(57)【要約】  本開示は、ＳＬＣ３４Ａ２の細胞外領域へ特異的に結合する、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート（例えば、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−ポリマー−薬物コンジュゲート）、並びに様々な治療的、診断的、及び予防的適用における、かかるコンジュゲートの使用方法を提供する。【選択図】図１
2019508456.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＬＣ３４Ａ２の細胞外領域に特異的に結合する単離された抗体、及び単離された抗体に結合された１又は複数のＤ担持ポリマースカフォールドを含有するコンジュゲートであって、ここで１又は複数のＤ担持ポリマースカフォールドの各々は、独立して、式（Ｉｃ）であり：
【化１】
2019508456.tif 000078
（Ｉｃ）
式中、スカフォールドは、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲にある分子量を有するポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチル−ホルマール）（ＰＨＦ）であり；
Ｄの各々は、独立して、分子量≦５ｋＤａを有する治療薬であり；
ＬD1は、カルボニル含有部分であり；
【化２】
2019508456.tif 000079
における
【化３】
2019508456.tif 000080
の各々は、独立して、生分解性結合を含む第一リンカーであり、これによりこの結合が破壊されたときに、Ｄは、意図する治療効果のために活性型で放出される；並びに、
【化４】
2019508456.tif 000081
中のＬD1とＤの間の
【化５】
2019508456.tif 000082
は、ＤのＬD1への直接又は間接の結合を意味し；
【化６】
2019508456.tif 000083
の各々は、独立して、単離された抗体と未だ結合されていない第二リンカーであり、ここでＬP2は、単離された抗体の官能基と共有結合を未だ形成していない官能基を含む部分であり、及び、ＬD1とＬP2の間の
【化７】
2019508456.tif 000084
は、ＬP2のＬD1への直接又は間接の結合を意味し、そして、第二リンカーの各々は、第一リンカーの各々とは異なり；
【化８】
2019508456.tif 000085
の各々は、独立して、各Ｄ担持ポリマースカフォールドを単離された抗体へ結合する第三リンカーであり、ここでＬP2へ結合した末端
【化９】
2019508456.tif 000086
は、ＬP2の官能基と単離された抗体の官能基の間の共有結合の形成における、ＬP2の単離された抗体への直接又は間接の結合を意味し、そして、第三リンカーの各々は、第一リンカーの各々とは異なり；
ｍは、１〜約３００の整数であり；
ｍ1は、１〜約１４０の整数であり；
ｍ2は、１〜約４０の整数であり；
ｍ3は、０〜約１８の整数であり；
ｍ4は、１〜約１０の整数であり；
ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3、及びｍ4の合計は、１５〜３００の範囲にあり；並びに
単離された抗体に結合されたＬP2の総数は、１０以下である、コンジュゲート。
【請求項２】
前記ＳＬＣ３４Ａ２の細胞外領域へ特異的に結合する単離された抗体が、アミノ酸配列GYTFTGYNIH（配列番号５）を含む可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、アミノ酸配列AIYPGNGDTSYKQKFRG（配列番号６）を含む可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）、アミノ酸配列GETARATFAY（配列番号７）を含む可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）、アミノ酸配列SASQDIGNFLN（配列番号８）を含む可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）、アミノ酸配列YTSSLYS（配列番号９）を含む可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）、アミノ酸配列QQYSKLPLT（配列番号１０）を含む可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）を含む、請求項１記載のコンジュゲート。
【請求項３】
前記ＳＬＣ３４Ａ２の細胞外領域へ特異的に結合する単離された抗体が、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変配列及び配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列を含む、請求項１又は２記載のコンジュゲート。
【請求項４】
前記ＳＬＣ３４Ａ２の細胞外領域へ特異的に結合する単離された抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１〜３のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項５】
前記ＳＬＣ３４Ａ２の細胞外領域へ特異的に結合する単離された抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１〜４のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項６】
前記ＳＬＣ３４Ａ２の細胞外領域へ特異的に結合する単離された抗体が、ウサギ、マウス、キメラ、ヒト化又は完全ヒトのモノクローナル抗体である、請求項１〜５のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項７】
前記ＳＬＣ３４Ａ２の細胞外領域へ特異的に結合する単離された抗体が、ＩｇＧアイソタイプである、請求項１〜６のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項８】
前記ＳＬＣ３４Ａ２の細胞外領域へ特異的に結合する単離された抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプである、請求項１〜７のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項９】
前記単離された抗体が、アミノ酸配列GYTFTGYNIH（配列番号５）を含む可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、アミノ酸配列AIYPGNGDTSYKQKFRG（配列番号６）を含む可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）、アミノ酸配列GETARATFAY（配列番号７）を含む可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）、アミノ酸配列SASQDIGNFLN（配列番号８）を含む可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）、アミノ酸配列YTSSLYS（配列番号９）を含む可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）、アミノ酸配列QQYSKLPLT（配列番号１０）を含む可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）を含む単離された抗体と、ヒトＮａＰｉ２ｂへの特異的結合について競合する、請求項１〜８のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項１０】
前記単離された抗体が、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変配列及び配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変配列を含む単離された抗体、又は配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む単離された抗体と、ヒトＮａＰｉ２ｂへの特異的結合について競合する、請求項１〜８のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項１１】
前記ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3及びｍ4の合計が、１５〜１５０の範囲にあり、ｍ1が、１〜７０の整数であり、ｍ2が、１〜２０の整数であり、ｍ3が、０〜１０の整数であり、並びに、ＰＨＦが、約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有する、請求項１〜１０のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項１２】
前記ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3及びｍ4の合計が、２０〜１１０の範囲にあり、ｍ1が、２〜５０の整数であり、ｍ2が、２〜１５の整数であり、ｍ3が、０〜８の整数であり；並びに、ＰＨＦが、約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有する、請求項１〜１１のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項１３】
前記ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3及びｍ4の合計が、４０〜７５の範囲にあり、ｍ1が、２〜３５の整数であり、ｍ2が、２〜１０の整数であり、ｍ3が、０〜５の整数であり；並びに、ＰＨＦが、約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有する、請求項１〜１２のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項１４】
前記ＬP2の官能基が、-ＳＲp、−Ｓ−Ｓ−ＬＧ、
【化１０】
2019508456.tif 000087
及び、ハロから選択され、ここでＬＧは、脱離基であり、Ｒpは、Ｈ又は硫黄保護基であり、並びにＸa及びＸbの一方はＨであり、且つ他方は水溶性マレイミドブロッキング部分であるか、或いはＸa及びＸbはそれらが結合した炭素原子と一緒に、炭素−炭素二重結合を形成する、請求項１〜１３のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項１５】
前記ＬD1が、
【化１１】
2019508456.tif 000088
のカルボニル基に直接結合されたＸを伴う−Ｘ−（ＣＨ2）v−Ｃ（＝Ｏ）−を含み、ここでＸは、ＣＨ2、Ｏ、又はＮＨであり、及びｖは、１〜６の整数である、請求項１〜１４のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項１６】
前記
【化１２】
2019508456.tif 000089
の各々が、独立して、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ2）v−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ2）u−ＮＨＣ（＝Ｏ）−（ＣＨ2）w−（ＯＣＨ2）x−ＮＨＣ（＝Ｏ）−（ＣＨ2）y−Ｍであり、ここで、Ｘは、ＣＨ2、Ｏ、又はＮＨであり、ｖ、ｕ、ｗ、ｘ及びｙの各々は、独立して、１〜６の整数であり、並びにＭは、
【化１３】
2019508456.tif 000090
であり、ここでＸa及びＸbの一方はＨであり、且つ他方は水溶性マレイミドブロッキング部分であるか、或いはＸa及びＸbはそれらが結合した炭素原子と一緒に、炭素−炭素二重結合を形成する、請求項１〜１５のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項１７】
前記ｖ、ｕ、ｗ、ｘ及びｙの各々が、２である、請求項１〜１６のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項１８】
前記Ｄの各々が、ビンカ・アルカロイド、アウリスタチン、ツブリシン、デュオカルマイシン、カリケアマイシン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ＰＩ３キナーゼ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＫＳＰ阻害剤、ピロロベンゾジアゼピン、非天然のカンプトテシン、メイタンシノイド、ＤＮＡ結合性薬物、ＤＮＡアルキル化剤、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤、及びそれらのアナログから独立して選択される、請求項１〜１７のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項１９】
前記１又は複数のＤ担持ポリマースカフォールドの各々が、独立して、式（Ｉｄ）：
【化１４】
2019508456.tif 000091
（Ｉｄ）
であり、式中：
ｍ3aは、０〜約１７の整数であり、
ｍ3bは、１〜約８の整数であり、並びに
末端
【化１５】
2019508456.tif 000092
は、１又は複数のポリマースカフォールドの単離された抗体への直接の結合を意味する、請求項１〜１８のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項２０】
前記１又は複数のＤ担持ポリマースカフォールドの各々が、独立して、式（Ｉｆ）：
【化１６】
2019508456.tif 000093
（Ｉｆ）
であり、式中：
ｍは、１〜約３００の整数であり；
ｍ1は、１〜約１４０の整数であり；
ｍ2は、１〜約４０の整数であり；
ｍ3aは、０〜約１７の整数であり；
ｍ3bは、１〜約８の整数であり；
ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜約１８の範囲にあり；並びに
ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a、及びｍ3bの合計は、１５〜約３００の範囲にあり；
末端
【化１７】
2019508456.tif 000094
は、１又は複数のポリマースカフォールドの、ＳＬＣ３４Ａ２へ特異的に結合する単離された抗体への結合を意味し、ここでＳＬＣ３４Ａ２へ特異的に結合する単離された抗体は、アミノ酸配列SASQDIGNFLN（配列番号８）を含む可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）、アミノ酸配列YTSSLYS（配列番号９）を含む可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）、アミノ酸配列QQYSKLPLT（配列番号１０）を含む可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）；アミノ酸配列GYTFTGYNIH（配列番号５）を含む可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、アミノ酸配列AIYPGNGDTSYKQKFRG（配列番号６）を含む可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）、アミノ酸配列GETARATFAY（配列番号７）を含む可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）を含む単離された抗体であり、並びに
ＰＨＦと抗体の比が、１０以下である、請求項１記載のコンジュゲート。
【請求項２１】
前記式（Ｉｆ）におけるＰＨＦが、約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有し、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a、及びｍ3bの合計が、約１５〜約１５０の範囲にあり、ｍ1は、１〜約７０の整数であり、ｍ2は、１〜約２０の整数であり、ｍ3aは、０〜約９の整数であり、ｍ3bは、１〜約８の整数であり、ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜約１０の範囲にあり、並びにＰＨＦとＳＬＣ３４Ａ２へ特異的に結合する単離された抗体の比が、２〜約８の整数である、請求項２０記載のコンジュゲート。
【請求項２２】
前記式（Ｉｆ）におけるＰＨＦが、約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有し、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a、及びｍ3bの合計が、約２０〜約１１０の範囲にあり、ｍ1は、２〜約５０の整数であり、ｍ2は、２〜約１５の整数であり、ｍ3aは、０〜約７の整数であり、ｍ3bは、１〜約８の整数であり、ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜約８の範囲にあり、並びにＰＨＦとＳＬＣ３４Ａ２へ特異的に結合する単離された抗体の比が、２〜約８の整数である、請求項２０記載のコンジュゲート。
【請求項２３】
前記式（Ｉｆ）におけるＰＨＦが、約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有し、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a、及びｍ3bの合計が、約４０〜約７５の範囲にあり、ｍ1は、約２〜約３５の整数であり、ｍ2は、約２〜約１０の整数であり、ｍ3aは、０〜約４の整数であり、ｍ3bは、１〜約５の整数であり、ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜約５の範囲にあり、並びにＰＨＦとＳＬＣ３４Ａ２へ特異的に結合する単離された抗体の比が、２〜約８の整数である、請求項２０〜２２のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項２４】
前記式（Ｉｆ）におけるＰＨＦが、約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有し、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a、及びｍ3bの合計が、約４０〜約７５の範囲にあり、ｍ1は、約２〜約３５の整数であり、ｍ2は、約２〜約１０の整数であり、ｍ3aは、０〜約４の整数であり、ｍ3bは、１〜約５の整数であり、ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜約５の範囲にあり、並びにＰＨＦとＳＬＣ３４Ａ２へ特異的に結合する単離された抗体の比が、２〜約６の整数である、請求項２０〜２３のいずれか一項記載のコンジュゲート。
【請求項２５】
請求項１〜２４のいずれか一項記載のコンジュゲート及び医薬として許容し得る担体を含有する、医薬組成物。
【請求項２６】
請求項１記載のコンジュゲートの調製方法であって、ＳＬＣ３４Ａ２へ特異的に結合する単離された抗体を、式（Ｉａ）のＤ担持ポリマースカフォールドと反応させ、これによりコンジュゲートが形成され：
【化１８】
2019508456.tif 000095
（Ｉａ）
式中
ＬD1は、カルボニル含有部分であり；
【化１９】
2019508456.tif 000096
における
【化２０】
2019508456.tif 000097
の各々は、独立して、生分解性結合を含む第一リンカーであり、これによりこの結合が破壊されたときに、Ｄは、意図する治療効果のために活性型で放出される；並びに、
【化２１】
2019508456.tif 000098
中のＬD1とＤの間の
【化２２】
2019508456.tif 000099
は、ＤのＬD1への直接又は間接の結合を意味し；
【化２３】
2019508456.tif 000100
の各々は、独立して、単離された抗体と未だ結合されていない第二リンカーであり、ここでＬP2は、単離された抗体の官能基と共有結合を未だ形成していない官能基を含む部分であり、及び、ＬD1とＬP2の間の
【化２４】
2019508456.tif 000101
は、ＬP2のＬD1への直接又は間接の結合を意味し、そして、第二リンカーの各々は、第一リンカーの各々とは異なり；
ｍは、１〜約３００の整数であり；
ｍ1は、１〜約１４０の整数であり；
ｍ2は、１〜約４０の整数であり；
ｍ3は、０〜約１８の整数であり、並びに
ｍ、ｍ1、ｍ2、及びｍ3の合計は、１５〜約３００の範囲にある、コンジュゲートを調製する方法。
【請求項２７】
緩和を必要とする対象における癌の症状を緩和する方法であって、該方法が、請求項１〜２４のいずれか一項記載のコンジュゲートを、癌の症状を緩和するのに十分量、対象へ投与することを含む、方法。
【請求項２８】
前記対象が、ヒトである、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
前記癌が、卵巣癌、甲状腺癌、結腸直腸癌、肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、乳癌、腎臓癌及び唾液腺導管癌からなる群から選択される、請求項２７又は２８記載の方法。
【請求項３０】
前記癌が、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）及び卵巣癌からなる群から選択される、請求項２７〜２９のいずれか一項記載の方法。
【請求項３１】
前記非小細胞肺癌が非扁平上皮非小細胞肺癌である、請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
前記卵巣癌が、卵巣上皮癌である、請求項３０記載の方法。
【請求項３３】
前記対象へ治療薬を投与することを更に含む、請求項２７〜３２のいずれか一項記載の方法。
【請求項３４】
前記対象が、再発性卵巣癌、白金製剤−感受性卵巣癌、白金製剤−不応性卵巣癌、及び白金製剤−抵抗性卵巣癌から選択された１又は複数の卵巣癌を有する、請求項２７〜３３のいずれか一項記載の方法。
【請求項３５】
前記対象が、進行性卵巣癌を有し、且つ癌を治療するための化学療法を以前に受けたことがない、請求項２７〜３３のいずれか一項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、米国特許法（３５ＵＳＣ）第１１９条（ｅ）の下で、２０１６年３月１５日に出願された米国特許仮出願第６２／３０８，５６７号；２０１６年４月１５日に出願された第６２／３２３，０６８号、及び２０１６年９月２日に出願された第６２／３８３，３２４号の優先権及び利益を請求するものである。これらの各出願の内容は、それらの全体が引用により本明細書中に組込まれている。
【０００２】
開示の分野
本開示は一般に、ＳＬＣ３４Ａ２の細胞外領域へ特異的に結合する、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート（例えば、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−ポリマー−薬物コンジュゲート）、並びに治療薬及び／又は診断薬としてのこれらのコンジュゲートの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
ＮａＰｉ２ｂ（ＳＬＣ３４Ａ２、ＮａＰｉＩＩｂ、Ｎｐｔ２）である、複数回膜貫通型ナトリウム依存性リン酸輸送体（Xuら、Genomics, 62:281-284 (1999)）は、哺乳動物小腸の刷子縁膜に通常発現され、且つ経細胞無機リン酸（Ｐｉ）吸収に加担し、体内のリン酸ホメオスタシスの維持に寄与する。タンパク質レベルでのＮａＰｉ２ｂの発現は、肝臓において、乳房、唾液腺の上皮細胞の頂端膜側で、並びに肺、精巣、唾液腺、甲状腺、小腸、及び子宮において、検出されている。ＮａＰｉ２ｂの突然変異は、肺胞及び精巣の微石症の臨床症候群に関連づけられている。ＮａＰｉ２ｂは、非扁平上皮非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、非粘液性卵巣癌及び甲状腺乳頭癌において、高度に発現される。ＮａＰｉ２ｂ−陽性組織の免疫反応性は、ＮＳＣＬＣ標本の６１％、及び卵巣癌標本の９２％に存在する。
【０００４】
卵巣癌は、最も一般的な婦人科悪性腫瘍の一つであり、女性において５番目に最も頻出する癌死である。高い致死率は一部、進行した病期で卵巣癌が診断されることが多い結果であり、且つその致死率は、罹患率のおよそ６５％である。卵巣の上皮腫瘍は、全ての卵巣新生物の５８％、及び卵巣悪性腫瘍の９０％以上を構成している。デバルキング手術及び白金製剤ベースの併用化学療法（タキサンを含む）は、現在の治療様式であるが；しかし、卵巣上皮癌の再発した患者の大半は、最終的には本疾患により死に至る。モノクローナル抗体又は癌ワクチン−ベースのアプローチによる免疫療法などの、標的化療法を含む、卵巣癌の新規治療様式の必要性が存在する。
【０００５】
ＮＳＣＬＣは、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）以外の肺上皮癌のいずれかの型である。ＮＳＣＬＣは、全ての肺癌の約８５％を占める。クラスとして、ＮＳＣＬＣは、小細胞癌と比べ、化学療法に対しかなり感受性が悪い。可能である場合は、これらは、治癒を目的とした外科的切除により、主に治療されるが、術前（ネオアジュバント化学療法）及び術後（アジュバント化学療法）の両方を使用する化学療法が増えてきている。転移性又は効力のない状況において、化学療法及び／又は免疫療法が使用されるが、このステージの疾患は大部分治癒できず、且つ生存期間は短期であり続ける。モノクローナル抗体又は癌ワクチン−ベースのアプローチによる免疫療法などの、標的化療法を含む、ＮＳＣＬＣにおける新規治療様式の必要性が存在する。
【０００６】
従って、ＮａＰｉ２ｂの生物学的活性を標的化する療法の必要性が存在する。
【発明の概要】
【０００７】
要約
本開示は、生分解性であり、生体適合性であり、且つ高い薬物負荷並びにＳＬＣ３４Ａ２の細胞外領域への特異的結合を示す、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート（例えば、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−ポリマー−薬物コンジュゲート）を提供する。本明細書に提供されるＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート（例えば、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−ポリマー−薬物コンジュゲート）は、ナトリウム依存型リン酸輸送タンパク質２Ｂとしても公知である、ＮａＰｉ２ｂを特異的に認識する抗体を含む。本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲートにおいて使用される抗体は、ＮａＰｉ２ｂの少なくとも１種の生物活性を修飾、ブロック、阻害、減少、拮抗、中和、又はそうでなければ干渉することが可能であるか又はそれに有用であるものを含むことができるか又は含んでもよい。本明細書に開示された抗体はまた、可溶性ＮａＰｉ２ｂに結合する抗体も含む。
【０００８】
一部の実施態様において、本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、物質と結合して、コンジュゲートを形成することができる。一部の実施態様において、この物質は、治療薬である。一部の実施態様において、この物質は、抗新生物薬である。一部の実施態様において、この物質は、毒素又はその断片である。一部の実施態様において、この物質は、（ａ）アウリスタチン化合物；（ｂ）カリケアマイシン化合物；（ｃ）デュオカルマイシン化合物；（ｄ）ＳＮ３８、（ｅ）ピロロベンゾジアゼピン；（ｆ）ビンカ化合物；（ｇ）ツブリシン化合物；（ｈ）非天然のカンプトテシン化合物；（ｉ）メイタンシノイド化合物；（ｊ）ＤＮＡ結合性薬物；（ｋ）キナーゼ阻害剤；（ｌ）ＭＥＫ阻害剤；（ｍ）ＫＳＰ阻害剤；（ｎ）トポイソメラーゼ阻害剤；（ｏ）ＤＮＡアルキル化剤；（ｐ）ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤；又は、それらのアナログである。一部の実施態様において、この物質は、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体へ、リンカーを介してコンジュゲートされる。一部の実施態様において、リンカーは、切断可能なリンカーである。一部の実施態様において、リンカーは、切断不可能なリンカーである。一部の実施態様において、この物質は、本明細書記載の任意の毒素である。
【０００９】
一態様において、本明細書記載のＮａＰｉ２ｂ標的化抗体コンジュゲートは、１又は複数の治療薬又は診断薬（“Ｄ”）に直接又は間接に結合された、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体を含む。一部の実施態様において、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体コンジュゲートはまた、抗体に結合された１又は複数のポリマースカフォールドを含み、ここで１又は複数のＤの各々は、独立して、１又は複数のポリマースカフォールドを介して抗体に結合されている。
【００１０】
一部の実施態様において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体へ結合されている１又は複数のポリマースカフォールドの各々は、独立して、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチル−ホルマール）（ＰＨＦ）を含み、例えば、分子量約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲を有するＰＨＦを含む。
【００１１】
一部の実施態様において、１又は複数のポリマースカフォールドの各々は、独立して、式（Ｉｃ）であり：
【化１】
2019508456.tif 000003
（Ｉｃ）
式中：
ＬD1は、カルボニル含有部分であり；
【化２】
2019508456.tif 000004
における
【化３】
2019508456.tif 000005
の各々は、独立して、生分解性結合を含む第一リンカーであり、これによりこの結合が破壊されたときに、Ｄは、意図する治療効果のために活性型で放出される；並びに、
【化４】
2019508456.tif 000006
中のＬD1とＤの間の
【化５】
2019508456.tif 000007
は、ＤのＬD1への直接又は間接の結合を意味し；
【化６】
2019508456.tif 000008
の各々は、独立して、単離された抗体と未だ結合されていない第二リンカーであり、ここでＬP2は、単離された抗体の官能基と共有結合を未だ形成していない官能基を含む部分であり、及び、ＬD1とＬP2の間の
【化７】
2019508456.tif 000009
は、ＬP2のＬD1への直接又は間接の結合を意味し、そして、第二リンカーの各々は、第一リンカーの各々とは異なり；
【化８】
2019508456.tif 000010
の各々は、独立して、各Ｄ担持ポリマースカフォールドを単離された抗体へ結合する第三リンカーであり、ここでＬP2へ結合した末端
【化９】
2019508456.tif 000011
は、ＬP2の官能基と単離された抗体の官能基の間の共有結合の形成における、ＬP2の単離された抗体への直接又は間接の結合を意味し、そして、第三リンカーの各々は、第一リンカーの各々とは異なり；
ｍは、１〜約３００の整数であり；
ｍ1は、１〜約１４０の整数であり；
ｍ2は、１〜約４０の整数であり；
ｍ3は、０〜約１８の整数であり；
ｍ4は、１〜約１０の整数であり；
ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3、及びｍ4の合計は、約１５〜約３００の範囲にあり；並びに
単離された抗体に結合されたＬP2の総数は、１０以下である。
【００１２】
本明細書記載のコンジュゲートは、下記の特徴の１又は複数を含むことができる：
【００１３】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、分子量４０ｋＤａ又はそれよりも大きい（例えば、６０ｋＤａ又はそれよりも大きい、８０ｋＤａ又はそれよりも大きい、１００ｋＤａ又はそれよりも大きい、１２０ｋＤａ又はそれよりも大きい、１４０ｋＤａ又はそれよりも大きい、１６０ｋＤａ又はそれよりも大きい、１８０ｋＤａ又はそれよりも大きい、もしくは２００ｋＤａ又はそれよりも大きい、もしくは約４０〜２００ｋＤａ、４０〜１８０ｋＤａ、４０〜１４０ｋＤａ、６０〜２００ｋＤａ、６０〜１８０ｋＤａ、６０〜１４０ｋＤａ、８０〜２００ｋＤａ、８０〜１８０ｋＤａ、８０〜１４０ｋＤａ、１００〜２００ｋＤａ、１００〜１８０ｋＤａ、１００〜１４０ｋＤａ、もしくは１４０〜１５０ｋＤａ）を有する。一部の実施態様において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体又は本開示の任意の抗体は、非限定的な例として、本明細書記載のＸＭＴ１５３５抗体及び１０Ｈ１．１１．４Ｂ抗体を含む。
【００１４】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、ヒトＮａＰｉ２ｂのエピトープへ特異的に結合する。一部の実施態様において、単離された抗体は、ヒトＮａＰｉ２ｂの細胞外ドメイン上のエピトープへ特異的に結合する。
【００１５】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、本明細書記載のＸＭＴ１５３５抗体及び／又は１０Ｈ１．１１．４Ｂ抗体、並びにそれらのバイオシミラーである。或いは、このモノクローナル抗体は、同じエピトープに結合する抗体及び／又は本開示の抗体もしくはそれらのバイオシミラーを交差ブロックする抗体である。これらの抗体は、各々、本明細書において「ＮａＰｉ２ｂ抗体」又は「ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体」と称される。ＮａＰｉ２ｂ抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体、並びにヒト化モノクローナル抗体及びキメラ抗体を含む。これらの抗体は、ヒトＮａＰｉ２ｂに対する特異性を示し、且つこれらは少なくとも１種のＮａＰｉ２ｂ活性を修飾、ブロック、阻害、減少、拮抗、中和又はそうでなければ干渉することができるか又はそうしてよい。
【００１６】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、モノクローナル抗体である。
【００１７】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、ウサギ、マウス、キメラ、ヒト化又は完全ヒトモノクローナル抗体である。
【００１８】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、ＩｇＧアイソタイプである。一部の実施態様において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプである。
【００１９】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、アミノ酸配列GYTFTGYNIH（配列番号５）と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）；アミノ酸配列AIYPGNGDTSYKQKFRG（配列番号６）と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）；並びに、アミノ酸配列GETARATFAY（配列番号７）と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）を含む。例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、アミノ酸配列SASQDIGNFLN（配列番号８）と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）；アミノ酸配列YTSSLYS（配列番号９）と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）；並びに、アミノ酸配列QQYSKLPLT（配列番号１０）と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）を含む。
【００２０】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、アミノ酸配列GYTFTGYNIH（配列番号５）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１；アミノ酸配列AIYPGNGDTSYKQKFRG（配列番号６）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２；アミノ酸配列GETARATFAY（配列番号７）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３；アミノ酸配列SASQDIGNFLN（配列番号８）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１；アミノ酸配列YTSSLYS（配列番号９）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２；並びに、アミノ酸配列QQYSKLPLT（配列番号１０）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む。
【００２１】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、アミノ酸配列GYTFTGYNIH（配列番号５）を含む可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）；アミノ酸配列AIYPGNGDTSYKQKFRG（配列番号６）を含む可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）；及び、アミノ酸配列GETARATFAY（配列番号７）を含む可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）を含む。例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、アミノ酸配列SASQDIGNFLN（配列番号８）を含む可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）；アミノ酸配列YTSSLYS（配列番号９）を含む可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）；及び、アミノ酸配列QQYSKLPLT（配列番号１０）を含む可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）を含む。
【００２２】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、アミノ酸配列GYTFTGYNIH（配列番号５）を含むＣＤＲＨ１；アミノ酸配列AIYPGNGDTSYKQKFRG（配列番号６）を含むＣＤＲＨ２；アミノ酸配列GETARATFAY（配列番号７）を含む可変ＣＤＲＨ３；アミノ酸配列SASQDIGNFLN（配列番号８）を含むＣＤＲＬ１；アミノ酸配列YTSSLYS（配列番号９）を含むＣＤＲＬ２；及び、アミノ酸配列QQYSKLPLT（配列番号１０）を含むＣＤＲＬ３を含む。
【００２３】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）領域を含む。例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）領域を含む。
【００２４】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。
【００２５】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）領域を含む。一部の実施態様において、本明細書に開示された抗体−薬物コンジュゲートにおいて使用されるそれらの本明細書に開示された抗体−薬物コンジュゲートにおいて使用される抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）領域を含む。
【００２６】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。
【００２７】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００２８】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００２９】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００３０】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００３１】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、アミノ酸配列GFSFSDFAMS（配列番号１８）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）；アミノ酸配列ATIGRVAFHTYYPDSMKG（配列番号１９）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）；及び、アミノ酸配列ARHRGFDVGHFDF（配列番号２０）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）を含む。例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、アミノ酸配列RSSETLVHSSGNTYLE（配列番号２１）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）；アミノ酸配列RVSNRFS（配列番号２２）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）；及び、アミノ酸配列FQGSFNPLT（配列番号２３）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）を含む。
【００３２】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、アミノ酸配列GFSFSDFAMS（配列番号１８）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１；アミノ酸配列ATIGRVAFHTYYPDSMKG（配列番号１９）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２；アミノ酸配列ARHRGFDVGHFDF（配列番号２０）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３；アミノ酸配列RSSETLVHSSGNTYLE（配列番号２１）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１；アミノ酸配列RVSNRFS（配列番号２２）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２；及び、アミノ酸配列FQGSFNPLT（配列番号２３）と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を含む。
【００３３】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、アミノ酸配列GFSFSDFAMS（配列番号１８）を含む可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）；アミノ酸配列ATIGRVAFHTYYPDSMKG（配列番号１９）を含む可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）；及び、アミノ酸配列ARHRGFDVGHFDF（配列番号２０）を含む可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）を含む。例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、アミノ酸配列RSSETLVHSSGNTYLE（配列番号２１）を含む可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）；アミノ酸配列RVSNRFS（配列番号２２）を含む可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）；及び、アミノ酸配列FQGSFNPLT（配列番号２３）を含む可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）を含む。
【００３４】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、アミノ酸配列GFSFSDFAMS（配列番号１８）を含むＣＤＲＨ１；アミノ酸配列ATIGRVAFHTYYPDSMKG（配列番号１９）を含むＣＤＲＨ２；及び、アミノ酸配列ARHRGFDVGHFDF（配列番号２０）を含むＣＤＲＨ３；アミノ酸配列RSSETLVHSSGNTYLE（配列番号２１）を含むＣＤＲＬ１；アミノ酸配列RVSNRFS（配列番号２２）を含むＣＤＲＬ２；及び、アミノ酸配列FQGSFNPLT（配列番号２３）を含むＣＤＲＬ３を含む。
【００３５】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）領域を含む。例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）領域を含む。
【００３６】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。
【００３７】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む可変重鎖（ＶＨ）領域を含む。例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖（ＶＬ）領域を含む。
【００３８】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を含む。
【００３９】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００４０】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも多く同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００４１】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００４２】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００４３】
例えば、式（Ｉｃ）において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、ヒトＮａＰｉ２ｂへの特異的結合について、（ｉ）アミノ酸配列GYTFTGYNIH（配列番号５）を含む可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）；アミノ酸配列AIYPGNGDTSYKQKFRG（配列番号６）を含む可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）；アミノ酸配列GETARATFAY（配列番号７）を含む可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）；アミノ酸配列SASQDIGNFLN（配列番号８）を含む可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）；アミノ酸配列YTSSLYS（配列番号９）を含む可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）；及び、アミノ酸配列QQYSKLPLT（配列番号１０）を含む可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）、或いは（ｉｉ）アミノ酸配列GFSFSDFAMS（配列番号１８）を含むＣＤＲＨ１；アミノ酸配列ATIGRVAFHTYYPDSMKG（配列番号１９）を含むＣＤＲＨ２；アミノ酸配列ARHRGFDVGHFDF（配列番号２０）を含むＣＤＲＨ３；アミノ酸配列RSSETLVHSSGNTYLE（配列番号２１）を含むＣＤＲＬ１；アミノ酸配列RVSNRFS（配列番号２２）を含むＣＤＲＬ２；及び、アミノ酸配列FQGSFNPLT（配列番号２３）を含むＣＤＲＬ３を含む単離された抗体と、競合する単離された抗体である。
【００４４】
例えば、式（Ｉｃ）において、ｍ1は、１〜約１２０（例えば、約１〜９０）の整数であり、及び／又はｍ3は、１〜約１０（例えば、約１〜８）の整数である。
【００４５】
例えば、式（Ｉｃ）中のＰＨＦが約６ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有する（すなわち、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3、及びｍ4の合計が、約４５〜約１５０の範囲にある）場合、ｍ2は２〜約２０の整数であり、ｍ3は０〜約９の整数であり、ｍ4は１〜約１０の整数であり、及び／又はｍ1は１〜約７５の整数である（例えば、ｍ1は約４〜４５である）。
【００４６】
例えば、式（Ｉｃ）中のＰＨＦが約８ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有する（すなわち、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3、及びｍ4の合計が、約６０〜約１１０の範囲にある）場合、ｍ2は２〜約１５の整数であり、ｍ3は０〜約７の整数であり、ｍ4は１〜約１０の整数であり、及び／又はｍ1は１〜約５５の整数である（例えば、ｍ1は約４〜３０である）。
【００４７】
例えば、式（Ｉｃ）中のＰＨＦが約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有する（すなわち、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3、及びｍ4の合計が、約１５〜約１５０の範囲にある）場合、ｍ2は１〜約２０の整数であり、ｍ3は０〜約１０の整数であり（例えば、ｍ3は０〜約９の範囲にある）、ｍ4は１〜約８の整数であり、及び／又はｍ1は１〜約７０の整数であり、並びに単離された抗体に結合されたＬP2の総数は、約２〜約８の範囲（例えば、約２、３、４、５、６、７、又は８）である。
【００４８】
例えば、式（Ｉｃ）中のＰＨＦが約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有する（すなわち、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3、及びｍ4の合計が、約２０〜約１１０の範囲にある）場合、ｍ2は２〜約１５の整数であり、ｍ3は０〜約８の整数であり（例えば、ｍ3は０〜約７の範囲にある）、ｍ4は１〜約８の整数であり、及び／又はｍ1は２〜約５０の整数であり、並びに単離された抗体に結合されたＬP2の総数は、約２〜約８の範囲（例えば、約２、３、４、５、６、７、又は８）である。
【００４９】
例えば、式（Ｉｃ）中のＰＨＦが約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有する（すなわち、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3、及びｍ4の合計が、約４０〜約７５の範囲にある）場合、ｍ2は約２〜約１０の整数であり（例えば、ｍ2は約３〜１０である）、ｍ3は０〜約５の整数であり（例えば、ｍ3は０〜約４の範囲にある）、ｍ4は１〜約８の整数であり（例えば、ｍ4は１〜約５の範囲にある）、及び／又はｍ1は約２〜約３５の整数であり（例えば、ｍ1は約５〜３５である）、並びに単離された抗体に結合されたＬP2の総数は、約２〜約８の範囲（例えば、約２、３、４、５、６、７、又は８）である。
【００５０】
例えば、Ｄの各々は独立して、例えば分子量≦５ｋＤａを有する治療薬である。
【００５１】
例えば、Ｄの各々は独立して、診断薬又は標識である。
【００５２】
例えば、Ｄの一部の出現は独立して、治療薬（例えば分子量≦５ｋＤａを有する）であり、及びＤの他の出現は、診断薬又は標識である。
【００５３】
例えば、Ｄの各々は独立して、例えば、ビンカ・アルカロイド、アウリスタチン、ツブリシン、デュオカルマイシン、非天然のカンプトテシン化合物、メイタンシノイド、カリケアマイシン化合物、トポイソメラーゼ阻害剤、ピロロベンゾジアゼピン、ＤＮＡ結合性薬物、ＤＮＡアルキル化剤、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤、キナーゼ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＫＳＰ阻害剤、及びそれらのアナログから選択された、抗癌剤である。
【００５４】
例えば、アウリスタチン化合物の各々は、アウリスタチン、ドラスタチン（例えば、ドラスタチン１０又はドラスタチン１５）、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、アウリスタチンＦヒドロキシプロピルアミド（ＡＦＨＰＡ）、モノメチルアウリスタチンＦヒドロキシプロピルアミド（ＡＦＨＰＡ）、又はアウリスタチンＦフェニレンジアミン（ＡＦＰ）である。
【００５５】
例えば、デュオカルマイシン又はそのアナログの各々は、デュオカルマイシンＡ、デュオカルマイシンＢ１、デュオカルマイシンＢ２、デュオカルマイシンＣ１、デュオカルマイシンＣ２、デュオカルマイシンＤ、デュオカルマイシンＳＡ、ＣＣ−１０６５、アドゼレシン、ビゼレシン、又はカルゼレシンである。
【００５６】
例えば、カンプトテシン化合物の各々は、カンプトテシン、ＣＰＴ−１１（イリノテカン）、ＳＮ−３８、又はトポテカンである。
【００５７】
例えば、ピロロベンゾジアゼピン化合物の各々は、ピロロベンゾジアゼピンモノマー、対称のピロロベンゾジアゼピンダイマー、又は非対称のピロロベンゾジアゼピンダイマーである。
【００５８】
例えば、単離された抗体に結合されていない場合の、各
【化１０】
2019508456.tif 000012
は、独立して、末端基ＷPを含み、ここで各ＷPは、独立して以下のものであり：
【化１１】
2019508456.tif 000013
ここで、Ｒ1Kは、脱離基（例えば、ハライド、又はＲが水素、脂肪族、ヘテロ脂肪族、炭素環式、ヘテロシクロアルキル部分であるＲＣ（Ｏ）Ｏ−）であり、Ｒ1Aは、硫黄保護基であり、及び環Ａは、シクロアルキル又はヘテロシクロアルキルであり、及びＲ1Jは、水素、脂肪族、ヘテロ脂肪族、炭素環式、又はヘテロシクロアルキル部分である。
【００５９】
例えば、各Ｒ1Aは、独立して、
【化１２】
2019508456.tif 000014
であり、ここで、ｒは１又は２であり、並びにＲs1、Ｒs2及びＲs3の各々は、水素、脂肪族、ヘテロ脂肪族、炭素環式、又はヘテロシクロアルキル部分である。
【００６０】
例えば、単離された抗体の官能基（抗体のアミノ酸残基上の官能基又は反応性部分、例えば、抗体のシステイン残基又はリジン残基上の官能基など）と未だ共有結合を形成していないＬP2の官能基は、-ＳＲp、−Ｓ−Ｓ−ＬＧ、
【化１３】
2019508456.tif 000015
及び、ハロから選択され、ここでＬＧは、脱離基であり、Ｒpは、Ｈ又は硫黄保護基であり、並びにＸa及びＸbの一方はＨであり、且つ他方は水溶性マレイミドブロッキング部分であるか、或いはＸa及びＸbはそれらが結合した炭素原子と一緒に、炭素−炭素二重結合を形成する。例えば、未だ共有結合を形成していないＬP2の官能基は、単離された抗体の官能基と反応しない官能基であり、例えば、ＬP2の官能基として：
【化１４】
2019508456.tif 000016
（式中、Ｘa及びＸbの一方はＨであり、且つ他方は水溶性マレイミドブロッキング部分であるか、或いはＸa及びＸbである）である。
【００６１】
例えば、ＬD1は、
【化１５】
2019508456.tif 000017
のカルボニル基に直接結合されたＸを伴う−Ｘ−（ＣＨ2）v−Ｃ（＝Ｏ）−を含み、ここでＸは、ＣＨ2、Ｏ、又はＮＨであり、及びｖは、１〜６の整数である。
【００６２】
例えば、
【化１６】
2019508456.tif 000018
の各々が、独立して、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ2）v−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ2）u−ＮＨＣ（＝Ｏ）−（ＣＨ2）w−（ＯＣＨ2）x−ＮＨＣ（＝Ｏ）−（ＣＨ2）y−Ｍであり、ここで、Ｘは、ＣＨ2、Ｏ、又はＮＨであり、ｖ、ｕ、ｗ、ｘ及びｙの各々は、独立して、１〜６の整数であり、並びにＭは、
【化１７】
2019508456.tif 000019
であり、ここでＸa及びＸbの一方はＨであり、且つ他方は水溶性マレイミドブロッキング部分であるか、或いはＸa及びＸbはそれらが結合した炭素原子と一緒に、炭素−炭素二重結合を形成する。
【００６３】
例えば、ｖ、ｕ、ｗ、ｘ及びｙの各々は、２である。
【００６４】
例えば、Ｄと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約２５：１、２４：１、２３：１、２２：１、２１：１、２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６；１、５：１、４：１、３：１、２：１又は１：１である。
【００６５】
例えば、Ｄと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約２０：１、１５：１、１０：１、５：１、２：１又は１：１である。
【００６６】
例えば、Ｄと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１又は１０：１である。
【００６７】
例えば、Ｄと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約１５：１、１４：１、１３：１、１２：１又は１１：１である。
【００６８】
例えば、Ｄと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約１５：１、１４：１、１３：１又は１２：１である。
【００６９】
例えば、Ｄと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約６：１、５：１、４：１、３：１、２：１又は１：１である。
【００７０】
例えば、１又は複数のＤ担持ポリマースカフォールドの各々は、独立して、式（Ｉｄ）：
【化１８】
2019508456.tif 000020
（Ｉｄ）
であり、式中：
ｍ3aは、０〜約１７の整数であり、
ｍ3bは、１〜約８の整数であり、並びに
末端
【化１９】
2019508456.tif 000021
は、１又は複数のポリマースカフォールドの、４０ｋＤａ又はそれよりも大きい分子量を有し、且つ（ｉ）アミノ酸配列GYTFTGYNIH（配列番号５）を含む可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）；アミノ酸配列AIYPGNGDTSYKQKFRG（配列番号６）を含む可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）；アミノ酸配列GETARATFAY（配列番号７）を含む可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）；アミノ酸配列SASQDIGNFLN（配列番号８）を含む可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）；アミノ酸配列YTSSLYS（配列番号９）を含む可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）；及び、アミノ酸配列QQYSKLPLT（配列番号１０）を含む可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）か、又は（ｉｉ）アミノ酸配列GFSFSDFAMS（配列番号１８）を含むＣＤＲＨ１；アミノ酸配列ATIGRVAFHTYYPDSMKG（配列番号１９）を含むＣＤＲＨ２；アミノ酸配列ARHRGFDVGHFDF（配列番号２０）を含むＣＤＲＨ３；アミノ酸配列RSSETLVHSSGNTYLE（配列番号２１）を含むＣＤＲＬ１；アミノ酸配列RVSNRFS（配列番号２２）を含むＣＤＲＬ２；及び、アミノ酸配列FQGSFNPLT（配列番号２３）を含むＣＤＲＬ３である、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体への直接の結合を意味する。
【００７１】
一部の実施態様において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、４０ｋＤａ又はそれよりも大きい分子量を有し、且つ（ｉ）アミノ酸配列GYTFTGYNIH（配列番号５）を含むＣＤＲＨ１；アミノ酸配列AIYPGNGDTSYKQKFRG（配列番号６）を含むＣＤＲＨ２；アミノ酸配列GETARATFAY（配列番号７）を含むＣＤＲＨ３；アミノ酸配列SASQDIGNFLN（配列番号８）を含むＣＤＲＬ１；アミノ酸配列YTSSLYS（配列番号９）を含むＣＤＲＬ２；及び、アミノ酸配列QQYSKLPLT(配列番号:10)を含むCDRL3を含む。
【００７２】
一部の実施態様において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、４０ｋＤａ又はそれよりも大きい分子量を有し、且つアミノ酸配列GFSFSDFAMS（配列番号１８）を含むＣＤＲＨ１；アミノ酸配列ATIGRVAFHTYYPDSMKG（配列番号１９）を含むＣＤＲＨ２；アミノ酸配列ARHRGFDVGHFDF（配列番号２０）を含むＣＤＲＨ３；アミノ酸配列RSSETLVHSSGNTYLE（配列番号２１）を含むＣＤＲＬ１；アミノ酸配列RVSNRFS（配列番号２２）を含むＣＤＲＬ２；及び、アミノ酸配列FQGSFNPLT（配列番号２３）を含むＣＤＲＬ３を含む。
【００７３】
式（Ｉｄ）のスカフォールドは、以下の特徴の１又は複数を含むことができる：
【００７４】
ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜１８である。
【００７５】
式（Ｉｄ）のＰＨＦが約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の分子量を有する場合、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a及びｍ3bの合計は、約１５〜約３００の範囲にあり、ｍ1は１〜約１４０の整数であり、ｍ2は１〜約４０の整数であり、ｍ3aは０〜約１７の整数であり、ｍ3bは１〜約８の整数であり、ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜約１８の範囲にあり；並びにＰＨＦと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、１０以下である。
【００７６】
式（Ｉｄ）のＰＨＦが約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有する場合、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a及びｍ3bの合計は、約１５〜約１５０の範囲にあり、ｍ1は１〜約７０の整数であり、ｍ2は１〜約２０の整数であり、ｍ3aは０〜約９の整数であり、ｍ3bは１〜約８の整数であり、ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜約１０の範囲にあり；並びにＰＨＦと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、２〜約８の整数である。
【００７７】
式（Ｉｄ）のＰＨＦが約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有する場合、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a及びｍ3bの合計は、約２０〜約１１０の範囲にあり、ｍ1は２〜約５０の整数であり、ｍ2は２〜約１５の整数であり、ｍ3aは０〜約７の整数であり、ｍ3bは１〜約８の整数であり、ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜約８の範囲にあり；並びにＰＨＦと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、２〜約８（例えば、約２〜約６又は約２〜約４）の整数である。
【００７８】
式（Ｉｄ）のＰＨＦが約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有する場合、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a及びｍ3bの合計は、約４０〜約７５の範囲にあり、ｍ1は約２〜約３５の整数であり、ｍ2は約２〜約１０の整数であり、ｍ3aは０〜約４の整数であり、ｍ3bは１〜約５の整数であり、ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜約５の範囲にあり；並びにＰＨＦと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、２〜約８（例えば、約２〜約６又は約２〜約４）の整数である。
【００７９】
特定の実施態様において、アウリスタチンＦヒドロキシプロピルアミド（“ＡＦ  ＨＰＡ”）と単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約３０：１、２９：１、２８：１、２７：１、２６：１、２５：１、２４：１、２３：１、２２：１、２１：１、２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１又は６：１であることができる。
【００８０】
特定の実施態様において、ＡＦ  ＨＰＡと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約２５：１、２４：１、２３：１、２２：１、２１：１、２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１又は６：１であることができる。
【００８１】
他の実施態様において、ＡＦ  ＨＰＡと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１又は６：１であることができる。
【００８２】
一部の実施態様において、ＡＦ  ＨＰＡと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１又は１０：１であることができる。
【００８３】
一部の実施態様において、ＡＦ  ＨＰＡと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約１５：１、１４：１、１３：１、１２：１又は１１：１であることができる。
【００８４】
一部の実施態様において、ＡＦ  ＨＰＡと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約１５：１、１４：１、１３：１又は１２：１であることができる。
【００８５】
特定の実施態様において、ＰＨＦと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１又は１：１であることができる。
【００８６】
特定の実施態様において、ＰＨＦと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１又は２：１であることができる。
【００８７】
他の実施態様において、ＰＨＦと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約６：１、５：１、４：１、３：１、２：１又は１：１であることができる。
【００８８】
他の実施態様において、ＰＨＦと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約６：１、５：１、４：１、３：１又は２：１であることができる。
【００８９】
他の実施態様において、ＰＨＦと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約６：１、５：１、４：１又は３：１であることができる。
【００９０】
一部の実施態様において、ＰＨＦと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約５：１、４：１又は３：１であることができる。
【００９１】
一部の実施態様において、ＰＨＦと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、約４：１、３：１又は２：１であることができる。
【００９２】
水溶性マレイミドブロッキング部分（例えば、Ｘa又はＸb）は、マレイミド基の、下記式（ＩＩ）のチオール−含有化合物との反応時に、２個のオレフィン炭素原子の一方に共有的に結合することができる部分であり：
Ｒ90−（ＣＨ2）d−ＳＨ          （ＩＩ）
式中：
Ｒ90は、ＮＨＲ91、ＯＨ、ＣＯＯＲ93、ＣＨ（ＮＨＲ91）ＣＯＯＲ93、又は置換フェニル基であり；
Ｒ93は、水素又はＣ1-4アルキルであり；
Ｒ91は、水素、ＣＨ3、又はＣＨ3ＣＯであり；及び
ｄは、１〜３の整数である。
【００９３】
一実施態様において、式（ＩＩ）の水溶性マレイミドブロッキング化合物は、システイン、Ｎ−アセチルシステイン、システインメチルエステル、Ｎ−メチルシステイン、２−メルカプトエタノール、３−メルカプトプロパン酸、２−メルカプト酢酸、メルカプトメタノール（すなわち、ＨＯＣＨ2ＳＨ）、そのフェニルが１又は複数の親水性置換基により置換されているベンジルチオール、又は３−アミノプロパン−１−チオールであることができる。フェニル上の１又は複数の親水性置換基は、ＯＨ、ＳＨ、メトキシ、エトキシ、ＣＯＯＨ、ＣＨＯ、ＣＯＣ1-4アルキル、ＮＨ2、Ｆ、シアノ、ＳＯ3Ｈ、ＰＯ3Ｈなどを含む。
【００９４】
別の態様において、水溶性マレイミドブロッキング基は、−Ｓ−（ＣＨ2）d−Ｒ90であり、
式中：
Ｒ90は、ＯＨ、ＣＯＯＨ、又はＣＨ（ＮＨＲ91）ＣＯＯＲ93であり；
Ｒ93は、水素又はＣＨ3であり；
Ｒ91は、水素又はＣＨ3ＣＯであり；及び
ｄは、１又は２である。
【００９５】
別の実施態様において、水溶性マレイミドブロッキング基は、−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ（ＮＨ2）ＣＯＯＨである。
【００９６】
特定の実施態様において、本明細書記載のコンジュゲートは、１又は複数のＤ担持ＰＨＦを含み、その各々は、独立して、式（Ｉｆ）であり、ここでＰＨＦは、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの分子量を有し：
【化２０】
2019508456.tif 000022
（Ｉｆ）
式中：
ｍは、１〜約３００の整数であり；
ｍ1は、１〜約１４０の整数であり；
ｍ2は、１〜約４０の整数であり；
ｍ3aは、０〜約１７の整数であり；
ｍ3bは、１〜約８の整数であり；
ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜約１８の範囲にあり；並びに
ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a、及びｍ3bの合計は、１５〜約３００の範囲にあり；
末端
【化２１】
2019508456.tif 000023
は、１又は複数のＰＨＦポリマースカフォールドの、ＳＬＣ３４Ａ２へ特異的に結合する単離された抗体への結合を意味し、ここでＳＬＣ３４Ａ２へ特異的に結合する単離された抗体は、（ｉ）アミノ酸配列GYTFTGYNIH（配列番号５）を含む可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）；アミノ酸配列AIYPGNGDTSYKQKFRG（配列番号６）を含む可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）；アミノ酸配列GETARATFAY（配列番号７）を含む可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）；アミノ酸配列SASQDIGNFLN（配列番号８）を含む可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）；アミノ酸配列YTSSLYS（配列番号９）を含む可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）；及び、アミノ酸配列QQYSKLPLT（配列番号１０）を含む可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）を含むか、或いは（ｉｉ）アミノ酸配列GFSFSDFAMS（配列番号１８）を含むＣＤＲＨ１；アミノ酸配列ATIGRVAFHTYYPDSMKG(配列番号１９）を含むＣＤＲＨ２；アミノ酸配列ARHRGFDVGHFDF（配列番号２０）を含むＣＤＲＨ３；アミノ酸配列RSSETLVHSSGNTYLE（配列番号２１）を含むＣＤＲＬ１；アミノ酸配列RVSNRFS（配列番号２２）を含むＣＤＲＬ２；及び、アミノ酸配列FQGSFNPLT（配列番号２３）を含むＣＤＲＬ３を含む単離された抗体であり；並びに、
ＰＨＦと抗体の比は、１０以下である。
【００９７】
一部の実施態様において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、ＳＬＣ３４Ａ２へ特異的に結合し、且つ（ｉ）アミノ酸配列GYTFTGYNIH（配列番号５）を含むＣＤＲＨ１；アミノ酸配列AIYPGNGDTSYKQKFRG（配列番号６）を含むＣＤＲＨ２；アミノ酸配列GETARATFAY（配列番号７）を含むＣＤＲＨ３；アミノ酸配列SASQDIGNFLN（配列番号８）を含むＣＤＲＬ１；アミノ酸配列YTSSLYS（配列番号９）を含むＣＤＲＬ２；及び、アミノ酸配列QQYSKLPLT（配列番号１０）を含むＣＤＲＬ３を含む。
【００９８】
一部の実施態様において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、ＳＬＣ３４Ａ２へ特異的に結合し、且つ（ｉ）アミノ酸配列GFSFSDFAMS（配列番号１８）を含むＣＤＲＨ１；アミノ酸配列ATIGRVAFHTYYPDSMKG（配列番号１９）を含むＣＤＲＨ２；アミノ酸配列ARHRGFDVGHFDF（配列番号２０）を含むＣＤＲＨ３；アミノ酸配列RSSETLVHSSGNTYLE（配列番号２１）を含むＣＤＲＬ１；アミノ酸配列RVSNRFS（配列番号２２）を含むＣＤＲＬ２；及び、アミノ酸配列FQGSFNPLT（配列番号２３）を含むＣＤＲＬ３を含む。
【００９９】
式（Ｉｆ）のスカフォールドは、下記の特徴の１又は複数を含むことができる：
【０１００】
式（Ｉｆ）のＰＨＦが約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有する場合、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a及びｍ3bの合計は、約１５〜約１５０の範囲にあり、ｍ1は１〜約７０の整数であり、ｍ2は１〜約２０の整数であり、ｍ3aは０〜約９の整数であり、ｍ3bは１〜約８の整数であり、ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜約１０の範囲にあり；並びにＰＨＦと抗体の比は、２〜約８の整数である。
【０１０１】
式（Ｉｆ）のＰＨＦが約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有する場合、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a及びｍ3bの合計は、約２０〜約１１０の範囲にあり、ｍ1は２〜約５０の整数であり、ｍ2は２〜約１５の整数であり、ｍ3aは０〜約７の整数であり、ｍ3bは１〜約８の整数であり、ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜約８の範囲にあり；並びにＰＨＦと抗体の比は、２〜約８（例えば、約２〜約６又は約２〜約４）の整数である。
【０１０２】
式（Ｉｆ）のＰＨＦが約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有する場合、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a及びｍ3bの合計は、約４０〜約７５の範囲にあり、ｍ1は約２〜約３５の整数であり、ｍ2は約２〜約１０の整数であり、ｍ3aは０〜約４の整数であり、ｍ3bは１〜約５の整数であり、ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜約５の範囲にあり；並びにＰＨＦと抗体の比は、２〜約８（例えば、約２〜約６又は約２〜約４）の整数である。
【０１０３】
特定の実施態様において、アウリスタチンＦヒドロキシプロピルアミド（“ＡＦ  ＨＰＡ”）と抗体の比は、約３０：１、２９：１、２８：１、２７：１、２６：１、２５：１、２４：１、２３：１、２２：１、２１：１、２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１又は６：１であることができる。
【０１０４】
特定の実施態様において、ＡＦ  ＨＰＡと抗体の比は、約２５：１、２４：１、２３：１、２２：１、２１：１、２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１又は６：１であることができる。
【０１０５】
他の実施態様において、ＡＦ  ＨＰＡと抗体の比は、約２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１又は６：１であることができる。
【０１０６】
一部の実施態様において、ＡＦ  ＨＰＡと抗体の比は、約１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１又は１０：１であることができる。
【０１０７】
一部の実施態様において、ＡＦと抗体の比は、約１５：１、１４：１、１３：１、１２：１又は１１：１であることができる。
【０１０８】
一部の実施態様において、ＡＦ  ＨＰＡと抗体の比は、約１５：１、１４：１、１３：１又は１２：１であることができる。
【０１０９】
特定の実施態様において、ＰＨＦと抗体の比は、約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１又は１：１であることができる。
【０１１０】
特定の実施態様において、ＰＨＦと抗体の比は、約８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１又は２：１であることができる。
【０１１１】
他の実施態様において、ＰＨＦと抗体の比は、約６：１、５：１、４：１、３：１、２：１又は１：１であることができる。
【０１１２】
他の実施態様において、ＰＨＦと抗体の比は、約６：１、５：１、４：１、３：１又は２：１であることができる。
【０１１３】
他の実施態様において、ＰＨＦと抗体の比は、約６：１、５：１、４：１又は３：１であることができる。
【０１１４】
一部の実施態様において、ＰＨＦと抗体の比は、約５：１、４：１又は３：１であることができる。
【０１１５】
一部の実施態様において、ＰＨＦと抗体の比は、約４：１、３：１又は２：１であることができる。
【０１１６】
本開示の別の態様は、本明細書記載のコンジュゲートを調製する方法を特徴としている。この方法は、単離された抗体を、式（Ｉａ）のＤ担持ポリマースカフォールドと反応させ、これにより、下記コンジュゲートが形成され：
【化２２】
2019508456.tif 000024
（Ｉａ）
式中
ＬD1は、カルボニル含有部分であり；
【化２３】
2019508456.tif 000025
における
【化２４】
2019508456.tif 000026
の各々は、独立して、生分解性結合を含む第一リンカーであり、これによりこの結合が破壊されたときに、Ｄは、意図する治療効果のために活性型で放出される；並びに、
【化２５】
2019508456.tif 000027
中のＬD1とＤの間の
【化２６】
2019508456.tif 000028
は、ＤのＬD1への直接又は間接の結合を意味し；
【化２７】
2019508456.tif 000029
の各々は、独立して、単離された抗体と未だ結合されていない第二リンカーであり、ここでＬP2は、単離された抗体の官能基と共有結合を未だ形成していない官能基を含む部分であり、及び、
ＬD1とＬP2の間の
【化２８】
2019508456.tif 000030
は、ＬP2のＬD1への直接又は間接の結合を意味し、そして、第二リンカーの各々は、第一リンカーの各々とは異なり；
ｍは、１〜約３００の整数であり；
ｍ1は、１〜約１４０の整数であり；
ｍ2は、１〜約４０の整数であり；
ｍ3は、０〜約１８の整数であり、並びに
ｍ、ｍ1、ｍ2、及びｍ3の合計は、１５〜約３００の範囲にある。
【０１１７】
本明細書に開示されたポリマースカフォールドに関する式において、ポリアセタール単位間の不連続又はギャップは、これらの単位は、任意の順番で互いに結合できることを示している。別の表現をすると、例えば、Ｄ、ＬP2、及び単離された抗体を含む付属基は、ポリマー骨格に沿って無作為に分布され得る。
【０１１８】
本開示はまた、本明細書に開示されたコンジュゲートを、かかる治療又は予防が望ましい対象へ投与することによる、異常なＮａＰｉ２ｂ発現、機能及び／又は活性化に関連した１又は複数の病理の治療、予防、進行の遅延、又は他方で症状の改善、或いはかかる病理に関連した症状の軽減の方法も提供する。治療される対象は、例えばヒトである。このコンジュゲートは、この病理に関連した症状を治療、予防又は軽減するのに十分な量で投与される。
【０１１９】
本開示はまた、本明細書に開示されたコンジュゲートを、かかる治療又は予防が望ましい対象へ投与することによる、ＮａＰｉ２ｂ発現、機能及び／又は活性化に関連した１又は複数の病理の治療、予防、進行の遅延、又は他方で症状の改善、或いはかかる病理に関連した症状の軽減の方法も提供する。治療される対象は、例えばヒトである。このコンジュゲートは、この病理に関連した症状を治療、予防又は軽減するのに十分な量で投与される。
【０１２０】
本明細書に開示されたコンジュゲートを用い治療及び／又は予防される病理は、例えば癌を含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたコンジュゲートは、ＮａＰｉ２ｂを発現している癌の、治療、予防、進行の遅延、又はそうでなければ改善において有用である。例えば、本明細書に開示されたコンジュゲートは、卵巣癌（卵巣上皮癌など）、甲状腺癌、結腸直腸癌、肺癌、非扁平上皮ＮＳＣＬＣなどの非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、乳癌、腎臓癌及び唾液腺導管癌からなる群から選択される癌の、治療、予防、進行の遅延、又はそうでなければ症状の改善に有用である。
【０１２１】
一部の実施態様において、本明細書に開示されたコンジュゲートは、卵巣癌の治療、予防、進行の遅延、又はそうでなければ症状の改善に有用である。一部の実施態様において、卵巣癌は、卵巣上皮癌である。
【０１２２】
一部の実施態様において、本明細書に開示されたコンジュゲートは、ＮＳＣＬＣの治療、予防、進行の遅延、又はそうでなければ症状の改善に有用である。一部の実施態様において、ＮＳＣＬＣは、非扁平上皮ＮＳＣＬＣである。
【０１２３】
一部の実施態様において、本明細書に開示されたコンジュゲートは、卵巣癌の治療、予防、進行の遅延、又はそうでなければ症状の改善に有用である。一部の実施態様において、卵巣癌は、卵巣上皮癌である。
【０１２４】
本開示はまた、本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲートによる治療前に、対象のＮａＰｉ２ｂスコアを確定することにより、本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲートの治療的投与に適した患者集団を、確定するか又はそうでなければ精緻化する、例えば階層化するためのキット及び／又は方法も提供する。一部の実施態様において、この対象は、ＮａＰｉ２ｂ発現に関して１＋又は２＋又は３＋のスコアを有するものとして確定される。一部の実施態様において、試験細胞集団は、生検試料からの新鮮な、凍結されない組織に由来する。一部の実施態様において、試験細胞集団は、原発性又は転移性部位に由来する。一部の実施態様において、試験細胞集団は、生検又は手術試料からの凍結組織又は腹水液又は胸膜液に由来する。一部の実施態様において、試験細胞集団は、生検又は手術試料からの固定組織（例えば、ホルマリン固定）に由来する。
【０１２５】
ＩＨＣ試験は、例えば、卵巣癌組織試料又は肺癌試料などの癌組織試料中の細胞の表面上のＮａＰｉ２ｂ受容体タンパク質の量を測定し、且つ細胞表面ＮａＰｉ２ｂ受容体の検出されたレベルを、ＮａＰｉ２ｂスコア０、１＋、２＋又は３＋に割り当てる。
【０１２６】
一部の実施態様において、対象は、標準の化学療法薬、フロントライン化学療法薬を含む、化学療法に対し不応性である。
【０１２７】
一部の実施態様において、対象は、白金製剤−抵抗性卵巣癌を有する。
【０１２８】
一部の実施態様において、対象は、白金製剤−感受性卵巣癌を有する。
【０１２９】
一部の実施態様において、対象は、白金製剤−不応性卵巣癌を有する。
【０１３０】
一部の実施態様において、対象は、進行性卵巣癌を有し、且つ癌（例えば卵巣癌）を治療するための療法を以前に受けたことがない。一部の実施態様において、対象は、進行性卵巣癌を有し、且つ癌（例えば卵巣癌）を治療するための化学療法を以前に受けたことがない。
【０１３１】
本明細書に提供される方法及び用途のいずれかの実施態様において使用されるＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲートは、この疾患の任意のステージで投与することができる。例えば、かかるＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲートは、初期から転移期までの任意のステージの癌に罹患した患者へ投与することができる。
【０１３２】
一部の実施態様において、本開示のＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲートは、療法において単独で又は他の組成物と組合せてのいずれかで投与することができる。例えば、本開示のコンジュゲートは、少なくとも１種の追加の治療薬及び／又はアジュバントと同時投与されてよい。特定の実施態様において、追加の治療薬は、小型分子阻害剤、別の抗体−ベースの療法、ポリペプチドもしくはペプチド−ベースの療法、核酸−ベースの療法及び／又は他の生物製剤である。追加の治療薬は、コンジュゲートを形成するために使用される「Ｄ」と同じであるか又は異なるかのいずれかであることができる。
【０１３３】
特定の実施態様において、追加の治療薬は、細胞毒性物質、化学療法薬、成長阻害剤、血管新生阻害剤、ＰＡＲＰ（ポリ（ＡＤＰ）−リボースポリメラーゼ）阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗物質、微小管阻害物質、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞毒性抗生物質、任意の他の核酸損傷物質又は免疫チェックポイント阻害剤である。一実施態様において、癌の治療に使用される治療薬は、白金化合物（例えば、シスプラチン又はカルボプラチン）；タキサン（例えば、パクリタキセル又はドセタキセル）；トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、イリノテカン又はトポテカン）；アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標））又はリポソーム型ドキソルビシン（ドキシル（登録商標）））；代謝拮抗物質（例えば、ゲムシタビン、ペメトレキセド）；シクロホスファミド；ビノレルビン（ナベルビン（登録商標））；ヘキサメチルメラミン；イホスファミド；エトポシド；血管新生阻害剤（例えば、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標）））、サリドマイド、ＴＮＰ−４７０、血小板第４因子、インターフェロン又はエンドスタチン）；ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、オラパリブ（リンパラザ(商標)））；免疫チェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌのいずれか（（例えば、ペンブロリズマブ（キイトルーダ（登録商標））、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）もしくはニボルマブ（オプジーボ（登録商標）））又はＣＴＬＡ−４（例えば、イピリムマブ（ヤーボイ（登録商標）））を標的化するモノクローナル抗体、キナーゼ阻害剤（例えば、ソラフェニブ又はエルロチニブ）、ＡＬＫ阻害剤（例えば、クリゾチニブ（キサルコリ）、セリチニブ（ザイカディア）、アレシチニブ（アレセンサ）、ダランテルセプト（ＡＣＥ−０４１）、ブリガチニブ（ＡＰ２６１１３）、エントレクチニブ（ＮＭＳ−Ｅ６２８）、ＰＦ−０６４６３９２２  ＴＳＲ−０１１、ＣＥＰ−３７４４０及びＸ−３９６）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ又はカルフィルゾミブ）、免疫修飾剤（例えば、レナリドミド又はＩＬ−２）、放射性物質、及び／又はそれらのバイオシミラー及び／又はそれらの組合せを含むが、これらに限定されるものではない。他の好適な物質は、当業者により標準治癒と考えられる物質及び／又は当業者に周知の化学療法薬を含む。
【０１３４】
一部の実施態様において、本開示の組合せ及び方法に適した免疫チェックポイント阻害剤は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、融合タンパク質又はそれらの組合せである。
【０１３５】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤＬｌ、ＰＤＬ２、ＰＤｌ、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、Ａ２ａＲ、Ｂ−７ファミリーリガンド、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤ２２６、ＣＤ２７６、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＨＡＶＣＲ２、ＨＶＥＭ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＣＯＳ（誘導性Ｔ細胞共刺激分子）、ＬＡＩＲ１、ＬＩＧＨＴ、ＭＡＲＣＯ（コラーゲン構造を持つマクロファージ受容体）、ＯＸ−４０、ＳＬＡＭ、ＴＩＧＨＴ、ＶＴＣＮ１又はそれらの組合せを含むチェックポイントタンパク質を阻害する。
【０１３６】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤＬｌ、ＰＤＬ２、ＰＤｌ、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、Ａ２ａＲ、Ｂ−７ファミリーリガンド、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤ２２６、ＣＤ２７６、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＨＡＶＣＲ２、ＨＶＥＭ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＣＯＳ（誘導性Ｔ細胞共刺激分子）、ＬＡＩＲ１、ＬＩＧＨＴ、ＭＡＲＣＯ（コラーゲン構造を持つマクロファージ受容体）、ＯＸ−４０、ＳＬＡＭ、ＴＩＧＨＴ、ＶＴＣＮ１又はそれらの組合せを含むチェックポイントタンパク質のリガンドと相互作用する。
【０１３７】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤＬｌ、ＰＤ１又はそれらの組合せを含む、チェックポイントタンパク質を阻害する。
【０１３８】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ペンブロリズマブ（ＭＫ−３４７５）、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８）、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１）、ＡＭＰ−２２４、ＭＤＸ−１  １０５、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＢＭＳ−９３６５５９、ＩＰＨ２１０１、ＴＳＲ−０４２、ＴＳＲ−０２２、イピリムマブ、リリルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、トレメリムマブ、又はそれらの組合せを含む。
【０１３９】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８）、イピリムマブ、ペンブロリズマブ、アテゾリズマブ、トレメリムマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、又はそれらの組合せを含む。
【０１４０】
一部の実施態様において、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート及び追加の物質（複数可）は、単独の治療的組成物へ製剤化され、且つＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート及び追加の物質は、同時に投与される。或いは、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート及び追加の物質は、互いに個別であり、例えば、各々個別の治療的組成物へ製剤化され、且つＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲートと追加の物質は同時に投与されるか、或いはＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲートと追加の物質は、治療レジメン中の異なる時点で投与される。例えば、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲートは追加物質の投与前に投与されるか、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲートは追加物質の投与に続けて投与されるか、或いはＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート及び追加物質は交互様式で投与される。本明細書記載のように、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート抗体及び追加物質は、単回投与量又は反復投与量で投与される。
【０１４１】
一部の実施態様において、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート及び免疫チェックポイント阻害剤は、同じ製剤に製剤化される。
【０１４２】
一部の実施態様において、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート及び免疫チェックポイント阻害剤は、個別の製剤に製剤化される。
【０１４３】
一部の実施態様において、本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート及び免疫チェックポイント阻害剤を含む組合せは、卵巣癌の治療、予防、進行の遅延、又はそうでなければ症状の改善において有用である。一部の実施態様において、卵巣癌は卵巣上皮癌である。
【０１４４】
一部の実施態様において、本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート及び免疫チェックポイント阻害剤を含む組合せは、ＮＳＣＬＣの治療、予防、進行の遅延、又はそうでなければ症状の改善において有用である。一部の実施態様において、ＮＳＣＬＣは非扁平上皮ＮＳＣＬＣである。
【０１４５】
ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート及び免疫チェックポイント阻害剤を含むキットも、開示されている。キットの成分は、一緒に、又は２個又はそれよりも多い容器に個別に包装されてよい。一部の実施態様において、容器は、再構成に適している組成物の無菌の凍結乾燥された製剤を含むバイアルであってよい。キットはまた、再構成及び／又は他の試薬の希釈に適した、１又は複数の緩衝液も含んでよい。使用することができる他の容器は、パウチ、トレー、ボックス、チューブなどを含むが、これらに限定されるものではない。キットの成分は、これらの容器内に包装され且つ無菌状態で維持されてよい。含むことができる別の成分は、その用途のためのキットの使用者への説明書である。
【０１４６】
本開示の医薬組成物は、本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート及び好適な担体を含むことができる。これらの医薬組成物は、例えば診断キットなどの、キット内に含まれることができる。
【０１４７】
当業者は、本明細書に開示された抗体は様々な用途を有することを理解するであろう。例えば、本明細書に開示されたタンパク質は、治療薬として使用される。本明細書に開示された抗体はまた、診断キット中の試薬として又は診断ツールとして使用されるか、或いはこれらの抗体は、治療的試薬を作製するための競合アッセイにおいて使用することができる。
【０１４８】
別に定義されない限りは、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の業者により通常理解されるものと同じ意味を有する。本明細書において、単数形はまた、文脈が明確にそうでないことを指摘しない限りは、複数も含む。本明細書記載のものと類似の又は同等の方法及び材料を、本発明の実践又は試験において使用することができるが、好適な方法及び材料は、以下に説明されている。矛盾する場合、定義を含む、本明細書が支配するであろう。加えて、材料、方法及び実施例は、単なる例証であり、限定されることを意図しない。
【０１４９】
本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び請求項から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１５０】
図面の簡単な説明
【図１】図１は、ＯＶＣＡＲ３マウス腫瘍異種移植モデルにおいて測定した、ＸＭＴ−１５３５：実施例３Ａ、リツキシマブ−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））；実施例４Ａ（（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（ＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢＡ−ＭＭＡＥ））；実施例２Ｃ（（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））；及び、実施例１Ｂ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の抗−腫瘍有効性を図示している。
【図２】図２は、ＯＶＣＡＲ３マウス腫瘍異種移植モデルにおいて測定した、実施例３Ｂ、リツキシマブ−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））；実施例４Ｂ（（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（ＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢＡ−ＭＭＡＥ））；及び、実施例１Ｃ、ＸＭＴ  １５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の抗−腫瘍有効性を図示している。
【図３】図３は、ＫＲＡＳ突然変異体患者由来非小細胞肺癌異種移植モデルにおいて測定した、実施例３Ｂ、リツキシマブ−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））；実施例４Ｂ（（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（ＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢＡ−ＭＭＡＥ））；及び、実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の抗−腫瘍有効性を図示している。
【図４】図４は、患者由来の非小細胞肺癌異種移植モデルにおいて測定した、実施例３Ｂ、リツキシマブ−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））；実施例４Ｂ（（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（ＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢＡ−ＭＭＡＥ））；及び、実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の抗−腫瘍有効性を図示している。
【図５】図５は、患者由来の非小細胞肺癌異種移植モデルにおいて測定した、実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の抗−腫瘍有効性を図示している。
【図６】図６Ａ及び６Ｂは、各々、カニクイザルにおける、実施例１Ｃの１．２５ｍｇ／ｋｇ（１０７４μｇ／ｍ2アウリスタチンペイロード等価物）、２．５ｍｇ／ｋｇ（２１４７μｇ／ｍ2アウリスタチンペイロード等価物）又は５ｍｇ／ｋｇ（又は、４２９４μｇ／ｍ2アウリスタチンペイロード等価物）の単回ＩＶ注入で投与した後の、総抗体及び総薬物に関する、血漿薬物動態を示している。
【図７】図７は、患者由来の非小細胞肺癌異種移植モデルにおいて測定した、実施例３Ｂ、リツキシマブ−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））；実施例４Ｂ（（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（ＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢＡ−ＭＭＡＥ））；及び、実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の抗−腫瘍有効性を図示している。
【図８】図８は、患者由来の非小細胞肺癌異種移植モデルにおいて測定した、実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の抗−腫瘍有効性を図示している。
【図９】図９は、患者由来の非小細胞肺癌異種移植モデルにおいて測定した、実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の抗−腫瘍有効性を図示している。
【図１０】図１０は、患者由来の非小細胞肺癌異種移植モデルにおいて測定した、実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の抗−腫瘍有効性を図示している。
【発明を実施するための形態】
【０１５１】
詳細な説明
本開示は、生分解性で、生体適合性であり、且つ高い薬物負荷、並びにＳＬＣ３４Ａ２の細胞外領域へ特異的結合を示す、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート（ＮａＰｉ２ｂ抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートなど）を提供する。本明細書に提供されるＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート（ＮａＰｉ２ｂ抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートなど）は、ナトリウム依存性リン酸輸送体タンパク質２Ｂとしても知られているＮａＰｉ２ｂを特異的に認識する抗体を含む。本明細書に開示されたコンジュゲートにおいて使用されるＮａＰｉ２ｂ抗体は、ＮａＰｉ２ｂの少なくとも１種の生物活性を修飾、例えば、ブロック、阻害、減少、拮抗、中和、又はそうでなければ干渉することが可能であるか又はそれに有用である。本明細書に開示された抗体はまた、可溶性ＮａＰｉ２ｂに結合する抗体を含む。
【０１５２】
本明細書に提供されるＮａＰｉ２ｂ抗体−薬物コンジュゲートは、ＮａＰｉ２ｂエピトープへ、平衡解離定数（Ｋd又はＫD）の≦１μＭ、例えば、≦１００ｎＭ、好ましくは≦１０ｎＭ、及びより好ましくは≦１ｎＭで結合する抗体を含む。例えば、本明細書に開示された抗体−薬物コンジュゲートで使用されるＮａＰｉ２ｂ抗体は、およそ≦１ｎＭ〜約１ｐＭの範囲のＫdを示す。
【０１５３】
本明細書に提供されるＮａＰｉ２ｂ抗体−薬物コンジュゲートは、ＮａＰｉ２ｂの機能活性を修飾、ブロック、阻害、減少、拮抗、中和、又はそうでなければ干渉するように働く抗体を含むことができる。ＮａＰｉ２ｂの機能活性は、例えば、経細胞無機リン酸（Ｐｉ）吸収への加担、それによる体内のリン酸ホメオスタシスの維持への寄与を含む。例えば、ＮａＰｉ２ｂ抗体は、経細胞無機リン酸吸収を部分的に又は完全に修飾、ブロック、阻害、減少、拮抗、中和、又はそうでなければ干渉することにより、ＮａＰｉ２ｂ機能活性を完全に又は部分的に阻害する。経細胞無機リン酸吸収活性は、非限定的に、本明細書に開示された抗−ＮａＰｉ２ｂ抗体の存在下及び非存在下での経細胞無機リン酸吸収のレベルの検出を含む、経細胞無機リン酸吸収活性を検出するための任意の技術分野−認識した方法を用いて、評価される。
【０１５４】
本明細書に開示された抗体−薬物コンジュゲートで使用されるＮａＰｉ２ｂ抗体は、ＮａＰｉ２ｂ抗体の存在下でのＮａＰｉ２ｂ機能活性のレベルが、本明細書記載のＮａＰｉ２ｂ抗体との結合の非存在舌でのＮａＰｉ２ｂ機能活性のレベルと比べ、少なくとも９５％、例えば、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％減少される場合に、ＮａＰｉ２ｂ機能活性を完全に修飾、ブロック、阻害、減少、拮抗、中和、又はそうでなければ干渉すると考えられるものであることができる。ＮａＰｉ２ｂ抗体は、ＮａＰｉ２ｂ抗体の存在下でのＮａＰｉ２ｂ活性のレベルが、本明細書記載のＮａＰｉ２ｂ抗体との結合の非存在舌でのＮａＰｉ２ｂ活性のレベルと比べ、９５％未満、例えば、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％又は９０％減少される場合に、ＮａＰｉ２ｂ機能活性を部分的に修飾、ブロック、阻害、減少、拮抗、中和、又はそうでなければ干渉すると考えられる。
【０１５５】
別に定義されない限りは、本開示と結びつけて使用される技術用語及び科学用語は、当業者により通常理解される意味を有するものとする。更に文脈により別に必要としない限りは、単数の用語は、複数を含み、且つ複数の用語は単数を含むものとする。一般に、本明細書記載の細胞及び組織培養、分子生物学、並びにタンパク質及びオリゴ−又はポリヌクレオチドの化学及びハイブリダイゼーションの技術と共に利用される命名法は、当該技術分野において周知であり且つ一般に使用されるものである。組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、及び組織培養及び形質転換に関して、標準技術が使用される（例えば、電気穿孔法、リポフェクション）。酵素反応及び精製技術は、製造業者の仕様に従うか、又は当該技術分野において通常達成されるように又は本明細書記載のように、実行される。前述の技術及び手順は、当該技術分野において周知の常法に従い、及び本明細書を通じて引用及び考察される様々な一般の及びより特定した参考文献に説明されたように、一般に実行される。例えば、Sambrookら、「Molecular Cloning: A Laboratory Manual」(第2版、Cold Spring Harbor Laboratory Press, コールドスプリングハーバー, N.Y. (1989))を参照されたい。本明細書記載の分析化学、合成有機化学、並びに医化学及び薬化学の実験手順及び技術と結びつけて利用される命名法は、当該技術分野において周知であり且つ一般に使用されるものである。化学合成、化学分析、医薬調製、製剤化、及び送達、並びに患者の治療に関して、標準技術が使用される。
【０１５６】
本開示に従い利用される下記の用語は、別に指摘しない限りは、以下の意味を有すると理解されるものとする：
【０１５７】
本明細書に使用される用語「ＮａＰｉ２ｂ」（ナトリウム依存性リン酸輸送体タンパク質２Ｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、ＮａＰｉＩＩｂ、Ｎｐｔ２、Ｎａ（＋）−依存性リン酸共輸送体２Ｂ；ナトリウム／リン酸共輸送体２Ｂ；Ｎａ（＋）／Ｐｉ共輸送体２Ｂ；ＮａＰｉ３ｂ；可溶性担体ファミリー３４メンバー２としても公知）は、本明細書において使用される場合、ヒトＮａＰｉ２ｂ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号Ｏ９５４３６．３）を指し、且つ腫瘍細胞を含む細胞により天然に発現されるか、又はＮａＰｉ２ｂ遺伝子によりトランスフェクションされた細胞上で発現される、ＮａＰｉ２ｂの任意の変種、アイソフォーム及び種ホモログを含む。これらの用語は、同義語であり、且つ互換的に使用されてよい。
【０１５８】
本明細書で使用される用語「ＮａＰｉ２ｂ抗体」又は「抗−ＮａＰｉ２ｂ抗体」は、抗原ＮａＰｉ２ｂへ特異的に結合する抗体である。
【０１５９】
本明細書において２種又はそれよりも多い抗体の文脈で使用される場合、用語「と競合する」又は「と交差−競合する」とは、２種又はそれよりも多い抗体が、ＮａＰｉ２ｂへの結合について競合すること、例えば任意の当該技術分野において認められたアッセイにおいてＮａＰｉ２ｂ結合について競合することを指摘している。任意の当該技術分野において認められたアッセイを用いて決定した場合、抗体が、２５％又はそれよりも多く、１種又は複数の他の抗体と競合する場合には、この抗体は、１種又は複数の他の抗体をＮａＰｉ２ｂへの結合から「ブロック」するか又は「交差−ブロック」し、２５％〜７４％は「部分的ブロック」を表し、且つ７５％〜１００％は「完全ブロック」を表す。一部の抗体の対について、任意の当該技術分野において認められたアッセイにおける競合又はブロックは、１種の抗体が、プレート上にコートされ、且つ他方が競合に使用される場合、並びにその逆が当てはまる場合にのみ、認められる。文脈により別に規定又は否定されない限り、本明細書において使用される用語「と競合する」、「と交差−競合する」、「ブロックする」又は「交差−ブロックする」は、かかる抗体の対を対象とすることも意図されている。
【０１６０】
本明細書において使用される用語「抗体」とは、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の免疫学的に活性のある部分、すなわち、抗原と特異的に結合する（免疫反応する）抗原結合部位を含む分子を指す。「と特異的に結合する」又は「と免疫反応する」又は「に対し向けられる」は、抗体は、所望の抗原の１又は複数の抗原決定基と反応し、且つ他のポリペプチドとは反応しないか又は遙かに低い親和性（Ｋd＞１０-6）で結合することを意味する。抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体及びキメラ抗体を含むが、これらに限定されるものではない。
【０１６１】
基本的抗体構造単位は、四量体を含むことが分かっている。各四量体は、ポリペプチド鎖の２つの同一対で構成され、各対は、１本の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ−末端部分は、主に抗原認識に寄与する、約１００〜１１０又はそれよりも多いアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ−末端部分は、主にエフェクター機能に寄与する、定常領域を規定する。概して、ヒトから得られた抗体分子は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ及びＩｇＤのクラスのいずれかに関連し、これらは、その分子に存在する重鎖の性質により、互いに異なる。特定のクラスは、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、及び他のものなど、更にサブクラスを有する。更にヒトにおいて、軽鎖は、カッパ鎖又はラムダ鎖であってよい。
【０１６２】
本明細書において使用される用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）又は「モノクローナル抗体組成物」とは、独自の軽鎖遺伝子産物及び独自の重鎖遺伝子産物からなる抗体分子の唯一の分子種を含む、抗体分子の集団を指す。特に、モノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、その集団の分子全てにおいて同一である。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、それへの独自の結合親和性により特徴付けられる抗原の特定のエピトープと免疫反応することが可能である抗原−結合部位を含む。
【０１６３】
概して、ヒトから得られた抗体分子は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ及びＩｇＤの任意のクラスに関連しており、これらは、その分子に存在する重鎖の性質により、互いに異なる。特定のクラスは、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、及び他のものなど更にサブクラスを有する。更にヒトにおいて、軽鎖は、カッパ鎖又はラムダ鎖であってよい。
【０１６４】
用語「抗原−結合部位」又は「結合部位」とは、抗原結合に加担する免疫グロブリン分子の一部分を指す。抗原結合部位は、重（“Ｈ”）鎖及び軽（“Ｌ”）鎖のＮ−末端可変（“Ｖ”）領域のアミノ酸残基により形成される。「超可変領域」と称される、重鎖及び軽鎖のＶ領域内の３つの高度に異なる部分配列は、「フレームワーク領域」又は「ＦＲ」として知られるより保存されたフランキング部分配列の間に挟まれている。従って用語「ＦＲ」は、免疫グロブリンの超可変領域の間に、及びこれに隣接して天然に認められるアミノ酸配列を指す。抗体分子において、軽鎖の３つの超可変領域及び重鎖の３つの超可変領域は、抗原−結合表面を形成するように、三次元空間において互いに関連して配置される。抗原−結合表面は、結合された抗原の三次元表面に対し相補的であり、且つ各重鎖及び軽鎖の３つの超可変領域は、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」と称される。各ドメインに対するアミノ酸の割当は、「Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest」(National Institutes of Health、ベセスダ、Md.(1987及び1991))、又はChothia及びLesk、J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)、Chothiaら、Nature 342:878-883 (1989)の定義に従う。
【０１６５】
本明細書で使用される用語「エピトープ」は、免疫グロブリンもしくはその断片、又はＴ細胞受容体への特異的結合が可能である任意のタンパク質決定因子を含む。用語「エピトープ」は、免疫グロブリン又はＴ細胞受容体への特異的結合が可能である任意のタンパク質決定因子を含む。エピトープの決定因子は通常、アミノ酸又は糖鎖などの分子の化学的に活性のある表面基(groupings)からなり、且つ通常特異的三次元構造的特徴、並びに特異的電荷特徴を有する。抗体は、解離定数が、≦１μＭ；例えば、≦１００ｎＭ、好ましくは≦１０ｎＭ及びより好ましくは≦１ｎＭである場合に、抗原へ特異的に結合すると言われる。
【０１６６】
本明細書において使用される用語「免疫学的結合」及び「免疫学的結合特性」とは、免疫グロブリン分子と免疫グロブリンに特異的である抗原の間に生じる型の非共有的相互作用を指す。免疫学的結合相互作用の強度、又は親和性は、相互作用の解離定数（Ｋd）に関して表現することができ、ここでより小さいＫdは、より大きい親和性を表す。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性は、当該技術分野において周知の方法を用いて定量することができる。一つのかかる方法は、抗原−結合部位／抗原の複合体形成及び解離の速度の測定を必然的に伴い、ここでそれらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、及び両方向で速度に同等に影響を及ぼす幾何学的パラメータによって左右される。従って、「オンレート定数」（Ｋon）及び「オフレート定数」（Ｋoff）の両方は、濃度の計算、並びに会合及び解離の実際の速度により、決定することができる（Nature, 361:186-87 (1993)参照）。比Ｋoff／Ｋonは、親和性に無関係の全てのパラメータの取り消しを可能にし、且つ解離定数Ｋdと等しい（一般にDaviesら、(1990) Annual Rev Biochem, 59:439-473参照）。本開示の抗体は、放射性リガンド結合アッセイ又は当業者に公知の類似のアッセイなどのアッセイにより測定され、平衡解離定数（Ｋd又はＫD）が≦１μＭ、好ましくは≦１００ｎＭ、より好ましくは≦１０ｎＭ及び最も好ましくは≦１００ｐＭ〜約１ｐＭである場合に、ＮａＰｉ２ｂへ特異的に結合すると称される。
【０１６７】
本明細書において使用される用語「単離されたポリヌクレオチド」とは、ゲノム、ｃＤＮＡ、もしくは合成起源のポリヌクレオチド又はそれらの組合せを意味するものとし、その起源のおかげで「単離されたポリヌクレオチド」は、（１）その中で「単離されたポリヌクレオチド」が天然に認められないポリヌクレオチドの全て又は一部分に会合しないか、（２）それが天然には連結されないポリヌクレオチドに機能的に連結されるか、或いは（３）より大きい配列の一部として天然には生じない。本開示に従うポリヌクレオチドは、配列番号１、３、１４、及び１６で表された重鎖免疫グロブリン分子及びその一部をコードしている核酸分子、並びに配列番号２、４、１５、及び１７で表された軽鎖免疫グロブリン分子及びその一部をコードしている核酸分子を含む。
【０１６８】
本明細書で言及される用語「単離されたタンパク質」は、ｃＤＮＡ、組換えＲＮＡ、もしくは合成起源のタンパク質又はそれらの組合せの一部を意味し、その起源、もしくは誘導体の給源のおかげで、「単離されたタンパク質」は、（１）天然に認められるタンパク質とは会合しないか、（２）同じ給源由来の他のタンパク質を含まないか、（３）異なる種由来の細胞により発現されるか、或いは（４）天然には生じない。
【０１６９】
用語「ポリペプチド」は、ポリペプチド配列の、未変性のタンパク質、断片、又はアナログを指す総称として、本明細書において使用される。それ故、未変性のタンパク質断片、及びアナログは、ポリペプチド属(genus)の種(species)である。本開示に従うポリペプチドは、配列番号１、３、１４、及び１６で表された重鎖免疫グロブリン分子及びその一部分、並びに配列番号２、４、１５、及び１７で表された軽鎖免疫グロブリン分子及びその一部分、並びにカッパ軽鎖免疫グロブリン分子などの軽鎖免疫グロブリン分子と重鎖免疫グロブリン分子を含む組合せ、及びその逆により形成された抗体分子、並びにそれらの断片及びアナログを含む。
【０１７０】
物体に適用されて本明細書において使用される用語「天然に生じる」とは、物体は天然に認めることができるという事実を指す。例えば、天然の給源から単離することができる生物（ウイルスを含む）において存在し、且つ実験室又は別所においてヒトにより意図的に修飾されていない、ポリペプチド又はポリヌクレオチド配列は、天然に生じる。
【０１７１】
本明細書において使用される用語「機能的に連結された」とは、成分がそれらの意図された様式で機能することを可能にする関係にある、そのように説明された成分の位置を指す。コード配列に「機能的に連結された」制御配列は、コード配列の発現が制御配列と適合し得る条件下で達成されるような様式で、ライゲーションされる。
【０１７２】
本明細書において使用される用語「制御配列」とは、それらがライゲーションされるコード配列の発現及びプロセッシングに作用するために必要であるポリヌクレオチド配列を指す。かかる制御配列の性質は、原核生物における宿主生物に応じて異なり、かかる制御配列は一般に、真核生物のプロモーター、リボソーム結合部位、及び転写終結配列を含み、一般にかかる制御配列は、プロモーター及び転写終結配列を含む。用語「制御配列」は、最低でも、その存在が発現及びプロセッシングに必須である全ての成分を含み、且つ同じく、その存在が有利である追加成分、例えばリーダー配列及び融合パートナー配列も含むことができることが意図されている。本明細書において言及される用語「ポリヌクレオチド」は、リボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチドのいずれか、又はいずれかの型のヌクレオチドの修飾された形の、長さが少なくとも１０塩基のヌクレオチドのポリマーボロン(polymeric boron)を意味する。この用語は、ＤＮＡの１本鎖及び２本鎖の形を含む。
【０１７３】
本明細書において言及される用語「オリゴヌクレオチド」は、天然に生じる、及び天然に生じないオリゴヌクレオチド連結により、一緒に連結された、天然に生じ且つ修飾されたヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、一般に２００塩基又はそれよりも少ない長さを含む、ポリヌクレオチドのサブセットである。好ましくはオリゴヌクレオチドは、長さが１０〜６０塩基、及び最も好ましくは長さが１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０から４０塩基である。オリゴヌクレオチドは、例えばプローブに関して、通常１本鎖であるが、オリゴヌクレオチドは、例えば、遺伝子変異体の構築における使用に関して、二重鎖であってよい。本明細書に開示されたオリゴヌクレオチドは、センスオリゴヌクレオチド又はアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかである。
【０１７４】
本明細書において言及される用語「天然に生じるヌクレオチド」は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドを含む。本明細書において言及される用語「修飾されたヌクレオチド」は、修飾又は置換された糖基などを伴うヌクレオチドを含む。本明細書において言及される用語「オリゴヌクレオチド連結」は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノアート、ホスホロジセレノアート、ホスホロアミロチオエート(phosphoroanilothioate)、ホスホラニリデート(phoshoraniladate)、ホスホロアミダートなどなどの、オリゴヌクレオチド連結を含む。例えば、LaPlancheら、Nucl. Acids Res. 14:9081 (1986)；Stecら、J. Am. Chem. Soc. 106:6077 (1984)、Steinら、Nucl. Acids Res. 16:3209 (1988)、Zonら、Anti Cancer Drug Design 6:539 (1991)；Zonら、Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, pp. 87-108(F. Eckstein編集、Oxford University Press、オックスフォード、英国(1991))；Stecら、米国特許第５，１５１，５１０号；Uhlmann及びPeyman、Chemical Reviews 90:543 (1990)を参照されたい。オリゴヌクレオチドは、望ましいならば、検出のための標識を含むことができる。
【０１７５】
下記の用語を使用し、２又はそれよりも多いポリヌクレオチド配列又はアミノ酸配列の間の配列関係を説明する：「参照配列」、「比較ウインドウ」、「配列同一性」、「配列同一性の割合」、及び「実質的同一性」。「参照配列」は、配列比較のための基礎として使用される、規定された配列であり、参照配列は、例えば配列リストに示された完全長ｃＤＮＡ、又は遺伝子配列のセグメントのように、より大きい配列のサブセットであってよいか、或いは完全ｃＤＮＡ又は遺伝子配列を含んでよい。一般に、参照配列は、長さが少なくとも１８ヌクレオチド又は６アミノ酸であり、頻繁には長さが少なくとも２４ヌクレオチド又は８アミノ酸であり、長さが少なくとも４８ヌクレオチド又は１６アミノ酸であることが多い。２つのポリヌクレオチド配列又はアミノ酸配列は、各々、（１）２つの分子の間で類似している配列（すなわち、完全ポリヌクレオチド配列又はアミノ酸配列の一部）を含み、並びに（２）２つのポリヌクレオチド配列又はアミノ酸配列の間で異なる配列を更に含んでよいので、２つ（又はそれよりも多い）分子の間の配列比較は、典型的には配列類似性の局所領域を同定し且つ比較するために、「比較ウインドウ」にわたり２つの分子の配列を比較することにより実行される。本明細書で使用される「比較ウインドウ」は、少なくとも１８の近接ヌクレオチド位置又は６のアミノ酸の概念的セグメントを指し、ここでポリヌクレオチド配列又はアミノ酸配列は、少なくとも１８の近接ヌクレオチド又は６のアミノ酸配列の参照配列と比較されてよく、且つその比較ウインドウ内のポリヌクレオチド配列の位置は、２つの配列の最適アライメントのために、参照配列（これは付加又は欠失を含まない）と比べ２０％以下の付加、欠失、置換など（すなわちギャップ）を含んでよい。比較ウインドウを並置するための配列の最適アラインメントは、Smith及びWaterman、Adv. Appl. Math. 2:482 (1981)の局所相同性アルゴリズムにより、Needleman及びWunsch、J. Mol. Biol. 48:443 (1970)の相同性アラインメントアルゴリズムにより、Pearson及びLipman、Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 85:2444 (1988)の類似性の検索方法により、これらのアルゴリズムのコンピュータによる実行（Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0(Genetics Computer Group, 575 Science Dr., マジソン、WI)、Geneworks、又はMacVectorソフトウェアパッケージにおけるGAP、BESTFIT、FASTA、及びTFASTA）により、又は検証により、実行されてよく、且つ様々な方法により作製された最良のアラインメント（すなわち、比較ウインドウにわたり最高の相同率を生じる）が、選択される。
【０１７６】
用語「配列同一性」は、２つのポリヌクレオチド配列又はアミノ酸配列が、比較ウインドウにわたり、同一である（すなわち、ヌクレオチド毎又は残基毎を基に）ことを意味する。用語「配列同一性の％」は、比較ウインドウにわたり、２つの最適に並置された配列を比較し、両方の配列において同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｕ又はＩ）又は残基が生じる位置の数を決定し、マッチした位置の数を生じ、マッチした位置の数を比較ウインドウの位置の総数（すなわち、ウインドウサイズ）により除算し、その結果を百倍し、配列同一性の割合（％）を生じることにより、計算される。本明細書において使用される用語「実質的同一性」は、ポリヌクレオチド又はアミノ酸の配列の特徴を示し、ここでポリヌクレオチド又はアミノ酸は、少なくとも１８ヌクレオチド（６アミノ酸）位置の比較ウインドウにわたり、頻繁には少なくとも２４〜４８ヌクレオチド（８〜１６アミノ酸）位置のウインドウにわたり、参照配列と比べ、少なくとも８５％の配列同一性、好ましくは少なくとも９０〜９５％の配列同一性、より一般には少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含み、ここで配列同一性％は、その比較ウインドウにわたり参照配列の合計２０％以下である欠失又は付加を含み得る配列を、参照配列と比較することにより、計算される。参照配列は、より大きい配列のサブセットであってよい。
【０１７７】
本明細書に使用されるように、２０種の慣習的アミノ酸及びそれらの略語は、慣習的用法に従う。「Immunology - A Synthesis」（第２版、E.S. Golub及びD.R. Green編集、Sinauer Associates、Sunderland7 Mass. (1991)）参照。２０種の慣習的アミノ酸、α−，α−二置換アミノ酸などの非天然のアミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、及び他の非慣習的アミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）も、本開示のポリペプチドに関する好適な成分であり得る。非慣習的アミノ酸の例は、４ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、ε−Ｎ−アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、σ−Ｎ−メチルアルギニン、及び他の類似のアミノ酸及びイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）を含む。本明細書において使用されるポリペプチド表記法において、標準の用法及び慣習に従い、左手方向は、アミノ末端方向であり、且つ右手方向は、カルボキシ−末端方向である。
【０１７８】
同様に、別に特定しないならば、１本鎖ポリヌクレオチド配列の左側末端は、５’末端であり、２本鎖ポリヌクレオチド配列の左手方向端は、５’方向と称される。新生ＲＮＡ転写産物の５’から３’方向の付加は、転写方向と称され、ＲＮＡと同じ配列を有し且つＲＮＡ転写産物の５’から５’末端であるＤＮＡ鎖上の配列領域は、「上流配列」と称され、並びにＲＮＡと同じ配列を有し且つＲＮＡ転写産物の３’から３’末端であるＤＮＡ鎖上の配列領域は、「下流配列」と称される。
【０１７９】
ポリペプチドに適用される用語「実質的同一性」は、デフォルトのギャップウェイトを使用する、ＧＡＰ又はＢＥＳＴＦＩＴプログラムなどにより最適に並置された２つのペプチド配列は、少なくとも８０％の配列同一性、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性、及び最も好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を共有することを意味する。
【０１８０】
好ましくは、同一でない残基位置は、保存的アミノ酸置換により異なる。
【０１８１】
保存的アミノ酸置換は、類似の側鎖を有する残基の互換性を指す。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシンであり；脂肪族−ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群は、セリン及びトレオニンであり；アミド−含有側鎖を有するアミノ酸の群は、アスパラギン及びグルタミンであり；芳香族側鎖を有するアミノ酸の群は、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンであり；塩基性側鎖を有するアミノ酸の群は、リジン、アルギニン、及びヒスチジンであり；並びに、硫黄−含有側鎖を有するアミノ酸の群は、システイン及びメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換基は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸、及びアスパラギン−グルタミンである。
【０１８２】
本明細書に考察したように、抗体又は免疫グロブリン分子のアミノ酸配列の小さい変動は、そのアミノ酸配列おける変動が、少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、９０％、９５％、及び最も好ましくは９９％を維持することを条件として、本開示により包含されるように企図される。特に、保存的アミノ酸の置き換えが企図される。保存的置き換えは、それらの側鎖に関連しているアミノ酸のファミリー内で起こるものである。遺伝子コードされたアミノ酸は一般に、以下のファミリーに分けられる：（１）酸性アミノ酸は、アスパラギン酸、グルタミン酸であり；（２）塩基性アミノ酸は、リジン、アルギニン、ヒスチジンであり；（３）非極性アミノ酸は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンであり、並びに（４）非帯電極性アミノ酸は、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシンである。親水性アミノ酸は、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、セリン、及びトレオニンを含む。疎水性アミノ酸は、アラニン、システイン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシン及びバリンを含む。アミノ酸の他のファミリーは、（ｉ）脂肪族−ヒドロキシファミリーである、セリン及びトレオニン；（ｉｉ）アミド含有ファミリーである、アスパラギン及びグルタミン；（ｉｉｉ）脂肪族ファミリーである、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン；並びに、（ｉｖ）芳香族ファミリーである、フェニルアラニン、トリプトファン、及びチロシンに分けられる。例えば、ロイシンのイソロイシン又はバリンによる、アスパラギン酸のグルタミン酸による、トレオニンのセリンによる単離された置き換え、又はアミノ酸の構造的に関連したアミノ酸による類似の置き換えは、特にその置き換えがフレームワーク部位内のアミノ酸に関与しない場合に、生じる分子の結合又は特性に大きな作用を有さないと考えることは、妥当である。アミノ酸変化は、機能的ペプチドを生じるかどうかは、ポリペプチド誘導体の特異的活性をアッセイすることにより、容易に決定することができる。アッセイは、本明細書に詳述される。抗体又は免疫グロブリン分子のアナログは、当業者により容易に調製することができる。好ましいアナログのアミノ−末端及びカルボキシ−末端は、機能ドメインの境界近傍に生じる。構造ドメイン及び機能ドメインは、ヌクレオチド及び／又はアミノ酸配列データの、公開されたか又は独占使用権のある配列データベースとの比較により、同定することができる。好ましくは、コンピュータによる比較法を用い、配列モチーフを同定するか、或いは既知の構造及び／又は機能の他のタンパク質において生じるタンパク質コンホメーションドメインを予測する。既知の三次元構造へフォールディングするタンパク質配列を同定する方法は、公知である。Bowieら、Science, 253:164 (1991)。従って、前述の例は、当業者は、本開示に従い構造ドメイン及び機能ドメインを規定するために使用することができる配列モチーフ及び構造コンホメーションを認識することができることを��らかにしている。
【０１８３】
好ましいアミノ酸置換は、（１）タンパク質分解の受け易さを低減し、（２）酸化の受け易さを低減し、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変更し、（４）結合親和性を変更し、且つ（４）かかるアナログの他の物理化学特性又は機能特性を付与又は修飾する：ものである。アナログは、天然に生じるペプチド配列以外の配列の様々な変異タンパク質を含むことができる。例えば、単独又は複数のアミノ酸置換（好ましくは保存的アミノ酸置換）は、天然に生じる配列において（好ましくは分子間接触を形成するドメイン（複数可）の外側のポリペプチド部分において）生じることができる。保存的アミノ酸置換は、親配列の構造的特徴を実質的に変化してはならない（例えば、置き換えアミノ酸は、親配列において生じるヘリックスを破壊するか、又は親配列を特徴付ける二次構造の他の型を混乱する傾向はあってはならない）。当該技術分野において認識されたポリペプチド二次構造及び三次構造の例は、「Proteins, Structures and Molecular Principles)」(Creighton編集W. H. Freeman and Company, New York (1984))；「Introduction to Protein Structure」(C. Branden及びJ. Tooze編集、Garland Publishing, ニューヨーク, NY(1991))；並びに、Thorntonら、Nature, 354:105 (1991)において説明される。
【０１８４】
用語「物質」は、化学化合物、化学化合物の混合物、生体高分子、又は生物学的材料から作製された抽出物を意味するように、本明細書において使用される。
【０１８５】
本明細書において使用される用語「標識」又は「標識された」は、例えば、放射標識されたアミノ酸の組込み、又は印を付けたアビジン（例えば、光学的もしくは熱量測定方法により検出することができる蛍光マーカーもしくは酵素活性を含むストレプトアビジン）により検出することができるビオチン化部分のポリペプチドへの結合による、検出可能なマーカーの組込みを指す。特定の状況において、標識又はマーカーはまた治療薬であることもできる。ポリペプチド及び糖タンパク質を標識する様々な方法が、当該技術分野において公知であり、且つ使用することができる。ポリペプチドのための標識の例は、以下を含むが、これらに限定されるものではない：放射性同位元素又は放射性核種（例えば、3Ｈ、14Ｃ、15Ｎ、35Ｓ、90Ｙ、99Ｔｃ、111Ｉｎ、125Ｉ、131Ｉ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドリン光体）、酵素標識（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、ｐ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光、ビオチン化基、二次リポーターにより認識される予め決定されたポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）。一部の実施態様において、標識は、可能性のある立体障害を減少するために、様々な長さのスペーサーアームにより結合される。本明細書で使用される用語「医薬品又は薬物」は、適切に患者へ投与される場合に、所望の治療効果を誘導することが可能である化学化合物又は組成物を指す。
【０１８６】
本明細書の他の化学用語は、The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (Parker, S.編集、McGraw-Hill、サンフランシスコ(1985))に例示されたような、当該技術分野において慣習的な用法に従い使用される。
【０１８７】
本明細書において使用される「実質的に純粋」とは、対象種が、存在する優先的な種である（すなわち、モルベースで、これは組成物中のあらゆる他の個別の種よりもより豊富である）ことを意味し、且つ好ましくは実質的に精製された画分は、対象種が、存在する全ての巨大分子種の少なくとも約５０％（モルベースで）を含む組成物である。
【０１８８】
一般に、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在する全ての巨大分子種の約８０％よりも多くを、より好ましくは約８５％、９０％、９５％、及び９９％より多くを含むであろう。最も好ましくは、対象種は、本質的に均質である（夾雑種は、慣習的検出法により、組成物中に検出することができない）ように精製され、ここで組成物は、本質的に単独の巨大分子種からなる。
【０１８９】
以下の説明及び請求項の両方における冠詞「a、an、the」の使用は、本明細書において別に指摘しないか又は文脈により明確に否定されない限りは、単数及び複数の両方を対象とするように解釈される。用語「含む(comprising)」、「有する」、「化学式における」のような「における」、「含む(including)」及び「含んでいる(containing)」は、別に注記しない限りは、オープンタームとして構築される（すなわち、「含むが、これらに限定されるものではない」ことを意味する）。例えば、特定の式のポリマースカフォールドは、その式において示されるモノマー単位全てを含み、且つまたその式において示されない追加のモノマー単位も含んでよい。加えて、「含む」又は別のオープンエンドタームが実施態様において使用される場合は常に、同じ実施態様が、インターメディエイトターム「から本質的になる」又はクローズドターム「からなる」を使用しより狭く請求することができると理解されるべきである。
【０１９０】
用語「約」、「およそ」又は「ほぼ」は、数値に結びつけて使用される場合、値の集合又は範囲が、含まれることを意味する。例えば、「約Ｘ」は、Ｘの±２０％、±１０％、±５％、±２％、±１％、±０．５％、±０．２％、又は±０．１％である値の範囲を含み、ここでＸは数値である。一実施態様において、用語「約」は、特定された値よりも、５％より多い又はより少ない値の範囲を指す。別の実施態様において、用語「約」は、特定された値よりも、２％より多い又はより少ない値の範囲を指す。別の実施態様において、用語「約」は、特定された値よりも、１％より多い又はより少ない値の範囲を指す。
【０１９１】
値の範囲の列挙は、本明細書において別に指摘しない限りは、その範囲内に収まる各個別の値を個々に言及することの簡便な方法として働くことが単に意図され、且つ各個別の値は、本明細書に個々に列挙されるように、本明細書に組込まれる。本明細書において使用される範囲は、別に特定されない限りは、その範囲の２つの限界を含む。例えば、表現「１と６の間の整数であるｘ」及び「１から６の整数であるｘ」は、両方共、「１、２、３、４、５、又は６であるｘ」を意味し、すなわち、用語「ＸとＹの間」及び「ＸからＹまでの範囲」は、Ｘ及びＹ、並びにその間の整数を含む。
【０１９２】
本明細書記載の全ての方法は、本明細書において別に指摘しない限り又は文脈により明確に否定されない限りは、任意の好適な順番で実行することができる。本明細書に提供される任意及び全ての例、又は例証的用語（例えば、「のような」）の使用は、本開示をより良く例示することのみが意図され、且つ明確に別に請求されない限りは、請求項の範囲に対する限定として解釈されるものではない。本明細書中の言語は、何らかの請求されない要素は、請求される事項に必須であることを示すようには解釈されない。
【０１９３】
本明細書において使用される「生体適合性」は、体液又は生存細胞もしくは組織と接触される際に、最小の破壊的作用又は宿主反応作用を発揮する化合物を説明することが意図される。従って、本明細書において使用される「生体適合性基」は、脂肪族、シクロアルキル、ヘテロ脂肪族、ヘテロシクロアルキル、アリール又はヘテロアリール部分を指し、これは先に及び本明細書において規定したように、用語「生体適合性」の定義内に収まる。本明細書において使用される用語「生体適合性」はまた、その化合物は、かかる相互作用が特に望ましいことを除いて、認識タンパク質と、例えば、天然に生じる抗体、細胞タンパク質、細胞及び生体系の他の成分と、最小の相互作用を発揮することを意味すると解される。従って、前述の最小の相互作用を引き起こすことが特に意図される物質及び官能基、例えば薬物及びプロドラッグは、生体適合性であると考えられる。好ましくは（細胞毒性であると意図される化合物、例えば抗新生物薬などを除いて）、インビトロにおいて、意図される全身のインビボ濃度に類似した濃度での、正常細胞への化合物の添加が、その化合物のインビボにおける半減期（例えば、インビボ投与された化合物の５０％が消失／クリアランスされるのに必要な期間）と同等の期間に、１％未満又はそれと等しい細胞死を生じる場合、並びにそれらのインビボ投与が、最小の及び医学的に許容し得る炎症、異物反応、免疫毒性、化学毒性及び／又は他のかかる有害作用を誘導する場合に、化合物は「生体適合性」である。前述の文において、用語「正常細胞」とは、試験される化合物により破壊されるか、又はそうでなければ著しく影響されることが意図されない細胞を指す。
【０１９４】
「生分解性」：本明細書において使用される「生分解性」ポリマーは、インビボにおいて生物学的処理を受け易いポリマーである。本明細書において使用される「生分解性」化合物又は部分は、細胞により取込まれた場合に、リソソームのもしくは他の化学機構により、又は細胞が、細胞への著しい毒性作用を伴わずに再使用もしくは処分のいずれかができる成分への加水分解により、破壊され得るものである。本明細書において使用される用語「生体切断可能性(biocleavable)」は、「生分解性」と同じ意味を有する。その分解断片は、好ましくは、臓器又は細胞の過剰負荷、又はインビボにおいてかかる過剰負荷もしくは他の有害作用により引き起こされる病的過程を、ほどんど又は全く誘導しない。生分解過程の例は、酵素的及び非酵素的加水分解、酸化及び還元を含む。本明細書記載の生分解性タンパク質−ポリマー−薬物コンジュゲート（又はそれらの成分、例えば、生分解性ポリマー担体及び担体と抗体もしくは薬物分子の間のリンカー）の非酵素的加水分解に適した条件は、例えば、リソソーム細胞内区分の温度及びｐＨでの、生分解性コンジュゲートの水への曝露を含む。一部のタンパク質−ポリマー−薬物コンジュゲート（又はそれらの成分、例えば、生分解性ポリマー担体及び担体と抗体もしくは薬物分子の間のリンカー）の生分解もまた、細胞外で、例えば動物の体の低いｐＨ領域、例えば非炎症領域で、活性化されたマクロファージ又は分解促進因子を放出している他の細胞の近傍において、増強されることができる。特定の好ましい実施態様において、ｐＨ〜７．５でのポリマー担体の有効サイズは、１〜７日間にわたり検出できるようには変化せず、且つ少なくとも数週間は当初のポリマーサイズの５０％以内であり続ける。他方ｐＨ〜５では、ポリマー担体は、好ましくは、１〜５日間にわたり、検出可能に分解し、且つ２週間から数ヶ月の時間枠内で、低分子量断片へ完全に転換される。かかる試験におけるポリマー完全性は、例えば、サイズ排除ＨＰＬＣにより、測定することができる。より迅速な分解は、場合によっては好ましいが、概してポリマーは、細胞によるポリマー断片の代謝及び排泄の速度を超えない速度で、細胞において分解することがより望ましい。好ましい実施態様において、ポリマー及びポリマー生分解副産物は、生体適合性である。
【０１９５】
本明細書において使用される「マレイミドブロッキング化合物」は、マレイミドと反応し、これをスクシンイミドへ転換することができる化合物を指し、且つ「マレイミドブロッキング部分」は、転換時にスクシンイミドへ結合された化学部分を指す。特定の実施態様において、マレイミドブロッキング化合物は、マレイミドと反応するための末端チオール基を有する化合物である。一実施態様において、マレイミドブロッキング化合物は、システイン、Ｎ−アセチルシステイン、システインメチルエステル、Ｎ−メチルシステイン、２−メルカプトエタノール、３−メルカプトプロパン酸、２−メルカプト酢酸、メルカプトメタノール（すなわち、ＨＯＣＨ2ＳＨ）、フェニルが１又は複数の親水性置換基により置換されているベンジルチオール、又は３−アミノプロパン−１−チオールである。
【０１９６】
「親水性」：用語「親水性」は、例えばそれらを親水性又は水溶性とする、ポリマーモノマー単位上又はマレイミドブロッキング部分上の置換基に関する場合、当該技術分野のこの用語の通常の意味とは本質的に異ならず、且つイオン化、極性、もしくは分極性原子を含むか、又はそうでなければ水分子により溶媒和とされる化学部分を意味する。従って、本明細書において使用される「親水基」は、脂肪族、シクロアルキル、ヘテロ脂肪族、ヘテロシクロアルキル、アリール又はヘテロアリール部分を指し、これは先に規定したように、用語「親水性」の定義内に収まる。適している特定の親水性有機部分の例は、約１個と１２個原子の間の範囲の原子鎖を含む脂肪族基又はヘテロ脂肪族基、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アミン、カルボキシル、アミド、カルボン酸エステル、チオエステル、アルデヒド、ニトリル、イソニトリル、ニトロソ、ヒドロキシルアミン、メルカプトアルキル、ヘテロ環、カルバメート、カルボン酸及びそれらの塩、スルホン酸及びそれらの塩、スルホン酸エステル、リン酸及びそれらの塩、リン酸エステル、ポリグリコールエーテル、ポリアミン、ポリカルボン酸塩、ポリエステル及びポリチオエステルを含むが、これらに限定されるものではない。特定の実施態様において、親水性置換基は、カルボキシル基（ＣＯＯＨ）、アルデヒド基（ＣＨＯ）、ケトン基（ＣＯＣ1-4アルキル）、メチロール（ＣＨ2ＯＨ）又はグリコール（例えば、ＣＨＯＨ−ＣＨ2ＯＨもしくはＣＨ−（ＣＨ2ＯＨ）2）、ＮＨ2、Ｆ、シアノ、ＳＯ3Ｈ、ＰＯ3Ｈなどを含む。
【０１９７】
用語「親水性」は、本明細書に開示されたポリマーに関する場合、一般に当該技術分野のこの用語の用法とは異ならず、且つ先に規定した親水性官能基を含むポリマーを意味する。好ましい実施態様において、親水性ポリマーは、水溶性ポリマーである。ポリマーの親水性は、水和エネルギーの決定を介して直接測定するか、或いは２つの液相の間の研究を介して、もしくは例えばＣ４もしくはＣ１８など既知の疎水性を持つ固相上のクロマトグラフィーにより、決定することができる。
【０１９８】
「ポリマー担体」：本明細書において使用される用語ポリマー担体とは、指定されたリンカーを伴う１又は複数の薬物分子及び／又は指定されたリンカーを伴う１又は複数のＰＢＲＭへの、共有的結合に適しているか、又は共有的に結合され得る、ポリマー又は修飾されたポリマーを指す。
【０１９９】
「生理的条件」：本明細書において使用される語句「生理的条件」は、恐らく生存組織の細胞外液体中で遭遇する、化学的条件（例えば、ｐＨ、イオン強度）及び生化学的条件（例えば、酵素濃度）の範囲に関する。ほとんどの正常組織に関して、生理的ｐＨは、約７．０〜７．４の範囲にある。循環血漿及び正常間隙液は、正常な生理的条件の典型例を表している。
【０２００】
「薬物」：本明細書において使用される用語「薬物」とは、生物学的に活性があり、且つそれ（例えば、活性医薬構成成分）を必要とする対象への投与後、所望の生理的作用を提供する化合物を指す。
【０２０１】
「抗血管新生物質」又は「血管新生阻害物質」とは、直接又は間接のいずれかで、血管新生、脈管形成、又は望ましくない血管透過性亢進を阻害する、小分子量物質、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、単離されたタンパク質、組換えタンパク質、抗体、又はそれらのコンジュゲートもしくは融合タンパク質を指す。血管新生阻害物質は、血管新生因子又はその受容体に結合するか又は血管新生活性をブロックするそのような物質を含む。例えば、抗血管新生物質は、血管新生物質に対する抗体又は他のアンタゴニストであり、ＶＥＧＦ−Ａ又はＶＥＧＦ−Ａ受容体（例えば、ＫＤＲ受容体もしくはＦｌｔ−１受容体）に対する抗体、ＶＥＧＦ−トラップ、抗−ＰＤＧＦＲ阻害剤、例えばグリーベック（商標）（イマチニブメシラート）を含むが、これらに限定されるものではない。抗血管新生物質はまた、未変性の血管新生阻害物質、例えば、アンギオスタチン、エンドスタチンなどを含む。
【０２０２】
「細胞毒性」：本明細書において使用される用語「細胞毒性」は、細胞又は選択された細胞集団（例えば癌細胞）に対する毒性を意味する。毒性作用は、細胞死及び／又は溶解を生じることができる。特定の例において、毒性作用は、細胞に対し致命的以下の破壊的作用、例えば、細胞増殖を遅延又は停止することができる。細胞毒性作用を達成するために、薬物又はプロドラッグは、とりわけ、ＤＮＡ損傷物質、微小管破壊物質、又は細胞毒性タンパク質もしくはポリペプチドからなる群から選択されてよい。
【０２０３】
「細胞分裂阻害性」：本明細書において使用される用語「細胞分裂阻害性」とは、細胞増殖及び／又は複製を阻害又は停止する薬物又は他の化合物を指す。
【０２０４】
「小型分子」：本明細書において使用される「小型分子」は、天然に生じるか又は人工的に作出される（例えば、化学合成による）かにかかわらず、比較的低い分子量を有する分子を指す。好ましい小型分子は、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトにおいて、局所作用又は全身作用を生じる点で、生物学的活性がある。特定の好ましい実施態様において、小型分子は薬物であり、且つ小型分子は、「薬物分子」又は「薬物」又は「治療薬」と称される。特定の実施態様において、薬物分子は、約５ｋＤａ未満又はそれと等しいＭＷを有する。他の実施態様において、薬物分子は、約１．５ｋＤａ未満又はそれと等しいＭＷを有する。実施態様において、薬物分子は、ビンカ・アルカロイド、アウリスタチン、デュオカルマイシン、ツブリシン、非天然のカンプトテシン化合物、トポイソメラーゼ阻害剤、ＤＮＡ結合薬、キナーゼ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＫＳＰ阻害剤、カリケアマイシン、ＳＮ３８、ピロロベンゾジアゼピン、及びそれらのアナログから選択される。好ましくは、必ずしもではないが、薬物は、適切な政府機関又は団体、例えばＦＤＡにより使用に関して安全且つ有効と既にみなされるものである。例えば、ヒト使用のための薬物は、ＦＤＡの連邦規制集第２１章（ＣＦＲ）３３０．５、３３１から３６１、及び４４０から４６０において；獣医用途のための薬物は、ＦＤＡの連邦規制集第２１章５００から５８９に列挙され、これらは引用により本明細書中に組込まれており、全て本親水性ポリマーとの使用に適していると考えられる。
【０２０５】
本明細書において使用される「薬物誘導体」又は「修飾された薬物」などは、本明細書に開示されたコンジュゲート及び薬物分子をポリマー担体へ結合することが可能である官能基により送達されることが意図された薬物分子を含む化合物を指す。
【０２０６】
本明細書において使用される「活性型」は、インビボ又はインビトロにおいて意図された医薬有効性を発揮する化合物の形状を指す。特に、本明細書に開示されたコンジュゲートにより送達されることが意図された薬物分子がコンジュゲートから放出される場合、活性型は、意図された治療特性を発揮する薬物それ自身又はその誘導体であることができる。コンジュゲートからの薬物の放出は、薬物をポリマー担体へ結合するリンカーの生分解性結合の切断により達成することができる。従って活性薬物誘導体は、リンカーの一部を含むことができる。
【０２０７】
「ＰＨＦ」とは、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチル−ホルマール）を指す。
【０２０８】
本明細書において使用される用語「ポリマー単位」、「モノマー性単位」、「モノマー」、「モノマー単位」、「単位」は全て、ポリマー中の反復可能な構造単位を指す。
【０２０９】
本明細書において使用されるポリマー又はポリマー担体／スカフォールド又はポリマーコンジュゲートの「分子量」又は「ＭＷ」は、別に特定されない限り、未修飾のポリマーの重量平均分子量を指す。
【０２１０】
本明細書において使用される「免疫チェックポイント阻害剤」又は「免疫チェックポイント阻害物質」又は「免疫チェックポイントブロッキング物質」又は「免疫チェックポイントモジュレーター」とは、阻害性免疫チェックポイントタンパク質に結合し且つその活性をブロックし、それにより免疫系が腫瘍細胞を認識することを可能にし、且つ持続された免疫療法反応をもたらす物質を指す。この阻害は、ステリック又はアロステリックであることができる競合性又は非競合性阻害であることができる。免疫チェックポイントタンパク質が免疫刺激タンパク質である場合において、免疫チェックポイント阻害剤は、例えば刺激性免疫チェックポイントタンパク質に結合し且つ活性化することによるか、或いは刺激性免疫チェックポイントタンパク質の阻害剤へ結合し且つ失活することによるなど、これと干渉することにより阻害することで免疫刺激タンパク質の活性を促進するように作用する。免疫チェックポイント阻害剤の例は、抗−免疫チェックポイントタンパク質抗体である。
【０２１１】
本明細書において使用される「免疫チェックポイント」とは、副次的(collateral)組織損傷を最小化するために、自己忍容性を維持し、且つ末梢組織における生理学的免疫応答の期間及び大きさを修飾することに寄与する、免疫系の阻害経路を指す。免疫チェックポイントは、免疫チェックポイントタンパク質により調節される。
【０２１２】
本明細書において使用される「免疫チェックポイントタンパク質」とは、免疫応答の程度を調節又は修飾する、タンパク質、典型的には受容体（例えば、ＣＴＬＡ４もしくはＰＤ−１）又はリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１）を指す。免疫チェックポイントタンパク質は、阻害性又は刺激性であることができる。特に免疫チェックポイントタンパク質は、免疫応答の活性化に対し阻害性である。従って阻害性免疫チェックポイントタンパク質の阻害は、Ｔ細胞活性化及び増殖などの、免疫応答を刺激又は活性化するように作用する。
【０２１３】
本明細書において使用される免疫チェックポイント阻害剤の「標的」は、それに対し免疫チェックポイント阻害剤又は免疫チェックポイント阻害物質が結合し、活性をブロックする、免疫チェックポイントタンパク質である。典型的には、免疫チェックポイント阻害剤は、標的に特異的に結合する。例えば、イピリムマブと称される例証的抗−ＣＴＬＡ４抗体の標的は、ＣＴＬＡ４である。
【０２１４】
本明細書において使用される「併用療法」は、単独の疾患を治療するために、対象に、少なくとも２種又は少なくとも３種の治療薬など、２種又はそれよりも多い治療薬が与えられる治療を指す。本明細書の目的に関して、併用療法は、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート及び免疫チェックポイント阻害剤による療法を含む。
【０２１５】
本明細書で使用される「同時投与」、「同時投与する」又は「同時投与された」とは、十分に近い間隔での、少なくとも２種の異なる治療薬の投与を指す。かかる投与は、同時投与、並びに数秒から最大数日間、間をあけた投与を含め、任意の順番で行われてよい。かかる投与はまた、１つの物質及び／又は独立して他の物質の単回より多い投与を含んでよい。これらの物質の投与は、同じ又は異なる経路により行われてよい。
【０２１６】
本明細書で使用される「抗−ＣＴＬＡ４抗体」とは、細胞傷害性Ｔリンパ球−関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）又はそれらの可溶性断片に特異的に結合し、且つリガンドのＣＴＬＡ４への結合をブロックし、これによりＣＴＬＡ４の競合的阻害及びＴ細胞活性化のＣＴＬＡ４−媒介性阻害の阻害を生じる、任意の抗体を指す。それ故、抗−ＣＴＬＡ４抗体は、ＣＴＬＡ４阻害剤である。本明細書における抗−ＣＴＬＡ４抗体の言及は、ＣＴＬＡ４へ特異的に結合する、完全長抗体及びその誘導体、例えばその抗原−結合性断片を含む。抗−ＣＴＬＡ４抗体の例は、イピリムマブ又はトレメリムマブ又はそれらの誘導体もしくは抗原−結合性断片を含むが、これらに限定されるものではない。
【０２１７】
本明細書で使用される「細胞傷害性Ｔリンパ球−関連タンパク質４」（ＣＴＬＡ４；ＣＤ１５２としても公知）抗原とは、ＣＤ８０（Ｂ７−１とも称される）及びＣＤ８６（Ｂ７−２とも称される）などのリガンドにより結合される、免疫グロブリンスーパーファミリーの阻害性受容体を指す。ＣＴＬＡ４は、ヒト及び非ヒトタンパク質を含む。特に、ＣＴＬＡ４抗原は、ヒトＣＴＬＡ４を含み、これは配列番号１０に示したアミノ酸配列を有する（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号ＡＡＬ０７４７３．１参照）。
【０２１８】
本明細書で使用される「抗−ＰＤ−１抗体」とは、プログラムされた細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）又はそれらの可溶性断片へ特異的に結合し、且つリガンドのＰＤ−１への結合をブロックし、これにより、ＰＤ−１の競合的阻害及びＴ細胞活性化のＰＤ−１媒介性阻害の阻害を生じる、任意の抗体を指す。それ故、抗−ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１阻害剤である。本明細書における抗−ＰＤ−１抗体の言及は、ＰＤ−１へ特異的に結合する、完全長抗体及びその誘導体、例えばその抗原−結合性断片を含む。抗−ＰＤ−１抗体の例は、ニボルマブ、ＭＫ−３４７５、ピジリズマブ又はそれらの誘導体もしくは抗原−結合性断片を含むが、これらに限定されるものではない。
【０２１９】
本明細書で使用される「プログラムされた細胞死タンパク質１」（ＰＤ−１）抗原とは、１型膜タンパク質であり、且つＢ７ファミリーのメンバーであるＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２などのリガンドにより結合される、阻害性受容体を指す。ＰＤ−１は、ヒト及び非ヒトタンパク質を含む。特に、ＰＤ−１抗原は、ヒトＰＤ−１を含み、これは配列番号２９９に示したアミノ酸配列を有する（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ寄託番号Ｑ１５１１６．３参照）。本明細書で使用される抗−ＰＤ−Ｌ１抗体は、プログラムされた死−リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）又はそれらの可溶性断片へ特異的に結合し、且つリガンドのＰＤ−１への結合をブロックし、これにより、ＰＤ−１の競合的阻害及びＴ細胞活性化のＰＤ−１媒介性阻害の阻害を生じる抗体を指す。それ故、抗−ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＰＤ−１阻害剤である。本明細書における抗−ＰＤ−Ｌｌ抗体の言及は、ＰＤ−Ｌ１へ特異的に結合する、完全長抗体及びその誘導体、例えばその抗原−結合性断片を含む。抗−ＰＤ−Ｌｌ抗体の例は、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６又はそれらの誘導体もしくは抗原−結合性断片を含むが、これらに限定されるものではない。
【０２２０】
本明細書で使用される「投薬レジメン」又は「投薬計画」とは、投与される物質の量、例えばＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲートを含有する組成物の量、及び投与頻度を指す。投薬レジメンは、治療される疾患又は状態の関数であり、従って変動し得る。
【０２２１】
本明細書で使用される投与の「頻度」とは、治療の連続投与の間の時間を指す。例えば、頻度は、数日、数週又は数ヶ月であることができる。例えば、頻度は、週１回以上、例えば、週２回、週３回、週４回、週５回、週６回又は毎日であることができる。頻度はまた、１、２、３又は４週間であることができる。特定の頻度は、治療される特定の疾患又は状態の関数である。一般に、頻度は、週１回以上であり、一般に週２回である。
【０２２２】
本明細書で使用される「投与サイクル」とは、連続投与にわたり繰り返される酵素及び／又は第二物質の投与の投薬レジメンの反復スケジュールを指す。例えば、例証的投与サイクルは、３週間にわたり週２回の投与、それに続く１週間の休薬を伴う、２８日サイクルである。
【０２２３】
本明細書で使用されるように、ｍｇ／対象のｋｇを基にした用量が言及される場合、平均ヒト対象は、体重(mass)約７０ｋｇ〜７５ｋｇ、例えば７０ｋｇ、並びに体表面積（ＢＳＡ）１．７３ｍを有すると考えられる。本明細書で使用される医薬組成物又は他の治療薬の投与などによる、治療による特定の疾患又は障害の症状の改善は、症状の、又は状態の有害作用の、永久的又は一時的、持続性又は一過性かにかかわらず、何らかの減少、例えば、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲートに関連した又はこれの投与時に生じる有害作用の軽減などを指す。
【０２２４】
本明細書で使用される「治療している」又は「治療する」は、疾患、状態、又は障害を根絶することを目的とした患者の管理及び治癒を説明し、且つ疾患、状態又は障害の症状又は合併症を軽減するため、或いは疾患、状態又は障害を排除するための、本開示のコンジュゲート、又はそれらの医薬組成物の投与を含む。
【０２２５】
本明細書で使用される「防止」又は「予防」とは、疾患もしくは状態を発生するリスクの減少、又は疾患、状態もしくは障害の症状もしくは合併症の発症の減少もしくは排除を指す。
【０２２６】
用語「有効量」又は「十分量」は、活性物質について言及される場合、これらは所望の生物学的反応を誘起するのに必要な量を指す。本明細書で使用される「治療的有効量」又は「治療的に有効な投与量」とは、検出可能な治療効果を生じるのに少なくとも十分である、物質、化合物、材料、又は化合物を含有する組成物の量又は分量を指す。この効果は、当該技術分野において公知の任意のアッセイ方法により、検出することができる。対象に関する正確な有効量は、対象の体重、サイズ、及び健康状態；状態の性質及び程度；並びに投与のために選択された治療薬によって左右されるであろう。
【０２２７】
「対象」は、哺乳動物を含む。哺乳動物は、例えば、任意の哺乳動物、例えば、ヒト、霊長類、鳥類、マウス、ラット、家禽、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヤギ、ラクダ、ヒツジ又はブタであることができる。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【０２２８】
本明細書で使用される「単位投与量形」又は「単位剤形」とは、ヒト及び動物対象に適している物理的に個別の単位を指し、且つ当該技術分野において公知のように個別に包装されている。
【０２２９】
本明細書で使用される単回投与量製剤は、単回投与量としての製剤を指す。
【０２３０】
本明細書で使用される「キット」とは、成分の組合せ、例えば本明細書の組成物と、非限定的に、再構成、活性化を含む目的のための他の商品との、並びに、送達、投与、診断及び生物活性もしくは特性の評価のための器具／装置との組合せなどを指す。キットは、任意に使用説明書を含む。
【０２３１】
本開示は、本化合物において生じる原子の全ての同位体を含むことが意図される。同位体は、同じ原子番号を有するが、異なる質量数を有する、それらの原子を含む。一般例として限定せずに、水素の同位体は、トリチウム及び重水素を含む。炭素の同位体は、Ｃ−１３及びＣ−１４を含む。
【０２３２】
本開示は、光学異性体、及び互変異性体と称され且つこれらを含む、化合物の全ての異性体を含むことが意図され、ここで光学異性体は、エナンチオマー及びジアステレオマー、キラル異性体及び非キラル異性体を含み、且つ光学異性体は、単離された光学異性体、並びにラセミ体及び非ラセミ体の混合物を含む光学異性体の混合物を含み；ここで、異性体は、単離された形状又は１又は複数の他の異性体との混合物であってよい。
【０２３３】
ＮａＰｉ２ｂ抗体
本明細書に開示された抗体−薬物コンジュゲートは、ＮａＰｉ２ｂを特異的に認識し且つＮａＰｉ２ｂ活性を阻害する能力を有する、モノクローナル抗体を含む。
【０２３４】
本明細書に開示された抗体−薬物コンジュゲートにおいて使用される抗体の例は、例えば、本明細書においてＸＭＴ１５３５抗体及び／又は１０Ｈ１．１１．４Ｂ抗体と称される抗体を含む。これらの抗体は、ヒトＮａＰｉ２ｂに対する特異性を示し、且つこれらはすインビトロにおいてＮａＰｉ２ｂの機能活性を阻害することが示されている。
【０２３５】
本明細書記載の各ＮａＰｉ２ｂモノクローナル抗体は、以下に示したアミノ酸配列及び対応する核酸配列に示されたように、重鎖（ＨＣ）、重鎖可変領域（ＶＨ）、軽鎖（ＬＣ）、及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。各抗体に関する可変重鎖領域及び可変軽鎖領域には、以下のアミノ酸配列において影をつけている。重鎖及び軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）には、以下に示したアミノ酸配列において下線を付けている。ＸＭＴ１５３５抗体に関する相補性決定領域（ＣＤＲ）を包含するアミノ酸は、E.A. Kabatらにより規定され（Kabat, E.A.ら、「Sequences of Protein of immunological interest」第5版、US Department of Health and Human Services, US Government Printing Office (1991)参照）、且つ米国特許第８，６０３，４７４号に開示され、並びに１０Ｈ１．１１．４Ｂ抗体に関するＣＤＲを包含しているアミノ酸は、米国特許第８，５３５，６７５号に規定されている。
＞ＸＭＴ１５３５重鎖アミノ酸配列（重鎖可変領域（配列番号３）＋ＩｇＧ１重鎖定常領域（配列番号１１））
2019508456.tif 000031
ＣＤＲＨ１：  GYTFTGYNIH  （配列番号５）
ＣＤＲＨ２：  AIYPGNGDTSYKQKFRG  （配列番号６）
ＣＤＲＨ３：  GETARATFAY  （配列番号７）
＞ＸＭＴ  １５３５軽鎖アミノ酸配列（軽鎖鎖可変領域（配列番号４）＋軽鎖定常領域（配列番号１２））
2019508456.tif 000032
ＣＤＲＬ１：  SASQDIGNFLN  （配列番号８）
ＣＤＲＬ２：  YTSSLYS  （配列番号９）
ＣＤＲＬ３：  QQYSKLPLT  （配列番号１０）
＞１０Ｈ１．１１．４Ｂ重鎖アミノ酸配列（重鎖可変領域（配列番号１６）＋ＩｇＧ１重鎖定常領域（配列番号１３））
2019508456.tif 000033
ＣＤＲＨ１：  GFSFSDFAMS  （配列番号１８）
ＣＤＲＨ２：  ATIGRVAFHTYYPDSMKG  （配列番号１９）
ＣＤＲＨ３：  ARHRGFDVGHFDF  （配列番号２０）
＞１０Ｈ１．１１．４Ｂ軽鎖アミノ酸配列（軽鎖可変領域（配列番号１７）＋軽鎖定常領域（配列番号１２））
2019508456.tif 000034
ＣＤＲＬ１：  RSSETLVHSSGNTYLE  （配列番号２１）
ＣＤＲＬ２：  RVSNRFS  （配列番号２２）
ＣＤＲＬ３：  FQGSFNPLT  （配列番号２３）
【０２３６】
同じく、本明細書記載の抗体と同じエピトープに結合するか又は同じエピトープへの結合と交差競合する抗体も、本開示に含まれる。例えば、本明細書に開示された抗体は、ＮａＰｉ２ｂへ特異的に結合し、ここで該抗体は、ヒトＮａＰｉ２ｂ上の１又は複数のアミノ酸残基を含むエピトープ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号Ｏ９５４３６．３）へ結合する。
【０２３７】
本明細書に開示された抗体は、以下のアミノ酸配列を含む完全長ヒトＮａＰｉ２ｂ上のエピトープへ特異的に結合する：
1 MAPWPELGDA QPNPDKYLEG AAGQQPTAPD KSKETNKTDN TEAPVTKIEL
51 LPSYSTATLI DEPTEVDDPW NLPTLQDSGI KWSERDTKGK ILCFFQGIGR
101 LILLLGFLYF FVCSLDILSS AFQLVGGKMA GQFFSNSSIM SNPLLGLVIG
151 VLVTVLVQSS STSTSIVVSM VSSSLLTVRA AIPIIMGANI GTSITNTIVA
201 LMQVGDRSEF RRAFAGATVH DFFNWLSVLV LLPVEVATHY LEIITQLIVE
251 SFHFKNGEDA PDLLKVITKP FTKLIVQLDK KVISQIAMND EKAKNKSLVK
301 IWCKTFTNKT QINVTVPSTA NCTSPSLCWT DGIQNWTMKN VTYKENIAKC
351 QHIFVNFHLP DLAVGTILLI LSLLVLCGCL IMIVKILGSV LKGQVATVIK
401 KTINTDFPFP FAWLTGYLAI LVGAGMTFIV QSSSVFTSAL TPLIGIGVIT
451 IERAYPLTLG SNIGTTTTAI LAALASPGNA LRSSLQIALC HFFFNISGIL
501 LWYPIPFTRL PIRMAKGLGN ISAKYRWFAV FYLIIFFFLI PLTVFGLSLA
551 GWRVLVGVGV PVVFIIILVL CLRLLQSRCP RVLPKKLQNW NFLPLWMRSL
601 KPWDAVVSKF TGCFQMRCCC CCRVCCRACC LLCDCPKCCR CSKCCEDLEE
651 AQEGQDVPVK APETFDNITI SREAQGEVPA SDSKTECTAL  （配列番号２４）
【０２３８】
本明細書に開示された抗体は、ヒトＮａＰｉ２ｂの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）上のエピトープへ特異的に結合する。
【０２３９】
当業者は、モノクローナル抗体(former)は、本明細書に開示されたモノクローナル抗体(latter)が、天然の結合パートナー又はＮａＰｉ２ｂに会合することがわかっている他の分子へ結合するのを妨害するかどうかを解明することにより、過度の実験を伴わずに、モノクローナル抗体が、本明細書に開示されたモノクローナル抗体（例えば、ＸＭＴ１５３５、１０Ｈ１．１１．４Ｂ）と同じ特異性を有するかどうかを決定することは可能であることを認めるであろう。本明細書に開示されたモノクローナル抗体による結合の減少により示されるように、被験モノクローナル抗体が、本明細書に開示されたモノクローナル抗体と競合するならば、これら２種のモノクローナル抗体は、同じエピトープ又は密接に関連したエピトープに結合する。
【０２４０】
モノクローナル抗体が、本明細書に開示されたモノクローナル抗体の特異性を有するかどうかを決定する代替方法は、本明細書に開示されたモノクローナル抗体を、可溶性ＮａＰｉ２ｂ（これにより通常の反応性を有する）と予備インキュベーションし、次に被験モノクローナル抗体を添加し、ＮａＰｉ２ｂへ結合するその能力が阻害されるかどうかを、被験モノクローナル抗体について決定することである。被験モノクローナル抗体が阻害される場合、ほとんど確実に、これは、本明細書に開示されたモノクローナル抗体と同じ又は機能的に同等のエピトープ特異性を有する。
【０２４１】
本明細書に開示されたモノクローナル抗体のスクリーニングはまた、例えば、ＮａＰｉ２ｂ−媒介性活性を測定し、且つ被験モノクローナル抗体がＮａＰｉ２ｂの活性を修飾、ブロック、阻害、減少、拮抗、中和、又はそうでなければ干渉することができるかどうかを決定することにより、実行することができる。
【０２４２】
ＮａＰｉ２ｂ抗体は、例えば、ＮａＰｉ２ｂに対する、又はその誘導体、断片、アナログ、ホモログもしくはオルソログに対する、モノクローナル抗体を産生するために使用され得る、当該技術分野において公知の様々な手順を使用し作製されてよい（例えば、「Antibodies: A Laboratory Manual」、Harlow E及びLane D, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory Press, コールドスプリングハーバー, NYを参照し、これは引用により本明細書中に組込まれている）。完全ヒト抗体は、そのＣＤＲを含む、軽鎖及び重鎖の両方の全配列がヒト遺伝子から生じる、抗体分子である。かかる抗体は、本明細書において「ヒト抗体」又は「完全ヒト抗体」と称される。ヒトモノクローナル抗体は、例えば、以下に提供される実施例に説明された手順を用いて調製される。ヒトモノクローナル抗体はまた、トリオーマ技術；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Kozborら、1983 Immunol Today 4: 72参照）；及び、ヒトモノクローナル抗体を作製するためのＥＢＶハイブリドーマ技術（Coleら、1985、「MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY」、Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96参照）を使用することにより、調製することもできる。ヒトモノクローナル抗体は、ヒトハイブリドーマを使用することにより（Coteら、1983. Proc Natl Acad Sci USA 80: 2026-2030参照）、又はヒトＢ細胞をエプスタイン・バー・ウイルスによりインビトロにおいて形質転換することにより（Coleら、1985、「MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY」、Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96参照）、利用され、且つ産生され得る。
【０２４３】
抗体は、免疫血清のＩｇＧ画分を主に提供する、プロテインＡ又はプロテインＧを使用するアフィニティクロマトグラフィーなどの、周知の技術により精製される。引き続き、又は代わりに、求められる免疫グロブリンの標的である特異抗原、又はそのエピトープは、カラム上に固定され、イムノアフィニティクロマトグラフィーにより免疫特異抗体を精製することができる。免疫グロブリンの精製は、例えば、D. Wilkinson(The Scientist、The Scientist, Inc.(フィラデルフィア、PA)刊行、14巻8号(2000年4月17日), pp. 25-28）により考察されている。
【０２４４】
ＮａＰｉ２ｂ活性を修飾、ブロック、阻害、減少、拮抗、中和、又はそうでなければ干渉するモノクローナル抗体は、例えば、動物の膜結合した及び／又は可溶性ＮａＰｉ２ｂ、例えばマウス、ラットもしくはヒトのＮａＰｉ２ｂ又はその免疫原性断片、誘導体もしくは変種による免疫化により、作製される。代わりに、動物は、ＮａＰｉ２ｂをコードしている核酸分子を含むベクターによりトランスフェクションされた細胞により免疫化され、これによりＮａＰｉ２ｂは発現され、且つトランスフェクションされた細胞の表面に会合される。代わりに、この抗体は、ＮａＰｉ２ｂへの結合に関する抗体又は抗原結合ドメインの配列を含むライブラリーのスクリーニングにより、得られる。このライブラリーは、例えば、集成されたファージ粒子の表面に発現されるバクテリオファージコートタンパク質へのタンパク質又はペプチド融合体としてバクテリオファージにおいて、及びファージ粒子内に含まれたコードＤＮＡ配列（すなわち、「ファージディスプレイライブラリー」）で、調製される。骨髄腫／Ｂ細胞融合体から生じるハイブリドーマは次に、ＮａＰｉ２ｂに対する反応性に関してスクリーニングされる。加えて、以下に説明されたように、抗体は、酵母抗体ディスプレイライブラリー及び酵母ライブラリー提示システムから選択され、且つそれにおいて任意に最適化される：例えば、Blaise L, Wehnert A, Steukers MP, van den Beucken T, Hoogenboom HR, Hufton SE、「Construction and diversification of yeast cell surface displayed libraries by yeast mating: application to the affinity maturation of Fab antibody fragments」、Gene. 2004 Nov 24;342(2):211-8；Boder ET, Wittrup KD、「Yeast surface display for screening combinatorial polypeptide libraries」、Nat Biotechnol. 1997 Jun;15(6):553-7；Kuroda K, Ueda M.、「Cell surface engineering of yeast for applications in white biotechnology」、Biotechnol Lett. 2011 Jan;33(1):1-9. doi: 10.1007/s10529-010-0403-9、総説；Lauer TM, Agrawal NJ, Chennamsetty N, Egodage K, Helk B, Trout BL.、「Developability index: a rapid in silico tool for the screening of antibody of aggregation propensity」、J Pharm Sci. 2012 Jan;101(1):102-15；Orcutt K.D.及びWittrup K.D.、(2010), 207-233 doi: 10.1007/978-3-642-01144-3_15；Rakestraw JA, Aird D, Aha PM, Baynes BM, Lipovsek D.、「Secretion-and-capture cell-surface display for selection of target-binding proteins」、Protein Eng Des Sel. 2011 Jun;24(6):525-30；米国特許であるＵＳ８，２５８，０８２；ＵＳ６，３００，０６４；ＵＳ６，６９６，２４８；ＵＳ６，１６５，７１８；ＵＳ６，５００，６４４；ＵＳ６，２９１，１５８；ＵＳ６，２９１，１５９；ＵＳ６，０９６，５５１；ＵＳ６，３６８，８０５；ＵＳ６，５００，６４４。酵母ライブラリー提示システムの例は、例えば、ＷＯ２００８１１８４７６；ＷＯ２００９／０３６３７９；ＷＯ２０１０１０５２５６；及び、ＷＯ２０１２００９５６８に説明されている。特定の実施態様において、かかる酵母抗体ディスプレイライブラリー又は酵母ライブラリー提示システムは、ヒト免疫前抗体レパトアの多様性の特徴を模倣又は反映するように設計される。特定の実施態様において、かかる酵母抗体ディスプレイライブラリー多様性又は酵母ライブラリー提示システムの多様性は、インシリコにおいて作製される。特定の実施態様において、かかる酵母抗体ディスプレイライブラリー又は酵母ライブラリー提示システム��、サッカロミセス・セレビシアエ細胞などの、サッカロミセス属酵母細胞を含む。特定の実施態様において、かかる酵母抗体ディスプレイライブラリー又は酵母ライブラリー提示システムは、ピキア属細胞を含む。
【０２４５】
モノクローナル抗体は、例えば、Kohler及びMilstein、Nature, 256:495 (1975)に説明された方法などの、ハイブリドーマ法を用いて調製される。ハイブリドーマ法において、マウス、ハムスター、又は他の好適な宿主動物は、典型的には、免疫化物質により免疫化され、この免疫化物質に特異的に結合するであろう抗体を産生するか又は産生することが可能であるリンパ球を誘発する。代わりに、これらのリンパ球は、インビトロにおいて免疫化され得る。
【０２４６】
この免疫化物質は、典型的にはタンパク質抗原、それらの断片又はそれらの融合タンパク質を含むであろう。一般に、ヒト起源細胞が望ましい場合には末梢血液リンパ球が、又は非ヒト哺乳動物給源が望ましい場合には脾臓細胞もしくはリンパ節細胞のいずれかが使用される。次にリンパ球は、ポリエチレングリコールなどの、好適な融合剤を用い、不死化された細胞株と融合され、ハイブリドーマ細胞を形成する（Goding、「Monoclonal Antibodies: Principles and Practice」、Academic Press, (1986) pp. 59-103）。不死化された細胞株は通常、形質転換された哺乳動物細胞、特に齧歯類、ウシ及びヒト起源の骨髄腫細胞である。通常、ラット又はマウスの骨髄腫細胞株が利用される。このハイブリドーマ細胞は、好ましくは融合されず、不死化された細胞の成長又は生存を阻害する１又は複数の物質を含有する好適な培養培地において培養することができる。例えば、親細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシル転移酵素（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠いている場合、これらのハイブリドーマのための培養培地は典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含み（「ＨＡＴ培地」）、これらの物質はＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を妨害する。
【０２４７】
好ましい不死化された細胞株は、効率的に融合し、選択された抗体−産生細胞による抗体の安定した高レベルの発現を支援し、且つＨＡＴ培地などの培地に対し感受性のあるものである。より好ましい不死化された細胞株は、マウス骨髄腫株であり、これは例えばSalk Institute Cell Distribution Center、サンディエゴ、カリフォルニア州、及びアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）、マナサス、バージニア州から入手することができる。ヒト骨髄腫株及びマウス−ヒト異種骨髄腫細胞株もまた、モノクローナル抗体の産生のために説明されている（Kozbor、J. Immunol., 133:3001 (1984)；Brodeurら、「Monoclonal Antibodies Production Techniques and Applications」、Marcel Dekker, Inc.、ニューヨーク(1987) pp. 51-63）参照）。
【０２４８】
ハイブリドーマ細胞が培養される培養培地は、次に、その抗原に対し向けられたモノクローナル抗体の存在についてアッセイすることができる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞により産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降により、又は放射免疫測定（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などの、インビトロ結合アッセイにより、決定される。かかる技術及びアッセイは、当該技術分野において公知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Munson及びPollardのスキャチャード解析、Anal. Biochem., 107:220 (1980)により決定することができる。更に、モノクローナル抗体の治療的適用において、標的抗原に対する高度の特異性及び高い結合親和性を有する抗体を同定することは重要である。
【０２４９】
所望のハイブリドーマ細胞が同定された後、それらのクローンは、限定希釈法によりサブクローニングされ、且つ標準方法により増殖される（Goding、「Monoclonal Antibodies: Principles and Practice」、Academic Press, (1986) pp. 59-103参照）。この目的のための好適な培養培地は、例えば、ダルベッコ改変イーグル培地及びＲＰＭＩ−１６４０培地を含む。代わりに、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物の腹水のようにインビボにおいて増殖することができる。
【０２５０】
これらのサブクローンにより分泌されるモノクローナル抗体は、培養培地又は腹水液から、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析又はアフィニティクロマトグラフィーなどの、慣習的免疫グロブリン精製手順により、単離又は精製することができる。
【０２５１】
モノクローナル抗体はまた、米国特許第４，８１６，５６７号に説明された方法のような、組換えＤＮＡ法により作製することもできる。本明細書に開示されたモノクローナル抗体をコードしているＤＮＡは、慣習的手順を用い（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードしている遺伝子に特異的に結合することが可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）、容易に単離し且つ配列決定することができる。本明細書に開示されたハイブリドーマ細胞は、かかるＤＮＡの好ましい給源として役立つ。一旦単離されると、ＤＮＡは、発現ベクターに配置され、これは次に、そうでなければ免疫グロブリンタンパク質を生成しない宿主細胞、シミアンＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又は骨髄腫細胞などへトランスフェクションされ、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を得ることができる。ＤＮＡはまた、例えば、ヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのコード配列を、相同マウス配列の代わりに置換することにより（米国特許第４，８１６，５６７号；Morrison、Nature 368, 812-13 (1994)参照）、又は免疫グロブリンコード配列へ、非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全てもしくは一部を共有的に結合することにより、修飾することができる。かかる非免疫グロブリンポリペプチドは、本明細書に開示された抗体の定常ドメインを置換することができるか、又は本明細書に開示された抗体の１つの抗原−結合部位の可変ドメインを置換し、キメラ二価抗体を作製することができる。
【０２５２】
本明細書に開示されたモノクローナル抗体は、完全ヒト抗体又はヒト化抗体を含む。これらの抗体は、投与される免疫グロブリンに対するヒトによる免疫応答を操作することなく、ヒトへの投与に適している。
【０２５３】
ヒト化又は完全ヒトＮａＰｉ２ｂ抗体は、例えば、以下に提供される「実施例」に説明された手順を用いて作製される。
【０２５４】
他方で別法において、ＮａＰｉ２ｂ抗体は、例えば、ヒト配列のみを含む抗体を使用するファージ−ディスプレイ法を用いて、開発される。かかるアプローチは、例えば、引用により本明細書中に組込まれている、ＷＯ９２／０１０４７及び米国特許第６，５２１，４０４号など、当該技術分野において周知である。このアプローチにおいて、軽鎖及び重鎖のランダム対を保有するファージのコンビナトリアルライブラリーは、ＮａＰｉ２ｂの天然又は組換えの給源を用いて、スクリーニングされる。別のアプローチにおいて、ＮａＰｉ２ｂ抗体は、そのプロセスの少なくとも１工程が、トランスジェニック非ヒト動物のヒトＮａＰｉ２ｂタンパク質による免疫化を含むプロセスにより作製することができる。このアプローチにおいて、この異種間非ヒト動物の内因性重鎖及び／又はカッパ軽鎖遺伝子座の一部は、機能せず、且つ抗原に反応する免疫グロブリンをコードしている遺伝子を作製するためには必要とされる再構成が不可能である。加えて、少なくとも１種のヒト重鎖遺伝子座及び少なくとも１つのヒト軽鎖遺伝子座は、動物へ安定してトランスフェクションされている。従って、投与された抗原に反応して、ヒト遺伝子座は再構成し、その抗原に免疫特異的なヒト可変領域をコードしている遺伝子を提供する。従って免疫化時に、XenoMouseは、完全ヒト免疫グロブリンを分泌するＢ細胞を産生する。
【０２５５】
異種間非ヒト動物を作出する様々な技術が、当該技術分野において周知である。例えば、その全体が引用により本明細書中に組込まれている、米国特許第６，０７５，１８１号及び第６，１５０，５８４号を参照されたい。この一般的戦略は、１９９４年に公表された、最初のXenoMouse（商標）系統の作出と結びつけて明らかにされた。Greenら、Nature Genetics 7:13-21 (1994)を参照し、これはその全体が引用により本明細書中に組込まれている。同じく米国特許第６，１６２，９６３号、第６，１５０，５８４号、第６，１１４，５９８号、第６，０７５，１８１号、及び第５，９３９，５９８号、並びに日本国特開３  ０６８  １８０  Ｂ２、３  ０６８  ５０６  Ｂ２、及び３  ０６８  ５０７  Ｂ２、並びに欧州特許第０  ４６３  １５１  Ｂ１号、並びに国際公開公報ＷＯ  ９４／０２６０２、ＷＯ  ９６／３４０９６、ＷＯ  ９８／２４８９３、ＷＯ  ００／７６３１０、並びに関連した対応特許を参照されたい。
【０２５６】
代替のアプローチにおいて、他のものは、外因性Ｉｇ遺伝子座が、Ｉｇ遺伝子座由来の断片（個別の遺伝子）の封入を介して模倣される、「ミニ遺伝子座」アプローチを利用する。従って、１又は複数のＶＨ遺伝子、１又は複数のＤH遺伝子、１又は複数のＪH遺伝子、ミュー定常領域、及び第二の定常領域（好ましくはガンマ定常領域）が、動物へ挿入するための構築体に形成される。例えば、米国特許第５，５４５，８０６号；第５，５４５，８０７号；第５，５９１，６６９号；第５，６１２，２０５号；第５，６２５，８２５号；第５，６２５，１２６号；第５，６３３，４２５号；第５，６４３，７６３号；第５，６６１，０１６号；第５，７２１，３６７号；第５，７７０，４２９号；第５，７８９，２１５号；第５，７８９，６５０号；第５，８１４，３１８号；第５，８７７，３９７号；第５，８７４，２９９号；第６，０２３，０１０号；及び、第６，２５５，４５８号；並びに、欧州特許第０  ５４６  ０７３  Ｂ１号、並びに、国際公開公報ＷＯ  ９２／０３９１８、ＷＯ  ９２／２２６４５、ＷＯ  ９２／２２６４７、ＷＯ  ９２／２２６７０、ＷＯ  ９３／１２２２７、ＷＯ  ９４／００５６９、ＷＯ  ９４／２５５８５、ＷＯ  ９６／１４４３６、ＷＯ  ９７／１３８５２、及びＷＯ  ９８／２４８８４、並びに関連した対応特許を参照されたい。
【０２５７】
ミクロセル融合により、染色体の大型断片、又は全染色体が導入されているマウスからのヒト抗体の作出もまた、明らかにされている。欧州特許出願第７７３  ２８８号及び第８４３  ９６１号を参照されたい。
【０２５８】
ヒト抗−マウス抗体（ＨＡＭＡ）反応は、キメラ抗体又はそうでなければヒト化抗体を調製する産業に繋がる。キメラ抗体は、ヒト定常領域及び免疫可変領域を含む一方で、これは、特に本抗体の長期又は反復−投与量の利用で、特定のヒト抗−キメラ抗体（ＨＡＣＡ）反応が認められることが予想される。従って、ＨＡＭＡ又はＨＡＣＡ反応の懸念及び／又は効果を無効にするか又はそうでなければ軽くするために、ＮａＰｉ２ｂに対する完全ヒト抗体を提供することは、望ましいであろう。
【０２５９】
低下した免疫原性を伴う抗体の作製もまた、ヒト化、キメラ化及び適当なライブラリーを使用するディスプレイ技術により達成される。マウス抗体又は他の種由来の抗体は、当該技術分野において周知の技術を使用し、ヒト化もしくは霊長類化されることができることは理解されるであろう。例えば、Winter及びHarris、Immunol Today 14:43 46 (1993)、並びにWrightら、Crit, Reviews in Immunol. 12125-168 (1992)を参照されたい。関心対象の抗体は、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ヒンジドメイン、及び／又はフレームワークドメインを、対応するヒト配列と置換する、組換えＤＮＡ技術により操作されてよい（ＷＯ  ９２１０２１９０及び米国特許第５，５３０，１０１号；第５，５８５，０８９号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７９２号；第５，７１４，３５０号；及び第５，７７７，０８５号参照）。同じく、キメラ免疫グロブリン遺伝子の構築のためのＩｇ  ｃＤＮＡの使用も、当該技術分野において公知である（Liuら、P.N.A.S. 84:3439 (1987)、及びJ. Immunol. 139:3521 (1987)）。ｍＲＮＡは、抗体を産生するハイブリドーマ又は他の細胞から単離され、且つｃＤＮＡを作製するために使用される。関心対象のｃＤＮＡは、特異的プライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応により増幅されてよい（米国特許第４，６８３，１９５号及び第４，６８３，２０２号）。代わりに、ライブラリーが作製され、且つ関心対象の配列を単離するために、スクリーニングされる。抗体の可変領域をコードしているＤＮＡ配列は、次に、ヒト定常領域配列へ融合される。ヒト定常領域遺伝子の配列は、Kabatら、(1991)「Sequence of Proteins of Immunological Interest」、N.I.H.出版番号91-3242において認めることができる。ヒトＣ領域遺伝子は、既知のクローンから容易に入手可能である。アイソタイプの選択は、補体結合、又は抗体−依存性細胞傷害性における活性などの、所望のエフェクター機能により導かれるであろう。好ましいアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４である。ヒト軽鎖定常領域のカッパ又はラムダのいずれかが使用されてよい。キメラ抗体、ヒト化抗体はその後、慣習的方法により発現される。
【０２６０】
更に、ヒト抗体又は他の種由来の抗体は、当該技術分野において周知の技術を使用し、非限定的に、ファージディスプレイ、レトロウイルスディスプレイ、リボソームディスプレイを含むディスプレイ型技術、及び他の技術により、作製することができ、且つ生じる分子は、親和性成熟などの追加の成熟に供され得、かかる技術は、当該技術分野において周知の技術である。Wrightら、Crit, Reviews in Immunol. 12125-168 (1992)、Hanes及びPluckthun、PNAS USA 94:4937-4942 (1997)（リボソームディスプレイ）、Parmley及びSmith、Gene 73:305-318 (1988)（ファージディスプレイ）、Scott、TIBS, 17:241-245 (1992)、Cwirlaら、PNAS USA 87:6378-6382 (1990)、Russelら、Nucl. Acids Research 21:1081-1085 (1993)、Hoganboomら、Immunol. Reviews 130:43-68 (1992)、Chiswell及びMcCafferty、TIBTECH; 10:80-8A (1992)、並びに米国特許第５，７３３，７４３号。非ヒト抗体を作製するためにディスプレイ技術が利用される場合は、かかる抗体は、先に説明したようにヒト化されることができる。
【０２６１】
これらの技術を使用し、抗体は、ＮａＰｉ２ｂ発現細胞、ＮａＰｉ２ｂの可溶性型、それらのエピトープ又はペプチド、並びにそれらの発現ライブラリーに対して作製することができ（例えば、米国特許第５，７０３，０５７号参照）、これはその後、本明細書記載の活性について、先に説明したようにスクリーニングすることができる。
【０２６２】
本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ抗体は、先に説明した一本鎖抗体をコードしているＤＮＡセグメントを含有するベクターにより発現することができる。
【０２６３】
これらは、ベクター、リポソーム、裸のＤＮＡ、アジュバント−支援ＤＮＡ、遺伝子銃、カテーテルなどを含むことができる。ベクターは、ＷＯ  ９３／６４７０１に説明されたような化学コンジュゲートを含み、これは標的化部分（例えば、細胞表面受容体へのリガンド）、及び核酸結合性部分（例えば、ポリリジン）、ウイルスベクター（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡウイルスベクター）、標的部分を含む融合タンパク質（例えば、標的細胞に特異的な抗体）である、ＰＣＴ／ＵＳ９５／０２１４０（ＷＯ  ９５／２２６１８）に説明されたような融合タンパク質、並びに核酸結合性部分（例えば、プロタミン）、プラスミド、ファージなどを有する。これらのベクターは、染色体性、非染色体性又は合成であることができる。
【０２６４】
好ましいベクターは、ウイルスベクター、融合タンパク質及び化学コンジュゲートを含む。レトロウイルスベクターは、モロニーマウス白血病ウイルスを含む。ＤＮＡウイルスベクターが好ましい。これらのベクターは、オルトポックスベクター又はトリポックスベクターなどのポックスベクター、単純ヘルペスウイルスＩ型（ＨＳＶ）ベクターなどのヘルペスウイルスベクター（Geller, A. I.ら、J. Neurochem, 64:487 (1995)；Lim, F.ら、「DNA Cloning: Mammalian Systems」、D. Glover編集(Oxford Univ. Press, オックスフォード、英国)(1995)；Geller, A. I.ら、Proc Natl. Acad. Sci.: U.S.A. 90:7603 (1993)；Geller, A. I.ら、Proc Natl. Acad. Sci USA 87:1149 (1990)参照)、アデノウイルスベクター(LeGal LaSalleら、Science, 259:988 (1993)；Davidsonら、Nat. Genet 3:219 (1993)；Yangら、J. Virol. 69:2004 (1995)参照)、並びにアデノ随伴ウイルスベクター(Kaplitt, M. G.ら、Nat. Genet. 8:148 (1994)参照）を含む。
【０２６５】
ポックスウイルスベクターは、遺伝子を細胞の細胞質へ導入する。トリポックスウイルスベクターは、核酸の短期間の発現のみ生じる。アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター及び単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターは、核酸の神経系細胞への導入に好ましい。アデノウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（約４ヶ月）よりも、より短い期間の発現（約２ヶ月）を生じ、次にアデノ随伴ウイルスはＨＳＶベクターよりもより短い。選択された特定のベクターは、標的細胞及び治療される状態によって決まるであろう。導入は、標準技術、例えば、感染、トランスフェクション、形質導入又は形質転換などによることができる。遺伝子導入の様式の例は、例えば、裸のＤＮＡ、ＣａＰＯ4沈降、ＤＥＡＥデキストラン、電気穿孔、プロトプラスト融合、リポフェクション、細胞の微量注入、及びウイルスベクターを含む。
【０２６６】
ベクターは、本質的に任意の所望の標的細胞を標的化するために、利用することができる。例えば、定位的注入を使用し、ベクター（例えば、アデノウイルス、ＨＳＶ）を、所望の位置へ方向付けることができる。加えて、粒子を、SynchroMed Infusion Systemなどの、ミニポンプ注入システムを使用する脳室内（ｉｃｖ）注入により送達することができる。対流と称されるバルクフローを基にした方法も、大型分子の脳の広範な領域への送達に有効であり、且つベクターの標的細胞への送達において有用であることが証明されている（Boboら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:2076-2080 (1994)；Morrisonら、Am. J. Physiol. 266:292-305 (1994)参照）。使用することができる他の方法は、カテーテル、静脈内、非経口、腹腔内及び皮下注射、並びに経口又は他の公知の投与経路を含む。
【０２６７】
これらのベクターを使用し、様々な様式で使用することができる大量の抗体を発現することができる。例えば、試料中のＮａＰｉ２ｂの存在を検出するためである。この抗体はまた、ＮａＰｉ２ｂ−関連したシグナル伝達に結合し且つこれを破壊するように使用することもできる。
【０２６８】
ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体コンジュゲート：
本開示はまた、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性毒素、又はそれらの断片）などの細胞毒性物質、又は放射性同位元素（すなわち、放射性コンジュゲート）にコンジュゲートされた抗体を含む、免疫コンジュゲートに関連する。
【０２６９】
使用することができる酵素活性毒素及びそれらの断片は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、α−サルシン、シナアブラギリ(Aleurites fordii)タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ(Phytolacca americana)タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ツルレイシ(momordica charantia)インヒビター、クルシン、クロチン、サボンソウ(saponaria officinalis)インヒビター、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンを含む。様々な放射性核種が、放射性コンジュゲートされた抗体の作製に利用できる。例は、212Ｂｉ、131Ｉ、131Ｉｎ、90Ｙ、及び186Ｒｅが挙げられる。
【０２７０】
抗体及び細胞毒性物質のコンジュゲートは、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）などの様々な二官能性タンパク質−カップリング剤、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣＬなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアン酸エステル（トリレン２，６−ジイソシアナートなど）、及びビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）を使用し、作製される。例えば、リシン免疫毒素は、Vitettaら、Science 238: 1098 (1987)に説明されたように調製することができる。炭素−１４−標識した１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドを抗体へコンジュゲートするためのキレート剤の例である（ＷＯ９４／１１０２６参照）。
【０２７１】
当業者は、多種多様な可能性のある部分を、本明細書に開示された得られる抗体にカップリングすることができることを認めるであろう（例えば、「“Conjugate Vaccines”, Contributions to Microbiology and Immunology」、J. M. Cruse及びR. E. Lewis, Jr(編集)、Carger Press、ニューヨーク(1989)を参照し、その内容の全体は引用により本明細書中に組込まれている）。
【０２７２】
カップリングは、抗体及び他の部分がそれらの各活性を保持する限りは、２つの分子を結合する任意の化学反応により達成されてよい。この連結は、例えば共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合及び錯体形成など、多くの化学機構を含むことができる。しかし好ましい結合は、共有結合である。共有結合は、存在する側鎖の直接の縮合、又は外部の架橋分子の組込のいずれかにより達成することができる。多くの二価又は多価の連結物質が、本開示の抗体などのタンパク質分子の、他の分子へのカップリングにおいて有用である。例えば、代表的カップリング剤は、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアン酸エステル、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン及びヘキサメチレンジアミンなどの、有機化合物を含むことができる。この列挙は、当該技術分野において公知の様々なクラスのカップリング剤の網羅であることは意図せず、むしろより一般的なカップリング剤の例である（Killen及びLindstrom、Jour. Immun. 133:1335-2549 (1984)；Jansenら、Immunological Reviews 62:185-216 (1982)；並びに、Vitettaら、Science 238:1098 (1987)参照）。
【０２７３】
好ましいリンカーは、文献に説明されている（例えば、ＭＢＳ（Ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルの使用を記載している、Ramakrishnan, S.ら、Cancer Res. 44:201-208 (1984)参照）。同じくオリゴペプチドリンカーにより、抗体にカップリングされたハロゲン化されたアセチルヒドラジド誘導体の使用を説明している、米国特許第５，０３０，７１９号も参照されたい。特に好ましいリンカーは、以下を含む：（ｉ）ＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）カルボジイミド塩酸塩；（ｉｉ）ＳＭＰＴ（４−スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジル−ジチオ）−トルエン（Pierce Chem.社、カタログ番号（２１５５８Ｇ））；（ｉｉｉ）ＳＰＤＰ（６［３−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサン酸スクシンイミジル（Pierce Chem社、カタログ番号２１６５１Ｇ）；（ｉｖ）スルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰ（６［３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオンアミド］ヘキサン酸スルホスクシンイミジル（Pierce Chem社、カタログ番号２１６５−Ｇ）；並びに、（ｖ）ＥＤＣにコンジュゲートされたスルホ−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスルホ−スクシンイミド：Pierce Chem社、カタログ番号２４５１０）。
【０２７４】
先に説明したリンカーは、異なる特質をする成分を含み、従って異なる物理化学特性を持つコンジュゲートにつながる。例えば、カルボン酸アルキルのスルホ−ＮＨＳエステルは芳香族カルボン酸のスルホ−ＮＨＳエステルよりも、より安定している。リンカーを含むＮＨＳ−エステルは、スルホ−ＮＨＳエステルよりも、溶解しにくい。更に、リンカーＳＭＰＴは、立体的に束縛されたジスルフィド結合を含み、且つ安定性が増大したコンジュゲートを形成することができる。ジスルフィド連結は、概して、他の連結よりも安定性が低く、その理由はジスルフィド連結は、インビトロにおいて切断され、入手できるコンジュゲートはより少ないからである。スルホ−ＮＨＳは特に、カルボジイミドカップリングの安定性を増強することができる。カルボジイミドカップリング（ＥＤＣなど）は、スルホ−ＮＨＳとのコンジュゲーションにおいて使用される場合、カルボジイミドカップリング反応単独よりも、加水分解に対しより抵抗性であるエステルを形成する。
【０２７５】
一態様において、本明細書記載のコンジュゲートは、分子量が約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲にある、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチル−ホルマール）（ＰＨＦ）を独立して含む、１又は複数のＤ担持ポリマースカフォールドに直接又は間接に結合された、ＳＬＣ３４Ａ２の細胞外領域に特異的に結合する単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体を含み、ここで、１又は複数のＤ担持ポリマースカフォールドの各々は、独立して、式（Ｉｃ）であり：
【化２９】
2019508456.tif 000035
（Ｉｃ）
式中：
Ｄの各々は、独立して、治療薬又は診断薬であり；
ＬD1は、カルボニル含有部分であり；
【化３０】
2019508456.tif 000036
における
【化３１】
2019508456.tif 000037
の各々は、独立して、生分解性結合を含む第一リンカーであり、これによりこの結合が破壊されたときに、Ｄは、意図する治療効果のために活性型で放出される；並びに、
【化３２】
2019508456.tif 000038
中のＬD1とＤの間の
【化３３】
2019508456.tif 000039
は、ＤのＬD1への直接又は間接の結合を意味し；
【化３４】
2019508456.tif 000040
の各々は、独立して、単離された抗体と未だ結合されていない第二リンカーであり、ここでＬP2は、単離された抗体の官能基と共有結合を未だ形成していない官能基を含む部分であり、及び、ＬD1とＬP2の間の
【化３５】
2019508456.tif 000041
は、ＬP2のＬD1への直接又は間接の結合を意味し、そして、第二リンカーの各々は、第一リンカーの各々とは異なり；
【化３６】
2019508456.tif 000042
の各々は、独立して、各Ｄ担持ポリマースカフォールドを単離された抗体へ結合する第三リンカーであり、ここでＬP2へ結合した末端
【化３７】
2019508456.tif 000043
は、ＬP2の官能基と単離された抗体の官能基の間の共有結合の形成における、ＬP2の単離された抗体への直接又は間接の結合を意味し、そして、第三リンカーの各々は、第一リンカーの各々とは異なり；
ｍは、１〜約３００の整数であり；
ｍ1は、１〜約１４０の整数であり；
ｍ2は、１〜約４０の整数であり；
ｍ3は、０〜約１８の整数であり；
ｍ4は、１〜約１０の整数であり；
ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3、及びｍ4の合計は、約１５〜約３００の範囲にあり；並びに、単離された抗体に結合されたＬP2の総数は、１０以下である。
【０２７６】
このコンジュゲートは、以下の特徴の１又は複数を含んでよい。
【０２７７】
例えば、式（Ｉｃ）において、ｍ1は、１〜約１２０（例えば、約１〜９０）の整数であり、及び／又はｍ3は、１〜約１０（例えば、約１〜８）の整数である。
【０２７８】
例えば、式（Ｉｃ）のＰＨＦが、約６ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有する（すなわち、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3、及びｍ4の合計は、約４５〜約１５０の範囲にある）場合、ｍ2は、２〜約２０の整数であり、ｍ3は、０〜約９の整数であり、ｍ4は、１〜約１０の整数であり、及び／又はｍ1は、１〜約７５の整数（例えば、ｍ1は約４−４５）である。
【０２７９】
例えば、式（Ｉｃ）のＰＨＦが、約８ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有する（すなわち、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3、及びｍ4の合計は、約６０〜約１１０の範囲にある）場合、ｍ2は、２〜約１５の整数であり、ｍ3は、０〜約７の整数であり、ｍ4は、１〜約１０の整数であり、及び／又はｍ1は、１〜約５５の整数（例えば、ｍ1は約４−３０）である。
【０２８０】
例えば、式（Ｉｃ）のＰＨＦが、約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有する（すなわち、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3、及びｍ4の合計は、約１５〜約１５０の範囲にある）場合、ｍ2は、１〜約２０の整数であり、ｍ3は、０〜約１０の整数（例えば、ｍ3は０〜約９の範囲）であり、ｍ4は、１〜約８の整数であり、及び／又はｍ1は、１〜約７０の整数であり、並びに単離された抗体に結合されたＬP2の総数は、約２〜約８の範囲（例えば、約２、３、４、５、６、７、又は８）である。
【０２８１】
例えば、式（Ｉｃ）のＰＨＦが、約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有する（すなわち、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3、及びｍ4の合計は、約２０〜約１１０の範囲にある）場合、ｍ2は、２〜約１５の整数であり、ｍ3は、０〜約８の整数（例えば、ｍ3は０〜約７の範囲）であり、ｍ4は、１〜約８の整数であり、及び／又はｍ1は、２〜約５０の整数であり、並びに単離された抗体に結合されたＬP2の総数は、約２〜約８の範囲（例えば、約２、３、４、５、６、７、又は８）である。
【０２８２】
例えば、式（Ｉｃ）のＰＨＦが、約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有する（すなわち、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3、及びｍ4の合計は、約４０〜約７５の範囲にある）場合、ｍ2は、約２〜約１０の整数であり（例えば、ｍ2は約３〜１０である）、ｍ3は、０〜約５の整数（例えば、ｍ3は０〜約４の範囲）であり、ｍ4は、１〜約８の整数であり（例えば、ｍ4は１〜約５の範囲にあり）、及び／又はｍ1は、約２〜約３５の整数であり（例えば、ｍ1は約５〜３５である）、並びに単離された抗体に結合されたＬP2の総数は、約２〜約８の範囲（例えば、約２、３、４、５、６、７、又は８）である。
【０２８３】
例えば、ＰＨＦが、２ｋＤａ〜４０ｋＤａ（例えば、約６〜２０ｋＤａ又は約８〜１５ｋＤａ、約２〜２０ｋＤａ、又は約３〜１５ｋＤａ、又は約５〜１０ｋＤａ）の範囲の分子量を有する場合、１つのＰＨＦ当たりの薬物の数（例えば、ｍ2）は、１〜約４０（例えば、約１〜２０、又は約２〜１５又は約３〜１０又は約２〜１０）の整数である。このスカフォールドは、例えば、分子量４０ｋＤａ又はそれよりも大きい（例えば、６０ｋＤａ又はそれよりも大きい；８０ｋＤａ又はそれよりも大きい；１００ｋＤａ又はそれよりも大きい；１２０ｋＤａ又はそれよりも大きい；１４０ｋＤａ又はそれよりも大きい；１６０ｋＤａ又はそれよりも大きい、１８０ｋＤａ又はそれよりも大きい、又は２００ｋＤａ又はそれよりも大きい、又は約４０〜２００ｋＤａ、４０〜１８０ｋＤａ、４０〜１４０ｋＤａ、６０〜２００ｋＤａ、６０〜１８０ｋＤａ、６０〜１４０ｋＤａ、８０〜２００ｋＤａ、８０〜１８０ｋＤａ、８０〜１４０ｋＤａ、１００〜２００ｋＤａ、１００〜１８０ｋＤａ、１００〜１４０ｋＤａ又は１４０〜１５０ｋＤａ）を有する単離された抗体をコンジュゲートするために使用することができる。この実施態様において、単離された抗体のＰＨＦに対する比は、約１：１と約１：１０の間、約１：１と約１：９の間、約１：１と約１：８の間、約１：１と約１：７の間、約１：１と約１：６の間、約１：１と約１：５の間、約１：１と約１：４の間、約１：１と約１：３の間、約１：１と約１：２の間、約１：２と約１：４の間、約１：２と約１：３の間、約１：３と約１：４の間、又は約１：３と約１：５の間である。
【０２８４】
例えば、ＰＨＦが、２ｋＤａ〜４０ｋＤａ（例えば、約６〜２０ｋＤａ又は約８〜１５ｋＤａ、約２〜２０ｋＤａ、又は約３〜１５ｋＤａ、又は約５〜１０ｋＤａ）の範囲の分子量を有する場合、１つのＰＨＦ当たりの薬物の数（例えば、ｍ2）は、１〜約４０（例えば、約１〜２０、又は約２〜１５又は約３〜１０又は約２〜１０）の整数である。このスカフォールドは、例えば、分子量１４０ｋＤａ〜１８０ｋＤａ又は１４０ｋＤａ〜１５０ｋＤａを有する単離された抗体をコンジュゲートするために使用することができる。この実施態様において、単離された抗体のＰＨＦに対する比は、約１：１と約１：１０の間、約１：１と約１：９の間、約１：１と約１：８の間、約１：１と約１：７の間、約１：１と約１：６の間、約１：１と約１：５の間、約１：１と約１：４の間、約１：１と約１：３の間、約１：１と約１：２の間、約１：２と約１：４の間、約１：２と約１：３の間、約１：３と約１：４の間、又は約１：３と約１：５の間である。
【０２８５】
この分子量範囲内のＮａＰｉ−２ｂ抗体は、例えばＩｇＧ、ＩｇＭなどの完全長抗体を含むが、これらに限定されるものではない。
【０２８６】
例えば、ＰＨＦが、２ｋＤａ〜４０ｋＤａの範囲の分子量を有する場合、１つのＰＨＦ当たりの薬物の数（例えば、ｍ2）は、１〜約４０（例えば、約１〜２０又は約２〜１５又は約３〜１０又は約２〜１０）の整数である。このスカフォールドは、例えば、分子量６０ｋＤａ〜１２０ｋＤａを有する単離された抗体をコンジュゲートするために使用することができる。この実施態様において、単離された抗体のＰＨＦに対する比は、約１：１と約１：１０の間、約１：１と約１：９の間、約１：１と約１：８の間、約１：１と約１：７の間、約１：１と約１：６の間、約１：１と約１：５の間、約１：１と約１：４の間、約１：１と約１：３の間、約１：１と約１：２の間、約１：２と約１：４の間、約１：２と約１：３の間、約１：３と約１：４の間、又は約１：３と約１：５の間である。
【０２８７】
特定の実施態様において、Ｄは治療薬である。特定の実施態様において、治療薬は、分子量≦約５ｋＤａ、≦約４ｋＤａ、≦約３ｋＤａ、≦約１．５ｋＤａ、又は≦約１ｋＤａを有する小型分子である。
【０２８８】
特定の実施態様において、治療薬は、約１ｎＭ未満のＩＣ50を有する。
【０２８９】
別の実施態様において、治療薬は、約１ｎＭよりも大きいＩＣ50を有し、例えば治療薬は、約１〜５０ｎＭのＩＣ50を有する。
【０２９０】
約１ｎＭより大きいＩＣ50を有する一部の治療薬（例えば「効能の弱い薬物」）は、当該技術分野において認められたコンジュゲーション技術を使用する抗体とのコンジュゲーションには適していない。理論に結びつけられることを欲するものではないが、薬物の十分なコピー（すなわち、８より多い）は、コンジュゲートの薬物動態特性及び物理化学特性を弱めることなく、当該技術分野において認められた技術を用いコンジュゲートすることはできないので、かかる治療薬は、慣習的技術を使用する、標的化抗体−薬物コンジュゲートにおける使用には不充分な効能を有する。しかし、これらの効能の弱い薬物の十分に高い負荷は、本明細書記載のコンジュゲーション戦略を用いて達成することができ、これにより治療薬の高い負荷を生じる一方で、所望の薬物動態特性及び物理化学特性を維持する。従って、本開示はまた、単離された抗体、ＰＨＦ及び少なくとも８の治療薬部分を含む、抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートに関連し、ここでＤは、アウリスタチン、ドラスタチン（例えば、ドラスタチン１０又はドラスタチン１５）、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、アウリスタチンＦ、ＡＦ  ＨＰＡ、モノメチルＡＦ  ＨＰＡ、フェニレンジアミン（ＡＦＰ）である。
【０２９１】
例えば、デュオカルマイシン又はそのアナログは、デュオカルマイシンＡ、デュオカルマイシンＢ１、デュオカルマイシンＢ２、デュオカルマイシンＣ１、デュオカルマイシンＣ２、デュオカルマイシンＤ、デュオカルマイシンＳＡ、ＣＣ−１０６５、アドゼレシン、ビゼレシン、又はカルゼレシンである。
【０２９２】
他のＤの例は、例えば、米国特許第８，８１５，２２６号；及び、米国特許出願公開第２０１５−０１０４４０７号に記載されたものを含み；その各々の内容は、その全体が引用により本明細書中に組込まれている。
【０２９３】
一部の実施態様において、抗体にコンジュゲートされ得るＤ担持ポリマースカフォールドの数は、遊離のシステイン残基の数により制限される。一部の実施態様において、遊離のシステイン残基は、本明細書記載の方法により、抗体アミノ酸配列へ導入される。本明細書に開示されたコンジュゲートの例は、１、２、３、又は４つの操作されたシステインアミノ酸を有する抗体を含むことができる（Lyon, R.ら、(2012) Methods in Enzym. 502:123-138）。一部の実施態様において、１又は複数の遊離システイン残基は、操作を使用することなく、既に抗体中に存在し、この場合存在する遊離システイン残基は、抗体のＤ担持ポリマースカフォールドへのコンジュゲートに使用されてよい。一部の実施態様において、抗体は、１又は複数の遊離システイン残基の作製のために、抗体のコンジュゲーションの前に、還元条件に曝露される。
【０２９４】
特定の実施態様において、単離された抗体の官能基（抗体のアミノ酸残基上の官能基又は反応性部分、例えば、抗体のシステイン残基又はリジン残基上の官能基など）と未だ共有結合を形成していないＬP2の官能基は、-ＳＲp、−Ｓ−Ｓ−ＬＧ、
【化３８】
2019508456.tif 000044
及び、ハロから選択され、ここでＬＧは、脱離基であり、Ｒpは、Ｈ又は硫黄保護基であり、並びにＸa及びＸbの一方はＨであり、且つ他方は水溶性マレイミドブロッキング部分であるか、或いはＸa及びＸbはそれらが結合した炭素原子と一緒に、炭素−炭素二重結合を形成する。例えば、未だ共有結合を形成していないＬP2の官能基は、単離された抗体の官能基と反応していない官能基であり、例えば、ＬP2の官能基として：
【化３９】
2019508456.tif 000045
（式中、Ｘa及びＸbの一方はＨであり、且つ他方は水溶性マレイミドブロッキング部分であるか、或いはＸa及びＸbである）である。
【０２９５】
特定の実施態様において、本明細書記載のコンジュゲートにおける、式（Ｉｃ）のＤ担持ポリマースカフォールドは、式（Ｉｅ）：
【化４０】
2019508456.tif 000046
（Ｉｅ）
であり、式中：
ＰＨＦは、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の分子量を有し；
Ｄの各々は独立して、分子量≦５ｋＤａを有する治療薬であり、並びにＤとカルボニル基の間の
【化４１】
2019508456.tif 000047
は、Ｄのカルボニル基への直接又は間接の結合を意味し、
Ｘは、ＣＨ2、Ｏ、又はＮＨであり；
Ｘa及びＸbの一方はＨであり、且つ他方は水溶性マレイミドブロッキング部分であるか、或いはＸa及びＸbはそれらが結合した炭素原子と一緒に、炭素−炭素二重結合を形成し、ｍ1は、１〜約１４０の整数であり、
ｍ7は、１〜約４０の整数であり、並びにｍ1とｍ7の合計は、約２〜約１８０であり、
ｍは、１〜約３００の整数であり、
ｍ3aは、０〜約１７の整数であり、
ｍ3bは、１〜約８の整数であり、ｍ3aとｍ3bの合計は、１と１８の間であり、並びに
ｍ、ｍ1、ｍ7、ｍ3a、及びｍ3bの合計は、約１５〜約３００の範囲にある。
【０２９６】
特定の実施態様において、本明細書記載のコンジュゲートにおける、式（Ｉｃ）のＤ担持ポリマースカフォールドは、式（Ｉｄ）：
【化４２】
2019508456.tif 000048
（Ｉｄ），
であり、式中：
Ｘa及びＸbの一方はＨであり、且つ他方は水溶性マレイミドブロッキング部分であるか、或いはＸa及びＸbはそれらが結合した炭素原子と一緒に、炭素−炭素二重結合を形成し、
ｍ3aは、０〜約１７の整数であり、
ｍ3bは、１〜約８の整数であり、及びｍ3aとｍ3bの合計は、１と１８の間であり、並びに
ｍ、ｍ1、ｍ7、ｍ3a、及びｍ3bの合計は、約１５〜約３００の範囲にある。
【０２９７】
例えば、ｍ2とｍ3bの比は、１：１より大きく、且つ１０：１未満又はこれと等しい。
【０２９８】
例えば、ｍ2とｍ3bの比は、約９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、又は２：１である。
【０２９９】
例えば、ｍ2とｍ3bの比は、２：１と８：１の間である。
【０３００】
例えば、ｍ2とｍ3bの比は、約８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、又は２：１である。
【０３０１】
例えば、ｍ2とｍ3bの比は、２：１と４：１の間である。
【０３０２】
例えば、ｍ2とｍ3bの比は、約４：１、３：１、又は２：１である。
【０３０３】
例えば、ｍ2とｍ3bの比は、約３：１及び５：１である。
【０３０４】
例えば、ｍ2とｍ3bの比は、約３：１、４：１又は５：１である。
【０３０５】
例えば、式（Ｉｄ）のＰＨＦが、約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有する場合、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a及びｍ3bの合計は、約１５〜約１５０の範囲にあり、ｍ1は、１〜約７０の整数であり、ｍ2は、１〜約２０の整数であり、ｍ3aは、０〜約９の整数であり、ｍ3bは、１〜約８の整数であり、並びにＰＨＦと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、２〜約８の整数である。
【０３０６】
例えば、式（Ｉｄ）のＰＨＦが、約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有する場合、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a及びｍ3bの合計は、約２０〜約１１０の範囲にあり、ｍ1は、２〜約５０の整数であり、ｍ2は、２〜約１５の整数であり、ｍ3aは、０〜約７の整数であり、ｍ3bは、１〜約８の整数であり、並びにＰＨＦと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、２〜約８の整数（例えば、２〜約６の整数又は２〜約４の整数）である。
【０３０７】
例えば、式（Ｉｄ）のＰＨＦが、約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有する場合、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a及びｍ3bの合計は、約４０〜約７５の範囲にあり、ｍ1は、約２〜約３５の整数であり、ｍ2は、約２〜約１０の整数であり、ｍ3aは、０〜約４の整数であり、ｍ3bは、１〜約５の整数であり、並びにＰＨＦと単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の比は、２〜約８の整数（例えば、２〜約６の整数又は２〜約４の整数）である。
【０３０８】
例えば、水溶性マレイミドブロッキング部分は、マレイミド基の式（ＩＩ）のチオール−含有化合物との反応時に、２個のオレフィン炭素原子の１個へ共有的に結合することができる部分であり：
Ｒ90−（ＣＨ2）d−ＳＨ
（ＩＩ）
式中：
Ｒ90は、ＮＨＲ91、ＯＨ、ＣＯＯＲ93、ＣＨ（ＮＨＲ91）ＣＯＯＲ93、又は置換フェニル基であり；
Ｒ93は、水素又はＣ1-4アルキルであり；
Ｒ91は、水素、ＣＨ3、又はＣＨ3ＣＯであり；並びに
ｄは、１〜３の整数である。
【０３０９】
例えば、式（ＩＩ）の水溶性マレイミドブロッキング化合物は、システイン、Ｎ−アセチルシステイン、システインメチルエステル、Ｎ−メチルシステイン、２−メルカプトエタノール、３−メルカプトプロパン酸、２−メルカプト酢酸、メルカプトメタノール（すなわち、ＨＯＣＨ2ＳＨ）、フェニルが１又は複数の親水性置換基により置換されているベンジルチオール、又は３−アミノプロパン−１−チオールである。フェニル上の１又は複数の親水性置換基は、ＯＨ、ＳＨ、メトキシ、エトキシ、ＣＯＯＨ、ＣＨＯ、ＣＯＣ1-4アルキル、ＮＨ2、Ｆ、シアノ、ＳＯ3Ｈ、ＰＯ3Ｈなどを含む。
【０３１０】
例えば、水溶性マレイミドブロッキング基は、−Ｓ−（ＣＨ2）d−Ｒ90であり、ここでＲ90は、ＯＨ、ＣＯＯＨ、又はＣＨ（ＮＨＲ91）ＣＯＯＲ93であり；
Ｒ93は、水素又はＣＨ3であり；
Ｒ91は、水素又はＣＨ3ＣＯであり；並びに
ｄは、１又は２である。
【０３１１】
例えば、水溶性マレイミドブロッキング基は、−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ（ＮＨ2）ＣＯＯＨである。
【０３１２】
例えば、ＰＨＦが、２ｋＤａ〜４０ｋＤａ（例えば、約２〜２０ｋＤａ、又は約３〜１５ｋＤａ、又は約５〜１０ｋＤａ）の範囲の分子量を有する場合、１つのＰＨＦ当たりの薬物の数（例えば、ｍ2）は、１〜約４０（例えば、約１〜２０又は約２〜１５又は約３〜１０又は約２〜１０）の整数である。このスカフォールドは、例えば、分子量４０ｋＤａ又はそれよりも大きい（例えば、６０ｋＤａ又はそれよりも大きい；８０ｋＤａ又はそれよりも大きい；又は１００ｋＤａ又はそれよりも大きい；１２０ｋＤａ又はそれよりも大きい；１４０ｋＤａ又はそれよりも大きい；１６０ｋＤａ又はそれよりも大きい、１８０ｋＤａ又はそれよりも大きい、又は２００ｋＤａ又はそれよりも大きい、又は約４０〜２００ｋＤａ、４０〜１８０ｋＤａ、４０〜１４０ｋＤａ、６０〜２００ｋＤａ、６０〜１８０ｋＤａ、６０〜１４０ｋＤａ、８０〜２００ｋＤａ、８０〜１８０ｋＤａ、８０〜１４０ｋＤａ、１００〜２００ｋＤａ、１００〜１８０ｋＤａ、１００〜１４０ｋＤａ又は１４０〜１５０ｋＤａ）を有する単離された抗体をコンジュゲートするために使用することができる。この実施態様において、ＰＨＦに対する単離された抗体の比は、約１：１と約１：１０の間、約１：１と約１：９の間、約１：１と約１：８の間、約１：１と約１：７の間、約１：１と約１：６の間、約１：１と約１：５の間、約１：１と約１：４の間、約１：１と約１：３の間、約１：１と約１：２の間、約１：２と約１：８の間、約１：２と約１：６の間、約１：２と約１：５の間、約１：２と約１：４の間、約１：２と約１：３の間、約１：３と約１：４の間、又は約１：３と約１：５の間である。
【０３１３】
例えば、ＰＨＦが、２ｋＤａ〜４０ｋＤａ（例えば、約２〜２０ｋＤａ、又は約３〜１５ｋＤａ、又は約５〜１０ｋＤａ）の範囲の分子量を有する場合、１つのＰＨＦ当たりの薬物の数（例えば、ｍ2）は、１〜約４０（例えば、約１〜２０又は約２〜１５又は約３〜１０又は約２〜１０）の整数である。このスカフォールドは、例えば、分子量１４０ｋＤａ〜１８０ｋＤａ又は１４０ｋＤａ〜１５０ｋＤａを有する単離された抗体をコンジュゲートするために使用することができる。この実施態様において、単離された抗体のＰＨＦに対する比は、約１：１と約１：１０の間、約１：１と約１：９の間、約１：１と約１：８の間、約１：１と約１：７の間、約１：１と約１：６の間、約１：１と約１：５の間、約１：１と約１：４の間、約１：１と約１：３の間、約１：１と約１：２の間、約１：２と約１：８の間、約１：２と約１：６の間、約１：２と約１：５の間、約１：２と約１：４の間、約１：２と約１：３の間、約１：３と約１：４の間、又は約１：３と約１：５の間である。
【０３１４】
この分子量範囲の単離された抗体は、例えばＩｇＧ、ＩｇＭなどの完全長抗体を含むが、これらに限定されるものではない。
【０３１５】
例えば、ＰＨＦが、２ｋＤａ〜４０ｋＤａ（例えば、約２〜２０ｋＤａ、又は約３〜１５ｋＤａ、又は約５〜１０ｋＤａ）の範囲の分子量を有する場合、１つのＰＨＦ当たりの薬物の数（例えば、ｍ2）は、１〜約４０（例えば、約１〜２０又は約２〜１５又は約３〜１０又は２〜１０）の整数である。このスカフォールドは、例えば、分子量６０ｋＤａ〜１２０ｋＤａを有する単離された抗体をコンジュゲートするために使用することができる。この実施態様において、単離された抗体のＰＨＦに対する比は、約１：１と約１：１０の間、約１：１と約１：９の間、約１：１と約１：８の間、約１：１と約１：７の間、約１：１と約１：６の間、約１：１と約１：５の間、約１：１と約１：４の間、約１：１と約１：３の間、約１：１と約１：２の間、約１：２と約１：８の間、約１：２と約１：６の間、約１：２と約１：５の間、約１：２と約１：４の間、約１：２と約１：３の間、約１：３と約１：４の間、約１：３と約１：５の間である。
【０３１６】
例えば、ＰＨＦが、２ｋＤａ〜４０ｋＤａ（例えば、約２〜２０ｋＤａ、又は約３〜１５ｋＤａ、又は約５〜１０ｋＤａ）の範囲の分子量を有する場合、１つのＰＨＦ当たりの薬物の数（例えば、ｍ2）は、１〜約４０（例えば、約１〜２０又は約２〜１５又は約３〜１０又は２〜１０）の整数である。このスカフォールドは、例えば、分子量４０ｋＤａ〜８０ｋＤａを有する単離された抗体をコンジュゲートするために使用することができる。この実施態様において、単離された抗体のＰＨＦに対する比は、約１：１と約１：１０の間、約１：１と約１：９の間、約１：１と約１：８の間、約１：１と約１：７の間、約１：１と約１：６の間、約１：１と約１：５の間、約１：１と約１：４の間、約１：１と約１：３の間、約１：１と約１：２の間、約１：２と約１：８の間、約１：２と約１：６の間、約１：２と約１：５の間、約１：２と約１：４の間、約１：２と約１：３の間、約１：３と約１：４の間、又は約１：３と約１：５の間である。
【０３１７】
特定の実施態様において、本明細書記載のコンジュゲートにおける、式（Ｉｅ）のＤ担持ポリマースカフォールドは、式（Ｉｆ）であり、ここでポリマーは、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の分子量を有するＰＨＦであり：
【化４３】
2019508456.tif 000049
（Ｉｆ）
式中：
ｍは、１〜約３００の整数であり、
ｍ1は、１〜約１４０の整数であり、
ｍ2は、１〜約４０の整数であり、
ｍ3aは、０〜約１７の整数であり、
ｍ3bは、１〜約８の整数であり、
ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜約１８の範囲にあり、
ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a、及びｍ3bの合計は、約１５〜約３００の範囲にあり；
末端
【化４４】
2019508456.tif 000050
は、１又は複数のポリマースカフォールドの、ＳＬＣ３４Ａ２の細胞外領域へ特異的に結合する単離された抗体への結合を意味し、この抗体は、（ｉ）アミノ酸配列GYTFTGYNIH（配列番号５）を含む可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）；アミノ酸配列AIYPGNGDTSYKQKFRG（配列番号６）を含む可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）；アミノ酸配列GETARATFAY（配列番号７）を含む可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）；アミノ酸配列SASQDIGNFLN（配列番号８）を含む可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）；アミノ酸配列YTSSLYS（配列番号９）を含む可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）；及び、アミノ酸配列QQYSKLPLT（配列番号１０）を含む可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）か、又は（ｉｉ）アミノ酸配列GFSFSDFAMS（配列番号１８）を含むＣＤＲＨ１；アミノ酸配列ATIGRVAFHTYYPDSMKG（配列番号１９）を含むＣＤＲＨ２；アミノ酸配列ARHRGFDVGHFDF（配列番号２０）を含むＣＤＲＨ３；アミノ酸配列RSSETLVHSSGNTYLE（配列番号２１）を含むＣＤＲＬ１；アミノ酸配列RVSNRFS（配列番号２２）を含むＣＤＲＬ２；及び、アミノ酸配列FQGSFNPLT（配列番号２３）を含むＣＤＲＬ３を含み；並びに、
ＰＨＦと抗体の比は、１０以下である。
【０３１８】
一部の実施態様において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、ＳＬＣ３４Ａ２へ特異的に結合し、且つ（ｉ）アミノ酸配列GYTFTGYNIH（配列番号５）を含むＣＤＲＨ１；アミノ酸配列AIYPGNGDTSYKQKFRG（配列番号６）を含むＣＤＲＨ２；アミノ酸配列GETARATFAY（配列番号７）を含むＣＤＲＨ３；アミノ酸配列SASQDIGNFLN（配列番号８）を含むＣＤＲＬ１；アミノ酸配列YTSSLYS（配列番号９）を含むＣＤＲＬ２；及び、アミノ酸配列QQYSKLPLT（配列番号１０）を含むＣＤＲＬ３を含む。
【０３１９】
一部の実施態様において、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体は、ＳＬＣ３４Ａ２へ特異的に結合し、且つ（ｉ）アミノ酸配列GFSFSDFAMS（配列番号１８）を含むＣＤＲＨ１；アミノ酸配列ATIGRVAFHTYYPDSMKG（配列番号１９）を含むＣＤＲＨ２；アミノ酸配列ARHRGFDVGHFDF（配列番号２０）を含むＣＤＲＨ３；アミノ酸配列RSSETLVHSSGNTYLE（配列番号２１）を含むＣＤＲＬ１；アミノ酸配列RVSNRFS（配列番号２２）を含むＣＤＲＬ２；及び、アミノ酸配列FQGSFNPLT（配列番号２３）を含むＣＤＲＬ３を含む。
【０３２０】
式（Ｉｆ）のスカフォールドは、下記の特徴の１又は複数を含む：
【０３２１】
式（Ｉｆ）におけるＰＨＦが、約２ｋＤａ〜約２０ｋＤａの範囲の分子量を有する場合、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a、及びｍ3bの合計は、約１５〜約１５０の範囲にあり、ｍ1は、１〜約７０の整数であり、ｍ2は、１〜約２０の整数であり、ｍ3aは、０〜約９の整数であり、ｍ3bは、１〜約８の整数であり、ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜約１０の範囲にあり、並びにＰＨＦと抗体の比は、２〜約８の整数である。
【０３２２】
式（Ｉｆ）におけるＰＨＦが、約３ｋＤａ〜約１５ｋＤａの範囲の分子量を有する場合、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a、及びｍ3bの合計は、約２０〜約１１０であり、ｍ1は、２〜約５０の整数であり、ｍ2は、２〜約１５の整数であり、ｍ3aは、０〜約７の整数であり、ｍ3bは、１〜約８の整数であり、ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜約８の範囲にあり、並びにＰＨＦと抗体の比は、２〜約８（例えば、約２〜約６又は約２〜約４）の整数である。
【０３２３】
式（Ｉｆ）におけるＰＨＦが、約５ｋＤａ〜約１０ｋＤａの範囲の分子量を有する場合、ｍ、ｍ1、ｍ2、ｍ3a、及びｍ3bの合計は、約４０〜約７５であり、ｍ1は、約２〜約３５の整数であり、ｍ2は、約２〜約１０の整数であり、ｍ3aは、０〜約４の整数であり、ｍ3bは、１〜約５の整数であり、ｍ3a及びｍ3bの合計は、１〜約５の範囲にあり、並びにＰＨＦと抗体の比は、２〜約８（例えば、約２〜約６又は約２〜約４）の整数である。
【０３２４】
特定の実施態様において、アウリスタチンＦヒドロキシプロピルアミド（“ＡＦ  ＨＰＡ”）と抗体の比は、約３０：１、２９：１、２８：１、２７：１、２６：１、２５：１、２４：１、２３：１、２２：１、２１：１、２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、又は６：１であることができる。
【０３２５】
特定の実施態様において、ＡＦ  ＨＰＡと抗体の比は、約２５：１、２４：１、２３：１、２２：１、２１：１、２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、又は６：１であることができる。
【０３２６】
他の実施態様において、ＡＦ  ＨＰＡと抗体の比は、約２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、又は６：１であることができる。
【０３２７】
一部の実施態様において、ＡＦ  ＨＰＡと抗体の比は、約１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、又は１０：１であることができる。
【０３２８】
一部の実施態様において、ＡＦと抗体の比は、約１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、又は１１：１であることができる。
【０３２９】
一部の実施態様において、ＡＦ  ＨＰＡと抗体の比は、約１５：１、１４：１、１３：１、又は１２：１であることができる。
【０３３０】
特定の実施態様において、ＰＨＦと抗体の比は、約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、又は１：１であることができる。
【０３３１】
特定の実施態様において、ＰＨＦと抗体の比は、約８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、又は２：１であることができる。
【０３３２】
他の実施態様において、ＰＨＦと抗体の比は、約６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、又は１：１であることができる。
【０３３３】
他の実施態様において、ＰＨＦと抗体の比は、約６：１、５：１、４：１、３：１、又は２：１であることができる。
【０３３４】
他の実施態様において、ＰＨＦと抗体の比は、約６：１、５：１、４：１、又は３：１であることができる。
【０３３５】
一部の実施態様において、ＰＨＦと抗体の比は、約５：１、４：１、又は３：１であることができる。
【０３３６】
一部の実施態様において、ＰＨＦと抗体の比は、約４：１、３：１、又は２：１であることができる。
【０３３７】
抗体−ポリマー薬物コンジュゲートの他の実施態様は、例えば、米国特許第８，８１５，２２６号；及び、米国特許出願第２０１５−０１０４４０７号に説明されており；その各々の内容はそれらの全体が引用により本明細書中に組込まれている。
【０３３８】
この開示はまた、ポリマー担体が存在しない抗体に直接コンジュゲートされ得るように修飾された薬物誘導体、及びそれらの薬物−抗体コンジュゲートにも関する。
【０３３９】
一部の実施態様において、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体薬物コンジュゲートは、薬物部分にコンジュゲートされた、すなわち、共有的結合された抗体を含む。一部の実施態様において、抗体は、リンカー、例えば非−ポリマーリンカーを介して、薬物部分へ共有的結合されている。
【０３４０】
ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の「Ｄ」（例えば、薬物部分）は、本明細書規定の細胞毒性又は細胞分裂阻害性作用を有する、任意の化合物、部分又は基を含んでよい。特定の実施態様において、ＮａＰｉ２ｂ標的化された−抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、腫瘍細胞を標的化するＮａＰｉ２ｂ標的化抗体（Ａｂ）、Ｄ（例えば、薬物部分）、及びＡｂをＤへ結合するリンカー部分（Ｌ）を含む。一部の実施態様において、抗体は、リジン及び／又はシステインなどの、１又は複数のアミノ酸残基を介して、リンカー部分（Ｌ）に結合される。
【０３４１】
特定の実施態様において、ＡＤＣは、式（Ｉｇ）を有し：
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）p
（Ｉｇ）
ここで、ｐは、１〜約２０である。
【０３４２】
一部の実施態様において、抗体へコンジュゲートされ得る薬物部分の数は、遊離のシステイン残基の数により制限される。一部の実施態様において、遊離システイン残基は、本明細書記載の方法により、抗体アミノ酸配列へ導入される。式Ｉｇの例証的ＡＤＣは、１、２、３、又は４個の操作されたシステインアミノ酸を有する抗体を含むが、これらに限定されるものではない（Lyon, R.ら、(2012) Methods in Enzym. 502:123-138）。一部の実施態様において、１又は複数の遊離システイン残基は、操作を使用することなく、抗体中に既に存在しており、この場合、存在する遊離システイン残基は、抗体を薬物へコンジュゲートするために使用することができる。一部の実施態様において、抗体は、１又は複数の遊離システイン残基を作製するために、抗体のコンジュゲーションの前に、還元条件に曝露される。
【０３４３】
一部の実施態様において。「リンカー」（Ｌ）は、１又は複数のＤ（例えば、薬物部分）を抗体（Ａｂ）へ連結し、式Ｉｇの抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を形成するために使用することができる、二官能性部分又は多官能性部分である。一部の実施態様において、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、薬物への及び抗体への共有的結合のための反応性官能基を有するリンカーを用いて、調製することができる。例えば、一部の実施態様において、抗体（Ａｂ）のシステインチオールは、リンカー又は薬物−リンカー中間体の反応性官能基と結合を形成し、ＡＤＣを作製することができる。
【０３４４】
一態様において、リンカーは、抗体上に存在する遊離システインと反応し、共有結合を形成することが可能である官能基を有する。かかる反応性官能基の非限定的例は、マレイミド、ハロアセトアミド、α−ハロアセチル、スクシンイミドエステル、４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステルなどの活性化エステル、無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアナート、及びイソチオシアネートを含む。例えば、コンジュゲーション法は、Klussmanらの文献、(2004), Bioconjugate Chemistry, 15(4):765-773の766頁及びその中の実施例を参照されたい。
【０３４５】
一部の実施態様において、リンカーは、抗体上に存在する求電子基と反応することが可能である官能基を有する。かかる求電子基の例は、アルデヒド基及びケトンカルボニル基を含むが、これらに限定されるものではない。一部の実施態様において、リンカーの反応性官能基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応し、且つ抗体単位への共有結合を形成することができる。かかる反応性官能基の非限定的例は、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシラート、及びアリールヒドラジドを含むが、これらに限定されるものではない。
【０３４６】
リンカーは、１又は複数のリンカー成分を含んでよい。リンカー成分の例は、６−マレイミドカプロイル（“ＭＣ”）、マレイミドプロパノイル（“ＭＰ”）、バリン−シトルリン（“ｖａｌ−ｃｉｔ”又は“ｖｃ”）、アラニン−フェニルアラニン（“ａｌａ−ｐｈｅ”）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（“ＰＡＢ”）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（“ＳＰＰ”）、及び４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシラート（“ＭＣＣ”）が挙げられる。様々なリンカー成分が、当該技術分野において公知であり、その一部は以下に説明されている。
【０３４７】
リンカーは、薬物の放出を促進する、「切断可能なリンカー」であってよい。切断可能なリンカーの非限定的例は、酸−不安定なリンカー（例えば、ヒドラゾン含有）、プロテアーゼ−感受性（例えば、ペプチダーゼ−感受性）リンカー、光に不安定なリンカー、又はジスルフィド−含有リンカーを含む（Chariら、Cancer Research 52:127-131 (1992)；米国特許第５，２０８，０２０号）。
【０３４８】
特定の実施態様において、リンカーは、下記式（ＩＩｇ）を有し：
−Ａa−Ｗw−Ｙy
（ＩＩｇ）
式中：
Ａは、「ストレッチャー単位」であり、且つａは、０〜１の整数であり；
Ｗは、「アミノ酸単位」であり、且つｗは、０〜１２の整数であり；
Ｙは、「スペーサー単位」であり、且つｙは、０、１もしくは２の整数である。式（ＩＩｇ）のリンカーを含むＡＤＣは、式Ｉ（Ａ）を有し：Ａｂ−（Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−Ｄ）ｐ、式中、Ａｂ、Ｄ、及びｐは、式（Ｉｇ）について先に規定されている。かかるリンカーの例証的実施態様は、米国特許第７，４９８，２９８号に開示されており、これはその全体が引用により本明細書中に組込まれている。
【０３４９】
一部の実施態様において、リンカー成分は、抗体を別のリンカー成分又は薬物部分へ連結する、「ストレッチャー単位」（Ａ）を含む。ストレッチャー単位の非限定的例を、以下に示している（式中、波線は、抗体、薬物、又は追加のリンカー成分への共有的結合の部位を示す）：
【化４５】
2019508456.tif 000051
【０３５０】
一部の実施態様において、リンカー成分は、「アミノ酸単位」（Ｗ）を含む。一部のかかる実施態様において、アミノ酸単位は、プロテアーゼによるリンカーの切断を可能にし、これによりリソソーム酵素などの、細胞内プロテアーゼに曝露された際の、免疫複合体からの薬物の放出を促進する（Doroninaら、(2003) Nat. Biotechnol. 21:778-784）。アミノ酸単位の例は、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、及びペンタペプチドを含むが、これらに限定されるものではない。例証的ジペプチドは、バリン−シトルリン（ｖｃ又はｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｆ又はａｌａ−ｐｈｅ）；フェニルアラニン−リジン（ｆｋ又はｐｈｅ−ｌｙｓ）；フェニルアラニン−ホモリジン（ｐｈｅ−ｈｏｍｏｌｙｓ）；及び、Ｎ−メチル−バリン−シトルリン（Ｍｅ−ｖａｌ−ｃｉｔ）を含むが、これらに限定されるものではない。例証的トリペプチドは、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｖａｌ−ｃｉｔ）及びグリシン−グリシン−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）を含むが、これらに限定されるものではない。アミノ酸単位は、天然に生じるアミノ酸残基及び／又は少量のアミノ酸及び／又は天然に生じないアミノ酸アナログ、例えばシトルリンを含んでよい。アミノ酸単位は、特定の酵素、例えば腫瘍−関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ及びＤ、又はプラスミンプロテアーゼなどによる、酵素切断のために、設計され且つ最適化され得る。
【０３５１】
典型的には、ペプチド−型リンカーは、２個又はそれよりも多いアミノ酸及び／又はペプチド断片の間に、ペプチド結合を形成することにより、調製することができる。かかるペプチド結合は、例えば、液相合成法（例えば、E. Schrider及びK. Lubke、「The peptides」、第1巻76-136頁、Academic Press (1965)）に従い、調製することができる。
【０３５２】
一部の実施態様において、リンカー成分は、直接又はストレッチャー単位及び／もしくはアミノ酸単位を介してのいずれかで、抗体を薬物部分へ連結する「スペーサー」単位を含む。スペーサー単位は、「自己犠牲(self-immolative)」又は「非自己犠牲」であってよい。「非自己犠牲」スペーサー単位は、ＡＤＣの切断時に、スペーサー単位の一部又は全体が、薬物部分に結合され続けるものである。非自己犠牲スペーサー単位の例は、グリシンスペーサー単位及びグリシン−グリシンスペーサー単位を含むが、これに限定されるものではない。一部の実施態様において、腫瘍−細胞関連プロテアーゼによる、グリシン−グリシンスペーサー単位を含むＡＤＣの酵素的切断は、ＡＤＣの残余からのグリシン−グリシン−薬物部分の放出を生じる。一部のかかる実施態様において、グリシン−グリシン−薬物部分は、腫瘍細胞において加水分解工程に供され、結果的に薬物部分からグリシン−グリシンスペーサー単位を切断する。
【０３５３】
「自己犠牲」スペーサー単位は、薬物部分の放出を可能にする。特定の実施態様において、リンカーのスペーサー単位は、ｐ−アミノベンジル単位を含む。一部のかかる実施態様において、ｐ−アミノベンジルアルコールは、アミド結合を介して、アミノ酸単位に結合され、且つカルバメート、メチルカルバメート、又はカーボネートは、ベンジルアルコールと薬物の間に形成される（Hamannら、(2005) Expert Opin. Ther. Patents (2005) 15:1087-1103）。一部の実施態様において、スペーサー単位は、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）を含む。一部の実施態様において、自己犠牲リンカーを含むＡＤＣは、下記構造を有し：
【化４６】
2019508456.tif 000052
式中：
Ｑは、−Ｃ1−Ｃ8アルキル、−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ8アルキル）、ハロゲン、ニトロ、又はシアノであり；
ｎ6は、０〜４の整数であり；
Ｘaは、１又は複数の追加のスペーサー単位であるか、又は存在しないことができ；並びに
ｐは、１〜約２０の整数である。
【０３５４】
一部の実施態様において、ｐは、１〜１０、１〜７、１〜５、又は１〜４の整数である。Ｘaスペーサー単位の非限定的例は、下記であり：
【化４７】
2019508456.tif 000053
式中、Ｒ101及びＲ102は、独立して、Ｈ及びＣ1−Ｃ6アルキルから選択される。一部の実施態様において、Ｒ101及びＲ102は、各々−ＣＨ3である。
【０３５５】
自己犠牲スペーサーの他の例は、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体（米国特許第７，３７５，０７８号；Hayら、(1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237）、及びオルト−もしくはパラ−アミノベンジルアセタールなどの、ＰＡＢ基に電気的に類似している芳香族化合物を含むが、これらに限定されるものではない。一部の実施態様において、アミド結合の加水分解時に環化を受けるスペーサーを使用することができ、これは例えば置換及び非置換の４−アミノ酪酸アミド（Rodriguesら、(1995) Chemistry Biology 2:223）、好適に置換されたビシクロ［２．２．１］及びビシクロ［２．２．２］環系（Stormら、(1972) J. Amer. Chem. Soc. 94:5815）、並びに２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Amsberryら、(1990) J. Org. Chem. 55:5867）などである。薬物のグリシン残基のα−炭素への連結は、ＡＤＣにおいて有用である自己犠牲スペーサーの別の例である（Kingsburyら、(1984) J. Med. Chem. 27:1447）。
【０３５６】
一部の実施態様において、リンカーＬは、分岐した多官能性リンカー部分を介した、２つ以上の薬物部分の抗体への共有的結合のための、樹状型リンカーであってよい（Sunら、(2002) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215；Sunら、(2003) Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-1768）。樹状型リンカーは、ＡＤＣの効能に関連している、薬物の抗体に対する分子比、すなわち負荷を増加することができる。従って、抗体が１個の反応性システインチオール基のみを保持する場合、多数の薬物部分は、樹状型リンカーを介して結合され得る。
【０３５７】
リンカーの非限定的例は、式（Ｉｇ）のＡＤＣについて以下に示し：
【化４８−１】
2019508456.tif 000054
【化４８−２】
2019508456.tif 000055
式中、Ｒ101及びＲ102は、独立して、Ｈ及びＣ1−Ｃ6アルキルから選択され；
ｎ5は、０〜１２の整数である。
【０３５８】
一部の実施態様において、ｎは、２〜１０の整数である。一部の実施態様において、ｎは、４〜８の整数である。
【０３５９】
一部の実施態様において、Ｒ101及びＲ102は、各々−ＣＨ3である。
【０３６０】
更なるＡＤＣの非限定的例は、下記構造を含み：
【化４９】
2019508456.tif 000056
式中、Ｘａは、以下であり：
【化５０】
2019508456.tif 000057
Ｙは、以下であり：
【化５１】
2019508456.tif 000058
各Ｒ103は、独立して、Ｈ又はＣ1−Ｃ6アルキルであり；並びに、ｎ７は、１〜１２の整数である。
【０３６１】
一部の実施態様において、リンカーは、溶解度及び／又は反応性を変更する基により、置換される。非限定的例として、スルホネート（−ＳＯ3-）又はアンモニウムのような帯電した置換基は、リンカー試薬の水への溶解度を増加し、且つリンカー試薬の抗体及び／又は薬物部分とのカップリング反応を促進するか、或いはＡＤＣを調製するために利用される合成経路に応じて、Ａｂ−Ｌ（抗体−リンカー中間体）のＤとの、又はＤ−Ｌ（薬物−リンカー中間体）のＡｂとのカップリング反応を促進する。一部の実施態様において、リンカーの一部は抗体へカップリングされ、且つリンカーの一部は薬物へカップリングされ、次にＡｂ−（リンカー部分）aは、薬物−（リンカー部分）bへカップリングされ、式ＩｇのＡＤＣを形成する。
【０３６２】
本明細書に開示された化合物は、非限定的に、以下のリンカー試薬により調製されるＡＤＣを明白に企図し：ビス−マレイミド−トリオキシエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、Ｎ−（β−マレイミドプロピルオキシ）−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、Ｎ−（ε−マレイミドカプロイルオキシ）スクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、Ｎ−［γ−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）、１，６−ヘキサン−ビス−ビニルスルホン（ＨＢＶＳ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロン酸エステル）（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、３−（ブロモアセトアミド）プロピオン酸スクシンイミジル（ＳＢＡＰ）、ヨード酢酸スクシンイミジル（ＳＩＡ）、スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＳＭＣＣ）、スクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチラート（ＳＭＰＢ）、スクシンイミジル６−［（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート］（ＳＭＰＨ）、イミノチオラン（ＩＴ）、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、及びスクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート（ＳＶＳＢ）；並びに、ビス−マレイミド試薬：ジチオビスマレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４−ビスマレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４ビスマレイミジル−２，３−ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビスマレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、ＢＭ（ＰＥＧ）2（以下に示す）、及びＢＭ（ＰＥＧ）3（以下に示す）；イミドエステルの二官能性誘導体（アジピン酸ジメチルＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス−（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアナート（トルエン２，６−ジイソシアナートなど）、並びにビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）を含む。一部の実施態様において、ビス−マレイミド試薬は、抗体中のシステインのチオール基の、チオール−含有薬物部分、リンカー、又はリンカー−薬物中間体への結合を可能にする。チオール基と反応性である他の官能基は、ヨードアセトアミド、ブロモアセトアミド、ビニルピリジン、ジスルフィド、ピリジルジスルフィド、イソシアナート、及びイソチオシアナートを含むが、これらに限定されるものではない。
【化５２】
2019508456.tif 000059
【０３６３】
いくつかの有用なリンカー試薬を、Pierce Biotechnology社（ロックフォード、IL）、Molecular Biosciences社（ボルダー、CO）などの、様々な商業的供給業者から入手するか、又は当該技術分野において説明された手順に従い合成することができる：例えば、Tokiら、(2002) J. Org. Chem. 67:1866-1872；Dubowchikら、(1997) Tetrahedron Letters, 38:5257-60；Walker, M. A.、(1995) J. Org. Chem. 60:5352-5355；Frischら、(1996) Bioconjugate Chem. 7:180-186；米国特許第６，２１４，３４５号；ＷＯ０２／０８８１７２；ＵＳ２００３１３０１８９；ＵＳ２００３０９６７４３；ＷＯ０３／０２６５７７；ＷＯ０３／０４３５８３；及び、ＷＯ０４／０３２８２８。
【０３６４】
炭素−１４−標識した１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体へのコンジュゲーションのためのキレート剤の例である。例えば、ＷＯ９４／１１０２６参照。
【０３６５】
ポリマーＮａＰｉ２ｂ標的化抗体コンジュゲートの製造方法：
特定の実施態様において、本コンジュゲートは、いくつかの工程で形成される。これらの工程は、（１）ポリマーを修飾し、これによりこれが薬物又はその誘導体の官能基と反応することができる官能基を含むようにする工程；（２）修飾されたポリマーを、薬物又はその誘導体と反応させ、これにより薬物をそのポリマーに連結させる工程；（３）ポリマー−薬物コンジュゲートを修飾し、これによりポリマーが、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体又はその誘導体の官能基と反応することができる官能基を含むようにする工程；並びに、（４）修飾されたポリマー−薬物コンジュゲートを、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体と反応させ、本明細書に開示されたコンジュゲートを形成する工程：を含む。工程（３）は、工程（１）により生成された修飾されたポリマーが、抗体の官能基と反応することができる官能基を含む場合には、省略してよい。
【０３６６】
別の実施態様において、本コンジュゲートは、いくつかの工程で形成され、これは：（１）ポリマーを修飾し、これによりこれが第一の薬物又はその誘導体の官能基と反応することができる官能基を含むようにする工程；（２）修飾されたポリマーを、第一の薬物又はその誘導体と反応させ、これにより第一の薬物がそのポリマーに連結させる工程；（３）ポリマー−薬物コンジュゲートを修飾し、これによりこれが、第二の薬物又はその誘導体の官能基と反応することができる異なる官能基を含むようにする工程；（４）修飾されたポリマー−薬物コンジュゲートを、第二の薬物又はその誘導体と反応させ、これにより第二の薬物が、ポリマー−薬物コンジュゲートに連結させる工程；（５）２種の異なる薬物を含むポリマー−薬物コンジュゲートを修飾し、これによりポリマーが、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の官能基と反応することができる官能基を含むようにする工程；並びに、（６）工程（５）の修飾されたポリマー−薬物コンジュゲートを、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体又はその誘導体と反応させ、本明細書に開示されたコンジュゲートを形成する工程：を含む。工程（５）及び（６）は、２種の異なる単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体又はそれらの誘導体が、コンジュゲートされ、２種の異なる薬物及び２種の異なる抗体を含有するポリマー−薬物コンジュゲートを形成する場合には、繰り返されてよい。
【０３６７】
また別の実施態様において、本コンジュゲートは、いくつかの工程で形成される。これらの工程は、（１）ポリマーを修飾し、これによりこれが薬物又はその誘導体の官能基と反応することができる官能基を含むようにする工程；（２）ポリマーを更に修飾し、これによりこれがＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の官能基と反応することができる官能基も含むようにする工程；（３）修飾されたポリマーを、薬物又はその誘導体と反応させ、これにより薬物がそのポリマーに連結させる工程；並びに、（４）修飾されたポリマー−薬物コンジュゲートを、ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体と反応させ、本明細書に開示されたコンジュゲートを形成する工程：を含む。工程（１）及び（２）の順番又は工程（３）及び（４）の順番は、逆であることができる。更に工程（１）又は（２）のいずれかは、修飾されたポリマーが、薬物又はその誘導体の官能基、及びＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の官能基の両方と反応することができる官能基を含む場合には、省略してよい。
【０３６８】
別の実施態様において、本コンジュゲートは、いくつかの工程で形成され、これは：（１）ポリマーを修飾し、これによりこれが第一の薬物又はその誘導体の官能基と反応することができる官能基を含むようにする工程；（２）更にポリマーを修飾し、これによりこれがＮａＰｉ２ｂ標的化抗体の官能基と反応することができる官能基を含むようにする工程；（３）修飾されたポリマーを、第一の薬物又はその誘導体と反応させ、これにより第一の薬物がそのポリマーに連結させる工程；（４）ポリマー−薬物コンジュゲートを修飾し、これによりこれが、第二の薬物又はその誘導体の官能基と反応することができる異なる官能基を含むようにする工程；（５）修飾されたポリマー−薬物コンジュゲートを、第二の薬物又はその誘導体と反応させ、これにより第二の薬物が、ポリマー−薬物コンジュゲートに連結させる工程；（６）２種の異なる薬物を含む修飾されたポリマー−薬物コンジュゲートを、単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体又はその誘導体と反応させ、本明細書に開示されたコンジュゲートを形成する工程：を含む。工程（６）は、２種の異なる単離された抗体又はそれらの誘導体が、コンジュゲートされ、２種の異なる薬物及び２種の異なる抗体を含有するポリマー−薬物コンジュゲートを形成する場合には、繰り返されてよい。工程（４）は、工程（１）の後に実行されて右よく、これにより修飾されたポリマーは、２種の異なる薬物又はそれらの誘導体と反応することができる２種の異なる官能基を含む。この実施態様において、修飾されたポリマーの、２種の異なる薬物（工程（３）及び工程（５））又は抗体（工程（６））との反応前の前に：２種の異なる薬物又はそれらの誘導体と反応することができる２種の異なる官能基を含む修飾されたポリマーは、更に修飾され、これによりこれは、抗体の官能基と反応することができる官能基を含むようになる。
【０３６９】
特定の例証的実施態様において、本明細書に開示されたコンジュゲートは、薬物送達及び組織操作などの、生物医学的応用における使用を認め、且つ本ポリマー担体は、生体適合性があり且つ生分解性である。特定の実施態様において、本担体は、可溶性ポリマー、ナノ粒子、ゲル、リポソーム、ミセル、縫合糸、インプラントなどである。特定の実施態様において、用語「可溶性ポリマー」は、ポリアール(polyal)（例えば、親水性ポリアセタール又はポリケタール）などの、生分解性で生体適合性のポリマーを包含している。特定の他の実施態様において、本担体は、完全合成、半合成又は天然に生じるポリマーである。特定の他の実施態様において、本担体は親水性である。本明細書に開示されたコンジュゲートを製造するための好適なポリマー担体の例は、米国特許第８，８１５，２２６号に記載されており、その内容は、その全体が引用により本明細書中に組込まれている。
【０３７０】
一実施態様において、ポリマー担体は、式（ＩＶ）の単位を含み：
【化５３】
2019508456.tif 000060
（ＩＶ）、
ここで、Ｘ’は、ポリマー骨格のヒドロキシル基の置換基を示す。式（ＩＶ）及び本明細書記載の他の式において示されたように、各ポリアセタール単位は、該単位のグリセロール部分に結合した単独のヒドロキシル基、及び該単位のグリコールアルデヒド部分に結合したＸ’基を有する。これは、単に便宜上であり、且つ式（ＩＶ）の単位を有するポリマー及び本明細書記載の他の式は、該単位のグリコールアルデヒド部分に結合されたＸ’基（又はマレイミド末端を含むリンカーなどの別の置換基）を有する単位、及び該単位のグリセロール部分に結合した単独のＸ’基（又はマレイミド末端を含むリンカーなどの別の置換基）を有する単位、並びに一方は該単位のグリコールアルデヒド部分に結合し、且つ他方はグリセロール部分に結合した、２個のＸ’基（又はマレイミド末端を含むリンカーなどの別の置換基）を有する単位の無作為の分布を含むことができると解釈されるべきである。
【０３７１】
一実施態様において、本開示を実践するために適している生分解性で生体適合性のポリアールは、約２〜約４０ｋＤａの間、約６〜約２０ｋＤａの間、又は約８〜約１５ｋＤａの間の分子量を有する。例えば、本明細書に開示されたポリマースカフォールド又はコンジュゲートのために使用された生分解性で生体適合性のポリアールは、約２〜約４０ｋＤａの間（例えば、約２〜２０ｋＤａ、３〜１５ｋＤａ、又は５〜１０ｋＤａ）の分子量を有するＰＨＦである。
【０３７２】
修飾因子へのコンジュゲーションに適したポリマー担体（例えば、生体適合性、生分解性ポリマー担体）を調製する方法は、当該技術分野において公知である。例えば、合成指針は、米国特許第５，８１１，５１０号；第５，８６３，９９０号；第５，９５８，３９８号；第７，８３８，６１９号；第７，７９０，１５０号；及び第８，６８５，３８３号において認めることができる。当業者は、本開示の実践において使用するためのポリマー担体を作製するためにこれらの方法をどのように適合させるかを知っているであろう。
【０３７３】
一実施態様において、本開示の生分解性で生体適合性のポリアールコンジュゲートを形成する方法は、それにより好適な多糖が、グリコール−特異的酸化剤と有効量で組合せられ、アルデヒド中間体を形成するプロセスを含む。ポリアールそれ自身であるアルデヒド中間体は、次に、対応するポリオールへ還元され、スクシニル化され、且つ１又は複数の好適な修飾因子とカップリングされ、スクシンアミド−含有連結を含む生分解性で生体適合性のポリアールコンジュゲートを形成してよい。
【０３７４】
別の好ましい実施態様において、本開示において使用するための完全に合成した生分解性で生体適合性のポリアールは、好適な開始剤が、好適な前駆体化合物と反応することにより調製され得る。
【０３７５】
例えば、完全合成ポリアールは、ビニルエーテルの保護された置換ジオールによる縮合により調製されてよい。方法の有効性が、保護基の置換度及び嵩高性(bulkiness)によって決まる、開環重合などのその他の方法を、使用してよい。
【化５４】
2019508456.tif 000061
【０３７６】
当業者は、溶媒系、触媒及び他の因子は、最大分子量の生成物を得るために、最適化されてよいことを理解するであろう。
【０３７７】
特定の実施態様において、本担体は、ＰＨＦである。
【０３７８】
実施態様において、本ポリマー担体は、多分散指数（ＰＤＩ）≦１．５、例えば、＜１．４、＜１．３、＜１．２又は＜１．１を有するＰＨＦである。
【０３７９】
例えば、分子量４０ｋＤａ〜２００ｋＤａを有する単離されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体のコンジュゲーションに関して、スカフォールドのポリマー担体は、ポリアセタール、例えば、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の（例えば、約２〜２０ｋＤａ、又は約３〜１５ｋＤａ、又は約５〜１０ｋＤａ）の分子量（すなわち、修飾されたＰＨＦのＭＷ）を有するＰＨＦである。
【０３８０】
例えば、分子量４０ｋＤａ〜８０ｋＤａを有する抗体のコンジュゲーションに関して、本明細書に開示されたスカフォールドのポリマー担体は、ポリアセタール、例えば、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の（例えば、約２〜２０ｋＤａ、又は約３〜１５ｋＤａ、又は約５〜１０ｋＤａ）の分子量（すなわち、修飾されたＰＨＦのＭＷ）を有するＰＨＦである。例えば、ＰＨＦは、分子量約５ｋＤａ、６ｋＤａ、７ｋＤａ、８ｋＤａ、９ｋＤａ、１０ｋＤａ、１１ｋＤａ、１２ｋＤａ、１３ｋＤａ、１４ｋＤａ、又は１５ｋＤａを有する。
【０３８１】
例えば、分子量６０ｋＤａ〜１２０ｋＤａを有する抗体のコンジュゲーションに関して、本明細書に開示されたスカフォールドのポリマー担体は、ポリアセタール、例えば、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の（例えば、約２〜２０ｋＤａ、又は約３〜１５ｋＤａ、又は約５〜１０ｋＤａ）の分子量（すなわち、修飾されたＰＨＦのＭＷ）を有するＰＨＦである。例えば、ＰＨＦは、分子量約５ｋＤａ、６ｋＤａ、７ｋＤａ、８ｋＤａ、９ｋＤａ、１０ｋＤａ、１１ｋＤａ、１２ｋＤａ、１３ｋＤａ、１４ｋＤａ、又は１５ｋＤａを有する。
【０３８２】
例えば、分子量１４０ｋＤａ〜１８０ｋＤａ又は１４０ｋＤａ〜１５０ｋＤａを有する抗体のコンジュゲーションに関して、本明細書に開示されたスカフォールドのポリマー担体は、ポリアセタール、例えば、約２ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲の（例えば、約２〜２０ｋＤａ、又は約３〜１５ｋＤａ、又は約５〜１０ｋＤａ）の分子量（すなわち、修飾されたＰＨＦのＭＷ）を有するＰＨＦである。例えば、ＰＨＦは、分子量約５ｋＤａ、６ｋＤａ、７ｋＤａ、８ｋＤａ、９ｋＤａ、１０ｋＤａ、１１ｋＤａ、１２ｋＤａ、１３ｋＤａ、１４ｋＤａ、又は１５ｋＤａを有する。
【０３８３】
この分子量範囲内のそれらの抗体は、例えばＩｇＧ、ＩｇＭなどの完全長抗体を含むが、これらに限定されるものではない。
【０３８４】
本明細書に開示された生分解性で生体適合性のコンジュゲートは、所望の生分解性及び親水性の必要要件に合致するように調製することができる。例えば、生理的条件下では、生分解性と安定性の間の平衡に到達することができる。例えば、特定の閾値を超える分子量（一般に、分子の物理的形状に応じて、４０〜１００ｋＤａを上回る）を持つ分子は、小型分子のように、腎臓を通って排泄されず、且つ細胞による取込み、及び細胞内区分、最も顕著にはリソソーム内での分解によってのみ体からクリアランスされ得ることはわかっている。この知見は、機能的に安定しているが生分解性の物質が、一般的生理条件下（ｐＨ＝７．５±±０．５）及びリソソームｐＨ（ｐＨ５近傍）でのそれらの安定性を変更することにより、設計される方法を例証している。例えば、アセタール基及びケタール基の加水分解は、酸により触媒され、結果的にポリアールは概して、例えば血漿中よりも酸性のリソソーム環境内で安定性が低いことはわかっている。例えば、水性媒体中、３７℃のｐＨ＝５とｐＨ＝７．５での、ポリマー分解プロファイルを比較し、且つ結果的に正常な生理的環境中と細胞により取込まれた後の「消化性」リソソーム区分内での、ポリマー安定性の予想される平衡を決定する試験を設計することができる。かかる試験におけるポリマーの完全性は、例えば、サイズ排除ＨＰＬＣにより、測定することができる。当業者は、分解された本明細書に開示されたコンジュゲートの様々な断片を研究する他の好適な方法を選択することができる。
【０３８５】
多くの場合において、ｐＨ＝７．５で、ポリマーの有効サイズは、１〜７日間にわたり検出できるほど変化せず、且つ少なくとも数週間は、当初からの５０％以内を維持することは好ましいであろう。他方で、ｐＨ＝５で、ポリマーは、好ましくは１〜５日間にわたり検出できるほど分解し、且つ２週間から数ヶ月の時間枠内で、低分子量断片に完全に変換されるべきである。より迅速な分解が、場合によっては好ましいことがあるが、概して、ポリマーは、ポリマー断片の細胞による代謝又は排泄の速度を超えることのない速度で、細胞において分解され得ることがより望ましい。従って、特定の実施態様において、本開示のコンジュゲートは、特に細胞による取込み時に、生分解性であり、且つ生物学的システムとの関係において比較的「不活性」であることが期待される。担体の分解の産物は、好ましくは帯電しておらず、且つその環境のｐＨを有意に偏らせない。多数のアルコール基は、特にファゴサイトーシスの、細胞受容体によるポリマー認識の遅い速度を提供し得ることが提唱されている。本開示のポリマー骨格は一般に、もしあったとしても少ない抗原決定基を含み（例えば、一部の多糖及びポリペプチドに特徴的）、且つ一般に、それが望ましい場合を除き、インビボにおいて「キーとロック」型相互作用において嵌合することが可能な剛性構造を含まない。従って、本明細書に開示された可溶性の架橋された固形のコンジュゲートは、低い毒性及び生体接着性を有し、このことはこれらをいくつもの生物医学用途にとって好適なものとしていると予想される。
【０３８６】
本開示の特定の実施態様において、生分解性で生体適合性のコンジュゲートは、線状又は分岐した構造を形成することができる。例えば、本開示の生分解性で生体適合性のポリアールコンジュゲートは、キラル（光学活性）であることができる。任意に、本開示の生分解性で生体適合性のポリアールコンジュゲートは、スケールミック(scalemic)であることができる。
【０３８７】
特定の実施態様において、本明細書に開示されたコンジュゲートは、水溶性である。特定の実施態様において、本明細書に開示されたコンジュゲートは、水に不溶性である。特定の実施態様において、本発明のコンジュゲートは、固体形状である。特定の実施態様において、本明細書に開示されたコンジュゲートは、コロイド状である。特定の実施態様において、本明細書に開示されたコンジュゲートは、粒子形状である。特定の実施態様において、本明細書に開示されたコンジュゲートは、ゲル形状である。
【０３８８】
下記スキーム１は、本明細書に開示されたポリマー薬物スカフォールドを作製する合成スキームを示している。一実施態様において、本コンジュゲートは、以下のいくつかの工程で形成される：（１）ポリマー、ＰＨＦが、ＣＯＯＨ部分（例えば、-Ｃ（Ｏ）−Ｘ−（ＣＨ2）2−ＣＯＯＨ）を含むように、修飾される工程；（２）次に、ポリマーが更に修飾され、これによりこれが、ＰＢＲＭの官能基と反応することができるマレイミド部分（例えば、ＥＧ２−ＭＩ）を含むようにする工程；（３）２個の異なる官能基を含む修飾されたポリマーが、薬物又はその誘導体（例えば、ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）の官能基と反応され、ポリマー−薬物コンジュゲートを形成する工程；（４）ＰＢＲＭのジスルフィド結合が還元される工程；（５）その後還元されたＰＢＲＭが、ポリマー−薬物コンジュゲートと反応され、タンパク質−ポリマー−薬物コンジュゲートを形成する工程；並びに、（６）残存するマレイミド部分が、マレイミドブロッキング化合物（例えば、システイン）と任意に反応される工程。
【０３８９】
別の実施態様において、工程（２）及び（３）の順番は、下記スキーム１の右側の経路において示したように、逆転することができる。
スキーム１
【化５５−１】
2019508456.tif 000062
【化５５−２】
2019508456.tif 000063
【０３９０】
更に別の実施態様において、先の工程（２）及び（３）は、下記スキーム２に示したように同時に実行される。
スキーム２
【化５６−１】
2019508456.tif 000064
【化５６−２】
2019508456.tif 000065
【０３９１】
ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲートの使用
本開示に従う治療的実体の投与は、改善された移行、送達、忍容性などを提供するために製剤へ混入される、好適な担体、賦形剤、及び他の物質と共に投与されることは、理解されるであろう。多数の好適な製剤は、全ての医薬科学者に公知の処方集において認めることができる：「レミントン薬科学」（第１５版、Mack Publishing社、イーストン、PA(1975)）の中の特にBlaug、Seymourによる第８７章。これらの製剤は、例えば、散剤、泥膏、軟膏、ゼリー、ワックス、油状物、脂質、脂質（陽イオン性又は陰イオン性）含有小胞（Lipofectin(商標)など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収泥膏、水中油型及び油中水型乳剤、乳剤カルボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固形ゲル、及びカルボワックスを含有する半固形混合物を含む。製剤中の活性成分が、製剤により失活されず、且つ製剤が投与経路と物理的に適合性があり且つ忍容性があるならば、前述の混合物のいずれかは、本開示に従う治療及び療法において適している。同じくBaldrick P.の「Pharmaceutical excipient development: the need for preclinical guidance」、Regul. Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8 (2000)；Wang W.の「Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals」、Int. J. Pharm. 203(1-2):1-60 (2000)；Charman WNの「Lipids, lipophilic drugs, and oral drug delivery-some emerging concepts」、J Pharm Sci. 89(8):967-78 (2000)；Powellらの「Compendium of excipients for parenteral formulations」、PDA J Pharm Sci Technol. 52:238-311 (1998)、並びに医薬化学者に周知の製剤、賦形剤及び担体に関する追加情報に関するそれらの中の引用文献を参照されたい。
【０３９２】
一実施態様において、本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ抗体コンジュゲートは、治療薬として使用されてよい。かかる物質は、一般に、例えば、対象における異常なＮａＰｉ２ｂ活性及び／又は発現に関連した疾患又は病理の診断、予後判定、モニタリング、治療、緩和、予防、及び／又は進行の遅延に利用されるであろう。治療的レジメンは、標準方法を用い、異常なＮａＰｉ２ｂ活性及び／又は発現に関連した疾患又は障害、例えば癌に罹患している（又は発症のリスクのある）対象、例えばヒト患者を確定することにより実行される。ＮａＰｉ２ｂ抗体コンジュゲート調製品、好ましくはその標的抗原に対して高い特異性及び高い親和性を有するものは、対象へ投与され、且つ一般に標的とのその結合に起因した効果を有するであろう。このコンジュゲートの投与は、標的のシグナル伝達機能を解消するか又は阻害するか又は干渉することができる。本コンジュゲートの投与は、それが天然に結合する内在性リガンドとの標的の結合を解消するか又は阻害するか又は干渉することができる。例えば、本コンジュゲートは、標的に結合し、ＮａＰｉ２ｂ活性及び／又は発現を修飾、ブロック、阻害、減少、拮抗、中和、又はそうでなければ干渉する。
【０３９３】
異常なＮａＰｉ２ｂ活性及び／又は発現に関連した疾患又は障害は、癌を含むが、これに限定されるものではない。標的の癌は、卵巣上皮癌などの卵巣癌、甲状腺癌、結腸直腸癌、肺癌、非扁平上皮ＮＳＣＬＣなどの非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、乳癌、腎臓癌及び唾液腺癌であることができる。
【０３９４】
別の態様において、疾患又は障害は、非扁平上皮ＮＳＣＬＣなどの非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、及び卵巣上皮癌などの卵巣癌からなる群から選択される癌である。一般に疾患又は障害の緩和又は治療は、その疾患又は障害に関連している１又は複数の症状又は医学的問題点の軽減に関与している。例えば、癌の症例において、治療的有効量のコンジュゲート又はその医薬組成物は、以下の一つ又は組合せを達成することができる：癌細胞の数の減少；腫瘍サイズの減少；末梢器官への癌細胞の浸潤の阻害（すなわち、ある程度の減少及び／又は停止）；腫瘍転移の阻害；腫瘍増殖のある程度の阻害；並びに／又は、癌に関連した１又は複数の症状のある程度の軽減。一部の実施態様において、本明細書に開示された組成物は、対象における疾患又は障害の発症又は再発を防止するために使用することができる。
【０３９５】
本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ抗体コンジュゲートの治療的有効量は、一般に治療目的を達成するために必要とされる量に関連している。先に注記したように、これは、特定の場合においては、標的の機能と干渉する抗体とその標的抗原の間の結合相互作用であることができる。投与される必要とされる量は、更に、抗体のその特異的抗原への結合親和性によって左右され、且つまた、投与された抗体が、それが投与される自由容積(free volume)の他の対象から枯渇される速度により左右されるであろう。本明細書に開示されたコンジュゲートを利用する投薬計画はまた、患者の型、種、年齢、体重、性別及び医学的状態；治療される状態の重症度；投与経路；患者の腎臓及び肝臓の機能；並びに、利用される特定のコンジュゲートを含む様々な他の因子に従い選択される。熟練した医師又は獣医師は、その状態の進行を防止、対抗、又は停止するために必要とされるコンジュゲートの有効量を、容易に決定し且つ処方することができる。本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ抗体コンジュゲートの治療的有効用量の通常の範囲は、非限定的例として、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重、又は約０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜約１５０ｍｇ／ｋｇ体重である。本明細書に開示された範囲は、対象の体重を基にした投与される量として表現され、且つ当業者は、これを対象の体表面積当たりに投与される量として、容易に表現することができる。例えば、成人の１ｍｇ／ｋｇ体重は、約３７ｍｇ／ｍ2と等しく、且つ小児の１ｍｇ／ｋｇ体重は、約２５ｍｇ／ｍ2と等しい。
【０３９６】
一般の投薬頻度は、例えば、１日２回から月１回までの範囲にあってよい（例えば、１日１回、週１回；隔週１回；３週毎に１回又は月１回）。例えば、本明細書に開示されたＸＭＴ１５３５又は１０Ｈ１．１１．４Ｂのコンジュゲートは、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．２５ｍｇ／ｋｇ、１．６７ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、又は２０ｍｇ／ｋｇ）で、投与されることができる（例えば、毎週、２週毎、３週毎、又は毎月の単回投与量として）。例えば、本明細書に開示されたＸＭＴ１５３５又は１０Ｈ１．１１．４Ｂのコンジュゲートは、ＮａＰｉ２ｂ−発現している卵巣癌又はＮａＰｉ２ｂ−発現しているＮＳＣＬＣ癌の治療のために、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．２５ｍｇ／ｋｇ、１．６７ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、又は２０ｍｇ／ｋｇ）で、投与されることができる（例えば、毎週、２週毎、３週毎、又は毎月の単回投与量として）。
【０３９７】
治療の有効性は、特定のＮａＰｉ２ｂ−関連した障害を診断又は治療する任意の公知の方法に関連して決定される。ＮａＰｉ２ｂ−関連した障害の１又は複数の症状の緩和は、この抗体が臨床的恩恵をもたらすことを示している。
【０３９８】
所望の特異性を持つ抗体のスクリーニング方法は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）及び当該技術分野において公知の他の免疫学に媒介された技術を含むが、これらに限定されるものではない。
【０３９９】
ＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−薬物コンジュゲートの治療的投与及び製剤化
本明細書に開示されたコンジュゲート（本明細書において「活性化合物」とも称す）は、投与に適した医薬組成物へ混入することができる。かかる組成物の調製に関与した原理及び考察、並びに成分の選択の指針は、例えば、「レミントン薬科学：製剤の科学と実践」、第19版（Alfonso R. Gennaroら編集)、Mack Pub.社、イーストン、Pa.:1995：「Enhancement: Concepts, Possibilities, Limitations, And Trends」、Harwood Academic Publishers社、ラングホーン、Pa., 1994；並びに、「Peptide And Protein Drug Delivery」(Advances In Parenteral Sciences、第4巻)、1991, M. Dekker、ニューヨークに提供される。
【０４００】
かかる組成物は典型的には、抗体及び／又はそれらのコンジュゲート及び医薬として許容し得る担体を含有する。
【０４０１】
本明細書で使用される語句「医薬として許容し得る」とは、正当な医学的判断の範囲内で、妥当なベネフィット／リスク比に釣り合う、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、又は他の問題点もしくは合併症を伴わずに、ヒト及び動物の組織と接触して使用するのに適している、それらの化合物、物質、組成物、担体、及び／又は剤形を指す。
【０４０２】
本明細書で使用される用語「医薬として許容し得る担体」は、医薬投与に適合した、任意の及び全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張化剤及び吸収遅延剤などを含むことが意図される。好適な担体は、この分野の標準参考書である最新版の「レミントン薬科学」に説明されており、これは引用により本明細書中に組込まれている。かかる担体又は希釈剤の好ましい例は、水、食塩水、リンゲル液、デキストロース液、及び５％ヒト血清アルブミンを含むが、これらに限定されるものではない。リポソーム及び不揮発性油などの非水性ビヒクルも、使用されてよい。医薬活性物質のためのかかる媒体及び物質の使用は、当該技術分野において周知である。任意の慣習的媒体又は物質が、活性化合物と不適合である場合を除いて、組成物中のそれらの使用が企図されている。
【０４０３】
インビボ投与に使用される製剤は、無菌でなければならない。これは、無菌の濾過膜を通る濾過により容易に達成される。
【０４０４】
本明細書に開示された医薬組成物は、その意図された投与経路と適合するように製剤化される。投与経路の例は、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば吸入）、経真皮（すなわち外用）、経粘膜的、及び経直腸の投与を含む。非経口、皮内、又は皮下適用に使用される液剤又は懸濁剤は、以下の成分を含むことができる：無菌の希釈剤、例えば注射用水、食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒；抗菌剤、例えばベンジルアルコール又はメチルパラベン；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えばエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；緩衝剤、例えば酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩、並びに張度調節物質、例えば塩化ナトリウム又はデキストロース。ｐＨは、酸又は塩基、例えば塩酸又は水酸化ナトリウムにより調節することができる。非経口調製品は、アンプル、使い捨て注射器、又はガラスもしくはプラスチック製の反復投与量バイアル内に封入されることができる。
【０４０５】
一実施態様において、医薬組成物は、バルク又は単位剤形である。単位剤形は、例えば、カプセル剤、ＩＶバッグ、錠剤、エアロゾル吸入器上の単回用ポンプ又はバイアルを含む、様々な形状のいずれかである。組成物の単位投与量中の活性成分（例えば、本明細書に開示されたコンジュゲート）の量は、有効量であり、且つ関連した特定の治療に従い変動する。当業者は、患者の年齢及び状態に応じて決まる用量に対し、時には慣習的な変動をもたらす必要があることを理解するであろう。この用量はまた、投与経路によっても左右される。
【０４０６】
注射用途に適した医薬組成物は、無菌の水溶液（水溶性の場合）又は分散剤、及び無菌の注射用液剤もしくは分散剤の現場調製のための無菌の散剤を含む。静脈内投与に関して、好適な担体は、生理食塩水、静菌水、クレモフォールＥＬ（商標）(BASF社、パルシパニー、N.J.)又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含む。全ての場合において、組成物は、無菌でなければならず、且つ容易な注射針通過性が存在する程度に流体でなければならない。これは、製造及び貯蔵の条件下で、安定していなければならず、且つ細菌及び真菌などの微生物の夾雑作用に対し保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、及び好適なそれらの混合物を含む、溶媒又は分散媒であることができる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散剤の場合必要な粒子サイズの維持により、及び界面活性剤の使用により、維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどにより、実現することができる。多くの場合において、組成物中に等張化剤、例えば、糖類、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、塩化ナトリウムを含むことは、好ましいであろう。注射用組成物の延長された吸収は、組成物中に、吸収を遅延する物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの含有によりもたらすことができる。
【０４０７】
無菌の注射用液剤は、必要ならば、先に列挙した構成成分の一つ又は組合せを伴う、好適な溶媒中の、必要量の活性化合物の混入、それに続く濾過滅菌により、調製することができる。一般に、分散剤は、基本的分散媒及び先に列挙されたものからの必要な他の成分を含む、無菌のビヒクルへの、活性化合物の混入により、調製される。無菌の注射用液剤の調製のための無菌の散剤の場合、調製方法は、先に滅菌濾過されたそれらの液剤から、活性成分と任意の追加の所望の成分の散剤を生じる真空乾燥及びフリーズドライである。
【０４０８】
経口組成物は一般に、不活性希釈剤又は食用担体を含む。これらは、ゼラチンカプセル中に封入されるか又は錠剤に圧縮されることができる。経口治療的投与の目的で、活性化合物は、賦形剤と混入され、且つ錠剤、トローチ剤、又はカプセル剤の形状で使用することができる。経口組成物はまた、含嗽剤として使用するための液体担体を用いて調製することができ、ここで液体担体中の本化合物は、経口適用され、且つ局所使用(swished)され、且つ吐き出されるか又は飲み下される。医薬として適合する結合剤、及び／又はアジュバント物質は、組成物の一部として含むことができる。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の構成成分のいずれか、又は類似の性質の化合物を含むことができる：結合剤、例えば微結晶性セルロース、トラガカントガム又はゼラチン；賦形剤、例えばデンプン又は乳糖；崩壊剤、例えばアルギン酸、プリモゲル、又はトウモロコシデンプン；滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム又はSterotes；流動促進剤、例えばコロイド状二酸化ケイ素；甘味剤、例えばショ糖又はサッカリン；或いは、香味剤、例えばペパーミント、サリチル酸メチル、又はオレンジ香料。
【０４０９】
吸入による投与に関して、本化合物は、好適な噴射剤、例えば二酸化炭素などの気体を含む、加圧容器もしくはディスペンサー、又はネブライザーから、エアロゾルスプレーの形状で送達される。
【０４１０】
全身投与はまた、経粘膜的又は経真皮的手段によるものであることができる。経粘膜的又は経真皮的投与は、透過されるべき障壁に適した浸透剤が、製剤中で使用される。かかる浸透剤は一般に、当該技術分野において公知であり、且つ例えば、経粘膜的投与に関して、洗浄剤、胆汁塩、及びフシジン酸誘導体を含む。経粘膜的投与は、鼻腔内噴霧器の使用又は坐剤により達成することができる。経真皮的投与に関して、活性化合物は、当該技術分野において一般に公知であるような、軟膏、サルバ、ゲル、又はクリームに製剤化される。
【０４１１】
これらの化合物はまた、直腸送達のための、坐剤（例えば、カカオバター及び他のグリセリドなどの慣習的坐剤基剤）又は停留浣腸の形状で調製されることができる。
【０４１２】
一実施態様において、本活性化合物は、インプラント及び微小カプセル化送達システムを含む、持続放出／制御放出製剤などの、体からの迅速な消失に対し化合物を保護する担体により、調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの、生分解性で生体適合性のポリマーを、使用することができる。かかる製剤の調製方法は、当業者には明らかであろう。
【０４１３】
例えば、本活性成分は、例えば、コロイド状薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）中又はマクロエマルション中の、各々、例えばヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルの、コアセルベーション技術によるか、又は界面重合により調製されたマイクロカプセル中に捕獲され得る。
【０４１４】
持続放出調製品を、調製することができる。持続放出調製品の好適な例は、抗体を含有する固形疎水ポリマーの半透過性マトリクスを含み、このマトリクスは、成形された商品、例えば、フィルム、又はマイクロカプセルの形状である。持続放出マトリクスの例は、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタミン酸エステルのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、例えばLUPRONDEPOT（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドで構成された注射用ミクロスフェア）、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸を含む。エチレン−酢酸ビニル及び乳酸−グリコール酸などのポリマーは、１００日間を超える分子の放出が可能であるが、特定のヒドロゲルは、より短い期間タンパク質を放出する。
【０４１５】
これらの物質はまた、Alza社及びNova Pharmaceuticals社から商業的に入手することもできる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を伴う感染細胞へ標的化されたリポソームを含む）もまた、医薬として許容し得る担体として使用することができる。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に説明されたように、当業者に公知の方法に従い調製することができる。
【０４１６】
投与が容易で且つ均一用量の単位剤形で、経口又は非経口組成物を製剤化することは、特に利点がある。本明細書において使用される単位剤形とは、治療される対象にとって単位用量として適した物理的に個別の単位を指し；各単位は、必要な医薬担体と関連して、所望の治療効果を生じるように計算された活性化合物の予め決定された量を含有する。本明細書に開示された単位剤形の仕様は、活性化合物の独自の特徴及び達成されるべき特定の治療効果、並びに個人の治療のためのかかる活性化合物の配合の当該技術分野における固有の制限により、指定され且つ直接左右される。
【０４１７】
これらの医薬組成物は、投与に関する説明書と一緒に、容器、パック、又はディスペンサー中に含むことができる。
【０４１８】
本製剤はまた、好ましくは互いに有害に作用しない補完する活性を伴う化合物である、治療される特定の適応症に必要な、２種以上の活性化合物を含むこともできる。代わりに、又は加えて、本組成物は、例えば、細胞傷害性物質、サイトカイン、化学療法薬、又は成長阻害剤などの、その機能を増強する物質を含むことができる。かかる分子は、好適には意図された目的に関して有効である量で組合せて存在する。
【０４１９】
一実施態様において、これらの活性化合物は、併用療法で、すなわち、癌、自己免疫疾患及び炎症疾患の様々な形態などの病態又は障害を治療するのに有用な、他の物質、例えば治療薬と組合せて投与される。この文脈における用語「併用」とは、これらの物質が、同時に又は連続してのいずれかで、実質的に同時期に与えられることを意味する。連続して与えられる場合、第二の化合物の投与開始時に、これら２種の化合物の最初のものは、治療部位で有効濃度で依然検出可能であることが好ましい。
【０４２０】
例えば、併用療法は、コンジュゲートを形成するために使用される抗体又は異なる抗体と同じであることができる、１又は複数の追加の抗体、例えばＮａＰｉ２ｂ抗体と共製剤化される、及び／又は同時投与される、１又は複数の本明細書に開示されたコンジュゲートを含むことができる。
【０４２１】
例えば、併用療法は、１又は複数の治療薬及び／又はアジュバントを含むことができる。特定の実施態様において、追加の治療薬は、小型分子の阻害剤、別の抗体−ベースの療法、ポリペプチドもしくはペプチド−ベースの療法、核酸−ベースの療法及び／又は他の生物製剤である。
【０４２２】
特定の実施態様において、追加の治療薬は、細胞傷害性物質、化学療法薬、成長阻害剤、血管新生阻害剤、ＰＡＲＰ（ポリ（ＡＤＰ）−リボースポリメラーゼ）阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗物質、微小管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞傷害性抗生物質、任意の他の核酸損傷剤又は免疫チェックポイント阻害剤である。一実施態様において、癌の治療に使用される治療薬は、白金化合物（例えば、シスプラチン又はカルボプラチン）；タキサン（例えば、パクリタキセル又はドセタキセル）；トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、イリノテカン又はトポテカン）；アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標））又はリポソーム型ドキソルビシン（ドキシル（登録商標）））；代謝拮抗物質（例えば、ゲムシタビン、ペメトレキセド）；シクロホスファミド；ビノレルビン（ナベルビン（登録商標））；ヘキサメチルメラミン；イホスファミド；エトポシド：血管新生阻害剤（例えば、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標）））、サリドマイド、ＴＮＰ−４７０、血小板第４因子、インターフェロン又はエンドスタチン）；ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、オラパリブ（リンパラザ（商標）））；免疫チェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ（（ペムブロリズマブ（キイトルーダ（登録商標））、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）又はニボルマブ（オプジーボ（登録商標）））又はＣＴＡ−４（イピリムマブ（ヤーボイ（登録商標））のいずれかを標的化するモノクローナル抗体；キナーゼ阻害剤（例えば、ソラフェニブ又はエルロチニブ）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ又はカルフィルゾミブ）、免疫調節薬（例えば、レナリドミド又はＩＬ−２）、放射性物質、ＡＬＫ阻害剤（例えば、クリゾチニブ（キサルコリ）、セリチニブ（ジカディア）、レクチニブ（アレセンサ）、ダランテルセプト（ＡＣＥ−０４１）、ブリガチニブ（ＡＰ２６１１３）、エントレクチニブ（ＮＭＳ−Ｅ６２８）、ＰＦ−０６４６３９２２  ＴＳＲ−０１１、ＣＥＰ−３７４４０及びＸ−３９６）、及び／又はそれらのバイオシミラー並びに／又はそれらの組合せを含むが、これらに限定されるものではない。他の好適な物質は、当業者により標準治療と考えられる物質及び／又は当業者に周知の化学療法薬を含む。
【０４２３】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４の阻害剤である。一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４に対する抗体である。一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４に対するモノクローナル抗体である。他の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４に対するヒト抗体又はヒト化抗体である。一実施態様において、抗−ＣＴＬＡ−４抗体は、ＣＴＬＡ−４の、抗原提示細胞上に発現されたＣＤ８０（Ｂ７−１）及び／又はＣＤ８６（Ｂ７−２）に対する結合をブロックする。ＣＴＬＡ−４に対する抗体の例は、Bristol Meyers Squibb社の抗−ＣＴＬＡ−４抗体であるイピリムマブ（ヤーボイ（登録商標）、ＭＤＸ−０１０、ＢＭＳ−７３４０１６及びＭＤＸ−１０１としても公知）；Millipore社からの抗−ＣＴＬＡ４抗体、クローン９Ｈ１０；Pfizer社のトレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６、チシリムマブ）；並びに、Abcam社からの抗−ＣＴＬＡ４抗体クローンＢＮＩ３を含むが、これらに限定されるものではない。
【０４２４】
一部の実施態様において、抗−ＣＴＬＡ−４抗体は、以下の特許公報（引用により本明細書中に組込まれている）のいずれかに開示された抗−ＣＴＬＡ−４抗体である：ＷＯ２００１０１４４２４；ＷＯ２００４０３５６０７；ＵＳ２００５／０２０１９９４；ＥＰ  １２１２４２２  Ｂ１；ＷＯ２００３０８６４５９；ＷＯ２０１２１２０１２５；ＷＯ２００００３７５０４；ＷＯ２００９１００１４０；Ｗ０２００６０９６４９；ＷＯ２００５０９２３８０；ＷＯ２００７１２３７３７；ＷＯ２００６０２９２１９；ＷＯ２０１００９７９５９７；Ｗ０２００６１２１６８；及び、ＷＯ１９９７０２０５７４。追加のＣＴＬＡ−４抗体は、米国特許第５，８１１，０９７号、第５，８５５，８８７号、第６，０５１，２２７号、及び第６，９８４，７２０号；ＰＣＴ公報ＷＯ０１／１４４２４及びＷＯ００／３７５０４；並びに、米国特許公開番号２００２／００３９５８１及び２００２／０８６０１４；並びに、米国特許第５，９７７，３１８号、第６，６８２，７３６号、第７，１０９，００３号、及び第７，１３２，２８１号（これらは引用により本明細書中に組込まれている）に説明されている。一部の実施態様において、抗−ＣＴＬＡ−４抗体は、例えば、ＷＯ９８／４２７５２；米国特許第６，６８２，７３６号及び第６，２０７，１５６号；Hurwitzら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95(17): 10067-10071 (1998)；Camachoら、J. Clin. Oncol., 22(145): Abstract No. 2505 (2004)(抗体ＣＰ−６７５２０６)；Mokyrら、Cancer Res., 58:5301-5304 (1998)（引用により本明細書中に組込まれている）に開示されたものである。
【０４２５】
一部の実施態様において、ＣＴＬＡ−４阻害剤は、ＷＯ１９９６０４０９１５に開示されたようなＣＴＬＡ−４リガンドである。
【０４２６】
一部の実施態様において、ＣＴＬＡ−４阻害剤は、ＣＴＬＡ−４発現の核酸阻害剤である。例えば、抗−ＣＴＬＡ４  ＲＮＡｉ分子は、Mello及びFireにより、ＰＣＴ公報ＷＯ１９９９／０３２６１９及びＷＯ２００１／０２９０５８；米国特許公開番号２００３／００５１２６３、２００３／００５５０２０、２００３／００５６２３５、２００４／２６５８３９、２００５／０１００９１３、２００６／００２４７９８、２００８／００５０３４２、２００８／００８１３７３、２００８／０２４８５７６、及び２００８／０５５４４３；並びに／又は米国特許第６，５０６，５５９号、第７，２８２，５６４号、第７，５３８，０９５号、及び第７，５６０，４３８号（引用により本明細書中に組込まれている）に説明された、分子の形状をとることができる。一部の場合において、抗−ＣＴＬＡ４  ＲＮＡｉ分子は、Tuschlにより欧州特許ＥＰ  １３０９７２６（引用により本明細書中に組込まれている）に説明されている、二本鎖ＲＮＡｉ分子の形状をとる。一部の場合において、抗−ＣＴＬＡ４  ＲＮＡｉ分子は、Tuschlにより米国特許第７，０５６，７０４号及び第７，０７８，１９６号（引用により本明細書中に組込まれている）に説明された、二本鎖ＲＮＡｉ分子の形状をとる。一部の実施態様において、ＣＴＬＡ４阻害剤は、ＰＣＴ公報ＷＯ２００４０８１０２１に説明された、アプタマーである。
【０４２７】
加えて、本開示の抗−ＣＴＬＡ４  ＲＮＡｉ分子は、Crookeにより米国特許第５，８９８，０３１号、第６，１０７，０９４号、第７，４３２，２４９号、及び第７，４３２，２５０号、並びに欧州特許出願ＥＰ  ０９２８２９０（引用により本明細書中に組込まれている）に説明された、ＲＮＡ分子の形をとってよい。
【０４２８】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１の阻害剤である。一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１に対する抗体である。一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１に対するモノクローナル抗体である。他の又は追加の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１に対するヒト抗体又はヒト化抗体である。一実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１などの、１又は複数の免疫チェックポイントタンパク質の発現又は活性を減少する。別の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の間の相互作用を減少する。免疫チェックポイント阻害剤の例は、抗体（例えば、抗−ＰＤ−Ｌ１抗体）、ＲＮＡｉ分子（例えば、抗−ＰＤ−Ｌ１  ＲＮＡｉ）、アンチセンス分子（例えば、抗−ＰＤ−Ｌ１アンチセンスＲＮＡ）、ドミナントネガティブタンパク質（例えば、ドミナントネガティブＰＤ−Ｌ１タンパク質）、及び小型分子阻害剤を含む。抗体は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、脱免疫化抗体、及びＩｇ融合タンパク質を含む。抗−ＰＤ−Ｌ１抗体の例は、クローンＥＨ１２を含む。ＰＤ−Ｌ１に対する抗体の例は：Genentech社のＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＲＧ７４４６）；BioXcell社の抗−マウスＰＤ−Ｌ１抗体クローン１０Ｆ．９Ｇ２（カタログ番号ＢＥ０１０１）；Bristol-Meyer's Squibb社の抗−ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体ＭＤＸ−１  １０５（ＢＭＳ−９３６５５９）及びＢＭＳ−９３５５５９；ＭＳＢ００１０７１８Ｃ；マウス抗−ＰＤ−Ｌ１クローン２９Ｅ．２Ａ３；並びに、AstraZeneca社のＭＥＤＩ４７３６がある。一部の実施態様において、抗−ＰＤ−Ｌ１抗体は、以下の特許公報（引用により本明細書中に組込まれている）のいずれかに開示された抗−ＰＤ−Ｌ１抗体である：ＷＯ２０１３０７９１７４；ＣＮ１０１１０４６４０；ＷＯ２０１００３６９５９；ＷＯ２０１３０５６７１６；ＷＯ２００７００５８７４；ＷＯ２０１００８９４１１；ＷＯ２０１００７７６３４；ＷＯ２００４００４７７１；ＷＯ２００６１３３３９６；Ｗ０２０１３０９９０６；ＵＳ２０１４０２９４８９８；ＷＯ２０１３１８１６３４又はＷＯ２０１２１４５４９３。
【０４２９】
一部の実施態様において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１発現の核酸阻害剤である。一部の実施態様において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、以下の特許公報（引用により本明細書中に組込まれている）のいずれかに開示されたものである：ＷＯ２０１１１２７１８０又はＷＯ２０１１０００８４１。一部の実施態様において、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ラパマイシンである。
【０４３０】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２の阻害剤である。一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２に対する抗体である。一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２に対するモノクローナル抗体である。別の又は追加の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２に対するヒト抗体又はヒト化抗体である。一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２などの、１又は複数の免疫チェックポイントタンパク質の発現又は活性を減少する。他の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２の間の相互作用を減少する。免疫チェックポイント阻害剤の例は、抗体（例えば、抗−ＰＤ−Ｌ２抗体）、ＲＮＡｉ分子（例えば、抗−ＰＤ−Ｌ２  ＲＮＡｉ）、アンチセンス分子（例えば、抗−ＰＤ−Ｌ２アンチセンスＲＮＡ）、ドミナントネガティブタンパク質（例えば、ドミナントネガティブＰＤ−Ｌ２タンパク質）、及び小型分子阻害剤を含む。抗体は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体，、脱免疫化抗体、及びＩｇ融合タンパク質を含む。
【０４３１】
一部の実施態様において、ＰＤ−Ｌ２阻害剤は、GlaxoSmithKline社のＡＭＰ−２２４（Amplimmune）である。一部の実施態様において、ＰＤ−Ｌ２阻害剤は、ｒＨＩｇＭ１２Ｂ７である。
【０４３２】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１の阻害剤である。一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１に対する抗体である。一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１に対するモノクローナル抗体である。他の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１に対するヒト抗体又はヒト化抗体である。米国特許第７，０２９，６７４号；第６，８０８，７１０号；又は、米国特許出願第２００５０２５０１０６号及び第２００５０１５９３５１号に開示された例えば、ＰＤ−１生物活性（又はそのリガンド）の阻害剤は、本明細書に提供される組合せにおいて使用することができる。ＰＤ−１に対する抗体の例は：BioXcell社の抗−マウスＰＤ−１抗体クローンＪ４３（カタログ番号ＢＥ００３３−２）；BioXcell社の抗−マウスＰＤ−１抗体クローンＲＭＰ１−１４（カタログ番号ＢＥ０１４６）；マウス抗−ＰＤ−１抗体クローンＥＨ１２；Merck社のＭＫ−３４７５抗−マウスＰＤ−１抗体（キイトルーダ（登録商標）、ペンブロリズマブ、ラムブロリズマブ、ｈ４０９Ａ１１）；並びに、ＡＮＢ０１１として公知のAnaptysBio社の抗−ＰＤ−１抗体；抗体ＭＤＸ−１  １０６（ＯＮＯ−４５３８）；Bristol-Myers Squibb社のヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体ニボルマブ（オプジーボ（登録商標）、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ１１０６）；AstraZeneca社のＡＭＰ−５１４、及びＡＭＰ−２２４；並びに、CureTech社のピリジズマブ（ＣＴ−０１１又はｈＢＡＴ−１）が挙げられる。
【０４３３】
追加の抗−ＰＤ−１抗体の例は、Goldbergら、Blood 1 10(1): 186-192 (2007)、Thompsonら、Clin. Cancer Res. 13(6): 1757-1761 (2007)、及びKormanら、国際出願ＰＣＴ／ＪＰ２００６／３０９６０６（公開番号ＷＯ２００６／１２１１６８Ａ１）に説明されており、これらは各々明白に引用により本明細書中に組込まれている。一部の実施態様において、抗−ＰＤ−１抗体は、下記の特許公報（引用により本明細書中に組込まれている）のいずれかにおいて開示された抗−ＰＤ−１抗体である：ＷＯ０１４５５７；ＷＯ２０１１１１０６０４；ＷＯ２００８１５６７１２；ＵＳ２０１２０２３７５２；ＷＯ２０１１１１０６２１；ＷＯ２００４０７２２８６；ＷＯ２００４０５６８７５；ＷＯ２０１０００３６９５９；ＷＯ２０１００２９４３４；ＷＯ２０１２１３５４８；ＷＯ２００２０７８７３１；ＷＯ２０１２１４５４９３；ＷＯ２０１００８９４１１；ＷＯ２００１０１４５５７；ＷＯ２０１３０２２０９１；ＷＯ２０１３０１９９０６；ＷＯ２００３０１１９１１；ＵＳ２０１４０２９４８９８；及び、ＷＯ２０１０００１６１７。
【０４３４】
一部の実施態様において、ＰＤ−１阻害剤は、ＷＯ２００９１４３３５（引用により本明細書中に組込まれている）に開示されたＰＤ−１結合タンパク質である。
【０４３５】
一部の実施態様において、ＰＤ−１阻害剤は、ＷＯ２０１３１３２３１７（引用により本明細書中に組込まれている）に開示されたような、ＰＤ−１のペプチド模倣薬阻害剤である。
【０４３６】
一部の実施態様において、ＰＤ−１阻害剤は、抗−マウスＰＤ−１  ｍＡｂ：クローンＪ４３、BioXcell社(West Lebanon, N.H.)である。
【０４３７】
一部の実施態様において、ＰＤ−１阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１タンパク質、ＰＤ−Ｌ２タンパク質、又は断片、並びに特定の悪性腫瘍の治療について臨床試験されている抗体ＭＤＸ−１  １０６（ＯＮＯ−４５３８）（Brahmerら、J Clin Oncol. 2010 28(19): 3167-75、電子版2010年6月1日）である。他のブロッキング抗体は、先に説明されたように、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２の間の相互作用の公知のドメインを基に、当業者により、容易に同定され、且つ調製されてよい。例えば、ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２のＩｇＶ領域（又はこの領域の一部）に対応するペプチドは、当該技術分野において周知の方法を用い、ブロッキング抗体を開発するための抗原として使用することができる。
【０４３８】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ１の阻害剤である。一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ１に対する小型分子である。ＩＤＯ１に対する小型分子の例は：Incyte社のＩＮＣＢ０２４３６０、ＮＳＣ−７２１７８２（１−メチル−Ｄ−トリプトファンとしても公知）、及びBristol Meyers Squibb社のＦ００１２８７がある。
【０４３９】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ３（ＣＤ２２３）の阻害剤である。一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ３に対する抗体である。一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ３に対するモノクローナル抗体である。他の又は追加の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ３に対するヒト抗体又はヒト化抗体である。追加の実施形態において、ＬＡＧ３に対する抗体は、ＬＡＧ３の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩＩ分子との相互作用をブロックする。ＬＡＧ３に対する抗体の例は：eBioscience社の抗−Ｌａｇ−３抗体クローンｅＢｉｏＣ９Ｂ７Ｗ（Ｃ９Ｂ７Ｗ）；LifeSpan Biosciences社の抗−Ｌａｇ３抗体ＬＳ−Ｂ２２３７；Immutep社のＩＭＰ３２１（ImmuFact）；抗−Ｌａｇ３抗体ＢＭＳ−９８６０１６；及び、ＬＡＧ−３キメラ抗体Ａ９Ｈ１２がある。一部の実施態様において、抗−ＬＡＧ３抗体は、以下の特許公報（引用により本明細書中に組込まれている）のいずれかに開示された抗−ＬＡＧ３抗体である：ＷＯ２０１００１９５７０；ＷＯ２００８１３２６０１；又は、ＷＯ２００４０７８９２８。
【０４４０】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ３（ＨＡＶＣＲ２としても公知）に対する抗体である。一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ３に対するモノクローナル抗体である。他の又は追加の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ３に対するヒト抗体又はヒト化抗体である。追加の実施形態において、ＴＩＭ３に対する抗体は、ＴＩＭ３のガレクチン−９（Ｇａｌ９）との相互作用をブロックする。一部の実施態様において、抗−ＴＩＭ３抗体は、以下の特許公報（引用により本明細書中に組込まれている）のいずれかに開示された抗−ＴＩＭ３抗体である：ＷＯ２０１３００６４９０；Ｗ０２０１１５５６０７；ＷＯ２０１１１５９８７７；又は、ＷＯ２００１１７０５７。別の実施態様において、ＴＩＭ３阻害剤は、ＷＯ２００９０５２６２３に開示されたＴＩＭ３阻害剤である。
【０４４１】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｂ７−Ｈ３に対する抗体である。一実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＭＧＡ２７１である。
【０４４２】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＭＲに対する抗体である。一実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、リリルマブ（ＩＰＨ２１０１）である。一部の実施態様において、ＭＲに対する抗体は、ＫＩＲのＨＬＡとの相互作用をブロックする。
【０４４３】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ又はＴＮＦＲＳＦ９としても公知）に対する抗体である。一実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ウレルマブ(urelumab)（ＢＭＳ−６６３５１３、Bristol-Myers Squibb社）、ＰＦ−０５０８２５６６（抗−４−１ＢＢ、ＰＦ−２５６６、Pfizer社）、又はＸｍＡｂ−５５９２（Xencor社）である。一実施態様において、抗−ＣＤ１３７抗体は、米国特許出願公開ＵＳ２００５／００９５２４４に開示された抗体；発行された米国特許第７，２８８，６３８号に開示された抗体（２０Ｈ４．９−ＩｇＧ４［１００７もしくはＢＭＳ−６６３５１３］又は２０Ｈ４．９−ＩｇＧ１［ＢＭＳ−６６３０３１］など）；発行された米国特許第６，８８７，６７３号に開示された抗体［４Ｅ９又はＢＭＳ−５５４２７１］；発行された米国特許第７，２１４，４９３号に開示された抗体；発行された米国特許第６，３０３，１２１号に開示された抗体；発行された米国特許第６，５６９，９９７号に開示された抗体；発行された米国特許第６，９０５，６８５号に開示された抗体；発行された米国特許第６，３５５，４７６号に開示された抗体；発行された米国特許第６，３６２，３２５号に開示された抗体［１Ｄ８又はＢＭＳ−４６９４９２；３Ｈ３又はＢＭＳ−４６９４９７；又は３Ｅ１］；発行された米国特許第６，９７４，８６３号に開示された抗体（５３Ａ２など）；又は、発行された米国特許第６，２１０，６６９号に開示された抗体（１Ｄ８、３Ｂ８、又は３Ｅ１など）である。更なる実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＷＯ２０１４０３６４１２に開示されている。別の実施態様において、ＣＤ１３７に対する抗体は、ＣＤ１３７のＣＤ１３７Ｌとの相互作用をブロックする。
【０４４４】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＳに対する抗体である。一実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、バビツキシマブである。
【０４４５】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＤ５２に対する抗体である。一実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、アレムツズマブである。
【０４４６】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＤ３０に対する抗体である。一実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ブレンツキシマブベドチンである。別の実施態様において、ＣＤ３０に対する抗体は、ＣＤ３０のＣＤ３０Ｌとの相互作用をブロックする。
【０４４７】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＤ３３に対する抗体である。一実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ゲムツズマブ、オゾガマイシンである。
【０４４８】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＤ２０に対する抗体である。一実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、イブリツモマブ、チウキセタンである。別の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、オファツムマブである。別の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、リツキシマブである。別の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、トシツモマブである。
【０４４９】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７としても公知）に対する抗体である。一実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＤＸ−１１２７（Celldex Therapeutics社）である。別の実施態様において、ＣＤ２７に対する抗体は、ＣＤ２７のＣＤ７０との相互作用をブロックする。
【０４５０】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０（ＴＮＦＲＳＦ４又はＣＤ１３４としても公知）に対する抗体である。一実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗−ＯＸ４０マウスＩｇＧである。別の実施態様において、ＯＸ４０に対する抗体は、ＯＸ４０のＯＸ４０Ｌとの相互作用をブロックする。
【０４５１】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、グルココルチコイド−誘導腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）に対する抗体である。一実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＲＸ５１８（ＧＩＴＲ）である。別の実施態様において、ＧＩＴＲに対する抗体は、ＧＩＴＲのＧＩＴＲＬとの相互作用をブロックする。
【０４５２】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、誘導性Ｔ−細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ、ＣＤ２７８としても公知）に対する抗体である。一実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＭＥＤＩ５７０（MedImmune社）又はＡＭＧ５５７（Amgen社）である。別の実施態様において、ＩＣＯＳに対する抗体は、ＩＣＯＳのＩＣＯＳＬ及び／又はＢ７−Ｈ２との相互作用をブロックする。
【０４５３】
一部の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＢＴＬＡ（ＣＤ２７２）、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＬＡＩＲ１、ＴＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ、ＤＲ３、ＣＤ２２６、ＣＤ２、又はＳＬＡＭに対する阻害剤である。本明細書の別所に記載したように、免疫チェックポイント阻害剤は、１又は複数の結合タンパク質、免役チェックポイント分子に結合する抗体（又はそれらの断片もしくは変種）、免役チェックポイント分子の発現をダウンレギュレーションする核酸、又は免役チェックポイント分子に結合する任意の他の分子（すなわち、小型有機分子、ペプチド模倣薬、アプタマーなど）であることができる。一部の例において、ＢＴＬＡ（ＣＤ２７２）の阻害剤は、ＨＶＥＭである。一部の例において、ＣＤ１６０の阻害剤は、ＨＶＥＭである。一部の場合において、２Ｂ４の阻害剤は、ＣＤ４８である。一部の例において、ＬＡＩＲ１の阻害剤は、コラーゲンである。一部の例において、ＴＩＧＨＴの阻害剤は、ＣＤ１１２、ＣＤ１１３、又はＣＤ１５５である。一部の例において、ＣＤ２８の阻害剤は、ＣＤ８０又はＣＤ８６である。一部の例において、ＬＩＧＨＴの阻害剤は、ＨＶＥＭである。一部の例において、ＤＲ３の阻害剤は、ＴＬ１Ａである。一部の例において、ＣＤ２２６の阻害剤は、ＣＤ１５５又はＣＤ１１２である。一部の場合において、ＣＤ２の阻害剤は、ＣＤ４８又はＣＤ５８である。一部の場合において、ＳＬＡＭは、自己阻害性であり、且つＳＬＡＭの阻害剤は、ＳＬＡＭである。
【０４５４】
特定の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、非限定的に、ＣＴＬＡ４（細胞傷害性Ｔ−リンパ球抗原４、ＣＤ１５２としても公知）、ＰＤ−Ｌ１（プログラムされた細胞死１リガンド１、ＣＤ２７４としても公知）、ＰＤＬ２（プログラムされた細胞死タンパク質２）、ＰＤ−１（プログラムされた細胞死タンパク質１、ＣＤ２７９としても公知）、Ｂ−７ファミリーリガンド（Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４）、ＢＴＬＡ（Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター、ＣＤ２７２としても公知）、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３（Ｔ−細胞膜タンパク質３）、ＧＡＬ９、ＬＡＧ−３（リンパ球活性化遺伝子−３；ＣＤ２２３）、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ（キラー免疫グロブリン受容体）、２Ｂ４（ＣＤ２４４としても公知）、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＨＫ１（チェックポイントキナーゼ１）、ＣＨＫ２（チェックポイントキナーゼ２）、Ａ２ａＲ（アデノシンＡ２ａ受容体）、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤ２２６、ＣＤ２７６、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＨＡＶＣＲ２、ＨＶＥＭ、ＩＤＯ１（インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ１）、ＩＤＯ２（インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ２）、ＩＣＯＳ（誘導性Ｔ細胞共刺激分子）、ＬＡＩＲ１、ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ１４としても公知、ＴＮＦファミリーメンバー）、ＭＡＲＣＯ（コラーゲン構造を持つマクロファージ受容体）、ＯＸ４０（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー、メンバー４、ＴＮＦＲＳＦ４、及びＣＤ１３４としても公知）、及びそのリガンドＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＳＬＡＭ、ＴＩＧＨＴ、ＶＴＣＮ１、又はそれらの組合せを含む、チェックポイントタンパク質を阻害する。
【０４５５】
特定の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤＬｌ、ＰＤＬ２、ＰＤｌ、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、Ａ２ａＲ、Ｂ−７ファミリーリガンド、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤ２２６、ＣＤ２７６、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＨＡＶＣＲ２、ＨＶＥＭ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＣＯＳ（誘導性Ｔ細胞共刺激分子）、ＬＡＩＲ１、ＬＩＧＨＴ、ＭＡＲＣＯ（コラーゲン構造を持つマクロファージ受容体）、ＯＸ−４０、ＳＬＡＭ、ＴＩＧＨＴ、ＶＴＣＮ１又はそれらの組合せを含む、チェックポイントタンパク質のリガンドと相互作用する。
【０４５６】
特定の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤＬｌ、ＰＤ１又はそれらの組合せを含むチェックポイントタンパク質を阻害する。
【０４５７】
特定の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４及びＰＤ１又はそれらの組合せを含むチェックポイントタンパク質を阻害する。
【０４５８】
特定の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ペムブロリズマブ（ＭＫ−３４７５）、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８）、ピジリズマブ（ＣＴ−０１１）、ＡＭＰ−２２４、ＭＤＸ−１  １０５、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＢＭＳ−９３６５５９、ＩＰＨ２１０１、ＴＳＲ−０４２、ＴＳＲ−０２２、イピリムマブ、リリルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、トレメリムマブ、又はそれらの組合せを含む。
【０４５９】
特定の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８）、イピリムマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、トレメリムマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、又はそれらの組合せである。
【０４６０】
特定の実施態様において、免疫チェックポイント阻害剤は、ペムブロリズマブである。
【０４６１】
診断薬及び予防薬の処方
本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ抗体コンジュゲートは、診断用及び予防用処方において使用される。一実施態様において、本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ抗体コンジュゲートは、前述の疾患の１又は複数を、例えば非限定的に癌を発症するリスクのある患者へ投与される。前述の適応症の１又は複数に対する患者の又は臓器の素因は、遺伝型、血清型又は生化学的マーカーを用いて決定することができる。
【０４６２】
本開示の別の実施態様において、本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ抗体コンジュゲートは、前述の疾患の１又は複数、例えば非限定的に癌などに関連した臨床適応症と診断されたヒト個体に投与される。診断時に、本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ抗体コンジュゲートは、前述の疾患の１又は複数に関連した臨床適応症の作用を軽減又は逆行するように、投与される。
【０４６３】
本開示の別の実施態様において、本明細書に開示されたコンジュゲートによる治療に適している卵巣癌患者を確定する方法は、患者から得られた腫瘍試料中の特定の特徴の状態を測定すること、及び腫瘍試料中の特定の特徴の状態を基にした治療に関して患者を確定することを含む。
【０４６４】
本開示の別の実施態様において、本明細書に開示されたコンジュゲートによる治療に適しているＮＳＣＬＣ患者を確定する方法は、患者から得られた腫瘍試料中の特定の特徴の状態を測定すること、及び腫瘍試料中の特定の特徴の状態を基にした治療に関して患者を確定することを含む。
【０４６５】
本明細書に開示された抗体もまた、患者試料におけるＮａＰｉ２ｂの検出に有用であり、従って診断薬として有用である。例えば、本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ抗体は、患者試料中のＮａＰｉ２ｂレベルを検出するために、インビトロアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡにおいて使用される。
【０４６６】
一実施態様において、本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ抗体は、固形支持体（例えば、マイクロタイタープレートのウェル（複数可））上に固定される。固定された抗体は、被験試料中に存在し得る任意のＮａＰｉ２ｂの捕獲抗体として働く。固定された抗体が患者試料と接触する前に、固形支持体は、洗われ、且つ被検体の非特異的吸着を防ぐために、ミルクタンパク質又はアルブミンなどのブロッキング剤により処理される。
【０４６７】
引き続きウェルは、抗原を含有することが疑われる被験試料と、又は標準量の抗原を含有する溶液で処理される。かかる試料は、すなわち、例えば病理の診断薬であると考えられる循環抗原をあるレベル有することが疑われる対象由来の血清試料である。被験試料又は標準を洗い落とした後、固形支持体は、検出できるよう標識された二次抗体で処理される。標識された二次抗体は、検出抗体として働く。検出可能な標識のレベルが測定され、且つ被験試料中のＮａＰｉ２ｂ抗原の濃度は、標準試料から作製された標準曲線との比較により決定される。
【０４６８】
インビトロ診断アッセイにおいて本明細書に開示されたＮａＰｉ２ｂ抗体を使用し得られた結果を基に、ＮａＰｉ２ｂ抗原の発現レベルを基に対象における疾患をステージ判定することは可能であることは理解されるであろう。所与の疾患に関して、血液の試料は、疾患の進行において様々なステージにあると診断された対象から、及び／又は疾患の治療処置において様々な時点で採取される。進行又は療法の各ステージについて統計学的に有意な結果を提供する試料の集団を使用し、各ステージにおいて特徴的であると考えられる抗原の濃度範囲が、指定される。
【０４６９】
本明細書に引用された全ての刊行物及び特許文献は、かかる刊行物又は文献の各々が、引用により本明細書中に組込まれていることが具体的に且つ個別に指摘されたように、引用により本明細書に組込まれている。刊行物及び特許文献の引用は、いずれかが先行技術に該当することの承認としては意図されず、またその内容又は日付について何らかの承認を構成するものでもない。本開示は、書面の説明によりここで説明されており、当業者は、本開示は、様々な実施態様において実践することができること、並びに前述の説明及び以下の実施例は、例証を目的とし、下記の請求項の限定ではないことを認めるであろう。
【実施例】
【０４７０】
実施例
下記の作業実施例は、リンカー、薬物分子及びＰＢＲＭ、並びにこれらを調製する方法を例示している。これらは、限定することを意図せず、且つ当業者により他の試薬又は方法を利用してよいことは容易に理解されるであろう。
【０４７１】
略語
下記の略語は、以下の反応スキーム及び合成実施例において使用される。このリストは、本願において使用される略語の全ての包括的リストを意味するものではなく、有機合成の分野の業者により容易に理解される追加の標準略語も、本合成スキーム及び実施例において使用することができる。
ＡＦ−ＨＰＡ      アウリスタチンＦ−ヒドロキシプロピルアミド
ＦＢＳ        ウシ胎仔血清
ＭＭＡＥ        モノメチルアウリスタチンＥ
ＮａＰｉ２ｂ      ＩＩ型ナトリウム−リン酸共輸送体
ＮＳＣＬＣ      非小細胞肺癌。
【０４７２】
全般的情報
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ付番スキームにより定義される。
【０４７３】
腫瘍増殖阻害（％ＴＧＩ）は、処置群及び対照群の間の腫瘍容積中央値（ＭＴＶ）における差異率（％）として定義される。
【０４７４】
治療有効性は、本試験期間中に観察された腫瘍サイズの退縮反応の発生率及び大きさから決定される。治療は、動物における腫瘍の部分寛解（ＰＲ）又は完全寛解（ＣＲ）を引き起こし得る。ＰＲ反応において、腫瘍容積は、本試験過程での３回の連続測定について、その１日目容積の５０％以下であり、且つこれらの３回の測定値の１又は複数について、１３．５ｍｍ3と等しいか又はそれよりも大きかった。ＣＲ反応において、腫瘍容積は、本試験過程での３回の連続測定について、１３．５ｍｍ3未満であった。試験終了時にＣＲ反応を伴う動物は更に、無腫瘍生存（ＴＦＳ）として分類した。動物は、退縮反応についてモニタリングした。
【０４７５】
ＡＦ−ＨＰＡは、米国特許第８，６８５，３８３号実施例４８に説明された様式に類似した様式で調製した。
【０４７６】
抗−ＮａＰｉ２ｂ抗体（ＸＭＴ−１５３５）は、米国特許第８，６０３，４７４Ｂ２号から配列番号３８及び配列番号３９を用いて作製した。
【０４７７】
抗−ＮａＰｉ２ｂ抗体（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）は、米国特許第８，５３５，６７５Ｂ２号から配列番号８０及び配列番号８１を用いて作製した。
【０４７８】
ＨＰＬＣ精製は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  ５μｍ  １１０Å、２５０×１０ｍｍ、５ミクロン、半調製カラム上で行った。
【０４７９】
ＳＥＣは、Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＴＳＫゲルＧ４０００カラム（７．８ｍｍ×３０ｃｍ、１０ｕｍ）又はＳｕｐｅｒｏｓｅ  １２カラム（GE Healthcare社）上で行った。
【０４８０】
ＷＣＸは、ＰｒｏＰａｃ  ＷＣＸ−１０（９４ｍｍ×２５０ｍｍ）カラム（ThermoFisher社）上で行った。
【０４８１】
可能な限りは、コンジュゲートの薬物含量は、分光学的に決定し、そうでなければＬＣ／ＭＳ又は1Ｈ−ＮＭＲを、薬物含量の定量測定のために行った。
【０４８２】
タンパク質−ポリマー−薬物コンジュゲートのタンパク質含量は、２８０ｎｍで分光学的に又はＥＬＩＳＡにより決定した。
【０４８３】
ポリマーコンジュゲートの分子量（見かけの重量分子量又はピーク分子量として報告された）は、多糖又はタンパク質の分子量標準を使うＳＥＣにより決定した。より具体的には、ポリマー又はポリマー−薬物コンジュゲートについては、多糖分子量標準を使用し、且つタンパク質−薬物−ポリマーコンジュゲートについては、タンパク質標準を使用した。具体的に示さない限りは、報告されたポリマー担体分子量は、ＰＨＦの重量平均分子量であり；且つ、ポリマー−薬物コンジュゲート分子量及びタンパク質−ポリマー−薬物コンジュゲートは、ピーク分子量である。ＮａＰｉ２ｂ抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートは、ピーク分子量約１７０ｋＤａ〜約２５０ｋＤａを有する。合成され／測定されたポリマー及びポリマーコンジュゲートは、典型的には多分散性≦１．５を有した。
【０４８４】
ＮａＰｉ２ｂ抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートは、（Ｐｒｅｐ−ＷＣＸ  ＨＰＬＣ）により、残存する未反応の薬物−ポリマーコンジュゲートから分離した。必要ならば、サイズ排除クロマトグラフィーによる追加の精製を行い、何らかの凝集されたＮａＰｉ２ｂ抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートを除去した。概して、ＮａＰｉ２ｂ抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートは、典型的には、ＳＥＣにより決定された＜５％（ｗ／ｗ）の凝集された画分；ＲＰ−ＨＰＬＣ又はＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより決定された＜０．５％（ｗ／ｗ、例えば、＜０．１％ｗ／ｗ）の遊離（コンジュゲートされない）薬物；ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定された＜１％（ｗ／ｗ）の遊離ポリマー−薬物コンジュゲート；並びに、ＨＩＣ−ＨＰＬＣ及び／又はＷＣＸ  ＨＰＬＣにより決定された＜２％（ｗ／ｗ、例えば＜１％ｗ／ｗ）のコンジュゲートされないＮａＰｉ２ｂを含んだ。還元された又は部分的に還元された抗体は、文献に説明された手順を用いて調製し、例えば、Franciscoら、Blood, 102 (4): 1458-1465 (2003)を参照されたい。総薬物（コンジュゲートされた及びコンジュゲートされない）濃度は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより決定した。
【０４８５】
ＮａＰｉ２ｂ抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートの薬物動態を決定するために、ＮａＰｉ２ｂ抗体−ＰＨＦ−ＡＦ−ＨＰＡコンジュゲート（すなわち、コンジュゲートされたＡＦ−ＨＰＡ）の血漿濃度、並びに放出されたコンジュゲートされないＡＦ−ＨＰＡ及びＡＦ（遊離薬物）の濃度を測定するアッセイを開発した。遊離薬物の血漿濃度を決定するために、酸性化した血漿試料を、アセトニトリルにより処理し、血漿タンパク質及び抗体薬物コンジュゲートを沈殿させ、並びにアセトニトリル含有上清を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより遊離薬物について分析した。コンジュゲートされたＡＦ−ＨＰＡの濃度を決定するために、酸性化された血漿試料を、塩基性加水分解、引き続き酸性化及びアセトニトリルによるタンパク質沈殿に供した。放出されたＡＦ−ＨＰＡ及びＡＦを含有するアセトニトリル上清を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析した。血漿中の遊離薬物及びコンジュゲートされたＡＦ−ＨＰＡの標準曲線は、各々、濃度範囲１〜３，０００ｎｇ／ｍＬ及び１０〜２０，０００ｎｇ／ｍＬにわたり直線であった。総ＮａＰｉ２ｂ濃度は、ＥＬＩＳＡにより決定した。
【０４８６】
全般的手順
全般的手順Ａ    ポリマーのリンカー又は薬物とのコンジュゲーション
概して、ポリマー（ＰＨＦ−ＢＡ又はＰＨＦ−ＧＡ）の、例えばＥＧ２−マレイミドなどのアミン−含有リンカー、又は例えばＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ、ＨＰＡ−Ａｌａなどのアミン−含有リンカー薬物とのコンジュゲーションは、水性又は１０〜９０％有機／水性溶媒混合物中で、例えばＥＤＣ．ＨＣｌなどの活性化剤の存在下で、実行する。典型的有機溶媒は、水混和性溶媒、例えばＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＮＭＰ、プロピレングリコール及びＡＣＮなどを含むが、これらに限定されるものではない。カップリングを促進するために、コアクチベーター、例えばＮＨＳなどを添加する。ポリマーは、最初にアミノ−含有化合物と混合し、その後コアクチベーター（ＮＨＳ）を添加し、次にアクチベーター（ＥＤＣ．ＨＣｌ）を添加する。この反応は、０〜１０℃、ｐＨ４．５〜７．５で１時間から、外界温度で２４時間までで実行する。生じるポリマーコンジュゲートされた生成物は、ダイアフィルトレーション又はＳＥＣにより精製する。この生成物を、２〜５０ｍｇ／ｍＬまで濃縮し、そのｐＨを４．５〜６．５に調節し、薬物−ポリマーリンカーの安定性を確実にし、且つこのコンジュゲートは、更なる使用時まで、−２０〜−８０℃で凍結貯蔵する。
【０４８７】
このポリマーのアミン−含有リンカー又は薬物とのコンジュゲーションは、任意の順番で連続して、又は同時に行うことができる。
【０４８８】
全般的手順Ｂ    タンパク質（ＮａＰｉ２ｂ抗体）の部分的選択的還元
ポリマー−薬物コンジュゲートとのコンジュゲーション前の、関連するＮａＰｉ２ｂ抗体中の鎖間ジスルフィド基又は非対ジスルフィドの部分的選択的還元は、例えばＴＣＥＰ、ＤＴＴ又はβ−メルカプトエタノールなどの還元剤を用いて、実行する。還元が過剰な還元剤により実行される場合は、コンジュゲーション前に、還元剤を、ダイアフィルトレーション又はＳＥＣにより除去する。ＮａＰｉ２ｂジスルフィド基の反応性スルフヒドリル基への転換度は、ＮａＰｉ２ｂの化学量論、還元剤、ｐＨ、温度及び／又は反応期間によって左右される。ＰＢＲＭ中の全てではないが一部のジスルフィド基が還元される場合、還元されたＰＢＲＭは、部分的に還元されたＮａＰｉ２ｂである。
【０４８９】
全般的手順Ｃ    部分的に還元されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体のポリマー薬物コンジュゲートとのコンジュゲーション
部分的に還元されたＮａＰｉ２ｂ標的化抗体のポリマー−薬物コンジュゲートへのコンジュゲーションは、中性又はわずかに塩基性の条件（ｐＨ６．５〜８．５）下で、抗体濃度１〜１０ｍｇ／ｍＬ及びポリマー−薬物コンジュゲート濃度０．５〜１０ｍｇ／ｍＬで実行する。ポリマー−薬物コンジュゲートは典型的には、所望のタンパク質−ポリマー−薬物コンジュゲートの化学量論に対して、１〜５倍過剰で使用する。抗体がポリマー−薬物コンジュゲートのマレイミド基へコンジュゲートされる場合、コンジュゲーションは任意に、水溶性マレイミドブロッキング化合物、例えばＮ−アセチルシステイン、システインメチルエステル、Ｎ−メチルシステイン、２−メルカプトエタノール、３−メルカプトプロパン酸、２−メルカプト酢酸、メルカプトメタノール（すなわちＨＯＣＨ2ＳＨ）、ベンジルチオールなどの添加により、停止する。
【０４９０】
生じるＮａＰｉ２ｂ標的化抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートは、典型的には、ダイアフィルトレーションにより精製し、あらゆるコンジュゲートされないポリマー−薬物コンジュゲート、コンジュゲートされない薬物及び小型分子不純物を除去する。代わりに又は加えて、好適なクロマトグラフィー分離手順、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオンクロマトグラフィー、例えばＷＣＸクロマトグラフィーなど；逆相クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー又はそれらの組合せなどを使用し、ＮａＰｉ２ｂ抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートを精製することができる。生じる精製されたＮａＰｉ２ｂ−ポリマー−薬物コンジュゲートは、典型的には、ｐＨ５．０〜６．５で緩衝液中で製剤化される。
【０４９１】
実施例１：ＸＭＴ−１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の合成
【化５７】
2019508456.tif 000066
ＸＭＴ−１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））コンジュゲートは、米国特許出願公開ＵＳ−２０１５−０１０４４０７−Ａ１に説明された手順を用いて調製した。表Ｉは、この抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートの詳細を提供する。
表Ｉ
【表１】
2019508456.tif 000067
【０４９２】
ＸＭＴ−１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））コンジュゲートは、ピーク分子量約１８０ｋＤａ〜約２５０ｋＤａを有した。合成され／測定されたポリマー及びポリマーコンジュゲートは、典型的には、多分散性≦１．５を有した。このポリマー−薬物コンジュゲート（すなわち、抗体に結合した薬物−保有ポリマー鎖）は、β−アラニン約２５％モル〜約３５％モル、ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ約７．０％モル〜約１０％モル、及びＥＧ２−ＭＩ約１．５％モル〜約４％モルを含んだ。
【０４９３】
実施例２：（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の合成
【化５８】
2019508456.tif 000068
（１０Ｈ１１．１．４Ｂ）−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））コンジュゲート（非−結合対照）は、米国特許出願公開ＵＳ−２０１５−０１０４４０７−Ａ１に説明された手順を用いて調製した。表ＩＩは、この抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートの詳細を提供する。
表ＩＩ
【表２】
2019508456.tif 000069
【０４９４】
（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））コンジュゲートは、ピーク分子量約１７０ｋＤａ〜約２３０ｋＤａを有した。合成され／測定されたポリマー及びポリマーコンジュゲートは、典型的には、多分散性≦１．５を有した。このポリマー−薬物コンジュゲート（すなわち、抗体に結合した薬物−保有ポリマー鎖）は、β−アラニン約２５％モル〜約３５％モル、ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ約７％モル〜約１０％モル、及びＥＧ２−ＭＩ約１．５％モル〜約４％モルを含んだ。
【０４９５】
実施例３：リツキシマブ−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の合成
【化５９】
2019508456.tif 000070
リツキシマブ−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））コンジュゲート（非−結合対照）は、米国特許出願公開ＵＳ−２０１５−０１０４４０７−Ａ１に説明された手順を用いて調製した。表ＩＩＩは、この抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートの詳細を提供する。
表ＩＩＩ
【表３】
2019508456.tif 000071
【０４９６】
リツキシマブ−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））コンジュゲートは、ピーク分子量約１７０ｋＤａ〜約２３０ｋＤａを有した。合成され／測定されたポリマー及びポリマーコンジュゲートは、典型的には、多分散性≦１．５を有した。このポリマー−薬物コンジュゲート（すなわち、抗体に結合した薬物−保有ポリマー鎖）は、β−アラニン約２５％モル〜約３５％モル、ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ約７％モル〜約１０％モル、及びＥＧ２−ＭＩ約１．５％モル〜約４％モルを含んだ。
【０４９７】
実施例４：（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（ＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢＡ−ＭＭＡＥ）の合成
【化６０】
2019508456.tif 000072
（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（マレイミド−ＶＣ−ＰＡＢＡ−ＭＭＡＥ）コンジュゲートは、Doroninaら、Nature biotechnology, 21: 778-784 (2003)に説明された手順を使用し、調製した。表ＩＶは、この抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートの詳細を提供する。
表ＩＶ
【表４】
2019508456.tif 000073
【０４９８】
実施例５：ＮａＰｉ２ｂ−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））コンジュゲートに関する細胞傷害性アッセイ
実施例１Ａ、ＸＭＴ−１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））；実施例２Ｃ、（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））；実施例３Ａ、リツキシマブ−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））及びＡＦ−ＨＰＡ、又は実施例１Ｃ、ＸＭＴ−１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））；実施例２Ｃ、（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））；実施例３Ｂ、リツキシマブ−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））；及びＡＦ−ＨＰＡを、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Promega社）を使用し、インビトロでの腫瘍細胞株におけるそれらの抗増殖特性について評価した。ＯＶＣＡＲ３（卵巣腺癌細胞株、増幅せず、ＡＴＣＣカタログ番号ＨＴＢ−１６１）を、２０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地において培養した。ＴＯＶ−２１Ｇ（ヒト卵巣腺癌細胞株、増幅せず、ＡＴＣＣカタログ番号ＣＲＬ−１１７３０）を、１５％ＦＢＳを含有する、最終濃度１．５ｇ／Ｌの炭酸水素ナトリウムを含有するＭＣＤＢ  １０５培地と最終２．２ｇ／Ｌの炭酸水素ナトリウムを含有する培地１９９の１：１の混合物において培養した。ＩＧＲＯＶ１（卵巣腺癌細胞株、増幅せず）を、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地において培養した。ＨＣＣ−４００６（ヒト肺癌細胞株、増幅せず、ＡＴＣＣカタログ番号ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−２８７１（商標））を、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地において培養した。
【０４９９】
細胞傷害性アッセイに関して、細胞を、９６ウェルプレートにおいて、１ウェル当たり５０００個細胞の密度で播種し、５％ＣＯ2の存在下で、３７℃で、一晩インキュベーションさせた。次に培地を、一連のコンジュゲート実施例１Ａ、２Ｃ、３ＡもしくはＡＦ−ＨＰＡ（１００ｎＭ〜０．１ｐＭ）又は実施例１Ｃ、２Ｃ、３ＢもしくはＡＦ−ＨＰＡ（１００ｎＭ〜０．１ｐＭ）を含有する新鮮な培地と置き換え、且つ細胞を、５％ＣＯ2の存在下で、３７℃で、７２時間又は６日間、インキュベーションした。細胞の生存を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）ルミネセント細胞生存度アッセイ（Promega社、マジソン、WI）を、キット説明書に記載のように用いて測定した。細胞生存度は、未処理の対照に対して規準化し、且つ百分率（％）として表した。これらの値をプロットし、ＩＣ50値を、４パラメータ、可変スロープ、用量反応曲線フィッティングアルゴリズムを使用する、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア（サンディエゴ、CA）により算出した。表ＶＡ及びＶＢは、コンジュゲート及びＡＦ−ＨＰＡの細胞傷害性に関する具体的結果を提供する。
【表５】
2019508456.tif 000074
【０５００】
表ＶＡ及び表ＶＢに示したように、ＸＭＴ−１５３５抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートは、（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）抗体−ポリマー−薬物コンジュゲート又はリツキシマブ抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートよりも、全ての試験した細胞株において、より強力であった。
【０５０１】
実施例６  ＮａＰｉ２ｂ抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートの投与に対する腫瘍増殖反応
雌のＣＢ−１７  ＳＣＩＤマウスに、ＯＶＣＡＲ−３（各群ｎ＝１０）又は非小細胞肺癌腫瘍断片（各群ｎ＝１０）を皮下移植した。被験化合物又はビヒクルを、１日目に単回投与量として又は指摘したようにＩＶ投与した。腫瘍サイズを、デジタルキャリパーを使用し、図１から図３に示した時点で測定した。腫瘍容積を計算し、且つこれを用いて腫瘍増殖の遅延を決定した。腫瘍がサイズ１０００ｍｍ3に到達した時点で、マウスを屠殺した。腫瘍容積を、各群について、平均±ＳＥＭとして報告した。
【０５０２】
図１は、ビヒクル；ＸＭＴ−１５３５；実施例３Ａ、リツキシマブ−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））；実施例４Ａ（（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（ＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢＡ−ＭＭＡＥ））；実施例２Ｃ（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））又は実施例１Ｂ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の各３ｍｇ／ｋｇ（０．２１ｍｇ／ｋｇアウリスタチンペイロード等価物投与量）の単回投与量として、１日目に、ＩＶ投与した後の、ＯＶＣＡＲ−３腫瘍断片（各群ｎ＝１０）を皮下に移植したマウスにおける腫瘍反応の結果を提供する。ビヒクル、ＸＭＴ−１５３５；コンジュゲート実施例３Ａ及び実施例４Ａは全て、腫瘍容積の増加を示し、何らかの部分退縮を示した治療はなかった。コンジュゲート実施例２Ｃ及び実施例１Ｂは各々、腫瘍容積の減少を示した。コンジュゲート実施例２Ｃは、単独の部分的退縮反応を有したのに対し、コンジュゲート実施例１Ｂは、４つの部分的退縮及び３つの完全退縮からなる７０％退縮を有した。エンドポイントまでの時間（ＴＴＥ）の中央値は、５７日間であり、これは１１８％腫瘍増殖遅延（ＴＧＤ）（３０．９日間）に対応している。２３日目の、腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）転帰は、９５％であった。これは、対照から統計学的差異があり（Ｐ＜０．００１、マン・ホイットニー検定）、且つ６０％を上回る可能性のある治療的活性閾値であった。
【０５０３】
図２は、ビヒクル；３週間にわたり週１回３ｍｇ／ｋｇ投与された実施例３Ｂ、リツキシマブ−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））；３週間にわたり週１回３ｍｇ／ｋｇ投与された実施例４Ｂ（（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（ＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢＡ−ＭＭＡＥ））；１日目に単回投与量として３ｍｇ／ｋｇ、又は３週間にわたり週１回３ｍｇ／ｋｇ投与された実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））；或いは、１日目に単回投与量として５ｍｇ／ｋｇ（０．３６ｍｇ／ｋｇアウリスタチンペイロード等価物投与量）投与された実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の、ＩＶ投与後の、ＯＶＣＡＲ−３腫瘍断片（各群についてｎ＝１０）を皮下に移植したマウスにおける腫瘍反応の結果を提供する。ビヒクル並びにコンジュゲート実施例３Ｂ及び実施例４Ｂは全て、腫瘍容積の増加を示し、何らかの部分退縮を示す治療はなかった。コンジュゲート実施例４Ｂに関して、２２日目の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）は、対照とは統計学的に異なり（Ｐ＜０．００１、マン・ホイットニー検定）、且つ６３％〜６０％をわずかに上回る可能性のある治療的活性閾値であった。コンジュゲート実施例１Ｂは、全ての治療投与量で本試験において最も活性があり、８０〜１００％の退縮反応を生じた。このコンジュゲートに関して、２２日目のＴＧＩ転帰は、対照とは統計学的に異なり（Ｐ＜０．００１、マン・ホイットニー検定）、且つ９６〜９７％であった。
【０５０４】
図３は、ビヒクル；各々３週間にわたり週１回３ｍｇ／ｋｇ投与された、実施例３Ｂ、リツキシマブ−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））；実施例４Ｂ（（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（ＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢＡ−ＭＭＡＥ））；又は、実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の、ＩＶ投与後の、患者由来の異種移植片ＫＲＡＳ突然変異体非小細胞肺癌モデル（ＣＴＧ−０８６０）（各群についてｎ＝１０）の腫瘍反応の結果を提供する。ビヒクル及びコンジュゲート実施例３Ｂ及び実施例４Ｂは各々、腫瘍容積の増加を示した。１７日目の腫瘍容積の比較は、実施例１Ｃの腫瘍容積は、ビヒクル対照群のそれよりも有意に低かった（ｐ≦０．０５）ことを示した。０日目から１７日目までのデータの解析は、実施例１Ｃの３ｍｇ／ｋｇ群は、ビヒクル対照群のそれと比べ、有意に少ない腫瘍容積を有した（ｐ≦０．０１）ことを示した。実施例１Ｃの３ｍｇ／ｋｇ群において、２つのＰＲが存在した。本試験の間、これらの群のいずれにおいても、死亡例は存在しなかった。
【０５０５】
図４は、ビヒクル；実施例３Ｂ、リツキシマブ−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））；実施例４Ｂ（（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（ＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢＡ−ＭＭＡＥ））；実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の、各々３週間にわたり週１回投与された３ｍｇ／ｋｇの、又は実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の１日目に単回投与量として５ｍｇ／ｋｇの、ＩＶ投与後の、患者由来の異種移植片非小細胞肺癌モデル（ＣＴＧ−０８５２）（各群についてｎ＝８）の腫瘍反応の結果を提供する。０日目から６２日目までのデータの解析は、全ての群は、ビヒクル対照群のそれと比べ、有意に少ない腫瘍容積を有した（ｐ≦０．０１又はｐ≦０．０００１）ことを示した。実施例４Ｂの３ｍｇ／ｋｇ群において、３つのＰＲが存在した。実施例１Ｃの５ｍｇ／ｋｇ群において７つのＰＲが、並びに実施例１Ｃの３ｍｇ／ｋｇ群において、５つのＰＲ、１つのＣＲ、及び２つのＴＦＳが存在した。実施例３Ｂの３ｍｇ／ｋｇ群において、ＰＲ、ＣＲ、又はＴＦＳは存在しなかった。本試験の間、これらの群のいずれにおいても、死亡例は存在しなかった。
【０５０６】
図５は、ビヒクル；及び、３週間にわたり週１回３ｍｇ／ｋｇ又は６ｍｇ／ｋｇ投与された、実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の、ＩＶ投与後の、患者由来の異種移植片非小細胞肺癌モデル（ＳＴ１９０６、ＢＲＡＦ  Ｋ６０１Ｅ突然変異）（各群についてｎ＝６）の腫瘍反応の結果を提供する。ビヒクルは、腫瘍容積の増加を示したのに対し、コンジュゲート実施例１Ｃは堅固な抗−腫瘍活性を示した。６例中６例が、コンジュゲート実施例１Ｃによる処置後６０日目に、ＴＦＳを示した。
【０５０７】
図７は、ビヒクル；各々３週間にわたり週１回３ｍｇ／ｋｇ投与された、実施例３Ｂ、リツキシマブ−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））；実施例４Ｂ、（（１０Ｈ１．１１．４Ｂ）−（ＭＣ−ＶＣ−ＰＡＢＡ−ＭＭＡＥ））；もしくは、実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の、又は単回投与量として５ｍｇ／ｋｇの、実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の、ＩＶ投与後の、患者由来の異種移植片非小細胞肺癌モデル（ＣＴＧ−０１７８）（各群についてｎ＝８）の腫瘍反応の結果を提供する。ビヒクル；コンジュゲート実施例３Ｂ及び実施例４Ｂは各々、腫瘍容積の増加を示した。コンジュゲート実施例１Ｃの３ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇは、ビヒクル対照群のそれと比べ、有意に少ない腫瘍増殖を示した（ｐ≦０．０５）。本試験の間、これらの群のいずれにおいても、死亡例は存在しなかった。
【０５０８】
図８は、ビヒクル；及び、３週間にわたり週１回３ｍｇ／ｋｇ又は６ｍｇ／ｋｇ投与された、実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の、ＩＶ投与後の、患者由来の異種移植片非小細胞肺癌モデル（ＳＴ１４３７、ＥＧＦＲ野生型、Ａｌｋ野生型突然変異）（各群についてｎ＝６）の腫瘍反応の結果を提供する。ビヒクルは、腫瘍容積の増加を示したのに対し、コンジュゲート実施例１Ｃは、抗−腫瘍活性を示した。６例中１例が、コンジュゲート実施例１Ｃによる処置後６０日目にＴＦＳを示した。
【０５０９】
図９は、ビヒクル；及び、３週間にわたり週１回３ｍｇ／ｋｇ又は６ｍｇ／ｋｇ投与された、実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の、ＩＶ投与後の、患者由来の異種移植片非小細胞肺癌モデル（ＳＴ７４２、ＥＭＬＫ−Ａｌｋ転座）（各群についてｎ＝６）の腫瘍反応の結果を提供する。ビヒクルは、腫瘍容積の増加を示したのに対し、コンジュゲート実施例１Ｃは、抗−腫瘍活性を示した。６例中５例が、コンジュゲート実施例１Ｃによる処置後６０日目にＴＦＳを示した。
【０５１０】
図１０は、ビヒクル；及び、３週間にわたり週１回３ｍｇ／ｋｇ又は６ｍｇ／ｋｇ投与された、実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の、ＩＶ投与後の、患者由来の異種移植片非小細胞肺癌モデル（ＳＴ１２４３、ＥＧＦＲ増幅、ＫＩＴ増幅、ＣＤＫＮ２Ａ欠失）（各群についてｎ＝６）の腫瘍反応の結果を提供する。ビヒクルは、腫瘍容積の増加を示したのに対し、コンジュゲート実施例１Ｃは、抗−腫瘍活性を示した。
【０５１１】
実施例７：フローサイトメトリーを使用するＸＭＴ−１５３５及びＮａＰｉ２ｂ−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））コンジュゲートに関する細胞結合親和性
実施例１Ｃ、ＸＭＴ１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））及び抗−ＮａＰｉ２Ｂ抗体ＸＭＴ１５３５の、抗原発現している細胞への細胞表面結合を、フローサイトメトリーにより評価した。ＴＯＶ−２１Ｇ細胞又はＯＶＣＡＲ３細胞を、一晩、培地中およそ９０％集密度培養物となるよう成長させ、次にトリプシン−ＥＤＴＡ（Gibco-Thermo Fisher Scientific社、USA）による処理により、プレート表面から離した。剥離した細胞を、６％ヤギ血清を含有する氷冷した培地により１回洗浄し、同じ培地中に再浮遊させた。５０，０００個の細胞を、Ｖ−底９６−ウェルプレートの１ウェル当たりにアリコート化し、且つ６％ヤギ血清を含有する培地（ＭＣＤＢ１０５（１．５ｇ／Ｌ炭酸水素ナトリウム）及び培地１９９（２．２ｇ／Ｌ炭酸水素ナトリウム＋１５％ＦＢＳ）の１：１混合物）１００μｌ中の、被験物質の濃度範囲（０．２３〜５００ｎＭ）と共に、氷上で３時間インキュベーションした。その後細胞を、氷冷したＰＢＳにより１回洗浄し、２％ヤギ血清及び６μｇ／ｍｌの蛍光標識した二次抗体であるＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７−標識したヤギ抗−ヒトＩｇＧ（Life Technologies社、カタログ番号Ａ−２１４４５）を含有する培地１５０μｌ中に、氷上で１時間再浮遊させた。これらの細胞を、氷冷したＰＢＳで１回洗浄し、１％パラホルムアルデヒドを含有する氷冷したＰＢＳの１５０μｌ中に浮遊させた。１細胞当たりに結合した蛍光の量を、ＭＡＣＳＱｕａｎｔフローサイトメーター（Miltenyi Biotec社、Bergisch Gladbach、独国）上で各処理について５０００個の細胞を試行することにより、決定した。各処理に関する蛍光値の中央値を、グラフ化し、且つ結合定数ＫDを、各被験物質について、片側特異的結合モデルを使用する非線形回帰により、GraphPad Prismソフトウェアを使って算出した。
表ＶＩ
【表６】
2019508456.tif 000075
【０５１２】
表ＶＩに示したように、裸の抗体ＸＭＴ−１５３５及びＸＭＴ−１５３５−抗体−ポリマー−薬物コンジュゲートは、試験した細胞株に関して、類似の結合親和性を有する。
【０５１３】
実施例８：非ヒト霊長類の毒性試験及びＰＫ試験
単回投与量毒性試験を、実施例１Ｃ、ＸＭＴ−１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））により、カニクイザルにおいて行った。このコンジュゲートは、２匹動物／性別の群に、０ｍｇ／ｋｇ（第１群）、１．２５ｍｇ／ｋｇ（１０７４μｇ／ｍ2アウリスタチンペイロード等価物；第２群）、２．５ｍｇ／ｋｇ（２１４７μｇ／ｍ2アウリスタチンペイロード等価物；第３群）又は５ｍｇ／ｋｇ（もしくは４２９４μｇ／ｍ2アウリスタチンペイロード等価物；第４群）を、単回ｉｖ注入として投与した。血液学、凝固、及び血清化学の分析のために、−７、３、８、１５、及び２２日目に、全ての群から、血液を採取した。血液試料はまた、ＰＫ決定のために、投与前、ＩＶ注入の終了後、１０分、１、６、２４、４８、７２、９６、及び１６８時間、並びに１５日目及び２２日目でも、採取した。
【０５１４】
コンジュゲート実施例１Ｃは、最大５ｍｇ／ｋｇ（すなわち、４２９４μｇ／ｍ2  アウリスタチンペイロード等価物）を投与した場合に、カニクイザルにおいて忍容性が良好であり、標的−媒介性毒性は認められず、且つ有害所見は限定的であった。骨髄毒性の証拠は存在しなかった。第２、３、及び４群において、瀕死状態は存在しなかった。本被験物質に関連した所見は、下記表ＶＩＩに示している。
表ＶＩＩ
【表７】
2019508456.tif 000076
【０５１５】
全ての群において１匹の動物が、死亡時剖検で、胃腸管に係わる有害変化により影響を受けた。回復した動物は、肝臓（第２〜４群）、脾臓（第３及び４群）、及び肺（第４群）において、被験物質に関連した所見（各組織中１例）を有したが、これらはいずれも有害とはみなされなかった。増加したグロブリン濃度、減少したアルブミンレベル及び減少したアルブミン対グロブリン比と一緒に、好中球数の一過性の増加及び単球増加が存在した。同じく、上昇したクレアチンキナーゼ（ＣＫ）及びアスパラギン酸アミノ基転移酵素（ＡＳＴ）レベルが認められた。これらの変化はいずれも、回復期間を通じて持続性には検出しなかった。骨髄抑制は存在せず、且つ好中球減少も存在しなかった。加えて、剖検時の被験物質の肉眼所見又は関連した体重減少は存在しなかった。有効性及びこの非ヒト霊長類の毒性試験を基に、コンジュゲート実施例１Ｃ、ＸＭＴ−１５３５−（ＥＧ２−ＭＩ−（１０ｋＤａ  ＰＨＦ−ＢＡ−（ＡＦ−ＨＰＡ−Ａｌａ）））の治療係数は、約６である。
【０５１６】
血液試料を、各時点で、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析し、総ＡＦ−ＨＰＡの濃度を決定し、及びＥＬＩＳＡにより分析し、総抗体濃度を決定した。図６Ａ及び図６Ｂは、コンジュゲート実施例１Ｃの１．２５ｍｇ／ｋｇ（１０７４μｇ／ｍ2アウリスタチンペイロード等価物；第２群）、２．５ｍｇ／ｋｇ（２１４７μｇ／ｍ2アウリスタチンペイロード等価物；第３群）又は５ｍｇ／ｋｇ（もしくは４２９４μｇ／ｍ2アウリスタチンペイロード等価物；第４群）による単回投与量の投与後の、カニクイザルにおけるそれぞれの総抗体及び総薬物に関しての血漿薬物動態を示す。表ＶＩＩＩは、総抗体及び総ＡＦ−ＨＰＡに関する、算出したＡＵＣ0ー504時間、及び半減期を示す。遊離薬物（すなわち、コンジュゲートしていないＡＦ及びコンジュゲートしていないＡＦ−ＨＰＡ）は、検出されなかった（ＬＣＭＳ／ＭＳ法のＬＬＯＱは、１ｎｇ／ｍＬであった）。
表ＶＩＩＩ
【表８】
2019508456.tif 000077
【０５１７】
ＸＭＴ−１５３５−ポリマー−薬物コンジュゲートは、半減期〜９日間、ＡＵＣ0-504時間の〜１．４ｍｇ・時／ｍＬ／ｍｇ／ｋｇを有した。総ＡＦ−ＨＰＡは、半減期〜５日間、ＡＵＣ0-504時間の〜１５７μｇ・時／ｍＬ／ｍｇ／ｋｇを有した。このコンジュゲートは、遊離薬物がほとんど又は全く検出されない、血漿中の良好な安定性を明らかにした。
【０５１８】
他の実施態様
本発明は、それらの詳細な説明と一緒に説明されているが、前述の説明は、本発明の範囲を例示しているが、限定せず、これは添付された請求の範囲により規定されることを意図している。他の態様、利点、及び変更は、以下の請求の範囲内である。
【図１】
2019508456.tif 000102
【図２】
2019508456.tif 000103
【図３】
2019508456.tif 000104
【図４】
2019508456.tif 000105
【図５】
2019508456.tif 000106
【図６】
2019508456.tif 000107
【図７】
2019508456.tif 000108
【図８】
2019508456.tif 000109
【図９】
2019508456.tif 000110
【図１０】
2019508456.tif 000111
【配列表】
2019508456000001.app
【国際調査報告】
2019508456.tif 000112
2019508456.tif 000113
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