(57)【要約】  本発明は、高レベルのＶＥＧＦ−Ｄを有する患者における転移性結腸直腸癌の治療のための、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体に関する方法、治療、および使用を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体をそれを必要とするヒト患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法であって、前記患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量の測定結果を受け取った後に、治療のために前記患者が選択されることを条件とする、方法。
【請求項２】
治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体をそれを必要とする患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法であって、前記患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量の測定結果を受け取った後に、治療のために前記患者が選択されることを条件とし、前記抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体が、配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む、方法。
【請求項３】
前記抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体がラムシルマブである、請求項１〜２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４】
前記患者が以前ベバシズマブで治療された、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体が、２週間毎に約８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体が、前記生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体が、前記生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌである場合に投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体が、前記生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記生物学的試料が、前記患者由来の血漿または血清を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記生物学的試料がヘパリンをさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記生物学的試料がエチレンジアミン四酢酸をさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量が、イムノアッセイを用いて測定される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記イムノアッセイが、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記イムノアッセイが、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である捕捉抗体を含む、請求項１２〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記捕捉抗体がビオチンで標識される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記イムノアッセイが、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である検出抗体を含む、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記検出抗体が、ルテニウムまたは西洋ワサビペルオキシドで標識される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記捕捉抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１０のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む、請求項１４〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記検出抗体が、配列番号１１のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１２のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む、請求項１６〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
転移性結腸直腸癌を有する患者の治療に使用するための、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体と１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む医薬組成物であって、前記患者由来の生物学的試料がヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルについて測定され、前記抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体が、前記生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄの前記レベルが約７６ｐｇ／ｍｌ、好ましくは約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌ、またはより好ましくは約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与される、医薬組成物。
【請求項２１】
前記抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体が、配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む、請求項２０に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２２】
前記抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体がラムシルマブである、請求項２０〜２１のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２３】
前記生物学的試料が前記患者由来の血清を含む、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２４】
前記生物学的試料が前記患者由来の血漿を含む、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２５】
前記生物学的試料が、ヘパリンまたはエチレンジアミン四酢酸を含む、請求項２０〜２４のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２６】
前記抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体が、２週間毎に８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２７】
ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量が、イムノアッセイを用いて測定される、請求項２０〜２６のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２８】
前記イムノアッセイが、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含む、請求項２７に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項２９】
前記イムノアッセイが、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である捕捉抗体を含む、請求項２７〜２８のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項３０】
前記捕捉抗体がビオチンで標識される、請求項２９に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項３１】
前記捕捉抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１０のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む、請求項２９〜３０のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項３２】
前記イムノアッセイが、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である検出抗体を含む、請求項２７〜３１のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項３３】
前記検出抗体が、ルテニウムまたは西洋ワサビペルオキシドで標識される、請求項３２に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項３４】
前記検出抗体が、配列番号１１のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１２のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む、請求項３２から３３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項３５】
前記患者が以前ベバシズマブで治療された、請求項２０〜３４のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌治療の分野に関する。より具体的には、本発明は、高レベルのヒト血管内皮増殖因子Ｄ（ＶＥＧＦ−Ｄ）を有する患者における転移性結腸直腸癌（ｍＣＲＣ）の治療のための抗ＶＥＧＦＲ−２抗体、好ましくはラムシルマブの使用に関する。ＶＥＧＦ−Ｄのレベルを測定することは、ラムシルマブによる治療のためにｍＣＲＣ患者を選択する際に有用であると考えられる。
【０００２】
ラムシルマブは、以前のフルオロピリミジンまたは白金含有化学療法の途中または後に疾患の進行があった進行胃癌または食道胃接合部腺癌の治療のために、単剤としてまたはパクリタキセルと組み合わせて、白金ベースの化学療法の途中または後に疾患の進行があった転移性非小細胞肺癌の治療のために、ドセタキセルと組み合わせて、以前のベバシズマブ、オキサリプラチン、およびフルオロピリミジンを用いた以前の治療の途中または後に疾患の進行があった転移性結腸直腸癌の治療のために、ＦＯＬＦＩＲＩと組み合わせて、米国食品医薬品局によって認可されている。
【０００３】
ＶＥＧＦ−Ｄは、ヒト血管内皮成長受容体−２（ＶＥＧＦＲ−２）のリガンドである。転移性結腸直腸癌に罹患した、低レベルのＶＥＧＦ−Ｄ（ＩＨＣによって決定される）を有する患者は、ベバシズマブ治療から利益を得ること、および転移性結腸直腸癌に罹患した、より高いＶＥＧＦ−Ｄ発現を有する患者は、ベバシズマブからより少ない利益を得ることが示されている。Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  １１３，３７−４５（２０１５）。また、ＶＥＧＦ−Ｄの循環レベルから、転移性結腸直腸癌に罹患した、ＦＯＬＦＯＸまたはＦＯＬＦＩＲＩ＋ベバシズマブまたはセツキシマブで治療された患者におけるベバシズマブ治療の利益を予測することができ、低いＶＥＧＦ−Ｄレベルを有する患者が最大のベバシズマブの利益を受けることも示されている（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３４，２０１６（ｓｕｐｐｌ．；ａｂｓｔｒａｃｔ  ３５９７））。しかしながら、複数のマーカーが試験されたものの、複数の試験について補正した後、ＶＥＧＦ−Ｄを含めて、いずれも統計的に有意であるという報告はなかった（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３４，２０１６（ｓｕｐｐｌ．；ａｂｓｔｒａｃｔ  ３５９７））。
【０００４】
意外にも、高いＶＥＧＦ−Ｄ血漿レベルを有するｍＣＲＣ患者は、より低いＶＥＧＦ−Ｄレベルを有する患者と比較して、ＦＯＬＦＩＲＩにラムシルマブを追加することによってより大きな生存利益を得ることが分かった。
【０００５】
ラムシルマブは、ヒト血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ−２）に対するヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ラムシルマブならびにラムシルマブを作製および使用する方法は、以前に開示されている。ラムシルマブは、以前のフルオロピリミジンまたは白金含有化学療法の途中または後に疾患の進行があった進行胃癌または食道胃接合部腺癌の治療のために、単剤としてまたはパクリタキセルと組み合わせて、および、白金ベースの化学療法の途中または後に疾患の進行があった転移性非小細胞肺癌の治療のために、ドセタキセルと組み合わせて、米国食品医薬品局によって認可されている。上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）または未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）ゲノム腫瘍異常を有する患者は、ＣＹＲＡＭＺＡ（登録商標）を投与する前に、これらの異常に対してＦＤＡに認可された治療の途中で疾患の進行が認められているはずであり、ベバシズマブ、オキサリプラチン、およびフルオロピリミジンを用いた以前の治療の途中または後に疾患の進行があった転移性結腸直腸癌の治療のために、ＦＯＬＦＩＲＩ（イリノテカン、フォリン酸、および５−フルオロウラシル）と併用される。
【０００６】
本発明は、ラムシルマブの第３相臨床試験（「ベバシズマブ、オキサリプラチン、およびフルオロピリミジンとの第一選択併用療法中または併用療法後に進行した転移性結腸直腸癌患者における、イリノテカン、フォリン酸、および５−フルオロウラシル（ＦＯＬＦＩＲＩ）＋ラムシルマブまたはプラセボのランダム化二重盲検多施設第３相試験」（「試験」）に由来する。
【０００７】
本明細書で使用する場合、用語「ヒトＶＥＧＦＲ−２」は、配列番号５のアミノ酸配列を有するヒト血管内皮増殖因子受容体２を指す。ＶＥＧＦＲ２は、ＫＤＲとしても知られている。
【０００８】
本明細書で使用する場合、用語「ヒトＶＥＧＦ−Ｄ」は、配列番号６のアミノ酸配列を有するヒト血管内皮増殖因子−Ｄを指す。
【０００９】
ラムシルマブの非限定的な例は、ＣＹＲＡＭＺＡ（登録商標）であり、ＣＡＳ登録番号９４７６８７−１３−０を有する。ラムシルマブは、軽鎖の各々が配列番号３のアミノ酸配列を有する２つの軽鎖と、重鎖の各々が配列番号４のアミノ酸配列を有する２つの重鎖とを含む、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体である。ラムシルマブの軽鎖可変領域は、配列番号１に示されるものである。ラムシルマブの重鎖可変領域は、配列番号２で示されるものである。
【００１０】
選択された抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、ヒトＶＥＧＦＲ−２に対する十分に強い結合親和性を有するであろう。例えば、抗体は、一般に、約１００ｎＭ〜約１ｐＭのＫｄ値でＶＥＧＦＲ−２に結合する。抗体の親和性は、例えば、表面プラズモン共鳴に基づくアッセイ（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイがＷＯ２００５／０１２３５９に記載されている）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、および競合アッセイ（例えば、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ））によって決定され得る。一実施形態において、Ｋｄは、ラムシルマブを用いて行われるＲＩＡによって測定される。
【００１１】
ベバシズマブは、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）に特異的な抗体であり、転移性結腸直腸癌患者のための第一選択治療として米国食品医薬品局によって認可されている。ベバシズマブは、静脈内５−フルオロウラシルベースの化学療法と併用するための転移性結腸直腸癌の二次選択治療として米国食品医薬品局によって認可されている。ベバシズマブはまた、ベバシズマブを含む治療計画による第一選択治療中に疾患が進行した転移性結腸直腸癌（ｍＣＲＣ）患者の治療のためのフルオロピリミジン−イリノテカン−またはフルオロピリミジン−オキサリプラチンベースの化学療法との併用についても、米国食品医薬品局によって認可されている。
【００１２】
本明細書で使用される「ベバシズマブ」は、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）、ならびに配列番号７および配列番号８にそれぞれ示される重鎖および軽鎖を含む他の抗体だけでなく、表１に示されるような以下の非限定的な例も含む。本明細書で使用される「ベバシズマブ」は、様々な細胞株を使用して作製することができ、結果としてのグリコシル化における相違を含むがこれに限定されない、いくつかの相違を示し得ることを認識されたい。
【表１】
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【００１３】
本明細書で使用する場合、「治療すること」、「治療する」、または「治療」という用語は、既存の症状、障害、容態、もしくは疾患の進行もしくは重症度を抑制、減速、弱化、低下、もしくは逆転させること、または容態の臨床症状を緩解させることを指す。有益なまたは所望の臨床結果には、検出可能であろうと検出不可能であろうと、症状の緩和、疾患または障害の程度の低減、疾患または障害の安定化（すなわち、疾患もしくは障害が悪化していない場合）、疾患または障害の進行の遅延または減速、疾患または障害の緩解または緩和、および疾患または障害の寛解（部分的であろうと全体としてであろうと）が含まれるが、これらに限定されない。治療は、治療を受けていない場合に期待される生存と比較して、生存を延ばすことも意味することができる。治療を必要とする者には、すでにその疾患に罹患している者が含まれる。一実施形態では、本発明は薬剤として使用することができる。
【００１４】
本明細書で使用する場合、用語「癌」は、典型的には未制御の細胞増殖によって特徴付けられる哺乳動物の生理学的状態を指すか、または説明する。この定義には、良性および悪性の癌が含まれる。
【００１５】
本発明の方法において、治療有効量の本発明の抗体が、それを必要とする哺乳動物または患者に投与される。さらに、本発明の医薬組成物は、治療有効量の本発明のラムシルマブを含み得る。
【００１６】
「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するための、必要な投薬量および必要な期間、効果的な量を指す。治療有効量は、既知の技術の使用により、および同様の状況下で得られた結果を観察することにより、当業者のような担当診断医によって容易に決定され得る。患者のための治療有効量を決定する際には、限定されないが、患者の種、そのサイズ、年齢、および全体的な健康状態、関与する特定の疾患または障害、標的部位、疾患または障害の重症度の程度、個々の患者の反応、投与される特定の化合物、投与様式、投与される製剤の生物学的利用率特性、選択される用法、併用薬物の使用、投与される他の薬物、ならびに他の関連する状況を含む多数の要因が、担当診断医によって考慮される。治療有効量はまた、治療的に有益な効果が、抗体または抗体部分の毒性または有害作用を上回る量でもある。
【００１７】
一般に、投薬レジメンは、最適な所望の反応（例えば、治療反応）を提供するように調整され得る。治療投薬量は、安全性および有効性を最適化するために、当業者に既知の日常的な方法を用いて滴定することができる。投与スケジュールは、典型的には、単一ボーラス投与または連続注入から、１日当たり複数回の投与（例えば、４〜６時間毎）までの範囲であるか、または治療する医師および患者の状態によって示される通りである。抗体の投与頻度は、患者を治療する医師によって決定され、毎日、１週間に３回、週１回、２週間毎、またはより少ない頻度で投与され得、より好ましくは２週間毎に投与され得る。抗体の投与量もまた、患者を治療する医師によって決定され、常用範囲内であり得、より好ましくは約８ｍｇ／ｋｇであり得る。
【００１８】
ある場合には、前述のラムシルマブの投与量の下限を下回る投薬レベルが十分過ぎる可能性があり、他の場合には、許容される副作用を伴ってより大きな用量が用いられてもよく、したがって、前述の投薬量は、決して本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【００１９】
本発明の治療の治療有効量は、限定されないが、生存期間の延長（全生存期間（ＯＳ）および無増悪生存期間（ＰＦＳ）を含む）、客観的奏効（完全奏効（ＣＲ）または部分奏効（ＰＲ）を含む）を得ること、腫瘍退縮、腫瘍重量またはサイズの縮小、疾患進行までの期間の延長、生存期間の延長、より長期のＰＦＳ、ＯＳ率の改善、奏効期間の延長、ならびにクオリティ・オブ・ライフの改善および／または癌の徴候もしくは症状の改善を含む、癌治療を評価する際に一般的に使用される種々のエンドポイントによって測定することができる。
【００２０】
本明細書で使用する場合、「病勢進行」（ＰＤ）という用語は、試験で最小の径和（ベースライン径和が試験の最小値である場合はベースライン径和を含む）を基準として、標的病変の径和が少なくとも２０％増加することを指す。２０％の相対的増加に加えて、径和は、少なくとも５ｍｍの絶対的増加も示さなければならない。１つ以上の新しい病変の出現もまた進行であると考えられる。
【００２１】
本明細書で使用する場合、「部分奏効」（ＰＲ）という用語は、ベースライン径和を基準として、標的病変の径和が少なくとも３０％減少することを指す。
【００２２】
本明細書で使用する場合、「完全奏効」（ＣＲ）という用語は、全ての非結節性の標的病変が消失し、任意の標的リンパ節の短軸が＜１０ｍｍまで縮小することを指す。
【００２３】
本明細書で使用する場合、「病勢安定」（ＳＤ）という用語は、試験における最小の径和を基準として、ＰＲには縮小が不十分であり、またＰＤであると認めるには増加が不十分であることを指す。
【００２４】
本明細書で使用する場合、「客観的奏功率」（ＯＲＲ）という用語は、ＲＥＣＩＳＴ１．１に従って部分奏効または完全奏効（ＰＲ＋ＣＲ）の最良総合効果を達成する患者の割合に等しい。
【００２５】
本明細書で使用する場合、「全生存」（ＯＳ）という用語は、診断または治療の時点から１年、５年等の一定期間生存している患者の割合を指す。好ましい実施形態において、ＯＳは、本試験におけるランダム化の日から任意の原因による死亡日までの期間を指す。患者が追跡期間の終了時に生存している場合、または追跡不能となった場合、ＯＳデータは、患者が生存していたことが分かっている最後の日に中途打ち切りとされる。全生存期間はＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ法により評価され、９５％信頼区間（ＣＩ）が各治療群のＯＳ中央値に対して提供される。
【００２６】
本明細書で使用する場合、「無増悪生存期間」（ＰＦＳ）という用語は、癌が進行または増悪することなく生存している患者を指す。本発明の好ましい態様において、ＰＦＳは、本試験におけるランダム化から、ＲＥＣＩＳＴ（バージョン１．１）によって定義された客観的進行が最初にＸ線撮影により記録されるまでの期間、または任意の原因による死亡までの期間として定義される。以前の進行が報告されずに死亡した患者は、死亡した日に進行があったと見なされる。進行がなかった、または追跡不能となった患者は、最後のＸ線撮影による腫瘍評価の日に中途打ち切りとされる。好ましい実施形態において、無増悪生存期間は、ログランク検定を用いて分析され、地理的な領域（北米対欧州他の全領域）、ＫＲＡＳ状態（変異型対野生型）、および第一選択治療開始後の疾患進行までの期間（＜６ヶ月対≧６ヶ月）によって層別化される。
【００２７】
本明細書で使用する場合、「病勢コントロール率」（ＤＣＲ）という用語は、疾患の進行およびその割合の欠如を指す。これは、ＣＲ、ＰＲまたはＳＤ（特にＰＤを有する患者を除外する）に分類された最良総合効果を有する患者の群を指し、最良総合効果は、治療の開始からＰＤまで記録される最良の効果である。
【００２８】
本明細書で使用する場合、「臨床的有用率」という用語は、１２週間でＳＤまたはそれより良好であることを指す。１２週間でのＳＤまたはそれより良好な腫瘍反応率（すなわち、ＣＲ＋ＰＲ＋ＳＤ）は、治験薬の最初の投与後１２週間で、ＲＥＣＩＳＴ１．１によって定義されるＳＤまたはそれより良好な反応を有する患者の割合として定義される。１２週間またはそれ以前に患者が死亡した場合、またはＸ線撮影による評価がＰＤの反応を示した場合、患者は「失敗」であるとみなされる。
【００２９】
本明細書で使用する場合、「生存期間の延長」または「長期生存期間」という用語は、本明細書において互換的に使用され、ｉ）未治療の患者、ｉｉ）特定の併用療法において全ての抗腫瘍剤を用いずに治療された患者、またはｉｉｉ）対照治療プロトコルと比較して、治療された患者においてＯＳまたはＰＦＳが増加することを意味する。生存は、治療の開始後または癌の初期診断後にモニタリングされる。
【００３０】
本発明において、任意の適切な方法または経路を用いて本発明のラムシルマブを投与することができるが、静脈内（ｉｖ）投与が好ましい経路である。しかしながら、本発明はいかなる特定の投与方法または投与経路にも限定されるものではないことが強調されなければならない。
【００３１】
限定されないがラムシルマブを含む抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、治療の目的で患者に使用される場合、好ましくは医薬組成物として製剤化される。そのような医薬組成物およびそれを調製するためのプロセスは、当該技術分野において周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｇｅｎｎａｒｏ  Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，１９９５）を参照されたい。
【００３２】
ＶＥＧＦ−Ｄは、当該技術分野において既知の技術によって患者の血液から採取することができる。ＶＥＧＦのレベルは、本明細書に記載されるように測定される。血清および血漿は、当該技術分野において既知の方法によって得ることができる。ＶＥＧＦ−Ｄのレベルは、ラムシルマブによる治療効果を予測するかまたはそれを示すことができる。
【００３３】
別段の記載がない限り、「抗体」という用語は、ジスルフィド結合によって相互接続された２つの重鎖（ＨＣ）および２つの軽鎖（ＬＣ）を含む免疫グロブリン分子を指す。各鎖のアミノ末端部分は、その中に含まれる相補性決定領域（ＣＤＲ）を介した抗原認識を主に担う約１００〜約１１０個のアミノ酸からなる可変部を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主に担う定常領域を定義する。
【００３４】
本明細書で使用する場合、「軽鎖可変領域」または「ＬＣＶＲ」という用語は、ＣＤＲおよびフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含む抗体分子の軽鎖の一部を指す。
【００３５】
本明細書で使用する場合、「重鎖可変領域」「ＨＣＶＲ」という用語は、ＣＤＲおよびＦＲのアミノ酸配列を含む抗体分子の重鎖の一部を指す。
【００３６】
本明細書に記載される抗体は、哺乳動物細胞において容易に産生され得、その非限定的な例として、ＣＨＯ、ＮＳ０、ＨＥＫ２９３またはＣＯＳ細胞が挙げられる。宿主細胞は、当該技術分野において周知の技術を使用して培養される。これに関連して、適切な宿主細胞は、最適な所定のＨＣ：ＬＣベクター比、またはＨＣ（重鎖）およびＬＣ（軽鎖）の両方をコードする単一のベクター系を使用して、抗体を分泌するための発現系で一過性または安定にトランスフェクトすることができる。対象となるポリヌクレオチド配列（例えば、抗体のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドおよび発現制御配列）を含むベクターは、細胞宿主の種類に応じて異なり得る周知の方法によって宿主細胞に導入され得る。抗体が分泌された清澄化培地は、多くの一般的に使用される技術のうちのいずれかを使用して精製され得る。タンパク質精製の種々の方法が用いられてもよく、そのような方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８２：８３−８９（１９９０）およびＳｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＮＹ（１９９４）に記載される。いくつかの例において、培地は、適合性のある緩衝液で平衡化されたカラムに都合よく適用され得る。カラムは、非特異的結合成分を除去するために洗浄され得る。結合した抗体は、例えばｐＨ勾配によって溶出され得る。抗体画分は、紫外線吸光度またはＳＤＳ−ＰＡＧＥ等によって検出され得、次いで、プールされてもよい。意図する使用に応じて、さらなる精製は任意選択的である。抗体は、一般的な技術を使用して濃縮および／または滅菌濾過され得る。可溶性凝集体および多量体は、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、マルチモーダル、またはヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む一般的な技術によって効果的に除去され得る。これらのクロマトグラフィーステップ後の抗体の純度は、典型的には、９５％を超える。生成物は、−７０℃ですぐに冷凍されてもよく、または凍結乾燥されてもよい。
【００３７】
本開示は、治療を必要とする患者において転移性結腸直腸癌を治療する方法であって、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定することと、その後、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む方法を提供する。
【００３８】
本開示は、治療を必要とする患者において転移性結腸直腸癌を治療する方法であって、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定することと、その後、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む方法を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。本開示は、治療を必要とする患者において転移性結腸直腸癌を治療する方法であって、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定することと、その後、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む方法を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とをさらに含む。本開示は、治療を必要とする患者において転移性結腸直腸癌を治療する方法であって、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定することと、その後、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む方法を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体はラムシルマブである。
【００３９】
本開示は、治療を必要とする患者において転移性結腸直腸癌を治療する方法であって、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定することと、その後、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む方法を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与される。
【００４０】
本開示は、治療を必要とする患者において転移性結腸直腸癌を治療する方法であって、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定することと、その後、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む方法を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌである場合に投与される。
【００４１】
本開示は、治療を必要とする患者において転移性結腸直腸癌を治療する方法であって、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定することと、その後、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む方法を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与される。
【００４２】
本開示は、治療を必要とする患者において転移性結腸直腸癌を治療する方法であって、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定することと、その後、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む方法を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、生物学的試料は、患者由来の血清または患者由来の血漿を含み、任意選択的に、生物学的試料は、ヘパリンまたはエチレンジアミン四酢酸をさらに含む。
【００４３】
本開示は、治療を必要とする患者において転移性結腸直腸癌を治療する方法であって、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定することと、その後、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む方法を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、２週間毎に８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００４４】
本開示は、治療を必要とする患者において転移性結腸直腸癌を治療する方法であって、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定することと、その後、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む方法を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定される。
【００４５】
本開示は、治療を必要とする患者において転移性結腸直腸癌を治療する方法であって、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定することと、その後、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む方法を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含む。
【００４６】
本開示は、治療を必要とする患者において転移性結腸直腸癌を治療する方法であって、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定することと、その後、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む方法を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含み、イムノアッセイは、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である捕捉抗体および／またはマウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である検出抗体をさらに含む。
【００４７】
本開示は、治療を必要とする患者において転移性結腸直腸癌を治療する方法であって、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定することと、その後、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む方法を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含み、イムノアッセイは、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である捕捉抗体と、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である検出抗体とをさらに含み、捕捉抗体はビオチンで標識され、検出抗体はルテニウムまたは西洋ワサビペルオキシドで標識される。
【００４８】
本開示は、治療を必要とする患者において転移性結腸直腸癌を治療する方法であって、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定することと、その後、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む方法を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、患者は以前にベバシズマブで治療されている。
【００４９】
本開示は、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体をそれを必要とする患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法を提供するが、但し、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定する試験の結果を受け取った後に、治療のために患者が選択されるものとする。
【００５０】
本開示は、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体をそれを必要とする患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法を提供するが、但し、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定する試験の結果を受け取った後に、治療のために患者が選択されるものとし、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。本開示は、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体をそれを必要とする患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法を提供するが、但し、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定する試験の結果を受け取った後に、治療のために患者が選択されるものとし、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とをさらに含む。本開示は、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体をそれを必要とする患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法を提供するが、但し、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定する試験の結果を受け取った後に、治療のために患者が選択されるものとし、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体はラムシルマブである。
【００５１】
本開示は、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体をそれを必要とする患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法を提供するが、但し、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定する試験の結果を受け取った後に、治療のために患者が選択されるものとし、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与される。
【００５２】
本開示は、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体をそれを必要とする患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法を提供するが、但し、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定する試験の結果を受け取った後に、治療のために患者が選択されるものとし、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌである場合に投与される。
【００５３】
本開示は、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体をそれを必要とする患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法を提供するが、但し、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定する試験の結果を受け取った後に、治療のために患者が選択されるものとし、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与される。
【００５４】
本開示は、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体をそれを必要とする患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法を提供するが、但し、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定する試験の結果を受け取った後に、治療のために患者が選択されるものとし、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、生物学的試料は、患者由来の血清または患者由来の血漿を含み、任意選択的に、生物学的試料は、ヘパリンまたはエチレンジアミン四酢酸をさらに含む。
【００５５】
本開示は、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体をそれを必要とする患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法を提供するが、但し、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定する試験の結果を受け取った後に、治療のために患者が選択されるものとし、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、２週間毎に８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００５６】
本開示は、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体をそれを必要とする患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法を提供するが、但し、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定する試験の結果を受け取った後に、治療のために患者が選択されるものとし、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定される。
【００５７】
本開示は、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体をそれを必要とする患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法を提供するが、但し、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定する試験の結果を受け取った後に、治療のために患者が選択されるものとし、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含む。
【００５８】
本開示は、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体をそれを必要とする患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法を提供するが、但し、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定する試験の結果を受け取った後に、治療のために患者が選択されるものとし、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含み、イムノアッセイは、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である捕捉抗体および／またはマウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である検出抗体をさらに含む。
【００５９】
本開示は、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体をそれを必要とする患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法を提供するが、但し、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定する試験の結果を受け取った後に、治療のために患者が選択されるものとし、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含み、イムノアッセイは、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である捕捉抗体と、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である検出抗体とをさらに含み、捕捉抗体はビオチンで標識され、検出抗体はルテニウムまたは西洋ワサビペルオキシドで標識される。
【００６０】
本開示は、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体をそれを必要とする患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法を提供するが、但し、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定する試験の結果を受け取った後に、治療のために患者が選択されるものとし、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、患者は以前にベバシズマブで治療されている。
【００６１】
本開示は、ヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の存在について患者由来の生物学的試料を試験することを含む、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を用いた治療のために転移性結腸直腸癌を有する患者を同定する方法を提供し、生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、患者は抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を用いた治療に適格である。
【００６２】
本開示は、ヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の存在について患者由来の生物学的試料を試験することを含む、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を用いた治療のために転移性結腸直腸癌を有する患者を同定する方法を提供し、生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、患者は抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を用いた治療に適格であり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。本開示は、ヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の存在について患者由来の生物学的試料を試験することを含む、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を用いた治療のために転移性結腸直腸癌を有する患者を同定する方法を提供し、生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、患者は抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を用いた治療に適格であり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とをさらに含む。本開示は、ヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の存在について患者由来の生物学的試料を試験することを含む、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を用いた治療のために転移性結腸直腸癌を有する患者を同定する方法を提供し、生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、患者は抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を用いた治療に適格であり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体はラムシルマブである。
【００６３】
本開示は、ヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の存在について患者由来の生物学的試料を試験することを含む、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を用いた治療のために転移性結腸直腸癌を有する患者を同定する方法を提供し、生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、患者は抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を用いた治療に適格であり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与される。
【００６４】
本開示は、ヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の存在について患者由来の生物学的試料を試験することを含む、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を用いた治療のために転移性結腸直腸癌を有する患者を同定する方法を提供し、生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、患者は抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を用いた治療に適格であり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌである場合に投与される。
【００６５】
本開示は、ヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の存在について患者由来の生物学的試料を試験することを含む、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を用いた治療のために転移性結腸直腸癌を有する患者を同定する方法を提供し、生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、患者は抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を用いた治療に適格であり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与される。
【００６６】
本開示は、ヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の存在について患者由来の生物学的試料を試験することを含む、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を用いた治療のために転移性結腸直腸癌を有する患者を同定する方法を提供し、生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、患者は抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を用いた治療に適格であり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、生物学的試料は、患者由来の血清または患者由来の血漿を含み、任意選択的に、生物学的試料は、ヘパリンまたはエチレンジアミン四酢酸をさらに含む。
【００６７】
本開示は、ヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の存在について患者由来の生物学的試料を試験することを含む、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を用いた治療のために転移性結腸直腸癌を有する患者を同定する方法を提供し、生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、患者は抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を用いた治療に適格であり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、２週間毎に８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００６８】
本開示は、ヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の存在について患者由来の生物学的試料を試験することを含む、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を用いた治療のために転移性結腸直腸癌を有する患者を同定する方法を提供し、生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、患者は抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を用いた治療に適格であり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定される。
【００６９】
本開示は、ヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の存在について患者由来の生物学的試料を試験することを含む、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を用いた治療のために転移性結腸直腸癌を有する患者を同定する方法を提供し、生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、患者は抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を用いた治療に適格であり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含む。
【００７０】
本開示は、ヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の存在について患者由来の生物学的試料を試験することを含む、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を用いた治療のために転移性結腸直腸癌を有する患者を同定する方法を提供し、生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、患者は抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を用いた治療に適格であり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含み、イムノアッセイは、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である捕捉抗体および／またはマウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である検出抗体をさらに含む。
【００７１】
本開示は、ヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の存在について患者由来の生物学的試料を試験することを含む、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を用いた治療のために転移性結腸直腸癌を有する患者を同定する方法を提供し、生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、患者は抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を用いた治療に適格であり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含み、イムノアッセイは、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である捕捉抗体と、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である検出抗体とをさらに含み、捕捉抗体はビオチンで標識され、検出抗体はルテニウムまたは西洋ワサビペルオキシドで標識される。
【００７２】
本開示は、ヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の存在について患者由来の生物学的試料を試験することを含む、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を用いた治療のために転移性結腸直腸癌を有する患者を同定する方法を提供し、生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、患者は抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を用いた治療に適格であり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、患者は以前にベバシズマブで治療されている。
【００７３】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有し、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である患者を選択することと、ｂ）治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌を治療するための治療計画を提供する。
【００７４】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有し、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である患者を選択することと、ｂ）治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌を治療するための治療計画を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。本開示は、転移性結腸直腸癌を有し、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である患者を選択することと、ｂ）治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌を治療するための治療計画を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とをさらに含む。本開示は、転移性結腸直腸癌を有し、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である患者を選択することと、ｂ）治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌を治療するための治療計画を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体はラムシルマブである。
【００７５】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有し、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である患者を選択することと、ｂ）治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌を治療するための治療計画を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与される。
【００７６】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有し、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である患者を選択することと、ｂ）治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌を治療するための治療計画を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌである場合に投与される。
【００７７】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有し、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である患者を選択することと、ｂ）治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌を治療するための治療計画を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与される。
【００７８】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有し、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である患者を選択することと、ｂ）治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌を治療するための治療計画を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、生物学的試料は、患者由来の血清または患者由来の血漿を含み、任意選択的に、生物学的試料は、ヘパリンまたはエチレンジアミン四酢酸をさらに含む。
【００７９】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有し、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である患者を選択することと、ｂ）治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌を治療するための治療計画を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、２週間毎に８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００８０】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有し、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である患者を選択することと、ｂ）治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌を治療するための治療計画を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定される。
【００８１】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有し、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である患者を選択することと、ｂ）治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌を治療するための治療計画を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含む。
【００８２】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有し、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である患者を選択することと、ｂ）治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌を治療するための治療計画を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含み、イムノアッセイは、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である捕捉抗体および／またはマウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である検出抗体をさらに含む。
【００８３】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有し、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である患者を選択することと、ｂ）治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌を治療するための治療計画を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含み、イムノアッセイは、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である捕捉抗体と、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である検出抗体とをさらに含み、捕捉抗体はビオチンで標識され、検出抗体はルテニウムまたは西洋ワサビペルオキシドで標識される。
【００８４】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有し、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である患者を選択することと、ｂ）治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌を治療するための治療計画を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、患者は以前にベバシズマブで治療されている。
【００８５】
本開示は、（ａ）患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定するためにイムノアッセイを行うことと、（ｂ）生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄの量を決定することと、（ｃ）生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌の治療に使用するための抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を提供する。
【００８６】
本開示は、（ａ）患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定するためにイムノアッセイを行うことと、（ｂ）生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄの量を決定することと、（ｃ）生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌の治療に使用するための抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。（ａ）患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定するためにイムノアッセイを行うことと、（ｂ）生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄの量を決定することと、（ｃ）生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌の治療に使用するための抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体であって、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とをさらに含む、抗体。（ａ）患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定するためにイムノアッセイを行うことと、（ｂ）生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄの量を決定することと、（ｃ）生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌の治療に使用するための抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体であって、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体はラムシルマブである、抗体。
【００８７】
本開示は、（ａ）患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定するためにイムノアッセイを行うことと、（ｂ）生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄの量を決定することと、（ｃ）生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌の治療に使用するための抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与される。
【００８８】
本開示は、（ａ）患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定するためにイムノアッセイを行うことと、（ｂ）生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄの量を決定することと、（ｃ）生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌の治療に使用するための抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌである場合に投与される。
【００８９】
本開示は、（ａ）患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定するためにイムノアッセイを行うことと、（ｂ）生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄの量を決定することと、（ｃ）生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌の治療に使用するための抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与される。
【００９０】
本開示は、（ａ）患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定するためにイムノアッセイを行うことと、（ｂ）生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄの量を決定することと、（ｃ）生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌の治療に使用するための抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、生物学的試料は、患者由来の血清または患者由来の血漿を含み、任意選択的に、生物学的試料は、ヘパリンまたはエチレンジアミン四酢酸をさらに含む。
【００９１】
本開示は、（ａ）患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定するためにイムノアッセイを行うことと、（ｂ）生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄの量を決定することと、（ｃ）生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌の治療に使用するための抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、２週間毎に８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００９２】
本開示は、（ａ）患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定するためにイムノアッセイを行うことと、（ｂ）生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄの量を決定することと、（ｃ）生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌の治療に使用するための抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定される。
【００９３】
本開示は、（ａ）患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定するためにイムノアッセイを行うことと、（ｂ）生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄの量を決定することと、（ｃ）生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌の治療に使用するための抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含む。
【００９４】
本開示は、（ａ）患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定するためにイムノアッセイを行うことと、（ｂ）生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄの量を決定することと、（ｃ）生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌の治療に使用するための抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含み、イムノアッセイは、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である捕捉抗体および／またはマウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である検出抗体をさらに含む。
【００９５】
本開示は、（ａ）患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定するためにイムノアッセイを行うことと、（ｂ）生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄの量を決定することと、（ｃ）生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌の治療に使用するための抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含み、イムノアッセイは、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である捕捉抗体と、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である検出抗体とをさらに含み、捕捉抗体はビオチンで標識され、検出抗体はルテニウムまたは西洋ワサビペルオキシドで標識される。
【００９６】
本開示は、（ａ）患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量を測定するためにイムノアッセイを行うことと、（ｂ）生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄの量を決定することと、（ｃ）生物学的試料中にヒトＶＥＧＦ−Ｄが存在する場合、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体を患者に投与することと、を含む、転移性結腸直腸癌の治療に使用するための抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体を提供し、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、患者は以前にベバシズマブで治療されている。
【００９７】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有する患者の治療に使用するための、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体と１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物を提供し、患者由来の生物学的試料がヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルについて測定され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ、好ましくは約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌ、またはより好ましくは約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与される。
【００９８】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有する患者の治療に使用するための、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体と１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物を提供し、患者由来の生物学的試料がヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルについて測定され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ、好ましくは約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌ、またはより好ましくは約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。本開示は、転移性結腸直腸癌を有する患者の治療に使用するための、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体と１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物を提供し、患者由来の生物学的試料がヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルについて測定され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ、好ましくは約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌ、またはより好ましくは約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とをさらに含む。転移性結腸直腸癌を有する患者の治療に使用するための、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体と１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物であって、患者由来の生物学的試料がヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルについて測定され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ、好ましくは約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌ、またはより好ましくは約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体はラムシルマブである。
【００９９】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有する患者の治療に使用するための、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体と１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物を提供し、患者由来の生物学的試料がヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルについて測定され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ、好ましくは約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌ、またはより好ましくは約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、生物学的試料は、患者由来の血清または患者由来の血漿を含み、任意選択的に、生物学的試料は、ヘパリンまたはエチレンジアミン四酢酸をさらに含む。
【０１００】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有する患者の治療に使用するための、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体と１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物を提供し、患者由来の生物学的試料がヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルについて測定され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ、好ましくは約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌ、またはより好ましくは約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、２週間毎に８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【０１０１】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有する患者の治療に使用するための、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体と１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物を提供し、患者由来の生物学的試料がヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルについて測定され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ、好ましくは約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌ、またはより好ましくは約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定される。
【０１０２】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有する患者の治療に使用するための、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体と１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物を提供し、患者由来の生物学的試料がヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルについて測定され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ、好ましくは約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌ、またはより好ましくは約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含む。
【０１０３】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有する患者の治療に使用するための、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体と１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物を提供し、患者由来の生物学的試料がヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルについて測定され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ、好ましくは約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌ、またはより好ましくは約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含み、イムノアッセイは、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である捕捉抗体および／またはマウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である検出抗体をさらに含む。
【０１０４】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有する患者の治療に使用するための、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体と１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物を提供し、患者由来の生物学的試料がヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルについて測定され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ、好ましくは約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌ、またはより好ましくは約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、任意選択的に、イムノアッセイは、ヒトＶＥＧＦ−Ｄまたは組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄを含む標準を含み、イムノアッセイは、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である捕捉抗体と、マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体である検出抗体とをさらに含み、捕捉抗体はビオチンで標識され、検出抗体はルテニウムまたは西洋ワサビペルオキシドで標識される。
【０１０５】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有する患者の治療に使用するための、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体と１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物を提供し、患者由来の生物学的試料がヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルについて測定され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ、好ましくは約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌ、またはより好ましくは約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか、（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むか、または（ｃ）ラムシルマブであり、患者は以前にベバシズマブで治療されている。
【０１０６】
本開示は、治療有効量の抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体をそれを必要とする患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法を提供するが、但し、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）の量の測定結果を受け取った後に、治療のために患者が選択されるものとし、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、イムノアッセイを用いて測定され、イムノアッセイは、配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１０のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む捕捉抗体、および配列番号１１のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１２のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む検出抗体を含む。
【０１０７】
本開示は、治療有効量のラムシルミルブをそれを必要とする患者に投与することを含む、転移性結腸直腸癌を治療する方法を提供するが、但し、患者由来の生物学的試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ以上である場合、治療のために患者が選択されるものとする。
【０１０８】
本開示は、転移性結腸直腸癌を有する患者の治療に使用するための、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２（配列番号５）抗体と１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物を提供し、患者由来の生物学的試料がヒトＶＥＧＦ−Ｄ（配列番号６）のレベルについて測定され、抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体は、生物学的試料中のＶＥＧＦ−Ｄのレベルが約７６ｐｇ／ｍｌ、好ましくは約７６ｐｇ／ｍｌ〜約４００ｐｇ／ｍｌ、またはより好ましくは約１１５ｐｇ／ｍｌ以上である場合に投与され、ヒトＶＥＧＦ−Ｄの量は、捕捉抗体および検出抗体を含むイムノアッセイを用いて測定され、捕捉抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１０のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含み、検出抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１２のアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む。
【０１０９】
ベバシズマブ、オキサリプラチン、およびフルオロピリミジンとの第一選択併用療法中または併用療法後に進行した転移性結腸直腸癌患者における、イリノテカン、フォリン酸、および５−フルオロウラシル（ＦＯＬＦＩＲＩ）＋ラムシルマブまたはプラセボのランダム化二重盲検多施設第３相試験
試験デザイン
試験ＮＣＴ０１１８３７８０は、ベバシズマブ、オキサリプラチン、およびフルオロピリミジンとの第一選択併用療法中または併用療法後に進行した転移性結腸直腸癌患者における、イリノテカン、フォリン酸、および５−フルオロウラシル（ＦＯＬＦＩＲＩ）＋ラムシルマブ（ＩＭＣ−１１２１Ｂ）製剤またはプラセボの多施設ランダム化二重盲検第３相試験である。
【０１１０】
全適格基準を満たす約１０５０人の登録患者を、２つの群にランダム化する。Ａ群の患者にはＦＯＬＦＩＲＩ＋プラセボを投与し（以下、プラセボ群と称される）、Ｂ群の患者にはＦＯＬＦＩＲＩ＋ラムシルマブ（ＩＭＣ−１１２１Ｂ）製剤（ＤＰ）を投与する（以下、ラムシルマブ群と称される）。患者は、１４日毎にＦＯＬＦＩＲＩ＋プラセボを投与されるか、または１４日毎にＦＯＬＦＩＲＩ＋ラムシルマブＤＰを投与される。ランダム化において、患者は、地理的な領域（北米対欧州対他の全地域）、ＫＲＡＳ状態（変異型対野生型）、および第一選択治療開始後の疾患進行までの期間（＜６ヶ月対＞６ヶ月）によって層別化される。ラムシルマブＤＰは、無菌の、防腐剤を含まない輸液であり、１０ｍｇ／ｍＬ（５００ｍｇ／５０ｍＬバイアル）の濃度で水溶液に製剤化され、２週間毎に８ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内（ＩＶ）輸液として投与される。輸液は約６０分で送達される。注入速度は２５ｍｇ／分を超えない。プラセボは、５０ｍＬバイアルで供給される、無菌の、防腐剤を含まない輸液である。投与されるプラセボの体積は、あたかもそれが１０ｍｇ／ｍＬで製剤化された活性生成物であるかのように算出される（２週間毎に８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される）。イリノテカン、フォリン酸（ＦＡ）、および５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）の市販の製剤が使用され、静脈内投与される。各サイクルの１日目、治験薬の注入が終了した１時間後に、９０分かけて１８０ｍｇ／ｍ２のイリノテカンを静脈内投与し、続いて、各サイクルの１日目に、１２０分かけて４００ｍｇ／ｍ２のＦＡを静脈内投与し（あるいは、ＦＡを［別々の注入ラインを介して］イリノテカンと同時に投与してもよい）、続いて、各サイクルの１日目のＦＡ注入が完了した直後に、２〜４分間かけて４００ｍｇ／ｍ２のボーラスで５−ＦＵを静脈内投与し、続いて、各サイクルの１日目および２日目に、４６〜４８時間かけて（連続的に）２４００ｍｇ／ｍ２の５−ＦＵを静脈内投与する。
【０１１１】
治療は、疾患の進行、許容できない毒性の発現、患者の同意の不履行もしくは取り消し、または治験責任医師の決定があるまで継続する。疾患反応の放射線学的評価は、治験薬の初回投与から疾患進行まで、３６週にわたって約６週毎（±３日）、その後１２週毎（±３日）に行われる。治験薬の中止後、患者が生存している限り、または試験が完了するまで、全ての患者を生存について定期的な間隔で（３ヶ月毎［±１４日］）追跡調査する。
【０１１２】
一次有効性分析は、全てのランダム化された患者からなる、治療意図集団において行われる。一次分析は、地理的な領域（北米対欧州他の全領域）、ＫＲＡＳ状態（変異型対野生型）、および第一選択治療開始後の疾患進行までの期間（＜６ヶ月対≧６ヶ月）によって層別化されたログランク検定のｐ値を用いて、２つの治療群（ラムシルマブＤＰを用いた場合対用いない場合）間のＯＳを比較する。２つの治療群についての生存曲線の推定値は、カプラン・マイヤー法を用いて求められる。治療法を比較するための層別化したコックス回帰モデルを実行して、ＨＲおよびその９５％信頼限界を求める。全生存期間は、ランダム化の日から任意の原因による死亡日までの期間として定義される。無増悪生存期間は、ログランク検定を用いて分析され、地理的な領域（北米対欧州他の全領域）、ＫＲＡＳ状態（変異型対野生型）、および第一選択治療開始後の疾患進行までの期間（＜６ヶ月対≧６ヶ月）によって層別化される。層別化ＨＲおよびその９５％信頼限界は、層別化因子としての第一選択治療を開始した後の地理的な地域、ＫＲＡＳ状態、および疾患進行までの期間を用いた比例ハザードモデル（Ｃｏｘモデル）から推定される。２つの治療群についての生存曲線の推定値は、カプラン・マイヤー法を用いて求められる。無増悪生存期間は、ランダム化の日から、（ＲＥＣＩＳＴ  ｖ．１．１によって）客観的に決定される病勢進行の日または任意の原因による死亡日までの期間のいずれか早い方として定義される。各治療群におけるＯＲＲは、層別変数に対して調整されたコクラン・マンテル・ヘンツェル検定を用いて比較される。正確な信頼限界（信頼区間：９５％）が決定される。ＯＲＲ（ＲＥＣＩＳＴ  ｖ．１．１による）は、部分奏効または完全奏効の最良総合効果を示した患者の割合として定義される。
【０１１３】
患者から採取した血漿、全血、および保存された腫瘍組織試料に対してトランスレーショナルリサーチを行う。試料は、ＣＲＣ、ラムシルマブもしくはＦＯＬＦＩＲＩの作用機序、および／または血管新生に関連する経路の研究に使用されてもよく、また関連する研究方法または診断ツールもしくはアッセイ（複数可）の検証にも使用され得る。
【０１１４】
臨床試験ＮＣＴ０１１８３７８０に関するバイオマーカーの統計分析
バイオマーカーと臨床転帰との間の相関研究が行われる。アダプティブデザイン（Ｆｒｅｉｄｌｉｎ  ａｎｄ  Ｓｉｍｏｎ  ２００５に基づく）は、探索的研究にさらなる統計的ロバスト性を与えるために使用される。試験層別化因子によってセットのバランスをとるための層別化および治療割り付けを用いて、試験集団をマーカー探索セット（ＭＥ）（ｎは約３５０人の患者）およびマーカー検証（ＭＣ）セット（ｎは約７００人の患者）の２つのセットに１：２の割合でランダムかつ前向きに分割する。
【０１１５】
どの患者がラムシルマブから最も利益を得る可能性があるかを予測するバイナリ分類子を識別する試みにおいて、ＭＥセットからのベースラインアッセイ結果を臨床転帰とともに分析する。この分析の間、治験依頼者は、ＭＣセットの患者からのアッセイデータを入手することはできない。潜在的な分類子が識別されると、この分類子に関してＭＣセットの前向き統計解析計画書（ＳＡＰ）が作成され、治験依頼者によってロックされる。この計画書は、ＭＣセット内の第１種の誤りの確率が制御されるためのものである。
【０１１６】
ＳＡＰに詳述される分析の主要目的は、１１５ｐｇ／ｍＬ以上、および１１５ｐｇ／ｍＬ未満の循環血管内皮増殖因子Ｄ（ＶＥＧＦ−Ｄ）レベルを有するＲＡＩＳＥ試験からの患者のサブグループ（ＭＣコホートおよびＭＥ＋ＭＣコホートを合わせた）においてラムシルマブの有効性を評価することである。ＭＣセットの患者および完全トランスレーショナルリサーチ（ＴＲ）集団（ＭＥ＋ＭＣ）においてＶＥＧＦ−Ｄレベルと有効性転帰との見かけの関係を調べるために、ＭＥセットの患者の結果に基づいてＶＥＧＦ−Ｄのカットオフ値を定義する。ＳＴＥＰＰプロット、バイオマーカー値の範囲にわたる二分化のための診断プロット、および治療意図（ＩＴＴ）セットの患者とＭＥセットの患者との間の有効性転帰の相違を含む統計的手法からのＯＳおよびＰＦＳの両方の情報を包括的、経験的に考慮して、ＶＥＧＦ−Ｄのカットポイントとして０．１１５ｎｇ／ｍＬ（１１５ｐｇ／ｍＬに相当）を選択する。血漿タンパク質レベルは連続変数として報告される。試料中のタンパク質レベルがアッセイによって定量可能なレベルを下回る場合、その試料についてＢＱＬ（定量限界未満）という結果が報告される。
【０１１７】
有効性分析：
ＶＥＧＦ−Ｄレベルとラムシルマブによって観察された治療効果との関連性
ＩＴＴ患者集団では、ＶＥＧＦ−Ｄレベルに関係なく、ラムシルマブ群のＯＳ中央値は１３．３ヶ月であり、プラセボ群のＯＳ中央値は１１．７ヶ月である。層別化ＨＲは０．８４である（９５％ＣＩ：０．７３、０．９８；ｐ＝０．０２１９）。ラムシルマブ群のＰＦＳ中央値は５．７ヶ月であり、プラセボ群のＰＦＳ中央値は４．５ヶ月である。層別化ＨＲは０．７９である（９５％ＣＩ：０．７９、０．９０；ｐ＝０．０００５）。
【０１１８】
ＭＥおよびＭＣを合わせたコホート分析：
ＭＥおよびＭＣを合わせた患者集団（ＩＴＴ集団の８２％）において、ラムシルマブ群のＯＳ中央値は１３．３ヶ月であり、プラセボ群のＯＳ中央値は１２．０ヶ月である。層別化ＨＲは０．８９である（９５％ＣＩ：０．７６、１．０４；ｐ＝０．１５３８）。さらに、ＭＥおよびＭＣを合わせた患者集団において、ラムシルマブ群のＰＦＳ中央値は５．７ヶ月であり、プラセボ群のＰＦＳ中央値は４．８ヶ月である。層別化ＨＲは０．８９である（９５％ＣＩ：０．６９、０．９２；ｐ＝０．００２１）。
【０１１９】
予め指定されたカットポイント１１５ｐｇ／ｍＬでのＭＥおよびＭＣコホート分析：
予め指定されたカットポイントである１１５ｐｇ／ｍｌを使用した分析により、患者の予後不良がＶＥＧＦ−Ｄレベルの上昇と関連していたことが明らかになる。プラセボ群のＯＳまたはＰＦＳを評価した場合、１１５ｐｇ／ｍＬ以上のＶＥＧＦ−Ｄレベルを有する患者（ＯＳ中央値＝１１．５３ヶ月）は、１１５ｐｇ／ｍＬ未満のレベルを有する患者（ＯＳ中央値＝１３．０７か月）よりも不良な予後を有する。ＰＦＳについても同様に、１１５ｐｇ／ｍＬ以上のＶＥＧＦ−Ｄレベルを有する患者（ＰＦＳ中央値＝４．２ヶ月）は、１１５ｐｇ／ｍＬ未満のレベルを有する患者（ＰＦＳ中央値＝５．６１ヶ月）よりも不良な予後を有する。これらの結果は、ＶＥＧＦ−ＤがｍＣＲＣ患者におけるＯＳおよびＰＦＳの予後因子であることを示している。
【０１２０】
ラムシルマブ治療の利益を、１１５ｐｇ／ｍＬのＶＥＧＦ−Ｄという予め指定されたカットポイントを使用して、ＭＥおよびＭＣを合わせた患者集団においてさらに評価する。以下の表２および表３に示す結果は、ラムシルマブがＯＳおよびＰＦＳの両方で１１５ｐｇ／ｍＬ以上のＶＥＧＦ−Ｄレベルを有する患者において高い利益を有することを示す。ＭＣセット単独の結果も同様の結果を示し、ＭＥ分析とは無関係にＶＥＧＦ−Ｄの関係を裏付けている。
【表２】
2019533024.tif 000003
【表３】
2019533024.tif 000004
【０１２１】
ＶＥＧＦ−ＤレベルとＯＳおよびＰＦＳとの関係のより詳細な分析を、表４および５にそれぞれ示す。これらの表は、ＶＥＧＦ−Ｄレベルの範囲にわたる患者の治療ＨＲ（および関連する９５％信頼区間）の点推定値を示す。各ＨＲの点推定値を、中央値レベルが示されているＶＥＧＦ−Ｄレベルを有する患者の群（示されるようにＮは約２００である）のサブセット分析から算出する。スライディングウィンドウ手法を使用して、最も低いＶＥＧＦ−Ｄレベルを有する患者を最初に分析し、ＨＲを算出する。次いで、ウィンドウをわずかに高いＶＥＧＦ−Ｄレベルに向かってスライドさせる。最も低いレベルを有する患者を群から除外し、わずかに高いＶＥＧＦ−Ｄレベルを有する他の患者を群に追加し、再び分析を行う。治験で観察された全範囲のＶＥＧＦ−Ｄレベルにわたってこれを継続する。下記の表４は、ＭＥ＋ＭＣを合わせた集団（Ｎ＝８８４）におけるＶＥＧＦ−Ｄデータを有するＴＲ集団からの亜集団による全生存分析のハザード比推定値を示す（ラムシルマブ＋ＦＯＬＦＩＲＩ対プラセボ＋ＦＯＬＦＩＲＩ）。１を超えるハザード比は、プラセボ＋ＦＯＬＦＩＲＩと比較してラムシルマブ＋ＦＯＬＦＩＲＩの方がハザードが高いことを示す。
【表４】
2019533024.tif 000005
【０１２２】
下記の表５は、ＭＥ＋ＭＣを合わせた集団（Ｎ＝８８４）におけるＶＥＧＦ−Ｄデータを有するＴＲ集団からの亜集団による無増悪生存分析のハザード比推定値を示す（ラムシルマブ＋ＦＯＬＦＩＲＩ対プラセボ＋ＦＯＬＦＩＲＩ）。１を超えるハザード比は、プラセボ＋ＦＯＬＦＩＲＩと比較してラムシルマブ＋ＦＯＬＦＩＲＩの方がハザードが高いことを示す。
【表５】
2019533024.tif 000006
【０１２３】
下記の表６および表７に示されるように、７６ｐｇ／ｍｌのＶＥＧＦ−Ｄレベルもまた、ラムシルマブ治療からより大きな利益を受ける患者を同定するのに有用な適切な値であり得る。
【表６】
2019533024.tif 000007
【表７】
2019533024.tif 000008
【０１２４】
ＶＥＧＦ−Ｄアッセイ
この試験の目的は、Ｍｅｓｏ  ＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ（ＭＳＤ−ＥＣＬ）プラットフォームを利用して、ヒト血液試料由来の試料中のヒトＶＥＧＦ−Ｄのレベルを評価することである。以下のＭＳＤ−ＥＣＬ法は、規制に準拠した方法で臨床試験からのヒト血清試料、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）血漿試料、およびヘパリン血漿試料中のＶＥＧＦ−Ｄを決定するための妥当性が確認されている。この方法の妥当性は、最小希釈倍率（ＭＲＤ）、検量線の真度および精度、測定内および測定間の精度、定量範囲の下限（ＬＬＯＱ）、希釈直線性、正常ヒト血清（ＮＨＳ）試料の基準範囲、添加回収、ならびに短期、長期および凍結／融解安定性を含む。ヒトＶＥＧＦ−Ｄ濃度を決定するための血液試料を、指定された時点で採取し、以下の免疫アッセイを用いて分析する。以下の検出抗体とともに使用されるシグナル伝達剤は、当該技術分野において既知のように変更されてもよく、またいくつかの例では、非標識捕捉抗体と置き換えられてもよい：シグナル伝達剤の非限定的な例として、ルテニウム複合体（西洋ワサビペルオキシダーゼ複合体、フィコエリトリン複合体、ビオチン複合体等）の代わりに比色または化学発光複合体の使用が挙げられる。しかしながら、そのような改変はアッセイの感度に影響を及ぼす可能性があり、その結果として、改変されたアッセイは、最良の結果のために以下に記載されるアッセイで較正されるべきである。
【０１２５】
このアッセイでは、プレート（ストレプトアビジンＭＳＤ  ＥＬＩＳＡプレート、カタログ番号Ｌ１５ＳＡ−１）を３５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液（１×ＴＢＳＴ緩衝液）で３回洗浄し、次いで２００μＬ／ウェルのブロッキング緩衝液（１％ウシ血清アルブミンを含有する１×ＴＢＳＴ緩衝液）でブロックする。ＴＢＳＴは、Ｂｏｓｔｏｎ  Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓカタログ番号ＩＢＢ−１８１Ｘ（２０Ｘ  ＴＢＳＴ）から得られる。プレートを密封し、約６００ｒｐｍに設定したＴｉｔｒａｍａｘ（商標）１０００プレートシェーカー上で、室温（ＲＴ）で約１時間インキュベートする。ブロックしたプレートを３５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄する。ウェルを、５０μＬ／ウェルのコーティング緩衝液（１×ＴＢＳＴ緩衝液＋０．１％ＢＳＡ）中の５μｇ／ｍＬのビオチン標識マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体（Ｂｉｏ−ａｎｔｉ−ＶＥＧＦ−Ｄ）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＭＡＢ２８６１）でコーティングする。あるいは、配列番号９および配列番号１０にそれぞれ示されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖を有するＩＢＡ１１１が、ＭＡＢ２８６１の代わりに使用されてもよい。プレートを密封し、約６００ｒｐｍに設定したＴｉｔｒａｍａｘ（商標）１０００プレートシェーカー上で、ＲＴで約１時間インキュベートする。バイオ抗ＶＥＧＦ−Ｄインキュベーションの間、全ての血漿試料を約１４，０００ｒｐｍで１０分間回転させ、必要であれば血清試料を回転させる。
【０１２６】
インキュベーション終了前に、希釈緩衝液（アッセイ緩衝液＋０．１％ＢＳＡ＋１００μｇ／ｍＬヘテロ親和性ブロッキング試薬１）中でＶＥＧＦ−Ｄ標準を希釈することにより、検量線の各点につき２回の複製に適した体積で検量線を作成する。組換えヒトＶＥＧＦ−Ｄタンパク質を標準として使用する（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、６２２−ＶＤ−０２５）。検量線は、３００ｎｇ／ｍＬで始まって、合計１１回の希釈のために１対３（１部の標準、２部の希釈緩衝液）に希釈する、１２段階の希釈曲線として作成され、１２回目の希釈はゼロＶＥＧＦ−Ｄ点である。対照は、血清中で５倍に前希釈される。試料および前希釈した対照を希釈緩衝液中で２倍に希釈する。２つの５０μＬ／ウェル複製に十分な体積を調製する。プレートに添加する前に試料をボルテックスする。インキュベーションが完了した後、プレートを３５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄する。別段の指定がない限り、ブロックされ、かつバイオ抗ＶＥＧＦ−Ｄでコーティングされたプレートの複製ウェルに、５０μＬの標準、希釈対照および希釈試料を添加する。プレートを密封し、約６００ｒｐｍに設定したＴｉｔｒａｍａｘ１０００プレートシェーカー上で、ＲＴで約２時間インキュベートする。プレートを３５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄する。アッセイ緩衝液＋０．１％ＢＳＡ中の５０μＬの０．５μｇ／ｍＬルテニウム標識マウス抗ヒトＶＥＧＦ−Ｄ抗体（Ｒｕ−抗ＶＥＧＦ−Ｄ）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＭＡＢ２８６）を各ウェルに添加する。あるいは、配列番号１１および配列番号１２にそれぞれ示されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖を有するＩＢＡ１１２が、ＭＡＢ２８６の代わりに使用されてもよい。プレートを密封し、約６００ｒｐｍに設定したＴｉｔｒａｍａｘ１０００プレートシェーカー上で、ＲＴで約１時間インキュベートする。プレートを３５０μＬ／ウェルの洗浄緩衝液で３回洗浄する。２×ＭＳＤ  Ｒｅａｄ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｔ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号Ｒ９２ＴＣ−２）を調製し、１５０μＬを各ウェルに添加する。プレートを短時間振盪し、読み取り緩衝液を添加してから５分以内にＳＥＣＴＯＲ  Ｉｍａｇｅｒ  ６０００（６２０ｎｍ）で読み取る。
配列表
配列番号１（抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体、ＬＣＶＲ）（人工配列）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＩＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＤＮＷＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＤＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＹＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＡＫＡＦＰＰＴＦＧＧＧＴＫＶＤＩＫ
配列番号２（抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体、ＨＣＶＲ）（人工配列）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＳＳＳＳＹＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＴＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
配列番号３（抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体、ＬＣ）（人工配列）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＩＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＤＮＷＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＤＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＹＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＡＫＡＦＰＰＴＦＧＧＧＴＫＶＤＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号４（抗ヒトＶＥＧＦＲ−２抗体、ＨＣ）（人工配列）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＳＳＳＳＹＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＴＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＬＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号５（ヒトＶＥＧＦＲ−２）（ホモサピエンス）
ＭＱＳＫＶＬＬＡＶＡＬＷＬＣＶＥＴＲＡＡＳＶＧＬＰＳＶＳＬＤＬＰＲＬＳＩＱＫＤＩＬＴＩＫＡＮＴＴＬＱＩＴＣＲＧＱＲＤＬＤＷＬＷＰＮＮＱＳＧＳＥＱＲＶＥＶＴＥＣＳＤＧＬＦＣＫＴＬＴＩＰＫＶＩＧＮＤＴＧＡＹＫＣＦＹＲＥＴＤＬＡＳＶＩＹＶＹＶＱＤＹＲＳＰＦＩＡＳＶＳＤＱＨＧＶＶＹＩＴＥＮＫＮＫＴＶＶＩＰＣＬＧＳＩＳＮＬＮＶＳＬＣＡＲＹＰＥＫＲＦＶＰＤＧＮＲＩＳＷＤＳＫＫＧＦＴＩＰＳＹＭＩＳＹＡＧＭＶＦＣＥＡＫＩＮＤＥＳＹＱＳＩＭＹＩＶＶＶＶＧＹＲＩＹＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＰＦＶＡＦＧＳＧＭＥＳＬＶＥＡＴＶＧＥＲＶＲＩＰＡＫＹＬＧＹＰＰＰＥＩＫＷＹＫＮＧＩＰＬＥＳＮＨＴＩＫＡＧＨＶＬＴＩＭＥＶＳＥＲＤＴＧＮＹＴＶＩＬＴＮＰＩＳＫＥＫＱＳＨＶＶＳＬＶＶＹＶＰＰＱＩＧＥＫＳＬＩＳＰＶＤＳＹＱＹＧＴＴＱＴＬＴＣＴＶＹＡＩＰＰＰＨＨＩＨＷＹＷＱＬＥＥＥＣＡＮＥＰＳＱＡＶＳＶＴＮＰＹＰＣＥＥＷＲＳＶＥＤＦＱＧＧＮＫＩＥＶＮＫＮＱＦＡＬＩＥＧＫＮＫＴＶＳＴＬＶＩＱＡＡＮＶＳＡＬＹＫＣＥＡＶＮＫＶＧＲＧＥＲＶＩＳＦＨＶＴＲＧＰＥＩＴＬＱＰＤＭＱＰＴＥＱＥＳＶＳＬＷＣＴＡＤＲＳＴＦＥＮＬＴＷＹＫＬＧＰＱＰＬＰＩＨＶＧＥＬＰＴＰＶＣＫＮＬＤＴＬＷＫＬＮＡＴＭＦＳＮＳＴＮＤＩＬＩＭＥＬＫＮＡＳＬＱＤＱＧＤＹＶＣＬＡＱＤＲＫＴＫＫＲＨＣＶＶＲＱＬＴＶＬＥＲＶＡＰＴＩＴＧＮＬＥＮＱＴＴＳＩＧＥＳＩＥＶＳＣＴＡＳＧＮＰＰＰＱＩＭＷＦＫＤＮＥＴＬＶＥＤＳＧＩＶＬＫＤＧＮＲＮＬＴＩＲＲＶＲＫＥＤＥＧＬＹＴＣＱＡＣＳＶＬＧＣＡＫＶＥＡＦＦＩＩＥＧＡＱＥＫＴＮＬＥＩＩＩＬＶＧＴＡＶＩＡＭＦＦＷＬＬＬＶＩＩＬＲＴＶＫＲＡＮＧＧＥＬＫＴＧＹＬＳＩＶＭＤＰＤＥＬＰＬＤＥＨＣＥＲＬＰＹＤＡＳＫＷＥＦＰＲＤＲＬＫＬＧＫＰＬＧＲＧＡＦＧＱＶＩＥＡＤＡＦＧＩＤＫＴＡＴＣＲＴＶＡＶＫＭＬＫＥＧＡＴＨＳＥＨＲＡＬＭＳＥＬＫＩＬＩＨＩＧＨＨＬＮＶＶＮＬＬＧＡＣＴＫＰＧＧＰＬＭＶＩＶＥＦＣＫＦＧＮＬＳＴＹＬＲＳＫＲＮＥＦＶＰＹＫＴＫＧＡＲＦＲＱＧＫＤＹＶＧＡＩＰＶＤＬＫＲＲＬＤＳＩＴＳＳＱＳＳＡＳＳＧＦＶＥＥＫＳＬＳＤＶＥＥＥＥＡＰＥＤＬＹＫＤＦＬＴＬＥＨＬＩＣＹＳＦＱＶＡＫＧＭＥＦＬＡＳＲＫＣＩＨＲＤＬＡＡＲＮＩＬＬＳＥＫＮＶＶＫＩＣＤＦＧＬＡＲＤＩＹＫＤＰＤＹＶＲＫＧＤＡＲＬＰＬＫＷＭＡＰＥＴＩＦＤＲＶＹＴＩＱＳＤＶＷＳＦＧＶＬＬＷＥＩＦＳＬＧＡＳＰＹＰＧＶＫＩＤＥＥＦＣＲＲＬＫＥＧＴＲＭＲＡＰＤＹＴＴＰＥＭＹＱＴＭＬＤＣＷＨＧＥＰＳＱＲＰＴＦＳＥＬＶＥＨＬＧＮＬＬＱＡＮＡＱＱＤＧＫＤＹＩＶＬＰＩＳＥＴＬＳＭＥＥＤＳＧＬＳＬＰＴＳＰＶＳＣＭＥＥＥＥＶＣＤＰＫＦＨＹＤＮＴＡＧＩＳＱＹＬＱＮＳＫＲＫＳＲＰＶＳＶＫＴＦＥＤＩＰＬＥＥＰＥＶＫＶＩＰＤＤＮＱＴＤＳＧＭＶＬＡＳＥＥＬＫＴＬＥＤＲＴＫＬＳＰＳＦＧＧＭＶＰＳＫＳＲＥＳＶＡＳＥＧＳＮＱＴＳＧＹＱＳＧＹＨＳＤＤＴＤＴＴＶＹＳＳＥＥＡＥＬＬＫＬＩＥＩＧＶＱＴＧＳＴＡＱＩＬＱＰＤＳＧＴＴＬＳＳＰＰＶ
配列番号６（ヒトＶＥＧＦ−Ｄ）（ホモサピエンス）
ＭＹＲＥＷＶＶＶＮＶＦＭＭＬＹＶＱＬＶＱＧＳＳＮＥＨＧＰＶＫＲＳＳＱＳＴＬＥＲＳＥＱＱＩＲＡＡＳＳＬＥＥＬＬＲＩＴＨＳＥＤＷＫＬＷＲＣＲＬＲＬＫＳＦＴＳＭＤＳＲＳＡＳＨＲＳＴＲＦＡＡＴＦＹＤＩＥＴＬＫＶＩＤＥＥＷＱＲＴＱＣＳＰＲＥＴＣＶＥＶＡＳＥＬＧＫＳＴＮＴＦＦＫＰＰＣＶＮＶＦＲＣＧＧＣＣＮＥＥＳＬＩＣＭＮＴＳＴＳＹＩＳＫＱＬＦＥＩＳＶＰＬＴＳＶＰＥＬＶＰＶＫＶＡＮＨＴＧＣＫＣＬＰＴＡＰＲＨＰＹＳＩＩＲＲＳＩＱＩＰＥＥＤＲＣＳＨＳＫＫＬＣＰＩＤＭＬＷＤＳＮＫＣＫＣＶＬＱＥＥＮＰＬＡＧＴＥＤＨＳＨＬＱＥＰＡＬＣＧＰＨＭＭＦＤＥＤＲＣＥＣＶＣＫＴＰＣＰＫＤＬＩＱＨＰＫＮＣＳＣＦＥＣＫＥＳＬＥＴＣＣＱＫＨＫＬＦＨＰＤＴＣＳＣＥＤＲＣＰＦＨＴＲＰＣＡＳＧＫＴＡＣＡＫＨＣＲＦＰＫＥＫＲＡＡＱＧＰＨＳＲＫＮＰ
配列番号７（ベバシズマブ、ＨＣ）（人工配列）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＨＹＹＧＳＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号８（ベバシズマブ、ＬＣ）（人工配列）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＩＹＦＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号９（ＩＢＡ１１１、ＨＣ）人工配列
ＥＶＫＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＭＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＮＹＷＭＮＷＶＲＱＳＰＥＫＧＬＥＷＶＡＥＩＴＬＫＳＮＮＹＡＴＨＹＡＥＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＳＳＶＹＬＱＭＮＮＬＲＰＥＤＴＧＩＹＹＣＴＲＮＤＹＤＲＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ
配列番号１０（ＩＢＡ１１１、ＬＣ）人工配列
ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴＬＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＳＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＥＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＮＹＰＷＴＦＧＧＧＳＫＬＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ
配列番号１１（ＩＢＡ１１１、ＨＣ）人工配列
ＥＶＱＬＱＥＳＧＰＳＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＳＶＴＧＤＳＦＴＳＤＹＷＮＷＩＲＫＦＰＧＮＲＬＥＹＭＧＹＩＳＹＲＧＶＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＹＹＬＱＬＮＳＶＴＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＲＷＧＴＶＰＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ
配列番号１２（ＩＢＡ１１２、ＬＣ）人工配列
ＤＶＬＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＧＳＨＩＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＭＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ
【配列表】
2019533024000001.app
【国際調査報告】
2019533024.tif 000009
2019533024.tif 000010
2019533024.tif 000011
2019533024.tif 000012
2019533024.tif 000013
2019533024.tif 000014