(57)【要約】プログラム死１（ＰＤ−１）に特異的に結合し、ＰＤ−１の発現及び／または活性を調節するタンパク質を使用した、自己免疫疾患などの免疫障害を管理、治療、または予防するための方法が本明細書に提供される。【選択図】図１
2019531284.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における免疫障害を管理、予防、または治療する方法であって、
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域及び配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体によって認識されるヒトＰＤ−１のエピトープに結合するか、または
（ｂ）ヒトＰＤ−１への結合について、配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域及び配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体と競合する、治療有効量の抗体またはその抗原結合断片を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
対象における免疫障害を管理、予防、または治療する方法であって、ＰＤ−１に結合する治療有効量の抗体またはその抗原結合断片を前記対象に投与することを含み、前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）表１に示される抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のうちのいずれか１つの軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）、及び／または
（ｂ）表２に示される抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のうちのいずれか１つの重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、前記方法。
【請求項３】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）表３に示される抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のうちのいずれか１つの軽鎖可変領域（ＶＬ）フレームワーク１（ＦＲ１）、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４をさらに含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）、及び／または
（ｂ）表４に示される抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のうちのいずれか１つの重鎖可変領域（ＶＨ）フレームワーク１（ＦＲ１）、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４をさらに含む、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１、２、及び３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７、２、及び３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３が、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項２０】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域またはそのバリアントを含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ  Ｆｃ領域を含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号３６〜４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖Ｆｃ領域を含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域をさらに含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域、及び
（ｂ）配列番号３６〜４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖Ｆｃ領域を含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び
（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び
（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び
（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び
（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
ＰＤ−１に結合したとき、前記抗体または抗原結合断片が、配列番号４２のアミノ酸配列内の残基１００〜１０９のうちの少なくとも１つに結合する、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
ＰＤ−１に結合したとき、前記抗体または抗原結合断片が、配列番号４２のアミノ酸配列内の残基１００〜１０５のうちの少なくとも１つに結合する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ＰＤ−１に結合したとき、前記抗体または抗原結合断片が、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される少なくとも１つの残基に結合する、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
ＰＤ−１に結合したとき、前記抗体または抗原結合断片が、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３に結合する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
ＰＤ−１に結合したとき、前記抗体または抗原結合断片が、配列番号４２のアミノ酸配列内のＴ５１に結合する、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
ＰＤ−１に結合したとき、前記抗体または抗原結合断片が、配列番号４２のアミノ酸配列内のＳ５７に結合する、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
ＰＤ−１に結合したとき、前記抗体または抗原結合断片が、配列番号４２のアミノ酸配列内のＬ１００に結合する、請求項３７に記載の方法。
【請求項４２】
ＰＤ−１に結合したとき、前記抗体または抗原結合断片が、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ１０２に結合する、請求項３７に記載の方法。
【請求項４３】
ＰＤ−１に結合したとき、前記抗体または抗原結合断片が、配列番号４２のアミノ酸配列内のＧ１０３に結合する、請求項３７に記載の方法。
【請求項４４】
ＰＤ−１に結合したとき、前記抗体または抗原結合断片が、配列番号４２のアミノ酸配列内のＲ１０４に結合する、請求項３７に記載の方法。
【請求項４５】
ＰＤ−１に結合したとき、前記抗体または抗原結合断片が、配列番号４２のアミノ酸配列内のＤ１０５に結合する、請求項３７に記載の方法。
【請求項４６】
ＰＤ−１に結合したとき、前記抗体または抗原結合断片が、配列番号４２のアミノ酸配列内のＨ１０７に結合する、請求項３７に記載の方法。
【請求項４７】
ＰＤ−１に結合したとき、前記抗体または抗原結合断片が、配列番号４２のアミノ酸配列内のＳ１０９に結合する、請求項３７に記載の方法。
【請求項４８】
ＰＤ−１に結合したとき、前記抗体または抗原結合断片が、配列番号４２のアミノ酸配列内のＧ１０３及びＲ１０４に結合する、請求項３７に記載の方法。
【請求項４９】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）Ｔ細胞活性を減弱化し、及び／または
（ｂ）Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現を下方制御する、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記Ｔ細胞活性の減弱化が、サイトカイン産生の阻害によって測定される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記抗体またはその抗原結合断片によって阻害される前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記サイトカインがＩＬ−１である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記サイトカインがＩＬ−２である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
前記サイトカインがＩＬ−６である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
前記サイトカインがＩＬ−１２である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５６】
前記サイトカインがＩＬ−１７である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５７】
前記サイトカインがＩＬ−２２である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５８】
前記サイトカインがＩＬ−２３である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５９】
前記サイトカインがＧＭ−ＣＳＦである、請求項５１に記載の方法。
【請求項６０】
前記サイトカインがＴＮＦ−αである、請求項５１に記載の方法。
【請求項６１】
前記サイトカインがＩＦＮ−γである、請求項５１に記載の方法。
【請求項６２】
前記Ｔ細胞活性の減弱化が、Ｔ細胞増殖の阻害によって測定される、請求項４９〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記Ｔ細胞活性の減弱化が、Ｔ細胞の表面での阻害受容体の発現の上方制御によって測定され、前記阻害受容体が、ＰＤ−１ではない、請求項４９に記載の方法。
【請求項６４】
前記阻害受容体が、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、及びＴＩＭ−３からなる群から選択される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記Ｔ細胞活性の減弱化が、Ｔ細胞リコール応答の阻害によって測定される、請求項４９に記載の方法。
【請求項６６】
前記Ｔ細胞活性の減弱化が、Ｔ細胞疲弊の増加によって測定される、請求項４９に記載の方法。
【請求項６７】
前記Ｔ細胞活性の減弱化が、制御性Ｔ細胞の増加によって測定される、請求項４９に記載の方法。
【請求項６８】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＰＤ−１及び／またはサルＰＤ−１に特異的に結合するが、齧歯類ＰＤ−１にはしない、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記抗体またはその抗原結合断片が、減弱化されたＡＤＣＣ活性及び／または減弱化されたＣＤＣ活性を有する、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の前記下方制御が、
（ａ）前記抗体またはその抗原結合断片での治療の４時間後に早ければ生じ、及び／または
（ｂ）サイトカイン阻害と同時もしくはそれに先立つ、請求項４９に記載の方法。
【請求項７１】
精製されたヒトＰＤ−１に結合するＫＤが、約１００ｐＭ〜約１０ｎＭであり、細胞表面に発現されたヒトＰＤ−１及び細胞表面に発現されたサルＰＤ−１に結合するＫＤが、約１００ｐＭ〜約１０ｎＭである、請求項６８に記載の方法。
【請求項７２】
Ｔ細胞活性を減弱化するためのＥＣ５０が、約１ｐＭ〜約１０ｐＭ、約１０ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１００ｐＭ〜約１ｎＭ、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ、または約１０ｎＭ〜約１００ｎＭである、請求項４９に記載の方法。
【請求項７３】
Ｔ細胞活性の最大減弱化パーセントが、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１００％である、請求項４９に記載の方法。
【請求項７４】
ＰＤ−１発現の最大下方制御パーセントが、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１００％である、請求項４９に記載の方法。
【請求項７５】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
前記抗体が、ヒト化抗体、ヒト抗体、またはキメラ抗体である、請求項１〜７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記ヒト化抗体が、脱免疫化抗体または複合ヒト抗体である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、または抗体断片から形成された多重特異性抗体である、請求項１〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
前記抗体またはその抗原結合断片が、薬剤に複合体化されている、請求項１〜７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
前記薬剤が、放射性同位体、金属キレート剤、酵素、蛍光化合物、生物発光化合物、及び化学発光化合物からなる群から選択される、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記抗体またはその抗原結合断片が、薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１〜８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
前記免疫障害が炎症性疾患である、請求項１〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記免疫障害が過敏性疾患である、請求項１〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記過敏性疾患が、アレルギー、アトピー性皮膚炎、及び過敏性血管炎からなる群から選択される、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記過敏性疾患がアレルギーである、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記過敏性疾患がアトピー性皮膚炎である、請求項８４に記載の方法。
【請求項８７】
前記過敏性疾患が過敏性血管炎である、請求項８４に記載の方法。
【請求項８８】
前記免疫障害が自己免疫疾患である、請求項１〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記自己免疫疾患が、リウマチ性関節炎、クローン病、乾癬、乾癬性関節炎、多発性硬化症、狼瘡、強直性脊椎炎、Ｉ型糖尿病、シェーグレン症候群、潰瘍性大腸炎、視神経脊髄炎、セリアック病、強皮症、及び側頭動脈炎からなる群から選択される、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記自己免疫疾患がリウマチ性関節炎である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記自己免疫疾患がクローン病である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
前記自己免疫疾患が乾癬である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９３】
前記自己免疫疾患が乾癬性関節炎である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９４】
前記自己免疫疾患が多発性硬化症である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９５】
前記自己免疫疾患が狼瘡である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９６】
前記自己免疫疾患が強直性脊椎炎である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９７】
前記自己免疫疾患がＩ型糖尿病である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９８】
前記自己免疫疾患がシェーグレン症候群である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９９】
前記自己免疫疾患が潰瘍性大腸炎である、請求項８９に記載の方法。
【請求項１００】
前記自己免疫疾患が視神経脊髄炎である、請求項８９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記自己免疫疾患がセリアック病である、請求項８９に記載の方法。
【請求項１０２】
前記自己免疫疾患が側頭動脈炎である、請求項８９に記載の方法。
【請求項１０３】
前記自己免疫疾患が強皮症である、請求項８９に記載の方法。
【請求項１０４】
前記狼瘡が全身性エリテマトーデスである、請求項９５に記載の方法。
【請求項１０５】
前記狼瘡が皮膚エリテマトーデスである、請求項９５に記載の方法。
【請求項１０６】
前記狼瘡がループス腎炎である、請求項９５に記載の方法。
【請求項１０７】
前記炎症性疾患がブドウ膜炎である、請求項８２に記載の方法。
【請求項１０８】
前記対象における免疫細胞がＰＤ−１を発現する、請求項１〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年９月１９日に出願された米国仮特許出願第６２／３９６，７３６号に対する優先権の利益を主張するものであり、その開示は、その全体において参照
により本明細書に組み込まれる。
技術分野
プログラム死１（ＰＤ−１）に特異的に結合し、ＰＤ−１の発現及び／または活性を調節するタンパク質を使用して、自己免疫疾患などの免疫障害ならびに炎症性障害を管理、治療、または予防するための方法が本明細書に提供される。
【発明の概要】
【０００２】
本開示は、ＰＤ−１に結合する抗体などの結合タンパク質を含む、ＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１、配列番号４３）に結合する治療有効量のタンパク質を対象に投与することを含む対象における免疫障害を管理、予防、または治療する方法を提供する。抗体を含むそのような結合タンパク質は、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１断片、及び／またはＰＤ−１エピトープに結合し得る。抗体を含むそのような結合タンパク質は、アゴニスト（例えば、ＰＤ−１リガンド様シグナル伝達を誘発する）であり得る。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、ＰＤ−１（例えば、非ブロッキング抗体）との相互作用について、ＰＤ−１リガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２）と競合しない。
【０００３】
本開示はまた、ある特定の実施形態では、（ｉ）ヒトＰＤ−１に結合し、（ｉｉ）ＰＤ−１リガンド様シグナル伝達を誘発し、（ｉｉｉ）ＰＤ−１との相互作用についてＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２と競合しない、抗体またはその断片を含む治療有効量の結合タンパク質を対象に投与することを含む対象における免疫障害を管理、予防、または治療する方法を提供する。
【０００４】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法における使用のための結合タンパク質（例えば、抗ＰＤ−１抗体）は、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）または６つ未満のＣＤＲを含む。他の実施形態では、結合タンパク質（例えば、抗ＰＤ−１抗体）は、重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３から選択される、１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、結合タンパク質（例えば、抗ＰＤ−１抗体）は、本明細書に記載されるようにＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６、またはそれらのヒト化バリアントとして示されるモノクローナル抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３から選択される、１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、結合タンパク質（例えば、抗ＰＤ−１抗体）は、ヒト免疫グロブリンアミノ酸配列またはそのバリアントのＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、ＶＨ  ＦＲ４、ＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及び／またはＶＬ  ＦＲ４を含む、骨格領域またはフレームワーク領域（ＦＲ）をさらに含む。
【０００５】
本方法のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域及び配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体によって認識されるヒトＰＤ−１のエピトープに結合する。
【０００６】
本方法の他の実施形態では、抗体またはその抗体断片は、配列番号８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域及び配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体を有するヒトＰＤ−１のエピトープに結合する。
【０００７】
本方法のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、表１に示される抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６のうちのいずれか１つのＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０００８】
本方法の他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、表２に示される抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６のうちのいずれか１つのＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨを含む。
【０００９】
本方法のさらなる他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）表３に示される抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６のうちのいずれか１つのＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４を含むＶＬ、及び
（ｂ）表４に示される抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６のうちのいずれか１つのＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４を含むＶＨを含む。
【００１０】
本方法のある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１、２、及び３のアミノ酸配列を含み、抗体またはその抗原結合断片のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含む。
【００１１】
本方法のさらなる別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号７、２、及び３のアミノ酸配列を含み、抗体またはその抗原結合断片のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４、５、及び６のアミノ酸配列を含む。
【００１２】
本方法の別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、１つ以上のその保存的修飾を含む。
【００１３】
本方法のある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、１つ以上のその保存的修飾を含む。
【００１４】
本方法のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、１つ以上のその保存的修飾を含む。
【００１５】
本方法のある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、１つ以上のその保存的修飾を含む。
【００１６】
本方法の他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、１つ以上のその保存的修飾を含む。
【００１７】
本方法の別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸配列は、１つ以上のその保存的修飾を含む。
【００１８】
本方法のある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００１９】
本方法のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００２０】
本方法の他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００２１】
本方法の一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００２２】
本方法の別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００２３】
本方法のある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００２４】
本方法のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００２５】
本方法の他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬ、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００２６】
本方法のある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ、及び（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。
【００２７】
いくつかの実施形態では、ＶＬのアミノ酸配列は、１つ以上のその保存的修飾を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨのアミノ酸配列は、１つ以上のその保存的修飾を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ及びＶＨのアミノ酸配列は、１つ以上のその保存的修飾を含む。
【００２８】
本方法のいくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、バリアントヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む。
【００２９】
本方法の一実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ  Ｆｃ領域を含む。
【００３０】
本方法のいくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、バリアントヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域を含む。
【００３１】
本方法の別の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ４Ｐ  Ｆｃ領域を含む。
【００３２】
本方法のさらなる別の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ４ＰＥ  Ｆｃ領域を含む。
【００３３】
本方法のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域をさらに含む。
【００３４】
本方法の他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片が、配列番号３６〜４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖Ｆｃ領域をさらに含む。
【００３５】
本方法のさらなる別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域、及び配列番号３６〜４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖Ｆｃ領域をさらに含む。
【００３６】
本方法のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００３７】
本方法の別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００３８】
本方法の他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００３９】
本方法のある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４０】
本方法の他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４１】
本方法の一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４２】
本方法のさらなる別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４３】
本方法のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４４】
本方法の他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００４５】
本方法のある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列を有する残基１００〜１０９のうちの少なくとも１つに結合する。
【００４６】
本方法のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列を有する残基１００〜１０５のうちの少なくとも１つに結合する。
【００４７】
本方法の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される少なくとも１つの残基に結合する。
【００４８】
本方法のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される２つ以上の残基に結合する。
【００４９】
本方法の他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される３つ以上の残基に結合する。
【００５０】
本方法のある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される４つ以上の残基に結合する。
【００５１】
本方法の一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される５つ以上の残基に結合する。
【００５２】
本方法の別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される６つ以上の残基に結合する。
【００５３】
本方法のさらなる別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される７つ以上の残基に結合する。
【００５４】
本方法のさらなる別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される８つ以上の残基に結合する。
【００５５】
本方法のある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される９つ以上の残基に結合する。
【００５６】
本方法の他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される１０個すべての残基に結合する。
【００５７】
本方法の一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３に結合する。
【００５８】
本方法の別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＴ５１に結合する。
【００５９】
本方法の特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＳ５７に結合する。
【００６０】
本方法の１つの特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＬ１００に結合する。
【００６１】
本方法のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ１０２に結合する。
【００６２】
本方法の他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＧ１０３に結合する。
【００６３】
本方法の別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＲ１０４に結合する。
【００６４】
本方法のさらなる別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＧ１０３及びＲ１０４に結合する。
【００６５】
本方法のさらなる別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＤ１０５に結合する。
【００６６】
本方法のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＨ１０７に結合する。
【００６７】
本方法のある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＳ１０９に結合する。
【００６８】
本方法の一実施形態では、ヒトＰＤ−１のエピトープは、ＰＤ−Ｌ１結合部位とは異なる。別の実施形態では、ヒトＰＤ−１のエピトープは、ＰＤ−Ｌ２結合部位とは異なる。特定の実施形態では、ヒトＰＤ−１のエピトープは、ＰＤ−Ｌ１結合部位及びＰＤ−Ｌ２結合部位の両方とは異なる。
【００６９】
本方法の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＰＤ−１及び／またはサルＰＤ−１（例えば、カニクイザル）に特異的に結合するが、齧歯類ＰＤ−１にはしない。
【００７０】
本方法のある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、減弱化された抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）活性を有する。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、減弱化された補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）活性を有する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、減弱化されたＡＤＣＣ及び／または減弱化されたＣＤＣ活性を有する。
【００７１】
一態様では、対象における免疫障害を管理、予防、または治療する方法が本明細書に提供され、ヒトＰＤ−１のエピトープに結合する治療有効量の抗体またはその抗原結合断片を対象に投与することを含み、抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）Ｔ細胞活性を減弱化し、及び／または（ｂ）Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現を下方制御する。
【００７２】
本方法の一実施形態では、抗体は、Ｔ細胞活性を減弱化する。別の実施形態では、抗体は、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現を下方制御する。
【００７３】
ある特定の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、Ｔ細胞エフェクター機能によって測定される。
【００７４】
本方法のいくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、サイトカイン産生の阻害によって測定される。
【００７５】
本方法のある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片によって阻害されるサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、及び／またはＩＦＮ−γを含む。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１である。いくつかの実施形態では、サイトカインはＩＬ−２である。他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−６である。別の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１２である。いくつかの他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１７である。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−２２である。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−２３である。いくつかの実施形態では、サイトカインはＧＭ−ＣＳＦである。他の実施形態では、サイトカインはＩＦＮ−γである。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＴＮＦ−αである。ある特定の実施形態では、サイトカインはＩＬ−２及びＩＬ−１７である。いくつかの実施形態では、サイトカインはＩＬ−２及びＩＦＮ−γである。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１７及びＩＦＮ−γである。さらなる他の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、及びＩＦＮ−γである。上記に記述のサイトカインのうちの２つ、３つ、またはそれ以上の他の組み合わせが企図される。
【００７６】
本方法のいくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、Ｔ細胞増殖の阻害によって測定される。
【００７７】
本方法のある特定の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、Ｔ細胞の表面での阻害受容体の発現の上方制御によって測定され、阻害受容体はＰＤ−１ではない。いくつかの実施形態では、阻害受容体は、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、及びＴＩＭ−３からなる群から選択される。１つの特定の実施形態では、阻害受容体はＬＡＧ−３である。別の特定の実施形態では、阻害受容体はＣＴＬＡ−４である。さらなる別の特定の実施形態では、阻害受容体はＴＩＭ−３である。
【００７８】
本方法のいくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、Ｔ細胞リコール応答の阻害によって測定される。
【００７９】
本方法のある特定の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、Ｔ細胞疲弊の増加によって測定される。
【００８０】
本方法のいくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、Ｔ細胞活性化マーカーの下方制御によって測定される。
【００８１】
本方法のいくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、制御性Ｔ細胞バイオマーカーの上方制御によって測定される。
【００８２】
本方法のいくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、制御性Ｔ細胞数の増加によって測定される。
【００８３】
本方法のある特定の実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後に早ければ生じる。別の実施形態では、下方制御は、接触の６時間後に早ければ生じる。さらなる別の実施形態では、下方制御は、接触の８時間後に早ければ生じる。さらなる別の実施形態では、下方制御は、接触の１０時間後に早ければ生じる。一実施形態では、下方制御は、接触の１２時間後に早ければ生じる。別の実施形態では、下方制御は、接触の１４時間後に早ければ生じる。さらなる別の実施形態では、下方制御は、接触の１６時間後に早ければ生じる。さらなる別の実施形態では、下方制御は、接触の１８時間後に早ければ生じる。一実施形態では、下方制御は、接触の２０時間後に早ければ生じる。別の実施形態では、下方制御は、接触の２２時間後に早ければ生じる。さらなる別の実施形態では、下方制御は、接触の２４時間後に早ければ生じる。いくつかの実施形態では、接触は、抗体を伴う。他の実施形態では、接触は、その抗原結合断片を伴う。
【００８４】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、サイトカイン阻害に先立つ。一実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。一実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。一実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。
【００８５】
他の実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、サイトカイン阻害と同時である。一実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。一実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。一実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。
【００８６】
さらなる他の実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、サイトカイン阻害の後である。一実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。一実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。一実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。
【００８７】
本方法の一実施形態では、精製されたヒトＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合断片のＫＤは、約１ｎＭ〜約１００ｎＭである。本方法の別の実施形態では、細胞表面に発現されたヒトＰＤ−１及び細胞表面に発現されたサルＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合断片のＫＤは、約１００ｐＭ〜約１０ｎＭである。
【００８８】
本方法のいくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性を減弱化するための抗体またはその抗原結合断片のＥＣ５０は、約１ｐＭ〜約１０ｐＭ、約１０ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１００ｐＭ〜約１ｎＭ、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ、または約１０ｎＭ〜約１００ｎＭである。
【００８９】
本方法の他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片によるＴ細胞活性の最大減弱化パーセントは、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１００％である。
【００９０】
本方法の別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方制御パーセントは、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１００％である。
【００９１】
本方法のある特定の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体、ヒト抗体、またはキメラ抗体である。別の実施形態では、ヒト化抗体は、脱免疫化抗体または複合ヒト抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。特定の実施形態では、抗体は、ヒトＰＤ−１に特異的に結合するヒト化抗体である。
【００９２】
本方法のある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、またはテトラボディである。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、抗体断片から形成された多重特異性抗体である。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、二重特異性抗体である。
【００９３】
本方法のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、薬剤に複合体化されている。一実施形態では、薬剤は、放射性同位体、金属キレート剤、酵素、蛍光化合物、生物発光化合物、または化学発光化合物である。
【００９４】
本方法の別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞活性を減弱化する。一実施形態では、Ｔ細胞活性の最大減弱化パーセントは、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１００％である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、Ｔ細胞増殖の阻害によって測定される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、サイトカイン産生の阻害によって測定される。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１である。いくつかの実施形態では、サイトカインはＩＬ−２である。他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−６である。別の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１２である。いくつかの他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１７である。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−２２である。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−２３である。いくつかの実施形態では、サイトカインはＧＭ−ＣＳＦである。他の実施形態では、サイトカインはＩＦＮ−γである。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＴＮＦ−αである。ある特定の実施形態では、サイトカインはＩＬ−２及びＩＬ−１７である。いくつかの実施形態では、サイトカインはＩＬ−２及びＩＦＮ−γである。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１７及びＩＦＮ−γである。さらなる他の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、及びＩＦＮ−γである。上記に記述のサイトカインのうちの２つ、３つ、またはそれ以上の他の組み合わせが企図される。ある特定の実施形態では、サイトカイン産生の阻害は、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御に続く。他の実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、または２４時間後に早ければ生じる。一実施形態では、下方制御は、接触の４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。一実施形態では、下方制御は、接触の６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。一実施形態では、下方制御は、接触の８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。一実施形態では、下方制御は、接触の１０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。別の実施形態では、下方制御は、接触の１２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。実施形態では、下方制御は、接触の１４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。他の実施形態では、下方制御は、接触の１６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。一実施形態では、下方制御は、接触の１８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。��の実施形態では、下方制御は、接触の２０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。一実施形態では、下方制御は、接触の２２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。いくつかの実施形態では、下方制御は、接触の２４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。いくつかの実施形態では、サイトカイン産生の阻害は、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御と同時である。一実施形態では、下方制御は、接触の４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。一実施形態では、下方制御は、接触の６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。一実施形態では、下方制御は、接触の８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。一実施形態では、下方制御は、接触の１０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。別の実施形態では、下方制御は、接触の１２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。実施形態では、下方制御は、接触の１４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。他の実施形態では、下方制御は、接触の１６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。一実施形態では、下方制御は、接触の１８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。別の実施形態では、下方制御は、接触の２０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。一実施形態では、下方制御は、接触の２２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。いくつかの実施形態では、下方制御は、接触の２４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。いくつかの実施形態では、サイトカイン産生の阻害は、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御に先立つ。一実施形態では、下方制御は、接触の４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。一実施形態では、下方制御は、接触の６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。一実施形態では、下方制御は、接触の８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。一実施形態では、下方制御は、接触の１０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。別の実施形態では、下方制御は、接触の１２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。実施形態では、下方制御は、接触の１４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。他の実施形態では、下方制御は、接触の１６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。一実施形態では、下方制御は、接触の１８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。別の実施形態では、下方制御は、接触の２０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。一実施形態では、下方制御は、接触の２２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。いくつかの実施形態では、下方制御は、接触の２４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。
【００９５】
本方法のさらなる別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現を下方制御する。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片によるＰＤ−１発現の最大下方制御パーセントは、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％である。別の実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後に早ければ生じる。一実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、サイトカイン阻害に先立つ。一実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、サイトカイン阻害と同時である。一実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、サイトカイン阻害に続く。ある特定の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ、またはそれらの任意の組み合わせである。ある特定の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１である。いくつかの実施形態では、サイトカインはＩＬ−２である。他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−６である。別の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１２である。他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１７である。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−２２である。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−２３である。いくつかの実施形態では、サイトカインはＧＭ−ＣＳＦである。他の実施形態では、サイトカインはＩＦＮ−γである。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＴＮＦ−αである。ある特定の実施形態では、サイトカインはＩＬ−２及びＩＬ−１７である。いくつかの実施形態では、サイトカインはＩＬ−２及びＩＦＮ−γである。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１７及びＩＦＮ−γである。さらなる他の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、及びＩＦＮ−γである。
【００９６】
本方法の別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、サイトカイン産生を阻害することによってＴ細胞活性を減弱化する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片によって阻害されるサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ、またはそれらの任意の組み合わせから選択される。ある特定の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１である。いくつかの実施形態では、サイトカインはＩＬ−２である。他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−６である。別の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１２である。他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１７である。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−２２である。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−２３である。いくつかの実施形態では、サイトカインはＧＭ−ＣＳＦである。他の実施形態では、サイトカインはＩＦＮ−γである。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＴＮＦ−αである。ある特定の実施形態では、サイトカインはＩＬ−２及びＩＬ−１７である。いくつかの実施形態では、サイトカインはＩＬ−２及びＩＦＮ−γである。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１７及びＩＦＮ−γである。さらなる他の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、及びＩＦＮ−γである。上記に記述のサイトカインのうちの２つ、３つ、またはそれ以上の他の組み合わせが企図される。
【００９７】
また、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む治療有効量の組成物を対象に投与することを含む、対象における免疫障害を管理、予防、または治療する方法が本明細書に提供される。本方法のある特定の実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む。
【００９８】
本開示は、本明細書に記載の治療有効量の抗体またはその抗原結合断片を対象に投与することを含む、対象における免疫障害を管理、予防、または治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、免疫障害は、炎症性疾患である。一実施形態では、炎症性疾患は、ブドウ膜炎である。他の実施形態では、免疫障害は、過敏性疾患である。一実施形態では、過敏性疾患は、Ｔ細胞過敏性疾患である。さらなる他の実施形態では、免疫障害は、自己免疫疾患である。
【００９９】
ある特定の実施形態では、過敏性疾患は、アレルギー、アトピー性皮膚炎、または過敏性血管炎である。一実施形態では、過敏性疾患は、アレルギーである。他の実施形態では、過敏性疾患は、アトピー性皮膚炎である。さらなる他の実施形態では、過敏性疾患は、過敏性血管炎である。
【０１００】
ある特定の実施形態では、免疫障害は、自己免疫疾患である。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、リウマチ性関節炎、クローン病、乾癬、乾癬性関節炎、多発性硬化症、狼瘡、強直性脊椎炎、Ｉ型糖尿病、シェーグレン症候群、潰瘍性大腸炎、視神経脊髄炎、セリアック病、強皮症、及び側頭動脈炎からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、狼瘡は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、皮膚エリテマトーデス（ＣＬＥ）、またはループス腎炎である。一実施形態では、自己免疫疾患は、リウマチ性関節炎である。別の実施形態では、自己免疫疾患は、クローン病である。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、乾癬である。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、多発性硬化症である。別の実施形態では、自己免疫疾患は、強直性脊椎炎である。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、Ｉ型糖尿病である。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、シェーグレン症候群である。さらなる実施形態では、自己免疫疾患は、潰瘍性大腸炎である。別の実施形態では、自己免疫疾患は、視神経脊髄炎である。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、セリアック病である。一実施形態では、自己免疫疾患は、側頭動脈炎である。別の実施形態では、自己免疫疾患は、強皮症である。一実施形態では、自己免疫疾患は、狼瘡である。一実施形態では、自己免疫疾患は、ＳＬＥである。別の実施形態では、自己免疫疾患は、ＣＬＥである。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、ループス腎炎である。
【０１０１】
ある特定の実施形態では、対象は、自己免疫疾患を有するか、または抗炎症性治療で自己免疫疾患を治療される。
【０１０２】
特定の他の実施形態では、対象の免疫細胞は、ＰＤ−１を発現する。
【図面の簡単な説明】
【０１０３】
【図１】図１Ａ及び図１Ｂは、抗ＰＤ−１抗体（ＰＤ１ＡＢ）を減弱化するＴ細胞が、ＰＤ−１：（Ａ）ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、及びＰＤ１ＡＢ−６、（Ｂ）ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、及びＰＤ１ＡＢ−５に結合するＰＤ−Ｌ１（ＰＤ−Ｌ１−ＤｙＬ６５０は、染料ＤｙＬ６５０と複合体化されたＰＤ−Ｌ１を示す）と競合しないことを示す。アンタゴニスト抗体であるＭＤＸ  ４Ｈ１は、ＰＤ−１に結合するＰＤ−Ｌ１をブロックする。
【０１０４】
【図２】ＰＤ−１：ＰＤ１ＡＢ−６  Ｆａｂ相互作用部位が、ＰＤ−１：ＰＤ−Ｌ１相互作用部位に対してＰＤ−１の遠位側にあることを示す。
【０１０５】
【図３】ＰＤ１ＡＢ−６  Ｆａｂが、ＰＤ−１  βシートに対して結合し、ＰＤ−１ループで形成される実質的な相互作用が残基１００〜１０５から構成されることを示す。
【０１０６】
【図４】ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１の重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）、ならびにそのバリアントＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３及びＰＤ１ＡＢ−６−４ＰのＨＣのアミノ酸配列を示す。
【０１０７】
【図５】図５Ａ及び図５Ｂは、ＣＨＯ細胞上に発現されたカニクイザル（Ａ）またはヒト（Ｂ）ＰＤ−１のＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１親和性を示す。
【０１０８】
【図６】ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、アイソタイプ対照、及びヒトＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ融合タンパク質（ｈＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ）の、ＣＤ４＋Ｔ細胞上にゲーティングされた活性化ヒトＰＢＭＣへの結合を示す。
【０１０９】
【図７】ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、アイソタイプ対照、及びヒトＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ融合タンパク質（ｈＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ）の、ＣＤ４＋Ｔ細胞上にゲーティングされた活性化カニクイザルＰＢＭＣへの結合を示す。
【０１１０】
【図８】図８Ａ〜図８Ｄは、Ｃｉｓｂｉｏ  Ｔａｇ−ｌｉｔｅ（商標）検出を使用してＨＥＫ２９３細胞上に発現されたＦｃγＲＩ（Ａ）、ＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ１５８）（Ｂ）、またはＦｃγＲＩＩｂ（Ｃ）に結合するＰＤ１ＡＢ−６バリアント、及びＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ１５８）、またはＦｃγＲＩＩｂに結合するＰＤ１ＡＢ−６バリアントの（Ｄ）ＥＣ５０値を示す。
【０１１１】
【図９】図９Ａ〜図９Ｃは、ＦＡＣＳを使用してＣＨＯ細胞上に発現されたＦｃγＲＩＩＩａ（Ｖ１５８）（Ａ）またはＦｃγＲＩ（Ｂ）に結合するＰＤ１ＡＢ−６バリアント、及び（Ｃ）ＦｃγＲＩまたはＦｃγＲＩＩＩａを結合するＰＤ−１抗体バリアントのＥＣ５０値を示す。
【０１１２】
【図１０】図１０Ａ及び図１０Ｂは、４人の個体の健康なドナーのうちの２人の代表者：（Ａ）ドナー７及び（Ｂ）ドナー８における、ＰＤ１ＡＢ−６バリアント及び対照ヒトＩｇＧ１  ＦｃのＡＤＣＣ活性を示す。
【０１１３】
【図１１】ＰＤ１ＡＢ−６バリアントのＣＤＣ活性を示す。データは、３つの独立した実験の代表である：（ｉ）ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１及び抗ヒトＣＤ２０  ＩｇＧ１のＣＤＣ活性、（ｉｉ）ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１及びＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３のＣＤＣ活性、（ｉｉｉ）ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐ及び商用のヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体及びヒトＩｇＧ１  Ｆｃタンパク質のＣＤＣ活性。
【０１１４】
【図１２】刺激後２４時間で培養上清中のＩＬ−２レベルによって測定された、ヒトＰＢＭＣアッセイにおけるＰＤ１ＡＢ−６バリアントの強力な減弱活性を示す。
【０１１５】
【図１３】ヒト全血アッセイにおけるＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３の活性を示す。グラフは、ＩＦＮ−γ阻害のＥＣ５０を計算するために使用されるドナー４からの代表曲線を示す。表は、ＰＤ１ＡＢ−６バリアント及びＣＴＬＡ４Ｉｇを有する４人の健康なドナーのＩＦＮ−γ阻害のＥＣ５０値を示す。
【０１１６】
【図１４】図１４Ａ〜図１４Ｃは、（Ａ）４８時間抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８で活性化されたヒトＰＢＭＣにおけるＣＤ３＋Ｔ細胞上のアイソタイプ対ＰＤ−１染色、（Ｂ）ＰＢＭＣ（検出抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−６によってブロックされていない）を治療した、アイソタイプＩｇＧ１対ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１におけるＰＤ−１発現、ならびに（Ｃ）抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８で活性化された３人の異なるドナーからのヒトＰＢＭＣにおけるＣＤ３＋Ｔ細胞上でのＰＤ−１発現、及びアイソタイプＩｇＧ１またはＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１のいずれかの３つの異なる濃度によって測定した場合のＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１によるＰＤ−１発現の下方制御を示す。
【０１１７】
【図１５】図１５Ａ〜図１５Ｃは、（Ａ）ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、（Ｂ）ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐ、及び（Ｃ）Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００上でＰＤ−１抗原に結合するＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３を示す。
【０１１８】
【図１６】ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１が、３人の異なるドナーからのＰＢＭＣにおける同様のＩＣ５０値でＣＤ４＋Ｔ細胞の破傷風リコール応答を阻害したことを示す。
【０１１９】
【図１７】図１７Ａ及び図１７Ｂは、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３が、自己免疫疾患の患者からの全血液試料中のＩＦＮ−γ（Ａ）及びＩＬ−１７（Ｂ）の分泌をブロックしたことを示す。
【０１２０】
【図１８】ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３が、疲弊していないＩＬ−７ＲｈｉＣＤ８＋Ｔ細胞を低減したことを示す。
【０１２１】
【図１９Ａ】ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３が、（Ａ）単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を阻害したことを示す。
【図１９Ｂ】ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３が、（Ｂ）単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を阻害したことを示す。
【０１２２】
【図２０】ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１が、形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦ−β）の様々な濃度でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋誘発制御性Ｔ細胞を増加させたことを示す。
【０１２３】
【図２１】ＲＡ患者５の滑膜中の、濾胞形成におけるリンパ球中の強いＰＤ−１発現（左側パネル）及びリンパ系凝集体中の低いＰＤ−Ｌ１発現（右側パネル）を示す。
【０１２４】
【図２２】ＲＡ患者１の、関節中の結合組織におけるリンパ系凝集体中の稀なＰＤ−１＋リンパ球（左側パネル）及び同様の位置における稀なＰＤ−Ｌ１＋抗原提示細胞（右側パネル）を示す。
【０１２５】
【図２３】クローン病患者の腸内で、ＰＤ−１＋細胞が、濾胞中で優勢であり、深い粘膜固有層中で稀であり（左側パネル）、ＰＤ−Ｌ１が、粘膜固有層中の濾胞中ならびにマクロファージ及びリンパ球中で広く発現される（右側パネル）ことを示す。
【０１２６】
【図２４】クローン病の腸の試料の、潰瘍化領域に近い粘膜固有層を伴う稀なＰＤ−１＋リンパ球（左側パネル）及び同じ領域中の多数のＰＤ−Ｌ１＋マクロファージ（右側パネル）を示す（４０倍）。
【０１２７】
【図２５】図２５Ａ〜図２５Ｃは、（Ａ）クローン病、（Ｂ）リウマチ性関節炎（ＲＡ）、及び（Ｃ）乾癬のパイロット研究におけるＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１発現スコアを示す。
【０１２８】
【図２６】図２６Ａ及び図２６Ｂは、低減されたＣ１ｑ結合を有するＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３が、脾臓中の（Ａ）ｈＧＭ−ＣＳＦレベル及び（Ｂ）いくつかのヒトＣＤ４５＋細胞によって測定される場合、ＰＢＭＣ移植異種ＧｖＨＤモデル中のＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１分子と同様の阻害活性を有することを示す。
【０１２９】
【図２７】図２７Ａ及び図２７Ｂは、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３が、ＣＤ４＋Ｔ細胞移植異種ＧｖＨＤモデルにおいて血液（Ａ）及び脾臓（Ｂ）中のヒトＣＤ４５＋リンパ球生着を阻害したことを示す。
【０１３０】
【図２８】図２８Ａ〜図２８Ｃは、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３が、ＣＤ４＋Ｔ細胞移植異種−ＧｖＨＤモデルにおいてＧＭ−ＣＳＦ（Ａ）、ＴＮＦ−α（Ｂ）、及びＩＬ−１７（Ｃ）の分泌を阻害したことを示す。
【０１３１】
【図２９】図２９Ａ及び図２９Ｂは、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３が、サイトカインＧＭ−ＣＳＦ分泌（Ｂ）の阻害に先立つＰＤ−１発現（Ａ）の下方制御を誘発したことを示す。
【０１３２】
【図３０】図３０Ａ及び図３０Ｂは、ＩＬ−１７阻害（Ａ）及びＩＦＮ−γ阻害（Ｂ）によって例示される、ＰＤ−１発現のＰＤ１ＡＢ−６バリアント誘発性下方制御とサイトカイン分泌の阻害との間の相関関係を示す。
【０１３３】
【図３１】ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３のマウスの代用が、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデルにおいて疾患スコアを阻害したことを示す。
【０１３４】
【図３２】図３２Ａ及び図３２Ｂは、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３のマウスの代用が、ＥＡＥモデルにおいて２３日目に脾臓でのリコールアッセイにおいてＩＦＮ−γ分泌（Ａ）及びＩＬ−１７分泌（Ｂ）を阻害したことを示す。
【０１３５】
【図３３】４人の例示的なドナーからの精製されたＣＤ３＋Ｔ細胞及び全Ｂ細胞を使用した、インビトロＴ細胞／Ｂ細胞の共培養系におけるＣＤ２０＋ＣＤ３８−活性化Ｂリンパ球のＣＤ２０−ＣＤ３８＋形質芽細胞への分化を示す。
【０１３６】
【図３４】図３４Ａ〜図３４Ｃは、形質芽細胞数の低減（Ａ）、ＩｇＧ分泌（Ｂ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞／全Ｂ細胞共培養を活性化したＴ細胞受容体中のＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３によって誘発されたＩｇＭ表面発現（Ｃ）の百分率を示す。
【０１３７】
【図３５】図３５Ａ〜図３５Ｃは、形質芽細胞数の低減（Ａ）、ＩｇＧ分泌（Ｂ）、及びＣＤ３＋Ｔ細胞／全Ｂ細胞共培養を活性化したＴ細胞受容体中のＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ融合タンパク質によって誘発されたＩｇＭ表面発現（Ｃ）の百分率を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１３８】
ＰＤ−１に結合する抗体など有効量の結合タンパク質を対象に投与することを含む、対象における免疫障害を管理、予防、または治療する方法が本明細書に提供される。一実施形態では、有効量のＰＤ−１結合タンパク質を対象に投与することを含む、対象における免疫障害を管理、予防、または治療する方法が本明細書に提供される。一実施形態では、有効量のＰＤ−１結合タンパク質を対象に投与することを含む、対象における免疫障害を予防する方法が本明細書に提供される。一実施形態では、有効量のＰＤ−１結合タンパク質を対象に投与することを含む、対象における免疫障害を治療する方法が本明細書に提供される。特定の実施形態では、ＰＤ−１結合タンパク質は、ＰＤ−１に結合する抗体である。これらの方法において有用である例示的なＰＤ−１抗体が本明細書に提供される。
【０１３９】
本明細書に提供される様々な方法のいくつかの実施形態では、抗体は、ヒト及び／またはカニクイザルＰＤ−１に結合する。いくつかの実施形態では、ヒト及び／またはカニクイザルＰＤ−１に結合する抗体などの結合タンパク質は、齧歯類ＰＤ−１に結合しない。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される抗体を含むＰＤ−１結合タンパク質は、アゴニストである（例えば、ＰＤ−１リガンドＰＤ−１の効果を模倣し、シグナル伝達を誘発し得る）。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＰＤ−１に対する抗体など結合タンパク質は、（ｉ）ヒト及び／またはカニクイザルＰＤ−１に結合し、（ｉｉ）結合についてＰＤ−１リガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２）と競合せず、及び／または（ｉｉｉ）ＰＤ−１シグナル伝達を誘発する。一実施形態では、ＰＤ−１抗体は、ヒトＰＤ−１に結合する。一実施形態では、ＰＤ−１抗体は、カニクイザルＰＤ−１に結合する。一実施形態では、ＰＤ−１抗体は、ヒトＰＤ−１及びカニクイザルＰＤ−１の両方に結合する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１への結合についてＰＤ−Ｌ１と競合しない。他の実施形態では、ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１への結合についてＰＤ−Ｌ２と競合しない。さらなる他の実施形態では、ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１への結合についてＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２のいずれかと競合しない。他の実施形態では、ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１シグナル伝達を誘発する。特定の実施形態では、本明細書に提供されるＰＤ−１抗体は、ヒトＰＤ−１及びカニクイザルＰＤ−１の両方に結合し、ＰＤ−１への結合についてＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２のいずれかと競合せず、ＰＤ−１シグナル伝達を誘発する。いくつかの実施形態では、結合、競合、及び／またはシグナル伝達は、インビトロ、例えば、細胞に基づくアッセイで評価される。他の実施形態では、結合、競合、及び／またはシグナル伝達は、エクスビボ、例えば、Ｔ細胞機能アッセイで評価される。他の実施形態では、結合、競合、及び／またはシグナル伝達は、対象（例えば、ヒト対象）からの試料を使用して評価される。ある特定の実施形態では、アッセイ及び測定値は、（１）ヒトまたはカニクイザルＰＢＭＣアッセイ（例えば、実施例５．２．１及び５．２．２を参照されたい）、（２）ヒト全血試料アッセイ（例えば、実施例５．２．１及び５．４．２を参照されたい）、（３）破傷風トキソイド抗原（ＴＴＸ）リコールアッセイ（例えば、実施例５．４．１を参照されたい）、（４）Ｔ細胞阻害受容体の発現を測定すること（例えば、実施例５．４．３及び５．４．６を参照されたい）、（５）Ｔ細胞増殖を測定すること（例えば、実施例５．４．４を参照されたい）、及び（６）制御性Ｔ細胞の数を測定すること（例えば、実施例５．４．５を参照されたい）を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体などの結合タンパク質は、本明細書に記載されるように、ＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２の自然生物学的機能と一貫する活性を呈する。いくつかの実施形態では、活性は、インビトロで呈される。他の実施形態では、活性は、エクスビボで呈される。
【０１４０】
他の実施形態では、結合、競合及び／またはシグナル伝達は、インビボ、例えば、ヒトの疾患について異種移植片対宿主病（異種ＧｖＨＤ）モデルで評価される。特定の実施形態では、結合、競合及び／またはシグナル伝達は、動物疾患モデル（例えば、マウス疾患モデル）を使用して評価される。特定の実施形態では、結合、競合及び／またはシグナル伝達は、疾患モデル対象（例えば、マウス疾患モデル対象）からの試料を使用して評価される。ある特定の実施形態では、動物疾患モデル及びアッセイは、（１）異種ＧｖＨＤモデル（例えば、実施例５．５．１を参照されたい）、及び（２）ヒトＰＤ−１ノックイン（ＫＩ）マウスにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデル（例えば、実施例５．５．２を参照されたい）を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体などの結合タンパク質は、本明細書に記載されるように、ＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２の自然生物学的機能と一貫する活性を呈する。他の実施形態では、活性は、インビボで呈される。
【０１４１】
抗ＰＤ−１抗体を含む、そのような結合タンパク質がＰＤ−１シグナル伝達を誘発するという発見は、それらを免疫障害の治療のための様々な治療法にする。ある特定の実施形態では、免疫障害は、炎症性疾患である。一実施形態では、炎症性疾患は、ブドウ膜炎である。他の実施形態では、免疫障害は、過敏性疾患である。いくつかの実施形態では、過敏性疾患は、Ｔ細胞過敏性疾患である。ある特定の実施形態では、過敏性疾患は、アレルギーである。他の実施形態では、過敏性疾患は、アトピー性皮膚炎である。さらなる他の実施形態では、過敏性疾患は、過敏性血管炎である。いくつかの実施形態では、免疫障害は、自己免疫疾患である。一実施形態では、自己免疫疾患は、リウマチ性関節炎である。別の実施形態では、自己免疫疾患は、クローン病である。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、乾癬である。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、多発性硬化症である。別の実施形態では、自己免疫疾患は、強直性脊椎炎である。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、Ｉ型糖尿病である。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、シェーグレン症候群である。さらなる実施形態では、自己免疫疾患は、潰瘍性大腸炎である。別の実施形態では、自己免疫疾患は、視神経脊髄炎である。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、セリアック病である。一実施形態では、自己免疫疾患は、側頭動脈炎である。別の実施形態では、自己免疫疾患は、強皮症である。一実施形態では、自己免疫疾患は、狼瘡である。一実施形態では、自己免疫疾患は、ＳＬＥである。別の実施形態では、自己免疫疾患は、ＣＬＥである。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、ループス腎炎である。この発見はまた、抗ＰＤ−１抗体を含む開示される結合タンパク質を、任意の疾患、障害、またはＰＤ−１シグナル伝達（例えば、インビボまたはインビトロ）を模倣または増加させるために望ましい状態の幅広い治療のための様々な治療法にすることができる。
【０１４２】
本明細書に提供される様々な方法の特定の実施形態では、ＰＤ−１に結合する抗体など、本明細書に記載の結合タンパク質は、ＰＤ−１の結合のために互いに競合するという共通の特徴を共有する。この競合的阻害は、各抗体が、ＰＤ−１の同じ領域（例えば、同じエピトープ）に結合することを示し得、それによって同様の効果を主張する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、及び／またはＰＤ１ＡＢ−６に由来するか、またはそれらに基づくものなどのヒト化抗ＰＤ−１抗体を含む。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、結合について、ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、及び／またはＰＤ１ＡＢ−６に由来するか、またはそれらに基づく抗体と競合する。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、表１及び表２に記載される通りＣＤＲ配列を有する。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、特定のドメインまたはヒトＰＤ−１（例えば、残基１００〜１０５、実施例５．１．４を参照されたい）のエピトープに結合する。さらに、そのような結合は、領域内で特定のアミノ酸残基（例えば、Ｇ１０３及びＲ１０４、実施例５．１．４を参照されたい）に大いに起因し、それは、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体によって認識されるエピトープを含む。まとめると、本明細書に提供される結果は、表１及び表２に記載の１つ以上のＣＤＲを有する抗体を含む、ＰＤ１ＡＢ−６に由来するか、またはそれに基づく抗ＰＤ−１抗体について観察される効果が、同じまたは同様のエピトープ特異性（例えば、同じまたは同様のＣＤＲ）を有する本明細書に提供される他の抗ＰＤ−１抗体に外装され得ることを示す。例えば、例示的なヒト化抗ＰＤ−１抗体について、実施例５．１．２〜３、５．１．７〜１０、５．２．１〜３、５．３．１、５．４．１〜４、５．５．１〜３に示される抗体の活性は、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体の活性及び効果の代表である。
【０１４３】
本明細書に提供される様々な方法のいくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体などの結合タンパク質は、表１及び表２に記載の１つ以上のＣＤＲを含む免疫グロブリン可変領域を含み得る。そのような結合タンパク質（例えば、抗ＰＤ−１抗体）では、ＣＤＲは、１つ以上の骨格領域またはフレームワーク領域（ＦＲ）と結合され得、それは、ＣＤＲ（複数可）の適切な抗原結合特性が達成されるようにＣＤＲ（複数可）を適応させる。本明細書に記載の抗ＰＤ−１抗体を含むそのような結合タンパク質は、ＰＤ−１シグナル伝達を誘発し得る。
【０１４４】
４．１一般的技法
本明細書において記載されるか、または参照される技法及び手順は、当業者により概して十分に理解され、及び／または、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（３ｄ  ｅｄ．２００１）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，２００３）、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ  Ｂｅｎｃｈ  ｔｏ  Ｃｌｉｎｉｃ（Ａｎ  ｅｄ．２００９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ａｌｂｉｔａｒ  ｅｄ．２０１０）、及びＡｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｖｏｌｓ  １  ａｎｄ  ２（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，２ｄ  ｅｄ．２０１０）に記載されている幅広く利用される方法論などの従来の方法論を使用して一般に用いられるものを含む。
【０１４５】
４．２用語法
別途記載されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書を解釈する目的において、以下の説明が適用され、適当な場合はいつでも、単数形で使用される用語は複数形も含み、その逆も同様である。すべての特許、出願、公開された出願、及び他の出版物は、それらの全体において参照により組み込まれる。記載されるいずれかの説明が、参照により本明細書に組み込まれるいずれかの文献と矛盾する場合には、以下に記載される説明が優先する。
【０１４６】
用語「プログラム死１リガンド１」、「プログラム細胞死１」、「タンパク質ＰＤ−１」、「ＰＤ−１」、「ＰＤ−１ポリペプチド」、または「ＰＤ１」は、別途示されない限り霊長類などの哺乳動物（例えば、ヒト及びカニクイザル（ｃｙｎｏｓ））イヌ、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）を含む、任意の脊椎動物供給源からの任意の天然ポリペプチドを含むポリペプチド（「ポリペプチド」及び「タンパク質」が本明細書において交換可能に使用される）を包含する。ある特定の実施形態では、用語は、「関連ＰＤ−１ポリペプチド」を含み、そのＳＮＰバリアントを含む。用語「ＰＤ−１」はまた、「全長」で未処理のＰＤ−１、ならびに細胞内における処理により生じるＰＤ−１の任意の形態を包含する。いくつかの実施形態では、ＰＤ１は、配列番号４３のアミノ酸配列を有する。ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号Ｕ６４８６３は、別の例示的なヒトＰＤ−１核酸配列を提供する。
【０１４７】
「関連ＰＤ−１ポリペプチド」は、対立遺伝子バリアント（例えば、ＳＮＰバリアント）；スプライスバリアント；断片；誘導体；置換、欠失、及び挿入バリアント；融合ポリペプチド；ならびにＰＤ−１活性を保持し得る種間相同体を含む。当業者には理解されるように、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド断片、ＰＤ−１抗原、及び／またはＰＤ−１エピトープに結合し得る。「エピトープ」は、より大きなＰＤ−１抗原の部分であり得、それはより大きなＰＤ−１ポリペプチド断片の部分であり得、次いでより大きなＰＤ−１ポリペプチドの部分であり得る。ＰＤ−１は、天然の形態または変性された形態で存在し得る。本明細書に記載されるＰＤ−１ポリペプチドは、ヒト組織型から、もしくは別の源から等、多様な源から単離され得るか、または組み換え法または合成法によって調製され得る。ＰＤ−１ポリペプチドに対するオーソログもまた、当該技術分野において周知である。
【０１４８】
用語「ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１」、「ＰＤ１ＡＢ−６  ＩｇＧ１」、「ＰＤ１ＡＢ−６＿ＩｇＧ１」、「ＩｇＧ１＿ＰＤ１ＡＢ−６」、及び「ＩｇＧ１−ＰＤ１ＡＢ−６」は、交換可能に使用され、ＩｇＧ１  Ｆｃ領域を有する抗体ＰＤ１ＡＢ−６を指す。ある特定の実施形態では、抗体ＰＤ１ＡＢ−６は、例えば、図４に示されるように、ＬＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１（配列番号３１）の軽鎖アミノ酸配列及びＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１（配列番号３２）の重鎖アミノ酸配列を含む。
【０１４９】
用語「ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３」、「ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ」、「ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３２２Ａ」、「ＩｇＧ１＿ＰＤ１ＡＢ−６＿Ｋ３２２Ａ」、「ＩｇＧ１＿ＰＤ１ＡＢ−６＿Ｋ３」、「ＩｇＧ１−ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３２２Ａ」、及び「ＩｇＧ１−ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３」は、交換可能に使用され、ＩｇＧ１  Ｆｃ領域においてＫ３２２Ａ置換を有するＰＤ１ＡＢ−６バリアントを指す。ある特定の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６バリアントは、例えば、図４に示されるように、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ（配列番号３３）の重鎖アミノ酸配列を有する。
【０１５０】
用語「ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐ」、「ＩｇＧ４Ｐ＿ＰＤ１ＡＢ−６」、「ＩｇＧ４Ｐ−ＰＤ１ＡＢ−６」、「ＰＤ１ＡＢ−６＿ＩｇＧ４Ｐ」、及び「ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４Ｐ」は、交換可能に使用され、ＩｇＧ４Ｐ  Ｆｃ領域を有するＰＤ１ＡＢ−６バリアントを指す。ある特定の実施形態では、ＰＤ−１抗体バリアントは、例えば、図４に示されるように、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４Ｐ（配列番号３４）の重鎖アミノ酸配列を有する。
【０１５１】
用語「ＰＤ１ＡＢ−６−４ＰＥ」、「ＩｇＧ４ＰＥ＿ＰＤ１ＡＢ−６」、「ＩｇＧ４ＰＥ−ＰＤ１ＡＢ−６」、ならびに「ＰＤ１ＡＢ−６＿ＩｇＧ４ＰＥ」及び「ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４ＰＥ」は、交換可能に使用され、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４ＰＥ（配列番号３５）としてＩｇＧ４ＰＥ重鎖アミノ酸配列を有するＰＤ１ＡＢ−６バリアントを指す。
【０１５２】
用語「ＰＤ−１リガンド」は、例えば、インビボまたはインビトロで、ＰＤ−１に結合する分子を指す。ＰＤ−１リガンドの非限定的な実施例は、天然発生リガンド、例えば、ＰＤ−１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ１またはＣＤ２７４としても知られている）及びＰＤ−１リガンド２（ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−ＤＣまたはＣＤ２７３としても知られている）、ならびに人工生成リガンドを含む。
【０１５３】
用語「ＰＤ−Ｌ１」及び「ＰＤＬ−１」は、本明細書において交換可能に使用され、ＰＤ−１リガンド１（Ｂ７−Ｈ１またはＣＤ２７４としても知られている）を指す。
【０１５４】
用語「ＰＤ−１活性」、「ＰＤ−ｌシグナル伝達」、及び「ＰＤ−１リガンド様シグナル伝達」は、本開示のＰＤ−１に結合する抗体などの結合タンパク質に適用されるとき、結合タンパク質（例えば、抗体）が、ＰＤ−１リガンドの結合によって誘発される生物学的効果を模倣または調節し、例えば、インビボまたはインビトロで、そうでなければＰＤ−１へのＰＤ−１リガンド結合に起因するであろう生物学的応答を誘発することを意味する。抗ＰＤ−１抗体の結合特異性を評価することにおいて、例えば、ＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１）に結合する抗体またはその断片など、抗体は、応答が、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、または２００％以上の野生型ＰＤ−１リガンド標準の活性など、５％以上であるときに、生物学的応答を誘発すると考えられる。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体またはＰＤ−１リガンドは、固定化される（例えば、プラスチック表面またはビーズ上）。ある特定の実施形態では、抗体は、以下の特性を有する：例えば、（１）ヒトまたはカニクイザルＰＢＭＣアッセイ（例えば、実施例５．２．１及び５．２．２を参照されたい）、（２）ヒト全血試料アッセイ（例えば、実施例５．２．１及び５．４．２を参照されたい）、（３）ＴＴＸリコールアッセイ（例えば、実施例５．４．１を参照されたい）、（４）Ｔ細胞阻害受容体発現アッセイ（例えば、実施例５．４．３及び５．４．６を参照されたい）、（５）Ｔ細胞増殖アッセイ（例えば、実施例５．４．４）、（６）制御性Ｔ細胞アッセイ（例えば、実施例５．４．５を参照されたい）、（７）異種ＧｖＨＤモデル（例えば、実施例５．５．１を参照されたい）、及び（８）ヒトＰＤ−１  ＫＩマウスにおけるＥＡＥモデル（例えば、実施例５．５．２を参照されたい）における、１００ｎＭ以下、例えば、９０ｎＭ、８０ｎＭ、７０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭのＥＣ５０を有する、５％以上のＰＤ−１リガンド標準の有効性レベルを呈する。
【０１５５】
用語「結合タンパク質」は、ヒト及び／またはカニクイザルＰＤ−１を含む、ＰＤ−１に結合する部分（例えば、ＣＤＲなどの１つ以上の結合領域）、任意に、結合部分が結合タンパク質のＰＤ−１ポリペプチド、断片、またはエピトープへの結合を促進する立体配座を採用することを可能にする骨格またはフレームワーク部分（例えば、１つ以上の骨格またはフレームワーク領域）を含むタンパク質を指す。そのような結合タンパク質の例としては、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、組み換え抗体、一本鎖抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ＩｇＤ抗体、ＩｇＥ抗体、ＩｇＭ抗体、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、またはＩｇＧ４抗体などの抗体、及びそれらの断片が挙げられる。結合タンパク質は、例えば、ＣＤＲまたはＣＤＲ誘導体を有する代替的なタンパク質骨格または人工骨格を含み得る。そのような骨格は、これらに限定されないが、例えば、結合タンパク質、ならびに例えば、生体適合性ポリマーを含む全合成骨格の三次元構造を安定させるために導入される変異を含む抗体由来骨格を含む。例えば、Ｋｏｒｎｄｏｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ５３（１）：１２１−２９、及びＲｏｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：６３９−５４を参照されたい。さらに、ペプチド抗体模倣物（「ＰＡＭ」）が使用され得、ならびに骨格としてフィブロネクチン構成成分を利用する抗体模倣物に基づく骨格も使用され得る。本開示の文脈において、結合タンパク質は、例えば、解離定数（ＫＤ）が≦１０−７Ｍであるときに、ＰＤ−１に特異的に結合するか、または選択的に結合すると考えられている。いくつかの実施形態では、結合タンパク質（例えば、抗体）は、約１０−７Ｍ〜約１０−１２ＭのＫＤでＰＤ−１に特異的に結合し得る。ある特定の実施形態では、ＫＤが≦１０−８Ｍであるか、またはＫＤが≦１０−９Ｍであるときに、結合タンパク質（例えば、抗体）は、高い親和性を有するＰＤ−１に特異的に結合し得る。一実施形態では、結合タンパク質（例えば、抗体）は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）によって測定して、１ｘ１０−９Ｍ〜１０ｘ１０−９ＭのＫＤで精製されたヒトＰＤ−１に特異的に結合し得る。別の実施形態では、結合タンパク質（例えば、抗体）は、ＫｉｎＥｘＡ（商標）（Ｓａｐｉｄｙｎｅ，Ｂｏｉｓｅ，ＩＤ）によって測定して、０．１ｘ１０−９Ｍ〜１ｘ１０−９ＭのＫＤで精製されたヒトＰＤ−１に特異的に結合し得る。さらなる別の実施形態では、結合タンパク質（例えば、抗体）は、約０．１ｘ１０−９Ｍ〜１０ｘ１０−９ＭのＫＤで細胞上に発現されたヒトＰＤ−１に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、結合タンパク質（例えば、抗体）は、０．１ｘ１０−９Ｍ〜１ｘ１０−９ＭのＫＤで細胞上に発現されたヒトＰＤ−１に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、結合タンパク質（例えば、抗体）は、１ｘ１０−９Ｍ〜１０ｘ１０−９ＭのＫＤで細胞上に発現されたヒトＰＤ−１に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、結合タンパク質（例えば、抗体）は、約０．１ｘ１０−９Ｍ、約０．５ｘ１０−９Ｍ、約１ｘ１０−９Ｍ、約５ｘ１０−９Ｍ、約１０ｘ１０−９Ｍ、または任意の範囲もしくはその間のＫＤで細胞上に発現されたヒトＰＤ−１に特異的に結合する。さらなる別の実施形態では、結合タンパク質（例えば、抗体）は、０．１ｘ１０−９Ｍ〜１０ｘ１０−９ＭのＫＤで細胞上に発現されたカニクイザルＰＤ−１に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、結合タンパク質（例えば、抗体）は、０．１ｘ１０−９Ｍ〜１ｘ１０−９ＭのＫＤで細胞上に発現されたカニクイザルＰＤ−１に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、結合タンパク質（例えば、抗体）は、１ｘ１０−９Ｍ〜１０ｘ１０−９ＭのＫＤで細胞上に発現されたカニクイザルＰＤ−１に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、結合タンパク質（例えば、抗体）は、約０．１ｘ１０−９Ｍ、約０．５ｘ１０−９Ｍ、約１ｘ１０−９Ｍ、約５ｘ１０−９Ｍ、約１０ｘ１０−９Ｍ、または任意の範囲もしくはその間のＫＤで細胞上に発現されたカニクイザルＰＤ−１に特異的に結合する。
【０１５６】
用語「抗体」、「免疫グロブリン」、または「Ｉｇ」は、本明細書において交換可能に使用され、最も広い意味で使用され、具体的に、例えば、以下に提供されるように、少なくとも２つの無傷抗体、一本鎖抗ＰＤ−１抗体、及び抗ＰＤ−１抗体の断片から形成される個々の抗ＰＤ−１モノクローナル抗体（アゴニスト、アンタゴニスト、中和抗体、全長または無傷モノクローナル抗体を含む）、ポリエピトープもしくはモノエピトープ特異性を有する抗ＰＤ−１抗体組成物、ポリクローナル、または一価抗体、多価抗体、多重特異性抗体（例えば、所望の生物学的活性を呈する限り二重特異性抗体）を網羅する。抗体は、ヒト型、ヒト化型、キメラ型、及び／または親和性成熟型、ならびに例えば、マウス及びウサギ等の他の種からの抗体であり得る。用語「抗体」は、特異性分子抗原に結合することができ、ポリペプチド鎖の２つの同一の対から構成されるポリペプチドの免疫グロブリンクラス内にＢ細胞のポリペプチド生成物を含むことを意図し、各対は、１つの重鎖（約５０〜７０ｋＤａ）及び１つの軽鎖（約２５ｋＤａ）を有し、各鎖の各アミノ末端部分は、約１００〜約１３０またはそれ以上のアミノ酸の様々な領域を含み、各鎖の各カルボキシ末端部分は、定常領域を含む。例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ  ｅｄ．，２ｄ  ｅｄ．１９９５）、及びＫｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（３ｄ  ｅｄ．１９９７）を参照されたい。特定の実施形態では、特異性分子抗原は、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１断片、またはＰＤ−１エピトープを含む、本明細書に提供される抗体によって結合され得る。抗体はまた、これらに限定されないが、合成抗体、組み換え産生された抗体、ラクダ化抗体、内部抗体、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、及び上記のうちのいずれかの機能的断片（例えば、ＰＤ−１−結合断片などの抗原結合断片）を含み、断片が由来した抗体のいくつかまたはすべての結合活性を保持する抗体重鎖または軽鎖ポリペプチドの部分を指す。機能的断片（例えば、ＰＤ−１−結合断片などの抗原結合断片）の非限定的な例としては、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、単一特異性、二重特異性等を含む）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、及びミニボディを含む。特に、本明細書に提供される抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、例えば、抗原結合ドメイン、またはＰＤ−１抗原（例えば、抗ＰＤ−１抗体の１つ以上のＣＤＲ）に結合する抗原結合部位を含む分子を含む。そのような抗体断片は、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８９）、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｍｙｅｒｓ  ｅｄ．，１９９５）、Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  ２２：１８９−２２４、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ａｎｄ  Ｓｋｅｒｒａ，１９８９，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．��７８：４９７−５１５、及びＤａｙ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２ｄ  ｅｄ．１９９０）に見出され得る。本明細書に提供される抗体は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）であり得る。抗ＰＤ−１抗体は、アゴニスト抗体またはアンタゴニスト抗体であり得る。ＰＤ−１シグナル伝達を誘発する抗体を含む、ＰＤ−１に対するアゴニスト抗体が本明細書に提供される。特定の実施形態では、ＰＤ−１に対するアゴニスト抗体は、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２の結合について競合しない。
【０１５７】
「抗原」は、抗体が選択的に結合し得る所定の抗原である。標的抗原は、ポリペプチド、炭水化物、核酸、脂質、ハプテン、または他の天然発生化合物もしくは合成化合物であり得る。いくつかの実施形態では、標的抗原は、ポリペプチドである。
【０１５８】
用語「抗原結合断片」、「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」、及び同様の用語は、抗原と相互作用し、結合剤に抗原（例えば、ＣＤＲ）のその特異性及び親和性を付与するアミノ酸残基を含む、抗体の部分を指す。
【０１５９】
用語「結合する」または「結合」は、例えば、複合体を形成することを含む、分子間の相互作用を指す。相互作用は、例えば、水素結合、イオン結合、疎水性相互作用、及び／またはファンデルワールス相互作用を含む非共有結合相互作用であり得る。複合体はまた、共有結合または非共有結合、相互作用、または力によって一緒に保持される２つ以上の分子の結合を含み得る。抗体上の単一抗原結合部位とＰＤ−１などの標的分子の単一エピトープとの間の全非共有結合相互作用の強度は、抗体の親和性またはエピトープの機能的断片である。解離速度（ｋｏｆｆ）対抗体の一価抗原に対する会合速度（ｋｏｎ）（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）の比率は、親和性に反比例する解離定数ＫＤである。ＫＤ値がより低いほど、抗体の親和性はより高くなる。ＫＤの値は、抗体及び抗原の異なる複合体に対して変化し、ｋｏｎ及びｋｏｆｆの両方に依存する。本明細書に提供される抗体の解離定数ＫＤは、本明細に提供される任意の方法または当業者に周知の任意の他の方法を使用して決定され得る。１つの結合部位での親和性は、抗体と抗原との間の相互作用の真の強度を常に反映するわけではない。多価ＰＤ−１などの複数の反復抗原決定基を含む複合体抗原が、複数の結合部位を含む抗体と接触するとき、第１の部位での抗原との抗体の相互作用は、第２の部位での反応の確率を増加させるであろう。多価の抗体と抗原との間のそのような複数の相互作用の強度は、結合活性と称される。抗体の結合活性は、その個々の結合部位親和性よりもその結合能のより良好な基準であり得る。例えば、高い結合活性は、ＩｇＧより低い親和性を有し得る五量体ＩｇＭ抗体のために見出されることがあるため、低い親和性を補うことができるが、その多価に起因するＩｇＭの高い結合活性は、それが抗原を有効に結合することを可能にする。
【０１６０】
用語「ＰＤ−１に特異的に結合する抗体」、「ＰＤ−１エピトープに特異的に結合する抗体」、及び類似の用語はまた、本明細書で交換可能に使用され、ＰＤ−１抗原、または断片、またはエピトープ（例えば、ヒトＰＤ−１ポリペプチド、抗原、またはエピトープなどのヒトＰＤ−１）などのＰＤ−１ポリペプチドに特異的に結合する抗体を指す。ＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１）に特異的に結合する抗体は、細胞外ドメインまたはＰＤ−１の細胞外に由来するペプチドに結合し得る。ＰＤ−１抗原（例えば、ヒトＰＤ−１）に特異的に結合する抗体は、関連抗原（例えば、カニクイザルＰＤ−１）と交差反応性であり得る。ある特定の実施形態では、ＰＤ−１抗原に特異的に結合する抗体は、他の抗原と交差反応しない。ＰＤ−１抗原に特異的に結合する抗体は、例えば、免疫測定法、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）、または当業者に既知の他の技法によって特定され得る。抗体は、放射性免疫測定法（ＲＩＡ）及び酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）などの実験技術を使用して決定される場合、交差反応性抗原へよりもより高い親和性でＰＤ−１抗原に結合するときに、ＰＤ−１抗原に特異的に結合する。典型的には、特定のまたは選択的な反応は、少なくとも２倍のバックグラウンド信号またはノイズであり、約１０倍超のバックグラウンドであり得る。例えば、抗体特異性に関する議論について、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３３２−３６（Ｐａｕｌ  ｅｄ．，２ｄ  ｅｄ．１９８９）を参照されたい。「対象の抗原に結合する」（例えば、ＰＤ−１などの標的抗原）抗体は、抗体が、抗原を発現する細胞または組織を標的とするのに治療剤として有用であり、他のタンパク質と有意には交差反応しないように十分な親和性で抗原を結合するものである。このような実施形態では、抗体の「非標的」タンパク質への結合の程度は、例えば、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析または（ＲＩＡ）によって決定されるように、抗体のその特定の標的タンパク質への結合の約１０％未満である。抗体の標的分子への結合に関して、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープへの「特異的結合」、それ「に特異的に結合する」、またはそれ「に特異的」という用語は、非特異的相互作用とは測定可能に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、一般に結合活性を有しない同様の構造の分子である対照分子の結合と比較して、分子の結合を決定することによって測定され得る。例えば、特異的結合は、標的に類似した対照分子、例えば、過剰な標識されていない標的との競合によって決定することができる。この場合、標識された標的のプローブへの結合が過剰な標識されていない標的によって阻害されると、特異的結合が示される。用語「抗ＰＤ−１抗体」または「ＰＤ−１に結合する抗体」は、抗体が、例えば、ＰＤ−１を標的とする上で診断剤として有用になるように、十分な親和性でＰＤ−１に結合することができる抗体を含む。本明細書において使用される場合、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープへの「特異的結合」、それ「に特異的に結合する」、またはそれ「に特異的」という用語は、分子が、いずれの他のポリペプチドまたは���リペプチドエピトープにも実質的に結合することなく、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに結合する、結合を指す。ある特定の実施形態では、ＰＤ−１に結合する抗体は、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．９ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下、または０．１ｎＭ以下の解離定数（ＫＤ）を有する。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、異なる種由来のＰＤ−１の間で保存されているＰＤ−１のエピトープに結合する（例えば、ヒトとカニクイザルＰＤ−１との間）。
【０１６１】
用語「競合する」は、抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＰＤ−１に結合し、標的上の同じエピトープまたは結合部位について競合するアゴニスト抗体及び結合タンパク質）の文脈において使用される場合、研究下でその抗体（または結合断片）が、参照分子（例えば、参照抗体などの参照リガンドまたは参照抗原結合タンパク質）の共通の抗原（例えば、ＰＤ−１またはその断片）への特異的結合を防ぐまたは阻害するアッセイによって決定される場合に、競合を意味する。多数の種類の競合的結合アッセイは、試験抗体がＰＤ−１（例えば、ヒトＰＤ−１）への結合について参照抗体と競合するかどうかを測定するために使用され得る。用いられ得るアッセイの例としては、固相直接または間接ＲＩＡ、固相直接または間接酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、サンドイッチ法（例えば、Ｓｔａｈｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ９：２４２−５３）、固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４−１９を参照されたい）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチ法（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８８）を参照されたい）、Ｉ−１２５標識を使用した固相直接標識ＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７−１５を参照されたい）、及び直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７−８２）が挙げられる。典型的には、そのようなアッセイは、固体表面に結合される精製された抗原（例えば、ヒトＰＤ−１などのＰＤ−１）、または非標識試験抗原結合タンパク質（例えば、試験抗ＰＤ−１抗体）または標識参照抗原結合タンパク質（例えば、参照抗ＰＤ−１抗体）のいずれかを保有する細胞の使用を含む。競合的阻害は、試験抗原結合タンパク質の存在下で固体表面または細胞に結合されるラベルの量を測定することによって測定され得る。通常、試験抗原結合タンパク質は、過剰に存在する。競合アッセイ（競合抗体）によって特定される抗体は、参照抗体として同じエピトープ結合している抗体、及び／または生じる立体障害性の抗体の参照によって結合されるエピトープに十分に近位にある隣接するエピトープに結合している抗体を含む。競合的結合を測定するための方法に関する追加の詳細は、以下に説明される。通常、競合抗体タンパク質が過剰に存在するとき、それは、参照抗体の共通抗原への特異的結合を少なくとも３０％、例えば４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％阻害する。いくつかの例では、結合は、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上阻害される。
【０１６２】
「単離された」抗体は、細胞もしくは組織供給源及び／または抗体が由来する他の混入構成成分から他の細胞性物質もしくは他の混入タンパク質を実質的に含まないか、または化学合成される場合、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まない。「細胞性物質を実質的に含まない」という語は、抗体が単離されているかまたは組み換え産生される細胞の細胞構成成分から抗体が分離される、抗体の調製物を含む。したがって、実質的に細胞性物質を含まない抗体は、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満（乾燥重量による）の異種タンパク質（本明細書において「混入タンパク質」とも称される）を有する抗体の調製物を含む。ある特定の実施形態では、抗体が組み換え産生されるとき、それは、培養培地、例えば、約２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、または１％未満のタンパク質調製物の量を表す培養培地を実質的に含まない。ある特定の実施形態では、抗体が化学合成によって産生されるとき、それは、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まず、例えば、それはタンパク質の合成に含まれる化学的前駆体または他の化学物質から分離される。したがって、抗体そのような調製物は、対象の抗体以外に約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満（乾燥重量による）の化学的前駆体または化合物を有する。混入構成成分はまた、これらに限定されないが、抗体の治療上の使用を妨げる材料を含み得、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含み得る。ある特定の実施形態では、抗体は、（１）Ｌｏｗｒｙ法（Ｌｏｗｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９５１，Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．１９３：２６５−７５）によって測定された場合に、９６％、９７％、９８％、または９９％など、９５重量％超の抗体に、（２）回転カップ配列決定装置の使用によりＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度まで、あるいは（３）クーマシーブルーもしくは銀染色を使用した還元もしくは非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって同種になるように、精製される。単離抗体には、組み換え細胞内でインサイツの抗体が含まれるが、これは、抗体の天然環境の少なくとも１つの構成要素が存在していないためである。しかしながら、通常、単離抗体は、少なくとも１つの精製ステップにより調製されるであろう。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は単離される。
【０１６３】
４鎖抗体ユニットは、２本の同一の軽（Ｌ）鎖及び２本の同一の重（Ｈ）鎖から構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＧの場合、４本鎖ユニットは、概して約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つのジスルフィド共有結合によってＨ鎖に結合されているが、一方で２本のＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに応じて１つ以上のジスルフィド結合によって互いに結合されている。Ｈ鎖及びＬ鎖はそれぞれ、規則的に離間した鎖間ジスルフィド架橋も有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、続いてα鎖及びγ鎖のそれぞれについては３つの定常ドメイン（ＣＨ）、ならびにμ及びεアイソタイプについては４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、続いてその反対側の端部に定常ドメイン（ＣＬ）を有する。ＶＬは、ＶＨと整列しており、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列している。特定のアミノ酸残基が軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられている。ＶＨとＶＬとが一緒に対合することにより、単一の抗原結合部位を形成する。異なるクラスの抗体の構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７１（Ｓｔｉｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，８ｔｈ  ｅｄ．１９９４）を参照されたい。
【０１６４】
用語「可変領域」、「可変ドメイン」、「Ｖ領域」、または「Ｖドメイン」は、概して軽鎖または重鎖のアミノ末端に位置し、重鎖において約１２０個〜約１３０個のアミノ酸及び軽鎖において約１００個〜約１１０個のアミノ酸の長さを有する抗体の軽鎖または重鎖の部分を指し、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合及び特異性において使用される。重鎖の可変領域は、「ＶＨ」と称され得る。軽鎖の可変領域は、「ＶＬ」と称され得る。用語「可変」は、可変領域の特定のセグメントが配列において抗体間で広範囲にわたって異なるという事実を指す。Ｖ領域は、抗原結合を媒介し、特定の抗体の、その特定の抗原に対する特異性を定義する。しかしながら、可変性は、１１０個のアミノ酸の長さの可変領域全体に均等に分布しているわけではない。代わりに、Ｖ領域は、各々９個〜１２個のアミノ酸長である「超可変領域」と称されるより大きな可変性（例えば、極度の可変性）のより短い領域によって分離される約１５個〜約３０個のアミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより少ない可変（例えば、比較的不変）である範囲からなる。重鎖及び軽鎖の可変領域は各々、主にβシート構成を採用し、３つの超可変領域により連結され、βシート構造に連結し、ある場合にはその一部を形成するループを形成する４つのＦＲを含む。各鎖における超可変領域は、ＦＲによって、他方の鎖の超可変領域と近接して保持されており、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（５ｔｈ  ｅｄ．１９９１）を参照されたい）。定常領域は、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体の抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）への参加などの様々なエフェクター機能を呈する。可変領域は、異なる抗体間で配列において広範囲にわたって異なる。特定の実施形態では、可変領域は、ヒト可変領域である。
【０１６５】
用語「Ｋａｂａｔにあるような可変領域残基番号付け」または「Ｋａｂａｔにあるようなアミノ酸位置番号付け」、及びそれらの変形は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）における抗体の編集物の重鎖可変領域または軽鎖可変領域に使用される番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用すると、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲもしくはＣＤＲの短縮、またはそれへの挿入に対応するより少ないアミノ酸または追加のアミノ酸を含み得る。例えば、重鎖可変ドメインは、残基５２の後に単一のアミノ酸挿入断片（Ｋａｂａｔによると残基５２ａ）、及び残基８２の後に３つの挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃ等）を含み得る。残基のＫａｂａｔ番号付けは、「標準の」Ｋａｂａｔにより番号付けられた配列との抗体の配列の相同性領域での整列によって所与の抗体について決定され得る。Ｋａｂａｔ番号付けシステムは、一般に、可変ドメイン内の残基（おおよそ軽鎖の残基１〜１０７及び重鎖の残基１〜１１３）を指すときに用いられる（例えば、Ｋａｂａｔら（上記））。「ＥＵ番号付けシステム」または「ＥＵ指標」は、一般に、免疫グロブリン重鎖定常領域内の残基に言及する際に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）で報告されているＥＵ指標）。「ＫａｂａｔにあるようなＥＵ指標」とは、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。他の番号付けシステムは、例えば、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、及びＡＨｏｎによって説明されている。
【０１６６】
「無傷抗体」は、抗原結合部位、ならびにＣＬ及び少なくとも重鎖定常領域、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含むものである。定常領域は、ヒト定常領域またはそのアミノ酸配列バリアントを含み得る。ある特定の実施形態では、無傷抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有する。
【０１６７】
「抗体断片」は、無傷抗体の抗原結合領域または可変領域などの無傷抗体の部分を含む。抗体断片の例としては、限定することなく、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；ダイアボディ及びジダイアボディ（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：６４４４−４８、Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：１９６６５−７２、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−３４、ＷＯ９３／１１１６１、及び米国特許第５，８３７，２４２号及び第６，４９２，１２３号を参照されたい）；一本鎖抗体分子（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号、第５，２６０，２０３号、第５，４８２，８５８号、及び第５，４７６，７８６号を参照されたい）；二重可変ドメイン抗体（例えば、米国特許第７，６１２，１８１号を参照されたい）；単一可変ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）（例えば、Ｗｏｏｌｖｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ５０：９８−１０１、及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１０１：１２４４４−４９を参照されたい）；ならびに抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【０１６８】
治療抗体の「機能的断片」、「結合断片」、または「抗原結合断片」は、無傷抗体に起因する少なくとも１つ、そうでない場合はいくつかまたはすべての生物学的機能を呈し、その機能は、標的抗原（例えば、ＰＤ−１結合断片またはＰＤ−１に結合する断片）に少なくとも結合することを含む。
【０１６９】
本明細書において使用される場合、用語「融合タンパク質」は、抗体のアミノ酸配列、及び異種ポリペプチドまたはタンパク質（例えば、通常は抗体（例えば、非抗ＰＤ−１抗原結合抗体）の部分ではないポリペプチドまたはタンパク質）のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。用語「融合」は、ＰＤ−１または抗ＰＤ−１抗体に関連して使用される場合、ペプチドもしくはポリペプチド、または異種ペプチドまたはポリペプチドを有する断片、バリアント、及び／またはその誘導体の結合を指す。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、ＰＤ−１または抗ＰＤ−１抗体の生物学的活性を保持する。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、ＰＤ−１抗体のＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ  ＣＤＲ（１、２、または３つのＶＨ  ＣＤＲ）、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ（１、２、または３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、融合タンパク質は、ＰＤ−１エピトープ、ＰＤ−１断片、及び／またはＰＤ−１ポリペプチドに結合する。
【０１７０】
用語「重鎖」は、抗体に関して使用される場合、約５０〜約７０ｋＤａのポリペプチド鎖を指し、アミノ末端部分は、約１２０個〜１３０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分は、定常領域を含む。定常領域は、重鎖定常領域のアミノ酸に基づいて、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）と称される５つの異なる種類（例えば、アイソタイプ）のうちの１つであり得る。異なるサイズ：α、δ、及びγの異なる重鎖は、おおよそ４５０個のアミノ酸を含むが、μ及びεは、おおよそ５５０個のアミノ酸を含む。軽鎖と組み合わされる場合、重鎖のこれらの異なる種類は、抗体それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭの５つの周知のクラス（例えば、アイソタイプ）を引き起こし、ＩｇＧの４つのサブクラス、すなわちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む。重鎖はヒト重鎖であり得る。
【０１７１】
用語「軽鎖」は、抗体に関して使用される場合、約２５ｋＤａのポリペプチド鎖を指し、アミノ末端部分は、約１００個〜１１０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分は、定常領域を含む。軽鎖のおおよその長さは、２１１個〜２１７個のアミノ酸である。定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）またはラムダ（λ）と称される２つの異なる種類が存在する。軽鎖アミノ酸配列は、当該技術分野で周知である。軽鎖はヒト軽鎖であり得る。
【０１７２】
本明細書において使用される場合、用語「宿主」は、哺乳動物（例えば、ヒト）などの動物を指す。
【０１７３】
本明細書において使用される場合、用語「宿主細胞」は、核酸分子及びそのような細胞の子孫または潜在的な子孫でトランスフェクトされ得る特定の対象細胞を指す。そのような細胞の子孫は、後続の世代または核酸分子の宿主細胞ゲノムへの統合において生じ得る変異または環境的影響に起因して、核酸分子でトランスフェクトされた親細胞と同一でない場合がある。
【０１７４】
本明細書において使用される場合、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に同種の抗体の集団から得られた抗体を指し、例えば、その集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る天然発生変異の可能性を除いて同一であり、各モノクローナル抗体は、典型的には、抗原上の単一エピトープを認識する。特定の実施形態では、本明細書において使用される場合、「モノクローナル抗体」は、単一ハイブリドーマまたは他の細胞によって産生される抗体であり、抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡまたは当該技術分野で既知の他の抗原結合もしくは競合的結合アッセイによって測定される場合、ＰＤ−１エピトープのみに結合する。用語「モノクローナル」は、抗体を作製するための任意の特定の方法に限定されない。例えば、本開示において有用なモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ方法論によって調製されてもよく、または細菌または真核生物の動物または植物細胞における組み換えＤＮＡ法を使用して作製されてもよい（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−２８及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−９７に記載されている技術を使用してファージ抗体ライブラリから単離され得る。クローナル細胞株の調整、及びそれによって発現されたモノクローナル抗体の調整のための他の方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，５ｔｈ  ｅｄ．２００２）を参照されたい。モノクローナル抗体を産生する例示的な方法が本明細書の実施例に提供される。
【０１７５】
用語「天然」は、核酸分子、ポリペプチド、宿主細胞等などの生物学的物質に関して使用される場合、自然に見出され、人間によって操作、修飾、及び／または変更（例えば、精製、選択）されないものを指す。
【０１７６】
本明細書に提供される抗体は、所望の生物学的活性を呈する限り、重鎖及び／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来する抗体、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または同種である一方で、鎖（複数可）の残りが、別の種に由来する抗体、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または同種である「キメラ」抗体、ならびにそのような抗体の断片を含む（米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−５５を参照されたい）。
【０１７７】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、天然ＣＤＲ残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（例えば、ドナー抗体）の対応するＣＤＲからの残基によって置き換えられるヒト免疫グロブリン（例えば、受容体抗体）を含むキメラ抗体である。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンの１つ以上のＦＲ領域残基は、非ヒト残基に対応することによって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見られない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体の性能をさらに改良するために行われる。ヒト化抗体の重鎖または軽鎖は、少なくとも１つ以上の可変領域の実質的にすべてを含み得、ＣＤＲのすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲに対応し、ＦＲのすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含むことになる。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−２９、Ｐｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−９６、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：４２８５−８９、米国特許第６，８００，７３８号、第６，７１９，９７１号、第６，６３９，０５５号、第６，４０７，２１３号、及び第６，０５４，２９７号を参照されたい。
【０１７８】
「ヒト抗体」は、ヒトによって産生され、及び／または本明細書に開示されるヒト抗体を作製するための技法のうちのいずれかを使用して作製された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリ（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１）及び酵母ディスプレイライブラリ（Ｃｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  １：７５５−６８）を含む、当該技術分野において既知の様々な技法を使用して産生され得る。Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ７７（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：８６−９５、及びｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，２００１，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４に記載される方法も、ヒトモノクローナル抗体の調製のために利用可能である。ヒト抗体は、抗原攻撃に応答してそのような抗体を産生するように修飾されているが、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物、例えば、マウスに抗原を投与することにより調製され得る（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，１９９５，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６（５）：５６１−６６、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｔａｕｓｓｉｎｇ，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８（４）：４５５−５８、ならびにＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）に関する米国特許第６，０７５，１８１号及び第６，１５０，５８４号を参照されたい）。例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって生成されたヒト抗体に関するＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０３：３５５７−６２もまた参照されたい。
【０１７９】
「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン（Ｉｇまたは抗体）ＶＨ  βシートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域（Ｈ１、Ｈ２、またはＨ３）のうちの１つ、または抗体ＶＬ  βシートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域（Ｌ１、Ｌ２、またはＬ３）のうちの１つを指す。したがって、ＣＤＲは、フレームワーク領域配列内に散在されている可変領域配列である。ＣＤＲ領域は、当業者に周知であり、例えば、抗体可変（Ｖ）ドメイン内で最も超可変性の領域として、Ｋａｂａｔによって定義されている（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−１６、Ｋａｂａｔ，１９７８，Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１−７５）。ＣＤＲ領域配列はまた、保存されているβシートフレームワークの一部ではなく、それ故に異なる立体配座を適合させることができるそれらの残基として、Ｃｈｏｔｈｉａによって構造的に定義されている（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−１７を参照されたい）。両方の用語法は、当該技術分野において十分に認識される。ＣＤＲ領域配列はまた、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、及びＩＭＧＴによって定義されている。正準抗体可変領域内のＣＤＲの位置は、多数の構造の比較によって決定されている（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−４８、Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０：２６７−７９）。超可変領域内の残基の数は、異なる抗体中で変化するため、正準位置に対する追加の残基は、正準可変領域番号付けスキームにおける残基番号の次に、ａ、ｂ、ｃなどを用いて慣例的に番号付けされる（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照））。そのような命名法は同様に、当該技術分野において十分に周知である。
【０１８０】
本明細書で使用される場合、用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」は、配列が超可変性であり、及び／または構造的に定義されたループを形成する抗体可変領域の領域を指す。一般に、抗体は６つの超可変領域を含み、このうち３つがＶＨにあり（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、３つがＶＬにある（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。いくつかの超可変領域記述法が使用されており、本明細書に包含される。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列可変性に基づくものであり、最も一般的に使用されている（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照））。Ｃｈｏｔｈｉａは、その代わりに、構造的ループの位置を指す（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−１７を参照されたい）。Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１ループの端は、Ｋａｂａｔ番号付け規則を使用して番号付けされる場合、ループの長さに応じてＨ３２及びＨ３４の間で変化する（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームが、Ｈ３５Ａ及びＨ３５Ｂで挿入を配置するためであり；３５Ａまたは３５Ｂのいずれも存在しない場合、ループは３２で終了し；３５Ａのみ存在する場合、ループは３３で終了し；３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終了する）。ＡｂＭ超可変領域は、ＫａｂａｔのＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａの構造的ループとの折衷物であり、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されている（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｖｏｌ．２（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，２ｄ  ｅｄ．２０１０）を参照されたい）。「接触」超可変領域は、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づく。これらの超可変領域またはＣＤＲのうちの各々に由来する残基が以下に記載される。
【０１８１】
最近は、ユニバーサル番号付けシステム、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）が開発され、幅広く採用されている（Ｌａｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５−７７）。ＩＭＧＴは、ヒト及び他の脊椎動物の免疫グロブリン（ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、及び主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）を専門とする総合情報システムである。本明細書において、ＣＤＲは、軽鎖または重鎖内のアミノ酸配列及び位置の両方に関して言及される。免疫グロブリン可変ドメインの構造内のＣＤＲの「位置」は、種族間で保存され、構造的特徴に従って可変ドメイン配列を整列する番号付けシステムを使用することによってループと称される構造内に存在するため、ＣＤＲ及びフレームワーク残基は容易に特定される。この情報は、典型的には、ヒト抗体からの受容体フレームワークへの１種の免疫グロブリンからのＣＤＲ残基のグラフティング及び置き換えにおいて使用され得る。追加の番号付けシステム（ＡＨｏｎ）は、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，２００１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９：６５７−７０によって開発されている。例えば、Ｋａｂａｔ番号付け及びＩＭＧＴ独自番号付けシステムを含む、番号付けシステム間の対応は、当業者に周知である（例えば、Ｋａｂａｔ（上記参照）；Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ（上記参照）；Ｍａｒｔｉｎ（上記参照）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）を参照されたい）。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴ番号付けシステムによって定義される通りである。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによって定義される通りである。ある特定の実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭ番号付けシステムによって定義される通りである。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａシステムによって定義される通りである。さらなる他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けシステムによって定義される通りである。
【表１】
2019531284.tif 000003
【０１８２】
超可変領域は、以下の「伸長超可変領域」を含み得る：ＶＬにおいて、２４−３６または２４−３４（Ｌ１）、４６−５６または５０−５６（Ｌ２）、及び８９−９７または８９−９６（Ｌ３）、ならびにＶＨにおいて、２６−３５または２６−３５Ａ（Ｈ１）、５０−６５または４９−６５（Ｈ２）、及び９３−１０２、９４−１０２、または９５−１０２（Ｈ３）。本明細書において使用される場合、用語「ＨＶＲ」及び「ＣＤＲ」は、交換可能に使用される。
【０１８３】
用語「定常領域」または「定常ドメイン」は、抗体の抗原への結合に直接的に含まれていないが、Ｆｃ受容体との相互作用など様々なエフェクター機能を呈する軽鎖及び重鎖のカルボキシ末端部分を指す。用語は、抗原結合部位を含む可変領域である免疫グロブリンの他方の部分と比較してより保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常領域は、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３領域、ならびに軽鎖のＣＬ領域を含み得る。
【０１８４】
用語「フレームワーク」または「ＦＲ」は、ＣＤＲに隣接する可変領域残基を指す。ＦＲ残基は、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ドメイン抗体ダイアボディ、直鎖状抗体、及び二重特異性抗体に存在する。ＦＲ残基は、超可変領域残基またはＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【０１８５】
「親和性成熟」抗体は、その１つ以上のＨＶＲに１つ以上の変化（例えば、変化、付加、及び／または欠失を含むアミノ酸配列の変形）を有し、これらの変化が、これらの変化（複数可）を有しない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性を向上させるものである。親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモルまたはさらにはピコモルの親和性を有し得る。親和性成熟抗体は、当該技術分野において既知の手技によって産生される。論評のために、Ｈｕｄｓｏｎ  ａｎｄ  Ｓｏｕｒｉａｕ，２００３，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ９：１２９−３４、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，２００５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１０５−１６、Ｑｕｉｒｏｚ  ａｎｄ  Ｓｉｎｃｌａｉｒ，２０１０，Ｒｅｖｉｓｔａ  Ｉｎｇｅｎｅｒｉａ  Ｂｉｏｍｅｄｉａ  ４：３９−５１を参照されたい。
【０１８６】
「ブロッキング」抗体または「アンタゴニスト」抗体とは、それが結合する抗原の生物学的活性を阻害または低減する抗体である。例えば、ブロッキング抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物学的活性を実質的にまたは完全に阻害する。
【０１８７】
「アゴニスト」抗体は、例えば、対象のポリペプチド（例えば、ＰＤ−Ｌ１）の機能的活性の少なくとも１つを模倣するものなど、反応を引き起こす抗体である。アゴニスト抗体は、リガンド模倣物である抗体を含み、例えば、リガンドは細胞表面受容体に結合し、結合は細胞間細胞シグナル伝達経路を介して細胞シグナル伝達または活性を誘発し、抗体は同様の細胞シグナル伝達または活性化を誘発する。ＰＤ−１の「アゴニスト」は、ＰＤ−１を発現する細胞中でなど、ＰＤ−１の生物学的活性の１つ以上を活性化するか、そうでなければそれを増加させることが可能である分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１のアゴニスト（例えば、本明細書に記載されるようなアゴニスト抗体）は、例えば、ＰＤ−１タンパク質を発現する細胞の活性化及び／または細胞シグナル伝達経路を活性化することによって、またはそうでなければそれを増加させることによって作用し、それによって、アゴニストの不在下でＰＤ−１媒介生物学的活性に対して細胞のＰＤ−１媒介生物学的活性を増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１シグナル伝達を誘発する抗体を含むアゴニスト抗ＰＤ−１抗体である。
【０１８８】
「結合親和性」は、一般的に、分子（例えば、抗体などの結合タンパク質）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば抗原）との間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は一般に、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含む当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は、一般に、抗原にゆっくり結合し、容易に解離する傾向があるが、高親和性抗体は、一般に、抗原により早く結合し、より長く結合したままである傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法が当該技術分野で既知であり、これらのいずれも、本開示の目的のために使用することができる。特定の例示としての実施形態は以下のものを含む。一実施形態では、「ＫＤ」または「ＫＤ値」は、当該技術分野において既知のアッセイによって、例えば結合アッセイによって測定され得る。ＫＤは、ＲＩＡによって測定され得、例えば、対象の抗体及びその抗原のＦａｂバージョンで行われ得る（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２９３：８６５−８１）。ＫＤまたはＫＤ値はまた、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ−２０００またはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ−３０００を使用した、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）による表面プラズモン共鳴アッセイを使用することによって、または例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＱＫ３８４システムを使用したバイオレイヤー干渉法によって測定され得る。「結合速度」または「会合の速度」または「会合速度」または「ｋｏｎ」はまた、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ−２０００もしくはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ−３０００、またはＯｃｔｅｔ（登録商標）ＱＫ３８４システムを使用した上記に記載の同じ表面プラズモン共鳴法またはバイオレイヤー干渉技術で測定され得る。
【０１８９】
句「実質的に同様の」または「実質的に同じ」は、２つの数値（例えば、一方は本開示の抗体に関連し、他方は参照抗体に関連する）間の十分に高い度合いの類似性を表し、これは、当業者が、２つの値の間の差異を、値（例えば、ＫＤ値）によって測定される生物学的特徴の文脈において生物学的及び／または統計的有意性がほとんどもしくは全くないものとみなすようなものである。例えば、２つの値の間の差異は、参照抗体に関する値の関数として、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満であり得る。
【０１９０】
本明細書に使用される場合、句「実質的に増加された」、「実質的に低減された」、または「実質的に異なる」は、２つの数値（例えば、一方が本開示の抗体と関連付けられており、他方が参照抗体と関連付けられている）の間の十分に高い相違を表し、結果として、当業者であれば、これら２つの値の間の相違が、値によって測定される生物学的特徴に関して、統計的に有意なものであるとみなすであろう。例えば、２つの値の間の差異は、参照抗体に対する値の関数として、約１０％超、約２０％超、約３０％超、約４０％超、及び／または約５０％超であり得る。
【０１９１】
本明細書で使用される場合、用語「阻害」または「阻害する」は、部分的な（１％、２％、５％、１０％、２０％、２５％、５０％、７５％、９０％、９５％、９９％など）または完全な（すなわち、１００％）阻害を指す。
【０１９２】
「抗体エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（例えば、天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に帰属する生物学的活性を指し、抗体のアイソタイプに応じて変化する。抗体エフェクター機能の例としては、これらに限定されないが、Ｃ１ｑ結合、ＣＤＣ、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、及びＢ細胞活性化が挙げられる。
【０１９３】
「Ｔ細胞エフェクター機能」は、これらに限定されないが、細胞障害性Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、制御性Ｔ細胞、及びメモリーＴ細胞を含む、様々な種類のＴ細胞に帰属する生物学的活性を指す。Ｔ細胞エフェクター機能の例としては、Ｔ細胞増殖を増加させること、サイトカインを分泌すること、細胞毒を放出すること、膜関連分子を発現すること、標的細胞を殺滅すること、マクロファージを活性化すること、及びＢ細胞を活性化することが挙げられる。
【０１９４】
「Ｔ細胞疲弊」は、慢性感染、がん、及び他の疾患、障害、または状態の発症中に生じるＴ細胞機能障害の状態を指す。Ｔ細胞疲弊としては、これらに限定されないが、Ｔ細胞エフェクター機能不良（例えば、Ｔ細胞増殖の低減またはサイトカイン産生の低減）、阻害受容体の持続的発現（例えば、ＰＤ−１）、及び機能的エフェクターまたはメモリーＴ細胞とは異なる転写状態が挙げられる。
【０１９５】
本明細書における用語「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義して使用され、例えば、天然配列Ｆｃ領域、組み換えＦｃ領域、及び変異体Ｆｃ領域を含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域はしばしば、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで伸びると定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付けシステムによると残基４４７）は、例えば、抗体の産生もしくは精製の間に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組み換え操作することによって、除去されてもよい。したがって、無傷抗体の組成物は、全Ｋ４４７残基が除去された抗体集団、除去されたＫ４４７残基がない抗体集団、及びＫ４４７残基を有する抗体と有しない抗体との混合物を有する抗体集団を含んでもよい。
【０１９６】
「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を保有する。例示的な「エフェクター機能」としては、Ｃ１ｑ結合、ＣＤＣ、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御等が挙げられる。そのようなエフェクター機能は、概して、Ｆｃ領域と結合領域及び結合ドメイン（例えば、抗体可変領域またはドメイン）との結合を必要とし、例えば、開示される様々なアッセイを使用して評価することができる。
【０１９７】
「天然配列Ｆｃ領域」は、天然で見出される、ヒトによって操作されていない、修飾されていない、及び／または変化されていない（例えば、単離、精製、選択されていない、様々な領域配列などの他の配列を含まない、またはそれらと組み合わせていない）Ｆｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域は、天然配列ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）、天然配列ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域、ならびにその天然発生バリアントを含む。例えば、天然ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域アミノ酸配列は、以下に提供される：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３６、強調されているＫ３２２）。
例示的な天然ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域配列は、以下に提供される：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３８、強調されているＳ２２８及びＬ２３５）。
【０１９８】
「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾（例えば、置換、付加、または欠失）によって天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１個のアミノ酸置換、例えば、約１個〜約１０個のアミノ酸置換、また約１個〜約５個のアミノ酸置換を、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域内に有する。本明細書におけるバリアントＦｃ領域は天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、またはそれらと少なくとも約９０％の相同性、例えば、それらと少なくとも約９５％の相同性を保有し得る。例えば、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃアミノ酸配列、ＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ  Ｆｃ領域において３２２位でＡに対する１つのアミノ酸のＫの変化を有するバリアントは、以下に提供される：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３７、強調されているＫ３２２Ａ置換）。
ヒトＩｇＧ４  Ｆｃアミノ酸配列、ＩｇＧ４Ｐ  Ｆｃ領域において２２８位でＰに対する１つのアミノ酸のＳの変化を有する例示的なバリアントは、以下に提供される：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３９、強調されているＳ２２８Ｐ置換）。
ヒトＩｇＧ４  Ｆｃアミノ酸配列、ＩｇＧ４ＰＥ  Ｆｃ領域において２２８及び２３５位で２つのアミノ酸変化を有する例示的なバリアントは、以下に提供される：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４０、強調されているＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ置換）。
【０１９９】
用語「バリアント」は、ＰＤ−１または抗ＰＤ−１抗体に関連して使用される場合、天然または修飾されていない配列と比較して、１つ以上（例えば、約１〜約２５、約１〜約２０、約１〜約１５、約１〜約１０、または約１〜約５など）のアミノ酸配列の置換、欠失、及び／または付加を含むペプチドまたはポリペプチドを指し得る。例えば、ＰＤ−１バリアントは、天然ＰＤ−１のアミノ酸配列への１つ以上（例えば、約１〜約２５、約１〜約２０、約１〜約１５、約１〜約１０、または約１〜約５など）の変化に起因し得る。また、例として、抗ＰＤ−１抗体のバリアントは、天然または事前に修飾されていない抗ＰＤ−１抗体のアミノ酸配列への１つ以上（例えば、約１〜約２５、約１〜約２０、約１〜約１５、約１〜約１０、または約１〜約５など）の変化に起因し得る。バリアントは、対立遺伝子またはスプライスバリアントなど天然発生であり得るか、または人工的に構築され得る。ポリペプチドバリアントは、バリアントをコードする対応する核酸分子から調製され得る。特定の実施形態では、ＰＤ−１バリアントまたは抗ＰＤ−１抗体バリアントは、それぞれＰＤ−１または抗ＰＤ−１抗体の機能的活性を少なくとも保持する。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体バリアントは、ＰＤ−１に結合し、及び／またはＰＤ−１活性に対してアンタゴニスト性である。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体バリアントは、ＰＤ−１に結合し、及び／またはＰＤ−１活性に対してアゴニスト性である。ある特定の実施形態では、バリアントは、１つ以上のＣＤＲなどＰＤ−１または抗ＰＤ−１抗体のＶＨもしくはＶＬ領域またはサブ領域をコードする核酸分子の単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）バリアントによってコードされる。
【０２００】
用語「ベクター」は、例えば、核酸配列を宿主細胞に導入するために、本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体をコードする核酸配列を含む核酸配列を処理または含むために使用される物質を指す。使用に適用可能なベクターとしては、例えば、発現ベクター、プラスミド、ファージベクター、ウイルスベクター、エピソーム、及び人工クロモソームが挙げられ、それは、宿主細胞のクロモソームへの安定した統合のために操作可能な選択配列または選択マーカーを含み得る。さらに、ベクターは、１つ以上の選択可能なマーカー遺伝子及び適切な発現制御配列を含み得る。含まれ得る選択可能なマーカー遺伝子は、例えば、抗生物質または毒素への耐性を提供するか、栄養要求性欠損を補完するか、または培養培地において重要な栄養素を供給する。発現制御配列は、当該技術分野において周知である、構成的及び誘導的プロモーター、転写エンハンサー、転写ターミネーター等を含み得る。２つ以上の核酸分子が共発現される場合（例えば、抗体重鎖及び軽鎖の両方、または抗体ＶＨ及びＶＬ）、両方の核酸分子は、例えば、単一発現ベクターまたは分離発現ベクターに挿入され得る。単一ベクター発現については、コードする核酸は、１つの誘導的プロモーター及び１つの構造的プロモーターなどの１つの共通の発現制御配列に操作可能に結合され得るか、または異なる発現制御配列に結合され得る。核酸分子の宿主細胞への導入は、当該技術分野において周知の方法を使用して確認され得る。そのような方法は、例えば、ｍＲＮＡのノーザンブロットまたはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅などの核酸分析、遺伝子生成物の発現のための免疫ブロット、または導入された核酸配列またはその対応する遺伝子生成物の発現を試験するために他の好適な分析的方法を含む。核酸分子が、所望の生成物（例えば、本明細書に記載されるような抗ＰＤ−１抗体）を生成するのに十分な量で発現されることが当業者によって理解され、発現レベルが、当該技術分野において周知の方法を使用して十分な発現を得るために最適化され得ることがさらに理解される。
【０２０１】
「抗体依存性細胞媒介性細胞毒性」または「ＡＤＣＣ」は、ある特定の細胞毒性細胞（例えばナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）と結合した分泌免疫グロブリンが、これらの細胞毒性エフェクター細胞が抗原保有標的細胞と特異的に結合して、続いて細胞毒を用いて標的細胞を殺滅することができるようにする細胞毒性の形態を指す。抗体は細胞毒性細胞を「備え」ており、このような殺滅には絶対に必要である。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞がＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、既知である（例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，１９９１，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−９２を参照されたい）。対象の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、インビトロＡＤＣＣアッセイ（例えば、米国特許第５，５００，３６２号及び第５，８２１，３３７号を参照されたい）を行ってもよい。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替的または追加的には、対象の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、動物モデル（例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−５６を参照されたい）において評定され得る。ＡＤＣＣ活性をほとんどまたは全く有さない抗体が使用のために選択され得る。
【０２０２】
「抗体依存性細胞性食作用」または「ＡＤＣＰ」は、ある特定の食細胞（例えば、好中球、単球、及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）と結合した分泌免疫グロブリンが、これらの食細胞が抗原保有標的細胞と特異的に結合して、続いて標的細胞を殺滅することを可能にするときに、単球またはマクロファージ媒介食作用による標的細胞の破滅を指す。対象の分子のＡＤＣＰ活性を評価するために、インビトロＡＤＣＰアッセイ（例えば、Ｂｒａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３２３：１６０−７１を参照されたい）を行ってもよい。そのようなアッセイに有用な食細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ＰＢＭＣから精製された単球、または単核型に分化されたＵ９３７細胞が挙げられる。代替的または追加的には、対象の分子のＡＤＣＰ活性は、インビボで、例えば、動物モデル（例えば、Ｗａｌｌａｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８：１６７−８２を参照されたい）において評価され得る。ＡＤＣＰ活性をほとんどまたは全く有さない抗体が使用のために選択され得る。
【０２０３】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を表す。例示的なＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲである。さらに、例示的なＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（例えば、ガンマ受容体）に結合するものであり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含み、これらの受容体の対立遺伝子バリアント及び代替的にスプライシングされた形態も含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含み、これらは、主にその細胞質ドメインが異なる同様のアミノ酸配列を有する（例えば、Ｄａｅｒｏｎ，１９９７，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−３４を参照されたい）。様々なＦｃＲが既知である（例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，１９９１，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−９２、Ｃａｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４、及びｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１を参照されたい）。将来的に特定されるものも含む他のＦｃＲは、本明細書における「ＦｃＲ」という用語に包含される。この用語はまた、母体ＩｇＧの胎児への移行に関与している新生児受容体ＦｃＲｎも含む（例えば、Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９７６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７−９３、及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｅｕ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４２９−３４を参照されたい）。ＦｃＲへの結合が改善または減少された抗体バリアントが記載されている（例えば、ＷＯ２０００／４２０７２、米国特許第７，１８３，３８７号、第７，３３２，５８１号、及び第７．３３５，７４２号、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６０４を参照されたい）。
【０２０４】
「補体依存性細胞障害」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。古典的補体経路の活性化は、補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）が（適当なサブクラスの）抗体と結合することにより開始され、抗体にはそれらの同族抗原が結合する。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイ（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３を参照されたい）を行ってもよい。改変されたＦｃ領域アミノ酸配列を有するポリペプチドバリアント（バリアントＦｃ領域を有するポリペプチド）及びＣ１ｑ結合能力の増加または減少について記載されている。（例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ１９９９／５１６４２、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−８４を参照されたい）。ＣＤＣ活性をほとんどまたは全く有さない抗体が使用のために選択され得る。
【０２０５】
ＰＤ−１ポリペプチド「細胞外ドメイン」または「ＥＣＤ」は、
膜貫通及び細胞質ドメインを本質的に含まないＰＤ−１ポリペプチドの形態を指す。例えば、ＰＤ−１ポリペプチドＥＣＤは、１％未満の膜貫通及び／または細胞質ドメインを有し得、０．５％未満のそのようなドメインを有し得る。
【０２０６】
用語「同一性」は、配列を整列すること及び含むことによって決定される場合、２つ以上のポリペプチド分子または２つ以上の核酸分子の配列間の関係を指す。基準ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大の配列同一性パーセントを達成するように、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後に、かついかなる保存的置換も配列同一性の一部とは見なさずに、候補配列内のアミノ酸残基が、基準ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一であるパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するための整列は、当業者が備えている技能の範囲内の様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭＥＧＡＬＩＧＮ（ＤＮＡＳｔａｒ，Ｉｎｃ．）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成され得る。当業者であれば、比較されている配列の完全長にわたって最大の整列を達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列を整列させるための適切なパラメータを決定することができる。
【０２０７】
アミノ酸残基／位置の「修飾」は、開始アミノ酸配列と比較した場合、一次アミノ酸配列の変化を指し、変化は、アミノ酸残基／位置を含む配列改変に起因する。例えば、典型的な修飾は、別のアミノ酸を有する残基の置換（例えば、保存的または非保存的置換）、残基／位置に近接する１つ以上（例えば、概して５、４、または３つ未満）のアミノ酸の挿入、及び／または残基／位置の欠失を含む。
【０２０８】
「エピトープ」は、抗体の１つ以上の抗原結合領域に結合されることができ、免疫応答を引き出すことができる哺乳動物（例えば、ヒト）などの動物において抗原または免疫原性活性である、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド断片など、抗原の表面での局在化領域などの単一抗体分子が結合する抗原分子の表面での部位である。免疫原性活性を有するエピトープは、動物において抗体応答を引き出すポリペプチドの部分である。抗原活性を有するエピトープは、例えば、免疫アッセイによることを含む、当該技術分野において周知の任意の方法によって決定される場合、抗体が結合するポリペプチドの部分である。抗原エピトープは、必ずしも免疫原性である必要はない。エピトープはしばしば、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面分類からなり、特定の三次元構造特徴及び特定の電荷特徴を有する。抗体エピトープは、直鎖エピトープまたは立体配座エピトープであり得る。直鎖エピトープは、タンパク質中のアミノ酸の連続配列によって形成される。立体配座エピトープは、タンパク質配列において不連続であるアミノ酸から形成されるが、それは、その三次元構造へのタンパク質の折り畳み時に一緒になる。誘発されたエピトープは、タンパク質の三次元構造が以下の別のタンパク質またはリガンドの活性化または結合などの改変された立体配座にあるときに形成される。ある特定の実施形態では、ＰＤ−１エピトープは、ＰＤ−１ポリペプチドの三次元表面特徴である。他の実施形態では、ＰＤ−１エピトープは、ＰＤ−１ポリペプチドの直鎖特徴である。概して、抗原は、いくつかまたは多くの異なるエピトープを有し、多くの異なる抗体と反応し得る。
【０２０９】
抗体は、「エピトープ」、２つの抗体が三次元空間で同一、重複、または隣接するエピトープを認識するときに、参照抗体として「本質的に同じエピトープ」、または「同じエピトープ」に結合する。２つの抗体が三次元空間で同一、重複、または隣接するエピトープに結合するかどうかを決定するために最も幅広く使用され、かつ迅速な方法は、例えば、標識された抗原または標識された抗体のいずれかを使用していくつかの異なる形式で構成され得る、競合アッセイである。いくつかのアッセイでは、抗原は、９６ウェルプレート上に固定化されるか、または細胞表面上に発現され、標識された抗体の結合をブロックする標識されていない抗体の能力は、放射性、蛍光性、または酵素の標識を使用して測定される。
【０２１０】
「エピトープマッピング」は、抗体の標的抗原上の抗体の結合部位、またはエピトープを特定するプロセスである。「エピトープビニング」は、抗体が認識するエピトープに基づいて抗体を分類するプロセスである。より具体的には、エピトープビニングは、抗体のエピトープ認識特性に基づいて抗体をクラスター化し、異なる結合特異性を有する抗体を特定するためにコンピュータプロセスと組み合わせた競合アッセイを使用して異なる抗体のエピトープ認識特性を区別するための方法及びシステムを含む。
【０２１１】
「ＰＤ−１媒介疾患」、「ＰＤ−１媒介障害」、及び「ＰＤ−１媒介状態」は、交換可能に使用され、任意の疾患、障害、またはＰＤ−１シグナル伝達によって完全にまたは部分的に引き起こされるか、またはその結果である状態、及び／または代替的には、任意の疾患、障害、またはＰＤ−１シグナル伝達（例えば、インビボまたはインビトロ効果）を模倣または増加させるために望ましい状態を指す。
【０２１２】
「有効量」は、概して、症状の重症度及び／または頻度を低減、症状及び／または根本的原因を排除、症状及び／またはそれらの根本的原因の発生を予防、及び／または例えば、リウマチ性関節炎、乾癬、クローン病、多発性硬化症、アトピー性皮膚炎、狼瘡、もしくはシェーグレン症候群を含む、疾患、障害、または状態に起因するか、もしくはそれらに関連する損傷を改善または回復するために十分な量である。いくつかの実施形態では、有効量は、治療有効量または予防有効量である。
【０２１３】
本明細書において使用される場合、用語「治療有効量」は、所与の疾患、障害、または状態、及び／またはそれらに関連する症状（例えば、リウマチ性関節炎、乾癬、クローン病、多発性硬化症、アトピー性皮膚炎、狼瘡、またはシェーグレン症候群）重症度及び／または期間を低減及び／または改善するために十分な薬剤の量（例えば、本明細書に提供される抗体、または本明細書に記載される任意の他の薬剤）を指す。本開示の物質／分子／薬剤の「治療有効量」（例えば、抗ＰＤ−１抗体）は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重等の要因、ならびに個体における所望の応答を引き出す物質／分子／薬剤の能力により変動し得る。治療有効量は、治療上有益な効果が、物質／分子／薬剤の任意の毒性または有害効果を上回る量を包含する。ある特定の実施形態では、用語「治療有効量」は、対象または哺乳動物における疾患、障害、または状態を「治療する」のに有効な抗体もしくは他の薬剤（例えば、薬物）の量を指す。
【０２１４】
「予防有効量」は、対象に投与されるときに、例えば、疾患、障害、状態、または関連症状（複数可）（例えば、リウマチ性関節炎、乾癬、クローン病、多発性硬化症、アトピー性皮膚炎、狼瘡、またはシェーグレン症候群）の発症（もしくは再発）の可能性を予防、遅延、または低減などの意図される予防効果を有する薬学的組成物の量である。典型的であって必ずしもそうではないが、疾患、障害、もしくは状態の早期段階前または早期段階で予防用量が対象において用いられるため、予防上有効な量は、治療上有効な量よりも少ない場合がある。完全な治療または予防効果は、１用量の投与によって必ずしも生じるとは限らず、一連の用量の投与後にのみ生じる場合もある。したがって、治療または予防有効量は、１回以上の投与で投与することができる。
【０２１５】
「慢性」投与は、急性の形態に対して、初期の治療効果（活性）を長期間維持するような連続方式での薬剤（複数可）の投与を指す。「間欠的」投与は、中断なく連続的に行うのではなく、むしろ周期的な治療である。
【０２１６】
本明細書で使用される場合、「担体」は、用いられる投与量及び濃度でそれに曝露されている細胞または哺乳動物に非毒性の薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤を含む。多くの場合、生理的に許容される担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理的に許容される担体の例としては、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（例えば、約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む、単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；及び／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。用語「担体」はまたは、希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全または不完全））、賦形剤、またはビヒクルを指す。薬学的担体を含むそのような担体は、水、及びピーナッツ油、ダイズ油、鉱物油、ゴマ油といった石油、動物、植物、もしくは合成起源のものを含む油などの無菌液体であり得る。組成物（例えば、薬学的組成物）が静脈内投与されるとき、水は例示的な担体である。食塩水溶液ならびにデキストロース及びグリセロールの水溶液はまた、特に注射溶液のために液体担体として用いられ得る。好適な薬学的賦形剤としてはまた、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物は、所望の場合、少量の湿潤剤、乳化剤、またはｐＨ緩衝剤を含有することもできる。組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、粉末剤、徐放性製剤などの形態をとり得る。製剤を含む経口組成物は、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等の標準的な担体を含み得る。好適な薬学的担体の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ  ｅｄ．１９９０）に記載されている。薬学的化合物を含む組成物は、例えば、好適な量の担体とともに単離されたまたは精製された形態で、抗ＰＤ−１抗体を含み得る。
【０２１７】
本明細書において使用される場合、用語「薬学的に許容される」は、動物において、及びより具体的にはヒトにおいての使用のために、連邦政府もしくは州政府の規制機関によって承認されているか、または米国薬局方、欧州薬局方、もしくは他の一般に認識される薬局方に列挙されていることを意味する。
【０２１８】
本明細書において使用される場合、「ポリクローナル抗体」は、多くのエピトープを有するタンパク質に対する免疫原性応答で生成され、したがって、タンパク質内の同じまたは異なるエピトープに対する様々な異なる抗体を含む、抗体集団を指す。ポリクローナル抗体を産生するための方法は、当該技術分野において既知である（例えば、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，５ｔｈ  ｅｄ．２００２）を参照されたい）。
【０２１９】
「単離された核酸」は、天然配列を天然に伴うリボソーム及びポリメラーゼなどの他のゲノムＤＮＡ配列、ならびにタンパク質または複合体から実質的に分離されている核酸、例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ、または混合された核酸である。「単離された」核酸分子は、核酸分子の天然の供給源に存在する他の核酸分子から分離されている核酸分子である。さらに、ｃＤＮＡなどの「単離された」核酸分子は、組み換え技法によって産生されるか、または化学的前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まない場合、化学合成される場合、他の細胞性物質または培地を実質的に含み得ない。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体をコードする１つ以上の核酸分子は、単離または精製される。用語は、それらの天然発生環境から除去されている核酸配列を包含し、組み換えまたはクローン化ＤＮＡ単離物及び化学合成された類似体または異種系によって生物学的に合成された類似体を含む。実質的に純粋な分子は、単離された形態の分子を含み得る。
【０２２０】
本明細書において交換可能に使用される場合、「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、及び／またはそれらの類似体、あるいはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによってまたは合成反応によってポリマーに組み込まれ得る任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体などの修飾されたヌクレオチドを含んでもよい。本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」は、一般に、約２００ヌクレオチド長未満であるが、必ずしもそうではない一般に短い一本鎖合成ポリヌクレオチドを指す。用語「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」は、相互排他的ではない。ポリヌクレオチドに関する上記の説明は、等しく完全にオリゴヌクレオチドに適用可能である。本開示の抗ＰＤ−１抗体を産生する細胞は、親ハイブリドーマ細胞、ならびに抗体をコードする核酸が導入されている細菌及び真核生物宿主細胞を含み得る。好適な宿主細胞は、以下に開示される。
【０２２１】
別段指定されない限り、本明細書に開示される任意の一本鎖ポリヌクレオチド配列の左手端は５’端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左手方向は５’方向と称される。新生ＲＮＡ転写の５’から３’の付加の方向は、転写方向と称され、ＲＮＡ転写と同一の配列を有し、ＲＮＡ転写の５’から５’端であるＤＮＡ鎖上の配列領域は、「上流配列」と称され、ＲＮＡ転写と同一の配列を有し、ＲＮＡ転写の３’から３’端であるＤＮＡ鎖上の配列領域は、「下流配列」と称される。
【０２２２】
用語「予防する」、「予防すること」、及び「予防」は、疾患、障害、状態、または関連症状（複数可）（例えば、リウマチ性関節炎、乾癬、クローン病、多発性硬化症、狼瘡、またはシェーグレン症候群）の発症（もしくは再発）の可能性を低減することを指す。
【０２２３】
用語「予防薬剤」は、対象におけるＰＤ−１媒介疾患及び／またはそれに関連する症状の発達、再発、発症、または蔓延を全体的もしくは部分的に阻害し得る任意の薬剤を指す。ある特定の実施形態では、用語「予防薬剤」は、本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体を指す。
【０２２４】
本明細書において使用される場合、「予防有効血清価」は、対象におけるＰＤ−１媒介疾患、障害、または状態、及び／またはそれに関連する症状の発達、再発、発症、または蔓延を全体的もしくは部分的に阻害するＰＤ−１抗体、例えば、対象（例えば、ヒト）における本明細書に記載されるＰＤ−１抗体の血清価である。
【０２２５】
ある特定の実施形態では、「治療有効血清価」は、対象におけるＰＤ−１媒介疾患、障害、もしくは状態に関連する重症度、期間、及び／または症状を低減するＰＤ−１抗体、例えば、対象（例えば、ヒト）における本明細書に記載されるＰＤ−１抗体の血清価である。
【０２２６】
用語「組み換え抗体」は、組み換え手段によって調製、発現、作製、または単離された抗体を指す。組み換え抗体は、宿主細胞にトランスフェクトされた組み換え発現ベクター、組み換えコンビナトリアル抗体ライブラリから単離された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子に対してトランスジェニック及び／またはトランスクロモソーマルである動物（例えば、マウスまたはウシ）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７−９５を参照されたい）、または他のＤＮＡ配列に対して免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを含む任意の他の手段によって調製、発現、作製、もしくは単離された抗体を使用して発現された抗体であり得る。そのような組み換え抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来するものを含む様々な及び定常領域を有し得る（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）を参照されたい）。しかしながら、ある特定の実施形態では、そのような組み換え抗体は、インビトロ変異誘発（または、ヒトＩｇ配列に対して動物トランスジェニックが使用される場合、インビボ体細胞変異誘発）に施され得、したがって、組み換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系ＶＨ及びＶＬ配列に由来及び関連するが、インビボでヒト抗体生殖細胞系レパートリー内に天然には存在しない場合がある配列である。
【０２２７】
用語「血清価」は、複数の試料（例えば、複数の時点で）からの対象における、または少なくとも１０人、少なくとも２０人、少なくとも４０人の対象、最大約１００人、約１０００人、またはそれ以上の集団における平均血清価を指す。
【０２２８】
用語「副作用」は、治療（例えば、予防薬剤または治療薬剤）の不必要な作用及び／または有害作用を包含する。不必要な作用は、必ずしも有害であるわけではない。治療（例えば、予防薬剤または治療薬剤）からの有害作用は、有害、不快、または危険であり得る。副作用の例としては、下痢、咳、胃腸炎、喘鳴、吐き気、嘔吐、食欲不振、腹部疝痛、発熱、疼痛、体重減少、脱水症状、脱毛、呼吸困難、不眠症、眩暈、粘膜炎、神経及び筋肉作用、疲労、口渇、食欲不振、投与の部位での発疹または腫脹、発熱、悪寒、及び疲労などのインフルエンザ様症状、消化管異常、ならびにアレルギー反応が挙げられる。患者によって経験される追加の不所望な作用は、数多くあり、当該技術分野において既知である。多くはＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（６８ｔｈ  ｅｄ．２０１４）に記載される。
【０２２９】
用語「対象」及び「患者」は、交換可能に使用されてもよい。本明細書において使用される場合、ある特定の実施形態では、対象は、非霊長動物（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット等）または霊長動物（例えば、サル及びヒト）などの哺乳動物である。特定の実施形態では、対象はヒトである。一実施形態では、対象は、ＰＤ−１媒介疾患、障害、または状態を有する哺乳動物（例えば、ヒト）である。別の実施形態では、対象は、ＰＤ−１媒介疾患、障害、または状態を発症する危険性がある哺乳動物（例えば、ヒト）である。
【０２３０】
「実質的にすべて」は、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％を指す。
【０２３１】
用語「治療薬剤」は、ＰＤ−１媒介疾患、障害、もしくは状態及び／またはそれに関連する症状の１つ以上の症状の治療、予防、もしくは軽減を含む、疾患、障害、または状態を治療すること、予防すること、または軽減することにおいて使用され得る任意の薬剤を指す。ある特定の実施形態では、治療薬剤は、本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体を指す。
【０２３２】
用語「治療」は、ＰＤ−１媒介疾患、障害、もしくは状態の予防、管理、治療、及び／または回復において使用され得る任意のプロトコル、方法、及び／または薬剤を指す。ある特定の実施形態では、用語「治療（ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）」及び「治療（ｔｈｅｒａｐｙ）」は、医療関係者などの当業者に既知である、ＰＤ−１媒介疾患、障害、もしくは状態の予防、管理、治療、及び／または回復に有用な生物学的療法、支持療法、及び／または他の治療を指す。
【０２３３】
用語「検出可能なプローブ」は、検出可能なシグナルを提供する組成物を指す。用語は、限定することなく、その活性を介して検出可能なシグナルを提供する、任意の蛍光体、発色団、放射標識、酵素、抗体または抗体断片等を含む。
【０２３４】
用語「検出可能な薬剤」は、試料または対象における、本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体などの所望の分子の生存または存在を確認するために使用され得る物質を指す。検出可能な薬剤は、可視化されることが可能である物質か、またはそうでなければ、決定及び／または測定（例えば、定量化によって）されることが可能である物質であり得る。
【０２３５】
用語「診断剤」は、疾患、障害、または状態の診断を助ける対象に投与される物質を指す。そのような物質は、疾患を引き起こすプロセスの局在化を明らかにする、特定する、及び／または定義するために使用され得る。ある特定の実施形態では、診断剤は、対象に投与されるか、または対象からの試料と接触されるときにＰＤ−１媒介疾患の診断を助ける、本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体に複合体化される物質を含む。
【０２３６】
核酸分子の参照において使用される場合、用語「コードする核酸」またはその文法的等価物は、その天然状態にあるか、またはｍＲＮＡを生成するために転写され得る当業者に周知の方法によって操作され、それは次いで、ポリペプチド及び／またはその断片へ翻訳されるときの核酸分子を指す。アンチセンス鎖はそのような核酸分子の補体であり、コードする配列はそこから推定され得る。
【０２３７】
用語「賦形剤」は、希釈剤、ビヒクル、防腐剤、結合剤、または安定剤として一般に使用され、これらに限定されないが、タンパク質（例えば、血清アルブミン等）、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、グリシン、ヒスチジン等）、脂肪酸及びリン脂質（例えば、スルホン酸アルキル、カプリル酸エステル等）、界面活性剤（例えば、ＳＤＳ、ポリソルベート、非イオン性界面活性剤等）、糖類（例えば、スクロース、マルトース、トレハロース等）、ならびにポリオール（例えば、マンニトール、ソルビトール等）を含む、不活性物質を指す。また、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ  ｅｄ．１９９０）も参照されたく、これは、その全体において参照により本明細書に組み込まれる。
【０２３８】
ペプチドまたはポリペプチドの文脈において、本明細書において使用される場合、用語「断片」は、全長未満のアミノ酸配列を含むペプチドまたはポリペプチドを指す。そのような断片は、例えば、アミノ末端での切断、カルボキシ末端での切断、及び／またはアミノ酸配列からの残基（複数可）の内部欠失から生じ得る。断片は、例えば、代替的なＲＮＡスプライシングまたはインビボプロテアーゼ活性に起因する。ある特定の実施形態では、ＰＤ−１断片または抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ−１ポリペプチドもしくは抗ＰＤ−１抗体のアミノ酸配列の少なくとも５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも３０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも４０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも５０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも６０個の連続したアミノ残基、少なくとも７０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも８０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも９０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも連続した１００個のアミノ酸残基、少なくとも１２５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１５０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１７５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２００個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２５０個、少なくとも３００個、少なくとも３５０個、少なくとも４００個、少なくとも４５０個、少なくとも５００個、少なくとも５５０個、少なくとも６００個、少なくとも６５０個、少なくとも７００個、少なくとも７５０個、少なくとも８００個、少なくとも８５０個、少なくとも９００個、または少なくとも９５０個の連続したアミノ酸残基のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。特定の実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチドの断片または抗ＰＤ−１抗体は、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、またはそれ以上の機能を保持する。
【０２３９】
用語「管理する」、「管理すること」、及び「管理」は、対象が治療（例えば、予防薬剤または治療薬剤）から得る有益な効果を指し、それは疾患の治癒をもたらさない。ある特定の実施形態において、対象は、ＰＤ−１媒介疾患、その１つ以上の症状を「管理する」ために１つ以上の治療法（例えば、本明細書に提供される抗体などの予防薬剤または治療薬剤）を投与され、疾患の進行もしくは悪化を予防する。
【０２４０】
用語「約」及び「おおよそ」は、２０％以内、１５％以内、１０％以内、９％以内、８％以内、７％以内、６％以内、５％以内、４％以内、３％以内、２％以内、１％以内、または所定の値もしくは範囲未満を意味する。
【０２４１】
「投与する」または「投与」は、粘膜、皮内、静脈内、筋肉内送達、及び／または本明細書に記載されるかもしくは当該技術分野において既知の任意の他の物理的送達方法などによって、体外に存在する物質（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体）を、注射または他の様式で患者へ物理的に送達する行為を指す。疾患、障害、状態、またはその症状が治療されるとき、物質の投与は、典型的には、疾患、障害、状態、またはその症状の発症の後に生じる。疾患、障害、状態、またはその症状が予防されるとき、物質の投与は、典型的には、疾患、障害、状態、またはその症状の発症の前に生じる。
【０２４２】
ポリペプチドの文脈において、本明細書において使用される場合、用語「類似体」は、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、もしくは抗ＰＤ−１抗体と同様または同一の機能を有するが、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、もしくは抗ＰＤ−１抗体と同様または同一のアミノ酸配列を必ずしも含まないか、またはＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、もしくは抗ＰＤ−１抗体と同様または同一の構造を有しないポリペプチドを指す。同様のアミノ酸配列を有するポリペプチドは、以下のうちの少なくとも１つを満たすポリペプチドを指す：（ａ）ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、または本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体のアミノ酸配列と少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチド、（ｂ）少なくとも５個のアミノ酸残基、少なくとも１０個のアミノ酸残基、少なくとも１５個のアミノ酸残基、少なくとも２０個のアミノ酸残基、少なくとも２５個のアミノ酸残基、少なくとも３０個のアミノ酸残基、少なくとも４０個のアミノ酸残基、少なくとも５０個のアミノ酸残基、少なくとも６０個のアミノ残基、少なくとも７０個のアミノ酸残基、少なくとも８０個のアミノ酸残基、少なくとも９０個のアミノ酸残基、少なくとも１００個のアミノ酸残基、少なくとも１２５個のアミノ酸残基、または少なくとも１５０個のアミノ酸残基のＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、または本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体（またはそのＶＨもしくはＶＬ領域）をコードするヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされたポリペプチド（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２００１）、及びＭａｎｉａｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８２）を参照されたい）；または（ｃ）ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、または本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体（またはそのＶＨもしくはＶＬ領域）をコードするヌクレオチド配列と少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列によってコードされたポリペプチド。ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、または本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体と同様の構造を有するポリペプチドは、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、または本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体と同様の二次、三次、もしくは四次構造を有するポ���ペプチドを指す。ポリペプチドの構造は、これらに限定されないが、Ｘ線結晶学、核磁気共鳴、及び結晶学電子顕微鏡を含む、当業者に既知の方法によって決定され得る。
【０２４３】
ポリペプチドの文脈において、本明細書において使用される場合、用語「誘導体」は、アミノ酸残基の置換、欠失、もしくは付加の導入によって改変されている、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、またはＰＤ−１ポリペプチドに結合する抗体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。本明細書において使用される場合、用語「誘導体」はまた、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、または例えば、任意の種類の分子のポリペプチドへの共有結合によって化学修飾されているＰＤ−１ポリペプチドに結合する抗体を指す。例えば、限定するものではないが、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、または抗ＰＤ−１抗体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ＰＥＧ化、リン酸化、アミド化、既知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解切断、化学的切断、配合、ツニカマイシンの代謝合成、細胞リガンドまたは他のタンパク質への結合等によって化学修飾され得る。誘導体は、結合された分子の種類または位置のいずれかで、天然発生または開始ペプチドもしくはポリペプチドとは異なる様式で修飾される。誘導体は、ペプチドまたはポリペプチド上に天然に存在する１つ以上の化学基の欠失をさらに含む。さらに、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、または抗ＰＤ−１抗体の誘導体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含み得る。ポリペプチド誘導体は、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチドの断片、もしくは本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体と同様または同一の機能を有する。
【０２４４】
用語「組成物」は、任意に特定量で、特定成分（例えば、本明細書に提供される抗体）を含む組成物を包含するよう意図されている。
【０２４５】
４．３組成物及びその作製方法
ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド断片、ＰＤ−１ペプチド、またはＰＤ−１エピトープに結合する治療有効量の抗体を対象に投与することを含む、対象における免疫障害を管理、予防、または治療する方法が本明細書に提供される。
【０２４６】
本方法のある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒト及び／またはカニクイザルＰＤ−１に結合する。一実施形態では、ＰＤ−１抗体は、ヒトＰＤ−１に結合する。一実施形態では、ＰＤ−１抗体は、カニクイザルＰＤ−１に結合する。一実施形態では、ＰＤ−１抗体は、ヒトＰＤ−１及びカニクイザルＰＤ−１の両方に結合する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、齧歯類ＰＤ−１に結合しない。
【０２４７】
本方法のいくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に結合する。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−Ｌ１結合部位とは異なるＰＤ−１のＥＣＤにおいてエピトープに結合する。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−Ｌ２結合部位とは異なるＰＤ−１のＥＣＤにおいてエピトープに結合する。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２結合部位の両方とは異なるＰＤ−１のＥＣＤにおいてエピトープに結合する。
【０２４８】
本方法のさらなる他の実施形態では、抗体は、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体が、ＰＤ−１ポリペプチドへ結合することを競合的にブロックする。
【０２４９】
本方法の別の実施形態では、抗体は、ＰＤ−１ポリペプチドへの結合について本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体と競合する。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１ポリペプチドへの結合をブロックしない。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１ポリペプチドへの結合をブロックしない。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１ポリペプチドへの結合をブロックしない。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１ポリペプチドへの結合についてＰＤ−Ｌ１と競合しない。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１ポリペプチドへの結合についてＰＤ−Ｌ２と競合しない。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１ポリペプチドへの結合についてＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２と競合しない。
【０２５２】
ある特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合は、抗体によって阻害されない。他の実施形態では、ＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合は、抗体によって阻害されない。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合またはＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合のいずれも、抗体によって阻害されない。
【０２５３】
本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体はまた、例えば、診断剤または検出可能な薬剤に複合体化または組み換え融合され得る。抗ＰＤ−１抗体を含む組成物がさらに提供される。
【０２５４】
４．３．１抗ＰＤ−１抗体
一実施形態では、本開示は、治療剤として本明細書においての使用を見出し得る抗ＰＤ−１抗体を提供する。別の実施形態では、本開示は、診断剤として本明細書においての使用を見出し得る抗ＰＤ−１抗体を提供する。例示的な抗体としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、二重特異性抗体、及びヘテロ複合体抗体、ならびに改善された親和性または他の特性を有するそれらのバリアントが挙げられる。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド断片、ＰＤ−１ペプチド、またはＰＤ−１エピトープを含むＰＤ−１に結合する抗体が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒト及び／またはカニクイザルＰＤ−１に結合する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、齧歯類ＰＤ−１（例えば、マウスＰＤ−１）に結合しない。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＰＤ−１に結合する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、カニクイザルＰＤ−１に結合する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＰＤ−１及びカニクイザルＰＤ−１に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＰＤ−１に結合し、齧歯類ＰＤ−１（例えば、マウスＰＤ−１）には結合しない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、カニクイザルＰＤ−１に結合し、齧歯類ＰＤ−１（例えば、マウスＰＤ−１）には結合しない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＰＤ−１に結合し、カニクイザルＰＤ−１に結合し、齧歯類ＰＤ−１（例えば、マウスＰＤ−１）には結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１ポリペプチドへの結合をブロックしない。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１ポリペプチドへの結合をブロックしない。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１ポリペプチドへの結合をブロックしない。他の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド断片、ＰＤ−１ペプチド、またはＰＤ−１エピトープを含むＰＤ−１に結合するヒト化抗体（例えば、ヒト定常領域を含む）である。
【０２５６】
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、本明細書に提供されるマウスのモノクローナル抗体のいずれか１つのＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３は、ＩＭＧＴ番号付けシステムによって定義される通りである。他の実施形態では、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによって定義される通りである。ある特定の実施形態では、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３は、ＡｂＭ番号付けシステムによって定義される通りである。他の実施形態では、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３は、Ｃｈｏｔｈｉａシステムによって定義される通りである。さらなる他の実施形態では、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３は、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付けシステムによって定義される通りである。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に提供される単離された抗体またはその機能的断片は、表１及び表２に示されるように、（ａ）抗体ＰＤ１ＡＢ−１、（ｂ）抗体ＰＤ１ＡＢ−２、（ｃ）抗体ＰＤ１ＡＢ−３、（ｄ）抗体ＰＤ１ＡＢ−４、（ｅ）抗体ＰＤ１ＡＢ−５、または（ｆ）抗体ＰＤ１ＡＢ−６からの、１、２、及び／または３つの重鎖ＣＤＲ及び／または１、２、及び／または３つの軽鎖ＣＤＲを含む。
表１．ＶＬ  ＣＤＲアミノ酸配列
【表２】
2019531284.tif 000004
表２．ＶＨ  ＣＤＲアミノ酸配列
【表３】
2019531284.tif 000005
【０２５７】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、６つのＣＤＲ、例えば、表１及び表２に特定されるＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３を含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、６つ未満のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、表１及び表２に特定されるＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３からなる群から選択される、１、２、３、４、または５つのＣＤＲを含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書に記載される（ａ）抗体ＰＤ１ＡＢ−１、（ｂ）抗体ＰＤ１ＡＢ−２、（ｃ）抗体ＰＤ１ＡＢ−３、（ｄ）抗体ＰＤ１ＡＢ−４、（ｅ）抗体ＰＤ１ＡＢ−５、及び（ｆ）抗体ＰＤ１ＡＢ−６からなる群から選択されるモノクローナル抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３からなる群から選択される１、２、３、４、または５つのＣＤＲを含むか、またはそれらからなる。したがって、いくつかの実施形態では、抗体は、表１及び表２に特定されるＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３のいずれか１つの１、２、３、４、または５つのＣＤＲを含むか、またはそれらからなる。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、表２に列挙される１つ以上（例えば、１、２、または３つ）のＶＨ  ＣＤＲを含む。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、表１に列挙される１つ以上（例えば、１、２、または３つ）のＶＬ  ＣＤＲを含む。さらなる他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、表２に列挙される１つ以上（例えば、１、２、または３つ）のＶＨ  ＣＤＲ、及び表１に列挙される１つ以上のＶＬ  ＣＤＲを含む。したがって、いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、表２に示されるＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３アミノ酸配列（複数可）のいずれか１つから独立して選択されるＶＨ  ＣＤＲ１及び／またはＶＨ  ＣＤＲ２及び／またはＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１及び７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、表１に示されるＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれか１つから独立して選択されるＶＬ  ＣＤＲ１及び／またはＶＬ  ＣＤＲ２及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０２５９】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、（１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、（２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。
【０２６０】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、（１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、（２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに（１）配列番号７のアミノ酸を有するＶＬ  ＣＤＲ１、（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、（１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、（２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む。
【０２６２】
他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、（１）配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。
【０２６４】
表１及び表２に列挙される１つ以上（例えば、１、２、または３つ）のＶＨ  ＣＤＲ及び１つ以上（例えば、１、２、または３つ）のＶＬ  ＣＤＲを含む抗体もまた本明細書に記載される。特に、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む抗体が本明細書に提供される。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態では��抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。いくつ���の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、表１及び表２に列挙されるＶＨ  ＣＤＲ及びＶＬ  ＣＤＲのそれらの任意の組み合わせを含む。
【０２６５】
さらなる別の態様では、本明細書に開示されるＣＤＲは、関連抗体（例えば、表１及び表２を参照されたい）の群に由来するコンセンサス配列を含む。本明細書に記載されるように、「コンセンサス配列」は、いくつかの配列及び所定のアミノ酸配列内で変化する可変アミノ酸の間で共通である保存されたアミノ酸を有するアミノ酸配列を指す。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される単離された抗体またはその機能的断片は、表３及び表４に示されるように、（ａ）抗体ＰＤ１ＡＢ−１、（ｂ）抗体ＰＤ１ＡＢ−２、（ｃ）抗体ＰＤ１ＡＢ−３、（ｄ）抗体ＰＤ１ＡＢ−４、（ｅ）抗体ＰＤ１ＡＢ−５、または（ｆ）抗体ＰＤ１ＡＢ−６からの、１、２、３、及び／または４つの重鎖ＦＲ及び／または１、２、３、及び／または４つの軽鎖ＦＲをさらに含む。
表３．ＶＬ  ＦＲアミノ酸配列
【表４】
2019531284.tif 000006
表４．ＶＨ  ＦＲアミノ酸配列
【表５】
2019531284.tif 000007
【０２６７】
ある特定の実施形態では、単離された抗体またはその機能的断片は、表４に示されるように、（ａ）抗体ＰＤ１ＡＢ−１、（ｂ）抗体ＰＤ１ＡＢ−２、（ｃ）抗体ＰＤ１ＡＢ−３、（ｄ）抗体ＰＤ１ＡＢ−４、（ｅ）抗体ＰＤ１ＡＢ−５、または（ｆ）抗体ＰＤ１ＡＢ−６からの１、２、３、及び／または４つの重鎖ＦＲをさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−１からのものである。いくつかの実施形態では、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−２からのものである。他の実施形態では、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−３からのものである。ある特定の実施形態では、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−４からのものである。他の実施形態では、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−５からのものである。別の実施形態では、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−６からのものである。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその機能的断片は、表３に示されるように、（ａ）抗体ＰＤ１ＡＢ−１、（ｂ）抗体ＰＤ１ＡＢ−２、（ｃ）抗体ＰＤ１ＡＢ−３、（ｄ）抗体ＰＤ１ＡＢ−４、（ｅ）抗体ＰＤ１ＡＢ−５、または（ｆ）抗体ＰＤ１ＡＢ−６からの１、２、３、及び／または４つの軽鎖ＦＲをさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−１からのものである。いくつかの実施形態では、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−２からのものである。他の実施形態では、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−３からのものである。ある特定の実施形態では、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−４からのものである。他の実施形態では、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−５からのものである。別の実施形態では、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−６からのものである。
【０２６９】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるその断片の抗体は、（１）配列番号１９及び２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２１及び２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含むＶＨ領域を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるその断片の抗体は、（１）配列番号１９のアミノ酸を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含むＶＨ領域を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるその断片の抗体は、（１）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含むＶＨ領域を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるその断片の抗体は、（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含むＶＨ領域を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるその断片の抗体は、（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含むＶＨ領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。
【０２７０】
したがって、いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１９及び２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１を含むＶＨ領域を含む。一実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１を含むＶＨ領域を含む。一実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１を含むＶＨ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２を含むＶＨ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号２１及び２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３を含むＶＨ領域を含む。一実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３を含むＶＨ領域を含む。一実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３を含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含むＶＨ領域を含む。
【０２７１】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるその断片の抗体は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１６及び１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。他の実施形態では、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。
【０２７２】
したがって、いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１を含むＶＬ領域を含む。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２を含むＶＬ領域を含む。他の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１６及び１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３を含むＶＬ領域を含む。一実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３を含むＶＬ領域を含む。他の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３を含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含むＶＬ領域を含む。
【０２７３】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるその断片の抗体は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号１９及び２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２１及び２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含み、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１６及び１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、その断片の抗体は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含み、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、その断片の抗体は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含み、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、その断片の抗体は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含み、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、その断片の抗体は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含み、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、その断片の抗体は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含み、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、その断片の抗体は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含み、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、その断片の抗体は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含み、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、その断片の抗体は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含み、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０２８２】
表３及び表４に列挙される１つ以上（例えば、１、２、または３つ）のＶＨ  ＦＲ及び１つ以上（例えば、１、２、または３つ）のＶＬ  ＣＤＲを含む抗体もまた本明細書に記載される。特に、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む抗体が本明細書に提供される。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。他の実施形態では、抗���は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ��Ｒ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号  １６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、
及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番
号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４��配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０��、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では��抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２
（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  Ｆ��３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、表３及び表４に列挙されるＶＨ  ＦＲ（配列番号１９〜２４）及びＶＬ  ＦＲ（配列番号１４〜１８）のその任意の組み合わせを含む。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＶＨ領域またはＶＨドメインを含む。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＶＬ領域またはＶＬドメインを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、（ｉ）ＶＨドメインもしくはＶＨ領域、及び／または（ｉｉ）ＶＬドメインもしくはＶＬ領域の組み合わせを有する。さらなる他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、表５及び表６に示される配列番号８〜１３からなる群から選択される（ｉ）ＶＨドメインもしくはＶＨ領域、及び／または（ｉｉ）ＶＬドメインもしくはＶＬ領域の組み合わせを有する。さらなる他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、表５及び表６に示される抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つの（ｉ）ＶＨドメインもしくはＶＨ領域、及び／または（ｉｉ）ＶＬドメインもしくはＶＬ領域の組み合わせを有する。
【０２８４】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、（１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、（２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３、ならびに表５に示される配列番号８〜１０からなる群から選択されるＶＬ領域を含むＶＨ領域を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号８のアミノ酸配列を有する。他の実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号９のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号１０のアミノ酸配列を有する。
【０２８５】
他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、表６に示される配列番号１１〜１３からなる群から選択されるＶＨ領域、ならびに（１）配列番号１及び７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。さらなるいくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、表６に示される配列番号１１〜１３からなる群から選択されるＶＨ領域、ならびに（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、表６に示される配列番号１１〜１３からなる群から選択されるＶＨ領域、ならびに（１）配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号１１のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号１２のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する。
表５．ＶＬドメインアミノ酸配列
【表６】
2019531284.tif 000008
表６．ＶＨドメインアミノ酸配列
【表７】
2019531284.tif 000009
【０２８６】
ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド断片、ＰＤ−１ペプチド、またはＰＤ−１エピトープに結合する抗ＰＤ−１抗体の免疫グロブリンの重鎖、軽鎖、ＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３をコードする単離された核酸分子もまた本明細書に提供される。抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、及びＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＶＬ領域及びＶＨ領域の例示的な核酸配列は、表７及び表８に示される。
表７．ＶＬ核酸配列
【表８】
2019531284.tif 000010
2019531284.tif 000011
表８．ＶＨ核酸配列
【表９】
2019531284.tif 000012
2019531284.tif 000013
【０２８７】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ１ＡＢ−１のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号８のＶＬアミノ酸配列を含む。
【０２８８】
他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ１ＡＢ−２のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号９のＶＬアミノ酸配列を含む。
【０２８９】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ１ＡＢ−３のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１２のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号１０のＶＬアミノ酸配列を含む。
【０２９０】
他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ１ＡＢ−４のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１２のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号９のＶＬアミノ酸配列を含む。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ１ＡＢ−５のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１３のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号９のＶＬアミノ酸配列を含む。
【０２９２】
他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ１ＡＢ−６のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１３のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号８のＶＬアミノ酸配列を含む。
【０２９３】
ある特定の実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、軽鎖は、以下のアミノ酸配列を有する定常領域を含む：
ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号４１）。
【０２９４】
他の実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３６、強調されているＫ３２２）。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、配列番号３６のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含まない。
【０２９５】
ある特定の実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ  Ｆｃ領域を含む：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３７、強調されているＫ３２２Ａ置換）。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域を含む：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３８、強調されているＳ２２８及びＬ２３５）。
【０２９７】
別の実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４Ｐ  Ｆｃ領域を含む：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３９、強調されているＳ２２８Ｐ置換）。
【０２９８】
さらなる別の実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４ＰＥ  Ｆｃ領域を含む：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４０、強調されているＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ置換）。
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、配列番号４０のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４ＰＥ  Ｆｃ領域を含まない。
【０２９９】
さらなる別の実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖及び重鎖を含み、軽鎖は、配列番号４１のアミノ酸配列を有する定常領域を含み、重鎖は、配列番号３６〜４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＦｃ領域を含む。
【０３００】
ある特定の実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、軽鎖は、以下の通りアミノ酸配列を含む：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＧＱＳＶＬＹＳＳＮＱＫＮＦＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＨＱＹＬＹＳＷＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号３１、ＬＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１）。
【０３０１】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、以下の通りアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＭＨＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＡＮＧＤＲＫＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＧＰＶＹＹＹＧＳＳＹＶＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３２、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、強調されているＫ３２２）。
【０３０２】
他の実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、以下の通りアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＭＨＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＡＮＧＤＲＫＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＧＰＶＹＹＹＧＳＳＹＶＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３３、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ、強調されているＫ３２２Ａ置換）。
【０３０３】
別の実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、以下の通りアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＭＨＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＡＮＧＤＲＫＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＧＰＶＹＹＹＧＳＳＹＶＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３４、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４Ｐ、斜体及び下線で示されているＩｇＧ４Ｐ  Ｆｃ骨格）。
【０３０４】
さらなる別の実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、以下の通りアミノ酸配列を含む：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＭＨＷＶＱＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＧＲＩＤＰＡＮＧＤＲＫＹＤＰＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＤＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＧＰＶＹＹＹＧＳＳＹＶＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３５、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４ＰＥ、斜体及び下線で示されているＩｇＧ４ＰＥ  Ｆｃ骨格）。
【０３０５】
１つの特定の実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、（ｉ）軽鎖は配列番号３１のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）重鎖は配列番号３２のアミノ酸配列を含む。
【０３０６】
別の特定の実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、（ｉ）軽鎖は配列番号３１のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）重鎖は配列番号３３のアミノ酸配列を含む。
【０３０７】
さらなる別の特定の実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、（ｉ）軽鎖は配列番号３１のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）重鎖は配列番号３４のアミノ酸配列を含む。
【０３０８】
さらなる別の特定の実施形態では、ＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、（ｉ）軽鎖は配列番号３１のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）重鎖は配列番号３５のアミノ酸配列を含む。
【０３０９】
さらなる別の態様では、ＰＤ−１への結合について例示される抗体または機能的断片の１つと競合する抗体が提供される。そのような抗体はまた、本明細書に例示される抗体の１つと同じエピトープ、または重複するエピトープに結合し得る。例示される抗体として同じエピトープと競合するか、またはそれに結合する抗体及び断片は、同様の機能的特性を示すことが予期される。例示される抗原結合タンパク質及び断片は、表１〜表６中のものを含む、ＶＨ及びＶＬ領域、及び本明細書に提供されるＣＤＲを有するものを含む。したがって、特定の例として、提供される抗体は、（ａ）表１及び表２に列挙される抗体について列挙されるＣＤＲの１、２、３、４、５、もしくは６つすべて、（ｂ）表５及び表６に列挙される抗体について列挙されるＶＨ及びＶＬ領域から選択されるＶＨ及びＶＬ、または（ｃ）表５及び表６に列挙される抗体について特定されるＶＨ及びＶＬを含む２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む抗体と競合するものを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＰＤ１ＡＢ−１である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＰＤ１ＡＢ−２である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＰＤ１ＡＢ−３である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＰＤ１ＡＢ−４である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＰＤ１ＡＢ−５である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＰＤ１ＡＢ−６である。
【０３１０】
別の態様では、本明細書に提供される抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＰＤ−１またはカニクイザルＰＤ−１のエピトープを含む領域に結合する。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＰＤ−１のアミノ酸残基３３〜１０９を含むヒトＰＤ−１（配列番号４２）の領域に結合する。さらなる別の態様では、本明細書に提供される抗体は、ヒトＰＤ−１の特異的エピトープに結合する。
【０３１１】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内の残基１００〜１０９のうちの少なくとも１つ（配列番号４３）に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内の１００〜１０５（配列番号４４）の少なくとも１つに結合する。
【０３１２】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される少なくとも１つの残基に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＬ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される少なくとも１つの残基に結合する。
【０３１３】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される２つ以上の残基に結合する。
【０３１４】
他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される３つ以上の残基に結合する。
【０３１５】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される４つ以上の残基に結合する。
【０３１６】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される５つ以上の残基に結合する。
【０３１７】
別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される６つ以上の残基に結合する。
【０３１８】
さらなる別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される７つ以上の残基に結合する。
【０３１９】
さらなる別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される８つ以上の残基に結合する。
【０３２０】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される９つ以上の残基に結合する。
【０３２１】
他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群の１０個すべての残基に結合する。
【０３２２】
別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３に結合する。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＴ５１に結合する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＳ５７に結合する。１つの特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＬ１００に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ１０２に結合する。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＧ１０３に結合する。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＲ１０４に結合する。さらなる別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＧ１０３及びＲ１０４に結合する。さらなる別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＤ１０５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＨ１０７に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＳ１０９に結合する。上記参照のアミノ酸ＰＤ−１結合部位の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上の任意の組み合わせはまた企図される。
【０３２３】
１つの態様では、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１活性及び／または発現を調節する（例えば、ＰＤ−１シグナル伝達を活性化及び／またはＰＤ−１発現を阻害する）抗体が本明細書に記載される。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体である、ヒトＰＤ−１のＥＣＤに特異的に結合し、少なくとも１つのＰＤ−１活性（例えば、サイトカイン産生を阻害する）を活性化する（例えば、部分的に活性化する）ＰＤ−１アゴニストが本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、本明細書に提供されるＰＤ−１アゴニストは、ヒトＰＤ−１のＥＣＤに特異的に結合し、ＰＤ−１発現を下方制御する本明細書に提供される抗体である。ある特定の実施形態では、ＰＤ−１に特異的に結合し、（ａ）例えば、サイトカイン産生の阻害によって測定される場合、Ｔ細胞活性を減弱化し、及び／または（ｂ）細胞中のＰＤ−１発現を下方制御する抗体が本明細書に記載される。ある特定の実施形態では、ＰＤ−１に特異的に結合し、（ａ）例えば、サイトカイン産生の阻害によって測定される場合、Ｔ細胞活性を減弱化し、（ｂ）細胞中のＰＤ−１発現を下方制御し、及び／または（ｃ）ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２結合を阻害しない抗体が本明細書に記載される。ある特定の実施形態では、ＰＤ−１に特異的に結合する抗体は、ヒトＰＤ−１のＥＣＤ、またはそのヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに結合する。ある特定の実施形態では、抗体は、ＰＤ−Ｌ１結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体は、ＰＤ−Ｌ２結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体は、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２結合部位の両方とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合は、抗体によって阻害されない。他の実施形態では、ＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合は、抗体によって阻害されない。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合またはＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合のいずれも、抗体によって阻害されない。
【０３２４】
ＰＤ−１活性は、当業者に既知であるかまたは当該技術分野において記載されているものなどのＰＤ−１の任意の活性に関連し得る。ＰＤ−１活性及びＰＤ−１シグナル伝達は、本明細書において交換可能に使用される。ある特定の態様では、ＰＤ−１活性は、ＰＤ−１へのＰＤ−１リガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１）結合によって誘発される。ＰＤ−１の発現レベルは、本明細書に記載されるかまたは当業者に既知の方法によって評価され得る（例えば、ウエスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学、またはフローサイトメトリー）。ある特定の実施形態では、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を減少させる抗体が本明細書に記載される。ある特定の実施形態では、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｔ細胞活性を減弱化する抗体が本明細書に記載される。ある特定の実施形態では、ＰＤ−１に特異的に結合し、サイトカイン産生を阻害する抗体が本明細書に記載される。ある特定の実施形態では、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１シグナル伝達を活性化する（例えば、部分的に活性化する）抗体が本明細書に記載される。ある特定の実施形態では、ＰＤ−１に特異的に結合する抗体は、ヒトＰＤ−１のＥＣＤ、またはそのヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに結合する。ある特定の実施形態では、抗体は、ＰＤ−Ｌ１結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体は、ＰＤ−Ｌ２結合部位とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体は、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２結合部位の両方とは異なるヒトＰＤ−１のＥＣＤのエピトープに特異的に結合する。ある特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合は、抗体によって阻害されない。他の実施形態では、ＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合は、抗体によって阻害されない。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合またはＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合のいずれも、抗体によって阻害されない。
【０３２５】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を減弱化する（例えば、部分的に減弱化する）。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約１０％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約１５％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約２０％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約２５％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約３０％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約３５％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約４０％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約４５％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約５０％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約５５％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約６０％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約６５％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約７０％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約７５％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約８０％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約８５％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約９０％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約９５％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約９８％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約９９％減弱化する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約１００％減弱化する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞活性を少なくとも約２５％〜約６５％減弱化し得る（例えば、部分的に減弱化する）。特定の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、本明細書に記載される方法によって評価される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、当業者に既知の方法によって評価される。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、いずれの抗ＰＤ−１抗体にもよらない刺激の存在下でのＴ細胞活性と相対的である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞活性減弱化は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）による刺激の存在下でのＴ細胞活性と相対的である。
【０３２６】
一実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、Ｔ細胞増殖の阻害によって示される。特定の実施形態では、Ｔ細胞増殖は、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞増殖は、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約１０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約１５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約２０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約２５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約３０％を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約３５％を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約４０％を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約４５％を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約５５％を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約６０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約６５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約７０％を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約８０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約８５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約９０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約９８％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約９９％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約１００％阻害する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞増殖を少なくとも約２５％〜約６５％阻害し得る（例えば、部分的に阻害する）。特定の実施形態では、Ｔ細胞増殖は、本明細書に記載される方法によって評価される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞増殖は、当業者に既知の方法によって評価される。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞増殖は、いずれの抗ＰＤ−１抗体にもよらない刺激の存在下でのＴ細胞増殖と相対的である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞増殖は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）による刺激の存在下でのＴ細胞増殖と相対的である。
【０３２７】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約１５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約２０％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約３０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約３５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約４５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約５０％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約６０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約７５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約８０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約９０％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約９５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約９９％阻害する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の阻害は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の阻害は、当業者に既知の方法によって評価される（例えば、チミジン取り込み法、ＭＴＴアッセイ、または細胞増殖バイオマーカーアッセイ）。特定の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の阻害は、チミジン取り込み法によって評価される。別の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の阻害は、ＭＴＴアッセイによって評価される。さらなる別の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の阻害は、細胞増殖バイオマーカーアッセイによって評価される。特定の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、いずれの抗ＰＤ−１抗体にもよらない刺激の存在下でのＣＤ４＋Ｔ細胞増殖と比較して阻害される。他の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）による刺激の存在下でのＣＤ４＋Ｔ細胞増殖と比較して阻害される。
【０３２８】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を阻害する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の方法によって評価される（例えば、チミジン取り込み法、ＭＴＴアッセイ、または細胞増殖バイオマーカーアッセイ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、チミジン取り込み法によって評価される。別の実施形態では、ＥＣ５０は、ＭＴＴアッセイによって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、細胞増殖バイオマーカーアッセイによって評価される。
【０３２９】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約１５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約２０％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約３０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約３５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約４５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約５０％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約６０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約７５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約８０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約９０％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約９５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約９９％阻害する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の阻害は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の阻害は、当業者に既知の方法によって評価される（例えば、チミジン取り込み法、ＭＴＴアッセイ、または細胞増殖バイオマーカーアッセイ）。特定の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の阻害は、チミジン取り込み法によって評価される。別の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の阻害は、ＭＴＴアッセイによって評価される。さらなる別の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の阻害は、細胞増殖バイオマーカーアッセイによって評価される。特定の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖は、いずれの抗ＰＤ−１抗体にもよらない刺激の存在下でのＣＤ８＋Ｔ細胞増殖と比較して阻害される。他の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）による刺激の存在下でのＣＤ８＋Ｔ細胞増殖と比較して阻害される。
【０３３０】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を阻害する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の方法によって評価される（例えば、チミジン取り込み法、ＭＴＴアッセイ、または細胞増殖バイオマーカーアッセイ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、チミジン取り込み法によって評価される。別の実施形態では、ＥＣ５０は、ＭＴＴアッセイによって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、細胞増殖バイオマーカーアッセイによって評価される。
【０３３１】
一実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、ＰＤ−１受容体（例えば、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、またはＴＩＭ−３）ではないＴ細胞の表面での阻害受容体の発現の上方制御によって示される。いくつかの実施形態では、阻害受容体は、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、もしくはＴＩＭ−３、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、阻害受容体は、ＬＡＧ−３である。別の実施形態では、阻害受容体は、ＣＴＬＡ−４である。さらなる別の実施形態では、阻害受容体は、ＴＩＭ−３である。ある特定の実施形態では、阻害受容体は、ＬＡＧ−３及びＣＴＬＡ−４である。いくつかの実施形態では、阻害受容体は、ＬＡＧ−３及びＴＩＭ−３である。さらなる他の実施形態では、阻害受容体は、ＣＴＬＡ−４及びＴＩＭ−３である。さらなる他の実施形態では、阻害受容体は、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、またはＴＩＭ−３である。
【０３３２】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３受容体の発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約１０％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約１５％上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約２０％上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約２５％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約３０％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約３５％上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約４０％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約４５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約５０％上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約５５％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約６０％上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約６５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約７０％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約７５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約８０％上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約８５％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約９０％上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約９５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約９８％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約９９％上方制御する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＬＡＧ−３発現を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％上方制御する。いくつかの実施形態では、ＬＡＧ−３発現の上方制御は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＬＡＧ−３発現の上方制御は、当業者に既知の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＬＡＧ−３発現の上方制御は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＬＡＧ−３発現の上方制御は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＬＡＧ−３発現の上方制御は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＬＡＧ−３発現の上方制御は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。特定の実施形態では、ＬＡＧ−３発現は、いずれの抗ＰＤ−１抗体にもよらない刺激の存在下でのＬＡＧ−３発現と比較して上方制御される。他の実施形態では、ＬＡＧ−３発現は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）による刺激の存在下でのＬＡＧ−３発現と比較して上方制御される。
【０３３３】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＬＡＧ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＬＡＧ−３発現を上方制御する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＥＣ５０は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。
【０３３４】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４受容体の発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約１０％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約１５％上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約２０％上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約２５％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約３０％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約３５％上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約４０％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約４５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約５０％上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約５５％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約６０％上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約６５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約７０％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約７５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約８０％上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約８５％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約９０％上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約９５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約９８％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約９９％上方制御する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４発現を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％上方制御する。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ−４発現の上方制御は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＣＴＬＡ−４発現の上方制御は、当業者に既知の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＣＴＬＡ−４発現の上方制御は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＣＴＬＡ−４発現の上方制御は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＣＴＬＡ−４発現の上方制御は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＣＴＬＡ−４発現の上方制御は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。特定の実施形態では、ＣＴＬＡ−４発現は、いずれの抗ＰＤ−１抗体にもよらない刺激の存在下でのＣＴＬＡ−４発現と比較して上方制御される。他の実施形態では、ＣＴＬＡ−４発現は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）による刺激の存在下でのＣＴＬＡ−４発現と比較して上方制御される。
【０３３５】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＣＴＬＡ−４発現を上方制御する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＥＣ５０は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。
【０３３６】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３受容体の発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約１０％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約１５％上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約２０％上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約２５％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約３０％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約３５％上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約４０％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約４５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約５０％上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約５５％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約６０％上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約６５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約７０％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約７５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約８０％上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約８５％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約９０％上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約９５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約９８％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約９９％上方制御する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＩＭ−３発現を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％上方制御する。いくつかの実施形態では、ＴＩＭ−３発現の上方制御は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＴＩＭ−３発現の上方制御は、当業者に既知の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＴＩＭ−３発現の上方制御は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＴＩＭ−３発現の上方制御は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＴＩＭ−３発現の上方制御は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＴＩＭ−３発現の上方制御は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。特定の実施形態では、ＴＩＭ−３発現は、いずれの抗ＰＤ−１抗体にもよらない刺激の存在下でのＴＩＭ−３発現と比較して上方制御される。他の実施形態では、ＴＩＭ−３発現は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）による刺激の存在下でのＴＩＭ−３発現と比較して上方制御される。
【０３３７】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＴＩＭ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＴＩＭ−３発現を上方制御する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＥＣ５０は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。
【０３３８】
一実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、Ｔ細胞リコール応答の阻害によって示される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞リコール応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖によって測定される。他の実施形態では、Ｔ細胞リコール応答は、ＣＤ２５上方制御によって測定される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約１０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約１５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約２０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約２５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約３５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約４０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約４５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約５５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約６０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約６５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約７０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約８０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約８５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約９０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約９８％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約９９％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約１００％阻害する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約２５％〜約６５％阻害し得る（例えば、部分的に阻害する）。特定の実施形態では、Ｔ細胞リコール応答は、本明細書に記載される方法によって評価される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞リコール応答は、当業者に既知の方法によって評価される（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖アッセイまたはＣＤ２５上方制御アッセイ）。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞リコール応答は、いずれの抗ＰＤ−１抗体にもよらない刺激の存在下でのＴ細胞リコール応答と相対的である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞リコール応答は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）による刺激の存在下でのＴ細胞リコール応答と相対的である。
【０３３９】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化Ｔ細胞活性化バイオマーカーの下方制御によって示される。一実施形態では、Ｔ細胞活性化バイオマーカーは、ＣＤ２５である。別の実施形態では、Ｔ細胞活性化バイオマーカーは、ＣＤ６９である。
【０３４０】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５の発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約５％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約１０％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約１５％下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約２０％下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約２５％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約３０％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約３５％下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約４０％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約４５％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約５０％下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約５５％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約６０％下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約６５％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約７０％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約７５％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約８０％下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約８５％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約９０％下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約９５％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約９８％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約９９％下方制御する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５発現を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％下方制御する。いくつかの実施形態では、ＣＤ２５発現の下方制御は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＣＤ２５発現の下方制御は、当業者に既知の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＣＤ２５発現の下方制御は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＣＤ２５発現の下方制御は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＣＤ２５発現の下方制御は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＣＤ２５発現の下方制御は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。特定の実施形態では、ＣＤ２５発現は、いずれの抗ＰＤ−１抗体にもよらない刺激の存在下でのＣＤ２５発現と比較して下方制御される。他の実施形態では、ＣＤ２５発現は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）による刺激の存在下でのＣＤ２５発現と比較して下方制御される。
【０３４１】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＣＤ２５発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５発現を下方制御する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＥＣ５０は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。
【０３４２】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９の発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約５％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約１０％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約１５％下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約２０％下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約２５％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約３０％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約３５％下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約４０％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約４５％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約５０％下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約５５％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約６０％下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約６５％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約７０％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約７５％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約８０％下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約８５％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約９０％下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約９５％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約９８％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約９９％下方制御する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ６９発現を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％下方制御する。いくつかの実施形態では、ＣＤ６９発現の下方制御は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＣＤ６９発現の下方制御は、当業者に既知の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＣＤ６９発現の下方制御は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＣＤ６９発現の下方制御は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＣＤ６９発現の下方制御は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＣＤ６９発現の下方制御は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。特定の実施形態では、ＣＤ６９発現は、いずれの抗ＰＤ−１抗体にもよらない刺激の存在下でのＣＤ６９発現と比較して下方制御される。他の実施形態では、ＣＤ６９発現は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）による刺激の存在下でのＣＤ６９発現と比較して下方制御される。
【０３４３】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＣＤ６９発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ６９発現を下方制御する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＥＣ５０は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。
【０３４４】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、制御性Ｔ細胞バイオマーカーの上方制御によって示される。一実施形態では、制御性Ｔ細胞バイオマーカーは、Ｆｏｘｐ３である。
【０３４５】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３の発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約１０％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約１５％上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約２０％上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約２５％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約３０％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約３５％上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約４０％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約４５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約５０％上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約５５％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約６０％上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約６５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約７０％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約７５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約８０％上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約８５％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約９０％上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約９５％上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約９８％上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約９９％上方制御する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、Ｆｏｘｐ３発現を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％上方制御する。いくつかの実施形態では、Ｆｏｘｐ３発現の上方制御は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、Ｆｏｘｐ３発現の上方制御は、当業者に既知の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３発現の上方制御は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、Ｆｏｘｐ３発現の上方制御は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、Ｆｏｘｐ３発現の上方制御は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、Ｆｏｘｐ３発現の上方制御は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。特定の実施形態では、Ｆｏｘｐ３発現は、いずれの抗ＰＤ−１抗体にもよらない刺激の存在下でのＦｏｘｐ３発現と比較して上方制御される。他の実施形態では、Ｆｏｘｐ３発現は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）による刺激の存在下でのＦＯＸＰ３発現と比較して上方制御される。
【０３４６】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、Ｆｏｘｐ３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＦｏｘｐ３発現を上方制御する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＥＣ５０は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。
【０３４７】
一実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、Ｔ細胞疲弊の増加によって示される。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞疲弊の増加は、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞の低減によって測定される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞疲弊の増加は、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞の増加によって測定される。他の実施形態では、Ｔ細胞疲弊の増加は、ＬＡＧ−３発現の増加によって測定される。さらなる他の実施形態では、Ｔ細胞疲弊の増加は、ＣＴＬＡ−４発現の増加によって測定される。さらなる他の実施形態では、Ｔ細胞疲弊の増加は、ＴＩＭ−３発現の増加によって測定される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約１０％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約１５％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約２０％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約２５％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約３０％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約３５％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約４０％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約４５％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約５０％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約５５％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約６０％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約６５％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約７０％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約７５％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約８０％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約８５％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約９０％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約９５％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約９８％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約９９％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞疲弊を少なくとも約１００％増加させる。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、Ｔ細胞リコール応答を少なくとも約２５％〜約６５％阻害し得る（例えば、部分的に阻害する）。特定の実施形態では、Ｔ細胞疲弊は、本明細書に記載される方法によって評価される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞疲弊は、当業者に既知の方法によって評価される（例えば、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞フローサイトメトリー；ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞フローサイトメトリー；ＬＡＧ−３発現フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲ；ＣＴＬＡ−４発現フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲ；またはＴＩＭ−３発現フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲ）。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞疲弊は、いずれの抗ＰＤ−１抗体にもよらない刺激の存在下でのＴ細胞疲弊と相対的である。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞疲弊は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）による刺激の存在下でのＴ細胞疲弊と相対的である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。他の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。さらなる他の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞である。
【０３４８】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約５％低減する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約１０％低減する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約１５％低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約２０％低減する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約２５％低減する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約３０％低減する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約３５％低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約４０％低減する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約４５％低減する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約５０％低減する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約５５％低減する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約６０％低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約６５％低減する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約７０％低減する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約７５％低減する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約８０％低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約８５％低減する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約９０％低減する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約９５％低減する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約９８％低減する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約９９％低減する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％低減する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞の低減は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞の低減は、当業者に既知の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞の低減は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞の低減は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞の低減は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞の低減は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。特定の実施形態では、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞は、いずれの抗ＰＤ−１抗体にもよらない刺激の存在下でのＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞と比較して低減される。他の実施形態では、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）による刺激の存在下でのＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞と比較して低減される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。他の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。さらなる他の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞である。
【０３４９】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞を低減する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＥＣ５０は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。他の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。さらなる他の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞である。
【０３５０】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約５％増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約１０％増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約１５％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約２０％増加させる。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約２５％増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約３０％増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約３５％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約４０％増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約４５％増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約５０％増加させる。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約５５％増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約６０％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約６５％増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約７０％増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約７５％増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約８０％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約８５％増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約９０％増加させる。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約９５％増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約９８％増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約９９％増加させる。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％増加させる。いくつかの実施形態では、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞の増加は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞の増加は、当業者に既知の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞の増加は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞の増加は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞の増加は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞の増加は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。特定の実施形態では、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞は、いずれの抗ＰＤ−１抗体にもよらない刺激の存在下でのＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞と比較して増加される。他の実施形態では、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）による刺激の存在下でのＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞と比較して増加される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。他の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。さらなる他の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞である。
【０３５１】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞を増加させる。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＥＣ５０は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。他の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。さらなる他の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞である。
【０３５２】
一実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、制御性Ｔ細胞の増加によって示される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞の増加によって示される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞の増加によって示される。
【０３５３】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約５％増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約１０％増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約１５％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約２０％増加させる。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約２５％増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約３０％増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約３５％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約４０％増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約４５％増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増少なくとも約５０％増加させる。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約５５％増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約６０％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約６５％増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約７０％増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約７５％増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約８０％増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約８５％増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約９０％増加させる。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約９５％増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約９８％増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約９９％増加させる。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％増加させる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞の増加は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞の増加は、当業者に既知の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞の増加は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞の増加は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞の増加は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞の増加は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。特定の実施形態では、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞は、いずれの抗ＰＤ−１抗体にもよらない刺激の存在下でのＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞と比較して増加される。他の実施形態では、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）による刺激の存在下でのＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞と比較して増加される。
【０３５４】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞を増加させる。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＥＣ５０は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。
【０３５５】
一実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、サイトカイン分泌の阻害によって示される。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、ＩＦＮ−γ、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、及びＴＮＦ−αからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１である。いくつかの実施形態では、サイトカインはＩＬ−２である。他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−６である。別の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１２である。他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１７である。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−２２である。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−２３である。いくつかの実施形態では、サイトカインはＧＭ−ＣＳＦである。他の実施形態では、サイトカインはＩＦＮ−γである。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＴＮＦ−αである。ある特定の実施形態では、サイトカインはＩＬ−２及びＩＬ−１７である。いくつかの実施形態では、サイトカインはＩＬ−２及びＩＦＮ−γである。さらなる他の実施形態では、サイトカインはＩＬ−１７及びＩＦＮ−γである。さらなる他の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、及びＩＦＮ−γである。
【０３５６】
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を阻害する（例えば、細胞、例えば、Ｔ細胞から）。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約１５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約３５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約４５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約８０％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約９９％阻害する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２分泌の阻害は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＩＬ−２分泌の阻害は、当業者に既知の方法によって評価される（例えば、ＭｅｓｏＳｃａｌｅ（商標）Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）マルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＩＬ−２分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不在下でのＩＬ−２分泌と比較して阻害される。他の実施形態では、ＩＬ−２分泌は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＩＬ−２分泌と比較して阻害される。
【０３５７】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２分泌を阻害する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、ＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３５８】
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を阻害する（例えば、細胞、例えば、Ｔ細胞から）。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約１０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約１５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約２０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約２５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約３５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約４０％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約４５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約５０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約５５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約６５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約７０％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約８０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約８５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約９５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約９８％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約９９％阻害する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１７分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１７分泌の阻害は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＩＬ−１７分泌の阻害は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＩＬ−１７分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不在下でのＩＬ−１７分泌と比較して阻害される。他の実施形態では、ＩＬ−１７分泌は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＩＬ−１７分泌と比較して阻害される。
【０３５９】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＬ−１７分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１７分泌を阻害する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、ＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３６０】
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を阻害する（例えば、細胞、例えば、Ｔ細胞から）。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約１０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約１５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約２５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約３０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約３５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約４０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約４５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約５０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約５５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約６０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約６５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約７０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約７５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約８０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約８５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約９０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約９５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約９８％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約９９％阻害する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＦＮ−γ分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ−γ分泌の阻害は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＩＦＮ−γ分泌の阻害は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＩＦＮ−γ分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不在下でのＩＦＮ−γ分泌と比較して阻害される。他の実施形態では、ＩＦＮ−γ分泌は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＩＦＮ−γ分泌と比較して阻害される。
【０３６１】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＦＮ−γ分泌を阻害する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、ＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３６２】
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を阻害する（例えば、細胞、例えば、Ｔ細胞から）。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約１５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約３５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約４５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約８０％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約９９％阻害する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１分泌の阻害は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＩＬ−１分泌の阻害は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＩＬ−１分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不在下でのＩＬ−１分泌と比較して阻害される。他の実施形態では、ＩＬ−１分泌は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＩＬ−１分泌と比較して阻害される。
【０３６３】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１分泌を阻害する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、ＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３６４】
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を阻害する（例えば、細胞、例えば、Ｔ細胞から）。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約１５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約３５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約４５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約８０％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約９９％阻害する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−６分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−６分泌の阻害は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＩＬ−６分泌の阻害は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＩＬ−６分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不在下でのＩＬ−６分泌と比較して阻害される。他の実施形態では、ＩＬ−６分泌は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＩＬ−６分泌と比較して阻害される。
【０３６５】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−６分泌を阻害する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、ＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３６６】
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を阻害する（例えば、細胞、例えば、Ｔ細胞から）。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約１５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約３５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約４５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約８０％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約９９％阻害する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−１２分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−１２分泌の阻害は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＩＬ−１２分泌の阻害は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＩＬ−１２分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不在下でのＩＬ−１２分泌と比較して阻害される。他の実施形態では、ＩＬ−１２分泌は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＩＬ−１２分泌と比較して阻害される。
【０３６７】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−１２分泌を阻害する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、ＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３６８】
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を阻害する（例えば、細胞、例えば、Ｔ細胞から）。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約１５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約３５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約４５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約８０％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約９９％阻害する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２２分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２２分泌の阻害は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＩＬ−２２分泌の阻害は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＩＬ−２２分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不在下でのＩＬ−２２分泌と比較して阻害される。他の実施形態では、ＩＬ−２２分泌は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＩＬ−２２分泌と比較して阻害される。
【０３６９】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２２分泌を阻害する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、ＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３７０】
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を阻害する（例えば、細胞、例えば、Ｔ細胞から）。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約１５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約３５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約４５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約８０％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約９９％阻害する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＩＬ−２３分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、ＩＬ−２３分泌の阻害は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＩＬ−２３分泌の阻害は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＩＬ−２３分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不在下でのＩＬ−２３分泌と比較して阻害される。他の実施形態では、ＩＬ−２３分泌は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＩＬ−２３分泌と比較して阻害される。
【０３７１】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＩＬ−２３分泌を阻害する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、ＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３７２】
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する（例えば、細胞、例えば、Ｔ細胞から）。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約１５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約３５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約４５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約８０％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約９９％阻害する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦ分泌の阻害は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦ分泌の阻害は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦ分泌、抗ＰＤ−１抗体の不在下でのＧＭ−ＣＳＦ分と比較して阻害される。他の実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦ分泌は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＧＭ−ＣＳＦ分泌と比較して阻害される。
【０３７３】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＧＭ−ＣＳＦ分泌を阻害する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、ＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３７４】
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を阻害する（例えば、細胞、例えば、Ｔ細胞から）。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約１０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約１５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約２０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約２５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約３０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約３５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約４０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約４５％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約５０％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約５５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約６０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約６５％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約８０％阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約８５％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約９０％阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約９５％阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約９８％阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約９９％阻害する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＴＮＦ−α分泌を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％阻害する。いくつかの実施形態では、ＴＮＦ−α分泌の阻害は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＴＮＦ−α分泌の阻害は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＴＮＦ−α分泌は、抗ＰＤ−１抗体の不在下でのＴＮＦ−α分と比較して阻害される。他の実施形態では、ＴＮＦ−α分泌は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）の存在下でのＴＮＦ−α分泌と比較して阻害される。
【０３７５】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＴＮＦ−α分泌を阻害する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、ＭＳＤマルチプレックスアッセイ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、ＭＳＤマルチプレックスアッセイによって評価される。
【０３７６】
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を下方制御する（例えば、細胞、例えば、Ｔ細胞中で）。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約５％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約１０％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約１５％下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約２０％下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約２５％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約３０％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約３５％下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約４０％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約４５％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約５０％下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約５５％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約６０％下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約６５％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約７０％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約７５％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約８０％下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約８５％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約９０％下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約９５％下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約９８％下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約９９％下方制御する。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１発現を少なくとも約２５％または３５％、任意に約７５％下方制御する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１発現の下方制御は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＰＤ−１発現の下方制御は、当業者に既知の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＰＤ−１発現の下方制御は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＰＤ−１発現の下方制御は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ−１発現の下方制御は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ−１発現の下方制御は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。特定の実施形態では、ＰＤ−１発現は、抗ＰＤ−１抗体の不在下でのＰＤ−１発現と比較して下方制御される。他の実施形態では、ＰＤ−１発現は、無関連抗体（例えば、ＰＤ−１に特異的に結合しない抗体）による刺激の存在下でのＰＤ−１発現と比較して下方制御される。
【０３７７】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体（例えば、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つまたはその抗原結合断片、あるいは抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、もしくはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＰＤ−１発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約４０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約３０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約２０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約１ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．１ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、多くても約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約４０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約３０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約２０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１０ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約１ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．７５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．１ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．０１ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。別の実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００５ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。一実施形態では、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体は、少なくとも約０．００１ｎＭのＥＣ５０でＰＤ−１発現を下方制御する。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、本明細書に記載される方法によって評価される。他の実施形態では、ＥＣ５０は、当業者に既知の他の方法によって評価される（例えば、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法、またはＲＴ−ＰＣＲ）。特定の実施形態では、ＥＣ５０は、フローサイトメトリーによって評価される。別の実施形態では、ＥＣ５０は、ウエスタンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ノーザンブロット法によって評価される。さらなる別の実施形態では、ＥＣ５０は、ＲＴ−ＰＣＲによって評価される。
【０３７８】
本方法のある特定の実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後に早ければ生じる。別の実施形態では、下方制御は、接触の６時間後に早ければ生じる。さらなる別の実施形態では、下方制御は、接触の８時間後に早ければ生じる。さらなる別の実施形態では、下方制御は、接触の１０時間後に早ければ生じる。一実施形態では、下方制御は、接触の１２時間後に早ければ生じる。別の実施形態では、下方制御は、接触の１４時間後に早ければ生じる。さらなる別の実施形態では、下方制御は、接触の１６時間後に早ければ生じる。さらなる別の実施形態では、下方制御は、接触の１８時間後に早ければ生じる。一実施形態では、下方制御は、接触の２０時間後に早ければ生じる。別の実施形態では、下方制御は、接触の２２時間後に早ければ生じる。さらなる別の実施形態では、下方制御は、接触の２４時間後に早ければ生じる。いくつかの実施形態では、接触は、抗体を伴う。他の実施形態では、接触は、その抗原結合断片を伴う。
【０３７９】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、サイトカイン阻害に先立つ。一実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。一実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。一実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害に先立つ。
【０３８０】
他の実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、サイトカイン阻害と同時である。一実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。一実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。一実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害と同時である。
【０３８１】
さらなる他の実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、サイトカイン阻害の後である。一実施形態では、Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１発現の下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。一実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１６時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の１８時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。一実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２０時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２２時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。さらなる別の実施形態では、下方制御は、抗体またはその抗原結合断片との接触の２４時間後に早ければ生じ、サイトカイン阻害の後である。
【０３８２】
４．３．１．１ポリクローナル抗体
本開示の抗体は、ポリクローナル抗体を含み得る。ポリクローナル抗体の調製方法は、当業者に既知である。ポリクローナル抗体は、哺乳動物において、例えば、免疫付与剤及び必要に応じてアジュバントの１回以上の注入によって産生され得る。典型的には、免疫付与剤及び／またはアジュバントは、複数の皮下または腹腔内注入によって哺乳動物に注入される。免疫付与剤は、ＰＤ−１ポリペプチドまたはその融合タンパク質を含み得る。免疫付与される哺乳動物において免疫原性であることが知られているタンパク質に免疫付与剤を複合体化させるか、または哺乳動物をタンパク質及び１つ以上のアジュバントで免疫化することが有用であり得る。そのような免疫原性タンパク質の例としては、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、及び大豆トリプシン阻害剤が挙げられるが、それらに限定されない。用いられ得るアジュバントの例としては、Ｒｉｂｉ、ＣｐＧ、Ｐｏｌｙ  １Ｃ、フロイント完全アジュバント、及びＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（モノホスホリル脂質Ａ、合成トレハロースジコリノミコラート）が挙げられる。免疫化プロトコルは、過度な実験なしに当業者によって選択され得る。次いで、哺乳動物が採血され得、血清がＰＤ−１抗体力価についてアッセイされる。望ましい場合、哺乳動物は、抗体力価が増加または定常化するまで追加免疫され得る。追加的または代替的には、リンパ球は、以下に記載される通り、ハイブリドーマからのモノクローナル抗体の融合及び調製ために免疫化された動物から得られる場合がある。
【０３８３】
４．３．１．２モノクローナル抗体
本開示の抗体は、代替的に、モノクローナル抗体であり得る。モノクローナル抗体は、最初にＫｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−９７により記載されるハイブリドーマ法を使用して作製され得るか、または組み換えＤＮＡ法により作製され得る（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。
【０３８４】
ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物、例えばハムスターなどが、上述のように免疫化されて、免疫化に使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を産生するか、または産生することのできるリンパ球が誘発される。あるいは、リンパ球は、インビトロで免疫化され得る。免疫化の後、リンパ球が単離され、次いでポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用して骨髄腫細胞株と融合されて、ハイブリドーマ細胞が形成される（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ５９−１０３（１９８６））。
【０３８５】
このように調製されたハイブリドーマ細胞は、好適な培地に播種され増殖し、この培地は、ある特定の実施形態では、非融合の親骨髄腫細胞（融合パートナーとも称される）の増殖または生存を阻害する１つ以上の物質を含有する。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠如する場合、ハイブリドーマの選択培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含むことになり（ＨＡＴ培地）、これらは、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防止する。
【０３８６】
例示的な融合パートナー骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定した高レベルの産生を支持し、かつ非融合の親細胞に対して選択する選択培地に対して感受性を示すものである。例示的な骨髄腫細胞株は、ＳＰ−２及び誘導体、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手可能なＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞、ならびにＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から入手可能なＭＯＰＣ−２１及びＭＰＣ−１１マウス腫瘍由来のものなどのマウス骨髄腫株である。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株も、ヒトモノクローナル抗体の産生について説明されている（Ｋｏｚｂｏｒ，１９８４，Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１−０５、及びＢｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ５１−６３（１９８７））。
【０３８７】
ハイブリドーマ細胞が成長する培養培地は、抗原に対して指向されたモノクローナル抗体の産生に関してアッセイされる。ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降またはインビトロ結合アッセイ、例えば、ＲＩＡまたはＥＬＩＳＡによって決定される。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０−３９に記載されているスキャチャード分析によって決定され得る。
【０３８８】
所望の特異性、親和性、及び／または活性を有する抗体を産生するハイブリドーマ細胞が一旦特定されると、クローンが限界希釈手技によってサブクローニングされ、標準の方法によって成長し得る（Ｇｏｄｉｎｇ（上記参照））。この目的に好適な培養培地としては、例えば、ＤＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。加えて、ハイブリドーマ細胞は、例えば、マウスにこの細胞をｉ．ｐ．注射することによって、動物において腹水癌としてインビボで増殖させることができる。
【０３８９】
サブクローンにより分泌されるモノクローナル抗体は、例えば、親和性クロマトグラフィー（例えば、タンパク質Ａまたはタンパク質Ｇ−セファロースを使用する）またはイオン交換クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析などの従来の抗体精製手技によって、培地、腹水、または血清から好適に分離される。
【０３９０】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離及び配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの源として機能する。単離されると、ＤＮＡが発現ベクター内に入れられてよく、これは次いで、宿主細胞、例えばＥ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはさもなければ抗体タンパク質を産生しない骨髄腫などにトランスフェクトされて、組み換え宿主細胞内のモノクローナル抗体の合成体が得られる。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組み換え発現に関する概説論文としては、Ｓｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２５６−６２及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，１９９２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１−８８が挙げられる。
【０３９１】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１エピトープに結合する抗体は、（１）本明細書に記載されるＶＨ及び／またはＶＬドメインのいずれか１つをコードするヌクレオチド配列の補体に、ストリンジェントな条件下（例えば、約４５℃で６倍の塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でフィルター結合されたＤＮＡにハイブリダイゼーションし、その後に約５０〜６５℃で０．２倍のＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中で１回以上の洗浄）、高度にストリンジェントな条件下（例えば、約４５℃で６倍のＳＳＣ中でフィルター結合された核酸にハイブリダイゼーションし、その後に約６８℃で０．１倍のＳＳＣ／０．２％ＳＤＳで１回以上の洗浄）、または当業者に既知の他のストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされる、ＶＨドメインのアミノ酸配列及び／またはＶＬドメインのアミノ酸配列を含む。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．Ｉ，６．３．１−６．３．６  ａｎｄ  ２．１０．３（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，１９８９）を参照されたい。
【０３９２】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１エピトープに結合する抗体は、表１及び表２に示されるＶＨ  ＣＤＲ及び／またはＶＬ  ＣＤＲのいずれか１つをコードするヌクレオチド配列の補体に、ストリンジェントな条件下（例えば、約４５℃で６倍のＳＳＣ中でフィルター結合されたＤＮＡにハイブリダイゼーションし、その後に約５０〜６５℃で０．２倍のＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中で１回以上の洗浄）、高度にストリンジェントな条件下（例えば、約４５℃で６倍のＳＳＣ中でフィルター結合された核酸にハイブリダイゼーションし、その後に約６８℃で０．１倍のＳＳＣ／０．２％ＳＤＳで１回以上の洗浄）、または当業者に既知の他のストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によってコードされるＶＨ  ＣＤＲのアミノ酸配列またはＶＬ  ＣＤＲのアミノ酸配列を含む（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）を参照されたい）。
【０３９３】
さらなる実施形態では、モノクローナル抗体または抗体断片は、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ａｎｄ  Ａｉｔｋｅｎ  ｅｄｓ．，２００２）に記載されている技術を使用して産生される抗体ファージライブラリから単離され得る。原則として、合成抗体クローンは、ファージコートタンパク質に融合した抗体可変領域（Ｆｖ）の様々な断片をディスプレイするファージを含むファージライブラリをスクリーニングすることによって選択される。そのようなファージライブラリは、所望の抗原に対してスクリーニングされる。所望の抗原に結合することができるＦｖ断片を発現するクローンは、抗原に吸着し、それ故に、ライブラリ内の非結合クローンから分離される。その後、結合クローンは、抗原から溶出し、抗原吸着／溶出の追加のサイクルによってさらに富化され得る。
【０３９４】
可変ドメインは、例えば、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３−５５に記載されるように、ＶＨ及びＶＬが短い柔軟性ペプチドを介して共有結合される一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片として、またはそれらが各々定常ドメインに融合して非共有結合的に相互作用するＦａｂ断片としてのいずれかで、ファージ上に機能的にディスプレイされ得る。
【０３９５】
ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ＰＣＲによって別個にクローニングされ、ファージライブラリ内でランダムに組み換えられ得、その後、これは、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）に記載されるように、抗原結合クローンについて検索され得る。免疫化源由来のライブラリは、ハイブリドーマの構築を必要とすることなく、高親和性抗体を免疫原に提供する。あるいは、ナイーブレパートリーは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５−３４に記載されるように、クローニングされて、いずれの免疫化も伴うことなく、単一のヒト抗体源を広範囲の非自己抗原及び自己抗原に提供することができる。最後に、ナイーブライブラリは、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１−８８に記載されるように、幹細胞由来の再配置されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、かつランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用することによっても合成的に作製されて、高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、インビトロでの再配置を達成することができる。
【０３９６】
ライブラリのスクリーニングは、当該技術分野で既知の様々な技法によって達成され得る。例えば、ＰＤ−１（ＰＤ−１ポリペプチド、断片、またはエピトープ）は、吸着プレートに付着した宿主細胞に発現された吸着プレートのウェルを被覆するために使用され得るか、または細胞選別で使用され得るか、ストレプトアビジン被覆ビーズで捕捉するためにビオチンに複合体化され得るか、またはディスプレイライブラリをパニングするための任意の他の方法で使用され得る。遅い解離速度（例えば、良好な結合親和性）を有する抗体の選択は、Ｂａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，８：３０９−１４及びＷＯ９２／０９６９０に記載されるように、長時間の洗浄及び一価ファージディスプレイの使用、ならびにＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：７７９−８３に記載されるように、抗原の低被覆密度の使用によって促進され得る。
【０３９７】
抗ＰＤ−１抗体は、目的とするファージクローンを選択するのに好適な抗原スクリーニング手順を設計し、続いて、目的とするファージクローン由来のＶＨ及び／またはＶＬ配列（例えば、Ｆｖ配列）、またはＶＨ及びＶＬ配列からの様々なＣＤＲ配列を使用した完全長抗ＰＤ−１抗体クローンの構造、ならびにＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）に記載されている好適な定常領域（例えば、Ｆｃ）配列を設計することによって得られることができる。
【０３９８】
別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、Ｂｏｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１０８：２０４５５−６０、例えば、ＳＨＭ−ＸＨＬ（商標）プラットフォーム（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）に記載されるような方法を使用することによって産生される。簡潔には、このアプローチでは、ＩｇＧの完全ヒトライブラリは、開始ライブラリとして哺乳動物細胞株（例えば、ＨＥＫ２９３）中に構築される。標的ペプチドまたはエピトープに結合する免疫グロブリンをディスプレイする哺乳動物細胞が選択され（例えば、ＦＡＣＳ選別によって）、次いで、活性化誘導性シチジンデアミナーゼ（ＡＩＤ）誘発体細胞超変異は、インビトロで再産生され、抗体の最初に選択されたプールの多様性を拡大する。インビトロ体細胞超変異で哺乳動物細胞表面ディスプレイに結合することによる親和性成熟のいくつかのラウンドの後、高親和性、高特異性抗ＰＤ−１抗体が生成される。抗体ライブラリ及び／または抗体親和性成熟を生成するために使用され得るさらなる方法は、例えば、米国特許第８，６８５，８９７号及び第８，６０３，９３０号、ならびに米国公開第２０１４／０１７０７０５号、第２０１４／００９４３９２号、第２０１２／００２８３０１号、第２０１１／０１８３８５５号、及び第２００９／００７５３７８号に開示されており、それらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０３９９】
４．３．１．３抗体断片
本開示は、ＰＤ−１に結合する抗体及び抗体断片を提供する。ある特定の状況では、全抗体ではなく抗体断片を使用する利点がある。より小さなサイズの断片により、迅速なクリアランスが可能になり、細胞、組織、または器官へのアクセスの改善がもたらされ得る。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．９：１２９−３４を参照されたい。
【０４００】
抗体断片を産生するための様々な技法が開発されている。従来、これらの断片は、無傷抗体のタンパク質分解消化により得られていた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１７、及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１−８３を参照されたい）。しかしながら、これらの断片は、現在、組み換え宿主細胞により直接産生され得る。Ｆａｂ、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ抗体断片がすべて、Ｅ．ｃｏｌｉまたは酵母細胞中に発現され、Ｅ．ｃｏｌｉまたは酵母細胞から分泌され得るため、これらの断片の容易な大量産生が可能になる。抗体断片は、上述の抗体ファージライブラリから単離され得る。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収され、化学的にカップリングされて、Ｆ（ａｂ’）２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−６７）。別のアプローチに従って、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組み換え宿主細胞培養から直接単離することができる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含むインビボ半減期が増加したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片が、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。抗体断片を産生するための他の技法が、当業者に明らかであるだろう。ある特定の実施形態では、抗体は、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である（例えば、ＷＯ９３／１６１８５、米国特許第５，５７１，８９４号及び第５，５８７，４５８号を参照されたい）。Ｆｖ及びｓｃＦｖは、定常領域を欠く無傷の結合部位を有し、それ故に、それらは、インビボでの使用中の非特異的結合の低減に好適であり得る。ｓｃＦｖ融合タンパク質が構築されて、ｓｃＦｖのアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかでのエフェクタータンパク質の融合をもたらすことができる（例えば、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ  ｅｄ．（上記参照）を参照されたい）。抗体断片はまた、例えば、上記に引用される参考文献に記載されるように、「直鎖状抗体」であり得る。そのような直鎖状抗体は、単一特異性、または二重特異性などの多重特異性であり得る。
【０４０１】
同様の抗体由来結合構造は、分離可変ドメイン（Ｖドメイン）であり、また単一可変ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）とも命名されている。ある特定の種類の生物、ラクダ科及び軟骨魚類は、それらの免疫系の一部としてＦｃ同等のドメイン構造上にマウントされている高親和性単一Ｖ様ドメインを有する。（Ｗｏｏｌｖｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ５０：９８−１０１、及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１０１：１２４４４−４９）。Ｖ様ドメイン（ラクダ類においてＶｈＨ、及びサメ類においてＶ−ＮＡＲを称される）は、典型的には、標的抗原の腔の浸透を可能にする長い表面ループをディスプレイする。それらはまた、疎水性表面パッチを被覆することによって単離されたＶＨドメインを安定化する。
【０４０２】
これらのＶｈＨ及びＶ−ＮＡＲドメインは、ｓｄＡｂを操作するために使用されている。ヒトＶドメインバリアントは、安定した、高結合ＶＬ及びＶＨ由来ドメインをもたらしているファージライブラリ及び他のアプローチからの選択を使用して設計されている。
【０４０３】
本明細書に提供される抗体は、これらに限定されないが、免疫グロブリン分子及びｉ免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、例えば、ＰＤ−１エピトープに結合する抗原結合部位を含む分子を含む。本明細書に提供される免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）であり得る。
【０４０４】
抗体のバリアント及び誘導体は、ＰＤ−１エピトープに結合する能力を保持する抗体の機能的断片を含む。例示的な機能的断片は、Ｆａｂ断片（例えば、抗原結合ドメインを含み、かつジスルフィド結合によって架橋された軽鎖及び重鎖の一部を含む、抗体断片）；Ｆａｂ’（例えば、ヒンジ領域を通してＦａｂ及び重鎖の追加の部分を含む単一抗原結合ドメインを含む、抗体断片）；Ｆ（ａｂ’）２（例えば、重鎖のヒンジ領域で鎖間ジスルフィド結合によって結合されている２つのＦａｂ’分子；Ｆａｂ’分子は、同じまたは異なるエピトープに対して指向され得る）；二重特異性Ｆａｂ（例えば、２つの抗原結合ドメインを有するＦａｂ分子であり、それら各々は異なるエピトープに指向され得る）；ｓｃＦｖとしても既知である可変領域を含む一本鎖（例えば、１０〜２５個のアミノ酸の鎖によって一緒に結合されている抗体の単一軽鎖及び重鎖の可変、抗原結合決定領域）、ジスルフィド結合Ｆｖ、またはｄｓＦｖ（例えば、ジスルフィド結合によって一緒に結合されている抗体の単一軽鎖及び重鎖の可変、抗原結合決定領域）；ラクダ化ＶＨ（例えば、ＶＨ界面でいくつかのアミノ酸が天然発生ラクダ抗体の重鎖において見出されるものである抗体の単一重鎖の可変、抗原結合決定領域）、二重特異性ｓｃＦｖ（例えば、２つの抗原結合ドメインを有するｓｃＦｖまたはｄｓＦｖ分子であり、それらの各々は、異なるエピトープに指向され得る）；ダイアボディ（例えば、第１のｓｃＦｖのＶＨドメインが第２のｓｃＦｖのＶＬドメインと組み立て、第１のｓｃＦｖのＶＬドメインが第２のｓｃＦｖのＶＨドメインと組み立てるときに形成される二量体化ｓｃＦｖ；ダイアボディの２つの抗原結合領域は、同じまたは異なるエピトープに対して指向され得る）；及びトリアボディ（例えば、ダイアボディと同様の様式であるが、３つの抗原結合ドメインが単一複合体中に作製される様式で形成される三量体化；３つの抗原結合ドメインは、同じまたは異なるエピトープに対して指向され得る）を含む。
【０４０５】
４．３．１．４ヒト化抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒト及び／またはカニクイザルＰＤ−１を含むＰＤ−１に結合するヒト化抗体であり得る。例えば、本開示のヒト化抗体は、表１及び表２に示されるように、１つ以上のＣＤＲを含み得る。非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法が当該技術分野で既知である。例えば、ヒト化抗体は、非ヒトである源からそれに導入された１つ以上のアミノ酸残基を有し得る。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、典型的には「移入」可変ドメインから得られる「移入」残基と称される。ヒト化は、例えば、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−２７、及びＶｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−３６）の方法に従って、超可変領域配列をヒト抗体の対応する配列に置換することによって行うことができる。
【０４０６】
いくつかの場合では、ヒト化抗体は、ＣＤＲグラフティングによって構築され、そこで親非ヒト抗体（例えば、齧歯類）６つのＣＤＲのアミノ酸配列ヒト抗体フレームワーク上にグラフティングされる。例えば、Ｐａｄｌａｎらは、ＣＤＲ中の３分の１の残基のみが抗原を実際に接触させることを判定し、これらを「特異性決定残基」、またはＳＤＲと命名した（Ｐａｄｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１３３−３９）。ＳＤＲの技術では、ＳＤＲ残基のみが、ヒト抗体フレームワーク上にグラフティングされる（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４を参照されたい）。
【０４０７】
ヒト化抗体を作製するのに使用される軽及び重の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を低減するのに非常に重要であり得る。例えば、いわゆる「最良適合」法に従って、非ヒト（例えば、齧歯類）抗体の可変ドメインの配列を、既知のヒト可変−ドメイン配列の全ライブラリに対してスクリーニングする。齧歯類の配列に最も近いヒト配列をヒト化抗体のヒトフレームワークとして選択され得る（Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６−３０８、及びＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−１７）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定の下位群のすべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークがいくつかの異なるヒト化抗体に使用され得る（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：４２８５−８９、及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３−３２）。いくつかの場合では、フレームワークは、最も豊富なヒトサブクラス、ＶＬ６下位群Ｉ（ＶＬ６Ｉ）及びＶＨ下位群ＩＩＩ（ＶＨＩＩＩ）のコンセンサス配列に由来する。別の方法では、ヒト生殖細胞系遺伝子は、フレームワーク領域の源として使用される。
【０４０８】
超ヒト化と称されるＣＤＲの比較に基づく代替的な規範では、ＦＲ相同性は、無関係である。方法は、機能的ヒト生殖細胞系遺伝子レパートリーを有する非ヒト配列の比較からなる。次いで、マウス配列と同じまたは密接に関係する正準構造が選択される。次に、非ヒト抗体を有する正準構造を共有する遺伝子内で、ＣＤＲ内で最も高い相同性を有するものがＦＲドナーとして選択される。最後に、非ヒトＣＤＲは、これらのＦＲ上にグラフティングされる（例えば、Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９−２５を参照されたい）。
【０４０９】
抗体が、抗原に対するそれらの親和性及び他の好ましい生物学的特性を保持してヒト化されることがさらに概して望ましい。この目標を達成するために、一方法によれば、ヒト化抗体は、親及びヒト化配列の三次元モデルを使用した親配列及び様々な概念的ヒト化産物の分析過程によって調製される。三次元免疫グロブリンモデルは一般的に、利用可能であり、当業者にはよく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の推定三次元立体配座構造を図解及び表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらは、例えば、ＷＡＭ（Ｗｈｉｔｅｌｅｇｇ  ａｎｄ  Ｒｅｅｓ，２０００，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１３：８１９−２４）、Ｍｏｄｅｌｌｅｒ（Ｓａｌｉ  ａｎｄ  Ｂｌｕｎｄｅｌｌ，１９９３，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３４：７７９−８１５）、及びＳｗｉｓｓ  ＰＤＢ  Ｖｉｅｗｅｒ（Ｇｕｅｘ  ａｎｄ  Ｐｅｉｔｓｃｈ，１９９７，Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  １８：２７１４−２３）を含む。これらのディスプレイの精査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性の高い役割の分析、例えば、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響する残基の分析を可能にする。このように、標的抗原（複数可）に対する増加した親和性等の所望の抗体特徴が達成されるように、ＦＲ残基をレシピエント及び移入配列から選択し、組み合わされ得る。概して、超可変領域残基は、抗原結合への影響に直接的に、かつ最も実質的に関与している。
【０４１０】
抗体のヒト化のための別の方法は、ヒトストリング含有量（ＨＳＣ（Ｈｕｍａｎ  Ｓｔｒｉｎｇ  Ｃｏｎｔｅｎｔ））と命名されている抗体人間性の計量に基づく。この方法は、マウス配列をヒト生殖細胞系遺伝子のレパートリーと比較し、その差異は、ＨＳＣとして点数化される。次いで、標的配列は、グローバルな同一性測定を使用するよりも、そのＨＳＣを最大化することによってヒト化され、複数の多様なヒト化バリアントを生成する（Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：１９８６−９８）。
【０４１１】
上記に記載される方法に加えて、経験的な方法は、ヒト化抗体を生成及び選択するために使用され得る。これら方法は、ヒト化バリアントの大きなライブラリの生成及び技術の豊富化または高スループットスクリーニング技術を使用した最良のクローンの選択に基づくものである。抗体バリアントは、ファージ、リボソーム、及び酵母ディスプレイライブラリから、ならびに細菌コロニースクリーニングによって単離され得る（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，２００５，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１０５−１６、Ｄｕｆｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２４：５２３−２９、Ｆｅｌｄｈａｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：１６３−７０、及びＳｃｈｌａｐｓｃｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．１７：８４７−６０を参照されたい）。
【０４１２】
ＦＲライブラリアプローチでは、残基バリアントの収集は、ＦＲにおける特定の位置で導入され、その後にグラフティングされたＣＤＲを最良で支持するＦＲを選択するためにライブラリのスクリーニングが続く。置換される残基は、ＣＤＲ構造に潜在的に寄与するとして特定されるか（例えば、Ｆｏｏｔｅ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−９９を参照されたい）、またはＢａｃａら  （１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−８４）によって特定される標的残基のより限定されるセットからの、いくつかまたはすべての「バーニア」残基を含み得る。
【０４１３】
ＦＲシャッフリングでは、ＦＲ全体は、選択される残基バリアントのコンビナトリアルライブラリを作製する代わりに非ヒトＣＤＲと組み合わされる（例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：４３−６０）。ライブラリは、最初にＶＬ、その後にＶＨをヒト化する２段階プロセスで結合するためにスクリーニングされ得る。代替的には、１段階ＦＲシャッフリングプロセスが使用され得る。そのようなプロセスは、結果として得られる抗体が、増強された発現、増加された親和性、及び熱安定性を含む、改善された生化学的及び物理化学特性を呈したため、２段階スクリーニングよりも効率的であることが示されている（例えば、Ｄａｍｓｃｈｒｏｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：３０４９−６０を参照されたい）。
【０４１４】
「ヒューマニアリング」方法は、本質的な最小の特異性決定因子（ＭＳＤ）の実験的同一化に基づき、ヒトＦＲのライブラリへの非ヒト断片の連続的な置き換え、及び結合の評価に基づく。それは、非ヒトＶＨ及びＶＬ鎖のＣＤＲ３の領域で始まり、ＶＨ及びＶＬの両方のＣＤＲ１及びＣＤＲ２を含むヒトＦＲへの非ヒト抗体の他の領域を進行的に置き換える。この方法論は、典型的には、エピトープ保持及び異なるヒトＶセグメントＣＤＲを有する複数のサブクラスからの抗体の同一化をもたらす。ヒューマニアリングは、ヒト生殖細胞系遺伝子抗体と９１〜９６％同種である抗体の単離を可能にする（例えば、Ａｌｆｅｎｉｔｏ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｈｅａｌｔｈｔｅｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ’ｓ  Ｔｈｉｒｄ  Ａｎｎｕａｌ  ＰＥＧＳ，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｓｕｍｍｉｔ，２００７を参照されたい）。
【０４１５】
「ヒト操作」方法は、低減された免疫原性を有するが、それでも元の非ヒト抗体の望ましい結合特性を保持するヒトにおける修飾された抗体を産生するために、抗体のアミノ酸配列に特異的変化を作ることによって、マウスもしくはキメラ抗体または抗体断片などの非ヒト抗体または抗体断片を改変することを含む。概して、本技法は、非ヒト（例えば、マウス）抗体のアミノ酸残基を「低リスク」、「中リスク」または「高リスク」残基として分類することを含む。分類は、置換が結果として得られる抗体の折り畳みに影響するというリスクに対する特定の置換（例えば、ヒトにおける免疫原性）を作製することの予期される利益を評価するグローバルリスク／報酬算出を使用して行われる。非ヒト（例えば、マウス）抗体配列の所定の位置（例えば、低リスクまたは中リスク）で置換される特定のヒトアミノ酸残基は、特異性またはコンセンサスヒト抗体配列の対応する領域を有する非ヒト抗体の可変領域からのアミノ酸配列を整列することによって選択され得る。非ヒト配列における低リスクまたは中リスクでのアミノ酸残基は、整列に従ってヒト抗体配列における対応する残基へ置換され得る。ヒト操作タンパク質を作製するために技法は、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７：８０５−１４、米国特許第５，７６６，８８６号、第５，７７０，１９６号、第５，８２１，１２３号、及び第５，８６９，６１９号、ならびにＰＣＴ公開ＷＯ９３／１１７９４により詳細に記載されている。
【０４１６】
４．３．１．５ヒト抗体
ヒト抗ＰＤ−１抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列（複数可）を既知のヒト定常ドメイン配列（複数可）と組み合わせることによって構築され得る。あるいは、本開示のヒトモノクローナル抗ＰＤ−１抗体は、ハイブリドーマ法によって作製され得る。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株は、例えば、Ｋｏｚｂｏｒ，１９８４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１−０５、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ５１−６３（１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６−９５によって説明されている。
【０４１７】
内因性免疫グロブリン産生の不在下で免疫化時にヒト抗体の全レパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を産生することが可能である。ヒト抗体レパートリーを発現するトランスジェニックマウスは、幅広い様々な潜在的な薬物標的に対して高親和性ヒト配列モノクローナル抗体を生成するために使用されている（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，１９９５，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６（５）：５６１−６６、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｔａｕｓｓｉｎｇ，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８（４）：４５５−５８、米国特許第６，０７５，１８１号及び第６，１５０，５８４号、ならびにＬｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１１７−２５を参照されたい）。
【０４１８】
代替的には、ヒト抗体は、標的抗原に対して指向される抗体を産生するヒトＢリンパ球の不死化を介して調製され得る（例えば、そのようなＢリンパ球は、個体から回収され得るか、またはインビトロで免疫化されている場合がある）（例えば、Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：８６−９５、及び米国特許第５，７５０，３７３号を参照されたい）。
【０４１９】
遺伝子シャッフリングを使用して、ヒト抗体を非ヒト抗体、例えば、齧歯類抗体から誘導することもでき、ヒト抗体は、出発非ヒト抗体と同様の親和性及び特異性を有する。「エピトープインプリンティング」または「誘導選択」とも称されるこの方法に従って、本明細書に記載のファージディスプレイ技法によって得られた非ヒト抗体断片の重鎖可変領域または軽鎖可変領域のいずれかが、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーで置き換えられ、非ヒト鎖／ヒト鎖ｓｃＦｖまたはＦａｂキメラ集団を作り出す。抗原を用いた選択により、非ヒト鎖／ヒト鎖キメラｓｃＦｖまたはＦａｂの単離がもたらされ、そこで、ヒト鎖が一次ファージディスプレイクローンにおける対応する非ヒト鎖の除去時に破壊された抗原結合部位を復元する（例えば、エピトープがヒト鎖パートナーの選択を誘導する（インプリントする）。残りの非ヒト鎖を置き換えるためにこのプロセスが繰り返されると、ヒト抗体が得られる（例えば、ＰＣＴ  ＷＯ９３／０６２１３、及びＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１−６８を参照されたい）。ＣＤＲグラフティングによる非ヒト抗体の伝統的なヒト化とは異なり、この技法は、非ヒト起源のＦＲまたはＣＤＲ残基を有しない完全なヒト抗体を提供する。細胞表面抗原に対してマウス抗体をヒト化するための誘導選択の例としては、卵巣癌細胞上に存在する葉酸塩結合タンパク質（例えば、Ｆｉｇｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：９９１−９６を参照されたい）及びＣＤ１４７が挙げられ、それは、肝細胞癌上に高度に発現される（例えば、Ｂａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．４：１３７４−８０を参照されたい）。
【０４２０】
誘導選択アプローチの潜在的な欠点は、一方の抗体鎖のシャッフリングが、他方を維持している間にエピトープドリフトをもたらし得ることである。非ヒト抗体によって認識されるエピトープを維持するために、ＣＤＲ保持が適用され得る（例えば、Ｋｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．８３：２５２−６０、及びＢｅｉｂｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：８３３−４９を参照されたい）。この方法では、非ヒトＶＨ  ＣＤＲ３は、このＣＤＲが抗原結合部位の中心であり得、かつ抗原認識のための抗体の最も重要な領域であり得るため、一般に保持される。いくつかの例では、非ヒト抗体のＶＨ  ＣＤＲ３及びＶＬ  ＣＤＲ３、ならびにＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ１は保持され得る。
【０４２１】
４．３．１．６二重特性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ヒト抗体またはヒト化抗体である。ある特定の実施形態では、結合特異性の一方は、ＰＤ−１へのものであり、他方は、任意の他の抗原へのものである。いくつかの実施形態では、結合特異性の一方は、ＰＤ−１へのものであり、他方は、ＰＤ−１を発現する細胞上に発現された別の表面抗原へのものである。特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ＰＤ−１の２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製され得る。
【０４２２】
二重特異性抗体を作製するための方法は、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の共発現によってなど、当該技術分野で既知であり、２つの重鎖は、異なる特異性を有する（例えば、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，１９８３，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７−４０を参照されたい）。二重特異性抗体を生成のさらなる詳細に関しては、例えば、Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ｅｄ．，２０１１）を参照されたい。
【０４２３】
４．３．１．７多価抗体
多価抗体は、その抗体が結合する抗原を発現する細胞によって、二価抗体よりも速く内部移行（及び／または異化）され得る。本開示の抗体は、３つ以上の抗原結合部位を有する（ＩｇＭクラス以外の）多価抗体（例えば、四価抗体）とすることができ、これは、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組み換え発現によって容易に産生することができる。多価抗体は、二量体化ドメイン、及び３つ以上の抗原結合部位を含むことができる。ある特定の実施形態では、二量体化ドメインは、Ｆｃ領域またはヒンジ領域を含む（またはそれらからなる）。このシナリオでは、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域のアミノ末端側に３つ以上の抗原結合部位とを含む。ある特定の実施形態では、多価抗体は、３つ〜約８つの抗原結合部位を含む（またはそれらからなる）。１つのそのような実施形態では、多価抗体は、４つの抗原結合部位を含む（またはそれらからなる）。多価抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖（例えば、２つのポリペプチド鎖）を含み、このポリペプチド鎖（複数可）は、２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−（Ｘ２）ｎ−Ｆｃを含み得、ＶＤ１は第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の可変ドメインであり、ＦｃはＦｃ領域の１つのポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２はアミノ酸またはポリペプチドを表し、ｎは０または１である。例えば、ポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＨ−ＣＨ１−可動性リンカー−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖、またはＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖を含んでもよい。本明細書における多価抗体は、少なくとも２つ（例えば、４つ）の軽鎖可変ドメインポリペプチドをさらに含んでもよい。本明細書における多価抗体は、例えば、約２つ〜約８つの軽鎖可変ドメインポリペプチドを含んでもよい。本明細書に企図される軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、任意に、ＣＬドメインをさらに含む。
【０４２４】
４．３．１．８Ｆｃ操作
Ｆｃ操作によって本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体を修飾することが望ましい場合がある。ある特定の実施形態では、抗体のＦｃ領域への修飾は、抗体のエフェクター機能の減少または排除をもたらす。ある特定の実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及び／またはＣＤＣである。いくつかの実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣである。他の実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＰである。他の実施形態では、エフェクター機能は、ＣＤＣである。一実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰである。一実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣである。一実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＰ及びＣＤＣである。一実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及びＣＤＣである。これは、１つ以上のアミノ酸置換を抗体のＦｃ領域内に導入することによって達成され得る。例えば、２３３位〜２３６位のＩｇＧ２残基及び３２７位、３３０位、及び３３１位のＩｇＧ４残基を使用したヒトＩｇＧ１への置換、ＡＤＣＣ及びＣＤＣを大いに低減することが示された（例えば、Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（８）：２６１３−２４、及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１−６０４を参照されたい）。他のＦｃバリアントは、本明細書の他の箇所で提供される。
【０４２５】
抗体の血清半減期を増加させるため、例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されるように、１つはサルベージ受容体結合エピトープを抗体（特に抗体断片）に組み込み得る。用語「サルベージ受容体結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期を増加させる原因となる、ＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
【０４２６】
４．３．１．９代替的な結合剤
本開示は、本明細書に開示される抗ＰＤ−１と同じエピトープに特異的に結合する非免疫グロブリン結合剤を包含する。いくつかの実施形態では、非免疫グロブリン結合剤は、競合結合アッセイにおいて本開示の抗ＰＤ−１抗体に取って代わるかまたは取って代えられる薬剤として定義される。これらの代替的な結合剤は、例えば、当該技術分野で既知の操作されたタンパク質骨格のいずれかを含み得る。そのような骨格は、表１及び表２に示されるように、１つ以上のＣＤＲを含み得る。そのような骨格は、例えば、リポカリン骨格、リガンド結合部位を形成する４つの超可変ループを支持する強固なβバレルによって特徴付けられているタンパク質構造に基づくアンチカリンを含む。新規の結合特異性は、機能的ディスプレイ及び誘導選択と組み合わせて、ループ領域内で標的化されたランダム変異誘発によって操作され得る（例えば、Ｓｋｅｒｒａ，２００８，ＦＥＢＳ  Ｊ．２７５：２６７７−８３を参照されたい）。他の好適な骨格は、例えば、ヒトフィブロネクチンＩＩＩの１０番目の細胞外ドメインに基づく、アドネクチン、またはモノボディ（例えば、Ｋｏｉｄｅ  ａｎｄ  Ｋｏｉｄｅ，２００７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３５２：９５−１０９を参照されたい）；ブドウ球菌プロテインＡのＺドメインに基づくアフィボディ（例えば、Ｎｙｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，ＦＥＢＳ  Ｊ．２７５：２６６８−７６を参照されたい）；アンキリンリピートタンパク質に基づくＤＡＲＰｉｎ（例えば、Ｓｔｕｍｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ  １３：６９５−７０１を参照されたい）；ヒトＦｙｎタンパク質キナーゼのＳＨ３ドメインに基づくフィノマー（例えば、Ｇｒａｂｕｌｏｖｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：３１９６−２０４を参照されたい）；スルフォロバスアシドラリウスからのＳａｃ７ｄに基づくアフィチン（例えば、Ｋｒｅｈｅｎｂｒｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８３：１０５８−６８を参照されたい）；ヒトｙ−Ｂ−クリスタリンに基づくアフィリン（例えば、Ｅｂｅｒｓｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３７２：１７２−８５）；膜受容体タンパク質のＡドメインに基づくアビマー（例えば、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１５５６−６１を参照されたい）；システインリッチノットペプチド（例えば、Ｋｏｌｍａｒ，２００８，ＦＥＢＳ  Ｊ．２７５：２６８４−９０）；及び操作されたＫｕｎｉｔｚ型阻害剤（例えば、Ｎｉｘｏｎ  ａｎｄ  Ｗｏｏｄ，２００６，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．Ｄｅｖ．９：２６１−６８を参照されたい）を含み得る。論評のために、例えば、Ｇｅｂａｕｅｒ  ａｎｄ  Ｓｋｅｒｒａ，２００９，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３：２４５−５５を参照されたい。
【０４２７】
４．３．２抗体バリアント
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１に結合する抗体のアミノ酸配列修飾（複数可）が企図される。例えば、限定されないが、特異性、熱安定性、発現レベル、エフェクター機能、グリコシル化、低減された免疫原性、または可溶性を含む、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。したがって、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体に加えては、抗ＰＤ−１抗体バリアントが調製され得ることが企図される。例えば、抗ＰＤ−１抗体バリアントは、適切なヌクレオチド変化を、コードするＤＮＡに導入することによって、及び／または所望の抗体またはポリペプチドの合成によって調製され得る。当業者は、アミノ酸変化は、抗ＰＤ−１抗体の翻訳後処理を改変し得、例えば、グリコシル化部位の数もしくは位置を変化させることまたは膜固着特性を改変することができることを理解する。
【０４２８】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、例えば、抗体への分子の任意の種類の共有結合によって化学修飾される。抗体誘導体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ＰＥＧ化、リン酸化、アミド化、既知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への結合等によって化学修飾されている抗体を含み得る。多数の化学修飾のいずれかは、これらに限定されないが、特異的化学的切断、アセチル化、配合、ツニカマイシンの代謝合成等を含む、既知の技術によって実施され得る。さらに、抗体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含み得る。
【０４２９】
変形は、天然配列抗体またはポリペプチドと比較した場合に、アミノ酸配列における変化をもたらす抗体またはポリペプチドをコードする１つ以上のコドンの置換、欠失、もしくは挿入であり得る。アミノ酸置換は、ロイシンのセリンでの置き換え、例えば、保存的アミノ酸の置き換えなど、１つのアミノ酸を、同様の構造及び／または化学特性を有する別のアミノ酸で置き換えた結果であり得る。挿入または欠失は、任意に、約１〜５つのアミノ酸の範囲であり得る。ある特定の実施形態では、置換、欠失、または挿入は、元の分子に対して、２５個未満のアミノ酸置換、２０個未満のアミノ酸置換、１５個未満のアミノ酸置換、１０個未満のアミノ酸置換、５個未満のアミノ酸置換、４個未満のアミノ酸置換、３個未満のアミノ酸置換、または２個未満のアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、置換は、１つ以上の予期される非必須アミノ酸残基で作製される保守的アミノ酸置換である。許容される変形は、配列におけるアミノ酸の挿入、欠失、または置換を合成的に行うことと、完全長または成熟天然配列によって呈される活性について結果として得られるバリアントを試験することとによって決定され得る。
【０４３０】
アミノ酸配列挿入には、長さが１残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドの範囲であるアミノ末端及び／またはカルボキシル末端の融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入バリアントには、酵素（例えば、抗体指向性酵素プロドラッグ療法のための）またはポリペプチドへの抗体のＮ末端もしくはＣ末端の融合が挙げられ、これは抗体の血清半減期を増加させる。
【０４３１】
抗体の生物学的特性の実質的な修飾は、置換を選択することにより達成され、これらは、（ａ）置換領域におけるポリペプチド骨格の構造、例えば、シートもしくは螺旋立体配座、（ｂ）標的部位における分子の荷電もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖のバルクの維持に対するそれらの影響が著しく異なる。代替的には、保守的（例えば、同様の特性を有するアミノ酸基及び／または側鎖内）置換は、特性を維持するか、または著しく変化しないように行われ得る。アミノ酸は、それらの側鎖の特性の類似性に従って群分けされ得る（例えば、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ７３−７５（２ｄ  ｅｄ．１９７５）を参照されたい）：（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）；（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）；（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）；及び（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）。
【０４３２】
代替的には、天然発生残基は、共通の側鎖特性に基づいて群に分割され得る：（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び（６）芳香性：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０４３３】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。そのような置換された残基はまた、保守的置換部位、または残りの（非保存された）部位に導入され得る。したがって、一実施形態では、ＰＤ−１エピトープに結合する抗体またはその断片は、本明細書に提供されるマウスモノクローナル抗体のアミノ酸配列と少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＰＤ−１エピトープに結合する抗体またはその断片は、表１〜表６に示されるアミノ酸配列と少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。さらなる別の実施形態では、ＰＤ−１エピトープに結合する抗体またはその断片は、表２に示されるＶＨ  ＣＤＲアミノ酸配列及び／または表１に示されるＶＬ  ＣＤＲアミノ酸配列と少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であるＶＨ  ＣＤＲ及び／またはＶＬ  ＣＤＲアミノ酸配列を含む。変形は、オリゴヌクレオチド媒介（部位指向性）変異誘発、アラニンスキャニング、及びＰＣＲ変異誘発など、当該技術分野で既知の方法を使用して行われ得る。部位指向性変異誘発（例えば、Ｃａｒｔｅｒ，１９８６，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．２３７：１−７、及びＺｏｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１０：６４８７−５００を参照されたい）、カセット変異誘発（例えば、Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｇｅｎｅ  ３４：３１５−２３）、または他の既知の技術は、抗ＰＤ−１抗体バリアントＤＮＡを産生するためにクローン化されたＤＮＡ上で行われ得る。
【０４３４】
抗ＰＤ−１抗体の適切な立体配座の維持に関与しない任意のシステイン残基もまた、例えば、アラニンまたはセリンなどの別のアミノ酸で置換されて、分子の酸化的安定性が改善され、異常な架橋が阻止され得る。逆に、システイン結合（複数可）は抗ＰＤ−１抗体に付加されて、その安定性を改善することができる（例えば、抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合）。
【０４３５】
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＰＤ−１抗体分子は、「脱免疫化」抗体である。「脱免疫化」抗ＰＤ−１抗体は、それぞれの元の非脱免疫化抗体と比較して、抗体の免疫原性の低減をもたらすそのアミノ酸配列において１つ以上の改変を有するヒト化またはキメラ抗ＰＤ−１抗体由来の抗体である。そのような抗体変異体を生成するための手順の１つは、抗体分子のＴ細胞エピトープの同一化及び除去を含む。最初のステップにおいて、抗体分子の免疫原性は、いくつかの方法、例えば、当該技術分野で既知のような、Ｔ細胞エピトープのインビトロ測定によって、またはそのようなエピトープのインシリコ予測によって測定され得る。Ｔ細胞エピトープ機能の重要な残基が一旦同一化されると、変異が行われ、免疫原性を除去し、抗体活性を保持し得る。論評のために、例えば、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ５２５：４０５−２３を参照されたい。
【０４３６】
４．３．２．１インビトロ親和性成熟
いくつかの実施形態では、親抗体と比較した場合に、親和性、安定性、または発現レベルなどの改善された特性を有する抗体バリアントは、インビトロ親和性成熟によって調製され得る。天然プロトタイプの様に、インビトロ親和性は、変異及び選択の原理に基づく。抗体のライブラリは、生物の表面に（例えば、ファージ、細菌、酵母、または哺乳動物細胞）またはそれらのコードするｍＲＮＡまたはＤＮＡと関連して（例えば、共有的にまたは非共有的に）のいずれかで、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはＶドメイン断片としてディスプレイされる。ディスプレイされた抗体の親和性選択は、生物、または抗体をコードする遺伝情報を運ぶ複合体の単離を可能にする。ファージディスプレイなどのディスプレイ法を使用した変異及び選択の２つまたは３つのラウンドは、通常、低ナノモル範囲において親和性を有する抗体断片をもたらす。親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモルまたはさらにはピコモルの親和性を有し得る。
【０４３７】
ファージディスプレイは、抗体のディスプレイ及び選択のための広く普及した方法である。抗体は、バクテリオファージ被覆タンパク質への融合としてＦｄまたはＭ１３バクテリオファージの表面にディスプレイされる。選択は、ファージディスプレイされた抗体がそれらの標的に結合することを可能にするために、抗原への曝露、「パニング」と称されるプロセスを含む。抗原に結合するファージは、回収され、細菌に感染させるために使用され、選択のさらなるラウンドのためにファージを生成する。論評のために、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，２００２，Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８：１−３７、及びＢｒａｄｂｕｒｙ  ａｎｄ  Ｍａｒｋｓ，２００４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２９０：２９−４９を参照されたい。
【０４３８】
酵母ディスプレイ系（例えば、Ｂｏｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：５５３−５７、及びＣｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  １：７５５−６８を参照されたい）では、抗体は、重鎖及び軽鎖が可動性リンカーによって連結される一本鎖可変融合（ｓｃＦｖ）としてディスプレイされ得る。ｓｃＦｖは、酵母凝集素タンパク質Ａｇａ２ｐの付着サブユニットに融合され、それは、Ａｇａ１ｐへのジスルフィド結合を通して酵母細胞壁に結合する。Ａｇａ２ｐを介するタンパク質のディスプレイは、タンパク質を細胞表面から突出させ、酵母細胞壁上の他の分子との潜在的な相互作用を最小化する。磁気分離及びフローサイトメトリーは、ライブラリをスクリーニングするために使用され、改善された親和性及び安定性を有する抗体を選択する。対象の可溶性抗原への結合は、ビオチン化された抗原及び蛍光体に複合体化されたストレプトアビジンなどの二次試薬で酵母を標識することによって決定される。抗体の表面発現における変形は、赤血球凝集素またはｓｃＦｖに隣接するｃ−Ｍｙｃエピトープタグのいずれかの免疫蛍光標識を通して決定され得る。発現は、ディスプレイされたタンパク質の安定性と相関することが示されており、したがって、抗体は、改善された安定性、ならびに親和性のために選択され得る（例えば、Ｓｈｕｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９２：９４９−５６を参照されたい）。酵母ディスプレイの追加の利点は、ディスプレイされたタンパク質が、核生物の酵母細胞の小胞体中に折り畳まれ、小胞体シャペロン及び品質管理の仕組みを活用することである。一旦成熟が完了すると、抗体親和性は、酵母の表面上にディスプレイされる間に好都合に「滴定され」得、各クローンの発現及び精製の必要性を排除する。酵母表面ディスプレイの理論限界は、他のディスプレイ法のそれよりも潜在的により小さな機能的ライブラリサイズであるが、しかしながら、最近のアプローチは、酵母細胞の配偶様式を使用して、１０１４のサイズであることが推定される組み換え多様性を作製する（例えば、米国特許  公開第２００３／０１８６３７４号、及びＢｌａｉｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｇｅｎｅ  ３４２：２１１−１８を参照されたい）。
【０４３９】
リボソームディスプレイでは、抗体−リボソーム−ｍＲＮＡ（ＡＲＭ）複合体は、無細胞系における選択のために生成される。抗体の特定のライブラリをコードするＤＮＡライブラリは、停止コドンを欠如するスペーサー配列に遺伝子的に融合される。このスペーサー配列は、翻訳されるとき、ペプチジルｔＲＮＡに依然として結合され、リボソームのトンネルを占有し、したがって、対象のタンパク質がリボソームから突出し、折り畳むことを可能にする。ｍＲＮＡ、リボソーム、及びタンパク質の結果として得られる複合体は、表面結合されたリガンドに結合し得、リガンドを伴う親和性捕捉を通して抗体及びそのコードｍＲＮＡの同時単離を可能にする。次いで、リボソーム結合されたｍＲＮＡは、ｃＤＮＡに逆転写され、次いでそれは、変異誘発を経て、選択の次のラウンドにおいて使用される（例えば、Ｆｕｋｕｄａ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３４：ｅ１２７を参照されたい）。ｍＲＮＡディスプレイでは、抗体及びｍＲＮＡ間の共有結合は、ピューロマイシン分子を使用して確立される（Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９８：３７５０−５５）。
【０４４０】
これらの方法は全体的にインビトロで行われるため、それらは、他の選択技術よりも２つの主な利点を提供する。第１に、ライブラリの多様性は、細菌細胞の形質転換効率によって限定されないが、試験チューブ内に存在するリボソーム及び異なるｍＲＮＡ分子の数によってのみ限定される。第２に、ランダム変異は、ライブラリが任意の多様化ステップ後に形質転換される必要がないため、例えば、非プルーフリーディングポリメラーゼによって、各選択ラウンドの後に非容易に導入され得る。
【０４４１】
哺乳動物細胞ディスプレイ系（例えば、Ｂｏｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１０８：２０４５５−６０を参照されたい）では、ＩｇＧの完全ヒトは、事前に組み替えられたＤ（Ｊ）領域に結合された生殖細胞系配列Ｖ遺伝子セグメントに基づいて構築される。重鎖及び軽鎖の完全長Ｖ領域は、ヒト重鎖及び軽鎖定常領域と組み立てられ、哺乳動物細胞株（例えば、ＨＥＫ２９３）にトランスフェクトされる。トランスフェクトされたライブラリは、拡大され、ストレプトアビジン（ＳＡ）結合磁性ビーズに対して負の選択のいくつかのラウンド、その後ビオチン化された標的タンパク質、ペプチド断片、またはエピトープで被覆されたＳＡ結合磁性ビーズに対して正の選択のラウンドにかけられる。正に選択された細胞は拡大され、次いで、ＦＡＣＳのラウンドによって分類され、標的タンパク質、ペプチド断片、またはエピトープに特異的に結合する抗体をディスプレイする単一細胞クローンを単離する。これらの単一細胞クローンの重鎖及び軽鎖対は、さらなる成熟のためにＡＩＤで再トランスフェクトされる。ＡＩＤ誘発体細胞超変異と結合された哺乳動物細胞ディスプレイのいくつかのラウンドは、高特異性、高親和性抗体を生成する。
【０４４２】
多様性はまた、標的化された様式でまたはランダム導入を介して抗体ライブラリのＣＤＲまたはＶ遺伝子全体に導入され得る。以前のアプローチは、高レベルまたは低レベル変異誘発を介して抗体のすべてのＣＤＲを逐次的に標的化すること、または体細胞超変異の単離されたホットスポット（例えば、Ｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：６０７−１７）もしくは実験的基礎または構造的理由において親和性に影響する疑いのある残基を標的化することを含む。特定の実施形態では、体細胞超変異は、ＡＩＤ誘発体細胞超変異によって、例えば、ＳＨＭ−ＸＥＬ（商標）プラットフォーム（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して行われる。ランダム変異は、Ｅ．ｃｏｌｉ変異誘発株、ＤＮＡポリメラーゼを用いた誤りがちな複製（例えば、Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−９６を参照されたい）、またはＲＮＡ複製酵素を使用してＶ遺伝子全体を通して導入され得る。多様性はまた、ＤＮＡシャッフリングまたは同様の技術を介して、天然に多様である領域の置き換えによって導入され得る（例えば、Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：４３４９６−５０７；、米国特許第５，５６５，３３２号及び第６，９８９，２５０号を参照されたい）。フレームワーク領域残基内に伸長する超可変ループを標的とする代替的な技術（例えば、Ｂｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４８：６９９−７０９を参照されたい）は、ＣＤＲにおいてループ欠失及び挿入を用いるか、またはハイブリダイゼーションに基づく多様化を使用する（例えば、米国特許  公開第２００４／０００５７０９号を参照されたい）。ＣＤＲにおいて多様性を生成する追加の方法は、例えば、米国特許第７，９８５，８４０号に開示されている。抗体ライブラリ及び／または抗体親和性成熟を生成するために使用され得るさらなる方法は、例えば、米国特許第８，６８５，８９７号及び第８，６０３，９３０号、ならびに米国公開第２０１４／０１７０７０５号、第２０１４／００９４３９２号、第２０１２／００２８３０１号、第２０１１／０１８３８５５号、及び第２００９／００７５３７８号に開示されており、それらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０４４３】
ライブラリのスクリーニングは、当該技術分野で既知の様々な技法によって達成され得る。例えば、ＰＤ−１は、固体支持体、カラム、ピン、またはセルロース／ポリ（フッ化ビニリデン）膜／他のフィルター上に固定化されるか、吸着プレートに付着した宿主細胞に発現させるか、または細胞選別で使用され得るか、またはストレプトアビジン被覆ビーズで捕捉するためにビオチンに複合体化され得るか、またはディスプレイライブラリをパニングするための任意の他の方法で使用され得る。
【０４４４】
インビトロ親和性成熟方法論評のために、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，２００５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１０５−１６、Ｑｕｉｒｏｚ  ａｎｄ  Ｓｉｎｃｌａｉｒ，２０１０，Ｒｅｖｉｓｔａ  Ｉｎｇｅｎｅｒｉａ  Ｂｉｏｍｅｄｉａ  ４：３９−５１、及びそれらにおける参考文献を参照されたい。
【０４４５】
４．３．２．２抗ＰＤ−１抗体の修飾
抗ＰＤ−１抗体の共有結合修飾は、本開示の範囲内に含まれる。共有結合修飾は、抗ＰＤ−１抗体の標的化されたアミノ酸残基を、選択された側鎖または抗ＰＤ−１抗体のＮ末端もしくはＣ末端残基と反応することができる有機誘導体化剤と反応させることを含む。他の修飾としては、グルタミニル及びアスパラギニル残基のそれぞれ対応するグルタミル及びアスパルチル残基への脱アミド化、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリルまたはトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ７９−８６（１９８３）を参照されたい）、Ｎ末端アミンのアセチル化、ならびに任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化が挙げられる。
【０４４６】
本開示の範囲内に含まれる抗ＰＤ−１抗体の共有結合修飾の他の種類は、抗体またはポリペプチドの天然グリコシル化パターンを改変すること（例えば、Ｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．９：４８２−５０１、及びＷａｌｓｈ，２０１０，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ  １５：７７３−８０を参照されたい）、及び抗体を、例えば、米国特許第４，６４０，８３５号、第４，４９６，６８９号、第４，３０１，１４４号、第４，６７０，４１７号、第４，７９１，１９２号、または第４，１７９，３３７号に示される様式で、多様な非タンパク質性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシアルキレンのうちの１つに連結することを含む。
【０４４７】
本開示の抗ＰＤ−１抗体はまた、別の異種ポリペプチドまたはアミノ酸配列、例えば、エピトープタグ（例えば、Ｔｅｒｐｅ，２００３，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６０：５２３−３３を参照されたい）またはＩｇＧ分子のＦｃ領域（例えば、Ａｒｕｆｆｏ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ２２１−４２（Ｃｈａｍｏｗ  ａｎｄ  Ａｓｈｋｅｎａｚｉ  ｅｄｓ．，１９９９）を参照されたい）に融合した抗ＰＤ−１抗体を含むキメラ分子を形成するように修飾され得る。
【０４４８】
ＰＤ−１抗原及び異種ポリペプチドに結合する本明細書に提供される抗体を含む融合タンパク質もまた本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、抗体が融合される異種ポリペプチドは、抗体を細胞表面発現されたＰＤ−１を有する細胞に標的化するために有用である。
【０４４９】
ＰＤ−１抗原に結合する抗体のパネルもまた本明細書に提供される。特定の実施形態では、抗体のパネルは、ＰＤ−１抗原の異なる会合速度、異なる解離速度、異なる親和性、及び／またはＰＤ−１抗原の異なる特異性を有する。いくつかの実施形態では、パネルは、約１０、約２５、約５０、約７５、約１００、約１２５、約１５０、約１７５、約２００、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約４５０、約５００、約５５０、約６００、約６５０、約７００、約７５０、約８００、約８５０、約９００、約９５０、または約１０００個の抗体またはそれ以上を含むか、またはそれらからなる。抗体のパネルは、例えば、ＥＬＩＳＡなどのアッセイのために９６ウェルプレートまたは３８４ウェルプレートで使用され得る。
【０４５０】
４．３．３抗ＰＤ−１抗体の調製
抗ＰＤ−１抗体は、抗ＰＤ−１抗体コード核酸を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトされた細胞を培養することによって産生され得る。本開示の抗体のポリペプチド成分をコードするポリヌクレオチド配列は、標準の組み換え技術を使用して得られ得る。所望のポリヌクレオチド配列は、ハイブリドーマ細胞等の抗体産生細胞から単離及び配列決定され得る。あるいは、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチド合成機またはＰＣＲ技術を使用して合成され得る。得られた時点で、ポリペプチドをコードする配列は、宿主細胞内で異種ポリヌクレオチドを複製及び発現することができる組み換えベクターに挿入される。利用可能であり、当該技術分野で既知である多くのベクターが本開示で使用され得る。適切なベクターの選択は、ベクターに挿入される核酸の大きさ及びベクターで形質転換される特定の宿主細胞に主に依存する。本出願の抗体の発現に好適な宿主細胞としては、グラム陰性またはグラム陽性生物を含むＡｒｃｈａｅｂａｃｔｅｒｉａ及びＥｕｂａｃｔｅｒｉａなどの原核生物、糸状菌または酵母などの真核微生物、昆虫細胞または植物細胞などの無脊椎動物細胞、ならびに哺乳動物宿主細胞株などの脊椎動物細胞が挙げられる。宿主細胞は、上述の発現ベクターで形質転換され、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅に適切になるように修飾された従来の栄養素培地で培養される。宿主細胞によって産生された抗体は、当該技術分野で既知の標準タンパク質精製方法を使用して精製される。
【０４５１】
ベクター構築発現、及び生成を含む抗体産生の方法は、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ：Ｆｒｏｍ  ＰＣＲ  ｔｏ  ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ２０３−５２（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，１９９６）、Ｋｗｏｎｇ  ａｎｄ  Ｒａｄｅｒ，Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆａｂ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００９）、Ｔａｃｈｉｂａｎａ  ａｎｄ  Ｔａｋｅｋｏｓｈｉ，Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆａｂ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｓｃｈｉａ  ｃｏｌｉ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ（Ａｌ−Ｒｕｂｅａｉ  ｅｄ．，  ２０１１）、及びＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ  Ｂｅｎｃｈ  ｔｏ  Ｃｌｉｎｉｃ（Ａｎ  ｅｄ．，２００９）にさらに記載されている。
【０４５２】
当然、当該技術分野で周知の代替的な方法が抗ＰＤ−１抗体を調製するために用いられ得ることが企図される。例えば、適切なアミノ酸配列またはその部分は、固相技法を使用する直接ペプチド合成によって産生され得る（例えば、Ｓｔｅｗａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１９６９）、及びＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，１９６３，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−５４を参照されたい）。インビトロタンパク質合成は、手動技法を使用して、または自動で行われ得る。抗ＰＤ−１抗体の様々な部分が別個に化学的に合成され、化学的または酵素的方法を使用して組み合わせられて、所望の抗ＰＤ−１抗体を産生することができる。代替的には、抗体は、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号及び第５，８２７，６９０号に開示されているように、抗体を発現するように操作されたトランスジェニック動物の、乳などの細胞または体液から精製され得る。
【０４５３】
４．３．４免疫複合体
本開示はまた、合成リンカーによって１つ以上の非抗体剤に共有結合された本開示の抗ＰＤ−１抗体のいずれか１つを含む複合体を提供する。
【０４５４】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、例えば、診断もしくは検出可能分子に複合体化または組み換え融合される。複合体化または組み換え融合された抗体は、例えば、ＰＤ−１媒介疾患の発症、発達、進行、及び／または重症度を監視もしくは予後診断するために有用であり得る。
【０４５５】
そのような診断及び検出は、例えば、抗体を、これらに限定されないが、様々な酵素、例えば、これらに限定されないが、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、βガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼ；補欠分子族、例えば、これらに限定されないが、ストレプトアビジン／ビオチンまたはアビジン／ビオチン；蛍光物質、例えば、これらに限定されないが、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、またはフィコエリトリン；発光物質、例えば、これらに限定されないが、ルミノール；生物発光物質、例えば、これらに限定されないが、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、またはイクオリン；化学発光物質、例えば、これらに限定されないが、アクリジニウム系化合物またはＨＡＬＯＴＡＧ；放射性物質、例えば、これらに限定されないが、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、及び１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、及び１１１Ｉｎ）、テクニチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ及び６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、または１１７Ｓｎ；様々な陽電子放出断層撮影法を使用した陽電子放出金属；ならびに非放射性常磁性金属イオンを含む検出可能な物質に結合することによって達成され得る。
【０４５６】
融合タンパク質を生成するように、異種タンパク質またはポリペプチド（もしくはその断片、例えば、約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、または約１００個のアミノ酸のポリペプチドに）に、組み換え融合または化学的に複合体化（共有または非共有複合体化）される抗体、ならびにその使用もまた本明細書に記載される。特に、本明細書に提供される抗体の抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆｃ断片、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、ＶＨドメイン、ＶＨ  ＣＤＲ、ＶＬドメイン、またはＶＬ  ＣＤＲ）、及び異種タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドを含む融合タンパク質が本明細書に提供される。一実施形態では、抗体が融合される異種タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドは、抗体をＰＤ−１を発現する細胞などの特定の細胞型に標的化するために有用である。例えば、特定の細胞型によって発現された細胞表面受容体に結合する抗体は、本明細書に提供される修飾された抗体に融合または複合体化され得る。
【０４５７】
さらに、本明細書に提供される抗体は、マーカーまたはペプチドなどの「タグ」配列に融合され、精製を容易にし得る。特定の実施形態では、マーカーまたはタグアミノ酸配列は、とりわけ、ｐＱＥベクター（例えば、ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．を参照されたい）に提供されるタグなどのヘキサヒスチジンペプチドであり、それらの多くは市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：８２１−２４に記載されているように、ヘキサヒスチジンは、融合タンパク質の好都合な精製を提供する。精製に有用な他のペプチドタグとしては、これらに限定されないが、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質（Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ  ３７：７６７−７８）由来のエピトープに対応するヘマグルチニン（「ＨＡ」）タグ、及び「ＦＬＡＧ」タグが挙げられる。
【０４５８】
抗体へ部分（ポリペプチドを含む）を融合または複合体化する方法は既知である（例えば、Ａｒｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２４３−５６（Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，１９８５）、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ６２３−５３  （Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，２ｄ  ｅｄ．１９８７）、Ｔｈｏｒｐｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ４７５−５０６（Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，１９８５）、Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ３０３−１６（Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，１９８５）、Ｔｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−５８、米国特許第５，３３６，６０３号、第５，６２２，９２９号、第５，３５９，０４６号、第５，３４９，０５３号、第５，４４７，８５１号、第５，７２３，１２５号、第５，７８３，１８１号、第５，９０８，６２６号、第５，８４４，０９５号、及び第５，１１２，９４６；ＥＰ３０７，４３４、ＥＰ３６７，１６６、ＥＰ３９４，８２７；ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０６５７０、ＷＯ９６／０４３８８、ＷＯ９６／２２０２４、ＷＯ９７／３４６３１、及びＷＯ９９／０４８１３；Ａｓｈｋｅｎａｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：１０５３５−３９、Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４−８６、Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０−６００、ならびにＶｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１１３３７−４１を参照されたい）。
【０４５９】
融合タンパク質は、例えば、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エキソンシャッフリング、及び／またはコドンシャッフリング（まとめると、「ＤＮＡシャッフリング」と称される）の技術を通して生成され得る。ＤＮＡシャッフリングは、例えば、より高い親和性及びより低い解離速度を有する抗体を含む、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体の活性を改変するために用いられ得る（例えば、米国特許第５，６０５，７９３号、第５，８１１，２３８号、第５，８３０，７２１号、第５，８３４，２５２号、及び第５，８３７，４５８号、Ｐａｔｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４−３３、Ｈａｒａｙａｍａ，１９９８，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６−８２、Ｈａｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５−７６、ならびにＬｏｒｅｎｚｏ  ａｎｄ  Ｂｌａｓｃｏ，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２４（２）：３０８−１３を参照されたい）。抗体、またはコードされた抗体は、組み換え前に、誤りがちなＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入、または他の方法によってランダム変異誘発を施されることによって改変され得る。本明細書に提供される抗体をコードするポリヌクレオチドは、１つ以上の異種分子の、１つ以上の成分、モチーフ、切片、部分、ドメイン、断片等で組み換えられ得る。
【０４６０】
本明細書に提供される抗体は、米国特許第４，６７６，９８０号に記載されるように、第２の抗体に共役されて抗体ヘテロ共役体を形成することができる。
【０４６１】
本明細書に提供されるように、ＰＤ−１に結合する抗体はまた、標的抗原の免疫アッセイまたは精製に特に有用である、固体支持体に結合され得る。そのような固体支持体としては、これらに限定されないが、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、またはポリプロピレンが挙げられる。
【０４６２】
リンカーは、細胞内で複合体化された薬剤の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であり得るが、非切断可能なリンカーもまた本明細書に企図される。本開示の複合体における使用のためのリンカーとしては、限定することなく、酸に不安定なリンカー（例えば、ヒドラゾンリンカー）、ジスルフィド含有リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー（例えば、アミノ酸、例えば、シトルリン−バリンもしくはフェニルアラニン−リジンなどのバリン及び／またはシトルリンを含むペプチドリンカー）、感光性リンカー、ジメチルリンカー（例えば、Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２７−３１、及び米国特許第５，２０８，０２０号を参照されたい）、チオエーテルリンカー、または多剤輸送体媒介耐性を回避するように設計された親水性リンカー（例えば、Ｋｏｖｔｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７０：２５２８−３７を参照されたい）が挙げられる。
【０４６３】
抗体及び薬剤の複合体は、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、スルホ−ＳＭＰＢ、及びＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）などの様々な二官能性タンパク質結合剤を使用して作製され得る。本開示は、抗体及び薬剤の複合体は、当該技術分野において開示されているように、任意の好適な方法を使用して調製され得る（例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ  ｅｄ．，２ｄ  ｅｄ．２００８）を参照されたい）。
【０４６４】
抗体及び薬剤の従来の複合体化方略は、異種複合体をもたらすＬｙｓ残基のε−アミノ基またはＣｙｓ残基のチオール基を含むランダム複合体化化学に基づいている。最近開発された技術は、抗体への部位特異的複合体化を可能にし、均質な負荷をもたらし、改変された抗原結合または薬物動態を有する複合体の亜集団を回避する。これらは、反応性チオール基を提供し、かつ免疫グロブリンの折り畳み及び組み立てを乱さないか、または抗原結合を改変しない重鎖及び軽鎖上の位置でのシステイン置換を含む「チオＭａｂ」の操作を含む（例えば、Ｊｕｎｕｔｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．３３２：４１−５２、及びＪｕｎｕｔｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６：９２５−３２を参照されたい）。別の方法では、セレノシステインは、末端からセレノシステイン挿入まで停止コドンＵＧＡを再コードすることによって抗体配列に同時翻訳で挿入され、他の天然アミノ酸の存在下でセレノシステインの求核セレノール基で部位特異的共有複合体化を可能にする（例えば、Ｈｏｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０５：１２４５１−５６、及びＨｏｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４８（５０）：１２０４７−５７を参照されたい）。
【０４６５】
４．４抗体及びその組成物を使用する方法
対象における免疫障害を治療する方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、方法は、免疫障害を治療するのに有効な量で、本明細書に提供されるＰＤ−１結合タンパク質を対象に投与することを含む。対象における免疫障害を管理する方法もまた本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、方法は、免疫障害を管理するのに有効な量で、本明細書に提供されるＰＤ−１結合タンパク質を対象に投与することを含む。対象における免疫障害を予防する方法もまた本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、方法は、免疫障害を予防するのに有効な量で、本明細書に提供されるＰＤ−１結合タンパク質を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、対象は、免疫障害を有する。他の実施形態では、対象は、免疫障害を有する危険性がある。一実施形態では、対象は、その必要がある対象である。特定の実施形態では、ＰＤ−１結合タンパク質は、本明細書に提供されるＰＤ−１抗体である。ある特定の実施形態では、ＰＤ−１結合タンパク質は、本明細書に提供されるＰＤ−１抗体の抗原結合断片である。
【０４６６】
本明細書に提供される様々な方法のいくつかの実施形態では、免疫障害は、炎症性疾患である。一実施形態では、炎症性疾患は、ブドウ膜炎である。本明細書に提供される様々な方法の特定の実施形態では、免疫疾患は、リウマチ性関節炎、クローン病、乾癬、乾癬性関節炎、多発性硬化症、狼瘡、強直性脊椎炎、Ｉ型糖尿病、シェーグレン症候群、潰瘍性大腸炎、視神経脊髄炎、セリアック病、強皮症、及び側頭動脈炎などの自己免疫疾患である。いくつかの実施形態では、狼瘡は、ＳＬＥ、ＣＬＥ、またはループス腎炎である。本明細書に提供される様々な方法の他の実施形態では、免疫障害は、例えば、アトピー性皮膚炎、過敏性血管炎、ならびにアレルギー、例えば、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎（花粉症）、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）（蕁麻疹（ｈｉｖｅｓ））、及びアナフィラキシーを含む、過敏性疾患である。ある特定の実施形態では、過敏性疾患は、Ｔ細胞過敏性疾患である。
【０４６７】
本明細書に提供される様々な方法のいくつかの実施形態では、免疫障害は、自己免疫疾患である。一実施形態では、自己免疫疾患は、リウマチ性関節炎である。別の実施形態では、自己免疫疾患は、クローン病である。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、乾癬である。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、多発性硬化症である。別の実施形態では、自己免疫疾患は、強直性脊椎炎である。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、Ｉ型糖尿病である。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、シェーグレン症候群である。さらなる実施形態では、自己免疫疾患は、潰瘍性大腸炎である。別の実施形態では、自己免疫疾患は、視神経脊髄炎である。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、セリアック病である。一実施形態では、自己免疫疾患は、側頭動脈炎である。別の実施形態では、自己免疫疾患は、強皮症である。一実施形態では、自己免疫疾患は、狼瘡である。一実施形態では、自己免疫疾患は、ＳＬＥである。別の実施形態では、自己免疫疾患は、ＣＬＥである。さらなる別の実施形態では、自己免疫疾患は、ループス腎炎である。
【０４６８】
いくつかの実施形態では、免疫障害は、過敏性疾患である。ある特定の実施形態では、過敏性疾患は、Ｔ細胞過敏性疾患である。一実施形態では、免疫障害は、アトピー性皮膚炎である。別の実施形態では、免疫障害は、過敏性血管炎である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、アレルギーである。一実施形態では、免疫障害は、アレルギー性喘息である。別の実施形態では、免疫障害は、アレルギー性鼻炎（花粉症）である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）（蕁麻疹（ｈｉｖｅｓ））である。ある特定の実施形態では、免疫障害は、アナフィラキシーである。
【０４６９】
用語「Ｔ細胞過敏性」は、対象の免疫障害に関して使用される場合、一過性または慢性の異常に高いレベルのＴ細胞エフェクター機能を指す。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞エフェクター機能は、ＴＨ２サイトカインの分泌を含む。例示的なＴＨ２サイトカインは、これらに限定されないが、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−３１、及びＴＳＬＰを含む。一実施形態では、ＴＨ２サイトカインは、ＩＬ−２である。別の実施形態では、ＴＨ２サイトカインは、ＩＬ−４である。さらなる別の実施形態では、ＴＨ２サイトカインは、ＩＬ−９である。さらなる別の実施形態では、ＴＨ２サイトカインは、ＩＬ−１３である。一実施形態では、ＴＨ２サイトカインは、ＩＬ−３１である。別の実施形態では、ＴＨ２サイトカインは、ＴＳＬＰである。いくつかの実施形態では、対象は、一過性または慢性の異常に高いレベルの、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の異なるＴＨ２サイトカインを有する。いくつかの実施形態では、対象は、一過性または慢性の異常に高いレベルの、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−３１、及びＴＳＬＰからなる群から選択される２、３、４、５、または６のサイトカインを有する。
【０４７０】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド断片、ＰＤ−１ペプチド、またはＰＤ−１エピトープを含むＰＤ−１に結合する抗体を投与することを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒト及び／またはカニクイザルＰＤ−１に結合する。他の実施形態では、抗体は、齧歯類ＰＤ−１（例えば、マウスＰＤ−１）には結合しない。一実施形態では、抗体は、ヒトＰＤ−１に結合する。別の実施形態では、抗体は、カニクイザルＰＤ−１に結合する。別の実施形態では、抗体は、ヒトＰＤ−１及びカニクイザルＰＤ−１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＰＤ−１に結合し、齧歯類ＰＤ−１（例えば、マウスＰＤ−１）には結合しない。いくつかの実施形態では、抗体は、カニクイザルＰＤ−１に結合し、齧歯類ＰＤ−１（例えば、マウスＰＤ−１）には結合しない。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＰＤ−１に結合し、カニクイザルＰＤ−１に結合し、齧歯類ＰＤ−１（例えば、マウスＰＤ−１）には結合しない。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１ポリペプチドへの結合をブロックしない。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１ポリペプチドへの結合をブロックしない。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１ポリペプチドへの結合をブロックしない。他の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１ポリペプチド、ＰＤ−１ポリペプチド断片、ＰＤ−１ペプチド、またはＰＤ−１エピトープを含むＰＤ−１に結合するヒト化抗体（例えば、ヒト定常領域を含む）である。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、表１〜表６に示されるアミノ酸配列などの、本明細書に提供されるマウスのモノクローナル抗体のいずれか１つのＶＨ領域、ＶＬ領域、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３を含む。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に提供される単離された抗体またはその機能的断片は、表１及び表２に示されるように、（ａ）抗体ＰＤ１ＡＢ−１、（ｂ）抗体ＰＤ１ＡＢ−２、（ｃ）抗体ＰＤ１ＡＢ−３、（ｄ）抗体ＰＤ１ＡＢ−４、（ｅ）抗体ＰＤ１ＡＢ−５、または（ｆ）抗体ＰＤ１ＡＢ−６からの、１、２、及び／または３つの重鎖ＣＤＲ及び／または１、２、及び／または３つの軽鎖ＣＤＲを含む。
【０４７１】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、６つのＣＤＲ、例えば、表１及び表２に特定されるＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３を含むか、またはそれらからなる抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、６つ未満のＣＤＲを含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、表１及び表２に特定されるＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３からなる群から選択される、１、２、３、４、または５つのＣＤＲを含むか、またはそれらからなる。いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書に記載される（ａ）抗体ＰＤ１ＡＢ−１、（ｂ）抗体ＰＤ１ＡＢ−２、（ｃ）抗体ＰＤ１ＡＢ−３、（ｄ）抗体ＰＤ１ＡＢ−４、（ｅ）抗体ＰＤ１ＡＢ−５、及び（ｆ）抗体ＰＤ１ＡＢ−６からなる群から選択されるモノクローナル抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３からなる群から選択される１、２、３、４、または５つのＣＤＲを含むか、またはそれらからなる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、表１及び表２に特定されるＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３のいずれか１つの１、２、３、４、または５つのＣＤＲを含むか、またはそれらからなる抗体を投与することを含む。
【０４７２】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、表２に列挙される１つ以上（例えば、１、２、または３つ）のＶＨ  ＣＤＲを含む抗体を投与することを含む。他の実施形態では、抗体は、表１に列挙される１つ以上（例えば、１、２、または３つ）のＶＬ  ＣＤＲを含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、表２に列挙される１つ以上（例えば、１、２、または３つ）のＶＨ  ＣＤＲ及び表１に列挙される１つ以上のＶＬ  ＣＤＲを含む。したがって、いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、表２に示されるＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３アミノ酸配列（複数可）のいずれか１つから独立して選択されるＶＨ  ＣＤＲ１及び／またはＶＨ  ＣＤＲ２及び／またはＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１及び７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、表１に示されるＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれか１つから独立して選択されるＶＬ  ＣＤＲ１及び／またはＶＬ  ＣＤＲ２及び／またはＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０４７３】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、（１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、（２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む抗体を投与することを含む。他の実施形態では、抗体は、（１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、（２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに（１）配列番号７のアミノ酸を有するＶＬ  ＣＤＲ１、（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、（２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（１）配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。
【０４７４】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、表１及び表２に列挙される１つ以上（例えば、１、２、または３つ）のＶＨ  ＣＤＲ及び１つ以上（例えば、１、２、または３つ）のＶＬ  ＣＤＲを含む抗体を投与することを含む。特定の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤ��２（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ１（配列番号４）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ２（配列番号５）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＣＤＲ３（配列番号６）、ＶＬ  ＣＤＲ１（配列番号１または７）、ＶＬ  ＣＤＲ２（配列番号２）、及びＶＬ  ＣＤＲ３（配列番号３）を含む。別の実施形態では、抗体は、表１及び表２に列挙されるＶＨ  ＣＤＲ及びＶＬ  ＣＤＲのそれらの任意の組み合わせを含む。
【０４７５】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、関連抗体に由来するコンセンサス配列を含む本明細書に開示されるＣＤＲを含む抗体を投与することを含む（例えば、表１及び表２を参照されたい）。
【０４７６】
他の実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、表３及び表４に示されるように、（ａ）抗体ＰＤ１ＡＢ−１、（ｂ）抗体ＰＤ１ＡＢ−２、（ｃ）抗体ＰＤ１ＡＢ−３、（ｄ）抗体ＰＤ１ＡＢ−４、（ｅ）抗体ＰＤ１ＡＢ−５、または（ｆ）抗体ＰＤ１ＡＢ−６からの、１、２、３、及び／または４つの重鎖ＦＲ及び／または１、２、３、及び／または４つの軽鎖ＦＲをさらに含む抗体（もしくはその機能的断片）を投与することを含む。
【０４７７】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、表４に示されるように、（ａ）抗体ＰＤ１ＡＢ−１、（ｂ）抗体ＰＤ１ＡＢ−２、（ｃ）抗体ＰＤ１ＡＢ−３、（ｄ）抗体ＰＤ１ＡＢ−４、（ｅ）抗体ＰＤ１ＡＢ−５、または（ｆ）抗体ＰＤ１ＡＢ−６からの、１、２、３、及び／または４つの重鎖ＦＲをさらに含む抗体（もしくはその機能的断片）を投与することを含む。いくつかの実施形態では、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−１からのものである。いくつかの実施形態では、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−２からのものである。他の実施形態では、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−３からのものである。ある特定の実施形態では、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−４からのものである。他の実施形態では、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−５からのものである。別の実施形態では、抗体重鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−６からのものである。
【０４７８】
他の実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、表３に示されるように、（ａ）抗体ＰＤ１ＡＢ−１、（ｂ）抗体ＰＤ１ＡＢ−２、（ｃ）抗体ＰＤ１ＡＢ−３、（ｄ）抗体ＰＤ１ＡＢ−４、（ｅ）抗体ＰＤ１ＡＢ−５、または（ｆ）抗体ＰＤ１ＡＢ−６からの、１、２、３、及び／または４つの軽鎖ＦＲをさらに含む抗体（もしくはその機能的断片）を投与することを含む。いくつかの実施形態では、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−１からのものである。いくつかの実施形態では、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−２からのものである。他の実施形態では、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−３からのものである。ある特定の実施形態では、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−４からのものである。他の実施形態では、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−５からのものである。別の実施形態では、抗体軽鎖ＦＲ（複数可）は、抗体ＰＤ１ＡＢ−６からのものである。
【０４７９】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、（１）配列番号１９及び２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２１及び２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含むか、またはそれらをさらに含むＶＨ領域を含む抗体を投与することを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（１）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含むか、またはそれらをさらに含むＶＨ領域を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（１）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含むか、またはそれらをさらに含むＶＨ領域を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含むか、またはそれらをさらに含むＶＨ領域を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含むか、またはそれらをさらに含むＶＨ領域を含む。特定の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。
【０４８０】
したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、配列番号１９及び２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１を含むＶＨ領域を含むヒト化抗体を投与することを含む。一実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１を含むＶＨ領域を含む。一実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１を含むＶＨ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２を含むＶＨ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号２１及び２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３を含むＶＨ領域を含む。一実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３を含むＶＨ領域を含む。一実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３を含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含むＶＨ領域を含む。
【０４８１】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１６及び１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含むＶＬ領域を含む抗体を投与することを含む  いくつかの実施形態では、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。他の実施形態では、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。
【０４８２】
したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１を含むＶＬ領域を含むヒト化抗体を投与することを含む。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２を含むＶＬ領域を含む。他の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１６及び１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３を含むＶＬ領域を含む。一実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３を含むＶＬ領域を含む。他の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３を含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含むＶＬ領域を含む。
【０４８３】
他の実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含む抗体を投与することを含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号１９及び２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２１及び２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含む、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１６及び１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０４８４】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含む抗体を投与することを含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含み、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０４８５】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含む抗体を投与することを含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含み、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０４８６】
他の実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、ＶＨ領域及びＶＬ領域抗体を投与することを含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含み、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０４８７】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含む抗体を投与することを含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含み、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０４８８】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含む抗体を投与することを含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含み、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０４８９】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含む抗体を投与することを含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含み、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０４９０】
他の実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含む抗体を投与することを含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含み、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０４９１】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含む抗体を投与することを含み、ＶＨ領域は、（１）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ１、（２）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ２、（３）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＦＲ４を含み、ＶＬ領域は、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ１、（２）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ２、（３）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ３、及び／または（４）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＦＲ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域を含む。他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。さらなる他の実施形態では、抗体は、上記参照のＶＨ  ＦＲ１、ＶＨ  ＦＲ２、ＶＨ  ＦＲ３、及びＶＨ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＨ領域、ならびに上記参照のＶＬ  ＦＲ１、ＶＬ  ＦＲ２、ＶＬ  ＦＲ３、及びＶＬ  ＦＲ４の４つすべてを含むＶＬ領域を含む。
【０４９２】
本明細書に提供される方法は、ある特定の実施形態では、表３及び表４に列挙される１つ以上（例えば、１、２、３、または４つ）のＶＨ  ＦＲ及び１つ以上（例えば、１、２、３、または４つ）のＶＬ  ＦＲを含む抗体を投与することを含む。特に、いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、及びＶＬ  Ｆ���３（配列番号１６または１８）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配���番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では���抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号  １６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、Ｖ
Ｈ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列���号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、及びＶＬ  ＦＲ４（���列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、Ｖ
Ｈ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列��号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗
体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列���号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番��１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。別の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ１（配列番号１９または２４）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。一実施形態では、抗体は、ＶＨ  ＦＲ２（配列番号２０）、ＶＨ  ＦＲ３（配列番号２１または２３）、ＶＨ  ＦＲ４（配列番号２２）、ＶＬ  ＦＲ１（配列番号１４）、ＶＬ  ＦＲ２（配列番号１５）、ＶＬ  ＦＲ３（配列番号１６または１８）、及びＶＬ  ＦＲ４（配列番号１７）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、表３及び表４に列挙されるＶＨ  ＦＲ（配列番号１９〜２４）及びＶＬ  ＦＲ（配列番号１４〜１８）のその任意の組み合わせを含む。
【０４９３】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、ＶＨ領域またはＶＨドメインを含む抗体を投与することを含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＬ領域またはＶＬドメインを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、（ｉ）ＶＨドメインもしくはＶＨ領域、及び／または（ｉｉ）ＶＬドメインもしくはＶＬ領域の組み合わせを有する。方法において有用な抗体の例示的なＶＨ領域、ＶＨドメイン、ＶＬ領域、及びＶＬドメインは、本明細書の他の箇所で示される。いくつかの実施形態では、抗体は、表５及び表６に示されるように、配列番号８〜１３からなる群から選択される（ｉ）ＶＨドメインもしくはＶＨ領域、及び／または（ｉｉ）ＶＬドメインもしくはＶＬ領域の組み合わせを有する。他の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、表５及び表６に示されるように、抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６のいずれか１つの（ｉ）ＶＨドメインもしくはＶＨ領域、及び／または（ｉｉ）ＶＬドメインもしくはＶＬ領域の組み合わせを有する。
【０４９４】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、（１）配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、（２）配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、ならびに表５に示されるように、配列番号８〜１０からなる群から選択されるＶＬ領域を含む抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号８のアミノ酸配列を有する。他の実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号９のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号１０のアミノ酸配列を有する。
【０４９５】
他の実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、表６に示されるように、配列番号１１〜１３からなる群から選択されるＶＨ領域、ならびに（１）配列番号１及び７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む抗体を投与することを含む。他の実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、表６に示されるように、配列番号１１〜１３からなる群から選択されるＶＨ領域、ならびに（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む抗体を投与することを含む。さらなる他の実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、表６に示されるように、配列番号１１〜１３からなる群から選択されるＶＨ領域、ならびにＶＬ領域（１）配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、及び（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号１１のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号１２のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する。
【０４９６】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、ＰＤ１ＡＢ−１のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号８のＶＬアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、抗体は、ＰＤ１ＡＢ−２のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号９のＶＬアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＰＤ１ＡＢ−３のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１２のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号１０のＶＬアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、抗体は、ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１２のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号９のＶＬアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＰＤ１ＡＢ−５のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１３のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号９のＶＬアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、抗体は、ＰＤ１ＡＢ−６のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１３のＶＨアミノ酸配列、及び配列番号８のＶＬアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、軽鎖及び重鎖を含むＰＤ−１ポリペプチド（例えば、ＰＤ−１のＥＣＤ、例えばヒトＰＤ−１）に特異的に結合する抗体を投与することを含み、軽鎖は、配列番号４１のアミノ酸配列を有する定常領域を含む。他の実施形態では、抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、配列番号３６のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、配列番号３６のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含まない。特定の実施形態では、抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、配列番号３７のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ  Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、配列番号３８のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域を含む。別の実施形態では、抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、配列番号３９のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４Ｐ  Ｆｃ領域を含む。さらなる別の実施形態では、抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、配列番号４０のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４ＰＥ  Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、配列番号４０のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４ＰＥ  Ｆｃ領域を含まない。さらなる別の実施形態では、抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、軽鎖は、配列番号４１のアミノ酸配列を有する定常領域を含み、重鎖は、配列番号３６〜４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＦｃ領域を含む。
【０４９７】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、軽鎖及び重鎖を含む抗体を投与することを含み、軽鎖は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、配列番号３３のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、配列番号３４のアミノ酸配列を含む。さらなる別の実施形態では、抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、重鎖は、配列番号３５のアミノ酸配列を含む。１つの特定の実施形態では、抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、（ｉ）軽鎖は、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）重鎖は、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、（ｉ）軽鎖は、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）重鎖は、配列番号３３のアミノ酸配列を含む。さらなる別の特定の実施形態では、抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、（ｉ）軽鎖は、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）重鎖は、配列番号３４のアミノ酸配列を含む。さらなる別の特定の実施形態では、抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、（ｉ）軽鎖は、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）重鎖は、配列番号３５のアミノ酸配列を含む。
【０４９８】
さらなる別の実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、本明細書に提供されるＰＤ−１への結合について例示される抗体または機能的断片の１つと競合する抗体を投与することを含む。そのような抗体はまた、本明細書に例示される抗体の１つと同じエピトープ、または重複するエピトープに結合し得る。例示される抗体として同じエピトープと競合するか、またはそれに結合する抗体及び断片は、同様の機能的特性を示すことが予期される。例示される抗原結合タンパク質及び断片は、表１〜表６中のものを含む、ＶＨ及びＶＬ領域、及び本明細書に提供されるＣＤＲを有するものを含む。したがって、特定の例として、本明細書に提供される方法において有用な抗体は、（ａ）表１及び表２に列挙される抗体について列挙されるＣＤＲの１、２、３、４、５、もしくは６つすべて、（ｂ）表５及び表６に列挙される抗体について列挙されるＶＨ及びＶＬ領域から選択されるＶＨ及びＶＬ、または（ｃ）表５及び表６に列挙される抗体について特定されるＶＨ及びＶＬを含む２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む抗体と競合するものを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＰＤ１ＡＢ−１である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＰＤ１ＡＢ−２である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＰＤ１ＡＢ−３である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＰＤ１ＡＢ−４である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＰＤ１ＡＢ−５である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＰＤ１ＡＢ−６である。
【０４９９】
したがって、有効量の抗ＰＤ−１抗体を対象に投与することを含む、対象における免疫障害を治療する方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−１である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−２である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−３である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−４である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−５である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−６である。また、有効量の抗ＰＤ−１抗体の抗原結合断片を対象に投与することを含む、対象における免疫障害を治療する方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、抗原結合断片は、ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６抗体の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−１の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−２の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−３の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−４の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−５の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−６の断片である。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−１のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−１のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−２のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−２のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−３のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−３のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及��ＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−３のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−３のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−４のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−４のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−４のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−４のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−５のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−５のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−５のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、及び抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−５のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−６のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−６のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−６のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−６のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。さらなる別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、配列番号８のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。さらなる別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。さらなる別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。さらなる別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。特定の実施形態では、ＩｇＧ１定常領域は、Ｋ３２２Ａ置換を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３（ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３２２Ａ）を含む。いくつかの実施形態では、対象は、免疫障害を有する。他の実施形態では、対象は、免疫障害を有する危険性がある。本明細書に提供される方法のある特定の実施形態では、方法は、対象における免疫障害の１つ以上の症状の軽減をもたらす。一実施形態では、対象は、その必要がある対象である。いくつかの実施形態では、免疫障害は、炎症性疾患である。一実施形態では、免疫障害は、ブドウ膜炎である。ある特定の実施形態では、免疫障害は、自己免疫疾患である。一実施形態では、免疫障害は、リウマチ性関節炎である。別の実施形態では、免疫障害は、クローン病である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、乾癬である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、乾癬性関節炎である。他の実施形態では、免疫障害は、多発性硬化症である。別の実施形態では、免疫障害は、強直性脊椎炎である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、Ｉ型糖尿病である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、シェーグレン症候群である。一実施形態では、免疫障害は、潰瘍性大腸炎である。別の実施形態では、免疫障害は、視神経脊髄炎である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、セリアック病である。一実施形態では、自己免疫疾患は、狼瘡である。一実施形態では、免疫障害は、ＳＬＥである。別の実施形態では、免疫障害は、ＣＬＥである。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、ループス腎炎である。一実施形態では、免疫障害は、側頭動脈炎である。別の実施形態では、免疫障害は、強皮症である。いくつかの実施形態では、免疫障害は、過敏性疾患である。ある特定の実施形態では、過敏性疾患は、Ｔ細胞過敏性疾患である。一実施形態では、免疫障害は、アトピー性皮膚炎である。別の実施形態では、免疫障害は、過敏性血管炎である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、アレルギーである。一実施形態では、免疫障害は、アレルギー性喘息である。別の実施形態では、免疫障害は、アレルギー性鼻炎（花粉症）である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）（蕁麻疹（ｈｉｖｅｓ））である。ある特定の実施形態では、免疫障害は、アナフィラキシーである。
【０５００】
また、有効量の抗ＰＤ−１抗体を対象に投与することを含む、対象における免疫障害を管理する方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−１である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−２である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−３である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−４である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−５である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−６である。また、有効量の抗ＰＤ−１抗体の抗原結合断片を対象に投与することを含む、対象における免疫障害を管理する方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、抗原結合断片は、ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６抗体の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−１の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−２の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−３の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−４の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−５の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−６の断片である。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−１のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−１のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−２のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−２のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−３のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−３のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−３のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−３のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−４のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−４のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−４のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−４のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−５のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−５のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−５のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、及び抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−５のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−６のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−６のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−６のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−６のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。さらなる別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、配列番号８のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。さらなる別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。さらなる別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。さらなる別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。特定の実施形態では、ＩｇＧ１定常領域は、Ｋ３２２Ａ置換を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３（ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３２２Ａ）を含む。いくつかの実施形態では、対象は、免疫障害を有する。他の実施形態では、対象は、免疫障害を有する危険性がある。本明細書に提供される方法のある特定の実施形態では、方法は、対象における免疫障害の１つ以上の症状の軽減をもたらす。一実施形態では、対象は、その必要がある対象である。いくつかの実施形態では、免疫障害は、炎症性疾患である。一実施形態では、免疫障害は、ブドウ膜炎である。ある特定の実施形態では、免疫障害は、自己免疫疾患である。一実施形態では、免疫障害は、リウマチ性関節炎である。別の実施形態では、免疫障害は、クローン病である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、乾癬である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、乾癬性関節炎である。他の実施形態では、免疫障害は、多発性硬化症である。別の実施形態では、免疫障害は、強直性脊椎炎である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、Ｉ型糖尿病である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、シェーグレン症候群である。一実施形態では、免疫障害は、潰瘍性大腸炎である。別の実施形態では、免疫障害は、視神経脊髄炎である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、セリアック病である。一実施形態では、自己免疫疾患は、狼瘡である。一実施形態では、免疫障害は、ＳＬＥである。別の実施形態では、免疫障害は、ＣＬＥである。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、ループス腎炎である。一実施形態では、免疫障害は、側頭動脈炎である。別の実施形態では、免疫障害は、強皮症である。いくつかの実施形態では、免疫障害は、過敏性疾患である。ある特定の実施形態では、過敏性疾患は、Ｔ細胞過敏性疾患である。一実施形態では、免疫障害は、アトピー性皮膚炎である。別の実施形態では、免疫障害は、過敏性血管炎である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、アレルギーである。一実施形態では、免疫障害は、アレルギー性喘息である。別の実施形態では、免疫障害は、アレルギー性鼻炎（花粉症）である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）（蕁麻疹（ｈｉｖｅｓ））である。ある特定の実施形態では、免疫障害は、アナフィラキシーである。
【０５０１】
また、有効量の抗ＰＤ−１抗体を対象に投与することを含む、対象における免疫障害を予防する方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−１である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−２である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−３である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−４である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−５である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−６である。また、有効量の抗ＰＤ−１抗体の抗原結合断片を対象に投与することを含む、対象における免疫障害を予防する方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、抗原結合断片は、ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６抗体の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−１の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−２の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−３の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−４の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−５の断片である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体断片は、ＰＤ１ＡＢ−６の断片である。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−１のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−１のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−２のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−２のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−３のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−３のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−３のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−３のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−４のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−４のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−４のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−４のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−５のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−５のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−５のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、及び抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−５のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−６のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−６のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、ＰＤ１ＡＢ−６のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、ＰＤ１ＡＢ−６のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。さらなる別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＬは、配列番号８のアミノ酸配列を含み、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片のＶＨは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。さらなる別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。さらなる別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。さらなる別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体、またはその抗原結合断片は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。特定の実施形態では、ＩｇＧ１定常領域は、Ｋ３２２Ａ置換を含む。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３（ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３２２Ａ）を含む。いくつかの実施形態では、対象は、免疫障害を有する。他の実施形態では、対象は、免疫障害を有する危険性がある。本明細書に提供される方法のある特定の実施形態では、方法は、対象における免疫障害の１つ以上の症状の軽減をもたらす。一実施形態では、対象は、その必要がある対象である。いくつかの実施形態では、免疫障害は、炎症性疾患である。一実施形態では、免疫障害は、ブドウ膜炎である。ある特定の実施形態では、免疫障害は、自己免疫疾患である。一実施形態では、免疫障害は、リウマチ性関節炎である。別の実施形態では、免疫障害は、クローン病である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、乾癬である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、乾癬性関節炎である。他の実施形態では、免疫障害は、多発性硬化症である。別の実施形態では、免疫障害は、強直性脊椎炎である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、Ｉ型糖尿病である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、シェーグレン症候群である。一実施形態では、免疫障害は、潰瘍性大腸炎である。別の実施形態では、免疫障害は、視神経脊髄炎である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、セリアック病である。一実施形態では、自己免疫疾患は、狼瘡である。一実施形態では、免疫障害は、ＳＬＥである。別の実施形態では、免疫障害は、ＣＬＥである。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、ループス腎炎である。一実施形態では、免疫障害は、側頭動脈炎である。別の実施形態では、免疫障害は、強皮症である。いくつかの実施形態では、免疫障害は、過敏性疾患である。ある特定の実施形態では、過敏性疾患は、Ｔ細胞過敏性疾患である。一実施形態では、免疫障害は、アトピー性皮膚炎である。別の実施形態では、免疫障害は、過敏性血管炎である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、アレルギーである。一実施形態では、免疫障害は、アレルギー性喘息である。別の実施形態では、免疫障害は、アレルギー性鼻炎（花粉症）である。さらなる別の実施形態では、免疫障害は、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）（蕁麻疹（ｈｉｖｅｓ））である。ある特定の実施形態では、免疫障害は、アナフィラキシーである。
【０５０２】
さらなる別の実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、ヒトＰＤ−１またはカニクイザルＰＤ−１のエピトープを含む領域に結合する本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片を含む。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＰＤ−１のアミノ酸残基３３〜１０９を含むヒトＰＤ−１（配列番号４２）の領域に結合する。さらなる別の態様では、抗体は、ヒトＰＤ−１の特異的エピトープに結合する。
【０５０３】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される様々な方法は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内の残基１００〜１０９（配列番号４３）のうちの少なくとも１つに結合する抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内の１００〜１０５（配列番号４４）の少なくとも１つに結合する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される少なくとも１つの残基に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＬ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される少なくとも１つの残基に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される２つ以上の残基に結合する。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される３つ以上の残基に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される４つ以上の残基に結合する。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される５つ以上の残基に結合する。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される６つ以上の残基に結合する。さらなる別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される７つ以上の残基に結合する。さらなる別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される８つ以上の残基に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群から選択される９つ以上の残基に結合する。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３、Ｔ５１、Ｓ５７、Ｌ１００、Ｎ１０２、Ｇ１０３、Ｒ１０４、Ｄ１０５、Ｈ１０７、及びＳ１０９からなる群の１０個すべての残基に結合する。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ３３に結合する。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＴ５１に結合する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＳ５７に結合する。１つの特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＬ１００に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＮ１０２に結合する。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＧ１０３に結合する。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＲ１０４に結合する。さらなる別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＧ１０３及びＲ１０４に結合する。さらなる別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＤ１０５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＨ１０７に結合する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−１に結合したとき、配列番号４２のアミノ酸配列内のＳ１０９に結合する。上記参照のアミノ酸ＰＤ−１結合部位の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上の任意の組み合わせはまた企図される。
【０５０４】
本明細書に提供される様々な方法のいくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合タンパク質（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体）は、Ｔ細胞過敏性を治療するのに有効な量で投与される。本明細書に提供される様々な方法のいくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合タンパク質（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体）は、血清／血漿の炎症誘発性サイトカインの望ましくないまたは異常に高められたレベルを低減するのに有効な量で投与される。本明細書に提供される様々な方法のいくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合タンパク質（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体）は、対象におけるＰＤ−１シグナル伝達を活性化するのに有効な量で投与される。
【０５０５】
本明細書に提供される様々な方法のいくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合タンパク質（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体）は、対象におけるＰＤ−１発現を下方制御するのに有効な量で投与される。本明細書に提供される様々な方法のいくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合タンパク質（例えば、本明細書に記載される抗ＰＤ−１抗体）は、対象におけるＴ細胞活性を減弱化するのに有効な量で投与される。いくつかの実施形態では、治療の効果は、（ａ）Ｔ細胞活性を減弱化すること、及び／または（ｂ）ＰＤ−１発現を下方制御することによって測定される。ある特定の実施形態では、治療の効果は、Ｔ細胞活性を減弱化することによって測定される。他の実施形態では、治療の効果は、ＰＤ−１発現を下方制御することによって測定される。いくつかの実施形態では、治療の効果は、（ａ）Ｔ細胞活性を減弱化すること、及び（ｂ）ＰＤ−１発現を下方制御することによって測定される。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、サイトカインの分泌を阻害することによって測定される。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、またはそれらの組み合わせである。一実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、ＩＬ−１の分泌を阻害することによって測定される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、ＩＬ−２の分泌を阻害することによって測定される。別の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、ＩＬ−６の分泌を阻害することによって測定される。さらなる別の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、ＩＬ−１２の分泌を阻害することによって測定される。さらなる別の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、ＩＬ−１７の分泌を阻害することによって測定される。一実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、ＩＬ−２２の分泌を阻害することによって測定される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、ＩＬ−２３の分泌を阻害することによって測定される。別の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、ＧＭ−ＣＳＦの分泌を阻害することによって測定される。さらなる別の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、ＴＮＦ−αの分泌を阻害することによって測定される。さらなる別の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、ＩＦＮ−γの分泌を阻害することによって測定される。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、Ｔ細胞増殖の阻害によって測定される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞増殖の阻害は、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の阻害である。他の実施形態では、Ｔ細胞増殖の阻害は、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の阻害である。さらなる別の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、Ｔ細胞活性化マーカーの下方制御によって測定される。一実施形態では、Ｔ細胞活性化マーカーは、ＣＤ２５である。別の実施形態では、Ｔ細胞活性化マーカーは、ＣＤ６９である。さらなる別の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、制御性Ｔ細胞バイオマーカーの上方制御によって測定される。一実施形態では、制御性Ｔ細胞バイオマーカーは、Ｆｏｘｐ３である。さらなる別の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、制御性Ｔ細胞数の増加によって測定され���。一実施形態では、制御性Ｔ細胞は、誘発されたＦｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞である。一実施形態では、制御性Ｔ細胞は、誘発されたＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞である。
【０５０６】
ある特定の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、Ｔ細胞表面での阻害受容体の発現の上方制御によって測定され、阻害受容体はＰＤ−１ではない。いくつかの実施形態では、阻害受容体は、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、及びＴＩＭ−３、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、阻害受容体は、ＬＡＧ−３である。別の実施形態では、阻害受容体は、ＣＴＬＡ−４である。さらなる別の実施形態では、阻害受容体は、ＴＩＭ−３である。
【０５０７】
ある特定の実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、Ｔ細胞リコール応答の阻害によって測定される。一実施形態では、Ｔ細胞リコール応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の低減によって測定される。別の実施形態では、Ｔ細胞リコール応答は、ＣＤ２５の上方制御の阻害によって測定される。さらなる別の実施形態では、Ｔ細胞リコール応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の低減及びＣＤ２５の上方制御の阻害によって測定される。
【０５０８】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性の減弱化は、Ｔ細胞疲弊の増加によって測定される。一実施形態では、Ｔ細胞疲弊の増加は、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞の低減によって測定される。別の実施形態では、Ｔ細胞疲弊の増加は、ＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞の増加によって測定される。さらなる別の実施形態では、Ｔ細胞疲弊の増加は、ＩＬ−７ＲｈｉＴ細胞の低減及びＩＬ−７ＲｌｏＴ細胞の増加によって測定される。一実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。他の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞である。
【０５０９】
さらに、抗ＰＤ−１抗体またはその断片は、獣医学目的のためまたはヒト疾患の動物モデルとして、抗体が交差反応するＰＤ−１を発現する非ヒト哺乳動物（例えば、霊長動物）に投与され得る。後者に関して、そのような動物モデルは、本開示の抗体の治療有効性を評価するのに有用であり得る（例えば、投与量及び投与の時間経過を試験する）。
【０５１０】
本明細書に提供される様々な方法のある特定の実施形態では、治療有効量もしくは予防有効量の抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、対象に投与される。抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片の治療有効量もしくは予防有効量は、１日当たり約０．００５〜約１，０００ｍｇ、１日当たり約０．０１〜約５００ｍｇ、１日当たり約０．０１〜約２５０ｍｇ、１日当たり約０．０１〜約１００ｍｇ、１日当たり約０．１〜約１００ｍｇ、１日当たり約０．５〜約１００ｍｇ、１日当たり約１〜約１００ｍｇ、１日当たり約０．０１〜約５０ｍｇ、１日当たり約０．１〜約５０ｍｇ、１日当たり約０．５〜約５０ｍｇ、１日当たり約１〜約５０ｍｇ、１日当たり約０．０２〜約２５ｍｇ、または１日当たり約０．０５〜約１０ｍｇである。
【０５１１】
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片の治療有効量もしくは予防有効量は、１日当たり約０．１、約０．２、約０．５、約１、約２、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約４０、約４５、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、または約１５０ｍｇである。
【０５１２】
一実施形態では、本明細書に記載の状態についての抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片の推奨される１日用量範囲は、１日当たり約０．５ｍｇ〜約５０ｍｇの範囲であり、好ましくは単一の１日１回用量として、または１日を通して分割用量で与えられる。いくつかの実施形態では、投与量は、１日当たり約１ｍｇ〜約５０ｍｇの範囲に及ぶ。他の実施形態では、投与量は、１日当たり約０．５〜約５ｍｇの範囲に及ぶ。１日当たりの特定の用量には、１日当たり０．１、０．２、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０ｍｇを含む。
【０５１３】
特定の実施形態では、推奨される開始投与量は、１日当たり０．１、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、または５０ｍｇであり得る。別の実施形態では、推奨される開始投与量は、１日当たり０．５、１、２、３、４、または５ｍｇであり得る。投与量は、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、及び５０ｍｇ／日まで増量され得る。
【０５１４】
ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片の治療有効量または予防有効量は、約０．００１〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１〜約２５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１〜約９ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１〜約８ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１〜約７ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１〜約６ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１〜約４ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１〜約３ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１〜約２ｍｇ／ｋｇ／日、または約０．０１〜約１ｍｇ／ｋｇ／日である。
【０５１５】
投与された用量はまた、ｍｇ／ｋｇ／日以外の単位で表され得る。例えば、非経口投与のための投与量は、ｍｇ／ｍ２／日として表され得る。当業者であれば、所与の対象の身長もしくは体重のいずれかまたはそれらの両方に対する投与量をｍｇ／ｋｇ／日からｍｇ／ｍ２／日に変換する方法を容易に理解し得る（ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｃｄｅｒ／ｃａｎｃｅｒ／ａｎｉｍａｌｆｒａｍｅ．ｈｔｍを参照されたい）。例えば、６５ｋｇのヒトに対する１ｍｇ／ｋｇ／日の投与量は、３８ｍｇ／ｍ２／日とほぼ同等である。
【０５１６】
ある特定の実施形態では、投与される抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片の量は、約０．００１〜約５００μＭ、約０．００２〜約２００μＭ、約０．００５〜約１００μＭ、約０．０１〜約５０μＭ、約１〜約５０μＭ、約０．０２〜約２５μＭ、約０．０５〜約２０μＭ、約０．１〜約２０μＭ、約０．５〜約２０μＭ、または約１〜約２０μＭの範囲に及ぶ、抗体の定常状態での血漿濃度を提供するのに十分である。
【０５１７】
他の実施形態では、投与される抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片の量は、約５〜約１００ｎＭ、約５〜約５０ｎＭ、約１０〜約１００ｎＭ、約１０〜約５０ｎＭ、または約５０〜約１００ｎＭの範囲に及ぶ、抗体の定常状態での血漿濃度を提供するのに十分である。
【０５１８】
本明細書で使用される場合、用語「定常状態での血漿濃度」は、本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片、例えば、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３の投与期間後に到達される濃度である。定常状態に達すると、抗体の血漿濃度の時間依存曲線上に微小ピーク及びトラフが存在する。
【０５１９】
ある特定の実施形態では、投与される抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片の量は、約０．００１〜約５００μＭ、約０．００２〜約２００μＭ、約０．００５〜約１００μＭ、約０．０１〜約５０μＭ、約１〜約５０μＭ、約０．０２〜約２５μＭ、約０．０５〜約２０μＭ、約０．１〜約２０μＭ、約０．５〜約２０μＭ、または約１〜約２０μＭの範囲に及ぶ、抗体の最大血漿濃度（ピーク濃度）を提供するのに十分である。
【０５２０】
特定の実施形態では、投与される抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片の量は、約０．００１〜約５００μＭ、約０．００２〜約２００μＭ、約０．００５〜約１００μＭ、約０．０１〜約５０μＭ、約１〜約５０μＭ、約０．０１〜約２５μＭ、約０．０１〜約２０μＭ、約０．０２〜約２０μＭ、約０．０２〜約２０μＭ、または約０．０１〜約２０μＭの範囲に及ぶ、抗体の最小血漿濃度（トラフ濃度）を提供するのに十分である。
【０５２１】
ある特定の実施形態では、投与される抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片の量は、約１００〜約１００，０００ｎｇ＊ｈｒ／ｍＬ、約１，０００〜約５０，０００ｎｇ＊ｈｒ／ｍＬ、約５，０００〜約２５，０００ｎｇ＊ｈｒ／ｍＬ、または約５，０００〜約１０，０００ｎｇ＊ｈｒ／ｍＬの範囲に及ぶ、抗体の曲線下面積（ＡＵＣ）を提供するのに十分である。
【０５２２】
本明細書に提供される抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片、例えば、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、１日１回（ＱＤ）投与され得るか、または１日２回（ＢＩＤ）、１日３回（ＴＩＤ）、及び１日４回（ＱＩＤ）等の複数の１日投与量に分割され得る。加えて、投与は、連続して（すなわち、連続した日にわたって毎日、または毎日）、間欠的に、例えば、サイクルで（すなわち、数日間、数週間、または数ヶ月の休薬期間を含む）あり得る。本明細書で使用される場合、用語「毎日」は、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの治療的抗体が、例えば、ある期間にわたって、１日１回または１回超投与されることを意味するよう意図されている。用語「連続」は、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの治療的抗体が、少なくとも１０日間〜５２週間の中断なしの期間にわたって毎日投与されることを意味するよう意図されている。本明細書において使用される場合、用語「間欠的」または「間欠的に」は、規則的間隔または不規則な間隔のいずれかで、停止及び開始することを意味することが意図されている。例えば、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体の間欠的投与は、週に１〜６日間の投与、サイクル投与（例えば、連続した２〜８週間にわたって連日投与、その後、最大１週間の投与なしの休止期間）、または隔日投与である。本明細書において使用される場合、用語「サイクル」は、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの治療的抗体が、毎日または連続して投与されるが、休止期間を伴うことを意味するよう意図されている。
【０５２３】
いくつかの実施形態では、投与頻度は、約１日投与量から約１月投与量までの範囲である。ある特定の実施形態では、投与は、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、隔日１回、週２回、週１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、または４週間毎に１回である。一実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、１日１回投与される。別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、１日２回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、１日３回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、１日４回投与される。
【０５２４】
ある特定の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗ＰＤ−１抗体は、１日〜６ヶ月間、１週間〜３ヶ月間、１週間〜４週間、１週間〜３週間、または１週間〜２週間にわたって１日１回投与される。ある特定の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、１週間、２週間、３週間、または４週間にわたって１日１回投与される。一実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、１週間にわたって１日１回投与される。別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、２週間にわたって１日１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、３週間にわたって１日１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、４週間にわたって１日１回投与される。
【０５２５】
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片の治療有効量または予防有効量は、約０．００１〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約９ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約８ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約７ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約６ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約４ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約３ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２ｍｇ／ｋｇ、または約０．０１〜約１ｍｇ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片の治療有効量または予防有効量は、約０．００１、約０．００３、約０．００５、約０．０１、約０．０３、約０．０５、約０．１、約０．３、約０．５、約１、約３、約５、約１０、約３０、または約５０ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片の治療有効量または予防有効量は、０．００１ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片の治療有効量または予防有効量は、０．０１ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片の治療有効量または予防有効量は、０．１ｍｇ／ｋｇある。別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片の治療有効量または予防有効量は、０．３ｍｇ／ｋｇある。別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片の治療有効量または予防有効量は、０．５ｍｇ／ｋｇである。さらなる別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片の治療有効量または予防有効量は、１ｍｇ／ｋｇである。さらなる別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片の治療有効量または予防有効量は、３ｍｇ／ｋｇである。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片の治療有効量または予防有効量は、５ｍｇ／ｋｇである。別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片の治療有効量または予防有効量は、１０ｍｇ／ｋｇである。さらなる別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片の治療有効量または予防有効量は、３０ｍｇ／ｋｇである。さらなる別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体もしくはその抗原結合断片の治療有効量または予防有効量は、５０ｍｇ／ｋｇである。
【０５２６】
いくつかの実施形態では、投与頻度は、週１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、または４週間毎に１回である。一実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、週１回投与される。別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、２週間毎に１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、３週間毎に投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、４週間毎に投与される。
【０５２７】
一実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、０．１ｍｇ／ｋｇの投与量で週１回投与される。別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、０．３ｍｇ／ｋｇの投与量で週１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、０．５ｍｇ／ｋｇの投与量で週１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、１ｍｇ／ｋｇの投与量で週１回投与される。一実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、３ｍｇ／ｋｇの投与量で週１回投与される。別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、５ｍｇ／ｋｇの投与量で週１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で週１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、３０ｍｇ／ｋｇの投与量で週１回投与される。
【０５２８】
一実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、０．１ｍｇ／ｋｇの投与量で２週間毎に１回投与される。別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、０．３ｍｇ／ｋｇの投与量で２週間毎に１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、０．５ｍｇ／ｋｇの投与量で２週間毎に１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、１ｍｇ／ｋｇの投与量で２週間毎に１回投与される。一実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、３ｍｇ／ｋｇの投与量で２週間毎に１回投与される。別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、５ｍｇ／ｋｇの投与量で２週間毎に１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で２週間毎に１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、３０ｍｇ／ｋｇの投与量で２週間毎に１回投与される。
【０５２９】
一実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、０．１ｍｇ／ｋｇの投与量で３週間毎に１回投与される。別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、０．３ｍｇ／ｋｇの投与量で３週間毎に１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、０．５ｍｇ／ｋｇの投与量で３週間毎に１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、１ｍｇ／ｋｇの投与量で３週間毎に１回投与される。一実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、３ｍｇ／ｋｇの投与量で３週間毎に１回投与される。別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、５ｍｇ／ｋｇの投与量で３週間毎に１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で３週間毎に１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、３０ｍｇ／ｋｇの投与量で３週間毎に１回投与される。
【０５３０】
一実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、０．１ｍｇ／ｋｇの投与量で４週間毎に１回投与される。別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、０．３ｍｇ／ｋｇの投与量で４週間毎に１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、０．５ｍｇ／ｋｇの投与量で４週間毎に１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、１ｍｇ／ｋｇの投与量で４週間毎に１回投与される。一実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、３ｍｇ／ｋｇの投与量で４週間毎に１回投与される。別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、５ｍｇ／ｋｇの投与量で４週間毎に１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で４週間毎に１回投与される。さらなる別の実施形態では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３などの抗体は、３０ｍｇ／ｋｇの投与量で４週間毎に１回投与される。
【０５３１】
治療される疾患及び対象の状態に応じて、本明細書に提供される抗体、例えば、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、非経口（例えば、筋肉内、腹腔内、静脈内、持続静脈内、嚢内注射もしくは注入、皮下注射、または埋植）、吸入、鼻腔内、膣内、直腸、舌下、または局部（例えば、経皮もしくは局所）投与経路により投与され得る。一実施形態では、投与経路は、皮下注射である。別の実施形態では、投与経路は、静脈内である。さらなる別の実施形態では、投与経路は、筋肉内である。さらなる別の実施形態では、投与経路は、腹腔内である。一実施形態では、投与経路は、持続静脈内である。別の実施形態では、投与経路は、嚢内注射もしくは注入である。さらなる別の実施形態では、投与経路は、埋植である。さらなる別の実施形態では、投与経路は、吸入である。一実施形態では、投与経路は、鼻腔内である。別の実施形態では、投与経路は、直腸である。さらなる別の実施形態では、投与経路は、舌下である。さらなる別の実施形態では、投与経路は、経皮である。本明細書に提供される任意の抗ＰＤ−１抗体、例えば、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、単独で、または好適な投薬単位で各投与経路に適切な薬学的に許容される賦形剤、担体、アジュバント、及びビヒクルと一緒に製剤化され得る。
【０５３２】
本明細書に提供される様々方法のいくつかの実施形態では、方法は、治療有効量の第２の活性薬剤を投与すること、または支持療法をさらに含む。第２の活性薬剤は、大分子（例えば、タンパク質）または小分子（例えば、合成無機、有機金属、もしくは有機分子）であり得る。いくつかの実施形態では、第２の活性薬剤は、本明細書に提供される抗体の投与に関連する有害作用を緩和することができる小分子である。しかしながら、いくつかの大分子と同様に、多くは、（例えば、その投与前、その投与後、またはその投与と同時に）本明細書に提供される抗体と（例えば、前、後、または同時に）投与される場合、相乗効果を提供することができると考えられる。小分子の第２の活性薬剤の例としては、抗がん剤、抗炎症剤、免疫抑制剤、及びステロイドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０５３３】
４．５薬学的組成物
１つの態様では、本開示は、本開示の少なくとも１つの抗ＰＤ−１抗体を含む本明細書に提供される様々な方法における使用のための薬学的組成物をさらに記載する。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、１）抗ＰＤ−１抗体、及び２）薬学的に許容可能な担体を含む。
【０５３４】
抗体を含む薬学的組成物は、所望の純度を有する抗体を、水性溶液または凍結乾燥もしくはその他の乾燥製剤の形で、任意選択的な生理的に許容される担体、賦形剤、または安定剤（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ  ｅｄ．１９８０）を参照されたい）と混合することによって、貯蔵のために調製される。
【０５３５】
本開示の抗体は、標的細胞／組織への送達のために任意の適切な形、例えば、マイクロカプセルもしくはマクロエマルジョン（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ（上記参照）、Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  １０：１４６−６１、Ｍａｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖ．４：１４１−５１）として、徐放性製剤として（Ｐｕｔｎｅｙ  ａｎｄ  Ｂｕｒｋｅ，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：１５３−５７）、またはリポソーム中に（Ｍａｃｌｅａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．１１：３２５−３２、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，２００６，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．８：３９−４５）調製され得る。
【０５３６】
本明細書に提供される抗体はまた、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）中に、あるいはマクロエマルジョン中に、封入され得る。そのような技術は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ（上記参照）に開示されている。
【０５３７】
様々な組成物及び送達系は既知であり、これらに限定されないが、リポソーム中のカプセル封入、微小粒子、マイクロカプセル、抗体を発現することができる組み換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−３２を参照されたい）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構造等を含む、本明細書に記載のＰＤ−１に結合する抗体とともに使用され得る。別の実施形態では、組成物は、制御放出系または持続放出系として提供され得る。一実施形態では、ポンプは、制御放出または持続放出を達成するために使用され得る（例えば、Ｌａｎｇｅｒ（上記参照）、Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１−４０、Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７−１６、及びＳａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５６９−７４を参照されたい）。別の実施形態では、ポリマー物質は、予防薬剤もしくは治療薬剤（例えば、本明細書に記載されるＰＤ−１に結合する抗体）、または本発明の組成物（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ（Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ  ｅｄｓ．，１９７４）、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ（Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ  ｅｄｓ．，１９８４）、Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１−１２６、Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０−９２、Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１−５６、Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５−１２、米国特許第５，６７９，３７７号、第５，９１６，５９７号、第５，９１２，０１５号、第５，９８９，４６３号、及び第５，１２８，３２６号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／１５１５４号、ならびに第ＷＯ９９／２０２５３号を参照されたい）の制御放出または持続放出を達成するために使用され得る。持続放出製剤中で使用されるポリマーの例としては、これらに限定されないが、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−ｃｏ−酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリアンハイドライド、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、及びポリオルトエステルが挙げられる。一実施形態では、持続放出製剤中で使用されるポリマーは、不活性、浸出性不純物を含まない、貯蔵上安定した、無菌、及び生物分解性である。
【０５３８】
さらなる別の実施形態では、制御放出系または持続放出系は、特定の標的組織、例えば、鼻腔または肺に近接して配置され得、それ故に、全身用量のほんの一画分を必要とし得る（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｖｏｌ．２，１１５−３８（１９８４）を参照されたい）。制御放出系は、例えば、Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−３３によって議論されている。当業者に既知の任意の技術は、本明細書に記載されるように、ＰＤ−１に結合する１つ以上の抗体を含む持続放出製剤を生成するために使用され得る（例えば、米国特許第４，５２６，９３８号、ＰＣＴ公開第  ＷＯ９１／０５５４８及びＷＯ９６／２０６９８、Ｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３９：１７９−８９、Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，ＰＤＡ  Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．＆  Ｔｅｃｈ．５０：３７２−９７、Ｃｌｅｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３−５４、ならびにＬａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９−６０を参照されたい）。
【０５３９】
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術及び科学用語は、本発明が属する当業者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様または同等の方法及び材料が本発明の実施または試験で使用され得るが、好適な方法及び材料が本明細書に記載される。
【０５４０】
本明細書で示されるすべての出願、出版物、特許、及び他の参考文献、ＧｅｎＢａｎｋの引用、ならびにＡＴＣＣの引用は、それらの全体において参照により組み込まれる。矛盾する場合には、定義を含めて、明細書が優先する。
【０５４１】
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」「ａｎｄ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上そうではないという指示がない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「ペプチド配列」は、複数のそのような配列などを含む。
【０５４２】
本明細書で使用される場合、多数の値は、この文書を通して範囲形式でしばしば表される。範囲形式の使用は、単に便宜及び簡潔さのためのものであり、文脈上そうではないという指示がない限り、本発明の範囲の柔軟性のない制限として解釈されるべきでない。したがって、範囲の使用は、文脈上そうではないという指示がない限り、そのような範囲内の整数及び値の端数または範囲内の整数を含む、すべての可能な部分範囲、範囲内のすべての個々の多数の値、及びすべての多数の値または多数の範囲を明確に含む。この解釈は、範囲の幅に関わらず、この特許文書を通してすべての文脈において適用する。したがって、例えば、９０〜１００％の範囲の参照は、９１〜９９％、９２〜９８％、９３〜９５％、９１〜９８％、９１〜９７％、９１〜９６％、９１〜９５％、９１〜９４％、９１〜９３％などを含む。９０〜１００％の範囲の参照はまた、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９５％、９７％等、ならびに９１．１％、９１．２％、９１．３％、９１．４％、９１．５％等、９２．１％、９２．２％、９２．３％、９２．４％、９２．５％等などを含む。
【０５４３】
さらに、１〜３、３〜５、５〜１０、１０〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜６０、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜１００、１００〜１１０、１１０〜１２０、１２０〜１３０、１３０〜１４０、１４０〜１５０、１５０〜１６０、１６０〜１７０、１７０〜１８０、１８０〜１９０、１９０〜２００、２００〜２２５、２２５〜２５０の範囲の参照は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０等を含む。さらなる例では、２５〜２５０、２５０〜５００、５００〜１，０００、１，０００〜２，５００、２，５００〜５，０００、５，０００〜２５，０００、２５，０００〜５０，０００の範囲の参照は、そのような値、例えば、２５、２６、２７、２８、２９…２５０、２５１、２５２、２５３、２５４…５００、５０１、５０２、５０３、５０４…等以内のまたはそれらを包含する任意の多数の値もしくは範囲を含む。
【０５４４】
本明細書で使用される場合、一連の範囲は、この文書を通して開示されている。一連の範囲の使用は、別の範囲を提供するために上限及び下限の組み合わせを含む。この解釈は、範囲の幅に関わらず、この特許文書を通してすべての文脈において適用する。したがって、例えば、５〜１０、１０〜２０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜７５、７５〜１００、１００〜１５０などの一連の範囲の参照は、５〜２０、５〜３０、５〜４０、５〜５０、５〜７５、５〜１００、５〜１５０、及び１０〜３０、１０〜４０、１０〜５０、１０〜７５、１０〜１００、１０〜１５０、及び２０〜４０、２０〜５０、２０〜７５、２０〜１００、２０〜１５０などの範囲を含む。
【０５４５】
簡潔さのために、ある特定の略語が本明細書で使用される。１つの例は、アミノ酸残基を表すための１文字略語である。アミノ酸及びそれらの対応する３文字及び１文字略語は、以下の通りである：
【表１０】
2019531284.tif 000014
【０５４６】
本発明は、概して、多数の実施形態を記載するために肯定的な言語を使用して本明細書に開示される。本発明はまた、物質（ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）または物質（ｍａｔｅｒｉａｌｓ）、方法のステップ及び条件、プロトコル、手順、アッセイまたは分析など、全部または一部において、特定の主題が除外される実施形態を特に含む。したがって、本発明は、概して、本発明が含まないことに関して本明細書に表現されていないが、本発明に明確に含まれていない態様は、言うまでもなく本明細書に開示されている。
【０５４７】
本発明のいくつかの実施形態が説明されている。言うまでもなく、本発明の趣旨及ぶ範囲から逸脱することなく、多様な修正がなされ得ることが理解される。したがって、以下の実施例は、請求項に記載される本発明の範囲を例示するために意図されるが、それを制限するものではない。
【実施例】
【０５４８】
この項（すなわち、５項）の実施例は、限定するものではなく、例証として提供されている。
【０５４９】
５．１実施例１：抗ＰＤ−１抗体の生成
５．１．１抗ＰＤ−１抗体の生成
親ＰＤ−１−ＩｇＧ１  ｍＡｂは、ヒトＰＤ−１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）抗原またはＣＨＯ−ｈＰＤ−１トランスフェクト細胞を使用して、マウス免疫化方法によって最初に生成された。ハイブリドーマプールの最初の特徴付けは、可溶性抗原に対して、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）によって測定されたＫＤ約６ｎＭを有する抗ヒトＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１非ブロッキング及びＰＤ−Ｌ２非ブロッキング抗体（データには示されていない）を産生するＰＤ１Ｓｕｂ１を設計したサブクローンを特定した。ＰＤ１Ｓｕｂ１ハイブリドーマのマウスＶＨ及びＶＬ遺伝子は、最も近いＪ領域（それぞれ、ＩｇＨ  Ｊ６及びＩｇκ  Ｊ２）を利用する最も同種のヒトＶＨ及びＶＬフレームワーク遺伝子（それぞれ、ＩｇＨ１−ｆ及びＶκ４−１）のヒトγ１及びκ定常領域へのヒトＣＤＲグラフティングのために配列及び使用された。ヒト生殖細胞系ＨＧ１  ＶＨ及びＶＬ領域についてのみ、マウスＣＤＲ３セグメントは、ヒトＶＨ及びＶＬフレームワーク生殖細胞遺伝子、それぞれ、ＩｇＨ  １−ｆ及びＶκ  ４−１に入れられた。
【０５５０】
安定したＡＩＤ（活性化誘導性デアミナーゼ）を有するＤｅｃｉｄｕｏｕｓ（商標）構築物中にＣＤＲグラフティングまたは生殖細胞系ＨＧ１抗体のいずれかを発現する安定したＨＥＫ−２９３ｃ１８細胞株は、ＳＨＭ−ＸＥＬ（商標）親和性成熟プラットフォーム（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）における使用のために生成された。抗体可変ドメインにおける遺伝子多様性のインサイツの生成は、親抗体のより高い親和性バリアントを発現する細胞をもたらした。これらは、単量体または二量体ｈＰＤ−１を使用してフローサイトメトリーによって単離された。親和性精製及び選択の複数のラウンドは、６のコリドー及び４５のクローンを産出した。追加の「インシリコでのＳＨＭ」イベントに加えて、これらのクローンのサンガー及びディープ配列決定は、変異をＶＨ及びＶＬＣＤＲに富化することを組み込む部位指向性変異誘発のラウンドをもたらした。最も高い親和性結合である１２の変異タンパク質は、ＰＤ−１への結合動態、及びＣＨＯ細胞の表面に発現された完全長ＰＤ−１への結合について、生化学的、生物物理学的にさらに特徴付けられた。精製された抗体の機能的な特徴付けは、２つのアッセイ：細胞表面ＰＤ−１への結合についてのＰＤ−Ｌ１の競合、及び活性化されたヒトＣＤ４＋Ｔ細胞の再活性化のＩＬ−２産生における阻害活性で行われた。
【０５５１】
これらの方法に基づいて、抗ＰＤ−１抗体ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４、ＰＤ１ＡＢ−５、またはＰＤ１ＡＢ−６は、表９に示されるように生成された。
表９．抗ＰＤ−１抗体の特徴付け
【表１１】
2019531284.tif 000015
【０５５２】
５．１．２ヒトＰＢＭＣまたはヒト全血におけるＣＤ４＋再活性化アッセイ
ＰＤ−１発現は、３７℃で４８時間のＰＨＡ活性化で白血球低減系（ＬＲＳ）から単離されたヒトＰＢＭＣ上で誘発された。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＤ４単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用してＰＢＭＣから単離され、固定化された抗ＣＤ３または抗ＣＤ３と滴定された抗ＰＤ−１またはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体とともに９６ウェルプレート上に再播種された。上清は、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、及びＩＬ−１７サイトカイン測定のために２４時間及び４８時間で収集された。６つの抗ＰＤ−１クローンすべては、表１０に支援されるように、ＩＬ−２については２０〜３６ｎＭ、ＩＦＮ−γについては３４〜５８ｎＭ、及びＩＬ−１７については２７〜４１ｎＭの範囲に及ぶ、同様の阻害ＥＣ５０を示した。
表１０．ＰＢＭＣ再活性化アッセイにおける６つのリード抗体の活性を減弱化するＴ細胞の比較
【表１２】
2019531284.tif 000016
【０５５３】
次いで、特異性Ｔ細胞機能の阻害は、ヒト全血マトリックスにおいて評価された。新たに抜き取られた、ヘパリン化されたヒト血液は、抗ＣＤ３または抗ＣＤ３と滴定された抗ＰＤ−１またはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体のいずれかとともに固定化されたウェル上に播種された。２４時間及び４８時間で収集された血漿は、ＩＬ−２（２４時間）及びＩＦＮ−γ／ＩＬ−１７（４８時間）について測定された。３つの他の試験された抗体クローンと比較して、ＰＤ１ＡＢ−６は、表１１に示されるように、特定のＩＬ−２（ＥＣ５０４．０＋０．９ｎＭ、ｎ＝４）、ＩＦＮ−γ（ＥＣ５０４．１＋２．２ｎＭ、ｎ＝２）、及びＩＬ−１７（ＥＣ５０３．６＋１．２ｎＭ、ｎ＝３）阻害において２〜３倍増加した有効性を示した。
表１１．全血アッセイにおける４つのリード分子の活性を減弱化するＴ細胞の比較
【表１３】
2019531284.tif 000017
【０５５４】
５．１．３細胞系リガンド結合アッセイ
リガンド競合を評価するために、細胞結合アッセイが導入され、特定された６つの抗体クローンを評価した。簡潔には、１００ｎＭ〜１００ｐＭの片対数濃度での個々の抗体クローンは、ヒトＰＤ−１−ＣＨＯ細胞（２ｘ１０５細胞）に追加する前に、氷上で４５分間、１０ｎＭのＤｙＬ６５０−ＰＤ−Ｌ１と予混合された。次いで、細胞は、ＤｙＬ６５０−ＰＤ−Ｌ１結合がＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｒａｙ（商標）上で分析される前に洗浄され、アイソタイプ抗体に対する平均蛍光強度は、各濃度でプロットされた。図１Ａ及び図１Ｂに示されるように、ＰＤ１ＡＢ−６、ならびに親クローンＰＤ１ＡＢ−１を含む他の５つのクローンは、最大１００ｎＭまでＤｙＬ６５０−ＰＤ−Ｌ１結合に対する著しい競合は示さなかった。対照的に、ＭＤＸ  ４Ｈ１（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、アンタゴニスト、リガンドブロッキング、ＰＤ−１抗体は、標識されたＰＤ−Ｌ１結合を用量依存的にブロックし、結合ＥＣ５０約５〜１０ｎＭを生成した。
【０５５５】
５．１．４エピトープマッピング
ＰＤ−１エピトープは、ヒトＰＤ−１細胞外ドメインと複合したＰＤ１ＡＢ−６  Ｆａｂの結晶構造を１．８Åの解像度まで解くことによって測定された。ＰＤ−１：
ＰＤ１ＡＢ−６  Ｆａｂ互作用部位は、ＰＤ−１：ＰＤ−Ｌ１相互作用部位（図２）に対してＰＤ−１の遠位側で生じ、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ１ＡＢ−６がＰＤ−１結合について競合しないという結果と一致する。ＰＤ１ＡＢ−６  Ｆａｂは、ＰＤ−１  βシートに対して結合し、ＰＤ−１ループで形成される実質的な相互作用が残基１００〜１０５から構成される（図３）。ＰＤ−１上のＲ１０４は、Ｆａｂ  ＣＤＲ  Ｈ１上の残基との複数の極性相互作用を結合する。隣接する残基Ｇ１０３はまた、Ｆａｂとの密接な極性相互作用を作る。Ｒ１０４及びＧ１０３の両方は、マウスＰＤ−１（それぞれ、ヒスチジン及びアルギニンへの）において変異され、ＰＤ１ＡＢ−６のマウスＰＤ−１への結合の欠如について構造理論的根拠を提供する。ＰＤ−１と相互作用するＰＤ１ＡＢ−６  Ｆａｂ領域は、ＣＤＲ  Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、及びＬ２である。ＰＤ−１：ＰＤ１ＡＢ−６  Ｆａｂ相互作用の原子の詳細は、表１２に記載される。ＰＤ−１エピトープと相互作用するＨＣ及びＬＣ残基が記載される。略語は以下の通りである：ＨＢ−水素結合、ＨＹＤ−疎水性相互作用、ＩＯＮ−イオン性相互作用。
表１２．ＰＤ１ＡＢ−６：ＰＤ−１相互作用の原子の詳細
【表１４】
2019531284.tif 000018
【０５５６】
５．１．５ＰＤ１ＡＢ−６のバリアントの生成
ＰＤ１ＡＢ−６  ＩｇＧ１抗体（ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１）及びＦｃ修飾ＩｇＧ４ＰＥ抗体（ＰＤ１ＡＢ−６−４ＰＥ）が生成された。ＰＤ１ＡＢ−６−４ＰＥは、著しくより低いＦｃ媒介エフェクター機能を有するように設計された。ＣＨ領域であるγ４は、２つの非標準アミノ酸置換、Ｓ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ（ＥＵ番号付けシステム、Ｋａｂａｔ  ａｎｄ  Ｗｕ  １９９１）を含む。ＩｇＧ４のヒンジにおける共通のアミノ酸の種類であるセリン２２８は、ＩｇＧ４においてより一般的に観察されないアミノ酸の種類及びＩｇＧ１において高度に保存されたアミノ酸である、プロリンに変化された。この変化は、ＩｇＧ４サブクラス抗体の産生において一般的に観察される「半抗体」のレベルを著しく低減した。Ｆｃγ受容体との重鎖の相互作用に含まれる重要なアミノ酸の１つであるロイシン２３５は、グルタミン酸に変化された。Ｌ２３５Ｅ置換は、γ４鎖のＦｃγＲへの相互作用を著しく低減し、ＰＤ−１発現正常細胞のＡＤＣＣ及びＦｃ受容体媒介排除を排除した。加えて、γ４重鎖による補体結合の固有の欠如は、ＣＤＣ機能を欠くＰＤ１ＡＢ−６−４ＰＥ分子を与える。２つの他のバリアントは、低減されたＣＤＣについてＣ１ｑへの結合親和性を最小化するために生成された（図４）。ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３を生成するために、リジン３２２は、ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１においてアラニンで置換された。Ｋ３２２Ａ置換は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃを有するキメラ抗体であるリツキシマブ上でＣ１ｑ結合を抑制すると報告される（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４（８）：４１７８−８４）。ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐは、ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１のＦｃ骨格をＳ２２８Ｐ置換を有するＩｇＧ４のＦｃ骨格に変換することによって生成された。ＩｇＧ４のヒンジにおける共通のアミノ酸の種類であるセリン２２８は、ＩｇＧ４においてより一般的に観察されないアミノ酸の種類及びＩｇＧ１において高度に保存されたアミノ酸である、プロリンに変化された。この変化は、ＩｇＧ４サブクラス抗体の産生において頻繁に観察される「半抗体」のレベルを著しく低減した。ＩｇＧ４抗体は、減弱化されたＡＤＣＣ及びＣＤＣ機能を有することが報告される（Ｏｖｅｒｄｉｊｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８９（７）：３４３０−３８）。すべての変化は、可変領域内での変化を伴わないＣＨ領域で作られた。ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、標識されたＬＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１及びＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１である（図４）。２つの重鎖バリアントは、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ及びＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４Ｐを含む。軽鎖ＬＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１は、３つの個々の重鎖と対になる、それぞれ、ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３、及びＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐを生成する。
【０５５７】
５．１．６一過性トランスフェクションからの細胞株開発及び抗体製造
５．１．６．１重鎖及び軽鎖の分子クローニング
ＩｇＧ  ＬＣ発現ベクターｐＦＵＳＥ２ｓｓ−ＣＬＩｇ−ｈｋ及びＩｇＧ  ＨＣ発現ベクターｐＦＵＳＥｓｓ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１は、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）より購入された。
【０５５８】
ＬＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１（図４）をコードするアミノ酸配列は、哺乳動物細胞におけるタンパク質発現のためにコドン最適化遺伝子配列に変換された。制限酵素部位である５’末端のＥｃｏＲＩ及び３’末端のＮｈｅＩは、最適化遺伝子に追加された。ＥｃｏＲＩ及びＮｈｅＩ部位を有する最適化ＬＣ遺伝子は、合成され、挿入断片を産生した。ＩｇＧ  ＬＣ発現ベクターｐＦＵＳＥ２ｓｓ−ＣＬＩｇ−ｈｋは、ＥｃｏＲＩ及びＮｈｅＩで消化され、おおよそ３．５ｋｂのｐＦＵＳＥ２ｓｓ−ＣＬＩｇ−ｈｋ−ＥｃｏＲＩ／ＮｈｅＩ断片を産生した。挿入断片は、ｐＦＵＳＥ２ｓｓ−ＣＬＩｇ−ｈｋ−ＥｃｏＲＩ／ＮｈｅＩ断片にライゲーションされ、ｐＦＵＳＥ２ｓｓ−ＣＬＩｇ−ｈｋ−ＬＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１であるｐＪＳ−１の産生をもたらした。
【０５５９】
ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ、またはＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４Ｐ（図４）をコードするアミノ酸配列は、哺乳動物細胞におけるタンパク質発現のためにコドン最適化遺伝子配列に変換された。制限酵素部位である５’末端のＥｃｏＲＩ、停止コドン（ｐＦＵＳＥｓｓ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１におけるＨＣ配列の３’末端の後）から３’末端のＨｐａＩまでの定常領域が追加された。ＥｃｏＲＩ及びＨｐａＩ部位を有する最適化遺伝子は、合成され、それぞれ、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ、及びＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４Ｐをコードする遺伝子を含む挿入断片を産生した。ＩｇＧ  ＨＣ発現ベクターｐＦＵＳＥｓｓ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１は、ＥｃｏＲＩ及びＨｐａＩで消化され、おおよそ３．４ｋｂのｐＦＵＳＥｓｓ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１−ＥｃｏＲＩ／ＨｐａＩ断片を産生した。挿入断片は、ｐＦＵＳＥｓｓ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１−ＥｃｏＲＩ／ＨｐａＩ断片にライゲーションされ、それぞれ、ｐＦＵＳＥｓｓ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１−ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、ｐＦＵＳＥｓｓ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１−ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａ、及びｐＦＵＳＥｓｓ−ＣＨＩｇ−ｈＧ１−ＨＣ＿ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ４ＰであるｐＪＳ−２、ｐＪＳ−３、及びｐＪＳ−１２の産生をもたらした。
【０５６０】
５．１．６．２タンパク質産生
ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３、及びＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐの３つのバリアントすべては、インビトロ及びインビボでの有効性研究のために振盪フラスコ中に実験室規模で製造された。非ＧＬＰ毒性学研究及び追加の特徴付けのために、ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐ及びＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３抗体は、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）のＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ  ＣＨＯ発現系、ならびにＥｘｐｉ２９３（商標）発現系を使用して、５０Ｌのバイオリアクター（５０Ｌの撹拌槽及び５０Ｌの波動バッグ）中に製造された。ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ  ＣＨＯ発現系は、製造者の標準プロトコルを使用してＣＨＯ−Ｓ細胞の一過性トランスフェクションのために使用された。Ｅｘｐｉ２９３（商標）発現系は、製造者の標準プロトコルを使用してＥｘｐｉ２９３細胞の一過性トランスフェクションのために使用された。３：２比の軽鎖対重鎖は、トランスフェクションの間、１Ｌ当たり１ｍｇの培養でＤＮＡ混合のために使用された。細胞は、３７℃で５０Ｌのバイオリアクター中に０．５百万細胞／ｍＬで播種され、及び一晩成長させて１百万細胞／ｍＬに達した。次いで、細胞は、製造者の標準プロトコルを使用してトランスフェクトされた。トランスフェクション後１日目に、１ｍＭの酪酸ナトリウムを加えた１％ｖ／ｖの供給培地（Ｙｅａｓｔｏｌａｔｅ、ＣＨＯ  ＣＤ  ＥｆｆｉｃｉｅｎｔＦｅｅｄ（商標）Ａ、Ｇｌｕｔａｍａｘ、及びＧｌｕｃｏｓｅ）はバイオリアクターに追加され、温度は３２  ℃まで低下された。４０リットルの細胞を加えた添加剤は、５０Ｌの撹拌槽に播種され、２５Ｌの細胞を加えた添加剤は、５０Ｌの波動バイオリアクターに播種された。細胞生存性及び力価は、毎日監視され、バッチは、細胞生存性が５０％未満のときに回収された。Ｖｉ−Ｃｅｌｌ（商標）器具は、生存性分析のために使用され、抗ヒトＩｇＧセンサを備えたＯｃｔｅｔ  ＲＥＤは、標準曲線について精製された抗体を使用して力価分析のために使用された。細胞及び上清は、ＧＥ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓの深層濾過及び滅菌カラムを使用して回収され、ＵＬＴＡ  Ｐｒｉｍｅ  ＧＦ  ５μＭカプセルは、深層濾過のために使用され、その後ＵＬＴＡ  Ｐｕｒｅ  ＨＣ０．６／０．２μＭ滅菌カプセルが使用された。清澄化された上清は、クロスフロー濾過を使用して５〜８倍に濃縮され、ＧＥ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅの５０ＫｄカットオフＫｖｉｃｋ（商標）Ｌａｂ  ＳＣＵは、ＴＦＦのために使用された。回収時に各アイソタイプから得られた力価及び最大細胞密度は、表１３に示される。
表１３．流加バイオリアクター（５０リットル）における生産性
【表１５】
2019531284.tif 000019
【０５６１】
５．１．６．３タンパク質精製
産生された物質の精製は、プロテインＡ親和性クロマトグラフィー及び低ｐＨウイルス不活性化を含む一連の下流精製ステップによって行われ、その後ＩＥＸ相互作用（Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅ＆Ｃａｐｔｏ（商標）ＳＰ  ＩｍｐＲｅｓ）クロマトグラフィーステップによって行われた。精製された抗体は、緩衝液に対して交換された緩衝液（１０ｍＭコハク酸塩、ｐＨ５．５、９％スクロース、０．０５％ＰＳ２０）によって大量に製剤化され、０．２μＭフィルターを通して濾過され、等分される。
【０５６２】
プロテインＡ親和性クロマトグラフィーは、生成物を捕獲し、関連不純物のプロセスを除去するように設計されたＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ（商標）を使用して実施された。その後のウイルス不活性化ステップは、酸性条件下（ｐＨ３．４±０．１で４５分間）で行われ、その後ｐＨ５．５±０．１へ不活性プールの調整を行った。ウイルス不活性化の後、アニオン交換体は、Ｃａｐｔｏ（商標）Ａｄｈｅｒｅを使用した中間研磨ステップのためにフロースルーモードで使用され、凝集物、ＤＮＡ、宿主細胞タンパク質、及び内毒素などの不純物を除去した。生成物プールは、ｐＨ６．５±０．１に調整され、導伝性は、次のプロセスステップの前に２ｍＳ／ｃｍまで低減された。カチオン交換体Ｃａｐｔｏ（商標）ＳＰ  ＩｍｐＲｅｓは、研磨ステップとして使用され、生成物は１０ｍＳ／ｃｍで分解された。次いで、抗体は、保存溶液（１０ｍＭコハク酸塩、９％スクロース、０．０５％ＰＳ２０、ｐＨ５．５）中で緩衝液交換され、２０ｍｇ／ｍＬに濃縮された。次いで、生成物プールは、０．２μＭフィルターを通して濾過され、アリコートされた。
【０５６３】
５．１．７細胞系ＰＤ−１結合アッセイ
ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１結合は、ヒトＰＤ−１及びカニクイザルＰＤ−１（図５Ａ及び図５Ｂ）を発現するＣＨＯ細胞上、及び一次ヒトＰＢＭＣ（図６）及びカニクイザルＰＢＭＣ（図７）上で評価された。
【０５６４】
ヒトＰＤ−１及びカニクイザルＰＤ−１を発現するＣＨＯ細胞は、４℃で４０分間、様々な濃度の標識されていないＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１抗体とともにインキュベートされ、洗浄され、４℃で３０分間、抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で染色された。ヒトＩｇＧ１  Ｆｃは、陰性対照として使用された。ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１は、ＥＣ５０＝０．４ｎＭでＣＨＯ細胞上に発現されたヒトＰＤ−１に結合し、ＥＣ５０＝０．８ｎＭでＣＨＯ細胞上に発現されたカニクイザルＰＤ−１に結合する（図５Ａ及び図５Ｂ）。
【０５６５】
ヒトＰＢＭＣは、３日間抗ＣＤ３を結合した１μｇ／ｍＬプレートで活性化され、Ｔ細胞上にＰＤ−１発現を誘発した。細胞は、４℃で３０分間、様々な濃度の標識されていないＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１抗体とともにインキュベートされ、洗浄され、４℃で３０分間、抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で染色された。ヒトＩｇＧ１  Ｆｃは、陰性対照として使用された。幾何学的ＭＦＩは、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で測定された。２名のヒトの健康なドナーのうちの１名のデータは、図６に示される。
【０５６６】
カニクイザルＰＢＭＣは、２日間１μｇ／ｍＬ抗カニクイザルＣＤ３／ＣＤ２８で活性化され、Ｔ細胞上にＰＤ−１発現を誘発した。細胞は、４℃で３０分間、様々な濃度の標識されていないＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１抗体とともにインキュベートされ、洗浄され、４℃で３０分間、抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で染色された。ヒトＩｇＧ１  Ｆｃは、陰性対照として使用された。幾何学的ＭＦＩは、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で測定された。２匹のカニクイザルドナーのうちの１匹のデータは、図７に示される。
【０５６７】
５．１．８Ｆｃ受容体結合アッセイ
バリアント生成、すなわち、減少されたＦｃγＲ媒介エフェクター機能の目的を確認するために、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３及びＰＤ１ＡＢ−６−４ＰバリアントへのＦｃγＲ結合は、２つの方法論によって分析された。第１に、結合は、Ｃｉｓｂｉｏ  Ｔａｇ−ｌｉｔｅ（登録商標）検出を使用した置換ＦｃγＲアッセイで試験された（図８Ａ〜図８Ｄ）。テルビウム（Ｔｂ）ドナー色素で事前に標識された特定のＦｃγＲ（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩｂ）を発現するように操作されたＨＥＫ２９３細胞は、参照対照またはＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３、及びＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐ抗体とともに、１００００ｎＭ〜０．１ｐＭの範囲の対数濃度にわたって混合された。次いで、第２の、ヒトｈＩｇＧ−ｄ２（受容体）は、受容体結合について競合するために追加された。Ｔｂ−ｄ２近接によって生成された蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）シグナルの検出は、測定され、ＰＤ１ＡＢ−６バリアント結合ＦｃγＲに反比例する。図８Ａ〜図８Ｄに示されるように、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３バリアントは、ＡＤＣＣ活性の原因となるＮＫ細胞上の低親和性受容体であるＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６）への減少された結合を示した。ＦｃγＲＩ（穎粒球、樹状細胞（ＤＣ）、または単球上に発現された）への結合は、親ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１分子と同様であった。
【０５６８】
第２に、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３及びＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐバリアントの両方は、ＦＡＣＳに基づく結合アッセイで試験された（図９Ａ〜図９Ｃ）。簡潔には、細胞株を発現するＦｃγＲＩ−ＣＨＯまたはＦｃγＲＩＩＩａＶ１５８−ＣＨＯは、取り出され、氷上で１時間異なる濃度にわたってＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３及びＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐバリアントとの混合前に洗浄された。ＰＤ１ＡＢ−６バリアント結合細胞は、氷上でさらに１時間、標識されたＰＥ複合体化Ｆ（ａｂ’）２ヤギ抗ヒト二次抗体で検出され、洗浄され、ＦＡＣＳによる分析の前に固定され、平均蛍光強度は、各濃度でプロットされた。ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐバリアントは、それぞれ、ＦｃγＲＩ及びＦｃγＲＩＩＩａ株に対して著しくより高い結合ＥＣ５０（＞１５Ｘ及び＞２１Ｘ）に回復した（図９Ａ〜図９Ｃ）。
【０５６９】
５．１．９インビトロＡＤＣＣアッセイ
ＰＤ１ＡＢ−６バリアントのＡＤＣＣを誘発する能力は、健康なドナーからのナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及びＰＤ−１発現標的細胞を含む共培養アッセイで評価された。ＰＤ１ＡＢ−６バリアントで前処理された標的細胞（ＮＣＩ−ＯＣＩ−Ｌｙ３）は、４時間活性化されたＮＫ細胞で共培養された。上清ＬＤＨ濃度は、特異的溶解を計算するために使用した。ＥＣ５０（ｎＭ）は、プリズムを使用して計算された。エラーバーは、実験が３連であることを表す。データは、４名の個体の健康なドナーのうちの２名の代表である。図１０Ａ及び図１０Ｂに示されるように、ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１の滴定は、用量依存的ＡＤＣＣを誘発したが、一方でＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は低減されたＡＤＣＣ活性を示した。
【０５７０】
５．１．１０インビトロＣＤＣアッセイ
ＰＤ１ＡＢ−６バリアントのＣＤＣを誘発する能力は、ＣＤ２０＋ＮＣＩ−ＯＣＩ−Ｌｙ３細胞を発現するＰＤ−１を使用して評価された。抗体で前処理された標的細胞（ＮＣＩ−ＯＣＩ−Ｌｙ３）は、４時間５％のウサギ補体で捕捉された血清を含まない培地で培養された。細胞溶解は、ＦＡＣＳによる７−ＡＡＤ＋細胞によって測定された。データは、３つの独立した実験の代表である：（ｉ）ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１及び抗ＣＤ２０  ＩｇＧ１のＣＤＣ活性、（ｉｉ）ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１及びＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３のＣＤＣ活性、（ｉｉｉ）ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐ及び商用のマウス抗ＰＤ−１  ＩｇＧ１抗体のＣＤＣ活性。図１１に示されるように、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、ＣＤＣを一貫して誘発しなかった（ｎ＝３）。親ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１及びＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐもまたは、ＣＤＣを誘発しなかった。これは、抗ＣＤ２０  ＩｇＧ１が、５％のウサギ補体の存在下でＮＣＩ−ＯＣＩ−Ｌｙ３細胞上に用量依存的ＣＤＣを繰り返し誘発したため、標的Ｔ細胞株の補体殺滅に対する耐性に起因するものではなかった。
【０５７１】
５．２実施例２：活性アッセイ
５．２．１ヒトＴ細胞活性化アッセイ
Ｔ細胞エフェクター機能を阻害することについてのＰＤ１ＡＢ−６バリアントの機能的評価は、２つの方法によって行われた。１つのアッセイでは、末梢血単核細胞は、ＰＤ−１を発現するように事前に活性化され、可溶性ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３の存在下で再刺激された（図１２）。健康なドナーの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、マイトジェンであるＰＨＡで４８時間事前に活性化され、ＰＤ−１発現を上方制御した。次いで、これらの細胞は、１００ｎＭ〜０．１ｎＭの範囲の最終濃度にわたって希釈されたＰＤ１ＡＢ−６バリアントの存在下で、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を複合体化した抗ＣＤ３を使用して再刺激された。Ｔ細胞活性化は、刺激後２４時間で培養上清中のＩＬ−２レベルを使用して測定された。図１２に示されるように、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３及び２つの他のバリアントは、５〜２５ｎＭのＥＣ５０を用いたこのアッセイにおいて強力なＴ細胞阻害活性を示した。
【０５７２】
２つ目のアッセイは、Ｔ細胞機能を阻害することにおいてＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３の直接エクスビボ測定のために使用された。（図１３）。これは、新鮮なヒト全血を抗ＣＤ３＋／−ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３で共被覆された９６ウェルプレート上に直接的に入れること、及びＴ細胞活性化の読み取りとしてＩＬ−１７及びＩＦＮ−γレベルを測定することによって行われた。ＣＴＬＡ４Ｉｇ（Ｏｒｅｎｃｉａ（登録商標））は、これらのアッセイにおいて陽性対照として使用され、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ断片は、陰性対照として使用された。図１３に示されるように、全体として、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐよりも良好な有効性である傾向にあった。陰性対照であるｈＩｇＧ  Ｆｃは、ＥＣ５０＞１００ｎＭで活性を示さなかった。
【０５７３】
５．２．２カニクイザル交差反応性アッセイ
リードＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３を用いた機能的カニクイザル交差反応性の測定は、新たに単離されたカニクイザルＰＢＭＣを使用してヒトの試料と同様に行われ、示されるように、抗カニクイザルＣＤ３、ＣＤ２８、及びＰＤ１ＡＢ−６バリアントで活性化された。ＣＴＬＡ４Ｉｇは、これらのアッセイにおいて陽性対照として使用され、ｈＩｇＧ１  Ｆｃは、陰性対照として使用された。培養上清は、カニクイザルＩＬ−２  ＭＳＤアッセイのためにサイトカイン測定の４８時間後に除去された。表１４に示されるように、これらのアッセイは、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３が、カニクイザルＴ細胞サイトカイン分泌を、陽性対照のＣＴＬＡ４Ｉｇに相当するレベルに減弱化し、活性は、ヒトアッセイにおいて見られたものに相当したことを示した。
表１４．カニクイザルＰＢＭＣアッセイにおけるＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３活性
【表１６】
2019531284.tif 000020
【０５７４】
５．２．３作用のインビトロメカニズム
ＣＤ３及びＣＤ４などのＴ細胞表面分子に結合するいくつかの抗体は、シグナル伝達及びその後のそれらの分子の表面発現の下方制御をもたらす。ＰＤ１ＡＢ−６抗体は、ＰＤ−１を介してアゴニストシグナルを提供するように設計されているため、インビトロでのＰＤ１ＡＢ−６治療後にＰＤ−１発現を評価することは重要であった。
【０５７５】
５．２．３．１ＰＤ１ＡＢ−６治療後の減少されたＰＤ−１発現
異なるドナーからのヒトＰＢＭＣは、様々な濃度の可溶性対照のＩｇＧ１またはＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１で抗ＣＤ２８を結合した抗ＣＤ３＋０．２５μｇ／ｍＬを結合した１μｇ／ｍＬプレートで活性化された。４時間〜７２時間のインキュベーション後、細胞は、ＣＤ３、ＣＤ４５ＲＯ、及びＰＤ−１へ染色され、Ｔ細胞上のＰＤ−１発現を評価した。図１４Ａ〜図１４Ｃは、４８時間のＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１治療後のヒトＣＤ３＋Ｔ細胞上のＰＤ−１の低減された発現を示す。ＰＤ−１発現の分析は、ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１治療が、Ｔ細胞の表面のＰＤ−１発現の下方制御をもたらしたことを示した（図１４Ａ及び図１４Ｂの１名のドナーの代表的なヒストグラム、及び図１４Ｃの３名のドナー及び様々な抗体濃度にわたる４８時間での平均蛍光強度の分析）。ＰＤ−１下方制御は、ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１でのインキュベーションから４時間後に早くも見れらた。表面ＰＤ−１発現の下方制御は、ＰＤ−１を介するシグナル伝達を誘発したＰＤ１ＡＢ−６に起因する可能性が高く、Ｔ細胞受容体シグナル伝達とともに観察されるものと同様のメカニズムを介した（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １２（２）：１６１−７０）。
【０５７６】
５．３実施例３：ＰＤ１ＡＢ−６バリアントの物理化学的特徴付け
５．３．１Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）結合分析
精製されたＰＤ１ＡＢ−６バリアント抗体は、捕捉方法を使用してｈＰＤ１抗原への結合についてＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００上で分析された。Ｆｃ特異性抗ヒトＩｇＧは、Ｆｃ２上に固定化され、Ｆｃ１は、基準チャネルとして空のままされた。精製されたＰＤ１抗体は、抗ヒトＩｇＧ上に捕捉され、最初に産生されたｈＰＤ１抗原（ＰＤ１＿００２）は、結合の動態を測定するために、１００ｎＭ〜２００ｐＭの２倍の希釈系列を使用して両方のチャネルにわたって流された。使用されたＰＤ−１は、封入体としてＥ．Ｃｏｌｉ中に発現され、再び折り畳まれたヒトＰＤ−１（残基３２〜１６０）の細胞外ドメインであった。表面は、３Ｍの塩化マグネシウムを使用して各抗原濃度の間に再生成された。ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐ、及びＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３についての結合動態の実施例ならびにｋｏｎ、ｋｏｆｆ、及びＫＤの値は、図１５Ａ〜図１５Ｃに示される。３つのバリアントすべては、１９〜２２ｎＭの相当するＫＤ値を有するＰＤ−１抗原と同様の会合速度及び解離速度を有した。
【０５７７】
５．４実施例４：インビトロ薬理学
５．４．１破傷風トキソイド抗原（ＴＴＸ）リコールアッセイ
抗原特異性ＣＤ４＋Ｔ細胞機能へのＰＤ１ＡＢ−６の効果は、健康なドナーのＰＢＭＣを用いて行われたＴＴＸリコールアッセイにおいて可溶性ＰＤ１ＡＢ−６を使用して試験された（ＡｌｌＣｅｌｌｓ，ＬＬＣ，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｂｌｏｏｄ  Ｂａｎｋ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ａｓｔａｒｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ  ＬＬＣ，Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）。破傷風特異性ＣＤ４＋Ｔ細胞活性化を誘発するために、１μｇ／ｍＬの破傷風トキソイドクロストリジウムＴＥ（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ  ５８２２３１２５ＵＧ）で刺激する前に、１時間ＰＤ１ＡＢ−６とともにＰＢＭＣをインキュベートした。ＴＴＸインキュベーションの７日後、フローサイトメトリーによるＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ  ｌｏｗ細胞によって示される細胞分裂によって測定して、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖についてＰＢＭＣを評価した。ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）染料（ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ  Ｂｌｕｅ  Ｄｅａｄ  Ｃｅｌｌ  Ｓｔａｉｎ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（商標）Ｌ２３１０５）は、分析からの死細胞を除外するために使用された。３名のドナーすべてにおいて、ＰＤ１ＡＢ−６は、０．０１〜０．０２μｇ／ｍＬのＩＣ５０でＣＤ４リコール応答を阻害した（図１６）。
【０５７８】
別々の実験では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３で前処理されたＰＢＭＣは、７日間様々な血清濃度でＴＴＸとともにインキュベートされ、ＣＤ２５の上方制御によって示されるように、抗原依存性増殖及び活性化について評価された。健康なドナーのＰＢＭＣは、細胞増殖色素（ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｃ３４５７１）で標識された（３７℃で２０分間）。破傷風特異性ＣＤ４＋Ｔ細胞活性化を誘発するために、１μｇ／ｍＬの破傷風トキソイドで刺激する前に、１時間様々な濃度（０．０１ｎＭ〜１００ｎＭ）でＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３またはＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１とともにＣｅｌｌＴｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔ染料で標識されたＰＢＭＣ（５ｘ１０６細胞／ｍＬ）を事前にインキュベートした。アイソタイプ適合抗ＲＳＶ  ＩｇＧ１−Ｋ３２２Ａは、陰性対照として含まれたが、ＰＤ−Ｌ１  Ｆｃは、ＰＤ−１経路単独で活性化することがＴ細胞を阻害するかどうかを決定するために、治療対照として追加された。ＰＢＭＣは、ＣＤ４＋／ＣＤ８−Ｔ細胞を特定するために表面マーカーで染色され、Ｔ細胞増殖は、フローサイトメトリーによるＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ  ｌｏｗ細胞によって検出された細胞分裂によって測定された。ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）染料（ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ  Ｂｌｕｅ  Ｄｅａｄ  Ｃｅｌｌ  Ｓｔａｉｎ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（商標）Ｌ２３１０５）は、分析からの死細胞を除外するために使用された。ＦＡＣＳ分析（ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏフローサイトメーター、Ｆｌｏｗｊｏ（登録商標）ソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ，Ｉｎｃ））は、破傷風トキソイド依存性増殖を行うすべてのＣＤ４＋細胞が、ＣＤ２５発現に対して陽性であり、その大部分がＰＤ−１を発現したことを示した。
【０５７９】
５．４．２エクスビボ全血サイトカイン分泌
ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、健康なドナー及び自己免疫疾患患者（アトピー性皮膚炎［ＡＤ］、リウマチ性関節炎［ＲＡ］、乾癬［ＰＳ］、クローン病［ＣＤ］、乾癬性関節炎［ＰｓＡ］、及び全身性エリテマトーデス［ＳＬＥ］）の全血を用いた機能的アッセイにおいてさらに特徴付けされた。全血は、健康なドナー及び事前にスクリーニングされた自己免疫疾患患者から得られ、ヘパリン化された（Ｓａｎｇｕｉｎｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｈｅｒｍａｎ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）。ヘパリン化された全血は、ＲＰＭＩ−１６４０培地で希釈され、２００μＬが抗ＣＤ３抗体で事前に被覆されたＣｏｖａｌｉｎｋ（商標）培養プレート上に播種され、プレート用量は抗体（ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３、ＣＴＬＡ−４Ｉｇ（陽性対照）、またはｈＩｇＧ１  Ｆｃ（陰性対照））で滴定された（１００ｎＭ〜０．１ｎＭ）。３７℃で４８時間後、血漿は除去され、ＩＦＮ−γ  及び／または  ＩＬ−１７放出について評価された。ＩＦＮ−γまたはＩＬ−１７の計算されたＥＣ５０は、所定の自己免疫疾患についてドナー毎にプロットされた。
【０５８０】
全体として、正常及び疾患全血にわたって、固定化されたＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、Ｔ細胞特異性ＩＦＮ−γ（図１７Ａ）及びＩＬ−１７（図１７Ｂ）放出のブロッキングにおいて活性を示した。正常のドナーの全血において、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３（ｎ＝４）によるＩＦＮ−γ阻害の平均ＥＣ５０は、６．１８±１０．９ｎＭであると計算されたが、このアッセイにおいて陽性対照であるＣＴＬＡ４−Ｉｇは、２２．５±３９．２ｎＭのＥＣ５０を有した（データには示されていない）。被覆されたｈＩｇＧ１  Ｆｃ（陰性対照）は、阻害活性を呈さなかった（データには示されていない）。
５．４．３Ｔ細胞阻害受容体の細胞表面発現への効果
Ｔ細胞阻害受容体は、Ｔ細胞活性化及び機能を負に妨げる共阻害分子である。Ｔ細胞上の免疫チェックポイントタンパク質の発現へのＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３の効果は、刺激されていない培養条件及び刺激された培養条件下で、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、及びＰＤ−１の細胞表面発現を測定するためにフローサイトメトリーを使用して評価された。ヒトＰＢＭＣは、新鮮なバフィーコート全血（Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，ＮＪ；Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ，ＮＹ；Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｏｒｐ．，Ｃｏｌｍａｒ，ＰＡ）から単離された。ＰＭＢＣ（２ｘ１０６細胞）は、２４時間３７℃でＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３−、対照ヒトＩｇＧ１−、またはＰＤ−Ｌ１Ｆｃ−複合体化ビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄ（商標）Ｍ−４５０  Ｅｐｏｘｙ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で前処理された。次いで、細胞は、３７℃で２日間、抗ＣＤ３（０．３  μｇ／ｍＬ、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍ、ＭＡＢ１００  ＡＲＨ１１１３０９１）またはブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）溶液（２μｇ／μＬ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、１１１００−４５−１）のいずれかで刺激された（一次刺激）。刺激されていない条件下で（すなわち、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３治療のみ）、ＬＡＧ−３発現は、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞上で著しく阻害され、ＣＤ８＋メモリーＴ細胞上のＬＡＧ−３発現において濃度依存性の低減の傾向があったが、ＰＤ−１表面発現は、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞及びＣＤ８＋メモリーＴ細胞の両方において著しく減少された（表１５及び表１６）。抗ＣＤ３及びＳＥＢ刺激細胞の両方は、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞上のＬＡＧ−３発現において著しい低減を示した（表１５）。ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、一次刺激条件下でＬＡＧ−３またはＣＴＬＡ−４のいずれかのＣＤ８＋Ｔ細胞発現への効果は有さなかった（表１６）。以下に議論されるインビボ研究と同様に、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、刺激されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞中のＰＤ−１発現を一貫して下方制御した。（表１５及び表１６を参照されたい）。括弧内の数はドナーの数を示す；「Ｔｅｔ．」は破傷風を治療された群である；「時間」は、「刺激なし」群においてＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３で治療された時間またはすべての他の群において刺激後の時間である；「ＮＥ」は効果なしである；「ｎ／ｓ」は、有意でない；一元配置分散分析、その後のＤｕｎｎｅｔｔの多重比較事後検定により培地対照に対して＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．０１、＊＊＊ｐ≦０．００１、＊＊＊＊ｐ≦０．０００１。
表１５．一次刺激におけるＣＤ４＋メモリーＴ細胞上の阻害受容体発現へのＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３効果
【表１７】
2019531284.tif 000021
表１６．一次刺激におけるＣＤ８＋メモリーＴ細胞上の阻害受容体発現へのＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３効果
【表１８】
2019531284.tif 000022
【０５８１】
二次刺激を達成するために、上記に記載されるヒトＰＢＭＣは、３７℃で２４〜４８時間、抗ＣＤ３（３μｇ／ｍＬ）及び抗ＣＤ２８（１  μｇ／ｍＬ）で事前に刺激され、次いで、２４時間３７℃でＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３またはヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照で処理された。次いで、細胞は、６〜２４時間、抗ＣＤ３（３μｇ／ｍＬ）及び抗ＣＤ２８（１μｇ／ｍＬ）で再刺激された。ＬＡＧ−３及びＣＴＬＡ−４発現は、フローサイトメトリー（ＢＤ  ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）フローサイトメーター、ＦＡＣＳＤｉｖａ（商標）分析ソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、及びＦｌｏｗ  Ｊｏ  Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェア）によって評価された。二次刺激条件下で、ＬＡＧ−３発現は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋メモリーＴ細胞の両方において増加され、及びＣＴＬＡ−４は、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞において増加された（データには示されていない）。
【０５８２】
ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＴ細胞疲弊は、インターロイキン−７受容体（ＩＬ−７Ｒ）などのメモリーマーカーの下方制御、ならびに阻害受容体の上方制御によって特徴付けられる（Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｕ．Ｓ．１０（１）：２９−３７）。慢性炎症性状態では、ＰＤ−１活性は、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞のＩＬ−７Ｒなどのメモリーマーカーの下方制御に関連する疲弊したＴ細胞状態を含むことによって、Ｔ細胞炎症性機能を減弱化することが提案される。ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３のＣＤ８＋Ｔ細胞疲弊への効果を評価するために、活性化Ｔ細胞上のＩＬ−７Ｒα（ＣＤ１２７）発現は、ＣＤ８＋Ｔ細胞において測定される。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、６日間、ＣＤ２を通して共刺激性シグナルと組み合わせて、抗ＣＤ３（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍ、ＭＡＢ１００  ＡＲＨ１１１３０９１）及び抗ＣＤ２８（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、１６−０２８９）抗体で活性化された。ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、インビトロアッセイにおいて、疲弊していないＩＬ−７ＲｈｉＣＤ８＋Ｔ細胞を低減し、疲弊したＩＬ−７ＲｌｏＣＤ８＋Ｔ細胞を増加させた（図１８）。図１８において、ＩｇＧ１は、非特異性ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照を表し；ＩｇＧＦｃは、ｔ検定対Ａｂ対照なし（Ｎ＝８）による非特異性ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ断片対照を表し；＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１；短剣符は、スチューデントのｔ検定によるアイソタイプ対照と比較したｐ値を表す；†ｐ＜０．０５；††ｐ＜０．０１；†††ｐ＜０．００１。これらの結果は、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３治療が、ＬＡＧ−３もしくはＣＴＬＡ−４発現の上方制御またはＩＬ−７Ｒ発現の下方制御によって定義されるように、疲弊したＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を増加させたことを示す。
【０５８３】
５．４．４Ｔ細胞増殖の阻害
他の細胞からの影響の不在化でＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３のＴ細胞増殖への効果を評価するために、単離されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞は、シス（同じビーズ表面の刺激及びＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３）またはトランス（別々のビーズ表面の刺激及びＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３）中のビーズに結合されたＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３とともにインキュベートされた。効果は、トリチウム化チミジン取り込みアッセイによって測定された。
【０５８４】
ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）陰性選択とともにインキュベートした後に、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離法によって、新鮮なバフィーコート（白血球富化ユニット、Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，ＮＪ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ，ＮＹ及びＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｏｒｐ．Ｃｏｌｍａｒ，ＰＡ）から富化された。簡潔には、２ｘ１０８細胞／ｍｌのＰＢＭＣは、４ｍｌのＲｏｂｏｓｅｐ（商標）緩衝液で混合され、１４ｍｌのポリスチレン丸底チューブに移された。ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒト強化カクテル（２００μｌ）は、チューブ毎に追加され、ボルテックスされ、１０分間室温でインキュベートされた。ＥａｓｙＳｅｐ（商標）磁性粒子は、追加され（チューブ毎に３００μｌ）、ボルテックスされ、５分間室温でインキュベートされた。Ｒｏｂｏｓｅｐ（商標）緩衝液（５ｍｌ）は、各チューブに追加され、上下にピペッティングすることによって十分に混合された。チューブは、銀の磁石に置かれ、５分間室温でインキュベートされた。磁石及びチューブは、持ち上げられ、１つの連続動作で逆位にされ、所望の一画分を５０ｍＬのコニカルチューブに注いだ。細胞は、５分間１２００ｒｐｍで回転された。上清が注がれ、５ｍｌの新鮮な培地が追加された。細胞が数えられた後、アリコートは、ＦＡＣＳ分析のために除去され、残りの細胞は培養のために使用された。細胞は、フローサイトメトリーによって測定して、約９５％純粋まで単離された。精製された細胞は、細胞適切培地に１ウェル当たり１００μｌで、無菌９６ウェルプレートに、１ｘ１０５細胞／ウェルで播種された。
【０５８５】
ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、製造者のプロトコル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に従ってＤｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍ−４５０  Ｅｐｏｘｙビーズに共有結合された。簡潔には、１０７ビーズは５μｇの抗体で被覆された。「シス」構造について、１０７ビーズは、１μｇの抗ＣＤ３抗体及び２μｇのＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３の混合物で結合された。「トランス」構造について、１０７ビーズは、１μｇの抗ＣＤ３抗体、または２μｇのＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３で結合された。タンパク質のビーズへの共有結合は、緩い傾斜及び回転で、室温で２４時間、１ｍｏｌ／Ｌのリン酸ナトリウム緩衝液中で行われた。Ｄｙｎａｂｅａｄｓは、０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を有する１ｍｌのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）中で再懸濁され、４ｘ１０８ビーズ／ｍｌを得た。
【０５８６】
単離されたＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞（１０６細胞）は、９６ウェルプレートに、１ウェル当たり１００μＬの培養培地中で再懸濁された。１００μＬのＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３−複合体化ビーズは、２：１または８：１のビーズ対細胞比で追加された。細胞は、５％ＣＯ２で加湿インキュベータにおいて３７℃でインキュベートされた。Ｔ細胞の治療の２日目及び回収の２４時間前に、１マイクロキュリーの３Ｈチミジン（Ａｍｅｒｓｈａｍ）は、各ウェルに追加され、細胞は、５％ＣＯ２で加湿インキュベータにおいて３７℃で再度インキュベートされた。３Ｈチミジンとともにインキュベートしてから２４時間後、細胞は、セルハーベスター（Ｔｏｍｔｅｃ）を使用してＵｎｉＦｉｌｔｅｒ（商標）ＧＦ／Ｃフィルタープレート（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）上に回収され、プレートは、一晩乾燥させられた。Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ（商標）２０（Ｐａｃｋａｒｄ）（２０μＬ／ウェル）は、追加され、プレートは、ＴｏｐＣｏｕｎｔ（商標）ＮＸＴ（Ｐａｃｋａｒｄ）マイクロプレートシンチレーション及びルミネッセンスカウンターを使用して分析された。各ウェルは、１分間計数され、分毎の計数（ｃｐｍ）値は、ＧｒａｐｈＰａｄ（商標）プリズムを使用してプロットされた。
【０５８７】
ＣＤ４＋Ｔ細胞：１：２及び１：８の細胞対ビーズ比で、トランスについて抗ＣＤ３で処置された細胞と比較して、抗ＣＤ３／ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３で処置された細胞について著しい増殖阻害があったが（それぞれ、５７±１２及び５５±９の阻害％［ｐ＜０．０００１、Ｎ＝４］、シス構造は、著しい阻害を示さなかった（図１９Ａ）。
【０５８８】
ＣＤ８＋Ｔ細胞：１：２及び１：８の細胞対ビーズ比で、トランスについて抗ＣＤ３で処置された細胞と比較して、抗ＣＤ３／ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３で処置された細胞について著しい増殖阻害があったが（それぞれ、４２±１７及び３７±１４の阻害％［ｐ≦０．０５、Ｎ＝４］）、シス構造は、著しい阻害を示さなかった（図１９Ｂ）。
【０５８９】
これらの結果は、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３が、他の細胞からの影響の不在化で抗ＣＤ３で処置されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を阻害したことと、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３のＴ細胞増殖への阻害効果は、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３及び抗ＣＤ３がトランス構造にあるときのみ生じたこととを示す。
【０５９０】
５．４．５ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋誘発制御性Ｔ細胞の増加
抗ＰＤ−１抗体の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）生成への効果を評価するために、ＰＢＭＣから単離された天然ＣＤ４＋Ｔ細胞は、誘発されたＴｒｅｇ細胞に分化するように誘発された。天然ＣＤ４  Ｔ細胞は、製造者の説明書に従って天然ＣＤ４＋Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用してＰＢＭＣから負に選択された。天然ＣＤ４＋Ｔ細胞は、０〜２．５ｎｇ／ｍＬのＴＧＦ−β、１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−２、０．２５μｇ／ｍＬの可溶性抗ＣＤ２８、及び１μｇ／ｍＬの固定化された抗ＣＤ３で培養された。可溶性ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１及びＩｇＧ１  Ｆｃアイソタイプは、１ｎＭで追加された。インキュベーションの５日後、細胞は、回収され、Ｆｏｘｐ３へ染色された。
【０５９１】
細胞は、４℃で３０分間、希釈された表面染色抗体（ＣＤ４  ＰｅｒＣＰ、ＣＤ２５  ＰＥ、ＰＤ−１  ＢＶ４２１）で染色され、３００μＬのＦＢＳで洗浄された。細胞は、室温で６０分間のインキュベーションとともに、チューブ毎に５００μＬの１倍のＦｏｘｐ３固定／透過処理用緩衝液で透過処理及び固定された。細胞は、５００μＬの固定緩衝液で２回洗浄された。細胞は、５００μＬの固定緩衝液で洗浄される前に、室温で１時間、５０μＬの希釈されたＦｏｘｐ３抗体でＦｏｘｐ３へ細胞内部に染色された。細胞は、５００μＬのＦＡＣＳ緩衝液で１回洗浄され、１７５μＬのＦＡＣＳ緩衝液で再懸濁された。細胞は、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）フローサイトメーター上で試料取得のために９６ウェルプレートに移された。
【０５９２】
図２０に示されるように、ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１は、ＴＧＦ−β濃度の範囲を超えてＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋誘発Ｔｒｅｇ細胞を増加させた。
【０５９３】
５．４．６正常なドナー及び自己免疫疾患患者におけるＴ細胞上の免疫チェックポイントタンパク質の発現
ＰＤ−１細胞表面発現は、正常なドナー及び自己免疫疾患患者（ＡＤ、ＣＤ、ＰＳ、ＰｓＡ、ＲＡ、及びＳＬＥ）の天然及び刺激された細胞間で比較された。健康なドナーにおいて、Ｔ細胞の大部分はＰＤ−１を発現したが、ほんの少数の天然Ｔ細胞がＰＤ−１を発現した（データには示されていない）。患者由来のＴ細胞は、１０％熱不活性化ＦＢＳで培養したときに、５μｇ／ｍＬのフィトヘマグルチニン（Ｓｉｇｍａ、６１７６４−１ＭＧ）での活性化の前及びその後に健康なドナーのＰＢＭＣと比較して、同様のレベルのＰＤ−１を発現した（データには示されていない）。
【０５９４】
Ｔ細胞の表面でのＰＤ−１及び他のチェックポイント阻害タンパク質の発現は、疾患の状態において差別的に調節され得、延長として、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３活性への影響を有する。健康な対照及び自己免疫疾患患者（ＡＤ、ＲＡ、及びＰＳ）のＴ細胞上の自己ＰＤ−１及び他の免疫チェックポイントタンパク質の発現は、ＰＢＭＣのエクスビボ培養において評価された。健康なドナー及び自己免疫疾患ドナー（Ｃｏｎｖｅｒｓａｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）のＰＢＭＣ（５ｘ１０５）は、１０％熱不活性化ヒト自己血清（Ｃｏｎｖｅｒｓａｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）を含むＲＰＭＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で培養された。ＰＢＭＣは、刺激されないままであった（基本条件）か、または抗ＣＤ３（３  μｇ／ｍＬ、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍ、ＭＡＢ１００  ＡＲＨ１１１３０９１）及び抗ＣＤ２８（１μｇ／ｍＬ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、１６−０２８９）抗体で、２４時間３７℃で刺激されたかのいずれかあった。細胞は、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）染料（ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ  Ｂｌｕｅ  Ｄｅａｄ  Ｃｅｌｌ  Ｓｔａｉｎ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（商標）Ｌ２３１０５）で染色され、次いで、フローサイトメトリー（ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター、ＦＡＣＳＤｉｖａ分析ソフトウェア、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；ＦｌｏｗＪｏ（商標）分析ソフトウェア）による検出のために、抗ＣＤ４＋（ＡＰＣ−Ｃｙ７、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ５５７８７１）、抗ＣＤ８＋（ＰＥ−Ｃｙ５、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ５５５３６７）、抗ＰＤ−１（ＢＶ６５０、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ５６４３２４）、抗ＰＤ−Ｌ１（ＢＶ４２１、５６３７３８）、抗ＰＤ−Ｌ２（ＡＰＣ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ５５７９２６）、抗ＬＡＧ−３（ＦＩＴＣ  ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  １１−２２３９）、抗ＣＴＬＡ−４（ＣＤ１５２）（ＢＶ７８６、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ５６３９３１）、及び抗ＴＩＭ−３（ＰＥ−Ｃｙ７、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２５−３１０９）抗体に蛍光物質を結合させた。
【０５９５】
残りのＣＤ４＋Ｔ細胞上で、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、及びＴＩＭ−３のベースライン発現は、疾患患者及び健康な対照（ＨＣ）の間で著しく異なっていなかった（表１７）。ＣＤ４＋Ｔ細胞とは対照に、ＡＤ及びＰＳ患者の残りのＣＤ８＋Ｔ細胞は、著しくより低いＰＤ−１及びＴＩＭ−３発現を示したが、ＲＡ患者は、健康な対照と比較して異なっていなかった（表１７）。
【０５９６】
活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞において、ＰＤ−１発現は、刺激されていない細胞に対してＨＣ及びＰＳ患者において上方制御された。ＰＳ患者のＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＰＤ−１発現の増加は、刺激されたＨＣのそれよりも著しくより高かった。Ｔ細胞刺激によるＰＤ−Ｌ１の誘発は、ＰＤ−１と同様のパターンを呈した。ＰＳ患者のＣＤ４＋Ｔ細胞もまたは、ＨＣと比較してＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、及びＴＩＭ−３発現のより高いレベルの上方制御を呈した。ＰＤ−Ｌ２の発現は、すべての群においてのＴ細胞刺激の後に実質的に変化されなかったが、ＡＤ試料は、重要性には達しなかった可変誘発ＰＤ−１及びＴＩＭ−３発現を有した（表１８）。
【０５９７】
活性化されたＣＤ８＋Ｔ細胞において、ＰＤ−１発現は、ＰＤ−１をそれらの状態で既に発現する刺激されていないＣＤ８＋Ｔ細胞に対してより高い傾向があったが、しかしながら、増加された発現は、重要性には達しなかった。基本の刺激されていないレベルで健康なドナーに対して低減されたレベルのＰＤ−１を示していた、ＡＤ、ＲＡ、及びＰＳの３つの疾患群すべては、ＰＤ−１（表１７）、より高いレベルの刺激されたＣＤ８＋Ｔ細胞上のＰＤ−１を示したが、発現は、刺激されていないＨＣのそのままであったか、それ未満であった（表１８）。ＰＤ−Ｌ１は、ＨＣ、ＡＤ、及びＰＳ患者と比較して、活性化されたＣＤ８＋Ｔ細胞において著しく誘発された（ＰＤ−Ｌ１は、ＲＡ患者において重要性には到達しなかった）（表１８）。ＰＤ−Ｌ２発現もまた、ＨＣにおいてＣＤ８＋Ｔ細胞刺激後に誘発されたが、疾患患者（ＡＤ、ＲＡ、またはＰＳ）においては誘発されなかった（表１８）。
【０５９８】
結果は、ＡＤ、ＲＡ、及びＰＳにおける循環ＣＤ４＋Ｔ細胞は、活性化されると、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ−４、及びＴＩＭ−３を発現することができ、ＰＳ  ＣＤ４＋Ｔ細胞が、健康な対照のものと比較してより高いレベルのＰＤ−１及びＴＩＭ−３発現を刺激することを示した。しかし、疾患によっては、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、疾患によって活性化後にＰＤ−１及びＴＩＭ−３を発現するそれらの基本及び誘発性能力の両方において鈍らせられた。
表１７．自己免疫疾患患者の休止Ｔ細胞上の免疫チェックポイントタンパク質のベースライン発現
【表１９】
2019531284.tif 000023
表１８．刺激された健康な対照に対する自己免疫疾患患者の刺激されたＴ細胞上の免疫チェックポイントタンパク質の発現
【表２０】
2019531284.tif 000024
【０５９９】
５．４．７リウマチ性関節炎、クローン病、及び乾癬の疾患組織におけるＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１の発現
ＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１の発現は、免疫組織化学を使用して、リウマチ性関節炎患者（ｎ＝５）、クローン病患者（ｎ＝３）、及び乾癬患者（ｎ＝３）の小さなサブセットにおいて、それらの正常な対象物（ｎ＝３）と比較して調査された。
【０６００】
疾患の部位で十分に組織化されたリンパ濾胞の形成は、クローン病及びリウマチ性関節炎において一般的であるが、乾癬ではそうでなく、疾患進行中のＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１発現、応答、及び動態が、これらの慢性の兆候のなかでも異なり得ることを提案する。ＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１発現のスコア（図２５Ａ〜図２５Ｃ）は、クローン病においてＰＤ−１（２倍増加）及びＰＤ−Ｌ１（６倍増加）の明白な上方制御（図２５Ａ）、及び乾癬において微妙な変化（図２５Ｃ）を示す。
【０６０１】
概して、ＰＤ−１は、組織化されたリンパ濾胞内に存在するリンパ球中に発現されるが、びまん性浸潤にあるリンパ球中には発現されない（図２１〜図２３、左側パネル）。次いで、ＰＤ−Ｌ１は、より幅広く発現され、リンパ濾胞内の白血球中に見出され（図２２、右側パネル）、また、疾患組織中にびまん性に分布される（図２３、右側パネル）。ＰＤ−Ｌ１はまた、激しい炎症の領域において、間質線維芽細胞及び内皮細胞などの他の細胞型によって発現される。図２４の右側パネルは、クローン病患者の腸潰瘍の領域における、ＰＤ−Ｌ１発現の明白な上方制御の詳細を示す。大きな細胞は、活性化されたマクロファージの形態と適合性である形態を有する。
【０６０２】
図２１及び図２２は、２名のＲＡ患者における代表的なＩＨＣ染色を示す。図２１に示されるように、ＰＤ−１は、ＲＡ患者の滑膜中にリンパ系凝集体内のリンパ球の細胞質中に強発現されるが（左側パネル）、ＰＤ−Ｌ１の発現は弱く、リンパ系凝集体内に少数の大きな細胞（マクロファージ細胞／樹状細胞である可能性が高い）に制限される（右側パネル）。図２２に示されるように、少数のリンパ球は、ＲＡ患者のリンパ系凝集体内に細胞質／膜ＰＤ−１を発現する（左側パネル）。ＰＤ−Ｌ１は、同様の位置のマクロファージ細胞及び／または樹状細胞の細胞質及び膜中に弱発現される。
【０６０３】
図２３は、クローン病患者の腸内の代表的なＩＨＣ染色を示す。図２３に示されるように、ＰＤ−１の発現（左側パネル）は、クローン病患者の粘膜（左上）及び粘膜下層（中央下）中のリンパ系凝集体内のリンパ球に制限される。一方で、ＰＤ−Ｌ１（右側パネル）は、リンパ系凝集体中及びびまん性粘膜炎症性浸潤においてマクロファージ細胞／樹状細胞によってより幅広く発現され、
【０６０４】
図２４は、クローン病の腸の試料の潰瘍化領域内の代表的なＩＨＣ染色を示す。図２４に示されるように、炎症性浸潤が、濾胞形成なしでびまん性である潰瘍化の領域では、稀なＰＤ−１＋リンパ球（左側パネル）が存在するが、豊富ＰＤ−Ｌ１＋マクロファージ（右側パネル）は存在しない。ＰＤ−１の発現は、主に細胞質であるが、ＰＤ−Ｌ１は、上方制御されたとき、主に膜質である。
【０６０５】
図２５Ａ〜図２５Ｃは、クローン病、ＲＡ、及び乾癬患者におけるＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１発現スコアを示す。ＰＤ−Ｌ１の著しい上方制御は、クローン病において観察されたが（図２５Ａ）、ＰＤ−Ｌ１発現の微妙な増加が乾癬において観察された（図２５Ｃ）。
【０６０６】
５．４．８形質芽細胞へのＢ細胞の分化の阻害
ＣＤ１９＋Ｂ細胞は、ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）のＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＢ細胞強化キットを使用して、正常なヒトＰＢＭＣから精製された。ＣＤ３＋Ｔ細胞は、ＳｔｅｍＣｅｌｌ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＥａｓｙＳｅｐ（商標）直接ヒトＴ細胞強化キットを使用して、正常ヒト全血から精製された。
【０６０７】
ヒト抗ＣＤ３抗体ＵＣＨＴ１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３、またはＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ融合タンパク質は、製造者のプロトコル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）に従ってＤｙｎａｂｅａｄ  Ｍ−４５０  Ｅｐｏｘｙビーズに共有結合された。ビーズを結合した「トランス」構造について、１０７ビーズは、各タンパク質が、単一ビーズ上に複合体化されている１つのみのタンパク質型でセットされた異なるビーズを表すように、１μｇの抗ＣＤ３抗体、または２μｇのＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３またはＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ融合タンパク質のいずれかと結合された。タンパク質のビーズへの共有結合は、緩い傾斜及び回転で、室温で２４時間、１ｍｏｌ／Ｌのリン酸ナトリウム緩衝液中で行われた。タンパク質結合されたＤｙｎａｂｅａｄｓは、遠心分離され、１ｍＬのブロッキング緩衝液（０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）中で再懸濁され、４ｘ１０８ビーズ／ｍＬを得た。ヌルビーズは、ブロッキング緩衝液中のみでビーズをインキュベートすることによって作製された。
【０６０８】
強化された正常なヒトＣＤ１９＋Ｂ及びＣＤ３＋Ｔ細胞は、インビボＢ細胞分化共培養系において培養された。ＣＤ１９＋Ｂ細胞は、９６−ウェル丸底プレートの各ウェルに追加された（最終細胞計数＝２ｘ１０５／ウェル）。ＣＤ３＋Ｔ細胞は、９６−ウェル丸底プレートの各ウェルに追加された（最終細胞計数＝１ｘ１０５／ウェル）。ビーズ結合ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３、ＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ融合タンパク質、またはヌルビーズは、４対１のビーズ対細胞比で追加された。
【０６０９】
１時間後、ビーズ結合ヒト抗ＣＤ３抗体ＵＣＨＴ１（２対１のビーズ対細胞比）及び組み換えヒトＩＬ−２１（１００ｎｇ／ｍＬ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）は、各ウェルに追加され、４日間３７℃でインキュベートされた。４日目に、追加の組み換えヒトＩＬ−２１（１００  ｎｇ／ｍＬ）は、各ウェルに追加され、２日間３７℃でインキュベートされた。
【０６１０】
細胞は６日目に回収された。次いで、細胞は、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ  Ｆｉｘａｂｌｅ  ｂｌｕｅ  ｄｅａｄ  ｃｅｌｌ  ｓｔａｉｎ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で染色された。次に、細胞は、ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ（商標）Ｆｃ  ｂｌｏｃｋ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）でブロックされた。ブロッキング後、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅフロー抗体（ＣＤ２０−ＡＰＣ、ＣＤ３８−  ＢＶ５１０、ＩｇＭ−ＢＵＶ３９５、ＣＤ３−ＰＥＲＣＰ５．５、ＣＤ２７−ＢＶ７８６）は、表面マーカー染色のために実験計画に従って追加された。試料は、すぐに分析されるか、一晩４℃で置かれた。すべての試料は、ＢＤ  ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）セルアナライザー、ＦＡＣＳＤｉｖａ（商標）分析ソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、及びＦｌｏｗＪｏ（登録商標）分析ソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ  ＬＬＣ，Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）を使用して分析された。形質芽細胞は、全ＣＤ１９＋Ｂ細胞集団内のＣＤ２０−ＣＤ３８＋Ｂ細胞として定義された。
【０６１１】
上清は、６日目に回収され、ＩｇＧ産生についてヒトＩｇＧ  ＥＬＩＳＡキット（Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）によって分析された。
【０６１２】
図３３は、インビトロＴ細胞／Ｂ細胞共培養系において、ＣＤ２０＋ＣＤ３８−活性化Ｂリンパ球のＣＤ２０−ＣＤ３８＋形質芽細胞への分化を示す４名のドナーからの例示的なフローサイトメトリーの結果を示す。
【０６１３】
Ｔ細胞受容体活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞／全Ｂ細胞共培養において、ビーズ結合ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、ヌルビーズと比較して、形質芽細胞数の平均２５．０％低減（ｐ＝０．１５）（図３４Ａ）、ＩｇＧ分泌の平均２４．４％低減（ｐ＝０．０４）（図３４Ｂ）を誘発したが、ＩｇＭ表面発現の１１．５％増加（ｐ＝０．１５）（図３４Ｃ）を誘発した。各ドナー試料における変化パーセンテージは、以下の表２２に列挙される。
表２２．Ｔ細胞受容体活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞／全Ｂ細胞共培養における形質芽細胞数、ＩｇＧ分泌、及びＩｇＭ表発現のＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３−誘発変化パーセンテージ
【表２１】
2019531284.tif 000025
【０６１４】
相似するＴ細胞受容体活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞／全Ｂ細胞共培養において、ビーズ結合ＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ融合タンパク質は、ヌルビーズと比較して、形質芽細胞数の平均４３．８％低減（ｐ＝０．０２）（図３５Ａ）、ＩｇＧ分泌の平均１２．７％低減（ｐ＝０．３８）（図３５Ｂ）を誘発したが、ＩｇＭ表面発現の０％増加（中央値６．７％増加、ｐ＝０．５５）（図３５Ｃ）を誘発した。各ドナー試料における変化パーセンテージは、以下の表２３に列挙される。
表２３．Ｔ細胞受容体活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞／全Ｂ細胞共培養における形質芽細胞数、ＩｇＧ分泌、及びＩｇＭ表発現のＰＤ−Ｌ１  Ｆｃ融合タンパク質誘発変化パーセンテージ
【表２２】
2019531284.tif 000026
【０６１５】
これらの結果は、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３が、インビトロＣＤ３＋Ｔ細胞／全Ｂ細胞共培養系におけるＢ細胞の形質芽細胞への分化及びＩｇＧの分泌を阻害することを示し、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、アレルギーなどのＢ細胞媒介疾患を治療することにおいて効果的であり得ることを提案する。
【０６１６】
５．５インビボ薬理学
５．５．１異種移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）モデル
異種ＧｖＨＤモデルは、ヒトＰＢＭＣまたはヒトＴ細胞サブセット（特異性Ｔ細胞サブセットの精製または欠乏によって単離された）の、マウスの免疫不全ＮＳＧ株への移植を含む。ヒトＰＢＭＣまたはＴ細胞の免疫不全ＮＳＧマウスへの移植は、ヒトＴ細胞のリンパ器官への生着、サイトカイン分泌として測定可能なヒトＴ細胞の活性化、及びヒトリンパ球の様々な器官への浸潤をもたらす。有効性研究において、血漿中のＴ細胞サイトカインレベル（ＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１７、及びＴＮＦ−α）、ならびに血液及び／または脾臓中のヒト細胞生着（ヒトＣＤ４５＋％として測定された場合）は、主要エンドポイントとして使用される。いくつかの研究において、非リンパ系器官へのリンパ球浸潤の追加の特徴付けは、試験分子の生物学をより良く理解するために行われた。このモデルは、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３のマウスＰＤ−１への交差反応性の欠乏に起因して選択された。すべての３つの研究において、ＣＴＬＡ４Ｉｇは、モデルとして陽性対照として使用された。
【０６１７】
５．５．１．１Ｔ細胞活性化のヒトＰＢＭＣ移植モデルにおけるＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３の効果
研究は、ヒトＴ細胞活性化へのＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３インビボ有効性を測定するために行われた。ヒトＰＢＭＣは、ＮＳＧノックアウトマウスに移植され、Ｔ細胞活性化は、血漿中へのサイトカイン放出、及びマウスの血液及び脾臓中のヒトＣＤ４５＋リンパ球生着によって測定された。健康なドナーの２０百万のヒトＰＢＭＣ（０．１ｍＬ）（ＡｌｌＣｅｌｌｓ  Ｉｎｃ．，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）は、０日目に、ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）の尾へ注入によって静脈内投与された。１日目に、適切な試験物質（ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３、ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１、ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐ、ＣＴＬＡ４Ｉｇ／アバタセプト陽性対照（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）及びヒトＩｇＧ１アイソタイプ陰性対照（Ｅｕｒｅｋａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ））は、研究Ｉ及びＩＩにおいて２８日間、ならびに研究ＩＩＩにおいて１６日間、２．５ｍｇ／ｋｇで、週に３回（月曜日、水曜日、及び金曜日）、腹腔内に（ＩＰ）投与された。２８日後、マウスの血液及び脾臓は、血漿及び細胞懸濁液の調製のために回収された。ヒトサイトカインＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７のレベルは、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ（商標）Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ６０００を使用して、カスタムヒトＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ（商標）４スポット酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）キット（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を介してマウス血漿中で測定された。サイトカインの血漿レベルは、標準曲線に従って決定された（５．０００〜０．３ｐｇ／ｍＬ）。有効性は、ビヒクル対照と比較して、阻害％として表された。ヒトＣＤ４５＋細胞の生着は、フローサイトメトリーによるヒトＣＤ４５＋細胞の増加％を測定することによって異種ＧｖＨＤマウスモデルにおいて評価された。１００マイクロリットルの各脾臓細胞懸濁液または全血試料は、フローサイトメトリー分析（ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（商標）、ＦｌｏｗＪｏ（商標）ソフトウェア、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）のために抗ヒトＣＤ４５−ＰｅｒＣＰで染色された。
【０６１８】
研究は、ヒトリンパ球生着（ヒトＣＤ４５＋細胞）のレベル、及びマウス血漿中で検出されるＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、及びＩＬ−１７などのヒトサイトカインのレベルは、ドナーによって変化したことを示した。ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、ヒトＣＤ４５＋リンパ球生着への最小の効果を有したが、ＣＴＬＡ４Ｉｇは、生着の程度を著しく低減した（図２６Ｂ）。ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、１つの研究においてサイトカインの阻害、及び異なるドナーでの別の研究においてサイトカイン（ＧＭ−ＣＳＦ（図２６Ａ）、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ  α、ＩＬ−１０、及びＩＬ  １７［ｐ＜０．０００１〜０．０５］）の統計的に有意な阻害の傾向を示した。予期に反して、より高いサイトカインレベルを用いた研究は、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３でのより多くの阻害を示した。ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３治療は、両方の研究において血液及び脾臓中のＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞上でのＰＤ−１発現を著しく低減した（データには示されていない）。脾臓から単離されたＴ細胞中で探索された差別的な遺伝子発現は、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３（５ｍｇ／ｋｇ）対ビヒクル治療されたＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞の間でいかなる統計的に有意な差異も示さなかった。しかしながら、仮定された薬物作用及び経路分析アプローチに関連する対照の特異性遺伝子の分析は、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３治療によって著しく改変されたいくつかの経路及び機能的遺伝子群を明らかにした（データには示されていない）。表１９は、研究Ｉ及び研究ＩＩの代表的なデータを示す。
表１９．ヒトＰＢＭＣ移植モデルにおいてＰＤ１ＡＢ−６バリアントを試験した結果の要約
【表２３】
2019531284.tif 000027
【０６１９】
ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、Ｔ細胞サイトカイン産生を阻害し、それは他の２つのバリアントＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１及びＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐとともに見られたサイトカインレベルの阻害に相当であり、ＰＤ１ＡＢ−６活性はＴエフェクター細胞の補体媒介の欠乏に起因しなかったことを示す（表１９）。加えて、試験されたＰＤ１ＡＢ−６抗体のいずれかで生着されたヒトＣＤ４５＋細胞は存在せず、Ｃ１ｑ（補体）依存性細胞欠乏は生じていなかったという仮説をさらに支持した（この研究で見られたＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐで生着されたＣＤ４５＋細胞の、小さいが、統計的に有意な阻害は、研究を通して一貫しては見られない）。同様の用量での陽性対照ＣＴＬＡ４Ｉｇは、ヒト細胞の生着を妨げ、検出可能なサイトカイン産生をもたらさなかった。
【０６２０】
５．５．１．２Ｔ細胞活性化のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞移植モデルにおけるＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３の効果
いくつかの自己免疫疾患において主な媒介物であるＣＤ４＋Ｔ細胞へのＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３の効果を具体的に試験するために、研究は、精製されたヒトＣＤ４＋Ｔ細胞をＮＳＧノックアウトマウスに移植することによって行われ、血液及び脾臓中のヒトＣＤ４５＋細胞の血漿サイトカインレベル及びパーセンテージを測定した。ＣＤ４＋細胞は、非定型抗酸菌複合体（ＭＡＣＳ）磁性分離システム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）を使用してヒトＰＢＭＣ（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）から精製された。５百万の精製されたヒトＣＤ４＋Ｔ細胞は、０日目にＮＳＧ雌のマウスに静脈内（ＩＶ）注射され、１日後、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋは、３２．５ｍｇ／ｋｇで、腹腔内に、週に３回投与された。２８日後、マウスの血液及び脾臓は、血漿及び細胞懸濁液の調製のために回収された。血漿サイトカインレベル及びＣＤ４５＋細胞生着の分析は、以前に議論されるように行われた（５．５．１．１項を参照されたい）。
【０６２１】
ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、ビヒクル対照またはヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照と比較して、ヒトＣＤ４５＋リンパ球生着を著しく阻害した（＞７５％）。ＣＤ４５＋細胞生着のこの阻害は、ＰＢＭＣ移植モデルにおいては見られず、非ＣＤ４＋Ｔ細胞からのシグナルが、ヒトＣＤ４５＋リンパ球生着のＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３−媒介阻害に影響を有したことを示す。ビヒクル対照群と比較して、週に３回与えられた２．５ｍｇ／ｋｇでのＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、ヒトＧＭ−ＣＳＦ（９８％）、ＩＦＮ  γ（９９％）、及びＩＬ−１７（９８％）産生を阻害した（ｐ＜０．０００１）。２．５ｍｇ／ｋｇの単回腹腔内投与後４時間でのＣｍａｘでは、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３のレベルは、投与後７２時間で５μｇ／ｍＬであり、最大１６８時間検出可能であった。表２０は、これらの研究の代表的なデータを示す。
表２０．ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞移植モデルにおいてＰＤ１ＡＢ−６バリアントを試験した結果の要約
【表２４】
2019531284.tif 000028
2019531284.tif 000029
【０６２２】
図２７Ａ及び図２７Ｂならびに図２８Ａ〜図２８Ｃは、研究Ｖの代表的なデータを示す。０．６３ｍｇ／ｋｇと同程度に低い用量レベルで、腹腔内に、週に３回与えられたＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、ビヒクル治療と比較して、血液（８４％、ｐ＜０．０００１、図２７Ａ）及び脾臓（７３％、ｐ＜０．０００１、図２７Ｂ）の両方において、ならびにＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、及びＩＬ−１７の血漿レベル（８６％〜９８％低減、ｐ＜０．０００１）（図２８Ａ〜図２８Ｃ）においてＣＤ４５＋生着を著しく阻害した。これは、ＣＤ４＋Ｔ細胞移植モデルにおいてＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３の最小の有効用量は、＜０．６３ｍｇ／ｋｇで週に３回となる可能性が高いことを示した。
【０６２３】
５．５．１．３Ｔ細胞活性化のＣＤ８＋Ｔ細胞欠乏ヒトＰＢＭＣ移植モデルにおけるＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３の効果
研究はまた、非Ｔ細胞からの共刺激性シグナル及び生存シグナルの存在下でＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３のＣＤ４＋Ｔ細胞への効果の評価を可能にしたＣＤ８＋Ｔ細胞欠乏ＰＢＭＣの移植によって確立された修飾された異種ＧｖＨＤモデルにおいて行われた。ＣＤ８＋細胞は、ＢＳＬ２実験室でＭＡＣＳ  ＣＤ８マイクロビーズを使用して新鮮なヒトＰＢＭＣ（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）において磁気的に標識された。標識されると、細胞懸濁液は、磁界でＭＡＣＳ分離カラムに入れられ、それはＣＤ８＋細胞を保持するか、またはＱｕａｒｏＭＡＣＳ（商標）セパレータ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して精製された。ＣＤ８陰性であった標識されていない細胞は、回収され、プールされた。実験の開始時に（０日目）、０．１ｍＬの細胞懸濁液（動物当たり２０百万のＣＤ８＋Ｔ細胞欠乏ＰＢＭＣ）は、ＮＳＧ雌のマウスの尾静脈に静脈内注射された。研究ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩの予防投与、及び研究ＩＸの予防投与では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３、ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐ、ＣＴＬＡ４Ｉｇ、またはＰＤ−Ｌ１  Ｆｃの投与は１日目に開始し、研究は１６日目に終了した。研究ＶＩＩＩの治療投与では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３、ＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐ、ＣＴＬＡ４Ｉｇ、またはＰＤ−Ｌ１  Ｆｃの投与は１５日目に開始し、研究は２８日目に終了した。血漿サイトカインレベル及びＣＤ４５＋細胞生着の分析は、以前に議論されるように行われた（５．５．１．１項を参照されたい）。
【０６２４】
週に３回与えられた０．６３ｍｇ／ｋｇの開始用量レベルは、ＣＤ４＋Ｔ細胞移植モデルにおいて試験された最も低い用量に基づいて選択された。ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３治療での１６日目（研究終了）で血液または脾臓のいずれにおいてもヒトＣＤ４５＋細胞生着の阻害はなかった。研究ＶＩでは、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３（０．６３ｍｇ／ｋｇ及び０．３ｍｇ／ｋｇ）の用量の両方は、ＧＭ−ＣＳＦ（０．６３ｍｇ／ｋｇで７９％；０．３ｍｇ／ｋｇで７１％；ｐ＜０．０００１）、ＩＦＮ−γ（０．６３ｍｇ／ｋｇで６０％；０．３ｍｇ／ｋｇで５１％；ｐ＜０．０５）、及びＩＬ−１７（０．６３ｍｇ／ｋｇで８７％；０．３ｍｇ／ｋｇで６６％；ｐ＜０．０１〜０．０５）の著しい阻害を示した。異なるドナーでの別の研究ＶＩＩでは、週に３回与えられた０．３及び０．１５ｍｇ／ｋｇのより低い用量が試験された（データには示されていない）。いくつかのサイトカインの阻害があったが（ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−１７は両方の用量、ＴＮＦ−αは０．１５ｍｇ／ｋｇのみ）、いずれの用量でもＩＦＮ−γの阻害はなかった。しかしながら、ＣＴＬＡ４−Ｉｇでの治療は、０．１５ｍｇ／ｋｇと同程度に低い用量でＴ細胞生着を阻害し、サイトカイン放出を抑制した。研究ＶＩ及びＶＩＩの両方では、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、試験されたすべての用量でＣＤ４＋Ｔ細胞上のＰＤ−１発現を著しく下方制御した。
【０６２５】
０．６３ｍｇ／ｋｇで毎週投与されたＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、ＧＭ−ＣＳＦ（ｐ＜０．０５）及びＩＬ−１７（ｐ＜０．０１）の阻害を示したが（研究ＶＩＩＩの予防投与）、異なるドナーＰＢＭＣでのＩＬ−１７阻害（ｐ＜０．０５）のみであった（研究ＩＸの予防投与）。週に３回の投与での結果と同様に、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３での週に１回の治療は、ヒトＣＤ４５＋細胞の生着に影響を有さなかった。研究ＶＩＩＩの治療投与では、疾患発症後（細胞移植から１５日後、治療投与とみなされる）ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３またはＣＴＬＡ４−Ｉｇの１．２５ｍｇ／ｋｇで週に３回の投与は、ＧＭ−ＣＳＦのみを阻害し、ＣＤ８＋Ｔ細胞欠乏ヒトＰＢＭＣ移植モデルにおける治療投与において有効でないと考えられた。ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３治療での脾臓中のＣＤ４＋Ｔ細胞上でのヒトＰＤ−１発現の４６％の著しい低減があった（ｐ＜０．０５、データには示されていない）。上記の研究すべてのサイトカイン阻害の結果に基づいて、０．６３ｍｇ／ｋｇで、腹腔内、週に３回でのＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、ＣＤ８＋Ｔ細胞欠乏ヒトＰＢＭＣ移植モデルにおいて最小の有効用量として特定された。表２１は、研究ＶＩＩ〜ＩＸの代表的なデータを示す。
表２１．ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞欠乏ＰＢＭＣ移植モデルにおいてＰＤ１ＡＢ−６バリアントを試験した結果の要約
【表２５】
2019531284.tif 000030
2019531284.tif 000031
【０６２６】
上記に示されるように、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３治療は、精製されたＣＤ４＋Ｔ細胞がＮＳＧマウスに移植されたときに、全体の生着効率低減したが、ＰＢＭＣまたはＣＤ８＋Ｔ細胞欠乏ＰＢＭＣが生着されたときに、ヒトＣＤ４５＋リンパ系細胞の生着に影響を及ぼさなかったか、またはＣＤ４：ＣＤ８のパーセンテージを生着された細胞内で改変しなかった（表１９〜表２１）。これは、他の細胞型（主に、ＣＤ８＋Ｔ細胞欠乏ＰＢＭＣ中の単球）への受容体との相互作用が、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３からの阻害シグナルに影響を及ぼすことを示した。
【０６２７】
５．５．１．４サイトカイン阻害に先立つＰＤ−１発現の下方制御
５百万の精製されたヒトＣＤ４＋Ｔ細胞は、０日目にＮＳＧ雌のマウスに静脈内注射された。マウスは、Ｔ細胞移植後の２１日目に５０μｇ／マウスのＴＡＰＡ抗体の単回用量を与えられた。ＰＫ試料は、７日目まで回収された。サイトカインレベル及びＰＤ−１発現は、最後の用量後２４時間測定された。細胞は、ＰＤ−１発現を測定するために、抗ヒトＣＤ４５及び抗ヒトＣＤ４（ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞を識別するため）ならびに抗ＰＤ−１（ＰＤ１ＡＢ−６バリアントの存在下でＰＤ−１に結合することが示されるｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ抗体）で染色された。グラフは、ＣＤ４＋Ｔ細胞表面でのＰＤ−１の平均蛍光強度染色を示す。図２９Ａ及び図２９Ｂに示されるように、ＰＤ−１下方制御は、ＰＤ−１抗体の単回用量の２４時間後に早ければ見られ（図２９Ａ）、サイトカイン阻害が検出され得る前に見られた（図２９Ｂ）。
【０６２８】
５．５．１．５ＰＤ−１下方制御との有効性（サイトカイン阻害）の相関関係
ＰＤ−１下方制御及びサイトカイン阻害（有効性）の相関関係は、様々な研究にわたってプロットされた（図３０Ａ〜図３０Ｂ）。ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、ＰＤ−１発現のより増強された下方制御、ならびにＰＤ１ＡＢ−６−４Ｐと比較してよりサイトカイン阻害の傾向を示した。これは、ＩＬ−１７阻害（図３０Ａ）について特に当てはまった。サイトカインの阻害を示さなかったＰＤ−Ｌ１．Ｆｃもまた、ＰＤ−１を下方制御しなかった（図３０Ａ及び図３０Ｂ）。
【０６２９】
５．５．２ヒトＰＤ−１ノックイン（ｈＰＤ−１  ＫＩ）マウスにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデル
ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３のマウスの代用を使用して、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３のインビボ有効性は、ＥＡＥのマウスモデルにおいてさらに試験された。Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンド上のヒトＰＤ−１ノックイン同型接合（ｈＰＤ−１  ＫＩ）マウスがこれらの研究のために使用された。ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３は、ＰＤ−１結合可変領域を保持するように修飾され、Ｆｃ領域とともにＫ３２２Ａに相当する変異を有するマウスＩｇＧ２ａに転換された。この分子は、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３  ｍｕＦｃと称され、ｈＰＤ−１  ＫＩマウスにおけるＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３活性を試験するための代用の分子として機能する。親ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１及びＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３  ｍｕＦｃは、雌のｈＰＤ−１  ＫＩマウス（ＭＯＧ−ＥＡＥ）における百日咳毒素（ＰＴＸ）または抗ＣＤ２５のいずれかの投与で、エリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）ペプチドによって誘発されたＥＡＥのマウスモデルの２つのバージョンにおける有効性について評価された。
【０６３０】
ＰＴＸ投与バージョンについて、マウスは、吸入イソフルランで麻酔をかけられ、０日目に合計２００μＬのＭＯＧ／ＣＦＡ注射のために、Ｈｏｏｋｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｌａｗｒｅｎｃｅ，ＭＡ）の完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）に乳化されたＭＯＧ  ペプチド３５−５５（ＭＯＧ）の各１００μＬの２回の皮下（ＳＣ）注射を与えられた。１回目の注射は上背部、２回目は腰背部に与えられた（注射部位当たり１００μＬ）。免疫化後２時間、ＰＴＸ（０．１ｍＬ中に２００ｎｇ）の第１の腹腔内（ＩＰ）投与（Ｈｏｏｋｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）が各動物に与えられた。ＰＴＸ（０．１ｍＬ中に２００ｎｇ）の第２の腹腔内投与は、２４時間後に与えられた。
【０６３１】
抗ＣＤ２５投与バージョンについて、マウスは、吸入イソフルランで麻酔をかけられ、マウスの腰背部に０日目に１００μＬのＭＯＧ／ＣＦＡの１回の皮下注射を与えられた。６日目に、各マウスは、１ｍｇの抗マウスＣＤ２５抗体（Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ，Ｗｅｓｔ  Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）を２００μＬの量で腹腔内に注射された。１００μＬのＭＯＧ／ＣＦＡの２回目の注射は、上背部に７日目に与えられた。
【０６３２】
親ＰＤ１ＡＢ−６−ＩｇＧ１は、研究の開始後５日目に開始して、月曜日、水曜日、及び金曜日に、１０ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与された。ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３  ｍｕＦｃは、研究の開始後５日目（予防的治療）または１２日目（治療的治療）に開始して、月曜日、水曜日、及び金曜日に、１．２５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与された。
【０６３３】
ＥＡＥモデルにおいて、マウスが、ＭＯＧ／ＣＦＡでの注入、その後のＰＴＸの２回の注入後に慢性ＥＡＥを発達させるように誘発された場合、ビヒクル群と比較して、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３−ＩｇＧ１またはＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３  ｍｕＦｃを投与された治療群において著しい死亡率があった。死亡は、より高い疾患スコアと関連しておらず、抗体注入の数時間以内に発生した。
【０６３４】
ＰＴＸとのＭＯＧ−ＥＡＥモデルにおける死亡が標的関連していたかどうかを決定するために、追加の研究が文献（Ｊｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８６（５）：２７５０−５６）に基づいて計画された。ラット抗マウスインテグリンアルファ（非常に遅い抗原［ＶＬＡ］）−４抗体（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）及び対応するラットアイソタイプ対照抗体がＭＯＧ−ＥＡＥモデルにおいてＰＴＸとともに使用された。文献に沿って、５日目からの抗ＶＬＡ−４及びラットアイソタイプ対照抗体での治療は、ビヒクル対照と比較して著しい死亡率をもらたし、抗体注入の数時間以内に死亡が発生し、死亡率及び疾患スコア間の相関関係は欠如していた。これらの観察は、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３  ｍｕＦｃで行われたものと同様であり、死亡は標的関連していなかったことを提案する。ＭＯＧ−ＥＡＥモデルは、文献（Ｍｏｎｔｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｊ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．２３（１）：１−７）に基づいてアジュバントとしてＰＴＸを欠乏する抗ＣＤ２５と置き換えるように修飾された。
【０６３５】
修飾された抗ＣＤ２５  ＥＡＥモデルにおいて、マウスが、ＭＯＧ／ＣＦＡ及び抗ＣＤ２５の注入後に慢性ＥＡＥを発達させるように誘発された場合、臨床ＥＡＥ（体重変化及び疾患スコアによって評価された場合）は、ビヒクル群において１１日目〜１６日目まで明白であり、約２０日目にピークに達した。ビヒクル食塩水群から２匹の動物は、足及び尾の領域における過度の傷のため、２４日目及び２７日目に安楽死させられた。アイソタイプ対照（マウスＩｇＧ２ａ、Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ）の５ｍｇ／ｋｇ群及びＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３  ｍｕＦｃの５ｍｇ／ｋｇ群からそれぞれ１匹の動物は、３３日目に死んでいた。これらのマウス両方は、高疾患スコア４を有し、死亡はＥＡＥ疾患に関連する可能性が高かった。マウスＩｇＧ２ａ及びＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３  ｍｕＦｃ群の両方において死亡が見られたため、ＥＡＥモデルにおけるＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３の投与に特異的な有害作用であるとはみなされない。
【０６３６】
５ｍｇ／ｋｇでのＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３  ｍｕＦｃは、２０日目〜３１日目に疾患スコアを著しく阻害し（ｐ＜０．００１〜０．０５；図３１）、用量適合アイソタイプ対照と比較して疾患スコアのＡＵＣを４０％（ｐ＜０．０５）阻害した。１．２５ｍｇ／ｋｇでのＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３  ｍｕＦｃまたはマウスＩｇＧ２ａは、疾患スコアまたは疾患スコアのＡＵＣへ効果を有さなかった。陽性対照ＦＴＹ７２０（フィンゴリモド、Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）は、研究のスコアリングの２０日目から最終日までＥＡＥ疾患スコアの著しい阻害を示した（３１日目；ｐ＜０．０００１）。ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３  ｍｕＦｃの血清レベルを疾患への効果と関係づけるために、血清は、研究の終了時に回収され、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３  ｍｕＦｃのレベルは測定された。極めて少ない数の動物が、検出のレベルを超えるＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３  ｍｕＦｃのレベルを有した（５ｍｇ／ｋｇで１０匹中４匹の動物及び１．２５ｍｇ／ｋｇ用量群で１０匹中１匹の動物のみ）。すべての動物は、測定可能なレベルの抗薬物抗体を有した。用量適合アイソタイプ対照群と比較して、５ｍｇ／ｋｇでＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３  ｍｕＦｃでの治療後、脾臓及び血液のＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞においてヒトＰＤ−１発現レベルの低減の傾向があった。ＭＯＧ−ＥＡＥ実験の終了時（２３日目及び３４日目）に、脾臓細胞は、エクスビボアッセイにおいて試験された。治療ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３  ｍｕＦｃ群（２３日目終了）の脾細胞は、ＩＦＮ−γ分泌の著しい（ｐ＜０．０００１）阻害（６６％）、高可変性でのＩＬ−１７の阻害の傾向（４０％）、及びリコールアッセイにおいてＭＯＧの最も高い用量に応答したＣＤ４＋Ｔ細胞の著しくより低い増殖（４２％、図３２Ａ）を示した。３４日目の脾細胞は、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３  ｍｕＦｃ治療後のサイトカイン分泌または増殖へのいかなる効果も示さなかった。
【０６３７】
要するに、インビトロ及びインビボ研究は、ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３が、炎症誘発性サイトカインの分泌を阻害し、Ｔ細胞上での阻害受容体の発現を増加させる能力によって測定して、Ｔ細胞活性を減弱化する高親和性ＰＤ−１結合抗体であることを示した。ＰＤ１ＡＢ−６−Ｋ３の特異性及び活性特性は、自己免疫疾患状況において有益な治療薬となる可能性を示す。
【０６３８】
６．配列表
本明細書は、コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）コピーの配列表とともに提出されている。２０１７年９月１１日に作成され、５０，８８２バイトのサイズである１０６２４−３８５−２２８＿ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔと題されるＣＲＦは、配列表のハードコピーと同一であり、その全体において参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
2019531284.tif 000032
【図２】
2019531284.tif 000033
【図３】
2019531284.tif 000034
【図４】
2019531284.tif 000035
【図５】
2019531284.tif 000036
【図６】
2019531284.tif 000037
【図７】
2019531284.tif 000038
【図８】
2019531284.tif 000039
【図９Ａ−９Ｂ】
2019531284.tif 000040
【図９Ｃ】
2019531284.tif 000041
【図１０】
2019531284.tif 000042
【図１１】
2019531284.tif 000043
【図１２】
2019531284.tif 000044
【図１３】
2019531284.tif 000045
【図１４】
2019531284.tif 000046
【図１５Ａ】
2019531284.tif 000047
【図１５Ｂ】
2019531284.tif 000048
【図１５Ｃ】
2019531284.tif 000049
【図１６】
2019531284.tif 000050
【図１７】
2019531284.tif 000051
【図１８】
2019531284.tif 000052
【図１９Ａ】
2019531284.tif 000053
【図１９Ｂ】
2019531284.tif 000054
【図２０】
2019531284.tif 000055
【図２１】
2019531284.tif 000056
【図２２】
2019531284.tif 000057
【図２３】
2019531284.tif 000058
【図２４】
2019531284.tif 000059
【図２５】
2019531284.tif 000060
【図２６】
2019531284.tif 000061
【図２７】
2019531284.tif 000062
【図２８】
2019531284.tif 000063
【図２９】
2019531284.tif 000064
【図３０】
2019531284.tif 000065
【図３１】
2019531284.tif 000066
【図３２】
2019531284.tif 000067
【図３３】
2019531284.tif 000068
【図３４】
2019531284.tif 000069
【図３５】
2019531284.tif 000070
【手続補正書】
【提出日】令和1年6月3日(2019.6.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2019531284000001.app
【国際調査報告】
2019531284.tif 000071
2019531284.tif 000072
2019531284.tif 000073
2019531284.tif 000074