形態のいずれかにしたがって製造されたグリコシル化ステビオール配糖体組成物は、以下により詳細に説明するように、食品、飲料製品、化粧品および医薬品に組み込まれるか、成分として使用する前にさらに加工および／または精製することができる。
【００８７】
適切な精製／加工技術には、酵素不活性化、中和または他のｐＨ調整、濾過、滅菌、脱色、脱塩、クロマトグラフィーなどによる分画、乾燥、濃縮、沈殿、結晶化、吸着剤（例えば、マクロポーラス（ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ）吸着剤および疎水性樹脂などの重合体吸着剤、活性炭）処理、イオン交換樹脂処理などおよびこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。グリコシル化ステビオール配糖体組成物が水溶液（例えば、シロップ）の形態で得られる場合、それはその自体で使用してもよく、または任意に例えば、噴霧乾燥によって乾燥形態に転換してもよい。グリコシル化ステビオール配糖体組成物は、乾燥前または後に１種以上の他の成分（例えば、甘味料または他の香味改質剤）と配合することができる。
【００８８】
本発明の特定の実施形態において、グリコシル化ステビオール配糖体組成物を上述した方法中、１つ以上を用いて加工／または精製し、そのステビオール配糖体（存在する場合、未反応の出発ステビオール配糖体（ら）および出発ステビオール配糖体（ら）のグリコシル化産物両方とも含む）の含量が、乾燥重量基準で少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％となるようにする。生成されたグリコシル化ステビオール配糖体の量は、ＨＰＬＣを用いて出発ステビオール配糖体量の減少を測定することによって定量することができる。
【００８９】
用いられるさらなる加工／精製条件に応じて、得られるグリコシル化ステビオール配糖体組成物は、少量の残留グルコース供与体および／またはグルコース供与体から得られる炭水化物産物（例えば、グルコース供与体が澱粉である場合、マルトデキストリン）を含有することができる。組成物はまた、または代替的に出発ステビオール配糖体組成物中に存在するステビオール配糖体の一部分（例えば、未反応のステビオール配糖体）を含有することができる。
【００９０】
本発明の様々な実施形態において、グリコシル化ステビオール配糖体組成物を加工／または精製して甘味料および／または香味剤として消耗品（例えば、食品または飲料製品）の成分として意図された、または成分として使用するのに適した組成物を提供する。例えば、このようなグリコシル化ステビオール配糖体組成物は、乾燥固体基準で１５重量％〜４０重量％の未反応のステビオール配糖体および６０重量％〜８５重量％のグリコシル化ステビオール配糖体を含むことができ、ここで未反応のステビオール配糖体とグリコシル化ステビオール配糖体の総重量は、乾燥重量基準で、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の総重量の少なくとも９０％である。他の実施形態において、乾燥固体基準で２０重量％〜３５重量％の未反応のステビオール配糖体および６５重量％〜８０重量％のグリコシル化ステビオール配糖体で構成されるグリコシル化ステビオールの配糖体組成物が提供され、ここで未反応のステビオール配糖体とグリコシル化ステビオール配糖体の総重量は、乾燥重量基準で、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の総重量の少なくとも９５％である。
【００９１】
特定の実施形態によって、グリコシル化レバウジオシドＢ、グリコシル化ステビオールビオシド、ステビオールビオシドおよびレバウジオシドＢを含有するグリコシル化ステビオール配糖体組成物が提供される。このような成分はともに、乾燥重量基準で、例えば、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の５〜５０％または１０〜２５％を占めることができる。グリコシル化ステビオール配糖体組成物の残りは、主としてまたは全的にグリコシル化レバウジオシドＢ、グリコシル化ステビオールビオシド、ステビオールビオシドおよびレバウジオシドＢ以外の１種以上のステビオール配糖体およびグリコシル化ステビオール配糖体（例えば、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＨ、レバウジオシドＬ、レバウジオシドＫ，レバウジオシドＪ、レバウジオシドＭ（レバウジオシドＸとも称される）、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＯ、ズルコシドＡ、ズルコシドＢ、ルブソシド、ステビオシドおよびこれらのグリコシル化誘導体）で構成され得る。例えば、グリコシル化ステビオール配糖体組成物中のステビオール配糖体とグリコシル化ステビオール配糖体の総重量は、乾燥重量基準で、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％であり得る。上述したグリコシル化ステビオール配糖体およびステビオール配糖体以外にも、グリコシル化ステビオール配糖体組成物は、比較的微量の残留グルコース供与体および／またはグルコース供与体から得られる炭水化物産物（例えば、乾燥重量基準で、総５％以下または１０％以下の残留グルコース供与体および／またはグルコース供与体から得られる炭水化物産物）を含むことができる。上記で説明したグリコシル化ステビオール配糖体組成物は、特に、有利な官能特性を有することが明らかになった。
【００９２】
さらなる実施形態によって、グリコシル化レバウジオシドＢおよびグリコシル化ステビオールビオシドを含有するグリコシル化ステビオール配糖体組成物が提供される。このような成分はともに、乾燥重量基準で、例えば、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の２％〜２５％または５％〜１５％を占めることができる。グリコシル化ステビオール配糖体組成物の残りは、主としてまたは全的にグリコシル化レバウジオシドＢおよびグリコシル化ステビオールビオシド以外の１種以上のステビオール配糖体およびグリコシル化ステビオール配糖体（例えば、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＨ、レバウジオシドＬ、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＪ、レバウジオシドＭ（レバウジオシドＸとも称される）、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＯ、ズルコシドＡ、ズルコシドＢ、ルブソシド、ステビオールビオシド、ステビオシド、およびグリコシル化レバウジオシドＢおよびグリコシル化ステビオールビオシド以外のこれらのグリコシル化された誘導体）で構成され得る。例えば、グリコシル化ステビオール配糖体組成物中のステビオール配糖体とグリコシル化ステビオール配糖体の総重量は、乾燥重量基準で、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％であり得る。上記で言及したグリコシル化ステビオール配糖体およびステビオール配糖体以外にも、グリコシル化ステビオール配糖体組成物は、比較的微量の残留グルコース供与体および／またはグルコース供与体から得られる炭水化物産物（例えば、乾燥重量基準で、総５％以下または１０％以下の残留グルコース供与体および／またはグルコース供与体から得られる炭水化物産物）を含むことができる。上記で説明したグリコシル化ステビオール配糖体組成物は、特に、有利な官能特性を有することが明らかになった。
例示的なプロセス段階のさらなる説明
【００９３】
本発明の態様は、出発ステビオール配糖体組成物を食品、飲料製品、化粧品または医薬品などの消耗性製品に（例えば、甘味料または香味剤として）使用するのに適したグリコシル化ステビオール配糖体組成物に転換させるために実施され得る一連の加工段階を図式的形態に示す図１を参照してさらに説明することができる。図１において、個々の段階の番号は、単に参照目的のためのものであり、このような段階が番号順に実施されるか、言及されているすべての段階が必ず実施されることを暗示するものではない。しかし、本発明によって、段階１（実施形態Ｂ）、段階３（実施形態Ａ）または段階８（実施形態Ｃ）中、少なくとも１つは実行される。
【００９４】
段階１において、出発ステビオール配糖体組成物は、任意に本発明の実施形態Ｂにしたがって塩基処理することができる。次いで、塩基−処理されたステビオール配糖体組成物は、塩基−処理されたステビオール配糖体組成物中に存在するステビオール配糖体の少なくとも一部分をグリコシル化するのに效果的な条件下で、ＣＧＴアーゼの存在下でグルコース供与体と接触させることができる（段階３および４）。このような塩基処理は、少なくともステビオール配糖体の特定の類型が出発ステビオール配糖体組成物中に存在する場合に最終的に得られるグリコシル化ステビオール組成物の１つ以上の官能特性を向上させるのに役立つことが明らかになった。代替的に（図１に図示せず）、グリコシル化反応は、実施形態Ｂに塩基で処理されていない出発ステビオール配糖体組成物を用いて実施することができる。本発明の実施形態Ａに対応する段階３において、グリコシル化は、７．５超過のｐＨ（例えば、少なくとも８のｐＨ）を有する水性媒体を用いて行われる。このようなより高いｐＨ条件下のグリコシル化は、収率、味の質および／またはグリコシル化程度の向上をもたらすことが発見されている。代替的に、段階４に示したように、従来のｐＨ条件（例えば、ｐＨ＝５．５〜７．５）を使用することができる。
【００９５】
段階３または４で使用されるグルコース供与体は、デキストリンまたは澱粉などの未変形された、または未処理されたオリゴ糖、あるいは多糖類であり得る。しかしながら、段階２に示すように、グルコース供与体をアミラーゼまたはアミラーゼとＣＧＴアーゼの混合物と接触させた後、（例えば、低いｐＨ熱処理によって）アミラーゼを不活性化させる液化段階にグルコース供与体を適用することによって、これを前処理することが有利であり得る。
【００９６】
一旦、段階３または４のグリコシル化反応が出発ステビオール配糖体組成物の所望の転換率（これは、一旦、仕様が設定された後に、ＨＰＬＣまたはＬＣ−ＭＳによってモニタリングすることができ、このような仕様は、得られる生成物の官能分析を用いて決定される）に進行されると、ＣＧＴアーゼを熱処理または他の適切な手段によって不活性化させることができる（段階５）。次いで、これによって得られる反応産物を直接精製し（段階９）、本明細書の他の部分で説明した消耗品に使用するのに適したグリコシル化ステビオール配糖体組成物を提供することができる。代替的に、段階８に示すように、反応産物を精製段階９の前に本発明の実施形態Ｃにしたがって塩基−処理することができる。さらなる変形（段階６）において、グリコシル化ステビオール配糖体を含有する反応産物をグリコシル化ステビオール配糖体に存在する少なくとも特定のグルコース間の結合の切断を引き起こすのに効果的な条件下で、アミラーゼまたは他のグルコース間の結合切断酵素と接触させ、これによって反応産物に存在する個々のグリコシル化ステビオール配糖体の類型および／または相対量を変更することができる。その後、アミラーゼまたは他の酵素を反応産物のさらなる精製（段階９）の前に不活性化させることができる（段階７）。
【００９７】
本明細書に記載された加工段階は、組み合わせることができ、以下の例示的なプロセスフローにしたがって実行することができる：
Ｉ）．出発ステビオール配糖体組成物の塩基処理（ＩＩＩまたはＶＩＩが実施される場合には選択的）。
ＩＩ）．デキストリンまたは他のグルコース供与体のアミラーゼおよびＣＧＴアーゼへの処理（選択的）。
ＩＩＩ）．ｐＨ＞７．５において、出発ステビオール配糖体組成物（これは、塩基−処理されていてもいなくてもよい）とＣＧＴアーゼおよびグルコース供与体の接触（ＩまたはＶＩＩのいずれかが実施される場合には、ｐＨ≦７．５で実施されてもよい）。
ＩＶ）．ＣＧＴアーゼの不活性化（例えば、熱処理によって）。
Ｖ）．グリコシル化ステビオール配糖体組成物およびアミラーゼまたは他のグルコース間の結合切断酵素の接触（選択的）。
ＶＩ）．アミラーゼまたは他の酵素の不活性化（例えば、加熱によって）。
ＶＩＩ）．グリコシル化ステビオール配糖体組成物の塩基処理（ＩまたはＩＩＩが実施される場合には選択的）。
ＶＩＩＩ）．グリコシル化ステビオール配糖体組成物の精製（活性炭、イオン交換樹脂および／または疎水性樹脂処理によっておよび／または不純物を除去する他の方法によって）。
グリコシル化ステビオール配糖体組成物の用途
【００９８】
本発明の方法によって製造されたグリコシル化ステビオール配糖体組成物は、例えば、食品、飲料製品、化粧品（パーソナルケア）および医薬品を含む消費用として意図された製品の成分または構成要素として使用することができる。グリコシル化ステビオール配糖体組成物は、例えば、単独の甘味または香味改質成分として、または他の甘味料および／または香味改質剤と組み合わせて、甘味料および／または香味改質剤または増強剤として有用である。
【００９９】
本発明にしたがって製造されたグリコシル化ステビオール配糖体組成物と組み合わせて使用され得る適切な甘味料は、天然甘味料、合成甘味料、栄養および非−栄養甘味料のみならず、高強度および低強度甘味料を含む。甘味料は、スクロース、グリセルアルデヒド、ジヒドロキシアセトン、エリスロース、トレオース、エリトルロース、リキソース、リボース、キシロース、リブロース、キシルロース、アロース、ガラクトース、グルコース、グロース、イドース、マンノース、タロース、フルクトース、オールロース（プシコース）、ソルボース、タガトース、マンノヘプツロース、セドヘプツロース、オクトロース、フコース、ラムノース、アラビノース、ツラノース、シアロース、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＨ、レバウジオシドＬ、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＪ、レバウジオシドＭ（レバウジオシドＸとも称される）、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＯ、ズルコシドＡ、ズルコシドＢ、ルブソシド、ステビア抽出物、ステビオシド、モグロシドＩＶ、モグロシドＶ、羅漢果（Ｌｕｏ  Ｈａｎ  Ｇｕｏ）抽出物、シアメノシド、モナチンおよびその塩（モナチンＳＳ、ＲＲ、ｒＳ、ＳＲ）、クルクリン（ｃｕｒｃｕｌｉｎ）、グリチルリジン酸およびその塩、タウマチン（ｔｈａｕｍａｔｉｎ）、モネリン、マビンリン、ブラゼイン、ヘルナンズルチン（ｈｅｒｎａｎｄｕｌｃｉｎ）、フィロズルチン、グリチフィリン（ｇｌｙｃｙｐｈｙｌｌｉｎ）、フロリジン（ｐｈｌｏｒｉｄｚｉｎ）、トリロバチン、バイユノシド、オスラジン、ポリポドシドＡ、プテロカリオシドＡ、プテロカリオシドＢ、ムクロジオシド、フロミソシドＩ、ペリアンドリンＩ、アブルソシドＡ、ステビオールビオシドおよびシクロカリオシドＩ、エリスリトールなどの糖アルコール、スクラロース、アセスルファムカリウム、アセスルファム酸およびその塩、アスパルターム、アリターム、サッカリンおよびその塩、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン、シクラマート、シクラミン酸およびその塩、ネオターム、アドバンターム（ａｄｖａｎｔａｍｅ）、本明細書に説明された方法以外の方法によって製造されるグルコシル化ステビオール配糖体（ＧＳＧ）およびこれらの組み合わせからなる群より選択され得るが、これらに限定されるものではない。
【０１００】
本発明の一実施形態によればグリコシル化ステビオール配糖体組成物は、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の味および香味特性を向上させるのに効果的な量のレバウジオシドＢと組み合わされる。グリコシル化ステビオール配糖体組成物は、本明細書に説明されている手順のいずれかにしたがって製造することができるが、出発ステビオール配糖体組成物をグリコシル化反応に適用する当業界に公知されている任意の他の方法を用いて得られるグリコシル化ステビオール配糖体組成物であり得る。特定の実施形態において、グリコシル化ステビオール配糖体組成物は，乾燥固体基準で、１５％〜約４０重量％（例えば、乾燥固体基準で約２０重量％〜約３５重量％）の未反応のステビオール配糖体を含むことができ、残りは、全的にまたは主として（例えば、乾燥固体基準で少なくとも８０重量％、少なくとも８５重量％、または少なくとも９０重量％）グリコシル化ステビオール配糖体である。
【０１０１】
レバウジオシドＢをグリコシル化ステビオール配糖体組成物（例えば、本発明によって得られるステビオール配糖体組成物）と組み合わせることは、グリコシル化ステビオール配糖体組成物の嗜好（ｈｅｄｏｎｉｃ）特性を顕著に向上させ得ることが明らかになった。好ましくは、グリコシル化ステビオール配糖体組成物は、実施形態Ａ（出発ステビオール配糖体組成物、グルコース供与体およびシクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼが７．５超過〜１０以下のｐＨを有する水性媒体中で接触される本発明の様態）にしたがって製造されたものである。本発明の有利な実施形態において、グリコシル化ステビオール配糖体組成物および、グリコシル化ステビオールの配糖体組成物ならびにレバウジオシドＢの総乾燥重量基準で少なくとも１％、少なくとも２％または少なくとも３重量％のレバウジオシドＢを含むか、これらから本質的になるか、これらからなる、甘味料組成物が提供される。グリコシル化ステビオール配糖体組成物は、乾燥重量基準で、２％未満、１％未満、または０．５％未満、またはさらには０％のレバウジオシドＢを含有することができる。甘味料組成物は、様々な実施形態において、グリコシル化ステビオール配糖体組成物およびレバウジオシドＢの総乾燥重量基準で、１０重量％以下、９重量％以下、８重量％以下、７重量％以下、６重量％以下または５重量％以下のレバウジオシドＢを含有することができる。例えば、甘味料組成物は、グリコシル化ステビオール配糖体組成物およびレバウジオシドＢの総重量基準で、１〜１０重量、２〜８重量％、３〜６重量％または約４重量％レバウジオシドＢを含有することができる。
【０１０２】
有利に向上された甘味料組成物は、本発明の異なる様態にしたがって製造されたグリコシル化ステビオール配糖体組成物を組み合わせて製造することもできる。
【０１０３】
例えば、出発ステビオール配糖体組成物、グルコース供与体およびシクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼを７．５超過〜１０以下のｐＨを有する水性媒体中で接触させるが、グリコシル化の前または後の出発ステビオール配糖体組成物の塩基処理を行わずに製造されたグリコシル化ステビオール配糖体組成物（「ＧＳＧ組成物Ａ型」）の官能性能は、このような組成物をａ）出発ステビオール配糖体組成物を塩基性水性媒体または塩基性樹脂と接触させ、塩基−処理されたステビオール配糖体組成物を得る段階およびｂ）上記塩基−処理されたステビオール配糖体組成物、グルコース供与体およびシクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼを水性媒体（任意の適切なｐＨ、例えば、約５〜約１０を有する水性媒体；グリコシル化ステビオール組成物のより高収率は、弱塩基性ｐＨ、例えば、約８〜約９のｐＨで得ることができる）中で接触させる段階によって製造されるグリコシル化ステビオール配糖体組成物（「ＧＳＧ組成物Ｂ型」）と組み合わせて増強させることができる。このようなブレンドの利益は、消耗性製品中の比較的高濃度の甘味料組成物（例えば、少なくとも１０００ｐｐｍの総グリコシル化ステビオール配糖体）において特に、明らかである。甘味料組成物中のＧＳＧ組成物Ｂ型の量は、ＧＳＧ組成物Ａ型とＧＳＧ組成物Ｂ型の総乾燥重量基準で、少なくとも５重量％および５０重量％以下（または３５重量％以下）であり得る。これに対応し、甘味料組成物中のＧＳＧ組成物Ａ型の量は、ＧＳＧ組成物Ａ型とＧＳＧ組成物Ｂ型の総乾燥重量基準で、少なくとも５０重量％および９５重量％以下（または６５重量％以下）であり得る。
【０１０４】
別の例において、出発ステビオール配糖体組成物、グルコース供与体およびシクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼを７．５超過〜１０以下のｐＨを有する水性媒体中で接触させるが、グリコシル化の前または後の出発ステビオール配糖体組成物の塩基処理を行わずに製造されたグリコシル化ステビオール配糖体組成物（「ＧＳＧ組成物Ａ型」）の官能性能は，このような組成物をグリコシル化ステビオール配糖体組成物および塩基性水性媒体または塩基性樹脂を接触させて製造されたグリコシル化ステビオール配糖体組成物（「ＧＳＧ組成物Ｃ型」）と組み合わせて増強させることができる。このようなブレンドの利益は、消耗性製品中の比較的高濃度の甘味料組成物（例えば、少なくとも１０００ｐｐｍの総グリコシル化ステビオール配糖体）において特に、明らかである。甘味料組成物中のＧＳＧ組成物Ｃ型の量は、ＧＳＧ組成物Ａ型とＧＳＧ組成物Ｃ型の総乾燥重量基準で、少なくとも５重量％および５０重量％以下であり得る。これに対応し、甘味料組成物中のＧＳＧ組成物Ａ型の量は、ＧＳＧ組成物Ａ型とＧＳＧ組成物Ｃ型の総乾燥重量基準で、少なくとも５０重量％および９５重量％以下であり得る。
【０１０５】
本発明のさらなる実施形態によって、以下を含むか、以下から本質的になるか、以下からなる、甘味料組成物が提供される：
ａ）乾燥固体基準で、本発明の実施形態Ｃにしたがって製造された塩基−処理されたグリコシル化ステビオール配糖体組成物約１０〜約２５（または約１５〜約２０）重量％［ここで、上記グリコシル化ステビオール配糖体組成物は、（乾燥重量基準で）２５〜３０％ステビオシド、５５〜６５％レバウジオシドＡおよび他のステビオール配糖体で構成され、総ステビオール配糖体含量が少なくとも９５％に達する出発ステビオール配糖体組成物または（乾燥重量基準で）５５〜６５％レバウジオシドＡ、２０〜３０％ステビオシドおよび総３〜８％のレバウジオシドＣおよびズルコシドＡで構成され、少なくとも９０％の総ステビオール配糖体含量を有する出発ステビオール配糖体組成物のグリコシル化によって得られる］；
ｂ）乾燥固体基準で、本発明の実施形態Ｃにしたがって塩基−処理されていないグリコシル化ステビオール配糖体組成物約６５〜約９０（または約７０〜約８５）重量％［ここで、上記グリコシル化ステビオール配糖体組成物は、（乾燥重量基準で）２５〜３０％ステビオシド、５５〜６５％レバウジオシドＡおよび他のステビオール配糖体で構成され、総ステビオール配糖体含量が少なくとも９５％に達する出発ステビオール配糖体組成物または（乾燥重量基準で）５５〜６５％レバウジオシドＡ、２０〜３０％ステビオシドおよび総３〜８％レバウジオシドＣとズルコシドＡで構成され、少なくとも９０％の総ステビオール配糖体含量を有する出発ステビオール配糖体組成物のグリコシル化によって得られる］；および
ｃ）乾燥固体基準で、残留グルコース供与体および／またはグルコース供与体から得られる炭水化物産物総０〜約１０（または０〜約５）重量％。
【０１０６】
本発明の別の実施形態において、以下を含むか、以下から本質的になるか、以下からなる、甘味料組成物が提供される：
ａ）乾燥固体基準で、本発明の実施形態Ａにしたがって製造されたグリコシル化ステビオール配糖体組成物約１０〜約２５（または約１５〜約２０）重量％［ここで、上記グリコシル化ステビオール配糖体組成物は、（乾燥重量基準で）２５〜３０％ステビオシド、５５〜６５％レバウジオシドＡおよび他のステビオール配糖体で構成され、総ステビオール配糖体含量が少なくとも９５％に達する出発ステビオール配糖体組成物または（乾燥重量基準で）５５〜６５％レバウジオシドＡ、２０〜３０％ステビオシドおよび総３〜８％のレバウジオシドＣとズルコシドＡで構成され、少なくとも９０％の総ステビオール配糖体含量を有する出発ステビオールの配糖体組成物を塩基−処理し、塩基−処理された出発ステビオール配糖体組成物を得て、次いでこれをグリコシル化することによって得られる］；
ｂ）乾燥固体基準で、（乾燥重量基準で）２５〜３０％ステビオシド、５５〜６５％レバウジオシドＡおよび他のステビオール配糖体で構成され、総ステビオール配糖体含量が少なくとも９５％に達する出発ステビオール配糖体組成物または（乾燥重量基準で）５５〜６５％レバウジオシドＡ、２０〜３０％ステビオシドおよび総３〜８％のレバウジオシドＣとズルコシドＡで構成され、少なくとも９０％の総ステビオール配糖体含量を有する出発ステビオール配糖体組成物のグリコシル化によって得られるグリコシル化ステビオール配糖体組成物約６５〜約９０（または約７０〜約８５）重量％［ここで、上記出発ステビオール配糖体組成物は、グリコシル化の前に塩基−処理されていない］；および
ｃ）乾燥固体基準で、残留グルコース供与体および／またはグルコース供与体から得られる炭水化物産物総０〜約１０（または０〜約５）重量％。
【０１０７】
本発明の一様態は、一般に少なくとも１つの追加的な食品成分と組み合わせる、本発明にしたがって製造されたグリコシル化ステビオール配糖体組成物またはこのようなグリコシル化ステビオール配糖体組成物の組み合わせを含む食品を提供する。場合によって、特に、レバウジオシドＢを含む１種以上の個々のステビオール配糖体をこのようなグリコシル化ステビオール配糖体組成物（ら）と組み合わせて使用することができる。例えば、食品は、このようなグリコシル化ステビオール配糖体組成物以外にも、レバウジオシドＢとグリコシル化ステビオール配糖体組成物の総乾燥重量基準で、１〜１０重量％、２〜８重量％、３〜６重量％または約４重量％のレバウジオシドＢを含むことができる。食品中のグリコシル化ステビオール配糖体組成物の量は、例えば、甘味の増加および／または香味の向上などの特定の所望の結果を達成するために必要に応じて変更することができる。例えば、食品は、グリコシル化ステビオール配糖体組成物を甘味量以下の量（ｓｕｂｓｗｅｅｔｅｎｉｎｇ  ａｍｏｕｎｔ）または甘味量で含むことができる。食品中のグリコシル化ステビオール配糖体組成物の濃度は、乾燥重量基準で、５〜２０００ｐｐｍであり得る。他の実施形態において、食品は、食品に少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９または少なくとも１０、あるいは少なくとも１１、しかし一般に２０または１５以下のＳＥＶを付与するのに効果的な量のグリコシル化ステビオール配糖体組成物を含有し、ここで、上記食品は、ＳＥＶにも寄与する１種以上の他の甘味料をさらに含むことができる。グリコシル化ステビオール配糖体組成物は、１種以上の他の甘味料も含有する食品に、食品のＳＥＶを少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０または少なくとも１１に増加させるのに効果的な量で添加され、これによって所定の所望の甘味を有する食品を提供することができる。したがって、食品は、本発明の様々な実施形態において、１〜２０、５〜１５または７〜１３のＳＥＶを有することができる。
【０１０８】
食品の非限定的例には、菓子製品（ゼリーキャンディー、ハードキャンディーおよびガムを含むが、これらに限定されない）、ヨーグルト（全脂肪、低脂肪および低脂肪乳製品ヨーグルトのみならず、非乳製品ヨーグルトおよび乳糖不含ヨーグルト、ならびにこれらのすべての冷凍等価物を含むが、これらに限定されない）などのデザート製品、冷凍デザート（アイスクリーム−通常のアイスクリーム、ソフトサーブアイスクリームおよび他の種類のアイスクリームを含む−などの冷凍乳製品デザート、および非乳製品デザートを含むが、これらに限定されない）、スイートベーカリー製品（ビスケット、ケーキ、ロール、パイ、ペストリー、クッキーを含むが、これらに限定されない）スイートベーカリー製品を製造するために予め作られたスイートベーカリーミックス、パイ詰め物（果実パイ詰め物、およびピーカンパイ詰め物のようなナッツパイ詰め物を含むが、これらに限定されない）加糖朝食用シリアルのようなシリアル製品（押出成形された朝食用シリアル、フレーク状朝食用シリアルおよび膨化朝食用シリアルを含むが、これらに限定されない）、シリアルコーティング組成物、パン製品（発酵および非発酵パン、酵母パンおよびソーダパン（ｓｏｄａ  ｂｒｅａｄ）のような無酵母パン、任意の小麦粉類型を含むパン、任意の非−小麦粉を含むパン（例えば、ジャガイモ、米およびライ麦の粉など）、グルテンフリーのパンを含むが、これらに限定されない）、製パンするために予め作られたパンミックス、凍結乳製品、肉類、乳製品、調味料（ｃｏｎｄｉｍｅｎｔ）、スナックバー（シリアル、ナッツ、種子および／またはフルーツバーを含むが、これらに限定されない）、スープ、ドレッシング、ミックス、調理済み食品、ベビーフード、ダイエット調製物、シロップ、食品コーティング、ドライフルーツ、ソース、グレービー、スプレッド（ジャム／ゼリー、バターおよび他のスプレッド型保存食品、コンサーヴ）のようなものを含むが、これらに限定されない）が含まれる。本明細書で言及されていないが、通常１種以上の栄養甘味料を含む他の種類の食品、特に、還元糖または低糖製品も本発明の範囲であると考えられる。食品は、ペットフードのような動物飼料製品であってもよい。本発明の食品は、食品の表面に形成されるコーティングまたは糖衣として甘味料組成物を含むことができる。このようなコーティングは、食品の香味を向上させるのみならず、食品の貯蔵寿命も向上させる。
【０１０９】
本発明のグリコシル化ステビオール配糖体組成物はまた、医療用食品（単独の通常の食餌療法のみでは充足されない特有の栄養要求を有する疾患の食事管理用として特別に処方され、意図された食品）においても有用である。
【０１１０】
本発明の別の様態は、任意にレバウジオシドＢなどの１種類以上の個々のステビオール配糖体に改質された、本発明によるグリコシル化ステビオール配糖体組成物または本発明によるグリコシル化ステビオール配糖体組成物の組み合わせを含む飲料製品を提供する。例えば、飲料製品は、このようなグリコシル化ステビオール配糖体組成物以外にも、レバウジオシドＢとグリコシル化ステビオール配糖体組成物の総乾燥重量基準で、１〜１０重量％、２〜８重量％、３〜６重量％または約４重量％レバウジオシドＢを含むことができる。飲料製品中のグリコシル化ステビオール配糖体組成物の量は、例えば、甘味の増加および／または香味の向上などの特定の所望の結果を達成するために必要に応じて変更することができる。例えば、飲料製品は、グリコシル化ステビオール配糖体組成物を甘味量以下の量または甘味量で含むことができる。飲料製品中のグリコシル化ステビオール配糖体組成物の濃度は（乾燥固体基準で）、５〜２０００ｐｐｍであり得る。一実施形態において、飲料製品は、８００〜１８００ｐｐｍ（乾燥）グリコシル化ステビオール配糖体組成物で構成される。他の実施形態において、飲料製品は、飲料製品に少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９または少なくとも１０、あるいは少なくとも１１、しかし典型的に２０または１５以下のＳＥＶを付与するのに効果的な量のグリコシル化ステビオール配糖体組成物を含有し、ここで上記飲料製品は、ＳＥＶにも寄与する１種以上の他の甘味料をさらに含有することができる。グリコシル化ステビオール配糖体組成物は、１種以上の他の甘味料も含有する飲料製品に、飲料製品のＳＥＶを少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０または少なくとも１１に増加させるのに効果的な量で添加され、これによって所定の所望の甘味を有する飲料製品を提供することができる。例えば、非−ダイエット清涼飲料は、典型的に水１００ｍＬ当たり、スクロース１２グラム、すなわち、１２％スクロースを含有する。したがって、同等の甘味ダイエット清涼飲料は、（存在し得る１種以上の他の甘味料とともに）１２のＳＥＶを達成するのに充分な量のグリコシル化ステビオール配糖体組成物を用いて調製することができる。したがって、飲料製品は、本発明の様々な実施形態において、１〜２０、５〜１５または７〜１３のＳＥＶを有することができる。
【０１１１】
飲料製品の非限定的な例には、炭酸飲料（炭酸清涼飲料を含むが、これに限定されない）、非炭酸飲料（香味添加ミネラルウォーター（ｆｌａｖｏｒｅｄ  ｗａｔｅｒ）および甘茶（ｓｗｅｅｔ  ｔｅａ）またはコーヒー飲料などの非−炭酸清涼飲料を含むが、これに限定されない）、フルーツ味飲料、フルーツジュース、茶、牛乳、コーヒー、特に、還元糖または低糖製品が含まれる。冷凍飲料製品（時にはスラッシーとして知られている）も明示的に考慮される。本明細書で言及されていないが、通常１種以上の栄養甘味料を含有する他の種類の飲料製品、特に、還元糖または低糖製品も本発明の範囲であると考えられる。
【０１１２】
本発明のさらなる様態は、本発明による少なくとも１つのグリコシル化ステビオール配糖体組成物を含む食卓用甘味料を提供する。本発明の食卓用甘味料は、バルク剤（ｂｕｌｋｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（マルトデキストリン、ポリデキストロース、キサンタンガムまたはグアーガムなどのガム、可溶性トウモロコシ繊維素（ＳＣＦ）、澱粉およびポリオールなど）、天然および／または人工香味、香味増強剤、天然および／または人工色素、繊維素、酸味料、ビタミン、抗酸化剤、保存剤、澱粉加水分解物などからなる群より選択される１つ以上のさらなる成分を任意に含むことができる。一実施形態において、食卓用甘味剤は、本発明による少なくとも１つのグリコシル化ステビオール組成物と、レバウジオシドＢなどの少なくとも１つの個々のステビオール配糖体両方とも含まれる。
【０１１３】
一実施形態によれば、食卓用の甘味料は乾燥型食卓用甘味料である。例えば、上記甘味料は、錠剤、顆粒または粉末の形態を取ることができる。液体の食卓用甘味料も考えられ、典型的に構成成分の水溶液形態を取る。
【０１１４】
一実施形態によれば、食卓用甘味料は、１種以上の栄養甘味料をさらに含むことができる。栄養甘味料は、スクロース、グルコース、グルコースシロップ、イソグルコース、フルクトース、グルコースフルクトースシロップ、マルトース、ラクトース、コーンシロップ、高フルクトースコーンシロップ、転化糖、糖蜜、蜂蜜およびリュウゼツランからなる群より選択することができる。好ましい一実施形態において、栄養甘味料は、スクロースである。食卓用製品が栄養甘味料を含む場合、上記栄養甘味料は、食卓用甘味料の総重量基準で、最大約３０重量％の量で存在することができる。例えば、栄養甘味料は、食卓用甘味料の総重量基準で、約２６重量％の量で存在することができる。一実施形態によって、食卓用甘味料は、高強度甘味料および糖アルコールからなる群より選択される１種以上の補助甘味料をさらに含むことができる。種々の合成高強度甘味料が１種以上の補助甘味料として使用することもできる。具体的な例には、スクラロース、アスパルタームおよびアセスルファムカリウム（Ａｃｅ  Ｋ）が含まれる。種々の糖アルコールが本発明の１種以上の補助甘味料として使用することもできる。具体的な例には、マルチトール、キシリトールおよびエリトリトールが含まれる。
【０１１５】
本発明による食卓用甘味料は、典型的に飲料、特に、茶およびコーヒーなどの温かい飲料を甘くするために使用することができる。
【０１１６】
本発明の別の様態は、本発明によるグリコシル化ステビオール配糖体組成物を含むバルク剤を提供する。
【０１１７】
本発明のさらなる様態は、本発明によるグリコシル化ステビオール配糖体組成物を含むコーティング剤を提供する。
【０１１８】
本発明の別の様態は、本発明によるグリコシル化ステビオール配糖体組成物および活性成分または賦形剤などの少なくとも１つの他の医薬成分を含む医薬品を提供する。例示的な医薬品には、咳止めシロップ、チュアブル錠剤、ロゼンジ剤、ビタミン剤などが含まれる。
【０１１９】
本発明の別の様態は、本発明によるグリコシル化ステビオール配糖体組成物を含む栄養製品またはスポーツ栄養食（ｓｐｏｒｔｓ  ｐｒｏｄｕｃｔ）を提供する。
【０１２０】
本発明の別の様態は、本発明によるグリコシル化ステビオール配糖体組成物および少なくとも１つの化粧品成分を含む化粧品（パーソナルケア）を提供する。例示的な化粧品には、歯磨剤、口腔清潔剤などが含まれる。
【０１２１】
食品、飲料製品、医薬品、栄養製品、スポーツ栄養食または化粧品に存在する本発明にしたがって得られるグリコシル化ステビオール配糖体組成物の量がグリコシル化ステビオール配糖体組成物の甘味、味、香味および他の官能属性および製品に存在する他の甘味料（ら）および／または香味改質剤（ら）の種類（ら）と量（ら）および製品の所望の甘味または他の香味特性のみならず、製品の所望のカロリー含量などの他の要因に依存するということが理解されるであろう。グリコシル化ステビオール配糖体組成物は、その甘味検出限界（グリコシル化ステビオール配糖体が任意の他の甘味料の不在下で製品に認知可能な甘味を付与する最小限の濃度）未満の製品中の濃度で香味増強剤として使用することができ、その甘味検出限界以上の製品中の濃度で甘味料として使用することができる。
【０１２２】
本発明の代替的様態は、バルク剤としてまたはコーティング剤として、食品、飲料製品、医薬品、栄養製品、スポーツ栄養食または化粧品における本発明の甘味料組成物の用途を提供する。
【０１２３】
本発明にしたがって製造されるグリコシル化ステビオール配糖体組成物は、任意の摂取可能な形態、例えば、シロップ、粉末形態、錠剤形態、顆粒、溶液としてまたは飲料製品および食品を含む任意の他の適切な形態で調剤することができる。
【実施例】
【０１２４】
実施例１
【０１２５】
本実施例においては、ステビオール配糖体の高純度の組み合わせ（主成分としてレバウジオシドＡを含む）を出発材料として使用し、最初にグリコシル化した。次いで、生成されたグリコシル化ステビオール配糖体組成物を塩基で処理した。
材料
【０１２６】
１）      マルトデキストリン（デキストロース当量＝１）。
２）      シクロデキストリングルコトランスフェラーゼ（ＣＧＴアーゼ）。
３）      マルトジェニックアミラーゼ
４）      ＧＬＧ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから供給されるＳＧ９５ステビオール配糖体混合物（ステビア葉から発見される９種の甘味ステビオール配糖体の高純度組み合わせとして、Ｒｅｂ  Ａが混合物の約６０重量％を占め、ステビオシドが混合物の約３０重量％を占める）。
５）      顆粒状活性炭、再生。
６）      重量基準で６０：４０の強塩基陰イオン性樹脂対強酸陽イオン性樹脂の比率で混合した、強塩基陰イオン性樹脂と強酸陽イオン性樹脂。
７）      マクロポーラス吸着樹脂（巨大網状構造と高い表面積を有するビーズ状の非イオン性脂肪族アクリル系重合体）。
反応
【０１２７】
手順は、５００ｍＬ発効槽で行った。各反応の３つのサンプル（表１参照）を以下の手順を用いて同時に製造した：
１）      ２０ｇのＳＧ９５ステビオール配糖体を１０００ｍＬビーカー内の３４０ｍＬの温水に懸濁させる。
２）      ４０ｇのマルトデキストリン（ＤＥ＝１）を上記懸濁液に添加し、ブレンディングして材料を浸水させる。
３）      水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．２に調整する。
４）      ２ｍＬのＣＧＴアーゼ酵素を上記溶液に添加する。
５）      ２００ｒｐｍで攪拌しながら、５０℃で２４時間インキュベートする。
６）      フラスコに移し、反応混合物を沸騰水（約９５℃）中で３０分間加熱してＣＧＴアーゼ酵素を変性させた後、室温まで放冷させた。
７）      混合物を再び発酵槽のビーカーに戻し、フラスコをＤＩ水（ＤＩ  ｗａｔｅｒ）で洗浄し、材料がフラスコからビーカーに完全な移動を確実にし、混合物の総容積が約５００ｍｌになるようにする。
８）      上記溶液に５ｍＬ（１％）のマルトジェニックアミラーゼを添加する。
９）      １５０ｒｐｍで攪拌しながら、３０℃で２４時間インキュベートする。
１０）    反応混合物を沸騰水（約９５℃）中で３０分間加熱し、マルトジェニックアミラーゼを変性させた後、室温まで放冷させた。
１１）    ブフナー漏斗で溶液を濾過し、未反応の固体／デキストリンを除去する。
１２）    活性炭をＤＩ水で洗浄し、微粒子を除去する。パック１＃１５×３００ｍｍジャケット型カラムに顆粒状の活性炭を充填する。炭素カラムを５０℃に予熱し、引き続き１．５ＬのＤＩ水で洗浄して微粒子を除去する。
１３）    ２９．９５ｇの強塩基陰イオン性樹脂と２０．００ｇの強酸陽イオン性樹脂をＤＩ水で洗浄し、混合床樹脂を製造する。パック１＃１５×３００ｍｍジャケット型カラムに混合床樹脂を充填する。カラムを２５℃に予熱し、引き続き１．５ＬのＤＩ水で洗浄する。
１４）    反応溶液を１．５ｍＬ／分の流速で炭素カラムおよび混合床樹脂カラムを通過する。カラムを水で洗浄する。
１５）    マクロポーラス吸着カラムを１５００ｇの脱気したＤＩ水で洗浄する。
１６）    反応溶液をマクロポーラス吸着カラムを介して濾過する。
１７）    マクロポーラス吸着カラムを１５００ｇの脱気したＤＩ水で洗浄する。
１８）    マクロポーラス吸着カラムを１５００ｇの５０％エタノール溶液（７５８．６８ｇ脱気されたＤＩ水と７５０．６３ｇの１９０プルーフエタノール）で洗浄する。
１９）    エタノール洗浄された溶液を収集し、上記溶液からエタノールを蒸発させる。
２０）    溶液（７４０．１１ｇ）を２Ｌガラスビーカーに移す。ｐＨ（４．２４）を測定し、水酸化ナトリウムを用いて１０．０３の最終ｐＨに調整する。溶液を５０℃に加熱し、３５０ｒｐｍで２４時間攪拌する。
２１）    溶液を冷却させ、７％ｗ／ｗ塩酸を用いてｐＨを８．２０〜５．００に調整する。
２２）    溶液を凍結乾燥機に位置させる。
２３）    乾燥した物質（総２４．１７ｇ）を収集し、分析検査のために提出する。
【表１】
2019517823.tif 000002
結果
【０１２８】
このようなサンプルに対して使用された主要な分析技術は、ＬＣ−ＭＳであった。質量分析器（ＭＳ）は、クロマトグラフィー（ＬＣ）からのピークの分子量（電荷で割ったものであって、これは一般に１であった）を報告する。ステビオール配糖体は、以下の表に示す分子量を有すると予想される。ステビオールコアに添加される最も一般的な糖残基は、グルコース、ラムノース、キシロース、６−デオキシグルコースおよびフルクトースである。質量観点から、グルコース＝フルクトースであり、ラムノース＝６−デオキシグルコースである。質量分析法の別の現象は、イオン化中に付加物が形成され得るということである。これらの反応産物は、予想質量対電荷比に対して質量を付加する。本実験の場合、図２に示すｍ／ｚ６８７は、ルブソシドとギ酸付加物に対応する。このようなｍ／ｚピークは、ルブソシドを含有するステビオール配糖体標準においても見られる。図２は、大部分の反応産物がモノ−グリコシル化、ジ−グリコシル化およびトリ−グリコシル化ステビオール配糖体に対応し、９６５および８０３で最も高いピークは、各々レバウジオシドＡおよびステビオシドであることを示す。
【表２】
2019517823.tif 000003
【０１２９】
上記表２に見られるように、ステビオシドは、８０３のｍ／ｚを有し、レバウジオシドＡは、９６５のｍ／ｚを有する。図２および図３において、これらは９〜１２分の保持時間で溶出する大きなピークに対応する。
【表３】
2019517823.tif 000004
論議
【０１３０】
レバウジオシドＢおよびステビオールビオシドが出発材料の塩基処理の主要産物であるため、本手順で予想される主要産物は、グリコシル化レバウジオシドＢおよびグリコシル化ステビオールビオシドであった。これらの産物は、１０分後にＬＣ−ＭＳで現れると予想できた。一般に、より高度のグリコシル化は、より低い保持時間と相関があるため、７分前に大きなピークを有する産物は、より大きいグリコシドを有するステビオール配糖体を相当量を含むと予想できた。このような産物の一部が生成されているが、これらは、より多くの典型的に製造されたサンプルよりも優勢ではないと見られる（図４）。図３を図４と比較すると、上記図間の最も顕著な違いは、約７．５分で１１２７ｍ／ｚピークおよび１４５１ｍ／ｚピークの抑制である。このようなピークは、ジ−グリコシル化およびトリ−グリコシル化レバウジオシドＡおよびトリ−グリコシル化ステビオシドに対応する可能性がある。両方の手順とも、商業的グリコシル化ステビオール配糖体産物と比較して、高度のグリコシル化を有する成分をより低い存在量で生産するものと見られる（図５）。
実施例２
【０１３１】
本実施例は、グリコシル化ステビオール配糖体組成物を製造するためのステビオール配糖体組成物の初期塩基処理後グリコシル転移を立証する。
塩基処理
【０１３２】
１）      ３９．９９ｇのステビオール配糖体混合物（ＳＧ９５，ＧＬＧ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を３６０．００ｇの１．２５Ｎ水酸化ナトリウム溶液に溶解させた。生成された混合物のｐＨは、１３．６であった。
２）      上記混合物を５０℃に加熱し、３６０ｒｐｍで２４時間攪拌した。
３）      次いで、混合物を氷浴で冷却させた。
４）      一旦、冷却させた後、次いで７％ｗ／ｗ塩酸を用いて混合物をｐＨ５（初期ｐＨ１３．６０、最終ｐＨ４．９９）となるようにした。
５）      生成された物質を３回遠心分離し（５０ｍＬチューブ中で２５℃で４５００ｒｐｍで３０分間）、乾燥させた。沈殿物をステビオール配糖体の含量に対して分析し、グリコシル転移段階で使用した。
グリコシル転移
【０１３３】
１）      ２０ｇの塩基−処理されたＳＧ９５ステビオール配糖体混合物を１０００ｍＬビーカー中の３４０ｍＬの温水に懸託させた。
２）      ４０ｇのマルトデキストリン（ＤＥ＝１）を上記懸濁液に添加し、ブレンディングして材料を浸水させた。
３）      ｐＨを８．２に調整し、混合物を５０℃に保持させた。
４）      ２ｍＬのＣＧＴアーゼ酵素を上記溶液に添加した。
５）      混合物を２００ｒｐｍで攪拌しながら、５０℃で２４時間インキュベートした。
６）      次いで、反応混合物をフラスコに移し、ほぼ沸騰水（約９５℃）中で３０分間加熱し；次いで、サンプルを室温まで放冷させた。
７）      混合物を再び発酵槽に戻し、フラスコをＤＩ水で洗浄して材料がフラスコからビーカーに完全な移動を確実にした。混合物の総容積は、約５００ｍｌであった。
８）      上記溶液に５ｍＬ（１％）のマルトジェニックアミラーゼを添加した。
９）      混合物を１５０ｒｐｍで攪拌しながら、３０℃で２４時間インキュベートした。
１０）    次いで、反応混合物をフラスコに移し、ほぼ沸騰水（約９５℃）中で３０分間加熱し、次いで、サンプルを室温まで放冷させた。
１１）    次いで、混合物を濾紙を通して濾過し、不良に分散したデキストリンを除去した。
１２）    次いで、顆粒状の活性炭をＤＩ水で洗浄し、１５×３００ｍｍジャケット型カラム内に充填した。次いで、炭素カラムを５０℃に予熱し、１．５ＬのＤＩ水で洗浄して微粒子を除去した。
１３）    次いで、段階１１の濾液を１．５ｍＬ／分の流速で炭素カラムを通過させた。その後、上記カラムを水で洗浄した。
１４）    ２４．１３ｇの強塩基陰イオン性樹脂を１６．１０ｇの強酸陽イオン性樹脂とともにＤＩ水で洗浄し、１５×３００ｍｍジャケット型カラム内に充填した。次いで、混合床カラムを２５℃に加熱し、１．５ＬのＤＩ水で洗浄した。
１５）    次いで、段階１３の濾液を１．５ｍＬ／分の流速で混合床カラムを通過させた。その後、カラムを水で洗浄した。
１６）    マクロポーラス吸着カラムを１５００ｇの脱気したＤＩ水で洗浄した。
１７）    次いで、段階１５の濾液をマクロポーラス吸着カラムを通過させた後、１５００ｇの脱気したＤＩ水で洗浄した。
１８）    次いで、マクロポーラス吸着カラムを１５００ｇの５０％エタノール溶液（７６０．６９ｇの脱気したＤＩ水と７２９．０７ｇの１９０プルーフエタノール）で洗浄した。
１９）    エタノール分画を収集し、回転蒸発（ｒｏｔｏｖａｐ）および凍結乾燥機を介して乾燥させた。
２０）    次いで、乾燥した物質（２０．０７ｇ）を重金属、残留溶媒および配糖体分析のための分析検査に提出した。
結果
【０１３４】
酵素処理前の塩基−処理されたＳＧ９５ステビオール配糖体混合物のＬＣ−ＭＳ分析は、レバウジオシドＢおよびステビオールビオシドに対応するピークを示す（図６）。
【０１３５】
酵素−処理された物質のＬＣ−ＭＳクロマトグラムは、図７に示す。すべての割り当てられた質量は、ステビオールコアに対する糖（グルコース）添加に対応する。
【０１３６】
ステビオール配糖体は、以下の表４に示す分子量を有すると予想される（「Ｘ  ｇｌｃ」という表示は、ステビオールコアに添加されたグルコース単位の数を意味する）：
【表４】
2019517823.tif 000005
【０１３７】
１７分後に溶出する大きな６４１ピークおよび８０３ピークは、レバウジオシドＢおよびステビオールビオシドである。７８７および７７３のｍ／ｚを有する上記ピーク後のピークは、ズルコシドＢおよび脱グリコシル化レバウジオシドＦに対応する：これらは、レバウジオシドＣおよびレバウジオシドＦ塩基処理の予想産物であろう。このような産物に対するラムノースとキシロースの残基は、それらのグリコシル化を抑制する可能性がある。
【０１３８】
ＳＧ９５ステビオール配糖体混合物の塩基処理は、予想通りステビオールビオシドおよびレバウジオシドＢを生成するものと見られる。上昇した（塩基性）ｐＨと２：１グルコース供与体対ステビオール配糖体の比率（ｗ／ｗ）を用いるグリコシル化条件下で、大部分のレバウジオシドＢ（および可能にはステビオールビオシドも同様に）は、未反応の状態で残っているものと予測された。図７の６分〜１１分の小さなピークは、グリコシル化を弱酸性ｐＨおよび１：１（ｗ／ｗ）グルコース供与体：ステビオール配糖体の比率で行ったレバウジオシドＢで得られた以前の結果と比較すると、多少予想外であった（図８）。例えば、図７のクロマトグラムは、８０３のｍ／ｚを有する４つのピークを示す：これらは、ステビオシド、モノ−グリコシル化ステビオールビオシドおよびレバウジオシドＢである場合にのみ可能である。これは、ステビオールビオシドが多数の位置でグリコシル化され得るか、フラグメンテーションピークがクロマトグラムで記録されていることを暗示する。しかしながら、図８と比較して図７の相対的複雑性は、ステビオールビオシドグリコシル化がレバウジオシドＢと比較して複雑であることを強く暗示する。
【０１３９】
ステビオールビオシドとレバウジオシドＢ間の構造的違いは、レバウジオシドＢは、１−２、１−３結合されたグルコース部分を有する一方で、ステビオールビオシドは、１−２結合された部分のみを有するということである。立体障害の減少によって、ステビオールビオシドの２つのグルコース残基がともにグリコシル化され得ることが可能な反面、レバウジオシドＢに対してはこのような可能性が強く阻害される。
実施例３
【０１４０】
種々のステビオール配糖体組成物およびグリコシル化ステビオール配糖体組成物の味覚性能を評価した。評価された組成物は、以下のように説明される：
Ｒｅｂ  Ａ＝レバウジオシドＡ、９７％純度。
Ｒｅｂ  Ａ  Ｇ＝グリコシル化レバウジオシドＡ（ｐＨ５．５〜６．０でグリコシル化、デキストリン：ステビオール配糖体重量比＝１：１）。
Ｒｅｂ  Ｂ  Ｇ＝グリコシル化レバウジオシドＢ（ｐＨ５．５〜６．０でグリコシル化、デキストリン：ステビオール配糖体重量比＝１：１）。
ＳＧ９５  Ｂ−Ｇ＝グリコシル化ＳＧ９５ステビオール配糖体混合物（供給源：ＧＬＧ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、約６０重量％レバウジオシドＡおよび約３０重量％ステビオシドを含む）、グリコシル化の前に塩基−処理される（ｐＨ約８．５でグリコシル化、デキストリン：ステビオール配糖体重量比＝２：１）。
ＳＧ９５  Ｇ−Ｂ＝グリコシル化ＳＧ９５ステビオール配糖体混合物（供給源：ＧＬＧ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、約６０重量％レバウジオシドＡおよび約３０重量％ステビオシドを含む）、グリコシル化の後に塩基−処理される（ｐＨ約８．５でグリコシル化、デキストリン：ステビオール配糖体重量比＝２：１）。
ステビオシドＧ＝グリコシル化ステビオシド（ｐＨ５．５〜６．０でグリコシル化、デキストリン：ステビオール配糖体重量比＝１：１）。
Ｓｔｅｖｉｔｅｎ＝Ｄａｅｐｙｕｎｇ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ．によって商標名「Ｓｔｅｖｉｔｅｎ」で市販されている商業的グリコシル化ステビオール配糖体製品。
【０１４１】
出発ステビオール配糖体組成物およびデキストリンを５０℃で２４時間ＣＧＴアーゼと接触させ、Ｒｅｂ  Ａ  Ｇ、Ｒｅｂ  Ｂ  Ｇ、ＳＧ９５  Ｂ−Ｇ、ＳＧ９５  Ｇ−ＢおよびステビオシドＧ組成物を製造した。加熱殺菌（酵素不活性化）段階の後、得られた各組成物を３０℃で２４時間アミラーゼで処理し、鎖−短縮した。第２酵素死滅段階の後に、組成物をイオン交換樹脂、炭素濾過および吸着樹脂によって精製した。次いで、すべての組成物を凍結乾燥を用いて乾燥させた。
【０１４２】
各ステビア産物を１日の検査中に２つのレベルで検査し、検査は、５００ｐｐｍおよび１０００ｐｐｍ両方の利用率で実施した。知られているキャリーオーバー効果（ｃａｒｒｙｏｖｅｒ  ｅｆｆｅｃｔ）によって、産物を上昇的濃度で提供し、両データポイントともに明瞭な読み取りを可能にした。溶液を室温で３−桁の符号が付着された２オンスのスフレカップに提供した。パネリストは、検査前および検査中にこれらの味覚を清潔にするためにＲＯ水（ＲＯ  ｗａｔｅｒ）および無塩クラッカーを用いることができる。各々の毎日の研究は、３０名人を対象としたが、時には。排除条件（すなわち、研究を開始したが、過程中に脱落した授乳婦、妊婦、投薬中など）によって２８名程度と少ないパネリストが検査された。
【０１４３】
研究は、中性ｐＨ水中のスクロース溶液の基準の固定されたスケール（ａｎｃｈｏｒｅｄ  ｓｃａｌｅ）を用いる等級化研究として設計した。本研究において、パネリストにＳＥＶ当量が標識および識別された一連の基準サンプルを提供した。範囲は、検査サンプルの予想甘味を超過しており、パネリストは、検査サンプルの予想甘味を超過する甘味を１５−ｐｔ最大値を用いて等級化した。
【０１４４】
検査溶液の予備選別は、ほとんどの個体がこれらの溶液を１０ＳＥＶ以下と認知し得ることを示唆した。検査前にすべての個体の敏感性を効果的に予測することはできないため、より広範囲な基準が用いられた。具体的には、ＳＥＶ基準は、以下の通りであった（表５）：
【表５】
2019517823.tif 000006
【０１４５】
パネリストにまず、各基準溶液の強度およびそれに対応するＳＥＶに慣れるように要請した。その後、パネリストは、３０秒間待ち、水とクラッカーで味覚を清潔にした．次いで、パネリストに検査サンプル（ランダムに３−桁の符号で識別される）を試食するように要請した。次いで、パネリストに線スケール（ｌｉｎｅ  ｓｃａｌｅ）で上述した基準と比較し、それらの検査サンプルの甘味と一致するマーカーをドラッグ（ｄｒａｇ）するように指示し、スケールは、０〜１５の範囲であった。線スケールの右側にあるボックスは、パネリストが等級化している甘味当量に関して混同しないように保障するため、パネリストにドラッグする値を見せた。一旦、これが完了すると、図９に示すフォーマットを使用し、検査サンプルの選好度、検査サンプルと糖味の類似性、任意の異臭の強度および任意の異臭の実体に関する質問をした。
【０１４６】
選好度スケールのために使用された値は、１〜７範囲の標準７−ｐｔ嗜好スケールであり、類似性スケールは、１〜５範囲の標準５−ｐｔ強度スケールであり、異臭スケールは、０〜５範囲のゼロ−ｐｔ固定された６−ｐｔ強度スケールであった。パネリストが潜在的なオフ−ノート（ｏｆｆ  ｎｏｔｅ）にこれらが望む任意の名称でも付けることができるように異臭に対する記述に制限をしなかった。
【０１４７】
得られた味覚性能データは、以下の表（表６）に要約する。ＳＥＶは、スクロース当量値（％スクロース溶液）である。「スクロース当量値」または「ＳＥＶ」という語句は、同一の食品、飲料または溶液中の所定のスクロース百分率の甘味を提供するために必要な非−スクロース甘味料の量である。逆転％は、５００ｐｐｍのサンプルを１０００ｐｐｍサンプルよりも甘いと評価したパネリストの百分率である。これは、強度曲線の平坦領域（ｐｌａｔｅａｕ）付近にあることを示し、高濃度で甘味をマスキングする苦味または他の不愉快な味を示す。高いＳＥＶと高い選好度値とともに、低い値の逆転％が最適である。糖点数との低い差、低いＳＥＶ標準偏差および低い異臭点数がまた好ましい。
【表６】
2019517823.tif 000007
【０１４８】
味覚データは、すべてのグリコシル化されたサンプルがＳＥＶ以外のすべての尺度においてレバウジオシドＡより優れていることを示す。１０００ｐｐｍにおいて、いくつかのサンプルは、等級化でより小さい標準偏差を有しながら、甘味に対してレバウジオシドＡと同等であると見なされ得る。これは、一般消費者集団が食品および飲料などの消耗性製品中の成分としてレバウジオシドＡと比較してこれらの産物とのより一貫した経験を有し、これによってこのような産物を製造する利点を提供することを暗示する。検査された組成物中において、ＳＧ９５Ｇ−Ｂは、５００ｐｐｍで特に、効能がある。したがって、上記組成物が検査された組成物中で最も低い甘味閾値を有することは当然である。この属性は、そのような組成物を低いレベルで香味増強剤として使用するときに有益であろう。上記組成物の効能の利点は、Ｓｔｅｖｉｔｅｎと比較するときに最も明らかである。ＳＧ９５Ｇ−Ｂに見られるように、グリコシル化されたＳＧ９５型産物が主にレバウジオシドＡ、ステビオシドおよびこれらのグリコシル化された産物で構成されているため、その味覚性能がグリコシル化レバウジオシドＡの味覚性能とグリコシル化ステビオシドの味覚性能の間にあり得ることは当然である。しかしながら、驚くべきことにＳＧ９５Ｇ−Ｂは、上述した産物のいずれよりも甘いことが明らかになった。同様に、ＳＧ９５Ｂ−Ｇは、主にレバウジオシドＢ、ステビオールビオシドおよびグリコシル化された産物で構成されている。ステビオールビオシドは、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢまたはステビオシドと比較して甘味がなく、味の質が悪いと報告されていることを考慮すると、上記産物（ＳＧ９５Ｂ−Ｇ）がグリコシル化レバウジオシドＢと非常に類似に作用するということは驚くべきことであった。
実施例４
【０１４９】
本実施例においては、以下のグリコシル化ステビオール配糖体サンプルを検査した：
ＳＧ９５Ｇ＝グリコシル化ＳＧ９５ステビオール配糖体混合物（供給元：Ｓｗｅｅｔ  Ｇｒｅｅｎ  Ｆｉｅｌｄｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、約６０重量％レバウジオシドＡおよび約２５重量％ステビオシドを含む）、ｐＨ約８．５でグリコシル化、デキストリン：ステビオール配糖重量比＝２：１。
４％Ｒｅｂ  Ｂを有するＳＧ９５Ｇ＝４％レバウジオシドＢを有する上記のような９６％ＳＧ９５Ｇ（乾燥ブレンディングされる）。
１５％ＳＧ９５Ｂ−Ｇを有するＳＧ９５Ｇ＝１５％ＳＧ９５Ｂ−Ｇを有する８５％ＳＧ９５Ｇ（実施例３で説明した通り）。
【０１５０】
２０％Ｇ−Ｂを有するＳＧ９５Ｇ＝グリコシル化ＳＧ９５ステビオール配糖体混合物（供給元：Ｓｗｅｅｔ  Ｇｒｅｅｎ  Ｆｉｅｌｄｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、約６０重量％レバウジオシドＡおよび約２５重量％ステビオシドを含む）、ｐＨ約８．５でグリコシル化、デキストリン：ステビオール配糖体重量比＝２：１、ここで材料の２０％は、グリコシル化後に塩基処理する。
【０１５１】
出発ステビオール配糖体組成物とデキストリンを５０℃で最大２４時間ＣＧＴアーゼと接触させ、ＳＧ９５Ｇサンプルを製造した。次いで、上記産物を３０℃で２４時間アミラーゼを用いて鎖−短縮させた。酵素死滅段階（９５℃で３０分間加熱）後、産物をイオン交換樹脂、炭素濾過および吸着樹脂によって精製した。次いで、サンプルを噴霧乾燥した。
【０１５２】
出発ステビオール配糖体組成物およびデキストリンを８０℃で最大１８時間ＣＧＴアーゼと接触させ、２０％Ｇ−Ｂを有するＳＧ９５Ｇサンプルを製造した。次いで、上記産物を５０℃で２時間アミラーゼを用いて鎖−短縮させた。酵素死滅段階（９５℃で３０分間加熱）後、残留炭水化物を除去した。次いで、溶液の２０％を８０℃で塩基処理した。中和後、物質を元の溶液と再結合させ、イオン交換樹脂および炭素濾過で処理した。次いで、サンプルを凍結乾燥を用いて乾燥させた。
【０１５３】
サンプルを、１５００ｐｐｍを含む追加濃度を評価し、実施例３に記載されているように検査した。得られた結果は、表７に要約する。
【表７】
2019517823.tif 000008
【０１５４】
表７で見られるように、ＳＧ９５Ｇは（極めて甘いながら）、本実験で検査された他の産物より異臭が高く、選好度点数が低い。４％のレバウジオシドＢは、ＳＧ９５Ｇの選好度および異臭点数を向上させることが明らかになった。塩基処理されたグリコシル化ステビア（グリコシル化の前または後に塩基処理される）を含むことによって、異臭の減少および／または選好度の増大によって甘味料の味覚性能をさらに向上させることが明らかになった。さらに、ＳＧ９５Ｇの１５００ｐｐｍ溶液と比較し、苦い異臭の減少によってより高い甘味レベルが得られる可能性が大きい。
【図１】
2019517823.tif 000009
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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