(57)【要約】  ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）を含む生体吸収性ポリマーのシクロスポリン添加微粒子を含む制御放出医薬製剤であって、微粒子の平均直径が２０μｍ〜４０μｍの範囲である制御放出医薬製剤が提供される。また、提供されるのは、特にブドウ膜炎の治療における医薬製剤の医学的使用、硝子体内注射用に製剤化されたものを含む、医薬製剤及び注射用剤形の生成のための過程である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）を含む生体吸収性ポリマーのシクロスポリン添加微粒子を含む制御放出医薬製剤であって、微粒子の平均直径が２０μｍ〜４０μｍの範囲である、制御放出医薬製剤。
【請求項２】
前記ポリマーがポリ（Ｌ−ラクチド）及び／又はポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）をさらに含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
前記ポリマーが１％〜１５％  ｗ／ｗのポリ（Ｌ−ラクチド）を含む、請求項２に記載の製剤。
【請求項４】
前記微粒子が１５％〜２５％  ｗ／ｗのシクロスポリンを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項５】
前記製剤の微小粒子の少なくとも９５％が２５μｍ〜４０μｍの範囲の直径を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項６】
前記微粒子の直径の変動係数が０．１以下であり、前記変動係数が前記微粒子の平均直径で割った前記微粒子の直径の標準偏差である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項７】
前記製剤が薬学的に許容される担体、希釈剤、ビヒクル、緩衝剤、抗凝集剤及び／又は粘度調整剤をさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項８】
前記薬学的に許容される担体、希釈剤又はビヒクルが塩、界面活性剤、糖、及び滅菌水の１以上を含む、請求項７に記載の製剤。
【請求項９】
前記製剤が液体ビヒクル中に懸濁される前記微粒子を含み、液体ビヒクルは２０℃で測定される３０〜４５ｍＰａｓの粘性を有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１０】
液体形態で、製剤がずり減粘及び／又はチキソトロピー挙動を示す、請求項７〜９のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１１】
前記製剤がチキソトロープ剤を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１２】
前記チキソトロープ剤がヒプロメロース、ヒドロキシエチルセルロース、親水性が改変されたヒドロキシエチルセルロース、キサンタンガム、グアーガム、及びセチルアルコールからなる群から選択される、請求項１１に記載の製剤。
【請求項１３】
ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、リン酸緩衝生理食塩水、スクロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒプロメロース、ヒドロキシエチルセルロース、親水性が改変されたヒドロキシエチルセルロース、キサンタンガムガム、グアーガム、セチルアルコール及びマンニトールの１以上を含む、請求項７〜１２のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１４】
前記製剤がリン酸緩衝生理食塩水、ポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロース及びヒプロメロース、並びに必要に応じてマンニトールを含む、請求項１３に記載の製剤。
【請求項１５】
以下の成分の濃度が、以下の：
リン酸緩衝生理食塩水：５．０〜８．０ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて６．５ｍｇ／ｍＬ；
ポリソルベート８０：０．８〜１．２ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて１．０ｍｇ／ｍＬ；
ヒドロキシエチルセルロース：１．８〜２．２ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて２．０ｍｇ／ｍＬ；
ヒプロメロース：３．８〜４．２ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて４．０ｍｇ／ｍＬ；
マンニトール、存在する場合：４．８〜５．２ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて５．０ｍｇ／ｍＬ；及び
前記シクロスポリン添加微粒子：１００〜２００ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて１５０ｍｇ／ｍＬ
のようなそれぞれの濃度範囲にある、請求項１４に記載の製剤。
【請求項１６】
前記製剤が注射可能な形態であるか又は使用前に注射可能な形態に再構成されるように適合される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１７】
前記製剤が硝子体内デポー注射用である、請求項１６に記載の製剤。
【請求項１８】
前記製剤が少なくとも８０％の回収率で３０ゲージ、０．５インチの長さの皮下注射針（内径０．１５９±０．０１９ｍｍ；長さ２５．４ｍｍ）を通して注射可能である、請求項７〜１７のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１９】
医薬での使用のための請求項１〜１８のいずれか一項に記載の制御放出医薬製剤。
【請求項２０】
哺乳動物対象でのブドウ膜炎の治療における使用のための、必要に応じて前記哺乳動物対象がヒト又はウマである、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の制御放出医薬製剤。
【請求項２１】
前記ブドウ膜炎が視力を脅かす非感染性病因の中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎又は汎ブドウ膜炎であり、又は前記ブドウ膜炎がウマ再発性ブドウ膜炎である、請求項２０に記載の使用のための製剤。
【請求項２２】
前記治療がステロイド性ブドウ膜炎の治療を受けている対象におけるブドウ膜炎の再発の低減又は予防である、請求項２１に記載の使用のための製剤。
【請求項２３】
前記ブドウ膜炎が視力を脅かす結核性ブドウ膜炎である、請求項２０に記載の使用のための製剤。
【請求項２４】
前記治療が基礎となる結核感染の治療のための抗生物質療法と組み合わされる、請求項２３に記載の使用のための製剤。
【請求項２５】
前記製剤が硝子体内注射を介する投与用である、請求項１９〜２４のいずれか一項に記載の使用のための製剤。
【請求項２６】
哺乳動物対象におけるブドウ膜炎を治療する方法であって、治療を必要とする対象に請求項１〜１８のいずれか一項に記載の制御放出医薬製剤を投与することを含み、必要に応じて前記哺乳動物対象がヒト又はウマである、方法。
【請求項２７】
前記ブドウ膜炎が視力を脅かす非感染性病因の中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎又は汎ブドウ膜炎であり、又は前記ブドウ膜炎がウマ再発性ブドウ膜炎である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記治療がステロイド性ブドウ膜炎の治療を受けている対象におけるブドウ膜炎の再発の低減又は予防である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ブドウ膜炎が視力を脅かす結核ブドウ膜炎である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
結核感染の治療のために前記対象に抗生物質療法を施すことをさらに含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記制御放出医薬製剤が硝子体内注射を介して前記対象に投与される、請求項２６〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
請求項２６〜３１のいずれか一項に記載の方法での使用のための医薬の調製における請求項１〜１８のいずれか一項に記載の制御放出医薬製剤の使用。
【請求項３３】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載の制御放出医薬製剤；
前記製剤を収容するための容器；及び
挿入物又はラベル
を含む製品。
【請求項３４】
前記挿入及び／又はラベルが哺乳動物対象におけるブドウ膜炎の治療における前記製剤の使用に関する指示書、投薬量及び／又は投与情報を提供する、請求項３３に記載の製品。
【請求項３５】
溶質、溶媒及びシクロスポリン又はその塩、溶液又は懸濁液を含む第１の液体を提供することであって、前記溶質がポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）含有ポリマーを含み、前記第１の液体中のポリマーの濃度が少なくとも１０％ｗ／ｖであり、「ｗ」がポリマーの重量でありかつ「ｖ」が溶媒の体積である、提供すること；
液滴を生じるように動作可能な圧電素子を含む液滴発生器を提供すること、前記液滴発生器に前記第１の液体の液滴を形成させること；
ガスを通して液滴を通過させること、
前記溶媒が前記液滴を出るようにさせるために前記液滴を第２の液体と接触させること、ひいては固体微粒子を形成すること；
を含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の制御放出医薬製剤を生成するための過程であって、
前記第２の液体中の溶媒の溶解度が第２の液体１００ｍｌ当たり少なくとも５ｇの溶媒であり、前記溶媒が前記第２の液体と実質的に混和性であり、
前記第２の液体が流れとして提供されかつ方法が第２の液体の流れと前記液滴を接触させることを含む、過程。
【請求項３６】
前記溶媒がＤＭＳＯを含む、請求項３５に記載の過程。
【請求項３７】
前記第２の液体が水を含み、必要に応じてｔｅｒｔ−ブタノールをさらに含む、請求項３５又は請求項３６に記載の過程。
【請求項３８】
前記第２の液体の流れが噴流として提供される、請求項３５〜３７のいずれか一項に記載の処理。
【請求項３９】
前記液滴発生器の近傍における第１の液体の温度が１０〜２５℃の範囲である、請求項３５〜３８のいずれか一項に記載の過程。
【請求項４０】
前記第２の液体の温度が１〜１０℃の範囲である、請求項３５〜３９のいずれか一項に記載の過程。
【請求項４１】
前記第１の液体中のポリマーの濃度が少なくとも３０％  ｗ／ｖである、請求項３５〜４０のいずれか一項に記載の過程。
【請求項４２】
前記第２の液体から前記固体微粒子を分離することによって前記固体微粒子を回収することをさらに含む、請求項３５〜４１のいずれか一項に記載の過程。
【請求項４３】
前記固体微粒子を回収すること及び医薬組成物若しくは送達形態へと前記微粒子を製剤化する又は包括することをさらに含む、請求項３５〜４２のいずれか一項に記載の過程。
【請求項４４】
前記微粒子を凍結乾燥して前記微粒子の凍結乾燥された集団を形成することをさらに含む、請求項３５〜４３のいずれか一項に記載の過程。
【請求項４５】
前記微粒子が１種以上の賦形剤と共に凍結乾燥され、必要に応じて前記１種以上の賦形剤がマンニトールを含む、請求項４４に記載の過程。
【請求項４６】
前記固体微粒子が硝子体内注射による送達用の液体又は懸濁液へと製剤化される、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の過程。
【請求項４７】
前記微粒子が液体と混合されて請求項９〜１８のいずれか一項に記載の製剤を提供する、請求項４６に記載の過程。
【請求項４８】
シクロスポリン添加微粒子の乾燥集団を提供すること；
リン酸緩衝生理食塩水、ポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロース及びヒプロメロース、並びに必要に応じてマンニトールを含む注射用ビヒクル溶液と前記微粒子を接触させること、
を含む、シクロスポリン添加微粒子の注射可能な製剤を生成するための過程。
【請求項４９】
以下の成分の濃度が、以下のとおり：
リン酸緩衝生理食塩水：５．０〜８．０ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて６．５ｍｇ／ｍＬ；
ポリソルベート８０：０．８〜１．２ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて１．０ｍｇ／ｍＬ；
ヒドロキシエチルセルロース：１．８〜２．２ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて２．０ｇ／ｍＬ；
ヒプロメロース：３．８〜４．２ｍｇ／ｍＬ；
存在する場合、マンニトール：４．８〜５．２ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて５．０ｍｇ／ｍＬ；及び
前記シクロスポリン添加微粒子：１００〜２００ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて１５０ｍｇ／ｍＬ
のそれぞれの濃度範囲で組み合わされる、請求項４８に記載の過程。
【請求項５０】
前記シクロスポリン添加微粒子が請求項１〜６のいずれか一項に記載のとおりである、請求項４８又は請求項４９に記載の過程。
【請求項５１】
前記注射用ビヒクルが２０℃で測定される３０〜４５ｍＰａｓの粘性を有する、請求項４８〜５０のいずれか一項に記載の過程。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ブドウ膜炎の治療における使用を含む医薬で使用するための生体適合性ポリマー微粒子内に封入されたシクロスポリンを含有する制御放出医薬製剤に関する。微粒子の生成のための過程及び送達システムも開示される。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、哺乳動物、特にヒトでの眼疾患の治療用を含む、組成物及び生成物、並びにかかる組成物及び生成物を作製し投与する方法を対象とする。
【０００３】
ＷＯ２０１２／０４２２７３及びＷＯ２０１２／０４２２７４は、生物活性剤を封入し、例えば、デポー注射を介して、徐放性で使用するのに適している固体ビーズを調製するための装置及び過程について記載している。
【０００４】
ＥＰ１４８４０５４は、微粒子の結膜下投与のための薬物送達システムについて記載している。
【０００５】
Ｃｏｐｌａｎｄら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．，２００８，４９巻，Ｎｏ．１２，５４５８−５４６５ページは、組織浸潤と細胞浸潤を相関させて、局所内視鏡眼底イメージング（ＴＥＦＩ）を用いる実験的自己免疫性ブドウ膜網膜炎（ＥＡＵ）の臨床的時間経過について記載している。
【０００６】
Ｈｅら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．，２００６，４７巻，３９８３−３９８８ページは、ブドウ膜炎の治療のためのシクロスポリン添加ミクロスフェアについて記載している。
【０００７】
ＷＯ２０１６／０１１４４９は、２０１６年１月２１日に公表され、結膜下及び眼周囲注射用のシクロスポリンＡの懸濁組成物について記載している。
【０００８】
ＷＯ９６／３１２０２は、シクロスポリンが実質的にアモルファス状態であり、かつ生分解性ポリマーが１２．５％ｗ／ｗを超えるポリ（ラクチド）を含むようにミクロスフェア又はナノスフェアを形成するための、生分解性ポリマー中に捕捉されたシクロスポリンを含む制御放出医薬製剤について記載している。
【０００９】
Ｌｉら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，２００５，２９５巻，６７−７６ページは、ＰＬＧＡミクロスフェアと比較して、ラクチドとε−カプロラクトンのコポリマーに基づくシクロスポリンＡ添加ミクロスフェアのインビトロ及びインビボ研究について記載している。
【００１０】
Ｓａｎｃｈｅｚら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，１９９３，９９巻，２６３−２７３ページは、シクロスポリンＡの制御放出のための生分解性ミクロスフェア及びナノスフィアの開発について記載している。
【００１１】
米国特許公開第２００４／００９２４３５号は、シクロスポリンＡによる眼疾患の治療のための方法について記載している。
【００１２】
ＷＯ２０１０／１１１４４９は、眼症状を治療するための眼内徐放性薬物送達システム及び方法について記載している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
ブドウ膜炎の治療に使用するための医薬製剤及び送達システム、特に、硝子体内注射の頻度及び／若しくは不快感を低減する又は最小限に抑える医薬製剤及び送達システムに対する必要性が満たされていない。本発明は、これらの及び他の必要性に対処するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
発明の簡単な説明
概して、本発明は、硝子体内注射用の、例えば、ブドウ膜炎の治療用のシクロスポリンの制御放出医薬製剤又は徐放性医薬製剤に関する。本発明者らは、驚くべきことに、シクロスポリンを封入するポリ（ラクチド）で形成された直径約２０〜４０μｍの高度に単分散したミクロスフェア製剤が、既知のシクロスポリン添加ミクロスフェア製剤と比較して、優れた硝子体内注入性を示すことを見出した。さらに、自己免疫性ブドウ膜炎のインビボマウスモデルのデータは、全身シクロスポリン投与と同様であるが、作用部位がはるかにより局所的に定義される効力を示し、したがってより少ないオフターゲット効果が予想される。
【００１５】
したがって、第１の態様において、本発明は、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）を含む生体吸収性ポリマーのシクロスポリン添加微粒子を含む制御放出医薬製剤であって、微粒子の平均直径が、２０μｍ〜４０μｍ、例えば、２５μｍ〜３６μｍの範囲である制御放出医薬製剤を提供する。場合によって、製剤の微小粒子の少なくとも９５％は、２５μｍ〜４０μｍの範囲の直径を有する。
【００１６】
場合によって、生体吸収性ポリマーは、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）及びポリ（Ｌ−ラクチド）を含む。ポリ（Ｌ−ラクチド）は、好ましくは、少なくとも部分的に結晶形態である。非結晶性ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）に加えてポリマーマトリックス中にある割合の結晶性ポリ（Ｌ−ラクチド）を有することは、インビボでのより遅い分解速度に寄与し、それによって、結晶性ポリ（Ｌ−ラクチド）を欠く純粋なポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）微粒子製剤と比較してシクロスポリンペイロードの徐放性期間を延長すると考えられている。場合によって、ポリマーは、１％〜１５％ｗ／ｗのポリ（Ｌ−ラクチド）を含む。
【００１７】
場合によって、生体吸収性ポリマーはポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）及びポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）を含み、必要に応じてポリ（Ｌ−ラクチド）も含んでよい。ポリマーの最終混合物中のラクチド対グリコリドコモノマーの比（「Ｌ：Ｇ比」）は、生体吸収速度、したがって経時的なシクロスポリンの放出特性に影響を及ぼし得る。特定の場合において、Ｌ：Ｇ比は、６０：４０〜９５：５の範囲であり、例えば７０：３０〜８０：２０の範囲内であってよい。
【００１８】
場合によって、本発明の微粒子は、１５％〜２５％ｗ／ｗのシクロスポリンを含む。特に、シクロスポリン添加は１７％〜２１％（ｗ／ｗ）の範囲であってよい。
【００１９】
場合によって、微粒子の直径の変動係数は０．１以下（例えば、０．０５、０．０１又は０．００１以下）であり、変動係数は、微粒子の平均直径で割った微粒子の直径の標準偏差である。本発明者らは、単分散製剤、すなわち、本質的に全て同じ又は非常に類似した大きさであり、実質的に球形の形状であり、したがって、微粒子径の変動係数が小さい微粒子が、硝子体内注射による投与で使用される細いゲージの針を介する注入性の改善に寄与することを発見した。任意の特定の理論に束縛されるものではないが、不規則な大きさ又は形の微粒子の比較的より堅固なパッキングと比較して、同じサイズの球体の比較的緩いパッキングは、粘性及び注射時の針詰まりを減少させると現在考えられている。
【００２０】
場合によって、微粒子の直径の標準偏差は、３．０μｍ未満、例えば、１．０μｍ〜３．０μｍの範囲である。
【００２１】
場合によって、微粒子は、「治癒（ｈｅａｌｅｄ）」表面を有する。この文脈での治癒は、生成後の過程で形成された微粒子を、ポリマーのガラス固化温度又は「ガラス転移温度」（Ｔｇ）をわずかに下回る温度に加熱することによって達成される滑らかな表面を指す。このように微粒子を加熱することは、表面変形を充填及び／又は平滑にするためにポリマーが流れるモルテン様又はゴム様の状態を表面に一時的に取らせ、滑らかな表面をもたらす。その後の冷却時に、滑らかな表面は保持される。不規則な又は微孔性表面は平滑化され、これは比較的より多孔質で不規則な表面を有する非治癒微粒子と比較して微小粒子内部に捕捉されたペイロードを保持する傾向があるので、治癒表面を有する微粒子は医薬ペイロードのより遅い放出を示す。
【００２２】
場合によって、製剤はさらに、薬学的に許容される担体、希釈剤、ビヒクル、緩衝剤、抗凝集剤及び／又は粘度調整剤を含む。場合によって、製剤は液体ビヒクル中に懸濁された上記微粒子を含み、この液体ビヒクルは１７℃で測定するか、又は２０℃で測定した時に３０〜４５ｍＰａｓの粘性を有する。粘度測定は、製造業者の指示に従って、Ａ＆Ｄ  ＳＶ−１ａ  Ｖｉｂｒｏｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒ（Ａ＆Ｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ，Ａｂｉｎｇｄｏｎ，ＵＫ）を用いて測定されるとおりであり得る。本明細書の実施例５に記載されるように、この範囲で粘性を有する液体ビヒクルは、注射針通過性（ｓｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）の著しい困難さを回避しながら、注射に適した時間の間、懸濁液中の微粒子を維持するのに役立つことが見出された。特定の場合において、微粒子は、ずり減粘及び／又はチキソトロピー挙動を示す液体注射用ビヒクル中に懸濁されてよい。言い換えると、流体の粘度は、剪断応力の非存在下よりも剪断応力下でより低い。本明細書に詳細に記載されるように、ずり減粘性挙動は都合のよいことに、ある期間（例えば、数分）懸濁液中で微粒子を保持し、さらに細い硝子体内注射針を介する注射の剪断応力下での粘性の低下は、例えば必要とされる機械的吐出力を低減することによって、注射を容易にする。特定の場合において、本発明の製剤はチキソトロピー剤を含む。場合によって、チキソトロープ剤は、ヒプロメロース、ヒドロキシエチルセルロース、親水性が改変されたヒドロキシエチルセルロース、キサンタンガム、グアーガム、及びセチルアルコールからなる群から選択される。
【００２３】
特に、薬学的に許容される担体、希釈剤又はビヒクルは、塩、界面活性剤、糖、及び滅菌水の１以上を含んでよい。特定の場合において、本発明の製剤はさらに、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、リン酸緩衝生理食塩水、スクロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒプロメロース、ヒドロキシエチルセルロース、親水性が改変されたヒドロキシエチルセルロース、キサンタンガム、グアーガム、セチルアルコール、及びマンニトールのうちの１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、又はそれより多く）を含んでよい。
【００２４】
場合によって、製剤はさらに、リン酸緩衝生理食塩水、ポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロース及びヒプロメロース、並びに必要に応じてマンニトールを含む。
【００２５】
場合によって、製剤成分の濃度は、以下のようなそれぞれの濃度範囲にある：
（ｉ）リン酸緩衝生理食塩水：５．０〜８．０ｍｇ／ｍＬ、例えば６．５ｍｇ／ｍＬ；
（ｉｉ）ポリソルベート８０：０．８〜１．２ｍｇ／ｍＬ、例えば１．０ｍｇ／ｍＬ；
（ｉｉｉ）ヒドロキシエチルセルロース：１．８〜２．２ｍｇ／ｍＬ、例えば２．０ｍｇ／ｍＬ；
（ｉｖ）ヒプロメロース：３．８〜４．２ｍｇ／ｍＬ、例えば４．０ｍｇ／ｍＬ；
（ｖ）マンニトール、存在する場合：４．８〜５．２ｍｇ／ｍＬ、例えば５．０ｍｇ／ｍＬ；及び／又は
（ｖｉ）上記シクロスポリン添加微粒子：１００〜２００ｍｇ／ｍＬ、例えば１２５ｍｇ／ｍＬ又は１５０ｍｇ／ｍＬ。
【００２６】
本発明の製剤は、注射可能な形態であるか、又は使用前に注射可能な形態に再構成されるように適合されてよい。好ましくは、製剤は、硝子体内デポー注射用である。製剤は単一注射用量の形態で提供でき、ここで注射量は、硝子体内注射に適合する。
【００２７】
場合によって、製剤は、少なくとも８０％、少なくとも８５％又は少なくとも９０％の回収率で３０ゲージ、０．５インチの長さの皮下注射針（内径０．１５９±０．０１９ｍｍ、長さ２５．４ｍｍ）を介して注射できる。本明細書の表１に示すように、９０％を超える注射回収率が、本発明の製剤の特定の実施形態について実証された。
【００２８】
第２の態様において、本発明は、医薬における使用のための本発明の第１の態様の制御放出医薬製剤を提供する。
【００２９】
第３の態様において、本発明は、哺乳動物対象（例えば、ヒト又はウマ）におけるブドウ膜炎の治療での使用のための、本発明の第１の態様の制御放出医薬製剤を提供する。
【００３０】
場合によって、哺乳動物対象は、ブドウ膜炎を有すると診断されるか、又はブドウ膜炎を有すると疑われている。特定の場合において、ブドウ膜炎は、視力を脅かす非感染性病因の中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎又は汎ブドウ膜炎であるか、又はウマのブドウ膜炎、例えば、ウマ再発性ブドウ膜炎である。治療は、ステロイド性ブドウ膜炎の治療を受けている対象におけるブドウ膜炎の再発を低減又は防止することを意図し得る。特定の場合において、ブドウ膜炎は、視力を脅かす結核ブドウ膜炎（すなわち、結核菌の感染に続発するブドウ膜炎）であり得る。特に、治療は、基礎となる結核感染の治療のための抗生物質療法と組み合わされてよい。結核の抗生物質治療は、例えば、イソニアジド及び／又はリファンピシンによる治療を伴ってよい。
【００３１】
本発明の第１、第２又は第３の態様によれば、製剤は、硝子体内注射を介する投与用であり得る。製剤は、例えば、１週ごとの注射、２週ごとの注射、３週ごとの注射、４週ごとの注射、毎月の注射、６週ごとの注射、８週ごとの注射、２ヶ月ごと注射、１２週ごとの注射、３ヶ月ごとの注射、１６週ごとの注射又は４ヶ月ごとの注射による投与用であり得る。
【００３２】
第４の態様において、本発明は、哺乳動物対象（例えば、ヒト又はウマ）におけるブドウ膜炎を治療する方法であって、治療を必要とする対象に、本発明の第１の態様の制御放出医薬製剤を投与することを含む方法を提供する。場合によって、ブドウ膜炎は、視力を脅かす非感染性病因の中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎又は汎ブドウ膜炎であり得る。特定の場合において、ブドウ膜炎は、ウマのブドウ膜炎、例えば、ウマの再発性ブドウ膜炎（月盲としても知られる）であり得る。特定の場合において、治療の方法は、ステロイド性ブドウ膜炎の治療を受けている対象におけるブドウ膜炎の再発を低減若しくは防止できるか、又は低減若しくは防止することを意図するものであり得る。場合によって、方法は、視力を脅かす結核ブドウ膜炎を治療するためであり得る。本方法はさらに、結核感染の治療のために対象に抗生物質療法を施すことを含んでよい。場合によって、制御放出医薬製剤は、硝子体内注射を介して対象に投与される。
【００３３】
第５の態様において、本発明は、本発明の第４の態様の方法で使用するための医薬の調製における、本発明の第１の態様の制御放出医薬製剤の使用を提供する。
【００３４】
第６の態様において、本発明は、
本発明の第１の態様の制御放出医薬製剤；
この製剤を収容するための容器；及び
挿入物又はラベル
を含む製品を提供する。挿入及び／又はラベルは、哺乳動物対象でのブドウ膜炎の治療における製剤の使用に関する指示書、投薬量及び／又は投与情報を提供する。
【００３５】
第７の態様において、本発明は、本発明の第１の態様の制御放出医薬製剤を生成するための過程であって、
溶質、溶媒及びシクロスポリン又はその塩、溶液又は懸濁液を含む第１の液体を提供すること（溶質がポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）含有ポリマーを含み、第１の液体中のポリマーの濃度が少なくとも１０％  ｗ／ｖであり、「ｗ」はポリマーの重量であり、「ｖ」は溶媒の体積である）；
液滴を生じるように動作可能な圧電素子を含む液滴発生器を提供すること、この液滴発生器に第１の液体の液滴を形成させること；
ガスを通して液滴を通過させること；
溶媒を液滴から出させるために第２の液体と液滴を接触させること、ひいては固体微粒子を形成すること；
を含み、
第２の液体中の溶媒の溶解度が第２の液体１００ｍｌ当たり少なくとも５ｇの溶媒であり、溶媒が第２の液体と実質的に混和性であり、
ここで第２の液体が流れとして提供され、本方法が第２の液体の流れと液滴を接触させることを含む、過程を提供する。
【００３６】
場合によって、過程は、２０１６年１２月１６日出願の同時係属出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１６／０８１４３６及び／又は２０１５年１２月１８日出願のＧＢ１５２２４２３．１に記載される通りであり得、その全体の内容は、両方とも参照により本明細書に組み込まれる。
【００３７】
場合によって、溶媒は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含んでよい。
【００３８】
場合によって、第２の液体は水を含む。特に、第２の液体は、水中のｔｅｒｔ−ブタノールなどの、水中のアルコールを含んでよい。
【００３９】
場合によって、液滴発生器の近傍における第１の液体の温度は、１０℃〜２５℃の範囲である。
【００４０】
場合によって、第２の液体の温度は１℃〜１０℃の範囲である。
【００４１】
場合によって、第１の液体中のポリマーの濃度は、少なくとも３０％  ｗ／ｖである。
【００４２】
本発明のこの態様による特定の場合において、過程はさらに、第２液体から固体微粒子を分離することによって固体微粒子を収集することを含む。
【００４３】
場合によって、方法はさらに、固体微粒子を収集し、医薬組成物若しくは送達形態に微粒子を製剤化又は包装することを含む。特に、固体微粒子は、硝子体内注射による送達用の液体へと製剤化できる。
【００４４】
特定の場合には、本発明の第７の態様の過程はさらに、微粒子の凍結乾燥された集団を形成するために、微粒子を凍結乾燥することを含む。特に、微粒子は、１以上の賦形剤と共に凍結乾燥され、例えば１以上の賦形剤は、マンニトールを含んでよい。場合によって、過程はさらに、再構成ステップを含んでよく、乾燥微粒子（例えば、凍結乾燥微粒子）は、注射に適する懸濁液を形成するために、液体注射用ビヒクルと混合される。液体注射用ビヒクルは、本発明の第１の態様に関連して定義されるとおりであり得る。
【００４５】
第８の態様において、本発明は、活性含有（例えば、シクロスポリン添加）微粒子の注射可能な製剤を生成する過程であって、
活性含有（例えば、シクロスポリン添加）微粒子の乾燥集団を提供すること；
リン酸緩衝生理食塩水、ポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロース及びヒプロメロース、及び必要に応じてマンニトールを含む注射用ビヒクル溶液と微粒子を接触させること、
を含む過程を提供する。
【００４６】
場合によって、注射用ビヒクルの成分の濃度は、以下のようなそれぞれの濃度範囲にある：
リン酸緩衝生理食塩水：５．０〜８．０ｍｇ／ｍＬ、例えば６．５ｍｇ／ｍＬ；ポリソルベート８０：０．８〜１．２ｍｇ／ｍＬ、例えば１．０ｍｇ／ｍＬ；ヒドロキシエチルセルロース：１．８〜２．２ｍｇ／ｍＬ、例えば２．０ｇ／ｍＬ；ヒプロメロース：３．８〜４．２ｍｇ／ｍＬ、例えば４．０ｍｇ／ｍＬ；及びマンニトール、存在する場合：４．８〜５．２ｍｇ／ｍＬ、例えば５．０ｍｇ／ｍＬ。
【００４７】
シクロスポリン添加微粒子は、場合によって、注射用ビヒクルと組み合わされて、１００〜２００ｍｇ／ｍＬ、例えば１２５ｍｇ／ｍＬ又は１５０ｍｇ／ｍＬの懸濁液中の濃度（ｗ／ｖ）を与えてよい。場合によって、注射用ビヒクルは、２０℃で測定した時に、３０〜４５ｍＰａｓの粘性を有する。場合によって、注射用ビヒクルは、チキソトロピー及び／又はずり減粘挙動を示す。
【００４８】
場合によって、シクロスポリン添加微小粒子は、本発明の第１の態様に関連して定義されるとおりである。
【００４９】
本発明の、特にその第２〜第５の態様によれば、対象は、ヒト、コンパニオンアニマル（例えば、イヌ又はネコ）、実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ブタ又は非ヒト霊長類）、家庭用又は農場用の動物（例えば、ブタ、ウシ、ウマ又はヒツジ）であり得る。好ましくは、対象はヒトである。ブドウ膜炎は、馬に影響を及ぼすことが知られている。馬の再発性ブドウ膜炎は、馬の失明の最も一般的な形態である。本発明の組成物によるウマ対象の治療が、具体的に企図される。
【００５０】
本発明は、このような組合せが、明らかに許容できないか、又は明白に回避されることが記載されている場合を除き、記載の態様及び好ましい特徴の組み合わせを含む。これらの及びさらなる態様並びに本発明の実施形態を、添付の実施例及び図面を参照して、さらに詳細に以下で説明する。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】注射用ビヒクルの範囲での懸濁後のミクロスフェア沈降を示す。沈降速度を４つの製剤のそれぞれについてプロットする（懸濁したミクロスフェアの割合対時間）：ＷＦＩ中のＴｗｅｅｎ２０（０．４ｍｇ／ｍｌ）（青）；ＰＢＳ中のＴｗｅｅｎ２０（０．４ｍｇ／ｍｌ）（赤色）；ＰＢＳ及びＣＭＣ（５ｍｇ／ｍｌ）中のＴｗｅｅｎ２０（０．４ｍｇ／ｍｌ）（緑色）；及びスクロース（５％）を有するＷＦＩ中のＴｗｅｅｎ２０（０．４ｍｇ／ｍｌ）（紫）。
【図２】未処置の（菱形）、硝子体内注射によってビヒクル処置した（四角）、本発明のＣｓＡ添加微粒子の形態の４．５μｇのシクロスポリン（ＣｓＡ）で処置した（十字）及び６．７ｍｇ／ｋｇ／日の経口ＣｓＡ（丸）で処置したブドウ膜炎マウスモデルについて経時的に（日で）局所内視鏡眼底イメージング（ＴＥＦＩ）によってスコア化したブドウ膜炎の疾患の重症度のプロットを示す。両方のＣｓＡ処置群は、未処置又はビヒクルよりも低いＴＥＦＩスコア（すなわち、より低い重症度の疾患）を示した。
【図３】インストロン装置を用いて測定した時の、「現在の」注射用ビヒクルについての力（Ｎ）対圧縮伸長（ｍｍ）の注入性プロットを示す。
【図４】インストロン装置を用いて測定した時の、「開発した」注射用ビヒクルについての力（Ｎ）対圧縮伸長（ｍｍ）の注入性プロットを示す。Ｙ軸スケールは、図３のものとは異なることに留意されたい。
【図５】それぞれの注射用ビヒクル中のＣｓＡ添加ミクロスフェアの１７．５ｍｇ／ｍｌ懸濁液についての時間（分で）に対する４２０ｎｍでの吸光度の変化によって測定した時の、「現在の」（三角）及び「開発した」（四角）注射用ビヒクル製剤についての沈降速度のプロットを示す。
【図６】「開発した」注射用ビヒクルについての温度（℃）対粘性（ｍＰａｓ）のプロットを示す。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
発明の詳細な説明
本発明の説明において、以下の用語が使用され、以下に示すように定義されることが意図される。
【００５３】
微粒子
本発明による微粒子は、固体ビーズの形態であり得る。微粒子又はビーズに関連して本明細書で使用する場合、固体はゲルを包含することが意図される。本明細書で使用される微粒子は、具体的に、ミクロンスケールの任意のポリマー粒子又はビーズ（典型的には最大９９９μｍの直径）を含む。本明細書で企図される微粒子は、ＷＯ２０１２／０４２２７４に記載の過程によって得られる単分散ポリマービーズを有利に含む（その全内容は、参照により本明細書にはっきりと組み込まれる、例えば、その請求項１〜４４を参照されたい）。
【００５４】
シクロスポリン（「ＣｓＡ」）
シクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）、シクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）、シクロスポリンＡ（ｃｉｃｌｏｓｐｏｒｉｎ  Ａ）、シクロスポリンＡ（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  Ａ）、シクロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  Ａ）又は「ＣｓＡ」としても知られるシクロスポリン（国際一般名；ＩＮＮ）は、免疫抑制活性を有する１１個のアミノ酸の環状非リボソームペプチドである。ＣｓＡは、ＩＵＰＡＣ名（３Ｓ，６Ｓ，９Ｓ，１２Ｒ，１５Ｓ，１８Ｓ，２１Ｓ，２４Ｓ，３０Ｓ，３３Ｓ）−３０−エチル−３３−［（１Ｒ，２Ｒ，４Ｅ）−１−ヒドロキシ−２−メチル−４−ヘキセン−１−イル］−６，９，１８，２４−テトライソブチル−３，２１−ジイソプロピル−１，４，７，１０，１２，１５，１９，２５，２８−ノナメチル−１，４，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１−ウンデカアザシクロトリトリアコンタン−２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２−ウンデコン、を有する。ＣｓＡは、水中の溶解性は乏しく、懸濁液、エマルジョン及びゼラチンカプセル製剤で市販されている。
【００５５】
微粒子内にシクロスポリンを封入するための過程
特定の場合において、微粒子は、ＷＯ２０１２／０４２２７４に記載された過程により生成できる（その全体の内容は、参照により明白に本明細書に組み込まれる）。場合によって、微粒子は、２０１６年１２月１６日に出願された同時係属出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１６／０８１４３６及び／又は２０１５年１２月１８日に出願されたＧＢ１５２２４２３．１に記載の過程により生成でき、その両方の全内容は、参照により明白に本明細書に組み込まれる。特に、シクロスポリンは、第１の液体に「ターゲット材料」として添加でき、第１の液体は、溶媒（例えば、ＤＭＳＯ）中に溶解されたポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）を含むポリマーである。第２の液体は、水とアルコール（例えば、ｔｅｒｔ−ブタノール）の混合物であり得、噴流の形態で提供される。第１の液体は、複数の液滴発生器（例えば、１００〜１５００アウトレットのバンクを有するインクジェットプリントヘッド）から排出されて、ガスを通過し第２の液体の噴流に入る液滴を形成する。溶媒は次いで、第２の液体中へと通過する際に液滴を出て、その中にシクロスポリンが封入される固体ポリマー微粒子の形成をもたらす。この生成方法は、サイズの均一性が優れている（例えば、０．１以下の変動係数）小さなサイズ（直径２０〜４０μｍ）のシクロスポリン封入微粒子をもたらすことが判明した。小さなサイズとサイズの均一性の組み合わせは、より大きなサイズ及び／又はより低い単分散特性のシクロスポリン添加微粒子と比較して、硝子体内注射に必要な細いゲージの針（例えば、２７Ｇ）を介する微粒子の注入性を改善することが見出されている。特に、エマルション系又は溶媒蒸発技術などの、前に記載された生産の方法は典型的に、サイズの可変性が高いより大きな微粒子を生じる（例えば、Ｈｅら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．，２００６，４７巻，３９８３−３９８８ページの表１を参照されたい）。
【００５６】
投与及び治療
本発明の微粒子及び医薬製剤は、任意の数の異なる経路によって患者に投与できる。しかしながら、本明細書では、投与は、硝子体内デポー注射を介することが具体的に企図される。
【００５７】
本発明のＣｓＡ添加微粒子は、ブドウ膜炎の治療に使用するためであり得る。特に、ブドウ膜炎の治療は、以下の１つ以上であり得る：
１．長期の高用量ステロイド（全身又は局所投与）での従来の治療が必要な患者における視力を脅かす非感染性病因の中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎又は汎ブドウ膜炎の再発の予防。
本発明者らは、本発明のＣｓＡ添加微粒子の使用は、再発の回数及び／又は重症度を低減し、大用量の全身性ステロイド又は全身性免疫抑制薬（例えば、経口ＣｓＡ）の使用を回避することができると考えている。
２．視力を脅かす非感染性病因の中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎又は汎ブドウ膜炎の治療。
本発明者らは、第１次治療として本発明のＣｓＡ添加微粒子の使用は、低減された副作用（非全身送達）及び低減された投与頻度の形で利点を提供し、それにより患者の経験及びコンプライアンスを向上すると考えている。
３．視力を脅かす結核（ＴＢ）ブドウ膜炎の治療。
本発明者らは、本発明のＣｓＡ添加微粒子の使用は、ＴＢの眼の症状を治療し、慢性ブドウ膜炎の眼の後遺症を予防すると考えている。都合のよいことに、本発明のＣｓＡ添加微粒子での治療は、基礎となるＴＢ感染の治療のための抗生物質療法と組み合わせて実施できる。
【００５８】
以下は、例として提示され、特許請求の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【００５９】
実施例
実施例１−ポリマーミクロスフェア内へのシクロスポリン（ＣｓＡ）の封入
以下の製剤を、ＣｓＡ封入ミクロスフェアの合成に使用した：
１ｍＬについて
・１５０ｍｇのＲｅｓｏｍｅｒ  Ｒ２０２Ｈ（ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）酸性末端基、ＭＷ  １８０００〜２４０００）
・１５０ｍｇのＲｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ７５２Ｈ（ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）酸性末端基、ラクチド：グリコリド７５：２５、ＭＷ  ４０００〜１５０００）
・７５ｍｇのシクロスポリンＡ
・適量のａｄ  ＤＭＳＯ
【００６０】
その全体の内容が参照により明白に本明細書に組み込まれるＷＯ２０１２／０４２２７３及び／又は２０１６年１２月１６日に出願された同時係属出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１６／０８１４３６、及び／又は２０１５年１２月１８日に出願されたＧＢ１５２２４２３．１に記載されるように、合成を、圧電液滴発生装置を用いて行った。簡単に説明すると、第１の液体を、ＤＭＳＯ中に溶解したＲｅｓｏｍｅｒ  Ｒ２０２Ｈ、Ｒｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ７５２ＨとシクロスポリンＡの上記の組み合わせで構成した。第２の液体は、チャネル中の流れの形態又は噴流の形態で提供される水とアルコール（例えば、ｔｅｒｔ−ブタノール）の混合物であった。第１の液体は複数の液滴発生器から排出され、ガス（例えば、空気）を通過して第２の液体の流れの中に入る（それぞれ、チャネル内又は噴流中に）液滴を形成する。溶媒は次いで、第２の液体中に入る際に液滴を出て、その中にシクロスポリンが封入される固体ポリマー微粒子の形成をもたらす。
【００６１】
１．５ｇの総質量のミクロスフェアが生成され、これらは２０．２％の薬物添加を有した。ミクロスフェアを次いで、以下のようにバッチ法で後処理した：
・洗浄培地＝５ｍｇ／ｍＬのマンニトール
・洗浄温度＝３７℃
・洗浄時間＝１時間
【００６２】
最終生成物中の薬物添加は２０．１％であり、後処理中の最小限の薬物損失を示した。
【００６３】
全てのミクロスフェアを２〜８℃で保存した。
【００６４】
【表１】
2019503352.tif 000002
【００６５】
注射用ビヒクル構成要素は以下のとおりであった。
・５ｍｇ／ｍＬのカルボキシメチルセルロースナトリウム
・０．４ｍｇ／ｍＬのポリソルベート２０
・リン酸緩衝液、ｐＨ７
【００６６】
【表２】
2019503352.tif 000003
【００６７】
実施例２−注射用ビヒクルの開発及び注入性の評価
ＣｓＡ添加ミクロスフェアの硝子体内経路及び性質により、注射用ビヒクルの最適化を、簡単で再現性ある注射を提供するために行った。本発明者らは、プラセボミクロスフェアの再構成時間、沈降速度及び注入性を調べるために多くの研究を行い、これらの目的について、プラセボミクロスフェアが、ＣｓＡ添加ミクロスフェアと非常に類似した特性を有する。初期の研究では、緩衝系、界面活性剤の含有量、ポリオール含有量及び粘度調整剤を調べた。これらの実験により、本発明者らは、好ましい再懸濁及び注射プロトコルを確立できた。均質な懸濁液を２分以下で形成でき、良好な沈降速度を提供するために最適化し（図１）、これまでに得られたデータは、これらが１／２”  ３０Ｇ針を通して注射可能であることを示す（図１）。
【００６８】
【表３】
2019503352.tif 000004
【００６９】
実施例３−ある範囲の皮下注射針を通過する５種の異なるシクロスポリン添加ミクロスフェアバッチの注射針通過性の検討。
方法
この検討で使用した５つのミクロスフェアバッチ及びそれらの特性を表２に記載する。
【表４】
2019503352.tif 000005
【００７０】
ＯｐｓｉＳｐｏｒｉｎ注射用ビヒクルの調製
注射用ビヒクルは、０．８μｇ／ｍＬのｔｗｅｅｎ２０及び５ｍｇ／ｍＬのカルボキシメチルセルロースナトリウムを有するリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７）からなった。
【００７１】
注射針通過性
ミクロスフェアバッチの注射針通過性を、１８、３６、５４、７２及び１４０ｍｇ／ｍＬの濃度で調べた。具体的に、特定の質量のミクロスフェアを２ｍＬのエッペンドルフチューブに秤量し、１ｍＬの注射用ビヒクル（上記）を添加し、エッペンドルフチューブを１分間超音波処理装置中に置いた。これにより均質な懸濁液が得られ、その１００μＬを、２１Ｇ、２５Ｇ、２７Ｇ又は３０Ｇの皮下注射針のいずれかを取り付けた１ｍＬのシリンジに引き入れた。懸濁液を次いで、同じ皮下注射針を介して排出した。
【００７２】
合格とみなすためには、正確な量の懸濁液を注射器中に吸引し、かつ注射器から排出しなければならない。吸引する能力において、針の閉塞又は用量の不正確な送達は失敗とみなした。
【００７３】
結果
結果を、各濃度での吸引及び注射が可能かどうかを特定するために、はい（チェックマーク）又はいいえ（×）を用いて、表３〜７に示す。３回連続の失敗（「×」で示される）は、懸濁液が注射可能ではなかったことを裏付けた。
【００７４】
【表５】
2019503352.tif 000006
【００７５】
【表６】
2019503352.tif 000007
【００７６】
【表７】
2019503352.tif 000008
【００７７】
【表８】
2019503352.tif 000009
【００７８】
【表９】
2019503352.tif 000010
【００７９】
結論
この実験の結果は、３５μｍの直径及び１０％未満のＣＶを有するＣｓＡミクロスフェアが、より大きな及び／又はより少ない単分散ミクロスフェア集団よりも高い懸濁液濃度で２７Ｇ及び３０Ｇ皮下注射針を通って吸引及び排出されたことを示した。これは、ミクロスフェアの直径及び粒度分布が、最小の皮下注射針を通過するミクロスフェア懸濁液に重要であることを裏付けた。
【００８０】
実施例４−自己免疫性ブドウ膜炎のマウスモデルのインビボ処置
実験モデルの背景
本発明のシクロスポリン添加微粒子の有効性を、自己免疫性ブドウ膜炎の確立されたインビボモデルを用いて評価した。Ｃｏｐｌａｎｄら，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．，２００８，４９巻，Ｎｏ．１２，５４５８−５４６５ページ（参照により本明細書に組み込まれる）は、組織浸潤と細胞浸潤を相関させて局所内視鏡眼底イメージング（ＴＥＦＩ）を用いる実験的自己免疫性ブドウ膜網膜炎（ＥＡＵ）の臨床的時間経過について記載している。Ｃｏｐｌａｎｄの論文はＢ１０マウス系統を採用したが、本研究はＣ５７マウス系統を採用した。Ｂ１０マウス系統は、短期間の重篤な疾患である、より急性の疾患を示すが、Ｃ５７マウス株は、重症度がより低いより長期的な疾患を示す。そのより長い期間が長時間作用型徐放性治療用生成物の評価に適しているので、本発明者らは、本研究のための自己免疫性ブドウ膜炎の実験的マウスモデル用にＣ５７マウス系統を選択した。
【００８１】
実験概要
到着時に、マウスを無作為に１０のグループに割り当て、１週間順応させた。全ての動物の健康状態を、研究開始前に確認した。
【００８２】
実験的自己免疫性ブドウ膜炎（ＥＡＵ）を誘導するため０日目に、２．５ｍｇ／ｍｌの結核菌Ｈ３７  Ｒａ（Ｄｉｆｃｏ）を補充した完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ；Ｓｉｇｍａ）で乳化（１：１  容量／容量）した光受容体間レチノイド結合タンパク質ペプチド１−２０結合（ＩＲＢＰｐ  １〜２０、ＧＰＴＨＬＦＱＰＳＬＶＬＤＭＡＫＶＬＬＤ（配列番号１）；Ｓｅｖｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）抗原を、動物に皮下注射した。マウスにまた、免疫賦与の時点で、１．５μｇの百日咳菌毒素（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を腹腔内注射した。
【００８３】
経口投与したシクロスポリンＡの徐放性の効果とビヒクルのみの対照群を比較するために、以下のスケジュールに従って治療を施した（表８）。
【００８４】
シクロスポリン添加微粒子生成物（「ＯｐｓｉＳｐｏｒｉｎ」）の徐放性特性により、疾患誘導後に、唯一の機会の０日目に、硝子体内処置を施した。ビヒクルのみを与える対照群も、０日目に注射した。加えて、１０匹の動物の２つのグループに、陽性対照処置として、１日１回、経口的にＣＭＣ中のＣｓＡを与えた。
【００８５】
臨床疾患の徴候を、７日目から、２８日目の終了日まで週２回、局所内視鏡眼底底イメージング（ＴＥＦＩ）によって監視した。動物をまた、体調不良の兆候について毎週２回監視し、秤量し、あらゆる異常を記録した。
【００８６】
【表１０】
2019503352.tif 000011
ｎ／ａ−適用されない；ｓ．ｉ．ｄ．−１日１回投与；Ｓ．Ｃ．−皮下；ｉ．ｐ．−腹腔内；ＩＲＢＰｐ−光受容体間レチノイド結合タンパク質ペプチド１−２０；ＣＦＡ−完全フロイントアジュバント；ＣｓＡ−シクロスポリンＡ
【００８７】
硝子体内注射量を４μＬに固定し、したがって、適切な用量を達成するために、表９に示すように、ＯｐｓｉＳｐｏｒｉｎ懸濁液を調製した。
【００８８】
【表１１】
2019503352.tif 000012
【００８９】
読み出し
臨床観察
動物を、研究の開始時（０日目）に、及びその後、終了の２８日目まで週２回秤量した。全ての動物をまた、病気の兆候について週２回観察し、あらゆる異常を記録した。
【００９０】
局所的な内視鏡眼底底イメージング（ＴＥＦＩ）に使用する網膜イメージング
マウスの網膜を、１％のトロピカミド、その後フェニレフリン塩酸塩２．５％での瞳孔拡大後に、７日目から終了の２８日目まで週２回記録した。網膜像を、局所内視鏡眼底イメージング（ＴＥＦＩ）を用いてキャプチャし、２０の最大スコアを与える以下の標準化スコアリングシステムに従ってスコア化した（表１０）。
【００９１】
【表１２】
2019503352.tif 000013
【００９２】
結果
図２は、ブドウ膜炎の上記マウスモデルについて経時的に（日で）局所内視鏡眼底イメージング（ＴＥＦＩ）によってスコア化された、ブドウ膜炎の疾患の重症度を示す。未処置の（菱形）、硝子体内注射によるビヒクル処置（四角）、本発明のＣｓＡ添加微粒子の形態の４．５μｇのシクロスポリン（ＣｓＡ）での処置（十字）及び６．７ｍｇ／ｋｇ／日の経口ＣｓＡ（丸）での処置。両方のＣｓＡ処置群は、未処置又はビヒクルよりも低いＴＥＦＩスコア（すなわち、より重症度の低い疾患）を示した。
【００９３】
実施例５−様々な注射用ビヒクル製剤の注入性の比較
本研究は、改善された湿潤の容易さ、改善された懸濁安定性（すなわち、微粒子が沈降する前に懸濁液中に残っている時間がより長い）及び／又は改善された注入性を有する注射用ビヒクル製剤を特定することを目的とした。
【００９４】
以下の注射用ビヒクル製剤を調製した：
【００９５】
【表１３】
2019503352.tif 000014
【００９６】
粘性を、製造業者の指示に従いＡ＆Ｄ  ＳＶ−１ａ  Ｖｉｂｒｏｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒ  （Ａ＆Ｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ，Ａｂｉｎｇｄｏｎ，ＵＫ）を用いて測定した。Ａ＆Ｄ  Ｖｉｂｒｏ  Ｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒの取扱説明書（Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ２００８）はＡ＆ＤのＷｅｂサイトから入手可能である。
【００９７】
使用前に２０℃で、水の試料によりキャリブレーションを行った。３５〜４５ｍＬの試料の量を、粘性を決定するために使用した。粘性の読み取り値を、上の表１１並びに下の表１２及び表１３に示す。他に特定しない限り、全ての読み取りを２０℃で行った。
【００９８】
微粒子（注射用ビヒクルの１２５ｍｇ／ｍＬについては４００μｌ又は１５０ｍｇ／ｍＬについては３３３．３μｌのいずれかの中の５０ｍｇの微粒子）の再構成時間、水和性及び注射針通過性の評価を行った。注射用ビヒクルＡ、Ｂ、Ｃ及びＥは、最適に満たない再構成及び注射針通過性を示すことが判明し、これは微粒子には迅速に沈降する傾向があり、このことが次に、微粒子を含まない注射用ビヒクルのみを又は主にそれをシリンジ中に吸い上げさせたという事実による。注射用ビヒクルＦ及びＧは、粘性が高すぎて、２７Ｇ及び２９Ｇのインスリン注射器を通りニートな注射用ビヒクルを吸引することを困難にすることが判明した。注射用ビヒクルＤ、Ｈ及びＩは均一な溶液への微粒子の最良の再構成を示し、かつ固定２７Ｇ又は２９Ｇインスリン注射器のいずれかを使用する１００μｌの注射量によって評価した時に、最高の注射針通過性を示した。懸濁液の再構成時間、水和性、注射針通過性及び品質に基づいて、さらなる注射用ビヒクル製剤「Ｊ」を生成するために、濃度を変更して、賦形剤と注射用ビヒクルＤ、Ｈ及びＩを組み合わせることを決定した（下の表１２を参照されたい）。注射用ビヒクルＪに加えて複製用の注射用ビヒクル製剤「Ｋ」も作製し、それはマンニトールの添加により注射用ビヒクルＪとは異なった。これは、凍結乾燥後に存在し得る違いを調べるために行った。マンニトールは典型的には、再構成前に凍結乾燥される微粒子製剤用に添加される。
【００９９】
【表１４】
2019503352.tif 000015
【０１００】
注射用ビヒクルＪ及びＫを、再構成及び水和性について評価した。３３３．３μｌの各注射用ビヒクルを５０ｍｇの微粒子に添加し、１５０ｍｇ／ｍＬを得た。約３分間ボルテックスし、約３分間超音波処理することによって再構成を促進した。得られた懸濁液は、高度に均質であることが判明した。注射用ビヒクルＪ及びＫの注射針通過性を、１００μｌの注射量及び固定２７Ｇインスリン注射器でインストロン装置を用いて確認した。注射用ビヒクルＪ及びＫの両方は同様の結果を示し（３回の試行中２回が注入性を達成した）、マンニトールの存在の有無は、注射用ビヒクルの注射針通過性を著しく変更しないことを示唆した。
【０１０１】
注射用ビヒクル製剤のさらなる最適化は注射用ビヒクルＬ（記の表１２を参照されたい）をもたらし、これをさらなる開発のために使用した。以前の注射用ビヒクル製剤（「現在」）及び注射用ビヒクルＬ（「開発」）の特性を下の表１３に示す。
【０１０２】
【表１５】
2019503352.tif 000016
【０１０３】
表１３に示される注射用ビヒクル製剤を、インストロン装置を用いて注入性について試験した。両方の製剤中のＣｓＡ添加微粒子の濃度は１５０ｍｇ／ｍｌであった。針は２７Ｇであり、注射量は１００μｌであった。
【０１０４】
図３は、現在の注射用ビヒクル製剤の力（Ｎ）対圧縮伸長（ｍｍ）についてのプロットを示す。図４は、開発した注射用ビヒクル製剤の力（Ｎ）対圧縮伸長（ｍｍ）についてのプロットを示す。図３及び４のｙ軸スケールの違いに留意されたく、開発した注射用ビヒクル製剤は、約１０倍低い力で圧縮伸長の同様のレベルを達成したことが明らかである。表１３に示すように、開発した注射用ビヒクル製剤は現在の注射用ビヒクル製剤よりも実際に高い粘性を有するので、この結果は驚くべきことであった。
【０１０５】
現在の及び開発した注射用ビヒクル製剤の沈降速度を、それぞれ、現在の及び開発した製剤中のＣｓＡ添加ミクロスフェアの１７．５ｍｇ／ｍＬの懸濁液について、４２０ｎｍでの吸光度の変化を経時的に測定することにより評価した。結果を図５に示す。図５から容易に明らかであるように、現在の注射用ビヒクル製剤は、開発した製剤よりもはるかに速い沈降を示した（現在の注射用ビヒクル製剤の実質的な沈降は１分以内であるのに対して、開発した製剤については約１０〜３０分であった）。
【０１０６】
いかなる特定の理論に縛られることなく、本発明者らは、現在の製剤と比較して、開発した注射用ビヒクル製剤のより高い粘性、及びそれに対応するより長い沈降時間は、微粒子が注射の過程で開発した製剤によって懸濁液中で良好に保持されることを意味すると考える。注射中の微粒子の沈降は微粒子の凝集をもたらし、これが次に、硝子体内注射に必要とされる細い針を部分的に遮断する「プラグ」の形成をもたらすと考えられる。これは、粘性のより高い開発した製剤は、所定のレベルの圧縮伸長を達成するのにより少ない力を必要とするという、上記の反直感的な発見を説明する。
【０１０７】
硝子体内注射用の細い針（例えば、２７Ｇ又は３０Ｇ）を通過する所定の注射量を達成するために、より低いレベルの力が非常に望ましい。したがって、開発した注射用ビヒクル製剤は、硝子体内注射のためのＣｓＡ添加微粒子の改良された注入性を提供することが期待される。再び、任意の特定の理論に縛られることなく、本発明者らは、チキソトロープ剤ヒプロメロース（ヒドロキシプロピルメチルセルロース、「ＨＰＭＣ」又はＥ４６４としても知られる）の添加は開発した注射用ビヒクル製剤の有利な特性に寄与すると考えている。注射用ビヒクル中のチキソトロープ剤の存在は、ずり減粘を示す流体をもたらす。レオロジーでは、ずり減粘は、その粘性がせん断ひずみの下で減少する流体の非ニュートン挙動である。再び、任意の特定の理論に縛られることなく、本発明者らは、ずり減粘を示す注射用ビヒクルが本発明に関連して特に都合がよいと考える。せん断応力の非存在下での比較的高い粘性は、懸濁液中の微粒子を維持するのに役立つ。細い針を通した注射（例えば、硝子体内注射）は、ずり減粘性流体の粘性を低下させる剪断応力を誘導し、これは注射を促進する。したがって、注射用ビヒクルが１以上のチキソトロピー剤を含んでよいことが本明細書において特に企図される。注射用ビヒクル中の使用のためのチキソトロープ剤の例としては、ヒプロメロース、ヒドロキシエチルセルロース、親水性が改変されたヒドロキシエチルセルロース、キサンタンガム、グアーガム、及びセチルアルコールが挙げられる。
【０１０８】
各個々の刊行物又は特許又は特許出願が、参照によりその全体が組み込まれることが具体的かつ個別に示されるのと同程度に、本明細書に引用される全ての参考文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１０９】
本明細書に記載される特定の実施形態は、限定されるものではないが、一例として提供される。本明細書の任意のサブタイトルは、便宜のためにのみ含まれており、いかなる方法でも本開示を限定するものとして解釈されるべきではない。
【図１】
2019503352.tif 000017
【図２】
2019503352.tif 000018
【図３】
2019503352.tif 000019
【図４】
2019503352.tif 000020
【図５】
2019503352.tif 000021
【図６】
2019503352.tif 000022
【手続補正書】
【提出日】平成29年10月18日(2017.10.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）を含む生体吸収性ポリマーのシクロスポリン添加微粒子を含む制御放出医薬製剤であって、
微粒子の平均直径が２０μｍ〜４０μｍの範囲であり、
前記製剤が、液体ビヒクル中に懸濁された前記微粒子を含み、前記液体ビヒクルは、製造業者の指示に従ってＡ＆Ｄ  ＳＶ−１ａ  Ｖｉｂｒｏｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒ（Ａ＆Ｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ）を用いて２０℃で測定された場合に３０〜４５ｍＰａｓの粘性を有し、
前記製剤が、ヒプロメロース、ヒドロキシエチルセルロース、親水性が改変されたヒドロキシエチルセルロース、キサンタンガム、グアーガム、及びセチルアルコールからなる群から選択されるチキソトロープ剤を含み、
液体の前記製剤は、粘性がせん断ひずみの下で減少するようにずり減粘挙動を示す、
制御放出医薬製剤。
【請求項２】
前記ポリマーがポリ（Ｌ−ラクチド）及び／又はポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）をさらに含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
前記ポリマーが１％〜１５％  ｗ／ｗのポリ（Ｌ−ラクチド）を含む、請求項２に記載の製剤。
【請求項４】
前記微粒子が１５％〜２５％  ｗ／ｗのシクロスポリンを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項５】
前記製剤の微小粒子の少なくとも９５％が２５μｍ〜４０μｍの範囲の直径を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項６】
前記微粒子の直径の変動係数が０．１以下であり、前記変動係数が前記微粒子の平均直径で割った前記微粒子の直径の標準偏差である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項７】
前記製剤が薬学的に許容される担体、希釈剤、ビヒクル、緩衝剤、抗凝集剤及び／又は粘度調整剤をさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項８】
前記薬学的に許容される担体、希釈剤又はビヒクルが塩、界面活性剤、糖、及び滅菌水の１以上を含む、請求項７に記載の製剤。
【請求項９】
前記チキソトロープ剤がヒプロメロースを含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１０】
前記製剤がリン酸緩衝生理食塩水、ポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロース及びヒプロメロース、並びに必要に応じてマンニトールを含む、請求項９に記載の製剤。
【請求項１１】
以下の成分の濃度が、以下の：
リン酸緩衝生理食塩水：５．０〜８．０ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて６．５ｍｇ／ｍＬ；
ポリソルベート８０：０．８〜１．２ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて１．０ｍｇ／ｍＬ；
ヒドロキシエチルセルロース：１．８〜２．２ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて２．０ｍｇ／ｍＬ；
ヒプロメロース：３．８〜４．２ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて４．０ｍｇ／ｍＬ；
マンニトール、存在する場合：４．８〜５．２ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて５．０ｍｇ／ｍＬ；及び
前記シクロスポリン添加微粒子：１００〜２００ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて１５０ｍｇ／ｍＬ
のようなそれぞれの濃度範囲にある、請求項１０に記載の製剤。
【請求項１２】
前記製剤が注射可能な形態であるか又は使用前に注射可能な形態に再構成されるように適合される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１３】
前記製剤が硝子体内デポー注射用である、請求項１２に記載の製剤。
【請求項１４】
前記製剤が少なくとも８０％の回収率で３０ゲージ、０．５インチの長さの皮下注射針（内径０．１５９±０．０１９ｍｍ；長さ２５．４ｍｍ）を通して注射可能である、請求項７〜１３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１５】
医薬での使用のための請求項１〜１４のいずれか一項に記載の制御放出医薬製剤。
【請求項１６】
哺乳動物対象でのブドウ膜炎の治療における使用のための、必要に応じて前記哺乳動物対象がヒト又はウマである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の制御放出医薬製剤。
【請求項１７】
前記ブドウ膜炎が視力を脅かす非感染性病因の中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎又は汎ブドウ膜炎であり、又は前記ブドウ膜炎がウマ再発性ブドウ膜炎である、請求項１６に記載の使用のための製剤。
【請求項１８】
前記治療がステロイド性ブドウ膜炎の治療を受けている対象におけるブドウ膜炎の再発の低減又は予防である、請求項１７に記載の使用のための製剤。
【請求項１９】
前記ブドウ膜炎が視力を脅かす結核性ブドウ膜炎である、請求項１６に記載の使用のための製剤。
【請求項２０】
前記治療が基礎となる結核感染の治療のための抗生物質療法と組み合わされる、請求項１９に記載の使用のための製剤。
【請求項２１】
前記製剤が硝子体内注射を介する投与用である、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の使用のための製剤。
【請求項２２】
請求項１〜６のいずれか１項において定義されるシクロスポリン添加微粒子の注射可能な製剤を生成するための過程であって、
前記シクロスポリン添加微粒子の乾燥集団を提供すること；
リン酸緩衝生理食塩水、ポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロース及びヒプロメロース、並びに必要に応じてマンニトールを含む注射用ビヒクル溶液と前記微粒子を接触させること、
を含み、
前記注射用ビヒクルは、製造業者の指示に従ってＡ＆Ｄ  ＳＶ−１ａ  Ｖｉｂｒｏｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒ（Ａ＆Ｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ）を用いて２０℃で測定された場合に３０〜４５ｍＰａｓの粘性を有し、
液体の前記製剤は、粘性がせん断ひずみの下で減少するようにずり減粘挙動を示す、
過程。
【請求項２３】
以下の成分の濃度が、以下のとおり：
リン酸緩衝生理食塩水：５．０〜８．０ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて６．５ｍｇ／ｍＬ；
ポリソルベート８０：０．８〜１．２ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて１．０ｍｇ／ｍＬ；
ヒドロキシエチルセルロース：１．８〜２．２ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて２．０ｇ／ｍＬ；
ヒプロメロース：３．８〜４．２ｍｇ／ｍＬ；
存在する場合、マンニトール：４．８〜５．２ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて５．０ｍｇ／ｍＬ；及び
前記シクロスポリン添加微粒子：１００〜２００ｍｇ／ｍＬ、必要に応じて１５０ｍｇ／ｍＬ
のそれぞれの濃度範囲で組み合わされる、請求項２２に記載の過程。
【国際調査報告】
2019503352.tif 000023
2019503352.tif 000024
2019503352.tif 000025