(57)【要約】  本出願は、がん、例えばＢＲＡＦ及び／またはＫＲＡＳ変異を持つ及び持たないがんなどの治療に使用可能な、化合物、組成物、及びそれらの組み合わせを記載する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における腫瘍の治療方法であって、前記対象に、ＤＮＡ損傷剤、及びＢ−ｒａｆ阻害剤、またはそれらの薬学上許容される塩を投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、またはソラフェニブ、あるいはそれらの薬学上許容される塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＤＮＡ損傷剤は、二本鎖切断（ＤＳＢ）、一本鎖切断を引き起こす作用剤、代謝拮抗剤、ＤＮＡ架橋剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、またはアルキル化剤である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、５−ＦＵ、シタラビン、メトトレキセート、ピリメタミン、ブレオマイシン、オキサリプラチン、シスプラチン、エトポシド、ドキソルビシン、ビノレルビン、ミトキサントロン、ポドフィロトキシン、アフィディコリン、ホテムスチン、カルムスチン、Ｓ−２３９０６、Ｓ３９、ＳＮ−３８、トポテカン、カンプトテシン、レベッカマイシン、またはそれらの任意の薬学上許容される塩である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、メトトレキセート、及び／またはピリメタミン、またはそれらの薬学上許容される塩である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤またはその薬学上許容される塩、及び前記ＤＮＡ損傷剤は、順次、同時、または重複する様式で、投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ＤＮＡ損傷剤は、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤が前記対象に投与される前に、前記対象に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、前記ＤＮＡ損傷剤が前記対象に投与されてから少なくとも１〜２４時間後に、前記対象に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記対象は、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤が前記対象に投与される前に、前記ＤＮＡ損傷剤で前処置を受ける、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及び前記ＤＮＡ損傷剤は、経口投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及び前記ＤＮＡ損傷剤は、静脈内投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩は、経口投与され、かつ前記ＤＮＡ損傷剤は、静脈内投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩は、静脈内投与され、かつ前記ＤＮＡ損傷剤は、経口投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、またはソラフェニブ、あるいはそれらの薬学上許容される塩である、請求項３から１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記腫瘍は、膵臓腫瘍、黒色腫腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、卵巣腫瘍、前立腺腫瘍、または乳腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記腫瘍は、膵臓腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記腫瘍は、黒色腫腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記腫瘍は、転移性腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記腫瘍は、野生型ＢＲＡＦとして特性決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記腫瘍は、野生型ＫＲＡＳとして特性決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記腫瘍は、変異型ＢＲＡＦとして特性決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記腫瘍は、変異型ＢＲＡＦ  Ｖ６００ＥまたはＶ６００Ｋとして特性決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記腫瘍は、変異型ＫＲＡＳとして特性決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記腫瘍は、野生型ＢＲＡＦ及び変異型ＫＲＡＳとして特性決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記腫瘍は、変異型ＢＲＡＦ及び野生型ＫＲＡＳとして特性決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記対象は、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩を、９６０ｍｇ、７２０ｍｇ、４８０ｍｇ、２４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１００ｍｇ、５０ｍｇ、または２５ｍｇを１日２回という、約その用量、あるいはそれ未満の用量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＤＮＡ損傷剤は、１２５０ｍｇ／ｍ２、１０００ｍｇ／ｍ２、８００ｍｇ／ｍ２、６００ｍｇ／ｍ２、４００ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、または５０ｍｇ／ｍ２、２５ｍｇ／ｍ２、１０ｍｇ／ｍ２、または５ｍｇ／ｍ２という、約その用量あるいはそれ未満の用量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＤＮＡ損傷剤は、毎日、週に２回、週に３回、週に４回、週に５回、毎週、２週ごと、３週ごと、または毎月投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＤＮＡ損傷剤は、二本鎖切断ＤＮＡ損傷剤、またはその薬学上許容される塩である、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、メトトレキセート、またはピリメタミン、あるいはそれらの薬学上許容される塩である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
さらに、ＭＥＫ阻害剤を投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＭＥＫ阻害剤は、前記ＤＮＡ損傷剤が前記対象に投与された後に、前記対象に投与される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
さらに、ＭＥＫ阻害剤を投与することを含む、請求項２から３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
さらに、ＥＧＦＲ阻害剤を投与することを含む、請求項１から２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＥＧＦＲ阻害剤は、セツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブ、マツズマブ、ゲフィチニブ、またはエルロチニブである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３７】
前記腫瘍の大きさは、前記対象において減少する、請求項１に記載の方法。
【請求項３８】
前記腫瘍の大きさは、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００％減少する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記腫瘍は、治療後、大きさが増加しない、請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
対象における腫瘍の状態の維持方法であって、前記対象に、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項４１】
前記ＤＮＡ損傷剤は、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤が前記対象に投与される前に、前記対象に投与される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、前記ＤＮＡ損傷剤が前記対象に投与されてから少なくとも１〜２４時間後に、前記対象に投与される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記対象は、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤が前記対象に投与される前に、前記ＤＮＡ損傷剤で前処置を受ける、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記腫瘍は、前記対象において再発しない、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
前記腫瘍は、前記対象において、大きさが増加しない、請求項４０に記載の方法。
【請求項４６】
前記対象は、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及び前記ＤＮＡ損傷剤を投与される前に、黒色腫腫瘍、膵臓腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、卵巣腫瘍、または前立腺腫瘍の治療を受けたことがある、請求項４０に記載の方法。
【請求項４７】
前記腫瘍を持つ前記対象は、ＤＮＡ損傷剤とともにまたはなしで、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩で以前に治療されたことがある、請求項４０に記載の方法。
【請求項４８】
前記腫瘍は、野生型ＢＲＡＦとして特性決定される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４９】
前記腫瘍は、変異型ＢＲＡＦとして特性決定される、請求項４０に記載の方法。
【請求項５０】
前記腫瘍は、変異型ＢＲＡＦがＶ６００ＥまたはＶ６００Ｋであるとして特性決定される、請求項４０に記載の方法。
【請求項５１】
前記腫瘍は、野生型ＫＲＡＳとして特性決定される、請求項４０に記載の方法。
【請求項５２】
前記腫瘍は、変異型ＫＲＡＳとして特性決定される、請求項４０に記載の方法。
【請求項５３】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、またはソラフェニブ、あるいはそれらの薬学上許容される塩である、請求項４０から５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
前記ＤＮＡ損傷剤は、二本鎖切断（ＤＳＢ）、一本鎖切断を引き起こす作用剤、代謝拮抗剤、ＤＮＡ架橋剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、またはアルキル化剤である、請求項４０から５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
前記ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、５−ＦＵ、シタラビン、メトトレキセート、ピリメタミン、ブレオマイシン、オキサリプラチン、シスプラチン、エトポシド、ドキソルビシン、ビノレルビン、ミトキサントロン、ポドフィロトキシン、アフィディコリン、ホテムスチン、カルムスチン、Ｓ−２３９０６、Ｓ３９、ＳＮ−３８、トポテカン、カンプトテシン、レベッカマイシン、またはそれらの任意の薬学上許容される塩である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
さらに、ＭＥＫ阻害剤またはＥＧＦＲ阻害剤を投与することを含む、請求項４０から５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
ＢＲＡＦ  Ｖ６００ＥまたはＶ６００Ｋ変異を持たない腫瘍を持つ対象の治療方法であって、前記ＢＲＡＦ  Ｖ６００ＥまたはＶ６００Ｋ変異を持たない前記対象に、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項５８】
Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、またはソラフェニブ、あるいはそれらの薬学上許容される塩である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＤＮＡ損傷剤は、二本鎖切断（ＤＳＢ）、一本鎖切断を引き起こす作用剤、代謝拮抗剤、ＤＮＡ架橋剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、またはアルキル化剤である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
前記ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、５−ＦＵ、シタラビン、メトトレキセート、ピリメタミン、ブレオマイシン、オキサリプラチン、シスプラチン、エトポシド、ドキソルビシン、ビノレルビン、ミトキサントロン、ポドフィロトキシン、アフィディコリン、ホテムスチン、カルムスチン、Ｓ−２３９０６、Ｓ３９、ＳＮ−３８、トポテカン、カンプトテシン、レベッカマイシン、またはそれらの任意の薬学上許容される塩である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
さらに、ＭＥＫ阻害剤またはＥＧＦＲ阻害剤を投与することを含む、請求項５７から６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
さらに、前記投与工程の前に、前記対象に由来する腫瘍試料中のＢＲＡＦ  Ｖ６００ＥまたはＶ６００Ｋ変異の有無を検出することを含む、請求項５７から６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＢＲＡＦ  Ｖ６００ＥまたはＶ６００Ｋ変異を持たない前記腫瘍は、ＫＲＡＳ変異を持たない、または前記ＢＲＡＦ  Ｖ６００ＥまたはＶ６００Ｋ変異を持たない前記腫瘍は、ＫＲＡＳ変異を含む、請求項５７から６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
前記ＫＲＡＳ変異または前記ＢＲＡＦ変異の有無を検出することを含む、請求項５７から６３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６５】
前記ＤＮＡ損傷剤は、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤が前記対象に投与される前に、前記対象に投与される、請求項５７に記載の方法。
【請求項６６】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、前記ＤＮＡ損傷剤が前記対象に投与されてから少なくとも１〜２４時間後に、前記対象に投与される、請求項５７に記載の方法。
【請求項６７】
前記対象は、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤が前記対象に投与される前に、前記ＤＮＡ損傷剤で前処置を受ける、請求項５７に記載の方法。
【請求項６８】
前記腫瘍は、膵臓腫瘍または黒色腫腫瘍である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６９】
対象における転移性腫瘍の治療方法であって、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項７０】
前記転移性腫瘍は、転移性黒色腫、転移性膵臓腫瘍、転移性肺腫瘍、転移性結腸腫瘍、転移性卵巣腫瘍、転移性前立腺腫瘍、または転移性乳房腫瘍である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記腫瘍は、野生型ＢＲＡＦとして特性決定される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７２】
前記腫瘍は、変異型ＢＲＡＦとして特性決定される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７３】
前記変異型ＢＲＡＦは、ＢＲＡＦ  Ｖ６００ＥまたはＶ６００Ｋである、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記腫瘍は、野生型ＫＲＡＳとして特性決定される、請求項６９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７５】
前記腫瘍は、変異型ＫＲＡＳとして特性決定される、請求項６９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７６】
さらに、前記投与工程の前に、前記対象に由来する腫瘍試料中のＢＲＡＦ  Ｖ６００ＥまたはＶ６００Ｋ変異の有無を検出することを含む、請求項６９から７５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７７】
さらに、前記投与工程の前に、前記対象に由来する腫瘍試料中のＫＲＡＳ変異の有無を検出することを含む、請求項６９から７６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７８】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、またはソラフェニブ、あるいはそれらの薬学上許容される塩である、請求項６９から７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７９】
前記ＤＮＡ損傷剤は、二本鎖切断（ＤＳＢ）、一本鎖切断を引き起こす作用剤、代謝拮抗剤、ＤＮＡ架橋剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、またはアルキル化剤である、請求項６９から７８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８０】
前記ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、５−ＦＵ、シタラビン、メトトレキセート、ピリメタミン、ブレオマイシン、オキサリプラチン、シスプラチン、エトポシド、ドキソルビシン、ビノレルビン、ミトキサントロン、ポドフィロトキシン、アフィディコリン、ホテムスチン、カルムスチン、Ｓ−２３９０６、Ｓ３９、ＳＮ−３８、トポテカン、カンプトテシン、レベッカマイシン、またはそれらの任意の薬学上許容される塩である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
さらに、前記対象に、ＥＧＦＲ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤を投与することを含む、請求項６９から８０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８２】
前記ＤＮＡ損傷剤は、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤が前記対象に投与される前に、前記対象に投与される、請求項６９に記載の方法。
【請求項８３】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、前記ＤＮＡ損傷剤が前記対象に投与されてから少なくとも１〜２４時間後に、前記対象に投与される、請求項６９に記載の方法。
【請求項８４】
前記対象は、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤が前記対象に投与される前に、前記ＤＮＡ損傷剤で前処置を受ける、請求項６９に記載の方法。
【請求項８５】
薬物耐性腫瘍の治療方法であって、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項８６】
前記薬物耐性腫瘍は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤からなる治療に耐性がある、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記薬物耐性腫瘍は、転移性腫瘍である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記転移性腫瘍は、転移性黒色腫、転移性膵臓腫瘍、転移性肺腫瘍、転移性結腸腫瘍、転移性卵巣腫瘍、転移性前立腺腫瘍、転移性肺腫瘍、または転移性乳房腫瘍である、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記薬物耐性腫瘍は、黒色腫、膵臓腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、卵巣腫瘍、前立腺腫瘍、肺腫瘍、または乳房腫瘍である、請求項８５に記載の方法。
【請求項９０】
前記腫瘍は、野生型ＢＲＡＦとして特性決定される、請求項８５に記載の方法。
【請求項９１】
前記腫瘍は、変異型ＢＲＡＦとして特性決定される、請求項８５に記載の方法。
【請求項９２】
前記変異型ＢＲＡＦは、ＢＲＡＦ  Ｖ６００ＥまたはＶ６００Ｋである、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記腫瘍は、野生型ＫＲＡＳとして特性決定される、請求項８５に記載の方法。
【請求項９４】
前記腫瘍は、変異型ＫＲＡＳとして特性決定される、請求項８５に記載の方法。
【請求項９５】
さらに、前記投与工程の前に、前記対象に由来する腫瘍試料中のＢＲＡＦ  Ｖ６００ＥまたはＶ６００Ｋ変異の有無を検出することを含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項９６】
さらに、前記投与工程の前に、前記対象に由来する腫瘍試料中のＫＲＡＳ変異の有無を検出することを含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項９７】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、またはソラフェニブ、あるいはその薬学上許容される塩である、請求項８５に記載の方法。
【請求項９８】
前記ＤＮＡ損傷剤は、二本鎖切断（ＤＳＢ）、一本鎖切断を引き起こす作用剤、代謝拮抗剤、ＤＮＡ架橋剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、またはアルキル化剤である、請求項８５に記載の方法。
【請求項９９】
前記ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、５−ＦＵ、シタラビン、メトトレキセート、ピリメタミン、ブレオマイシン、オキサリプラチン、シスプラチン、エトポシド、ドキソルビシン、ビノレルビン、ミトキサントロン、ポドフィロトキシン、アフィディコリン、ホテムスチン、カルムスチン、Ｓ−２３９０６、Ｓ３９、ＳＮ−３８、トポテカン、カンプトテシン、レベッカマイシン、またはそれらの任意の薬学上許容される塩である、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記ＤＮＡ損傷剤は、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤が前記対象に投与される前に、前記対象に投与される、請求項８５に記載の方法。
【請求項１０１】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、前記ＤＮＡ損傷剤が前記対象に投与されてから少なくとも１〜２４時間後に、前記対象に投与される、請求項８５に記載の方法。
【請求項１０２】
前記対象は、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤が前記対象に投与される前に、前記ＤＮＡ損傷剤で前処置を受ける、請求項８５に記載の方法。
【請求項１０３】
Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を含む、医薬組成物。
【請求項１０４】
前記ＤＮＡ損傷剤は、二本鎖切断作用剤である、請求項１０３に記載の医薬組成物。
【請求項１０５】
前記ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、メトトレキセート、及び／またはピリメタミン、またはそれらの薬学上許容される塩である、請求項１０３に記載の医薬組成物。
【請求項１０６】
前記医薬組成物は、経口送達に適している、請求項１０３に記載の医薬組成物。
【請求項１０７】
前記医薬組成物は、注射に適している、請求項１０３に記載の医薬組成物。
【請求項１０８】
さらに、ＭＥＫ阻害剤及び／またはＥＧＦＲ阻害剤を含む、請求項１０３に記載の医薬組成物。
【請求項１０９】
Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を含む、固定単位剤形。
【請求項１１０】
前記剤形は、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤を、１５０ｍｇ、２４０ｍｇ、または１５０ｍｇ未満もしくは約１５０ｍｇ、または約２４０ｍｇ含む、請求項１０９に記載の固定単位剤形。
【請求項１１１】
前記剤形は、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤を約５〜約２００ｍｇ含む、請求項１０９に記載の固定単位剤形。
【請求項１１２】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、またはソラフェニブ、あるいはそれらの薬学上許容される塩である、請求項１０９に記載の固定単位剤形。
【請求項１１３】
前記ＤＮＡ損傷剤は、二本鎖切断（ＤＳＢ）、一本鎖切断を引き起こす作用剤、代謝拮抗剤、ＤＮＡ架橋剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、またはアルキル化剤である、請求項１０９に記載の固定単位剤形。
【請求項１１４】
前記ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、５−ＦＵ、シタラビン、メトトレキセート、ピリメタミン、ブレオマイシン、オキサリプラチン、シスプラチン、エトポシド、ドキソルビシン、ビノレルビン、ミトキサントロン、ポドフィロトキシン、アフィディコリン、ホテムスチン、カルムスチン、Ｓ−２３９０６、Ｓ３９、ＳＮ−３８、トポテカン、カンプトテシン、レベッカマイシン、またはそれらの任意の薬学上許容される塩である、請求項１１３に記載の固定単位剤形。
【請求項１１５】
前記ＤＮＡ損傷剤は、１２５０ｍｇ／ｍ２、１０００ｍｇ／ｍ２、８００ｍｇ／ｍ２、６００ｍｇ／ｍ２、４００ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、または５０ｍｇ／ｍ２、２５ｍｇ／ｍ２、１０ｍｇ／ｍ２、または５ｍｇ／ｍ２という、約その量あるいはそれ未満の量で存在する、請求項１１３に記載の固定単位剤形。
【請求項１１６】
ＥＧＦＲ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤を含む、あるいはＥＧＦＲ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤を含まない、請求項１０９に記載の固定単位剤形。
【請求項１１７】
Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を含む、注射用医薬組成物。
【請求項１１８】
前記組成物は、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤を、１５０ｍｇ、２４０ｍｇ、または１５０ｍｇ未満もしくは約１５０ｍｇ、または約２４０ｍｇ含む、請求項１１７に記載の注射用医薬組成物。
【請求項１１９】
前記剤形は、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤を約５〜約２００ｍｇ含む、請求項１１７に記載の注射用医薬組成物。
【請求項１２０】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、またはソラフェニブ、あるいはそれらの薬学上許容される塩である、請求項１１７に記載の注射用医薬組成物。
【請求項１２１】
前記ＤＮＡ損傷剤は、二本鎖切断（ＤＳＢ）、一本鎖切断を引き起こす作用剤、代謝拮抗剤、ＤＮＡ架橋剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、またはアルキル化剤である、請求項１１７に記載の注射用医薬組成物。
【請求項１２２】
前記ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、５−ＦＵ、シタラビン、メトトレキセート、ピリメタミン、ブレオマイシン、オキサリプラチン、シスプラチン、エトポシド、ドキソルビシン、ビノレルビン、ミトキサントロン、ポドフィロトキシン、アフィディコリン、ホテムスチン、カルムスチン、Ｓ−２３９０６、Ｓ３９、ＳＮ−３８、トポテカン、カンプトテシン、レベッカマイシン、またはそれらの任意の薬学上許容される塩である、請求項１１７に記載の注射用医薬組成物。
【請求項１２３】
前記ＤＮＡ損傷剤は、１２５０ｍｇ／ｍ２、１０００ｍｇ／ｍ２、８００ｍｇ／ｍ２、６００ｍｇ／ｍ２、４００ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、または５０ｍｇ／ｍ２、２５ｍｇ／ｍ２、１０ｍｇ／ｍ２、または５ｍｇ／ｍ２という、約その量あるいはそれ未満の量で存在する、請求項１１７に記載の注射用医薬組成物。
【請求項１２４】
ＥＧＦＲ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤を含む、あるいはＥＧＦＲ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤を含まない、請求項１１７に記載の注射用医薬組成物。
【請求項１２５】
前記ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、メトトレキセート、またはピリメタミンである、請求項１１７に記載の注射用医薬組成物。
【請求項１２６】
Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を含む注射用医薬組成物の調製方法であって、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を混合して、注射用医薬組成物を形成させることを含む、前記方法。
【請求項１２７】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、またはソラフェニブ、あるいはそれらの薬学上許容される塩である、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
前記ＤＮＡ損傷剤は、二本鎖切断（ＤＳＢ）、一本鎖切断を引き起こす作用剤、代謝拮抗剤、ＤＮＡ架橋剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、またはアルキル化剤である、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２９】
前記ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、５−ＦＵ、シタラビン、メトトレキセート、ピリメタミン、ブレオマイシン、オキサリプラチン、シスプラチン、エトポシド、ドキソルビシン、ビノレルビン、ミトキサントロン、ポドフィロトキシン、アフィディコリン、ホテムスチン、カルムスチン、Ｓ−２３９０６、Ｓ３９、ＳＮ−３８、トポテカン、カンプトテシン、レベッカマイシン、またはそれらの任意の薬学上許容される塩である、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１３０】
Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を含む、キット。
【請求項１３１】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤を含む第一の薬学上許容される容器、及び前記ＤＮＡ損傷剤を含む第二の薬学上許容される容器を含む、請求項１３０に記載のキット。
【請求項１３２】
前記容器は、滅菌されており、パイロジェンを含まない、請求項１３０に記載のキット。
【請求項１３３】
さらに、処方情報を含む、請求項１３０に記載のキット。
【請求項１３４】
前記処方情報は、対象への前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤及び前記ＤＮＡ損傷剤の投与についての説明書を含む、請求項１３３に記載のキット。
【請求項１３５】
前記処方情報は、野生型ＲＡＦとして特性決定された腫瘍を持つ対象への前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤及び前記ＤＮＡ損傷剤の投与についての説明書を含む、請求項１３３に記載のキット。
【請求項１３６】
前記処方情報は、前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤を投与する前に、前記対象に前記ＤＮＡ損傷剤を投与することについての説明書を含む、請求項１３３に記載のキット。
【請求項１３７】
Ｂ−ｒａｆ阻害剤を含む医薬製剤及び処方情報を含む容器であって、前記処方情報は、野生型ＲＡＦとして特性決定された腫瘍を持つ対象への前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤及びＤＮＡ損傷剤の投与についての説明書を含む、前記容器。
【請求項１３８】
腫瘍は、黒色腫腫瘍である、請求項１３７に記載の容器。
【請求項１３９】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤を含む、カプセル剤、錠剤、または他の経口剤形を含む、請求項１３７に記載の容器。
【請求項１４０】
前記Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、またはソラフェニブ、あるいはそれらの薬学上許容される塩である、請求項１３７のいずれか１項に記載の容器。
【請求項１４１】
前記ＤＮＡ損傷剤は、二本鎖切断（ＤＳＢ）、一本鎖切断を引き起こす作用剤、代謝拮抗剤、ＤＮＡ架橋剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、またはアルキル化剤である、請求項１３７のいずれか１項に記載の容器。
【請求項１４２】
前記ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、５−ＦＵ、シタラビン、メトトレキセート、ピリメタミン、ブレオマイシン、オキサリプラチン、シスプラチン、エトポシド、ドキソルビシン、ビノレルビン、ミトキサントロン、ポドフィロトキシン、アフィディコリン、ホテムスチン、カルムスチン、Ｓ−２３９０６、Ｓ３９、ＳＮ−３８、トポテカン、カンプトテシン、レベッカマイシン、またはそれらの任意の薬学上許容される塩である、請求項１４１に記載の容器。
【請求項１４３】
さらに、ＥＧＦＲ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤を含む、あるいはＥＧＦＲ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤を含まない、請求項１３７に記載の容器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
【０００２】
本出願は、２０１６年２月５日出願の米国仮出願第６２／２９１，９３１号、２０１６年６月２日出願の米国仮出願第６２／３４４，６１２号、及び２０１６年１１月２１日出願の米国仮出願第６２／４２４，７９２号に関連し、これらはそれぞれ、そのまま全体が、本明細書により参照として援用される。
【０００３】
技術分野
【０００４】
本開示は、概して、がん、例えば野生型または変異型ＲａｆもしくはＲａｓを持つがんなどを治療するための化合物の組み合わせを示す。
【背景技術】
【０００５】
背景技術
【０００６】
Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、後期黒色腫、例えば転移性黒色腫または切除不能な黒色腫などの治療用に既に認可されている。しかしながら、それらは、ＢＲＡＦ変異、例えばＶ６００ＥまたはＶ６００Ｋなどを有する黒色腫にしか認可されていない。さらに、これらの化合物が、実際には、野生型ＢＲＡＦを持つ患者では腫瘍を増悪させる可能性があることが、広く認められている。そのうえさらに、これらの化合物の有効性は、永久ではなく、変異型ＢＲＡＦを持つ腫瘍は、そのような治療に耐性を持つようになることが多い。変異型ＫＲＡＳを持つ腫瘍は、これらの化合物で治療した場合に進行が速くなることさえあることも、わかってきている。すなわち、野生型及び変異型ＢＲＡＦを持つ腫瘍において、さらには黒色腫を超えて、これらの化合物の有効性を高める必要性がある。本明細書中記載される実施形態は、こうした必要性及び他のものを満たすことになる。
【発明の概要】
【０００７】
概要
【０００８】
本明細書中提供される実施形態は、対象において腫瘍を治療する方法を提供し、本方法は、対象に、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を投与することを含む。
【０００９】
本明細書中提供される実施形態は、対象において腫瘍の状態を維持する方法を提供し、本方法は、対象に、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を投与することを含む。
【００１０】
本明細書中提供される実施形態は、ＢＲＡＦ  Ｖ６００ＥまたはＶ６００Ｋ変異を持たない腫瘍を持つ対象を治療する方法を提供し、本方法は、ＢＲＡＦ  Ｖ６００ＥまたはＶ６００Ｋ変異を持たない腫瘍を持つ対象に、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を投与することを含む。
【００１１】
本明細書中提供される実施形態は、対象において転移性腫瘍を治療する方法を提供し、本方法は、対象に、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を投与することを含む。
【００１２】
本明細書中提供される実施形態は、対象において薬物耐性腫瘍を治療する方法を提供し、本方法は、対象に、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を投与することを含む。
【００１３】
本明細書中提供される実施形態は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１４】
本明細書中提供される実施形態は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を含む固定単位剤形を提供する。
【００１５】
本明細書中提供される実施形態は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を含む注射用医薬組成物を提供する。
【００１６】
本明細書中提供される実施形態は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を含む注射用医薬組成物を調製する方法を提供し、本方法は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を混合して、注射用医薬組成物を形成することを含む。
【００１７】
本明細書中提供される実施形態は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を含むキットを提供する。
【００１８】
本明細書中提供される実施形態は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤を含む医薬製剤及び処方情報を含む容器を提供し、この処方情報は、野生型ＲＡＦとして特性決定された腫瘍を持つ対象に、Ｂ−ｒａｆ阻害剤をＤＮＡ損傷剤とともに投与するための説明書を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
図面の簡単な説明
【００２０】
【図１Ａ】示すとおりの様々ながん細胞株での４８時間死滅曲線を示す。薬物Ａは、ベムラフェニブであり、薬物Ｂは、ゲムシタビンである。ＫＲＡＳ及びＢＲＡＦの変異状態は、図中に示す。
【図１Ｂ】示すとおりの様々ながん細胞株での４８時間死滅曲線を示す。薬物Ａは、ベムラフェニブであり、薬物Ｂは、ゲムシタビンである。ＫＲＡＳ及びＢＲＡＦの変異状態は、図中に示す。
【図２Ａ】４８時間死滅曲線（非線形回帰）を示し、この曲線は、ＷＴ−ＢＲＡＦ及びＫＲＡＳ−Ｇ１２Ｃ変異を持つ間葉系膵臓癌細胞株において、ベムラフェニブ及びゲムシタビンの併用処理を用いると感度が１００倍に上昇することを示す。薬物Ａは、ベムラフェニブであり、薬物Ｂは、ゲムシタビンである。ＫＲＡＳ及びＢＲＡＦの変異状態は、図中に示す。
【図２Ｂ】４８時間死滅曲線（非線形回帰）を示し、この曲線は、ＷＴ−ＢＲＡＦ及びＫＲＡＳ−Ｇ１２Ｃ変異を持つ間葉系膵臓癌細胞株において、ベムラフェニブ及びゲムシタビンの併用処理を用いると感度が１００倍に上昇することを示す。薬物Ａは、ベムラフェニブであり、薬物Ｂは、ゲムシタビンである。ＫＲＡＳ及びＢＲＡＦの変異状態は、図中に示す。
【図３Ａ】本明細書中記載されるとおりのベムラフェニブ及びゲムシタビン処理のコロニー阻害％を示す。
【図３Ｂ】本明細書中記載されるとおりのベムラフェニブ及びゲムシタビン処理のコロニー阻害％を示す。
【図４Ａ】ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の特性決定を示す。ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞とＳＫＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の増殖速度比較（ｎ＝３）。１０００００個の細胞を、０時点で播種した。
【図４Ｂ】ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の特性決定を示す。ベムラフェニブを差示的用量で用いた処理後のＳＫＭＥＬ−２８細胞及びＳＫＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝５）（ｐ＜０．０００１）。
【図５Ａ】ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の特性決定を示す。不偏質量分析：ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞及びＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の差示的処理後のＦＡＭ１２９Ｂタンパク質存在量（ｎ＝３）。
【図５Ｂ】ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の特性決定を示す。ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の特性決定を示す。差示的処理したＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞及びＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞のＰＨＧＤＨタンパク質発現のウェスタンブロット。アルファチューブリンを、ローディングコントロールとして用いた。各レーンに、タンパク質５０μｇをロードした。
【図６Ａ】ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞におけるベムラフェニブ耐性に対するセリン生合成経路の重要性を示す：差示的用量のベムラフェニブを用いた対照ｓｉＲＮＡまたはＰＨＧＤＨ  ｓｉＲＮＡ処理後のＳＫＭＥＬ−２８細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ＝０．３０５２）。
【図６Ｂ】ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞におけるベムラフェニブ耐性に対するセリン生合成経路の重要性を示す：差示的用量のベムラフェニブを用いた対照ｓｉＲＮＡまたはＰＨＧＤＨ  ｓｉＲＮＡ処理後のＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ＜０．０００１）。
【図６Ｃ】ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞におけるベムラフェニブ耐性に対するセリン生合成経路の重要性を示す：差示的用量のベムラフェニブ＋／−メトトレキセート（７５ｎＭ）を用いた処理後のＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ＝０．９２０３）。
【図６Ｄ】ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞におけるベムラフェニブ耐性に対するセリン生合成経路の重要性を示す：差示的用量のベムラフェニブ＋／−メトトレキセート（７５ｎＭ）を用いた処理後のＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ＜０．０００１）。
【図６Ｅ】ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞におけるベムラフェニブ耐性に対するセリン生合成経路の重要性を示す：ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞におけるベムラフェニブ耐性に対するセリン生合成経路の重要性を示す。培地に差示的用量のベムラフェニブ＋／−セリンを用いた処理後のＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ０．０００１）。
【図７Ａ】ゲムシタビンが、ＳＫＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞をベムラフェニブに対して感作させることを示す。差示的用量のベムラフェニブ＋／−ゲムシタビン（５０ｎＭ）を用いた処理後のＳＫＭＥＬ−２８細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ０．０００１）。
【図７Ｂ】ゲムシタビンが、ＳＫＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞をベムラフェニブに対して感作させることを示す。差示的用量のベムラフェニブ＋／−ゲムシタビン（５０ｎＭ）を用いた処理後のＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ＜０．０００１）。
【図７Ｃ】ゲムシタビンが、ＳＫＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞をベムラフェニブに対して感作させることを示す。差示的用量のベムラフェニブ＋／−ゲムシタビン（５０ｎＭ）を用いた対照ｓｉＲＮＡまたはＰＨＧＤＨｓｉＲＮＡ処理後のＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ＝０．９８１６）。
【図７Ｄ】ゲムシタビンが、ＳＫＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞をベムラフェニブに対して感作させることを示す。差示的用量のベムラフェニブ＋／−ゲムシタビン（５０ｎＭ）を用いた対照ｓｉＲＮＡまたはＰＨＧＤＨｓｉＲＮＡ処理後のＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ＝０．０１８９）。
【図７Ｅ】ゲムシタビンが、ＳＫＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞をベムラフェニブに対して感作させることを示す。差示的用量のベムラフェニブ＋ゲムシタビン（５０ｎＭ）＋／−メトトレキセート（７５ｎＭ）を用いた処理後のＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ＝０．６５８５）。
【図７Ｆ】ゲムシタビンが、ＳＫＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞をベムラフェニブに対して感作させることを示す。差示的用量のベムラフェニブ＋ゲムシタビン（５０ｎＭ）＋／−メトトレキセート（７５ｎＭ）を用いた処理後のＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１（ｎ＝３）細胞のコロニー形成アッセイ（ｐ＜０．０００１）。
【図７Ｇ】ゲムシタビンが、ＳＫＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞をベムラフェニブに対して感作させることを示す。ゲムシタビンとベムラフェニブの間の相乗効果を表すＦａ−ＣＩプロット。線より下にくるデータ点は、薬物間に相乗効果があることを示す。データ点は、特定用量でのＣＩ計算値を表す。本明細書中の表３に、ＣＩ値を示す。
【図８Ａ】ゲムシタビンが、膵癌細胞株及びＮＳＣＬＣ細胞株をベムラフェニブに対して感作させることを示す。差示的用量のゲムシタビン＋／−ベムラフェニブ（１μΜ）を用いた処理後のＢｘＰＣ３Ｍ１細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ＜０．０００１）。
【図８Ｂ】ゲムシタビンが、膵癌細胞株及びＮＳＣＬＣ細胞株をベムラフェニブに対して感作させることを示す。ゲムシタビンとベムラフェニブの間の相乗効果を表すＦａ−ＣＩプロット。線より下にくるデータ点は、薬物間に相乗効果があることを示す。データ点は、特定用量でのＣＩ計算値を表す。本明細書中の表３に、ＣＩ値を示す。ＣＩ値については、表３を参照のこと。
【図８Ｃ】ゲムシタビンが、膵癌細胞株及びＮＳＣＬＣ細胞株をベムラフェニブに対して感作させることを示す。差示的用量のゲムシタビン＋／−ベムラフェニブ（１μΜ）を用いた処理後のＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ＜０．０００１）。
【図９Ａ】ベムラフェニブが、膵臓癌細胞株において細胞増殖及びセリン合成を誘導したことを示す。ベムラフェニブ（１０μΜ）で処理したＢｘＰＣ３細胞の細胞増殖アッセイ。１０００００個の細胞を、０日目に播種した。
【図９Ｂ】ベムラフェニブが、膵臓癌細胞株において細胞増殖及びセリン合成を誘導したことを示す。ベムラフェニブ（１０μＭ）で処理したＢｘＰＣ３Ｍ１細胞の細胞増殖アッセイ。１０００００個の細胞を、０日目に播種した。
【図９Ｃ】ベムラフェニブが、膵臓癌細胞株において細胞増殖及びセリン合成を誘導したことを示す。ベムラフェニブ（１０μＭ）で処理したＰａｎｃ１細胞の細胞増殖アッセイ。１０００００個の細胞を、０日目に播種した。
【図９Ｄ】ベムラフェニブが、膵臓癌細胞株において細胞増殖及びセリン合成を誘導したことを示す。ベムラフェニブ（１０μΜ）で処理したＭｉａＰａｃａ２細胞の細胞増殖アッセイ。１０００００個の細胞を、０日目に播種した。
【図９Ｅ】ベムラフェニブが、膵臓癌細胞株において細胞増殖及びセリン合成を誘導したことを示す。質量分析：ＤＭＳＯまたはベムラフェニブ（１０μΜ）で処理した膵臓癌細胞におけるＰＨＧＤＨタンパク質発現（ｎ＝３）。
【図９Ｆ】ベムラフェニブが、膵臓癌細胞株において細胞増殖及びセリン合成を誘導したことを示す。質量分析：ＤＭＳＯまたはベムラフェニブ（１０μΜ）で処理した膵臓癌細胞におけるＰＳＡＴ１タンパク質発現（ｎ＝３）。
【図９Ｇ】ベムラフェニブが、膵臓癌細胞株において細胞増殖及びセリン合成を誘導したことを示す。質量分析：ＤＭＳＯまたはベムラフェニブ（１０μΜ）で処理した膵臓癌細胞におけるＰＳＰＨタンパク質発現（ｎ＝３）。
【図９Ｈ】ベムラフェニブが、膵臓癌細胞株において細胞増殖及びセリン合成を誘導したことを示す。質量分析：ＤＭＳＯまたはベムラフェニブ（１０μΜ）で処理した膵臓癌細胞におけるＳＡＲＳタンパク質発現（ｎ＝３）。
【図１０Ａ】ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞及びＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞のベムラフェニブ誘導型感作の向上を示す。差示的用量のゲムシタビン＋／−ベムラフェニブ（１μΜ）＋／−メトトレキセート（７５ｎＭ）を用いた処理後のＢｘＰＣ３Ｍ１細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ＝０．０２５８）。
【図１０Ｂ】ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞及びＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞のベムラフェニブ誘導型感作の向上を示す。差示的用量のゲムシタビン＋／−ベムラフェニブ（１μΜ）＋／−メトトレキセート（７５ｎＭ）を用いた処理後のＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ＝００２０）。
【図１０Ｃ】ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞及びＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞のベムラフェニブ誘導型感作の向上を示す。差示的用量のベムラフェニブ＋／−セリンを用いた処理後のＢｘＰＣ３Ｍ１細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ０．０００１）。
【図１１Ａ】ダブラフェニブが、ＢｘＰＣ３Ｍ１、ＮＣＩ−Ｈ２１２２、及びＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞を、ゲムシタビンに対して感作させることを示す。差示的用量のゲムシタビン＋／−ダブラフェニブ（１μΜ）を用いた処理後のＢｘＰＣ３Ｍ１細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ＜０．０００１）。
【図１１Ｂ】ダブラフェニブが、ＢｘＰＣ３Ｍ１、ＮＣＩ−Ｈ２１２２、及びＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞を、ゲムシタビンに対して感作させることを示す。差示的用量のゲムシタビン＋／−ダブラフェニブ（１μΜ）を用いた処理後のＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ０．０００１）。
【図１１Ｃ】ダブラフェニブが、ＢｘＰＣ３Ｍ１、ＮＣＩ−Ｈ２１２２、及びＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞を、ゲムシタビンに対して感作させることを示す。差示的用量のダブラフェニブ＋／−ゲムシタビン（５０ｎＭ）を用いた処理後のＢｘＰＣ３Ｍ１細胞のコロニー形成アッセイ（ｎ＝３）（ｐ＜０．０００１）。
【図１２Ａ】ゲムシタビン及びＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ阻害剤を用いた順次組み合わせ処理を介したがん細胞感作の概略図を示す：カスケードは、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ変異内でのＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ阻害剤（ＢＲＡＦｉ）に対するＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞応答を表す。
【図１２Ｂ】ゲムシタビン及びＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ阻害剤を用いた順次組み合わせ処理を介したがん細胞感作の概略図を示す：左側のカスケードは、変異プロファイル内でのＢＲＡＦｉに対する後天性ＢＲＡＦｉ耐性ＳＫＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞応答を表す。後天性耐性は、ゲムシタビン前処理なしにＭＡＰＫカスケードの奇異性誘導を引き起こす。ゲムシタビン前処理及びそれに続くＢＲＡＦｉは、細胞を停止させたままでＭＡＰＫカスケードの誘導及びセリン合成の誘導を招く。セリン合成の誘導は、ヌクレオチド合成のための葉酸回路の誘導を招く。これらの事象シリーズは、ゲムシタビン誘導型ＤＮＡ損傷から生じる細胞周期停止シグナルを引き起こす細胞シグナル伝達経路の活性化と、ＢＲＡＦ阻害剤によるＭＡＰＫシグナル伝達経路の活性化との相克的活性化により、細胞死を招く。右側のカスケードは、ゲムシタビン前処理による、ＢＲＡＦ  ＷＴ膵癌ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞及び非小細胞肺癌ＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞の、ＢＲＡＦ阻害剤に対する感作を示す。これらのＢＲＡＦ  ＷＴ細胞株では、ゲムシタビンは、細胞周期停止を誘導する。停止細胞にＢＲＡＦ阻害剤を添加すると、ＭＡＰＫカスケードが誘導され、上昇したセリン合成及び葉酸合成を招く。これらの事象シリーズは、ゲムシタビン誘導型ＤＮＡ損傷から生じる細胞周期停止を引き起こす細胞シグナル伝達経路の活性化と、ＢＲＡＦ阻害剤によるＭＡＰＫシグナル伝達経路の活性化との相克的活性化により、細胞死を招く。細胞死の実際の機構は、未だに不明である。
【図１３】ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞のＰＨＧＤＨ遺伝子破壊を示す：レーン１：ＰＨＧＤＨ  ｓｉＲＮＡ＋ベムラフェニブ。レーン２：ＰＨＧＤＨ  ｓｉＲＮＡ＋ＤＭＳＯ。レーン３：対照ｓｉＲＮＡ＋ベムラフェニブ。レーン４：対照ｓｉＲＮＡ＋ＤＭＳＯ。アルファチューブリンをローディングコントロールとして使用した。各レーンに、タンパク質５０μｇをロードした。
【図１４Ａ】ゲムシタビンが、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞及びＢｘＰＣ３Ｍ１細胞をベムラフェニブに対して感作させたことを示す。ＳＫ−ＭＥＬ２８ＶＲ１細胞におけるゲムシタビンとベムラフェニブの相乗効果を示す正規化アイソボログラム。線より左にくるデータ点は、薬物間に相乗効果があることを示す。データ点は、特定用量でのＣＩ計算値を表す（ＣＩ値については、表３を参照のこと）。
【図１４Ｂ】ゲムシタビンが、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞及びＢｘＰＣ３Ｍ１細胞をベムラフェニブに対して感作させたことを示す。ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞におけるゲムシタビンとベムラフェニブの相乗効果を示す正規化アイソボログラム。線より左にくるデータ点は、薬物間に相乗効果があることを示す。データ点は、特定用量でのＣＩ計算値を表す（ＣＩ値については、表４を参照のこと）。
【図１５】三次元球状増殖アッセイにおいて、ゲムシタビンが、膵癌患者由来細胞株及びＡＴＣＣの確立された細胞株を、ベムラフェニブまたはダブラフェニブに対して感作させたことを示す：０日目、２０，０００個の細胞を播種し（Ｃｏｒｎｉｎｇ４５１５球面プレート）、２日目、ゲムシタビンを添加し（すべての球体は、直径が少なくとも５００μｍ）、３日目、ゲムシタビンを洗い落としてＢ−ｒａｆ阻害剤を添加し、５日目、ＣＴＧ３Ｄ細胞生存アッセイを行った（ｎ＝２）。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
詳細な説明
【００２２】
本出願は、化合物の組み合わせ及びその使用方法を記載する。化合物及び組み合わせは、単位剤形で、または異なる剤形で投与することが可能な医薬組成物として調製することも可能である。
【００２３】
ベムラフェニブは、式Ｉの化合物、またはその薬学上許容される塩を示す：
【化１】
2019508491.tif 000002
【００２４】
ダブラフェニブは、式ＩＩの化合物、またはその薬学上許容される塩を示す：
【化２】
2019508491.tif 000003
【００２５】
本明細書全体を通じてＢ−ｒａｆ阻害剤と記述する。例として、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、またはソラフェニブ、及びそれらの薬学上許容される塩が挙げられるが、これらに限定されない。他のＢ−ｒａｆ阻害剤、例えばソラフェニブなどで置き換えることも可能である。すなわち、疑いを回避するため、ベムラフェニブまたはダブラフェニブいずれかが記述されている場合、Ｂ−ｒａｆ阻害剤が全般的に使用可能である、すなわち他の特定種類のＢ−ｒａｆ阻害剤も使用可能であるということが、開示されている。この記述は、本明細書中開示される化合物の薬学上許容される塩を示しているとも解釈されなければならない。ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、またはソラフェニブ、あるいはそれらの薬学上許容される塩は、様々ながん治療薬、例えば、ＤＮＡ損傷剤など（これに限定されない）と組み合わせる（同時または順次）ことができる。そのようなＤＮＡ損傷剤の例として、二本鎖切断（ＤＳＢ）を引き起こす作用剤、一本鎖切断を引き起こす作用剤、代謝拮抗剤、ＤＮＡ架橋剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、またはアルキル化剤が挙げられるが、これらに限定されない。実施形態によっては、ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、５−ＦＵ、シタラビン、メトトレキセート、ピリメタミン、ブレオマイシン、オキサリプラチン、シスプラチン、エトポシド、ドキソルビシン、ビノレルビン、ミトキサントロン、ポドフィロトキシン、アフィディコリン、ホテムスチン、カルムスチン、Ｓ−２３９０６、Ｓ３９、ＳＮ−３８、トポテカン、カンプトテシン、レベッカマイシンなどである。これらの作用剤は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはそれらの薬学上許容される塩の単体または組み合わせいずれかと組み合わせることができる。これらは、ＭＥＫ阻害剤とも組み合わせることができ、ＭＥＫ阻害剤として、トラメチニブなどがあるが、これに限定されない。実施形態によっては、ＭＥＫ阻害剤も、本明細書中記載されるとおりの、Ｂ−ｒａｆ阻害剤（例えば、ベムラフェニブまたはダブラフェニブ）及びＤＮＡ損傷剤と組み合わせる、または共に投与することができる。実施形態によっては、ＢＲＡＦ阻害剤は、ＭＥＫ阻害剤と組み合わせて（同時にまたは順次に）は投与されない。
【００２６】
化合物、組成物、及びそれらの組み合わせは、本明細書中記載される方法のどれにでも使用することができ、そのような方法として、対象においてがんまたは腫瘍、例えば、黒色腫、膵癌、肺癌（例えばＮＳＣＬＣ）、大腸癌、卵巣癌、前立腺癌、または乳癌などを治療する方法が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】
実施形態によっては、Ｂ−ｒａｆ阻害剤（例えばベムラフェニブ、ダブラフェニブ、またはソラフェニブ）またはそれらの薬学上許容される塩を、ＤＮＡ損傷剤と合わせた組成物、例えば医薬組成物または固定剤形が、提供される。組成物は、ＭＥＫ阻害剤またはＥＧＦＲ阻害剤も含むことができる。実施形態によっては、組成物は、ＭＥＫ阻害剤またはＥＧＦＲ阻害剤を含まないことが可能である。本明細書中提供される、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩と、ＤＮＡ損傷剤との組み合わせ、及び組み合わせの使用は、本明細書中記載されるとおり、驚くべきかつ予期せぬがん治療能力及び他の予期せぬ結果を実証する。実施形態によっては、組み合わせは、腫瘍進行を遅らせる。実施形態によっては、組み合わせは、腫瘍の大きさを減少させる。実施形態によっては、組み合わせは、Ｂ−ｒａｆ阻害剤に耐性を獲得した腫瘍を再感作させる。実施形態によっては、組み合わせは、Ｂ−ｒａｆ阻害剤に耐性である腫瘍を感作させる。再感作された腫瘍とは、Ｂ−ｒａｆ阻害剤（例えばベムラフェニブ、ダブラフェニブ、またはソラフェニブ）などの一次治療に対して耐性を獲得した腫瘍または耐性を獲得することが予想される腫瘍を示す。感作された腫瘍とは、治療に対して耐性であったが、現在その治療で治療することが可能な腫瘍を示す。例えば、Ｂ−ｒａｆ阻害剤に反応しない腫瘍を、Ｂ−ｒａｆ阻害剤とＤＮＡ損傷剤の組み合わせで治療する場合、その腫瘍は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤に対して感作される。実施形態によっては、感作は、腫瘍を、Ｂ−ｒａｆ阻害剤と共にＤＮＡ損傷剤で前処置することにより、提供される。特定の理論に固執するつもりはないが、Ｂ−ｒａｆ阻害剤とＤＮＡ損傷剤の組み合わせは（前処置であろうとなかろうと）、それぞれの成分単独の場合と比べて、相乗的に働く。実施形態によっては、Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、ＤＮＡ損傷剤と組み合わせることにより、以前の使用時よりも少ない用量で使用することも可能である。そのような用量の例は、本明細書中記載されるが、それらに限定されない。ＤＮＡ損傷剤も、Ｂ−ｒａｆ阻害剤と組み合わせることにより、その典型的な用量よりも少ない用量で使用可能である。そのような用量の例は、本明細書中記載されるが、それらに限定されない。これらの組み合わせはまた、ＭＥＫ阻害剤と組み合わせても組み合わせなくても使用可能である。ＭＥＫ阻害剤の例は、本明細書中記載されるが、他のものも使用可能である。組み合わせはまた、ＥＧＦＲ阻害剤と併せて投与することも可能である。組み合わせはまた、ＥＧＦＲ阻害剤と組み合わせずに投与することも可能である。ＥＧＦＲ阻害剤の例として、セツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブ、マツズマブ、ゲフィチニブ、及びエルロチニブが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書中記載される組み合わせは、同一配合物中または単位剤形中に組み合わせることも、別々に投与することも可能であるが、それでも組み合わせられているとみなすことができる。なぜなら、それらは、治療薬それぞれを用いてがんを治療することを意図して、患者に投与されているからである。
【００２８】
実施形態によっては、Ｂ−ｒａｆ阻害剤とＤＮＡ損傷剤の組み合わせを、維持療法及び／または二次療法に使用する。維持療法、または二次療法は、がんを有していたが一次療法ですでに治療されており、腫瘍が一次治療に反応した患者を二次療法で治療することを示す。維持療法は、腫瘍が完全に除去できない場合にはその増殖能力を低下させる、または腫瘍が完全に除去できる場合にはその再発を阻止するために使用できる。腫瘍が安定している、または患者が完全奏功を示した（例えば、寛解していると見なされる）場合に、維持療法が使用されることが多い。しかしながら、維持療法は、対象が一次治療に対して部分的反応、または単に反応を示していた場合にも使用することができる。組み合わせは、本明細書中記載されるとおり、ＭＥＫ阻害剤またはＥＧＦＲ阻害剤も含むことができる。
【００２９】
実施形態によっては、がん転移を治療する方法が提供され、本方法は、対象に、Ｂ−ｒａｆ阻害剤（例えばベムラフェニブ、ダブラフェニブ、及び／またはソラフェニブ）及びＤＮＡ損傷剤を投与することを含む。実施形態によっては、本方法は、ＭＥＫ阻害剤またはＥＧＦＲ阻害剤を投与することを含み、それらの例が本明細書中提供されるが、例示に限定されない。実施形態によっては、転移性がんは、転移性の黒色腫、膵癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌、前立腺癌、または乳癌である。実施形態によっては、本方法は、本明細書中記載される他の実施形態と同様または同一に、Ｂ−ｒａｆ阻害剤の前に、ＤＮＡ損傷剤を投与することを含む。
【００３０】
がん（腫瘍）は、治療自身に由来する淘汰圧により治療に対する耐性を獲得することが多い。すなわち、Ｂ−ｒａｆ阻害剤などの治療は、最初は機能することができるが、一定期間後、耐性の獲得のため機能しなくなる。この耐性は、本明細書中記載されるＢ−ｒａｆ阻害剤とＤＮＡ損傷剤の組み合わせを投与することにより、克服するまたは低下させることができる。したがって、実施形態によっては、耐性がんの治療法方が提供される。実施形態によっては、本方法は、治療耐性がんを持つ患者に、Ｂ−ｒａｆ阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を投与することを含む。それらの例は、本明細書中記載される。実施形態によっては、がんは、ベムラフェニブ及び／またはダブラフェニブに対して耐性がある。実施形態によっては、本方法は、ＭＥＫ阻害剤またはＥＧＦＲ阻害剤を投与することを含み、それらの例は、本明細書中記載されるが、例示に限定されない。実施形態によっては、本方法は、本明細書中記載される他の実施形態と同様または同一に、Ｂ−ｒａｆ阻害剤の前に、ＤＮＡ損傷剤を投与することを含む。
【００３１】
医薬組成物／配合物
【００３２】
医薬組成物は、１種または複数の生理学上許容されるキャリアまたは賦形剤を用いて、標準技法により配合することができる。配合物は、緩衝剤及び／または保存剤を含有することができる。化合物ならびにそれらの生理学上許容される塩及び溶媒和物は、任意の適切な投与用に配合することができ、そのような投与として、吸入、外用、経鼻、経口、非経口（例えば、静脈内、腹腔内、膀胱内、またはくも膜下腔内）、または直腸を介した、１種または複数の薬学上許容されるキャリアを含むビヒクルに入れた投与が挙げられ、それらの比率は、化合物の溶解性及び化学的性質、選択した投与経路、ならびに生物学的標準実務により決定される。
【００３３】
医薬組成物は、有効量の１種または複数の本明細書中記載される化合物（複数可）を、例えば、薬学上許容される希釈剤、保存剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバント、及び／または他のキャリアと一緒に含むことができる。そのような組成物は、様々な緩衝剤内容物（例えば、トリスまたは他のアミン、炭酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、アミノ酸緩衝剤、例えば、グリシンアミド塩酸塩（特に生理学的ｐＨ範囲の場合）、Ｎ−グリシルグリシン、リン酸ナトリウムもしくはリン酸カリウム（二塩基性、三塩基性）、など、またはトリス−ＨＣｌもしくは酢酸）、ｐＨ、及びイオン強度の希釈剤；添加剤、例えば、界面活性剤及び可溶化剤（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリソルベート８０）、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ、ポリオール、例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなどの界面活性剤）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、保存剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベンなど）、ならびに増量物質（例えば、スクロース、ラクトース、マンニトールなどの糖類、ポリビニルピロリドンなどの重合体、またはデキストランなど）など；及び／または材料を重合体化合物（ポリ乳酸、ポリグリコール酸など）またはリポソームの粒状製剤中に組み込むことを含むことができる。ヒアルロン酸も使用可能である。そのような組成物は、本明細書中記載される化合物の、物理的状態、安定性、ｉｎ  ｖｉｖｏ放出速度、及びｉｎ  ｖｉｖｏクリアランス速度に影響を与えるために使用することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １８ｔｈ  Ｅｄ．  （１９９０，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．  １８０４２）  ｐａｇｅｓ  １４３５−１７１２を参照、これは本明細書中参照として援用される。組成物は、例えば、液状で調製することも可能であり、乾燥粉末、例えば凍結乾燥形状で調製することも可能である。そのような組成物を投与する特定の方法を、以下に記載する。
【００３４】
本明細書中記載される配合物に緩衝剤を含ませようとする場合、緩衝剤は、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、グリシルグリシン、ヒスチジン、グリシン、リシン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウム、及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、またはそれらの混合物から選択することができる。緩衝剤は、グリシルグリシン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、及びリン酸ナトリウム、またはそれらの混合物も可能である。
【００３５】
本明細書中記載される化合物の１種の配合物に薬学上許容される保存剤を含ませようとする場合、保存剤は、フェノール、ｍ−クレゾール、メチル＝ｐ−ヒドロキシベンゾアート、プロピル＝ｐ−ヒドロキシベンゾアート、２−フェノキシエタノール、ブチル＝ｐ−ヒドロキシベンゾアート、２−フェニルエタノール、ベンジルアルコール、クロロブタノール、及びチオメルサール、またはそれらの混合物から選択することができる。
【００３６】
保存剤は、濃度約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌ、濃度約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌ、または濃度約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌで存在する。
【００３７】
医薬組成物における保存剤の使用は、当業者に周知である。便宜上、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，
１９ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  １９９５を挙げておく。
【００３８】
配合物は、さらに、キレート化剤を含むことができ、キレート化剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸、及びアスパラギン酸の塩、ならびにそれらの混合物から選択することができる。
【００３９】
キレート化剤は、濃度０．１ｍｇ／ｍｌ〜５ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ〜２ｍｇ／ｍｌ、または２ｍｇ／ｍｌ〜５ｍｇ／ｍｌで存在することができる。
【００４０】
医薬組成物におけるキレート化剤の使用は、当業者に周知である。便宜上、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  １９ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  １９９５を挙げておく。
【００４１】
本明細書中記載される化合物の配合物は、さらに、高分子量重合体及び低分子量化合物から選択される安定剤を含むことができ、そのような安定剤として、ポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ３３５０）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、様々な塩（例えば塩化ナトリウム）、Ｌ−グリシン、Ｌ−ヒスチジン、イミダゾール、アルギニン、リシン、イソロイシン、アスパラギン酸、トリプトファン、及びトレオニン、またはそれらの任意の混合物が挙げられるが、これらに限定されない。安定剤は、Ｌ−ヒスチジン、イミダゾール、またはアルギニンであることも可能である。
【００４２】
高分子量重合体は、濃度０．１ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ〜５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ〜２０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ〜３０ｍｇ／ｍｌ、または３０ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌで存在することができる。
【００４３】
低分子量化合物は、濃度０．１ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ〜５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ〜２０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ〜３０ｍｇ／ｍｌ、または３０ｍｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌで存在することができる。
【００４４】
医薬組成物における安定剤の使用は、当業者に周知である。便宜上、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，
１９ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  １９９５を挙げておく。
【００４５】
本明細書中記載される化合物の配合物は、さらに、界面活性剤を含むことができる。実施形態によっては、界面活性剤は、界面活性剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）、エトキシ化ヒマシ油、ポリグリコール化グリセリド、アセチル化モノグリセリド、ソルビタン脂肪酸エステル、ポロキサマー、例えば１８８及び４０７など、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン誘導体、例えばアルキル化及びアルコキシ化誘導体（ｔｗｅｅｎｓ、例えばＴｗｅｅｎ−２０、またはＴｗｅｅｎ−８０）など、モノグリセリドまたはそのエトキシ化誘導体、ジグリセリドまたはそのポリオキシエチレン誘導体、グリセロール、コール酸またはその誘導体、レシチン、アルコール及びリン脂質、グリセロリン脂質（レシチン、ケファリン、ホスファチジルセリン）、グリセロ糖脂質（ガラクトピラノシド）、スフィンゴリン脂質（スフィンゴミエリン）、及びスフィンゴ糖脂質（セラミド、ガングリオシド）、ＤＳＳ（ドクサートナトリウム、ドクサートカルシウム、ドクサートカリウム）、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウムまたはラウリル硫酸ナトリウム）、ジパルミトイルホスファチジン酸、カプリル酸ナトリウム、胆汁酸及びその塩ならびにグリシンまたはタウリン抱合体、ウルソデオキシコール酸、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、Ｎ−ヘキサデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホナート、アニオン性（アルキル−アリール−スルホナート）一価界面活性剤、パルミトイルリゾホスファチジル−Ｌ−セリン、リゾリン脂質（例えば１−アシル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸のエタノールアミン、コリン、セリン、またはトレオニンエステル）、アルキル、アルコキシル（アルキルエステル）、リゾホスファチジル及びホスファチジルコリンのアルコキシ（アルキルエーテル）誘導体、例えばリゾホスファチジルコリンのラウロイル及びミリストイル誘導体、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ならびに極性頭部、すなわちコリン、エタノールアミン、ホスファチジン酸、セリン、トレオニン、グリセロール、イノシトール、及び正電荷を帯びたＤＯＤＡＣ、ＤＯＴＭＡ、ＤＣＰ、ＢＩＳＨＯＰ、リゾホスファチジルセリン、及びリゾホスファチジルトレオニンの修飾物、双性イオン界面活性剤（例えばＮ−アルキル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホナート、３−コールアミド−１−プロピルジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホナート、ドデシルホスホコリン、ミリストイルリゾホスファチジルコリン、ニワトリ卵リゾレシチン）、カチオン性界面活性剤（第四級アンモニウム塩基）（例えばセチルトリメチルアンモニウムブロミド、セチルピリジニウムクロリド）、非イオン性界面活性剤、ポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドブロック共重合体（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ／Ｔｅｔｒｏｎｉｃｓ、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、ドデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド）または重合体界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ−４０、Ｔｗｅｅｎ−８０、Ｂｒｉｊ−３５）、フシジン酸誘導体（例えばタウロ−ジヒドロフシド酸ナトリウムなど）、長鎖脂肪酸及びそのＣ６−Ｃ１２塩（例えばオレイン酸���びカプリル酸）、アシルカルニチン及び誘導体、リシン、アルギニン、もしくはヒスチジンのＮα−アセチル化誘導体、またはリシンもしくはアルギニンの側鎖アシル化誘導体、リシン、アルギニン、もしくはヒスチジンと中性もしくは酸性アミノ酸との任意の組み合わせを含むジペプチドのＮα−アシル化誘導体、中性アミノ酸と２つの電荷を帯びたアミノ酸との任意の組み合わせを含むトリペプチドのＮα−アシル化誘導体から選択することができ、あるいは界面活性剤は、イミダゾリン誘導剤またはそれらの混合物の群から選択することができる。
【００４６】
医薬組成物における界面活性剤の使用は、当業者に周知である。便宜上、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  １９ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  １９９５を挙げておく。
【００４７】
薬学上許容される甘味剤を、本明細書中記載される化合物の配合物の一部にすることができる。薬学上許容される甘味剤として、少なくとも１種の強い甘味剤、例えば、サッカリン、サッカリンナトリウムもしくはカルシウム、アスパルテーム、アセスルファムカリウム、シクラミン酸ナトリウム、アリターム、ジヒドロカルコン甘味剤、モネリン、ステビオシド、またはスクラロース（４，１’，６’−トリクロロ−４，１’，６’−トリデオキシガラクトスクロース）、サッカリン、サッカリンナトリウムもしくはカルシウムなど、及び任意選択で膨張性甘味剤、例えば、ソルビトール、マンニトール、フルクトース、スクロース、マルトース、イソマルト、グルコース、水素化グルコースシロップ、キシリトール、カラメル、及びハチミツなどが挙げられる。
【００４８】
強い甘味剤は、低濃度で都合よく使用される。例えば、サッカリンナトリウムの場合、濃度は、最終配合物の合計体積に基づいて０．０４％〜０．１％（ｗ／ｖ）の範囲が可能であり、または低投薬量配合物では約０．０６％及び高投薬量配合物では約０．０８％である。膨張性甘味剤は、約１０％〜約３５％、または約１０％〜１５％（ｗ／ｖ）の範囲のより多い量で効果的に使用することができる。
【００４９】
本明細書中記載される化合物の配合物は、従来技法により、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １９８５、またはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  １９ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  １９９５に記載されるとおりにして、調製することができ、医薬産業のそのような従来技法には、成分を適切に溶解及び混合して所望の最終製品を得ることが関与する。
【００５０】
「薬学上許容される」または「治療上許容される」という語句は、ヒトに投与した場合に、生理学的に忍容性があり、好ましくは、アレルギー性反応または同様な有害反応、例えば胃不調、めまいなどを、典型的には引き起こさない分子実体及び組成物を示す。本明細書中使用される場合、「薬学上許容される」という用語は、連邦政府または州政府の規制当局により認可されている、あるいは米国薬局方または他の一般に認識されている薬局方（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．  （Ａ．Ｒ．  Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｄｉｔ．  １９８５））に、動物用、より詳細にはヒト用として列挙されているものを意味する。
【００５１】
本明細書中記載される化合物の投与は、当該分野で既知の任意の方法を用いて行うことができる。例えば、投与は、経皮、非経口、静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、頭蓋内、眼窩内、眼内、脳室内（ｉｎｔｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）、関節内、脊髄内、大槽内、腹腔内、脳室内（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）、くも膜下腔内、鼻腔内、エーロゾル、坐剤による、または経口投与が可能である。本明細書中記載される化合物の医薬組成物は、注射による投与用でも、経口、肺内、鼻腔、経皮、眼内投与用でも可能である。
【００５２】
経口投与の場合、本明細書中記載される化合物の医薬組成物は、カプセル剤または錠剤などの単位剤形に配合される。錠剤またはカプセル剤は、薬学上許容される賦形剤を用いて従来の手段により調製することができ、そのような賦形剤として、結合剤、例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、またはヒドロキシプロピルメチルセルロースなど；充填剤、例えば、ラクトース、微結晶性セルロース、またはリン酸水素カルシウムなど；潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、またはシリカなど；崩壊剤、例えば、ジャガイモデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウムなど；あるいは、湿潤剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなどが挙げられる。錠剤は、当該分野で周知の方法により被覆することができる。経口投与用の液体製剤は、例えば、液剤、シロップ剤、または懸濁剤の形を取ることもできるし、使用前に水または他の適切なビヒクルを用いて液状にする乾燥製剤として提供することもできる。そのような液体製剤は、薬学上許容される添加剤を用いて従来の手段により調製することができ、そのような添加剤として、例えば、懸濁化剤、例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体、または水素化食用脂肪など；乳化剤、例えば、レシチンまたはアラビアゴムなど；非水性ビヒクル、例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、または分別植物油など；及び保存剤、例えば、メチルもしくはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾアートまたはソルビン酸などがある。製剤は、緩衝剤塩、香味剤、着色剤、及び／または甘味剤も、適宜含有することができる。所望であれば、経口投与用製剤は、活性化合物の放出制御をもたらすように適切に配合することができる。実施形態によっては、単位剤形は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤と１種または複数のＤＮＡ損傷剤との両方を含む合剤として配合することができる。実施形態によっては、単位剤形は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤を含む第一の組成物及び１種または複数のＤＮＡ損傷剤を含む第二の組成物を示す。複数のＤＮＡ損傷剤が使用される場合、それと同数の単位剤形を調製して使用することができる。
【００５３】
非経口投与用の場合、本明細書中記載される化合物は、薬学上許容されるビヒクルまたはキャリアを用いた組成物に含まれて、静脈内、皮下、または筋肉内注射いずれかにより投与される。化合物は、注射、例えば、ボーラス注射または持続点滴による非経口投与用に配合することができる。注射用配合物は、単位剤形で、例えば、アンプルに入って、または複数用量容器に入って、保存剤が添加された状態で提供することができる。組成物は、油性または水性ビヒクルの懸濁剤、液剤、または乳剤などの形状を取ることができ、配合用作用剤、例えば、懸濁化剤、安定剤、及び／または分散剤を含有することができる。あるいは、活性成分は、使用前に適切なビヒクル、例えば滅菌無パイロジェン水を用いて液状にする粉末状であることができる。
【００５４】
注射による投与の場合、化合物（複数可）は、滅菌水性ビヒクルの溶液にして使用することができ、この溶液は、緩衝剤または保存剤などの他の溶質、ならびに溶液を等張性にするのに十分な量の薬学上許容される塩またはグルコースも含有することができる。本明細書中記載される化合物の医薬組成物は、薬学上許容されるキャリアとともに配合し、注射投与用の滅菌液剤または懸濁剤を提供することができる。注射液は、従来の剤形、液状の液剤または懸濁剤、注射前に液状の液剤または懸濁剤にするのに適した固形、または乳剤いずれかで調製することができる。適切な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、ブドウ糖、マンニトール、ラクトース、レシチン、アルブミン、グルタミン酸ナトリウム、システイン塩酸塩などである。また、所望であれば、注射用医薬組成物は、少量の無毒補助物質、例えば湿潤剤、ｐＨ緩衝剤などを含有することができる。所望であれば、吸収性向上製剤（例えば、リポソーム）を利用することができる。適切な医薬キャリアは、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」ｂｙ  Ｅ．  Ｗ．  Ｍａｒｔｉｎに記載されている。注射用配合物は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤と１種または複数のＤＮＡ損傷剤との組み合わせを含むことができる。注射用配合物は、別々の配合物を１つにまとめることにより調製することもできる。配合物は、順次、または同時もしくはほぼ同時に投与することもできる。
【００５５】
化合物は、直腸用組成物、例えば、坐剤または停留浣腸剤に配合することもでき、例えば、従来の坐剤基材、例えば、カカオバターまたは他のグリセリドを含有する。
【００５６】
そのうえさらに、化合物は、デポー製剤として配合することができる。そのような長時間作用性配合物は、移植（例えば、皮下または筋肉内）により、または筋肉内注射により投与することができる。すなわち、例えば、化合物は、適切な重合体もしくは疎水性材料（例えば、許容される油中の乳剤として）またはイオン交換樹脂とともに、あるいは難容性誘導体として、例えば難容性塩として、配合することができる。
【００５７】
組成物は、所望であれば、活性成分を含有する単位剤形を１つまたは複数含有することができるパックまたは吐出装置に入れて提供することができる。パックは、例えば、金属箔またはプラスチック箔を含むことができ、例えば、ブリスターパックである。パックまたは吐出装置は、投与の説明書を付属させることができる。
【００５８】
本明細書中記載される化合物は、プロドラッグと称する誘導体も含み、プロドラッグは、修飾が常用操作またはｉｎ  ｖｉｖｏいずれかで親化合物に結合するようなやり方で、化合物に存在する官能基を修飾することにより、調製することができる。
【００５９】
投薬量
【００６０】
本明細書中記載される化合物は、１種また複数の本明細書中記載される疾患を予防、治療、または制御するのに治療上有効な用量で患者に投与することができ、そのような疾患として、本明細書中記載されるがんがあるが、これに限定されない。本明細書中記載される化合物を１種また複数含む医薬組成物は、患者に有効な治療反応を誘発するのに十分な量で患者に投与することができる。これを達成するのに適切な量を、「治療上有効量」と定義する。この用量は、使用される特定化合物の有効性及び対象の状態、ならびに体重または治療しようとする範囲の表面積により決定することができる。投与の規模も、特定対象における特定化合物またはベクターの投与に関連する任意の有害作用の存在、性質、及び程度により決定されることになる。
【００６１】
そのような化合物の毒性及び治療有効性は、細胞培養物または実験動物での標準薬学手技により、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％致死用量）及びＥＤ５０（集団の５０％に治療上有効な用量）を測定することにより、決定することができる。ＬＤ５０及びＥＤ５０は、成分単独または組み合わせについて決定することができる。毒性と治療効果の間の用量比は、治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０という比で表すことができる。実施形態によっては、高い治療指数を示す組み合わせが使用される。毒性副作用を示す化合物が使用可能であるものの、そのような化合物で患部組織部位を狙う送達系の設計では、正常細胞に対する損傷の可能性を最小限に抑え、それにより副作用を低減させるように、注意を払わなければならない。実施形態によっては、本明細書中記載される、Ｂ−ｒａｆ阻害剤と１種または複数のＤＮＡ損傷剤との組み合わせを使用することにより、副作用を回避することができる。副作用は、１種または複数の治療薬の用量を減らして使用することにより、回避または低減することができる。
【００６２】
細胞培養アッセイ及び動物実験から得られたデータを使用して、ヒトで使用する場合の投薬範囲を定式化することができる。実施形態によっては、そのような化合物の投薬量は、ほとんどまたはまったく毒性のないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。投薬量は、採用した剤形及び投与経路に応じてこの範囲内で変わり得る。本明細書中記載される化合物のいずれについても、治療上有効量は、最初に細胞培養アッセイから概算することができる。用量は、細胞培養物で決定されたとおりのＩＣ５０（症候の最大半量阻害を達成する試験化合物濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するように動物モデルで定式化することができる。そのような情報は、ヒトでの有用濃度をより正確に決定するのに使用することができる。血漿中レベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により測定することができる。一般に、修飾物質の用量当量は、典型的な対象について約１ｎｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである。
【００６３】
本明細書中記載される化合物及び／またはその薬学上許容される塩の投与の量及び頻度は、患者の年齢、状態、及び体格、ならびに治療する症候の重篤度などの因子を考慮して担当医師の判断により調節されることになる。当該分野の医師及び獣医師なら、症状の進行を防止する、これに対抗する、またはこれを停止させるのに必要な薬物の有効量を容易に決定及び処方することができる。概して、有効量は、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、詳細には０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ体重となることが企図される。必要な用量を、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の分割用量として、適切な間隔で１日がかりで投与することが適切な場合がある。この分割用量は、単位剤形として、例えば、１単位剤形あたり、０．０１〜５００ｍｇ、詳細には０．１ｍｇ〜２００ｍｇの活性成分を含有するように配合することができる。
【００６４】
実施形態によっては、医薬製剤は、単位剤形をしている。そのような剤形では、製剤は、活性成分を適切な量、例えば、所望の目的を達成する有効量で含有する適切な大きさの単位剤形に細分割される。製剤の単位用量中の活性化合物の量は、特定の用途に応じて、約０．０１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約０．０１ｍｇ〜約７５０ｍｇ、約０．０１ｍｇ〜約５００ｍｇ、または約０．０１ｍｇ〜約２５０ｍｇで変わるまたは調節される場合がある。実施形態によっては、対象に投与されるＢ−ｒａｆ阻害剤またはその薬学上許容される塩は、９６０ｍｇ、７２０ｍｇ、４８０ｍｇ、２４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１００ｍｇ、５０ｍｇ、または２５ｍｇを１日２回という量より少ない、約そのぐらいの量、またはその量である。採用される実際の投薬量は、患者の必要量及び治療される症状の重篤度に応じて変わる場合がある。特定の状況に適切な投薬レジメンの決定は、当業者の技能の範囲内にある。便宜を図って、全投薬量は、１日の間に、必要に応じて複数に分割投与される場合がある。
【００６５】
実施形態によっては、１種または複数の本明細書中記載される化合物は、別の化合物とともに投与される。投与は、順次の場合も同時の場合もある。組み合わせは、同一剤形中にある場合も、別個の用量として投与される場合もある。実施形態によっては、第一の化合物は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤であり、他方の化合物は、１種または複数のＤＮＡ損傷剤である。実施形態によっては、ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、５−ＦＵ、シタラビン、メトトレキセート、ピリメタミン、ブレオマイシン、オキサリプラチン、シスプラチン、エトポシド、ドキソルビシン、ビノレルビン、ミトキサントロン、ポドフィロトキシン、アフィディコリン、ホテムスチン、カルムスチン、Ｓ−２３９０６、Ｓ３９、ＳＮ−３８、トポテカン、カンプトテシン、レベッカマイシンなどである。実施形態によっては、ＤＮＡ損傷剤は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤の前に投与される。実施形態によっては、ＤＮＡ損傷剤は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤の、少なくともまたは約１０、２０、３０、４０、５０、６０、１２０、１８０、２４０、３００、または３６０分前に投与される。実施形態によっては、ＤＮＡ損傷剤は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤の、少なくともまたは約１、２、３、４、または５日前に投与される。実施形態によっては、ＤＮＡ損傷剤は、対象にＭＥＫ阻害剤が投与される前に、対象に投与される。実施形態によっては、ＤＮＡ損傷剤は、ＭＥＫ阻害剤の、少なくともまたは約１０、２０、３０、４０、５０、６０、１２０、１８０、２４０、３００、または３６０分前に投与される。実施形態によっては、ＤＮＡ損傷剤は、ＭＥＫ阻害剤の、少なくともまたは約１、２、３、４、または５日前に投与される。
【００６６】
実施形態によっては、Ｂ−ｒａｆ阻害剤の量は、約１ｍｇ〜約１００ｍｇ、約５ｍｇ〜約１００ｍｇ、約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約２５ｍｇ〜約１００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約１００ｍｇ、または約７５ｍｇ〜約１００ｍｇが可能である。実施形態によっては、Ｂ−ｒａｆ阻害剤の量は、約１ｍｇ〜約８０ｍｇ、約１ｍｇ〜約６０ｍｇ、約１ｍｇ〜約４０ｍｇ、約１ｍｇ〜約２０ｍｇ、または約１ｍｇ〜約１０ｍｇが可能である。実施形態によっては、Ｂ−ｒａｆ阻害剤の量は、約５ｍｇ〜約８０ｍｇが可能である。実施形態によっては、Ｂ−ｒａｆ阻害剤の量は、約５ｍｇ〜約２４０ｍｇである。実施形態によっては、ＤＮＡ損傷剤は、１２５０ｍｇ／ｍ２、１０００ｍｇ／ｍ２、８００ｍｇ／ｍ２、６００ｍｇ／ｍ２、４００ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、または５０ｍｇ／ｍ２、２５ｍｇ／ｍ２、１０ｍｇ／ｍ２、または５ｍｇ／ｍ２の用量、または約その用量、またはその用量未満、あるいはそれらの間の任意の範囲で投与される。実施形態によっては、ＤＮＡ損傷剤の用量は、患者または対象にとって、致死量以下の用量と判断される。
【００６７】
本明細書中記載される化合物は、制吐剤とともに投与することもでき、これは制吐剤とも称することができる。そのような作用剤の例として、ドラセトロン、グラニセトロン、オンダンセトロン、トロピセトロン、パロノセトロン、ミルタザピン、アプレピタント、カソピタントなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６８】
医療用途
【００６９】
本明細書中記載される組成物は、がん治療に役立つ可能性がある。そのようながんの例として、黒色腫、膵癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌、前立腺癌、及び乳癌が挙げられるが、これらに限定されない。実施形態によっては、腫瘍は、ＢＲＡＦ変異が陰性である。実施形態によっては、腫瘍は、野生型ＢＲＡＦである。実施形態によっては、腫瘍は、ＢＲＡＦに変異を有する。実施形態によっては、腫瘍は、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ変異を有する。実施形態によっては、腫瘍は、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ変異を持たない。実施形態によっては、腫瘍は、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｋ変異を有する。実施形態によっては、腫瘍は、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｋ変異を持たない。実施形態によっては、腫瘍は、ＫＲＡＳ変異を有する。実施形態によっては、ＫＲＡＳ変異は、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、またはＧ１３Ｄである。実施形態によっては、腫瘍は、ＫＲＡＳ変異を持たない。実施形態によっては、腫瘍は、野生型ＫＲＡＳである。
【００７０】
実施形態によっては、Ｂ−ｒａｆ阻害剤と１種または複数のＤＮＡ損傷剤との組み合わせを投与する前に、腫瘍を変異について分析する。実施形態によっては、腫瘍を、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ変異について分析する。実施形態によっては、腫瘍を、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｋ変異について分析する。実施形態によっては、腫瘍を、ＫＲＡＳ  Ｇ１２Ｃ変異について分析する。実施形態によっては、腫瘍を、ＫＲＡＳ  Ｇ１２Ｄ変異について分析する。実施形態によっては、腫瘍を、ＫＲＡＳ  Ｇ１２Ｖ変異について分析する。実施形態によっては、腫瘍を、ＫＲＡＳ  Ｇ１３Ｄ変異について分析する。実施形態によっては、患者は、ＢＲＡＦに変異が見られない場合にのみ、Ｂ−ｒａｆ阻害剤及びＤＮＡ損傷剤で治療される。実施形態によっては、患者は、ＢＲＡＦに変異が見られる場合にのみ、Ｂ−ｒａｆ阻害剤及びＤＮＡ損傷剤で治療される。実施形態によっては、患者は、ＫＲＡＳに変異が見られない場合にのみ、Ｂ−ｒａｆ阻害剤及びＤＮＡ損傷剤で治療される。実施形態によっては、患者は、ＫＲＡＳに変異が見られる場合にのみ、Ｂ−ｒａｆ阻害剤及びＤＮＡ損傷剤で治療される。
【００７１】
実施形態によっては、がんの治療方法が提供される。実施形態によっては、がんは、黒色腫、膵癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌、前立腺癌、または乳癌である。実施形態によっては、がんは、本明細書中記載されるがんの１種を起源とする転移性がんである。したがって、本明細書の記載によれば、転移性がんの治療方法が提供される。
【００７２】
実施形態によっては、本明細書中記載される方法は、本明細書中記載されるとおりのＢ−ｒａｆ阻害剤と１種または複数のＤＮＡ損傷剤との組み合わせを投与することを含む。実施形態によっては、Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、対象に、１種または複数のＤＮＡ損傷剤と同時に、または１種または複数のＤＮＡ損傷剤と順次（前または後に）投与される。実施形態によっては、本方法は、最初にＢ−ｒａｆ阻害剤を投与すること、及び次いで阻害剤を投与し終わる前に１種または複数のＤＮＡ損傷剤を投与すること、あるいはその逆を含む。そのような投与は、治療薬の重複と称することができる。実施形態によっては、組み合わせはまた、本明細書中記載されるとおり、ＭＥＫ阻害剤またはＥＧＦＲ阻害剤とともに投与される。化合物は、任意の順序で投与することができ、記載は単なる例示にすぎず、限定することを意図しない。実施形態によっては、対象は、ＢＲＡＦ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤で治療される前に、本明細書中記載されるとおりのＤＮＡ阻害剤を投与される。実施形態によっては、対象は、第一工程でゲムシタビン、メトトレキセート、またはピリメタミン（または本明細書中記載される他のＤＮＡ損傷剤）が投与され、続いて対象は、ＢＲＡＦ阻害剤が投与される。これは、前処置と称することもできる。したがって、実施形態によっては、対象は、ＤＮＡ損傷剤で前処置されてから、Ｂ−ｒａｆ阻害剤を投与される。実施形態によっては、ＤＮＡ損傷剤とＢ−ｒａｆ阻害剤及び／またはＭＥＫ阻害剤の投与の間の時間は、約、あるいは少なくとも、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１６、１８、２０、または２４時間である。実施形態によっては、ＤＮＡ損傷剤とＢＲＡＦ及び／またはＭＥＫ阻害剤の投与の間の時間は、約、あるいは少なくとも、１〜２４、１〜１８、１〜１２、１〜８、１〜６、１〜４、４〜１２、４〜１６、４〜２０、４〜２４、８〜１２、８〜１６、８〜２０、８〜２４、１２〜１６、１２〜１８、１２〜２４、１６〜２０、１６〜２４、または２０〜２４時間である。実施形態によっては、ＢＲＡＦ及び／またはＭＥＫ阻害剤は、ＤＮＡ損傷剤が投与されてから１〜１０日後に投与される。実施形態によっては、ＢＲＡＦ及び／またはＭＥＫ阻害剤は、ＤＮＡ損傷剤が投与されてから、約または少なくとも１〜１０日後に投与される。実施形態によっては、ＢＲＡＦ及び／またはＭＥＫ阻害剤は、ＤＮＡ損傷剤が投与されてから、約または少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、後に投与される。このプロトコルは、必要に応じて繰り返すことができ、例えば、例示にすぎないが、１、２、３、４、５、６、７、または８回繰り返される。実施形態によっては、対象は、ＭＥＫ阻害剤を投与されない。
【００７３】
実施形態によっては、本明細書中記載される方法は、対象の腫瘍中のＢＲＡＦ及び／またはＫＲＡＳ変異を検出すること、及びＢＲＡＦ及び／またはＫＲＡＳ変異を有さない対象において、Ｂ−ｒａｆ阻害剤と１種または複数のＤＮＡ損傷剤との組み合わせを用いて対象を治療することを含む。これは、患者が治療の恩恵を確実に受けるようにするために行うことができる。しかしながら、そのような変異について患者が具体的に試験されなければならないというわけではない。実施形態によっては、検出されない変異は、ＢＲＡＦ  Ｖ６００ＥまたはＶ６００Ｋである。実施形態によっては、ＢＲＡＦ及び／またはＫＲＡＳ変異を持つ患者が、本明細書中記載される組み合わせで治療される。実施形態によっては、治療される対象は、野生型ＢＲＡＦ及び変異型ＫＲＡＳである腫瘍を有する。実施形態によっては、変異型ＫＲＡＳは、本明細書中記載される変異を含む。実施形態によっては、治療される対象は、変異型ＢＲＡＦ及び変異型ＫＲＡＳを持つ腫瘍を有する。実施形態によっては、それぞれの変異は、それぞれ本明細書中記載されるものである。実施形態によっては、治療される対象は、変異型ＢＲＡＦ及び野生型ＫＲＡＳを持つ腫瘍を有する。変異はどのような変異でも可能であり、例えば、本明細書中記載されるものである。腫瘍に存在する変異は、任意の方法、例えば、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ゲノム配列決定、ＲＮＡ配列決定、ノーザンブロット、サザンブロット、ウエスタンブロット、またはＢＲＡＦ及び／またはＫＲＡＳの変異を検出するのに使用可能な任意の他の分子技法などにより検出することができる。ＢＲＡＦ及び／またはＫＲＡＳの変異を検出する具体的な方法は、重要ではない。変異は、任意の腫瘍試料で検出することができる。腫瘍試料は、例えば、生検を通じて得ることができる。血液試料も、腫瘍の変異状態を同定するのに使用することができる。試料及び変異の有無を検出する技法は、本明細書中記載される方法にとって重要ではない。
【００７４】
実施形態によっては、薬物耐性腫瘍の治療方法が提供される。実施形態によっては、本方法は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤、またはその薬学上許容される塩、及びＤＮＡ損傷剤を投与することを含む。実施形態によっては、薬物耐性腫瘍は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤からなる治療に耐性がある。実施形態によっては、薬物耐性腫瘍は、転移性腫瘍である。実施形態によっては、転移性腫瘍は、転移性黒色腫、転移性膵臓腫瘍、転移性肺腫瘍、転移性結腸腫瘍、転移性卵巣腫瘍、転移性前立腺腫瘍、転移性肺腫瘍、または転移性乳腫瘍である。実施形態によっては、薬物耐性腫瘍は、黒色腫、膵臓腫瘍、肺腫瘍、結腸腫瘍、卵巣腫瘍、前立腺腫瘍、肺腫瘍、乳腫瘍である。
【００７５】
実施形態によっては、薬物耐性腫瘍は、野生型ＢＲＡＦと特性決定される。実施形態によっては、薬物耐性腫瘍は、変異型ＢＲＡＦと特性決定される。実施形態によっては、変異型ＢＲＡＦは、ＢＲＡＦ  Ｖ６００ＥまたはＶ６００Ｋである。
【００７６】
実施形態によっては、薬物耐性腫瘍は、野生型ＫＲＡＳと特性決定される。実施形態によっては、薬物耐性腫瘍は、変異型ＫＲＡＳと特性決定される。実施形態によっては、薬物耐性腫瘍の治療方法は、さらに、投与工程の前に、対象由来の腫瘍試料で、ＢＲＡＦ  Ｖ６００ＥまたはＶ６００Ｋ変異の有無を検出することを含む。実施形態によっては、本方法は、投与工程の前に、対象由来の腫瘍試料で、ＫＲＡＳ変異の有無を検出することを含む。Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、本明細書中記載される任意のそのような阻害剤が可能である。
【００７７】
実施形態によっては、ＤＮＡ損傷剤は、本明細書中記載される任意のものである。実施形態によっては、ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、５−ＦＵ、シタラビン、メトトレキセート、ピリメタミン、ブレオマイシン、オキサリプラチン、シスプラチン、エトポシド、ドキソルビシン、ビノレルビン、ミトキサントロン、ポドフィロトキシン、アフィディコリン、ホテムスチン、カルムスチン、Ｓ−２３９０６、Ｓ３９、ＳＮ−３８、トポテカン、カンプトテシン、レベッカマイシン、または任意のそれらの薬学上許容される塩である。実施形態によっては、ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、メトトレキセート、及び／またはピリメタミンである。
【００７８】
本明細書中記載されるとおり、実施形態によっては、本明細書中記載される組み合わせは、任意の適切な経路で投与することができ、そのような経路として、１種または複数の薬学上許容されるキャリアを含むビヒクルに入れて、吸入、外用、鼻腔内、経口、非経口（例えば、静脈内、腹腔内、膀胱内、またはくも膜下腔内）、または直腸内経路が挙げられるが、これらに限定されず、それらの割合は、化合物の溶解性及び化学的性質、選択した投与経路、ならびに常識により決定される。
【００７９】
本明細書中提供される実施形態は、キットも提供する。実施形態によっては、キットは、Ｂ−ｒａｆ阻害剤またはその薬学上許容される塩を含む医薬組成物、及びＤＮＡ損傷剤を含む医薬組成物、を含む。実施形態によっては、１つの医薬組成物が両方を含む。実施形態によっては、それらは、別々の医薬組成物である。実施形態によっては、キットは、Ｂ−ｒａｆ阻害剤を含む第一の薬学上許容される容器及びＤＮＡ損傷剤を含む第二の薬学上許容される容器を含む。実施形態によっては、容器は、滅菌されていてパイロジェンを含まない。実施形態によっては、キットは、処方情報を含む。実施形態によっては、処方情報は、野生型Ｂ−ｒａｆ及び／または変異型Ｂ−ｒａｆと特性決定された腫瘍を持つ対象に、Ｂ−ｒａｆ阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を投与するための説明書を含む。実施形態によっては、処方情報は、野生型ＫＲＡＳまたは変異型ＫＲＡＳと特性決定された腫瘍を持つ対象に、Ｂ−ｒａｆ阻害剤及びＤＮＡ損傷剤を投与するための説明書を含む。
【００８０】
本明細書中提供される実施形態は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤を含む医薬組成物及び処方情報を含む容器も提供し、処方情報は、野生型ＲＡＦと特性決定された腫瘍を持つ対象に、Ｂ−ｒａｆ阻害剤をＤＮＡ損傷剤とともに投与するための説明書を含む。実施形態によっては、腫瘍は、黒色腫腫瘍である。実施形態によっては、容器は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤を含むカプセル剤、錠剤、または他の経口剤形を含む。実施形態によっては、Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、またはソラフェニブ、あるいはそれらの薬学上許容される塩である。実施形態によっては、ＤＮＡ損傷剤は、二本鎖切断（ＤＳＢ）、一本鎖切断を引き起こす作用剤、代謝拮抗剤、ＤＮＡ架橋剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、またはアルキル化剤である。実施形態によっては、ＤＮＡ損傷剤は、ゲムシタビン、５−ＦＵ、シタラビン、メトトレキセート、ピリメタミン、ブレオマイシン、オキサリプラチン、シスプラチン、エトポシド、ドキソルビシン、ビノレルビン、ミトキサントロン、ポドフィロトキシン、アフィディコリン、ホテムスチン、カルムスチン、Ｓ−２３９０６、Ｓ３９、ＳＮ−３８、トポテカン、カンプトテシン、レベッカマイシン、またはそれらの任意の薬学上許容される塩である。実施形態によっては、説明書は、さらに、対象に、ＥＧＦＲ阻害剤またはＭＥＫ阻害剤を投与することを提示し、そのような阻害剤は本明細書中記載されるものであるが、それらに限定されない。
【００８１】
定義
【００８２】
特に定義されない限り、本明細書中使用されるすべての技術用語及び科学用語は、当業者が一般的に理解するのと同じ意味を有する。本明細書中記載される組成物及び化合物の実行または試験において本明細書中記載されるものと同様なまたは等価な方法及び材料を使用可能であるものの、適切な方法及び材料を以下に記載する。本明細書中言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参照は、そのまま全体が参照として援用される。矛盾する場合、本明細書が、定義も含めて、優先されることになる。また、材料、方法、及び例は、例示にすぎず、限定することを意図しない。本明細書中記載される組成物及び化合物の他の特長及び利点は、以下の詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかとなる。
【００８３】
本明細書中使用される場合、「薬学上許容される」という語句は、適正な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を起こさずにヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに適しており、合理的な損益比に見合う、化合物、材料、組成物、及び／または剤形を示す。
【００８４】
「医薬配合物」は、さらに、キャリア、溶媒、賦形剤、及び塩が、配合物の活性成分（例えば、本明細書中記載される化合物）と適合性でなければならないことを意味する。当業者には当然のことながら、「医薬配合物」及び「医薬組成物」という用語は、概して、同義であり、これらは、本出願の目的に関して、そのように使用される。
【００８５】
本明細書中使用される場合、「薬学上許容される塩」は、開示される化合物の誘導体を示し、親化合物は、その酸塩または塩基塩を形成することにより修飾されている。薬学上許容される塩の例として、アミンなどの塩基性残基の無機または有機酸塩；カルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機塩；などが挙げられるが、これらに限定されない。薬学上許容される塩として、例えば、無毒無機または有機酸から形成される、親化合物の従来の無毒塩または第四級アンモニウム塩が挙げられる。例えば、そのような従来の無毒塩として、２−アセトキシ安息香酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、重炭酸、炭酸、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、グリコリルアルサニル酸、ヘキシルレゾルシン酸、ヒドラバム酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフトエ酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリルスルホン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ナプシル酸、硝酸、シュウ酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、リン酸、ポリガラクツロン酸、プロピオン酸、サリチル酸、ステアリン酸、ｓｕｂａｃｅｔｉｃ、コハク酸、スルファミン酸、スルファニル酸、硫酸、タンニン酸、酒石酸、及びトルエンスルホン酸から選択される無機及び有機酸に由来するものが挙げられるが、これらに限定されない。本開示は、任意の本明細書中記載される化合物（複数可）の薬学上許容される塩を含む。
【００８６】
薬学上許容される塩は、塩基性または酸性部分を有する親化合物から、従来の化学的手法により合成することができる。一般に、そのような塩は、水または有機溶媒中、あるいは二者の混合物中、一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルなどの非水性媒体中で、遊離酸または塩基形のそのような化合物を、化学量論的量の適切な塩基または酸と反応させることにより調製することができる。適切な塩の一覧は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １８ｔｈ  ｅｄ．，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ，  ＵＳＡ，  ｐ．１４４５  （１９９０）に見られる。
【００８７】
プロドラッグは、医薬の多数の望ましい品質（例えば、溶解性、生体利用能、製造性など）を向上させることが既知であることから、本明細書中記載される化合物は、プロドラッグ形で送達することができ、疾患の治療のため、この形で投与することができる。「プロドラッグ」は、そのようなプロドラッグが哺乳類対象に投与された場合に、ｉｎ  ｖｉｖｏで本明細書中記載される活性親薬物を放出する共役結合した任意のキャリアを含むことを意図する。プロドラッグは、官能基に加えた修飾が常用操作またはｉｎ  ｖｉｖｏいずれかで切断されて親化合物になるようなやり方で、化合物に存在する官能基を修飾することにより、調製される。プロドラッグとして、ヒドロキシ、アミノ、またはスルフヒドリル基が任意の基と結合しており、そのプロドラッグが哺乳類対象に投与された場合に、その任意の基が開裂して遊離ヒドロキシル、遊離アミノ、または遊離スルフヒドリル基をそれぞれ形成する、本明細書中記載される化合物が挙げられる。プロドラッグの例として、本明細書中記載される化合物のアルコール及びアミン官能基の酢酸誘導体、ギ酸誘導体、安息香酸誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８８】
本明細書中使用される場合、「治療する」または「治療」は、症状、疾患、障害などの改善をもたらす任意の効果、例えば、低下、減少、調節、または除去などを含む。疾患状態を「治療する」または疾患状態の「治療」は、哺乳類、特にヒトでの疾患状態の治療を意味し、以下を含む：（ａ）既存の疾患状態を阻止すること、すなわち、その発達またはその臨床症候を停止させること；及び／または（ｃ）疾患状態を緩和すること、すなわち、疾患状態の後退を引き起こすこと。
【００８９】
本明細書中使用される場合、「哺乳類」または「対象」は、ヒト及び非ヒト患者を示す。実施形態によっては、対象とは、治療を必要とする対象である。「対象」及び「患者」は、同義で使用することができる。本明細書中使用される場合、「治療を必要とする」患者とは、治療を必要とすると同定された、または治療の必要があると疑われる対象である。例えば、がんと診断された対象は、治療を必要とする対象とみなすことができる。従来、ＢＲＡＦ変異のない対象は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤の治療を必要とする対象と見なされなかった。なぜなら、そのような対象に、その治療は禁忌であるからである。しかしながら、Ｂ−ｒａｆ阻害剤と１種または複数のＤＮＡ損傷剤との本明細書中記載される組み合わせは、その組み合わせの持つ、そのようなＢＲＡＦ野生型腫瘍をＢ−ｒａｆ阻害剤治療に対して感作させる能力により、まさにそのような対象を、治療を必要とする対象へと変えることができる。
【００９０】
本明細書中使用される場合、「治療上有効量」という用語は、生物活性、例えば疼痛緩和を誘発するのに十分な量でレシピエント中または上に存在する、本明細書中記載される化合物または化合物の組み合わせを示す。実施形態によっては、化合物の組み合わせは、相乗的組み合わせである。相乗効果とは、例えば、Ｃｈｏｕ  ａｎｄ  Ｔａｌａｌａｙ，
Ａｄｖ．  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．  ｖｏｌ．  ２２，  ｐｐ．２７−５５  （１９８４）に記載されるとおり、化合物を組み合わせて投与した場合に、その化合物の効果が、単一作用剤として単独で投与した場合の化合物の効果の相加よりも大きく生じることである。一般に、相乗効果は、化合物の最適以下の濃度で最も明白に実証される。相乗効果は、個々の成分と比較して、組み合わせが持つ、細胞毒性の低下、疼痛減少の増大、または何かしら他の有益な効果に関するものであり得る。
【００９１】
本明細書中使用される全てのパーセンテージ及び比は、特に記載がない限り、重量基準である。
【００９２】
説明全体を通じて、組成物が具体的な成分を有する、含有する、または含むと記載される場合、あるいはプロセスが具体的なプロセス工程を有する、含有する、または含むと記載される場合、本明細書中記載される組成物は、記載される成分から本質的になる、またはその成分のみからなる場合もあること、及び本明細書中記載されるプロセスは、記載されるプロセス工程から本質的になる、またはそのプロセス工程のみからなる場合もあることが企図される。さらに、当然のことながら、工程の順序またはある特定の行動を行う順序は、プロセスが操作可能であり続ける限り、重要ではない。そのうえ、２つ以上の工程または行動を、同時に行うことが可能である。
【００９３】
本開示全体を通じて使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈で明白にそうではないと指示されない限り、複数についての言及も含む。すなわち、例えば、「ａ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ（組成物）」という記述は、１つの組成物だけでなく、そのような組成物が複数ある場合も含み、「ａ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔ（治療薬）」という記述は、１種または複数の治療薬及び／または薬学作用剤及び当業者に既知であるその等価物についての言及である、などである。すなわち、例えば、「ａ  ｈｏｓｔ  ｃｅｌｌ（宿主細胞）」という記述は、そのような宿主細胞が複数ある場合も含み、「ａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ（抗体）」という記述は、１つまたは複数の抗体及び当業者に既知であるその等価物についての言及である、などである。
【００９４】
本明細書中記載される化合物は、既知の方法に従って調製することができる。
【実施例】
【００９５】
実施例
【００９６】
以下の実施例は、本明細書中記載される方法及び組成物の模範例であるが、限定するものではない。治療で普通に遭遇する様々な条件及びパラメーターならびに当業者に明白である他の適切な修飾及び適合は、本明細書中記載される化合物及び方法の精神及び範囲に含まれる。
【００９７】
実施例１：ゲムシタビンは、ベムラフェニブの治療効果を向上させる
【００９８】
細胞を、１ウェルあたり約２５０，０００個で播種した。約２４時間後、化合物を、図１Ａ及び図１Ｂに示すとおり、単独でまたは組み合わせて投与した。約４８時間後、細胞を収穫して計測した。図１Ａ及び図１Ｂは、ベムラフェニブとゲムシタビンの相乗効果を示す。化合物の組み合わせが、野生型ＢＲＡＦである細胞型においてさえも有効であったことは、驚くべき結果であった。
【００９９】
図２Ａ及び図２Ｂは、ベムラフェニブとゲムシタビンの組み合わせが、細胞のベムラフェニブに対する感受性を約１００倍上昇させたことを示す。細胞は、野生型ＢＲＡＦを有する腺癌に由来するものである。したがって、ベムラフェニブが細胞の死滅に有効であることはあまり期待できなかった。しかしながら、ベムラフェニブをゲムシタビンと組み合わせた場合に、細胞は、感作されて、ベムラフェニブ治療に反応するようになることがわかった。図１Ａ、図１Ｂ、図２Ａ、及び図２Ｂからわかるとおり、各作用剤を単独で使用した場合には、その結果は観測されず、組み合わせて使用した場合にのみ観測された。この組み合わせは、各化合物の１種または複数をより少ない量で使用しても、有意な細胞死滅を達成することができた。この組み合わせは、各化合物単独よりも良好に、相乗効果的量で、コロニー形成も阻害した（データは示さず）。
【０１００】
野生型Ｂ−ｒａｆ及び変異型ＫＲＡＳ（Ｇ１２Ｃ）を持つ転移性がん細胞株を、様々な条件下、ゲムシタビン及びベムラフェニブで処理した。細胞は、両方の作用剤で、同時または順次いずれかで処理した。順次は、すなわち最初にゲムシタビン、続いてベムラフェニブ、または最初にベムラフェニブ、続いてゲムシタビンいずれかであった。作用剤を細胞から洗い落とした後、細胞にコロニーを形成させた。細胞を固定し（濃メタノール）、０．４％クリスタルバイオレットの２０％エタノール溶液で染色し、５９５ｎｍで吸光度を読むことでコロニーを定量した。以下の表に示すとおり、結果は、ゲムシタビンに続いてベムラフェニブを加える順次添加が、同時処理またはベムラフェニブ（薬物Ａ）を加えてからゲムシタビン（薬物Ｂ）を加えた場合と比べて、コロニー形成の減少を招いたことを示す。
【０１０１】
【表１】
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これらの結果を、図３Ａ及び図３Ｂにも図示する。
【０１０２】
どのような特定の理論にも固執するつもりはないが、この結果は、ＷＴ  ＢＲＡＦ／変異型ＫＲＡＳ細胞を、細胞のＳ期での停止を引き起こすＤＮＡ損傷剤（ゲムシタビン）を致死量以下の用量で用いて刺激することによると思われる、すなわち、もし他のＤＮＡ損傷剤（ドキソルビシン、エトポシド）をＧ２期で用いたならば、ベムラフェニブ、または本明細書中開示されるものなど他のＢ−ｒａｆ阻害剤の添加は、細胞周期の停止を受けて、ＭＡＰＫ経路を活性化し、停止細胞は、損傷した非複製ＤＮＡを用いて増殖しようと試みる。そうすると、細胞は生存することができず、死滅する。ＤＮＡ損傷剤を用いて細胞を刺激しない場合は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、通常どおり、ＭＡＰＫ経路を活性化し、野生型Ｂ−Ｒａｆを持つ腫瘍細胞の増殖の向上を招く。野生型Ｂ−Ｒａｆは、Ｂ−ｒａｆ阻害剤のラベルに禁忌とある。
【０１０３】
これらの結果は、ベムラフェニブ、及び他のＢ−ｒａｆ阻害剤のラベルを考慮すると驚くべきことである。ラベルには、医師に、ベムラフェニブ治療の前に腫瘍検体のＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ変異についてエビデンスを確認するよう指示がある。なぜなら、野生型Ｂ−ｒａｆ腫瘍でそのような阻害剤を使用することは、有害効果を生じる可能性があるからである。したがって、ベムラフェニブが、処置した細胞型において有効であることはあまり期待できず、ベムラフェニブの効果が、二本鎖切断を引き起こす作用剤であるゲムシタビンなどのＤＮＡ損傷剤と組み合わせることにより相乗的に向上することもあまり期待できなかった。細胞を死滅させる能力は、ＫＲＡＳ変異には関係なく、このことも驚くべきまた予期せぬことであった。なぜなら、以前のエビデンスは、ベムラフェニブがＫＲＡＳ変異型腫瘍において有効ではなかったことを示すからである。
【０１０４】
実施例２：
ベムラフェニブ耐性ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の同定及び特性決定。ＳＫ−ＭＥＬ−２８ベムラフェニブ耐性細胞株を、薬物選抜を介してＳＫ−ＭＥＬ−２８親細胞から単離した。ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１は、増殖速度も、親細胞株より高かった（図４Ａ）。ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞は、倍加時間が１６時間であったのに対して、親細胞は倍加時間が２３．１時間であった。コロニー形成アッセイは、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞が、その親細胞株よりもベムラフェニブに対して耐性があったことを明らかにした（図４Ｂ）。ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞は、ベムラフェニブのＩＣ５０が約３０μΜであったが（データは示さず）、親細胞株は、ＩＣ５０が約１μΜであった（図４Ｂ）。質量分析（ＭＳ）解析は、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１が、ベムラフェニブ治療への反応で、親細胞株とは異なるプロテオミクスプロファイルを有することを明らかにした。ＦＡＭ１２９Ｂが、ベムラフェニブで処理したＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞とビヒクルで処理したＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の間で、３番目に高い差示的発現を有するとして、同定された（表２）。
【０１０５】
【表２】
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【０１０６】
細胞質ＦＡＭ１２９Ｂ存在量は、ビヒクル処理に比べてベムラフェニブ処理で約６倍増加した（図５Ａ）。興味深いことに、ＦＡＭ１２９Ｂ存在量は、親ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞では、ベムラフェニブ処理に反応して減少した。これらの傾向は、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞には活性ＭＡＰＫ経路があるが、ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞にはないことを示した。そのうえさらに、ＦＡＭ１２９Ｂタンパク質の傾向は、観測された細胞増殖の誘導を支持し、ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞に比べて、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の浸潤の可能性が上昇することを示唆した。
【０１０７】
重要なことは、セリン生合成経路タンパク質が、耐性細胞と感受性細胞の間で、ベムラフェニブに反応して、規定された経路内のタンパク質で最も発現に差が出たことであった。経路の３種の酵素全て（ＰＨＧＤＨ、ＰＳＡＴ１、ＰＳＰＨ）ならびにセリン−ｔＲＮＡリガーゼＳＡＲＳ（細胞質）及びＳＡＲＳ２（ミトコンドリア）は、ベムラフェニブと接触したＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞で、ビヒクルと接触した細胞と同等またはそれより多い存在量で発現したが、反対の傾向が親細胞で観察された（データは示さず）。ＰＨＧＤＨ抗体を用いたウエスタンブロット法により、ＭＳ分析を通じて観測された傾向が確認された（図５Ｂ）。ＭＳデータと一致して、ウエスタンブロットから、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞では、ベースラインＰＨＧＤＨ発現が親細胞よりも上昇したことが明らかとなった（図５Ｂ）。さらに、ウエスタンブロットから、ＰＨＧＤＨレベルが、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞でベムラフェニブ処置後に上昇しことが明らかとなり（図５Ｂ）、これはＭＳデータと一致した（示さず）。
【０１０８】
ＰＨＧＤＨは、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞のベムラフェニブ耐性に必須である：ＰＨＧＤＨは、３−ホスホグリセリン酸から３−ホスホヒドロキシピルビン酸への変換を触媒する酵素であり、セリン合成経路の第一工程に含まれる。セリン合成がベムラフェニブ耐性に重要であるかどうかを直接試験するため、本発明者らは、ｓｉＲＮＡを用いて、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞株及びＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞株でＰＨＧＤＨを枯渇させた（図１３）。ＰＨＧＤＨ  ｓｉＲＮＡは、ベムラフェニブ処理後のＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞死を大幅に増加させたが、親ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞のベムラフェニブによる細胞死にはまったく追加効果を有さなかった（図６Ａ及び図６Ｂ）。対照ｓｉＲＮＡ処理で、各細胞株のベムラフェニブ処置後の細胞生存率のベースラインを確立した。ＰＨＧＤＨ  ｓｉＲＮＡ＋ベムラフェニブ処理は、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞ではベースライン未満への細胞生存率の低下を示したが（図６Ｂ）、親細胞では示さなかった（図６Ａ）。
【０１０９】
メトトレキセートは、選択的にＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞をベムラフェニブに対して感作させる：セリン生合成タンパク質は、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞で選択的に誘導され、親ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞では誘導されないので、本発明者らは、セリン合成が葉酸回路に寄与するかどうかを調べた。なぜなら、セリンは、葉酸回路の直接のインプットだからである。葉酸回路は、がん細胞でＤＮＡ合成及び修復に重要なチミジル酸の生成を招くテトラヒドロ葉酸（ＴＨＦ）の生成に必要である（Ｔｅｄｅｓｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３）。さらに、同じ試験から、セリンからグリシンへの変換及び葉酸回路の両方が、腫瘍由来細胞株の細胞質ゾルでのＡＴＰ産生の一炭素代謝回路の前駆体に寄与することが実証された。葉酸代謝拮抗剤であるメトトレキセートは、ジヒドロ葉酸レダクターゼ及びチミジル酸シンターゼを阻害し、したがってヌクレオチド合成を阻害する（Ｓｎｅａｄｅｒ，  ２００６）。メトトレキセートは、腫瘍由来細胞株でＡＴＰレベルを低下させることも示されている（Ｔｅｄｅｓｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３）。葉酸回路におけるセリンの重要性と一致して、メトトレキセート（７５ｎＭ）は、ベムラフェニブ処理後のＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の死滅を有意に増加させた（図６Ｄ）。対照的に、親ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞では、メトトレキセート／ベムラフェニブ処理による有意差での死滅はなかった（図６Ｃ）。
【０１１０】
セリンの枯渇は、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞をベムラフェニブに対して感作させる：セリン合成下流の葉酸回路をメトトレキセートで妨害することが、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞をベムラフェニブに対して感作させることになったので、本発明者らは、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１ベムラフェニブ耐性に対する細胞外セリン枯渇の効果を調べた。本発明者らは、コロニー形成アッセイにおいてＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の細胞播種及び薬物処理の間、セリン、グルコース、及びグリシン枯渇培地を用いた。薬物処理後、細胞に完全培地を再供給し、増殖させてコロニーを形成させた。コロニー形成アッセイの定量化から、セリン枯渇条件下、ベムラフェニブ処理後のＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞で、細胞死の増加が明らかとなった（図６Ｅ）。ベムラフェニブ用量２．５μΜ及び５μΜで、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞は、セリン枯渇で＞５０％の細胞死を示したが、完全培地では示さなかった。本発明者らは、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞のベムラフェニブ耐性に対する、高濃度細胞外セリンの効果も調べた。多量の細胞外セリンは、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞のベムラフェニブ耐性に影響を及ぼさなかった（データは示さず）。まとめると、このデータは、ベースラインの細胞外セリンレベルが、ベムラフェニブストレス条件下、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の生存に重要であることを示す。
【０１１１】
ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞のベムラフェニブに対する増感剤としてのゲムシタビンの同定：葉酸回路は、ＤＮＡ修復中のヌクレオチド生成に重要であり、ＰＨＧＤＨ、ＰＳＡＴ１、及びＰＳＰＨタンパク質レベルは、ゲノム不安定性の条件下で上昇することが示されてきた（Ｍａｒｋｋａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１５）。したがって、本発明者らは、ＤＮＡ架橋剤、トポイソメラーゼ阻害剤、及びヌクレオシド類似体をはじめとする複数クラスのＤＮＡ損傷剤を、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞のベムラフェニブに対する増感剤の候補として試験した。ヌクレオシド類似ゲムシタビンは、併用した場合にＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞をベムラフェニブに対して有意に感作したが、この組み合わせ処理は、ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞をベムラフェニブ単独処理よりも感作することはなかった（図７Ａ及び図７Ｂ）。コロニー形成アッセイで、５０ｎＭ用量のゲムシタビンを、様々な用量のベムラフェニブに加えた。重要なことは、ＰＨＧＤＨ  ｓｉＲＮＡ処理が、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の細胞死を、ゲムシタビン／ベムラフェニブ組み合わせ処理で観測された細胞死よりも増加させたが、ゲムシタビン／ベムラフェニブ組み合わせで処理されたＳＫ−ＭＥＬ−２８親細胞の細胞死は増加させなかったことである（図７Ｃ及び図７Ｄ）。さらに、メトトレキセートは、ゲムシタビン／ベムラフェニブ組み合わせと並行して処理した場合にＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の細胞死を有意に増加させたが、ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞では増加させなかった（図７Ｅ及び図７Ｆ）。重要なことは、併用指数（ＣＩ）計算値が、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞において、試験した全ての用量で、ゲムシタビンとベムラフェニブの間に相乗効果を示したことである（図７Ｇ、表３（以下）、図１４Ａ）。
【０１１２】
【表３】
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【０１１３】
ベムラフェニブは、膵臓及び非小細胞肺癌細胞をゲムシタビンに対して感作させる：ゲムシタビンは、膵癌の第一選択治療である。そこで、本発明者らは、４種の膵臓細胞株（ＢｘＰＣ３、Ｐａｎｃ１、ＭｉａＰａｃａ２、及びＢｘＰＣ３Ｍ１）を、ベムラフェニブ処理を介したゲムシタビン感作について調べた。様々なゲムシタビン用量及び１μΜの一定ベムラフェニブ用量を用いたところ、コロニー形成アッセイは、ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞が、ベムラフェニブによりゲムシタビンに対して有意に感作されたことを明らかにした（図８Ａ）。重要なことは、併用指数（ＣＩ）計算値が、ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞で、特定用量でゲムシタビンとベムラフェニブの間の相乗効果を示したことである（図８Ｂ、表４、図１４Ｂ）。最大（５０００ｎＭ）及び最低（５ｎＭ及び１０ｎＭ）ゲムシタビン用量は、ゲムシタビンとベムラフェニブの間の競合性を示した。しかしながら、２５ｎＭ〜１０００ｎＭのゲムシタビン用量は、これら２種の薬物間の相乗効果を示した。さらに、ゲムシタビンは、進行非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、特に高齢者及び治療に向かない患者において、その治療に有効でもあった（Ｈａｙａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１）。本発明者らは、ステージ４の腺癌ＮＳＣＬＣ細胞株ＮＣＩ−Ｈ２１２２で試験した。本発明者らは、１μΜのベムラフェニブがＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞をゲムシタビンに対して感作したことを観察した（図８Ｃ）。
【０１１４】
【表４】
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【０１１５】
ベムラフェニブは、膵臓癌細胞でセリン合成タンパク質を誘導する：次に、本発明者らは、膵臓癌細胞増殖に対するベムラフェニブ処理の効果を試験した。試験した全４種の細胞株（ＢｘＰＣ３Ｍ１、ＢｘＰＣ３、Ｐａｎｃ１、及びＭｉａＰａｃａ２）は、ＷＴ  ＢＲＡＦを表出する。２０１０  Ｎａｔｕｒｅの研究（Ｇｅｏｒｇｉａ  Ｈａｔｚｉｖａｓｓｉｌｉｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）に基づいて、予想どおり、ベムラフェニブ処理（１０μΜ）は、全４種の細胞株の増殖の増加をもたらした（図９Ａ、図９Ｂ、図９Ｃ、及び図９Ｄ）。セリン合成は腫瘍細胞の増殖の増加と相関することが示されているので、本発明者らは、膵臓細胞株のプロテオミクスプロファイルをＭＳで比較した。予想どおり、ＰＨＧＤＨ、ＰＳＡＴ１、ＰＳＰＨ、及びＳＡＲＳタンパク質存在量は、試験した全４種の細胞株で増加した（図９Ｅ、図９Ｆ、図９Ｇ、及び図９Ｈ）。重要なことは、ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞は、試験した他の３種の細胞株に比べて全４種のタンパク質の存在量の増加を、最も大きく表出したことである。さらに、メトトレキセート処理とゲムシタビン＋ベムラフェニブとの組み合わせは、メトトレキセートのないゲムシタビン＋ベムラフェニブ処理に比べて、ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞及びＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞の細胞死を増加させた（図１０Ａ及び図１０Ｂ）。次に、本発明者らは、ＢｘＰＣ３Ｍ１ベムラフェニブ耐性に対する細胞外セリン枯渇の効果を調べた。本発明者らは、コロニー形成アッセイにおいて、細胞播種及びＢｘＰＣ３Ｍ１細胞の薬物処理中に、セリン、グルコース、及びグリシン枯渇培地を使用した。薬物処理後、細胞に完全培地を再供給し、コロニーを形成させた。コロニー形成アッセイの定量化から、セリン枯渇条件下、ベムラフェニブ処理後にＢｘＰＣ３Ｍ１細胞の細胞死が有意に増加することが明らかとなった（図１０Ｃ）。５μΜのベムラフェニブ用量で、ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞は、セリン枯渇培地で＞５０％の細胞死を示したが、完全培地では示さなかった。
【０１１６】
別のＢＲＡＦ阻害剤であるダブラフェニブは、がん細胞をゲムシタビンに対して感作させる：ベムラフェニブと同様に、ダブラフェニブは、転移性黒色腫に対して効力を有するＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ阻害剤である（Ｍｅｎｚｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２；Ｓｐａｇｎｏｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１５）。本発明者らは、ダブラフェニブの、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞、ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞、及びＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞を感作させる有効性を試験した。各疾患状態の第一選択薬は、様々な用量で与えられた。ダブラフェニブは、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ変異を持つ転移性黒色腫の第一選択薬と見なされており、一方ゲムシタビンは、膵癌及びＮＳＣＬＣの第一選択薬である。ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の場合、ゲムシタビン用量を５０ｎｍで一定に保ち、ダブラフェニブの用量を変化させた。対照的に、膵癌及びＮＳＣＬＣ細胞株では、ダブラフェニブ用量を１μΜで一定に保ち、ゲムシタビンの用量を変化させた。興味深いことに、ダブラフェニブ処理は、ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞及びＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞をゲムシタビンに対して感作させ（図１１Ａ及び図１１Ｂ）、ゲムシタビンは、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞をダブラフェニブに対して感作させた（図１１Ｃ）。
【０１１７】
考察：本発明者らは、ベムラフェニブ耐性ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞（ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１）を単離して、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ阻害剤耐性の機構を調べた。本発明者らのプロテオミクスデータは、ベムラフェニブに対する反応でＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞とその親ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞のタンパク質シグネチャーに差異を認めた。セリン生合成経路酵素レベル（ＰＨＧＤＨ、ＰＳＡＴ１、及びＰＳＰＨ、ならびにセリンｔＲＮＡ−リガーゼＳＡＲＳ１／２）は、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞のベムラフェニブ処理に反応して上昇することが観察された。対照的に、上記のタンパク質の全５種が、ＳＫ−ＭＥＬ−２８親細胞のベムラフェニブ処理に反応して減少した。その後のウエスタンブロット法から、ＭＳアッセイで観察されたタンパク質の傾向を確認した。これらの結果から、本発明者らは、セリン合成が、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞のベムラフェニブ耐性に重要であると仮定した。セリン合成は、がん細胞増殖に重要であることが示されている（Ｌａｂｕｓｃｈａｇｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１４）。Ｌａｂｕｓｃｈａｇｎｅらによる最近の研究から、がん細胞増殖中のヌクレオチド及びアミノ酸合成に重要であるのは、セリンであってグリシンではないことが示された。実際、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞（倍加時間１６時間）は、ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞（倍加時間２３．１時間）よりも速い増殖速度を有した。ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞でベムラフェニブに反応して誘導されるセリン生合成についての本発明者らのプロテオミクス観察は、セリン合成と正の相関がありがん細胞生存率を高めるという公表された報告を支持する（Ｍａｔｔａｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１６；  Ｐｏｓｓｅｍａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１）。
【０１１８】
ｓｉＲＮＡを介したＰＨＧＤＨ破壊後のコロニー形成アッセイから、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１のベムラフェニブ耐性に対するＰＨＧＤＨ遺伝子産物の重要性を確認した。このデータは、メトトレキセート処理後のコロニー形成アッセイと合わせて、セリン合成が、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の耐性シグネチャーの重要要素であることを裏付けた。ＰＨＧＤＨは、セリン生合成経路の第一工程である、３−ホスホグリセリン酸から３−ホスホヒドロキシピルビン酸への変換を触媒する。さらに、乳癌及び黒色腫でＰＨＧＤＨ遺伝子増幅が報告されている（Ｂｅｒｏｕｋｈｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０；  Ｌｏｃａｓａｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１；  Ｐｏｓｓｅｍａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１）。事実、ある特定の乳癌細胞型は、ＰＨＧＤＨ遺伝子発現の上昇を通じたセリン合成流速の増加に依存することが示されている（Ｐｏｓｓｅｍａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１）。さらに、ＮＳＣＬＣでは、ＰＨＧＤＨ遺伝子増幅及び過剰発現が、侵襲性疾患と正の相関を有する（ＤｅＮｉｃｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１５）。重要なことは、ＰＨＧＤＨ遺伝子が、転移性黒色腫で増幅される場合が多く、そのノックダウンは細胞生存度に負の影響を及ぼすことである（Ｍｕｌｌａｒｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１）。ＰＨＧＤＨ破壊により誘導されたベムラフェニブ感作は、乳癌におけるＢＲＣＡ１破壊及びプラチナ系化学療法の話を連想させる。
【０１１９】
セリン生合成は、ヌクレオチド及びアミノ酸代謝に関与する複数の経路の上流に位置して、それらに供給される。具体的には、葉酸回路は、ヌクレオチド代謝に寄与する。本発明者らは、ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞及びＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の生存度に対して、葉酸代謝拮抗剤であるメトトレキセートをベムラフェニブと組み合わせて試験した。メトトレキセートは、選択的に、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞をベムラフェニブに対して感作させた。メトトレキセートは、ＳＯＧ（セリン−一炭素回路−グリシン開裂）として知られる代替代謝経路中のセリン生合成の下流に位置する葉酸回路を阻害することが知られており、ＳＯＧは、増殖中のがん細胞で活性化する（Ｔｅｄｅｓｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３）。そのうえ、セリン枯渇実験は、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１ベムラフェニブ耐性にはベースラインレベルの細胞外セリンが必要であることを実証した。最近の研究から、ＢＲＡＦ阻害剤耐性黒色腫細胞は、細胞増殖の誘導中に酸化的代謝へと切り替わる必要があることが同定された（Ｂａｅｎｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１６）。事実、耐性細胞は、増殖のためにグルコースではなくグルタミンに過度に依存することが報告されている。興味深いことに、グルタミンから触媒変換されるグルタミン酸は、セリン生合成経路の第二工程の前駆体である。酵素ＰＳＰＨは、３−ホスホヒドロキシピルビン酸からホスホセリンへの変換中の、グルタミン酸からα−ケトグルタル酸への変換を触媒する。本発明者らは、可能性として、記載した増殖中の酸化的代謝への切り替えの結果としてセリン合成が本発明者らのＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞で活性であると仮定する。ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞のグルタミン依存性を調べるためにさらなる研究が必要である。
【０１２０】
高信頼度のヒットの中でも特に、ＦＡＭ１２９Ｂは、ベムラフェニブ治療に関して２種の細胞株間で最も発現に差が出たタンパク質の１種として同定された。ＦＡＭ１２９Ｂは、接着結合関連タンパク質であり、Ｎｉｂａｎ様タンパク質１としても知られる。ＦＡＭ１２９Ｂは、Ｂ−ＲＡＦ／ＭＡＰＫＫ／ＥＲＫシグナル伝達カスケードにより４つのセリン残基でホスホリル化され（Ｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９）、またＦＡＭ１２９Ｂは、ＭＡＰＫ経路が活性な条件下でのみ、黒色腫細胞の細胞質全体に分散していることが知られている。ＭＡＰＫカスケードを化学阻害剤ＵＯ１２６で阻害すると、ＦＡＭ１２９Ｂの細胞膜局在化が引き起こされた。Ｓｍａｌｌｅｙらは、ＦＡＭ１２９Ｂ過剰発現が、黒色腫細胞の侵襲能を高めることを示した（Ｓｍａｌｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６）。ＦＡＭ１２９Ｂは、黒色腫において、ＭＡＰＫカスケード下流の複数のシグナル伝達経路に影響を及ぼす（Ｃｏｎｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３）。本発明者らのアッセイでは、細胞質ＦＡＭ１２９Ｂタンパク質存在量は、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞では、ベムラフェニブ処理後に増加したが、ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞では減少した。したがって、本発明者らのＭＳアッセイでのＦＡＭ１２９Ｂタンパク質傾向は、ベムラフェニブが、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞ではＭＡＰＫ経路活性化を誘導するが、ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞では誘導しないことを示唆した。さらに、ＭＡＰＫ活性化は、ベムラフェニブがＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞で細胞増殖を誘導する可能性があることを示唆し、このことはセリン合成誘導が観察されたことを支持する。本発明者らは、現在、ＦＡＭ１２９Ｂを、転移性黒色腫細胞におけるベムラフェニブ耐性のバイオマーカー候補として調査中である。
【０１２１】
興味深いことに、葉酸回路は、細胞増殖中のヌクレオチドプールの補充に寄与することが知られており、ＤＮＡ損傷は、ヌクレオチドの生成を誘導する。そのうえ、ＤＮＡ損傷及びゲノム不安定の条件下、３種のセリン合成酵素のレベルは全て上昇することが示されている（Ｍａｒｋｋａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１５）。本発明者らは、複数のＤＮＡ損傷剤を、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞のベムラフェニブに対する増感剤として試験した。ゲムシタビンは、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞を薬物で前処理してからベムラフェニブを添加する場合に、増感剤であると同定された。併用指数計算値から、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞におけるゲムシタビンとベムラフェニブの間の相乗効果が明らかとなった。ゲムシタビンは、デオキシシチジン類似体であり、膵臓（Ｆｅｌｄｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９；  Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８；  Ｒｕｂｉｎ  ａｎｄ  ｄｅ  Ｓａｕｖａｇｅ，  ２００６）及び肺癌（Ｂｒｏｄｏｗｉｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６；  Ｃｌｅｇｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１；  Ｅｄｅｉｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１；  Ｔｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８）をはじめとする複数の腫瘍型に対する第一化学療法となっている。ゲムシタビンは、ｐ５３変異細胞では細胞周期Ｓ期の複製フォーク崩壊の結果としてＤＮＡ二本鎖切断（ＤＳＢ）を引き起こし、ｐ５３ＷＴ細胞ではＧ１期のＰＵＭＡ（Ｐｉｅｔｅｎｐｏｌ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４；  Ｑｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２）及びＢａｘ（Ｃｈｉｐｕｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４；  Ｅｒｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４）介在型細胞死プログラムを通じたアポトーシスを誘導する。しかしながら、膵臓及び肺癌腫瘍細胞のｐ５３及び他の遺伝子で一般的に生じる変異（Ｍｕｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｖｏｕｓｄｅｎ，  ２０１４）は、ゲムシタビンに対する耐性を獲得させ（Ｂｅｒｇｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２；  Ｆｒｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１；  Ｏｈｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８）、その結果、無病生存率が低くなる（Ｐａｕｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３；  Ｗｏｌｆｇａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３）。ｐ５３変異型癌細胞は、ｎＭ用量でのゲムシタビン治療後にＳ期で停止するようになるが、死滅はしない。一方で、ｐ５３ＷＴ細胞は、同一用量で、Ｇ１停止後に死滅する（Ｓｅｎｔｕｒｋ  ａｎｄ  Ｍａｎｆｒｅｄｉ，  ２０１３）。ｐ５３、ＢＲＡＦ、及びＫＲＡＳのようなゲートキーパー遺伝子での変異は、自然ながん細胞進行において一般的な事象であり（Ｂａｒｄｅｅｓｙ  ａｎｄ  ＤｅＰｉｎｈｏ，  ２００２；  Ｍｅａｃｈａｍ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  ２０１３）；したがって、がん細胞が転移に向けて進歩するというがん細胞の持つ薬物のＤＮＡ損傷効果に抵抗する生得能力は、特に問題となる。それにもかかわらず、ゲムシタビンは、依然として、進行型膵癌（ＰＣａ）に対する第一選択治療である。
【０１２２】
薬物添加の順序は、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞における本発明者らのゲムシタビン／ベムラフェニブ組み合わせの成功に重要であった。同時薬物処理またはベムラフェニブもしくはダブラフェニブ前処理に続いてゲムシタビン処理する実験は、目立った感作を表出しなかった（データは示さず）。本発明者らは、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞が、ゲムシタビンにより引き起こされたＤＮＡ二本鎖切断の結果として、Ｓ期で停止すると仮定する。結果として、本発明者らが停止細胞をベムラフェニブで処理すると、ＭＡＰＫカスケードが活性化されて、セリン生合成及び葉酸回路が誘導される。本発明者らは、これら一連の事象がＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞で最終的に細胞死を招くと考える。ゲムシタビン／ベムラフェニブ組み合わせを介したＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞死を完全に特性決定するために、さらなる実験が必要である。本発明者らは、ＤＮＡ損傷がＤＮＡ修復のためＳＫ−ＭＥＬ２８ＶＲ１細胞で細胞周期停止を誘導し、葉酸回路及びヌクレオチド合成の活性化を開始すると仮定する。細胞は停止するものの、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ阻害剤治療は、ＭＡＰＫ経路を活性化して、セリン合成及びヌクレオチド合成を誘導する。２つの相克的経路が細胞のヌクレオチドプールを枯渇させることにより、細胞死が引き起こされる。
【０１２３】
次に、本発明者らは、本発明者らのベムラフェニブ研究をＢＲＡＦ  ＷＴ癌細胞株で繰り返した。ＢＲＡＦ  ＷＴ癌細胞株は、生来、この薬物に反応しない。ベムラフェニブは、ＢＲＡＦ  ＷＴ背景を持つ細胞の増殖を増加させることが知られているため、本発明者らは、ベムラフェニブ処理条件下では、セリン生合成が、細胞の生存及び増殖に重要である可能性があると仮定した。本発明者らは、ＢＲＡＦ  ＷＴであり本質的にベムラフェニブ耐性である複数のがん細胞株を調べた。本発明者らは、膵臓、ＮＳＣＬ、乳房、及び結腸癌細胞を試験した。実際、ＭＳ試験は、セリン生合成経路が、ＢＲＡＦ  ＷＴ膵臓癌細胞において、ベムラフェニブ処理に反応して大幅に誘導されると同定した。ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞は、薬物処理された膵臓癌細胞株のセリン合成酵素の増加が最も大きかった。次いで、本発明者らは、ベムラフェニブ用量を一定に保ちながらゲムシタビンを様々な用量で試験した。１種の膵臓癌細胞株（ＢｘＰＣ３Ｍ１）及び１種のＮＳＣＬ癌細胞株（ＮＣＩ−Ｈ２１２２）を、ゲムシタビン／ベムラフェニブ組み合わせ処理で感作させた。薬物の添加順序は、感作に大きな役割を果たした。ゲムシタビン前処理は、Ｂ−ｒａｆ阻害剤と組み合わせた場合に、感作に相乗効果を示した。併用指数計算値から、２５ｎＭ〜１０００ｎＭのゲムシタビン用量で、ゲムシタビンとベムラフェニブの間に相乗効果が明らかとなった。この２種の薬物は、ゲムシタビン用量が５ｎＭ、１０ｎＭ、及び５０００ｎＭでは競合関係にあった。このデータは、ゲムシタビン単独で５０００ｎＭの用量は細胞死を引き起こすことを示したもので、１μΜのベムラフェニブを加えると、実際、ゲムシタビンの毒性が低下する。しかしながら、それより少ない用量のゲムシタビン（２５ｎＭ〜１０００ｎＭ）は、ベムラフェニブとの相乗効果を示した。最も少ない用量のゲムシタビン（５ｎＭ及び１０ｎＭ）では、この２種の薬物は、競合関係になる。ゲムシタビンのこれらの用量は、少なすぎて、本発明者らのＣＩプロットには全く影響しないと思われる。本発明者らは、ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞では、細胞周期停止が、ベムラフェニブ誘導型細胞死に必要であると考える。さらに、ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞増殖が、ベムラフェニブ処理により誘導された。セリン枯渇実験は、ＢｘＰＣ３Ｍ１ベムラフェニブ耐性にはベースラインレベルの細胞外セリンが必要であることを実証した。重要なことは、ゲムシタビンが、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１、ＢｘＰＣ３Ｍ１、及びＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞を、第二のＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ阻害剤ダブラフェニブに対して感作させたことである。まとめると、本発明者らのデータは、ベムラフェニブまたはダブラフェニブに対するＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞の後天性耐性ならびにＢｘＰＣ３Ｍ１細胞及びＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞の内因性耐性が、ゲムシタビン添加を介して反転し得ることを示した。ゲムシタビン及びベムラフェニブは、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞及びＢｘＰＣ３Ｍ１細胞で、相乗効果を示した。
【０１２４】
試験した全ての膵癌及びＮＳＣＬＣ細胞株にまたがってゲムシタビン／ベムラフェニブ組み合わせでの感作が観察されたわけではなかったので、本発明者らは、反応細胞である、ＳＫ−ＭＥＬ２８ＶＲ１細胞、ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞、及びＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞間の統一特性を調べ始めた。本発明者らは、先のＲＮＡ配列決定データ（データは示さず）から、ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞がＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞株と同一のホモ接合性ＫＲＡＳ  Ｇ１２Ｃ変異を有することを知っている。本発明者らは、現在、ＫＲＡＳ変異がＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞に生じていたかどうかを調査中である。さらに、ＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞及びＢｘＰＣ３Ｍ１細胞は、ＢＲＡＦに関してＷＴである。しかしながら、本発明者らがさらに探求している興味深い観察は、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞、ＢｘＰＣ３Ｍ１細胞、及びＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞に共通する定性的特長である。３種の細胞株は全て、浮遊表現型を有する（データは示さず）。この表現型は、間葉系癌細胞の浮遊表現型と一致する。上皮間葉転換（ＥＭＴ）は、ベムラフェニブ耐性に至る道として優先される（Ｆｅｄｏｒｅｎｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１６；  Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１５；  Ｐａｕｌｉｔｓｃｈｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１５）。本発明者らは、現在、ＥＭＴ規模でＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１、ＢｘＰＣ３Ｍ１、及びＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞を完全特性決定するべく研究中であり、ならびに３Ｄゲル浸潤試験及びゲノム配列決定を通じてそれらの転移能を調査中である。本発明者らは、転移能ならびに変異プロファイルが、ゲムシタビン／ベムラフェニブ組み合わせに対する細胞の感度の重要な決定因子であり、個別化治療の可能性を照らし出すものと仮定している。そのうえ、本発明者らは、さらなる耐性黒色腫細胞株の、メトトレキセート＋ベムラフェニブまたはダブラフェニブ処理に対する反応を調査中である。
【０１２５】
この研究は、セリン生合成を、がん細胞におけるＢＲＡＦ阻害剤耐性の新規の重要な決定因子として同定した。さらに、本発明者らは、メトトレキセートが、黒色腫細胞のＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ阻害剤に対する増感剤となることを実証した。さらなる実験で、ＳＯＧ経路のさらなる阻害剤を、細胞のＢＲＡＦ阻害剤に対する増感剤としての有効性について試験することになる。重要なことは、本発明者らは、ゲムシタビン前処理が、がん細胞のベムラフェニブまたはダブラフェニブに対する増感剤となることを実証したことであり、これらは、Ｂ−ｒａｆ阻害剤である。最後に、本発明者らの研究は、定量的プロテオミクスプロファイリングを使用して、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ及びＢＲＡＦ  ＷＴ癌細胞の、ＢＲＡＦ阻害剤、すなわちベムラフェニブまたはダブラフェニブに対する耐性を破壊して反転させることができる新規タンパク質及び経路標的を同定するのに成功したことを実証する。特定の理論に固執するつもりはないが、図１２Ａ及び図１２Ｂは、本明細書中記載されるデータ及び経路を例示する。これらの組み合わせは、例えば、膵癌及び黒色腫、ならびに本明細書中記載される他の型の癌の治療に使用することができる。
【０１２６】
材料及び方法：
【０１２７】
細胞培養及び化学物質：Ｐａｎｃ１細胞、ＢｘＰＣ３細胞、ＭｉａＰａｃａ２細胞、及びＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞は、アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）から購入した。ＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞は、Ｆｏｘ  Ｃｈａｓｅがんセンター（ＦＣＣＣ）のＤｒ．Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｂｅｌｌａｃｏｓａの御厚意により提供された。細胞株ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１は、累進的ベムラフェニブ選択を通じて同定された。簡単に述べると、１００，０００個のＳＫ−ＭＥＬ−２８細胞を、１０μΜのベムラフェニブと４８時間接触させ、次いで２０μΜのベムラフェニブと４８時間、次いで３０μΜのベムラフェニブと４８時間接触させた。生存細胞をプールし、ＳＫ−ＭＥＬ−２８ＶＲ１細胞株として同定した。細胞株ＢｘＰＣ３Ｍ１は、ＢｘＰＣ３細胞の受動的選択を通じて同定した。単一ＢｘＰＣ３細胞を播種し、増殖させてサブクローンにした。高接着性ＢｘＰＣ３親細胞と質的に異なるｄｅｔａｃｈｅｄ表現型を持つサブクローンを、ＢｘＰＣ３Ｍ細胞株として同定単離した。そのような細胞株の１つがＢｘＰＣ３Ｍ１である。全ての細胞株は、ＤＭＥＭ／１０％ＦＢＳ（ＧｅｎＤｅｐｏｔ）または２ｍＭのグルタミン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；２５０３００８１）を補充したＲＰＭＩ１６４０／１０％ＦＢＳ（ＧｅｎＤｅｐｏｔ）で培養し、５％ＣＯ２中３７℃に維持した。グルコース、グリシン、またはセリンを含まないＲＰＭＩ１６４０（Ｔｅｋｎｏｖａ）／１０％透析ＦＢＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；２６４０００３６）を、セリン欠乏研究で用いた。ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、メトトレキセート、及びゲムシタビン−ＨＣＬは、Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍから入手した。ＰＨＧＤＨ  ｓｉＲＮＡは、Ａｍｂｉｏｎ（ＡＭ１６７０８）から入手し、リポフェクタミンＲＮＡｉＭａｘは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（１０００１４４７２）から入手した。
【０１２８】
細胞生存度アッセイ：コロニー形成アッセイの場合、０日目、１ウェルあたり４００個の細胞を、２４ウェルプレートに播種した。１日目、細胞を、ＤＭＳＯまたは様々な用量のゲムシタビンで２４時間処理した。２日目、ゲムシタビンを洗い落とし、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、及びメトトレキセートを加えた。４日目、２日目に加えた薬物を洗い落とした。細胞をその後７日間増殖させてから、先に記載されたとおり定量するため（Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｊｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１４）、固定し（１０％メタノール＋１０％酢酸）、クリスタルバイオレット（０．４％濃度２０％エタノール溶液）で染色した。
【０１２９】
質量分析：試料を、乾燥させ、液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）分析のため２．５％ＡＣＮ／０．１％ギ酸に再溶解させた。ＬＣ−ＭＳ／ＭＳは、Ｑ−Ｅｘａｃｔｉｖｅ  ＨＦ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にＵ３０００  ＲＳＬＣｎａｎｏ  ＨＰＬＣ装置（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を連結させて行った。試料５μＬを、Ｃ１８トラップカラム（ＰｅｐＭａｐ１００；３００μｍ内径×５ｍｍ、５μｍ粒子径、１００Å；Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に、流速１０μＬ分−１でロードした。ペプチド分離は、Ｃ１８カラム（ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  Ｍ−ＣｌａｓｓペプチドＣＳＨ  Ｃ１８；１３０Å  １．７μｍ  ７５μｍ×２５０ｍｍ、Ｗａｔｅｒｓ）で、流速０．２６μＬ分−１及び以下の勾配で行った：０−３分、２％のＢ均一溶媒；３−７６分、Ｂを２％から３０％へ；７６−９０分、Ｂを３０％から４５％へ；９０−９８分、Ｂを４５％から９８％へ。移動相Ａは、０．１％ギ酸であり、移動相Ｂは、８０：２０のアセトニトリル：水に０．１％ギ酸添加したものであった。測定結果を、プロテオミクス用Ｐｒｏｇｅｎｅｓｉｓ−ＱＩ（Ｎｏｎｌｉｎｅａｒ  ｄｙｎａｍｉｃｓ）を用いて解析した。Ｍａｓｃｏｔ（Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｌｏｎｄｏｎ、ＵＫ；バージョン２．５．１）を用いて、クロマトグラムを整列させ、ペプチド同定のためＭＳ／ＭＳデータを抽出した。Ｍａｓｃｏｔは、消化酵素トリプシンを仮定して、ＱＭＣペプチド配列及びＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓに関して選択されたもの）を含むカスタムデータベースであるｃＲＡＰデータベースを検索するように設定した。Ｍａｓｃｏｔは、断片イオン質量許容度０．０６Ｄａ及び親イオン許容度１５ＰＰＭで検索させた。アスパラギン及びグルタミンの脱アミド化、メチオニンの酸化、リシンのアセチル、リシンのプロピオニル、及びシステインのカルバミドメチル化を、Ｍａｓｃｏｔで、可変修飾として指定した。ＦＤＲ＜１％を用いて同定されたペプチドを抽出し、ピークを同定するため、Ｐｒｏｇｅｎｅｓｉｓに戻し入れた。少なくとも２つの独自ペプチド及びＭａｓｃｏｔスコア２０を持つタンパク質のみを、さらなる解析に使用した。ペプチド及びタンパク質定量化は、試料にまたがり正規化するための合成対照ペプチドを使用した。全てのＭＳ測定は、プロテオミクス及び質量分析のため、Ｄｏｎａｌｄ  Ｄａｎｆｏｒｔｈ  Ｐｌａｎｔ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒで、ならびにＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｎｅｂｒａｓｋａ、Ｌｉｎｃｏｌｎのプロテオミクス及びメタボロミクス施設で行った。
【０１３０】
データプロット及び統計処理：全てのプロテオミクス傾向のプロットは、Ｅｖｏｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅソフトウェアセット（ＥＳＳｖ１．０）を用いて構築した。Ｖｏｌｃａｎｏプロットは、発現比及び統計的有意差の両方によりデータ点を二軸で視覚的に分離するように機能する。これにより、所定の比較内で、最大有意差で発現が異なるタンパク質を簡潔に決定することが可能になる。各タンパク質について、反復値を各実験から収集して、比較し、値の２つの分布を作成する。値の２つの独立した試料間に同一平均のスチューデントＴ検定を用いて、分布を比較し、統計的有意差のｐ値を生成させる。次いで、ｐ値の−ｌｏｇ１０を用いて、グラフ表示で、Ｙ座標とする。Ｘ座標は比であり、これは、所定の実験について反復比の値の平均のｌｏｇ１０で与えられる。併用指数計算、Ｆａ−ＣＩプロット、及びアイソボログラムは、Ｃｏｍｐｕｓｙｎソフトウェアプログラムを用い、Ｃｈｏｕ−Ｔｕｌａｌａｙ法を用いて構築した（Ｃｈｏｕ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ，  ２００７）。コロニー形成アッセイを表す全てのプロットは、Ｐｒｉｓｍ７ソフトウェア（Ｇｒａｐｈｐａｄ．ｃｏｍ）を用いて構築した。二元配置分散分析検定を用いて、ｐ値を計算した。
【０１３１】
ウエスタンブロット法：細胞を収穫し、ＰＢＳで洗い、ＮＰ４０溶解緩衝液（１％ＮＰ４０／ＰＢＳ／１０％グリセロール）中でプロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤を用いて溶解させた。タンパク質濃度を、総合タンパク質アッセイキット（ＩＴＳＩ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｋ−００１４−２０）で測定し、次いで、溶解液にＳＤＳ試料緩衝液を加えた。煮沸した溶解液５０ｕｇを、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離させ、次いでＩｍｍｏｂｉｌｏｎＰ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；ＩＰＶＨ０００１０）上に移した。免疫ブロッティングのために使用したＰＨＧＤＨ抗体は、Ａｂｃａｍ（ａｂ２１１３６５）から入手した。免疫ブロッティングのために使用したα−チューブリン抗体は、Ａｂｃａｍ（ａｂ７２９１）から入手した。α−チューブリンは、どのような細胞株または薬物処理でも発現が変化しないので、これを、ローディングコントロールとして使用した。
【０１３２】
実施例３。ＤＮＡ損傷剤は、三次元球状増殖アッセイにおいて、膵癌患者由来細胞及びＡＴＣＣ確立細胞株を、ベムラフェニブまたはダブラフェニブに対して感作させる。三次元球状増殖アッセイにおいて、２０，０００個の細胞を播種して増殖させた。（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ４５１５球面プレート）。２日後、全ての球体が、少なくとも直径５００μｍになった時点で、播種の２日後にゲムシタビンを加えた。翌日、ゲムシタビンを洗い落とし、３日目（播種から３日後）Ｂ−ｒａｆ阻害剤を加えた。播種から５日後、ＣＴＧ３Ｄ細胞生存度アッセイを行った（すなわち、５日目、ｎ＝２）。図１５のデータが示すとおり、細胞をゲムシタビンなどのＤＮＡ損傷剤で前処理すると、膵臓癌細胞をＢ−ｒａｆ阻害剤に対して感作させ、それらの増殖を阻害するだけでなく、細胞死を招く。この組み合わせで細胞が死滅する可能性があるというのは、驚くべきかつ予期せぬ効果であった。
【０１３３】
参考文献：
【０１３４】
Ａｂｄｅｌ−Ｗａｈａｂ，  Ｏ．，  Ｋｌｉｍｅｋ，  Ｖ．Ｍ．，  Ｇａｓｋｅｌｌ，
Ａ．  ａ．，  Ｖｉａｌｅ，  Ａ．，  Ｃｈｅｎｇ，  Ｄ．，  Ｋｉｍ，  Ｅ．，  Ｒａｍｐａｌ，  Ｒ．，  Ｂｌｕｔｈ，  Ｍ．，  Ｈａｒｄｉｎｇ，  Ｊ．Ｊ．，  Ｃａｌｌａｈａｎ，  Ｍ．Ｋ．，  Ｍｅｒｇｈｏｕｂ，  Ｔ．，  Ｂｅｒｇｅｒ，  Ｍ．Ｆ．，
Ｓｏｌｉｔ，  Ｄ．Ｂ．，  Ｒｏｓｅｎ，  Ｎ．，  Ｌｅｖｉｎｅ，  Ｒ．Ｌ．，  Ｃｈａｐｍａｎ，  Ｐ．Ｂ．，  ２０１４．  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ＲＡＦ  ａｎｄ  ＭＥＫ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ  ＢＲＡＦ−  ａｎｄ  ＮＲＡＳ−ｍｕｔａｎｔ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ４，  ５３８−５４５．  ｄｏｉ：１０．１１５８／２１５９−８２９０．ＣＤ−１３−１０３８
【０１３５】
Ａｃｑｕａｖｉｖａ，  Ｊ．，  Ｓｍｉｔｈ，  Ｄ．Ｌ．，  Ｊｉｍｅｎｅｚ，  Ｊ．−Ｐ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｃ，  Ｓｅｑｕｅｉｒａ，  Ｍ．，  Ｈｅ，  Ｓ．，  Ｓａｎｇ，  Ｊ．，  Ｂａｔｅｓ，  Ｒ．Ｃ．，  Ｐｒｏｉａ，  Ｄ．  ａ，  ２０１４．  Ｏｖｅｒｃｏｍｉｎｇ  Ａｃｑｕｉｒｅｄ  ＢＲＡＦ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  Ｍｅｌａｎｏｍａ  ｖｉａ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
ｏｆ  Ｈｓｐ９０  ｗｉｔｈ  Ｇａｎｅｔｅｓｐｉｂ．  Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．  １３，  ３５３−３６３．  ｄｏｉ：１０．１１５８／１５３５−７１６３．ＭＣＴ−１３−０４８１
【０１３６】
Ａｔｅｆｉ，  Ｍ．，  ｖｏｎ  Ｅｕｗ，  Ｅ．，  Ａｔｔａｒ，  Ｎ．，  Ｎｇ，  Ｃ，  Ｃｈｕ，  Ｃ，  Ｇｕｏ，  Ｄ．，  Ｎａｚａｒｉａｎ，  Ｒ．，  Ｃｈｍｉｅｌｏｗｓｋｉ，  Ｂ．，  Ｇｌａｓｐｙ，  Ｊ．  Ａ．，  Ｃｏｍｉｎ−Ａｎｄｕｉｘ，  Ｂ．，  Ｍｉｓｃｈｅｌ，  Ｐ．Ｓ．，  Ｌｏ，  Ｒ．Ｓ．，  Ｒｉｂａｓ，  Ａ．，  ２０１１．  Ｒｅｖｅｒｓｉｎｇ  ｍｅｌａｎｏｍａ  Ｃｒｏｓｓ−Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＢＲＡＦ  ａｎｄ  ＭＥＫ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｂｙ  Ｃｏ−Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ＡＫＴ／ｍＴＯＲ  ｐａｔｈｗａｙ．  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ６．  ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００２８９７３
【０１３７】
Ｂａｅｎｋｅ，  Ｆ．，  Ｃｈａｎｅｔｏｎ，  Ｂ．，  Ｓｍｉｔｈ，  Ｍ．，  Ｖａｎ  Ｄｅｎ  Ｂｒｏｅｋ，  Ｎ．，  Ｈｏｇａｎ，  Ｋ．，  Ｔａｎｇ，  Ｈ．，  Ｖｉｒｏｓ，  Ａ．，  Ｍａｒｔｉｎ，  Ｍ．，  Ｇａｌｂｒａｉｔｈ，  Ｌ．，  Ｇｉｒｏｔｔｉ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｄｈｏｍｅｎ，  Ｎ．，  Ｇｏｔｔｌｉｅｂ，  Ｅ．，  Ｍａｒａｉｓ，  Ｒ．，  Ｃａｎｔｏｒ，  Ｊ．Ｒ．，  Ｓａｂａｔｉｎｉ，  Ｄ．Ｍ．，  Ｃｈａｎｅｔｏｎ，  Ｂ．，  Ｈｉｌｌｍａｎｎ，  Ｐ．，  Ｚｈｅｎｇ，  Ｌ．，  Ｍａｒｔｉｎ，  Ａ．Ｃ．，  Ｍａｄｄｏｃｋｓ，  Ｏ．Ｄ．，  Ｃｈｏｋｋａｔｈｕｋａｌａｍ，  Ａ．，  Ｃｏｙｌｅ，  Ｊ．Ｅ．，  Ｊａｎｋｅｖｉｃｓ，  Ａ．，  Ｈｏｌｄｉｎｇ，  Ｆ．Ｐ．，  Ｖｏｕｓｄｅｎ，  Ｋ．Ｈ．，  Ｆｒｅｚｚａ，  Ｃ，  Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ，  Ｍ．，  Ｇｏｔｔｌｉｅｂ，  Ｅ．，  Ｃｏｒａｚａｏ−Ｒｏｚａｓ，  
Ｐ．，  Ｇｕｅｒｒｅｓｃｈｉ，  Ｐ．，  Ｊｅｎｄｏｕｂｉ，  Ｍ．，  Ａｎｄｒｅ，
Ｆ．，  Ｊｏｎｎｅａｕｘ，  Ａ．，  Ｓｃａｌｂｅｒｔ，  Ｃ，  Ｇａｒｃｏｎ，  Ｇ．，  Ｍａｌｅｔ−Ｍａｒｔｉｎｏ，  Ｍ．，  Ｂａｌａｙｓｓａｃ，  Ｓ．，  Ｒｏｃｃｈｉ，  Ｓ．，  Ｓａｖｉｎａ，  Ａ．，  Ｆｏｒｍｓｔｅｃｈｅｒ，  Ｐ．，  Ｍｏｒｔｉｅｒ，  Ｌ．，  Ｋｌｕｚａ，  Ｊ．，  ３月ｅｔｔｉ，  Ｐ．，  Ｄａｎｇ，
Ｌ．，  Ｗｈｉｔｅ，  Ｄ．Ｗ．，  Ｇｒｏｓｓ，  Ｓ．，  Ｂｅｎｎｅｔｔ，  Ｂ．Ｄ．，  Ｂｉｔｔｉｎｇｅｒ，  Ｍ．Ａ．，  Ｄｒｉｇｇｅｒｓ，  Ｅ．Ｍ．，  Ｆａｎｔｉｎ，  Ｖ．Ｒ．，  Ｊａｎｇ，  Ｈ．Ｇ．，  Ｊｉｎ，  Ｓ．，  Ｋｅｅｎａｎ，  Ｍ．Ｃ．，  Ｍａｒｋｓ，  Ｋ．Ｍ．，  Ｐｒｉｎｓ，  Ｒ．Ｍ．，  Ｗａｒｄ，  Ｐ．Ｓ．，  Ｙｅｎ，  Ｋ．Ｅ．，  Ｌｉａｕ，  Ｌ．Ｍ．，  Ｒａｂｉｎｏｗｉｔｚ，  Ｊ．Ｄ．，  Ｃａｎｔｌｅｙ，  Ｌ．Ｃ．，  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，  Ｃ．Ｂ．，  Ｈｅｉｄｅｎ，  Ｍ．Ｇ．  Ｖａｎｄｅｒ，  Ｓｕ，  Ｓ．Ｍ．，  Ｄａｖｉｅｓ，  Ｈ．，  Ｂｉｇｎｅｌｌ，  Ｇ．Ｒ．，  Ｃｏｘ，  Ｃ，  Ｓｔｅｐｈｅｎｓ，  Ｐ．，  Ｅｄｋｉｎｓ，  Ｓ．，  Ｃｌｅｇｇ，  Ｓ．，  Ｔｅａｇｕｅ，  Ｊ．，  Ｗｏｆｆｅｎｄｉｎ，  Ｈ．，  Ｇａｒｎｅｔｔ，  Ｍ．Ｊ．，  Ｂｏｔｔｏｍｌｅｙ，  Ｗ．，  Ｄａｖｉｓ，  Ｎ．，  Ｄｉｃｋｓ，  Ｅ．，  Ｅｗｉｎｇ，  Ｒ．，  Ｆｌｏｙｄ，  Ｙ．，  Ｇｒａｙ，  Ｋ．，  Ｈａｌｌ，  Ｓ．，  Ｈａｗｅｓ，  Ｒ．，  Ｈｕｇｈｅｓ，  Ｊ．，  Ｋｏｓｍｉｄｏｕ，  Ｖ．，  Ｍｅｎｚｉｅｓ，  Ａ．，  Ｍｏｕｌｄ，  Ｃ，  Ｐａｒｋｅｒ，  Ａ．，  Ｓｔｅｖｅｎｓ，  Ｃ，  Ｗａｔｔ，  Ｓ．，  Ｈｏｏｐｅｒ，  Ｓ．，  Ｗｉｌｓｏｎ，  Ｒ．，  Ｊａｙａｔｉｌａｋｅ，  Ｈ．，  Ｇｕｓｔｅｒｓｏｎ，  Ｂ．Ａ．，  Ｃｏｏｐｅｒ，  Ｃ，  Ｓｈｉｐｌｅｙ，  Ｊ．，  Ｈａｒｇｒａｖｅ，  Ｄ．，  Ｐｒｉｔｃｈａｒｄ−  Ｊｏｎｅｓ，  Ｋ．，  Ｍａｉｔｌａｎｄ，  Ｎ．，  Ｃｈｅｎｅｖｉｘ−Ｔｒｅｎｃｈ，  Ｇ．，  Ｒｉｇｇｉｎｓ，  Ｇ．Ｊ．，  Ｂｉｇｎｅｒ，  Ｄ．Ｄ．，  Ｐａｌｍｉｅｒｉ，  Ｇ．，  Ｃｏｓｓｕ，  Ａ．，  Ｆｌａｎａｇａｎ，  Ａ．，  Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ，  Ａ．，  Ｈｏ，  Ｊ．Ｗ．，  Ｌｅｕｎｇ，  Ｓ．Ｙ．，  Ｙｕｅｎ，  Ｓ．Ｔ．，  Ｗｅｂｅｒ，  Ｂ．Ｌ．，  Ｓｅｉｇｌｅｒ，  Ｈ．Ｆ．，  Ｄａｒｒｏｗ，  Ｔ．Ｌ．，  Ｐａｔｅｒｓｏｎ，  Ｈ．，  Ｍａｒａｉｓ，  Ｒ．，  Ｍａｒｓｈａｌｌ，  Ｃ．Ｊ．，  Ｗｏｏｓｔｅｒ，  Ｒ．，  Ｓｔｒａｔｔｏｎ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｆｕｔｒｅａｌ，  Ｐ．  Ａ．，  Ｄｈｏｍｅｎ，  Ｎ．，  Ｍａｒａｉｓ，  Ｒ．，  Ｆｒｅｚｚａ，  Ｃ，  Ｚｈｅｎｇ，  Ｌ．，  Ｆｏｌｇｅｒ，  Ｏ．，  Ｒａｊａｇｏｐａｌａｎ，  Ｋ．Ｎ．，  ＭａｃＫｅｎｚｉｅ，  Ｅ．Ｄ．，  Ｊｅｒｂｙ，  Ｌ．，  Ｍｉｃａｒｏｎｉ，  Ｍ．，  Ｃｈａｎｅｔｏｎ，  Ｂ．，  Ａｄａｍ，  Ｊ．，  Ｈｅｄｌｅｙ，  Ａ．，  Ｋａｌｎａ，  Ｇ．，  Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，  Ｉ．Ｐ．，  Ｐｏｌｌａｒｄ，  Ｐ．  Ｊ．，  Ｗａｔｓｏｎ，  Ｄ．Ｇ．，  Ｄｅｂｅｒａｒｄｉｎｉｓ，  Ｒ．Ｊ．，  Ｓｈｌｏｍｉ，  Ｔ．，  Ｒｕｐｐｉｎ，  Ｅ．，  Ｇｏｔｔｌｉｅｂ，  Ｅ．，  Ｇｉｒｏｔｔｉ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｓａｔｕｒｎｏ，  Ｇ．，  Ｌｏｒｉｇａｎ，  Ｐ．，  Ｍａｒａｉｓ，  Ｒ．，  Ｇｉｒｏｔｔｉ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｐｅｄｅｒｓｅｎ，  Ｍ．，  Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｌａｏｒｄｅｎ，  Ｂ．，  Ｖｉｒｏｓ，  Ａ．，  Ｔｕｒａｊｌｉｃ，  Ｓ．，  Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ−Ｄｕｖａｚ，  Ｄ．，  Ｚａｍｂｏｎ，  Ａ．，  Ｓｉｎｃｌａｉｒ，  Ｊ．，  Ｈａｙｅｓ，  Ａ．，  Ｇｏｒｅ，  Ｍ．，  Ｌｏｒｉｇａｎ，  Ｐ．，  Ｓｐｒｉｎ���ｅｒ，  Ｃ，  Ｌａｒｋｉｎ，  Ｊ．，  Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ，  Ｃ，  Ｍａｒａｉｓ，  Ｒ．，  Ｇｏｍｅｓ，  Ｌ．Ｃ．，  Ｂｅｎｅｄｅｔｔｏ，  Ｇ．  Ｄｉ，  Ｓｃｏｒｒａｎｏ，  Ｌ．，  Ｈａｌｌ，  Ａ．，  Ｍｅｙｌｅ，  Ｋ．Ｄ．，  Ｌａｎｇｅ，  Ｍ．Ｋ．，  Ｋｌｉｍａ，  Ｍ．，  Ｓａｎｄｅｒｈｏｆｆ，  Ｍ．，  Ｄａｈｌ，  Ｃ，  Ａｂｉｌｄｇａａｒｄ，  Ｃ，  Ｔｈｏｒｕｐ，  Ｋ．，  Ｍｏｇｈｉｍｉ，  Ｓ．Ｍ．，  Ｊｅｎｓｅｎ，  Ｐ．Ｂ．，  Ｂａｒｔｅｋ，  Ｊ．，  Ｇｕｌｄｂｅｒｇ，  Ｐ．，  Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，  Ｃ，  Ｈａｑ，  Ｒ．，  Ｓｈｏａｇ，  Ｊ．，  Ａｎｄｒｅｕ−Ｐｅｒｅｚ，  Ｐ．，  Ｙｏｋｏｙａｍａ，  Ｓ．，  Ｅｄｅｌｍａｎ，  Ｈ．，  Ｒｏｗｅ，  Ｇ．Ｃ．，  Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，  Ｄ．Ｔ．，  Ｈｕｒｌｅｙ，  Ａ．Ｄ．，  Ｎｅｌｌｏｒｅ，  Ａ．，  Ｋｕｎｇ，  Ａ．Ｌ．，  Ｗａｒｇｏ，  Ｊ．Ａ．，  Ｓｏｎｇ，  Ｊ．Ｓ．，  Ｆｉｓｈｅｒ，  Ｄ．Ｅ．，  Ａｒａｎｙ，  Ｚ．，  Ｗｉｄｌｕｎｄ，  Ｈ．Ｒ．，  Ｈａｕｓｃｈｉｌｄ，  Ａ．，  Ｇｒｏｂ，  Ｊ．  Ｊ．，  Ｄｅｍｉｄｏｖ，  Ｌ．Ｖ．，  Ｊｏｕａｒｙ，  Ｔ．，  Ｇｕｔｚｍｅｒ，  Ｒ．，  Ｍｉｌｌｗａｒｄ，  Ｍ．，  Ｒｕｔｋｏｗｓｋｉ，  Ｐ．，  Ｂｌａｎｋ，  Ｃ．Ｕ．，  Ｍｉｌｌｅｒ，  Ｗ．Ｈ．，  Ｋａｅｍｐｇｅｎ，  Ｅ．，  Ｍａｒｔｉｎ−Ａｌｇａｒｒａ，  Ｓ．，  Ｋａｒａｓｚｅｗｓｋａ，  Ｂ．，  Ｍａｕｃｈ，  Ｃ，  Ｃｈｉａｒｉｏｎ−Ｓｉｌｅｎｉ，  Ｖ．，  Ｍａｒｔｉｎ，  Ａ．Ｍ．，  Ｓｗａｎｎ，  Ｓ．，  Ｈａｎｅｙ，  Ｐ．，  Ｍｉｒａｋｈｕｒ，  Ｂ．，  Ｇｕｃｋｅｒｔ，  Ｍ．Ｅ．，  Ｇｏｏｄｍａｎ，  Ｖ．，  Ｃｈａｐｍａｎ，  Ｐ．Ｂ．，  Ｈｅｉｄｏｒｎ，  Ｓ．Ｊ．，  Ｍｉｌａｇｒｅ，  Ｃ，  Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ，  Ｓ．，  Ｎｏｕｒｒｙ，  Ａ．，  Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ−Ｄｕｖａｓ，  Ｉ，  Ｄｈｏｍｅｎ，  Ｎ．，  Ｈｕｓｓａｉｎ，  Ｊ．，  Ｒｅｉｓ−Ｆｉｌｈｏ，  Ｊ．Ｓ．，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，  Ｃ．Ｊ．，  Ｐｒｉｔｃｈａｒｄ，Ｃ，  Ｍａｒａｉｓ，  Ｒ．，  Ｊｏｈａｎｎｅｓｓｅｎ，  ＣＭ．，  Ｂｏｅｈｍ，  Ｊ．Ｓ．，  Ｋｉｍ，  Ｓ．Ｙ．，  Ｔｈｏｍａｓ，  Ｓ．Ｒ．，  Ｗａｒｄｗｅｌｌ，  Ｌ．，  Ｊｏｈｎｓｏｎ，  Ｌ．Ａ．，  Ｅｍｅｒｙ，  ＣＭ．，  Ｓｔｒａｎｓｋｙ，  Ｎ．，  Ｃｏｇｄｉｌｌ，  Ａ．Ｐ．，  Ｂａｒｒｅｔｉｎａ，  Ｊ．，  Ｃａｐｏｎｉｇｒｏ，  Ｇ．，  Ｈｉｅｒｏｎｙｍｕｓ，  Ｈ．，  Ｍｕｒｒａｙ，  Ｒ．Ｒ．，  Ｓａｌｅｈｉ−Ａｓｈｔｉａｎｉ，  Ｋ．，  Ｈｉｌｌ，  Ｄ．Ｅ．，  Ｖｉｄａｌ，  Ｍ．，  Ｚｈａｏ，  Ｊ．Ｊ．，  Ｙａｎｇ，  Ｘ．，  Ａｌｋａｎ，  Ｏ．，  Ｋｉｍ，  Ｓ．，  Ｈａｒｒｉｓ，  Ｊ．Ｌ．，  Ｗｉｌｓｏｎ，  Ｃ．Ｊ．，  Ｍｙｅｒ，  Ｖ．Ｅ．，  Ｆｉｎａｎ，  Ｐ．Ｍ．，  Ｒｏｏｔ，  Ｄ．  Ｅ．，  Ｒｏｂｅｒｔｓ，  Ｔ．Ｍ．，  Ｇｏｌｕｂ，  Ｔ．，  Ｆｌａｈｅｒｔｙ，  Ｋ．Ｔ．，  Ｄｕｍｍｅｒ，  Ｒ．，  Ｗｅｂｅｒ，  Ｂ．Ｌ．，  Ｓｅｌｌｅｒｓ，  Ｗ．Ｒ．，  Ｓｃｈｌｅｇｅｌ，  Ｒ．，  Ｗａｒｇｏ，  Ｊ．Ａ．，  Ｈａｈｎ，  Ｗ．Ｃ，  Ｇａｒｒａｗａｙ，  Ｌ．Ａ．，  Ｊｏｈａｎｎｅｓｓｅｎ，  ＣＭ．，  Ｊｏｈｎｓｏｎ，  Ｌ．Ａ．，  Ｐｉｃｃｉｏｎｉ，  Ｆ．��  Ｔｏｗｎｅｓ，  Ａ．，  Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，  Ｄ．Ｔ．，  Ｄｏｎａｈｕｅ，  Ｍ．Ｋ．，  Ｎａｒａｙａｎ，  Ｒ．，  Ｆｌａｈｅｒｔｙ，  Ｋ．Ｔ．，  Ｗａｒｇｏ，  Ｊ．  Ａ．，  Ｒｏｏｔ，  Ｄ．Ｅ．，  Ｇａｒｒａｗａｙ，  Ｌ．Ａ．，  Ｋｏｍｕｒｏｖ，  Ｋ．，  Ｔｓｅｎｇ，  Ｊ．Ｔ．，  Ｍｕｌｌｅｒ，  Ｍ．，  Ｓｅｖｉｏｕｒ，  Ｅ．Ｇ．，  Ｍｏｓｓ，  Ｔ．Ｊ．，  Ｙａｎｇ，  Ｌ．，  Ｎａｇｒａｔｈ，  Ｄ．，  Ｒａｍ，  Ｐ．Ｔ．，  Ｌｅ，  Ａ．，  Ｌａｎｅ，  Ａ．Ｎ．，  Ｈａｍａｋｅｒ，  Ｍ．，  Ｂｏｓｅ，  Ｓ．，  Ｇｏｕｗ，  Ａ．，  Ｂａｒｂｉ，  Ｊ．，  Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ，  Ｔ．，  Ｒｏｊａｓ，  Ｃ．Ｊ．，  Ｓｌｕｓｈｅｒ，  Ｂ．Ｓ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｈ．，  Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ，  Ｌ．Ｊ．，  Ｌｉｅｂｌｅｒ，  Ｄ．Ｃ，  Ｓｌｅｂｏｓ，  Ｒ．Ｊ．，  Ｌｏｒｋｉｅｗｉｃｚ，  Ｐ．Ｋ．，  Ｈｉｇａｓｈｉ，  Ｒ．Ｍ．，  Ｆａｎ，  Ｔ．Ｗ．，  Ｄａｎｇ，  Ｃ．Ｖ．，  Ｌｉｔｏ，  Ｐ．，  Ｒｏｓｅｎ，  Ｎ．，  Ｓｏｌｉｔ，  Ｄ．Ｂ．，  Ｍａｅｒｔｅｎｓ，  Ｏ．，  Ｊｏｈｎｓｏｎ，  Ｂ．，  Ｈｏｌｌｓｔｅｉｎ，  Ｐ．，  Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，  Ｄ．Ｔ．，  Ｃｏｏｐｅｒ，  Ｚ．Ａ．，  Ｍｅｓｓａｉｅｎ，  Ｌ．，  Ｂｒｏｎｓｏｎ，  Ｒ．Ｔ．，  ＭｃＭａｈｏｎ，  Ｍ．，  Ｇｒａｎｔｅｒ，  Ｓ．，  Ｆｌａｈｅｒｔｙ，  Ｋ．Ｔ．，  Ｗａｒｇｏ，  Ｊ．  Ａ．，  Ｍａｒａｉｓ，  Ｒ．，  Ｃｉｃｈｏｗｓｋｉ，  Ｋ．，  ＭｃＧｕｉｒｋ，  Ｓ．，  Ｇｒａｖｅｌ，  Ｓ．Ｐ．，  Ｄｅｂｌｏｉｓ，  Ｇ．，  Ｐａｐａｄｏｐｏｌｉ，  Ｄ．Ｊ．，  Ｆａｕｂｅｒｔ，  Ｂ．，  Ｗｅｇｎｅｒ，  Ａ．，  Ｈｉｌｌｅｒ，  Ｋ．，  Ａｖｉｚｏｎｉｓ，  Ｄ．，  Ａｋａｖｉａ，  Ｕ．Ｄ．，  Ｊｏｎｅｓ，  Ｒ．Ｇ．，  Ｇｉｇｕｅｒｅ，  Ｖ．，  Ｓｔ−Ｐｉｅｒｒｅ，  Ｊ．，  Ｍｅｎｚｉｅｓ，  Ａ．Ｍ．，  Ｌｏｎｇ，  Ｇ．Ｖ．，  Ｍｅｔａｌｌｏ，  ＣＭ．，  Ｇａｍｅｉｒｏ，  Ｐ．Ａ．，  Ｂｅｌｌ，  Ｅ．Ｌ．，  Ｍａｔｔａｉｎｉ，  Ｋ．Ｒ．，  Ｙａｎｇ，  Ｊ．，  Ｈｉｌｌｅｒ，  Ｋ．，  Ｊｅｗｅｌｌ，  ＣＭ．，  Ｊｏｈｎｓｏｎ，  Ｚ．Ｒ．，  Ｉｒｖｉｎｅ，  Ｄ．Ｊ．，  Ｇｕａｒｅｎｔｅ，  Ｌ．，  Ｋｅｌｌｅｈｅｒ，  Ｊ．Ｋ．，  Ｈｅｉｄｅｎ，  Ｍ．Ｇ．  Ｖａｎｄｅｒ，  Ｉｌｉｏｐｏｕｌｏｓ，  Ｏ．，  Ｓｔｅｐｈａｎｏｐｏｕｌｏｓ，  Ｇ．，  Ｍｏｎｔａｇｕｔ，  Ｃ，  Ｓｈａｒｍａ，  Ｓ．Ｖ．，  Ｓｈｉｏｄａ，  Ｔ．，  ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ，  Ｕ．，  Ｕｌｍａｎ，  Ｍ．，  Ｕｌｋｕｓ，  Ｌ．Ｅ．，  Ｄｉａｓ−Ｓａｎｔａｇａｔａ，  Ｄ．，  Ｓｔｕｂｂｓ，  Ｈ．，  Ｌｅｅ，  Ｄ．Ｙ．，  Ｓｉｎｇｈ，  Ａ．，  Ｄｒｅｗ，  Ｌ．，  Ｈａｂｅｒ，  Ｄ．Ａ．，  Ｓｅｔｔｌｅｍａｎ，  Ｊ．，  Ｎａｚａｒｉａｎ，  Ｒ．，  Ｓｈｉ，  Ｈ．，  Ｗａｎｇ，  Ｑ．，  Ｋｏｎｇ，  Ｘ．，  Ｋｏｙａ，  Ｒ．Ｃ，  Ｌｅｅ，  Ｈ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｚ．，  Ｌｅｅ，  Ｍ．Ｋ．，  Ａｔｔａｒ，  Ｎ．，  Ｓａｚｅｇａｒ，  Ｈ．，  Ｃｈｏｄｏｎ，  Ｔ．，  Ｎｅｌｓｏｎ，  Ｓ．Ｆ．，  ＭｃＡｒｔｈｕｒ，  Ｇ．，  Ｓｏｓｍａｎ，  Ｊ．  Ａ．，  Ｒｉｂａｓ，  Ａ．，  Ｌｏ，  Ｒ．Ｓ．，  Ｐａｒｍｅｎｔｅｒ，  Ｔ．Ｊ．，  Ｋｌｅｉｎｓｃｈｍｉｄｔ，  Ｍ．，  Ｋｉｎｒｏｓｓ，  Ｋ．Ｍ．，  Ｂｏｎｄ，  Ｓ．Ｔ．，  Ｌｉ，  Ｊ．，  Ｋａａｄｉｇｅ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｒａｏ，  Ａ．，  Ｓｈｅｐｐａｒｄ，  Ｋ．Ｅ．，  Ｈｕｇｏ，  Ｗ．，  Ｐｕｐｏ，  Ｇ．Ｍ．，  Ｐｅａｒｓｏｎ，  Ｒ．Ｂ．，  ＭｃＧｅｅ，  Ｓ．Ｌ．，  Ｌｏｎｇ，  Ｇ．Ｖ．，  Ｓｃｏｌｙｅｒ，  Ｒ．Ａ．，  Ｒｉｚｏｓ，  Ｈ．，  Ｌｏ，  Ｒ．Ｓ．，  Ｃｕｌｌｉｎａｎｅ，  Ｃ，  Ａｙｅｒ，  Ｄ．Ｅ．，  Ｒｉｂａｓ，Ａ．，  Ｊｏｈｎｓｔｏｎｅ，  Ｒ．Ｗ．，  Ｈｉｃｋｓ，  Ｒ．Ｊ．，  ＭｃＡｒｔｈｕｒ，  Ｇ．Ａ．，  Ｐｏｕｌｉｋａｋｏｓ，  Ｐ．Ｉ．，  Ｐｅｒｓａｕｄ，  Ｙ．，  Ｊａｎａｋｉｒａｍａｎ，  Ｍ．，  Ｋｏｎｇ，  Ｘ．，  Ｎｇ，  Ｃ，  Ｍｏｒｉｃｅａｕ，  Ｇ．，  Ｓｈｉ，  Ｈ．，  Ａｔｅｆｉ，  Ｍ．，  Ｔｉｔｚ，  Ｂ．，  Ｇａｂａｙ，  Ｍ．Ｔ．，  Ｓａｌｔｏｎ，  Ｍ．，  Ｄａｈｌｍａｎ，  Ｋ．Ｂ．，  Ｔａｄｉ，  Ｍ．，  Ｗａｒｇｏ，  Ｊ．Ａ．，  Ｆｌａｈｅｒｔｙ，  Ｋ．Ｔ．，  Ｋｅｌｌｅｙ，  Ｍ．Ｃ，  Ｍｉｓｔｅｌｉ，  Ｔ．，  Ｃｈａｐｍａｎ，  Ｐ．Ｂ．，  Ｓｏｓｍａｎ，  Ｊ．Ａ．，  Ｇｒａｅｂｅｒ，  Ｔ．Ｇ．，  Ｒｉｂａｓ，  Ａ．，  Ｌｏ，  Ｒ．Ｓ．，  Ｒｏｓｅｎ，  Ｎ．，  Ｓｏｌｉｔ，  Ｄ．Ｂ．，  Ｐｕｉｇｓｅｒｖｅｒ，  Ｐ．，  Ｓｐｉｅｇｅｌｍａｎ，  Ｂ．Ｍ．，  Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｌａｏｒｄｅｎ，  Ｂ．，  Ｖｉｒｏｓ，  Ａ．，  Ｇｉｒｏｔｔｉ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｐｅｄｅｒｓｅｎ，  Ｍ．，  Ｓａｔｕｒｎｏ，  Ｇ．，  Ｚａｍｂｏｎ，  Ａ．，  Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ−Ｄｕｖａｚ，  Ｄ．，  Ｔｕｒａｊｌｉｃ，  Ｓ．，  Ｈａｙｅｓ，  Ａ．，  Ｇｏｒｅ，  Ｍ．，  Ｌａｒｋｉｎ，  Ｊ．，  Ｌｏｒｉｇａｎ，  Ｐ．，  Ｃｏｏｋ，  Ｍ．，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，  Ｃ，  Ｍａｒａｉｓ，  Ｒ．，  Ｓｃｏｔｔ，  Ｄ．Ａ．，
Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，  Ａ．Ｄ．，  Ｆｉｌｉｐｐ，  Ｆ．Ｖ．，  Ｋｎｕｔｚｅｎ，  Ｃ．Ａ．，  Ｃｈｉａｎｇ，  Ｇ．Ｇ．，  Ｒｏｎａｉ，  Ｚ．Ａ．，  Ｏｓｔｅｒｍａｎ，  Ａ．Ｌ．，  Ｓｍｉｔｈ，  Ｊ．Ｗ．，  Ｓｈｉ，  Ｈ．，  Ｋｏｎｇ，  Ｘ．，  Ｒｉｂａｓ，  Ａ．，  Ｌｏ，  Ｒ．Ｓ．，  Ｓｏｌｉｔ，  Ｄ．Ｂ．，  Ｇａｒｒａｗａｙ，  Ｌ．Ａ．，  Ｐｒａｔｉｌａｓ，  Ｃ．Ａ．，  Ｓａｗａｉ，  Ａ．，  Ｇｅｔｚ，  Ｇ．，  Ｂａｓｓｏ，  Ａ．，  Ｙｅ，  Ｑ．，  Ｌｏｂｏ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｓｈｅ，  Ｙ．，  Ｏｓｍａｎ，  Ｌ，  Ｇｏｌｕｂ，  Ｔ．Ｒ．，  Ｓｅｂｏｌｔ−Ｌｅｏｐｏｌｄ，  Ｊ．，  Ｓｅｌｌｅｒｓ，  Ｗ．Ｒ．，  Ｒｏｓｅｎ，  Ｎ．，  Ｓｏｓｍａｎ，  Ｊ．  Ａ．，  Ｋｉｍ，  Ｋ．Ｂ．，  Ｓｃｈｕｃｈｔｅｒ，  Ｌ．，  Ｇｏｎｚａｌｅｚ，  Ｒ．，  Ｐａｖｌｉｃｋ，  Ａ．Ｃ．，  Ｗｅｂｅｒ，  Ｊ．Ｓ．，  ＭｃＡｒｔｈｕｒ，  Ｇ．Ａ．，  Ｈｕｔｓｏｎ，  Ｔ．Ｅ．，  Ｍｏｓｃｈｏｓ，  Ｓ．Ｊ．，  Ｆｌａｈｅｒｔｙ，  Ｋ．Ｔ．，  Ｈｅｒｓｅｙ，  Ｐ．，  Ｋｅｆｆｏｒｄ，  Ｒ．，  Ｌａｗｒｅｎｃｅ，  Ｄ．，  Ｐｕｚａｎｏｖ，  Ｉ，  Ｌｅｗｉｓ，  Ｋ．Ｄ．，  Ａｍａｒａｖａｄｉ，  Ｒ．Ｋ．，  Ｃｈｍｉｅｌｏｗｓｋｉ，  Ｂ．，  Ｌａｗｒｅｎｃｅ，  Ｈ．Ｊ．，  Ｓｈｙｒ，  Ｙ．，  Ｙｅ，  Ｆ．，  Ｌｉ，  Ｊ．，  Ｎｏｌｏｐ，  Ｋ．Ｂ．，  Ｌｅｅ，  Ｒ．Ｊ．，  Ｊｏｅ，  Ａ．Ｋ．，  Ｒｉｂａｓ，  Ａ．，  Ｓｔｒａｕｓｓｍａｎ，  Ｒ．，  Ｍｏｒｉｋａｗａ，  Ｔ．，  Ｓｈｅｅ，  Ｋ．，  Ｂａｒｚｉｌｙ−Ｒｏｋｎｉ，  Ｍ．，  Ｑｉａｎ，  Ｚ．Ｒ．，  Ｄｕ，  Ｊ．，  Ｄａｖｉｓ，  Ａ．，  Ｍｏｎｇａｒｅ，  Ｍ．Ｍ．，  Ｇｏｕｌｄ，  Ｊ．，  Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，  Ｄ．Ｔ．，  Ｃｏｏｐｅｒ，  Ｚ．Ａ．，  Ｃｈａｐｍａｎ，  Ｐ．Ｂ．，  Ｓｏｌｉｔ，  Ｄ．Ｂ．，  Ｒｉｂａｓ，  Ａ．，  Ｌｏ，  Ｒ．Ｓ．，  Ｆｌａｈｅｒｔｙ，  Ｋ．Ｔ．，  Ｏｇｉｎｏ，  Ｓ．，  Ｗａｒｇｏ，  Ｊ．Ａ．，  Ｇｏｌｕｂ，  Ｔ．Ｒ．，  Ｈｅｉｄｅｎ，  Ｍ．Ｇ．  Ｖａｎｄｅｒ，  Ｌｕｎｔ，  Ｓ．Ｙ．，  Ｄａｙｔｏｎ，  Ｔ．Ｌ．，  Ｆｉｓｋｅ，  Ｂ．Ｐ．，  Ｉｓｒａｅｌｓｅｎ，  Ｗ．Ｊ．，  Ｍａｔｔａｉｎｉ，  Ｋ．Ｒ．，  Ｖｏｋｅｓ，  Ｎ．Ｉ．，  Ｓｔｅｐｈａｎｏｐｏｕｌｏｓ，  Ｇ．，  Ｃａｎｔｌｅｙ，  Ｌ．Ｃ．，  Ｍｅｔａｌｌｏ，  ＣＭ．，  Ｌｏｃａｓａｌｅ，  Ｊ．Ｗ．，  Ｖａｚｑｕｅｚ，  Ｆ．，  Ｌｉｍ，  Ｊ．Ｈ．，  Ｃｈｉｍ，  Ｈ．，  Ｂｈａｌｌａ，  Ｋ．，  Ｇｉｒｎｕｎ，  Ｇ，  Ｐｉｅｒｃｅ，  Ｋ．，  Ｃｌｉｓｈ，  Ｃ．Ｂ．，  Ｇｒａｎｔｅｒ，  Ｓ．Ｒ．，  Ｗｉｄｌｕｎｄ，  Ｈ．Ｒ．，  Ｓｐｉｅｇｅｌｍａｎ，  Ｂ．Ｍ．，  Ｐｕｉｇｓｅｒｖｅｒ，  Ｐ．，  Ｗａｎ，  Ｐ．Ｔ．，  Ｇａｒｎｅｔｔ，  Ｍ．Ｊ．，  Ｒｏｅ，  Ｓ．Ｍ．，  Ｌｅｅ，  Ｓ．，  Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ−Ｄｕｖａｚ，  Ｄ．，  Ｇｏｏｄ，  Ｖ．Ｍ．，  Ｊｏｎｅｓ，  ＣＭ．，  Ｍａｒｓｈａｌｌ，  Ｃ．Ｊ．，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，  Ｃ．Ｊ．，  Ｂａｒｆｏｒｄ，  Ｄ．，  Ｍａｒａｉｓ，  Ｒ．，  Ｗａｎｇ，  Ｑ．，  Ｂｅａｕｍｏｎｔ，  Ｋ．Ａ．，  Ｏｔｔｅ，  Ｎ．Ｊ．，  Ｆｏｎｔ，  Ｊ．，  Ｂａｉｌｅｙ，  Ｃ．Ｇ．，  Ｇｅｌｄｅｒｍａｌｓｅｎ，  Ｍ．  ｖａｎ，  Ｓｈａｒｐ，  Ｄ．Ｍ．，  Ｔｉｆｆｅｎ，  Ｊ．Ｃ，  Ｒｙａｎ，  Ｒ．Ｍ．，  Ｊｏｒｍａｋｋａ，  Ｍ．，  Ｈａａｓｓ，  Ｎ．Ｋ．，  Ｒａｓｋｏ，  Ｊ．Ｅ．，  Ｈｏｉｓｔ，  Ｊ．，  Ｗａｒｄ，  Ｐ．Ｓ．，  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，  Ｃ．Ｂ．，  Ｗｉｌｓｏｎ，  Ｔ．Ｒ．，  Ｆｒｉｄｌｙａｎｄ，  Ｊ．，  Ｙａｎ，  Ｙ．，  Ｐｅｎｕｅｌ，  Ｅ．，  Ｂｕｒｔｏｎ，  Ｌ．，  Ｃｈａｎ，  Ｅ．，  Ｐｅｎｇ，  Ｊ．，  Ｌｉｎ，  Ｅ．，  Ｗａｎｇ，  Ｙ．，  Ｓｏｓｍａｎ，  Ｊ．，  Ｒｉｂａｓ，  Ａ．，  Ｌｉ，  Ｊ．，  Ｍｏｆｆａｔ，  Ｊ．，  Ｓｕｔｈｅｒｌｉｎ，  Ｄ．Ｐ．，  Ｋｏｅｐｐｅｎ，  Ｈ．，  Ｍｅｒｃｈａｎｔ，  Ｍ．，  Ｎｅｖｅ，  Ｒ．，  Ｓｅｔｔｌｅｍａｎ，  Ｊ．，  Ｗｉｓｅ，  Ｄ．Ｒ．，  ＤｅＢｅｒａｒｄｉｎｉｓ，  Ｒ．Ｊ．，  Ｍａｎｃｕｓｏ，  Ａ．，  Ｓａｙｅｄ，  Ｎ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｘ．Ｙ．，  Ｐｆｅｉｆｆｅｒ，  Ｈ．Ｋ．，  Ｎｉｓｓｉｍ，  Ｉ．，  Ｄａｉｋｈｉｎ，  Ｅ．，  Ｙｕｄｋｏｆｆ，  Ｍ．，  ＭｃＭａｈｏｎ，  Ｓ．Ｂ．，  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，  Ｃ．Ｂ．，  Ｘｉａｎｇ，  Ｙ．，  Ｓｔｉｎｅ，  Ｚ．Ｅ．，  Ｘｉａ，  Ｊ．，  Ｌｕ，  Ｙ．，  Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ，  Ｒ．Ｓ．，  Ａｌｔｍａｎ，  Ｂ．Ｊ．，  Ｈｓｉｅｈ，  Ａ．Ｌ．，  Ｇｏｕｗ，  Ａ．Ｍ．，  Ｔｈｏｍａｓ，  Ａ．Ｇ．，  Ｇａｏ，  Ｐ．，  Ｓｕｎ，  Ｌ．，  Ｓｏｎｇ，  Ｌ．，  Ｙａｎ，  Ｂ．，  Ｓｌｕｓｈｅｒ，  Ｂ．Ｓ．，  Ｚｈｕｏ，  Ｊ．，  Ｏｏｉ，  Ｌ．Ｌ．，  Ｌｅｅ，  Ｃ．Ｇ．，  Ｍａｎｃｕｓｏ，  Ａ．，  ＭｃＣａｌｌｉｏｎ，  Ａ．Ｓ．，  Ｌｅ，  Ａ．，  Ｍｉｌｏｎｅ，  Ｍ．Ｃ，  Ｒａｙｐｏｒｔ，  Ｓ．，  Ｆｅｌｓｈｅｒ，  Ｄ．Ｗ．，  Ｄａｎｇ，  Ｃ．Ｖ．，  Ｙａｎｇ，  Ｌ．，  Ｍｏｓｓ，  Ｔ．，  Ｍａｎｇａｌａ，  Ｌ．Ｓ．，  Ｍａｒｉｎｉ，  Ｊ．，  Ｚｈａｏ，  Ｈ．，  Ｗａｈｌｉｇ，  Ｓ．，  Ａｒｍａｉｚ−Ｐｅｎａ，  Ｇ．，  Ｊｉａｎｇ，  Ｄ．，  Ａｃｈｒｅｊａ，  Ａ．，  Ｗｉｎ，  Ｊ．，  Ｒｏｏｐａｉｍｏｏｌｅ，  Ｒ．，  Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ａｇｕａｙｏ，  Ｃ，  Ｍｅｒｃａｄｏ−Ｕｒｉｂｅ，  Ｉ．，  Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，  Ｇ．，  Ｌｉｕ，  Ｊ．，  Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ，  Ｔ．，  Ｓｏｏｄ，  Ａ．Ｋ．，  Ｒａｍ，  Ｐ．Ｔ．，  Ｎａｇｒａｔｈ，  Ｄ．，  Ｙｉｎｇ，  Ｈ．，  Ｋｉｍｍｅｌｍａｎ，  Ａ．Ｃ，  Ｌｙｓｓｉｏｔｉｓ，  Ｃ．Ａ．，  Ｈｕａ，  Ｓ．，  Ｃｈｕ，  Ｇ．Ｃ．，  Ｆｌｅｔｃｈｅｒ−Ｓａｎａｎｉｋｏｎｅ，  Ｅ．，  Ｌｏｃａｓａｌｅ，  Ｊ．Ｗ．，  Ｓｏｎ，  Ｊ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｈ．，  Ｃｏｌｏｆｆ，  Ｊ．Ｌ．，  Ｙａｎ，  Ｈ．，  Ｗａｎｇ，  Ｗ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｓ．，  Ｖｉａｌｅ，  Ａ．，  Ｚｈｅｎｇ，  Ｈ．，  Ｐａｉｋ，  Ｊ．Ｈ．，  Ｌｉｍ，  Ｃ，  Ｇｕｉｍａｒａｅｓ，  Ａ．Ｒ．，  Ｍａｒｔｉｎ，  Ｅ．Ｓ．，  Ｃｈａｎｇ，  Ｊ．，  Ｈｅｚｅｌ，  Ａ．Ｆ．，  Ｐｅｒｒｙ，  Ｓ．Ｒ．，  Ｈｕ，  Ｊ．，  Ｇａｎ，  Ｂ．，  Ｘｉａｏ，  Ｙ．，  Ａｓａｒａ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｗｅｉｓｓｌｅｄｅｒ，  Ｒ．，  Ｗａｎｇ，  Ｙ．Ａ．，  Ｃｈｉｎ，  Ｌ．，  Ｃａｎｔｌｅｙ，  Ｌ．Ｃ．，  ＤｅＰｉｎｈｏ，  Ｒ．Ａ．，  Ｙｕａｎ，  Ｐ．，  Ｉｔｏ，  Ｋ．，  Ｐｅｒｅｚ−Ｌｏｒｅｎｚｏ，  Ｒ．，  Ｇｕｚｚｏ，  Ｃ．  Ｄｅｌ，  Ｌｅｅ，  Ｊ．Ｈ．，  Ｓｈｅｎ，  Ｃ．Ｈ．，  Ｂｏｓｅｎｂｅｒｇ，  Ｍ．Ｗ．，  ＭｃＭａｈｏｎ，  Ｍ．，  Ｃａｎｔｌｅｙ，  Ｌ．Ｃ．，  Ｚｈｅｎｇ，  Ｂ．，  Ｚｈａｏ，  Ｙ．，  Ｌｉｕ，  Ｈ．，  Ｌｉｕ，  Ｚ．，  Ｄｉｎｇ，  Ｙ．，  Ｌｅｄｏｕｘ，  Ｓ．Ｐ．，  Ｗｉｌｓｏｎ，  Ｇ．Ｌ．，  Ｖｏｅｌｌｍｙ，  Ｒ．，  Ｌｉｎ，  Ｙ．，  Ｌｉｎ，  Ｗ．，  Ｎａｈｔａ，  Ｒ．，  Ｌｉｕ，  Ｂ．，  Ｆｏｄｓｔａｄ，  Ｏ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｊ．，  Ｗｕ，  Ｙ．，  Ｐｒｉｃｅ，  Ｊ．Ｅ．，  Ｔａｎ，  Ｍ．，  ２０１６．  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｙ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．  Ｍｏｌ．  Ｏｎｃｏｌ．  １０，  ７３−８４．  ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｍｏｌｏｎｃ．２０１５．０８．００３
【０１３８】
Ｂａｒｄｅｅｓｙ，  Ｎ．，  ＤｅＰｉｎｈｏ，  Ｒ．Ａ．，  ２００２．  Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ．  Ｎａｔ．
Ｒｅｖ．  Ｃａｎｃｅｒ  ２，  ８９７−９０９．  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｃ９４９
【０１３９】
Ｂｅｒｇｍａｎ，  Ａ．Ｍ．，  Ｐｉｎｅｄｏ，  Ｈ．Ｍ．，  Ｐｅｔｅｒｓ，  Ｇ．Ｊ．，  ２００２．  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ  ｏｆ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ２’，２’−ｄｉｆｌｕｏｒｏｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ  （ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）．  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔ．  Ｕｐｄａｔ．  ５，  １９−３３．  ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ１３６８−７６４６（０２）００００２−Ｘ
【０１４０】
Ｂｅｒｏｕｋｈｉｍ，  Ｒ．，  Ｍｅｒｍｅｌ，  Ｃ．Ｈ．，  Ｐｏｒｔｅｒ，  Ｄ．，  Ｗｅｉ，  Ｇ．，  Ｒａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉ，  Ｓ．，  Ｄｏｎｏｖａｎ，  Ｊ．，  Ｂａｒｒｅｔｉｎａ，  Ｊ．，  Ｂｏｅｈｍ，  Ｊ．Ｓ．，  Ｄｏｂｓｏｎ，  Ｊ．，  Ｕｒａｓｈｉｍａ，  Ｍ．，  Ｍｃ  Ｈｅｎｒｙ，  Ｋ．Ｔ．，  Ｐｉｎｃｈｂａｃｋ，  Ｒ．Ｍ．，  Ｌｉｇｏｎ，  Ａ．Ｈ．，  Ｃｈｏ，  Ｙ．−Ｊ．，  Ｈａｅｒｙ，  Ｌ．，  Ｇｒｅｕｌｉｃｈ，  Ｈ．，  Ｒｅｉｃｈ，  Ｍ．，  Ｗｉｎｃｋｌｅｒ，  Ｗ．，  Ｌａｗｒｅｎｃｅ，  Ｍ．Ｓ．，  Ｗｅｉｒ，  Ｂ．Ａ．，  Ｔａｎａｋａ，  Ｋ．Ｅ．，  Ｃｈｉａｎｇ，  Ｄ．Ｙ．，  Ｂａｓｓ，  Ａ．  Ｊ．，  Ｌｏｏ，  Ａ．，  Ｈｏｆｆｍａｎ，  Ｃ，  Ｐｒｅｎｓｎｅｒ，  Ｊ．，  Ｌｉｅｆｅｌｄ，  Ｔ．，  Ｇａｏ，  Ｑ．，  Ｙｅｃｉｅｓ，  Ｄ．，  Ｓｉｇｎｏｒｅｔｔｉ，  Ｓ．，  Ｍａｈｅｒ，  Ｅ．，  Ｋａｙｅ，  Ｆ．Ｊ．，  Ｓａｓａｋｉ，  Ｈ．，  Ｔｅｐｐｅｒ，  Ｊ．Ｅ．，  Ｆｌｅｔｃｈｅｒ，  Ｊ．  Ａ．，  Ｔａｂｅｒｎｅｒｏ，  Ｊ．，  Ｂａｓｅｌｇａ，  Ｊ．，  Ｔｓａｏ，  Ｍ．−Ｓ．，  Ｄｅｍｉｃｈｅｌｉｓ，  Ｆ．，  Ｒｕｂｉｎ，  Ｍ．Ａ．，  Ｊａｎｎｅ，  Ｐ．Ａ．，  Ｄａｌｙ，  Ｍ．Ｊ．，  Ｎｕｃｅｒａ，  Ｃ，  Ｌｅｖｉｎｅ，  Ｒ．Ｌ．，  Ｅｂｅｒｔ，  Ｂ．Ｌ．，  Ｇａｂｒｉｅｌ，  Ｓ．，  Ｒｕｓｔｇｉ，  Ａ．Ｋ．，  Ａｎｔｏｎｅｓｃｕ，  Ｃ．Ｒ．，  Ｌａｄａｎｙｉ，  Ｍ．，  Ｌｅｔａｉ，  Ａ．，  Ｇａｒｒａｗａｙ，  Ｌ．Ａ．，  Ｌｏｄａ，  Ｍ．，  Ｂｅｅｒ，  Ｄ．Ｇ．，  Ｔｒｕｅ，  Ｌ．Ｄ．，  Ｏｋａｍｏｔｏ，  Ａ．，  Ｐｏｍｅｒｏｙ，  Ｓ．Ｌ．，  Ｓｉｎｇｅｒ，  Ｓ．，  Ｇｏｌｕｂ，  Ｔ．Ｒ．，  Ｌａｎｄｅｒ，  Ｅ．Ｓ．，  Ｇｅｔｚ，  Ｇ．，  Ｓｅｌｌｅｒｓ，  Ｗ．Ｒ．，  Ｍｅｙｅｒｓｏｎ，  Ｍ．，  ２０１０．  Ｔｈｅ  ｌａｎｄｓｃａｐｅ  ｏｆ  ｓｏｍａｔｉｃ  ｃｏｐｙ−ｎｕｍｂｅｒ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ  ａｃｒｏｓｓ  ｈｕｍａｎ  ｃａｎｃｅｒｓ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４６３，  ８９９−９０５．  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ０８８２２
【０１４１】
Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｊｅｅ，  Ｖ．，  Ｚｈｏｕ，  Ｙ．，  Ｙｅｎ，  Ｔ．Ｊ．，
２０１４．  Ａ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｌｅｔｈａｌ  ｓｃｒｅｅｎ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ｔｈｅ  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒ  ｉｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．  Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ  １３，  ３８３９−５６．  ｄｏｉ：１０．４１６１／１５３８４１０１．２０１４．９６７０７０
【０１４２】
Ｂｒｏｄｏｗｉｃｚ，  Ｔ．，  Ｋｒｚａｋｏｗｓｋｉ，  Ｍ．，  Ｚｗｉｔｔｅｒ，
Ｍ．，  Ｔｚｅｋｏｖａ，  Ｖ．，  Ｒａｍｌａｕ，  Ｒ．，  Ｇｈｉｌｅｚａｎ，  Ｎ．，  Ｃｉｕｌｅａｎｕ，  Ｔ．，  Ｃｕｃｅｖｉｃ，  Ｂ．，  Ｇｙｕｒｋｏｖｉｔｓ，  Ｋ．，  Ｕｌｓｐｅｒｇｅｒ，  Ｅ．，  Ｊａｓｓｅｍ，  Ｊ．，  Ｇｒｇｉｃ，
Ｍ．，  Ｓａｉｐ，  Ｐ．，  Ｓｚｉｌａｓｉ，  Ｍ．，  Ｗｉｌｔｓｃｈｋｅ，  Ｃ，  Ｗａｇｎｅｒｏｖａ，  Ｍ．，  Ｏｓｋｉｎａ，  Ｎ．，  Ｓｏｌｄａｔｅｎｋｏｖａ，  Ｖ．，  Ｚｉｅｌｉｎｓｋｉ，  Ｃ，  Ｗｅｎｃｚｌ，  Ｍ．，  ２００６．  Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ  ａｎｄ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｌｌｏｗｅｄ  ｂｙ  ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ｏｒ  ｂｅｓｔ  ｓｕｐｐｏｒｔｉｖｅ  ｃａｒｅ  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ：  ａ  ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  ｔｒｉａｌ．  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  ５２，  １５５−６３．  ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｌｕｎｇｃａｎ．２００６．０１．００６
【０１４３】
Ｃｈｉｐｕｋ，  Ｊ．Ｅ．，  Ｋｕｗａｎａ，  Ｔ．，  Ｂｏｕｃｈｉｅｒ−Ｈａｙｅｓ，  Ｌ．，  Ｄｒｏｉｎ，  Ｎ．Ｍ．，  Ｎｅｗｍｅｙｅｒ，  Ｄ．Ｄ．，  Ｓｃｈｕｌｅｒ，  Ｍ．，  Ｇｒｅｅｎ，  Ｄ．Ｒ．，  ２００４．  Ｄｉｒｅｃｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂａｘ  ｂｙ  ｐ５３  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （８０−．  ）．  ３０３，  １０１０−４．  ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．１０９２７３４
【０１４４】
Ｃｈｏｕ，  Ｔ．−Ｃ，  Ｍａｒｔｉｎ，  Ｎ．，  ２００７．  ＣｏｍｐｕＳｙｎ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｄｏｓｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ，  ａｎｄ  ｕｓｅｒ’ｓ  ｇｕｉｄｅ．
【０１４５】
Ｃｌｅｇｇ，  Ａ．，  Ｓｃｏｔｔ，  Ｄ．Ａ．，  Ｓｉｄｈｕ，  Ｍ．，  ２００１．  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ：  Ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  ｏｆ  Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ，  Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ，  Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ａｎｄ  Ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ．  Ｈｅａｌｔｈ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．  Ａｓｓｅｓｓ．  （Ｒｏｃｋｖ）．  ５，  ２０９．
【０１４６】
Ｃｏｎｒａｄ，  Ｗ．，  Ｍａｊｏｒ，  Ｍ．Ｂ．，  Ｃｌｅａｒｙ，  Ｍ．Ａ．，  Ｆｅｒｒｅｒ，  Ｍ．，  Ｒｏｂｅｒｔｓ，  Ｂ．，  Ｍａｒｉｎｅ，  Ｓ．，  Ｃｈｕｎｇ，  Ｎ．，  Ａｒｔｈｕｒ，  Ｗ．Ｔ．，  Ｍｏｏｎ，  Ｒ．Ｔ．，  Ｂｅｒｎｄｔ，  Ｊ．Ｄ．，  Ｃｈｉｅｎ，  Ａ．Ｊ．，  ２０１３．  ＦＡＭ１２９Ｂ  ｉｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  Ｗｎｔ／β−ｃａｔｅｎｉｎ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．  Ｆ１０００Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２，  １３４．  ｄｏｉ：１０．１２６８８／ｆ１０００ｒｅｓｅａｒｃｈ．２−１３４．ｖ２
【０１４７】
Ｃｏｒｃｏｒａｎ，  Ｒ．Ｂ．，  Ｄｉａｓ−Ｓａｎｔａｇａｔａ，  Ｄ．，  Ｂｅｒｇｅｔｈｏｎ，  Ｋ．，  ｌａｆｒａｔｅ，  Ａ．Ｊ．，  Ｓｅｔｔｌｅｍａｎ，  Ｊ．，  Ｅｎｇｅｌｍａｎ，  Ｊ．Ａ．，  ２０１０．  ＢＲＡＦ  ｇｅｎｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｃａｎ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＭＥＫ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｈａｒｂｏｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ｍｕｔａｔｉｏｎ．  Ｓｃｉ．  Ｓｉｇｎａｌ．  ３，  ｒａ８４．  ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｓｉｇｎａｌ．２００１１４８
【０１４８】
ＤｅＮｉｃｏｌａ，  Ｇ．Ｍ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｐ．−Ｈ．，  Ｍｕｌｌａｒｋｙ，  Ｅ．，  Ｓｕｄｄｅｒｔｈ，  Ｊ．Ａ．，  Ｈｕ，  Ｚ．，  Ｗｕ，  Ｄ．，  Ｔａｎｇ，  Ｈ．，  Ｘｉｅ，  Ｙ．，  Ａｓａｒａ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｈｕｆｆｍａｎ，  Ｋ．Ｅ．，  Ｗｉｓｔｕｂａ，  Ｉ．Ｉ．，  Ｍｉｎｎａ，  Ｊ．Ｄ．，  ＤｅＢｅｒａｒｄｉｎｉｓ，  Ｒ．Ｊ．，  Ｃａｎｔｌｅｙ，  Ｌ．Ｃ．，  ２０１５．  ＮＲＦ２  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｓｅｒｉｎｅ  ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｎａｔ．  Ｇｅｎｅｔ．  ４７，  １４７５−１４８１．  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｇ．３４２１
【０１４９】
Ｅｄｅｉｍａｎ，  Ｍ．Ｊ．，  Ｑｕａｍ，  Ｈ．，  Ｍｕｌｌｉｎｓ，  Ｂ．，  ２００１．  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ，  ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ  ａｎｄ  ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｙ  ｄｅｆｉｎｅｄ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ４８，  １４１−１４４．  ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ００２８０００００２７３
【０１５０】
Ｅｒｓｔｅｒ，  Ｓ．，  Ｍｉｈａｒａ，  Ｍ．，  Ｋｉｍ，  Ｒ．Ｈ．，  Ｐｅｔｒｅｎｋｏ，  Ｏ．，  Ｍｏｌｌ，  Ｕ．Ｍ．，  ２００４．  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐ５３  Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  Ｔｒｉｇｇｅｒｓ  ａ  Ｒａｐｉｄ  Ｆｉｒｓｔ  Ｗａｖｅ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ｉｎ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ＤＮＡ  Ｄａｍａｇｅ  Ｔｈａｔ  Ｃａｎ  Ｐｒｅｃｅｄｅ  ｐ５３  Ｔａｒｇｅｔ  Ｇｅｎｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２４，  ６７２８−６７４１．  ｄｏｉ：１０．１１２８／ＭＣＢ．２４．１５．６７２８−６７４１．２００４
【０１５１】
Ｆｅｄｏｒｅｎｋｏ，  Ｉ．  Ｖ．，  Ｐａｒａｉｓｏ，  Ｋ．Ｈ．Ｔ．，  Ｓｍａｌｌｅｙ，  Ｋ．Ｓ．Ｍ．，  ２０１１．  Ａｃｑｕｉｒｅｄ  ａｎｄ  ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ  ｍｕｔａｎｔ  ｍｅｌａｎｏｍａ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ８２，  ２０１−２０９．  ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｂｃｐ．２０１１．０５．０１５
【０１５２】
Ｆｅｄｏｒｅｎｋｏ，  Ｉ．  Ｖ，  Ａｂｅｌ，  Ｅ．  Ｖ，  Ｋｏｏｍｅｎ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｆａｎｇ，  Ｂ．，  Ｗｏｏｄ，  Ｅ．Ｒ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｙ．Ａ．，  Ｆｉｓｈｅｒ，  Ｋ．Ｊ．，  Ｉｙｅｎｇａｒ，  Ｓ．，  Ｄａｈｌｍａｎ，  Ｋ．Ｂ．，  Ｗａｒｇｏ，  Ｊ．  Ａ．，  Ｆｌａｈｅｒｔｙ，  Ｋ．Ｔ．，  Ｓｏｓｍａｎ，  Ｊ．
Ａ．，  Ｓｏｎｄａｋ，  Ｖ．Ｋ．，  Ｍｅｓｓｉｎａ，  Ｊ．Ｌ．，  Ｇｉｂｎｅｙ，  Ｇ．Ｔ．，  Ｓｍａｌｌｅｙ，  Ｋ．Ｓ．Ｍ．，  ２０１６．  Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ａｂｒｏｇａｔｅｓ  ｔｈｅ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｏｆ  ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ／ＰＴＥＮ−ｎｕｌｌ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ３５，  １２２５−３５．  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｏｎｃ．２０１５．１８８
【０１５３】
Ｆｅｌｄｍａｎｎ，  Ｇ．，  Ｒａｕｅｎｚａｈｎ，  Ｓ．，  Ｍａｉｔｒａ，  Ａ．，  ２００９．  Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｆｏｒ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ｒｅｓｅａｒｃｈ．  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ４，  ４２９−４４３．  ｄｏｉ：１０．１５１７／１７４６０４４０９０２８２１６５７
【０１５４】
Ｆｌａｈｅｒｔｙ，  Ｋ．Ｔ．，  Ｉｎｆａｎｔｅ，  Ｊ．Ｒ．，  Ｄａｕｄ，  Ａ．，  Ｇｏｎｚａｌｅｚ，  Ｒ．，  Ｋｅｆｆｏｒｄ，  Ｒ．Ｆ．，  Ｓｏｓｍａｎ，  Ｊ．，  Ｈａｍｉｄ，  Ｏ．，  Ｓｃｈｕｃｈｔｅｒ，  Ｌ．，  Ｃｅｂｏｎ，  Ｊ．，  Ｉｂｒａｈｉｍ，  Ｎ．，  Ｋｕｄｃｈａｄｋａｒ，  Ｒ．，  Ｂｕｒｒｉｓ，  Ｈ．  ａ．，  Ｆａｌｃｈｏｏｋ，  Ｇ．，  Ａｌｇａｚｉ，  Ａ．，  Ｌｅｗｉｓ，  Ｋ．，  Ｌｏｎｇ，  Ｇ．  Ｖ．，  Ｐｕｚａｎｏｖ，  Ｌ，  Ｌｅｂｏｗｉｔｚ，  Ｐ．，  Ｓｉｎｇｈ，  Ａ．，  Ｌｉｔｔｌｅ，  Ｓ．，  Ｓｕｎ，  Ｐ．，  Ａｌｌｒｅｄ，  Ａ．，  Ｏｕｅｌｌｅｔ，  Ｄ．，  Ｋｉｍ，  Ｋ．Ｂ．，  Ｐａｔｅｌ，  Ｋ．，  Ｗｅｂｅｒ，  Ｊ．，  ２０１２．  Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ＢＲＡＦ  ａｎｄ  ＭＥＫ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｍｅｌａｎｏｍａ  ｗｉｔｈ  ＢＲＡＦ  Ｖ６００  Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ．  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３６７，  １６９４−１７０３．  ｄｏｉ：１０．１０５６／ＮＥＪＭｏａ１２１００９３
【０１５５】
Ｆｒｙｅｒ，  Ｒ．Ａ．，  Ｂａｒｌｅｔｔ，  Ｂ．，  Ｇａｌｕｓｔｉａｎ，  Ｃ，
Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ，  Ａ．Ｇ．，  ２０１１．  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｓｅｎｓｉｔｉｓａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｉＭｉＤ  ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ．  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ３１，  ３７４７−３７５６．
【０１５６】
Ｇｉｒｏｔｔｉ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｐｅｄｅｒｓｅｎ，  Ｍ．，  Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｌａｏｒｄｅｎ，  Ｂ．，  Ｖｉｒｏｓ，  Ａ．，  Ｔｕｒａｊｌｉｃ，  Ｓ．，  Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ−Ｄｕｖａｚ，  Ｄ．，  Ｚａｍｂｏｎ，  Ａ．，  Ｓｉｎｃｌａｉｒ，  Ｊ．，  Ｈａｙｅｓ，  Ａ．，  Ｇｏｒｅ，  Ｍ．，  Ｌｏｒｉｇａｎ，  Ｐ．，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，  Ｃ，  Ｌａｒｋｉｎ，  Ｊ．，  Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ，  Ｃ，  Ｍａｒａｉｓ，  Ｒ．，  ２０１３．  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ＥＧＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｏｒ  ＳＲＣ  ｆａｍｉｌｙ  ｋｉｎａｓｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｏｖｅｒｃｏｍｅｓ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ３，  １５８−１６７．  ｄｏｉ：１０．１１５８／２１５９−８２９０．ＣＤ−１２−０３８６
【０１５７】
Ｇｏｗｒｉｓｈａｎｋａｒ，  Ｋ．，  Ｓｎｏｙｍａｎ，  Ｓ．，  Ｐｕｐｏ，  Ｇ．Ｍ．，  Ｂｅｃｋｅｒ，  Ｔ．Ｍ．，  Ｋｅｆｆｏｒｄ，  Ｒ．Ｆ．，  Ｒｉｚｏｓ，  Ｈ．，  ２０１２．  Ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｃａｎ  ｃｏｎｆｅｒ  ｃｒｏｓｓ−ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ＢＲＡＦ／ＭＥＫ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ．  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １３２，  １８５０−１８５９．  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｊｉｄ．２０１２．６３
【０１５８】
Ｇｒｅｇｅｒ，  Ｊ．Ｇ．，  Ｅａｓｔｍａｎ，  Ｓ．Ｄ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｖ．，
Ｂｌｅａｍ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｈｕｇｈｅｓ，  Ａ．Ｍ．，  Ｓｍｉｔｈｅｍａｎ，  Ｋ．Ｎ．，  Ｄｉｃｋｅｒｓｏｎ，  Ｓ．Ｈ．，  Ｌａｑｕｅｒｒｅ，  Ｓ．Ｇ．，  Ｌｉｕ，  Ｌ．，  Ｇｉｌｍｅｒ，  Ｔ．Ｍ．，  ２０１２．  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ＢＲＡＦ，  ＭＥＫ，  ａｎｄ  ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｖｅｒｃｏｍｅ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＧＳＫ２１１８４３６  ｄａｂｒａｆｅｎｉｂ，  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ＮＲＡＳ  ｏｒ  ＭＥＫ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ．  Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．  １１，  ９０９−２０．  ｄｏｉ：１０．１１５８／１５３５−７１６３．ＭＣＴ−１１−０９８９
【０１５９】
Ｈａｌａｂａｎ，  Ｒ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｗ．，  Ｂａｃｃｈｉｏｃｃｈｉ，  Ａ．，  Ｃｈｅｎｇ，  Ｅ．，  Ｐａｒｉｓｉ，  Ｆ．，  Ａｒｉｙａｎ，  Ｓ．，  Ｋｒａｕｔｈａｍｍｅｒ，  Ｍ，  ＭｃＣｕｓｋｅｒ，  Ｊ．Ｐ．，  Ｋｌｕｇｅｒ，  Ｙ．，  Ｓｚｎｏｌ，  Ｍ，  ２０１０．  ＰＬＸ４０３２，  ａ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ＢＲＡＦ（Ｖ６００Ｅ）  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｔｈｅ  ＥＲＫ  ｐａｔｈｗａｙ  ａｎｄ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｃｅｌｌ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＢＲＡＦ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．  Ｐｉｇｍｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｌａｎｏｍａ  Ｒｅｓ．  ２３，  １９０−２００．  ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊ．１７５５−１４８Ｘ．２０１０．００６８５．ｘ
【０１６０】
Ｈａｔｚｉｖａｓｓｉｌｉｏｕ，  Ｇ．，  Ｓｏｎｇ，  Ｋ．，  Ｙｅｎ，  Ｉ，  Ｂｒａｎｄｈｕｂｅｒ，  Ｂ．Ｊ．，  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，  Ｄ．Ｊ．，  Ａｌｖａｒａｄｏ，  Ｒ．，  Ｌｕｄｌａｍ，  Ｍ．Ｊ．，  Ｓｔｏｋｏｅ，  Ｄ．，  Ｇｌｏｏｒ，  Ｓ．Ｌ．，  Ｖｉｇｅｒｓ，  Ｇ．，  Ｍｏｒａｌｅｓ，  Ｔ．，  Ａｌｉａｇａｓ，  Ｉ，  Ｌｉｕ，  Ｂ．，  Ｓｉｄｅｒｉｓ，  Ｓ．，  Ｈｏｅｆｌｉｃｈ，  Ｋ．Ｐ．，
Ｊａｉｓｗａｌ，  Ｂ．Ｓ．，  Ｓｅｓｈａｇｉｒｉ，  Ｓ．，  Ｋｏｅｐｐｅｎ，  Ｈ．，  Ｂｅｌｖｉｎ，  Ｍ．，  Ｆｒｉｅｄｍａｎ，  Ｌ．Ｓ．，  Ｍａｌｅｋ，  Ｓ．，  ２０１０．  ＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｐｒｉｍｅ  ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ  ＲＡＦ  ｔｏ  ａｃｔｉｖａｔｅ  ｔｈｅ  ＭＡＰＫ  ｐａｔｈｗａｙ  ａｎｄ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｇｒｏｗｔｈ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４６４，  ４３１−４３５．  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ０８８３３
【０１６１】
Ｈａｔｚｉｖａｓｓｉｌｉｏｕ，  Ｇ．，  Ｓｏｎｇ，  Ｋ．，  Ｙｅｎ，  Ｉ，  Ｂｒａｎｄｈｕｂｅｒ，  Ｂ．Ｊ．，  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，  Ｄ．Ｊ．，  Ａｌｖａｒａｄｏ，  Ｒ．，  Ｌｕｄｌａｍ，  Ｍ．Ｊ．Ｃ．，  Ｓｔｏｋｏｅ，  Ｄ．，  Ｇｌｏｏｒ，  Ｓ．Ｌ．，  Ｖｉｇｅｒｓ，  Ｇ．，  Ｍｏｒａｌｅｓ，  Ｔ．，  Ａｌｉａｇａｓ，  Ｉ，  Ｌｉｕ，  Ｂ．，  Ｓｉｄｅｒｉｓ，  Ｓ．，  Ｈｏｅｆｌｉｃｈ，  Ｋ．Ｐ．，  Ｊａｉｓｗａｌ，  Ｂ．Ｓ．，  Ｓｅｓｈａｇｉｒｉ，  Ｓ．，  Ｋｏｅｐｐｅｎ，  Ｈ．，  Ｂｅｌｖｉｎ，  Ｍ．，  Ｆｒｉｅｄｍａｎ，  Ｌ．Ｓ．，  Ｍａｌｅｋ，  Ｓ．，  ２０１０．  ＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｐｒｉｍｅ  ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ  ＲＡＦ  ｔｏ  ａｃｔｉｖａｔｅ  ｔｈｅ  ＭＡＰＫ  ｐａｔｈｗａｙ  ａｎｄ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｇｒｏｗｔｈ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４６４，  ４３１−５．  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ０８８３３
【０１６２】
Ｈａｙａｓｈｉ，  Ｈ．，  Ｋｕｒａｔａ，  Ｔ．，  Ｎａｋａｇａｗａ，  Ｋ．，  ２０１１．  Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ：  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｓｔａｇｅ  ｎｏｎｓｑｕａｍｏｕｓ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｃｌｉｎ．  Ｍｅｄ．  Ｉｎｓｉｇｈｔｓ．  Ｏｎｃｏｌ．  ５，  １７７−８４．  ｄｏｉ：１０．４１３７／ＣＭＯ．Ｓ６２５２
【０１６３】
Ｌａｂｕｓｃｈａｇｎｅ，  Ｃ．Ｆ．，  ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｒｏｅｋ，  Ｎ．Ｊ．Ｆ．，  Ｍａｃｋａｙ，  Ｇ．Ｍ．，  Ｖｏｕｓｄｅｎ，  Ｋ．Ｈ．，  Ｍａｄｄｏｃｋｓ，  Ｏ．Ｄ．Ｋ．，  ２０１４．  Ｓｅｒｉｎｅ，  ｂｕｔ  Ｎｏｔ  Ｇｌｙｃｉｎｅ，  Ｓｕｐｐｏｒｔｓ  Ｏｎｅ−Ｃａｒｂｏｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌｓ．  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ．  ７，  １２４８−１２５８．  ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｒｅｐ．２０１４．０４．０４５
【０１６４】
Ｌｉ，  Ｆ．Ｚ．，  Ｄｈｉｌｌｏｎ，  Ａ．Ｓ．，  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，  Ｒ．Ｌ．，  ＭｃＡｒｔｈｕｒ，  Ｇ．，  Ｆｅｒｒａｏ，  Ｐ．Ｔ．，  ２０１５．  Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ：  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ．  Ｆｒｏｎｔ．  Ｏｎｃｏｌ．  ５，  ３１．  ｄｏｉ：１０．３３８９／ｆｏｎｃ．２０１５．０００３１
【０１６５】
Ｌｏｃａｓａｌｅ，  Ｊ．Ｗ．，  Ｇｒａｓｓｉａｎ，  Ａ．Ｒ．，  Ｍｅｌｍａｎ，
Ｔ．，  Ｌｙｓｓｉｏｔｉｓ，  Ｃ．Ａ．，  Ｍａｔｔａｉｎｉ，  Ｋ．Ｒ．，  Ｂａｓｓ，  Ａ．Ｊ．，  Ｈｅｆｆｒｏｎ，  Ｇ．，  Ｍｅｔａｌｌｏ，  ＣＭ．，  Ｍｕｒａｎｅｎ，  Ｔ．，  Ｓｈａｒｆｉ，  Ｈ．，  Ｓａｓａｋｉ，  Ａ．Ｔ．，  Ａｎａｓｔａｓｉｏｕ，  Ｄ．，  Ｍｕｌｌａｒｋｙ，  Ｅ．，  Ｖｏｋｅｓ，  Ｎ．Ｉ．，  Ｓａｓａｋｉ，  Ｍ．，  Ｂｅｒｏｕｋｈｉｍ，  Ｒ．，  Ｓｔｅｐｈａｎｏｐｏｕｌｏｓ，  Ｇ．，  Ｌｉｇｏｎ，  Ａ．Ｈ．，  Ｍｅｙｅｒｓｏｎ，  Ｍ．，  Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，  Ａ．Ｌ．，  Ｃｈｉｎ，  Ｌ．，  Ｗａｇｎｅｒ，  Ｇ．，  Ａｓａｒａ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｂｒｕｇｇｅ，  Ｊ．Ｓ．，  Ｃａｎｔｌｅｙ，  Ｌ．Ｃ．，  Ｖａｎｄｅｒ  Ｈｅｉｄｅｎ，  Ｍ．Ｇ．，  ２０１１．  Ｐｈｏｓｐｈｏｇｌｙｃｅｒａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  ｄｉｖｅｒｔｓ  ｇｌｙｃｏｌｙｔｉｃ  ｆｌｕｘ  ａｎｄ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｏｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓ．  Ｎａｔ．  Ｇｅｎｅｔ．  ４３，  ８６９−７４．  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｇ．８９０
【０１６６】
Ｌｏｎｇ，  Ｇ．  Ｖ．，  Ｓｔｒｏｙａｋｏｖｓｋｉｙ，  Ｄ．，  Ｇｏｇａｓ，  Ｈ．，  Ｌｅｖｃｈｅｎｋｏ，  Ｅ．，  Ｄｅ  Ｂｒａｕｄ，  Ｆ．，  Ｌａｒｋｉｎ，
Ｊ．，  Ｇａｒｂｅ，  Ｃ，  Ｊｏｕａｒｙ，  Ｔ．，  Ｈａｕｓｃｈｉｌｄ，  Ａ．，  Ｇｒｏｂ，  Ｊ．Ｊ．，  Ｃｈｉａｒｉｏｎ−Ｓｉｌｅｎｉ，  Ｖ．，  Ｌｅｂｂｅ，  Ｃ，  Ｍａｎｄａｌａ，  Ｍ．，  Ｍｉｌｌｗａｒｄ，  Ｍ．，  Ａｒａｎｃｅ，  Ａ．，  Ｂｏｎｄａｒｅｎｋｏ，  Ｌ，  Ｈａａｎｅｎ，  Ｊ．Ｂ．Ａ．Ｇ．，  Ｈａｎｓｓｏｎ，  Ｊ．，  Ｕｔｉｋａｌ，  Ｊ．，  Ｆｅｒｒａｒｅｓｉ，  Ｖ．，  Ｋｏｖａｌｅｎｋｏ，  Ｎ．，  Ｍｏｈｒ，  Ｐ．，  Ｐｒｏｂａｃｈａｉ，  Ｖ．，  Ｓｃｈａｄｅｎｄｏｒｆ，  Ｄ．，  Ｎａｔｈａｎ，  Ｐ．，  Ｒｏｂｅｒｔ，  Ｃ，  Ｒｉｂａｓ，  Ａ．，  Ｄｅｍａｒｉｎｉ，  Ｄ．Ｊ．，  Ｉｒａｎｉ，  Ｊ．Ｇ．，  Ｓｗａｎｎ，  Ｓ．，  Ｌｅｇｏｓ，  Ｊ．  Ｊ．，  Ｊｉｎ，  Ｆ．，  Ｍｏｏｋｅｒｊｅｅ，  Ｂ．，  Ｆｌａｈｅｒｔｙ，  Ｋ．，  ２０１５．  Ｄａｂｒａｆｅｎｉｂ  ａｎｄ  ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ  ｖｅｒｓｕｓ  ｄａｂｒａｆｅｎｉｂ  ａｎｄ  ｐｌａｃｅｂｏ  ｆｏｒ  Ｖａｌ６００  ＢＲＡＦ−ｍｕｔａｎｔ  ｍｅｌａｎｏｍａ：  Ａ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ，  ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ，  ｐｈａｓｅ  ３  ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ．  Ｌａｎｃｅｔ  ３８６，  ４４４−４５１．  ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ０１４０−６７３６（１５）６０８９８−４
【０１６７】
Ｍａｒｋｋａｎｅｎ，  Ｅ．，  Ｆｉｓｃｈｅｒ，  Ｒ．，  Ｌｅｄｅｎｔｃｏｖａ，
Ｍ．，  Ｋｅｓｓｌｅｒ，  Ｂ．Ｍ．，  Ｄｉａｎｏｖ，  Ｇ．Ｌ．，  ２０１５．  Ｃｅｌｌｓ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｉｎ  ｂａｓｅ−ｅｘｃｉｓｉｏｎ  ｒｅｐａｉｒ  ｒｅｖｅａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｈａｌｌｍａｒｋｓ  ｏｒｉｇｉｎａｔｉｎｇ  ｆｒｏｍ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔｓ  ｔｏ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ４３，  ３６６７−７９．  ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｖ２２２
【０１６８】
Ｍｅａｃｈａｍ，  Ｃ．Ｅ．，  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  Ｓ．Ｊ．，  ２０１３．  Ｔｕｍｏｕｒ  ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ．  Ｎａｔｕｒｅ  ５０１，  ３２８−３３７．  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１２６２４
【０１６９】
Ｍｅｎｚｉｅｓ，  Ａ．Ｍ．，  Ｌｏｎｇ，  Ｇ．  Ｖ，  Ｍｕｒａｌｉ，  Ｒ．，  ２０１２．  Ｄａｂｒａｆｅｎｉｂ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｍｅｌａｎｏｍａ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．  Ｄｅｖｅｌ．  Ｔｈｅｒ．  ６，  ３９１−４０５．  ｄｏｉ：１０．２１４７／ＤＤＤＴ．Ｓ３８９９８
【０１７０】
Ｍｏｒｇａｎ，  Ｍ．，  Ｅｌ  Ｓｈａｉｋｈ，  Ｍ．  ａ，  Ａｂｕ−Ｉｓａ，  Ｅ．，  Ｄａｖｉｓ，  Ｍ．  ａ，  Ｌａｗｒｅｎｃｅ，  Ｔ．Ｓ．，  ２００８．  Ｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ｆｉｘｅｄ−ｄｏｓｅ−ｒａｔｅ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｖｅｒｓｕｓ  ｂｏｌｕｓ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｍｏｄｅｌ．  Ｔｒａｎｓｌ．  Ｏｎｃｏｌ．  １，  ４４−４９．  ｄｏｉ：ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１５９３／ｔｌｏ．０７１１８
【０１７１】
Ｍｏｒｉｃｅａｕ，  Ｇ．，  Ｈｕｇｏ，  Ｗ．，  Ｈｏｎｇ，  Ａ．，  Ｓｈｉ，  Ｈ．，  Ｋｏｎｇ，  Ｘ．，  Ｙｕ，  Ｃ．Ｃ．，  Ｋｏｙａ，  Ｒ．Ｃ．，  Ｓａｍａｔａｒ，  Ａ．Ａ．，  Ｋｈａｎｌｏｕ，  Ｎ．，  Ｂｒａｕｎ，  Ｊ．，  Ｒｕｃｈａｌｓｋｉ，  Ｋ．，  Ｓｅｉｆｅｒｔ，  Ｈ．，  Ｌａｒｋｉｎ，  Ｊ．，  Ｄａｈｌｍａｎ，  Ｋ．Ｂ．，  Ｊｏｈｎｓｏｎ，  Ｄ．Ｂ．，  Ａｌｇａｚｉ，  Ａ．，  Ｓｏｓｍａｎ，  Ｊ．Ａ．，  Ｒｉｂａｓ，  Ａ．，  Ｌｏ，  Ｒ．Ｓ．，  ２０１５．  Ｔｕｎａｂｌｅ−ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｌｉｍｉｔ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ＢＲＡＦ／ＭＥＫ  ｃｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｂｕｔ  ｒｅｓｕｌｔ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｄｒｕｇ  ａｄｄｉｃｔｉｏｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２７，  ２４０−５６．  ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｃｅｌｌ．２０１４．１１．０１８
【０１７２】
Ｍｏｒｒｉｓ，  Ｅ．Ｊ．，  Ｊｈａ，  Ｓ．，  Ｒｅｓｔａｉｎｏ，  Ｃ．Ｒ．，  Ｄａｙａｎａｎｔｈ，  Ｐ．，  Ｚｈｕ，  Ｈ．，  Ｃｏｏｐｅｒ，  Ａ．，  Ｃａｒｒ，  Ｄ．，  Ｄｅｎｇ，  Ｙ．，  Ｊｉｎ，  Ｗ．，  Ｂｌａｃｋ，  Ｓ．，  Ｌｏｎｇ，  Ｂ．，  Ｌｉｕ，  Ｊ．，  ＤｉＮｕｎｚｉｏ，  Ｅ．，  Ｗｉｎｄｓｏｒ，  Ｗ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｒ．，  Ｚｈａｏ，  Ｓ．，  Ａｎｇａｇａｗ，  Ｍ．Ｈ．，  Ｐｉｎｈｅｉｒｏ，  Ｅ．Ｍ．，  Ｄｅｓａｉ，  Ｊ．，  Ｘｉａｏ，  Ｌ．，  Ｓｈｉｐｐｓ，  Ｇ．，  Ｈｒｕｚａ，  Ａ．，  Ｗａｎｇ，  Ｊ．，  Ｋｅｌｌｙ，  Ｊ．，  Ｐａｌｉｗａｌ，  Ｓ．，  Ｇａｏ，  Ｘ．，  Ｂａｂｕ，  Ｂ．Ｓ．，  Ｚｈｕ，  Ｌ．，  Ｄａｕｂｌａｉｎ，  Ｐ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｌ．，  Ｌｕｔｔｅｒｂａｃｈ，  Ｂ．  Ａ．，  Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ，  Ｍ．Ｒ．，  Ｐｈｉｌｉｐｐａｒ，  Ｕ．，  Ｓｉｌｉｐｈａｉｖａｎｈ，  Ｐ．，  Ｗｉｔｔｅｒ，  Ｄ．，  Ｋｉｒｓｃｈｍｅｉｅｒ，  Ｐ．，  Ｒｏｂｅｒｔ  Ｂｉｓｈｏｐ，  Ｗ．，  Ｈｉｃｋｌｉｎ，  Ｄ．，  Ｇａｒｙ  Ｇｉｌｌｉｌ，  Ｄ．，  Ｊａｙａｒａｍａｎ，  Ｌ．，  Ｚａｗｅｌ，  Ｌ．，  Ｆａｗｅｌｌ，  Ｓ．，  Ｓａｍａｔａｒ，  Ａ．  Ａ．，  ２０１３．  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ＥＲＫ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｗｉｔｈ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＢＲＡＦ  ａｎｄ  ＭＥＫ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ３，  ７４２−７５０．  ｄｏｉ：１０．１１５８／２１５９−８２９０．ＣＤ−１３−００７０
【０１７３】
Ｍｕｌｌａｒｋｙ，  Ｅ．，  Ｍａｔｔａｉｎｉ，  Ｋ．Ｒ．，  Ｖａｎｄｅｒ  Ｈｅｉｄｅｎ，  Ｍ．Ｇ．，  Ｃａｎｔｌｅｙ，  Ｌ．Ｃ．，  Ｌｏｃａｓａｌｅ，  Ｊ．Ｗ．，  ２０１１．  ＰＨＧＤＨ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｌｔｅｒｅｄ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ．  Ｐｉｇｍｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｌａｎｏｍａ  Ｒｅｓ．  ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊ．１７５５−１４８Ｘ．２０１１．００９１９．ｘ
【０１７４】
Ｍｕｌｌｅｒ，  Ｐ．Ａ．Ｊ．，  Ｖｏｕｓｄｅｎ，  Ｋ．Ｈ．，  ２０１４．  Ｍｕｔａｎｔ  ｐ５３  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ：  Ｎｅｗ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２５，
３０４−３１７．  ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｃｒ．２０１４．０１．０２１
【０１７５】
Ｏｈｈａｓｈｉ，  Ｓ．，  Ｏｈｕｃｈｉｄａ，  Ｋ．，  Ｍｉｚｕｍｏｔｏ，  Ｋ．，  Ｆｕｊｉｔａ，  Ｈ．，  Ｅｇａｍｉ，  Ｔ．，  Ｙｕ，  Ｊ．，  Ｔｏｍａ，  Ｈ．，  Ｓａｄａｔｏｍｉ，  Ｓ．，  Ｎａｇａｉ，  Ｅ．，  Ｔａｎａｋａ，  Ｍ．，  ２００８．  Ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ｉｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ．  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２８，  ２２０５−２２１２．
【０１７６】
Ｏｌｄ，  Ｗ．Ｍ．，  Ｓｈａｂｂ，  Ｊ．Ｂ．，  Ｈｏｕｅｌ，  Ｓ．，  Ｗａｎｇ，  Ｈ．，  Ｃｏｕｔｓ，  Ｋ．Ｌ．，  Ｙｅｎ，  Ｃ，  Ｌｉｔｍａｎ，  Ｅ．Ｓ．，  Ｃｒｏｙ，  Ｃ．Ｈ．，  Ｍｅｙｅｒ−Ａｒｅｎｄｔ，  Ｋ．，  Ｍｉｒａｎｄａ，  Ｊ．Ｇ．，  Ｂｒｏｗｎ，  Ｒ．Ａ．，  Ｗｉｔｚｅ，  Ｅ．Ｓ．，  Ｓｃｈｗｅｐｐｅ，  Ｒ．Ｅ．，  Ｒｅｓｉｎｇ，  Ｋ．Ａ．，  Ａｈｎ，  Ｎ．Ｇ．，  ２００９．  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｏｆ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｂ−Ｒａｆ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｍｅｌａｎｏｍａ．  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  ３４，  １１５．  ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｍｏｌｃｅｌ．２００９．０３．００７
【０１７７】
Ｐａｕｌｉｔｓｃｈｋｅ，  Ｖ．，  Ｂｅｒｇｅｒ，  Ｗ．，  Ｐａｕｌｉｔｓｃｈｋｅ，  Ｐ．，  Ｈｏｆｓｔａｔｔｅｒ，  Ｅ．，  Ｋｎａｐｐ，  Ｂ．，  Ｄｉｎｇｅｌｍａｉｅｒ−Ｈｏｖｏｒｋａ，  Ｒ．，  Ｆｏｄｉｎｇｅｒ，  Ｄ．，  Ｊａｇｅｒ，  Ｗ．，  Ｓｚｅｋｅｒｅｓ，  Ｔ．，  Ｍｅｓｈｃｈｅｒｙａｋｏｖａ，  Ａ．，  Ｂｉｌｅｃｋ，  Ａ．，  Ｐｉｒｋｅｒ，  Ｃ，  Ｐｅｈａｍｂｅｒｇｅｒ，  Ｈ．，  Ｇｅｒｎｅｒ，  Ｃ，  Ｋｕｎｓｔｆｅｌｄ，  Ｒ．，  ２０１５．  Ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｓｉｇｎａｔｕｒｅ  ｂｙ  ｐｒｏｔｅｏｍｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆｆｅｒｓ  ｎｅｗ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ａｎｄ  ｒａｔｉｏｎａｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｃｏｎｃｅｐｔｓ．  Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．  １４，  ７５７−７６８．  ｄｏｉ：１０．１１５８／１５３５−７１６３．ＭＣＴ−１４−０７０１
【０１７８】
Ｐａｕｌｓｏｎ，  Ａ．Ｓ．，  Ｔｒａｎ  Ｃａｏ，  Ｈ．Ｓ．，  Ｔｅｍｐｅｒｏ，
Ｍ．Ａ．，  Ｌｏｗｙ，  Ａ．Ｍ．，  ２０１３．  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏ
ｌｏｇｙ  １４４，  １３１６−１３２６．  ｄｏｉ：１０．１０５３／ｊ．ｇａｓｔｒｏ．２０１３．０１．０７８
【０１７９】
Ｐｉｅｔｅｎｐｏｌ，  Ｊ．Ａ．，  Ｔｏｋｉｎｏ，  Ｔ．，  Ｔｈｉａｇａｌｉｎｇａｍ，  Ｓ．，  ｅｌ−Ｄｅｉｒｙ，  Ｗ．Ｓ．，  Ｋｉｎｚｌｅｒ，  Ｋ．Ｗ．，  Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ，  Ｂ．，  １９９４．  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｐ５３．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．  Ｓ．  Ａ．  ９１，  １９９８−２００２．
【０１８０】
Ｐｏｓｓｅｍａｔｏ，  Ｒ．，  Ｍａｒｋｓ，  Ｋ．Ｍ．，  Ｓｈａｕｌ，  Ｙ．Ｄ．，  Ｐａｃｏｌｄ，  Ｍ．Ｅ．，  Ｋｉｍ，  Ｄ．，  Ｂｉｒｓｏｙ，  Ｋ．，  Ｓｅｔｈｕｍａｄｈａｖａｎ，  Ｓ．，  Ｗｏｏ，  Ｈ．−Ｋ．，  Ｊａｎｇ，  Ｈ．Ｇ．，  Ｊｈａ，  Ａ．Ｋ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｗ．Ｗ．，  Ｂａｒｒｅｔｔ，  Ｆ．Ｇ．，  Ｓｔｒａｎｓｋｙ，  Ｎ．，  Ｔｓｕｎ，  Ｚ．−Ｙ．，  Ｃｏｗｌｅｙ，  Ｇ．Ｓ．，  Ｂａｒｒｅｔｉｎａ，  Ｊ．，  Ｋａｌａａｎｙ，  Ｎ．Ｙ．，  Ｈｓｕ，  Ｐ．Ｐ．，  Ｏｔｔｉｎａ，  Ｋ．，  Ｃｈａｎ，  Ａ．Ｍ．，  Ｙｕａｎ，  Ｂ．，  Ｇａｒｒａｗａｙ，  Ｌ．Ａ．，  Ｒｏｏｔ，  Ｄ．Ｅ．，  Ｍｉｎｏ−Ｋｅｎｕｄｓｏｎ，  Ｍ．，  Ｂｒａｃｈｔｅｌ，  Ｅ．Ｆ．，  Ｄｒｉｇｇｅｒｓ，  Ｅ．Ｍ．，  Ｓａｂａｔｉｎｉ，  Ｄ．Ｍ．，  ２０１１．  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ｒｅｖｅａｌ  ｔｈａｔ  ｔｈｅ  ｓｅｒｉｎｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４７６，  ３４６−５０．  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１０３５０
【０１８１】
Ｐｏｕｌｉｋａｋｏｓ，  Ｐ．Ｉ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｃ，  Ｂｏｌｌａｇ，  Ｇ，  Ｓｈｏｋａｔ，  Ｋ．Ｍ．，  Ｒｏｓｅｎ，  Ｎ．，  ２０１０．  ＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｅ  ＲＡＦ  ｄｉｍｅｒｓ  ａｎｄ  ＥＲＫ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｉｎ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ  ＢＲＡＦ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４６４，  ４２７−３０．  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ０８９０２
【０１８２】
Ｑｉａｎ，  Ｈ．，  Ｗａｎｇ，  Ｔ．，  Ｎａｕｍｏｖｓｋｉ，  Ｌ．，  Ｌｏｐｅｚ，  Ｃ．Ｄ．，  Ｂｒａｃｈｍａｎｎ，  Ｒ．Ｋ．，  ２００２．  Ｇｒｏｕｐｓ  ｏｆ  ｐ５３  ｔａｒｇｅｔ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｐ５３  ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｃｌｕｓｔｅｒ  ｉｎｔｏ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｃｌａｓｓｅｓ  ｏｆ  ＤＮＡ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅｓ．  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２１，  ７９０１−７９１１．  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｊ．ｏｎｅ．１２０５９７４
【０１８３】
Ｒｕｂｉｎ，  Ｌ．Ｌ．，  ｄｅ  Ｓａｕｖａｇｅ，  Ｆ．Ｊ．，  ２００６．  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｈｅｄｇｅｈｏｇ  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ５，  １０２６−３３．  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｄ２０８６
【０１８４】
Ｓａｌａ，  Ｅ．，  Ｍｏｌｏｇｎｉ，  Ｌ．，  Ｔｒｕｆｆａ，  Ｓ．，  Ｇａｅｔａｎｏ，  Ｃ，  Ｂｏｌｌａｇ，  Ｇ．Ｅ．，  Ｇａｍｂａｃｏｒｔｉ−Ｐａｓｓｅｒｉｎｉ，  Ｃ，  ２００８．  ＢＲＡＦ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｂｙ  ｓｈｏｒｔ  ｈａｉｒｐｉｎ  ＲＮＡ  ｏｒ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｂｙ  ＰＬＸ４０３２  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ａｎｄ  ｔｈｙｒｏｉｄ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．  Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃ
ｅｒ  Ｒｅｓ．  ６，  ７５１−７５９．  ｄｏｉ：１０．１１５８／１５４１−７７８６．ＭＣＲ−０７−２００１
【０１８５】
Ｓｅｎｔｕｒｋ，  Ｅ．，  Ｍａｎｆｒｅｄｉ，  Ｊ．Ｊ．，  ２０１３．  ｐ５３  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ａｆｔｅｒ  ＤＮＡ  ｄａｍａｇｅ．
Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ９６２，  ４９−６１．  ｄｏｉ：１０．１００７／９７８−ｌ−６２７０３−２３６−０＿４
【０１８６】
Ｓｈｉ，  Ｈ．，  Ｈｕｇｏ，  Ｗ．，  Ｋｏｎｇ，  Ｘ．，  Ｈｏｎｇ，  Ａ．，  Ｋｏｙａ，  Ｒ．Ｃ．，  Ｍｏｒｉｃｅａｕ，  Ｇ，  Ｃｈｏｄｏｎ，  Ｔ．，  Ｇｕｏ，  Ｒ．，  Ｊｏｈｎｓｏｎ，  Ｄ．Ｂ．，  Ｄａｈｌｍａｎ，  Ｋ．Ｂ．，  Ｋｅｌｌｅｙ，  Ｍ．Ｃ．，  Ｋｅｆｆｏｒｄ，  Ｒ．Ｆ．，  Ｃｈｍｉｅｌｏｗｓｋｉ，  Ｂ．，  Ｇｌａｓｐｙ，  Ｊ．Ａ．，  Ｓｏｓｍａｎ，  Ｊ．Ａ．，  Ｖａｎ  Ｂａｒｅｎ，  Ｎ．，  Ｌｏｎｇ，  Ｇ．  Ｖ．，  Ｒｉｂａｓ，  Ａ．，  Ｌｏ，  Ｒ．Ｓ．，  ２０１４．  Ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｎｄ  ｃｌｏｎａｌ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｄｕｒｉｎｇ  ＢＲＡＦ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ４．  ｄｏｉ：１０．１１５８／２１５９−８２９０．ＣＤ−１３−０６４２
【０１８７】
Ｓｍａｌｌｅｙ，  Ｋ．Ｓ．Ｍ．，  Ｈａａｓｓ，  Ｎ．Ｋ．，  Ｂｒａｆｆｏｒｄ，
Ｐ．Ａ．，  Ｌｉｏｎｉ，  Ｍ．，  Ｆｌａｈｅｒｔｙ，  Ｋ．Ｔ．，  Ｈｅｒｌｙｎ，  Ｍ．，  ２００６．  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｍｕｓｔ  ｂｅ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｏ  ｏｖｅｒｃｏｍｅ  ｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ．  Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．  ５．
【０１８８】
Ｓｎｅａｄｅｒ，  Ｗ．，  ２００６．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ：  Ａ  Ｈｉｓｔｏｒｙ，  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ：  Ａ  Ｈｉｓｔｏｒｙ．  ｄｏｉ：１０．１００２／０４７００１５５３５
【０１８９】
Ｓｎｅｌｌ，  Ｋ．，  Ｎａｔｓｕｍｅｄａ，  Ｙ．，  Ｅｂｌｅ，  Ｊ．Ｎ．，  Ｇｌｏｖｅｒ，  Ｊ．Ｌ．，  Ｗｅｂｅｒ，  Ｇ，  １９８８．  Ｅｎｚｙｍｉｃ  ｉｍｂａｌａｎｃｅ  ｉｎ  ｓｅｒｉｎｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｏｌｏｎ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ａｎｄ  ｒａｔ  ｓａｒｃｏｍａ．  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ５７，  ８７−９０．  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｂｊｃ．１９８８．１５
【０１９０】
Ｓｎｅｌｌ，  Ｋ．，  Ｎａｔｓｕｍｅｄａ，  Ｙ．，  Ｗｅｂｅｒ，  Ｇ．，  １９８７．  Ｔｈｅ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｒｉｎｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｉｎ  ｈｅｐａｔｏｍａ  ３９２４Ａ  ｄｕｒｉｎｇ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｐｈａｓｅｓ  ｏｆ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｊ．  ２４５，  ６０９−６１２．  ｄｏｉ：１０．１０４２／ｂｊ２４５０６０９
【０１９１】
Ｓｐａｇｎｏｌｏ，  Ｆ．，  Ｇｈｉｏｒｚｏ，  Ｐ．，  Ｏｒｇｉａｎｏ，  Ｌ．，
Ｐａｓｔｏｒｉｎｏ，  Ｌ．，  Ｐｉｃａｓｓｏ，  Ｖ．，  Ｔｏｒｎａｒｉ，  Ｅ．，  Ｏｔｔａｖｉａｎｏ，  Ｖ．，  Ｑｕｅｉｒｏｌｏ，  Ｐ．，  ２０１５．  ＢＲＡＦ−ｍｕｔａｎｔ  ｍｅｌａｎｏｍａ：  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ，  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，  ａｎｄ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ．  Ｏｎｃｏ．  Ｔａｒｇｅｔｓ．  Ｔｈｅｒ．  ｄｏｉ：１０．２１４７／ＯＴＴ．Ｓ３９０９６
【０１９２】
Ｓｕｌｌｉｖａｎ，  Ｒ．Ｊ．，  Ｆｌａｈｅｒｔｙ，  Ｋ．Ｔ．，  ２０１１．  ＢＲＡＦ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ：  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ，  ａｎｄ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．  Ｊ．  Ｓｋｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１１，  ４２３２３９．  ｄｏｉ：１０．１１５５／２０１１／４２３２３９
【０１９３】
Ｔｅｄｅｓｃｈｉ，  Ｐ．Ｍ．，  Ｍａｒｋｅｒｔ，  Ｅ．Ｋ．，  Ｇｏｕｎｄｅｒ，
Ｍ．，  Ｌｉｎ，  Ｈ．，  Ｄｖｏｒｚｈｉｎｓｋｉ，  Ｄ．，  Ｄｏｌｆｉ，  Ｓ．Ｃ．，  Ｃｈａｎ，  Ｌ．Ｌ．−Ｙ．，  Ｑｉｕ，  Ｊ．，  ＤｉＰａｏｌａ，  Ｒ．Ｓ．，  Ｈｉｒｓｈｆｉｅｌｄ，  Ｋ  Ｍ．，  Ｂｏｒｏｓ，  Ｌ．Ｇ．，  Ｂｅｒｔｉｎｏ，  Ｊ  Ｒ．，  Ｏｌｔｖａｉ，  Ｚ．Ｎ．，  Ｖａｚｑｕｅｚ，  Ａ．，  ２０１３．  Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｒｉｎｅ，  ｆｏｌａｔｅ  ａｎｄ  ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＡＴＰ，  ＮＡＤＰＨ  ａｎｄ  ｐｕｒｉｎｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．  Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｓ．  ４，  ｅ８７７．  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｄｄｉｓ．２０１３．３９３
【０１９４】
Ｔｈａｍ，  Ｌ．Ｓ．，  Ｗａｎｇ，  Ｌ．，  Ｓｏｏ，  Ｒ．Ａ．，  Ｌｅｅ，  Ｓ．Ｃ．，  Ｌｅｅ，  Ｈ．Ｓ．，  Ｙｏｎｇ，  Ｗ．Ｐ．，  Ｇｏｈ，  Ｂ．Ｃ．，  Ｈｏｌｆｏｒｄ，  Ｎ．Ｈ．Ｇ．，  ２００８．  Ａ  ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｉｍｅ  ｃｏｕｒｓｅ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｓｈｒｉｎｋａｇｅ  ｂｙ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ＋  ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓ．  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １４，  ４２１３−４２１８．  ｄｏｉ：１０．１１５８／１０７８−０４３２．ＣＣＲ−０７−４７５４
【０１９５】
Ｔｓａｉ，  Ｊ．，  Ｌｅｅ，  Ｊ．Ｔ．，  Ｗａｎｇ，  Ｗ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｊ．，  Ｃｈｏ，  Ｈ．，  Ｍａｍｏ，  Ｓ．，  Ｂｒｅｍｅｒ，  Ｒ．，  Ｇｉｌｌｅｔｔｅ，  Ｓ．，  Ｋｏｎｇ，  Ｊ．，  Ｈａａｓｓ，  Ｎ．Ｋ．，  Ｓｐｒｏｅｓｓｅｒ，  Ｋ．，  Ｌｉ，  Ｌ．，  Ｓｍａｌｌｅｙ，  Ｋ．Ｓ．Ｍ．，  Ｆｏｎｇ，  Ｄ．，  Ｚｈｕ，  Ｙ．−Ｌ．，  Ｍａｒｉｍｕｔｈｕ，  Ａ．，  Ｎｇｕｙｅｎ，  Ｈ．，  Ｌａｍ，  Ｂ．，  Ｌｉｕ，  Ｊ．，  Ｃｈｅｕｎｇ，  Ｌ，  Ｒｉｃｅ，  Ｊ．，  Ｓｕｚｕｋｉ，  Ｙ．，  Ｌｕｕ，  Ｃ，  Ｓｅｔｔａｃｈａｔｇｕｌ，  Ｃ，  Ｓｈｅｌｌｏｏｅ，  Ｒ．，  Ｃａｎｔｗｅｌｌ，  Ｊ．，  Ｋｉｍ，  Ｓ．−Ｈ，  Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ，  Ｊ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｋ．Ｙ．Ｊ．，  Ｗｅｓｔ，  Ｂ．Ｌ．，  Ｐｏｗｅｌｌ，  Ｂ．，  Ｈａｂｅｔｓ，  Ｇ，  Ｚｈａｎｇ，  Ｃ，  Ｉｂｒａｈｉｍ，  Ｐ．Ｎ．，  Ｈｉｒｔｈ，  Ｐ．，  Ａｒｔｉｓ，  Ｄ．Ｒ．，  Ｈｅｒｌｙｎ，  Ｍ．，  Ｂｏｌｌａｇ，  Ｇ．，  ２００８．  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ  Ｂ−Ｒａｆ  ｋｉｎａｓｅ  ｗｉｔｈ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉｍｅｌａｎｏｍａ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．  Ｓ．  Ａ．  １０５，  ３０４１−６．  ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．０７１１７４１１０５
【０１９６】
Ｖｉｌｌａｎｕｅｖａ，  Ｊ．，  Ｉｎｆａｎｔｅ，  Ｊ．Ｒ．，  Ｋｒｅｐｌｅｒ，
Ｃ，  Ｒｅｙｅｓ−Ｕｒｉｂｅ，  Ｐ．，  Ｓａｍａｎｔａ，  Ｍ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｈ．Ｙ．，  Ｌｉ，  Ｂ．，  Ｓｗｏｂｏｄａ，  Ｒ．Ｋ．，  Ｗｉｌｓｏｎ，  Ｍ．，
Ｖｕｌｔｕｒ，  Ａ．，  Ｆｕｋｕｎａｂａ−Ｋａｌａｂｉｓ，  Ｍ．，  Ｗｕｂｂｅｎｈｏｒｓｔ，  Ｂ．，  Ｃｈｅｎ，  Ｔ．Ｙ．，  Ｌｉｕ，  Ｑ．，  Ｓｐｒｏｅｓｓｅｒ，  Ｋ．，  ＤｅＭａｒｉｎｉ，  Ｄ．Ｊ．，  Ｇｉｌｍｅｒ，  Ｔ．Ｍ．，  Ｍａ
ｒｔｉｎ，  Ａ．Ｍ．，  Ｍａｒｍｏｒｓｔｅｉｎ，  Ｒ．，  Ｓｃｈｕｌｔｚ，  Ｄ．Ｃ．，  Ｓｐｅｉｃｈｅｒ，  Ｄ．Ｗ．，  Ｋａｒａｋｏｕｓｉｓ，  Ｇ．Ｃ．，  Ｘｕ，  Ｗ．，  Ａｍａｒａｖａｄｉ，  Ｒ．Ｋ．，  Ｘｕ，  Ｘ．，  Ｓｃｈｕｃｈｔｅｒ，  Ｌ．Ｍ．，  Ｈｅｒｌｙｎ，  Ｍ．，  Ｎａｔｈａｎｓｏｎ，  Ｋ．Ｌ．，  ２０１３．  Ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ  ＭＥＫ２  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ＢＲＡＦ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｃｏｎｆｅｒ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＢＲＡＦ  ａｎｄ  ＭＥＫ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｍｅｌａｎｏｍａ．  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ．  ４．  ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｒｅｐ．２０１３．０８．０２３
【０１９７】
Ｗｏｌｆｇａｎｇ，  Ｃ．Ｌ．，  Ｈｅｒｍａｎ，  Ｊ．Ｍ．，  Ｌａｈｅｒｕ，  Ｄ．Ａ．，  Ｋｌｅｉｎ，  Ａ．Ｐ．，  Ｅｒｄｅｋ，  Ｍ．Ａ．，  Ｆｉｓｈｍａｎ，  Ｅ．Ｋ．，  Ｈｒｕｂａｎ，  Ｒ．Ｈ．，  ２０１３．  Ｒｅｃｅｎｔ  ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ．  ＣＡ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  ６３，  ３１８−３４８．  ｄｏｉ：  １０．３３２２／ｃａａｃ．２１１９０
【０１９８】
まとめると、ベムラフェニブ及びダブラフェニブなどのＢ−ｒａｆ阻害剤を、ＤＮＡ損傷剤と併用する組み合わせは、これらのクラスの化合物に対して非感受性であるとこれまで考えられていた細胞株をベムラフェニブ及びダブラフェニブに対して感作させることがわかり、ＤＮＡ損傷剤としてはゲムシタビン、メトトレキセート、またはピリメタミンなどであるが、これらに限定されない。これらの結果は、驚くべきかつ予期せぬものであった。
【０１９９】
本明細書中記載される実施形態は、例示を参照しながら記載されてきたものの、当業者ならその精神及び範囲から逸脱することなく様々な修飾を行うことができるとわかる。
【０２００】
本明細書中参照される及び／または出願日データシートに列挙される、上記の米国特許、米国特許出願公報、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、及び非特許刊行物は全て、そのまま全体が、本明細書中参照として援用される。
【図１Ａ】
2019508491.tif 000008
【図１Ｂ】
2019508491.tif 000009
【図２Ａ】
2019508491.tif 000010
【図２Ｂ】
2019508491.tif 000011
【図３Ａ】
2019508491.tif 000012
【図３Ｂ】
2019508491.tif 000013
【図４Ａ】
2019508491.tif 000014
【図４Ｂ】
2019508491.tif 000015
【図５Ａ】
2019508491.tif 000016
【図５Ｂ】
2019508491.tif 000017
【図６Ａ】
2019508491.tif 000018
【図６Ｂ】
2019508491.tif 000019
【図６Ｃ】
2019508491.tif 000020
【図６Ｄ】
2019508491.tif 000021
【図６Ｅ】
2019508491.tif 000022
【図７Ａ】
2019508491.tif 000023
【図７Ｂ】
2019508491.tif 000024
【図７Ｃ】
2019508491.tif 000025
【図７Ｄ】
2019508491.tif 000026
【図７Ｅ】
2019508491.tif 000027
【図７Ｆ】
2019508491.tif 000028
【図７Ｇ】
2019508491.tif 000029
【図８Ａ】
2019508491.tif 000030
【図８Ｂ】
2019508491.tif 000031
【図８Ｃ】
2019508491.tif 000032
【図９Ａ】
2019508491.tif 000033
【図９Ｂ】
2019508491.tif 000034
【図９Ｃ】
2019508491.tif 000035
【図９Ｄ】
2019508491.tif 000036
【図９Ｅ】
2019508491.tif 000037
【図９Ｆ】
2019508491.tif 000038
【図９Ｇ】
2019508491.tif 000039
【図９Ｈ】
2019508491.tif 000040
【図１０Ａ】
2019508491.tif 000041
【図１０Ｂ】
2019508491.tif 000042
【図１０Ｃ】
2019508491.tif 000043
【図１１Ａ】
2019508491.tif 000044
【図１１Ｂ】
2019508491.tif 000045
【図１１Ｃ】
2019508491.tif 000046
【図１２Ａ】
2019508491.tif 000047
【図１２Ｂ】
2019508491.tif 000048
【図１３】
2019508491.tif 000049
【図１４Ａ】
2019508491.tif 000050
【図１４Ｂ】
2019508491.tif 000051
【図１５】
2019508491.tif 000052
【国際調査報告】
2019508491.tif 000053
2019508491.tif 000054
2019508491.tif 000055