(57)【要約】  ヒト化、マウスまたはキメラ抗ＣＤ４７モノクローナル抗体が提供される。抗体は、ヒトグリコシル化および脱グリコシル化ＣＤ４７に最適化Ｋｏｆｆ値で結合し、それらはヒトＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を妨害し、様々な治療、予防または診断方法において用途を見出す。発明は、単離抗体ならびにその誘導体および断片、ヒト化またはキメラ抗ＣＤ４７モノクローナル抗体の１つ以上を含む医薬製剤；ならびにこれらのモノクローナル抗体を産生する細胞株を含む。抗体のアミノ酸およびヌクレオチド配列もまた、提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリコシル化および非グリコシル化ＣＤ４７に結合する抗体であって、前記抗体のＣＤ４７への結合は、ＣＤ４７のグリコシル化に依存しない、抗体。
【請求項２】
前記抗体は治療抗体としての使用に好適である、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記抗体はヒトＣＤ４７のグリコシル化および脱グリコシル化形態に結合する、請求項１または請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
ヒトＣＤ４７の前記グリコシル化形態は、ヒトＣＤ４７のアミノ酸配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１）における位置Ｎ２３、Ｎ３４、Ｎ５０、Ｎ７３、Ｎ１１１および／またはＮ２０６に１つ以上のＮ−グリコシル化残基を含む、請求項３に記載の抗体。
【請求項５】
ヒトＣＤ４７の前記脱グリコシル化形態は、Ｎ−グリコシル化の除去のためにペプチドＮ−グリコシダーゼ（ＰＮＧａｓｅ）で処理されたグリコシル化ヒトＣＤ４７を含む、前記いずれかの請求項に記載の抗体。
【請求項６】
（ｉ）前記抗体のＣＤ４７の非グリコシル化形態対グリコシル化形態への結合のＥＣ５０の比率は４：１、３：１、２：１、１：２、１：３または１：４未満、好ましくは４：１〜１：４の範囲、より好ましくは３：１〜１：３、最も好ましくは２：１〜１：２であり；および／または（ｉｉ）前記抗体のＣＤ４７の非グリコシル化形態対グリコシル化形態への結合のＥＣ９５の比率は２５：１、２０：１または１０：１、１：１０、１：２０または１：２５未満、好ましくは１０：１〜１：１０の範囲、より好ましくは９：１〜１：９、最も好ましくは１０：１〜１：１０である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項７】
前記抗体は、８０ｐＭ以下、好ましくは７０ｐＭ以下、より好ましくは６０ｐＭ以下の平衡結合定数でグリコシル化ＣＤ４７および非グリコシル化ＣＤ４７の各々に結合する、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体の非グリコシル化ＣＤ４７に対する最大結合能（Ｂｍａｘ２）は前記抗体のグリコシル化ＣＤ４７に対する最大結合能（Ｂｍａｘ１）の少なくとも６０％である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体は、約１．０×１０−４ｓ−１（１／ｓ）以上の、グリコシル化および／または非グリコシル化ＣＤ４７への結合についてのＫｏｆｆ値を有する、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項１０】
前記抗体は、１．０×１０−４ｓ−１〜１．０×１０−３ｓ−１の、グリコシル化および／または非グリコシル化ＣＤ４７への結合についてのＫｏｆｆ値を有する、請求項９に記載の抗体。
【請求項１１】
前記抗体は、２．５×１０−４ｓ−１〜８．０×１０−４ｓ−１の、グリコシル化および／または非グリコシル化ＣＤ４７への結合についてのＫｏｆｆ値を有する、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１２】
１．０×１０−４ｓ−１〜１．０×１０−３ｓ−１の、ＣＤ４７への結合についてのＫｏｆｆ値を有する、ＣＤ４７に結合する抗体。
【請求項１３】
前記抗体は全長キメラ、マウスまたはヒト化抗体である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項１４】
前記抗体は抗体断片であり、前記抗体断片は任意でＦ（ａｂ’）２またはＦａｂ断片である、請求項１〜１２のいずれかに記載の抗体。
【請求項１５】
前記抗体は二重特異性抗体である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項１６】
前記抗体は、グリコシル化および非グリコシル化ＣＤ４７に特異的に結合し、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を妨害し、好ましくは、前記抗体は、それぞれ、グリコシル化および非グリコシル化ヒトＣＤ４７に特異的に結合し、ヒトＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を妨害する、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項１７】
任意で突然変異Ｓ２２８Ｐを有する（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６２）または任意で二重突然変異Ｓ２２８Ｐ−Ｌ２３５Ｅを有する（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６４）ヒトＩｇＧ４を有する、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項１８】
前記抗体はＣＤ４７、好ましくはヒトＣＤ４７上の不連続エピトープに結合する、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項１９】
前記不連続エピトープは、ヒトＣＤ４７（ＳＥＱ  ＩＤ  １５１）のアミノ酸残基Ｋ５９、Ｒ６３、Ｙ６６、Ｔ６７、Ｈ１０８、Ｔ１０９、Ｔ１１７およびＴ１２０；または前記不連続エピトープは、ヒトＣＤ４７（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１）のアミノ酸残基Ｋ５９、Ｋ６１、Ｓ１０７、Ｈ１０８、Ｔ１１７、Ｔ１２０およびＲ１２１を含む、請求項１８に記載の抗体。
【請求項２０】
前記抗体はＣＤ４７単量体およびＣＤ４７二量体、好ましくはそれぞれヒトＣＤ４７単量体および二量体、に結合する、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項２１】
前記抗体は、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９−５１（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２−５４（ＩＭＧＴアノテーション）に記載されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５−５７（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８−６０（ＩＭＧＴアノテーション）に記載されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群、（ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１−６３（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４−６６（ＩＭＧＴアノテーション）に記載されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７−６９（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７０−７２（ＩＭＧＴアノテーション）に記載されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群、ならびに（ｉｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９−５１（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２−５４（ＩＭＧＴアノテーション）に記載されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５、１５２、５７（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８、１５３、６０（ＩＭＧＴアノテーション）に記載されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群からなる抗体の群より選択される、先行する請求項のいずれかに記載の抗体。
【請求項２２】
前記抗体は、
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９に記載されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３０に記載されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群；または
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１に記載されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３２に記載されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群；または
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９に記載されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５４に記載されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群
からなる抗体の群より選択される、請求項２０に記載の抗体。
【請求項２３】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１に記載されるアミノ酸配列を有するＶＨとＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６−１５０および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５−１５９に記載されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬとを含むヒト化抗体である；または、前記ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２に記載されるアミノ酸配列を有するＶＨとＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６−１５０および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５−１５９に記載されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬとを含む；または、前記ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３に記載されるアミノ酸配列を有するＶＨとＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６−１５０および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５−１５９に記載されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬとを含む；または、前記ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４４に記載されるアミノ酸配列を有するＶＨとＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６−１５０および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５−１５９に記載されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬとを含む；または、前記ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４５に記載されるアミノ酸配列を有するＶＨとＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６−１５０および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５−１５９に記載されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬとを含む；または、前記ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８に記載されるアミノ酸配列を有するＶＨとＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２−１７５に記載されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬとを含む；または、前記ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９に記載されるアミノ酸配列を有するＶＨとＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２−１７５に記載されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬとを含む；または、前記ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７０に記載されるアミノ酸配列を有するＶＨとＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２−１７５に記載されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬとを含む；または、前記ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１に記載されるアミノ酸配列を有するＶＨとＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２−１７５に記載されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬとを含む、請求項１〜２０のいずれかに記載の抗体。
【請求項２４】
先行する請求項のいずれかに記載される抗体をコードするポリヌクレオチド。
【請求項２５】
請求項１〜２３のいずれか一項に記載される抗体を産生する細胞。
【請求項２６】
請求項１−２３のいずれか一項に記載される抗体を含み、任意で、薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、医薬組成物。
【請求項２７】
被験体における疾患の治療において使用するための、請求項１−２３のいずれかに記載の抗体または請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
癌の治療において使用するための、請求項２７に記載の使用のための抗体または組成物。
【請求項２９】
前記癌は胃、肺、卵巣または乳癌、好ましくは胃癌である、請求項２８に記載の使用のための抗体または組成物。
【請求項３０】
単独療法として使用するための、請求項２７〜２９のいずれかに記載の使用のための抗体または組成物。
【請求項３１】
併用療法、好ましくはＨｅｒ−２阻害剤もしくは抗Ｈｅｒ２抗体またはＥＧＦＲ阻害剤もしくは抗ＥＧＦＲ抗体との併用で使用するための、請求項２７〜２９のいずれかに記載の使用のための抗体または組成物。
【請求項３２】
前記被験体はヒトまたは非ヒト動物である、請求項２７−３１に記載の使用のための抗体または組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
ヒト化、マウスまたはキメラ抗ＣＤ４７モノクローナル抗体が提供される。抗体は、ヒトグリコシル化および脱グリコシル化ＣＤ４７に最適化Ｋｏｆｆ値で結合し、それらはヒトＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を妨害し、様々な治療、予防または診断方法において用途を見出す。発明は単離抗体ならびにその誘導体および断片、ヒト化またはキメラ抗ＣＤ４７モノクローナル抗体の１つ以上を含む医薬製剤；ならびにこれらのモノクローナル抗体を産生する細胞株を含む。抗体のアミノ酸およびヌクレオチド配列もまた、提供される。
【背景技術】
【０００２】
マクロファージは病原体および損傷もしくは老化した細胞を血流から食作用により除去する。細胞−表面ＣＤ４７は、マクロファージ上のその受容体、ＳＩＲＰαと相互作用し、正常で、健康な細胞の食作用を阻害する。ＣＤ４７は単一のＩｇ様ドメインおよび５つの膜貫通領域を有する広範に発現している膜貫通糖タンパク質であり、ＳＩＲＰαのための細胞リガンドとして機能し、結合は、ＳＩＲＰαのＮＨ２末端Ｖ様ドメインにより媒介される。ＳＩＲＰαは主として、マクロファージ、顆粒球、骨髄樹状細胞（ＤＣ）、マスト細胞、およびそれらの前駆体、例えば造血幹細胞（ＨＳＣ）を含む骨髄細胞上で発現される。
【０００３】
ＳＩＲＰαは、マクロファージによる宿主細胞の食作用を阻害し、この場合、マクロファージ上のＳＩＲＰαの、宿主標的細胞上に発現されたＣＤ４７による連結により、食作用をネガティブに制御するＳＨＰ−１により媒介される抑制シグナルが生成される。ＳＩＲＰαは「自身」により提供されたシグナルを検出し、これらの細胞に対する自然免疫エフェクター機能をネガティブに制御するように作用する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｃｌｏｔｈｉａ  Ｃ，Ｎｏｖｏｔｎｙ  Ｊ，Ｂｒｕｃｃｏｌｅｒｉ  Ｒ，Ｋａｒｐｌｕｓ  Ｍ．“Ｄｏｍａｉｎ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．Ｔｈｅ  ｐａｃｋｉｎｇ  ｏｆ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ．”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８６：６５１−６３（１９８５）
【０００５】
【非特許文献２】；Ｎｏｖｏｔｎｙ  Ｊ．ａｎｄ  Ｈａｂｅｒ  Ｅ．“Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｉｎｖａｒｉａｎｔｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ＶＬ−ＶＨ  ａｎｄ  ＶＬ−ＶＬ  ｄｏｍａｉｎ  ｄｉｍｅｒｓ．”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２：４５９２−９６（１９８５）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
正常細胞の食作用を阻害するＣＤ４７の役割に従って、これが多くの癌で上方制御される証拠がある。例えば骨髄性白血病などの癌細胞株上でのＣＤ４７の過剰発現は、食作用を逃れさせることによりその病原性を増加させる。よって、ＣＤ４７上方制御は、炎症媒介動員中に正常ＨＳＣに対する保護を提供し、癌細胞がマクロファージ死滅を逃れるために利用する重要なメカニズムである。
【０００７】
本発明は被験体、例えばヒトにおける癌などの疾患の治療について様々な望ましい特性を示す抗ＣＤ４７抗体を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
１つの態様では、本発明は、グリコシル化および非グリコシル化ＣＤ４７に結合する抗体に関し、ここで、抗体のＣＤ４７への結合は、ＣＤ４７のグリコシル化に依存しない。１つの実施形態では、抗体はヒトＣＤ４７のグリコシル化および脱グリコシル化形態に結合する。別の実施形態では、ヒトＣＤ４７のグリコシル化形態は、ヒトＣＤ４７のアミノ酸配列における位置Ｎ２３、Ｎ３４、Ｎ５０、Ｎ７３、Ｎ１１１および／またはＮ２０６に１つ以上のＮ−グリコシル化残基を含む。ヒトＣＤ４７の脱グリコシル化形態は、Ｎ−グリコシル化の除去のためにペプチドＮ−グリコシダーゼ（ＰＮＧａｓｅ）で処理されたグリコシル化ヒトＣＤ４７を含み得る。
【０００９】
１つの実施形態では、抗体のＣＤ４７の非グリコシル化形態対グリコシル化形態への結合のＥＣ５０の比率は４：１、３：１または２：１未満、好ましくは４：１〜１：４の範囲、より好ましくは３：１〜１：３、最も好ましくは２：１〜１：２であり；あるいは、抗体のＣＤ４７の非グリコシル化形態対グリコシル化形態への結合のＥＣ９５の比率は２５：１、２０：１または１０：１未満、好ましくは１０：１〜１：１０の範囲、より好ましくは９：１〜１：９、最も好ましくは１０：１〜１：１０である。
【００１０】
別の実施形態では、抗体はグリコシル化および非グリコシル化ＣＤ４７の各々に、８０ｐＭ以下、好ましくは７０ｐＭ以下、より好ましくは６０ｐＭ以下の平衡結合定数で結合する。
【００１１】
別の実施形態では、抗体の非グリコシル化ＣＤ４７に対する最大結合能（Ｂｍａｘ２）は、抗体のグリコシル化ＣＤ４７に対する最大結合能（Ｂｍａｘ１）の少なくとも６０％である。
【００１２】
好ましくは、抗体は、約１．０×１０−４ｓ−１（１／ｓ）以上の、グリコシル化および／または非グリコシル化ＣＤ４７への結合についてのＫｏｆｆ値を有する。より好ましくは、抗体は、１．０×１０−４ｓ−１〜１．０×１０−３ｓ−１の、グリコシル化および／または非グリコシル化ＣＤ４７への結合についてのＫｏｆｆ値を有する。最も好ましくは、抗体は、２．５×１０−４ｓ−１〜５．０×１０−４ｓ−１の、グリコシル化および／または非グリコシル化ＣＤ４７への結合についてのＫｏｆｆ値を有する。
【００１３】
別の態様では、発明は、ＣＤ４７に結合する抗体を提供し、ここで、抗体は、１．０×１０−４ｓ−１〜１．０×１０−３ｓ−１のＣＤ４７への結合についてのＫｏｆｆ値を有する。
【００１４】
ヒト化またはキメラ抗ＣＤ４７モノクローナル抗体に関連する組成物および方法が提供される。発明の抗体は、ＣＤ４７に結合し、特有の機能プロファイルを有する。特に前記抗体は下記特性の少なくとも１つを有する：ヒトＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を妨害する、ＣＤ４７−ＳＩＲＰαシグナル伝達を阻害する、ある一定のＣＤ４７発現細胞の食作用を増加させる、著しいレベルの細胞の凝集を引き起こさない、および、様々な治療的方法において用途を見出す。ヒトＣＤ４７に結合し、ＩｇＧ４型である抗体が好ましい。ヒトＣＤ４７に結合し、ＩｇＧ１型でもある二重特異型の抗体が好ましい。高いＫｏｆｆ値（迅速な解離反応速度を示唆する）を有し、ならびにアポトーシスプロファイルおよび赤血球凝集活性が弱い、またはこれを欠く（低毒性を示唆する）非活性化抗体が好ましい。
【００１５】
さらに、異なるグリコシル化パターンのヒトＣＤ４７に、および／またはヒトＣＤ４７の脱グリコシル化形態に結合する抗体が好ましい。発明の実施形態は、単離抗体ならびにその誘導体および断片、ヒト化またはキメラ抗ＣＤ４７モノクローナル抗体の１つ以上を含む医薬製剤；ならびにこれらのモノクローナル抗体を産生する細胞株を含む。抗体のアミノ酸およびヌクレオチド配列もまた、提供される。
【００１６】
対象となる抗体は、提供されるヒト化、改変またはキメラ抗体、およびそれらのバリアントを含む。発明のモノクローナル抗体は、ヒトにおけるＣＤ４７と関連する疾患の診断および免疫療法のための、特に、血液腫瘍および固形腫瘍などの癌治療における試薬として特定の有用性を見出す。発明のモノクローナル抗体の利点は、ヒト化プロセスに由来する。よって、免疫療法のための発明のモノクローナル抗体のインビボ使用は、抗体に対する著しい宿主免疫応答の問題を大きく低減させる。
【００１７】
様々な形態の抗体が本明細書で企図される。例えば、抗ＣＤ４７抗体は、例えば、任意のアイソタイプ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、などのヒト免疫グロブリン定常領域を有する全長キメラまたはヒト化抗体、または抗体断片、例えば単鎖抗体、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆ（ａｂ）断片、などであってもよい。ＣＤＲ領域を含む断片もまた、例えばイメージング目的のために対象となるが、ＩｇＧ４型が明らかに好ましい形態である。二重特異性アプローチでは、ＩｇＧ１型もまた好適であり得る。さらに、抗体は、検出可能な標識で標識され、固相上で固定化され、および／または異種化合物とコンジュゲートされ得る。抗体はまた、特に癌抗原を含む第２の抗原と反応性の二重特異性または多特異性抗体として提供され得る。好ましい二重特異性抗体は、Ｈｅｒ−２抗原と機能的に反応する抗体である。好ましい用途の二重特異性抗体は、例えば候補２０および２２およびそれらのバリアント（例えば、そのヒト化バージョン）などの、ヒトＣＤ４７に対して中くらいの結合を有するものである。
【００１８】
特にＣＤ４７を発現する望ましくない細胞の検出および排除に関連する、抗体についての診断的および治療的使用が、企図される。１つの診断適用では、発明は、ＣＤ４７発現癌細胞の存在を決定するための方法を提供し、これは、ＣＤ４７発現癌細胞を含む疑いがある患者試料を抗ＣＤ４７抗体に曝露させること、および抗体の試料への結合を決定することを含む。この用途のために、発明は抗体および抗体を使用するための説明書を含むキットを提供する。
【００１９】
発明の抗体は疾患の治療において特に有効であり、例えばＣＤ４７発現細胞の食作用を増加させる。治療は全身または局所であってもよく、例えば腫瘍内投与による送達、などである。
【００２０】
発明の実施形態は、本明細書で提供される少なくとも３つのＣＤＲ配列を、通常、ヒト可変領域由来のフレームワーク配列と共に含む、単離抗体ならびにその誘導体および断片を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書では、可変領域フレームワーク（限定はされないが、ヒトまたはマウス可変領域フレームワークであってもよい）内の位置で提供される３つの軽鎖ＣＤＲ配列を含む少なくとも１つの軽鎖、および、本明細書では、可変領域フレームワーク（限定はされないが、ヒトまたはマウス可変領域フレームワークであってもよい）内の位置で提供される３つの重鎖ＣＤＲ配列を含む少なくとも１つの重鎖を含む。
【００２１】
他の実施形態では、抗体は提供された抗体のＣＤＲのアミノ酸配列バリアントを含み、そのバリアントは、ＣＤＲ残基内のまたはこれに隣接する１つ以上のアミノ酸挿入（複数可）および／またはＣＤＲ残基内のまたはこれに隣接する欠失（複数可）および／またはＣＤＲ残基（複数可）の置換（複数可）（置換（複数可）は、そのようなバリアントの生成のためのアミノ酸変化の好ましい型である）を含む。そのようなバリアントは通常、ヒトＣＤ４７について、少なくとも約１０−８Ｍの結合親和性を有し、例えば、例として、２ｎＭ〜１５ｎＭのヒトＣＤ４７に対する結合親和性を有し、ヒトＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を妨害し、本明細書で明記されるもののアミノ酸配列を有する抗体と同じエピトープに結合する。様々な形態の抗体が本明細書で企図される。例えば、抗体は、例えば、任意のアイソタイプ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、より好ましくはＩｇＧ４のヒト免疫グロブリン定常領域を有し、任意で突然変異（複数可）を有する全長抗体、または、抗体断片、例えばＦ（ａｂ’）２断片、Ｆ（ａｂ）断片、などであってもよい。さらに、抗体は、検出可能な標識で標識され、固相上で固定化され、および／または異種化合物とコンジュゲートされ得る。
【００２２】
発明の実施形態は、（ｉ）抗体アイソタイプ（およびエフェクター機能）に関係なく、ヒトＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用の強力な妨害を有する、（ｉｉ）ヒト単球由来マクロファージによるＣＤ４７発現腫瘍細胞の効率的な食作用を可能にする、（ｉｉｉ）１．０×１０−４ｓ−１〜１．０×１０−３ｓ−１の間の最適化Ｋｏｆｆ値を有する（より高密度のＣＤ４７保有癌細胞に対する抗体の低いシンク効果およびより大きな有効性を可能にする）、および／または（ｉｖ）標的ＣＤ４７を過剰発現する異種移植片マウスモデルにおいて腫瘍成長の阻害を示す、抗ＣＤ４７抗体を含む。発明の好ましい実施形態は、加えて弱い赤血球凝集活性を示し、追加の低毒性を示唆する（候補番号１９、３３、２０）および／またはＪｕｒｋａｔ細胞のアポトーシスを誘導しない（または、わずかにしか誘導しない）（候補番号７、１９、２０、２２、３３）一群の抗ＣＤ４７抗体である。さらに、発明のより好ましい実施形態は、加えて、細胞外でグリコシル化および非グリコシル化ＣＤ４７に結合する、または、その免疫学的に活性な、グリコシル化および非グリコシル化断片に結合する、一群の抗ＣＤ４７抗体である。さらに、発明のより好ましい実施形態はＣＤ４７の単量体および二量体に結合する一群の抗ＣＤ４７抗体である。さらに、発明のより好ましい実施形態はＣＤ４７上の特定のエピトープ、すなわち特に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１にしたがい番号付けされた場合、ヒトＣＤ４７のＫ５９、Ｒ６３、Ｙ６６、Ｔ６７、Ｈ１０８、Ｔ１０９、Ｔ１１７およびＴ１２０を含む不連続エピトープに結合する一群の抗ＣＤ４７抗体である（例えば、候補２０ならびにそのヒト化および改変バージョン）。発明の一実施形態の別の例は、ＣＤ４７上の特定のエピトープ、すなわち特に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１にしたがい番号付けされた場合、ヒトＣＤ４７のＫ５９、Ｋ６１、Ｓ１０７、Ｈ１０８、Ｔ１１７、Ｔ１２０およびＲ１２１を含む不連続エピトープに結合する一群の抗ＣＤ４７抗体である（例えば候補２２ならびにそのヒト化および改変バージョン）。
【００２３】
発明の実施形態は、（ｉ）抗体アイソタイプ（およびエフェクター機能）に関係なく、ヒトＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用の強力な妨害を有する、（ｉｉ）ヒト単球由来マクロファージによるＣＤ４７発現腫瘍細胞の効率的な食作用を可能にする、（ｉｉｉ）１．０×１０−４ｓ−１〜１．０×１０−３ｓ−１の間の最適化Ｋｏｆｆ値を有する（より高密度のＣＤ４７を保有する癌細胞に対する抗体の低いシンク効果およびより大きな有効性を可能にする）、（ｉｖ）標的ＣＤ４７を過剰発現する異種移植片マウスモデルにおいて腫瘍成長の阻害を示す、および／または（ｖ）下記表２および３において設定されるＣＤＲの組み合わせを有する抗ＣＤ４７抗体を含み、ここで、１つ以上のＣＤＲにおいて、最大５まで、より好ましくは最大４、３、２または１までのアミノ酸が、例えば保存的置換のように、他のアミノ酸により置き換えられ、しかしながら、ここで、上記要素（ｉ）〜（ｉｖ）などの抗体の全体プロファイルは不変または同様であり、すなわち標準生物学的分散の１０％範囲内である。
【００２４】
発明は、下記をさらに提供する：抗体およびそれらのバリアントをコードする単離核酸；ベクターで形質転換される宿主細胞により認識される制御配列に任意で作動可能に連結された、その核酸を含むベクター；そのベクターを含む宿主細胞；核酸が発現されるように宿主細胞を培養すること、および任意で、宿主細胞培養物から（例えば、宿主細胞培地から）抗体を回収することを含む抗体を産生させるためのプロセス。発明はまた、１つ以上の抗ヒトＣＤ４７抗体および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む組成物を提供する。治療的使用のためのこの組成物は無菌であり、凍結乾燥され得、例えば、単位用量で希釈剤および送達装置、例えば吸入器、シリンジ、などと共にプリパックとして提供される。
【００２５】
添付の図面は縮尺通りに描かれることは意図されない。図は例示にすぎず、開示の実施可能性に必須ではない。明確にするために、全ての構成要素が全ての図面において表示されるわけではない可能性がある。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】抗ＣＤ４７抗体による、ＣＨＯ細胞上に発現されたｈＣＤ４７へのｈＳＩＲＰα結合の阻害を示す。
【図２】抗ＣＤ４７抗体のＲａｊｉ細胞上に発現されたｈＣＤ４７への結合プロファイルを示す。
【図３】抗ＣＤ４７抗体による、Ｒａｊｉ細胞上に発現されたｈＣＤ４７へのｈＳＩＲＰα結合の阻害を示す。
【図４】抗ＣＤ４７抗体を用いた、ヒトマクロファージによるＲａｊｉ細胞食作用の増強を示す。
【図５】抗ＣＤ４７抗体による精製ヒトＲＢＣの凝集を示す。
【図６】ＳＰＲにより測定された抗ＣＤ４７抗体のｈＣＤ４７との会合および解離のプロファイルを示す。
【図７】候補２０のマウスＶＨ配列の配列（ＶＨ０）と共に整列させた５つのヒト化ＶＨバリアント（ＶＨ１〜ＶＨ５）のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲは、下線が付けられている（ＫＡＢＡＴおよびＩＭＧＴの定義の組み合わせを用いて）。
【図８】候補２０のマウスＶＬ配列の配列（ＶＬ０）と共に整列させた５つのヒト化ＶＬバリアント（ＶＬ１〜ＶＬ５）のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲは、下線が付けられている（ＫＡＢＡＴおよびＩＭＧＴの定義の組み合わせを用いて）。
【図９Ａ】Ａ）ＮＯＧマウスにおけるヒトＲａｊｉリンパ腫細胞の成長およびＢ）Ｒａｊｉ腫瘍細胞生着後のＮＯＧマウスの生存（＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．００５；Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ検定）に対する抗ＣＤ４７抗体の効果を示す。
【図９Ｂ】Ａ）ＮＯＧマウスにおけるヒトＲａｊｉリンパ腫細胞の成長およびＢ）Ｒａｊｉ腫瘍細胞生着後のＮＯＧマウスの生存（＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．００５；Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ検定）に対する抗ＣＤ４７抗体の効果を示す。
【図１０Ａ】ＮＯＧマウスにおけるＡ２７８０／Ｌｕｃヒト卵巣腫瘍の成長に対する、抗ＣＤ４７候補２０の単独、またはハーセプチン（登録商標）またはアービタックス（登録商標）との併用での効果を示す。Ａ２７８０／Ｌｕｃ細胞を、ＮＯＧマウス（ｎ＝４／群）において腹腔内に生着させ（ＩＰ）、抗体治療を、グラフト後１日に５週間までの間（３回の注射／週、ＩＰ）１０ｍｇ／ｋｇで開始した。（Ａ）各マウスにおいて第２８日に観察された腹這いおよび背臥ルミネセンス
【図１０Ｂ】ＮＯＧマウスにおけるＡ２７８０／Ｌｕｃヒト卵巣腫瘍の成長に対する、抗ＣＤ４７候補２０の単独、またはハーセプチン（登録商標）またはアービタックス（登録商標）との併用での効果を示す。Ａ２７８０／Ｌｕｃ細胞を、ＮＯＧマウス（ｎ＝４／群）において腹腔内に生着させ（ＩＰ）、抗体治療を、グラフト後１日に５週間までの間（３回の注射／週、ＩＰ）１０ｍｇ／ｋｇで開始した。（Ｂ）腫瘍生着後に時間に対してプロットしたバイオルミネセンス強度（背臥＋腹這い）の定量化。処置群をビヒクル群と、第２８日に、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアの独立ｔ検定を使用することにより比較した（＊＊ｐ＜０．００５；＊＊＊ｐ＜０．００１）。
【図１１Ａ】ＮＯＧマウスにおけるＡ５４９ヒト肺腫瘍細胞の成長に対する、抗ＣＤ４７候補２０の、単独、またはハーセプチン（登録商標）またはアービタックス（登録商標）との併用での効果を示す。Ａ５４９細胞をＮＯＧマウスの皮下に生着させ（ｎ＝４／群）、抗体治療を、腫瘍が触知できるようになった時（第１０日）に、１０週間までの間（３回の注射／週、ＩＰ）１０ｍｇ／ｋｇで開始した。（Ａ）腫瘍生着後の時間に対してプロットした各群についての、平均腫瘍体積＋／−ＳＤ（ｃｍ３）により測定される腫瘍細胞成長。処置群を、Ｈａｔｈｅｒらにより記載される速度に基づくＴ／Ｃ方法を使用することによりビヒクル群と比較した（Ｈａｔｈｅｒ  Ｇ．，Ｌｉｕ  Ｒ．，Ｂａｎｄｉ  Ｓ．，Ｍｅｔｔｅｔａｌ  Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．“Ｇｒｏｗｔｈ  Ｒａｔｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｆｏｒ  Ｔｕｍｏｒ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  Ｓｔｕｄｉｅｓ．”Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １３（Ｓ４）：６５−７２（２０１４））（＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．００５）。
【図１１Ｂ】ＮＯＧマウスにおけるＡ５４９ヒト肺腫瘍細胞の成長に対する、抗ＣＤ４７候補２０の、単独、またはハーセプチン（登録商標）またはアービタックス（登録商標）との併用での効果を示す。Ａ５４９細胞をＮＯＧマウスの皮下に生着させ（ｎ＝４／群）、抗体治療を、腫瘍が触知できるようになった時（第１０日）に、１０週間までの間（３回の注射／週、ＩＰ）１０ｍｇ／ｋｇで開始した。（Ｂ）マウスの生存曲線。処置群を、ＧｒａｐｈＰａｄ  ＰｒｉｓｍソフトウェアのＬｏｇ−ｒａｎｋ（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ）検定を使用することにより、ビヒクル群と比較した（＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１）。
【図１２Ａ】フローサイトメトリーによるＲａｊｉ細胞上での抗ＣＤ４７候補２０のヒト化バリアントの結合を示す。ＶＬ−ＣＤＲ２−Ｆ５６Ｙ突然変異を有するヒト化バリアント（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５２（Ｋａｂａｔ）および１５３（ＩＭＧＴ）を有するＣＤＲ２、すなわち候補２０．２６（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５Ｙ）、２０．２７（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２Ｙ）、２０．２８（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３Ｙ）、２０．２９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４Ｙ）、２０．３０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５Ｙ））を、Ｆ５６Ｙ突然変異を有さない対応するバリアント、候補２０．１０（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５）、２０．１２（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２）、２０．１３（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３）、２０．１９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４）、２０．２０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５））と、およびキメラ候補２０（全ての抗体はヒトＩｇＧ４型である）と比較した。
【図１２Ｂ】フローサイトメトリーによるＲａｊｉ細胞上での抗ＣＤ４７候補２０のヒト化バリアントの結合を示す。ＶＬ−ＣＤＲ２−Ｆ５６Ｙ突然変異を有するヒト化バリアント（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５２（Ｋａｂａｔ）および１５３（ＩＭＧＴ）を有するＣＤＲ２、すなわち候補２０．２６（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５Ｙ）、２０．２７（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２Ｙ）、２０．２８（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３Ｙ）、２０．２９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４Ｙ）、２０．３０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５Ｙ））を、Ｆ５６Ｙ突然変異を有さない対応するバリアント、候補２０．１０（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５）、２０．１２（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２）、２０．１３（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３）、２０．１９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４）、２０．２０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５））と、およびキメラ候補２０（全ての抗体はヒトＩｇＧ４型である）と比較した。
【図１２Ｃ】フローサイトメトリーによるＲａｊｉ細胞上での抗ＣＤ４７候補２０のヒト化バリアントの結合を示す。ＶＬ−ＣＤＲ２−Ｆ５６Ｙ突然変異を有するヒト化バリアント（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５２（Ｋａｂａｔ）および１５３（ＩＭＧＴ）を有するＣＤＲ２、すなわち候補２０．２６（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５Ｙ）、２０．２７（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２Ｙ）、２０．２８（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３Ｙ）、２０．２９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４Ｙ）、２０．３０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５Ｙ））を、Ｆ５６Ｙ突然変異を有さない対応するバリアント、候補２０．１０（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５）、２０．１２（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２）、２０．１３（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３）、２０．１９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４）、２０．２０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５））と、およびキメラ候補２０（全ての抗体はヒトＩｇＧ４型である）と比較した。
【図１２Ｄ】フローサイトメトリーによるＲａｊｉ細胞上での抗ＣＤ４７候補２０のヒト化バリアントの結合を示す。ＶＬ−ＣＤＲ２−Ｆ５６Ｙ突然変異を有するヒト化バリアント（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５２（Ｋａｂａｔ）および１５３（ＩＭＧＴ）を有するＣＤＲ２、すなわち候補２０．２６（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５Ｙ）、２０．２７（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２Ｙ）、２０．２８（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３Ｙ）、２０．２９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４Ｙ）、２０．３０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５Ｙ））を、Ｆ５６Ｙ突然変異を有さない対応するバリアント、候補２０．１０（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５）、２０．１２（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２）、２０．１３（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３）、２０．１９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４）、２０．２０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５））と、およびキメラ候補２０（全ての抗体はヒトＩｇＧ４型である）と比較した。
【図１２Ｅ】フローサイトメトリーによるＲａｊｉ細胞上での抗ＣＤ４７候補２０のヒト化バリアントの結合を示す。ＶＬ−ＣＤＲ２−Ｆ５６Ｙ突然変異を有するヒト化バリアント（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５２（Ｋａｂａｔ）および１５３（ＩＭＧＴ）を有するＣＤＲ２、すなわち候補２０．２６（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５Ｙ）、２０．２７（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２Ｙ）、２０．２８（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３Ｙ）、２０．２９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４Ｙ）、２０．３０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５Ｙ））を、Ｆ５６Ｙ突然変異を有さない対応するバリアント、候補２０．１０（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５）、２０．１２（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２）、２０．１３（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３）、２０．１９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４）、２０．２０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５））と、およびキメラ候補２０（全ての抗体はヒトＩｇＧ４型である）と比較した。
【図１３Ａ】抗ＣＤ４７候補２０のヒト化バリアントによる、Ｒａｊｉ細胞上のｈＣＤ４７へのｈＳＩＲＰα結合の阻害を示す。ＶＬ−ＣＤＲ２−Ｆ５６Ｙ突然変異を有するヒト化バリアント（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５２（Ｋａｂａｔ）および１５３（ＩＭＧＴ）を有するＣＤＲ２、すなわち候補２０．２６（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５Ｙ）、２０．２７（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２Ｙ）、２０．２８（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３Ｙ）、２０．２９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４Ｙ）、２０．３０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５Ｙ））を、Ｆ５６Ｙ突然変異を有さない対応するバリアント、候補２０．１０（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５）、２０．１２（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２）、２０．１３（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３）、２０．１９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４）、２０．２０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５））と比較した。
【図１３Ｂ】抗ＣＤ４７候補２０のヒト化バリアントによる、Ｒａｊｉ細胞上のｈＣＤ４７へのｈＳＩＲＰα結合の阻害を示す。ＶＬ−ＣＤＲ２−Ｆ５６Ｙ突然変異を有するヒト化バリアント（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５２（Ｋａｂａｔ）および１５３（ＩＭＧＴ）を有するＣＤＲ２、すなわち候補２０．２６（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５Ｙ）、２０．２７（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２Ｙ）、２０．２８（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３Ｙ）、２０．２９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４Ｙ）、２０．３０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５Ｙ））を、Ｆ５６Ｙ突然変異を有さない対応するバリアント、候補２０．１０（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５）、２０．１２（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２）、２０．１３（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３）、２０．１９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４）、２０．２０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５））と比較した。
【図１３Ｃ】抗ＣＤ４７候補２０のヒト化バリアントによる、Ｒａｊｉ細胞上のｈＣＤ４７へのｈＳＩＲＰα結合の阻害を示す。ＶＬ−ＣＤＲ２−Ｆ５６Ｙ突然変異を有するヒト化バリアント（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５２（Ｋａｂａｔ）および１５３（ＩＭＧＴ）を有するＣＤＲ２、すなわち候補２０．２６（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５Ｙ）、２０．２７（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２Ｙ）、２０．２８（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３Ｙ）、２０．２９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４Ｙ）、２０．３０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５Ｙ））を、Ｆ５６Ｙ突然変異を有さない対応するバリアント、候補２０．１０（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５）、２０．１２（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２）、２０．１３（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３）、２０．１９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４）、２０．２０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５））と比較した。
【図１３Ｄ】抗ＣＤ４７候補２０のヒト化バリアントによる、Ｒａｊｉ細胞上のｈＣＤ４７へのｈＳＩＲＰα結合の阻害を示す。ＶＬ−ＣＤＲ２−Ｆ５６Ｙ突然変異を有するヒト化バリアント（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５２（Ｋａｂａｔ）および１５３（ＩＭＧＴ）を有するＣＤＲ２、すなわち候補２０．２６（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５Ｙ）、２０．２７（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２Ｙ）、２０．２８（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３Ｙ）、２０．２９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４Ｙ）、２０．３０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５Ｙ））を、Ｆ５６Ｙ突然変異を有さない対応するバリアント、候補２０．１０（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５）、２０．１２（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２）、２０．１３（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３）、２０．１９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４）、２０．２０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５））と比較した。
【図１３Ｅ】抗ＣＤ４７候補２０のヒト化バリアントによる、Ｒａｊｉ細胞上のｈＣＤ４７へのｈＳＩＲＰα結合の阻害を示す。ＶＬ−ＣＤＲ２−Ｆ５６Ｙ突然変異を有するヒト化バリアント（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５２（Ｋａｂａｔ）および１５３（ＩＭＧＴ）を有するＣＤＲ２、すなわち候補２０．２６（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５Ｙ）、２０．２７（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２Ｙ）、２０．２８（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３Ｙ）、２０．２９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４Ｙ）、２０．３０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５Ｙ））を、Ｆ５６Ｙ突然変異を有さない対応するバリアント、候補２０．１０（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５）、２０．１２（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２）、２０．１３（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３）、２０．１９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４）、２０．２０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５））と比較した。
【図１４】Ｒａｊｉ細胞上での、ＣＤ４７結合アッセイおよびＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用アッセイにおける、候補２０のＶＬ−ＣＤＲ２−Ｆ５６Ｙヒト化バリアント（すなわち候補２０．２６（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５Ｙ）、２０．２７（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２Ｙ）、２０．２８（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３Ｙ）、２０．２９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４Ｙ）、２０．３０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５Ｙ））の抗体ＡＢ０６．１２およびＨｕ５Ｆ９との比較を示す。
【図１５】候補２０とｈＣＤ４７の間の相互作用のエピトープマッピングを示す。
【図１６】候補２２とｈＣＤ４７の間の相互作用のエピトープマッピングを示す。
【図１７】ＳＥＣ−ＨＰＬＣによる可溶性ｈＣＤ４７の分析は、タンパク質調製物における不均一性を示し、ＣＤ４７の単量体および二量体が存在した。
【図１８】それぞれ、約３０ｋＤａおよび＞５０ｋＤａでの精製ｈＣＤ４７単量体および二量体画分のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図１９】結合ＥＬＩＳＡによる、候補２０および２２によるｈＣＤ４７単量体および二量体の認識を示す。
【図２０】ＲＢＣへの結合後の抗ＣＤ４７抗体の遊離を示す。ヒトＲＢＣを、１μｇ／ｍＬのマウス抗ＣＤ４７候補１４、１９、２０、２２またはマウス２Ａ１もしくはＢ６Ｈ１２抗体で＋４℃にて最初に染色した。洗浄後、ＲＢＣを６時間（Ｔ＋６ｈ）の間または２４時間（Ｔ＋２４ｈ）の間、＋３７℃にて抗体を含まない培地中でインキュベートし、ＲＢＣ上に固定された残留レベルマウス抗ＣＤ４７抗体をＰＥ−コンジュゲート抗マウスＩｇＧ抗体およびフローサイトメトリーを用いて明らかにした。結果を、６および２４時間インキュベーション前（Ｔ０）に同じ抗体を用いたＲＢＣの染色について得られたＭＦＩと比較した、Ｔ＋６ｈまたはＴ＋２４ｈで、抗ＣＤ４７抗体で染色したＲＢＣ上にて測定した、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の減少％として表した。
【図２１】Ｒａｊｉ細胞への結合後の抗ＣＤ４７抗体の遊離および抗ＣＤ４７抗体によるそれらの染色後の、Ｒａｊｉ腫瘍細胞の食作用の減少を示す。（Ａ）Ｒａｊｉリンパ腫細胞を最初に、１μｇ／ｍＬのマウス抗ＣＤ４７候補１４、１９、２０、２２で、またはマウス２Ａ１もしくはＢ６Ｈ１２抗体で染色した。洗浄後、Ｒａｊｉ細胞を２４時間（Ｔ＋２４ｈ）の間、＋３７℃で抗体を含まない培地中でインキュベートし、その後、洗浄し、ＰＦＡ４％で固定した。Ｒａｊｉ細胞上で固定されたマウス抗ＣＤ４７抗体の残留レベルをその後、ＰＥ−コンジュゲート抗マウスＩｇＧ抗体およびフローサイトメトリーを用いて明らかにした。結果を、２４時間インキュベーション前（Ｔ０）にＰＦＡ固定Ｒａｊｉ細胞の同じ抗体による染色について得られたＭＦＩと比較した、Ｔ＋２４ｈに、抗ＣＤ４７抗体で染色した細胞上で測定した、平均蛍光強度（ＭＦＩ）の減少％として表した。（Ｂ）ＣＦＳＥ−標識Ｒａｊｉリンパ腫細胞を最初に、０．１または１μｇ／ｍＬのマウス抗ＣＤ４７候補１４、１９、２０、２２で、またはマウス２Ａ１もしくはＢ６Ｈ１２抗体で染色した。洗浄後、Ｒａｊｉ細胞を２４時間（Ｔ＋２４ｈ）の間、＋３７℃で抗体を含まない培地中でインキュベートし、その後、洗浄し、食作用アッセイにおいて、フローサイトメトリーにより、Ｆａｒ−Ｒｅｄ−標識ヒトマクロファージ（ｈＭＤＭ）を用いて試験した。結果を、２４時間インキュベーション期間前（Ｔ０）に、同じ抗体で染色したＲａｊｉ細胞の食作用と比較した、抗ＣＤ４７抗体で染色したＲａｊｉ細胞についてＴ＋２４ｈで測定した食作用の減少％として表した。
【図２２】グリコシル化またはＮ−脱グリコシル化ｈＣＤ４７でコートされたプレート上でＥＬＩＳＡより測定される、キメラ候補２０および２２、ヒト化ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ抗体、およびヒト化Ｈｕ５Ｆ９およびＡＢ０６．１２抗体によるヒトグリコシル化（Ａ）およびＮ−脱グリコシル化（Ｂ）ＣＤ４７の認識を示す。全ての抗体をｈｕ−ＩｇＧ４型で試験した。
【図２３】ＮＯＧマウスにおけるＡ５４９  ＮＳＣＬＣ異種移植片モデルでの、単独で、またはハーセプチン（登録商標）との併用でのヒト化ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ抗体の効力を示す。Ａ５４９細胞をＮＯＧマウスの皮下に生着させ（ｎ＝８／群）、抗体治療を、腫瘍が約１００ｍｍ３（第１４日）となった時、１０週間までの間開始させた。抗体をＩＰ注射し（３回の注射／週）、ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙをｈｕ−ＩｇＧ４型（ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ−Ｇ４）で１０ｍｇ／ｋｇ／用量にて注射し、ハーセプチン（登録商標）（ｈｕ−ＩｇＧ１）を２．５ｍｇ／ｋｇ／用量にて注射した。マウスの生存をモニタし、生存曲線を提示する。処置群を、ＧｒａｐｈＰａｄ  ＰｒｉｓｍソフトウェアのＬｏｇ−ｒａｎｋ（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ）検定を使用することによりビヒクル群と比較した（＊ｐ＜０．０５；＊＊＊ｐ＜０．００５）。ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ−Ｇ４およびハーセプチン（登録商標）の併用で処置したマウスの生存は、ハーセプチン（登録商標）のみで処置した群と比べ著しく増強された（ｐ＜０．０１）。
【図２４】ＮＯＧマウスにおけるＮＣＩ−Ｎ８７胃異種移植片モデルでの、ヒト化抗体ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙの単独で、またはハーセプチン（登録商標）との併用での効力を示す。ＮＣＩ−Ｎ８７細胞（１０×１０６）をＮＯＧマウスの皮下に生着させ（ｎ＝８／群）、抗体治療を、腫瘍が約１００ｍｍ３（第７日）となった時に、５週間までの間開始させた。抗体をＩＰ注射し（３回の注射／週）、ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙをｈｕ−ＩｇＧ４−Ｓ２２８Ｐ−Ｌ２３５Ｅ型（ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ−Ｇ４ＰＥ）で１０ｍｇ／ｋｇ／用量にて注射し、ハーセプチン（登録商標）（ｈｕ−ＩｇＧ１）を２．５ｍｇ／ｋｇ／用量で注射した。腫瘍細胞成長を、腫瘍体積を測定することによりモニタした。各群の平均腫瘍体積（ｃｍ３）＋／−ＳＤを、最初のマウスが死ぬまたはこれを屠殺するまで異なる時間について提示し、個々の群に入れた。処置群を、ビヒクル群と、Ｈａｔｈｅｒらにより記載される速度に基づくＴ／Ｃ方法を用いることにより比較した（Ｈａｔｈｅｒ  Ｇ．，Ｌｉｕ  Ｒ．，Ｂａｎｄｉ  Ｓ．，Ｍｅｔｔｅｔａｌ  Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．“Ｇｒｏｗｔｈ  Ｒａｔｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｆｏｒ  Ｔｕｍｏｒ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  Ｓｔｕｄｉｅｓ．”Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １３（Ｓ４）：６５−７２（２０１４））（＊ｐ＜０．０５；＊＊＊ｐ＜０．０００５）。ＮＣＩ−Ｎ８７腫瘍細胞の成長もまた、ハーセプチン（登録商標）のみで処置した動物と比べた場合、ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ−Ｇ４ＰＥ＋ハーセプチン（登録商標）の併用で処置した動物の群において著しく低減された（ｐ＜０．０５）。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、ＣＤ４７に特異的であるモノクローナル抗体に関する。そのような抗体の核酸およびアミノ酸配列もまた、開示される。抗体はＣＤ４７と関連する治療および診断方法において用途を見出す。
【００２８】
「治療」は、治療的処置および予防的もしくは防止的手段の両方を示す。治療を必要とするものとしては、すでにその障害を有するものならびにその障害が防止されるべきであるものが挙げられる。
【００２９】
治療の目的のための「哺乳類」は、哺乳類と分類される任意の動物を示し、ヒト、飼育および農場動物、ならびに動物園、スポーツ、またはペット動物、例えばイヌ、ウマ、ネコ、雌ウシ、などが含まれる。好ましくは、哺乳類はヒトである。
【００３０】
「抗体」という用語は最も広い意味で使用され、特定的には、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体断片（それらが所望の生物活性を示す限り）を包含する。「抗体」（Ａｂ）および「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、同じ構造特性を有する糖タンパク質である。抗体は特異抗原に対して結合特異性を示すが、免疫グロブリンは抗体および抗原特異性を欠く他の抗体様分子の両方を含む。後者の種類のポリペプチドは、例えば、リンパ系により低レベルで、ミエローマにより増加したレベルで生成される。
【００３１】
この発明では、「エピトープ」という用語は、抗体のパラトープが結合する抗原上の任意の抗原決定基を意味する。エピトープ決定基は通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の、化学的に活性な表面基から構成され、通常、特異的３次元構造特性、ならびに特異的電荷特性を有する。
【００３２】
「天然抗体および免疫グロブリン」は通常、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質であり、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成される。各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合により重鎖に連結され、一方、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で変動する。各重および軽鎖はまた、規則的間隔の鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は一端に可変ドメイン（ＶＨ）、続いて多くの定常ドメインを有する。各軽鎖は一端に可変ドメイン（ＶＬ）を、およびその他端に定常ドメインを有し；軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと共に整列され、軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと共に整列される。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの間の界面を形成すると考えられる（Ｃｌｏｔｈｉａ  Ｃ，Ｎｏｖｏｔｎｙ  Ｊ，Ｂｒｕｃｃｏｌｅｒｉ  Ｒ，Ｋａｒｐｌｕｓ  Ｍ．“Ｄｏｍａｉｎ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．Ｔｈｅ  ｐａｃｋｉｎｇ  ｏｆ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ．”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８６：６５１−６３（１９８５）；Ｎｏｖｏｔｎｙ  Ｊ．ａｎｄ  Ｈａｂｅｒ  Ｅ．“Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｉｎｖａｒｉａｎｔｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ＶＬ−ＶＨ  ａｎｄ  ＶＬ−ＶＬ  ｄｏｍａｉｎ  ｄｉｍｅｒｓ．”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２：４５９２−９６（１９８５））。
【００３３】
「可変」という用語は、可変ドメインのある一定の部分は、抗体間で配列が大規模に異なっており、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合および特異性において使用されるという事実を示す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメインの全体にわたって均一に分配されていない。それは、軽鎖および重鎖可変ドメインの両方において相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。天然重および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、４つのＦＲ領域を含み、主にβ−シート構造をとり、３つのＣＤＲにより連結され、これらは、β−シート構造を連結させる、場合によっては、その一部を形成するループを形成する。各鎖におけるＣＤＲは、ＦＲ領域により非常に近接して共に保持され、他の鎖由来のＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（ＫＡＢＡＴアノテーションについては、Ｋａｂａｔ  Ｅ．Ａ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）を参照されたい。または、ＩＭＧＴアノテーションについては、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇを参照されたい）。定常ドメインは抗原への抗体の結合に直接関与しないが、様々なエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）における抗体の関与を示す。
【００３４】
例示的な抗ＣＤ４７重および軽鎖組み合わせのＣＤＲ配列は配列表において明記され、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−１２０、１５２、１５３が含まれる（表２および３を参照されたい、上記）。
【００３５】
抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片（各々が単一の抗原結合部位を有する）、および残りの「Ｆｃ」断片（その名称は容易に結晶化するその能力を反映する）が生成される。ペプシン処理によりＦ（ａｂ’）２断片が得られ、これは２つの抗原結合部位を有し、依然として、抗原を架橋することができる。
【００３６】
「Ｆｖ」は最小抗体断片であり、これは完全抗原認識および結合部位を含む。２本鎖Ｆｖ種では、この領域は、密接な、非共有結合性会合にある、１つの重鎖および１つの軽鎖可変ドメインの二量体から構成される。単鎖Ｆｖ種（ｓｃＦｖ）では、１つの重鎖および１つの軽鎖可変ドメインは、フレキシブルペプチドリンカーにより共有結合で連結させることができ、そのため、軽および重鎖は会合して、２本鎖Ｆｖ種と類似する「二量体」構造となり得る。この配置では、各可変ドメインの３つのＣＤＲは相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を規定する。集合的に、６つのＣＤＲは、抗体に抗原結合特異性を与える。しかしながら、単一の可変ドメイン（またはある抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、抗原を認識し、これに結合する能力を有するが、全結合部位よりも親和性が低い。ｓｃＦｖのレビューについては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  Ａ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ，ｉｎ“Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”，ｂｙ  Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｖｏｌ．１１３，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい。
【００３７】
Ｆａｂ断片はまた軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメインを含む。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端での数残基の付加によりＦａｂ断片と異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは本明細書ではＦａｂ’のための指定であり、この場合、定常ドメインのシステイン残基（複数可）は遊離チオール基を有する。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は元々、Ｆａｂ’断片の対として生成され、それらの間にヒンジシステインを有する。抗体断片の他の化学的カップリングもまた、知られている。
【００３８】
免疫グロブリンの５つの主要なクラスが存在し：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ、ならびにこれらのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２に分けることができる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および３次元配置はよく知られている。
【００３９】
「抗体断片」、およびその全ての文法的変形は、本明細書では、無傷の抗体の抗原結合部位または可変領域を含む、無傷の抗体の一部として規定され、ここで、その部分は、無傷の抗体のＦｃ領域の定常重鎖ドメイン（すなわちＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４、抗体アイソタイプによる）を含まない。抗体断片の例としては、下記が挙げられる：Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片；ダイアボディ；近接アミノ酸残基の１つの中断されていない配列から構成される一次構造を有するポリペプチドである任意の抗体断片（本明細書では、「単鎖抗体断片」または「単鎖ポリペプチド」と呼ばれる）（下記が含まれるが、限定はされない：（１）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子（２）１つの軽鎖可変ドメインのみを含む単鎖ポリペプチド、または軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含むが、関連する重鎖部分を有さないその断片、ならびに（３）１つの重鎖可変領域のみを含む単鎖ポリペプチド、または重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含むが、関連する軽鎖部分を有さないその断片）；ならびに抗体断片から形成される多特異性または多価構造。１つ以上の重鎖を含む抗体断片では、重鎖（複数可）は、無傷の抗体の非Ｆｃ領域において見出される任意の定常ドメイン配列（例えば、ＩｇＧアイソタイプにおけるＣＨ１）を含むことができ、および／または、無傷の抗体で見出される任意のヒンジ領域配列を含むことができ、および／または重鎖（複数可）のヒンジ領域配列または定常ドメイン配列に融合された、またはこれ中に位置するロイシンジッパー配列を含むことができる。
【００４０】
特定的に反対のことが示されない限り、「コンジュゲート」という用語は、本明細書で記載され、特許請求されるように、１つ以上の抗体断片（複数可）の１つ以上のポリマ分子（複数可）への共有結合により形成される不均一分子として規定され、ここで、不均一分子は水溶性であり、すなわち、血液などの生理液に可溶性であり、および、不均一分子は、構造化強凝集体を含まない。対象となるコンジュゲートはＰＥＧである。前記定義との関連で、「構造化強凝集体」という用語は、下記を示す：（１）スフェロイドまたはスフェロイドシェル構造を有する、水溶液中の分子の任意の強凝集体、そのため、不均一分子はミセルまたは他のエマルジョン構造ではなく、脂質二重層、小胞またはリポソームに固定されない；ならびに（２）水相と接触しても溶液中に不均一分子を遊離しない、固体または不溶形態、例えばクロマトグラフィービーズマトリクス中の分子の任意の強凝集体。したがって、「コンジュゲート」という用語は、本明細書で規定されるように、沈殿、沈降、生体内分解性マトリクスまたは、固体の水和で水溶液中に不均一分子を遊離することができる他の固体中の前記不均一分子を包含する。
【００４１】
「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）という用語は、本明細書では、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を示す、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、少量存在し得る可能性のある自然発生突然変異を除き同一である。モノクローナル抗体は非常に特異的であり、単一の抗原部位に対して作られる。各ｍＡｂは、抗原上の単一の決定基に対して作られる。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養物または哺乳類細胞株により合成することができ、他の免疫グロブリンにより汚染されないという点で有利である。修飾語句「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明により使用されるモノクローナル抗体は不死化Ｂ細胞またはそのハイブリドーマにおいて生成させることができ、または組換えＤＮＡ法により生成させることができる。
【００４２】
本明細書におけるモノクローナル抗体は、元の種または免疫グロブリンクラスまたはサブクラス指定に関係なく、抗ＣＤ４７抗体の可変（超可変を含む）ドメインを定常ドメイン（例えば「ヒト化」抗体）と共に、または軽鎖を重鎖と共に、または１つの種由来の鎖を別の種由来の鎖とスプライシングすることにより生成されるハイブリッドおよび組換え抗体、または、異種タンパク質との融合物、ならびに抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ）（それらが所望の生物活性を示す限り）を含む。
【００４３】
本明細書におけるモノクローナル抗体は特定的に、「キメラ」抗体（免疫グロブリン）を含み、この場合、重および／または軽鎖の一部が、特定種由来の、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同であり、一方、鎖（複数可）の残りは、別の種由来の、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同であり、ならびにそのような抗体の断片を含む（それらが所望の生物活性を示す限り）。
【００４４】
「単離された」抗体は、その自然環境の成分から、同定され、分離されたおよび／または回収されたものである。その自然環境の汚染物質成分は、抗体についての診断的または治療的使用を妨害する材料であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が挙げられ得る。いくつかの実施形態では、抗体は、（１）Ｌｏｗｒｙ法により決定されるように７５重量％を超える抗体まで、最も好ましくは８０重量％、９０重量％または９９重量％超まで、または（２）ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより還元または非還元条件下で、クーマシーブルーまたは、好ましくは、銀染色を用いて均質となるまで精製される。単離抗体は組換え細胞内のインサイチューの抗体を含み、というのも、抗体の自然環境の少なくとも１つの成分は存在しないからである。しかしながら、通常、単離抗体は少なくとも１つの精製工程により調製されるであろう。
【００４５】
「エピトープタグ付き」という用語は、本明細書で使用される場合、「エピトープタグ」に融合された抗ＣＤ４７抗体を示す。エピトープタグポリペプチドは、抗体がこれに対して作られ得るエピトープを提供するのに十分な残基を有するが、ＣＤ４７抗体の活性を妨害しないように十分短い。エピトープタグは好ましくは、十分独特であり、そのため、エピトープに特異的な抗体は他のエピトープと実質的に交差反応しない。好適なタグポリペプチドは一般に、少なくとも６つのアミノ酸残基、通常約８−５０のアミノ酸残基（好ましくは約９−３０残基）を有する。例としては、ｃ−ｍｙｃタグおよびそれに対する８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７および９Ｅ１０抗体（Ｅｖａｎ  Ｇ．Ｉ．，Ｌｅｗｉｓ  Ｇ．Ｋ．，Ｒａｍｓａｙ  Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．“Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｃ−ｍｙｃ  ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔ”，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５（１２）：３６１０−３６１６（１９８５））；ならびに単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タグおよびその抗体（Ｐａｂｏｒｓｋｙ  Ｌ．Ｒ．，Ｆｅｎｄｌｙ  Ｂ．Ｍ．，Ｆｉｓｈｅｒ  Ｋ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．“Ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌ  ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｉｓｓｕｅ  ｆａｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｇｅｎ”，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ３（６）：５４７−５５３（１９９０））が挙げられる。
【００４６】
「標識」という単語は、本明細書で使用される場合、抗体に直接的または間接的にコンジュゲートされた検出可能な化合物または組成物を示す。標識はそれ自体で自身を検出可能とすることができ（例えば、放射性同位体標識または蛍光標識）または、酵素標識の場合、検出可能な基質化合物または組成物の化学的変化を触媒することができる。
【００４７】
「固相」により、本発明の抗体が付着することができる非水性マトリクスが意味される。本明細書で包含される固相の例としては、部分的にまたは完全にガラス（例えば、細孔性ガラス）、ポリサッカライド（例えば、アガロース）、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリビニルアルコールおよびシリコーンから形成されたものが挙げられる。ある一定の実施形態では、文脈によって、固相はアッセイプレートのウェルを含むことができ；他の例では、これは精製カラム（例えば、アフィニティークロマトグラフィーカラム）である。この用語はまた、米国特許第４，２７５，１４９号に記載されるものなどの、離散粒子の不連続固相を含む。
【００４８】
ＣＤ４７のグリコシル化
ＣＤ４７は翻訳後修飾、中でも注目すべきはグリコシル化を受ける。ＣＤ４７は、細胞表面提示に直接影響し、細胞外リガンドとの相互作用を調節する多くのＮ末端グリコシル化部位を有する。例えば、脱グリコシル化ＣＤ４７は、グリコシル化ＣＤ４７よりも、ＳＩＲＰαに対してより高い結合活性を有し、逆に、脱グリコシル化ＳＩＲＰαはＣＤ４７に対してより高い結合活性を有する（Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ  Ｓ．，Ｂｏｄｅｒ  Ｅ．Ｔ．，ａｎｄ  Ｄｉｓｃｈｅｒ  Ｄ．Ｅ．“Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ  ｏｆ  ＣＤ４７  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ｈｕｍａｎ  ｓｉｇｎａｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ  α  ｒｅｖｅａｌｓ  ｌｏｃｕｓ  ｏｆ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ．”Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇ．Ｃｈｅｍ．２８２（３）：１８０５−１８（２００７）；Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ  Ｓ．，Ｐａｒｔｈａｓａｒａｔｈｙ  Ｒ．，Ｓｅｎ  Ｓ．，Ｂｏｄｅｒ  Ｅ．Ｔ．，ａｎｄ  Ｄｉｓｃｈｅｒ  Ｄ．Ｅ．”Ｓｐｅｃｉｅｓ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｔｙｐｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ＣＤ４７  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ＳＩＲＰα．”Ｂｌｏｏｄ  １０７（６）：２５４８−５６（２００６））。
【００４９】
逆に、高グリコシル化ＳＩＲＰαはＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用を妨害することができる（Ｏｇｕｒａ  Ｔ．，Ｎｏｇｕｃｈｉ  Ｔ．，Ｍｕｒａｉ−ｔａｋｅｂｅ  Ｒ．，Ｈｏｓｏｏｋａ  Ｔ．，Ｈｏｎｍａ  Ｎ．，ａｎｄ  Ｋａｓｕｇａ  Ｍ．“Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｏｆ  Ｂ１６  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  ＣＤ４７−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ  ａｓ  ａ  ｒｅｓｕｌｔ  ｏｆ  ａｂｅｒｒａｎｔ  Ｎ−ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＨＰＳ−１．”Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７９（１４）：１３７１１−２０（２００４））。
【００５０】
注目すべきことに、Ｎ結合型グリコシル化部位の部位特異的変異誘発は、酵母モデルにおいてＣＤ４７の細胞表面局在を阻害した（Ｐａｒｔｈａｓａｒａｔｈｙ  Ｒ．，Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ  Ｓ．，Ｂｏｄｅｒ  Ｅ．Ｔ．，ａｎｄ  Ｄｉｓｃｈｅｒ  Ｄ．Ｅ．“Ｐｏｓｔ−Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｄｏｍａｉｎ  ｉｎ  Ｙｅａｓｔ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ．”Ｂｉｏｔｈｅｃｈ  Ｂｉｏｉｎ  ９３（１）：１５９−６８（２００６））が、同様の変異誘発はＣＨＯ細胞における、ヒトＣＤ４７の膜局在に影響しなかった（Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６、上記）。
【００５１】
ＣＤ４７またはＳＩＲＰαのいずれかの異常なグリコシル化はまた、下流応答を変化させることがあり、異なるグリコシル化ＳＩＲＰαは、Ｂ１６メラノーマ細胞を、運動性のＣＤ４７誘導阻害に耐性とする（Ｏｇｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，２００４、上記）。加えて、ＣＤ４７の著しいグリコシル化（＞２５０ｋＤ）形態が初代、および形質転換されたＴ−細胞、内皮細胞および血管平滑筋細胞において検出されている（Ｋａｕｒ  Ｓ．，Ｋｕｚｎｅｔｓｏｖａ  Ｓ．Ａ．，Ｐｅｎｄｒａｋ  Ｍ．Ｌ．，Ｒｏｍｅｏ  Ｍ．Ｊ．，Ｌｉ  Ｚ．，Ｚｈａｎｇ  Ｌ．，ａｎｄ  Ｒｏｂｅｒｔｓ  Ｄ．Ｄ．“Ｈｅｐａｒａｎ  Ｓｕｌｆａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＤ４７  Ｉｓ  Ｎｅｃｅｓｓａｒｙ  ｆｏｒ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｂｙ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ−１”，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８６（１７）：１４９９１−１５００２（２０１１））。この修飾はＳＩＲＰα結合部位から遠位に位置したが、Ｔ−細胞におけるＴＳＰ−１媒介阻害シグナル伝達に対して要求された。
【００５２】
腫瘍細胞は異常なグリコシル化パターンを発現し得るので、グリコシル化と関係なくＣＤ４７に結合する抗ＣＤ４７抗体を提供することが望ましいであろう。しかしながら、公知の治療的に関係のある抗ＣＤ４７抗体は典型的には、グリコシル化ＣＤ４７には効果的に結合するが、それらは典型的には、非グリコシル化または脱グリコシル化ＣＤ４７に対して結合が不十分である（例えば、より低い結合親和性／より高い平衡結合定数または低減された最大結合能（Ｂｍａｘ）を有する）。
【００５３】
１つの態様では、本発明の抗体は、グリコシル化および非グリコシル化ＣＤ４７に結合する。例えば、１つの実施形態では、抗体のＣＤ４７への結合は、ＣＤ４７のグリコシル化に依存しない。これにより、ＣＤ４７のグリコシル化は抗体のＣＤ４７への十分な結合に対して要求されず、例えば、抗体は、ＣＤ４７のグリコシル化のレベルに関係なく、ＣＤ４７への著しい特異的結合を示すことが意味される。言い換えれば、抗体のＣＤ４７への結合は、少なくとも部分的に、著しく、または実質的に、グリコシル化に依存しない。
【００５４】
本明細書では、「グリコシル化」ＣＤ４７は典型的には、１つ以上の残基でＮ−グリコシル化された（例えばヒト）ＣＤ４７を示す。ヒトＣＤ４７は、ヒトＣＤ４７のアミノ酸配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１）における位置Ｎ２３、Ｎ３４、Ｎ５０、Ｎ７３、Ｎ１１１およびＮ２０６の１つ以上の（例えばアスパラギン）残基でＮ−グリコシル化され得る。好ましくは、グリコシル化ＣＤ４７は、上記位置の少なくとも２、３、４、５または６でグリコシル化される。
【００５５】
「脱グリコシル化」ＣＤ４７は、１つ以上のグリカン鎖（例えばＮ−グリカン）が除去されたＣＤ４７の形態を示す。ＣＤ４７の脱グリコシル化は、ペプチドＮ−グリコシダーゼ（ＰＮＧａｓｅ）、例えばＰＮＧａｓｅ  Ｆ（Ｎ−グリカンを除去する）などの酵素による処理により実行され得る。「非グリコシル化」および「脱グリコシル化」という用語は、本明細書で同じ意味で使用される。よって、非グリコシル化または脱グリコシル化形態は典型的には、ヒトＣＤ４７のアミノ酸配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１）における位置Ｎ２３、Ｎ３４、Ｎ５０、Ｎ７３、Ｎ１１１および／またはＮ２０６のグリカン残基を欠く。
【００５６】
１つの実施形態では、ＣＤ４７の脱グリコシル化は、抗体の（ヒト）ＣＤ４７への結合活性／親和性および／または最大結合能に著しくは影響しない。ＣＤ４７のグリコシル化および脱グリコシル化形態に対する抗体の結合活性／親和性および最大結合能（Ｂｍａｘ）は、例えば、下記実施例において設定される標準アッセイを用いて決定することができる。抗体のその標的エピトープに対する親和性は、その解離定数に反比例する。解離定数はまた、抗体のＣＤ４７への結合についてのＥＣ５０値に直接関連し得る。ＥＣ５０は最大結合の半分を提供する抗体の濃度であり、すなわち、その濃度で、ＣＤ４７上の結合部位の５０％が結合されている。また、ＥＣ９５値は９５％最大結合を提供する抗体の濃度であり、ＣＤ４７上の結合部位の９５％が結合されている抗体の濃度を示す。どの測定を使用するかに関係なく、本発明の実施形態によれば、重要になるのは、グリコシル化および非グリコシル化形態に対して得られる相対値であり、すなわち、絶対値は必ずしも決定される必要はなく、ただし、グリコシル化および非グリコシル化形態が合理的に同様の結果を示すことが条件とされる。
【００５７】
よって、いくつかの実施形態では、抗体のＣＤ４７の非グリコシル化およびグリコシル化形態に対する親和性は、抗体の各形態への結合についてのＥＣ５０値またはＥＣ９５値の比率を決定することにより比較され得る。好ましくは、この比率は５：１、４：１、３：１、または２：１未満であるが、ＥＣ９５についてはさらに高くてもよく、すなわち２５：１、２０：１、１０：１、好ましくは１０：１〜１：１０の範囲、より好ましくは９：１〜１：９、最も好ましくは１０：１〜１：１０であってもよい。言い換えれば、抗体の非グリコシル化ＣＤ４７への結合についてのＥＣ５０は、抗体のグリコシル化ＣＤ４７への結合についてのＥＣ５０値よりも、わずか３または２倍高いにすぎない可能性がある。抗体の非グリコシル化ＣＤ４７への結合についてのＥＣ９５は、抗体のグリコシル化ＣＤ４７への結合についてのＥＣ９５値よりも、わずか９または１０倍高いにすぎない可能性がある。さらなる実施形態では、ＥＣ５０の比率は好ましくは、３：１〜１：３または２：１〜１：２の範囲内にあり、最も好ましくは３：１〜１：３であり；またはＥＣ９５の比率は好ましくは１０：１〜１：１０の範囲内にあり、より好ましくは９：１〜１：９、最も好ましくは１０：１〜１：１０である。そのような実施形態では、脱グリコシル化は、結合親和性に著しくは影響しない、すなわち抗体のＣＤ４７への結合は、グリコシル化に依存しないと考えられる。いくつかの実施形態では、抗体は、ＣＤ４７の非グリコシル化形態（および、好ましくはＣＤ４７の非グリコシル化およびグリコシル化形態の両方）に８０ｐＭ以下、好ましくは７０ｐＭ以下、より好ましくは６０ｐＭ以下の平衡結合定数で結合する。
【００５８】
他の実施形態では、ＣＤ４７の脱グリコシル化は、抗体のＣＤ４７への最大結合能を著しくは低減させない。例えば、最大結合能（すなわちＢｍａｘ１）は抗体のグリコシル化ＣＤ４７への結合について決定され得る。Ｂｍａｘ１は過剰抗体濃度での抗体のＣＤ４７への結合のレベル、すなわち抗体とＣＤ４７の間の特異的結合の最大レベルに関連する。よって、Ｂｍａｘ１は、グリコシル化ＣＤ４７上の抗体に対する有効結合部位の濃度の測定値である。ＣＤ４７はその後脱グリコシル化（例えばＰＮＧａｓｅを使用して）され、過剰抗体濃度でのＣＤ４７への結合のレベルが再び決定され得る（試料中のＣＤ４７の同じで濃度で）。よって、抗体の脱グリコシル化ＣＤ４７への最大結合能（すなわちＢｍａｘ２）は、脱グリコシル化ＣＤ４７上の抗体に対する有効結合部位の濃度の測定値となる。
【００５９】
好ましい実施形態では、抗体の非グリコシル化ＣＤ４７に対する最大結合能（すなわちＢｍａｘ２）は、抗体のグリコシル化ＣＤ４７に対する最大結合能（すなわちＢｍａｘ１）の少なくとも６０％、または少なくとも７０％である。そのような実施形態では、脱グリコシル化は、最大結合能に著しくは影響しない、すなわち抗体のＣＤ４７への結合は、グリコシル化に依存しないと考えられる。
【００６０】
さらなる実施形態では、抗体のＣＤ４７のグリコシル化および脱グリコシル化形態に対する結合特性はＥＣ９５値の比率に基づいて比較され得る。ＥＣ９５はＣＤ４７上の結合部位の９５％が結合されている抗体の濃度である。よって、いくつかの実施形態では、抗体のＣＤ４７の非グリコシル化およびグリコシル化形態に対する親和性は、抗体の各形態への結合についてのＥＣ９５値の比率を決定することにより比較され得る。好ましくは、この比率は１０：１または９：１未満である。言い換えれば、抗体のへ非グリコシル化ＣＤ４７の結合についてのＥＣ９５は、抗体のグリコシル化ＣＤ４７への結合についてのＥＣ９５よりもわずか１０または９倍高いにすぎない可能性がある。
【００６１】
抗体解離動力学
発明の別の態様では、規定された範囲内のＣＤ４７からの解離速度（Ｋｏｆｆ）を有する抗ＣＤ４７抗体が提供される。特に、１×１０−３ｓ−１より優れたＫｏｆｆ値により特徴付けられる高い解離速度を有する抗ＣＤ４７抗体は、ＲＢＣから強くかつ迅速に脱離するが、また、腫瘍細胞上でのそれらの機能的活性、例えば、腫瘍細胞食作用の増強のほとんどを迅速に失うことが証明されている。対照的に、１×１０−４ｓ−１より劣るＫｏｆｆ値により特徴付けられる非常に遅い解離速度を有する抗ＣＤ４７抗体は、腫瘍細胞からよりゆっくりと脱離するが、ＲＢＣ上に付着して滞在し、よって、重要なシンク効果およびおそらくより多くの副作用を有し得る。
【００６２】
よって、１×１０−４〜１×１０−３ｓ−１からなるＫｏｆｆ値により特徴付けられる中間解離動力学を有する抗ＣＤ４７抗体は最適ＣＤ４７結合／遊離平衡を有し、すなわち、それらの抗腫瘍効力を維持しながら、弱いシンク効果および副作用を提供する。したがって、１つの態様では、本発明は、ＣＤ４７に結合する抗体を提供し、ＣＤ４７に対する結合についてのＫｏｆｆ値は１．０×１０−４ｓ−１〜１．０×１０−３ｓ−１からなる。特定の実施形態では、抗体は、グリコシル化および／または非グリコシル化ＣＤ４７にこの範囲内のＫｏｆｆ値で結合し得る。好ましくは、抗体は、（例えば、グリコシル化および／または非グリコシル化）ＣＤ４７への結合について、１．０×１０−４ｓ−１〜１．０×１０−３ｓ−１、２．０×１０−４ｓ−１〜１．０×１０−３ｓ−１、２．５×１０−４ｓ−１〜８．０×１０−４ｓ−１、２．５×１０−４ｓ−１〜５．０×１０−４ｓ−１、または３．０×１０−４ｓ−１〜４．５×１０−４ｓ−１からなるＫｏｆｆ値を有する。
【００６３】
抗体
１つの態様では、本発明は、ヒトＣＤ４７に特異的に結合するマウス、ヒト化またはキメラモノクローナル抗体、およびそのような抗体を産生させる細胞株に関する。発明のそのような抗ＣＤ４７抗体は、癌治療（しかし、これに限定されない）のための様々な望ましい特性、例えば、抗体アイソタイプ（およびエフェクター機能）に関係なく、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用の強力な妨害、１．０×１０−４ｓ−１〜１．０×１０−３ｓ−１、２．０×１０−４ｓ−１〜１．０×１０−３ｓ−１、２．５×１０−４ｓ−１〜８．０×１０−４ｓ−１、２．５×１０−４ｓ−１〜５．０×１０−４ｓ−１、または３．０×１０−４ｓ−１〜４．５×１０−４ｓ−１の範囲のＫｏｆｆ値を有する解離の迅速動力学を示す（ここで、ベンチマーク抗体は、５．０〜８．９×１０−５ｓ−１のより低いＫｏｆｆ値を示す）。さらに、発明の抗体は赤血球上のＣＤ４７に結合後迅速に遊離される（ここで、より低いＫｏｆｆ値を有するベンチマーク抗体は、よりゆっくりと遊離される）。
【００６４】
加えて、発明の抗ＣＤ４７抗体は、ヒト単球由来マクロファージによるＣＤ４７発現腫瘍細胞の効率的な食作用を可能にする。その上、発明の抗ＣＤ４７抗体は標的ＣＤ４７を過剰発現する異種移植片マウスモデルにおいて腫瘍成長の阻害を示す。その上、前記抗体は、下記特性の少なくとも１つを有する：ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を妨害する、３．０より優れていない脱グリコシル化ＣＤ４７対グリコシル化ＣＤ４７に関するＥＣ５０の比率および１０．０より優れていない脱グリコシル化ＣＤ４７対グリコシル化ＣＤ４７に関するＥＣ９５の比率でグリコシル化および非グリコシル化ＣＤ４７に結合する、ＣＤ４７−ＳＩＲＰαシグナル伝達を阻害する、ある一定のＣＤ４７発現細胞の食作用を増加させる、著しいレベルの細胞の凝集を引き起こさない、および様々な治療および診断方法において用途を見出す。ヒトＣＤ４７に結合し、任意的な突然変異（複数可）（例えば、ＣＤＲ２などのＣＤＲ領域においてさえもＴ細胞エピトープ（複数可）を除去するためのアミノ酸の置き換え）を有するＩｇＧ４型で存在する抗体が好ましい。
【００６５】
発明の好ましい実施形態は、加えて弱い赤血球凝集活性を示し、追加の低毒性を示唆する（候補番号１９、３３、２０（候補２０のヒト化およびさらに改変された抗体を含む））および／またはＪｕｒｋａｔ細胞のアポトーシスを誘導しない（または、わずかにしか誘導しない）（候補番号７、１９、２０（候補２０のヒト化およびさらに改変された抗体を含む）、２２（候補２２のヒト化およびさらに改変された抗体を含む）、３３）一群の抗ＣＤ４７抗体である。さらに、発明のより好ましい実施形態は加えて、細胞外でグリコシル化および非グリコシル化ＣＤ４７に結合する、または、その免疫学的に活性な、グリコシル化および非グリコシル化断片に結合する、一群の抗ＣＤ４７抗体である。さらに、発明のより好ましい実施形態はヒトＣＤ４７などのＣＤ４７の単量体および二量体に結合する一群の抗ＣＤ４７抗体である。さらに、発明のより好ましい実施形態はＣＤ４７上の特定のエピトープ、すなわち特に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１にしたがい番号付けされた場合、ヒトＣＤ４７のＫ５９、Ｒ６３、Ｙ６６、Ｔ６７、Ｈ１０８、Ｔ１０９、Ｔ１１７およびＴ１２０を含む不連続エピトープに結合する一群の抗ＣＤ４７抗体である（例えば、候補２０ならびにそのヒト化および改変バージョン）。発明の一実施形態の別の例はＣＤ４７上の特定のエピトープ、すなわち特に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１にしたがい番号付けされた場合、ヒトＣＤ４７のＫ５９、Ｋ６１、Ｓ１０７、Ｈ１０８、Ｔ１１７、Ｔ１２０およびＲ１２１を含む不連続エピトープに結合する一群の抗ＣＤ４７抗体である（例えば、候補２２ならびにそのヒト化および改変バージョン）。
【００６６】
好ましい候補は候補７、１４、１５、１９、２０、２２、２６および３３である。さらにより好ましい候補は７、１９、２０、２２、および３３である。さらにより好ましい候補は２０および２２である。最も好ましい候補は候補２０（候補２０のヒト化およびさらに改変された抗体、すなわち候補２０．１〜２０．３０を含む）である。例示的な抗体（本明細書では、通常、候補番号または抗体名により示される）のＣＤＲ（ＫＡＢＡＴ−（表２）およびＩＭＧＴ−（表３）アノテーションにおける）および可変領域（表１）が提供される（ＩＭＧＴアノテーションが好ましい）。対象となる抗体としては、例えばＦ（ａｂ）’抗体を作製するための、可変領域の適切な定常領域または定常領域の断片への合併、ならびに融合により提供されるこれらのものが挙げられる。
【００６７】
対象となる可変領域は、提供される抗ＣＤ４７抗体の少なくとも１つのＣＤＲ配列を含み、ここで、ＣＤＲは３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはそれ以上のアミノ酸であってもよい。あるいは、対象となる抗体は、提供された抗体で明記される可変領域、または本明細書で明記される可変領域配列対を含む。これらの抗体は、例えば任意で突然変異（複数可）を有する、任意のアイソタイプ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、より好ましくはＩｇＧ４のヒト免疫グロブリン定常領域を有する全長抗体であってもよく、例えば、この場合、いくつかまたは全てのＴ細胞エピトープ（複数可）がＣＤＲ領域内にあっても、例えばサイレント保存的アミノ酸（複数可）により置き換えられ（実施例に対する実験部分も参照されたい）、Ｓ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅ突然変異などの例があり、すなわち、この場合、Ｓ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅ突然変異はそれぞれ、可能性のある鎖交換を回避し、ｈＩｇＧ４のＦｃγ受容体への親和性を減少させるために導入される。
【００６８】
【表１】
2019508030.tif 000002
2019508030.tif 000003
【００６９】
【表２】
2019508030.tif 000004
【００７０】
【表３】
2019508030.tif 000005
【００７１】
Ｆａｂに加えて、ＣＤ４７の少なくとも１つのエピトープに対する結合特異性を有するより小さな抗体断片およびエピトープ−結合ペプチドもまた、本発明により企図され、また、発明の方法において使用することができる。例えば、単鎖抗体は、米国特許第４，９４６，７７８号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）の方法により構築することができる。単鎖抗体は、フレキシブルリンカー部分により連結される軽および重鎖の可変領域を含む。シングルドメイン抗体として知られている抗体断片はさらに小さく、これは単離ＶＨシングルドメインを含む。それらが由来とする無傷の抗体の結合特異性の少なくともいくつかを有するシングルドメイン抗体を得るための技術は当技術分野で知られている。
【００７２】
例えば、Ｗａｒｄら（Ｗａｒｄ  Ｓ．，Ｇｕｓｓｏｗ  Ｄ．，Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  Ａ．Ｄ．，Ｊｏｎｅｓ  Ｐ．Ｔ．，ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ  Ｇ．“Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ａ  Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ  ｏｆ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｆｒｏｍ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ，”Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−４６（１９８９））は、単離された形態でそれに結合するためにその標的エピトープに対し十分な親和性を有する抗体重鎖可変領域（Ｈシングルドメイン抗体）を得るためにスクリーニングするための方法を開示する。
【００７３】
発明はまた、ヒト化またはキメラ抗ＣＤ４７抗体をコードする単離核酸、核酸を含むベクターおよび宿主細胞、および抗体の産生のための組換え技術を提供する。対象となる核酸は、提供される核酸配列に少なくとも約８０％同一、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または同一であってもよい。そのような近接配列はＣＤＲ配列をコードすることができ、または完全可変領域をコードすることができる。当技術分野で知られているように、可変領域配列は、任意の適切な定常領域配列に融合され得る。
【００７４】
抗体の組換え生成のために、これをコードする核酸が、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のために複製可能なベクターに挿入される。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて容易に単離され、配列決定される（例えば、抗体の重および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）。多くのベクターが使用可能である。ベクター成分は一般に、下記の１つ以上を含むが、それらに限定されない：シグナル配列、複製開始点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列。
【００７５】
この発明の抗ＣＤ４７抗体は、組換えで直接的に生成され得るだけでなく、シグナル配列を含む異種または相同ポリペプチド、または成熟タンパク質またはポリペプチドのＮ末端に特異的な切断部位、免疫グロブリン定常領域配列、などを含む他のポリペプチドとの融合ポリペプチドとしても生成され得る。選択される異種シグナル配列は好ましくは、宿主細胞により認識され、処理される（すなわち、シグナルペプチダーゼにより切断される）ものであってもよい。天然抗体シグナル配列を認識して処理しない原核生物宿主細胞では、シグナル配列は、選択された原核生物シグナル配列により置換される。
【００７６】
「単離された」核酸分子は、抗体核酸の自然源において通常関連する、少なくとも１つの汚染核酸分子から同定され、分離された核酸分子である。単離核酸分子は、それが自然で見出される形態または設定とは異なる。そのため、単離核酸分子は、天然細胞に存在する核酸分子とは識別される。しかしながら、単離核酸分子は、通常、抗体を発現する細胞に含まれる核酸分子を含み、ここで、例えば、核酸分子は天然細胞とは異なる染色体上の位置に存在する。
【００７７】
ＤＮＡをクローニングする、または発現するために好適な宿主細胞は原核生物、酵母、または高等真核生物細胞である。有用な哺乳類宿主細胞株の例は、下記である：ＳＶ４０により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系統（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）；ヒト胚性腎臓細胞（懸濁培養での成長のためにサブクローニングされた２９３または２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ  Ｆ．Ｌ．ａｎｄ  Ｓｍｉｌｅｙ  Ｊ．“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  ｏｆ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ  ｂｙ  ＤＮＡ  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  ５，”Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．３６：５９−７２（１９７７））；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞；チャイニーズハムスター卵巣細胞／ｄｈＦｒ−（ＣＨＯ／ｄｈＦｒ−、Ｕｒｌａｕｂ  Ｇ．ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ  Ｌ．Ａ．“Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  ｈａｍｓｔｅｒ  ｃｅｌｌ  ｍｕｔａｎｔｓ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｉｎ  ｄｉｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７（７）：４２１６−２０（１９８０））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ  Ｊ．Ｐ．“Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｍｏｕｓｅ  ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ”，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３（１）：２４３−２５１（１９８０））；サル腎臓細胞（ＣＶ１、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）；マウス乳房腫瘍細胞（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）；ＴＲ１細胞（Ｍａｔｈｅｒ  Ｊ．Ｐ．，Ｚｈｕａｎｇ  Ｌ．Ｚ．，Ｐｅｒｅｚ−Ｉｎｆａｎｔｅ  Ｖ．，ａｎｄ  Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  Ｄ．Ｍ．“Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｈｏｒｍｏｎｅ−ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ  ｓｅｒｕｍ−ｆｒｅｅ  ｍｅｄｉｕｍ”，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２））；ＭＲＣ  ５細胞；ＥＢ６６細胞（例えばＥＰ２１５０２７５Ｂ１号を参照されたい）；ＦＳ４細胞；ならびにヒト肝細胞腫系統（Ｈｅｐ  Ｇ２）。
【００７８】
宿主細胞は抗ＣＤ４７抗体産生のための上記発現またはクローニングベクターで形質転換され、必要に応じて、プロモーターを誘導する、形質転換体を選択する、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅させるために改変された従来の栄養培地中で培養される。
【００７９】
細胞から調製した抗体組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、およびアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製することができ、アフィニティークロマトグラフィーが好ましい精製技術である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに存する。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２、またはγ４重鎖に基づく抗体を精製するために使用することができる（Ｌｉｎｄｍａｒｋ  Ｒ．，Ｔｈｏｒｅｎ−Ｔｏｌｌｉｎｇ  Ｋ．，Ｓｊｏｑｕｉｓｔ  Ｊ．“Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ  ｔｏ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｓｅｒａ”，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２（１）：１−１３（１９８３））。プロテインＧがヒトγ３について推奨される（Ｇｕｓｓ  Ｍ．，Ｅｌｉａｓｓｏｎ  Ｍ．，Ｏｌｓｓｏｎ  Ａ．，Ｕｈｌｅｎ  Ｍ．，Ｆｒｅｊ  Ａ．Ｋ．，Ｊｏｒｎｖａｌｌ  Ｈ．，Ｆｌｏｃｋ  Ｊ．Ｉ．，ａｎｄ  Ｌｉｎｄｂｅｒｇ  Ｍ．“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＩｇＧ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇ”，ＥＭＢＯ  Ｊ．５（１）：１５６７−１５７５（１９８６））。
【００８０】
親和性リガンドが付着されるマトリクスはほとんどの場合アガロースであるが、他のマトリクスも使用可能である。細孔性ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどの機械的に安定なマトリクスは、アガロースで達成することができるものより速い流速および短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ  ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，ＮＪ）が精製に有用である。タンパク質精製のための他の技術、例えば、イオン交換カラム上での分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上でのクロマトグラフィー、ヘパリン上でのクロマトグラフィー、アニオンまたはカチオン交換樹脂（例えば、ポリアスパラギン酸カラム）上でのセファロース（商標）クロマトグラフィー、等電点電気泳動、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈殿もまた、回収される抗体によって使用可能である。
【００８１】
任意の予備精製工程（複数可）後に、対象となる抗体および汚染物質を含む混合物は、約２．５−４．５のｐＨでの溶離バッファーを使用する、低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに供せられ得、好ましくは低塩濃度（例えば、約０−０．２５Ｍ塩）で実施される。
【００８２】
使用方法
発明のヒト化またはキメラモノクローナル抗体は食作用の調節において使用することができ、国際出願ＵＳ２００９／０００３１９号（本明細書で、その全体が参照により特定的に組み込まれる）において明記される方法が含まれる。例えば、抗体組成物は、ＣＤ４７を発現する癌細胞の食作用を増加させるために投与され得、よって、有効量の、発明のヒト化またはキメラモノクローナル抗体を投与することによる、被験体における癌の治療に好適である。
【００８３】
発明のヒト化またはキメラモノクローナル抗体および任意で薬学的に好適な賦形剤または担体を含む、癌の治療において使用するための医薬組成物もまた、提供される。
【００８４】
発明のヒト化またはキメラモノクローナル抗体は、ＣＤ４７疾患療法の過程をモニタするためにインビトロおよびインビボで使用することができる。よって、例えば、ＣＤ４７を発現する細胞、特にＣＤ４７を発現する癌細胞の数の増加または減少を測定することにより、疾患を寛解することを目指す特定の治療的レジメンが有効かどうか決定することができる。
【００８５】
好ましい実施形態では、発明のヒト化またはキメラモノクローナル抗体は、単独療法として、または他の抗癌剤（複数可）との併用で（併用療法）、癌または他の新生物状態の症状を治療する、その進行を遅延させる、その再発を防止する、またはこれを軽減するのに使用することができる。本明細書では、「癌」「新生物」および「腫瘍」という用語は互換性がある。癌の例としては、胃癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、子宮頸癌、前立腺癌、膀胱癌、結腸直腸癌、膵臓癌、肝臓癌、腎癌、甲状腺癌、脳癌、頭頸部癌、血液癌、癌腫、メラノーマ、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神経膠腫、神経膠芽腫、などが挙げられるが、それらに限定されない。「血液癌」は、血液の癌を示し、白血病、リンパ腫および骨髄腫などを含む。
【００８６】
固形腫瘍としては、例えば、胃腫瘍、乳腺腫瘍、肺腫瘍、卵巣腫瘍、前立腺腫瘍、膀胱腫瘍、結腸直腸腫瘍、膵臓腫瘍、肝臓腫瘍、腎臓腫瘍、甲状腺腫瘍、脳腫瘍、頭頸部腫瘍、食道腫瘍およびメラノーマ腫瘍、などが挙げられる。癌および他の新生物障害と関連する症状としては、炎症、発熱、全身倦怠、疼痛、食欲不振、体重減少、浮腫、頭痛、疲労、発疹、貧血、筋力低下および筋肉疲労が挙げられるが、それらに限定されない。
【００８７】
併用療法は、１つ以上の追加の治療薬、例えば、化学療法または抗悪性腫瘍薬、例えばサイトカインおよび成長因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症薬、代謝阻害剤、酵素阻害剤、および／または細胞傷害性薬物または細胞分裂阻害剤と同時処方、および／または共投与される発明の１つ以上の抗体を含むことができる。「併用」という用語はこの状況では、実質的に同時期に、同時にまたは順次のいずれかで与えられることを意味する。
【００８８】
例示的な化学療法薬としては、アルデスロイキン、アルトレタミン、アミホスチン、アスパラギナーゼ、ブレオマイシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クラドリビン、シサプリド、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、ダクチノマイシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、ドロナビノール、デュオカルマイシン、エトポシド、フィルグラスチム、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、グラニセトロン、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イホスファミド、インターフェロンα、イリノテカン、ランソプラゾール、レバミソール、ロイコボリン、メゲストロール、メスナ、メトトレキサート、メトクロプラミド、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、オメプラゾール、オンダンセトロン、パクリタキセル（タキソール（商標））、ピロカルピン、プロクロロペラジン（ｐｒｏｃｈｌｏｒｏｐｅｒａｚｉｎｅ）、サプロイン（ｓａｐｒｏｉｎ）、タモキシフェン、タキソール、トポテカン塩酸塩、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビノレルビン酒石酸塩が挙げられるが、それらに限定されない。
【００８９】
発明の抗体は有効用量の、患者ヘマトクリットを増加させる作用物質、例えばエリスロポエチン刺激薬（ＥＳＡ）と併用することができる。そのような作用物質は当技術分野で知られており、使用されており、例えば、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）、Ｅｐｏｇｅｎ（登録商標）ＮＦ／Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標）ＮＦ、Ｏｍｏｎｔｙｓ（登録商標）、Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標）、などが挙げられる。
【００９０】
他の実施形態では、発明の抗体は、有効用量の、癌の治療に使用されてきた他の抗体と併用することができ、限定はされないが、下記ＦＤＡ認可モノクローナル抗体が挙げられる：リツキシマブ（リツキサン（登録商標）、ＣＤ２０：キメラＩｇＧ１）、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標）、ＨＥＲ２：キメラＩｇＧ１）、アレムツズマブ（キャンパス（登録商標）、ＣＤ５２：ヒト化ＩｇＧ１）、イブリツモマブチウキセタン（ゼヴァリン（登録商標）、ＣＤ２０：マウス、ＩｇＧ１、放射標識（イットリウム９０）、トシツモマブ−Ｉ−１３１（ベキサール（登録商標）：ＣＤ２０、マウス、ＩｇＧ２ａ、放射標識（ヨウ素１３１））、セツキシマブ（アービタックス（登録商標）、ＥＧＦＲ：キメラ（ｃｊｉｍｅｒｉｃ）、ＩｇＧ１）、ベバシズマブ（ＶＥＧＦ：ヒト化、ＩｇＧ４）、パニツムマブ（ベクティビックス（登録商標）、ＥＧＦＲ：ヒトＩｇＧ２）、オファツムマブ（アーゼラ（登録商標）、ＣＤ２０：ヒトＩｇＧ１）、イピリムマブ（ヤーボイ（Ｙｐｅｒｖｏｙ）（登録商標）、ＣＴＬＡ−４：ヒトＩｇＧ１）、ブレンツキシマブベドチン（ｂｒｅｎｔｉｕｘｉｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）（アデクトリス（Ａｄｅｃｔｒｉｓ）（登録商標）、ＣＤ３０：キメラ、ＩｇＧ１、薬物−コンジュゲート）、ペルツズマブ（パージェクタ（Ｐｅｒｊｅｃｔａ）（登録商標）、ＨＥＲ２：ヒト化ＩｇＧ１、薬物コンジュゲート）、アドトラスツズマブエマタンシン（ｅｍａｔａｎｓｉｎｅ）（カドサイラ（登録商標）、ＨＥＲ２：ヒト化、ＩｇＧ１、薬物−コンジュゲート）、オビヌツズマブ（ガザイバ（登録商標）、ＣＤ２０：ヒト化およびグリコール操作）、ニボルマブおよびペムブロリズマブ（抗ＰＤ−１）、など。トラスツズマブはＨＥＲ−２抗原を標的にする。
【００９１】
この抗原は乳癌の２５％〜３５％で、および転移性胃癌で見られる。トラスツズマブは、ＨＥＲ２過剰発現乳癌およびＨＥＲ２過剰発現転移性胃および食道胃接合部腺癌の治療について認可されている。セツキシマブは、転移性結腸直腸癌、転移性非小細胞肺癌および頭頸部癌の治療のために使用される。ニボルマブおよびペムブロリズマブは、転移性メラノーマおよび非小細胞肺癌を治療するために最近承認された。それらは肺癌、腎細胞癌、リンパ腫および中皮腫のための臨床試験で試験される。現在のところ、臨床試験で試験され、または研究されている他の抗癌剤もまた併用され得る。
【００９２】
好ましい併用は発明のＣＤ４７抗体と下記の併用である：ｉ）免疫チェックポイント阻害剤またはｉｉ）マクロファージおよび樹状細胞の抗腫瘍活性を再プログラミングする免疫調節薬またはｉｉｉ）腫瘍関連抗原に対する抗体。ハーセプチン（登録商標）およびアービタックス（登録商標）に対する、例示の併用が本明細書で記載され、ここで、ハーセプチン（登録商標）との併用は、その付加的、協同的、またはおそらく相乗的効果のために好ましい。他の作用物質もまた、併用されるのに有用であり得る。
【００９３】
発明のモノクローナル抗体は、それらを液相で使用することができ、または固相担体に結合させることができるイムノアッセイにおいてインビトロで使用され得る。加えて、これらのイムノアッセイにおけるモノクローナル抗体は、様々な様式で、検出できるほどに標識させることができる。発明のモノクローナル抗体を使用することができるイムノアッセイの種類の例は、フローサイトメトリー、例えばＦＡＣＳ、ＭＡＣＳ、免疫組織化学的検査、直接または間接的形式のいずれかの競合的および非競合的イムノアッセイ；などである。発明のモノクローナル抗体を使用する抗原の検出は、順方向、逆方向または同時モードのいずれかで実施されるイムノアッセイ、例えば免疫組織化学的アッセイを生理学的試料上で使用して実施することができる。当業者であれば、他のイムノアッセイ形式を知っており、または必要以上の実験をせずにこれを容易に識別することができる。
【００９４】
発明のモノクローナル抗体は多くの異なる担体に結合させることができ、ＣＤ４７発現細胞の存在を検出するために使用することができる。よく知られた担体の例としてはガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然および変性セルロース、ポリアクリルアミド、アガロースおよびマグネタイトが挙げられる。担体の性質は発明の目的上、可溶性または不溶性のいずれかとすることができる。当業者はモノクローナル抗体を結合させるのに好適な他の担体を知っており、またはルーチン実験を使用してそのようなものを確認することができる。
【００９５】
多くの異なる標識および標識方法が当業者に知られており、治療方法におけるトレーサーとして、診断方法における使用のため、などの用途が見出される。診断目的上、標識は共有結合により、または非共有結合により、発明の抗体またはその断片（ＣＤＲ配列からなる、またはこれを含む断片を含む）に付着され得る。本発明において使用することができる標識の型の例としては、酵素、放射性同位体、蛍光化合物、コロイド金属、化学発光化合物、および生物発光化合物が挙げられる。当業者は発明のモノクローナル抗体に結合するのに好適な他の標識を知っており、または、ルーチン実験を使用してそのようなものを確認することができる。さらに、これらの標識の発明のモノクローナル抗体への結合は、当業者に一般的な標準技術を使用して実施することができる。
【００９６】
いくつかの実施形態では、例えばイメージングにおいて使用するために、抗体またはその断片はナノ粒子に付着される。有用なナノ粒子は当技術分野で知られているものであり、例えば、限定はされないが、ラマン−シリカ−金−ナノ粒子（Ｒ−Ｓｉ−Ａｕ−ＮＰ）が挙げられる。Ｒ−Ｓｉ−Ａｕ−ＮＰは、金コア上に吸着された狭帯域スペクトルシグネチャーを有するラマン有機分子から構成される。ラマン有機分子は変化させることができるので、各ナノ粒子はそれ自体のシグネチャーを有することができ、よって、複数のナノ粒子が、多重化により同時に、独立して検出され得る。ナノ粒子全体がシリカシェル内に被包され、ラマン有機分子が金ナノコア上に保持される。
【００９７】
Ｒ−Ｓｉ−Ａｕ−ＮＰの任意的なポリエチレングリコール（ＰＥＧ）化によりそれらのバイオアベイラビリティが増加され、標的部分を付着させるための機能的「ハンドル」が提供される（Ｔｈａｋｏｒ  Ａ．Ｓ．，Ｌｕｏｎｇ  Ｒ．，Ｐａｕｌｍｕｒｕｇａｎ  Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．ｅｔ  ａｌ．“Ｔｈｅ  ｆａｔｅ  ａｎｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｒａｍａｎ−ａｃｔｉｖｅ  ｓｉｌｉｃａ−ｇｏｌｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ”，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．３（７９）：７９ｒａ３３（２０１１）；Ｊｏｋｅｒｓｔ  Ｊ．Ｖ．，Ｍｉａｏ  Ｚ．，ｚａｖａｌｅｔａ  Ｃ．，Ｃｈｅｎｇ  Ｚ．，ａｎｄ  Ｇａｍｂｈｉｒ  Ｓ．Ｓ．“Ａｆｆｉｂｏｄｙ−ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ  ｇｏｌｄ−ｓｉｌｉｃａ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  Ｒａｍａｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ”，Ｓｍａｌｌ．７（５）：６２５−３３（２０１１）；Ｇａｏ  Ｊ．，Ｃｈｅｎ  Ｋ．，Ｍｉａｏ  Ｚ．，Ｒｅｎ  Ｇ．，Ｃｈｅｎ  Ｘ．，Ｇａｍｂｈｉｒ  Ｓ．Ｓ．，Ｃｈｅｎｇ  Ｚ．“Ａｆｆｉｂｏｄｙ−ｂａｓｅｄ  ｎａｎｏｐｒｏｂｅｓ  ｆｏｒ  ＨＥＲ２−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｃｅｌｌ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ  ｉｍａｇｉｎｇ”，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ３２（８）：２１４１−８（２０１１）を参照されたい；各々、参照により本明細書に特定的に組み込まれる）。
【００９８】
発明の目的上、ＣＤ４７は、生物流体中および組織上に存在する場合、インビボまたはインビトロで、発明のモノクローナル抗体により検出され得る。検出可能な量のＣＤ４７を含む任意の試料が使用され得る。試料は尿、唾液、脳脊髄液、血液、血清などの液体、または組織、糞便、などの固体もしくは半固体、あるいは、その代わりに、組織学的診断において一般的に使用されるものなどの固体組織とすることができる。
【００９９】
より大きな感度が得られ得る別の標識技術は、抗体を低分子量ハプテンにカップリングさせることから構成される。これらのハプテンはその後、第２の反応により特異的に検出することができる。例えば、ビオチンなどのハプテンを使用することは一般的であり、これは、アビジン、またはジニトロフェノール、ピリドキサール、またはフルオレセインと反応し、それらは特異的抗ハプテン抗体と反応することができる。
【０１００】
便宜上、本発明の抗体はキット、すなわち、あらかじめ決められた量の試薬と診断アッセイを実施するための説明書とのパッケージされた組み合わせ中で提供することができる。抗体が酵素で標識される場合、キットは、酵素により必要とされる基質および補因子（例えば、検出可能な発色団またはフルオロフォアを提供する基質前駆体）を含む。加えて、他の添加物、例えば安定剤、バッファー（例えば、ブロックバッファーまたは溶解バッファー）などが含められ得る。様々な試薬の相対量は、アッセイの感度を実質的に最適化する試薬の溶液中の濃度を提供するように広く変動させることができる。特に、試薬は、通常凍結乾燥された、賦形剤を含む乾燥粉末として提供されてもよく、これらは、溶解すると、適切な濃度を有する試薬溶液を提供する。
【０１０１】
発明の１つ以上の抗体を含む治療製剤は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、所望の純度を有する抗体を任意的な生理的に許容される担体、賦形剤または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と共に混合することにより、貯蔵するために調製される。抗体組成物は、良好な医療行為と一致する様式で製剤化され、服用され、および投与されるであろう。この状況での検討因子としては、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳類、個々の患者の臨床状態、障害の原因、作用物質の送達部位、投与方法、投与スケジュール、および医師に知られている他の因子が挙げられる。投与される抗体の「治療的有効量」はそのような検討事項により支配され、ＣＤ４７関連疾患を防止するために必要とされる最小量である。
【０１０２】
治療量は、少なくとも約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約０．０５ｍｇ／ｋｇ体重；少なくとも約０．１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約０．５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２．５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重、かつ約１００ｍｇ／ｋｇ体重以下であってもよく、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重が好ましい。当業者により、そのようなガイドラインは、例えば抗体断片の使用において、または抗体コンジュゲートの使用において、活性剤の分子量について調整されるであろうことが理解されるであろう。投与量はまた、局部投与、例えば鼻腔内、吸入、などのため、または全身投与、例えば、ｉ．ｍ．、ｉ．ｐ．、ｉ．ｖ．、などのために変化され得る。
【０１０３】
抗体は、その必要はないが、任意で、活性を増強する、または、別様に治療効果を増加させる１つ以上の作用物質と共に製剤化される。これらは一般に、同じ投与量で、前に使用された投与経路を用いて、または従来使用される投与量の約１〜９９％で使用される。
【０１０４】
許容される担体、賦形剤、または安定剤は、使用される投与量および濃度で、レシピエントに対して無毒性であり、下記が挙げられる：リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸などのバッファー；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（例えばオクタデシル（ｄｅｃｙｉ）ジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；ならびにｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマ；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン；単糖、二糖、および他の炭水化物、例えばグルコース、マンノース、またはデキストリン；ＥＤＴＡなどのキレート剤；糖、例えばスクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール；塩形成対イオン、例えばナトリウム；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；および／または非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）。インビボ投与のために使用される製剤は無菌でなければならない。これは、無菌濾過膜を通す濾過により容易に達成される。
【０１０５】
活性材料成分はまた、例えば、コアセルベーション技術または界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタシレート（ｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル中に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）中にまたはマクロエマルジョン中に封入され得る。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）において開示される。
【０１０６】
抗ＣＤ４７抗体は任意の好適な手段、例えば、非経口、皮下、腹腔内、肺内、および鼻腔内により投与される。非経口注入としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が挙げられる。加えて、抗ＣＤ４７抗体は、パルス注入により、特に漸減用量の抗体を用いて好適に投与される。
【０１０７】
疾患の防止または治療のために、抗体の適切な投与量は、上記で規定される治療される疾患の型、疾患の重症度および過程、抗体が防止目的で投与されるのかどうか、以前の療法、患者の病歴および抗体への応答、ならびに主治医の慎重さに依存する。抗体は患者に一度に、または一連の治療にわたって好適に投与される。
【０１０８】
本発明の別の実施形態では、上記で記載される障害の治療に有用な材料を含む製造物品が提供される。製造物品は容器およびラベルを含む。好適な容器としては、例えば、瓶、バイアル、シリンジ、および試験管が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、病状を治療するのに有効な組成物を保持し、無菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針により貫通可能な栓を有する、静注用溶液バッグまたはバイアルであってもよい）。組成物中の活性剤は抗ＣＤ４７抗体である。容器上の、またはこれと関連されたラベルは、組成物が最適な病状を治療するために使用されることを示す。製造物品は、薬学的に許容されるバッファー、例えばリン酸塩緩衝生理食塩水、リンゲル液および／またはデキストロース溶液を含む第２の容器をさらに含み得る。これは商業上およびユーザーの観点から望ましい他の材料、例えば、他のバッファー、希釈剤、フィルタ、針、シリンジ、および使用説明書を伴う添付文書をさらに含み得る。
【０１０９】
以下、発明について十分に記載するが、様々な変更および改変が発明の精神または範囲から逸脱せずに可能であることは、当業者には明らかであろう。
【０１１０】
配列
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１
ＶＴ００８−ＡＬ５−１０Ｇ７；重鎖；ＣＤＲ１−Ｋａｂａｔ
ＫＹＷＭＨ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２
ＶＴ００８−ＡＬ５−１０Ｇ７；重鎖；ＣＤＲ２−Ｋａｂａｔ
ＥＩＮＰＳＤＴＹＴＮＹＮＱＫＦＫＧ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３
ＶＴ００８−ＡＬ５−１０Ｇ７；重鎖；ＣＤＲ３−Ｋａｂａｔ
ＶＡＴＭＶＡＲＧＦＡＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４
ＶＴ００８−ＡＬ５−１０Ｇ７；重鎖；ＣＤＲ１−ＩＭＧＴ
ＧＹＴＦＴＫＹＷ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５
ＶＴ００８−ＡＬ５−１０Ｇ７；重鎖；ＣＤＲ２−ＩＭＧＴ
ＩＮＰＳＤＴＹＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６
ＶＴ００８−ＡＬ５−１０Ｇ７；重鎖；ＣＤＲ３−ＩＭＧＴ
ＡＲＶＡＴＭＶＡＲＧＦＡＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７
ＶＴ００８−ＡＬ５−１０Ｋ７；軽鎖；ＣＤＲ１−Ｋａｂａｔ
ＫＡＳＱＤＶＳＧＡＶＶ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８
ＶＴ００８−ＡＬ５−１０Ｋ７；軽鎖；ＣＤＲ２−Ｋａｂａｔ
ＬＡＴＹＲＹＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９
ＶＴ００８−ＡＬ５−１０Ｋ７；軽鎖；ＣＤＲ３−Ｋａｂａｔ
ＱＱＹＹＳＩＰＷＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０
ＶＴ００８−ＡＬ５−１０Ｋ７；軽鎖；ＣＤＲ１−ＩＭＧＴ
ＱＤＶＳＧＡ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１
ＶＴ００８−ＡＬ５−１０Ｋ７；軽鎖；ＣＤＲ２−ＩＭＧＴ
ＬＡＴＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２
ＶＴ００８−ＡＬ５−１０Ｋ７；軽鎖；ＣＤＲ３−ＩＭＧＴ
ＱＱＹＹＳＩＰＷＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３
ＶＴ００８−ＡＬ６−１４Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ１−Ｋａｂａｔ
ＮＹＷＭＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４
ＶＴ００８−ＡＬ６−１４Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ２−Ｋａｂａｔ
ＷＩＤＰＮＳＧＧＴＫＹＮＥＫＦＫＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５
ＶＴ００８−ＡＬ６−１４Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ３−Ｋａｂａｔ
ＧＧＹＴＭＤＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６
ＶＴ００８−ＡＬ６−１４Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ１−ＩＭＧＴ
ＧＹＴＦＴＮＹＷ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７
ＶＴ００８−ＡＬ６−１４Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ２−ＩＭＧＴ
ＩＤＰＮＳＧＧＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８
ＶＴ００８−ＡＬ６−１４Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ３−ＩＭＧＴ
ＡＲＧＧＹＴＭＤＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９
ＶＴ００８−ＡＬ６−１６Ｋ１；軽鎖；ＣＤＲ１−Ｋａｂａｔ
ＲＡＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０
ＶＴ００８−ＡＬ６−１６Ｋ１；軽鎖；ＣＤＲ２−Ｋａｂａｔ
ＫＶＳＮＲＦＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１
ＶＴ００８−ＡＬ６−１６Ｋ１；軽鎖；ＣＤＲ３−Ｋａｂａｔ
ＳＱＳＴＨＶＰＬＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２
ＶＴ００８−ＡＬ６−１６Ｋ１；軽鎖；ＣＤＲ１−ＩＭＧＴ
ＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３
ＶＴ００８−ＡＬ６−１６Ｋ１；軽鎖；ＣＤＲ２−ＩＭＧＴ
ＫＶＳＮ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４
ＶＴ００８−ＡＬ６−１６Ｋ１；軽鎖；ＣＤＲ３−ＩＭＧＴ
ＳＱＳＴＨＶＰＬＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５
ＶＴ００８−ＡＬ６−１８Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ１−Ｋａｂａｔ
ＮＹＷＩＨ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６
ＶＴ００８−ＡＬ６−１８Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ２−Ｋａｂａｔ
ＲＩＤＰＮＴＶＤＡＫＹＮＥＫＦＫＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７
ＶＴ００８−ＡＬ６−１８Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ３−Ｋａｂａｔ
ＧＧＹＴＭＤＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８
ＶＴ００８−ＡＬ６−１８Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ１−ＩＭＧＴ
ＧＹＴＦＩＮＹＷ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９
ＶＴ００８−ＡＬ６−１８Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ２−ＩＭＧＴ
ＩＤＰＮＴＶＤＡ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０
ＶＴ００８−ＡＬ６−１８Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ３−ＩＭＧＴ
ＳＲＧＧＹＴＭＤＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１
ＶＴ００８−ＡＬ６−１８Ｋ２１；軽鎖；ＣＤＲ１−Ｋａｂａｔ
ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２
ＶＴ００８−ＡＬ６−１８Ｋ２１；軽鎖；ＣＤＲ２−Ｋａｂａｔ
ＫＶＳＮＲＦＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３
ＶＴ００８−ＡＬ６−１８Ｋ２１；軽鎖；ＣＤＲ３−Ｋａｂａｔ
ＦＱＳＴＨＶＰＷＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４
ＶＴ００８−ＡＬ６−１８Ｋ２１；軽鎖；ＣＤＲ１−ＩＭＧＴ
ＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５
ＶＴ００８−ＡＬ６−１８Ｋ２１；軽鎖；ＣＤＲ２−ＩＭＧＴ
ＫＶＳＮ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６
ＶＬ００８−ＡＬ６−１８Ｋ２１；軽鎖；ＣＤＲ３−ＩＭＧＴ
ＦＱＳＴＨＶＰＷＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７
ＶＬ００８−ＡＬ１７−７Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ１−Ｋａｂａｔ
ＤＹＹＩＮ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８
ＶＬ００８−ＡＬ１７−７Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ２−Ｋａｂａｔ
ＷＩＦＰＧＳＧＬＴＹＹＮＫＫＦＫＧ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９
ＶＬ００８−ＡＬ１７−７Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ３−Ｋａｂａｔ
ＰＹＹＧＳＲＷＤＹＡＭＤＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０
ＶＬ００８−ＡＬ１７−７Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ１−ＩＭＧＴ
ＶＹＴＦＴＤＹＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４１
ＶＬ００８−ＡＬ１７−７Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ２−ＩＭＧＴ
ＩＦＰＧＳＧＬＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２
ＶＬ００８−ＡＬ１７−７Ｇ１；重鎖；ＣＤＲ３−ＩＭＧＴ
ＡＲＰＹＹＧＳＲＷＤＹＡＭＤＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３
ＶＬ００８−ＡＬ１７−７Ｋ６；軽鎖；ＣＤＲ１−Ｋａｂａｔ
ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＮＮＱＫＮＹＬＡ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４４
ＶＬ００８−ＡＬ１７−７Ｋ６；軽鎖；ＣＤＲ２−Ｋａｂａｔ
ＦＡＳＴＲＥＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４５
ＶＬ００８−ＡＬ１７−７Ｋ６；軽鎖；ＣＤＲ３−Ｋａｂａｔ
ＱＱＨＹＴＴＰＹＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６
ＶＬ００８−ＡＬ１７−７Ｋ６；軽鎖；ＣＤＲ１−ＩＭＧＴ
ＱＳＬＬＮＳＮＮＱＫＮＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７
ＶＬ００８−ＡＬ１７−７Ｋ６；軽鎖；ＣＤＲ２−ＩＭＧＴ
ＦＡＳＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４８
ＶＬ００８−ＡＬ１７−７Ｋ６；軽鎖；ＣＤＲ３−ＩＭＧＴ
ＱＱＨＹＴＴＰＹＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｇ４；重鎖；ＣＤＲ１−Ｋａｂａｔ
ＤＹＹＩＮ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５０
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｇ４；重鎖；ＣＤＲ２−Ｋａｂａｔ
ＲＩＹＰＧＩＧＮＴＹＹＮＫＫＦＫＧ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５１
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｇ４；重鎖；ＣＤＲ３−Ｋａｂａｔ
ＧＨＹＧＲＧＭＤＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｇ４；重鎖；ＣＤＲ１−ＩＭＧＴ
ＧＹＳＦＴＤＹＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５３
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｇ４；重鎖；ＣＤＲ２−ＩＭＧＴ
ＩＹＰＧＩＧＮＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５４
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｇ４；重鎖；ＣＤＲ３−ＩＭＧＴ
ＡＲＧＨＹＧＲＧＭＤＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；軽鎖；ＣＤＲ１−Ｋａｂａｔ
ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＩＤＱＫＮＹＬＡ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５６
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；軽鎖；ＣＤＲ２−Ｋａｂａｔ
ＦＡＳＴＫＥＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；軽鎖；ＣＤＲ３−Ｋａｂａｔ
ＱＱＨＹＳＴＰＷＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；軽鎖；ＣＤＲ１−ＩＭＧＴ
ＱＳＬＬＮＳＩＤＱＫＮＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５９
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；軽鎖；ＣＤＲ２−ＩＭＧＴ
ＦＡＳＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；軽鎖；ＣＤＲ３−ＩＭＧＴ
ＱＱＨＹＳＴＰＷＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１
ＶＬ００８−ＡＬ１３−８Ｇ５；重鎖；ＣＤＲ１−Ｋａｂａｔ
ＴＹＷＭＨ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２
ＶＬ００８−ＡＬ１３−８Ｇ５；重鎖；ＣＤＲ２−Ｋａｂａｔ
ＭＩＨＰＮＳＧＴＴＮＹＮＥＫＦＫＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６３
ＶＬ００８−ＡＬ１３−８Ｇ５；重鎖；ＣＤＲ３−Ｋａｂａｔ
ＳＨＹＹＤＧＨＦＳＹ
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ＶＬ００８−ＡＬ１３−８Ｇ５；重鎖；ＣＤＲ１−ＩＭＧＴ
ＧＹＴＦＴＴＹＷ
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ＶＬ００８−ＡＬ１３−８Ｇ５；重鎖；ＣＤＲ２−ＩＭＧＴ
ＩＨＰＮＳＧＴＴ
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ＴＲＳＨＹＹＤＧＨＦＳＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７
ＶＬ００８−ＡＬ１３−８Ｋ３；軽鎖；ＣＤＲ１−Ｋａｂａｔ
ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＲＴＲＫＮＹＬＡ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８
ＶＬ００８−ＡＬ１３−８Ｋ３；軽鎖；ＣＤＲ２−Ｋａｂａｔ
ＷＡＳＴＲＥＳ
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ＫＱＳＹＮＬＷＴ
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ＱＳＬＬＮＳＲＴＲＫＮＹ
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ＷＡＳＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２
ＶＬ００８−ＡＬ１３−８Ｋ３；軽鎖；ＣＤＲ３−ＩＭＧＴ
ＫＱＳＹＮＬＷＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３
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ＮＹＷＩＨ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７４
ＶＴ００８−ＡＬ６−１０Ｇ３；重鎖；ＣＤＲ２−Ｋａｂａｔ
ＲＩＤＰＮＳＧＧＴＫＹＮＥＫＦＫＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７５
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ＧＧＹＴＭＤＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６
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ＧＹＴＦＴＮＹＷ
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７８
ＶＴ００８−ＡＬ６−１０Ｇ３；重鎖；ＣＤＲ３−ＩＭＧＴ
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ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＨ
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ＶＴ００８−ＡＬ６−１０Ｋ１；軽鎖；ＣＤＲ２−Ｋａｂａｔ
ＫＶＳＹＲＦＳ
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ＶＴ００８−ＡＬ６−１０Ｋ１；軽鎖；ＣＤＲ３−Ｋａｂａｔ
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ＫＶＳＹ
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ＦＱＳＴＨＶＰＷＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５
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ＮＹＷＩＹ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８６
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ＹＩＮＰＲＳＤＤＴＫＹＮＱＫＦＲＤ
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ＶＴ００８−ＡＬ６−２０Ｇ７；重鎖；ＣＤＲ３−Ｋａｂａｔ
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９４
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９５
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ＧＹＮＩＹ
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０６
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０７
ＶＴ００８−ＡＬ６−３９Ｋ２；軽鎖；ＣＤＲ２−ＩＭＧＴ
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０８
ＶＴ００８−ＡＬ６−３９Ｋ２；軽鎖；ＣＤＲ３−ＩＭＧＴ
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０９
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ＤＹＹＩＮ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１０
ＶＬ００８−ＡＬ１７−８Ｇ５；重鎖；ＣＤＲ２−Ｋａｂａｔ
ＷＩＦＰＧＳＧＬＴＹＹＮＫＫＦＫＧ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１１
ＶＬ００８−ＡＬ１７−８Ｇ５；重鎖；ＣＤＲ３−Ｋａｂａｔ
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１２
ＶＬ００８−ＡＬ１７−８Ｇ５；重鎖；ＣＤＲ１−ＩＭＧＴ
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１３
ＶＬ００８−ＡＬ１７−８Ｇ５；重鎖；ＣＤＲ２−ＩＭＧＴ
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１８
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１９
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２０
ＶＬ００８−ＡＬ１７−８Ｋ７；軽鎖；ＣＤＲ３−ＩＭＧＴ
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１
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ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＭＰＧＳＳＶＫＬＳＣＫＴＳＧＹＴＦＴＫＹＷＭＨＷＶＫＲＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＳＤＴＹＴＮＹＮＱＫＦＫＧＫＳＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＶＡＴＭＶＡＲＧＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２２
ＶＴ００８−ＡＬ５−１０Ｋ７；可変領域軽鎖
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２３
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ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＬＲＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＭＹＷＶＲＱＲＰＧＲＧＬＥＷＩＧＷＩＤＰＮＳＧＧＴＫＹＮＥＫＦＫＳＫＡＴＬＴＶＤＫＰＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＮＣＡＲＧＧＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２４
ＶＴ００８−ＡＬ６−１６Ｋ１；可変領域軽鎖
ＤＶＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＡＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＦＣＳＱＳＴＨＶＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２５
ＶＴ００８−ＡＬ６−１８Ｇ１；可変領域重鎖
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＫＰＧＴＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＩＮＹＷＩＨＷＶＫＱＲＰＧＲＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＮＴＶＤＡＫＹＮＥＫＦＫＳＫＡＴＬＴＶＤＫＰＳＳＩＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＳＲＧＧＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２６
ＶＴ００８−ＡＬ６−１８Ｋ２１；可変領域軽鎖
ＤＶＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＴＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＩＹＦＣＦＱＳＴＨＶＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２７
ＶＬ００８−ＡＬ１７−７Ｇ１；可変領域重鎖
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＶＹＴＦＴＤＹＹＩＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＶＧＷＩＦＰＧＳＧＬＴＹＹＮＫＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＬＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＰＹＹＧＳＲＷＤＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２８
ＶＬ００８−ＡＬ１７−７Ｋ６；可変領域軽鎖
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＴＭＳＶＧＱＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＮＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＬＹＦＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＨＹＴＴＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｇ４；可変領域重鎖
ＱＶＱＬＫＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＤＹＹＩＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＡＲＩＹＰＧＩＧＮＴＹＹＮＫＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＥＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＧＨＹＧＲＧＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３０
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；可変領域軽鎖
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＭＳＶＧＱＫＶＴＭＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＩＤＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＶＹＦＡＳＴＫＥＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＨＹＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３２
ＶＬ００８−ＡＬ１３−８Ｋ３；可変領域軽鎖
ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＡＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＲＴＲＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＫＱＳＹＮＬＷＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３３
ＶＴ００８−ＡＬ６−１０Ｇ３；可変領域重鎖
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３４
ＶＴ００８−ＡＬ６−１０Ｋ１；可変領域軽鎖
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３５
ＶＴ００８−ＡＬ６−２０Ｇ７；可変領域重鎖
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６
ＶＴ００８−ＡＬ６−２０Ｋ７；可変領域軽鎖
ＤＶＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＨＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＮＬＬＩＹＫＶＳＹＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＦＣＳＱＧＴＨＶＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７
ＶＴ００８−ＡＬ６−３９Ｇ２；可変領域重鎖
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８
ＶＴ００８−ＡＬ６−３９Ｋ２；可変領域軽鎖
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９
ＶＬ００８−ＡＬ１７−８Ｇ５；可変領域重鎖
ＬＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＴＳＶＫＩＳＣＲＳＳＧＹＴＦＴＤＹＹＩＮＷＶＱＱＲＰＧＱＧＬＥＷＶＧＷＩＦＰＧＳＧＬＴＹＹＮＫＫＦＫＧＫＡＴＬＳＶＤＫＳＳＮＴＡＹＭＬＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＰＹＹＧＳＲＷＤＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４０
ＶＬ００８−ＡＬ１７−８Ｋ７；可変領域軽鎖
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＴＭＳＶＧＱＫＡＴＭＳＣＫＳＳＱＮＬＬＮＳＮＮＱＫＮＨＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＬＹＦＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＨＹＴＴＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｇ４；ヒト化可変領域重鎖；ＶＨ１
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｇ４；ヒト化可変領域重鎖；ＶＨ２
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｇ４；ヒト化可変領域重鎖；ＶＨ３
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ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４４
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｇ４；ヒト化可変領域重鎖；ＶＨ４
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＤＹＹＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＹＰＧＩＧＮＴＹＹＮＫＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＨＹＧＲＧＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４５
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｇ４；ヒト化可変領域重鎖；ＶＨ５
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＤＹＹＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＹＰＧＩＧＮＴＹＹＮＫＫＦＫＧＲＶＴＭＴＲＹＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＨＹＧＲＧＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；ヒト化可変領域軽鎖；ＶＬ１
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＩＤＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＦＡＳＴＫＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４７
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；ヒト化可変領域軽鎖；ＶＬ２
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＩＤＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＦＡＳＴＫＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４８
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；ヒト化可変領域軽鎖；ＶＬ３
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＩＤＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＡＧＱＳＰＫＬＬＩＹＦＡＳＴＫＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＤＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４９
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；ヒト化可変領域軽鎖；ＶＬ４
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＩＤＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＦＡＳＴＫＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＦＣＱＱＨＹＳＴＰＷＴＦＧＧＧＡＫＶＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５０
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；ヒト化可変領域軽鎖；ＶＬ５
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＩＤＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＦＡＳＴＫＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＶＡＶＹＦＣＱＱＨＹＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＲ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１
ＣＤ４７抗原（Ｒｈ関連抗原、インテグリン関連シグナルトランスデューサー）、アイソフォームＣＲＡ＿ｂ［ホモサピエンス］、受入：ＥＡＷ７９７３４．１
ＭＷＰＬＶＡＡＬＬＬＧＳＡＣＣＧＳＡＱＬＬＦＮＫＴＫＳＶＥＦＴＦＣＮＤＴＶＶＩＰＣＦＶＴＮＭＥＡＱＮＴＴＥＶＹＶＫＷＫＦＫＧＲＤＩＹＴＦＤＧＡＬＮＫＳＴＶＰＴＤＦＳＳＡＫＩＥＶＳＱＬＬＫＧＤＡＳＬＫＭＤＫＳＤＡＶＳＨＴＧＮＹＴＣＥＶＴＥＬＴＲＥＧＥＴＩＩＥＬＫＹＲＶＶＳＷＦＳＰＮＥＮＩＬＩＶＩＦＰＩＦＡＩＬＬＦＷＧＱＦＧＩＫＴＬＫＹＲＳＧＧＭＤＥＫＴＩＡＬＬＶＡＧＬＶＩＴＶＩＶＩＶＧＡＩＬＦＶＰＧＥＹＳＬＫＮＡＴＧＬＧＬＩＶＴＳＴＧＩＬＩＬＬＨＹＹＶＦＳＴＡＩＧＬＴＳＦＶＩＡＩＬＶＩＱＶＩＡＹＩＬＡＶＶＧＬＳＬＣＩＡＡＣＩＰＭＨＧＰＬＬＩＳＧＬＳＩＬＡＬＡＱＬＬＧＬＶＹＭＫＦＶＡＳＮＱＫＴＩＱＰＰＲＫＡＶＥＥＰＬＮＡＦＫＥＳＫＧＭＭＮＤＥ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５２
ＶＴ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；軽鎖；ＣＤＲ２−Ｋａｂａｔ；ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ修正済み
ＹＡＳＴＫＥＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５３
ＶＴ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；軽鎖；ＣＤＲ２−ＩＭＧＴ；ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ修正済み
ＹＡＳＴ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５４
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；可変領域軽鎖；ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ修正済み
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＭＳＶＧＱＫＶＴＭＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＩＤＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＶＹＹＡＳＴＫＥＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＨＹＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；ヒト化可変領域軽鎖；ＶＬ１；ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ修正済み
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＩＤＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＹＡＳＴＫＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５６
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；ヒト化可変領域軽鎖；ＶＬ２；ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ修正済み
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＩＤＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＹＡＳＴＫＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５７
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；ヒト化可変領域軽鎖；ＶＬ３；ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ修正済み
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＩＤＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＡＧＱＳＰＫＬＬＩＹＹＡＳＴＫＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＤＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５８
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；ヒト化可変領域軽鎖；ＶＬ４；ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ修正済み
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＩＤＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＹＡＳＴＫＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＦＣＱＱＨＹＳＴＰＷＴＦＧＧＧＡＫＶＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５９
ＶＬ００８−ＡＬ１８−１４Ｋ１；ヒト化可変領域軽鎖；ＶＬ５；ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ修正済み
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＩＤＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＹＡＳＴＫＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＶＡＶＹＦＣＱＱＨＹＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＲ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６０
ｈｕ−ｓＣＤ４７−６Ｈｉｓ；６Ｈｉｓ−タグを有するヒトＣＤ４７抗原の細胞外ドメイン
ＭＷＰＬＶＡＡＬＬＬＧＳＡＣＣＧＳＡＱＬＬＦＮＫＴＫＳＶＥＦＴＦＣＮＤＴＶＶＩＰＣＦＶＴＮＭＥＡＱＮＴＴＥＶＹＶＫＷＫＦＫＧＲＤＩＹＴＦＤＧＡＬＮＫＳＴＶＰＴＤＦＳＳＡＫＩＥＶＳＱＬＬＫＧＤＡＳＬＫＭＤＫＳＤＡＶＳＨＴＧＮＹＴＣＥＶＴＥＬＴＲＥＧＥＴＩＩＥＬＫＹＲＶＶＳＷＦＳＰＡＳＳＳＧＳＳＳＨＨＨＨＨＨ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６１
ｈｕ−ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ；ヒト定常領域重鎖ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ突然変異体
ＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＴＴＣＣＴＣＴＧＧＣＣＣＣＴＴＧＣＴＣＣＣＧＧＴＣＣＡＣＣＴＣＣＧＡＡＴＣＴＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＣＧＴＧＡＡＡＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＴＧＣＡＴＡＣＣＴＴＣＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＣＴＣＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＴＡＴＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＣＴＣＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＧＧＡＡＴＣＴＡＡＧＴＡＣＧＧＣＣＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＣＴＴＧＴＣＣＴＧＣＣＣＣＴＧＡＡＴＴＴＣＴＧＧＧＣＧＧＡＣＣＣＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＴＣＡＧＧＡＡＧＡＴＣＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＣＧＧＧＡＡＧＡＡＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＣＣＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＴＣＣＡＴＣＧＡＡＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＣＣＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＴＣＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＡＴＴＣＴＡＣＣＣＣＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＣＧＧＣＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＣＣＣＣＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＧＣＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＣＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＴＣＣＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＴＣＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６２
ｈｕＩｇＧ４＿Ｓ２２８Ｐ；ヒト定常領域重鎖ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ突然変異体
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６３
ｈｕ−ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ−Ｌ２３５Ｅ；ヒト定常領域重鎖ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ−Ｌ２３５Ｅ突然変異体
ＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＣＴＣＴＧＴＧＴＴＴＣＣＴＣＴＧＧＣＣＣＣＴＴＧＣＴＣＣＣＧＧＴＣＣＡＣＣＴＣＣＧＡＡＴＣＴＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＣＧＴＧＡＡＡＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＴＧＣＡＴＡＣＣＴＴＣＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＣＴＣＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＴＡＴＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＣＴＣＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＧＧＡＡＴＣＴＡＡＧＴＡＣＧＧＣＣＣＴＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＣＴＴＧＴＣＣＴＧＣＣＣＣＴＧＡＡＴＴＴＧＡＡＧＧＣＧＧＡＣＣＣＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＴＣＡＧＧＡＡＧＡＴＣＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＣＧＧＧＡＡＧＡＡＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡＣＣＴＡＣＣＧＧＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＴＣＣＡＴＣＧＡＡＡＡＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＣＣＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＴＣＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＡＴＴＣＴＡＣＣＣＣＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＣＧＧＣＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＣＣＣＣＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＧＣＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＣＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＴＣＣＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＴＣＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６４
ｈｕＩｇＧ４＿Ｓ２２８Ｐ−Ｌ２３５Ｅ；ヒト定常領域重鎖ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ−Ｌ２３５Ｅ突然変異体
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６５
ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５Ｙ；ｈｕＩｇＧ４＿Ｓ２２８Ｐ型における重鎖
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＤＹＹＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＹＰＧＩＧＮＴＹＹＮＫＫＦＫＧＲＶＴＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＨＹＧＲＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６６
ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５Ｙ；ｈｕ−ＩｇＧ４＿Ｓ２２８Ｐ−Ｌ３２５Ｅ型における重鎖
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＤＹＹＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＹＰＧＩＧＮＴＹＹＮＫＫＦＫＧＲＶＴＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＨＹＧＲＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６７
ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５Ｙ；軽鎖
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＩＤＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＹＡＳＴＫＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＶＡＶＹＦＣＱＱＨＹＳＴＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＲＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８
ＶＬ００８−ＡＬ１３−８Ｇ５；ヒト化可変領域重鎖；ＶＨ１ｍ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨＷＶＨＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＭＩＨＰＮＳＧＴＴＮＹＮＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＶＤＫＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＳＨＹＹＤＧＨＦＳＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９
ＶＬ００８−ＡＬ１３−８Ｇ５；ヒト化可変領域重鎖；ＶＨ２ｍ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＭＩＨＰＮＳＧＴＴＮＹＮＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＶＤＫＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＳＡＶＹＹＣＴＲＳＨＹＹＤＧＨＦＳＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７０
ＶＬ００８−ＡＬ１３−８Ｇ５；ヒト化可変領域重鎖；ＶＨ３
ＱＶＱＬＱＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＭＩＨＰＮＳＧＴＴＮＹＮＥＫＦＫＳＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＳＨＹＹＤＧＨＦＳＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１
ＶＬ００８−ＡＬ１３−８Ｇ５；ヒト化可変領域重鎖；ＶＨ４
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＧＳＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＭＩＨＰＮＳＧＴＴＮＹＮＥＫＦＫＳＲＶＴＬＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＴＳＤＤＴＡＶＹＹＣＴＲＳＨＹＹＤＧＨＦＳＹＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２
ＶＬ００８−ＡＬ１３−８Ｋ３；ヒト化可変領域軽鎖；ＶＬ１
ＤＩＶＭＴＱＳＰＧＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＦＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＲＴＲＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＫＱＳＹＮＬＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＶＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７３
ＶＬ００８−ＡＬ１３−８Ｋ３；ヒト化可変領域軽鎖；ＶＬ２
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＲＴＲＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＫＱＳＹＮＬＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７４
ＶＬ００８−ＡＬ１３−８Ｋ３；ヒト化可変領域軽鎖；ＶＬ３
ＥＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＲＴＲＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＡＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＤＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＫＱＳＹＮＬＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７５
ＶＬ００８−ＡＬ１３−８Ｋ３；ヒト化可変領域軽鎖；ＶＬ４
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＰＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＲＴＲＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＡＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＫＱＳＹＮＬＷＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６
ヒトκ軽鎖の定常領域
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【０１１１】
実施例
Ｉ．マウス抗ＣＤ４７抗体の作製
１．マウスの免疫化
ヒトＣＤ４７（ｈＣＤ４７）に対するものであり、マウスＣＤ４７（ｍＣＤ４７）と潜在的に交差反応するマウス抗体を作製するために、ＮＭＲＩ野生型またはＣＤ４７−ＫＯ（Ｃ５７ＢＬ６）マウスを下記の通り、２週間隔での４回のＤＮＡ注射、続いて、ＣＤ４７ＤＮＡまたはＣＤ４７発現ベクターでトランスフェクトされたＣＨＯ細胞を用いた１週間隔での２回の最終ブーストを含むプロトコルを用いて免疫化した：
−（５）ＷＴマウス：初回刺激ヒトＣＤ４７ＤＮＡ＋ブーストヒトＣＤ４７ＤＮＡ
−（３）ＣＤ４７−／−マウス：初回刺激ヒトＣＤ４７ＤＮＡ＋ブーストマウスＣＤ４７ＣＨＯ
−（３）ＣＤ４７−／−マウス：初回刺激マウスＣＤ４７ＣＨＯ＋ブーストマウスＣＤ４７ＣＨＯ
【０１１２】
動物屠殺を、血清スクリーニング結果に従い実施した。ヒトまたはマウスＣＤ４７へのＩｇＧ結合の存在および力価を、免疫化動物の血清中で、ＥＬＩＳＡ（ｈＣＤ４７−ヒトＩｇＧ１融合タンパク質、ｈＣＤ４７−Ｆｃ、またはｍＣＤ４７−ヒトＩｇＧ１融合タンパク質、ｍＣＤ４７−Ｆｃのコーティング）を用いることにより、およびフローサイトメトリーにより、ｈＣＤ４７またはｍＣＤ４７を発現する安定なＣＨＯ細胞（ｈＣＤ４７またはｍＣＤ４７をコードするベクターによるトランスフェクション、続いて安定なＣＤ４７発現クローンの選択により得られる、図示せず）上でモニタした。強い抗ＣＤ４７ＩｇＧ力価を呈する動物を屠殺した。それらの脾臓およびリンパ節を抽出し、単核細胞（ＭＮＣ）を精製し、凍結させた。
【０１１３】
２．ＩＳＡＡＣ技術を使用した単一Ｂ細胞スクリーニングおよび組換え抗ＣＤ４７抗体の作製
ＷＯ２００９／０１７２２６号に記載されるＩＳＡＡＣ技術は、各抗体分泌細胞を、マイクロアレイチップを使用して検出するための独特の方法であり、これにより、単一細胞を基本とする生細胞の分析が可能になり、関連細胞を同定し、回収するための迅速で、効率的でハイスループット（２３４，０００までの各細胞）のシステムが提供される。
【０１１４】
単一生細胞のアレイを、免疫化マウスの脾臓およびリンパ節から前に精製したマウスＭＮＣをマイクロアレイチップに適用することにより調製した。チップ表面を標的抗原（ｈＣＤ４７−ヒトＩｇＧ１融合タンパク質、ｈＣＤ４７−Ｆｃ）で前もってコートし、抗体分泌細胞により分泌される抗ＣＤ４７マウス抗体を、ウェル周りの表面上にコートさせたＣＤ４７によりトラップさせた。洗浄後、固定化ＣＤ４７に結合されたマウスＩｇＧの存在を、Ｃｙ３にカップリングされた抗マウスＩｇＧ抗体および蛍光顕微鏡法により検出した。抗原の特異抗体への結合は、明確な円形スポットを形成し、それらは非特異的シグナルから容易に識別可能であった。ＣＤ４７−特異抗体−分泌単一細胞をその後、顕微操作により回収し、ｍＲＮＡを単一細胞から回収し、ＩｇＧの重（ＶＨ）および軽（ＶＬ）鎖の可変領域をコードするｃＤＮＡ配列をＲＴ−ＰＣＲにより増幅させた。ＶＨおよびＶＬ配列をその後、それぞれ、マウスγ−２ａ定常領域（Ｆｃγ２ａ）およびκまたはλ定常領域を含む発現ベクターにクローン化した。ＨおよびＬ鎖発現ベクターのＣＨＯ細胞でのコトランスフェクション後、組換え抗体をプロテインＡカラム上で細胞上清から精製し、ＣＤ４７認識および特異性の確認を、ｈＣＤ４７−ＦｃまたはｍＣＤ４７−Ｆｃでコートされたプレート上でのＥＬＩＳＡにより、およびｈＣＤ４７またはｍＣＤ４７でトランスフェクトされた、またはされていないＣＨＯ細胞上でのフローサイトメトリーにより試験した。
【０１１５】
全体で、５５の抗体が同定され、そのうちの３４（１８の異なる生殖系列ファミリーに属する）を産生させ、精製させた。それらの３４の抗体のうち、１９はヒトＣＤ４７のみを認識し、１の抗体はマウスＣＤ４７のみを認識し、１４の抗体はヒトおよびマウスＣＤ４７の両方を認識した。
【０１１６】
ＩＩ．抗ＣＤ４７候補の配列
表１〜３（上記）は、１０の選択された候補のアミノ酸配列に言及する。列挙される配列において、ＣＤＲはＫａｂａｔおよびＩＭＧＴアノテーションに従い同定される。
【０１１７】
ＩＩＩ．組換えマウス抗ＣＤ４７抗体のインビトロキャラクタリゼーション
１．ＥＬＩＳＡによるＣＤ４７結合アッセイ
全ての抗体を、ＥＬＩＳＡプレート上にコートされた組換えｈＣＤ４７−ＦｃおよびｍＣＤ４７−Ｆｃに結合するそれらの能力について試験した。試験した３４の精製抗体のうち、１９はｈＣＤ４７のみを認識し、１つの抗体はｍＣＤ４７のみを認識し、１４の抗体はヒトおよびマウスＣＤ４７の両方を認識した（データ示さず）。
【０１１８】
２．ＣＤ４７トランスフェクトＣＨＯ細胞上でのフローサイトメトリーによるＣＤ４７結合アッセイおよびマウスおよびカニクイザルＣＤ４７との交差反応性
同定されたマウス抗ＣＤ４７抗体の、細胞膜発現ヒトＣＤ４７ならびに他の種由来のＣＤ４７タンパク質を認識する能力を、フローサイトメトリーにより、ヒト、マウスまたは非ヒト霊長類（カニクイザル）起源のＣＤ４７抗原を安定に発現するＣＨＯ細胞を用いることによりさらに分析した。ＣＨＯ細胞表面上での種特異的ＣＤ４７の発現を、適切な抗ＣＤ４７抗体による染色および非固定細胞上でのフローサイトメトリーを使用することにより確認した。抗体Ｂ６Ｈ１２（マウスＩｇＧ１、Ａｂｃａｍ）を使用して、ヒトおよびカニクイザルＣＤ４７の発現を確認し、ＭＩＡＰ３０１（ラットＩｇＧ２ａ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してマウスＣＤ４７の発現を確認し、ＭＥＭ１２２（マウスＩｇＭ、ａｂｃａｍ）を使用してサルＣＤ４７の発現を確認した。
【０１１９】
抗ＣＤ４７抗体およびアイソタイプコントロール抗体を、７．３μｇ／ｍＬ〜３．３ｎｇ／ｍＬの様々な濃度で、異なるＣＤ４７種を発現するＣＨＯ細胞と共に＋４℃で３０分間インキュベートした。２回の洗浄後、細胞膜ＣＤ４７に結合された抗体の存在を、一次抗体のアイソタイプによるＰＥ結合抗マウスまたは抗ヒトＩｇＧ抗体とのインキュベーションおよびＡｃｃｕｒｉ−Ｃ６フローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上での分析により明らかにした。抗体濃度の各々について得られた平均蛍光強度（ＭＦＩ）と一次抗体なしで得られた強度の差を計算し（Δ−ＭＦＩ）、抗体の濃度に対してプロットした。ＣＤ４７を認識しなかった適切なアイソタイプ（ｍＩｇＧ１、ｍＩｇＧ２ａ、ｈＩｇＧ１、ｈＩｇＧ４）のネガティブコントロール抗体を同じ条件下で試験し、バックグラウンド抗体染色（非特異的染色）を測定した。
【０１２０】
異なる抗ｈＣＤ４７ベンチマーク抗体もまた、我々の候補と並行して試験した。それらは、Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＷＯ２０１１／１４３６２４号）からのマウスＢ６Ｈ１２、キメラ５Ｆ９（ｃ５Ｆ９）およびヒト化５Ｆ９（ｈｕ５Ｆ９；ｖｈ２−ｖｌ２）抗体；Ｉｎｈｉｂｒｘ（ＵＳ２０１３／０２２４１８８号；ＷＯ２０１４／１２３５８０号）からのマウス２Ａ１抗体およびそのヒト化バリアントＡＢ０６．１２；Ｎｏｖｉｍｍｕｎｅ（ＷＯ２０１４／０８７２４８号）からのマウス５Ａ３Ｍ３抗体；ならびに、Ｆｒａｚｉｅｒら（ＷＯ２０１４／０９３６７８号）からのマウスＶｘＰ０３７−０１ＬＣ１抗体を含んだ。
【０１２１】
１０のマウス抗ＣＤ４７抗体について得られた結果を下記表４でまとめて示し、ベンチマーク抗体を用いて得られた結果と比較する。１０全てのマウス抗ＣＤ４７候補はヒトおよびカニクイザルＣＤ４７を発現するＣＨＯ細胞に強く結合したが、トランスフェクトされていないＣＨＯ細胞には結合しなかった。その上、候補のうちの５つ（候補１４、１５、２６、２９および３０）はまた、マウスＣＤ４７を発現するＣＨＯ細胞に強く結合したが、５つの他の抗体は結合しなかった。これらの結果から、５つの抗体はヒトおよびカニクイザル起源のＣＤ４７を特異的に認識し（候補７、１９、２０、２２および３３）、５つの他の抗体はまた、マウス起源のＣＤ４７に対して交差反応した（候補１４、１５、２６、２９、３０）ことが示され、それらの抗体による異なるエピトープ（複数可）の認識が示唆された。
【０１２２】
報告されたように、２Ａ１およびＢ６Ｈ１２ベンチマークはｈＣＤ４７を認識し、ｃｙｎｏＣＤ４７と交差反応したが、ｍＣＤ４７とは交差反応せず、一方、ＶｘＰ０３７−０１ＬＣ１抗体はカニクイザルおよびマウスＣＤ４７の両方、ならびにおそらく野生型ＣＨＯ細胞上に発現されたハムスターＣＤ４７に対し交差反応した。
【０１２３】
【表４】
2019508030.tif 000006
３．ＥＬＩＳＡによるＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用の阻害
抗体を、ＥＬＩＳＡにより、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を妨害するそれらの能力について試験した。実験の前日、ｈＣＤ４７−ｈＩｇＧ１融合タンパク質を９６ウェルプレートの底にコートし、一晩４℃でインキュベートした。ウェルをその後、洗浄し、２時間の間室温で飽和させた。洗浄工程後、抗原（ｈＳＩＲＰα−６ＨＩＳ融合タンパク質、Ｇｅｎｔａｕｒ）ならびに試験される抗体を各ウェルに添加し、１時間室温でインキュベートした。洗浄後、相互作用ＳＩＲＰαの存在または非存在を、ＨＲＰ−コンジュゲート抗６Ｈｉｓ二次抗体（Ｂｅｔｈｙｌ）およびペルオキシダーゼ基質により検出した。１０全ての選択した抗体が、ｈＳＩＲＰαのｈＣＤ４７への結合を阻害することが見出された（データ示さず）。
【０１２４】
４．ＣＨＯ細胞上でのフローサイトメトリーによるＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用の阻害
８つの最良候補をその後、ＥＬＩＳＡにより、ＣＤ４７トランスフェクトＣＨＯ細胞上で、それらの結合プロファイルに従いさらに選択し（候補７、１４、１５、１９、２０、２２、２６、３３）、ヒトＳＩＲＰα（ｈＳＩＲＰα）のＣＨＯ細胞上に発現されたｈＣＤ４７への結合を阻害するそれらの能力について試験した。ヒトＣＤ４７トランスフェクト細胞（３×１０５細胞／ウェルの９６−ウェルプレート）を最初に、＋４℃で３０分間、段階希釈の抗ＣＤ４７抗体またはアイソタイプコントロール抗体（ｍＩｇＧ２ａまたはｍＩｇＧ１型）と共にインキュベートした。細胞をその後、洗浄し、１０μｇ／ｍＬのＨｉｓ−タグ付けｈＳＩＲＰα（Ｈｉｓ−ｈＳＩＲＰα、Ｇｅｎｔａｕｒ）と共に３０分間＋４℃でインキュベートした。洗浄後、Ｈｉｓ−ｈＳＩＲＰαのＣＨＯ細胞への結合を、ウサギ抗Ｈｉｓ抗体（Ｂｅｔｈｙｌ）、続いてＦＩＴＣ−コンジュゲートヤギ抗ウサギＩｇＧ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）とのインキュベーションおよびＡｃｃｕｒｉ−Ｃ６フローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上でのフローサイトメトリー分析により明らかにした。
【０１２５】
ｈＣＤ４７へのｈＳＩＲＰα結合の阻害のパーセンテージを下記の通り計算した：
％阻害＝（１−（ＭＦＩ＿ｗＡｂ−ＭＦＩ＿ｗｏｈＳＩＲＰα）／（ＭＦＩ＿ｗｈＳＩＲＰα−ＭＦＩ＿ｗｏｈＳＩＲＰα））×１００、ここでＭＦＩ＿ｗＡｂは、試験抗体およびｈＳＩＲＰαと共にインキュベートしたｈＣＤ４７−ＣＨＯ細胞を用いて得られた平均強度蛍光（ＭＦＩ）であり；ＭＦＩ＿ｗｏｈＳＩＲＰαは、ｈＳＩＲＰαなしで得られたＭＦＩであり（１００％ｈＳＩＰＲα結合阻害）；ならびにＭＦＩ＿ｗｈＳＩＲＰαは、ｈＳＩＲＰαありだが、抗体とのプレインキュベーションなしの蛍光である（０％ＳＩＲＰα結合阻害）。阻害パーセンテージを抗体濃度に対してプロットし、ＩＣ５０値をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアの非線形回帰分析モデルを用いて計算した。
【０１２６】
図１および下記表５で提示される結果は、８つの選択された候補（番号７、１４、１５、１９、２０、２２、２６、および３３）は、ＣＨＯ細胞上に発現されたｈＣＤ４７上でのｈＳＩＲＰαの結合を強く阻害し、ＩＣ５０値は０．３６〜１．１０μｇ／ｍＬ（２．４〜７．３ｎＭ）の範囲であったことを示す。８つの抗ＣＤ４７候補は、Ｂ６Ｈ１２および５Ａ３Ｍ３抗体よりも優れており、２Ａ１およびＶｘＰ０３７−０１ＬＣ１抗体と同様であった。
【０１２７】
【表５】
2019508030.tif 000007
【０１２８】
５．Ｒａｊｉ細胞により発現されるｈＣＤ４７上での抗ＣＤ４７抗体の結合
８つのさらに選択された候補（番号７、１４、１５、１９、２０、２２、２６、３３）を、ＲａｊｉヒトＢリンパ腫細胞株上に発現されたｈＣＤ４７に結合するそれらの能力について試験した。Ｒａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−ＣＬＬ−８６；２×１０５細胞／ウェルの９６−ウェルプレート）を最初に＋４℃で３０分間、段階希釈の抗ＣＤ４７抗体または対照アイソタイプ抗体（ｍＩｇＧ２ａまたはｍＩｇＧ１型）と共にインキュベートした。細胞をその後、洗浄し、３０分間＋４℃で、ＰＥ−コンジュゲートＦ（ａｂ）’２ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体（１／１００希釈、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）と共にインキュベートした。洗浄後、細胞の蛍光を、Ａｃｃｕｒｉ−Ｃ６フローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上でのフローサイトメトリーにより分析した。
【０１２９】
試験抗体を用いて測定された強度と抗体なしでの強度の間の差を表すＭＦＩのΔを各抗体濃度について計算し、値を、抗体濃度に対してプロットした。ＥＣ５０値をその後、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアの非線形回帰分析モデルを使用することにより計算した。
【０１３０】
図２および下記表６で提示される結果により、８つの候補（番号７、１４、１５、１９、２０、２２、２６、および３３）は、Ｒａｊｉ細胞上に発現されたｈＣＤ４７に強く結合し、ＥＣ５０値は、０．０３〜０．１７μｇ／ｍＬ（０．２〜１．１ｎＭ）の範囲であったことが示される。８つの抗ＣＤ４７候補は、Ｂ６Ｈ１２および５Ａ３Ｍ３抗体より優れており、競合者からの２Ａ１およびＶｘＰ０３７−０１ＬＣ１抗体と同様であった。
【０１３１】
【表６】
2019508030.tif 000008
【０１３２】
６．Ｒａｊｉ細胞上でのフローサイトメトリーによるＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用の阻害
８つのさらに選択された候補のうちの６つ（番号１４、１５、１９、２０、２２、３３）を、ｈＳＩＲＰαのヒトＢリンパ腫Ｒａｊｉ細胞上に発現されたｈＣＤ４７への結合を阻害するそれらの能力について試験した。この目的を達成するために、Ｒａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−ＣＣＬ−８６；２×１０５細胞／ウェルの９６−ウェルプレート）を最初に＋４℃で３０分間、段階希釈の抗ＣＤ４７抗体またはアイソタイプコントロール抗体（ｈＩｇＧ１またはｈＩｇＧ４型で生成されるキメラ抗ＣＤ４７候補）と共にインキュベートした。細胞をその後、洗浄し、２．５μｇ／ｍＬのＨｉｓ−タグ付けｈＳＩＲＰα（Ｈｉｓ−ｈＳＩＲＰα、Ｇｅｎｔａｕｒ）と共に３０分間＋４℃でインキュベートした。洗浄後、Ｈｉｓ−ｈＳＩＲＰαのＲａｊｉ細胞への結合を、マウス抗Ｈｉｓ抗体（１／１０００希釈；Ｑｉａｇｅｎ）、続いてＰＥ−コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ（１／１００希釈；Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）とのインキュベーションおよびＡｃｃｕｒｉ−Ｃ６フローサイトメーター（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上でのフローサイトメトリー分析により明らかにした。
【０１３３】
ｈＣＤ４７へのｈＳＩＲＰα結合の阻害のパーセンテージを下記の通りに計算した：
％阻害＝（１−（ＭＦＩ＿ｗＡｂ−ＭＦＩ＿ｗｏｈＳＩＲＰα）／（ＭＦＩ＿ｗｈＳＩＲＰα−ＭＦＩ＿ｗｏｈＳＩＲＰα））×１００、ここで、ＭＦＩ＿ｗＡｂは試験抗体およびｈＳＩＲＰαと共にインキュベートしたＲａｊｉ細胞を用いて得られた平均強度蛍光（ＭＦＩ）であり；ＭＦＩ＿ｗｏｈＳＩＲＰαはｈＳＩＲＰαなしで得られたＭＦＩであり（１００％ｈＳＩＰＲα結合阻害）；ならびにＭＦＩ＿ｗｈＳＩＲＰαはｈＳＩＲＰαありだが、抗体とのプレインキュベーションなしでのＭＦＩである（０％ＳＩＲＰα結合阻害）。阻害パーセントを抗体濃度に対してプロットし、ＩＣ５０値をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアの非線形回帰分析モデルを使用することにより計算した。
【０１３４】
図３および下記表７で提示される結果から、６つの選択された候補（番号１４、１５、１９、２０、２２および３３）は、Ｒａｊｉ細胞上に発現されたｈＣＤ４７上でのｈＳＩＲＰαの結合を強く阻害し、ＩＣ５０値は、０．０２１〜０．３６９μｇ／ｍＬ（０．１４〜２．４６ｎＭ）の範囲であったことが示される。６つの抗ＣＤ４７候補はキメラＢ６Ｈ１２およびキメラ５Ｆ９抗体、ならびにヒト化５Ｆ９およびＡＢ０６．１２抗体と同様か、またはこれらより優れていた。
【０１３５】
【表７】
2019508030.tif 000009
【０１３６】
７．ヒトマクロファージによるＲａｊｉ細胞の食作用
ＣＤ４７は、マクロファージなどの食作用活性を有する細胞上で発現されるＳＩＲＰαと相互作用することによる、ＣＤ４７発現細胞の食作用を防止する「私を食べないで」シグナルとして考えられる。最良候補のマクロファージによる腫瘍細胞の食作用を増加させる能力を評価するために、ヒトＢリンパ腫Ｒａｊｉ細胞に最初に５（６）−カルボキシフルオレセインＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ、２．５μＭ、Ａｂｃａｍ）をロードし、その後、異なる希釈の抗ＣＤ４７抗体またはコントロール抗体（ｍＩｇＧ１型）と共にインキュベートした。細胞をその後、洗浄し、ヒト末梢血単球から前に区別された付着マクロファージの存在下で２４−ウェルプレートに、１０μｇ／ｍＬのＭ−ＣＳＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）の存在下で９日間置いた。＋３７℃での４時間のインキュベーション後、細胞混合物を冷ＰＢＳでしっかり洗浄し、付着マクロファージをＰＦＡで固定した。固定細胞を、ＨＢ０５０ランプが取り付けられたＡｘｉｏｖｅｒｔ  ４０ＦＬ蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ）下で調査した。緑色蛍光（Ｒａｊｉ細胞）および明視野（マクロファージ）の写真をデジタルＡｘｉｏＣａｍカメラでモニタし、Ｒａｊｉ細胞（緑色蛍光）およびマクロファージの数をＺＥＮライト画像解析ソフトウェアを用いて視野毎にカウントした。食作用係数をその後、１００マクロファージあたり摂取されるＲａｊｉ細胞の数として計算した。
【０１３７】
図４および下記表８で提示される結果により、８つの選択された候補（番号７、１４、１５、１９、２０、２２、２６および３３）は、ヒトマクロファージによるＲａｊｉ細胞の食作用を増強したことが示される。準最適濃度（０．１２５μｇ／ｍＬ）では、候補は、Ｂ６Ｈ１２および５Ａ３Ｍ３抗体より優れており、２Ａ１およびＶｘＰ０３７−０１ＬＣ１抗体と同様であった。
【０１３８】
【表８】
2019508030.tif 000010
【０１３９】
８．赤血球凝集アッセイ
８つの予め選択した候補を、ヒト赤血球（ＲＢＣ）の凝集を誘導するそれらの能力について試験し、ベンチマーク抗体と比較した。
【０１４０】
最初の一連の実験では、ヒト末梢血から精製したＲＢＣを、段階希釈の抗ＣＤ４７抗体またはコントロール抗体と共に１時間の間３７℃でＵ−底９６プレートにおいてインキュベートした。インキュベーション後、ＲＢＣ凝集の証拠は、非凝集ＲＢＣの点状赤色ペレットとは対照的な濁りの出現により証明された。ＲＢＣペレットの面積を測定し、血球凝集指数を、本質的にＷＯ２０１４／１２３５８０号に記載されるように、異なる抗体濃度でのＲＢＣの面積対抗体なしのＲＢＣの面積の比率により計算した。血球凝集指数を、図５に示されるように、抗体濃度に対してプロットした。候補１４および１５、およびより程度は低いが候補２６は、精製ＲＢＣの強い凝集を誘導することが見出された。注目すべきことに、これら３つの抗体は同じクローンファミリーに属し、ｍＣＤ４７と交差反応する。対照的に、候補１９、２０および３３は、０．０１ｎＭ〜２４０ｎＭ（約１．５ｎｇ／ｍＬ〜３６μｇ／ｍＬ）の範囲の濃度で試験した場合、２Ａ１抗体でも観察されるように、精製ＲＢＣの凝集を誘導しなかった。候補７および２２は、抗体ＶｘＰ０３７−０１ＬＣ１およびＢ６Ｈ１２でも観察されるように、濃度の狭いウィンドウで弱凝集を誘導することが見出された。抗体５Ａ３Ｍ３は高濃度でのみ精製ＲＢＣの凝集を誘導した。
【０１４１】
第２の組の実験では、８つの選択された候補を、ヒトＲＢＣの凝集を誘導するそれらの能力について、本質的にＷＯ２０１４／０８７２４８号に記載されるように、全末梢血由来の未精製ＲＢＣを使用することにより試験した。この目的を達成するために、ヒト末梢血（１／５最終希釈）を段階希釈の抗ＣＤ４７抗体またはコントロール抗体と共に一晩３７℃で平底９６−ウェルプレートにてインキュベートした。インキュベーション後、プレートを穏やかにかくはんさせ、約３０°で傾かせ、１０分間放置させた。ＲＢＣ凝集の証拠が、ウェルの下縁付近の底の、三日月形の形態の塊状堆積物の出現により証明された。異なる型の抗ＣＤ４７候補を試験し、ベンチマーク抗体と比較した。ｍＩｇＧ１またはｈＩｇＧ１キメラ型の候補２０は、２Ａ１およびＡＢ０６．１２（ヒト化２Ａ１）抗体についても観察されるように、０．０２３〜５０μｇ／ｍＬ（約０．１５〜３３０ｎＭ）の試験した濃度の範囲において、ＲＢＣ凝集を誘導しなかった。候補２０およびＡＢ０６．１２抗体（ｈＩｇＧ４型）の両方に対し、弱いＲＢＣ凝集が、１６μｇ／ｍＬより高い濃度について観察された。対照的に、キメラ５Ｆ９（ｃ５Ｆ９）およびヒト化５Ｆ９（ｈｕ５Ｆ９、ｖｈ２／ｖｌ２バリアント）は、ｈＩｇＧ１およびｈＩｇＧ４型の両方で試験した場合、より強い凝集を誘導した。キメラＢ６Ｈ１２はｈＩｇＧ１型ではＲＢＣ凝集を誘導したが、ｈＩｇＧ４アイソタイプではより弱かった。
【０１４２】
全血を用いたこのアッセイでは、候補１９、２２および３３は、５μｇ／ｍＬより高い濃度でＲＢＣ凝集を誘導することが見出された。この観察結果は試験された型（ｍＩｇＧまたはキメラｈＩｇＧ）とは独立していた。最後に、候補１４および１５、およびより程度は低いが候補７および２６は未精製ＲＢＣの強い凝集を誘導した。
【０１４３】
ＲＢＣ凝集アッセイデータが、下記表９においてまとめて示される。
【０１４４】
【表９】
2019508030.tif 000011
【０１４５】
９．最良マウス抗ＣＤ４７候補の親和性
マウス抗ＣＤ４７候補の速度定数（Ｋｏｎ  ＆  Ｋｏｆｆ）および解離定数（ＫＤ）を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によりＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上で６Ｈｉｓ−タグでタグ付けしたヒトＣＤ４７細胞外ドメインの可溶性調製物を使用してさらに測定し（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６０）（ｈＣＤ４７−ｈｉｓタンパク質）、ベンチマークと比較した。簡単に言うと、抗体とｈＣＤ４７−ｈｉｓ間の結合親和性をＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００機器のシングルサイクルカイネティクスプロトコルを＋２０℃で使用して測定した。抗ヒトまたは抗マウスＩｇＧ（Ｆｃ）を最初にＳｅｒｉｅ  ＳセンサチップＣＭ５の表面上に、ヒトまたはマウス抗体捕捉およびアミンカップリングキットを用いて、製造者の指示に従い（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）固定化した。これにより、表面上に固定化されたおよそ１０，０００の応答ユニット（ＲＵ）が得られた。試験されるマウス、キメラ化またはヒト化抗体をその後、対照として使用されるフローセル１を除く全てのフローセルにおいて、約３００ＲＵが表面上に捕捉されるように調整された濃度および接触時間で、適切な抗マウスまたは抗ヒトＩｇＧ表面上に捕捉させた。結合動力学を、増加する濃度のｈＣＤ４７−ｈｉｓを一連の５回の１０分注入で全てのフローセルを通して３０μＬ／分の速度で通過させることにより研究した。３倍希釈を２７０ｎＭの最大濃度まで使用した。最終注入後、バッファーを、各フローセルに６０分（マウス）または３０分（ヒト）間通過させ、結合抗原の解離をモニタした。結合表面の再生を、サイクルの終わりに３Ｍ  ＭｇＣｌ２を６０秒間２０μＬ／分で、続いて１０ｍＭグリシン−ＨＣｌ、ｐＨ１．７を１８０秒間１０μｌ／分（ヒト）で、または１０ｍＭグリシン−ＨＣｌ、ｐｈ１．７を３６０秒間１０μｌ／分（マウス）で流すことにより実施した。同じ抗体であるが抗原を含まない第２のサイクルを対照として実施した。動力学結合定数をセンソグラムデータのＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００評価ソフトウェアにより提供される１：１結合モデルへの非線形フィッティングにより推定した。結果を下記表１０に示す。全ての候補が、候補２２を除き、ｎＭ範囲の親和性を示し、ＫＤは０．９〜４．２ｎＭであったが、候補２２はより弱い親和性を示し、ＫＤは１５．７ｎＭであった。図６に示されるように、候補３３を除く全ての予め選択した候補は、Ｂ６Ｈ１２、２Ａ１およびＶｘＰ０３７−０１ＬＣ１抗体とは、より迅速な解離動力学を示すことにより異なっており、Ｋｏｆｆ値は、Ｂ６Ｈ１２、２Ａ１およびＶｘＰ０３７−０１ＬＣ１では５．０〜８．９×１０−５ｓ−１であるのと比べて、３．４×１０−３〜１．８×１０−４ｓ−１の範囲であった。
【０１４６】
【表１０】
2019508030.tif 000012
【０１４７】
１０．それらのＫｏｆｆ値に従う、ヒトＲＢＣまたは腫瘍細胞への結合後の抗ＣＤ４７抗体の遊離、および抗ＣＤ４７抗体による腫瘍細胞の食作用
ＣＤ４７は循環血液細胞、特にＲＢＣ上で発現され、腫瘍細胞などの標的細胞で使用可能な遊離抗体の量を低下させることにより、治療用抗ＣＤ４７抗体の薬物動態および効力に著しく影響する可能性がある、重要なシンク効果源を表す。その上、抗ＣＤ４７抗体のＲＢＣへの重要な長期の結合は、貧血などの毒性のリスクもまた増加させ得る。抗体のその抗原からの結合対遊離の動力学は、大部分はその会合および解離の動力学に依存し、それらは、それぞれ、ＫｏｎおよびＫｏｆｆ値を測定することにより、例えばこの発明の抗ＣＤ４７抗体のために実施されるＳＰＲにより定量化することができる。ＲＢＣへの結合後のそれらの遊離に対する抗ＣＤ４７抗体の解離動力学の影響をインビトロで評価するために、精製ヒトＲＢＣを１μｇ／ｍＬのマウス抗ＣＤ４７候補１４、１９、２０または２２と共に、あるいは１μｇ／ｍＬのマウス抗ＣＤ４７抗体２Ａ１またはＢ６Ｈ１２と共にインキュベートした。これらの抗ＣＤ４７候補は１×１０−４ｓ−１より優れた、または候補１４についてはさらに１×１０−３ｓ−１より優れたＫｏｆｆ値を有したために選択した（表１０を参照されたい）。反対に、抗ＣＤ４７  ２Ａ１およびＢ６Ｈ１２ベンチマークのＫｏｆｆ値は１×１０−４ｓ−１より劣っていた（表１０）。抗体との＋４℃での３０分のインキュベーション後、ＲＢＣを洗浄し、抗体を含まないＰＢＳ／ＢＳＡ／ＥＤＴＡバッファー中に再懸濁させ、＋３７℃で６時間または２４時間の間インキュベートした。異なるインキュベーション時間で、ＲＢＣをＰＢＳ／ＢＳＡ／ＥＤＴＡバッファー中で洗浄し、ＰＥ−コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧと共に＋４℃でインキュベートした。ＲＢＣ上のマウス抗ＣＤ４７抗体の結合をフローサイトメトリーによりさらに分析した。各抗体について、６時間（Ｔ＋６ｈ）または２４時間（Ｔ＋２４ｈ）後の生ＲＢＣ上でのゲーティングにより得られた平均蛍光強度（ＭＦＩ）を記録し、＋３７℃でインキュベーション期間直前（Ｔ０）に分析したＲＢＣ上で得られたＭＦＩと比較した。結果を、インキュベーション工程前にＴ０で記録されたＭＦＩと比較して、＋３７℃でのＴ＋６ｈまたはＴ＋２４ｈインキュベーション後に記録されたＭＦＩの減少のパーセンテージとして表した。
【０１４８】
図２０に示されるように、候補１４、１９、２０および２２で染色されたＲＢＣのＭＦＩは６時間後にすでに著しく低減され、＋３７℃での２４時間のインキュベーション後にさらにいっそう強く低減された。これらの結果から、候補１４、１９、２０および２２は、膜発現ＣＤ４７抗原に結合した後に、ＲＢＣから漸進的に脱離したことが示された。対照的に、＋３７℃での６または２４時間のインキュベーション後、抗体２Ａ１またはＢ６Ｈ１２で染色されたＲＢＣのＭＦＩは改変されず、または弱くしか改変されず、抗体２Ａ１およびＢ６Ｈ１２はＲＢＣ上に強く固着され、細胞外媒質中で遊離されなかった、またはゆっくりとしか遊離されなかったことが示される。
【０１４９】
注目すべきことに、ある一定の抗体（候補１４および２２、抗体Ｂ６Ｈ１２）で凝集が観察されたが、これはフローサイトメトリーによる単一ＲＢＣの分析に強くは影響しなかった。
【０１５０】
これらの結果により、１×１０−４ｓ−１より優れた高いＫｏｆｆ値を有する解離動力学を共有する候補１４、１９、２０および２２などの抗ＣＤ４７抗体は、ＲＢＣからより迅速に遊離され、標的細胞に到達することが示唆される。よって、候補１４、１９、２０および２２などの抗ＣＤ４７抗体は、１×１０−４ｓ−１より劣るＫｏｆｆ値を有する、２Ａ１またはＢ６Ｈ１２などの遅い解離動力学を有する抗体と比べて、標的腫瘍細胞上に発現されたＣＤ４７に到達するのにより有効となる。
【０１５１】
反対に、細胞発現ＣＤ４７からの高い解離速度を有する抗体は、より遅い解離速度を有する抗体よりも腫瘍細胞食作用を増強させるのにより効率でない可能性がある。この点に対処するために、以上、ＲＢＣ上で実施された結合／遊離実験と同様の実験を実施し、腫瘍細胞による抗ＣＤ４７抗体のインビトロ遊離および腫瘍細胞食作用に対するその効果を測定した。この目的を達成するために、ヒトＲａｊｉリンパ腫細胞をマウス抗ＣＤ４７候補１４、１９、２０または２２と共に、あるいはマウス抗ＣＤ４７抗体Ｂ６Ｈ１２または２Ａ１と共に、１μｇ／ｍＬで３０分間＋４℃でインキュベートし、その後、洗浄し、再び抗体を含まない培地中で２４時間、＋３７℃でインキュベートした。細胞をその後、２４時間のインキュベーション時間（Ｔ＋２４ｈ）後に収集し、ＰＢＳ中で洗浄し、４％ＰＦＡで固定した。染色の陽性対照として、細胞はまた、２４時間の間インキュベートする直前に（時間Ｔ０）４％ＰＦＡで固定した。最後のインキュベーション時間後、固定した細胞をＰＥ−コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ抗体により染色し、フローサイトメトリーにより分析した。各抗体について、２４時間（Ｔ＋２４ｈ）のインキュベーション後に得られた平均蛍光強度（ＭＦＩ）を記録し、＋３７℃でインキュベーション期間直前に（Ｔ０）分析したＲａｊｉ細胞上で得られたＭＦＩと比較した。結果を、インキュベーション工程前のＴ０で記録されたＭＦＩと比較した、＋３７℃でＴ＋２４ｈインキュベーション後に記録された細胞のＭＦＩの減少のパーセンテージとして表した。
【０１５２】
図２１Ａに示されるように、候補１４のＭＦＩの重要な減少は、３７℃でのＲａｊｉ細胞の２４時間インキュベーション後にすでに観察され、一方、より弱い減少が候補１９、２０および２２で、ならびに抗体２Ａ１で観察されたが、Ｂ６Ｈ１２では観察されなかった。これらの結果から、非常に迅速な解離反応速度を有する抗ＣＤ４７抗体、例えば１×１０−３ｓ−１より優れたＫｏｆｆ値を有する候補１４はＲａｊｉ腫瘍細胞からより迅速にかつより強く脱離し、よって、より遅い解離速度を有する抗ＣＤ４７抗体、例えば１×１０−３ｓ−１より劣るＫｏｆｆ値を有する候補１９、２０および２２よりも、腫瘍細胞食作用を増強させるのにより効率でない可能性があることが示される。
【０１５３】
この点に対処するために、Ｒａｊｉ細胞をＣＦＳＥ色素で最初に標識し、その後、抗ＣＤ４７抗体で０．１または１μｇ／ｍＬにて３０分間、＋４℃で染色した。Ｒａｊｉ細胞を以上で記載される通り、その後、洗浄し、２４時間の間＋３７℃で、抗体を含まない培地中でインキュベートした。２４時間のインキュベーション期間（Ｔ＋２４ｈ）後、Ｒａｊｉ細胞を、本質的にＴｓｅｎｇら（Ｔｓｅｎｇ  Ｄ．，Ｖｏｌｋｍｅｒ  Ｊ−Ｐ．，Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ  Ｓ．Ｂ．，Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ−Ｔｒｕｊｉｌｌｏ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．“Ａｎｔｉ−ＣＤ４７  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｂｙ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｐｒｉｍｅｓ  ａｎ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ”，ＰＮＡＳ  １１０（２７）：１１１０３−０８（２０１３））により記載されるように、ｈＭＤＭを用いる食作用アッセイにおいてフローサイトメトリー食作用アッセイを使用することにより試験した。抗ＣＤ４７抗体により染色する前にＣＦＳＥ色素で前に染色した、標的Ｒａｊｉ腫瘍細胞を、Ｆａｒ−Ｒｅｄ色素で前に標識したｈＭＤＭと共にインキュベートした。３７℃で６０分のインキュベーション後に、細胞を収集し、フローサイトメトリーにより分析し、ＣＦＳＥおよびＦａｒ−Ｒｅｄ蛍光をモニタした。ＣＦＳＥおよびＦａｒ−Ｒｅｄによる二重染色を示した細胞の集団はマクロファージにより貪食された標的腫瘍細胞に対応した。食作用の陽性対照（時間Ｔ０）として、同じ実験をＦａｒ−Ｒｅｄで標識し、異なる抗ＣＤ４７抗体で０．１または１μｇ／ｍＬで上記のように染色したＣＦＳＥ−標識Ｒａｊｉ細胞と共にインキュベートした、ｈＭＤＭの同じ調製物を用いて実施したが、Ｒａｊｉ細胞は２４時間の間＋３７℃でインキュベートしなかった。これは抗体を含まない培地中でのインキュベーション前の参照の時間Ｔ０に対応した。貪食された細胞のパーセンテージを、各条件におけるＣＦＳＥおよびＦａｒ−Ｒｅｄにより二重染色された細胞のパーセンテージから計算した。各抗体に特異的な食作用のパーセンテージを、同じ条件で無関係の抗体で処理したＲａｊｉ細胞を用いて得られた食作用のパーセンテージを減算することにより計算した。結果を最終的に、下記式を適用することにより、各試験抗体についてＴ０で測定された特異的食作用と比較して、Ｔ＋２４ｈで得られた特異的食作用の減少のパーセンテージとして表した：％減少食作用＝（１−（Ｔ＋２４ｈでの抗体Ａによる特異的食作用の％／Ｔ０での抗体Ａによる特異的食作用の％））×１００。
【０１５４】
図２１Ｂに示されるように、食作用の非常に強い減少が抗ＣＤ４７候補１４で染色したＲａｊｉ細胞について観察され、これについては、１μｇ／ｍＬの候補１４による染色後に食作用の約６０％減少が観察され、０．１μｇ／ｍＬで染色したＲａｊｉ細胞では、さらに１００％までの減少が観察された。対照的に、候補１９、２０および２２で染色したＲａｊｉ細胞では、ベンチマーク２Ａ１およびＢ６Ｈ１２についてのように、食作用の弱い減少のみが観察された。
【０１５５】
全体としては、これらの結果から、１×１０−３ｓ−１より優れたＫｏｆｆ値により特徴付けられる高い解離速度を有する抗ＣＤ４７抗体（例えば候補１４）は強くかつ迅速にＲＢＣから脱離するが、また、迅速に腫瘍細胞上でのそれらの機能的活性のほとんどを失い、すなわち腫瘍細胞食作用の増強となることが示される。よって、そのような抗体はより低いシンク／副作用を有することができるが、より弱い抗腫瘍効力を持つことにもなり得る。反対に、１×１０−４ｓ−１より劣るＫｏｆｆ値により特徴付けられる非常に遅い解離速度を有する抗ＣＤ４７抗体（例えば２Ａ１およびＢ６Ｈ１２）は、腫瘍細胞からよりゆっくり脱離するが、ＲＢＣ上に固着されたままであり、よって、重要なシンク効果およびおそらくより多くの副作用を有し得る。よって、１×１０−４〜１×１０−３ｓ−１の間で含まれるＫｏｆｆ値により特徴付けられる中間解離動力学を有する抗ＣＤ４７抗体（例えば候補１９、２０または２２）が最適ＣＤ４７結合／遊離平衡を有し、弱いシンク効果を提供しながら、それらの抗腫瘍効力を維持する。
【０１５６】
１１．Ｊｕｒｋａｔ細胞を用いたアポトーシスアッセイ
試験した８つの候補のなかで、候補１４および１５は、ヒトＪｕｒｋａｔ細胞（Ｔ細胞白血病細胞）の著しいアポトーシスを誘導することが見出され、候補２６も、弱いアポトーシスを誘導した（データ示さず）が、一方、候補２０および２２は、アポトーシスを誘導しなかった。これらのデータにより、抗体のこのファミリーは、ｈＣＤ４７上のエピトープを認識し、それはＣＤ４７結合後にＣＤ４７発現細胞中にシグナル伝達活性を送達したことが示唆される。この型のアゴニスト抗体はインビボでオフターゲット効果を誘導し得る。
【０１５７】
１２．インビトロキャラクタリゼーションの概要
要約すると、３４の抗ＣＤ４７抗体を産生させ、精製し、特異性および機能性についてインビトロで評価した。８つの候補（番号７、１４、１５、１９、２０、２２、２６、３３）を、結合および機能アッセイにおけるそれらの効力に基づき予め選択し（ｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰα相互作用の阻害、食作用の誘導）、その後、それらの親和性およびＲＢＣ凝集活性を測定するアッセイにおいて完全に特徴付けした。
【０１５８】
８つ全ての候補はｈＣＤ４７およびｃｙｎｏＣＤ４７の両方を強く認識し、ｈＣＤ４７に０．９〜１５．７ｎＭの範囲の親和性で結合した。８つ全ての候補は、ｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰα相互作用を強く阻害し、ヒトマクロファージによるＲａｊｉリンパ腫細胞の食作用を誘導することができた。
【０１５９】
同じクローンファミリーに属する３つの抗体（候補１４、１５、２６）はまたｍＣＤ４７と交差反応し、Ｊｕｒｋａｔ腫瘍細胞の著しいアポトーシスを誘導すること、および強いＲＢＣ凝集を誘導することが見出された。これらの候補はインビボで注射されると潜在毒性を誘導し得る。
【０１６０】
候補２０（そのクローンファミリーにおいて独特）は最良プロファイルを有し、強い機能的活性および非常に弱いが検出可能なＲＢＣ凝集を伴い、弱い（あったとしても）潜在毒性が示された。
【０１６１】
候補１９および３３（同じクローンファミリー）、ならびに候補７および２２（それらの個々のクローンファミリーにおいて独特）もまた、強い機能的活性を示し、試験したＩｇＧ型によって、いくらかの、しかしながら許容されるＲＢＣ凝集を伴った。
【０１６２】
１×１０−４〜１×１０−３ｓ−１のＫｏｆｆ値を有する候補１９、２０および２２もまた、ヒトＲＢＣに結合されるとすぐに迅速な遊離を示したが、ヒトマクロファージによる腫瘍細胞の食作用により測定される効率的な機能的活性を維持した。
【０１６３】
ＩＶ．選択したマウス抗ＣＤ４７候補のインビボキャラクタリゼーション
ｈＣＤ４７に特異的な、選択した候補１９、２０および２２をインビボでマウス腫瘍異種移植片モデルにおいて試験した。候補１４および１５もまた、インビボで最初の研究でｍＣＤ４７交差反応抗ＣＤ４７抗体として試験した。
【０１６４】
１．ヒトリンパ腫Ｒａｊｉモデル
抗ＣＤ４７候補１４、１９、２０および２２をヒト非ホジキンリンパ腫異種移植片モデルにおいてＲａｊｉ細胞を生着させた（１５０万細胞を右側腹部に皮下注射）ＮＯＧマウス（ｎ＝８／群）を用いて、インビボで評価した。細胞移植後１０日に、腫瘍は触知でき、抗体療法（１０ｍｇ／ｋｇ／用量、腹腔内注射、週３回を８週まで）を、４つの抗ＣＤ４７候補について、ネガティブコントロール抗体および抗ＣＤ４７ベンチマーク抗体２Ａ１、Ｂ６Ｈ１２およびＶｐＸ０３７−０１ＬＣ１と並行して開始した。全ての抗体はｍＩｇＧ１アイソタイプ型であった。腫瘍成長を２日毎にモニタし、マウスの生存を記録した。４つの候補１４、１９、２０および２２は、Ｒａｊｉ細胞の成長を遅延させ、ベンチマークＢ６Ｈ１２および２Ａ１は同様であったが、マウスＣＤ４７と強く交差反応するＶｘＰ０３７−０１ＬＣ１抗体はそうではなかった（図９Ａ）。図９Ｂに示されるように、候補２０および２２はまた、対照群と比較するとマウスの著しい保護を誘導することが見出され、ベンチマークＢ６Ｈ１２および２Ａ１は同様であったが、ＶｘＰ０３７−０１ＬＣ１はそうではなかった。
【０１６５】
これらの結果から、試験した４つの候補（候補１４、１９、２０および２２）は、参照抗ＣＤ４７抗体、例えばＢ６Ｈ１２について前に報告されたように、免疫低下マウスにおいてヒトＮＨＬＲａｊｉ腫瘍細胞の成長を制御することができたことが示された。候補２０および２２は、マウスの生存を延長させることについて候補１４および１９よりも強力であると考えられた。
【０１６６】
２．ヒトＡ２７８０卵巣異種移植片モデル
抗ＣＤ４７候補２０を、インビボでヒトＡ２７８０卵巣異種移植片モデルにおいて、単独でまたは抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブ（アービタックス（登録商標））または抗Ｈｅｒ２抗体トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））との併用でさらに評価した。Ａ２７８０細胞は、候補２０の結合により検出されるようにＣＤ４７を、ならびにハーセプチン（登録商標）の結合により検出されるように（データ示さず）Ｈｅｒ２を強く発現した。対照的に、Ａ２７８０細胞は、アービタックス（登録商標）による染色により測定されるように（データ示さず）、低レベルのＥＧＦＲしかインビトロで発現しなかった。ＮＯＧマウス（ｎ＝４／群）に、ルシフェラーゼがトランスフェクトされたＡ２７８０（Ａ２７８０／Ｌｕｃ）細胞を生着させた（１０００万細胞が腹腔内注射された）。細胞移植後１日に、抗体療法（１０ｍｇ／ｋｇ／用量、腹腔内注射、週３回５週まで）を、抗ＣＤ４７候補２０を単独で、またはハーセプチン（登録商標）またはアービタックス（登録商標）と併用して開始した。
【０１６７】
バイオルミネセンス強度（ＢＬＩ）を５日毎に腹這い位および背臥位の両方からモニタした。図１０に提示される結果は、抗ＣＤ４７候補２０単独による治療はＡ２７８０腫瘍細胞の成長を遅延させたことを示した。腫瘍成長の遅延は、ハーセプチン（登録商標）単独でも観察されたが、アービタックス（登録商標）単独では観察されなかった。さらに、抗ＣＤ４７候補２０のハーセプチン（登録商標）またはアービタックス（登録商標）との併用もまた、Ａ２７８０細胞の成長を遅延させた。
【０１６８】
これらの結果により、候補２０は、単剤として使用されると、Ａ２７８０卵巣腫瘍細胞の成長をＮＯＧ免疫低下マウスにおいてインビボで制御することができ、抗Ｈｅｒ−２抗体（ハーセプチン（登録商標））または抗ＥＧＦＲ抗体（アービタックス（登録商標））との併用で協同的活性を示すことができることが示唆される。
【０１６９】
３．ヒトＡ５４９肺異種移植片モデル
抗ＣＤ４７候補２０はまた、ヒトＡ５４９肺腺癌異種移植片モデルにおいて（Ｓｔｅｉｎｅｒ  Ｐ．，Ｊｏｙｎｅｓ  Ｃ．，Ｂａｓｓｉ  Ｒ．，Ｗａｎｇ  Ｓ．，Ｔｏｎｒａ  Ｊ．Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．“Ｔｕｍｏｒ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ｎｏｎ−Ｓｍａｌｌ  Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  Ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ  ａｎｄ  Ｍｕｔａｔｅｄ  Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ”，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １３（５）：１５４２−５１（  ２００７）；Ｋｅｌｌａｒ  Ａ．，Ｅｇａｎ  Ｃ．，ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓ  Ｄ．“Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｆｏｒ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，ＢｉｏＭｅｄ  Ｒｅｓ  Ｉｎｔ  ２０１５，ＩＤ  ６２１３２４（２０１５））単独で、または抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブ（アービタックス（登録商標））または抗Ｈｅｒ２抗体トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））との併用で、インビボで評価した。インビトロでは、Ａ５４９細胞（ＡＴＣＣ−ＣＣＬ−１８５）は候補２０の結合により検出されるＣＤ４７、ならびにアービタックス（登録商標）による染色により測定されるＥＧＦＲ、および、より弱い強度で、ハーセプチン（登録商標）を用いてフローサイトメトリー（データ示さず）により検出されるＨｅｒ２を強く発現した。ＮＯＧマウス（ｎ＝４／群）にＡ５４９細胞を生着させた（１０００万細胞皮下注射）。細胞移植後１０日に、腫瘍が触知できるとすぐに（体積＞３０ｍｍ３）、抗体療法（１０ｍｇ／ｋｇ／用量、腹腔内注射、週３回１０週まで）を、抗ＣＤ４７候補２０について、単独で、またはハーセプチン（登録商標）またはアービタックス（登録商標）との併用で開始した。
【０１７０】
図１１に示されるように、抗ＣＤ４７候補２０単独、ならびにアービタックス（登録商標）およびハーセプチン（登録商標）は、ビヒクル群と比べて、腫瘍体積の測定により定量化されるＡ５４９腫瘍細胞の成長を遅延させることができ（図１１Ａ）、かつ、マウスを著しく保護することができた（図１１Ｂ）。抗ＣＤ４７候補２０のハーセプチン（登録商標）との併用により、Ａ５４９腫瘍細胞成長のより重要な遅延（図１１Ａ）および生存分析におけるマウスのより強い保護が得られた（図１１Ｂ）。
【０１７１】
これらの結果により、抗ＣＤ４７候補２０は、単剤として使用されるとまたはハーセプチン（登録商標）との併用で、Ａ５４９肺腺癌の成長をＮＯＧマウスにおいてインビボで遅延させることができたことが示唆される。
【０１７２】
Ｖ．抗ＣＤ４７候補２０のヒト化
１．ヒト化抗ＣＤ４７候補２０
マウス候補２０をヒト化のための第１のリードとして選択した。５つのＶＨおよび５つのＶＬバリアントをヒトアクセプターフレームワーク中へのＣＤＲグラフトにより作製した。配列を、インシリコアルゴリズムを用いたＭＨＣクラスＩＩ高親和性を有する潜在的Ｔ−細胞エピトープの除去について、ならびに、Ｆｖグリコシル化および脱アミドなどの翻訳後修飾の存在について分析した。候補２０のマウスＶＨ配列の配列（ＶＨ０）と共に整列させた５つのＶＨバリアント（ＶＨ１〜ＶＨ５）のアミノ酸配列を図７に提示する。候補２０のマウスＶＬ配列の配列（ＶＬ０）と共に整列させた５つのＶＬバリアント（ＶＬ１〜ＶＬ５）のアミノ酸配列を図８に提示する。
【０１７３】
ｈＩｇＧ４／κヒト化バリアントを作製するために、５つのヒト化ＶＨバリアントをヒトＦｃγ４−Ｓ２２８Ｐバックボーン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６２）を含む発現ベクターにクローン化し、５つのヒト化ＶＬバリアントをヒトκバックボーン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６）を含む発現ベクターにクローン化した。突然変異Ｓ２２８Ｐを全てのｈＩｇＧ４抗体のＦｃ断片に導入し、ｈＩｇＧ４で観察された潜在的鎖交換を回避した（Ａｎｇａｌ  Ｓ．，Ｋｉｎｇ  Ｄ．Ｊ．，Ｂｏｄｍｅｒ  Ｍ．Ｗ．，Ｔｕｒｎｅｒ  Ａ．，Ｌａｗｓｏｎ  Ａ．Ｄ．，Ｒｏｂｅｒｔｓ  Ｇ．，Ｐｅｄｌｅｙ  Ｄ．，ａｎｄ  Ａｄａｉｒ  Ｊ．Ｒ．“Ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ａｂｏｌｉｓｈｅｓ  ｔｈｅ  ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ  ｏｆ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｍｏｕｓｅ／ｈｕｍａｎ（ＩｇＧ４）ａｎｔｉｂｏｄｙ”，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３０（１）：１０５−８（１９９３））。２５のｈＩｇＧ４／κバリアントを５つのＶＨのうちの１つおよび５つのＶＬベクターのうちの１つでコトランスフェクトされたＣＨＯ細胞から、産生させ、精製させた。得られた抗体をｈ２０−ＶＨｘ−ＶＬｘと命名し、ここで、ｈ２０はヒト化候補２０を指定し、ＶＨｘはヒト化ＶＨバリアントｘを有する重鎖可変ドメインを指定し（ＶＨ１〜ＶＨ５）、Ｌｘはヒト化ＶＬバリアントｘを有する軽鎖可変ドメインを指定した（ＶＬ１〜ＶＬ５）。２５の精製抗体を、ヒトＲａｊｉリンパ腫細胞および、ｈＣＤ４７またはｍＣＤ４７でトランスフェクトされた、またはされていないＣＨＯ細胞上でのそれらの結合活性および特異性について、Ｒａｊｉ細胞上でのｈＳＩＲＰαの結合の阻害におけるそれらの機能的活性について、および全血凝集アッセイにおいてヒトＲＢＣ凝集を誘導するそれらの能力について試験した。動力学（ＫｏｎおよびＫｏｆｆ）および親和性（ＫＤ）定数もまた、Ｂｉａｃｏｒｅ上でのＳＰＲにより測定した。全てのアッセイにおいて、２５のヒト化バリアントを、マウスＶＨ０およびＶＬ０配列のヒトＦｃγ４−Ｓ２２８Ｐおよびヒトκバックボーンを含む適切なベクターへのクローニングにより作製したｈＩｇＧ４キメラ候補２０と比較した。
【０１７４】
異なるアッセイにおいて得られた全ての結果が、下記表１２および表１３においてまとめて示される。
【０１７５】
【表１１】
2019508030.tif 000013
【０１７６】
【表１２】
2019508030.tif 000014
【０１７７】
ＶＨ１およびＶＨ５配列を有する全てのヒト化バリアントは他のバリアントよりも、低い、かつ、キメラ候補２０より低い親和性を有した（より高いＫＤ）。他のバリアントは、キメラ候補２０のものと同様のＫｏｎ、ＫｏｆｆおよびＫＤ定数を示した。いずれのバリアントも、キメラ候補２０と比べて、ｈＣＤ４７に対して著しく増加した親和性を示さなかった。全てのヒト化バリアントのＫｏｆｆ値は、５．３×１０−４〜１１．７×１０−４ｓ−１の範囲にあることが観察された。
【０１７８】
２５全てのバリアントはＲａｊｉ細胞上に発現されたＣＤ４７に強く結合し、ＥＣ５０は、キメラ候補２０のＥＣ５０と同様であった。それらはまた、キメラ候補２０のように（図示せず）、ｈＣＤ４７を特異的に認識したが、ＣＨＯ細胞上に発現されたｍＣＤ４７は認識しなかった。
【０１７９】
２５全てのバリアントは、ｈＳＩＲＰαのＲａｊｉ細胞上に発現されたＣＤ４７への結合を強く阻害し、ＩＣ５０は、キメラ候補２０のＩＣ５０と同じ範囲にあった。ＶＨ２配列を有するバリアントは、他のバリアント、ならびにキメラ候補２０よりも低いＩＣ５０を有した。
【０１８０】
試験したｈＩｇＧ４バリアントは全て、キメラｈＩｇＧ４候補２０と同様に、ヒトマクロファージによるＲａｊｉ細胞の食作用を増強することができた。
【０１８１】
ＶＨ１ファミリーのいくつかのバリアント（ｈ２０−ＶＨ１−ＶＬ１、ｈ２０−ＶＨ１−ＶＬ２、ｈ２０−ＶＨ１−ＶＬ３、ｈ２０−ＶＨ１−ＶＬ５）、バリアントｈ２０−ＶＨ２−ＶＬ１およびバリアントｈ２０−ＶＨ５−ＶＬ２およびｈ２０−ＶＨ５−ＶＬ４は、他のバリアントより、ならびにキメラ候補２０より多くのＲＢＣ凝集を誘導する傾向を示した。
【０１８２】
２．ヒト化抗体の最適化およびリード選択
ヒト化バリアントのＶＨおよびＶＬ配列内の潜在Ｔ細胞エピトープの分析により、５つのＶＬバリアント（ＶＬ１〜ＶＬ５）のＣＤＲ２ドメイン内の高親和性ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ（ＬＩＹＦＡＳＴＫＥＳＧＶ）の存在が明らかになった。この潜在Ｔ細胞エピトープはまたマウスＶＬ０配列のＣＤＲ２内に存在し、第１のヒト化候補の親和性および／または活性の損失を回避するために、５つの第１のヒト化ＶＬバリアントにおいて除去されなかった。しかしながら、ＶＬ配列の位置５６（Ｆ５６Ｙ）での単一の点変異Ｆ→Ｙ（シグナルペプチドなしでのアミノ酸番号付け）は、この潜在Ｔ細胞エピトープの免疫原性を除去するのに十分であった（ＬＩＹＦＡＳＴＫＥＳＧＶ→ＬＩＹＹＡＳＴＫＥＳＧＶ）。よって、Ｆ５６Ｙ突然変異は、ヒト化ＶＬ１〜ＶＬ５配列に導入された。これらの新規配列は、ＶＬ１−Ｆ５６Ｙ〜ＶＬ５−Ｆ５６Ｙと指定し、ＶＨ１〜ＶＨ５バリアントの１つをＶＬ１−Ｆ５６Ｙ〜ＶＬ５−Ｆ５６Ｙバリアントの１つと組み合わせることにより生成させた対応するヒト化抗体は、ｈ２０−Ｈｘ−ＬｘＹと指定した。５つのヒト化バリアント（候補２０．２６（ｈ２０−Ｈ２−Ｌ５Ｙ）、２０．２７（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ２Ｙ）、２０．２８（ｈ２０−Ｈ３−Ｌ３Ｙ）、２０．２９（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ４Ｙ）、２０．３０（ｈ２０−Ｈ４−Ｌ５Ｙ））を選択し、ｈＩｇＧ４タンパク質を安定化させることが知られているＳ２２８Ｐ突然変異を含むヒトＩｇＧ４型で生成させた（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６２）（Ａｎｇａｌ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９３）。精製抗体を、Ｒａｊｉ細胞上のｈＣＤ４７へのそれらの結合活性について、Ｒａｊｉ細胞上でのｈＣＤ４７／ｈＳＩＲＰα相互作用を阻害するそれらの効力について、および全血を使用したそれらのヒトＲＢＣ凝集活性について、インビトロでさらに特徴付けた。５つのヒト化Ｈｘ−ＬｘＹバリアントはまた、ｈＩｇＧ４−Ｓ２２８Ｐ型で生成させたキメラ候補２０と、ならびにｈＩｇＧ４−Ｓ２２８Ｐにクローン化させたＡＢ０６．１２およびＨｕ５Ｆ９ヒト化抗体と比較した。
【０１８３】
図１２および１３に示されるように、５つのＦ５６Ｙ−変異バリアントは、それらの非変異対応物と同様の効率で、キメラ候補２０と同様に、Ｒａｊｉ細胞に結合し（図１２）、ｈＳＩＲＰαのＲａｊｉ細胞への結合を阻害した（図１３）。５つのＦ５６Ｙ−変異ヒト化バリアントは全血アッセイにおいて、キメラ候補２０よりわずかに高いＲＢＣ凝集活性を有したが、依然として、Ｈｕ５Ｆ９ベンチマークよりも低かった（表１４）。
【０１８４】
最後に、候補２０の５つのＦ５６Ｙ−変異ヒト化バリアントは、ＡＢ０６．１２およびＨｕ５Ｆ９抗体と同様に、Ｒａｊｉ細胞上のｈＣＤ４７の強い認識およびＲａｊｉ細胞上のｈＣＤ４７へのｈＳＩＲＰα結合の強い阻害を示すことが見出された（図１４）。下記表１４は異なるアッセイにおいて得られた結果の概要を示す。
【０１８５】
【表１３】
2019508030.tif 000015
【０１８６】
５つの新規ヒト化ｈ２０−Ｈｘ−ＬｘＹバリアントの動力学（ＫｏｎおよびＫｏｆｆ）および親和性（ＫＤ）定数をＢｉａｃｏｒｅ上のＳＰＲにより決定した。表１５の結果により、ＶＬ  ＣＤＲ２−Ｆ５６Ｙ突然変異を有する５つのヒト化バリアントは、候補２０と同様に、かつＶＬ  ＣＤＲ２−Ｆ５６Ｙ突然変異を有さない対応するヒト化バリアントと同様に、２．０〜２．８ｎＭの親和性を保存したことが示される（表１５）。
【０１８７】
【表１４】
2019508030.tif 000016
【０１８８】
ＶＬ  ＣＤＲ２−Ｆ５６Ｙ突然変異を有する５つのヒト化バリアントもまた、マウスおよび候補２０について観察されるように、迅速な解離反応速度を保存し、Ｋｏｆｆ値は５．７３×１０−４〜７．６１×１０−４ｓ−１の範囲であった（表１３および１５）。
【０１８９】
３．抗ＣＤ４７候補２２のヒト化
マウス候補２２もまた、ヒト化のために選択した。４つのＶＨおよび４つのＶＬバリアントを、本質的にマウス候補２０について記載されるように、ヒトアクセプターフレームワーク中へのＣＤＲグラフトにより作製した。配列を、インシリコアルゴリズムを用いたＭＨＣクラスＩＩ高親和性を有する潜在的Ｔ−細胞エピトープの除去について、ならびにＦｖグリコシル化および脱アミドなどの翻訳後修飾の存在について分析した。
【０１９０】
ｈＩｇＧ４／κヒト化バリアントを作製するために、２つのヒト化ＶＨバリアントｈ２２−ＶＨ３およびｈ２２−ＶＨ４をヒトＦｃγ４−Ｓ２２８Ｐバックボーン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６２）を含む発現ベクターにクローン化し、４つのヒト化ｈ２２−ＶＬバリアントをヒトκバックボーン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７６）を含む発現ベクターにクローン化した。ｈＩｇＧ４／κバリアントの８つをｈ２２−ＶＨ３またはｈ２２−ＶＨ４の１つおよび４つのｈ２２−ＶＬベクターの１つでコトランスフェクトされたＣＨＯ細胞から産生させ、精製させた。得られた抗体をｈ２２−ＶＨｘ−ＶＬｘと呼び、ｈ２２はヒト化候補２２を指定し、ＶＨｘはヒト化ＶＨバリアントｘを有する重鎖可変ドメインを指定し（ＶＨ３〜ＶＨ４）、Ｌｘはヒト化ＶＬバリアントｘを有する軽鎖可変ドメインを指定した（ＶＬ１〜ＶＬ４）。８つの精製抗体の動力学（ＫｏｎおよびＫｏｆｆ）および親和性（ＫＤ）定数をＢｉａｃｏｒｅ上のＳＰＲにより測定した。８つの精製抗体はまた、ヒトＲａｊｉリンパ腫細胞上でのそれらの結合活性および特異性について、Ｒａｊｉ細胞上でのｈＳＩＲＰαの結合の阻害におけるそれらの機能的活性について、および全血においてヒトＲＢＣ凝集を誘導するそれらの能力について試験した。全てのアッセイにおいて、８つのヒト化バリアントを、候補２２のマウスＶＨおよびＶＬ配列のヒトＦｃγ４−Ｓ２２８Ｐおよびヒトκバックボーンを含む適切なベクターへのクローニングにより作製したｈＩｇＧ４キメラ候補２２と比較した。ＲＢＣ凝集では、８つのヒト化バリアントはまた、Ｈｕ５Ｆ９抗体と比較した。
【０１９１】
異なるアッセイにおいて得られた全ての結果が、下記表１６および表１７においてまとめて示される。
【０１９２】
【表１５】
2019508030.tif 000017
【表１６】
2019508030.tif 000018
【０１９３】
ｈ２２−ＶＬ１〜ｈ２２−ＶＬ４配列と組み合わせたｈ２２−ＶＨ３またはｈ２２−ＶＨ４配列を有する８つのヒト化バリアントは全て、キメラ候補２２のものと同様のＫｏｎ、ＫｏｆｆおよびＫＤ定数を示した。いずれのバリアントも、キメラ候補２２と比べて、ｈＣＤ４７に対して著しく増加した親和性を示さなかった。候補２２由来のヒト化バリアント全てのＫｏｆｆ値は、２．５×１０−４〜３．８×１０−４ｓ−１の範囲にあることが観察された。
【０１９４】
８つのバリアントは全てＲａｊｉ細胞上に発現されたＣＤ４７に強く結合し、ＥＣ５０はキメラ候補２２のＥＣ５０と同様であった。
【０１９５】
８つのバリアントは全て、ｈＳＩＲＰαのＲａｊｉ細胞上に発現されたＣＤ４７への結合を強く阻害し、ＩＣ５０は、キメラ候補２２のＩＣ５０と同じ範囲内にあった。
【０１９６】
８つのバリアントは全て、キメラ候補２２よりも、わずかに多くのＲＢＣ凝集を誘導する傾向を示した。それらのうち、５つはＨｕ５Ｆ９ベンチマークと同様のＲＢＣ凝集傾向を有した。
【０１９７】
ＶＩ．エピトープマッピング、二量体化＆グリコシル化
１．エピトープマッピング
マウス抗ＣＤ４７候補２０および２２によりｈＣＤ４７抗原上で認識されるエピトープを、ＣｏｖａｌＸにより開発された高分解能法を用いることにより決定した（Ｂｉｃｈ  Ｃ．，Ｓｃｏｔｔ  Ｍ．，Ｐａｎａｇｉｏｔｉｄｉｓ  Ａ．，Ｗｅｎｚｅｌ  Ｒ．Ｊ．，Ｎａｚａｂａｌ  Ａ．，Ｚｅｎｏｂｉ  Ｒ．“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｐｌａｓｍｏｎ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｈｉｈ−ｍａｓｓ  ｍａｔｒｉｘ−ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｌａｓｅｒ  ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｒｔｒｙ”，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ３７５：３５−４５，（２００８））。抗ＣＤ４７抗体を６Ｈｉｓ−タグでタグ付けしたヒトＣＤ４７細胞外ドメイン（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６０）の可溶性調製物と複合体化させた。
【０１９８】
抗ＣＤ４７抗体／ｈＣＤ４７複合体をその後、重水素化架橋剤と共にインキュベートし、多酵素切断に供した。架橋ペプチドの濃縮後、試料を高分解能質量分析（ｎＬＣ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ  ＭＳ）により分析し、生成されたデータをＸＱｕｅｓｔおよびＳｔａｖｒｏｘソフトウェアを用いて解析した。ＭＡＬＤＩ  ＴｏＦ  ＭＳ分析を、標準窒素レーザーを備えたＣｏｖａｌＸ  ＨＭ４相互作用モジュールを使用して、０〜１５００ｋＤａの異なる質量範囲に焦点を合わせて実施した。
【０１９９】
図１５に示されるように、化学架橋分析は、キメラ候補２０により認識されるｈＣＤ４７上のエピトープは不連続であり、アミノ酸残基Ｋ５９、Ｒ６３、Ｙ６６、Ｔ６７、Ｈ１０８、Ｔ１０９、Ｔ１１７およびＴ１２０（ＳＥＱ  ＩＤ１５１）またはｈＣＤ４７（ＳＥＱ  ＩＤ１５１）のアミノ酸残基ｘｘＫ５９ｘｘｘＲ６３ｘｘＹ６６Ｔ６７ｘｘ−−−−−−−−ｘｘＨ１０８Ｔ１０９ｘｘｘｘｘｘｘＴ１１７ｘｘＴ１２０ｘｘから構成されたことを示し、ここで、「ｘ」は任意のアミノ酸残基に対するものである（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１による番号付け）。
【０２００】
同様の分析により、キメラ候補２２により認識されたｈＣＤ４７上のエピトープ（図１６）もまた不連続であり、ｈＣＤ４７のＫ５９、Ｋ６１、Ｓ１０７、Ｈ１０８、Ｔ１１７、Ｔ１２０およびＲ１２１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１）またはｈＣＤ４７（ＳＥＱ  ＩＤ１５１）のアミノ酸残基ｘｘＫ５９ｘＫ６１ｘｘｘｘｘｘ−−−−−−−−−ｘｘｘｘｘｘｘｘＳ１０７Ｈ１０８ｘｘｘｘｘｘｘｘＴ１１７ｘｘＴ１２０Ｒ１２１ｘｘから構成されたことが示され、ここで、「ｘ」は任意のアミノ酸残基に対するものである（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１による番号付け）。
【０２０１】
同じ方法を使用して、ＡＢ０６．１２により認識されたｈＣＤ４７上のエピトープもまた、決定し、候補２０または２２とは異なることを見出した（データ示さず）。
【０２０２】
２．ＣＤ４７の二量体化
可溶性ｈＣＤ４７（細胞外ＩｇＶドメイン）調製物の高質量ＭＡＬＤＩ  ＴｏＦ分析およびＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析は、インビトロで自然に形成されるｈＣＤ４７の単量体、二量体および多量体の存在を示した。候補２０および２２のｈＣＤ４７の二量体を認識する能力をさらに調べるために、抗ＣＤ４７抗体／可溶性ｈＣＤ４７の混合物を、ＣｏｖａｌＸ  Ｋ２００  ＭＡＬＤＩ  ＭＳ分析キットを使用して過剰の抗原と共に架橋に提示した。データから、候補２０はｈＣＤ４７の二量体（６０．８％）および単量体（３９．２％）の両方に結合し得るが、１つの抗体の２つの単量体との複合体が検出されることを排除することができないことが示唆される（表１８）。同様に、候補２２はｈＣＤ４７二量体（３．８％）および単量体（５％）との架橋を形成し得る（表１８）。さらなる実験により、候補２０および２２はどちらも、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより精製されたヒトＣＤ４７単量体およびヒトＣＤ４７二量体に結合することが確認された（図１８および１９を参照されたい）。ＳＥ−ＨＰＬＣによる可溶性ｈＣＤ４７の分析はタンパク質調製物における不均一性を示し、推定ＣＤ４７単量体および二量体の存在を有した（図１７）。単量体および二量体画分を、セミ分取ＳＥ−ＨＰＬＣにより、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製のＳｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  Ｉｎｃｒｅａｓｅ  １０／３００  ＧＬを使用してさらに精製した。非還元条件におけるＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析により、２つの画分の純度がさらに証明され、約３０ｋＤａの大きなバンドは予測されるサイズのグリコシル化ｈＣＤ４７に対応するＣＤ４７単量体画分について観察され、５０ｋＤａよりわずかに上の主バンドはＣＤ４７二量体画分について観察された（図１８）。精製ＣＤ４７単量体および二量体画分をその後、ＥＬＩＳＡプレート上にコートさせ、抗ＣＤ４７抗体を、２つの画分を認識するそれらの能力について試験した。図１９に示されるように、候補２０および２２は、ｈＣＤ４７単量体および二量体の両方に同様の効力で結合することができた。
【０２０３】
【表１７】
2019508030.tif 000019
【０２０４】
３．脱グリコシル化ｈＣＤ４７の認識
グリコシル化のメカニズムは腫瘍細胞において改変され得ることが４０年以上前から知られており（Ｍｅｅｚａｎ  Ｅ．，Ｗｕ  Ｈ．Ｃ．，Ｂｌａｃｋ  Ｐ．Ｈ．，Ｒｏｂｂｉｎｓ  Ｐ．Ｗ．“Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ  ｏｆ  ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  ｖｉｒｕｓ−ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ  ｍｏｕｓｅ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．ＩＩ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｂｙ  Ｓａｐｈａｄｅｘ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ”，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ８（６）：２５１８−２４（１９６９）を参照されたい）、変化されたグリコシル化パターンを有するタンパク質の発現へと導かれる（最近のレビューについては、Ｐｉｎｈｏ  Ｓ．Ｓ．ａｎｄ  Ｒｅｉｓ  Ｃ．Ａ．”Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ：ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  １５：５４０−５５（２０１５）もまた、参照されたい）。ＣＤ４７は位置Ｎ２３、Ｎ３４、Ｎ５０、Ｎ７３、Ｎ１１１、Ｎ２０６の６つのＮ−グリコシル化部位を有する高グリコシル化膜貫通タンパク質である（Ｌｉｎｄｂｅｒｇ  Ｆ．Ｐ．，Ｇｒｅｓｈａｍ  Ｈ．Ｄ．，Ｓｃｈｗａｒｚ  Ｅ．，ａｎｄ  Ｂｒｏｗｎ  Ｅ．Ｊ．“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ：Ａｎ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  ｗｉｔｈ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｅｍｂｒａｎｅ−ｓｐａｎｎｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎｓ  ｉｍｐｌｉｃａｔｅｄ  ｉｎ  αｖβ３−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｌｉｇａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ”，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １２３：４８５−９６（１９９３））。
【０２０５】
ＣＤ４７グリコシル化パターンは腫瘍細胞において改変を受けるので、評価する重要な観点は、治療抗体は、標的へのそれらの結合について、ＣＤ４７グリコシル化レベルに依存するかどうかであった。この点に対処するために、可溶性ｈＣＤ４７を、ＰＮＧａｓｅで処理し、Ｎ−グリコシル化を除去し（Ｍａｌｅｙ  Ｆ．，Ｔｒｉｍｂｌｅ  Ｒ．Ｂ．，Ｔａｒｅｎｔｉｎｏ  Ａ．Ｌ．，ａｎｄ  Ｐｌｕｍｍｅｒ  Ｔ．Ｈ．“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｅｎｄｏｇｌｙｃｏｓｉｄａｓｅｓ”，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  １８０：１９５−２０４（１９８９））、その後、候補２０または２２をＤＳＳおよびＫ２００を用いて１８０分間室温で架橋させ、抗ＣＤ４７抗体／脱グリコシル化−ｈＣＤ４７架橋複合体を作製させた。これらの複合体を使用して、ＣｏｖａｌＸにより記載される方法に従い、これらの非共有結合性相互作用の性質をモニタした（Ｂｉｃｈ  Ｃ．，Ｓｃｏｔｔ  Ｍ．，Ｐａｎａｇｉｏｔｉｄｉｓ  Ａ．，Ｗｅｎｚｅｌ  Ｒ．Ｊ．，Ｎａｚａｂａｌ  Ａ．，Ｚｅｎｏｂｉ  Ｒ．“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｐｌａｓｍｏｎ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｈｉｈ−ｍａｓｓ  ｍａｔｒｉｘ−ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｌａｓｅｒ  ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｒｔｒｙ”，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ３７５：３５−４５（２００８））。ＭＡＬＤＩ−ＴｏＦによる非複合体化および複合体化分子のモニタリングで、我々は過剰に添加した可溶性抗体に対応するピーク（候補２０では１４８．９４４ｋＤａおよび２２では１４９．１７３ｋＤａ）、ならびに抗体−ＣＤ４７複合体のピーク（それぞれ１７４．４０７ｋＤａおよび１６３．４４０ｋＤａ）をうまく同定したが、非複合体化脱グリコシル化ＣＤ４７に対応するピークを同定することはできなかった（１５．９０１ｋＤａ；表１９を参照されたい）。これらのデータにより、使用可能な脱グリコシル化ｈＣＤ４７は全て、候補２０または候補２２のいずれかと共に複合体化されたことが示唆され、抗体２０および２２は、グリコシル化およびＮ−脱グリコシル化ｈＣＤ４７の両方を認識することができたという考えが支持される。
【０２０６】
【表１８】
2019508030.tif 000020
【０２０７】
ＣｏｖａｌＸアプローチを用いて観察される、候補２０および２２による脱グリコシル化ｈＣＤ４７の認識を確認し、定量するために、抗体をＥＬＩＳＡによりコートしたｈＣＤ４７および脱グリコシル化−ｈＣＤ４７調製物上で試験した。ｈＣＤ４７からのＮ−グリカンの除去の成功を、サイズ排除クロマトグラフィー分析により確認した（図示せず）。抗ＣＤ４７候補２０および２２を、キメラｈｕ−ＩｇＧ４型で、同様にｈｕ−ＩｇＧ４アイソタイプのヒト化バリアントｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙと並行して試験した。抗体をｈｕ−ＩｇＧ４型で作製したＡＢ０６．１２およびＨｕ５Ｆ９ヒト化抗体と共に試験し、ＥＬＩＳＡによる同じ認識効率を可能にした。図２２Ａならびに表２０、２１および２２に示されるように、Ｈｕ５Ｆ９およびＡＢ０６．１２はわずかに低い最大結合を示したが、全ての抗体が、同様のプロファイルおよびＥＣ５０、ＥＣ９５、平衡結合定数および最大特異的結合（Ｂｍａｘ）値で、グリコシル化ＣＤ４７に強く結合した（Ｂｍａｘ１）。対照的に、Ｈｕ５Ｆ９およびＡＢ０６．１２のＮ−脱グリコシル化ＣＤ４７への結合は、キメラ候補２０、２２、およびヒト化バリアントｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙについて観察される結合と比べると、強く低減された（図２２Ｂ、表２０、２１および２２）。実際、キメラ候補２０、２２、およびヒト化抗体ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙは、脱グリコシル化ＣＤ４７上で結合し、ＥＣ５０値は、グリコシル化ＣＤ４７上のＥＣ５０値の３．０倍未満であり、および／またはＥＣ９５値はグリコシル化ＣＤ４７上で観察されたＥＣ９５値の１０．０倍未満であった。対照的にＡＢ０６．１２およびＨｕ５Ｆ９のＥＣ５０およびＥＣ９５値はそれぞれ、グリコシル化ＣＤ４７上で測定されたＥＣ５０およびＥＣ９５値より、３．０および１０．０倍超優れていた（表２０）。その上、キメラ候補２０、２２、およびヒト化抗体ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙの平衡結合定数値は、グリコシル化およびＮ−脱グリコシル化ＣＤ４７の両方で≦６０ｐＭであり、一方、ＡＢ０６．１２およびＨｕ５Ｆ９の平衡結合定数値は、Ｎ−脱グリコシル化ＣＤ４７上で９０−１３０ｐＭの範囲であった（表２１）。最後に、キメラ候補２０、２２、およびヒト化抗体ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙはグリコシル化およびＮ−脱グリコシル化ＣＤ４７の両方に結合し、グリコシル化（Ｂｍａｘ１）および脱グリコシル化（Ｂｍａｘ２）ＣＤ４７上で最大特異的結合（Ｂｍａｘ）値≧１．９ＯＤであり、一方、ＡＢ０６．１２およびＨｕ５Ｆ９のＢｍａｘ２値はＮ−脱グリコシル化ＣＤ４７上で＜１．５ＯＤであった（表２２）。
【０２０８】
これらの結果から、候補２０、２２による、およびヒト化ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ抗体によるｈＣＤ４７の認識は、ＣＤ４７のＮ−グリコシル化レベルに依存しないことがさらに証明される。反対に、Ｈｕ５Ｆ９およびＡＢ０６．１２抗体はＮ−脱グリコシル化ＣＤ４７上ではそれらの結合能を著しく失う。細胞表面タンパク質のグリコシル化レベルおよび性質は腫瘍細胞上で改変される可能性があるので、ＣＤ４７抗原のグリコシル化もまた、腫瘍細胞により発現または過剰発現される場合、改変させることができることは可能である。注目すべきことに、ＣＤ４７のグリコシル化パターンは、そのＳＩＲＰαとの相互作用に必要とは考えられず（Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ  Ｓ．，Ｂｏｄｅｒ  Ｅ．Ｔ．，ａｎｄ  Ｄｉｓｃｈｅｒ  Ｄ．Ｅ．“Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ  ｏｆ  ＣＤ４７  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ｈｕｍａｎ  ｓｉｇｎａｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ  α  ｒｅｖｅａｌｓ  ｌｏｃｕｓ  ｏｆ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ．”Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇ．Ｃｈｅｍ．２８２（３）：１８０５−１８（２００７））、異常なグリコシル化はＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用を変化させないことが示唆される。よって、ＣＤ４７を過剰発現する癌細胞は、それらのグリコシル化パターンとは独立して、それら自体を食作用から保護する。反対に、ｈＣＤ４７のＮ−グリコシル化パターンは、抗体結合に影響し、治療効力を著しく低下させる可能性がある。結果として、我々は、抗ＣＤ４７治療抗体、例えば２０、２２、好ましくはｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ（そのｈＣＤ４７への結合はそのグリコシル化レベルに依存しない）を使用することにより、より広い抗腫瘍効果を予想する。
【０２０９】
【表１９】
2019508030.tif 000021
【０２１０】
【表２０】
2019508030.tif 000022
【０２１１】
【表２１】
2019508030.tif 000023
【０２１２】
ＶＩＩ．ヒト化抗ＣＤ４７抗体ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙのインビボ効力
ヒト化バリアントｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙを、前に記載されるように、Ａ５４９肺腺癌異種移植片モデルにおいて、ｈｕ−ＩｇＧ４型（ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ−Ｇ４）で、単剤として、および抗Ｈｅｒ２トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））との併用で評価した。ＮＯＧマウス（ｎ＝８／群）にＡ５４９細胞を生着させた（１０００万細胞皮下注射）。細胞移植後１４日に、腫瘍体積が約１００ｍｍ３となった時点で、抗体療法を開始した。抗ＣＤ４７抗体ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙおよびハーセプチン（登録商標）を単独で、または併用して、１０ｍｇ／ｋｇ／用量の用量で腹腔内注射により、週３回１０週間までの間注射した。図２３に示されるように、抗ＣＤ４７抗体ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ−Ｇ４のハーセプチン（登録商標）との併用で、ビヒクルが注射された動物の対照群（ｐ＜０．００５）およびハーセプチン（登録商標）単独で処置された動物の群（ｐ＜０．０５）と比較すると、処置マウスの生存が著しく延長される。よって、これらの結果により、ＮＯＧマウスにおけるインビボでのＡ５４９肺腺癌の成長を制御するための、ヒト化抗ＣＤ４７ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ抗体のハーセプチン（登録商標）との併用の効力の増加が示され、マウス抗ＣＤ４７候補２０で前に得られた結果が確認される。
【０２１３】
ヒト化ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ抗体はまた、Ｈｅｒ−２陽性胃癌のマウス異種移植片モデルにおいて、単剤として、および、Ｈｅｒ２過剰発現転移性胃癌の治療のために認可されている抗Ｈｅｒ２トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））との併用で評価した。この研究のために、ヒトＮＣＩ−Ｎ８７細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）−ＣＲＬ−５８２２）を、ハーセプチン（登録商標）治療に応答するＨｅｒ−２陽性胃腫瘍としての異種移植片のために選択した（Ｍａｔｓｕｉ  Ｙ．，Ｉｎｏｍａｔａ  Ｍ．，Ｔｏｊｉｇａｍｏｒｉ  Ｍ．，Ｓｏｎｏｄａ  Ｋ．，Ｓｈｉｒａｉｓｈｉ  Ｎ．，Ｋｉｔａｎｏ  Ｓ．“Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｗｉｔｈ  ＨＥＲ２  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ａｎ  ａｎｔｉ−ＨＥＲ２  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  ａ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ”，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．２７（３）：６８１−５（２００５））。インビトロで、これらの細胞は、ハーセプチン（登録商標）の結合により検出されるように、非常に強くＨｅｒ−２を発現し、かつ、ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ抗体による染色およびフローサイトメトリー分析により測定されるようにＣＤ４７を強く発現した（データ示さず）。研究をＮＯＧマウスにおいて実施し、ヒト化ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ抗体をｈｕ−ＩｇＧ４−Ｓ２２８Ｐ−Ｌ２３５Ｅ型で試験した（ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ−Ｇ４ＰＥ）。このために、ヒト化抗体ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙを、ヒトＦｃγ４−Ｓ２２８Ｐ−Ｌ２３５Ｅバックボーンを含む発現ベクターにおけるｈ２０−ＶＨ２バリアントのクローニング後に、Ｓ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅ突然変異を有するｈｕ−ＩｇＧ４型でさらに産生させた（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６４）。Ｌ２３５Ｅ突然変異は、ｈｕ−ＩｇＧ４のＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）に対する親和性を強く低減させることが示され、よって、Ｆｃエフェクター機能、例えばＡＤＣＣまたはＡＤＣＰが抑制される（Ａｌｅｇｒｅ  ＭＬ，Ｃｏｌｌｉｎｓ  ＡＭ，Ｐｕｌｉｔｏ  ＶＬ，Ｂｒｏｓｉｕｓ  ＲＡ，Ｏｌｓｏｎ  ＷＣ，ｅｔ  ａｌ．“Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ａ“ｈｕｍａｎｉｚｅｄ”ＯＫＴ３  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ”，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（１１）：３４６１−６８（１９９２）；Ｒｅｄｄｙ  ＭＰ，Ｋｉｎｎｅｙ  ＣＡＳ．，Ｃｈａｉｋｉｎ  ＭＡ，Ｆｉｓｈｍａｎ−Ｌｏｂｅｌｌ  Ｊ，Ｔｓｕｉ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．“Ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｃ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ａ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ＩｇＧ４  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  ＣＤ４”，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５−３３（２０００））。よって、Ｌ２３５Ｅ突然変異は、副作用、例えばオプソニン化された正常細胞（例えばＲＢＣ、血小板、など）の食作用または溶解のリスクを低減させる。ＮＯＧマウス（ｎ＝８／群）にＮＣＩ−Ｎ８７細胞を生着させ（１０００万細胞皮下注射）、抗体療法を細��移植後７日に、腫瘍体積が約１００ｍｍ３となった時点で開始した。抗ＣＤ４７抗体ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ−Ｇ４ＰＥを単独で、または併用で、１０ｍｇ／ｋｇ／用量にて注射し、一方、ハーセプチン（登録商標）を単独で、または併用で２．５ｍｇ／ｋｇ／用量の用量にて注射した。抗体を腹腔内注射により、週３回５週間までの間投与した。図２４に示されるように、ＮＣＩ−Ｎ８７成長の遅延が抗ＣＤ４７抗体ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ−Ｇ４ＰＥ単独で処置したマウスの群において観察され、ＮＣＩ−Ｎ８７成長のより強い遅延がハーセプチン（登録商標）の抗ＣＤ４７ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ−Ｇ４ＰＥ抗体との併用で処置したマウスにおいて観察された（図２４）。研究をＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおいて実施した場合に同様の結果が得られた（データ示さず）。ハーセプチン（登録商標）と抗ＣＤ４７ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ−Ｇ４ＰＥの併用で処置したマウスの群におけるＮＣＩ−Ｎ８７腫瘍成長のこの低減はハーセプチン（登録商標）単独で処置したマウスの群と比べると、統計学的により高く（ｐ＜０．０５、スチューデントｔ検定）、よって、ＮＣＩ−Ｎ８７腫瘍細胞のインビボでの、および潜在的に、他のＨｅｒ−２陽性胃腫瘍の増殖を制御するための、抗ＣＤ４７ｈ２０−Ｈ２Ｌ５Ｙ抗体とハーセプチン（登録商標）の間の協同的効果が証明される。
【０２１４】
さらなる態様：
１．下記からなる抗体の群より選択される抗体：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１−３（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４−６（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７−９（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０−１２（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群１；あるいは
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３−１５（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６−１８（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９−２１（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２−２４（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群２；あるいは
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５−２７（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８−３０（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１−３３（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４−３６（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群３；あるいは
（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３７−３９（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０−４２（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３−４５（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６−４８（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群４；あるいは
（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９−５１（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２−５４（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５−５７（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８−６０（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群５；あるいは
（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１−６３（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４−６６（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７−６９（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７０−７２（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群６；あるいは
（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７３−７５（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７６−７８（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７９−８１（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８２−８４（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群７；あるいは
（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８５−８７（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８８−９０（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９１−９３（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９４−９６（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群８；あるいは
（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９７−９９（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１００−１０２（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０３−１０５（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０６−１０８（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群９；あるいは
（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０９−１１１（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１２−１１４（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１５−１１７（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１８−１２０（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群１０；
（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９−５１（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２−５４（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５、１５２、５７（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８、１５３、６０（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群１１；
（ｌ）ならびに好ましい抗体の群は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９−５１（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２−５４（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５−５７（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８−６０（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１−６３（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４−６６（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７−６９（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７０−７２（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群６；ならびにＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９−５１（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２−５４（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５、１５２、５７（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８、１５３、６０（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群１１からなる抗体の群より選択される。
【０２１５】
２．前記抗体は、下記からなる抗体の群より選択され：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２１に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよび／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２２に明記されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群１；あるいは
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２３に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよび／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２４に明記されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群２；あるいは
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２５に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよび／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２６に明記されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群３；あるいは
（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２７に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよび／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２８に明記されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群４；あるいは
（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよび／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３０に明記されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群５；あるいは
（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよび／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３２に明記されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群６；あるいは
（ｇ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３３に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよび／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３４に明記されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群７；あるいは
（ｈ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３５に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよび／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３６に明記されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群８；あるいは
（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３７に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよび／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３８に明記されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群９；あるいは
（ｊ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３９に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよび／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４０に明記されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群１０；あるいは
（ｋ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよび／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５４に明記されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群１１；
（ｌ）ならびに、好ましい抗体の群はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよび／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３０に明記されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよび／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３２に明記されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群６、およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨ、および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５４に明記されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群１１からなる抗体の群より選択される、
態様１の抗体。
【０２１６】
３．抗体は全長キメラ、マウスまたはヒト化抗体である、態様１−２のいずれか一つの抗体。
【０２１７】
４．ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６−１５０および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５−１５９に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む；または、ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６−１５０および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５−１５９に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む；または、ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６−１５０および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５−１５９に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む；または、ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４４に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６−１５０および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５−１５９に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む；または、ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４５に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６−１５０および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５−１５９に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む；または、ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２−１７５に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む；または、ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２−１７５に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む；または、ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７０に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２−１７５に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む；または、ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２−１７５に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む、態様３の抗体。
【０２１８】
５．抗体は約１．０×１０−４ｓ−１（１／ｓ）以上のＫｏｆｆ値を有する、態様１−４のいずれか一つの抗体。
【０２１９】
６．任意で突然変異Ｓ２２８Ｐを有する（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６２）および／または任意で突然変異Ｓ２２８Ｐ−Ｌ２３５Ｅを有する（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６４）ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＡ定常領域、好ましくはヒトＩｇＧ４を有する、態様１−５のいずれかの抗体。
【０２２０】
７．抗体は抗体断片であり、抗体断片は任意でＦ（ａｂ’）２またはＦａｂ断片である、態様１−５のいずれかの抗体。
【０２２１】
８．抗体は二重特異性抗体である、態様１−７のいずれかの抗体。
【０２２２】
９．抗体はヒトＣＤ４７に特異的に結合し、結合でＣＤ４７を活性化しない、態様１−８のいずれか一つの抗体。
【０２２３】
１０．抗体はＣＤ４７、好ましくはヒトＣＤ４７上の不連続エピトープに結合する、態様１−９のいずれか一つの抗体。
【０２２４】
１１．不連続エピトープはアミノ酸残基Ｋ５９、Ｒ６３、Ｙ６６、Ｔ６７、Ｈ１０８、Ｔ１０９、Ｔ１１７およびＴ１２０を含み（ＳＥＱ  ＩＤ  １５１）；または不連続エピトープはｈＣＤ４７（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１）のアミノ酸残基Ｋ５９、Ｋ６１、Ｓ１０７、Ｈ１０８、Ｔ１１７、Ｔ１２０およびＲ１２１を含む、態様１０の抗体。
【０２２５】
１２．抗体はＣＤ４７単量体およびＣＤ４７二量体、好ましくは、それぞれ、ヒトＣＤ４７単量体および二量体に結合する、態様１−１１のいずれか一つの抗体。
【０２２６】
１３．抗体はＣＤ４７のグリコシル化および脱グリコシル化形態、好ましくは、それぞれ、ヒトＣＤ４７グリコシル化および脱グリコシル化形態に結合する、態様１−１２のいずれか一つの抗体。
【０２２７】
１４．態様１−１３のいずれか一つに明記される抗体をコードするポリヌクレオチド。
【０２２８】
１５．態様１−１３のいずれか一つに明記される抗体を産生する細胞。
【０２２９】
１６．態様１−１３のいずれか一つに明記される抗体を含み、任意で、薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、医薬組成物。
【０２３０】
１７．被験体における疾患の治療において使用するための、態様１−１３のいずれかの抗体または態様１６の医薬組成物。
【０２３１】
１８．癌の治療における使用のための、態様１７の使用のための抗体または組成物。
【０２３２】
１９．単独療法として使用するための、態様１７または態様１８の使用のための抗体または組成物。
【０２３３】
２０．併用療法、好ましくはＨｅｒ−２阻害剤もしくは抗Ｈｅｒ−２抗体またはＥＧＦＲ阻害剤もしくは抗ＥＧＦＲ抗体との併用において使用するための、態様１７または態様１８の使用のための抗体または組成物。
【０２３４】
２１．被験体はヒトおよび／または非ヒト動物である、態様１７−２０による使用のための抗体または組成物。
【０２３５】
２２．生体試料または組織においてＣＤ４７の存在を検出する方法であって、（ｉ）前記試料または組織を、態様１−１３のいずれか一つに明記される抗体と接触させること、および（ｉｉ）前記組織または試料に結合された抗体の存在を決定することを含む、方法。
【０２３６】
２３．態様１４の核酸が発現されるように態様１５の細胞を培養すること、および任意で、抗体を細胞培養物から回収することを含む、態様１−１３のいずれか一つの抗体を産生させるためのプロセス。
【０２３７】
２４．被験体において癌を治療または防止する方法であって、癌を有する、またはこれを発症するリスクがある被験体に有効量の態様１−１３の抗体を投与することを含む、方法。
【０２３８】
さらなる実施形態が下記番号付けされた段落において規定される：
１．グリコシル化および非グリコシル化ＣＤ４７に結合する抗体であって、抗体のＣＤ４７への結合は、ＣＤ４７のグリコシル化に依存しない、抗体。
【０２３９】
２．抗体は治療抗体としての使用に好適である、段落１の抗体。
【０２４０】
３．抗体はヒトＣＤ４７のグリコシル化および脱グリコシル化形態に結合する、段落１または段落２の抗体。
【０２４１】
４．ヒトＣＤ４７のグリコシル化形態は、ヒトＣＤ４７のアミノ酸配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１）における位置Ｎ２３、Ｎ３４、Ｎ５０、Ｎ７３、Ｎ１１１および／またはＮ２０６に１つ以上のＮ−グリコシル化残基を含む、段落３の抗体。
【０２４２】
５．ヒトＣＤ４７の脱グリコシル化形態は、Ｎ−グリコシル化の除去のためにペプチドＮ−グリコシダーゼ（ＰＮＧａｓｅ）で処理されたグリコシル化ヒトＣＤ４７を含む、前記段落のいずれかの抗体。
【０２４３】
６．（ｉ）抗体のＣＤ４７の非グリコシル化形態対グリコシル化形態への結合のＥＣ５０の比率は４、３、２、１、０．５、０．２５未満、好ましくは４〜１の範囲、より好ましくは３〜１、最も好ましくは２〜１であり；および／または（ｉｉ）抗体のＣＤ４７の非グリコシル化形態対グリコシル化形態への結合のＥＣ９５の比率は２５、２０、１０、１、０．５または０．２５未満、好ましくは１０〜１の範囲、より好ましくは９〜１、最も好ましくは９〜１である、前記段落のいずれかの抗体。
【０２４４】
７．抗体は、８０ｐＭ以下、好ましくは７０ｐＭ以下、より好ましくは６０ｐＭ以下の平衡結合定数でグリコシル化ＣＤ４７および非グリコシル化ＣＤ４７の各々に結合する、前記段落のいずれかの抗体。
【０２４５】
８．抗体の非グリコシル化ＣＤ４７に対する最大結合能（Ｂｍａｘ２）は、抗体のグリコシル化ＣＤ４７に対する最大結合能（Ｂｍａｘ１）の少なくとも６０％である、前記段落のいずれかの抗体。
【０２４６】
９．抗体は、約１．０×１０−４ｓ−１（１／ｓ）以上の、グリコシル化および／または非グリコシル化ＣＤ４７への結合についてのＫｏｆｆ値を有する、前記段落のいずれかの抗体。
【０２４７】
１０．抗体は、１．０×１０−４ｓ−１〜１．０×１０−３ｓ−１の、グリコシル化および／または非グリコシル化ＣＤ４７への結合についてのＫｏｆｆ値を有する、段落９の抗体。
【０２４８】
１１．抗体は、２．５×１０−４ｓ−１〜８．０×１０−４ｓ−１の、グリコシル化および／または非グリコシル化ＣＤ４７への結合についてのＫｏｆｆ値を有する、段落１０の抗体。
【０２４９】
１２．抗体は、１．０×１０−４ｓ−１〜１．０×１０−３ｓ−１の、ＣＤ４７への結合についてのＫｏｆｆ値を有する、ＣＤ４７に結合する抗体。
【０２５０】
１３．下記からなる抗体の群より選択される抗体：（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９−５１（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２−５４（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５−５７（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８−６０（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群、（ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１−６３（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４−６６（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７−６９（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７０−７２（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群；ならびに（ｉｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４９−５１（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５２−５４（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する重鎖およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５５、１５２、５７（Ｋａｂａｔアノテーション）またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８、１５３、６０（ＩＭＧＴアノテーション）において明記されるＣＤＲ配列の各々を有する軽鎖を含む抗体の群。
【０２５１】
１４．前記抗体は、下記からなる抗体の群より選択される、段落１３の抗体：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３０に明記されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群；または
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３１に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３２に明記されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群；または
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２９に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５４に明記されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体の群。
【０２５２】
１５．抗体は全長キメラ、マウスまたはヒト化抗体である、段落１３−１４のいずれか１つの抗体。
【０２５３】
１６．ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４１に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６−１５０および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５−１５９に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む；または、ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４２に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６−１５０および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５−１５９に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む；または、ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４３に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６−１５０および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５−１５９に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む；または、ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４４に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６−１５０および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５−１５９に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む；または、ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４５に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４６−１５０および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５５−１５９に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む、または、ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６８に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２−１７５に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む；または、ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６９に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２−１７５に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む；または、ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７０に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２−１７５に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む；または、ヒト化抗体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７１に明記されるアミノ酸配列を有するＶＨおよびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７２−１７５に明記されるアミノ酸配列からなるＶＬの群より選択されるＶＬを含む、段落１５の抗体。
【０２５４】
１７．抗体は１．０×１０−４ｓ−１〜１．０×１０−３ｓ−１のＫｏｆｆ値を有する、段落１３−１６のいずれか１つの抗体。
【０２５５】
１８．任意で突然変異Ｓ２２８Ｐを有する（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６２）または任意で突然変異Ｓ２２８Ｐ−Ｌ２３５Ｅを有する（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６４）ヒトＩｇＧ４定常領域を有する、段落１３−１７のいずれかの抗体。
【０２５６】
１９．抗体は抗体断片であり、抗体断片は任意でＦ（ａｂ’）２またはＦａｂ断片である、段落１３−１８のいずれかの抗体。
【０２５７】
２０．抗体は二重特異性抗体である、段落１３−１９のいずれかの抗体。
【０２５８】
２１．抗体はＣＤ４７に特異的に結合し、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を妨害し、好ましくは、それぞれ、抗体はヒトＣＤ４７に特異的に結合し、ヒトＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を妨害する、段落１３−２０のいずれか１つの抗体。
【０２５９】
２２．抗体はＣＤ４７、好ましくはヒトＣＤ４７上の不連続エピトープに結合する、段落１３−２１のいずれか１つの抗体。
【０２６０】
２３．不連続エピトープはヒトＣＤ４７（ＳＥＱ  ＩＤ１５１）のアミノ酸残基Ｋ５９、Ｒ６３、Ｙ６６、Ｔ６７、Ｈ１０８、Ｔ１０９、Ｔ１１７およびＴ１２０を含み；または不連続エピトープはヒトＣＤ４７（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５１）のアミノ酸残基Ｋ５９、Ｋ６１、Ｓ１０７、Ｈ１０８、Ｔ１１７、Ｔ１２０およびＲ１２１を含む、段落２２の抗体。
【０２６１】
２４．抗体はＣＤ４７単量体およびＣＤ４７二量体、好ましくは、それぞれ、ヒトＣＤ４７単量体および二量体に結合する、段落１３−２３のいずれか１つの抗体。
【０２６２】
２５．抗体はＣＤ４７のグリコシル化および脱グリコシル化形態、好ましくは、それぞれ、ヒトＣＤ４７グリコシル化および脱グリコシル化形態に結合する、段落１３−２４のいずれか１つの抗体。
【０２６３】
２６．段落１−２４のいずれか一つに明記される抗体をコードするポリヌクレオチド。
【０２６４】
２７．段落１−２４のいずれか一つに明記される抗体を産生する細胞。
【０２６５】
２８．段落１−２４のいずれか一つに明記された抗体を含み、任意で、薬学的に許容される賦形剤をさらに含む医薬組成物。
【０２６６】
２９．被験体における疾患の治療において使用するための、段落１−２４のいずれかの抗体または段落２８の医薬組成物。
【０２６７】
３０．癌の治療において使用するための、段落２９の使用のための抗体または組成物。
【０２６８】
３１．単独療法として使用するための、段落３０の使用のための抗体または組成物。
【０２６９】
３２．併用療法、好ましくはＨｅｒ−２阻害剤もしくは抗Ｈｅｒ２抗体またはＥＧＦＲ阻害剤もしくは抗ＥＧＦＲ抗体との併用で使用するための、段落３０の使用のための抗体または組成物。
【０２７０】
３３．被験体はヒトまたは非ヒト動物である、段落２９−３２による使用のための抗体または組成物。
【０２７１】
３４．生体試料または組織においてＣＤ４７の存在を検出する方法であって、（ｉ）前記試料または組織を、段落１−２４のいずれか一つに明記される抗体と接触させること、および（ｉｉ）前記組織または試料に結合された抗体の存在を決定することを含む、方法。
【０２７２】
３５．段落１−２４のいずれか一つの抗体を産生させるためのプロセスであって、段落２６の核酸が発現されるように段落２７の細胞を培養すること、および任意で、抗体を細胞培養物から回収することを含むプロセス。
【０２７３】
３６．被験体において癌を治療または防止する方法であって、癌を有する、またはこれを発症するリスクがある被験体に有効量の段落１−２４の抗体を投与することを含む、方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１２Ｅ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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