(57)【要約】  生物学的溶液中の単量体タンパク質から凝集タンパク質を分離するための方法であって、接触面を有する少なくとも１つのフィルタ要素［ここで、フィルタ要素は濾材を含み、濾材は、多孔質基材と、多孔質基材上に配置された、炭化水素主鎖、及び炭化水素主鎖に結合された複数のペンダント基を含むポリマーと、を含み、第１の複数のペンダント基のそれぞれは、（１）少なくとも１つの酸性基又はその塩と、（２）少なくとも１つの酸性基又はその塩を、少なくとも６個の原子が連結した鎖によって、炭化水素主鎖に直接連結させているスペーサー基と、を含む］を準備することと、単量体タンパク質から凝集タンパク質を分離するのに有効な条件下で、初期の生物学的溶液をフィルタ要素の接触面に接触させて、最終的な生物学的溶液が精製された単量体タンパク質を含むようにすることと、を含む、方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的溶液中の単量体タンパク質から凝集タンパク質を分離するための方法であって、
接触面を有する少なくとも１つのフィルタ要素
［ここで、前記フィルタ要素は濾材を含み、前記濾材は、
多孔質基材と、
前記多孔質基材上に配置された、炭化水素主鎖、及び前記炭化水素主鎖に結合された複数のペンダント基を含むポリマーと、
を含み、第１の複数のペンダント基のそれぞれは、
（１）少なくとも１つの酸性基又はその塩と、
（２）前記少なくとも１つの酸性基又はその塩を、少なくとも６個の原子が連結した鎖によって、前記炭化水素主鎖に直接連結させているスペーサー基と、
を含む］を準備することと、
前記単量体タンパク質から前記凝集タンパク質を分離するのに有効な条件下で、初期の生物学的溶液を前記フィルタ要素の前記接触面に接触させて、最終的な生物学的溶液が精製された単量体タンパク質を含むようにすることと、
を含む、方法。
【請求項２】
前記ポリマーが、
（１）少なくとも１つのエチレン性不飽和基と、
（２）少なくとも１つの酸性基又はその塩と、
（３）前記少なくとも１つのエチレン性不飽和基と、前記少なくとも１つの酸性基又はその塩とを、少なくとも６個の原子が連結した鎖によって、直接連結させているスペーサー基と、
を含む、少なくとも１つのモノマーの共重合された単位を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記単量体タンパク質を溶出せずに回収することを更に含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記条件が、前記最終的な溶液において、前記初期の生物学的溶液中に存在する前記単量体タンパク質の少なくとも７０％を回収するのに有効である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記条件が、前記初期の生物学的溶液から、前記凝集タンパク質の少なくとも１０％を除去するのに有効である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記タンパク質が、抗体、酵素、又はホルモンを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記タンパク質が抗体を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記条件が、９未満の前記生物学的溶液のｐＨを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記条件が、少なくとも１ｍＳ／ｃｍの前記生物学的溶液の導電率を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記多孔質基材上に配置された前記ポリマーの前記少なくとも１つの酸性基又はその塩が、濾材１グラム当たり少なくとも０．０２ｍｍｏｌｅの密度で存在する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
請求項２に応じ、前記少なくとも１つのエチレン性不飽和基が、エテニル基、１−アルキルエテニル基、及びこれらの組み合わせから選択される、請求項２〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記スペーサー基の前記鎖が、少なくとも８個の連結した原子を有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの酸性基又はその塩が、カルボキシ基、ホスホノ基、ホスファト基、スルホノ基、スルファト基、ボロナト基、及びこれらの組み合わせから選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記スペーサー基が、連結されたヘテロ原子を含有する炭化水素基である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記スペーサー基が、少なくとも１つの水素結合部分を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１６年９月９日出願の米国特許仮出願第６２／３８５３８５号の利益を主張するものであり、この開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
標的生体材料、特に単量体抗体（特に単量体モノクローナル抗体）などの単量体タンパク質の単離及び精製は、関節リウマチ、クローン病、高コレステロール血症、及び様々な癌などの、様々な疾患の治療用途に重要である。モノクローナル抗体は、例えば、健常組織に重大な有害作用を及ぼすことなく、特定の標的を対象とすることができるため、従来の治療よりも好ましい。単量体タンパク質からの凝集タンパク質の除去は、このような治療用途に特に重要である。
【０００３】
様々な標的生体材料の分離及び精製には、ポリマー材料が広く用いられてきた。このような分離及び精製方法は、イオン性基の存在、標的生体材料のサイズ、疎水性相互作用、親和性相互作用、水素結合相互作用、共有結合の形成などを含むいくつかの結合因子又は機構のいずれかに基づき得る。
【０００４】
特に使い捨て方式の膜に基づく技術が、バイオ医薬品及びワクチンの製造方法においてますます重要となりつつある。膜は、受動的な、サイズに基づく分離において、また、より最近では、能動濾過（例えば、精製方法の後期段階における微量汚染物質の除去用）において用いられている。
【０００５】
しかしながら、官能化膜（官能性ポリマーを担持する膜など）は、典型的には、比較的低い生体材料結合能が難点であり、これによって、概して、大規模な精製における用途が限定されてきた。したがって、官能化膜よりも、多孔質のビーズ状のクロマトグラフィー樹脂（イオン交換基又は他の相互作用性官能基を担持する）が、「捕捉及び溶出」型又は「結合及び溶出」型のタンパク質精製方法において標準的に用いられてきた。
【０００６】
したがって、単量体タンパク質の単離及び精製、特に単量体タンパク質、とりわけ単量体モノクローナル抗体からの凝集タンパク質の分離のための、比較的簡便で、費用対効果が高く、かつ／又は効率的な（例えば、比較的容易に入手可能な出発材料及び／又は比較的少ない処理工程を含む）方法が必要とされている。
【発明の概要】
【０００７】
本開示は、生物学的溶液中の単量体タンパク質から凝集タンパク質を分離するための方法を提供する。本方法は、接触面（例えば、上流面又は上面）を有する少なくとも１つのフィルタ要素を準備することと、単量体タンパク質から凝集タンパク質を分離するのに有効な条件下で、初期の生物学的溶液をフィルタ要素の接触面（例えば、上流面又は上面）に接触させて、最終的な生物学的溶液が精製された単量体タンパク質を含むようにすることと、を含む。
【０００８】
このような方法の一実施形態において、フィルタ要素は濾材を含み、濾材は、
多孔質基材と、
多孔質基材上に配置された、炭化水素主鎖、及び炭化水素主鎖に結合された複数のペンダント基を含むポリマーと、
を含み、第１の複数のペンダント基のそれぞれは、
（１）少なくとも１つの酸性基又はその塩と、
（２）少なくとも１つの酸性基又はその塩を、少なくとも６個の原子が連結した鎖によって、炭化水素主鎖に直接連結させているスペーサー基と、
を含む。
【０００９】
このような方法の別の実施形態において、フィルタ要素は濾材を含み、濾材は、
多孔質基材と、
多孔質基材上に配置された、少なくとも１つのモノマーの共重合された単位を含むポリマーと、
を含み、ポリマーは、
（１）少なくとも１つのエチレン性不飽和基と、
（２）少なくとも１つの酸性基又はその塩と、
（３）少なくとも１つのエチレン性不飽和基と、少なくとも１つの酸性基又はその塩とを、少なくとも６個の原子が連結した鎖によって、直接連結させているスペーサー基と、
を含む。
【００１０】
定義
本特許出願で用いる場合、
「凝集タンパク質」又は「タンパク質凝集体」は、目的の生成物、例えば、治療用タンパク質（例えば、抗体）の少なくとも２つの分子（すなわち、モノマー）の会合を指す。目的の生成物の少なくとも２つの分子の会合は、これらに限定されるものではないが、共有結合架橋、非共有結合架橋、ジスルフィド架橋、又は非還元性架橋などのいずれによっても生じ得る。
「ボロナト」は、式−Ｂ（ＯＨ）２の基を意味する。
「カルボニルイミノ」は、式−（ＣＯ）ＮＲ−［式中、Ｒは、水素、アルキル（例えば、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基から選択される）、又はアリールである（好ましくは、Ｒは水素である）］の二価の基又は部分を意味する。
「カルボキシ」は、式−ＣＯＯＨの基を意味する。
「連結した原子」は、（鎖置換基の原子ではなく）鎖中の原子を意味する。
「連結されたヘテロ原子」は、（例えば、炭素−ヘテロ原子−炭素鎖又は炭素−ヘテロ原子−ヘテロ原子−炭素鎖を形成するように）炭素鎖中で１つ以上の炭素原子を置換する炭素以外の原子（例えば、酸素、窒素、又は硫黄）を意味する。
「エチレン性不飽和」は、式−ＣＹ＝ＣＨ２［式中、Ｙは、水素、アルキル、シクロアルキル、又はアリールである］の基を意味する。
「グラフト密度」は、基材を完成したフィルタ要素に変換した後の質量増加を測定し、用いられたモノマー混合物の理論的分子量で除すことによって求め、ｍｍｏｌ／ｇ、すなわち、元の基材１グラム当たりにグラフト化されたリガンド基のミリモル（又はミリ当量）として表した。
「ヘテロ原子」は、炭素又は水素以外の原子を意味する。
「水素結合受容体」は、孤立電子対を有する酸素、窒素、及び硫黄から選択されるヘテロ原子を意味する。
「水素結合供与体」は、酸素、窒素、及び硫黄から選択されるヘテロ原子と共有結合した水素原子からなる部分を意味する。
「水素結合部分」は、少なくとも１つの水素結合供与体及び少なくとも１つの水素結合受容体を含む部分を意味する。
「ヒドロキシ」は、式−ＯＨの一価の基を意味する。
「イミノカルボニルイミノ」は、式−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ）−［式中、各Ｒは、独立して、水素、アルキル（例えば、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基から選択される）、又はアリールである（好ましくは、少なくとも１つのＲは水素であり、より好ましくは、両方とも水素である）］の二価の基又は部分を意味する。
「イミノチオカルボニルイミノ」は、式−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｓ）−Ｎ（Ｒ）−［式中、各Ｒは、独立して、水素、アルキル（例えば、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基から選択される）、又はアリールである（好ましくは、少なくとも１つのＲは水素であり、より好ましくは、両方とも水素である）］の二価の基又は部分を意味する。
「イソシアネート」は、式−Ｎ＝Ｃ＝Ｏの基を意味する。
「オキシカルボニルイミノ」は、式−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ）−［式中、Ｒは、水素、アルキル（例えば、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基から選択される）、又はアリールである（好ましくは、Ｒは水素である）］の二価の基又は部分を意味する。
「オキシチオカルボニルイミノ」は、式−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−Ｎ（Ｒ）−［式中、Ｒは、水素、アルキル（例えば、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基から選択される）、又はアリールである（好ましくは、Ｒは水素である）］の二価の基又は部分を意味する。
「ホスファト」は、式−ＯＰＯ３Ｈ２の基を意味する。
「ホスホノ」は、式−ＰＯ３Ｈ２の基を意味し、この基は酸素原子には結合していない。
生物学的溶液中の単量体タンパク質（例えば、抗体）のコンテクストにおける「精製された」は、初期の生物学的溶液に比べ、最終的な生物学的溶液中の、凝集タンパク質（例えば、抗体）の量に対する単量体タンパク質（例えば、抗体）の量が増加していることを意味する。
「スルファト」は、式−ＯＳＯ３Ｈの基を意味する。
「スルホノ」は、式−ＳＯ３Ｈの基を意味し、この基は酸素原子には結合していない。
「チオカルボニルイミノ」は、式−（ＣＳ）ＮＲ−［式中、Ｒは、水素、アルキル（例えば、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基から選択される）、又はアリールである（好ましくは、Ｒは水素である）］の二価の基又は部分を意味する。
【００１１】
また、本明細書において、用語「含む（comprises）」及びその変化形は、これらの用語が明細書及び特許請求の範囲に記載されている場合、限定的な意味は持たない。このような用語は、記載されたある１つの工程若しくは要素、又は複数の工程若しくは要素の群が含まれることを意味し、いかなる他の工程若しくは要素、又は複数の工程若しくは要素の群も排除されないことを意味するものと理解される。「からなる（consisting of）」により、この語句「からなる」に続くいかなるものも包み、これらに限定されることを意味する。したがって、語句「からなる」は、列挙された要素が必要又は必須であり、他の要素が存在し得ないことを示す。「から本質的になる（consisting essentially of）」により、この語句の後に列挙されるいかなる要素も含み、これらの列挙された要素に関して本開示で特定した作用若しくは機能に干渉又は寄与しない他の要素に限定されることを意味する。したがって、語句「から本質的になる」は、列挙された要素が必要又は必須であるが、他の要素は任意に含まれ、列挙された要素の作用若しくは機能に実質的に影響を及ぼすか否かに応じて存在してもよい、又は、しなくてもよいことを意味する。
【００１２】
「好ましい」及び「好ましくは」という語は、特定の状況下で特定の利益を提供し得る、本開示の実施形態を指す。しかしながら、同一の状況下又は他の状況下において、他の実施形態も好ましい場合がある。更には、１つ以上の好ましい実施形態の記載は、他の実施形態が有用ではないことを示唆するものではなく、本開示の範囲から他の実施形態を排除することを意図するものではない。
【００１３】
本出願では、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」などの用語は、単数の実体のみを指すことを意図するものではなく、例示のために具体例の使用が可能な、一般的な種類を含むことを意図するものである。用語「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、用語「少なくとも１つ」と互換的に用いられる。列挙が後続する「〜のうちの少なくとも１つ（at least one of）」及び「〜のうちの少なくとも１つを含む（comprises at least one of）」という語句は、列挙内の項目のうちのいずれか１つ、及び、列挙内の２つ以上の項目のいずれかの組み合わせを指す。
【００１４】
列挙が後続する「〜のうちの少なくとも１つ（at least one of）」及び「〜のうちの少なくとも１つを含む（comprises at least one of）」という語句は、列挙内の項目のうちのいずれか１つ、及び、列挙内の２つ以上の項目のいずれかの組み合わせを指す。
【００１５】
本明細書で用いる場合、用語「又は」は、内容が別途明示していない限り、概して「及び／又は」を含む通常の意味で用いられる。
【００１６】
用語「及び／又は」は、列挙された要素の１つ又は全て、若しくは列挙された要素の任意の２つ以上の組み合わせを意味する（例えば、苦痛を予防すること及び／又は治療することは、更なる苦痛を予防すること、治療すること、又は治療すること及び予防することの両方を意味する）。
【００１７】
本明細書において、数値範囲（例えば、特定の部分の炭素原子の数の範囲、特定の成分の量の範囲など）の様々な集合が記載されており、各集合内で、範囲のいずれかの下限を、範囲のいずれかの上限と組み合わせることができる。このような数値範囲はまた、その範囲内に包括される全ての数を含むことを意図する（例えば、１〜５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５などを含む）。
【００１８】
また、本明細書において、全ての数は用語「約」で修飾され、好ましくは用語「正確に」で修飾されるものとみなす。測定された量に関して本明細書で用いる場合、用語「約」は、当業者によって、測定を行い、測定の目的及び用いた測定機器の精度に見合う程度の注意を払って予想され得る、測定された量のばらつきを指す。本明細書において、「最大」数字（例えば、最大５０）は、その数（例えば、５０）を含む。
【００１９】
本明細書を通しての「一実施形態（one embodiment）」、「実施形態（an embodiment）」、「特定の実施形態（certain embodiments）」、又は「いくつかの実施形態（some embodiments）」などの言及は、実施形態に関して記載された特定の特徴、構成、組成、又は特性が、本開示の少なくとも１つの実施形態に含まれていることを意味する。したがって、本明細書を通して様々な箇所にこのような語句が記載されている場合、必ずしも、本開示の同一の実施形態を指しているわけではない。更に、特定の特徴、構成、組成、又は特性は、１つ以上の実施形態において任意の好適な方法で組み合わせてもよい。
【００２０】
ある基が本明細書に記載の式中に１回よりも多く存在する場合、具体的に記載されているか否かに関わらず、各基は「独立して」選択される。例えば、式中に１つよりも多いＲ２基が存在する場合、各Ｒ２基は独立して選択される。更に、これらの基内に含有される下位の基も独立して選択される。
【００２１】
上記の発明の概要の項は、本開示のあらゆる実施形態又はあらゆる実施の記載を意図するものではない。以下の発明を実施するための形態により、例示的な実施形態をより詳細に記載する。発明を実施するための形態を通し、例の列挙を通して指針を提供し、これらの例を様々な組み合わせで用いることができる。いずれの場合も、記載した列挙は、代表的な群としての役割を果たすのみであり、排他的な列挙として解釈すべきものではない。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本開示は、生物学的溶液中の単量体タンパク質から凝集タンパク質を分離するための方法を提供する。本方法は、接触面（例えば、上流面又は上面）を有する少なくとも１つのフィルタ要素を準備することと、単量体タンパク質から凝集タンパク質を分離するのに有効な条件下で、生物学的溶液をフィルタ要素の接触面（例えば、上流面又は上面）に接触させることと、を含む。
【００２３】
このような方法の特定の実施形態において、フィルタ要素は濾材を含み、濾材は、
多孔質基材と、
多孔質基材上に配置された、炭化水素主鎖、及び炭化水素主鎖に結合された複数のペンダント基を含むポリマーと、
を含み、第１の複数のペンダント基のそれぞれは、
（１）少なくとも１つの酸性基又はその塩と、
（２）少なくとも１つの酸性基又はその塩を、少なくとも６個の原子が連結した鎖によって、炭化水素主鎖に直接連結させているスペーサー基と、
を含む。
【００２４】
多孔質基材上に配置されたポリマーは、多孔質基材上に配置される前に形成することができる。例えば、ポリマーを形成した後に、基材表面上にコーティングすることができる。代替の実施形態において、ポリマーは、基材の存在下でモノマーから形成し、基材にグラフト化することができる。例えば、酸性基又はその塩を含むモノマーに、基材の存在下で電子ビーム線を施し、このようなモノマーをグラフト化し、かつ重合させることができる。別の実施形態において、酸性基又はその塩を含む化合物は、あらかじめ基材表面にグラフト化されたモノマー単位と反応させることができる。
【００２５】
このような方法の特定の実施形態において、多孔質基材上に配置されたポリマーは、少なくとも１つのモノマーの共重合された単位を含み、モノマーは、
（１）少なくとも１つのエチレン性不飽和基（いくつかの実施形態では、末端のエチレン性不飽和基）と、
（２）少なくとも１つの酸性基又はその塩と、
（３）少なくとも１つのエチレン性不飽和基と、少なくとも１つの酸性基又はその塩とを、少なくとも６個の原子が連結した鎖によって、直接連結させているスペーサー基と、
を含む。
【００２６】
特定の実施形態において、多孔質基材は多孔質膜であり、特定の実施形態において、多孔質基材は多孔質ポリマー膜である。
【００２７】
特定の実施形態において、ポリマーの複数のペンダント基中、又は、モノマー中の酸性基若しくはその塩は、カルボキシ、ホスホノ、ホスファト、スルホノ、スルファト、ボロナト、及びこれらの組み合わせから選択される。
【００２８】
特定の実施形態において、ポリマーの複数のペンダント基中、又は、モノマー中のスペーサー基は、少なくとも１つの水素結合部分を含む。
【００２９】
驚くべきことに、このようなポリマーの酸性基又はその塩は、単量体タンパク質に比べ、凝集タンパク質との相互作用において特に有効であり得る。ポリマーを担持する（特定の実施形態では、グラフト化ポリマーを担持する）多孔質基材は、より短い連結鎖のポリマーを担持する同様の多孔質基材よりも、予想外に、より高い凝集タンパク質結合能を呈することができる。凝集タンパク質結合能は、連結鎖中に少なくとも１つの水素結合部分を含むことにより、驚くほどに、更に向上させることができる。
【００３０】
特定の実施形態において、単量体タンパク質に比べ、凝集タンパク質への結合について相対的に高い結合能で官能化された基材は、モノマーのエチレン性不飽和基と酸性基又はその塩との間に多原子スペーサー基を有する特定のモノマーを用いることによって、調製することができる。モノマーは、少なくとも１つの酸性基又はその塩が、少なくとも１つのエチレン性不飽和基から、少なくとも６個の原子が連結した連結鎖によって隔離又は離されている化合物を含む。フリーラジカル重合すると、このようなモノマーは、得られたポリマー鎖又はポリマー主鎖から、少なくとも６個の原子が連結した連結鎖によって隔離又は離されている酸性基若しくはその塩を担持するポリマーをもたらす。
【００３１】
タンパク質を含有する多種多様な生物学的溶液を、本開示の方法において利用することができる。タンパク質を含有する溶液は、例えば、発酵ブロス又は細胞培養物又はマウス腹水を含んでいてもよい。タンパク質は、当該分野において既知の、任意のタンパク質、又はその断片であり得る。タンパク質は、天然の供給源由来又は組み換え供給源由来であってもよい。タンパク質は、天然配列又は非天然配列を有していてもよい。いくつかの実施形態において、タンパク質は酵素である。いくつかの実施形態において、タンパク質はホルモンである。いくつかの実施形態において、タンパク質は抗体である。特定の実施形態において、タンパク質はモノクローナル抗体又はその断片である。抗体の断片としては、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及び一本鎖抗体が挙げられる。ある場合には、タンパク質はヒトモノクローナル抗体であってもよい。他の場合には、タンパク質は免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）抗体である。更に他の場合には、タンパク質はＦｃ融合タンパク質などの融合タンパク質である。
【００３２】
生物学的溶液中の単量体タンパク質から凝集タンパク質を分離する方法は、単量体タンパク質を通過させながら、凝集タンパク質を濾材に結合させることによるものである。チャレンジロード（challenge load）が低い分離の初期段階では、単量体タンパク質が濾材に結合することもあるが、チャレンジロードが増大するにつれて凝集タンパク質が優先的に結合され、単量体タンパク質を置換する。したがって、本方法では、低いチャレンジロードにおいて単量体タンパク質が濾材に結合している場合があるが、本方法では、最終的には、単量体タンパク質から凝集タンパク質を分離し、最終的な生物学的溶液（すなわち、初期の生物学的溶液をフィルタ要素に接触させることによって得られた生成物）が精製された単量体タンパク質を含むようにする。
【００３３】
本方法の特定の実施形態において、生物学的溶液をフィルタ要素の接触面（例えば、上流面又は上面）に接触させることは、生物学的溶液を濾材を通して通過させることによって、又は、生物学的溶液を濾材を通して流通させることによって、又は、両方によって行われる。特定の実施形態において、生物学的溶液を接触面（例えば、上流面又は上面）に接触させることは、生物学的溶液を濾材を通して流通させることを伴う。
【００３４】
特定の実施形態において、本方法は、溶出工程を必要とせずに、単量体タンパク質を精製することを伴う。すなわち、本方法は、単量体タンパク質を結合させるのではなく、また、凝集タンパク質を洗い流すのではなく、凝集タンパク質を結合させ、単量体タンパク質を通過させる。これは、少なくとも単量体タンパク質の希釈を回避することにより、溶出した単量体タンパク質を後で濃縮する必要がなくなり、これによって処理効率がもたらされ、処理時間が短縮されるため有利である。これはまた、濾材に結合した凝集タンパク質の捕捉及び廃棄が可能となり、これは、濾材が使い捨てフィルタ物品内に封入されている場合に望ましいため、有利である。更に、緩衝液の交換及びｐＨ調整が不要となり得る。
【００３５】
特定の実施形態において、本方法は、最終的な溶液において、初期の生物学的溶液（すなわち、本明細書に記載の方法が施される前の生物学的溶液）中に存在する単量体タンパク質の少なくとも４０％、又は少なくとも４５％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも５５％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも６５％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも７５％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％を回収することを伴う。
【００３６】
特定の実施形態において、本方法は、初期の生物学的溶液から、凝集タンパク質の少なくとも５％、又は少なくとも１０％、又は少なくとも１５％、又は少なくとも２０％、又は少なくとも２５％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも３５％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも４５％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも５５％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも６５％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも７５％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％を除去することを伴う。
【００３７】
本方法は、単量体タンパク質から凝集タンパク質を分離し、所望の結果をもたらすのに有効な条件下で、生物学的溶液を、フィルタ要素の接触面（例えば、上流面又は上面）に接触させることを伴う。
【００３８】
特定の実施形態において、このような条件は、９未満、又は８．５未満、又は８未満、又は７．５未満、又は７未満、又は６．５未満の生物学的溶液のｐＨを含む。特定の実施形態において、このような条件は、少なくとも４、又は少なくとも４．５、又は少なくとも５の生物学的溶液のｐＨを含む。
【００３９】
特定の実施形態において、このような条件は、１センチメートル当たり少なくとも１ミリジーメンス（ｍＳ／ｃｍ）、又は少なくとも２ｍＳ／ｃｍ、又は少なくとも３ｍＳ／ｃｍ、又は少なくとも４ｍＳ／ｃｍ、又は少なくとも５ｍＳ／ｃｍ、又は少なくとも６ｍＳ／ｃｍ、又は少なくとも７ｍＳ／ｃｍ、又は少なくとも８ｍＳ／ｃｍ、又は少なくとも９ｍＳ／ｃｍ、又は少なくとも１０ｍＳ／ｃｍの生物学的溶液の導電率を含む。特定の実施形態において、このような条件は、１１０ｍＳ／ｃｍ以下、又は１００ｍＳ／ｃｍ以下、又は５０ｍＳ／ｃｍ以下、又は４０ｍＳ／ｃｍ以下、又は３０ｍＳ／ｃｍ以下の生物学的溶液の導電率を含む。
【００４０】
特定の実施形態において、生物学的溶液のこのような導電率は、無機塩、有機塩、又はこれらの組み合わせを含む緩衝液によってもたらされる。特定の実施形態において、このような緩衝塩は、塩化物（例えば、ＮａＣｌ）、リン酸塩、クエン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、又はこれらの組み合わせを含む。
【００４１】
特定の実施形態において、このような条件は、濾材１Ｌ当たり少なくとも１グラム（ｇ）、又は濾材１Ｌ当たり少なくとも１０ｇ、又は濾材１Ｌ当たり少なくとも２５ｇ、又は濾材１Ｌ当たり少なくとも５０ｇ、又は濾材１Ｌ当たり少なくとも７５ｇ、又は濾材１Ｌ当たり、少なくとも１００ｇ、若しくは少なくとも５００ｇ、若しくは少なくとも１０００ｇ、若しくは少なくとも２０００ｇのチャレンジロードを含む。このコンテクストにおいて、「チャレンジロード」は、濾材の体積に対するタンパク質（凝集タンパク質及び単量体タンパク質）の量、１リットル当たりのグラム数を意味する。チャレンジロードの上限は、単量体タンパク質に対する凝集タンパク質の選択性、初期の生物学的溶液中の凝集タンパク質の実際の量、初期の生物学的溶液中の総タンパク質濃度などを含む、いくつかの事項によって決まる。望ましくは、チャレンジロードは、キログラムから数キログラムの範囲であり、できる限り高いチャレンジロードである。
【００４２】
特定の実施形態において、本方法のための最適条件の評価は、試料容器のアレイを用いて好都合に実施され、各容器は、本開示のフィルタ要素を含む。特に有用な容器のアレイは、例えば、各ウェルが本開示のフィルタ要素を含む、９６ウェルフィルタプレートである。個々のプレートの各ウェルは、同一のフィルタ要素を含んでもよく、すなわち、同一のポリマー組成物でフィルタ要素を官能化してもよい。あるいは、２つ以上の異なるフィルタ要素、すなわち、異なるポリマー組成物で官能化されたフィルタ要素を、単一のプレートのウェル内に配置してもよい。各ウェルは単層のフィルタ要素を含んでもよい、あるいは、１層よりも多いフィルタ要素を含んでもよい。後者の場合、多層のフィルタ要素は、同一のポリマーで、又は、異なるポリマーで官能化されていてもよい。次いで、様々な緩衝塩、緩衝液のｐＨ値、緩衝液の導電率、及び／又はタンパク質濃度を利用し、タンパク質溶液を調製することができる。次いで、これらの初期の溶液を、フィルタ要素の接触面（例えば、上面）に接触するように、プレートのウェル中に適用することができる。所定の接触時間の後、遠心分離によって又は真空濾過によって、タンパク質溶液をフィルタ要素を通して通過させることができ、捕集プレートのウェルに捕集することができる。このように捕集された濾過液（最終的な溶液）は、ＨＰＬＣ分析などにより、単量体タンパク質及び凝集タンパク質の濃度について分析することができ、初期の溶液の濃度と比較することができる。このようにして、単量体タンパク質の減少を最小限に抑え、凝集タンパク質を除去するための最適条件（緩衝液、ｐＨ、導電率などに関して）を、単一の、ハイスループット実験のコンテクスト内で評価することができる。このような技法は、当業者に周知である。
【００４３】
モノマー
本開示の方法における濾材に用いられるポリマーの調製に用いるのに好適なモノマーとしては、（ａ）少なくとも１つのエチレン性不飽和基と；（ｂ）少なくとも１つの酸性基又はその塩と；（ｃ）少なくとも１つのエチレン性不飽和基と、少なくとも１つの酸性基又はその塩とを、少なくとも６個の原子が連結した鎖によって、直接連結させているスペーサー基と；を含む（又はこれらからなる）ものが挙げられる。
【００４４】
モノマーは中性状態であり得るが、一部のｐＨ条件下では、負に帯電している場合もある。
【００４５】
モノマーのエチレン性不飽和基（上記で定義した通り）は、式：−ＣＹ＝ＣＨ２［Ｙは、水素、アルキル、シクロアルキル、又はアリールである］によって表すことができる。特定の実施形態において、エチレン性不飽和基としては、エテニル、１−アルキルエテニル、及びこれらの組み合わせが挙げられる（すなわち、Ｙは、好ましくは水素又はアルキル、より好ましくは、Ｙは水素又はＣ１〜Ｃ４アルキル、更により好ましくは、Ｙは水素又はメチルである）。
【００４６】
モノマーは、単一のエチレン性不飽和基又は複数のエチレン性不飽和基（例えば、２個又は３個、又は最大６個程度）を含む場合があり、複数のエチレン性不飽和基は、本質的に同一であり得る、又は、異なり得る（好ましくは同一である）。モノマーは、好ましくは、１つのみのエチレン性不飽和基を有する。
【００４７】
モノマーの好適な酸性基としては、少なくともある程度の酸性度（比較的弱酸から比較的強酸の範囲であり得る）を呈するもの、及びその塩が挙げられる。このような酸性基又はその塩としては、イオン交換型又は金属キレート型のリガンドとして通常利用されるものが挙げられる。
【００４８】
特定の実施形態において、少なくとも１つの酸性基又はその塩は、ヘテロ原子含有基である。有用な酸性基としては、ヘテロヒドロカルビル基及び他のヘテロ原子含有基が挙げられる。例えば、有用な酸性基は、酸素、硫黄、リン、ホウ素など、及びこれらの組み合わせから選択される、１つ以上のヘテロ原子を含み得る。酸性基の有用な塩としては、アルカリ金属イオン（例えば、ナトリウムイオン又はカリウムイオン）、アルカリ土類金属イオン（例えば、マグネシウムイオン又はカルシウムイオン）、アンモニウムイオン、及びテトラアルキルアンモニウムイオンなど、並びにこれらの組み合わせから選択される対イオンを有するものが挙げられる。
【００４９】
モノマーは、単一の酸性基又は複数の酸性基（例えば、２個又は３個、又は最大６個程度）、又は、その塩を含む場合があり、複数の酸性基は、本質的に同一であり得る、又は、異なり得る（好ましくは同一である）。特定の実施形態において、酸性基は、カルボキシ、ホスホノ、ホスファト、スルホノ、スルファト、ボロナト、及びこれらの組み合わせから選択される。特定の実施形態において、酸性基としては、カルボキシ、ホスホノ、スルホノ、及びこれらの組み合わせが挙げられる。特定の実施形態において、酸性基はカルボキシ基である。
【００５０】
モノマーのスペーサー基は、少なくとも１つのエチレン性不飽和基及び少なくとも１つの酸性基又はその塩に、少なくとも６個の原子が連結した鎖によって、直接連結され得る。したがって、鎖は、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５個以上の連結した原子を含み得る（例えば、最大４０又は５０個程度を含む）。特定の実施形態において、鎖は、少なくとも７個の連結した原子（より好ましくは、少なくとも８個の連結した原子、更により好ましくは、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、又は少なくとも１２個）を含み、かつ／又は、３０個以下の連結した原子（より好ましくは２５個以下の連結した原子、更により好ましくは２０個以下、更により好ましくは１６個以下）を含む。
【００５１】
理論による束縛を望むものではないが、鎖の長さは、（モノマーの重合により形成される）ポリマー主鎖が、らせん構造又は部分的ならせん構造をとることに寄与し得る。鎖が比較的短い場合（例えば、６個未満の連結した原子）、酸性基間のイオン反発によって、ポリマー主鎖はランダムコイル型構造とされ得る。鎖長の増加に伴い、らせん構造をとることが可能となり得、８〜１４個の原子が連結した鎖長で、らせん構造をとる可能性は最大となり得る。基材にグラフト化されたポリマーのらせん構造によって、凝集タンパク質、特に凝集モノクローナル抗体との相互作用への酸性基又はその塩の提供を促進することができる。
【００５２】
特定の実施形態において、スペーサー基は少なくとも１つの水素結合部分を含み、これは、少なくとも１つの水素結合供与体及び少なくとも１つの水素結合受容体（両方ともヘテロ原子を含有する）を含む部分として上記で定義したものである。したがって、好ましいスペーサー基としては、ヘテロ原子含有炭化水素基（より好ましくは、連結されたヘテロ原子を含有する炭化水素基）が挙げられる。より好ましいスペーサー基は、少なくとも２つの水素結合部分を含む、又は、少なくとも１つの水素結合部分と、この水素結合部分とは別個の（この水素結合部分の一部ではない）少なくとも１つの水素結合受容体と、を含む。
【００５３】
特定の実施形態において、水素結合部分としては、少なくとも２つの水素結合供与体（例えば、イミノ、チオ、又はヒドロキシなどの供与体）、少なくとも２つの水素結合受容体（例えば、カルボニル、カルボニルオキシ、又はエーテル酸素の形態の受容体）、又は両方を含むものが挙げられる。例えば、イミノカルボニルイミノ部分（２つのＮ−Ｈ供与体と、カルボニル上の２つの孤立電子対の形態の少なくとも２つの受容体と、を有する）が、単一のイミノカルボニル部分よりも好ましい場合があり得る。特定の実施形態において、スペーサー基としては、少なくとも１つのイミノカルボニルイミノ部分（より好ましくは、カルボニルオキシなどの少なくとも１つの受容体との組み合わせである）、少なくとも２つのイミノカルボニル部分、又はこれらの組み合わせを含むものが挙げられる。
【００５４】
水素結合部分の水素結合供与体及び水素結合受容体は、互いに隣接している（直接結合している）場合がある、又は、隣接していない場合がある（好ましくは、隣接している、又は、４個以下の原子が連結した鎖によって、隔離されている、より好ましくは隣接している）。水素結合供与体及び／又は水素結合受容体のヘテロ原子は、スペーサー基の連結された原子の鎖中に配置することができる、あるいは、鎖置換基中に配置することができる。
【００５５】
水素結合供与体は、（供与体のヘテロ原子の孤立電子対によって）水素結合受容体としても機能する場合があるが、水素結合部分は、好ましくは、別個の供与体部分及び受容体部分を含む。これによって、分子内（モノマー間の）水素結合の形成を促進することができる。理論による束縛を望むものではないが、ポリマー分子内の隣接するモノマー繰り返し単位間又は近接する繰り返し単位間のこのような分子内水素結合は、スペーサー基の少なくともある程度の強化に寄与することができ、これによって、凝集タンパク質、特に凝集モノクローナル抗体との相互作用への酸性基又はその塩の提供を促進することができる。
【００５６】
驚くべきことに、このようなポリマーの酸性基又はその塩は、単量体タンパク質に比べ、凝集タンパク質との相互作用において特に有効であり得る。凝集タンパク質結合能は、モノマーの連結鎖中に少なくとも１つの水素結合部分を含むことにより、驚くほどに、更に向上させることができる。
【００５７】
特定の実施形態において、水素結合部分としては、カルボニルイミノ、チオカルボニルイミノ、イミノカルボニルイミノ、イミノチオカルボニルイミノ、オキシカルボニルイミノ、オキシチオカルボニルイミノなど、及びこれらの組み合わせが挙げられる。特定の実施形態において、水素結合部分としては、カルボニルイミノ、イミノカルボニルイミノ、オキシカルボニルイミノ、及びこれらの組み合わせ（より好ましくは、カルボニルイミノ、イミノカルボニルイミノ、及びこれらの組み合わせ）が挙げられる。特定の実施形態において、スペーサー基としては、二価、三価、又は四価（より好ましくは、二価又は三価、更に好ましくは、二価）のものが挙げられる。
【００５８】
有用なモノマーの種類としては、以下の一般式Ｉ：
ＣＨ２＝ＣＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｘ−Ｒ２−［Ｚ−Ｒ２］ｎ−Ｌ  （Ｉ）
［式中、
Ｒ１は、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、及びこれらの組み合わせから選択され、
各Ｒ２は、ヒドロカルビレン、ヘテロヒドロカルビレン、及びこれらの組み合わせから独立して選択され、
Ｘは、−Ｏ−又は−ＮＲ３−（式中、Ｒ３は、水素、ヒドロカルビル、ヘテロヒドロカルビル、及びこれらの組み合わせから選択される）であり、
Ｚは、少なくとも１つの水素結合供与体、少なくとも１つの水素結合受容体、又はこれらの組み合わせを含むヘテロヒドロカルビレンであり、
ｎは、０又は１の整数であり、
Ｌは、少なくとも１つの酸性基又はその塩を含む官能基である］によって表されるものが挙げられる。
【００５９】
式Ｉの特定の実施形態において、Ｒ１は、水素又はアルキル（より好ましくは、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり、更により好ましくは、水素又はメチル）である。
【００６０】
特定の実施形態において、各Ｒ２は、独立して、ヒドロカルビレン又はヘテロヒドロカルビレンである。特定の実施形態において、各Ｒ２は、独立して、アラルキレン（すなわち、アリールで置換されたアルキレン）、ヘテロアラルキレン、ヒドロキシ置換アルキレン、又はヒドロキシ置換アラルキレンである。特定の実施形態において、各Ｒ２は、独立して、ヒドロカルビレンである。特定の実施形態において、各Ｒ２は、独立して、アルキレンである。
【００６１】
特定の実施形態において、Ｘは、−Ｏ−又は−ＮＲ３−［式中、Ｒ３は水素である］である。
【００６２】
特定の実施形態において、Ｚは、カルボニル、カルボニルイミノ、カルボニルオキシ、エーテル酸素、チオカルボニルイミノ、イミノカルボニルイミノ、イミノチオカルボニルイミノ、オキシカルボニルイミノ、オキシチオカルボニルイミノ、及びこれらの組み合わせから選択される（より好ましくは、カルボニル、カルボニルイミノ、カルボニルオキシ、エーテル酸素、イミノカルボニルイミノ、オキシカルボニルイミノ、及びこれらの組み合わせから選択され、更により好ましくは、カルボニルイミノ、カルボニルオキシ、エーテル酸素、イミノカルボニルイミノ、及びこれらの組み合わせから選択され、更により好ましくは、カルボニルイミノ、イミノカルボニルイミノ、及びこれらの組み合わせから選択される）少なくとも１つの部分を含むヘテロヒドロカルビレンである。
【００６３】
特定の実施形態において、ｎは、整数１である。
【００６４】
特定の実施形態において、Ｌは、カルボキシ、ホスホノ、ホスファト、スルホノ、スルファト、ボロナト、及びこれらの組み合わせから選択される（より好ましくは、カルボキシ、ホスホノ、スルホノ、及びこれらの組み合わせから選択される）少なくとも１つの酸性基又はその塩を含む、官能基である。
【００６５】
このようなモノマーは、既知の合成方法によって、又は、既知の合成方法の類似法によって調製することができる。例えば、アミノ基含有カルボン酸、アミノ基含有スルホン酸、又はアミノ基含有ホスホン酸は、アミノ基と反応する少なくとも１つの基を含むエチレン性不飽和化合物と反応させることができる。同様に、ヒドロキシ基も含有する酸性基含有化合物は、任意に触媒の存在下で、ヒドロキシ基と反応する少なくとも１つの基を含むエチレン性不飽和化合物と反応させることができる。
【００６６】
好ましいモノマーは、（メタ）アクリロイル官能性である。本明細書で用いる場合、用語「（メタ）アクリロイル官能性」は、アクリロイル官能性及び／又はメタクリロイル官能性を指し、同様に、用語「（メタ）アクリレート」は、アクリレート及び／又はメタクリレートを指す。このようなモノマーにおいて、カルボニル基は、スペーサー基の一部である。
【００６７】
有用なモノマーの代表例としては、一般式ＩＩ：
【化１】
2019536736.tif 000002
のアルケニルアズラクトン
又は、一般式ＩＩＩ：
ＣＨ２＝Ｃ（Ｒ１）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｘ−Ｒ２−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ  （ＩＩＩ）
のエチレン性不飽和イソシアネートと、
一般式ＩＶ：
Ｈ−Ｘ−Ｒ２−Ｌ  （ＩＶ）
の酸性基含有化合物（又はその塩）と、
の反応から誘導され、一般式Ｉのモノマーを生成するもの（式中、式ＩＩ、ＩＩＩ、及び／又はＩＶ中のＲ１、Ｘ、Ｒ２、及びＬは、式Ｉについて上記で定義した通りである）が挙げられる。
【００６８】
特定の実施形態において、本開示の方法で用いられる濾材は、一般式Ｉのモノマーの混合物に、例えば、好適な基材の存在下で放射線（例えば、電子ビーム線）を施すことによって作製することができる。モノマーの混合物からの第１のモノマーを基材の表面に結合させ、第２のモノマーと反応するラジカルを生成させ、第３のモノマーと反応する更なるラジカルを形成するといった方法で、ポリマーを基材表面にグラフト化することができる。
【００６９】
必ずしも好ましいものではないが、本明細書に記載の濾材の調製方法の別法において、第１工程で、多孔質基材を、一般式ＩＩ又は一般式ＩＩＩのモノマーでグラフト化することができる。次いで、第２工程で、グラフト化された基材を、一般式ＩＶの酸性基含有化合物と反応させることができる。第１工程は、モノマーを基材にグラフト化するための既知の通常の方法のいずれかを用い（例えば、ＵＶ照射、ガンマ照射、及び／又は電子ビーム照射を用いることにより）、式ＩＩ及びＩＩＩのモノマーとは反応しない溶媒を用いることに注意して、実施することができる。第２工程では、グラフト化されたポリマーのアズラクトン基又はイソシアネート基とは反応しないが、式ＩＶの酸性基含有化合物を溶解させる溶媒を選択する。このような予防措置は、非常に反応性のアズラクトン基及びイソシアネート基の、競合する加水分解又は加溶媒分解を最小限に抑えるためにとられる。任意に、反応の前又は後に、酸性基含有化合物を中和（塩の形態に変換）してもよい。
【００７０】
式ＩＩの有用なアルケニルアズラクトンの代表例としては、４，４−ジメチル−２−ビニル−４Ｈ−オキサゾール−５−オン（ビニルジメチルアズラクトン、ＶＤＭ）、２−イソプロペニル−４Ｈ−オキサゾール−５−オン、４，４−ジメチル−２−イソプロペニル−４Ｈ−オキサゾール−５−オン、２−ビニル−４，５−ジヒドロ−［１，３］オキサジン−６−オン、４，４−ジメチル−２−ビニル−４，５−ジヒドロ−［１，３］オキサジン−６−オン、４，５−ジメチル−２−ビニル−４，５−ジヒドロ−［１，３］オキサジン−６−オンなど、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００７１】
一般式ＩＩＩのエチレン性不飽和イソシアネートの代表例としては、２−イソシアネートエチル（メタ）アクリレート（ＩＥＭ又はＩＥＡ）、３−イソシアネートプロピル（メタ）アクリレート、４−イソシアネートシクロヘキシル（メタ）アクリレートなど、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００７２】
一般式ＩＶの有用な化合物の代表例としては、アミノ基含有カルボン酸、アミノ基含有スルホン酸、アミノ基含有ボロン酸、アミノ基含有ホスホン酸及びこれらの組み合わせ、又はこれらの塩が挙げられる。有用なアミノカルボン酸としては、グリシン、アラニン、バリン、プロリン、セリン、フェニルアラニン、ヒスチジン、トリプトファン、アスパラギン、グルタミン、Ｎ−ベンジルグリシン、Ｎ−フェニルグリシン、サルコシンなどのα−アミノ酸（Ｌ−、Ｄ−、又はＤＬ−α−アミノ酸）；β−アラニン、β−ホモロイシン、β−ホモグルタミン、β−ホモフェニルアラニンなどのβ−アミノ酸；γ−アミノ酪酸、６−アミノヘキサン酸、１１−アミノウンデカン酸、ペプチド（ジグリシン、トリグリシン、テトラグリシン、及び、異なるアミノ酸の混合物を含有する他のペプチドなど）などの他のα，ω−アミノ酸；及びこれらの組み合わせが挙げられる。有用なアミノスルホン酸としては、アミノメタンスルホン酸、２−アミノエタンスルホン酸（タウリン）、３−アミノ−１−プロパンスルホン酸、６−アミノ−１−ヘキサンスルホン酸など、及びこれらの組み合わせが挙げられる。有用なアミノボロン酸としては、ｍ−アミノフェニルボロン酸、ｐ−アミノフェニルボロン酸など、及びこれらの組み合わせが挙げられる。有用なアミノホスホン酸としては、１−アミノメチルホスホン酸、２−アミノエチルホスホン酸、３−アミノプロピルホスホン酸など、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００７３】
１つよりも多い酸性基を含有する有用な化合物としては、アスパラギン酸、グルタミン酸、α−アミノアジピン酸、イミノ二酢酸、Ｎα，Ｎα−ビス（カルボキシメチル）リジン、システイン酸、Ｎ−ホスホノメチルグリシンなど、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００７４】
他の有用な酸性基含有化合物の代表例としては、ヒドロキシ基及び酸性基を含む化合物が挙げられる。具体例としては、グリコール酸、乳酸、６−ヒドロキシヘキサン酸、クエン酸、２−ヒドロキシエチルスルホン酸、２−ヒドロキシエチルホスホン酸など、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００７５】
上記の酸性基含有化合物の多くは、市販されている。更に他の有用な酸性基含有化合物は、通常の合成手順によって調製することができる。例えば、様々なジアミン又はアミノアルコールを、１当量の環状無水物と反応させ、カルボキシル基及びアミノ基又はヒドロキシ基を含む、中間体の酸性基含有化合物を生成させることができる。
【００７６】
有用なモノマーは、酸性基含有化合物と、エチレン性不飽和ハロゲン化アシル（例えば、（メタ）アクリロイルクロリド）との反応によっても調製することができる。更に、有用なモノマーは、ヒドロキシ含有若しくはアミン含有（メタ）アクリレートモノマー又はヒドロキシ含有若しくはアミン含有（メタ）アクリルアミドモノマーと、環状無水物との反応によって、カルボキシル基含有モノマーを生成させることによって、調製することができる。
【００７７】
特定の実施形態において、有用なモノマーは、アルケニルアズラクトンと、アミノカルボン酸と、アルケニルアズラクトン及びアミノスルホン酸の反応によって調製されたモノマーと、エチレン性不飽和イソシアネート及びアミノカルボン酸の反応によって調製されたモノマーと、エチレン性不飽和イソシアネート及びアミノスルホン酸との反応によって調製されたモノマー、又はこれらの組み合わせと、の反応によって調製することができる。
【００７８】
特定の実施形態において、有用なモノマーは以下のものである（酸として示しているが、このような酸の塩を用いてもよい）。
ＶＤＭ−４−アミノメチル−シクロヘキサンカルボン酸：
【化２】
2019536736.tif 000003
ＶＤＭ−２−ヒドロキシ−４−アミノブタン酸：
【化３】
2019536736.tif 000004
ＶＤＭ−２−アミノ−３−ヒドロキシプロパン酸（ＶＤＭ−セリン）：
【化４】
2019536736.tif 000005
ＶＤＭ−２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパン酸（ＶＤＭ−チロシン）：
【化５】
2019536736.tif 000006
ＶＤＭ−（２Ｓ）−２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン酸（ＶＤＭ−トリプトファン）：
【化６】
2019536736.tif 000007
ＶＤＭ−７−アミノヘプタン酸：
【化７】
2019536736.tif 000008
ＶＤＭ−２−アミノ−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン酸（ＶＤＭ−ヒスチジン）：
【化８】
2019536736.tif 000009
ＩＥＭ−３−アミノプロパン酸：
【化９】
2019536736.tif 000010
ＩＥＭ−タウリン：
【化１０】
2019536736.tif 000011
ＶＤＭ−タウリン：
【化１１】
2019536736.tif 000012
ＶＤＭ−２−（ヒドロキシエチル）ホスホン酸：
【化１２】
2019536736.tif 000013
ＶＤＭ−３−アミノプロパン酸：
【化１３】
2019536736.tif 000014
ＶＤＭ−４−アミノ酪酸：
【化１４】
2019536736.tif 000015
ＶＤＭ−５−アミノ吉草酸：
【化１５】
2019536736.tif 000016
ＶＤＭ−６−アミノカプロン酸：
【化１６】
2019536736.tif 000017
ＶＤＭ−フェニルアラニン：
【化１７】
2019536736.tif 000018
ＩＥＭ−フェニルアラニン：
【化１８】
2019536736.tif 000019
【００７９】
上記のモノマーは、概して（かつ好ましくは）、単独重合され得る。
【００８０】
しかしながら、当業者であれば、特定の用途に所望される結合能の種類及び程度が得られることを条件とし、結合能を調整し、かつ／又は特別な特性を得るために、これらのモノマーを他のモノマー（以下、「改質コモノマー」と呼ぶ；例えば、より短いスペーサー基を有する改質コモノマー、又は他の種類のリガンドを含む改質コモノマー、又はリガンドを含まない改質コモノマー）と共重合させることが可能であることを認識するであろう。
【００８１】
例えば、多孔質基材にある程度の親水性を付与するために、モノマーを、少なくとも１つのアルケニル基（好ましくは、（メタ）アクリロイル基）及び親水性基（例えば、ポリ（オキシアルキレン）基、水酸基、アミノ基、又はアミド基など）を含む１つ以上の親水性改質コモノマーと、任意に、共重合させることができる。好適な親水性改質コモノマーとしては、アクリルアミド、ジメチルアクリルアミド、ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコールモノ（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシエチルアクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリドンなど、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００８２】
任意に、モノマーを、少なくとも２つのフリーラジカル重合性基を含有する１つ以上の改質（メタ）アクリロイルコモノマーと共重合させることができる。このような改質多官能性（メタ）アクリロイルコモノマー（多官能性（メタ）アクリレート及び多官能性（メタ）アクリルアミドを含む）は、概して比較的少量（例えば、モノマー及びコモノマーの総重量に基づいて約０．１〜５重量パーセント）でのみ重合性モノマーのブレンドに組み込まれ、得られたコポリマーにある程度の分枝及び／又は比較的軽度の架橋を付与することができる。より多くの量を特定の用途に用いることができるが、より多くの量を用いることにより、凝集タンパク質に対する結合能が低下してしまうことを理解されたい。
【００８３】
有用な改質多官能性（メタ）アクリロイルコモノマーとしては、ジ（メタ）アクリレート、トリ（メタ）アクリレート、テトラ（メタ）アクリレート、多官能性（メタ）アクリルアミドなど、及びこれらの組み合わせが挙げられる。このような多官能性（メタ）アクリロイルコモノマーとしては、エチレングリコールジ（メタ）アクリレート、１，６−ヘキサンジオールジ（メタ）アクリレート、ポリ（エチレングリコール）ジ（メタ）アクリレート、ポリブタジエンジ（メタ）アクリレート、ポリウレタンジ（メタ）アクリレート、プロポキシル化グリセリントリ（メタ）アクリレート、メチレンビスアクリルアミド、エチレンビスアクリルアミド、ヘキサメチレンビスアクリルアミド、ジアクリロイルピペラジンなど、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００８４】
濾材
モノマーの重合は、既知の技法を用いて実施することができる。例えば、重合は、熱開始剤又は光開始剤のいずれか（好ましくは、光開始剤）を用いて開始することができる。多種多様な従来のフリーラジカル開始剤を用い、開始ラジカルを生成させることができる。好適な熱開始剤の例としては、過酸化ベンゾイル、過酸化ジベンゾイル、過酸化ジラウリル、過酸化シクロヘキサン、過酸化メチルエチルケトン、ヒドロペルオキシド（例えば、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド及びクメンヒドロペルオキシド）などの過酸化物、ジシクロヘキシルペルオキシジカーボネート、ｔ−ブチルペルベンゾエートなど、及びこれらの組み合わせが挙げられる。市販の熱開始剤の例としては、ＤｕＰｏｎｔ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）より、ＶＡＺＯ  ６７（２，２’−アゾ−ビス（２−メチルブチロニトリル））、ＶＡＺＯ  ６４（２，２’−アゾ−ビス（イソブチロニトリル））、及びＶＡＺＯ  ５２（２，２’−アゾ−ビス（２，２−ジメチルバレロニトリル））などのＶＡＺＯの商標名で入手可能な開始剤、並びに商標名ＬＵＣＩＤＯＬ  ７０（ベンゾイルペルオキシド）でＥｌｆ  Ａｔｏｃｈｅｍ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）より入手可能なものが挙げられる。
【００８５】
有用な光開始剤としては、ベンゾインメチルエーテル及びベンゾインイソプロピルエーテルなどのベンゾインエーテル；ＩＲＧＡＣＵＲＥ  ６５１光開始剤（Ｃｉｂａ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）として入手可能な２，２−ジメトキシアセトフェノン、ＥＳＡＣＵＲＥ  ＫＢ−１光開始剤（Ｓａｒｔｏｍｅｒ  Ｃｏ．（Ｗｅｓｔ  Ｃｈｅｓｔｅｒ，ＰＡ））として入手可能な２，２  ジメトキシ−２−フェニル−１−フェニルエタノン、ＩＲＧＡＣＵＲＥ  ２９５９（Ｃｉｂａ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）として入手可能な１−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−１−プロパン−１−オン、及びジメトキシヒドロキシアセトフェノンなどの置換アセトフェノン；２−メチル−２−ヒドロキシプロピオフェノンなどの置換α−ケトール；２−ナフタレン−スルホニルクロリドなどの芳香族スルホニルクロリド；１−フェニル−１，２−プロパンジオン−２−（Ｏ−エトキシ−カルボニル）オキシムなどの光活性オキシムなど；並びにこれらの組み合わせが挙げられる。これらの中で特に好ましいのは、置換アセトフェノン（特に、その水溶性により、１−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）フェニル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−１−プロパン−１−オン、ＩＲＧＡＣＵＲＥ  ２９５９）である。有用な重合性光開始剤は、本質的に米国特許第５，５０６，２７９号（Ｂａｂｕら）の実施例１に記載のように調製することができる、２−ビニル−４，４−ジメチルアズラクトンとＩＲＧＡＣＵＲＥ  ２９５９との１：１付加物である。
【００８６】
他の有用な光開始剤としては、ベンゾフェノン、４−（３−スルホプロピルオキシ）ベンゾフェノンナトリウム塩、ミヒラーケトン、ベンジル、アントラキノン、５，１２−ナフタセンキノン、アセアントラセンキノン、ベンズ（Ａ）アントラセン−７，１２−ジオン、１，４−クリセンキノン、６，１３−ペンタセンキノン、５，７，１２，１４−ペンタセンテトロン、９−フルオレノン、アントロン、キサントン、チオキサントン、２−（３−スルホプロピルオキシ）チオキサンテン−９−オン、アクリドン、ジベンゾスベロン、アセトフェノン、クロモンなど、及びこれらの組み合わせなどの水素引き抜き型（ＩＩ型）光開始剤が挙げられる。
【００８７】
開始剤は、モノマーのフリーラジカル重合を開始させるのに有効な量で用いることができる。このような量は、例えば、開始剤の種類及び利用される重合条件に応じて異なる。開始剤は、概して、１００部の総モノマーに基づいて、約０．０１重量部〜約５重量部の範囲の量で用いることができる。
【００８８】
重合溶媒は、モノマー（及び、用いられる場合はコモノマー）を実質的に溶解（又は、エマルション若しくは懸濁液の重合の場合には、分散若しくは懸濁）することができる、本質的に任意の溶媒とすることができる。多くの実施形態において、溶媒は、水又は水／水混和性有機溶媒混合物とすることができる。有機溶媒に対する水の比は、モノマーの溶解度に応じて大きく異なり得る。いくつかのモノマーを用いる場合、水の有機溶媒に対する比は、典型的には１：１超（体積／体積）（好ましくは、５：１超、より好ましくは７：１超）であり得る。他のモノマーを用いる場合、より高い比率の有機溶媒（最大１００パーセント）が好ましい場合がある（特に、いくつかのアルコールを用いる場合）。
【００８９】
任意のこのような水混和性有機溶媒は、好ましくは、重合を阻害し得る基を有しない。いくつかの実施形態において、水混和性溶媒は、１〜４個の炭素原子を有する低級アルコール、２〜６個の炭素原子を有する低級グリコール、及び３〜６個の炭素原子と１〜２個のエーテル結合とを有する低級グリコールエーテルなどの、プロトン基含有有機液体とすることができる。いくつかの実施形態において、ポリ（エチレングリコール）などの高級グリコールを用いることができる。具体例としては、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔ−ブチルアルコール、エチレングリコール、メトキシエタノール、エトキシエタノール、プロポキシエタノール、ブトキシエタノール、メチルカルビトール、エチルカルビトールなど、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００９０】
他の実施形態において、非プロトン性水混和性有機溶媒を用いることができる。このような溶媒としては、脂肪族エステル（例えば、メトキシエチルアセテート、エトキシエチルアセテート、プロポキシエチルアセテート、ブトキシエチルアセテート、及びトリエチルホスフェート）、ケトン（例えば、アセトン、メチルエチルケトン、及びメチルプロピルケトン）、及びスルホキシド（例えば、ジメチルスルホキシド）が挙げられる。
【００９１】
重合溶媒中のモノマー濃度は、これらに限定されるものではないが、単数のモノマー又は複数のモノマーの性質、所望の重合度、モノマーの反応性、及び用いられる溶媒などの、いくつかの要因に応じて異なる場合がある。典型的には、モノマー濃度は、モノマー及び溶媒の総重量に基づいて、０．１重量パーセント（重量％）〜約６０重量％（好ましくは１重量％〜４０重量％、より好ましくは５重量％〜３０重量％）の範囲であり得る。
【００９２】
水性モノマー混合物は、任意に、比較的より高レベルの多官能性（架橋）モノマー又は改質コモノマー（例えば、モノマー及びコモノマーの総重量に基づいて５重量％〜９０重量％）と配合され、任意に、添加されたポロゲンの存在下で、非極性、非混和性の有機溶媒中の懸濁液又は分散体として重合され、本モノマーを含む架橋された多孔質粒子を生成することができる。このような方法は周知であり、例えば、米国特許第７，０９８，２５３号（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎら）、同第７，６７４，８３５号（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎら）、同第７，６４７，８３６号（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎら）、及び同第７，６８３，１００号（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎら）に記載されている。
【００９３】
所望により、重合は、得られたポリマーを担持する多孔質基材を含む物品を形成するように、多孔質基材の存在下で実施することができる。例えば、モノマー、任意のコモノマー、開始剤、及び溶媒を含む吸収溶液又はコーティング溶液を、多孔質基材に吸収させる、又は、多孔質基材上にコーティングする（又は堆積させる）ことができる。
【００９４】
多孔質基材は、粒子、繊維、フィルム、ウェブ、膜、スポンジ、又はシートなどの本質的に任意の形態とすることができる。好適な多孔質基材は、有機、無機、又はこれらの組み合わせ（好ましくは有機、より好ましくはポリマー）とすることができる。好適な多孔質基材としては、多孔質粒子、多孔質膜、多孔質不織布ウェブ、多孔質織布ウェブ、多孔質スポンジ、多孔質繊維など、及びこれらの組み合わせが挙げられる。好ましくい多孔質基材としては、多孔質膜（より好ましくは多孔質ポリマー膜、更により好ましくは多孔質ポリアミド膜）及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００９５】
例えば、多孔質基材は、任意の好適な熱可塑性ポリマー材料から形成することができる。好適なポリマー材料としては、ポリオレフィン、ポリ（イソプレン）、ポリ（ブタジエン）、フッ素化ポリマー、塩素化ポリマー、ポリアミド、ポリイミド、ポリエーテル、ポリ（エーテルスルホン）、ポリ（スルホン）、ポリ（ビニルアセテート）、ポリ（乳酸）などのポリエステル、ポリ（エチレン）−コ−ポリ（ビニルアルコール）などのビニルアセテートのコポリマー、ポリ（ホスファゼン）、ポリ（ビニルエステル）、ポリ（ビニルエーテル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（カーボネート）など、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００９６】
いくつかの実施形態において、熱可塑性ポリマーは、プラズマ放電又はプライマーの使用などによって表面処理され、多孔質基材の表面に好適な官能性をもたらすことができる。表面処理により、モノマー溶液によって湿潤性を改善することができるヒドロキシ基などの官能基をもたらすことができる。このような有用なプラズマ処理の１つは、米国特許第７，１２５，６０３号（Ｄａｖｉｄら）に記載されている。
【００９７】
好適なポリオレフィンとしては、ポリ（エチレン）、ポリ（プロピレン）、ポリ（１−ブテン）、エチレンとプロピレンとのコポリマー、αオレフィンコポリマー（エチレン又はプロピレンと１−ブテン、１−ヘキセン、１−オクテン、及び１−デセンとのコポリマーなど）、ポリ（エチレン−コ−１−ブテン）、ポリ（エチレン−コ−１−ブテン−コ−１−ヘキセン）など、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００９８】
好適なフッ素化ポリマーとしては、ポリ（フッ化ビニル）、ポリ（フッ化ビニリデン）、フッ化ビニリデンのコポリマー（ポリ（フッ化ビニリデン−コ−ヘキサフルオロプロピレン）など）、クロロトリフルオロエチレンのコポリマー（ポリ（エチレン−コ−クロロトリフルオロエチレン）など）など、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００９９】
好適なポリアミドとしては、ポリ（イミノアジポリルイミノヘキサメチレン）、ポリ（イミノアジポリルイミノデカメチレン）、ポリカプロラクタムなど、及びこれらの組み合わせが挙げられる。好適なポリイミドとしては、ポリ（ピロメリットイミド）など、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【０１００】
好適なポリ（エーテルスルホン）としては、ポリ（ジフェニルエーテルスルホン）、ポリ（ジフェニルスルホン−コ−ジフェニレンオキシドスルホン）など、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【０１０１】
好適なビニルアセテートのコポリマーとしては、ポリ（エチレン−コ−ビニルアセテート）、アセテート基のうちの少なくともいくつかが加水分解され、様々なポリ（ビニルアルコール）を生成しているコポリマーなど、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【０１０２】
好ましい多孔質基材は、熱誘起相分離（ＴＩＰＳ）膜などの微多孔質膜である。ＴＩＰＳ膜は、熱可塑性材料とその熱可塑性材料の融点を超える第２の材料との溶液を形成することによって調製されることが多い。冷却すると、熱可塑性材料が晶出し、第２の材料から相分離する。晶出した材料は、延伸されることが多い。第２の材料は、延伸の前又は後のいずれかに、任意に除去される。微多孔質膜は、米国特許第４，５３９，２５６号（Ｓｈｉｐｍａｎ）、同第４，７２６，９８９号（Ｍｒｏｚｉｎｓｋｉ）、同第４，８６７，８８１号（Ｋｉｎｚｅｒ）、同第５，１２０，５９４号（Ｍｒｏｚｉｎｓｋｉ）、同第５，２６０，３６０号（Ｍｒｏｚｉｎｓｋｉ）、及び同第５，９６２，５４４号（Ｗａｌｌｅｒ，Ｊｒ．）に更に開示されている。いくつかの例示的なＴＩＰＳ膜は、ポリ（フッ化ビニリデン）（ＰＶＤＦ）、ポリ（エチレン）又はポリ（プロピレン）などのポリオレフィン、エチレン−ビニルアルコールコポリマーなどのビニル含有ポリマー又はコポリマー、及びブタジエン含有ポリマー又はコポリマー、及びアクリレート含有ポリマー又はコポリマーを含む。いくつかの用途には、ＰＶＤＦを含むＴＩＰＳ膜が特に望ましい場合がある。ＰＶＤＦを含むＴＩＰＳ膜は、米国特許第７，３３８，６９２号（Ｓｍｉｔｈら）に更に記載されている。
【０１０３】
多くの実施形態において、サイズ排除分離を最小限に抑え、拡散の制約を最小限に抑え、かつ、表面積と、凝集タンパク質、特に凝集抗体、より詳細には凝集モノクローナル抗体の結合に基づく分離と、を最大化するため、多孔質基材は、典型的には０．２マイクロメートル超の平均孔径を有し得る。概して、孔径は、０．１〜１０マイクロメートル（凝集タンパク質の結合に用いる場合、好ましくは０．５〜３マイクロメートル、より好ましくは０．８〜２マイクロメートル）の範囲であり得る。
【０１０４】
例示的な実施形態において、多孔質基材は、米国特許第６，０５６，５２９号（Ｍｅｙｅｒｉｎｇら）、同第６，２６７，９１６号（Ｍｅｙｅｒｉｎｇら）、同第６，４１３，０７０号（Ｍｅｙｅｒｉｎｇら）、同第６，７７６，９４０号（Ｍｅｙｅｒｉｎｇら）、同第３，８７６，７３８号（Ｍａｒｉｎａｃｃｉｏら）、同第３，９２８，５１７号（Ｋｎｉｇｈｔら）、同第４，７０７，２６５号（Ｂａｒｎｅｓ，Ｊｒ．ら）、及び同第５，４５８，７８２号（Ｈｏｕら）に記載のものなどの、ナイロン微多孔質フィルム又はシート（例えば、微多孔質膜）を含み得る。
【０１０５】
他の実施形態において、多孔質基材は不織布ウェブであり得、不織布ウェブの周知の製造方法のいずれかによって製造される不織布ウェブを含み得る。本明細書で用いる場合、用語「不織布ウェブ」は、不規則にかつ／又は一方向に、マット状に組み込まれた個々の繊維又はフィラメントの構造を有する布地を指す。
【０１０６】
例えば、繊維不織布ウェブは、ウェットレイド法、カーディング法、エアレイド法、スパンレース法、スパンボンド法、若しくはメルトブロー法、又はこれらの組み合わせによって製造することができる。スパンボンド繊維は、典型的には、溶融した熱可塑性ポリマーを、微細で通常は円形の複数の紡糸口金のキャピラリーからフィラメントとして押し出し、押し出された繊維の直径を急激に縮小させることによって形成される小径繊維である。メルトブローン繊維は、典型的には、溶融した熱可塑性材料を、微細で通常は円形の複数のダイキャピラリーを通し、溶融糸又はフィラメントとして、高速の、通常は加熱されたガス（例えば空気）流中に押し出し、溶融した熱可塑性材料のフィラメントを細くし、その直径を縮小させることによって形成される。その後、メルトブローン繊維を高速ガス流によって移動させ、収集面上に堆積させ、不規則に分散されたメルトブローン繊維のウェブを形成する。不織布ウェブのいずれかは、１種類の繊維から、又は、熱可塑性ポリマーの種類及び／又は厚さが異なる２種類以上の繊維から製造することができる。
【０１０７】
有用な不織布ウェブの製造方法の更なる詳細は、Ｗｅｎｔｅによる「Ｓｕｐｅｒｆｉｎｅ  Ｔｈｅｒｍｏｐｌａｓｔｉｃ  Ｆｉｂｅｒｓ」，４８  Ｉｎｄｕｓ．Ｅｎｇ．Ｃｈｅｍ．１３４２（１９５６）及びＷｅｎｔｅらによる「Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ  Ｏｆ  Ｓｕｐｅｒｆｉｎｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｆｉｂｅｒｓ」，Ｎａｖａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｒｅｐｏｒｔ  Ｎｏ．４３６４（１９５４）に記載されている。
【０１０８】
重合、洗浄、及び乾燥後、多孔質基材による典型的な総重量増加は、概して、０．５パーセント（％）〜３０％の範囲（好ましくは２％〜１０％の範囲）であり得る。多孔質基材の存在下におけるモノマーの重合により、ポリマーを担持する多孔質基材を製造することができる。ポリマーはコーティングの形態であり得、好ましい実施形態において、ポリマーは多孔質基材の表面にグラフト化（共有結合）することができる。所望により、重合を別途実施し、次いで、得られたポリマーを多孔質基材にコーティングする（任意に、好適な架橋剤の存在下で）、又はグラフト化する、又は適用することができるが、これは、概して好ましいものではない。
【０１０９】
例示的な方法において、米国特許出願公開第２０１５／０１３６６９８号（３Ｍ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｃｏ．）に記載のように、ＩＩ型光開始剤の存在下でモノマーをフリーラジカル重合し、多孔質基材の表面にグラフト化することができる。あるいは、国際公開第２０１４／０５２２１５号（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎら）に記載のように、モノマーをフリーラジカル重合し、光開始剤含有モノマー単位を含むコポリマーの架橋コポリマー層を含む多孔質基材にグラフト化することができる。更に、米国特許出願公開第２０１２／０２５２０９１（Ａ１）号（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎら）に記載のように、モノマーをフリーラジカル重合し、架橋ポリマープライマー層を含む多孔質基材にグラフト化することができる。更に別の例示的な方法において、米国特許出願公開第２０１１／０１００９１６（Ａ１）号（Ｓｈａｎｎｏｎら）に記載のように、モノマーをフリーラジカル重合し、多孔質粒子にグラフト化することができる。
【０１１０】
特定の実施形態において、ポリマーの酸性基又はその塩は、多孔質基材上に、濾材１グラム当たり少なくとも０．０２ミリモル（ｍｍｏｌｅ）、又は濾材１グラム当たり少なくとも０．０３ｍｍｏｌｅ、又は濾材１グラム当たり少なくとも０．０４ｍｍｏｌｅ、又は濾材１グラム当たり少なくとも０．０５ｍｍｏｌｅの密度で配置されている。特定の実施形態において、ポリマーの酸性基又はその塩は、多孔質基材上に、濾材１グラム当たり最大０．６ｍｍｏｌｅ、又は濾材１グラム当たり最大０．５ｍｍｏｌｅ、又は濾材１グラム当たり最大０．４ｍｍｏｌｅ、濾材１グラム当たり、最大０．３５ｍｍｏｌｅ、又は最大０．３ｍｍｏｌｅの密度で配置されている。
【０１１１】
コーティング又はグラフト化されたポリマー（モノマーの酸性基又はその塩が存在するため、官能性ポリマーである）は、多孔質基材の元の性質を変化させることができる。得られたポリマーを担持する多孔質基材（官能化多孔質基材）は、元の多孔質基材の利点の多く（例えば、機械的及び熱的安定性、多孔率（porosity）など）を保持することができるが、凝集タンパク質に対する結合能の向上を呈することもできる。本官能性ポリマーを担持する多孔質基材は、生体試料から、単量体タンパク質に比べ、凝集タンパク質を選択的に結合及び／又は除去するための濾材として特に有用であり得る。本ポリマーを担持する多孔質基材を含む物品は、ハウジング、ホルダ、アダプタなど、及びこれらの組み合わせなどの従来の構成要素を更に含み得る。
【０１１２】
所望により、凝集タンパク質の結合及び捕捉の効率は、複数の積層化又は層状化した官能化多孔質基材（例えば、官能化多孔質膜）をフィルタ要素として用いることによって改善することができる。したがって、フィルタ要素は、官能化多孔質基材の１つ以上の層を含み得る。フィルタ要素の個々の層は、同一であり得る、又は、異なり得る。層は、多孔率、グラフト化の程度などが異なる場合がある。フィルタ要素は、上流のプレフィルタ層及び／又は下流の支持層を更に含む場合がある。個々の層は、所望に応じ、平面状又はプリーツ状とすることができる。
【０１１３】
好適なプレフィルタ及び支持層材料の例としては、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリアミド、樹脂結合繊維又はバインダーを含まない繊維（例えば、ガラス繊維）、他の合成品（織布及び不織布フリース構造体）；ポリオレフィン、金属、及びセラミックスなどの焼結材料；紡績糸；特別な濾紙（例えば、繊維と、セルロースと、ポリオレフィンと、バインダーとの混合物）；ポリマー膜など、及びこれらの組み合わせの、任意の好適な多孔質膜が挙げられる。
【０１１４】
凝集タンパク質の捕捉又は濾過用途に有用な物品としては、上記のフィルタ要素のうちの１つ以上を含むフィルタカートリッジ、上記のフィルタ要素のうちの１つ以上を含むフィルタアセンブリ、及びフィルタハウジングなどが挙げられる。他の有用な物品は、各容器が、接触面（例えば、上流面又は上面）を有するフィルタ要素を含む、試料容器のアレイ（例えば、９６ウェルプレート）の形態であり得る。
【０１１５】
実施形態
実施形態１は、生物学的溶液中の単量体タンパク質から凝集タンパク質を分離するための方法であって、
接触面（例えば、上流面又は上面）を有する少なくとも１つのフィルタ要素
［ここで、フィルタ要素は濾材を含み、濾材は、
多孔質基材と、
多孔質基材上に配置された、炭化水素主鎖、及び炭化水素主鎖に結合された複数のペンダント基を含むポリマーと、
を含み、第１の複数のペンダント基のそれぞれは、
（１）少なくとも１つの酸性基又はその塩と、
（２）少なくとも１つの酸性基又はその塩を、少なくとも６個の原子が連結した鎖によって、炭化水素主鎖に直接連結させているスペーサー基と、
を含む］を準備することと、
単量体タンパク質から凝集タンパク質を分離するのに有効な条件下で、初期の生物学的溶液をフィルタ要素の接触面に接触させて、最終的な生物学的溶液が精製された単量体タンパク質を含むようにすることと、
を含む、方法である。
【０１１６】
実施形態２は、生物学的溶液中の単量体タンパク質から凝集タンパク質を分離するための方法であって、
接触面（例えば、上流面又は上面）を有する少なくとも１つのフィルタ要素
［ここで、フィルタ要素は濾材を含み、濾材は、
多孔質基材と、
多孔質基材上に配置された、少なくとも１つのモノマーの共重合された単位を含むポリマーと、を含み、モノマーは、
（１）少なくとも１つのエチレン性不飽和基（いくつかの実施形態では、末端のエチレン性不飽和基）と、
（２）少なくとも１つの酸性基又はその塩と、
（３）少なくとも１つのエチレン性不飽和基と、少なくとも酸性基又はその塩とを、少なくとも６個の原子が連結した鎖によって、直接連結させているスペーサー基と、
を含む（いくつかの実施形態では、これらからなる）］を準備することと、
単量体タンパク質から凝集タンパク質を分離するのに有効な条件下で、初期の生物学的溶液をフィルタ要素の接触面に接触させて、最終的な生物学的溶液が精製された単量体タンパク質を含むようにすることと、
を含む、方法である。
【０１１７】
実施形態３は、単量体タンパク質を溶出せずに回収することを更に含む、実施形態１又は２に記載の方法である。
【０１１８】
実施形態４は、条件が、最終的な溶液において、初期の生物学的溶液中に存在する単量体タンパク質の少なくとも４０％、又は少なくとも４５％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも５５％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも６５％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも７５％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％を回収するのに有効である、実施形態１〜３のいずれか１つに記載の方法である。
【０１１９】
実施形態５は、条件が、初期の生物学的溶液から、凝集タンパク質の少なくとも５％、又は少なくとも１０％、又は少なくとも１５％、又は少なくとも２０％、又は少なくとも２５％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも３５％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも４５％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも５５％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも６５％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも７５％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％を除去するのに有効である、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の方法である。
【０１２０】
実施形態６は、タンパク質が、抗体、酵素、又はホルモンを含む、実施形態１〜５のいずれか１つに記載の方法である。
【０１２１】
実施形態７は、タンパク質が抗体を含む、実施形態６に記載の方法である。
【０１２２】
実施形態８は、抗体がモノクローナル抗体又はその断片を含む、実施形態７に記載の方法である。
【０１２３】
実施形態９は、条件が、９未満、又は８．５未満、又は８未満、又は７．５未満、又は７未満、又は６．５未満の生物学的溶液のｐＨを含む、実施形態１〜８のいずれか１つに記載の方法である。
【０１２４】
実施形態１０は、条件が、少なくとも４、又は少なくとも４．５、又は少なくとも５の生物学的溶液のｐＨを含む、実施形態１〜９のいずれか１つに記載の方法である。
【０１２５】
実施形態１１は、条件が、少なくとも１ｍＳ／ｃｍ、又は少なくとも２ｍＳ／ｃｍ、又は少なくとも３ｍＳ／ｃｍ、又は少なくとも４ｍＳ／ｃｍ、又は少なくとも５ｍＳ／ｃｍ、又は少なくとも６ｍＳ／ｃｍ、又は少なくとも７ｍＳ／ｃｍ、又は少なくとも８ｍＳ／ｃｍ、又は少なくとも９ｍＳ／ｃｍ、又は少なくとも１０ｍＳ／ｃｍの生物学的溶液の導電率を含む、実施形態１〜１０のいずれか１つに記載の方法である。
【０１２６】
実施形態１２は、生物学的溶液の導電率が、無機塩、有機塩、又はこれらの組み合わせを含む緩衝液によってもたらされる、実施形態１１に記載の方法である。
【０１２７】
実施形態１３は、緩衝塩が、塩化物（例えば、ＮａＣｌ）、リン酸塩、クエン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、又はこれらの組み合わせを含む、実施形態１２に記載の方法である。
【０１２８】
実施形態１４は、条件が、１１０ｍＳ／ｃｍ以下、又は１００ｍＳ／ｃｍ以下、又は５０ｍＳ／ｃｍ以下、又は４０ｍＳ／ｃｍ以下、又は３０ｍＳ／ｃｍ以下の生物学的溶液の導電率を含む、実施形態１〜１３のいずれか１つに記載の方法である。
【０１２９】
実施形態１５は、条件が、濾材１Ｌ当たり少なくとも１ｇ、又は濾材１Ｌ当たり少なくとも１０ｇ、又は濾材１Ｌ当たり少なくとも２５ｇ、又は濾材１Ｌ当たり少なくとも５０ｇ、又は濾材１Ｌ当たり少なくとも７５ｇ、又は濾材１Ｌ当たり、少なくとも１００ｇ、若しくは少なくとも５００ｇ、若しくは少なくとも１０００ｇ、若しくは少なくとも２０００ｇのチャレンジロードを含む、実施形態１〜１４のいずれか１つに記載の方法である。
【０１３０】
実施形態１６は、多孔質基材がポリマーである、実施形態１〜１５のいずれか１つに記載の方法である。
【０１３１】
実施形態１７は、多孔質基材が多孔質膜である、実施形態１〜１６のいずれか１つに記載の方法である。
【０１３２】
実施形態１８は、多孔質基材上に配置されたポリマーの少なくとも１つの酸性基又はその塩が、濾材１グラム当たり少なくとも０．０２ｍｍｏｌｅ、又は濾材１グラム当たり少なくとも０．０３ｍｍｏｌｅ、又は濾材１グラム当たり少なくとも０．０４ｍｍｏｌｅ、又は濾材１グラム当たり少なくとも０．０５ｍｍｏｌｅの密度で存在する、実施形態１〜１７のいずれか１つに記載の方法である。
【０１３３】
実施形態１９は、多孔質基材上に配置されたポリマーの少なくとも１つの酸性基又はその塩が、濾材１グラム当たり最大０．６ｍｍｏｌｅ、又は濾材１グラム当たり最大０．５ｍｍｏｌｅ、又は濾材１グラム当たり最大０．４ｍｍｏｌｅ、濾材１グラム当たり、最大０．３５ｍｍｏｌｅ、又は最大０．３ｍｍｏｌｅの密度で存在する、実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の方法である。
【０１３４】
実施形態２０は、実施形態２に応じ、少なくとも１つの一価のエチレン性不飽和基が、エテニル基、１−アルキルエテニル基、及びこれらの組み合わせから選択される、実施形態２〜１９のいずれか１つに記載の方法である。
【０１３５】
実施形態２１は、少なくとも１つのモノマーが（メタ）アクリロイルモノマーを含む、実施形態２０に記載の方法である。
【０１３６】
実施形態２２は、少なくとも１つの酸性基又はその塩が、カルボキシ基、ホスホノ基、ホスファト基、スルホノ基、スルファト基、ボロナト基、及びこれらの組み合わせから選択される、実施形態１〜２１のいずれか１つに記載の方法である。
【０１３７】
実施形態２３は、少なくとも１つの酸性基又はその塩が、カルボキシ基、ホスホノ基、スルホノ基、及びこれらの組み合わせから選択される、実施形態２２に記載の方法である。
【０１３８】
実施形態２４は、少なくとも１つの酸性基又はその塩が、カルボキシ基である、実施形態２３に記載の方法である。
【０１３９】
実施形態２５は、スペーサー基が、連結されたヘテロ原子を含有する炭化水素基である、実施形態１〜２４のいずれか１つに記載の方法である。
【０１４０】
実施形態２６は、スペーサー基が、少なくとも１つの水素結合部分を含む、実施形態１〜２５のいずれか１つに記載の方法である。
【０１４１】
実施形態２７は、水素結合部分が、カルボニルイミノ部分、チオカルボニルイミノ部分、イミノカルボニルイミノ基、イミノチオカルボニルイミノ部分、オキシカルボニルイミノ部分、オキシチオカルボニルイミノ部分、及びこれらの組み合わせから選択される、実施形態２６に記載の方法である。
【０１４２】
実施形態２８は、水素結合部分が、カルボニルイミノ部分、イミノカルボニルイミノ基、オキシカルボニルイミノ部分、及びこれらの組み合わせから選択される、実施形態２７に記載の方法である。
【０１４３】
実施形態２９は、スペーサー基の鎖が、少なくとも７個の連結した原子を有する、実施形態１〜２８のいずれか１つに記載の方法である。
【０１４４】
実施形態３０は、スペーサー基の鎖が、少なくとも８個の連結した原子を有する、実施形態２９に記載の方法である。
【０１４５】
実施形態３１は、スペーサー基の鎖が、５０個以下の連結した原子を有する、実施形態１〜３０のいずれか１つに記載の方法である。
【０１４６】
実施形態３２は、スペーサー基の鎖が、９〜１６個の連結した原子を有する、実施形態３０又は３１に記載の方法である。
【０１４７】
実施形態３３は、実施形態２に応じ、少なくとも１つのモノマーが、以下の一般式：
ＣＨ２＝ＣＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−Ｘ−Ｒ２−［Ｚ−Ｒ２］ｎ−Ｌ  （Ｉ）
［式中、
Ｒ１は、水素、アルキル基、シクロアルキル基、アリール基、及びこれらの組み合わせから選択され、
各Ｒ２は、ヒドロカルビレン基、ヘテロヒドロカルビレン基、及びこれらの組み合わせから独立して選択され、
Ｘは、−Ｏ−又は−ＮＲ３−（式中、Ｒ３は、水素、ヒドロカルビル基、ヘテロヒドロカルビル基、及びこれらの組み合わせから選択される）であり、
Ｚは、少なくとも１つの水素結合供与体、少なくとも１つの水素結合受容体、又はこれらの組み合わせを含むヘテロヒドロカルビレン基であり、
ｎは、０又は１の整数であり、
Ｌは、少なくとも１つの酸性基又はその塩を含む官能基である］によって表される種類のうちの１つである、実施形態２〜３２のいずれか１つに記載の方法である。
【０１４８】
実施形態３４は、Ｒ１が、水素、メチル、又はこれらの組み合わせから選択される、実施形態３３に記載の方法である。
【０１４９】
実施形態３５は、少なくとも１つのモノマーが、
ＶＤＭ−４−アミノメチル−シクロヘキサンカルボン酸：
【化１９】
2019536736.tif 000020
ＶＤＭ−２−ヒドロキシ−４−アミノブタン酸：
【化２０】
2019536736.tif 000021
ＶＤＭ−２−アミノ−３−ヒドロキシプロパン酸（ＶＤＭ−セリン）：
【化２１】
2019536736.tif 000022
ＶＤＭ−２−アミノ−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパン酸（ＶＤＭ−チロシン）：
【化２２】
2019536736.tif 000023
ＶＤＭ−（２Ｓ）−２−アミノ−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン酸（ＶＤＭ−トリプトファン）：
【化２３】
2019536736.tif 000024
ＶＤＭ−７−アミノヘプタン酸：
【化２４】
2019536736.tif 000025
ＶＤＭ−２−アミノ−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン酸（ＶＤＭ−ヒスチジン）：
【化２５】
2019536736.tif 000026
ＩＥＭ−３−アミノプロパン酸：
【化２６】
2019536736.tif 000027
ＩＥＭ−タウリン：
【化２７】
2019536736.tif 000028
ＶＤＭ−タウリン：
【化２８】
2019536736.tif 000029
ＶＤＭ−２−（ヒドロキシエチル）ホスホン酸：
【化２９】
2019536736.tif 000030
ＶＤＭ−３−アミノプロパン酸：
【化３０】
2019536736.tif 000031
ＶＤＭ−４−アミノ酪酸：
【化３１】
2019536736.tif 000032
ＶＤＭ−５−アミノ吉草酸：
【化３２】
2019536736.tif 000033
ＶＤＭ−６−アミノカプロン酸：
【化３３】
2019536736.tif 000034
ＶＤＭ−フェニルアラニン：
【化３４】
2019536736.tif 000035
ＩＥＭ−フェニルアラニン：
【化３５】
2019536736.tif 000036
から選択される、実施形態３４に記載の方法である。
【０１５０】
実施形態３６は、ポリマーが多孔質基材にグラフト化されている、実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の方法である。
【０１５１】
実施形態３７は、ポリマーが多孔質基材上にコーティングされている、実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の方法である。
【０１５２】
実施形態３８は、実施形態２に応じ、少なくとも１つのアルケニル基及び少なくとも１つの親水性基を含む親水性コモノマーから選択される改質コモノマーの共重合された単位を含むポリマーが、多孔質基材上に配置されている、実施形態２〜３７のいずれか１つに記載の方法である。
【０１５３】
実施形態３９は、親水性改質コモノマーが、アクリルアミド、ジメチルアクリルアミド、ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコールモノ（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシエチルアクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリドン、及びこれらの組み合わせから選択される、実施形態３８に記載の方法である。
【０１５４】
実施形態４０は、実施形態２に応じ、少なくとも２つのフリーラジカル重合性基を含む改質多官能性（メタ）アクリロイルコモノマーの共重合された単位を含むポリマーが、多孔質基材上に配置されている、実施形態２〜３９のいずれか１つに記載の方法である。
【０１５５】
実施形態４１は、改質多官能性（メタ）アクリロイルコモノマーが、ジ（メタ）アクリレート、トリ（メタ）アクリレート、テトラ（メタ）アクリレート、多官能性（メタ）アクリルアミド、及びこれらの組み合わせから選択される、実施形態４０に記載の方法である。
【０１５６】
実施形態４２は、改質多官能性（メタ）アクリロイルコモノマーが、エチレングリコールジ（メタ）アクリレート、１，６−ヘキサンジオールジ（メタ）アクリレート、ポリ（エチレングリコール）ジ（メタ）アクリレート、ポリブタジエンジ（メタ）アクリレート、ポリウレタンジ（メタ）アクリレート、プロポキシル化グリセリントリ（メタ）アクリレート、メチレンビスアクリルアミド、エチレンビスアクリルアミド、ヘキサメチレンビスアクリルアミド、ジアクリロイルピペラジン、及びこれらの組み合わせから選択される、実施形態４１に記載の方法である。
【実施例】
【０１５７】
本開示の目的及び利点を以下の実施例によって更に例示するが、これらの実施例に記載の特定の材料及びこれらの量、並びに他の条件及び詳細は、本開示を不当に限定するものと解釈してはならない。これらの実施例は、単に例示目的のものであり、添付の特許請求の範囲の限定を意図するものではない。
【０１５８】
材料：
【表１】
2019536736.tif 000037
【０１５９】
ＩｇＧ抗体溶液の調製：
モノクローナル抗体ＩｇＧ（３３．２ｍｇ／ｍＬ、３〜４％の凝集物含有量、ｐＩ＞８、ｐＨ５．３、３．０ｍＳ／ｃｍ）を、クエン酸塩（ｐＨ５及び６）、ＭＥＳ（ｐＨ６）、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ６）、リン酸ナトリウム（ｐＨ７）、又はＴｒｉｓ（ｐＨ８）の２０ｍＭ緩衝溶液で、１０倍又は４０倍のいずれかに希釈した。得られた緩衝溶液を、１．５〜１０５ｍＳ／ｃｍの範囲の導電率を有するように、塩化ナトリウムで調整した。ＩｇＧ含有緩衝溶液の導電率及びｐＨ測定値は、Ａｃｃｕｍｅｔ  Ｅｘｃｅｌ  ＸＬ５０導電率計（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｈａｍｐｔｏｎ，ＮＨ））及びＶＷＲ  ｓｙｍｐＨｏｎｙ（商標）卓上ｐＨ計（ＶＷＲ（Ｒａｄｎｏｒ，ＰＡ））をそれぞれ用いて求めた。表２に、各ＩｇＧ含有緩衝溶液（ＩｇＧ溶液番号１〜２７）の緩衝液、ｐＨ及び導電率を記録する。
【表２】
2019536736.tif 000038
【０１６０】
モノマーの調製：
モノマー実施例Ａ．
４−［［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］メチル］シクロヘキサンカルボン酸、ナトリウム塩
（ＶＤＭ−４−アミノメチル−シクロヘキサンカルボン酸、ナトリウム塩）
【化３６】
2019536736.tif 000039
トランス−４−アミノメチル−シクロヘキサンカルボン酸（２．００ｇ、０．０１３ｍｏｌ）を、１００ｍＬの丸底フラスコに加えた。水酸化ナトリウム水溶液（１．０Ｎ、１３ｍＬ）をこのフラスコに加え、固体が溶解するまで、得られた混合物を撹拌した。次いでこのフラスコを氷水浴中に置き、１５分間撹拌した。２−ビニル−４，４−ジメチルアズラクトン（ＶＤＭ）（１．７７ｇ、１．７ｍＬ、０．０１３ｍｏｌ）をシリンジによって加え、フラスコを引き続き氷水浴中に維持し、反応を３０分間撹拌した。次いでこの冷却浴を取り除き、３０分間の時間にわたり、反応を室温まで温めた。濃塩酸溶液を数滴加えることにより、反応のｐＨを約７に調整した。アリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、４−［［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］メチル］シクロヘキサンカルボン酸、ナトリウム塩の形成を確認した。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）δ０．８９（ｑ，２Ｈ），１．２７（ｑ，２Ｈ），１．４２（ｓ，６Ｈ），１．４３（ｍ，１Ｈ），１．６９（ｄ，２Ｈ），１．８２（ｄ，２Ｈ），２．０３（ｍ，１Ｈ），２．９８（ｄ，２Ｈ），５．７２（ｍ，１Ｈ），６．１４（ｍ，１Ｈ），６．２３（ｍ，１Ｈ）。
【０１６１】
モノマー実施例Ｂ．
２−ヒドロキシ−４−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタン酸、ナトリウム塩
（ＶＤＭ−２−ヒドロキシ−４−アミノブタン酸、ナトリウム塩）
【化３７】
2019536736.tif 000040
２−ヒドロキシ−４−アミノブタン酸（５．００ｇ、０．０４２ｍｏｌ）を、１００ｍＬの丸底フラスコに加えた。水酸化ナトリウム溶液の水溶液（１．０Ｎ、４２ｍＬ）をこのフラスコに加え、固体が溶解するまで、得られた混合物を撹拌した。次いでこのフラスコを氷水浴中に置き、１５分間撹拌した。ＶＤＭ（５．８４ｇ、５．６ｍＬ、０．０４２ｍｏｌ）をシリンジによって加え、フラスコを引き続き氷水浴中に維持し、反応を３０分間撹拌した。次いでこの冷却浴を取り除き、３０分間の時間にわたり、反応を室温まで温めた。アリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、２−ヒドロキシ−４−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタン酸、ナトリウム塩の形成を確認した。濃塩酸溶液を数滴加えることにより、反応のｐＨを約７に調整した。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）δ１．４３（ｓ，６Ｈ），１．７１（ｍ，１Ｈ），１．８９（ｍ，１Ｈ），３．２２（ｍ，１Ｈ），３．２９（ｍ，１Ｈ），３．９９（ｍ，２Ｈ），５．７３（ｍ，１Ｈ），６．１５（ｍ，１Ｈ），６．２３（ｍ，１Ｈ）。
【０１６２】
モノマー実施例Ｃ．
３−ヒドロキシ−２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩
（ＶＤＭ−セリン、ナトリウム塩）
【化３８】
2019536736.tif 000041
Ｌ−セリン（５．００ｇ、０．０４８ｍｏｌ）を、１００ｍＬの丸底フラスコに加えた。水酸化ナトリウム水溶液（１．０Ｎ、４８ｍＬ）をこのフラスコに加え、固体が溶解するまで、得られた混合物を撹拌した。次いでこのフラスコを氷水浴中に置き、１５分間撹拌した。ＶＤＭ（６．６２ｇ、６．４ｍＬ、０．０４８ｍｏｌ）をシリンジによって加え、フラスコを引き続き氷水浴中に維持し、反応を３０分間撹拌した。次いでこの冷却浴を取り除き、３０分間の時間にわたり、反応を室温まで温めた。濃塩酸溶液を数滴加えることにより、反応のｐＨを約７に調整した。アリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、３−ヒドロキシ−２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩の形成を確認した。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）δ１．４８（ｓ，６Ｈ），３．７９（ｍ，２Ｈ），４．２２（ｍ，１Ｈ），５．７４（ｍ，１Ｈ），６．１６（ｍ，１Ｈ），６．２５（ｍ，１Ｈ）。
【０１６３】
モノマー実施例Ｄ．
３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩
（ＶＤＭ−チロシン、ナトリウム塩）
【化３９】
2019536736.tif 000042
ＤＬ−チロシン（５．００ｇ、０．０２８ｍｏｌ）を、２５０ｍＬの丸底フラスコに加えた。水酸化ナトリウム水溶液（０．５Ｎ、１５０ｍＬ）をこのフラスコに加え、固体が溶解するまで、得られた混合物を撹拌した。次いでこのフラスコを氷水浴中に置き、１５分間撹拌した。ＶＤＭ（３．８４ｇ、３．７ｍＬ、０．０２８ｍｏｌ）をシリンジによって加え、フラスコを引き続き氷水浴中に維持し、反応を２時間撹拌した。次いでこの冷却浴を取り除き、３０分間の時間にわたり、反応を室温まで温めた。アリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩の形成を確認した。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）δ１．３９（ｓ，６Ｈ），２．７０（ｍ，１Ｈ），２．８４（ｍ，１Ｈ），３．４２（ｍ，１Ｈ），５．６７（ｍ，１Ｈ），６．１１（ｍ，１Ｈ），６．２２（ｍ，１Ｈ），６．５８（ｍ，２Ｈ），６．９５（ｍ，２Ｈ）。
【０１６４】
モノマー実施例Ｅ．
３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩
（ＶＤＭ−トリプトファン、ナトリウム塩）
【化４０】
2019536736.tif 000043
ＤＬ−トリプトファン（５．００ｇ、０．０２５ｍｏｌ）を、２５０ｍＬの丸底フラスコに加えた。水酸化ナトリウム溶液の水溶液（０．５Ｎ、１００ｍＬ）をこのフラスコに加え、固体が溶解するまで、得られた混合物を撹拌した。次いでこのフラスコを氷水浴中に置き、１５分間撹拌した。ＶＤＭ（３．４０ｇ、３．５ｍＬ、０．０２５ｍｏｌ）をシリンジによって加え、フラスコを引き続き氷水浴中に維持し、反応を３時間撹拌した。次いでこの冷却浴を取り除き、３０分間の時間にわたり、反応を室温まで温めた。アリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩の形成を確認した。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）δ１．３９（ｓ，６Ｈ），３．０１（ｍ，１Ｈ），３．１３（ｍ，１Ｈ），３．５４（ｍ，１Ｈ），５．６７（ｍ，１Ｈ），６．１１（ｍ，１Ｈ），６．２１（ｍ，１Ｈ），７．１２（ｍ，１Ｈ），７．１９（ｍ，２Ｈ），７．４６（ｍ，１Ｈ），７．７０（ｍ，１Ｈ）。
【０１６５】
モノマー実施例Ｆ．
７−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ヘプタン酸、ナトリウム塩
（ＶＤＭ−７−アミノヘプタン酸、ナトリウム塩）
【化４１】
2019536736.tif 000044
７−アミノヘプタン酸（５．００ｇ、０．０３５ｍｏｌ）を、１００ｍＬの丸底フラスコに加えた。水酸化ナトリウム水溶液（１．０Ｎ、３５ｍＬ）をこのフラスコに加え、固体が溶解するまで、得られた混合物を撹拌した。次いでこのフラスコを氷水浴中に置き、１５分間撹拌した。ＶＤＭ（４．７９ｇ、４．６ｍＬ、０．０３５ｍｏｌ）をシリンジによって加え、フラスコを引き続き氷水浴中に維持し、反応を３０分間撹拌した。次いでこの冷却浴を取り除き、３０分間の時間にわたり、反応を室温まで温めた。濃塩酸溶液を数滴加えることにより、反応のｐＨを約７に調整した。アリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、７−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ヘプタン酸、ナトリウム塩の形成を確認した。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）δ１．２４（ｓ，６Ｈ），１．４１（ｍ，８Ｈ），１．４９（ｍ，２Ｈ），２．１１（ｍ，２Ｈ），３．１１（ｍ，２Ｈ），５．７２（ｍ，１Ｈ），６．１５（ｍ，１Ｈ），６．２２（ｍ，１Ｈ）。
【０１６６】
モノマー実施例Ｇ．
３−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）−２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩
（ＶＤＭ−ヒスチジン、ナトリウム塩）
【化４２】
2019536736.tif 000045
Ｌ−ヒスチジン（２．００ｇ、０．０１３ｍｏｌ）を、１００ｍＬの丸底フラスコに加えた。水酸化ナトリウム水溶液（１．０Ｎ、１３ｍＬ）をこのフラスコに加え、固体が溶解するまで、得られた混合物を撹拌した。次いでこのフラスコを氷水浴中に置き、１５分間撹拌した。ＶＤＭ（１．７９ｇ、１．７２ｍＬ、０．０１３ｍｏｌ）をシリンジによって加え、フラスコを引き続き氷水浴中に維持し、反応を３０分間撹拌した。次いでこの冷却浴を取り除き、３０分間の時間にわたり、反応を室温まで温めた。アリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、３−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）−２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩の形成を確認した。濃塩酸溶液を数滴加えることにより、反応のｐＨを約７に調整した。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）１．３０（ｄ，６Ｈ），２．８７（ｄｄ，１Ｈ），３．０４（ｄｄ，１Ｈ），４．２４（ｑ，１Ｈ），５．６１（ｄ，１Ｈ），６．０１（ｄ，１Ｈ），６．１２（ｄｄ，１Ｈ），６．９０（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ）。
【０１６７】
モノマー実施例Ｈ．
３−［２−（２−メチルプロプ−２−エノイルオキシ）エチルカルバモイルアミノ］プロパン酸、ナトリウム塩
（ＩＥＭ−３−アミノプロパン酸、ナトリウム塩）
【化４３】
2019536736.tif 000046
３−アミノプロパン酸（１．７８ｇ、０．０２ｍｏｌ）を、１００ｍＬの丸底フラスコに加えた。水酸化ナトリウム溶液の水溶液（１．０Ｎ、２０ｍＬ）をこのフラスコに加え、固体が溶解するまで、得られた混合物を撹拌した。次いでこのフラスコを氷水浴中に置き、１５分間撹拌した。２−イソシアネートエチルメタクリレート（ＩＥＭ）（３．１ｇ、０．０２ｍｏｌ）をシリンジによって加え、フラスコを引き続き氷水浴中に維持し、反応を３０分間撹拌した。次いでこの冷却浴を取り除き、３０分間の時間にわたり、反応を室温まで温めた。反応混合物から、無色の沈殿物を濾過した。濃塩酸溶液を数滴加えることにより、濾過液のｐＨを約７に調整した。濾過液のアリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、３−［２−（２−メチルプロプ−２−エノイルオキシ）エチルカルバモイルアミノ］プロパン酸、ナトリウム塩の形成を確認した。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）δ１．７８（ｓ，３Ｈ），２．２２（ｔ，２Ｈ），３．１６（ｔ，２Ｈ），３．３０（ｔ，２Ｈ），４．０７（ｔ，２Ｈ），５．５８（ｓ，１Ｈ），５．９９（ｓ，１Ｈ）。
【０１６８】
モノマー実施例Ｉ．
２−［２−（２−メチルプロプ−２−エノイルオキシ）エチルカルバモイルアミノ］エタンスルホン酸、ナトリウム塩
（ＩＥＭ−タウリン、ナトリウム塩）
【化４４】
2019536736.tif 000047
タウリン（２．５０ｇ、０．０２ｍｏｌ）を、１００ｍＬの丸底フラスコに加えた。水酸化ナトリウム溶液の水溶液（１．０Ｎ、２０ｍＬ）をこのフラスコに加え、固体が溶解するまで、得られた混合物を撹拌した。次いでこのフラスコを氷水浴中に置き、１５分間撹拌した。ＩＥＭ（３．１ｇ、０．０２ｍｏｌ）をシリンジによって加え、フラスコを引き続き氷水浴中に維持し、反応を３０分間撹拌した。次いでこの冷却浴を取り除き、３０分間の時間にわたり、反応を室温まで温めた。反応混合物から、無色の沈殿物を濾過した。濃塩酸溶液を数滴加えることにより、濾過液のｐＨを約７に調整した。濾過液のアリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、２−［２−（２−メチルプロプ−２−エノイルオキシ）エチルカルバモイルアミノ］エタンスルホン酸、ナトリウム塩の形成を確認した。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）δ１．７５（ｓ，３Ｈ），２．８８（ｔ，２Ｈ），３．２８（ｔ，２Ｈ），３．３２（ｔ，２Ｈ），４．０６（ｔ，２Ｈ），５．５６（ｍ，１Ｈ），５．９７（ｓ，１Ｈ）。
【０１６９】
モノマー実施例Ｊ．
２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］エタンスルホン酸、ナトリウム塩
（ＶＤＭ−タウリン、ナトリウム塩）
【化４５】
2019536736.tif 000048
タウリン（２．５０ｇ、０．０２ｍｏｌ）を、１００ｍＬの丸底フラスコに加えた。水酸化ナトリウム溶液の水溶液（１．０Ｎ、２０ｍＬ）をこのフラスコに加え、固体が溶解するまで、得られた混合物を撹拌した。次いでこのフラスコを氷水浴中に置き、１５分間撹拌した。ＶＤＭ（２．７８ｇ、０．０２ｍｏｌ）をシリンジによって加え、フラスコを引き続き氷水浴中に維持し、反応を３０分間撹拌した。次いでこの冷却浴を取り除き、３０分間の時間にわたり、反応を室温まで温めた。濃塩酸溶液を数滴加えることにより、反応のｐＨを約７に調整した。アリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］エタンスルホン酸、ナトリウム塩の形成を確認した。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）δ１．３５（ｓ，６Ｈ），２．９４（ｔ，２Ｈ），３．４５（ｔ，２Ｈ），５．６４（ｍ，１Ｈ），６．１０（ｍ，２Ｈ）。
【０１７０】
モノマー実施例Ｋ．
２−［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］オキシエチルホスホン酸
（ＶＤＭ−２−（ヒドロキシエチル）ホスホン酸）
【化４６】
2019536736.tif 000049
２−ヒドロキシエチルジメチルホスフェート（９０％の純度、１５．０ｇ、９７．３ｍｍｏｌ）及び１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン（１ｍＬ）を、無水塩化メチレン１００ｍＬに溶解したＶＤＭ（１３．７ｇ、９７．３ｍｍｏｌ）の溶液を含む２５０ｍＬのフラスコに加え、反応を終夜撹拌した。反応混合物を追加の塩化メチレンで希釈し、飽和５％ＮａＨ２ＰＯ４、Ｈ２Ｏ、及びブラインで順次洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥した後、濾過した。少量（約１３０ｍｇ）のＢＨＴを加え、溶液を減圧下で濃縮し、無色の液体１１．２ｇを得た。この液体を塩化メチレンの５０ｍＬに溶解し、窒素雰囲気下で氷水浴中に置いた。ブロモトリメチルシラン（１２．３ｇ、８０．２ｍｍｏｌ）を加え、反応を、室温で９０分間撹拌した。溶液を減圧下で濃縮した。メタノール（５０ｍＬ）を得られた残渣に加え、溶液を、室温で１時間撹拌した。次いで、溶液を、室温において減圧下で濃縮し、最終生成物を澄明な液体として得た。アリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、２−［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］オキシエチルホスホン酸の形成を確認した。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）δ１．４４（ｓ，６Ｈ），２．１４（ｄｔ，２Ｈ），４．２９（ｄｔ，２Ｈ），５．６９（ｄｄ，１Ｈ），６．１２（ｄｄ，１Ｈ），６．１９（ブロードｓ，１Ｈ）。
【０１７１】
モノマー実施例Ｌ．
３−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩
（ＶＤＭ−３−アミノプロパン酸、ナトリウム塩）
【化４７】
2019536736.tif 000050
３−アミノプロパン酸（１．７８ｇ、０．０２ｍｏｌ）を、１００ｍＬの丸底フラスコに加えた。水酸化ナトリウム水溶液（１．０Ｎ、２０ｍＬ）をこのフラスコに加え、固体が溶解するまで、得られた混合物を撹拌した。次いでこのフラスコを氷水浴中に置き、１５分間撹拌した。ＶＤＭ（２．７８ｇ、０．０２ｍｏｌ）をシリンジによって加え、フラスコを引き続き氷水浴中に維持し、反応を３０分間撹拌した。次いでこの冷却浴を取り除き、３０分間の時間にわたり、反応を室温まで温めた。濃塩酸溶液を数滴加えることにより、反応のｐＨを約７に調整した。アリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、３−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩の形成を確認した。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）δ１．３２（ｓ，６Ｈ），２．２３（ｔ，２Ｈ），３．２４（ｔ，２Ｈ），５．６３（ｍ，１Ｈ），６．０〜６．２（ｍ，２Ｈ）。
【０１７２】
モノマー実施例Ｍ．
４−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタン酸、ナトリウム塩
（ＶＤＭ−ＧＡＢＡ、ナトリウム塩）
【化４８】
2019536736.tif 000051
４−アミノブタン酸（２．０６ｇ、０．０２ｍｏｌ）を、１００ｍＬの丸底フラスコに加えた。水酸化ナトリウム水溶液（１．０Ｎ、２０ｍＬ）をこのフラスコに加え、固体が溶解するまで、得られた混合物を撹拌した。次いでこのフラスコを氷水浴中に置き、１５分間撹拌した。ＶＤＭ（２．７８ｇ、０．０２ｍｏｌ）をシリンジによって加え、フラスコを引き続き氷水浴中に維持し、反応を３０分間撹拌した。次いでこの冷却浴を取り除き、３０分間の時間にわたり、反応を室温まで温めた。濃塩酸溶液を数滴加えることにより、反応のｐＨを約７に調整した。アリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、４−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタン酸、ナトリウム塩の形成を確認した。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）δ１．３４（ｓ，６Ｈ），１．５９（ｐ，２Ｈ），２．０４（ｔ，２Ｈ），３．０５（ｔ，２Ｈ），５．６２（ｄ，１Ｈ），６．０〜６．２（ｍ，２Ｈ）。
【０１７３】
モノマー実施例Ｎ．
５−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ペンタン酸、ナトリウム塩
（ＶＤＭ−５−アミノ吉草酸、ナトリウム塩）
【化４９】
2019536736.tif 000052
５−アミノペンタン酸（２．３４ｇ、０．０２ｍｏｌ）を、１００ｍＬの丸底フラスコに加えた。水酸化ナトリウム水溶液（１．０Ｎ、２０ｍＬ）をこのフラスコに加え、固体が溶解するまで、得られた混合物を撹拌した。次いでこのフラスコを氷水浴中に置き、１５分間撹拌した。ＶＤＭ（２．７８ｇ、０．０２ｍｏｌ）をシリンジによって加え、フラスコを引き続き氷水浴中に維持し、反応を３０分間撹拌した。次いでこの冷却浴を取り除き、３０分間の時間にわたり、反応を室温まで温めた。濃塩酸溶液を数滴加えることにより、反応のｐＨを約７に調整した。アリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、５−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ペンタン酸、ナトリウム塩の形成を確認した。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）δ１．３３（ｓ及びｍ，１０Ｈ），２．０４（ｔ，２Ｈ），３．０５（ｔ，２Ｈ），５．６３（ｄ，１Ｈ），６．０〜６．２（ｍ，２Ｈ）。
【０１７４】
モノマー実施例Ｏ．
６−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ヘキサン酸、ナトリウム塩
（ＶＤＭ−６−アミノカプロン酸、ナトリウム塩）
【化５０】
2019536736.tif 000053
６−アミノヘキサン酸（２．６２ｇ、０．０２ｍｏｌ）を、１００ｍＬの丸底フラスコに加えた。水酸化ナトリウム水溶液（１．０Ｎ、２０ｍＬ）をこのフラスコに加え、固体が溶解するまで、得られた混合物を撹拌した。次いでこのフラスコを氷水浴中に置き、１５分間撹拌した。ＶＤＭ（２．７８ｇ、０．０２ｍｏｌ）をシリンジによって加え、フラスコを引き続き氷水浴中に維持し、反応を３０分間撹拌した。次いでこの冷却浴を取り除き、３０分間の時間にわたり、反応を室温まで温めた。濃塩酸溶液を数滴加えることにより、反応のｐＨを約７に調整した。アリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、６−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ヘキサン酸、ナトリウム塩の形成を確認した。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）δ１．１４（ｍ，２Ｈ），１．３４（ｓ及びｍ，８Ｈ），１．４１（ｍ，２Ｈ），２．０２（ｔ，２Ｈ），３．０３（ｔ，２Ｈ），５．６２（ｄ，１Ｈ），６．０〜６．２（ｍ，２Ｈ）。
【０１７５】
モノマー実施例Ｐ．
２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］−３−フェニルプロパン酸、ナトリウム塩
（ＶＤＭ−フェニルアラニン、ナトリウム塩）
【化５１】
2019536736.tif 000054
Ｌ−フェニルアラニン（３．３ｇ、０．０２ｍｏｌ）を、１００ｍＬの丸底フラスコに加えた。水酸化ナトリウム水溶液（１．０Ｎ、２０ｍＬ）をこのフラスコに加え、固体が溶解するまで、得られた混合物を撹拌した。次いでこのフラスコを氷水浴中に置き、１５分間撹拌した。ＶＤＭ（２．７８ｇ、０．０２ｍｏｌ）をシリンジによって加え、フラスコを引き続き氷水浴中に維持し、反応を３０分間撹拌した。次いでこの冷却浴を取り除き、３０分間の時間にわたり、反応を室温まで温めた。濃塩酸溶液を数滴加えることにより、反応のｐＨを約７に調整した。アリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］−３−フェニルプロパン酸、ナトリウム塩の形成を確認した。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）δ１．２６（ｓ，６Ｈ），２．８９（ｍ，１Ｈ），２．９５（ｍ，１Ｈ），４．３０（ｍ，１Ｈ），５．６２（ｄ，１Ｈ），６．００〜６．１０（ｍ，２Ｈ），７．０７〜７．２０（ｍ，５Ｈ）。
【０１７６】
モノマー実施例Ｑ．
２−［２−（２−メチルプロプ−２−エノイルオキシ）エチルカルバモイルアミノ］−３−フェニルプロパン酸、ナトリウム塩
（ＩＥＭ−フェニルアラニン、ナトリウム塩）
【化５２】
2019536736.tif 000055
Ｌ−フェニルアラニン（３．３ｇ、０．０２ｍｏｌ）を、１００ｍＬの丸底フラスコに加えた。水酸化ナトリウム水溶液（１．０Ｎ、２０ｍＬ）をこのフラスコに加え、固体が溶解するまで、得られた混合物を撹拌した。次いでこのフラスコを氷水浴中に置き、１５分間撹拌した。ＩＥＭ（３．１ｇ、０．０２ｍｏｌ）をシリンジによって加え、フラスコを引き続き氷水浴中に維持し、反応を３０分間撹拌した。次いでこの冷却浴を取り除き、３０分間の時間にわたり、反応を室温まで温めた。反応混合物から、無色の沈殿物を濾過した。濃塩酸溶液を数滴加えることにより、濾過液のｐＨを約７に調整した。濾過液のアリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、２−［２−（２−メチルプロプ−２−エノイルオキシ）エチルカルバモイルアミノ］−３−フェニルプロパン酸、ナトリウム塩の形成を確認した。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）δ１．７４（ｂｒ．ｓ，３Ｈ），２．７３（ｍ，１Ｈ），２．９９（ｍ，１Ｈ），３．１３（ｍ，１Ｈ），３．２６（ｍ，１Ｈ），３．９０（ｍ，２Ｈ），４．１７（ｍ，１Ｈ），５．５４（ｍ，１Ｈ），５．９５（ｍ，１Ｈ），７．０９及び７．１５（ｍ，５Ｈ）。
【０１７７】
モノマー実施例Ｒ．
２−［２−（２−メチルプロプ−２−エノイルオキシ）エチルカルバモイルアミノ］エタン酸、ナトリウム塩
（ＩＥＭ−グリシン、ナトリウム塩）
【化５３】
2019536736.tif 000056
グリシン（１．５ｇ、０．０２ｍｏｌ）を、１００ｍＬの丸底フラスコに加えた。水酸化ナトリウム水溶液（１．０Ｎ、２０ｍＬ）をこのフラスコに加え、固体が溶解するまで、得られた混合物を撹拌した。次いでこのフラスコを氷水浴中に置き、１５分間撹拌した。ＩＥＭ（３．１ｇ、０．０２ｍｏｌ）をシリンジによって加え、フラスコを引き続き氷水浴中に維持し、反応を３０分間撹拌した。次いでこの冷却浴を取り除き、３０分間の時間にわたり、反応を室温まで温めた。反応混合物から、無色の沈殿物を濾過した。濃塩酸溶液を数滴加えることにより、濾過液のｐＨを約７に調整した。濾過液のアリコートの１Ｈ−ＮＭＲにより、２−［２−（２−メチルプロプ−２−エノイルオキシ）エチルカルバモイルアミノ］エタン酸、ナトリウム塩の形成を確認した。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，５００ＭＨｚ）δ１．７９（ｓ，３Ｈ），３．３３（ｍ，２Ｈ），３．５４（ｓ，２Ｈ），４．０９（ｍ，２Ｈ），５．５９（ｓ，１Ｈ），５．９９（ｓ，１Ｈ）。
【０１７８】
実施例１．
４−［［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］メチル］シクロヘキサンカルボン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ａ）の溶液（２３．８５％ｗ／ｗの脱イオン水溶液３．３４グラム、２．５ｍｍｏｌ）を、開始剤４−（３−スルホプロピルオキシ）ベンゾフェノン、ナトリウム塩（Ｓ−ＢＰ）（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液５００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．５Ｍ、開始剤濃度を０．５％とした。ナイロン膜基材（９ｃｍ×１２ｃｍ、ナイロン６６膜、単一補強層ナイロン３ゾーン膜、名目上の（nominal）孔径１．８μｍ、＃０８０ＺＮ、３Ｍ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．（Ｍｅｒｉｄａｎ，ＣＴ）より入手）を、透明なポリエステルフィルム（約０．２５ｍｍ厚）のシート上に配置し、基材のトップ面上にコーティング溶液をピペットで加えた。コーティング溶液を基材に約１分間浸漬させた後、透明なポリエステルフィルム（約０．２５ｍｍ厚）の第２のシートを基材のトップ面の上に配置した。２．２８ｋｇの円筒形の重りを、得られた３層のサンドイッチ状試料（ポリエステルフィルム−膜基材−ポリエステルフィルム）のトップの上で転がし、余分なコーティング溶液を搾り出した。１８個のバルブ（Ｓｙｌｖａｎｉａ  ＲＧ２  ４０Ｗ  Ｆ４０／３５０ＢＬ／ＥＣＯ、基材の上に１０個、下に８個、長さ１．１７メートル（４６インチ）、中央の間隔５．１ｃｍ（２インチ））を備えたＵＶスタンド（Ｃｌａｓｓｉｃ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，Ｉｎｃ．（Ｏａｋｄａｌｅ，ＭＮ））を用い、１５分間の照射時間でサンドイッチ状試料に照射することにより、紫外線（ＵＶ）開始グラフト化を実施した。ポリエステルシートを取り外し、残った官能化基材を、２５０ｍＬのポリエチレン瓶に入れた。瓶に０．９パーセント（重量％）食塩水を充填し、密封し、３０分間振とうし、任意の残留モノマー又は未グラフト化ポリマーを洗い落とした。食塩水をデカントし、官能化基材を新鮮な食塩水で更に３０分間洗浄した後、脱イオン水で３０分間洗浄し、乾燥させた。完成したフィルタ要素は、グラフト密度が０．２０ｍｍｏｌ／グラムであった。グラフト密度は、基材を完成したフィルタ要素に変換した後の質量増加を測定することによって求めた。
【０１７９】
実施例２．
２−ヒドロキシ−４−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｂ）の溶液（２３．５５％ｗ／ｗの脱イオン水溶液２．９８グラム、２．５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液５００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．５Ｍ、開始剤濃度を０．５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．０７ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１８０】
実施例３．
３−ヒドロキシ−２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｃ）の溶液（２３．８５％ｗ／ｗの脱イオン水溶液２．７９グラム、２．５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液５００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．５Ｍ、開始剤濃度を０．５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．２３ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１８１】
実施例４．
３−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）−２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｇ）の溶液（２７．５５％ｗ／ｗの脱イオン水溶液２．８７グラム、２．５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液５００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．５Ｍ、開始剤濃度を０．５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．１９ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１８２】
実施例５．
４−［［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］メチル］シクロヘキサンカルボン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ａ）の溶液（２３．８５％ｗ／ｗの脱イオン水溶液１．６７グラム、１．２５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液５００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．２５Ｍ、開始剤濃度を０．５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．１２ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１８３】
実施例６．
２−ヒドロキシ−４−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｂ）の溶液（２３．５５％ｗ／ｗの脱イオン水溶液１．４８グラム、１．２５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液５００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．２５Ｍ、開始剤濃度を０．５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．０４ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１８４】
実施例７．
３−ヒドロキシ−２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｃ）の溶液（２３．８５％ｗ／ｗの脱イオン水溶液１．３９グラム、１．２５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液５００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．２５Ｍ、開始剤濃度を０．５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．１１ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１８５】
実施例８．
３−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）−２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｇ）の溶液（２７．５５％ｗ／ｗの脱イオン水溶液１．４５グラム、１．２５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液５００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．２５Ｍ、開始剤濃度を０．５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．０８ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１８６】
実施例９．
２−ヒドロキシ−４−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｂ）の溶液（２３．５５％ｗ／ｗの脱イオン水溶液２．９８グラム、２．５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液１００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．５Ｍ、開始剤濃度を０．１％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．１０ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１８７】
実施例１０．
４−［［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］メチル］シクロヘキサンカルボン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ａ）の溶液（２３．８５％ｗ／ｗの脱イオン水溶液１．６７グラム、１．２５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液１００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．２５Ｍ、開始剤濃度を０．１％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．０７ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１８８】
実施例１１．
３−ヒドロキシ−２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｃ）の溶液（２３．８５％ｗ／ｗの脱イオン水溶液１．３９グラム、１．２５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液１００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．２５Ｍ、開始剤濃度を０．１％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．０７ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１８９】
実施例１２．
３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｄ）の溶液（１Ｍの脱イオン水溶液１．２５ｍＬ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド（１Ｍの溶液１．２５ｍＬ）及びＳ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液５００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．２５Ｍ、開始剤濃度を０．５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．２１ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１９０】
実施例１３．
３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｅ）の溶液（１Ｍの脱イオン水溶液１．２５ｍＬ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液５００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．２５Ｍ、開始剤濃度を０．５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．１６ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１９１】
実施例１４．
２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］エタンスルホン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｊ）の溶液（１Ｍの脱イオン水溶液２．５ｍＬ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液５００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．５Ｍ、開始剤濃度を０．５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．１５ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１９２】
実施例１５．
２−［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］オキシエチルホスホン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｋ）の溶液（１Ｍの脱イオン水溶液２．５ｍＬ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液５００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．５Ｍ、開始剤濃度を０．５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．２０ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１９３】
実施例１６．
３−［２−（２−メチルプロプ−２−エノイルオキシ）エチルカルバモイルアミノ］プロパン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｈ）の溶液（１Ｍの脱イオン水溶液３．７５ｍＬ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液５００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．７５Ｍ、開始剤濃度を０．５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．５０ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１９４】
実施例１７．
３−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］プロパン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｌ）の溶液（１Ｍの脱イオン水溶液３．７５ｍＬ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液５００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．７５Ｍ、開始剤濃度を０．５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．６２３ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１９５】
実施例１８．
４−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｍ）の溶液（２１．６５％ｗ／ｗの脱イオン水溶液１．５３グラム、１．２５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液１２５μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．２５Ｍ、開始剤濃度を０．１２５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．２３ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１９６】
実施例１９．
５−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ペンタン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｎ）の溶液（２２．０５％ｗ／ｗの脱イオン水溶液１．５８グラム、１．２５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液６２．５μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．２５Ｍ、開始剤濃度を０．０６２５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．１９ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１９７】
実施例２０．
６−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ヘキサン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｏ）の溶液（２３．７％ｗ／ｗの脱イオン水溶液１．５４グラム、１．２５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液３１．２μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．２５Ｍ、開始剤濃度を０．０３１２％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．２０ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１９８】
実施例２１．
７−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ヘプタン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｆ）の溶液（２４．５％ｗ／ｗの脱イオン水溶液１．５６グラム、１．２５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液６２．５μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．２５Ｍ、開始剤濃度を０．０６２５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．１８ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０１９９】
実施例２２．
７−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ヘプタン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｆ）の溶液（２４．５％ｗ／ｗの脱イオン水溶液１．５６グラム、１．２５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液１２５μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．２５Ｍ、開始剤濃度を０．１２５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．２４ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０２００】
実施例２３．
２−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］−３−フェニルプロパン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｐ）の溶液（２４．８％ｗ／ｗの脱イオン水溶液１．６５グラム、１．２５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液３１．２μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．２５Ｍ、開始剤濃度を０．０３１２％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．１８ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０２０１】
実施例２４．
２−［２−（２−メチルプロプ−２−エノイルオキシ）エチルカルバモイルアミノ］−３−フェニルプロパン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｑ）の溶液（２５％ｗ／ｗの脱イオン水溶液１．７１グラム、１．２５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液３１．２μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．２５Ｍ、開始剤濃度を０．０３１２％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．４２ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０２０２】
実施例２５．
４−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｍ）の溶液（０．２５Ｍの脱イオン水溶液３．７５ｍＬ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド（０．２５Ｍの溶液１．２５ｍＬ）及びＳ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液３１．２５μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．１４ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０２０３】
実施例２６．
４−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｍ）の溶液（０．２５Ｍの脱イオン水溶液２．５ｍＬ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド（０．２５Ｍの溶液２．５ｍＬ）及びＳ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液３１．２５μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．２３ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０２０４】
実施例２７．
４−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｍ）の溶液（０．２５Ｍの脱イオン水溶液１．２５ｍＬ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド（０．２５Ｍの溶液３．７５ｍＬ）及びＳ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液３１．２５μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．４２ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０２０５】
実施例２８．
４−［［２−メチル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパノイル］アミノ］ブタン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｍ）の溶液（０．５Ｍの脱イオン水溶液１．２５ｍＬ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド（０．５Ｍの溶液３．７５ｍＬ）及びＳ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液３１．２５μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．４３ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０２０６】
実施例２９．
２−［２−（２−メチルプロプ−２−エノイルオキシ）エチルカルバモイルアミノ］エタンスルホン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｉ）の溶液（０．７５Ｍの脱イオン水溶液２．５ｍＬ）を、３−フェニル−２−（プロプ−２−エノイルアミノ）プロパン酸（０．７５Ｍの溶液２．５ｍＬ）及びＳ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液５００μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。実施例１に記載の手順に従い、完成したフィルタ要素を得た。
【０２０７】
実施例３０．
２−［２−（２−メチルプロプ−２−エノイルオキシ）エチルカルバモイルアミノ］エタン酸、ナトリウム塩（モノマー実施例Ｒ）の溶液（１９．５％ｗ／ｗの脱イオン水溶液１．６２グラム、１．２５ｍｍｏｌ）を、Ｓ−ＢＰ（０．０５ｇ／ｍＬの脱イオン水溶液６２．５μＬ）と混合することにより、コーティング溶液を調製した。この混合物を脱イオン水で全量５グラムに希釈し、最終的なモノマー濃度を０．２５Ｍ、開始剤濃度を０．０６２５％とした。実施例１に記載の手順に従い、グラフト密度が０．２５ｍｍｏｌ／グラムの完成したフィルタ要素を得た。
【０２０８】
実施例３１．単量体ＩｇＧから凝集ＩｇＧを分離するための方法
実施例１〜３０の完成したフィルタ要素を、直径７．５ｍｍのディスクにカットした。本来の固相抽出材をあらかじめ取り除いた、９６ウェルＥｍｐｏｒｅ（商標）フィルタプレート（モデル６０６５、３Ｍ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ））の各ウェル中に、２枚のディスクを挿入した。フィルタ要素のディスクを、プラスチック製のＯリングで、所定の位置に保持した。各ウェルの総有効フィルタ容量（total working filter volume）は、約８．６μＬであった。各ウェルを、ウェル中で試験するＩｇＧ含有溶液中のものと同一の緩衝液組成を有する非ＩｇＧ含有緩衝溶液１ｍＬで平衡化した。遠心分離（Ａｌｌｅｇｒａ  ２５Ｒ遠心分離機，Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ（Ｂｒｅａ，ＣＡ））を用い、平衡溶液をウェルから除去した。次いで、プレートのウェルに、表２から選択される単一のＩｇＧ含有緩衝溶液１ｍＬを（ピペットによって）個々に添加した。プレートを、順次１００、２００、３００、６００、１２００、及び３０００ｒｃｆ（相対遠心力）で、又は、個々の試料がフィルタ要素を完全に流通するまで遠心分離した。各遠心工程は、約５分間実施した。ＩｇＧ含有緩衝溶液中のＩｇＧの濃度は３．３２ｍｇ／ｍＬ又は０．８３ｍｇ／ｍＬのいずれかであり、これはチャレンジロード３８６ｇ／Ｌ又は９６．５ｇ／Ｌのいずれかに相当する。チャレンジロードは、所与の体積の濾材当たりのＩｇＧの量（１リットル当たりのグラム数、ｇ／Ｌ）で規定される。平衡溶液及びＩｇＧ試料溶液には、別々の捕集プレートを用いた。フィルタを通した溶液は、ＴＳＫｇｅｌ（商標）Ｇ３０００ＳＷｘｌカラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＬＬＣ（Ｇｒｉｅｓｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ））を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ  Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ  ＨＰＬＣ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｃｏｌｕｍｂｉａ，ＭＤ））を用い、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって分析した（分析条件：注入量２０μＬ；流量１ｍＬ／分；移動相：１００ｍＭリン酸ナトリウム、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．９；検出２８０ナノメートル）。
【０２０９】
実施例１〜３０のフィルタ要素と、表２に記載したＩｇＧ溶液（１〜２７番）と、を用いた実施例３１の方法について、表３〜３５に結果を示す。開始時の溶液及びフィルタを通した溶液のピーク面積を比較することによってモノマーの収率及び凝集物の除去を求め、結果を、２回の反復試験の平均として報告する。
【０２１０】
実施例３１の分離方法を実施する前のＩｇＧ溶液（初期のＩｇＧ溶液）中に存在する単量体ＩｇＧの百分率を、上記のＳＥＣクロマトグラフィー法を用いて求めた。式１によって、試料の単量体成分のピーク面積（ピークＡ）を、試料のピーク面積の合計（総ピーク面積）と比較した。
【０２１１】
実施例３１の分離方法を実施する前のＩｇＧ溶液（初期のＩｇＧ溶液）中に存在する凝集ＩｇＧの百分率を、上記のＳＥＣクロマトグラフィー法を用いて求めた。式２によって、試料の凝集成分のピーク面積（ピークＢ）を、試料のピーク面積の合計（総ピーク面積）と比較した。
【０２１２】
初期のＩｇＧ溶液中（すなわち、実施例３１の分離方法を実施する前）の、凝集ＩｇＧの百分率に対する単量体ＩｇＧの百分率の比を、式３によって算出し、「初期の組成比」として報告する。
【０２１３】
凝集ＩｇＧの除去率（％）を、上記のＳＥＣクロマトグラフィー法を用い、凝集成分のピーク面積を、実施例３１の分離方法を実施する前（ピークＢ）及び分離方法を実施した後（ピークＣ）に測定して求めた。「凝集ＩｇＧの除去率（％）」を、式４によって算出した。
【０２１４】
単量体ＩｇＧの収率（％）を、上記のＳＥＣクロマトグラフィー法を用い、単量体成分のピーク面積を、実施例３１の分離方法を実施する前（ピークＡ）及び分離方法を実施した後（ピークＤ）に測定して求めた。「単量体ＩｇＧの収率（％）」を、式５によって算出した。
【０２１５】
実施例３１の分離方法後の単量体ＩｇＧの回収率の計算値を式６によって求め、「最終的な単量体ＩｇＧの回収率（％）」として報告する。
【０２１６】
実施例３１の分離方法後の凝集ＩｇＧの回収率の計算値を式７によって求め、「最終的な凝集ＩｇＧの回収率（％）」として報告する。
【０２１７】
最終的なＩｇＧ溶液中（すなわち、実施例３１の分離方法を実施した後）の、凝集ＩｇＧの百分率に対する単量体ＩｇＧの百分率の比を式８によって算出し、「最終的な組成比」として報告する。
【０２１８】
「初期の組成比に対する最終的な組成比の比」を、式９によって算出した。
【０２１９】
式１〜９について算出した値を、表３〜３５に報告する。
式１：
初期の単量体ＩｇＧ（％）＝（（ピーク面積Ａ）／（総ピーク面積））×１００
式２：
初期の凝集ＩｇＧ（％）＝（（ピーク面積Ｂ）／（総ピーク面積））×１００
式３：
初期の組成比＝（（初期の単量体ＩｇＧ（％））／（初期の凝集ＩｇＧ（％）））
式４：
凝集ＩｇＧの除去率（％）＝１００−（（（ピーク面積Ｃ）／（ピーク面積Ｂ））×１００）
式５：
単量体ＩｇＧの収率（％）＝（（ピーク面積Ｄ）／（ピーク面積Ａ））×１００
式６：
最終的な単量体ＩｇＧの回収率（％）＝（（初期の単量体ＩｇＧ（％）×単量体ＩｇＧの収率（％））／１００）
式７：
最終的な凝集ＩｇＧの回収率（％）＝初期の凝集ＩｇＧ（％）×（（１００−凝集ＩｇＧの除去率（％））／１００）
式８：
最終的な組成比＝（（最終的な単量体ＩｇＧの回収率（％））／（最終的な凝集ＩｇＧの回収率（％）））
式９：
初期の組成比に対する最終的な組成比の比＝（（最終的な組成比）／（初期の組成比））
【表３】
2019536736.tif 000057
【表４】
2019536736.tif 000058
【表５】
2019536736.tif 000059
【表６】
2019536736.tif 000060
【表７】
2019536736.tif 000061
【表８】
2019536736.tif 000062
【表９】
2019536736.tif 000063
【表１０】
2019536736.tif 000064
【表１１】
2019536736.tif 000065
【表１２】
2019536736.tif 000066
【表１３】
2019536736.tif 000067
【表１４】
2019536736.tif 000068
【表１５】
2019536736.tif 000069
【表１６】
2019536736.tif 000070
【表１７】
2019536736.tif 000071
【表１８】
2019536736.tif 000072
【表１９】
2019536736.tif 000073
【表２０】
2019536736.tif 000074
【表２１】
2019536736.tif 000075
【表２２】
2019536736.tif 000076
【表２３】
2019536736.tif 000077
【表２４】
2019536736.tif 000078
【表２５】
2019536736.tif 000079
【表２６】
2019536736.tif 000080
【表２７】
2019536736.tif 000081
【表２８】
2019536736.tif 000082
【表２９】
2019536736.tif 000083
【表３０】
2019536736.tif 000084
【表３１】
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【表３２】
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【表３３】
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【表３４】
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【表３５】
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【０２２０】
本明細書で言及した特許、特許文献、及び刊行物に含まれる、参照した記載は、それぞれが個々に組み込まれたかのように、これらの全体が参照により組み込まれる。本開示に対する様々な予測できない改変及び変更が、本開示の範囲及び趣旨を逸脱することなく、当業者には明らかとなるであろう。本開示は、本明細書に記載の例示的な実施形態及び実施例によって不当に限定されることを意図するものではないこと、並びにこのような実施例及び実施形態は、以下のような本明細書に記載の特許請求の範囲によってのみ限定されることを意図した本開示の範囲内の例示としてのみ提示されることを理解されたい。
【国際調査報告】
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