(57)【要約】抗微生物活性を発生させるための組成物が記載される。組成物は、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる酵素、酵素のための基質、および２０℃、１気圧で少なくとも１００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する糖または糖誘導体の形態の溶質を含む。組成物は、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含んでいなくてもよい。本発明は、ハチミツが提供する抗微生物性の利点のいくつかを提供し、かつその不利益のいくつかを克服する改善された組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗微生物活性を発生させるための組成物であって、
基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、
前記酵素のための精製された基質、および
２０℃、１気圧で少なくとも１００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する糖または糖誘導体の形態の溶質
を含み、
前記酵素が前記基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない、組成物。
【請求項２】
前記溶質が少なくとも３００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記溶質が単糖である、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項４】
前記単糖がフルクトースである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記溶質が乾燥重量で前記組成物の少なくとも６０％である、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記基質が乾燥重量で前記組成物の少なくとも３０％である、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
前記基質と前記溶質とを合わせた乾燥重量が前記組成物の少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％であるか、または前記組成物中の糖または糖誘導体の全量が乾燥重量で少なくとも９０％、好ましくは乾燥重量で少なくとも９５％である、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
緩衝剤を含む、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
６〜８のｐＨを有する、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物の希釈の後、少なくとも２４時間の間、２ｍｍｏｌ／ｌ未満のレベル、および／または少なくとも０．１ｍｍｏｌ／ｌのレベルで過酸化水素の持続放出を提供する、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
前記酵素がグルコースオキシダーゼであり、前記酵素のための前記基質がＤ−グルコースである、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
無菌であり、任意選択で、照射、好ましくはガンマ線照射への曝露によって、より好ましくは１０〜７０ｋＧｙで、さらにより好ましくは２５〜７０ｋＧｙで、最も好ましくは３５〜７０ｋＧｙで滅菌されている、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
無菌であり、電子線照射への曝露によって、好ましくは１０〜１００ｋＧｙで、より好ましくは３５〜８０ｋＧｙで滅菌されている、請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
実質的に過酸化水素を含まない、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
前記酵素のための前記基質が前記溶質であるか、または前記酵素のための前記基質が前記溶質とは異なる、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
実質的に酸化亜鉛を含まない、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
実質的にカタラーゼを含まない、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
実質的にペルオキシダーゼを含まない、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９】
医薬グレードの組成物である、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
２５〜２０００ｐｐｍの前記酵素を含む、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項２１】
２５０〜１５００ｐｐｍの前記酵素を含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
ハチミツを含まない、前記請求項のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
医薬としての使用のための、請求項１から２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
微生物感染の予防、処置、または改善における使用のための、請求項１から２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２５】
創傷の処置における使用のための、請求項１から２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２６】
創傷を被覆するための被覆材料と、請求項１から２２のいずれかに記載の組成物とを含む創傷被覆材。
【請求項２７】
抗微生物活性を発生させるための組成物を製造するための方法であって、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素を、前記酵素のための精製された基質、および少なくとも１つの糖または糖誘導体の形態の溶質と接触させるステップを含み、前記溶質が２０℃、１気圧で１００ｇ／１００ｇ水を超える溶解度を有し、
前記組成物が、前記酵素が前記基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない、方法。
【請求項２８】
前記酵素、基質および溶質が、乾燥形態、好ましくは粉末形態で互いに接触する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記組成物が、液体または溶液の形態であり、前記基質、溶質および酵素が、水に溶解している、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
請求項１から２６のいずれかに記載の組成物または創傷被覆材を滅菌する方法であって、前記組成物または被覆材を、照射、好ましくはガンマ線照射または電子線照射に、好ましくは１０〜７０ｋＧｙ、より好ましくは２５〜７０ｋＧｙ、最も好ましくは３５〜７０ｋＧｙで曝露するステップを含む、方法。
【請求項３１】
抗微生物溶液を形成する方法であって、請求項１から２２のいずれかに記載の組成物を、前記酵素が前記基質を変換することを可能にするために十分な自由水が存在するように水溶液中で希釈するステップを含む、方法。
【請求項３２】
３０ｇ／ｌ〜１５０ｇ／ｌ、５０〜１００ｇ／ｌまたは６５〜７５ｇ／ｌの前記組成物を含有する溶液を形成するために、前記組成物を希釈するステップを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
請求項３１または３２に記載の方法によって得られた、または得られ得る溶液。
【請求項３４】
過酸化水素が、少なくとも１０μＭ、好ましくは１０〜５０μＭ、より好ましくは２０〜３０μＭの濃度で存在する、請求項３３に記載の溶液。
【請求項３５】
過酸化水素の前記濃度が、形成後、少なくとも１時間、好ましくは少なくとも２時間、より好ましくは少なくとも１０時間、さらにより好ましくは少なくとも２４時間、維持される、請求項３４に記載の溶液。
【請求項３６】
基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、前記酵素のための精製された基質、２０℃、１気圧で少なくとも１００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する糖または糖誘導体の形態の溶質、および前記酵素が前記基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含む組成物であって、過酸化水素が、少なくとも１０μＭ、好ましくは１０〜５０μＭ、より好ましくは２０〜３０μＭの濃度で存在する、組成物。
【請求項３７】
過酸化水素の前記濃度が、形成後、少なくとも１時間、好ましくは少なくとも２時間、より好ましくは少なくとも１０時間、さらにより好ましくは少なくとも２４時間、維持される、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
バイオフィルムを含む微生物感染の処置における使用のための、請求項３３から３７のいずれかに記載の溶液または組成物。
【請求項３９】
前記微生物感染がＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ、ＭＲＳＡまたはＭＳＳＡを含む、請求項３８に記載の使用のための溶液または組成物。
【請求項４０】
慢性副鼻腔炎の処置における使用のための、請求項３３から３７のいずれかに記載の溶液または組成物。
【請求項４１】
バイオフィルムを含む感染の処置における使用のための、請求項１から２２または３３から３７のいずれかに記載の溶液または組成物であって、前記組成物が抗生物質とともに投与され、任意選択で前記抗生物質がコアモキシクラブであり、および／または任意選択で前記感染がＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａを含む、溶液または組成物。
【請求項４２】
前記投与が組合せ、同時、または逐次的である、請求項４１に記載の使用のための溶液または組成物。
【請求項４３】
抗生物質を含み、任意選択で前記抗生物質がコアモキシクラブである、請求項１から２２または３３から３７のいずれかに記載の溶液または組成物。
【請求項４４】
請求項１から２２または３３から３７のいずれかに記載の組成物または溶液と、別々に抗生物質とを含むキット。
【請求項４５】
アフタ性潰瘍または地図状舌の処置における使用のための、請求項１から２２または３３から３７のいずれかに記載の溶液または組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は抗微生物活性を発生させるための組成物、特に過酸化水素を発生させることができる組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ハチミツは古代より微生物感染の処置のために使用されてきた。近年、特に創傷治癒の分野におけるハチミツの治療有効性に対する興味が復活してきた。ハチミツがＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓおよびＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ等の一般的な創傷感染生物に対して有効な、効果的な広域スペクトラムの抗微生物剤であり、細菌の抗生物質耐性株に対して有効であることが臨床試験によって示された。ハチミツは天然産物であるので、薬物による処置に対する魅力的な選択肢を提供している。
【０００３】
多くの異なった種類のハチミツが抗微生物活性を有している。この活性は主として浸透圧、ｐＨ、過酸化水素の産生、および植物化学成分の存在に帰せられる。
【０００４】
本出願人は、ハチミツの抗微生物効果がグルコースオキシダーゼをハチミツに添加することによって大きく向上し、制御され得ること、およびハチミツと添加したグルコースオキシダーゼを含む組成物が多くの感染の処置、特にバイオフィルムによって引き起こされる感染の処置に適用できることを認識した（ＷＯ２０１５／１６６１９７、ＷＯ２０１６／０８３７９８およびＷＯ２０１６／１２４９２６を参照）。
【０００５】
しかし、ハチミツは天然産物であるので、その組成はその供給源によって大きく変動し得る。例えば、ハチミツの間での抗微生物有効性の相違はハチミツの地理的、季節的、および植物学的供給源、ならびに収穫、加工、および保存条件によって１００倍を超えることがある。したがって、抗微生物有効性は使用したハチミツの種類によっても変動し得る。さらにハチミツはアレルゲン、例えば微量の花粉等の他の成分を含有することもあり、これらはある種の対象に適用した際に副反応を引き起こし、ある種の医薬適用に不適当になることがある。
【０００６】
ハチミツはそれが対象への適用に好適な形態であるように加工する必要があり、そのため製造プロセスに費用と複雑さを付け加えることがある。そのような加工にはクリーム化または低温殺菌が含まれ得る。
【０００７】
したがって、ハチミツが提供する抗微生物性の利点のいくつかを提供し、かつその不利益のいくつかを克服する改善された組成物を提供することが望まれている。長期にわたって抗微生物有効性を保持することができる組成物を提供することも望まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第２０１５／１６６１９７号
【特許文献２】国際公開第２０１６／０８３７９８号
【特許文献３】国際公開第２０１６／１２４９２６号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
広い意味では、本発明は、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる酵素、および酵素のための基質を含む組成物を提供する。
【００１０】
広い意味では、本発明は、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる酵素、および酵素のための基質に変換することができる前駆体−基質を含む組成物も提供する。
【００１１】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、および酵素のための精製された基質を含む組成物が提供される。
【００１２】
驚くべきことに、本出願人は、精製された酵素および酵素のための精製された基質を含む組成物が、過酸化水素を発生させることができるハチミツベースの公知の組成物よりも微生物殺滅効果が大きい可能性を見出した。
【００１３】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、および酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体−基質を含む組成物も提供される。
【００１４】
本明細書における「酵素」への言及は、１つまたは複数の酵素を意味する。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる複数の酵素を含んでよい。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、基質を変換して過酸化水素を放出させることができるただ１つの酵素を含んでよい。
【００１５】
本明細書において用語「精製された酵素」は、酵素が生産された際にもともと存在する不純物の少なくともいくつかから酵素が分離された酵素調製物を含んで用いられる。好ましくは、除去されまたは低減された不純物には、除去されなければ酵素が基質を変換して過酸化水素を放出させる能力を妨害するかもしれない不純物が含まれる。
【００１６】
酵素が基質を変換して過酸化水素を放出させることができれば、精製された酵素が高レベルの純度を有していることは必ずしも必要または望ましいわけではないかもしれない。いくつかの状況では、比較的低純度の酵素調製物を使用することが望ましいこともある。好適な純度レベルの例には、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％の純度が含まれる。好ましくは、酵素は少なくとも９０％の純度である。さらにより好ましくは、酵素は少なくとも９９％の純度である。
【００１７】
酵素は組換えまたは非組換え手段によって産生されたものでよく、組換えまたは非組換え酵素であってよい。酵素は微生物源から、好ましくは遺伝子改変されていない微生物から精製されてよい。
【００１８】
酵素の純度のレベルは組成物の意図された用途に応じて適切に選択してよい。医学用途には、医用グレードまたは医用デバイスグレードの純度を用いるべきである。医薬用途には、医薬グレードの純度を用いるべきである。
【００１９】
本発明の組成物は、特定のレベルまたは濃度で過酸化水素を持続放出させるために十分な酵素および基質（または前駆体基質）を含んでよい。
【００２０】
本発明の組成物は、任意選択で組成物の希釈の後、少なくとも２４時間の間、２ｍｍｏｌ／ｌ未満のレベルで過酸化水素を持続放出させるために十分な酵素および基質（または前駆体基質）を含んでよい。
【００２１】
本発明の組成物は、少なくとも２４時間、より好ましくは４８時間の間、少なくとも０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１または１．５ｍｍｏｌ／ｌの過酸化水素を持続放出させるために十分な酵素および基質（または前駆体基質）を含んでよい。
【００２２】
したがって、いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、少なくとも２４時間、より好ましくは４８時間の間、０．１〜２ｍｍｏｌ／ｌの過酸化水素の持続放出を提供するために十分な酵素および基質（または前駆体基質）を含んでよい。
【００２３】
例えばいくつかの実施形態では、本発明の組成物は少なくとも２ｐｐｍ、少なくとも５ｐｐｍ、少なくとも１０ｐｐｍ、少なくとも２０ｐｐｍまたは少なくとも５０ｐｐｍの濃度で過酸化水素の持続放出を提供し得る。好ましい実施形態では、レベルは少なくとも２ｐｐｍであってよい。いくつかの実施形態では、濃度は最大５００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ、５０ｐｐｍ、２０ｐｐｍまたは１０ｐｐｍであってよい。好ましい実施形態では、レベルは２０ｐｐｍまたはそれ未満であってよい。さらにより好ましい実施形態では、レベルは１０ｐｐｍまたはそれ未満であってよい。例えば、濃度は１０〜５００ｐｐｍ、２０〜２００ｐｐｍまたは５０〜１００ｐｐｍ、２〜５０ｐｐｍ、２〜２０ｐｐｍまたは５〜１０ｐｐｍであってよい。酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を組成物が含まない場合（例えば組成物が乾燥したまたは乾燥された組成物である場合）には、組成物が水で希釈され、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水が存在する場合にのみ、過酸化水素の産生が起こり得る。したがって水の添加によって過酸化水素の産生が開始され得る。本発明の組成物は少なくとも１時間、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日、または少なくとも４日、過酸化水素の持続放出を提供し得る。好ましくは、過酸化水素のレベルは少なくとも４日持続する。好ましい実施形態では、過酸化水素のレベルは少なくとも１時間、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日、または少なくとも４日、１０〜５００ｐｐｍで持続する。他の実施形態では、過酸化水素のレベルは少なくとも１時間、少なくとも１２時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日、または少なくとも４日、５０〜１００ｐｐｍで持続する。他の実施形態では、過酸化水素のレベルは少なくとも１２時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日、または少なくとも４日、２〜５０ｐｐｍで持続する。他の実施形態では、過酸化水素のレベルは少なくとも１２時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日、または少なくとも４日、５〜１０ｐｐｍで持続する。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は少なくとも２４時間、２〜５００ｐｐｍの過酸化水素の持続放出を提供し得る。
【００２４】
本発明の組成物は２５〜２０００ｐｐｍの酵素、例えば５０〜１０００ｐｐｍの酵素を含んでよい。本発明の組成物は７５０〜２０００ｐｐｍの酵素を含んでよい。本発明の組成物は５００ｐｐｍを超える酵素を含んでよい。本発明の組成物は２５０〜１５００ｐｐｍの酵素を含んでよい。
【００２５】
酵素活性（例えばグルコースオキシダーゼ活性）は、例えば１〜４００ＩＵ／ｍｇ、または１〜３００ＩＵ／ｍｇ、例えば２５０〜２８０ＩＵ／ｍｇの範囲であってよい。使用する酵素の量は、組成物の所望の用途、過酸化水素放出の所望のレベル、および過酸化水素放出の所望の期間の長さを含むいくつかの要素による可能性がある。好適な酵素の量は、必要であれば種々の酵素量に対する過酸化水素放出量を決定するウェル拡散アッセイを使用して、当業者によって容易に決定することができる。酵素（グルコースオキシダーゼ等）の好適な量は組成物の０．０００１％〜０．５％ｗ／ｗであってよい。使用する酵素の量は、選択されたフェノール標準（例えば１０％、２０％、または３０％フェノール標準）と等価な抗微生物活性を発生するための組成物を産生するように選択してよい。
【００２６】
本発明の組成物は、組成物１グラムあたり少なくとも１単位で好ましくは１５００単位までの酵素を含んでよい。本明細書において「単位」は、ｐＨ７．０、２５℃で１分あたり１マイクロモルの基質（例えばグルコース）の酸化を引き起こす酵素（例えばグルコースオキシダーゼ）の量として定義される。
【００２７】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、組成物１グラムあたり１５単位を超え、例えば少なくとも３０単位、少なくとも５０単位、または少なくとも１００単位で、好適には６８５単位未満、例えば１００〜５００単位の酵素（例えばグルコースオキシダーゼ）を含む。
【００２８】
本発明の他の実施形態では、本発明の組成物は、組成物１グラムあたり少なくとも５００単位、例えば５００〜１０００単位、または６８５〜１０００単位の酵素（例えばグルコースオキシダーゼ）を含む。
【００２９】
本明細書における「基質」または「前駆体−基質」への言及は、１つもしくは複数の基質または１つもしくは複数の前駆体−基質を意味する。例えば、いくつかの実施形態では、本発明の組成物は複数の基質または前駆体−基質を含んでよい。いくつかの実施形態では、本発明の組成物はただ１つの基質またはただ１つの前駆体−基質を含んでよい。
【００３０】
本明細書において用語「精製された基質」または「精製された前駆体−基質」は、基質または前駆体−基質が得られまたは生産された際にもともと存在する不純物の少なくともいくつかから基質または前駆体−基質が分離された基質または前駆体−基質調製物を含んで用いられる。精製された基質または前駆体−基質は天然源から得られ、または合成により生産され得る。精製された基質は加工され、抽出され、または純化された基質または前駆体−基質（即ち不純物または望ましくない要素が加工によって除去された基質または前駆体−基質）であってよい。
【００３１】
酵素が基質を変換して過酸化水素を放出させることができれば、精製された基質または前駆体−基質が高レベルの純度を有していることは必ずしも必要または望ましいわけではないかもしれない。いくつかの状況では、比較的低純度の基質または前駆体−基質調製物を使用することが望ましいこともある。好適な純度レベルの例には、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の純度が含まれる。好ましくは、純度レベルは少なくとも９０％である。さらにより好ましくは、純度は少なくとも９９％である。しかし、いくつかの実施形態では、精製された基質または前駆体−基質は医用グレード、医用デバイスグレード、または医薬グレードの基質であることが望ましいこともある。
【００３２】
特定の実施形態では、精製された基質または前駆体−基質は精製された糖であるか、これを含む。本明細書において用語「糖」は一般式Ｃｍ（Ｈ２Ｏ）ｎを有する炭水化物を意味するように用いられる。精製された糖は天然源から得られ（例えば加工され、抽出され、または純化された天然の糖）、または合成により生産され得る。精製された糖は少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の純度であってよい。好ましくは、純度レベルは少なくとも９０％である。さらにより好ましくは、純度は少なくとも９９％である。精製された糖は医用グレード、医用デバイスグレード、または医薬グレードの糖であってよい。糖は、例えば精製されたＤ−グルコース、ヘキソース、またはＤ−ガラクトースを含んでよい。例えば、精製された糖は医用グレード、医用デバイスグレード、または医薬グレードのＤ−グルコース、ヘキソース、またはＤ−ガラクトースであってよい。
【００３３】
特定の実施形態では、酵素および基質は精製されており、例えば精製されたグルコースオキシダーゼおよび精製されたＤ−グルコース、好適には医用グレード、医用デバイスグレード、または医薬グレードのグルコースオキシダーゼおよびＤ−グルコースである。
【００３４】
好ましくは、本発明の組成物は保存安定性がよい。好ましくは、本発明の組成物は、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない。好ましくは、本発明の組成物は前駆体−基質を基質に変換することを可能にするために十分な自由水を含まない。
【００３５】
代替の実施形態では、本発明の組成物は、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含んでよい。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は前駆体基質を基質に変換することを可能にするために十分な自由水を含んでよい。
【００３６】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、および酵素のための精製された基質を含む組成物であって、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない、組成物が提供される。
【００３７】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、および酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体基質を含む組成物であって、前駆体基質を酵素のための基質に変換することを可能にするか、または酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない、組成物が提供される。
【００３８】
本明細書において用語「保存安定」は、組成物の希釈の後、抗微生物活性を発生させる能力を保持しながら、少なくとも数日、好ましくは少なくとも１週間、より好ましくは少なくとも１または２か月、周囲温度で保存できる組成物を意味するように用いられる。好ましい保存温度は３７℃未満、好ましくは２０〜２５℃である。好ましくは組成物は光への曝露がないように保存される。
【００３９】
過酸化水素は一般に周囲温度では不安定である。本発明の保存安定組成物には十分な自由水が存在しないので、酵素が基質を変換して過酸化水素を放出させることが防止され、それにより周囲温度で長期間、組成物の安定性を維持することが助けられる。酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水が存在しなければ、本発明の保存安定組成物はいくらかの水を含んでよい。好適な水の量は組成物の正確な成分によって変動することになる。しかし、典型的には、本発明の保存安定組成物は、好ましくは２０％（重量で）未満の全含水量、例えば１０％〜１９％の水を含む。
【００４０】
本発明の組成物は１２％（重量で）またはそれ未満の水を含んでよい。
【００４１】
本発明の組成物は１０％（重量で）またはそれ未満の水を含んでよい。
【００４２】
本発明の組成物は５％（重量で）またはそれ未満の水を含んでよい。
【００４３】
本発明の組成物は３％（重量で）またはそれ未満の水を含んでよい。
【００４４】
酵素が基質を変換することを可能にするか、または前駆体−基質の変換を可能にするために十分な自由水を含有しない本発明の組成物については、水は重量で少なくとも２０％、または重量で少なくとも３０％の量で存在してよい。
【００４５】
好ましくは、本発明の組成物は実質的に過酸化水素を含まないか、検出可能な過酸化水素を含まない。例えば、過酸化水素は、好ましくはＱｕａｎｔｏｆｉｘ（登録商標）パーオキサイドテストスティック（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＫ）等の過酸化水素テストストリップを使用して検出できない。例えば、過酸化水素は１ｐｐｍ未満のレベルまたは０．５ｐｐｍ未満のレベルで存在してよい。過酸化水素は０．１ｐｐｍ未満のレベルであってよい。
【００４６】
本発明の組成物は、好ましくは溶質である追加の成分を含んでよい。本明細書における「溶質」への言及は、１つまたは複数の溶質を意味する。例えばいくつかの実施形態では、本発明の組成物は複数の溶質を含んでよい。いくつかの実施形態では、組成物は１つの溶質のみを含んでよい。好ましくは、溶質は水に可溶性である。
【００４７】
溶質は基質もしくは前駆体−基質とは異なってよく、またはいくつかの例では基質もしくは前駆体−基質は溶質と同じであってよい。例えば、組成物はフルクトースおよびフルクトースオキシダーゼを含んでよく、フルクトースは溶質であり、酵素のための基質でもある。別の例では、基質はグルコースであってよく、溶質はフルクトースであってよい。
【００４８】
溶質は、好ましくは精製されており、即ち溶質は、溶質が得られまたは生産された際にもともと存在する不純物の少なくともいくつかから分離されている。精製された溶質は天然源から得られ、または合成により生産され得る。精製された溶質は加工され、抽出され、または純化された基質（即ち不純物または望ましくない要素が加工によって除去された溶質）であってよい。
【００４９】
精製された溶質が高レベルの純度を有していることは必ずしも必要または望ましいわけではないかもしれない。いくつかの状況では、比較的低純度の溶質調製物を使用することが望ましいこともある。好適な純度レベルの例には、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の純度が含まれる。好ましくは、純度レベルは少なくとも９０％である。しかし、いくつかの実施形態では、精製された溶質は医用グレード、医用デバイスグレード、または医薬グレードの溶質であることが望ましいこともある。
【００５０】
溶質は炭水化物であってよい。溶質は多糖であってよい。好ましくは、溶質は糖または糖誘導体である。より好ましくは、溶質は糖である。好適な糖には、オリゴ糖、二糖または単糖が含まれる。好ましくは、糖は二糖または単糖である。特に好ましい実施形態では、糖は単糖である。好適な糖には、フルクトース、グルコース、ガラクトース、シュクロース、マルトースが含まれ得る。特に好ましい実施形態では、糖はフルクトースである。
【００５１】
本明細書において用語「糖誘導体」は、ヒドロキシル基以外の１つまたは複数の置換基の付加によって改変された糖を意味するように用いられる。したがって糖誘導体はアミノ糖、酸性糖、デオキシ糖、糖アルコール、グリコシルアミンおよび糖リン酸塩を包含する。例えば、糖誘導体にはグルコース−６−ホスフェートグルコサミン、グルクロネート（glucoronate）、グルコネート、ガラクトサミン、グルコサミン、シアル酸、デオキシリボースフコース、ラムノースグルクロン酸、ポリオール類（例えばソルビトール、エリスリトール、キシリトール、マニトール、ラクチトールおよびマルチトール）およびシュクラロースが含まれ得る。
【００５２】
本発明の組成物は本明細書に記載するように２つまたはそれより多い溶質を含んでよい。例えば、本発明の組成物は２つまたはそれより多い糖または糖誘導体を含んでよい。組成物は最大２つの溶質、例えば２つの糖もしくは糖誘導体、または最大３つの溶質、例えば３つの糖もしくは糖誘導体を含んでよい。
【００５３】
例えば、本発明の組成物はグルコース、フルクトースおよびシュクロースを含んでよい。
【００５４】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体基質、および少なくとも１つの糖または糖誘導体を含む組成物であって、前駆体−基質を酵素のための基質に変換することを可能にするか、または酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない、組成物が提供される。
【００５５】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための精製された基質、および少なくとも２つの糖または糖誘導体を含む組成物であって、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない、組成物が提供される。
【００５６】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体基質、および少なくとも２つの糖または糖誘導体を含む組成物であって、前駆体−基質を酵素のための基質に変換することを可能にするか、または酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない、組成物が提供される。
【００５７】
溶質は、好ましくは高い水溶性、例えばグルコースより高い溶解度を有する。グルコースは２０℃、１気圧で９０ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する。好ましい実施形態では、溶質は２０℃、１気圧で１００ｇ／１００ｇ水またはそれより高い溶解度を有し、より好ましい実施形態では、溶質は２０℃、１気圧で２００ｇ／１００ｇ水またはそれより高い溶解度を有し、さらにより好ましい実施形態では、溶質は２０℃、１気圧で３００ｇ／１００ｇ水より高い溶解度を有する。
【００５８】
本発明の組成物が溶液である場合、溶液を高濃度の溶質を含むようにすることが可能であり、それにより高い浸透圧または浸透強度が得られ得るので、溶解度の高い溶質が有利であり得る。高い浸透圧または浸透強度を有する組成物は、微生物が利用できる水の量を低減し、または微生物から水を引き離すことができるので、組成物の抗微生物有効性を補助することができ、創傷治癒および創傷デブリードマンを助けることができる。
【００５９】
フルクトースは２０℃、１気圧で約３７５ｇ／１００ｇ水の溶解度を有しているので、特に好ましい溶質である。したがって、溶質はフルクトースであってよい。
【００６０】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための精製された基質、および２０℃、１気圧で少なくとも１００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する溶質を含む組成物であって、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない、組成物が提供される。
【００６１】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体−基質、および２０℃、１気圧で少なくとも１００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する溶質を含む組成物であって、前駆体−基質を酵素のための基質に変換することを可能にするか、または酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない、組成物が提供される。
【００６２】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための精製された基質、および２０℃、１気圧で少なくとも１００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する糖または糖誘導体を含む組成物であって、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない、組成物が提供される。
【００６３】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体−基質、および２０℃、１気圧で少なくとも１００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する糖または糖誘導体を含む組成物であって、前駆体基質を酵素のための基質に変換することを可能にするか、または酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない、組成物が提供される。
【００６４】
他の実施形態では、糖または糖誘導体は２０℃、１気圧で少なくとも２００ｇ／１００ｇ水、または２０℃、１気圧で少なくとも３００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有してよい。
【００６５】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための精製された基質、および精製されたフルクトースを含む組成物であって、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない、組成物が提供される。
【００６６】
本発明によれば、精製されたグルコースオキシダーゼ、精製されたグルコース、および精製されたフルクトースを含む組成物であって、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない、組成物が提供される。
【００６７】
本発明の組成物は、乾燥形態または固体形態であってよい。例えば、組成物は粉末の形態であってよい。
【００６８】
組成物が乾燥形態である場合には、溶質（例えば糖または糖誘導体）は重量で組成物の少なくとも６０％であってよい。基質は重量で組成物の少なくとも３０％であってよい。
【００６９】
乾燥した組成物は対象に直接、例えば創傷の部位に適用してよい。したがって、創傷部位、または適用の部位に存在する流体は組成物を希釈し、酵素が基質を変換して過酸化水素の産生を開始するために十分な自由水が提供され得る。あるいは、乾燥した組成物が最初に水に添加されて過酸化水素の産生が開始され、次いで対象に適用され得る。
【００７０】
本発明の組成物は溶液または液体の形態でよい。
【００７１】
液体または溶液である本発明の組成物は、重量で少なくとも７０％の基質および溶質（例えば溶質は糖または誘導体である）、より好ましくは重量で少なくとも７５％の基質および溶質（例えば溶質は糖または誘導体である）、さらにより好ましくは重量で少なくとも８０％の基質および溶質（例えば溶質は糖または誘導体である）を含んでよい。例えば好ましい実施形態では、組成物はグルコースおよびフルクトースを含む。好ましくは、グルコースおよびフルクトースは重量で少なくとも８０％の総量で存在する。
【００７２】
いくつかの実施形態では、２０℃、１気圧で少なくとも１００ｇ／１００ｇ水、２０℃、１気圧で少なくとも２００ｇ／１００ｇ水または２０℃、１気圧で少なくとも３００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する溶質は、精製された基質であってよい。したがって、例えば本発明の組成物はフルクトースおよびフルクトースオキシダーゼを含んでよい。
【００７３】
したがって、本発明の組成物は溶質であり基質であるただ１つの糖または糖誘導体と、基質を変換して過酸化水素を発生させる１つの酵素とを含んでよい。
【００７４】
いくつかの実施形態では、２０℃、１気圧で少なくとも１００ｇ／１００ｇ水、２０℃、１気圧で少なくとも２００ｇ／１００ｇ水または２０℃、１気圧で少なくとも３００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する溶質は、精製された基質と異なってよい。例えば、本発明の組成物はグルコース、グルコースオキシダーゼおよびフルクトースを含んでよい。
【００７５】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための精製された基質、および２０℃、１気圧で少なくとも１００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する溶質を含む液体または溶液である組成物であって、組成物が、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まず、基質および溶質が重量で組成物の少なくとも７０％、より好ましくは重量で少なくとも７５％、または最も好ましくは重量で少なくとも８０％を提供する、組成物が提供される。
【００７６】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体−基質、および２０℃、１気圧で少なくとも１００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する溶質を含む液体または溶液である組成物であって、組成物が前駆体−基質を酵素のための基質に変換することを可能にするか、または酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まず、基質および溶質が重量で組成物の少なくとも７０％、より好ましくは重量で少なくとも７５％、または最も好ましくは重量で少なくとも８０％を提供する、組成物が提供される。
【００７７】
他の実施形態では、溶質は２０℃、１気圧で少なくとも２００ｇ／１００ｇ水、またはより好ましくは２０℃、１気圧で少なくとも３００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する。
【００７８】
本発明の組成物が２０℃、１気圧で少なくとも１００ｇ／１００ｇ水、２０℃、１気圧で２００ｇ／１００ｇ水または２０℃、１気圧で３００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する溶質（例えばフルクトース）を含む場合には、好ましくはその溶質は少なくとも４０％、好ましくは少なくとも５０％の量で存在する。精製された基質（例えばグルコース）は本発明の組成物中に、重量で少なくとも２０％、好ましくは重量で少なくとも２５％、より好ましくは重量で少なくとも３０％の量で存在してよい。したがって、１つの例では、溶質（例えばフルクトース）は重量で４０〜６０％の量で存在し、基質（例えばグルコース）は重量で２０〜４０％の量で存在する。別の例では、基質（例えばグルコース）は重量で２５〜３５％の量で存在し、溶質（例えばフルクトース）は重量で４５〜５５％の量で存在する。
【００７９】
好ましい実施形態では、精製された基質は糖または糖誘導体（例えばグルコース）であり、溶質は糖または糖誘導体（例えばフルクトース）である。
【００８０】
液体または溶液である本発明の組成物は、重量で少なくとも７０％の糖または糖誘導体、より好ましくは重量で少なくとも７５％の糖または糖誘導体、さらにより好ましくは重量で少なくとも８０％の糖または糖誘導体を含んでよい。例えば、好ましい実施形態では、組成物はグルコースおよびフルクトースを含む。好ましくは、グルコースおよびフルクトースは重量で組成物の少なくとも８０％の量で存在する。
【００８１】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための精製された基質を含む液体または溶液である組成物であって、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まず、重量で少なくとも７０％の糖もしくは糖誘導体、より好ましくは重量で少なくとも７５％の糖もしくは糖誘導体、または最も好ましくは重量で少なくとも８０％の糖もしくは糖誘導体を含む、組成物が提供される。
【００８２】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための精製された前駆体−基質を含む液体または溶液である組成物であって、前駆体−基質を酵素のための基質に変換することを可能にするか、または酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まず、重量で少なくとも７０％の糖もしくは糖誘導体、より好ましくは重量で少なくとも７５％の糖もしくは糖誘導体、または最も好ましくは重量で少なくとも８０％の糖もしくは糖誘導体を含む、組成物が提供される。
【００８３】
好ましくは、組成物は少なくとも２つの糖または糖誘導体（例えばグルコースおよびフルクトースを含む）を含む。組成物は最大で２つの糖または糖誘導体（例えばグルコースおよびフルクトースのみ）を含んでよい。
【００８４】
溶液または液体である本発明の組成物中、水は重量で２０％未満であるが、好ましくは重量で１０％を超え、より好ましくは重量で１５％を超える量で存在してよい。例えば、水は重量で１０〜２０％の間の量、または重量で１０〜２０％の量で存在してよい。
【００８５】
本発明の組成物は緩衝剤を含んでよい。好適な緩衝剤の例は５０ｍＭｏｌクエン酸／ＮａＯＨ緩衝剤等のクエン酸／ＮａＯＨ緩衝剤である。本発明の組成物は５またはそれ未満、例えば３〜５（ｐＨ約４等）のｐＨで緩衝されてよい。あるいは、本発明の組成物は５を超え、例えば６〜８（ｐＨ約７等）のｐＨで緩衝されてよい。
【００８６】
本発明の組成物は２０℃で少なくとも５０００ｍＰａｓ、より好ましくは２０℃で少なくとも７５００の動粘度等の粘度を有してよい。本発明の組成物は２０℃で５０００〜２００００ｍＰａｓ、より好ましくは２０℃で７５００〜１２０００ｍＰａｓの粘度を有してよい。粘稠な溶液または液体は高濃度の糖または糖誘導体によって得られ、同様の粘度をハチミツに提供し得る。高粘度は組成物が創傷との接触を保つことを可能にするために有利であり得る。あるいは、粘稠な溶液または液体は、例えば非水溶媒、ポリマーまたは本明細書に記載するハイドロコロイドゲル化剤の存在によって得ることができる。
【００８７】
本発明の組成物は乾燥重量で合わせて少なくとも９０％の基質および溶質（好ましくは糖または糖誘導体）を含んでよい。本発明の組成物は乾燥重量で合わせて少なくとも９５％の基質および溶質（好ましくは糖または糖誘導体）を含んでよい。
【００８８】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための精製された基質、および溶質（好ましくは糖または糖誘導体）を含む組成物であって、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まず、乾燥重量で合わせて少なくとも９０％の基質および溶質を含む、組成物が提供される。
【００８９】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体−基質、および溶質（好ましくは糖または糖誘導体）を含む組成物であって、前駆体−基質を酵素のための基質に変換することを可能にするか、または酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まず、乾燥重量で合わせて少なくとも９０％の基質および溶質を含む、組成物が提供される。
【００９０】
本発明の組成物は乾燥重量で少なくとも９０％の糖または糖誘導体を含んでよい。本発明の組成物は乾燥重量で少なくとも９５％の糖または糖誘導体を含んでよい。
【００９１】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための精製された基質を含む組成物であって、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まず、乾燥重量で少なくとも９０％（好ましくは少なくとも９５％）の糖または糖誘導体を含む、組成物が提供される。
【００９２】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体−基質を含む組成物であって、前駆体−基質を酵素のための基質に変換することを可能にするか、または酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まず、乾燥重量で少なくとも９０％（好ましくは少なくとも９５％）の糖または糖誘導体を含む、組成物が提供される。
【００９３】
本発明の組成物は乾燥重量で少なくとも６０％の溶質（例えば糖または糖誘導体）を含んでよい。基質は乾燥重量で組成物の少なくとも３０％であってよい。
【００９４】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための精製された基質、および溶質（好ましくは糖または糖誘導体）を含む組成物であって、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まず、乾燥重量で少なくとも６０％の溶質および／または乾燥重量で少なくとも３０％の基質を含む、組成物が提供される。
【００９５】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体−基質、および溶質（好ましくは糖または糖誘導体）を含む組成物であって、前駆体−基質を酵素のための基質に変換することを可能にするか、または酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まず、乾燥重量で少なくとも６０％の溶質および／または乾燥重量で少なくとも３０％の前駆体−基質を含む、組成物が提供される。
【００９６】
前駆体−基質を含む本発明の組成物については、組成物は、好ましくは前駆体−基質を酵素のための基質に変換するための１つまたは複数の精製された酵素を含む。しかし、いくつかの実施形態では、前駆体−基質は必ずしも酵素によって基質に変換されなくてもよい。例えばいくつかの前駆体基質については、水の添加が変換に十分であることもある。あるいはまたはさらに、本発明の組成物は非酵素触媒を含んでよい。
【００９７】
したがって、前駆体−基質を含む本発明の組成物は、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる第１の酵素、および前駆体−基質を第１の酵素のための基質に変換することができる第２の酵素を含んでよい。
【００９８】
前駆体−基質は、好ましくは多糖、または糖、例えば二糖、または糖誘導体等の炭水化物である。
【００９９】
例えば、前駆体−基質はシュクロースであってよく、第１の酵素はグルコースオキシダーゼであってよく、第２の酵素はインベルターゼであってよい。
【０１００】
別の例では、前駆体−基質はマルトースであってよく、第１の酵素はグルコースオキシダーゼであってよく、第２の酵素はマルターゼであってよい。
【０１０１】
前駆体−基質を含む本発明の組成物は、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる酵素（好ましくは精製された酵素）および前駆体−基質を第１の酵素のための基質に変換することができる少なくとも２つの酵素（例えば第２および第３の酵素、好ましくは精製された酵素）を含んでよい。
【０１０２】
例えば、前駆体−基質はデンプンであってよく、第１の酵素はグルコースオキシダーゼであってよく、第２および第３の酵素はアミラーゼおよびマルターゼであってよい。
【０１０３】
例えば、前駆体−基質はセルロースであってよく、第１の酵素はグルコースオキシダーゼであってよく、第２および第３の酵素はセルロースおよびベータ−グルコシダーゼであってよい。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、酵素によって変換されて過酸化水素を発生させることができる基質と、基質に変換することができる前駆体−基質の両方を含んでよい。基質と前駆体基質とを合わせた重量は、乾燥重量で組成物の少なくとも３０％であってよい。基質と前駆体−基質と溶質とを合わせた乾燥重量は、組成物の少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％であってよい。
【０１０５】
本発明の組成物は、好ましくは実質的に酸化亜鉛を含有しない。本発明の組成物は、好ましくは本質的に酸化亜鉛を含有しない。
【０１０６】
本発明の組成物は、好ましくは実質的にカタラーゼを含有する。本発明の組成物は、好ましくは本質的にカタラーゼを含有する。
【０１０７】
本発明の組成物は、好ましくは実質的にペルオキシダーゼを含有しない。本発明の組成物は、好ましくは本質的にペルオキシダーゼを含有しない。
【０１０８】
本発明の組成物は液体の粘度を増大させ、その他の特性を実質的に変化させない増粘剤またはゲル化剤を含んでよい。好適なゲル化剤または増粘剤には、ヒドロキシエチルセルロースまたはハイドロコロイドが含まれる。
【０１０９】
本発明の組成物は、好ましくは純化されていない物質を含まない。本明細書において用語「純化されていない」は、純粋な形態に加工されていない物質を意味するように用いられる。純化されていない物質には、例えば乾燥または煮沸によって濃縮されていてもよい物質が含まれる。
【０１１０】
本発明の組成物は、好ましくは天然源からの１つまたは複数の基質（本明細書で「天然物質」と称する）を含まない。天然物質の例には、樹液、根、花蜜、花、種、果実、葉、または芽からのものを含む植物源からの物質が含まれる。
【０１１１】
好ましくは、本発明の組成物は純化されていない天然物質を含まない。例えば、本発明の組成物は、好ましくはハチミツを含まない。
【０１１２】
本発明の組成物は少なくとも１つの好適な抗微生物もしくは免疫刺激成分、賦形剤もしくはアジュバント、または抗微生物活性を発生させる能力を提供するために望まれる任意の他の好適な成分を含んでよい。しかし、好ましくは、組成物は抗生物質を何ら含まない。
【０１１３】
本発明の組成物は抗生物質を含んでよい。好適な抗生物質はコアモキシクラブであり得る。本発明の組成物をコアモキシクラブ等の抗生物質とともに投与することによって、バイオフィルム、例えばＮＴＨｉを含むバイオフィルムの処置等において相乗効果が得られ得る。
【０１１４】
本発明によれば、感染（バイオフィルムを含む感染等）の処置における使用のための本明細書で定義した組成物であって、抗生物質とともに投与される、組成物が提供され得る。感染にはＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ（例えば分類不能型ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ、ＮＴＨｉ）が含まれ得る。抗生物質はコアモキシクラブであってよいが、他の抗生物質も使用できる。投与は組合せ、同時、または逐次的であってよい。
【０１１５】
本発明によれば、本発明の組成物と、別々に抗生物質（例えばコアモキシクラブ）とを含むキットが提供される。
【０１１６】
本発明の組成物はポリマーを含んでよい。組成物中のポリマーは、任意の食品医薬品局承認（ＦＤＡ承認）ポリマー等の任意の医療用に許容されるポリマーであってよい。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、ポリマーは合成ポリマーであってよい。いくつかの実施形態では、ポリマーは天然ポリマーである。
【０１１８】
任意選択で、ポリマーは水溶性である。ポリマーは有機溶媒または非水溶媒に可溶性であってよい。ポリマーは水性溶媒および非水溶媒の混合物に可溶性であってよい。ポリマーは生物分解性または生物侵食性であってよい。ポリマーはコポリマーであってよい。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、ポリマーはポリエチレンオキシド（またはポリエチレングリコール）、ポリビニルアルコールおよびポリビニルピロリドンから選択される。
【０１２０】
他のポリマーにはポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリカプロラクトンまたはポリマー性界面活性剤が含まれ得る。別の好適なポリマーはホスフィノカルボン酸（ＰＣＡ）であり得る。
【０１２１】
さらなるポリマーにはセルロース（これにはヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロース等の誘導体が含まれる）等の多糖類、アルギネート、ゼラチンまたはシクロデキストリンが含まれ得る。好適なポリマーにはキトサンまたはヒアルロン酸も含まれ得る。
【０１２２】
本発明の組成物は重量で５０％、２５％、１０％または５％までのポリマーを含んでよい。例えば、組成物は重量で０．５〜３％のポリマーを含んでよい。任意選択で、ポリマーは重量で組成物の０．５〜５０％であってよい。
【０１２３】
本発明の組成物は電界紡糸可能であってよい。
【０１２４】
本発明によれば、本発明の電界紡糸可能な組成物を電界紡糸するステップを含む、繊維を生産する方法も提供される。
【０１２５】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、およびｉ）酵素のための精製された基質、またはｉｉ）酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体基質を含む繊維、好ましくはナノ繊維が提供される。繊維は、好ましくは、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない。繊維は本明細書に記載する１つまたは複数の溶質を含んでよい。
【０１２６】
本発明によれば、本発明の１つまたは複数の繊維を含む創傷被覆材またはナノ繊維マットも提供される。
【０１２７】
電界紡糸可能な組成物は溶液であってよい。溶液中の溶媒は水であってもよく、水を含んでもよい。溶媒は水性溶媒および／または有機溶媒等の非水溶媒を含んでよい。
【０１２８】
電界紡糸可能な組成物は１つまたは複数の電界紡糸可能な成分を含んでよい。本発明の繊維または被覆材の形成を促進する任意の電界紡糸可能な成分が好適であり得る。好ましくは、１つまたは複数の電界紡糸可能な成分は電界紡糸可能なポリマーである。いくつかの実施形態では、ポリマーは合成ポリマーであってよい。いくつかの実施形態では、ポリマーは天然ポリマーである。いくつかの実施形態では、電界紡糸可能なポリマーはポリエチレンオキシド、ポリビニルアルコールおよびポリビニルピロリドンから選択される。他のポリマーにはポリカプロラクトンまたはホスフィノカルボン酸（ＰＣＡ）が含まれ得る。
【０１２９】
電界紡糸可能な成分は、好ましくは生体親和性である。任意選択で、電界紡糸可能な成分は水溶性である。電界紡糸可能な成分は有機溶媒または非水溶媒に可溶性であってよい。電界紡糸可能な成分は水性溶媒および非水溶媒の混合物に可溶性であってよい。好適な非水溶媒はグリセロール、ジメチルスルホキシド、エチレングリコールまたはプロピレングリコールであってよく、これらを含んでもよい。
【０１３０】
電界紡糸可能な組成物は電界紡糸可能な成分を重量で５０％、２５％、１０％または５％まで含んでよい。任意選択で、電界紡糸可能な成分は重量で組成物の１〜５０％であってよい。電界紡糸可能な成分は純化されていない天然物質を重量で３０％、２０％または１０％まで含んでよい。
【０１３１】
電界紡糸可能な成分と溶媒の相対量は、繊維の特性を変化させるために変動してもよいことが認識されよう。
【０１３２】
電界紡糸可能な成分から形成された繊維は、純化されていない天然物質を重量で８０％まで含んでよい。繊維は電界紡糸可能な成分を重量で２０％またはそれより多く含んでよい。
【０１３３】
本発明の組成物は塩を含んでよい。あるいは、塩を組成物の残りの成分と分離してキットの中に提供してもよい。したがって、本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる酵素および酵素のための基質を含む物質を含む抗微生物活性を発生させるための組成物と、別々に塩とを含むキットも提供される。キットは例えばキットの成分の混合、ならびに微生物感染を処置するためのそれらの使用のための使用説明書をさらに含んでよい。
【０１３４】
塩は乾燥形態または水溶液で提供してよい。塩は塩化ナトリウムを含んでよい。
【０１３５】
乾燥形態の組成物は、例えば１：２〜５：１、または２：３〜３：２の、抗微生物活性を発生させるための組成物の塩に対する比を含んでよい。
【０１３６】
組成物は、重量で例えば１〜９９％、１〜８０％、１〜７０％、１〜６０％、１〜５０％、１〜４０％、１〜３０％、１〜２０％、または１〜１０％の抗微生物活性を発生させるための組成物を含んでよい。
【０１３７】
組成物は、重量で例えば１〜９９％、１〜８０％、１〜７０％、１〜６０％、１〜５０％、１〜４０％、１〜３０％、１〜２０％、または１〜１０％の塩を含んでよい。
【０１３８】
組成物は水性混合物として提供してよい。水性混合物は等張または高張混合物であってよい。水性混合物は、例えば０．１〜２０％ｗ／ｖの塩、好適には０．２５〜１０％、０．２５〜１０％、０．２５〜５％、０．２５〜３％、０．５〜１０％、０．５〜５％、または０．５〜３％、例えば０．９％ｗ／ｖの塩を含んでよい。水性混合物は、例えば１〜３００％、１〜２５０％、１〜２００％、１〜１５０％、１〜１００％、１〜５０％、１〜４０％、１〜３０％、１〜２０％、または１〜１０％ｗ／ｖの抗微生物活性を発生させるための組成物を含んでよい。水性混合物は、例えば１０〜３００％、１０〜２５０％、１０〜２００％、１０〜１５０％、１０〜１００％、１０〜５０％、１０〜４０％、１０〜３０％、または１０〜２０％ｗ／ｖの抗微生物活性を発生させるための組成物を含んでよい。水性混合物は、例えば５０〜３００％、５０〜２５０％、５０〜２００％、５０〜１５０％、または５０〜１００％ｗ／ｖの抗微生物活性を発生させるための組成物を含んでよい。水性混合物は、例えば０．１〜２０％、０．１〜１０％、０．１〜５％、０．１〜１％ｗ／ｖの重炭酸ナトリウムを含んでよい。
【０１３９】
本発明の組成物、例えば塩を含む組成物は、例えば鼻の微生物感染、副鼻腔炎、鼻炎、ＣＲＳ、鼻アレルギー、風邪もしくはインフルエンザ症状、鼻詰まり、または乾燥を予防しまたは処置するための鼻洗剤として使用され得る。本発明の組成物は微生物感染、例えばバイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む微生物感染を予防しまたは処置するために使用され得る。バイオフィルムを含む微生物感染は鼻の微生物感染であってよく、またはバイオフィルムを形成することができる微生物は鼻の微生物感染の部分であってよい。
【０１４０】
本発明の組成物または混合物を鼻洗剤として使用するためには、重力を助けとしてこれを一方の鼻孔に滴下して他方から流出させることができ、その間、呼吸のために口を開けたままにしておく。あるいは、洗浄を促進するためにある形態の陽圧を適用してもよい。例えば、任意選択で鼻孔に適合する特別のチップを有する可撓性のプラスチック製ボトルを絞って鼻腔を流れる混合物に陽圧をかけることができ、その間、呼吸しつつ液体が喉を流下することを防ぐために口を常に開けたままにしておく。電動モーターで駆動されるポンプを利用する潅流器も使用可能である。圧力を適用するいくつかの鼻潅流システムは、使用済みの塩水溶液が鼻腔に逆流することを防止するための逆止弁を有している。
【０１４１】
本発明の組成物または混合物は、ネチポット、即ち鼻洗剤を投与するために使用される容器で提供され得る。ネチポットは典型的には金属、ガラス、セラミックまたはプラスチックで作られている。これらは外鼻腔を洗浄するため、ヘッドの位置決めおよび繰り返し実施とともに重力に頼っている。典型的にはこれらは底の付近にスパウトが取り付けられており、時には反対側にハンドルがある。
【０１４２】
本発明の組成物は非水溶媒を含んでよい。非水溶媒を含む本発明の組成物において、非水溶媒にはエタノール、ジメチルスルホキシド、グリセロール、エチレングリコールまたはプロピレングリコールが含まれ得る。好ましくは、非水溶媒はグリセロールであるか、グリセロールを含む。グリセロールは保湿剤として作用することができ、したがってグリセロールを含む組成物は乾燥した皮膚を軟化しまたは湿潤化することを助けることができる。
【０１４３】
種々の非水溶媒の溶解度パラメーターおよび粘度パラメーターを以下の表に示す。
【表１】
2019533661.tif 000002
【表２】
2019533661.tif 000003
【０１４４】
好ましい実施形態では、非水溶媒は以下の表に例示する非水溶媒の範囲内の溶解度パラメーターを有するように選択してよい。例えば、δｔ／ＭＰａ１／２は２６〜５０、例えば２６．５〜４７．８であってよい。δｄ／ＭＰａ１／２は１５〜１９、例えば１５．６〜１８．１であってよい。δｐ／ＭＰａ１／２は８〜１６、例えば８．８〜１６であってよい。δｈ／ＭＰａ１／２は１０〜４５、例えば１０．２〜４２．３であってよい。
【０１４５】
非水溶媒は所望の粘度によって選択してよい。例えば、大きな粘度が望ましい場合には、グリセロールが好ましいことがある。
【０１４６】
非水溶媒を含む組成物の好ましい実施形態では、組成物は重量で少なくとも１０％の非水溶媒を含んでよい。他の実施形態では、組成物は重量で少なくとも２０％の非水溶媒を含んでよい。他の実施形態では、組成物は重量で少なくとも２５％の非水溶媒を含んでよい。他の実施形態では、組成物は重量で少なくとも５０％の非水溶媒を含んでよい。いくつかの実施形態では、組成物は重量で少なくとも７５％の非水溶媒を含んでよい。水性溶媒の量は組成物の意図された用途によって変動し得る。例えば、スプレー可能な組成物、または抗菌ワイプとともに使用するための組成物は、組成物がより低い粘度を有するように、より高レベルの非水溶媒を含んでよい。いくつかの実施形態では、組成物中の非水溶媒の量は重量で５０〜９０％であってよい。
【０１４７】
いくつかの適用のためには、創傷被覆材の形成における使用のための組成物等、非水溶媒の量が少ない組成物を有することが望ましい場合がある。したがって、いくつかの組成物は最大量の非水溶媒を含んでよい。組成物中の非水溶媒の最大量は重量で５０％またはそれ未満であってよい。いくつかの実施形態では、組成物中の非水溶媒の量は重量で１〜５０、５〜５０または１０〜５０％であってよい。
【０１４８】
本発明の組成物が布帛等の基質を被覆するために使用される場合には、組成物の重量は、好ましくは基質１平方ｍあたり少なくとも１００ｇである。他の実施形態では、組成物の重量は基質１平方ｍあたり少なくとも２００ｇであってよい。他の実施形態では、組成物の重量は基質１平方ｍあたり少なくとも３００ｇであってよい。
【０１４９】
本発明の組成物は、典型的には酵素が基質を変換すること、または前駆体−基質を基質に変換することを可能にすることが期待され得る量の水を含んでよい。例えば、本発明の組成物は重量で２０％より多い水、または重量で３０％より多い水を含んでよい。しかし、いくつかの実施形態では、この水は、非水溶媒が水に結合するか、閉じ込め得るので、酵素が基質を変換することを可能にするためには使用できないか、自由にはできない場合がある。したがって非水溶媒は保湿剤として作用することができる。非水溶媒または保湿剤は組成物の水の活量（ａｗ）を低下させ得る。
【０１５０】
したがって、本発明の組成物は保湿剤を含んでよい。いくつかの実施形態では、保湿剤は非水溶媒ではない。しかし、好ましい実施形態では、保湿剤は非水溶媒である。
【０１５１】
粘稠な組成物はその適用範囲を限定することがある。組成物中の非水溶媒または保湿剤の含有によって組成物の粘度が低下することがあり、例えば組成物が容易にスプレー可能であるべき場合には低粘度の組成物の方が有利であり得る。本発明の組成物に好適な粘度は、２０℃で１００ｍＰａ．ｓまたはそれ未満であってよい。いくつかの実施形態では、好適な粘度は２０℃で７５ｍＰａ．ｓまたはそれ未満であってよい。いくつかの実施形態では、好適な粘度は２０℃で５０ｍＰａ．ｓまたはそれ未満であってよい。
【０１５２】
本発明の組成物中の保湿剤または非水溶媒、および追加の水の相対量は、組成物が、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まないように選択してよい。そのような組成物がさらなる水と接触すると、例えば組成物が希釈された場合、または組成物が創傷からの流体と接触した場合、酵素が基質を変換して過酸化水素を産生させるために十分な自由水が存在することがある。
【０１５３】
本発明の組成物中、水の活量（ａｗ）は０．６未満、好ましくは０．５未満であってよい。
【０１５４】
保湿剤または非水溶媒を含む本発明の組成物中、保湿剤または非水溶媒の量は重量で少なくとも３０％であってよい。他の実施形態では、保湿剤または非水溶媒の量は重量で少なくとも４０％であってよい。いくつかの実施形態では、保湿剤または非水溶媒の量は重量で少なくとも５０％であってよい。保湿剤または非水溶媒の量は重量で７５％またはそれ未満であってよい。保湿剤または非水溶媒の量は重量で６０％またはそれ未満であってよい。いくつかの実施形態では、保湿剤または非水溶媒の量は重量で３０〜７５％または４０〜６０％であってよい。
【０１５５】
本発明の組成物は止血剤または血液凝固剤を含んでよい。例えば、本発明の組成物はフィブリノーゲンまたはトロンビン等の１つまたは複数の血液凝固因子を含んでよい。本発明の組成物はキチン等の他の天然産生止血剤を含んでよい。
【０１５６】
あるいは、またはさらに、本発明の組成物はそれぞれに複数のフィブリノーゲン結合ペプチドが固定化された担体を含む薬剤等の合成止血剤を含んでよい。そのような薬剤にはＷＯ２００８／０６５３８８およびＷＯ２０１５／１０４５４４に記載されたものが含まれ得、これらはトロンビンの非存在下でフィブリノーゲンと接触してバイオゲルを形成することができる。
【０１５７】
本発明の組成物は親油性相および水相を含んでよい。
【０１５８】
本発明の組成物はコロイドまたは懸濁液の形態であってよい。
【０１５９】
本明細書において用語「コロイド」は、第２の物質にわたって分散した１つの物質の大分子または超顕微鏡粒子からなる均一な非結晶性物質を意味するように用いられる。コロイドにはゲル、ゾル、およびエマルジョンが含まれる。粒子は沈降せず、懸濁液中の粒子のように通常の濾過または遠心分離によって分離することはできない。
【０１６０】
本明細書において用語「懸濁液」は、物質の小粒子が液体中にわたって分散した混合物を意味するように用いられる。懸濁液を静置しておくと、粒子は底に沈降しやすくなる。懸濁液中の粒子はコロイドまたは溶液中の粒子より大きい。
【０１６１】
本発明の組成物はエマルジョンの形態であってよい。本明細書において用語「エマルジョン」は、溶解または混和しない別の液体中の１つの液体の小滴の微細な分散液を意味するように用いられる。本発明のエマルジョンは油と水のエマルジョン、特に水中油エマルジョン、または油中水エマルジョンであってよい。組成物はマイクロエマルジョンであってよい。
【０１６２】
本発明によれば、第１相（または第１の液体、もしくは第１の成分）および第２相（または第２の液体、もしくは第２の成分）、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、ならびに酵素のための精製された基質を含む組成物が提供される。
【０１６３】
本発明によれば、第１相（または第１の液体、もしくは第１の成分）および第２相（または第２の液体、もしくは第２の成分）、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、ならびに酵素のための基質に変換することができる前駆体−基質を含む組成物が提供される。
【０１６４】
第１相と第２相は非混和性でよい。例えば、第１相は第２相より低極性でよい。第１相は親油性相または疎水性相、例えば油等の非極性相であってよい。第２相は水相等の極性相であってよい。第２相は非水溶媒を含んでよい。第２相の液滴またはミセルは第１相の中に分散していてよい。
【０１６５】
好ましくは、第１相および第２相を含む組成物は、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない。
【０１６６】
本発明によれば、親油性相、水相、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、および酵素のための精製された基質を含む組成物が提供される。
【０１６７】
本発明によれば、親油性相、水相、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、および酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体−基質を含む組成物が提供される。
【０１６８】
本発明によれば、油、エマルシファイヤー、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる酵素、および酵素のための精製された基質を含む組成物が提供される。
【０１６９】
本発明によれば、油、エマルシファイヤー、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる酵素、および酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体−基質を含む組成物が提供される。
【０１７０】
第２相は水および／または非水溶媒を含んでよい。組成物の酵素および物質は水および／または非水溶媒に溶解してよい。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、第２相は水を含んでいなくてもよく、または実質的に水を含んでいなくてもよいことが考えられる。そのような状況では、第２相は非水と記述してもよい。例えば、酵素および酵素のための基質を含む物質を非水溶媒に溶解させてもよい。非水溶媒は第１相、例えば親油性相に対して非混和性であってよい。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる酵素および酵素のための基質を含む物質は、第１相、例えば親油性相の中に分散したミセルの中に含有されていてよい。
【０１７３】
いくつかの組成物では、組成物は二重エマルジョンの形態であってよい。例えば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる酵素および酵素のための基質を含む物質を含有する液滴は親油性相の小球（例えば油の小球）の中に分散していてよく、小球は水相の中に分散していてよい。そのような二重エマルジョンは水中油中水型（Ｗ／Ｏ／Ｗ）エマルジョンと称し得る。
【０１７４】
本発明の組成物は乳化剤（またはエマルシファイヤー）をさらに含んでよい。エマルジョンは、エマルジョン界面における表面活性剤（乳化剤）の吸着によって安定化され得る。乳化剤は界面張力を低下させ、液滴を分散状態に保つ。乳化剤は親水性部分と親油性部分とを有する。水と組み合わせた特定の製剤について物理的に最も安定なエマルジョンを産生するために必要な乳化剤の相対量を計算することが可能である。このアプローチは親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）方法と呼ばれる（「The HLB SYSTEM a time-saving guide to emulsifier selection」、ICI Americas Inc.、Wlimington、Delaware 19897、１９７６年、１９８０年改訂）。それぞれの乳化剤には分子の親油性部分と親水性部分の相対的特性を表すＨＬＢ数が割り当てられる。大きな数（理論値である２０まで）は主として親水性または極性を示す乳化剤を示し、小さな数は親油性または非極性の特徴を表す。ＨＬＢシステムによれば、全ての油脂は必要なＨＬＢを有する。最適の性能を有するエマルジョンはＨＬＢの要求を乳化剤のＨＬＢ値と一致させることによって得ることができる。水中油エマルジョンについては、油相がより極性になれば乳化剤はより極性でなければならない。例えば、ＨＬＢシステムによって要求されるＨＬＢが７である大豆油を乳化するには、ＨＬＢが７±１の乳化剤または乳化剤のブレンドを使用する必要がある。乳化剤のＨＬＢは試行錯誤によって計算しまたは決定することができる。
【０１７５】
したがって、安定な製品を保証するために、本発明の組成物の親油性相は特定のＨＬＢ数を有する乳化剤を必要とし得る。本発明の組成物の親油性相は油またはワックスを含んでよい。本発明の組成物の親油性相における使用のための油およびワックスの例（化粧品成分国際命名法、ＩＮＣＩの名称で）（それぞれの要求されるＨＬＢとともに）には以下が含まれる。
Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  Ｍｏｌｕｃｃａｎａ種油［７］
アーモンド油ＮＦ［６］
無水ラノリンＵＳＰ［１０］
アプリコット仁油［７］
アボカド（Ｐｅｒｓｅａ  Ｇｒａｔｉｓｓｉｍａ）油［７］
ババス油［８］
ビーズワックス［１２］
ルリヂサ（Ｂｏｒａｇｏ  Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）種油［７］
ブラジルナッツ油［８］
Ｃ１２〜１５アルキルベンゾエート［１３］
Ｃａｎｎａｂｉｓ  Ｓａｔｉｖａ種油［７］
キャノーラ油［７］
カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド［５］
ニンジン（Ｄａｕｃｕｓ  Ｃａｒｏｔａ  Ｓａｔｉｖａ）種油［６］
ヒマ（Ｒｉｃｉｎｕｓ  Ｃｏｍｍｕｎｉｓ）油［１４］
セレシン［８］
セテアリルアルコール［１５．５］
セチルアルコール［１５．５］
セチルエステル類［１０］
セチルパルミテート［１０］
ココナツ油［８］
Ｄａｕｃｕｓ  Ｃａｒｏｔａ  Ｓａｔｉｖａ（ニンジン）根抽出物［６］
ジイソプロピルアジペート［９］
ジメチコン［５］
ドッグローズ（Ｒｏｓａ  Ｃａｎｉｎａ）ヒップス油［７］
エミュー油［８］
月見草油［７］
ブドウ（Ｖｉｔｉｓ  Ｖｉｎｉｆｅｒａ）種油［７］
ハイブリッドサフラワー（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ  Ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ）油［９］
イソプロピルミリステート［１１．５］
イソプロピルパルミテート［１１．５］
ホホバ（Ｂｕｘｕｓ  Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）油［６．５］
ラノリン［１０］
マカデミア（Ｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ）ナッツ油［７］
Ｍａｎｇｉｆｅｒａ  Ｉｎｄｉｃａ（マンゴ）種バター［８］
鉱物油［１０．５］
ミリスチルミリステート［８．５］
オリーブ（Ｏｌｅａ  Ｅｕｒｏｐａｅａ）油［７］
Ｏｒｙｚａ  Ｓａｔｉｖａ（コメぬか）油［７］
ピーナツ油ＮＦ［６］
ペトロラタム［７］
ＰＰＧ−１５ステアリルエーテル［７］
レチニルパルミテート［６］
サフラワー（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ  Ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ）油［８］
ゴマ（Ｓｅｓａｍｕｍ  Ｉｎｄｉｃｕｍ）油［７］
シアバター（Ｂｕｔｙｒｏｓｐｅｒｍｕｍ  Ｐａｒｋｉｉ）［８］
大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅ  Ｓｏｊａ）油［７］
ステアリン酸［１５］
ステアリルアルコール［１５．５］
ヒマワリ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  Ａｎｎｕｓ）油［７］
スイートアーモンド（Ｐｒｕｎｕｓ  Ａｍｙｇｄａｌｕｓ  Ｄｕｌｃｉｓ）油［７］
Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ  Ｃａｃａｏ（ココア）種バター［６］
トコフェロール［６］
【０１７６】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物の親油性相はビーズワックスを含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、親油性相は油である。いくつかの実施形態では、油はオリーブ油、コーン油、植物油、ヒマワリ油またはパラフィン油から選択される。好ましい実施形態では、油はオリーブ油であってよい。別の好ましい実施形態では、油はパラフィン油であってよい。
【０１７８】
本発明の組成物における使用のための油中水乳化剤は３〜６の範囲のＨＬＢ値を有してよい。本発明の組成物における使用のための水中油乳化剤は８〜１８の範囲のＨＬＢ値を有してよい。本発明の組成物における使用のための乳化剤の例（ＩＮＣＩの名称で）（そのＨＬＢ数とともに）には以下が含まれる。
カルシウムステアロイルラクチレート［ＨＬＢ＝５．１±１］
Ｃｅｔｅａｒｅｔｈ−２０［ＨＬＢ＝１５．２±１］
セテアリルグルコシド［ＨＬＢ＝１１±１］
Ｃｅｔｅｔｈ−１０［ＨＬＢ＝１２．９±１］
Ｃｅｔｅｔｈ−２［ＨＬＢ＝５．３±１］
Ｃｅｔｅｔｈ−２０［ＨＬＢ＝１５．７±１］
コカミドＭＥＡ［ＨＬＢ＝１３．５±１］
グリセリルラウレート［ＨＬＢ＝５．２±１］
グリセリルステアレート［ＨＬＢ＝３．８±１］
グリセリルステアレート（および）ＰＥＧ−１００ステアレート［ＨＬＢ＝１１±１］
グリセリルステアレートＳＥ［ＨＬＢ＝５．８±１］
グリコールジステアレート［ＨＬＢ＝１±１］
グリコールステアレート［ＨＬＢ＝２．９±１］
Ｉｓｏｃｅｔｅｔｈ−２０［ＨＬＢ＝１５．７±１］
Ｉｓｏｓｔｅａｒｅｔｈ−２０［ＨＬＢ＝１５±１］
ラウラミドＤＥＡ［ＨＬＢ＝１５±１］
Ｌａｕｒｅｔｈ−２３［ＨＬＢ＝１６．９±１］
Ｌａｕｒｅｔｈ−４［ＨＬＢ＝９．７±１］
レシチン［ＨＬＢ＝４±１］
レシチン［ＨＬＢ＝９．７±１］
リノレアミドＤＥＡ［ＨＬＢ＝１０±１］
メチルグルコースセスキステアレート［ＨＬＢ＝６．６±１］
Ｏｌｅｔｈ−１０［ＨＬＢ＝１２．４±１］
Ｏｌｅｔｈ−１０／ポリオキシル１０オレイルエーテルＮＦ［ＨＬＢ＝１２．４±１］
Ｏｌｅｔｈ−２［ＨＬＢ＝４．９±１］
Ｏｌｅｔｈ−２０［ＨＬＢ＝１２．４±１］
Ｏｌｅｔｈ−２０［ＨＬＢ＝１５．３±１］
ＰＥＧ−１００ステアレート［ＨＬＢ＝１８．８±１］
ＰＥＧ−２０アーモンドグリセリド［ＨＬＢ＝１０±１］
ＰＥＧ−２０メチルグルコースセスキステアレート［ＨＬＢ＝１５±１］
ＰＥＧ−２５水素化ヒマ油［ＨＬＢ＝１０．８±１］
ＰＥＧ−３０ジポリヒドロキシステアレート［ＨＬＢ＝５．５±１］
ＰＥＧ−４ジラウレート［ＨＬＢ＝６±１］
ＰＥＧ−４０ソルビタンペルオレエート［ＨＬＢ＝９±１］
ＰＥＧ−６０アーモンドグリセリド［ＨＬＢ＝１５±１］
ＰＥＧ−８ラウレート［ＨＬＢ＝１３±１］
ＰＥＧ−８０ソルビタンラウレート［ＨＬＢ＝１９．１±１］
ポリソルベート２０［ＨＬＢ＝１６．７±１］
ポリソルベート６０［ＨＬＢ＝１４．９±１］
ポリソルベート８０［ＨＬＢ＝１５±１］
ポリソルベート８５［ＨＬＢ＝１１±１］
ステアロイル乳酸ナトリウム［ＨＬＢ＝８．３±１］
ソルビタンイソステアレート［ＨＬＢ＝４．７±１］
ソルビタンラウレート［ＨＬＢ＝８．６±１］
ソルビタンオレエート［ＨＬＢ＝４．３±１］
ソルビタンセスキオレエート［ＨＬＢ＝３．７±１］
ソルビタンステアレート［ＨＬＢ＝４．７±１］
ソルビタンステアレート（および）シュクロースココエート［ＨＬＢ＝６±１］
ソルビタントリオレエート［ＨＬＢ＝１．８±１］
ステアルアミドＭＥＡ［ＨＬＢ＝１１±１］
Ｓｔｅａｒｅｔｈ−２［ＨＬＢ＝４．９±１］
Ｓｔｅａｒｅｔｈ−２１［ＨＬＢ＝１５．５±１］
【０１７９】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物の乳化剤はレシチンを含む。
【０１８０】
乳化剤にはイオン性および非イオン性界面活性剤、ならびに親油性脂肪両親媒性化合物（例えば脂肪アルコールまたは脂肪酸）が含まれる。非イオン性界面活性剤はアニオン性またはカチオン性界面活性剤よりも皮膚刺激が少ない可能性があるので好ましい場合がある。
【０１８１】
他の好適な乳化剤の例には、界面活性剤：ラウリル硫酸ナトリウム、セトリミド、セトマクロゴール１０００、ＰＥＧ１０００モノステアレート、トリエタノールアミンステアレート、ステアリン酸ナトリウム、脂肪両親媒性化合物：セトステアリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、グリセリルモノステアレート、ステアリン酸、ホスファチジルコリンが含まれる。
【０１８２】
市販の乳化ワックスの例には、乳化ワックスＢＰ（セトステアリルアルコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、乳化ワックスＵＳＮＦ（セチルアルコール、ポリソルベート）、カチオン性乳化ワックスＢＰＣ（セトステアリルアルコール、セトリミド）、グリセリルモノステアレートＳ．Ｅ．（グリセリルモノステアレート、ステアリン酸ナトリウム）、セトマクロゴール乳化ワックスＢＰＣ（セトステアリルアルコール、セトマクロゴール１０００）、Ｐｏｌａｗａｘ（セチルアルコール、非イオン性界面活性剤）、レシチン（ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸）が含まれる。
【０１８３】
本発明の組成物における使用のための界面活性剤には、ＴＷＥＥＮ（例えばＴＷＥＥＮ８０）、ＳＰＡＮ（例えばＳＰＡＮ８０）、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ（例えばＰｏｌｏｘａｍｅｒ４０７）およびポリグリセロールポリリシンオレエート（ＰＧＰＲ）の１つまたは複数が含まれてよい。好ましい界面活性剤はＰｏｌｏｘａｍｅｒ４０７等のＰｏｌｏｘａｍｅｒであってよい。別の好ましい界面活性剤はＰＧＰＲであってよい。
【０１８４】
界面活性剤は界面活性ポリマー、またはコポリマーを含んでよい。例えば、好適な界面活性剤は、中央の疎水性ブロックとその両側の２つの親水性ブロックからなるトリブロックコポリマーであってよい。
【０１８５】
本発明の組成物は非水溶媒を含んでよい。非水溶媒は１５を超える誘電定数を有する溶媒等の極性溶媒であってよい。非水溶媒は有機溶媒であってよい。例えば、溶媒はグリセロール、ジメチルスルホキシド、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールであるか、これらを含んでよい。非水溶媒は第１相、例えば親油性相（油等）に対して非混和性であってよい。
【０１８６】
好ましい実施形態では、非水溶媒はグリセロールであるか、グリセロールを含んでよい。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物はミセル、好ましくは逆ミセルを含んでよい。それぞれのミセルの中には酵素および物質（これはハチミツ等の純化されていない天然物質を含んでよい）が存在してよく、ミセルの外側には第１相、例えば親油性相（油等）が存在してよい。それぞれの逆ミセルの中には、水および／または非水溶媒も存在してよい。それぞれのミセルの中には、酵素が基質を変換するために十分な水は存在しなくてよい。
【０１８８】
本発明の組成物は癒合を低減することを助け得るさらなる成分を含んでよい。癒合は、２つまたはそれより多い液滴またはミセルが合体して単一の液滴またはミセルを形成する状況を説明する。癒合を低減または防止するために、界面フィルム、即ち親油性相と水相との間の界面の強度が強化され得る。これは、例えば両親媒性ポリマーを含む界面活性剤の濃度を高めること、および／または５〜７個の炭素原子を有する脂肪族アルコール等のアルコールを加えることによって達成され得る。
【０１８９】
局所的適用のための本発明の組成物は、例えばクリーム、ローション、またはリップバームの形態であってよい。
【０１９０】
本明細書において用語「クリーム」は、局所使用のための水中油、または油中水の半固体エマルジョンを意味するように用いられる。水中油（ｏ／ｗ）クリームは連続した水相の中に分散した油の小滴から構成され、油中水（ｗ／ｏ）クリームは連続した油相の中に分散した水の小滴から構成される。水中油クリームはグリース状でなく、水を使用して容易に洗い流せる。油中水クリームは油性のバリアを提供して皮膚の最外層からの水の損失を低減するので、より湿潤化できる。
【０１９１】
用語「クリーム」は、第１相の液滴が連続した第２相の中に分散した、または第２相の液滴が連続した第１相の中に分散した半固体エマルジョンも意味する場合がある。例えば、第１相は第２相より極性が低くてよい。第１相は親油性相または疎水性相、例えば油等の非極性相であってよい。第２相は水相等の極性相であってよい。第２相は非水溶媒を含んでよい。第２相は水および／または非水溶媒を含んでよい。いくつかの実施形態では、第２相が水を含まず、または実質的に水を含まない場合があることが考えられる。そのような状況では、第２相は非水と記述され得る。非水溶媒は第１相、例えば親油性相に対して非混和性であってよい。
【０１９２】
本明細書において用語「ローション」は、局所的適用のための液体懸濁液またはエマルジョンを意味するように用いられる。ローションは懸濁剤および／もしくは表面活性剤によって懸濁液中に、または１つもしくは複数の表面活性剤によって安定化されたエマルジョン（特に水中油エマルジョン）中に保持された、微細に粉末化された不溶性固体を含んでよい。ローションはクリームよりも低い粘度を有する。
【０１９３】
本明細書において用語「リップバーム」は、口唇に局所適用して、ひび割れたまたは乾燥した唇を湿潤化および緩和するワックス様物質を意味するように用いられる。リップバームは、他の成分の中でも例えばビーズワックスまたはカルナウバワックス、樟脳、セチルアルコール、ラノリン、パラフィン、およびペトロラタムを含んでよい。
【０１９４】
本発明の組成物中の親油性相の水相に対する比、または第１相の第２相に対する比は、９：１〜１：９、８：１〜１：８、７：１〜１：７、６：１〜１：６、５：１〜１：５、４：１〜１：４、３：１〜１：３、または２：１〜１：２（ｖ／ｖ）、例えば４：１〜１：４であってよい。
【０１９５】
本発明の組成物は５〜９５％、１０〜９５％、１５〜９５％、２０〜９５％、２５〜９５％、３０〜９５％、３５〜９５％、４０〜９５％、４５〜９５％、５０〜９５％、５５〜９５％、６０〜９５％、６５〜９５％、７０〜９５％、７５〜９５％、８０〜９５％、８５〜９５％、または９０〜９５％（ｖ／ｖ）の親油性相、または第１相（存在する任意の乳化剤を含む）を含んでよい。
【０１９６】
あるいは、本発明の組成物は５〜９５％、５〜９０％、５〜８５％、５〜８０％、５〜７５％、５〜７０％、５〜６５％、５〜６０％、５〜５５％、５〜５０％、５〜４５％、５〜４０％、５〜３５％、５〜３０％、５〜２５％、５〜２０％、５〜１５％、または５〜１０％（ｖ／ｖ）の親油性相、または第１相（存在する任意の乳化剤を含む）を含んでよい。
【０１９７】
本発明の組成物は５〜９５％、１０〜９５％、１５〜９５％、２０〜９５％、２５〜９５％、３０〜９５％、３５〜９５％、４０〜９５％、４５〜９５％、５０〜９５％、５５〜９５％、６０〜９５％、６５〜９５％、７０〜９５％、７５〜９５％、８０〜９５％、８５〜９５％、または９０〜９５％（ｖ／ｖ）の水相、または第２相を含んでよい。
【０１９８】
あるいは、本発明の組成物は５〜９５％、５〜９０％、５〜８５％、５〜８０％、５〜７５％、５〜７０％、５〜６５％、５〜６０％、５〜５５％、５〜５０％、５〜４５％、５〜４０％、５〜３５％、５〜３０％、５〜２５％、５〜２０％、５〜１５％、または５〜１０％（ｖ／ｖ）の水相、または第２相を含んでよい。
【０１９９】
本発明の組成物は１〜６０％、１〜５０％、１〜４０％、１〜３０％、１〜２０％、または１〜１０％（ｗ／ｖ）の物質、例えばハチミツを含んでよい。
【０２００】
本発明の組成物は１〜６０％、５〜６０％、１０〜６０％、１５〜６０％、２０〜６０％、２５〜６０％、３０〜６０％、３５〜６０％、４０〜６０％、４５〜６０％、または５０〜６０％（ｗ／ｖ）の物質、例えばハチミツを含んでよい。
【０２０１】
本発明の組成物は、組成物１グラムあたり１〜１５００単位、１５〜１５００単位、３０〜１５００単位、５０〜１５００単位、１００〜１５００単位、１〜６８５単位未満、１５〜６８５単位未満、３０〜６８５単位未満、５０〜６８５単位未満、１００〜６８５単位未満、５００〜１０００単位、６８５〜１０００単位、または１００〜５００単位の酵素、好ましくはグルコースオキシダーゼを含んでよい。
【０２０２】
本発明の組成物は８５％以下の水、例えば８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、もしくは２０％以下の水、または２０％未満の水、例えば１０〜１９％の水を含んでよい。本発明の組成物は２０％（ｗ／ｗ）未満の水を含んでよい。本発明の組成物は１５％（ｗ／ｗ）未満の水を含んでよい。本発明の組成物は１２％（ｗ／ｗ）未満の水を含んでよい。
【０２０３】
本発明の組成物は１０〜６０％（ｗ／ｗ）の非水溶媒を含んでよい。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は２０〜５０％（ｗ／ｗ）の非水溶媒を含んでよい。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は３５〜４０％（ｗ／ｗ）の非水溶媒を含んでよい。
【０２０４】
本発明の組成物は１０〜４０％（ｗ／ｗ）の第１相、例えば親油性相（油等）を含んでよい。組成物は２０〜３０％（ｗ／ｗ）の第１相、例えば親油性相（油等）を含んでよい。
【０２０５】
本発明の組成物は１〜１０％（ｗ／ｗ）のエマルシファイヤーを含んでよい。組成物は１〜５％（ｗ／ｗ）のエマルシファイヤーを含んでよい。エマルシファイヤーは、好ましくは界面活性剤である。
【０２０６】
本発明の組成物は２０〜５０％（ｗ／ｗ）の非水溶媒、２０〜３０％（ｗ／ｗ）の第１相、例えば親油性相（油等）、１〜５％（ｗ／ｗ）のエマルシファイヤーおよび２０〜４０％（ｗ／ｗ）の酵素のための基質を含む物質を含んでよい。
【０２０７】
本発明の組成物は１０〜６０％（ｗ／ｗ）の非水溶媒、１０〜４０％（ｗ／ｗ）の第１相、例えば親油性相（油等）、１〜１０％（ｗ／ｗ）のエマルシファイヤーおよび１０〜５０％（ｗ／ｗ）の酵素のための基質を含む物質を含んでよい。
【０２０８】
本発明の組成物は３５〜４５％（ｗ／ｗ）の非水溶媒、２０〜３０％（ｗ／ｗ）の第１相、例えば親油性相（油等）、１〜５％（ｗ／ｗ）のエマルシファイヤーおよび２５〜３５％（ｗ／ｗ）の酵素のための基質を含む物質を含んでよい。
【０２０９】
本発明の組成物は３０〜６０％（ｖ／ｖ）の溶媒、例えば非水極性溶媒を含んでよい。
【０２１０】
本発明の組成物は３０〜６０％（ｖ／ｖ）の第１相、例えば親油性相（例えば油）を含んでよい。
【０２１１】
本発明の組成物は１〜１０％（ｖ／ｖ）のエマルシファイヤー、例えば界面活性剤を含んでよい。
【０２１２】
本発明の組成物中の第１相の第２相に対する比は１以下：１（ｖ／ｖ）、例えば０．１〜１：１（ｖ／ｖ）であってよい。いくつかの実施形態では、第１相の第２相に対する比は０．６未満：１（ｖ／ｖ）、例えば０．１〜０．６未満：１（ｖ／ｖ）である。いくつかの実施形態では、第１相の第２相に対する比は０．４以下：１（ｖ／ｖ）、例えば０．１〜０．４：１（ｖ／ｖ）である。
【０２１３】
本発明の組成物中の第１相は組成物の６０％（ｖ／ｖ）未満で存在してよい。いくつかの実施形態では、第１相は組成物の１０％〜６０％（ｖ／ｖ）未満で存在する。いくつかの実施形態では、第１相は組成物の１０％〜５０％（ｖ／ｖ）未満で存在する。いくつかの実施形態では、第１相は組成物の１０％〜４０％（ｖ／ｖ）未満で存在する。いくつかの実施形態では、第１相は組成物の１０％〜３０％（ｖ／ｖ）未満で存在する。いくつかの実施形態では、第１相は組成物の１０％〜２５％（ｖ／ｖ）未満で存在する。
【０２１４】
本発明の組成物はエマルシファイヤーを含んでよい。いくつかの実施形態では、エマルシファイヤーは組成物の２５％（ｖ／ｖ）まで、例えば組成物の１〜２５％（ｖ／ｖ）、組成物の５〜２５％（ｖ／ｖ）、または組成物の１０〜２５％（ｖ／ｖ）で存在する。
【０２１５】
本発明の組成物はエマルジョンであってよい。特定の実施形態では、本発明の組成物は逆ミセルを含むエマルジョンである。逆ミセルは第２相によって形成されてよい。
【０２１６】
本発明の組成物のいくつかの実施形態では、酵素および基質は第２相に溶解している。
【０２１７】
本発明の特定の実施形態では、第１相はパラフィン油であるか、パラフィン油を含む。
【０２１８】
本発明の特定の実施形態では、第２相はグリセロールであるか、グリセロールを含む。
【０２１９】
本発明の特定の実施形態では、エマルシファイヤーはポリグリセロールポリリシンオレエート（ＰＧＰＲ）であるか、ポリグリセロールポリリシンオレエート（ＰＧＰＲ）を含む。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物はクリームである。典型的には、クリームとして使用されるエマルジョンの粘度はスプレーとして使用されるエマルジョンの粘度より高いことになる。クリームは、組成物中に増粘物質またはゲル化剤（例えばハイドロコロイド）等の粘度増加剤を含ませることによって形成され得る。
【０２２１】
ハイドロコロイドは、水中に分散した際に粘稠な分散液および／またはゲルを形成する能力によって特徴付けられる親水性の長鎖ポリマー（多糖類またはタンパク質）の不均一な群である（SahaおよびBhattacharya、JFood Sci Technol、２０１０年、４７巻（６号）：５８７〜５９７頁）。増粘の程度はハイドロコロイドの種類および性質によって異なる。かなり高い濃度で低い粘度を提供するものもあるが、大部分は１％未満の濃度で高い粘度を提供する。ハイドロコロイド分散液の粘度は主として不規則なコンフォメーションを有するポリマー鎖の非特異的な絡み合いに起因する。増粘剤（本明細書ではハイドロコロイド増粘物質と称する）として使用できるハイドロコロイドには、デンプン、改質デンプン、キサンタン、ガラクトマンナン類（グアーガム、ローカストビーンガム、およびタラガム等）、アラビアガムもしくはアカシアガム、カラヤガム、トラガントガム、コンニャクマンナン、ならびにカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース等のセルロース誘導体が含まれる。
【０２２２】
いくつかのハイドロコロイドは、架橋して液体媒体中に浸漬された相互連結された分子ネットワークを形成するポリマー分子からなるゲルを形成することができる。ゲルのレオロジー的定義は、「損失モジュラス」（Ｇ”）より大きな「貯蔵モジュラス」（Ｇ’）を有する粘弾性システムである（de Vries、２００４年、Gums and stabilizers for thefood industry、１２巻、RSC Publ、Oxford、２２〜３０頁）。ハイドロコロイドは、水素結合、疎水的会合、およびカチオン媒介架橋によるポリマー鎖間の物理的な会合によってゲルを形成する。ゲル化型ハイドロコロイド（またはハイドロコロイドゲル化剤）には、アルギネート、ペクチン、カラギーナン、ゼラチン、ゼラン、寒天、改質デンプン、メチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースが含まれる。
【０２２３】
ハイドロコロイドのゲル化は種々の機構、即ちイオンチャネル型ゲル化、低温固定ゲル化および熱固定ゲル化によって起こり得る（Bureyら、２００８年、Crit Rev Food Sci Nutr、４８巻：３６１〜３７７頁）。イオンチャネル型ゲル化は、ハイドロコロイド鎖のイオンによる架橋、典型的には負電荷を有する多糖類のカチオン媒介ゲル化プロセスによって起こる。イオンチャネル型ゲル化によってゲルを形成し得るハイドロコロイドの例には、アルギネート、カラギーナンおよびペクチンが含まれる。イオンチャネル型ゲル化は拡散固定または内部ゲル化によって実施できる。低温固定ゲル化では、ハイドロコロイド粉末を温／沸騰水に溶解して分散液を形成し、これを冷却してゲルを形成する。寒天およびゼラチンはこの機構によってゲルを形成する。熱固定ゲルではゲル（例えばカードラン、コンニャクグルコマンナン、メチルセルロース、デンプンおよび球状タンパク質）に熱を適用する必要がある。
【０２２４】
したがって、いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、増粘物質またはゲル化剤、例えばハイドロコロイド等の粘度増加剤を含む。特定の実施形態では、ハイドロコロイドは多糖またはタンパク質であるか、これらを含む。ハイドロコロイドは、デンプン、改質デンプン、キサンタン、ガラクトマンナン（グアーガム、ローカストビーンガム、およびタラガム等）、アラビアガムもしくはアカシアガム、カラヤガム、トラガントガム、コンニャクマンナン、またはカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、もしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース等のセルロース誘導体等のハイドロコロイド増粘物質であってよい。
【０２２５】
他の実施形態では、ハイドロコロイドは、例えば架橋した多糖、架橋したアルギネート、ペクチン、カラギーナン、ゼラチン、ゼラン、寒天、アガロース、改質デンプン、またはメチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース等のセルロース誘導体等の架橋したハイドロコロイドであるか、これらを含む。
【０２２６】
ハイドロコロイドは、例えば上述のハイドロコロイドのゲル化のための方法、即ちイオンチャネル型ゲル化、低温固定ゲル化および熱固定ゲル化を含む任意の好適な方法で架橋してよい。特定の実施形態では、ハイドロコロイドの分子はハイドロコロイドゲル化剤のイオンチャネル型ゲル化の結果としてカチオン（例えばカルシウムイオン）によって架橋される。本発明の組成物中に存在し得るカチオンによって架橋されたハイドロコロイドの例には、アルギネート、カラギーナンまたはペクチンが含まれる。
【０２２７】
特定の実施形態では、本発明の組成物は架橋アルギネート、例えばカルシウムイオンによって架橋されたアルギネートを含む。アルギン酸ナトリウムは冷水に可溶性であるので、アルギネートは事前に加熱することなくゲルを形成することができる。
【０２２８】
架橋アルギネートはアルギン酸ナトリウムとカルシウムイオン（例えば塩化カルシウムによって提供される）から形成してよい。いくつかの実施形態では、カルシウムイオンを解離させるための溶媒として水を使用してよい。しかし、これによって酵素と酵素のための基質を含む物質による過酸化水素の産生が活性化され、組成物の安定性が制限される可能性があるので、カルシウムイオンを解離させるためにはエタノールまたは酢酸等の非水溶媒を使用することが好ましい場合がある。
【０２２９】
本出願人らは、自由水を結合させるためにグリセロールが使用できることを認識した。この特性により、酵素と酵素のための基質を含む物質から過酸化水素が時期尚早に放出されることを防止するために十分なグリセロールが存在すれば、アルギネートを溶解するために水を使用することができる。
【０２３０】
本発明によれば、親油性成分、水性成分、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、および酵素のための精製された基質を混合するステップを含む、本発明の組成物を作製する方法も提供される。
【０２３１】
本発明によれば、親油性成分、水性成分、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、および酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体−基質を混合するステップを含む、本発明の組成物を作製する方法も提供される。
【０２３２】
本発明によれば、第１の成分（または第１相の液体）、第２の成分（または第２相の液体）、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、および酵素のための精製された基質を混合して組成物を形成するステップを含む、本発明の組成物を作製する方法であって、第１の成分（または第１相の液体）と第２の成分（または第２相の液体）が非混和性である、方法も提供される。
【０２３３】
本発明によれば、第１の成分（または第１相の液体）、第２の成分（または第２相の液体）、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、および酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体−基質を混合して組成物を形成するステップを含む、本発明の組成物を作製する方法であって、第１の成分（または第１相の液体）と第２の成分（または第２相の液体）が非混和性である、方法も提供される。
【０２３４】
本発明によれば、油、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、および酵素のための精製された基質を混合して組成物を形成するステップを含む、本発明の組成物を作製する方法も提供される。
【０２３５】
本発明によれば、油、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、および酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体−基質を混合して組成物を形成するステップを含む、本発明の組成物を作製する方法も提供される。
【０２３６】
本発明の方法は極性有機溶媒等の非水溶媒を混合するステップも含んでよい。
【０２３７】
本発明の方法は、本発明の組成物を形成するためにレオメーターを利用してよい。レオメーターによってずり速度および温度を制御することができる。
【０２３８】
酵素および基質（または前駆体−基質）を非水溶媒に溶解して第１の混合物を形成してもよい。エマルシファイヤーを第１相、親油性相または油に添加して第２の混合物を形成してもよい。次いで、例えばレオメーターまたはミキサーを使用して混合しながら第１の混合物を第２の混合物に滴下して加えてエマルジョンを形成してもよい。
【０２３９】
エマルジョンを形成するため、混合は１５００ｓ−１〜２５００ｓ−１の間、２０００ｓ−１等のずり速度で行ってよい。混合は３０および５０℃、例えば約３７℃で行ってよい。
【０２４０】
本発明によれば、精製された酵素、酵素のための精製された基質、第２相の液体、第１相の液体、および任意選択でエマルシファイヤーを、エマルジョンを形成するために十分な時間、高いずり速度で混合するステップを含む、本発明の組成物を作製する方法がさらに提供される。
【０２４１】
本発明によれば、精製された酵素、酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体−基質、第２相の液体、第１相の液体、および任意選択でエマルシファイヤーを、エマルジョンを形成するために十分な時間、高いずり速度で混合するステップを含む、本発明の組成物を作製する方法がさらに提供される。エマルジョンの成分をエマルシファイヤーと接触させる前に予備混合しておけば、より安定なエマルジョンを形成することができる。したがって、いくつかの実施形態では、酵素、酵素のための基質を含む物質、第２相の液体、および第１相の液体を、予備混合された成分をエマルシファイヤーと接触させる前に高いずり速度で予備混合し、予備混合された成分とエマルシファイヤーを含む混合物を高いずり速度で混合する。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、酵素および基質（または前駆体−基質）を第２相の液体に溶解して溶液を形成し、その後で溶液を第１相の液体と接触させる。
【０２４３】
高いずり速度は１０００ｓ−１〜４０００ｓ−１であってよい。本出願人らは、本発明の方法を用いて作製したエマルジョンは例えば２０００ｓ−１を超え４０００ｓ−１まで、２０００ｓ−１を超え３５００ｓ−１まで、２５００ｓ−１を超え４０００ｓ−１まで、または２５００ｓ−１を超え３５００ｓ−１までの高いずり速度を用いて形成した場合により安定であることを見出した。
【０２４４】
酵素、酵素のための基質を含む物質、第２相の液体、第１相の液体、およびエマルシファイヤー（存在する場合）を混合するステップは２０℃〜４０℃、例えば３５℃〜４０℃の温度で行ってよい。酵素、酵素のための基質を含む物質、第２相の液体、第１相の液体、およびエマルシファイヤー（存在する場合）を混合するステップがより高い温度、例えば３７．５℃を超え４０℃まで、または３８℃〜４０℃で行われた場合には、より安定なエマルジョンが形成され得る。
【０２４５】
本発明の方法のいくつかの実施形態では、酵素、酵素のための基質を含む物質、第２相の液体、第１相の液体、およびエマルシファイヤー（存在する場合）は、少なくとも５分、例えば５〜３０分、高いずり速度で混合される。
【０２４６】
本発明の方法は、例えば増粘物質またはゲル化剤、例えばハイドロコロイド等の粘度増加剤を含ませることにより、クリームを形成するために用いることができる。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は粘度増加剤を酵素、酵素のための基質を含む物質、第２相の液体、第１相の液体、およびエマルシファイヤー（存在する場合）と高いずり速度で混合してクリームを形成するステップをさらに含む。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、粘度増加剤はハイドロコロイド、例えば多糖であるか、これを含む。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、ハイドロコロイドはデンプン、改質デンプン、キサンタン、ガラクトマンナン（グアーガム、ローカストビーンガム、およびタラガム等）、アラビアガムもしくはアカシアガム、カラヤガム、トラガントガム、コンニャクマンナン、またはカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、もしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース等のセルロース誘導体等のハイドロコロイド増粘物質であるか、これらを含む。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、ハイドロコロイドはアルギネート、ペクチン、カラギーナン、ゼラチン、ゼラン、寒天、アガロース、改質デンプン、またはメチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース等のセルロース誘導体等のハイドロコロイドゲル化剤であるか、これらを含む。
【０２５１】
ハイドロコロイドゲル化剤はカチオンの存在下でイオンチャネル型ゲル化によってゲルを形成することができる場合がある。そのような実施形態では、本発明の方法はカチオンをハイドロコロイドゲル化剤、酵素、酵素のための基質を含む物質、第２相の液体、第１相の液体、およびエマルシファイヤー（存在する場合）と高いずり速度で混合してクリームを形成するステップをさらに含む。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、イオンチャネル型ゲル化によってゲルを形成することができるハイドロコロイドゲル化剤、酵素、酵素のための基質（または前駆体−基質）、第２相の液体、第１相の液体、およびエマルシファイヤー（存在する場合）を混合して混合物を形成し、その後にカチオンを混合物と接触させる。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、イオンチャネル型ゲル化によってゲルを形成することができるハイドロコロイドゲル化剤を、第１相の液体と接触させる前に、第２相の液体、酵素、および酵素のための基質（または前駆体−基質）と接触させる。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、カチオンはカルシウムイオンであるか、これを含む。
【０２５５】
特定の実施形態では、カチオンの存在下にイオンチャネル型ゲル化によってゲルを形成することができるハイドロコロイドゲル化剤は、アルギネート、カラギーナンまたはペクチン、例えばアルギネートであるか、これらを含む。
【０２５６】
特定の実施形態では、ハイドロコロイドゲル化剤は水溶液で提供され、第２相はグリセロールであり、グリセロールは組成物中の自由水と結合するために十分な量で存在し、それにより酵素が酵素のための基質からの過酸化水素の放出を触媒することを防止する。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、イオンチャネル型ゲル化によってゲルを形成することができるハイドロコロイドゲル化剤（例えばアルギネート）は、酵素のための基質（または前駆体−基質）、第２相の液体、および第１相の液体と高いずり速度で予備混合され、その後で予備混合された成分がエマルシファイヤー（存在する場合）およびカチオン（例えばカルシウムイオン）と接触し、予備混合された成分、エマルシファイヤー（存在する場合）およびカチオンを含む混合物が高いずり速度で混合される。
【０２５８】
エマルシファイヤー（存在する場合）はカチオン（例えばカルシウムイオン）の前に予備混合された成分と接触してよい。カチオン（例えばカルシウムイオン）は滴下により添加してよい。
【０２５９】
カチオン（例えばカルシウムイオン）は水溶液で提供してよい。あるいは、カチオンはエタノールまたは酢酸等の非水溶媒を使用して非水溶液で提供してよい。
【０２６０】
特定の実施形態では、塩化カルシウムがエタノール中で提供され、アルギン酸ナトリウムが水溶液で提供され、第２相はグリセロールであり、グリセロールはアルギネート溶液中の自由水と結合するために十分な量で存在し、それにより酵素が酵素のための基質からの過酸化水素の放出を触媒することを防止する。これにより組成物が水と接触するまでの過酸化水素の時期尚早な放出が防止され、そのため安定な組成物が提供される。
【０２６１】
上述のように、本発明の方法は本発明の組成物を形成するためにレオメーターを利用してよい。レオメーターによってずり速度および温度を制御することができる。あるいは、高いずり速度は超音波プローブ、またはホモジナイザーの使用によって提供され得る。
【０２６２】
本発明の組成物は任意の好適な手段で滅菌してよい。好ましくは、本発明の組成物は、照射によって滅菌されている。本出願人は、組成物がガンマ線照射または電子線照射への曝露による滅菌の後にグルコースオキシダーゼ活性（したがって希釈によって過酸化水素を放出する能力）を保持できることを見出した。ガンマ線照射の好適なレベルは１０〜７０ｋＧｙ、好ましくは２５〜７０ｋＧｙ、より好ましくは３５〜７０ｋＧｙである。あるいは、本発明の組成物は電子線照射によって滅菌してよい。照射（例えば電子線照射）の好適なレベルまたは線量は１０〜１００ｋＧｙ、好ましくは３０〜８０ｋＧｙ、より好ましくは５０〜８０ｋＧｙであってよい。線量は３５ｋＧｙより大きくてよい。線量は８０ｋＧｙ未満、例えば７５ｋＧｙまたはそれ未満であってよい。１つの実施形態では、本発明の組成物はガンマ線照射ではない照射によって滅菌してもよい。
【０２６３】
本発明によれば、組成物を、照射、好ましくはガンマ線照射または電子線照射に曝露するステップを含む、本発明の組成物を滅菌する方法も提供される。
【０２６４】
創傷治癒における使用のためのハチミツベースの製品の滅菌のためにオゾンは米国ＦＤＡによって認可されていないので、本発明の組成物は、好ましくはオゾン処理によって滅菌されておらず、オゾンまたはオゾン処理による滅菌の対象となった成分を何ら含まない。特に、本発明の組成物はオゾン処理されたハチミツまたはオゾン処理された油を含むべきではない。
【０２６５】
本発明による医療用途のための好ましい組成物は無菌の一回使用の組成物である。
【０２６６】
光への曝露がないように保存された本発明による使用のための滅菌された組成物は、少なくとも６か月、安定性を保つと予想される。例えば、そのような組成物は高密度ポリエチレン／低密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ／ＬＤＰＥ）管またはポリエステル−アルミニウム−ポリエチレン（ＰＥＴ／Ａｌ／ＰＥ）の小袋に包装してよい。
【０２６７】
本発明の組成物は容器または小袋に入れてよい。容器は組成物の無菌性を維持するための助けとなり得る。好ましくは、容器はシールされまたは気密である。容器は除去可能なおよび／または置き換え可能なキャップまたはシールを有してよい。容器は、好ましくは不透明である。
【０２６８】
本発明の組成物は、好ましくは医用グレードまたは医用デバイスグレードの組成物である。本発明の組成物は医薬グレードの組成物であってよい。
【０２６９】
本発明の組成物は被覆材とともに提供され得る。好適な被覆材にはガーゼ、バンデージ、ティッシュ、フィルム、ゲル、発泡体、ハイドロコロイド、アルギネート、ハイドロゲル、または多糖ペースト、顆粒もしくはビーズが含まれる。組成物はコラーゲンまたはコラーゲン−グリコサミノグリカンマトリックス等の創傷被覆マトリックスとともに存在してよい。被覆材はチュール状の被覆材であってよい。被覆材と組み合わせた組成物は、好ましくは無菌であり、照射、例えばガンマ線照射を使用して滅菌されてもよい。
【０２７０】
組成物は固体または半固体調製物の形態であってよい。固体または半固体調製物の例にはカプセル、ペレット、ゲルキャップ、粉末、ハイドロゲル、ピル、丸薬、または小球が含まれる。あるいは、組成物は液体調製物の形態であってよい。液体調製物の例にはシロップ、ペースト、スプレー、ドロップ、軟膏、クリーム、ローション、油、塗布薬、またはゲルが含まれる。典型的なゲルにはイソプロパノール、エタノール、もしくはプロパノールゲル等のアルコール性ゲル、またはハイドロゲルが含まれる。
【０２７１】
本発明の組成物はヒトまたは動物対象への投与に好適な形態であってよい。好適な形態には局所または口腔投与に適合した形態が含まれる。局所投与に好適な形態には、局所軟膏、クリーム、ローション、油、塗布薬、液体、ゲル、または可溶性ストリップが含まれる。口腔投与に好適な形態には、カプセル、ペレット、ゲルキャップ、ピル、丸薬、小球、トローチ、デンタルフロス、歯磨き、洗口剤、可溶性フィルムストリップが含まれる。保存安定組成物を使用する場合には、これは投与部位に存在する液体（例えば口腔投与における唾液、または創傷からの浸出液）によって希釈され、投与部位における過酸化水素の放出がもたらされ得る。
【０２７２】
本発明の組成物は、過酸化水素によって処置できる任意の微生物感染を処置するために使用することができる。例には、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌、抗酸性細菌、ウイルス、酵母、寄生性もしくは病原性微生物または真菌によって引き起こされる感染が含まれる。例えば、以下の微生物：Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｓ、ベータ溶血性ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉグループＡまたはＢ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｃｏｌｉ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  Ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、メチシリン感受性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  Ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓおよびＴｏｘｏｐｌａｓｍａによって引き起こされる感染を処置することができる。
【０２７３】
本発明によれば、微生物感染症、例えば、バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成できる微生物を含む微生物感染症の予防または処置において使用するための本発明の組成物がさらに提供される。したがって、バイオフィルムまたはバイオフィルムを形成できる微生物を含む微生物感染症の予防または処置において使用するための本発明の組成物が提供され得る。バイオフィルムは、細菌、真菌および／またはウイルスを含み得る。
【０２７４】
本発明によれば、微生物感染症、例えば、バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成できる微生物を含む微生物感染症の予防または処置のための医薬の製造における本発明の組成物の使用も提供される。
【０２７５】
本発明はまた、感染症の部位に有効量の本発明の組成物を投与することを含む、微生物感染症、例えば、バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成できる微生物を含む微生物感染症を予防または処置する方法を提供する。
【０２７６】
本発明によれば、微生物増殖を予防または阻害するための本発明の組成物または溶液の使用も提供される。
【０２７７】
本発明によれば、医薬として使用するための本発明の組成物も提供される。
【０２７８】
本発明の組成物は、動物を処置するために使用され得る。本発明の組成物は、ヒトを処置するために使用され得る。
【０２７９】
本発明によれば、微生物感染症の予防、処置、または改善のための本発明の組成物がさらに提供される。
【０２８０】
本発明はまた、微生物感染症の予防、処置、または改善のための医薬の製造における本発明の組成物または溶液の使用を提供する。
【０２８１】
本発明によれば、微生物感染症を予防し、処置しまたは改善する方法であって、本発明の組成物または溶液をそのような予防、処置または改善を必要とする対象に投与することを含む、方法がさらに提供される。対象は、ヒトまたは動物対象であり得る。本発明の組成物は、局所的に投与され得る。
【０２８２】
本発明によれば、ＣＲＳなどの副鼻腔感染症を予防または処置する方法であって、有効量の本発明の組成物または混合物をそのような予防または処置を必要とする対象に投与することを含む、方法も提供される。
【０２８３】
ある特定の状態、例えば、ＣＲＳなどの鼻感染症を処置するために、本発明の組成物は、特定の処置濃度となるように希釈され得る。ある特定の処置濃度は、異なる状態のために最適なものであり得る。例えば、１０００ｐｐｍのグルコースオキシダーゼ、５２質量％のフルクトース、３１質量％のグルコースおよび１７質量％の５０ｍＭｏｌのクエン酸／ＮａＯＨ緩衝剤を含有するｐＨ７．０４の本発明の組成物は、７１ｇ／ｌの濃度の水溶液を形成するときに、特に、ＭＲＳＡおよびＭＳＳＡなどの微生物、およびそのような微生物を含むバイオフィルムの処置のために、最適であり得る。したがって、本発明の組成物は、ＭＲＳＡおよびＭＳＳＡに対して特に有効であり得る。
【０２８４】
結果として、少なくとも３０ｇ／ｌ、例えば３０ｇ／ｌ〜１５０ｇ／ｌの濃度の溶液を形成するように本発明の組成物を希釈することは有益であり得る。例えば、形成される溶液の濃度は、５０〜１００ｇ／ｌ、例えば６５〜７５ｇ／ｌであり得る。
【０２８５】
本発明の組成物によって形成される水溶液中で産生される過酸化水素の濃度は、少なくとも１０μＭ、例えば１０〜５０μＭ、例えば、２０〜３０μＭであり得る。濃度は、少なくとも１時間、好ましくは少なくとも２時間、より好ましくは少なくとも１０時間、よりいっそう好ましくは少なくとも２４時間にわたって維持され得る。
【０２８６】
本発明によれば、酵素が基質を変換するのを可能とするために十分な自由水が存在するように本発明の組成物を水溶液中に希釈することを含む、抗菌溶液を形成する方法が提供され得る。方法は、組成物を希釈して、少なくとも３０ｇ／ｌの組成物を含有する溶液を形成することを含み得る。方法は、組成物を希釈して、３０ｇ／ｌ〜１５０ｇ／ｌ、５０〜１００ｇ／ｌまたは６５〜７５ｇ／ｌの組成物を含有する溶液を形成することを含み得る。本発明によれば、この方法によって得られたまたは得られ得る溶液も提供され得る。溶液中に、過酸化水素は、１０〜５０μＭ、好ましくは２０〜３０μＭの濃度で存在し得る。過酸化水素は、少なくとも１０μＭの濃度で存在し得る。過酸化水素は、１００μＭ未満の濃度で存在し得る。濃度は、少なくとも１時間、好ましくは少なくとも２時間、より好ましくは少なくとも１０時間、よりいっそう好ましくは少なくとも２４時間にわたって維持され得る。
【０２８７】
本発明によれば、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素；酵素のための精製された基質；２０℃および１ａｔｍの水１００ｇあたり少なくとも１００ｇの溶解度を有する糖または糖誘導体の形態の溶質、および酵素が基質を変換するのを可能とするために十分な自由水を含む組成物であって、過酸化水素が１０〜５０μＭ、好ましくは２０〜３０μＭの濃度で存在する、組成物が提供され得る。過酸化水素は、少なくとも１０μＭの濃度で存在し得る。過酸化水素は、１００μＭ未満の濃度で存在し得る。濃度は、少なくとも１時間、好ましくは少なくとも２時間、より好ましくは少なくとも１０時間、よりいっそう好ましくは少なくとも２４時間にわたって維持され得る。
【０２８８】
バイオフィルムを含む微生物感染症の処置において使用するための本発明の組成物または溶液が提供され得る。微生物感染症は、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ、ＭＲＳＡまたはＭＳＳＡを含み得る。組成物または溶液は、慢性鼻副鼻腔炎の処置において使用するためのものであり得る。
【０２８９】
本発明の組成物または混合物はまた、肺組織において、微生物感染症、例えば、バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成できる微生物を含む微生物感染症を予防または処置するために肺に投与され得る。例えば、本発明の組成物または混合物は、結核を予防または処置するため、または嚢胞性繊維症（ＣＦ）に関連する微生物感染症を予防または処置するために肺に投与され得る。Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓは結核の原因因子である。本発明の組成物または混合物は、呼吸器感染症、例えば、ＣＯＰＤ、嚢胞性繊維症、気管支拡張症、または喘息などの呼吸器疾患、またはＨＩＶ／ＡＩＤＳ関連呼吸器感染症、または終末期疾患に関連する呼吸器感染症に罹患した対象における呼吸器感染症を予防または処置するために使用され得る。
【０２９０】
本発明の組成物は、嚢胞性繊維症を有する患者における微生物感染症、特に、バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成できる微生物を含む嚢胞性繊維症を有する患者における微生物感染症を予防または処置するために使用され得る。感染症は肺感染症であり得る。例えば、本発明の組成物は、嚢胞性繊維症を有する対象における肺のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症を予防または処置するために使用され得る。
【０２９１】
本発明の組成物は、有効量の本発明の組成物をそのような予防または処置を必要とする対象に投与することを含む、微生物による肺感染症の処置のために使用され得る。
【０２９２】
肺感染気管支拡張症の例。気管支拡張症に関連する気道感染症は、以下の細菌：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、非結核性抗酸菌によって引き起こされる感染症を含む。
【０２９３】
本発明の組成物は、慢性気管支炎、気腫、または両方を有する人々の総称である慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を処置するために使用され得る。Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａおよびＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓはＣＯＰＤの増悪に関係があるとされてきた。様々な微生物病原体がＣＯＰＤにおける慢性感染症に関係があるとされてきた。これらは、分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅおよびＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａなどの定型細菌、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅなどの非定型細菌、アデノウイルスおよび潜在的に呼吸器合胞体ウイルスなどのウイルス、および真菌、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉを含む。
【０２９４】
ＨＩＶ陽性またはＡＩＤＳ患者に見られる最も一般的な日和見感染性肺疾患の一部は、ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、結核（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによって引き起こされる）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ複合体（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ−Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ複合体（ＭＡＩＣ））、真菌感染症（カンジダ症またはコクシジオイデス症など）ならびにウイルス性および細菌性肺炎（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅによって引き起こされる細菌性肺炎など）である。
【０２９５】
本発明の組成物は、以下の微生物：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ；Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、非結核性抗酸菌；Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ；Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ；アデノウイルス；呼吸器合胞体ウイルス；Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉ；ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ；Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ；Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ−Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ複合体（ＭＡＩＣ）；ｃａｎｄｉｄａ；Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ；Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓのいずれかによって引き起こされる感染症、特に呼吸器感染症の予防または処置のために使用され得る。
【０２９６】
本発明の組成物は、より下部の生殖器感染症を処置するために使用され得る。例えば、本発明の組成物は、そのような感染症を処置するために局所的に適用され得る。そのような感染症の例は、細菌性膣症および一般細菌腟分泌物を含む。本発明の組成物は、タンポンなどの挿入デバイスに適用され得る。
【０２９７】
本発明の組成物は、カルバペネム耐性腸内細菌科（ＣＲＥ）またはカルバペネマーゼ産生腸内細菌科（ＣＰＥ）細菌を含む感染症を処置するために使用され得る。
【０２９８】
本発明の組成物は、尿路感染症を処置するために使用され得る。例えば、本発明の組成物は、カテーテルを使用して投与され得る。本発明の組成物は、カテーテルを使用して投与する前に生理食塩水と混合され得る。組成物は、例えば、少なくとも１週間、場合により約２週間までの期間にわたって連日投与され得る。
【０２９９】
本発明の組成物は、気管支粘膜および声帯ヒダの裏打ち、子宮内膜、食道粘膜、胃粘膜、腸粘膜、鼻粘膜、嗅覚粘膜、口腔粘膜、陰茎粘膜、膣粘膜などの他の粘膜の感染症を処置するためにも使用され得る。
【０３００】
本発明の組成物は、スプレーにより、注射により、吸入により、あるいは組成物を患者の鼻腔もしくは副鼻腔、または患者の肛門もしくは直腸に適用することにより投与または適用され得る。組成物は、患者に外用でまたは内服で投与または適用され得る。
【０３０１】
本発明の組成物は、例えば膿胸の、胸膜腔などの部位に投与され得る。これは、胸部ドレーン注入を介して達成され得る。
【０３０２】
本発明の組成物は、例えば複合感染した腹部内の手術において、腹膜に投与され得る。これは、外科的手順または腹部ドレーンを介して達成され得る。
【０３０３】
本発明の組成物は、例えば補綴関節といった整形外科用補綴インプラントなどの補綴デバイスに適用され得る。これは、手術後の感染症の予防を補助し得る。
【０３０４】
本発明の組成物は、吸入器、例えば、肺への組成物の送達用の、定量吸入器、乾燥粉末吸入器、ネブライザー、または経鼻吸入器において提供され得る。
【０３０５】
本発明の組成物は、スプレー可能または噴霧可能であり得る。例えば、組成物は、スプレーまたは噴霧を許容するレオロジー特性を有し得る。
【０３０６】
本発明によれば、本発明の組成物を含む、患者に組成物を送達するためのデバイスも提供される。
【０３０７】
デバイスは、ポンプ作用スプレーまたはエアロゾルスプレーなどの、スプレーまたは噴霧デバイスであり得る。デバイスは、吸入器、例えば、肺への組成物の送達用の、定量吸入器、乾燥粉末吸入器、ネブライザーであるか、または経鼻吸入器であり得る。
【０３０８】
ネブライザーは、吸入のために好適なエアロゾル小滴に液体を変換するデバイスである。ネブライザーは、酸素、圧縮空気または超音波の力を使用して医薬溶液を分割し、治療用量のエアロゾル粒子を肺に直接的に送達する。多様なネブライザーが利用可能である。ネブライザーは、圧縮ガス（ジェットネブライザー）または超音波振動する結晶（超音波ネブライザー）によって駆動され得る。
【０３０９】
５〜１０分のうちに溶液から小さい十分な粒子を産生するために、少なくとも６Ｌ／分のガス流速が通常必要である。超音波ネブライザーは、迅速に振動する圧電結晶を使用してエアロゾル粒子を産生する。超音波ネブライザー機器は、小さくかつ静かなことが多い。
【０３１０】
多くのネブライザーは、処方された薬物用量の１０％しか肺に送達されない。薬物の大部分は、装置内部に捕捉されたり、または呼気中に廃棄されたりする。薬物送達の効率は、ネブライザーチャンバーの種類および体積ならびにそれが駆動される流速に依存する。一部のチャンバーは、吸気の間の粒子送達の効率を増加させ、呼気の間の環境への損失を低減させるためにリザーバーおよびバルブシステムを有する。息に補助されたオープンベントシステムは薬物送達を向上させるが、患者が十分な呼気流量を有することに依存する。フェイスマスクまたはマウスピースをエアロゾル粒子の投与のために使用してもよい。
【０３１１】
ネブライザーは、多くの呼吸器疾患の処置のために使用される。ネブライザーの使用の適応症は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の増悪および長期処置の管理、嚢胞性繊維症、気管支拡張症、喘息、ＨＩＶ／ＡＩＤＳの管理、および緩和ケアにおける症状軽減を含む。
【０３１２】
ネブライザー注入される本発明の組成物は、ＣＯＰＤ、嚢胞性繊維症、気管支拡張症、もしくは喘息などの呼吸器疾患、またはＨＩＶ／ＡＩＤＳ関連呼吸器感染症、または終末期疾患に関連する呼吸器感染症に罹患した対象において、微生物感染症、例えば、バイオフィルム、またはバイオフィルムを形成できる微生物を含む微生物感染症を予防または処置するために使用され得る。
【０３１３】
デバイスは、患者の皮膚に組成物を適用するためなどの、外的使用のためのものであり得る。
【０３１４】
デバイスは、患者への内的適用のためのものであり得る。例えば、デバイスは、患者の気道に組成物を投与するための吸入器またはネブライザーであり得る。デバイスは、灌注器であり得る。デバイスは、注射器などの、患者に組成物を注射するためのデバイスであり得る。したがって、本発明の組成物は、注射物質であり得る。本発明の方法は、本発明の組成物を患者に注射することを含み得る。
【０３１５】
本発明の組成物は、予防的適用のためのものであり得る。
【０３１６】
例えば、手術前の皮膚滅菌用の予防スプレーが提供され得る。そのようなスプレーは、低粘度組成物を含み得る。適用されるときに、組成物は粘着性でなくてもよい。スプレーは、皮膚への活性酸素層の送達を可能とし得る。層は、外科的切開の前に皮膚を滅菌し、外科的手順の間および後に予防的保護を提供し得る長期間にわたり活性酸素を送達し続け得る。
【０３１７】
吸入用の噴霧スプレーが提供され得る。吸入用の噴霧スプレーは、患者の気道における感染症を処置するために使用され得る。噴霧スプレーは、低い粘度を有する組成物を必要とし得る。
【０３１８】
スプレーは、被覆材を適用する前に熱傷または創傷組織に適用するために使用され得る。これは、より高い粘度の組成物を必要とし得る。
【０３１９】
スプレーは、臓器感染症および敗血症を予防するために、手術後に、患者に内服で適用され得る。これは、より高い粘度の組成物を必要とし得る。
【０３２０】
本発明の組成物は、小袋またはパウチなどの水溶性容器内に含有され得る。
【０３２１】
よって、本発明によれば、本発明の組成物を封入または含有する水溶性容器が提供される。
【０３２２】
有利なことに、これは、測定された量の水または生理食塩水などの溶媒を加えることによって特定の治療的応用のために精密な量の組成物を送達することを可能とし得る。例えば、水溶性小袋中に含有された本発明の組成物は、鼻灌注溶液、またはネブライザー注入もしくは噴霧される溶液を形成するために使用され得る。結果として、水性溶媒との組成物を含有する可溶性小袋の接触は、本発明の水性混合物の形成を結果としてもたらし得る。水性混合物は、酵素が基質を変換して過酸化水素を産生するのを可能とするために十分な自由水を含有し得る。
【０３２３】
水溶性小袋は、好ましくは、医療グレード材料から製造される。小袋は、３８℃の水に溶解性であり得る。好ましくは、水溶性小袋は、非毒性、帯電防止性、紫外光による分解に耐性、ならびにガス、油およびグリースによる分解に耐性である。一例では、可溶性小袋は、ポリビニルアルコールなどのポリマーまたはプラスチック材料から製造され得る。
【０３２４】
水溶性小袋中に含有された本発明の組成物は、以下の状態の１つまたは複数を処置するために有用であり得る：副鼻腔炎および鼻副鼻腔炎などの鼻の状態；上気道感染症（例えば、扁桃炎、喉頭炎および副鼻腔炎またはより下部の気道感染症（例えば、気管支炎、肺炎、細気管支炎および結核）などの気道感染症；慢性閉塞性肺疾患；および嚢胞性繊維症。
【０３２５】
本発明の組成物、および、障壁または層として機能し得る水溶性材料を含む創傷被覆材が提供され得る。水溶性材料は、組成物と接触していてもよく、またはそれに隣接していてもよい。本発明の組成物は、水溶性材料によって封入されていてもよく、またはそれの中に含有されていてもよい。したがって、水溶性材料は、小袋、パウチまたは封入物を形成し得る。組成物は、水溶性材料の層の間に配置され得る。水溶性材料は、医療グレード材料から製造され得る。水溶性材料は、３８℃の水に溶解性であり得る。好ましくは、水溶性材料は、非毒性、帯電防止性、紫外光による分解に耐性、ならびにガス、油およびグリースによる分解に耐性である。一例では、水溶性材料は、ポリビニルアルコールなどのポリマーまたはプラスチック材料から製造され得る。使用時に、被覆材を創傷に適用することにより、水溶性材料を創傷滲出液に溶解させて、本発明の組成物を創傷に接触させ、創傷に活性酸素を送達し得る。したがって、有利なことに、測定可能かつ正確な用量の活性酸素が創傷に送達され得る。水溶性材料は、創傷被覆材からの組成物の放出を制御することができる。
【０３２６】
水溶性材料および組成物は、従来の無菌の創傷被覆材の表面に取り付けることができる。
【０３２７】
高いオスモル濃度（好適には、ハチミツと類似の範囲内、すなわち、０．４７〜０．７の水分活性（ａｗ）を有する）を有する本発明の組成物は、組織プロテアーゼの自己分解作用によって創傷のデブリードマンを促進すると考えられる。それらは、それらの強い浸透作用を通じて創傷組織からリンパ液を引き出すことによって湿った創傷環境を作り出し得る。これは、創傷床と重層する壊死組織との境界面にプロテアーゼの一定の供給を提供する。この作用はまた、創傷床の表面をその下から洗浄する。デブリードマン作用はまた、死んだ組織の除去によって創傷の細菌負荷の低下に寄与し得る。死んだ組織は、創傷中に残された場合、細菌増殖用の優れた培地を提供し、感染症のリスクを増加させることが周知である。
【０３２８】
本発明の好ましい態様によれば、本発明の組成物は、創傷の処置、または創傷敗血症の処置もしくは管理を含む、創傷ケアの方法において使用され得る。
【０３２９】
創傷は、急性創傷、慢性創傷、外科的創傷（例えば、帝王切開創傷）、慢性熱傷、または急性熱傷であり得る。本発明の組成物は、創傷敗血症の予防的防止において使用され得る。貯蔵安定的な本発明の組成物が使用される場合、これは、創傷部位に存在する液体によって希釈され、それによって、希釈された組成物による過酸化水素の放出に繋がり得ることが理解されるであろう。
【０３３０】
本発明によれば、本発明の組成物を創傷に投与することを含む、創傷を処置する方法が提供される。
【０３３１】
本発明によれば、創傷の処置のための本発明の組成物も提供される。
【０３３２】
本発明の組成物は、臨界的定着を呈した創傷を処置するために使用され得る。「臨界的定着を呈した」という用語は、細菌が創傷に負に影響し始め、かつそれらの存在の徴候を誘発し始める臨界点に達した創傷を指すために使用されることが多い。臨界的定着を呈した創傷は、バイオフィルムの存在を指し示し得る。組織１グラムあたり生物１０５個より大きい細菌負荷は、多くの場合、創傷治癒を妨害するものとして認められる（Siddiqui AR、Bernstein JM（2010年）Chronic wound infection: Facts andcontroversies. Clinics in Dermatology ２８巻：５１９〜２６頁；Edmonds,M.およびFoster, A.（２００４年）．The useof antibiotics in the diabetic foot. Am J Surg, １８７巻（５Ａ号）、２５Ｓ〜２８Ｓ頁。結果として、本発明の組成物は、組織１グラムあたり生物１０５個より大きい細菌負荷を有する創傷を処置するために使用され得る。
【０３３３】
本発明によれば、創傷を処置するための医薬の製造における本発明の組成物の使用がさらに提供される。
【０３３４】
本発明によれば、本発明の組成物を炎症の部位に投与することを含む、炎症を処置する方法も提供される。
【０３３５】
本発明によれば、炎症を処置するための本発明の組成物も提供される。
【０３３６】
本発明によれば、炎症を処置するための医薬の製造における本発明の組成物の使用がさらに提供される。
【０３３７】
本発明によれば、本発明の組成物をそのような刺激を必要とする部位に投与することを含む、組織成長を刺激する方法も提供される。
【０３３８】
本発明によれば、組織成長を刺激するための本発明の組成物も提供される。
【０３３９】
本発明によれば、組織成長を刺激するための医薬の製造における本発明の組成物の使用がさらに提供される。
【０３４０】
本発明によれば、本発明の組成物を、デブリードマンを必要とする創傷に投与することを含む、創傷のデブリードマンを行う方法も提供される。
【０３４１】
本発明によれば、創傷のデブリードマンを行うための本発明の組成物も提供される。
【０３４２】
本発明によれば、創傷のデブリードマンを行うための医薬の製造における本発明の組成物の使用がさらに提供される。
【０３４３】
本発明によれば、本発明の組成物を、脱臭を必要とする創傷に投与することを含む、創傷を脱臭する方法も提供される。
【０３４４】
本発明によれば、創傷を脱臭するための本発明の組成物も提供される。
【０３４５】
本発明によれば、創傷を脱臭するための医薬の製造における本発明の組成物の使用がさらに提供される。
【０３４６】
創傷治癒の応用のために、本発明の組成物は、健康管理の提供者によって決定される適切な頻度で投与され得る。好適には、本発明の組成物は、少なくとも数日毎、例えば毎週投与され得るが、好ましくは、毎日または１日毎に投与され得る。
【０３４７】
投与される本発明の組成物の量は、組成物の抗菌特性の強度、および組成物の他の創傷治癒特性、創傷の大きさ、ならびに処置される対象の年齢および状態などの多くの要因に依存する。しかし、多くの応用について、２〜１００ｇ、または５〜１００ｇ、好ましくは１０〜５０ｇの本発明の組成物の投与が好適であることが予期される。
【０３４８】
本発明の組成物は、制御または持続放出送達のために好適な形態であり得る。例えば、経口投与形態は、制御または持続放出送達を提供するために腸溶性コーティングを有し得る。
【０３４９】
本発明の別の態様によれば、本発明の組成物は、美容組成物として使用するための形態であり得る。本発明の組成物は、少なくとも１つの好適な美容賦形剤またはアジュバントと共に存在し得る。美容応用は、ふけなどの毛の状態の処置、または体臭の処置を含む多くの異なるパーソナルケアの応用をカバーする。
【０３５０】
本発明の組成物は、予防用ハンドバリア溶液または手消毒溶液の形態で提供され得る。そのようなハンドバリア溶液は、クリーム、ローション、またはハイドロゲルの形態で提供されてよく、微生物感染症の予防的防止のために有利な特性を有するハンドウォッシュ型製品として使用される。本発明の組成物は、組織または皮膚用のワイプの一部として投与され得る。
【０３５１】
微生物感染症は、口腔、目、耳、皮膚、胸部、または爪の感染症であり得る。口腔感染症は、歯肉疾患、口腔潰瘍および／または口腔衛生障害であり得る。口腔衛生障害は、口臭および／または歯肉炎であり得る。あるいは、口腔感染症は、鼻のブドウ球菌感染症を含む、咽頭感染症または鼻感染症であり得る。
【０３５２】
本発明の組成物は、細菌、ウイルスまたは真菌などの病原体による感染症の結果でなくてもよい状態を処置するために使用され得る。そのような状態は、口腔状態を含む。
【０３５３】
例えば、再発性アフタ性潰瘍などのアフタ性潰瘍は、病原体による感染症の結果でないことがある。アフタ性潰瘍は、さもなければ健常な個体における良性かつ非伝染性の口腔潰瘍（アフタ）の繰返しの形成によって特徴付けられる。アフタ性潰瘍の原因は完全には理解されていないが、様々な要因によって誘発されるＴ細胞媒介性の免疫応答を伴うと考えられている。誘発因子は、栄養欠乏症、局所的外傷、ストレス、ホルモンの影響、アレルギー、遺伝的素因または他の要因を含み得る。
【０３５４】
病原体の感染症の結果でなくてもよい別の口腔状態は、地図状舌である。これは、通常は背側表面上にある、舌の粘膜の炎症性の状態である。
【０３５５】
歯科医は通常、そのような状態を処置することが難しい。
【０３５６】
本発明によれば、病原体による感染症の結果ではない状態の処置において使用するための本明細書に記載される組成物が提供される。状態は、好ましくは、口腔状態である。
【０３５７】
本発明によれば、病原体による感染症の結果ではない状態の処置において使用するための医薬の製造における本明細書に記載される組成物の使用が提供される。状態は、好ましくは、口腔状態である。
【０３５８】
本発明によれば、本明細書に記載される組成物をそのような処置を必要とする患者に投与することを含む、病原体による感染症の結果ではない口腔状態を処置する方法が提供される。状態は、好ましくは、口腔状態である。
【０３５９】
本発明によれば、アフタ性潰瘍（好ましくは、再発性アフタ性潰瘍）または地図状舌の処置において使用するための本明細書に記載される組成物が提供される。
【０３６０】
本発明によれば、アフタ性潰瘍（好ましくは、再発性アフタ性潰瘍）または地図状舌の処置において使用するための医薬の製造における本明細書に記載される組成物の使用が提供される。
【０３６１】
本発明によれば、本明細書に記載される組成物をそのような処置を必要とする患者に投与することを含む、アフタ性潰瘍（好ましくは、再発性アフタ性潰瘍）または地図状舌を処置する方法が提供される。
【０３６２】
組成物は、局所的に投与され得る。組成物は、対象の口腔内の罹患部位に直接的に投与され得る。
【０３６３】
眼感染症は、結膜炎を含み得る。皮膚感染症は、真菌皮膚感染症であり得る。真菌皮膚感染症は、ヒトにおける水虫および／または白癬を含む。獣医学において、真菌性皮膚状態は、腐蹄症、白癬および人獣共通感染性皮膚感染症の制御を含む。爪感染症は、爪真菌症などの真菌爪感染症であり得る。
【０３６４】
本発明の組成物は、ざ瘡、湿疹、または乾癬などの皮膚障害の処置のために使用され得る。ざ瘡および湿疹は、該組成物によって処置できる微生物感染症成分を有することがあり、引っ掻きによって引き起こされる乾癬病変の二次的な微生物感染症は、本発明の組成物によって処置され得る。
【０３６５】
本発明の組成物は、獣医学において使用され得る。重要な獣医学的応用は、微生物感染症の処置および創傷ケアの処置もしくは管理、または熱傷の処置を含む。具体的な状態は、イヌにおける慢性皮膚感染症（皮下ブドウ球菌感染症）、外耳炎（耳感染症）、動物における口腔ケア、ニワトリにおけるカンピロバクター感染症、コリオーシス（coliosis）、ブタ、家禽およびウシにおける腸微生物感染症、クリプトスポリジウム感染症、人獣共通感染症のクリアランス、創傷被覆材、例えば、角の除去、および膿瘍の処置を含む。本発明は、食物連鎖に抗生物質を導入することなく微生物感染症の処置を可能とする点で、獣医学的用途において特定の利点を有する。
【０３６６】
本発明の組成物は、抗菌活性を生成する能力を提供することが所望される任意の他の組成物または製品と共に提供され得る。本発明の組成物は、他の組成物または製品との混合物として、またはそれらとは別々に、例えば、他の組成物または製品とのキットとしてパッケージ化されて、提供され得る。本発明の組成物が他の組成物または製品との混合物として提供される場合、この他の組成物または製品は、酵素が本発明の組成物の基質を変換するのを可能とするために十分な自由水を含まないことが好ましい。
【０３６７】
本発明の組成物は、組成物の使用のための使用説明書と共に提供され得る。例えば、本発明の組成物は、使用説明書と共にキットとしてパッケージ化され得る。
【０３６８】
本発明によれば、本発明の組成物を製造する方法も提供される。
【０３６９】
本発明によれば、本発明の組成物を産生する方法であって、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる酵素を基質と接触させることを含む、方法が提供される。
【０３７０】
本発明によれば、本発明の組成物を産生する方法であって、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる酵素を、酵素のための基質に変換されることができる基質前駆体と接触させることを含む、方法が提供される。
【０３７１】
好ましくは、酵素および基質（または基質前駆体）は、本明細書に記載されるようにして精製される。
【０３７２】
酵素および基質、または酵素および基質前駆体は、乾燥または固体形態で接触または混合され得る。
【０３７３】
方法は、本明細書に記載される溶質を混合することを含み得る。
【０３７４】
方法は、酵素を加える前に、水などの溶媒中に基質または基質前駆体を溶解することを含み得る。
【０３７５】
方法は、基質前駆体を基質に変換できる少なくとも１つの酵素を加えることを含み得る。
【０３７６】
一部の実施形態では、本発明の組成物を形成するために、フルクトースおよびグルコースが水中に溶解される。フルクトースは室温で溶解し得る一方、グルコースは、溶解させるために加熱および撹拌を必要とし得る。
【０３７７】
本発明によれば、抗菌溶液を形成する方法であって、酵素が基質を変換して過酸化水素を生成できるようにおよび／または基質前駆体が基質に変換されることができるように、本発明の組成物を十分な水と接触させるか、または本発明の組成物を十分な水で希釈することを含む、方法が提供される。
【０３７８】
本発明によれば、第１の組成物および第２の組成物を含むキットであって、第１の組成物が、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる酵素を含み、第２の組成物が、酵素のための基質を含み、かつ、第１の組成物および第２の組成物が別々である、キットが提供される。
【０３７９】
第１の組成物は酵素のための基質を含まず、かつ、第２の組成物は基質のための酵素を含まない。結果として、過酸化水素の産生は、第１の組成物および第２の組成物が混合されたときにのみ開始され得る。第１の組成物および第２の組成物は、水溶液であり得る。キットは、第１の組成物および第２の組成物が混合されたときに、（本明細書に記載される）望ましいレベルで過酸化水素の産生が進むことができるように予め定められた量の酵素、基質および溶媒を含有し得る。本発明のキットの組成物は、本明細書に記載される発明の組成物のさらなる特徴のいずれかを有し得る。例えば、（本明細書に記載されるように）酵素は、好ましくは精製されており、かつ、基質は、好ましくは精製されている。好ましくは、キットの第１の組成物および第２の組成物は、本明細書に記載されるように、滅菌されている。
【０３８０】
本発明によれば、第１の組成物および第２の組成物を含むキットであって、第１の組成物が、基質前駆体を第２の酵素のための基質に変換できる第１の酵素を含み、かつ、第２の組成物が、第１の酵素のための基質前駆体を含み、かつ、第１の組成物および第２の組成物が別々である、キットが提供される。
【０３８１】
過酸化水素の産生は、第１の組成物と第２の組成物が混合された際のみに開始され得る。したがって、第１の組成物は前駆体−基質を含まず、第２の組成物は第１の酵素を含まない。第２の酵素は第１の組成物もしくは第２の組成物、または第１の組成物と第２の組成物の両方に存在してよい。第１の組成物および第２の組成物は水溶液でよい。キットは、第１の組成物と第２の組成物が混合された際に所望のレベルで（本明細書に記載したように）過酸化水素の産生が進行するように、酵素、前駆体−基質および溶媒の所定量を含んでよい。本発明のキットの組成物は、本明細書に記載する本発明の組成物のさらなる特徴のいずれを有してもよい。例えば、第１の酵素と第２の酵素は、好ましくは精製されており、前駆体−基質は、好ましくは精製されている（本明細書に記載したように）。好ましくは、キットの第１の組成物および第２の組成物は本明細書に記載したように無菌である。本発明のいくつかの態様を以下の番号付きパラグラフにまとめる。
【０３８２】
１．抗微生物活性を発生させるための組成物であって、
基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、
酵素のための精製された基質、
２０℃、１気圧で少なくとも１００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する糖または糖誘導体の形態の溶質
を含み、
酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない、組成物。
【０３８３】
２．溶質が２０℃、１気圧で少なくとも２００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する、番号付きパラグラフ１に記載の組成物。
【０３８４】
３．溶質が少なくとも３００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する、番号付きパラグラフ１または番号付きパラグラフ２に記載の組成物。
【０３８５】
４．溶質が二糖または単糖である、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０３８６】
５．溶質が単糖である、番号付きパラグラフ４に記載の組成物。
【０３８７】
６．単糖がフルクトースである、番号付きパラグラフ５に記載の組成物。
【０３８８】
７．溶質が乾燥重量で組成物の少なくとも６０％である、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０３８９】
８．基質が乾燥重量で組成物の少なくとも３０％である、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０３９０】
９．基質と溶質とを合わせた乾燥重量が組成物の少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％である、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０３９１】
１０．組成物中の糖または糖誘導体の全量が乾燥重量で少なくとも９０％、好ましくは乾燥重量で少なくとも９５％である、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０３９２】
１１．乾燥または固体形態である、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０３９３】
１２．粉末の形態である、番号付きパラグラフ１１に記載の組成物。
【０３９４】
１３．溶液または液体の形態である、番号付きパラグラフ１から１０のいずれかに記載の組成物。
【０３９５】
１４．重量で２０％またはそれ未満の水を含む、番号付きパラグラフ１３に記載の組成物。
【０３９６】
１５．重量で少なくとも１０％、好ましくは少なくとも１５％の水を含む、番号付きパラグラフ１３または番号付きパラグラフ１４に記載の組成物。
【０３９７】
１６．合わせて重量で少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、またはさらにより好ましくは重量で少なくとも８０％の基質および溶質を含む、番号付きパラグラフ１３から１５のいずれかに記載の組成物。
【０３９８】
１７．組成物中の糖または糖誘導体の全量が重量で少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、またはさらにより好ましくは重量で少なくとも８０％である、番号付きパラグラフ１３から１５のいずれかに記載の組成物。
【０３９９】
１８．緩衝剤を含む、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４００】
１９．ｐＨが５またはそれ未満である、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４０１】
２０．ｐＨが６〜８である、番号付きパラグラフ１から１８のいずれかに記載の組成物。
【０４０２】
２１．組成物の希釈の後、少なくとも２４時間、より好ましくは少なくとも４８時間の間、過酸化水素を持続放出する、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４０３】
２２．組成物の希釈の後、少なくとも２４時間の間、２ｍｍｏｌ／ｌ未満のレベル、および／または少なくとも０．１ｍｍｏｌ／ｌのレベルで過酸化水素を持続放出する、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４０４】
２３．酵素が酸化還元酵素である、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４０５】
２４．酸化還元酵素がグルコースオキシダーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、ピラノースオキシダーゼ、コリンオキシダーゼ、ピルベートオキシダーゼ、グリコレートオキシダーゼ、アミノ酸オキシダーゼ、またはマンノースオキシダーゼである、番号付きパラグラフ２３に記載の組成物。
【０４０６】
２５．酸化還元酵素のための基質がＤ−グルコース、ヘキソース、コレステロール、Ｄ−ガラクトース、ピラノース、コリン、ピルベート、グリコレートまたはアミノ酸である、番号付きパラグラフ２３または番号付きパラグラフ２４に記載の組成物。
【０４０７】
２６．酸化還元酵素がグルコースオキシダーゼであり、酸化還元酵素のための基質がＤ−グルコースである、番号付きパラグラフ２３に記載の組成物。
【０４０８】
２７．組成物１グラムあたり少なくとも１単位のグルコースオキシダーゼを含む、番号付きパラグラフ２６に記載の組成物。
【０４０９】
２８．組成物１グラムあたり１５００単位までのグルコースオキシダーゼを含む、番号付きパラグラフ２６または番号付きパラグラフ２７に記載の組成物。
【０４１０】
２９．組成物１グラムあたり１５単位を超えるグルコースオキシダーゼを含む、番号付きパラグラフ２６から２８のいずれかに記載の組成物。
【０４１１】
３０．組成物１グラムあたり少なくとも１００単位、好ましくは１００〜５００単位のグルコースオキシダーゼを含む、番号付きパラグラフ２６から２９のいずれかに記載の組成物。
【０４１２】
３１．組成物１グラムあたり少なくとも５００単位、好ましくは５００〜１０００単位のグルコースオキシダーゼを含む、番号付きパラグラフ２６から２９のいずれかに記載の組成物。
【０４１３】
３２．２５〜２０００ｐｐｍの酵素を含む、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４１４】
３３．医用グレードまたは医用デバイスグレードの組成物である、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４１５】
３４．無菌である、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４１６】
３５．照射、好ましくはガンマ線照射への曝露によって、より好ましくは１０〜７０ｋＧｙで、より好ましくは２５〜７０ｋＧｙで、最も好ましくは３５〜７０ｋＧｙで滅菌されている、番号付きパラグラフ３４に記載の組成物。
【０４１７】
３６．カタラーゼおよび／またはペルオキシダーゼ活性を有しない、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４１８】
３７．純化されていない天然物質を何ら含まない、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４１９】
３８．ハチミツを含まない、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４２０】
３９．２０℃で少なくとも５０００ｍＰａｓ、より好ましくは２０℃で少なくとも７５００ｍＰａの粘度、または２０℃で５０００〜２００００ｍＰａｓの粘度を有する、番号付きパラグラフ１１または番号付きパラグラフ１２以外の前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４２１】
４０．血液凝固剤を含む、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４２２】
４１．凝固因子、任意選択でフィブリノーゲンおよび／またはトロンビンを含む、番号付きパラグラフ４０に記載の組成物。
【０４２３】
４２．複数の担体を含み、複数のフィブリノーゲン結合ペプチドがそれぞれの担体に固定化されている、番号付きパラグラフ４０または番号付きパラグラフ４１に記載の組成物。
【０４２４】
４３．実質的に過酸化水素を含まないか、検出可能な過酸化水素を含まない、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４２５】
４４．酵素のための基質が溶質である、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４２６】
４５．酵素のための基質が溶質とは異なる、番号付きパラグラフ１から４３のいずれかに記載の組成物。
【０４２７】
４６．非水溶媒を含む、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４２８】
４７．ポリマーを含む、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４２９】
４８．塩を含む、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４３０】
４９．第１相および第２相を含み、第１相と第２相が非混和性である、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４３１】
５０．親油性相および水相を含む、番号付きパラグラフ４９に記載の組成物。
【０４３２】
５１．油およびエマルシファイヤーを含む、番号付きパラグラフ４９または５０のいずれかに記載の組成物。
【０４３３】
５２．薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤とともに、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物を含む医薬組成物。
【０４３４】
５３．無菌である、番号付きパラグラフ５２に記載の医薬組成物。
【０４３５】
５４．医用グレードまたは医用デバイスグレードの医薬組成物である、番号付きパラグラフ５２または番号付きパラグラフ５３に記載の医薬組成物。
【０４３６】
５５．対象への局所または口腔投与に適合した、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４３７】
５６．対象に注射可能であるか、対象への注射に適合した、番号付きパラグラフ１から５５のいずれかに記載の組成物。
【０４３８】
５７．前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物と、組成物を投与するための使用説明書とを含むキット。
【０４３９】
５８．創傷を被覆するための被覆材料と、番号付きパラグラフ１から５６のいずれかに記載の組成物とを含む創傷被覆材。
【０４４０】
５９．前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物、キットまたは被覆材を滅菌する方法であって、組成物、キットまたは被覆材を、照射、好ましくはガンマ線照射または電子線照射に、好ましくは１０〜７０ｋＧｙ、より好ましくは２５〜７０ｋＧｙ、最も好ましくは３５〜７０ｋＧｙで曝露するステップを含む、方法。
【０４４１】
６０．抗微生物溶液を形成する方法であって、番号付きパラグラフ１から５６のいずれかに記載の組成物を、酵素が基質を変換するために十分な水と混合し、接触させ、または水で希釈するステップを含む、方法。
【０４４２】
６１．抗微生物活性を発生させるための組成物を製造するための方法であって、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素を、酵素のための精製された基質、および少なくとも１つの糖または糖誘導体の形態の溶質と接触させるステップを含み、溶質が２０℃、１気圧で１００ｇ／１００ｇ水を超える溶解度を有し、
組成物が、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない、方法。
【０４４３】
６２．酵素、基質および溶質が、乾燥形態、好ましくは粉末形態で互いに接触する、番号付きパラグラフ６１に記載の方法。
【０４４４】
６３．組成物が、液体または溶液の形態であり、基質、溶質および酵素が、水に溶解している、番号付きパラグラフ６１に記載の方法。
【０４４５】
６４．緩衝剤を添加するステップを含む、番号付きパラグラフ６１から６３のいずれかに記載の方法。
【０４４６】
６５．医薬としての使用のための、番号付きパラグラフ１から５６のいずれかに記載の組成物。
【０４４７】
６６．微生物感染の予防、処置、または改善における使用のための、番号付きパラグラフ１から５６のいずれかに記載の組成物。
【０４４８】
６７．微生物感染の予防、処置、または改善のための医薬の製造における、番号付きパラグラフ１から５６のいずれかに記載の組成物の使用。
【０４４９】
６８．微生物感染を予防し、処置し、または改善する方法であって、番号付きパラグラフ１から５６のいずれかに記載の組成物を、そのような予防、処置、または改善を必要とする対象に投与するステップを含む、方法。
【０４５０】
６９．組成物または溶液を局所投与するステップを含む、番号付きパラグラフ６５から６８のいずれかに記載の使用または方法。
【０４５１】
７０．組成物を注射するステップを含む、番号付きパラグラフ６５から６８のいずれかに記載の使用または方法。
【０４５２】
７１．微生物感染がバイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、番号付きパラグラフ６５から６８のいずれかに記載の使用または方法。
【０４５３】
７２．微生物感染がバイオフィルムを形成することができる細菌、好ましくはグラム陰性細菌を含むか、またはバイオフィルムが以下の細菌種のいずれかを含むか、もしくは微生物が以下の細菌種のいずれかであって、以下の細菌種がＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、もしくはメチシリン感受性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）であるか、または微生物感染が慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）等の鼻洞感染であるか、または微生物感染がＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染等の微生物肺感染もしくは嚢胞性線維症を有する対象におけるＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染である、番号付きパラグラフ７１に記載の使用または方法。
【０４５４】
７３．番号付きパラグラフ１から５６のいずれかに記載の組成物を創傷部位に投与するステップを含む、創傷を処置する方法。
【０４５５】
７４．創傷の処置における使用のための、番号付きパラグラフ１から５６のいずれかに記載の組成物。
【０４５６】
７５．創傷の処置のための医薬の製造における、番号付きパラグラフ１から５６のいずれかに記載の組成物の使用。
【０４５７】
７６．基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、および酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体−基質を含む組成物であって、前駆体−基質を酵素のための基質に変換することを可能にするか、または酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含まない、組成物。
【０４５８】
７７．前駆体−基質が炭水化物である、番号付きパラグラフ７６に記載の組成物。
【０４５９】
７８．炭水化物がデンプン、シュクロース、マルトースおよびセルロースからなる群から選択される、番号付きパラグラフ７７に記載の組成物。
【０４６０】
７９．前駆体−基質を基質に変換するための１つまたは複数の酵素を含む、番号付きパラグラフ７６から７８のいずれかに記載の組成物。
【０４６１】
８０．インベルターゼ、マルターゼ、セルラーゼおよびアミラーゼからなる群から選択される１つまたは複数の酵素を含む、番号付きパラグラフ７９に記載の組成物。
【０４６２】
８１．非水溶媒を含む、番号付きパラグラフ７６から８０のいずれかに記載の組成物。
【０４６３】
８２．ポリマーを含む、番号付きパラグラフ７６から８１のいずれかに記載の組成物。
【０４６４】
８３．塩を含む、番号付きパラグラフ７６から８２のいずれかに記載の組成物。
【０４６５】
８４．第１相および第２相を含み、第１相と第２相が非混和性である、番号付きパラグラフ７６から８３のいずれかに記載の組成物。
【０４６６】
８５．親油性相および水相を含む、番号付きパラグラフ８４に記載の組成物。
【０４６７】
８６．油およびエマルシファイヤーを含む、番号付きパラグラフ８４または番号付きパラグラフ８５に記載の組成物。
【０４６８】
８７．固体形態、例えば粉末である、番号付きパラグラフ７６から８６のいずれかに記載の組成物。
【０４６９】
８８．液体形態、例えば溶液である、番号付きパラグラフ７６から８６のいずれかに記載の組成物。
【０４７０】
８９．２０℃、１気圧で少なくとも１００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する糖または糖誘導体の形態の溶質を含む、番号付きパラグラフ７６から８８のいずれかに記載の組成物。
【０４７１】
９０．溶質が２０℃、１気圧で少なくとも２００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する、番号付きパラグラフ８９に記載の組成物。
【０４７２】
９１．溶質が少なくとも３００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する、番号付きパラグラフ８９または番号付きパラグラフ９０に記載の組成物。
【０４７３】
９２．溶質が二糖または単糖である、番号付きパラグラフ８９から９１のいずれかに記載の組成物。
【０４７４】
９３．溶質が単糖である、番号付きパラグラフ９２に記載の組成物。
【０４７５】
９４．単糖がフルクトースである、番号付きパラグラフ９３に記載の組成物。
【０４７６】
９５．溶質が乾燥重量で組成物の少なくとも６０％である、番号付きパラグラフ９０から９４のいずれかに記載の組成物。
【０４７７】
９６．前駆体−基質が乾燥重量で組成物の少なくとも３０％である、番号付きパラグラフ８９から９５のいずれかに記載の組成物。
【０４７８】
９７．前駆体−基質と溶質とを合わせた乾燥重量が組成物の少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％である、番号付きパラグラフ８９から９６のいずれかに記載の組成物。
【０４７９】
９８．組成物中の糖または糖誘導体の全量が乾燥重量で少なくとも９０％、好ましくは乾燥重量で少なくとも９５％である、番号付きパラグラフ７６から９７のいずれかに記載の組成物。
【０４８０】
９９．重量で２０％またはそれ未満の水を含む、番号付きパラグラフ７６から９８のいずれかに記載の組成物。
【０４８１】
１００．重量で少なくとも１０％、好ましくは重量で少なくとも１５％の水を含む、番号付きパラグラフ８７以外の番号付きパラグラフ７６から９９のいずれかに記載の組成物。
【０４８２】
１０１．合わせて重量で少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、またはさらにより好ましくは重量で少なくとも８０％の前駆体−基質および溶質を含む、番号付きパラグラフ８９から１００のいずれかに記載の組成物。
【０４８３】
１０２．組成物中の糖または糖誘導体の全量が重量で少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、またはさらにより好ましくは重量で少なくとも８０％である、番号付きパラグラフ７６から１０１のいずれかに記載の組成物。
【０４８４】
１０３．緩衝剤を含む、番号付きパラグラフ７６から１０２のいずれかに記載の組成物。
【０４８５】
１０４．ｐＨが５またはそれ未満である、番号付きパラグラフ７６から１０３のいずれかに記載の組成物。
【０４８６】
１０５．ｐＨが６〜８である、番号付きパラグラフ７６から１０３のいずれかに記載の組成物。
【０４８７】
１０６．組成物の希釈の後、少なくとも２４時間、より好ましくは少なくとも４８時間の間、過酸化水素を持続放出する、番号付きパラグラフ７６から１０５のいずれかに記載の組成物。
【０４８８】
１０７．組成物の希釈の後、少なくとも２４時間の間、２ｍｍｏｌ／ｌ未満のレベル、および／または少なくとも０．１ｍｍｏｌ／ｌのレベルで過酸化水素を持続放出する、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４８９】
１０８．酵素が酸化還元酵素である、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０４９０】
１０９．酸化還元酵素がグルコースオキシダーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、ピラノースオキシダーゼ、コリンオキシダーゼ、ピルベートオキシダーゼ、グリコレートオキシダーゼ、アミノ酸オキシダーゼ、またはマンノースオキシダーゼである、番号付きパラグラフ１０８に記載の組成物。
【０４９１】
１１０．酸化還元酵素のための基質がＤ−グルコース、ヘキソース、コレステロール、Ｄ−ガラクトース、ピラノース、コリン、ピルベート、グリコレートまたはアミノ酸である、番号付きパラグラフ１０８または番号付きパラグラフ１０９に記載の組成物。
【０４９２】
１１１．酸化還元酵素がグルコースオキシダーゼであり、酸化還元酵素のための基質がＤ−グルコースである、番号付きパラグラフ１０９から１１０のいずれかに記載の組成物。
【０４９３】
１１２．組成物１グラムあたり少なくとも１単位のグルコースオキシダーゼを含む、番号付きパラグラフ１０８から１１１のいずれかに記載の組成物。
【０４９４】
１１３．組成物１グラムあたり１５００単位までのグルコースオキシダーゼを含む、番号付きパラグラフ１０８から１１２のいずれかに記載の組成物。
【０４９５】
１１４．組成物１グラムあたり１５単位を超えるグルコースオキシダーゼを含む、番号付きパラグラフ１０８から１１３のいずれかに記載の組成物。
【０４９６】
１１５．組成物１グラムあたり少なくとも１００単位、好ましくは１００〜５００単位のグルコースオキシダーゼを含む、番号付きパラグラフ１０８から１１４のいずれかに記載の組成物。
【０４９７】
１１６．組成物１グラムあたり少なくとも５００単位、好ましくは５００〜１０００単位のグルコースオキシダーゼを含む、番号付きパラグラフ１０８から１１５のいずれかに記載の組成物。
【０４９８】
１１７．２５〜２０００ｐｐｍの酵素を含む、番号付きパラグラフ７６から１１６のいずれかに記載の組成物。
【０４９９】
１１８．医用グレードまたは医用デバイスグレードの組成物である、番号付きパラグラフ７６から１１７のいずれかに記載の組成物。
【０５００】
１１９．無菌である、番号付きパラグラフ７６から１１８のいずれかに記載の組成物。
【０５０１】
１２０．照射、好ましくはガンマ線照射または電子線照射への曝露によって、より好ましくは１０〜７０ｋＧｙで、より好ましくは２５〜７０ｋＧｙで、最も好ましくは３５〜７０ｋＧｙで滅菌されている、番号付きパラグラフ１１９に記載の組成物。
【０５０２】
１２１．カタラーゼおよび／またはペルオキシダーゼ活性を有しない、番号付きパラグラフ７６から１２０のいずれかに記載の組成物。
【０５０３】
１２２．純化されていない天然物質を何ら含まない、番号付きパラグラフ７６から１２１のいずれかに記載の組成物。
【０５０４】
１２３．ハチミツを含まない、番号付きパラグラフ７６から１２２のいずれかに記載の組成物。
【０５０５】
１２４．２０℃で少なくとも５０００ｍＰａｓ、より好ましくは２０℃で少なくとも７５００ｍＰａｓの粘度、または２０℃で５０００〜２００００ｍＰａｓの粘度を有する、番号付きパラグラフ８７以外の番号付きパラグラフ７６から１２３のいずれかに記載の組成物。
【０５０６】
１２５．血液凝固剤を含む、前記番号付きパラグラフのいずれかに記載の組成物。
【０５０７】
１２６．凝固因子、任意選択でフィブリノーゲンおよび／またはトロンビンを含む、番号付きパラグラフ１２５に記載の組成物。
【０５０８】
１２７．複数の担体を含み、複数のフィブリノーゲン結合ペプチドがそれぞれの担体に固定化されている、番号付きパラグラフ１２５または番号付きパラグラフ１２６に記載の組成物。
【０５０９】
１２８．実質的に過酸化水素を含まないか、検出可能な過酸化水素を含まない、番号付きパラグラフ７６から１２７のいずれかに記載の組成物。
【０５１０】
１２９．前駆体−基質が溶質である、番号付きパラグラフ８９から１２８のいずれかに記載の組成物。
【０５１１】
１３０．前駆体−基質が溶質とは異なる、番号付きパラグラフ８９から１２８のいずれかに記載の組成物。
【０５１２】
１３１．薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤とともに、番号付きパラグラフ７６から１３０のいずれかに記載の組成物を含む医薬組成物。
【０５１３】
１３２．無菌である、番号付きパラグラフ１４０に記載の医薬組成物。
【０５１４】
１３３．医用グレードまたは医用デバイスグレードの医薬組成物である、番号付きパラグラフ１３１または番号付きパラグラフ１３２に記載の医薬組成物。
【０５１５】
１３４．対象への局所または口腔投与に適合した、番号付きパラグラフ７６から１３３のいずれかに記載の組成物。
【０５１６】
１３５．対象に注射可能であるか、対象への注射に適合した、番号付きパラグラフ７６から１３４のいずれかに記載の組成物。
【０５１７】
１３６．番号付きパラグラフ７６から１３５のいずれかに記載の組成物と、組成物を投与するための使用説明書とを含むキット。
【０５１８】
１３７．創傷を被覆するための被覆材料と、番号付きパラグラフ７６から１３５のいずれかに記載の組成物とを含む創傷被覆材。
【０５１９】
１３８．番号付きパラグラフ７６から１３７のいずれかに記載の組成物、キットまたは被覆材を滅菌する方法であって、組成物、キットまたは被覆材を、照射、好ましくはガンマ線照射または電子線照射に、好ましくは１０〜７０ｋＧｙ、より好ましくは２５〜７０ｋＧｙ、最も好ましくは３５〜７０ｋＧｙで曝露するステップを含む、方法。
【０５２０】
１３９．抗微生物溶液を形成する方法であって、番号付きパラグラフ７６から１３５のいずれかに記載の組成物を、酵素が基質を変換するため、および前駆体−基質を酵素のための基質に変換するために十分な水と混合し、接触させ、または水で希釈するステップを含む、方法。
【０５２１】
１４０．抗微生物活性を発生させるための組成物を製造するための方法であって、基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素を、酵素のための基質に変換することができる精製された前駆体−基質、および少なくとも１つの糖または糖誘導体の形態の溶質と接触させるステップを含み、溶質が２０℃、１気圧で１００ｇ／１００ｇ水を超える溶解度を有し、
組成物が、酵素が基質を変換することを可能にするか、前駆体基質を酵素のための基質に変換することを可能にするために十分な自由水を含まない、方法。
【０５２２】
１４１．酵素、前駆体−基質および溶質が、乾燥形態、好ましくは粉末形態で互いに接触する、番号付きパラグラフ１４０に記載の方法。
【０５２３】
１４２．組成物が、液体または溶液の形態であり、基質または前駆体−基質および酵素が、水に溶解している、番号付きパラグラフ１４０に記載の方法。
【０５２４】
１４３．緩衝剤を添加するステップを含む、番号付きパラグラフ１４０から１４２のいずれかに記載の方法。
【０５２５】
１４４．医薬としての使用のための、番号付きパラグラフ７６から１３５のいずれかに記載の組成物。
【０５２６】
１４５．微生物感染の予防、処置、または改善における使用のための、番号付きパラグラフ７６から１３５のいずれかに記載の組成物。
【０５２７】
１４６．微生物感染の予防、処置、または改善のための医薬の製造における、番号付きパラグラフ７６から１３５のいずれかに記載の組成物の使用。
【０５２８】
１４７．微生物感染を予防し、処置し、または改善する方法であって、番号付きパラグラフ７６から１３５のいずれかに記載の組成物を、そのような予防、処置、または改善を必要とする対象に投与するステップを含む、方法。
【０５２９】
１４８．組成物または溶液を局所投与するステップを含む、番号付きパラグラフ１４４から１４７のいずれかに記載の使用または方法。
【０５３０】
１４９．組成物を注射するステップを含む、番号付きパラグラフ１４４から１４７のいずれかに記載の使用または方法。
【０５３１】
１５０．微生物感染がバイオフィルム、またはバイオフィルムを形成することができる微生物を含む、番号付きパラグラフ１４５から１４９のいずれかに記載の使用または方法。
【０５３２】
１５１．微生物感染がバイオフィルムを形成することができる細菌、好ましくはグラム陰性細菌を含むか、またはバイオフィルムが以下の細菌種のいずれかを含むか、もしくは微生物が以下の細菌種のいずれかであって、以下の細菌種がＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、もしくはメチシリン感受性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）であるか、または微生物感染が慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）等の鼻洞感染であるか、または微生物感染がＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染等の微生物肺感染もしくは嚢胞性線維症を有する対象におけるＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染である、番号付きパラグラフ１５０に記載の使用または方法。
【０５３３】
１５２．番号付きパラグラフ７６から１３５のいずれかに記載の組成物を創傷部位に投与するステップを含む、創傷を処置する方法。
【０５３４】
１５３．創傷の処置における使用のための、番号付きパラグラフ７６から１３５のいずれかに記載の組成物。
【０５３５】
１５４．創傷の処置のための医薬の製造における、番号付きパラグラフ７６から１３５のいずれかに記載の組成物の使用。
【０５３６】
１５５．抗微生物溶液を形成する方法であって、番号付きパラグラフ１から５６または７６から１３５のいずれかに記載の組成物を、酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水が存在するように水溶液中で希釈するステップを含む、方法。
【０５３７】
１５６．組成物を希釈して、３０ｇ／ｌ〜１５０ｇ／ｌ、５０〜１００ｇ／ｌまたは６５〜７５ｇ／ｌの組成物を含有する溶液を形成するステップを含む、番号付きパラグラフ１５５に記載の方法。
【０５３８】
１５７．番号付きパラグラフ１５５または１５６に記載の方法によって得られた、または得られる溶液。
【０５３９】
１５８．過酸化水素が、少なくとも１０μＭ、好ましくは１０〜５０μＭ、より好ましくは２０〜３０μＭの濃度で存在する、番号付きパラグラフ１５７に記載の溶液。
【０５４０】
１５９．過酸化水素の濃度が、溶液の形成後、少なくとも１時間、好ましくは少なくとも２時間、より好ましくは少なくとも１０時間、さらにより好ましくは少なくとも２４時間、維持される、番号付きパラグラフ１５８に記載の溶液。
【０５４１】
１６０．基質を変換して過酸化水素を放出させることができる精製された酵素、酵素のための精製された基質、２０℃、１気圧で少なくとも１００ｇ／１００ｇ水の溶解度を有する糖または糖誘導体の形態の溶質、および酵素が基質を変換することを可能にするために十分な自由水を含む組成物であって、過酸化水素が、少なくとも１０μＭ、好ましくは１０〜５０μＭ、より好ましくは２０〜３０μＭの濃度で存在する、組成物。
【０５４２】
１６１．過酸化水素の濃度が、形成後、少なくとも１時間、好ましくは少なくとも２時間、より好ましくは少なくとも１０時間、さらにより好ましくは少なくとも２４時間、維持される、番号付きパラグラフ１６０に記載の組成物。
【０５４３】
１６２．バイオフィルムを含む微生物感染の処置における使用のための、番号付きパラグラフ１５７から１６１のいずれかに記載の溶液または組成物であって、任意選択でコアモキシクラブ等の抗生物質とともに投与される、溶液または組成物。
【０５４４】
１６３．微生物感染がＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ、ＭＲＳＡまたはＭＳＳＡを含む、番号付きパラグラフ１６２に記載の使用のための溶液または組成物。
【０５４５】
１６４．慢性副鼻腔炎の処置における使用のための、番号付きパラグラフ１５７から１６１のいずれかに記載の溶液または組成物。
【０５４６】
１６５．抗生物質と組み合わせた、番号付きパラグラフ１から５６、７６から１３５、もしくは１６０から１６２のいずれかに記載の組成物、または番号付きパラグラフ１５７から１５９のいずれかに記載の溶液。
【０５４７】
１６６．抗生物質がコアモキシクラブである、番号付きパラグラフ１６５に記載の組成物または溶液。
【０５４８】
１６７．番号付きパラグラフ１から５６、７６から１３５、１５７から１５９、または１６０から１６２のいずれかに記載の組成物または溶液と、別々に抗生物質とを含むキット。
【０５４９】
一般的なフォーマット「［状態Ｙ］の処置における使用のための［組成物Ｘ］」における本明細書の記述および特許請求の範囲は、代替のフォーマット「［状態Ｙ］の処置のための医薬の製造における［組成物Ｘ］の使用」、または「処置を必要とする対象に［組成物Ｘ］を投与するステップを含む［状態Ｙ］を処置する方法」においても表すことができる。
【０５５０】
本発明の好ましい実施形態を、添付の図面を参照して、単なる例示のためにこれより説明する。
【図面の簡単な説明】
【０５５１】
【図１】図１は、様々な濃度において、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（商標）と比較したプランクトン様ＭＲＳＡの増殖に対するグルコース、グルコースオキシダーゼおよびフルクトースを含む本発明の組成物（ＳｙｎｔｈｅｔｉｃＲＯ）の効果を示すグラフである。
【０５５２】
【図２】図２は、様々な濃度において、プランクトン様ＭＲＳＡの増殖に対するグルコース、グルコースオキシダーゼおよびフルクトースを含む滅菌および非滅菌の本発明の組成物（ｐＨ４．０３に緩衝化）の効果を示すグラフである。
【０５５３】
【図３】図３は、様々な濃度において、プランクトン様ＭＲＳＡの増殖に対するグルコース、グルコースオキシダーゼおよびフルクトースを含む滅菌および非滅菌の本発明の組成物（非緩衝化）の効果を示すグラフである。
【０５５４】
【図４】図４は、様々な濃度において、プランクトン様ＭＲＳＡの増殖に対するグルコース、グルコースオキシダーゼおよびフルクトースを含む滅菌および非滅菌の本発明の組成物（ｐＨ７．０４に緩衝化）の効果を示すグラフである。
【０５５５】
【図５】図５は、様々な濃度において、プランクトン様ＭＲＳＡのＭＩＣおよびＭＢＣに対するグルコース、グルコースオキシダーゼおよびフルクトースを含む滅菌および非滅菌の本発明の組成物の効果を示す表である。
【０５５６】
【図６】図６は、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（商標）を含有するエマルジョン中の逆ミセルの光学顕微鏡像を示す。
【０５５７】
【図７】図７は、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯが、ゲートキーピング遺伝子の発現を変化させることによってＴヘルパー細胞（Ｔｈ）サブセットのバランスに影響することを示す。Ｔｈ系列ゲートキーピング遺伝子の遺伝子発現プロファイルを１０ｇ／Ｌまたは１００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯで５分間、１時間および２時間処置した鼻上皮細胞において定量的リアルタイムＰＣＲを使用して解析した。内因性β−アクチンハウスキーピング遺伝子の発現に対する正規化に基づいて倍数変化を算出した。各点は、６つの独立した実験についての遺伝子発現の平均倍数変化を示す。ｙ＝０の点線は、処置群における遺伝子発現をそれに対して正規化し、対のない両側Ｔ検定を使用して比較した非処置の対照群を表す。＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊＊ｐ≦０．０００１。
【０５５８】
【図８】図８は、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯが、鼻上皮細胞においてＴｈ１７応答を誘導することを示す。Ｔｈ１７関連サイトカインの遺伝子発現プロファイルを１０ｇ／Ｌまたは１００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯで５分間、１時間および２時間処置した鼻上皮細胞において定量的リアルタイムＰＣＲを使用して解析した。内因性β−アクチンハウスキーピング遺伝子の発現に対する正規化に基づいて倍数変化を算出した。各点は、６つの独立した実験についての遺伝子発現の平均倍数変化を示す。ｙ＝０の点線は、処置群における遺伝子発現をそれに対して正規化し、対のない両側Ｔ検定を使用して比較した非処置の対照群を表す。＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊＊ｐ≦０．０００１。
【０５５９】
【図９】図９は、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯが、鼻上皮細胞において侵入病原体への宿主免疫応答をモジュレートできることを示す。（ａ）マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）関連遺伝子および（ｂ）Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）遺伝子の遺伝子発現プロファイルを１０ｇ／Ｌまたは１００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯで５分間、１時間および２時間処置した鼻上皮細胞において定量的リアルタイムＰＣＲを使用して解析した。内因性β−アクチンハウスキーピング遺伝子の発現に対する正規化に基づいて倍数変化を算出した。各点は、６つの独立した実験についての遺伝子発現の平均倍数変化を示す。ｙ＝０の点線は、処置群における遺伝子発現をそれに対して正規化し、対のない両側Ｔ検定を使用して比較した非処置の対照群を表す。＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊＊ｐ≦０．０００１。
【０５６０】
【図１０】図１０は、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯが、マスト細胞においてＴｈ１７応答を誘導することを示す。Ｔｈ１７関連サイトカインの遺伝子発現プロファイルを１０ｇ／Ｌまたは１００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯで５分間、１時間および２時間処置したＨＭＣ−１において定量的リアルタイムＰＣＲを使用して解析した。内因性β−アクチンハウスキーピング遺伝子の発現に対する正規化に基づいて倍数変化を算出した。各点は、６つの独立した実験についての遺伝子発現の平均倍数変化を示す。ｙ＝０の点線は、処置群における遺伝子発現をそれに対して正規化し、対のない両側Ｔ検定を使用して比較した非処置の対照群を表す。＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊＊ｐ≦０．０００１。
【０５６１】
【図１１−１】図１１は、過酸化水素の蛍光光度測定を示す。過酸化水素産生の濃度を２４時間の時間経過にわたって測定した。ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯおよびアカシアハチミツの両方による過酸化水素産生の速度論を細胞の存在なし（ａ）、鼻上皮細胞系と共に（ｂ）およびマスト細胞系と共に（ｃ）測定した。データは平均を表し、エラーバーは、少なくとも３つの独立した実験の平均の標準偏差を示す。
【図１１−２】同上。
【０５６２】
【図１２−１】図１２は、過酸化水素での処置が、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯと同様にゲートキーピング遺伝子の発現を変化させることによってＴヘルパー細胞（Ｔｈ）サブセットのバランスに影響することを示す。Ｔｈ系列ゲートキーピング遺伝子の遺伝子発現プロファイルをＲＴ−ＰＣＲによって解析した。（ａ）は鼻上皮細胞におけるＧＡＴＡ３遺伝子発現を示し、（ｂ）は鼻上皮細胞および（ｃ）はマスト細胞のＴｈ１７関連サイトカインの発現を示す。両方の細胞系を過酸化水素（０〜４００μＭ）ありまたはなしのいずれかで１時間処置した。内因性β−アクチンハウスキーピング遺伝子の発現に対する正規化に基づいて倍数変化を算出した。各点は、５つの独立した実験についての遺伝子発現の平均倍数変化を示す。ｙ＝０の点線は、処置群における遺伝子発現をそれに対して正規化し、対のない両側Ｔ検定を使用して比較した非処置の対照群を表す。＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊＊ｐ≦０．０００１。
【図１２−２】同上。
【０５６３】
【図１３】図１３は、過酸化水素での処置が、鼻上皮細胞およびマスト細胞の両方において侵入病原体への抗微生物および宿主免疫応答をモジュレートできることを示す。ＭＭＰ関連遺伝子の遺伝子発現プロファイルを様々な濃度の外因性過酸化水素（０〜４００μＭ）で１時間処置した（ａ）鼻上皮細胞および（ｂ）マスト細胞において定量的リアルタイムＰＣＲを使用して解析した。内因性β−アクチンハウスキーピング遺伝子の発現に対する正規化に基づいて倍数変化を算出した。各処置群について、５つの独立した実験についての遺伝子発現の平均倍数変化を示す。ｙ＝０の点線は、処置群における遺伝子発現をそれに対して正規化し、対のない両側Ｔ検定を使用して比較した非処置の対照群を表す。＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊＊ｐ≦０．０００１。
【０５６４】
【図１４】図１４は、様々な濃度の外因性過酸化水素（０〜４００μＭ）で１時間（ａ）；１０ｇ／Ｌまたは１００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯで５分間、１時間および２時間処置した鼻上皮細胞におけるＩＬ１０の遺伝子発現を定量的リアルタイムＰＣＲを使用して解析したものを示す。内因性β−アクチンハウスキーピング遺伝子の発現に対する正規化に基づいて倍数変化を算出した。各点は、５つの独立した実験についての遺伝子発現の平均倍数変化を示す。ｙ＝０の点線は、処置群における遺伝子発現をそれに対して正規化し、対のない両側Ｔ検定を使用して比較した非処置の対照群を表す。＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊＊ｐ≦０．０００１。
【０５６５】
【図１５】図１５は、様々な濃度において、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯと比較したプランクトン様ＭＲＳＡの増殖に対するグルコース、グルコースオキシダーゼおよびフルクトースを含む本発明の組成物（ＳｙｎｔｈｅｔｉｃＲＯ）の効果を示す。
【０５６６】
【図１６】図１６は、様々な濃度において、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯと比較したプランクトン様ＭＲＳＡのＭＩＣおよびＭＢＣに対するＳｙｎｔｈｅｔｉｃＲＯの効果を示す。
【０５６７】
【図１７】図１７は、プランクトン様ＭＳＳＡ分離株の増殖に対するグルコース、グルコースオキシダーゼおよびフルクトースを含むＳｙｎｔｈｅｔｉｃＲＯ（ＳｙｎｔｈｅｔｉｃＲＯ）の効果を示す。
【０５６８】
【図１８】図１８（ａおよびｂ）は、プランクトン様ＭＲＳＡおよびＭＳＳＡを使用してＳｙｎｔｈｅｔｉｃＲＯをＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯと比較し、図１８ｃは、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯと比較して本発明の組成物のＭＩＣを示す表である。プランクトン様ＭＲＳＡおよびＭＳＳＡのｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養物を各々の組成物の存在下で１８時間増殖させた後、吸光度（ＯＤ５９５）を測定し、非処置の培養物と比較した（ｎ＝６）。
【０５６９】
【図１９】図１９は、ＳｙｎｔｈｅｔｉｃＲＯ＋（酵素あり）およびＳｙｎｔｈｅｔｉｃＲＯ−（酵素なし）で２４時間処置した４８時間のＭＲＳＡ（ａおよびｃ）およびＭＳＳＡ（ｂおよびｄ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏバイオフィルムを示し（ｎ＝５）、生存能力はｃｆｕの計数によって測定し（ａおよびｂ）、バイオマスは吸光度［ＯＤ５９５］によって測定した（ｃおよびｄ）。
【０５７０】
【図２０】図２０は、７１ｇ／ｌのＳｙｎｔｈｅｔｉｃＲＯ＋およびＳｙｎｔｈｅｔｉｃＲＯ−で２４時間処置した後、共焦点顕微鏡法およびＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ染色（ｂ）を使用してイメージングした４８時間のＭＲＳＡおよびＭＳＳＡのバイオフィルムを示し、最大のバイオフィルムの高さを測定し、非処置対照と比較した（ａ）。
【０５７１】
【図２１】図２１は、７１ｇ／ｌの合成ＲＯ＋で処置した個々のＭＲＳＡ（ａ；ｎ＝７）およびＭＳＳＡ（ｂ；ｎ＝５）臨床分離株によって形成された４８時間のバイオフィルムについて、ｃｆｕの計数によって生存能力を測定したものを示す。
【０５７２】
【図２２】図２２は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａバイオフィルムのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ処置の結果を示す。（ａ）ＮＴＨｉ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏプランクトン様培養物をＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯまたはアカシアの存在下で１８時間増殖させた後、吸光度（ＯＤ５９５）の測定によって増殖を評価した。（ｂ）４８時間のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＮＴＨｉバイオフィルムをＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯまたはアカシアで２時間処置し、ｃｆｕの計数によってバイオフィルムの生存能力を測定し、（ｃ）異なるＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯおよびアカシア濃度による２時間時のＨ２Ｏ２産生の蛍光光度測定。（ｄ）ｐＨ６．３（７１ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯと同等のｐＨ）に調整したＨＢＳＳで２時間処置した４８時間のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＮＴＨｉバイオフィルム、およびｃｆｕの計数によってバイオフィルムの生存能力を測定した。＊Ｐ≦０．０５；＊＊Ｐ≦０．０１。
【０５７３】
【図２３】図２３は、分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａバイオフィルムの処置におけるＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯとコアモキシクラブとの比較を示す。（ａ）４８時間のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＮＴＨｉバイオフィルムを７１ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯおよび３００／６０μｇ．ｍｌのコアモキシクラブ単独で、および組合せで２時間処置し、ｃｆｕの計数によって生存能力を測定した。（ｂ）非処置の４８時間のＮＴＨｉバイオフィルム、（ｃ）３００／６０μｇ．ｍｌのコアモキシクラブおよびｄ）７１ｇ／：のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯで２時間処置したバイオフィルムに対して共焦点顕微鏡法を行った。生細胞（緑色蛍光）および死細胞（赤色蛍光）を可視化するためにＬｉｖｅ／Ｄｅａｄ染色を使用してバイオフィルムをイメージングした。＊Ｐ≦０．０５。
【発明を実施するための形態】
【０５７４】
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙは、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（商標）、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯまたはＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（商標）と称されることもある。精製されたグルコース、精製されたフルクトースおよびグルコースオキシダーゼを含む組成物などの本発明の組成物は、ＳｙｎｔｈｅｔｉｃＲＯ、合成ハチミツ組成物または合成組成物と称されることがある。
【実施例】
【０５７５】
具体的な実施例
（実施例１）
合成ハチミツ組成物
グルコースオキシダーゼを含有しないバッチ番号「ＲＯ」の試料。
【０５７６】
５０ｐｐｍのグルコースオキシダーゼを含有するバッチ番号「ＲＯ１」の試料。
【０５７７】
１０００ｐｐｍのグルコースオキシダーゼを含有するバッチ番号「ＲＯ２」の試料。
Ａ．ｐＨ４．０３に緩衝化された試料
Ａ１．バッチ番号ＮＢ０１ｐ４３ＲＯ
非滅菌
【表３】
2019533661.tif 000004
【０５７８】
説明
非滅菌の基礎緩衝化糖溶液。
Ａ２．バッチ番号ＮＢ０１ｐ４３ＲＯ
滅菌
【表４】
2019533661.tif 000005
【０５７９】
説明  滅菌された基礎緩衝化糖溶液
Ａ３．バッチ番号ＮＢ０１ｐ４４ＲＯ１
非滅菌
【表５】
2019533661.tif 000006
【０５８０】
説明
非滅菌の基礎緩衝化ＲＯ１糖溶液。
Ａ４．バッチ番号ＮＢ０１ｐ４４ＲＯ１
滅菌
【表６】
2019533661.tif 000007
【０５８１】
説明
滅菌された基礎緩衝化ＲＯ１糖溶液
Ａ５．バッチ番号ＮＢ０１ｐ４４ＲＯ２
非滅菌
【表７】
2019533661.tif 000008
【０５８２】
説明
非滅菌の基礎緩衝化ＲＯ２糖溶液。
Ａ６．バッチ番号ＮＢ０１ｐ４３ＲＯ２
滅菌
【表８】
2019533661.tif 000009
【０５８３】
説明  滅菌された基礎緩衝化ＲＯ２糖溶液
Ｂ．非緩衝化試料
Ｂ１．バッチ番号ＮＢ０１ｐ５１ＲＯ
非滅菌
【表９】
2019533661.tif 000010
【０５８４】
説明
非滅菌の基礎緩衝化糖溶液。
Ｂ２．バッチ番号ＮＢ０１ｐ５１ＲＯ
滅菌
【表１０】
2019533661.tif 000011
【０５８５】
説明  滅菌された基礎緩衝化糖溶液
Ｂ３．バッチ番号ＮＢ０１ｐ５１ＲＯ１
非滅菌
【表１１】
2019533661.tif 000012
【０５８６】
説明
非滅菌の基礎緩衝化ＲＯ１糖溶液。
Ｂ４．バッチ番号ＮＢ０１ｐ５１ＲＯ１
滅菌
【表１２】
2019533661.tif 000013
【０５８７】
説明
滅菌された基礎緩衝化ＲＯ１糖溶液
Ｂ５．バッチ番号ＮＢ０１ｐ５１ＲＯ２
非滅菌
【表１３】
2019533661.tif 000014
【０５８８】
説明
非滅菌の基礎緩衝化ＲＯ２糖溶液。
Ｂ６．バッチ番号ＮＢ０１ｐ５１ＲＯ２
滅菌
【表１４】
2019533661.tif 000015
【０５８９】
説明
滅菌された基礎緩衝化ＲＯ２糖溶液
Ｃ．ｐＨ７．０４に緩衝化された試料
Ｃ１．バッチ番号ＮＢ０１ｐ５７ＲＯ
非滅菌
【表１５】
2019533661.tif 000016
【０５９０】
説明
非滅菌の基礎緩衝化糖溶液。
Ｃ２．バッチ番号ＮＢ０１ｐ５７ＲＯ
滅菌
【表１６】
2019533661.tif 000017
【０５９１】
説明
滅菌された基礎緩衝化糖溶液
Ｃ３．バッチ番号ＮＢ０１ｐ５７ＲＯ１
非滅菌
【表１７】
2019533661.tif 000018
【０５９２】
説明
非滅菌の基礎緩衝化ＲＯ１糖溶液。
Ｃ４．バッチ番号ＮＢ０１ｐ５７ＲＯ１
滅菌
【表１８】
2019533661.tif 000019
【０５９３】
説明
滅菌された基礎緩衝化ＲＯ１糖溶液
Ｃ５．バッチ番号ＮＢ０１ｐ５７ＲＯ２
非滅菌
【表１９】
2019533661.tif 000020
【０５９４】
説明
非滅菌の基礎緩衝化ＲＯ２糖溶液。
Ｃ６．バッチ番号ＮＢ０１ｐ５７ＲＯ２
【表２０】
2019533661.tif 000021
【０５９５】
説明
滅菌された基礎緩衝化ＲＯ２糖溶液
（実施例２）
プランクトン様ＭＲＳＡに対する合成ハチミツ組成物の有効性
【０５９６】
ＲＯ１試料（５０ｐｐｍのグルコースオキシダーゼを含有する）についてＭＩＣおよびＭＢＣを評価し、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（商標）（これも５０ｐｐｍのグルコースオキシダーゼを含有する）と比較した。Andrews J. M.、Journal of AntimicrobialChemotherapy（２００１年）４８巻、補遺Ｓ１号、５〜１６頁を参照。
【０５９７】
結果を図１〜５に示す。
【０５９８】
結果は、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙと同様、グルコース、グルコースオキシダーゼおよびフルクトースを含有する合成組成物は微生物増殖を阻害できることを示す。
【０５９９】
全ての合成組成物のうち、ｐＨ７．０４に緩衝化された合成組成物は最も有効なＭＩＣを有していた。滅菌組成物は非滅菌組成物より有効であり、ｐＨ７．０４に緩衝化された合成組成物は、他の合成組成物と比較したときに、そしてＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙと比較したときにさえ、最も有効なＭＢＣを有していた。
【０６００】
図１５（ａ〜ｄ）および図１６は、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ２試料および合成ＲＯ２試料を含むＭＩＣおよびＭＢＣの結果を示す。
【０６０１】
ｐＨ７．０４の配合物をプランクトン様ＭＳＳＡ分離株に対して試験した。図１７は得られた結果を示す。
【０６０２】
さらなる研究のために合成ＲＯ２組成物を選択した。図１８（ａ、ｂおよびｃ）は、プランクトン様表現型を使用してＳｙｎｔｈｅｔｉｃＲＯ（ＲＯ２；ｐＨ７．０４）をＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯと比較したものを示す。ＲＯ−は、酵素活性を欠いた製品を指し示す。
（実施例３）
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（商標）エマルジョン
調製
【０６０３】
１０ｇのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙを１０ｍｌのグリセロールに溶解した。その後、Ｊａｃｋｅｔ  Ｐｅｌｔｉｅｒおよび翼形状物を取り付けたレオメーター（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＡＲ−Ｇ２）に１０ｍｌのパラフィン油を加えた。その後、１ｍｌのＰＧＰＲ（ポリグリセロールポリリシノレエート）を加えた。その後、レオメーターを以下の条件下で開始させた：せん断速度２０００ｓ−１、温度は３７．５℃に設定。２分後、１０ｍｌのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ−グリセロール溶液を滴下で加えた。合計で１０分が経過したらエマルジョンをＪａｃｋｅｔ  Ｐｅｌｔｉｅｒから容器に移した。
光学顕微鏡法
【０６０４】
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙを封入した逆ミセルをエマルジョンが含有したことが光学顕微鏡法により明らかになった。そのようなミセルは図６において観察することができる。平均ミセル直径は１７８μｍであった。
過酸化水素試験
【０６０５】
過酸化水素スティック試験（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｑｕａｎｔｏｆｉｘ（登録商標））より購入）を使用してエマルジョン中の過酸化水素を検出した。試験は水を加える前および後に実行し、水を加える前にエマルジョンは過酸化水素を産生せず、水を加えた後に、試験したエマルジョンは過酸化水素について陽性であることが示された。試験の陽性は、青色への色の変化によって指し示された。
安定性試験
【０６０６】
周囲条件下での少なくとも４週間にわたる貯蔵後にエマルジョンは過酸化水素を生成する能力を維持した。
スプレー試験
【０６０７】
エマルジョンをポンプ作用スプレーボトルに加えたところ、スプレー可能であった。
（実施例４）
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（商標）エマルジョンの安定性に対する異なるパラメーターの効果
【０６０８】
１回に１つのパラメーターで、実施例３に記載のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙエマルジョンの調製方法を変更する効果を調べた。変更およびそれらの効果を以下に要約する。
ｉ）Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ−グリセロール相に対する油相の割合
【０６０９】
１０ｍｌより大きい、および１０ｍｌ未満の油体積を試験した。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ−グリセロール相の体積と比べてより小さい体積の油を使用したときにエマルジョンはより安定であった。油の体積が６ｍｌ未満の場合、エマルジョンは総体積中の３％未満が７２時間で分離した。４ｍｌの体積は、７２時間で総体積の１．３％のみの分離を可能とした。この安定性は、同じ期間で総体積の９．４％の分離を伴うエマルジョンを提供した実施例３に記載の方法の安定性よりはるかに大きい。
ｉｉ）ＰＧＰＲの体積
【０６１０】
最大４ｍｌ、および１ｍｌ未満のＰＧＰＲの体積を試験した。より多くの量のＰＧＰＲを使用したときにエマルジョンはより安定であった。４ｍｌの体積において、より少ない体積を使用した場合よりもＰＧＰＲはより高い安定性を提供し、実施例３に記載のエマルジョンよりはるかに高い安定性を提供した。
ｉｉｉ）せん断速度
【０６１１】
１０００ｓ−１〜３０００ｓ−１のせん断速度を試験した。より高いせん断速度を適用したときにエマルジョンはより安定であった。３０００ｓ−１のせん断速度は最も安定なエマルジョンを産生した。７２時間で総体積の４．６％のみの分離がこのせん断速度で調製されたエマルジョンについて観察されたのに対し、実施例３に記載されるように調製されたエマルジョンについて同じ期間で総体積の９．４％の分離体積であった。
ｉｖ）温度
【０６１２】
２０℃〜４０℃の温度を試験した。温度を増加させたときにエマルジョンの安定性に関して目立った傾向はなかった。しかし、４０℃の温度は最も安定なエマルジョンを産生した。７２時間で総体積の３．１％のみの分離がこのエマルジョンについて観察された。
ｖ）せん断の長さ
【０６１３】
実施例３に記載の調製方法において使用されたものに加えて、２０分および３０分のせん断時間を試験した。しかし、せん断時間を延長することによる有意差は生じなかった。
ｖｉ）試薬を加える順序
【０６１４】
レオメーターに試薬を加える順序を変更する効果を試験した。レオメーターを開始する前に全ての成分を加える効果を、最初にＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ−グリセロールおよび油成分を加え、１〜２分後にＰＧＰＲを加える効果と比較した。ＰＧＰＲを最後に加えたときに最も安定なエマルジョンが形成された。結果として得られたエマルジョンは、１２０時間で総体積の２．８％の分離体積を提供した。
ｖｉｉ）グリセロール中に溶解したＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙの濃度
【０６１５】
以下のグリセロール（ｍｌ）に対するＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（ｇ）の比を試験した：１ｇ：１ｍｌ；０．５ｇ：１ｍｌ；２ｇ：１ｍｌ。最も安定なエマルジョンを産生した比は１ｇ：１ｍｌであり、これは実施例３に記載の調製方法において使用されたものと同じ比であった。
ｖｉｉｉ）塩化ナトリウム
【０６１６】
エマルジョンの極性層に溶解されたときに塩化ナトリウムはこの層の極性を増加させる。それはまた、エマルジョンの脂質層と静電相互作用を形成する。静電相互作用および増加した極性は、安定性を向上させ、凝縮を低減させるかもしれない。しかし、塩化ナトリウム（１ｇ、２ｇまたは４ｇ）の追加はエマルジョンの安定性に影響しなかった。
変更の効果を下記の表に要約する：
【表２１】
2019533661.tif 000022
（実施例５）
高い安定性を有するＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（商標）エマルジョン
【０６１７】
上記の変更からの結果を使用して、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙエマルジョンを調製するさらなる方法を設計した。この方法を以下に記載する。
調製
【０６１８】
１０ｇのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙを１０ｍｌのグリセロールに溶解した。その後、Ｊａｃｋｅｔ  Ｐｅｌｔｉｅｒおよび翼形状物を取り付けたレオメーター（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＡＲ−Ｇ２）に４、６、８、または１０ｍｌのパラフィン油を加えた。その後、１０ｍｌのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ−グリセロール溶液をレオメーターに加えた。その後、レオメーターを以下の条件下で開始させた：せん断速度３０００ｓ−１、温度４０℃、ギャップ４０００μｍ、実行時間１０分。１分後、４ｍｌのＰＧＰＲ（ポリグリセロールポリリシノレエート）を加えた。合計で１０分が経過したらエマルジョンをレオメーターから容器に移した。
【表２２】
2019533661.tif 000023
【０６１９】
全ての配合物は高度に安定であり、使用したパラフィン油の体積を増加させた際に安定性のわずかな増加が観察された。
（実施例６）
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（商標）クリーム配合物
【０６２０】
１．５ｇのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙを１．５ｍｌのグリセロールに溶解した。その後、１ｇのアルギン酸ナトリウムをＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ−グリセロール溶液に溶解した。次に、Ｊａｃｋｅｔ  Ｐｅｌｔｉｅｒおよび翼形状物を取り付けたレオメーター（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＡＲ−Ｇ２）に１０ｍｌのパラフィン油を加えた。その後、１ｍｌのＰＧＰＲ（ポリグリセロールポリリシノレエート）を加えた。その後、レオメーターを以下の条件下で開始させた：せん断速度２０００ｓ−１、温度は３７．５℃に設定、ギャップ４０００μｍ、実行時間１０分。２分後、１．５ｍｌのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ−アルギネートおよびグリセロール溶液をレオメーターに加えた。３分後、８ｍｌの塩化カルシウム溶液をレオメーターに滴下で加えた。合計で１０分が経過したらエマルジョンをＪａｃｋｅｔ  Ｐｅｌｔｉｅｒから容器に移した。
（実施例７）
非水性Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（商標）クリーム配合物
【０６２１】
実施例１０に記載の方法は、水を使用して塩化カルシウムをそのイオンに解離させる。これは、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙを活性化させて過酸化水素を産生し、クリーム配合物の安定性を制限する可能性がある。しかし、エタノールまたは酢酸などの非水性溶媒を使用して塩化カルシウムを解離できることを本発明者らは認識した。本発明者らはまた、グリセロールが自由水に結合できることも認識した。この特性は、過酸化水素の未熟な放出を防止するために十分なグリセロールが存在する場合に、水を使用してアルギネートを溶解することを可能とする。
【０６２２】
以下に記載の方法は、塩化カルシウム用の溶媒としてエタノール、およびアルギネート溶液中の自由水に結合するためのグリセロールを使用する。
【０６２３】
１ｇのアルギン酸ナトリウムを１５ｍｌの水に溶解した。次に、３０ｍｌのグリセロールをアルギネート溶液に加え、混合した。その後、３０ｇのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙを該溶液に溶解した。その後、Ｊａｃｋｅｔ  Ｐｅｌｔｉｅｒおよび翼形状物を取り付けたレオメーター（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＡＲ−Ｇ２）に１０ｍｌのパラフィン油を加えた。その後、１０ｍｌのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ溶液をレオメーターに加えた。その後、レオメーターを以下の条件下で開始させた：せん断速度３０００ｓ−１、温度４０℃、ギャップ４０００μｍ、実行時間１０分。１分後、４ｍｌのＰＧＰＲ（ポリグリセロールポリリシノレエート）を加えた。２分後、８ｍｌの非水性塩化カルシウム溶液（エタノール中の１Ｍの塩化カルシウム）をレオメーターに滴下で加えた。合計で１０分が経過したらエマルジョンをレオメーターから容器に移した。
【０６２４】
上記のエマルジョン配合物の要約。
【表２３】
2019533661.tif 000024
【０６２５】
本発明の合成ハチミツ組成物は、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙベースのエマルジョン中のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙおよび本明細書に記載のクリームを代用し得る。
（実施例８）
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（商標）を用いるアフタ性潰瘍および地図状舌の処置
【０６２６】
Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙを使用して地図状舌および再発性アフタ性潰瘍を有する２人の患者を処置した。Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙを局所的に適用し、嚥下の前にできるだけ長く１日に３回罹患した領域上に保持した。これを１週間続けた。
【０６２７】
両方の症例において、地図状舌は４８時間のうちに消散した。１人の症例では、潰瘍は進行しなかったが、この症例はＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙでの処置を停止した１０日後にさらなるアフタ性潰瘍を有した。他の症例では、潰瘍は通常ほどは悪くないことを対象は報告し、さらなる潰瘍の報告はなかった。
（実施例９）
電子ビーム照射による処置
【０６２８】
活性化アカシアハチミツの試料を調製した。３つのガラス試料バイアルに１０ｇの活性化されたハチミツをそれぞれ充填した。それぞれの試料をＬａｂｔｅｋ  ＰＥＲ１００過酸化物試験スティックにより試験して色の生成速度から過酸化水素の生成を決定した。約７５ｋＧｙの線量での電子ビーム照射により試料を滅菌した後、過酸化水素の生成について試験した。
【０６２９】
非滅菌の活性化アカシアハチミツ試料：過酸化物産生の測定された平均速度０．５４０ｐｐｍ／秒、標準偏差０．０６２。
滅菌された活性化アカシアハチミツ試料：過酸化物産生の測定された平均速度０．３５３ｐｐｍ／秒、標準偏差０．００８。
【０６３０】
ハチミツ試料は、電子ビーム照射による滅菌後に過酸化水素を産生する能力を維持した。
（実施例１０）
上皮細胞に対するＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ処置の免疫モジュレーション効果
【０６３１】
ヒト鼻上皮細胞系を使用して、上皮の完全性および機能に対するＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙとしても公知）の即時の効果を調べた。加えて、ヒトマスト細胞系を代表的な白血球として使用して、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯに対する免疫応答を調べた。マスト細胞は、組織中の上皮の直下に位置するセンチネル細胞としてのそれらの機能により、選択した。マスト細胞は外部環境と密接に接触し、例えば鼻粘膜中に見られ、そこで理想的には、細菌などの病原体に対する宿主の防御における先天免疫および適応免疫を連結させる必須の役割を有する免疫エフェクターおよびモジュレーション細胞として作用することによって、病原体の初期認識に参加するように配置されている。
【０６３２】
マスト細胞を使用する別の理由は、マスト細胞中の細胞内細菌の発見に関する（Hayesら、J Allergy Clin Immunol ２０１５年；１３５巻（６号）：１６４８〜５１頁）。この処置の目的の１つは、細胞外環境に細菌を定常的に播種し、したがって進行性の炎症および慢性化の発生を促進するリザーバーとして作用する細胞内細菌を標的化するためのその使用を開発することである。
【０６３３】
本研究の目的の１つは、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯでの処置が宿主に免疫モジュレーション効果を誘発し得るかどうかを決定することであった。図７は、Ｔ細胞分化の４つの主なゲートキーピング遺伝子の発現に対するＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯの効果を実証する。ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ処置は、ＴｈのバランスのＴｈ２へのシフトおよび鼻上皮細胞についてＴｈ１７極性化を引き起こす。いずれの濃度のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯを用いても時間経過にわたってＴ−ｂｅｔの発現の有意な増加が観察されないため、結果はこれを示す。しかし、ＧＡＴＡ３の発現の用量および時間依存的な増加があり、１００ｇ／Ｌで処置した場合、この差異は全ての時点において有意である（ｐ≦０．０５）。２時間時に、１００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯで２．７４倍、１０ｇ／Ｌで２．１９倍の発現の有意な増加がある。
【０６３４】
図７はまた、１００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯで処置したときに１時間（−０．３４に減少、ｐ≦０．０５）および２時間（−０．６０に減少、ｐ≦０．０００１）の両方において有意性と共にＦＯＸＰ３発現の用量および時間依存的な減少があることを示す。鼻上皮細胞は、Ｔｈ１７ゲートキーピング遺伝子ＲＯＲγＣの発現の増加を示す。１００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯで２時間処置した場合、上皮細胞は、ｐ≦０．０５でＲＯＲγＣ発現の有意な１．８９倍の増加を有した。データは、試験した全ての遺伝子について、マッチさせた濃度（１０ｇ／Ｌおよび１００ｇ／Ｌ）の非操作基礎ハチミツ（アカシア）で細胞処置の効果がないことを示した（データ示さず）。
【０６３５】
Ｔｈ１７の極性化は、Ｔｈ１７関連サイトカインであるインターロイキン２２（ＩＬ２２）およびインターロイキン２３受容体（ＩＬ２３Ｒ）の遺伝子発現の変化によってさらに支持される（図８）。ＩＬ２２の発現の時間および用量依存的な増加があり、それぞれ、１００ｇ／Ｌで時点にわたって０．２２から２．０５倍（ｐ≦０．０５）および１．６７（ｐ≦０．０１）、１０ｇ／Ｌで０．８６倍から１．３３および１．３８（ｐ≦０．０５）に増加する。さらには、ＩＬ２３Ｒ発現の時間および用量依存的な増加があるが、これは１００ｇ／Ｌで処置したときのみであり、時間経過にわたって２．７４倍（ｐ≦０．００１）から８．５４倍（ｐ≦０．０５）、そして最後に１４．２８倍（ｐ≦０．０５）に増加する。
【０６３６】
Ｔｈ１７応答に影響するＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯの能力を実証したが、侵入病原体への宿主応答を媒介する能力を該処置が有するかどうかを調べることを本発明者らは望んだ。マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）は、活性化された上皮細胞によって分泌されることが公知である。マトリックスの分解および創傷治癒特性に加えて、ＭＭＰはまた、感染性因子に対する宿主防御応答において重要な役割を果たす。ＭＭＰ７は、抗菌性のデフェンシンの活性化に関与し、成熟ＴＮＦおよびケモカインを放出させて感染症に対処する。ＭＭＰ９は、免疫応答を調節し、かつ、細胞外基質の切断の結果としてもたらされる組織リモデリングを促進するリンパ球性細胞の遊走を誘引することができる。
【０６３７】
図９ａは、ＭＭＰ７およびＭＭＰ９の両方の時間および用量依存的な上方調節を実証し、これは、１０ｇ／Ｌおよび１００ｇ／Ｌの両方のＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯでの処置後の有意な倍の増加を結果としてもたらす。ＭＭＰ７の発現は、２時間時に１０ｇ／Ｌで４．５６（ｐ≦０．０１）および１００ｇ／Ｌで８．０４（ｐ≦０．０５）という倍数変化に有意に増加した。ＭＭＰ９もまた、１０ｇ／Ｌで１．３７倍（ｐ≦０．０１）および１００ｇ／Ｌで３．７３倍（ｐ≦０．０５）に有意に増加した。デフェンシン５およびＴＮＦαの両方の発現の有意な増加もあった。１００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯでの２時間の処置後に、０．９倍（ｐ≦０．０１）のデフェンシン５発現の平均増加があり、ＴＮＦα発現は４．２４倍（ｐ≦０．０５）増加した。これは、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯが侵入病原体への宿主応答を高める能力を有するという仮説を支持する直接的な証拠である（図９ａ）。
【０６３８】
病原体への早期先天免疫応答の必須機能はＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）によって果たされ、該受容体による病原体関連微生物パターン（ＰＡＭＰ）、および内因性危険関連分子パターン（ＤＡＭＰ）の認識が、下流のシグナル伝達カスケードを開始させ、適応免疫応答に対して直接的な効果を有する炎症促進性およびエフェクターサイトカインの産生を結果としてもたらす。図９ｂは、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯでの鼻上皮細胞の処置後の２つのＴＬＲ（ＴＬＲ２およびＴＬＲ４）の遺伝子発現の増加を示す（図９ｂ）。１００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯで２時間処置したときにＴＬＲ２の発現において１．８５倍の高度に有意な（ｐ≦０．００１）平均の増加がある。
【０６３９】
本発明者らは次に、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ処置に対するマスト細胞系（ＨＭＣ−１）の応答を研究した。鼻上皮細胞で見られた効果と合致して、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ処置後にＴｈ１７関連サイトカインの発現増加もある。１００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯで２時間処置した場合、マスト細胞は、それぞれ、ＲＯＲγＣ発現において１．８９倍（ｐ≦０．０１）、ＩＬ２２発現において１．３５倍（ｐ≦０．０５）およびＩＬ２３Ｒ発現において０．６１倍（ｐ≦０．０５）の有意な増加を示した（図１０）。
（実施例１１）
ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯによる過酸化水素の産生
【０６４０】
ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯの潜在的な免疫モジュレーション効果に加えて、本研究において使用した濃度（１０ｇ／Ｌおよび１００ｇ／Ｌ）についてＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯによる過酸化水素の産生を定量化した。この実験の目的は、以前に観察された免疫モジュレーション効果がＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯによる内因性の過酸化水素産生の結果であったのかどうかを検証することであった。
【０６４１】
図１１ａは、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯによる過酸化水素の放出が、非操作基礎ハチミツ（アカシア）のそれより有意に高いことを示す。過酸化水素の産生は、２時間と６時間との間にピークがあり、その時間において、１０ｇ／Ｌのものより１００ｇ／Ｌについて約１２倍高い。産生の指数関数的な増加後に、過酸化水素のレベルは、測定した最後の時点である２４時間まで一定のままである。
【０６４２】
本研究では、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯおよびアカシアハチミツを使用して両方の細胞系を処置したときの過酸化水素の産生を評価した。上皮細胞（図１１ｂ）またはマスト細胞（図１１ｃ）の存在または非存在下で１００ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯによって産生された過酸化水素の最大量は約４００ｕＭであり、２時間時をピークとすることが示された。任意の細胞が存在するかどうかで有意差はなかった。培養物中の細胞の存在は有意差をもたらさず、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯが細胞培養物中の過酸化水素の主な供給源であることを示唆した。
（実施例１２）
外因性過酸化水素での処置の免疫モジュレーション効果
【０６４３】
図１１においてＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯによる過酸化水素産生の濃度が確立されたが、細胞培養物中で産生された過酸化水素の濃度が免疫モジュレーションの変化を誘導できるかどうかを知ることを本発明者らは望んだ。この場合、０〜４００ｕＭの適切な濃度範囲の純粋な過酸化水素で細胞を処置した。
【０６４４】
ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯでの処置の効果は、同等の濃度の純粋な過酸化水素での効果と相関した。図１２ａは、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯでの処置と類似して、外因性過酸化水素が鼻上皮細胞においてＧＡＴＡ３発現の用量依存的な増加を誘発し、４００μＭの過酸化水素で１時間処置したときに０．９２の有意な倍の増加（ｐ≦０．５）であることを示す（図１２ａ）。
【０６４５】
ＲＯＲγＣの発現の用量依存的な増加も外因性過酸化水素での処置後に検出され、４００μＭの過酸化水素で鼻上皮細胞について１４．５７倍（ｐ≦０．０５）およびマスト細胞について２．８３倍（ｐ≦０．０５）の発現の平均の増加を結果としてもたらした。
【０６４６】
これらの変化はまた、両方の細胞系についてＩＬ２２およびＩＬ２３Ｒの増加に関連する（図１２ｂおよび図１２ｃ）。鼻上皮細胞では、４０μＭでの０．９０倍から２００μＭでの１．４２倍および４００μＭでの４．５５倍へのＩＬ２２の発現の安定した増加があり（ｐ≦０．００１）、ＩＬ２３Ｒでは、発現の倍数変化が濃度範囲にわたって０．４５から１．２０（ｐ≦０．０５）および１．８７（ｐ≦０．００１）に増加した。マスト細胞では、４０μＭでの０．６０倍から２００μＭでの１．２５（ｐ≦０．０５）および４００μＭでの１．８１（ｐ≦０．０１）へのＩＬ２２の発現の増加があり、ＩＬ２３Ｒでは、発現の倍数変化が濃度範囲にわたって０．４７から０．５８および１．０５（ｐ≦０．０５）に増加した。
【０６４７】
上皮細胞およびマスト細胞を用いた外因性過酸化水素での処置はまた、抗微生物性のＭＭＰ７およびＭＭＰ９の発現における用量依存的な増加を引き起こした（図１３ａおよび図１３ｂ）。しかし、鼻上皮細胞についてＭＭＰ９の発現（４００μＭで１．４７倍、ｐ≦０．０１）およびマスト細胞についてＭＭＰ７の発現（２００μＭおよび４００μＭでそれぞれ３．０７倍（ｐ≦０．０５）および３．３１倍（ｐ≦０．０５）の増加を有する）でのみ統計的有意性がある。
（実施例１３）
ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯおよび外因性過酸化水素の保護的抗炎症効果
【０６４８】
外因性過酸化水素での処置は、ＩＬ１０の発現を増加させることによって上皮細胞に対して保護的抗炎症効果を直接的に誘導することができる。図１４ａは、４００μＭの過酸化水素で処置した鼻上皮細胞における４．６３倍（ｐ≦０．０５）への抗炎症性サイトカインＩＬ１０の発現の有意な増加を示す。これらの効果と一致して、保護的かつ抗炎症性サイトカインＩＬ１０の発現の時間依存的な増加があることも本発明者らは実証した；倍数変化が、時点にわたってそれぞれ１００ｇ／Ｌで０．０１から２．６５（ｐ≦０．０５）および４．７３（ｐ≦０．０５）、１０ｇ／Ｌで−０．８１から３．０１（ｐ≦０．０５）および４．８５に増加（図１４ｂ）。ＩＬ１０発現のこの増加はまた、鼻上皮細胞におけるＧＡＴＡ３発現の増加と相関し、Ｔｈ２系列へのシフトを支持する。
【０６４９】
これらのデータは、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯおよび過酸化水素の両方の保護的な効果、ならびに特に鼻上皮細胞についてＴｈ２系列へのバランスのシフトを支持する。
【０６５０】
以上を合わせて、これらの実験は、Ｔｈ２およびＴｈ１７応答へのシフト、ならびに抗微生物および先天免疫応答を伴って鼻上皮細胞およびマスト細胞の両方におけるＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ処置の免疫モジュレーション効果を明確に実証する。これらの効果は、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯの過酸化水素産生によって媒介される可能性がある。ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯは皮膚に対して抗炎症性および創傷治癒効果を有することが示されている。本発明者らの研究において、これらの効果は、抗炎症性サイトカインＩＬ１０の上方調節を通じて媒介される可能性があることが示された。これらのデータは、Ｓｕｒｇｉｈｏｎｅｙ  ＲＯの免疫モジュレーション特性への新たな洞察を与える。
（実施例１４）
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓの慢性鼻副鼻腔炎に関連する粘膜細菌株に対するＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（商標）および合成ハチミツ組成物の評価
【０６５１】
ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（商標）および合成ＲＯ（ｐＨ７．０４；ＲＯ２）を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏプランクトン様表現型および臨床的なＭＲＳＡおよびＭＳＳＡ分離株の確立されたバイオフィルムの両方に対して試験した。バイオフィルム生存能力をコロニー形成単位（ｃｆｕ）の計数によって評価し、バイオマスを吸光度の測定によって評価した。共焦点顕微鏡法を使用してデータを検証した。
・材料および方法
細菌株および増殖条件
【０６５２】
Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株を冷凍したストックからコロンビア血液寒天（ＣＢＡ）プレート（Ｏｘｏｉｄ、ＵＫ）に継代培養し、３７℃および５％  ＣＯ２で１８時間インキュベートした後、コロニーをブレインハートインフュージョン（ＢＨＩ）ブロスに再懸濁し、実験用に指数増殖中期まで増殖させた。
プランクトンアッセイ
【０６５３】
平底９６ウェルプレート（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＫ）にウェルあたり約１．０×１０６のプランクトン様細菌（添加ＢＨＩ中で増殖）を接種した。ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯＴＭおよび合成製品（ＲＯ＋およびＲＯ−）をＢＨＩ中で調製し、６ｇ／Ｌ〜３８３ｇ／Ｌの最終濃度でウェルに加えた。非処置対照についてはＢＨＩを単独で処置の代わりに加えた。培養物を３７℃および５％  ＣＯ２で１８時間インキュベートした後、ＥＺＲｅａｄ  ４００分光光度計（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ；ｎ＝６）を使用して吸光度（ＯＤ５９５）によって濁度を測定した。
バイオフィルムアッセイ
【０６５４】
指数増殖中期のプランクトン様培養物を使用して非処置の６ウェルポリスチレンプレート（ウェルあたり約１．０×１０８のプランクトン様細菌；Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、ＵＳＡ）の個々のウェルに接種した。培養物を３７℃および５％  ＣＯ２で４８時間インキュベートし、使用済みの培地を２４時間時に新鮮なＢＨＩで置換した。処置の前に、使用済みの培地を除去し、バイオフィルムをハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ；Ｇｉｂｃｏ、ＵＫ）で２回洗浄した。バイオフィルムを７〜１４２ｇ／Ｌの最終濃度でＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ、ＲＯ＋またはＲＯ−（全てＨＢＳＳ中で調製）で処置した。非処置対照についてはＨＢＳＳを単独で処置の代わりに加えた。バイオフィルムを３７℃および５％  ＣＯ２で２４時間インキュベートした後、処置を除去し、バイオフィルムをＨＢＳＳで２回洗浄して非接着細胞を除去した。細胞スクレイピングおよび簡単にボルテックスすることによってバイオフィルムを１ｍｌのＨＢＳＳに再懸濁した後、コロンビア血液寒天に段階希釈した。プレートを３７℃および５％  ＣＯ２でインキュベートし、コロニー形成単位（ＣＦＵ）を計数した（ｎ＝５）。総バイオフィルムバイオマスを評価するために、１００μＬの再懸濁したバイオフィルムをＢＨＩに１０倍に希釈し、Ｊｅｎｗａｙ  ６３００分光光度計を使用して吸光度（ＯＤ５９５）によって濁度を測定した。
共焦点顕微鏡法
【０６５５】
指数増殖中期のプランクトン様培養物を使用して３５ｍｍの非処置のガラス底ＣｅｌｌＶｉｅｗ細胞培養皿（ウェルあたり約１．０×１０８のプランクトン様細菌；Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ  Ｏｎｅ、ＵＫ）に接種した。培養物を３７℃および５％  ＣＯ２で４８時間インキュベートし、使用済みの培地を２４時間時に新鮮なＢＨＩで置換した。培地を除去し、バイオフィルムをＨＢＳＳで２回洗浄した後、３７℃および５％  ＣＯ２で２４時間７１ｇ／ＬのＲＯ＋、７１ｇ／ＬのＲＯ−、またはＨＢＳＳ単独（非処置対照）で処置した。処置を除去し、バイオフィルムをＨＢＳＳで２回洗浄した後、製造者の使用説明書に従ってＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ  Ｂａｃｌｉｇｈｔ  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＫ）で染色した。２μｍの切片の逐次的な走査で６３×のオイルイマージョンレンズ（Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＫ）を使用し、倒立Ｌｅｉｃａ  ＳＰ８共焦点顕微鏡を使用してバイオフィルムを調べた。
統計解析
【０６５６】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏのプランクトンおよびバイオフィルムデータの統計解析は、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）およびクラスカル・ウォリス多重比較検定を使用して行った。≦０．０５のＰ値を有する比較データを統計的に有意と考えた。
・結果
【０６５７】
同じ分離株を使用する確立された４８時間のＭＲＳＡおよびＭＳＳＡバイオフィルムの処置は、ＲＯ＋製品での２４時間の処置が両方の事例においてバイオフィルムの生存能力を低減させることを明らかにした（図１９ａおよびｂ）。５３および７１ｇ／ＬでＭＲＳＡバイオフィルムを処置したときに生存能力の１ｌｏｇ低減が観察され（ｐ＝０．００７９）、１４２ｇ／Ｌで処置したときに２ｌｏｇ低減が観察された（ｐ＝０．０１５９）。これに対し、３６〜１４２ｇ／ＬでＭＳＳＡバイオフィルムを処置したときに１ｌｏｇ低減のみが観察された（ｐ≦０．０５）。ＲＯ−での処置は、試験した株のいずれかによって形成されたバイオフィルムの生存能力に対して効果を有しなかった（図１９ａおよびｂ）。３６〜７１ｇ／ＬのＲＯ＋またはＲＯ−のいずれかでの２４時間のＭＲＳＡバイオフィルムの処置も全体的なバイオフィルムバイオマスの有意な増加を結果としてもたらした一方（ｐ≦０．０５）、試験した全ての濃度（７〜１４２ｇ／Ｌ）はＭＳＳＡバイオフィルムのバイオマスを有意に増加させた（ｐ≦０．０５）。共焦点顕微鏡法を使用してバイオフィルムの生存能力およびバイオマスデータを検証した。４８時間の確立されたＭＲＳＡおよびＭＳＳＡバイオフィルムの両方は、７１ｇ／ＬのＲＯ−およびＲＯ＋製品で処置したときに生存能力の低減および最大のバイオフィルムの厚さの増加を実証した（図２０ａおよびｂ）。ＭＲＳＡバイオフィルムの最大高さは２５．３μｍから３６．３μｍ（ＲＯ−）および４５．３μｍ（ＲＯ＋）に増加した一方、ＭＳＳＡバイオフィルムは１９．６６μｍから４５．３μｍ（ＲＯ−）および３５．９９μｍ（ＲＯ＋）に増加した。最後に、いくつもの臨床的なＭＲＳＡ（ｎ＝７）およびＭＳＳＡ（ｎ＝５）分離株によって形成された４８時間の確立されたバイオフィルムの処置は、各バイオフィルムの生存能力が各群内で観察された平均１ｌｏｇ低減で低減されたことを明らかにした（図２１ａおよびｂ）。
（実施例１５）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏの非定型Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａバイオフィルムに対するＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙ（商標）の活性
・材料および方法
細菌株および増殖条件
【０６５８】
本研究において使用した細菌株は、４歳の子供達の鼻咽頭スワブから単離された。ＮＴＨｉを冷凍したストックからチョコレートウマ血液（Ｏｘｏｉｄ、ＵＫ）を有するコロンビア寒天に継代培養し、３７℃および５％  ＣＯ２で１８時間インキュベートした後、１０μｇ／ｍｌのヘミンおよび２μｇ／ｍｌのＮＡＤを添加したブレインハートインフュージョン（ＢＨＩ）ブロスにコロニーを再懸濁し、実験用に指数増殖中期まで増殖させた。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡ０１および臨床的なメチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ分離株をコロンビア血液寒天プレート（Ｏｘｏｉｄ、ＵＫ）に継代培養し、無添加ＢＨＩ中で増殖させた。６５
プランクトンアッセイ
【０６５９】
平底９６ウェルプレート（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＫ）にウェルあたり約１．０×１０６のプランクトン様細菌（添加ＢＨＩ中で増殖）を接種した。ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（商標）および非操作塩基ハチミツ（アカシア）の両方を添加ＢＨＩ中で調製し、６ｇ／Ｌ〜３１９ｇ／Ｌの最終濃度でウェルに加えた。非処置対照については添加ＢＨＩを単独で処置の代わりに加えた。培養物を３７℃および５％  ＣＯ２で１８時間インキュベートした後、ＥＺＲｅａｄ  ４００分光光度計（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ；ｎ＝６）を使用して吸光度（ＯＤ５９５）によって濁度を測定した。７５
バイオフィルムアッセイ
【０６６０】
指数増殖中期のプランクトン様培養物を使用して非処置の６ウェルポリスチレンプレート（ウェルあたり約１．０×１０８のプランクトン様細菌；Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、ＵＳＡ）の個々のウェルに接種した。培養物を３７℃および５％  ＣＯ２で４８時間インキュベートし、使用済みの培地を２４時間時に新鮮な添加ＢＨＩ（ＮＴＨｉ）で置換した。処置の前に、使用済みの培地を除去し、バイオフィルムをハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ；Ｇｉｂｃｏ、ＵＫ）で２回洗浄した。バイオフィルムを７〜２１３ｇ／Ｌの最終濃度でＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（商標）またはアカシア（共にＨＢＳＳ中で調製）で処置した。ｐＨの効果を評価するために、バイオフィルムをｐＨ６．３（ＨＢＳＳ中の７１ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（商標）のｐＨ）に調整したＨＢＳＳで処置した。アジュバントアッセイのために、バイオフィルムを３００μｇ／ｍＬのアモキシシリンおよび６０μｇ／ｍＬのクラブラン酸（コアモキシクラブ）で処置した。非処置対照についてはＨＢＳＳを単独で処置の代わりに加えた。バイオフィルムを３７℃および５％  ＣＯ２で２時間インキュベートした後、処置を除去し、バイオフィルムをＨＢＳＳで２回洗浄して非接着細胞を除去した。細胞スクレイピングおよび簡単にボルテックスすることによってバイオフィルムを１ｍｌのＨＢＳＳに再懸濁した後、チョコレートウマ血液（ＮＴＨｉ）でコロンビア寒天上に段階希釈した。プレートを３７℃および５％  ＣＯ２でインキュベートし、コロニー形成単位（ｃ．ｆ．ｕ．）を計数した（ｎ＝４）。
共焦点顕微鏡法
【０６６１】
指数増殖中期のプランクトン様培養物を使用して３５ｍｍの非処置のガラス底ＣｅｌｌＶｉｅｗ細胞培養皿（ウェルあたり約１．０×１０８のプランクトン様細菌；Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ  Ｏｎｅ、ＵＫ）に接種した。培養物を３７℃および５％  ＣＯ２で４８時間インキュベートし、使用済みの培地を２４時間時に新鮮な添加ＢＨＩで置換した。培地を除去し、バイオフィルムをＨＢＳＳで２回洗浄した後、３７℃および５％  ＣＯ２で２時間７１ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ、３００／６０μｇ．ｍｌのコアモキシクラブまたはＨＢＳＳ単独（非処置対照）で処置した。処置を除去し、バイオフィルムをＨＢＳＳで２回洗浄した後、製造者の使用説明書に従ってＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ  Ｂａｃｌｉｇｈｔ  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＫ）で染色した。２μｍの切片の逐次的な走査で６３×のオイルイマージョンレンズ（Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＵＫ）を使用し、倒立Ｌｅｉｃａ  ＳＰ８共焦点顕微鏡を使用してバイオフィルムを調べた。
過酸化水素の測定
【０６６２】
ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（商標）およびアカシアをＨＢＳＳ中７〜２１３ｇ／Ｌの範囲の濃度で調製し、３７℃および５％  ＣＯ２で２時間インキュベートした。その後、非処置の平底の黒色９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ＢｉｏＯｎｅ、ＵＫ）を使用して製造者の使用説明書に従ってＦｌｕｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  Ｈｙｄｒｏｇｅｎ  Ｐｅｒｏｘｉｄｅ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＫ）を使用して過酸化水素の産生を測定した。簡潔に述べれば、既知の濃度のＨ２Ｏ２を使用して標準曲線を生成し、それに対して、陰性ＨＢＳＳ対照を含めて、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（商標）およびアカシア試料を比較した。レッドペルオキシダーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼおよびアッセイ緩衝剤を含むマスターミックスを各標準および試料ウェルに加えた。試料を室温でインキュベートし、光から３０分間保護した後、蛍光を測定した（励起：５４０ｎｍ／発光：５９０ｎｍ；ｎ＝４）。
統計解析
【０６６３】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏのプランクトンおよびバイオフィルムデータの統計解析は、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）およびクラスカル・ウォリス多重比較検定を使用して行った。≦０．０５のＰ値を有する比較データを統計的に有意と考えた。
・結果
ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（商標）処置は、増加したＨ２Ｏ２生成を通じてｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＮＴＨｉバイオフィルムの生存能力を低減させる
【０６６４】
７１および１４２ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（商標）での２時間の確立された４８時間のｉｎ  ｖｉｔｒｏでのバイオフィルムの処置は、生存能力のそれぞれ４ｌｏｇおよび３ｌｏｇの低減を結果としてもたらした一方（Ｐ≦０．０５）、２１３ｇ／Ｌでの処置は生存能力を５ｌｏｇ低減させた（Ｐ≦０．０１；図２２ａ）。これに対し、同等の濃度のアカシアでの処置は、バイオフィルムの生存能力に対して効果を有しなかった（Ｐ＝０．７５；図１ｂ）。アカシアおよびＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（商標）の両方で処置したときに周囲培地中のＨ２Ｏ２レベルの用量依存的な増加も観察された（図２２ｂ）。しかし、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（商標）は、１０．７〜７１．２μＭに及ぶ、試験した全ての濃度においてＨ２Ｏ２の有意により高いレベルを生じさせたのに対し、同等の濃度のアカシアで処置したときには０．２４〜６．５μＭが生成された。さらには、これらのデータは、７１ｇ／ｌのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（商標）で実証されるように、ＮＴＨｉバイオフィルムの生存能力を低減させるのに有効なＨ２Ｏ２の最小濃度はおよそ１４．２〜２５．７μＭであることを指し示す（図２２ｂ）。生存能力のｐＨ媒介性の低減を説明するために、ｐＨ６．３に調整したＨＢＳＳでもＮＴＨｉバイオフィルムを処置し、これはバイオフィルムの生存能力に対して効果がないことを明らかにした（図２２ｃ）。
ＮＴＨｉバイオフィルムの処置においてＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（商標）はコアモキシクラブより有効である
【０６６５】
ＮＴＨｉバイオフィルムの生存能力を低減させるのに７１ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（商標）が有効であることを確認した後、活性を従来の抗生物質コアモキシクラブと比較し、またアジュバントとして使用されたときに抗生物質の有効性を向上させ得るかどうかも比較した。７１ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（商標）での２時間の確立された４８時間のｉｎ  ｖｉｔｒｏでのバイオフィルムの処置は、生存能力における５ｌｏｇの低減を結果としてもたらした一方（Ｐ＝０．０２９）、３００／６０μｇ．ｍｌのコアモキシクラブでの処置は生存能力に対して効果を有しなかった（Ｐ＝０．３４３；図２ａ）。しかし、組合せの処置は、コアモキシクラブの有効性を向上させなかった（図２３ａ）。共焦点レーザー走査型顕微鏡法により、７１ｇ／ＬのＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（商標）での２時間の処置後の４８時間のＮＴＨｉバイオフィルムのバイオフィルム生存能力の低減が確認され、またコアモキシクラブに有効性がないことも確認された（図２ｂ〜ｄ）。共焦点顕微鏡写真はまた、ＳｕｒｇｉｈｏｎｅｙＲＯ（商標）処置は全体的なバイオフィルムバイオマスまたは超微細構造に対して明らかな効果を有さず、全てのバイオフィルムは約７０μｍの最大高さであることを実証した（図２３ｂ〜ｄ）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【国際調査報告】
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