(57)【要約】  本明細書に開示される少なくとも１つのペプチド、またはその薬学的に許容される塩の投与を含む、虚血及び虚血再灌流傷害の治療及び／または予防のための方法及び組成物が本明細書に開示される。【選択図】図１Ａ
2019508484.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、及びＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）からなる群から選択される、ペプチド、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
少なくとも１つのペプチドであって、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、及びＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）からなる群から選択される、少なくとも１つのペプチド、またはその薬学的に許容される塩を含む、組成物。
【請求項３】
虚血再灌流傷害の治療を必要とする対象における治療方法であって、治療有効量の、請求項１に記載の少なくとも１つのペプチドを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項４】
心虚血再灌流傷害の治療を必要とする対象における治療方法であって、治療有効量の、請求項１に記載の少なくとも１つのペプチドを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項５】
心筋梗塞の治療を必要とする対象における治療方法であって、治療有効量の、請求項１に記載の少なくとも１つのペプチドを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項６】
前記ペプチドが、経口的に、局所的に、全身的に、静脈内に、皮下に、腹腔内に、または筋肉内に投与される、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１５年１２月３１日出願の米国仮出願第６２／２７３，８６２号に対する優先権を主張し、その内容全体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
ペプチド及び／または天然にもしくは人工的に存在する誘導体、またはその薬学的に許容される塩の投与を含む、疾患及び病態の治療及び／または改善に関連する方法及び組成物が本明細書に開示される。
【背景技術】
【０００３】
以下の説明は、読者の理解の助けとなるように提供される。提供される情報または引用文献のいずれも、先行技術であるとは認められない。
【０００４】
生体細胞は、一般に、細胞膜を通過することが許容される分子に対して非常に選択的である。そのようなものとして、小分子及び生体分子などの化合物の、細胞への送達は、通常、化合物の物理的特性によって限定される。小分子及び生体分子は、例えば、薬学的に活性な化合物であり得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本技術は、虚血再灌流傷害及び／または心筋梗塞の予防、治療、及び／または改善に有用な組成物及び方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一態様では、本開示は、ペプチド、誘導体、またはその薬学的に許容される塩を提供する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、またはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）から選択され、ＤＭＴは、２’，６’−ジメチルチロシンである。
【０００７】
一態様では、本開示は、ペプチド、誘導体、またはその薬学的に許容される塩を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、またはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）から選択され、ＤＭＴは、２’，６’−ジメチルチロシンである。
【０００８】
いくつかの実施形態では、組成物は、ペプチド、誘導体、またはその薬学的に許容される塩を含む。
【０００９】
いくつかの実施形態では、上記のペプチドのうちのいずれか１つにおけるアミノ酸残基は、非天然アミノ酸残基または天然アミノ酸の誘導体で置換されてもよい。
【００１０】
一態様では、本開示は、治療有効量の、本明細書に提供されるペプチドを含む組成物、もしくは誘導体、またはその薬学的に許容される塩を含む組成物を対象に投与することによって、その対象における虚血再灌流傷害を治療または予防するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、またはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）から選択される。いくつかの実施形態では、虚血再灌流傷害は、心虚血再灌流傷害である。いくつかの実施形態では、ペプチドは、経口的に、局所的に、全身的に、静脈内に、皮下に、腹腔内に、または筋肉内に投与される。
【００１１】
一態様では、本技術は、治療有効量の、本明細書に提供されるペプチド、もしくは誘導体、またはその薬学的に許容される塩を含む組成物を対象に投与して、梗塞の開始または進行を防止することによって、再灌流時の心臓への傷害を防止するように、対象における心筋梗塞を治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、ペプチドは、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、またはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）から選択される。いくつかの実施形態では、ペプチドは、経口的に、局所的に、全身的に、静脈内に、皮下に、腹腔内に、または筋肉内に投与される。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１Ａ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおいて心虚血再灌流傷害を減衰させないテトラペプチドの例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｄｍｔ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−４６）で治療した心臓の、危険性のある領域（ＡＡＲ）のパーセンテージとして表される梗塞サイズについてのデータを示す。
【図１Ｂ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおいて心虚血再灌流傷害を減衰させないテトラペプチドの例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｄｍｔ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−４６）で治療した心臓の、最大左心室圧（ＬＶＤＰ）についてのデータを示す。
【図１Ｃ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおいて心虚血再灌流傷害を減衰させないテトラペプチドの例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｄｍｔ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−４６）で治療した心臓の、収縮の最大速度（＋ｄＰ／ｄｔ）についてのデータを示す。
【図１Ｄ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおいて心虚血再灌流傷害を減衰させないテトラペプチドの例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｄｍｔ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−４６）で治療した心臓の、弛緩の最大速度（−ｄＰ／ｄｔ）についてのデータを示す。
【図２Ａ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）で治療した心臓の、ＡＡＲのパーセンテージとして表される梗塞サイズについてのデータを示す。
【図２Ｂ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）で治療した心臓の、最大左心室圧（ＬＶＤＰ）についてのデータを示す。
【図２Ｃ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）で治療した心臓の、収縮の最大速度（＋ｄＰ／ｄｔ）についてのデータを示す。
【図２Ｄ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）で治療した心臓の、弛緩の最大速度（−ｄＰ／ｄｔ）についてのデータを示す。
【図３Ａ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及び（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）で治療した心臓の、最大左心室圧（ＬＶＤＰ）についてのデータを示す。
【図３Ｂ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及び（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）で治療した心臓の、収縮の最大速度（＋ｄＰ／ｄｔ）についてのデータを示す。
【図３Ｃ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及び（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）で治療した心臓の、弛緩の最大速度（−ｄＰ／ｄｔ）についてのデータを示す。
【図４Ａ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）で治療した心臓の、ＡＡＲのパーセンテージとして表される梗塞サイズについてのデータを示す。
【図４Ｂ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）で治療した心臓の、最大左心室圧（ＬＶＤＰ）についてのデータを示す。
【図４Ｃ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）で治療した心臓の、収縮の最大速度（＋ｄＰ／ｄｔ）についてのデータを示す。
【図４Ｄ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）で治療した心臓の、弛緩の最大速度（−ｄＰ／ｄｔ）についてのデータを示す。
【図５Ａ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおいて心虚血再灌流傷害を減衰させないテトラペプチドの例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｏｒｎ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１０２）で治療した心臓の、ＡＡＲのパーセンテージとして表される梗塞サイズについてのデータを示す。
【図５Ｂ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおいて心虚血再灌流傷害を減衰させないテトラペプチドの例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｏｒｎ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１０２）で治療した心臓の、最大左心室圧（ＬＶＤＰ）についてのデータを示す。
【図５Ｃ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおいて心虚血再灌流傷害を減衰させないテトラペプチドの例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｏｒｎ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１０２）で治療した心臓の、収縮の最大速度（＋ｄＰ／ｄｔ）についてのデータを示す。
【図５Ｄ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおいて心虚血再灌流傷害を減衰させないテトラペプチドの例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｏｒｎ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１０２）で治療した心臓の、弛緩の最大速度（−ｄＰ／ｄｔ）についてのデータを示す。
【図６Ａ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）で治療した心臓の、ＡＡＲのパーセンテージとして表される梗塞サイズについてのデータを示す。
【図６Ｂ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）で治療した心臓の、最大左心室圧（ＬＶＤＰ）についてのデータを示す。
【図６Ｃ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）で治療した心臓の、収縮の最大速度（＋ｄＰ／ｄｔ）についてのデータを示す。
【図６Ｄ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）で治療した心臓の、弛緩の最大速度（−ｄＰ／ｄｔ）についてのデータを示す。
【図７Ａ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）で治療した心臓の、最大左心室圧（ＬＶＤＰ）についてのデータを示す。
【図７Ｂ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）で治療した心臓の、収縮の最大速度（＋ｄＰ／ｄｔ）についてのデータを示す。
【図７Ｃ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）で治療した心臓の、弛緩の最大速度（−ｄＰ／ｄｔ）についてのデータを示す。
【図８Ａ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）で治療した心臓の、最大左心室圧（ＬＶＤＰ）についてのデータを示す。
【図８Ｂ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）で治療した心臓の、収縮の最大速度（＋ｄＰ／ｄｔ）についてのデータを示す。
【図８Ｃ】改変されたランゲンドルフラット心臓モデルにおける心虚血再灌流傷害の減衰の例示的な実施例を示すグラフである。切除したスプラーグ・ドーリーラットの心臓を、実施例１に記載のように再灌流した。対照心臓及びＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）で治療した心臓の、弛緩の最大速度（−ｄＰ／ｄｔ）についてのデータを示す。
【図９】対照スプラーグ・ドーリーラット心臓及び（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、またはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）で治療したスプラーグ・ドーリーラット心臓の、ＡＡＲのパーセンテージとして表される低減した梗塞サイズを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本技術のある特定の態様、様式、実施形態、変形、及び特徴が、本技術の実質的理解を提供するために様々なレベルの詳細で以下に説明されることを理解されたい。
【００１４】
本開示は、本開示のペプチドを含む組成物を提供する。また、疾患及び病態の予防、治療、及び／または改善に有用な組成物の投与を含む治療方法も提供される。
【００１５】
Ｉ．選択定義
本明細書で使用されるある特定の用語の定義が、以下に提供される。別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、一般に、本技術が属する当業者によって通常理解されている意味と同じ意味を有する。
【００１６】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、文脈が別途明確に指示しない限り、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、複数の指示対象を含む。例えば、「１つの細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」への言及は、２つ以上の細胞の組み合わせを含み、その他も同様である。
【００１７】
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、測定において生じ得る実験誤差の範囲を包含し、当業者には明らかとなるであろう。
【００１８】
本明細書で使用される場合、対象への薬剤、薬物、またはペプチドの「投与」は、対象に化合物を導入または送達して、その意図される機能を実施する、任意の経路を含む。投与は、経口、鼻腔内、非経口（静脈内、筋肉内、腹腔内、もしくは皮下）、または局所などを含む、任意の好適な経路によって実施することができる。投与は、自己投与及び別のものによる投与を含む。
【００１９】
本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、天然アミノ酸及び合成アミノ酸、ならびに天然アミノ酸と同様の様式で機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体を含む。天然アミノ酸は、遺伝コードによってコードされるもの、ならびに後に修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、及びＯ−ホスホセリンである。アミノ酸類似体は、天然アミノ酸と同じ基本化学構造を有する化合物、即ち、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基に結合するα−炭素、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。かかる類似体は、修飾Ｒ基（例えば、ノルロイシン）または修飾ペプチド骨格を有するが、同じ基本化学構造を天然アミノ酸として保持する。アミノ酸模倣体は、アミノ酸の一般化学構造とは異なる構造を有するが、天然アミノ酸と同様の様式で機能する、化学化合物を指す。アミノ酸は、本明細書において、それらの一般的に知られている３文字記号によって、またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生化学命名法委員会により推奨される１文字記号によって参照され得る。
【００２０】
本明細書で使用される場合、「化学結合された」は、共有結合による付着を指す。「物理的に結合している」は、物理的相互作用（非共有結合）による付着を指す。実施例は、水素結合、パイスタッキング静電相互作用、マトリックス、塩、共結晶、閉塞、溶媒和物、水和物、ファン・デル・ワース力、及びロンドン分散力であるが、これらに限定されない。
【００２１】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、所望の治療効果及び／または予防効果を達成するのに十分な量、例えば、疾患もしくは障害、または疾患もしくは障害に関連する１つ以上の兆候もしくは症状の予防または減少をもたらす量を指す。治療用途または予防用途の文脈において、対象に投与される組成物の量は、疾患の程度、種類、及び重症度、ならびに一般健康状態、年齢、性別、体重、及び薬物への耐性などの個体の特性に依存する。当業者であれば、これらの因子及び他の因子に応じて適切な投与量を決定することができるであろう。組成物はまた、１つ以上の追加の治療化合物との組み合わせで投与することができる。本明細書に記載の方法では、治療用化合物は、疾患または障害の１つ以上の徴候または症状を有する対象に投与されてもよい。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「単離された」または「精製された」ポリペプチドまたはペプチドは、細胞材料、または薬剤が誘導される細胞もしくは組織源からの他の汚染ポリペプチドを実質的に含まないか、あるいは化学合成されたとき、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まない。例えば、単離されたペプチドは、薬剤の診断的または治療的使用に干渉する物質を含まない。かかる干渉材料としては、酵素、ホルモン、ならびに他のタンパク質性及び非タンパク質性溶質が挙げられ得る。
【００２３】
本明細書で使用される場合、「天然に存在しない」という用語は、本質的にこの形態で見出されない組成物を指す。天然に存在しない組成物は、天然に存在する組成物から、例えば非限定的な例として、精製、単離、濃縮、化学修飾（例えば、化学基の付加もしくは除去）を介して、及び／または混合物の場合は、成分もしくは化合物の付加もしくは除去を介して誘導され得る。代替として、天然に存在しない組成物は、天然に存在する組成物の天然に存在しない組み合わせを含み得るか、またはそれから誘導され得る。したがって、天然に存在しない組成物は、精製された、単離された、修飾された、及び／もしくは濃縮された天然に存在する組成物を含み得、かつ／または自然に見出されない形態、濃度、比率、及び／もしくは純度のレベルの、天然に存在する組成物の混合物を含み得る。
【００２４】
本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、ペプチド結合または修飾ペプチド結合、すなわちペプチド同配体によって互いに接合された２つ以上のアミノ酸を含むポリマーを意味するように、本明細書では互換的に使用される。ポリペプチドは、通常はペプチド、糖ペプチド、またはオリゴマーと呼ばれる短い鎖、及び一般にタンパク質と呼ばれるより長い鎖の両方を指す。ポリペプチドは、２０個の遺伝子コードされたアミノ酸以外のアミノ酸を含有し得る。ポリペプチドは、翻訳後プロセシングなどの自然過程によって、または当該技術分野において周知である化学修飾技法によって修飾されるアミノ酸配列を含む。
【００２５】
本明細書で使用される場合、障害または病態の「予防」または「予防する」とは、統計試料中で、未治療の対照試料に対して治療した試料における障害もしくは病態の発症を低減するか、または未治療の対照試料に対して障害もしくは病態の１つ以上の症状の発症を遅延させる、１つ以上の化合物を指す。
【００２６】
本明細書で使用する場合、「保護基」という用語は、以下の特徴を示す化学基を指す。１）良好な収率で所望の官能基と選択的に反応して、保護が望まれる予定された反応に対して安定している保護された基質をもたらす、２）保護された基質から選択的に除去されて、所望の官能基を生むことが可能である、かつ３）かかる予定された反応中に存在するかまたはその中で生成される他の官能基（複数可）と適合性のある試薬によって良好な収率で除去可能である。好適な保護基の例は、任意かつあらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｒｅｅｎｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  Ｅｄ．（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に見出すことができる。アミノ保護基としては、メシチレンスルホニル（Ｍｔｓ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚまたはＺ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳまたはＴＢＤＭＳ）、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、アセチル（Ａｃ）、トリフルオロアセチル、トシル、ベンゼンスルホニル、２−ピリジルスルホニル、または６−ニトロベラトリルオキシカルボニル（Ｎｖｏｃ）、ニトロピペロニル、ピレニルメトキシカルボニル、ニトロベンジル、α−，α−ジメチルジメトキシベンジルオキシカルボニル（ＤＤＺ）、５−ブロモ−７−ニトロインドリル等の好適な感光性保護基、ならびに以下の構造によって例示されるようなホスホリル保護基が挙げられるが、これらに限定されず、
【化１】
2019508484.tif 000003
式中、Ｒ500及びＲ501は、各々独立して、水素、または置換もしくは非置換アルキル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール基である。ヒドロキシル保護基としては、Ｆｍｏｃ、ＴＢＳ、感光性保護基（ニトロベラトリルオキシメチルオキシメチルエーテル（Ｎｖｏｍ）など）、Ｍｏｍ（メトキシメチルエーテル）、及びＭｅｍ（メトキシエトキシメチルエーテル）、ＮＰＥＯＣ（４−ニトロフェネチルオキシカルボニル）、及びＮＰＥＯＭ（４−ニトロフェネチルオキシメチルオキシカルボニル）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】
本明細書で使用される場合、「対象」、「個体」、または「患者」という用語は、個々の生物、脊椎動物、哺乳動物、またはヒトであり得る。
【００２８】
本明細書で使用される場合、化合物の「治療有効量」は、疾患または障害の生理学的効果が最小値で改善される、化合物レベルを指す。治療有効量は、１回以上の投与で与えられ得る。治療有効量を構成する化合物の量は、化合物、障害及びその重症度、及び一般健康状態、年齢、性別、体重、及び治療される対象の薬物への耐性に応じて異なるが、当業者によって日常的に決定され得る。
【００２９】
本明細書で使用される場合、「治療する」または「治療」は、ヒトなどの対象における、本明細書に記載の疾患または障害の治療を網羅し、（ｉ）疾患もしくは障害を阻害すること、すなわちその発達を止めること、（ｉｉ）疾患もしくは障害を軽減する、すなわち障害の退行を引き起こすこと、（ｉｉｉ）障害の進行を減速させること、及び／または（ｉｖ）疾患もしくは傷害の１つ以上の症状の進行を阻害、軽減、もしくは減速させることを含む。
【００３０】
記載されるような内科疾患及び病態の治療または予防の様々な様式は、「実質的」を意味し、これは完全治療または予防だけでなく、完全ではない治療または予防も含み、一部の生物学的または医学的に関連する結果が達成される。治療は、慢性疾患のための持続的な長期治療、または急性病態の治療のための単回もしくは数回の投与であり得る。
【００３１】
ＩＩ．本技術のペプチド
治療的使用のためのペプチドが本明細書に記載される。本技術のペプチドは、ペプチド結合によって共有結合される４個のアミノ酸を含む。
【００３２】
いくつかの実施形態では、本技術のペプチドは、以下のペプチドから選択される。
【化２】
2019508484.tif 000004
、
【化３】
2019508484.tif 000005
、
【化４】
2019508484.tif 000006
、
【化５】
2019508484.tif 000007
、
【化６】
2019508484.tif 000008
、または
【化７】
2019508484.tif 000009
。
【００３３】
本技術において有用なペプチドは、１つ以上の非天然アミノ酸を含有し得る。非天然アミノ酸は、（Ｌ−）、右旋性（Ｄ）、またはそれらの混合物であり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、天然アミノ酸を有しない。
【００３４】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるペプチドのうちのいずれか１つにおけるアミノ酸残基は、非天然アミノ酸残基または天然アミノ酸の誘導体で置換されてもよい。
【００３５】
非天然アミノ酸は、典型的に、生存生物の正常な代謝過程において合成されないアミノ酸であり、タンパク質中に天然に存在しない。ある特定の実施形態では、本技術において有用な非天然アミノ酸もまた、共通のプロテアーゼによって認識されない。
【００３６】
非天然アミノ酸は、ペプチド中の任意の位置に存在し得る。例えば、非天然アミノ酸は、Ｎ末端、Ｃ末端、またはＮ末端とＣ末端との間の任意の位置にあり得る。
【００３７】
非天然アミノ酸は、例えば、アルキル、アリール、またはアルキルアリール基を含み得る。アルキルアミノ酸のいくつかの例としては、α−アミノ酪酸、β−アミノ酪酸、γ−アミノ酪酸、δ−アミノ吉草酸、及びε−アミノカプロン酸が挙げられる。アリールアミノ酸のいくつかの例としては、オルト−、メタ、及びパラ−アミノ安息香酸が挙げられる。アルキルアリールアミノ酸のいくつかの例としては、オルト−、メタ−、及びパラ−アミノフェニル酢酸、ならびにγ−フェニル−β−アミノ酪酸が挙げられる。
【００３８】
非天然アミノ酸はまた、天然アミノ酸の誘導体を含む。天然アミノ酸の誘導体は、例えば、１つ以上の化学基の、天然アミノ酸への付加を含み得る。
【００３９】
例えば、１つ以上の化学基は、フェニルアラニンもしくはチロシン残基の芳香族環の２’、３’、４’、５’、または６’位、またはトリプトファン残基のベンゾ環の４’、５’、６’、または７’位のうちの１つ以上に付加され得る。この基は、芳香族環に付加され得る任意の化学基であり得る。かかる基のいくつかの例としては、分岐状または非分岐状Ｃ1〜Ｃ4アルキル、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、またはｔ−ブチル、Ｃ1〜Ｃ4アルキルオキシ（すなわち、アルコキシ）、アミノ、Ｃ1〜Ｃ4アルキルアミノ、及びＣ1〜Ｃ4ジアルキルアミノ（例えば、メチルアミノ、ジメチルアミノ）、ニトロ、ヒドロキシル、ハロ（すなわち、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨード）が挙げられる。天然アミノ酸の天然に存在しない誘導体のいくつかの具体例としては、ノルバリン（Ｎｖａ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、及びヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）が挙げられる。
【００４０】
本方法において有用なペプチド中のアミノ酸の修飾の別の例は、アスパラギン酸のカルボキシル基またはペプチドのグルタミン酸残基の誘導体化である。誘導体化の一例は、アンモニアでのアミド化、または一級もしくは二級アミン、例えば、メチルアミン、エチルアミン、ジメチルアミン、もしくはジエチルアミンでのアミド化である。誘導体化の別の例としては、例えば、メチルまたはエチルアルコールでのエステル化が挙げられる。
【００４１】
別のかかる修飾としては、リジン、アルギニン、またはヒスチジン残基のアミノ基の誘導体化が挙げられる。例えば、かかるアミノ基は、アルキル化またはアシル化され得る。いくつかの好適なアシル基としては、例えば、ベンゾイル基、またはアセチル基もしくはプロピオニル基などの上述のＣ1〜Ｃ4アルキル基のうちのいずれかを含むアルカノイル基が挙げられる。
【００４２】
いくつかの実施形態では、非天然アミノ酸は、共通のプロテアーゼに対して耐性があり、いくつかの実施形態では、非感受性である。プロテアーゼに対して耐性または非感受性である非天然アミノ酸の例としては、上述の天然に存在するＬ−アミノ酸、ならびにＬ−及び／またはＤ非天然アミノ酸のうちのいずれかの右旋性（Ｄ−）形態が挙げられる。Ｄ−アミノ酸は、タンパク質中に通常は存在しないが、それらは、細胞の通常のリボソームタンパク質合成機構以外の手段によって合成されるある特定のペプチド抗生物質中に見出され、本明細書で使用される場合、Ｄ−アミノ酸は、非天然アミノ酸であると見なされる。
【００４３】
プロテアーゼ感受性を最小限に抑えるために、本技術の方法において有用なペプチドは、アミノ酸が天然であるか、または非天然であるかにかかわらず、共通のプロテアーゼによって認識される５個未満、４個未満、３個未満、または２個未満の連続したＬ−アミノ酸を有するべきである。いくつかの実施形態では、ペプチドは、Ｄ−アミノ酸のみを有し、Ｌ−アミノ酸を有しない。
【００４４】
ペプチドがアミノ酸のプロテアーゼ感受性配列を含有する場合、アミノ酸のうちの少なくとも１つは、天然に存在しないＤ−アミノ酸であり、それによってプロテアーゼ耐性を与える。プロテアーゼ感受性配列の例としては、エンドペプチダーゼ及びトリプシンなどの共通のプロテアーゼによって容易に切断される２つ以上の連続した塩基性アミノ酸が挙げられる。塩基性アミノ酸の例としては、アルギニン、リジン、及びヒスチジンが挙げられる。いくつかの実施形態では、ペプチド骨格中のアミドのうちの少なくとも１つがアルキル化され、それによりプロテアーゼ耐性を与える。
【００４５】
いくつかの実施形態では、カルボキシル基、特にＣ末端アミノ酸の末端カルボキシル基は、例えばアンモニアでアミド化され、Ｃ末端アミドを形成する。代替として、Ｃ末端アミノ酸の末端カルボキシル基は、任意の一級または二級アミンでアミド化され得る。一級または二級アミンは、例えば、アルキル、特に、分岐状または非分岐状Ｃ1〜Ｃ4アルキル、またはアリールアミンであり得る。したがって、ペプチドのＣ末端におけるアミノ酸は、アミド、Ｎ−メチルアミド、Ｎ−エチルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミド、Ｎ−メチル−Ｎ−エチルアミド、Ｎ−フェニルアミド、またはＮ−フェニル−Ｎ−エチルアミド基に変換されてもよい。
【００４６】
本技術のペプチドのＣ末端に存在しないアスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、及びグルタミン酸残基の遊離カルボキシレート基もまた、それらがペプチド内に存在する場合にアミド化され得る。これらの内部位置でのアミド化は、アンモニア、または本明細書に記載の一級もしくは二級アミンのうちのいずれかによるものであり得る。
【００４７】
一実施形態では、本技術の方法において有用なペプチドは、２つの正味正電荷及び少なくとも１つの芳香族アミノ酸を有するトリペプチドである。特定の実施形態では、本技術の方法において有用なペプチドは、２つの正味正電荷及び２つの芳香族アミノ酸を有するトリペプチドである。
【００４８】
いくつかの実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端（すなわち、第１のアミノ酸位置）にアルギニン残基またはアルギニン誘導体を有する。好適なアルギニンの誘導体としては、例えばＤ−アルギニンが挙げられる。Ｎ末端にアルギニン残基またはアルギニン誘導体を有するペプチドの例としては、式Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、またはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）を有するペプチドが挙げられる。
【００４９】
いくつかの実施形態では、ペプチドは、第２のアミノ酸位置にチロシン残基またはチロシン誘導体を有する。チロシンの好適な誘導体としては、２’−メチルチロシン（Ｍｍｔ）、２’，６’−ジメチルチロシン（ＤＭＴ）、３’，５’−ジメチルチロチン（３’５’Ｄｍｔ）、Ｎ，２’，６’−トリメチルチロシン（Ｔｍｔ）、及び２’−ヒドロキシ−６’−メチルチロシン（Ｈｍｔ）が挙げられる。第２のアミノ酸位置にチロシン残基またはチロシン誘導体を有するペプチドの例としては、式Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、またはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）を有するペプチドが挙げられる。
【００５０】
本明細書に列挙されるペプチドの好適な置換変異体は、保存的アミノ酸置換を含む。アミノ酸は、それらの物理化学的特性に従って以下の通りにグループ化され得る。
（ａ）非極性アミノ酸：Ａｌａ（Ａ）Ｓｅｒ（Ｓ）Ｔｈｒ（Ｔ）Ｐｒｏ（Ｐ）Ｇｌｙ（Ｇ）Ｃｙｓ（Ｃ）、
（ｂ）酸性アミノ酸：Ａｓｎ（Ｎ）Ａｓｐ（Ｄ）Ｇｌｕ（Ｅ）Ｇｌｎ（Ｑ）、
（ｃ）塩基性アミノ酸：Ｈｉｓ（Ｈ）Ａｒｇ（Ｒ）Ｌｙｓ（Ｋ）、
（ｄ）疎水性アミノ酸：Ｍｅｔ（Ｍ）Ｌｅｕ（Ｌ）Ｉｌｅ（Ｉ）Ｖａｌ（Ｖ）、及び
（ｅ）芳香族アミノ酸：Ｐｈｅ（Ｆ）Ｔｙｒ（Ｙ）Ｔｒｐ（Ｗ）。
【００５１】
同じ基における別のアミノ酸によるペプチド中のアミノ酸の置換は、保存的置換と称され、元のペプチドの物理化学的特性を保存し得る。対照的に、異なる基における別のアミノ酸によるペプチド中のアミノ酸の置換は、一般に、元のペプチドの特性を変化させる可能性がより高い。
【００５２】
本明細書に開示されるペプチド中の任意のアミノ酸は、Ｌ−またはＤ−構成のいずれかであり得る。
【００５３】
ＩＩＩ．本技術の組成物の使用
以下の考察は、単なる例として提示され、限定することを意図しない。
【００５４】
虚血は、組織または器官への血液供給の低減または減少であり、多くの異なる原因を有する。虚血は局所的であり得、例えば、血栓もしくは塞栓により引き起こされるか、またはより全体的には、低い灌流圧に起因する。虚血性事象は、低酸素（低減した酸素）及び／または無酸素（酸素の不在）をもたらし得る。
【００５５】
哺乳動物の組織または器官における虚血は、酸素欠乏（低酸素）及び／またはグルコース（例えば、基質）欠乏によって引き起こされる多面的な病理学的状態である。組織または器官の細胞における酸素及び／またはグルコース欠乏は、エネルギー生成能力の低減または全損、及び細胞膜にわたる活性イオン輸送の機能の間接喪失をもたらす。酸素及び／またはグルコース欠乏はまた、ミトコンドリア膜における透過性遷移を含む、他の細胞膜の病理学的変化ももたらす。さらに、通常、ミトコンドリア内で区分化されたアポトーシスタンパク質などの他の分子は、細胞質中に漏出し、アポトーシス細胞死を引き起こし得る。重大な虚血は、壊死性細胞死をもたらし得る。
【００５６】
特定の組織または器官中の虚血または低酸素は、組織または器官への血液供給の喪失または重度低減によって引き起こされ得る。血液供給の喪失または重度低減は、例えば、血栓塞栓性脳卒中、冠動脈アテローム性動脈硬化症、または末梢血管疾患に起因し得る。虚血または低酸素により影響される組織は、典型的には、心筋、骨格筋、または平滑筋などの筋肉である。
【００５７】
虚血または低酸素により影響される器官は、虚血または低酸素の対象となる任意の器官であり得る。例として、限定されないが、心筋虚血または低酸素は、アテローム硬化性または血栓性遮断によって一般に引き起こされ、心動脈及び毛細管血液供給によって、心組織への酸素送達の低減または喪失をもたらす。かかる心虚血または低酸素は、疼痛及び患部心筋の壊死を引き起こす場合があり、最終的には心不全をもたらし得る。
【００５８】
再灌流は、血液の流れが減少または遮断される任意の器官または組織への血流の回復である。例えば、血流は、虚血の影響を受けた任意の器官または組織に回復され得る。血流の回復（再灌流）は、当業者に既知の任意の方法によって生じ得る。例えば、虚血性心組織の再灌流は、血管形成術、冠動脈バイパス移植術、または血栓溶解薬の使用から生じ得る。
【００５９】
虚血再灌流傷害は、血液供給が虚血期間後の患部領域に戻るときに引き起こされる細胞または組織の損傷である。虚血中の酸素及び栄養素の欠如は、循環の回復が結果として組織への損傷を起こす病態を生み出す。例として、再灌流誘導性不整脈、心筋収縮不全、不活発な冠血流を呈する微小血管閉塞症、及び致死性心筋再灌流傷害（すなわち、インデックス虚血事象の終了時に生存していた心筋細胞の再灌流誘導性死）を含む、心筋再灌流傷害の形態が挙げられるが、これらに限定されない。研究は、致死性心筋再灌流傷害が、最終心筋梗塞のサイズの約５０％を占めることを示唆した。
【００６０】
治療方法
本技術の一態様は、虚血性傷害を有するか、有すると疑われるか、または有する危険性があると診断された対象における虚血性傷害に対する既存の治療薬に関連する虚血性傷害及び／または副作用を治療する方法を含む。治療用途において、本明細書に開示される少なくとも１つのペプチドを含む組成物または薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、もしくはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９））、またはその薬学的に許容される塩、例えば酢酸塩、酒石酸塩、またはトリフルオロ酢酸塩は、疾患の発達におけるその合併症及び中間病理学的表現型を含む疾患の症状を治癒するか、または少なくとも部分的に停止するのに十分な量で、虚血性傷害に罹患していることが疑われるか、または既に罹患している対象に投与される。虚血性傷害に罹患している対象は、当該技術分野において既知の診断アッセイまたは予後アッセイのいずれかまたは組み合わせにより特定され得る。例として、限定されないが、いくつかの実施形態では、虚血性傷害は、心虚血、脳虚血、腎虚血、大脳虚血、腸虚血、肝虚血、または心筋梗塞に関連する。
【００６１】
例として、限定されないが、心虚血の典型的な症状としては、狭心症（例えば、胸部痛及び圧迫感）、息切れ、動悸、虚弱、眩暈、吐き気、発汗、急速な心拍、及び疲労が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６２】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのペプチドとの心虚血と診断された対象の治療は、以下の心虚血の症状、狭心症（例えば、胸痛及び圧力）、息切れ、動悸、虚弱、眩暈、吐き気、発汗、急速な心拍、及び疲労のうちの１つ以上を改善または排除する。
【００６３】
例として、限定されないが、腎虚血の典型的な症状としては、尿毒症（すなわち、高いタンパク質副産物の血中レベル、例えば尿素など）、肺内の流体の突然蓄積によって引き起こされる呼吸困難の急性エピソード（努力性呼吸または呼吸困難）、高血圧、腎臓近くに感じる疼痛、虚弱、高血圧、吐き気、脚痛の履歴、脚部への循環不全を反映するストライド、及び頸部（例えば、頸動脈雑音）、腹部（腎動脈の狭窄を反映し得る）、及び股部（大腿動脈雑音）において検出され得る、動脈内の血流の乱流によって引き起こされる血管雑音（聴診器で聞こえる音または雑音）が挙げられる。
【００６４】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのペプチドとの腎虚血と診断された対象の治療は、以下の腎虚血の症状、尿毒症（すなわち、高いタンパク質副産物の血中レベル、例えば尿素など）、肺内の流体の突然蓄積によって引き起こされる呼吸困難の急性エピソード（努力性呼吸または呼吸困難）、高血圧、腎臓近くに感じる疼痛、虚弱、高血圧、吐き気、脚痛の履歴、脚部への循環不全を反映するストライド、及び頸部（例えば、頸動脈雑音）、腹部（腎動脈の狭窄を反映し得る）、及び股部（大腿動脈雑音）において検出され得る、動脈内の血流の乱流によって引き起こされる血管雑音（聴診器で聞こえる音または雑音）のうちの１つ以上を改善または排除する。
【００６５】
例として、限定されないが、大脳（または脳）虚血の典型的な症状としては、片目の失明、片腕または片足の虚弱、身体の片側全体における虚弱、眩暈、回転性眩暈、二重視覚、身体の両側における虚弱、発語困難、不明瞭言語、及び調整喪失が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６６】
いくつかの実施形態では、大脳（または脳）虚血と診断された対象の、本明細書に開示される少なくとも１つのペプチドによる治療は、片目の失明、片腕または片足の虚弱、身体の片側全体における虚弱、眩暈、回転性眩暈、二重視覚、身体の両側における虚弱、発語困難、不明瞭言語、及び調整喪失のうちの１つ以上を改善または排除する。
【００６７】
別の態様では、本技術は、虚血再灌流傷害に対する既存の治療薬に関連する虚血再灌流傷害及び／または副作用を治療する方法を含む。治療用途において、本明細書に開示される少なくとも１つのペプチドを含む組成物または薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、もしくはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９））、またはその薬学的に許容される塩、例えば酢酸塩、酒石酸塩、またはトリフルオロ酢酸塩は、疾患の発達におけるその合併症及び中間病理学的表現型を含む疾患の症状を治癒するか、または少なくとも部分的に停止するのに十分な量で、虚血性再灌流傷害に罹患していることが疑われるか、または既に罹患している対象に投与される。虚血性再灌流傷害に罹患している対象は、当該技術分野において既知の診断アッセイまたは予後アッセイのいずれかまたは組み合わせにより特定され得る。例として、限定されないが、いくつかの実施形態では、虚血再灌流傷害は、心虚血、脳虚血、腎虚血、大脳虚血、腸虚血、及び肝虚血に関連する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるペプチドは、心虚血再灌流傷害の治療に有用である。
【００６８】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるペプチドは、再灌流時の心臓への傷害を予防するために、対象における心筋梗塞を治療することにおいて有用である。いくつかの実施形態では、本技術は、冠血管再生の方法に関し、哺乳動物対象に、治療有効量の、本技術のＤ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、もしくはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）から選択される１つ以上のペプチド、またはその薬学的に許容される塩を投与することと、冠動脈バイパス移植（ＣＡＢＧ）手順をその対象に実施することと、を含む。
【００６９】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるペプチドによる心筋梗塞の治療は、梗塞サイズを低減し、ＬＶＤＰを増加させ、収縮と弛緩の最大速度（±ｄＰ／ｄｔ）を増加させる。
【００７０】
予防方法
いくつかの実施形態では、本技術は、虚血傷害を有する危険性がある対象における虚血性傷害の発症または虚血性傷害の症状を予防または遅延させるための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本技術は、虚血傷害を有する危険性がある対象における虚血性傷害の症状を予防または低減するための方法を提供する。
【００７１】
いくつかの実施形態では、本技術は、虚血再灌流傷害を有する危険性がある対象における虚血再灌流傷害の発症または虚血再灌流傷害の症状を予防または遅延させるための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本技術は、虚血再灌流傷害を有する危険性がある対象における虚血再灌流傷害の症状を予防または遅延させるための方法を提供する。
【００７２】
いくつかの実施形態では、虚血性傷害、虚血再灌流傷害、または虚血性傷害もしくは虚血再灌流傷害の症状は、心虚血、脳虚血、腎虚血、大脳虚血、腸虚血、及び肝虚血に関連する。いくつかの実施形態では、虚血性傷害は、心筋梗塞である。
【００７３】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるペプチドは、心虚血再灌流傷害の治療または予防に有用である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるペプチドは、心虚血再灌流傷害の予防に有用である。
【００７４】
虚血性傷害または虚血再灌流傷害の危険性がある対象は、例えば、当該技術分野において既知の診断アッセイまたは予後アッセイのいずれかまたは組み合わせによって特定され得る。予防用途において、ペプチドの薬学的組成物または薬剤（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、もしくはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９））、またはその薬学的に許容される塩、例えば酢酸塩、酒石酸塩、またはトリフルオロ酢酸塩は、虚血性傷害または虚血再灌流傷害に罹患しやすいか、そうでなければ危険性がある対象に、疾患を排除する、その危険性を低減する、もしくはその発症を遅延させる（疾患の生化学的、組織学的、及び／もしくは行動的症状、その合併症、ならびに疾患の発達中に出現する中間病理学的表現型を含む）、または症状及び／もしくは合併症、ならびに疾患の発達中に出現する中間病理学的表現型を低減するのに十分な量で投与される。予防ペプチドの投与は、疾患または障害に特徴的な症状の出現前に起こる可能性があり、それにより疾患または障害が予防されるか、その進行が遅延されるか、または疾患もしくは傷害の症状もしくは副作用の重症度が低減される。
【００７５】
例として、限定されないが、いくつかの実施形態では、対象は、冠動脈疾患（アテローム性動脈硬化）、血栓、及び冠動脈痙攣を有する場合、心虚血の危険性があり得る。
【００７６】
例として、限定されないが、いくつかの実施形態では、対象は、腎傷害（例えば、急性腎傷害）及び／または腎臓が長期間にわたって正常な血流が欠乏する手術（例えば、心臓バイパス術）からの傷害もしくは合併症を有する場合、腎虚血の危険性があり得る。
【００７７】
例として、限定されないが、いくつかの実施形態では、対象は、鎌状赤血球貧血、圧縮血管、心室性頻拍、動脈内のプラーク蓄積、血栓、心臓発作の結果としての極めて低い血圧を有する場合、卒中または先天性心臓欠陥を有していた場合、脳虚血の危険性があり得る。
【００７８】
治療及び／または予防用途の場合、本明細書に開示される少なくとも１つのペプチド（Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、もしくはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９））、またはその薬学的に許容される塩、例えば酢酸塩、酒石酸塩、もしくはトリフルオロ酢酸塩を含む組成物が、それを必要とする対象に投与される。いくつかの実施形態では、ペプチド組成物は、１日１回、２回、３回、４回、または５回投与される。いくつかの実施形態では、ペプチド組成物は、１日５回より多く投与される。追加として、または代替として、いくつかの実施形態では、ペプチド組成物は、毎日、１日おき、３日おき、４日おき、５日おき、または６日おきに投与される。いくつかの実施形態では、ペプチド組成物は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、または１カ月に１回投与される。いくつかの実施形態では、ペプチド組成物は、１週間、２週間、３週間、４週間、または５週間の期間にわたって投与される。いくつかの実施形態では、ペプチドは、６週間以上にわたって投与される。いくつかの実施形態では、ペプチドは、１２週間以上にわたって投与される。いくつかの実施形態では、ペプチドは、１年未満の期間にわたって投与される。いくつかの実施形態では、ペプチドは、１年超の期間にわたって投与される。
【００７９】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのペプチドでの治療は、以下の心虚血の症状、狭心症（例えば、胸部痛及び圧迫感）、息切れ、動悸、虚弱、眩暈、吐き気、発汗、急速な心拍、及び疲労のうちの１つ以上の発症を予防または遅延させる。
【００８０】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのペプチドでの治療は、以下の腎虚血の症状、尿毒症（すなわち、高いタンパク質副産物の血中レベル、例えば尿素など）、肺内の流体の突然蓄積によって引き起こされる呼吸困難の急性エピソード（努力性呼吸または呼吸困難）、高血圧、腎臓近くに感じる疼痛、衰弱、高血圧、吐き気、脚痛の履歴、脚部への循環不全を反映するストライド、及び頸部（例えば、頸動脈雑音）、腹部（腎動脈の狭窄を反映し得る）、及び股部（大腿動脈雑音）において検出され得る、動脈内の血流の乱流によって引き起こされる血管雑音（聴診器で聞こえる音または雑音）のうちの１つ以上の発症を予防または遅延させる。
【００８１】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される少なくとも１つのペプチドでの治療は、以下の大脳（または脳）虚血の症状、片目の失明、片腕または片足の虚弱、身体の片側全体における虚弱、眩暈、回転性眩暈、二重視覚、身体の両側における虚弱、発語困難、不明瞭言語、及び調整喪失のうちの１つ以上の発症を予防または遅延させる。
【００８２】
本技術のペプチドの生物学的効果の決定
種々の実施形態では、好適なインビトロまたはインビボアッセイを実施して、本技術の特定の組成物の効果、及びその投与が治療に対して示されるか否かを決定する。種々の実施形態では、インビトロアッセイを代表的な動物モデルで実施して、本技術の所与のペプチド（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、もしくはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９））、またはその薬学的に許容される塩が、疾患または病態の治療において所望の効果を発揮するかどうかを決定する。治療に使用するための化合物は、ヒト対象において試験する前に、ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、ウサギ等を含むが、これらに限定されない好適な動物モデル系において試験することができる。同様に、インビボ試験については、当該技術分野において既知の動物モデル系のうちのいずれかを、ヒト対象への投与の前に使用することができる。
【００８３】
ＩＶ．本技術の組成物の合成
本開示の方法において有用な化合物（例えば、ペプチド、または誘導体、またはその薬学的に許容される塩）は、当該技術分野において既知の任意の方法によって合成され得る。
【００８４】
本明細書に開示されるペプチド（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、またはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）は、当該技術分野において既知の任意の方法によって合成され得る。タンパク質を化学合成するための例示的な非限定的方法としては、「Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（１９８４）及び「Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２８９，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９７）においてＳｔｕａｒｔ及びＹｏｕｎｇにより記載されるものが挙げられる。
【００８５】
組み換えペプチドは、分子生物学、タンパク質生化学、細胞生物学、及び微生物学における従来の技法、例えばＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．Ｉ−ＩＩＩ，Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｅｄ．（１９９７）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄ．（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９）、ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｓ．Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ，Ｇｌｏｖｅｒ，Ｅｄ．（１９８５）、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｇａｉｔ，Ｅｄ．（１９８４）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，Ｈａｍｅｓ＆Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．（１９８５）、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ，Ｈａｍｅｓ＆Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．（１９８４）、Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ，Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｅｄ．（１９８６）、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６）、Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ；ｔｈｅ  ｓｅｒｉｅｓ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８４）、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ，Ｍｉｌｌｅｒ＆Ｃａｌｏｓ，Ｅｄｓ．（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮＹ，１９８７）、及びＭｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，Ｖｏｌｓ．１５４  ａｎｄ  １５５，Ｗｕ＆Ｇｒｏｓｓｍａｎ，ａｎｄ  Ｗｕ，Ｅｄｓ．にそれぞれ記載されるものを使用して生成され得る。
【００８６】
ペプチド前駆体は、当該技術分野において既知の化学合成（例えば、溶液及び固相化学ペプチド合成を使用する）または組み換え合成のいずれかによって作製され得る。例えば、本技術のアミド化ペプチドの前駆体は、同様の様式で作製され得る。いくつかの実施形態では、組み換え生成は、費用対効果が著しく高いと考えられる。いくつかの実施形態では、前駆体は、同様に当該技術分野において既知のアミド化反応によって活性ペプチドに変換される。例えば、酵素アミド化は、米国特許第４，７０８，９３４号、ならびに欧州特許公開第０３０８０６７号及び同第０３８２４０３号に記載されている。組み換え生成は、前駆体、及びペプチドの所望の活性形態への前駆体の変換を触媒する酵素の両方に使用され得る。かかる組み換え生成は、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１１（１９９３）ｐｐ．６４−７０において考察され、これはアミド化産物への前駆体の変換をさらに説明する。アミド化中、α−ケト酸などのケト酸、またはその塩もしくはエステルが、カタラーゼ共因子の代わりに使用されてもよく、α−ケト酸は、分子構造ＲＣ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）ＯＨを有し、式中、Ｒは、アリール、Ｃ1〜Ｃ4炭化水素部分、ハロゲン化またはヒドロキシル化Ｃ1〜Ｃ4炭化水素部分、及びＣ1〜Ｃ4カルボン酸からなる群から選択される。これらのケト酸の例としては、ピルビン酸エチル、ピルビン酸及びその塩、ピルビン酸メチル、ベンゾイルギ酸及びその塩、２−ケト酪酸及びその塩、３−メチル−２−オキソブタン酸及びその塩、ならびに２−ケト−グルタル酸及びその塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８７】
いくつかの実施形態では、組み換えペプチドの生成は、例えば、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼを用いて、Ｅ．ｃｏｌｉ中のグリシン延長前駆体を可溶性融合タンパク質として生成することによって進行し得る。α−アミド化酵素は、活性ペプチドへの前駆体の変換を触媒する。その酵素は、上で引用されるＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ論文に記載されるように、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞において組み換え的に生成される。他のアミド化ペプチドに対する他の前駆体は、同様の様式で生成され得る。アミド化または他の追加の機能を必要としないペプチドは、同様の様式で生成されてもよい。他のペプチド活性剤は、市販されているか、または当該技術分野において既知の技法によって生成され得る。
【００８８】
Ｖ．投与の様式
細胞、器官、または組織を、本明細書に開示される少なくとも１つのペプチド（例えば、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、もしくはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）、またはその薬学的に許容される塩と接触させるための、当業者に既知の任意の方法が用いられ得る。好適な方法としては、インビトロ、エキソビボ、またはインビボ方法が挙げられる。
【００８９】
インビトロ方法は、典型的には、培養された試料を含む。例えば、細胞をリザーバ（例えば、組織培養プレート）内に配置し、所望の結果を得るために好適な適切な条件下で化合物とともにインキュベートすることができる。好適なインキュベーション条件は、当業者によって容易に決定され得る。
【００９０】
エキソビボ方法は、典型的には、ヒトなどの哺乳動物から除去された細胞、器官、または組織を含む。細胞、器官、または組織は、例えば、適切な条件下で化合物とともにインキュベートすることができる。接触した細胞、器官、または組織は、典型的には、ドナーに戻されるか、レシピエントに配置されるか、または将来使用するために保管される。したがって、化合物は、一般に薬学的に許容される担体中にある。
【００９１】
インビボ方法は、典型的には、本明細書に記載されるものなどの本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩の、ヒトなどの哺乳動汚物への投与を含む。治療のためにインビボで使用されるとき、本技術の少なくとも１つのペプチドまたはその薬学的に許容される塩は、所望の結果を得ること、または哺乳動物を治療することにおいて有効な量で哺乳動物に投与される。有効量は、医師及び臨床医によく知られている方法によって、前臨床試験及び臨床試験中に決定される。用量及び投与レジメンは、対象における感染度、使用される本技術の特定のペプチドまたはその薬学的に許容される塩の特性、例えばその治療指数、対象、及び対象の病歴に依存する。
【００９２】
例えば薬学的組成物または薬剤中の、本方法において有用な本技術の少なくとも１つのペプチドまたはその薬学的に許容される塩の有効量は、薬学的組成物または薬剤を投与するための多くの周知の方法のうちのいずれかによって、それを必要とする哺乳動物に投与され得る。本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩は、全身にまたは局所的に投与されてもよい。
【００９３】
本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される塩として製剤化されてもよい。「薬学的に許容される塩」という用語は、哺乳動物などの患者への投与に許容される塩基または酸から調製される塩（例えば、所与の投与レジメンに対して許容される哺乳動物安全性を有する塩）を意味する。しかしながら、塩が、患者への投与を意図しない中間化合物の塩などの、薬学的に許容される塩である必要がないことが理解される。薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される無機または有機塩基、及び薬学的に許容される無機または有機酸に由来し得る。加えて、本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩が、アミン、ピリジン、またはイミダゾールなどの塩基部分、及びカルボン酸またはテトラゾールなどの酸性部分の両方を含有するとき、双性イオンが形成され得、本明細書で使用される「塩」という用語に含まれる。薬学的に許容される無機塩基に由来する塩としては、アンモニウム、カルシウム、銅、第２鉄、第１鉄、リチウム、マグネシウム、マンガン、亜マンガン、カリウム、ナトリウム、及び亜鉛塩等が挙げられる。薬学的に許容される有機塩基に由来する塩としては、一級、二級、及び三級アミンの塩が挙げられ、置換アミン、環状アミン、天然に存在するアミン等、例えばアルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ’ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン（ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ）、ピペラジン（ｐｉｐｅｒａｄｉｎｅ）、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミン等を含む。薬学的に許容される無機酸由来の塩としては、ホウ酸、炭酸、ハロゲン化水素酸（臭化水素酸、塩酸、フッ化水素酸、またはヨウ化水素酸）、硝酸、リン酸、スルファミン酸、及び硫酸の塩が挙げられる。薬学的に許容される有機酸に由来する塩としては、脂肪族ヒドロキシル酸（例えば、クエン酸、グルコン酸、グリコール酸、乳酸、ラクトビオン酸、リンゴ酸、及び酒石酸）、脂肪族モノカルボン酸（例えば、酢酸、酪酸、ギ酸、プロピオン酸、及びトリフルオロ酢酸）、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸及びグルタミン酸）、芳香族カルボン酸（例えば、安息香酸、ｐ−クロロ安息香酸、ジフェニル酢酸、ゲンチシン酸、馬尿酸、及びトリフェニル酢酸）、芳香族ヒドロキシル酸（例えば、ｏ−ヒドロキシ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、１−ヒドロキシナフタレン−２−カルボン酸、及び３−ヒドロキシナフタレン−２−カルボン酸）、アスコルビン酸、ジカルボン酸（例えば、フマル酸、マレイン酸、シュウ酸、及びコハク酸）、グルコロン（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｃ）酸、マンデル酸、粘液酸、ニコチン酸、オロチン酸、パモン酸、パントテン酸、スルホン酸（例えば、ベンゼンスルホン酸、カンホスルホン（ｃａｍｐｈｏｓｕｌｆｏｎｉｃ）酸、エジシル（ｅｄｉｓｙｌｉｃ）酸、エタンスルホン酸、イセチオン酸、メタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２，６−ジスルホン酸、及びｐ−トルエンスルホン酸）、キシナホ酸の塩、酢酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、フマル酸塩、トリフルオロ酢酸塩などが挙げられる。
【００９４】
本明細書に記載される本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩は、本明細書に記載される障害の治療または予防のために対象に投与するための薬学的組成物に組み込むことができる。かかる組成物は、典型的には、ペプチド及び薬学的に許容される担体を含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、薬学的投与と対応している、生理食塩水、溶媒、分散媒、コーティング、抗菌及び抗真菌剤、等張剤、及び吸収遅延剤等を含む。補足的活性化合物もまた、本組成物に組み込むことができる。
【００９５】
薬学的組成物は、典型的には、意図される投与経路と対応するように製剤化される。投与経路としては、例えば、非経口（例えば、静脈内、皮内、腹腔内、または皮下）、経口、呼吸器（例えば、吸入）、経皮（局所）、及び経粘膜投与が挙げられる。非経口、皮内、または皮下適用のために使用される溶液または懸濁液としては、以下の構成要素、注射用水、生理食塩液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒などの無菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンスなどの抗菌剤；アスコルビン酸または二重硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート化剤；酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩などの緩衝剤；及び塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの等張性の調節のための薬剤が挙げられる。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基で調整され得る。調製物は、アンプル、使い捨てシリンジ、またはガラスもしくはプラスチックから作製された複数用量バイアルに封入され得る。患者または治療する医師の便宜のために、投与製剤は、一連の治療（例えば、７日間の治療）のための全ての必要な装置（例えば、薬物のバイアル、希釈剤のバイアル、シリンジ、及び針）を含むキットで提供され得る。
【００９６】
注射用使用に好適な薬学的組成物は、無菌注射溶液または分散液の即座の調製のための無菌水溶液（水溶性である場合）または分散液及び無菌粉末を含むことができる。静脈内投与の場合、好適な担体としては、生理食塩水、静菌性水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（登録商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．，ＵＳＡ）、またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。全ての場合において、非経口投与のための組成物は無菌でなければならず、注射針通過性を容易にするために製剤化されるべきである。組成物は、製造及び保管の条件下で安定しているべきであり、細菌及び真菌などの微生物による汚染から遮蔽されなければならない。
【００９７】
一実施形態では、本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩は、静脈内投与される。例えば、本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩は、急速な静脈内ボーラス注射を介して投与され得る。いくつかの実施形態では、本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩は、定速静脈内注入として投与される。
【００９８】
本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩はまた、経口的に、局所的に、鼻腔内に、筋肉内に、皮下に、または経皮的に投与されてもよい。一実施形態では、経皮投与は、イオン泳動によるものであり、荷電組成物が、電流によって皮膚全体に送達される。
【００９９】
他の投与経路としては、脳室内または髄腔内が挙げられる。脳室内とは、脳の室系への投与を指す。髄腔内とは、脊髄のくも膜下の空間内への投与を指す。したがって、いくつかの実施形態では、脳室内または髄腔内投与は、中枢神経系の器官または組織に影響を及ぼす疾患及び病態に使用される。
【０１００】
本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩はまた、当該技術分野において既知の通り、持続放出によって哺乳動物に投与され得る。持続放出投与は、特定の期間にわたって薬物のある特定のレベルを達成するための薬物送達の方法である。このレベルは、典型的には、血清または血漿濃度によって測定される。制御放出によって化合物を送達するための方法の説明は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際ＰＣＴ出願第ＷＯ０２／０８３１０６号に見出すことができる。
【０１０１】
調剤の分野において既知の任意の製剤は、本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩の投与に好適である。経口投与の場合、液体または固体製剤が使用され得る。製剤の例としては、錠剤、ゼラチンカプセル、丸剤、トローチ、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、ウェハ、チューイングガム等が挙げられる。本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩は、当業者によって理解されるように、好適な薬学的担体（ビヒクル）または賦形剤と混合され得る。担体及び賦形剤の例としては、デンプン、乳、糖、ある特定の種類の粘土、ゼラチン、乳酸、ステアリン酸、またはその塩が挙げられ、ステアリン酸マグネシウムまたはカルシウム、タルク、植物性脂肪または油、ガム、及びグリコールを含む。
【０１０２】
全身、脳室内、髄腔内、局所、鼻腔内、皮下、または経皮投与の場合、本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩の製剤は、従来の希釈剤、担体、または賦形剤等、例えば本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩を送達するための、当該技術分野において既知のものを利用してもよい。例えば、製剤は、以下の安定剤、非イオン性界面活性剤などの界面活性剤、及び任意選択で塩及び／または緩衝剤のうちの１つ以上を含み得る。本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩は、水溶液の形態で、または凍結乾燥形態で送達され得る。
【０１０３】
安定剤は、例えば、グリシンなどのアミノ酸；スクロース、テトラロース、ラクトースなどのオリゴ糖、またはデキストランを含み得る。代替として、安定剤は、マンニトールなどの糖アルコールを含み得る。いくつかの実施形態では、安定剤または安定剤の組み合わせは、製剤化組成物の重量の約０．１重量％〜約１０重量％を構成する。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベートなどの非イオン性界面活性剤である。好適な界面活性剤の例は、Ｔｗｅｅｎ  ２０、Ｔｗｅｅｎ  ８０；ポリエチレングリコールまたはポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、例えばＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８を約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）で含む。
【０１０５】
塩または緩衝剤は、任意の塩または緩衝剤、例えば、それぞれ塩化ナトリウム、またはリン酸ナトリウム／カリウムなどであり得る。いくつかの実施形態では、緩衝剤は、約５．５〜約７．５の範囲の薬学的組成物のｐＨを維持する。塩及び／または緩衝剤はまた、浸透圧をヒトまたは動物への投与に好適なレベルで維持するのに有用である。いくつかの実施形態では、塩または緩衝剤は、約１５０ｍＭ〜約３００ｍＭのほぼ等張濃度で存在する。
【０１０６】
本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩の製剤は、追加として、１つ以上の従来の添加剤を含有し得る。かかる添加剤の例としては、例えば、グリセロールなどの可溶化剤；例えば、塩化ベンズアルコニウム（「クワット」として知られる第四級アンモニウム化合物の混合物）、ベンジルアルコール、クロレトン、またはクロロブタノールなどの抗酸化剤；例えばモルヒネ誘導体などの麻酔剤；及び本明細書に記載されるような等張剤等が挙げられる。酸化または他の腐敗に対するさらなる予防策として、薬学的組成物は、不透過性ストッパーで封止されたバイアル中、窒素ガス下で保管されてもよい。
【０１０７】
本技術に従って治療された哺乳動物は、任意の哺乳動物であり得、例えば、ヒツジ、ブタ、ウシ、及びウマなどの家畜動物；イヌ及びネコなどのペット動物；ならびにラット、マウス、及びウサギなどの実験動物を含む。一実施形態において、哺乳動物は、ヒトである。
【０１０８】
本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩は、全身にまたは局所的に投与されてもよい。一実施形態では、本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩は、静脈内投与される。例えば、本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩は、急速な静脈内ボーラス注射を介して投与され得る。一実施形態では、本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩は、定速静脈内注入として投与される。
【０１０９】
本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩は、例えば、血管形成もしくは冠動脈バイパス術中に冠動脈に直接注入され得るか、または冠動脈ステント上に適用され得る。
【０１１０】
本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）、またはそれらの好適な混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る、担体を含み得る。例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散剤の場合は必要な粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって、適切な流動性が維持され得る。微生物の作用の予防は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チオメラソール（ｔｈｉｏｍｅｒａｓｏｌ）等の種々の抗菌及び抗真菌剤によって達成することができる。グルタチオン及び他の抗酸化剤は、酸化を防止するために組成物に含まれ得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖、マンニトールなどのポリアルコール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含むことが望ましい。注射用組成物の長期吸収は、組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを含めることによってもたらされ得る。
【０１１１】
無菌注射溶液は、必要な量の活性化合物を、上に列挙された成分のうちの１つまたは組み合わせとともに適切な溶媒中に組み込むことによって、必要に応じて、後に濾過除菌することによって調製され得る。一般に、分散液は、活性化合物を、塩基性分散媒及び上に列挙されたものからの必要な他の成分を含有する無菌ビヒクル中に組み込むことによって調製される。無菌注射溶液の調製のための無菌粉末の場合、典型的な調製方法としては、真空乾燥及び凍結乾燥が挙げられ、活性成分＋その以前に除菌濾過した溶液からの任意の追加の所望の成分の粉末をもたらすことができる。
【０１１２】
経口組成物には、一般に、不活性希釈剤または食用担体が含まれる。経口治療投与の目的のために、活性化合物は、賦形剤とともに組み込むことができ、錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤、例えば、ゼラチンカプセルの形態で使用することができる。経口組成物はまた、口腔洗浄薬として使用するために流体担体を用いて調製することもできる。薬学的に適合する結合剤、及び／またはアジュバント材料が、組成物の一部として含まれてもよい。錠剤、丸剤、カプセル、トローチ等は、以下の成分または類似する性質の化合物、微結晶性セルロース、トラガカントガム、もしくはゼラチンなどの結合剤；デンプンもしくはラクトースなどの賦形剤、アルギニン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、もしくはトウモロコシデンプンなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムもしくはＳｔｅｒｏｔｅｓなどの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの滑剤；スクロースもしくはサッカリンなどの香味剤；またはペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジ香味などの香味剤のうちのいずれかを含有することができる。
【０１１３】
吸入による投与の場合、ペプチドまたはその薬学的に許容される塩は、好適な推進剤、例えば二酸化炭素などのガス、または噴霧剤を含有する加圧容器またはディスペンサーからのエアロゾル噴霧の形態で送達され得る。かかる方法は、米国特許第６，４６８，７９８号に記載されるものを含む。
【０１１４】
本明細書に記載される本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩の全身投与はまた、経粘膜または経皮手段によるものであり得る。経粘膜または経皮投与の場合、浸透される障壁に適切な浸透剤が、製剤に使用される。かかる浸透剤は、一般に当該技術分野において既知であり、例えば、経粘膜投与の場合、洗剤、胆汁塩、及びフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、経鼻スプレーの使用を介して達成することができる。経皮投与の場合、活性化合物は、当該技術分野において一般に知られている軟膏、膏薬、ゲル、またはクリームに製剤化される。一実施形態では、経皮投与は、イオン泳動によって実施され得る。
【０１１５】
本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩の投与量、毒性、及び治療有効性は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死性の用量）及びＥＤ５０（集団の５０％において治療上有効な用量）を決定するために、細胞培養物または実験動物において標準的な薬学的手順によって決定され得る。毒性効果と治療効果との間の用量比が治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表すことができる。いくつかの実施形態では、本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩は、高い治療指数を呈する。毒性副作用を呈する本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩が使用されてもよいが、非感染細胞に対する可能性のある損傷を最小限に抑え、それによって副作用を低減するために、かかる化合物を患部組織の部位に向ける送達系を設計することに注意すべきである。
【０１１６】
細胞培養アッセイ及び動物実験から得られたデータを、ヒトにおいて使用するための投与量の範囲を明確に述べる際に使用することができる。かかる化合物の投与量は、好ましくは、ほとんど毒性がないか、または全く毒性がないＥＤ５０を含む、循環濃度の範囲内である。投与量は、用いられる剤形及び利用される投与経路に応じて、この範囲内で異なってもよい。本明細書に記載される方法において使用される本技術の任意のペプチドまたはその薬学的に許容される塩の場合、治療上有効な用量は、最初に細胞培養アッセイから推定され得る。用量は、細胞培養において決定されるように、ＩＣ50（すなわち、症状の最大阻害の半分を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するように、動物モデルにおいて配合することができる。かかる情報を使用して、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定することができる。血漿中のレベルは、例えば、高性能液体クロマトグラフィーによって測定され得る。
【０１１７】
典型的には、治療効果または予防効果を達成するために十分な本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩の有効量は、体重１キログラム当たり１日約０．０００００１ｍｇ〜体重１キログラム当たり１日約１０，００００ｍｇの範囲である。いくつかの実施形態では、投与量範囲は、体重１キログラム当たり１日約０．０００１ｍｇ〜体重１キログラム当たり１日約１００ｍｇとなる。例えば、投与量は、毎日、２日ごと、もしくは３日ごとに体重１ｋｇ当たり１ｍｇもしくは体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ、または毎週、２週間ごと、または３週間ごとに１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。一実施形態では、本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩の単一投与量は、体重１ｋｇ当たり０．１〜１０，０００マイクログラムの範囲である。一実施形態では、ペプチドまたはその薬学的に許容される塩の担体中の濃度は、送達されるミリリットル当たり０．２〜２０００マイクログラムの範囲である。例示的な治療レジメンは、１日１回または週１回の投与を必要とする。間隔はまた、対象におけるグルコースまたはインスリンの血中レベルを測定すること、及びそれに従って投与量または投与を調整することによって示されるように不規則であり得る。いくつかの方法では、投与量は、所望の空腹時グルコースまたは空腹時インスリン濃度を達成するように調整される。治療用途では、比較的短い間隔での比較的高い投与量は、疾患の進行が低減もしくは終了するまで、または対象が疾患の症状の部分的または完全な改善を示すまで必要とされる場合がある。その後、患者は、予防レジメンを投与され得る。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩の治療有効量は、１０-11〜１０-6モル、例えばおよそ１０-7モルの標的組織における本技術のペプチドまたはその薬学的に許容される塩の濃度として定義される。この濃度は、体表面積につき０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇの全身用量または同等の用量によって送達され得る。用量のスケジュールは、例えば、１日１回または週１回の投与によって標的組織における治療濃度を維持するように最適化されるが、連続投与（例えば、非経口注入または経皮適用）も含む。
【０１１９】
当業者であれば、疾患または障害の重症度、以前の治療、対象の一般健康状態及び／もしくは年齢、ならびに他の疾患の存在を含むが、これらに限定されないある特定の要因が、対象を効果的に治療するのに必要な投与量及びタイミングに影響を与え得ることを理解するであろう。さらには、治療有効量の本明細書に記載される治療組成物による対象の治療は、単一の治療または一連の治療を含むことができる。
【実施例】
【０１２０】
本技術は、以下の実施例によってさらに例示されるが、これらは、いかなる様にも限定的であると解釈されるべきではない。以下の実施例の各々に対して、本明細書に記載の任意のペプチドを使用することができる。限定ではなく例として、以下の実施例で使用されるペプチドは、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、またはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）から選択され得る。
【０１２１】
実施例１：心筋機能及び再灌流傷害への応答に対するペプチドの効果
この実施例は、本技術のペプチドが心虚血性傷害及び心虚血性再灌流傷害の治療に有用であることを示す。
【０１２２】
改変されたランゲンドルフモデル
ランゲンドルフ齧歯類心臓モデルは、心筋機能及び傷害（例えば、虚血）への応答に関する研究において広く用いられている。全心臓研究のために、雄スプラーグ・ドーリーラット（７〜９週齢）にペントバルビタールを注射し（３５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内注射）、心臓を正中線開胸術で切除した。大動脈を、改変されたランゲンドルフ装置のカニューレの周囲に固定し、１１８ｍＭ  ＮａＣｌ、２４ｍＭ  ＮａＨＣＯ3、４．７５ｍＭ  ＫＣｌ、１．２ｍＭ  ＫＨ2ＰＯ4、１．２ｍＭ  ＭｇＳＯ4、２．０ｍＭ  ＣａＣｌ2、及び１０ｍＭグルコース（９５／５％  Ｏ2／ＣＯ2でガス化）を含有する改変されたクレブス・ヘンゼライト緩衝液で逆行的に灌流させた（７５ｍｍＨｇの灌流圧）。心臓を、実験期間にわたって３７℃に維持された緩衝液で充填した灌流チャンバ内に浸した。灌流の開始後、心臓を機械的機能及び電気的機能の同時観察のために計測した。デジタルマノメーターを使用して各日の開始時に較正される、緩衝液を充填したラテックスバルーン（サイズ５、Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）を、左心室拡張圧（ＬＶＤＰ）の測定のために、５〜８ｍｍＨｇの弛緩圧を確立するように調整されたバルーン体積で、左室内に（僧帽弁を介して）挿入した。３つの電極を、体積実行心電図（ＥＣＧ）の測定のために緩衝液で充填した灌流チャンバに配置した。冠状血流量を、灌流ラインと直列に接続されたフロープローブ（Ｔｒａｎｓｃｏｎｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｔｈａｃａ，ＮＹ，ＵＳＡ）で常に監視し、各実験の終了時に心臓湿潤重量（グラム）に正規化した。全ての生理学的パラメータを連続的に監視し、商業的に入手可能なソフトウェア（Ｃｈａｒｔ，ＡＤ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ  Ｓｐｒｉｎｇｓ，ＣＯ，ＵＳＡ）を使用して、パーソナルコンピュータ上に格納した。ＬＶＤＰトレースを使用して心拍を計算し、ＬＶＤＰトレースの導関数を使用して収縮（＋ｄＰ／ｄｔ）及び弛緩（−ｄＰ／ｄｔ）の最大速度を計算した。
【０１２３】
虚血／再灌流プロトコル及びペプチド治療
１０分間のベースラインの期間後、虚血／再灌流を開始した。２０分間灌流を停止することによって、心臓をノーフロー全虚血に曝露した。インデックス虚血の終了時に、灌流ラインからの静的緩衝液を（大動脈カニューレの近位にある補助ポートを介して）洗浄し、Ｋｒｅｂｓ緩衝液単独（対照）または１μＭの濃度で実験ペプチドを含有するＫｒｅｂｓ緩衝液のいずれかで２時間再灌流させた。試験したペプチドは、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｄｍｔ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−４６）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｏｒｎ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１０２）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、及びＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）を含んでいた。再灌流の終了時に、左室を切断し、５ｍｍ厚のスライスにスライスし、１％の塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）中で１０分間（３７℃）インキュベートして、後続の梗塞サイズ分析のためにデジタル写真を撮影する。梗塞サイズは、左心室のパーセンテージ（危険性のある領域（ＡＡＲ）の％）として表した（ＩｍａｇｅＪソフトウェア（ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＵＳＡ）を使用して計算した）。
【０１２４】
結果
対照及び試験ペプチド（すなわち、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｄｍｔ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−４６）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｏｒｎ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１０２）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、及びＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９））のＡＡＲ、ＬＶＤＰのパーセンテージとして表された梗塞サイズ、及び収縮と弛緩の最大速度（±ｄＰ／ｄｔ）を、図１〜９に示す。
【０１２５】
これらの結果は、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、及びＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）による治療が、対照と比較して、ペプチドによる治療が梗塞サイズを低減し（図２Ａ、４Ａ、６Ａ、及び９を参照）、ＬＶＤＰを増加させ（図２Ｂ、３Ａ、４Ｂ、６Ｂ、７Ａ、及び８Ａを参照）、収縮の最大速度（＋ｄＰ／ｄｔ）を増加させ（図２Ｃ、３Ｂ、４Ｃ、６Ｃ、７Ｂ、及び８Ｂを参照）、かつ弛緩の最大速度（−ｄＰ／ｄｔ）を増加させたため（図２Ｄ、３Ｃ、４Ｄ、６Ｄ、７Ｃ、及び８Ｃを参照）、心虚血傷害及び虚血再灌流傷害を減衰できたことを示す。
【０１２６】
これらの結果はまた、本技術の選択ペプチドによる治療は、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｄｍｔ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−４６）及びＤ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｏｒｎ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１０２）による治療が、対照と比較して、梗塞サイズを低減しなかったか、ＬＶＤＰを増加させなかったか、または収縮と弛緩の最大速度（±ｄＰ／ｄｔ）を増加させなかったため（図１Ａ〜Ｄ及び５Ａ〜Ｄを参照）、心虚血傷害及び虚血再灌流傷害を減衰できることを示す。
【０１２７】
これらの結果は、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、及びＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）が、心虚血傷害（例えば、心筋梗塞）及び虚血再灌流傷害の治療において有用であることを示す。
【０１２８】
実施例２：心虚血性傷害及び心虚血性再灌流傷害の予防
この実施例は、本技術のペプチドが心虚血性傷害及び心虚血性再灌流傷害の予防に有用であることを示す。
【０１２９】
改変されたランゲンドルフモデル
ランゲンドルフ齧歯類心臓モデルは、心筋機能及び傷害（例えば、虚血）への応答に関する研究において広く用いられている。全心臓研究のために、雄スプラーグ・ドーリーラット（７〜９週齢）に、ペントバルビタールを注射し（３５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内注射）、心臓を正中線開胸術で切除する。大動脈は、改変されたランゲンドルフ装置のカニューレの周囲に固定され、１１８ｍＭ  ＮａＣｌ、２４ｍＭ  ＮａＨＣＯ3、４．７５ｍＭ  ＫＣｌ、１．２ｍＭ  ＫＨ2ＰＯ4、１．２ｍＭ  ＭｇＳＯ4、２．０ｍＭ  ＣａＣｌ2、及び１０ｍＭグルコース（９５／５％  Ｏ2／ＣＯ2でガス化）を含有する改変されたクレブス・ヘンゼライト緩衝液で逆行的に灌流させた（７５ｍｍＨｇの灌流圧）。心臓を、実験期間にわたって３７℃に維持された緩衝液で充填した灌流チャンバ内に浸す。灌流の開始後、心臓を機械的機能及び電気的機能の同時観察のために計測する。デジタルマノメーターを使用して各日の開始時に較正される、緩衝液を充填したラテックスバルーン（サイズ５、Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）を、左心室拡張圧（ＬＶＤＰ）の測定のために、５〜８ｍｍＨｇの弛緩圧を確立するように調整されたバルーン体積で、左室内に（僧帽弁を介して）挿入する。３つの電極を、体積実行心電図（ＥＣＧ）の測定のために緩衝液で充填した灌流チャンバに配置する。冠状血流量を、灌流ラインと直列に接続されたフロープローブ（Ｔｒａｎｓｃｏｎｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｔｈａｃａ，ＮＹ，ＵＳＡ）で常に監視し、各実験の終了時に心臓湿潤重量（グラム）に正規化する。全ての生理学的パラメータを連続的に監視し、商業的に入手可能なソフトウェア（Ｃｈａｒｔ，ＡＤ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ  Ｓｐｒｉｎｇｓ，ＣＯ，ＵＳＡ）を使用して、パーソナルコンピュータ上に格納した。ＬＶＤＰトレースを使用して心拍を計算し、ＬＶＤＰトレースの導関数を使用して収縮（＋ｄＰ／ｄｔ）及び弛緩（−ｄＰ／ｄｔ）の最大速度を計算した。
【０１３０】
虚血／再灌流プロトコル及びペプチド治療
虚血／再灌流の開始前に、切除されたラットの心臓を、１μＭの濃度で実験ペプチドを含有する緩衝液、または緩衝液単独（対照）中に２時間浸す。実験ペプチドは、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｄｍｔ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−４６）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｏｒｎ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１０２）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、及びＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）から選択される。１０分間のベースラインの期間後、虚血／再灌流を開始する。２０分間灌流を停止することによって、心臓をノーフロー全虚血に曝露する。指標虚血の終了時に、灌流ラインからの静的緩衝液を（大動脈カニューレの近位にある補助ポートを介して）洗浄し、クレブス緩衝液で２時間再灌流させる。再灌流の終了時に、左室を切断し、５ｍｍ厚のスライスにスライスし、１％の塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）中で１０分間（３７℃）インキュベートして、後続の梗塞サイズ分析のためにデジタル写真を撮影する。梗塞サイズは、左心室のパーセンテージ（危険性のある領域（ＡＡＲ）の％）として表す（ＩｍａｇｅＪ  ｓｏｆｔｗａｒｅ，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＵＳＡを使用して計算する）。
【０１３１】
結果
Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、またはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）による治療は、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｄｍｔ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−４６）またはＤ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｏｒｎ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１０２）及び対照で治療されたラットと比較して、心虚血傷害及び虚血再灌流傷害を予防もしくは低減し、かつ／または心虚血傷害及び虚血再灌流傷害の症状を予防もしくは低減することが予想される。Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、またはＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）で治療されたラットは、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｄｍｔ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−４６）またはＤ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｏｒｎ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１０２）及び対照で治療されたラットと比較して、梗塞サイズを低減し、ＬＶＤＰを増加させ、収縮の最大速度（＋ｄＰ／ｄｔ）を増加させ、弛緩の最大速度（−ｄＰ／ｄｔ）を増加させることが予想される。
【０１３２】
これらの結果は、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−６８）、（Ａｃ）−Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−８５）、Ｄ−Ａｒｇ−Ｌ−Ｄｍｔ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１００）、Ｄ−Ｏｒｎ−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１３１）、Ｄ−（アミジン）Ａｒｇ（プロピルアミン）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４０）、及びＤ−Ａｒｇ（ブチルアミジン類似体）−Ｌ−ＤＭＴ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（ＳＢＴ−１４９）が、心虚血傷害（例えば、心筋梗塞）及び虚血再灌流傷害の予防に有用であることを示す。
【０１３３】
同等物
本技術は、本出願に記載される特定の実施形態に関して限定されず、本技術の個々の態様の単一の例示として意図される。当業者には明らかとなるように、本技術の多くの修正及び変形が、その趣旨及び範囲から逸脱することなく行われ得る。本明細書に列挙するものに加えて、本技術の範囲内の機能的に同等である方法及び装置は、前述の説明から当業者には明らかとなるであろう。かかる修正及び変形は、添付の特許請求の範囲内に属することを意図する。本技術は、添付の特許請求の範囲と、かかる特許請求の範囲が権限を有する同等物の全範囲によってのみ制限されるものとする。本技術が、当然異なり得る、特定の方法、試薬、化合物、組成物、または生体系に限定されないことを理解されたい。本明細書で使用される専門用語が、特定の実施形態のみを説明することを目的としており、限定するようには意図されていないことも理解されたい。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９】
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【国際調査報告】
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