(57)【要約】  本開示は、ＰＡＨを処置するためのリオシグアト、トレプロスチニル、またはイロプロストなどのｃＧＭＰ濃度上昇剤あるいはプロスタノイドと、ラリンパグとの組み合わせを含む。開示された併用療法は、有効性の改善、安全性の改善、ラリンパグおよび／またはリオシグアトの用量および／または頻度の減少、ラリンパグおよび／またはトレプロスチニルの用量および／または頻度の減少、あるいはラリンパグおよび／またはイロプロストの用量および／または頻度の減少などの利点をもたらす。いくつかの実施形態では、減少した用量の組み合わせの臨床有効性は、対応するラリンパグ、リオシグアト、トレプロスチニル、および／またはイロプロストの単独療法によってもたらされるそれと比較して、相加的あるいは相乗的である。【選択図】図１２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
必要とする患者における細胞増殖を減少させる方法であって、該方法は：
治療上有効な量のラリンパグ、またはその薬学的に許容可能な塩、水和物、あるいは溶媒和物を、治療上有効な量のｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドの１つ以上と組み合わせて投与する工程を含む、方法。
【請求項２】
１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤またはｃＡＭＰ濃度上昇剤は、可溶性グアニル酸シクラーゼ（ｓＧＣ）刺激剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ラリンパグは１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤と組み合わせて投与される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ラリンパグは１つ以上のｃＡＭＰ濃度上昇剤と組み合わせて投与される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
ラリンパグはプロスタノイドと組み合わせて投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ラリンパグは合成プロスタサイクリンアナログと組み合わせて投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ラリンパグの用量は、前記方法を始める際に標準滴定を必要としない、請求項１−６のいずれか１つに記載の方法。
【請求項８】
ｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドの１つ以上と組み合わせた治療上有効な量のラリンパグは、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドの１つ以上の同時投与がない場合の同等の治療上有効な量のラリンパグより少ない、請求項１−７のいずれか１つに記載の方法。
【請求項９】
ｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドの１つ以上と組み合わせたラリンパグの１日量は、１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドの同時投与がない場合のラリンパグの同等の治療量より、少なくとも約０．０１ｍｇ（用量当量）少ない、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドの１つ以上と組み合わせたラリンパグの１日量は、１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドの同時投与がない場合のラリンパグの同等の治療量より、少なくとも約０．０５ｍｇ（用量当量）少ない、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
ｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドの１つ以上と組み合わせたラリンパグの１日量は、１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドの同時投与がない場合のラリンパグの同等の治療量より、少なくとも約０．１ｍｇ（用量当量）少ない、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
治療上有効な量の１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドは、ラリンパグの同時投与がない場合の同等の治療上有効な量の１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤より少ない、請求項１−１１のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１３】
治療上有効な量の１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドは、ラリンパグの同時投与がない場合の同等の治療上有効な量の１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤より少なくとも約１％少ない、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
治療上有効な量の１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドは、ラリンパグの同時投与がない場合の同等の治療上有効な量の１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤より少なくとも約１０％少ない、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
ｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドの１つ以上と組み合わせた治療上有効な量のラリンパグの投与の頻度は、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドの１つ以上の同時投与がない場合の同等の治療上有効な量のラリンパグの投与の頻度より少ない、請求項１−１４のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１６】
ｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドの１つ以上と組み合わせた治療上有効な量のラリンパグは、１日当たり１回投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ラリンパグと組み合わせた治療上有効な量のｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドの１つ以上の投与の頻度は、ラリンパグの同時投与がない場合の同等の治療上有効な量のｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドの１つ以上の投与の頻度より少ない、請求項１−１６のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１８】
ラリンパグと組み合わされた治療上有効な量のｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドの１つ以上は、１日当たり１回投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤は、リオシグアト、ベルシグアト、アタシグアト、ネロシグアト、リフィシゴート、ＩＷ−１７０１、ＩＷ−１９７３、ＩＷＰ−０５１、ＩＷＰ−１２１、ＩＷＰ−４２７、ＩＷＰ−９５３、ＢＡＹ−６０−２７７０、Ａ−３４４９０５、Ａ−３５０６１９、Ａ−７７８９３５、ＢＩ−６８４０６７、ＢＩ−７０３７０４、ＢＡＹ−４１−２２７２、およびＢＡＹ−４１−８５４３からなる群から選択される、請求項１−１８のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２０】
ｃＧＭＰ濃度上昇剤はリオシグアトである、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
１つ以上のプロスタノイドはトレプロスチニルである、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
１つ以上のプロスタノイドはイロプロストである、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
方法は、ラリンパグおよびリオシグアトの同時投与を含む、請求項１−２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２４】
リオシグアトの量は、０．５、１、１．５、２、または２．５ｍｇから選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
リオシグアトの量は１日１回投与される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
リオシグアトの量は１日２回投与される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
リオシグアトの量は１日３回投与される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
リオシグアトが滴定される、請求項２３−２７のいずれか１つに記載の方法。
【請求項２９】
方法はラリンパグおよびトレプロスチニルの同時投与を含む、請求項１−２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３０】
方法はラリンパグおよびイロプロストの同時投与を含む、請求項１−２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３１】
方法はラリンパグおよび合成プロスタサイクリンアナログの同時投与を含む、請求項１−２２のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３２】
肺動脈圧高血圧症（ＰＡＨ）；特発性のＰＡＨ；家族性のＰＡＨ；膠原血管病、先天性心疾患、門脈圧亢進症、ＨＩＶ感染症、薬物または毒素の摂取、遺伝性出血性毛細管拡張症、脾臓摘出、肺静脈閉塞性疾患（ＰＶＯＤ）、または肺毛細管血管腫症（ＰＣＨ）に関連するＰＡＨ；静脈または毛細管の関与が大きいＰＡＨ；および、慢性血栓塞栓性肺高血圧症（ＣＴＥＰＨ）からなる群から選択される前記患者の疾病が処置される、請求項１−３１のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３３】
前記患者はＰＡＨを処置される、請求項１−３１のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３４】
細胞増殖を減少させる方法はＰＡＨを処置する方法である、請求項１−３１のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３５】
細胞増殖を減少させる方法はＣＴＥＰＨを処置する方法である、請求項１−３１のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３６】
ラリンパグの量は、０．０２、０．０４、０．０６、０．０８、０．１、０．１２、０．１４、０．１６、０．１８、０．２、０．２２、０．２４、０．２６、０．２８、０．３、０．３２、０．３４、０．３６、０．３８、０．４、０．４２、０．４４、０．４６、０．４８、０．５、０．５２、０．５４、０．５６、０．５８、または０．６ｍｇから選択される、請求項１−３５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３７】
ラリンパグの量は、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、０．２５、０．２６、０．２７、０．２８、０．２９、または０．３ｍｇから選択される、請求項１−３５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３８】
ラリンパグの量は、１日あたり、０．０１ｍｇ、０．０２ｍｇ、０．０２５ｍｇ、０．０３ｍｇ、０．０４ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．０６ｍｇ、０．０６５ｍｇ、０．０７ｍｇ、０．０７５ｍｇ、０．０８ｍｇ、０．０９ｍｇ、０．１ｍｇ、０．１２ｍｇ、０．１５ｍｇ、０．１６ｍｇ、０．２ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．３ｍｇ、０．３５ｍｇ、０．４ｍｇ、０．４５ｍｇ、０．５ｍｇ、０．５５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．６５ｍｇ、０．７ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８ｍｇ、０．８５ｍｇ、０．９ｍｇ、０．９５ｍｇ、および１．０ｍｇから選択される、請求項１−３５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項３９】
ラリンパグの量は、１日あたり、０．０１、０．０２、０．０２５、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０７５、０．０８、０．０９、および０．１ｍｇから選択される開始用量である、請求項１−３５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項４０】
ラリンパグの量は、１日あたり、０．４ｍｇ、０．４５ｍｇ、０．５ｍｇ、０．５５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．６５ｍｇ、０．７ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８ｍｇ、０．８５ｍｇ、０．９ｍｇ、０．９５ｍｇ、および１．０ｍｇから選択される最高耐量である、請求項１−３５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項４１】
ラリンパグの量は、１日あたり、０．４ｍｇ  ０．４５ｍｇ  ０．５ｍｇ、０．５５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．６５ｍｇ、０．７ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８ｍｇ、０．８５ｍｇ、０．９ｍｇ、０．９５ｍｇ、および１．０ｍｇから選択される最大用量である、請求項１−３５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項４２】
ラリンパグの量は、１日あたり、０．４ｍｇ  ０．４５ｍｇ  ０．５ｍｇ、０．５５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．６５ｍｇ、０．７ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８ｍｇ、０．８５ｍｇ、０．９ｍｇ、０．９５ｍｇ、および１．０ｍｇから選択される最大耐量である、請求項１−３５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項４３】
ラリンパグの量は、１日あたり、０．０１ｍｇ  ０．０２ｍｇ  ０．０２５ｍｇ、０．０３ｍｇ、０．０４ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．０６ｍｇ、０．０６５ｍｇ、０．０７ｍｇ、０．０７５ｍｇ、０．０８ｍｇ、０．０９ｍｇ、０．１ｍｇ、０．１２ｍｇ、０．１５ｍｇ、０．１６ｍｇ、０．２ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．３ｍｇ、０．３５ｍｇ、０．４ｍｇ、０．４５ｍｇ、０．５ｍｇ、０．５５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．６５ｍｇ、０．７ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８ｍｇ、０．８５ｍｇ、０．９ｍｇ、０．９５ｍｇ、および１．０ｍｇから選択される維持量である、請求項１−３５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項４４】
ラリンパグの量は１日１回投与される、請求項３６−４３のいずれか１つに記載の方法。
【請求項４５】
ラリンパグの量は１日２回投与される、請求項３６−４３のいずれか１つに記載の方法。
【請求項４６】
ラリンパグが滴定される、請求項１−４５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項４７】
必要とする個体にラリンパグおよびリオシグアトを投与する工程を含む、肺動脈圧高血圧症を治療する方法。
【請求項４８】
リオシグアトの量は、約０．２５、０．５、０．７５、１、１．２５、１．５、１．７５、２、２．２５、２．５、２．７５、３、３．２５、３．５、３．７５、４、４．２５、４．５、４．７５、および５ｍｇから選択される、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
必要とする個体にラリンパグおよびトレプロスチニルを投与する工程を含む、肺動脈圧高血圧症を処置する方法。
【請求項５０】
トレプロスチニルの量は、０．１、０．１２５、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５、０．５、０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、０．９５、１、０．２５、０．５、１．７５、２、２．２５、２．５、２．７５、３、３．２５、３．５、３．７５、４、４．２５、４．５、４．７５、および５ｍｇから選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
トレプロスチニルの量は、０．１、０．２、０．２５、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．７５、０．８、０．９、１、２．５、３、４、５、６、７、７．５、８、９、および１０ｍｇ／ｍｌから選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
ラリンパグの量は、約０．０１ｍｇ  ０．０２ｍｇ  ０．０２５ｍｇ、０．０３ｍｇ、０．０４ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．０６ｍｇ、０．０６５ｍｇ、０．０７ｍｇ、０．０７５ｍｇ、０．０８ｍｇ、０．０９ｍｇ、０．１ｍｇ、０．１２ｍｇ、０．１５ｍｇ、０．１６ｍｇ、０．２ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．３ｍｇ、０．３５ｍｇ、０．４ｍｇ、０．４５ｍｇ、０．５ｍｇ、０．５５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．６５ｍｇ、０．７ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８ｍｇ、０．８５ｍｇ、０．９ｍｇ、０．９５ｍｇ、および１．０ｍｇから選択される、請求項４７−５１のいずれか１つに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
＜関連出願の相互参照＞
本出願は、２０１６年１１月１０日に出願された米国仮特許出願６２／４２０，５１５号、および２０１７年７月１０日に出願された米国仮特許出願６２／５３０，５３３号の優先権の利益を主張し、両文献の内容は参照により全体として本明細書に組み込まれる。  
【０００２】
本発明は、ラリンパグ（ｒａｌｉｎｅｐａｇ）（ＡＰＤ８１１としても知られる）とｃＡＭＰ濃度上昇剤（ｃＧＭＰ−ｅｌｅｖａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）またはｃＧＭＰ濃度上昇剤（ｃＧＭＰ−ｅｌｅｖａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）（例えば、リオシグアトのような可溶性グアニル酸シクラーゼ（ｓＧＣ）刺激剤）との組み合わせ、ラリンパグとプロスタノイド（例えば、トレプロスチニル）との組み合わせ、ならびにラリンパグとプロスタサイクリン受容体アゴニストとの組み合わせおよび処置の方法に関し、これらは、肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）；特発性のＰＡＨ；家族性のＰＡＨ；膠原血管病、先天性心疾患、門脈圧亢進症、ＨＩＶ感染症、薬物または毒素の摂取、遺伝性出血性毛細管拡張症、脾臓摘出、肺静脈閉塞性疾患（ＰＶＯＤ）、または肺毛細管血管腫症（ＰＣＨ）に関連するＰＡＨ：；静脈または毛細管の関与が大きいＰＡＨ；血小板凝集；冠動脈疾患、心筋梗塞、一過性脳乏血発作；アンギナ、脳卒中；虚血再潅流障害；再狭窄；心房細動；血管形成手術または冠状動脈バイパス手術の個体あるいは心房細動を患う個体における血餅形成；アテローム血栓症；喘息またはその症状；糖尿病末梢神経障害、糖尿病腎症、または糖尿病網膜症などの糖尿病関連障害；緑内障または異常な眼内圧を有する眼の他の疾患；高血圧症；炎症；乾癬；乾癬性関節炎；関節リウマチ；クローン病；移植拒絶反応；多発性硬化症；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；潰瘍性大腸炎；アテローム性動脈硬化、ざ瘡；Ｉ型糖尿病；ＩＩ型糖尿病；敗血症；および、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の処置に有用である。
【背景技術】
【０００３】
肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）は、右心不全および死亡へとつながる、高い増殖性の炎症性の血管リモデリング疾患である。プロスタサイクリン（エポプロステノール）の肺の薬理学は、ＰＡＨの処置においてエポプロステノールおよびその安定した模倣物を使用するため、かなりの関心がある分野であり続けている。プロスタノイド化合物イロプロスト（静脈内吸入される）およびトレプロスチニル（皮下静脈内吸入される）は、この疾患の処置において広く使用される。上記の送達経路によってもたらされる合併症を考慮すると、成功した経口治療には、このクラスの化合物を用いた改善された有効性および／または結果を有する疾患プロセスを初期段階で使用することが求められている（ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９；  Ｃｌａｐｐ  ＆  Ｇｕｒｕｎｇ，  ２０１５）。
【０００４】
経口のベラプロスト（いくつかのベラプロスト異性体を含有する）は、日本および韓国のみで認可されており（Ｖａｃｈｉｅｒｙ、２０１１）、臨床的に有効性が限られているように思われる（Ｂａｒｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３）。経口の製剤が、皮下または静脈内の投与方法に見られる臨床効果に近づくかどうかは現時点で明らかではないが、経口のトレプロスチニルはつい最近ＦＤＡの認可を得た（Ｔａｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３）。セレキシパグ（ＮＳ−３０４）は、経口の、非プロスタノイドＩＰ受容器アゴニスト（Ｓｋｏｒｏ−Ｓａｊｅｒ  ＆  Ｌａｎｇ，  ２０１４；  Ｓｉｔｂｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１５）である。それは、非プロスタノイドのジフェニルピラジン誘導体であり、その活性代謝物、ＭＲＥ−２６９（ＡＣＴ−３３３６７９としても知られる）は、非常に選択的なＩＰ受容器アゴニスト（Ｋｕｗａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７）であることが報告される。ＭＲＥ−２６９は、この受容体（Ｋｉ＝２６０ｎＭ）においてセレキシパグに非常により少ない親和性がある一方、ヒトＩＰ受容器（Ｋｉ＊＝２０ｎＭ）と強力に結合する；しかし、両方とも、他のプロスタノイド受容体（Ｋｉ≧２．６μＭ）に対する結合親和性がほとんどない。
【０００５】
正常なヒトの肺動脈圧平滑筋細胞（ＰＡＳＭＣ）において、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）の生成を介するＩＰ受容器は、トレプロスチニルおよびイロプロストに対する抗増殖性の応答の主要なメディエーターであるように思われる（Ｗｈａｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００；  Ｃｌａｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２；  Ｆａｌｃｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）。これに対して、ＩＰＡＨ患者から単離されたヒトＰＡＳＭＣは、少なくとも研究された濃度において、ＩＰ受容器とｃＡＭＰのどちらも、トレプロスチニルおよびイロプロストの抗増殖性の効果を支える主要なメディエーターであるように思われない（Ｆａｌｃｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）。したがって、ＰＡＨを患う患者におけるように、ＩＰ受容器に選択的な薬物が、ＩＰ受容器発現がより低い疾患において、どれだけ効果的であるかについての明瞭な示唆が科学文献には存在しない（Ｌａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８；  Ｆａｌｃｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）。
【０００６】
ラリンパグ（２−（（（１ｒ，４ｒ）−４−（（（４−クロロフェニル）（フェニル）カルバモイルオキシ）メチル）シクロヘキシル）メトキシ酢酸（ＡＰＤ８１１としても知られる）は、本明細書で記載されるような様々な疾病、例えば、ＰＡＨなどの血管痙攣の疾患を処置するための、経口的に利用可能な非プロスタノイドプロスタサイクリン（ＩＰ）受容体アゴニストである。ラリンパグは、米国特許第特許公報第２０１１／００５３９５８号で開示され、参照によってその全体があらゆる目的のために本明細書に組み込まれる。
【０００７】
ラリンパグは、ＰＡＨなどの疾病を処置するための経口の単独療法として現在評価されている。最近の臨床試験では、患者は耐容量を確立するためにラリンパグの滴定を受けた。ラリンパグを投与する可能性のある方法は、最初に低用量で１日に１回または２回投与し、次に、ラリンパグ投与量および／または投与頻度は最も高い許容可能な１日量に到達するまで徐々に増加させることによって、典型的に、数週間にわたって投与量を漸増させる工程を含む。
【０００８】
用量漸増の必要性は、患者に対する所望の最高許容可能治療量の送達を遅らせることができ、それによって、潜在的な臨床的有用性を遅らせる。加えて、１日量を複数回投与する必要があることは不便であり、患者コンプライアンスを低下させ得る。したがって、用量漸増が減少されるか除去される、および／または複数の１日量の必要性が減少されるか除去される、ラリンパグの投与方法を提供することが望ましい。加えて、副作用を最小限にしながら、例えば、１つ以上の化合物のより低い投与量で臨床効果を達成することによって、ラリンパグの治療効果および／または同時投与された化合物を増強する方法を提供することが望ましい。そのような方法は、患者コンプライアンスを改良すると同様に、明瞭な臨床的有用性を提供する。現在の開示は、特に、ＰＡＨおよび関連する疾病を処置するために、ラリンパグを投与する改善された処置および方法を提供する。
【発明の概要】
【０００９】
その様々な実施形態では、本発明は、必要とする患者における細胞増殖（例えば、肺動脈圧平滑筋細胞の（ＰＡＳＭＣ））を減少させる方法に関し、治療上に有効な量の１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、プロスタノイド、またはプロスタサイクリン受容体アゴニストと組み合わせて、治療上に有効な量のラリンパグ、あるいはその薬学的に許容可能な塩、水和物、または溶媒和物を投与する工程を含む。
【００１０】
様々な実施形態では、１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤またはｃＡＭＰ濃度上昇剤は、可溶性グアニル酸シクラーゼモジュレーターである。
【００１１】
様々な実施形態では、ラリンパグは、１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤、例えば、薬剤本明細書に開示されるｃＧＭＰ濃度上昇剤のいずれかと組み合わせて投与される。
【００１２】
様々な実施形態では、ラリンパグは、１つ以上のｃＡＭＰ濃度上昇剤、例えば、本明細書に開示されるｃＡＭＰ濃度上昇剤のいずれか、と組み合わせて投与される。
【００１３】
様々な実施形態では、ラリンパグは、プロスタノイド、例えば、本明細書に開示されるプロスタノイドのいずれか、と組み合わせて投与される。
【００１４】
様々な実施形態では、１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤、プロスタノイド、またはプロスタサイクリン受容体アゴニストを有するラリンパグの同時投与は、滴定（例えば、前記同時投与方法を始める際のラリンパグの滴定）を必要としない。様々な実施形態では、１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、プロスタノイド、またはプロスタサイクリン受容体アゴニストとラリンパグの同時投与は、滴定（例えば、１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、プロスタノイド、またはプロスタサイクリン受容体アゴニストの滴定）を必要としない。例えば、いくつかの実施形態では、リオシグアトとラリンパグの同時投与は、ラリンパグの滴定を必要としない。いくつかの実施形態では、リオシグアトとラリンパグの同時投与は、リオシグアトの滴定を必要としない。
【００１５】
様々な実施形態では、１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、プロスタノイド、またはプロスタサイクリン受容体アゴニストとラリンパグの同時投与は、同時投与された薬剤の１つまたは両方について、標準滴定スキーム（例えば、単独療法のための製品ラベル上に提供される滴定スキーム）ほど多くのステップを必要としない。様々な実施形態では、１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、プロスタノイド、またはプロスタサイクリン受容体アゴニストとラリンパグの同時投与は、同時投与された薬剤の１つまたは両方について、標準滴定スキーム（例えば、単独療法のための製品ラベル上に提供される滴定スキーム）より高い初回量を可能にする。
【００１６】
様々な実施形態では、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、またはプロスタノイドの１つ以上と組み合せたラリンパグの１日量は、少なくとも約０．０１ｍｇ、０．０２ｍｇ、０．０３ｍｇ、０．０４ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．０６ｍｇ、０．０７ｍｇ、０．０８ｍｇ、０．０９ｍｇ、０．１ｍｇ、０．１１ｍｇ、０．１２ｍｇ、０．１３ｍｇ、０．１４ｍｇ、０．１５ｍｇ、０．１６ｍｇ、０．１７ｍｇ、０．１８ｍｇ、０．１９ｍｇ、０．２ｍｇ、０．２１ｍｇ、０．２２ｍｇ、０．２３ｍｇ、０．２４ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．２６ｍｇ、０．２７ｍｇ、０．２８ｍｇ、０．２９ｍｇ、または０．３ｍｇ（用量当量（ｄｏｓｅ  ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ））であり、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤またはプロスタノイドの１つ以上の同時投与がない場合のラリンパグの同等の治療量より少ない。
【００１７】
様々な実施形態では、同等の臨床効果をもたらすラリンパグおよび／またはｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、プロスタノイド、またはプロスタサイクリン受容体アゴニストの１日量に対して、１つ以上のｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、プロスタノイド、またはプロスタサイクリン受容体アゴニストとラリンパグの同時投与は、ラリンパグおよび／またはｃＧＭＰ濃度上昇剤、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、プロスタノイド、またはプロスタサイクリン受容体アゴニストの１日量の減少をもたらす。
【００１８】
様々な実施形態では、ラリンパグは、リオシグアト、ベルシグアト、アタシグアト（ａｔａｃｉｇｕａｔ）、ネロシグアト（ｎｅｌｏｃｉｇｕａｔ）、リフィシゴート（ｌｉｆｉｃｉｇｕａｔ）、ＩＷ−１７０１、ＩＷ−１９７３、ＩＷＰ−０５１、ＩＷＰ−１２１、ＩＷＰ−４２７、ＩＷＰ−９５３、ＢＡＹ−６０−２７７０、Ａ−３４４９０５；Ａ−３５０６１９、Ａ−７７８９３５、ＢＩ−６８４０６７、ＢＩ−７０３７０４、ＢＡＹ−４１−２２７２およびＢＡＹ−４１−８５４３の１つ以上と同時投与される。
【００１９】
様々な実施形態では、ラリンパグの量は、０．０２、０．０２５  ０．０４、０．０５、０．０６、０．０７５、０．０８、０．１、０．１２、０．１２５、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７５、０．１８、０．２、０．２２、０．２４、０．２５、０．２６、０．２７５、０．２８、０．３、０．３２、０．３２５、０．３４、０．３５、０．３６、０．３７５、０．３８、０．４、０．４２、０．４４、０．４５、０．４６、０．４８、０．５、０．５２、０．５８、０．６、０．６２５、０．６５、０．６７５、０．７、０．７２５、０．７５、０．７７５、０．８、０．８２５、０．８５、０．８７５、０．９、０．９２５、０．９５、０．９７５、または１．０ｍｇ、あるいは約０．０２、０．０２５  ０．０４、０．０５、０．０６、０．０７５、０．０８、０．１、０．１２、０．１２５、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７５、０．１８、０．２、０．２２、０．２４、０．２５、０．２６、０．２７５、０．２８、０．３、０．３２、０．３２５、０．３４、０．３５、０．３６、０．３７５、０．３８、０．４、０．４２、０．４４、０．４５、０．４６、０．４８、０．５、０．５２、０．５８、０．６、０．６２５、０．６５、０．６７５、０．７、０．７２５、０．７５、０．７７５、０．８、０．８２５、０．８５、０．８７５、０．９、０．９２５、０．９５、０．９７５、または１．０ｍｇ、あるいは任意の２つのそのような量の範囲である。例えば、様々な実施形態では、ラリンパグの量は、約０．０５−０．６ｍｇである。様々な実施形態では、ラリンパグの量は、約０．０５−０．７５ｍｇである。
【００２０】
様々な実施形態では、ラリンパグの量は、１日あたり、０．０２、０．０２５、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７５、０．０８、０．１、０．１２、０．１２５、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７５、０．１８、０．２、０．２２、０．２４、０．２５、０．２６、０．２７５、０．２８、０．３、０．３２、０．３２５、０．３４、０．３５、０．３６、０．３７５、０．３８、０．４、０．４２、０．４４、０．４５、０．４６、０．４８、０．５、０．５４、０．５６、０．５８、０．６、０．６２５、０．６５、０．６７５、０．７、０．７２５、０．７５、０．７７５、０．８、０．８２５、０．８５、０．８７５、０．９、０．９２５、０．９５、０．９７５、または１．０ｍｇ、あるいは約０．０２、０．０２５、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７５、０．０８、０．１、０．１２、０．１２５、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７５、０．１８、０．２、０．２２、０．２４、０．２５、０．２６、０．２７５、０．２８、０．３、０．３２、０．３２５、０．３４、０．３５、０．３６、０．３７５、０．３８、０．４、０．４２、０．４４、０．４５、０．４６、０．４８、０．５、０．５４、０．５６、０．５８、０．６、０．６２５、０．６５、０．６７５、０．７、０．７２５、０．７５、０．７７５、０．８、０．８２５、０．８５、０．８７５、０．９、０．９２５、０．９５、０．９７５、または１．０ｍｇ、あるいは任意の２つのそのような量の範囲である。例えば、様々な実施形態では、ラリンパグの量は、１日あたり、０．０５−０．６ｍｇまたは約０．０５−０．６ｍｇである。
【００２１】
様々な実施形態では、ラリンパグの量は、１日１回（ＱＤ）あたり、０．０２、０．０２５、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７５、０．０８、０．１、０．１２、０．１２５、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７５、０．１８、０．２、０．２２、０．２４、０．２５、０．２６、０．２７５、０．２８、０．３、０．３２、０．３２５、０．３４、０．３５、０．３６、０．３７５、０．３８、０．４、０．４２、０．４４、０．４５、０．４６、０．４８、０．５、０．５２、０．５４、０．５６、０．５８、０．６ｍｇ、０６．２５、０．６５、０．６７５、０．７、０．７２５、０．７５、０．７７５、０．８、０．８２５、０．８５、０．８７５、０．９、０．９２５、０．９５、０．９７５、または１．０ｍｇ、あるいは約０．０２、０．０２５、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７５、０．０８、０．１、０．１２、０．１２５、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７５、０．１８、０．２、０．２２、０．２４、０．２５、０．２６、０．２７５、０．２８、０．３、０．３２、０．３２５、０．３４、０．３５、０．３６、０．３７５、０．３８、０．４、０．４２、０．４４、０．４５、０．４６、０．４８、０．５、０．５２、０．５４、０．５６、０．５８、０．６ｍｇ、０６．２５、０．６５、０．６７５、０．７、０．７２５、０．７５、０．７７５、０．８、０．８２５、０．８５、０．８７５、０．９、０．９２５、０．９５、０．９７５、または１．０ｍｇ、あるいは任意の２のそのような量の範囲である。例えば、様々な実施形態では、ラリンパグの量は、０．０５−０．６ｍｇＱＤまたは約０．０５−０．６ｍｇＱＤである。
【００２２】
様々な実施形態では、ラリンパグの量は、１日２回（ＢＩＤ）あたり、０．０１、０．０２、０．０２５、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０７５、０．０８、０．０９、０．１、０．１１、０．１２、０．１２５、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１７５、０．１８、０．１９、０．２、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、０．２５、０．２６、０．２７、０．２７５、０．２８、０．２９、０．３、０．３２５、０．３５、０．３７５、０．４、０．４２５、０．４５、０．４７５、または０．５ｍｇ、あるいは約０．０１、０．０２、０．０２５、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０７５、０．０８、０．０９、０．１、０．１１、０．１２、０．１２５、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１７５、０．１８、０．１９、０．２、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、０．２５、０．２６、０．２７、０．２７５、０．２８、０．２９、０．３、０．３２５、０．３５、０．３７５、０．４、０．４２５、０．４５、０．４７５、または０．５ｍｇ、あるいは任意の２つのそのような量の範囲である。例えば、様々な実施形態では、ラリンパグの量は、０．０５−０．３ｍｇＢＩＤまたは約０．０５−０．３ｍｇＢＩＤである。
【００２３】
様々な実施形態では、ラリンパグの量は、１日おきに、０．０１、０．０２、０．０２５、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０７５、０．０８、０．０９、または０．１ｍｇ、あるいは約０．０１、０．０２、０．０２５、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０７５、０．０８、０．０９、または０．１ｍｇである。
【００２４】
様々な実施形態では、リオシグアトの量は、０．２５、０．５、０．７５、１、１．２５、１．５、１．７５、２、２．２５、２．５、２．７５、３、３．２５、３．５、３．７５、４、４．２５、４．５、４．７５、または５ｍｇ、あるいは約０．２５、０．５、０．７５、１、１．２５、１．５、１．７５、２、２．２５、２．５、２．７５、３、３．２５、３．５、３．７５、４、４．２５、４．５、４．７５、または５ｍｇ、あるいは任意の２つそのような量の範囲である。例えば、様々な実施形態では、リオシグアトの量は、０．５〜２．５ｍｇまたは約０．５〜２．５ｍｇである。
【００２５】
様々な実施形態では、リオシグアトの量は、１日あたり、０．２５、０．５、０．７５、１、１．２５、１．５、１．７５、２、２．２５、２．５、２．７５、３、３．２５、３．５、３．７５、４、４．２５、４．５、４．７５、または５ｍｇ、あるいは約０．２５、０．５、０．７５、１、１．２５、１．５、１．７５、２、２．２５、２．５、２．７５、３、３．２５、３．５、３．７５、４、４．２５、４．５、４．７５、または５ｍｇ、あるいは任意の２つのそのような量の範囲である。例えば、様々な実施形態では、リオシグアトの量は、１日あたり、０．５〜２．５ｍｇまたは約０．５〜２．５ｍｇである。
【００２６】
様々な実施形態では、リオシグアトの量は、１日１回あたり（ＱＤ）、０．２５、０．５、０．７５、１、１．２５、１．５、１．７５、２、２．２５、２．５、２．７５、３、３．２５、３．５、３．７５、４、４．２５、４．５、４．７５、または５ｍｇ、あるいは約０．２５、０．５、０．７５、１、１．２５、１．５、１．７５、２、２．２５、２．５、２．７５、３、３．２５、３．５、３．７５、４、４．２５、４．５、４．７５、または５ｍｇ、あるいは任意の２つのそのような量の範囲である。例えば、様々な実施形態では、リオシグアトの量は、１日１回０．５〜２．５ｍｇまたは約０．５〜２．５ｍｇである。様々な実施形態では、リオシグアトは１日２回投与される。様々な実施形態では、リオシグアトは１日３回投与される。
【００２７】
様々な実施形態では、リオシグアトの量は、１日２回（ＢＩＤ）あたり、０．２５、０．５、０．７５、１、１．２５、１．５、１．７５、２、２．２５、または２．５ｍｇ、あるいは約０．２５、０．５、０．７５、１、１．２５、１．５、１．７５、２、２．２５、または２．５ｍｇ、あるいは任意の２つのそのような量の範囲である。
【００２８】
様々な実施形態では、リオシグアトの量は、１日３回（ＴＩＤ）あたり、０．５、１、１．５、２、または２．５ｍｇ、または任意の２つのそのような量の範囲である。
【００２９】
様々な実施形態では、リオシグアトの量は、０．２５、０．５、０．７５、１、１．２５、１．５、１．７５、２、２．２５、２．５、２．７５、３、３．２５、３．５、３．７５、４、４．２５、４．５、４．７５、または５ｍｇ以下である。
【００３０】
いくつかの実施形態では、リオシグアトは吸入形態である。いくつかの実施形態では、リオシグアトは静脈内形態である。いくつかの実施形態では、リオシグアトは経口形態である。
【００３１】
様々な実施形態では、トレプロスチニルの量は、０．１、０．１２５、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５、０．５、０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、０．９５、１、０．２５、０．５、１．７５、２、２．２５、２．５、２．７５、３、３．２５、３．５、３．７５、４、４．２５、４．５、４．７５、５、６、７、８、９、または１０ｍｇ、あるいは約０．１、０．１２５、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５、０．５、０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、０．９５、１、０．２５、０．５、１．７５、２、２．２５、２．５、２．７５、３、３．２５、３．５、３．７５、４、４．２５、４．５、４．７５、５、６、７、８、９、または１０ｍｇ、あるいは任意の２つのそのような量の範囲である。例えば、様々な実施形態では、トレプロスチニルの量は、０．１２５−５ｍｇまたは約０．１２５−５ｍｇである。
【００３２】
様々な実施形態では、トレプロスチニルの量は、１、２．５、３、４、５、６、７、７．５、８、９、１０、１１、１２、１２．５、１３、１４、１５、１６、１７、１７．５、１８、１９、２０、または２５ｍｇ／ｍｌ、あるいは約１、２．５、３、４、５、６、７、７．５、８、９、１０、１１、１２、１２．５、１３、１４、１５、１６、１７、１７．５、１８、１９、２０、または２５ｍｇ／ｍｌ、あるいは任意の２つのそのような量の範囲である。様々な実施形態では、トレプロスチニルの量は、ＩＶ皮下形態で１−１０ｍｇ／ｍｌである。
【００３３】
様々な実施形態では、トレプロスチニルの量は、０．１、０．２、０．２５、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．７５、０．８、０．９、または１ｍｇ／ｍｌ、あるいは約０．１、０．２、０．２５、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．７５、０．８、０．９、または１ｍｇ／ｍｌ、あるいは任意の２つのそのような量の範囲である。様々な実施形態では、トレプロスチニルの量は、吸入形態で０．６ｍｇ／ｍｌである。
【００３４】
様々な実施形態では、トレプロスチニルの量は、０．１、０．１２５、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５、０．５、０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、０．９５、１、０．２５、０．５、１．７５、２、２．２５、２．５、２．７５、３、３．２５、３．５、３．７５、４、４．２５、４．５、４．７５、または５ｍｇ以下である。様々な実施形態では、トレプロスチニルの量は、１、２．５、３、４、５、６、７、７．５、８、９、または１０ｍｇ／ｍｌ以下である。様々な実施形態では、トレプロスチニルの量は、０．１、０．２、０．２５、０．３、０．４、０．５、または０．６ｍｇ／ｍｌ以下である。
【００３５】
様々な実施形態では、トレプロスチニルは吸入形態である。いくつかの実施形態では、トレプロスチニルは注射可能な形態である。様々な実施形態では、トレプロスチニルは静脈内形態である。様々な実施形態では、トレプロスチニルはＩＶ皮下形態である。様々な実施形態では、トレプロスチニルは経口形態である。様々な実施形態では、トレプロスチニルは経皮的形態である。様々な実施形態では、トレプロスチニルは経皮パッチである。様々な実施形態では、トレプロスチニルは１日１回投与される。様々な実施形態では、トレプロスチニルは１日２回投与される。様々な実施形態では、トレプロスチニルは１日３回投与される。
【００３６】
いくつかの実施形態では、ラリンパグの治療上有効な量は開始用量である。いくつかの実施形態では、ラリンパグの治療上有効な量は最高耐量（ｈｉｇｈｅｓｔ  ｔｏｌｅｒａｔｅｄ  ｄｏｓｅ）である。いくつかの実施形態では、ラリンパグの治療上有効な量は最大用量である。いくつかの実施形態では、ラリンパグの治療上有効な量は最大耐量である。いくつかの実施形態では、ラリンパグの治療上有効な量は維持量である。
【００３７】
いくつかの実施形態では、開始用量は患者向けである。いくつかの実施形態では、開始用量は患者集団向けである。いくつかの実施形態では、最高耐量は患者向けである。いくつかの実施形態では、最高耐量は患者集団向けである。いくつかの実施形態では、最大用量は患者向けである。いくつかの実施形態では、最大用量は患者集団向けである。いくつかの実施形態では、最大耐量は患者向けである。いくつかの実施形態では、最大耐量は患者集団向けである。いくつかの実施形態では、維持量は患者向けである。いくつかの実施形態では、維持量は患者集団向けである。
【００３８】
いくつかの実施形態では、ラリンパグの開始用量は、１日あたり、０．０１、０．０２、０．０２５、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０７５、０．０８、０．０９、または０．１ｍｇ、あるいは約０．０１、０．０２、０．０２５、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０７５、０．０８、０．０９、または０．１ｍｇから選択される。いくつかの実施形態では、ラリンパグ  の開始用量は、１日約０．０１ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの開始用量は、１日約０．０２ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの開始用量は、１日約０．０５ｍｇである。
【００３９】
いくつかの実施形態では、ラリンパグの用量は、毎週間隔で１日０．０５ｍｇずつ、１日０．８ｍｇの最高耐量まで増加される。
【００４０】
いくつかの実施形態では、ラリンパグの用量は毎週間隔で増加される。いくつかの実施形態では、ラリンパグの用量は隔月間隔で増加される。
【００４１】
いくつかの実施形態では、ラリンパグの用量は、１日あたり、０．０２ｍｇから０．０５ｍｇ、および０．７５ｍｇから０．１ｍｇから選択される量で増加される。
【００４２】
いくつかの実施形態では、ラリンパグの用量は、１日あたり、０．０２ｍｇから０．０５ｍｇ、および０．７５ｍｇから０．１ｍｇから選択される量で、毎週間隔で増加される。
【００４３】
いくつかの実施形態では、ラリンパグの最高耐量は、１日あたり、０．４ｍｇ  ０．４５ｍｇ  ０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．６５ｍｇ、０．７ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８ｍｇ、０．８５ｍｇ、０．９ｍｇ、０．９５ｍｇ、および１．０ｍｇ、あるいは約０．４ｍｇ  ０．４５ｍｇ  ０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．６５ｍｇ、０．７ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８ｍｇ、０．８５ｍｇ、０．９ｍｇ、０．９５ｍｇ、および１．０ｍｇから選択される。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最高耐量は１日あたり０．６ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最高耐量は１日あたり、０．７５ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最高耐量は１日あたり、０．８ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最高耐量は１日あたり、０．４から１．０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最高耐量は１日あたり、０．６から１．０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最高耐量は１日あたり０．６から０．８ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最高耐量は１日あたり０．６５から１．０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最高耐量は１日あたり０．６５から０．８ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最高耐量は１日あたり０．４ｍｇを超える。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最高耐量は１日あたり０．６ｍｇを超える。
【００４４】
いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は、１日あたり、０．４ｍｇ  ０．４５ｍｇ  ０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．６５ｍｇ、０．７ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８ｍｇ、０．８５ｍｇ、０．９ｍｇ、０．９５ｍｇ、および１．０ｍｇ、あるいは約０．４ｍｇ  ０．４５ｍｇ  ０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．６５ｍｇ、０．７ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８ｍｇ、０．８５ｍｇ、０．９ｍｇ、０．９５ｍｇ、および１．０ｍｇから選択される。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は１日あたり０．０６ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は１日あたり０．７５ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は１日あたり０．８ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は１日あたり０．４から１．０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は１日あたり０．６から１．０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は１日あたり０．６から０．８ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は１日あたり０．６５から１．０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は１日あたり０．６５から０．８ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は１日あたり０．４ｍｇを超える。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は１日あたり０．６ｍｇを超える。
【００４５】
いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大耐量は、１日あたり、０．４ｍｇ  ０．４５ｍｇ  ０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．６５ｍｇ、０．７ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８ｍｇ、０．８５ｍｇ、０．９ｍｇ、０．９５ｍｇ、および１．０ｍｇ、あるいは約０．４ｍｇ  ０．４５ｍｇ  ０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．６５ｍｇ、０．７ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８ｍｇ、０．８５ｍｇ、０．９ｍｇ、０．９５ｍｇ、および１．０ｍｇから選択される。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大耐量は１日あたり、０．０６ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大耐量は１日あたり、０．７５ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大耐量は１日あたり、０．８ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大耐量は１日あたり、０．７５ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大耐量は１日あたり、０．８ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大耐量は１日あたり、０．４から１．０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大耐量は１日あたり、０．６から１．０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大耐量は１日あたり、０．６から０．８ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大耐量は１日あたり、０．６５から１．０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大耐量は１日あたり、０．６５から０．８ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大耐量は１日あたり、０．４ｍｇを超える。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大耐量は１日あたり、０．６ｍｇを超える。
【００４６】
いくつかの実施形態では、剤形のラリンパグの最大用量は、０．４ｍｇ  ０．４５ｍｇ  ０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．６５ｍｇ、０．７ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８ｍｇ、０．８５ｍｇ、０．９ｍｇ、０．９５ｍｇ、および１．０ｍｇ、あるいは約０．４ｍｇ  ０．４５ｍｇ  ０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．６５ｍｇ、０．７ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８ｍｇ、０．８５ｍｇ、０．９ｍｇ、０．９５ｍｇ、および１．０ｍｇから選択される。いくつかの実施形態では、剤形のラリンパグの最大用量は０．０６ｍｇである。いくつかの実施形態では、剤形のラリンパグの最大用量は０．７５ｍｇである。いくつかの実施形態では、剤形のラリンパグの最大用量は０．８ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は１日あたり、０．４から１．０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は１日あたり、０．６から１．０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は１日あたり、０．６から０．８ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は１日あたり、０．６５から１．０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は１日あたり、０．６５から０．８ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は１日あたり、０．４ｍｇを超える。いくつかの実施形態では、ラリンパグの最大用量は１日あたり、０．６ｍｇを超える。
【００４７】
いくつかの実施形態では、ラリンパグの維持量は、１日あたり、０．０１ｍｇ  ０．０２ｍｇ  ０．０２５ｍｇ、０．０３ｍｇ、０．０４ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．０６ｍｇ、０．０６５ｍｇ、０．０７ｍｇ、０．０７５ｍｇ、０．０８ｍｇ、０．０９ｍｇ、０．１ｍｇ、０．１２ｍｇ、０．１５ｍｇ、０．１６ｍｇ、０．２ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．３ｍｇ、０．３５ｍｇ、０．４ｍｇ、０．４５ｍｇ、０．５ｍｇ、０．５５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．６５ｍｇ、０．７ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８ｍｇ、０．８５ｍｇ、０．９ｍｇ、０．９５ｍｇ、および１．０ｍｇ、あるいは約０．０１ｍｇ  ０．０２ｍｇ  ０．０２５ｍｇ、０．０３ｍｇ、０．０４ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．０６ｍｇ、０．０６５ｍｇ、０．０７ｍｇ、０．０７５ｍｇ、０．０８ｍｇ、０．０９ｍｇ、０．１ｍｇ、０．１２ｍｇ、０．１５ｍｇ、０．１６ｍｇ、０．２ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．３ｍｇ、０．３５ｍｇ、０．４ｍｇ、０．４５ｍｇ、０．５ｍｇ、０．５５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．６５ｍｇ、０．７ｍｇ、０．７５ｍｇ、０．８ｍｇ、０．８５ｍｇ、０．９ｍｇ、０．９５ｍｇ、および１．０ｍｇから選択される。いくつかの実施形態では、ラリンパグの維持量は１日あたり、０．４から１．０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの維持量は１日あたり、０．６から１．０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの維持量は１日あたり、０．６から０．８ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの維持量は１日あたり、０．６５から１．０ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの維持量は１日あたり、０．６５から０．８ｍｇである。いくつかの実施形態では、ラリンパグの維持量は耐用性によって決定される。いくつかの実施形態では、ラリンパグの維持量は１日あたり、０．４ｍｇを超える。いくつかの実施形態では、ラリンパグの維持量は１日あたり、０．６ｍｇを超える。
【００４８】
いくつかの実施形態では、許容され得ないラリンパグの投与を受ける患者において、ラリンパグの用量は以前の耐量まで減少される。いくつかの実施形態では、以前の耐量は患者にとって最大耐量である。
【００４９】
いくつかの実施形態では、ラリンパグの量は、即時放出型および持続放出型の間の生物学的同等性の違いを考慮して調整される。例えば、いくつかの実施形態では、２つの０．３ｍｇの即時放出剤形中のラリンパグと等しくなるように、持続放出剤形中の０．８ｍｇのラリンパグが提供され、ここで、持続放出剤形は、未満の即時放出剤形と１００％より少ない生物学的同等性を有する。
【００５０】
いくつかの実施形態では、治療上有効な量は１日１回の投与に適切である。いくつかの実施形態では、治療上有効な量は１日２回の投与に適切である。いくつかの実施形態では、治療上有効な量が１日１回投与される。いくつかの実施形態では、治療上有効な量が１日２回投与される。
【００５１】
様々な実施形態では、ラリンパグが滴定される。様々な実施形態では、リオシグアトが滴定される。様々な実施形態では、ラリンパグおよびリオシグアトの両方が滴定される。いくつかの実施形態では、リオシグアトは、参照によって本明細書に組み込まれる、規制当局（米国ＦＤＡなど、ＡＤＥＭＰＡＳ（登録商標）ラベル参照）によって承認された製品ラベルに従って滴定される。
【００５２】
様々な実施形態では、ラリンパグが滴定される。様々な実施形態では、トレプロスチニルが滴定される。様々な実施形態では、ラリンパグおよびトレプロスチニルの両方が滴定される。いくつかの実施形態では、トレプロスチニルは、参照によって本明細書に組み込まれる、規制当局（米国ＦＤＡなど、ＴＹＶＡＳＯ（登録商標）ラベル参照）によって承認された製品ラベルに従って滴定される。
【００５３】
様々な実施形態では、ラリンパグは、トレプロスチニル、イロプロスト、シカプロスト（ｃｉｓａｐｒｏｓｔ）、およびエポプロステノールの１つ以上と同時投与される。
【００５４】
様々な実施形態では、本明細書に開示される同時投与方法は、ＰＡＨ、例えば、特発性のＰＡＨ；遺伝性のＰＡＨ；家族性のＰＡＨ；膠原血管病、先天性心疾患、修復されたシャントを伴う先天性心疾患（ａ  ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｗｉｔｈ  ｒｅｐａｉｒｅｄ  ｓｈｕｎｔｓ）、門脈圧亢進症、結合組織病、ＨＩＶ感染症、薬物または毒素の摂取、遺伝性出血性毛細管拡張症、脾臓摘出、肺静脈閉塞性疾患（ＰＶＯＤ）、または肺毛細管血管腫症（ＰＣＨ）に関連するＰＡＨに関連するＰＡＨ：および、静脈または毛細管の関与が大きいＰＡＨを処置するのに有用である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される同時投与方法は、症候性ＰＡＨを患うヒト被験体を処置するために有用である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される同時投与方法は、ＷＨＯ機能分類ＩのＰＡＨを患うヒト被験体を処置するために有用である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される同時投与方法は、ＷＨＯ機能分類ＩＩのＰＡＨを患うヒト被験体を処置するために有用である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される同時投与方法は、ＷＨＯ機能分類ＩＩＩのＰＡＨを患うヒト被験体を処置するために有用である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される同時投与方法は、ＷＨＯ機能分類ＩＶのＰＡＨを患うヒト被験体を処置するために有用である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される同時投与方法は、ＷＨＯグループＩのＰＡＨを患うヒト被験体を処置するために有用である。特定の実施形態では、本明細書に開示される同時投与方法は、ＷＨＯ機能分類ＩＩ−ＩＩＩの症状を有するＰＡＨ患者を処置するために有用である。様々な実施形態では、本明細書に開示される同時投与方法は、慢性血栓塞栓性肺高血圧症（ＣＴＥＰＨ）を処置するために有用である。様々な実施形態では、本明細書に開示される同時投与方法は、外科的処置後の持続性／再発性のＣＴＥＰＨ（ＷＨＯグループ４）を処置するために有用である。様々な実施形態では、本明細書に開示される同時投与方法は、運動能力および／またはＷＨＯ機能分類を改善するために手術不可能なＣＴＥＰＨを処置するのに有用である。様々な実施形態では、本明細書に開示される同時投与方法は、運動能力を改善するためにＰＡＨ（ＷＨＯグループ１）を処置するのに有用である。様々な実施形態では、本明細書に開示される同時投与方法は、ＷＨＯ機能分類を改善するために、および／または臨床的悪化を遅らせるために有用である。様々な実施形態では、本明細書に開示される同時投与方法は、疾患進行を遅らせるため、および／またはＰＡＨの入院治療の危険を減少させるために有用である。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１Ａ】図１Ａ−１Ｆは、１００ｎＭのリオシグアトと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのリオシグアトおよびＳＭＢＭ単独の非存在下または存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳおよびＤＭＳＯの応答として得られた、ＦＢＳおよびＤＭＳＯによって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグおよび溶媒±リオシグアトの存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチン（ｆｉｔｔｉｎｇ  ｒｏｕｔｉｎｅ）を用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。ラリンパグ単独と比較された場合、＊＝Ｐ〈０．０５；ボンフェローニポストホック検定（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ  ｐｏｓｔ  ｈｏｃ  ｔｅｓｔ）を用いた二元配置分散分析。
【図１Ｂ】図１Ａ−１Ｆは、１００ｎＭのリオシグアトと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのリオシグアトおよびＳＭＢＭ単独の非存在下または存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳおよびＤＭＳＯの応答として得られた、ＦＢＳおよびＤＭＳＯによって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグおよび溶媒±リオシグアトの存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。ラリンパグ単独と比較された場合、＊＝Ｐ〈０．０５；ボンフェローニポストホック検定を用いた二元配置分散分析。
【図１Ｃ】図１Ａ−１Ｆは、１００ｎＭのリオシグアトと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのリオシグアトおよびＳＭＢＭ単独の非存在下または存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳおよびＤＭＳＯの応答として得られた、ＦＢＳおよびＤＭＳＯによって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグおよび溶媒±リオシグアトの存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。ラリンパグ単独と比較された場合、＊＝Ｐ〈０．０５；ボンフェローニポストホック検定を用いた二元配置分散分析。
【図１Ｄ】図１Ａ−１Ｆは、１００ｎＭのリオシグアトと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのリオシグアトおよびＳＭＢＭ単独の非存在下または存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳおよびＤＭＳＯの応答として得られた、ＦＢＳおよびＤＭＳＯによって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグおよび溶媒±リオシグアトの存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。ラリンパグ単独と比較された場合、＊＝Ｐ〈０．０５；ボンフェローニポストホック検定を用いた二元配置分散分析。
【図１Ｅ】図１Ａ−１Ｆは、１００ｎＭのリオシグアトと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのリオシグアトおよびＳＭＢＭ単独の非存在下または存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳおよびＤＭＳＯの応答として得られた、ＦＢＳおよびＤＭＳＯによって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグおよび溶媒±リオシグアトの存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。  ラリンパグ単独と比較された場合、＊＝Ｐ〈０．０５；ボンフェローニポストホック検定を用いた二元配置分散分析。
【図１Ｆ】図１Ａ−１Ｆは、１００ｎＭのリオシグアトと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのリオシグアトおよびＳＭＢＭ単独の非存在下または存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳおよびＤＭＳＯの応答として得られた、ＦＢＳおよびＤＭＳＯによって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグおよび溶媒±リオシグアトの存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。ラリンパグ単独と比較された場合、＊＝Ｐ〈０．０５；ボンフェローニポストホック検定を用いた二元配置分散分析。
【図２】リオシグアトの存在下でのＰＡＨ患者由来のヒトＰＡＳＭＣにおいて、ラリンパグがより効果的な血清誘発増殖の阻害剤であることを示す。１００ｎＭのリオシグアトの非存在下（Ａ）および存在下（Ｂ）における、ラリンパグの漸増用量の平均の抗増殖性の効果。ヒトＰＡＳＭＣは、９％の血清（ＦＢＳ）および０．１％のＤＭＳＯ中で４日間±薬物で増殖された。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳおよびＤＭＳＯの応答として得られた、ＦＢＳおよびＤＭＳＯによって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグおよび溶媒±リオシグアトの存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。さらにグラフに示されるのは、溶媒を含む増殖培地の存在下でのリオシグアトの効果（１００ｎＭ）である。対照（ＦＢＳおよびＤＭＳＯ）と比較した場合、＊＝Ｐ〈０．０５、＊＊＊＝Ｐ〈０．００１；ボンフェローニポストホック検定を用いた一元配置分散分析（ｎ＝５）。
【図３Ａ】図３Ａ−３Ｆは、１００ｎＭのシルデナフィルと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのシルデナフィルおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図３Ｂ】図３Ａ−３Ｆは、１００ｎＭのシルデナフィルと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのシルデナフィルおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図３Ｃ】図３Ａ−３Ｆは、１００ｎＭのシルデナフィルと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのシルデナフィルおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図３Ｄ】図３Ａ−３Ｆは、１００ｎＭのシルデナフィルと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのシルデナフィルおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図３Ｅ】図３Ａ−３Ｆは、１００ｎＭのシルデナフィルと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのシルデナフィルおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図３Ｆ】図３Ａ−３Ｆは、１００ｎＭのシルデナフィルと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのシルデナフィルおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図４】ＰＡＨ患者由来のヒトＰＡＳＭＣ中のラリンパグの抗増殖性の応答におけるシルデナフィルの効果を示す。１００ｎＭのシルデナフィルの非存在下（Ａ）および存在下（Ｂ）における、ラリンパグの漸増用量の平均の抗増殖性の効果。ヒトＰＡＳＭＣは、９％の血清（ＦＢＳ）および０．１％のＤＭＳＯ中で４日間±薬物で増殖された。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグおよび溶媒±シルデナフィルの存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。グラフに示されるのは、溶媒を含む増殖培地の存在下における、シルデナフィルの効果（Ｓｉｌｄ；１００ｎＭ）である。対照（ＦＢＳとＤＭＳＯ）と比較した場合、＊＝Ｐ〈０．０５、＊＊＝Ｐ〈０．０１、＊＊＊＝Ｐ〈０．００１；ボンフェローニポストホック検定を用いた一元配置分散分析（ｎ＝５）。
【図５Ａ】図５Ａ−５Ｆは、１００ｎＭのトレプロスチニルと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのトレプロスチニルおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図５Ｂ】図５Ａ−５Ｆは、１００ｎＭのトレプロスチニルと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのトレプロスチニルおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図５Ｃ】図５Ａ−５Ｆは、１００ｎＭのトレプロスチニルと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのトレプロスチニルおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチン）を用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図５Ｄ】図５Ａ−５Ｆは、１００ｎＭのトレプロスチニルと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのトレプロスチニルおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図５Ｅ】図５Ａ−５Ｆは、１００ｎＭのトレプロスチニルと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのトレプロスチニルおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図５Ｆ】図５Ａ−５Ｆは、１００ｎＭのトレプロスチニルと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのトレプロスチニルおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図６】トレプロスチニルの存在下でのＰＡＨ患者由来のヒトＰＡＳＭＣにおいて、ラリンパグがより効果的な血清誘発増殖の阻害剤であることを示す。１００ｎＭのトレプロスチニルの非存在下（Ａ）および存在下（Ｂ）における、ラリンパグの漸増用量の平均の抗増殖性の効果。ヒトＰＡＳＭＣは、９％の血清（ＦＢＳ）および０．１％のＤＭＳＯ中で４日間±薬物で増殖された。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグおよび溶媒±トレプロスチニルの存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。さらにグラフに示されるのは、溶媒を含む増殖培地の存在下でのトレプロスチニルの効果（Ｔｒｅｐ；１００ｎＭ）である。対照（ＦＢＳおよびＤＭＳＯ）と比較した場合、＊＝Ｐ〈０．０５、＊＊＝Ｐ＜０．０１、＊＊＊＝Ｐ＜０．００１；ボンフェローニポストホック検定を用いた一元配置分散分析（ｎ＝５）。
【図７Ａ】図７Ａ−７Ｆは、１００ｎＭのマシテンタンと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのマシテンタンおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされて、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図７Ｂ】図７Ａ−７Ｆは、１００ｎＭのマシテンタンと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのマシテンタンおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図７Ｃ】図７Ａ−７Ｆは、１００ｎＭのマシテンタンと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのマシテンタンおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図７Ｄ】図７Ａ−７Ｆは、１００ｎＭのマシテンタンと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのマシテンタンおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図７Ｅ】図７Ａ−７Ｆは、１００ｎＭのマシテンタンと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのマシテンタンおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図７Ｆ】図７Ａ−７Ｆは、１００ｎＭのマシテンタンと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのマシテンタンおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図８】ＰＡＨ患者由来のヒトＰＡＳＭＣ中のラリンパグの抗増殖性の応答におけるマシテンタンの効果を示す。１００ｎＭのマシテンタンの非存在下（Ａ）および存在下（Ｂ）における、ラリンパグの漸増用量の平均の抗増殖性の効果。ヒトＰＡＳＭＣは、９％の血清（ＦＢＳ）および０．１％のＤＭＳＯ中で４日間±薬物で増殖された。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグおよび溶媒±マシテンタンの存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。グラフに示されるのは、溶媒を含む増殖培地の存在下における、マシテンタンの効果（Ｍａｃｉ；１００ｎＭ）である。対照（ＦＢＳとＤＭＳＯ）と比較した場合、＊＝Ｐ〈０．０５、＊＊＝Ｐ〈０．０１、＊＊＊＝Ｐ〈０．００１；ボンフェローニポストホック検定を用いた一元配置分散分析（ｎ＝５）。
【図９Ａ】図９Ａ−９Ｆは、１００ｎＭのボセンタンと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのボセンタンおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされて、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図９Ｂ】図９Ａ−９Ｆは、１００ｎＭのボセンタンと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのボセンタンおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図９Ｃ】図９Ａ−９Ｆは、１００ｎＭのボセンタンと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのボセンタンおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図９Ｄ】図９Ａ−９Ｆは、１００ｎＭのボセンタンと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのボセンタンおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図９Ｅ】図９Ａ−９Ｆは、１００ｎＭのボセンタンと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのボセンタンおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図９Ｆ】図９Ａ−９Ｆは、１００ｎＭのボセンタンと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果を示す。増殖停止細胞は、１００ｎＭのボセンタンおよびＳＭＢＭ単独の非存在下および存在下で（時間対照）、９％のＦＢＳ±０．１％ＤＭＳＯ、ＦＢＳプラスラリンパグおよびＤＭＳＯのいずれかを含む、ヒト平滑筋基本培地（ＳＭＢＭ）中で９６時間インキュベートされた。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグプラス溶媒の存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。ＧｒａｐｈＰａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いてデータがフィットされ、各フィットのパラメーターが示される。データは、５つの個々の患者細胞単離物からのものである。
【図１０】ＰＡＨ患者由来のヒトＰＡＳＭＣ中のラリンパグの抗増殖性の応答におけるボセンタンの効果を示す。１００ｎＭのボセンタンの非存在下（Ａ）および存在下（Ｂ）における、ラリンパグの漸増用量の平均の抗増殖性の効果。ヒトＰＡＳＭＣは、９％の血清（ＦＢＳ）および０．１％のＤＭＳＯ中で４日間±薬物で増殖された。細胞増殖は、時間対照を引いたＦＢＳの応答として得られた、ＦＢＳ単独によって誘発される増殖応答に対して正規化された（＝４日で１００％増殖）。ラリンパグおよび溶媒±ボセンタンの存在下で誘発された増殖応答は、ＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖における％変化として示される。グラフに示されるのは、溶媒を含む増殖培地の存在下における、ボセンタンの効果（Ｂｏｓ；１００ｎＭ）である。対照（ＦＢＳとＤＭＳＯ）と比較した場合、＊＝Ｐ〈０．０５、＊＊＝Ｐ〈０．０１、＊＊＊＝Ｐ〈０．００１；ボンフェローニポストホック検定を用いた一元配置分散分析（ｎ＝５）。
【図１１Ａ】図１１Ａ−１１Ｅは、ヒトＰＡＳＭＣ細胞中の細胞増殖におけるラリンパグとＰＡＨ治療法との組み合わせを示す。同じＰＡＨ患者由来の細胞および継代において比較を行い、９％の血清（ＦＢＳ）ならびに０．１％のＤＭＳＯ中で４日間増殖させ、ラリンパグ±リオシグアト（Ａ）、シルデナフィル（Ｂ）、トレプロスチニル（Ｃ）、マシテンタン（Ｄ）またはボセンタン（Ｅ）で処置した。細胞増殖は、ＦＢＳプラス溶媒によって誘発された増殖応答に対して正規化された。データは、Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いた、フィットにおける平均値±標準誤差として示され、各フィットのパラメーターが示される。ラリンパグ単独と比較された場合、＊＝Ｐ〈０．０５；ボンフェローニポストホック検定を用いた一元配置分散分析（ｎ＝５）。
【図１１Ｂ】図１１Ａ−１１Ｅは、ヒトＰＡＳＭＣ細胞中の細胞増殖におけるラリンパグとＰＡＨ治療法との組み合わせを示す。同じＰＡＨ患者由来の細胞および継代において比較を行い、９％の血清（ＦＢＳ）ならびに０．１％のＤＭＳＯ中で４日間増殖させ、ラリンパグ±リオシグアト（Ａ）、シルデナフィル（Ｂ）、トレプロスチニル（Ｃ）、マシテンタン（Ｄ）またはボセンタン（Ｅ）で処置した。細胞増殖は、ＦＢＳプラス溶媒によって誘発された増殖応答に対して正規化された。データは、Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いた、フィットにおける平均値±標準誤差として示され、各フィットのパラメーターが示される。ラリンパグ単独と比較された場合、＊＝Ｐ〈０．０５；ボンフェローニポストホック検定を用いた一元配置分散分析（ｎ＝５）。
【図１１Ｃ】図１１Ａ−１１Ｅは、ヒトＰＡＳＭＣ細胞中の細胞増殖におけるラリンパグとＰＡＨ治療法との組み合わせを示す。同じＰＡＨ患者由来の細胞および継代において比較を行い、９％の血清（ＦＢＳ）ならびに０．１％のＤＭＳＯ中で４日間増殖させ、ラリンパグ±リオシグアト（Ａ）、シルデナフィル（Ｂ）、トレプロスチニル（Ｃ）、マシテンタン（Ｄ）またはボセンタン（Ｅ）で処置した。細胞増殖は、ＦＢＳプラス溶媒によって誘発された増殖応答に対して正規化された。データは、Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いた、フィットにおける平均値±標準誤差として示され、各フィットのパラメーターが示される。ラリンパグ単独と比較された場合、＊＝Ｐ〈０．０５；ボンフェローニポストホック検定を用いた一元配置分散分析（ｎ＝５）。
【図１１Ｄ】図１１Ａ−１１Ｅは、ヒトＰＡＳＭＣ細胞中の細胞増殖におけるラリンパグとＰＡＨ治療法との組み合わせを示す。同じＰＡＨ患者由来の細胞および継代において比較を行い、９％の血清（ＦＢＳ）ならびに０．１％のＤＭＳＯ中で４日間増殖させ、ラリンパグ±リオシグアト（Ａ）、シルデナフィル（Ｂ）、トレプロスチニル（Ｃ）、マシテンタン（Ｄ）またはボセンタン（Ｅ）で処置した。細胞増殖は、ＦＢＳプラス溶媒によって誘発された増殖応答に対して正規化された。データは、Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いた、フィットにおける平均値±標準誤差として示され、各フィットのパラメーターが示される。ラリンパグ単独と比較された場合、＊＝Ｐ〈０．０５；ボンフェローニポストホック検定を用いた一元配置分散分析（ｎ＝５）。
【図１１Ｅ】図１１Ａ−１１Ｅは、ヒトＰＡＳＭＣ細胞中の細胞増殖におけるラリンパグとＰＡＨ治療法との組み合わせを示す。同じＰＡＨ患者由来の細胞および継代において比較を行い、９％の血清（ＦＢＳ）ならびに０．１％のＤＭＳＯ中で４日間増殖させ、ラリンパグ±リオシグアト（Ａ）、シルデナフィル（Ｂ）、トレプロスチニル（Ｃ）、マシテンタン（Ｄ）またはボセンタン（Ｅ）で処置した。細胞増殖は、ＦＢＳプラス溶媒によって誘発された増殖応答に対して正規化された。データは、Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄの可変的勾配Ｓ字状の曲線フィッティングルーチンを用いた、フィットにおける平均値±標準誤差として示され、各フィットのパラメーターが示される。ラリンパグ単独と比較された場合、＊＝Ｐ〈０．０５；ボンフェローニポストホック検定を用いた一元配置分散分析（ｎ＝５）。
【図１２】ＰＡＨ患者由来のヒトＰＡＳＭＣ中の細胞増殖に対するラリンパグと様々なＰＡＨとの薬物の組み合わせの比較を示す。データは平均値±標準誤差として示され、図１、３、５、７、および９から得られる。この薬物が、１００ｎＭのボセンタン、マシテンタン、シルデナフィル、トレプロスチニル、またはリオシグアトのいずれかと組み合わされた時の、血清誘発増殖に対するラリンパグの濃度依存の効果が比較される。ラリンパグと比較された時、＊＝Ｐ〈０．０５、＊＊＝Ｐ〈０．０１；ボンフェローニポストホック検定を用いた二元配置分散分析。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
本開示は、必要とする患者、特に、多くの形態のＰＡＨ、例えば、特発性のＰＡＨ；家族性のＰＡＨ；膠原血管病、先天性心疾患、門脈圧亢進症、ＨＩＶ感染症、薬物または毒素の摂取、遺伝性出血性毛細管拡張症、脾臓摘出、肺静脈閉塞性疾患（ＰＶＯＤ）、または肺毛細管血管腫症（ＰＣＨ）に関連するＰＡＨ；静脈または毛細管の関与が大きいＰＡＨに苦しむ患者のために、ラリンパグを投与する改善された方法を提供する。本開示の方法はまた、血小板凝集；冠動脈疾患、心筋梗塞、一過性脳乏血発作；アンギナ、脳卒中；虚血再潅流障害；再狭窄；心房細動；血管形成術または冠状動脈のバイパス術の個体または心房細動を患う個体における血餅形成；アテローム血栓症；喘息またはその症状；糖尿病末梢神経障害、糖尿病腎症、または糖尿病網膜症などの糖尿関連障害；緑内障または異常な眼内圧を有する眼の他の疾患；高血圧症；炎症；乾癬；乾癬性関節炎；関節リウマチ；クローン病；移植拒絶反応；多発性硬化症；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；潰瘍性大腸炎；アテローム性動脈硬化、ざ瘡；Ｉ型糖尿病；ＩＩ型糖尿病；敗血症；および、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの他の疾病を処置するのに適している。
【００５７】
肺動脈圧高血圧症（ＰＡＨ）は、右室肥大に結びつく進行性肺性脈管障害によって特徴付けられる生死にかかわる病気である。未処置のままにしておくと、右心不全が起こる。肺性脈管障害に対する血管拡張性および抗増殖性の効果を有するプロスタサイクリンは、正常な対照と比較して、ＰＡＨを患う患者において低いことが分かった。プロスタサイクリンまたはプロスタサイクリンのアナログ、例えば、トレプロスチニル、イロプロスト、およびベラプロストなどのプロスタノイドの外因性投与がＰＡＨを処置するために使用される。しかし、プロスタサイクリン、トレプロスチニル、およびイロプロストは、経口的に活性でなく、静脈内に投与されなければならない。ベラプロストは、経口的に活発であるが、ヨーロッパおよび米国では承認されていない。
【００５８】
セレキシパグ（２−｛４―［（５，６−ジフェニルピラジン−２−イル）（プロパノ−２−イル）アミノ］ブトキシ｝−Ｎ−（メタンスルホニル）アセトアミド）およびその遊離カルボン酸活性代謝物、ＭＲＥ−２６９は、ＰＡＨを処置することでも知られている。しかし、これらの薬物は高価であり、それぞれインビボで８、３−４、および０．５時間の比較的短い半減期を有する（Ｋｕｗａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７；  Ｃｌａｐｐ  ＆  Ｇｕｒｕｎｇ，  ２０１５））。これに対して、また、投与に関係なく、ラリンパグには比較的長い血漿内半減期がある。したがって、ラリンパグは、既知の治療剤と比較して、ＰＡＨ（および本明細書で記載されるような関連疾病）の処置における改善された治療有効性を提供する可能性がある。
【００５９】
ラリンパグ、および薬学的に許容可能な塩、水和物、多形体およびその溶媒和物の合成、ならびに医薬製剤および治療法の一般的な記載は、例えば、米国特許第１２／９３３，１９６（米国特許第２０１１／００５３９５８として公開され；米国特許第８，８９５，７７６として発行された）に開示される。ラリンパグを滴定する方法を含む処置する方法は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０５６８２４（国際公開第２０１６／０６５１０３として公開された）に開示される。この後者の出願は、ラリンパグを用いた処置を必要とする患者に対して容量を最適化する様々な方法を詳細に記載する。様々な実施形態では、ラリンパグの初回量は、０．０１ｍｇの遊離酸形態と等しく（０．０１ｍｇと同等の用量と呼ばれる）、また１日当たり１回（ＱＤ）または１日あたり２回（ＢＩＤ）投与される。この投与が許容される場合、投与の頻度は第２週目に増加され（例えば、ＱＤからＢＩＤ投与へと）、および／またはラリンパグの量は、例えば、０．０１ｍｇＢＩＤと同等の初回量から、毎週０．０１ｍｇ（用量当量）の増分で、例えば、最大０．３ｍｇのラリンパグのＢＩＤ投与まで増加される。
【００６０】
本明細書では、その用量の患者への投与が、受け入れられない有害事象または有害事象の組み合わせを結果としてもたらさない場合、ラリンパグなどの化合物の容量は「許容する」と言われる。当業者は、許容度は主観的であること、およびある患者に許容できる量が、異なる患者にとっては許容できないことを認識するだろう。典型的には、許容度は、任意の有害事象に対する容量の臨床的有用性の間の主観的なバランスを反映する。本明細書で記載されるように、「有害事象」は、化合物を用いた処置に関連する、望ましくないまたは不要な臨床症状を指す。ラリンパグに関して、典型的な有害事象は、頭痛、悪心、嘔吐、顎痛、フラッシング、異常な脈拍数、異常なＱＴ間隔、約１６０ｍｍＨｇを超える坐位収縮期血圧、約１００ｍｍＨｇを超える坐位拡張期血圧、約９０ｍｍＨｇより少ない収縮期圧、腹痛症、鼻血、筋肉痛、熱感、動悸、めまい、そう痒、下痢、胸部圧迫感、関節痛、チクチクまたはピリピリ感皮膚感覚、胸痛、胸部不快感、紅斑、または上記の任意の組み合わせを含む。
【００６１】
「最適化された容量」または「最適用量」は、治療量、典型的に、許容できない副作用（例えば、有害事象）を最小限にしつつ、患者への最大の所望の臨床的有用性を誘発する化合物（または、その薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、水和物など）の最も高い治療量を指す。当業者は、最適用量が患者ごとに変化し得ること、または特定の患者に対しても経時的にさえ変化し得ることを認識するだろう。
【００６２】
副作用を最小限にし、最適化されたまたは最適な用量を特定するために、ラリンパグを滴定する必要があることは時間を消費し得る。例えば、多くの実施形態では、ラリンパグの最適用量を特定するために、約２〜９週間程度の滴定（つまり、用量および／または投与の頻度を徐々に、典型的に週単位で増加させること）が必要とされる。この滴定期間中、患者はかなりの期間、最適以下の用量を維持する可能性があり、これは望ましくない。ＰＡＨ重症度を考慮に入れると、できるだけ早く最適用量を達成することが非常に望ましい。さらに、患者コンプライアンスを改善するために、ＢＩＤ投与計画ではなくＱＤ投与計画でラリンパグを投与することが望ましい。
【００６３】
本明細書で記載されるように、リオシグアトなどのｃＧＭＰ濃度上昇剤またはｃＡＭＰ濃度上昇剤とラリンパグとを同時投与すること、あるいは、プロスタサイクリン受容体アゴニストと、もしくはトレプロスチニルまたはイロプロストなどのプロスタノイドとラリンパグとを同時投与することは、予期しない利点をもたらす。具体的には、これらの組み合わせは実質的な改善をもたらす。いくつかの実施形態では、その改善によって、どちらかの単独療法と比較して、優れた有効性が可能になる。いくつかの実施形態では、その改善は、ラリンパグおよび／またはｃＡＭＰ濃度上昇剤、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、プロスタサイクリン受容体アゴニスト、またはプロスタノイドの用量の減少することができる。あるいはまたは加えて、そのような組み合わせが実質的な改善をもたらすため、最適な臨床結果が、（それぞれの単独療法と比較して）低用量のラリンパグおよび／またはｃＡＭＰ濃度上昇剤、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、プロスタサイクリン受容体アゴニスト、あるいはプロスタノイドで得られることができ、それによって、単独療法処置方法の臨床的有用性を提供するが、副作用は減少される。あるいは、本方法の組み合わせは、臨床的有用性の改善および副作用の減少の両方を提供することができる。
【００６４】
所望の臨床的有用性は、患者の改善を測定するために当技術分野において適切なまたな使用される任意の臨床的測定基準によって測定され得る。例えば、臨床的有用性は、例えば、“Ａｍ．  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｒｉｔ．  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．  Ｖｏｌ．  １６６，  ｐ．  １１１−１１７，  ２００２；  ＤＯｌ：  １０．１１６４／ｒｃｃｍ．１６６／１／１１１”に開示される６分間の歩行試験の米国胸部学会ガイドラインに従って、「６分間の歩行試験」（６ＭＷＴ）によって測定された、少なくとも４０メートルの増加であり得る。「同等の」または実質的に同様の臨床的有用性は、例えば、６ＭＷＴによって測定されるような従来の臨床的測定基準によって測定された臨床的有用性を意味し、それは、本明細書に記載されるラリンパグと少なくとも１つのｃＡＭＰ濃度上昇剤、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、プロスタサイクリン受容体アゴニスト、またはプロスタノイドとの併用療法を比較する時、他の同様のレベルの有害事象または副作用を経験する同一の患者（類似の生理特性、臨床症状、およびラリンパグに対する反応）と比較して、その他の点で同一の患者、または同じ患者において実質的に同じ結果をもたらす。
【００６５】
いくつかの実施形態では、本明細書で記載される同時投与されたラリンパグおよび少なくとも１つのｃＡＭＰ濃度上昇剤、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、プロスタサイクリン受容体アゴニスト、またはプロスタノイドは、同じまたはより高い用量のラリンパグを使用するラリンパグ単独療法と比較して、臨床的有用性における改善をもたらす。例えば、本明細書で記載される併用療法は、ラリンパグ単独療法（つまり、同時投与されたｃＡＭＰ濃度上昇剤、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、プロスタサイクリン受容体アゴニスト、またはプロスタノイドを含まない）を使用して、他の点で同一の患者に投与される同じ１日量と比較して、少なくとも約５ｍ、少なくとも約１０ｍ、少なくとも約１５ｍ、少なくとも約２０ｍ、少なくとも約２５ｍ、または少なくとも約３０ｍの６ＭＷＴ測定基準を用いる臨床的有用性において改善を示し得る。
【００６６】
同様に、本明細書に記載されるｃＡＭＰ濃度上昇剤、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、プロスタサイクリン受容体アゴニスト、またはプロスタノイドとラリンパグとの同時投与は、単独療法（つまり、ラリンパグを含まない）として、そのようなｃＡＭＰ濃度上昇剤、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、プロスタサイクリン、またはプロスタノイドを投与された他の点で同一の患者における同等の治療効果を達成するために必要とされる量に対して、そのようなｃＡＭＰ濃度上昇剤、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、プロスタサイクリン受容体アゴニスト、またはプロスタノイドの用量を減少することができる。例えば、本明細書で考察されるように、それぞれのｃＡＭＰ濃度上昇剤、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、プロスタサイクリン受容体アゴニスト、またはプロスタノイドの用量は、例えば、６ＭＷＴおよび／または副作用レベルによって測定されるような同様のレベルの臨床効果を達成しながら、ラリンパグなしで、必要とされる用量に対して、約１％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、または約５０％減少させることができる。あるいは、ｃＡＭＰ濃度上昇剤、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、プロスタサイクリン受容体アゴニスト、またはプロスタノイドとラリンパグとの組み合わせは、ラリンパグを含まない同様のレベルのｃＡＭＰ濃度上昇剤、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、プロスタノイド、またはプロスタサイクリン受容体アゴニストを投与された患者と比較して、例えば、６ＭＷＴ（少なくとも約５ｍ、少なくとも約１０ｍ、少なくとも約１５ｍ、少なくとも約２０ｍ、少なくとも約２５ｍ、または少なくとも約３０ｍ）によって測定されるような有効性の改善をもたらす。
【００６７】
一実施形態では、リオシグアト、プロスタサイクリン、トレプロスチニルまたはイロプロスト（または、他のプロスタノイド）とラリンパグとを同時投与する場合、他の点で同一の患者（または、同じ患者）において同様のまたは実質的に同様の臨床的有用性を達成するためにラリンパグ単独療法で必要とされる量と比較して、併用療法における有意に低用量のラリンパグが投与され得る。すなわち、リオシグアト、プロスタサイクリン、トレプロスチニル、またはイロプロスト同時投与によってラリンパグの臨床効果が強められるか増強されるように、リオシグアト、プロスタサイクリン、トレプロスチニル、またはイロプロストとラリンパグとの組み合わせは相乗的に作用する。例えば、本明細書に記載される併用療法に必要とされるラリンパグの１日量は、他の点で同一の患者（または、同じ患者）において同等または実質的に同様の臨床的有用性を達成するために単独療法で必要とされる１日のラリンパグ用量よりも、少なくとも約０．０１ｍｇ、０．０２ｍｇ、０．０３ｍｇ、０．０４ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．０６ｍｇ、０．０７ｍｇ、０．０８ｍｇ、０．０９ｍｇ、０．１ｍｇ、０．１５ｍｇ、０．２ｍｇ、０．２２５ｍｇ、０．２５ｍｇ、または０．２７５ｍｇ、あるいは０．３ｍｇ少ない。１日量はＱＤまたはＢＩＤの投与プロトコルの下で提供され得る。
【００６８】
他の実施形態では、リオシグアト、プロスタサイクリン、トレプロスチニル、またはイロプロスト（または、他のプロスタノイド）とラリンパグとを同時投与する場合、ラリンパグ単独療法において投与され得る同様の用量のラリンパグが併用療法において投与され得る。しかし、併用療法では、実質的に同様の副作用プロフィール（つまり、他の点で同一の患者または同じ患者における併用療法と単独療法とを比較する）を用いて、例えば、６ＭＷＴ（少なくとも約５ｍ、少なくとも約１０ｍ、少なくとも約１５ｍ、少なくとも約２０ｍ、少なくとも約２５ｍ、または少なくとも約３０ｍ）によって測定されるような、実質的に改善された臨床的有用性が提供される。
【００６９】
さらに他の実施形態では、有意に低用量のラリンパグおよび減少した用量のリオシグアト、プロスタサイクリン、トレプロスチニル、またはイロプロスト（または、他のプロスタノイド）の組み合わせによって、同等または実質的に同様の臨床的有用性が提供される。例えば、本明細書に記載される併用療法に必要とされるラリンパグの１日量は、他の点で同一の患者（または、同じ患者）において、同様または実質的に同様の臨床的有用性を達成するために単独療法で必要とされる１日のラリンパグ用量よりも、少なくとも約０．０１ｍｇ、０．０２ｍｇ、０．０３ｍｇ、０．０４ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．０６ｍｇ、０．０７ｍｇ、０．０８ｍｇ、０．０９ｍｇ、０．１ｍｇ、０．１５ｍｇ、０．２ｍｇ、０．２２５ｍｇ、０．２５ｍｇ、または０．２７５ｍｇ、あるいは０．３ｍｇ少ない。他の点で同一の患者あるいは同じ患者において同等または実質的に同様の臨床的有用性を達成するために、ラリンパグを含まない単独療法で必要とされる用量に対して、リオシグアト、プロスタサイクリン、トレプロスチニル、またはイロプロスト（または、他のプロスタノイド）の１日量は、約１％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、または約５０％減少され得る。例えば、本明細書に記載される併用療法で必要とされるリオシグアトの１日量は、同等の臨床的有用性および／または有害事象プロフィールに必要とされるリオシグアトの用量より、少なくとも約０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１．０ｍｇ、１．２５ｍｇ、１．５ｍｇ、１．７５ｍｇ、または２ｍｇ少なくてもよい。１日量はＱＤまたはＢＩＤの投与プロトコルの下で提供され得る。
【００７０】
いくつかの実施形態では、治療上に有効な量のラリンパグおよび１つ以上のｃＡＭＰ濃度上昇剤、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、プロスタサイクリン受容体アゴニスト、またはプロスタノイドの両方が、患者の体内に存在し、それらの治療効果を同時に発揮するように、治療上に有効な量のラリンパグは、１つ以上のｃＡＭＰ濃度上昇剤、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、プロスタサイクリン受容体アゴニスト、またはプロスタノイドと同時に投与される。ｃＡＭＰ濃度上昇剤、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、プロスタサイクリン受容体アゴニスト、またはプロスタノイドの前に、それと同時に、またはその後、ラリンパグを投与することができる。ラリンパグおよびｃＡＭＰ濃度上昇剤、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、プロスタサイクリン受容体アゴニスト、またはプロスタノイドの両方を同時に投与する場合、それらは異なる剤形で、あるいは、いくつかの実施形態では、組み合わせた剤形で別々に投与することができる。別々の剤形で投与される場合、ラリンパグは錠剤またはカプセル剤の形態で経口的に投与され、およびｃＡＭＰ濃度上昇剤、ｃＧＭＰ濃度上昇剤、プロスタサイクリン受容体アゴニスト、またはプロスタノイドは経口的に（経口剤形が利用可能であるか可能である場合）、または静脈内あるいは皮下の剤形として投与され得る。いくつかの実施形態では、ラリンパグは注入可能な剤形またはＩＶの剤形としてさらに投与され得る。
【００７１】
一実施形態では、ラリンパグはリオシグアトと同時投与される。別の実施形態では、ラリンパグはトレプロスチニルと同時投与される。さらに別の実施形態では、ラリンパグはイロプロスと同時投与される。さらに別の実施形態では、ラリンパグはプロスタサイクリンと同時投与される。別の実施形態では、ラリンパグはリオシグアトおよびトレプロスチニルと同時投与される。別の実施形態では、ラリンパグはリオシグアトおよびイロプロストと同時投与される。
【００７２】
ラリンパグは非常に選択的なＩＰ受容器アゴニストである。正常なヒトの肺動脈圧平滑筋細胞（ＰＡＳＭＣ）、ＩＰ受容器において、サイクリックＡＭＰの生成を介するＩＰ受容器は、トレプロスチニルおよびイロプロストに対する抗増殖性応答の主要なメディエーターであるように思われる（Ｗｈａｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００；  Ｃｌａｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２；  Ｆａｌｃｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）。これに対して、特発性の肺動脈高血圧症（ＩＰＡＨ）患者から単離されたヒトＰＡＳＭＣにおいて、少なくとも研究された濃度では、ＩＰ受容器もサイクリックＡＭＰも、トレプロスチニルおよびイロプロストの抗増殖性の効果の根底にある主要なメディエーターであるようには見えなかった（Ｆａｌｃｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）。
【００７３】
肺動脈あるいは正常組織の微小血管由来またはＰＡＨ患者由来の細胞におけるラリンパグ機能効果はこれまで知られておらず、したがって、肺循環におけるそのような選択的ＩＰアゴニストの薬理学的挙動は予測不能であった。したがって、ラリンパグは、ＰＡＨ患者から単離されたＰＡＳＭＣにおいてｃＡＭＰを産生し平滑筋増殖を阻害するその能力をどのように比較するのか確認するために、他のプロスタサイクリン薬物（他のプロスタノイド受容体（Ｃｌａｐｐ  ＆  Ｇｕｒｕｎｇ，  ２０１５）を含む、さらなる標的の活性化を介する多様な効果を有すると予期される）を用いて評価された。
【実施例】
【００７４】
エンドセリン−１受容体アンタゴニスト（ＥＲＡ）、ホスホジエステラーゼタイプ５（ＰＤＥ  ５）阻害剤、またはｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ濃度上昇剤（例えば、可溶性グアニル酸シクラーゼ活性剤）とラリンパグとの組み合わせの効果を本明細書で評価した。
【００７５】
＜高血圧患者および正常な患者由来の肺組織のソース＞
処置の失敗後に移植を受けたか、死亡したかのいずれかである、グループ１  ＰＡＨまたはグループ３  ＰＡＨ（肺疾患関連のＰＡＨ）を患う患者から肺組織サンプルを得た。対照サンプルとして、移植に適していないか、または悪性腫瘍が疑われるためにの肺切除術に適していないことが判明したドナーの肺を使用した（Ｂｅｎｙａｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３）。
【００７６】
ＰＡＨ患者由来の遠位のＰＡＳＭＣの初代細胞株は、上記にように体外移植組織した肺に由来する（Ｆａｌｃｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０；  Ｂｕｂｂ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１４）。これらの細胞は、培養液で増殖される場合、異常な増殖能力を有する（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７；  Ｆａｌｃｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）。凍結細胞を復活させて、５％のＣＯ２の加湿雰囲気中３７°Ｃで９％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）補充したヒト平滑筋基本培地−２中で増殖させた（ＳＭＢＭ；Ｌｏｎｚａ，  Ｓｌｏｕｇｈ，  ＵＫ）。コンフルエンスに達した後に、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、さらなる継代のためにトリプシン−ＥＤＴＡで処理した。継代３および１０の間の細胞のみを実験に使用した。
【００７７】
＜サイクリックＡＭＰアッセイ＞
ＰＡＨ患者由来のヒトＰＡＳＭＣを、９％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）、（ペニシリン（５０Ｕ／ｍｌ）／ｓストレプトマイシン（５０μｇ／ｍｌ）を含む、ＤＭＥＭ／Ｆ１２中の１２ウェルプレートにおいて７０−８０％のコンフルエンスまで増殖した。ｃＡＭＰ上昇の時間的経過を評価するために、１００ｎＭのラリンパグを用いて、様々な時間（０．５、１、２、４、８、２４、４８時間）で細胞を刺激した。予備実験におけるｃＡＭＰ生成についてのＥＣ５０と近いということに基づき、この用量のラリンパグを選択した。他の実験では、ＩＰ受容器アゴニストを、１μＭのＩＰ受容器アンタゴニスト、ＲＯ−１１３８４５２の非存在下および存在下において、全濃度範囲（０．１−１０，０００ｎＭ）にわたって特定の時間（６０分）加えた。アンタゴニストを３０分前に加えて、終始維持した。
【００７８】
サイクリックＡＭＰを抽出するために、培養液を吸引し、そしてＰＡＳＭＣ細胞を氷の上で２０分間、０．１  Ｍ  ＨＣｌ中でインキュベートし、その後、４°Ｃで１０分間、１０００ｇで遠心分離した。上澄部のタンパク濃度を、ブラッドフォードに基づくタンパク質アッセイ（ＢＣＡ，  Ｎｏｖａｇｅｎ，  ＥｍＤ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）を使用して決定した。細胞内のサイクリックＡＭＰは競合的酵素免疫測定法９６ウェルプレートキット（ＡＤＩ−９００−１６３（ＡＤＩ−９００−１６３，  Ｅｎｚｏ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｅｘｅｔｅｒ，  ＵＫ））を用いて測定し、アッセイを製造業者の指示に従って実施した。各サンプルを重複して実行し、データは、各個々のサンプルについて、総タンパク質１ｍｇあたりのｃＡＭＰのｐｍｏｌとして表した。各アゴニスト濃度データポイントから基礎レベルを差し引いた。様々な患者サンプル由来のｃＡＭＰ生成における大きな変動（〜１５倍）を考慮して、データも各細胞単離物中のピークサイクリックＡＭＰ応答（１００％割り当てられた）に対して正規化した。
【００７９】
＜細胞増殖アッセイ＞
細胞増殖におけるＩＰ受容器アゴニストの比較的濃度依存性の効果を、ＰＡＨ患者由来のヒトＰＡＳＭＣについて評価した。細胞を１×１０４細胞／ｍｌの密度で９６ウェルプレートの上に播種し、９％のＦＢＳおよびペニシリン・ストレプトマイシン（Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ；５０の単位／ｍｌ）を含むヒト平滑筋基本培地−２（ＳＭＢＭ；  Ｌｏｎｚａ）中の湿らされたＣＯ２インキュベータ中で３７°Ｃで増殖した。２４時間後、追加の血清を含んでいない新鮮培地中で４８時間インキュベートすることによって、細胞を増殖停止させた。続いて培地を除去し、ＩＰ受容器アゴニスト（ラリンパグ、イロプロスト、トレプロスチニル、またはＭＲＥ−２６９のいずれか）の非存在下および存在下において、０．１％のＤＭＳＯを含むか、または含まない９％の血清を含んでいるヒトＳＭＢＭと交換し、および細胞を濃度範囲（１０−１２−１０−５Ｍ）にわたって４日間、ＩＰ受容器アゴニストを用いて処理した。ＩＰアゴニストの添加の３０−６０分前に細胞に加えられ、および実験を通して維持された、ＩＰ受容器アンタゴニスト（ＲＯ−１１３８４５２（１μＭ））を含む細胞において応答を直接比較した。血清を追加しないで同じ期間（４日）にわたってインキュベートした細胞が、時間対照として機能した。
【００８０】
細胞のミトコンドリアデヒドロゲナーゼによるホルマザンに対するテトラゾリウム塩ＭＴＳの切断に基づいて生存細胞の数を決定するための比色法である、ＭＴＳ増殖キット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して細胞増殖を得た。細胞数の増加は、形成されたホルマザン色素の量に比例する増加につながり、４９０ｎｍでの色素溶液の吸収度を測定することによって定量化した。各場合において、すべての他の吸光度から「無細胞」の対照ウェルからの平均の吸収度を差し引くことによって、バックグラウンド吸光度を補正した。
【００８１】
その後、細胞増殖を、ＦＢＳ単独で誘発された増殖応答に対して正規化し、ＦＢＳ応答から時間対照（＝４日で１００％増殖）を差し引いたものとして得た。溶媒±薬物の％存在下で誘発された増殖応答は、すべての図におけるＦＢＳ応答単独に対する細胞増殖の変化として示される。
＜材料、試薬、装置＞  
・ヒト平滑筋基本培地−２（Ｌｏｎｚａ，  Ｓｌｏｕｇｈ，  ＵＫ；  Ｃａｔ  Ｎｏ．  ＣＣ−３１８１）
・ＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｐａｉｓｌｅｙ，  ＵＫ；  Ｃａｔ  Ｎｏ  １１３２０−０７４）
・南アメリカウシ胎児血清（ＦＢＳ；  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｃａｔ  Ｎｏ  １０２７０１０６））
・ペニシリン・ストレプトマイシン  Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（５０００  ｕｎｉｔｓ／ｍｌ；  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｐａｉｓｌｅｙ，  ＵＫ；  Ｃａｔ  Ｎｏ  １５０７０−０６３）
・滅菌Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋遊離リン酸緩衝生理食塩水（ＢＳ；  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｃａｔ  Ｎｏ  １００１０−０５６）
・滅菌トリプシン／ＥＤＴＡ溶液（０．０５％；  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｃａｔ  Ｎｏ  ２５３００−０５４）
・滅菌ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ；  Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｃａｔ  Ｎｏ，  Ｄ２６５０）
・ＭＲＥ２６９（［４［（５，６ジフェニルピラジニル）（１メチルエチル）アミノ］ブトキシ］酢酸（ＣＡＹ１００１０４１２）、イロプロスト（５０：５０  Ｒ／Ｓ異性体；ＵＫ  （ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｏｒ  ｆｏｒ  Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ；）ボセンタン（Ｃａｔ  Ｎｏ  １１７３１）をＣａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ  （ＵＳＡ）から購入した。
・吹き飛ばして（ｂｌｏｗｎ  ｏｆｆ）、ＤＭＳＯと交換した酢酸メチルに、イロプロスト分解して１０ｍＭの貯蔵液を得た。他のすべての貯蔵液を、１０ｍＭの最終濃度になるようにＤＭＳＯ（トレプロスチニル、ＲＯ−１１３８４５２、ラリンパグ、ＭＲＥ−２６９）内で作った。薬物は増殖培地中で連続的に希釈し、加えられた薬剤の濃度にかかわらず、各ウェル中の溶媒濃度は一定の０．１１％で維持した。
・競合的酵素免疫測定法９６ウェルプレートｃＡＭＰキット（ＡＤＩ−９００−１６３，  Ｅｎｚｏ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｅｘｅｔｅｒ，  ＵＫ）
・細胞増殖アッセイキット（ＭＴＳ，  Ｐｒｏｍｅｇａ，  ＵＫ，  Ｃａｔ  Ｎｏ  Ｇ５４２１）
・ＢＣＡ（ビシンコニン酸）タンパク質アッセイキット（Ｃａｔ  Ｎｏ．  ７１２８５−３；  Ｎｏｖａｇｅｎ，  Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，  Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ，  ＵＫ）
・Ｇａｌａｘｙ  Ｒ  ＣＯ２細胞培養インキュベータ（ＷｏｌｆＬａｂｓ  Ｌｔｄ，  Ｙｏｒｋ  ＵＫ）
・Ｔｅｃａｎ  Ｇｅｎｉｏｓマイクロプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ  Ｇｒｏｕｐ  Ｌｔｄ，  Ｍａｎｎｅｄｏｒｆ  ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）
・ＯｐｓｙｓＭＲＴＭマイクロプレートリーダー（Ｄｙｎｅｘ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｃｈａｎｔｉｌｌｙ，  ＶＡ，  ＵＳＡ）データ評価および統計的分析
【００８２】
すべてのデータは、少なくとも５回の観察の平均値±標準誤差（Ｓ．Ｅ．Ｍ）として示される。アゴニスト対数−濃度の曲線は、ＧｒａｐｈＰａｄプリズム４または６（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）の非線形のフィッティングルーチンを使用して構築され適合された。計算された負の対数（ｐＥＣ５０）および平均のＥＣ５０として、５０の％の最大の応答（ＥMax）をもたらすアゴニストの濃度を発現した。図の説明文中で示されるような事後補正を伴う一元配置または二元配置の分散分析を使用して、統計分析を実施した。Ｐ値＜０．０５は、統計的に有意であると考えられる。
【００８３】
実施例１：＜サイクリックＧＭＰおよびサイクリックＡＭＰ上昇剤、またはエンドセリン−１アンタゴニストと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果＞
ＰＡＨ患者由来のヒト肺性平滑筋細胞（ＰＡＳＭＣ）におけるラリンパグの抗増殖性の効果を、他のプロスタサイクリン模倣薬と比較し、およびエンドセリン−１受容器アンタゴニスト（ＥＲＡ）、ホスホジエステラーゼタイプ５（ＰＤＥ５）阻害剤、または可溶性グアニル酸シクラーゼ（ｓＧＣ）活性剤と組み合わせて比較した。
【００８４】
ラリンパグおよびＭＲＥ−２６９を、サイクリックＡＭＰにおいて選択的なＩＰ受容器アゴニストとして、ＰＡＨ患者由来のヒトＰＡＳＭＣにおいて細胞増殖アッセイとして作用し、ラリンパグは２倍より多くのサイクリックＡＭＰおよび１０倍より多くの抗増殖効果をもたらした。ラリンパグおよびＭＲＥ−２６９の両方は、トレプロスチニルよりも、サイクリックＡＭＰおよび細胞増殖アッセイにおいてより弱い最大効果をもたらした。トレプロスチニルおよびイロプロストは、ＩＰ非依存性メカニズムによって細胞増殖の阻害を示した。
【００８５】
＜リオシグアトと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果＞
９％の血清および０．１％のＤＭＳＯ中で４日間増殖されたヒトＰＡＳＭＣ中の１００ｎＭのリオシグアトの非存在下および存在下における、ラリンパグの濃度依存性の抗増殖性の効果を図１示で示す。５つの細胞単離物のうち４つにおいては、リオシグアトとラリンパグを組み合わせた場合、ラリンパグ単独と比較して、細胞増殖のより大きな阻害があった。平均データから、全体的に見て、ラリンパグは全濃度範囲（０．０１−１０，０００のｎＭ）にわたって、リオシグアト存在下においてより効果的であり、１０ｎＭ以上で有意により効果的であった（Ｐ〈０．０５、ボンフェローニの事後補正を伴う二元配置分散分析）。
【００８６】
リオシグアト単独（１００のｎＭ）は、ＦＢＳとＤＭＳＯおよび比較して、細胞増殖の有意な阻害（〜１５％）を引き起こした。１００ｎＭにおいて、ラリンパグは、増殖を２８％（図２Ａ）阻害し、同じ用量のリオシグアトによって誘発された阻害のほぼ２倍であった（図２Ｂ）。しかし、１００ｎＭのリオシグアトの存在下において、１００倍低い用量（０．０１ｎＭ）のラリンパグで細胞増殖の有意な阻害が生じた。これは、増殖の阻害を増強するために、薬剤が別々の経路――ｃＧＭＰを介するリオシグアト（Ｌａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２）およびＩＰ受容器およびｃＡＭＰ生成を介するラリンパグ（本明細書に提供される実験において、増殖は、ＩＰ受容器アンタゴニストＲＯ１１３８４５２によって完全に阻害された）で作用すること示唆する。増強作用がラリンパグサブナノモル濃度で生じた。より高い用量のラリンパグでは、細胞増殖阻害は、相加効果から予測されるよりも多いものと思われた。
【００８７】
リオシグアトは、アポトーシスを誘発し、可溶性グアニリル発現の上向き調節およびサイクリックＧＭＰ産生の増加に関する肺動脈細胞の増殖を阻害することが示される（Ｌａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２）。したがって、リオシグアトによるラリンパグの効果の増強作用は、ＩＰ受容器アゴニストによって誘発されたｃＡＭＰ生成を調整することで知られているアイソフォームである、ＰＤＥ３のサイクリックＧＭＰ依存性阻害に応じたサイクリックＡＭＰレベルの上昇に起因し得る（Ｋｎｅｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３）。先の実験は、ＰＡＨ患者由来のヒトＰＡＳＭＣ中のＰＤＥ５阻害剤またはＥＲＡのいずれかと比較して、リオシグアトがトレプロスチニルとの最も効果的な抗増殖性の組み合わせだったことを示した（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１４）。しかし、相加的である場合、併用効果は予期されたものより低かった。両方の薬剤は、増殖阻害のメカニズムの点から、複数のクロスオーバーを伴う別々の経路（サイクリックＧＭＰおよびＩＰ受容器／ｃＡＭＰの経路）に作用し得る。例えば、カルシウム依存性ホスファターゼ、カルシニューリンの阻害を介する細胞増殖の阻害は、サイクリックＧＭＰおよびサイクリックＡＭＰの両方を介して生じ得る（Ｊａｂｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７；  Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３）。
【００８８】
＜シルデナフィルと組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果＞
９％の血清および０．１％のＤＭＳＯ中で４日間増殖されたヒトＰＡＳＭＣ中の１００ｎＭのシルデナフィルの非存在下および存在下における、ラリンパグの濃度依存性抗増殖性の効果を図３に示す。５つの細胞単離物のうち４つにおいて、シルデナフィルとラリンパグとを組み合わせた場合、ラリンパグ単独と比較してより大きな細胞増殖の阻害があった。個々の薬物用量の有意性がボンフェローニの事後分析では見られなかったが、ラリンパグは、シルデナフィル存在下において、全濃度範囲（０．０１−１０，０００ｎＭ）にわたって、有意に（Ｐ〈０．００１、二元配置分散分析）より効果的であったことがわかった。９％の血清および０．１％のＤＭＳＯ単独に対する応答と比較した、１００ｎＭのシルデナフィルの非存在下および存在下における、ラリンパグの平均の抗増殖性の効果を図４に示す。リオシグアトと異なり、シルデナフィル（１００ｎＭ）は血清によって誘発された増殖を有意に阻害しなかった。しかし、ラリンパグと組み合わせると、ラリンパグ単独と比較してさらなる細胞増殖の阻害があった。１ｎＭのラリンパグにおいては、シルデナフィルの存在下において、増殖を１４％〜２７％まで阻害し、これらの変化の規模は、試験された最高用量（１０μＭ）では低かった（５０％とは対照的に、５６％の細胞増殖の阻害）。
【００８９】
シルデナフィルの強化効果は、リオシグアトで観察されたものよりも低いことがわかった。これは、グアニル酸シクラーゼの直接活性化体であるリオシグアトによるものであり得、シルデナフィルよりも高いサイクリックＧＭＰの上昇を産出し、基礎のサイクリックＧＭＰレベルを増加させると予測される。さらに、５つの細胞単離物のうち３つにおいて、薬物の組み合わせの抗増殖性の効果は、ラリンパグのより高い用量で漸減し、ＰＤＥ５阻害剤の下流メカニズムおよびＩＰ受容器アゴニストのいくつかの重複と一致した。実際に、シルデナフィルは、これらの肺性平滑筋細胞におけるトレプロスチニルの抗増殖性の効果の根底にあると知られているメカニズムである、ＰＰＡＲγの活性化（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３）を介して細胞増殖を部分的に阻害した（Ｆａｌｃｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）。患者におけるこの薬物の上限血漿レベルが１５００ｎＭであったため、シルデナフィルについては、これらの実験で使用された用量が治療量より低い可能性が高い。（Ｂｕｒｇｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８）。しかし、シルデナフィルについて報告されたＰＤＥ５阻害のＫｉをはるかに上回っており、それは１−３ｎＭであることが報告される（Ｂａｌｌａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８）。さらに、１００ｎＭにおいて、シルデナフィルはＰＤＥ１およびＰＤＥ６活性（それぞれ、Ｋｉ  ４０ｎＭおよび１０ｎＭ）を阻害する可能があり、したがって、その作用様式は、治療的上、ＰＤＥ５の阻害と完全に関連しないかもしれない（Ｂｉｓｃｈｏｆｆ，  ２００４）。
【００９０】
＜トレプロスチニルと組み合わせたラリンパグ抗増殖性の効果＞
９％の血清および０．１％のＤＭＳＯ中で４日間増殖されたヒトＰＡＳＭＣ中の１００ｎＭのトレプロスチニルの非存在下および存在下における、ラリンパグの濃度依存性抗増殖性の効果を図５に示す。５つの細胞単離物のうち４つにおいて、トレプロスチニルをラリンパグと組み合わせた場合、ラリンパグ単独と比較してより大きな細胞増殖の阻害があった。平均のデータから、全体のラリンパグは、全濃度範囲（Ｐ〈０．００１、二元配置分散分析）にわたって、トレプロスチニルの存在下において、より効果的であるように思われたが、ラリンパグの最高用量（１０μＭ）のみが、ポストホック検定におけるトレプロスチニルによって有意に増強された（Ｐ〈０．０５、ボンフェローニの補正を伴う二元配置分散分析）。
【００９１】
９％の血清および０．１％のＤＭＳＯ単独に対する応答と比較した、１００ｎＭのトレプロスチニルの非存在下および存在下における、ラリンパグの平均の抗増殖性の効果を図６に示す。トレプロスチニルは、血清およびＤＭＳＯ単独と比較して、１００ｎＭで増殖を有意に阻害した。ラリンパグと組み合わせると、１０倍低い用量（０．１ｎＭ）のラリンパグで細胞増殖の有意な阻害が生じた。試験された最高用量（１０μＭ）では、トレプロスチニルの非存在下における５０％とは対照的に、ラリンパグは細胞増殖の６９％阻害をもたらした。血清誘導細胞増殖のこのより大きな阻害は、トレプロスチニル単独で誘発された阻害の規模によって部分的に説明でき、両方の薬剤が別々の経路を介して細胞増殖を阻害していることを示唆する。
【００９２】
両方の薬剤がＩＰアゴニストであり、おそらく細胞増殖阻害するために同じ経路を活性化することを考慮すると、トレプロスチニルがラリンパグ応答を増強したことは驚くべきことかもしれない。トレプロスチニルさらに、ＥＰ２およびＤＰ１受容体有力な活性剤であり（Ｃｌａｐｐ  ＆  Ｇｕｒｕｎｇ，  ２０１５において概説される）、それは、トレプロスチニルの存在下において、ラリンパグに対するより大きな応答について説明し得る。本明細書に提供される実験では、トレプロスチニルに対する抗増殖性の応答がＩＰ受容器アンタゴニストによってわずかに阻害された一方で、ラリンパグに対するそれらの応答は完全に阻害されたことを観察した。
【００９３】
＜エンドセリン−１受容器アンタゴニスト（ＥＲＡ）と組み合わせたラリンパグの抗増殖性の効果＞
９％の血清および０．１％のＤＭＳＯ中で４日間増殖されたヒトＰＡＳＭＣ中の１００ｎＭのマシテンタンの非存在下および存在下における、ラリンパグの濃度依存性抗増殖性の効果を図７に示す。マシテンタン（１００のｎＭ）は、組み合わせた場合にラリンパグに対する応答にわずかに影響を与え、および５つの細胞単離物のうち２つにおいて、研究されたラリンパグのいずれの濃度でも、抗増殖性の効果を増強しなかった。他の３つの細胞単離物では、細胞増殖のより大きな阻害をもたらす傾向があり、これは、１００ｎＭのマシテンタンと組み合わせた場合、低用量のラリンパグでより明白であった。しかし、平均のデータから全体的に見て、マシテンタンの存在下では、ラリンパグ単独と比較して、ラリンパグは有意により効果的ではなかった。
【００９４】
９％の血清および０．１％のＤＭＳＯ単独に対する応答と比較した、１００ｎＭのマシテンタンの非存在下および存在下における、ラリンパグの平均の抗増殖性の効果を図８に示す。マシテンタン単独（１００ｎＭ）は、血清およびＤＭＳＯと比較して、細胞増殖の有意な阻害（〜１２％）を引き起こした。さらに、マシテンタンと組み合わせた場合のラリンパグは、ラリンパグ単独と比較して１０倍低い用量（０．１ｎＭ）で細胞増殖を阻害した。より高い濃度のラリンパグ（〉１０ｎＭ）では効果が収束し、その結果、マシテンタンの非存在下または存在下において、ラリンパグに対する応答が類似した。
【００９５】
これらの２つの薬物の作用様式は重複し得、したがって、組み合わせた場合に実際の付加的利益をもたらさない。マシテンタンは、混成ＥＴ−１アンタゴニストであり、それぞれ０．５ｎＭおよび３９１ｎＭの平均ＩＣ５０値で、ＥＴＡおよびＥＴＢ受容体への結合を阻害する（Ｉｇｌａｒｚ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１４）。したがって、使用濃度では、マシテンタンは、遠位のヒトＰＡＳＭＣのＥＴ−１誘導細胞増殖に寄与することが知られる受容体である、ＥＴＡ受容体を優位に阻害した（Ｚａｍｏｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３；  Ｄａｖｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２）。他方では、プロスタサイクリンアナログは、ヒト遠位のＰＡＳＭＣ中の血清または形質転換増殖因子β（ＴＧＦ−β）誘発ＥＴ−１放出ｔ（ｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  β  （ＴＧＦ−β）  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ＥＴ−１）を阻害し、そのようなメカニズムが、正常ヒトＰＡＳＭＣ中のプロスタサイクリンアナログの抗増殖性の効果の根底にあると部分的に仮定された（Ｗｏｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１；  Ｄａｖｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２）。
【００９６】
９％の血清および０．１％のＤＭＳＯ中で４日間増殖されたヒトＰＡＳＭＣ中の１００ｎＭのボセンタンの非存在下および存在下における、ラリンパグの濃度依存性抗増殖性の効果を図９に示す。他のＰＡＨ薬物とは対照的に、ボセンタンは、５つの細胞単離物のうち４つにおいて、ラリンパグに対する抗増殖性の応答を増強せず、１つの細胞単離物において、実際にその応答を減少させた。平均のデータから全体的に見て、ラリンパグは全濃度にわたって、ボセンタンの存在下においてより効果的ではなかった。図１０に示されるのは、９％の血清および０．１％のＤＭＳＯ単独に対する応答と比較して、１００ｎＭボセンタンの非存在下および存在下でのラリンパグの平均の抗増殖性の効果である。マシテンタンと異なり、ボセンタン（１００ｎＭ）は、血清およびＤＭＳＯ単独と比較された時に、細胞増殖の有意な阻害を引き起こさなかった。さらに、ラリンパグと組み合わせた時、ボセンタンは、ラリンパグ単独と比較して、細胞増殖の阻害を増強せず、他のすべての薬剤（リオシグアト、トレプロスチニル、およびマシテンタン）で観察されるように、ラリンパグが細胞増殖を有意に阻害し始めた濃度（１ｎＭ）も低下させなかった。したがって、ボセンタンは、マシテンタンよりも細胞増殖に対してより少ない阻害効果を有するように見え、それは恐らく、ＥＴＡ受容体におけるそのより低い効力および／または差次的な受容体ＥＴ−１受容体選択性に関連する。ボセンタンはマシテンタン、混成ＥＴ−１受容器アンタゴニストに類似するが、ＥＴＡおよびＥＴＢの受容体に対するその効力および選択比は、その受容体動的とはいくぶん異なる。ボセンタンは、ＥＴＡ受容体のための４ｎＭのＫｉを有するマシテンタンより１０倍低い効力を有するが、マシテンタンに対する７８０の選択比と比較して（Ｉｇｌａｒｚ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１４）、わずか〜２０のＥＴＡ／ＥＴＢの選択比を有する（Ｄａｖｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９）。
【００９７】
＜ラリンパグと組み合わせた様々なＰＡＨ薬物の比較＞
ｃＧＭＰ濃度上昇剤およびトレプロスチニルは、ラリンパグと組み合わせてより大きな抗増殖性の効果を提供する一方、ＥＴＲＡは細胞増殖に対するラリンパグの効果を有意に増強しないと思われる（図１１）。１０ｎＭのラリンパグでは、リオシグアトと組み合わせた時に増殖は４５％阻害され、ボセンタンの存在下においては２１％しか阻害されなかった（図１２）。しかし、リオシグアトと比較して、およびトレプロスチニルを用いたより少ない程度と比較して、シルデナフィルを用いた強化効果はより小さかった（たとえ有意な薬物相互作用があっても、ポストホック検定との有意差はなかった）。様々なＰＡＨ治療の非存在下および存在下におけるラリンパグの抗増殖性の効果の概要であって、ここで、ＥＣ５０およびＥＭａｘの値が各個々のフィットについて得られた（図１、３、５、７、および９に含まれる使用データは平均値±標準誤差として表される）。表１は、ラリンパグが、それぞれリオシグアトおよびシルデナフィルの存在下において、〜２．５−５倍強力あるであることを示す（ＥＣ５０＝１０ｎＭおよび５ｎＭ）。全体として、ラリンパグは、リオシグアトまたはトレプロスチニルの存在下において、有意なより大きい最大応答を生成するが、他のＰＡＨ治療と組み合わせた場合はそうではない。ＥＣ５０およびＥＭａｘの値が平均データ（図１１）に対するフィットから得られた分析を表２で示す。効力は、リオシグアトおよびシルデナフィルの存在下において、依然として８倍増強されたが、ラリンパグに対するＥＣ５０は、個々のフィット（２５ｎＭと対照的に４４ｎＭ）よりわずかに高い。ラリンパグは依然として、リオシグアトまたはトレプロスチニルの存在下において、有意なより大きい最大応答を生成したが、他のＰＡＨ治療ではそうではなかった。
【００９８】
【表１】
2019533713.tif 000003
【００９９】
【表２】
2019533713.tif 000004
【０１００】
実施例２：＜臨床試験＞
最大９週間の用量漸増期間を有する２２週間の無作為化二重盲検プラセボ対照試験を実施した。６１人の患者に対して２：１のラリンパグとプラセボで無作為化された用量漸増期間の試験１日目に先立って、および２２週目に右心カテーテル法（ＲＨＣ）測定値を得た。下記の値を得て記録した：肺動脈圧（ＰＡＰ）（収縮期、拡張期、および平均）、心拍数（ＨＲ）、右房圧（ＲＡＰ）、肺毛細管楔入圧（ＰＣＷＰ）右室圧（ＲＶＰ）、および心拍出量（ＣＯ）、肺血管抵抗（ＰＶＲ）、動脈および静脈血酸素飽和度（ＦｉＯ２）（適用可能な場合）。血圧測定から全身血管抵抗（ＳＶＲ）を評価した。すべての患者は、エンドセリン受容体アンタゴニスト、ホスホジエステラーゼタイプ−５−阻害剤、または可溶性グアニル酸シクラーゼ活性剤を単独でまたは組み合わせて、バックグラウンドＰＡＨ処置を受けていた。
【０１０１】
試験の主要な有効性評価項目は、２２週間の処置後のＰＶＲにおけるベースラインからの変化であった。さらなる分析は、２２週間の処置後の６ＭＷＤにおけるベースラインからの変化、血行動態、ならびに安全性および耐用性を含んでいた。ラリンパグを、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、および０．１０ｍｇの用量強度でカプセル剤として投与した。
【０１０２】
ラリンパグの開始用量は１日２回０．０１ｍｇであった。ラリンパグの用量を患者の許容度に従って滴定した。初回量が許容された場合（１日２回０．０１ｍｇ）、用量を以下の様式で週に１度増加した：１日２回０．０２ｍｇ、１日２回０．０３ｍｇ、１日２回０．０４ｍｇ、１日２回０．０６ｍｇ、１日２回０．０８ｍｇ、１日２回０．１ｍｇ、１日２回０．２ｍｇ、および１日２回０．３ｍｇ。耐容性まで、可能な最大の合計１日量の０．６ｍｇ（１日２回０．３ｍｇ）にまで用量を随意に増大した。用量が許容されなかった場合、前の用量レベルにまでラリンパグを随意に減少させた。１日２回０．０１ｍｇの初回量が許容されなかった場合、１日１回０．０１ｍｇまで用量を随意に減少させた。
【０１０３】
ラリンパグは、プラセボと比較して、ベースラインを肺血管抵抗（ＰＶＲ）の統計的に有意な変化を有する主要評価指標を達成した。ラリンパグはさらに、６分間の歩行距離（６ＭＷＤ）における数値的改善を示した。試験において観察された有害事象は、ＰＡＨの管理のための他のプロスタサイクリン処置と一致した。ラリンパグを受けた患者への維持量の分配は以下の通りであった：０．０２ｍｇ（ｎ＝１）、０．０３ｍｇ（ｎ＝１）、０．０４ｍｇ（ｎ＝０）、０．０６ｍｇ（ｎ＝３）、０．０８ｍｇ（ｎ＝３）、０．１２ｍｇ（ｎ＝５）、０．１６ｍｇ（ｎ＝４）、０．２ｍｇ（ｎ＝６）、０．４ｍｇ（ｎ＝１２）、および０．６ｍｇ（ｎ＝５）。
【０１０４】
本明細書で引用される特許および非特許文献を含むすべての文書は、あらゆる目的のために、それぞれが参照によってその全体として本明細書に組込まれる。
＜参考文献＞
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７．Ｂｕｒｇｅｓｓ  Ｇ，  Ｈｏｏｇｋａｍｅｒ  Ｈ，  Ｃｏｌｌｉｎｇｓ  Ｌ，  ＆  Ｄｉｎｇｅｍａｎｓｅ  Ｊ  （２００８）．Ｍｕｔｕａｌ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｓｔｅａｄｙ−ｓｔａｔｅ  ｂｏｓｅｎｔａｎ  ａｎｄ  ｓｉｌｄｅｎａｆｉｌ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ６４，  ４３−５０．
８．Ｃｌａｐｐ  ＬＨ，  Ｆｉｎｎｅｙ  ＰＡ，  Ｔｕｒｃａｔｏ  Ｓ，  Ｔｒａｎ  Ｓ，  Ｒｕｂｉｎ  ＬＪ，  ＆  Ｔｉｎｋｅｒ  Ａ  （２００２）．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｓｔａｂｌｅ  ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｏｎ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｙｃｌｉｃ  ＡＭＰ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌｅｃ  Ｂｉｏｌ  ２６，  １９４−２０１．
９．Ｃｌａｐｐ  ＬＨ  ＆  Ｇｕｒｕｎｇ  Ｒ  （２０１５）．Ｔｈｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｓｔａｂｌｅ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ：Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｖｅｒｓｕｓ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  Ｏｔｈｅｒ  Ｌｉｐｉｄ  Ｍｅｄｉａｔ  １２０，  ５６−７１．
１０．Ｄａｖｉｅ  Ｎ，  Ｈａｌｅｅｎ  ＳＪ，  Ｕｐｔｏｎ  ＰＤ，  Ｐｏｌａｋ  ＪＭ，  Ｙａｃｏｕｂ  ＭＨ，  Ｍｏｒｒｅｌｌ  ＮＷ，  ＆  Ｗｈａｒｔｏｎ  Ｊ  （２００２）．
ＥＴＡ  ａｎｄ  ＥＴＢ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｔｈｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １６５，  ３９８−４０５．
１１．Ｄａｖｉｅ  ＮＪ，  Ｓｃｈｅｒｍｕｌｙ  ＲＴ，  Ｗｅｉｓｓｍａｎｎ  Ｎ，  Ｇｒｉｍｍｉｎｇｅｒ  Ｆ，  ＆  Ｇｈｏｆｒａｎｉ  ＨＡ  （２００９）．
Ｔｈｅ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ−１  ａｎｄ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ：
ｃｕｒｒｅｎｔ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｓｔｕｄｉｅｓ．
Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ３９  Ｓｕｐｐｌ  ２，  ３８−４９．
１２．Ｆａｌｃｅｔｔｉ  Ｅ，  Ｈａｌｌ  ＳＭ，  Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  ＰＧ，  Ｐａｔｅｌ  Ｊ，  Ｍｏｒｒｅｌｌ  ＮＷ，  Ｈａｗｏｒｔｈ  ＳＧ，  ＆  Ｃｌａｐｐ  ＬＨ  （２０１０）．Ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ  （ＩＰ）  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．
Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １８２，  １１６１−１１７０．
１３．  Ｇａｌｉｅ  Ｎ，  Ｂａｒｂｅｒａ  ＪＡ，  Ｆｒｏｓｔ  ＡＥ，  Ｇｈｏｆｒａｎｉ  ＨＡ，  Ｈｏｅｐｅｒ  ＭＭ，  ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ＶＶ，  Ｐｅａｃｏｃｋ  ＡＪ，  Ｓｉｍｏｎｎｅａｕ  Ｇ，  Ｖａｃｈｉｅｒｙ  ＪＬ，  Ｇｒｕｎｉｇ  Ｅ，  Ｏｕｄｉｚ  ＲＪ，  Ｖｏｎｋ−Ｎｏｏｒｄｅｇｒａａｆ  Ａ，  Ｗｈｉｔｅ  ＲＪ，  Ｂｌａｉｒ  Ｃ，  Ｔａｄａｌａｆｉｌ  ｉｎ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ａｒｔｅｒｉａｌ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．
Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３７３，  ８３４−８４４．
１４．Ｇｒｉｍｍｉｎｇｅｒ  Ｆ，  Ｗｅｉｍａｎｎ  Ｇ，  Ｆｒｅｙ  Ｒ，  Ｖｏｓｗｉｎｃｋｅｌ  Ｒ，  Ｔｈａｍｍ  Ｍ，  Ｂｏｌｋｏｗ  Ｄ，  Ｗｅｉｓｓｍａｎｎ  Ｎ，  Ｍｕｃｋ  Ｗ，  Ｕｎｇｅｒ  Ｓ，  Ｗｅｎｓｉｎｇ  Ｇ，  Ｓｃｈｅｒｍｕｌｙ  ＲＴ，  ＆  Ｇｈｏｆｒａｎｉ  ＨＡ  （２００９）．
Ｆｉｒｓｔ  ａｃｕｔｅ  ｈａｅｍｏｄｙｎａｍｉｃ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｇｕａｎｙｌａｔｅ  ｃｙｃｌａｓｅ  ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ  ｒｉｏｃｉｇｕａｔ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．
Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ  ３３，  ７８５−７９２．
１５．Ｈｏｅｐｅｒ  ＭＭ，  Ｌｅｕｃｈｔｅ  Ｈ，  Ｈａｌａｎｋ  Ｍ，  Ｗｉｌｋｅｎｓ  Ｈ，  Ｍｅｙｅｒ  ＦＪ，  Ｓｅｙｆａｒｔｈ  ＨＪ，  Ｗｅｎｓｅｌ  Ｒ，  Ｒｉｐｋｅｎ  Ｆ，  Ｂｒｅｍｅｒ  Ｈ，  Ｋｌｕｇｅ  Ｓ，  Ｈｏｅｆｆｋｅｎ  Ｇ，  ＆  Ｂｅｈｒ  Ｊ  （２００６）．Ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ  ｉｎｈａｌｅｄ  ｉｌｏｐｒｏｓｔ  ｗｉｔｈ  ｂｏｓｅｎｔａｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．
Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ  ２８，  ６９１−６９４．
１６．Ｈｕｍｂｅｒｔ  Ｍ，  Ｂａｒｓｔ  ＲＪ，  Ｒｏｂｂｉｎｓ  ＩＭ，  Ｃｈａｎｎｉｃｋ  ＲＮ，  Ｇａｌｉｅ  Ｎ，  Ｂｏｏｎｓｔｒａ  Ａ，  Ｒｕｂｉｎ  ＬＪ，  Ｈｏｒｎ  ＥＭ，  Ｍａｎｅｓ  Ａ，  ＆  Ｓｉｍｏｎｎｅａｕ  Ｇ  （２００４）．
Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｏｓｅｎｔａｎ  ｗｉｔｈ  ｅｐｏｐｒｏｓｔｅｎｏｌ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ：
ＢＲＥＡＴＨＥ−２．Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ  ２４，  ３５３−３５９．
１７．Ｉｇｌａｒｚ  Ｍ，  Ｂｏｓｓｕ  Ａ，  Ｗａｎｎｅｒ  Ｄ，  Ｂｏｒｔｏｌａｍｉｏｌ  Ｃ，  Ｒｅｙ  Ｍ，  Ｈｅｓｓ  Ｐ，  ＆  Ｃｌｏｚｅｌ  Ｍ  （２０１４）．
Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｍａｃｉｔｅｎｔａｎ  ａｎｄ  ｂｏｓｅｎｔａｎ  ｉｎ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ａｎｄ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  １１８，  ３３３−３３９．
１８．Ｊａｂｒ  ＲＩ，  Ｗｉｌｓｏｎ  ＡＪ，  Ｒｉｄｄｅｒｖｏｌｄ  ＭＨ，  Ｊｅｎｋｉｎｓ  ＡＨ，  Ｐｅｒｒｉｎｏ  ＢＡ，  ＆  Ｃｌａｐｐ  ＬＨ  （２００７）．
Ｎｕｃｌｅａｒ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ  Ａβ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ  Ａα  ｂｙ  ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｒａｔ  ａｏｒｔｉｃ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２９２，  Ｃ２２１３−Ｃ２２２５．
１９．  Ｋａｍ  Ｙ，  Ｃｈｏｗ  ＫＢ，  ＆  Ｗｉｓｅ  Ｈ  （２００１）．
Ｆａｃｔｏｒｓ  ａｆｆｅｃｔｉｎｇ  ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｉｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｃｅｌｌ  ｔｙｐｅｓ．
Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌ  １３，  ８４１−８４７．
２０．Ｋｎｅｂｅｌ  ＳＭ，  Ｅｌｒｉｃｋ  ＭＭ，  Ｂｏｗｌｅｓ  ＥＡ，  Ｚｄａｎｏｖｅｃ  ＡＫ，  Ｓｔｅｐｈｅｎｓｏｎ  ＡＨ，  Ｅｌｌｓｗｏｒｔｈ  ＭＬ，  ＆  Ｓｐｒａｇｕｅ  ＲＳ  （２０１３）．Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ  ａｎａｌｏｇｓ  ａｎｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｎ  ｃｙｃｌｉｃ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ３’，５’  ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ３’５’  ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ．Ｅｘｐ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ  （Ｍａｙｗｏｏｄ  ）  ２３８，  １０６９−１０７４．
２１．Ｋｕｗａｎｏ  Ｋ，  Ｈａｓｈｉｎｏ  Ａ，  Ａｓａｋｉ  Ｔ，  Ｈａｍａｍｏｔｏ  Ｔ，  Ｙａｍａｄａ  Ｔ，  Ｏｋｕｂｏ  Ｋ，  ＆  Ｋｕｗａｂａｒａ  Ｋ  （２００７）．
２−  『ｃ（［４−［（５，６−ｄｉｐｈｅｎｙｌｐｙｒａｚｉｎ−２−ｙｌ）（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ）ａｍｉｎｏ］ｂｕｔｏｘｙ］−Ｎ−（ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ）ｃ』  ）ａｃｅｔａｍｉｄｅ  （ＮＳ−３０４），  ａｎ  ｏｒａｌｌｙ  ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｎｄ  ｌｏｎｇ−ａｃｔｉｎｇ  ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｐｒｏｄｒｕｇ．
Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  ３２２，  １１８１−１１８８．
２２．Ｌａｉ  ＹＪ，  Ｐｕｌｌａｍｓｅｔｔｉ  ＳＳ，  Ｄｏｎｙ  Ｅ，  Ｗｅｉｓｓｍａｎｎ  Ｎ，  Ｂｕｔｒｏｕｓ  Ｇ，  Ｂａｎａｔ  ＧＡ，  Ｇｈｏｆｒａｎｉ  ＨＡ，  Ｓｅｅｇｅｒ  Ｗ，  Ｇｒｉｍｍｉｎｇｅｒ  Ｆ，  ＆  Ｓｃｈｅｒｍｕｌｙ  ＲＴ  （２００８）．Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｓｔａｎｏｉｄ  ＥＰ４  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎ  ｉｌｏｐｒｏｓｔ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｖａｓｏｄｉｌａｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．
Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １７８，  １８８−１９６．
２３．Ｌａｎｇ  Ｍ，  Ｋｏｊｏｎａｚａｒｏｖ  Ｂ，  Ｔｉａｎ  Ｘ，  Ｋａｌｙｍｂｅｔｏｖ  Ａ，  Ｗｅｉｓｓｍａｎｎ  Ｎ，  Ｇｒｉｍｍｉｎｇｅｒ  Ｆ，  Ｋｒｅｔｓｃｈｍｅｒ  Ａ，  Ｓｔａｓｃｈ  ＪＰ，  Ｓｅｅｇｅｒ  Ｗ，  Ｇｈｏｆｒａｎｉ  ＨＡ，  ＆  Ｓｃｈｅｒｍｕｌｙ  ＲＴ  （２０１２）．Ｔｈｅ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｇｕａｎｙｌａｔｅ  ｃｙｃｌａｓｅ  ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ  ｒｉｏｃｉｇｕａｔ  ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｈｙｐｏｘｉａ  ａｎｄ  ＳＵ５４１６  ｉｎ  ｒａｔｓ．
ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ７，  ｅ４３４３３．
２４．  Ｌａｎｇｌｅｂｅｎ  Ｄ，  Ｇａｌｉｅ  Ｎ，  Ｈｅ  Ｊ，  Ｈｕａｎｇ  Ｙ，  Ｈｕｍｂｅｒｔ  Ｍ，  Ｋｅｏｇｈ  Ａ，  Ｒｕｂｉｎ  ＬＪ，  Ｚｈｏｕ  Ｄ，  Ｃｕｒｒａｍ  Ｊ，  Ｄａｖｉｅ  Ｎ，  ＆  Ｇｈｏｆｒａｎｉ  ＨＡ  （２０１５）．Ｕｓｅ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ  ｒｅｌｅｖａｎｔ  ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｔｏ  ｅｖａｌｕａｔｅ  ｔｈｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  ＰＡＴＥＮＴ−１  ｓｔｕｄｙ．
Ｊ  Ｈｅａｒｔ  Ｌｕｎｇ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ３４，  ３３８−３４７．
２５．Ｌｕ  Ｊ，  Ｗａｎｇ  Ｘ，  Ｘｉｅ  Ｘ，  Ｈａｎ  Ｄ，  Ｌｉ  Ｓ，  ＆  Ｌｉ  Ｍ  （２０１３）．Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ／ＮＦＡＴ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ−１−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ−５．
Ｎａｎ  Ｆａｎｇ  Ｙｉ  Ｋｅ  Ｄａ  Ｘｕｅ  Ｘｕｅ  Ｂａｏ  ３３，  ２６−２９．
２６．ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  Ｖ，  Ｃｈａｎｎｉｃｋ  ＲＮ，  Ｇｈｏｆｒａｎｉ  ＨＡ，  Ｌｅｍａｒｉｅ  ＪＣ，  Ｎａｅｉｊｅ  Ｒ，  Ｐａｃｋｅｒ  Ｍ，  Ｓｏｕｚａ  Ｒ，  Ｔａｐｓｏｎ  ＶＦ，  Ｔｏｌｓｏｎ  Ｊ，  Ａｌ  ＨＨ，  Ｍｅｙｅｒ  Ｇ，  ＆  Ｈｏｅｐｅｒ  ＭＭ  （２０１５）．Ｂｏｓｅｎｔａｎ  ａｄｄｅｄ  ｔｏ  ｓｉｌｄｅｎａｆｉｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ  ４６，  ４０５−４１３．
２７．ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ＶＶ，  Ａｒｃｈｅｒ  ＳＬ，  Ｂａｄｅｓｃｈ  ＤＢ，  Ｂａｒｓｔ  ＲＪ，  Ｆａｒｂｅｒ  ＨＷ，  Ｌｉｎｄｎｅｒ  ＪＲ，  Ｍａｔｈｉｅｒ  ＭＡ，  ＭｃＧｏｏｎ  ＭＤ，  Ｐａｒｋ  ＭＨ，  Ｒｏｓｅｎｓｏｎ  ＲＳ，  Ｒｕｂｉｎ  ＬＪ，  Ｔａｐｓｏｎ  ＶＦ，  ＆  Ｖａｒｇａ  Ｊ  （２００９）．ＡＣＣＦ／ＡＨＡ  ２００９  ｅｘｐｅｒｔ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｄｏｃｕｍｅｎｔ  ｏｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ａ  ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  Ｔａｓｋ  Ｆｏｒｃｅ  ｏｎ  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  Ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ  ｉｎ  ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｃｈｅｓｔ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ；Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｈｏｒａｃｉｃ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，  Ｉｎｃ．；ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ  ５３，  １５７３−１６１９．
２８．Ｍｕｒｒａｙ  Ｆ，  Ｐａｔｅｌ  ＨＨ，  Ｓｕｄａ  ＲＹ，  Ｚｈａｎｇ  Ｓ，  Ｔｈｉｓｔｌｅｔｈｗａｉｔｅ  ＰＡ，  Ｙｕａｎ  ＪＸ，  ＆  Ｉｎｓｅｌ  ＰＡ  （２００７）．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｃＡＭＰ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  ｉｓｏｆｏｒｍｓ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ：ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ＰＤＥ１．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２９２，  Ｌ２９４−Ｌ３０３．
２９．Ｏｒｉｅ  ＮＮ，  Ｌｅｄｗｏｚｙｗ  Ａ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＤＪ，  Ｗｈｉｔｔｌｅ  ＢＪ，  ＆  Ｃｌａｐｐ  ＬＨ  （２０１３）．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｔｒｅｐｒｏｓｔｉｎｉｌ  ａｎｄ  ｉｌｏｐｒｏｓｔ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｓｅｌｅｘｉｐａｇ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ，  ＭＲＥ−２６９  （ＡＣＴ−  ３３３６７９）  ｉｎ  ｒａｔ  ｓｍａｌｌ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉｅｓ  ａｎｄ  ｖｅｉｎｓ．Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  ＆  Ｏｔｈｅｒ  Ｌｉｐｉｄ  Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  １０６，  １−７．
３０．Ｐａｔｅｌ  ＪＡ，  Ｈａｌｌ  ＳＭ，  Ａｂｒａｈａｍ  ＤＪ，  Ｎｅｌｓｅｎ  ＡＣ，  Ｓｉｌｖｅｒｓｔｅｉｎ  ＡＭ，  ＆  Ｃｌａｐｐ  ＬＨ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｔｏ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ  （ＰＡＳＭＣｓ）  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．４４［Ｓｕｐｐｌ．  ５８］，  Ｐ２３５５．
２０１４．
３１．Ｐａｔｅｌ  ＪＡ，  Ｓｈｅｎ  Ｌ，  Ｈａｌｌ  ＳＭ，  Ｎｏｒｅｌ  Ｘ，  ＭｃＡｎｕｌｔｙ  ＲＪ，  Ｓｉｌｖｅｒｓｔｅｉｎ  ＡＭ，  Ｗｈｉｔｔｌｅ  ＢＪ，  ＆  Ｃｌａｐｐ  ＬＨ．ＥＰ２  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｐｌａｙ  ａ  ｋｅｙ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｍｅｄｉｔａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｒｅｐｒｏｓｔｉｎｉｌ  ｉｎ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｌｕｎｇｓ  ｏｆ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１９１，  Ａ５９５４．２０１５．
３２．Ｓｃｈｅｒｍｕｌｙ  ＲＴ，  Ｐｕｌｌａｍｓｅｔｔｉ  ＳＳ，  Ｂｒｅｉｔｅｎｂａｃｈ  ＳＣ，  Ｗｅｉｓｓｍａｎｎ  Ｎ，  Ｇｈｏｆｒａｎｉ  ＨＡ，  Ｇｒｉｍｍｉｎｇｅｒ  Ｆ，  Ｎｉｌｉｕｓ  ＳＭ，  Ｓｃｈｒｏｒ  Ｋ，  Ｋｉｒｃｈｒａｔｈ  ＪＭ，  Ｓｅｅｇｅｒ  Ｗ，  ＆  Ｒｏｓｅ  Ｆ  （２００７）．Ｉｌｏｐｒｏｓｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｄｅｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｒａｂｂｉｔ  ｌｕｎｇｓ．
Ｒｅｓｐｉｒ  Ｒｅｓ  ８，  ４．
３３．Ｓｃｈｅｒｍｕｌｙ  ＲＴ，  Ｓｔａｓｃｈ  ＪＰ，  Ｐｕｌｌａｍｓｅｔｔｉ  ＳＳ，  Ｍｉｄｄｅｎｄｏｒｆｆ  Ｒ，  Ｍｕｌｌｅｒ  Ｄ，  Ｓｃｈｌｕｔｅｒ  ＫＤ，  Ｄｉｎｇｅｎｄｏｒｆ  Ａ，  Ｈａｃｋｅｍａｃｋ  Ｓ，  Ｋｏｌｏｓｉｏｎｅｋ  Ｅ，  Ｋａｕｌｅｎ  Ｃ，  Ｄｕｍｉｔｒａｓｃｕ  Ｒ，  Ｗｅｉｓｓｍａｎｎ  Ｎ，  Ｍｉｔｔｅｎｄｏｒｆ  Ｊ，  Ｋｌｅｐｅｔｋｏ  Ｗ，  Ｓｅｅｇｅｒ  Ｗ，  Ｇｈｏｆｒａｎｉ  ＨＡ，  ＆  Ｇｒｉｍｍｉｎｇｅｒ  Ｆ  （２００８）．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｇｕａｎｙｌａｔｅ  ｃｙｃｌａｓｅ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ  ３２，  ８８１−８９１．
３４．Ｓｉｍｏｎｎｅａｕ  Ｇ，  Ｒｕｂｉｎ  ＬＪ，  Ｇａｌｉｅ  Ｎ，  Ｂａｒｓｔ  ＲＪ，  Ｆｌｅｍｉｎｇ  ＴＲ，  Ｆｒｏｓｔ  ＡＥ，  Ｅｎｇｅｌ  ＰＪ，  Ｋｒａｍｅｒ  ＭＲ，  Ｂｕｒｇｅｓｓ  Ｇ，  Ｃｏｌｌｉｎｇｓ  Ｌ，  Ｃｏｓｓｏｎｓ  Ｎ，  Ｓｉｔｂｏｎ  Ｏ，  ＆  Ｂａｄｅｓｃｈ  ＤＢ  （２００８）．Ａｄｄｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｉｌｄｅｎａｆｉｌ  ｔｏ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｅｐｏｐｒｏｓｔｅｎｏｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ：ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ．Ａｎｎ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  １４９，  ５２１−５３０．
３５．Ｓｉｔｂｏｎ  Ｏ，  Ｃｈａｎｎｉｃｋ  Ｒ，  Ｃｈｉｎ  ＫＭ，  Ｆｒｅｙ  Ａ，  Ｇａｉｎｅ  Ｓ，  Ｇａｌｉｅ  Ｎ，  Ｇｈｏｆｒａｎｉ  ＨＡ，  Ｈｏｅｐｅｒ  ＭＭ，  Ｌａｎｇ  ＩＭ，  Ｐｒｅｉｓｓ  Ｒ，  Ｒｕｂｉｎ  ＬＪ，  Ｄｉ  ＳＬ，  Ｔａｐｓｏｎ  Ｖ，  Ａｄｚｅｒｉｋｈｏ  Ｉ，  Ｌｉｕ  Ｊ，  Ｍｏｉｓｅｅｖａ  Ｏ，  Ｚｅｎｇ  Ｘ，  Ｓｉｍｏｎｎｅａｕ  Ｇ，  ＆  ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ＶＶ  （２０１５）．Ｓｅｌｅｘｉｐａｇ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ａｒｔｅｒｉａｌ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３７３，  ２５２２−２５３３．
３６．Ｓｋｏｒｏ−Ｓａｊｅｒ  Ｎ  ＆  Ｌａｎｇ  ＩＭ  （２０１４）．
Ｓｅｌｅｘｉｐａｇ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ  １５，  ４２９−４３６．
３７．Ｓｙｅｄ  ＮＩ  ＆  Ｊｏｎｅｓ  ＲＬ  （２０１５）．Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｐｒｏｆｉｌｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｔｒｅｐｒｏｓｔｉｎｉｌ  ａｎｄ  ｎａｘａｐｒｏｓｔｅｎｅ，  ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙ  ｔｈｅｉｒ  ＤＰ１  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  Ｌｅｕｋｏｔ  Ｅｓｓｅｎｔ  Ｆａｔｔｙ  Ａｃｉｄｓ  ９５，  １９−２９．
３８．Ｔａｐｓｏｎ  ＶＦ，  Ｊｉｎｇ  ＺＣ，  Ｘｕ  ＫＦ，  Ｐａｎ  Ｌ，  Ｆｅｌｄｍａｎ  Ｊ，  Ｋｉｅｌｙ  ＤＧ，  Ｋｏｔｌｙａｒ  Ｅ，  ＭｃＳｗａｉｎ  ＣＳ，  Ｌａｌｉｂｅｒｔｅ  Ｋ，  Ａｒｎｅｓｏｎ  Ｃ，  ＆  Ｒｕｂｉｎ  ＬＪ  （２０１３）．Ｏｒａｌ  ｔｒｅｐｒｏｓｔｉｎｉｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ  ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ａｎｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  ｔｙｐｅ  ５  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ  （ｔｈｅ  ＦＲＥＥＤＯＭ−Ｃ２  ｓｔｕｄｙ）：ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ．Ｃｈｅｓｔ  １４４，  ９５２−９５８．
３９．Ｔｕｒｃａｔｏ  Ｓ  ＆  Ｃｌａｐｐ  ＬＨ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｔｈａｔ  ｖａｓｏｒｅｌａｘａｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  Ｇｓ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｓ  ｌａｒｇｅｌｙ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｆ  ｃＡＭＰ  ｉｎ  ｇｕｉｎｅａ−ｐｉｇ  ａｏｒｔａ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ  ３０，  Ａ１９０．１９９８．Ｒｅｆ  Ｔｙｐｅ：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ４０．Ｖａｃｈｉｅｒｙ  ＪＬ  （２０１１）．Ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎｓ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ：ｔｈｅ  ｎｅｅｄ  ｆｏｒ  ｅａｒｌｉｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ａｄｖ  Ｔｈｅｒ  ２８，  ２５１−２６９．
４１．Ｗａｎｇ  Ｊ，  Ｙａｎｇ  Ｋ，  Ｘｕ  Ｌ，  Ｚｈａｎｇ  Ｙ，  Ｌａｉ  Ｎ，  Ｊｉａｎｇ  Ｈ，  Ｚｈａｎｇ  Ｙ，  Ｚｈｏｎｇ  Ｎ，  Ｒａｎ  Ｐ，  ＆  Ｌｕ  Ｗ  （２０１３）．Ｓｉｌｄｅｎａｆｉｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｈｙｐｏｘｉａ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｖｉａ  ｃＧＭＰ−ＰＫＧ−ＰＰＡＲγ  ａｘｉｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ４９，  ２３１−２４０．
４２．Ｗｈａｒｔｏｎ  Ｊ，  Ｄａｖｉｅ  Ｎ，  Ｕｐｔｏｎ  ＰＤ，  Ｙａｃｏｕｂ  ＭＨ，  Ｐｏｌａｋ  ＪＭ，  ＆  Ｍｏｒｒｅｌｌ  ＮＷ  （２０００）．Ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ｄｉｓｔａｌ  ａｎｄ  ｐｒｏｘｉｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０２，  ３１３０−３１３６．
４３．Ｗｈｉｔｔｌｅ  ＢＪ，  Ｓｉｌｖｅｒｓｔｅｉｎ  ＡＭ，  Ｍｏｔｔｏｌａ  ＤＭ，  ＆  Ｃｌａｐｐ  ＬＨ  （２０１２）．Ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  （ＩＰ）  ａｇｏｎｉｓｔｓ，  ｔｒｅｐｒｏｓｔｉｎｉｌ  ａｎｄ  ｉｌｏｐｒｏｓｔ，  ａｔ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｓｔａｎｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ｔｒｅｐｒｏｓｔｉｎｉｌ  ｉｓ  ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ＤＰ１  ａｎｄ  ＥＰ２  ａｇｏｎｉｓｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ８４，  ６８−７５．
４４．Ｗｏｒｔ  ＳＪ，  Ｗｏｏｄｓ  Ｍ，  Ｗａｒｎｅｒ  ＴＤ，  Ｅｖａｎｓ  ＴＷ，  ＆  Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  ＪＡ  （２００１）．Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｌｙ  ｒｅｌｅａｓｅｄ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ−１  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ：ｒｅｌｅｖａｎｃｅ  ｔｏ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２５，  １０４−１１０．
４５．Ｚａｍｏｒａ  ＭＡ，  Ｄｅｍｐｓｅｙ  ＥＣ，  Ｗａｌｃｈａｋ  ＳＪ，  ＆  Ｓｔｅｌｚｎｅｒ  ＴＪ  （１９９３）．ＢＱ１２３，  ａｎ  ＥＴＡ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ，  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ−１−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ９，  ４２９−４３３．
４６．Ｚｈａｎｇ  Ｓ，  Ｐａｔｅｌ  ＨＨ，  Ｍｕｒｒａｙ  Ｆ，  Ｒｅｍｉｌｌａｒｄ  ＣＶ，  Ｓｃｈａｃｈ  Ｃ，  Ｔｈｉｓｔｌｅｔｈｗａｉｔｅ  ＰＡ，  Ｉｎｓｅｌ  ＰＡ，  ＆  Ｙｕａｎ  ＪＸ  （２００７）．Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｎｏｒｍａｌ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ  ａｎｄ  ＩＰＡＨ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｓｈｏｗ  ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ  ｃＡＭＰ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ＴＲＰＣ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｃａｐａｃｉｔａｔｉｖｅ  Ｃａ２＋  ｅｎｔｒｙ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２９２，  Ｌ１２０２−Ｌ１２１０．
【図１Ａ】
2019533713.tif 000005
【図１Ｂ】
2019533713.tif 000006
【図１Ｃ】
2019533713.tif 000007
【図１Ｄ】
2019533713.tif 000008
【図１Ｅ】
2019533713.tif 000009
【図１Ｆ】
2019533713.tif 000010
【図２】
2019533713.tif 000011
【図３Ａ】
2019533713.tif 000012
【図３Ｂ】
2019533713.tif 000013
【図３Ｃ】
2019533713.tif 000014
【図３Ｄ】
2019533713.tif 000015
【図３Ｅ】
2019533713.tif 000016
【図３Ｆ】
2019533713.tif 000017
【図４】
2019533713.tif 000018
【図５Ａ】
2019533713.tif 000019
【図５Ｂ】
2019533713.tif 000020
【図５Ｃ】
2019533713.tif 000021
【図５Ｄ】
2019533713.tif 000022
【図５Ｅ】
2019533713.tif 000023
【図５Ｆ】
2019533713.tif 000024
【図６】
2019533713.tif 000025
【図７Ａ】
2019533713.tif 000026
【図７Ｂ】
2019533713.tif 000027
【図７Ｃ】
2019533713.tif 000028
【図７Ｄ】
2019533713.tif 000029
【図７Ｅ】
2019533713.tif 000030
【図７Ｆ】
2019533713.tif 000031
【図８】
2019533713.tif 000032
【図９Ａ】
2019533713.tif 000033
【図９Ｂ】
2019533713.tif 000034
【図９Ｃ】
2019533713.tif 000035
【図９Ｄ】
2019533713.tif 000036
【図９Ｅ】
2019533713.tif 000037
【図９Ｆ】
2019533713.tif 000038
【図１０】
2019533713.tif 000039
【図１１Ａ】
2019533713.tif 000040
【図１１Ｂ】
2019533713.tif 000041
【図１１Ｃ】
2019533713.tif 000042
【図１１Ｄ】
2019533713.tif 000043
【図１１Ｅ】
2019533713.tif 000044
【図１２】
2019533713.tif 000045
【国際調査報告】
2019533713.tif 000046
2019533713.tif 000047
2019533713.tif 000048
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2019533713.tif 000050