(57)【要約】  本発明は、ホスホジエステラーゼ２（ＰＤＥ２）の阻害剤としての新規な［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−イル誘導体に関する。本発明はまた、この化合物を含む医薬組成物、このような化合物および組成物を調製するための方法、ならびに神経障害および精神障害などの、ＰＤＥ２が関与する障害の予防および治療のためのこのような化合物および組成物の使用も対象とする。【化１】2019532985.tif 000215
2019532985.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2019532985.tif 000211
を有する化合物、またはその立体異性体形（式中、
ＲＡは、Ｈ、ＣＨ３、ＣＮ、およびＣＨＦ２からなる群から選択され；
ＲＢは、（ａ）、（ｂ）および（ｃ）からなる群から選択される基であり：
【化２】
2019532985.tif 000212
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、ＦまたはＣＨ３であり；
Ｒ２は、ＨまたはＣ１〜４アルキル、特に、メチルまたはｎ−ブチルであり（ただし、Ｒ２がＨである場合、Ｒ１はＦまたはＣＨ３である）；
Ｒ３は、Ａｒ、Ｈｅｔ、またはＡｒ−Ｃ２〜４アルケニルであり；ここで、
Ａｒは、ハロ；ＣＮ；ＮＲ２ＡＲ２Ｂ（式中、Ｒ２ＡおよびＲ２Ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；ＯＨ；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキル；ＣＮで置換されたＣ１〜６アルキル；Ｃ３〜６シクロアルキル；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルオキシ；ならびにピラゾリルからなる群からそれぞれ独立に選択される、１つ、２つもしくは３つの置換基でそれぞれ任意選択的に置換されたフェニルまたはナフチルを示し；
Ｈｅｔは、
（ｉ）１Ｈ−ピロリル；チエニル；フラニル；１Ｈ−ピラゾリル；１Ｈ−イミダゾリル；１，２−オキサゾリル；１，３−オキサゾリル；およびチアゾリルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；ＮＲ３ＡＲ３Ｂ（式中、Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；ならびにフラン−２−イルからなる群からそれぞれ独立に選択される１つ、２つまたは３つの置換基で任意選択的に置換され得る、５員ヘテロアリール；
（ｉｉ）ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、およびピリダジニルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；ＯＨ；ＣＮ；ＮＲ４ＡＲ４Ｂ（式中、Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；ＯＨで置換されたＣ１〜４アルキル；Ｃ３〜６シクロアルキル；Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ；
１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキルオキシ；およびＣ１〜４アルキルオキシＣ１〜４アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される、１つ、２つまたは３つの置換基で任意選択的に置換され得る、６員ヘテロアリール；
（ｉｉｉ）２，３−ジヒドロ−１−ベンゾフラニル；２Ｈ−クロメニル；３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメニル；Ｃ１〜４アルキル、メチルスルホニル、１−アセチル、もしくはフルオロアセチルにより１位で任意選択的に置換された２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドリル；２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソリル；メチル置換基で任意選択的に置換された１，３−ベンゾジオキソリル；Ｃ１〜４アルキルで任意選択的に置換された３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−ベンゾオキサジニル；５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル；ハロ置換基で任意選択的に置換された５，６，７，８−テトラヒドロキノリニル；および２，３−ジヒドロピラゾロ［５，１−ｂ］［１，３］オキサゾリルからなる群から選択される８員〜１０員二環式部分不飽和ヘテロシクリル；または
（ｉｖ）１−ベンゾフラニル；１−ベンゾチオフェニル；１Ｈ−インドリル；１，３−ベンゾオキサゾリル；１，３−ベンゾチアゾリル；インドリジニル；１Ｈ−ベンゾイミダゾリル；イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル；ピラゾロ［１，５−ａ］ピリジニル；１Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラゾリル；イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾリル；ピロロ［２，３−ｃ］ピリジニル；チエノ［３，２−ｂ］ピリジニル；キノリニル；イソキノリニル；キノキサリニル；１，８−ナフチリジニル；および１，６−ナフチリジニルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；ＯＨ；ＮＲ５ＡＲ５Ｂ（式中、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；および１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される１つまたは２つの置換基で任意選択的に置換され得る、９員〜１０員二環式ヘテロアリールを示し；
（ただし、前記化合物は、
【化３】
2019532985.tif 000213
ではない）））
またはそのＮ−オキシド、もしくは薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ３が、ＡｒまたはＨｅｔであり；ここで、
Ａｒが、ハロ；ＣＮ；ＯＨ；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキル；ＣＮで置換されたＣ１〜６アルキル；Ｃ３〜６シクロアルキル；および１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される１つ、２つまたは３つの置換基で任意選択的に置換されたフェニルを示し；
Ｈｅｔが、
（ｉ）１Ｈ−ピロリル；チエニル；フラニル；１Ｈ−ピラゾリル；１Ｈ−イミダゾリル；１，２−オキサゾリル；１，３−オキサゾリル；およびチアゾリルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；ＮＲ３ａＲ３ｂ（式中、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；ならびにフラン−２−イルからなる群からそれぞれ独立に選択される１つ、２つまたは３つの置換基で任意選択的に置換され得る、５員ヘテロアリール；
（ｉｉ）ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、およびピリダジニルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；ＯＨ；ＣＮ；ＮＲ４ａＲ４ｂ（式中、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；Ｃ３〜６シクロアルキル；Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ；ならびに１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される、１つ、２つまたは３つの置換基で任意選択的に置換され得る、６員ヘテロアリール；
（ｉｉｉ）２，３−ジヒドロ−１−ベンゾフラニル；２Ｈ−クロメニル；３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメニル；Ｃ１〜４アルキル、メチルスルホニル、１−アセチル、もしくはフルオロアセチルにより１位で任意選択的に置換された２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドリル；２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソリル；メチル置換基で任意選択的に置換された１，３−ベンゾジオキソリル；５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル；ハロ置換基で任意選択的に置換された５，６，７，８−テトラヒドロキノリニル；および２，３−ジヒドロピラゾロ［５，１−ｂ］［１，３］オキサゾリルからなる群から選択される８員〜１０員二環式部分不飽和ヘテロシクリル；または
（ｉｖ）１−ベンゾフラニル；１−ベンゾチオフェニル；１Ｈ−インドリル；１，３−ベンゾオキサゾリル；１，３−ベンゾチアゾリル；インドリジニル；１Ｈ−ベンゾイミダゾリル；イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル；ピラゾロ［１，５−ａ］ピリジニル；１Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラゾリル；チエノ［３，２−ｂ］ピリジニル；キノリニル；１，８−ナフチリジニル；および１，６−ナフチリジニルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；ＯＨ；ＮＲ３ａＲ３ｂ（式中、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；および１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される１つまたは２つの置換基で任意選択的に置換され得る、９員〜１０員二環式ヘテロアリールを示す、
請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項３】
ＲＡが、ＣＨ３またはＣＨＦ２である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
ＲＢが、（ａ）または（ｃ）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３がＨｅｔである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３が、
（ｉ）ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、およびピリダジニルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；ＯＨ；ＣＮ；ＮＲ４ａＲ４ｂ（式中、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；Ｃ３〜６シクロアルキル；Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ；および１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される１つ、２つまたは３つの置換基で任意選択的に置換され得る、６員ヘテロアリール；または
（ｉｉ）１−ベンゾフラニル；１−ベンゾチオフェニル；１Ｈ−インドリル；１，３−ベンゾオキサゾリル；１，３−ベンゾチアゾリル；インドリジニル；１Ｈ−ベンゾイミダゾリル；イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル；ピラゾロ［１，５−ａ］ピリジニル；１Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラゾリル；チエノ［３，２−ｂ］ピリジニル；キノリニル；１，８−ナフチリジニル；および１，６−ナフチリジニルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；ＯＨ；ＮＲ３ａＲ３ｂ（式中、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；および１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される１つまたは２つの置換基で任意選択的に置換され得る、９員〜１０員二環式ヘテロアリールである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
式（Ｉ−ａ）または（Ｉ−ｂ）
【化４】
2019532985.tif 000214
（式中、ＲＡ、Ｒ２およびＲ３は、請求項１〜６のいずれか一項において定義されるものである）を有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
治療有効量の請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項９】
薬剤としての使用のための、請求項８に記載の医薬組成物の中の請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
精神病性の障害および病態；不安障害；運動障害；薬物乱用；気分障害；神経変性障害；症状として、注意および／または認知の不足を含む障害または病態；記憶の獲得および固定に関連する障害；脳卒中；ならびに自閉症性障害の群から選択される中枢神経系障害を治療または予防するのに使用するための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物または請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記精神病性の障害が、統合失調症；統合失調症様障害；統合失調性感情障害；妄想性障害；物質誘発性精神病性障害；妄想性パーソナリティ障害；および統合失調型パーソナリティ障害の群から選択され；
前記不安障害が、パニック障害；広場恐怖症；特定恐怖症；社交恐怖症；強迫性障害；心的外傷後ストレス障害；急性ストレス障害；および全般性不安障害の群から選択され；
前記運動障害が、ハンチントン病およびジスキネジア；パーキンソン病；むずむず脚症候群および本態性振戦；トゥーレット症候群および他のチック障害の群から選択され；
物質関連障害が、アルコール乱用；アルコール依存症；アルコール離脱症状；アルコール離脱性せん妄；アルコール誘発性精神病性障害；アンフェタミン依存症；アンフェタミン離脱症状；コカイン依存症；コカイン離脱症状；ニコチン依存症；ニコチン離脱症状；オピオイド依存症およびオピオイド離脱症状の群から選択され；
前記気分障害が、鬱病；躁病；双極性Ｉ型障害、双極性ＩＩ型障害；気分循環性障害；気分変調性障害；大鬱病性障害；治療抵抗性鬱病；および物質誘発性気分障害から選択され；
前記神経変性障害が、パーキンソン病；ハンチントン病；認知症；アルツハイマー病；多発梗塞性認知症；エイズ関連認知症または前頭側頭型認知症の群から選択され；
症状として、注意および／または認知の不足を含む前記障害または病態が、アルツハイマー病に関連する認知症；多発梗塞性認知症；レビー小体病による認知症；アルコール性認知症または物質誘発性持続性認知症；頭蓋内腫瘍または脳外傷に関連する認知症；ハンチントン病に関連する認知症；パーキンソン病に関連する認知症；エイズ関連認知症；ピック病による認知症；クロイツフェルト・ヤコブ病による認知症；せん妄；健忘障害；心的外傷後ストレス障害；脳卒中；進行性核上麻痺；精神遅滞；学習障害；注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）；軽度の認知機能障害；アスペルガー症候群；加齢による認知機能障害；および知覚、集中、学習または記憶に関連する認知機能障害の群から選択され；
記憶の獲得および固定に関連する前記障害が、記憶障害から選択される、請求項１０に記載の使用のための化合物または医薬組成物。
【請求項１２】
薬学的に許容される担体が、治療有効量の請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物と均質に混合されることを特徴とする、請求項８に記載の医薬組成物を調製するための方法。
【請求項１３】
請求項１０〜１１のいずれか一項に記載の病態の治療または予防に使用するための、さらなる医薬品と組み合わされた請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
（ａ）請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物；および
（ｂ）さらなる医薬品
を含む、
請求項１０〜１１のいずれか一項に記載の病態の治療もしくは予防における同時使用、別々の使用または逐次使用のための組み合わされた製剤としての製品。
【請求項１５】
精神病性の障害および病態；不安障害；運動障害；薬物乱用；気分障害；神経変性障害；症状として、注意および／または認知の不足を含む障害または病態；記憶の獲得および固定に関連する障害；脳卒中；および自閉性障害の群から選択される障害を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、治療有効量の請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物または治療量の請求項８に記載の医薬組成物を投与する工程を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホスホジエステラーゼ２（ＰＤＥ２）の阻害剤としての新規な［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−イル誘導体に関する。本発明はまた、この化合物を含む医薬組成物、このような化合物および組成物を調製するための方法、ならびに神経障害および精神障害などの、ＰＤＥ２が関与する障害の予防および治療のためのこのような化合物および組成物の使用も対象とする。
【背景技術】
【０００２】
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）は、２１種の遺伝子によってコードされる酵素のファミリーであり、構造特性および機能特性に従って１１個の別々のファミリーに細分化される。これらの酵素は、広く存在する細胞内セカンドメッセンジャー、３’，５’−環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）および３’，５’−環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）を代謝的に不活性化する。これらの２つのメッセンジャーは、炎症促進性メディエータの産生および作用、イオンチャネル機能、筋収縮、学習、分化、アポトーシス、脂質生成、グリコーゲン分解、および糖新生を含む多種多様な生物学的過程を調節する。これらのメッセンジャーが、プロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）およびプロテインキナーゼＧ（ＰＫＧ）を活性化し、これによって、無数の生理反応を調節する転写因子およびイオンチャネルを含む多種多様な基質がリン酸化されることによって、これがなされる。ニューロンにおいて、これは、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ依存性キナーゼの活性化ならびにシナプス伝達の急な調節ならびに神経分化および生存に関与するタンパク質の後続のリン酸化を含む。ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの細胞内濃度は、シクラーゼによる生合成の速度によって、またＰＤＥによる分解の速度によって厳密に調節されている。ＰＤＥは、３’−エステル結合の触媒的加水分解によってｃＡＭＰおよびｃＧＭＰを不活性化する加水分解酵素であり、この不活性化により、不活性な５’−一リン酸が形成される（スキームＡ）。
【０００３】
【化１】
2019532985.tif 000003
基質特異性に基づいて、ＰＤＥファミリーは、３つのグループに分類することができる：ｉ）ＰＤＥ４、７、および８を含むｃＡＭＰ特異的ＰＤＥ；ｉｉ）ｃＧＭＰ選択的酵素であるＰＤＥ５、６、および９；ならびにｉｉｉ）二重基質ＰＤＥであるＰＤＥ１、２、および３、ならびにＰＤＥ１０および１１。
【０００４】
さらに、ＰＤＥは、中枢神経系を含め、生体全体を通して、差次的に発現される。したがって、異なるＰＤＥアイソザイムは、異なる生理的機能を有し得る。ＰＤＥファミリーまたはアイソザイムを選択的に阻害する化合物は、特定の治療活性、より少ない副作用、またはその両方を示し得る。
【０００５】
ホスホジエステラーゼ２Ａ（ＰＤＥ２Ａ）は、それらの分解によって（生体関連の二次メッセンジャーｃＡＭＰおよびｃＧＭＰを加水分解して、それぞれシグナル伝達しないＡＭＰおよびＧＭＰにすることによって）、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰによって媒介される環状ヌクレオチドシグナル伝達に依存する細胞内シグナル伝達機構を不活性化する。このようなシグナル伝達経路は、シナプス可塑性の誘導に関与する遺伝子の調節に役割を果たすことが知られている。
【０００６】
したがって、ＰＤＥ２の薬理学的阻害は、シナプス可塑性（学習および記憶の根本的な関連要因）のレベルの増加を引き起こし、これは、ＰＤＥ２Ａ調節が、例えば、統合失調症、アルツハイマー病、パーキンソン病および認知機能障害に関連する他の中枢神経系障害などの障害に罹患した人に見られる認知障害を軽減するための対象であり得ることを示唆している。
【０００７】
ホスホジエステラーゼ２Ａ（ＰＤＥ２Ａ）は、末梢組織と比べて脳における発現が多い。大脳辺縁系（同皮質、海馬、扁桃体、手綱、基底核）においてＰＤＥ２の発現が高いことは、ＰＤＥ２が、感情、知覚、集中、学習、および記憶に関与する神経シグナル伝達を調節する可能性を示唆する。さらに、ＰＤＥ２は、側坐核、嗅球、嗅結節、および扁桃体でも発現されるが、これは、ＰＤＥ２が不安および鬱病にも関与する可能性もあるという示唆を支持する。（例えば、Ｌａｋｉｃｓ，Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  ｍＲＮＡ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｒａｉｎ  ａｎｄ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．５９，３６７−３７４を参照のこと）。
【０００８】
さらに、ＰＤＥ２阻害剤は、酸化的ストレス誘発性不安の軽減に有益であることが示されており、これは、アルツハイマー病、パーキンソン病および多発性硬化症などの、酸化的ストレスに関与する精神神経障害および神経変性障害における不安の治療へのＰＤＥ２阻害剤の使用を支持している。
【０００９】
ＰＤＥ２阻害剤は、ラットにおいて、シナプス伝達の長期増強を促進し、対象認識および社会認識試験における記憶の獲得および固定を改善することが示されている。さらに、ＰＤＥ２阻害剤は、マウスにおいて、Ｔ迷路におけるＭＫ−８０１誘発性作業記憶障害を回復させることが示されている。
ＰＤＥ２阻害剤は、強制水泳試験および明暗箱モデルにおいて活性を示し；高架式十字迷路、ホールボードおよびオープンフィールドテストにおいて抗不安薬様の効果を示し、アポトーシスおよび行動のストレス誘発性の変化を防ぐことも示されている。
【００１０】
したがって、ＰＤＥ２阻害剤は、記憶欠損、認知障害、不安、双極性障害、および鬱病の治療に有用となり得る。
【００１１】
国際公開第２０１５／１６４５０８号パンフレット（Ｄａｒｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，ＬＬＣ）は、ＰＤＥ２阻害剤としての置換［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−イル化合物を開示している。国際公開第２０１７／０７６９００号パンフレット（Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ  ＮＶ）は、［（３Ｓ，４Ｒ）−３−［５−（ジフルオロメチル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−４−メチル−１−ピペリジル］−（２，６−ジメチル−４−ピリジル）メタノンを開示している。
【００１２】
例えば、効力の向上、ＰＤＥ３および／もしくはＰＤＥ１０に対する良好な選択性、ならびに／または良好な化学的安定性もしくは代謝安定性などの特性の有利なバランスを有するＰＤＥ２阻害剤化合物が依然として必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の目的は、ＰＤＥ２酵素活性に関連する疾患の治療に潜在的に有用であり得るＰＤＥ２の新規な阻害剤を提供することである。
【００１４】
したがって、本発明は、式（Ｉ）
【化２】
2019532985.tif 000004
の化合物およびその立体異性体型（式中、
ＲＡは、Ｈ、ＣＨ３、ＣＮ、およびＣＨＦ２からなる群から選択され；
ＲＢは、（ａ）、（ｂ）および（ｃ）からなる群から選択される基であり：
【化３】
2019532985.tif 000005
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、ＦまたはＣＨ３であり；
Ｒ２は、ＨまたはＣ１〜４アルキル、特に、メチルまたはｎ−ブチルであり（ただし、Ｒ２がＨである場合、Ｒ１はＦまたはＣＨ３である）；
Ｒ３は、Ａｒ、Ｈｅｔ、またはＡｒ−Ｃ２〜４アルケニルであり；ここで、
Ａｒは、ハロ；ＣＮ；ＮＲ２ＡＲ２Ｂ（式中、Ｒ２ＡおよびＲ２Ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；ＯＨ；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキル；ＣＮで置換されたＣ１〜６アルキル；Ｃ３〜６シクロアルキル；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルオキシ；ならびにピラゾリルからなる群からそれぞれ独立に選択される、１つ、２つもしくは３つの置換基でそれぞれ任意選択的に置換されたフェニルまたはナフチルを示し；
Ｈｅｔは、
（ｉ）１Ｈ−ピロリル；チエニル；フラニル；１Ｈ−ピラゾリル；１Ｈ−イミダゾリル；１，２−オキサゾリル；１，３−オキサゾリル；およびチアゾリルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；ＮＲ３ＡＲ３Ｂ（式中、Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；ならびにフラン−２−イルからなる群からそれぞれ独立に選択される１つ、２つまたは３つの置換基で任意選択的に置換され得る、５員ヘテロアリール；
（ｉｉ）ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、およびピリダジニルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；ＯＨ；ＣＮ；ＮＲ４ＡＲ４Ｂ（式中、Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；ＯＨで置換されたＣ１〜４アルキル；Ｃ３〜６シクロアルキル；Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキルオキシ；ならびにＣ１〜４アルキルオキシＣ１〜４アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される、１つ、２つまたは３つの置換基で任意選択的に置換され得る、６員ヘテロアリール；
（ｉｉｉ）２，３−ジヒドロ−１−ベンゾフラニル；２Ｈ−クロメニル；３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメニル；Ｃ１〜４アルキル、メチルスルホニル、１−アセチル、もしくはフルオロアセチルにより１位で任意選択的に置換された２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドリル；２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソリル；メチル置換基で任意選択的に置換された１，３−ベンゾジオキソリル；Ｃ１〜４アルキルで任意選択的に置換された３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−ベンゾオキサジニル；５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル；ハロ置換基で任意選択的に置換された５，６，７，８−テトラヒドロキノリニル；および２，３−ジヒドロピラゾロ［５，１−ｂ］［１，３］オキサゾリルからなる群から選択される８員〜１０員二環式部分不飽和ヘテロシクリル；または
（ｉｖ）１−ベンゾフラニル；１−ベンゾチオフェニル；１Ｈ−インドリル；１，３−ベンゾオキサゾリル；１，３−ベンゾチアゾリル；インドリジニル；１Ｈ−ベンゾイミダゾリル；イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル；ピラゾロ［１，５−ａ］ピリジニル；１Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラゾリル；イミダゾ［２，１−ｂ］チアゾリル；ピロロ［２，３−ｃ］ピリジニル；チエノ［３，２−ｂ］ピリジニル；キノリニル；イソキノリニル；キノキサリニル；１，８−ナフチリジニル；および１，６−ナフチリジニルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；ＯＨ；ＮＲ５ＡＲ５Ｂ（式中、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；および１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される１つまたは２つの置換基で任意選択的に置換され得る、９員〜１０員二環式ヘテロアリール
を示す
（ただし、化合物は、
【化４】
2019532985.tif 000006
ではない）））
ならびにそのＮ−オキシド、および薬学的に許容される塩および溶媒和物を対象とする。
【００１５】
本発明の実例は、薬学的に許容される担体および本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む医薬組成物である。本発明の実例は、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、および薬学的に許容される担体を混合することによって作製される医薬組成物である。本発明の実例は、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、および薬学的に許容される担体を混合する工程を含む、医薬組成物を作製するための方法である。
【００１６】
本発明のさらなる実例は、神経可塑性を高めるための方法であって、それを必要とする被験体に、治療有効量の本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または本明細書に記載の医薬組成物を投与する工程を含む方法である。
【００１７】
本発明の例示は、ＰＤＥ２酵素によって媒介される障害を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、治療有効量の本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または本明細書に記載の医薬組成物を投与する工程を含む方法である。
【００１８】
本発明のさらなる例示は、ＰＤＥ２酵素を阻害する方法であって、それを必要とする被験体に、治療有効量の本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または本明細書に記載の医薬組成物を投与する工程を含む方法である。
【００１９】
本発明の一例は、神経障害および精神障害からなる群から選択される障害を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、治療有効量の本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または本明細書に記載の医薬組成物を投与する工程を含む方法である。
【００２０】
本発明の一例は、精神病性の障害および病態；不安障害；運動障害；薬物乱用；気分障害；神経変性障害；症状として、注意および／または認知の不足を含む障害または病態；脳卒中；ならびに自閉症性障害から選択される神経障害および精神障害の群から選択される障害を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、治療有効量の本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物または本明細書に記載の医薬組成物を投与する工程を含む方法である。
【００２１】
本発明の一例は、神経障害および精神障害からなる群から選択される障害を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、治療有効量の本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または本明細書に記載の医薬組成物を投与する工程を含む方法である。
【００２２】
本発明の一例は、精神病性の障害および病態；不安障害；運動障害；薬物乱用；気分障害；神経変性障害；症状として、注意および／または認知の不足を含む障害または病態；記憶の獲得および固定に関連する障害；脳卒中；ならびに自閉症性障害から選択される神経障害および精神障害の群から選択される障害を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物、または本明細書に記載の医薬組成物を投与する工程を含む方法である。
【００２３】
また、本発明の例示は、薬剤として使用するための式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物、または本明細書に記載の医薬組成物である。
【００２４】
本発明のさらなる例示は、ヒトを含む哺乳動物における、ホスホジエステラーゼ２の機能不全に関連する様々な神経障害および精神障害のリスクの治療、予防、改善、制御または軽減に使用するための式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物、または本発明に係る医薬組成物であり、これらの治療または予防は、ホスホジエステラーゼ２の阻害によって影響または促進される。
【００２５】
本発明の一例は、精神病性の障害および病態；不安障害；運動障害；薬物乱用；気分障害；神経変性障害；症状として、注意および／または認知の不足を含む障害または病態；記憶の獲得および固定に関連する障害；脳卒中；ならびに自閉症性障害から選択される様々な障害のリスクの治療、予防、改善、制御または軽減に使用するための本発明に係る式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物または本発明に係る医薬組成物である。
【００２６】
本発明の一例は、アルツハイマー病、軽度の認知機能障害、老化、認知症、レビー小体認知症、ダウン症候群、脳卒中に関連する認知症、パーキンソン病に関連する認知症およびβ−アミロイドに関連する認知症、好ましくはアルツハイマー病からなる群から選択される障害を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または本明細書に記載の医薬組成物を投与する工程を含む方法である。
【００２７】
本発明の別の例は、（ａ）アルツハイマー病、（ｂ）軽度の認知機能障害、（ｃ）老化、
（ｄ）認知症、（ｅ）レビー小体認知症、（ｆ）ダウン症候群、（ｇ）脳卒中に関連する認知症、（ｈ）パーキンソン病に関連する認知症、（ｉ）β−アミロイドに関連する認知症、（ｊ）抑鬱障害および（ｋ）不安障害の治療において、それを必要とする被験体において使用するための本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１ａ】苔状線維シナプスにおける長期増強（ＬＴＰ）の弱いＨＦＳ誘導に対する化合物１１０の効果を示す。
【図１ｂ】（上記のとおり。）
【図２】シータバースト刺激についての実験計画を示す。
【図３】苔状線維シナプスにおける長期増強（ＬＴＰ）の弱いＨＦＳ誘導に対する化合物７０の効果を示す。
【図４】苔状線維シナプスにおける長期増強（ＬＴＰ）の弱いＨＦＳ誘導に対する化合物２５ａの効果を示す。
【図５】苔状線維シナプスにおける長期増強（ＬＴＰ）の弱いＨＦＳ誘導に対する化合物２２０の効果を示す。
【図６】（それぞれ、化合物２２０、１１０、９３、３２、７０、２５ａ、２８１、２９５、３５６、および３３５）マーシャルビーグル犬のＣＳＦにおけるｃＧＭＰレベルの測定を示す。図６〜１５において、試験化合物の様々な用量は、次の：
【数１】
2019532985.tif 000007
として表される。
【図７】（上記のとおり。）
【図８】（上記のとおり。）
【図９】（上記のとおり。）
【図１０】（上記のとおり。）
【図１１】（上記のとおり。）
【図１２】（上記のとおり。）
【図１３】（上記のとおり。）
【図１４】（上記のとおり。）
【図１５】（上記のとおり。）
【図１６ａ】図１６は、シャッファー側枝（ＳＣ）−ＣＡ１シナプスでのインビボにおけるシナプス機能に対する化合物１１０の鋭敏な効果を示す。図１６ａは、シャッファー側枝経路における双極刺激電極の配置の模式図、および海馬のアンモン角（Ｃｏｒｎｕ  Ａｍｍｏｎｉｓ）ＣＡ１領域の放線状層における単極式記録電極の模式図を示す。図１６ｂは、強度を増大させた刺激を適用し、その結果として生じるＳＣ−ＣＡ１経路の基本的な興奮性において相違が示されないｆＥＰＳＰの初期の傾きを測定することによって生成されるＩ／Ｏ曲線の概略を示す。図１６ｃは、ベースライン中、処置後３０分およびテタヌス性ＨＦＳプロトコル後３０分における応答形態を示す。ベースラインおよび化合物１１０処置群における溶媒条件を超えて増大した、処置群間のベースライン記録中のｆＥＰＳＰ応答の大きさの類似性に留意されたい。図１６ｄは、３０分間のベースライン記録、化合物１１０投与後３０分間、およびテタヌス性ＨＦＳプロトコルを適用した後のｆＥＰＳＰの傾きの時間経過を示し、ｆＥＰＳＰの傾きはさらに２時間記録された。なお、用量２０ｍｇ／ｋｇおよび４０ｍｇ／ｋｇでの化合物１１０により、テタヌス性ＨＦＳプロトコル前の基底のシナプス伝達、およびＨＦＳプロトコル後２時間にわたるｆＥＰＳＰの傾きが高まった（挿入プロット）。図１６ｅは、ｆＥＰＳＰを３０分間で平均化した場合、化合物１１０（４０ｍｇ／ｋｇ）は、シナプス伝達の大きさを高め、溶媒処置群との相違は有意なままであったことを示す。値はＨＦＳの前に記録された値のパーセンテージとして表され、結果は平均値±ＳＥＭとして示される。一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）および最小有意差（ＬＳＤ）事後分析試験を群の比較に適用した。図１６ｂおよびｃにおいて、パターンは以下の意味を有する：
【数２】
2019532985.tif 000008
図１６ｄおよび１６ｅにおいて、パターンは以下の意味を有する：
【数３】
2019532985.tif 000009
【図１６ｂ】（上記のとおり。）
【図１６ｃ】（上記のとおり。）
【図１６ｄ】（上記のとおり。）
【図１６ｅ】（上記のとおり。）
【発明を実施するための形態】
【００２９】
定義
「Ｃ１〜４アルキル」は、単独でまたは別の基の一部として本明細書中で使用される場合、メチル、エチル、１−プロピル、１−メチル、ブチル、１−メチル−プロピル、２−メチル−１−プロピル、１，１−ジメチルエチルなど、１、２、３または４個の炭素原子を有する、直鎖状または分岐状の飽和炭化水素基を定義する。「Ｃ１〜６アルキル」という用語は、本明細書で基または基の一部として使用される場合、１〜６個の炭素原子を有する、直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素基、例えば、Ｃ１〜４アルキルで定義される基、およびｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、２−メチルブチルなどを示す。「Ｃ１〜４アルキルオキシ」は、エーテル基を示すこととし、ここで、Ｃ１〜４アルキルは、本明細書中で定義されるとおりである。「Ｃ１〜６アルキルオキシ」は、エーテル基を示すこととし、ここで、Ｃ１〜６アルキルは、本明細書中で定義されるとおりである。「ハロ」は、フルオロ、クロロおよびブロモを示すこととする。「Ｃ３〜６シクロアルキル」は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロへキシルを示すこととする。「Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ」は、エーテル基を示すこととし、ここで、Ｃ３〜６シクロアルキルは、本明細書中で定義されるとおりである。
【００３０】
「置換された」という用語が本発明において使用される場合は常に、別段の断りがない限り、または文脈から明らかでない限り、「置換された」を用いた表現において示される原子または基上の１つ以上の水素、好ましくは１〜３つの水素または１〜２つの水素または１つの水素が、指定の基から選択されるもので置き換えられることを示すものとし、ただし、通常の原子価を超えず、置換により、化学的に安定な化合物、すなわち反応混合物からの有用な程度の純度までの単離および治療用薬剤への製剤に耐える十分に強固な化合物がもたらされるものとする。
【００３１】
式（Ｉ）の化合物のＮ−オキシド形態は、１つまたはいくつかの窒素原子が酸化されて、いわゆるＮ−オキシド、特にピリジニル基の窒素原子が酸化されているＮ−オキシドになっている式（Ｉ）の化合物を含むものとする。Ｎ−オキシドは、当業者に既知の手順にしたがって形成することができる。Ｎ−酸化反応は、一般に、式（Ｉ）の出発物質を適切な有機または無機の過酸化物と反応させることにより行うことができる。適切な無機過酸化物には、例えば、過酸化水素、アルカリ金属またはアルカリ金属過酸化物、例えば、過酸化ナトリウム、過酸化カリウムが含まれ；適切な有機過酸化物には、過酸、例えば、ベンゼンカルボペルオキソ酸またはハロ置換ベンゼンカルボペルオキソ酸、例えば、３−クロロペルオキシ安息香酸（または３−クロロ過安息香酸）、ペルオキソアルカン酸、例えば、ペルオキソ酢酸、アルキルヒドロペルオキシド、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルヒロドペルオキシドを含んでもよい。例えば、好適な溶媒には、例えば、水、低級アルカノール（例えば、エタノール等）、炭化水素（例えば、トルエン）、ケトン（例えば、２−ブタノン）、ハロゲン化炭化水素（例えば、ジクロロメタン）、およびこのような溶媒の混合物がある。
【００３２】
したがって、特定の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）の化合物に関し、式中、Ｒ３はＨｅｔであり、Ｈｅｔは、本明細書に記載のとおりの任意選択的に置換されたピリジル基の酸化物、すなわち、任意選択的に置換されたピリジニウミル酸化物基である。
【００３３】
本明細書で使用する「被験体」という用語は、治療、観察または実験の対象であるか、または対象であった、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。
【００３４】
「治療有効量」という用語は、本明細書中で使用する場合、治療されている疾患または障害の症状の軽減を含む、研究者、獣医師、医師または他の臨床医が求めている組織系、動物またはヒトにおいて生物学的または医学的反応を誘発する活性化合物または医薬品の量を意味する。
【００３５】
本明細書で使用する場合、「組成物」という用語は、特定成分を特定量で含む生成物、および特定成分の特定量での組合せから直接的または間接的に得られる任意の生成物を包含するものとする。
【００３６】
上記および下記で、「式（Ｉ）の化合物」という用語は、その付加塩、溶媒和物および立体異性体を含むものとする。
【００３７】
「立体異性体」または「立体化学的異性体型」という用語は、本明細書中の上記または本明細書中の下記で、交換可能に使用される。
【００３８】
本発明は、純粋な立体異性体として、または２種以上の立体異性体の混合物として、式（Ｉ）の化合物の全ての立体異性体を含む。
【００３９】
エナンチオマーは、重ね合わせることができない互いの鏡像となっている立体異性体である。１対のエナンチオマーの１：１混合物は、ラセミ体またはラセミ混合物である。ジアステレオマー（またはジアステレオ異性体）は、エナンチオマーではない立体異性体であり、すなわち、鏡像の関係にない。したがって、本発明は、エナンチオマー、ジアステレオマー、ラセミ体を含む。
【００４０】
本発明に係る化合物において、平行線の楔型で示される結合
【化５】
2019532985.tif 000010
は、図の平面の下方に突出した結合を示し、一方で太い楔型で示される結合
【化６】
2019532985.tif 000011
は、図の平面の上方に突出した結合を示す。
【００４１】
絶対配置は、カーン・インゴルド・プレローグ表示法にしたがって特定される。不斉原子における配置は、ＲまたはＳのいずれかによって特定される。絶対配置が不明の分割された化合物は、これらが平面偏光を回転させる方向に応じて（＋）または（−）によって示すことができる。
【００４２】
特定の立体異性体が同定される場合、これは、前記立体異性体が実質的に他の異性体を含まず、すなわち、５０％未満、好ましくは２０％未満、より好ましくは１０％未満、さらにより好ましくは５％未満、特に２％未満、最も好ましくは１％未満の他の異性体しか伴わないことを意味する。したがって、式（Ｉ）の化合物が例えば（Ｒ）と特定される場合、これは、化合物が（Ｓ）異性体を実質的に含まないことを意味する。
【００４３】
さらに、本発明の化合物に対する結晶形態のうち一部は多形体として存在し得、それ自体本発明中に含まれるものとする。さらに、本発明の化合物のうち一部は、水（すなわち水和物）または一般的な有機溶媒とともに溶媒和物を形成する場合があり、このような溶媒和物もまた、本発明の範囲内に包含されるものとする。
【００４４】
医薬で使用される場合、本発明の化合物の塩は、毒性のない「薬学的に許容される塩」を指す。しかしながら、他の塩が、本発明による化合物またはその薬学的に許容される塩の調製に有用となることがある。本化合物の好適な薬学的に許容される塩として、例えば、化合物の溶液を、塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸、またはリン酸などの薬学的に許容される酸の溶液と混合することによって形成され得る酸付加塩が挙げられる。さらに、本発明の化合物が酸部分を有する場合、その好適な薬学的に許容される塩として、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウム塩またはマグネシウム塩；および好適な有機配位子と形成される塩、例えば第四級アンモニウム塩を挙げてもよい。
【００４５】
薬学的に許容される塩の調製に使用され得る代表的な酸としては、以下に限定されるものではないが：酢酸、２，２−ジクロロ−酢酸、アシル化アミノ酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、（＋）−カンファー酸、カンファースルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクラミン酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、Ｄ−グルクロン酸、Ｌ−グルタミン酸、β−オキソ−グルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、
（＋）−Ｌ−乳酸、（±）−ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、（±）−ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロト酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、
ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロメチルスルホン酸およびウンデシレン酸が挙げられる。
【００４６】
薬学的に許容される塩の調製に使用することができる代表的な塩基として、以下に限定されるものではないが：アンモニア、Ｌ−アルギニン、ベネタミン、ベンザチン、水酸化カルシウム、コリン、ジメチルエタノールアミン、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、２−（ジエチルアミノ）−エタノール、エタノールアミン、エチレン−ジアミン、Ｎ−メチル−グルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ−イミダゾール、Ｌ−リジン、水酸化マグネシウム、４−（２−ヒドロキシエチル）−モルホリン、ピペラジン、水酸化カリウム、１−（２−ヒドロキシエチル）−ピロリジン、二級アミン、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン、トロメタミンおよび水酸化亜鉛が挙げられる。
【００４７】
本発明の化合物の名称は、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｉｎｃ．ソフトウェア（ＡＣＤ／Ｎａｍｅ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｖｅｒｓｉｏｎ  １０．０１；ビルド１５４９４、２００６年１２月１日またはＡＣＤ／ＣｈｅｍＳｋｅｔｃｈ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｖｅｒｓｉｏｎ  １２．５；ビルド４７８７７、２０１１年４月２０日）を用いてＣｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅ（ＣＡＳ）により同意される命名規則に従い、またはＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｉｎｃ．，ソフトウェア（ＡＣＤ／Ｎａｍｅ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｖｅｒｓｉｏｎ  １０．０１．０．１４１０５、２００６年１０月）を用いて国際純正・応用化学連合（ＩＵＰＡＣ）により同意される命名規則に従い生成された。互変異性体型の場合、その構造の示される互変異性体型の名称が生成された。示されていない他の互変異性体型もまた本発明の範囲内に含まれる。
【００４８】
本発明は、上に定義した式（Ｉ）の化合物、ならびにその薬学的に許容される塩および溶媒和物を対象とする。
【００４９】
一実施形態において、本発明は、式（Ｉ）
【化７】
2019532985.tif 000012
の化合物およびその立体異性体型（式中、
ＲＡは、Ｈ、ＣＨ３、ＣＮ、およびＣＨＦ２からなる群から選択され；
ＲＢは、（ａ）、（ｂ）および（ｃ）からなる群から選択される基であり：
【化８】
2019532985.tif 000013
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、ＦまたはＣＨ３であり；
Ｒ２は、ＨまたはＣ１〜４アルキル、特に、メチルまたはｎ−ブチルであり（ただし、Ｒ２がＨである場合、Ｒ１はＦまたはＣＨ３である）；
Ｒ３は、ＡｒまたはＨｅｔであり；ここで、
Ａｒは、ハロ；ＣＮ；ＯＨ；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキル；ＣＮで置換されたＣ１〜６アルキル；Ｃ３〜６シクロアルキル；および１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される１つ、２つまたは３つの置換基で任意選択的に置換されたフェニルを示し；
Ｈｅｔは、
（ｉ）１Ｈ−ピロリル；チエニル；フラニル；１Ｈ−ピラゾリル；１Ｈ−イミダゾリル；１，２−オキサゾリル；１，３−オキサゾリル；およびチアゾリルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；ＮＲ３ＡＲ３Ｂ（式中、Ｒ３ＡおよびＲ３Ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；ならびにフラン−２−イルからなる群からそれぞれ独立に選択される１つ、２つまたは３つの置換基で任意選択的に置換され得る、５員ヘテロアリール；
（ｉｉ）ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、およびピリダジニルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；ＯＨ；ＣＮ；ＮＲ４ＡＲ４Ｂ（式中、Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；Ｃ３〜６シクロアルキル；Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ；ならびに１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される、１つ、２つまたは３つの置換基で任意選択的に置換され得る、６員ヘテロアリール；
（ｉｉｉ）２，３−ジヒドロ−１−ベンゾフラニル；２Ｈ−クロメニル；３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメニル；Ｃ１〜４アルキル、メチルスルホニル、１−アセチル、もしくはフルオロアセチルにより１位で任意選択的に置換された２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドリル；２，２−ジフルオロ−１，３−ベンゾジオキソリル；メチル置換基で任意選択的に置換された１，３−ベンゾジオキソリル；５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル；ハロ置換基で任意選択的に置換された５，６，７，８−テトラヒドロキノリニル；および２，３−ジヒドロピラゾロ［５，１−ｂ］［１，３］オキサゾリルからなる群から選択される８員〜１０員二環式部分不飽和ヘテロシクリル；または
（ｉｖ）１−ベンゾフラニル；１−ベンゾチオフェニル；１Ｈ−インドリル；１，３−ベンゾオキサゾリル；１，３−ベンゾチアゾリル；インドリジニル；１Ｈ−ベンゾイミダゾリル；イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル；ピラゾロ［１，５−ａ］ピリジニル；１Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラゾリル；チエノ［３，２−ｂ］ピリジニル；キノリニル；１，８−ナフチリジニル；および１，６−ナフチリジニルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；ＯＨ；ＮＲ５ＡＲ５Ｂ（式中、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；および１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される１つまたは２つの置換基で任意選択的に置換され得る、９員〜１０員二環式ヘテロアリール
を示す
（ただし、化合物は、
【化９】
2019532985.tif 000014
ではない）））
ならびにその薬学的に許容される塩および溶媒和物を対象とする。
【００５０】
特定の実施形態において、ＲＡは、ＣＨ３またはＣＨＦ２であり；残りの可変要素は本明細書で定義されるとおりである。
【００５１】
特定の実施形態において、ＲＢは、（ａ）および（ｂ）からなる群から選択され、残りの可変要素は本明細書で定義されるとおりである。
【００５２】
特定の実施形態において、ＲＡは、ＣＨ３またはＣＨＦ２であり；ＲＢは、（ａ）および（ｂ）からなる群から選択され、残りの可変要素は本明細書で定義されるとおりである。
【００５３】
特定の実施形態において、Ｒ１はＨであり、Ｒ２はＣ１〜４アルキル、特に、メチルまたはｎ−ブチルであり；残りの可変要素は本明細書で定義されるとおりである。
【００５４】
特定の実施形態において、Ｒ３はＨｅｔであり、残りの可変要素は本明細書で定義されるとおりである。
【００５５】
特定の実施形態において、Ｒ３は、
（ｉ）ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、およびピリダジニルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；ＯＨ；ＣＮ；ＮＲ４ＡＲ４Ｂ（式中、Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；Ｃ３〜６シクロアルキル；Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ；および１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される１つ、２つまたは３つの置換基で任意選択的に置換され得る、６員ヘテロアリール；または
（ｉｉ）１−ベンゾフラニル；１−ベンゾチオフェニル；１Ｈ−インドリル；１，３−ベンゾオキサゾリル；１，３−ベンゾチアゾリル；インドリジニル；１Ｈ−ベンゾイミダゾリル；イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル；ピラゾロ［１，５−ａ］ピリジニル；
１Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラゾリル；チエノ［３，２−ｂ］ピリジニル；キノリニル；１，８−ナフチリジニル；および１，６−ナフチリジニルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；ＯＨ；ＮＲ５ＡＲ５Ｂ（式中、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；および１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される１つまたは２つの置換基で任意選択的に置換され得る、９員〜１０員二環式ヘテロアリールであり；
残りの可変要素は本明細書で定義されるとおりである。
【００５６】
さらなる実施形態において、Ｒ３は、
（ｉ）ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、およびピリダジニルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；；ＮＲ４ＡＲ４Ｂ（式中、Ｒ４ＡおよびＲ４Ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；Ｃ３〜６シクロアルキル；Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ；および１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される１つ、２つまたは３つの置換基で任意選択的に置換され得る、６員ヘテロアリール；または
（ｉｉ）１−ベンゾフラニル；１−ベンゾチオフェニル；１Ｈ−インドリル；１，３−ベンゾオキサゾリル；１，３−ベンゾチアゾリル；インドリジニル；１Ｈ−ベンゾイミダゾリル；イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル；ピラゾロ［１，５−ａ］ピリジニル；
１Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラゾリル；チエノ［３，２−ｂ］ピリジニル；キノリニル；１，８−ナフチリジニル；および１，６−ナフチリジニルからなる群から選択され；それぞれが、ハロ；ＮＲ５ＡＲ５Ｂ（式中、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；および１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される１つまたは２つの置換基で任意選択的に置換され得る、９員〜１０員二環式ヘテロアリールであり；
残りの可変要素は本明細書で定義されるとおりである。
【００５７】
一実施形態では、本明細書で定義される式（Ｉ）の化合物は、具体的には式（Ｉ−ａ）または（Ｉ−ｂ）
【化１０】
2019532985.tif 000015
の化合物であり、全ての可変要素は本明細書に定義されるとおりである。
【００５８】
より具体的には、本明細書で定義される式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−ｂ１）
【化１１】
2019532985.tif 000016
を有し、全ての可変要素は本明細書に定義されるとおりである。
【００５９】
特定の実施形態において、Ｒ３は、（３−ａ）、（３−ｂ）および（３−ｃ）
【化１２】
2019532985.tif 000017
（式中、
Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、水素；ハロ；ＣＮ；ＮＲ４ａＲ４ｂ（式中、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、ＨおよびＣＨ３からそれぞれ独立に選択される）；１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル；Ｃ３〜６シクロアルキル；および１つ、２つもしくは３つの独立して選択されるハロ置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択され；
Ｒ３ｃは、Ｆ、Ｃｌ、Ｃ１〜３アルキル、シクロプロピル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、シクロプロピルオキシ、およびＣＦ３からなる群から選択され；Ｒ３ｄおよびＲ３ｅは、水素、Ｃｌ、ＣＮ、Ｃ１〜３アルキル、シクロプロピル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、シクロプロピルオキシ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＯＣＨＦ２、およびＯＣＦ３からそれぞれ独立に選択されるが；ただし、Ｒ３ｄおよびＲ３ｅは同時に水素であることはない）からなる群から選択される基である。
【００６０】
特に、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、水素；クロロ；−ＮＨ２；Ｃ１〜４アルキル；−ＣＦ３；シクロプロピル；−ＯＣＨ３；−ＯＣＨ（ＣＨ３）２；−ＯＣＨＦ２；および−ＯＣＦ３からなる群からそれぞれ独立に選択される。
【００６１】
より特定すると、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、クロロ；Ｃ１〜４アルキル；−ＣＦ３；シクロプロピル；−ＯＣＨ３；−ＯＣＨ（ＣＨ３）２；−ＯＣＨＦ２；および−ＯＣＦ３からなる群からそれぞれ独立に選択される。
【００６２】
特に、Ｒ３ａはＣｌまたはＣＨ３であり、かつＲ３ｂは、ＣＨ３、−ＯＣＨ３、−ＣＦ３、およびシクロプロピルからなる群から選択される。
【００６３】
さらなる実施形態において、Ｒ３ａはＣｌまたはＣＨ３であり、かつＲ３ｂはＣＨ３または−ＯＣＨ３である。
【００６４】
特に、Ｒ３ｃは、Ｆ、ＣＨ３、および−ＯＣＨ３からなる群から選択され；Ｒ３ｄは、水素、ＣＨ３、シクロプロピル、および−ＯＣＨ３からなる群から選択され；かつＲ３ｅは、Ｃｌ、ＣＨ３、シクロプロピル、−ＯＣＨ３；−ＯＣＨ（ＣＨ３）２；シクロプロピルオキシ；ＣＨＦ２、およびＯＣＨＦ２からなる群から選択される。さらなる実施形態において、Ｒ３ｃはＦである。
【００６５】
さらなる実施形態において、本発明による化合物は、式（Ｉ−ａ）を有する化合物であり、式中、Ｒ２はＣ１〜４アルキル、特に、メチルまたはｎ−ブチルである。
【００６６】
化合物の調製
実験手順１
【化１３】
2019532985.tif 000018
Ａ：アミドカップリング
本明細書ではそれぞれ式（Ｉ−Ａ）および式（Ｉ−ＢＣ）（式中、−−−−は、ＣＨ２またはＣＨ２ＣＨ２を示す）の化合物と称される最終化合物（式中、ＲＢは、式（ａ）または式（ｂ）もしくは（ｃ）の基である）は、好都合には、当技術分野で知られるカップリング手順に従って、適切なカルボン酸（ＩＩＩ）との反応によって調製され得る（反応工程Ａ）。前記変換は、好都合には、式（ＩＩ−ａ）または（ＩＩ−ｂ）の中間体中のピペリジン型官能基を、好適な温度、例えば室温で、例えばＤＣＭまたはＤＭＦなどの好適な反応不活性溶媒中において、ＤＩＰＥＡおよびトリエチルアミンなどの塩基の存在下、ＨＢＴＵまたはＥＤＣＩなどのカップリング試薬で処理することよって行ってもよく、あるいは、式（ＩＩ−ａ）または（ＩＩ−ｂ）の中間体を、例えば、乾燥ＡＣＮなどの好適な反応不活性溶媒中において、トリエチルアミンなどの好適な塩基の存在下、１−プロパンホスホン無水物などのホスホン無水物と反応させてもよい。式（ＩＩＩ）のカルボン酸は、市販されているか、または当技術分野で知られる手順に従って調製することができる。
【００６７】
実験手順２
【化１４】
2019532985.tif 000019
Ｂ：Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドジメチルアセタールとの反応
Ｃ、Ｆ：１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−アミン塩酸塩との反応
Ｄ：保護基切断
Ｅ：２，２，−ジフルオロ−酢酸エチルエステルとの反応
本明細書ではそれぞれ式（ＩＩ−ａ１）および式（ＩＩ−ａ２）の中間体と称される式（ＩＩ−ａ）の中間体（例えば、式中、ＲＡは、メチルまたはＣＨＦ２である）の構造は、式（ＩＶ−ａ）の中間体から調製することができ、式中、ＰＧは、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）などの好適なアミノ保護基である。
【００６８】
Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドジメチルアセタールとの反応は、例えば１００℃で加熱するなどの適切な熱的条件下で行うことができる。
【００６９】
２，２−ジフルオロ酢酸エチルエステルとの反応は、ＫＯｔＢｕなどの塩基の存在下、トルエンなどの反応不活性溶媒中において０〜５℃に続いて室温などの適切な温度で実施することができる。
【００７０】
二環式コアは、例えば、ＤＭＦなどの反応不活性溶媒中における、例えば、８０℃で加熱するなどの熱的条件下での中間体（Ｖ−ａ）または（Ｖ−ｂ）と１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−アミン塩酸塩の反応により形成することができる。（Ｖ−ｂ）から（ＶＩ−ｂ）にする場合には、保護基が不安定である可能性があり、次の保護工程が必要となる場合がある。
【００７１】
中間体（ＶＩ−ａ）または（ＶＩ−ｂ）における保護基の切断は、当技術分野で知られる手順に従って実施することができ、例えば、保護基がＢｏｃである場合、切断は、例えば、室温でのＭｅＯＨ中のＨＣｌ、またはＤＣＭ中のＴＦＡなどの酸性条件下で実施することができる。
【００７２】
実験手順３
【化１５】
2019532985.tif 000020
Ｇ：二硫化炭素およびヨウ化メチルとの反応
Ｈ、Ｌ：１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−アミン塩酸塩との反応
Ｉ：酸化
Ｊ：ＮａＣＮとの反応
Ｋ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタールとの反応
Ｌ：メチル化
Ｄ：保護基切断
本明細書で（ＩＩ−ａ４）と称される式（ＩＩ−ａ）の中間体（式中、ＲＡは本明細書で（ＩＩ−ａ３）と称されるシアノであるか、またはＲＡは水素であり、かつＲ１はメチルである）は、市販されているか、または当技術分野で知られる手順に従って作製される式（ＩＶ−ｂ）の中間体からの一連の合成工程に従って作製することができる（例えば、Ｒ２＝Ｈまたはメチル、ＰＧ＝Ｂｏｃ）。
【００７３】
このように、二硫化炭素との反応後、ＮａＨなどの塩基およびＴＨＦなどの反応不活性溶媒の存在下、０℃でのヨウ化メチルとの反応により（Ｖ−ｃ）が得られ、次にこれを本明細書に記載の条件下で１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミン塩酸塩と反応させて（ＶＩ−ｃ、ｎ＝０）を得ることができ、その後、例えばＤＣＭまたはＣＨＣｌ３などの反応不活性溶媒の存在下、例えばｍＣＰＢＡなどの適切な過酸による酸化により、（ＶＩ−ｅ、ｎ＝２）が得られる。例えばＤＭＳＯ中のＮａＣＮなどのシアン化物源によるメチルスルホン基の置換により（ＶＩＩ−ｃ）を得て、これを、本明細書に記載の条件下での保護基の切断にかけることができる。
【００７４】
（ＩＶ−ｂ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタールとの反応は、還流状態で加熱するなどの適切な熱的条件下で行うことができる。本明細書に記載の条件下での１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−アミン塩酸塩との反応により（ＶＩ−ｄ）を得て、これを、例えば、ＤＭＦなどの反応不活性溶媒中でＮａＨなどの塩基の存在下、ヨウ化メチルと反応させることによってなど、当技術分野で知られる条件下でメチル化することができる。その後、本明細書に記載の条件下での保護基切断により、中間体（ＩＩ−ａ４）を得る。
【００７５】
実験手順４
【化１６】
2019532985.tif 000021
Ｍ：フッ素化
Ｎ：メチル化および／または鹸化
Ｘ：還元
Ｏ：鈴木（アルキル化）および鹸化
Ｐ：水素化
Ｑ：鹸化
Ｒ：ワインレブアミド形成
Ｓ：アミドからケトンへの変換（例えば、グリニャール）
中間体（ＩＶ−ａ）または（ＩＶ−ｂ）の形成は、市販されているか、または例えば本明細書に記載のものなどの手順に従って調製することができる中間体（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）または（Ｘ）から出発する一連の官能基相互変換により実施することができる。
【００７６】
式（ＶＩＩＩ）の化合物（式中、Ｒ２ａは水素またはメチルであり、かつＰＧはＢｏｃである）は、市販されているか、または例えば本明細書に記載のものなどの一連の既知の手順に従って作製される。それらを、ＬＤＡなどの塩基の存在下、ＴＨＦなどの反応不活性溶媒中でのＮ−フルオロベンゼンスルホンイミドとの反応、またはＬｉＨＭＤＳなどの塩基による処理後のヨウ化アルキルによるアルキル化などの当技術分野で知られる手順によってフッ素化またはアルキル化して、続いて、任意選択的に当技術分野で知られる条件下で鹸化して（ＸＩ）を得ることができる。
【００７７】
式（ＩＸ）の化合物もまた当技術分野で知られており、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４などの触媒の存在下、１，４−ジオキサンなどの反応不活性溶媒中における加熱などの熱的条件下でのボロン酸／エステルの使用などの当業者に知られる条件を使用して、鈴木型手順によってアルキル化することができる。その後、本明細書に記載のものと同様の条件下での鹸化および水素化によって、式（ＸＩ）の中間体を得る。
【００７８】
その後、本明細書に記載のとおり、ワインレブアミド形成およびグリニャールを用いるアミドからケトンへの変換により、所望の中間体（ＩＶ−ａ）または（ＩＶ−ｂ）を得る。
【００７９】
実験手順５
【化１７】
2019532985.tif 000022
Ｔ：シアノギ酸メチルとの反応
Ｕ：還元
Ｖ：脱水
Ｗ：水素化
Ｘ：カップリング
Ｙ：脱炭酸反応および保護基切断
式（ＩＩ−ｂｃ）（式中、−−−−はＣＨ２またはＣＨ２ＣＨ２を示す）の中間体の構造は、Ｎ−Ｂｏｃ−ノルトロピノン［１８５０９９−６７−６］または６−Ｂｏｃ−３−オキソ−６−アザビシクロ［３．１．１］ヘプタン［１２４６２８１−８６−６］などの式（ＸＩＶ）の市販の出発物質から開始される一連の合成工程により作製することができる。ｎＢｕＬｉおよびＮＨｉＰｒ２などの塩基の存在下、ＴＨＦなどの反応不活性溶媒中における−７８℃などの適切な温度でのシアノギ酸メチルとの反応により、ケト−エステル（ＸＶ）が得られ、続いて、これは、ＮａＢＨ４と共に当技術分野で知られる条件、例えば、約０℃でＭｅＯＨ中において還元され得、次に、トリエチルアミンおよびＤＭＡＰなどの塩基の存在下、ＤＣＭなどの反応不活性溶媒中において、温度を６０℃未満に保ちながら、例えばトリフルオロ酢酸無水物により脱水され得る。例えば、ＭｅＯＨ中のパラジウム炭素触媒存在下などの当技術分野で知られる条件下での水素化により、中間体（ＸＶＩＩＩ）が得られ、続いて、これは、例えば、ＬＤＡなどの塩基の存在下、ＴＨＦなどの反応不活性溶媒中において、−７８〜−６０℃の間の温度で、市販されているか、または当技術分野で知られる手順で作製される式（ＸＩＸ）の中間体と反応させられ得る。例えば、１５０℃で加熱するなどの熱的条件下での濃ＨＣｌとの反応により、酸に不安定である場合、例えば、Ｂｏｃなどの保護基の切断を伴って中間体（ＩＩ−ｂｃ）が得られる。市販の出発物質から式（ＩＩ−ｂｃ）（式中、ＲＡはＣＨＦ２であり、かつ−−−はＣＨ２ＣＨ２である）の中間体を作製する代替の方法は、本明細書の実施例において記載される。
【００８０】
薬理学
本発明による化合物は、ＰＤＥ２、特に、ＰＤＥ２Ａの酵素活性を阻害し、その結果、ＰＤＥ２を発現する細胞内のｃＡＭＰまたはｃＧＭＰのレベルを上昇させる。したがって、ＰＤＥ２の酵素活性の阻害は、細胞内のｃＡＭＰまたはｃＧＭＰの量が不足することにより引き起こされる疾患の治療に有用となり得る。ＰＤＥ２阻害剤はまた、正常レベルを超えてｃＡＭＰまたはｃＧＭＰの量を上昇させることが治療効果をもたらす場合に有益となり得る。ＰＤＥ２の阻害剤は、神経障害および精神障害を治療するために使用され得る。
【００８１】
したがって、本発明は、医薬品として使用するための、本発明に係る式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、ならびに薬剤の製造のための、本発明に係る式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または本発明に係る医薬組成物の使用に関する。本発明はまた、ヒトを含む哺乳動物における病態の治療または予防、特に、治療に使用するための、本発明に係る式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または本発明に係る医薬組成物にも関し、これらの治療または予防は、ホスホジエステラーゼ２酵素の阻害によって影響または促進される。本発明はまた、ヒトを含む哺乳動物における病態の治療または予防、特に、治療のための薬剤の製造のための、本発明に係る式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または本発明に係る医薬組成物の使用にも関し、これらの治療または予防は、ホスホジエステラーゼ２酵素の阻害によって影響または促進される。
【００８２】
本発明はまた、ヒトを含む哺乳動物における、ホスホジエステラーゼ２の機能不全に関連する様々な神経障害および精神障害のリスクの治療、予防、改善、制御または軽減に使用するための本発明に係る式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または本発明に係る医薬組成物に関し、これらの治療または予防は、ホスホジエステラーゼ２の阻害によって影響または促進される。
【００８３】
また、本発明は、ヒトを含む哺乳動物における、ホスホジエステラーゼ２の機能不全に関連する様々な神経障害および精神障害のリスクを治療、予防、改善、制御または軽減する薬剤の製造のための、本発明に係る式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または本発明に係る医薬組成物の使用に関し、これらの治療または予防は、ホスホジエステラーゼ２の阻害によって影響または促進される。
【００８４】
本発明が、例えば被験体、例えば哺乳動物の治療のための薬剤の製造のための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または本発明に係る組成物の使用に関することが記載されている場合、このような使用は、例えば被験体の治療の方法であって、それ（例えば治療）を必要とする被験体に、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または本発明に係る組成物を投与する工程を含む方法として、一定の管轄において解釈されるべきであることが理解される。
【００８５】
具体的には、ＰＤＥ２阻害剤を単独でまたは他の薬物と組み合わせて用いて治療してもよい適応症としては、これらに限定されないが、基底核、前頭前野皮質、および海馬により部分的に媒介されると考えられる疾患が挙げられる。
【００８６】
これらの適応症としては、精神病性の障害および病態；不安障害；運動障害；薬物乱用；気分障害；神経変性障害；症状として、注意および／または認知の不足を含む障害または病態；記憶の獲得および固定に関連する障害；脳卒中；ならびに自閉症性障害または自閉症から選択される神経障害および精神障害が挙げられる。
【００８７】
特に、ＰＤＥ２の機能不全に関連する精神病性の障害および病態としては、以下の病態または疾患の１つ以上が挙げられる：例えば、妄想型、解体型、緊張型、鑑別不能型または残遺型の統合失調症；統合失調症様障害；妄想型または鬱病型などの統合失調性感情障害；妄想性障害；アルコール、アンフェタミン、大麻、コカイン、幻覚剤、吸入剤、オピオイド、またはフェンシクリジンによって誘発される精神病などの物質誘発性精神病性障害；妄想性パーソナリティ障害；および統合失調型パーソナリティ障害。
【００８８】
特に、不安障害としては、パニック障害；広場恐怖症；特定恐怖症；社交恐怖症；強迫性障害；心的外傷後ストレス障害；急性ストレス障害；および全般性不安障害が挙げられる。
【００８９】
特に、運動障害としては、ハンチントン病およびジスキネジア；パーキンソン病；むずむず脚症候群および本態性振戦が挙げられる。さらに、トゥーレット症候群および他のチック障害が含まれ得る。
【００９０】
特に、中枢神経系障害は、アルコール乱用；アルコール依存症；アルコール離脱症状；アルコール離脱性せん妄；アルコール誘発性精神病性障害；アンフェタミン依存症；アンフェタミン離脱症状；コカイン依存症；コカイン離脱症状；ニコチン依存症；ニコチン離脱症状；オピオイド依存症およびオピオイド離脱症状の群から選択される物質関連障害である。
【００９１】
特に、気分障害および気分エピソードとしては、鬱病、躁病および双極性障害が挙げられる。好ましくは、気分障害は、双極性障害（ＩおよびＩＩ型）；気分循環性障害；鬱病；気分変調性障害；大鬱病性障害；治療抵抗性鬱病；および物質誘発性気分障害の群から選択される。
【００９２】
特に、神経変性障害としては、パーキンソン病；ハンチントン病；例えばアルツハイマー病などの認知症；多発梗塞性認知症；エイズ関連認知症または前頭側頭型認知症が挙げられる。神経変性障害または病態は、線条体中型有棘ニューロン応答の機能不全を含む。
【００９３】
特に、症状として、注意および／または認知の不足を含む障害または病態としては、アルツハイマー病などの認知症；多発梗塞性認知症；レビー小体病による認知症；アルコール性認知症または物質誘発性持続性認知症；頭蓋内腫瘍または脳外傷に関連する認知症；ハンチントン病に関連する認知症；パーキンソン病に関連する認知症；エイズ関連認知症；ピック病による認知症；クロイツフェルト・ヤコブ病による認知症が挙げられ；他の疾病としては、せん妄；健忘障害；心的外傷後ストレス障害；脳卒中；進行性核上麻痺；精神遅滞；学習障害；注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）；軽度認知障害；アスペルガー症候群；加齢による認知機能障害；および知覚、集中、学習または記憶に関連する認知機能障害が挙げられる。
【００９４】
特に、記憶の獲得および固定に関連する障害としては、加齢による記憶喪失、記憶欠損などの記憶障害が挙げられる。
【００９５】
好ましくは、精神病性障害は、統合失調症、妄想性障害、統合失調性感情障害、統合失調症様障害および物質誘発性精神病性障害の群から選択される。
【００９６】
好ましくは、中枢神経系障害は、強迫性パーソナリティ障害および統合失調症病質、統合失調症型障害の群から選択されるパーソナリティ障害である。
【００９７】
好ましくは、中枢神経系障害は、双極性（ＩおよびＩＩ型）障害、気分循環性障害、鬱病、気分変調性障害、大鬱病性障害；治療抵抗性鬱病；および物質誘発性気分障害の群から選択される気分障害である。
【００９８】
好ましくは、中枢神経系障害は、注意欠陥多動性障害である。
【００９９】
好ましくは、中枢神経系障害は、せん妄、物質誘発性持続性せん妄、認知症、ＨＩＶ疾患による認知症、ハンチントン病による認知症、パーキンソン病による認知症、アルツハイマー型の認知症、物質誘発性持続性認知症および軽度の認知機能障害の群から選択される認知障害である。
【０１００】
好ましくは、本発明の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物によって治療される障害は、統合失調症；強迫性障害；全般性不安障害；ハンチントン病；ジスキネジア；パーキンソン病；鬱病；双極性障害；アルツハイマー病などの認知症；注意欠陥多動性障害；薬物乱用；脳卒中；および自閉症から選択される。
【０１０１】
好ましくは、本発明の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物によって治療される障害は、統合失調症（その陽性症状および陰性症状を含む）、および注意障害または記憶障害などの認知障害である。
【０１０２】
上記の疾患のうち、不安、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害；全般性不安障害、統合失調症、鬱病、注意欠陥多動性障害、アルツハイマー病、ハンチントン病による認知症、パーキンソン病による認知症、アルツハイマー型の認知症、物質誘発性持続性認知症および軽度の認知機能障害の治療が、特に重要である。
【０１０３】
上記の疾患のうち、不安、強迫性障害、統合失調症、鬱病、注意欠陥多動性障害、およびアルツハイマー病の治療が、特に重要である。
【０１０４】
他の中枢神経系障害としては、統合失調症性不安障害（ｓｃｈｉｚｏａｎｘｉｅｔｙ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、および併存する鬱病および不安、特に、併存する全般性不安障害、社会不安障害、またはパニック障害を伴う大鬱病性障害が挙げられ；併存する鬱病および不安が、不安抑鬱、混合性不安抑鬱、混合性不安抑鬱障害、または不安症状を伴う大鬱病性障害という用語（これらは、本明細書において区別なく使用される）によっても示され得ることが理解される。
【０１０５】
現在、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎのＤｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ＆  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ（ＤＳＭ−ＩＶ）の第４版は、本明細書に記載の障害を特定するための診断ツールを記載している。本明細書に記載の神経障害および精神障害に関する代替の命名法、疾病分類、および分類体系が存在し、これらが医学および科学の進歩と共に変化することは、当業者であれば分かるであろう。例えば、「Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＶＡ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，２０１３」（ＤＳＭ−５（商標））は、抑鬱障害、特に、大鬱病性障害、持続性抑鬱障害（気分変調症）、物質・医薬品誘発性抑鬱障害；神経認知障害（ＮＣＤ）（認知症および軽度認知障害の両方）、特に、アルツハイマー病による神経認知障害、血管性ＮＣＤ（多発性梗塞を呈する血管性ＮＣＤなど）、ＨＩＶ感染によるＮＣＤ、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）によるＮＣＤ、パーキンソン病によるＮＣＤ、ハンチントン病によるＮＣＤ、前頭側頭型ＮＣＤ、プリオン病によるＮＣＤ、および物質・医薬品誘発性ＮＣＤ；神経発達症、特に、知的障害、限局性学習症、神経発達運動障害、コミュニケーション症、および注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）；物質関連障害および嗜癖障害、特に、アルコール使用障害、アンフェタミン使用障害、大麻使用障害、コカイン使用障害、他の幻覚剤使用障害、タバコ使用障害、オピオイド使用障害、およびフェンシクリジン使用障害；統合失調症スペクトラムおよび他の精神病性の障害、特に、統合失調症、統合失調症様障害、統合失調性感情障害、妄想性障害、短期精神病性障害、物質・医薬品誘発性精神病性障害；および気分循環性障害（ＤＳＭ−５（商標）では、双極性障害および関連する障害のカテゴリーに入る）などの用語を用いる。このような用語は、本明細書で言及する疾患または病態のいくつかの代替の命名法として当業者により使用されることがある。さらなる神経発達症としては、自閉症スペクトラム症（ＡＳＤ）が挙げられ、これは、ＤＳＭ−５（商標）によれば、早期幼児自閉症、小児自閉症、カナー型自閉症、高機能自閉症、非定型自閉症、特定不能の広汎性発達障害、小児期崩壊性障害、およびアスペルガー障害の用語で従来から知られている障害を包含する。
【０１０６】
したがって、本発明はまた、上述される疾患のいずれか１つの治療に使用するための、本発明に係る式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物に関する。
【０１０７】
本発明はまた、上述される疾患のいずれか１つを治療するのに使用するための、本発明に係る式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物に関する。
【０１０８】
本発明はまた、上述される疾患のいずれか１つの治療または予防、特に、治療のための、本発明に係る式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物に関する。
【０１０９】
本発明はまた、上述される病態のいずれか１つの治療または予防のための薬剤の製造のための、本発明に係る式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用に関する。
【０１１０】
本発明はまた、上述される病態のいずれか１つの治療のための薬剤の製造のための、本発明に係る式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用に関する。
【０１１１】
本発明の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、上述される疾患のいずれか１つの治療または予防のために、哺乳動物、好ましくはヒトに投与され得る。
【０１１２】
本発明に係る式（Ｉ）の化合物ならびにその薬学的に許容される塩および溶媒和物の有用性を考慮して、上述される障害または疾患を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、治療有効量の、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または医薬組成物を投与する工程を含む方法が提供される。
【０１１３】
前記方法は、ヒトを含む温血動物への、治療有効量の本発明に係る式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の投与、すなわち、全身投与または局所投与、好ましくは経口投与を含む。
【０１１４】
したがって、本発明はまた、上述される疾患のいずれか１つの予防および／または治療のための方法であって、治療有効量の本発明に係る式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を、それを必要とする患者に投与する工程を含む方法に関する。
【０１１５】
本明細書に記載されるＰＤＥ２阻害剤は、単独で、組み合わせて、あるいは、統合失調症および双極性障害、強迫性障害、パーキンソン病、認知機能障害および／または記憶喪失などの精神病の治療に使用される他の薬剤などの他の医薬品、例えばニコチン性α−７アゴニスト、ＰＤＥ４阻害剤（ロリプラム、ＧＥＢＲ−７ｂ、ＧＳＫ３５６２７８、ＧＳＫ２５６０６６、アプレミラスト、ＭＫ−０９５２、ロフルミラスト、ＡＮ２８９８、ＡＮ２７２８、アリフロ（シロミラスト）、ドトラベリン、ロノミラスト（エルビミラスト）、レバミラスト、テトミラスト、Ｅ６００５、ＧＤＰ−１１１６、ＨＴ０７１２、ＭＫ−０８７３）、ＰＤＥ５阻害剤（シルデナフィル、バルデナフィル、タダラフィル、ウデナフィル、アバナフィル、ミロデナフィル、ロデナフィル、ダサンタフィル、ＰＦ−００４８９７９１）、ＰＤＥ９（ＰＦ−０４４４７９４３）、他のＰＤＥ２阻害剤（Ｂａｙ  ６０−７５５０、ＰＦ−９９９、ＮＤ−７００１）、ＰＤＥ１０阻害剤（ＰＦ−０２５４５９２０、ＡＭＧ５７９）、ＰＤＥ２および１０阻害剤、カルシウムチャネル遮断薬、ムスカリン性ｍ１およびｍ２調節剤、アデノシン受容体調節剤、アンパカイン、ＮＭＤＡ−Ｒ調節剤、ｍＧｌｕＲ調節剤、ドーパミン調節剤、セロトニン調節剤、カンナビノイド調節剤、ＨＤＡＣ阻害剤（ボリノスタットＳＡＨＡ、パノビノスタット、キシノスタット、バルプロ酸）およびコリンエステラーゼ阻害剤（例えばドネペジル、リバスチグミン、およびガランタミン）と組み合わせて使用され得る。このような組合せにおいて、本発明の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、式（Ｉ）の化合物または他の薬剤が有用性を有し得る疾患または病態のリスクの治療、予防、制御、改善、または軽減において、１つ以上の他の薬剤と組み合わせて用いられてもよく、これらの薬剤を合わせた組合せは、いずれかの単独の薬剤より、安全であるかまたはより有効である。
【０１１６】
当業者であれば、本発明のＰＤＥ２阻害剤の治療有効量が、ＰＤＥ２酵素を阻害するのに十分な量であること、そして、とりわけ疾患のタイプ、治療製剤中の化合物の濃度、および患者の状態に応じて、この量が変動することを認識するであろう。一般に、本明細書に記載の障害などのＰＤＥ２酵素の阻害が有益である疾患を治療するための治療用薬剤として投与されるＰＤＥ２阻害剤の量は、症例毎に主治医が決定することになる。
【０１１７】
一般に、好適な用量は、治療部位におけるＰＤＥ２阻害剤の濃度が０．５ｎＭ〜２００μＭ、より一般的には５ｎＭ〜５０μＭの範囲となる用量である。これらの治療濃度を得るために、治療を必要とする患者は、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ体重、特に、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２．５０ｍｇ／ｋｇ体重、特に、０．０１〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重、特に、０．１ｍｇ／ｋｇ〜０．５０ｍｇ／ｋｇ体重で投与されることになるものと考えられる。治療効果を達成するのに必要な、本明細書で有効成分とも称される本発明の化合物の量は、当然のことながら、症例毎に変動し、特定の化合物、投与経路、レシピエントの年齢および病態、ならびに治療される特定の障害または疾患によって変動することになる。治療方法はまた、１日に１〜４回摂取する投薬計画で有効成分を投与する工程を含んでもよい。これらの治療方法では、本発明の化合物は、好ましくは入院前に製剤化される。本明細書で下記に記載するように、好適な医薬製剤は、よく知られている容易に入手可能な成分を使用して、既知の手順で調製される。
【０１１８】
医薬組成物
本発明はまた、神経障害および精神障害などのＰＤＥ２の阻害が有益である疾患を予防または治療するための組成物を提供する。前記組成物は、治療有効量の式（Ｉ）の化合物および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む。
【０１１９】
有効成分を単独で投与することは可能であるが、医薬組成物として提供することが好ましい。したがって、本発明はさらに、本発明による化合物を、薬学的に許容される担体または希釈剤とともに含む医薬組成物を提供する。担体または希釈剤は、組成物の他の成分と混合可能であり、そのレシピエントに有害でないという意味で、「許容される」ものでなければならない。
【０１２０】
本発明の医薬組成物は、薬学の技術分野においてよく知られる任意の方法によって調製され得る。治療有効量の特定の化合物は、有効成分として、塩基形態または付加塩形態で、薬学的に許容される担体と組み合わされて均質な混合物にされるが、これは投与に所望される製剤の形態に応じて多種多様な形態をとり得る。これらの医薬組成物は、好ましくは、経口、経皮もしくは非経口投与などの全身投与；または吸入、鼻腔スプレー、点眼剤を介したもの、もしくはクリーム、ゲル、シャンプーなどを介したものなどの局所投与に好適な単位剤形であることが望ましい。例えば、経口剤形の組成物の製造においては、懸濁剤、シロップ、エリキシル剤、および液剤などの経口液体製剤の場合、例えば、水、グリコール、油、アルコールなど；または、散剤、丸剤、カプセル剤、および錠剤の場合、デンプン、糖類、カオリン、滑沢剤、結合剤、および崩壊剤などの固体担体などの、通常の医薬媒体のいずれかを使用することができる。投与が容易であるため、錠剤およびカプセル剤が最も有利な経口単位剤形であり、その場合、固体医薬担体が当然使用される。非経口組成物の場合、担体は、通常、滅菌水を少なくとも大部分含むことになるが、例えば溶解性を助ける他の成分が含まれてもよい。例えば、担体が生理食塩水、ブドウ糖溶液、または生理食塩水とブドウ糖溶液との混合物を含む注射用溶液剤を調製してもよい。注射用懸濁剤を調製してもよく、その場合、適切な液体担体および懸濁化剤などが使用され得る。経皮投与に好適な組成物においては、担体は、皮膚に大きな有害作用を引き起こさない任意の性質の少量の好適な添加剤と、任意選択により組み合わせて、浸透促進剤および／または好適な水和剤を任意選択により含む。前記添加剤は、皮膚への投与を容易にし得、かつ／または所望の組成物を調製するのに役立ち得る。これらの組成物は、様々な方法で、例えば、経皮貼付剤として、スポットオン製剤として、または軟膏剤として投与することができる。
【０１２１】
投与を容易にし、投与量を均一にするために、前述した医薬組成物を単位剤形に製剤化することが特に有利である。本明細書および特許請求の範囲で使用する単位剤形とは、単位投与量として好適な、物理的に個別の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と共同して所望の治療効果が生じるように計算された所定量の有効成分を含有する。そのような単位剤形の例としては、錠剤（割線入り錠剤またはコーティング錠を含む）、カプセル剤、丸剤、分包散剤、カシェ剤、注射用溶液剤または懸濁剤、小さじ量、および大さじ量など、ならびにそれらを分割して複合したものがある。
【０１２２】
投与方法に応じて、医薬組成物は、有効成分を０．０５〜９９重量％、好ましくは０．１〜７０重量％、より好ましくは０．１〜５０重量％、および薬学的に許容される担体を１〜９９．９５重量％、好ましくは３０〜９９．９重量％、より好ましくは５０〜９９．９重量％含むことになり、パーセンテージは全て組成物の全重量に基づく。
【０１２３】
本化合物は、経口、経皮もしくは非経口投与などの全身投与；または吸入、鼻腔スプレー、点眼剤を介したもの、もしくはクリーム、ゲルもしくはシャンプーなどを介したものなどの局所投与のために使用することができる。本化合物は経口投与されるのが好ましい。
【０１２４】
正確な投与量および投与頻度は、当業者によく知られているように、化合物、治療される特定の病態、治療される病態の重症度、特定の患者の年齢、体重、性別、障害の程度および全身の健康状態、ならびにその個体が摂取している可能性がある他の医薬に依存する。さらに、前記有効１日量が、治療対象の応答に応じておよび／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて、減少または増加され得ることは明らかである。
【０１２５】
単回剤形を製造するために担体材料と組み合わせることができる式（Ｉ）の化合物の量は、治療される疾患、哺乳動物種および特定の投与方法に応じて変動することになる。しかし、一般的な指針として、本発明の化合物についての好適な単位用量は、例えば、好ましくは０．１ｍｇ〜約１０００ｍｇの活性化合物を含有し得る。好ましい単位用量は１ｍｇ〜約５００ｍｇである。より好ましい単位用量は１ｍｇ〜約３００ｍｇである。より一層好ましい単位用量は１ｍｇ〜約１００ｍｇである。このような単位用量は、７０ｋｇの成人の総投与量が、１回の投与につき、対象の体重１ｋｇ当たり０．００１〜約１５ｍｇの範囲になるように、１日に１回超、例えば１日に２回、３回、４回、５回または６回投与することができるが、好ましくは１日に１回または２回である。好ましい投与量は、１回の投与当たり対象の体重１ｋｇ当たり０．０１〜約１．５ｍｇであり、そのような療法は数週間または数ヶ月間、場合により数年間にわたる可能性がある。しかし、当業者にはよく理解されているように、任意の特定の患者に対する特定の用量レベルは、使用する特定の化合物の活性、治療を受ける個体の年齢、体重、全身の健康状態、性別および食事、投与時間および投与経路、排泄率；以前投与された他の薬物、ならびに、治療を受ける特定の疾患の重症度を含む様々な要因に依存することは理解されよう。
【０１２６】
典型的な投与量は、１日１回もしくは１日複数回服用される１個の１ｍｇ〜約１００ｍｇ錠剤もしくは１ｍｇ〜約３００ｍｇ、または１日１回服用され、比較的高含有量の有効成分を含有する１個の徐放性カプセル剤もしくは錠剤であってもよい。徐放効果は、異なるｐＨ値で溶解するカプセル材料により、浸透圧で徐々に放出するカプセルにより、または他の既知の任意の放出制御手段により得ることができる。
【０１２７】
当業者には明らかなことであろうが、これらの範囲外の投与量を使用することが必要となる場合があり得る。さらに、臨床医または治療医が、個々の患者の応答に応じて、治療を開始、中断、調整または終了する方法および時を知っているであろうことにも留意されたい。
【０１２８】
上記の組成物、方法およびキットについて、当業者は、それぞれに使用するのに好ましい化合物は、本明細書に記載されている化合物であることが分かるであろう。
【実施例】
【０１２９】
実験の部
本明細書で使用する場合、用語「ＡＣＮ」は、アセトニトリルを意味し、「ＡｃＯＨ」または「ＴＦＡ」は、酢酸を意味し、「Ｂｏｃ」は、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルを意味し、「Ｂｏｃ２Ｏ」は、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（ｄｉ−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ  ｄｅｃａｒｂｏｎａｔｅ）を意味し、「ｄ」は、日を意味し、「ＤＭＡＰ」は、４−ジメチルアミノピリジンを意味し、「ＤＳＣ」は、示差走査熱量測定を意味し、「ＬＣＭＳ」は、液体クロマトグラフィー／質量分析法を意味し、「ＨＰＬＣ」は、高速液体クロマトグラフィーを意味し、「ＲＰ  ＨＰＬＣ」は、逆相高速液体クロマトグラフィーを意味し、「ａｑ．」は、水性を意味し、「ＤＣＭ」は、ジクロロメタンを意味し、「ＤＩＰＥ」は、ジイソプロピルエーテルを意味し、「ＤＩＰＥＡ」は、ジイソプロピルエチルアミンを意味し、「ＤＭＦ」は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを意味し、「ＤＭＳＯ」は、ジメチルスルホキシドを意味し、「ＥＤＣＩ」は、１−エチルー３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドを意味し、「ＥｔＯＨ」は、エタノールを意味し、「Ｅｔ２Ｏ」は、ジエチルエーテルを意味し、「ＥｔＯＡｃ」は、酢酸エチルを意味し、「Ｅｔ３Ｎ」または「ＴＥＡ」は、トリエチルアミンを意味し、「ＨＡＴＵ」は、１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェートを意味し、「ＨＢＴＵ」は、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ，’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートを意味し、「ＬｉＨＭＤＳ」は、リチウムビス（トリメチルシリル）アミドを意味し、「ＴＨＦ」は、テトラヒドロフランを意味し、「ｍｉｎ」は、分を意味し、「ｈ」は、時間を意味し、「ｍＣＰＢＡ」は、３−クロロ過安息香酸を意味し、「ＭｅＯＨ」は、メタノールを意味し、「ＭＴＢＥ」は、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルを意味し、「Ｐｄ／Ｃ」は、パラジウム炭素を意味し、「Ｐｄ（ＰＰｈ３）４」は、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）を意味し、「ｉＰｒＯＨ」は、２−プロパノールを意味し、「ＲＭ」または「ｒｍ」は、反応混合物を意味し、「ＲＴ」または「ｒｔ」は、室温を意味し、「ＯＬ」は、有機層を意味し、「Ｒｔ」は保持時間（分）を意味し、「ｑｕａｎｔ．」は、定量的を意味し、「ｓａｔ．」は、飽和を意味し、「ＳＦＣ］は、超臨界流体クロマトグラフィーを意味し、「ｓｏｌ．」は溶液を意味し、「ｍ．ｐ．」は融点を意味し、「ｑ．ｓ．」は、適量を意味する。
【０１３０】
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、試薬用溶媒を用いてシリカゲル６０  Ｆ２５４プレート（Ｍｅｒｃｋ）上で行った。オープンカラムクロマトグラフィーは、標準的な技術のもと、シリカゲル、メッシュ２３０〜４００粒径および６０Åポアサイズ（Ｍｅｒｃｋ）上で行った。自動化フラッシュカラムクロマトグラフィーは、破砕状シリカゲル、粒径１５〜４０μｍ（順相使い捨てフラッシュカラム）上において、Ａｒｍｅｎ  ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔのＳＰＯＴまたはＬＡＦＬＡＳＨシステム上でＭｅｒｃｋのそのまま接続できるカートリッジを用いて行った。
【０１３１】
立体中心が「ＲＳ」と共に示されるとき、別段の断りがない限り、これはその示された中心でラセミ混合物が得られたことを意味する。一部の化合物での中心の立体化学的配置は、この混合物が分離された場合に「Ｒ」または「Ｓ」と指定されてもよく、一部の化合物に関して、示した中心での立体化学的配置は、この化合物自体が単一の立体異性体として単離されており、かつ鏡像異性的に／ジアステレオ異性的に純粋ではあるが絶対立体化学が決定されていない場合に「＊Ｒ」または「＊Ｓ」と指定されている。
【０１３２】
一部の化合物の絶対立体化学的配置は、振動円二色性（ＶＣＤ）を用いて決定した。それらは、ＣＤ２Ｃｌ２を溶媒として用い、ＫＢｒ液体セルに入れて、ＰＭＡ  ３７を備えるＢｒｕｋｅｒ  Ｅｑｕｉｎｏｘ  ５５で測定した（ＰＥＭ：１３５０ｃｍ−１、ＬＩＡ：１ｍＶ、分解能：４ｃｍ−１）。絶対配置を決定するためのＶＣＤの使用に関する説明は、Ｄｙａｔｋｉｎ  Ａ．Ｂ．ｅｔ．ａｌ，Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ，１４：２１５−２１９（２００２）に見出すことができる。第一原理計算：徹底的な配座探索を、混合ねじれ／低モードサンプリングをＯＰＬＳ−２００５力場で行うＭａｃｒｏｍｏｄｅｌを使用して、分子力学レベルで行った。突き止めた最小値は、ＪａｇｕａｒをＢ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ＊＊レベルで使用し、ジクロロメタン溶媒を模倣するポアソン−ボルツマン連続溶媒和モデルを用いて最適化した。１０ｋＪ／ｍｏｌ以内の間隔の全ての配座を使用して、ＶＣＤおよびＩＲスペクトルをシミュレートした。双極子強度および旋光強度を、同じＢ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ＊＊レベルで、Ｊａｇｕａｒを使用して計算した。０．９７倍だけ周波数をスケーリングし、ローレンツ型バンドに変換し、ボルツマンアンサンブルを取る各配座異性体の寄与を合計した後に生成された、計算されたＶＣＤスペクトルを、正確な立体化学を割り当てるために実験スペクトルと視覚的に比較した。
【０１３３】
当業者に理解されるように、示されたようなプロトコルを用いて合成された化合物は、溶媒和物、例えば、水和物として存在してもよく、かつ／または残留溶媒もしくは微量の不純物を含有してもよい。塩形態として単離される化合物は、化学量論的な整数、すなわち、単塩もしくは複塩であってもよく、または中間の化学量論であってもよい。
【０１３４】
次の実施例は、説明するためのものであって、本発明の範囲を限定するものではない。別段の断りがない限り、出発物質は全て、市販業者から入手し、さらに精製することなく使用した。
【０１３５】
Ａ．中間体の合成：
中間体１
【化１８】
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手順ａ：４−メチル−３−ピリジンカルボン酸塩酸塩（１：１）（４０ｇ、２３０．４ｍｍｏｌ）を、硫酸（２０ｍＬ）とＭｅＯＨ（４００ｍＬ）の還流混合物に加えた。混合物を一晩還流させ、次に、それを蒸発させ、得られたスラリーを、水（３６０ｍＬ）中のＮａＨＣＯ３（６４ｇ）の冷溶液に加えた。生成物をＤＣＭで抽出し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、中間体１を得た（２８．７０ｇ、８３％）。
【０１３６】
手順ｂ：金属製の反応器に、３−ブロモ−４−メチル−ピリジン（２００ｇ、０．１１６ｍｏｌ）、およびＤＭＦ／ＭｅＯＨ（１Ｌ／１Ｌ）の混合物を充填した。これに、Ｅｔ３Ｎ（４００ｇ、０．３９５ｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（８ｇ、０．０３６ｍｏｌ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（１６ｇ、０．０２９ｍｏｌ）を加えた。反応器を閉め、ＣＯガス（３ＭＰａ）で加圧し、反応混合物を撹拌し、１４０℃で一晩加熱した。反応混合物を冷却し、濾過し、真空中で濃縮した。残渣を、シリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィー（勾配溶離液：ＥｔＯＡｃ／石油エーテル  １／１〜１／０）により精製した。生成物画分を回収し、溶媒を蒸発させて、所望の中間体１を得た（９０ｇ、５１％）。
【０１３７】
中間体２
【化１９】
2019532985.tif 000024
手順ａ：水素化フラスコに、ＡｃＯＨ（５００ｍＬ）を充填し、次に、ＰｔＯ２（１５．０２ｇ、６６．２ｍｍｏｌ）を加えた。中間体１（５０ｇ、３３０．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で７日間水素化した。反応混合物をｄｉｃａｌｉｔｅ（登録商標）上で濾過し、濾液を蒸発させて、中間体２（５２ｇ）を得て、それをさらに精製せずに次の工程に使用した。
【０１３８】
手順ｂ：酸化白金（５ｇ、０．０２２ｍｏｌ）を、中間体１（９０ｇ、０．５９５ｍｏｌ）およびＡｃＯＨ（１Ｌ）の溶液に加えた。反応混合物を撹拌し、３．５ｋＰａの圧力下で、５０℃で５日間水素化した。冷却された反応混合物を真空中で濃縮して、酢酸塩としての中間体２を得た（１４０ｇ、９７％、１Ｈ−ＮＭＲによって決定される９０％の純度）。
【０１３９】
中間体３
【化２０】
2019532985.tif 000025
手順ａ：ＤＣＭ（８６９ｍＬ）中の中間体２（５２ｇ、３３０．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（８５．５ｇ、６６１．５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（４．０４ｇ、３３．０８ｍｍｏｌ）を加えた。次に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（７２．１９ｇ、３３０．８ｍｍｏｌ）を、少しずつこの溶液に加え、反応物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を水および塩水で洗浄し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。生成物を、カラムクロマトグラフ（シリカゲル、溶離液：ＤＣＭ、ＤＣＭ中１％のＭｅＯＨ、２％、４％）により精製した。所望の画分を蒸発させて、中間体３を得た（６４．１ｇ、７５％）。
【０１４０】
手順ｂ：ＤＣＭ（１．５Ｌ）中の中間体２（１４０ｇ、０．５９５ｍｏｌ）の撹拌および冷却された（０℃）溶液に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１３０ｇ、０．５９６ｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（２２５ｇ、１．７４ｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１０ｇ、０．０８２ｍｏｌ）を連続して加え、撹拌を室温で２時間続けた。反応混合物をＨ２Ｏ（５００ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を蒸発させて、粗中間体３（１５０ｇ、９０％、１Ｈ−ＮＭＲによって決定される９０％の純度）を得て、それを次の工程にそのまま使用した。
【０１４１】
中間体４
【化２１】
2019532985.tif 000026
手順ａ：中間体３（６４．１ｇ、２４９．１ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）中において室温で撹拌した。ＮａＯＨ（２Ｍ、７４７．３ｍＬ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を１ＮのＨＣｌで酸性化し、生成物をＥｔ２Ｏで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、白色固体として中間体４を得た（５９．７０ｇ）。
【０１４２】
手順ｂ：ＭｅＯＨ（０．９Ｌ）中の中間体３（１５０ｇ、９０％純粋、０．５２４ｍｏｌ）の撹拌溶液に、２ＭのＮａＯＨ溶液（１．８ｍｏｌ）の溶液を加えた。室温で１４時間後、反応混合物をＭＴＢＥ（２×０．８Ｌ）で抽出した。水層を１０％のクエン酸で酸性化し、次に、ＥｔＯＡｃ（４×１Ｌ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、粗中間体４（１４２ｇ、１Ｈ−ＮＭＲによって決定される９０％の純度、１００％）を得て、それを次の工程にそのまま使用した。
【０１４３】
中間体５
【化２２】
2019532985.tif 000027
手順ａ：ＴＨＦ（８００ｍＬ）中の中間体４（５９．７ｇ、０．２５ｍｏｌ）の溶液に、ジ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル−メタノン（５４ｇ、０．３３ｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。別のフラスコ中で、ＡＣＮ（５００ｍＬ）中のＮ−メトキシ−メタンアミン塩酸塩（１：１）（３２．９３ｇ、０．３４ｍｏｌ）の懸濁液に、トリメチルアミン（３５．７５ｇ、０．３５ｍｏｌ）を加えた。両方の混合物を合わせて、監視しながら５０℃で撹拌した。中間生成物が反応混合物から晶出し、これは、所望の生成物を形成するようにＮ−メトキシ−メタンアミンと反応しなかった。中間体が溶解されるまでＤＣＭを加えた。反応物を、８０℃で１週間撹拌したままにした。溶媒を蒸発させた。残渣をＤＣＭに溶解させ、水、２０％のＡｃＯＨ溶液および最後に飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。生成物を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液：ＤＣＭ中２％のＭｅＯＨ、４％）により精製した。純粋な画分を蒸発させて、中間体５を得た（７０ｇ、定量的）。
【０１４４】
手順ｂ：ＤＣＭ（２Ｌ）中の中間体４（１４０ｇ、０．５１８ｍｏｌ）の撹拌および氷冷された溶液に、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン（１１３ｇ、１．１６ｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（１１３ｇ、１．７９ｍｏｌ）を加えた。次に、ＨＡＴＵ（２３５ｇ、０．６１８ｍｏｌ）を加え、撹拌を１４時間続けた。溶媒を蒸発させ、ＮａＨＣＯ３溶液（０．５Ｌ）を加え、次に、ＤＣＭ（３×１Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣を石油エーテル中１〜１０％のＥｔＯＡｃで溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、中間体５を得た（１５２ｇ、１００％）。
【０１４５】
中間体６
【化２３】
2019532985.tif 000028
手順ａ：ＴＨＦ（２５０ｍＬ）中の中間体５（７０ｇ、２４４．４ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下でフラスコに充填し、−１５℃に冷却した。メチルマグネシウムブロミド（トルエン／ＴＨＦ  ７５／２５中１．４Ｍ、２０６ｍＬ）を、温度が０℃を超えないように、滴下して加えた。添加後、反応混合物を室温で１時間撹拌した。次に、反応混合物を、２０ｍＬのＡｃＯＨと共に氷上に注いだ。生成物をＥｔ２Ｏで抽出し、有機層を５％のＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、中間体６を得た（５３．３５ｇ、９０％）。
【０１４６】
手順ｂ：ＴＨＦ（２Ｌ）中の中間体５（１５０ｇ、０．５２４ｍｏｌ）の撹拌および冷却された溶液（０℃）に、ＴＨＦ（０．７５Ｌ、２．２５ｍｏｌ）中３Ｍのメチルマグネシウムブロミド溶液を滴下して加え、撹拌を室温で２時間続けた。反応混合物をＮＨ４Ｃｌ水溶液に注ぎ、ＤＣＭで抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣を、石油エーテル中１〜５％のＥｔＯＡｃで溶離するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、中間体６を得た（１２０ｇ、９５％）。
【０１４７】
中間体７
【化２４】
2019532985.tif 000029
中間体６（５３．３５ｇ、０．２２ｍｏｌ）を、トルエン（１５００ｍＬ）中においてＮ２下０℃で撹拌した。カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（３４．１４ｇ）を、０〜５℃で加え、２，２−ジフルオロ−酢酸エチルエステル（３３．０１ｇ、０．２７ｍｏｌ）を、０〜５℃で滴下して加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次に、水中１０％のＨ２ＳＯ４で洗浄し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、中間体７を得た（７０．５０ｇ、定量的）。
【０１４８】
中間体８
【化２５】
2019532985.tif 000030
中間体７（７０．５ｇ、２２０．８ｍｍｏｌ）、１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミン塩酸塩（１：１）（５３．２２ｇ、４４１．５２ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１５００ｍＬ）を、８０℃で２４時間撹拌した。Ｅｔ３Ｎ（２０ｇ）および二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２０ｇ）を加えた。混合物を３０分間撹拌し、蒸発させ、次に、ＥｔＯＡｃに溶解させ、水および塩水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。４つの異性体が観察された。第１の画分が、Ｅｔ２Ｏから結晶化された。結晶を濾別し、乾燥させて、中間体８を得た（２４．６０ｇ、３０％）。母液は、化合物の第２の画分を生じた。結晶を濾別し、乾燥させて、中間体８を得た（２．５３ｇ、３％）。
「ＲＳ」は、中間体が、トランス相対配置の２つのエナンチオマーのラセミ混合物であることを意味することに注意されたい。
【０１４９】
中間体９、９ａおよび９ｂ
【化２６】
2019532985.tif 000031
ＭｅＯＨ（３５０ｍＬ）中の中間体８（２４．６ｇ、６７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ−ｉＰｒＯＨ（３５０ｍＬ）を加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を蒸発させ、生成物がＥｔＯＨから結晶化された。結晶を濾別し、乾燥させ、２０．３３ｇの粗製物を得て、それに、水、Ｎａ２ＣＯ３およびＤＣＭを加えた。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、１２．８０ｇの中間体９を得た。この遊離塩基を、分取ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ  ３０×２５０ｍｍ；移動相：ＣＯ２、（０．４％のｉＰｒＮＨ２と共に（ＭｅＯＨ−ｉＰｒＯＨ  ５０／５０））による精製によってエナンチオマー９ａおよび９ｂへと分離して、中間体９ａ（５ｇ、１９％、保持時間＝７．５７分）および中間体９ｂ（５．１３ｇ、１９％、保持時間＝９．３６分）を得た。
【０１５０】
中間体９ａおよび９ｂを遊離塩基として単離するか、あるいは、それらをＭｅＯＨに溶解させた後、ＨＣｌ／ｉ−ＰｒＯＨを加え、混合物を蒸発させた。塩酸塩（それぞれの場合において、．ＨＣｌ）を、ＡＣＮから結晶化させ、濾別し、乾燥させた。
【０１５１】
中間体１０
【化２７】
2019532985.tif 000032
Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドジメチルアセタール（２０ｍＬ、０．９１ｇ／ｍＬ、０．１４ｍｏｌ）中のＩ−６（７．３ｇ、０．０３ｍｏｌ）の撹拌混合物を、１００℃で４時間加熱した。反応混合物を真空中で濃縮し、トルエン（２×２０ｍＬ）と共蒸発させて、茶色の残渣としてＩ−７（９．４ｇ、収率１００．１％）を得て、これを次の工程にそのまま使用した。
【０１５２】
中間体１１（Ｉ−１１）
【化２８】
2019532985.tif 000033
ＡｃＯＨ（５０ｍＬ、１．０５ｇ／ｍＬ、１．７５ｍｏｌ）中のＩ−１０（９．４ｇ、０．０３ｍｏｌ）の混合物に、ＨＯＡｃ（５０ｍＬ、１．０５ｇ／ｍＬ、１．７５ｍｏｌ）中の３−アミノ−１，２，４−トリアゾール（２．６８ｇ、０．０３ｍｏｌ）の混合物を加え、結果として生じる反応混合物をＤｒｙｓｙｎ（登録商標）金属製ヒーティングブロックにおいて１３０℃で１５分間加熱した。反応混合物を冷却し、真空中で濃縮し、ＤＣＭ（０．２Ｌ）で希釈し、１  ＮａＯＨによりｐＨ約８まで処理した。層を分離し、水層をＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、真空中で濃縮して、暗褐色の油を得て、これを、ＤＣＭ中の０〜３％の７Ｎ  ＮＨ３／ＭｅＯＨの勾配で溶離するＲｅｄｉｓｅｐ（登録商標）１２０ｇフラッシュカラムを用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、約１：４＝シス：トランス混合物の黄褐色の油として中間体１１を得た（２．１５ｇ、収率２１．４２％）。
【０１５３】
中間体１２
【化２９】
2019532985.tif 000034
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ、０．７９ｇ／ｍＬ、１．２３ｍｏｌ）中のＩ−１１（２．１５ｇ、０．００６５ｍｏｌ）の撹拌混合物をＨＣｌ（ｉＰｒＯＨ中の６Ｍ）（５０ｍＬ、６Ｍ、０．３ｍｏｌ）で処理し、室温で１６時間後、反応混合物を真空中で濃縮して、オフホワイトの固体を得た。これをＥｔ２Ｏ（２００ｍＬ）とＡＣＮ（３０ｍＬ）の混合物で１６時間トリチュレートした。この固体を濾過により回収し、乾燥させて、オフホワイト固体のシス／トランス混合物（１８％／８２％）として中間体１２を得た（１．７ｇ、収率９７．８７％）。
【０１５４】
中間体１２Ａおよび中間体１２ｂ
【化３０】
2019532985.tif 000035
ＭｅＯＨ（１６５ｍＬ）中のＩ−１１（２３ｇ、０．０６９４ｍｏｌ）の撹拌混合物をＨＣｌ（ｉＰｒＯＨ中の６Ｍ）（１６５ｍＬ、６Ｍ、０．９８６ｍｏｌ）で処理し、室温で１６時間後、反応混合物を真空中で濃縮して、オフホワイトの固体を得た。これを水およびＤＣＭで希釈し、Ｎａ２ＣＯ３で処理した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して残渣を得て、これをＳＣＦ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ  ２０×２５０ｍｍ、移動相：ＣＯ２、ＭｅＯＨ−ｉＰｒＯＨ（５０−５０）＋０．４％ｉＰｒＮＨ２）を用いて精製して、中間体１２ａおよび１２ｂを得た。これらをＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中に溶解させ、ＨＣｌ（ｉＰｒＯＨ中の６Ｍ）（１００ｍＬ）で０℃において２時間処理した。揮発物を減圧下で蒸発させ、得られた残渣をＥｔ２Ｏ中において０℃で撹拌して、中間体１２ａ  （９．２５ｇ、４３％、保持時間＝３．５４分、［α］２０Ｄ＝−１７．４７°（ｃ  ０．５４、ＤＭＦ））および中間体１２ｂ（８．８ｇ、４２％、保持時間＝３．２４分、［α］２０Ｄ＝＋１６．５°（ｃ  ０．５２、ＤＭＦ））を得た。
【０１５５】
中間体１３
【化３１】
2019532985.tif 000036
１００ｍｌのＴＨＦ（２４５ｍＬ）中のＬＤＡ（ＴＨＦ／ヘプタン／エチルベンゼン中２Ｍ、４２．７ｍＬ、２Ｍ、８５．４９３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の中間体３（２０ｇ、７７．７２１ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で滴下して加えた。この溶液を３０分間撹拌し、次に、１００ｍｌのＴＨＦ中のＮ−フルオロベンゼンスルホンイミド（３０．６ｇ、９７．１ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で移した。反応混合物を０℃で１５分間、続いて室温で一晩撹拌した。反応混合物を蒸発させ、ＥｔＯＡｃを加えた後、反応混合物を水、０．１Ｎ  ＨＣｌ溶液、ＮａＨＣＯ３飽和溶液および塩水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。生成物を、シリカゲル（溶離液：ＤＣＭからＤＣＭ中１％のＭｅＯＨ）により精製した。純粋な画分を蒸発させて、中間体１３を得た（２１．４ｇ、定量的）。
【０１５６】
中間体１４
【化３２】
2019532985.tif 000037
中間体１３（２１．４ｇ、７７．７２８ｍｍｏｌ）の溶液を、ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）中において室温で撹拌した。ＮａＯＨ（４８６ｍＬ、２Ｍ、９７３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を１ＮのＨＣｌで酸性化し、生成物をＥｔ２Ｏで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。生成物を、シリカゲル（溶離液：ＤＣＭからＤＣＭ中５％のＭｅＯＨ）により精製した。純粋な画分を蒸発させて、１４を得た（１５ｇ、７４％）。
【０１５７】
中間体１５
【化３３】
2019532985.tif 000038
中間体１４（１５ｇ、５７．４０７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０００ｍＬ）に溶解させた。次に、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１１．２ｇ、１１４．８ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（１７．４ｇ、１７２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃に冷却した。次に、ＨＡＴＵ（２４．０ｇ、６３．１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）に注いだ。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、溶媒を蒸発させた。残渣を、シリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離液：ＤＣＭからＤＣＭ中１％のＭｅＯＨ）により精製した。生成物画分を回収し、溶媒を蒸発させて、所望の中間体１５を得た（８．４９、収率４９％  ｇ）。
【０１５８】
中間体１６
【化３４】
2019532985.tif 000039
ＴＨＦ（６０ｍＬ）中の中間体１５（８．４９、２７．９ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下でフラスコに移し、−１５℃に冷却した。メチルマグネシウムブロミド（１６．３ｍＬ、３Ｍ、４８．８ｍｍｏｌ）を、温度が０℃を超えないように、滴下して加えた。添加後、反応混合物を室温で１時間撹拌した。次に、反応混合物を、２０ｍＬのＡｃＯＨと共に氷上に注いだ。生成物をＥｔ２Ｏで抽出し、有機層を５％のＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させ、シリカゲル（溶離液：ＤＣＭ）上で精製した。純粋な画分を蒸発させて、中間体１６を得た（３．２０ｇ、４４％）。
【０１５９】
中間体１７
【化３５】
2019532985.tif 000040
中間体１６（３．２ｇ、０．０１２３ｍｏｌ）をトルエン（１５０ｍＬ）中においてＮ２下０℃で撹拌した。カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１．９４ｇ、１７．３ｍｍｏｌ）を０〜５℃で加え、ジフルオロ酢酸エチル（１．８４ｇ、０．０１４９ｍｏｌ）を０〜５℃で滴下して加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を水中の１０％Ｈ２ＳＯ４で洗浄し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、中間体１７を得た（４．１６ｇ、９９％）。
【０１６０】
中間体１８
【化３６】
2019532985.tif 000041
ＤＭＦ（４０ｍＬ）中の中間体１７（４．１６ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）および１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミン塩酸塩（２．９７ｇ、２４．７ｍｍｏｌ）を、８０℃で１６時間撹拌した。反応混合物を蒸発させ、ＤＣＭを加え、２ｇの（Ｂｏｃ）２Ｏおよび２ｍＬのＥｔ３Ｎを加えた。混合物を３０分間撹拌し、水で洗浄し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。生成物（４つの異性体）を、シリカゲル（溶離液：ＤＣＭからＤＣＭ中２％のＭｅＯＨ）により精製した。その画分を蒸発させて、３．５５ｇの粗製物を得て、これを分取ＨＰＬＣ（固定相：Ｕｐｔｉｓｐｈｅｒｅ（登録商標）Ｃ１８  ＯＤＢ−１０μｍ、２００ｇ、５ｃｍ、移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＣＨ３ＣＮ）により精製して、中間体１８を得た（７３０ｍｇ、１５％）。
【０１６１】
中間体１９
【化３７】
2019532985.tif 000042
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の中間体１８（０．７３ｇ、１．８９４ｍｍｏｌ）にＨＣｌ（ｉＰｒＯＨ中の６Ｍ）（２０ｍＬ、６Ｍ、１２０ｍｍｏｌ）を加え、これを室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させて、中間体１９を得た（６００ｍｇ、９９％）。
【０１６２】
中間体１９に至る代替的手順ならびに中間体１９ａおよび１９ｂへの分離
【化３８】
2019532985.tif 000043
ＤＣＭ（５２ｍＬ）中の中間体１８（４．５ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）にトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（ｉＰｒＯＨ中の６Ｍ）（５．４ｍＬ、６Ｍ、７０ｍｍｏｌ）を加え、これを室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、得られた残渣をＤＣＭに溶解させ、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で洗浄した。有機層を分離し、水層をＤＣＭで２回逆抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。得られた残渣を、溶離液としてＤＣＭ／ＮＨ３（ＭｅＯＨ）（９９／１〜９３／７）の勾配を用いてシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、ラセミ混合物として中間体１９を得た（２．２ｇ、収率６６％）。これを、分取ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ  ２０×２５０ｍｍ、移動相：ＣＯ２、ＥｔＯＨ＋０．４％ｉＰｒＮＨ２）によりエナンチオマーに分離して、中間体１９ａ（９５５ｍｇ、２９％、保持時間２．３６分）および１９ｂ（９７０ｍｇ、２９％、保持時間２．９９分）を得た。
【０１６３】
中間体２０
【化３９】
2019532985.tif 000044
８−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−２，８−ジカルボン酸，８−（１，１−ジメチルエチル）２−メチルエステル［１０３３８２０−２８−８］（４．７７ｇ、１７．７１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（４１．６０８ｍＬ）中において室温で撹拌した。ＮａＯＨ（１０６ｍＬ、１Ｍ、１０６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。ＭｅＯＨを蒸発させた。反応混合物を１ＮのＨＣｌで酸性化し、生成物をクロロホルムで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、中間体２０を得た（４．５２ｇ、１００％）。
【０１６４】
中間体２１
【化４０】
2019532985.tif 000045
中間体２０（４．５２ｇ、１７．７０４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２００ｍＬ）に溶解させた。次に、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（３．４５４ｇ、３５．４０７ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（５．３７ｇ、５３．１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃に冷却した。次に、ＨＡＴＵ（７．４１ｇ、１９．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を、ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）に注いだ。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、溶媒を蒸発させた。残渣を、シリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離液：ＤＣＭからＤＣＭ中１％のＭｅＯＨ）により精製した。生成物画分を回収し、溶媒を蒸発させて、中間体２１を得た（３．０３ｇ、５７％）。
【０１６５】
中間体２２
【化４１】
2019532985.tif 000046
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の中間体２１（３．０３ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下でフラスコに移し、−１５℃に冷却した。メチルマグネシウムブロミド（１２．７ｍＬ、１．４Ｍ、１７．８ｍｍｏｌ）を、温度が０℃を超えないように、滴下して加えた。添加後、反応混合物を室温で１時間撹拌した。次に、反応混合物を、ＡｃＯＨ（２０ｍＬ）と共に氷上に注いだ。生成物をＥｔ２Ｏで抽出し、有機層を５％のＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させ、シリカゲル（溶離液：ＤＣＭ）上で精製した。純粋な画分を蒸発させて、中間体２２を得た（２．５７ｇ、１００％）。
【０１６６】
中間体２３
【化４２】
2019532985.tif 000047
中間体２２（２．５７ｇ、０．０１０１ｍｏｌ）を、トルエン（１５０ｍＬ）中においてＮ２下０℃で撹拌した。カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１．５９ｇ、１４．２ｍｍｏｌ）を０〜５℃で加え、ジフルオロ酢酸エチル（１．５２ｇ、０．０１２２ｍｏｌ）を０〜５℃で滴下して加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を水中の１０％Ｈ２ＳＯ４で洗浄し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、中間体２３を得た（３．３４ｇ、９９％）。
【０１６７】
中間体２４
【化４３】
2019532985.tif 000048
ＤＭＦ（３０ｍＬ）中の中間体２３（３．３４ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）および１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミン塩酸塩（２．４３ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）を８０℃で１６時間撹拌した。反応混合物を蒸発させ、ＤＣＭを加え、２ｇの（Ｂｏｃ）２ＯおよびＥｔ３Ｎ（２ｍＬ）を加えた。混合物を３０分間撹拌し、水で洗浄し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。生成物（４つの異性体）を、シリカゲル（溶離液：ＤＣＭからＤＣＭ中２％のＭｅＯＨ）により精製した。その画分を蒸発させて、３．０７ｇの粗製物を得て、これを分取ＨＰＬＣ（固定相：Ｕｐｔｉｓｐｈｅｒｅ（登録商標）Ｃ１８  ＯＤＢ−１０μｍ、２００ｇ、内径５ｃｍ、移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＭｅＯＨ）により精製して、中間体２４を得た（１．０７ｇ、収率２８％）。
【０１６８】
中間体２５
【化４４】
2019532985.tif 000049
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中の中間体２４（１．０７ｇ、２．８２ｍｍｏｌ）にＨＣｌ（ｉＰｒＯＨ中の６Ｍ  ３０ｍＬ、６Ｍ、１７９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、生成物がエーテルから結晶化された。結晶を濾別し、乾燥させて、塩酸塩として中間体２５を得た（１．１２ｇ、１１２％）。
【０１６９】
中間体２５に至る代替的手順
工程１．中間体４３
【化４５】
2019532985.tif 000050
ｎ−ブチルリチウム（ｎＢｕＬｉ、１０６．５ｍＬ、２６６．３ｍｍｏｌ、ヘキサン中２．５Ｍ）を、ＴＨＦ（５００ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（２６．９５ｇ、２６６．３ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で加えた。反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、次に、それを−７８℃に冷却し、ＴＨＦ（７５ｍＬ）中のＮ−Ｂｏｃ−ノルトロピノン（５０ｇ、２２１．９ｍｍｏｌ）の溶液で処理した。得られた混合物を−７８℃で９０分間撹拌し、次に、シアノギ酸メチル（２２．９ｍＬ、２８８．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温に温め、一晩撹拌した。反応混合物をＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液でクエンチし、次に、それをＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を分離し、次に水と塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。得られた残渣を、溶離液として勾配：１００％ＤＣＭ〜ＤＣＭ中における１％ＭｅＯＨを用いるシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、中間体４３を得た（６０．２５ｇ、９５．８％）。
【０１７０】
工程２．中間体４４
【化４６】
2019532985.tif 000051
水素化ホウ素ナトリウム（１６．０２ｇ、４２３．５ｍｍｏｌ）を、メタノール（７００ｍＬ）中の中間体４３（６０ｇ、２１１．８ｍｍｏｌ）の冷（氷浴）溶液に加え、反応混合物を５時間撹拌した。完了した反応をＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液でクエンチし、次に、溶媒を減圧下で蒸発乾固させた。得られた残渣を水中に溶解させ、ＤＣＭで３回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、中間体４４を得て（５９ｇ、９７．６％）、これをさらに精製することなくそのまま使用した。
【０１７１】
工程３．中間体４５
【化４７】
2019532985.tif 000052
トリフルオロ酢酸無水物（５７．５ｍＬ、４１３．５ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（８００ｍＬ）中の中間体４４（５９ｇ、２０６．８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１１５ｍＬ、８２７．１ｍｍｏｌ）および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（２．５２ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）の溶液に６０℃未満の温度に保ちながら非常にゆっくりと滴下して加えた（発熱を伴うため注意されたい）。反応混合物を室温で一晩撹拌し、次に、それを氷浴中で冷却し、水でクエンチした。得られた溶液のｐＨを、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液を用いて８〜８．５に調整し、室温で１時間撹拌した。次に、水層をＤＣＭで３回抽出し、続いて、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。得られた残渣を、溶離液として１００％ＤＣＭ〜ＤＣＭ中における２％ＭｅＯＨの勾配を用いてシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、中間体４５を得た（３３．７ｇ、６１％）。
【０１７２】
工程４．中間体４６
【化４８】
2019532985.tif 000053
ＭｅＯＨ（５９ｍＬ）を、中間体４５（２．４４ｇ、９．１３ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（１０％）（０．９７１ｇ、０．９１３ｍｍｏｌ）を含有するフラスコに窒素雰囲気下で加えた。これを排気し、水素ガスを充填し、室温で一晩撹拌した。反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドで濾過し、次に、溶媒を真空中で除去した。得られた残渣を、溶離液として１００％ＤＣＭ〜ＤＣＭ中における２％ＭｅＯＨの勾配を用いてシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、中間体４６を得た（２ｇ、８１％）。
【０１７３】
工程５．中間体４７
【化４９】
2019532985.tif 000054
ＬＤＡ（５４．３ｍＬ、１０８．７ｍｍｏｌ、シクロヘキサン／エチルベンゼン／ＴＨＦ中２Ｍ）を、無水ＴＨＦ（３６３ｍＬ）中の中間体４６（２４．４ｇ、９０．６ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素雰囲気下にて−７８℃〜−６０℃で滴下して加えた。添加の後、反応混合物を−３０℃に温め、１０分間撹拌し、その後、−７８℃に冷却して戻した。７−クロロ−５−（ジフルオロメチル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン（［１３４０３９４−６３−９］、１８．５ｇ、９０．６ｍｍｏｌ）を最小量のＴＨＦ中で溶解させ、シリンジで滴下して加えた。反応混合物を−６０℃で１時間撹拌し、次に、温度を室温まで上昇させ、反応をＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液でクエンチした。揮発物を真空中で濃縮し、得られた残渣をＥｔＯＡｃと水の間で分配した。層を分離し、次に、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。得られた残渣がジエチルエーテルから結晶化され、中間体４７を得た（２３．８ｇ、６０％）。濾液を蒸発させ、得られた残渣を、溶離液として１００％ＤＣＭ〜ＤＣＭ中における２％ＭｅＯＨの勾配を用いるシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、中間体４７（２ｇ、５％）を得て、その後、ジエチルエーテルから再結晶させた。
【０１７４】
工程６．中間体２５、中間体２５Ａおよび中間体２５Ｂ
【化５０】
2019532985.tif 000055
中間体４７（２５．８ｇ、５８．９ｍｍｏｌ）を濃ＨＣｌ溶液（２６６ｍＬ、３．１９ｍｏｌ、Ｈ２Ｏ中３７％）において１５０℃で一晩撹拌した。揮発物を真空中で蒸発させ、得られた残渣をトルエンで２回共蒸発させた。生成物をＮａＨＣＯ３飽和水溶液で塩基性ｐＨになるまで処理した。水層をＤＣＭで抽出し、次に、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。得られた残渣を、溶離液として１００％ＤＣＭ〜ＤＣＭ中における８％ＭｅＯＨ／ＮＨ３の勾配を用いてシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、ラセミ混合物として中間体２５を得た（１３ｇ、７９％）。この物質を分取ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ  ２０×２５０ｍｍ、移動相：ＣＯ２、ＥｔＯＨ＋０．４  ｉＰｒＮＨ２）により精製した。１Ｓ，４Ｓ，５Ｓ−エナンチオマーをそのＨＣｌ塩に変換し、ＣＨ３ＣＮから再結晶させて、中間体２５ａを得た（５．５８ｇ、３０％、保持時間＝２．９１分、［α］２０Ｄ＝−６６．６（ｃ＝０．４８、ＤＭＦ））。
【０１７５】
中間体２６
【化５１】
2019532985.tif 000056
１，４−ジオキサン［１２３−９１］（３００ｍＬ）中の１−ｔｅｒｔ−ブチル３−メチル４−（（（トリフルオロメチル）スルホニル）オキシ）−５，６−ジヒドロピリジン−１，３（２Ｈ）−ジカルボキシラート［１６１４９１−２５−４］（１５ｇ、３８．５３ｍｍｏｌ、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１５，５４，１２９４２−１２９４６に従って調製）、Ｎ−ブチルボロン酸［４４２６−４７−５］（５．８９ｇ、５７．８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４［１４２２１−０１−３］（１．７８ｇ、１．５４ｍｍｏｌ）およびＮａ２ＣＯ３［４９７−１９−８］（８．１６７ｇ、７７．０５２ｍｍｏｌ）の混合物を９０℃で一晩撹拌し、加熱した。揮発物を真空中で蒸発させ、得られた残渣を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液で処理した。水層をＤＣＭで抽出し、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させた。得られた残渣を、溶離液としてＤＣＭ−ＭｅＯＨ（９：１、ｖ／ｖ）／ＤＣＭ、０／１００〜３０／７０の勾配を用いるシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。これにより、３．６５ｇの１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチル−４−ブチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１，５−ジカルボキシラートを得て、これをメタノールと１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液の混合物（１：１、ｖ／ｖ、２００ｍＬ）に溶解させ、室温で一晩撹拌した。揮発物を減圧下で蒸発させ、得られた残渣を氷中に置き、１Ｎ  ＨＣｌ水溶液で酸性化した。水層をクロロホルムで抽出し、次に、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。得られた残渣を、溶離液としてＤＣＭ中の１％ＭｅＯＨ〜ＤＣＭ中の２％ＭｅＯＨの勾配を用いて、シリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、中間体２６を得た（１．６９ｇ、収率１５．５％）。
【０１７６】
中間体２７
【化５２】
2019532985.tif 000057
中間体２６（１．４７ｇ、５．１８８ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ［６７−５６−１］（１３４ｍＬ）中のＰｄ／Ｃ（１０％）（６６８ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）の懸濁液に加えた。次に、混合物をＨ２雰囲気下に置き、３６時間撹拌した。この時間経過後、触媒をＣｅｌｉｔｅのパッド上で濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させて、中間体２７を得た（１．４５ｇ、９８％）。
【０１７７】
中間体２８
【化５３】
2019532985.tif 000058
中間体８の合成について報告されるものと同様の手順に従うことによって、中間体２８を中間体２７から出発して合成し、中間体２８を得た（２００ｍｇ）。
【０１７８】
中間体２９、２９ａおよび２９ｂ
【化５４】
2019532985.tif 000059
ＮａＨ（鉱油中６０％の分散体、１．５ｇ、３９．０５ｍｍｏｌ）を、３−ピリジンカルボン酸（１１．５ｇ、３２．５４ｍｍｏｌ）から出発して中間体８および１１と同様に調製された、ＤＭＦ（５００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル３−［５−（ジフルオロメチル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］ピペリジン−１−カルボキシラートの溶液に、Ｎ２流下、室温で加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、次に、ヨウ化メチル（５．５４ｇ、３９．０５ｍｍｏｌ）を滴下して加え、混合物を室温で一晩撹拌した。水を加え、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。得られた残渣を、分取ＨＰＬＣ（固定相：Ｕｐｔｉｓｐｈｅｒｅ（登録商標）Ｃ１８  ＯＤＢ−１０μｍ、２００ｇ、内径５ｃｍ、移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＭｅＯＨ）により精製して、ラセミ混合物として中間体２９を得た（４．３２ｇ、３６％）。これを、分取ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  Ｄｉａｃｅｌ  ＯＪ  ２０×２５０ｍｍ、移動相：ＣＯ２、ｉＰｒＯＨ＋０．２％ｉＰｒＮＨ２）によりエナンチオマーに分離して、中間体２９ａ（２ｇ、１７％）および２９ｂ（２ｇ、１７％）を得た。
【０１７９】
中間体３０ａ
【化５５】
2019532985.tif 000060
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の中間体２９ａ（５００ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）にＨＣｌ（ｉＰｒＯＨ中の６Ｍ  ２０ｍＬ、６Ｍ、１２０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させて、塩酸塩として中間体３０ａを得た（４００ｍｇ、９７％）。
【０１８０】
中間体３０ｂ
【化５６】
2019532985.tif 000061
２９ｂから出発して、中間体３０ａについて記載されたのと同じ方法において中間体３０ｂを得た（４００ｍｇ、９７％）。
【０１８１】
中間体２９に至る代替的手順
工程１．中間体３１
【化５７】
2019532985.tif 000062
Ｋ２ＣＯ３（３３．１５ｇ、０．２４ｍｏｌ）を、ＤＭＦ（６００ｍＬ）中の１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−３−カルボン酸［８４３５８−１２−３］（５０．０ｇ、０．２２ｍｏｌ）の撹拌溶液に室温で加えた。３０分後、ヨウ化メチル（３４．０５ｇ、０．２４ｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温でさらに２．５時間撹拌した。揮発物を真空中で蒸発させ、得られた残渣を水中に置いて、ＤＩＰＥで抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、５４．７５ｇの中間体３１を得て、これを次の工程においてそのまま使用した。
【０１８２】
工程２．中間体３２
【化５８】
2019532985.tif 000063
ＬｉＨＭＤＳ（４５０ｍＬ、０．４５ｍｏｌ、１Ｍ）を、ＴＨＦ（１Ｌ）中の中間体３１（５４．７５ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ２雰囲気下にて−７８℃で滴下して加えた。溶液を−７８℃で１時間撹拌し、次に、ヨウ化メチル（６３．９ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）をこの温度で滴下して加えた。添加が完了した後、反応混合物を室温に温めた。次に、反応混合物をＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液で処理した。水層をＥｔ２Ｏで抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。得られた残渣を、溶離液としてヘプタン中の２０％ＥｔＯＡｃ溶液を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、中間体３２を得た（５５．５ｇ、収率９６％）。
【０１８３】
中間体２９
【化５９】
2019532985.tif 000064
中間体８の合成について報告したものと同様の手順に従って、中間体３２から出発し、中間体２９を得た（３６．７ｇ、収率４３．５％）。
【０１８４】
中間体３３
【化６０】
2019532985.tif 000065
ＮａＨ（鉱油中６０％の分散体、０．９７ｇ、２４．２ｍｍｏｌ）を、２５０ｍＬの４ネックＲＢＦ中において、無水ＴＨＦ（３５ｍＬ）中の中間体６（５ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）にＮ２流下０℃で加えた。１０分後、二硫化炭素（１．４６ｍＬ、２４．１ｍｍｏｌ）を滴下して加え、次に、ヨウ化メチル（２．７１ｍＬ、４３．５ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。混合物を室温で一晩撹拌した。水を加え、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、中間体３３（８．２ｇ、９２％）を得て、これを次の工程にそのまま使用した。
【０１８５】
中間体３４
【化６１】
2019532985.tif 000066
中間体３３（１ｇ、２．８９ｍｍｏｌ）および１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミン塩酸塩（０．３５ｇ、２．８９ｍｍｏｌ）を、溶融状態での反応において１５０℃で３時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、ＤＣＭに溶解させた。有機層をＮａＨＣＯ３飽和水溶液、水、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。生成物をシリカゲル（溶離液  ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００／０〜９８／２）で精製して、中間体３４を得た（２００ｍｇ、２６％）。
【０１８６】
中間体３５
【化６２】
2019532985.tif 000067
ＤＣＭ（３．３ｍＬ）中の中間体３４（２００ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）に、（Ｂｏｃ）２Ｏ（１９９ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（１２７ｕＬ、０．９１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、次に、残渣をＤＣＭ中に置き、水（３×）、続いて塩水で洗浄した。有機層を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、蒸発させて、中間体３５（１９９ｍｇ、７２％）を得て、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。
【０１８７】
中間体３６
【化６３】
2019532985.tif 000068
ＣＣｌ３（１２ｍＬ）中の中間体３５（３４７ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）に、ｍＣＰＢＡ（６５９ｍｇ、３．８２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を２時間還流させた。反応混合物をＣＨＣｌ３で希釈し、１ＮのＮａＯＨで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、中間体３６（３０１ｍｇ、７９％）を得て、これを次の工程にそのまま使用した。
【０１８８】
中間体３７
【化６４】
2019532985.tif 000069
中間体３６（７９９ｍｇ、２．０２ｍｍｏｌ）およびシアン化ナトリウム（２０２ｍｇ、４．０４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＳＯ（５ｍＬ）中において室温で３０分間撹拌した。反応混合物を水中に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、中間体３７（５５０ｍｇ、８０％）を得て、これを次の工程にそのまま使用した。
【０１８９】
中間体３８
【化６５】
2019532985.tif 000070
ＤＣＭ（３．０ｍＬ）中の中間体３７（５２０ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）にＴＦＡ（６ｍＬ）を加え、反応混合物を０℃で１時間撹拌した。反応混合物をＮａ２ＣＯ３飽和溶液に注ぎ、次に、有機層を再び飽和Ｎａ２ＣＯ３、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、中間体３８を得た（２７３ｍｇ、７３％）。
【０１９０】
中間体３９
【化６６】
2019532985.tif 000071
中間体６’（中間体３〜６に関するものと同じ変換に従って中間体３１から得られる）（５０ｇ、０．２２）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（１１０ｍＬ）に加え、混合物を４日間還流させた。反応混合物を蒸発させ、追加のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタールを加え、混合物をさらに４時間還流させた。溶媒を蒸発させ、生成物をシリカゲル（溶離液：ＤＣＭ中１％のＭｅＯＨ、２％）により精製した。純粋な画分を蒸発させて、中間体３９を得た（６０ｇ、９７％）。
【０１９１】
中間体４０
【化６７】
2019532985.tif 000072
酢酸（５３ｍＬ）中の中間体３９（６０ｇ、０．２１ｍｏｌ）と１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミン塩酸塩（２２．３ｇ、０．２７ｍｏｌ）の溶液を、還流状態にて１時間撹拌した。水を加え、生成物をエーテルで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、中間体４０を得た（６２ｇ、９６％）。
【０１９２】
中間体４１
【化６８】
2019532985.tif 000073
中間体４０（５００ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５０ｍＬ）中においてＮ２流下にて室温で撹拌した。ＮａＨ（鉱油中６０％の分散体、７２ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を３０分間撹拌した。ヨウ化メチル（２．５７ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。反応を水でクエンチし、蒸発させた。水を加え、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。これを、（ＲＰ  Ｖｙｄａｃ  Ｄｅｎａｌｉ  Ｃ１８−１０μｍ、２００ｇ、５ｃｍ；移動相（０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＭｅＯＨ）の分取ＨＰＬＣにより精製して、中間体４１を得た（２５０ｍｇ、４８％）。
【０１９３】
中間体４２
【化６９】
2019532985.tif 000074
中間体４１（２００ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中で撹拌し、ｉ−ＰｒＯＨ（２３ｍＬ）中の６Ｎ  ＨＣｌを加えた。混合物を１時間撹拌した。反応混合物を蒸発させて、中間体４２を得た（２５０ｍｇ、１００％）。
【０１９４】
中間体４８
【化７０】
2019532985.tif 000075
工程１．中間体４９
【化７１】
2019532985.tif 000076
ＮａＨ（１．３７ｇ、３４．４ｍｍｏｌ、鉱油中６０％の分散体）を、ＡＣＮ（１５０ｍＬ）中の２−ヒドロキシ−６−メチルイソニコチン酸メチル（２．３ｇ、１３．７６ｍｍｏｌ）のスラリーにＮ２雰囲気下にて０℃で加えた。反応混合物を室温に到達させ、４５分間撹拌した。次に、２，２−ジフルオロ−２−（フルオロスルホニル）酢酸（３．１６ｇ、１７．７６ｍｍｏｌ）を反応混合物に滴下して加え、これを１５時間室温でさらに撹拌した。この時間経過後、ＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液でクエンチし、得られた混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。得られた残渣を、溶離液としてヘプタン／ＥｔＯＡＣ  １００／０〜５０／５０の勾配を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、中間体４９を得た（２．２１ｇ、７３．９％）。
【０１９５】
工程２．中間体４８
ＮａＯＨ水溶液（１５ｍＬ、１５ｍｍｏｌ、１Ｍ）を、エタノール（１５ｍＬ）中の中間体４９（２．１１ｇ、９．７２ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。得られた混合物を１時間撹拌し、次に、それをＨＣｌ水溶液（１５ｍＬ、１５ｍｍｏｌ、１Ｎ）で処理した。白色沈殿物が形成され、これを濾過し、冷水で洗浄し、次に、真空オーブンで一晩乾燥させて、中間体４８を得た（１．７５ｇ、８８．６％）。
【０１９６】
中間体５０
【化７２】
2019532985.tif 000077
工程１．中間体５１
【化７３】
2019532985.tif 000078
濃Ｈ２ＳＯ４（０．７９１ｍＬ、４．８５ｍｍｏｌ、１．８４ｇ／ｍＬ）を、ＭｅＯＨ（９９ｍＬ）中の２，６−ジクロロ−３−フルオロ−イソニコチン酸（［１４９４６８−００−８］、５．５ｇ、２６．１９ｍｍｏｌ）の溶液に加え、得られた混合物を８５℃に１２時間加熱した。この時間経過後、さらなるＨ２ＳＯ４（０．７９１ｍＬ、１４．８４６ｍｍｏｌ、１．８４ｇ／ｍＬ）を加え、反応混合物を９０℃で２４時間撹拌した。反応を室温に冷却し、溶媒を蒸発させ、得られた残渣に氷を加えた。沈殿物が形成され、これを濾過し、氷冷水で洗浄し、真空オーブンで２日間乾燥させて、ベージュ色固体として中間体５１を得た（４．３５ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）。
【０１９７】
工程２．中間体５２Ａおよび５２Ｂ
【化７４】
2019532985.tif 000079
無水１，４−ジオキサン（１２８ｍＬ）中の中間体５１（３．９５ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）とトリメチルボロキシン（１．６６ｍＬ、５．８２ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中３．５Ｍ）の溶液を、１５分間脱気した。酢酸パラジウム（ＩＩ）（１９８ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）、トリシクロフェニルホスフィン（４９４ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ）およびリン酸三カリウム（１１．２３ｇ、５３．０ｍｍｏｌ）を連続的に加え、得られた混合物を脱気し、次に、圧力チューブにおいて１１０℃で１８時間撹拌し、加熱した。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を真空中で蒸発させた。得られた残渣を水とＥｔＯＡｃとの間で分配した。得られた二相混合物を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせた有機層を塩水（１×）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させた。得られた残渣を、溶離液としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００／０〜９０／１０の勾配を用いるシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、中間体５２ａ（９８０ｍｇ、２７％）およびその位置異性体５２ｂ（４６０ｍｇ、１２．８％）を得た。
【０１９８】
工程３．中間体５０
水（１０ｍＬ）中のＬｉＯＨ（２７７ｍｇ、１１．５ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の中間体５２ａ（７８５ｍｇ、３．８５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。反応混合物を室温で１．５時間撹拌し、次に、揮発物を真空中で蒸発させた。得られた水性残渣のｐＨを、ＨＣｌ水溶液（１Ｍ）による処理によって約２にした。白色沈殿物が形成され、これを濾過し、氷冷水で洗浄し、真空オーブンで２日間乾燥させて、白色固体として中間体５０を得た（４９１ｍｇ、６７％）。
【０１９９】
中間体５３
【化７５】
2019532985.tif 000080
工程１．中間体５４
【化７６】
2019532985.tif 000081
メチルトリオキソレニウム（ＶＩＩ）（０．４４３ｇ、１．７８ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（７１ｍＬ）中の５−フルオロ−２−メトキシイソニコチン酸メチル（４ｇ、２１．６ｍｍｏｌ）の冷（０℃）溶液に一度に加えた後、過酸化水素（６４．３ｍＬ、０．７３５ｍｏｌ、水中３５％）を滴下して加えた。反応混合物を室温に温まるまで放置し、続いて、３５℃に加熱した。２４時間後、さらなるメチルトリオキソレニウム（ＶＩＩ）（０．２ｇ、０．８０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を３５℃で２日間撹拌したままにした。メチルトリオキソレニウム（ＶＩＩ）（０．２ｇ、０．８０２ｍｍｏｌ）および過酸化水素（３０ｍＬ、０．３４３ｍｏｌ、水中３５％）の一部を８時間にわたって３回加え、反応混合物を２７℃で１６時間撹拌した。反応混合物を氷浴中で冷却し、次に、それを、ガス放出が止まり、黒色の混合物が得られるまで二酸化マンガンを少量ずつ加えることによってクエンチした（激しいガス放出および熱放出に注意されたい）。これを、１ｇの５−フルオロ−２−メトキシイソニコチン酸メチルから出発する反応から得られる別の反応混合物バッチと合わせた。合わせた反応混合物を、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）プラグに通して濾過し、ＤＣＭで洗浄した。二相の濾液を分離し、水相をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させた。得られた残渣（４．９ｇ）を、溶離液としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００／０〜０／１００の勾配を用いる、シリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、中間体５４を得た（５８５ｍｇ）。
【０２００】
工程２．中間体５５
【化７７】
2019532985.tif 000082
オキシ塩化リン（４．１ｍＬ、４３．６ｍｍｏｌ）中の中間体５４（５８５ｍｇ、２．９１ｍｍｏｌ）の懸濁液を撹拌し、油浴中にて１０５℃に温めた。１．５時間後、溶媒を真空中で除去した。得られた残渣に氷（１０ｍＬ）を加え、水性混合物をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空中で蒸発させた。得られた残渣（５８０ｍｇ）を、溶離液としてヘプタン／ＤＣＭ、１００／０〜５０／５０の勾配を用いる、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、中間体５５を得た（５２２ｍｇ、７２．７％）。
【０２０１】
工程３．中間体５３
水（５．７ｍＬ）中のＬｉＯＨ（１５２ｍｇ  ｍｇ、６．３５ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＨＦ（５．７ｍＬ）中の中間体５５（５２２ｍｇ、２．１２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。反応混合物を室温で１．５時間撹拌し、次に、揮発物を真空中で蒸発させた。得られた水性残渣のｐＨを、ＨＣｌ水溶液（１Ｍ）による処理によって約３にした。白色沈殿物が形成され、これを濾過し、氷冷水で洗浄し、真空オーブンで乾燥させて、白色固体として中間体５３を得た（１７２ｍｇ、３９％）。濾液を減圧下で蒸発乾固させて、化合物５３のリチウム塩を得た（３６６ｍｇ）。
【０２０２】
Ｂ−最終化合物の合成
化合物１ａおよび化合物１ｂ
【化７８】
2019532985.tif 000083
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のＩ−１２（０．２７ｇ、０．００１ｍｏｌ）と２，６−ジメチルイソニコチン酸（０．１６ｇ、０．００１ｍｏｌ）の混合物を、ＤＩＰＥＡ（０．６９ｍＬ、０．７５ｇ／ｍＬ、０．００４ｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（０．３８ｇ、０．００１ｍｏｌ）で処理した。撹拌を１６時間続けた。反応混合物を水（５ｍＬ）で希釈し、１Ｍ  ＨＣｌでｐＨ約３まで酸性化し、層を分離し、有機層をｐＨ約９になるまで１Ｍ  ＮａＯＨで洗浄し、水で洗浄し、次に、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して油を得た（０．８ｇ）。分取ＨＰＬＣ（固定相：ＲＰ  ＸＢｒｉｄｇｅ（登録商標）Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ−１０μｍ、５０×１５０ｍｍ、移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＭｅＯＨ）により精製を行って、２つの画分を得た。分取ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ  ２０×２５０ｍｍ、移動相：ＣＯ２、０．４％ｉＰｒＮＨ２を伴うＥｔＯＨ）を用いて精製を行って、４つの画分を得て、そのうちの２つから化合物１ｂ（６４ｍｇ、１８％）および１ａ（７０ｍｇ、１９％）を得た。
【０２０３】
以下に示す出発物質から、化合物１ａおよび１ｂと類似の方法で化合物２ａ〜３ｂを調製した。
【０２０４】
【表１】
2019532985.tif 000084
【０２０５】
化合物４
【化７９】
2019532985.tif 000085
２−メチル−６−（トリフルオロメチル）イソニコチン酸（１０１ｍｇ、０．４９３ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２０ｍＬ）中で撹拌した。ＤＩＰＥＡ（０．３４ｍＬ、０．７５ｇ／ｍＬ、１．９７ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（２０６ｍｇ、０．５４２ｍｍｏｌ）を加え、室温で２０分間撹拌を続けた。Ｉ−１３ａ（１５０ｍｇ、０．４９３ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌を続けた。反応混合物を水でクエンチし、２０分間撹拌し、次に、有機層を分離した。水層をＤＣＭで２回逆抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、続いて分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。この物質をＤＣＭ中の０〜５％ＭｅＯＨで溶離するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、粗化合物４を得た（１２０ｍｇ、収率５２．９３１％）。分取ＨＰＬＣ（固定相：ＲＰ  Ｖｙｄａｃ  Ｄｅｎａｌｉ  Ｃ１８−１０μｍ、２００ｇ、内径５ｃｍ、移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＭｅＯＨ）により精製を行い、ＭｅＯＨと共蒸発させ、真空オーブン中で一晩乾燥させた後、化合物４を得た（７４ｍｇ、３６％）。
【０２０６】
化合物５〜２３を、エナンチオピュアな中間体Ｉ−１３ａを用いる化合物６と同様の方法において調製した。
【０２０７】
【表２】
2019532985.tif 000086
【０２０８】
【表３】
2019532985.tif 000087
【０２０９】
【表４】
2019532985.tif 000088
【０２１０】
化合物２４ａおよび化合物２４ｂ
【化８０】
2019532985.tif 000089
ＤＣＭ（２０ｍＬ、１．３３ｇ／ｍＬ、０．３１ｍｏｌ）中の２−シクロプロピル−６−メチル−ピリジン−４−カルボン酸（０．１６ｇ、０．０００７５ｍｏｌ）の撹拌混合物に、ＨＢＴＵ（０．２８ｇ、０．０００７５ｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．５４ｍＬ、０．７５ｇ／ｍＬ、０．００３１ｍｏｌ）を加えた。混合物を３０分間撹拌した後、Ｉ−１９（０．２ｇ、０．０００６２ｍｏｌ）を一度に加えた。反応混合物を１時間撹拌したままにし、次に、１Ｍ  ＮａＯＨ（５ｍＬ）を加え、層を分離し、有機層を水（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して油を得た。これを、ＤＣＭ中の０〜５％の勾配により溶離する２４ｇのＲｅｄｉｓｅｐ（登録商標）フラッシュカラムを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して油を得て、これがＤＩＰＥ（１０ｍＬ）から結晶化されて、白色固体を得た（０．２３ｇ、収率８３．２％）。分取ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ  ３０×２５０ｍｍ、移動相：ＣＯ２、０．２％ｉＰｒＮＨ２を伴うｉＰｒＯＨ）により精製を行って、２つの画分を得た。両画分をチューブに移し、真空オーブン中で乾燥させ（４５℃、１６時間）、これにより非晶質固体である化合物番号２４ａ（０．１１ｇ、収率３９．７％）および化合物番号２４ｂ（０．１１ｇ、収率３８．３％）を得た。
【０２１１】
化合物２５ａおよび２５ｂ
【化８１】
2019532985.tif 000090
ベンゾチアゾール−６−カルボン酸（１４２ｍｇ、０．７９２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１５ｍＬ）中で撹拌し、ＤＩＰＥＡ（０．８２ｍＬ、４．８ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（３００ｍｇ、０．７９２ｍｍｏｌ）を加えた。室温で０．５時間撹拌を続けた。この溶液に中間体２５（２５０ｍｇ、０．７９２ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌を続けた。ＮａＯＨ溶液（１Ｎ、１ｍＬ）を加え、５分間撹拌した。生成物をｅｘｔｒｅｌｕｔｅフィルターで濾過し、濾液を蒸発させた。生成物を、シリカゲル（溶離液：ＤＣＭからＤＣＭ中４％のＭｅＯＨ）により精製した。純粋な画分を蒸発させて、化合物２５ａと２５ｂの混合物を得た（３４０ｍｇ）。これを、分取ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ（登録商標）Ｄｉａｃｅｌ  ＯＤ  ２０×２５０ｍｍ；移動相：ＣＯ２、ＥｔＯＨ＋０．４ｉＰｒＮＨ２）により精製して、両生成物を得て、これらがＥｔ２Ｏから結晶化され、化合物番号２５ａ（１２１ｍｇ、３５％）および化合物番号２５ｂ（１２８ｍｇ、３７％）を得た。
【０２１２】
化合物２６ａおよび２６ｂ
【化８２】
2019532985.tif 000091
２，６−ジメチルイソニコチン酸（１５４．８４５ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）中で撹拌した。ＤＩＰＥＡ（０．５３ｍＬ、３．１ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４２７ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で０．５分間撹拌を続けた。中間体３８（２７３ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解させ、この混合物を溶液に加え、室温で３．５時間撹拌を続けた。反応混合物を水でクエンチし、次に、二層を分離し、水層をＤＣＭで逆抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。生成物を、シリカゲル（溶離液：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００／０〜９７／３〜９４／６）で精製して、混合物として２対のジアステレオマーを得た。分取ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ（登録商標）Ｄｉａｃｅｌ  ＯＤ  ２０×２５０ｍｍ；移動相：ＣＯ２、ＥｔＯＨ＋０．４ｉＰｒＮＨ２）により精製を行って、２つのトランスエナンチオマーを得た。分取ＨＰＬＣ（固定相：ＲＰ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＤＢ−５μｍ、３０×２５０ｍｍ、移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＣＨ３ＣＮ）により精製を行って、化合物２６ａ（２６ｍｇ、収率６．７６１％）および２６ｂ（２０ｍｇ、収率５．２０１％）を得た。
【０２１３】
化合物３２１
【化８３】
2019532985.tif 000092
ＤＣＭ（７１．４ｍＬ）中の中間体９ｂ（．２ＨＣｌ、１．２ｇ、３．５２７ｍｍｏｌ）、２−（ジフルオロメチル）−６−メチル−４−ピリジンカルボン酸（６６０ｍｇ、３．５２７ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（１．３５２ｇ、７．０５３ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（１．８２３ｇ、１４．１０７ｍｍｏｌ）を室温で４時間撹拌した。反応混合物を１Ｎ  ＮａＯＨで洗浄し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。生成物をシリカゲル（溶離液  ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜３／９７）で精製した。純粋な画分を蒸発させ、ＤＩＰＥから結晶化させた。結晶を濾別し、乾燥させて、化合物３２１を得た（９２０ｍｇ、６０％）。
【０２１４】
化合物３３３
【化８４】
2019532985.tif 000093
乾燥ＡＣＮ（５ｍＬ）中の中間体２５ａ（１００ｍｇ、０．３１７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、３，５−ジクロロ安息香酸（７２．５９３ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を加えた。ＴＥＡ（０．２２ｍＬ、１．５８ｍｍｏｌ）を加えた後、１−プロパンホスホン無水物（［６８９５７−９４−８］、０．２８ｍＬ、０．４８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で３時間撹拌して、茶色の溶液中に白色沈殿物を得た。溶媒を真空中で除去し、粗製物をＤＣＭ（１０ｍＬ）とＮａＨＣＯ３飽和水溶液（１０ｍＬ）の間で分配した。有機層をＮａ２ＣＯ３飽和水溶液（１×１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空中で除去し、トルエン（１×２０ｍＬ）で共蒸発させて、茶色の溶液中に白色沈殿物を得て、これを一晩乾燥させて、茶色および白色の結晶を得た。Ｅｔ２Ｏからの再結晶により、オフホワイトの結晶を得て、これを４０℃の真空オーブン中において一晩オーブンで乾燥させて、オフホワイトの結晶として化合物３３３を得た（８８ｍｇ、６１％）。
【０２１５】
下の表１に、上記例と同様に調製したさらなる化合物を記載する。塩形態が示されていない場合、その化合物は遊離塩基として得られたものである。「Ｃｏ．Ｎｏ．」は化合物番号を意味する。化合物の合成に使用された試薬は、市販されているか、または当業者に知られる手順によって作製することができる。試薬の列において化合物３２１と同様に作製された化合物が示され（ＥＤＣＩカップリングであることに注意されたい）；化合物３３３と同様に作製された化合物が示される（ホスホン酸無水物であることに注意されたい）。
【０２１６】
【表５】
2019532985.tif 000094
【０２１７】
【表６】
2019532985.tif 000095
【０２１８】
【表７】
2019532985.tif 000096
【０２１９】
【表８】
2019532985.tif 000097
【０２２０】
【表９】
2019532985.tif 000098
【０２２１】
【表１０】
2019532985.tif 000099
【０２２２】
【表１１】
2019532985.tif 000100
【０２２３】
【表１２】
2019532985.tif 000101
【０２２４】
【表１３】
2019532985.tif 000102
【０２２５】
【表１４】
2019532985.tif 000103
【０２２６】
【表１５】
2019532985.tif 000104
【０２２７】
【表１６】
2019532985.tif 000105
【０２２８】
【表１７】
2019532985.tif 000106
【０２２９】
【表１８】
2019532985.tif 000107
【０２３０】
【表１９】
2019532985.tif 000108
【０２３１】
【表２０】
2019532985.tif 000109
【０２３２】
【表２１】
2019532985.tif 000110
【０２３３】
【表２２】
2019532985.tif 000111
【０２３４】
【表２３】
2019532985.tif 000112
【０２３５】
【表２４】
2019532985.tif 000113
【０２３６】
【表２５】
2019532985.tif 000114
【０２３７】
【表２６】
2019532985.tif 000115
【０２３８】
【表２７】
2019532985.tif 000116
【０２３９】
【表２８】
2019532985.tif 000117
【０２４０】
【表２９】
2019532985.tif 000118
【０２４１】
【表３０】
2019532985.tif 000119
【０２４２】
【表３１】
2019532985.tif 000120
【０２４３】
【表３２】
2019532985.tif 000121
【０２４４】
【表３３】
2019532985.tif 000122
【０２４５】
【表３４】
2019532985.tif 000123
【０２４６】
【表３５】
2019532985.tif 000124
【０２４７】
【表３６】
2019532985.tif 000125
【０２４８】
【表３７】
2019532985.tif 000126
【０２４９】
【表３８】
2019532985.tif 000127
【０２５０】
【表３９】
2019532985.tif 000128
【０２５１】
【表４０】
2019532985.tif 000129
【０２５２】
【表４１】
2019532985.tif 000130
【０２５３】
【表４２】
2019532985.tif 000131
【０２５４】
【表４３】
2019532985.tif 000132
【０２５５】
【表４４】
2019532985.tif 000133
【０２５６】
【表４５】
2019532985.tif 000134
【０２５７】
【表４６】
2019532985.tif 000135
【０２５８】
【表４７】
2019532985.tif 000136
【０２５９】
【表４８】
2019532985.tif 000137
【０２６０】
【表４９】
2019532985.tif 000138
【０２６１】
【表５０】
2019532985.tif 000139
【０２６２】
【表５１】
2019532985.tif 000140
【０２６３】
【表５２】
2019532985.tif 000141
【０２６４】
【表５３】
2019532985.tif 000142
【０２６５】
【表５４】
2019532985.tif 000143
【０２６６】
【表５５】
2019532985.tif 000144
【０２６７】
【表５６】
2019532985.tif 000145
【０２６８】
【表５７】
2019532985.tif 000146
【０２６９】
【表５８】
2019532985.tif 000147
【０２７０】
【表５９】
2019532985.tif 000148
【０２７１】
他の経路による最終化合物の変換および合成
化合物３８６および化合物２８２／３８７
【化８５】
2019532985.tif 000149
工程１．化合物３８８および化合物３８９
【化８６】
2019532985.tif 000150
ＮａＯＭｅ（１０．５ｍＬ、５６．７ｍｍｏｌ、ＭｅＯＨ中３０％）を、ＭｅＯＨ（１３ｍＬ）中の化合物７１（６５４ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）の溶液に加え、得られた混合物を０℃で１時間撹拌した。反応混合物をＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液でクエンチした。揮発物を真空下で除去し、残留する水性残渣をＤＣＭで分配した。水層をＤＣＭ（２×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させて、白色フォームとして化合物３８８および３８９を得て（６５６ｍｇ）、これを次の工程にそのまま使用した。
【０２７２】
工程２．化合物３８６および化合物２８２／３８７
前工程由来の混合物を１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）に溶解させ、得られた溶液をマイクロ波チューブ中に置き、５分間脱気した。次に、Ｋ２ＣＯ３（６６８ｍｇ、４．８３ｍｍｏｌ）を加えた後、トリメチルボロキシン（０．７８９ｍＬ、２．７６ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中３．５Ｍ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（１５９．５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を加えた。次に、反応混合物をマイクロ波照射下１００℃で２．５時間加熱した。さらにトリメチルボロキシン（０．３９４ｍＬ、１．３８ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中３．５Ｍ）を加え、反応混合物をマイクロ波照射下１００℃でさらに１時間加熱した。溶媒を真空中で蒸発させ、得られた残渣をＤＣＭ／水の１：１混合物（４０ｍＬ）に溶解させた。二相混合物を分離し、水相をＤＣＭ（２×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。得られた残渣（８４３ｍｇ）を、溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００／０〜９７／３の勾配を用いるシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。標題の化合物に対応する画分を回収した。１つの画分をＤＩＰＥから再結晶させて、化合物２８２／３８７を得た（１４６ｍｇ、２４％）。第２の画分を、固定相として：ＲＰ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ−１０μｍ、３０×１５０ｍｍ、および移動相として：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＣＨ３ＣＮを用いる分取ＨＰＬＣにより精製して、白色固体として化合物３８６を得た（８２ｍｇ、１３．８％）。
【０２７３】
化合物３９０（および化合物３９１
【化８７】
2019532985.tif 000151
圧力チューブに化合物２７１（１５０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、シクロプロピルボロン酸（１２７．２ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）およびトルエン（３．０ｍＬ）を充填し、これを１５分間脱気した後、連続して酢酸パラジウム（ＩＩ）（４．１ｍｇ、０．０１８５ｍｍｏｌ）、トリシクロヘキシルホスフィン（１０．４ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）、蒸留水（０．７３４ｍＬ、４０．６５ｍｍｏｌ）およびリン酸三カリウム（２３５．７ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）を加えた。チューブに蓋をし、結果として生じる反応混合物を１００℃の油浴中に置き、１６時間撹拌した。得られた溶液を室温まで冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドに通して濾過し、これをトルエンおよびＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を減圧下で蒸発乾固させた。得られた残渣をＥｔＯＡｃに溶解させ、水と塩水で洗浄し、次に、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させた。得られた残渣（１５５ｍｇ）を、固定相として：ＲＰ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ−１０μｍ、３０×１５０ｍｍ、および移動相：０．５％ＮＨ４Ａｃ水溶液＋１０％ＣＨ３ＣＮ、ＭｅＯＨを用いる分取ＨＰＬＣにより精製して、ヘプタンでのトリチュレーション後に化合物３９０（１８ｍｇ、１１．７％）および化合物３９１（６６ｍｇ、４３．４％）を得た。
【０２７４】
化合物３９２
【化８８】
2019532985.tif 000152
工程１．
化合物３９３
【化８９】
2019532985.tif 000153
フッ化セシウム（５７７ｍｇ、３．８ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（７．３５ｍＬ）中の化合物７１（４３６ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）の溶液に加え、得られた混合物を撹拌し、１５分間脱気した。シクロプロパノール（０．０７２ｍＬ、１．１４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をマイクロ波照射下１１０℃で２時間加熱した。溶媒を真空中で除去し、次に、得られた残渣をＤＣＭ／水の１：１混合物（２０ｍＬ）に溶解させた。得られた二相混合物を分離し、次に、水層をＤＣＭ（２×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。得られた残渣を、溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００／０〜９９／１の勾配を用いるシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、不純な物質として化合物３９３（３０８ｍｇ）を得て、これを次の工程にそのまま使用した。
【０２７５】
工程２．化合物３９２  １，４−ジオキサン（４．６ｍＬ）中の化合物３９３（３０８ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）の溶液を１５分間脱気し、次に、Ｋ２ＣＯ３（３１０ｍｇ、２．２４ｍｍｏｌ）、トリメチルボロキシン（０．５５０ｍＬ、１．９２ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中３．５Ｍ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（７４．０１５ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）を連続的に加え、得られた混合物を圧力チューブ中において１００℃で２．５時間加熱した。溶媒を真空中で除去し、得られた残渣をＤＣＭ（１０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）の間で分配した。得られた二相混合物を分離し、水層をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。得られた残渣（３４０ｍｇ）を、固定相として：ＲＰ  Ｖｙｄａｃ（登録商標）Ｄｅｎａｌｉ（登録商標）Ｃ１８−１０μｍ、２００ｇ、内径５ｃｍ、および移動相：ＭｅＯＨを用いる分取ＨＰＬＣにより精製して、ＤＩＰＥからの再結晶化後に白色結晶として化合物３９２を得た（５５ｍｇ、１８．６％）。
【０２７６】
化合物３９４
【化９０】
2019532985.tif 000154
工程１．化合物３９５
【化９１】
2019532985.tif 000155
ＥＤＣＩ（９９３ｍｇ、５．２ｍｍｏｌ）および６−クロロ−３−フルオロ−２−メチル−イソニコチン酸（中間体５０、４９２ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の中間体９−ｂ（７５０ｍｇ、２．４７ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に連続的に加えた。次に、ＤＩＰＥＡ（１．７８ｍＬ、１０．４ｍｍｏｌ）を混合物に加え、得られた黄色溶液を室温で５時間撹拌した。反応混合物をＮａＯＨ水溶液（２０ｍＬ、１Ｍ）でクエンチした。水層をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。得られた残渣（１．５ｇ）を、溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００／０〜９９／１の勾配を用いるシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、白色フォームとして化合物３９５を得た（７２０ｍｇ、６２％）。
【０２７７】
工程２．中間体５６
【化９２】
2019532985.tif 000156
ヨードトリメチルシラン（０．０６５ｍＬ、０．４６ｍｍｏｌ）を、プロピオニトリル（０．８ｍＬ）中の化合物３９５（２００ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）の溶液に窒素雰囲気下で加えた。次に、ヨウ化ナトリウム（２０５ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を８０℃に加熱した。５時間後、ＬＣＭＳ分析はわずか１５％の変換を示し、したがって、さらなるヨードトリメチルシラン（０．０６５ｍＬ、０．４５６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を８０℃で２２時間撹拌した。この時間経過後、さらなるヨードトリメチルシラン（０．０６５ｍＬ、０．４５６ｍｍｏｌ）およびヨウ化ナトリウム（２０５ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１２時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、次に、得られた残渣を水とＤＣＭの間で分配した。得られた二相混合物を分離し、水層をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去した。得られた残渣（１．５ｇ）を、溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００／０〜９７．５／２．５の勾配を用いるシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、不純な物質として中間体５６（１６２ｍｇ）を得て、次の工程にそのまま使用した。
【０２７８】
工程３．化合物３９４  ２，２−ジフルオロ−２−（フルオロスルホニル）酢酸メチル（０．１９２ｍＬ、１．５１ｍｍｏｌ）を、圧力チューブ中における無水ＤＭＦ（０．９５８ｍＬ）中の中間体５６（１６０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）およびヨウ化銅（７５ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。得られた混合物を油浴中にて２時間８０℃に加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、次に、ＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液でクエンチした。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去した。得られた残渣を、溶離液としてヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１００／０〜６０／４０の勾配を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物３９４を得た（１７．５ｍｇ、１２％）。
【０２７９】
化合物３９６
【化９３】
2019532985.tif 000157
工程１．中間体３９７
【化９４】
2019532985.tif 000158
ＥＤＣＩ（９３４ｍｇ、４．８７ｍｍｏｌ）および２−クロロ−３−フルオロ−６−メチルイソニコチン酸（４８５ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１８．５ｍＬ）中の中間体９−ｂ（７４０．１ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に加えた。ＤＩＰＥＡ（１．６８ｍＬ、９．７４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をＮａＯＨ水溶液（３０ｍＬ、１Ｍ）でクエンチした。水層をＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。得られた残渣（１．５ｇ）を、溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００／０〜９９／１の勾配を用いるシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、白色粉末として化合物３９７を得た（８５４ｍｇ、８０％）。
【０２８０】
工程２．中間体５７
【化９５】
2019532985.tif 000159
ヨードトリメチルシラン（０．２６ｍＬ、１．８２ｍｍｏｌ）を、プロピオニトリル（１．６ｍＬ）中の化合物３９７（４００ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）の溶液に窒素雰囲気下で加えた。次に、ヨウ化ナトリウム（４１０ｍｇ、２．７３ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を１．５時間８０℃に加熱した。溶媒を真空中で除去し、次に、得られた残渣を水とＥｔＯＡｃの間で分配した。得られた二相混合物を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。得られた残渣を、溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００／０〜９７．５／２．５の勾配を用いるシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、不純な物質として中間体５７（１９７ｍｇ）を得て、これを次の工程にそのまま使用した。
【０２８１】
工程３．化合物３９６  （ヨウ化銅（９２ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（１．１８ｍＬ）中の中間体５７（１９７ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）の溶液に加え、得られた混合物を窒素で１０分間脱気した。次に、２，２−（ジフルオロ）−２−（フルオロスルホニル）酢酸メチル（０．２３６ｍＬ、１．８６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を撹拌し、８０℃で２時間加熱し、その後、それを一晩室温に冷却したままにした。反応混合物をＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液でクエンチした。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（６×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で除去した。得られた残渣（５５０ｍｇ）を、固定相として：ＲＰ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ−１０μｍ、５０×１５０ｍｍ、および移動相として：ＣＨ３ＣＮを用いる分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物３９６を得た（７．４ｍｇ、４％）。
【０２８２】
化合物３９８
【化９６】
2019532985.tif 000160
工程１．化合物３９９
【化９７】
2019532985.tif 000161
ＥＤＣＩ（３２０．５ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）、続いてＤＩＰＥＡ（０．５７ｍＬ、３．３４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（６．３５ｍＬ）中の中間体９−ｂ（２４２．ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）および２−クロロ−３−フルオロ−６−メトキシ−イソニコチン酸（中間体５３、１７２ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。さらなるＥＤＣＩ（８０ｍｇ、０．４１７ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．１ｍＬ、０．７５ｇ／ｍＬ、０．５８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１２時間撹拌し、次に、それをＮａＯＨ水溶液（２０ｍＬ、１Ｍ）でクエンチした。水層をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。得られた残渣（６００ｍｇ）を、溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００／０〜９８．５／１．５の勾配を用いるシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、白色フォームと化合物３９９を得た（１３６ｍｇ、８０％）。
【０２８３】
工程２．化合物３９８
１，４−ジオキサン（２．１７ｍＬ）中の化合物３９９（１３６ｍｇ、０．２９９ｍｍｏｌ）の溶液を、圧力チューブ中において１５分間脱気した。Ｋ２ＣＯ３（１４４．６ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）、トリメチルボロキシン（０．２５６ｍＬ、０．８９７ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中３．５Ｍ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（３４．５ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を連続的に加え、得られた混合物を１００℃で２時間加熱した。溶媒を真空中で除去し、得られた残渣をＤＣＭと水の間で分配した。得られた二相混合物を分離し、水層をＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。得られた残渣（２２０ｍｇ）を、溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００／０〜９６／４の勾配を用いるシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物３９８を得た（８８ｍｇ、６８％）。
【０２８４】
化合物４００
【化９８】
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工程１．化合物４０１
【化９９】
2019532985.tif 000163
ＤＩＰＥＡ（０．６５ｍＬ、３．７７ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（３００ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（３０ｍＬ）中の６−クロロ−３−フルオロ−２−メチルイソニコチン酸（中間体５０、１５０ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。次に、中間体２５−ａ（２３８ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で約１．５時間撹拌した。反応混合物をＮａＯＨ水溶液（１ｍＬ、１Ｍ）でクエンチし、次に、Ｅｘｔｒｅｌｕｔｅ（登録商標）フィルターを通して濾過した。減圧下で溶媒を除去した。得られた残渣を、溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００／０〜９８／２の勾配を用いるシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、無色の油として化合物４０１を得た（３２０．５ｍｇ、８３％）。
【０２８５】
工程２．化合物４００
１，４−ジオキサン（５．１ｍＬ）中の化合物４０１（３２０ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）の溶液を１５分間脱気した。Ｋ２ＣＯ３（３４３．３ｍｇ、２．４５ｍｍｏｌ）、トリメチルボロキシン（０．６０８ｍＬ、２．１２９ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中３．５Ｍ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（８２．０ｍｇ、０．０７１ｍｍｏｌ）を連続的に加え、得られた混合物を、圧力チューブ中において１００℃で２時間加熱した。溶媒を真空中で除去し、得られた残渣をＤＣＭ（２０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）の間で分配した。二相混合物を分離し、水層をＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。得られた残渣を、溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００／０〜９５／５の勾配を用いるシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。これにより、エンド／エキソ異性体の混合物（２３０ｍｇ）が得られ、これを、固定相として：ＲＰ  ＸＢｒｉｄｇｅ（登録商標）Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ−１０μｍ、５０×１５０ｍｍ、および移動相：ＭｅＯＨを用いる分取ＨＰＬＣにより分離した。生成物を含有する画分を蒸発させ、得られた残渣をＥｔ２Ｏから再結晶させて、化合物４００を得た（５７ｍｇ、１８．６％）。
【０２８６】
化合物４０２
【化１００】
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ｍＣＰＢＡ（３０７．８２５ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１．６ｍＬ）中の国際公開第２０１７／０７６９００号パンフレットの化合物１（２５０ｍｇ、０．６２４ｍｍｏｌ）の溶液に１０℃で加え、得られた混合物をＥａｓｙｍａｘ（登録商標）中で３日間撹拌した。この時間経過後、反応混合物をＮａＨＣＯ３飽和水溶液（１．５ｍＬ）でクエンチした。二相混合物を分離し、水層をＤＣＭ（３×５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。得られた残渣を、溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１００／０〜９６／４の勾配を用いるシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、白色粉末として化合物４０２を得た（２５０ｍｇ、９６％）。
【０２８７】
分析の部
融点
値はピーク値または融解範囲のいずれかであり、この分析方法に通常付随する実験上の不確実性を伴って得られる。
ＤＳＣ８２３ｅ（Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ）で融点を測定した。融点は１０℃／分の温度勾配で測定した。最高温度は３００℃であった。
【０２８８】
【表６０】
2019532985.tif 000165
【０２８９】
【表６１】
2019532985.tif 000166
【０２９０】
ＬＣ／ＭＳ法
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）測定は、それぞれの方法に明記したＬＣポンプ、ダイオードアレイ（ＤＡＤ）またはＵＶ検出器、およびカラムを用いて行った。必要ならば、追加の検出器を含めた（下の方法の表を参照されたい）。
【０２９１】
カラムからの流れを、大気圧イオン源を装備した質量分析計（ＭＳ）に導入した。化合物の公称モノアイソトピック分子量（ＭＷ）の特定を可能にするイオンを得るために、調整パラメータ（例えば、走査範囲、データ取込時間など）を設定することは当業者の知識の範囲内である。データ取得は、適切なソフトウェアを用いて行った。
【０２９２】
化合物は、それらの実測保持時間（Ｒｔ）およびイオンで表される。データについての表で別に指定しない場合、報告した分子イオンは、［Ｍ＋Ｈ］＋（プロトン化分子）および／または［Ｍ−Ｈ］−（脱プロトン化分子）に対応する。化合物を直接イオン化できなかった場合、付加物の種類を記載する（すなわち、［Ｍ＋ＮＨ４］＋、［Ｍ＋ＨＣＯＯ］−など）。複数の同位体パターンを有する分子（Ｂｒ、Ｃｌ）については、報告される値は最低同位体質量について得られた値とする。全ての結果は、用いられた方法に通常付随する実験的不確実性を伴って得られた。
【０２９３】
以下、「ＳＱＤ」はシングル四重極検出器を意味し、「ＭＳＤ」は質量選択検出器を意味し、「ＲＴ」は室温を意味し、「ＢＥＨ」は架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッドを意味し、「ＤＡＤ」はダイオードアレイ検出器を意味し、「ＨＳＳ」は高強度シリカを意味する。
【０２９４】
【表６２】
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【０２９５】
【表６３】
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【０２９６】
【表６４】
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【０２９７】
【表６５】
2019532985.tif 000170
【０２９８】
【表６６】
2019532985.tif 000171
【０２９９】
【表６７】
2019532985.tif 000172
【０３００】
【表６８】
2019532985.tif 000173
【０３０１】
【表６９】
2019532985.tif 000174
【０３０２】
【表７０】
2019532985.tif 000175
【０３０３】
【表７１】
2019532985.tif 000176
【０３０４】
【表７２】
2019532985.tif 000177
【０３０５】
【表７３】
2019532985.tif 000178
【０３０６】
【表７４】
2019532985.tif 000179
【０３０７】
【表７５】
2019532985.tif 000180
【０３０８】
【表７６】
2019532985.tif 000181
【０３０９】
【表７７】
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【０３１０】
ＳＦＣ−ＭＳ法
ＳＦＣ測定は、二酸化炭素（ＣＯ２）およびモディファイアを供給するバイナリポンプ、オートサンプラー、カラムオーブン、４００バールまで耐用する高圧フローセルを備えたダイオードアレイ検出器で構成される分析超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）システムを使用して行った。質量分析計（ＭＳ）が配置されている場合、カラムからの流れを（ＭＳ）に導入した。化合物の公称モノアイソトピック分子量（ＭＷ）の特定を可能にするイオンを得るために、調整パラメータ（例えば、走査範囲、データ取込時間など）を設定することは当業者の知識の範囲内である。データ取得は、適切なソフトウェアを用いて行った。
【０３１１】
【表７８】
2019532985.tif 000183
【０３１２】
【表７９】
2019532985.tif 000184
【０３１３】
【表８０】
2019532985.tif 000185
【０３１４】
【表８１】
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【０３１５】
【表８２】
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【０３１６】
核磁気共鳴（ＮＭＲ）：
４００ＭＨｚで動作し、標準的なパルスシーケンスを有する、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ−４００分光計、または３６０ＭＨｚで動作するＢｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ−３６０のいずれかにおいて、溶媒としてＤＭＳＯ−ｄ６（重水素化ＤＭＳＯ、ジメチル−ｄ６スルホキシド）を用いて１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを記録した。化学シフト（δ）は、内部標準として使用したテトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対する百万分率（ｐｐｍ）で報告する。
【０３１７】
化合物番号２５ａ：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６摂氏１００度）δ  ｐｐｍ  １．７４−１．９３（ｍ，４Ｈ）１．９７−２．１１（ｍ，３Ｈ）２．３１−２．４５（ｍ，１Ｈ）４．０６−４．２３（ｍ，１Ｈ）４．６１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）４．８２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）７．０２（ｔ，Ｊ＝５４．２Ｈｚ，１Ｈ）７．５０（ｓ，１Ｈ）７．７８（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．８Ｈｚ，１Ｈ）８．１７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）８．４４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）８．４７（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，１Ｈ）９．４５（ｓ，１Ｈ）；
【０３１８】
化合物番号９３：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６摂氏１００度）δ  ｐｐｍ  ０．８４（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）０．８８−０．９８（ｍ，４Ｈ）１．４５（ｑｄ，Ｊ＝１２．４，４．４Ｈｚ，１Ｈ）１．９１（ｂｒ  ｄｄ，Ｊ＝１３．４，２．６Ｈｚ，１Ｈ）２．０６−２．１４（ｍ，１Ｈ）２．４２（ｓ，３Ｈ）２．４５−２．４９（ｍ，１Ｈ）３．１３（ｂｒ  ｔ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ）３．３７（ｄｄ，Ｊ＝１２．９，１１．１Ｈｚ，１Ｈ）３．６０（ｔｄ，Ｊ＝１０．９，４．０Ｈｚ，１Ｈ）４．１７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）６．７９−７．２３（ｍ，３Ｈ）７．５７（ｓ，１Ｈ）８．７２（ｓ，１Ｈ）；
【０３１９】
化合物番号１０８：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ０．７７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）１．３４−１．５６（ｍ，１Ｈ）１．６８−２．００（ｍ，１Ｈ）２．４３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）２．７６−３．２８（ｍ，２Ｈ）３．４９−３．７４（ｍ，２Ｈ）３．８７（ｓ，３Ｈ）４．４６−４．７６（ｍ，１Ｈ）６．８１−７．３３（ｍ，３Ｈ）７．６５（ｓ，１Ｈ）８．８０（ｓ，１Ｈ）；
【０３２０】
化合物番号１１０：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６摂氏１００度）δ  ｐｐｍ  ０．８３（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）１．３９−１．５０（ｍ，１Ｈ）１．８５−１．９５（ｍ，１Ｈ）２．４３（ｓ，３Ｈ）２．４４−２．４８（ｍ，１Ｈ）３．１３（ｂｒ  ｔ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ）３．３７（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ）３．５８（ｔｄ，Ｊ＝１０．９，４．０Ｈｚ，１Ｈ）３．８８（ｓ，３Ｈ）４．１３（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）６．５８（ｓ，１Ｈ）６．８２（ｓ，１Ｈ）７．０１（ｔ，Ｊ＝５４．２Ｈｚ，１Ｈ）７．５６（ｓ，１Ｈ）８．７１（ｓ，１Ｈ）；
【０３２１】
化合物番号１３２：１Ｈ  ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ０．７８（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）１．３８−１．６１（ｍ，１Ｈ）１．６７−２．０１（ｍ，１Ｈ）２．６０（ｓ，３Ｈ）２．８６−３．３０（ｍ，２Ｈ）３．４９（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１４．６Ｈｚ，１Ｈ）３．５９−３．７２（ｍ，２Ｈ）４．４８−４．７９（ｍ，１Ｈ）６．８７−７．３５（ｍ，１Ｈ）７．５４−７．８９（ｍ，３Ｈ）８．７９（ｓ，１Ｈ）；
【０３２２】
化合物番号２２８：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６摂氏１００度）δ  ｐｐｍ  ０．８５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，４Ｈ）１．４３−１．５６（ｍ，１Ｈ）１．８６−１．９９（ｍ，１Ｈ）３．１９（ｔｄ，Ｊ＝１２．９，２．８Ｈｚ，１Ｈ）３．４２（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ）３．６４（ｔｄ，Ｊ＝１０．９，４．０Ｈｚ，１Ｈ）４．１５−４．２６（ｍ，１Ｈ）４．２８−４．３８（ｍ，１Ｈ）７．０１（ｔ，Ｊ＝５４．２Ｈｚ，１Ｈ）７．５８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）７．６１（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．５Ｈｚ，１Ｈ）８．１１（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）８．２７（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ）８．７０（ｓ，１Ｈ）９．４０（ｓ，１Ｈ）；
【０３２３】
化合物番号２８１：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６摂氏１２０度）δ  ｐｐｍ  ０．８２（ｄ，Ｊ＝６．４０Ｈｚ，３Ｈ）１．４６（ｑｄ，Ｊ＝１２．４７，４．４０Ｈｚ，１Ｈ）１．８４−１．９３（ｍ，１Ｈ）２．４１−２．５３（ｍ，１Ｈ）２．８４（ｓ，３Ｈ）３．０７−３．１８（ｍ，１Ｈ）３．３５（ｄｄ，Ｊ＝１２．９８，１１．２２Ｈｚ，１Ｈ）３．５８（ｔｄ，Ｊ＝１０．９５，３．８５Ｈｚ，１Ｈ）３．８８−４．３３（ｍ，２Ｈ）６．８５（ｓ，１Ｈ）６．９８（ｔ，Ｊ＝５４．３６Ｈｚ，１Ｈ）７．１２（ｓ，１Ｈ）７．５３（ｓ，１Ｈ）７．５５（ｔ，Ｊ＝７３．０７Ｈｚ，１Ｈ）７．７４（ｓ，１Ｈ）８．６７（ｓ，１Ｈ）；
【０３２４】
化合物番号２９５：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６摂氏１００度）δ  ｐｐｍ  １．６７−１．８７（ｍ，４Ｈ）１．８９−２．１０（ｍ，３Ｈ）２．２６−２．３８（ｍ，１Ｈ）３．８２（ｓ，３Ｈ）４．１３（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１２．１０Ｈｚ，１Ｈ）４．５６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）４．８６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）６．５５（ｄ，Ｊ＝２．６４Ｈｚ，１Ｈ）７．０２（ｔ，Ｊ＝５５．００Ｈｚ，１Ｈ）７．３５（ｄ，Ｊ＝３．０８Ｈｚ，１Ｈ）７．４１−７．４９（ｍ，３Ｈ）７．９０（ｓ，１Ｈ）８．５９（ｓ，１Ｈ）；
【０３２５】
化合物番号３２１：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６摂氏１００度）δ  ｐｐｍ  ０．８１（ｄ，Ｊ＝６．６０Ｈｚ，３Ｈ）１．４７（ｑｄ，Ｊ＝１２．４３，４．２９Ｈｚ，１Ｈ）１．８５−１．９３（ｍ，１Ｈ）２．３９−２．４６（ｍ，１Ｈ）２．９４（ｓ，３Ｈ）３．０９−３．１８（ｍ，１Ｈ）３．３３−３．４０（ｍ，１Ｈ）３．５７−３．６４（ｍ，１Ｈ）３．８３−４．５２（ｍ，２Ｈ）６．８２（ｍ，１Ｈ）７．００（ｍ，１Ｈ）７．４３（ｓ，１Ｈ）７．４６（ｓ，１Ｈ）７．５５（ｓ，１Ｈ）８．６９（ｓ，１Ｈ）；
【０３２６】
化合物番号３３５：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６摂氏１００度）δ  ｐｐｍ  １．７４−２．００（ｍ，６Ｈ）２．０２−２．０８（ｍ，１Ｈ）２．３６−２．４１（ｍ，１Ｈ）２．４２（ｓ，３Ｈ）３．８４（ｓ，３Ｈ）４．０８−４．１４（ｍ，１Ｈ）４．８１−４．８５（ｍ，１Ｈ）５．１３−５．１７（ｍ，１Ｈ）７．０５（ｔ，Ｊ＝５４．４０Ｈｚ，１Ｈ）７．５６（ｓ，１Ｈ）７．８９（ｓ，１Ｈ）８．６９（ｓ，１Ｈ）；
【０３２７】
化合物番号３５６：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６摂氏１００度）δ  ｐｐｍ  １．６８−１．８９（ｍ，４Ｈ）１．９２−２．０４（ｍ，３Ｈ）２．３０−２．４５（ｍ，１Ｈ）４．０１−４．０７（ｍ，１Ｈ）４．３９−４．８４（ｍ，２Ｈ）７．０１（ｔ，Ｊ＝５２．８０Ｈｚ，１Ｈ）７．４９（ｓ，１Ｈ）７．５８（ｄｄ，Ｊ＝８．２５，１．８７Ｈｚ，１Ｈ）７．７１（ｄ，Ｊ＝８．１４Ｈｚ，１Ｈ）７．８３（ｄ，Ｊ＝１．５４Ｈｚ，１Ｈ）８．５８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）．
【０３２８】
薬理学的実施例
本発明で提供される化合物はＰＤＥ２、特に、ＰＤＥ２Ａの阻害剤である。いくつかの薬理学的アッセイにおいて、化合物の試験結果が以下に示される。
【０３２９】
インビトロアッセイＰＤＥ２Ａ
組み換えｒＰＤＥ１０Ａバキュロウイルス構築物を用いて、ヒト組み換えＰＤＥ２Ａ（ｈＰＤＥ２Ａ）を、Ｓｆ９細胞中で発現させた。感染の４８時間後に細胞を採取し、ｈＰＤＥ２Ａタンパク質を、Ｎｉ−セファロース６ＦＦにおける金属キレートクロマトグラフィーによって精製した。試験される化合物を、１００％のＤＭＳＯに溶解させ、アッセイにおける最終濃度の１００倍の濃度に希釈した。化合物の希釈物（０．４μｌ）を、３８４ウェルプレート中で、２０μｌのインキュベーション緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．８）、８．３ｍＭのＭｇＣｌ２、１．７ｍＭのＥＧＴＡ）に加えた。インキュベーション緩衝液中の１０μｌのｈＰＤＥ２Ａ酵素を加え、１０μＭのｃＧＭＰおよび０．０１μＣｉの３Ｈ−ｃＧＭＰの最終濃度まで１０μｌの基質を加えることによって、反応を開始させた。反応物を室温で４５分間インキュベートした。インキュベーションの後、２００ｍＭのＺｎＣｌ２が補充された１７．８ｍｇ／ｍｌのＰＤＥ  ＳＰＡシンチレーション近接アッセイ）ビーズからなる２０μｌの停止液を用いて、反応を停止させた。３０分間ビーズを沈降させた後、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｔｏｐｃｏｕｎｔシンチレーションカウンターにおいて放射能を測定し、結果をｃｐｍとして表した。ブランク値のために、酵素を反応から除外し、インキュベーション緩衝液で置き換えた。化合物の代わりに１％の最終濃度のＤＭＳＯを加えることによって、対照値を得た。最小平方和法によって、化合物濃度に対するブランク値を差し引いた対照値の％のプロットに最良適合曲線を合わせて、この曲線から、半数阻害濃度（ＩＣ５０）値を導き出す。
【０３３０】
インビトロアッセイＰＤＥ３Ａ
ヒト組み換えＰＤＥ３Ａ（ｈＰＤＥ３Ａ）は、Ｓｃｏｔｔｉｓｈ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌによって部分的に精製された昆虫細胞溶解物として供給され、それを、ヒト脳からクローン化し、Ｓｆ９細胞中で発現させた。試験される化合物を、１００％のＤＭＳＯに溶解させ、アッセイにおける最終濃度の１００倍の濃度に希釈した。化合物の希釈物（０．４μｌ）を、３８４ウェルプレート中で、２０μｌのインキュベーション緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．８）、８．３ｍＭのＭｇＣｌ２、１．７ｍＭのＥＧＴＡ）に加えた。インキュベーション緩衝液中の１０μｌのｈＰＤＥ３Ａ酵素を加え、０．４μＭのｃＡＭＰおよび２．４μＣｉ／ｍｌの［３Ｈ］−ｃＡＭＰの最終濃度まで１０μｌの基質を加えることによって、反応を開始させた。反応物を室温で６０分間インキュベートした。インキュベーションの後、２００ｍＭのＺｎＣｌ２が補充された１７．８ｍｇ／ｍｌのＰＤＥ  ＳＰＡ（シンチレーション近接アッセイ）ビーズからなる２０μｌの停止液を用いて、反応を停止させた。３０分間ビーズを沈降させた後、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｔｏｐｃｏｕｎｔシンチレーションカウンターにおいて放射能を測定し、結果をｃｐｍとして表した。ブランク値のために、酵素を反応から除外し、インキュベーション緩衝液で置き換えた。化合物の代わりに１％の最終濃度のＤＭＳＯを加えることによって、対照値を得た。最小平方和法によって、化合物濃度に対するブランク値を差し引いた対照値の％のプロットに最良適合曲線を合わせて、この曲線から、半数阻害濃度（ＩＣ５０）値を導き出す。
【０３３１】
インビトロアッセイＰＤＥ１０Ａ
組み換えｒＰＤＥ１０Ａバキュロウイルス構築物を用いて、ラット組み換えＰＤＥ１０Ａ（ｒＰＤＥ１０Ａ２）を、Ｓｆ９細胞中で発現させた。感染の４８時間後に細胞を採取し、ｒＰＤＥ１０Ａタンパク質を、Ｎｉ−セファロース６ＦＦにおける金属キレートクロマトグラフィーによって精製した。試験される化合物を、１００％のＤＭＳＯに溶解させ、アッセイにおける最終濃度の１００倍の濃度に希釈した。自社内で作製され、増幅された組み換えｈＰＤＥ１０Ａバキュロウイルスを用いて、ヒト組み換えＰＤＥ１０Ａ（ｈＰＤＥ２Ａ）を、Ｓｆ９細胞中で発現させた。感染の７２時間後に細胞を採取し、ｈＰＤＥ１０Ａタンパク質を、Ｎｉ−セファロースにおける金属キレートクロマトグラフィーによって精製した。化合物の希釈物（０．４μｌ）を、３８４ウェルプレート中で、２０μｌのインキュベーション緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．８）、８．３ｍＭのＭｇＣｌ２、１．７ｍＭのＥＧＴＡ）に加えた。インキュベーション緩衝液中の１０μｌのｈＰＤＥ１０ＡまたはｈＰＤＥ１０Ａ酵素を加え、６０ｎＭのｃＡＭＰおよび０．００８μＣｉ／ｍｌの３Ｈ−ｃＡＭＰの最終濃度まで１０μｌの基質を加えることによって、反応を開始させた。反応物を室温で６０分間インキュベートした。インキュベーションの後、１７．８ｍｇ／ｍｌのＰＤＥ  ＳＰＡ（シンチレーション近接アッセイ）ビーズからなる２０μｌの停止液を用いて、反応を停止させた。３０分間ビーズを沈降させた後、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｔｏｐｃｏｕｎｔシンチレーションカウンターにおいて放射能を測定し、結果をｃｐｍとして表した。ブランク値のために、酵素を反応から除外し、インキュベーション緩衝液で置き換えた。化合物の代わりに１％の最終濃度のＤＭＳＯを加えることによって、対照値を得た。最小平方和法によって、化合物濃度に対するブランク値を差し引いた対照値の％のプロットに最良適合曲線を合わせて、この曲線から、半数阻害濃度（ＩＣ５０）値を導き出す。
【０３３２】
【表８３】
2019532985.tif 000188
【０３３３】
【表８４】
2019532985.tif 000189
【０３３４】
【表８５】
2019532985.tif 000190
【０３３５】
【表８６】
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【０３３６】
【表８７】
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【０３３７】
【表８８】
2019532985.tif 000193
【０３３８】
【表８９】
2019532985.tif 000194
【０３３９】
【表９０】
2019532985.tif 000195
【０３４０】
【表９１】
2019532985.tif 000196
【０３４１】
【表９２】
2019532985.tif 000197
【０３４２】
【表９３】
2019532985.tif 000198
【０３４３】
【表９４】
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【０３４４】
【表９５】
2019532985.tif 000200
【０３４５】
【表９６】
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【０３４６】
【表９７】
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【０３４７】
【表９８】
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【０３４８】
【表９９】
2019532985.tif 000204
【０３４９】
【表１００】
2019532985.tif 000205
【０３５０】
試験化合物によるＰＤＥ２占有率
方法
放射性リガンド（Ｂｕｉｊｎｓｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｂａｓｅｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ａ  Ｐｏｔｅｎｔ，Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ，ａｎｄ  Ｂｒａｉｎ  Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  ＰＤＥ２  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｗｉｔｈ  Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ  Ｔａｒｇｅｔ  Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ．ＡＣＳ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ．５（９）：１０４９−５３における化合物１２）として［３Ｈ］Ｂ−１７ａ（国際公開第２０１３／０００９２４号パンフレットに記載される）を用いて、エクスビボオートラジオグラフィーによって、ＰＤＥ２Ａの占有率を評価した。
雄ウィスターラット（２００〜２５０ｇ）を、溶媒または漸増用量の［３Ｈ］Ｂ−１７ａの経口投与によって処理し、１時間後に殺処分した。脳を頭蓋骨から即座に取り出し、ドライアイスで冷却した２−メチルブタン（−４０℃）中で急速に凍結させた。厚さ２０μｍの線条体切片を、Ｌｅｉｃａ  ＣＭ  ３０５０  ｃｒｙｏｓｔａｔ−ｍｉｃｒｏｔｏｍｅ（ｖａｎ  Ｈｏｐｐｌｙｎｕｓ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）を用いて切り出し、顕微鏡スライド（ＳｕｐｅｒＦｒｏｓｔ  Ｐｌｕｓ  Ｓｌｉｄｅｓ、ＬａｂｏＮｏｒｄ、Ｆｒａｎｃｅ）に解凍して固定し、使用するまで−２０℃で保存した。
【０３５１】
解凍後、切片を、冷気流下で乾燥させ、０．３％のＢＳＡを含有するＴｒｉｓ−ＨＣｌ（５０ｍＭ、ｐＨ７．４）中の３０ｎＭの［３Ｈ］Ｂ−１７ａと共に１分間インキュベートした。薬剤投与動物および溶媒投与動物からの脳切片を、並行してインキュベートした。非特異的な結合が、ＰＤＥ２Ａ酵素を含有しない脳領域である小脳切片において測定された。インキュベーションの後、過剰な［３Ｈ］Ｂ−１７ａを、氷冷緩衝液で、１０分間で２回洗い落とした後、蒸留水中に迅速に浸漬させた。次に、切片を、冷気流下で乾燥させた。
【０３５２】
脳切片を、４時間にわたってβ−ｉｍａｇｅｒ（Ｂｉｏｓｐａｃｅ、Ｐａｒｉｓ）に装填し、定められた脳領域から出る放射能を、Ｂｅｔａ  ｖｉｓｉｏｎ  ｐｒｏｇｒａｍ（Ｂｉｏｓｐａｃｅ、Ｐａｒｉｓ）を用いて定量した。特異的な結合は、線条体における全体的な結合と、小脳における非特異的な結合の差として決定された。動物に投与された薬剤の受容体占有率のパーセンテージは、処理された動物において標識された受容体パーセンテージを１００％から差し引いた値に相当した。ＥＤ５０値の決定については、受容体占有率のパーセンテージを用量に対してプロットし、最もフィットするＳ字形の対数の用量効果曲線を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｐｒｏｇｒａｍを用いて、非線形回帰分析によって計算した。９５％の信頼限界を有するＥＤ５０（５０％の受容体占有率をもたらす薬剤用量）を、用量反応曲線から計算した。
【０３５３】
【表１０１】
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【０３５４】
【表１０２】
2019532985.tif 000207
【０３５５】
【表１０３】
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【０３５６】
【表１０４】
2019532985.tif 000209
【０３５７】
【表１０５】
2019532985.tif 000210
【０３５８】
シナプス伝達に対する化合物１１０の効果
重要な試薬
スクロース解剖緩衝液は、（ｍＭ単位で）スクロース（１５０）、ＮａＣｌ（４０）、ＫＣｌ（４）、ＮａＨ２ＰＯ４．Ｈ２Ｏ（０．３）、ＭｇＣｌ．６Ｈ２Ｏ（７）、ＮａＨＣＯ３（２６）、ＣａＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（０．５）、Ｄ−グルコース（１０）を含有しており、これを９５％のＯ２および５％のＣＯ２ガス混合物で平衡化した。平衡化および記録の間使用される人工脳脊髄液（ＡＣＳＦ）は、（ｍＭ単位で）：ＮａＣｌ（１２４）、ＫＣｌ（２．７）、ＮａＨ２ＰＯ４．Ｈ２Ｏ（１．２５）、ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ（１．３）、ＮａＨＣＯ３（２６）、ＣａＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（２）、Ｄ−グルコース（１０）、アスコルビン酸（２）を含有しており、これを９５％のＯ２および５％のＣＯ２ガス混合物で平衡化した。ＣＮＱＸおよびキヌレン酸を、それぞれ５０μＭおよび１ｍＭの濃度で、ＡＣＳＦ中で調製した。試験化合物を、ＡＣＳＦ中でおよび０．１％を超えない最終ＤＭＳＯ濃度を有する原液（ＤＭＳＯを含む）から新たに調製した。全ての試薬は、特に示されない限り、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製であった。
【０３５９】
動物（種、体重、および性別）
使用した動物は、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｇｅｒｍａｎｙによって提供される、１４５〜２００ｇの体重範囲の雄スプラーグドーリーラットであった。
【０３６０】
海馬切片の調製
標準的なプロトコルに従ってイソフルオランで麻酔した雄スプラーグドーリーラットの中間から腹側海馬から、水平な脳切片（３００μｍ）を得た。０．１ｍｍ／秒の速度で、低温（４℃）スクロース解剖緩衝液中で振動組織スライサー（Ｌｅｉｃａ  ＶＴ１２００Ｓ）を用いて、切片を切断した。切断後、切片を、３５℃で２０分間平衡化し、次に、人工脳脊髄液（ＡＣＳＦ）中において、室温で少なくとも１時間回復させた。３〜４つの切片を１つの脳から調製した。
【０３６１】
試験系
全てのデータは、６０チャネルＡ／Ｄカードに連結された４チャネル刺激発生器および６０チャネル増幅器ヘッドステージから構成されるＭｕｌｔｉＣｈａｎｎｅｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＭＣＳ  ＧｍｂＨ（Ｒｅｕｔｌｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から市販されているＭＥＡ設備を用いて記録された。刺激、記録および分析のためのソフトウェアは、それぞれＭｕｌｔｉ  Ｃｈａｎｎｅｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ：ＭＣ  Ｓｔｉｍ（ＩＩ  ２．０．０リリース）およびＭＣ  Ｒａｃｋ（３．８．１．０リリース）から市販されているものである。全ての実験は、１００μｍ間隔を空けた６０の先端形状および６０μｍ高さの電極からなる３次元ＭＥＡ（Ａｙａｎｄａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓ．Ａ．、ＣＨ−１０１５  Ｌａｕｓａｎｎｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて行った。ＭＥＡ電極は、６００ｋΩ＜インピーダンス＜９００ｋΩを有する白金で作製されている。
【０３６２】
実験計画
シナプス伝達に対する試験化合物の効果を、海馬切片における細胞外電場電位を記録することによって調べた。シナプス伝達が、記録電極を囲むニューロンの集団における同期されたシナプス活性を反映する細胞外電場電位の偏位を生じ得ることは十分に確立されている。
【０３６３】
細胞外電場電位の記録。回復後、脳切片を、顕微鏡下でＭＥＡチップに装着し、６０の記録電極を、海馬の苔状線維シナプス（歯状回−ＣＡ３）領域に配置した。ＡＣＳＦ溶液を、２ｍＬ／分の速度で、間断なく灌流させた。ＭＥＡチャンバの温度を、ＭＥＡ増幅器ヘッドステージに配置されたペルチェ素子を用いて３２±０．１℃に維持した。全てのデータは、ＭｕｌｔｉＣｈａｎｎｅｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＭＣＳ  ＧｍｂＨ（Ｒｅｕｔｌｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から市販されているＭＥＡ設備を用いて記録した。チップの２つの隣接する電極を、歯状回の門部における苔状線維を刺激するように選択し、海馬のＣＡ３領域の末端領域部位におけるｆＥＰＳＰを記録した。電場細胞外シナプス後電位（ｆＥＰＳＰ）を、３０ｍ秒の間隔を空けて、６０秒毎に繰り返される２つの連続する電気パルス（パルス幅１００μ秒、および電流刺激強度（μＡ）４０％の相対最大振幅）を有する苔状線維入力の刺激によって誘起した。溶媒（ＤＭＳＯ）で処理されるように無作為に割り当てられた切片からの対照実験を同時に行った。Ｎは切片の数を示し、１匹の動物につき通常３〜４つの切片を使用した。シナプス後ニューロンレベル（ｆＥＰＳＰ）で誘起された反応は、それらが、正確な位置、安定したベースライン（連続１０分間で＋／−１０％以内の変動、１００μＶ超の振幅を含む一定の品質基準を満たす場合に記録される。選択された電極からのｆＥＰＳＰを、５ｋＨｚでサンプリングし、オフライン分析のためにＰＣのハードディスクに記録した。並行して、選択された電極のｆＥＰＳＰ振幅を、（ＭＣ  Ｒａｃｋプログラムを用いて）オンラインでコンパイルして、実験の品質を監視し、追跡した。データは、オフライン分析のためにスプレッドシートファイルにおいてプロットされる。
【０３６４】
弱い長期増強（ＬＴＰ）を、単一の高頻度刺激（ＨＦＳ）によって誘起して、ｆＥＰＳＰの最大未満の増強をもたらした。
【０３６５】
この試験の結果は、弱い長期増強プロトコルによるＬＴＰの誘導に対する促通におけるＰＤＥ２阻害剤である化合物１１０の効果に関して、図１に示される。
【０３６６】
シナプス伝達に対する化合物７０、２５ａおよび２２０（遊離塩基）の効果
重要な試薬
スクロース解剖緩衝液は、（ｍＭ単位で）ＮａＣｌ（１２４）、ＫＣｌ（４．４）、ＮａＨ２ＰＯ４．Ｈ２Ｏ（１．２）、ＭｇＣｌ．６Ｈ２Ｏ（２）、ＮａＨＣＯ３（２６）、ＣａＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（２）、Ｄ−グルコース（１０）を含有しており、これを９５％のＯ２および５％のＣＯ２ガス混合物で平衡化した。平衡化および記録の間使用される人工脳脊髄液（ＡＣＳＦ）は、（ｍＭ単位で）：ＮａＣｌ（１２４）、ＫＣｌ（４．４）、ＮａＨ２ＰＯ４．Ｈ２Ｏ（１．２）、ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ（２）、ＮａＨＣＯ３（２６）、ＣａＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（２）、Ｄ−グルコース（１０）、アスコルビン酸（２）を含有しており、これを９５％のＯ２および５％のＣＯ２ガス混合物で平衡化した。
化合物１、２および３を、ＡＣＳＦ中でおよび０．１％を超えない最終ＤＭＳＯ濃度を有する原液（ＤＭＳＯを含む）から新たに調製した。全ての試薬は、特に示されない限り、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製であった。
【０３６７】
動物（種、体重、および性別）
使用した動物は、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｇｅｒｍａｎｙによって提供される、１４５〜２００ｇの体重範囲の雄スプラーグドーリーラットであった。
【０３６８】
海馬切片の調製
ラットをイソフルランで麻酔し、即座に断頭した。脳をアガロースブロックの隣に置き、刃を腹側から背側に前進させて水平に切断した。０．０８ｍｍ／秒の速度および０．７５ｍｍの振動振幅で、低温（４℃）のカルボゲン処理された人工脳脊髄液（ＡＣＳＦ）中において振動組織スライサー（Ｌｅｉｃａ  ＶＴ１２００Ｓ）を用いて、３５０μｍの厚さで切片を切断した。切断後、切片を、３５℃で２０分間平衡化し、次に、ＡＣＳＦ中において、室温で少なくとも１時間回復させた。通常、６〜８つの切片が各脳から調製され、３〜４つが１回の実験で使用された。
【０３６９】
試験系
全てのデータは、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃａ（ＵＫ）から市販されている、４つの記録ステーションで構成されるＳｌｉｃｅｍａｓｔｅｒ設備を用いて記録した。ｉｓｏｎｅｌでコーティングされた白金刺激電極を、ラットの海馬のＣＡ３領域に置いた。記録用微小電極（抵抗  約５ＭΩ）をＡＣＳＦで満たし、ラットの海馬のＣＡ１内に置いた。刺激および記録電極の配置を、電流刺激を２０秒毎に印加することによって確認した。切片からの応答が安定しているかを知るために、２０分間の事前の記録が利用された。電流刺激は、電流アイソレーターＡ３６５（Ｗｏｒｌｄ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）によって印加された。１０ｋＨｚのサンプリング速度、１ｋＨｚでのローパスフィルタ処理、および３Ｈｚでのハイパスフィルタ処理のもと、Ｄｉｇｉｄａｔａ  １４４０Ａデータ取得ボード（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）とインターフェースで接続したｐＣｌａｍｐ  １０を用いてデータを取得した。０〜１００μＡの範囲の１００μ秒の刺激を用いてｆＥＰＳＰを誘起し、ｆＥＰＳＰの大きさを、ピーク負振幅または上昇相の２０〜８０％傾きを測定することによって決定した。データは、ＩＧＯＲｐｒｏ（Ｗａｖｅｍｅｔｒｉｃｓ）において特別仕様で作成されたアルゴリズムを用いてオフラインで分析された。
【０３７０】
実験計画
シナプス伝達に対する化合物７０、２５ａおよび２２０（遊離塩基）の効果を、海馬切片における細胞外電場電位を記録することによって調べた。シナプス伝達が、記録電極を囲むニューロンの集団における同期されたシナプス活性を反映する細胞外電場電位の偏位を生じ得ることは十分に確立されている。
【０３７１】
細胞外電場電位の記録。回復後、切片を酸素化したＡＣＳＦで間断なく灌流した（２．５ｍＬ／分）。溶液を水浴中で予熱し、その後記録チャンバに注入した。３２℃で記録を行った。４つの別個の脳切片からのｆＥＰＳＰを同時に記録した。Ｎは切片の数を示し、１匹の動物につき通常３〜４つの切片を使用した。シナプス後ニューロンレベル（ｆＥＰＳＰ）で誘起された反応は、それらが、正確な位置、安定したベースライン（連続１０分間で＋／−１０％以内の変動、１００μＶ超の振幅を含む一定の品質基準を満たす場合に記録される。選択された電極からのｆＥＰＳＰを、５ｋＨｚでサンプリングし、オフライン分析のためにＰＣのハードディスクに記録した。並行して、ｆＥＰＳＰ振幅を、（ｐｃｌａｍｐを用いて）オンラインでコンパイルして、実験の品質を監視し、追跡した。データは、オフライン分析のためにスプレッドシートファイルにおいてプロットされる。
【０３７２】
入出力曲線を生成し、刺激強度を、最小と最大のｆＥＰＳＰ（ｆＥＰＳＰの振幅において集合スパイクまたはプラトーを生成するのに十分な刺激強度によって定義される）の範囲の５０％に設定した。続いて、ＬＴＰ実験のために、切片を２０分のベースライン期間（化合物を含有するかまたは含有しない溶媒）において６０秒毎に刺激し、その後直ちにシータバースト刺激を行った（図２に示される）。シータバースト刺激の後、続いて、切片を６０分間６０秒毎に刺激して、ＬＴＰのレベルを測定した。
【０３７３】
この試験の結果は、弱い長期増強プロトコルによるＬＴＰの誘導に対する促通における、化合物７０の効果に関して図３において示され、化合物２５ａの効果に関して図４に示され、化合物２２０（遊離塩基）の効果に関して図５に示される。
【０３７４】
単回投与ＰＫ／ＰＤ  ＰＤＥ２ｉイヌ試験
これらの試験では、雄および雌マーシャルビーグル犬（１〜６歳）を使用した：１つの処理群につき２匹の雄および２匹の雌。脳脊髄液（ＣＳＦ）を、装置を装着された意識のある動物においてニードルガイドカニューレを介して側脳室から採取した。
【０３７５】
ベースラインＣＳＦおよび血液試料を、投与の２〜５日前に採取した。イヌに一晩絶食させ、翌朝、空腹時に（強制経口）投与した。投与後の所定の時点で、血液および／またはＣＳＦを、化合物レベルおよびｃＧＭＰの測定のために採取した。ｃＧＭＰの分析を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって行った：２５μｌのＣＳＦを、１２５μｌの人工ＣＳＦ（ＳＴＩＬ（２０ｎｇ／ｍｌ））で希釈し、遠心分離し、２５μｌを注入した。使用したシステムは：Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＳＩＬ−３０  ＵＰＬＣ−システム（Ｈｙｐｅｒｃａｒｂ（５０ｍｍ×１ｍｍ（３μｍ））カラム、塩基性（１０ｍＭの炭酸アンモニウム）水溶液−アセトニトリル勾配（５．５分で５％から９８％）２５０μｌ／分の流速）およびＥＳＩ源を備えたＡＰＩ  Ｓｃｉｅｘ  ５５００システム（選択的ＭＲＭトランジション（ｍ／ｚ  ３４６．１−＞１５２．１（７５ｍ秒のデータ取込時間））であった。この試験の結果は、図６〜１５にまとめられている。
【０３７６】
ＰＤＥ２阻害が、麻酔下ラットの海馬のシャッファー側枝−ＣＡ１回路においてシナプス可塑性を促進した：化合物１１０を用いた症例研究
導入
シナプス可塑性は、多くの神経生物学的機能のための基本的機構である。海馬ならびに皮質におけるシナプス強度の持続性の高度に局所化した増加である長期増強（ＬＴＰ）は、記憶および学習のためのシナプスの基体である（Ｃｏｏｋｅ  ａｎｄ  Ｂｌｉｓｓ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ．２００５；６（１）：２５−３４）。シナプス強度の増加および減少は、シナプス前およびシナプス後ニューロンの活性、脳内のネットワークが、記憶中の複数の項目の感覚再現の設定、および運動反応の生成の際にどのように機能するかに依存する。無処置の脳における、これらのシナプス修飾の様々な特徴は、様々なタイプのネットワークの作用およびいくつかの異なる脳回路の作用に極めて重要である。したがって、ＬＴＰは、アルツハイマー病などの加齢性の精神障害および神経変性障害において損なわれていることが予想される（Ｂｅｒｇａｄｏ  ａｎｄ  Ａｌｍａｇｕｅｒ，Ｎｅｕｒａｌ  Ｐｌａｓｔ．２００２；９（４）：２１７−３２；Ｒｏｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ．２００５；３３：５６３−７）。動物において、無処置の高度に相互接続された脳領域において麻酔下で行われる処置は、単一パルスまたはペアドパルスで供給される低周波および高周波を有するテタヌス性電気刺激後の海馬−皮質回路における有効な接続性および可塑性の持続的変化を調べるための強力な手段を提供する（Ａｌｂｅｎｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ．２００７；２０４：１−１３）。これらの研究は、シナプス強度の低下の発生の根底にある神経回路の理解を深め、すなわち、直接的な回路の経路およびシナプスの弱化を媒介する特定の領域間のネットワーク接続が有する特定の生物学的標的の役割を決定するのに役立つ。この処置により、病理学的形態の神経可塑性を回復させ、例えば、シナプス効力を増大することによって、ＬＴＰおよびネットワーク接続性の欠陥を改善する（これは、関連する認知および学習能力に対する有益な効果を有することが予想される）ことを目的とした薬剤の試験が可能になる（Ｃｏｏｋｅ  ａｎｄ  Ｂｌｉｓｓ，２００５；Ａｌｂｅｎｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０３７７】
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）は、二次メッセンジャー３’，５’−環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）および３’，５’−環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）の代謝的不活性化に関与する酵素のクラスである（Ｆｒａｎｃｉｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ．２０１１，９：６５１−９０）。ＰＤＥの最大で１１のファミリーが、それらの構造特性、酵素的特性および分布に基づいて分類された（Ｏｍｏｒｉ  ａｎｄ  Ｋｏｔｅｒａ  Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００７；１００：３０９−２７）。環状ヌクレオチドシグナル伝達の増強におけるＰＤＥの役割により、これらの酵素は、興奮性を調節し、ニューロン間コミュニケーションの効果を高めるための魅力的な標的になっている。脳において、ＰＤＥ２は、主に、皮質、海馬および線条体において発現され、そこで、ｃＡＭＰの加水分解を制御する。ここ数年にわたって、研究グループは、可塑性および認知過程に作用するように細胞内二次メッセンジャーであるｃＧＭＰおよびｃＡＭＰを修飾する方法として、ＰＤＥ２阻害剤の開発に焦点を当てている（Ｄｕｉｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ．２０１５；２１：３８１３−２８；Ｇｏｍｅｚ  ａｎｄ  Ｂｒｅｉｔｅｎｂｕｃｈｅｒ，Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ．２０１３；２３：６５２２−７；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ．２０１５；３６：９５５−７０；Ｂａｒｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ２００３；７：１０１−１１４）。
【０３７８】
本研究において、化合物１１０を用いたＰＤＥ２阻害が、ウレタン麻酔スプラーグドーリーラットの海馬のシャッファー側枝−ＣＡ１シナプスにおいて、興奮性、またはシナプス増強を発現する能力の変化をもたらすかどうかを調べた。
【０３７９】
材料および方法
動物
本実験は、国際実験動物ケア評価認証協会（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）（ＡＡＡＬＡＣ）の指針、および１９８６年１１月２４日の欧州委員会理事会指令（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ）（８６／６０９／ＥＥＣ）に厳密に従って行われ、地方倫理委員会によって承認されたものである。
手術の時点で１７０〜２００ｇの重量のスプラーグドーリーラットを、制御された環境条件下に維持された動物施設に到着した後、１２時間の明／暗周期（午前０７：００に点灯）で配置された換気されたケージ内において集団で飼育した。
【０３８０】
手術および電気生理学
ラットに、ウレタン１．５ｇ／ｋｇ体重の腹腔内注射で麻酔をかけた。動物を、電極の挿入のために定位固定フレームに設置し、それらの体温を、直腸プローブによって常に監視し、加熱パッドで３７℃に維持した。全身麻酔を確実にするために必要に応じてウレタン（０．２〜０．５ｇ／ｋｇ）の追加投与を行った。刺激および記録電極のために左海馬構造の位置で頭蓋骨に２つの小さい孔（直径１ｍｍ）を空けた。双極刺激電極；水平に０．１２５μｍ離れた先端を有する撚り対線のタングステンワイヤ（７５μｍ）を、シャッファー側枝−交連神経（ＳＣ）経路に位置決めし（ＡＰ−３．４、ＭＬ−２．５、ＤＶ−１．９〜２．４）、タングステン記録電極を、背側海馬のアンモン角（Ｃｏｒｎｕ  Ａｍｍｏｎｉｓ）（ＣＡ１）領域の放線状層に位置決めする（ＡＰ−４．２、ＭＬ−４．０、ＤＶ−２．５〜３．４）（図１６ａ）。両方の孔を通して硬膜に穿孔し、刺激および記録電極を、皮質および海馬の上側層を通して、背側海馬のｍＰＰおよびＤＧへと非常にゆっくりと下げた（０．２ｍｍ／分）。手術中、動物の苦しみを最小限に抑えるあらゆる努力がなされた。
【０３８１】
興奮性シナプス後場電位（ｆＥＰＳＰ）の傾きが、興奮性シナプス伝達の尺度として使用される。定電流ユニット（ＭＣ、Ｇｅｒｍａｎｙ）によって生成される単一の単相矩形０．１または０．２ｍ秒波パルスが、例えばＳＣに印加され、誘起された反応が、ＣＡ１において生成される。細胞外電場電位が増幅され；１Ｈｚ〜２ｋＨｚのバンドパスフィルタ処理され、デジタル化され、特別仕様で作成されたソフトウェアを用いて分析される。最大反応を有する陰性波ｆＥＰＳＰが観察されるまで電極を下げた。最小３０分間が、測定前に安定した興奮性を確実にするために許容される。次に、１〜１２ボルトの範囲の刺激強度を有する単相定電流パルスを供給して、入力／出力（Ｉ／Ｏ）曲線を作成し、最大のｆＥＰＳＰの傾きを決定し、次に、最大反応の５０％を生成した刺激強度（すなわち、試験パルス）を後の実験に使用した。
【０３８２】
ＬＴＰ誘導：Ｉ／Ｏ曲線の決定後、続いて、試験刺激をテタヌス性刺激の前および後に３０秒毎に印加した。実験中の測定された各時点について、０．０３３Ｈｚの周波数で誘起された反応の５つの記録を平均した。ベースライン活性を５分毎に少なくとも１時間測定して、安定したベースラインを確保した。薬剤適用の直後のベースライン記録の最後の３０分間（６つの時点）を平均し、ＬＴＰ誘導に対する対照として使用した。最大反応の約５０％であったｆＥＰＳＰの傾きを誘起した刺激強度の矩形パルス（０．２ｍ秒の刺激持続時間、２０回の刺激のうち１０回のバースト、２秒のバースト間間隔）からなる高頻度刺激（ＨＦＳ）２００−Ｈｚプロトコルを用いて、テタヌス刺激を誘導した。ＨＦＳ後にｆＥＰＳＰを１２０分間記録して、ＳＣ−ＣＡ１ニューロンのシナプス応答において起こりうる変化を決定した。ＨＦＳ後の１２０分間で得られた正規化された傾きの平均をＨＦＳの前の３０分間で収集した正規化された傾きの平均で除算したフィールドＥＰＳＰ比から、ＬＴＰ測定値を導出した。推定上のｆＥＰＳＰの傾きを、刺激アーチファクトの端と負のピークのトラフの間で測定した。これらのポイント間の８０％の間隔において、線形フィットの最小二乗分析を用いてＥＰＳＰの傾きを算出した。
【０３８３】
組織学
電気生理学的試験の最後に、３０秒間にわたる５００μＡの電気刺激を供給して、刺激および記録電極の先端に損傷を生じさせ、電極配置の組織学的検証のために脳を採取した。脳切片（２０μｍ）を、光学顕微鏡を用いて調べた。不正確な電極配置を有する動物を、試験から除外した。
【０３８４】
化合物１１０を、２０％のシクロデキストリン（ＣＤ）＋１ＨＣｌに溶解させた。皮下投与のために、化合物１１０を２０％のＣＤ＋１ＨＣｌに溶解させて、最終濃度２ｍｇ／ｍｌおよび４ｍｇ／ｍｌを得た。
【０３８５】
統計
各動物について、３０分間にわたる安定したベースライン（テタヌス刺激前）反応を平均し、平均を、１００％であるものとして正規化し、テタヌス後反応データを、ベースライン平均に対して表した。テタヌス刺激後の溶媒および化合物１１０の効果の比較を、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて３０分間隔で行い、最小有意差（ＬＳＤ）事後分析を群比較のために適用した。
【０３８６】
結果
ＳＣ−ＣＡ１経路のｆＥＰＳＰの傾きにおける相違は、試験群のＩ／Ｏにわたって見出されなかったが、これは、ＣＡ１細胞の興奮性が全ての動物において類似していたことを示唆する（図１６ｂ、ｃ）。ベースラインのテタヌス刺激前の化合物１１０（２０および４０ｍｇ／ｋｇ）と溶媒投与対照の間で有意な変化が見出されたため（それぞれ、＋８および９％）、基底のシナプス伝達は高められた（図１６ｄ、ｅ）。ＬＴＰ誘導パラダイムの間、化合物１１０（２０および４０ｍｇ／ｋｇ）の皮下投与は、持続的な（＞２時間）シナプス増強を促進した（溶媒レベル１１９±４％と比較して、それぞれ、１３７±８％および１４２±５％）（図１６ｄ、挿入されたプロット）。テタヌス刺激の完了後０〜３０分後の時点で、ｆＥＰＳＰの傾きは、溶媒レベル１３９±１％と比較して、１５３±５％および１５５±４％、ｐ＜０．０５）であった。その後の３０分間隔においては、刺激−応答曲線の分析により、用量４０ｍｇ／ｋｇでのｆＥＰＳＰにおいて有意な持続的増大が明らかになった（３０〜６０分：１４６±６％、６０〜９０分：１３７±５％および９０〜１２０分：１２９±５％、それぞれ溶媒レベル１２５±６、１１６±９および１０６±１３％と比較して、ｐ＜０．０５）。概して、化合物１１０は、インビボでの基底のシナプス伝達およびＬＴＰを促進する。
【０３８７】
妥当な変動は、本発明の範囲から逸脱しているとみなすべきではない。このように記載される本発明は、当業者によって多くの方法で変更され得ることが明らかであろう。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６ａ】
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【図１６ｂ】
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【図１６ｃ】
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【図１６ｄ】
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【図１６ｅ】
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【国際調査報告】
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