(57)【要約】  本発明は、空調装置内の悪臭を誘発する微生物を制御できる抗菌剤のスクリーニング方法および空調装置内の悪臭を除去する方法に関する。本発明の空調装置内の悪臭誘発微生物は、新規抗菌剤の開発または上記微生物の代謝産物の化学的性質を究明して悪臭を遮断するための芳香剤の開発に利用することができる。また、空調装置で上記微生物が生息できない環境をあらかじめ作り、根本的に悪臭の原因を除去するための用途に利用できるなど、様々な産業上の有用性がある。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペロモナス・プラクアエ（Ｐｅｌｏｍｏｎａｓ  ｐｕｒａｑｕａｅ）、スピロソーマ・ラジオトレランス（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｒａｄｉｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、フィブレラ・アエスチュアリナ（Ｆｉｂｒｅｌｌａ  ａｅｓｔｕａｒｉｎａ）、クリセオバクテリウム・ジオカルポスファエラエ（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｅｏｃａｒｐｏｓｐｈａｅｒａｅ）、スピロソーマ・リングアレ（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｌｉｎｇｕａｌｅ）およびジオバチルス・トエビー（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｏｅｂｉｉ）からなる群から選択される１種以上の微生物が空調装置内で引き起こす悪臭を低減させるための空調装置内の悪臭低減用の抗菌剤のスクリーニング方法であって、
（ａ）上記微生物またはその培養物を準備する段階と、
（ｂ）上記微生物またはその培養物に試料を接触させる段階と、
（ｃ）上記微生物の生育の抑制を測定する段階と、
（ｄ）上記微生物の生育が抑制された時に、上記試料が、上記微生物が発生させる空調装置内の悪臭を低減させる坑菌活性を有すると判別する段階
とを含む、空調装置内の悪臭低減用の抗菌剤のスクリーニング方法。
【請求項２】
上記空調装置がエアコンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
上記微生物が空調装置内のエバポレータコアにバイオフィルムを形成して悪臭を誘発する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
上記エバポレータコアが、その材質がアルミニウム、アルミニウム合金、銅または銅合金である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
上記ペロモナス・プラクアエが、クリセオバクテリウム・ペロモナス・プラクアエ（Ｐｅｌｏｍｏｎａｓ  ｐｕｒａｑｕａｅ）ＨＫＭＣ−１１３（寄託番号：ＫＣＣＭ１１６８９Ｐ）、上記スピロソーマ・ラジオトレランスがスピロソーマ・ラジオトレランス（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｒａｄｉｏｔｏｌｅｒａｎｓ）ＨＫＭＣ−１１４（寄託番号：ＫＣＣＭ１１６９０Ｐ）、上記フィブレラ・アエスチュアリナがフィブレラ・アエスチュアリナ（Ｆｉｂｒｅｌｌａ  ａｅｓｔｕａｒｉｎａ）ＨＫＭＣ−１１５（寄託番号：ＫＣＣＭ１１６９１Ｐ）、上記クリセオバクテリウム・ジオカルポスファエラエがクリセオバクテリウム・ジオカルポスファエラエ（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｅｏｃａｒｐｏｓｐｈａｅｒａｅ）ＨＫＭＣ−１１６（寄託番号：ＫＣＣＭ１１６９２Ｐ）、上記スピロソーマ・リングアレがスピロソーマ・リングアレ（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｌｉｎｇｕａｌｅ）ＨＫＭＣ−１１７（寄託番号：ＫＣＣＭ１１６９３Ｐ）、上記ジオバチルス・トエビーがジオバチルス・トエビー（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｏｅｂｉｉ）ＨＫＭＣ−１１８（寄託番号：ＫＣＣＭ１１６９４Ｐ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法でスクリーニングされた悪臭低減用の抗菌剤を空調装置内に塗布または噴射する段階を含む、空調装置内の悪臭誘発微生物の生育抑制方法。
【請求項７】
請求項１に記載の方法でスクリーニングされた悪臭低減用の抗菌剤を空調装置内に塗布または噴射する段階を含む、空調装置内の悪臭除去方法。
【請求項８】
空調装置内でペロモナス・プラクアエ（Ｐｅｌｏｍｏｎａｓ  ｐｕｒａｑｕａｅ）、スピロソーマ・ラジオトレランス（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｒａｄｉｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、フィブレラ・アエスチュアリナ（Ｆｉｂｒｅｌｌａ  ａｅｓｔｕａｒｉｎａ）、クリセオバクテリウム・ジオカルポスファエラエ（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｅｏｃａｒｐｏｓｐｈａｅｒａｅ）、スピロソーマ・リングアレ（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｌｉｎｇｕａｌｅ）およびジオバチルス・トエビー（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｏｅｂｉｉ）からなる群から選択される１種以上の悪臭誘発微生物を上記空調装置から分離または死滅させる段階を含む、空調装置内の悪臭除去方法。
【請求項９】
空調装置内でペロモナス・プラクアエ（Ｐｅｌｏｍｏｎａｓ  ｐｕｒａｑｕａｅ）、スピロソーマ・ラジオトレランス（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｒａｄｉｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、フィブレラ・アエスチュアリナ（Ｆｉｂｒｅｌｌａ  ａｅｓｔｕａｒｉｎａ）、クリセオバクテリウム・ジオカルポスファエラエ（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｅｏｃａｒｐｏｓｐｈａｅｒａｅ）、スピロソーマ・リングアレ（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｌｉｎｇｕａｌｅ）およびジオバチルス・トエビー（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｏｅｂｉｉ）からなる群から選択される１種以上の悪臭誘発微生物の生育を抑制させる段階を含む、空調装置内の悪臭除去方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、空調装置内の悪臭を誘発する微生物を制御できる抗菌剤のスクリーニング方法および空調装置内の悪臭を除去する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
清浄な空気は人間の健康と快適な暮らしの基本とされており、不快な臭いを誘発したり汚染した空気は快適な環境を害する主な要素として作用する。例えば、密閉した条件で不快に感じられる室内空気質は次の２つの重要な要因によってもたされる。一つは、密閉した環境を構成する構成物質そのもの（建物、車両など）から直接発生する室内空気汚染物質であり、もう一つは、人間の活動によって発生したり外部から流入した物質が原因となって発生した臭いである。
【０００３】
空調システムは、建物、車両、鉄道、船舶、航空機などにおいて空気の温度、湿度、気流および清浄度を調和させる空気調和を目的に室内の温度を下げ、室内環境を最適化するシステムである。このような空調システムは生活レベルの向上に伴って普及率がますます増加している。空調システムの普及率の増加によって基本的な機能は多く発展してきたが、室内空気の質のための環境的側面ではまだ解決すべき問題が多く残っている。
【０００４】
空調システムにおいて、特に、エアコンの臭気はかびと細菌の代謝物質に起因すると知られているが、該当するかびと細菌の種類および微生物が具体的にいかなる代謝物質をどれくらい分泌するかに関する具体的な資料はまだ明らかになっていない。
【０００５】
空調装置の構造上、ブロワーを通過した空気はいずれもエバポレータコアを通過するが、冷たい冷媒と空気との熱交換の際、エバポレータコアの表面には温度差による凝縮水の凝結現象が発生し、この凝縮水の凝結が続くと、エバポレータコアの表面にはかびと細菌が生息、繁殖しやすい環境が整う。外部空気に露出されたエバポレータコアにかびと細菌が増殖した状態で、エバポレータコアの表面に増殖した細菌の代謝物質によって微生物の揮発性有機化合物（ｍＶＯＣｓ）が発生し、エバポレータコアを通過した空気が室内に送風されると、この時に微生物によって発生した揮発性有機化合物により、長期間使用時に室内にはかびと細菌による悪臭が生じることがある。
【０００６】
悪臭が発生するエバポレータコアの表面は、長期間使用されることからバイオフィルムで覆われており、これらはバクテリア、セルクラスター、ＥＰＳで構成されるが、ＥＰＳはタンパク質、ポリサッカライド、ポリウロン酸、核酸、脂質などの様々な成分を含んでいる。そのため、エバポレータコアの表面では様々な細菌、かびがバイオフィルムを養分として増殖し、代謝物質により微生物から有機化合物（ｍＶＯＣｓ）を排出するが、これがエアコン悪臭の一要因である腐敗臭として知られている。
【０００７】
上記悪臭を除去するために多種の芳香剤が市販されているが、これらは上記エバポレータコアに生息するかびと細菌を根本的に除去できるものではなく、単に、一時的に不快な臭いを薄めるものに過ぎない場合が多い。同様に、現在市販中の抗菌剤も、エバポレータコアに生息する特定のかびまたは細菌に特異に作用するように開発された事例はなく、単に通常の病原菌に対する坑菌力があるという理由で販売されている状況である。
【０００８】
したがって、上記エバポレータコアに生息するかびおよび細菌の種類に対する明確な究明とその繁殖を特異的に遮断または予防することによって快適な室内空気環境の造成が可能な抗菌剤およびこれを用いて不快な臭気を除去できる技術の開発が切に望まれている。
【０００９】
上記の背景技術として説明された事項は、本発明の背景に関する理解を高めるためのものであり、この技術分野における通常の知識を有する者に既に知られた従来技術に該当するものと理解してはならないだろう。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明者らは、空調装置内に生息して悪臭を誘発する微生物を究明し、それらを効果的に制御できる方法を見出すために努力した結果、上記空調装置内でバイオフィルムを形成して生育する悪臭微生物６種を分離することに成功し、それらを制御すると、空調装置で誘発される悪臭を有意に遮断できることを確認し、本発明を完成するに至った。
【００１１】
したがって、本発明の目的は、空調装置内の悪臭を誘発する微生物であるペロモナス・プラクアエ（Ｐｅｌｏｍｏｎａｓ  ｐｕｒａｑｕａｅ）、スピロソーマ・ラジオトレランス（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｒａｄｉｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、フィブレラ・アエスチュアリナ（Ｆｉｂｒｅｌｌａ  ａｅｓｔｕａｒｉｎａ）、クリセオバクテリウム・ジオカルポスファエラエ（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｅｏｃａｒｐｏｓｐｈａｅｒａｅ）、スピロソーマ・リングアレ（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｌｉｎｇｕａｌｅ）およびジオバチルス・トエビー（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｏｅｂｉｉ）からなる群から選択される１種以上の微生物に対する抗菌剤のスクリーニング方法を提供することにある。
【００１２】
本発明の他の目的は、空調装置内の悪臭誘発微生物を提供することにある。
【００１３】
本発明の更に他の目的は、抗菌剤を空調装置内に塗布または噴射する段階を含む空調装置内の悪臭誘発微生物の生育抑制方法を提供することにある。
【００１４】
本発明の更に他の目的は、空調装置から悪臭誘発微生物を分離または死滅させる段階を含む空調装置内の悪臭除去方法を提供することにある。
【００１５】
本発明の更に他の目的は、空調装置内で悪臭誘発微生物の生育を抑制させる段階を含む空調装置内の悪臭除去方法を提供することにある。
【００１６】
本発明の他の目的および利点は、下記の発明の詳細な説明、特許請求の範囲および図面からさらに明確になる。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明の一態様によれば、本発明は、次の段階を含む空調装置内の悪臭低減用の抗菌剤のスクリーニング方法を提供する：
ペロモナス・プラクアエ（Ｐｅｌｏｍｏｎａｓ  ｐｕｒａｑｕａｅ）、スピロソーマ・ラジオトレランス（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｒａｄｉｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、フィブレラ・アエスチュアリナ（Ｆｉｂｒｅｌｌａ  ａｅｓｔｕａｒｉｎａ）、クリセオバクテリウム・ジオカルポスファエラエ（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｅｏｃａｒｐｏｓｐｈａｅｒａｅ）、スピロソーマ・リングアレ（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｌｉｎｇｕａｌｅ）およびジオバチルス・トエビー（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｏｅｂｉｉ）からなる群から選択される１種以上の微生物が空調装置内に引き起こす悪臭を低減させるための空調装置内の悪臭低減用の抗菌剤のスクリーニング方法であって、
（ａ）上記微生物またはその培養物を準備する段階；
（ｂ）上記微生物またはその培養物に試料を接触させる段階；
（ｃ）上記微生物の生育抑制を測定する段階；および
（ｄ）上記微生物の生育が抑制された時に、上記試料が、上記微生物が引き起こす空調装置内の悪臭を低減させる坑菌活性を有すると判別する段階。
【００１８】
本発明者らは、空調装置内に生息しつつ悪臭を誘発する微生物を究明し、それらを効果的に制御できる方法を見つけようと努力した結果、上記空調装置内でバイオフィルムを形成して生育する悪臭微生物６種を分離することに成功し、それらを制御すると空調装置で誘発される悪臭を有意に遮断できることを確認した。
【００１９】
本明細書でいう「空調装置」とは、外部環境から一部または全部が分離された空間で温度、湿度、空気の清浄度、流れなどを快適に維持するシステムを総称する。上記分離された空間の好ましい例としては、建物の内部、または車両、鉄道、船舶、航空機などの内部のように外部から部分的にまたは全体的に分離された内部の空間を挙げることができる。上記空調装置の好ましい例としてはエアコンを挙げることができる。
【００２０】
空調装置は、その構造上、ブロワーを通過した空気が全てエバポレータコアを通過し、上記エバポレータコアの表面には温度差による凝縮水の凝結現象が起き続いて微生物の生育しやすい環境となり、長時間が経つとバイオフィルム（ｂｉｏｆｉｌｍ）が形成される。この時、微生物は空気中に存在する室内および室外の様々な物質を営養分にして代謝し、代謝の結果として発生した揮発性有機化合物（ｍＶＯＣｓ）によって悪臭が発生する。
【００２１】
バイオフィルムは微生物が集まって生息する群集形態であり、一つの膜で囲まれた層の構造を有し、この膜は微生物を外部環境から保護し、営養分を供給する役割を担う。膜を構成する成分としてＥＰＳ（exopolymeric substances）があり、これはタンパク質、ポリサッカライド、ポリウロン酸、核酸、脂質などの様々な成分を含むので、エバポレータコアの表面では様々な微生物が上記の成分を養分にして増殖し、代謝物質として悪臭を排出する。
【００２２】
本発明者らは上記エバポレータコアから悪臭を誘発する微生物を分離し、それらを培養した結果、コロニーを形成する微生物の中から優占菌株を分離培養した。優占菌株を分離および培養する方法は、当業界に公知の様々な方法を利用することができ、例えば、希釈比率、コロニーの色、大きさ、形状などの形態学的なアプローチによって優占微生物を選抜することができる。
【００２３】
上記優占微生物は、フィブレラ属微生物、クリセオバクテリウム属微生物、スピロソーマ属微生物、ジオバチルス属微生物またはペロモナス属微生物を含み、好ましくは、フィブレラ・アエスチュアリナ（Ｆｉｂｒｅｌｌａ  ａｅｓｔｕａｒｉｎａ）、クリセオバクテリウム・ジオカルポスファエラエ（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｅｏｃａｒｐｏｓｐｈａｅｒａｅ）、スピロソーマ・リングアレ（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｌｉｎｇｕａｌｅ）、スピロソーマ・ラジオトレランス（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｒａｄｉｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、ジオバチルス・トエビー（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｏｅｂｉｉ）またはペロモナス・プラクアエ（Ｐｅｌｏｍｏｎａｓ  ｐｕｒａｑｕａｅ）を含む。
【００２４】
これらの微生物は、韓国微生物保存センターに２０１５年４月１７日付で寄託され、次の寄託番号を受けた：フィブレラ・アエスチュアリナ（Ｆｉｂｒｅｌｌａ  ａｅｓｔｕａｒｉｎａ）ＨＫＭＣ−１１５（寄託番号：ＫＣＣＭ１１６９１Ｐ）、クリセオバクテリウム・ジオカルポスファエラエ（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｅｏｃａｒｐｏｓｐｈａｅｒａｅ）ＨＫＭＣ−１１６（寄託番号：ＫＣＣＭ１１６９２Ｐ）、スピロソーマ・リングアレ（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｌｉｎｇｕａｌｅ）ＨＫＭＣ−１１７（寄託番号：ＫＣＣＭ１１６９３Ｐ）、スピロソーマ・ラジオトレランス（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｒａｄｉｏｔｏｌｅｒａｎｓ）ＨＫＭＣ−１１４（寄託番号：ＫＣＣＭ１１６９０Ｐ）、ジオバチルス・トエビー（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｏｅｂｉｉ）ＨＫＭＣ−１１８（寄託番号：ＫＣＣＭ１１６９４Ｐ）、ペロモナス・プラクアエ（Ｐｅｌｏｍｏｎａｓ  ｐｕｒａｑｕａｅ）ＨＫＭＣ−１１３（寄託番号：ＫＣＣＭ１１６８９Ｐ）。
【００２５】
これらの悪臭誘発微生物は、様々な産業的有用性がある。例えば、上記微生物の生育を抑制できる新規抗菌剤の開発、上記微生物の代謝産物の化学的性質を究明して悪臭を遮断するための芳香剤の開発に利用することができる。また、空調装置で上記微生物が生息できない環境をあらかじめ作り、根本的に悪臭の原因を除去するための用途に利用することができる。
【００２６】
本発明の抗菌剤のスクリーニング方法で用いる試料は、上記微生物に対する坑菌活性を保有するか否かを確認するためのものである。例えば、特定の試料がペロモナス・プラクアエに抗菌活性を有すると、上記試料は、ペロモナス・プラクアエに対する抗菌剤としてスクリーニングすることができる。
【００２７】
本発明のスクリーニング方法で判別された抗菌剤は、好ましくは、ペロモナス・プラクアエに抗菌活性を有し、より好ましくは、上記微生物のみならず他の種類の微生物に対しても坑菌活性を有することができる。
【００２８】
例えば、ある抗菌剤は、上記６種の微生物の全てに対して坑菌活性を有することもあり、他の抗菌剤は１種または一部の種に対して坑菌活性が全くないこともある。また、上記６種の微生物の全てに対して坑菌活性を有する抗菌剤であっても各微生物の種類によって坑菌活性が異なることがある（表８）。
【００２９】
本発明の好ましい具現例によれば、上記スクリーニングしようとする試料は、単一化合物および化合物の混合物、動植物の抽出物、ヌクレオチド、ポリペプチドなどの遺伝情報を有する生物学的製剤、化合物および生物学的製剤の混合物を含む。
【００３０】
本発明の他の態様によれば、本発明は、空調装置内の悪臭誘発微生物を提供する。
【００３１】
上記悪臭誘発微生物は、好ましくは、ペロモナス・プラクアエ（Ｐｅｌｏｍｏｎａｓ  ｐｕｒａｑｕａｅ）、スピロソーマ・ラジオトレランス（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｒａｄｉｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、フィブレラ・アエスチュアリナ（Ｆｉｂｒｅｌｌａ  ａｅｓｔｕａｒｉｎａ）、クリセオバクテリウム・ジオカルポスファエラエ（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｅｏｃａｒｐｏｓｐｈａｅｒａｅ）、スピロソーマ・リングアレ（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｌｉｎｇｕａｌｅ）およびジオバチルス・トエビー（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｏｅｂｉｉ）からなる群から選択される１種以上である。
【００３２】
本発明のさらに他の態様によれば、本発明は、抗菌剤を空調装置内に塗布または噴射する段階を含む、空調装置内の悪臭誘発微生物の生育抑制方法を提供する。
【００３３】
本発明で利用可能な抗菌剤は、ペロモナス・プラクアエ（Ｐｅｌｏｍｏｎａｓ  ｐｕｒａｑｕａｅ）、スピロソーマ・ラジオトレランス（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｒａｄｉｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、フィブレラ・アエスチュアリナ（Ｆｉｂｒｅｌｌａ  ａｅｓｔｕａｒｉｎａ）、クリセオバクテリウム・ジオカルポスファエラエ（Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｅｏｃａｒｐｏｓｐｈａｅｒａｅ）、スピロソーマ・リングアレ（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｌｉｎｇｕａｌｅ）およびジオバチルス・トエビー（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｏｅｂｉｉ）からなる群から選択される１種以上の微生物に対する抗菌性を保有するものと判別されるか判別され得る抗菌剤はいずれも適用可能である。
【００３４】
上記抗菌剤は、空調装置内に塗布または噴射されて上記悪臭誘発微生物またはそれを含む微生物の生育を抑制し、上記塗布または噴射は、気体状、液体状、ゲル状、または固体状を懸濁した懸濁液などを含めて、当業界に公知の様々な形態とすることができる。
【００３５】
また、上記塗布または噴射は、空調装置内部の表面または内部構成の一部または全部に行うことができ、好ましくは、空調装置内のエバポレータコアに塗布または噴射する。上記生育の抑制に関して、既に上記悪臭誘発微生物がバイオフィルムを形成した状態で塗布または噴射したり、上記悪臭誘発微生物がバイオフィルムを形成する前に生育予防の側面で塗布または噴射することができる。
【００３６】
本発明のさらに他の態様によれば、本発明は、抗菌剤を空調装置内に塗布または噴射する段階を含む空調装置内の悪臭除去方法を提供する。
【００３７】
本発明の悪臭除去は、悪臭の全部または一部の除去を含み、悪臭の予防面で悪臭発生前に塗布または噴射することも含む。
【００３８】
空調装置内には様々な微生物が生育しており、それらの微生物は、大きく、悪臭を誘発する微生物と悪臭を誘発しない微生物とに分類できる。したがって、上記抗菌剤が悪臭を誘発する微生物に特異的に作用したり、悪臭を誘発する微生物のうち優占種の全部または一部に生育抑制活性を有する場合、上記空調装置の悪臭を全てまたは一部除去または改善することができる。
【００３９】
本発明のさらに他の態様によれば、本発明は、空調装置内で悪臭誘発微生物を上記空調装置から分離または死滅させる段階を含む空調装置内の悪臭除去方法を提供する。
【００４０】
本発明の分離または死滅は、上記微生物またはそれを含む微生物の全部または一部を物理的、化学的および生物学的方法によって行うことができる。物理的方法としては、上記微生物またはそれを含む微生物を、物理的装置を用いて人為的に分離または死滅することができ、化学的方法としては、上記微生物またはそれを含む微生物に対する抗菌剤または殺菌剤を用いて空調装置から分離させたり死滅させることができ、生物学的方法としては、上記微生物に毒性をもつ生物学的製剤または上記微生物と生存競争関係にある他の微生物を用いて分離または死滅させることができるが、これらの例に制限されることはない。
【００４１】
本発明のさらに他の態様によれば、本発明は、空調装置内で悪臭誘発微生物の生育を抑制させる段階を含む空調装置内の悪臭除去方法を提供する。
【発明の効果】
【００４２】
本発明は、空調装置内の悪臭を誘発する微生物を提供する。また、本発明は、上記微生物を制御できる抗菌剤のスクリーニング方法を提供する。さらに、本発明は、上記微生物を制御して空調装置内の悪臭を除去する方法を提供する。
【００４３】
本発明の空調装置内の悪臭誘発微生物は、新規抗菌剤の開発または上記微生物の代謝産物の化学的性質を究明して悪臭を遮断するための芳香剤の開発に利用することができる。また、空調装置で上記微生物が生息できない環境をあらかじめ作り、根本的に悪臭の原因を除去するための用途に利用できるなど、様々な産業上の有用性がある。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】悪臭発生の中古車のエバポレータコアからサンプリングした試片を示す写真である。
【図２】本発明に係る坑菌度テスト方法を示す図である。
【図３】優占無臭微生物の組合せを、エバポレータコアの材質であるアルミニウムフィンを用いて培養する様子を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
以下、実施例を挙げて本発明をより詳しく説明する。これらの実施例は単に本発明をより具体的に説明するためのものであり、本発明の要旨によって本発明の範囲がこれらの実施例に制限されるわけではないということは、当業界における通常の知識を有する者にとって明らかであろう。
【００４６】
実施例１：悪臭誘発優占微生物の選別
【００４７】
１．悪臭車種の確保および空調装置の分離
【００４８】
本発明者らは、車両内部のような密閉した環境で発生する悪臭の原因を究明するために、季節別（冬期：２〜３月、夏期：６〜７月）に悪臭のする中古車１０種を確保し、それぞれの車両に装着されている空調装置を分離して、空調装置内の悪臭誘発微生物によるバイオフィルムが形成されていると予想されるエバポレータコアを引き離して試片をサンプリングした（表１）。
【００４９】
【表１】
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【００５０】
２．エバポレータコア試片のサンプリング
【００５１】
上記悪臭の中古車１〜１０から確保したエバポレータコアから得たエバポレータコアサンプルを、使用するまで４℃で冷蔵保管するが、ポリエチレン袋に密封して保管した。微生物を分離培養するために、それぞれのエバポレータコアの前面部および後面部を含む任意の部位から、滅菌したラジオペンチを使って各５ｇずつ試料を採取した後、混合して使用した（図１）。
【００５２】
３．微生物の脱離
【００５３】
上記エバポレータコアから採取した試料からの微生物の脱離は、次の過程で行った。
【００５４】
１）エバポレータコアから抽出した試料を混合して攪拌器に入れる。
２）滅菌した１×ＰＢＳ（Phosphate Buffered Saline）２００ｍｌを上記攪拌器に入れる。
３）混合した試料とＰＢＳを３０秒間攪拌する。
４）攪拌器を氷に１分間置く。
５）上記３）〜４）過程を２回さらに繰り返す。
６）懸濁液を４℃で３分間１３，０００ｒｐｍで遠心分離する。
７）上澄液だけを採って新しいチューブに移し入れる。
８）滅菌した綿棒を上澄液に濡らして、サンプルを採取したエバポレータコアの表面を数回ぬぐい取る。
９）ぬぐい取った綿棒は、上澄液にヘッド部分だけを入れてボルテックスする。
１０）上記６）過程で得た沈殿物と９）の混合物とを混合して接種原液として用いる。
【００５５】
上記１）〜１０）の過程を車種１〜１０に装着されているエバポレータコアに対して行ってそれぞれ物理的脱離を施し、微生物を分離した。
【００５６】
４．悪臭誘発微生物の分離および優占種の選別
【００５７】
エアコンの細菌の分離は、通常、一般細菌という好気性従属栄養細菌を従属栄養平板培養により分離する。一般細菌の分離は、ＰＴＹＧ寒天培地およびＲ２Ａ寒天培地の複合栄養培地を用いて２８〜３０℃で１４日間培養（ＰＴＹＧ寒天培地はペプトン０．２５ｇ（Ｄｉｆｃｏ社製）、トリプトン０．２５ｇ（Ｄｉｆｃｏ社製）、酵母エキス０．５ｇ（Ｄｉｆｃｏ社製）、グルコース０．５ｇ（Ｄｉｆｃｏ社製）、ＭｇＳＯ４  ３０ｍｇ（Ｓｉｇｍａ社製）、ＣａＣｌ２  ３ｍｇ（Ｓｉｇｍａ社製）、バクトアガー１５ｍｇ（Ｄｉｆｃｏ社製）を蒸留水９８０ｍｌに入れてｐＨ７．０に調整した後、１２１℃で１５分間高圧滅菌して使用し、Ｒ２Ａ寒天培地は、酵母エキス０．５ｇ（Ｄｉｆｃｏ社製）、プロテオースペプトンＮｏ．３  ０．５ｇ（Ｄｉｆｃｏ社製）、カザミノ酸０．５ｇ（Ｄｉｆｃｏ社製）、デキストロース０．５ｇ（Ｄｉｆｃｏ社製）、可溶性デンプン０．５ｇ（Ｄｉｆｃｏ社製）、ピルビン酸ナトリウム０．３ｇ（Ｄｉｆｃｏ社製）、硫酸二カリウム０．３ｇ（Ｄｉｆｃｏ社製）、硫酸マグネシウム０．０５ｇ（Ｄｉｆｃｏ社製）、バクトアガー１５ｇ（Ｄｉｆｃｏ社製）を蒸留水９８０ｍｌに入れてｐＨ７．２に調整した後（最終１０００ｍｌ）、１２１℃で１５分間高圧滅菌して使用）し、非優占細菌の分離のためにカナマイシン、アンピシリンおよびクロラムフェニコールを１００ｐｐｍ濃度でフィルタ滅菌した後、培地温度が５０℃になった時に接種して抗菌剤の培地を製作した。
【００５８】
優占菌株を分離培養するために、まず希釈比率とコロニーの色、大きさ、形状など形態学的なアプローチによって様々な優占菌株を選別した。
【００５９】
１）分離培養された培地からかびとバクテリアを分けて分離する。
２）形態学的に異なる様々な細菌を、ループを用いて複合培地に接種して純粋分離する。
３）接種された培地のうちの最も生育の良い培地を選択して継代培養する。
４）かびは、菌糸の終端部を、外科用メスを用いて分離した後、複合培地に接種する。
５）かび菌株も、接種された培地のうちの最も生育の良い培地を選択して継代培養する。
【００６０】
５．優占微生物の同定
【００６１】
上記分離微生物の正確な同定のために、次の段階を含む１６Ｓ  ｒＲＮＡの同定を行った。
【００６２】
ａ）ＲＥＰ−ＰＣＲパターン分析によるフィンガープリントの調査
【００６３】
ＲＥＰ−ＰＣＲは、細菌染色体の構造を分析する分子生物学的方法であって、各細菌菌株と他の細菌を分けて識別できるフィンガープリント方法である。ＲＥＰ−ＰＣＲを行うために下記の各手順によって遺伝的特性を分析した。
【００６４】
（１）細胞溶解の手順
【００６５】
１）Ｌｙｓｅ−Ｎ−Ｇｏ  ＰＣＲ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ社製）２．５μｌをＰＣＲチューブに入れる。
２）クリーンベンチでコロニーをピペットで採って上記チューブに入れてピペッティングする。この時、採る量は、溶液がやや濁ることのないように注意する。
３）製造業者の指示に従ってＰＣＲ装置で培養する。
【００６６】
（２）ＰＣＲ反応
【００６７】
下記表２に記載する成分を用いて、下記表３に記載するように、９３℃で７分の予備変性段階、９２℃で１分の変性段階、５１．５℃で１分のアニーリング、６５℃で８分間の伸長段階を行い、変性、アニーリング、伸長過程を３３回繰り返してＰＣＲ増幅過程を行った。
【００６８】
【表２】
2019503173.tif 000004
【表３】
2019503173.tif 000005
【００６９】
（３）ゲル電気泳動
【００７０】
それぞれのＰＣＲによって増幅されたＤＮＡ断片を採取し、ＥｔＢｒを添加した１．２〜１．５％のアガロースゲルを使用し、６×色素とサンプルを１：５の比率で混合して、できるだけ多くローディングした。大部分のＰＣＲ産物は１００〜１０００ｂｐであるため、１００ｂｐのラダーを共にローディングして、できるだけゆっくり（５０Ｖ）ブロモフェノールブルーとキシレンシアノール色素の中間がゲル全体の中間となるように電気泳動した。ゲル上のＤＮＡパターンが同じ菌株は同一菌株と見なした。
【００７１】
ｂ）エアコンの優占バクテリアの１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子分析による同定
【００７２】
１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子は、バクテリアの遺伝学的分類を同定するために用いられ、ＲＥＰ−ＰＣＲにより分類されたバクテリアの属および種のレベルでの同定が可能である。
【００７３】
（１）細胞溶解の手順
【００７４】
１）Ｌｙｓｅ−Ｎ−Ｇｏ  ＰＣＲ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ社製）５μｌをＰＣＲチューブに入れる。
２）クリーンベンチでコロニーをピペットで採り、上記チューブに入れてピペッティングする。このとき、採った量は、溶液が少し濁る程度にする。
３）製造業者の指示に従ってＰＣＲ装置で溶解する（表４）。
【００７５】
【表４】
2019503173.tif 000006
（２）１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子ＰＣＲ
【００７６】
ＰＣＲ条件（合計５０μｌ）：ＤＮＡとＴａｑを除いた残り溶液を下記表５のように必要量だけ混合し、上記溶解溶液に４４．５μｌを加えた。その後、表６に記載するように、９４℃で５分の予備変性段階、９４℃で１分の変性段階、５５℃で１分のアニーリング、７２℃で１分３０秒の伸長段階を行い、変性、アニーリングおよび伸長段階を２９回施してＰＣＲ増幅過程を行った。
【００７７】
【表５】
2019503173.tif 000007
【表６】
2019503173.tif 000008
（３）ＰＣＲ精製
【００７８】
１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子のＰＣＲにより増幅した産物を、Ｑｉａｑｕｉｃｋ  ＰＣＲ  ｐｕｒｉｆｃａｔｉｏｎ  ｋｉｔを用いて下記の手順により精製した。
【００７９】
１）ＰＣＲ産物の５倍のＰＢバッファーを入れる。
２）混合した液をＱＩＡｑｕｉｃｋカラムに分注する。
３）ＤＮＡを結合するために１分間遠心分離し、通過した混合液を除去する。
４）洗浄のために７５０μｌのＰＥバッファーをＱＩＡｑｕｉｃｋカラムに入れて１分間遠心分離し、通過した混合液を除去する。
５）１分間再び遠心分離する。
６）ＱＩＡｑｕｉｃｋカラムを新しいチューブに移す。
７）ＤＮＡを抽出するために３０μｌのＥＢバッファーを入れて１分間置く。
８）１分間遠心分離して、ＥＢに溶けたＤＮＡをチューブに集める。
【００８０】
上記実験の結果、純粋分離した微生物から悪臭が発生したか否かを確認するために次のような方法で培養して官能評価を実施した。
【００８１】
１）純粋分離され培養された微生物を液体栄養培地に接種する。
２）接種された培地を２８℃で５〜７日間培養する。
３）固体栄養培地に、液体培地で培養された菌体を１００μｌ採って接種する。
４）接種した菌体を、スプレッダーを用いて均一に広げる。
５）ペトリ皿を密封して２８℃で１０日間培養する。
【００８２】
官能評価は、５点尺度法を用いて総７人のパネリストから臭い強度を評価してもらい、その平均値を用いて悪臭誘発の優占微生物を選別し、上記１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子の分析による同定によって下記表７のような合計6種類の優占種を同定し、それらを韓国微生物保存センターに２０１５年４月１７日付で寄託した。
【００８３】
【表７】
2019503173.tif 000009
【００８４】
実施例２：選別された悪臭誘発微生物に対する抗菌剤別の抗菌度の評価
【００８５】
１．実験過程
【００８６】
本発明者らは、現在市販されている種々の抗菌剤を用いて、上記実施例１で選別された優占微生物に対する抗菌度を評価した。本発明で利用した抗菌剤は次のとおりである。
【００８７】
Ａ抗菌剤：キムケア（ユハンキンバリー社製）
Ｂ抗菌剤：ファブリーズ（Ｐ＆Ｇ社製）
Ｃ抗菌剤：メチルアルコール４５〜５０％、硫酸クロム（ＣＡＳ １０１０１−５３−８）１〜５％、ブロム系１〜５％および水を含む量産抗菌剤
【００８８】
抗菌度の評価は次の段階により施した。
【００８９】
１）滅菌された濾過紙を準備
２）３種類の抗菌剤を準備（対照群：抗菌剤の無処理群、実験群：抗菌剤Ａ、抗菌剤Ｂ、抗菌剤Ｃ）
３）抗菌剤に濾過紙を投入
４）それぞれの悪臭誘発微生物を栄養培地に塗布
５）悪臭誘発微生物が塗布された栄養培地に、それぞれの抗菌剤が含まれた濾過紙を載せる
６）２８〜３０℃で５日間培養
７）生育抑制区域を測定
【００９０】
上記生育抑制区域の測定は、ノギスを用いて生育抑制区域の直径を測定したが、その具体的な方法は図２に示す。
【００９１】
２．実験結果
【００９２】
悪臭誘発微生物６種に対してそれぞれ３回ずつ上記方法により実験して生育抑制区域の直径を測定し、その平均値を表８に示す。
【００９３】
【表８】
2019503173.tif 000010
【００９４】
表８から、抗菌剤Ａの場合、クリセオバクテリウム・ジオカルポスファエラエに対しては抗菌力が相対的に弱く、抗菌剤Ｂの場合、フィブレラ・アエスチュアリナに対しては抗菌力が強い方であるが、クリセオバクテリウム・ジオカルポスファエラエに対しては弱い抗菌力を発揮することが分かる。
【００９５】
また、抗菌剤Ｃの場合は、ジオバチルス・トエビーに対して抗菌力が相対的に弱いが、６種の微生物全てに対して全般的に抗菌剤ＡおよびＢに比べて高い抗菌力を発揮することが確認できた。
【００９６】
実施例３：悪臭誘発微生物が除去されたエバポレータコアに対する臭い評価
【００９７】
本発明者らは、悪臭微生物が除去または分離された状態のエバポレータコアを得るために、上記エバポレータコアに生息する優占微生物のうち、実施例１の悪臭微生物を除く無臭微生物の組合せを、エバポレータコアの材質であるアルミニウムフィンを用いて培養した（表９、図３）。
【００９８】
無臭微生物としては、上記エバポレータコアに生息する微生物の中で培養時にコロニーを形成する微生物のうち悪臭を誘発しない優占種を選定し、培養方法は下記のようにした。
【００９９】
１）純粋分離され培養された無臭微生物をＲ２Ａ液体培地に接種する。
２）接種された培地を２８℃で５〜７日間培養する。
３）１２１℃で２０分間高圧滅菌したアルミニウムフィンを準備する。
４）それぞれの抗菌剤に浸漬して表面を均一にコーティングする。
５）コーティングされたアルミニウムフィンをペトリ皿に載せる。
６）培養された無臭微生物の接種液１ｍｌを遠心分離して上澄液を捨てる。
７）滅菌された１×ＰＢＳを１ｍｌ入れて再び遠心分離する。
８）上記７）の方法を２回繰り返す。
９）ＰＢＳで洗浄した無臭微生物を１００μｌずつアルミニウムフィンの中間に落とす。
１０）準備されたアルミニウムフィン上に接種して室温で乾かす。
１１）ペトリ皿を密封して２８℃で1ヶ月間培養する。
【０１００】
その結果、１ヵ月後に、下記表９（悪臭微生物が除去されたエバポレータコア生息微生物の培養時の臭い評価の結果）の組合せにおいていずれも悪臭がしないことが判明された。
【０１０１】
【表９】
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2019503173.tif 000012
【０１０２】
上記の実験結果のように、空調装置内に生息している微生物のうちの悪臭誘発微生物を化学的または物理的方法などを用いて除去し、悪臭を誘発しない微生物だけで組合せを形成すると、空調装置から発生する悪臭を有意に除去することができる。
【０１０３】
以上、本発明の特定の部分を詳しく記述してきたが、当業界における通常の知識を有する者にとって、このような具体的な記述は単なる好ましい実施例に過ぎないもので、それに本発明の範囲が制限されることはないということは明らかである。したがって、本発明の実質的な範囲は添付の請求項およびその同等物によって定義されるべきであろう。
【０１０４】
2019503173.tif 000013
【０１０５】
2019503173.tif 000014
【０１０６】
2019503173.tif 000015
【０１０７】
2019503173.tif 000016
【０１０８】
2019503173.tif 000017
【０１０９】
2019503173.tif 000018
【０１１０】
2019503173.tif 000019
【０１１１】
2019503173.tif 000020
【０１１２】
2019503173.tif 000021
【０１１３】
2019503173.tif 000022
【０１１４】
2019503173.tif 000023
【０１１５】
2019503173.tif 000024
【図１】
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【図２】
2019503173.tif 000026
【図３】
2019503173.tif 000027
【配列表】
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【国際調査報告】
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2019503173.tif 000029
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