(57)【要約】  本発明は、ＣＦＨとＣＤ１１ｂ／１８との間の相互作用を阻害する薬剤に関する。また本発明は、特に加齢黄斑変性などの炎症性障害を治療するための、前記薬剤の使用にも関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症の治療に使用するための、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対する補体因子Ｈの結合を阻害する薬剤。
【請求項２】
ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に結合する、請求項１に記載の使用のための薬剤。
【請求項３】
抗体である、請求項１または２に記載の使用のための薬剤。
【請求項４】
クローン５Ｃ６およびクローンＩＲＦ４４を含む群から選択される抗ＣＤ１１ｂ抗体である、請求項２または３に記載の使用のための薬剤。
【請求項５】
エルリズマブ（ｅｒｌｉｚｕｍａｂ）およびクローンＬ１３０を含む群から選択される抗ＣＤ１８抗体である、請求項２または３に記載の使用のための薬剤。
【請求項６】
小分子である、請求項１または２に記載の使用のための薬剤。
【請求項７】
前記炎症が、単核食細胞の蓄積に関連する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用のための薬剤。
【請求項８】
前記単核食細胞の蓄積に関連する炎症が、網膜の炎症、神経変性疾患、および代謝障害を含む群から選択される、請求項７に記載の使用のための薬剤。
【請求項９】
前記単核食細胞の蓄積に関連する炎症が、網膜の炎症である、請求項７または８に記載の使用のための薬剤。
【請求項１０】
前記炎症が、加齢黄斑変性である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用のための薬剤。
【請求項１１】
前記対象に局所投与される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用のための薬剤。
【請求項１２】
ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対する補体因子Ｈの結合を阻害する薬剤と少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１３】
ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対する補体因子Ｈの結合を阻害する薬剤を含む薬物。
【請求項１４】
炎症、好ましくは加齢黄斑変性の治療に使用するための、請求項１２に記載の医薬組成物または請求項１３に記載の薬物。
【請求項１５】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の薬剤、請求項１２もしくは１４に記載の医薬組成物、または請求項１３もしくは１４に記載の薬物を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８と補体因子Ｈの相互作用を阻害する薬剤に関する。また本発明は、加齢黄斑変性などの炎症性の障害および疾患の治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は、先進国の法的盲の原因の第一位である。後期ＡＭＤには２つの病型：脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）により定義されている、急速に発症する滲出型（「ウエット型」ＡＭＤ）と、網膜色素上皮（ＲＰＥ）萎縮症および地図状萎縮（ＧＡ、または後期の「ドライ型」ＡＭＤ）として知られている視細胞の変性を特徴とする、徐々に発症する萎縮型とが存在する。多くの場合、ＡＭＤは「萎縮型」および「ウェット型」に分類されるが、両者は炎症を遠因として発症し、補体因子Ｈ（ＣＦＨ）の遺伝子多型などの同じ遺伝子多型に関連している（Ｈａｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ．  ２００５，  ３０８：４１９−４２１；  Ｅｄｗａｒｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ．  ２００５，  ３０８：４２１−４２４），  Ｓｅｒｉｎｅ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｈｉｇｈ  Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ  Ａ１  （ＨＴＡＲ１）  ａｎｄ  Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍａｃｕｌｏｐａｔｈｙ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ２  （ＡＲＭＳＤ２）  （Ｄｅｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ．  ２００６，  ３１４：９８９−９９２；  Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ．  ２００６，  ３１４：９９２−９９３）。
【０００３】
単核食細胞（ＭＰ）は、ミクログリア細胞（ＭＣ）、単球（Ｍｏ）、およびマクロファージ（Ｍφ）を含む細胞のファミリーを含む。生理学的に、ＭＣは、網膜内層にのみ存在する。網膜色素上皮（ＲＰＥ）と視細胞外節（ＰＯＳ）との間に位置する網膜下腔は、ＦａｓＬ（ＣＤ９５Ｌ）を抑制する白血球を含む、免疫抑制性ＲＰＥシグナルによって媒介される免疫特権領域である。にもかかわらず、失明の恐れのある２つの進行型のＡＭＤにおいては、ＭＰが網膜下腔で蓄積する（Ｋｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ２００４，  １３７：４８６−４９５）。これらは、脈絡膜血管新生の際にＲＰＥと密接に接触しており、地図状萎縮のＲＰＥ病変の近くに存在する（Ｇｕｐｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  ２００３，  ７６：４６３−４７１；  Ｓｅｎｎｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１３，  ５：１７７５−１７９３）。ＭＰは、ＣＮＶ（Ｔｓｕｔｓｕｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ．  ２００３，  ７４：２５−３２）およびＧＡにおける視細胞の変性（Ｃｒｕｚ−Ｇｕｉｌｌｏｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｉｎｆｌａｍ．  ２０１３，  ２０１３：５０３７２５）に関与すると考えられている。最近では、網膜下のＭＰが、軟性ドルーゼンおよびその周辺にも存在することが示されており、このことは後期ＡＭＤ発症の重要なリスク因子である（Ｓｅｎｎｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１３，  ５：１７７５−１７９３；  Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１５，  ７：２１１−２２６）。にもかかわらず、ＡＭＤにおける網膜下の免疫抑制の変化およびその後のＭＰの蓄積の理由は、未だ知られていない。
【０００４】
薬物療法または外科手術による治療は、「ドライ型」の病態では利用できないが、進行を遅くするために、高用量の抗酸化剤、ルテイン、およびゼアキサンチンを含むビタミンの栄養補助食品が提案されている（Ｓｅｄｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｙｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃａｓｅ−Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ  ＪＡＭＡ．  １９９４，  ２７２：１４１３−１４２０）。
【０００５】
ウェット型ＡＭＤの公知の治療は、抗血管新生剤および光線力学的治療（黄斑へのレーザ―照射）の使用などである。ウェット型ＡＭＤの治療用の抗血管新生剤として、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の作用を遮断し、それによりウェット型ＡＭＤ患者に脈絡膜の血管新生および失明をもたらす血管新生（網膜での新規の血管の形成）を遅らせる薬剤が挙げられる。このような、ウェット型ＡＭＤを治療するための、承認済みまたは臨床試験中の「抗ＶＥＧＦ剤」として、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（商標））、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（商標））、およびアフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ（商標））が挙げられる。
【０００６】
新規の治療の提案が、たとえば国際特許公開公報第２００８００８９８６号に記載されており、これは、ＣＦＨＲ１および／またはＣＦＨＲ３ポリペプチドの投与を開示している。国際特許公開公報第２０１１１３７３６３号は、加齢黄斑変性を治療するために５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）の活性の低減を目的としている。別の例として、ＡＭＤを治療するために、ＲｄＣＶＦＬポリヌクレオチドまたはポリペプチドを対象に投与することに関する国際特許公開公報第２０１４０６０５１７号がある。
【０００７】
しかしながら、ドライ型ＡＭＤまたは地図状萎縮を治療するための薬は、現在販売されていない。
【０００８】
ＡＭＤは、治療抵抗性の軽度の慢性炎症に関連している（Ｃｏｍｂａｄｉｅｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２００７，  １１７：２９２０−２９２８；  Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１５，  ７：２１１−２２６）。より広い意味では、炎症は、組織損傷および微生物の侵入に対する生物の応答である。理想的には、炎症は、迅速かつ効率的に病原体を除去し、再生または瘢痕化のいずれかにより組織損傷を修復する。炎症応答が迅速に制御されていない場合、多くの慢性炎症性疾患で見られるように、炎症応答は病原性となり、疾患の進行に関与し得る。治療抵抗性の軽度の慢性炎症は、代謝疾患（肥満、アテローム性動脈硬化症）（Ｈｏｔａｍｉｓｌｉｇｉｌ，  Ｃｅｌｌ．  ２０１０，  １４０：９００−９１７）、神経変性疾患（Ｇｌａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ．  ２０１０，  １４０：９１８−９３４）、および癌（Ｇｒｉｖｅｎｎｉｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ．  ２０１０，  １４０：８８３−８９９）などの状況で、認められている。治療抵抗性炎症はこれら疾患の主要な原因ではないが、好中球および間質性マクロファージにより産生された殺菌性媒介物質（活性酸素種、プロテアーゼ、および炎症性サイトカイン）は宿主細胞にかなりの付随性の損傷を引き起こす場合があり、損傷自体がより多くの炎症を引き起こすため、これらの発病に有意に関与している。多くの場合、持続する主な問題のため、または炎症、付随性の損傷、および新たな炎症の周期を脱することができないために、慢性炎症がどの程度持続するかは、明らかになっていない。
【０００９】
よって、これら要因を考慮すると、炎症、より具体的には単核食細胞の蓄積に関連する炎症、より詳しくはＡＭＤを予防および／または治療するための活性成分を同定することが、現在もなお必要とされている。
【００１０】
驚くべきことに本出願人は、補体因子Ｈ（ＣＦＨ）がＭＰの除去を阻害し、ＭＰの蓄積に関与していることを例証した。特に、本出願人は、ＣＦＨが、インテグリン  ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８との相互作用を介してこの阻害的な役割を果たしていることを示している。
【００１１】
補体因子Ｈは、地図状萎縮のリスクに関連していることが知られており（Ｆｒｉｔｓｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．  ２０１３，  ４５：４３３−４３９）、ＣＦＨのリスクアレルの存在は、たとえば国際特許公開公報第２００６０８８９５０号および同第２０１５１２０１３０号に記載されるように、ＧＡの診断に使用され得る。しかしながら、ＭＰの蓄積によって媒介される炎症機構においてＭＰの除去を阻害する補体因子Ｈの役割は、本出願人によって最初に示された。
【００１２】
よって、本発明は、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８との補体因子Ｈの相互作用を阻害する薬剤、および加齢黄斑変性などの炎症性障害の治療におけるこれら薬剤の使用に関する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は、炎症の治療に使用するための、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対する補体因子Ｈの結合を阻害する薬剤に関する。
【００１４】
一実施形態では、前記薬剤はＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に結合する。
【００１５】
特定の実施形態では、前記薬剤は抗体である。好ましい実施形態では、前記薬剤は、クローン５Ｃ６およびクローンＩＣＲＦ４４を含む群から選択される抗ＣＤ１１ｂである。別の好ましい実施形態では、上記薬剤は、エルリズマブ（ｅｒｌｉｚｕｍａｂ）およびクローンＬ１３０を含む群から選択される抗ＣＤ１８抗体である。
【００１６】
別の特定の実施形態では、前記薬剤は小分子である。
【００１７】
一実施形態では本発明の炎症は、単核食細胞の蓄積に関連している。一実施形態では、前記単核食細胞の蓄積に関連する炎症は、網膜の炎症、神経変性疾患、および代謝障害を含む群から選択される。
【００１８】
一実施形態では、前記単核食細胞の蓄積に関連する炎症は網膜の炎症である。特定の実施形態では、前記炎症は加齢黄斑変性である。
【００１９】
一実施形態では、本発明の薬剤を、前記対象に局所投与する。
【００２０】
本発明の別の目的は、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対する補体因子Ｈの結合を阻害する薬剤と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物である。
【００２１】
本発明のさらなる目的は、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対する補体因子Ｈの結合を阻害する薬剤を含む薬物である。
【００２２】
一実施形態では、本発明の医薬組成物または薬物は、炎症、好ましくは加齢黄斑変性の治療に使用するためのものである。
【００２３】
さらに本発明は、上述の薬剤、医薬組成物、または薬物を含むキットに関する。
【００２４】
定義
本発明では、以下の用語は以下の意味を有する。
【００２５】
用語「ペプチド」は、５０個未満のアミノ酸がペプチド結合により共に結合しているアミノ酸の直鎖状ポリマーを表す。用語「ポリペプチド」は、従来の意味、すなわち、１００個未満のアミノ酸の配列として使用されている。一実施形態では、本発明のポリペプチドは、１０〜１００個のアミノ酸、好ましくは５０〜１００個のアミノ酸を有する。ポリペプチドは、通常、モノマーの実体を表す。用語「タンパク質」は、１００個超のアミノ酸の配列および／または多量体の実体を表す。本発明のタンパク質は、特定の長さの産物に限定されるものではない。この用語は、天然に存在するまたは天然には存在しない、タンパク質の発現後の修飾、たとえばグリコシル化、アセチル化、リン酸化など、ならびに当該分野で知られている他の修飾を表すものではなく、またはこれらを除外するものではない。タンパク質は、タンパク質全体であってもよく、またはその部分配列であってもよい。本発明の状況下での対象の特定のタンパク質は、ＣＤＲを含み、抗原に結合することができるアミノ酸配列である。「単離されたタンパク質」は、天然の環境の成分から同定および分離ならびに／または回収されているタンパク質である。好ましい実施形態では、単離されたタンパク質は、（１）ローリー法により決定された、タンパク質重量の８０重量％超、８５重量％超、９０重量％超、９５重量％超、最も好ましくは９６重量％超、９７重量％超、９８重量％超、または９９重量％超まで、（２）スピニングカップシークエネーター（ｓｐｉｎｎｉｎｇ  ｃｕｐ  ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）の使用によるＮ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るために十分な度合まで、または（３）クーマシーブルーまたは好ましくは銀染色を使用して還元条件または非還元条件でのＳＤＳ−ＰＡＧＥにより均一となるまで、精製される。単離されたタンパク質は、タンパク質の天然の環境の少なくとも１つの構成要素が存在しないため、組み換え細胞内での本来の位置のタンパク質を含む。しかしながら、通常、単離されたタンパク質は、少なくとも１つの精製ステップにより調製されている。
【００２６】
用語「イムノグロブリン」は、関連する何等かの特異的な免疫反応性を有するかどうかに関わらず、２つの重鎖および２つの軽鎖の組み合わせを有するポリペプチドを含む。用語「抗体」は、対象の抗原（たとえばＣＦＨ、ＣＤ１１ｂまたはＣＤ１８）に対して、既知の有意な、特異的な免疫反応の活性を有するアセンブリを表す。用語「ＣＦＨ抗体、ＣＤ１１ｂ抗体、またはＣＤ１８抗体」は、本明細書中、ＣＦＨ、ＣＤ１１ｂ、またはＣＤ１８タンパク質に対して免疫学的特異性を示す抗体を表す。さらに、この用語はまた、ＣＦＨタンパク質残基およびＣＤ１１ｂまたはＣＤ１８タンパク質残基にまたがるエピトープ、またはＣＤ１１ｂタンパク質残基およびＣＤ１８タンパク質残基にまたがるエピトープを認識する抗体を除外するものではない。抗体およびイムノグロブリンは、軽鎖および重鎖を含み、軽鎖および重鎖の間に鎖間共有結合を伴うまたは伴わない。脊椎動物系の基本的なイムノグロブリンの構造は、比較的よく理解されている。一般的な用語「イムノグロブリン」は、生化学的に区別することができる５つの別々の抗体のクラスを含む。５つのクラスすべての抗体が本発明の範囲内であり、以下の論述では、概して、ＩｇＧクラスのイムノグロブリン分子を対象としている。ＩｇＧに関して、イムノグロブリンは、分子量約２３，０００ダルトンの２つの同一の軽鎖ポリペプチドと、分子量５３，０００〜７０，０００ダルトンの２つの同一の重鎖とを含む。これら４つの鎖は、「Ｙ」の構成でジスルフィド結合により結合しており、軽鎖は、「Ｙ」の口で始まり、可変領域を通して続いている重鎖を挟んでいる。抗体の軽鎖は、カッパまたはラムダ（［κ］、［λ］）のいずれかに分類される。各重鎖のクラスは、カッパまたはラムダの軽鎖のいずれかと結合し得る。一般的に、軽鎖および重鎖は互いに共有結合しており、２つの重鎖の「尾」の領域は、イムノグロブリンがハイブリドーマ、Ｂ細胞、または遺伝子操作された宿主細胞により産生される場合は、ジスルフィド共有結合または非共有結合により結合している。重鎖では、アミノ酸配列は、Ｙの構成の分岐した末端のＮ末端から各鎖の下部のＣ末端まで伸びている。当業者は、重鎖が、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロン（γ、μ、α、δ、ε）として、これらの一部のサブクラス（たとえばγ１〜γ４）として分類されていることを認識するものである。ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ  ＩｇＧ、またはＩｇＥとして抗体の「クラス」をそれぞれ決定するのは、この鎖の性質である。イムノグロブリンのサブクラス（アイソタイプ）、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１などは、良好に特徴づけされており、専門的な機能を付与することが知られている。これらクラスおよびアイソタイプのそれぞれの修飾型は、本開示を見ることにより、当業者にとって容易に識別可能であり、よって、本発明の範囲内にある。上述のように、抗体の可変領域によって、抗体は抗原上のエピトープを選択的に認識し特異的に結合することができる。すなわち、抗体のＶＬドメインおよびＶＨドメインは、３次元の抗原結合部位を定義する可変領域を形成するように結合している。このような４次抗体構造は、Ｙの各アームの末���に存在している抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位は、ＶＨ鎖およびＶＬ鎖のそれぞれの３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）により定義されている。
【００２７】
用語「結合部位」は、対象の標的抗原（たとえばＣＦＨ、ＣＤ１１ｂまたはＣＤ１８）に対する選択的結合の原因であるポリペプチドの領域を含む。結合ドメインまたは結合領域は、少なくとも１つの結合部位を含む。例示的な結合ドメインとして、抗体の可変ドメインが挙げられる。本発明の抗体分子は、単一の結合部位または複数（たとえば２個、３個、または４個）の抗原結合部位を含み得る。
【００２８】
指定されたタンパク質（たとえばＣＦＨ抗体、ＣＤ１１ｂ抗体もしくはＣＤ１８抗体、またはそれらの抗原結合フラグメント）の前の用語「〜に由来する」は、ポリペプチドの起源を表す。一実施形態では、特定の開始ポリペプチドに由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列はＣＤＲ配列またはそれに関連する配列である。一実施形態では、特定の開始ポリペプチドに由来するアミノ酸配列は、連続していない。たとえば一実施形態では、１個、２個、３個、４個、５個、または６個のＣＤＲが、開始抗体に由来する。一実施形態では、特定の開始ポリペプチドまたはアミノ酸配列に由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列は、開始配列と本質的に同一であるアミノ酸配列、または少なくとも３〜５個のアミノ酸、５〜１０個のアミノ酸、少なくとも１０〜２０個のアミノ酸、少なくとも２０〜３０個のアミノ酸、もしくは少なくとも３０〜５０個のアミノ酸からなる、もしくはそうでなければ開始配列に起源を有すると当業者が同定可能である、その領域を有する。
【００２９】
用語「ダイアボディ」は、Ｖドメインの鎖内ではなく鎖間の対が達成され、二価のフラグメント、すなわち２つの抗原結合部位を有するフラグメントをもたらすように、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に短いリンカー（約５〜１０個の残基）を伴うｓＦｖフラグメント（ｓＦｖの段落を参照）を構築することにより調製された小さな抗体フラグメントを表す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖に存在する２つの「クロスオーバー」ｓＦｖフラグメントのヘテロダイマーである。ダイアボディは、たとえば欧州特許第４０４，０９７号；国際特許公開公報第９３／１１１６１号；およびＨｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ９０：６４４４−６４４８  （１９９３）により詳しく説明されている。
【００３０】
用語「ペプチボディ」は、Ｆｃドメインに移植した生物学的に活性のペプチドを表す。一実施形態では、ペプチボディは、一部の望ましい抗体の特徴、特に、２つのＦｃの二量体化により与えられるアビディティを介して増加した見かけ上の親和性を保持する。
【００３１】
用語「操作した」は、合成手段による（たとえば組み換え技術、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのペプチド合成による、ペプチドの酵素的カップリングもしくは化学的カップリング、またはこれら技術の一部の組み合わせによる）、核酸またはポリペプチド分子の操作を含む。好ましくは、本発明の抗体は操作されており、たとえばヒト化抗体および／またはキメラ抗体、ならびに、抗原結合、安定性／半減期、またはエフェクター機能などの１つもしくは複数の特性を改善するように操作された抗体を含む。
【００３２】
用語「エピトープ」は、薬剤（たとえば抗体または小分子）が結合する、ペプチドまたはタンパク質に位置するアミノ酸の特定の配置を表す。多くの場合、エピトープは、アミノ酸または糖の側鎖などの分子の化学的に活性な表面の基からなり、特異的な３次元構造上の特徴、ならびに特異的な電荷の特徴を有する。エピトープは、直鎖状またはコンフォメーションエピトープでありえて、すなわち、必ずしも連続しているわけではない抗原の様々な領域のアミノ酸の２つ以上の配列を含む。
【００３３】
用語「フラグメント」はインタクト抗体または完全な抗体または抗体の鎖よりも少ないアミノ酸残基を含む抗体または抗体の鎖の一部または領域を表す。用語「抗原結合フラグメント」は、抗原結合（すなわちＣＦＨ、ＣＤ１１ｂ、またはＣＤ１８に特異的な結合）に関して、抗原に結合する、またはインタクト抗体と（たとえばこれが由来するインタクト抗体と）競合するイムノグロブリンまたは抗体のポリペプチドフラグメントを表す。本明細書中使用されるように、抗体分子の「フラグメント」との用語は、抗体の抗原結合フラグメント、たとえば抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、抗体の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、シングルドメイン抗体フラグメント（ＤＡｂ）、１アーム（一価）の抗体、ダイアボディ、または当該抗原結合フラグメントの組み合わせ、アセンブリ、もしくはコンジュゲーションにより形成されるいずれかの抗原結合分子を含む。フラグメントは、たとえばインタクト抗体もしくは完全な抗体もしくは抗体の鎖の化学的もしくは酵素的な処理を介して、または組み換え手段により、得ることができる。
【００３４】
用語「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む最小の抗体フラグメントである。このフラグメントは、強力に非共有的に会合した１つの重鎖および１つの軽鎖の可変領域ドメインの二量体からなる。これら２つのドメインのフォールディングから、抗原結合のためにアミノ酸残基を与え、抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変性のループ（Ｈ鎖およびＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が得られる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識し結合する能力を有する。
【００３５】
用語「免疫特異的」、「〜に特異的である」、または「特異的に結合する」：本明細書中使用されるように、抗体は、検出可能なレベルで、好ましくは約１０４Ｍ−１以上、または約１０５Ｍ−１以上、約１０６Ｍ−１以上、約１０７Ｍ−１以上、または１０８Ｍ−１以上、または１０９Ｍ−１以上、または１０１０Ｍ−１以上の親和性定数Ｋａで抗原と反応する場合に、抗原に対して「免疫特異性」であり、抗原に「特異的」であり、または抗原に「特異的に結合する」と言われる。また、その同族の抗原に対する抗体の親和性は、一般に解離定数Ｋｄとして表現され、特定の実施形態では、抗体は、１０−４Ｍ以下、約１０−５Ｍ以下、約１０−６Ｍ以下、１０−７Ｍ以下、１０−８Ｍ以下、または５．１０−９Ｍ以下、１０−９Ｍ以下、または５．１０−１０Ｍ以下、または１０−１０Ｍ以下のＫｄで結合する場合、抗原と特異的に結合する。抗体の親和性は、従来の技術、たとえばＳｃａｔｃｈａｒｄ  Ｇら（Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．  １９４９，  ５１：６６０−６７２）により記載の技術を使用して、容易に決定することができる。抗原、細胞、またはその組織に対する抗体の結合特性は、一般に、たとえば免疫組織化学検査（ＩＨＣ）および／または蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）などの免疫蛍光法ベースのアッセイを含む免疫検出方法を使用して、決定または評価され得る。
【００３６】
２つ以上のポリペプチドの配列間の関係に使用する場合、用語「同一性」または「同一の」は、２つ以上のアミノ酸残基の鎖の間のマッチ数により決定される、ポリペプチド間の配列の関連性の度合いをあらわす。「同一性」は、特定の数学的モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち「アルゴリズム」）により提示される、ギャップアライメントを伴い（存在する場合）２つ以上の配列のうちの小さい方に合わせた配列間の同一のマッチのパーセントを測定する。関連するポリペプチドの同一性は、既知の方法により容易に計算することができる。このような方法として、限定するものではないが、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｌｅｓｋ，  Ａ．  Ｍ．，  ｅｄ．，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８８；  Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，  Ｓｍｉｔｈ，  Ｄ．  Ｗ．，  ｅｄ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９３；  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，  Ｐａｒｔ  １，  Ｇｒｉｆｆｉｎ，  Ａ．  Ｍ．，  ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，  Ｈ．  Ｇ．，  ｅｄｓ．，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，  １９９４；  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，  Ｇ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８７；  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，  Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，  Ｍ．  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，  Ｊ．，  ｅｄｓ．，  Ｍ．  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９１；およびＣａｒｉｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ＳＩＡＭ  Ｊ．  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．  ４８，  １０７３  （１９８８）に記載されるものが挙げられる。同一性を決定するための好ましい方法は、試験する配列間で最大のマッチを生じるように設計されている。同一性を決定する方法は、公表されているコンピュータプログラムに記載されている。２つの配列間の同一性を決定するための好ましいコンピュータプログラム方法として、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄ．  Ｒｅｓ．  ＼２，  ３８７  （１９８４）；  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，  Ｍａｄｉｓｏｎ，  Ｗｉｓ．）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  ＭｏＩ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５，  ４０３−４１０  （１９９０））を含む、ＧＣＧプログラムパッケージが挙げられる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）および他の供給源（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ，  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．  ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．  ２０８９４；  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ｓｕｐｒａ）から、公表されている。また、既知のＳｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを、同一性を決定するために使用してもよい。
【００３７】
用語「哺乳動物」は、ヒト、家畜動物（ｄｏｍｅｓｔｉｃ  ａｎｄ  ｆａｒｍ  ａｎｉｍａｌｓ）、および動物園の動物、競技用の動物、またはペット用の動物、たとえばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなどを含むいずれかの哺乳動物を表す。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【００３８】
用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を表し、すなわち、この集団に含まれる個別の抗体は、微量で存在し得る天然に存在する起こり得る変異を除き同一である。モノクローナル抗体は非常に特異的で、単一の抗原部位を対象とする。さらに、異なる決定因子（エピトープ）を対象とする異なる抗体を含むポリクローナル抗体の調製物とは対照的に、モノクローナル抗体は、それぞれ、抗原上の単一の決定因子を対象とする。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の抗体が混入することなく合成され得るという点で好ましい。修飾語句の「モノクローナル」は、いずれかの特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈してはならない。たとえば、本発明に有用なモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ２５６：４９５（１９７５）によって初めて記載されたハイブリドーマ方法論により調製してもよく、または細菌細胞、真核性の動物細胞もしくは植物細胞において、組み換えＤＮＡ法を使用して作製してもよい（たとえば米国特許第４，８１６，５６７号参照）。また、「モノクローナル抗体」は、たとえばＣｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３５２：６２４−６２８  （１９９１）およびＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ２２２：５８１−５９７  （１９９１）に記載される技術を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。
【００３９】
用語「ポリクローナル抗体」は、それぞれが異なるエピトープを同定する、特異的な抗原に対して反応するイムノグロブリン分子のコレクションを表す。よって、モノクローナル抗体とは反対に、ポリクローナル抗体は、単一の細胞株に由来するものではない。
【００４０】
用語「特異性」は、所定の標的、たとえばＣＦＨ、ＣＤ１１ｂ、またはＣＤ１８に特異的に結合（たとえば免疫反応）する能力を表す。ポリペプチドは、単一特異性であってもよく、ある標的に特異的に結合する１つもしくは複数の結合部位を含んでもよく、またはポリペプチドは、多重特異性であってもよく、同じまたは異なる標的に特異的に結合する２つ以上の結合部位を含んでもよい。一実施形態では、本発明の抗体は、１超の標的に特異的である。たとえば一実施形態では、本発明の多重特異性結合分子は、ＣＦＨおよびＣＤ１１またはＣＤ１８に結合する。
【００４１】
ポリペプチドに関する「合成の」との用語は、天然に存在しないアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。たとえば、天然に存在しないポリペプチドは、天然に存在するポリペプチドの修飾型（たとえば付加、置換、もしくは欠失などの変異を含む）、または、本来は天然に結合していない第２のアミノ酸配列（天然に存在していてもよく、または存在していなくてもよい）に、アミノ酸の直鎖状配列で結合している第１のアミノ酸配列（天然に存在していてもよく、または存在していなくてもよい）を含むポリペプチドである。
【００４２】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略されている用語「一本鎖Ｆｖ」は、一本鎖のポリペプチドに結合しているＶＨおよびＶＬの抗体ドメインを含む抗体フラグメントである。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、それによってｓＦｖが抗原結合にとって望ましい構造を形成することができるポリペプチドリンカーをＶＨドメインおよびＶＬドメインの間にさらに含む。ｓＦｃのレビューについては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  ｖｏｌ．  １１３，  Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ｐｐ．  ２６９−３１５  （１９９４）；  Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ  １９９５，  ｉｎｆｒａを参照されたい。
【００４３】
用語「小分子」は、脂質、単糖、セカンドメッセンジャー、他の天然物および代謝物を含む低分子量の分子を意味する。小分子は、タンパク質などの高分子とは異なっている。
【００４４】
用語「競合的アンタゴニスト」は、ある受容体（たとえばＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８）に結合するが、この受容体を活性化せず、前記受容体の受容体結合部位に関して天然のリガンド（たとえばＣＦＨ）と競合する受容体アンタゴニストを表す。本発明の一実施形態では、競合的アンタゴニストは、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８のアンタゴニスト、好ましくは、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８と結合し、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合を阻害する小分子である。
【００４５】
用語「アロステリック阻害剤」は、タンパク質の活性部位またはタンパク質―タンパク質の結合部位以外の部位に結合することにより、タンパク質またはタンパク質―タンパク質の相互作用（たとえばＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合）を阻害する薬剤を表す。本発明の一実施形態では、アロステリック阻害剤は、ＣＦＨ−ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８の結合部位以外の部位でＣＦＨまたはＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に結合する薬剤、好ましくは小分子である。
【００４６】
用語「対象」は、哺乳動物、好ましくはヒトである。一実施形態では、対象は男性である。別の実施形態では、対象は女性である。一実施形態では、対象は、「患者」、すなわち医療の受診を待機している、または医療を受診している、または医療処置の対象であった／対象である／対象となるであろう、または炎症の発症に関してモニタリングされている、温血動物、より好ましくはヒトであり得る。一実施形態では、対象は成年（たとえば１８歳超の対象）であり得る。別の実施形態では、対象は小児（たとえば１８歳未満の対象）である。一実施形態では、本発明の薬剤は、その必要のあるヒト患者に投与される。
【００４７】
用語「治療上有効量」は、標的に、有意な悪影響または有害な副作用を引き起こすことなく、（１）炎症の発症を遅延もしくは予防すること；（２）炎症の１つもしくは複数の症状の進行、増悪、もしくは悪化を遅延もしくは停止すること；（３）炎症の症状の改善をもたらすこと；（４）炎症の重症度もしくは頻度を低減させること；または（５）炎症を治癒することを目的とする、薬剤のレベルまたは量を意味する。治療上有効量を、予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）作用または防止（ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ）作用のために、炎症の発症より前に投与してもよい。あるいはまたはさらに、治療上有効量を、治療作用または治療作用の維持のために、炎症の開始後に投与してもよい。
【００４８】
用語「治療する」または「治療」または「軽減」は、炎症の防止または遅延（軽減）を目的とする、治療上の処置と予防的または防止的手段との両方を表す。治療の必要のある対象は、この障害をすでに有する対象、ならびに炎症を有する傾向のある対象、または炎症を防止すべき対象を含む。本発明に従う薬剤の治療量を投与した後に、患者が、以下：病原性細胞数の減少；病原性である細胞総数のパーセントの減少；および／または炎症に関連する症状のうちの１つもしくは複数の、ある程度までの軽減；罹患率および死亡率の低下、ならびにクオリティオブライフの問題の改善のうちの１つまたは複数の、観察可能および／もしくは測定可能な低下または非存在を示す場合、対象または哺乳類は感染症に関して成功理に「治療されている」。疾患における治療の成功および改善を評価するための上記のパラメータは、医師によく知られている通常の手段によって容易に測定可能である。
【００４９】
用語「薬学的に許容可能な賦形剤」は、動物、好ましくはヒトに投与する場合に、有害反応、アレルギー反応、または他の望ましくない反応をもたらさない賦形剤を表す。これは、あらゆる溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含む。薬学的に許容可能な担体または賦形剤は、非毒性の任意の種類の固体、半固体、もしくは液体の充填剤、希釈剤、封入材料、または製剤用補助剤を表す。ヒトの投与では、調製物は、ＦＤＡの生物学的製剤基準（Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ  ｓｔａｎｄａｒｄｓ）が要求する無菌性、発熱性、一般的な安全性、および純度の基準と一致すべきである。
【００５０】
ある値の前の用語「約」は、前記値の±１０％を意味する。
【００５１】
詳細な説明
補体因子Ｈは、Ｃ３ｂを結合し、Ｃ３ｂＢｂの形成を阻害することにより、「自己」細胞表面上で補体の活性化を阻害する能力が最もよく知られている、２０個の球形のショートコンセンサスリピートドメイン（Ｓｈｏｒｔ  Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  Ｒｅｐｅａｔ（ＳＣＲ）ｄｏｍａｉｎｓ）（Ｚｉｐｆｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ．  ２００２，  ３０：９７１−９７８）から構成される大きな高分子である。しかしながら、ＣＦＨは、好中球の抗菌活性（Ｌｏｓｓｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１０，  １８４：９１２−９２１）、単球によるオプソニン化細胞デブリの食作用（Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ．  ２０１２，  ２１７：４５５−４６４）、および酸化ストレスからの保護（Ｗｅｉｓｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ．  ２０１１，  ４７８：７６−８１）にも重要な役割を果たしている。このＳＣＲ７は、単球および好中球上のインテグリンＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８（補体Ｃ３受容体、マクロファージ１抗原、Ｍａｃ−１）に結合する（Ｌｏｓｓｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１０，  １８４：９１２−９２１；  Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ．  ２０１２，  ２１７：４５５−４６４）。ＣＦＨは、肝細胞により分泌され、血漿中に多く存在するが、ミクログリア細胞およびマクロファージなどの単核食細胞によっても強く発現され、このことは炎症性組織におけるＣＦＨの局所的な濃度に大きく寄与している（Ｓｃｈｌａｆ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  ２００１，  ３８：２３１−２３９）（Ｇａｕｔｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１２，  １３：１１１８−１１２８）。
【００５２】
ＳＣＲ７の遺伝子多型は、チロシン４０２のヒスチジン（Ｙ４０２Ｈ）への置換をもたらし、これは加齢黄斑変性に強く関連している。この関連は、後期ＡＭＤのウェット型ＡＭＤおよび地図状萎縮（ＧＡ）の病型の両方で見いだされている。これはまた、後期ＡＭＤの重要なリスク因子である、網膜色素上皮（ＲＰＥ）下でのリポタンパク質性のデブリである大きい軟性ドルーゼンにも関連している（Ｄｅｓｐｒｉｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ＪＡＭＡ．  ２００６，  ２９６：３０１−３０９；  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ．  ２００７，  １６：２１３５−２１４８）。これらの知見は、４０２Ｈ  ＣＦＨが、初期の疾患の発症にすでに関与している病理機序を促進することを示唆している。
【００５３】
インテグリンＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８（補体３受容体、Ｍａｃ−１）は、多形核白血球（多くの場合好中球）、ＮＫ細胞、およびマクロファージのような単核食細胞で見いだされる細胞表面受容体である。ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８は、侵入する細菌の表面で見いだされる多くの分子を認識および結合することができるパターン認識受容体である。また、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８は、外来細胞の表面に結合する場合に、ｉＣ３ｂも認識する。
【００５４】
国際特許公開公報第８９／０４１１７４号は、炎症性の刺激に対する骨髄単球細胞の動員を阻害するための、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対する抗体を開示している。ＤｉＳｃｉｐｉｏらは、多形核白血球とＣＦＨとの間の相互作用が、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８により媒介されると述べている（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；  １９９８，  １６０（８）：４０５７−４０６６）。
【００５５】
本明細書中、本発明者らは、ＣＦＨが、炎症傾向のある（ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ−ｐｒｏｎｅ）Ｃｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスにおいて慢性的な加齢に関連する網膜下でのＭＰの蓄積に必要であることを示している（実施例１参照）。急性の光誘導型の網膜下炎症では、ＣＦＨの欠損は、初期の網膜下のＭＰの増加に影響しなかったが、Ｃｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスにおいてこれらの除去を有意に加速させた（実施例２参照）。ＭＰ  ＣＦＨの発現は、網膜下腔へのミクログリア細胞（ＭＣ）の養子移入実験、光で損傷させたＣｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスにおける肝臓ＣＦＨの遺伝子置換により示されるように、この減少の原因であった（実施例２参照）。また本発明者らは、ＣＦＨがＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に結合すること、およびこの結合の防止により、血管内皮を通過しない非動員マクロファージを含む炎症部位でのＭＰの除去に及ぼすＣＦＨの阻害作用を反転させることをも示している（実施例２および３参照）。さらに本発明者らは、ＡＭＤに関連する４０２Ｈ  ＣＦＨが、Ｙ４０２型よりもＭＰの除去を有意に阻害することを示している（実施例４参照）。
【００５６】
よって、本発明者らは、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合が、炎症部位でのマクロファージの除去、特に網膜下のマクロファージの除去を加速させることを示している。
【００５７】
よって、本発明は、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合を阻害する薬剤に関する。
【００５８】
言い換えると、一実施形態では、本発明の薬剤は、ＣＦＨとＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８との間の相互作用を阻害する。
【００５９】
２つのタンパク質またはポリペプチドの間の相互作用を評価するための方法は、当該分野でよく知られている。ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合を評価するための方法の例として、限定するものではないが、タンパク質のアフィニティクロマトグラフィー、アフィニティーブロッティング、免疫共沈降、およびクロスリンクなどの生化学的方法；ならびにタンパク質のプロービング、２ハイブリッドシステム、およびファージディスプレイなどの分子生物学的方法が挙げられる。
【００６０】
一実施形態では、本発明の薬剤は、補体因子Ｈに結合する。特定の実施形態では、本発明の薬剤は、補体因子Ｈに特異的に結合する。一実施形態では、本発明の薬剤は、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対する少なくとも１つの結合部位にＣＦＨを結合する。
【００６１】
別の実施形態では、本発明の薬剤は、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に結合する。一実施形態では、本発明の薬剤は、ＣＦＨに対する少なくとも１つの結合部位にＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８を結合する。
【００６２】
別の実施形態では、本発明の薬剤は、ＣＤ１１ｂに結合する。一実施形態では、本発明の薬剤は、ＣＤ１１ｂに特異的に結合する。一実施形態では、本発明の薬剤は、ＣＦＨに対する少なくとも１つの結合部位にＣＤ１１ｂを結合する。
【００６３】
別の実施形態では、本発明の薬剤は、ＣＤ１８に結合する。一実施形態では、本発明の薬剤は、ＣＤ１８に特異的に結合する。一実施形態では、本発明の薬剤は、ＣＦＨに対する少なくとも１つの結合部位にＣＤ１８を結合する。
【００６４】
別の実施形態では、本発明の薬剤は、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１８に結合する。一実施形態では、本発明の薬剤は、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１８に特異的に結合する。一実施形態では、本発明の薬剤は、ＣＦＨに対する少なくとも１つの結合部位にＣＤ１１ｂおよびＣＤ１８を結合する。
【００６５】
本明細書中使用されるように、用語「阻害する」は、本薬剤が、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合を阻害、低減、予防、または中和できることを意味する。
【００６６】
当業者は、たとえばＣＦＨとＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８との間の距離を測定することにより、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合を薬剤が阻害する能力を決定することができる。このような試験の一例は、フローサイトメトリー（本発明の実施例３に示されている）である。
【００６７】
一実施形態では、本発明の薬剤は、ポリペプチドまたはタンパク質である。
【００６８】
一実施形態では、前記タンパク質は、全抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体、二量体の一本鎖抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、脱フコシル化抗体、二重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディを含む、またはからなる群から選択される抗体分子である。
【００６９】
別の実施形態では、前記タンパク質は、ユニボディ（ｕｎｉｂｏｄｙ）、ドメイン抗体、およびナノボディを含む、またはからなる群から選択される抗体フラグメントである。
【００７０】
別の実施形態では、前記タンパク質は、アフィボディ（Ａｆｆｉｂｏｄｙ）、アフィリン（ａｆｆｉｌｉｎ）、アフィチン（ａｆｆｉｔｉｎ）、アドネクチン、アトリマー、エバシン（ｅｖａｓｉｎ）、ＤＡＲＰｉｎ、アンチカリン（ａｎｔｉｃａｌｉｎ）、アビマー（Ａｖｉｍｅｒ）、フィノマー（Ｆｙｎｏｍｅｒ）、ヴァーサボディ（ｖｅｒｓａｂｏｄｙ）、およびデュオカリン（ｄｕｏｃａｌｉｎ）を含む、またはからなる群から選択される抗体模倣体である。
【００７１】
別の実施形態では、前記タンパク質は、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）である。
【００７２】
ドメイン抗体は、当該分野でよく知られており、抗体の重鎖または軽鎖いずれかの可変領域に対応する、抗体の最小の機能的結合部位を表す。
【００７３】
ナノボディは、当該分野でよく知られており、天然に存在する重鎖抗体の固有の構造上および機能的な特性を含む抗体に由来する治療用タンパク質を表す。これらの重鎖抗体は、単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）と２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）とを含む。
【００７４】
ユニボディは、当該分野でよく知られており、ＩｇＧ４抗体のヒンジ領域を欠いている抗体フラグメントを表す。ヒンジ領域の欠失は、基本的に従来のＩｇＧ４抗体の半分の大きさで、ＩｇＧ４抗体の二価結合領域ではなくて一価の結合領域を有する分子をもたらす。
【００７５】
アフィボディは、当該分野でよく知られており、ブドウ球菌プロテインＡのＩｇＧ結合ドメインのうちの１つに由来する、５８個のアミノ酸残基のタンパク質ドメインに基づくアフィニティータンパク質を表す。
【００７６】
ＤＡＲＰｉｎｓ（Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  Ａｎｋｙｒｉｎ  Ｒｅｐｅａｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）は、当該分野でよく知られており、非抗体ポリペプチドの結合能を利用するために開発された抗体模倣体ＤＲＰ（設計された反復タンパク質）を表す。
【００７７】
アンチカリンは、当該分野でよく知られており、結合特異性がリポカリンに由来する、別の抗体模倣体技術を表す。またアンチカリンは、デュオカリン（ｄｕｏｃａｌｉｎ）とも呼ばれる二重の標的化タンパク質として形成され得る。
【００７８】
アビマーは、当該分野でよく知られており、別の抗体模倣体技術を表す。
【００７９】
ヴァーサボディは、当該分野でよく知られており、別の抗体模倣体技術を表す。これらは、１５％超のシステインを含む３〜５ｋＤａの小さなタンパク質であり、高密度のジスルフィドスキャフォールドを形成し、典型的なタンパク質が有する疎水性コアを置換している。
【００８０】
別の実施形態では、前記タンパク質は、治療剤とコンジュゲートした抗体またはそのフラグメントを含むイムノコンジュゲートである。
【００８１】
一実施形態では、本発明のタンパク質は、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合を阻害する抗ＣＦＨ抗体またはその抗原結合フラグメントである。抗ＣＦＨ（または抗Ｈ因子）抗体の例として、限定するものではないが、Ｙ４０２  ＣＦＨ型に特異的な抗体、Ｈ４０２  ＣＦＨ型に特異的な抗体（Ｈａｋｏｂｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．  ２０１０，  ７８（８）：７８２−８に記載される）が挙げられる。
【００８２】
別の実施形態では、本発明のタンパク質は、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合を阻害する抗ＣＤ１１ｂ抗体またはその抗原結合フラグメントである。クローン５Ｃ６（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、以前のＡｂｄ  Ｓｅｒｏｔｅｃ，  ｒｅｆ  ＭＣＡ７１１）およびＩＣＲＦ４４（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ｒｅｆ  ５５７３２１）は、ＣＤ１１ｂに対するＣＦＨの結合を阻害するＣＤ１１ｂ抗体である。よって、特定の実施形態では、抗ＣＤ１１ｂ抗体は、クローン５Ｃ６およびクローンＩＣＲＦ４４、またはそれらの混合物もしくは誘導体を含む群から選択される。一実施形態では、本発明は、５Ｃ６抗体と本質的に同じエピトープを結合する抗体を提供する。
【００８３】
別の実施形態では、本発明のタンパク質は、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合を阻害する抗ＣＤ１８抗体またはその抗原結合フラグメントである。エルリズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ−Ｒｏｃｈｅ，  ｒｈｕＭＡｂ  ＣＤ１８）およびクローンＬ１３０（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ｒｅｆ  ５５６０８４）は、ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合を阻害するＣＤ１８抗体である。よって、特定の実施形態では、抗ＣＤ１８抗体は、エルリズマブおよびクローンＬ１３０、またはそれらの混合物もしくは誘導体を含む群から選択される。一実施形態では、本発明は、エルリズマブ抗体と本質的に同じエピトープを結合する抗体を提供する。
【００８４】
一実施形態では、前記タンパク質はモノクローナル抗体である。別の実施形態では、前記タンパク質はポリクローナル抗体である。
【００８５】
本発明の一部の実施形態では、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを含むＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合を阻害する抗体、またはそのＣＤＲは、ＣＨ１ドメインおよび／またはＣＬドメインを含んでもよく、このアミノ酸配列は、完全にヒトまたは実質的にヒトである。本発明の抗原に結合するポリペプチドがヒトの治療での使用を意図している抗体である場合、典型的には、抗体全体の定常領域または少なくともその一部が完全にヒトまたは実質的にヒトのアミノ酸配列を有する。よって、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、およびＣＬドメイン（およびもし存在する場合はＣＨ４ドメイン）のうちの１つもしくは複数、またはいずれかの組み合わせは、そのアミノ酸配列に関して完全にまたは実質的にヒトであり得る。好ましくは、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、およびＣＬドメイン（およびもし存在する場合はＣＨ４ドメイン）は、すべてが、完全にまたは実質的にヒトのアミノ酸配列を有してもよい。ヒト化抗体またはキメラ抗体、または抗体フラグメントの定常領域では、用語「実質的にヒト」は、ヒトの定常領域と少なくとも９０％、または少なくとも９５％、または少なくとも９７％、または少なくとも９９％のアミノ酸の配列同一性を表す。この状況下での用語「ヒトアミノ酸配列」は、生殖系列の遺伝子、再配列された遺伝子、および体細胞変異した遺伝子を含む、ヒトイムノグロブリン遺伝子によりコードされたアミノ酸配列を表す。また、本発明は、「完全にヒト」のヒンジ領域の存在が明らかに必要とされる実施形態を除き、ヒトの配列に関して１つまたは複数のアミノ酸の付加、欠失、または置換により変化している「ヒト」配列の定常ドメインを含むポリペプチドをも企図している。本発明のＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合を阻害する抗体における「完全にヒト」のヒンジ領域の存在は、免疫原性を最小限にし、かつ抗体の安定性を最適化するために有益であり得る。１つまたは複数のアミノ酸の置換、挿入、または欠失が、重鎖および／または軽鎖の定常領域内、特にＦｃ領域内で作製され得ることが考慮されている。アミノ酸の置換は、置換されるアミノ酸の、異なる天然に存在するアミノ酸、または非天然のアミノ酸もしくは修飾されたアミノ酸との置換をもたらし得る。たとえば、グリコシル化パターンの変化（たとえばＮまたはＯ結合型グリコシル化部位の付加または欠失によるグリコシル化パターンの変化）などの他の構造上の修飾も、許容され得る。企図される抗体の使用に応じて、たとえばエフェクター機能を調節するため、Ｆｃ受容体に対する結合特性に関して本発明の抗体を修飾することが望ましい場合がある。たとえば、システイン残基をＦｃ領域に導入してもよく、よって、この領域での鎖間ジスルフィド結合形成を可能にする。このようにして作製されたホモ二量体抗体は、改善されたエフェクター機能を有し得る。Ｃａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １７６：  １１９１  −  １１９５  （１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，  Ｂ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４８：２９１８−２９２２  （１９９２）を参照されたい。あるいは、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合を阻害する抗体は、二重のＦｃ領域を有するように操作することができ、よって補体の溶解およびＡＤＣＣの能力を高めることが可能である。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ３：２１９−２３０  （１９８９）を参照されたい。また本発明は、化学療法剤、毒素（たとえば細菌、真菌、植物もしくは動物由来の酵素的に活性な毒素、もしくはそのフラグメント）、または放射性同位体（すなわちラジオコンジュゲート（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ））などの細胞傷害性薬物とコンジュゲートした本明細書中記載の抗体を含むイムノコンジュゲートをも考慮している。また、Ｆｃ領域は、本明細書中参照として援用されているＣｈａｎ  ａｎｄ  Ｃａｒｔｅｒ，  ２０１０  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ：  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  １０：３０１−３１６に記載されているように、半減期が延長するよう操作されてもよい。また、本明細書中記載されるように、Ｆｃ領域がタンパク質工学により修飾されているＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合を阻害する抗体のバリアントは、Ｆｃの修飾を伴わない同等の抗体（すなわち同等の抗原結合特性）と比較して、改善された有効性（すなわち治療上／診断上の有効性）を示し得る。
【００８６】
一実施形態では、本発明の抗体はヒト化されている。本発明に係る抗体の「ヒト化」型は、マウスイムノグロブリンに由来する最小配列を含む、特異的なキメライムノグロブリン、イムノグロブリン鎖またはそのフラグメント（抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２，または他の抗原結合部分配列）である。大抵の場合、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、本来の抗体（ドナー抗体）の望ましい特異性、親和性、および能力を維持しつつ、本来の抗体のＣＤＲ由来の残基により置換されている、ヒトイムノグロブリン（レシピエント抗体）である。
【００８７】
一部の例では、ヒトイムノグロブリンのＦｖフレームワーク（ＦＲ）残基を、対応する非ヒトの残基により置換してもよい。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体、または移入したＣＤＲもしくはフレームワーク配列のいずれでも見いだされない残基を含むことができる。これらの修飾は、抗体の性能をさらに精密化および最適化するために行われる。一般的に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが、本来の抗体のＣＤＲ領域に対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが、ヒトイムノグロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域に対応する、少なくとも１つ、典型的に２つの可変ドメインの実質的にすべてを含む。また好ましくは、ヒト化抗体は、イムノグロブリンの定常領域（Ｆｃ）の少なくともある領域、典型的にヒトイムノグロブリンの定常領域（Ｆｃ）の領域を含む。さらなる詳細に関しては、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３２１，  ｐｐ．  ５２２  （１９８６）；  Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３３２，  ｐｐ．  ３２３  （１９８８）；  Ｐｒｅｓｔａ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．，  ３，  ｐｐ．  ３９４  （１９９２）；  Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２３９，  ｐｐ．  １５３４；および米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい。これら開示全体は本明細書中参照として援用されている。本発明の抗体をヒト化するための方法は、当該分野でよく知られている。
【００８８】
ヒト化抗体を作製する際に使用される、軽鎖および重鎖の両方のヒトの可変ドメインの選択は、抗原性を低減するために非常に重要である。いわゆる「ベストフィット」方法に従い、本発明の抗体の可変ドメインの配列を、既知のヒトの可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングする。次に、マウス配列に近縁のヒト配列を、ヒト化抗体のヒトのフレームワーク（ＦＲ）として容認する（Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５１，  ｐｐ．  ２２９６  （１９９３）；  Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６，  ｐｐ．  ９０１）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループのすべてのヒト抗体のコンセンサス配列由来の特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークを、いくつかの異なるヒト化抗体に使用することができる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ＰＮＡＳ  ８９，  ｐｐ．  ４２８５  （１９９２）；  Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １５１  （１９９３））。「ヒト化」モノクローナル抗体を作製する別の方法は、免疫化に使用するマウスとしてＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ、カリフォルニア州フリーモント）を使用することである。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅは、そのイムノグロブリン遺伝子が機能的なヒトのイムノグロブリン遺伝子により置換されている、本発明に係るマウス宿主である。よって、このマウスにより産生またはこのマウスのＢ細胞から作製されたハイブリドーマで産生された抗体は、すでにヒト化されている。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅは、米国特許第６，１６２，９６３号に記載されており、この文献全体は本明細書中参照として援用されている。
【００８９】
またヒト抗体は、様々な他の技術、たとえばヒトの抗体のレパートリーを発現するよう操作された他のトランスジェニック動物を免疫化のために使用することにより（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  ３６２  （１９９３）  ２５５）、またはファージディスプレイ方法を使用する抗体レパートリーの選択により、産生されてもよい。このような技術は当業者に知られており、本願に開示されているモノクローナル抗体から開始して行うことができる。タンパク質―タンパク質の相互作用を阻害する別の方法は、Ａｒｋｉｎ  ＆  Ｗｅｌｌｓ  （Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．  ２００４，  ３：３０１−３１７）およびＪｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  （Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．  ２０１４，  ５４：４３５−４５６）に記載されるように、小分子の使用である。
【００９０】
一実施形態では、本発明の薬剤は小分子である。
【００９１】
本明細書中使用されるように、用語「小分子」は、低分子量を有する分子を意味する。一実施形態では、本発明の小分子は、１ｋＤａ（１０００Ｄａまたはダルトン）未満の分子量を有する。一実施形態では、本発明の小分子は、９００Ｄａ未満、８００Ｄａ未満、７００Ｄａ未満、６００Ｄａ未満、５００Ｄａ未満、４００Ｄａ未満、３００Ｄａ未満、２５０Ｄａ未満、２００Ｄａ未満、１５０Ｄａ未満、または１００Ｄａ未満の分子量を有する。
【００９２】
特定の実施形態では、本発明の薬剤は、小分子阻害剤または小分子遮断剤である。よって一実施形態では、本発明の薬剤は、ＣＦＨとＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８との間のタンパク質―タンパク質の相互作用の小分子阻害剤である。一実施形態では、本発明の小分子は、競合的アンタゴニストである。別の実施形態では、本発明の小分子は、アロステリック阻害剤である。
【００９３】
本発明の目的の１つは、炎症の治療に使用するための、ＣＦＨおよび／またはＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合を阻害する薬剤である。
【００９４】
一実施形態では、本発明の薬剤は、予防剤および／または治療剤である。特定の実施形態では、本発明の薬剤は治療剤である。
【００９５】
本発明の意味の中での、「炎症」は、ドーランド医学辞典に定義されているように、「組織の損傷または破壊により誘発され、有害な薬剤および損傷した組織の両方を破壊、希釈、または隔離するように作用する局所的な保護的応答」を意味する。炎症は、微小血管系の開窓、血液成分の間質腔への漏出、および炎症組織への白血球の遊走を特徴とする。肉眼でのレベルでは、これは通常、紅斑、浮腫、痛覚過敏（圧痛）、および疼痛といったよく知られた臨床兆候を伴う。
【００９６】
一実施形態では、本発明に係る薬剤は、炎症の治療に使用するためのものであって、前記炎症は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、網膜色素変性、パーキンソン病、多発性硬化症、アルツハイマー病、肥満、アテローム性動脈硬化、アレルギー、強直性脊椎炎、関節炎（変形性関節炎、リウマチ性関節炎、または乾癬性関節炎）、喘息、移植片対宿主病、クローン病、大腸炎、皮膚炎、憩室炎、線維筋痛症、肝炎、過敏性腸症候群、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｕｓ）、腎炎、および潰瘍性大腸炎を含む群から選択される。
【００９７】
一実施形態では、本発明の炎症は、急性炎症である。別の実施形態では、本発明の炎症は慢性炎症である。
【００９８】
一実施形態では、本発明の炎症は、治療抵抗性炎症である。一実施形態では、本発明の炎症は、軽度の慢性炎症である。一実施形態では、本発明の炎症は、治療抵抗性かつ軽度の慢性炎症である。
【００９９】
一実施形態では、本発明の炎症は、肥満およびアテローム性動脈硬化症などの代謝疾患、神経変性疾患、ならびに癌を含む群から選択される、治療抵抗性かつ軽度の慢性炎症である。
【０１００】
一実施形態では、本発明の薬剤は、単核食細胞系の蓄積に関連する炎症の治療に使用するためのものである。
【０１０１】
単核食細胞（ＭＰ）は、ミクログリア細胞（ＭＣ）、単球（Ｍｏ）、およびマクロファージ（Ｍφ）を含む細胞のファミリーを含む。単核食細胞の蓄積に関連する炎症として、限定するものではないが、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）または網膜色素変性などの網膜の炎症；パーキンソン病、多発性硬化症、またはアルツハイマー病などの神経変性疾患；肥満またはアテローム性動脈硬化などの代謝性障害；アレルギー；強直性脊椎炎；変形性関節炎、リウマチ性関節炎、または乾癬性関節炎などの関節炎；喘息、移植片対宿主病；クローン病；大腸炎；皮膚炎；憩室炎；線維筋痛症；肝炎；過敏性腸症候群；全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｕｓ）；腎炎；および潰瘍性大腸炎が挙げられる。
【０１０２】
一実施形態では、本発明に係る炎症は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）または網膜色素変性などの網膜の炎症；パーキンソン病、多発性硬化症、またはアルツハイマー病などの神経変性疾患；肥満またはアテローム性動脈硬化などの代謝障害を含む群から選択される。
【０１０３】
一実施形態では、本発明に係る炎症は、眼の炎症である。
【０１０４】
１つの好ましい実施形態では、本発明に係る炎症は、網膜の炎症である。本発明の意味の中では、「網膜の炎症」は、単核食細胞によって媒介される網膜下腔の炎症を意味する。一実施形態では、本発明に係る炎症は、網膜下の炎症である。
【０１０５】
一実施形態では、本発明の網膜の炎症は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）および網膜色素変性を含む。
【０１０６】
一実施形態では、本発明の薬剤は、加齢黄斑変性の治療に使用するためのものである。特定の実施形態では、加齢黄斑変性は、早期ＡＭＤ、萎縮性ＡＭＤ、および血管新生ＡＭＤ（またはウェット型ＡＭＤ）を含む。一実施形態では、本発明の薬剤は、萎縮性ＡＭＤの治療に使用するためのものである。別の実施形態では、本発明の予防剤および／または治療剤は、血管新生ＡＭＤの治療に使用するためのものである。
【０１０７】
一実施形態では、本発明に係るＡＭＤは早期である。早期（ＡＭＤ）は、色素斑（色素上皮の変質）に関連する、ドルーゼンと呼ばれている細胞外の沈殿物の、黄斑および黄斑周辺での蓄積を特徴とする。
【０１０８】
別の実施形態では、本発明に係るＡＭＤは後期である。後期（ＡＭＤ）は、片側または両側の合併症を特徴とする。後期ＡＭＤは、萎縮性ＡＭＤまたはウェット型ＡＭＤであり得る。
【０１０９】
一実施形態では、対象は、炎症、すなわち、単核食細胞の蓄積に関連する炎症に罹患している。特定の実施形態では、対象は、網膜の炎症に罹患している。好ましい実施形態では、対象は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）に罹患している。
【０１１０】
一実施形態では、ＡＭＤは早期ＡＭＤである。別の実施形態では、ＡＭＤは後期のＡＭＤである。一実施形態では、対象は、脈絡膜の血管新生ＡＭＤ（「ウェット型」ＡＭＤ）に罹患している。別の実施形態では、対象は、地図状萎縮（「ドライ型」ＡＭＤ）に罹患している。
【０１１１】
別の実施形態では、対象は、炎症の発症、すなわち、単核食細胞の蓄積の発生に対して感受性がある。特定の実施形態では、対象は、網膜の炎症を発症するリスクがある。好ましい実施形態では、対象は、ＡＭＤを発症するリスクがある。
【０１１２】
ＡＭＤを発症するリスクの例として、限定するものではないが、遺伝、喫煙、日光への露出、またはバランスが不十分な食事などのライフスタイル、年齢、過剰な血中コレステロール濃度、高血圧などが挙げられる。
【０１１３】
一実施形態では、本発明の対象は高齢者である。本明細書中使用されるように、用語「高齢者」は、対象が、少なくとも５０歳、少なくとも５５歳、６０歳、６５歳、７０歳、７５歳、８０歳、８５歳、または９０歳であることを意味する。
【０１１４】
特定の実施形態では、対象は、チロシン４０２のヒスチジン（Ｙ４０２Ｈ）への置換をもたらす、ＣＦＨのＳＣＲ７の多型により、ＡＭＤを発症するリスクがある。
【０１１５】
一実施形態では、対象は、未だ、炎症、好ましくはＡＭＤのための別の治療で治療されていない。別の実施形態では、対象は、すでに、炎症、好ましくはＡＭＤのための別の治療で治療されている。
【０１１６】
本発明の１つの目的は、上述の本発明の薬剤の少なくとも１つを含む組成物である。
【０１１７】
本発明の別の目的は、上述の本発明の薬剤の少なくとも１つと少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物である。
【０１１８】
これらの組成物に使用され得る薬学的に許容可能な賦形剤として、限定するものではないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和型植物性脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、塩、または硫酸プロタミンなどの電解質、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質（たとえばカルボキシメチルセルロースナトリウム）、ポリエチレングリコール、ポリアクリル酸塩、ワックス、ポリエチレン―ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコール、および羊毛脂が挙げられる。
【０１１９】
さらに本発明は、本発明の薬剤を含む薬物、組成物、または医薬組成物に関する。
【０１２０】
一実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物は、炎症、好ましくはＡＭＤを治療するため（または治療に使用するため）に使用される。
【０１２１】
好ましくは、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物は、本発明の薬剤の治療上有効量を含む。
【０１２２】
一実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物は、追加的な予防剤および／または治療剤をさらに含む。一実施形態では、前記追加的な予防剤および／または治療剤は、炎症、特にＡＭＤを治療するための別の薬剤である。
【０１２３】
本発明の薬剤、本発明の組成物、医薬組成物、および薬物の一日の総使用量は、健全な医学的判断の範囲内で主治医により決定されると理解されている。いずれかの特定の患者に特異的な治療上有効用量は、治療される障害および障害の重症度；使用される特定の薬剤の活性；使用される特定の組成物、患者の年齢、体重、一般的な健康状態、性別、および食事；使用される特定の薬剤の投与時間、投与経路、および排泄速度；治療期間；使用される特定の薬剤と併用してまたは特定の薬剤と同時に使用される薬物；ならびに医療の分野でよく知られている同様の要因を含む様々な要因に依拠するものである。たとえば、望ましい治療効果を達成するために必要とされる用量よりも少ないレベルで薬剤の投与を開始すること、および望ましい効果が達成されるまで用量を徐々に上げていくことは、当業者の範囲内である。しかしながら、本製品の一日用量は、成人で、１日あたり約１０〜約１００００ｍｇ、好ましくは１００〜約５０００ｍｇ、より好ましくは約２００〜約２０００ｍｇの幅広い範囲で変動し得る。好ましくは、本組成物は、治療される患者に対する用量を症状により調節するため、１０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇ、５００ｍｇ、１０００ｍｇ、および２，０００ｍｇの活性成分を含む。薬物は、典型的に約１０〜約１００００ｍｇの活性成分、好ましくは５〜約５０００ｍｇ、より好ましくは約１０〜約２０００ｍｇの活性成分を含む。薬物の有効量は、通常、０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、好ましくは約０．０５〜４０ｍｇ／ｋｇ体重／日、より好ましくは約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重／日、より好ましくは約０．２ｍｇ／ｋｇ体重／日の用量で供給されている。
【０１２４】
本発明の医薬組成物における抗体の投与に関するスケジュールおよび用量は、これら生成物に関する既知の方法に従い、たとえば製造社の説明書を使用して決定することができる。たとえば、本発明の医薬組成物に存在する抗体は、１００ｍｇ（１０ｍｌ）または５００ｍｇ（５０ｍｌ）のいずれかの単回使用のバイアルに、１０ｍｇ／ｍｌの濃度で供給することができる。生成物は、９．０ｍｇ／ｍｌの塩化ナトリウム、７．３５ｍｇ／ｍｌのクエン酸ナトリウム二水和物、０．７ｉｎｇ／ｍｌのポリソルベート８０、および滅菌注射用水中で、静脈内（ＩＶ）投与のために製剤化されている。ｐＨは、６．５に調節されている。これらのスケジュールは例示的なものであり、最適なスケジュールおよびレジメンは、臨床試験で決定しなければならない医薬組成物中の特定の抗体の親和性および忍容性を考慮して適合させることができることが、理解されるであろう。
【０１２５】
対象への投与に使用するため、本組成物は、対象への投与のために製剤化されている。本発明の組成物は、経口投与、非経口投与、局所投与、吸入噴霧による投与、直腸投与、経鼻投与、頬側投与、経膣投与、または埋め込み型リザーバーを介した投与を行ってもよい。本明細書中使用される用語「投与」は、皮下、静脈内、筋肉内、眼内、関節内、滑膜内、胸骨内、くも膜下腔内、肝臓内、病巣内、および頭蓋内の注射または注入の技術を含む。
【０１２６】
一実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、薬物は、局所投与に適した形態である。
【０１２７】
局所投与に適合させた形態の例として、限定するものではないが、液剤、ペースト、または固体の組成物、およびより具体的には、水溶液、点滴薬（ｄｒｏｐ）、点眼液（ｅｙｅ  ｄｒｏｐ）、点眼剤（ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、分散剤、スプレー、マイクロカプセル、マイクロ粒子もしくはナノ粒子、ポリマーパッチ、または徐放パッチの形態が挙げられる。
【０１２８】
一実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物は、局所投与、より具体的には局所的な眼への投与に適合させた製剤のための、１つまたは複数の薬学的に許容可能な担体を含む。
【０１２９】
一実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物は、注射に適合させた形態、たとえば眼内、筋肉内、皮下、皮内、経皮性、または静脈内の注射または注入に適合させた形態である。
【０１３０】
注射に適合させた形態の例として、限定するものではないが、溶液、たとえば滅菌水溶液、分散剤、エマルジョン、懸濁剤、使用前に液体を添加して溶液または懸濁液を調製するための使用に適した固体の形態、たとえば散剤、リポソームの形態などが挙げられる。
【０１３１】
本発明の組成物の滅菌注射可能形態は、水性または油性の懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して、当該分野で知られている技術によって、製剤化され得る。また、滅菌注射可能調製物は、非毒性の非経口で許容可能な希釈剤または溶媒中の滅菌注射可能な溶液または懸濁液であり得る。使用され得る許容可能なビヒクルおよび溶媒は、水、リンガー溶液、および等張食塩水である。さらに、滅菌不揮発性油は、溶媒または懸濁媒体として、以前より使用されている。この目的のため、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含むいずれかの非刺激性の不揮発性油を使用してもよい。オリーブ油またはヒマシ油、特にこれらのポリオキシエチル化のバージョンなど、オレイン酸およびそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は、天然の薬学的に許容可能な油であるため、注射可能な調製物に有用である。また、これらの油性の溶液または懸濁液は、エマルジョンおよび懸濁剤を含む薬学的に許容可能な剤形の製剤化に一般に使用されている長鎖アルコール希釈剤または分散剤、たとえばカルボキシメチルセルロースまたは類似の分散剤を含んでもよい。その他の、薬学的に許容可能な固体、液体、または他の剤形の製造に一般に使用されている、Ｔｗｅｅｎｓ、Ｓｐａｎｓなどの一般に使用される界面活性剤、および乳化剤または生体利用能促進剤（ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ｅｎｈａｎｃｅｒ）を、製剤化の目的のため使用してもよい。
【０１３２】
特定の実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物は、眼内投与、より好ましくは眼内注射に適した形態である。
【０１３３】
本発明の意味の範囲内では、「眼内投与」は、眼の内部への直接的な薬剤の注射を意味し、ここで眼の内部は、眼球内に位置するいずれかの領域を意味し、一般に、限定するものではないが、眼球の中に見いだされるいずれかの機能的な（たとえば視覚に関する）もしくは構造上の組織、または眼球の内側を部分的もしくは完全に覆う組織もしくは細胞の層を含む。このような領域の具体例として、前眼房、後眼房、硝子体腔、脈絡膜、黄斑、および網膜、ならびに、後眼の領域または部位を血管形成または神経支配する血管および神経が挙げられる。一実施形態では、眼の内部は、後眼房、硝子体腔、脈絡膜、黄斑、および網膜、ならびに後眼の領域または部位を血管形成または神経支配する血管および神経を含む後眼部を意味する。この実施形態では、眼内投与は、後眼部内投与、好ましくは、硝子体内投与を表し、眼内投与は、好ましくは硝子体内注射である。
【０１３４】
一実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物は、少なくとも１日に１回、その必要がある対象に投与される。たとえば、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物を、１日に１回、１日に２回、または１日に３回投与してもよい。好ましい実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物を、１日に１回、その必要がある対象に投与する。
【０１３５】
別の実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物を、少なくとも１週間に１回、その必要がある対象に投与する。たとえば、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物を、１週間に１回、１週間に２回、１週間に３回、１週間に４回、または１週間に最大７回投与してもよい。
【０１３６】
別の実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物を、１ケ月に１回、１ケ月に２回、２ケ月ごと、２ケ月もしくは３ケ月ごと、１年に２回、または１年に１回、その必要のある対象に投与する。
【０１３７】
本発明の別の目的は、その必要のある対象の炎症を治療する方法であって、本発明の薬剤の治療上有効量を前記対象に投与することを含む、方法である。
【０１３８】
一実施形態では、本発明の方法は、単核食細胞の蓄積に関連する炎症を治療するためのものである。好ましい実施形態では、本発明の方法は、加齢黄斑変性を治療するためのものである。
【０１３９】
一実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物を、対象に投与する。
【０１４０】
本発明の別の目的は、その必要のある対象のＣＦＨ活性を阻害するための方法であって、本発明の薬剤の有効量を対象に投与することを含む、方法である。
【０１４１】
また、本発明は、その必要がある対象においてＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合を阻害するための方法であって、本発明の薬剤の有効量を対象に投与することを含む、方法に関する。
【０１４２】
本発明の別の目的は、その必要がある対象において単核食細胞の蓄積を除去する方法であって、上述の薬剤の治療上有効量を前記対象に投与することを含む、方法である。
【０１４３】
一実施形態では、本発明の方法は、上述の薬剤の治療上有効量をその必要のある対象に投与することを含む、前記対象において単核食細胞の蓄積を除去することにより、単核食細胞の蓄積に関連する炎症を治療するためのものである。
【０１４４】
本発明のさらなる目的は、その必要のある対象における炎症部位でのマクロファージの除去を加速させるための方法であって、上述の薬剤の治療上有効量を前記対象に投与することを含む、方法である。
【０１４５】
一実施形態では、マクロファージは、非動員組織マクロファージ、すなわち血流に入っていないマクロファージを含む。
【０１４６】
また、本発明は、本発明に係る薬剤、医薬組成物、または薬物を含むキットに関する。
【０１４７】
一実施形態では、本発明のキットは、薬剤、医薬組成物、または薬物をその必要がある対象に投与するための手段をさらに含む。
【０１４８】
一実施形態では、本発明のキットは、薬物、医薬組成物、または薬物を前記対象に投与するための説明書をさらに含む。
【０１４９】
一実施形態では、本発明のキットは、２つの部分を含み、第１の部分は、本発明に係る薬剤、医薬組成物、または薬物を含み、第２の部分は、追加的な予防剤および／または治療剤を含む。一実施形態では、前記追加的な予防剤および／または治療剤は、炎症、特にＡＭＤを治療するための別の薬剤である。
【０１５０】
一実施形態では、本発明のキットは、炎症を治療するために（または治療に使用するために）使用されている。
【０１５１】
一実施形態では、追加的な予防剤および／または治療剤を含む部分である本キットの部分は、本発明の薬剤、医薬組成物、または薬物と同じ投与経路に適合させた形態である。別の実施形態では、追加的な予防剤および／または治療剤を含む部分である本キットの部分は、本発明の薬剤、医薬組成物、または薬物とは別の投与経路に適合させた形態である。
【図面の簡単な説明】
【０１５２】
【図１】ＣＦＨの欠損が慢性病原性網膜下炎症を予防することを示す一連のグラフである。Ａ：１２ケ月齢のＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスおよびＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスのＩＢＡ−１で染色したＲＰＥのフラットマウントの代表的な画像、ならびに表記の系統の２〜３ケ月齢および１２ケ月齢のマウスの網膜下のＩＢＡ−１＋ＭＰの定量化（群あたりｎ＝１１〜１７、一元配置Ａｎｏｖａ／Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉの検定  ＊ｐ＜０．０００１、他のすべての群との比較、＄ｐ＜０．０００１、Ｃｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰ（１２ケ月齢）との比較）。Ｂ：１２ケ月齢のＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスおよびＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスの視神経から１０００μｍで撮影した顕微鏡写真。Ｂ’：１２ケ月齢のマウスにおける、視神経（０μｍ）から離れていく距離（−３０００μｍ：下極、＋３０００μｍ：上極）での、視細胞核の配列。Ｂ’’：１２ケ月齢の表記のトランスジェニックマウス系統の視細胞核の配列の数の曲線下面積の定量化（一元配置Ａｎｏｖａ／Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉの検定  Ｃ’’：ｎ＝４〜６／群、＊ｐ＜０．００１；Ｄ：ｎ＝７〜９／群  ＊ｐ＜０．００１）。マウスを、定量化のため、いくつかの（≧３）独立したケージから得た。ＯＮＬ：外核層。スケールバー＝５０μｍ。Ｃ：ピーナッツ凝集素（錐状体区域を染色、赤）、錐体アレスチン（白色）、ＩＢＡ−１（緑色）で３重に染色した１２ケ月齢のＣｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスおよびＣｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰ  Ｃｆｈ−／−マウスにおいて、上部周辺部で撮影した顕微鏡写真。Ｃ’：表記のトランスジェニックマウス系統の１２ケ月齢のマウスにおける、周辺部網膜、中心網膜、下部網膜、および上部網膜（−３０００μｍ：下極、＋３０００μｍ：上極、視神経：０μｍ）の網膜のフラットマウントでの錐状体密度の定量化ならびにそれらの平均値（Ｃ’’）（Ｃ’’：一元配置Ａｎｏｖａ／Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉの検定：＊ｐ＜０．０００１、他のすべての群との比較；マン・ホイットニーの検定  ＄ｐ＝０．００２４、Ｃｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスとの比較）。Ｎは、グラフに示した反復実験の数であり、反復実験は、少なくとも３つの異なるケージの異なるマウス由来の眼の定量化を表す。
【図２】Ｃｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスおよびＣｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスを、血清フリーのＤＭＥＭ培地で２４時間インキュベートしたか、またはＡＰＯＥ３（５μｇ／ｍｌ）で刺激した、初代培養の骨髄単球（ＢＭ−Ｍｏ、１００  ０００細胞／ウェル）および脳のミクログリア細胞（ＭＣ、２００  ０００細胞／ウェル）由来の上清のサイトカインマルチプレックス解析を示す一連のグラフである（Ａ：ＩＬ−１α；Ｂ：ＩＬ−１β；Ｃ：ＴＮＦα；Ｄ：ＩＬ−６）。
【図３】ＭＰ由来のＣＦＨが網膜下の急性炎症の消散を阻害することを示す一連のグラフである。Ａ：表記の系統の２〜３ケ月齢のマウスの、光照射していないマウス（ＮＩ）、４日間光刺激したマウス（ｄ４）、および４日間光刺激した後に１０日間の回復期を経たマウス（４＋１０）における、網膜下のＩＢＡ−１＋ＭＰの定量化（ｎ＝６〜１２／群、一元配置Ａｎｏｖａ／Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉの検定  ＊ｐ＜０．００１、ＮＩ群との比較、＄ｐ＜０．０００１、Ｃｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰｄ４＋１０との比較）。Ｂ：光刺激モデルの前（Ｄ０）、終了時（Ｄ４）、および１０日後（Ｄ１４）の、２〜３ケ月齢のＣｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウス、Ｃｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスの循環血漿中のＣ３のＥＬＩＳＡによる定量化。４日前に、マウスに１００μｇの空のプラスミドもしくはマウスのＣＦＨを発現するプラスミドを注射し、または注射しなかった（ｎ＝４〜５／群、一元配置Ａｎｏｖａ／Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉの検定  ＊ｐ＜０．００１）。Ｃ：１００μｇの空のプラスミドもしくはマウスＣＦＨを発現するプラスミドを注射した２〜３ケ月齢のＣｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウス、Ｃｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスにおける、光刺激モデルの１４日目での網膜下ＩＢＡ−１＋ＭＰ／ｍｍ２の定量化（ｎ＝６〜１０／群、一元配置Ａｎｏｖａ／Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉの検定  ＊ｐ＜０．００１）。Ｄ：表記の系統由来の網膜、脈絡膜／ＲＰＥ、循環血液中の単球（ｃＭｏ）、骨髄単球（ＢＭ−Ｍｏ）、網膜のミクログリア（ＭＣ  網膜）、脳のミクログリア（ＭＣ  ＣＮＳ；ｎ＝５匹のマウス由来のプールした３つの調製物）のＲｐｓ２６  ｍＲＮＡで正規化したＣｆｈ  ｍＲＮＡの定量的ＲＴ−ＰＣＲ。Ｅ：Ｃｆｈ−／−マウスに網膜下養子移入してから２４時間後の、表記の系統のＣＦＳＥ＋ＭＣの代表的な顕微鏡写真。Ｃ５７ＢＬ６／Ｊ野生型またはＣｆｈ−／−のマウスへの養子移入から２４時間後の、表記の系統のＣＦＳＥ＋ＭＣの定量化（ｎ＝１２〜１８／群；一元配置Ａｎｏｖａ／Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉの検定  ＊ｐ＜０．００１、Ｃ５７ＢＬ６／Ｊ野生型のＣＦＳＥ＋ＭＣとの比較、＄ｐ＜０．０００１、Ｃｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰのＣＦＳＥ＋ＭＣとの比較、†ｐ＜０．０００１、Ｃｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−のＣＦＳＥ＋ＭＣとの比較）。スケールバー＝５０μｍ
【図４】トランスジェニックマウスにおける血漿中のＣ３濃度、ならびにＣ３およびＣ３フラグメント、およびＣＦＨの免疫組織化学検査を示す、一連のグラフおよび写真である。Ａ：Ｃ５７ＢＬ６／Ｊ野生型、Ｃｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰ、またはＣｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−のマウス由来の血漿中のＣ３濃度の補体因子Ｃ３（Ｃ３）−ＥＬＩＳＡの測定。Ｂ〜Ｄ：４日間光刺激したＣｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスおよびＣｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスにおけるＣ３（Ｂ、クローン１１Ｈ９  Ｈｙｃｕｌｔ  ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｃ３ｂ／ｉＣ３ｂ／Ｃ３ｃ（Ｃ、クローン３／２６  Ｈｙｃｕｌｔ  ｂｉｏｔｅｃｈ）、およびＣＦＨ（Ｄ、ａｂ８８４２  Ａｂｃａｍ）の免疫組織化学検査。ＯＮＬ：外核層；ＲＰＥ：網膜色素上皮。陰性対照：一次抗体を省略すると染色は認められなかった（不図示）；実験を３回反復したが類似の結果を得た。スケールバー＝５０μｍ。
【図５】ＭＰにおけるＣｄ１１ｂおよびＣｄ１８の転写を示す一連のグラフである。ＷＴのＣ５７ＢＬ６／Ｊマウス由来（左のカラム）の網膜（１）、ＭＣを含まない網膜（２、ＭＣの分取後）、肝臓（３）、骨髄単球（ＢＭ−Ｍｏ）、網膜のミクログリア（５、ＭＣ網膜）、および脳のミクログリア（６、ＣＮＳ  ＭＣ）、ならびにＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスおよびＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスの網膜およびＣＮＳ由来のＢＭ−ＭｏおよびＭＣの、Ｒｐｓ２６  ｍＲＮＡで正規化した、Ｃｄ１１ｂ（Ａ−Ｂ）、Ｃｄ１８（Ｃ−Ｄ）のｍＲＮＡの定量的ＲＴ−ＰＣＲ。
【図６】ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの固定化が、ＭＰの除去を阻害することを示す一連のグラフである。ＡおよびＢ：（Ａ）漸増用量のｈＣＦＨ：：Ｃｙ５．５（１５，６２５μｇ／ｍｌ〜５００μｇ／ｍｌ）とインキュベートした、分取された脳のＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−ミクログリア細胞（ＧＦＰｈｉｇｈでゲートを設定）、および（Ｂ）アイソタイプまたは抗ＣＤ１１ｂ  ５Ｃ６抗体とプレインキュベートした後ｈＣＦＨ：：ｃｙ３（１００μｇ／ｍｌ）またはＰＢＳでインキュベーションした、分取されたＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−骨髄単球の代表的なフローサイトメトリーの画像。骨髄単球は、ＧＦＰ＋ＣＤ１１５＋ＬＹ６Ｇ−細胞でゲートを設定した（実験を３回反復したが類似の結果を得た）。Ｃ：養子移入から２４時間後の、対照ＩｇＧまたは抗ＣＤ１１ｂ  ５Ｃ６抗体によるＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−のＣＦＳＥ＋ＭＣの定量化（ｎ＝１２〜１３／群；Ａｎｏｖａ／Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉの検定  †ｐ＜０．０００１、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−のＣＦＳＥ＋ＭＣとの比較、‡ｐ＜０．０００１、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−＋ＣＦＨ＋ｃＩｇＧとの比較）。スケールバー＝５０μｍ。Ｄ：ｄ０に対照のＩｇＧまたは抗ＣＤ１１ｂ  ５Ｃ６を注射した３ケ月齢のＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスの、レーザー損傷から７日後の、ＣＤ１０２＋ＣＮＶ  ７に対して０〜５００μｍの距離で計測したＲＰＥ上での網膜下ＩＢＡ−１＋ＭＰの定量化（ｎ＝７〜１２／群、ＭａｎｎＷｈｉｔｎｅｙ  ＄ｐ＝０，０２９８ｖｓｃＩｇＧ）。Ｅ：ｄ０に対照のＩｇＧまたは抗ＣＤ１１ｂ  ５Ｃ６を注射した３ケ月齢のＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスの、レーザー損傷から７日後の、ＲＰＥ／脈絡膜でのＣＤ１０２＋ＣＮＶの定量化（ｎ＝７〜１２／群、ＭａｎｎＷｈｉｔｎｅｙ  ＄ｐ＝０．０３５、ｃＩｇＧとの比較）。
【図７】ＡＭＤ関連の４０２Ｈ  ＣＦＨが、一般的な４０２Ｙ  ＣＦＨよりも有意に網膜下のＭＰの除去を阻害することを示している、一連のヒストグラムである。Ａ：精製したＣＦＨＹ４０２またはＣＦＨ４０２Ｈを伴うまたは伴わないＷＴのＣ５７ＢＬ６／Ｊへの養子移入から２４時間後のＲＰＥおよび網膜のフラットマウント上での網膜下のＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−  ＣＦＳＥ＋単球の定量化（Ａｎｏｖａ／Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ検定  ＊ｐ＜０．０００１）。Ｂ：ＰＢＳ、ｈＣＦＨ  ４０２Ｙ、またはｈＣＦＨ  ４０２Ｈを伴うＲＰＥおよび網膜のフラットマウントでのＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−ＣＦＳＥ＋ＭＣの定量化（ｎ＝１８〜３０／群、一元配置Ａｎｏｖａ／Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉの検定  ＊ｐ＜０．０００１）。Ｍｏ：単球；ＭＣ：ミクログリア細胞；ｎ＝グラフで示されている反復の数。反復は、３個の異なる細胞調製物での２回（Ａ）から３回（Ｂ）の実験由来の個々のマウスからの定量化を表す。
【発明を実施するための形態】
【０１５３】
実施例
本発明は、以下の実施例を参照することにより、より良好に理解されるであろう。これらの実施例は、本発明の特定の実施形態を表すことを企図しており、本発明の範囲を限定することを企図するものではない。
【０１５４】
材料および方法
動物
Ｃｆｈ−／−−マウスは、親切にも贈与された。Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスを購入し（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｊａｃｋｓｏｎ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、Ｃｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスの系統を作製した。すべてのマウスは、Ｃｒｂ１ｒｄ８、Ｐｄｅ６ｂｒｄ１、およびＧｎａｔ２ｃｐｆｌ３の変異に関して陰性であるか、または陰性となるように戻し交配された。マウスを、水および通常の食餌を自由に与えた特定の無菌条件下の動物施設に、１２／１２時間の明／暗周期（１００〜５００ルクス）で収容した。すべての実験プロトコルおよび手法は、地域の動物倫理委員会（ｌｏｃａｌ  Ａｎｉｍａｌ  ｅｔｈｉｃｓ  ｃｏｍｍｉｔｔｅｅｓ）の“Ｃｏｍｉｔｅ  ｄ’ｅｔｈｉｑｕｅ  ｅｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ａｎｉｍａｌｅ  Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｄａｒｗｉｎ”  （Ｎ°  Ｃｅ５／２０１０／０１１，  Ｃｅ５／２０１０／０４４，  Ｃｅ５／２０１１／０３３）によって、承認されたものであった。
【０１５５】
単核食細胞および錐状体の定量化のための脈絡膜および網膜のフラットマウント
眼球を摘出し、４％のＰＦＡで３０分間固定し、角膜輪部で分割し、角膜および水晶体を廃棄した。網膜を、ＲＰＥ／脈絡膜／強膜から注意深く剥がした。網膜および脈絡膜を、ピーナッツ凝集素のＡｌｅｘａ  ５９４（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ；１：５０）、抗ＩＢＡ−１抗体（Ｗａｋｏ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ；１：４００）、および抗マウス錐体アレスチン抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，  ＃ＡＢ１５２８２；１：１００００）、次いでＡｌｅｘａ  ４８８およびＡｌｅｘａ  ６４７に結合した抗ウサギ二次抗体（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ；１：５００）とインキュベートし、Ｈｏｅｃｈｓｔを使用して核染色を行った。脈絡膜および網膜のフラットマウントを作製し、蛍光顕微鏡ＤＭ５５００Ｂ（Ｌｅｉｃａ）で観察した。ＩＢＡ−１＋細胞を、ＲＰＥ／脈絡膜全体のフラットマウント、および網膜の外節側で計測した。ＰＡ＋錐体アレスチン＋細胞を、中心網膜および末梢網膜の方位性の網膜のフラットマウントで計測した。
【０１５６】
組織学的検査および免疫組織化学検査
眼を、０．５％のグルタルアルデヒド、４％のＰＦＡで２時間固定し、脱水させ、Ｈｉｓｔｏｒｅｓｉｎ（Ｌｅｉｃａ）で標本にした。下極、視神経、および上極が交叉する５μｍの方位性切片を作製し、トルイジンブルー（ｔｏｌｕｉｄｉｎ  ｂｌｕｅ）で染色した。ＯＮＬの核の列（Ｒｏｗｓ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｉ）を、視神経から異なる距離で計測した（Ｓｅｎｎｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１３，  ５：１７７５−１７９３）。免疫組織化学検査では、４日間光刺激したマウス由来の眼を、４％のＰＦＡで２時間固定し、３０％のスクロースで、４℃で一晩インキュベートし、ＯＣＴに包埋し、切片を作製し（１０μｍ）、抗Ｃ３抗体（クローン１１Ｈ９  Ｈｙｃｕｌｔ  ｂｉｏｔｅｃｈ；１：５０）、抗Ｃ３ｂ／ｉＣ３ｂ／Ｃ３ｃ抗体（クローン３／２６  Ｈｙｃｕｌｔ  ｂｉｏｔｅｃｈ；１：５０）、および抗ＣＦＨ抗体（ａｂ８８４２  Ａｂｃａｍ；１：１００）、ならびに適切な二次抗体およびＨｏｅｃｈｓｔの核染色で染色した。
【０１５７】
光刺激モデル
２〜３ケ月齢のマウスを、６時間暗室に順応させ、瞳孔を毎日散大させ、緑色のＬＥＤ光（２ＡＭに開始、４５００ルクス、ＪＰ  Ｖｅｚｏｎ  ｅｑｕｉｐｅｍｅｎｔｓ）に４日間曝露し、その後、上述の１２ｈ／１２ｈ周期の通常の施設の条件で飼育した（Ｓｅｎｎｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ，  ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１３，  ５：１７７５−１７９３）。ＭＰの計数を、光の曝露の終了時または１０日後（ｄ１４）に評価した。
【０１５８】
流体力学的注射
マウスの補体因子Ｈを、ＮｈｅＩおよびＳａｃＩＩの制限部位を使用してＰｌｉｖｅベクター（Ｍｉｒｕｓ）にクローン化した。プラスミドをシークエンシングし、エンドトキシンフリーのＭｅｇａｐｒｅｐ  ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）で増幅させた。０．９％のＮａＣｌで希釈したプラスミドを、マウス当たり１００μｇ注射した。尾静脈に注射した容量は体重（約２５ｇ）の１０％であった（Ｒａｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ．  ２０１０，  １１５：４８７０−４８７７）。４日後に、マウスを光刺激モデルに曝露し、Ｃ３の濃度を定量化するため、Ｄ０、Ｄ４、およびＤ１４に、５０μｌの血液を採取した（下顎静脈）。
【０１５９】
逆転写およびリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応およびＥＬＩＳＡ
上述のように（Ｓｅｎｎｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１３，  ５：１７７５−１７９３）、Ｓｙｂｒ  Ｇｒｅｅｎ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用したＲＴ−ＰＣＲ（ＣＦＨ  センス：５’ＡＡＧ  ＡＧＡ  ＴＴＣ  ＡＣＣ  ＧＣＣ  ＡＴＴ  ＴＣ−３’；ＣＦＨ  アンチセンス：５’ＴＧＣ  ＡＴＧ  ＴＧＣ  ＣＴＴ  ＴＣＴ  ＡＡＡ  ＣＡ  ３’；Ｓ２６  センス：５’ＡＡＧ  ＴＴＴ  ＧＴＣ  ＡＴＴ  ＣＧＧ  ＡＡＣ  ＡＴＴ−３’；Ｓ２６  アンチセンス：５’ＡＧＣＡＧＧＴＣＴＧＡＡＴＣＧＴＧＧ  ＴＧ−３’）およびマウスＣ３  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を使用した単離した血漿でのＥＬＩＳＡ。
【０１６０】
単球およびミクログリア細胞の調製、解析、および培養
血液試料を、ＥＬＩＳＡによる血漿中のＣ３（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）レベルを決定するために回収した。骨髄単球、循環血液中の単球、中枢神経のＭＣ、および網膜のＭＣを精製した。Ｍｏを、陰性選択により単離した（ＥａｓｙＳｅｐ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  Ｋｉｔ，  Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）。解離させし、ＰＢＳを灌流した脳または網膜から、ＭＣを調製した（Ｎｅｕｒａｌ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ，  Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）。解離させた後、７０μｍのフィルターを通過させた細胞懸濁液を洗浄し、ミエリンを除去し、パーコール密度勾配遠心を行った。次に、抗ＣＤ１１ｂマイクロビーズ（クローンＭ１／７０．１５．１１．５，  Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）で標識した細胞を、ＭＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）により精製し、洗浄した。血清由来のＣＦＨによる細胞の混入を回避するため、いずれの精製ステップでも血清は使用しなかった。この細胞を養子移入実験に使用し、ＲＴ−ｑＰＣＲにより解析するか、または組み換えヒトＡＰＯＥ３（Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ；１０μｇ／ｍＬ）の存在下で、無血清ＤＭＥＭ中で２４時間培養し、最終的に、その上清を、サイトカインマルチプレックスアレイ（ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ  ＭＡＰ  Ｍｏｕｓｅ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｂｅａｄ  Ｐａｎｅｌ，  Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）により解析した。
【０１６１】
網膜下でのＭＰの養子移入およびクリアランス
Ｌｅｖｙら（ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１５，  ７：２１１−２２６）に従い、表記のマウス系統の脳のミクログリアを、上述のように分取し、１０μｍのＣＦＳＥ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で標識し、洗浄し、ＰＢＳに再懸濁した。１２０００個の細胞（４μｌ）を、麻酔した１０〜１４週齢の野生型またはＣｆｈ−／−マウスの網膜下腔に、ガラスのマイクロキャピラリー（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）およびマイクロインジェクターを使用して注射した。眼内の圧力増大を回避し、４μｌの溶液で網膜の解離を可能にするため、網膜下注射の前に、ガラスのキャピラリーで穴をあけた。網膜下注射は、眼底検査により確認した。特定の実験では、細胞を、ドナー由来のヒトＣＦＨ（５００μｇ／ｍｌ）（Ｔｅｃｏｍｅｄｉｃａｌ）、精製４０２Ｈおよび４０２Ｙ  ＣＦＨ（Ｃｌａｉｒｅ  Ｈａｒｒｉｓ）、または合成ＣＦＨ（ＬＦＢ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｌｉｌｌｅ）、抗ＣＤ１１ｂ（１０μｇ／ｍｌ、クローン５Ｃ６  Ａｂｄ  Ｓｅｒｏｔｅｃ）、抗Ｃ３ｂ／ｉＣ３ｂ／Ｃ３ｃ抗体（１０μｇ／ｍｌ、クローン３／２６  Ｈｙｃｕｌｔ  ｂｉｏｔｅｃｈ）、アイソタイプコントロールラットのＩｇＧ２ｂ（１０μｇ／ｍｌ，  Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）、ならびにアイソタイプ対照マウスＩｇＭ（１０μｇ／ｍｌ，  Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）と同時注射した。２４時間後に眼を摘出し、４％のＰＦＡで３０分間固定し、ＤＡＰＩで標識した。出血を伴う眼を廃棄した。網膜下腔のＣＦＳＥ＋細胞を、網膜のＲＰＥ側およびＲＰＥの頂端側のフラットマウントで定量化した。
【０１６２】
フローサイトメトリーによるＣＦＨ結合アッセイ
ヒトＣＦＨを、シアニン５．５（Ａｂｃａｍ  ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ｋｉｔｓ）にコンジュゲートした。Ｃｘ３Ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−由来のＭＣを、表記の濃度のコンジュゲートヒトＣＦＨ（ＩｇＧおよび抗ＣＤ１１ｂ  １０μｇ／ｍｌを伴うまたは伴わない）によって、ＰＢＳ中３７℃で３０分間染色し、２回洗浄した後、ＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で獲得した。解析を、Ｆｌｏｗｊｏを使用して行った。簡単に述べると、ＦＳＣ−Ｈ、ＦＳＣ−Ｗ、ＳＳＣ−Ｈ、およびＳＳＣ−Ｗに関してダブレットを排除し、ミクログリア細胞をＧＦＰｈｉｇｈ細胞として解析した。ｈＣＦＨ：：Ｃｙ５とインキュベートした骨髄単球を、ラット抗ＣＤ１１５−ＰＥ（Ａｂｄ  Ｓｅｒｏｔｅｃ）、ラット抗−ＬＹ６Ｇ  ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ７００（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で標識し、ＧＦＰ＋、ＣＤ１１５＋、ＬＹ６Ｇ−細胞として定義した。ＭＣの精製に使用される抗ＣＤ１１ｂ  クローンＭ１／７０．１５．１１．５は、図６Ａに示されるようにＣＦＨの結合を妨害せず、組み換えＣＦＨが、クローンＭ１／７０を使用して分取されたＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−のＭＣおよびＴＲＥ２Ｃｆｈ−／−のＭＣの除去の加速を逆転させることができるという事実に、留意されたい（図３）。この差異は、クローンＭ１／７０が５Ｃ６クローンと比較して別個のＣＤ１１ｂのエピトープを認識するという事実による可能性がある（Ｒｏｓｅｎ  ａｎｄ  Ｇｏｒｄｏｎ，  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  １９８７，  １６６，  １６８５−１７０１）。
【０１６３】
レーザー損傷モデル
レーザー凝固を、手術用顕微鏡に取り付けた５３２ｎｍの眼科用レーザーで行った（Ｖｉｔｒａ  Ｌａｓｅｒ、５３２ｎｍ、４５０ｍＷ、５０ｍｓ、および２５０μｍ）。２μｌのＰＢＳ、アイソタイプ対照ラットのＩｇＧ２ｂ（５０μｇ／ｍｌ，Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）、またはラット抗マウスＣＤ１１ｂ（５０μｇ／ｍｌ，クローン５Ｃ６  Ａｂｄ  Ｓｅｒｏｔｅｃ）の硝子体内注射を、ガラスキャピラリー（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）およびマイクロインジェクターを使用して行い、マウスを１０日目に屠殺した。ＲＰＥおよび網膜のフラットマウントを、ポリクローナルウサギ抗ＩＢＡ−１（Ｗａｋｏ）およびラット抗マウスＣＤ１０２（クローン３Ｃ４、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の適切な二次抗体を使用して上述のように染色し、定量化した（Ｓｅｎｎｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１３，  ５，  １７７５−１７９３）。必要な場合は、Ｈｏｅｃｈｓｔで対比染色した。蛍光顕微鏡（ＤＭ５５００，  Ｌｅｉｃａ）下で調製物を観察し、ＲＰＥ上でＩＢＡ−１＋ＭＰを、ＣＤ１０２＋血管新生の周辺の直径５００μｍで計測した。
【０１６４】
統計解析
実験用の試料の大きさを、以前の試験に従い決定した（Ｃｏｍｂａｄｉｅｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２００７，  １１７，  ２９２０−２９２８；  Ｓｅｎｎｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１３，  ５，  １７７５−１７９３）。網膜下注射に続発する重篤な出血は、ＭＰのクリアランスを妨害するものであり、除外基準として使用した。Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  ６（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を、データ解析およびグラフ表示に使用した。すべての値を、平均値±ＳＥＭとして記録した。実験のデザインに応じて平均値において、一元配置ＡＮＯＶＡ、次いでＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉのポスト検定（多重比較のため）またはマン・ホイットニーのＵ検定（２組の比較）により統計解析を行った。ｎおよびｐ値は、図面のキャプションに示されている。
【０１６５】
実施例１：ＣＦＨの欠損は、慢性病原性網膜下炎症を予防する。
網膜下腔は、正常な条件下では、有意な数の単核食細胞（ＭＰ）を含まない。これは、おそらくは、浸潤するＭＰを迅速に除去する強力な免疫抑制性ＲＰＥシグナルに加えて、化学誘引物質が生理学的に低レベルである結果である（Ｓｅｎｎｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ，  ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１３，  ５：１７７５−１７９３；Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１５，  ７：２１１−２２６）。Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスは、ドルーゼンおよびＲＰＥ萎縮を発生しないが、ＲＰＥでのＭＰの蓄積、ならびにＡＭＤで観察される関連する視細胞の変性および過剰なＣＮＶのモデルとなる（Ｃｏｍｂａｄｉｅｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２００７，  １１７：２９２０−２９２８；  Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１５，  ７：２１１−２２６）。網膜下のＭＰの蓄積におけるＣＦＨの潜在的な役割を評価するために、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスを作製した。すべてのマウスは、ＡＭＤ様の特徴を引き起こし得る、Ｃｒｂ１ｒｄ８の混入を含まず、ケージにカバーを追加することなく、１００〜５００ルクスの１２時間／１２時間の明暗周期下で飼育した。２〜３ケ月齢および１２ケ月齢のマウスの網膜およびＲＰＥ／脈絡膜フラットマウント上での網膜下のＩＢＡ−１＋ＭＰの定量化により、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスにおける網膜下ＭＰの加齢に関連する増加が、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスではほぼ完全に予防されることが明らかになった（図１Ａ）。本出願人らは、以前に、１２ケ月齢のＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスで観察された網膜下ＭＰの蓄積が、有意な視細胞の変性に関連することを示した（Ｓｅｎｎｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ，  ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１３，  ５：１７７５−１７９３）。また、１２ケ月齢のマウスの視神経から等しい距離で撮影した顕微鏡写真もまた、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスで観察された外核層（視細胞核を有するＯＮＬ）の薄化が、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスでは観察されないことを示している（図１Ｂ）。視細胞核の配列の数（図１Ｂ’）および曲線下面積の計算（図１Ｂ’’）は、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスが、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスで観察された視細胞喪失から有意に保護されており、Ｃｆｈ−／−マウスおよび野生型のマウスと比較して有意差がないことを示した。
【０１６６】
同様に、Ｃｆｈの欠損は、１２ケ月齢のＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウス由来の、ピーナッツ凝集素／錐体アレスチンで染色した網膜のフラットマウントで観察された錐状体の損失を完全に保護した（図１Ｃ、１Ｃ’、および１Ｃ’’）。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＭＰの重要な病原性サイトカインの分泌には効果がなかった（図２Ａ〜Ｄ）。このことは、極性化の差異ではなく数値の増加が変性を誘発することを示唆している。
【０１６７】
よって、これらの結果は、ＣＦＨが、炎症傾向のあるＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスで観察された慢性的な加齢関連網膜下ＭＰの蓄積および関連する視細胞の変性に関与していることを示している。
【０１６８】
実施例２：ＭＰ由来のＣＦＨは、急性網膜下炎症の消散を阻害する。
次に、急性光誘導型網膜下炎症モデルにおいてＣＦＨの作用を評価した。本明細書中使用される本出願人らの光刺激モデルの強度は、炎症傾向のあるＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスにおいて実質的な網膜下炎症を誘導するが、Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスでは誘導しないように調整した（Ｓｅｎｎｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ，  ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１３，  ５：１７７５−１７９３）。４日間の光刺激後の網膜およびＲＰＥ／脈絡膜のフラットマウントでの網膜下ＩＢＡ−１＋ＭＰの定量化から、４日目に観察された急性の網膜下ＭＰ蓄積が、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰ−およびＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスで類似していたことが明らかになった。しかしながら、通常の光条件でさらに１０日後、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスにおけるＭＰ蓄積は、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスよりも有意に迅速に低下した（図３Ａ）。
【０１６９】
Ｃｆｈ−／−マウスと同様に（Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．  ２００２，  ３１：４２４−４２８）、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスは、おそらくは、網膜下ＭＰ動員を妨害し得る血漿中の補体の活性化および消耗が阻害されていないことによる、低い循環レベルの補体因子Ｃ３を特徴とする（図４〜Ｄ）。Ｃ３の全身的な欠損が、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスにおける網膜下ＭＰの除去が加速された原因であったかどうかを試験するために、肝Ｃｆｈを、光刺激の４日前に、アルブミン（ａｌｂｕｍｉｎｅ）プロモーター下でＣｆｈをコードするプラスミドの流体力学的注射により置換した。血漿中Ｃ３のＥＬＩＳＡ解析は、Ｃｆｈのトランスフェクションが、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスにおける血中のＣ３濃度を、対照プラスミドをトランスフェクトしたマウスおよびトランスフェクトしていないＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−−マウスと比較して、１４日間の実験プロトコルにおいて、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰレベルの４０〜６０％へと有意に回復させたことを示した（図３Ｂ）。しかしながら、血中のＣ３レベルの有意な増加は、１４日目で、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスにおける網膜下ＭＰの数（ＩＢＡ−１で染色した網膜およびＲＰＥ／脈絡膜のフラットマウントで定量化）を増加させなかった（図３Ｃ）。
【０１７０】
４日目での急性炎症の開始時の網膜のＭＰ数が同等であったこと（図３Ａ）および消散期でのＭＰ数に及ぼす血中のＣ３レベルの影響がなかったこと（図３Ｃ）は、全身性のＣＦＨまたはＣ３が、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−マウスにおいて、ＭＰ動員に関与しておらず、または除去の加速の原因ではないことを示唆した。網膜およびＲＰＥ／脈絡膜の組織のホモジネート、骨髄および循環血液中の単球、ならびに脳および網膜のミクログリア細胞（ＭＣ）の相対的Ｃｆｈ発現のＲＴ−ＰＣＲは、ＲＰＥ／脈絡膜およびＭＣが、ｉｎ  ｖｉｖｏでの網膜下ＭＰの周りでのＣＦＨタンパク質の局在化に従い（図４Ａ〜Ｄ）、ＷＴおよびＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスで最高レベルのＣｆｈのｍＲＮＡを発現することを示した（図３Ｄ）。ＭＣ由来またはＲＰＥ由来のＣＦＨが網膜下ＭＰの除去に影響したかどうかを評価するために、次に本出願人らは、異なるマウス系統由来のＣＦＳＥ標識脳ＭＣを、野生型またはＣｆｈ−／−のマウスのいずれかの網膜下腔に養子移入し、注射から２４時間後に生存しているＣＦＳＥ＋ＭＣを計測した。本出願人らは、以前に、単球であり得る野生型のＭＰ、ＭＣ、またはＭφが、網膜下腔から非常に迅速に除去されること、およびそのクリアランスが、Ｃｘ３ｃｒ１−欠損ＭＰでは有意に遅いことを示した（Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１５，  ７：２１１−２２６）。ここでは、結果は、Ｃｆｈの欠損が、Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰのＭＣの除去速度を有意に増大させ、この差異が、精製ヒトＣＦＨにより逆転することを示している（図３Ｅ）。興味深いことに、レシピエント由来のＣＦＨは、ＭＣ除去速度に関して非常に小さな作用のみを有した。
【０１７１】
よって、これらの結果は、ＭＰ由来のＣＦＨが、網膜下ＭＣの除去を阻害し、ｉｎ  ｖｉｖｏで観測された急性の網膜下炎症の消散に及ぼす局所ＣＦＨの観察された阻害作用の原因である可能性があることを示している。
【０１７２】
実施例３：ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの固定は、ＭＰの除去を阻害する。
インテグリンＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）およびＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）は、単球および好中球上の表面のＣＦＨを結合することが示されているヘテロダイマー（ＭＡＣ−１、ＣＲ３）を形成する。ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８は、ＭＰにおいて強力に発現されており、この発現は、異なるマウス系統で検出可能な差異はない（図５Ａ〜Ｎ）。Ｃｙ５コンジュゲート精製ＣＦＨとインキュベートしたＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−のＭＣのフローサイトメトリーは、ＣＦＨが、精製したＭＣの表面でも固定することを示した（図６Ａ）。次に、陰性に分取したＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−の骨髄単球を、対照ＩｇＧ２または抗ＣＤ１１ｂ  ５Ｃ６抗体クローンと共にあらかじめインキュベートした後、Ｃｙ３コンジュゲートＣＦＨとインキュベートした。フローサイトメトリーは、抗ＣＤ１１ｂ  ５Ｃ６クローンが、細胞表面でのＣＦＨの固定を強力に阻害することを示した（図６Ｂ）。興味深いことに、ＭＣを精製するために使用されている抗ＣＤ１１ｂ  Ｍ１／７０クローンは、ＣＦＨの結合を妨害しなかったが、このことは、図６Ａのフローサイトメトリーおよび組み換えＣＦＨが、Ｍ１／７０で分取されたＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−−ＭＣの除去の加速を逆転させることができるという事実により例証されている（図３）。この差異は、おそらくは、Ｍ１／７０クローンが、５Ｃ６クローン４８と比較してＣＤ１１ｂの別の部分を認識するという事実によるものである。実際に、網膜下に養子移入したＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−のＭＣ（野生型のレシピエント）において抗ＣＤ１１ｂ  ５Ｃ６  ＩｇＧを使用してＣＦＨの固定化を遮断すると、対照ＩｇＧと比較して、添加したＣＦＨタンパク質が除去速度に及ぼす阻害作用を完全に防止した（図６Ｃ）。網膜下炎症の消散を治療的に加速させることが可能であるかどうかを試験するために、３ケ月齢のＣｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰマウスにおいて網膜下の炎症をレーザーによる火傷を使用して誘導し、これによりｄ４をピークとしてその後消散する網膜下ＭＰの有意な蓄積が誘導される（Ｌａｖａｌｅｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．  ２０１１，  １７８：２４１６−２４２３）。結果は、（ＣＦＨの固定化を阻害するための）抗ＣＤ１１ｂ  ５Ｃ６  ＩｇＧの０日目での局所硝子体内注射が、網膜／ＲＰＥのフラットマウントおよび関連する血管新生（図６Ｅ、ＣＤ１０２陽性領域として定量化）において、７日目に対照ＩｇＧと比較して、衝撃部位周辺の網膜下ＩＢＡ＋ＭＰの数を有意に低下させた（図６Ｄ）ことを示している。
【０１７３】
これらの結果は、ＣＦＨが、ＭＣの表面に固定していること、およびＭＣ  ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの固定が、ＣＦＨがＭＣの除去を阻害するために必要であることを示している。これらはまた、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対するＣＦＨの結合の阻害が、炎症部位でＭＰの除去を加速させることをも例証している。
【０１７４】
実施例４：ＡＭＤ関連４０２Ｈ  ＣＦＨは、一般的な４０２Ｙ  ＣＦＨよりも有意に網膜下ＭＰの除去を阻害する。
軟性ドルーゼンおよびＡＭＤに強く関連しているＹ４０２Ｈ多型は、ＣＦＨのＳＣＲ７に位置しており、これは、ポリアニオン性細胞表面に対するその結合を媒介するが、ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８に対する結合も媒介する（Ｌｏｓｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０１０，  １８４：９１２−９２１；  Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ．  ２０１２，  ２１７：４５５−４６４）。疾患関連４０２Ｈ  ＣＦＨが、網膜下ＭＰの除去を阻害する能力に関して、一般的な４０２Ｙ  ＣＦＨと異なるかどうかを評価するために、ＣＦＳＥ標識Ｃｘ３ｃｒ１ＧＦＰ／ＧＦＰＣｆｈ−／−ＭＣを、野生型レシピエントの網膜下腔に養子移入し、血漿濃度に対応する５００μｇ／ｍｌのＣＦＨのいずれかの形態を同時注射した。注射から２４時間後での、ＲＰＥ／網膜のフラットマウント上での網膜下ＣＦＳＥ＋ＭＣ数から、両方のアイソフォームが、ＣＦＨを含まずに注射した細胞と比較して、ＭＣの除去を有意に阻害したこと（図７）、および両アイソフォームの混合物を含む可能性がある、市販の精製ＣＦＨと同様であったこと（図６参照）が明らかになった。しかしながら、疾患関連４０２Ｈ  ＣＦＨ型と共に注射したＣＦＳＥ＋ＭＣは、一般的な４０２Ｙ  ＣＦＨ型を注射したものよりも有意にクリアランスに抵抗した（図７）。
【０１７５】
よって、これらの結果は、ＡＭＤ関連４０２Ｈ  ＣＦＨが、一般的な４０２Ｙ  ＣＦＨよりも強力に網膜下ＭＰの除去を阻害することを示している。よって、これは、軟性ドルーゼンおよび後期ＡＭＤを伴う患者で観察される網膜下ＭＰの存在により明らかなように、炎症の消散を阻害している可能性があり、ＡＭＤの網膜下の炎症の慢性化（ｃｈｒｏｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ）の原因である可能性がある。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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