(57)【要約】本開示は、がんの治療及び予防のための組み換えウイルスベクターに関する。腫瘍溶解性ウイルスベクターは、次の特徴：腫瘍抑制性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）標的配列をウイルスゲノムに挿入することによるウイルス複製制限、がん促進性ｍｉＲＮＡ機能の破壊、がん微小環境リモデリング、及びプロテアーゼ活性化抗体をウイルス粒子に組み込むことによるがん細胞標的化のうちの１つ以上を組み込む。【選択図】図３３
2019508063.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以
上の腫瘍抑制性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）標的配列のコピーを１つ以上含む、組み換え腫
瘍溶解性ウイルス。
【請求項２】
前記ウイルスが、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、ポリオウイルス、ワクシニ
アウイルス、麻疹ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、オルトミクソウイルス、パルボウイ
ルス、マラバウイルスまたはコクサッキーウイルスである、請求項１に記載の腫瘍溶解性
ウイルス。
【請求項３】
前記ウイルスが、単純ヘルペスウイルスであり、ウイルス複製に必要とされる前記１つ
以上のウイルス遺伝子が、ＵＬ１、ＵＬ５、ＵＬ６、ＵＬ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１１
、ＵＬ１２、ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１７、ＵＬ１８、ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ２２
、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２６．５、ＵＬ２７、ＵＬ２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ
３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３５、ＵＬ３６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、ＵＬ
３９、ＵＬ４０、ＵＬ４２、ＵＬ４８、ＵＬ４９、ＵＬ５２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、ＩＣ
Ｐ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、γ−３４．５、ＵＳ３、ＵＳ４
、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ８、ＵＳ９、ＵＳ１０、ＵＳ１１及びＵＳ１２からなる
群から選択される、請求項１または２に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、表３から選択されるｍｉＲに対する標的配列である
、請求項１〜３のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項５】
前記１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ウイルス複製に必要とされる前記１つ以
上のウイルス遺伝子の５’非翻訳領域（ＵＴＲ）または３’ＵＴＲに組み込まれる、請求
項１〜４のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項６】
第１の細胞における前記ウイルスの複製が、第２の細胞における前記ウイルスの複製と
比較して、減少または減衰する、請求項１〜５のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項７】
前記第１の細胞は、前記１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列に結合することができる
腫瘍抑制性ｍｉＲの発現が、前記第２の細胞における前記腫瘍抑制性ｍｉＲの発現と比較
して上昇している、請求項６に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項８】
前記第１の細胞における前記腫瘍抑制性ｍｉＲの発現レベルが、前記第２の細胞におけ
る前記腫瘍抑制性ｍｉＲの発現レベルよりも少なくとも５％高い、請求項７に記載の腫瘍
溶解性ウイルス。
【請求項９】
前記第１の細胞が非がん性細胞である、請求項６に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１０】
前記第２の細胞は、前記１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列に結合することができる
腫瘍抑制性ｍｉＲの発現が、前記第１の細胞における前記腫瘍抑制性ｍｉＲの発現と比較
して低下している、請求項６に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１１】
前記第２の細胞における前記腫瘍抑制性ｍｉＲの発現レベルが、前記第１の細胞におけ
る前記腫瘍抑制性ｍｉＲの発現レベルよりも少なくとも５％低い、請求項１０に記載の腫
瘍溶解性ウイルス。
【請求項１２】
前記第２の細胞ががん性細胞である、請求項６に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１３】
ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−１４３−３ｐ及びｍｉＲ−５５９に対す
る腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列を含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイ
ルス。
【請求項１４】
膵癌、肺癌及び／または結腸癌を治療するための請求項１３に記載の腫瘍溶解性ウイル
ス。
【請求項１５】
ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−４５１、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−１及びｍｉＲ−５
５９に対する腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列を含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の腫瘍
溶解性ウイルス。
【請求項１６】
ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−４５１、ｍｉＲ−１４５−５ｐ及びｍｉＲ−５５９に対する
腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列を含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイル
ス。
【請求項１７】
任意のがん種に由来する腫瘍を治療するための請求項１５及び／または１６に記載の腫
瘍溶解性ウイルス。
【請求項１８】
ｍｉＲ−２０５ｐ、ｍｉＲ−１４１−５ｐ、ｍｉＲ−３１−５ｐ及びｍｉＲ−１２４に
対する腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列を含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の腫瘍溶解性
ウイルス。
【請求項１９】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２７、ＵＬ１９及び／またはＵＬ
３０遺伝子座に挿入される、請求項１〜１８のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２０】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ｍｉＲ−１３６−３ｐ、ｍｉＲ−４３２−５ｐ、ｍ
ｉＲ−１−３ｐ、ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｍｉＲ−３７９−５ｐ、ｍｉＲ−４９３−５ｐ
、ｍｉＲ−２２３−５ｐ、ｍｉＲ−２２３−５ｐ、ｍｉＲ−１３６−５ｐ、ｍｉＲ−４５
１ａ、ｍｉＲ−４８７ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−３７０−３ｐ、ｍｉＲ−４１０−３ｐ、ｍｉＲ
−４３１−３ｐ、ｍｉＲ−４４８５−３ｐ、ｍｉＲ−４４８５−５ｐ、ｍｉＲ−１２７−
５ｐ、ｍｉＲ−４０９−３ｐ、ｍｉＲ−３３８−３ｐ、ｍｉＲ−５５９、ｍｉＲ−４１１
−５ｐ、ｍｉＲ−１３３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−３７６ｂ−３ｐ、ｍ
ｉＲ−７５８−３ｐ、ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１１８０、ｍｉＲ−１２３
６、ｍｉＲ−１２４−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１２８０、ｍ
ｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１４１、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４４
、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１８ａ、ｍｉＲ−１９２、
ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２００ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２
０３、ｍｉＲ−２０５、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２３ｂ、ｍｉＲ−２
６ａ、ｍｉＲ−２９ｃ、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３７０、ｍｉＲ−
４０９−３ｐ、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４５１ｂ、ｍｉＲ−４９０−５ｐ、ｍｉＲ−４
９３、ｍｉＲ−５７６−３ｐ及び／またはｍｉＲ−９９ａに対する標的配列である、請求
項１〜１２のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２１】
膀胱癌を治療するための請求項２０に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２２】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ｍｉＲ−１２５１−５ｐ、ｍｉＲ−２１９ａ−５ｐ
、ｍｉＲ−２１９ａ−２−３ｐ、ｍｉＲ−１２４−３ｐ、ｍｉＲ−４４８、ｍｉＲ−１３
８−２−３ｐ、ｍｉＲ−４９０−５ｐ、ｍｉＲ−１２９−１−３ｐ、ｍｉＲ−１２６４、
ｍｉＲ−３９４３、ｍｉＲ−４９０−３ｐ、ｍｉＲ−３８３−５ｐ、ｍｉＲ−１３３ｂ、
ｍｉＲ−１２９−２−３ｐ、ｍｉＲ−１２８−２−５ｐ、ｍｉＲ−１３３ａ−３ｐ、ｍｉ
Ｒ−１２９−５ｐ、ｍｉＲ−１−３ｐ、ｍｉＲ−８８５−３ｐ、ｍｉＲ−１２４−５ｐ、
ｍｉＲ−７５９、ｍｉＲ−７１５８−３ｐ、ｍｉＲ−７７０−５ｐ、ｍｉＲ−１３５ａ−
５ｐ、ｍｉＲ−８８５−５ｐ、ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０１、
ｍｉＲ−１０６ａ、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２４ａ、ｍｉＲ−１２５ａ、ｍｉＲ−１
２５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｍｉＲ−１２８、ｍｉＲ−１
２９、ｍｉＲ−１３６、ｍｉＲ−１３７、ｍｉＲ−１３９−５ｐ、ｍｉＲ−１４２−３ｐ
、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４６ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１４９、ｍｉＲ
−１５２、ｍｉＲ−１５３、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２１２−３ｐ、ｍ
ｉＲ−２１９−５ｐ、ｍｉＲ−２２２、ｍｉＲ−２９ｂ、ｍｉＲ−３１、ｍｉＲ−３１８
９−３ｐ、ｍｉＲ−３２０、ｍｉＲ−３２０ａ、ｍｉＲ−３２６、ｍｉＲ−３３０、ｍｉ
Ｒ−３３１−３ｐ、ｍｉＲ−３４０、ｍｉＲ−３４２、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３７６
ａ、ｍｉＲ−４４９ａ、ｍｉＲ−４８３−５ｐ、ｍｉＲ−５０３、ｍｉＲ−５７７、ｍｉ
Ｒ−６６３、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−７−５ｐ、ｍｉＲ−８７３、ｌｅｔ−７ａ、ｌｅｔ−
７ｆ、ｍｉＲ−１０７、ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１２４−５ｐ、ｍｉＲ−１３９、ｍｉ
Ｒ−１４６ａ、ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５ｂ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１８１ａ、
ｍｉＲ−１８１ａ−１、ｍｉＲ−１８１ａ−２、ｍｉＲ−１８１ｂ、ｍｉＲ−１８１ｂ−
１、ｍｉＲ−１８１ｂ−２、ｍｉＲ−１８１ｃ、ｍｉＲ−１８１ｄ、ｍｉＲ−１８４、ｍ
ｉＲ−１８５、ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２００ｂ、ｍｉＲ
−２０３、ｍｉＲ−２０４、ｍｉＲ−２０５、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２３ｂ、ｍｉＲ
−２６ｂ、ｍｉＲ−２７ａ、ｍｉＲ−２９ｃ、ｍｉＲ−３２８、ｍｉＲ−３４ｃ−３ｐ、
ｍｉＲ−３４ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−３８３、ｍｉＲ−４５１、ｍｉＲ−４
５２、ｍｉＲ−４９５、ｍｉＲ−５８４、ｍｉＲ−６２２、ｍｉＲ−６５６、ｍｉＲ−９
８、ｍｉＲ−１２４−３ｐ、ｍｉＲ−１８１ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２００ｂ及び／またはｍ
ｉＲ−３１８９−３ｐに対する標的配列である、請求項１〜１２のいずれかに記載の腫瘍
溶解性ウイルス。
【請求項２３】
脳癌を治療するための請求項２２に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２４】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ｍｉＲ−１０ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１２６−３ｐ、ｍ
ｉＲ−１４５−３ｐ、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−５６８３、
ｍｉＲ−３１９５、ｍｉＲ−３１８２、ｍｉＲ−１２７１−５ｐ、ｍｉＲ−２０４−５ｐ
、ｍｉＲ−４０９−５ｐ、ｍｉＲ−１３６−５ｐ、ｍｉＲ−５１４ａ−５ｐ、ｍｉＲ−５
５９、ｍｉＲ−４８３−３ｐ、ｍｉＲ−１−３ｐ、ｍｉＲ−６０８０、ｍｉＲ−１４４−
３ｐ、ｍｉＲ−１０ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−６１３０、ｍｉＲ−６０８９、ｍｉＲ−２０３ｂ
−５ｐ、ｍｉＲ−４２６６、ｍｉＲ−４３２７、ｍｉＲ−５６９４、ｍｉＲ−１９３ｂ、
ｌｅｔ−７ａ、ｌｅｔ−７ａ−１、ｌｅｔ−７ａ−２、ｌｅｔ−７ａ−３、ｌｅｔ−７ｂ
、ｌｅｔ−７ｃ、ｌｅｔ−７ｄ、ｌｅｔ−７ｅ、ｌｅｔ−７ｆ−１、ｌｅｔ−７ｆ−２、
ｌｅｔ−７ｇ、ｌｅｔ−７ｉ、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０７、ｍｉＲ−１０ａ、ｍｉ
Ｒ−１０ｂ、ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２５８、ｍｉＲ−１２５ａ−
５ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１２７、ｍｉＲ−１２９、ｍｉＲ−
１３０ａ、ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４５、ｍｉ
Ｒ−１４６ａ、ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１４７、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１４９
、ｍｉＲ−１５２、ｍｉＲ−１５３、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１７−５
ｐ、ｍｉＲ−１８１ａ、ｍｉＲ−１８２６、ｍｉＲ−１８３、ｍｉＲ−１８５、ｍｉＲ−
１９１、ｍｉＲ−１９３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−
１９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２００ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２０
５、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２１１、ｍｉＲ−２１６ｂ、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２
２、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ−３００、ｍｉＲ−３０ａ、ｍｉＲ−３１
、ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３３９−５ｐ、ｍｉＲ−３３ｂ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−
３４ｂ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−３７４ａ、ｍｉＲ−３７９、ｍｉＲ−３８１、ｍｉＲ
−３８３、ｍｉＲ−４２５、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４５０ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−４９４
、ｍｉＲ−４９５、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−５０２−５ｐ、ｍｉＲ−５１７ａ、ｍｉＲ
−５７４−３ｐ、ｍｉＲ−６３８、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−７２０、ｍｉＲ−８７３、ｍｉ
Ｒ−８７４、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−９８、ｍｉＲ−９９ａ、ｍｍｕ−ｍｉＲ−２９０
−３ｐ及び／またはｍｍｕ−ｍｉＲ−２９０−５ｐに対する標的配列である、請求項１〜
１２のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２５】
乳癌を治療するための請求項２４に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２６】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１７−
５ｐ、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３
４２−３ｐ、ｍｉＲ−３７２、ｍｉＲ−４２４、ｍｉＲ−４９１−５ｐ、ｍｉＲ−４９７
、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−９９ａ、ｍｉＲ−９９ｂ、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０１、ｍ
ｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−８８６−５ｐ、ｍｉＲ−１０６
ａ、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−２９ａ及び／またはｍｉＲ−３７５に
対する標的配列である、請求項１〜１２のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２７】
子宮頸癌を治療するための請求項２６に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２８】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ｍｉＲ−１３３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−４９０−５ｐ、
ｍｉＲ−１２４−３ｐ、ｍｉＲ−１３７、ｍｉＲ−６５５−３ｐ、ｍｉＲ−３７６ｃ−３
ｐ、ｍｉＲ−３６９−５ｐ、ｍｉＲ−４９０−３ｐ、ｍｉＲ−４３２−５ｐ、ｍｉＲ−４
８７ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−３４２−３ｐ、ｍｉＲ−２２３−３ｐ、ｍｉＲ−１３６−３ｐ、
ｍｉＲ−１３６−３ｐ、ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｍｉＲ−１−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−３
ｐ、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ−３ｐ、ｍｉＲ
−４５１ａ、ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｍｉＲ−１３３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１４５−５ｐ、
ｍｉＲ−１４５−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｌｅｔ−７ａ−１、ｌｅｔ−７ａ−２
、ｌｅｔ−７ａ−３、ｌｅｔ−７ｂ、ｌｅｔ−７ｃ、ｌｅｔ−７ｄ、ｌｅｔ−７ｅ、ｌｅ
ｔ−７ｆ−１、ｌｅｔ−７ｆ−２、ｌｅｔ−７ｇ、ｌｅｔ−７ｉ、ｍｉＲ−１００、ｍｉ
Ｒ−１０１、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４５
、ｍｉＲ−１９２、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−２１５
、ｍｉＲ−２２、ｍｉＲ−２５、ｍｉＲ−３０２ａ、ｍｉＲ−３２０、ｍｉＲ−３２０ａ
、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−３６５、ｍｉＲ−３７３、ｍｉＲ−４２４
、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４５５、ｍｉＲ−４８４、ｍｉＲ−５０２、ｍｉＲ−５０３
、ｍｉＲ−９３、ｍｉＲ−９８、ｍｉＲ−１８６、ｍｉＲ−３０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−６２
７、ｌｅｔ−７ａ、ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２５ａ、ｍｉＲ−１２９、
ｍｉＲ−１２９５ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１３０７、ｍｉＲ−１３０ｂ、ｍｉＲ−１３２、ｍ
ｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１３７、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１３９
、ｍｉＲ−１３９−５ｐ、ｍｉＲ−１４０−５ｐ、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１４８ｂ
、ｍｉＲ−１４９、ｍｉＲ−１５０−５ｐ、ｍｉＲ−１５４、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−
１５ｂ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１８ａ、ｍｉＲ−１９１、ｍｉＲ−１９３ａ−５ｐ、ｍ
ｉＲ−１９４、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−１９６ａ、ｍｉＲ−１９８、ｍｉＲ−１９９ａ
−５ｐ、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２０４−５ｐ、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２１２、ｍ
ｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２２４、ｍｉＲ−２４−３ｐ、ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ−２７ａ
、ｍｉＲ−２８−３ｐ、ｍｉＲ−２８−５ｐ、ｍｉＲ−２９ｂ、ｍｉＲ−３０ａ−３ｐ、
ｍｉＲ−３０ｂ、ｍｉＲ−３２８、ｍｉＲ−３３８−３ｐ、ｍｉＲ−３４２、ｍｉＲ−３
４５、ｍｉＲ−３４ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−３７８
、ｍｉＲ−３７８ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｍｉＲ−４０９−３ｐ、ｍｉＲ−
４２２ａ、ｍｉＲ−４４８７、ｍｉＲ−４８３、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−４９８、ｍｉ
Ｒ−５１８ａ−３ｐ、ｍｉＲ−５５１ａ、ｍｉＲ−５７４−５ｐ、ｍｉＲ−６２５、ｍｉ
Ｒ−６３８、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｍｉＲ−２０２−３ｐ、ｍｉＲ−３０ａ
及び／またはｍｉＲ−４５１に対する標的配列である、請求項１〜１２のいずれかに記載
の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２９】
結腸癌または大腸癌を治療するための請求項２８に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３０】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺
伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１３０ａ、
ｍｉＲ−１３０ｂ、ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１５２
、ｍｉＲ−２０５、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−３０１ａ、ｍｉＲ−３０１ｂ、ｍｉＲ−３
０ｃ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−４２４、ｍｉＲ−４４９ａ、ｍｉＲ−
５４３及び／またはｍｉＲ−３４ｂに対する標的配列である、請求項１〜１２のいずれか
に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３１】
子宮内膜癌を治療するための請求項３０に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３２】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺
伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１３８、
ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１５ｂ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１６−１、ｍｉＲ−１６−１
−３ｐ、ｍｉＲ−１６−２、ｍｉＲ−１８１ａ、ｍｉＲ−１８１ｂ、ｍｉＲ−１９５、ｍ
ｉＲ−２２３、ｍｉＲ−２９ｂ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−４２４、ｍ
ｉＲ−１０ａ、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５０、ｍｉＲ−１５１、ｍｉＲ−１５５、
ｍｉＲ−２２７８、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−３０ｅ、ｍｉＲ−３１、ｍｉＲ−３２６、
ｍｉＲ−５６４、ｍｉＲ−２７ａ、ｌｅｔ−７ｂ、ｍｉＲ−１２４ａ、ｍｉＲ−１４２−
３ｐ、ｌｅｔ−７ｃ、ｍｉＲ−１７、ｍｉＲ−２０ａ、ｍｉＲ−２９ａ、ｍｉＲ−３０ｃ
、ｍｉＲ−７２０、ｍｉＲ−１０７、ｍｉＲ−３４２、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−２０２
、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−２９ｃ、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１９３ｂ、ｍｉＲ
−１９９ａ、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−２２、ｍｉＲ−１３７及び／またはｍｉＲ−１９
７に対する標的配列である、請求項１〜１２のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３３】
血液癌を治療するための請求項３２に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３４】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺
伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ
−１８２６、ｍｉＲ−１９９ａ、ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２
０５、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−５０８−３ｐ、ｍｉＲ−５０９−３ｐ、ｌｅｔ−７ａ、
ｌｅｔ−７ｄ、ｍｉＲ−１０６ａ＊、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１２８５、ｍｉＲ−１２
９−３ｐ、ｍｉＲ−１２９１、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１３５ａ、ｍｉＲ−１３８、
ｍｉＲ−１４１、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１８２−５ｐ、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−
２１８、ｍｉＲ−２８−５ｐ、ｍｉＲ−３０ａ、ｍｉＲ−３０ｃ、ｍｉＲ−３０ｄ、ｍｉ
Ｒ−３４ａ、ｍｉＲ−３７８、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−５０９−５ｐ、ｍｉＲ−６４６
、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｌｅｔ−７ｂ、ｌｅｔ−７ｃ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２０４
、ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３７７及び／またはｍｉＲ−５０６に対する標的配列である
、請求項１〜１２のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３５】
腎癌を治療するための請求項３４に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３６】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺
伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ−７ａ−１、ｌｅｔ−７ａ−２
、ｌｅｔ−７ａ−３、ｌｅｔ−７ｂ、ｌｅｔ−７ｃ、ｌｅｔ−７ｄ、ｌｅｔ−７ｅ、ｌｅ
ｔ−７ｆ、ｌｅｔ−７ｆ−１、ｌｅｔ−７ｆ−２、ｌｅｔ−７ｇ、ｌｅｔ−７ｉ、ｍｉＲ
−１、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１０５、ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１
２２ａ、ｍｉＲ−１２３６、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２６、ｍｉ
Ｒ−１２７、ｍｉＲ−１２７１、ｍｉＲ−１２８−３ｐ、ｍｉＲ−１２９−５ｐ、ｍｉＲ
−１３０ａ、ｍｉＲ−１３０ｂ、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１３７、
ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１３９、ｍｉＲ−１３９−５ｐ、ｍｉＲ−１４０−５ｐ、ｍｉ
Ｒ−１４１、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４４、ｍｉＲ−１４５
、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１４８ｂ、ｍｉＲ−１５０−５ｐ、ｍ
ｉＲ−１５ｂ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１８１ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１８５、ｍｉＲ−１８
８−５ｐ、ｍｉＲ−１９３ｂ、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−１９５−５ｐ、ｍｉＲ−１９７
、ｍｉＲ−１９８、ｍｉＲ−１９９ａ、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ、ｍ
ｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２００ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉ
Ｒ−２０２、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２０４−３ｐ、ｍｉＲ−２０５、ｍｉＲ−２０６
、ｍｉＲ−２０ａ、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｍｉＲ−２１１、ｍｉＲ−２１
２、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−２１７、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２１９−５ｐ、ｍｉＲ
−２２、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ−２９ａ、ｍｉＲ−
２９ｂ−１、ｍｉＲ−２９ｂ−２、ｍｉＲ−２９ｃ、ｍｉＲ−３０２ｂ、ｍｉＲ−３０２
ｃ、ｍｉＲ−３０ａ、ｍｉＲ−３０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３３８−３ｐ、
ｍｉＲ−３３ａ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３６５、ｍｉＲ−３７０、
ｍｉＲ−３７２、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−３７６ａ、ｍｉＲ−３７７、ｍｉＲ−４２２
ａ、ｍｉＲ−４２４、ｍｉＲ−４２４−５ｐ、ｍｉＲ−４３３、ｍｉＲ−４４５８、ｍｉ
Ｒ−４４８、ｍｉＲ−４５０ａ、ｍｉＲ−４５１、ｍｉＲ−４８５−５ｐ、ｍｉＲ−４８
６−５ｐ、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−５０３、ｍｉＲ−５０６、ｍｉＲ−５１９ｄ、ｍｉ
Ｒ−５２０ａ、ｍｉＲ−５２０ｂ、ｍｉＲ−５２０ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−５８２−５ｐ、ｍ
ｉＲ−５９０−５ｐ、ｍｉＲ−６１０、ｍｉＲ−６１２、ｍｉＲ−６２５、ｍｉＲ−６３
７、ｍｉＲ−６７５、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−８７７、ｍｉＲ−９４０、ｍｉＲ−９４１、
ｍｉＲ−９８、ｍｉＲ−９９ａ、ｍｉＲ−１３２及び／またはｍｉＲ−３１に対する標的
配列である、請求項１〜１２のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３７】
肝癌を治療するための請求項３６に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３８】
前記肝癌が肝細胞癌である、請求項３７に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３９】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺
伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−１２
６−３ｐ、ｍｉＲ−１２６−５ｐ、ｍｉＲ−１２６６−３ｐ、ｍｉＲ−６１３０、ｍｉＲ
−６０８０、ｍｉＲ−５１１−５ｐ、ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｍｉＲ−２２３−５ｐ、ｍ
ｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−４
５１ａ、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−１４４、ｍｉＲ−１５０−５ｐ、ｍｉＲ−１４
２−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍ
ｉＲ−１４５−３ｐ、ｍｉＲ−１４５−５ｐ、ｍｉＲ−１２９７、ｍｉＲ−１４１、ｍｉ
Ｒ−１４５、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２００ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、
ｍｉＲ−２９ｂ、ｍｉＲ−３８１、ｍｉＲ−４０９−３ｐ、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４
５１、ｍｉＲ−５１１、ｍｉＲ−９９ａ、ｌｅｔ−７ａ−１、ｌｅｔ−７ａ−２、ｌｅｔ
−７ａ−３、ｌｅｔ−７ｂ、ｌｅｔ−７ｃ、ｌｅｔ−７ｄ、ｌｅｔ−７ｅ、ｌｅｔ−７ｆ
−１、ｌｅｔ−７ｆ−２、ｌｅｔ−７ｇ、ｌｅｔ−７ｉ、ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１０１、
ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−１４４、ｍｉＲ−
１４６９、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５３、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１５ｂ、ｍｉ
Ｒ−１６−１、ｍｉＲ−１６−２、ｍｉＲ−１８２、ｍｉＲ−１９２、ｍｉＲ−１９３ａ
−３ｐ、ｍｉＲ−１９４、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−１９８、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−
２１７、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２２、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２
６ｂ、ｍｉＲ−２９ｃ、ｍｉＲ−３３ａ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３
４ｃ、ｍｉＲ−３６５、ｍｉＲ−４４９ａ、ｍｉＲ−４４９ｂ、ｍｉＲ−４８６−５ｐ、
ｍｉＲ−５４５、ｍｉＲ−６１０、ｍｉＲ−６１４、ｍｉＲ−６３０、ｍｉＲ−６６０、
ｍｉＲ−７５１５、ｍｉＲ−９５００、ｍｉＲ−９８、ｍｉＲ−９９ｂ、ｍｉＲ−１３３
ａ、ｌｅｔ−７ａ、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０６ａ、ｍｉＲ−１０７、ｍｉＲ−１２
４、ｍｉＲ−１２５ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１２
６＊、ｍｉＲ−１２９、ｍｉＲ−１３７、ｍｉＲ−１４０、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１
４６ｂ、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１４８ｂ、ｍｉＲ−１４９、ｍｉＲ−１５２、ｍｉ
Ｒ−１５４、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−１７−５ｐ、ｍｉＲ−１８１ａ−１、ｍｉＲ−１
８１ａ−２、ｍｉＲ−１８１ｂ、ｍｉＲ−１８１ｂ−１、ｍｉＲ−１８１ｂ−２、ｍｉＲ
−１８１ｃ、ｍｉＲ−１８１ｄ、ｍｉＲ−１８４、ｍｉＲ−１８６、ｍｉＲ−１９３ｂ、
ｍｉＲ−１９９ａ、ｍｉＲ−２０４、ｍｉＲ−２１２、ｍｉＲ−２２１、ｍｉＲ−２２４
、ｍｉＲ−２７ａ、ｍｉＲ−２７ｂ、ｍｉＲ−２９ａ、ｍｉＲ−３０ａ、ｍｉＲ−３０ｂ
、ｍｉＲ−３０ｃ、ｍｉＲ−３０ｄ、ｍｉＲ−３０ｄ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ｅ−５ｐ、ｍ
ｉＲ−３２、ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３３８−３ｐ、ｍｉＲ−３４０、ｍｉＲ−３４２
−３ｐ、ｍｉＲ−３６１−３ｐ、ｍｉＲ−３７３、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−４５００、
ｍｉＲ−４７８２−３ｐ、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−５０３、ｍｉＲ−５１２−３ｐ、ｍ
ｉＲ−５２０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−５２６ｂ、ｍｉＲ−６２５＊及び／またはｍｉＲ−９６
に対する標的配列である、請求項１〜１２のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４０】
肺癌を治療するための請求項３９に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４１】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺
伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ−７ｂ、ｍｉＲ−１０１、ｍｉ
Ｒ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２８０、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１４６
ｂ、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−１７、ｍｉＲ−１８４、ｍｉＲ−１８５、ｍｉＲ−１８ｂ
、ｍｉＲ−１９３ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２０４、ｍｉＲ−２
０５、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２０ａ、ｍｉＲ−２１１、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２
６ａ、ｍｉＲ−３１、ｍｉＲ−３３ａ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−３７
６ａ、ｍｉＲ−３７６ｃ、ｍｉＲ−５７３、ｍｉＲ−７−５ｐ、ｍｉＲ−９及び／または
ｍｉＲ−９８に対する標的配列である、請求項１〜１２のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウ
イルス。
【請求項４２】
黒色腫を治療するための請求項４１に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４３】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺
伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ−７ｄ、ｍｉＲ−２１８、ｍｉ
Ｒ−３４ａ、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−４９４、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１２４、ｍｉ
Ｒ−１２５０、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１２７１、ｍｉＲ−１３６
、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４７、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１８
１ａ、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２２０ａ、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ−
２９ａ、ｍｉＲ−３２、ｍｉＲ−３２３−５ｐ、ｍｉＲ−３２９、ｍｉＲ−３３８、ｍｉ
Ｒ−３７０、ｍｉＲ−４１０、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４３３、ｍｉＲ−４９９ａ−５
ｐ、ｍｉＲ−５０３、ｍｉＲ−５０６、ｍｉＲ−６３２、ｍｉＲ−６４６、ｍｉＲ−６６
８、ｍｉＲ−８７７及び／またはｍｉＲ−９に対する標的配列である、請求項１〜１２の
いずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４４】
口腔癌を治療するための請求項４３に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４５】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺
伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ−７ｉ、ｍｉＲ−１００、ｍｉ
Ｒ−１２４、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２９−５ｐ、ｍｉＲ−１３０ｂ、ｍｉＲ−１
３３ａ、ｍｉＲ−１３７、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１４１、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−
１４８ａ、ｍｉＲ−１５２、ｍｉＲ−１５３、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−１９９ａ、ｍｉ
Ｒ−２００ａ、ｍｉＲ−２００ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２１２、ｍｉＲ−３３５
、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−４０９−３ｐ、ｍｉＲ−
４１１、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４３２、ｍｉＲ−４４９ａ、ｍｉＲ−４９４、ｍｉＲ
−４９７、ｍｉＲ−４９８、ｍｉＲ−５１９ｄ、ｍｉＲ−６５５、ｍｉＲ−９、ｍｉＲ−
９８、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−５３２−５ｐ、ｍｉＲ−１２４ａ、ｍｉＲ−１９２、ｍ
ｉＲ−１９３ａ及び／またはｍｉＲ−７に対する標的配列である、請求項１〜１２のいず
れかに記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４６】
卵巣癌を治療するための請求項４５に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４７】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺
伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−２１６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−８
０２、ｍｉＲ−２１７、ｍｉＲ−１４５−３ｐ、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−４５１
ａ、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｍｉＲ−２１６ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−４３２
−５ｐ、ｍｉＲ−２１６ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、
ｍｉＲ−１３６−３ｐ、ｍｉＲ−２１６ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１３６−５ｐ、ｍｉＲ−１４
５−５ｐ、ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ−３ｐ、
ｍｉＲ−５５９、ｍｉＲ−１２９−２−３ｐ、ｍｉＲ−４５０７、ｍｉＲ−１−３ｐ、ｍ
ｉＲ−１４８ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１１８１、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−
１２４７、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１４１、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍ
ｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１４８ｂ、ｍｉＲ−１５０＊、ｍｉＲ−１５０−５ｐ、ｍｉＲ
−１５２、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１９８、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ
−２１６ａ、ｍｉＲ−２９ｃ、ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉ
Ｒ−３４ｃ、ｍｉＲ−３７３、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−４１０、ｍｉＲ−４９７、ｍｉ
Ｒ−６１５−５ｐ、ｍｉＲ−６３０、ｍｉＲ−９６、ｍｉＲ−１３２、ｌｅｔ−７ａ、ｌ
ｅｔ−７ａ−１、ｌｅｔ−７ａ−２、ｌｅｔ−７ａ−３、ｌｅｔ−７ｂ、ｌｅｔ−７ｃ、
ｌｅｔ−７ｄ、ｌｅｔ−７ｅ、ｌｅｔ−７ｆ−１、ｌｅｔ−７ｆ−２、ｌｅｔ−７ｇ、ｌ
ｅｔ−７ｉ、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１３５ａ、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４４、ｍ
ｉＲ−１５０、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２００ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ
、ｍｉＲ−２１７、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−３３７、ｍｉＲ−４９４及び／またはｍｉ
Ｒ−９８に対する標的配列である、請求項１〜１２のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイル
ス。
【請求項４８】
膵癌を治療するための請求項４７に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４９】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺
伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ−７ａ−３ｐ、ｌｅｔ−７ｃ、
ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１０５、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２８、
ｍｉＲ−１２９６、ｍｉＲ−１３０ｂ、ｍｉＲ−１３３ａ−１、ｍｉＲ−１３３ａ−２、
ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１３５ａ、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４
６ａ、ｍｉＲ−１５４、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１８７、ｍｉＲ−１８８−５ｐ、ｍｉ
Ｒ−１９９ｂ、ｍｉＲ−２００ｂ、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２０５、ｍｉＲ−２１２、
ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２２１、ｍｉＲ−２２４、ｍｉＲ−２３ａ、ｍｉＲ−２３ｂ、
ｍｉＲ−２５、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ−２９ｂ、ｍｉＲ−３０２ａ、
ｍｉＲ−３０ａ、ｍｉＲ−３０ｂ、ｍｉＲ−３０ｃ−１、ｍｉＲ−３０ｃ−２、ｍｉＲ−
３０ｄ、ｍｉＲ−３０ｅ、ｍｉＲ−３１、ｍｉＲ−３３０、ｍｉＲ−３３１−３ｐ、ｍｉ
Ｒ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−３７４ｂ、ｍｉＲ−４４９ａ、
ｍｉＲ−４７２３−５ｐ、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−６２８−５ｐ、ｍｉＲ−６４２ａ−
５ｐ、ｍｉＲ−７６５及び／またはｍｉＲ−９４０に対する標的配列である、請求項１〜
１２のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項５０】
前立腺癌を治療するための請求項４９に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項５１】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺
伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１８３、ｍ
ｉＲ−２０４、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３６５ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−４８６−３ｐ及び／
またはｍｉＲ−５３２−５ｐに対する標的配列である、請求項１〜１２のいずれかに記載
の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項５２】
網膜芽細胞腫を治療するための請求項５１に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項５３】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ
−１２６４、ｍｉＲ−４４８、ｍｉＲ−１２９８−５ｐ、ｍｉＲ−４９０−５ｐ、ｍｉＲ
−１３８−２−３ｐ、ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｍｉＲ−１４４−５ｐ、ｍｉＲ−１５０−
５ｐ、ｍｉＲ−１２９−１−３ｐ、ｍｉＲ−５５９、ｍｉＲ−１−３−ｐ、ｍｉＲ−１４
３−５ｐ、ｍｉＲ−２２３−３ｐ、ｍｉＲ−３９４３、ｍｉＲ−３３８−３ｐ、ｍｉＲ−
１２４−３ｐ、ｍｉＲ−２１９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２１９ａ−２−３ｐ、ｍｉＲ−４５１
ａ、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−１３３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１４５−５ｐ及び／また
はｍｉＲ−１４５−３ｐに対する標的配列である、請求項１〜１２のいずれかに記載の腫
瘍溶解性ウイルス。
【請求項５４】
膠芽腫を治療するための請求項５３に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項５５】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−２２３−３ｐ、ｍ
ｉＲ−６０８０、ｍｉＲ−２０８ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−１３３ａ−５ｐ、
ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１４５
−３ｐ、ｍｉＲ−１４５−５ｐ、ｍｉＲ−１５０−５ｐ、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ
−１４４−３ｐ、ｍｉＲ−１４４−５ｐ、ｍｉＲ−３３８−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−３ｐ
、ｍｉＲ−５５９、ｍｉＲ−１３３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１−３ｐ、ｍｉＲ−１２６−３ｐ
、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ及び／またはｍｉ
Ｒ−１９９ｂ−３ｐに対する標的配列である、請求項１〜１２のいずれかに記載の腫瘍溶
解性ウイルス。
【請求項５６】
頭頸部癌を治療するための請求項５５に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項５７】
前記腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列が、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−２０８ｂ−３ｐ、ｍｉ
Ｒ−６１３０、ｍｉＲ−１４１−５ｐ、ｍｉＲ−３１−３ｐ、ｍｉＲ−１２９３、ｍｉＲ
−１２９−２−３ｐ、ｍｉＲ−１２９−５ｐ、ｍｉＲ−１２４−３ｐ、ｍｉＲ−２１９ａ
−５ｐ、ｍｉＲ−２１９ａ−２−３ｐ、ｍｉＲ−４９０−３ｐ、ｍｉＲ−４８８−３ｐ、
ｍｉＲ−９３５、ｍｉＲ−１２４−５ｐ、ｍｉＲ−１２２−３ｐ、ｍｉＲ−１２２−５ｐ
、ｍｉＲ−１−３ｐ、ｍｉＲ−１３３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−１４１−３ｐ
、ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｍｉＲ−２０５−５ｐ、ｍｉＲ−２００ｃ−３ｐ及び／またはｍ
ｉＲ−２０３ａ−３ｐに対する標的配列である、請求項１〜１２のいずれかに記載の腫瘍
溶解性ウイルス。
【請求項５８】
シュワン腫を治療するための請求項５７に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項５９】
（ａ）ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入された
１つ以上の腫瘍抑制性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）標的配列、
（ｂ）１つ以上のタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードする１つ以上のポリ
ヌクレオチドであって、前記タンパク質もしくはオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ、遺伝子
もしくはＴＩＭＰの発現を減少させるか、その機能を抑制する、前記ポリヌクレオチド、
（ｃ）少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体、及び／または
（ｄ）少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体をコードするポリヌクレオチドのうち
の１つ以上を含む、組み換え腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項６０】
（ｂ）の前記ｍｉＲが、がん促進性ｍｉＲまたは微小環境リモデリングｍｉＲである、
請求項５９に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項６１】
前記がん促進性ｍｉＲが、表４に列挙されるｍｉＲから選択される、請求項６０に記載
の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項６２】
（ｂ）の前記遺伝子が、がん遺伝子である、請求項５９に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項６３】
前記がん遺伝子が、表７に列挙される遺伝子から選択される、請求項６２に記載の腫瘍
溶解性ウイルス。
【請求項６４】
前記微小環境リモデリングｍｉＲが、表５に列挙されるｍｉＲから選択される、請求項
６０に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項６５】
（ｂ）の前記ＴＩＭＰが、ＴＩＭＰ１、ＴＩＭＰ２、ＴＩＭＰ３及びＴＩＭＰ４から選
択される、請求項５９に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項６６】
（ｂ）の前記オリゴヌクレオチドが、ｓｈＲＮＡまたはデコイオリゴヌクレオチドであ
る、請求項５９に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項６７】
（ｂ）の前記タンパク質が、ヌクレアーゼ、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴ
Ｅ）、抗免疫抑制タンパク質または免疫原性抗原である、請求項５９に記載の腫瘍溶解性
ウイルス。
【請求項６８】
前記ヌクレアーゼが、クラスター化された規則的な間隔のある短い回文の繰り返し配列
（ＣＲＩＳＰＲ）関連エンドヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）ま
たは転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）から選択される、請求項
６７に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項６９】
前記ＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼが、ＳｐＣａｓ９、ＳｐＣａｓ９−ＨＦ１、
ＳｐＣａｓ９−ＨＦ２、ＳｐＣａｓ９−ＨＦ３、ＳｐＣａｓ９−ＨＦ４、ＳａＣａｓ９、
ＦｎＣｐｆ、ＦｎＣａｓ９、ｅＳｐＣａｓ９、Ｃ２Ｃ１、Ｃ２Ｃ３、Ｃｐｆ１、Ｃａｓ１
、Ｃａｓ１Ｂ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ
８、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１０、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓ
ｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓ
ｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓ
ｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ
１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３及びＣｓｆ４から選択される、請求項６
８に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項７０】
ｔｒａｃｒ−ＲＮＡ（ｔｒＲＮＡ）及びｃｒｉｓｐｒ−ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）をコード
する非相同ポリヌクレオチドを更に含み、前記ｃｒＲＮＡは、ｍｉＲまたはＴＩＭＰをコ
ードするゲノムＤＮＡ配列を標的にし、前記ｔｒＲＮＡは、ＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌク
レアーゼの結合及び活性化を促進する、請求項６９に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項７１】
前記抗免疫抑制タンパク質が、抗制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）タンパク質または抗骨髄由
来抑制細胞（ＭＤＳＣ）タンパク質である、請求項６７に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項７２】
前記抗免疫抑制タンパク質が、ＶＨＨ由来遮断剤またはＶＨＨ由来ＢｉＴＥである、請
求項６７に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項７３】
（ｂ）の前記タンパク質が、抗腫瘍免疫応答を誘導する、請求項５９に記載の腫瘍溶解
性ウイルス。
【請求項７４】
前記タンパク質が、ＥｐＣＡＭ、葉酸、ＩＦＮβ、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ１、Ａ２Ａ
、抗ＦＧＦ２、抗ＦＧＦＲ／ＦＧＦＲ２ｂ、抗ＳＥＭＡ４Ｄ、ＣＣＬ５、ＣＤ１３７、Ｃ
Ｄ２００、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１３、エンドセ
リンＢ型受容体、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２、ＩＬ−２１、ＩＬ−３５、ＩＳＲ
Ｅ７、ＬＦＡ−１、ＮＧ２（ＳＰＥＧ４としても知られる）、ＳＭＡＤタンパク質、ＳＴ
ＩＮＧ、ＴＧＦβ及びＶＣＡＭ１から選択される、請求項７３に記載の腫瘍溶解性ウイル
ス。
【請求項７５】
（ｃ）または（ｄ）の前記少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体が、ウイルス糖タ
ンパク質エンベロープに組み込まれる、請求項５９に記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項７６】
前記プロテアーゼ活性化抗体が、システインカテプシン、アスパラギン酸カテプシン、
カリクレイン（ｈＫ）、セリンプロテアーゼ、カスパーゼ、マトリックスメタロプロテア
ーゼ（ＭＭＰ）及びディスインテグリンメタロプロテアーゼ（ＡＤＡＭ）から選択される
プロテアーゼによって活性化される、請求項５９または７５に記載の腫瘍溶解性ウイルス
。
【請求項７７】
前記プロテアーゼが、カテプシンＫ、カテプシンＢ、カテプシンＬ、カテプシンＥ、カ
テプシンＤ、ｈＫ１、ＰＳＡ（ｈＫ３）、ｈＫ１０、ｈＫ１５、ｕＰＡ、ｕＰＡＲ、ＭＭ
Ｐ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０
、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−
１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭ
Ｐ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２
７、ＭＭＰ−２８または表６に列挙されるプロテアーゼから選択される、請求項７６に記
載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項７８】
前記プロテアーゼ活性化抗体が、非がん細胞または非がん微小環境よりもがん細胞また
はがん微小環境で高度に発現されるタンパク質に結合する、請求項５９または７５に記載
の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項７９】
前記プロテアーゼ活性化抗体が、ＮＫＧ２Ｄ、ｃ−ｍｅｔ、ＨＧＦＲ、ＣＤ８、ヘパラ
ン硫酸、ＶＳＰＧ４（ＮＧ２としても知られる）、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１
３３、ＣＸＣＲ４、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＬＣ−３、アネキシンＩＩ、ヒトトラ
ンスフェリン受容体またはＥｐＣＡＭに結合する、請求項７８に記載の腫瘍溶解性ウイル
ス。
【請求項８０】
（ａ）の前記ｍｉＲ標的配列、（ｂ）の前記１つ以上のポリヌクレオチド及び／または
（ｄ）の前記１つ以上のポリヌクレオチドが、前記ウイルスゲノムの遺伝子座に挿入され
る、請求項５９〜７９のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項８１】
前記ウイルスが、単純ヘルペスウイルスであり、前記少なくとも１つのポリヌクレオチ
ドが、内部反復接合領域（二倍体遺伝子ＩＣＰ０、ＩＣＰ３４．５、ＬＡＴ、ＩＣＰ４及
びＩＣＰ４７プロモーターのそれぞれを１コピー含む）、ＩＣＰ０、ＬＡＴ、ＵＬ１、Ｕ
Ｌ５、ＵＬ６、ＵＬ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１１、ＵＬ１２、ＵＬ１４、ＵＬ１５、Ｕ
Ｌ１７、ＵＬ１８、ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ２２、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２６．５
、ＵＬ２７、ＵＬ２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４
、ＵＬ３５、ＵＬ３６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、ＵＬ３９、ＵＬ４０、ＵＬ４２、ＵＬ４８
、ＵＬ４９、ＵＬ５２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、ＩＣＰ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ
２７、ＩＣＰ４７、γ−３４．５、ＵＳ３、ＵＳ４、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ８、
ＵＳ９、ＵＳ１０、ＵＳ１１及びＵＳ１２からなる群から選択される１つ以上のウイルス
遺伝子座に挿入されるか、これらの遺伝子座の間に挿入される、請求項８０に記載の腫瘍
溶解性ウイルス。
【請求項８２】
先行請求項のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルスをコードする、核酸分子。
【請求項８３】
請求項１〜８１のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルスを含む、ウイルスストック。
【請求項８４】
請求項１〜８１のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルスと、薬学的に許容される担体と
を含む、組成物。
【請求項８５】
がん性細胞を殺傷する方法であって、請求項１〜８１のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウ
イルスまたはその組成物に対して、前記がん性細胞を、前記腫瘍溶解性ウイルスが前記が
ん性細胞に感染し、前記がん性細胞内で複製するのに十分な条件下で曝露することを含み
、前記がん性細胞内における前記腫瘍溶解性ウイルスの複製が細胞死をもたらす、前記方
法。
【請求項８６】
前記がん性細胞は、前記１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列に結合することができる
腫瘍抑制性ｍｉＲの発現が、非がん性細胞における前記腫瘍抑制性ｍｉＲの発現と比較し
て低下している、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記がん性細胞における前記腫瘍抑制性ｍｉＲの発現レベルが、前記非がん性細胞にお
ける前記腫瘍抑制性ｍｉＲの発現レベルよりも少なくとも５％低い、請求項８６に記載の
腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項８８】
前記腫瘍溶解性ウイルスの複製が、前記１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列に結合す
ることができる前記腫瘍抑制性ｍｉＲの発現の低いがん性細胞において、増加または維持
される、請求項８５〜８７のいずれかに記載の方法。
【請求項８９】
前記ウイルス複製が、前記非がん性細胞における前記ウイルス複製と比較して、前記が
ん性細胞において少なくとも５％多い、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記細胞がｉｎ  ｖｉｖｏである、請求項８５〜８９のいずれかに記載の方法。
【請求項９１】
前記細胞が腫瘍内にある、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
請求項１〜８１のいずれかに記載の腫瘍溶解性ウイルスまたはその組成物を対象に投与
することを含む、がんの治療を必要とする前記対象において、がんを治療する方法。
【請求項９３】
前記対象が、マウス、ラット、ウサギ、ネコ、イヌ、ウマ、非ヒト霊長類またはヒトで
ある、請求項８５〜９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
前記腫瘍溶解性ウイルスまたはその組成物が、静脈内、皮下、腫瘍内、筋肉内、または
鼻腔内投与される、請求項９２または９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記がんが、肺癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、前立腺癌、精巣癌、大腸癌、結腸癌、膵
癌、肝癌、胃癌、頭頸部癌、甲状腺癌、悪性神経膠腫、膠芽腫、黒色腫、Ｂ細胞慢性リン
パ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）及び辺縁帯リンパ腫（Ｍ
ＺＬ）から選択される、請求項９２に記載の方法。
【請求項９６】
前記肺癌が、小細胞肺癌または非小細胞肺癌である、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記肝癌が、肝細胞癌（ＨＣＣ）である、請求項９６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年１月２７日に出願された米国特許仮出願第６２／２８７，６１９
号の優先権を主張するものであり、その内容全体は、参照により本明細書に援用される。
【０００２】
配列表に関する記述
本出願に関連する配列表は、紙媒体の代わりにテキスト形式で提供され、参照により本
明細書に援用される。配列表を含むテキストファイルの名称は、ＯＮＣＲ＿００１＿０１
ＷＯ＿ＳＴ２．ｔｘｔである。テキストファイルは、７ＫＢであり、２０１７年１月２６
日に作成され、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子提出された。
【０００３】
発明の分野
本開示は、がんの治療及び予防のための組み換えウイルスベクターに関する。ウイルス
ベクターは、次の側面：腫瘍抑制性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）標的配列をウイルスゲ
ノムに挿入することによるウイルス複製制限、がん促進性ｍｉＲＮＡ機能の破壊、がん微
小環境リモデリング、及び／またはプロテアーゼ活性化抗体をウイルス粒子に組み込むこ
とによるがん細胞標的化のうちの１つ以上を利用する。
【背景技術】
【０００４】
現在の標的化がん治療薬は、腫瘍タンパク質発現プロファイルの不均質性に起因して、
狭い範囲のがんにのみ有効である。更に、多くのがん治療は、既存のウイルスベクター、
化学療法、放射線及び手術を含め、正常な非がん性細胞の健康及び生存を維持しながらが
ん性細胞を選択的に治療するには、特異性に欠け、望ましくないオフターゲット効果を生
じることがある。そのため、複数のがんに広く有効であり、がん性細胞を選択的に排除す
ることができるがん治療法が当該技術分野において求められている。
【０００５】
腫瘍溶解性ウイルスは、がん細胞に優先的に感染するウイルスであり、複数のがん治療
前臨床試験及び臨床試験に使用されている。腫瘍溶解性ウイルスの使用は、健康な細胞が
非特異的にウイルス感染するリスクを伴い、非がん性細胞及び組織の死をもたらす。しか
し、正常組織とがん性組織で差次的に発現する経路、タンパク質及び遺伝子を利用するよ
うにウイルスを遺伝子操作することで、これらのウイルスの特異性を高め、オフターゲッ
ト感染及び細胞死を制限することができる。
【０００６】
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲ）は、その標的メッセンジャーＲＮＡに向か
い、分解または翻訳抑制を行うことによって遺伝子発現を制御する、内因性の小さなノン
コーディングＲＮＡである。ｍｉＲＮＡは、正常な細胞プロセスと密接に関係しているた
め、ｍｉＲＮＡの制御異常は、がんを含む広範な疾患の一因となる。多くのｍｉＲＮＡ遺
伝子は、がん関連ゲノム領域または脆弱部位に位置しており、ｍｉＲＮＡががんにおいて
中心的役割を果たすという証拠を更に強めている。ｍｉＲＮＡは、正常組織と比較してが
ん組織で差次的に発現し、腫瘍形成との因果関係を有し得る。この異なる腫瘍種での差次
的ｍｉＲＮＡ発現を利用することによって、本明細書に記載されるがん治療は、腫瘍溶解
性ウイルスの複製が特定のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ群の発現に基づいて制御されてお
り、広範囲の安全性及び有効プロファイルを有する。更に、本明細書に記載される腫瘍溶
解性ウイルスはまた、腫瘍全体にわたるウイルス伝播を促進するタンパク質、例えば、細
胞外マトリックスを制御する遺伝子及びタンパク質の発現を変更させるタンパク質などを
発現し得、これによって、その治療効果が増大し得る。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、がんの治療及び予防に有用な組み換えウイルスベクターに関する。腫瘍溶解
性ウイルスベクターは、次の側面：腫瘍抑制性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）標的配列をウイ
ルスゲノムに挿入することによって、ウイルスベクター複製をがん細胞または腫瘍細胞に
制限すること、１つ以上の遺伝子であって、その産物（複数可）ががん促進性ｍｉＲＮＡ
及び／またはがん細胞外マトリックスの機能を破壊する、１つ以上の遺伝子をウイルスゲ
ノムに組み込むこと、ならびにプロテアーゼ活性化抗体をウイルス粒子に組み込むことに
よって、ベクターをがん／腫瘍細胞に対して高度に選択的に標的化することを、個別にま
たは組み合わせて含む。
【０００８】
いくつかの実施形態において、本発明は、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイ
ルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上の腫瘍抑制性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）標的
配列のコピーを１つ以上含む、組み換え腫瘍溶解性ウイルスを提供する。いくつかの実施
形態において、ウイルスは、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、ポリオウイルス、
ワクシニアウイルス、麻疹ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、オルトミクソウイルス、パ
ルボウイルス、マラバウイルスまたはコクサッキーウイルスである。いくつかの実施形態
において、ウイルスは、単純ヘルペスウイルスであり、ウイルス複製に必要とされる１つ
以上のウイルス遺伝子は、ＵＬ１、ＵＬ５、ＵＬ６、ＵＬ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１１
、ＵＬ１２、ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１７、ＵＬ１８、ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ２２
、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２６．５、ＵＬ２７、ＵＬ２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ
３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３５、ＵＬ３６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、ＵＬ
３９、ＵＬ４０、ＵＬ４２、ＵＬ４８、ＵＬ４９、ＵＬ５２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、ＩＣ
Ｐ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、γ−３４．５、ＵＳ３、ＵＳ４
、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ８、ＵＳ９、ＵＳ１０、ＵＳ１１及びＵＳ１２からなる
群から選択される。いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、表３か
ら選択されるｍｉＲの標的配列である。いくつかの実施形態において、１つ以上の腫瘍抑
制性ｍｉＲ標的配列は、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺伝子の５’非
翻訳領域（ＵＴＲ）または３’ＵＴＲに組み込まれる。
【０００９】
いくつかの実施形態において、本発明は、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイ
ルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上の腫瘍抑制性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）標的
配列のコピーを１つ以上含む、組み換え腫瘍溶解性ウイルスであって、ウイルスの複製は
、第２の細胞におけるウイルスの複製と比較して、第１の細胞において減少または減衰す
る、組み換え腫瘍溶解性ウイルスを提供する。いくつかの実施形態において、第１の細胞
は、１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列に結合することができる腫瘍抑制性ｍｉＲの発
現が、第２の細胞における腫瘍抑制性ｍｉＲの発現と比較して上昇している。いくつかの
実施形態において、第１の細胞における腫瘍抑制性ｍｉＲの発現レベルは、第２の細胞に
おける腫瘍抑制性ｍｉＲの発現レベルよりも少なくとも５％高い。いくつかの実施形態に
おいて、第２の細胞は、１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列に結合することができる腫
瘍抑制性ｍｉＲの発現が、第１の細胞における腫瘍抑制性ｍｉＲの発現と比較して低下し
ている。いくつかの実施形態において、第２の細胞における腫瘍抑制性ｍｉＲの発現レベ
ルは、第１の細胞における腫瘍抑制性ｍｉＲの発現レベルよりも少なくとも５％低い。い
くつかの実施形態において、第２の細胞は、がん性細胞である。
【００１０】
いくつかの実施形態において、本発明は、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイ
ルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上の腫瘍抑制性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）標的
配列のコピーを１つ以上含む、組み換え腫瘍溶解性ウイルスであって、腫瘍抑制性ｍｉＲ
標的配列は、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−１４３−３ｐ及びｍｉＲ−５
５９に対するものである、組み換え腫瘍溶解性ウイルスを提供する。更なる実施形態にお
いて、腫瘍溶解性ウイルスは、膵癌、肺癌及び／または結腸癌の治療に使用される。いく
つかの実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−４５１、ｍ
ｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−１及びｍｉＲ−５５９に対する腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列
を含む。いくつかの実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ
−４５１、ｍｉＲ−１４５−５ｐ及びｍｉＲ−５５９に対する腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列
を含む。更なる実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、任意のがん種に由来する腫瘍
の治療に使用される。いくつかの実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、ｍｉＲ−２
０５ｐ、ｍｉＲ−１４１−５ｐ、ｍｉＲ−３１−５ｐ及びｍｉＲ−１２４に対する腫瘍抑
制性ｍｉＲ標的配列を含む。更なる実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、シュワン
腫の治療に使用される。更なる実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ＩＣＰ
４、ＩＣＰ２７、ＵＬ１９及び／またはＵＬ３０遺伝子座に挿入される。
【００１１】
いくつかの実施形態において、本発明は、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイ
ルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上の腫瘍抑制性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）標的
配列のコピーを１つ以上含む、組み換え腫瘍溶解性ウイルスであって、腫瘍抑制性ｍｉＲ
標的配列は、ｍｉＲ−１３６−３ｐ、ｍｉＲ−４３２−５ｐ、ｍｉＲ−１−３ｐ、ｍｉＲ
−１２７−３ｐ、ｍｉＲ−３７９−５ｐ、ｍｉＲ−４９３−５ｐ、ｍｉＲ−２２３−５ｐ
、ｍｉＲ−２２３−５ｐ、ｍｉＲ−１３６−５ｐ、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−４８７ｂ
−３ｐ、ｍｉＲ−３７０−３ｐ、ｍｉＲ−４１０−３ｐ、ｍｉＲ−４３１−３ｐ、ｍｉＲ
−４４８５−３ｐ、ｍｉＲ−４４８５−５ｐ、ｍｉＲ−１２７−５ｐ、ｍｉＲ−４０９−
３ｐ、ｍｉＲ−３３８−３ｐ、ｍｉＲ−５５９、ｍｉＲ−４１１−５ｐ、ｍｉＲ−１３３
ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−３７６ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−７５８−３ｐ、ｍ
ｉＲ−１、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１１８０、ｍｉＲ−１２３６、ｍｉＲ−１２４−３
ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１２８０、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ
−１３３ｂ、ｍｉＲ−１４１、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４４、ｍｉＲ−１４５、ｍｉ
Ｒ−１５５、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１８ａ、ｍｉＲ−１９２、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ
−２００ａ、ｍｉＲ−２００ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２０５、
ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２３ｂ、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２９ｃ、
ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３７０、ｍｉＲ−４０９−３ｐ、ｍｉＲ−
４２９、ｍｉＲ−４５１ｂ、ｍｉＲ−４９０−５ｐ、ｍｉＲ−４９３、ｍｉＲ−５７６−
３ｐ及び／またはｍｉＲ−９９ａに対する標的配列である、組み換え腫瘍溶解性ウイルス
を提供する。更なる実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、膀胱癌を治療するために
使用される。
【００１２】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ｍｉＲ−１２５１−５ｐ
、ｍｉＲ−２１９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２１９ａ−２−３ｐ、ｍｉＲ−１２４−３ｐ、ｍｉ
Ｒ−４４８、ｍｉＲ−１３８−２−３ｐ、ｍｉＲ−４９０−５ｐ、ｍｉＲ−１２９−１−
３ｐ、ｍｉＲ−１２６４、ｍｉＲ−３９４３、ｍｉＲ−４９０−３ｐ、ｍｉＲ−３８３−
５ｐ、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１２９−２−３ｐ、ｍｉＲ−１２８−２−５ｐ、ｍｉ
Ｒ−１３３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１２９−５ｐ、ｍｉＲ−１−３ｐ、ｍｉＲ−８８５−３ｐ
、ｍｉＲ−１２４−５ｐ、ｍｉＲ−７５９、ｍｉＲ−７１５８−３ｐ、ｍｉＲ−７７０−
５ｐ、ｍｉＲ−１３５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−８８５−５ｐ、ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｍｉＲ−
１００、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１０６ａ、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２４ａ、ｍｉ
Ｒ−１２５ａ、ｍｉＲ−１２５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｍ
ｉＲ−１２８、ｍｉＲ−１２９、ｍｉＲ−１３６、ｍｉＲ−１３７、ｍｉＲ−１３９−５
ｐ、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４６ｂ−５ｐ
、ｍｉＲ−１４９、ｍｉＲ−１５２、ｍｉＲ−１５３、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−２１、
ｍｉＲ−２１２−３ｐ、ｍｉＲ−２１９−５ｐ、ｍｉＲ−２２２、ｍｉＲ−２９ｂ、ｍｉ
Ｒ−３１、ｍｉＲ−３１８９−３ｐ、ｍｉＲ−３２０、ｍｉＲ−３２０ａ、ｍｉＲ−３２
６、ｍｉＲ−３３０、ｍｉＲ−３３１−３ｐ、ｍｉＲ−３４０、ｍｉＲ−３４２、ｍｉＲ
−３４ａ、ｍｉＲ−３７６ａ、ｍｉＲ−４４９ａ、ｍｉＲ−４８３−５ｐ、ｍｉＲ−５０
３、ｍｉＲ−５７７、ｍｉＲ−６６３、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−７−５ｐ、ｍｉＲ−８７３
、ｌｅｔ−７ａ、ｌｅｔ−７ｆ、ｍｉＲ−１０７、ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１２４−５
ｐ、ｍｉＲ−１３９、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５ｂ、ｍｉＲ−
１６、ｍｉＲ−１８１ａ、ｍｉＲ−１８１ａ−１、ｍｉＲ−１８１ａ−２、ｍｉＲ−１８
１ｂ、ｍｉＲ−１８１ｂ−１、ｍｉＲ−１８１ｂ−２、ｍｉＲ−１８１ｃ、ｍｉＲ−１８
１ｄ、ｍｉＲ−１８４、ｍｉＲ−１８５、ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２００ａ、
ｍｉＲ−２００ｂ、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２０４、ｍｉＲ−２０５、ｍｉＲ−２１８
、ｍｉＲ−２３ｂ、ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ−２７ａ、ｍｉＲ−２９ｃ、ｍｉＲ−３２８
、ｍｉＲ−３４ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−３４ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−３８３、ｍ
ｉＲ−４５１、ｍｉＲ−４５２、ｍｉＲ−４９５、ｍｉＲ−５８４、ｍｉＲ−６２２、ｍ
ｉＲ−６５６、ｍｉＲ−９８、ｍｉＲ−１２４−３ｐ、ｍｉＲ−１８１ｂ−５ｐ、ｍｉＲ
−２００ｂ及び／またはｍｉＲ−３１８９−３ｐに対する標的配列である。更なる実施形
態において、腫瘍溶解性ウイルスは、脳癌を治療するために使用される。
【００１３】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ｍｉＲ−１０ｂ−５ｐ、
ｍｉＲ−１２６−３ｐ、ｍｉＲ−１４５−３ｐ、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−１９９ｂ−
５ｐ、ｍｉＲ−５６８３、ｍｉＲ−３１９５、ｍｉＲ−３１８２、ｍｉＲ−１２７１−５
ｐ、ｍｉＲ−２０４−５ｐ、ｍｉＲ−４０９−５ｐ、ｍｉＲ−１３６−５ｐ、ｍｉＲ−５
１４ａ−５ｐ、ｍｉＲ−５５９、ｍｉＲ−４８３−３ｐ、ｍｉＲ−１−３ｐ、ｍｉＲ−６
０８０、ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｍｉＲ−１０ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−６１３０、ｍｉＲ−６
０８９、ｍｉＲ−２０３ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−４２６６、ｍｉＲ−４３２７、ｍｉＲ−５６
９４、ｍｉＲ−１９３ｂ、ｌｅｔ−７ａ、ｌｅｔ−７ａ−１、ｌｅｔ−７ａ−２、ｌｅｔ
−７ａ−３、ｌｅｔ−７ｂ、ｌｅｔ−７ｃ、ｌｅｔ−７ｄ、ｌｅｔ−７ｅ、ｌｅｔ−７ｆ
−１、ｌｅｔ−７ｆ−２、ｌｅｔ−７ｇ、ｌｅｔ−７ｉ、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０
７、ｍｉＲ−１０ａ、ｍｉＲ−１０ｂ、ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２
５８、ｍｉＲ−１２５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１２７、
ｍｉＲ−１２９、ｍｉＲ−１３０ａ、ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１４
３、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１４７、ｍｉＲ−
１４８ａ、ｍｉＲ−１４９、ｍｉＲ−１５２、ｍｉＲ−１５３、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ
−１６、ｍｉＲ−１７−５ｐ、ｍｉＲ−１８１ａ、ｍｉＲ−１８２６、ｍｉＲ−１８３、
ｍｉＲ−１８５、ｍｉＲ−１９１、ｍｉＲ−１９３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−
１９９ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２００ｂ、ｍｉＲ
−２００ｃ、ｍｉＲ−２０５、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２１１、ｍｉＲ−２１６ｂ、ｍ
ｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２２、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ−３００、ｍｉ
Ｒ−３０ａ、ｍｉＲ−３１、ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３３９−５ｐ、ｍｉＲ−３３ｂ、
ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−３７４ａ、ｍｉＲ−３７９
、ｍｉＲ−３８１、ｍｉＲ−３８３、ｍｉＲ−４２５、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４５０
ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−４９４、ｍｉＲ−４９５、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−５０２−５ｐ、
ｍｉＲ−５１７ａ、ｍｉＲ−５７４−３ｐ、ｍｉＲ−６３８、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−７２
０、ｍｉＲ−８７３、ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−９８、ｍｉＲ−９９ａ
、ｍｍｕ−ｍｉＲ−２９０−３ｐ及び／またはｍｍｕ−ｍｉＲ−２９０−５ｐに対する標
的配列である。更なる実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、乳癌を治療するために
使用される。
【００１４】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ
−１４５、ｍｉＲ−１７−５ｐ、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−２１８、ｍ
ｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３４２−３ｐ、ｍｉＲ−３７２、ｍｉＲ−４２４、ｍｉＲ−４９
１−５ｐ、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−９９ａ、ｍｉＲ−９９ｂ、ｍｉＲ−１
００、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−８８
６−５ｐ、ｍｉＲ−１０６ａ、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−２９ａ及び
／またはｍｉＲ−３７５に対する標的配列である。更なる実施形態において、腫瘍溶解性
ウイルスは、子宮頸癌を治療するために使用される。
【００１５】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ｍｉＲ−１３３ａ−５ｐ
、ｍｉＲ−４９０−５ｐ、ｍｉＲ−１２４−３ｐ、ｍｉＲ−１３７、ｍｉＲ−６５５−３
ｐ、ｍｉＲ−３７６ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−３６９−５ｐ、ｍｉＲ−４９０−３ｐ、ｍｉＲ−
４３２−５ｐ、ｍｉＲ−４８７ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−３４２−３ｐ、ｍｉＲ−２２３−３ｐ
、ｍｉＲ−１３６−３ｐ、ｍｉＲ−１３６−３ｐ、ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｍｉＲ−１−
３ｐ、ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ、ｍｉＲ
−１９９ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｍｉＲ−１３３ａ−３ｐ
、ｍｉＲ−１４５−５ｐ、ｍｉＲ−１４５−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｌｅｔ−７
ａ−１、ｌｅｔ−７ａ−２、ｌｅｔ−７ａ−３、ｌｅｔ−７ｂ、ｌｅｔ−７ｃ、ｌｅｔ−
７ｄ、ｌｅｔ−７ｅ、ｌｅｔ−７ｆ−１、ｌｅｔ−７ｆ−２、ｌｅｔ−７ｇ、ｌｅｔ−７
ｉ、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ
−１４３、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１９２、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ
−２１４、ｍｉＲ−２１５、ｍｉＲ−２２、ｍｉＲ−２５、ｍｉＲ−３０２ａ、ｍｉＲ−
３２０、ｍｉＲ−３２０ａ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−３６５、ｍｉＲ
−３７３、ｍｉＲ−４２４、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４５５、ｍｉＲ−４８４、ｍｉＲ
−５０２、ｍｉＲ−５０３、ｍｉＲ−９３、ｍｉＲ−９８、ｍｉＲ−１８６、ｍｉＲ−３
０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−６２７、ｌｅｔ−７ａ、ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１
２５ａ、ｍｉＲ−１２９、ｍｉＲ−１２９５ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１３０７、ｍｉＲ−１３
０ｂ、ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１３７、ｍｉＲ
−１３８、ｍｉＲ−１３９、ｍｉＲ−１３９−５ｐ、ｍｉＲ−１４０−５ｐ、ｍｉＲ−１
４８ａ、ｍｉＲ−１４８ｂ、ｍｉＲ−１４９、ｍｉＲ−１５０−５ｐ、ｍｉＲ−１５４、
ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１５ｂ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１８ａ、ｍｉＲ−１９１、ｍ
ｉＲ−１９３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１９４、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−１９６ａ、ｍｉＲ−
１９８、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２０４−５ｐ、ｍｉＲ−２
０６、ｍｉＲ−２１２、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２２４、ｍｉＲ−２４−３ｐ、ｍｉＲ
−２６ｂ、ｍｉＲ−２７ａ、ｍｉＲ−２８−３ｐ、ｍｉＲ−２８−５ｐ、ｍｉＲ−２９ｂ
、ｍｉＲ−３０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｂ、ｍｉＲ−３２８、ｍｉＲ−３３８−３ｐ、ｍ
ｉＲ−３４２、ｍｉＲ−３４５、ｍｉＲ−３４ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｍｉＲ
−３７５、ｍｉＲ−３７８、ｍｉＲ−３７８ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３７８ａ−５ｐ、ｍｉＲ
−４０９−３ｐ、ｍｉＲ−４２２ａ、ｍｉＲ−４４８７、ｍｉＲ−４８３、ｍｉＲ−４９
７、ｍｉＲ−４９８、ｍｉＲ−５１８ａ−３ｐ、ｍｉＲ−５５１ａ、ｍｉＲ−５７４−５
ｐ、ｍｉＲ−６２５、ｍｉＲ−６３８、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｍｉＲ−２０
２−３ｐ、ｍｉＲ−３０ａ及び／またはｍｉＲ−４５１に対する標的配列である。更なる
実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、結腸癌または大腸癌を治療するために使用さ
れる。
【００１６】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ウイルス複製に必要とさ
れる１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−１
０１、ｍｉＲ−１３０ａ、ｍｉＲ−１３０ｂ、ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ
−１４５、ｍｉＲ−１５２、ｍｉＲ−２０５、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−３０１ａ、ｍｉ
Ｒ−３０１ｂ、ｍｉＲ−３０ｃ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−４２４、ｍ
ｉＲ−４４９ａ、ｍｉＲ−５４３及び／またはｍｉＲ−３４ｂに対する標的配列である。
更なる実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、子宮内膜癌を治療するために使用され
る。
【００１７】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ウイルス複製に必要とさ
れる１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−１
２５ｂ、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１５ｂ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１
６−１、ｍｉＲ−１６−１−３ｐ、ｍｉＲ−１６−２、ｍｉＲ−１８１ａ、ｍｉＲ−１８
１ｂ、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−２９ｂ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３
４ｃ、ｍｉＲ−４２４、ｍｉＲ−１０ａ、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５０、ｍｉＲ−
１５１、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−２２７８、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−３０ｅ、ｍｉＲ
−３１、ｍｉＲ−３２６、ｍｉＲ−５６４、ｍｉＲ−２７ａ、ｌｅｔ−７ｂ、ｍｉＲ−１
２４ａ、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｌｅｔ−７ｃ、ｍｉＲ−１７、ｍｉＲ−２０ａ、ｍｉＲ
−２９ａ、ｍｉＲ−３０ｃ、ｍｉＲ−７２０、ｍｉＲ−１０７、ｍｉＲ−３４２、ｍｉＲ
−３４ａ、ｍｉＲ−２０２、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−２９ｃ、ｍｉＲ−１４５、
ｍｉＲ−１９３ｂ、ｍｉＲ−１９９ａ、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−２２、ｍｉＲ−１３７
及び／またはｍｉＲ−１９７に対する標的配列である。更なる実施形態において、腫瘍溶
解性ウイルスは、血液癌を治療するために使用される。
【００１８】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ウイルス複製に必要とさ
れる１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−１
、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１８２６、ｍｉＲ−１９９ａ、ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ、ｍ
ｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２０５、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−５０８−３ｐ、ｍｉＲ−５０
９−３ｐ、ｌｅｔ−７ａ、ｌｅｔ−７ｄ、ｍｉＲ−１０６ａ＊、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ
−１２８５、ｍｉＲ−１２９−３ｐ、ｍｉＲ−１２９１、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１
３５ａ、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１４１、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１８２−５ｐ、ｍ
ｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２８−５ｐ、ｍｉＲ−３０ａ、ｍｉＲ−３０
ｃ、ｍｉＲ−３０ｄ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３７８、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−５０
９−５ｐ、ｍｉＲ−６４６、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｌｅｔ−７ｂ、ｌｅｔ−７ｃ、ｍｉＲ−
２００ｃ、ｍｉＲ−２０４、ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３７７及び／またはｍｉＲ−５０
６に対する標的配列である。更なる実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、腎癌を治
療するために使用される。
【００１９】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ウイルス複製に必要とさ
れる１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ−７
ａ−１、ｌｅｔ−７ａ−２、ｌｅｔ−７ａ−３、ｌｅｔ−７ｂ、ｌｅｔ−７ｃ、ｌｅｔ−
７ｄ、ｌｅｔ−７ｅ、ｌｅｔ−７ｆ、ｌｅｔ−７ｆ−１、ｌｅｔ−７ｆ−２、ｌｅｔ−７
ｇ、ｌｅｔ−７ｉ、ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１０５、ｍ
ｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１２２ａ、ｍｉＲ−１２３６、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２５
ｂ、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１２７、ｍｉＲ−１２７１、ｍｉＲ−１２８−３ｐ、ｍｉ
Ｒ−１２９−５ｐ、ｍｉＲ−１３０ａ、ｍｉＲ−１３０ｂ、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−
１３４、ｍｉＲ−１３７、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１３９、ｍｉＲ−１３９−５ｐ、ｍ
ｉＲ−１４０−５ｐ、ｍｉＲ−１４１、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ
−１４４、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１４８ｂ、
ｍｉＲ−１５０−５ｐ、ｍｉＲ−１５ｂ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１８１ａ−５ｐ、ｍｉ
Ｒ−１８５、ｍｉＲ−１８８−５ｐ、ｍｉＲ−１９３ｂ、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−１９
５−５ｐ、ｍｉＲ−１９７、ｍｉＲ−１９８、ｍｉＲ−１９９ａ、ｍｉＲ−１９９ａ−５
ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ、ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２００ｂ
、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２０２、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２０４−３ｐ、ｍｉＲ
−２０５、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２０ａ、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｍｉ
Ｒ−２１１、ｍｉＲ−２１２、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−２１７、ｍｉＲ−２１８、ｍｉ
Ｒ−２１９−５ｐ、ｍｉＲ−２２、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２６ｂ、
ｍｉＲ−２９ａ、ｍｉＲ−２９ｂ−１、ｍｉＲ−２９ｂ−２、ｍｉＲ−２９ｃ、ｍｉＲ−
３０２ｂ、ｍｉＲ−３０２ｃ、ｍｉＲ−３０ａ、ｍｉＲ−３０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３３５
、ｍｉＲ−３３８−３ｐ、ｍｉＲ−３３ａ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−
３６５、ｍｉＲ−３７０、ｍｉＲ−３７２、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−３７６ａ、ｍｉＲ
−３７７、ｍｉＲ−４２２ａ、ｍｉＲ−４２４、ｍｉＲ−４２４−５ｐ、ｍｉＲ−４３３
、ｍｉＲ−４４５８、ｍｉＲ−４４８、ｍｉＲ−４５０ａ、ｍｉＲ−４５１、ｍｉＲ−４
８５−５ｐ、ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−５０３、ｍｉＲ−５０６
、ｍｉＲ−５１９ｄ、ｍｉＲ−５２０ａ、ｍｉＲ−５２０ｂ、ｍｉＲ−５２０ｃ−３ｐ、
ｍｉＲ−５８２−５ｐ、ｍｉＲ−５９０−５ｐ、ｍｉＲ−６１０、ｍｉＲ−６１２、ｍｉ
Ｒ−６２５、ｍｉＲ−６３７、ｍｉＲ−６７５、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−８７７、ｍｉＲ−
９４０、ｍｉＲ−９４１、ｍｉＲ−９８、ｍｉＲ−９９ａ、ｍｉＲ−１３２及び／または
ｍｉＲ−３１に対する標的配列である。更なる実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは
、肝癌を治療するために使用される。更なる実施形態において、肝癌は、肝細胞癌である
。
【００２０】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ウイルス複製に必要とさ
れる１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−１
４３−３ｐ、ｍｉＲ−１２６−３ｐ、ｍｉＲ−１２６−５ｐ、ｍｉＲ−１２６６−３ｐ、
ｍｉＲ−６１３０、ｍｉＲ−６０８０、ｍｉＲ−５１１−５ｐ、ｍｉＲ−１４３−５ｐ、
ｍｉＲ−２２３−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１
９９ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−１４４、ｍｉＲ−１
５０−５ｐ、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−５ｐ、ｍ
ｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１４５−３ｐ、ｍｉＲ−１４５−５ｐ、ｍｉＲ−１２９
７、ｍｉＲ−１４１、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２０
０ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２９ｂ、ｍｉＲ−３８１、ｍｉＲ−４０９−３ｐ、ｍ
ｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４５１、ｍｉＲ−５１１、ｍｉＲ−９９ａ、ｌｅｔ−７ａ−１、
ｌｅｔ−７ａ−２、ｌｅｔ−７ａ−３、ｌｅｔ−７ｂ、ｌｅｔ−７ｃ、ｌｅｔ−７ｄ、ｌ
ｅｔ−７ｅ、ｌｅｔ−７ｆ−１、ｌｅｔ−７ｆ−２、ｌｅｔ−７ｇ、ｌｅｔ−７ｉ、ｍｉ
Ｒ−１、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、
ｍｉＲ−１４４、ｍｉＲ−１４６９、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５３、ｍｉＲ−１５
ａ、ｍｉＲ−１５ｂ、ｍｉＲ−１６−１、ｍｉＲ−１６−２、ｍｉＲ−１８２、ｍｉＲ−
１９２、ｍｉＲ−１９３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１９４、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−１９８、
ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２１７、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２２、ｍｉＲ−２２３、ｍ
ｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ−２９ｃ、ｍｉＲ−３３ａ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍ
ｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−３６５、ｍｉＲ−４４９ａ、ｍｉＲ−４４９ｂ
、ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｍｉＲ−５４５、ｍｉＲ−６１０、ｍｉＲ−６１４、ｍｉＲ−
６３０、ｍｉＲ−６６０、ｍｉＲ−７５１５、ｍｉＲ−９５００、ｍｉＲ−９８、ｍｉＲ
−９９ｂ、ｍｉＲ−１３３ａ、ｌｅｔ−７ａ、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０６ａ、ｍｉ
Ｒ−１０７、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２５ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ａ−５ｐ、ｍｉ
Ｒ−１２６、ｍｉＲ−１２６＊、ｍｉＲ−１２９、ｍｉＲ−１３７、ｍｉＲ−１４０、ｍ
ｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１４８ｂ、ｍｉＲ−１４
９、ｍｉＲ−１５２、ｍｉＲ−１５４、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−１７−５ｐ、ｍｉＲ−
１８１ａ−１、ｍｉＲ−１８１ａ−２、ｍｉＲ−１８１ｂ、ｍｉＲ−１８１ｂ−１、ｍｉ
Ｒ−１８１ｂ−２、ｍｉＲ−１８１ｃ、ｍｉＲ−１８１ｄ、ｍｉＲ−１８４、ｍｉＲ−１
８６、ｍｉＲ−１９３ｂ、ｍｉＲ−１９９ａ、ｍｉＲ−２０４、ｍｉＲ−２１２、ｍｉＲ
−２２１、ｍｉＲ−２２４、ｍｉＲ−２７ａ、ｍｉＲ−２７ｂ、ｍｉＲ−２９ａ、ｍｉＲ
−３０ａ、ｍｉＲ−３０ｂ、ｍｉＲ−３０ｃ、ｍｉＲ−３０ｄ、ｍｉＲ−３０ｄ−５ｐ、
ｍｉＲ−３０ｅ−５ｐ、ｍｉＲ−３２、ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３３８−３ｐ、ｍｉＲ
−３４０、ｍｉＲ−３４２−３ｐ、ｍｉＲ−３６１−３ｐ、ｍｉＲ−３７３、ｍｉＲ−３
７５、ｍｉＲ−４５００、ｍｉＲ−４７８２−３ｐ、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−５０３、
ｍｉＲ−５１２−３ｐ、ｍｉＲ−５２０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−５２６ｂ、ｍｉＲ−６２５＊
及び／またはｍｉＲ−９６に対する標的配列である。更なる実施形態において、腫瘍溶解
性ウイルスは、肺癌を治療するために使用される。
【００２１】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ウイルス複製に必要とさ
れる１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ−７
ｂ、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２８０、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−
１４６ａ、ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−１７、ｍｉＲ−１８４、ｍｉＲ
−１８５、ｍｉＲ−１８ｂ、ｍｉＲ−１９３ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２０３、ｍ
ｉＲ−２０４、ｍｉＲ−２０５、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２０ａ、ｍｉＲ−２１１、ｍ
ｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−３１、ｍｉＲ−３３ａ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉ
Ｒ−３４ｃ、ｍｉＲ−３７６ａ、ｍｉＲ−３７６ｃ、ｍｉＲ−５７３、ｍｉＲ−７−５ｐ
、ｍｉＲ−９及び／またはｍｉＲ−９８に対する標的配列である。更なる実施形態におい
て、腫瘍溶解性ウイルスは、黒色腫を治療するために使用される。
【００２２】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ウイルス複製に必要とさ
れる１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ−７
ｄ、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−４９４、ｍｉＲ−１０
０、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２５０、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−
１２７１、ｍｉＲ−１３６、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４７、ｍｉＲ
−１４８ａ、ｍｉＲ−１８１ａ、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２２０ａ、ｍｉＲ−２６ａ、
ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ−２９ａ、ｍｉＲ−３２、ｍｉＲ−３２３−５ｐ、ｍｉＲ−３２
９、ｍｉＲ−３３８、ｍｉＲ−３７０、ｍｉＲ−４１０、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４３
３、ｍｉＲ−４９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−５０３、ｍｉＲ−５０６、ｍｉＲ−６３２、ｍｉ
Ｒ−６４６、ｍｉＲ−６６８、ｍｉＲ−８７７及び／またはｍｉＲ−９に対する標的配列
である。更なる実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、口腔癌を治療するために使用
される。
【００２３】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ウイルス複製に必要とさ
れる１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ−７
ｉ、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２９−５ｐ、ｍｉ
Ｒ−１３０ｂ、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１３７、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１４１、
ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１５２、ｍｉＲ−１５３、ｍｉＲ−１５５
、ｍｉＲ−１９９ａ、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２００ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ
−２１２、ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ
−４０９−３ｐ、ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４３２、ｍｉＲ−４４９ａ
、ｍｉＲ−４９４、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−４９８、ｍｉＲ−５１９ｄ、ｍｉＲ−６５
５、ｍｉＲ−９、ｍｉＲ−９８、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−５３２−５ｐ、ｍｉＲ−１２
４ａ、ｍｉＲ−１９２、ｍｉＲ−１９３ａ及び／またはｍｉＲ−７に対する標的配列であ
る。更なる実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、卵巣癌を治療するために使用され
る。
【００２４】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ウイルス複製に必要とさ
れる１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−２
１６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−８０２、ｍｉＲ−２１７、ｍｉＲ−１４５−３ｐ、ｍｉＲ−１４
３−３ｐ、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｍｉＲ−２１６
ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−４３２−５ｐ、ｍｉＲ−２１６ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、
ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１３６−３ｐ、ｍｉＲ−２１６ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１
３６−５ｐ、ｍｉＲ−１４５−５ｐ、ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ、
ｍｉＲ−１９９ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−５５９、ｍｉＲ−１２９−２−３ｐ、ｍｉＲ−４５０
７、ｍｉＲ−１−３ｐ、ｍｉＲ−１４８ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１１８１、
ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２４７、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１４１、ｍｉＲ−１４
５、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１４８ｂ、ｍｉＲ−１５０＊、ｍｉ
Ｒ−１５０−５ｐ、ｍｉＲ−１５２、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１９８、ｍｉＲ−２０３
、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−２１６ａ、ｍｉＲ−２９ｃ、ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３４
ａ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−３７３、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−４１
０、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｍｉＲ−６３０、ｍｉＲ−９６、ｍｉＲ−
１３２、ｌｅｔ−７ａ、ｌｅｔ−７ａ−１、ｌｅｔ−７ａ−２、ｌｅｔ−７ａ−３、ｌｅ
ｔ−７ｂ、ｌｅｔ−７ｃ、ｌｅｔ−７ｄ、ｌｅｔ−７ｅ、ｌｅｔ−７ｆ−１、ｌｅｔ−７
ｆ−２、ｌｅｔ−７ｇ、ｌｅｔ−７ｉ、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１３５ａ、ｍｉＲ−１
４３、ｍｉＲ−１４４、ｍｉＲ−１５０、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２
００ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２１７、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−３３７、ｍｉＲ
−４９４及び／またはｍｉＲ−９８に対する標的配列である。更なる実施形態において、
腫瘍溶解性ウイルスは、膵癌を治療するために使用される。
【００２５】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ウイルス複製に必要とさ
れる１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ−７
ａ−３ｐ、ｌｅｔ−７ｃ、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１０５、ｍｉＲ−
１２４、ｍｉＲ−１２８、ｍｉＲ−１２９６、ｍｉＲ−１３０ｂ、ｍｉＲ−１３３ａ−１
、ｍｉＲ−１３３ａ−２、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１３５ａ、ｍｉＲ−１４３、ｍｉ
Ｒ−１４５、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５４、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１８７、ｍ
ｉＲ−１８８−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ、ｍｉＲ−２００ｂ、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−
２０５、ｍｉＲ−２１２、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２２１、ｍｉＲ−２２４、ｍｉＲ−
２３ａ、ｍｉＲ−２３ｂ、ｍｉＲ−２５、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ−２
９ｂ、ｍｉＲ−３０２ａ、ｍｉＲ−３０ａ、ｍｉＲ−３０ｂ、ｍｉＲ−３０ｃ−１、ｍｉ
Ｒ−３０ｃ−２、ｍｉＲ−３０ｄ、ｍｉＲ−３０ｅ、ｍｉＲ−３１、ｍｉＲ−３３０、ｍ
ｉＲ−３３１−３ｐ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−３７
４ｂ、ｍｉＲ−４４９ａ、ｍｉＲ−４７２３−５ｐ、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−６２８−
５ｐ、ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｍｉＲ−７６５及び／またはｍｉＲ−９４０に対する標
的配列である。更なる実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、前立腺癌を治療するた
めに使用される。
【００２６】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ウイルス複製に必要とさ
れる１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−１
０１、ｍｉＲ−１８３、ｍｉＲ−２０４、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３６５ｂ−３ｐ、ｍ
ｉＲ−４８６−３ｐ及び／またはｍｉＲ−５３２−５ｐに対する標的配列である。更なる
実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、網膜芽細胞腫を治療するために使用される。
【００２７】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、
ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１２６４、ｍｉＲ−４４８、ｍｉＲ−１２９８−５ｐ、ｍｉ
Ｒ−４９０−５ｐ、ｍｉＲ−１３８−２−３ｐ、ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｍｉＲ−１４４
−５ｐ、ｍｉＲ−１５０−５ｐ、ｍｉＲ−１２９−１−３ｐ、ｍｉＲ−５５９、ｍｉＲ−
１−３−ｐ、ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｍｉＲ−２２３−３ｐ、ｍｉＲ−３９４３、ｍｉＲ
−３３８−３ｐ、ｍｉＲ−１２４−３ｐ、ｍｉＲ−２１９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２１９ａ−
２−３ｐ、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−１３３ａ−３ｐ、ｍｉＲ
−１４５−５ｐ及び／またはｍｉＲ−１４５−３ｐに対する標的配列である。更なる実施
形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、膠芽腫を治療するために使用される。
【００２８】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、
ｍｉＲ−２２３−３ｐ、ｍｉＲ−６０８０、ｍｉＲ−２０８ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２０６、
ｍｉＲ−１３３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１９９
ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１４５−３ｐ、ｍｉＲ−１４５−５ｐ、ｍｉＲ−１５０−５ｐ、ｍｉ
Ｒ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｍｉＲ−１４４−５ｐ、ｍｉＲ−３３８−３
ｐ、ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｍｉＲ−５５９、ｍｉＲ−１３３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１−３
ｐ、ｍｉＲ−１２６−３ｐ、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−１９９
ａ−３ｐ及び／またはｍｉＲ−１９９ｂ−３ｐに対する標的配列である。更なる実施形態
において、腫瘍溶解性ウイルスは、頭頸部癌を治療するために使用される。
【００２９】
いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉ
Ｒ−２０８ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−６１３０、ｍｉＲ−１４１−５ｐ、ｍｉＲ−３１−３ｐ、
ｍｉＲ−１２９３、ｍｉＲ−１２９−２−３ｐ、ｍｉＲ−１２９−５ｐ、ｍｉＲ−１２４
−３ｐ、ｍｉＲ−２１９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２１９ａ−２−３ｐ、ｍｉＲ−４９０−３ｐ
、ｍｉＲ−４８８−３ｐ、ｍｉＲ−９３５、ｍｉＲ−１２４−５ｐ、ｍｉＲ−１２２−３
ｐ、ｍｉＲ−１２２−５ｐ、ｍｉＲ−１−３ｐ、ｍｉＲ−１３３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３７
５、ｍｉＲ−１４１−３ｐ、ｍｉＲ−３１−５ｐ、ｍｉＲ−２０５−５ｐ、ｍｉＲ−２０
０ｃ−３ｐ及び／またはｍｉＲ−２０３ａ−３ｐに対する標的配列である。更なる実施形
態において、腫瘍溶解性ウイルスは、シュワン腫を治療するために使用される。
【００３０】
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）ウイルス複製に必要とされる１つ以上
のウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上の腫瘍抑制性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ
）標的配列、（ｂ）１つ以上のタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードする１つ
以上のポリヌクレオチドであって、当該タンパク質もしくはオリゴヌクレオチドは、ｍｉ
Ｒ、遺伝子もしくはＴＩＭＰの発現を減少させるか、その機能を阻害する、ポリヌクレオ
チド、（ｃ）少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体、及び／または（ｄ）少なくとも
１つのプロテアーゼ活性化抗体をコードするポリヌクレオチドのうちの１つ以上を含む、
組み換え腫瘍溶解性ウイルスを提供する。いくつかの実施形態において、ｍｉＲは、がん
促進性ｍｉＲまたは微小環境リモデリングｍｉＲである。いくつかの実施形態において、
がん促進性ｍｉＲは、表４に列挙されるｍｉＲから選択される。いくつかの実施形態にお
いて、遺伝子は、がん遺伝子である。いくつかの実施形態において、がん遺伝子は、表７
に列挙される遺伝子から選択される。いくつかの実施形態において、微小環境リモデリン
グｍｉＲは、表５に列挙されるｍｉＲから選択される。いくつかの実施形態において、Ｔ
ＩＭＰは、ＴＩＭＰ１、ＴＩＭＰ２、ＴＩＭＰ３及びＴＩＭＰ４から選択される。いくつ
かの実施形態において、（ｂ）のオリゴヌクレオチドは、ｓｈＲＮＡまたはデコイオリゴ
ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、
【００３１】
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）ウイルス複製に必要とされる１つ以上
のウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上の腫瘍抑制性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ
）標的配列、（ｂ）１つ以上のタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードする１つ
以上のポリヌクレオチドであって、当該タンパク質もしくはオリゴヌクレオチドは、ｍｉ
Ｒ、遺伝子もしくはＴＩＭＰの発現を低下させるか、その機能を阻害する、ポリヌクレオ
チド、（ｃ）少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体、及び／または（ｄ）少なくとも
１つのプロテアーゼ活性化抗体をコードするポリヌクレオチドのうちの１つ以上を含む、
組み換え腫瘍溶解性ウイルスであって、当該タンパク質は、ヌクレアーゼ、二重特異性Ｔ
細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）、抗免疫抑制タンパク質または免疫原性抗原である、組
み換え腫瘍溶解性ウイルスを提供する。いくつかの実施形態において、ヌクレアーゼは、
クラスター化された規則的な間隔のある短い回文の繰り返し配列（ＣＲＩＳＰＲ）関連エ
ンドヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）または転写活性化因子様エ
フェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）から選択される。いくつかの実施形態において、
ＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼは、ＳｐＣａｓ９、ＳｐＣａｓ９−ＨＦ１、ＳｐＣ
ａｓ９−ＨＦ２、ＳｐＣａｓ９−ＨＦ３、ＳｐＣａｓ９−ＨＦ４、ＳａＣａｓ９、ＦｎＣ
ｐｆ、ＦｎＣａｓ９、ｅＳｐＣａｓ９、Ｃ２Ｃ１、Ｃ２Ｃ３、Ｃｐｆ１、Ｃａｓ１、Ｃａ
ｓ１Ｂ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃ
ａｓ９、Ｃａｓ１０、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、
Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、
Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、
Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃ
ｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３及びＣｓｆ４から選択される。更なる実施形態
において、腫瘍溶解性ウイルスは、ｔｒａｃｒ−ＲＮＡ（ｔｒＲＮＡ）及びｃｒｉｓｐｒ
−ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）をコードする非相同ポリヌクレオチドを更に含み、ｃｒＲＮＡは
、ｍｉＲまたはＴＩＭＰをコードするゲノムＤＮＡ配列を標的にし、ｔｒＲＮＡは、ＣＲ
ＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼの結合及び活性化を促進する。
【００３２】
いくつかの実施形態において、抗免疫抑制タンパク質は、抗制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）
タンパク質または抗骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）タンパク質である。いくつかの実
施形態において、抗免疫抑制タンパク質は、ＶＨＨ由来遮断剤またはＶＨＨ由来ＢｉＴＥ
である。
【００３３】
いくつかの実施形態において、タンパク質は、抗腫瘍免疫応答を誘導する。更なる実施
形態において、タンパク質は、ＥｐＣＡＭ、葉酸、ＩＦＮβ、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ１
、Ａ２Ａ、抗ＦＧＦ２、抗ＦＧＦＲ／ＦＧＦＲ２ｂ、抗ＳＥＭＡ４Ｄ、ＣＣＬ５、ＣＤ１
３７、ＣＤ２００、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１３、
エンドセリンＢ型受容体、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２、ＩＬ−２１、ＩＬ−３５
、ＩＳＲＥ７、ＬＦＡ−１、ＮＧ２（ＳＰＥＧ４としても知られる）、ＳＭＡＤタンパク
質、ＳＴＩＮＧ、ＴＧＦβ及びＶＣＡＭ１から選択される。
【００３４】
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）ウイルス複製に必要とされる１つ以上
のウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上の腫瘍抑制性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ
）標的配列、（ｂ）１つ以上のタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードする１つ
以上のポリヌクレオチドであって、当該タンパク質もしくはオリゴヌクレオチドは、ｍｉ
Ｒ、遺伝子もしくはＴＩＭＰの発現を減少させるか、その機能を阻害する、ポリヌクレオ
チド、（ｃ）少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体、及び／または（ｄ）少なくとも
１つのプロテアーゼ活性化抗体をコードするポリヌクレオチドのうちの１つ以上を含む、
組み換え腫瘍溶解性ウイルスであって、少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体は、ウ
イルスの糖タンパク質エンベロープに組み込まれる、組み換え腫瘍溶解性ウイルスを提供
する。いくつかの実施形態において、プロテアーゼ活性化抗体は、システインカテプシン
、アスパラギン酸カテプシン、カリクレイン（ｈＫ）、セリンプロテアーゼ、カスパーゼ
、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）及びディスインテグリンメタロプロテアー
ゼ（ＡＤＡＭ）から選択されるプロテアーゼによって活性化される。いくつかの実施形態
において、プロテアーゼは、カテプシンＫ、カテプシンＢ、カテプシンＬ、カテプシンＥ
、カテプシンＤ、ｈＫ１、ＰＳＡ（ｈＫ３）、ｈＫ１０、ｈＫ１５、ｕＰＡ、ｕＰＡＲ、
ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−
１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭ
Ｐ−１６、ＭＭＰ−１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、
ＭＭＰ−２３Ａ、ＭＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ
−２７、ＭＭＰ−２８または表６に列挙されるプロテアーゼから選択される。
【００３５】
いくつかの実施形態において、プロテアーゼ活性化抗体は、非がん細胞または非がん微
小環境よりもがん細胞またはがん微小環境で高度に発現されるタンパク質に結合する。い
くつかの実施形態において、プロテアーゼ活性化抗体は、ＮＫＧ２Ｄ、ｃ−ｍｅｔ、ＨＧ
ＦＲ、ＣＤ８、ヘパラン硫酸、ＶＳＰＧ４（ＮＧ２としても知られる）、ＥＧＦＲ、ＥＧ
ＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１３３、ＣＸＣＲ４、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＬＣ−３、アネ
キシンＩＩ、ヒトトランスフェリン受容体またはＥｐＣＡＭに結合する。
【００３６】
いくつかの実施形態において、ｍｉＲ標的配列及び／または１つ以上のポリヌクレオチ
ドは、ウイルスゲノムの遺伝子座に挿入される。いくつかの実施形態において、ウイルス
は、単純ヘルペスウイルスであり、少なくとも１つのポリヌクレオチドは、内部反復接合
領域（二倍体遺伝子ＩＣＰ０、ＩＣＰ３４．５、ＬＡＴ、ＩＣＰ４及びＩＣＰ４７プロモ
ーターのそれぞれを１コピー含む）、ＩＣＰ０、ＬＡＴ、ＵＬ１、ＵＬ５、ＵＬ６、ＵＬ
７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１１、ＵＬ１２、ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１７、ＵＬ１８、
ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ２２、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２６．５、ＵＬ２７、ＵＬ２
８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３５、ＵＬ３
６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、ＵＬ３９、ＵＬ４０、ＵＬ４２、ＵＬ４８、ＵＬ４９、ＵＬ５
２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、ＩＣＰ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、
γ−３４．５、ＵＳ３、ＵＳ４、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ８、ＵＳ９、ＵＳ１０、
ＵＳ１１及びＵＳ１２からなる群から選択される１つ以上のウイルス遺伝子座に挿入され
るか、これらの遺伝子座の間に挿入される。
【００３７】
いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスを
コードする核酸分子を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書に記
載される腫瘍溶解性ウイルスのウイルスストックを提供する。いくつかの実施形態におい
て、本発明は、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスと、薬学的に許容される担体と
を含む、組成物を提供する。
【００３８】
いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスま
たはその組成物に対して、がん性細胞を、腫瘍溶解性ウイルスが当該がん性細胞に感染し
、当該がん性細胞内で複製するのに十分な条件下で曝露することを含み、がん性細胞内に
おける腫瘍溶解性ウイルスの複製が細胞死をもたらす、がん性細胞を殺傷する方法を提供
する。いくつかの実施形態において、がん性細胞は、１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配
列に結合することができる腫瘍抑制性ｍｉＲの発現が、非がん性細胞における腫瘍抑制性
ｍｉＲの発現と比較して低下している。いくつかの実施形態において、がん性細胞におけ
る腫瘍抑制性ｍｉＲの発現レベルは、非がん性細胞における腫瘍抑制性ｍｉＲの発現レベ
ルよりも少なくとも５％低い。いくつかの実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスの複製
は、１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列に結合することができる腫瘍抑制性ｍｉＲの発
現の低いがん性細胞において、増加または維持される。いくつかの実施形態において、ウ
イルス複製は、非がん性細胞におけるウイルス複製と比較して、がん性細胞において少な
くとも５％多い。いくつかの実施形態において、細胞は、ｉｎ  ｖｉｖｏである。いくつ
かの実施形態において、細胞は、腫瘍内である。
【００３９】
いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスま
たはその組成物を対象に投与することを含む、がんの治療を必要とする対象において、が
んを治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、対象は、マウス、ラット、
ウサギ、ネコ、イヌ、ウマ、非ヒト霊長類またはヒトである。いくつかの実施形態におい
て、腫瘍溶解性ウイルスまたはその組成物は、静脈内、皮下、腫瘍内、筋肉内、または鼻
腔内投与される。いくつかの実施形態において、がんは、肺癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌
、前立腺癌、精巣癌、大腸癌、結腸癌、膵癌、肝癌、胃癌、頭頸部癌、甲状腺癌、悪性神
経膠腫、膠芽腫、黒色腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ
腫（ＤＬＢＣＬ）及び辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）から選択される。いくつかの実施形態に
おいて、肺癌は、小細胞肺癌または非小細胞肺癌である。いくつかの実施形態において、
肝癌は、肝細胞癌（ＨＣＣ）である。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】がん性及び非がん性脳組織における、選択された２５のｍｉＲＮＡに対応するｍｉＲＮＡ発現プロファイルのヒートマップを示す。
【図２】がん性及び非がん性膀胱組織における、選択された２５のｍｉＲＮＡに対応するｍｉＲＮＡ発現プロファイルのヒートマップを示す。
【図３】がん性及び非がん性乳房組織における、選択された２５のｍｉＲＮＡに対応するｍｉＲＮＡ発現プロファイルのヒートマップを示す。
【図４】がん性及び非がん性結腸組織における、選択された２５のｍｉＲＮＡに対応するｍｉＲＮＡ発現プロファイルのヒートマップを示す。
【図５】膠芽腫及び非がん性脳組織における、選択された２５のｍｉＲＮＡに対応するｍｉＲＮＡ発現プロファイルのヒートマップを示す。
【図６】がん性及び非がん性頭頸部組織における、選択された２５のｍｉＲＮＡに対応するｍｉＲＮＡ発現プロファイルのヒートマップを示す。
【図７】がん性及び非がん性肺組織における、選択された２５のｍｉＲＮＡに対応するｍｉＲＮＡ発現プロファイルのヒートマップを示す。
【図８】がん性及び非がん性膵臓組織における、選択された２５のｍｉＲＮＡに対応するｍｉＲＮＡ発現プロファイルのヒートマップを示す。
【図９】シュワン腫組織及び非シュワン腫組織における、選択された２５のｍｉＲＮＡに対応するｍｉＲＮＡ発現プロファイルのヒートマップを示す。
【図１０】非がん性組織（正常）と比較した全腫瘍種（ＣＡ）におけるｍｉＲ−４５１ａ発現の下方制御を示す。
【図１１】全腫瘍種（ＣＡ）におけるｍｉＲ−１発現の下方制御、非がん性組織（正常）におけるｍｉＲ−１の中程度の発現、及び非がん性頭頸部組織（Ｈ＆Ｎ）におけるｍｉＲ−１の高発現を示す。
【図１２】全腫瘍種（ＣＡ）におけるｍｉＲ−５５９発現の下方制御、非がん性組織（正常）におけるｍｉＲ−５５９の低発現、及び非がん性肺組織におけるｍｉＲ−５５９の高発現を示す。
【図１３】全腫瘍種（ＣＡ）におけるｍｉＲ−１４５−５ｐ発現の下方制御、及び非がん性組織（正常）の大部分におけるｍｉＲ−１４５−５ｐの高発現を示す。
【図１４】結腸、肺及び膵臓の腫瘍種（ＣＡ）におけるｍｉＲ−１４３−３ｐ発現の下方制御、ならびに非がん性組織（正常）の大部分におけるｍｉＲ−１４３−３ｐの高発現を示す。
【図１５】実施例２に記載される、ｍｉＲＮＡの発現及び減衰のレポーター遺伝子系を示す。図１５Ａは、ｍｉＲＮＡ発現プラスミドの発現を誘導するｐＴｅｔＲ  ｔｅｔリプレッサープラスミドの模式図を示す。図１５Ｂは、ｔｅｔ誘導性ｍＣｈｅｒｒｙ及びｍｉＲＮＡ発現カセットを含有するｐＴＦ−００２  ｍｉＲＮＡ発現プラスミドの模式図を示す。図１５Ｃは、不安定化ＧＦＰ（ｄｓＧＦＰ）の読み出しを可能にするｐＴＦ−００４ｍｉＲＮＡ減衰レポーター遺伝子の模式図を示す。
【図１６】図１５に示され、かつ実施例２に記載されるレポーター系を使用した、ｍｉＲ−１２２の発現及び減衰を示す。
【図１７】図１５に示され、かつ実施例２に記載されるレポーター系を使用した、ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１８４、ｍｉＲ−３４ａ及びＬｅｔ７ａ媒介性ＧＦＰ減衰を例示する。円で囲んだウェルは、ＧＦＰ発現レベルの低下を示す。
【図１８】図１５に示され、かつ実施例２に記載されるレポーター系を使用した、ｍＣｈｅｒｒｙ発現によって示されるｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１８４、ｍｉＲ−３４ａ及びＬｅｔ７ａの発現を例示する。
【図１９】図１５に示され、かつ実施例２に記載されるレポーター系を使用した、ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１９９及びｍｉＲ−４５１媒介性ＧＦＰ減衰を例示する。円で囲んだウェルは、ＧＦＰ発現レベルの低下を示す。
【図２０】図１５に示され、かつ実施例２に記載されるレポーター系を使用した、ｍＣｈｅｒｒｙ発現によって示されるｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１９９及びｍｉＲ−４５１の発現を例示する。
【図２１】ｍｉＲ−１２２及びｍｉＲ−１８４のＧＦＰ蛍光減衰の定量を示す。
【図２２】ｍｉＲ−３４ａ及びｍｉＲ−１８４のＧＦＰ蛍光減衰の定量を示す。
【図２３】Ｌｅｔ７ａ及びｍｉＲ−１８４のＧＦＰ蛍光減衰の定量を示す。
【図２４】ｍｉＲ−１２４及びｍｉＲ−１８４のＧＦＰ蛍光減衰の定量を示す。
【図２５】ｍｉＲ−１４５及びｍｉＲ−１８４のＧＦＰ蛍光減衰の定量を示す。
【図２６】ｍｉＲ−１９９及びｍｉＲ−４５１のＧＦＰ蛍光減衰の定量を示す。
【図２７】ｍｉＲ−１２５及びｍｉＲ−４５１のＧＦＰ蛍光減衰の定量を示す。
【図２８】ｍｉＲ−１２６及びｍｉＲ−４５１のＧＦＰ蛍光減衰の定量を示す。
【図２９】ｍｉＲ−１２７及びｍｉＲ−４５１のＧＦＰ蛍光減衰の定量を示す。
【図３０】ｍｉＲ−１３３及びｍｉＲ−４５１のＧＦＰ蛍光減衰の定量を示す。
【図３１】ｍｉＲ−２２３及びｍｉＲ−４５１のＧＦＰ蛍光減衰の定量を示す。
【図３２】ＩＣＰ２７及びＩＣＰ４遺伝子に挿入された、様々なｍｉＲＮＡに対する標的配列を含む、ｍｉＲ減衰型ＨＳＶ構築物を示す。
【図３３】非がん性（有糸分裂後肺）細胞及びがん性（Ａ２５３）細胞におけるｍｉＲ−１２５によるＨＳＶ減衰を例示する。
【図３４】非がん性（ＰＭ肺）細胞及びがん性（Ａ２５３）肺細胞におけるｍｉＲ−１２５によるＨＳＶ減衰のｑＰＣＲに基づく定量を示す。
【図３５】ＨＣＣ１３９５細胞とＡ２５３細胞におけるｍｉＲ−１４５によるＨＳＶ減衰の蛍光に基づく定量を例示する。
【図３６】ＨＣＣ１３９５細胞とＡ２５３細胞におけるｍｉＲ−１４５によるＨＳＶ減衰のｑＰＣＲに基づく定量を示す。
【図３７】正常肺細胞におけるｍｉＲ−１９９ａ−５ｐとｍｉＲ−１４３−３ｐによるＨＳＶ減衰の蛍光に基づく定量を例示する。
【図３８】正常肺細胞におけるｍｉＲ−１９９ａ−５ｐとｍｉＲ−１４３−３ｐによるＨＳＶ減衰のｑＰＣＲに基づく定量を示す。
【図３９】がんまたは良性過剰増殖性疾患の治療のためのＩＣＰ４−ＴｍｉＲＮＡ減衰型ＨＳＶベクターの模式図を例示する。
【図４０】がんまたは良性過剰増殖性疾患の治療のためのＩＣＰ２７−ＴｍｉＲＮＡ減衰型ＨＳＶベクターの模式図を示す。
【図４１】がんまたは良性過剰増殖性疾患の治療のためのＵＬ１９−ＴｍｉＲＮＡ減衰型ＨＳＶベクターの模式図を示す。
【図４２】がんまたは良性過剰増殖性疾患の治療のためのＵＬ１９−ＴｍｉＲＮＡ・ＩＣＰ２７−ＴｍｉＲＮＡ減衰型ＨＳＶベクターの模式図を示す。
【図４３】がんまたは良性過剰増殖性疾患の治療のためのＵＬ１９−ＴｍｉＲＮＡ・ＩＣＰ４−ＴｍｉＲＮＡ減衰型ＨＳＶベクターの模式図を示す。
【図４４】がんまたは良性過剰増殖性疾患の治療のためのＵＬ１９−ＴｍｉＲＮＡ・ＩＣＰ２７−ＴｍｉＲＮＡ・ＩＣＰ４−ＴｍｉＲＮＡ減衰型ＨＳＶベクターの模式図を示す。
【図４５】がんの治療のためのＩＣＰ４−ＴｍｉＲＮＡ減衰型ゲノム編集ＨＳＶベクターの模式図を示す。
【図４６】がんの治療のためのＩＣＰ４−ＴｍｉＲＮＡ減衰型ゲノム編集微小環境リモデリングＨＳＶベクターの模式図を示す。
【図４７】膵癌、肺癌及び結腸癌の治療のためのＩＣＰ４−ＴｍｉＲＮＡ・ＩＣＰ２７−ＴｍｉＲＮＡ減衰型ＨＳＶベクターの模式図を示す。
【図４８】複数のがん種の治療のためのＩＣＰ４−ＴｍｉＲＮＡ・ＩＣＰ２７−ＴｍｉＲＮＡ減衰型ＨＳＶベクターの模式図を示す。
【図４９】シュワン腫の治療のためのＩＣＰ４−ＴｍｉＲＮＡ・ＩＣＰ２７−ＴｍｉＲＮＡ減衰型ＨＳＶベクターの模式図を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
いくつかの態様において、本発明は、ウイルスベクター複製を腫瘍細胞に効果的に制限
するために、ｍｉＲＮＡの差次的発現プロファイルを利用する。いくつかの実施形態にお
いて、本明細書に記載されるウイルスベクターはまた、腫瘍増殖、転移の減少、及び／ま
たはウイルス伝播の増強を可能にする腫瘍微小環境リモデリングのために、特定のｍｉＲ
ＮＡの発現を破壊する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるウイルスベ
クターは、腫瘍細胞への標的化を容易にするために、ウイルスベクター上の表面分子を使
用することを包含する。これらの側面を個別にまたは組み合わせて適用して、広範ながん
種を１つのウイルスベクターで治療することが潜在的に可能なウイルスベクターを開発す
ることができる。したがって、本発明は、更に、疾患及び障害（例えば、がん）の治療及
び予防に使用するための組み換え腫瘍溶解性ウイルスベクターを包含する。いくつかの実
施形態において、本発明は、広範ながんの治療に適した安全かつ有効的な組み換えウイル
スベクターを可能にするために、内因性マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）を利用する。
【００４２】
本明細書で使用される節の見出しは、単に構成目的のものであり、記載される主題を限
定するものと解釈されるべきではない。特許、特許出願、記事、書籍及び論文を含むが、
これらに限定されない、本明細書で引用される全ての文書または文書の一部は、その全体
があらゆる目的のために参照により本明細書に明確に援用される。援用される文書または
文書の一部のうちの１つ以上が、本出願における用語の定義と矛盾する用語の定義をして
いる場合、本出願に示される定義が優先される。しかし、本明細書で引用される任意の参
考文献、記事、出版物、特許、特許公報及び特許出願の言及は、世界の任意の国で、それ
らが有効な先行技術を構成し、または共通の一般知識の一部を形成するという承認または
何らかの示唆の形態ではなく、そのように解釈されるべきではない。
【００４３】
本発明の記載において、任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲または整数範
囲は、特に指定のしない限り、列挙される範囲内の任意の整数の値を含み、必要に応じて
、その分数（整数の１／１０及び１／１００など）を含むものと理解される。本明細書で
使用される「ａ」及び「ａｎ」という用語は、特に指定のない限り、列挙される構成成分
のうちの「１つ以上」を指すことを理解されたい。選択肢（例えば、「または」）の使用
は、選択肢の一方、両方またはその任意の組み合わせのいずれかを意味することを理解さ
れたい。本明細書で使用される、用語「ｉｎｃｌｕｄｅ（含む）」及び「ｃｏｍｐｒｉｓ
ｅ（含む）」は、同義的に使用される。本明細書で使用されるとき、「複数」は、１つ以
上の構成成分（例えば、１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列）を指し得る。
【００４４】
腫瘍溶解性ウイルス
いくつかの実施形態において、本発明は、１つ以上の腫瘍抑制性マイクロＲＮＡ（ｍｉ
Ｒ）標的配列の１つ以上のコピーが、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺
伝子の遺伝子座に挿入された、組み換え腫瘍溶解性ウイルスを提供する。本明細書で使用
されるとき、「腫瘍溶解性ウイルス」という用語は、がん細胞に感染するように改変され
ているか、天然に優先的にがん細胞に感染する、ウイルスを指す。腫瘍溶解性ウイルスの
例は、当該技術分野において知られており、限定するものではないが、単純ヘルペスウイ
ルス、アデノウイルス、ポリオウイルス、ワクシニアウイルス、麻疹ウイルス、水疱性口
内炎ウイルス、オルトミクソウイルス、パルボウイルス、マラバウイルスまたはコクサッ
キーウイルスが挙げられる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される腫瘍溶
解性ウイルスは、ウイルスベクター中に組み込まれる。「ベクター」という用語は、別の
核酸分子を輸送または運搬することができる核酸分子を指すために本明細書で使用される
。輸送される核酸は、通常、ベクター核酸分子に連結される（例えば、挿入される）。ベ
クターは、細胞内で自律複製を誘導する配列を有し得るか、宿主細胞ＤＮＡへの組み込み
を可能にするのに十分な配列を有し得る。ウイルスベクターは、時に、「組み換えウイル
ス」または「ウイルス」と称されることがある。「腫瘍溶解性ウイルス」及び「腫瘍溶解
性ベクター」という用語は、本明細書において区別なく用いられる。特定の実施形態にお
いて、組み換えウイルスベクターは、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ２０１５／０６６０４２号（
その全体を参照により援用する）に記載されている、腫瘍選択的にベクター複製ができる
単純ヘルペスウイルスである。
【００４５】
「マイクロＲＮＡ」、「ｍｉＲＮＡ」及び「ｍｉＲ」という用語は、本明細書において
区別なく用いられ、その標的メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）に向かい、分解または翻
訳抑制を行うことによって遺伝子発現を制御する、内因性の小さなノンコーディングＲＮ
Ａを指す。ｍｉＲは、複数のがん種を含む広範な病態において、差次的に発現される。い
くつかの態様において、所与のがん種またはがん組織のがん細胞は、非がん性対照細胞と
比較して、ｍｉＲの差次的発現を示す。本明細書で使用されるとき、「ｏｎｃｏｍｉＲ」
という用語は、発がん、悪性転換または転移に（正または負のいずれかで）関係するｍｉ
Ｒを指す。いくつかの態様において、特定のｏｎｃｏｍｉＲの発現レベルは、特定のがん
の発生または維持に関係している。このようなｍｉＲは、本明細書において、「がん促進
性ｍｉＲ」と称される。
【００４６】
いくつかの実施形態において、がん促進性ｍｉＲの発現は、非がん性対照と比較して、
がん性細胞または組織において上昇する。例えば、がん性細胞におけるがん促進性ｍｉＲ
の発現は、非がん性細胞または組織におけるがん促進性ｍｉＲの発現と比較して、少なく
とも５％上昇し得る。いくつかの実施形態において、がん促進性ｍｉＲの発現は、非がん
性細胞または組織におけるがん促進性ｍｉＲの発現と比較して、少なくとも５％、１０％
、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％
、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、４００％、５００％、１
０００％またはそれ以上、上昇する。いくつかの態様において、がん性細胞または組織は
、非がん性対照細胞または対照組織で発現されないがん促進性ｍｉＲを発現し得る。いく
つかの実施形態において、がん促進性ｍｉＲの発現は、異なるがん種に由来するがん性細
胞と比較して、がん性細胞または組織において上昇する。例えば、あるがん性細胞におけ
るがん促進性ｍｉＲの発現は、異なるがん種に由来するがん性細胞と比較して少なくとも
５％上昇し得る。いくつかの実施形態において、がん促進性ｍｉＲの発現は、異なるがん
種に由来するがん性細胞と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％
、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００
％、１５０％、２００％、３００％、４００％、５００％、１０００％またはそれ以上、
上昇する。がん組織でしばしば過剰発現されるがん促進性ｍｉＲＮＡの例には、ｍｉＲ−
２１、ｍｉＲ−１５５及びｍｉＲ−１７−９２が挙げられるが、これらに限定されない。
がん促進性ｍｉＲの更なる例は、表４に列挙される。
【００４７】
いくつかの実施形態において、特定のｏｎｃｏｍｉＲの発現は、発がん及び／または転
移の予防及び／または遅延に関係する。このようなｏｎｃｏｍｉＲは、その発現ががんの
発生を予防または抑制することから、本明細書において、「腫瘍抑制ｍｉＲ」または「腫
瘍抑制性ｍｉＲ」と称される。いくつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲの発現低
下は、がんを引き起こすことがある。したがって、いくつかの態様において、腫瘍抑制性
ｍｉＲは、健康な細胞で発現され、がん性細胞では発現されない。いくつかの態様におい
て、特定の腫瘍抑制性ｍｉＲの発現は、がん性細胞と比較して、健康な細胞において上昇
する。例えば、健康な（例えば、非がん性）細胞における腫瘍抑制性ｍｉＲの発現は、が
ん性細胞における腫瘍抑制性ｍｉＲの発現と比較して、少なくとも５％上昇し得る。いく
つかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲの発現は、がん性細胞における腫瘍抑制性ｍ
ｉＲの発現と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３
５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％
、２００％、３００％、４００％、５００％、１０００％またはそれ以上、上昇する。い
くつかの実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲの発現は、体内の異なる組織種または位置
に由来する正常細胞と比較して、正常細胞または正常組織において上昇する。例えば、あ
る正常細胞における腫瘍抑制性ｍｉＲの発現は、体内の異なる組織種または位置に由来す
る正常細胞と比較して、少なくとも５％上昇し得る。いくつかの実施形態において、ある
正常細胞における腫瘍抑制性ｍｉＲの発現は、体内の異なる組織種または位置に由来する
正常細胞と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５
％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、
２００％、３００％、４００％、５００％、１０００％またはそれ以上、上昇する。腫瘍
抑制性ｍｉＲＮＡの例には、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１６−１、ｍｉＲ−３４及びｌｅ
ｔ−７ファミリーのｍｉＲＮＡが挙げられるが、これらに限定されない。腫瘍抑制性ｍｉ
Ｒの更なる例は、表３及び表８に列挙される。
【００４８】
がんの病原は、不均質かつ多遺伝子性のプロセスである。したがって、特定の経路の活
性化及び特定の遺伝子の発現は、ある状況においては、がん発生をもたらすことがあり、
異なる状況において活性化または発現したときには、異なる結果または反対の結果を生じ
ることがある。したがって、特定の遺伝子またはｍｉＲを、「がん遺伝子」もしくは「が
ん促進性ｍｉＲ」または「腫瘍抑制遺伝子」もしくは「腫瘍抑制性ｍｉＲ」と特徴付ける
ことは、二者択一の区別ではなく、状況に依存することが多い。例えば、ｍｉＲ−１５２
ｂは、大部分の血液悪性腫瘍では、がん促進性ｍｉＲとして機能するが、多くの固形腫瘍
では、腫瘍抑制性ｍｉＲとして機能する。更に、特定のｍｉＲは、がん性細胞及び非がん
性細胞の両方で高度に発現される場合がある。例えば、ｍｉＲ−１５５は、正常細胞で高
度に発現され、マクロファージ極性化において重要な役割を果たすが、がん細胞において
も高度に発現される。したがって、本明細書に記載されるｍｉＲ減衰型ゲノム編集・微小
環境リモデリング腫瘍溶解性ウイルスの開発は、ある細胞集団または組織における特定の
ｍｉＲまたはｍｉＲ群の別の細胞集団または組織と比較した差次的発現を基礎とする。当
業者であれば、腫瘍抑制性ｍｉＲという用語が、一般に、がん性細胞または組織と比較し
て非がん性細胞または組織で高度に発現されるｍｉＲを指すこと、また、がん促進性ｍｉ
Ｒという用語が、一般に、非がん性細胞または組織と比較してがん性細胞または組織で高
度に発現されるｍｉＲを指すことを理解するであろう。当業者であれば、更に、あるがん
種において腫瘍抑制性ｍｉＲと特徴付けられたｍｉＲが、別のがん種において腫瘍抑制性
ｍｉＲとして機能する場合もあれば、機能しない場合もあること、また、あるがん種にお
いてがん促進性ｍｉＲとして特徴付けられたｍｉＲが、別のがん種においてがん促進性ｍ
ｉＲとして機能する場合もあれば、機能しない場合もあることを理解するであろう。
【００４９】
表１は、選択された１２のｏｎｃｏｍｉＲ（９つの腫瘍抑制遺伝子及び３つのがん促進
性ｍｉＲＮＡ）と多数のがんとの関係を示す。３，４１０のｏｎｃｏｍｉＲとがんとの関
係の一覧を表２に示す。ｍｉＲＮＡは、細胞増殖及びアポトーシスの制御に関与するタン
パク質の多くの転写物を制御する。制御されるタンパク質には、従来のがん原タンパク質
ならびにＲａｓ、Ｍｙｃ、Ｂｃｌ２、ＰＴＥＮ及びｐ５３などの腫瘍抑制因子が含まれる
。したがって、ｍｉＲＮＡの異常発現は、多くの場合、がんの発生に関与しており、がん
促進性ｍｉＲＮＡを阻害するか、減少した腫瘍抑制ｍｉＲＮＡを置き換えるかのいずれか
によって、治療的に修正することができる。更に、がん性細胞と非がん性細胞における特
定のｏｎｃｏｍｉＲの差次的発現は、がん治療薬をがん細胞に特異的に標的にする手段と
して利用することができる。したがって、いくつかの実施形態において、本明細書に記載
される腫瘍溶解性ウイルスベクターは、次の特性：腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列をウイ
ルスゲノムに挿入することによって、ウイルスベクター複製をがん細胞もしくは腫瘍細胞
に制限すること、１つ以上のポリヌクレオチドであって、その産物（複数可）ががん促進
性ｍｉＲＮＡ及び／もしくはがん細胞外マトリックスの機能を破壊する、１つ以上のポリ
ヌクレオチドをウイルスゲノムに組み込むこと、ならびに／またはベクターをがん細胞及
び／もしくは腫瘍細胞に対して高度に選択的に標的化するために、プロテアーゼ活性化抗
体をウイルス粒子に組み込むことを、個別にまたは組み合わせて含み得る。
【００５０】
本発明の一態様は、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺伝子の遺伝子座
に挿入された１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列（例えば、表３または表８に列挙
されるｍｉＲＮＡから選択されるｍｉＲＮＡ）のコピーを複数含む、組み換え腫瘍溶解性
ウイルス（またはウイルスベクター）を含む。ある特定の実施形態において、組み換え腫
瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要とされる少なくとも１つ、少なくとも２つ、少
なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少
なくとも８つ、少なくとも９つ、または少なくとも１０のウイルス遺伝子の遺伝子座に挿
入された腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列を含み得る。正常（非がん性）細胞において発現
される腫瘍抑制ｍｉＲＮＡは、このような標的配列に結合し、ｍｉＲＮＡ標的配列を含有
するウイルス遺伝子の発現を抑制することができ、これにより、健康な非がん性細胞にお
けるウイルス複製が制限される。このような組み換え腫瘍溶解性ウイルス及び／またはベ
クターは、本明細書において、腫瘍抑制性ｍｉＲを発現しない細胞またはその発現が低下
している細胞と比較して、組み込まれた腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列に結合することができ
る腫瘍抑制性ｍｉＲを発現する細胞において、ウイルス複製が減少または減衰することか
ら、「ｍｉＲ減衰型」または「複製制限型」と称される。ウイルス複製は、ウイルス複製
に必要とされる主要遺伝子に腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡを組み込むことによって、腫瘍抑制性
ｍｉＲＮＡを発現する正常な二倍体細胞において条件的に抑制することができ、腫瘍抑制
性ｍｉＲＮＡを発現しない細胞において、通常とおり進行され得る。このような実施形態
において、健康な非がん性細胞は、正常細胞から、組み換えウイルスベクターによる感染
の溶解作用から保護される。
【００５１】
ある特定の実施形態において、１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列は、ウイルス
複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺伝子の１つ以上の遺伝子の５’非翻訳領域（Ｕ
ＴＲ）及び／または３’ＵＴＲに組み込まれる。腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡは、正常な二倍体
細胞において、腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列を含む、操作された３’または５’ノンコ
ーディング配列に結合することができるが、これらの腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡは、形質転換
細胞または悪性細胞において欠如している。したがって、ウイルス複製は、腫瘍抑制性ｍ
ｉＲＮＡを欠く細胞またはその発現が低下している細胞で進行し得る。いくつかの実施形
態において、少なくとも１つの腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列は、複製に必要とされる１つ以
上のウイルス遺伝子に組み込まれる。いくつかの実施形態において、腫瘍溶解性ウイルス
ベクターは、複製に必要とされる１つのウイルス遺伝子に組み込まれた、同一の腫瘍抑制
性ｍｉＲ標的配列の複数コピーを含み得る。例えば、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列の１、２
、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上のコピーが、複製に必要とされるウ
イルス遺伝子に組み込まれ得る。特定の実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列の
２〜６つのコピーが、複製に必要とされるウイルス遺伝子の３’または５’ＵＴＲに組み
込まれる。更なる実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列の４つのコピーが、複製
に必要とされるウイルス遺伝子の３’または５’ＵＴＲに組み込まれる。いくつかの実施
形態において、腫瘍溶解性ウイルスベクターは、複製に必要とされる複数のウイルス遺伝
子に組み込まれた、同じ腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列の複数コピーを含み得る。例えば、腫
瘍抑制性ｍｉＲ標的配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の
コピーが、ウイルス複製に必要とされる１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０また
はそれ以上の遺伝子に組み込まれ得る。特定の実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的
配列の２〜６つのコピーが、複製に必要とされる２つ以上のウイルス遺伝子の３’または
５’ＵＴＲに組み込まれる。更なる実施形態において、腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列の少な
くとも４つのコピーが、複製に必要とされる２つ以上のウイルス遺伝子の３’または５’
ＵＴＲに組み込まれる。
【００５２】
いくつかの実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスベクターは、複製に必要とされる１
つのウイルス遺伝子に組み込まれた、２つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲに対する標的配列を含
み得る。例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の異なる腫
瘍抑制性ｍｉＲに対する標的配列が、ウイルス複製に必要とされる１つの遺伝子に組み込
まれ得る。いくつかの実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスベクターは、複製に必要と
される複数のウイルス遺伝子に組み込まれた、２つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲに対する標的
配列を含み得る。例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の
異なる腫瘍抑制性ｍｉＲに対する標的配列が、ウイルス複製に必要とされる１、２、３、
４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の遺伝子に組み込まれ得る。いくつかの実
施形態において、腫瘍溶解性ウイルスベクターは、少なくとも２つの異なる腫瘍抑制性ｍ
ｉＲ（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０の異なる腫瘍抑制
性ｍｉＲ）に対する複数の標的配列（例えば、１つの標的配列の少なくとも１、２、３、
４、５、６、７、８、９、１０のコピー）を含み得る。このような実施形態において、第
１の腫瘍抑制性ｍｉＲに対する複数の標的配列は、複製に必要とされる第１の遺伝子に組
み込まれ得、第２の腫瘍抑制性ｍｉＲに対する複数の標的配列は、複製に必要とされる第
２の遺伝子に組み込まれ得、第３の腫瘍抑制性ｍｉＲに対する複数の標的配列は、複製に
必要とされる第３の遺伝子に組み込まれ得るなどである。特定の実施形態において、本明
細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスベクターは、複製に必要とされる第１の遺伝子の３
’または５’ＵＴＲに組み込まれた、第１の腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列の少なくとも２つ
〜少なくとも８つのコピーと、複製に必要とされる第２の遺伝子の３’または５’ＵＴＲ
に組み込まれた、第２の腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列の少なくとも２つ〜少なくとも８つの
コピーと、複製に必要とされる第３の遺伝子の３’または５’ＵＴＲに組み込まれた、第
３の腫瘍抑制性ｍｉＲ標的配列の少なくとも２つ〜少なくとも８つのコピーとを含む。
【００５３】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるｍｉＲ減衰型腫瘍溶解性ウイルス
は、組み込まれたｍｉＲ標的配列のうちの１つ以上に結合することができる腫瘍抑制性ｍ
ｉＲを発現する細胞において、ウイルス複製が減少する。「ウイルス複製」は、所与の時
間内に特定の細胞または細胞集団で生じるウイルス複製サイクルの総数を指す。いくつか
の実施形態において、ウイルス複製は、所与の時間にわたる総ウイルス力価を評価するこ
とによって、または存在するウイルスゲノムのコピー数を評価することによって（例えば
、配列決定によって）、直接測定することができる。いくつかの実施形態において、ウイ
ルスベクターは、蛍光レポーター遺伝子などの検出可能な標識を追加で含み得る。このよ
うな実施形態において、ウイルス複製は、レポーター遺伝子の蛍光強度またはレポーター
遺伝子を発現する細胞の数を測定することによって、評価することができる。いくつかの
実施形態において、ウイルス複製は、所与の時間にわたって生細胞の数を評価することに
よって、間接的に測定することができる。例えば、ウイルス複製のレベルは、経時的な生
細胞の数と逆相関すると想定される。
【００５４】
本明細書で使用される「ウイルス複製の減少」は、ウイルス複製のレベルが、第２の細
胞または第２の細胞集団と比較して、第１の細胞または第１の細胞集団で低いことを指す
。いくつかの実施形態において、第１の細胞または第１の細胞集団におけるウイルス複製
のレベルは、第２の細胞または細胞集団におけるウイルス複製のレベルと比較して、少な
くとも５％低下する。いくつかの実施形態において、第１の細胞または第１の細胞集団に
おけるウイルス複製のレベルは、第２の細胞または細胞集団におけるウイルス複製のレベ
ルと比較して、少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２
５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以
上低下する。いくつかの実施形態において、第１の細胞または第１の細胞集団におけるウ
イルス複製は、第２の細胞または細胞集団におけるウイルス複製と比較して、完全に阻害
される。
【００５５】
いくつかの実施形態において、第１の細胞または第１の細胞集団におけるウイルス複製
の減少は、複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺伝子に組み込まれた１つ以上のｍｉ
Ｒ標的配列に結合することができる腫瘍抑制性ｍｉＲの発現と相関する。したがって、い
くつかの実施形態において、組み込まれたｍｉＲ標的配列に対応する腫瘍抑制性ｍｉＲの
発現は、複製遺伝子の発現を阻害または減少させ、これにより、ウイルス複製を阻害また
は減少させる。いくつかの実施形態において、第２の細胞または第２の細胞集団は、腫瘍
抑制性ｍｉＲを発現しないか、その発現レベルが低下している。いくつかの実施形態にお
いて、組み込まれたｍｉＲ標的配列に対応する腫瘍抑制性ｍｉＲの発現が欠如または低下
していることにより（例えば、がん細胞内）、ウイルス複製の進行が可能となる。いくつ
かの実施形態において、第２の細胞または細胞集団における腫瘍抑制性ｍｉＲの発現レベ
ルは、第１の細胞または集団における腫瘍抑制性ｍｉＲの発現レベルよりも少なくとも５
％低い。いくつかの実施形態において、第２の細胞または細胞集団における腫瘍抑制性ｍ
ｉＲの発現レベルは、第１の細胞または集団における腫瘍抑制性ｍｉＲの発現レベルと比
較して、少なくとも５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、
３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上、低
下する。いくつかの実施形態において、第２の細胞は、腫瘍抑制性ｍｉＲを発現しない。
特定の実施形態において、第１の細胞は、非がん性細胞であり、第２の細胞は、がん性細
胞である。
【００５６】
いくつかの態様において、腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列の複数コピー（例えば、少な
くとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つまたは
それ以上のコピー）は、ウイルスゲノムの遺伝子座にタンデムで挿入される。このような
実施形態において、標的配列の複数コピーは、リンカー配列またはスペーサー配列によっ
て分離されてもよい。いくつかの実施形態において、リンカー配列及び／またはスペーサ
ー配列は、４つ以上のヌクレオチドを含む。例えば、スペーサー配列またはリンカー配列
は、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５個以上のヌクレオチドを含み得る
。いくつかの実施形態において、リンカー配列またはスペーサー配列は、約５〜約２０個
のヌクレオチドを含む。更なる実施形態において、リンカー配列またはスペーサー配列は
、約８〜約１６個のヌクレオチドを含む。本発明を決して限定するものではないが、例示
的な実施形態として、腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウ
イルス遺伝子の遺伝子座にタンデムで挿入された次のサブユニット：（ａ）第１の腫瘍抑
制性ｍｉＲＮＡに対する標的配列−リンカー配列もしくはスペーサー配列−第１の腫瘍抑
制性ｍｉＲＮＡに対する標的配列、または（ｂ）第１の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡに対する標
的配列−リンカー配列もしくはスペーサー配列−第２の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡに対する標
的配列の１つ以上を少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ
、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ
または少なくとも１０含み得る。いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡ標的配列は、
ｍｉＲＮＡの逆相補鎖である。
【００５７】
いくつかの実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ
）であり、ウイルス複製に必要とされるウイルス遺伝子は、ＵＬ１、ＵＬ５、ＵＬ６、Ｕ
Ｌ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１１、ＵＬ１２、ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１７、ＵＬ１８
、ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ２２、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２６．５、ＵＬ２７、ＵＬ
２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３５、ＵＬ
３６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、ＵＬ３９、ＵＬ４０、ＵＬ４２、ＵＬ４８、ＵＬ４９、ＵＬ
５２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、ＩＣＰ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７
、γ−３４．５、ＵＳ３、ＵＳ４、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ８、ＵＳ９、ＵＳ１０
、ＵＳ１１及び／またはＵＳ１２である。いくつかの実施形態において、腫瘍溶解性ウイ
ルスは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）であり、１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的
配列は、ＩＣＰ０、ＩＣＰ４、ＵＬ１９及びＩＣＰ２７遺伝子のうちの１つ以上に組み込
まれる。ある特定の実施形態において、腫瘍溶解性ウイルスベクターは、ウイルス複製に
必要とされる１つ以上の遺伝子（例えば、ＵＬ１、ＵＬ５、ＵＬ６、ＵＬ７、ＵＬ８、Ｕ
Ｌ９、ＵＬ１１、ＵＬ１２、ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１７、ＵＬ１８、ＵＬ１９、ＵＬ
２０、ＵＬ２２、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２６．５、ＵＬ２７、ＵＬ２８、ＵＬ２９、
ＵＬ３０、ＵＬ３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３５、ＵＬ３６、ＵＬ３７、
ＵＬ３８、ＵＬ３９、ＵＬ４０、ＵＬ４２、ＵＬ４８、ＵＬ４９、ＵＬ５２、ＵＬ５３、
ＵＬ５４、ＩＣＰ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、γ−３４．５、
ＵＳ３、ＵＳ４、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ８、ＵＳ９、ＵＳ１０、ＵＳ１１または
ＵＳ１２）の５’または３’ＵＴＲに組み込まれた１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的
配列（例えば、表３に列挙される腫瘍抑制性ｍｉＲのいずれか）を含む、ＨＳＶである（
例えば、図３９〜４９）。
【００５８】
いくつかの実施形態において、複製制限型ウイルスベクター（例えば、ｍｉＲ減衰型ウ
イルスベクター）は、少なくとも１つのｌｅｔ−７標的配列を含み、肺癌を治療するため
に使用される。いくつかの実施形態において、複製制限型ウイルスベクターは、少なくと
も１つのｍｉＲ−１５ａ及び／または少なくとも１つのｍｉＲ−１６Ａの標的配列を含み
、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病を治療するために使用される。いくつかの実施形態におい
て、複製制限型ウイルスベクターは、少なくとも１つのｍｉＲ−１２５ｂ、少なくとも１
つのｍｉＲ−１４５、少なくとも１つのｍｉＲ−２１及び／または少なくとも１つのｍｉ
Ｒ−１５５の標的配列を含み、乳癌を治療するために使用される。他の実施形態において
、複製制限型ウイルスベクターは、少なくとも１つのｍｉＲ−１４３及び／または少なく
とも１つのｍｉＲ−１４５の標的配列を含み、大腸癌を治療するために使用される。ある
特定の実施形態において、複製制限型ウイルスベクターは、少なくとも１つのｍｉＲ−１
８１ａ、少なくとも１つのｍｉＲ−１８１ｂ及び／または少なくとも１つのｍｉＲ−１８
１ｃの標的配列を含み、膠芽腫を治療するために使用される。いくつかの実施形態におい
て、複製制限型ウイルスベクターは、少なくとも１つのｍｉＲ−１９９ａ＊、少なくとも
１つのｍｉＲ−１９５、少なくとも１つのｍｉＲ−１９９ａ、少なくとも１つのｍｉＲ−
２００ａ及び／または少なくとも１つのｍｉＲ−１２５ａの標的配列を含み、肝癌（例え
ば、肝細胞癌）を治療するために使用される。
【００５９】
特定の実施形態において、複製制限型ウイルスベクターは、少なくとも１つのｍｉＲ−
４５１ａ標的配列、少なくとも１つのｍｉＲ−１４３−３ｐ標的配列、少なくとも１つの
ｍｉＲ−５５９標的配列及び少なくとも１つのｍｉＲ−１２４標的配列を含み、膵臓、肺
及び／または結腸癌の治療に使用される。このような実施形態において、ｍｉＲ−４５１
ａ、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−５５９及びｍｉＲ−１２４に対する標的配列は、ウ
イルス複製に必要とされる２つ以上の遺伝子（例えば、ＩＣＰ４及びＩＣＰ２７）に組み
込まれる。更なる特定の実施形態において、複製制限型ウイルスベクターは、少なくとも
１つのｍｉＲ−４５１ａ標的配列、少なくとも１つのｍｉＲ−１４５−５ｐ標的配列、少
なくとも１つのｍｉＲ−５５９標的配列、及び少なくとも１つのｍｉＲ−１２４標的配列
を含み、本明細書に記載される任意のがん種の治療に使用される。このような実施形態に
おいて、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−１４５−５ｐ、ｍｉＲ−５５９及びｍｉＲ−１２４
に対する標的配列は、ウイルス複製に必要とされる２つ以上の遺伝子（例えば、ＩＣＰ４
及びＩＣＰ２７）に組み込まれる。更なる特定の実施形態において、複製制限型ウイルス
ベクターは、少なくとも１つのｍｉＲ−２０５ｐ標的配列、少なくとも１つのｍｉＲ−１
４１−５ｐ標的配列、少なくとも１つのｍｉＲ−３１−５ｐ標的配列、及び少なくとも１
つのｍｉＲ−１２４標的配列を含み、シュワン腫の治療に使用される。このような実施形
態において、ｍｉＲ−２０５ｐ、ｍｉＲ−１４１−５ｐ、ｍｉＲ−３１−５ｐ及びｍｉＲ
−１２４に対する標的配列は、ウイルス複製に必要とされる２つ以上の遺伝子（例えば、
ＩＣＰ４及びＩＣＰ２７）に組み込まれる。
【００６０】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要と
される１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−
１３６−３ｐ、ｍｉＲ−４３２−５ｐ、ｍｉＲ−１−３ｐ、ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｍｉ
Ｒ−３７９−５ｐ、ｍｉＲ−４９３−５ｐ、ｍｉＲ−２２３−５ｐ、ｍｉＲ−２２３−５
ｐ、ｍｉＲ−１３６−５ｐ、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−４８７ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−３７
０−３ｐ、ｍｉＲ−４１０−３ｐ、ｍｉＲ−４３１−３ｐ、ｍｉＲ−４４８５−３ｐ、ｍ
ｉＲ−４４８５−５ｐ、ｍｉＲ−１２７−５ｐ、ｍｉＲ−４０９−３ｐ、ｍｉＲ−３３８
−３ｐ、ｍｉＲ−５５９、ｍｉＲ−４１１−５ｐ、ｍｉＲ−１３３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１
４３−３ｐ、ｍｉＲ−３７６ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−７５８−３ｐ、ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１
０１、ｍｉＲ−１１８０、ｍｉＲ−１２３６、ｍｉＲ−１２４−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ
、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１２８０、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−
１４１、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４４、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−
１６、ｍｉＲ−１８ａ、ｍｉＲ−１９２、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−
２００ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２０５、ｍｉＲ−２１４、ｍｉ
Ｒ−２１８、ｍｉＲ−２３ｂ、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２９ｃ、ｍｉＲ−３２０ｃ、ｍ
ｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３７０、ｍｉＲ−４０９−３ｐ、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４５
１、ｍｉＲ−４９０−５ｐ、ｍｉＲ−４９３、ｍｉＲ−５７６−３ｐ及び／またはｍｉＲ
−９９ａに対する１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列の複数コピーを含む。この腫
瘍溶解性ウイルスは、膀胱癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【００６１】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要と
される１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−
１２５１−５ｐ、ｍｉＲ−２１９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２１９ａ−２−３ｐ、ｍｉＲ−１２
４−３ｐ、ｍｉＲ−４４８、ｍｉＲ−１３８−２−３ｐ、ｍｉＲ−４９０−５ｐ、ｍｉＲ
−１２９−１−３ｐ、ｍｉＲ−１２６４、ｍｉＲ−３９４３、ｍｉＲ−４９０−３ｐ、ｍ
ｉＲ−３８３−５ｐ、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１２９−２−３ｐ、ｍｉＲ−１２８−
２−５ｐ、ｍｉＲ−１３３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１２９−５ｐ、ｍｉＲ−１−３ｐ、ｍｉＲ
−８８５−３ｐ、ｍｉＲ−１２４−５ｐ、ｍｉＲ−７５９、ｍｉＲ−７１５８−３ｐ、ｍ
ｉＲ−７７０−５ｐ、ｍｉＲ−１３５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−８８５−５ｐ、ｌｅｔ−７ｇ−
５ｐ、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１０６ａ、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−
１２４ａ、ｍｉＲ−１２５ａ、ｍｉＲ−１２５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１
２７−３ｐ、ｍｉＲ−１２８、ｍｉＲ−１２９、ｍｉＲ−１３６、ｍｉＲ−１３７、ｍｉ
Ｒ−１３９−５ｐ、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−
１４６ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１４９、ｍｉＲ−１５２、ｍｉＲ−１５３、ｍｉＲ−１９５、
ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２１２−３ｐ、ｍｉＲ−２１９−５ｐ、ｍｉＲ−２２２、ｍｉＲ
−２９ｂ、ｍｉＲ−３１、ｍｉＲ−３１８９−３ｐ、ｍｉＲ−３２０、ｍｉＲ−３２０ａ
、ｍｉＲ−３２６、ｍｉＲ−３３０、ｍｉＲ−３３１−３ｐ、ｍｉＲ−３４０、ｍｉＲ−
３４２、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３７６ａ、ｍｉＲ−４４９ａ、ｍｉＲ−４８３−５ｐ
、ｍｉＲ−５０３、ｍｉＲ−５７７、ｍｉＲ−６６３、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−７−５ｐ、
ｍｉＲ−８７３、ｌｅｔ−７ａ、ｌｅｔ−７ｆ、ｍｉＲ−１０７、ｍｉＲ−１２２、ｍｉ
Ｒ−１２４−５ｐ、ｍｉＲ−１３９、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１
５ｂ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１８１ａ、ｍｉＲ−１８１ａ−１、ｍｉＲ−１８１ａ−２
、ｍｉＲ−１８１ｂ、ｍｉＲ−１８１ｂ−１、ｍｉＲ−１８１ｂ−２、ｍｉＲ−１８１ｃ
、ｍｉＲ−１８１ｄ、ｍｉＲ−１８４、ｍｉＲ−１８５、ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ、ｍｉ
Ｒ−２００ａ、ｍｉＲ−２００ｂ、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２０４、ｍｉＲ−２０５、
ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２３ｂ、ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ−２７ａ、ｍｉＲ−２９ｃ、
ｍｉＲ−３２８、ｍｉＲ−３４ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−３４ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−３７５、ｍｉ
Ｒ−３８３、ｍｉＲ−４５１、ｍｉＲ−４５２、ｍｉＲ−４９５、ｍｉＲ−５８４、ｍｉ
Ｒ−６２２、ｍｉＲ−６５６、ｍｉＲ−９８、ｍｉＲ−１２４−３ｐ、ｍｉＲ−１８１ｂ
−５ｐ、ｍｉＲ−２００ｂ及び／またはｍｉＲ−３１８９−３ｐに対する１つ以上の腫瘍
抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列の複数コピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、脳癌を治療
するための方法及び組成物に使用され得る。ある特定の実施形態において、脳癌は、星細
胞腫、膠芽腫または神経膠腫である。
【００６２】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要と
される１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−
１０ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１２６−３ｐ、ｍｉＲ−１４５−３ｐ、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉ
Ｒ−１９９ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−５６８３、ｍｉＲ−３１９５、ｍｉＲ−３１８２、ｍｉＲ
−１２７１−５ｐ、ｍｉＲ−２０４−５ｐ、ｍｉＲ−４０９−５ｐ、ｍｉＲ−１３６−５
ｐ、ｍｉＲ−５１４ａ−５ｐ、ｍｉＲ−５５９、ｍｉＲ−４８３−３ｐ、ｍｉＲ−１−３
ｐ、ｍｉＲ−６０８０、ｍｉＲ−１４４−３ｐ、ｍｉＲ−１０ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−６１３
０、ｍｉＲ−６０８９、ｍｉＲ−２０３ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−４２６６、ｍｉＲ−４３２７
、ｍｉＲ−５６９４、ｍｉＲ−１９３ｂ、ｌｅｔ−７ａ、ｌｅｔ−７ａ−１、ｌｅｔ−７
ａ−２、ｌｅｔ−７ａ−３、ｌｅｔ−７ｂ、ｌｅｔ−７ｃ、ｌｅｔ−７ｄ、ｌｅｔ−７ｅ
、ｌｅｔ−７ｆ−１、ｌｅｔ−７ｆ−２、ｌｅｔ−７ｇ、ｌｅｔ−７ｉ、ｍｉＲ−１００
、ｍｉＲ−１０７、ｍｉＲ−１０ａ、ｍｉＲ−１０ｂ、ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１２４
、ｍｉＲ−１２５８、ｍｉＲ−１２５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２６、ｍ
ｉＲ−１２７、ｍｉＲ−１２９、ｍｉＲ−１３０ａ、ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１３３ａ
、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１
４７、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１４９、ｍｉＲ−１５２、ｍｉＲ−１５３、ｍｉＲ−
１５ａ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１７−５ｐ、ｍｉＲ−１８１ａ、ｍｉＲ−１８２６、ｍ
ｉＲ−１８３、ｍｉＲ−１８５、ｍｉＲ−１９１、ｍｉＲ−１９３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１
９５、ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２
００ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２０５、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２１１、ｍｉＲ
−２１６ｂ、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２２、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ
−３００、ｍｉＲ−３０ａ、ｍｉＲ−３１、ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３３９−５ｐ、ｍ
ｉＲ−３３ｂ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−３７４ａ、
ｍｉＲ−３７９、ｍｉＲ−３８１、ｍｉＲ−３８３、ｍｉＲ−４２５、ｍｉＲ−４２９、
ｍｉＲ−４５０ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−４９４、ｍｉＲ−４９５、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−
５０２−５ｐ、ｍｉＲ−５１７ａ、ｍｉＲ−５７４−３ｐ、ｍｉＲ−６３８、ｍｉＲ−７
、ｍｉＲ−７２０、ｍｉＲ−８７３、ｍｉＲ−８７４、ｍｉＲ−９２ａ、ｍｉＲ−９８、
ｍｉＲ−９９ａ、ｍｍｕ−ｍｉＲ−２９０−３ｐ及び／またはｍｍｕ−ｍｉＲ−２９０−
５ｐに対する１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列の複数コピーを含む。この腫瘍溶
解性ウイルスは、乳癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【００６３】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要と
される１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−
１４３、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１７−５ｐ、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２１４、ｍｉ
Ｒ−２１８、ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３４２−３ｐ、ｍｉＲ−３７２、ｍｉＲ−４２４
、ｍｉＲ−４９１−５ｐ、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−９９ａ、ｍｉＲ−９９
ｂ、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−３４ａ
、ｍｉＲ−８８６−５ｐ、ｍｉＲ−１０６ａ、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉ
Ｒ−２９ａ及び／またはｍｉＲ−３７５に対する１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配
列の複数コピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、子宮頸癌を治療するための方法及び
組成物に使用され得る。
【００６４】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要と
される１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−
１３３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−４９０−５ｐ、ｍｉＲ−１２４−３ｐ、ｍｉＲ−１３７、ｍｉ
Ｒ−６５５−３ｐ、ｍｉＲ−３７６ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−３６９−５ｐ、ｍｉＲ−４９０−
３ｐ、ｍｉＲ−４３２−５ｐ、ｍｉＲ−４８７ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−３４２−３ｐ、ｍｉＲ
−２２３−３ｐ、ｍｉＲ−１３６−３ｐ、ｍｉＲ−１３６−３ｐ、ｍｉＲ−１４３−５ｐ
、ｍｉＲ−１−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ
−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｍｉＲ−
１３３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１４５−５ｐ、ｍｉＲ−１４５−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−５
ｐ、ｌｅｔ−７ａ−１、ｌｅｔ−７ａ−２、ｌｅｔ−７ａ−３、ｌｅｔ−７ｂ、ｌｅｔ−
７ｃ、ｌｅｔ−７ｄ、ｌｅｔ−７ｅ、ｌｅｔ−７ｆ−１、ｌｅｔ−７ｆ−２、ｌｅｔ−７
ｇ、ｌｅｔ−７ｉ、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１４２
−３ｐ、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１９２、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ
−２１、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−２１５、ｍｉＲ−２２、ｍｉＲ−２５、ｍｉＲ−３０
２ａ、ｍｉＲ−３２０、ｍｉＲ−３２０ａ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−
３６５、ｍｉＲ−３７３、ｍｉＲ−４２４、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４５５、ｍｉＲ−
４８４、ｍｉＲ−５０２、ｍｉＲ−５０３、ｍｉＲ−９３、ｍｉＲ−９８、ｍｉＲ−１８
６、ｍｉＲ−３０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−６２７、ｌｅｔ−７ａ、ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１２
４、ｍｉＲ−１２５ａ、ｍｉＲ−１２９、ｍｉＲ−１２９５ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１３０７
、ｍｉＲ−１３０ｂ、ｍｉＲ−１３２、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−
１３７、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１３９、ｍｉＲ−１３９−５ｐ、ｍｉＲ−１４０−５
ｐ、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１４８ｂ、ｍｉＲ−１４９、ｍｉＲ−１５０−５ｐ、ｍ
ｉＲ−１５４、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１５ｂ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１８ａ、ｍｉ
Ｒ−１９１、ｍｉＲ−１９３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１９４、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−１９
６ａ、ｍｉＲ−１９８、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２０４−５
ｐ、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２１２、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２２４、ｍｉＲ−２４
−３ｐ、ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ−２７ａ、ｍｉＲ−２８−３ｐ、ｍｉＲ−２８−５ｐ、
ｍｉＲ−２９ｂ、ｍｉＲ−３０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｂ、ｍｉＲ−３２８、ｍｉＲ−３
３８−３ｐ、ｍｉＲ−３４２、ｍｉＲ−３４５、ｍｉＲ−３４ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３６１
−５ｐ、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−３７８、ｍｉＲ−３７８ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３７８ａ
−５ｐ、ｍｉＲ−４０９−３ｐ、ｍｉＲ−４２２ａ、ｍｉＲ−４４８７、ｍｉＲ−４８３
、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−４９８、ｍｉＲ−５１８ａ−３ｐ、ｍｉＲ−５５１ａ、ｍｉ
Ｒ−５７４−５ｐ、ｍｉＲ−６２５、ｍｉＲ−６３８、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−９６−５ｐ
、ｍｉＲ−２０２−３ｐ、ｍｉＲ−３０ａ及び／またはｍｉＲ−４５１に対する１つ以上
の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列の複数コピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、結腸
癌または大腸癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【００６５】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要と
される１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−
１０１、ｍｉＲ−１３０ａ、ｍｉＲ−１３０ｂ、ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１４３、ｍｉ
Ｒ−１４５、ｍｉＲ−１５２、ｍｉＲ−２０５、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−３０１ａ、ｍ
ｉＲ−３０１ｂ、ｍｉＲ−３０ｃ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−４２４、
ｍｉＲ−４４９ａ、ｍｉＲ−５４３及び／またはｍｉＲ−３４ｂに対する１つ以上の腫瘍
抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列の複数コピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、子宮内膜癌
を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【００６６】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要と
される１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−
１２５ｂ、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１５ｂ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−
１６−１、ｍｉＲ−１６−１−３ｐ、ｍｉＲ−１６−２、ｍｉＲ−１８１ａ、ｍｉＲ−１
８１ｂ、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−２９ｂ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−
３４ｃ、ｍｉＲ−４２４、ｍｉＲ−１０ａ、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５０、ｍｉＲ
−１５１、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−２２７８、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−３０ｅ、ｍｉ
Ｒ−３１、ｍｉＲ−３２６、ｍｉＲ−５６４、ｍｉＲ−２７ａ、ｌｅｔ−７ｂ、ｍｉＲ−
１２４ａ、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｌｅｔ−７ｃ、ｍｉＲ−１７、ｍｉＲ−２０ａ、ｍｉ
Ｒ−２９ａ、ｍｉＲ−３０ｃ、ｍｉＲ−７２０、ｍｉＲ−１０７、ｍｉＲ−３４２、ｍｉ
Ｒ−３４ａ、ｍｉＲ−２０２、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−２９ｃ、ｍｉＲ−１４５
、ｍｉＲ−１９３ｂ、ｍｉＲ−１９９ａ、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−２２、ｍｉＲ−１３
７及び／またはｍｉＲ−１９７に対する１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列の複数
コピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、血液癌を治療するための方法及び組成物に使
用され得る。いくつかの実施形態において、血液癌は、白血病、リンパ腫または骨髄腫で
ある。
【００６７】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要と
される１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−
１、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１８２６、ｍｉＲ−１９９ａ、ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ、
ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２０５、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−５０８−３ｐ、ｍｉＲ−５
０９−３ｐ、ｌｅｔ−７ａ、ｌｅｔ−７ｄ、ｍｉＲ−１０６ａ＊、ｍｉＲ−１２６、ｍｉ
Ｒ−１２８５、ｍｉＲ−１２９−３ｐ、ｍｉＲ−１２９１、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−
１３５ａ、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１４１、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１８２−５ｐ、
ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２８−５ｐ、ｍｉＲ−３０ａ、ｍｉＲ−３
０ｃ、ｍｉＲ−３０ｄ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３７８、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−５
０９−５ｐ、ｍｉＲ−６４６、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｌｅｔ−７ｂ、ｌｅｔ−７ｃ、ｍｉＲ
−２００ｃ、ｍｉＲ−２０４、ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３７７及び／またはｍｉＲ−５
０６に対する１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列の複数コピーを含む。この腫瘍溶
解性ウイルスは、腎癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【００６８】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要と
される１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ−
７ａ−１、ｌｅｔ−７ａ−２、ｌｅｔ−７ａ−３、ｌｅｔ−７ｂ、ｌｅｔ−７ｃ、ｌｅｔ
−７ｄ、ｌｅｔ−７ｅ、ｌｅｔ−７ｆ、ｌｅｔ−７ｆ−１、ｌｅｔ−７ｆ−２、ｌｅｔ−
７ｇ、ｌｅｔ−７ｉ、ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１０５、
ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１２２ａ、ｍｉＲ−１２３６、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２
５ｂ、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１２７、ｍｉＲ−１２７１、ｍｉＲ−１２８−３ｐ、ｍ
ｉＲ−１２９−５ｐ、ｍｉＲ−１３０ａ、ｍｉＲ−１３０ｂ、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ
−１３４、ｍｉＲ−１３７、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１３９、ｍｉＲ−１３９−５ｐ、
ｍｉＲ−１４０−５ｐ、ｍｉＲ−１４１、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４３、ｍｉ
Ｒ−１４４、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１４８ｂ
、ｍｉＲ−１５０−５ｐ、ｍｉＲ−１５ｂ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１８１ａ−５ｐ、ｍ
ｉＲ−１８５、ｍｉＲ−１８８−５ｐ、ｍｉＲ−１９３ｂ、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−１
９５−５ｐ、ｍｉＲ−１９７、ｍｉＲ−１９８、ｍｉＲ−１９９ａ、ｍｉＲ−１９９ａ−
５ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ、ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２００
ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２０２、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２０４−３ｐ、ｍｉ
Ｒ−２０５、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２０ａ、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｍ
ｉＲ−２１１、ｍｉＲ−２１２、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−２１７、ｍｉＲ−２１８、ｍ
ｉＲ−２１９−５ｐ、ｍｉＲ−２２、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２６ｂ
、ｍｉＲ−２９ａ、ｍｉＲ−２９ｂ−１、ｍｉＲ−２９ｂ−２、ｍｉＲ−２９ｃ、ｍｉＲ
−３０２ｂ、ｍｉＲ−３０２ｃ、ｍｉＲ−３０ａ、ｍｉＲ−３０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３３
５、ｍｉＲ−３３８−３ｐ、ｍｉＲ−３３ａ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ
−３６５、ｍｉＲ−３７０、ｍｉＲ−３７２、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−３７６ａ、ｍｉ
Ｒ−３７７、ｍｉＲ−４２２ａ、ｍｉＲ−４２４、ｍｉＲ−４２４−５ｐ、ｍｉＲ−４３
３、ｍｉＲ−４４５８、ｍｉＲ−４４８、ｍｉＲ−４５０ａ、ｍｉＲ−４５１、ｍｉＲ−
４８５−５ｐ、ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−５０３、ｍｉＲ−５０
６、ｍｉＲ−５１９ｄ、ｍｉＲ−５２０ａ、ｍｉＲ−５２０ｂ、ｍｉＲ−５２０ｃ−３ｐ
、ｍｉＲ−５８２−５ｐ、ｍｉＲ−５９０−５ｐ、ｍｉＲ−６１０、ｍｉＲ−６１２、ｍ
ｉＲ−６２５、ｍｉＲ−６３７、ｍｉＲ−６７５、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−８７７、ｍｉＲ
−９４０、ｍｉＲ−９４１、ｍｉＲ−９８、ｍｉＲ−９９ａ、ｍｉＲ−１３２及び／また
はｍｉＲ−３１に対する１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列の複数コピーを含む。
この腫瘍溶解性ウイルスは、肝癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。いく
つかの実施形態において、肝癌は、肝細胞癌である。
【００６９】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要と
される１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−
１４３−３ｐ、ｍｉＲ−１２６−３ｐ、ｍｉＲ−１２６−５ｐ、ｍｉＲ−１２６６−３ｐ
、ｍｉＲ−６１３０、ｍｉＲ−６０８０、ｍｉＲ−５１１−５ｐ、ｍｉＲ−１４３−５ｐ
、ｍｉＲ−２２３−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−
１９９ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−１４４、ｍｉＲ−
１５０−５ｐ、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−５ｐ、
ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１４５−３ｐ、ｍｉＲ−１４５−５ｐ、ｍｉＲ−１２
９７、ｍｉＲ−１４１、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２
００ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２９ｂ、ｍｉＲ−３８１、ｍｉＲ−４０９−３ｐ、
ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４５１、ｍｉＲ−５１１、ｍｉＲ−９９ａ、ｌｅｔ−７ａ−１
、ｌｅｔ−７ａ−２、ｌｅｔ−７ａ−３、ｌｅｔ−７ｂ、ｌｅｔ−７ｃ、ｌｅｔ−７ｄ、
ｌｅｔ−７ｅ、ｌｅｔ−７ｆ−１、ｌｅｔ−７ｆ−２、ｌｅｔ−７ｇ、ｌｅｔ−７ｉ、ｍ
ｉＲ−１、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１４２−５ｐ
、ｍｉＲ−１４４、ｍｉＲ−１４６９、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５３、ｍｉＲ−１
５ａ、ｍｉＲ−１５ｂ、ｍｉＲ−１６−１、ｍｉＲ−１６−２、ｍｉＲ−１８２、ｍｉＲ
−１９２、ｍｉＲ−１９３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１９４、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−１９８
、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２１７、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２２、ｍｉＲ−２２３、
ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ−２９ｃ、ｍｉＲ−３３ａ、ｍｉＲ−３４ａ、
ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−３６５、ｍｉＲ−４４９ａ、ｍｉＲ−４４９
ｂ、ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｍｉＲ−５４５、ｍｉＲ−６１０、ｍｉＲ−６１４、ｍｉＲ
−６３０、ｍｉＲ−６６０、ｍｉＲ−７５１５、ｍｉＲ−９５００、ｍｉＲ−９８、ｍｉ
Ｒ−９９ｂ、ｍｉＲ−１３３ａ、ｌｅｔ−７ａ、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０６ａ、ｍ
ｉＲ−１０７、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２５ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ａ−５ｐ、ｍ
ｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１２６＊、ｍｉＲ−１２９、ｍｉＲ−１３７、ｍｉＲ−１４０、
ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１４８ｂ、ｍｉＲ−１
４９、ｍｉＲ−１５２、ｍｉＲ−１５４、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−１７−５ｐ、ｍｉＲ
−１８１ａ−１、ｍｉＲ−１８１ａ−２、ｍｉＲ−１８１ｂ、ｍｉＲ−１８１ｂ−１、ｍ
ｉＲ−１８１ｂ−２、ｍｉＲ−１８１ｃ、ｍｉＲ−１８１ｄ、ｍｉＲ−１８４、ｍｉＲ−
１８６、ｍｉＲ−１９３ｂ、ｍｉＲ−１９９ａ、ｍｉＲ−２０４、ｍｉＲ−２１２、ｍｉ
Ｒ−２２１、ｍｉＲ−２２４、ｍｉＲ−２７ａ、ｍｉＲ−２７ｂ、ｍｉＲ−２９ａ、ｍｉ
Ｒ−３０ａ、ｍｉＲ−３０ｂ、ｍｉＲ−３０ｃ、ｍｉＲ−３０ｄ、ｍｉＲ−３０ｄ−５ｐ
、ｍｉＲ−３０ｅ−５ｐ、ｍｉＲ−３２、ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３３８−３ｐ、ｍｉ
Ｒ−３４０、ｍｉＲ−３４２−３ｐ、ｍｉＲ−３６１−３ｐ、ｍｉＲ−３７３、ｍｉＲ−
３７５、ｍｉＲ−４５００、ｍｉＲ−４７８２−３ｐ、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−５０３
、ｍｉＲ−５１２−３ｐ、ｍｉＲ−５２０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−５２６ｂ、ｍｉＲ−６２５
＊及び／またはｍｉＲ−９６に対する１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列の複数コ
ピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、肺癌を治療するための方法及び組成物に使用さ
れ得る。
【００７０】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要と
される１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ−
７ｂ、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２８０、ｍｉＲ−１４３、ｍｉＲ
−１４６ａ、ｍｉＲ−１４６ｂ、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−１７、ｍｉＲ−１８４、ｍｉ
Ｒ−１８５、ｍｉＲ−１８ｂ、ｍｉＲ−１９３ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２０３、
ｍｉＲ−２０４、ｍｉＲ−２０５、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２０ａ、ｍｉＲ−２１１、
ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−３１、ｍｉＲ−３３ａ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍ
ｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−３７６ａ、ｍｉＲ−３７６ｃ、ｍｉＲ−５７３、ｍｉＲ−７−５
ｐ、ｍｉＲ−９及び／またはｍｉＲ−９８に対する１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的
配列の複数コピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、黒色腫を治療するための方法及び
組成物に使用され得る。
【００７１】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要と
される１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ−
７ｄ、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−４９４、ｍｉＲ−１
００、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２５０、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ
−１２７１、ｍｉＲ−１３６、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４７、ｍｉ
Ｒ−１４８ａ、ｍｉＲ−１８１ａ、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２２０ａ、ｍｉＲ−２６ａ
、ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ−２９ａ、ｍｉＲ−３２、ｍｉＲ−３２３−５ｐ、ｍｉＲ−３
２９、ｍｉＲ−３３８、ｍｉＲ−３７０、ｍｉＲ−４１０、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４
３３、ｍｉＲ−４９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−５０３、ｍｉＲ−５０６、ｍｉＲ−６３２、ｍ
ｉＲ−６４６、ｍｉＲ−６６８、ｍｉＲ−８７７及び／またはｍｉＲ−９に対する１つ以
上の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列の複数コピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、口
腔癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【００７２】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要と
される１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ−
７ｉ、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２５ｂ、ｍｉＲ−１２９−５ｐ、ｍ
ｉＲ−１３０ｂ、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１３７、ｍｉＲ−１３８、ｍｉＲ−１４１
、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１５２、ｍｉＲ−１５３、ｍｉＲ−１５
５、ｍｉＲ−１９９ａ、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−２００ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉ
Ｒ−２１２、ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉ
Ｒ−４０９−３ｐ、ｍｉＲ−４１１、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４３２、ｍｉＲ−４４９
ａ、ｍｉＲ−４９４、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−４９８、ｍｉＲ−５１９ｄ、ｍｉＲ−６
５５、ｍｉＲ−９、ｍｉＲ−９８、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−５３２−５ｐ、ｍｉＲ−１
２４ａ、ｍｉＲ−１９２、ｍｉＲ−１９３ａ及び／またはｍｉＲ−７に対する１つ以上の
腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列の複数コピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、卵巣癌
を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【００７３】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要と
される１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−
２１６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−８０２、ｍｉＲ−２１７、ｍｉＲ−１４５−３ｐ、ｍｉＲ−１
４３−３ｐ、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｍｉＲ−２１
６ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−４３２−５ｐ、ｍｉＲ−２１６ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ
、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１３６−３ｐ、ｍｉＲ−２１６ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−
１３６−５ｐ、ｍｉＲ−１４５−５ｐ、ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ
、ｍｉＲ−１９９ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−５５９、ｍｉＲ−１２９−２−３ｐ、ｍｉＲ−４５
０７、ｍｉＲ−１−３ｐ、ｍｉＲ−１４８ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１１８１
、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２４７、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１４１、ｍｉＲ−１
４５、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１４８ａ、ｍｉＲ−１４８ｂ、ｍｉＲ−１５０＊、ｍ
ｉＲ−１５０−５ｐ、ｍｉＲ−１５２、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１９８、ｍｉＲ−２０
３、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−２１６ａ、ｍｉＲ−２９ｃ、ｍｉＲ−３３５、ｍｉＲ−３
４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−３７３、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−４
１０、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−６１５−５ｐ、ｍｉＲ−６３０、ｍｉＲ−９６、ｍｉＲ
−１３２、ｌｅｔ−７ａ、ｌｅｔ−７ａ−１、ｌｅｔ−７ａ−２、ｌｅｔ−７ａ−３、ｌ
ｅｔ−７ｂ、ｌｅｔ−７ｃ、ｌｅｔ−７ｄ、ｌｅｔ−７ｅ、ｌｅｔ−７ｆ−１、ｌｅｔ−
７ｆ−２、ｌｅｔ−７ｇ、ｌｅｔ−７ｉ、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１３５ａ、ｍｉＲ−
１４３、ｍｉＲ−１４４、ｍｉＲ−１５０、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２００ａ、ｍｉＲ−
２００ｂ、ｍｉＲ−２００ｃ、ｍｉＲ−２１７、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−３３７、ｍｉ
Ｒ−４９４及び／またはｍｉＲ−９８に対する１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列
の複数コピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、膵癌を治療するための方法及び組成物
に使用され得る。
【００７４】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要と
される１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｌｅｔ−
７ａ−３ｐ、ｌｅｔ−７ｃ、ｍｉＲ−１００、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−１０５、ｍｉＲ
−１２４、ｍｉＲ−１２８、ｍｉＲ−１２９６、ｍｉＲ−１３０ｂ、ｍｉＲ−１３３ａ−
１、ｍｉＲ−１３３ａ−２、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１３５ａ、ｍｉＲ−１４３、ｍ
ｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４６ａ、ｍｉＲ−１５４、ｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１８７、
ｍｉＲ−１８８−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ、ｍｉＲ−２００ｂ、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ
−２０５、ｍｉＲ−２１２、ｍｉＲ−２１８、ｍｉＲ−２２１、ｍｉＲ−２２４、ｍｉＲ
−２３ａ、ｍｉＲ−２３ｂ、ｍｉＲ−２５、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２６ｂ、ｍｉＲ−
２９ｂ、ｍｉＲ−３０２ａ、ｍｉＲ−３０ａ、ｍｉＲ−３０ｂ、ｍｉＲ−３０ｃ−１、ｍ
ｉＲ−３０ｃ−２、ｍｉＲ−３０ｄ、ｍｉＲ−３０ｅ、ｍｉＲ−３１、ｍｉＲ−３３０、
ｍｉＲ−３３１−３ｐ、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−３
７４ｂ、ｍｉＲ−４４９ａ、ｍｉＲ−４７２３−５ｐ、ｍｉＲ−４９７、ｍｉＲ−６２８
−５ｐ、ｍｉＲ−６４２ａ−５ｐ、ｍｉＲ−７６５及び／またはｍｉＲ−９４０に対する
１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列の複数コピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルス
は、前立腺癌を治療するための方法及び組成物に使用され得る。
【００７５】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要と
される１つ以上のウイルス遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに挿入された、ｍｉＲ−
１０１、ｍｉＲ−１８３、ｍｉＲ−２０４、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３６５ｂ−３ｐ、
ｍｉＲ−４８６−３ｐ及び／またはｍｉＲ−５３２−５ｐに対する１つ以上の腫瘍抑制性
ｍｉＲＮＡ標的配列の複数コピーを含む。この腫瘍溶解性ウイルスは、網膜芽細胞腫を治
療するための方法及び組成物に使用され得る。
【００７６】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスは、単純ヘル
ペスウイルスであり、ウイルス複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺伝子は、ＵＬ１
、ＵＬ５、ＵＬ６、ＵＬ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１１、ＵＬ１２、ＵＬ１４、ＵＬ１５
、ＵＬ１７、ＵＬ１８、ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ２２、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２６
．５、ＵＬ２７、ＵＬ２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ
３４、ＵＬ３５、ＵＬ３６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、ＵＬ３９、ＵＬ４０、ＵＬ４２、ＵＬ
４８、ＵＬ４９、ＵＬ５２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、ＩＣＰ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、Ｉ
ＣＰ２７、ＩＣＰ４７、γ−３４．５、ＵＳ３、ＵＳ４、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ
８、ＵＳ９、ＵＳ１０、ＵＳ１１及びＵＳ１２からなる群から選択される。
【００７７】
いくつかの場合において、本発明の組み換えウイルスベクターは、単純ヘルペスウイル
ス（ＨＳＶ）であり、ＩＣＰ４７遺伝子に対するプロモーターの他に、二倍体遺伝子ＩＣ
Ｐ０、ＩＣＰ３４．５、ＬＡＴ及びＩＣＰ４のそれぞれを１コピー含む、内部反復（接合
）領域の欠失を更に含む。
【００７８】
ある特定の実施形態において、本発明の組み換えウイルスベクターは、直接感染及び／
または水平伝播のいずれかによる細胞内侵入が増強されたＨＳＶである。一態様において
、本発明のＨＳＶベクターは、ＨＳＶ感染の典型的なメディエーター以外の細胞タンパク
質（例えば、ネクチン−１、ＨＶＥＭまたはヘパラン硫酸／コンドロイチン硫酸プロテオ
グリカン以外の細胞タンパク質）との相互作用を介して、細胞に直接感染することができ
る。ある特定の実施形態において、本発明の組み換えウイルスベクターは、ＨＳＶであり
、通常以外の受容体を介したベクター侵入を容易にする、ｇＢまたはｇＨ遺伝子変異を更
に含む。別の態様において、本発明は、典型的にＨＳＶの水平伝播に抵抗性であるｇＤ受
容体を欠く細胞などの細胞において水平伝播を示す、変異ｇＨ糖タンパク質を更に含む、
ＨＳＶベクターを提供する。いくつかの実施形態において、本発明のＨＳＶベクターは、
米国特許出願公開第２０１３／００９６１８６号（その全体を参照により本明細書に援用
する）に記載されている変異ｇＢまたはｇＨタンパク質のうちの１つ以上を含む。ある特
定の態様において、ＨＳＶベクター中の変異侵入タンパク質は、ウイルス侵入に関与する
、ｇＢ、ｇＨなどの糖タンパク質であり、変異ＨＳＶベクターは、両タンパク質の変異体
を含み得る。しかしながら、変異侵入タンパク質は、ＨＳＶベクターの細胞への侵入に作
用する任意のタンパク質であってよい。ある特定の実施形態において、変異侵入タンパク
質は、ｇＤ以外であるが、ＨＳＶベクターは、リガンドまたは他の所望の変異を含有する
ような変異ｇＤを追加で含み得る。本発明のＨＳＶベクターにおいて使用されるｇＢまた
はｇＨ糖タンパク質の非限定的な変異は、次の残基：ｇＢ：Ｄ２８５、ｇＢ：Ａ５４９、
ｇＢ：Ｓ６６８、ｇＨ：Ｎ７５３及びｇＨ：Ａ７７８のうちの１つ以上に存在する。いく
つかの実施形態において、本発明のＨＳＶベクターは、ｇＢ：Ｄ２８５とｇＢ：Ａ５４９
の両方、ｇＨ：Ｎ７５３とｇＨ：Ａ７７８の両方、ならびに／またはｇＢ：Ｓ６６８、ｇ
Ｈ：Ｎ７５３及びｇＨ：Ａ７７８のそれぞれに変異を含む。ある特定の実施形態において
、ＨＳＶベクターは、２つ以上（例えば、３つ以上、４つ以上）のこのような変異を含有
し、ＨＳＶベクターは、これら５つの全ての残基に変異を含み得る。一実施形態において
、ＨＳＶベクターは、ｇＢ：２８５、ｇＢ；５４９、ｇＨ：７５３及びｇＨ：７７８に変
異を有する。変異は、本明細書において、ＨＳＶ−１株ＫＯＳの誘導株Ｋ２６ＧＦＰのｇ
Ｄ、ｇＢ及びｇＨ遺伝子のコドン（アミノ酸）ナンバリングを基準に示す。以下の表に示
されるように、Ｋ２６ＧＦＰのｇＢ及びｇＨの配列は、ＧｅｎＢａｎｋ（＃ＡＦ３１１７
４０（参照により本明細書に援用する））に開示されているｇＢ及びｇＨ（ＧｅｎＢａｎ
ｋ＃Ｘ０３８９６（参照により本明細書に援用する））の配列とは異なる。
【表９】
2019508063.tif 000003
【００７９】
ただし、Ｋ２６ＧＦＰは、ＧｅｎＢａｎｋ  Ｘ０３８９６のヌクレオチド２，０７９〜
２，１０２に対応する遺伝子領域に更なる差異を含有し得る。したがって、ＫＯＳ誘導株
Ｋ２６ＧＦＰまたはＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＦ３１１７４０のいずれかの配
列を、本明細書で考察されるｇＢ変異の参照配列として使用できることが理解されるだろ
う。また、ＫＯＳ誘導株Ｋ２６ＧＦＰまたはＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｘ０３８
９６のいずれかの配列を、本明細書で考察されるｇＨ変異の参照配列として使用できるこ
とが理解されるだろう。しかしながら、本発明のＨＳＶベクターは、任意のＨＳＶ株のｇ
Ｂ及びｇＨにおける相同の変異を含み得る。
【００８０】
いくつかの態様において、ＨＳＶベクターに含めるための侵入タンパク質の変異は、置
換変異であるが、変異は、置換変異体に限定されない。ある特定の実施形態において、Ｈ
ＳＶベクターに使用される変異ｇＢまたはｇＨ糖タンパク質は、ｇＢ：Ｄ２８５Ｎ、ｇＢ
：Ａ５４９Ｔ、ｇＢ：Ｓ６６８Ｎ、ｇＨ：Ｎ７５３Ｋ、ｇＨ：Ａ７７８Ｖからなる置換変
異からなる群から選択される。ある特定の態様において、ＨＳＶベクターは、これらの置
換（２つ以上のこのような置換（例えば、３つ以上、４つ以上または全て）など）の組み
合わせを含み、ｇＢ：Ｄ２８５Ｎ／ｇＢ：Ａ５４９Ｔ二重変異体、ｇＨ：Ｎ７５３Ｋ／ｇ
Ｈ：Ａ７７８Ｖ二重変異体、及びｇＢ：Ｓ６６８Ｎ／ｇＨ：Ｎ７５３Ｋ／ｇＨ：Ａ７７８
Ｖ三重変異体が実施形態の例である。一実施形態において、ＨＳＶベクターは、ｇＢ：Ｄ
２８５Ｎ／ｇＢ：Ａ５４９Ｔ／ｇＨ：Ｎ７５３Ｋ／ｇＨ：Ａ７７８Ｖを含む。
【００８１】
ある特定の態様において、ＨＳＶベクターは、変異ｇＢ及び／または変異ｇＨ糖タンパ
ク質を含み、糖タンパク質中の変異は、少なくとも２つの残基における置換変異であり、
ベクターがＨＳＶ−１  Ｋ２６ＧＦＰであるとき、少なくとも２つの残基は、ｇＢ：Ｄ２
８５、ｇＢ：Ａ５４９、ｇＢ：Ｓ６６８、ｇＨ：Ｎ７５３及びｇＨ：Ａ７７８からなる群
から選択されるか、ベクターが相同ＨＳＶであるとき、少なくとも２つの残基は、ｇＢ：
Ｄ２８５、ｇＢ：Ａ５４９、ｇＢ：Ｓ６６８、ｇＨ：Ｎ７５３及びｇＨ：Ａ７７８に対応
するアミノ酸から選択され、ｇＢ：Ｄ２８５残基は、ＶＹＰＹＸＥＦＶＬ（配列番号１）
中のＸに対応し、ｇＢ：Ａ５４９残基は、ＫＬＮＰＮＸＩＡＳ（配列番号２）中のＸに対
応し、ｇＢ：Ｓ６６８残基は、ＩＴＴＶＸＴＦＩＤ（配列番号３）中のＸに対応し、ｇＨ
：Ｎ７５３残基は、ＶＤＴＤＸＴＱＱＱ（配列番号４）中のＸに対応し、ｇＨ：Ａ７７８
残基は、ＶＰＳＴＸＬＬＬＦ（配列番号５）中のＸに対応し、ＨＳＶベクターは、ＨＳＶ
−１またはＨＳＶ−２ベクターである。
【００８２】
一態様において、本発明は、ｍｉＲＮＡ、遺伝子またはメタロプロテアーゼ組織阻害剤
（ＴＩＭＰ）の発現を低下させるか、その機能を阻害する、タンパク質またはオリゴヌク
レオチド（例えば、ｓｈＲＮＡ、デコイオリゴヌクレオチドまたはａｎｔａｇｏｍｉｒ）
をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む、組み換え腫瘍溶解性ウイルスを
包含する。このような組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、本明細書において、「ゲノム編集
」または「微小環境リモデリング」ウイルスまたはベクターと称される。コードされるタ
ンパク質またはオリゴヌクレオチドは、タンパク質（例えば、ＴＩＭＰ）を分解の標的に
すること（例えば、ユビキチン化及びプロテアソーム分解によって、またはリソソーム分
解標的化）、同種受容体との相互作用を遮断すること（例えば、ブロッキング抗体もしく
はその抗原結合断片またはペプチド阻害剤）、メッセンジャーＲＮＡ転写物を分解するこ
と（例えば、低分子干渉ＲＮＡまたは低分子ヘアピンＲＮＡ）、及び／または特定のｍｉ
Ｒ、遺伝子もしくはタンパク質をコードするゲノムＤＮＡ配列を改変すること（例えば、
エンドヌクレアーゼによって）を含む任意数の方法で、ｍｉＲＮＡ、遺伝子またはＴＩＭ
Ｐの発現を低下させるか、その機能を阻害することができる。
【００８３】
特定の実施形態において、タンパク質またはオリゴヌクレオチドは、発がんまたは転移
に関与するｍｉＲまたは遺伝子（例えば、がん促進性ｍｉＲまたはがん遺伝子）の発現を
低下させる。いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、がん促進性
ｍｉＲＮＡ（例えば、表４に列挙されるｍｉＲＮＡのうちの１つ以上）であるｍｉＲＮＡ
の発現または機能を低下させるタンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードする、少な
くとも１つのポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解
性ウイルスは、がん促進性ｍｉＲＮＡの発現または機能を低下させるタンパク質またはオ
リゴヌクレオチドをコードする、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０
またはそれ以上のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍
溶解性ウイルスは、複数のがん促進性ｍｉＲＮＡの発現または機能を低下させる複数のタ
ンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードする、少なくとも１、２、３、４、５、６、
７、８、９、１０またはそれ以上のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態におい
て、タンパク質またはオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１７−９２の発現を低下させ、肺
癌（例えば、小細胞肺癌）を治療するために使用される。他の実施形態において、タンパ
ク質またはオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２２１及び／またはｍｉＲ−２１の発現を低
下させ、膠芽腫を治療するために使用される。ある特定の実施形態において、タンパク質
またはオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１５５及び／またはｍｉＲ−１７−９２の発現を
低下させ、リンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、
辺縁帯リンパ腫または慢性リンパ球性白血病）を治療するために使用される。いくつかの
実施形態において、タンパク質またはオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２２１、ｍｉＲ−
２２２及び／またはｍｉＲ−１４６の発現を低下させ、甲状腺癌を治療するために使用さ
れる。いくつかの実施形態において、タンパク質またはオリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−
３７２及び／またはｍｉＲ−３７３の発現を低下させ、精巣癌（例えば、精巣胚細胞腫瘍
）を治療するために使用される。いくつかの実施形態において、タンパク質またはオリゴ
ヌクレオチドは、ｍｉＲ−１８及び／またはｍｉＲ−２２４の発現を低下させ、肝癌（例
えば、肝細胞癌）を治療するために使用される。
【００８４】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組み換えウイルスベクターは、腫
瘍細胞外マトリックス（ＥＣＭ）を分解するために使用され得、これにより、いくつかの
態様において、ウイルス伝播が増強される。マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）
は、亜鉛依存性プロテアーゼであり、その活性に基づいて、コラゲナーゼ、ゼラチナーゼ
、ストロムライシン及びマトリライシンに分類される。これらのプロテアーゼは、通常、
酵素前駆体（チモーゲン）として分泌され、プロペプチドのプロドメインのタンパク質分
解除去によって活性化される。がんにおいてＭＭＰが果たす主要な役割は、ＥＣＭの分解
であり、これにより、腫瘍浸潤及び転移が促進される。ＭＭＰはまた、腫瘍進行、上皮間
葉転換（ＥＭＴ）及び血管新生にも関与する。ＭＭＰは、ｍｉＲＮＡだけでなく、４つの
プロテアーゼ阻害剤ファミリー（ＴＩＭＰ１、ＴＩＭＰ２、ＴＩＭＰ３及びＴＩＭＰ４）
を含むＴＩＭＰによって制御される。本発明の組み換えウイルスベクターを用いて、ＭＭ
Ｐファミリーを負に制御するｍｉＲＮＡまたはＴＩＭＰを破壊することによって、広範な
腫瘍微小環境を弱めることができる。ｍｉＲＮＡ／ＭＭＰ相互作用の例は、表５に示され
る。これらの相互作用の多くは、複数のＭＭＰが単一のｍｉＲＮＡによって制御されるこ
とを示しており、例えば、ｌｅｔ−７は、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９及びＭＭＰ−１４を制
御し、ｍｉＲ−１４３は、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９及びＭＭＰ−１３を制御し、ｍｉＲ−
２１８は、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−７及びＭＭＰ−９を制御する。更に、大多数のＭＭＰは
、単一のＴＩＭＰマスタースイッチによって制御され得、例えば、ＴＩＭＰ１は、既知の
ＭＭＰのほぼ全てを阻害することが知られており、また広範な細胞種で細胞増殖を促進し
、ＴＩＭＰ２は、ＭＭＰ−１４及びＭＭＰ−２と相互作用する。
【００８５】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、微小環境リモデリング
ｍｉＲＮＡ（例えば、表５に列挙されるｍｉＲＮＡのうちの１つ以上）であるｍｉＲＮＡ
の発現または機能を低下させるタンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードする、少な
くとも１つのポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、タンパク質または
オリゴヌクレオチドは、１つの微小環境リモデリングｍｉＲＮＡの発現または機能を低下
させる。いくつかの実施形態において、タンパク質またはオリゴヌクレオチドは、少なく
とも２、３、４、５、６、７、８、９または１０以上の微小環境リモデリングｍｉＲＮＡ
の発現または機能を低下させる。いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイ
ルスは、複数の微小環境リモデリングｍｉＲＮＡの発現または機能を低下させる複数のタ
ンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードする、複数のポリヌクレオチドを含む。いく
つかの実施形態において、本明細書に記載される戦略は、ＭＭＰを負に制御するｍｉＲＮ
ＡまたはＴＩＭＰの発現または機能をノックダウンまたは破壊する本発明の組み換えウイ
ルスベクターによって活用され得る。いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性
ウイルスは、ＴＩＭＰ１、ＴＩＭＰ２、ＴＩＭＰ３及びＴＩＭＰ４から選択されるＴＩＭ
Ｐの発現を低下させる。
【００８６】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、
遺伝子の発現または機能を減少させるタンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードする
、少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様において、遺伝子は、がん
遺伝子（例えば、表７に列挙される遺伝子から選択される遺伝子）である。いくつかの態
様において、遺伝子は、がん促進性ｍｉＲ（例えば、表４に列挙されるｍｉＲＮＡ）、微
小環境リモデリングｍｉＲ（例えば、表５に列挙されるｍｉＲＮＡ）、またはＥＣＭ分解
の負の制御因子（例えば、ＴＩＭＰ）をコードする。遺伝子の発現及び／または機能の低
下は、転写レベル（例えば、ゲノムＤＮＡ配列の変異、欠失またはサイレンシング）また
は翻訳レベル（例えば、ｍＲＮＡ分解を介した遺伝子産物の産生の阻害）で達成され得る
。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、
遺伝子配列の変異、欠失または転写抑制を可能にすることによって遺伝子の発現または機
能を低下させるヌクレアーゼをコードする、１つ以上のポリヌクレオチドを含む。具体的
な実施形態において、ヌクレアーゼは、クラスター化された規則的な間隔のある短い回文
の繰り返し配列（ＣＲＩＳＰＲ）関連エンドヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアー
ゼ（ＺＦＮ）または転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）から選択
される。非限定的な例において、ＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼは、ＳｐＣａｓ９
、ＳｐＣａｓ９−ＨＦ１、ＳｐＣａｓ９−ＨＦ２、ＳｐＣａｓ９−ＨＦ３、ＳｐＣａｓ９
−ＨＦ４、ＳａＣａｓ９、ＦｎＣｐｆ、ＦｎＣａｓ９、ｅＳｐＣａｓ９、Ｃ２Ｃ１、Ｃ２
Ｃ３、Ｃｐｆ１、Ｃａｓ１、Ｃａｓ１Ｂ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃ
ａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９（Ｃｓｎ１及びＣｓｘ１２としても知られる）、
Ｃａｓ１０、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２
、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１
、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１
７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５
、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３及びＣｓｆ４から選択される。
【００８７】
本発明の組み換えウイルスベクターは、細菌系に基づいた遺伝子操作ヌクレアーゼ系で
あり、哺乳動物ゲノムを操作するために使用することができる、ＣＲＩＳＰＲ（クラスタ
ー化された規則的な間隔のある短い回文の繰り返し配列）／Ｃａｓ（ＣＲＩＳＰＲ関連）
ヌクレアーゼ系を利用してもよい。一般に、この系は、Ｃａｓヌクレアーゼと、ガイドＲ
ＮＡ（ｇＲＮＡ）とを含む。ｇＲＮＡは、標的ゲノムＤＮＡ配列に特異的なｃｒｉｓｐｒ
−ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）と、Ｃａｓ結合を促進するｔｒａｃｒＲＮＡ（ｔｒＲＮＡ）との
２つの部分からなる。ｃｒＲＮＡ及びｔｒＲＮＡは、別個のＲＮＡオリゴヌクレオチドと
して存在してもよいし、同じＲＮＡオリゴヌクレオチド中に存在してもよい（単一ガイド
ＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）と呼ばれる）。本明細書で使用されるとき、「ガイドＲＮＡ」また
は「ｇＲＮＡ」という用語は、個々のｔｒＲＮＡと、個々のｃｒＲＮＡとの組み合わせま
たはｓｇＲＮＡのいずれかを指す。例えば、Ｊｉｎｅｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ  ３３７：８１６−８２１；Ｃｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ  ３３９：８１９−８２３；Ｍａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  
３３９：８２３−８２６；Ｑｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｃｅｌｌ  １５２：１１７３
−１１８３；Ｊｉｎｅｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３），ｅＬｉｆｅ  ２：ｅ００４７１；
Ｄａｖｉｄ  Ｓｅｇａｌ（２０１３）ｅＬｉｆｅ  ２：ｅ００５６３；Ｒａｎ  ｅｔ  ａ
ｌ．（２０１３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ８（１１）：２２８１−２３０８
；Ｚｅｔｓｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃｅｌｌ  １６３（３）：７５９−７７１
；ＰＣＴ国際公開第ＷＯ２００７／０２５０９７号、同第ＷＯ２００８／０２１２０７号
、同第ＷＯ２０１０／０１１９６１号、同第ＷＯ２０１０／０５４１０８号、同第ＷＯ２
０１０／０５４１５４号、同第ＷＯ２０１２／０５４７２６号、同第ＷＯ２０１２／１４
９４７０号、同第ＷＯ２０１２／１６４５６５号、同第ＷＯ２０１３／０９８２４４号、
同第ＷＯ２０１３／１２６７９４号、同第ＷＯ２０１３／１４１６８０号及び同第ＷＯ２
０１３／１４２５７８号；米国特許出願公開第２０１０−００９３６１７号、同第２０１
３−００１１８２８号、同第２０１０−０２５７６３８号、同第２０１０−００７６０５
７号、同第２０１１−０２１７７３９号、同第２０１１−０３００５３８号、同第２０１
３−０２８８２５１号及び同第２０１２−０２７７１２０号；ならびに米国特許第８，５
４６，５５３号（そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）を参照されたい
。
【００８８】
複数のクラス１のＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系（Ｉ型及びＩＩＩ型系を含む）が特定され、
細部にわたって機能的に特徴付けられ、エフェクター複合体の複雑な構造及び力学が明ら
かになっている（Ｂｒｏｕｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００８、Ｍａｒｒａｆｆｉｎｉ  ａｎ
ｄ  Ｓｏｎｔｈｅｉｍｅｒ，２００８、Ｈａｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９、Ｓｉｎｋｕ
ｎａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４、Ｍｕｌｅ
ｐａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。加えて、Ｃａｓ９ファミリーの相同ＲＮＡ誘導エ
ンドヌクレアーゼをエフェクターとして利用する、いくつかのクラス２のＩＩ型ＣＲＩＳ
ＰＲ−Ｃａｓ系も特定され、実験的に特徴付けられている（Ｂａｒｒａｎｇｏｕ  ｅｔ  
ａｌ．，２００７、Ｇａｒｎｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０、Ｄｅｌｔｃｈｅｖａ  ｅ
ｔ  ａｌ．，２０１１、Ｓａｐｒａｎａｕｓｋａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１、Ｊｉｎｅ
ｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２、Ｇａｓｉｕｎａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。最近では
、一般に第２のクラス２のＶ型と言われるＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系がいくつかの細菌ゲノ
ムで特定されている。一般にＶ型と言われるＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系は、Ｃｐｆ１（Ｐｒ
ｅｖｏｔｅｌｌａ及びＦｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  １由来ＣＲＩＳＰＲ）と呼ばれる、約１
，３００の大きなアミノ酸タンパク質を含有する。
【００８９】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスは、ｍｉＲＮ
ＡまたはＴＩＭＰを標的にするｔｒＲＮＡ及びｃｒＲＮＡをコードする、少なくとも１つ
のポリヌクレオチドを更に含む。いくつかの場合において、ｔｒＲＮＡ及びｃｒＲＮＡを
コードする少なくとも１つのポリヌクレオチドは、ウイルスゲノム上の遺伝子座に挿入さ
れる。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、合成インスレーターまたは天
然ウイルス（例えば、ＨＳＶ）インスレーターを含む境界配列である。ある特定の実施形
態において、腫瘍溶解性ウイルスは、単純ヘルペスウイルスであり、ＲＮＡ結合部位をコ
ードする少なくとも１つのポリヌクレオチドは、内部反復接合領域（二倍体遺伝子ＩＣＰ
０、ＩＣＰ３４．５、ＬＡＴ、ＩＣＰ４及びＩＣＰ４７プロモーターのそれぞれを１コピ
ー含む）、ＩＣＰ０、ＬＡＴ、ＵＬ１、ＵＬ５、ＵＬ６、ＵＬ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ
１１、ＵＬ１２、ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１７、ＵＬ１８、ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ
２２、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２６．５、ＵＬ２７、ＵＬ２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、
ＵＬ３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３５、ＵＬ３６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、
ＵＬ３９、ＵＬ４０、ＵＬ４２、ＵＬ４８、ＵＬ４９、ＵＬ５２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、
ＩＣＰ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、γ−３４．５、ＵＳ３、Ｕ
Ｓ４、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ８、ＵＳ９、ＵＳ１０、ＵＳ１１及びＵＳ１２を含
む、１つ以上の遺伝子座に、または１つ以上の遺伝子座の間に挿入される。一実施形態に
おいて、腫瘍溶解性ウイルスは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）であり、ＲＮＡ結合部
位をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドは、ＵＬ３とＵＬ４のオープンリーデ
ィングフレームの間の遺伝子座に挿入される（例えば、図４５及び図４６）。
【００９０】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、二重特異性Ｔ細胞エン
ゲージャー（ＢｉＴＥ）、抗免疫抑制タンパク質または免疫原性抗原であるタンパク質を
コードする、少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。本明細書で使用されるとき、「
抗免疫抑制タンパク質」は、免疫抑制経路を阻害するタンパク質である。本発明は、抗制
御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）タンパク質または抗骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）タンパク質で
ある抗免疫抑制タンパク質を発現する、腫瘍溶解性ウイルスを包含する。いくつかの実施
形態において、抗免疫抑制タンパク質は、ＶＨＨ由来遮断剤またはＶＨＨ由来ＢｉＴＥで
ある。本明細書で使用されるとき、「免疫原性抗原」は、炎症性または免疫原性の免疫応
答を高めるタンパク質を指す。特定の実施形態において、抗免疫抑制及び免疫原性抗原は
、抗腫瘍免疫応答を誘導する。このようなタンパク質の例には、免疫チェックポイント受
容体（例えば、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３、ＰＤ１、ＰＤＬ１及びその他）に結合し阻害する
抗体もしくはその抗原結合断片、炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮα
、ＩＦＮβ、ＴＮＦα、ＩＬ−１２、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦ及び
その他）、または活性化受容体（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＩＩａ、ＦｃγＩＩＩａ、
共刺激受容体及びその他）に結合し活性化するタンパク質が挙げられる。特定の実施形態
において、タンパク質は、ＥｐＣＡＭ、葉酸、ＩＦＮβ、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ１、Ａ
２Ａ、抗ＦＧＦ２、抗ＦＧＦＲ／ＦＧＦＲ２ｂ、抗ＳＥＭＡ４Ｄ、ＣＣＬ５、ＣＤ１３７
、ＣＤ２００、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＳＦ−１Ｒ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１３、エン
ドセリンＢ型受容体、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２、ＩＬ−２１、ＩＬ−３５、Ｉ
ＳＲＥ７、ＬＦＡ−１、ＮＧ２（ＳＰＥＧ４としても知られる）、ＳＭＡＤ、ＳＴＩＮＧ
、ＴＧＦβ及びＶＣＡＭ１から選択される。
【００９１】
ある特定の実施形態において、ｍｉＲＮＡ、遺伝子またはＴＩＭＰの発現を低下させる
ために標的化されたタンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードするポリヌクレオチド
は、組み換え腫瘍溶解性ウイルスのウイルスゲノムの遺伝子座に挿入される。いくつかの
実施形態において、ポリヌクレオチドは、合成インスレーターまたは天然ウイルス（例え
ば、ＨＳＶ）インスレーターを含む境界配列である。ある特定の実施形態において、腫瘍
溶解性ウイルスは、単純ヘルペスウイルスであり、ＲＮＡ結合部位をコードする少なくと
も１つのポリヌクレオチドは、内部反復接合領域（二倍体遺伝子ＩＣＰ０、ＩＣＰ３４．
５、ＬＡＴ、ＩＣＰ４及びＩＣＰ４７プロモーターのそれぞれを１コピー含む）、ＩＣＰ
０、ＬＡＴ、ＵＬ１、ＵＬ５、ＵＬ６、ＵＬ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１１、ＵＬ１２、
ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１７、ＵＬ１８、ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ２２、ＵＬ２５、
ＵＬ２６、ＵＬ２６．５、ＵＬ２７、ＵＬ２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ３１、ＵＬ３
２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３５、ＵＬ３６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、ＵＬ３９、ＵＬ４
０、ＵＬ４２、ＵＬ４８、ＵＬ４９、ＵＬ５２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、ＩＣＰ０、ＩＣＰ
４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４７、γ−３４．５、ＵＳ３、ＵＳ４、ＵＳ５、Ｕ
Ｓ６、ＵＳ７、ＵＳ８、ＵＳ９、ＵＳ１０、ＵＳ１１及びＵＳ１２を含む、１つ以上の遺
伝子座に、または１つ以上の遺伝子座の間に挿入される。一実施形態において、ウイルス
は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）であり、少なくとも１つのポリヌクレオチドがＵＬ
３とＵＬ４のオープンリーディングフレームの間の遺伝子座に挿入される（例えば、図４
５及び図４６）。
【００９２】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、少なくとも１つのプロ
テアーゼ活性化抗体を含む。プロテアーゼ活性化抗体（Ｍｅｔｚら（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅ
ｎｇ  Ｄｅｓ  Ｓｅｌ，２５（１０）：５７１−８０，２０１２）が記載するものなど）
は、保護キャップのプロテアーゼ切断を受けた後、活性化され、標的にのみ結合する。い
くつかの場合において、腫瘍微小環境は、健康な周辺組織とは大きく異なる一連のプロテ
アーゼを有する。例えば、プロテアーゼカテプシンＢは、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、大腸
癌、胃癌、頭頸部癌、肝癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵癌、前立腺癌及び甲状腺癌を含む
、多数のがんで過剰発現される。ヒト分解産物の総体は、ヒト細胞によって合成されるプ
ロテアーゼの完全な一覧からなり、最も多いものから最も少ないものへの順序でメタロプ
ロテアーゼ（ＭＭＰ）、セリンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、スレオニンプロ
テアーゼ及びアスパラギン酸プロテアーゼの５つの大きなクラスに分類される、少なくと
も５６９のプロテアーゼから構成される（Ｌｏｐｅｚ−Ｏｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ
Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ，７（１０）：８００−８，２００７）。特に、ＭＭＰによって
特異的に切断されるプロテアーゼ抗体は、ＭＭＰが細胞外及び細胞周辺領域に存在するこ
とから、本明細書に記載される組み換えウイルスベクターを腫瘍微小環境に標的化する優
れた手段として役立ち得る。表６は、がんで過剰発現されるプロテアーゼをまとめたもの
であり、これらのプロテアーゼを利用することで、プロテアーゼ活性化抗体を用いてシュ
ードタイプ化される組み換えウイルスベクターの特異的結合が可能となる。
【００９３】
ある特定の実施形態において、プロテアーゼ活性化抗体は、ウイルス糖タンパク質エン
ベロープ中に組み込まれる。プロテアーゼ活性化抗体は、治療指数を上げ、かつオフター
ゲット感染を少なくするために、本発明の組み換えウイルスベクター（例えば、ＨＳＶベ
クター）の糖タンパク質エンベロープ中に組み込むことができる。ＨＳＶベクターの場合
、いくつかの実施形態において、糖タンパク質は、ｇＣまたはｇＤであり得る。いくつか
の実施形態において、本明細書に記載される組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、プロテアー
ゼ活性化抗体をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。ある特定の実施形
態において、プロテアーゼ活性化抗体は、システインカテプシン、アスパラギン酸カテプ
シン、カリクレイン（ｈＫ）、セリンプロテアーゼ、カスパーゼ、マトリックスメタロプ
ロテアーゼ（ＭＭＰ）及びディスインテグリン及びメタロプロテアーゼ（ＡＤＡＭ）から
選択されるプロテアーゼによって活性化される。いくつかの実施形態において、プロテア
ーゼは、カテプシンＫ、カテプシンＢ、カテプシンＬ、カテプシンＥ、カテプシンＤ、ｈ
Ｋ１、ＰＳＡ（ｈＫ３）、ｈＫ１０、ｈＫ１５、ｕＰＡ、ｕＰＡＲ、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ
−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１
、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、ＭＭＰ−
１７、ＭＭＰ−１８、ＭＭＰ−１９、ＭＭＰ−２０、ＭＭＰ−２１、ＭＭＰ−２３Ａ、Ｍ
ＭＰ−２３Ｂ、ＭＭＰ−２４、ＭＭＰ−２５、ＭＭＰ−２６、ＭＭＰ−２７、ＭＭＰ−２
８または表６に列挙されるプロテアーゼから選択される。
【００９４】
いくつかの実施形態において、プロテアーゼ活性化抗体は、非がん細胞または非がん微
小環境よりもがん細胞またはがん微小環境で高度に発現されるタンパク質に結合する。あ
る特定の態様において、プロテアーゼ活性化抗体は、ＮＫＧ２Ｄ、ｃ−ｍｅｔ、ＨＧＦＲ
、ＣＤ８、ヘパラン硫酸、ＶＳＰＧ４（ＮＧ２としても知られる）、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ
ｖＩＩＩ、ＣＤ１３３、ＣＸＣＲ４、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＬＣ−３、アネキシ
ンＩＩ、ヒトトランスフェリン受容体またはＥｐＣＡＭに結合する。ある特定の場合にお
いて、異なる腫瘍組織型への標的化を確実に行うために、単一のウイルスベクター粒子中
に複数のプロテアーゼ活性化抗体を組み込むことができる。例えば、少なくとも１、２、
３、４、６、７、８、９、１０またはそれ以上のプロテアーゼ活性化抗体は、ウイルス糖
タンパク質エンベロープ中に組み込まれ得る。いくつかの実施形態において、組み換え腫
瘍溶解性ウイルスは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ
以上のプロテアーゼ活性化抗体をコードする、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、
８、９、１０またはそれ以上のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、
腫瘍溶解性ウイルスは、非がん細胞または非がん微小環境よりもがん細胞またはがん微小
環境で高度に発現される第１のタンパク質に結合する第１のプロテアーゼ活性化抗体と、
非がん細胞または非がん微小環境よりもがん細胞またはがん微小環境で高度に発現される
第２のタンパク質に結合する第２のプロテアーゼ活性化抗体とを含む。更なる実施形態に
おいて、腫瘍溶解性ウイルスは、非がん細胞または非がん微小環境よりもがん細胞または
がん微小環境で高度に発現される複数のタンパク質に結合する複数のプロテアーゼ活性化
抗体を含む。腫瘍溶解性ウイルスは、例えば、プロテアーゼ活性化抗体を含み、抗体は、
ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である。いくつかの実施形態において、腫瘍溶解
性ウイルスは、完全長免疫グロブリン、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆ
ｖ、ダイアボディ、トリアボディ、ミニボディ、単一ドメイン抗体または多重特異性抗体
である抗体を含む。
【００９５】
いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、ウイルス複製に必要と
される１つ以上のウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上の腫瘍抑制性マイクロ
ＲＮＡ（ｍｉＲ）標的配列、１つ以上のタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコード
する１つ以上のポリヌクレオチドであって、当該タンパク質またはオリゴヌクレオチドは
、ｍｉＲ、遺伝子もしくはＴＩＭＰの発現を低下させるか、その機能を阻害する、オリゴ
ヌクレオチド、少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体、及び／または少なくとも１つ
のプロテアーゼ活性化抗体をコードするポリヌクレオチドのうちの１つ以上を含む。いく
つかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、非がん性細胞におけるウイル
ス複製に必要とされるウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉ
ＲＮＡ標的配列の複数コピー、及び／またはがん促進性ｍｉＲＮＡもしくはがん遺伝子の
発現低下を目的にしたタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードする第１のポリヌ
クレオチド、及び／または微小環境リモデリングｍｉＲＮＡもしくはＴＩＭＰの発現低下
を目的にしたタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードする第２のポリヌクレオチ
ドを含む。いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、非がん性細胞
におけるウイルス複製に必要とされるウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上の
腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列の複数コピー、及び／またはがん促進性ｍｉＲＮＡもしく
はがん遺伝子の発現低下を目的にしたタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードす
るポリヌクレオチド、及び／または少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体を含む。更
なる実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、非がん性細胞におけるウイルス
複製に必要とされるウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲ
ＮＡ標的配列の複数コピー、及び／または微小環境リモデリングｍｉＲＮＡもしくはＴＩ
ＭＰの発現低下を目的にしたタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードするポリヌ
クレオチド、及び／または少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体を含む。一実施形態
において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、非がん性細胞におけるウイルス複製に必要と
されるウイルス遺伝子の遺伝子座に挿入された１つ以上の腫瘍抑制性ｍｉＲＮＡ標的配列
の複数コピー、及び／またはがん促進性ｍｉＲＮＡもしくはがん遺伝子の発現低下を目的
にしたタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードする第１のポリヌクレオチド、及
び／または微小環境リモデリングｍｉＲＮＡもしくはＴＩＭＰの発現低下を目的にしたタ
ンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードする第２のポリヌクレオチド、及び／また
は少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体を含む。いくつかの具体的な実施形態におい
て、本段落に記載される腫瘍溶解性ウイルスは、単純ヘルペスウイルスであり、非がん性
細胞においてウイルス複製に必要とされるウイルス遺伝子は、ＵＬ１、ＵＬ５、ＵＬ６、
ＵＬ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１１、ＵＬ１２、ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１７、ＵＬ１
８、ＵＬ１９、ＵＬ２０、ＵＬ２２、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２６．５、ＵＬ２７、Ｕ
Ｌ２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３５、Ｕ
Ｌ３６、ＵＬ３７、ＵＬ３８、ＵＬ３９、ＵＬ４０、ＵＬ４２、ＵＬ４８、ＵＬ４９、Ｕ
Ｌ５２、ＵＬ５３、ＵＬ５４、ＩＣＰ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２２、ＩＣＰ２７、ＩＣＰ４
７、γ−３４．５、ＵＳ３、ＵＳ４、ＵＳ５、ＵＳ６、ＵＳ７、ＵＳ８、ＵＳ９、ＵＳ１
０、ＵＳ１１及びＵＳ１２である。
【００９６】
ある特定の態様において、本発明は、がん促進性ｍｉＲＮＡまたはがん遺伝子の発現低
下を目的にしたタンパク質またはオリゴヌクレオチドをコードする第１のポリヌクレオチ
ドと、微小環境リモデリングｍｉＲＮＡまたはＴＩＭＰの低下発現を目的にしたタンパク
質またはオリゴヌクレオチドをコードする第２のポリヌクレオチドとを含む、組み換え腫
瘍溶解性ウイルスに関する。他の実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、が
ん促進性ｍｉＲＮＡまたはがん遺伝子の発現低下を目的にしたタンパク質またはオリゴヌ
クレオチドをコードするポリヌクレオチドと、少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体
とを含む。いくつかの実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、微小環境リモ
デリングｍｉＲＮＡまたはＴＩＭＰの発現低下を目的にしたタンパク質またはオリゴヌク
レオチドをコードするポリヌクレオチドと、少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体と
を含む。一実施形態において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、がん促進性ｍｉＲＮＡも
しくはがん遺伝子の発現低下を目的にしたタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコー
ドする第１のポリヌクレオチド、及び／または微小環境リモデリングｍｉＲＮＡもしくは
ＴＩＭＰの発現低下を目的にしたタンパク質もしくはオリゴヌクレオチドをコードする第
２のポリヌクレオチド、及び／または少なくとも１つのプロテアーゼ活性化抗体を含む。
【００９７】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスは、ヘルペス
ウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス（例えば、ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２））、
アデノウイルス、ポリオウイルス、ワクシニアウイルス、麻疹ウイルス、水疱性口内炎ウ
イルス、オルトミクソウイルス、パルボウイルス、マラバウイルスまたはコクサッキーウ
イルスである。ＨＳＶ系ベクター及びその構築物のための方法は、例えば、米国特許第７
，０７８，０２９号、同第６，２６１，５５２号、同第５，９９８，１７４号、同第５，
８７９，９３４号、同第５，８４９，５７２号、同第５，８４９，５７１号、同第５，８
３７，５３２号、同第５，８０４，４１３号及び同第５，６５８，７２４号、ならびに国
際特許出願第ＷＯ９１／０２７８８号、同第ＷＯ９６／０４３９４号、同第ＷＯ９８／１
５６３７号及び同第ＷＯ９９／０６５８３号に記載されており、それらの全体を参照によ
り本明細書に援用する。ＨＳＶの配列は、公開されており（ＮＣＢＩアクセッション番号
ＮＣ＿００１８０６；ＭｃＧｏｅｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ，６９（
ＰＴ  ７），１５３１−１５７４（１９８８）も参照）、本発明のＨＳＶ系ベクターの設
計を容易にし得る。
【００９８】
本発明はまた、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスをコードする核酸分子も包含
する。
【００９９】
組成物及び使用方法
本発明のある特定の態様は、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスを含む、ストッ
ク及び組成物に関する。いくつかの態様において、本発明は、本明細書に記載される腫瘍
溶解性ウイルスを含む、ウイルスストックに関する。いくつかの実施形態において、ウイ
ルスストックは、均質なストックである。ウイルスストックの調製及び分析は、当該技術
分野においてよく知られている。例えば、ウイルスストックは、ウイルスベクターを形質
導入した細胞を含有するローラーボトル中で製造することができる。次いで、ウイルスス
トックをニコデンツ連続的密度勾配で精製し、等分し、必要時まで保存することができる
。ウイルスストックは、主に、ウイルス遺伝子型ならびにウイルスストックの調製に使用
するプロトコル及び細胞株に応じて、力価が大きく変動する。
【０１００】
特定の実施形態において、本明細書で企図されるウイルスストック（例えば、ＨＳＶ系
ベクターウイルスストック）の力価は、少なくとも約１０５プラーク形成単位（ｐｆｕ）
、例えば、少なくとも約１０６ｐｆｕ、または更により好ましくは少なくとも約１０７ｐ
ｆｕである。ある特定の実施形態において、力価は、少なくとも約１０８ｐｆｕ、または
少なくとも約１０９ｐｆｕであり得、少なくとも約１０１０ｐｆｕまたは少なくとも約１
０１１ｐｆｕの高力価ストックが最も好ましい。
【０１０１】
本発明は、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスまたは核酸分子と、薬学的に許容
される担体とを含む、組成物を更に企図する。「薬学的に許容される」という文言は、対
象（例えば、ヒト）に投与されたとき、アレルギー反応または同様の有害反応を起こさな
い分子実体及び組成物を指す。本明細書で使用される「組成物」という用語は、対象及び
／または細胞に投与または送達することができる、本明細書に記載される１つ以上の腫瘍
溶解性ウイルスまたは核酸分子の製剤を指す。典型的に、製剤は、その誘導体及び／また
はプロドラッグ、溶媒和物、立体異性体、ラセミ体もしくは互変異性体を、任意の生理学
的に許容される担体、希釈剤及び／または賦形剤とともに含む、生理学的に許容される全
ての組成物を含む。「治療組成物」または「医薬組成物」（本明細書において区別なく用
いられる）は、特定の疾患または障害の治療のために患者及び／または対象及び／または
細胞に投与または送達することができる、１つ以上の剤の組成物である。
【０１０２】
本明細書で開示される組成物は、中性形態または塩形態に製剤化され得る。「薬学的に
許容される塩」には、酸付加塩と塩基付加塩の両方が含まれる。薬学的に許容される塩に
は、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基と形成されるもの）、例えば、塩酸、臭化水素
酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸と形成されるもの、及び限定するものではないが、
酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、アスパラギン
酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、ショウノウ酸、カンフ
ァー−１０−スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、炭酸、ケイ皮酸、クエ
ン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸
、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、グ
ルコヘプトン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、２−オキソ−
グルタル酸、グリセロリン酸、グリコール酸、馬尿酸、イソ酪酸、乳酸、ラクトビオン酸
、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムチ
ン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、１−ヒドロキ
シ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、オレイン酸、オロト酸、シュウ酸、パルミチン酸、パ
モ酸、プロピオン酸、ピログルタミン酸、ピルビン酸、サリチル酸、４−アミノサリチル
酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、酒石酸、チオシアン酸、ｐトルエンスルホン
酸、トリフルオロ酢酸、ウンデシレン酸などの有機酸と形成されるものが含まれる。遊離
カルボキシル基と形成される塩は、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニ
ウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウムの塩などの無
機塩基から誘導することもできる。有機塩基から誘導される塩には、一級、二級及び三級
アミン、天然置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、ならびに塩基性イオン交換樹脂
、例えば、アンモニア、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリ
エチルアミン、トリプロピルアミン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、デアノー
ル、２−ジメチルアミノエタノール、２−ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシル
アミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コ
リン、ベタイン、ベネタミン、ベンザチン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグ
ルカミン、テオブロミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、プリン、ピペラジン、
ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ポリアミン樹脂の塩などが含まれるが、これらに限
定されない。特に好ましい有機塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノー
ルアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、コリン及びカフェインである。
溶液は、配合されたら、剤形と適合した様式により、治療上有効な量で、投与される。製
剤は、注射液、薬物放出カプセル剤などの様々な剤形で容易に投与される。
【０１０３】
本明細書で使用されるとき、「担体」は、あらゆる全ての溶媒、分散媒、ビヒクル、コ
ーティング剤、希釈剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張化剤及び吸収遅延剤、緩衝剤、担体液
、懸濁液、コロイドなどを含む。このような媒体及び剤を薬学的活性物質に使用すること
は、当該技術分野においてよく知られている。任意の従来の媒体または剤は、有効成分と
適合性がない場合を除き、治療組成物で使用されることが企図される。補助的な有効成分
もまた、組成物中に組み込むことができる。
【０１０４】
本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容される担体」には、限定するものではない
が、生理学的に適合性のある、あらゆる補助剤、担体、賦形剤、滑剤、甘味剤、希釈剤、
保存剤、色素／着色剤、風味向上剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、安定剤、
等張化剤、溶媒、界面活性剤、分散媒、コーティング剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張化剤
及び吸収遅延剤など、ヒト及び／または飼育動物への使用が許容されるものとして米国食
品医薬品局から承認を受けている、薬学的に許容される細胞培養培地及び／または乳化剤
が含まれる。例示的な薬学的に許容される担体には、ラクトース、グルコース及びスクロ
ースなどの糖、トウモロコシデンプン及びジャガイモデンプンなどのデンプン、カルボキ
シメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロースなどのセルロース
及びその誘導体、トラガカント、モルト、ゼラチン、タルク、カカオバター、ワックス、
動物性及び植物性脂肪、パラフィン、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、酸化亜鉛、ピ
ーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油及びダイズ油
などの油、プロピレングリコールなどのグリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニ
トール及びポリエチレングリコールなどのポリオール、オレイン酸エチル及びラウリン酸
エチルなどのエステル、寒天、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムなどの緩衝剤
、アルギン酸、パイロジェンフリー水、等張食塩水、リンゲル溶液、エチルアルコール、
リン酸緩衝液、ならびに医薬製剤に採用される他の適合物質が挙げられるが、これらに限
定されない。任意の従来の媒体及び／または剤は、本開示の剤と適合性がない場合を除き
、治療組成物で使用されることが企図される。補助的な有効成分もまた、組成物中に組み
込むことができる。
【０１０５】
湿潤剤、乳化剤、ならびに滑沢剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸
マグネシウムなど、ならびに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤、及び芳
香剤、防腐剤、ならびに酸化防止剤もまた、組成物中に存在し得る。
【０１０６】
薬学的に許容される酸化防止剤の例としては、（１）水溶性酸化防止剤、例えば、アス
コルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナト
リウムなど（２）油溶性酸化防止剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒド
ロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食
子酸プロピル、α−トコフェロールなど、及び（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸
、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などが挙げられ
る。
【０１０７】
一実施形態において、担体を含む組成物は、非経口投与、例えば、血管内（静脈内また
は動脈内）、腹腔内または筋肉内投与に適している。薬学的に許容される担体には、注入
可能な滅菌溶液または滅菌分散液を即時調製するための滅菌水溶液または滅菌分散液及び
滅菌粉末が含まれる。薬学的活性物質のためのこのような媒体及び薬剤を使用することは
、当該技術分野において周知である。任意の従来の媒体または剤は、ウイルスベクターま
たは核酸分子と適合性がない場合を除き、本発明の医薬組成物で使用されることが企図さ
れる。
【０１０８】
本発明の組成物は、単独または１つ以上の他の治療モダリティーとの組み合わせのいず
れかで細胞または動物に投与するために、薬学的に許容される溶液または生理学的に許容
される溶液中に配合された、本明細書に記載される１つ以上のポリペプチド、ポリヌクレ
オチド、ポリヌクレオチドを含むベクター、感染細胞などを含み得る。所望であれば、本
発明の組成物は、例えば、サイトカイン、成長因子、ホルモン、小分子または様々な薬学
的活性剤などの他の剤と組み合わせて投与することができることも理解される。組成物中
に更に含めることができる他の構成成分には、その追加の剤が、意図された治療を果たす
組成物の機能に悪影響を与えない限り、実質的に制限はない。
【０１０９】
本発明の医薬組成物において、薬学的に許容される賦形剤及び担体液の配合は、当業者
によく知られており、同様に、本明細書に記載される特定の組成物を様々な治療レジメン
で使用するのに適した投薬及び治療レジメンの策定も当業者によく知られている。溶液は
、配合されたら、剤形と適合した様式により、症状の改善または治癒をもたらす治療上有
効な量で、投与される。製剤は、摂取可能な溶液、薬物放出カプセル剤などの様々な剤形
で容易に投与される。用量については、治療がなされる対象の状態に応じて、いくらかの
変動が生じ得る。いずれにせよ、投与を担当する者が個々の対象に適切な用量を決定する
ことができる。更に、ヒトへの投与の場合、調製物は、ＦＤＡ生物学的製剤評価研究セン
ターが要求する、無菌性、一般的安全性及び純度の基準を満たすものである。投与経路は
、通常、治療される疾患の位置及び性質によって変わり、例えば、皮内、経皮吸収、真皮
下、非経口、経鼻、静脈内、筋肉内、鼻腔内、皮下、経皮、気管内、腹腔内、腫瘍内、灌
流、洗浄、直接注射及び経口による投与が含まれ得る。
【０１１０】
ある特定の状況では、例えば、米国特許第５，５４３，１５８号；米国特許第５，６４
１，５１５号及び米国特許第５，３９９，３６３号（それぞれの全体を参照により本明細
書に明示的に援用する）に記載されているように、本明細書で開示される組成物、組み換
えウイルスベクター及び核酸分子を非経口、静脈内、筋肉内または更に腹腔内により送達
するのが望ましいであろう。遊離塩基または薬理学的に許容される塩である活性化合物の
溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適切に混合された水中で調製
することができる。分散液はまた、グリセロール、液状ポリエチレングリコール及びこれ
らの混合物中、及び油中で調製することができる。これらの調製物は、通常の保存条件及
び使用条件下で、微生物の発育を阻止するための保存剤を含有する。
【０１１１】
注射用途に好適な医薬形態には、注入可能な滅菌溶液または滅菌分散液を即時調製する
ための滅菌水溶液または滅菌分散液及び滅菌粉末が含まれる（米国特許第５，４６６，４
６８号；その全体を参照により本明細書に明示的に援用する）。全ての場合において、当
該形態は、無菌でなければならず、容易に注射できる程度の流動性を有する必要がある。
これは、製造及び保管の条件下で安定でなければならず、細菌及び真菌等の微生物の混入
作用から保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例
えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液状ポリエチレングリコールなど）、そ
の好適な混合物及び／または植物油を含有する、溶媒または分散媒であり得る。適切な流
動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤の使用によって、分散液の場合には必要
とされる粒径の維持によって、また界面活性剤の使用によって、維持され得る。微生物作
用の阻止は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノ
ール、ソルビン酸、チメロサールなどによって促進することができる。多くの場合、等張
剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。注射可能な組成物
の吸収の延長は、吸収を遅延させる作用物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及
びゼラチンの組成物中の使用によってもたらされ得る。タンパク質を有効成分として含有
する水性組成物の調製は、当該技術分野においてよく理解されている。典型的に、このよ
うな組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかの注射剤として調製され、また、注射前
に液体中に溶解または懸濁するのに好適な固体形態も調製することができる。調製物は、
乳化することもできる。
【０１１２】
水溶液での非経口投与の場合、例えば、溶液を必要に応じて好適に緩衝化する必要があ
り、最初に十分な生理食塩水またはグルコースで液体希釈剤を等張にする必要がある。こ
れらの特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下及び腹腔内の投与に特に好適である。これ
に関して、採用することができる無菌水性媒体は、本開示に照らして、当業者に知られて
いる。例えば、１用量を１ｍｌのＮａＣｌ等張液中に溶解し、１０００ｍｌの皮下注射液
に加えるか、予定注射部位に注射することができる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈ
ｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  
Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ
＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００参照）。用量については、治療がなされる対象の状態に応じ
て、いくらかの変動が必然的に生じ得る。いずれにせよ、投与を担当する者が個々の対象
に適切な用量を決定する。更に、ヒトへの投与の場合、調製物は、ＦＤＡ生物学的製剤評
価オフィスが要求する、無菌性、発熱性、一般的安全性及び純度の基準を満たす必要があ
る。
【０１１３】
無菌注射用溶液は、上述の様々な他の成分とともに、活性化合物を必要な量で適切な溶
媒中に組み込み、必要に応じて、その後濾過滅菌することにより調製することができる。
一般に、分散液は、滅菌された様々な有効成分を、基本的な分散媒と、上記の成分のうち
必要とされる他の成分とを含有する無菌ビヒクル中に組み込むことにより調製することが
できる。無菌注射用溶液の調製のための無菌粉末の場合、その調製の好ましい方法は、予
め無菌濾過した溶液から有効成分と任意の所望の追加成分とを合わせた粉末が得られる、
真空乾燥及び凍結乾燥技術である。
【０１１４】
ある特定の実施形態において、組成物は、鼻腔内スプレー、吸入及び／または他のエア
ゾール送達ビヒクルによって送達され得る。経鼻エアゾールスプレーを介してポリヌクレ
オチド及びペプチド組成物を肺に直接送達するための方法は、例えば、米国特許第５，７
５６，３５３号及び米国特許第５，８０４，２１２号（それぞれの全体を参照により本明
細書に明示的に援用する）に記載されている。同様に、鼻腔内用微小粒子樹脂（Ｔａｋｅ
ｎａｇａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）及びリゾホスファチジル−グリセロール化合物（米
国特許第５，７２５，８７１号；その全体を参照により本明細書に明示的に援用する）を
使用した薬物の送達も薬学分野においてよく知られている。同様に、ポリテトラフルオロ
エチレン支持マトリックス形態での経粘膜による薬物送達は、米国特許第５，７８０，０
４５号（その全体を参照により本明細書に明示的に援用する）に記載されている。
【０１１５】
ある特定の実施形態において、送達は、本発明の組成物を好適な宿主細胞に導入するた
めに、リポソーム、ナノカプセル、微粒子、ミクロスフェア、脂質粒子、小胞などを、任
意選択によりＣＰＰポリペプチドと混合して使用することによって行うことができる。特
に、本発明の組成物は、脂質粒子、リポソーム、小胞、ナノスフェア、ナノ粒子などのい
ずれかに封入された状態での送達用に製剤化され得る。そのような送達ビヒクルの製剤化
及び使用は、既知の従来技術を使用して実施することができる。本発明の製剤及び組成物
は、単独または１つ以上の他の治療モダリティーとの組み合わせのいずれかで細胞または
動物に投与するために、薬学的に許容される溶液または生理学的に許容される溶液（例え
ば、培養培地）中に配合された、本明細書に記載される１つ以上のポリペプチド、ポリヌ
クレオチド及び小分子を含み得る。所望であれば、本発明の組成物は、例えば、細胞、他
のタンパク質もしくはポリペプチドまたは様々な薬学的活性剤などの他の剤と組み合わせ
て投与することができることも理解される。
【０１１６】
特定の一実施形態において、本発明による製剤または組成物は、本明細書で企図される
任意数のポリヌクレオチドまたはウイルスベクターの組み合わせと接触させた細胞を含む
。
【０１１７】
ある特定の態様において、本発明は、ウイルスベクター系を送達するのに好適な製剤ま
たは組成物を提供する。
【０１１８】
ｅｘ  ｖｉｖｏ送達のための例示的な製剤は、当該技術分野において知られている様々
なトランスフェクション剤（リン酸カルシウムなど）、エレクトロポレーション、熱ショ
ック及び各種リポソーム製剤（すなわち、脂質媒介トランスフェクション）の使用も含み
得る。リポソームは、水性流体の一部を閉じ込めた脂質二重層である。ＤＮＡは、カチオ
ン性リポソームの外表面と自然に会合し（その電荷によって）、これらのリポソームは、
細胞膜と相互作用する。
【０１１９】
本発明の特定の実施形態は、薬学分野でよく知られているもの、例えば、Ｒｅｍｉｎｇ
ｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ
，２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉ
ｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００に記載されているものなどの他の製剤を含み得
る。
【０１２０】
ある特定の態様において、本発明は、１つ以上の薬学的に許容される担体（添加剤）及
び／または希釈剤（例えば、薬学的に許容される細胞培養培地）とともに配合された、本
明細書に記載される治療上有効な量の１つ以上のウイルスベクターまたはポリヌクレオチ
ドを含む、薬学的に許容される組成物を提供する。本明細書で使用されるとき、「治療上
有効な量」は、所望の生理学的成果及び／または生物学的成果を達成するのに必要とされ
る、本明細書に記載される組成物または組み換えウイルスの量を指す。ウイルス、ウイル
スストックまたは組成物の「治療上有効な量」は、個体の病態、年齢、性別及び体重、な
らびに個体において所望の応答を誘導する幹細胞及び前駆細胞の能力などの因子に応じて
変動し得る。治療上有効な量はまた、治療上有益な効果が、ウイルスまたは形質導入した
治療細胞の任意の毒性または有害作用を上回るものでもある。「治療上有効な量」という
用語は、対象（例えば、患者）を「治療する」のに有効な量を含む。治療上有効な量は、
プラーク形成単位（ｐｆｕ）の総数（例えば、少なくとも１ｅ１〜少なくとも１ｅ２０、
特に約１ｅ４〜約１ｅ１５、より詳細には約１ｅ６〜約１ｅ１２ｐｆｕ）、またはウイル
スゲノムの数（例えば、少なくとも１ｅ１〜少なくとも１ｅ２０、特に約１ｅ４〜約１ｅ
１５、より詳細には約１ｅ６〜約１ｅ１２ウイルスゲノム）によって定量することができ
る。当業者であれば、治療上有効な量が、投与されるウイルスの種類、製剤の性質、投与
経路、治療される疾患の性質及び／もしくは重症度ならびに／または対象の全般的な健康
状態及び満足状態に基づいて変動することを理解するであろう。
【０１２１】
本発明のいくつかの態様は、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルスまたはその組成
物に対して、がん性細胞を、腫瘍溶解性ウイルスが当該がん性細胞に感染し、当該がん性
細胞内で複製するのに十分な条件下で曝露することを含み、がん性細胞内における腫瘍溶
解性ウイルスの複製が細胞死をもたらす、がん性細胞を殺傷する方法を包含する。ある特
定の実施形態において、がん性細胞は、非がん性細胞と比較して、腫瘍抑制性ｍｉＲの発
現が低下している。いくつかの実施形態において、本方法によって殺傷されるがん性細胞
は、ｉｎ  ｖｉｖｏである。ある特定の実施形態において、本方法によって殺傷されるが
ん性細胞は、腫瘍内にある。
【０１２２】
本発明は、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルス、ウイルスストックまたは組成物
の予防上有効な量または治療上有効な量を対象に投与することを含む、がんの治療を必要
とする対象において、がんを治療する方法に関する。「対象」は、本明細書で使用される
とき、本明細書で開示される組み換えウイルスベクター、組成物及び方法で治療すること
ができる疾患、障害または状態の症状を示す、任意の動物を含む。好適な対象（例えば、
患者）には、実験動物（マウス、ラット、ウサギまたはモルモットなど）、家畜（ウマま
たはウシなど）及び飼育動物またはペット（ネコまたはイヌなど）が含まれる。非ヒト霊
長類及び好ましくはヒト患者が含まれる。
【０１２３】
「投与」は、本明細書において、腫瘍溶解性ウイルス、ウイルスストックもしくはその
組成物を対象に導入すること、または腫瘍溶解性ウイルス、ウイルスストックもしくはそ
の組成物を細胞及び／もしくは組織と接触させることを指す。投与は、注射、灌注、吸入
、摂取、電気浸透、血液透析、イオントフォレシス及び当該技術分野において知られてい
る他の方法によって実施することができる。投与経路は、通常、治療される疾患の位置及
び性質によって変わり、例えば、耳介、頬側、結膜、皮膚、歯、子宮頸管内、副鼻腔内、
気管内、腸内、硬膜外、間質内、関節内、動脈内、腹内、耳介内、胆管内、気管支内、嚢
内、海綿内、脳内、槽内、角膜内、歯冠内、冠動脈内、頭蓋内、皮内、脊髄内、腺管内、
十二指腸内、十二指腸内、硬膜内、心外膜内、表皮内、食道内、胃内、歯肉内、肝内、回
腸内、病巣内、舌内、管腔内、リンパ腺内、乳腺内、骨髄内、髄膜内、筋肉内、鼻腔内、
節内、眼内、網内、卵巣内、腹腔内、心膜内、胸膜内、前立腺内、肺内、第一胃内、洞内
、脊髄内、滑液嚢内、腱内、精巣内、気管内、髄腔内、胸郭内、小管内、腫瘍内、鼓室内
、子宮内、腹腔内、脈管内、脳室内、膀胱内、前庭内、静脈内、硝子体内、喉頭部、経鼻
、経鼻胃、経口、眼、口咽頭、非経口、経皮、関節周囲、硬膜外、神経周囲、歯周、呼吸
器、尿細管後、直腸、脊髄、クモ膜下、結膜下、皮下、真皮下、歯肉下、舌下、粘膜下、
網膜下、局所、経皮吸収、経心内膜、経粘膜、経胎盤、経気管、経鼓膜、尿管、尿道及び
／または膣灌流、洗浄、直接注射ならびに経口による投与が挙げられる。
【０１２４】
本明細書で使用される「治療すること」及び「治療」という用語は、対象の疾患もしく
は状態、または疾患もしくは状態の症状が改善するように、本明細書に記載される組み換
えウイルスまたはその組成物の治療上有効な量を対象に投与することを指す。改善は、疾
患もしくは状態、または疾患もしくは状態の症状の任意の改善または治療である。改善は
、観察可能または測定可能な改善であってもよいし、対象の全般的な満足感の改善であっ
てもよい。したがって、当業者は、治療により疾患状態が改善し得るが、疾患の完全な治
癒ではないことがあることを認識している。「予防上有効な量」は、所望の予防結果を達
成するのに有効なウイルス、ウイルスストックまたは組成物の量を指す。本明細書で使用
されるとき、「予防」は、疾患症状の完全な予防、疾患症状の発生遅延、または後続して
発症する疾患症状の重症度の緩和を意味し得る。典型的であって、必ずしもそうではない
が、予防上有効な量は、疾患の早期段階前または早期段階において対象に使用される予防
用量であるので、治療上有効な量よりも少ない。
【０１２５】
本明細書における「がん」は、無秩序な細胞成長を典型的に特徴とする、哺乳類の生理
学的状態を指すか、当該状態を記述するものである。がんの例には、癌腫、リンパ腫、芽
細胞腫、肉腫（脂肪肉腫、骨原性肉腫、血管肉腫、内皮肉腫、平滑筋肉腫、脊索腫、リン
パ管肉腫、リンパ管内皮腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、粘液肉腫、軟骨肉腫を含む）、神経
内分泌腫瘍、中皮腫、滑膜腫、シュワン腫、髄膜腫、腺癌、黒色腫及び白血病またはリン
パ系悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。このようながんのより具体的な例
には、扁平上皮細胞癌（例えば、扁平細胞上皮癌）、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌
及び肺扁平上皮癌、小細胞肺癌を含む肺癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌を含む胃癌（ｇａ
ｓｔｒｉｃ／ｓｔｏｍａｃｈ）、膵癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、ヘパ
トーマ、乳癌、結腸癌、直腸癌、大腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺、腎癌（ｋｉ
ｄｎｅｙ／ｒｅｎａｌ）、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、精巣癌
、食道癌、胆道腫瘍、ユーイング腫瘍、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌
、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛
癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、精巣腫瘍、肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫
、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起
膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫
、ワルデンストレームマクログロブリン血症、骨髄異形成疾患、重鎖病、神経内分泌腫瘍
、シュワン腫及び他の癌腫ならびに頭頸部癌が挙げられる。
【０１２６】
ある特定の実施形態において、本明細書に記載される腫瘍溶解性ウイルス（例えば、Ｈ
ＳＶ）、ウイルスストックまたは組成物は、肺癌（例えば、小細胞肺癌または非小細胞肺
癌）、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、前立腺癌、精巣癌、大腸癌、結腸癌、膵癌、肝癌（例え
ば、肝細胞癌（ＨＣＣ））、胃癌、頭頸部癌、甲状腺癌、悪性神経膠腫、膠芽腫、黒色腫
、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）及び辺
縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）から選択されるがんを治療するために使用される。
【０１２７】
ある特定の態様において、本発明は、本明細書で開示される図面または実施形態のいず
れか１つに示される腫瘍溶解性ウイルスベクターに関する。
【実施例】
【０１２８】
以下の実施例は、本発明の各種実施形態を例示するためのものであり、いかなる形でも
本発明を限定することを意味しない。本実施例は、本明細書に記載の方法も含め、例示的
なものであり、本発明の範囲を限定する意図はない。特許請求の範囲によって定義される
本発明の趣旨内に包含される、本記載の実施形態に対する改変、変形及び他の変更が具体
的に企図される。
【０１２９】
実施例１−正常細胞及び悪性細胞のｍｉＲ配列分析
ｍｉＲの差次的発現は、多くのがんの特徴である（Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，
２００５）。８つの異なるがん細胞株で概ね高度に差次的に発現されるｍｉＲを決定する
ために実験を実施した。差次的発現は、非がん性対照組織との比較によって決定した。合
計で１０８のサンプルについて配列決定を行った。サンプルの詳細を以下の表に示す。
【表１０】
2019508063.tif 000004
【０１３０】
選択された細胞種でのＨＳＶ減衰に適した妥当なｍｉＲＮＡ標的配列の特定を容易にす
るために、がん系及び非がん対照組織のｍｉＲＮＡ配列プロファイリングを実施した。膀
胱、結腸、乳房、膵臓、肺、頭頸部、シュワン腫、膠芽腫、脳、肝臓及び骨髄を含む、が
ん細胞及び非がん細胞について、ダイサー処理されたＲＮＡのシーケンシングライブラリ
ーを調製した。これらのｍｉＲＮＡシーケンシングライブラリーを全ＲＮＡに対して正規
化し、シーケンシングリード最大３ｅ８リード／ラン用ＨｉＳｅｑ  Ｖ４化学試薬により
、ＨｉＳｅｑ  ２５００超ハイスループットシーケンシングシステム（Ｉｌｌｕｍｉｎａ
）を使用して、配列決定した。Ｂａｓｅｓｐａｃｅ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）のｍｉＲＮＡ解
析ツールを使用して、シーケンシングのランから得たＦＡＳＴＱファイルを解析した。正
常の平均値、がんの平均値を算出し、正常とがんの比を上から下に並べ替えることによっ
て、順位付けを行った。ゼロ及びゼロに変換した負の値を含む自然対数値を用いてヒート
マップを作成した（スケール：黒色が高発現、白色が低発現）。サンプル全体にわたる正
規化データは、所与のサンプルにおける正規化したｍｉＲＮＡ読み取り数として表した。
正規化は、比較する他のサンプルを基準とした所与のサンプルの総読み取り数に関する。
【０１３１】
図１は、２５のｍｉＲＮＡの非がん性脳組織及びがん性脳組織におけるｍｉＲＮＡ発現
プロファイルヒートマップを例示する。非がん性及びがん性の膀胱（図２）、乳房（図３
）、結腸（図４）、脳（図５）、頭頸部（図６）、肺（図７）、膵臓（図８）、及びシュ
ワン腫（図９）組織について、各例において２５のｍｉＲＮＡに対応する、ｍｉＲＮＡ発
現プロファイルヒートマップの更なる例を示す。図１０は、ｍｉＲ−４５１ａレベルが、
非がん性組織と比較して、全ての腫瘍種で下方制御されることを示し、汎腫瘍抑制ｍｉＲ
ＮＡであることを表している。図１１は、ｍｉＲ−１が、試験した全ての腫瘍種で下方制
御され、非がん性組織で中程度のレベルで存在し、頭頸部組織では高レベルで存在するこ
とを示している。図１２は、ｍｉＲ−５５９が、試験した全ての腫瘍種で下方制御され、
非がん性組織で概ね低レベルで存在し、非がん性肺組織では高レベルで存在することを示
している。図１３は、ｍｉＲ−１４５−５ｐが、試験した全ての腫瘍種で下方制御され、
試験した非がん性組織種の大部分で概ね高レベルで存在することを示している。図１４は
、ｍｉＲ−１４３−３ｐが結腸、肺及び膵臓の腫瘍で下方制御され、全ての正常組織種及
びいくつかの乳房腫瘍株で高レベルで存在することを示している。ｍｉＲＮＡデータ解析
により、新規かつ予想外のｍｉＲＮＡ発現プロファイルを表す、少なくとも１１のｍｉＲ
ＮＡが明らかになった。これらは、これまでの文献で特定されていないものである。
【０１３２】
特定されたこれらのｍｉＲＮＡの多くは、汎腫瘍特異性または多腫瘍特異性である。例
えば、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−５５９、ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１４５−３ｐ及びｍｉ
Ｒ１４３−３ｐの発現は、対照組織と比較して、試験した全てのがん細胞株にわたって、
概ね下方制御された。これは、特にｍｉＲ−４５１ａに顕著であり、全ての正常組織種で
高発現され、全てのがん種で実質的に下方制御されていることから、汎特異的腫瘍抑制性
ｍｉＲＮＡであることを表している。ｍｉＲ−５５９の発現は、正常肺組織を除く正常組
織種で低く、正常組織におけるｍｉＲ−１及びｍｉｒ−１４５−３ｐの発現は、様々であ
った。差の大きさ及び絶対発現レベルのばらつきにもかかわらず、がん細胞株の各ｍｉＲ
の平均発現は、対応する正常組織のレベルと比較して、実質的に低かった。これらのｍｉ
ＲＮＡは、様々ながん種を広く治療することができる汎腫瘍ＨＳＶビリオンの作製候補で
ある。
【０１３３】
ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−５５９、ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１４５−３ｐ及びｍｉＲ１
４３−３ｐの平均発現は、正常対照と比較して、がん細胞株でより低いが、この発現低下
は、全てのがん細胞株にわたって完全に一様ではなかった。例えば、試験した正常膀胱サ
ンプルの２／３は、ｍｉＲ−１４５−３ｐの発現上昇を示したが、残りのサンプルにおけ
る発現は、がん細胞株で観察された平均と実質的に同様であった。同様の結果が乳癌細胞
株でも観察された。全ての乳癌サンプルの平均読み取り数は１０６であったが、１２のサ
ンプルのうち５つが１０００を超える正規化読み取り数であり、そのうちの２つは、４０
，０００を超える数値であった。
【０１３４】
これらのデータは、広範な腫瘍種を治療の対象とすることができる単一のｍｉＲ減衰型
腫瘍溶解性ウイルスを作製できる可能性を示している。例えば、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ
−４５１ａ、ｍｉＲ−５５９、ｍｉＲ−１及びｍｉＲ−１４５−３ｐに対する標的配列を
含む構築物を、試験した全ての腫瘍種（例えば、膀胱、結腸、乳房、膵臓、肺、頭頸部、
シュワン腫及び膠芽腫）の治療に使用することができる。種々のがん種におけるｍｉＲ発
現レベルのばらつきは、ｍｉＲ発現によって、または更なるバイオマーカーの使用によっ
て、患者を層化する必要性が存在し得ることを示している。
【０１３５】
実施例２−ｍｉＲＮＡによる遺伝子減衰を迅速にアッセイするためのレポーター系の構
築及びその使用
実質的に任意のｍｉＲＮＡ標的配列と同種ｍｉＲＮＡを使用したｍｉＲＮＡによる遺伝
子減衰を評価するために、レポーター系を開発した。この系において（図１５に示す）、
ｍｉＲＮＡ（すなわち、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２２）によって認識される標的配列は、不安
定化緑色蛍光タンパク質（ｄｓＧＦＰ）の３’ＵＴＲに挿入した。更に、ｍＣｈｅｒｒｙ
をｍｉＲＮＡ発現の対照として使用し、同種ｍｉＲＮＡをテトラサイクリン（ｔｅｔ）誘
導性プロモーターを介して発現させた。ｍＣｈｅｒｒｙも発現するｔｅｔ抑制性ベクター
ｐｃＤＮＡ５  Ｆｒｔ／Ｔｏに全ての発現ベクターをクローニングした（ｐＴＦ００２）
。発現用ｍｉＲＮＡは全て、ヒトゲノムＤＮＡから遺伝子合成によって作製し、ｐＴＦ０
０２にクローニングした。減衰レポーター遺伝子ベクターを作製するために、ｄｓＧＦＰ
をｃＤＮＡ３．１＋にクローニングし、ベクターｐＴＦ００４を作製した。減衰ベクター
は、８〜１６ヌクレオチドで分離された、目的のｍｉＲＮＡ配列の逆相補鎖の４つのタン
デムリピートを含有する。標準的な分子生物学技術を使用して、合成生成したオリゴヌク
レオチドをｐＴＦ００４のｄｓＧＦＰ遺伝子の３'ＵＴＲに挿入することによって、プラ
スミドを構築した。１日目に、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００を製造元のプロト
コル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に従って使用し、ｍｉＲＮＡ減衰及びレポーター遺伝子発
現プラスミド（各０．１５μｇ、合計０．３μｇのＣＭＶプロモーター含有プラスミド）
をＨＥＫ２９３ＴｅｔＲ細胞にトランスフェクトした。２日目に、テトラサイクリン５ｎ
ｇ／ｍｌで細胞を処理し、最大７２時間インキュベートした。インキュベーション後、Ｇ
ＦＰ及びｍＣｈｅｒｒｙ蛍光シグナルをＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）ｉ３ｘ  Ｍｉ
ｎｉｍａｘマルチモードマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ
ｓ）を使用して毎日検出し、Ｓｏｆｔｍａｘ  ＰｒｏまたはＭｅｔａｍｏｒｐｈイメージ
ングソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して解析した。露光５
〜６ｍｓ、ＧＦＰ（５４１ｎｍのチャンネル）露光１０ｍｓ、及びｍＣｈｅｒｒｙ（７１
３ｎｍのチャンネル）２００〜１５００ｍｓで位相画像を取得した。
【０１３６】
図１６は、ｔｅｔを介してｍｉＲ−１２２発現を誘導したときの、２４時間におけるｍ
ｉＲ−１２２媒介性ＧＦＰ発現減衰を例示する。対照構築物ｍｉＲ−１８４、ｍｉＲ−３
４ａ及びＬｅｔ７ａは、ＧＦＰレベルを減衰せず、ｔｅｔの不在下でもＧＦＰ減衰は観察
されなかった。図１７は、各ｍｉＲ標的配列を個々に、またｍｉＲ−１２２／Ｌｅｔ７ａ
、ｍｉＲ−１２２／Ｌｅｔ７ａ／ｍｉＲ−３４ａ、またはｍｉＲ−１２２／Ｌｅｔ７ａ／
ｍｉＲ−１８４のカセット組み合わせで使用した、ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１８４、ｍ
ｉＲ−３４ａ及びＬｅｔ７ａの発現とＧＦＰ減衰を示す。ＧＦＰの低下は、適切なｍｉＲ
と同種の標的配列が一緒に存在するときにのみ観察される（円で囲んだウェル）。図１８
は、非減衰対照であり、ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１８４、ｍｉＲ−３４ａ及びＬｅｔ７
ａの発現とｍＣｈｅｒｒｙの発現を示す。
【０１３７】
図１９は、各標的配列を個々に使用した、ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−
１４５、ｍｉＲ−１９９及びｍｉＲ−４５１の発現とＧＦＰ減衰を示す（円で囲んだウェ
ル）。図２０は、上記例の非減衰対照であり、各標的配列を個々に使用した、ｍｉＲ−１
２２、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１９９及びｍｉＲ−４５１の発現とｍ
Ｃｈｅｒｒｙの発現を示す。図２１は、トランスフェクションから７２時間後に、同種の
ｍｉＲ−１２２またはｍｉＲ−１８４標的配列が存在するとき、ｍｉＲ−１２２及びｍｉ
Ｒ−１８４がＧＦＰ蛍光を減衰させることを示している。図２２は、トランスフェクショ
ンから７２時間後に、同種のｍｉＲ−３４ａまたはｍｉＲ−１８４標的配列が存在すると
き、ｍｉＲ−３４ａ及びｍｉＲ−１８４がＧＦＰ蛍光を減衰させることを示している。図
２３は、トランスフェクションから７２時間後に、同種のＬｅｔ−７ａまたはｍｉＲ−１
８４標的配列が存在するとき、Ｌｅｔ−７ａ及びｍｉＲ−１８４がＧＦＰ蛍光を減衰させ
ることを示している。図２４は、トランスフェクションから７２時間後に、同種のｍｉＲ
−１２４またはｍｉＲ−１８４標的配列が存在するとき、ｍｉＲ−１２４及びｍｉＲ−１
８４がＧＦＰ蛍光を減衰させることを示している。図２５は、トランスフェクションから
７２時間後に、同種のｍｉＲ−１２４またはｍｉＲ−１８４標的配列が存在するとき、ｍ
ｉＲ−１２４及びｍｉＲ−１８４がＧＦＰ蛍光を減衰させることを示している。図２６は
、トランスフェクションから７２時間後に、同種のｍｉＲ−１９９またはｍｉＲ−４５１
標的配列が存在するとき、ｍｉＲ−１９９及びｍｉＲ−４５１がＧＦＰ蛍光を減衰させる
ことを示している。図２７は、トランスフェクションから７２時間後に、同種のｍｉＲ−
１２５またはｍｉＲ−４５１標的配列が存在するとき、ｍｉＲ−１２５及びｍｉＲ−４５
１がＧＦＰ蛍光を減衰させることを示している。図２８は、トランスフェクションから７
２時間後に、同種のｍｉＲ−１２６またはｍｉＲ−４５１標的配列が存在するとき、ｍｉ
Ｒ−１２６及びｍｉＲ−４５１がＧＦＰ蛍光を減衰させることを示している。図２９は、
トランスフェクションから７２時間後に、同種のｍｉＲ−１２７またはｍｉＲ−４５１標
的配列が存在するとき、ｍｉＲ−１２７及びｍｉＲ−４５１がＧＦＰ蛍光を減衰させるこ
とを示している。図３０は、トランスフェクションから７２時間後に、同種のｍｉＲ−１
３３またはｍｉＲ−４５１標的配列が存在するとき、ｍｉＲ−１３３及びｍｉＲ−４５１
がＧＦＰ蛍光を減衰させることを示している。図３１は、トランスフェクションから７２
時間後に、同種のｍｉＲ−２２３またはｍｉＲ−４５１標的配列が存在するとき、ｍｉＲ
−２２３及びｍｉＲ−４５１がＧＦＰ蛍光を減衰させることを示している。
【０１３８】
このように、これらのデータは、ｍｉＲ発現が、同種のｍｉＲ標的配列を発現する遺伝
子の特異的減衰をもたらすことができることを示している。
【０１３９】
実施例３−ｍｉＲＮＡ減衰型ＨＳＶの作製
ｍｉＲＮＡ標的配列と同種ｍｉＲＮＡのペアに対するレポーター遺伝子による検証の後
、ｍｉＲＮＡ減衰カセットを含有するＨＳＶ系ウイルスを作製した。細菌人工染色体（Ｂ
ＡＣ）上のＨＳＶ−１  ＫＯＳ株の完全長ゲノムクローンであるＫＯＳ−３７  ＢＡＣに
一連の改変を記載されているように行った（Ｍａｚｚａｃｕｒａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍ
ｏｌ  Ｔｈｅｒ．，２０１５）。その産物であるＫＧＢＡＣは、ＩＣＰ４７遺伝子のプロ
モーターの他に、二倍体遺伝子ＩＣＰ０、ＩＣＰ３４．５、ＬＡＴ及びＩＣＰ４のそれぞ
れを１コピー含有する内部反復（接合）領域を欠失したものである。この欠失により、欠
失させた４遺伝子の残りのコピーに対する操作が容易になり、ウイルスの腫瘍溶解活性を
向上させる導入遺伝子の導入を可能にするスペースが豊富に得られ、神経毒性因子ＩＣＰ
３４．５の発現を低下させることによって腫瘍特異性が高まる。ＩＣＰ４７発現の排除は
、ウイルス特異的Ｔ細胞による、感染したがん細胞の免疫認識に有益である。ＫＧＢＡＣ
はまた、２Ａペプチド配列を介して糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）ＯＲＦに融合したＧＦＰオー
プンリーディングフレーム（ＯＲＦ）も含有し、後期（複製後）のウイルス遺伝子発現を
モニタリングできるようにした。最後に、ＫＧＢＡＣは、通常以外の受容体を介したＨＳ
Ｖ侵入の増強を示した、ｇＢ遺伝子の変異ペアを含有する。図３２に示されるように、ｍ
ｉＲＮＡ標的配列カセットを２Ａ５Ｂ−ＭＭＰ９のＩＣＰ４及び／またはＩＣＰ２７遺伝
子の３'ＵＴＲに組み換えて、ＯＮＣＲ−００３、ＯＮＣＲ−０１０、ＯＮＣＲ−０１１
、ＯＮＣＲ−０１２、ＯＮＣＲ−０１３、ＯＮＣＲ−０１４、ＯＮＣＲ−０１５、ＯＮＣ
Ｒ−０１６、ＯＮＣＲ−０１７、ＯＮＣＲ−０１８、ＯＮＣＲ−０１９、ＯＮＣＲ−０２
０、ＯＮＣＲ−０２１及びＯＮＣＲ−０２２を作製した。Ｖｅｒｏ−Ｃｒｅ細胞のトラン
スフェクションによって、全てのＢＡＣ構築物をウイルス粒子に変換し、同時にｌｏｘＰ
部位の間に位置するＢＡＣ配列を除去した。プラーク精製後、ウイルスストックを調製し
、Ｖｅｒｏ細胞で力価を決定した。
【０１４０】
実施例４−ｍｉＲＮＡ減衰型ＨＳＶを使用したウイルス感染力アッセイ
正常細胞及びがん性細胞におけるウイルスの感染力及び複製についてアッセイするため
に、ｍｉＲＮＡ減衰型ＨＳＶ粒子を以下のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで試験した。１日目
に、各感染細胞種について、ＨＳＶ粒子を導入して０．０１の多重感染度（ＭＯＩ）を達
成した。２〜５日目に、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）ｉ３ｘ  Ｍｉｎｉｍａｘマル
チモードマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して
ＧＦＰを検出することによってウイルス感染力をアッセイし、Ｓｏｆｔｍａｘ  Ｐｒｏま
たはＭｅｔａｍｏｒｐｈイメージングソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ
ｓ）を使用して解析した。あらゆる潜在的な非特異的自家蛍光シグナルを評価するために
、露光５〜６ｍｓ、ＧＦＰ（５４１ｎｍのチャンネル）露光１０ｍｓ、及びｍＣｈｅｒｒ
ｙ（７１３ｎｍのチャンネル）２００〜１５００ｍｓを使用して位相画像を取得した。
【０１４１】
ＯＮＣＲ−０１１複製は、図３３（ＧＦＰ陽性細胞定量による読み出し）及び図３４（
定量ＰＣＲによる読み出し）に示されるように、有糸分裂後の肺組織で大幅に減衰され、
これは、ＩＣＰ２７遺伝子中にｍｉＲ−１２５カセットが存在することと、これらの細胞
におけるｍｉＲ−１２５ａのレベルが高い（３０００個超）ことに起因する。ＯＮＣＲ−
０１１及び対照ウイルスのＯＮＣＲ−００３は、ＩＣＰ４遺伝子中にｍｉＲ−１２４標的
配列を含有するが、ｍｉＲ−１２４は低レベル（１００個未満）で存在することから、ウ
イルス複製の減衰は不十分であった。ＯＮＣＲ−０１１及びＯＮＣＲ−００３の両方は、
頭頸部がん細胞（Ａ２５３）で支障なく複製された。これは、これらの細胞がｍｉＲ−１
２５ａ及びｍｉＲ−１２４の両方を低レベル（１００個未満）で含むためである。ＯＮＣ
Ｒ−０１３複製は、図３５（ＧＦＰ陽性細胞定量による読み出し）及び図３６（定量ＰＣ
Ｒによる読み出し）に示されるように、ＨＣＣ１３９５細胞で大幅に減衰したが、Ａ２５
３細胞では減衰しなかった。ＯＮＣＲ−０１４複製は、図３７（ＧＦＰ陽性細胞定量によ
る読み出し）及び図３８（定量ＰＣＲによる読み出し）に示されるように、非がん性肺組
織で大幅に減衰した。
【０１４２】
実施例５−膵癌、肺癌または結腸癌に罹患している患者の治療
本明細書に開示される組成物及び方法を使用して、膵癌、肺癌または結腸癌に罹患して
いる患者を治療する。図３９〜４４に示されるように、１つ以上のｍｉＲＮＡ標的配列を
ＵＬ１９、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２７（または他のウイルス遺伝子）に組み込むことによって
減衰化したＨＳＶ系ウイルスストックを作製することができる。いくつかの場合において
、図４５〜４６に示されるように、ｍｉＲＮＡ標的配列に加えて、腫瘍破壊及び／または
微小環境リモデリングのためのゲノム編集能力をウイルスに操作する。具体例において、
ＩＣＰ４及びＩＣＰ２７に組み込まれたｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−１
４３−３ｐ及びｍｉＲ−５５９の減衰カセットを含有するＨＳＶ系ストックを、実施例３
に記載の方法に従って作製する。ｍｉＲＮＡ標的配列カセットは、図４７に示されるよう
に、ＩＣＰ４（ｍｉＲ−１２４）及びＩＣＰ２７（ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−１４３−
３ｐ、ｍｉＲ−５５９）遺伝子の３'ＵＴＲに導入される。Ｖｅｒｏ−Ｃｒｅ細胞のトラ
ンスフェクションによって、ＢＡＣ構築物をウイルス粒子に変換し、同時にｌｏｘＰ部位
の間に位置するＢＡＣ配列を除去する。プラーク精製後、ウイルスストックを更に精製し
、緩衝液交換を行い、Ｖｅｒｏ細胞で力価を決定する。膵癌、肺癌または結腸癌に罹患し
ている患者にｉｎ  ｖｉｖｏ投与する場合、ＨＳＶ粒子を薬学的に許容される安定化剤と
ともにリン酸緩衝液（ＰＢＳ）中で調製する。治療日に、薬学的に許容される担体（体積
１．０ｍＬ）中の１０９個のベクターゲノムを腫瘍内注射によって投与する。標準治療手
順を使用して、患者の具体的な予後に基づき、適切な時間間隔で腫瘍退縮について患者を
モニタリングする。
【０１４３】
実施例６−脳癌、膀胱癌、乳癌または頭頸部癌に罹患している患者の治療
本明細書に開示される組成物及び方法を使用して、脳癌、膀胱癌、乳癌または頭頸部癌
に罹患している患者を治療する。ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−１４５−
３ｐ及びｍｉＲ−５５９の減衰カセットを含有するＨＳＶ系ウイルスストックを実施例３
に記載の方法に従って作製する。ｍｉＲＮＡ標的配列カセットは、図４８に示されるよう
に、ＩＣＰ４（ｍｉＲ−１２４）及びＩＣＰ２７（ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ-１４５−
３ｐ、ｍｉＲ−５５９）遺伝子の３'ＵＴＲに導入される。Ｖｅｒｏ−Ｃｒｅ細胞のトラ
ンスフェクションによって、ＢＡＣ構築物をウイルス粒子に変換し、同時にｌｏｘＰ部位
の間に位置するＢＡＣ配列を除去する。プラーク精製後、ウイルスストックを更に精製し
、緩衝液交換を行い、Ｖｅｒｏ細胞で力価を決定する。脳癌、膀胱癌、乳癌または頭頸部
癌に罹患している患者にｉｎ  ｖｉｖｏ投与する場合、ＨＳＶ粒子を薬学的に許容される
安定化剤とともにリン酸緩衝液（ＰＢＳ）中で調製する。治療日に、薬学的に許容される
担体（体積１．０ｍＬ）中の１０９個のベクターゲノムを腫瘍内注射によって投与する。
標準治療手順を使用して、患者の具体的な予後に基づき、適切な時間間隔で腫瘍退縮につ
いて患者をモニタリングする。
【０１４４】
実施例７−シュワン腫に罹患している患者の治療
本明細書に開示される組成物及び方法を使用して、シュワン腫に罹患している患者を治
療する。ｍｉＲ−１２４−３ｐ、ｍｉＲ−２０５−５ｐ、ｍｉＲ−１４１−５ｐ及びｍｉ
Ｒ−３１−５ｐの減衰カセットを含有するＨＳＶ系ウイルスストックを実施例３に記載の
方法に従って作製する。ｍｉＲＮＡ標的配列カセットは、図４９に示されるように、ＩＣ
Ｐ４（ｍｉＲ−１２４）及びＩＣＰ２７（ｍｉＲ−２０５−５ｐ、ｍｉＲ−１４１−５ｐ
、ｍｉＲ−３１−５ｐ）遺伝子の３'ＵＴＲに組み換えられた。Ｖｅｒｏ−Ｃｒｅ細胞の
トランスフェクションによって、ＢＡＣ構築物をウイルス粒子に変換し、同時にｌｏｘＰ
部位の間に位置するＢＡＣ配列を除去する。プラーク精製後、ウイルスストックを更に精
製し、緩衝液交換を行い、Ｖｅｒｏ細胞で力価を決定した。シュワン腫に罹患している患
者にｉｎ  ｖｉｖｏ投与する場合、ＨＳＶ粒子を薬学的に許容される安定化剤とともにリ
ン酸緩衝液（ＰＢＳ）中で調製する。治療日に、薬学的に許容される担体（体積１．０ｍ
Ｌ）中の１０９個のベクターゲノムを腫瘍内注射によって投与する。標準治療手順を使用
して、患者の具体的な予後に基づき、適切な時間間隔で腫瘍退縮について患者をモニタリ
ングする。
【０１４５】
本発明の好ましい実施形態を本明細書に示し、記載しているが、当該実施形態は、例と
してのみ提供されることは、当業者には明らかであろう。当業者であれば、本発明を逸脱
することなく、多数の変形形態、変更及び置換を実施することができる。本明細書に記載
される本発明の実施形態に対する種々の代替手段が、本発明の実施において採用され得る
ことを理解されたい。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義し、特許請求の範囲内
の方法及び構造ならびにそれらの等価物を包含することが意図される。
【表１−１】
2019508063.tif 000005
【表１−２】
2019508063.tif 000006
【表１−３】
2019508063.tif 000007
【表１−４】
2019508063.tif 000008
【表２−１】
2019508063.tif 000009
【表２−２】
2019508063.tif 000010
【表２−３】
2019508063.tif 000011
【表２−４】
2019508063.tif 000012
【表２−５】
2019508063.tif 000013
【表２−６】
2019508063.tif 000014
【表２−７】
2019508063.tif 000015
【表２−８】
2019508063.tif 000016
【表２−９】
2019508063.tif 000017
【表２−１０】
2019508063.tif 000018
【表２−１１】
2019508063.tif 000019
【表２−１２】
2019508063.tif 000020
【表２−１３】
2019508063.tif 000021
【表２−１４】
2019508063.tif 000022
【表２−１５】
2019508063.tif 000023
【表２−１６】
2019508063.tif 000024
【表２−１７】
2019508063.tif 000025
【表２−１８】
2019508063.tif 000026
【表２−１９】
2019508063.tif 000027
【表２−２０】
2019508063.tif 000028
【表２−２１】
2019508063.tif 000029
【表２−２２】
2019508063.tif 000030
【表２−２３】
2019508063.tif 000031
【表２−２４】
2019508063.tif 000032
【表２−２５】
2019508063.tif 000033
【表２−２６】
2019508063.tif 000034
【表２−２７】
2019508063.tif 000035
【表２−２８】
2019508063.tif 000036
【表２−２９】
2019508063.tif 000037
【表２−３０】
2019508063.tif 000038
【表２−３１】
2019508063.tif 000039
【表２−３２】
2019508063.tif 000040
【表２−３３】
2019508063.tif 000041
【表２−３４】
2019508063.tif 000042
【表２−３５】
2019508063.tif 000043
【表２−３６】
2019508063.tif 000044
【表２−３７】
2019508063.tif 000045
【表２−３８】
2019508063.tif 000046
【表２−３９】
2019508063.tif 000047
【表２−４０】
2019508063.tif 000048
【表２−４１】
2019508063.tif 000049
【表２−４２】
2019508063.tif 000050
【表２−４３】
2019508063.tif 000051
【表２−４４】
2019508063.tif 000052
【表２−４５】
2019508063.tif 000053
【表２−４６】
2019508063.tif 000054
【表２−４７】
2019508063.tif 000055
【表２−４８】
2019508063.tif 000056
【表２−４９】
2019508063.tif 000057
【表２−５０】
2019508063.tif 000058
【表２−５１】
2019508063.tif 000059
【表２−５２】
2019508063.tif 000060
【表２−５３】
2019508063.tif 000061
【表２−５４】
2019508063.tif 000062
【表２−５５】
2019508063.tif 000063
【表２−５６】
2019508063.tif 000064
【表２−５７】
2019508063.tif 000065
【表２−５８】
2019508063.tif 000066
【表２−５９】
2019508063.tif 000067
【表２−６０】
2019508063.tif 000068
【表２−６１】
2019508063.tif 000069
【表２−６２】
2019508063.tif 000070
【表２−６３】
2019508063.tif 000071
【表２−６４】
2019508063.tif 000072
【表２−６５】
2019508063.tif 000073
【表２−６６】
2019508063.tif 000074
【表２−６７】
2019508063.tif 000075
【表２−６８】
2019508063.tif 000076
【表２−６９】
2019508063.tif 000077
【表２−７０】
2019508063.tif 000078
【表２−７１】
2019508063.tif 000079
【表２−７２】
2019508063.tif 000080
【表２−７３】
2019508063.tif 000081
【表２−７４】
2019508063.tif 000082
【表２−７５】
2019508063.tif 000083
【表２−７６】
2019508063.tif 000084
【表２−７７】
2019508063.tif 000085
【表２−７８】
2019508063.tif 000086
【表２−７９】
2019508063.tif 000087
【表２−８０】
2019508063.tif 000088
【表２−８１】
2019508063.tif 000089
【表２−８２】
2019508063.tif 000090
【表２−８３】
2019508063.tif 000091
【表２−８４】
2019508063.tif 000092
【表２−８５】
2019508063.tif 000093
【表２−８６】
2019508063.tif 000094
【表２−８７】
2019508063.tif 000095
【表２−８８】
2019508063.tif 000096
【表２−８９】
2019508063.tif 000097
【表２−９０】
2019508063.tif 000098
【表２−９１】
2019508063.tif 000099
【表２−９２】
2019508063.tif 000100
【表２−９３】
2019508063.tif 000101
【表２−９４】
2019508063.tif 000102
【表２−９５】
2019508063.tif 000103
【表２−９６】
2019508063.tif 000104
【表２−９７】
2019508063.tif 000105
【表２−９８】
2019508063.tif 000106
【表２−９９】
2019508063.tif 000107
【表２−１００】
2019508063.tif 000108
【表２−１０１】
2019508063.tif 000109
【表２−１０２】
2019508063.tif 000110
【表２−１０３】
2019508063.tif 000111
【表２−１０４】
2019508063.tif 000112
【表２−１０５】
2019508063.tif 000113
【表２−１０６】
2019508063.tif 000114
【表２−１０７】
2019508063.tif 000115
【表２−１０８】
2019508063.tif 000116
【表２−１０９】
2019508063.tif 000117
【表２−１１０】
2019508063.tif 000118
【表２−１１１】
2019508063.tif 000119
【表２−１１２】
2019508063.tif 000120
【表２−１１３】
2019508063.tif 000121
【表２−１１４】
2019508063.tif 000122
【表２−１１５】
2019508063.tif 000123
【表２−１１６】
2019508063.tif 000124
【表２−１１７】
2019508063.tif 000125
【表２−１１８】
2019508063.tif 000126
【表２−１１９】
2019508063.tif 000127
【表２−１２０】
2019508063.tif 000128
【表２−１２１】
2019508063.tif 000129
【表２−１２２】
2019508063.tif 000130
【表２−１２３】
2019508063.tif 000131
【表２−１２４】
2019508063.tif 000132
【表２−１２５】
2019508063.tif 000133
【表２−１２６】
2019508063.tif 000134
【表２−１２７】
2019508063.tif 000135
【表２−１２８】
2019508063.tif 000136
【表２−１２９】
2019508063.tif 000137
【表２−１３０】
2019508063.tif 000138
【表２−１３１】
2019508063.tif 000139
【表２−１３２】
2019508063.tif 000140
【表２−１３３】
2019508063.tif 000141
【表２−１３４】
2019508063.tif 000142
【表２−１３５】
2019508063.tif 000143
【表２−１３６】
2019508063.tif 000144
【表２−１３７】
2019508063.tif 000145
【表２−１３８】
2019508063.tif 000146
【表２−１３９】
2019508063.tif 000147
【表２−１４０】
2019508063.tif 000148
【表２−１４１】
2019508063.tif 000149
【表２−１４２】
2019508063.tif 000150
【表２−１４３】
2019508063.tif 000151
【表２−１４４】
2019508063.tif 000152
【表２−１４５】
2019508063.tif 000153
【表２−１４６】
2019508063.tif 000154
【表２−１４７】
2019508063.tif 000155
【表２−１４８】
2019508063.tif 000156
【表２−１４９】
2019508063.tif 000157
【表２−１５０】
2019508063.tif 000158
【表２−１５１】
2019508063.tif 000159
【表２−１５２】
2019508063.tif 000160
【表２−１５３】
2019508063.tif 000161
【表２−１５４】
2019508063.tif 000162
【表２−１５５】
2019508063.tif 000163
【表２−１５６】
2019508063.tif 000164
【表２−１５７】
2019508063.tif 000165
【表２−１５８】
2019508063.tif 000166
【表２−１５９】
2019508063.tif 000167
【表２−１６０】
2019508063.tif 000168
【表２−１６１】
2019508063.tif 000169
【表２−１６２】
2019508063.tif 000170
【表２−１６３】
2019508063.tif 000171
【表２−１６４】
2019508063.tif 000172
【表２−１６５】
2019508063.tif 000173
【表２−１６６】
2019508063.tif 000174
【表２−１６７】
2019508063.tif 000175
【表２−１６８】
2019508063.tif 000176
【表２−１６９】
2019508063.tif 000177
【表２−１７０】
2019508063.tif 000178
【表２−１７１】
2019508063.tif 000179
【表２−１７２】
2019508063.tif 000180
【表２−１７３】
2019508063.tif 000181
【表２−１７４】
2019508063.tif 000182
【表２−１７５】
2019508063.tif 000183
【表２−１７６】
2019508063.tif 000184
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【表４−１８９】
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【表５−１】
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【表５−２】
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【表５−３】
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【表５−４】
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【表６−１】
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【表６−２】
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【表７−１】
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【表７−３】
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【表７−４】
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【表７−５】
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【表７−６】
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【表７−１０】
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【表７−１１】
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【表７−１２】
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【表８−１】
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【表８−２】
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【表８−３】
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【表８−４】
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【表８−５】
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【表８−６】
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【表８−７】
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【表８−８】
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【表８−９】
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【表８−１０】
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【表８−１１】
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【表８−１２】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
2019508063.tif 000699
【配列表】
2019508063000001.app
【国際調査報告】
2019508063.tif 000700
2019508063.tif 000701
2019508063.tif 000702
2019508063.tif 000703
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