(57)【要約】  疾患、例えば腫瘍抗原の発現と関連する疾患を有する対象を処置するために、例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の使用及び製造に関連するＬＳＤ１阻害剤の使用が本明細書において提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の処置に使用するための、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含むＬＳＤ１阻害剤であって、前記対象は、免疫エフェクター細胞、例えばＣＡＲ分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞を含む治療を受けたか、受けているか、又は受けることになる、ＬＳＤ１阻害剤。
【請求項２】
免疫エフェクター細胞、例えばＣＡＲ分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞の製造における使用のための、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含むＬＳＤ１阻害剤。
【請求項３】
対象を処置する方法であって、ＬＳＤ１阻害剤と、ＣＡＲ分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団とを前記対象に投与することを含み、前記ＬＳＤ１阻害剤は、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含む、方法。
【請求項４】
ａ）前記ＬＳＤ１阻害剤は、前記対象が前記免疫エフェクター細胞の集団を投与される前に投与されるか、
ｂ）前記ＬＳＤ１阻害剤は、前記免疫エフェクター細胞の集団と同時に投与されるか、
ｃ）前記ＬＳＤ１阻害剤は、前記対象が前記免疫エフェクター細胞の集団を投与された後に投与されるか、又は
ｄ）ａ）、ｂ）及びｃ）の２つ又は全ての任意の組み合わせ
である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤又は方法。
【請求項５】
前記ＬＳＤ１阻害剤は、前記対象が前記免疫エフェクター細胞の集団を投与される前に投与され、前記ＬＳＤ１阻害剤の前記投与は、前記免疫エフェクター細胞の集団の投与後、ある期間にわたって継続される、請求項４に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤又は方法。
【請求項６】
前記ＬＳＤ１阻害剤の前記投与は、前記ＬＳＤ１阻害剤の非存在下で投与された前記免疫エフェクター細胞の均等な集団と比較して、前記免疫エフェクターの集団の抗腫瘍効果を増加させるのに十分な量におけるものである、請求項５に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤又は方法。
【請求項７】
ＣＡＲ、例えばＣＡＲＴ１９（例えば、ＣＴＬ０１９）を発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団の治療有効性を増加させる方法であって、前記細胞を、前記細胞におけるＬＳＤ１の活性又は発現を一過性又は永続的に減少させるのに十分な量において、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含むＬＳＤ１阻害剤と接触させることを含む方法。
【請求項８】
前記ＬＳＤ１阻害剤の前記投与又は前記接触は、任意選択により前記ＬＳＤ１阻害剤と接触されていない細胞と比較して、
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）前記免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
をもたらす、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤又は方法。
【請求項９】
対象を処置する方法であって、
ａ）３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含むＬＳＤ１阻害剤を対象に投与することと、
ｂ）前記ＬＳＤ１阻害剤の前記投与後、工程ａ）の前記対象から免疫エフェクター細胞の集団を採取することと、
ｃ）前記免疫エフェクター細胞の集団をエクスビボで提供することと、
ｄ）前記エクスビボでの免疫エフェクター細胞の集団を前記ＬＳＤ１阻害剤と接触させることであって、前記ＬＳＤ１阻害剤との前記接触は、非接触のエクスビボでの免疫エフェクター細胞の集団と比較して、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）前記免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上を生じさせる、接触させることと、
ｅ）前記免疫エフェクター細胞の集団を対象に投与することと
を含む方法。
【請求項１０】
前記ｅ）の工程は、前記ＬＳＤ１阻害剤を工程ｅ）の前記対象に投与することを更に含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ＣＡＲをコードする核酸を前記エクスビボでの免疫エフェクター細胞の集団の細胞に挿入する工程を更に含む、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
免疫エフェクター細胞の集団を作製する方法であって、
ａ）免疫エフェクター細胞の集団を、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含むＬＳＤ１阻害剤と接触させ、それにより免疫エフェクター細胞の集団を作製すること
を含み、前記ＬＳＤ１阻害剤との前記接触は、非接触の免疫エフェクター細胞の集団と比較して、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）前記免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上を生じさせる、方法。
【請求項１３】
ｂ）ＣＡＲをコードする核酸を前記免疫エフェクター細胞の集団の細胞に挿入する工程を更に含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
工程ａ）の前記接触は、
１）工程ｂ）の前記挿入前、
２）工程ｂ）の前記挿入と同時、
３）工程ｂ）の前記挿入後、又は
４）上記の１）〜３）の２つ以上（例えば、全て）の任意の組み合わせ
において起こる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
工程ａ）の前記接触及び任意選択により工程ｂ）の前記挿入は、エクスビボである、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の方法によって作製される免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項１７】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団であって、前記ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記細胞におけるＬＳＤ１の発現及び／又は機能は、低減又は除去されており、前記免疫エフェクター細胞の集団は、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含むＬＳＤ１阻害剤を含む、免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項１８】
前記免疫エフェクター細胞の集団は、ＬＳＤ１阻害剤と接触されている、請求項１７に記載の免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項１９】
前記免疫エフェクター細胞の集団は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞を含み、例えばそれらからなり、例えば、前記免疫エフェクター細胞は、ヒト細胞である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法又は免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２０】
前記Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞又はこれらの組み合わせである、請求項１９に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法又は免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２１】
前記ＣＡＲは、（任意選択により、抗体又は抗体フラグメント、ＴＣＲ又はＴＣＲフラグメントである）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び（任意選択により、共刺激ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインである）細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法又は免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２２】
前記抗原結合ドメインは、ＣＤ１９、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ−１、ＣＬＬ−１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、Ｔｎ  Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ−１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ−β、ＳＳＥＡ−４、ＣＤ２０、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ−ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１ａ、ＭＡＧＥ−Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ  Ａ１、ＥＴＶ６−ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ  ２、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＭＡＤ−ＣＴ−２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＣＴＡ−１／ガレクチン８、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ−ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ−２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ−１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５並びにＩＧＬＬ１からなる群から選択される腫瘍抗原に結合する、請求項２１に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法又は免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２３】
前記腫瘍抗原は、ＣＤ１９又はＢＣＭＡである、請求項２２に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法又は免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２４】
前記抗原結合ドメインは、
（ｉ）表６〜９によるＣＤ１９結合ドメインのアミノ酸配列、例えば表９によるＣＴＬ０１９  ｓｃＦｖドメインのアミノ酸配列若しくは配列番号９５７によるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列、
（ｉｉ）表６〜９によるヒト化ＣＤ１９結合ドメインのアミノ酸配列、例えば表９によるＣＡＲ２  ｓｃＦｖドメインのアミノ酸配列若しくは配列番号８９８によるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列、又は
（ｉｉｉ）表１１Ａ〜１１ＢによるＢＣＭＡ結合ドメインのアミノ酸配列、例えば表１１Ａによる１３９１０９  ｓｃＦｖドメインのアミノ酸配列若しくは配列番号９６７によるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列
を含む抗体又は抗体フラグメントであるか、又は前記ＣＡＲは、
（ｉ）表６〜９によるＣＤ１９  ＣＡＲのアミノ酸配列、例えば表９によるＣＴＬ０１９のアミノ酸配列若しくは配列番号９５６によるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列、
（ｉｉ）表６〜９によるヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲのアミノ酸配列、例えば表９によるＣＡＲ２のアミノ酸配列若しくは配列番号９０２によるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列、又は
（ｉｉｉ）表１１Ａ〜１１ＢによるＢＣＭＡ  ＣＡＲのアミノ酸配列、例えば表１１Ａによる１３９１０９  ＣＡＲのアミノ酸配列若しくは配列番号９７１によるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列
を含む、請求項２３に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法又は免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２５】
前記膜貫通ドメインは、
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの修飾であるが、２０、１０若しくは５つを超えない修飾を有するアミノ酸配列又は配列番号１２のアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列、又は
（ｉｉ）配列番号１２の前記配列
を含む、請求項２１〜２４のいずれか一項に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法又は免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２６】
前記抗原結合ドメインは、ヒンジ領域によって前記膜貫通ドメインに結合され、前記ヒンジ領域は、配列番号２若しくは配列番号６又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法又は免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２７】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン及び／又は共刺激シグナル伝達ドメインを含み、前記一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、共通ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲβ（ＦｃεＲ１ｂ）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＦｃγＲＩＩａ、ＤＡＰ１０又はＤＡＰ１２から選択されるタンパク質の機能的シグナル伝達ドメインを含む、請求項２１〜２６のいずれか一項に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法又は免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２８】
前記一次シグナル伝達ドメインは、
（ｉ）配列番号１８若しくは配列番号２０のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの修飾であるが、２０、１０若しくは５つを超えない修飾を有するアミノ酸配列又は配列番号１８若しくは配列番号２０のアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列、又は
（ｉｉ）配列番号１８又は配列番号２０の前記アミノ酸配列
を含む、請求項２１〜２７のいずれか一項に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法又は免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２９】
前記細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメイン又は一次シグナル伝達ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインを含み、前記共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６及びＮＫＧ２Ｄからなる群から選択されるタンパク質の機能的シグナル伝達ドメインを含む、請求項２１〜２８のいずれか一項に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法又は免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項３０】
前記共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１４若しくは配列番号１６の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの修飾であるが、２０、１０若しくは５つを超えない修飾を有するアミノ酸配列又は配列番号１４若しくは配列番号１６と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む、請求項２１〜２９のいずれか一項に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法又は免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項３１】
前記共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１４又は配列番号１６の配列を含む、請求項２１〜３０のいずれか一項に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法又は免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項３２】
前記細胞内ドメインは、配列番号１４又は配列番号１６の前記配列及び配列番号１８又は配列番号２０の前記配列を含み、前記細胞内シグナル伝達ドメインを含む前記配列は、同じフレームにおいて且つ単一のポリペプチド鎖として発現される、請求項２１〜３１のいずれか一項に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法又は免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項３３】
前記ＣＡＲは、配列番号２を含む、例えばそれからなるリーダー配列を含む、請求項２１〜３２のいずれか一項に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法又は免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項３４】
（１）ＬＳＤ１遺伝子又はその対応する調節エレメントの１つ以上の部位を標的とする遺伝子編集系、（２）前記ＬＳＤ１遺伝子の標的配列に相補性の配列を含む核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ若しくはｓｈＲＮＡ又はアンチセンスオリゴヌクレオチド）、（３）タンパク質（例えば、ドミナントネガティブＬＳＤ１、例えば触媒的不活性ＬＳＤ１又はＬＳＤ１のドミナントネガティブ結合パートナー）、（４）小分子、（５）（１）〜（３）のいずれかをコードする核酸、又は（６）（１）〜（５）の任意の組み合わせから選択される第２のＬＳＤ１阻害剤を投与することを更に含む、請求項１〜３３のいずれかに記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項３５】
前記第２のＬＳＤ１阻害剤は、例えば、配列番号４３〜８２のいずれかから選択される、前記ＬＳＤ１の標的配列に相補性の配列を含むｓｈＲＮＡ又はｓｉＲＮＡである、請求項３４に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項３６】
前記第２のＬＳＤ１阻害剤は、抗ＬＳＤ１  ｓｈＲＮＡをコードする任意の配列を含む核酸によってコードされる、例えば配列番号８３〜１２２から選択される配列を含む核酸によってコードされるｓｈＲＮＡである、請求項３４に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項３７】
前記第２のＬＳＤ１阻害剤は、抗ＬＳＤ１  ｓｈＲＮＡをコードする任意の配列、例えば配列番号８３〜１２２のいずれかから選択される配列を含む核酸である、請求項３４に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項３８】
前記核酸は、ベクター上に配置される、請求項３７に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項３９】
前記ベクターは、前記核酸に作動可能に連結されたＵ６又はＨ１プロモーターを更に含む、請求項３８に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項４０】
前記ベクターは、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクター、プラスミド、ミニサークル、ナノプラスミド又はＲＮＡベクターである、請求項３８又は３９に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項４１】
前記ベクターは、ＣＡＲをコードする配列を更に含む、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項４２】
前記第２のＬＳＤ１阻害剤は、ＣＲＩＳＰＲゲノム編集系、亜鉛フィンガーヌクレアーゼゲノム編集系、ＴＡＬＥＮゲノム編集系及びメガヌクレアーゼゲノム編集系から選択される、前記ＬＳＤ１遺伝子（ＫＤＭ１Ａ）又はその調節エレメントの配列に特異的なゲノム編集系である、請求項３４に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項４３】
前記第２のＬＳＤ１阻害剤は、前記ＬＳＤ１遺伝子（ＫＤＭ１Ａ）又はその調節エレメントの配列に相補性の標的ドメインを含む、例えば配列番号１３２〜８６２のいずれかを含むｇＲＮＡ分子を含むＣＲＩＳＰＲゲノム編集系である、請求項４２に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項４４】
前記第２のＬＳＤ１阻害剤は、小分子である、請求項３４に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項４５】
前記小分子は、可逆的又は不可逆的ＬＳＤ１阻害剤である、請求項３４に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項４６】
前記第２のＬＳＤ１阻害剤は、
ａ）ＧＳＫ２６９９５３７、
ｂ）ｒｅｌ−２−［［（１Ｒ，２Ｓ）−２−［４−［（４−クロロフェニル）メトキシ］フェニル］シクロプロピル］アミノ］−１−（４−メチル−１−ピペラジニル）−エタノン、
ｃ）（Ｒ）−４−（５−（ピロリジン−３−イルメトキシ）−２−（ｐ−トリル）ピリジン−３−イル）ベンゾニトリル、
ｄ）（１Ｓ，２Ｒ）−Ｎ−（（２−メトキシピリジン−３−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパン−１−アミン、
ｅ）Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−（（４−（４−（４−（ピペリジン−４−イル）フェニル）−１Ｈ−インダゾール−１−イル）フェニル）スルホニル）ピペリジン−４−アミン、
ｆ）５−（６−クロロ−４’−（メチルスルホニル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−２−（ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボニトリル、
ｇ）ｒｅｌ−Ｎ−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル］−４−ピペリジンアミン、
ｈ）２−（１Ｒ，２Ｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）−１−（４−メチルピペラジン−１−イル）エタノン、
ｉ）トランス−３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−ヒドロキシシクロヘキシル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリル、
ｊ）３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリル、又は
ｋ）前述のもののいずれかの薬学的に許容される塩
である、請求項４４又は４５に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項４７】
前記第２のＬＳＤ１阻害剤は、抗体又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートされる、請求項４４〜４６のいずれか一項に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項４８】
前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｔ細胞の表面の抗原を認識する、請求項４７に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項４９】
Ｔ細胞の表面の前記抗原は、ＣＤ３である、請求項４８に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項５０】
前記第２のＬＳＤ１阻害剤は、タンパク質であり、例えばＬＳＤ１のドミナントネガティブ結合パートナー（例えば、ＬＳＤ１又はＣｏ−ＲＥＳＴ若しくはＡＲ共アクティベータ複合体の他のメンバーと相互作用するヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ））又はＬＳＤ１の前記ドミナントネガティブ結合パートナーをコードする核酸である、請求項３４に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項５１】
前記第２のＬＳＤ１阻害剤は、タンパク質であり、例えばドミナントネガティブ（例えば、触媒的不活性）ＬＳＤ１又は前記ドミナントネガティブＬＳＤ１をコードする核酸である、請求項３４に記載の使用のためのＬＳＤ１阻害剤、方法。
【請求項５２】
治療における使用のための、請求項１４〜２０のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項５３】
対象の処置に使用するための、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含むＬＳＤ１阻害剤であって、前記対象は、請求項１４〜２０のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞の集団の有効量を含む治療を受けたか、受けているか、又は受けることになる、ＬＳＤ１阻害剤。
【請求項５４】
処置を、それを必要とする対象において行う方法であって、請求項１４〜２０のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞の集団の有効量を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項５５】
前記方法は、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含むＬＳＤ１阻害剤を前記対象に投与することを更に含む、請求項５２〜５４のいずれか一項に記載の使用又は方法。
【請求項５６】
前記対象は、前記免疫エフェクター細胞の集団の前記投与前に前記ＬＳＤ１阻害剤の前処置を受ける、請求項５３〜５５のいずれか一項に記載の使用又は方法。
【請求項５７】
前記対象は、ＬＳＤ１阻害剤及び前記免疫エフェクター細胞の集団による同時処置を受ける、請求項５３〜５５のいずれか一項に記載の使用又は方法。
【請求項５８】
前記対象は、前記免疫エフェクター細胞の集団の投与後にＬＳＤ１阻害剤による処置を受ける、請求項５３〜５６のいずれか一項に記載の使用又は方法。
【請求項５９】
前記対象は、腫瘍抗原の発現に関連する疾患、例えば増殖性疾患、前癌状態、癌及び前記腫瘍抗原の発現に関連する非癌関連の適応症を有する、請求項１〜１５又は１９〜５８のいずれか一項に記載の使用又は方法。
【請求項６０】
前記癌は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性白血病、急性リンパ系白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ系白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ系白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリーセル白血病、小細胞型若しくは大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性のリンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症又は前白血病の１つ以上から選択される血液癌である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記癌は、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺の非小細胞癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚又は眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣の癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、膀胱癌、腎臓癌又は尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境的に誘発された癌、前記癌の組み合わせ及び前記癌の転移性病変からなる群から選択される、請求項５９に記載の使用又は方法。
【請求項６２】
前記対象は、ヒトである、請求項１〜６１のいずれか一項に記載の方法又は免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項６３】
前記ヒトは、腫瘍抗原の発現と関連する疾患、例えば癌を有する、請求項６２に記載の方法又は免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項６４】
治療における使用のための、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含む化合物。
【請求項６５】
請求項１〜１５又は１９〜６４のいずれか一項に記載の方法おける使用のための、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含む化合物。
【請求項６６】
３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含むＬＳＤ１阻害剤を含む、免疫エフェクター細胞の集団のエクスビボでの製造における使用のための組成物。
【請求項６７】
前記ＬＳＤ１阻害剤の濃度は、約０．００１ｎＭ〜約１０ｍＭの範囲である、請求項６６に記載の組成物。
【請求項６８】
前記ＬＳＤ１阻害剤の前記濃度は、約０．１ｕＭ〜約１０ｕＭの範囲である、請求項６７に記載の組成物。
【請求項６９】
前記免疫エフェクター細胞の集団は、ＣＡＲを発現するように操作された細胞を含む、請求項６６〜６８のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１６年９月３０日に出願されたＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／中国特許出願公開第２０１６／１０１２１３号明細書に対する優先権を主張し、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０１７年９月２７日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｎ２０６７−７１４１ＷＯ２＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズが１，１１８，７６８バイトである。
【０００３】
本発明は、概して、疾患、例えば腫瘍抗原の発現と関連する疾患を有する対象を処置するために、例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の使用及び製造に関連するＬＳＤ１阻害剤の使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を形質導入したＴ細胞での養子細胞移入（ＡＣＴ）治療は、癌治験において有望性が示されている。改善された有効性を有するＴ細胞治療、特にＣＡＲ  Ｔ細胞治療に対する医学的ニーズがある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本明細書に開示される方法及び組成物は、疾患、例えば癌関連抗原（又は腫瘍マーカー）の発現と関連する疾患を処置するために、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）、例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作された免疫エフェクター細胞の使用及び／又は製造に関連するリシン特異的デメチラーゼ１（ＬＳＤ１）の阻害剤の使用に関する。
【０００６】
ＬＳＤ１阻害は、例えば、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の機能の改善に効果的であり、Ｔ細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ細胞治療及び／又は製造と組み合わされ得ることが発見された。
【０００７】
理論に拘束されることを望まないが、例えば、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団をＬＳＤ１阻害剤と接触させることは、例えば、このような細胞が（例えば、抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８刺激により）刺激されるか、又は（例えば、抗原認識、例えばＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを介した抗原認識に応答して）増殖を誘導された場合、非接触集団と比較して、ナイーブＴ細胞（例えば、ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞）の比率の少なくとも一過性の増加を伴うと考えられる。
【０００８】
理論に拘束されることを望まないが、例えば、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団をＬＳＤ１阻害剤と接触させることは、例えば、このような細胞が（例えば、抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８刺激により）刺激されるか、又は（例えば、抗原認識、例えばＣＡＲを介した抗原認識に応答して）増殖を誘導された場合、非接触集団と比較して、ナイーブＴ細胞（例えば、ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞）の数の少なくとも一過性の増加を伴うと考えられる。
【０００９】
理論に拘束されることを望まないが、例えば、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団をＬＳＤ１阻害剤と接触させることは、例えば、このような細胞が（例えば、抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８刺激により）刺激されるか、又は（例えば、抗原認識、例えばＣＡＲを介した抗原認識に応答して）増殖を誘導された場合、非接触集団と比較して、ＴＥＭ細胞の数の少なくとも一過性の減少を伴うと考えられる。
【００１０】
理論に拘束されることを望まないが、例えば、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団をＬＳＤ１阻害剤と接触させることは、例えば、このような細胞が（例えば、抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８刺激により）刺激されるか、又は（例えば、抗原認識、例えばＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを介した抗原認識に応答して）増殖を誘導された場合、非接触集団と比較して、ＴＥＭ細胞の比率の少なくとも一過性の減少を伴うと考えられる。
【００１１】
理論に拘束されることを望まないが、例えば、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団をＬＳＤ１阻害剤と接触させることは、例えば、このような細胞が（例えば、抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８刺激により）刺激されるか、又は（例えば、抗原認識、例えばＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを介した抗原認識に応答して）増殖を誘導された場合、非接触集団と比較して、前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の少なくとも一過性の増加を伴うと考えられる。
【００１２】
理論に拘束されることを望まないが、例えば、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団をＬＳＤ１阻害剤と接触させることは、例えば、このような細胞が（例えば、抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８刺激により）刺激されるか、又は（例えば、抗原認識、例えばＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを介した抗原認識に応答して）増殖を誘導された場合、非接触集団と比較して、ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の少なくとも一過性の減少を伴うと考えられる。
【００１３】
理論に拘束されることを望まないが、例えば、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団をＬＳＤ１阻害剤と接触させることは、例えば、このような細胞が（例えば、抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８刺激により）刺激されるか、又は（例えば、抗原認識、例えばＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを介した抗原認識に応答して）増殖を誘導された場合、非接触集団と比較して、ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の少なくとも一過性の増加を伴うと考えられる。
【００１４】
理論に拘束されることを望まないが、例えば、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団をＬＳＤ１阻害剤と接触させることは、例えば、このような細胞が（例えば、抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８刺激により）刺激されるか、又は（例えば、抗原認識、例えばＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを介した抗原認識に応答して）増殖を誘導された場合、非接触集団と比較して、ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の少なくとも一過性の減少を伴うと考えられる。
【００１５】
理論に拘束されることを望まないが、例えば、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団をＬＳＤ１阻害剤と接触させることは、例えば、このような細胞が（例えば、抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８刺激により）刺激されるか、又は（例えば、抗原認識、例えばＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを介した抗原認識に応答して）増殖を誘導された場合、非接触集団と比較して、ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の少なくとも一過性の増加を伴うと考えられる。
【００１６】
理論に拘束されることを望まないが、例えば、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団をＬＳＤ１阻害剤と接触させることは、例えば、このような細胞が（例えば、抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８刺激により）刺激されるか、又は（例えば、抗原認識、例えばＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを介した抗原認識に応答して）増殖を誘導された場合、非接触集団と比較して、免疫エフェクター細胞の増殖の少なくとも一過性の増加を伴うと考えられる。やはり理論に拘束されないが、Ｔ細胞は、例えば、ＣＤ３／ＣＤ２８刺激又は抗原刺激での刺激（例えば、ＣＡＲを介した誘導シグナル伝達による）により、枯渇し得ると考えられる。このような枯渇は、このような免疫エフェクター細胞の有効性又は機能の低下に至り得る（例えば、増殖、持続及び／又は抗腫瘍有効性低下）。本明細書に記載されるように、本発明者らは、ＬＳＤ１阻害がよりナイーブなＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の枯渇を阻害し、且つ／又は増殖及び／若しくは生存を増加させ、これがより良好な有効性及び機能を有することを発見した。従って、本発明の実施形態は、少なくとも部分的には、ＬＳＤ１阻害がＴ細胞機能及び／又は表現型の改善と関連するという認識に基づく。
【００１７】
一実施形態において、これらのアプローチは、対象における免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の性能の最適化に使用され得る。理論に拘束されることを望まないが、一実施形態において、内在性の非修飾免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の性能が改善されると考えられる。理論に拘束されることを望まないが、一実施形態において、例えば、本明細書に記載される、採取（例えば、ＬＳＤ１阻害剤投与対象から）され、ＣＡＲ分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の性能が改善されると考えられる。他の実施形態において、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作されたか又は操作される免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の集団は、非接触集団と比較して、ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数又は比率を改善し、且つ／又はＰＤ−１陰性、例えばＰＤ−１−／Ｔｉｍ３−／Ｌａｇ３−Ｔ細胞の数又は比率を改善する量のＬＳＤ１阻害剤と接触させることにより、エクスビボで処置され得る。
【００１８】
一実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、対象の末梢血における（又は対象から単離したＴ細胞の調製物における）ＰＤ−１陽性Ｔ細胞の比率の減少、ＰＤ−１陰性Ｔ細胞の比率の増加、又はＰＤ−１陰性Ｔ細胞／ＰＤ−１陽性Ｔ細胞の比率の増加に十分な時間にわたって投与される。
【００１９】
一実施形態において、対象、例えばヒト対象を処置する、例えば免疫応答を促進する方法は、例えば、ＬＳＤ１阻害剤と接触されていないＴ細胞と比較して、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２との関与によって媒介される負の免疫応答の阻害を含む。
【００２０】
一実施形態において、対象、例えばヒト対象を処置する、例えば免疫応答を促進する方法は、例えば、ＬＳＤ１阻害剤と接触されていないＴ細胞と比較して、増殖可能なＴ細胞の数の増加を含む。
【００２１】
一実施形態において、対象、例えばヒト対象を処置する、例えば免疫応答を促進する方法は、例えば、ＬＳＤ１阻害剤と接触されていないＴ細胞と比較して、細胞毒性機能、サイトカイン分泌又は活性化が可能なＴ細胞の数の増加を含む。
【００２２】
一実施形態において、対象、例えばヒト対象を処置する、例えば免疫応答を促進する方法は、例えば、ＬＳＤ１阻害剤と接触されていないＴ細胞と比較して、Ｔ細胞の刺激及び／又は活性化に応答したサイトカイン分泌（例えば、インターフェロンγ（ＩＦＮ−ｇ）及び／又はインターロイキン２（ＩＬ−２））の量の増加を含む。
【００２３】
一実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上が起こるのに十分な時間にわたり、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを（例えば、免疫エフェクター細胞の採取前又は後に）発現するように操作される免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の投与前に投与（インビボ又はエクスビボ）され、１）、２）、３）、４）、５）、６）、７）、８）、９）、１０）、１１）、１２）又は１３）は、例えば、未処置の対象と比較して、例えば少なくとも一時的に、例えば永続的に起こる。一実施形態において、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作される免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、ＬＳＤ１阻害剤の投与開始又は完了から少なくとも５日、１０日、１５日、２０日、２５日、３０日、３５日、４０日、４５日、５０日、５５日又は６０日後に採取される。
【００２４】
一実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、又は
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、又は
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０つ、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上が起こる、例えば採取された細胞又は操作された細胞において（又は未採取の細胞において、又はその両方において）起こるのに十分な時間にわたり、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作される免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の採取前に対象に投与され、１）、２）、３）、４）、５）、６）、７）、８）、９）、１０）、１１）、１２）又は１３）は、例えば、未処置の対象と比較して、例えば少なくとも一時的に、例えば永続的に起こる。一実施形態において、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作される免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、ＬＳＤ１阻害剤の投与開始又は完了から少なくとも５日、１０日、１５日、２０日、２５日、３０日、３５日、４０日、４５日、５０日、５５日又は６０日後に採取される。
【００２５】
一実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上が起こるのに十分な時間にわたり、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作される免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の採取後に投与され、１）、２）、３）、４）、５）、６）、７）、８）、９）、１０）、１１）、１２）又は１３）は、例えば、未処置の対象と比較して、例えば少なくとも一時的に、例えば永続的に起こる。
【００２６】
一実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上が起こるのに十分な時間にわたり、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作される免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の投与後に投与され、１）、２）、３）、４）、５）、６）、７）、８）、９）、１０）、１１）、１２）又は１３）は、例えば、未処置の対象と比較して、例えば少なくとも一時的に、例えば永続的に起こる。
【００２７】
一実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上が起こるのに十分な時間にわたり、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを有するか又はそれを発現するように操作される免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞にエクスビボで投与され、１）、２）、３）、４）、５）、６）、７）、８）、９）、１０）、１１）、１２）又は１３）は、例えば、未処置の細胞と比較して、例えば少なくとも一時的に、例えば永続的に起こる。
【００２８】
理論に拘束されないが、ＬＳＤ１はまた、ｐ５３を直接脱メチル化できると考えられ得る（Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １３，２９７−３１１（Ｍａｙ  ２０１２）、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。従って、一実施形態において、本明細書に記載の化合物及び方法は、ｐ５３の脱メチル化阻害に使用され得る。
【００２９】
一実施形態において、対象は、癌を有し、方法は、対象の癌に対する免疫応答の促進を含む。一実施形態において、対象は、癌を有することを基準に選択された。一実施形態において、癌の細胞は、ＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２を発現する。一実施形態において、癌微小環境内の細胞は、ＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２を発現する。
【００３０】
一実施形態において、癌は、固形腫瘍を含む。一実施形態において、癌は、血液癌である。一実施形態において、癌は、白血病である。一実施形態において、癌は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である。一実施形態において、癌は、ＣＬＬであり、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＣＤ１９を標的とする。一実施形態において、癌は、黒色腫である。
【００３１】
一実施形態において、方法は、対象に更なる処置、例えば化学療法、放射線、細胞療法又は骨髄移植を施すことを更に含む。一実施形態において、方法は、Ｔ細胞を死滅させる更なる処置、例えば放射線又は細胞毒性化学療法を施すことを更に含む。一実施形態において、方法は、ビタミンＥ、ビタミンＡ、抗細菌抗生物質、抗酸化剤、Ｌ−カルニチン、リポ酸、メトホルミン、レスベラトロール、レプチン、非ステロイド抗炎症剤又はＣＯＸ阻害剤などのｍＴＯＲ経路阻害剤を対象に投与することを更に含む。一実施形態において、方法は、メトホルミンを対象に投与することを更に含む。一実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、更なる処置開始前又は後に投与される。一実施形態において、方法は、癌のための更なる処置を施すことを更に含む。
【００３２】
一実施形態において、方法は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞を別の薬剤と組み合わせて（ＬＳＤ１阻害剤に加えて）投与することを更に含む。一実施形態において、薬剤は、キナーゼ阻害剤、例えばＣＤＫ４／６阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＭＮＫ阻害剤又はデュアルｍＴＯＲ／Ｐ１３Ｋキナーゼ阻害剤及びこれらの組み合わせであり得る。
【００３３】
一実施形態において、方法は、哺乳動物に抗腫瘍免疫を提供することを含む。一実施形態において、細胞は、自己Ｔ細胞又は自己ＮＫ細胞である。一実施形態において、細胞は、同種異系Ｔ細胞又は同種異系ＮＫ細胞である。一実施形態において、哺乳動物は、ヒトである。
【００３４】
一実施形態において、方法は、癌関連抗原又は腫瘍マーカーの発現と関連する疾患を有する哺乳動物の処置を含む。
【００３５】
一実施形態において、方法は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の有効性を増強する薬剤、例えば本明細書に記載の薬剤を投与することを含む。
【００３６】
一実施形態において、方法は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現する細胞、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の投与と関連する１つ以上の副作用を軽減する薬剤、例えば本明細書に記載の薬剤を投与することを含む。
【００３７】
一実施形態において、方法は、本明細書に記載の癌関連抗原と関連する疾患を処置する薬剤、例えば本明細書に記載の薬剤を投与することを含む。
【００３８】
一実施形態において、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞は、２つ以上のＣＡＲ分子を発現し、例えばそれを必要とする対象に癌処置のために投与される。
【００３９】
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）に例えばインビトロ転写を用いて導入され、及び対象（例えば、ヒト）は、ＣＡＲ分子を含む細胞の最初の投与、及びＣＡＲ分子を含む細胞の１回以上の後続の投与を受け、１回以上の後続の投与は、前回の投与から１５日未満、例えば１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３又は２日後に投与される。一実施形態において、ＣＡＲ分子を含む細胞の２回以上の投与が１週間当たりで対象（例えば、ヒト）に投与され、例えばＣＡＲ分子を含む細胞の２、３又は４回の投与が１週間当たりで投与される。一実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、１週間当たりにＣＡＲ分子を含む細胞の２回以上の投与（例えば、１週間当たりに２、３又は４回の投与）を受け（本明細書ではサイクルとも称される）、続く１週間ではＣＡＲ分子を含む細胞の投与がなく、次にＣＡＲ分子を含む細胞の１回以上の更なる投与（例えば、１週間当たりにＣＡＲ分子を含む細胞の２回以上の投与）が対象に投与される。別の実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、２サイクル以上のＣＡＲ分子を含む細胞を受け、各サイクル間の時間は、１０、９、８、７、６、５、４又は３日未満である。一実施形態において、ＣＡＲ分子を含む細胞は、１週間当たり３回の投与のために隔日投与される。一実施形態において、ＣＡＲ分子を含む細胞は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８週間又はそれを超えて投与される。
【００４０】
一実施形態において、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞は、疾患、例えば癌、例えば本明細書に記載の癌に対する第一選択治療として投与される。別の実施形態において、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、疾患、例えば癌、例えば本明細書に記載の癌に対する第二、第三、第四選択治療として投与される。
【００４１】
一実施形態において、本明細書に記載の細胞の集団が投与される。
【００４２】
一実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、単一組成物に存在し、例えば単一組成物として投与される。一実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、別々の組成物に存在し、例えば別々の組成物として投与される。
【００４３】
ある態様において、本開示は、対象の処置における使用のためのＬＳＤ１阻害剤を提供し、前記ＬＳＤ１阻害剤は、前記対象の免疫応答を増強し、前記対象は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞を受けたか、受けているか、又は受けることになる。
【００４４】
ある態様において、本開示は、対象の処置における使用のための、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞を提供し、前記対象は、ＬＳＤ１阻害剤、例えば前記対象の免疫応答を増強するものを受けたか、受けているか、又は受けることになる。
【００４５】
ある態様において、本開示は、対象の処置における使用のための、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞を提供し、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された前記免疫エフェクター細胞は、ＬＳＤ１阻害剤と接触されている、例えばエクスビボでＬＳＤ１阻害剤と接触されている。
【００４６】
一実施形態において、自己又は同種異系免疫エフェクター細胞の集団は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものをコードする核酸分子を含むベクターでトランスフェクト又は形質導入される。一実施形態において、ベクターは、レトロウイルスベクターである。一実施形態において、ベクターは、本明細書の他の箇所に記載する自己不活性化レンチウイルスベクターである。一実施形態において、ベクターは、細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞に送達（例えば、トランスフェクト又は電気穿孔により）され、ベクターは、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものをコードする核酸分子を含み、これは、ｍＲＮＡ分子として転写され、ＣＡＲ分子がＲＮＡ分子から翻訳され、細胞表面に発現される。
【００４７】
一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲ発現Ｔ細胞（ＣＡＲＴ細胞）又はＣＡＲ発現ＮＫ細胞の集団が投与される。一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞集団は、種々のＣＡＲを発現する細胞の混合物を含む。例えば、一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の集団は、本明細書に記載の腫瘍マーカーに結合する抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現する第１の細胞、及び本明細書に記載の第２の腫瘍マーカーに結合する、異なる抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現する第２の細胞を含み得る。別の例として、ＣＡＲ発現細胞の集団は、本明細書に記載の腫瘍マーカーに結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第１の細胞、及び本明細書に記載の腫瘍マーカー以外の標的に対する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第２の細胞を含み得る。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞集団は、例えば、初代細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第１の細胞及び二次シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第２の細胞を含む。
【００４８】
ある態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団を投与することを含む、対象（例えば、疾患、例えば腫瘍抗原の発現と関連する疾患、例えば癌を有する対象）を処置する方法を特徴とし、ＬＳＤ１阻害剤は、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含む。実施形態において、方法は、免疫エフェクター細胞の集団の前にＬＳＤ１阻害剤を投与することを含む。実施形態において、方法は、免疫エフェクター細胞の集団と同時にＬＳＤ１阻害剤を投与することを含む。実施形態において、方法は、免疫エフェクター細胞の集団の後にＬＳＤ１阻害剤を投与することを含む。一実施形態において、方法は、免疫エフェクター細胞の集団が投与される前後にＬＳＤ１阻害剤を（例えば、ある間隔で）投与することを含む。
【００４９】
ある態様において、本発明は、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含むＬＳＤ１阻害剤を対象に投与することを含む、対象（例えば、疾患、例えば腫瘍抗原の発現と関連する疾患、例えば癌に罹患している対象）を処置する方法であって、前記対象は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団を受けたか、受けているか、又は受けることになる、方法を特徴とする。一実施形態において、方法は、ＬＳＤ１阻害剤及び例えば本明細書に記載される、ＣＡＲ分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団を対象に投与することを含む。一実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団の前に投与され、前記ＬＳＤ１阻害剤の投与は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団の投与後、ある期間にわたって継続される。他の実施形態において、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団の投与後のＬＳＤ１阻害剤の投与は、前記ＬＳＤ１阻害剤の非存在下で投与されたＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の均等な集団と比較して、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団の抗腫瘍効果を増加させるのに十分な量におけるものである。
【００５０】
別の態様において、本発明は、対象におけるＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のもの、例えばＣＡＲ１９を発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団（例えば、ＣＴＬ０１９）の治療有効性を増加させる方法であって、前記細胞におけるＬＳＤ１の活性又は発現を少なくとも一過性に、例えば一過性又は永続的に減少させる工程を含み、それにより、前記細胞におけるＬＳＤ１の活性又は発現を減少させる工程は、前記細胞を３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含むＬＳＤ１阻害剤と接触させることを含む、方法を特徴とする。実施形態において、接触は、エクスビボで行われる。一実施形態において、接触は、インビボで行われる（例えば、免疫エフェクター細胞の集団及びＬＳＤ１阻害剤を対象に共投与する）。
【００５１】
前述の態様のいずれかの実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤の投与又は接触は、
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
をもたらす。
【００５２】
実施形態において、効果は、一過性である。一実施形態において、効果は、永続的である。実施形態において、効果は、ＬＳＤ１阻害剤と接触されていない細胞と比較したものである。実施形態において、効果は、ＬＳＤ１阻害剤と接触されていない同じ対象の細胞と比較したものである。
【００５３】
別の態様において、本発明は、対象を処置する方法であって、
ａ）３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含むＬＳＤ１阻害剤を対象に投与することと、
ｂ）ＬＳＤ１阻害剤の前記投与後、ａ）の対象から免疫エフェクター細胞の集団を採取することと、
ｃ）前記免疫エフェクター細胞の集団をエクスビボで提供することと、
ｄ）前記エクスビボでの免疫エフェクター細胞の集団をＬＳＤ１阻害剤と接触させることであって、ＬＳＤ１阻害剤との接触は、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上を生じさせる、接触させることと、
ｅ）免疫エフェクター細胞の集団を対象に投与することと
を含む方法を提供する。
【００５４】
一実施形態において、ｄ）の効果は、一過性である。一実施形態において、ｄ）の効果は、永続的である。実施形態において、ｄ）の効果は、ＬＳＤ１阻害剤と接触されていない細胞と比較したものである。実施形態において、工程ｅ）の投与は、工程ｂ）の対象と同じ対象に対するものである（例えば、自己免疫エフェクター細胞の集団を使用する処置方法に関する）。実施形態において、工程ｅ）の投与は、工程ｂ）の対象と例えば同じ種の異なる対象に対するものである（例えば、同種異系免疫エフェクター細胞の集団を使用する処置方法に関する）。
【００５５】
実施形態において、ｅ）の工程は、ＬＳＤ１阻害剤を対象に投与することを更に含む。実施形態において、方法は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものをコードする核酸をエクスビボでの免疫エフェクター細胞の集団の細胞に挿入する工程を更に含む。
【００５６】
別の態様において、本発明は、例えば、本明細書に記載される、例えばＣＡＲ分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団の製造における、ＬＳＤ１阻害剤の使用を特徴とする。ある態様において、本発明は、
ａ）免疫エフェクター細胞の集団を、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含むＬＳＤ１阻害剤と接触させ、それにより、任意選択によりＴ細胞の集団である免疫エフェクター細胞の集団を作製する工程
を含み、ＬＳＤ１阻害剤との接触は、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、又は
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、又は
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上を生じさせる、免疫エフェクター細胞の集団を作製する方法を提供する。
【００５７】
実施形態において、１）〜１３）の効果は、一過性である。実施形態において、１）〜１３）の効果は、永続的である。実施形態において、１）〜１３）の効果は、ＬＳＤ１阻害剤と接触されていない細胞と比較したものである。
【００５８】
実施形態において、方法は、ｂ）ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものをコードする核酸を免疫エフェクター細胞の集団の細胞に挿入する工程を更に含む。実施形態において、工程ａ）の接触は、
１）前記工程ｂ）の挿入前、
２）前記工程ｂ）の挿入と同時、
３）前記工程ｂ）の挿入後、又は
４）前記工程ｂ）の挿入の前後の両方
において起こる。一実施形態において、工程ａ）の接触及び任意選択により工程ｂ）の挿入は、エクスビボである。
【００５９】
別の態様において、本発明は、前述の態様において記載した方法のいずれかにより作製された、例えばＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された細胞、例えば免疫エフェクター細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団を特徴とする。
【００６０】
別の態様において、本発明は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団を特徴とし、ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記細胞におけるＬＳＤ１の発現及び／又は機能は、低減又は除去されている。一実施形態において、減少又は除去は、少なくとも一過性である。実施形態において、免疫エフェクター細胞の集団は、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含むＬＳＤ１阻害剤と接触されている。一実施形態において、本発明は、上記の免疫エフェクター細胞の集団及びＬＳＤ１阻害剤を含む組成物を特徴とする。
【００６１】
前述の態様及び実施形態のいずれかにおいて、細胞及び／又は細胞の集団は、免疫エフェクター細胞であり（又はそれを含み）、例えば、免疫エフェクター細胞の集団は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞を含む、例えばそれからなる。実施形態において、細胞は、Ｔ細胞、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞又はこれらの組み合わせである。実施形態において、細胞は、ＮＫ細胞である。
【００６２】
一実施形態において、細胞は、ヒト細胞である。実施形態において、細胞は、例えば、細胞を投与する対象に対して自己由来である。実施形態において、細胞は、例えば、細胞を投与する対象に対して同種異系である。
【００６３】
実施形態において、細胞は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された細胞であるか又はそれを含む。
【００６４】
ＣＡＲが関与する前述の態様及び実施形態のいずれかにおいて、ＣＡＲは、（任意選択により、抗体又は抗体フラグメント、ＴＣＲ又はＴＣＲフラグメントである）抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び（任意選択により、共刺激ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインである）細胞内シグナル伝達ドメインを含む。実施形態では、腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメインは、ＴＳＨＲ、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ−１、ＣＬＬ−１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、Ｔｎ  Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ−１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ−β、ＳＳＥＡ−４、ＣＤ２０、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ−ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１ａ、ＭＡＧＥ−Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ  Ａ１、ＥＴＶ６−ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ  ２、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＭＡＤ−ＣＴ−２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＣＴＡ−１／ガレクチン８、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ−ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ−２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ−１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５並びにＩＧＬＬ１からなる群から選択される。一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、ＣＤ１９又はＢＣＭＡに結合する。
【００６５】
一部の実施形態において、抗原結合ドメインは、
（ｉ）表６〜９によるＣＤ１９結合ドメインのアミノ酸配列、例えば表９によるＣＴＬ０１９  ｓｃＦｖドメインのアミノ酸配列若しくは配列番号９５７によるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列、
（ｉｉ）表６〜９によるＣＤ１９結合ドメインのアミノ酸配列、例えば表９によるＣＡＲ２  ｓｃＦｖドメインのアミノ酸配列若しくは配列番号８９８によるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列、又は
（ｉｉｉ）表１１Ａ〜１１ＢによるＢＣＭＡ結合ドメインのアミノ酸配列、例えば表１１Ａによる１３９１０９  ｓｃＦｖドメインのアミノ酸配列若しくは配列番号９６７によるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列
を含む抗体又は抗体フラグメントであるか、又はＣＡＲは、
（ｉ）表６〜９によるＣＤ１９  ＣＡＲのアミノ酸配列、例えば表９によるＣＴＬ０１９のアミノ酸配列若しくは配列番号９５６によるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列、
（ｉｉ）表６〜９によるヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲのアミノ酸配列、例えば表９によるＣＡＲ２のアミノ酸配列若しくは配列番号９０２によるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列、又は
（ｉｉｉ）表１１Ａ〜１１ＢによるＢＣＭＡ  ＣＡＲのアミノ酸配列、例えば表１１Ａによる１３９１０９  ＣＡＲのアミノ酸配列若しくは配列番号９７１によるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９５％同一のアミノ酸配列
を含む。
【００６６】
実施形態において、膜貫通ドメインは、
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの修飾であるが、２０、１０若しくは５つを超えない修飾を有するアミノ酸配列又は配列番号１２のアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列、又は
（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列
を含む。
【００６７】
一実施形態において、抗原結合ドメインは、ヒンジ領域によって膜貫通ドメインに結合され、前記ヒンジ領域は、配列番号２若しくは配列番号６又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。
【００６８】
一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン及び／又は共刺激シグナル伝達ドメインを含み、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、共通ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲβ（ＦｃεＲ１ｂ）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＦｃγＲＩＩａ、ＤＡＰ１０又はＤＡＰ１２から選択されるタンパク質の機能的シグナル伝達ドメインを含む。
【００６９】
実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、
（ｉ）配列番号１８若しくは配列番号２０のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの修飾であるが、２０、１０若しくは５つを超えない修飾を有するアミノ酸配列又は配列番号１８若しくは配列番号２０のアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列、又は
（ｉｉ）配列番号１８又は配列番号２０のアミノ酸配列
を含む。
【００７０】
一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメイン又は一次シグナル伝達ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインを含み、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６及びＮＫＧ２Ｄからなる群から選択されるタンパク質の機能的シグナル伝達ドメインを含み、例えば、共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１４若しくは配列番号１６のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの修飾であるが、２０、１０若しくは５つを超えない修飾を有するアミノ酸配列又は配列番号１４若しくは配列番号１６のアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含み、例えば、共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１４又は配列番号１６の配列を含み、例えば、細胞内ドメインは、配列番号１４又は配列番号１６の配列及び配列番号１８又は配列番号２０の配列を含み、細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列は、同一フレームにおいて且つ単一ポリペプチド鎖として発現される。
【００７１】
実施形態において、ＣＡＲは、配列番号２を含む、例えばそれからなるリーダー配列を含む。
【００７２】
前述の態様及び実施形態のいずれかにおいて、方法は、（１）ＬＳＤ１遺伝子又はその対応する調節エレメントの１つ以上の部位を標的とする遺伝子編集系、（２）ＬＳＤ１遺伝子の標的配列に相補性の配列を含む核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ若しくはｓｈＲＮＡ又はアンチセンスオリゴヌクレオチド）、（３）タンパク質（例えば、ドミナントネガティブＬＳＤ１、例えば触媒的不活性ＬＳＤ１又はＬＳＤ１のドミナントネガティブ結合パートナー）、（４）小分子、（５）（１）〜（３）のいずれかをコードする核酸、又は（６）（１）〜（５）の任意の組み合わせから選択される第２のＬＳＤ１阻害剤を投与することを更に含む。
【００７３】
ある態様において、第２のＬＳＤ１阻害剤は、ｓｈＲＮＡ又はｓｉＲＮＡである。実施形態において、第２のＬＳＤ１阻害剤は、ｓｈＲＮＡである。実施形態において、第２のＬＳＤ１阻害剤は、ｓｉＲＮＡである。一実施形態において、ｓｈＲＮＡ又はｓｉＲＮＡは、例えば、配列番号４３〜８２のいずれかから選択される、ＬＳＤ１遺伝子（ＫＤＭ１Ａ）の標的配列に相補性の配列を含む。
【００７４】
別の態様において、第２のＬＳＤ１阻害剤は、抗ＬＳＤ１  ｓｈＲＮＡをコードする任意の配列を含む核酸によってコードされる、例えば配列番号８３〜１２２のいずれかから選択される配列を含む核酸によってコードされるｓｈＲＮＡである。
【００７５】
別の態様において、第２のＬＳＤ１阻害剤は、抗ＬＳＤ１  ｓｈＲＮＡをコードする任意の配列を含む核酸、例えば配列番号８３〜１２２のいずれかから選択される配列である。
【００７６】
別の態様において、第２のＬＳＤ１阻害剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。一実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＬＳＤ１  ｍＲＮＡの配列と相補性である配列を含む。一実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＬＳＤ１プレｍＲＮＡの配列と相補性である配列を含む。
【００７７】
一実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤をコードする第２の核酸は、ベクター上に配置され、例えば、ベクターは、前記核酸に作動可能に連結されたＵ６又はＨ１プロモーターを更に含み、例えばレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクター、プラスミド、ミニサークル、ナノプラスミド又はＲＮＡベクターである。実施形態において、ベクターは、ＣＡＲ分子をコードする配列を更に含む。
【００７８】
別の態様において、第２のＬＳＤ１阻害剤は、ＣＲＩＳＰＲゲノム編集系、亜鉛フィンガーヌクレアーゼゲノム編集系、ＴＡＬＥＮゲノム編集系及びメガヌクレアーゼゲノム編集系から選択される、ＬＳＤ１遺伝子（ＫＤＭ１Ａ）又はその調節エレメントの配列に特異的なゲノム編集系である。
【００７９】
別の態様において、第２のＬＳＤ１阻害剤は、ＬＳＤ１遺伝子（ＫＤＭ１Ａ）又はその調節エレメントの配列に相補性の標的ドメインを含む、例えば配列番号１３２〜８６２のいずれかを含むｇＲＮＡ分子を含むＣＲＩＳＰＲゲノム編集系である。
【００８０】
他の態様において、第２のＬＳＤ１阻害剤は、小分子である。実施形態において、小分子は、可逆的ＬＳＤ１阻害剤である。実施形態において、小分子は、不可逆的ＬＳＤ１阻害剤である。実施形態において、小分子ＬＳＤ１阻害剤は、
ａ）ＧＳＫ２６９９５３７、
ｂ）ｒｅｌ−２−［［（１Ｒ，２Ｓ）−２−［４−［（４−クロロフェニル）メトキシ］フェニル］シクロプロピル］アミノ］−１−（４−メチル−１−ピペラジニル）−エタノン（国際公開第２０１００４３７２１号パンフレットに記載され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）、
ｃ）（Ｒ）−４−（５−（ピロリジン−３−イルメトキシ）−２−（ｐ−トリル）ピリジン−３−イル）ベンゾニトリル、
ｄ）（１Ｓ，２Ｒ）−Ｎ−（（２−メトキシピリジン−３−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパン−１−アミン、
ｅ）Ｎ、Ｎ−ジメチル−１−（（４−（４−（４−（ピペリジン−４−イル）フェニル）−１Ｈ−インダゾール−１−イル）フェニル）スルホニル）ピペリジン−４−アミン、
ｆ）５−（６−クロロ−４’−（メチルスルホニル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−２−（ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボニトリル、
ｇ）ｒｅｌ−Ｎ−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル］−４−ピペリジンアミン、
ｈ）２−（１Ｒ，２Ｓ）−２−（４−（ベンジルオキシ）フェニル）シクロプロピルアミノ）−１−（４−メチルピペラジン−１−イル）エタノン、
ｉ）トランス−３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−ヒドロキシシクロヘキシル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリル、
ｊ）３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリル、又は
ｋ）前述のもののいずれかの薬学的に許容される塩
である。
【００８１】
一実施形態において、第２のＬＳＤ１阻害剤は、小分子であり、第２のＬＳＤ１阻害剤は、抗体又はその抗原結合フラグメント、例えばＴ細胞表面の抗原、例えばＣＤ３を認識する抗体又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートされる。
【００８２】
別の態様において、第２のＬＳＤ１阻害剤は、タンパク質であり、例えばＬＳＤ１のドミナントネガティブ結合パートナー（例えば、ＬＳＤ１又はＣｏ−ＲＥＳＴ若しくはＡＲ共アクティベータ複合体の別のメンバーと相互作用するヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ））又はＬＳＤ１の前記ドミナントネガティブ結合パートナーをコードする核酸である。
【００８３】
別の態様において、第２のＬＳＤ１阻害剤は、タンパク質であり、例えばドミナントネガティブ（例えば、触媒的不活性）ＬＳＤ１又は前記ドミナントネガティブＬＳＤ１をコードする核酸である。
【００８４】
別の態様において、本発明は、処置を、それを必要とする対象において行う方法であって、先の態様及び実施形態のいずれかの免疫エフェクター細胞の集団の有効量を前記対象に投与することを含む方法を提供する。
【００８５】
一実施形態において、方法は、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含むＬＳＤ１阻害剤を前記対象に投与することを更に含む。
【００８６】
一実施形態において、対象は、免疫エフェクター細胞の集団の投与前にＬＳＤ１阻害剤の前処置を受ける。
【００８７】
一実施形態において、対象は、ＬＳＤ１阻害剤及び免疫エフェクター細胞の集団による同時処置を受ける。
【００８８】
一実施形態において、対象は、免疫エフェクター細胞の集団の投与後にＬＳＤ１阻害剤による処置を受ける。
【００８９】
一実施形態において、対象は、前述のもののいずれかの組み合わせを受ける。
【００９０】
処置方法に関連する先の態様を含む一態様において、本発明は、対象を処置する方法に関し、対象は、腫瘍抗原の発現と関連する疾患、例えば増殖性疾患、前癌状態、癌又は腫瘍抗原の発現と関連する非癌関連の適応症を有する。
【００９１】
実施形態において、癌は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性白血病、急性リンパ系白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ系白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ系白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリーセル白血病、小細胞型若しくは大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性のリンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症又は前白血病の１つ以上から選択される血液癌である。実施形態では、癌は、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺の非小細胞癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚又は眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣の癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、膀胱癌、腎臓癌又は尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境的に誘発された癌、前記癌の組み合わせ及び前記癌の転移性病変からなる群から選択される。
【００９２】
別の態様において、本発明は、新規化合物を提供する。このような化合物は、例えば、本明細書に記載の方法及び組成物に有用であるが、このような使用及び組成物は、限定的であることを意図するものではない。
【００９３】
一部の実施形態において、本発明は、式（Ｉ）：
【化１】
2019532953.tif 000002
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、本明細書において定義される場合、ＬＳＤ１媒介疾患又は障害の処置に有用であるその立体異性体、互変異性体、薬学的に許容される塩、多形体又は溶媒和物を含む）
の化合物を提供する。
【００９４】
一部の実施形態において、本発明は、本発明の化合物を作製するための過程及び中間体も提供する。
【００９５】
一実施形態において、本発明は、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリル、Ｎ、Ｎ−ジメチル−１−（（４−（４−（４−（ピペリジン−４−イル）フェニル）−１Ｈ−インダゾール−１−イル）フェニル）スルホニル）ピペリジン−４−アミン及び５−（６−クロロ−４’−（メチルスルホニル）ビフェニル−３−イル）−２−（ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボニトリルから選択される化合物を提供する。一実施形態において、本発明は、Ｎ、Ｎ−ジメチル−１−（（４−（４−（４−（ピペリジン−４−イル）フェニル）−１Ｈ−インダゾール−１−イル）フェニル）スルホニル）ピペリジン−４−アミンを提供する。一実施形態において、本発明は、５−（６−クロロ−４’−（メチルスルホニル）ビフェニル−３−イル）−２−（ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボニトリルを提供する。一実施形態において、本発明は、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを提供する。
【００９６】
本発明は、前述のもののいずれかの薬学的に許容される塩を更に提供する。
【００９７】
本発明は、医薬の製造における使用のための上記のような化合物、例えば３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを更に提供する。
【００９８】
本発明は、医薬として上記の化合物、例えば３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを更に提供する。
【００９９】
本発明は、ＬＳＤ１阻害剤としての使用、例えば本明細書に記載の方法のいずれかにおけるＬＳＤ１阻害剤としての使用のための医薬の製造における使用のための、上記の化合物、例えば３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを更に提供する。
【０１００】
一実施形態において、本発明は、治療における単独での又は任意選択により少なくとも別の１つの薬剤と組み合わせた使用のための、上記の化合物、例えば３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを提供する。
【０１０１】
本発明は、少なくとも１つの本発明の化合物と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤とを含む医薬組成物も提供する。医薬組成物は、少なくとも１つの更なる治療剤を更に含み得る。他の抗癌剤、免疫調節剤、抗アレルギー剤、制吐剤（又は制吐剤）、鎮痛剤、細胞保護剤及びこれらの組み合わせから選択される追加の治療剤が特に興味深い。
【０１０２】
本発明の化合物は、ＬＳＤ１によって媒介される疾患又は障害の処置において使用され得る。
【０１０３】
本発明の化合物は、治療において使用され得る。
【０１０４】
本発明の化合物は、ＬＳＤ１によって媒介される疾患又は障害の処置のための医薬の製造に使用され得る。
【０１０５】
本発明は、ＬＳＤ１によって媒介される疾患又は障害の処置のための方法であって、それを必要とする患者に治療上有効量の第１の治療剤を任意選択により第２の治療剤と共に投与することを含む方法を提供し、第１の治療剤は、本発明の化合物であり、第２の治療剤は、他の１種の治療剤である。
【０１０６】
ＬＳＤ１によって媒介される疾患又は障害の例は、これらに限定されないが、Ｂ細胞リンパ腫、急性骨髄性白血病、胃癌、肝細胞癌、前立腺癌、乳癌、神経芽細胞腫、神経膠芽腫、上咽頭癌、結腸癌、胆嚢癌、食道癌、頭頸部癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、子宮内膜癌及び横紋筋肉腫（ＲＭＳ）、軟骨肉腫、骨肉腫、ユーイング肉腫、肝線維症、鎌状赤血球症などの軟部組織肉腫を含む。
【０１０７】
本発明は、ＬＳＤ１によって媒介される疾患又は障害の処置方法であって、それを必要とする患者に治療上有効量の第１の治療剤を任意選択により第２の治療剤と共に投与することを含む方法を提供し、第１の治療剤は、ＬＳＤ１阻害剤であり、第２の治療剤は、他の１種の治療剤であり、疾患又は障害は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、他のリンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、胃癌、悪性ラブドイド腫瘍、前立腺癌及び肝細胞癌から選択される。
【０１０８】
本発明の化合物は、単独で、本発明の他の化合物と組み合わせて、又は１つ以上、好ましくは１〜２つの他の薬剤と組み合わせて同時に又は逐次的に使用することができる。
【０１０９】
別の態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤、例えば３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含む、免疫エフェクター細胞の集団のエクスビボでの製造に使用するための組成物を提供する。一実施形態において、組成物は、約０．００１ｎＭ〜約１０ｍＭ、例えば約０．１ｕＭ〜約１０ｕＭの範囲の濃度でＬＳＤ１阻害剤を含む。
【０１１０】
一態様において、本発明は、対象の処置に使用するための、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含むＬＳＤ１阻害剤を提供し、前記対象は、免疫エフェクター細胞、例えばＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞を含む治療を受けたか、受けているか、又は受けることになる。
【０１１１】
一態様において、本発明は、免疫エフェクター細胞、例えばＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の製造において使用するための、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルを含むＬＳＤ１阻害剤を提供する。
【０１１２】
一態様において、本発明は、免疫エフェクター細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団の製造方法であって、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものをコードする核酸を前記細胞に導入することを含む方法を提供し、核酸は、ＬＳＤ１発現及び／又は機能が低減されるようにＬＳＤ１遺伝子内の前記細胞のゲノムに組み込まれる。
【０１１３】
本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１１４】
【図１】対照と比較した、ＬＳＤ１阻害剤ｓｈＲＮＡ（分子１Ａ、１Ｂ、２、３Ａ、３Ｂ、４又は６Ａ）の存在下、ＣＤ３／ＣＤ２８を使用して活性化した後のＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋であるヒトドナーからのＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。
【図２】対照と比較した、ＬＳＤ１阻害剤ｓｈＲＮＡ（分子１Ａ、１Ｂ、２、３Ａ、３Ｂ、４又は６Ａ）の存在下、ＣＤ３／ＣＤ２８を使用して活性化した後のＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋であるヒトドナーからのＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。
【図３Ａ】示された化合物が所与の表現型のＴ細胞を産生する能力を評価したことを示す。ナイーブヒトＴ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の存在下、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。化合物を２日ごとに補充した。増殖後、Ｔ細胞表現型をＦＡＣＳ染色により決定した。ＬＳＤ１阻害は、対照と比較して及び他の公知の条件と比較して、ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＴｓｃｍ細胞のパーセンテージを有意に増加させた一方、Ｔｅｍ細胞のパーセンテージを減少させた。
【図３Ｂ】示された化合物が所与の表現型のＴ細胞を産生する能力を評価したことを示す。ナイーブヒトＴ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の存在下、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。化合物を２日ごとに補充した。増殖後、Ｔ細胞表現型をＦＡＣＳ染色により決定した。ＬＳＤ１阻害は、対照と比較して及び他の公知の条件と比較して、ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＴＳＣＭ細胞のパーセンテージを有意に増加させた一方、Ｔｅｍ細胞のパーセンテージを減少させた。
【図４Ａ】ＣＤ４＋細胞における、ＴＳＣＭ対ＴＥＭ比についてＴ細胞表現型に影響すると考えられる他の化合物と比較したＬＳＤ１阻害の効果を示す。
【図４Ｂ】ＣＤ８＋細胞における、ＴＳＣＭ対ＴＥＭ比についてＴ細胞表現型に影響すると考えられる他の化合物と比較したＬＳＤ１阻害の効果を示す。
【図５】ＬＳＤ１阻害剤の存在下でＣＤ３／ＣＤ２８刺激を使用したＴ細胞の増殖を示す。
【図６】ＬＳＤ１阻害剤の存在下で増殖させたＴ細胞におけるチェックポイントタンパク質ＰＤ１、Ｔｉｍ３及びＬａｇ３の発現を示す。
【図７】ＬＳＤ１阻害剤の存在下で増殖させたＴ細胞におけるＣＡＲ発現レベルを示す。
【図８】ＬＳＤ１阻害剤の存在下でのＣＤ４＋及びＣＤ８＋ＣＡＲＴ及び非形質導入Ｔ細胞の比率を示す。
【図９】ＬＳＤ１阻害剤の存在下でのＣＡＲＴ細胞及び非形質導入Ｔ細胞の増殖を示す。
【図１０】ＬＳＤ１阻害剤の存在下増殖させ、次いでＣＤ１９＋又はＣＤ１９−腫瘍細胞に曝露したＣＡＲＴ細胞からのサイトカイン産生を示す。
【図１１】ＣＡＲ刺激後、有意に増加した増殖能力におけるＬＳＤ１阻害の効果を示す。ナイーブヒトＴ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の存在下、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。Ｔ細胞を１日目に抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖで形質導入した。化合物を１０日目まで２日ごとに補充し、機能的アッセイ前に洗い流した。増殖後、Ｔ細胞をＣＤ１９＋腫瘍細胞株ＮＡＬＭ６及びＲａｊｉ並びにＣＤ１９−腫瘍細胞株Ｋ５６２と混合した。腫瘍細胞を照射し、Ｔ細胞及び腫瘍細胞を１：１の比率で混合した。インキュベーション後４日目に、Ｔ細胞を、タンパク質Ｌを使用してＣＡＲについて染色し、ＣＡＲ＋Ｔ細胞数を、ｃｏｕｎｔｂｒｉｇｈｔビーズを使用してＦＡＣＳにより決定した。増殖は、２５００個のビーズを計数するために使用された期間中に検出されたＦＡＣＳ陽性細胞の数として測定した。データを無標的対照（Ｋ５６２）の倍率として表した。
【図１２】陰性選択により単離し、示された化合物の示された用量での存在下又は処置なし（対照）で、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させたナイーブヒトＴ細胞に対する示された化合物の効果を示す。Ｔ細胞を１日目に抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖで形質導入した。化合物を１０日目まで２日ごとに補充し、機能的アッセイ前に洗い流した。増殖後、ルシフェラーゼ化ＣＤ１９＋ＮＡＬＭ６腫瘍細胞株のＴ細胞死滅を評価した。２０時間後、ルシフェラーゼシグナルを、ＥｎＶｉｓｉｏｎ装置でＢｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイを使用して測定した。
【図１３】ＬＳＤ１阻害剤の存在下、エクスビボで増殖させたＣＡＲＴ細胞のインビボ抗腫瘍有効性を示す。
【図１４Ａ】ＬＳＤ１阻害剤の存在下でのＣＤ４＋Ｔ細胞（例えば、ＴＳＣＭ）細胞の増殖レベルを示す。
【図１４Ｂ】ＬＳＤ１阻害剤の存在下でのＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、ＴＳＣＭ）細胞の増殖レベルを示す。
【図１５Ａ】ＬＳＤ１阻害剤の存在下増殖させたＣＤ４＋Ｔ細胞上のチェックポイントタンパク質ＰＤ１、Ｔｉｍ３及びＬａｇ３の発現レベルを示す。
【図１５Ｂ】ＬＳＤ１阻害剤の存在下増殖させたＣＤ８＋Ｔ細胞上のチェックポイントタンパク質ＰＤ１、Ｔｉｍ３及びＬａｇ３の発現レベルを示す。
【図１６】ＬＳＤ１阻害剤の存在下又は非存在下、増殖後のＰＤ１、Ｔｉｍ３又はＬａｇ３（左パネル）又は共発現ＰＤ１／Ｌａｇ３又はＰＤ１／Ｌａｇ３／Ｔｉｍ３を発現する全Ｔ細胞のパーセンテージを示す。
【図１７】ＬＳＤ１阻害剤の存在下又は非存在下、増殖後のＴｓｃｍであるＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージ（左パネル）及びＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージ（右パネル）を示す。
【図１８】ＬＳＤ１阻害剤の存在下又は非存在下、増殖後のＴｉｍ３／Ｌａｇ３／ＰＤ−１の共発現について陽性であるＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージ（左パネル）及びＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージ（右パネル）を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１１５】
定義
特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本発明が関係する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。
【０１１６】
用語「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」は、その冠詞の文法上の指示対象の１つ又は１つより多い（即ち少なくとも１つ）を指す。例として、「要素」は、１つの要素又は１つより多い要素を意味する。
【０１１７】
用語「約」は、量、時間的な継続期間などの計測可能な値を参照するとき、指定される値から±２０％又は一部の例では±１０％、又は一部の例では±５％、又は一部の例では±１％、又は一部の例では±０．１％の変動が、かかる変動が本開示の方法の実施に適切であるものとして包含されることを意味する。
【０１１８】
用語「キメラ抗原受容体」又は代替的に「ＣＡＲ」は、免疫エフェクター細胞内にあるとき、標的細胞、典型的には癌細胞に対する特異性、及び細胞内シグナル生成を細胞に付与するポリペプチドの組、最も単純な実施形態では典型的には２つのポリペプチドを指す。一部の実施形態において、ＣＡＲは、少なくとも、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、ＣＡＲ分子に関連して下記に定義される刺激分子及び／又は共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも称される）とを含む。一部の態様において、ポリペプチドの組は、互いに連続している。一部の実施形態において、一連のポリペプチドは、二量化スイッチを含み、このスイッチは、二量化分子の存在を受けてポリペプチドを互いにカップリングすることができ、例えば抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインにカップリングすることができる。一態様において、刺激分子はＴ細胞受容体複合体に関連したζ鎖である。一態様において、細胞質シグナル伝達ドメインは、以下に定義する、少なくとも１つの共刺激分子に由来する１つ以上の機能的シグナル伝達ドメインを更に含む。一態様において、共刺激分子は、本明細書に記載の共刺激分子、例えば４−１ＢＢ（即ちＣＤ１３７）、ＣＤ２７及び／又はＣＤ２８から選択される。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、１つ以上の共刺激分子に由来する２つの機能的シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、１つ以上の共刺激分子に由来する少なくとも２つの機能的シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含むキメラ融合タンパク質を含む。一態様において、ＣＡＲは、ＣＡＲ融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ−ｔｅｒ）に任意選択によるリーダー配列を含む。一態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端にリーダー配列を更に含み、リーダー配列は、任意選択により、細胞プロセシング及びＣＡＲの細胞膜局在化中に抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）から切断される。
【０１１９】
本明細書に記載のものなどの特定の腫瘍マーカーＸを標的とする抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ又はＴＣＲ）を含むＣＡＲは、ＸＣＡＲとも称される。例えば、ＣＤ１９を標的とする抗原結合ドメインを含むＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲと称される。
【０１２０】
用語「シグナル伝達ドメイン」は、二次メッセンジャーを生成するか又はかかるメッセンジャーに応答してエフェクターとして機能することにより定義されたシグナル伝達経路を介して細胞活性を調節するように細胞内で情報を伝えることにより機能するタンパク質の機能性の一部分を指す。
【０１２１】
用語「抗体」は、本明細書で使用されるとき、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子に由来するタンパク質又はポリペプチド配列を指す。抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル、多重鎖又は単鎖、又はインタクトな免疫グロブリンであり得、及び天然の供給源又は組換え供給源に由来し得る。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であり得る。
【０１２２】
用語「抗体フラグメント」は、抗原のエピトープと特異的に相互作用する（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布による）能力を保持する抗体の少なくとも一部分を指す。抗体フラグメントの例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ抗体フラグメント、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、線形抗体、ｓｄＡｂなどの単一ドメイン抗体（ＶＬ又はＶＨのいずれか）、ラクダ科動物のＶＨＨドメイン、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結した２つ以上、例えば２つのＦａｂフラグメント又は単離ＣＤＲを含む二価フラグメントなどの抗体フラグメントから形成される多特異性分子又は抗体の他のエピトープ結合フラグメントを含むが、これらに限定されない。抗原結合断片は、シングルドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ及びビス−ｓｃＦｖにも取り込まれ得る（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１２６−１１３６，２００５を参照されたい）。抗原結合断片は、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）などのポリペプチドをベースとする足場にもグラフトされ得る（フィブロネクチンポリペプチドミニボディについて記載している米国特許第６，７０３，１９９号明細書を参照されたい）。
【０１２３】
用語「ｓｃＦｖ」は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片と、重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体断片とを含む融合タンパク質を指し、軽鎖及び重鎖可変領域は、例えば、合成リンカー、例えば短い可動性ポリペプチドリンカーによって近接して連結されており、単鎖ポリペプチドとして発現することが可能であり、及びｓｃＦｖは、その由来であるインタクトな抗体の特異性を保持している。指定されない限り、本明細書で使用されるとき、ｓｃＦｖは、ＶＬ及びＶＨ可変領域を例えばポリペプチドのＮ端側及びＣ端側末端に対していずれの順序でも有し得、ｓｃＦｖは、ＶＬ−リンカー−ＶＨを含み得るか又はＶＨ−リンカー−ＶＬを含み得る。
【０１２４】
抗体又はその抗体フラグメントを含む本発明のＣＡＲの一部分は、様々な形態で存在し得、抗原結合ドメインは、例えば、シングルドメイン抗体フラグメント（ｓｄＡｂ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ヒト化抗体又は二特異性抗体を含め、連続したポリペプチド鎖の一部として発現する（Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｈｏｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６）。一態様において、本発明のＣＡＲ組成物の抗原結合ドメインは、抗体フラグメントを含む。更なる態様において、ＣＡＲは、ｓｃＦｖを含む抗体フラグメントを含む。所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」付番スキーム）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ  ２７３，９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」付番スキーム）又はこれらの組み合わせを含め、いくつもの周知のスキームのいずれかを用いて決定することができる。
【０１２５】
本明細書で使用されるとき、用語「結合ドメイン」又は「抗体分子」は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質、例えば免疫グロブリン鎖又はその断片を指す。用語「結合ドメイン」又は「抗体分子」は、抗体及び抗体断片を包含する。ある実施形態において、抗体分子は、多重特異性抗体分子であり、例えば、これは、複数個の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、複数個のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数個のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列が第２のエピトープに対する結合特異性を有する。ある実施形態において、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２つ以下の抗原に対して特異性を有する。二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列及び第２のエピトープに対して結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列によって特徴付けられる。
【０１２６】
用語「抗体重鎖」は、その天然に存在するコンホメーションをとる抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖の大きい方を指し、通常、これが抗体の属するクラスを決定する。
【０１２７】
用語「抗体軽鎖」は、その天然に存在するコンホメーションをとる抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖の小さい方を指す。カッパ（κ）及びラムダ（λ）軽鎖が２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。
【０１２８】
用語「組換え抗体」は、例えば、バクテリオファージ又は酵母発現システムによって発現される抗体など、組換えＤＮＡ技術を用いて作成される抗体を指す。この用語は、抗体をコードするＤＮＡ分子であって、抗体タンパク質を発現するＤＮＡ分子、又はその抗体を指定するアミノ酸配列の合成によって作成された抗体を意味するとも解釈されるべきであり、ＤＮＡ又はアミノ酸配列は、当技術分野において利用可能な周知の組換えＤＮＡ又はアミノ酸配列技術を用いて得られたものである。
【０１２９】
用語「抗原」又は「Ａｇ」は、免疫応答を引き起こす分子を指す。この免疫応答には、抗体産生、又は特異的免疫適格細胞の活性化のいずれか又は両方が含まれ得る。当業者は、任意の巨大分子が、事実上あらゆるタンパク質又はペプチドを含め、抗原となり得ることを理解するであろう。更に、抗原は、組換えＤＮＡ又はゲノムＤＮＡに由来し得る。当業者は、従って、免疫応答を生じさせるタンパク質をコードするヌクレオチド配列又は部分的ヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡが、その用語が本明細書において使用されるとおりの「抗原」をコードすることを理解するであろう。更に、当業者は、抗原がある遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によってのみコードされる必要はないことを理解するであろう。本発明には、限定されないが、２つ以上の遺伝子の部分的ヌクレオチド配列の使用が含まれること、及びそれらのヌクレオチド配列が所望の免疫応答を生じさせるポリペプチドをコードするように様々な組み合わせで配列されることが容易に明らかである。更に、当業者は、抗原が「遺伝子」によってコードされる必要は全くないことを理解するであろう。抗原は、合成され得、又は生体試料から得られ得、又はポリペプチド以外の巨大分子である可能性もあることが容易に明らかである。かかる生体試料には、限定されないが、組織試料、腫瘍試料、細胞又は体液が他の生物学的成分と共に含まれ得る。
【０１３０】
用語「抗癌効果」は、限定されないが、例えば腫瘍容積の減少、癌細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の増加、癌細胞増殖の減少、癌細胞生存の減少、又は癌性病態に関連する様々な生理学的症状の改善を含め、様々な手段によって明らかになり得る生物学的効果を指す。「抗癌効果」は、そもそも癌の発生を防ぐことにおけるペプチド、ポリヌクレオチド、細胞及び抗体の能力によっても明らかになり得る。用語「抗腫瘍効果」は、限定されないが、例えば腫瘍容積の減少、腫瘍細胞数の減少、腫瘍細胞増殖の減少又は腫瘍細胞生存の減少を含め、様々な手段によって明らかになり得る生物学的効果を指す。
【０１３１】
用語「自己」は、同じ個体に由来する任意の材料であって、後にその個体に再導入されることになる材料を指す。
【０１３２】
用語「同種異系」は、材料が導入される個体と同じ種の異なる動物に由来する任意の材料を指す。２つ以上の個体は、１つ以上の遺伝子座の遺伝子が同一でないとき、互いに同種異系であると言われる。一部の態様において、同じ種の個体からの同種異系材料は、抗原的に相互作用するのに十分に遺伝的に異なり得る。
【０１３３】
用語「異種」は、異なる種の動物に由来する移植片を指す。
【０１３４】
用語「癌」は、異常細胞の無制御の成長によって特徴付けられる疾患を指す。癌細胞は、局所的に又は血流及びリンパ系を通じて体の他の部位に広がり得る。様々な癌の例が本明細書に記載され、限定されないが、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、皮膚癌、膵癌、結腸直腸癌、腎癌、肝癌、脳癌、リンパ腫、白血病、肺癌などが挙げられる。用語「腫瘍」及び「癌」は、本明細書では同義的に使用され、例えば、両方の用語とも固形及び液性、例えばびまん性又は循環性腫瘍を包含する。本明細書で使用されるとき、用語「癌」又は「腫瘍」は、前癌性並びに悪性の癌及び腫瘍を含む。
【０１３５】
「由来する」は、この用語が本明細書で使用されるとき、第１の分子と第２の分子との間の関係を指す。これは、概して、第１の分子と第２の分子との間の構造的類似性に言及するものであり、第２の分子に由来する第１の分子に関する方法又は供給源を限定することを含意又は包含しない。例えば、ＣＤ３ζ分子に由来する細胞内シグナル伝達ドメインの場合、細胞内シグナル伝達ドメインは、それが、求められる機能、即ち適切な条件下でシグナルを生成する能力を有するような十分なＣＤ３ζ構造を保持している。これは、細胞内シグナル伝達ドメインの特定の作製方法に限定することを含意又は包含せず、例えば細胞内シグナル伝達ドメインを提供するためにＣＤ３ζ配列で開始して不要な配列を欠失させ、又は突然変異を付与して細胞内シグナル伝達ドメインに至らせなければならないことを意味しない。
【０１３６】
語句「本明細書に記載の腫瘍抗原の発現に関連する疾患」は、限定されないが、例えば癌若しくは悪性腫瘍などの増殖性疾患又は骨髄形成異常、骨髄異形成症候群若しくは前白血病などの前癌病態を含めた、本明細書に記載の腫瘍抗原の発現に関連する疾患又は本明細書に記載の腫瘍抗原を発現する細胞に関連する病状又は本明細書に記載の腫瘍抗原を発現する細胞に関連する非癌関連の適応症を含む。一態様において、本明細書に記載の腫瘍抗原の発現と関連する癌は、血液癌である。一態様において、本明細書に記載の腫瘍抗原の発現と関連する癌は、固形癌である。更に、本明細書に記載の腫瘍抗原の発現に関連する疾患には、限定されないが、例えば本明細書に記載の腫瘍抗原の発現に関連する非定型の及び／又は非古典的な癌、悪性腫瘍、前癌病態又は増殖性疾患が含まれる。本明細書に記載の腫瘍抗原の発現に関連する非癌関連徴候には、限定されないが、例えば自己免疫疾患（例えば、ループス）、炎症性障害（アレルギー及び喘息）及び移植が含まれる。一部の実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡを発現するか、又はいずれかの時点で発現した。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、腫瘍抗原タンパク質（例えば、野生型又は突然変異体）を産生し、腫瘍抗原タンパク質は、正常レベル又は低下したレベルで存在し得る。ある実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、一時的に検出可能なレベルの腫瘍抗原タンパク質を産生したが、続いて検出可能な腫瘍抗原タンパク質を実質的に産生しなくなった。
【０１３７】
用語「保存的配列改変」は、そのアミノ酸配列を含む抗体又は抗体断片の結合特性が大きい影響又は変化を被ることのないアミノ酸改変を指す。かかる保存的改変には、アミノ酸置換、付加及び欠失が含まれる。改変は、部位特異的突然変異誘発及びＰＣＲ媒介性突然変異誘発など、当技術分野において公知の標準技法によって本発明の抗体又は抗体断片に導入することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられるものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。従って、本発明のＣＡＲ内の１つ以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基に置き換えることができ、及び変化したＣＡＲは、本明細書に記載される機能アッセイを用いて試験することができる。
【０１３８】
「刺激」という用語は、刺激分子（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体又はＣＡＲ）とその同族のリガンド（又はＣＡＲの場合には腫瘍抗原）との結合によって誘導される一次応答を指し、それにより、限定されないが、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介したシグナル伝達、又は適切なＮＫ受容体若しくはＣＡＲのシグナル伝達ドメインを介したシグナル伝達などのシグナル伝達事象を媒介する。刺激は、ある分子の発現変化を媒介することができる。
【０１３９】
用語「刺激分子」は、免疫細胞シグナル伝達経路の少なくとも一部の側面について刺激的方法で免疫細胞の活性化を調節する細胞質シグナル伝達配列を提供する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞）によって発現される分子を指す。一態様において、シグナルは、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体とペプチドが負荷されたＭＨＣ分子との結合によって惹起され、これは、限定されないが、増殖、活性化、分化などを含めたＴ細胞応答の媒介につながる一次シグナルである。刺激的方法で機能する一次細胞質シグナル伝達配列（「一次シグナル伝達ドメイン」とも称される）は、免疫受容活性化チロシンモチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。本発明において特に有用なＩＴＡＭ含有細胞質シグナル伝達配列の例には、限定されないが、ＣＤ３ζ、共通ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃＲβ（ＦｃεＲ１ｂ）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２に由来するものが含まれる。本発明の具体的なＣＡＲにおいて、本発明の任意の１つ以上のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞内シグナル伝達配列、例えばＣＤ３−ζの一次シグナル伝達配列を含む。本発明の具体的なＣＡＲにおいて、ＣＤ３−ζの一次シグナル伝達配列は、配列番号１８として提供される配列又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基である。本発明の具体的なＣＡＲにおいて、ＣＤ３−ζの一次シグナル伝達配列は、配列番号２０に提供されるとおりの配列又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基である。
【０１４０】
用語「抗原提示細胞」又は「ＡＰＣ」は、その表面上に主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）と複合体化した外来抗原を提示するアクセサリー細胞などの免疫系細胞（例えば、Ｂ細胞、樹状細胞など）を指す。Ｔ細胞は、そのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を用いてこうした複合体を認識し得る。ＡＰＣは、抗原をプロセシングしてそれをＴ細胞に提示する。
【０１４１】
「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、この用語が本明細書で使用されるとき、分子の細胞内部分を指す。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有細胞、例えばＣＡＲＴ細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。例えば、ＣＡＲＴ細胞における免疫エフェクター機能の例としては、細胞溶解活性及びサイトカインの分泌を含めたヘルパー活性が挙げられる。
【０１４２】
ある実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。例示的一次細胞内シグナル伝達ドメインには、一次刺激又は抗原依存性刺激に関与する分子に由来するものが含まれる。ある実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含み得る。例示的共刺激細胞内シグナル伝達ドメインには、共刺激シグナル又は抗原非依存性刺激に関与する分子に由来するものが含まれる。例えば、ＣＡＲＴの場合、一次細胞内シグナル伝達ドメインがＴ細胞受容体の細胞質配列を含むことができ、及び共刺激細胞内シグナル伝達ドメインが共受容体又は共刺激分子からの細胞質配列を含むことができる。
【０１４３】
一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容活性化チロシンモチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含むことができる。ＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例には、限定されないが、ＣＤ３ζ、共通ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃＲβ（ＦｃεＲ１ｂ）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２に由来するものが含まれる。
【０１４４】
用語「ζ」若しくは代わりに「ζ鎖」、「ＣＤ３−ζ」（又は「ＣＤ３ζ、ＣＤ３  ζ若しくはＣＤ３ｚ）又は「ＴＣＲ−ζ」は、ＧｅｎＢａｎ受託番号ＢＡＧ３６６６４．１として提供されるタンパク質又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基として定義され、「ζ刺激ドメイン」若しくは代わりに「ＣＤ３−ζ刺激ドメイン」又は「ＴＣＲ−ζ刺激ドメイン」は、Ｔ細胞活性化に必要な初期シグナルを機能的に伝達するのに十分なζ鎖又はその機能的誘導体の細胞質ドメインからのアミノ酸残基として定義される。一態様において、ζの細胞質ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＢＡＧ３６６６４．１の残基５２〜１６４又はその機能的オルソログである非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基を含む。一態様において、「ζ刺激ドメイン」又は「ＣＤ３−ζ刺激ドメイン」は、配列番号１８として提供される配列である。一態様において、「ζ刺激ドメイン」又は「ＣＤ３−ζ刺激ドメイン」は、配列番号２０として提供される配列である。
【０１４５】
用語「共刺激分子」は、共刺激リガンドに特異的に結合して、それにより、限定されないが増殖など、Ｔ細胞による共刺激応答を媒介するＴ細胞上のコグネイト結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に寄与する。共刺激分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ及びＴｏｌｌリガンド受容体並びにＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）及び４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）を含むが、これらに限定されるものではない。そのような共刺激分子の更なる例は、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ及びＣＤ８３と選択的に結合するリガンドを含む。
【０１４６】
共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分であり得る。共刺激分子は、以下のタンパク質ファミリーに代表され得る：ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）及び活性化ＮＫ細胞受容体。そのような分子の例は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＡＭ−１、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤＳ、ＣＤ７、ＣＤ２８７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む。
【０１４７】
細胞内シグナル伝達ドメインは、その由来である分子の細胞内部分全体、又は天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体、又はその機能的断片若しくは誘導体を含み得る。
【０１４８】
用語「４−１ＢＢ」は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＡ６２４７８．２として提供されるアミノ酸配列又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基を有するＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーを指し、及び「４−１ＢＢ共刺激ドメイン」は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＡ６２４７８．２のアミノ酸残基２１４〜２５５又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基として定義される。一態様において、「４−１ＢＢ共刺激ドメイン」は、配列番号１４として提供される配列又は非ヒト種、例えばマウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの均等な残基である。
【０１４９】
「免疫エフェクター細胞」は、この用語が本明細書で使用されるとき、免疫応答、例えば免疫エフェクター応答の促進に関与する細胞を指す。免疫エフェクター細胞の例としては、Ｔ細胞、例えばα／β  Ｔ細胞及びγ／δ  Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、肥満細胞及び骨髄由来食細胞が挙げられる。
【０１５０】
「免疫エフェクター機能又は免疫エフェクター応答」は、この用語が本明細書で使用されるとき、標的細胞の免疫攻撃を亢進させる又は促進する例えば免疫エフェクター細胞の機能又は応答を指す。例えば、免疫エフェクター機能又は応答は、標的細胞の死滅又は成長若しくは増殖阻害を促進するＴ細胞又はＮＫ細胞の特性を指す。Ｔ細胞の場合、一次刺激及び共刺激が免疫エフェクター機能又は応答の例である。
【０１５１】
用語「コードする」は、定義付けられたヌクレオチド配列（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及びｍＲＮＡ）又は定義付けられたアミノ酸配列のいずれかを有する生物学的過程における他のポリマー及び巨大分子の合成の鋳型としての役割を果たす、遺伝子、ｃＤＮＡ又はｍＲＮＡなど、ポリヌクレオチド内の特異的ヌクレオチド配列の固有の特性及びそれによってもたらされる生物学的特性を指す。従って、遺伝子、ｃＤＮＡ又はＲＮＡは、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳によって細胞又は他の生体系のタンパク質が産生される場合にタンパク質をコードする。そのヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一の且つ通常配列表に提供されるものであるコード鎖、及び遺伝子又はｃＤＮＡの転写鋳型として使用される非コード鎖の両方は、その遺伝子のｃＤＮＡのタンパク質又は他の産物をコードすると称することができる。
【０１５２】
特記されない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の全てを含む。タンパク質又はＲＮＡをコードするヌクレオチド配列という語句には、そのタンパク質をコードするヌクレオチド配列が何らかのバージョンで１つ又は複数のイントロンを含み得る限りにおいて、イントロンも含まれ得る。
【０１５３】
用語「有効量」又は「治療有効量」は、本明細書では同義的に使用され、本明細書に記載されるとおりの化合物、製剤、材料又は組成物が特定の生物学的結果を達成するのに有効な量を指す。
【０１５４】
用語「内因性」は、生物、細胞、組織又は系由来の、又はその内部で産生される任意の材料を指す。
【０１５５】
用語「外因性」は、生物、細胞、組織又は系の外側から導入されるか又はその外側で産生される任意の材料を指す。
【０１５６】
用語「発現」は、プロモーターによってドライブされる特定のヌクレオチド配列の転写及び／又は翻訳を指す。
【０１５７】
用語「トランスファーベクター」は、単離核酸を含む組成物であって、細胞内部への単離核酸の送達に使用し得る組成物を指す。当技術分野では、限定されないが、線状ポリヌクレオチド、イオン性又は両親媒性化合物に関連するポリヌクレオチド、プラスミド及びウイルスを含め、多くのベクターが公知である。従って、用語「トランスファーベクター」には自己複製プラスミド又はウイルスが含まれる。この用語は、例えば、ポリリジン化合物、リポソームなど、細胞への核酸のトランスファーを促進する非プラスミド及び非ウイルス化合物も更に含むものと解釈されなければならない。ウイルストランスファーベクターの例としては、限定されないが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクターなどが挙げられる。
【０１５８】
用語「発現ベクター」は、発現させるヌクレオチド配列に作動可能に連結した発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現に十分なシス作用エレメントを含み、他の発現用エレメントは、宿主細胞によって供給されるか、又はインビトロ発現系に供給され得る。発現ベクターには、組換えポリヌクレオチドを組み込むコスミド、プラスミド（例えば、ネイキッド又はリポソームに含まれる）及びウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）を含め、当技術分野において公知のもの全てが含まれる。
【０１５９】
用語「レンチウイルス」は、レトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）の属を指す。レンチウイルスは、非分裂細胞を感染させることができる点でレトロウイルスの中でユニークであり、レンチウイルスは、宿主細胞のＤＮＡに多量の遺伝情報を送達することができ、そのため、遺伝子デリバリーベクターの最も効率的な方法の１つである。ＨＩＶ、ＳＩＶ及びＦＩＶは、全てレンチウイルスの例である。
【０１６０】
用語「レンチウイルスベクター」は、特に、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３−１４６４（２００９）に提供されるとおりの自己不活性化レンチウイルスベクターを含め、レンチウイルスゲノムの少なくとも一部分に由来するベクターを指す。臨床で使用し得るレンチウイルスベクターの他の例としては、限定されないが、例えばＯｘｆｏｒｄ  ＢｉｏＭｅｄｉｃａからのＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（登録商標）遺伝子デリバリー技術、ＬｅｎｔｉｇｅｎからのＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクターシステムなどが挙げられる。非臨床タイプのレンチウイルスベクターも利用可能であり、当業者に公知であろう。
【０１６１】
用語「相同」又は「同一性」は、２つのポリマー分子間、例えば２つのＤＮＡ分子又は２つのＲＮＡ分子など、２つの核酸分子間又は２つのポリペプチド分子間におけるサブユニット配列同一性を指す。２つの分子の両方におけるサブユニット位置が同じ単量体サブユニットによって占有されるとき、例えば、２つのＤＮＡ分子の各々の位置がアデニンによって占有される場合、それらは、その位置で相同又は同一である。２つの配列間の相同性は、一致する位置又は相同な位置の数の直接の関数である。例えば、２つの配列における位置の半分（例えば、１０サブユニット長のポリマーにおける５個の位置）が相同である場合、それらの２つの配列は、５０％相同である。位置の９０％（例えば、１０個中９個）が一致するか又は相同である場合、それらの２つの配列は、９０％相同である。
【０１６２】
「ヒト化」形態の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はその断片（抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は他の抗原結合部分配列など）である。ほとんどの場合、ヒト化抗体及びその抗体断片は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体又は抗体断片）においてレシピエントの相補決定領域（ＣＤＲ）からの残基が所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基に置き換えられているものである。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が対応する非ヒト残基に置き換えられる。更に、ヒト化抗体／抗体断片は、レシピエント抗体にも、移入されるＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見られない残基を含むことができる。これらの改変は抗体又は抗体断片の性能を更に精緻化及び最適化し得る。一般に、ヒト化抗体又はその抗体断片は、少なくとも１つ及び典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、及びＦＲ領域の全て又は大部分がヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体又は抗体断片は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部分も含むことができる。更なる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５，１９８６；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９，１９８８；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６，１９９２を参照されたい。
【０１６３】
「完全にヒト」は、分子全体がヒト起源であるか、又はヒト形態の抗体又は免疫グロブリンと同一のアミノ酸配列からなる抗体又は抗体断片などの免疫グロブリンを指す。
【０１６４】
用語「単離されている」は、自然状態から改変されているか又は取り出されていることを意味する。例えば、生きている動物に天然に存在する核酸又はペプチドは、「単離されている」のではないが、その自然状態の共存する材料から部分的又は完全に分離された同じ核酸又はペプチドは、「単離されている」。単離核酸又はタンパク質は、実質的に精製された形態で存在することができ、又は例えば宿主細胞など、非天然環境中に存在することができる。
【０１６５】
用語「作動可能に連結された」又は「転写制御」は、調節配列と異種核酸配列との間における後者の発現をもたらす機能的な連結を指す。例えば、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的に関係した状態に置かれているとき、第１の核酸配列は、第２の核酸配列と作動可能に連結されている。例えば、プロモーターがコード配列の転写又は発現に影響を及ぼす場合、プロモーターは、コード配列に作動可能に連結されている。作動可能に連結されるＤＮＡ配列は、互いに連続し得、例えば２つのタンパク質コード領域をつなぎ合わせる必要がある場合、同じリーディングフレーム内にある。
【０１６６】
免疫原性組成物の「非経口」投与という用語は、例えば、皮下（ｓ．ｃ．）、静脈内（ｉ．ｖ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、又は胸骨内注射、腫瘍内、又は輸注技法を含む。
【０１６７】
用語「核酸」又は「ポリヌクレオチド」は、一本鎖又は二本鎖の形態のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）及びそれらのポリマーを指す。具体的に限定しない限り、この用語には、参照核酸と同様の結合特性を有し、且つ天然に存在するヌクレオチドと同じように代謝される、天然ヌクレオチドの既知の類似体を含む核酸が包含される。特に指示されない限り、ある詳細な核酸配列は、黙示的に、その保存的に改変された変異体（例えば、縮重コドン置換）、アレル、オルソログ、ＳＮＰ及び相補配列並びに明示的に指示される配列も包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つ以上の選択の（又は全ての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基で置換されている配列を作成することによって達成し得る（Ｂａｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８（１９８５）；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１−９８（１９９４））。
【０１６８】
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、同義的に使用され、ペプチド結合によって共有結合的に連結したアミノ酸残基で構成される化合物を指す。タンパク質又はペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならず、タンパク質の配列又はペプチドの配列を含むことのできるアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、互いにペプチド結合によってつなぎ合わされた２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチド又はタンパク質を含む。本明細書で使用されるとき、この用語は、当技術分野では一般に例えばペプチド、オリゴペプチド及びオリゴマーとも称される短鎖と、当技術分野では概してタンパク質と称される、多数の種類があるより長い鎖との両方を指す。「ポリペプチド」には、例えば、生物学的に活性な断片、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドの変異体、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質が特に含まれる。ポリペプチドには、天然ペプチド、組換えペプチド又はこれらの組み合わせが含まれる。
【０１６９】
用語「プロモーター」は、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始させるのに必要である、細胞の合成機構又は導入された合成機構によって認識されるＤＮＡ配列を指す。
【０１７０】
用語「プロモーター／調節配列」は、そのプロモーター／調節配列に作動可能に連結された遺伝子産物の発現に必要な核酸配列を指す。一部の例では、この配列は、コアプロモーター配列であり得、他の例では、この配列は、エンハンサー配列及び遺伝子産物の発現に必要な他の調節エレメントも含み得る。プロモーター／調節配列は、例えば、遺伝子産物を組織特異的に発現するものであり得る。
【０１７１】
用語「構成的」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか又はそれを指定するポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、細胞のほとんど又は全ての生理条件下で細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
【０１７２】
用語「誘導性」プロモーターは、遺伝子産物をコードするか又はそれを指定するポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、実質的にプロモーターに対応する誘発物質が細胞に存在する場合に限り細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
【０１７３】
用語「組織特異的」プロモーターは、遺伝子をコードするか又はそれによって指定されるポリヌクレオチドと作動可能に連結されているとき、実質的に細胞がプロモーターに対応する組織型の細胞である場合に限り細胞において遺伝子産物の産生を生じさせるヌクレオチド配列を指す。
【０１７４】
用語「癌関連抗原」又は「腫瘍抗原」は、同義的に、癌細胞の表面上に、完全に又は代わりに断片（例えば、ＭＨＣ／ペプチド）として発現する分子（典型的にはタンパク質、炭水化物又は脂質）であって、癌細胞への薬理学的薬剤の優先的なターゲティングに有用な分子を指す。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、正常細胞及び癌細胞の両方が発現するマーカー、例えば系列マーカー、例えばＢ細胞上のＣＤ１９である。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、正常細胞と比較して癌細胞で過剰発現する（例えば、正常細胞と比較して１倍の過剰発現、２倍の過剰発現、３倍の過剰発現又はそれを超える）細胞表面分子である。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、癌細胞で不適切に合成される細胞表面分子、例えば正常細胞に発現する分子と比較して欠失、付加又は突然変異を含む分子である。一部の実施形態において、腫瘍抗原は癌細胞の細胞表面にのみ、完全に又は代わりに断片（例えば、ＭＨＣ／ペプチド）として発現することになり、正常細胞の表面に合成されず、又は発現しない。一部の実施形態において、本発明のＣＡＲは、ＭＨＣ提示ペプチドに結合する抗原結合ドメイン（例えば、抗体又は抗体断片）を含むＣＡＲを含む。通常、内因性タンパク質に由来するペプチドは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子のポケットに嵌まり、ＣＤ８＋Ｔリンパ球上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）によって認識される。ＭＨＣクラスＩ複合体は、あらゆる有核細胞によって構成的に発現される。癌では、ウイルス特異的及び／又は腫瘍特異的ペプチド／ＭＨＣ複合体が免疫療法用のユニークなクラスの細胞表面標的となる。ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）−Ａ１又はＨＬＡ−Ａ２のコンテクストでウイルス又は腫瘍抗原由来のペプチドを標的とするＴＣＲ様抗体が記載されている（例えば、Ｓａｓｔｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．２０１１  ８５（５）：１９３５−１９４２；Ｓｅｒｇｅｅｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１１  １１７（１６）：４２６２−４２７２；Ｖｅｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１０  １８４（４）：２１５６−２１６５；Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２００１  ８（２１）：１６０１−１６０８；Ｄａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１３  ５（１７６）：１７６ｒａ３３；Ｔａｓｓｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２０１２  １９（２）：８４−１００を参照されたい）。例えば、ＴＣＲ様抗体は、ヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリなど、ライブラリのスクリーニングによって同定することができる。
【０１７５】
用語「腫瘍支持抗原」又は「癌支持抗原」は、互換的に、それ自体癌性ではないが、例えば増殖又は生存、例えば免疫細胞に対する抵抗性を促進することにより癌細胞を支持する、細胞の表面に発現される分子（典型的には、タンパク質、炭水化物又は脂質）を指す。この型の例示的な細胞は、間質細胞及び骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を含む。腫瘍支持抗原自体は、抗原が癌細胞を支持する細胞上に存在する限り、腫瘍細胞を支持する役割を果たさなくてもよい。
【０１７６】
用語「可動性ポリペプチドリンカー」又は「リンカー」は、ｓｃＦｖとの関連で使用されるとき、可変重鎖領域と可変軽鎖領域とを共に連結するために単独又は組み合わせで使用されるグリシン及び／又はセリン残基などのアミノ酸からなるペプチドリンカーを指す。一実施形態において、可動性ポリペプチドリンカーは、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーであり、アミノ酸配列（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎは、１以上の正の整数、例えばｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５及びｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９及びｎ＝１０である）（配列番号２８）を含む。一実施形態において、可動性ポリペプチドリンカーには、限定されないが、（Ｇｌｙ４  Ｓｅｒ）４（配列番号２９）又は（Ｇｌｙ４  Ｓｅｒ）３（配列番号３０）が含まれる。別の実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）、（ＧｌｙＳｅｒ）又は（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）（配列番号３１）の複数の繰り返しを含む。また、国際公開第２０１２／１３８４７５号パンフレット（参照により本明細書に援用される）に記載されるリンカーも本発明の範囲内に含まれる。
【０１７７】
本明細書で使用されるとき、５’キャップ（ＲＮＡキャップ、ＲＮＡ７−メチルグアノシンキャップ又はＲＮＡ  ｍ７Ｇキャップとも称される）は、転写開始直後に真核生物メッセンジャーＲＮＡの「前」又は５’末端に付加された修飾グアニンヌクレオチドである。５’キャップは、１番目の転写ヌクレオチドに連結される末端基からなる。その存在は、リボソームによる認識及びＲＮアーゼからの保護に重要である。キャップ付加は転写と結び付いており、それぞれが他方に影響を与えるようにして同時転写的に起こる。転写開始直後、合成されているｍＲＮＡの５’末端に、ＲＮＡポリメラーゼに関連するキャップ合成複合体が結合する。この酵素複合体は、ｍＲＮＡキャッピングに必要な化学反応を触媒する。合成は、多段階生化学反応として進行する。キャッピング部分は、ｍＲＮＡのその安定性又は翻訳効率などの機能を調整するために改変することができる。
【０１７８】
本明細書で使用されるとき、「インビトロ転写ＲＮＡ」は、インビトロ合成されたＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡを指す。概して、インビトロ転写ＲＮＡは、インビトロ転写ベクターから作成される。インビトロ転写ベクターは、インビトロ転写ＲＮＡの作成に使用される鋳型を含む。
【０１７９】
本明細書で使用されるとき、「ポリ（Ａ）」は、ポリアデニル化によってｍＲＮＡに付加される一連のアデノシンである。一過性発現用のコンストラクトの好ましい実施形態において、ポリＡは、５０〜５０００（配列番号３４）、好ましくは６４より多く、より好ましくは１００より多く、最も好ましくは３００又は４００より多い。ポリ（Ａ）配列は、局在性、安定性又は翻訳効率などのｍＲＮＡ機能を調整するために化学的又は酵素的に改変することができる。
【０１８０】
本明細書で使用されるとき、「ポリアデニル化」は、メッセンジャーＲＮＡ分子へのポリアデニリル部分又はその改変変異体の共有結合を指す。真核生物では、ほとんどのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子が３’末端でポリアデニル化される。３’ポリ（Ａ）テールは、酵素、ポリアデニル酸ポリメラーゼの作用によってｍＲＮＡ前駆体に付加されるアデニンヌクレオチドの長い配列（多くの場合に数百個）である。高等真核生物では、ポリ（Ａ）テールは、特異的配列、ポリアデニル化シグナルを含む転写物に付加される。ポリ（Ａ）テール及びそれに結合したタンパク質は、ｍＲＮＡをエキソヌクレアーゼによる分解から保護するのに役立つ。ポリアデニル化は、転写終結、ｍＲＮＡの核外移行及び翻訳にも重要である。ポリアデニル化は、ＤＮＡからＲＮＡへの転写直後に核内で起こるが、更に後に細胞質でも起こり得る。転写が終結した後、ＲＮＡポリメラーゼに関連するエンドヌクレアーゼ複合体の作用によってｍＲＮＡ鎖が切断される。切断部位は、通常、切断部位近傍の塩基配列ＡＡＵＡＡＡの存在によって特徴付けられる。ｍＲＮＡが切断された後、切断部位の遊離３’末端にアデノシン残基が付加される。
【０１８１】
発現、例えばＣＡＲ分子の発現に関して本明細書で使用されるとき、「一過性」は、数時間、数日間又は数週間の期間にわたる組み込まれないトランス遺伝子の発現を指し、この発現期間は、宿主細胞においてゲノムに組み込まれた場合又は安定プラスミドレプリコン中に含まれている場合の遺伝子の発現期間よりも短い。
【０１８２】
効果、例えばＬＳＤ１阻害剤の効果と関連して本明細書において使用される「一過性」は、効果がある期間、例えば数日、数週間又は数ヶ月存在するが、ある期間にわたって減少する（例えば、効果がもはや測定できなくなるまで）ことを意味する。実施形態において、効果は、本明細書に記載される、例えば実施例におけるアッセイにより測定されるものである。
【０１８３】
本明細書で使用されるとき、用語「治療する」、「治療」及び「治療している」は、１つ以上の療法（例えば、本発明のＣＡＲなどの１つ以上の療法剤）の投与によってもたらされる増殖性障害の進行、重症度及び／又は持続期間の低減又は改善又は増殖性障害の１つ以上の症状（好ましくは１つ以上の認識し得る症状）の改善を指す。具体的な実施形態において、用語「治療する」、「治療」及び「治療している」は、患者には必ずしも認識できない、腫瘍の成長などの増殖性障害の少なくとも１つの計測可能な理学的パラメータの改善を指す。他の実施形態において用語「治療する」、「治療」及び「治療している」は、増殖性障害の進行の物理的な、例えば認識し得る症状の安定化による阻害、生理学的な、例えば理学的パラメータの安定化による阻害のいずれか又は両方を指す。他の実施形態において用語「治療する」、「治療」及び「治療している」は、腫瘍サイズ又は癌性細胞数の低減又は安定化を指す。
【０１８４】
用語「シグナル伝達経路」は、細胞のある部分から細胞の別の部分へのシグナルの伝達において役割を果たす種々のシグナル伝達分子間の生化学的関係を指す。語句「細胞表面受容体」は、シグナルを受け取り、且つ細胞の膜を越えてシグナルを伝える能力を有する分子及び分子複合体を含む。
【０１８５】
用語「対象」は、免疫応答を生じさせることのできる生きている生物（例えば、哺乳類、ヒト）を含むことが意図される。
【０１８６】
用語の「実質的に精製された」細胞は、他の細胞型を本質的に含まない細胞を指す。実質的に精製された細胞とは、その天然に存在する状態でそれが通常結び付いている他の細胞型と分離されている細胞も指す。一部の例では、実質的に精製された細胞集団とは、均質な細胞集団を指す。他の例では、この用語は、単に、その自然状態でそれが天然に結び付いている細胞から分離されている細胞を指す。一部の態様において、これらの細胞は、インビトロで培養される。他の態様において、これら細胞は、インビトロで培養されない。
【０１８７】
用語「療法的」とは、本明細書で使用されるとき、治療を意味する。療法的効果は疾患状態の低減、抑制、寛解又は根絶によって達成される。
【０１８８】
用語「予防」は、本明細書で使用されるとき、疾患又は疾患状態の予防又はそれに対する予防的治療を意味する。
【０１８９】
用語「トランスフェクトされた」、又は「形質転換された」、又は「形質導入された」は、外因性核酸を宿主細胞に移入させるか又は導入するプロセスを指す。「トランスフェクトされた」、又は「形質転換された」、又は「形質導入された」細胞は、外因性核酸をトランスフェクト、形質転換又は形質導入されたものである。細胞には初代対象細胞及びその子孫が含まれる。
【０１９０】
用語「特異的に結合する」は、試料中に存在する結合パートナー（例えば、腫瘍抗原）タンパク質を認識し、結合する抗体又はリガンドであって、しかし、試料中の他の分子は、実質的に認識又は結合しない、抗体又はリガンドを指す。
【０１９１】
「制御可能キメラ抗原受容体（ＲＣＡＲ）」は、本明細書で使用される場合、一連のポリペプチド、典型的には最も単純な実施形態で２ポリペプチドを指し、ＲＣＡＲＸ細胞にある場合、標的細胞、典型的には癌細胞に対する特異性及び制御可能細胞内シグナル産生又は増殖をＲＣＡＲＸ細胞に与え、これは、ＲＣＡＲＸ細胞の免疫エフェクター特性を最適化し得る。ＲＣＡＲＸ細胞は、抗原結合ドメインによって結合される抗原を含む標的細胞に対する特異性を付与するために、少なくとも部分的に抗原結合ドメインに依存する。一実施形態において、ＲＣＡＲは、二量体化分子存在下、細胞内シグナル伝達ドメインを抗原結合ドメインに結合できる二量体化スイッチを含む。
【０１９２】
「膜アンカー」又は「膜繋留ドメイン」は、この用語が本明細書で使用されるとき、細胞外又は細胞内ドメインを細胞膜にアンカリングするのに十分なポリペプチド又は部分、例えばミリストイル基を指す。
【０１９３】
「スイッチドメイン」は、この用語が本明細書で例えばＲＣＡＲに言及する場合に使用されるとき、二量化分子の存在下で別のスイッチドメインと会合する実体、典型的にはポリペプチドベースの実体を指す。この会合の結果、第１のスイッチドメインに連結、例えば融合した第１の実体と、第２のスイッチドメインに連結、例えば融合した第２の実体との機能的カップリングが生じる。第１及び第２のスイッチドメインは、まとめて二量化スイッチと称される。実施形態において、第１及び第２のスイッチドメインは、互いに同じであり、例えば、これらは、同じ一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、まとめてホモ二量化スイッチと称される。実施形態において、第１及び第２のスイッチドメインは、互いに異なり、例えば、これらは、異なる一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、まとめてヘテロ二量化スイッチと称される。実施形態において、スイッチは、細胞内である。実施形態において、スイッチは、細胞外である。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばＦＫＢＰ又はＦＲＢベースであり、二量化分子は、小分子、例えばラパログである。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばｍｙｃペプチドに結合するｓｃＦｖであり、二量化分子は、ポリペプチド、その断片又はポリペプチドの多量体、例えば１つ以上のｍｙｃ  ｓｃＦｖに結合するｍｙｃリガンド又はｍｙｃリガンドの多量体である。実施形態において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースの実体、例えばｍｙｃ受容体であり、二量化分子は、抗体又はその断片、例えばｍｙｃ抗体である。
【０１９４】
「二量化分子」は、この用語が本明細書で例えばＲＣＡＲに言及する場合に使用されるとき、第１のスイッチドメインと第２のスイッチドメインとの会合を促進する分子を指す。実施形態において、二量化分子は、対象に天然に存在しないか、又は有意な二量化をもたらし得る濃度で存在しない。実施形態において、二量化分子は、小分子、例えばラパマイシン又はラパログ、例えばＲＡＤ００１である。
【０１９５】
用語「生物学的に均等」は、参照用量又は参照量の参照化合物によって生じる効果と均等な効果を生じさせるのに必要な量の参照化合物以外の薬剤を指す。一実施形態において、効果は、例えば、ＬＳＤ１タンパク質レベルによって測定したときの、例えばインビボ又はインビトロアッセイで評価したときの、例えば本明細書に記載のアッセイ、例えばフローサイトメトリーによって測定したときのＬＳＤ１阻害レベルである。一実施形態において、効果は、例えば、細胞選別により測定して、ＴＳＣＭ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋細胞の増強された増殖、例えば他のＴ細胞表現型、例えばＴＣＭ（例えば、ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ６２Ｌ＋）、ＴＥＭ（例えば、ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ６２Ｌ−）、ＴＥＦＦ又はＴＲＥＧ細胞と比較して増強された増殖である。
【０１９６】
「不応性」は、本明細書で使用されるとき、治療に応答しない疾患、例えば癌を指す。実施形態において、不応性癌は、治療の開始前又は開始時点で治療に抵抗性であり得る。他の実施形態において、不応性癌は、治療中に抵抗性になり得る。不応性癌は、抵抗性癌とも称される。
【０１９７】
「再発した」は、本明細書で使用されるとき、改善期間後、例えば療法、例えば癌療法の前治療後における疾患（例えば、癌）又は癌などの疾患の徴候及び症状の再来を指す。
【０１９８】
「ＬＳＤ１」、「リシン特異的デメチラーゼ１Ａ」、「リシン特異的ヒストンデメチラーゼ１Ａ」、「ＫＤＭ１Ａ」、「ＡＯＦ２」、「ＫＩＡＡ０６０１」及び「ＢＨＣ１１０」は、本明細書において互換的に使用され、遺伝子ＫＤＭ１Ａ（リシン特異的デメチラーゼ１Ａ）及び前記遺伝子によりコードされるタンパク質、リシン特異的デメチラーゼ１Ａ（ＬＳＤ１）を指す。この遺伝子は、ＳＷＩＲＭドメイン、ＦＡＤ結合モチーフ及びアミンオキシダーゼドメインを含む核タンパク質をコードする。このタンパク質は、いくつかのヒストンデアセチラーゼ複合体の成分であり、それを通してヒストンデメチラーゼとして機能することにより遺伝子をサイレンシングする。ヒトゲノムにおいて、ＫＤＭ１Ａは、染色体１  Ｃｈｒ１：２３０３０５９６（Ａｓｓｅｍｂｌｙ  ＧＲＣｈ３８上）に位置する。現在、ＬＳＤ１の２つのアイソフォームが知られ、これらのアイソフォームは、ＧｅｎｅＢａｎｋ番号ＮＭ＿００１００９９９９．２及びＮＭ＿０１５０１３．３に記載される。
【０１９９】
ヒトＬＳＤ１のタンパク質配列の例は、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｏ６０３４１−１として提供され、以下のアミノ酸配列を有する。
【化２】
2019532953.tif 000003
【０２００】
本発明は、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｏ６０３４１−２として提供される、アイソフォーム２を含むＬＳＤ１の他のアイソフォームも含む。
【０２０１】
ＬＳＤ１をコードする核酸配列の例を以下の表１に提供する。ヒトＬＳＤ１の同定された２つのアイソフォームが存在する。ｍＲＮＡ配列を以下に提供する（実施形態において、各配列中、Ｔは、Ｕで置換され得る）。実施形態において、ＬＳＤ１は、下記配列の各々によりコードされるタンパク質を含む。
【０２０２】
【表１】
2019532953.tif 000004
【０２０３】
【表２】
2019532953.tif 000005
【０２０４】
【表３】
2019532953.tif 000006
【０２０５】
【表４】
2019532953.tif 000007
【０２０６】
【表５】
2019532953.tif 000008
【０２０７】
本明細書で使用される用語「ＬＳＤ１阻害剤」は、ＬＳＤ１の機能及び／又は発現を低減又は除去する分子又は分子群（例えば、系）を指す。一実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、ＬＳＤ１の発現を阻害する、例えばＬＳＤ１の発現を低減又は排除する分子である。実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、ＬＳＤ１の機能を阻害する分子である。ＬＳＤ１の発現を阻害するＬＳＤ１阻害剤の例は、遺伝子編集系結合部位又はその近辺の核酸の修飾がＬＳＤ１の発現を低減又は除去するように修飾される、例えば本明細書に記載される、ＬＳＤ１遺伝子内（例えば、ＫＤＭ１Ａ遺伝子内）又はその調節エレメント内の核酸を標的とする遺伝子編集系である。ＬＳＤ１の発現を阻害するＬＳＤ１阻害剤の別の例は、ＬＳＤ１  ｍＲＮＡとハイブリダイズすることができ、ＬＳＤ１翻訳の減少又は排除を生じる核酸分子、例えばＲＮＡ分子、例えば短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）又は短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である。ＬＳＤ１の発現を阻害するＬＳＤ１阻害剤の別の例は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。ＬＳＤ１阻害剤は、ＬＳＤ１発現を阻害する分子をコードする核酸（例えば、抗ＬＳＤ１  ｓｈＲＮＡ又はｓｉＲＮＡをコードする核酸又は抗ＬＳＤ１遺伝子編集系の１つ以上、例えば全ての成分をコードする核酸）も含む。ＬＳＤ１の機能を阻害する分子の例は、ＬＳＤ１の１つ以上の活性を阻害する分子、例えばタンパク質又は小分子である。例は、例えば本明細書に記載のＬＳＤ１の小分子阻害剤である。例示的な実施形態において、小分子ＬＳＤ１阻害剤は、可逆的ＬＳＤ１阻害剤である。別の例示的な実施形態において、小分子ＬＳＤ１阻害剤は、不可逆的ＬＳＤ１阻害剤である。小分子ＬＳＤ１阻害剤は、触媒部位又は触媒部位以外の部位でＬＳＤ１と結合し得る。別の例は、ドミナントネガティブＬＳＤ１タンパク質である。別の例は、抗ＬＳＤ１抗体又はその抗原結合フラグメントである。別の例は、ＬＳＤ１結合パートナーを阻害する分子、例えば小分子である。ＬＳＤ１阻害剤は、ＬＳＤ１機能の阻害剤をコードする核酸も含む。ＬＳＤ１阻害剤の更なる記載は、以下の「ＬＳＤ１阻害剤」と題された節に提供される。例示的なＬＳＤ１阻害剤は、３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリルである。
【０２０８】
本明細書においてＬＳＤ１結合パートナーに関連して使用される用語「結合パートナー」は、ＬＳＤ１タンパク質と相互作用する、例えば結合する分子、例えばタンパク質を指す。理論に拘束されることを望まないが、ＬＳＤ１は、１つ以上のＨＤＡＣタンパク質、例えばＨＤＡＣ１に結合すると考えられる。このようなＨＤＡＣタンパク質は、ＬＳＤ１結合パートナーの例として考慮される。他のＬＳＤ１結合パートナーは、例えば、Ｃｏ−ＲＥＳＴ／ＲＥＳＴ複合体、例えばＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ｐ４０、ｐ８０、Ｃｏ−ＲＥＳＴ及びＺＮＦ２１７のタンパク質（Ｌｅｅ，Ｍ．Ｇ．，Ｗｙｎｄｅｒ，Ｃ．，Ｃｏｏｃｈ，Ｎ．＆Ｓｈｉｅｋｈａｔｔａｒ，Ｒ．Ａｎ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ＣｏＲＥＳＴ  ｉｎ  ｎｕｃｌｅｏｓｏｍａｌ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ３  ｌｙｓｉｎｅ  ４  ｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ  ４３７，４３２−４３５（２００５））；Ｂｌｉｍｐ１複合体のタンパク質（Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２００９  Ｍａｒ；２９（６）：１４２１−３１．ｄｏｉ：１０．１１２８／ＭＣＢ．０１１５８−０８．Ｅｐｕｂ  ２００９  Ｊａｎ  ５）；ＮｕＲＤ複合体のタンパク質（Ｃｅｌｌ．２００９  Ａｕｇ．２１；１３８（４）：６６０−７２．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２００９．０５．０５０）；及びアンドロゲン受容体（Ｎａｔｕｒｅ．２００５  Ｓｅｐ  １５；４３７（７０５７）：４３６−９．Ｅｐｕｂ  ２００５  Ａｕｇ  ３）を含む。
【０２０９】
用語「系」は、例えば、遺伝子編集と関連して本明細書で使用される場合、一緒になって所望の機能を産生するように作用する分子群、例えば１つ以上の分子を指す。
【０２１０】
本明細書で使用される用語「遺伝子編集系」は、前記系により標的とされる遺伝子ＤＮＡの部位又はその近辺の１つ以上の核酸の改変、例えば欠失を導き及び実施する系、例えば１つ以上の分子を指す。遺伝子編集系は、当技術分野において公知であり、以下により詳細に記載する。
【０２１１】
「ドミナントネガティブ」遺伝子産物又はタンパク質は、遺伝子産物又はタンパク質の機能を妨害するものである。影響を受ける遺伝子産物は、ドミナントネガティブタンパク質と同一であるか又は異なり得る。ドミナントネガティブ遺伝子産物は、切断、点変異を有する全長タンパク質若しくはそのフラグメント、又は全長野生型若しくは変異体タンパク質若しくはそのフラグメントと他のタンパク質との融合体を含む多様な形態であり得る。観察される阻害レベルは、非常に低い可能性がある。例えば、これは、効果を見るために、機能的タンパク質又は過程に関与するタンパク質と比較して大過剰のドミナントネガティブタンパク質を必要とし得る。通常の生物学的アッセイ条件下での効果の確認は、困難であり得る。一実施形態において、ドミナントネガティブＬＳＤ１は、触媒的不活性ＬＳＤ１である。
【０２１２】
用語「比率」は、集団中の分子の総数に対する特定の分子の割合を指す。例示的な実施形態において、特定の表現型を有するＴ細胞（例えば、ＴＳＣＭ細胞）の割合は、集団におけるＴ細胞の総数に対する、その表現型を有するＴ細胞の数の比率を指す。例示的な実施形態において、特定の表現型を有するＴ細胞（例えば、ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋細胞）の割合は、集団におけるＴ細胞の総数に対する、その表現型を有するＴ細胞の数の比率を指す。このような比率は、示されている場合、細胞のあるサブセットに対して測定され得ることが理解されるであろう。例えば、ＣＤ４＋ＴＳＣＭ細胞の比率は、ＣＤ４＋Ｔ細胞の総数に対して測定され得る。
【０２１３】
用語「免疫エフェクター細胞の集団」は、本明細書において使用される場合、少なくとも２つ、例えば２つ以上、例えば１つを超える免疫エフェクター細胞を含む組成物を指し、いかなるレベルの純度も他の細胞型の存在又は非存在を示すものではない。例示的な実施形態において、集団は、他の細胞型を実質的に含まない。別の例示的な実施形態において、集団は、特定の細胞型又は特定の機能若しくは性質を有する少なくとも２つの細胞を含む。
【０２１４】
用語「ＴＳＣＭ様細胞」及び「ナイーブＴ細胞」は、互換的に使用され、ＣＤ４５ＲＡ及びＣＤ６２Ｌの表面発現を特徴とする低分化Ｔ細胞状態を指す（例えば、ＣＤ４５ＲＡ陽性及びＣＤ６２Ｌ陽性（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋と記載することがある）である）。一般的に、Ｔ細胞分化は、最も「ナイーブ」なものから最も「枯渇した」ものへ、ＴＳＣＭ様（例えば、ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋細胞）＞ＴＣＭ（例えば、ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ６２Ｌ＋細胞）＞ＴＥＭ（例えば、ＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ６２Ｌ−細胞）＞ＴＥＦＦと進む。ナイーブＴ細胞は、より枯渇したＴ細胞表現型と比較して、例えば自己再生、抗腫瘍有効性、増殖及び／又は生存が増加していることにより特徴付けられ得る。例示的な一実施形態において、ナイーブＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞を指す。別の例示的な実施形態において、ナイーブＴ細胞は、ＴＳＣＭ細胞、例えばＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋ＣＣＲ７＋ＣＤ２７＋ＣＤ９５＋Ｔ細胞を指す。
【０２１５】
用語「ＴＳＣＭ」は、その細胞表面にＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２７及びＣＤ９５を発現することを特徴とする、幹細胞記憶表現型を有するＴ細胞を指す（例えば、ＣＤ４５ＲＡ陽性、ＣＤ６２Ｌ陽性、ＣＣＲ７陽性、ＣＤ２７陽性及びＣＤ９５陽性（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋ＣＣＲ７＋ＣＤ２７＋ＣＤ９５＋と表記されることもある）である）。ＴＳＣＭ細胞は、ナイーブＴ細胞の一例である。Ｔ細胞は、ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞であり得る。
【０２１６】
範囲：本開示全体を通じて、本発明の様々な態様が範囲の形式で提示され得る。範囲の形式での記載は、単に便宜上及び簡潔にするためのものであり、本発明の範囲に対する確固たる限定と解釈されてはならないことが理解されるべきである。従って、範囲の記載は、具体的に開示される全ての可能な部分範囲並びにその範囲内にある個々の数値を有すると考えられなければならない。例えば、１〜６などの範囲の記載は、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６などの具体的に開示される部分範囲並びにその範囲内にある個々の数値、例えば１、２、２．７、３、４、５、５．３及び６を有すると考えられなければならない。別の例として、９５〜９９％の同一性などの範囲は、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するものを含み、及び９６〜９９％、９６〜９８％、９６〜９７％、９７〜９９％、９７〜９８％及び９８〜９９％の同一性などの部分範囲を含む。これは、範囲の幅に関わらず適用される。
【０２１７】
見出し、副見出し又は番号若しくは文字が振られた要素、例えば（ａ）、（ｂ）、（ｉ）等は、単に読み易いように提供される。本明細書で見出し又は番号若しくは文字が振られた要素を使用しても、工程若しくは要素がアルファベット順に実施される必要はなく、又は工程若しくは要素が必ず互いに別個のものである必要はない。
【０２１８】
本明細書において言及される刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献の全ては、全体として参照により組み込まれる。
【０２１９】
本発明の他の特徴、目的及び利点は、説明及び図面並びに特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
【０２２０】
ＬＳＤ１阻害剤
ＬＳＤ１を阻害する任意の分子は、例えば、本明細書に開示される細胞、組成物及び方法と関連して、本明細書に記載の本発明の態様において有用であり得る。以下の節は、例示的なＬＳＤ１阻害剤を提供し、限定することを意図するものではない。
【０２２１】
一部の実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤又はそれらの組み合わせは、その内容が全体として参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１７／１４９４６３号パンフレットに記載のＬＳＤ１阻害剤である。一部の実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団と共に投与される。
【０２２２】
実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、例えば、非処置ＣＡＲ発現細胞又は非処置対象と比較して、例えば培養物中又は対象において、ナイーブ表現型を有するＣＡＲ発現細胞（例えば、ＴＳＣＭ細胞）の増殖又は持続の増加又は延長を生じる分子又は系である。実施形態において、増殖の増加又は持続は、ＣＡＲ発現細胞の数の増加と関連する。増殖の増加又は持続を測定する方法は、実施例４に記載する。別の実施形態において、投与又はＬＳＤ１阻害剤との接触は、例えば、非処置ＣＡＲ発現細胞又は非処置対象と比較して、例えば培養又は対象においてサイトカインの放出を増加させるか又はＣＡＲ発現細胞による癌細胞死滅を増加させる。サイトカイン放出の増加を測定する方法は、例えば、実施例４に記載される。実施形態において、癌細胞死滅の増加は、腫瘍体積減少と相関する。癌細胞の死滅の増加を測定する方法は、実施例４及び例えばその全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開２０１４／１５３２７０号パンフレットに記載される。
【０２２３】
核酸阻害剤
ある態様において、ＬＳＤ１阻害剤は、核酸分子である。一実施形態において、核酸は、ＤＮＡ分子、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドである（例えば、Ｗａｔｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，２０１２，２２６（２），ｐｐ．３６５−３７９）。一実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＬＳＤ１  ｍＲＮＡ又はプレｍＲＮＡ分子と相補性である。別の態様において、ＬＳＤ１阻害剤は、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドをコードする核酸を含む。
【０２２４】
一実施形態において、核酸ＬＳＤ１阻害剤は、ＬＳＤ１の発現、例えば翻訳を阻害する干渉ＲＮＡ分子、例えばｓｈＲＮＡ又はｓｉＲＮＡである。別の態様において、ＬＳＤ１阻害剤は、前記干渉ＲＮＡ分子をコードする核酸を含む。一実施形態において、ＬＳＤ１の発現、例えば翻訳を阻害する干渉ＲＮＡ分子、例えばｓｈＲＮＡ又はｓｉＲＮＡは、ＬＳＤ１  ｍＲＮＡの配列（このような配列は、本明細書において干渉ＲＮＡ分子、例えばｓｈＲＮＡ又はｓｉＲＮＡに対して「標的配列」と称される）と相補性のドメインを含む。
【０２２５】
例示的なｓｈＲＮＡ及びｓｉＲＮＡ  ＬＳＤ１阻害剤に対する標的配列及び例示的なｓｈＲＮＡ  ＬＳＤ１阻害剤をコードする核酸は、配列番号８３〜１２２から選択されるか、又はその内容が全体として参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１７／１１４４９７号パンフレットに開示されている任意の配列を含む。
【０２２６】
核酸ＬＳＤ１阻害剤分子は、化学修飾、例えばペプチド核酸、ホスホモルホリノ骨格、ホスホロチオエート骨格、５’及び３’末端キャップ、２’−Ｏメチル修飾、２’−Ｆ修飾及び当技術分野において公知の他の修飾を含む、例えば核酸塩基、糖及び／又はリン酸骨格への修飾を含む核酸分子を含む。
【０２２７】
ゲノム編集系ＬＳＤ１阻害剤
ゲノム編集系は、当技術分野において公知であり、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ遺伝子編集系、ＴＡＬＥＮ遺伝子編集系、メガヌクレアーゼ遺伝子編集系及びＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集系を含む。本明細書で使用される用語「ゲノム編集系」（「遺伝子編集系」と同義的に使用される）は、前記系により標的とされる部位又はその近辺の核酸の修飾、例えば挿入又は欠失を導くのに必要且つ十分な分子又は分子の組を指す。本明細書において使用される場合、用語「ゲノム編集系」は、遺伝子編集系の１つ以上の成分（例えば、分子）をコードする核酸も指す。例示的な遺伝子編集系は、当技術分野において公知であり、以下により詳細に記載する。
【０２２８】
ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集系
本明細書において使用される用語「ＣＲＩＳＰＲ系」、「ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系」、「ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集系」、「ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓゲノム編集系」、「ＣＲＩＳＰＲゲノム編集系」及び「ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集系」は、本明細書において同義的に使用される。天然に存在するＣＲＩＳＰＲ系は、配列決定された真正細菌ゲノムの約４０％及び配列決定された古細菌の９０％に見られる。Ｇｒｉｓｓａ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ８：１７２。この系は、プラスミド及びファージなどの外来遺伝的要素に対する抵抗性を付与する１種の原核生物免疫系であり、後天性免疫の型を提供する。Ｂａｒｒａｎｇｏｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１５：１７０９−１７１２；Ｍａｒｒａｇｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２２：１８４３−１８４５。
【０２２９】
ＣＲＩＳＰＲ系は、マウス、霊長類及びヒトなどの真核生物における遺伝子編集（特定の遺伝子のサイレンシング、増強又は変更）に使用するために改変されている。Ｗｉｅｄｅｎｈｅｆｔ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｎａｔｕｒｅ  ４８２：３３１−８。これは、例えば、特異的に操作されたガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）をコードする１つ以上のベクター（例えば、真核生物ゲノムの配列と相補性の配列を含むｇＲＮＡ）及び１つ以上の適切なＲＮＡガイドヌクレアーゼ、例えばＣａｓタンパク質を真核生物細胞に導入することにより達成される。ＲＮＡガイドヌクレアーゼは、ｇＲＮＡと複合体を形成し、次いで、これは、ｇＲＮＡの配列の、真核生物ゲノムの相補性配列へのハイブリダイゼーションにより標的ＤＮＡ部位に指向され、次いで、ＲＮＡガイドヌクレアーゼは、ＤＮＡ中の二本鎖又は一本鎖切断を誘導する。鎖切断部位又はその近辺でのヌクレオチドの挿入又は欠失により、改変ゲノムが生成される。
【０２３０】
多くの異なるタイプの細菌で自然に生じるように、ＣＲＩＳＰＲの正確な配置及び構造、Ｃａｓ遺伝子の機能及び数及びそれらの産物は、種毎にいくぶん異なる。Ｈａｆｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）ＰＬｏＳ  Ｃｏｍｐｕｔ．Ｂｉｏｌ．１：ｅ６０；Ｋｕｎｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ．８：Ｒ６１；Ｍｏｊｉｃａ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．６０：１７４−１８２；Ｂｏｌｏｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１５１：２５５１−２５６１；Ｐｏｕｒｃｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１５１：６５３−６６３；及びＳｔｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｔｒｅｎｄｓ．Ｇｅｎｅｔ．２８：３３５−３４０。例えば、Ｃｓｅ（Ｃａｓサブタイプ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））タンパク質（例えば、ＣａｓＡ）は、機能的複合体、Ｃａｓｃａｄｅを形成し、これは、ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ転写物を、Ｃａｓｃａｄｅが保持するスペーサー−反復単位に処理する。Ｂｒｏｕｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２１：９６０−９６４。他の原核生物において、Ｃａｓ６は、ＣＲＩＳＰＲ転写物を加工する。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）におけるＣＲＩＳＰＲベースのファージ不活性化は、Ｃａｓｃａｄｅ及びＣａｓ３を必要とするが、Ｃａｓ１又はＣａｓ２を必要としない。パイロコッカス・フリオサス（Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆｕｒｉｏｓｕｓ）及び他の原核生物におけるＣｍｒ（Ｃａｓ  ＲＡＭＰモジュール）タンパク質は、小ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡと機能的複合体を形成し、これは、相補性標的ＲＮＡを認識し、切断する。より単純なＣＲＩＳＰＲ系は、二重らせんの各鎖のための２活性切断部位を有するヌクレアーゼであるタンパク質Ｃａｓ９に依存する。Ｃａｓ９と修飾ＣＲＩＳＰＲ遺伝子座ＲＮＡとの組み合わせを遺伝子編集のための系に使用できる。Ｐｅｎｎｉｓｉ（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４１：８３３−８３６。
【０２３１】
好ましい実施形態において、ＲＮＡガイドヌクレアーゼは、Ｃａｓ分子、例えばＣａｓ９分子である。様々な種のＣａｓ９分子が本明細書に記載の方法及び組成物において使用され得る。好ましい実施形態において、Ｃａｓ９分子は、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９分子である。実施形態において、Ｃａｓ９分子は、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９分子に由来する（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｑ９９ＺＷ２）。Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９分子は、本明細書の開示の大部分の対象であるが、本明細書に列挙される他の種のＣａｓ９タンパク質の、又はそれに由来する、又はそれに基づくＣａｓ９分子も同様に使用することができる。換言すると、他のＣａｓ９分子、例えばＳ．サーモフィルス（Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）及び／又はナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）Ｃａｓ９分子が本明細書に記載の系、方法及び組成物で使用され得る。更なるＣａｓ９種は、アシドボラックス・アベナエ（Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ａｖｅｎａｅ）、アクチノバチルス・プルロニューモニエ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、アクチノバチルス・サクシノゲネス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｃｃｉｎｏｇｅｎｅｓ）、アクチノバチルス・スイス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｉｓ）、アクチノミセス属（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、シクリフィルス・デニトリフィカンズ（ｃｙｃｌｉｐｈｉｌｕｓ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ）、アミノモナス・パウシボランス（Ａｍｉｎｏｍｏｎａｓ  ｐａｕｃｉｖｏｒａｎｓ）、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ）、バチルス・スミシイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｍｉｔｈｉｉ）、バチルス・チューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｐ．）、ブラストピレルラ・マリナ（Ｂｌａｓｔｏｐｉｒｅｌｌｕｌａ  ｍａｒｉｎａ）、ブラディリゾビウム属（Ｂｒａｄｙｒｈｉｚ’  ｏｂｉｕｍ  ｓｐ．）、ブレビバチルス・ラテロスプラス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）、カンピロバクター・コリ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｃｏｌｉ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）、カンピロバクター・ラド（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｌａｄ）、カンジダトス・プニセイスピリルム（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｐｕｎｉｃｅｉｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）、クロストリジウム・セルロリティカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃｅｌｌｕｌｏｌｙｔｉｃｕｍ）、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、コリネバクテリウム・アクコレンス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｃｏｌｅｎｓ）、コリネバクテリウム・ジフテリア（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）、コリネバクテリウム・マツルショッティイ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍａｔｒｕｃｈｏｔｉｉ）、ディノロセオバクター・シリバエ（Ｄｉｎｏｒｏｓｅｏｂａｃｔｅｒ  ｓｌｉｉｂａｅ）、ユーバクテリウム・ドリクム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｏｌｉｃｈｕｍ）、γプロテオバクテリウム（ｇａｍｍａ  ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、グルコンアセトバクター・ジアゾトロフィカス（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｌｅｒ  ｄｉａｚｏｔｒｏｐｈｉｃｕｓ）、ヘモフィルス・パラインフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、ヘモフィルス・スプトラム（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｐｕｔｏｒｕｍ）、ヘリコバクター・カナデンシス（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ）、ヘリコバクター・シネディ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｃｉｎａｅｄｉ）、ヘリコバクター・ムステラエ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｍｕｓｔｅｌａｅ）、イリオバクター・ポリトロパス（Ｉｌｙｏｂａｃｌｅｒ  ｐｏｌｙｔｒｏｐｕｓ）、キンゲラ・キンゲ（Ｋｉｎｇｅｌｌａ  ｋｉｎｇａｅ）、ラクトバチルス・クリスパタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）、リステリア・イバノビイ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｉｖａｎｏｖｉｉ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、リステリア科細菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａｃｅａｅ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、メチロシスティス属（Ｍｅｔｈｙｌｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．）、メチロサイナス・トリコスポリウム（Ｍｅｔｈｙｌｏｓｉｎｕｓ  ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ）、モビルンカス・ムリエリス（Ｍｏｂｉｌｕｎｃｕｓ  ｍｕｌｉｅｒｉｓ）、ナイセリア・バシリフォルミス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｂａｃｉｌｌｉｆｏｒｍｉｓ）、ナイセリア・シネレア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｃｉｎｅｒｅａ）、ナイセリア・フラベッセンス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）、ナイセリア・ラクタミカ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｌａｃｔａｍｉｃａ）、ナイセリア属（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｓｐ．）、ナイセリア・ワッズウォルシー（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｗａｄｓｗｏｒｔｈｉｉ）、ニトロソモナス属（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．）、パルビバクラム・ラバメンティボランス（Ｐａｒｖｉｂａｃｕｌｕｍ  ｌａｖａｍｅｎｔｉｖｏｒａｎｓ）、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、ファスコラークトバクテリウム・スクシナテュテンス（Ｐｈａｓｃｏｌａｒｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｕｃｃｉｎａｔｕｔｅｎｓ）、ラルストニア・シジジイ（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｙｚｙｇｉｉ）、ロドシュードモナス・パルストリス（Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐａｌｕｓｔｒｉｓ）、ロドブラム属（Ｒｈｏｄｏｖｕｌｕｍ  ｓｐ．）、シモンシエラ・ムエレリ（Ｓｉｍｏｎｓｉｅｌｌａ  ｍｕｅｌｌｅｒｉ）、スフィンゴモナス属（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．）、スポロラクトバシラス・ビネアエ（Ｓｐｏｒｏｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｖｉｎｅａｅ）、スタフィロコッカス・ルグドゥネンシス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｇｄｕｎｅｎｓｉｓ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）、サブドリグラヌルム属（Ｓｕｂｄｏｌｉｇｒａｎｕｌｕｍ  ｓｐ．）、チストレラ・モビリス（Ｔｉｓｌｒｅｌｌａ  ｍｏｂｉｌｉｓ）、トレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｓｐ．）又はベルミネフロバクター・アイセニアエ（Ｖｅｒｍｉｎｅｐｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｅｉｓｅｎｉａｅ）を含む。
【０２３２】
Ｃａｓ９分子は、この用語が本明細書において使用される場合、ｇＲＮＡ分子（例えば、ｔｒａｃｒのドメインの配列）と相互作用することができ、ｇＲＮＡ分子と協調して、標的配列及びＰＡＭ配列を含む部位に局所化（例えば、標的又は帰巣）する分子を指す。
【０２３３】
一実施形態において、活性Ｃａｓ９分子が標的核酸と相互作用し、切断する能力は、ＰＡＭ配列依存的である。ＰＡＭ配列は、標的核酸中の配列である。一実施形態において、標的核酸の切断は、ＰＡＭ配列の上流で起こる。異なる細菌種からの活性Ｃａｓ９分子は、異なる配列モチーフ（例えば、ＰＡＭ配列）を認識することができる。一実施形態において、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）の活性Ｃａｓ９分子は、配列モチーフＮＧＧを認識し、この配列から１〜１０、例えば３〜５塩基対上流の標的核酸配列の切断を導く。例えば、Ｍａｌｉ  ｅｌ  ａｌ，ＳＣＩＥＮＣＥ  ２０１３；３３９（６１２１）：８２３−８２６参照を参照されたい。一実施形態において、Ｓ．サーモフィルス（Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）の活性Ｃａｓ９分子は、配列モチーフＮＧＧＮＧ及びＮＮＡＧ  ＡＡＷ（Ｗ＝Ａ又はＴ）を認識し、これらの配列から１〜１０、例えば３〜５塩基対上流のコア標的核酸配列の切断を導く。例えば、Ｈｏｒｖａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，ＳＣＩＥＮＣＥ  ２０１０；３２７（５９６２）：１６７−１７０及びＤｅｖｅａｕ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  ＢＡＣＴＥＲＩＯＬ  ２００８；１９０（４）：１３９０−１４００を参照されたい。一実施形態において、Ｓ．ミュータンス（Ｓ．ｍｕｔａｎｓ）の活性Ｃａｓ９分子は、配列モチーフＮＧＧ又はＮＡＡＲ（Ｒ−Ａ又はＧ）を認識し、この配列から１〜１０、例えば３〜５塩基対上流のコア標的核酸配列の切断を導く。例えば、Ｄｅｖｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  ＢＡＣＴＥＲＩＯＬ  ２００８；１９０（４）：１３９０−１４００を参照されたい。
【０２３４】
一実施形態において、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）の活性Ｃａｓ９分子は、配列モチーフＮＮＧＲＲ（Ｒ＝Ａ又はＧ）を認識し、この配列から１〜１０、例えば３〜５塩基対上流の標的核酸配列の切断を導く。例えば、Ｒａｎ  Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，ＮＡＴＵＲＥ，ｖｏｌ．５２０，２０１５，ｐｐ．１８６−１９１を参照されたい。一実施形態において、Ｎ．メニンギティディス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の活性Ｃａｓ９分子は、配列モチーフＮＮＮＮＧＡＴＴを認識し、この配列から１〜１０、例えば３〜５塩基対上流の標的核酸配列の切断を導く。例えば、Ｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＥＡＲＬＹ  ＥＤＩＴＩＯＮ  ２０１３，１−６を参照されたい。Ｃａｓ９分子がＰＡＭ配列を認識する能力は、例えば、Ｊｉｎｅｋ  ｅｔ  ａｌ，ＳＣＩＥＮＣＥ  ２０１２，３３７：８１６に記載の形質転換アッセイを使用して決定され得る。
【０２３５】
例示的な天然に存在するＣａｓ９分子は、Ｃｈｙｌｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ，ＲＮＡ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２０１３；１０：５，７２７−７３７に記載される。このようなＣａｓ９分子は、クラスター１細菌ファミリー、クラスター２細菌ファミリー、クラスター３細菌ファミリー、クラスター４細菌ファミリー、クラスター５細菌ファミリー、クラスター６細菌ファミリー、クラスター７細菌ファミリー、クラスター８細菌ファミリー、クラスター９細菌ファミリー、クラスター１０細菌ファミリー、クラスター１１細菌ファミリー、クラスター１２細菌ファミリー、クラスター１３細菌ファミリー、クラスター１４細菌ファミリー、クラスター１細菌ファミリー、クラスター１６細菌ファミリー、クラスター１７細菌ファミリー、クラスター１８細菌ファミリー、クラスター１９細菌ファミリー、クラスター２０細菌ファミリー、クラスター２１細菌ファミリー、クラスター２２細菌ファミリー、クラスター２３細菌ファミリー、クラスター２４細菌ファミリー、クラスター２５細菌ファミリー、クラスター２６細菌ファミリー、クラスター２７細菌ファミリー、クラスター２８細菌ファミリー、クラスター２９細菌ファミリー、クラスター３０細菌ファミリー、クラスター３１細菌ファミリー、クラスター３２細菌ファミリー、クラスター３３細菌ファミリー、クラスター３４細菌ファミリー、クラスター３５細菌ファミリー、クラスター３６細菌ファミリー、クラスター３７細菌ファミリー、クラスター３８細菌ファミリー、クラスター３９細菌ファミリー、クラスター４０細菌ファミリー、クラスター４１細菌ファミリー、クラスター４２細菌ファミリー、クラスター４３細菌ファミリー、クラスター４４細菌ファミリー、クラスター４５細菌ファミリー、クラスター４６細菌ファミリー、クラスター４７細菌ファミリー、クラスター４８細菌ファミリー、クラスター４９細菌ファミリー、クラスター５０細菌ファミリー、クラスター５１細菌ファミリー、クラスター５２細菌ファミリー、クラスター５３細菌ファミリー、クラスター５４細菌ファミリー、クラスター５５細菌ファミリー、クラスター５６細菌ファミリー、クラスター５７細菌ファミリー、クラスター５８細菌ファミリー、クラスター５９細菌ファミリー、クラスター６０細菌ファミリー、クラスター６１細菌ファミリー、クラスター６２細菌ファミリー、クラスター６３細菌ファミリー、クラスター６４細菌ファミリー、クラスター６５細菌ファミリー、クラスター６６細菌ファミリー、クラスター６７細菌ファミリー、クラスター６８細菌ファミリー、クラスター６９細菌ファミリー、クラスター７０細菌ファミリー、クラスター７１細菌ファミリー、クラスター７２細菌ファミリー、クラスター７３細菌ファミリー、クラスター７４細菌ファミリー、クラスター７５細菌ファミリー、クラスター７６細菌ファミリー、クラスター７７細菌ファミリー又はクラスター７８細菌ファミリーのＣａｓ９分子を含む。
【０２３６】
例示的な天然に存在するＣａｓ９分子は、クラスター１細菌ファミリーのＣａｓ９分子を含む。例は、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（例えば、株ＳＦ３７０、ＭＧＡＳ  １０２７０、ＭＧＡＳ  １０７５０、ＭＧＡＳ２０９６、ＭＧＡＳ３１５、ＭＧＡＳ５００５、ＭＧＡＳ６１８０、ＭＧＡＳ９４２９、ＮＺ１３１及びＳＳＩ−１）、Ｓ．サーモフィルス（Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）（例えば、株ＬＭＤ−９）、Ｓ．シュードポルシヌス（Ｓ．ｐｓｅｕｄｏｐｏｒｃｉｎｕｓ）（例えば、株ＳＰＩＮ  ２００２６）、Ｓ．ミュータンス（Ｓ．ｍｕｔａｎｓ）（例えば、株ＵＡ  １５９、ＮＮ２０２５）、Ｓ．マカカエ（Ｓ．ｍａｃａｃａｅ）（例えば、株ＮＣＴＣ１１５５８）、Ｓ．ガロリリカス（Ｓ．ｇａｌｌｏｌｙｌｉｃｕｓ）（例えば、株ＵＣＮ３４、ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−２０６９）、Ｓ．エキンス（Ｓ．ｅｑｕｉｎｅｓ）（例えば、株ＡＴＣＣ  ９８１２、ＭＧＣＳ  １２４）、Ｓ．ジスガラクチアエ（Ｓ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）（例えば、株ＧＧＳ  １２４）、Ｓ．ボビス（Ｓ．ｂｏｖｉｓ）（例えば、株ＡＴＣＣ  ７００３３８）、Ｓ．アンギノーサス（Ｓ．ａｎｇｉｎｏｓｕｓ）（例えば、株Ｆ０２１  １）、ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａ）＊（例えば、株ＮＥＭ３１６、Ａ９０９）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅ）（例えば、株Ｆ６８５４）、リステリア・イノキュア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｉｎｎｏｃｕａ）（Ｌ．ｉｎｎｏｃｕａ、例えば株Ｃｌｉｐ  ｌ１２６２）、エンテロコッカス・イタリクス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｉｔａｌｉｃｕｓ）（例えば、株ＤＳＭ  １５９５２）又はエンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）（例えば、株１，２３，４０８）のＣａｓ９分子を含む。更なる例示的なＣａｓ９分子は、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）のＣａｓ９分子（Ｈｏｕ  ｅｔ’ａｌ．ＰＮＡＳ  Ｅａｒｌｙ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ２０１３，１−６）及びスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）Ｃａｓ９分子である。
【０２３７】
一実施形態において、Ｃａｓ９分子、例えば活性Ｃａｓ９分子又は不活性Ｃａｓ９分子は、本明細書に記載のＣａｓ９分子配列又は天然に存在するＣａｓ９分子配列、例えば本明細書に列挙されるか又はＣｈｙｌｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＲＮＡ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２０１３，１０：５，’Ｉ２’Ｉ−Τ，１  Ｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ  Ｅａｒｌｙ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ２０１３，１−６（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載の種からのＣａｓ９分子のいずれかと６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の相同性を有するか、比較した場合にアミノ酸残基の１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、３０％又は４０％を超えて異ならないか、少なくとも１、２、５、１０又は２０アミノ酸であるが、最大１００、８０、７０、６０、５０、４０又は３０アミノ酸異なるか、又は同一であるアミノ酸配列を含む。
【０２３８】
一実施形態において、Ｃａｓ９分子は、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｑ９９ＺＷ２）と６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％相同性を有するか、比較してアミノ酸残基の１％、２％、５％、１０％、１５％、２０％、３０％又は４０％を超えて異ならないか、少なくとも１、２、５、１０又は２０アミノ酸で異なるが、１００、８０、７０、６０、５０、４０又は３０アミノ酸を超えて異ならないか、又は同一であるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、Ｃａｓ９分子は、例えば、その内容が全体として参照により本明細書に組み込まれるＳｌａｙｍａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓ，ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｏｎｌｉｎｅ  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １，２０１５  ａｔ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＤＯＩ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．ａａｄ５２２７；Ｋｌｅｉｎｓｔｉｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５２９，２０１６，ｐｐ．４９０−４９５（ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１６５２６で、２０１６年１月６日にオンラインで入手可能）；又は米国特許出願公開第２０１６／０１０２３２４号明細書に記載の変異体などのＳ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９変異体を含む。一実施形態において、Ｃａｓ９分子は、触媒的不活性、例えばｄＣａｓ９である。Ｔｓａｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．３２：５６９−５７７；米国特許第８，８７１，４４５号明細書、第８，８６５，４０６号明細書、第８，７９５，９６５号明細書、第８，７７１，９４５号明細書及び第８，６９７，３５９号明細書、これらの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。触媒的に不活性なＣａｓ９、例えばｄＣａｓ９分子は、転写モジュレーター、例えば転写抑制因子又は転写活性化因子と融合し得る。
【０２３９】
実施形態において、Ｃａｓ９分子、例えばＳ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）のＣａｓ９は、更なる活性を付与する１つ以上のアミノ酸配列を含み得る。一部の態様において、Ｃａｓ９分子は、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０又はそれを超える核局在化配列（ＮＬＳ）などの１つ以上のＮＬＳを含み得る。典型的には、ＮＬＳは、タンパク質表面に露出した正電荷リシン又はアルギニンの１つ以上の短い配列からなるが、他の型のＮＬＳが知られている。ＮＬＳの非限定的な例は、アミノ酸配列ＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号８６４）を有するＳＶ４０ウイルス大Ｔ抗原のＮＬＳを含むか、又はそれに由来するＮＬＳ配列を含む。他の適当なＮＬＳ配列は、当技術分野で公知である（例えば、Ｓｏｒｏｋｉｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｍｏｓｃｏｗ）（２００７）７２：１３，１４３９−１４５７；Ｌａｎｇｅ  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．（２００７）２８２：８，５１０１−５）。前述の実施形態のいずれかにおいて、Ｃａｓ９分子は、更に（又は代わりに）、タグ、例えばＨｉｓタグ、例えばＨｉｓ（６）タグ（配列番号８６５）又はＨｉｓ（８）タグ（配列番号８６６）を例えばＮ末端及び／又はＣ末端に含み得る。
【０２４０】
従って、例えば、真核生物細胞における遺伝子編集のための操作されたＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集系は、典型的には、（１）標的ドメイン（ゲノムＤＮＡ標的配列にハイブリダイズすることができる）及びＣａｓ、例えばＣａｓ９酵素と結合することができる配列を含むガイドＲＮＡ分子（ｇＲＮＡ）と、（２）Ｃａｓ、例えばＣａｓ９タンパク質とを含む。この第２のドメインは、ｔｒａｃｒドメインと呼ばれるドメインを含み得る。標的ドメイン及びＣａｓ、例えばＣａｓ９酵素と結合することができる配列は、同じ（単一ｇＲＮＡ、キメラｇＲＮＡ又はｓｇＲＮＡと称されることがある）又は異なる分子（デュアルｇＲＮＡ又はｄｇＲＮＡと称されることがある）上に配置され得る。異なる分子上に配置されている場合、それぞれは、例えば、ハイブリダイゼーションにより、分子が会合することを可能にするハイブリダイゼーションドメインを含む。
【０２４１】
ｇＲＮＡ分子形式は、当技術分野において公知である。本発明の例示的なｇＲＮＡ分子、例えばｄｇＲＮＡ分子は、例えば、配列：ｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎｎＧＵＵＵＵＡＧＡＧＣＵＡＵＧＣＵＧＵＵＵＵＧ（配列番号８６７）であって、「ｎ」は、標的ドメイン、例えばＫＤＭ１Ａへの標的ドメイン、例えば本明細書に記載のものの残基を指し、１５〜２５ヌクレオチドからなり得、例えば２０ヌクレオチドからなる、配列を有する第１の核酸；及び例示的な配列：
【化３】
2019532953.tif 000009
を有する第２の核酸配列であって、任意選択により３’末端に１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ又は７つ（例えば、４つ又は７つ、例えば７つ）の更なるＵヌクレオチドを有する配列（配列番号８６８）を含む、例えばそれからなる。
【０２４２】
或いは、第２の核酸分子は、上記の配列のフラグメントからなり得、そのようなフラグメントは、第１の核酸とハイブリダイズできる。このような第２の核酸分子の例は、
ＡＡＣＡＧＣＡＵＡＧＣＡＡＧＵＵＡＡＡＡＵＡＡＧＧＣＵＡＧＵＣＣＧＵＵＡＵＣＡＡＣＵＵＧＡＡＡＡＡＧＵＧＧＣＡＣＣＧＡＧＵＣＧＧＵＧＣ
であり、任意選択により３’末端に１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ又は７つ（例えば、４つ又は７つ、例えば７つ）の更なるＵヌクレオチドを有する（配列番号８６９）。
【０２４３】
本発明の別の例示的なｇＲＮＡ分子、例えばｓｇＲＮＡ分子は、例えば、配列：
【化４】
2019532953.tif 000010
を有する第１の核酸を含み、例えばそれからなり、ここで、「ｎ」は、標的ドメイン、例えばＫＤＭ１Ａへの標的ドメイン、例えば本明細書に記載のものの残基を指し、１５〜２５ヌクレオチドからなり得、例えば２０ヌクレオチドからなり、任意選択により３’末端に１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ又は７つ（例えば、４つ又は７つ、例えば４つ）の更なるＵヌクレオチドを伴う。
【０２４４】
本発明において有用なｇＲＮＡ分子標的ドメインの例示的な配列（例えば、ＬＳＤ１遺伝子、例えばＫＤＭ１Ａを標的とする）は、配列番号１３２〜８６２から選択されるか、又はその内容が全体として参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１７／１１４４９７号パンフレットに開示されている任意の核酸配列を含む。
【０２４５】
当技術分野において公知のＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集系の更なる成分及び／又は要素は、例えば、米国特許出願公開第２０１４／００６８７９７号明細書、国際公開第２０１５／０４８５７７号パンフレット及びＣｏｎｇ（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３９：８１９−８２３に記載され、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。標的遺伝子を阻害するこのような系は、例えば、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集系を、標的遺伝子の配列とハイブリダイズする標的ドメインを含むｇＲＮＡ分子を含むように操作することにより産生され得る。実施形態において、ｇＲＮＡは、標的遺伝子、例えばＫＤＭ１Ａ又はその調節エレメントの１５〜２５ヌクレオチド、例えば２０ヌクレオチドと完全に相補性である標的ドメインを含む。一実施形態において、標的遺伝子の１５〜２５ヌクレオチド、例えば２０ヌクレオチドは、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集系（例えば、系は、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９タンパク質を含み、ＰＡＭ配列は、ＮＧＧを含み、ここで、Ｎは、Ａ、Ｔ、Ｇ又はＣのいずれかであり得る）のＲＮＡガイドヌクレアーゼ、例えばＣａｓタンパク質により認識されるプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列の５’の直近に配置される。
【０２４６】
一実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集系のｇＲＮＡ分子及びＲＮＡガイドヌクレアーゼ、例えばＣａｓタンパク質は、複合体化してＲＮＰ複合体を形成することができる。他の実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集系の１つ以上の成分をコードする核酸を使用し得る。
【０２４７】
一実施形態において、外来ＤＮＡを、標的細胞型におけるプロモーター活性を伴う又は伴わないＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集系、例えば所望の導入遺伝子をコードするＤＮＡと共に細胞に導入することができる。外来ＤＮＡの配列及びゲノムの標的配列に応じて、この過程は、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集系により標的化される部位又はその近辺で外来ＤＮＡをゲノムに組み込むために使用され得る。例えば、導入遺伝子に隣接する３’及び５’配列は、遺伝子編集系により切断されるゲノムにおける部位の遺伝子配列３’及び５’（それぞれ）と相同である外来ＤＮＡに含まれ得る。このような外来ＤＮＡ分子は、「鋳型ＤＮＡ」と称し得る。
【０２４８】
一実施形態において、本発明のＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集系は、Ｃａｓ９、例えばＳ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９及び目的の遺伝子、例えばＫＤＭ１Ａの配列とハイブリダイズする標的ドメインを含むｇＲＮＡを含む。一実施形態において、ｇＲＮＡ及びＣａｓ９は、ＲＮＰを形成するように複合体化される。一実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集系は、ｇＲＮＡをコードする核酸及びＣａｓタンパク質、例えばＣａｓ９、例えばＳ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９をコードする核酸を含む。一実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集系は、ｇＲＮＡ及びＣａｓタンパク質、例えばＣａｓ９、例えばＳ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９をコードする核酸を含む。
【０２４９】
例示的な実施形態において、ゲノム編集系ＬＳＤ１阻害剤は、ＣＲＩＳＰＲ系である。本発明の実施において有用なＣＲＩＳＰＲゲノム編集系は、例えば、当技術分野において公知の技術、例えば米国特許出願公開第２０１４００６８７９７号明細書及びＣｏｎｇ（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３９：８１９−８２３に記載のものを使用して、ＬＳＤ１を阻害する人工ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を産生できる。例えば、Ｔｓａｉ（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３２：６  ５６９−５７６、米国特許第８，８７１，４４５号明細書；同第８，８６５，４０６号明細書；同第８，７９５，９６５号明細書；同第８，７７１，９４５号明細書；及び同第８，６９７，３５９号明細書（これらは、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載のもののような、ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害する当技術分野において公知の他の人工ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系も産生できる。
【０２５０】
ＴＡＬＥＮ遺伝子編集系
ＴＡＬＥＮは、ＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合ドメインとＤＮＡ切断ドメインを融合することにより人工的に産生される。転写アクティベータ様効果（ＴＡＬＥ）は、任意の所望のＤＮＡ配列、縦叔母、標的遺伝子に結合するように操作できる。操作されたＴＡＬＥとＤＮＡ切断ドメインを合わせることにより、任意の所望のＤＮＡ配列に特異的な制限酵素を産生できる。次いで、これらは、例えば、細胞に導入されることにより、例えば遺伝子編集系、例えばＴＡＬＥＮ遺伝子編集系の成分として使用することができ、これらは、ゲノム編集に使用することができる。Ｂｏｃｈ（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１３５−６；及びＢｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２６：１５０９−１２；Ｍｏｓｃｏｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２６：３５０１。
【０２５１】
ＴＡＬＥは、ザントモナス細菌により分泌されるタンパク質である。ＤＮＡ結合ドメインは、１２番目及び１３番目のアミノ酸以外、反復した高度に保存的な３３〜３４アミノ酸配列を含む。これらの２箇所は、高度に可変であり、特定のヌクレオチド認識と強い相関を示す。それらは、従って、所望のＤＮＡ配列と結合するように操作され得る。
【０２５２】
ＴＡＬＥＮを産生するために、ＴＡＬＥタンパク質を、例えば、野生型又は変異ＦｏｋＩエンドヌクレアーゼであるヌクレアーゼ（Ｎ）と融合する。ＴＡＬＥＮにおいて使用するためにＦｏｋＩについていくつかの変異が行われており、これらは、例えば、切断特異性又は活性の改善を含む。Ｃｅｒｍａｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３９：ｅ８２；Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４３−８；Ｈｏｃｋｅｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：７３１−７３４；Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３３：３０７；Ｄｏｙｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ８：７４−７９；Ｓｚｃｚｅｐｅｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２５：７８６−７９３；及びＧｕｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００：９６。
【０２５３】
ＦｏｋＩドメインは、二量体として機能し、適切な配向及び間隔を有する標的ゲノムにおける部位のための独特なＤＮＡ結合ドメインを有する２つの構築物を必要とする。ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメインとＦｏｋＩ切断ドメインとの間のアミノ酸残基数及び２つの個々のＴＡＬＥＮ結合部位間の塩基数の両方が高レベルの活性を達成するために重要なパラメータであると考えられる。Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４３−８。
【０２５４】
ＴＡＬＥＮ（又はＴＡＬＥＮの対）を細胞内で使用して二重鎖切断（ＤＳＢ）を産生できる。変異は、修復機構が切断を非相同末端結合により不適切に修復する場合、切断部位に導入できる。例えば、不適切な修復は、フレームシフト変異を導入し得る。或いは、外来ＤＮＡを、ＴＡＬＥＮ、例えば導入遺伝子をコードするＤＮＡと共に細胞に導入することができ、外来ＤＮＡの配列及び染色体配列に応じて、この過程ｔは、ＴＡＬＥＮにより標的化される部位又はその近辺で導入遺伝子を組み込むのに使用され得る。標的遺伝子、例えばＬＳＤ１に特異的なＴＡＬＥＮは、モジュラー成分を使用する種々のスキームを含む、当技術分野において公知の任意の方法を使用して構築できる。Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４９−５３；Ｇｅｉｂｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ６：ｅ１９５０９；米国特許第８，４２０，７８２号明細書；米国特許第８，４７０，９７３号明細書、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２５５】
従って、例示的な実施形態において、ゲノム編集系ＬＳＤ１阻害剤は、ＬＳＤ１遺伝子の配列、例えばＫＤＭ１Ａに指向するＴＡＬＥＮ遺伝子編集系である。このような系は、当技術分野において一般的に知られており、ＬＳＤ１特異的ＴＡＬＥＮゲノム編集系は、公知の方法を使用して産生することができる。例えば、Ｂｏｃｈ（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１３５−６；及びＢｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２６：１５０９−１２；Ｍｏｓｃｏｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２６：３５０１；Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４９−５３；Ｇｅｉｂｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ６：ｅ１９５０９；米国特許第８，４２０，７８２号明細書；米国特許第８，４７０，９７３号明細書を参照されたい。
【０２５６】
亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）遺伝子編集系
「ＺＦＮ」又は「亜鉛フィンガーヌクレアーゼ」は、例えば、ＺＦＮ遺伝子編集系の一部として、所望の核酸配列、例えばＬＳＤ１遺伝子の所望の配列において又はその近辺において、１つ以上の核酸の改変、例えば挿入又は欠失に使用され得る亜鉛フィンガーヌクレアーゼ、人工ヌクレアーゼ又はヌクレアーゼの対を指す。
【０２５７】
ＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮは、ＤＮＡ結合ドメインに融合したＦｏｋＩヌクレアーゼドメイン（又はその誘導体）を含む。ＺＦＮの場合、ＤＮＡ結合ドメインは、１つ以上の亜鉛フィンガーを含む。Ｃａｒｒｏｌｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １８８：７７３−７８２；及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：１１５６−１１６０。
【０２５８】
亜鉛フィンガーは、１つ以上の亜鉛イオンにより安定化される小タンパク質構造モチーフである。亜鉛フィンガーは、例えば、Ｃｙｓ２Ｈｉｓ２を含むことができ、約３ｂｐ配列を認識できる。既知特異性の種々の亜鉛フィンガーを合わせて、約６ｂｐ、９ｂｐ、１２ｂｐ、１５ｂｐ又は１８ｂｐ配列を認識する多フィンガーポリペプチドを産生できる。ファージディスプレイ、酵母ワンハイブリッド系、細菌ワンハイブリッド及びツーハイブリッド系及び哺乳動物細胞を含む、特異的配列を認識する亜鉛フィンガー（及びそれらの組み合わせ）を産生するための種々の選択及びモジュラーアセンブリー技術が利用可能である。
【０２５９】
ＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮは、ＤＮＡを切断するために二量体化しなければならない。そのため、ＺＦＮの対が非パリンドロームＤＮＡ部位を標的とすることが必要である。２つの各々のＺＦＮは、そのヌクレアーゼが適切に離れて、ＤＮＡの逆の鎖に結合しなければならない。Ｂｉｔｉｎａｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：１０５７０−５。
【０２６０】
またＴＡＬＥＮと同様に、ＺＦＮは、ＤＮＡに二重鎖切断を創製でき、これは、不適切に修復された場合にフレームシフト変異を創製でき、細胞における標的遺伝子の発現及び量の減少に至る。ＺＦＮは、標的遺伝子若しくは遺伝子座を変異させるため、又は標的配列若しくはその近辺の部位に所望の導入遺伝子をコードする核酸を導入するために相同組換えと共に使用することもできる。
【０２６１】
標的遺伝子における配列に特異的なＺＦＮは、当技術分野において公知の任意の方法を使用して構築できる。例えば、その内容が全体として参照により本明細書に組み込まれるＰｒｏｖａｓｉ（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．１８：８０７−８１５；Ｔｏｒｉｋａｉ（２０１３）Ｂｌｏｏｄ  １２２：１３４１−１３４９；Ｃａｔｈｏｍｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６：１２００−７；及びＧｕｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４００：９６；米国特許出願公開第２０１１／０１５８９５７号明細書；及び米国特許出願公開第２０１２／００６０２３０号明細書を参照されたい。実施形態において、ＺＦＮ遺伝子編集系は、ＺＦＮ遺伝子編集系の１つ以上の成分をコードする核酸も含み得る。
【０２６２】
従って、例示的な実施形態において、ゲノム編集系ＬＳＤ１阻害剤は、ＬＳＤ１遺伝子、例えばＫＤＭ１Ａに特異的な亜鉛フィンガーヌクレアーゼ遺伝子編集系である。このような系は、当技術分野で一般的に公知であり、ＬＳＤ１に特異的な亜鉛フィンガーヌクレアーゼゲノム編集系は、既知方法を使用して産生することができる。例えば、Ｐｒｏｖａｓｉ（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．１８：８０７−８１５；Ｔｏｒｉｋａｉ（２０１３）Ｂｌｏｏｄ  １２２：１３４１−１３４９；Ｃａｔｈｏｍｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６：１２００−７；Ｇｕｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４００：９６；米国特許出願公開第２０１１／０１５８９５７号明細書；及び米国特許出願公開第２０１２／００６０２３０号明細書を参照されたい。
【０２６３】
例示的な実施形態において、ゲノム編集系ＬＳＤ１阻害剤は、メガヌクレアーゼ系である。このような系は、当技術分野で一般的に公知であり、ＬＳＤ１に特異的なメガヌクレアーゼゲノム編集系は、既知方法を使用して産生することができる。
【０２６４】
小分子ＬＳＤ１阻害剤
一態様において、ＬＳＤ１阻害剤は、小分子である。例示的な小分子ＬＳＤ１阻害剤は、以下に提供され、更なる候補分子は、ＬＳＤ１結合アッセイ及び本明細書に記載のアッセイなどの公知のアッセイにより同定され得る。
【０２６５】
有用なリシン特異的デメチラーゼ１（ＬＳＤ１）阻害剤は、不可逆的及び可逆的阻害剤の両方を含む。様々な可逆性及び不可逆性ＬＳＤ１阻害剤を記載するレビューは、Ｍｏｕｌｄ，Ｄａｎｉｅｌ  Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，“Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ＬＳＤ１  ａｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｔｏ  Ｄａｔｅ，”Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．，３５，Ｎｏ．３，５８６−６１８，（２０１５）；及びＸｈｅｎｇ，Ｙｉ−Ｃｈｏａ，ｅｔ．ａｌ．，“Ａ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｌｙｓｉｎｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｄｅｍｅｔｈｙｌａｓｅ  １  ａｎｄ  Ｉｔｓ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．，３５，Ｎｏ．５，１０３２−１０７１，（２０１５）により発表されており、これは、参照により本明細書に組み込まれる。適当なＬＳＤ１阻害剤は、国際公開第０７／０２１８３９号パンフレット；国際公開第２０１０／０４３７２１号パンフレット；国際公開第２０１０／０８４１６０号パンフレット；国際公開第２０１１／０３５９４１号パンフレット；国際公開第２０１１／０４２２１７号パンフレット；国際公開第２０１２／０１３７２７号パンフレット；国際公開第２０１２／０３４１１６号パンフレット；国際公開第２０１２／０７１４６９号パンフレット；国際公開第２０１２／１３５１１３号パンフレット；国際公開第２０１３／０５７３２０号パンフレット；国際公開第２０１３／０５７３２２号パンフレット；国際公開第２０１４／２０５２１３号パンフレット；国際公開第２０１５／０３１５６４号パンフレット；国際公開第２０１５／１２３４０８号パンフレット；国際公開第２０１５／１２３４３７号パンフレット；国際公開第２０１５／１２３４６５号パンフレット；及び国際公開第２０１５／１５６４１７号パンフレットにも記載され、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。不可逆的及び可逆的ＬＳＤ１阻害剤の代表例が以下の本明細書に記載される。
【０２６６】
例示的な不可逆的ＬＳＤ１阻害剤は、ＧＳＫ−ＬＳＤ１（トランス−ラセミ）ジヒドロクロライド、ｒｅｌ−Ｎ−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル］−４−ピペリジンアミンヒドロクロライド（１：２）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから入手可能）；トラニルシプロミン；Ｎ−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−フェニルシクロプロピル］−４−ピペリジンメタンアミン（ＧＳＫ２６９９５３７、国際公開第２０１３０５７３２０号パンフレット及び国際公開第２０１２１３５１１３号パンフレットに記載）；４−［［４−［［［（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル］アミノ］メチル］−１−ピペリジニル］メチル］−安息香酸又はその薬学的に許容される塩（ＧＳＫ２８７９５５２、国際公開第２０１２１３５１１３号パンフレットに記載）；トランス−Ｎ１−［（１Ｒ，２Ｓ）−２−フェニルシクロプロピル］−１，４−シクロヘキサンジアミン又はその薬学的に許容される塩（ＯＲＹ−１００１、国際公開第２０１３０５７３２２号パンフレットに記載）；ｒｅｌ−１−（４−メチル−１−ピペラジニル）−２−［［（１Ｒ＊，２Ｓ＊）−２−［４−フェニルメトキシ）フェニル］シクロプロピル］アミノ］エタノン又はその薬学的に許容される塩（ＲＮ−１、国際公開第２０１００４３７２１号パンフレットに記載）；ｒｅｌ−２−［［（１Ｒ，２Ｓ）−２−［４−［（４−クロロフェニル）メトキシ］フェニル］シクロプロピル］アミノ］−１−（４−メチル−１−ピペラジニル）−エタノン又はその薬学的に許容される塩（国際公開第２０１００４３７２１号パンフレットに記載）；４’−（（１Ｒ，２Ｓ）−２−アミノシクロプロピル）ビフェニル−３−オール又はその薬学的に許容される塩（ＯＧ−Ｌ００２、国際公開第２０１２０１３７２７号パンフレットに記載）；（１Ｓ，２Ｒ）−Ｎ−（（２−メトキシピリジン−３−イル）メチル）−２−フェニルシクロプロパン−１−アミン（国際公開第２０１０／０８４１６０号パンフレットに記載）又はその薬学的に許容される塩を含む。
【０２６７】
例示的な可逆性ＬＳＤ１阻害剤は、Ｎａｍｏｌｉｎｅ（ＣｈｅｍＢｒｉｄｇｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから入手可能）；３（４−モルホリニルスルホニル）−安息香酸、（２Ｅ）−２−［１−（５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）エチリデン］ヒドラジド（ＳＰ−２５０９、国際公開第２０１４２０５２１３号パンフレットに記載）；３［［４−［４−（アミノイミノメチル）ベンゾイル］−１−ピペラジニル］カルボニル］−５−［［４−（アミノイミノメチル）−１−ピペラジニル］メチル］−安息香酸，メチルエステル（ＣＢＢ−１００７、ＤＳＫ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａ，Ｉｎｃ．から入手可能で、国際公開第２０１２／０７１４６９号パンフレットに記載）；（Ｒ）−４−（５−（ピロリジン−３−イルメトキシ）−２−（ｐ−トリル）ピリジン−３−イル）ベンゾニトリル（ＧＳＫ３５４）；Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−（（４−（４−（４−（ピペリジン−４−イル）フェニル）−１Ｈ−インダゾール−１−イル）フェニル）スルホニル）ピペリジン−４−アミン；５（６−クロロ−４’−（メチルスルホニル）−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）−２−（ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボニトリル；３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリル；及びトランス−３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−ヒドロキシシクロヘキシル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリル；又は前述のもののいずれかの薬学的に許容される塩を含む。
【０２６８】
更なる例示的なＬＳＤ１阻害剤は、式（Ｉ）：
【化５】
2019532953.tif 000011
（式中、
Ｒ１は、独立して、１つ又は２つのＲａで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、１つ又は２つのＲａで置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、−（ＣＨ）ｎ−（１つ又は２つのＲｄで置換されたＣ３〜Ｃ６シクロアルキル）、−（ＣＨ）ｎ−（０〜３つのＲｂで置換されたフェニル）、−（ＣＨ）ｎ−（炭素原子と、Ｎ及びＮＲａから選択される１つ〜２つのヘテロ原子とを含むであって、０〜３つのＲｂで置換されている６員ヘテロアリール）、
【化６】
2019532953.tif 000012
から選択され；
Ｒ２は、独立して、Ｈ、ハロゲン及びＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；
Ｒ３は、独立して、
【化７】
2019532953.tif 000013
から選択され；
Ｒ４は、独立して、Ｈ、ハロゲン及びＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；
Ｒ５は、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ６は、独立して、Ｈ、ハロゲン及びＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；
Ｒ７は、各存在において、独立して、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）及びＮＨＣＯ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から選択され；
Ｒ８は、各存在において、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ１〜Ｃ４ハロアルキルから選択され；
Ｙは、各存在において、独立して、ＣＨ及びＮから選択され；
Ｗは、独立して、Ｏ及びＮＨから選択され；
Ｒａは、独立して、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ＣＯ２（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ＣＯ２（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ＣＯＮＲｅＲｆ、ＮＨＲｅから選択され；
Ｒｂは、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯ２（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ＣＯＮＲｅＲｆ、ＮＨＲｅ、０〜１つのＲｃで置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル及び０〜１つのＲｃで置換されたＣ１〜Ｃ４アルコキシから選択され；
Ｒｃは、独立して、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ＣＯ２（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ＣＯＮＲｅＲｆ、ＮＨＲｅから選択され；
Ｒｄは、独立して、ＯＨ、＝Ｏ及びＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から選択され；
Ｒｅは、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣＯ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から選択され；
Ｒｆは、独立して、Ｈ及びＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；
ｍは、独立して、１及び２から選択され；
ｎは、各存在において、独立して、０及び１から選択され；
ｑは、独立して、１、２及び３から選択される）
の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む。
【０２６９】
一部の実施形態において、本発明は、第１の態様の範囲内において、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ｒ１は、独立して、１つのＲａで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、１つのＲａで置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、−（ＣＨ）ｎ−（１つのＲｄで置換されたＣ３〜Ｃ６シクロアルキル）、−（ＣＨ）ｎ−（０〜２つのＲｂで置換されたフェニル）、−（ＣＨ）ｎ−（炭素原子と、Ｎ及びＮＲａから選択される１〜２つのヘテロ原子とを含む６員ヘテロアリールであって、０〜２つのＲｂで置換されている６員ヘテロアリールで）、
【化８】
2019532953.tif 000014
から選択され；
Ｒ２は、独立して、Ｈ、ハロゲン及びＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；
Ｒ３は、独立して、
【化９】
2019532953.tif 000015
から選択され；
Ｒ４は、独立して、Ｈ、ハロゲン及びＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；
Ｒ５は、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル及びＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから選択され；
Ｒ６は、独立して、Ｈ、ハロゲン及びＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；
Ｒ７は、各存在において、独立して、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）及びＮＨＣＯ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から選択され；
Ｒ８は、各存在において、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ１〜Ｃ４ハロアルキルから選択され；
Ｙは、各存在において、独立して、ＣＨ及びＮから選択され；
Ｗは、独立して、Ｏ及びＮＨから選択され；
Ｒａは、独立して、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ＣＯ２（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）及びＣＯＮＨ２から選択され；
Ｒｂは、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯ２（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ＣＯＮＨ２、０〜１つのＲｃで置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル及び０〜１つのＲｃで置換されたＣ１〜Ｃ４アルコキシから選択され；
Ｒｃは、独立して、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ＣＯ２（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）及びＣＯＮＨ２から選択され；
Ｒｄは、独立して、ＯＨ、＝Ｏ及びＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から選択され；
ｍは、独立して、１及び２から選択され；
ｎは、各存在において、独立して、０及び１から選択され；
ｑは、独立して、１、２及び３から選択される。
【０２７０】
一部の実施形態において、本発明は、第１又は第２の態様の範囲内において、式（Ｉ−１）：
【化１０】
2019532953.tif 000016
（式中、
Ｒ１は、独立して、１つのＲａで置換されたＣ２〜Ｃ６アルキル、１つのＲａで置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、−（ＣＨ）ｎ−（１つのＲｄで置換されたＣ４〜Ｃ６シクロアルキル）、−（ＣＨ）ｎ−（０〜２つのＲｂで置換されたフェニル）、−（ＣＨ）ｎ−（０〜２つのＲｂで置換されたピリジル）、ピペリジニル、
【化１１】
2019532953.tif 000017
から選択され；
Ｒ５は、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ＣＦ３及びシクロプロピルから選択され；
Ｒ６は、独立して、Ｈ及びＣ１〜Ｃ４アルキルから選択され；
Ｙは、独立して、ＣＨ及びＮから選択され；
Ｒａは、独立して、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ＣＯ２（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）及びＣＯＮＨ２から選択され；
Ｒｂは、独立して、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯ２（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ＣＯＮＨ２、０〜１つのＲｃで置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル及び０〜１つのＲｃで置換されたＣ１〜Ｃ４アルコキシから選択され；
Ｒｃは、独立して、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、ＣＯ２（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）及びＣＯＮＨ２から選択され；
Ｒｄは、独立して、ＯＨ、＝Ｏ及びＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）から選択され；
ｍは、独立して、１及び２から選択され；
ｎは、各存在において、独立して、０及び１から選択され；
ｑは、独立して、１、２及び３から選択される）
の化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【０２７１】
一部の実施形態において、本発明は、上記の態様のいずれかの範囲内において、式（Ｉ）若しくは（Ｉ−１）の化合物又はその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ｒ１は、独立して、１つのＲａで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、１つのＲａで置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、１つのＲｄで置換されたＣ４〜Ｃ６シクロアルキル、−（ＣＨ）ｎ−（１〜２つのＲｂで置換されたフェニル）、−（ＣＨ）ｎ−（１〜２つのＲｂで置換されたピリジル）、ピペリジニル、
【化１２】
2019532953.tif 000018
から選択され；
Ｒ５は、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＨ３、ＣＦ３及びシクロプロピルから選択され；
Ｒ６は、独立して、Ｈ及びＣＨ３から選択され；
Ｙは、独立して、ＣＨ及びＮから選択され；
Ｒａは、独立して、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＣＯ２ＣＨ３及びＣＯＮＨ２から選択され；
Ｒｂは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ、ＯＣＦ３、ＣＮ、ＣＯ２ＣＨ３、ＣＯＮＨ２から選択され；
０〜１つのＲｃで置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル及び０〜１つのＲｃで置換されたＣ１〜Ｃ４アルコキシから選択され；
Ｒｃは、独立して、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＣＯ２ＣＨ３及びＣＯＮＨ２から選択され；
Ｒｄは、独立して、ＯＨ、＝Ｏ及びＮＨＣＨ３から選択され；
ｍは、独立して、１及び２から選択され；
ｎは、各存在において、独立して、０及び１から選択され；
ｑは、独立して、１及び２から選択される。
【０２７２】
一部の実施形態において、本発明は、上記の態様のいずれかの範囲内において、式（Ｉ）若しくは（Ｉ−１）の化合物又はその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ｒ１は、独立して、１つのＲｄで置換されたＣ４〜Ｃ６シクロアルキル、１〜２つのＲｂで置換されたフェニル及び１〜２つのＲｂで置換されたピリジルから選択され；
Ｒ５は、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ及びＣＨ３から選択され；
Ｒ６は、独立して、Ｈ及びＣＨ３から選択され；
Ｙは、独立して、ＣＨ及びＮから選択され；
Ｒｂは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ、ＯＣＦ３、ＣＮ、ＣＯ２ＣＨ３、ＣＯＮＨ２、０〜１つのＲｃで置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル及び０〜１つのＲｃで置換されたＣ１〜Ｃ４アルコキシから選択され；
Ｒｃは、独立して、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＣＯ２ＣＨ３及びＣＯＮＨ２から選択され；
Ｒｄは、独立して、ＯＨ、＝Ｏ及びＮＨＣＨ３から選択される。
【０２７３】
一部の実施形態において、本発明は、上記の態様のいずれかの範囲内において、式（Ｉ）若しくは（Ｉ−１）の化合物又はその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ｒ１は、独立して、１つのＲｄで置換されたＣ４〜Ｃ６シクロアルキル又は１〜２つのＲｂで置換されたフェニルから選択され；
Ｒ５は、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ及びＣＨ３から選択され；
Ｒ６は、独立して、Ｈ及びＣＨ３から選択され；
Ｙは、独立して、ＣＨ及びＮから選択され；
Ｒｂは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ、ＯＣＦ３、Ｃ１〜Ｃ４アルキル及びＣ１〜Ｃ４アルコキシから選択され；
Ｒｄは、独立して、ＯＨ及びＮＨＣＨ３から選択される。
【０２７４】
一部の実施形態において、本発明は、国際公開第２０１７／１４９４６３号パンフレットの実施例１〜１０２の全ての化合物を含む、例示された実施例から選択される化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【０２７５】
一部の実施形態において、本発明は、
【化１３】
2019532953.tif 000019
又はその薬学的に許容される塩から選択される化合物を提供する。
【０２７６】
一部の実施形態において、本発明は、
【化１４】
2019532953.tif 000020
【化１５】
2019532953.tif 000021
又はその薬学的に許容される塩から選択される化合物を提供する。
【０２７７】
別の実施形態において、Ｒ１は、独立して、１つのＲａで置換されたＣ２〜Ｃ６アルキル、１つのＲａで置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、−（ＣＨ）ｎ−（１つのＲｅで置換されたＣ４〜Ｃ６シクロアルキル）、−（ＣＨ）ｎ−（０〜２つのＲｂで置換されたフェニル）、−（ＣＨ）ｎ−（０〜２つのＲｂで置換されたピリジル）、ピペリジニル、
【化１６】
2019532953.tif 000022
から選択される。
【０２７８】
別の実施形態において、Ｒ１は、独立して、１つのＲａで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、１つのＲａで置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、１つのＲｄで置換されたＣ４〜Ｃ６シクロアルキル、−（ＣＨ）ｎ−（１〜２つのＲｂで置換されたフェニル）、−（ＣＨ）ｎ−（１〜２つのＲｂで置換されたピリジル）、ピペリジニル、
【化１７】
2019532953.tif 000023
から選択される。
【０２７９】
別の実施形態において、Ｒ１は、独立して、１つのＲｄで置換されたＣ４〜Ｃ６シクロアルキル、１〜２つのＲｂで置換されたフェニル及び１〜２つのＲｂで置換されたピリジルから選択される。
【０２８０】
別の実施形態において、Ｒ１は、独立して、１つのＲｄで置換されたＣ４〜Ｃ６シクロアルキル及び１〜２つのＲｂで置換されたフェニルから選択される。
【０２８１】
別の実施形態において、Ｒ１は、独立して、１つのＲｄで置換されたＣ４〜Ｃ６シクロアルキルである。
【０２８２】
別の実施形態において、Ｒ１は、独立して、１〜２つのＲｂで置換されたフェニル及び１〜２つのＲｂで置換されたピリジルである。
【０２８３】
別の実施形態において、Ｒ１は、独立して、１〜２つのＲｂで置換されたフェニルである。
【０２８４】
別の実施形態において、Ｒ１は、独立して、１〜２つのＲｂで置換されたピリジルである。
【０２８５】
別の実施形態において、Ｒ５は、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ＣＦ３及びシクロプロピルから選択される。
【０２８６】
別の実施形態において、Ｒ５は、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＨ３、ＣＦ３及びシクロプロピルから選択される。
【０２８７】
別の実施形態において、Ｒ５は、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ及びＣＨ３から選択される。
【０２８８】
別の実施形態において、Ｒ６は、独立して、Ｈ及びＣ１〜Ｃ４アルキルから選択される。
【０２８９】
別の実施形態において、Ｒ６は、独立して、Ｈ及びＣＨ３から選択される。
【０２９０】
別の実施形態において、Ｙは、ＣＨである。
【０２９１】
別の実施形態において、Ｙは、Ｎである。
【０２９２】
別の実施形態において、本発明の化合物は、本明細書に開示されるＬＳＤ１  ＬＣ−ＭＳ及び／又はＬＳＤ１抗増殖アッセイを用いて、１μＭ以下のＩＣ５０値、好ましくは０．５μＭ以下のＩＣ５０値、更に好ましくは０．１μＭ以下のＩＣ５０値を有する。
【０２９３】
更なる例示的なＬＳＤ１阻害剤を以下の表３に提供する。
【０２９４】
【表６】
2019532953.tif 000024
【０２９５】
【表７】
2019532953.tif 000025
【０２９６】
本発明によって有用な小分子ＬＳＤ１阻害剤は、前述のもののいずれかのプロドラッグ、誘導体、薬学的に許容される塩又はその類似体も含む。
【０２９７】
小分子ＬＳＤ１阻害剤は、本明細書に記載の特定の用量に基づき、当技術分野で十分に確立された方法に基づいて送達用に製剤され得る。
【０２９８】
一実施形態において、ＬＳＤ１小分子阻害剤は、抗体又はその抗原結合フラグメントにコンジュゲートし得る。一実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｔ細胞の表面に発現される抗原に対し特異性を有する。
【０２９９】
タンパク質ＬＳＤ１阻害剤
実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、タンパク質ＬＳＤ１阻害剤であり得る。一実施形態において、タンパク質ＬＳＤ１阻害剤は、ＬＳＤ１のドミナントネガティブ結合パートナー（例えば、ＬＳＤ１又はＣｏ−ＲＥＳＴ若しくはＡＲ共アクティベータ複合体の他のメンバーと相互作用するヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ））又はＬＳＤ１の前記ドミナントネガティブ結合パートナーをコードする核酸である。一実施形態において、タンパク質ＬＳＤ１阻害剤は、ドミナントネガティブ（例えば、触媒として不活性）ＬＳＤ１又は前記分子をコードする核酸である。
【０３００】
ＬＳＤ１阻害剤を使用して免疫エフェクター細胞の集団を製造する方法
本発明は、例えば、本明細書に記載される、例えばＣＡＲ分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団の製造における、ＬＳＤ１阻害剤の使用を特徴とする。理論に拘束されないが、本発明は、部分的には、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞におけるＬＳＤ１の阻害が、より多数の及び／又はより比率の高いナイーブ免疫エフェクター細胞を伴い、且つ改善された治療特性を伴う免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の集団を生じるという驚くべき且つ予想外の発見に基づく。前記免疫エフェクター細胞におけるＬＳＤ１の阻害は、前記細胞を含む治療の前及び／又はそれと同時に起こり得る。従って、本発明のある態様は、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の製造におけるＬＳＤ１阻害剤のための組成物及びその使用に関する。
【０３０１】
ある態様において、本発明は、
ａ）免疫エフェクター細胞の集団をＬＳＤ１阻害剤と接触させ、それにより、任意選択によりＴ細胞の集団である免疫エフェクター細胞の集団を作製する工程
を含み、ＬＳＤ１阻害剤との接触は、任意選択により非接触の免疫エフェクター細胞の集団と比較して、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上を生じさせる、免疫エフェクター細胞の集団を作製する方法を提供する。
【０３０２】
実施形態において、方法は、ｂ）ＣＡＲをコードする核酸を免疫エフェクター細胞の集団の細胞に挿入する工程を更に含む。一実施形態において、工程ａ）の接触は、１）前記工程ｂ）の挿入前、２）前記工程ｂ）の挿入と同時、３）前記工程ｂ）の挿入後、又は４）前記工程ｂ）の挿入の前後の両方において起こる。一実施形態において、工程ａ）の接触及び任意選択により工程ｂ）の挿入は、エクスビボである。
【０３０３】
別の態様において、本発明は、任意選択によりＴ細胞の集団である免疫エフェクター細胞の集団を作製する方法であって、任意選択により列挙した順番で、
ａ）エクスビボで免疫エフェクター細胞の集団を提供する工程と、
ｂ）エクスビボで免疫エフェクター細胞の集団をＬＳＤ１阻害剤と接触させ、それにより、任意選択によりＴ細胞の集団である免疫エフェクター細胞の集団を作製する工程と
を含み、ＬＳＤ１阻害剤との接触は、任意選択により非接触の免疫エフェクター細胞の集団と比較して、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上を生じさせる、方法を提供する。
【０３０４】
実施形態において、方法は、ｃ）ＣＡＲをコードする核酸を免疫エフェクター細胞の集団の細胞に挿入する工程を更に含む。一実施形態において、工程ｂ）の接触は、１）前記工程ｃ）の挿入前、２）前記工程ｃ）の挿入と同時、３）前記工程ｃ）の挿入後、又は４）前記工程ｃ）の挿入の前後の両方において起こる。一実施形態において、工程ｂ）の接触及び任意選択により工程ｃ）の挿入は、エクスビボである。
【０３０５】
別の態様において、本発明は、任意選択によりＴ細胞の集団である免疫エフェクター細胞の集団を作製する方法であって、任意選択により列挙した順番で、
ａ）対象にＬＳＤ１阻害剤を投与する工程であって、ＬＳＤ１阻害剤の投与は、任意選択により非投与対象からの免疫エフェクター細胞の集団と比較して、前記対象において、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上を生じさせる、工程と、
ｂ）エクスビボで前記対象からの免疫エフェクター細胞の集団を提供し、それにより、任意選択によりＴ細胞の集団である免疫エフェクター細胞の集団を作製する工程と
を含む方法を提供する。
【０３０６】
実施形態において、方法は、ｃ）ＣＡＲをコードする核酸を免疫エフェクター細胞の集団の細胞に挿入する工程を更に含む。
【０３０７】
別の態様において、本発明は、任意選択によりＴ細胞の集団である免疫エフェクター細胞の集団を作製する方法であって、任意選択により列挙した順番で、
ａ）対象にＬＳＤ１阻害剤を投与する工程と、
ｂ）エクスビボで前記対象からの免疫エフェクター細胞の集団を提供する工程とと、
ｃ）エクスビボで免疫エフェクター細胞の集団をＬＳＤ１阻害剤と接触させ、それにより、任意選択によりＴ細胞の集団である免疫エフェクター細胞の集団を作製する工程と
を含み、任意選択により非接触及び非投与の免疫エフェクター細胞の集団と比較して、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ以上の組み合わせ
の１つ以上が起こる、方法を提供する。
【０３０８】
実施形態において、方法は、ｄ）ＣＡＲをコードする核酸を免疫エフェクター細胞の集団の細胞に挿入する工程を更に含む。一実施形態において、工程ｃ）の接触は、１）前記工程ｄ）の挿入前、２）前記工程ｄ）の挿入と同時、３）前記工程ｄ）の挿入後、又は４）前記工程ｄ）の挿入の前後の両方において起こる。
【０３０９】
態様において、対象から免疫エフェクター細胞の集団を採取する前の前記対象へのＬＳＤ１阻害剤の投与は、任意選択により免疫エフェクター細胞の非投与集団と比較して、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ以上の組み合わせ
の１つ以上が起こるのに十分な時間及び／又は十分な用量であり得る。本明細書に記載のアッセイは、適切な投与の用量及び／又は時間を決定するために利用され得る。実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、前記対象から免疫エフェクター細胞の集団を収集する前の少なくとも１日間の期間にわたって投与される。実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、前記対象から免疫エフェクター細胞の集団を収集する前の少なくとも２日間の期間にわたって投与される。実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、前記対象から免疫エフェクター細胞の集団を収集する前の少なくとも３日間の期間にわたって投与される。実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、前記対象から免疫エフェクター細胞の集団を収集する前の少なくとも４日間の期間にわたって投与される。実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、前記対象から免疫エフェクター細胞の集団を収集する前の少なくとも５日間の期間にわたって投与される。実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、前記対象から免疫エフェクター細胞の集団を収集する前の少なくとも６日間の期間にわたって投与される。実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、前記対象から免疫エフェクター細胞の集団を収集する前の少なくとも７日間の期間にわたって投与される。実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、前記対象から免疫エフェクター細胞の集団を収集する前の少なくとも１週間又は数週間の期間にわたって投与される。
【０３１０】
実施形態において、対象へのＬＳＤ１阻害剤の投与は、前記対象からの免疫エフェクター細胞の採取後に継続し、例えば免疫エフェクター細胞採取後１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間又はそれを超えた日数の期間継続し、例えば少なくとも免疫エフェクター細胞（エクスビボ修飾）が対象に戻し投与されるまで継続し、例えば免疫エフェクター細胞（エクスビボ修飾）が対象に戻し投与されるときを過ぎるまで継続する。
【０３１１】
ある態様において、免疫エフェクター細胞の集団へのＬＳＤ１阻害剤の接触（例えば、エクスビボ）は、任意選択により非接触の免疫エフェクター細胞の集団と比較して、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上が起こるのに十分な時間及び／又は十分な用量であり得る。本明細書に記載のアッセイは、適切な投与の用量及び／又は時間を決定するために利用され得る。実施形態において、免疫エフェクター細胞の集団は、少なくとも１日間の期間にわたってＬＳＤ１阻害剤と接触させる。実施形態において、免疫エフェクター細胞の集団は、少なくとも２日間の期間にわたってＬＳＤ１阻害剤と接触させる。実施形態において、免疫エフェクター細胞の集団は、少なくとも３日間の期間にわたってＬＳＤ１阻害剤と接触させる。実施形態において、免疫エフェクター細胞の集団は、少なくとも４日間の期間にわたってＬＳＤ１阻害剤と接触させる。実施形態において、免疫エフェクター細胞の集団は、少なくとも５日間の期間にわたってＬＳＤ１阻害剤と接触させる。実施形態において、免疫エフェクター細胞の集団は、少なくとも６日間の期間にわたってＬＳＤ１阻害剤と接触させる。実施形態において、免疫エフェクター細胞の集団は、少なくとも７日間の期間にわたってＬＳＤ１阻害剤と接触させる。実施形態において、免疫エフェクター細胞の集団は、少なくとも１週間又は数週間の期間にわたってＬＳＤ１阻害剤と接触させる。一実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤を含有する培地は、免疫エフェクター細胞がエクスビボである間、ＬＳＤ１阻害剤を含有する新鮮な培地と例えば１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回又は７回を超えて（例えば、毎日又は隔日で）交換される。ＬＳＤ１阻害剤の濃度は、所望の効果が生じるように調節することができ、例えば約０．００１ｎＭ〜約１０ｍＭ、例えば約０．０１ｎＭ〜約１ｍＭ、例えば約０．１ｎＭ〜約１００ｕＭ、例えば約１ｎＭ〜約１００ｕＭ、例えば約１０ｎＭ〜約１００ｕＭ、例えば約１００ｎＭ〜約１０ｕＭであり得る。実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤の濃度は、１００ｎＭである。実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤の濃度は、１００ｕＭである。実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤の濃度は、２００ｎＭである。実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤の濃度は、２００ｕＭである。
【０３１２】
別の態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤、例えば小分子ＬＳＤ１阻害剤を含む、免疫エフェクター細胞の集団のエクスビボでの製造に使用するための組成物を提供する。実施形態において、組成物は、約０．００１ｎＭ〜約１０ｍＭ、例えば約０．１ｕＭ〜約１０ｕＭの濃度で小分子ＬＳＤ１阻害剤を含む。
【０３１３】
ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞が関与する実施形態において、方法は、キメラ抗原受容体に関する節において以下に記載する態様、工程又は特徴のいずれも更に含み得ることが理解される。
【０３１４】
免疫エフェクター細胞及びＬＳＤ１阻害剤による処置方法
本発明は、患者における疾患、例えば癌の処置におけるＬＳＤ１阻害剤の使用を特徴とし、そのような処置は、免疫エフェクター細胞、例えばＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団の投与と組み合わせて行われる。理論に拘束されないが、本発明は、部分的には、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞におけるＬＳＤ１の阻害が、より多数の及び／又はより比率の高いナイーブ免疫エフェクター細胞を伴い、且つ改善された治療特性を伴う免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の集団を生じるという驚くべき且つ予想外の発見に基づく。従って、本発明のある態様は、例えば、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団及びＬＳＤ１阻害剤の組み合わせによる疾患、例えば癌の処置を提供する。
【０３１５】
ある態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤を対象に投与することを含む、対象の処置方法を特徴とし、前記対象は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団を受けたか、受けているか、又は受けることになる。一実施形態において、方法は、ＬＳＤ１阻害剤及び例えば本明細書に記載される、ＣＡＲ分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団を前記対象に投与することを含む。一実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団の前に投与され、前記ＬＳＤ１阻害剤の投与は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団の投与後、ある期間にわたって継続される。他の実施形態において、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団の投与後のＬＳＤ１阻害剤の投与は、前記ＬＳＤ１阻害剤の非存在下で投与されたＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の均等な集団と比較して、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団の抗腫瘍効果を増加させるのに十分な量におけるものである。
【０３１６】
別の態様において、本発明は、対象におけるＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のもの、例えばＣＡＲ１９を発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団（例えば、ＣＴＬ０１９）の治療有効性を増加させる方法であって、前記細胞におけるＬＳＤ１の活性又は発現を少なくとも一過性に減少させる工程を含む方法を特徴とする。一実施形態において、前記細胞におけるＬＳＤ１の活性又は発現を減少させる工程は、前記細胞をＬＳＤ１阻害剤と接触させることを含む。実施形態において、接触は、エクスビボで行われる。一実施形態において、接触は、インビボで行われる（例えば、免疫エフェクター細胞の集団及びＬＳＤ１阻害剤を対象に共投与する）。
【０３１７】
前述の態様のいずれかの実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤の投与又は接触は、
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
をもたらす。
【０３１８】
実施形態において、効果は、ＬＳＤ１阻害剤と接触されていない細胞と比較したものである。実施形態において、効果は、ＬＳＤ１阻害剤と接触されていない同じ対象の細胞と比較したものである。
【０３１９】
別の態様において、本発明は、対象を処置する方法であって、
ａ）前記対象にＬＳＤ１阻害剤を投与することと、
ｂ）ＬＳＤ１阻害剤の前記投与後、前記対象から免疫エフェクター細胞の集団を採取することと、
ｃ）前記免疫エフェクター細胞の集団をエクスビボで提供することと、
ｄ）前記エクスビボでの免疫エフェクター細胞の集団をＬＳＤ１阻害剤と接触させることであって、ＬＳＤ１阻害剤との接触は、任意選択により非接触のエクスビボでの免疫エフェクター細胞の集団と比較して、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上を生じさせる、接触させることと、
ｅ）免疫エフェクター細胞の集団を対象に投与することと
を含む方法を提供する。
【０３２０】
実施形態において、ｅ）の工程は、ＬＳＤ１阻害剤を対象に投与することを更に含む。実施形態において、方法は、ＣＡＲをコードする核酸をエクスビボでの免疫エフェクター細胞の集団の細胞に挿入する工程を更に含む。
【０３２１】
別の態様において、本発明は、処置を、それを必要とする対象において行う方法であって、先の態様及び実施形態のいずれかの免疫エフェクター細胞の集団の有効量を前記対象に投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、方法は、前記対象にＬＳＤ１阻害剤を投与することを更に含む。実施形態において、対象は、免疫エフェクター細胞の集団の投与前にＬＳＤ１阻害剤の前処置を受け、一実施形態において、対象は、ＬＳＤ１阻害剤及び免疫エフェクター細胞の集団による同時処置を受け、一実施形態において、対象は、免疫エフェクター細胞の集団の投与後にＬＳＤ１阻害剤による処置を受け、一実施形態において、対象は、前述のもののいずれかの組み合わせを受ける。
【０３２２】
処置方法に関連する先の態様を含む一態様において、本発明は、対象を処置する方法に関し、対象は、腫瘍抗原の発現と関連する疾患、例えば増殖性疾患、前癌状態、癌及び腫瘍抗原の発現と関連する非癌関連の適応症を有する。実施形態において、癌は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性白血病、急性リンパ系白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ系白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ系白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリーセル白血病、小細胞型若しくは大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性のリンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症又は前白血病の１つ以上から選択される血液癌である。実施形態では、癌は、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺の非小細胞癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚又は眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣の癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、膀胱癌、腎臓癌又は尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境的に誘発された癌、前記癌の組み合わせ及び前記癌の転移性病変からなる群から選択される。
【０３２３】
ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞が関与する実施形態において、処置方法は、キメラ抗原受容体に関する節において以下に記載する工程、態様又は特徴のいずれも更に含み得ることが理解される。
【０３２４】
細胞
本開示から当業者に容易に明らかとなるように、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤を含む細胞に関する。本発明は、例えば、任意選択により非接触細胞と比較して、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上が起こるのに十分な期間及び／又は用量でＬＳＤ１阻害剤と接触させた細胞を更に含む。
【０３２５】
本発明は、本明細書に記載の方法のいずれかにより作製される細胞に更に関する。
【０３２６】
細胞は、好ましくは、免疫エフェクター細胞である。一実施形態において、細胞は、Ｔ細胞である。一実施形態において、細胞は、ＮＫ細胞である。実施形態において、本発明は、本発明の細胞の集団、例えば本発明の免疫エフェクター細胞の集団に関する。一実施形態において、本発明の細胞の集団は、示される型の細胞を含み、他の型を含み得る（例えば、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の集団は、ＣＡＲ分子を発現するように操作されたＴ細胞及びＣＡＲ分子を発現するように操作されていないＴ細胞（又は他の細胞型）を含み得る）。実施形態において、本発明の細胞の集団は、示された型の細胞から本質的になる。一実施形態において、本発明の細胞の集団は、他の細胞型を実質的に含まない。実施形態において、本発明の細胞の集団は、示された細胞型からなる。
【０３２７】
前述の態様及び実施形態のいずれかにおいて、細胞及び／又は細胞の集団は、免疫エフェクター細胞であるか又はそれを含み、例えば、免疫エフェクター細胞の集団は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞を含む、例えばそれからなる。実施形態において、細胞は、Ｔ細胞、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞又はこれらの組み合わせである。ある実施形態において、細胞は、ＮＫ細胞である。
【０３２８】
一実施形態において、細胞は、ヒト細胞である。実施形態において、細胞は、例えば、細胞を投与する対象に対して自己由来である。実施形態において、細胞は、例えば、細胞を投与する対象に対して同種異系である。
【０３２９】
実施形態において、細胞は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された細胞であるか又はそれを含む。本発明において有用な細胞の更なる特徴及び／又は態様は、下にキメラ抗原受容体と題された節において記載する。
【０３３０】
一実施形態において、免疫エフェクターＣＡＲ分子を発現する細胞、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子は、ＬＳＤ１阻害剤を受けた対象から得られる。一実施形態において、ＣＡＲ分子を発現するように操作される免疫エフェクター細胞集団、例えばＴ細胞を、対象又は対象から採取したＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞のレベル又はＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の比が少なくとも一過性に増加するように、ＬＳＤ１阻害剤の投薬から十分な時間後又は十分な用量の後に採取する。
【０３３１】
他の実施形態において、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作されているか又は操作される免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞集団を、ＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の数を増やすか又はＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の比を増やす量のＬＳＤ１阻害剤と接触させることにより、エクスビボで処置できる。
【０３３２】
一実施形態において、ＮＫ細胞は、対象から得られる。別の実施形態において、ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞株、例えばＮＫ−９２細胞株（Ｃｏｎｋｗｅｓｔ）である。
【０３３３】
一実施形態において、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、対象へのＬＳＤ１阻害剤の投与後に対象から得られるか又は採取される。
【０３３４】
一実施形態において、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、ＰＤ１陰性免疫エフェクター、例えばＴ細胞の数の増加後又はＰＤ１陰性免疫エフェクター、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター、例えばＴ細胞の比率の増加後に採取する。
【０３３５】
一実施形態において、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、ナイーブＴ細胞数の増加が起こった後に採取する。
【０３３６】
一実施形態において、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上の後に採取され、増加又は減少は、一過性であり得る。増加又は減少は、永続的であり得る。増加又は減少は、標準、例えば未処置対象からの細胞と比較され得る。
【０３３７】
一実施形態において、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、エクスビボ（対象又はドナーからの除去後及び対象への導入前）でＬＳＤ１阻害剤と接触させる。
【０３３８】
一実施形態において、接触は、ＰＤ１陰性免疫エフェクター、例えばＴ細胞の数の増加又はＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター、例えばＴ細胞の比率の増加をもたらすレベルである。
【０３３９】
一実施形態において、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、エクスビボ（対象又はドナーからの除去後及び対象への導入前）でナイーブＴ細胞の数の増加をもたらすレベルにおいてＬＳＤ１阻害剤と接触させる。
【０３４０】
一実施形態において、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、エクスビボ（対象又はドナーからの除去後及び対象への導入前）で、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上をもたらすレベルにおいてＬＳＤ１阻害剤と接触させ、増加又は減少は、一過性であり得る。増加又は減少は、永続的であり得る。増加又は減少は、標準、例えば未処置対象からの細胞と比較し得る。
【０３４１】
一実施形態において、Ｔ細胞の調製は、ＰＤ１陰性免疫エフェクター、例えばＴ細胞の数の増加又はＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター、例えばＴ細胞の比率の増加のレベルについて評価される。
【０３４２】
一実施形態において、Ｔ細胞の調製は、ナイーブＴ細胞数増加のレベルについて評価される。一実施形態において、Ｔ細胞の調製は、以下：
１）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の比率の増加、
２）ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞の数の増加、
３）ＴＥＭ細胞の数の減少、
４）ＴＥＭ細胞の比率の減少、
５）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の比率の増加、
６）ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞の数の増加、
７）ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比率の減少、
８）ＰＤ−１陰性免疫エフェクター細胞／ＰＤ−１陽性免疫エフェクター細胞の比の増加、
９）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞の比率の減少、
１０）ＰＤ−１＋／Ｌａｇ３＋／Ｔｉｍ３＋免疫エフェクター細胞に対するＰＤ−１−／Ｌａｇ３−／Ｔｉｍ３−免疫エフェクター細胞の比の増加、
１１）免疫エフェクター細胞の増殖の増加、
１２）前記免疫エフェクター細胞の集団からのサイトカイン（例えば、ＩＦＮｇ及び／又はＩＬ−２）の産生の増加、又は
１３）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２又はそれを超える（例えば、全ての）ものの組み合わせ
の１つ以上について評価され、増加又は減少は、一過性であり得る。増加又は減少は、永続的であり得る。増加又は減少は、標準、例えば未処置の対象の細胞と比較され得る。
【０３４３】
医薬組成物：ＬＳＤ１阻害剤
ある態様において、本発明は、医薬としての使用のために製剤化された、ＬＳＤ１阻害剤、例えば本明細書に記載のＬＳＤ１阻害剤を含む医薬組成物に関する。
【０３４４】
ある態様において、本発明は、免疫エフェクター細胞の集団の製造における使用のために製剤された、ＬＳＤ１阻害剤、例えば本明細書に記載のＬＳＤ１阻害剤を含む医薬組成物に関する。
【０３４５】
ある態様において、本発明は、本明細書に記載のＣＡＲ細胞と組み合わせた使用のために製剤化された、ＬＳＤ１阻害剤、例えば本明細書に記載のＬＳＤ１阻害剤を含む医薬組成物に関する。
【０３４６】
一部の実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤は、例えば、本明細書に記載のＣＡＲ細胞に加えて、別の薬剤と組み合わせて投与するために製剤化される。
【０３４７】
一般に、本発明の化合物は、当技術分野において公知の通常の及び許容される方式のいずれかにより、単独で又は１つ以上の治療剤と組み合わせて上記の治療有効量で投与される。
【０３４８】
医薬製剤は、慣用の溶解及び混合方法を使用して製造し得る。例えば、原薬物質（例えば、ＬＳＤ１阻害剤又は安定化形態の化合物（例えば、シクロデキストリン誘導体又は他の公知の複合体化剤との複合体）を、本明細書に記載の賦形剤の１つ以上の存在下、適当な溶媒に溶解する。ＬＳＤ１阻害剤は、典型的には、薬物の容易に制御可能な投与量を提供し、患者に洗練された容易に取り扱い可能な製品を提供するように医薬投与形態に製剤される。
【０３４９】
本発明の化合物は、任意の慣用の経路、特に経腸的に、例えば経口的に、例えば錠剤又はカプセルの形態で、又は非経口的に、例えば注射可能な溶液又は懸濁液の形態で、局所的に、例えばローション、ゲル、軟膏又はクリームの形態又は経鼻又は坐剤の形態で医薬組成物として投与され得る。ＬＳＤ１阻害剤が本明細書に記載の別の薬剤と組み合わせて（同時に又は別々に）投与される場合、一態様において、両方の成分を同じ経路で（例えば、非経口的に）投与し得る。或いは、別の薬剤をＬＳＤ１阻害剤と異なる経路で投与し得る。例えば、ＬＳＤ１阻害剤は、経口的に投与することができ、他の薬剤は、非経口的に投与することができる。遊離形態又は薬学的に許容される塩形態のＬＳＤ１阻害剤を、少なくとも１つの薬学的に許容される担体又は希釈剤と共に含む医薬組成物は、混合、造粒又はコーティング法により従来の方法で製造することができる。例えば、経口組成物は、活性成分をａ）希釈剤、例えばラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース及び／又はグリシン；ｂ）滑沢剤、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウム又はカルシウム塩及び／又はポリエチレングリコール；錠剤についてはまた、ｃ）結合剤、例えばケイ酸アルミニウム・マグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び又はポリビニルピロリドン；所望の場合、ｄ）崩壊剤、例えばデンプン、寒天、アルギン酸若しくはそのナトリウム塩又は発泡性混合物；及び／又はｅ）吸収剤、着色剤、香味剤及び甘味剤と共に含む錠剤又はゼラチンカプセルであり得る。経口製剤は、２０〜６０％Ｅｕｄｒａｇｉｔ  ＥＰＯ、ヒドロキシプロピルセルロースＥＦ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース又はＫｏｌｌｉｄｏｎ  ＶＡ６４及び５％までのｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ又はＧｅｌｕｃｉｒｅ  ４４／１４と共に活性成分も含み得る。注射用組成物は、水性等張溶液又は懸濁液であり得、坐剤は、脂肪エマルジョン又は懸濁液から調整され得る。組成物は、滅菌され、及び／又は保存剤、安定化剤、湿潤剤又は乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調整するための塩及び／又は緩衝剤などのアジュバントを含み得る。更に、それらは、他の治療的に価値のある物質も含み得る。経皮適用に適した製剤は、有効量の本発明の化合物を担体と共に含む。担体は、宿主の皮膚を通過することを補助するための吸収性の薬理学的に許容される溶媒を含み得る。例えば、経皮装置は、背部材、化合物を任意選択により担体と共に含有する貯留部、任意選択により、制御され予め決められた速度で長期間にわたって宿主の皮膚に化合物を送達するための速度制御バリア及び装置を皮膚に固定するための手段を含む包帯の形態である。マトリックス経皮製剤も使用され得る。更なる態様において、本明細書に記載のＬＳＤ１阻害剤は、マイクロニードルパッチにより投与され得る。マイクロニードルベースの薬物送達は、当技術分野で周知であり（例えば、米国特許第８，１６２，９０１号明細書を参照されたい）、これらの技術及び方法は、当業者により、本明細書に記載のＬＳＤ１阻害剤の投与に適合��れ得る。例えば皮膚及び眼への局所適用に適当な製剤は、好ましくは、当技術分野において周知の水溶液、軟膏、クリーム又はゲルである。このような製剤は、可溶化剤、安定化剤、張性増加剤、緩衝剤及び防腐剤を含み得る。
【０３５０】
投与のための医薬組成物（又は製剤）は、薬物の投与に使用する方法に応じて様々な方法で投与され得る。一般的に、流通用物品は、適切な形態で医薬製剤を中に入れた容器を含む。適当な容器は当、業者に周知であり、ボトル（プラスチック及びガラス）、小袋、アンプル、ビニール袋、金属シリンダーなどの材料を含む。容器は、包装の内容物への不注意なアクセスを防止するための不正開封防止集合体も含む。更に、容器は、容器の内容物を記載するラベルが貼られている。ラベルは、適切な警告も含み得る。本発明は、ａ）遊離形態又は薬学的に許容される塩形態の、本明細書に開示されるＬＳＤ１阻害剤である第１の薬剤、及びｂ）少なくとも１つの更なる薬剤を含む医薬組み合わせ、例えばキットも提供する。キットは、その投与のための指示を含み得る。
【０３５１】
用語「医薬併用」は、本明細書で使用されるとき、２つ以上の活性成分を混合し又は組み合わせることにより得られる産物を意味し、活性成分の固定的組み合わせ及び非固定的組み合わせの両方を含む。用語「固定的組み合わせ」は、活性成分、例えばＬＳＤ１阻害剤と他の薬剤とが両方とも単一の実体又は投薬量の形態で同時に患者に投与されることを意味する。用語「非固定的組み合わせ」は、活性成分、例えばＬＳＤ１阻害剤と他の薬剤とが両方とも別個の実体として特定の時間制限なしに同時に、並行して、又は代わりに逐次的に患者に投与されることを意味し、かかる投与は、患者の体内において２つの化合物の治療上有効なレベルを提供する。後者は、カクテル療法、例えば３つ以上の活性成分の投与にも適用される。
【０３５２】
キメラ抗原受容体
本発明に関連するキメラ抗原受容体技術の一般的な説明
ＬＳＤ１阻害剤の投与を、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の集団の投与と組み合わせる方法が本明細書に記載される（細胞は、ＣＡＲを発現するように操作され、実施形態において、対象に投与されるときまでにＣＡＲを発現する。他の実施形態において、発現は、投与後開始される）。一部の実施形態において、細胞は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作されたＴ細胞であり、ＣＡＲ  Ｔ細胞（「ＣＡＲＴ」）は、抗癌特性を示す。ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の集団を、製造、例えば活性化及び／又は増殖するためにＬＳＤ１阻害剤を使用するための方法も本明細書に記載され、細胞は、ＬＳＤ１阻害剤を使用せずに製造した細胞と比較して増強した活性（例えば、増殖、サイトカイン放出及び／又は腫瘍標的有効性）及び／又はよりナイーブな表現型を有する。一般的に、この節で論じられる分子、細胞、方法又は他の態様は、本発明の方法、組成物、細胞及び他の態様において、例えばＬＳＤ１阻害剤と組み合わせて有用であり得る。
【０３５３】
一般に、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離核酸分子に関し、ＣＡＲは、本明細書に記載の腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメイン（例えば、抗体又は抗体フラグメント、ＴＣＲ又はＴＣＲフラグメント）、膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載の膜貫通ドメイン）及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン）（例えば、共刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載の共刺激ドメイン）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載の一次シグナル伝達ドメイン）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。他の態様において、本発明は、上記の核酸及びそのような核酸分子によりコードされる単離タンパク質を含む宿主細胞を含む。本発明に関連するＣＡＲ核酸構築物、コード化タンパク質、含有ベクター、宿主細胞、医薬組成物並びに投与及び処置の方法は、国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットに詳細に開示され、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３５４】
一態様において、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離核酸分子に関し、ＣＡＲは、腫瘍支持抗原（例えば、本明細書に記載の腫瘍支持抗原）に結合する抗原結合ドメイン（例えば、抗体又は抗体フラグメント、ＴＣＲ又はＴＣＲフラグメント）、膜貫通ドメイン（例えば、本明細書に記載の膜貫通ドメイン）及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメイン）（例えば、共刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載の共刺激ドメイン）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載の一次シグナル伝達ドメイン）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。一部の実施形態において、腫瘍支持抗原は、間質細胞又は骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）上に存在する抗原である。他の態様において、本発明は、このような核酸によりコードされるポリペプチド及びこのような核酸及び／又はポリペプチドを含む宿主細胞を特徴とする。他の態様において、本発明は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された細胞（例えば、細胞の集団）、例えば免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞を特徴とする。
【０３５５】
標的
本発明は、免疫エフェクター細胞を望ましくない細胞（例えば、癌細胞）に指向させる、１つ以上のＣＡＲを含有するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を提供する。これは、癌関連抗原に対して特異的であるＣＡＲ上の抗原結合ドメインを通して達成される。本発明のＣＡＲにより標的化され得る２つのクラスの癌関連抗原（腫瘍抗原）が存在する：（１）癌細胞の表面に発現される癌関連抗原；及び（２）それ自体は細胞内であるが、そのような抗原（ペプチド）のフラグメントがＭＨＣ（主要組織適合複合体）により癌細胞の表面に提示される癌関連抗原。
【０３５６】
一部の実施形態において、腫瘍抗原は、ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ−１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９及び１９Ａ２４とも称される）；Ｃ型レクチン様分子−１（ＣＬＬ−１又はＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮成長因子受容体変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（１−４）ｂＤＧｌｃｐ（１−１）Ｃｅｒ）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；Ｔｎ抗原（（ＴｎＡｇ）又は（ＧａｌＮＡｃα−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン−１３受容体サブユニットα−２（ＩＬ−１３Ｒａ２又はＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体α（ＩＬ−１１Ｒａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（テスチシン又はＰＲＳＳ２１）；血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来成長因子受容体β（ＰＤＧＦＲ−β）；ステージ特異的胎児抗原−４（ＳＳＥＡ−４）；ＣＤ２０；葉酸受容体α；受容体チロシン−プロテインキナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１、細胞表面関連（ＭＵＣ１）；上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２突然変異型（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質α（ＦＡＰ）；インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニット、β型、９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐ１００）；切断点クラスター領域（ＢＣＲ）及びエーベルソンマウス白血病ウイルス性癌遺伝子ホモログ１（Ａｂｌ）からなる癌遺伝子融合タンパク質（ｂｃｒ−ａｂｌ）；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；フコシルＧＭ１；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２−３）ｂＤＧａｌｐ（１−４）ｂＤＧｌｃｐ（１−１）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ−アセチル−ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；葉酸受容体β；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クローディン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣグループ５、メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；グロボＨグリコセラミドの六糖部分（ＧｌｏｂｏＨ）；乳腺分化抗原（ＮＹ−ＢＲ−１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレノセプターβ３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲγ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；癌／精巣抗原１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）；癌／精巣抗原２（ＬＡＧＥ−１ａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ−Ａ１）；ＥＴＳ転座変異体遺伝子６、染色体１２ｐに位置する（ＥＴＶ６−ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリー、メンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンギオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ  ２）；黒色腫癌精巣抗原−１（ＭＡＤ−ＣＴ−１）；黒色腫癌精巣抗原−２（ＭＡＤ−ＣＴ−２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３突然変異体；プロステイン；サバイビン；テロメラーゼ；前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴＡ−１又はガレクチン８）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原１（メランＡ又はＭＡＲＴ１）；ラット肉腫（Ｒａｓ）突然変異体；ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；サルコーマ転座切断点；黒色腫アポトーシス阻害因子（ＭＬ−ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通型プロテアーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢ１；ｖ−ｍｙｃトリ骨髄球腫症ウイルス性癌遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）；ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ−２）；シトクロムＰ４５０  １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ又は刷り込み部位の調節因子のブラザー）、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ−５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ−ＴＥＳ１）；リンパ球特異的プロテインチロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）；滑膜肉腫、Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）；後期糖化最終産物受容体（ＲＡＧＥ−１）；腎臓遍在性１（ＲＵ１）；腎臓遍在性２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒトパピローマウイルスＥ６（ＨＰＶ  Ｅ６）；ヒトパピローマウイルスＥ７（ＨＰＶ  Ｅ７）；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０−２突然変異型（ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ又はＣＤ８９）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５���；又は免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）の１つ以上から選択される。
【０３５７】
本明細書に記載のＣＡＲは、腫瘍支持抗原（例えば、本明細書に記載の腫瘍支持抗原）に結合する抗原結合ドメイン（例えば、抗体又は抗体フラグメント、ＴＣＲ又はＴＣＲフラグメント）を含み得る。一部の実施形態において、腫瘍支持抗原は、間質細胞又は骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）上に存在する抗原である。間質細胞は、微小環境における細胞分裂を促進するために成長因子を分泌し得る。ＭＤＳＣ細胞は、Ｔ細胞の増殖及び活性化を阻害することができる。理論に拘束されることを望まないが、一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、腫瘍支持細胞を破壊し、それにより腫瘍増殖又は生存を間接的に阻害する。
【０３５８】
一実施形態において、間質細胞抗原は、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）及びテネイシンの１つ以上から選択される。一実施形態において、ＦＡＰ特異的抗体は、シブロツズマブとの結合について競合するか、又はそれと同じＣＤＲを有する。実施形態において、ＭＤＳＣ抗原は、ＣＤ３３、ＣＤ１１ｂ、Ｃ１４、ＣＤ１５及びＣＤ６６ｂの１つ以上から選択される。従って、一部の実施形態において、腫瘍支持抗原は、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）又はテネイシン、ＣＤ３３、ＣＤ１１ｂ、Ｃ１４、ＣＤ１５及びＣＤ６６ｂの１つ以上から選択される。
【０３５９】
抗原結合ドメイン構造
一部の実施形態において、コード化ＣＡＲ分子の抗原結合ドメインは、抗体、抗体フラグメント、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、ＶＨ又はＶＬドメイン、ラクダ科動物のＶＨＨドメイン又は二機能的（例えば、二特異性）ハイブリッド抗体（例えば、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７，１０５（１９８７））を含む。
【０３６０】
ある例において、ｓｃＦｖは、当技術分野において公知の方法により製造できる（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照されたい）。ＳｃＦｖ分子は、可動性ポリペプチドリンカーを使用して、ＶＨ領域とＶＬ領域とを一緒に連結することにより産生できる。ｓｃＦｖ分子は、最適長及び／又はアミノ酸組成を有するリンカー（例えば、Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカー）を含む。リンカー長は、ｓｃＦｖの可変領域がどのように折りたたまれ、相互作用するかに大きく影響し得る。実際、短ポリペプチドリンカーを用いる場合、（例えば、５〜１０のアミノ酸）、鎖内折りたたみが阻止される。鎖内折りたたみは、２つの可変領域が一体となって機能的エピトープ結合部位を形成させるためにも必要である。リンカー方向及びサイズの例については、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９３  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４−６４４８、米国特許出願公開第２００５／０１００５４３号明細書、同第２００５／０１７５６０６号明細書、同第２００７／００１４７９４号明細書及び国際公開第２００６／０２０２５８号パンフレット及び国際公開第２００７／０２４７１５号パンフレットを参照されたい。
【０３６１】
ｓｃＦｖは、そのＶＬ領域とＶＨ領域との間に少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０又はそれを超えるアミノ酸残基のリンカーを含み得る。リンカー配列は、あらゆる天然に存在するアミノ酸を含み得る。一部の実施形態において、リンカー配列は、アミノ酸グリシン及びセリンを含む。別の実施形態において、リンカー配列は、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎは、１以上の正の整数である）などの一連のグリシン及びセリン反復を含む（配列番号２２）。一実施形態において、リンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４（配列番号２９）又は（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号３０）であり得る。リンカー長の変動は、活性を維持又は増強し、活性試験において優れた有効性を生じ得る。
【０３６２】
別の態様において、抗原結合ドメインは、Ｔ細胞受容体（「ＴＣＲ」）又はそのフラグメント、例えば単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）である。そのようなＴＣＲを作製する方法は、当技術分野において公知である。例えば、ｉｌｌｅｍｓｅｎ  ＲＡ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ７：１３６９−１３７７（２０００）；Ｚｈａｎｇ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １１：４８７−４９６（２００４）；Ａｇｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１９（４）：３６５−７４（２０１２）（参考文献は、その全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。例えば、リンカー（例えば、柔軟なペプチド）によって連結されたＴ細胞クローン由来のＶα及びＶβ遺伝子を含むｓｃＴＣＲを操作することができる。このアプローチは、それ自体が細胞内にある癌関連標的にとって非常に有用であるが、そのような抗原（ペプチド）のフラグメントは、ＭＨＣによって癌細胞の表面に提示される。
【０３６３】
実施形態において、コード化抗原結合ドメインは、１０−４Ｍ〜１０−８Ｍの結合親和性ＫＤを有する。
【０３６４】
一実施形態において、コード化ＣＡＲ分子は、標的抗原について、１０−４Ｍ〜１０−８Ｍ、例えば１０−５Ｍ〜１０−７Ｍ、例えば１０−６Ｍ又は１０−７Ｍの結合親和性ＫＤを有する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、抗原結合ドメインは、参照抗体、例えば本明細書に記載の抗体より少なくとも５倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍又は１０００倍小さい結合親和性を有する。一実施形態において、コード化抗原結合ドメインは、参照抗体（例えば、抗原結合ドメインが由来する抗体）より少なくとも５倍小さい結合親和性を有する。一態様において、かかる抗体断片は、それが、当業者によって理解されるであろうとおり、限定されないが、免疫応答の活性化、その標的抗原から生じるシグナル伝達の阻害、キナーゼ活性の阻害などを含み得る生物学的反応をもたらす点で機能性である。
【０３６５】
一態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、それが由来するｓｃＦｖのマウス配列と比較してヒト化されたｓｃＦｖ抗体フラグメントである。
【０３６６】
一態様において、本発明のＣＡＲの抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列が哺乳類細胞での発現にコドン最適化されている核酸分子によってコードされる。一態様において、本発明のＣＡＲコンストラクト全体は、配列全体が哺乳類細胞での発現にコドン最適化されている核酸分子によってコードされる。コドン最適化とは、コードＤＮＡにおける同義コドン（即ち同じアミノ酸をコードするコドン）の出現頻度が異なる種で偏っているという発見を指す。かかるコドン縮重により、同一のポリペプチドが種々のヌクレオチド配列によってコードされることが可能になる。種々のコドン最適化方法が当技術分野において公知であり、例えば少なくとも米国特許第５，７８６，４６４号明細書及び同第６，１１４，１４８号明細書に開示される方法が挙げられる。
【０３６７】
特異的抗原結合ドメイン
一部の実施形態において、抗原結合ドメインを含むＣＡＲの一部分は、腫瘍抗原、例えば本明細書（例えば、「標的」と題された節）に記載の腫瘍抗原を標的とする抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態において、腫瘍抗原は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１５年３月１３日に出願された国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレットに記載の腫瘍抗原である。ＣＡＲ発現細胞を使用して標的化することのできる例示的な標的抗原は、例えば、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット、国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレット、国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレット、国際公開第２０１４／１３０６５７号パンフレット、国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレット、国際公開第２０１６／０１４５７６号パンフレット、国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット、国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレット、国際公開第２０１６／１６４７３１号パンフレット、国際公開第２０１６／０１４５３５号パンフレット及び国際公開第２０１６／０２５８８０号パンフレット（これらの各々は、全体として参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるとおり、限定されないが、特にＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ３３、メソテリン、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ−１、ＣＤ２０、ＣＤ２２及びＧＦＲ  ＡＬＰＨＡ−４を含む。
【０３６８】
実施形態において、抗原結合ドメインは、本明細書若しくは参照により本明細書に組み込まれた刊行物のいずれかに記載の抗体からの１つ、２つ又は３つの（例えば、全ての）重鎖ＣＤＲ、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３及び／又は本明細書若しくは参照により本明細書に組み込まれた刊行物のいずれかに記載の抗体からの１つ、２つ又は３つの（例えば、全ての）軽鎖ＣＤＲ、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０３６９】
一実施形態において、抗原結合ドメインは、本明細書又は参照により本明細書に組み込まれる刊行物のいずれかに記載の抗体の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子のいずれか（例えば、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ３３、メソテリン、ＣＬＬ−１、ＣＤ２０、ＣＤ２２及びＧＦＲ  ＡＬＰＨＡ−４のいずれか）の抗原結合ドメインは、本明細書若しくは参照により本明細書に組み込まれた刊行物のいずれかに記載の抗体からの１つ、２つ又は３つの（例えば、全ての）重鎖ＣＤＲ、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３及び／又は本明細書若しくは参照により本明細書に組み込まれた刊行物のいずれかに記載の抗原結合ドメインからの１つ、２つ又は３つの（例えば、全ての）軽鎖ＣＤＲ、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、抗原結合ドメインは、本明細書又は参照により本明細書に組み込まれる刊行物のいずれかに記載の抗体の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含む。
【０３７０】
一実施形態において、抗原結合ドメインは、本明細書に記載の抗体（例えば、国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレット、米国特許出願公開第２０１５−０２８３１７８−Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６−００４６７２４−Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書又は国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に組み込まれる）に記載の抗体）からの１つ、２つ又は３つの（例えば、全ての）重鎖ＣＤＲ、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３及び／又は本明細書に記載の抗体（例えば、国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレット、米国特許出願公開第２０１５−０２８３１７８−Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６−００４６７２４−Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書又は国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に組み込まれる）に記載の抗体）からの１つ、２つ又は３つの（例えば、３つ全ての）軽鎖ＣＤＲ、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３を含む。
【０３７１】
一実施形態において、抗原結合ドメインは、本明細書に記載した抗体の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含む。実施形態において、抗原結合ドメインは、国際公開第２０１５／１４２６７５号パンフレット、米国特許出願公開第２０１５−０２８３１７８−Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６−００４６７２４−Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書又は国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載の抗原結合ドメインである。
【０３７２】
一実施形態において、ＣＤ１９に対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレット；国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ，Ｊ．Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３２（７），６８９−７０２（２００９）；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ，Ｊ．Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１１６（２０），４０９９−４１０２（２０１０）；国際公開第２０１４／０３１６８７号パンフレット；Ｂｅｊｃｅｋ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５５，２３４６−２３５１，１９９５；又は米国特許第７，４４６，１９０号明細書（それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載のＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ）、抗体又はその抗原結合フラグメントの抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０３７３】
一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、ＣＡＲ分子又は参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットの表３に記載の抗原結合ドメイン（例えば、ヒト化抗原結合ドメイン）を含む。ＣＤ１９  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ又は３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ又は３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットに指定される。実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ又は抗原結合ドメインは、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットに示されるアミノ酸を含むか、又はヌクレオチド配列若しくは前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、前記配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を有する。
【０３７４】
別の実施形態において、抗原結合ドメインは、抗ＣＤ１９抗体又はそのフラグメント、例えばｓｃＦｖを含む。例えば、抗原結合ドメインは、表６〜９に列挙される可変重鎖及び可変軽鎖又は前記配列のいずれかと実質的に同一の配列（例えば、前記配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）を含む。可変重鎖及び可変軽鎖を連結するリンカー配列は、例えば、本明細書に記載の任意のリンカー配列であり得るか、又はＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号８７１）であり得る。
【０３７５】
【表８】
2019532953.tif 000026
【０３７６】
【表９】
2019532953.tif 000027
【０３７７】
【表１０】
2019532953.tif 000028
【０３７８】
【表１１】
2019532953.tif 000029
【０３７９】
任意のＣＤ１９  ＣＡＲ、例えば任意の公知のＣＤ１９  ＣＡＲのＣＤ１９抗原結合ドメインは、本開示に従って使用され得る。例えば、ＬＧ−７４０；ＣＤ１９  ＣＡＲは、米国特許第８，３９９，６４５号明細書；米国特許第７，４４６，１９０号明細書；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ．２０１３  ５４（２）：２５５−２６０（２０１２）；Ｃｒｕｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２２（１７）：２９６５−２９７３（２０１３）；Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１１８（１８）：４８１７−４８２８（２０１１）；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１６（２０）：４０９９−１０２（２０１０）；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２２（２５）：４１２９−３９（２０１３）；及び１６ｔｈ  Ａｎｎｕ  Ｍｅｅｔ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｇｅｎ  Ｃｅｌｌ  Ｔｈｅｒ（ＡＳＧＣＴ）（Ｍａｙ  １５−１８，Ｓａｌｔ  Ｌａｋｅ  Ｃｉｔｙ）２０１３，Ａｂｓｔ  １０に記載され、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３８０】
一実施形態において、ＥＧＦＲｖＩＩＩに対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２０１４／１３０６５７号パンフレット又は米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書に記載のＣＡＲ、抗体又はその抗原結合フラグメントの抗原結合部分、例えばＣＤＲである。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ又は参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／１３０６５７号パンフレットの表２若しくは配列番号１１による抗原結合ドメイン又はそれと実質的に同一（例えば、それと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を含む。ＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１４／１３０６５７号パンフレットに指定される。一実施形態において、メソテリンに対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレットに記載の抗体、抗原結合フラグメント又はＣＡＲの抗原結合部分、例えばＣＤＲである。一実施形態において、メソテリンに対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第１９９７／０２５０６８号パンフレット、国際公開第１９９９／０２８４７１号パンフレット、国際公開第２００５／０１４６５２号パンフレット、国際公開第２００６／０９９１４１号パンフレット、国際公開第２００９／０４５９５７号パンフレット、国際公開第２００９／０６８２０４号パンフレット、国際公開第２０１３／１４２０３４号パンフレット、国際公開第２０１３／０４０５５７号パンフレット又は国際公開第２０１３／０６３４１９号パンフレットに記載の抗体、抗原結合フラグメント又はＣＡＲの抗原結合部分、例えばＣＤＲである。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のメソテリンＣＡＲ、例えば国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に組み込まれる）に記載のメソテリンＣＡＲを含む。実施形態において、メソテリンＣＡＲは、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレットに示されるアミノ酸を含むか、又はヌクレオチド配列若しくは前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、前記メソテリンＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を有する。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、メソテリンＣＡＲ又は参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレットの表２〜３による抗原結合ドメイン又はそれと実質的に同一（例えば、それと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を含む。メソテリンＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレットに指定される。
【０３８１】
一実施形態において、ＣＤ１２３に対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレットに記載の抗体、抗原結合フラグメント又はＣＡＲの抗原結合部分、例えばＣＤＲである。一実施形態において、ＣＤ１２３に対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレットに記載の抗体、抗原結合フラグメント又はＣＡＲの抗原結合部分、例えばＣＤＲである。一実施形態において、ＣＤ１２３に対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２０１４／１３８８０５号パンフレット、国際公開第２０１４／１３８８１９号パンフレット、国際公開第２０１３／１７３８２０号パンフレット、国際公開第２０１４／１４４６２２号パンフレット、国際公開第２００１／６６１３９号パンフレット、国際公開第２０１０／１２６０６６号パンフレット、国際公開第２０１４／１４４６２２号パンフレット又は米国特許出願公開第２００９／０２５２７４２号明細書に記載の抗体、抗原結合フラグメント又はＣＡＲの抗原結合部分、例えばＣＤＲである。一実施形態において、ＣＤ１２３に対する抗原結合ドメインは、例えば、その両方が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書に記載の抗体、抗原結合フラグメント又はＣＡＲの抗原結合部分、例えばＣＤＲである。実施形態において、ＣＤ１２３  ＣＡＲは、その両方が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書に示されるアミノ酸を含むか、又はヌクレオチド配列若しくは前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、前記ＣＤ１２３  ＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を有する。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＣＤ１２３  ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ１〜ＣＡＲ８のいずれか）又は参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレットの表１〜２による抗原結合ドメイン又はそれと実質的に同一（例えば、前記ＣＤ１２３  ＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を含む。ＣＤ１２３  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレットに指定される。
【０３８２】
他の実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＣＡＲ分子を含むＣＤ１２３  ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ１２３−１〜ＣＡＲ１２３−４及びｈｚＣＡＲ１２３−１〜ｈｚＣＡＲ１２３−３２のいずれか）又は参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレットの表２、６及び９による抗原結合ドメイン又はそれと実質的に同一（例えば、前記ＣＤ１２３  ＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を含む。ＣＤ１２３  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレットに指定される。
【０３８３】
一実施形態において、ＣＤ２２に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｈａｓｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１２１（７）：１１６５−１１７４（２０１３）；Ｗａｙｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １６（６）：１８９４−１９０３（２０１０）；Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋ  Ｒｅｓ  ３７（１）：８３−８８（２０１３）；Ｃｒｅａｔｉｖｅ  ＢｉｏＭａｒｔ（ｃｒｅａｔｉｖｅｂｉｏｍａｒｔ．ｎｅｔ）：ＭＯＭ−１８０４７−Ｓ（Ｐ）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲであり、これらは、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる。
【０３８４】
一実施形態において、ＣＳ−１に対する抗原結合ドメインは、エロツズマブ（ＢＭＳ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲであり、例えばそれぞれ参照により本明細書に組み込まれるＴａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｂｌｏｏｄ  １１２（４）：１３２９−３７；Ｔａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｂｌｏｏｄ．１１０（５）：１６５６−６３を参照されたい。
【０３８５】
一実施形態において、ＣＬＬ−１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｒ＆Ｄ、ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａｂｃａｍから入手可能な抗体、例えばＰＥ−ＣＬＬ１−ｈｕ  Ｃａｔ＃３５３６０４（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）；及びＰＥ−ＣＬＬ１（ＣＬＥＣ１２Ａ）Ｃａｔ＃５６２５６６（ＢＤ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０３８６】
他の実施形態において、ＣＬＬ１  ＣＡＲは、ＣＡＲ分子又は参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０１４５３５号パンフレットの表２に記載の抗原結合ドメインを含む。ＣＬＬ−１  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０１４５３５号パンフレットに指定される。
【０３８７】
一実施形態において、ＣＤ３３に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｂｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７（６）：１４９０−１４９６（２００１）（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  Ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ，ｈＰ６７．６）、Ｃａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５２（２４）：６７６１−６７６７（１９９２）（Ｌｉｎｔｕｚｕｍａｂ，ＨｕＭ１９５）、Ｌａｐｕｓａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ  ３０（３）：１１２１−１１３１（２０１２）（ＡＶＥ９６３３）、Ａｉｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２７（５）：１１０７−１１１５（２０１３）（ＡＭＧ３３０，ＣＤ３３  ＢｉＴＥ）、Ｄｕｔｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ  ｈｅｍａｔｏｌ  ２０１２：６８３０６５（２０１２）及びＰｉｚｚｉｔｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｄｏｉ：１０．１０３８／Ｌｕｅ．２０１４．６２（２０１４）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０３８８】
一実施形態において、ＣＤ３３に対する抗原結合ドメインは、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０３８９】
実施形態において、ＣＤ３３  ＣＡＲは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書に示されるアミノ酸を含むか、又はヌクレオチド配列若しくは前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、前記ＣＤ３３  ＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を有する。他の実施形態において、ＣＤ３３  ＣＡＲ  ＣＡＲ又はその抗原結合ドメインは、ＣＡＲ分子（例えば、ＣＡＲ３３−１〜ＣＡＲ−３３−９のいずれか）又は参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０１４５７６号パンフレットの表２又は９による抗原結合ドメイン又は前記配列のいずれかと実質的に同一の配列（例えば、前記ＣＤ３３  ＣＡＲ配列と少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）を含み得る。ＣＤ３３  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０１４５７６号パンフレットに指定される。
【０３９０】
一実施形態において、ＧＤ２に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｍｕｊｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７（４）：１０９８−１１０４（１９８７）；Ｃｈｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ４５（６）：２６４２−２６４９（１９８５），Ｃｈｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ５（９）：１４３０−１４４０（１９８７），Ｃｈｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １６（９）：３０５３−３０６０（１９９８），Ｈａｎｄｇｒｅｔｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ３５（３）：１９９−２０４（１９９２）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。一部の実施形態において、ＧＤ２に対する抗原結合ドメインは、ｍＡｂ  １４．１８、１４Ｇ２ａ、ｃｈ１４．１８、ｈｕ１４．１８、３Ｆ８、ｈｕ３Ｆ８、３Ｇ６、８Ｂ６、６０Ｃ３、１０Ｂ８、ＭＥ３６．１及び８Ｈ９（例えば、国際公開第２０１２０３３８８５号パンフレット、国際公開第２０１３０４０３７１号パンフレット、国際公開第２０１３１９２２９４号パンフレット、国際公開第２０１３０６１２７３号パンフレット、国際公開第２０１３１２３０６１号パンフレット、国際公開第２０１３０７４９１６号パンフレット及び国際公開第２０１３８５５５２号パンフレットを参照されたい）から選択される抗体の抗原結合部分である。一部の実施形態において、ＧＤ２に対する抗原結合ドメインは、米国特許出願公開第２０１００１５０９１０号明細書又は国際公開第２０１１１６０１１９号パンフレットに記載されている抗体の抗原結合部分である。
【０３９１】
一実施形態において、ＢＣＭＡに対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレットに記載の抗体、抗原結合フラグメント又はＣＡＲの抗原結合部分、例えば国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレットに記載のＣＡＲ  ＢＣＭＡ−１０の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。一実施形態において、ＢＣＭＡに対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２０１６／０１４７８９号パンフレットに記載の抗体、抗原結合フラグメント又はＣＡＲの抗原結合部分、例えばＣＤＲである。一実施形態において、ＢＣＭＡに対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２０１２／１６３８０５号パンフレット、国際公開第２００１／１２８１２号パンフレット及び国際公開第２００３／０６２４０１号パンプレットに記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０３９２】
他の実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子又はＢＣＭＡに対する抗原結合ドメイン、例えば米国特許出願公開第２０１６−００４６７２４−Ａ１号明細書又は国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレットに記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲを含む。一実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１６−００４６７２４−Ａ１号明細書によるＣＡＲ分子又は抗原結合ドメインのヌクレオチド配列、又は国際公開２０１６／０１４５６５号パンフレットの表１又は１６、配列番号２７１又は配列番号２７３、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の配列（例えば、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）を含む。ＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレットに指定される。
【０３９３】
一実施形態において、ＧＦＲ  ＡＬＰＨＡ−４  ＣＡＲ抗原に対する抗原結合ドメインは、例えば、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０２５８８０号パンフレットに記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＧＦＲ  ＡＬＰＨＡ−４  ＣＡＲ、例えば参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０２５８８０号パンフレットの表２によるＣＡＲ分子若しくは抗原結合ドメイン又は前記配列のいずれかと実質的に同一の配列（例えば、前記ＧＦＲ  ＡＬＰＨＡ−４配列と少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）を含む。ＧＦＲ  ＡＬＰＨＡ−４  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０２５８８０号パンフレットに指定される。
【０３９４】
一実施形態において、Ｔｎ抗原に対する抗原結合ドメインは、米国特許第８，４４０，７９８号明細書；Ｂｒｏｏｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  １０７（２２）：１００５６−１００６１（２０１０）及びＳｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １（６）：８６３−８７３（２０１２）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０３９５】
一実施形態において、ＰＳＭＡに対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｐａｒｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ  Ｐｕｒｉｆ  ８９（２）：１３６−１４５（２０１３），米国特許出願公開第２０１１０２６８６５６号明細書（Ｊ５９１  ＳｃＦｖ）；Ｆｒｉｇｅｒｉｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ４９（９）：２２２３−２２３２（２０１３）（ｓｃＦｖＤ２Ｂ）；国際公開第２００６１２５４８１号パンフレット（ｍＡｂ  ３／Ａ１２、３／Ｅ７及び３／Ｆ１１）に記載されている抗体及び単鎖抗体フラグメント（ｓｃＦｖ  Ａ５及びＤ７）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０３９６】
一実施形態において、ＲＯＲ１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｈｕｄｅｃｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９（１２）：３１５３−３１６４（２０１３）；国際公開第２０１１１５９８４７号パンフレット；及び米国特許出願公開第２０１３０１０１６０７号明細書に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０３９７】
一実施形態において、ＦＬＴ３に対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２０１１０７６９２２号パンフレット、米国特許第５７７７０８４号明細書、欧州特許第０７５４２３０号明細書、米国特許出願公開第２００９０２９７５２９号明細書及びいくつかの市販カタログ抗体（Ｒ＆Ｄ、ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ａｂｃａｍ）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０３９８】
一実施形態において、ＴＡＧ７２に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｈｏｍｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １１３（４）：１１６３−１１７０（１９９７）に記載されている抗体；及びＡｂｃａｍ  ａｂ６９１の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０３９９】
一実施形態において、ＦＡＰに対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｏｓｔｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １４：４５８４−４５９２（２００８）（ＦＡＰ５）、米国特許出願公開第２００９／０３０４７１８号明細書；シブロツズマブ（例えば、Ｈｏｆｈｅｉｎｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ２６（１），２００３を参照されたい）；及びＴｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２１０（６）：１１２５−１１３５（２０１３）に記載の抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４００】
一実施形態において、ＣＤ３８に対する抗原結合ドメインは、ダラツムマブ（例えば、Ｇｒｏｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１６（２１）：１２６１−１２６２（２０１０）；ＭＯＲ２０２（例えば、米国特許第８，２６３，７４６号明細書を参照されたい）；又は米国特許第８，３６２，２１１号明細書に記載の抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４０１】
一実施形態において、ＣＤ４４ｖ６に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｃａｓｕｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２２（２０）：３４６１−３４７２（２０１３）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４０２】
一実施形態において、ＣＥＡに対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｓｔｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １４３（４）：１０９５−１１０７（２０１２）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４０３】
一実施形態において、ＥＰＣＡＭに対する抗原結合ドメインは、例えば、ＭＴ１１０、ＥｐＣＡＭ−ＣＤ３二特異性Ａｂ（例えば、ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ００６３５５９６を参照されたい）；エドレコロマブ；３６２２Ｗ９４；ＩＮＧ−１；及びアデカツムマブ（ＭＴ２０１）から選択される抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４０４】
一実施形態において、ＰＲＳＳ２１に対する抗原結合ドメインは、米国特許第８，０８０，６５０号明細書に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４０５】
一実施形態において、Ｂ７Ｈ３に対する抗原結合ドメインは、例えば、抗体ＭＧＡ２７１（Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４０６】
一実施形態において、ＫＩＴに対する抗原結合ドメインは、例えば、米国特許第７９１５３９１号明細書、米国特許出願公開第２０１２０２８８５０６号明細書に記載されている抗体及びいくつかの市販のカタログ抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４０７】
一実施形態において、ＩＬ−１３Ｒａ２に対する抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２００８／１４６９１１号パンフレット、国際公開第２００４０８７７５８号パンフレット、いくつかの市販カタログ抗体及び国際公開第２００４０８７７５８号パンフレットに記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４０８】
一実施形態において、ＣＤ３０に対する抗原結合ドメインは、例えば、米国特許第７０９０８４３Ｂ１号明細書及び欧州特許第０８０５８７１号明細書に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４０９】
一実施形態において、ＧＤ３に対する抗原結合ドメインは、例えば、米国特許第７２５３２６３号明細書；米国特許第８，２０７，３０８号明細書；米国特許出願公開第２０１２０２７６０４６号明細書；欧州特許第１０１３７６１号明細書；国際公開第２００５０３５５７７号パンフレット；及び米国特許第６４３７０９８号明細書に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４１０】
一実施形態において、ＣＤ１７１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｈｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ３７（２）：９３−１０４（２０１４）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４１１】
一実施形態において、ＩＬ−１１Ｒａに対する抗原結合ドメインは、Ａｂｃａｍ（カタログ番号ａｂ５５２６２）又はＮｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ（カタログ番号ＥＰＲ５４４６）から入手可能な抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。別の実施形態において、ＩＬ−１１Ｒａに対する抗原結合ドメインは、ペプチドであり、例えばＨｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ７２（１）：２７１−２８１（２０１２）を参照されたい。
【０４１２】
一実施形態において、ＰＳＣＡに対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｍｏｒｇｅｎｒｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ６７（１０）：１１２１−１１３１（２００７）（ｓｃＦｖ  ７Ｆ５）；Ｎｅｊａｔｏｌｌａｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０１３（２０１３），ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ８３９８３１（ｓｃＦｖ  Ｃ５−ＩＩ）；及び米国特許出願公開第２００９０３１１１８１号明細書に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４１３】
一実施形態において、ＶＥＧＦＲ２に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｃｈｉｎｎａｓａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １２０（１１）：３９５３−３９６８（２０１０）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４１４】
一実施形態において、ルイスＹに対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｋｅｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｔｈｅｒ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ  ２３（４）：４１１−４２３（２００８）（ｈｕ３Ｓ１９３  Ａｂ（ｓｃＦｖｓ））；Ｄｏｌｅｚａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １６（１）：４７−５６（２００３）（ＮＣ１０  ｓｃＦｖ）に記載の抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４１５】
一実施形態において、ＣＤ２４に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｍａｌｉａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １４３（５）：１３７５−１３８４（２０１２）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４１６】
一実施形態において、ＰＤＧＦＲβに対する抗原結合ドメインは、抗体Ａｂｃａｍ  ａｂ３２５７０の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４１７】
一実施形態において、ＳＳＥＡ−４に対する抗原結合ドメインは、抗体ＭＣ８１３（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）又は他の市販の抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４１８】
一実施形態において、ＣＤ２０に対する抗原結合ドメインは、抗体リツキシマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ、ベルツズマブ又はＧＡ１０１の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４１９】
一実施形態において、葉酸受容体αに対する抗原結合ドメインは、抗体ＩＭＧＮ８５３又は米国特許出願公開第２０１２０００９１８１号明細書；米国特許第４８５１３３２号明細書、ＬＫ２６：米国特許第５９５２４８４号明細書に記載の抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４２０】
一実施形態において、ＥＲＢＢ２に対する抗原結合ドメイン（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）は、抗体トラスツズマブ又はペルツズマブの抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４２１】
一実施形態において、ＭＵＣ１に対する抗原結合ドメインは、抗体ＳＡＲ５６６６５８の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４２２】
一実施形態において、ＥＧＦＲに対する抗原結合ドメインは、抗体セツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブ又はマツズマブの抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４２３】
一実施形態において、ＮＣＡＭに対する抗原結合ドメインは、抗体クローン２−２Ｂ：ＭＡＢ５３２４（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４２４】
一実施形態において、エフリンＢ２に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ａｂｅｎｇｏｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１９（１９）：４５６５−４５７６（２０１２）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４２５】
一実施形態において、ＩＧＦ−Ｉ受容体に対する抗原結合ドメインは、例えば、米国特許第８３４４１１２Ｂ２号明細書；欧州特許出願公開第２３２２５５０Ａ１号明細書；国際公開第２００６／１３８３１５号パンフレット又はＰＣＴ／米国特許出願公開第２００６／０２２９９５号明細書に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４２６】
一実施形態において、ＣＡＩＸに対する抗原結合ドメインは、抗体クローン３０３１２３（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４２７】
一実施形態において、ＬＭＰ２に対する抗原結合ドメインは、例えば、米国特許第７，４１０，６４０号明細書又は米国特許出願公開第２００５０１２９７０１号明細書に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４２８】
一実施形態において、ｇｐ１００に対する抗原結合ドメインは、抗体ＨＭＢ４５、ＮＫＩｂｅｔａＢ、又は国際公開第２０１３１６５９４０号パンフレット又は米国特許出願公開第２０１３０２９５００７号明細書に記載の抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４２９】
一実施形態において、チロシナーゼに対する抗原結合ドメインは、例えば、米国特許第５８４３６７４号明細書；又は米国特許出願公開第１９９５０５０４０４８号明細書に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４３０】
一実施形態において、ＥｐｈＡ２に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２２（１）：１０２−１１１（２０１４）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４３１】
一実施形態において、ＧＤ３に対する抗原結合ドメインは、例えば、米国特許第７２５３２６３号明細書；米国特許第８，２０７，３０８号明細書；米国特許出願公開第２０１２０２７６０４６号明細書；欧州特許出願公開第１０１３７６１Ａ３号明細書；米国特許出願公開第２０１２０２７６０４６号明細書；国際公開第２００５０３５５７７号パンフレット；又は米国特許第６４３７０９８号明細書に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４３２】
一実施形態において、フコシルＧＭ１に対する抗原結合ドメインは、例えば、米国特許出願公開第２０１００２９７１３８号明細書；又は国際公開第２００７／０６７９９２号パンフレットに記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４３３】
一実施形態において、ｓＬｅに対する抗原結合ドメインは、抗体Ｇ１９３（ルイスＹについて）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。Ｓｃｏｔｔ  ＡＭ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６０：３２５４−６１（２０００）を参照されたく、Ｎｅｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍａｙ  ２０１３  １９０（Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）１７７．１０にも記載される。
【０４３４】
一実施形態において、ＧＭ３に対する抗原結合ドメインは、抗体ＣＡ２５２３４４９（ｍＡｂ  １４Ｆ７）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４３５】
一実施形態において、ＨＭＷＭＡＡに対する抗原結合ドメインは、Ｋｍｉｅｃｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３（１）：ｅ２７１８５（２０１４）（ＰＭＩＤ：２４５７５３８２）（ｍＡｂ９．２．２７）；米国特許第６５２８４８１号明細書；国際公開第２０１００３３８６６号パンフレット；又は米国特許出願公開第２０１４０００４１２４号明細書に記載の抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４３６】
一実施形態において、ｏ−アセチル−ＧＤ２に対する抗原結合ドメインは、抗体８Ｂ６の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４３７】
一実施形態において、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｍａｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ  ２３５（２）：２９８−３０８（２００６）；Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６３（２）：２２１−２３２（２０１１）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４３８】
一実施形態において、ＣＬＤＮ６に対する抗原結合ドメインは、抗体ＩＭＡＢ０２７（Ｇａｎｙｍｅｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。例えば、ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌ．ｇｏｖ／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ０２０５４３５１を参照されたい。
【０４３９】
一実施形態において、ＴＳＨＲに対する抗原結合ドメインは、例えば、米国特許第８，６０３，４６６号明細書；米国特許第８，５０１，４１５号明細書；又は米国特許第８，３０９，６９３号明細書に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４４０】
一実施形態において、ＧＰＲＣ５Ｄに対する抗原結合ドメインは、抗体ＦＡＢ６３００Ａ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）；又はＬＳ−Ａ４１８０（Ｌｉｆｅｓｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４４１】
一実施形態において、ＣＤ９７に対する抗原結合ドメインは、例えば、米国特許第６，８４６，９１１号明細書；ｄｅ  Ｇｒｏｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８３（６）：４１２７−４１３４（２００９）に記載されている抗体；又はＲ＆Ｄ：ＭＡＢ３７３４からの抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４４２】
一実施形態において、ＡＬＫに対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｍｉｎｏ−Ｋｅｎｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １６（５）：１５６１−１５７１（２０１０）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４４３】
一実施形態において、ポリシアル酸に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｎａｇａｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８８（４７）：３３７８４−３３７９６（２０１３）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４４４】
一実施形態において、ＰＬＡＣ１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｇｈｏｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ａｐｐｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２０１３  ｄｏｉ：１０．１００２／ｂａｂ．１１７７に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４４５】
一実施形態において、ＧｌｏｂｏＨに対する抗原結合ドメインは、抗体ＶＫ９；又は例えば、Ｋｕｄｒｙａｓｈｏｖ  Ｖ  ｅｔ  ａｌ，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ  Ｊ．１５（３）：２４３−９（１９９８），Ｌｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １１１（７）：２４８２−２４８７（２０１４）；ＭＢｒ１：Ｂｒｅｍｅｒ  Ｅ−Ｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５９：１４７７３−１４７７７（１９８４）に記載されている抗体の抗原結合部分である。
【０４４６】
一実施形態において、ＮＹ−ＢＲ−１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｊａｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｐｌ  Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ  Ｍｏｒｐｈｏｌ  １５（１）：７７−８３（２００７）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４４７】
一実施形態において、ＷＴ−１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｄａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ５（１７６）：１７６ｒａ３３（２０１３）；又は国際公開第２０１２／１３５８５４号パンフレットに記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４４８】
一実施形態において、ＭＡＧＥ−Ａ１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７４（１２）：７８５３−７８５８（２００５）（ＴＣＲ様ｓｃＦｖ）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４４９】
一実施形態において、精子タンパク質１７に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔａｒｇｅｔ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１３  Ａｕｇ  １４（ＰＭＩＤ：２３９４３３１３）；Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｄ  Ｏｎｃｏｌ  ２９（４）：２９２３−２９３１（２０１２）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４５０】
一実施形態において、Ｔｉｅ２に対する抗原結合ドメインは、抗体ＡＢ３３（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４５１】
一実施形態において、ＭＡＤ−ＣＴ−２に対する抗原結合ドメインは、例えば、ＰＭＩＤ：２４５０９５２；米国特許第７６３５７５３号明細書に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４５２】
一実施形態において、Ｆｏｓ関連抗原１に対する抗原結合ドメインは、抗体１２Ｆ９（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４５３】
一実施形態において、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１に対する抗原結合ドメインは、欧州特許第２５１４７６６Ａ２号明細書；又は米国特許第７，７４９，７１９号明細書に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４５４】
一実施形態において、肉腫転座切断点に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｌｕｏ  ｅｔ  ａｌ，ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．４（６）：４５３−４６１（２０１２）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４５５】
一実施形態において、ＴＲＰ−２に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１８４（６）：２２０７−１６（１９９６）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４５６】
一実施形態において、ＣＹＰ１Ｂ１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ｍａｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ  １０２（９）：３２８７−３２９４（２００３）に記載されている抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４５７】
一実施形態において、ＲＡＧＥ−１に対する抗原結合ドメインは、抗体ＭＡＢ５３２８（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４５８】
一実施形態において、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素に対する抗原結合ドメインは、抗体カタログ番号：ＬＳ−Ｂ９５−１００（Ｌｉｆｅｓｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４５９】
一実施形態において、腸カルボキシルエステラーゼに対する抗原結合ドメインは、抗体４Ｆ１２：カタログ番号：ＬＳ−Ｂ６１９０−５０（Ｌｉｆｅｓｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４６０】
一実施形態において、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２に対する抗原結合ドメインは、抗体Ｌｉｆｅｓｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ：モノクローナル：カタログ番号：ＬＳ−Ｃ１３３２６１−１００（Ｌｉｆｅｓｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４６１】
一実施形態において、ＣＤ７９ａに対する抗原結合ドメインは、Ａｂｃａｍから入手可能な抗体抗ＣＤ７９ａ抗体［ＨＭ４７／Ａ９］（ａｂ３１２１）；Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから入手可能な抗体ＣＤ７９Ａ抗体番号３３５１；又はＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈから入手可能なウサギにおいて産生した抗ＣＤ７９Ａ抗体である抗体ＨＰＡ０１７７４８の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４６２】
一実施形態において、ＣＤ７９ｂに対する抗原結合ドメインは、抗体ポラツズマブベドチン、Ｄｏｒｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ７９ｂ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，ａｎｔｉ−ＣＤ７９ｂ−ｖｃ−ＭＭＡＥ，ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａ”Ｂｌｏｏｄ．２００９  Ｓｅｐ  ２４；１１４（１３）：２７２１−９．ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ−２００９−０２−２０５５００．Ｅｐｕｂ  ２００９  Ｊｕｌ  ２４に記載の抗ＣＤ７９ｂ又は“４５０７  Ｐｒｅ−Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ  Ｃｅｌｌ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ａｎｔｉ−ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３  Ａｓ  ａ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｂ  Ｃｅｌｌ  Ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ”Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  ｏｆ  ５６ｔｈＡＳＨ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅｘｐｏｓｉｔｉｏｎ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ６−９  ２０１４に記載の二特異性抗体抗ＣＤ７９ｂ／ＣＤ３の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４６３】
一実施形態において、ＣＤ７２に対する抗原結合ドメインは、Ｍｙｅｒｓ及びＵｃｋｕｎ，“Ａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ７２  ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｔｈｅｒａｐｙ−ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  Ｂ−ｌｉｎｅａｇｅ  ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．”Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ．１９９５  Ｊｕｎ；１８（１−２）：１１９−２２に記載の抗体Ｊ３−１０９又はＰｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ：Ｔａｒｇｅｔ  ａｎｄ  Ｌｉｎｋｅｒ−Ｄｒｕｇ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ”Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  Ｍａｒｃｈ  １５，２００９  ６９；２３５８に記載の抗ＣＤ７２（１０Ｄ６．８．１，ｍＩｇＧ１）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４６４】
一実施形態において、ＬＡＩＲ１に対する抗原結合ドメインは、ＰｒｏＳｐｅｃから入手可能な抗体ＡＮＴ−３０１  ＬＡＩＲ１抗体；又はＢｉｏＬｅｇｅｎｄから入手可能な抗ヒトＣＤ３０５（ＬＡＩＲ１）抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４６５】
一実施形態において、ＦＣＡＲに対する抗原結合ドメインは、Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．から入手可能な抗体ＣＤ８９／ＦＣＡＲＡｎｔｉｂｏｄｙ（カタログ番号１０４１４−Ｈ０８Ｈ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４６６】
一実施形態において、ＬＩＬＲＡ２に対する抗原結合ドメインは、Ａｂｎｏｖａから入手可能な抗体ＬＩＬＲＡ２モノクローナル抗体（Ｍ１７）、クローン３Ｃ７又はＬｉｆｅｓｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから入手可能なマウス抗ＬＩＬＲＡ２抗体、モノクローナル（２Ｄ７）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４６７】
一実施形態において、ＣＤ３００ＬＦに対する抗原結合ドメインは、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄから入手可能な抗体マウス抗ＣＭＲＦ３５様分子１抗体、モノクローナル［ＵＰ−Ｄ２］又はＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓから入手可能なラット抗ＣＭＲＦ３５様分子１抗体、モノクローナル［２３４９０３］の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４６８】
一実施形態において、ＣＬＥＣ１２Ａに対する抗原結合ドメインは、抗体二特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）ｓｃＦｖ抗体及びＮｏｏｒｄｈｕｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ＣＬＥＣ１２Ａ  Ｉｎ  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｂｙ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ−Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＣＬＬ−１ｘＣＤ３  ＢｉＴＥ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ”５３ｒｄＡＳＨ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅｘｐｏｓｉｔｉｏｎ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １０−１３，２０１１に記載のＡＤＣ及びＭＣＬＡ−１１７（Ｍｅｒｕｓ）の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４６９】
一実施形態において、ＢＳＴ２（ＣＤ３１７とも称される）に対する抗原結合ドメインは、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−Ｏｎｌｉｎｅから入手可能な抗体マウス抗ＣＤ３１７抗体、モノクローナル［３Ｈ４］又はＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓから入手可能なマウス抗ＣＤ３１７抗体、モノクローナル［６９６７３９］の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４７０】
一実施形態において、ＥＭＲ２（ＣＤ３１２とも称される）に対する抗原結合ドメインは、Ｌｉｆｅｓｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから入手可能な抗体マウス抗ＣＤ３１２抗体、モノクローナル［ＬＳ−Ｂ８０３３］又はＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓから入手可能なマウス抗ＣＤ３１２抗体、モノクローナル［４９４０２５］の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４７１】
一実施形態において、ＬＹ７５に対する抗原結合ドメインは、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから入手可能な抗体マウス抗リンパ球抗原７５抗体、モノクローナル［ＨＤ３０］又はＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能なマウス抗リンパ球抗原７５抗体、モノクローナル［Ａ１５７９７］の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４７２】
一実施形態において、ＧＰＣ３に対する抗原結合ドメインは、Ｎａｋａｎｏ  Ｋ，Ｉｓｈｉｇｕｒｏ  Ｔ，Ｋｏｎｉｓｈｉ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉ−ｇｌｙｐｉｃａｎ  ３  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｂｙ  ＣＤＲ  ｇｒａｆｔｉｎｇ  ａｎｄ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ．２０１０  Ｎｏｖ；２１（１０）：９０７−９１６に記載の抗体ｈＧＣ３３、又はＭＤＸ−１４１４、ＨＮ３、又はＹＰ７の抗原結合部分、例えばＣＤＲであり、これら３つは、全てＦｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｇｌｙｐｉｃａｎ−３  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｎｅｗ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｌｉｖｅｒ  ｃａｎｃｅｒ．”ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．２０１４  Ｊａｎ  ２１；５８８（２）：３７７−８２に記載される。
【０４７３】
一実施形態において、ＦＣＲＬ５に対する抗原結合ドメインは、Ｅｌｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，“ＦｃＲＬ５  ａｓ  ａ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ”Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．２０１２  Ｏｃｔ；１１（１０）：２２２２−３２に記載の抗ＦｃＲＬ５抗体の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４７４】
一実施形態において、ＩＧＬＬ１に対する抗原結合ドメインは、Ｌｉｆｅｓｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから入手可能な抗体マウス抗免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１抗体、モノクローナル［ＡＴ１Ｇ４］、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄから入手可能なマウス抗免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１抗体、モノクローナル［ＨＳＬ１１］の抗原結合部分、例えばＣＤＲである。
【０４７５】
一実施形態において、抗原結合ドメインは、上記に挙げた抗体からの１つ、２つ、３つの（例えば、３つ全ての）重鎖ＣＤＲ、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３及び／又は上記に挙げた抗体からの１つ、２つ、３つの（例えば、３つ全ての）軽鎖ＣＤＲ、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、抗原結合ドメインは、上記に挙げた抗体の重鎖可変領域及び／又は可変軽鎖領域を含む。
【０４７６】
別の態様において、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体又は抗体断片を含む。一部の態様において、非ヒト抗体は、ヒト化であり、抗体の特定の配列又は領域は、ヒトで天然に産生される抗体又はその断片との類似性が増すように改変される。一態様において、抗原結合ドメインは、ヒト化である。
【０４７７】
二特異性ＣＡＲ
一実施形態において、抗原結合ドメインは、二特異性又は多特異性分子（例えば、多特異性抗体分子）である。一実施形態において、多重特異性抗体分子は、二特異性抗体分子である。二特異性抗体は、２つ以下の抗原に対して特異性を有する。二特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列及び第２のエピトープに対して結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列によって特徴付けられる。
【０４７８】
一実施形態において、第１及び第２のエピトープは、同じ抗原、例えば同じタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット）である。一実施形態において、第１及び第２のエピトープは、重複する。一実施形態において、第１及び第２のエピトープは、重複しない。一実施形態において、第１及び第２のエピトープは、異なる抗原、例えば異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット）にある。
【０４７９】
一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１のエピトープに結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列並びに第２のエピトープに結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列を含む。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１のエピトープに結合特異性を有する半抗体及び第２のエピトープに結合特異性を有する半抗体を含む。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１のエピトープに結合特異性を有する半抗体又はそのフラグメント及び第２のエピトープに結合特異性を有する半抗体又はそのフラグメントを含む。一実施形態において、二特異性抗体分子は、第１のエピトープに結合特異性を有するｓｃＦｖ又はそのフラグメント及び第２のエピトープに結合特異性を有するｓｃＦｖ又はそのフラグメントを含む。
【０４８０】
一実施形態において、抗体分子は、多特異性（例えば、二特異性又は三特異性）抗体分子である。このような分子は、例えば、二特異性融合タンパク質、例えば２つのｓｃＦｖとその間の親水性へリックスペプチドリンカー及び完全定常領域を含む発現構築物、例えば米国特許第５６３７４８１号明細書に記載のもの；二量体化して二特異性／多価分子を形成することができる、抗体ヒンジ領域及びＣＨ３領域にペプチドスペーサーで更に結合した、連結したＶＬ及びＶＨ鎖を有するミニボディ構築物、例えば米国特許第５８３７８２１号明細書に記載のもの；ペプチド結合により架橋性基とＣ末端で結合し、更にＶＬドメインと会合して一連のＦＶ（又はｓｃＦｖ）を形成する、ＶＨドメイン（又はファミリーメンバーのＶＬドメイン）のストリング、例えば米国特許第５８６４０１９号明細書に記載のもの；及び両方のｓｃＦＶ又は二特異性抗体型フォーマットを使用して、例えばホモ二価、ヘテロ二価、三価及び四価構造を形成する、非共有結合又は化学架橋により多価構造に組み合わせられたペプチドリンカーにより連結したＶＨ及びＶＬドメインの両方を有する単鎖結合ポリペプチド、例えば米国特許第５８６９６２０号明細書に記載のものを含む。上記で参照した出願の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０４８１】
二特異性抗体分子の各抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）内において、ＶＨは、ＶＬの上流又は下流にあり得る。一部の実施形態において、上流抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ１）の上流のそのＶＨ（ＶＨ１）と共に配置され、下流抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ２）の上流のそのＶＨ（ＶＨ２）と共に配置され、その結果、全体的二特異性抗体分子は、配置ＶＨ１−ＶＬ１−ＶＬ２−ＶＨ２を有する。他の実施形態において、上流抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ１）の上流のそのＶＬ（ＶＬ１）と共に配置され、下流抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ２）の上流のそのＶＬ（ＶＬ２）と共に配置され、その結果、全体的二特異性抗体分子は、配置ＶＬ１−ＶＨ１−ＶＨ２−ＶＬ２を有する。任意選択により、リンカーは、２つの抗体又は抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）間、例えば構築物がＶＨ１−ＶＬ１−ＶＬ２−ＶＨ２として配列される場合にＶＬ１とＶＬ２との間又は構築物がＶＬ１−ＶＨ１−ＶＨ２−ＶＬ２として配置される場合にＶＨ１とＶＨ２との間に配置される。リンカーは、本明細書に記載のリンカー、例えば（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｎリンカー（配列番号８９０）（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６、好ましくは４である）であり得る。一般に、２つのｓｃＦｖ間のリンカーは、２つのｓｃＦｖのドメイン間の誤対合を避けるのに十分長くなければならない。任意選択により、リンカーは、第１のｓｃＦｖのＶＬとＶＨとの間に配置される。任意選択により、リンカーは、第２のｓｃＦｖのＶＬとＶＨとの間に配置される。複数リンカーを有する構築物において、リンカーの任意の２つ以上は、同じであるか又は異なり得る。従って、一部の実施形態において、二特異性ＣＡＲは、本明細書に記載の配置でＶＬ、ＶＨ及び任意選択により１つ以上のリンカーを含む。
【０４８２】
膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインに関して、種々の実施形態において、本発明のキメラ分子（例えば、ＣＡＲ）は、キメラ分子の細胞外ドメインに結合する膜貫通ドメインを含むように設計できる。膜貫通ドメインは、膜貫通領域に隣接した１つ以上の更なるアミノ酸、例えば膜貫通が由来するタンパク質の細胞外領域と関連する１つ以上のアミノ酸（例えば、細胞外領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０〜最大１５アミノ酸）及び／又は膜貫通タンパク質が由来するタンパク質の細胞内領域と関連する１つ以上の更なるアミノ酸（例えば、細胞内領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０〜最大１５アミノ酸）を含み得る。一態様において、膜貫通ドメインは、キメラタンパク質（例えば、ＣＡＲ）の他のドメインの１つと関連するものであり、例えば、一実施形態において、膜貫通ドメインは、シグナル伝達ドメイン、共刺激ドメイン又はヒンジドメインが由来するのと同じタンパク質由来であり得る。別の態様において、膜貫通ドメインは、キメラタンパク質（例えば、ＣＡＲ）の任意の別のドメインが由来するものと同じタンパク質に由来しない。ある例において、膜貫通ドメインは、このようなドメインが同一又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインと結合するのを避けるように、例えば受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するように選択されるか又はアミノ酸置換によって改変され得る。一態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ発現細胞の細胞表面上の別のＣＡＲとホモ二量体化できる。異なる態様において、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、同じＣＡＲ発現細胞に存在する天然結合パートナーの結合ドメインとの相互作用を最小化するように改変又は置換され得る。
【０４８３】
膜貫通ドメインは、天然由来又は組換え源由来であり得る。源が天然であるとき、ドメインは、あらゆる膜結合又は膜貫通タンパク質由来であり得る。一態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲが標的に結合したときは常に細胞内ドメインにシグナル伝達できる。本発明において特に有用な膜貫通ドメインは、例えば、Ｔ細胞受容体のα、β又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４の少なくとも膜貫通領域を含み得る。
【０４８４】
一部の実施形態において、膜貫通ドメインは、例えば、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ又はＮＫＧ２Ｃの少なくとも膜貫通領域を含み得る。
【０４８５】
ある例において、膜貫通ドメインは、ヒンジ、例えばヒトタンパク質からのヒンジを介してＣＡＲの細胞外領域、例えばＣＡＲの抗原結合ドメインに結合できる。例えば、一実施形態において、ヒンジは、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジ（例えばＩｇＧ４ヒンジ、ＩｇＤヒンジ）、ＧＳリンカー（例えば、本明細書に記載のＧＳリンカー）、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジ又はＣＤ８ａヒンジであり得る。一実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、配列番号４のアミノ酸配列を含む（例えば、これからなる）。一態様において、膜貫通ドメインは、配列番号１２の膜貫通ドメインを含む（例えば、これからなる）。
【０４８６】
実施形態において、コード化膜貫通ドメインは、配列番号１２のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの修飾であるが、２０、１０若しくは５つを超えない修飾を有するＣＤ８膜貫通ドメインのアミノ酸配列又は配列番号１２のアミノ酸配列と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、コード化膜貫通ドメインは、配列番号１２の配列を含む。
【０４８７】
他の実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸分子は、例えば、配列番号１３の配列又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含むＣＤ８膜貫通ドメインのヌクレオチド配列を含む。
【０４８８】
実施形態において、コード化抗原結合ドメインは、膜貫通ドメインにヒンジ領域によって結合されている。一実施形態において、コード化ヒンジ領域は、ＣＤ８ヒンジのアミノ酸配列、例えば配列番号４；又はＩｇＧ４ヒンジのアミノ酸配列、例えば配列番号６又は配列番号４若しくは６と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。他の実施形態において、ヒンジ領域をコードする核酸配列は、それぞれＣＤ８ヒンジ又はＩｇＧ４ヒンジに対応する配列番号５若しくは配列番号７の配列又は配列番号５若しくは７と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。
【０４８９】
一態様において、ヒンジ又はスペーサーは、ＩｇＧ４ヒンジを含む。例えば、一実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、アミノ酸配列
【化１８】
2019532953.tif 000030
のヒンジを含む。
【０４９０】
一部の実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、
【化１９】
2019532953.tif 000031
のヌクレオチド配列によりコードされたヒンジを含む。
【０４９１】
一態様において、ヒンジ又はスペーサーは、ＩｇＤヒンジを含む。例えば、一実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、アミノ酸配列
【化２０】
2019532953.tif 000032
のヒンジを含む。
【０４９２】
一部の実施形態において、ヒンジ又はスペーサーは、
【化２１】
2019532953.tif 000033
のヌクレオチド配列によりコードされたヒンジを含む。
【０４９３】
一態様において、膜貫通ドメインは、組み換えであり得、その場合、ロイシン及びバリンなどの疎水性残基を優勢に含む。一態様において、フェニルアラニン、トリプトファン及びバリンのトリプレットを、組み換え膜貫通ドメインの各末端に見ることができる。
【０４９４】
任意選択により、２〜１０アミノ酸長の短オリゴ又はポリペプチドリンカーが、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質領域の間に結合を形成し得る。グリシン−セリンダブレットは特に適当なリンカーを提供する。例えば、一態様において、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳのアミノ酸配列を含む（配列番号１０）。一実施形態において、リンカーは、ＧＧＴＧＧＣＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＣのヌクレオチド配列によりコードされる（配列番号１１）。
【０４９５】
一態様において、ヒンジ又はスペーサーは、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジを含む。
【０４９６】
シグナル伝達ドメイン
細胞内シグナル伝達ドメインを有する本発明の実施形態において、このようなドメインは、例えば、一次シグナル伝達ドメイン及び／又は共刺激シグナル伝達ドメインの１つ以上を含み得る。一部の実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメインをコードする配列を含む。一部の実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインを含む。
【０４９７】
本発明のＣＡＲの細胞質部分内の細胞内シグナル伝達配列は、互いに無作為に又は特定の順序で連結し得る。任意選択により、例えば、２〜１０アミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０アミノ酸）長の短オリゴ又はポリペプチドリンカーは、細胞内シグナル伝達配列間に結合を形成し得る。一実施形態において、グリシン−セリンダブレットを適当なリンカーとして使用できる。一実施形態において、単一アミノ酸、例えばアラニン、グリシンを適当なリンカーとして使用できる。
【０４９８】
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つ以上、例えば２つ、３つ、４つ、５つ又はそれを超える共刺激性シグナル伝達ドメインを含むように設計される。一実施形態において、２つ以上、例えば２つ、３つ、４つ、５つ又はそれを超える共刺激性シグナル伝達ドメインは、リンカー分子、例えば本明細書に記載のリンカー分子により分けられる。一実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、リンカー分子はグリシン残基である。一実施形態において、リンカー分子はアラニン残基である。
【０４９９】
一次シグナル伝達ドメイン
一次シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ複合体の一次活性化を刺激性方向又は阻害性方向のいずれかで制御する。刺激性方向で作用する初代細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。
【０５００】
本発明において特に有用であるＩＴＡＭ含有初代細胞内シグナル伝達ドメインの例は、ＣＤ３ζ、共通ＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃＲβ（ＦｃεＲ１ｂ）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２のものを含む。一実施形態において、本発明のＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζの一次シグナル伝達ドメインを含む。
【０５０１】
一実施形態において、コード化一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの機能的シグナル伝達ドメインを含む。コード化ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１８若しくは配列番号２０の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの修飾であるが、２０、１０若しくは５つを超えない修飾を有するアミノ酸配列又は配列番号１８若しくは配列番号２０と９５〜９９％の同一性を有する配列を含み得る。一部の実施形態において、コード化一次シグナル伝達ドメインは、配列番号１８又は配列番号２０の配列を含む。他の実施形態において、一次シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列は、配列番号１９若しくは配列番号２１の配列又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。
【０５０２】
共刺激シグナル伝達ドメイン
一部の実施形態において、コード化細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。例えば、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインを含み得る。一部の実施形態において、コード化共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６及びＮＫＧ２Ｄの１つ以上から選択されるタンパク質の機能的シグナル伝達ドメインを含む。
【０５０３】
実施形態において、コード化共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１４若しくは配列番号１６の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの修飾であるが、２０、１０若しくは５つを超えない修飾を有するアミノ酸配列又は配列番号１４若しくは配列番号１６と９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、コード化共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１４又は配列番号１６の配列を含む。他の実施形態において、共刺激シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列は、配列番号１５若しくは配列番号１７の配列又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。
【０５０４】
他の実施形態において、コード化細胞内ドメインは、配列番号１４又は配列番号１６の配列及び配列番号１８又は配列番号２０の配列を含み、細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列は、同じフレームにおいて且つ単一のポリペプチド鎖として発現される。
【０５０５】
実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列は、配列番号１５若しくは配列番号１７の配列又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列及び配列番号１９若しくは配列番号２１の配列又はそれと９５〜９９％の同一性を有する配列を含む。
【０５０６】
一部の実施形態において、核酸分子は、リーダー配列を更にコードする。一実施形態において、リーダー配列は、配列番号２の配列を含む。
【０５０７】
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及び４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインは、配列番号１４のシグナル伝達ドメインである。一態様において、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメインは、配列番号１８のシグナル伝達ドメインである。
【０５０８】
一態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２７のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様において、ＣＤ２７のシグナル伝達ドメインは、ＱＲＲＫＹＲＳＮＫＧＥＳＰＶＥＰＡＥＰＣＲＹＳＣＰＲＥＥＥＧＳＴＩＰＩＱＥＤＹＲＫＰＥＰＡＣＳＰ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含む。一態様において、ＣＤ２７のシグナル伝達ドメインは、
【化２２】
2019532953.tif 000034
の核酸配列によりコードされる。
【０５０９】
例示的なＣＡＲ分子
本明細書に開示されるＣＡＲ分子は、標的、例えば本明細書に記載の標的と結合する結合ドメイン；膜貫通ドメイン、例えば本明細書に記載の膜貫通ドメイン；及び細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば本明細書に記載の細胞内ドメインを含み得る。実施形態において、結合ドメインは、本明細書に記載の重鎖結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）；並びに／又は本明細書に記載の軽鎖結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含む。
【０５１０】
他の実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のＣＤ１９  ＣＡＲ分子、例えば米国特許出願公開第２０１５−０２８３１７８−Ａ１号明細書に記載のＣＤ１９  ＣＡＲ分子、例えばＣＴＬ０１９を含む。実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１５−０２８３１７８−Ａ１号明細書（参照により本明細書に組み込まれる）に示されるアミノ酸を含むか、又はヌクレオチド配列若しくはそれと実質的に同一（例えば、それと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を有する。
【０５１１】
一実施形態において、ＣＤ１９と特異的に結合するＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＵＳＡＮ名ＴＩＳＡＧＥＮＬＥＣＬＥＵＣＥＬ−Ｔを有する。ＣＴＬ０１９は、Ｔ細胞の遺伝子修飾によって作製され、この修飾は、ＥＦ−１αプロモーターの制御下のＣＴＬ０１９導入遺伝子を含有する自己不活性化、複製欠損レンチウイルス（ＬＶ）ベクターでの形質導入による安定的挿入によって媒介される。ＣＴＬ０１９は、パーセント導入遺伝子陽性Ｔ細胞に基づいて対象に送達される導入遺伝子陽性Ｔ細胞と導入遺伝子陰性Ｔ細胞との混合物であり得る。
【０５１２】
他の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、ＣＡＲ分子又は参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットの表３に記載の抗原結合ドメイン（例えば、ヒト化抗原結合ドメイン）を含む。ＣＤ１９  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットに指定される。実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットに示されるアミノ酸を含むか、又はヌクレオチド配列若しくは前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、前記ＣＤ１９  ＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を有する。
【０５１３】
一実施形態において、親マウスｓｃＦｖ配列は、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレット（参照により本明細書に組み込まれる）に提供され、本明細書の表９に提供されるＣＡＲ１９構築物である。一実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメインは、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに記載され、本明細書に表９で提供されるｓｃＦｖである。
【０５１４】
一実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットで配列番号１２として提供されるアミノ酸配列を含む。実施形態において、アミノ酸配列は、大文字で示すシグナルペプチド配列を伴う又は伴わない、
【化２３】
2019532953.tif 000035
又はそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８５％、９０％又は９５％又はそれを超えて同一）である。
【０５１５】
実施形態において、アミノ酸配列は、
【化２４】
2019532953.tif 000036
又はそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも８５％、９０％又は９５％又はそれを超えて同一）である。
【０５１６】
実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のＣＤ１９  ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のヒト化ＣＡＲ分子、例えば表６〜９のヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲ分子であるか、又は表１０Ａ及び１０Ｂに記載のＣＤＲを有する。
【０５１７】
実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のＣＤ１９  ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のマウスＣＡＲ分子、例えば表９のマウスＣＤ１９  ＣＡＲ分子であるか、又は表１０Ａ及び１０Ｂに記載のＣＤＲを有する。
【０５１８】
一部の実施形態において、ＣＡＲ分子は、表１０Ａ及び１０Ｂのマウス又はヒト化ＣＤ１９  ＣＡＲの重鎖可変領域からの１つ、２つ及び／若しくは３つのＣＤＲ並びに／又は軽鎖可変領域からの１つ、２つ及び／若しくは３つのＣＤＲを含む。
【０５１９】
一実施形態において、抗原結合ドメインは、本明細書に列挙した抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全て）の重鎖ＣＤＲ、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２及びＨＣ  ＣＤＲ３並びに／又は本明細書に列挙した抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全て）の軽鎖ＣＤＲ、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２及びＬＣ  ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、抗原結合ドメインは、本明細書に挙げた又は記載した抗体の重鎖可変領域及び／又は可変軽鎖領域を含む。
【０５２０】
例示的なＣＤ１９  ＣＡＲは、例えば、本明細書に記載の１つ以上の表（例えば、表６〜９）において、本明細書に記載のＣＤ１９  ＣＡＲ又は抗ＣＤ１９結合ドメインのいずれか（例えば又はＸｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １２３．２４（２０１４）：３７５０−９；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １２２．２５（２０１３）：４１２９−３９、Ｃｒｕｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １２２．１７（２０１３）：２９６５−７３に記載の抗ＣＤ１９  ＣＡＲ：ＮＣＴ００５８６３９１、ＮＣＴ０１０８７２９４、ＮＣＴ０２４５６３５０、ＮＣＴ００８４０８５３、ＮＣＴ０２６５９９４３、ＮＣＴ０２６５０９９９、ＮＣＴ０２６４０２０９、ＮＣＴ０１７４７４８６、ＮＣＴ０２５４６７３９、ＮＣＴ０２６５６１４７、ＮＣＴ０２７７２１９８、ＮＣＴ００７０９０３３、ＮＣＴ０２０８１９３７、ＮＣＴ００９２４３２６、ＮＣＴ０２７３５０８３、ＮＣＴ０２７９４２４６、ＮＣＴ０２７４６９５２、ＮＣＴ０１５９３６９６、ＮＣＴ０２１３４２６２、ＮＣＴ０１８５３６３１、ＮＣＴ０２４４３８３１、ＮＣＴ０２２７７５２２，ＮＣＴ０２３４８２１６、ＮＣＴ０２６１４０６６、ＮＣＴ０２０３０８３４、ＮＣＴ０２６２４２５８、ＮＣＴ０２６２５４８０、ＮＣＴ０２０３０８４７、ＮＣＴ０２６４４６５５、ＮＣＴ０２３４９６９８、ＮＣＴ０２８１３８３７、ＮＣＴ０２０５０３４７、ＮＣＴ０１６８３２７９、ＮＣＴ０２５２９８１３、ＮＣＴ０２５３７９７７、ＮＣＴ０２７９９５５０、ＮＣＴ０２６７２５０１、ＮＣＴ０２８１９５８３、ＮＣＴ０２０２８４５５、ＮＣＴ０１８４０５６６、ＮＣＴ０１３１８３１７、ＮＣＴ０１８６４８８９、ＮＣＴ０２７０６４０５、ＮＣＴ０１４７５０５８、ＮＣＴ０１４３０３９０、ＮＣＴ０２１４６９２４、ＮＣＴ０２０５１２５７、ＮＣＴ０２４３１９８８、ＮＣＴ０１８１５７４９、ＮＣＴ０２１５３５８０、ＮＣＴ０１８６５６１７、ＮＣＴ０２２０８３６２、ＮＣＴ０２６８５６７０、ＮＣＴ０２５３５３６４、ＮＣＴ０２６３１０４４、ＮＣＴ０２７２８８８２、ＮＣＴ０２７３５２９１、ＮＣＴ０１８６０９３７、ＮＣＴ０２８２２３２６、ＮＣＴ０２７３７０８５、ＮＣＴ０２４６５９８３、ＮＣＴ０２１３２６２４、ＮＣＴ０２７８２３５１、ＮＣＴ０１４９３４５３、ＮＣＴ０２６５２９１０、ＮＣＴ０２２４７６０９、ＮＣＴ０１０２９３６６、ＮＣＴ０１６２６４９５、ＮＣＴ０２７２１４０７、ＮＣＴ０１０４４０６９、ＮＣＴ００４２２３８３、ＮＣＴ０１６８０９９１、ＮＣＴ０２７９４９６１又はＮＣＴ０２４５６２０７を含み、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０５２１】
本明細書に記載の方法において使用され得る例示的なＣＤ１９  ＣＡＲ及び抗原結合ドメイン構築物を表６〜９に示す。Ｋａｂａｔによる軽鎖及び重鎖ＣＤＲ配列は、太字及び下線で示し、下記の表９及び１０Ａ〜１０Ｂに要約する。シグナル配列及びヒスチジンタグの位置にも下線が引かれている。実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ配列及びその抗原結合フラグメントは、シグナル配列及び／又はヒスチジンタグ配列を含まない。
【０５２２】
実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲは、抗ＣＤ１９結合ドメイン（例えば、マウス又はヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記抗ＣＤ１９結合ドメインは、表６〜９及び１０Ａ〜１０Ｂに列挙される任意の抗ＣＤ１９重鎖結合ドメインアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）又はそれと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一である配列（例えば、５、４、３、２又は１アミノ酸未満の置換、例えば保存的置換を有する）を含む。
【０５２３】
一実施形態において、抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書（例えば、表６〜９）に記載の軽鎖可変領域及び／若しくは本明細書（例えば、表９）に記載の重鎖可変領域又はそれと８５％、９０％、９５％若しくはそれを超える同一性を有する配列を含む。
【０５２４】
一実施形態において、コード化抗ＣＤ１９結合ドメインは、表６〜９のアミノ酸配列又はそれと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一の配列の軽鎖及び重鎖を含むｓｃＦｖである。
【０５２５】
一実施形態において、ヒト又はヒト化抗ＣＤ１９結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、表６〜９に提供する軽鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）であるが、３０、２０若しくは１０を超えない修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するアミノ酸配列又はそれと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一である配列を含む軽鎖可変領域；及び／又は表６〜９に提供する重鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）であるが、３０、２０若しくは１０を超えない修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するアミノ酸配列又はそれと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一である配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０５２６】
【表１２】
2019532953.tif 000037
【０５２７】
【表１３】
2019532953.tif 000038
【０５２８】
【表１４】
2019532953.tif 000039
【０５２９】
【表１５】
2019532953.tif 000040
【０５３０】
【表１６】
2019532953.tif 000041
【０５３１】
【表１７】
2019532953.tif 000042
【０５３２】
【表１８】
2019532953.tif 000043
【０５３３】
【表１９】
2019532953.tif 000044
【０５３４】
【表２０】
2019532953.tif 000045
【０５３５】
【表２１】
2019532953.tif 000046
【０５３６】
【表２２】
2019532953.tif 000047
【０５３７】
【表２３】
2019532953.tif 000048
【０５３８】
【表２４】
2019532953.tif 000049
【０５３９】
【表２５】
2019532953.tif 000050
【０５４０】
【表２６】
2019532953.tif 000051
【０５４１】
【表２７】
2019532953.tif 000052
【０５４２】
【表２８】
2019532953.tif 000053
【０５４３】
【表２９】
2019532953.tif 000054
【０５４４】
【表３０】
2019532953.tif 000055
【０５４５】
一部の実施形態において、ＣＤ１９  ＣＡＲ又は結合ドメインは、リーダー配列又はｈｉｓタグを伴う又は伴わない表９のＣＴＬ０１９のアミノ酸配列を含むか、又はＣＴＬ０１９のヌクレオチド配列若しくはそれと実質的に同一の配列（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超える同一性）によりコードされる。
【０５４６】
一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム又はそれらの組み合わせに従って定義される。
【０５４７】
ｓｃＦｖドメインのヒト化ＣＤＲ配列の配列を重鎖可変ドメインについて表１０Ａ及び軽鎖可変ドメインについて表１０Ｂに示す。「ＩＤ」は、各ＣＤＲの各配列番号を意味する。
【０５４８】
【表３１】
2019532953.tif 000056
【０５４９】
【表３２】
2019532953.tif 000057
【０５５０】
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子、例えば米国特許出願公開第２０１６−００４６７２４−Ａ１号明細書又は国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレットに記載のＢＣＭＡ  ＣＡＲを含む。一実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１６−００４６７２４−Ａ１号明細書によるＣＡＲ分子又は抗原結合ドメインのヌクレオチド配列又は国際公開２０１６／０１４５６５号パンフレットの表１又は１６、配列番号２７１又は配列番号２７３、又は前記配列のいずれかと実質的に同一の配列（例えば、前記ＢＣＭＡ  ＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）を含む。ＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０１４５６５号パンフレットに指定される。
【０５５１】
一実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、ヒト又はヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン）、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、表１１Ａ又は１１Ｂに列挙される任意の抗ＢＭＣＡ重鎖結合ドメインアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）又はそれと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一である配列（例えば、５、４、３、２又は１アミノ酸未満の置換、例えば保存的置換を有する）を含む。
【０５５２】
一実施形態において、抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、本明細書（例えば、表１１Ａ又は１１Ｂ）に記載の軽鎖可変領域及び／若しくは本明細書（例えば、表１１Ａ又は１１Ｂ）に記載の重鎖可変領域又はそれと８５％、９０％、９５％若しくはそれを超える同一性を有する配列を含む。
【０５５３】
一実施形態において、コード化抗ＢＣＭＡ結合ドメインは、表１１Ａ又は１１Ｂのアミノ酸配列の軽鎖及び重鎖を含むｓｃＦｖである。
【０５５４】
一実施形態において、ヒト又はヒト化抗ＢＣＭＡ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、表１１Ａ又は１１Ｂに提供する軽鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）であるが、３０、２０若しくは１０を超えない修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するアミノ酸配列又はそれと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一である配列を含む軽鎖可変領域；及び／又は表１１Ａ又は１１Ｂに提供する重鎖可変領域のアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）であるが、３０、２０若しくは１０を超えない修飾（例えば、置換、例えば保存的置換）を有するアミノ酸配列又はそれと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一である配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０５５５】
【表３３】
2019532953.tif 000058
【０５５６】
【表３４】
2019532953.tif 000059
【０５５７】
【表３５】
2019532953.tif 000060
【０５５８】
【表３６】
2019532953.tif 000061
【０５５９】
【表３７】
2019532953.tif 000062
【０５６０】
【表３８】
2019532953.tif 000063
【０５６１】
【表３９】
2019532953.tif 000064
【０５６２】
【表４０】
2019532953.tif 000065
【０５６３】
【表４１】
2019532953.tif 000066
【０５６４】
【表４２】
2019532953.tif 000067
【０５６５】
【表４３】
2019532953.tif 000068
【０５６６】
【表４４】
2019532953.tif 000069
【０５６７】
【表４５】
2019532953.tif 000070
【０５６８】
【表４６】
2019532953.tif 000071
【０５６９】
【表４７】
2019532953.tif 000072
【０５７０】
【表４８】
2019532953.tif 000073
【０５７１】
【表４９】
2019532953.tif 000074
【０５７２】
【表５０】
2019532953.tif 000075
【０５７３】
【表５１】
2019532953.tif 000076
【０５７４】
【表５２】
2019532953.tif 000077
【０５７５】
【表５３】
2019532953.tif 000078
【０５７６】
【表５４】
2019532953.tif 000079
【０５７７】
【表５５】
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【０５７８】
【表５６】
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【０５７９】
【表５７】
2019532953.tif 000082
【０５８０】
【表５８】
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【０５８１】
【表５９】
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【０５８２】
【表６０】
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【０５８３】
【表６１】
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【０５８４】
【表６２】
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【０５８５】
【表６３】
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【０５８６】
【表６４】
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【０５８７】
【表６５】
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【０５８８】
【表６６】
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【０５８９】
【表６７】
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【０５９０】
【表６８】
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【０５９１】
【表６９】
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【０５９２】
【表７０】
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【０５９３】
【表７１】
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【０５９４】
【表７２】
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【０５９５】
【表７３】
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【０５９６】
【表７４】
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【０５９７】
【表７５】
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【０５９８】
【表７６】
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【０５９９】
【表７７】
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【０６００】
【表７８】
2019532953.tif 000103
【０６０１】
本明細書に開示する例示的なＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物は、ｓｃＦｖ（例えば、本明細書の表１１Ａ又は１１Ｂに開示するようなｓｃＦｖ、任意選択により、任意選択によるリーダー配列（例えば、それぞれ例示的なリーダーアミノ酸及びヌクレオチド配列として配列番号２及び配列番号３又は１９３８）が前に存在する）を含む。ｓｃＦｖフラグメントの配列（例えば、任意選択によるリーダー配列を含まない配列番号９６７〜１１８２のいずれか、例えば配列番号９６７、９７３、９７９、９８５、９９１、９９７、１００３、１００９、１０１５、１０２１、１０２７、１０３３、１０３９、１０４５、１０５１、１０５７、１０６３、１０６９、１０７５、１０８１、１０８７、１０９３、１０９９、１１０５、１１１１、１１１７、１１２３、１１２９、１１３５、１１４１、１１４７、１１５３、１１５９、１１６５、１１７１、１１７７からのＳｃＦｖ）は、本明細書の表１１Ａ又は１１Ｂに提供される。ＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物は、任意選択によるヒンジドメイン、例えばＣＤ８ヒンジドメイン（例えば、配列番号４のアミノ酸配列又は配列番号５の核酸配列によりコードされたアミノ酸配列を含む）；膜貫通ドメイン、例えばＣＤ８膜貫通ドメイン（例えば、配列番号１２のアミノ酸配列又は配列番号１３若しくは１９３９のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列を含む）；細胞内ドメイン、例えば４−１ＢＢ細胞内ドメイン（例えば、配列番号１４のアミノ酸配列又は配列番号１５若しくは１９４０のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列を含み、及び機能的シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζドメイン（例えば、配列番号１８若しくは２０のアミノ酸配列又は配列番号１９、１９４１若しくは２１のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列を含む）を更に含み得る。一実施形態において、ドメインは、単一融合タンパク質を形成するように同じリーディングフレームに隣接するか又はその中にある。他の実施形態において、ドメインは、例えば、本明細書に記載のＲＣＡＲ分子におけるような別々のポリペプチドにある。
【０６０２】
一実施形態において、全長ＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子は、表１１Ａ又は１１Ｂに提供するＢＣＭＡ−１、ＢＣＭＡ−２、ＢＣＭＡ−３、ＢＣＭＡ−４、ＢＣＭＡ−５、ＢＣＭＡ−６、ＢＣＭＡ−７、ＢＣＭＡ−８、ＢＣＭＡ−９、ＢＣＭＡ−１０、ＢＣＭＡ−１１、ＢＣＭＡ−１２、ＢＣＭＡ−１３、ＢＣＭＡ−１４、ＢＣＭＡ−１５、１４９３６２、１４９３６３、１４９３６４、１４９３６５、１４９３６６、１４９３６７、１４９３６８、１４９３６９、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ａ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｇ１、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７９−Ｃ１、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｃ７、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｄ１０、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７９−Ｃ１２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ｇ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ｄ２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ａ１０、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｄ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ａ２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８１−Ｃ３、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｇ４、Ａ７Ｄ１２．２、Ｃ１１Ｄ５．３、Ｃ１２Ａ３．２又はＣ１３Ｆ１２．１のアミノ酸配列又はそれと実質的に（例えば、８５％、９５〜９９％又はそれを超えて）同一の配列を含むか、又はそのヌクレオチド配列によりコードされる。
【０６０３】
一実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子又は抗ＢＣＭＡ抗原結合ドメインは、表１１Ａ又は１１Ｂに提供するＢＣＭＡ−１、ＢＣＭＡ−２、ＢＣＭＡ−３、ＢＣＭＡ−４、ＢＣＭＡ−５、ＢＣＭＡ−６、ＢＣＭＡ−７、ＢＣＭＡ−８、ＢＣＭＡ−９、ＢＣＭＡ−１０、ＢＣＭＡ−１１、ＢＣＭＡ−１２、ＢＣＭＡ−１３、ＢＣＭＡ−１４、ＢＣＭＡ−１５、１４９３６２、１４９３６３、１４９３６４、１４９３６５、１４９３６６、１４９３６７、１４９３６８、１４９３６９、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ａ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｇ１、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７９−Ｃ１、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｃ７、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｄ１０、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７９−Ｃ１２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ｇ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ｄ２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ａ１０、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｄ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ａ２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８１−Ｃ３、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｇ４、Ａ７Ｄ１２．２、Ｃ１１Ｄ５．３、Ｃ１２Ａ３．２又はＣ１３Ｆ１２．１のｓｃＦｖアミノ酸配列（リーダー配列を伴う又は伴わない）又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、８５％、９５〜９９％又はそれを超えて同一、又は最大２０、１５、１０、８、６、５、４、３、２又は１アミノ酸変化、例えば置換（例えば、保存的置換））の配列を含む。
【０６０４】
一実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子又は抗ＢＣＭＡ抗原結合ドメインは、表１１Ａ又は１１Ｂに提供するＢＣＭＡ−１、ＢＣＭＡ−２、ＢＣＭＡ−３、ＢＣＭＡ−４、ＢＣＭＡ−５、ＢＣＭＡ−６、ＢＣＭＡ−７、ＢＣＭＡ−８、ＢＣＭＡ−９、ＢＣＭＡ−１０、ＢＣＭＡ−１１、ＢＣＭＡ−１２、ＢＣＭＡ−１３、ＢＣＭＡ−１４、ＢＣＭＡ−１５、１４９３６２、１４９３６３、１４９３６４、１４９３６５、１４９３６６、１４９３６７、１４９３６８、１４９３６９、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ａ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｇ１、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７９−Ｃ１、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｃ７、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｄ１０、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７９−Ｃ１２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ｇ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ｄ２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ａ１０、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｄ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ａ２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８１−Ｃ３、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｇ４、Ａ７Ｄ１２．２、Ｃ１１Ｄ５．３、Ｃ１２Ａ３．２又はＣ１３Ｆ１２．１の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、８５％、９５〜９９％又はそれを超えて同一、又は最大２０、１５、１０、８、６、５、４、３、２又は１アミノ酸変化、例えば置換（例えば、保存的置換））の配列を含む。
【０６０５】
一実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子又は抗ＢＣＭＡ抗原結合ドメインは、表１２に提供する重鎖可変領域からの１つ、２つ又は３つのＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及び／又はＨＣＤＲ３）；及び／又は表１３に提供するＢＣＭＡ−１、ＢＣＭＡ−２、ＢＣＭＡ−３、ＢＣＭＡ−４、ＢＣＭＡ−５、ＢＣＭＡ−６、ＢＣＭＡ−７、ＢＣＭＡ−８、ＢＣＭＡ−９、ＢＣＭＡ−１０、ＢＣＭＡ−１１、ＢＣＭＡ−１２、ＢＣＭＡ−１３、ＢＣＭＡ−１４、ＢＣＭＡ−１５、１４９３６２、１４９３６３、１４９３６４、１４９３６５、１４９３６６、１４９３６７、１４９３６８、１４９３６９、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ａ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｇ１、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７９−Ｃ１、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｃ７、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｄ１０、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７９−Ｃ１２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ｇ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ｄ２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ａ１０、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｄ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ａ２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８１−Ｃ３、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｇ４、Ａ７Ｄ１２．２、Ｃ１１Ｄ５．３、Ｃ１２Ａ３．２又はＣ１３Ｆ１２．１の軽鎖可変領域からの１つ、２つ又は３つのＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３）；又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、８５％、９５〜９９％又はそれを超えて同一、又は最大２０、１５、１０、８、６、５、４、３、２又は１アミノ酸変化、例えば置換（例えば、保存的置換））の配列を含む。
【０６０６】
一実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子又は抗ＢＣＭＡ抗原結合ドメインは、表１４に提供する重鎖可変領域からの１つ、２つ又は３つのＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及び／又はＨＣＤＲ３）；及び／又は表１５に提供するＢＣＭＡ−１、ＢＣＭＡ−２、ＢＣＭＡ−３、ＢＣＭＡ−４、ＢＣＭＡ−５、ＢＣＭＡ−６、ＢＣＭＡ−７、ＢＣＭＡ−８、ＢＣＭＡ−９、ＢＣＭＡ−１０、ＢＣＭＡ−１１、ＢＣＭＡ−１２、ＢＣＭＡ−１３、ＢＣＭＡ−１４、ＢＣＭＡ−１５、１４９３６２、１４９３６３、１４９３６４、１４９３６５、１４９３６６、１４９３６７、１４９３６８、１４９３６９、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ａ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｇ１、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７９−Ｃ１、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｃ７、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｄ１０、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７９−Ｃ１２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ｇ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ｄ２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ａ１０、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｄ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ａ２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８１−Ｃ３、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｇ４、Ａ７Ｄ１２．２、Ｃ１１Ｄ５．３、Ｃ１２Ａ３．２又はＣ１３Ｆ１２．１の軽鎖可変領域からの１つ、２つ又は３つのＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３）；又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、８５％、９５〜９９％又はそれを超えて同一、又は最大２０、１５、１０、８、６、５、４、３、２又は１アミノ酸変化、例えば置換（例えば、保存的置換））の配列を含む。
【０６０７】
一実施形態において、ＢＣＭＡ  ＣＡＲ分子又は抗ＢＣＭＡ抗原結合ドメインは、表１６に提供する重鎖可変領域からの１つ、２つ又は３つのＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及び／又はＨＣＤＲ３）；及び／又は表１７に提供するＢＣＭＡ−１、ＢＣＭＡ−２、ＢＣＭＡ−３、ＢＣＭＡ−４、ＢＣＭＡ−５、ＢＣＭＡ−６、ＢＣＭＡ−７、ＢＣＭＡ−８、ＢＣＭＡ−９、ＢＣＭＡ−１０、ＢＣＭＡ−１１、ＢＣＭＡ−１２、ＢＣＭＡ−１３、ＢＣＭＡ−１４、ＢＣＭＡ−１５、１４９３６２、１４９３６３、１４９３６４、１４９３６５、１４９３６６、１４９３６７、１４９３６８、１４９３６９、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ａ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｇ１、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７９−Ｃ１、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｃ７、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｄ１０、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７９−Ｃ１２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ｇ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ｄ２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ａ１０、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｄ４、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８０−Ａ２、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９８１−Ｃ３、ＢＣＭＡ＿ＥＢＢ−Ｃ１９７８−Ｇ４、Ａ７Ｄ１２．２、Ｃ１１Ｄ５．３、Ｃ１２Ａ３．２又はＣ１３Ｆ１２．１の軽鎖可変領域からの１つ、２つ又は３つのＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３）；又は前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、８５％、９５〜９９％又はそれを超えて同一、又は最大２０、１５、１０、８、６、５、４、３、２又は１アミノ酸変化、例えば置換（例えば、保存的置換））の配列を含む。
【０６０８】
ｓｃＦｖドメインのヒトＣＤＲ配列の配列を重鎖可変ドメインについて表１２、１４及び１６並びに軽鎖可変ドメインについて表１３、１５及び１７に示す。「ＩＤ」は、各ＣＤＲの各配列番号を意味する。
【０６０９】
【表７９】
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【０６１０】
【表８０】
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【０６１１】
【表８１】
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【０６１２】
【表８２】
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【０６１３】
【表８３】
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【０６１４】
【表８４】
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【０６１５】
【表８５】
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【０６１６】
【表８６】
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【０６１７】
【表８７】
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【０６１８】
【表８８】
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【０６１９】
【表８９】
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【０６２０】
【表９０】
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【０６２１】
【表９１】
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【０６２２】
【表９２】
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【０６２３】
【表９３】
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【０６２４】
【表９４】
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【０６２５】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子（例えば、ＣＡＲ核酸又はＣＡＲポリペプチド）又はＢＣＭＡ結合ドメインは、
（１）次のものから選択される１つ、２つ又は３つの軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）ＢＣＭＡ−４  ＣＡＲ（１３９１０３）の配列番号１３２０のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１３６０のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１４００のＬＣ  ＣＤＲ３、
（ｉｉ）ＢＣＭＡ−１０  ＣＡＲ（１３９１０９）の配列番号１３１９のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１３５９のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１３９９のＬＣ  ＣＤＲ３、
（ｉｉｉ）ＢＣＭＡ−１３  ＣＡＲ（１３９１１２）の配列番号１３３１のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１３７１のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１４１１のＬＣ  ＣＤＲ３、又は
（ｉｖ）ＢＣＭＡ−１５  ＣＡＲ（１３９１１４）の配列番号１３３３のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１３７３のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１４１３のＬＣ  ＣＤＲ３、及び／又は
（２）次のものからの１つ、２つ、又は３つの重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）ＢＣＭＡ−４  ＣＡＲ（１３９１０３）の配列番号１２００のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号１２４０のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１２８０のＨＣ  ＣＤＲ３、
（ｉｉ）ＢＣＭＡ−１０  ＣＡＲ（１３９１０９）の配列番号１１９９のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号１２３９のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１２７９のＨＣ  ＣＤＲ３、
（ｉｉｉ）ＢＣＭＡ−１３  ＣＡＲ（１３９１１２）の配列番号１１２１のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号１２５１のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１２９１のＨＣ  ＣＤＲ３、又は
（ｉｖ）ＢＣＭＡ−１５（１３９１１４）の配列番号１２１３のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号１２５３のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１２９３のＨＣ  ＣＤＲ３
を含む。
【０６２６】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子（例えば、ＣＡＲ核酸又はＣＡＲポリペプチド）は、
（１）次のものから選択される１つ、２つ又は３つの軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）ＢＣＭＡ−４  ＣＡＲ（１３９１０３）の配列番号１５６０のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１６００のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１６４０のＬＣ  ＣＤＲ３、
（ｉｉ）ＢＣＭＡ−１０  ＣＡＲ（１３９１０９）の配列番号１５５９のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１５９９のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１６３９のＬＣ  ＣＤＲ３、
（ｉｉｉ）ＢＣＭＡ−１３  ＣＡＲ（１３９１１２）の配列番号１５７１のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１６１１のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１６５１のＬＣ  ＣＤＲ３、又は
（ｉｖ）ＢＣＭＡ−１５  ＣＡＲ（１３９１１４）の配列番号１５７３のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１６１３のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１６５３のＬＣ  ＣＤＲ３、及び／又は
（２）次のものから選択される１つ、２つ又は３つの重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）ＢＣＭＡ−４  ＣＡＲ（１３９１０３）の配列番号１４４０のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号１４８０のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１５２０のＨＣ  ＣＤＲ３、
（ｉｉ）ＢＣＭＡ−１０  ＣＡＲ（１３９１０９）の配列番号１４３９のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号１４７９のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１５１９のＨＣ  ＣＤＲ３、
（ｉｉｉ）ＢＣＭＡ−１３  ＣＡＲ（１３９１１２）の配列番号１４５１のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号１４９１のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１５３１のＨＣ  ＣＤＲ３、又は
（ｉｖ）ＢＣＭＡ−１５  ＣＡＲ（１３９１１４）の配列番号１４５３のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号１４９３のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１５３３のＨＣ  ＣＤＲ３
を含む。
【０６２７】
実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ分子（例えば、ＣＡＲ核酸又はＣＡＲポリペプチド）は、
（１）次のものから選択される１つ、２つ又は３つの軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）ＢＣＭＡ−４  ＣＡＲ（１３９１０３）の配列番号１８００のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１８４０のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１８８０のＬＣ  ＣＤＲ３、
（ｉｉ）ＢＣＭＡ−１０  ＣＡＲ（１３９１０９）の配列番号１７９９のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１８３９のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１８７９のＬＣ  ＣＤＲ３、
（ｉｉｉ）ＢＣＭＡ−１３  ＣＡＲ（１３９１１２）の配列番号１８１１のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１８５１のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１８９１のＬＣ  ＣＤＲ３、又は
（ｉｖ）ＢＣＭＡ−１５  ＣＡＲ（１３９１１４）の配列番号１８１３のＬＣ  ＣＤＲ１、配列番号１８５３のＬＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１８９３のＬＣ  ＣＤＲ３、及び／又は
（２）次のものから選択される１つ、２つ又は３つの重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ：
（ｉ）ＢＣＭＡ−４  ＣＡＲ（１３９１０３）の配列番号１６８０のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号１７２０のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１７６０のＨＣ  ＣＤＲ３、
（ｉｉ）ＢＣＭＡ−１０  ＣＡＲ（１３９１０９）の配列番号１６７９のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号１７１９のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１７５９のＨＣ  ＣＤＲ３、
（ｉｉｉ）ＢＣＭＡ−１３  ＣＡＲ（１３９１１２）の配列番号１６９１のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号１７３１のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１７７１のＨＣ  ＣＤＲ３、
（ｉｖ）ＢＣＭＡ−１５  ＣＡＲ（１３９１１４）の配列番号１６９３のＨＣ  ＣＤＲ１、配列番号１７３３のＨＣ  ＣＤＲ２及び配列番号１７７３のＨＣ  ＣＤＲ３
を含む。
【０６２８】
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のメソテリンＣＡＲ、例えば国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレット（参照により本明細書に組み込まれる）に記載のメソテリンＣＡＲを含む。実施形態において、メソテリンＣＡＲは、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレットに示されるアミノ酸を含むか、又はヌクレオチド配列若しくは前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、前記メソテリンＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を有する。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、メソテリンＣＡＲ又は参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレットの表２〜３による抗原結合ドメイン又はそれと実質的に同一（例えば、それと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を含む。メソテリンＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１５／０９０２３０号パンフレットに指定される。
【０６２９】
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のＣＬＬ１  ＣＡＲ、例えば米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書（参照により本明細書に組み込まれる）に記載のＣＬＬ１  ＣＡＲを含む。実施形態において、ＣＬＬ１  ＣＡＲは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１６／００５１６５１Ａ１号明細書に示されるアミノ酸を含むか、又はヌクレオチド配列若しくは前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、前記ＣＬＬ１  ＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を有する。
【０６３０】
他の実施形態において、ＣＬＬ１  ＣＡＲは、ＣＡＲ分子又は参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０１４５３５号パンフレットの表２による抗原結合ドメイン又は前記配列のいずれかと実質的に同一の配列（例えば、前記ＣＬＬ１  ＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）を含む。ＣＬＬ−１  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０１４５３５号パンフレットに指定される。
【０６３１】
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のＣＤ３３  ＣＡＲ、例えば米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書（参照により本明細書に組み込まれる）に記載のＣＤ３３  ＣＡＲを含む。実施形態において、ＣＤ３３  ＣＡＲは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１６／００９６８９２Ａ１号明細書に示されるアミノ酸を含むか、又はヌクレオチド配列若しくは前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、前記ＣＤ３３  ＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を有する。他の実施形態において、ＣＤ３３  ＣＡＲ  ＣＡＲ又はその抗原結合ドメインは、ＣＡＲ分子（例えば、ＣＡＲ３３−１〜ＣＡＲ−３３−９のいずれか）又は参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０１４５７６号パンフレットの表２又は９による抗原結合ドメイン又は前記配列のいずれかと実質的に同一の配列（例えば、前記ＣＤ３３  ＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）を含み得る。ＣＤ３３  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０１４５７６号パンフレットに指定される。
【０６３２】
実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のＣＤ１２３  ＣＡＲ、例えば米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書（両方とも参照により本明細書に組み込まれる）に記載のＣＤ１２３  ＣＡＲを含む。実施形態において、ＣＤ１２３  ＣＡＲは、その両方が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／０３２２２１２Ａ１号明細書又は米国特許出願公開第２０１６／００６８６０１Ａ１号明細書に示されるアミノ酸を含むか、又はヌクレオチド配列若しくは前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、前記ＣＤ１２３  ＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を有する。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＣＤ１２３  ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ１〜ＣＡＲ８のいずれか）又は参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレットの表１〜２による抗原結合ドメイン又はそれと実質的に同一（例えば、前記ＣＤ１２３  ＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を含む。ＣＤ１２３  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１４／１３０６３５号パンフレットに指定される。
【０６３３】
他の実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＣＡＲ分子を含むＣＤ１２３  ＣＡＲ（例えば、ＣＡＲ１２３−１〜ＣＡＲ１２３−４及びｈｚＣＡＲ１２３−１〜ｈｚＣＡＲ１２３−３２のいずれか）又は参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレットの表２、６及び９による抗原結合ドメイン又はそれと実質的に同一（例えば、前記ＣＤ１２３  ＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を含む。ＣＤ１２３  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０２８８９６号パンフレットに指定される。
【０６３４】
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ分子、例えば米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書（参照により本明細書に組み込まれる）に記載のＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲを含む。実施形態において、ＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／０３２２２７５Ａ１号明細書に示されるアミノ酸を含むか、又はヌクレオチド配列若しくは前記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、前記ＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を有する。一実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ又は参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／１３０６５７号パンフレットの表２若しくは配列番号１１による抗原結合ドメイン又はそれと実質的に同一（例えば、それと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）の配列を含む。ＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１４／１３０６５７号パンフレットに指定される。
【０６３５】
他の実施形態において、ＣＡＲ分子は、ＧＦＲ  ＡＬＰＨＡ−４  ＣＡＲを含み、例えば参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／０２５８８０号パンフレットの表２によるＣＡＲ分子若しくは抗原結合ドメイン又は前記配列のいずれかと実質的に同一の配列（例えば、前記ＧＦＲ  ＡＬＰＨＡ−４配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％又はそれを超えて同一）を含み得る。ＧＦＲ  ＡＬＰＨＡ−４  ＣＡＲ分子及び抗原結合ドメイン（例えば、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによる１つ、２つ、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び１つ、２つ、３つのＶＬ  ＣＤＲを含む）をコードするアミノ酸及びヌクレオチド配列は、国際公開第２０１６／０２５８８０号パンフレットに指定される。
【０６３６】
阻害性ドメイン
一実施形態において、ベクターは、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸配列及びｉｎｈＫＩＲ細胞質ドメイン；膜貫通ドメイン、例えばＫＩＲ膜貫通ドメイン；及び阻害剤細胞質ドメイン、例えばＩＴＩＭドメイン、例えばｉｎｈＫＩＲ  ＩＴＩＭドメインを含む阻害分子をコードする核酸配列を含む。一実施形態において、阻害分子は、天然に存在するｉｎｈＫＩＲであるか、又は天然に存在するｉｎｈＫＩＲと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％の相同性を共有するか、又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５若しくは２０残基を超えて異ならない配列である。
【０６３７】
一実施形態において、阻害分子をコードする核酸配列は、ＳＬＡＭファミリー細胞質ドメイン；膜貫通ドメイン、例えばＳＬＡＭファミリー膜貫通ドメイン；及び阻害剤細胞質ドメイン、例えばＳＬＡＭファミリードメイン、例えばＳＬＡＭファミリーＩＴＩＭドメインを含む。一実施形態において、阻害分子は、天然に存在するＳＬＡＭファミリーメンバーであるか、又は天然に存在するＳＬＡＭファミリーメンバーと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９％の相同性を共有するか、又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５若しくは２０残基を超えて異ならない配列である。
【０６３８】
一実施形態において、ベクターは、インビトロ転写ベクター、例えば本明細書に記載の核酸分子のＲＮＡを転写するベクターである。一実施形態において、ベクターの核酸配列は、ポリ（Ａ）テール、例えばポリＡテールを更に含む。一実施形態において、ベクターの核酸配列は、３’ＵＴＲ、例えば本明細書に記載される、例えばヒトβ−グロブリンに由来する３’ＵＴＲの少なくとも１つのリピートを含む３’ＵＴＲを更に含む。一実施形態において、ベクターの核酸配列は、プロモーター、例えばＴ２Ａプロモーターを更に含む。
【０６３９】
プロモーター
一実施形態において、ベクターは、プロモーターを更に含む。一部の実施形態において、プロモーターは、ＥＦ−１プロモーター、ＣＭＶ  ＩＥ遺伝子プロモーター、ＥＦ−１αプロモーター、ユビキチンＣプロモーター又はホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターから選択される。一実施形態において、プロモーターは、ＥＦ−１プロモーターである。一実施形態において、ＥＦ−１プロモーターは、配列番号１の配列を含む。
【０６４０】
宿主細胞
上記のとおり、一部の態様において、本発明は、本明細書に記載の核酸分子、キメラポリペプチド分子又はベクターを含む細胞、例えば免疫エフェクター細胞（例えば、細胞の集団、例えば免疫エフェクター細胞の集団）に関する。
【０６４１】
本発明の特定の態様において、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離など、当業者に知られるあらゆる技術を使用して、対象から採取した血液の単位から得ることができる。ある好ましい態様において、個体の循環血液からの細胞をアフェレーシスにより得る。アフェレーシス産物は、典型的にはＴ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球を含むリンパ球、赤血球及び血小板を含む。一態様において、アフェレーシスにより採取した細胞は、血漿画分を除去するために洗浄し、任意選択により細胞を続くプロセシング過程のために適切な緩衝液又は媒体に入れる。本発明の一態様において、細胞をリン酸緩衝化食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。別の実施形態において、洗浄溶液は、カルシウムを欠き、マグネシウムを欠き得るか、又は全てではないにしても多くの二価カチオンを欠き得る。
【０６４２】
カルシウム非存在下の初期活性化過程は、活性化の増強に至り得る。当業者に容易に認識されるように、洗浄工程は、製造業者の指示に従う半自動化「フロースルー」遠心分離（例えば、Ｃｏｂｅ  ２９９１  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ又はＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓａｖｅｒ  ５）により達成され得る。洗浄後、細胞を、例えば無Ｃａ、無ＭｇＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ又は他の緩衝剤を含む又は含まない食塩水溶液など、多様な生体適合性緩衝液に再懸濁し得る。代わりに、アフェレーシス試料の望ましくない要素を除去し、細胞を培養培地に直接再懸濁し得る。
【０６４３】
本願の方法は、５％以下、例えば２％の、ヒトＡＢ血清を含む培養培地条件を利用でき、既知培養培地条件及び組成物、例えばＳｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｎｏｖｅｌ  Ｘｅｎｏ−ｆｒｅｅ  ＣＴＳ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｅｒｕｍ  Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ”Ｃｌｉｎｉｃａｌ＆Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１５）４，ｅ３１；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｔｉ．２０１４．３１に記載のものを用い得ることが認識される。培養培地は、本明細書に記載の１つ以上、例えば１つのＬＳＤ１阻害剤を更に含み得る。
【０６４４】
一態様において、Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、例えばＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離又は向流遠心溶出法により単球を枯渇させることにより、末梢血リンパ球から単離する。単離したら、細胞を例えばエクスビボで本明細書に記載のＬＳＤ１阻害剤と接触させ得る。
【０６４５】
本明細書に記載の方法は、例えば、本明細書に記載される、例えば陰性選択技術を使用する、例えばＴ制御性細胞枯渇集団、ＣＤ２５＋枯渇細胞である、免疫エフェクター細胞の特異的亜集団、例えばＴ細胞の選択を含み得る。好ましくは、Ｔ制御性枯渇細胞集団は、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％未満のＣＤ２５＋細胞を含む。選択前又は後のいずれかに細胞を例えばエクスビボで本明細書に記載のＬＳＤ１阻害剤と接触させ得る。
【０６４６】
一実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンド、ＩＬ−２を使用して集団から除去する。一実施形態において、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンドを基質、例えばビーズにコンジュゲートするか又は他に基質、例えばビーズ上に被覆させる。一実施形態において、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメントを本明細書に記載の基質にコンジュゲートさせる。
【０６４７】
一実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ（商標）からのＣＤ２５枯渇剤を使用して集団から除去する。一実施形態において、細胞対ＣＤ２５枯渇剤の比は、１ｅ７細胞対２０μＬ、又は１ｅ７細胞対１５μＬ、又は１ｅ７細胞対１０μＬ、又は１ｅ７細胞対５μＬ、又は１ｅ７細胞対２．５μＬ、又は１ｅ７細胞対１．２５μＬである。一実施形態において、例えばＴ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋枯渇のために５億細胞／ｍｌを使用する。更なる態様において、６億、７億、８億又は９億細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。
【０６４８】
一実施形態において、枯渇すべき免疫エフェクター細胞集団は、約６×１０９ＣＤ２５＋Ｔ細胞を含む。他の態様において、枯渇すべき免疫エフェクター細胞集団は、約１×１０９〜１×１０１０（及びその間の任意の整数値）ＣＤ２５＋Ｔ細胞を含む。一実施形態において、得られたＴ制御性枯渇細胞集団は、２×１０９Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞又はそれ未満（例えば、１×１０９、５×１０８、１×１０８、５×１０７、１×１０７又はそれ未満のＣＤ２５＋細胞）を含む。
【０６４９】
一実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞を、例えばチュービング１６２−０１など、枯渇チュービングセットと共にＣｌｉｎｉＭＡＣ系を使用して集団から除去する。一実施形態において、ＣｌｉｎｉＭＡＣ系を例えばＤＥＰＬＥＴＩＯＮ２．１などの枯渇設定において動かす。
【０６５０】
特定の理論に拘束されることを望まないが、アフェレーシス前又はＣＡＲ発現細胞産物の製造中の対象における免疫細胞の負のレギュレーターのレベルの減少（例えば、望まない免疫細胞、例えばＴＲＥＧ細胞の数の減少）は、対象の再発リスクを減らし得る。例えば、ＴＲＥＧ細胞を枯渇する方法は、当技術分野で知られている。例えば、ＴＲＥＧ細胞を減少させる方法は、シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体（抗ＧＩＴＲ本明細書に記載の抗体）、ＣＤ２５枯渇及びそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。これらの方法は、免疫エフェクター細胞の集団を本明細書に記載のＬＳＤ１阻害剤と接触させることを含む製造方法と組み合わされ得る。
【０６５１】
一部の実施形態において、製造方法は、ＣＡＲ発現細胞製造前のＴＲＥＧ細胞の数の減少（例えば、枯渇）を含む。例えば、製造方法は、例えば、試料、例えばアフェレーシス試料を抗ＧＩＴＲ抗体及び／又は抗ＣＤ２５抗体（又はそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンド）と接触させ、ＣＡＲ発現細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）産物の製造前にＴＲＥＧ細胞を枯渇させることを含む。これらの方法は、免疫エフェクター細胞の集団を本明細書に記載のＬＳＤ１阻害剤と接触させることを含む製造方法と組み合わされ得る。
【０６５２】
一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞採取前にＴＲＥＧ細胞を減らす１つ以上の治療で前処置されており、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再び必要とするリスクを軽減する。一実施形態において、ＴＲＥＧ細胞を低減する方法は、対象へのシクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇又はこれらの組み合わせの１つ以上の投与を含むが、これらに限定されない。シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇又はこれらの組み合わせの１つ以上の投与は、ＣＡＲ発現細胞産物注入前、注入中又は注入後に行われ得る。これらの方法は、免疫エフェクター細胞の集団を本明細書に記載のＬＳＤ１阻害剤と接触させることを含む製造方法と組み合わされ得る。
【０６５３】
一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞の採取前にシクロホスファミドで前処置され、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再発するリスクを軽減する。一実施形態において、対象は、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞の採取前に抗ＧＩＴＲ抗体で前処置され、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置を再発するリスクを軽減する。これらの方法は、免疫エフェクター細胞の集団を本明細書に記載のＬＳＤ１阻害剤と接触させることを含む製造方法と組み合わされ得る。
【０６５４】
一実施形態において、除去すべき細胞集団は、制御性Ｔ細胞又は腫瘍細胞ではなく、ＣＡＲＴ細胞の増殖及び／又は機能に他に負に影響する細胞、例えばＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ１５又は潜在的免疫抑制性細胞により発現される他のマーカーを発現する細胞である。一実施形態において、このような細胞は、制御性Ｔ細胞及び／又は腫瘍細胞と同時に、又は前記枯渇後に、又は別の順番で除去することが意図される。
【０６５５】
本明細書に記載の方法は、２つ以上の選択工程、例えば２つ以上の枯渇工程を含み得る。陰性選択によるＴ細胞集団の富化は、例えば、陰性に選択される細胞に独特な表面マーカーを指向する抗体の組み合わせにより達成できる。１つの方法は、陰性に選択される細胞に存在する細胞表面マーカーを指向するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫粘着又はフローサイトメトリーによる細胞選別及び／又は選択である。例えば、陰性選択によりＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含み得る。これらの工程は、免疫エフェクター細胞の集団を本明細書に記載のＬＳＤ１阻害剤と接触させることを含む製造方法と組み合わされ得る。
【０６５６】
本明細書に記載の方法は、腫瘍抗原、例えばＣＤ２５を含まない腫瘍抗原、例えばＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ２０、ＣＤ１４又はＣＤ１１ｂを発現する細胞集団からの除去を更に含み、それによりＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲの発現に適するＴ制御性枯渇、例えばＣＤ２５＋枯渇及び腫瘍抗原枯渇細胞集団を提供する。一実施形態において、腫瘍抗原発現細胞は、Ｔ制御性、例えばＣＤ２５＋細胞と同時に除去される。例えば、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗腫瘍抗原抗体又はそのフラグメントを同じ基質、例えばビーズに結合でき、これを細胞の除去に使用でき、又は抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗腫瘍抗原抗体又はそのフラグメントを別のビーズに結合でき、その混合物を細胞の除去に使用できる。他の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞の除去及び腫瘍抗原発現細胞の除去は、逐次的であり、例えばいずれの順番でも生じ得る。これらの工程は、免疫エフェクター細胞の集団を本明細書に記載のＬＳＤ１阻害剤と接触させることを含む製造方法と組み合わされ得る。
【０６５７】
チェックポイント阻害剤、例えば本明細書に記載のチェックポイント阻害剤を発現する細胞、例えばＰＤ１＋細胞、ＬＡＧ３＋細胞及びＴＩＭ３＋細胞の１つ以上の集団からの除去を含み、それによりＴ制御性枯渇、例えばＣＤ２５＋枯渇細胞及びチェックポイント阻害剤枯渇細胞、例えばＰＤ１＋、ＬＡＧ３＋及び／又はＴＩＭ３＋枯渇細胞集団を提供する方法も提供される。例示的なチェックポイント阻害剤は、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−１、ＣＤ１６０、Ｐ１Ｈ、２Ｂ４、ＰＤ１、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＣＴＬＡ−４、ＢＴＬＡ及びＬＡＩＲ１を含む。一実施形態において、チェックポイント阻害剤発現細胞は、Ｔ制御性、例えばＣＤ２５＋細胞と同時に除去される。例えば、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗チェックポイント阻害剤抗体又はそのフラグメントを同じビーズに結合でき、それを細胞の除去に使用でき、又は抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント及び抗チェックポイント阻害剤抗体又はそのフラグメントを別のビーズに結合でき、その混合物を細胞の除去に使用できる。他の実施形態において、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋細胞の除去及びチェックポイント阻害剤発現細胞の除去は、逐次的であり、例えばいずれ順序の順番でも生じ得る。これらの工程は、免疫エフェクター細胞の集団を本明細書に記載のＬＳＤ１阻害剤と接触させることを含む製造方法と組み合わされ得る。
【０６５８】
本明細書に記載の方法は、陽性選択工程を含み得る。例えば、Ｔ細胞を、所望のＴ細胞の陽性選択に十分な時間にわたり、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（例えば、３×２８）コンジュゲートビーズとインキュベーションすることにより単離することができる。一実施形態において、時間は、約３０分である。更なる実施形態において、時間は、３０分〜３６時間又はそれより長い範囲及びその間の任意の整数値である。更なる実施形態において、時間は、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間又は６時間である。更に別の実施形態において、時間は、１０〜２４時間、例えば２４時間である。腫瘍組織又は免疫不全状態個体から腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）を単離するような、他の細胞型と比較してＴ細胞が少ないあらゆる状況において、Ｔ細胞を単離するために長いインキュベーション時間が使用され得る。更に、長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕獲効率を高め得る。そのため、単にＴ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと結合させる時間を短くするか若しくは長くし、及び／又はビーズ対Ｔ細胞比を増加若しくは減少させる（更に本明細書に記載のとおり）ことにより、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始時のために若しくはそれに対して又は過程中の他の時点で優先的に選択され得る。更に、ビーズ又は他の表面上の抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８抗体比を増加又は減少させることにより、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始時のために若しくはそれに対して又は他の所望の時点で優先的に選択され得る。これらの工程は、免疫エフェクター細胞の集団を本明細書に記載のＬＳＤ１阻害剤と接触させることを含む製造方法と組み合わされ得る。
【０６５９】
一実施形態において、Ｔ細胞ＩＦＮ−γ、ＴＮＦα、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、グランザイムＢ及びパーフォリン又は他の適切な分子、例えば他のサイトカインの１つ以上を発現するＴ細胞集団を選択できる。細胞発現についてスクリーニングする方法は、例えば、国際公開第２０１３／１２６７１２号パンフレットに記載する方法により決定できる。
【０６６０】
陽性又は陰性選択により所望の細胞集団を単離するために、細胞及び表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度は、変わり得る。一態様において、細胞とビーズとの最大接触を確実にするために、ビーズと細胞とを一緒に混合する体積を有意に低下させる（例えば、細胞濃度を増加させる）ことが望まれ得る。例えば、一態様において、１００億細胞／ｍｌ、９０億細胞／ｍｌ、８０億細胞／ｍｌ、７０億細胞／ｍｌ、６０億細胞／ｍｌ又は５０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。一態様において、１０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、細胞の７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万又は１億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、１億２５００万又は１億５０００万細胞／ｍｌの濃度を使用できる。
【０６６１】
高濃度を使用して細胞収率、細胞活性化及び細胞増殖を増加できる。更に、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞の、又は多くの腫瘍細胞が存在する試料（例えば、白血病性血液、腫瘍組織など）からのより効率的な捕獲を可能にする。このような細胞集団は、治療的価値を有し得、取得することが望ましい。例えば、高濃度細胞の使用は、通常ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
【０６６２】
関連する態様において、低濃度の細胞を使用することが望ましいことがある。Ｔ細胞と表面（例えば、ビーズなどの粒子）との混合物を有意に希釈することにより、粒子と細胞との相互作用が最小化される。これは、粒子に結合する所望の抗原を高量で発現する細胞で選択する。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、高レベルのＣＤ２８を発現し、希釈濃度でＣＤ８＋Ｔ細胞より効率的に捕獲される。一態様において、使用する細胞の濃度は５×１０６／ｍｌである。他の態様において、使用する濃度は約１×１０５／ｍｌ〜１×１０６／ｍｌ及びその間の任意の整数値であり得る。
【０６６３】
他の態様において、細胞を、種々の長さの時間、種々の速度で２〜１０℃又は室温においてローテータでインキュベートし得る。
【０６６４】
刺激のためのＴ細胞はまた、洗浄工程後凍結させ得る。理論に拘束されることを望まないが、凍結と続く解凍工程は、細胞集団から顆粒球及びある程度単球を除去することにより、より均一な産物を提供する。血漿及び血小板を除去する洗浄工程後、細胞を凍結溶液に懸濁し得る。多くの凍結溶液及びパラメータが当技術分野で知られ、これに関連して有用であるが、ある方法は、２０％ＤＭＳＯ及び８％ヒト血清アルブミンを含むＰＢＳ又は１０％Ｄｅｘｔｒａｎ  ４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ＤＭＳＯ又は３１．２５％Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ−Ａ、３１．２５％デキストロース５％、０．４５％ＮａＣｌ、１０％Ｄｅｘｔｒａｎ  ４０及び５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミン及び７．５％ＤＭＳＯを含む培養培地、又は例えばＨｅｓｐａｎ及びＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａを含む他の適当な細胞凍結媒体を使用し、次いで細胞を１°／分の速度で−８０℃に凍結し、気相の液体窒素貯蔵タンクに保存する。制御凍結の他の方法並びに直接−２０℃又は液体窒素の非制御凍結も使用できる。
【０６６５】
特定の態様において、凍結保存細胞を本明細書に記載のように解凍し、洗浄し、本発明の方法を使用する活性化前に室温で１時間休息させる。
【０６６６】
本発明に関連して、本明細書に記載の増殖細胞が必要となり得る時点の前の期間における対象からの血液試料又はアフェレーシス産物の収集も企図されている。従って、増殖する細胞の供給源を必要な任意の時点で採取でき、Ｔ細胞などの所望の細胞を、本明細書に記載のものなどの免疫エフェクター細胞療法からの利益があるであろう任意の数の疾患及び状態について、免疫エフェクター細胞治療におけるその後の使用のために単離及び凍結できる。一態様において、血液試料又はアフェレーシスを一般に健常対象から採取する。一態様において、血液試料又はアフェレーシスを、一般に、疾患を発症するリスクにあるが、依然として疾患を発症していない健常対象から採取し、目的の細胞をその後の使用のために単離及び凍結する。一態様において、Ｔ細胞をその後の時点で増殖、凍結及び使用し得る。一態様において、試料を、本明細書に記載の特定の疾患の診断の直後に、しかし、何らかの処置前に患者から採取する。更なる態様において、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤、化学療法剤、放射線、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノレート及びＦＫ５０６などの免疫抑制剤、ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、シトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８及び照射などの抗体又は他の免疫除去剤による処置を含むが、これらに限定されない、任意の数の関連する処置モダリティの前に対象からの血液試料又はアフェレーシスから細胞を単離する。
【０６６７】
本発明の更なる態様において、Ｔ細胞を、対象に機能的Ｔ細胞を残す処置後、患者から直接得る。ある癌処置、特に免疫系を損傷させる薬物での処置後、処置の直後、患者が、通常、その処置から回復するまでの間、得られるＴ細胞の品質がエクスビボで増殖する能力について最適であり得るか又は改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載の方法を使用するエクスビボ操作後、これらの細胞は、生着及びインビボ増殖増強について好ましい状態であり得る。そのため、本発明に関連して、Ｔ細胞、樹状細胞又は造血細胞系統の他の細胞を含む血液細胞をこの回復期に採取することが企図される。更に、一態様において、可動化（例えば、ＧＭ−ＣＳＦでの可動化）及びコンディショニングレジメンを使用して、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生及び／又は増殖に好都合である条件を、特に治療後の定められた時間枠中に対象に形成できる。細胞型の例は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞及び免疫系の他の細胞を含む。
【０６６８】
一実施形態において、免疫エフェクターＣＡＲ分子を発現する細胞、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子は、ＬＳＤ１阻害剤を受けた対象から得る。一実施形態において、ＣＡＲを発現するように操作される免疫エフェクター細胞集団、例えばＴ細胞を、対象又は対象から採取したＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞のレベル又はＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の比が少なくとも一過性に増加するように、ＬＳＤ１阻害剤の投薬から十分な時間後又は十分な用量の後に採取する。
【０６６９】
他の実施形態において、ＣＡＲを発現するように操作されているか又は操作される免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞集団を、ＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の数を増やすか又はＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の比を増やす量のＬＳＤ１阻害剤と接触させることにより、エクスビボで処理できる。
【０６７０】
一実施形態において、Ｔ細胞集団は、ジアシルグリセロールキナーゼ（ＤＧＫ）欠損である。ＤＧＫ欠損細胞は、ＤＧＫ  ＲＮＡ又はタンパク質を発現しないか、又はＤＧＫ活性が低下した又は阻害された細胞である。ＤＧＫ欠損細胞は、ＤＧＫ発現を低減又は阻止するための遺伝的方法、例えばＲＮＡ干渉剤、例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡの投与により産生できる。代わりに、ＤＧＫ欠損細胞は、本明細書に記載のＤＧＫ阻害剤での処置により産生できる。
【０６７１】
一実施形態において、Ｔ細胞集団は、イカロス欠損である。イカロス欠損細胞は、イカロスＲＮＡ又はタンパク質を発現しないか、又はイカロス活性が低下した又は阻害された細胞を含み、イカロス欠損細胞は、イカロス発現を低減又は阻止するための遺伝的方法、例えばＲＮＡ干渉剤、例えばｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡの投与により産生できる。代わりに、イカロス欠損細胞は、イカロス阻害剤、例えばレナリドマイドでの処置により産生できる。
【０６７２】
実施形態において、Ｔ細胞集団は、ＤＧＫ欠損及びイカロス欠損であり、例えばＤＧＫ及びイカロスを発現せず、又はＤＧＫ及びイカロス活性が低下又は阻害されている。このようなＤＧＫ及びイカロス欠損細胞は、本明細書に記載の方法のいずれかにより産生できる。
【０６７３】
一実施形態において、ＮＫ細胞を対象から得る。別の実施形態において、ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞株、例えばＮＫ−９２細胞株（Ｃｏｎｋｗｅｓｔ）である。
【０６７４】
追加の発現される薬剤
別の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞は、別の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を更に発現できる。例えば、一実施形態において、薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤であり得る。阻害分子の例は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４及びＴＧＦβ、例えば本明細書に記載のものを含む。一実施形態において、阻害性分子を阻害する薬剤は、細胞に正のシグナルを提供する第２のポリペプチド、例えば本明細書に記載する細胞内シグナル伝達ドメインと結合した第１のポリペプチド、例えば阻害性分子を含む。一実施形態において、薬剤は、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４又はＴＧＦβ又はこれらのいずれかのフラグメントなどの阻害分子の第１のポリペプチド及び本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインである第２のポリペプチド（例えば、共刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載される、例えば４１ＢＢ、ＣＤ２７又はＣＤ２８）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む）である第２のポリペプチドを含む。一実施形態において、薬剤は、ＰＤ−１又はそのフラグメントの第１のポリペプチド並びに本明細書に記載する細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載するＣＤ２８、ＣＤ２７、ＯＸ４０又は４−ＩＢＢシグナル伝達ドメイン及び／又は本明細書に記載するＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）の第２のポリペプチドを含む。
【０６７５】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞は、第２のＣＡＲ、例えば同じ標的（例えば、上記した標的）又は異なる標的に対する、例えば第２のＣＡＲの異なる抗原結合ドメインを更に含み得る。一実施形態において、第２のＣＡＲは、第１のＣＡＲの標的と同じ癌細胞型で発現される標的に対する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞は、第１の抗原を標的とし、共刺激シグナル伝達ドメインを有するが、一次シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＡＲ及び第２の異なる抗原を標的とし、一次シグナル伝達ドメインを有するが、共刺激シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。
【０６７６】
理論に拘束されることを望まないが、第１のＣＡＲへの共刺激シグナル伝達ドメイン、例えば４−１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ２７又はＯＸ−４０及び一次シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζの第２のＣＡＲへの配置は、両標的が発現される細胞に対してＣＡＲ活性を制限する。一実施形態において、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞は、例えば、上記の標的を標的とする抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激ドメインを含む第１のＣＡＲ並びに第１のＣＡＲが標的とする抗原以外の抗原（例えば、第１の標的と同一の癌細胞型に発現される抗原）を標的とし、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。別の実施形態において、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞は、例えば、上記の標的を標的とする抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＡＲ並びに第１のＣＡＲが標的とする抗原以外の抗原（例えば、第１の標的と同一の癌細胞型に発現される抗原）を標的とし、抗原に対する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。
【０６７７】
一実施形態において、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞は、本明細書に記載のＣＡＲ、例えば上記の標的に対するＣＡＲ及び阻害性ＣＡＲを含む。一実施形態において、阻害性ＣＡＲは、正常細胞、例えばまた標的を発現する正常細胞で見られるが、癌細胞で見られない抗原と結合する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、阻害性ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び阻害分子の細胞内ドメインを含む。例えば、阻害性ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４又はＴＧＦβの細胞内ドメインであり得る。
【０６７８】
一実施形態において、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、本明細書に記載の腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメインを含む第１のＣＡＲ及びＰＤ１細胞外ドメイン又はそのフラグメントを含む第２のＣＡＲを含む。
【０６７９】
一実施形態において、細胞は、上記の阻害分子を更に含む。
【０６８０】
一実施形態において、細胞内の第２のＣＡＲは阻害性ＣＡＲであり、阻害性ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び阻害分子の細胞内ドメインを含む。阻害分子は、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦβ、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及びＣＥＡＣＡＭ−５の１つ以上から選択され得る。一実施形態において、第２のＣＡＲ分子は、ＰＤ１の細胞外ドメイン又はそのフラグメントを含む。
【０６８１】
一実施形態において、細胞内の第２のＣＡＲ分子は、一次シグナル伝達ドメイン及び／又は細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを更に含む。
【０６８２】
他の実施形態において、細胞における細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの機能的ドメインを含む一次シグナル伝達ドメイン及び４−１ＢＢの機能的ドメインを含む共刺激シグナル伝達ドメインを含む。
【０６８３】
一実施形態において、細胞内の第２のＣＡＲ分子は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。
【０６８４】
一実施形態において、第１のＣＡＲ分子の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、第２のＣＡＲ分子の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含まない。例えば、第１のＣＡＲ分子の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、第２のＣＡＲ分子の抗原結合ドメインは、ラクダ科動物のＶＨＨドメインを含む。
【０６８５】
スプリットＣＡＲ
一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、スプリットＣＡＲを使用する。スプリットＣＡＲアプローチは、国際公開第２０１４／０５５４４２号パンフレット及び国際公開第２０１４／０５５６５７号パンフレットにより詳細に記載されている。簡潔には、スプリットＣＡＲ系は、第１の抗原結合ドメイン及び共刺激ドメイン（例えば、４１ＢＢ）を有する第１のＣＡＲを発現する細胞を含み、細胞は、第２の抗原結合ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ）を有する第２のＣＡＲも発現する。細胞が第１の抗原に遭遇したとき、共刺激ドメインが活性化され、細胞が増殖する。細胞が第２の抗原に遭遇したとき、細胞内シグナル伝達ドメインが活性化され、細胞死滅活性が開始される。そのため、ＣＡＲ発現細胞は、両方の抗原の存在下でのみ完全活性化される。
【０６８６】
複数ＣＡＲ発現
一態様において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞は、第２のＣＡＲ、例えば同じ標的又は異なる標的（例えば、本明細書に記載の癌関連抗原以外の標的又は本明細書に記載の異なる癌関連抗原）に対する、例えば第２のＣＡＲの異なる抗原結合ドメインを更に含み得る。一実施形態において、第２のＣＡＲは、癌関連抗原と同じ癌細胞型を発現する標的に対する抗原結合ドメインを含む。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、第１の抗原を標的とし、共刺激シグナル伝達ドメインを有するが、一次シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＡＲ、及び第２の異なる抗原を標的とし、一次シグナル伝達ドメインを有するが、共刺激シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。理論に拘束されることを望まないが、第１のＣＡＲへの共刺激シグナル伝達ドメイン、例えば４−１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ２７又はＯＸ−４０及び一次シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ζの第２のＣＡＲへの配置は、両標的が発現される細胞に対してＣＡＲ活性を制限する。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載の標的抗原に結合する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激ドメインを含む第１の癌関連抗原ＣＡＲ並びに異なる標的抗原（例えば、第１の標的抗原と同一の癌細胞型に発現される抗原）を標的とし、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。別の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載の標的抗原に結合する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む第１のＣＡＲ並びに第１の標的抗原以外の抗原（例えば、第１の標的抗原と同一の癌細胞型に発現される抗原）を標的とし、抗原に対する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共刺激シグナル伝達ドメインを含む第２のＣＡＲを含む。
【０６８７】
一部の実施形態において、本発明は、第１及び第２のＣＡＲを含み、前記第１のＣＡＲ、前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、可変軽ドメイン及び可変重ドメインを含まない。一部の実施形態において、前記第１のＣＡＲ、前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、他方は、ｓｃＦｖではない。一部の実施形態において、前記第１のＣＡＲ、前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、単一ＶＨドメイン、例えばラクダ科動物、サメ若しくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン又はヒト若しくはマウス配列由来の単一ＶＨドメインを含む。一部の実施形態において、前記第１のＣＡＲ、前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ナノボディを含む。一部の実施形態において、前記第１のＣＡＲ、前記第２のＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、ラクダ科動物のＶＨＨドメインを含む。
【０６８８】
同種細胞
本明細書に記載の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、同種免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞であり得る。例えば、細胞は、同種Ｔ細胞、例えば機能的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び／又はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）、例えばＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩの発現を欠く同種Ｔ細胞である。
【０６８９】
機能的ＴＣＲを欠くＴ細胞は、例えば、その表面に何ら機能的ＴＣＲを発現しないように操作され、機能的ＴＣＲを含む１つ以上のサブユニットを発現しないように操作され、又はその表面に微少の機能的ＴＣＲを産生するように操作され得る。代わりに、Ｔ細胞は、例えば、ＴＣＲのサブユニットの１つ以上の変異した又は切断型の発現により、実質的に障害されたＴＣＲを発現し得る。用語「実質的に障害されたＴＣＲ」は、このＴＣＲが宿主で有害な免疫反応を惹起しないことを意味する。
【０６９０】
本明細書に記載のＴ細胞は、例えば、その表面に機能的ＨＬＡを発現しないように操作され得る。例えば、本明細書に記載のＴ細胞は、細胞表面発現ＨＬＡ、例えばＨＬＡクラス１及び／又はＨＬＡクラスＩＩが下方制御されるように操作され得る。
【０６９１】
一部の実施形態において、Ｔ細胞は、機能的ＴＣＲ及び機能的ＨＬＡ、例えばＨＬＡクラスＩ及び／又はＨＬＡクラスＩＩを欠き得る。
【０６９２】
機能的ＴＣＲ及び／又はＨＬＡの発現を欠く修飾Ｔ細胞は、ＴＣＲ又はＨＬＡの１つ以上のサブユニットのノックアウト又はノックダウンを含む任意の適当な手段により得ることができる。例えば、Ｔ細胞は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、群生性等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用したＴＣＲ及び／又はＨＬＡのノックダウンを含み得る。
【０６９３】
一部の実施形態において、同種細胞は、例えば、本明細書に記載の方法のいずれかにより、阻害性分子を発現しないか又は低レベルで発現する細胞であり得る。例えば、細胞は、例えば、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を低下できる、阻害分子を発現しないか又は阻害分子を低レベルで発現する細胞であり得る。阻害分子の例は、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４及びＴＧＦβを含む。ＤＮＡ、ＲＮＡ又はタンパク質レベルでの阻害による阻害分子の阻害は、ＣＡＲ発現細胞性能を最適化できる。実施形態において、例えば本明細書に記載の阻害性核酸、例えば阻害性核酸、例えばｄｓＲＮＡ、例えばｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡ、群生性等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）、転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を使用できる。
【０６９４】
ＴＣＲ又はＨＬＡを阻害するためのｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡ
一部の実施形態において、ＴＣＲ発現及び／又はＨＬＡ発現を、Ｔ細胞におけるＴＣＲ及び／又はＨＬＡをコードする核酸を標的とするｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡを使用して阻害できる。
【０６９５】
ＴＣＲ又はＨＬＡを阻害するためのＣＲＩＳＰＲ系
本明細書で使用される「ＴＣＲ及び／又はＨＬＡに対するＣＲＩＳＰＲ系」又は「ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害するＣＲＩＳＰＲ」は、ＴＣＲ及び／又はＨＬＡ又はβ−２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）及びＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼ（例えば、Ｃａｓ、例えばＣａｓ９）の成分に対する遺伝子内の標的配列と相補性の標的ドメインを含む、１つ以上のガイドＲＮＡ分子を含むＣＲＩＳＰＲ系（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系）を指す。
【０６９６】
当技術分野で知られる技術、例えば米国特許出願公開第２０１４００６８７９７号明細書及びＣｏｎｇ（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３９：８１９−８２３に記載のものを使用して、ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害する人工ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を産生できる。例えば、Ｔｓａｉ（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３２：６  ５６９−５７６、米国特許第８，８７１，４４５号明細書；同第８，８６５，４０６号明細書；同第８，７９５，９６５号明細書；同第８，７７１，９４５号明細書；及び同第８，６９７，３５９号明細書に記載されるもののような、ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害する当技術分野で知られる他の人工ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系も産生できる。
【０６９７】
ＴＣＲ及び／又はＨＬＡを阻害するためのＴＡＬＥＮ
「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲに対するＴＡＬＥＮゲノム編集系」又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するためのＴＡＬＥＮ」は、ＨＬＡ及び／又はＴＣＲ遺伝子の編集に使用できる人工ヌクレアーゼである転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼを指す。
【０６９８】
ＴＡＬＥＮは、ＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合ドメインとＤＮＡ開裂ドメインを融合することにより人工的に産生される。転写アクティベータ様効果（ＴＡＬＥ）は、ＨＬＡ又はＴＣＲ遺伝子の部分を含む、任意の所望のＤＮＡ配列に結合するように操作できる。操作されたＴＡＬＥとＤＮＡ開裂ドメインを合わせることにより、ＨＬＡ又はＴＣＲ配列を含む、任意の所望のＤＮＡ配列に特異的な制限酵素を産生できる。次いで、これらを細胞に導入でき、そこで、それらは、ゲノム編集のために使用され得る。Ｂｏｃｈ（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１３５−６；及びＢｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２６：１５０９−１２；Ｍｏｓｃｏｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２６：３５０１。
【０６９９】
ＨＬＡ又はＴＣＲにおける配列に特異的なＴＡＬＥＮは、モジュラー要素を使用する多様なスキームを含む、当技術分野で知られる任意の方法を使用して構築できる。Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２９：１４９−５３；Ｇｅｉｂｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ６：ｅ１９５０９。
【０７００】
ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するための亜鉛フィンガーヌクレアーゼ
「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲに対するＺＦＮゲノム編集系」、又は「ＨＬＡ及び／又はＴＣＲを阻害するためのＺＦＮ」は、ＨＬＡ及び／又はＴＣＲ遺伝子の編集に使用できる人工ヌクレアーゼである亜鉛フィンガーヌクレアーゼを指す。
【０７０１】
ＨＬＡ及び／又はＴＣＲにおける配列に特異的なＺＦＮは、当技術分野で知られる任意の方法を使用して構築できる。例えば、Ｐｒｏｖａｓｉ（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．１８：８０７−８１５；Ｔｏｒｉｋａｉ（２０１３）Ｂｌｏｏｄ  １２２：１３４１−１３４９；Ｃａｔｈｏｍｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６：１２００−７；Ｇｕｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４００：９６；米国特許出願公開第２０１１／０１５８９５７号明細書；及び米国特許出願公開第２０１２／００６０２３０号明細書を参照されたい。
【０７０２】
テロメラーゼ発現
何らかの特定の理論に拘束されることを望まないが、一実施形態において、治療的Ｔ細胞は、Ｔ細胞における短縮されたテロメアのために患者における残留性が短く、従って、テロメラーゼ遺伝子を用いるトランスフェクションは、Ｔ細胞のテロメアを延長し、患者におけるＴ細胞の残留性を改善し得る。Ｃａｒｌ  Ｊｕｎｅ，“Ａｄｏｐｔｉｖｅ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１１７：１４６６−１４７６（２００７）を参照されたい。そのため、一実施形態において、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞、異所性にテロメラーゼサブユニット、例えばテロメラーゼの触媒的サブユニット、例えばＴＥＲＴ、例えばｈＴＥＲＴを発現する。いくつかの態様において、本開示は、細胞をテロメラーゼサブユニット、例えばテロメラーゼの触媒的サブユニット、例えばＴＥＲＴ、例えばｈＴＥＲＴをコードする核酸と接触させることを含む、ＣＡＲ発現細胞を産生する方法を提供する。細胞を、ＣＡＲをコードする構築物と接触させる前に、同時に又は後に核酸と接触させ得る。
【０７０３】
増殖及び活性化
Ｔ細胞などの免疫エフェクター細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号明細書；同第６，５３４，０５５号明細書；同第６，９０５，６８０号明細書；同第６，６９２，９６４号明細書；同第５，８５８，３５８号明細書；同第６，８８７，４６６号明細書；同第６，９０５，６８１号明細書；同第７，１４４，５７５号明細書；同第７，０６７，３１８号明細書；同第７，１７２，８６９号明細書；同第７，２３２，５６６号明細書；同第７，１７５，８４３号明細書；同第５，８８３，２２３号明細書；同第６，９０５，８７４号明細書；同第６，７９７，５１４号明細書；同第６，８６７，０４１号明細書；及び米国特許出願公開第２００６０１２１００５号明細書（これらは、それぞれ参照により全体として本明細書に組み込まれる）に記載する方法を使用して一般的に活性化及び増殖できる。
【０７０４】
一般に、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の集団を、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体結合シグナルを刺激する薬剤が結合したその表面とＴ細胞の表面上の共刺激性分子を刺激するリガンドを接触させることにより増殖できる。特に、Ｔ細胞集団は、表面上に固定された抗ＣＤ３抗体若しくはその抗原結合フラグメント又は抗ＣＤ２抗体との接触又はカルシウムイオノフォアと組み合わせたタンパク質キナーゼＣアクティベータ（例えば、ブリオスタチン）との接触により、本明細書に記載のように刺激し得る。Ｔ細胞表面上のアクセサリー分子の共刺激のために、アクセサリー分子と結合するリガンドを使用する。例えば、Ｔ細胞集団を、Ｔ細胞の増殖刺激に適する条件下で抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体と接触させ得る。ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体を使用できる。抗ＣＤ２８抗体の例は、９．３、Ｂ−Ｔ３、ＸＲ−ＣＤ２８を含み（Ｄｉａｃｌｏｎｅ，Ｂｅｓａｎｃｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）、当技術分野で一般に知られる他の方法のように使用できる（Ｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．３０（８）：３９７５−３９７７，１９９８；Ｈａａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（９）：１３１９１３２８，１９９９；Ｇａｒｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈ．２２７（１−２）：５３−６３，１９９９）。
【０７０５】
特定の態様において、Ｔ細胞のための一次刺激シグナル及び共刺激シグナルは、異なるプロトコルにより提供され得る。例えば、各シグナルを提供する薬剤は、溶液中でも表面と結合し得る。表面に結合しているとき、薬剤は、同じ表面（即ち「シス」形態）又は別の表面（即ち「トランス」形態）に結合し得る。代わりに、一方の薬剤が表面に結合し、他方が溶液にあり得る。一態様において、共刺激シグナルを提供する薬剤は、細胞表面に結合し、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、溶液中であるか又は表面と結合する。一態様において、両剤は、溶液中にあり得る。一態様において、薬剤は、不溶性形態であり、Ｆｃ受容体又は抗体又は薬剤と結合する他の結合剤を発現する細胞などの表面に架橋され得る。この点に関して、例えば本発明におけるＴ細胞の活性化及び増殖のために意図される人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）について、米国特許出願公開第２００４０１０１５１９号明細書及び同第２００６００３４８１０号明細書を参照されたい。
【０７０６】
一態様において、２剤は、ビーズに、同じビーズ、即ち「シス」又は別のビーズ、即ち「トランス」で固定化される。例として、一次活性化シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合フラグメントであり、共刺激シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ２８抗体又はその抗原結合フラグメントであり、両剤は、均等な分子量で同じビーズに共固定化される。一態様において、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖及びＴ細胞増殖のためのビーズに結合した１：１比の各抗体を使用する。本発明の一態様において、１：１比を使用して観察された増殖と比較して、Ｔ細胞増殖の増殖が観察されるように、ビーズに結合した抗ＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比を使用する。特定の一態様において、１：１比を使用して観察された増殖と比較して約１〜約３倍増加が観察される。一態様において、ビーズに結合したＣＤ３：ＣＤ２８抗体比は、１００：１〜１：１００及びその間の全ての整数値の範囲である。一態様において、抗ＣＤ３抗体より多くの抗ＣＤ２８抗体が粒子に結合しており、即ちＣＤ３：ＣＤ２８比が１未満である。一態様において、ビーズに結合した抗ＣＤ２８抗体対抗ＣＤ３抗体比は、２：１より大きい。特定の一態様において、ビーズに結合した１：１００  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：７５  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。更なる態様において、ビーズに結合した１：５０  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：３０  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。ある好ましい態様において、ビーズに結合した１：１０  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。一態様において、ビーズに結合した１：３  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。更なる態様において、ビーズに結合した３：１  ＣＤ３：ＣＤ２８比の抗体を使用する。
【０７０７】
１：５００〜５００：１及びその間の任意の整数値の粒子対細胞比をＴ細胞又は他の標的細胞の刺激のために使用し得る。当業者に容易に認識され得るように、粒子対細胞比は、標的細胞に対する粒子径に依存し得る。例えば、小さいサイズのビーズは、少ない細胞にのみ結合でき、大きいビーズは、多く結合できる。一態様において、細胞対粒子比は、１：１００〜１００：１及びその間の任意の整数値の範囲であり、更なる態様において１：９〜９：１及びその間の任意の整数値からなる比をＴ細胞刺激に使用し得る。Ｔ細胞刺激をもたらす抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８結合粒子対Ｔ細胞の比は、上記のように変わり得るが、しかしながら、ある好ましい値は、１：１００、１：５０、１：４０、１：３０、１：２０、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１及び１５：１を含み、１つの好ましい比は少なくとも１：１粒子対Ｔ細胞である。一態様において、１：１以下の粒子対細胞比を使用する。特定の一態様において、好ましい粒子：細胞比は、１：５である。更なる態様において、粒子対細胞比は、刺激の日により変わり得る。例えば、一態様において、粒子対細胞比は、１日目は１：１〜１０：１であり、更なる粒子をその後１０日目まで連日又は隔日で細胞に添加し、最終比１：１〜１：１０である（添加の比の細胞数に基づく）。特定の一態様において、粒子対細胞比は、刺激１日目に１：１であり、刺激３日目及び５日目に１：５に調節する。一態様において、粒子を、１日目の１：１及び刺激３日目及び５日目の１：５の最終比に基づき、連日又は隔日で添加する。一態様において、粒子対細胞比は、刺激１日目は２：１であり、刺激３日目及び５日目に１：１０に調節する。一態様において、粒子を、１日目の１：１及び３日目及び５日目の１：１０の最終比に基づき、連日又は隔日で添加する。当業者は、多様な他の比が本発明における使用に適し得ることを認識する。特に、比は、粒子径並びに細胞サイズ及びタイプによる。一態様において、使用するための最も典型的な比は、１日目の１：１、２：１及び３：１付近である。
【０７０８】
更なる態様において、Ｔ細胞などの細胞を薬剤被覆ビーズと組み合わせ、ビーズ及び細胞をその後分離し、次いで細胞を培養する。異なる態様において、培養前に薬剤被覆ビーズ及び細胞を分離するが、一緒に培養する。更なる態様において、ビーズ及び細胞を磁気力などの力の適用によりまず濃縮し、細胞表面マーカーのライゲーションを増加させ、それにより細胞刺激を誘導する。
【０７０９】
例として、細胞表面タンパク質を、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８が結合した常磁性ビーズ（３ｘ２８ビーズ）とＴ細胞を接触させることにより、ライゲートし得る。一態様において、細胞（例えば、１０４〜１０９Ｔ細胞）及びビーズ（例えば、ＤＹＮＡビーズＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔ常磁性ビーズを１：１比）を緩衝液、例えばＰＢＳ（カルシウム及びマグネシウムなどの二価カチオンなし）中で合わせる。再び、任意の細胞濃度を使用し得ることが当業者に容易に認識され得る。例えば、標的細胞は、試料中で極めて稀であり、試料の０．０１％のみが含まれるか又は試料全体（即ち１００％）が目的の標的細胞で構成され得る。従って、あらゆる細胞数が本発明に関連して一体となる。一態様において、細胞と粒子との最大接触を確実にするために、粒子及び細胞を混合する体積を有意に減少させる（即ち細胞の濃度を高める）ことが望ましいことがある。例えば、一態様において、約１００億細胞／ｍｌ、９０億／ｍｌ、８０億／ｍｌ、７０億／ｍｌ、６０億／ｍｌ、５０億／ｍｌ又は２０億細胞／ｍｌの濃度を使用する。一態様において、１億細胞／ｍｌ超を使用する。更なる態様において、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万又は５０００万細胞／ｍｌの細胞濃度を使用する。更なる態様において、細胞の７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万又は１億細胞／ｍｌの濃度を使用する。更なる態様において、１億２５００万又は１億５０００万細胞／ｍｌの濃度を使用できる。高濃度を使用して、細胞収率、細胞活性化及び細胞増殖を増加できる。更に、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現し得る細胞のより効率的な捕獲を可能にする。このような細胞集団は、治療的価値を有し得、及び特定の態様では得ることが望ましいであろう。例えば、高濃度細胞の使用は、通常、ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択を可能にする。
【０７１０】
一実施形態において、ＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸が形質導入された細胞を例えば本明細書に記載の方法により増殖する。一実施形態において、細胞を数時間（例えば、約２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１５時間、１８時間、２１時間）〜約１４日（例えば、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日又は１４日）の期間の培養により増殖する。一実施形態において、細胞は、４〜９日の期間増殖される。一実施形態において、細胞は、８日以下、例えば７日、６日又は５日の期間増殖される。一実施形態において、細胞は、５日の培養により増殖され、得られた細胞は、同じ培養条件において９日間培養で増殖された同じ細胞よりも強力である。効力は、例えば、多様なＴ細胞機能、例えば増殖、標的細胞死、サイトカイン産生、活性化、遊走又はそれらの組み合わせにより規定され得る。一実施形態において、細胞は、５日増殖され、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、抗原刺激による細胞倍加の少なくとも１倍、２倍、３倍又は４倍増加を示す。一実施形態において、細胞は、５日の培養により増殖され、得られた細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、高い炎症誘発性サイトカイン産生、例えばＩＦＮ−γ及び／又はＧＭ−ＣＳＦレベルを示す。一実施形態において、５日増殖された細胞は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、炎症誘発性サイトカイン産生、例えばＩＦＮ−γ及び／又はＧＭ−ＣＳＦレベルのｐｇ／ｍｌで少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍又はそれを超えて増加する。
【０７１１】
Ｔ細胞の培養期間が６０日以上となり得るような数サイクルの刺激も望まれ得る。Ｔ細胞培養に適する条件は、血清（例えば、胎児ウシ又はヒト血清）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インスリン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＧＦβ及びＴＮＦ−α又は当業者に知られる細胞増殖のための任意の他の添加剤を含む、増殖及び生存能に必要な因子を含み得る、適切な培地（例えば、最小必須培地又はＲＰＭＩ培地１６４０又はＸ−ｖｉｖｏ  １５（Ｌｏｎｚａ））を含む。細胞の増殖のための他の添加剤は、界面活性剤、プラスマネート、及びＮ−アセチル−システイン、及び２−メルカプトエタノールなどの還元剤を含むが、これらに限定されない。培地は、無血清又は適切な量の血清（又は血漿）が添加されたか、又は規定されたセットのホルモン及び／又はＴ細胞の増殖及び拡大に十分な量のサイトカインが添加されたＲＰＭＩ  １６４０、ＡＩＭ−Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、α−ＭＥＭ、Ｆ−１２、Ｘ−Ｖｉｖｏ１５及びＸ−Ｖｉｖｏ２０、Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒを含み得る。抗生物質、例えばペニシリン及びストレプトマイシンは、実験的培養においてのみ包含され、対象に注入すべき細胞の培養に含まれない。標的細胞は、増殖を支持するのに必要な条件、例えば適切な温度（例えば、３７℃）及び雰囲気（例えば、空気＋５％ＣＯ２）で維持される。
【０７１２】
一実施形態において、細胞は、例えば、フローサイトメトリーなどの本明細書に記載の方法により測定して、１４日の増殖期間にわたり、細胞の少なくとも２００倍（例えば、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍）増加をもたらす１つ以上のインターロイキンを含む適切な培地（例えば、本明細書に記載の培地）で増殖させる。一実施形態において、細胞は、ＩＬ−１５及び／又はＩＬ−７（例えば、ＩＬ−１５及びＩＬ−７）の存在下で増殖させる。
【０７１３】
実施形態において、本明細書に記載の方法、例えばＣＡＲ発現細胞製造方法は、Ｔ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を、例えば抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンド、ＩＬ−２を使用して細胞集団から除去することを含む。細胞集団からＴ制御性細胞、例えばＣＤ２５＋Ｔ細胞を除去する方法は、本明細書に記載される。実施形態において、方法、例えば製造方法は、細胞集団（例えば、ＣＤ２５＋Ｔ細胞などのＴ制御性細胞が枯渇されている細胞集団；又は抗ＣＤ２５抗体、そのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンドと前に接触された細胞集団）とＩＬ−１５及び／又はＩＬ−７との接触を更に含む。例えば、細胞集団（例えば、抗ＣＤ２５抗体、そのフラグメント又はＣＤ２５結合リガンドと先に接触されている）をＩＬ−１５及び／又はＩＬ−７の存在下で増殖させる。
【０７１４】
一部の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチド、インターロイキン−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒａ）ポリペプチド又はＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの組み合わせ、例えばｈｅｔＩＬ−１５を含む組成物とＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで接触させることを含む。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ＩＬ−１５ポリペプチドを含む組成物と接触させる。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ＩＬ−１５ポリペプチド及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両方の組み合わせを含む組成物と接触させる。実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞をＣＡＲ発現細胞の製造中に例えばエクスビボで、ｈｅｔＩＬ−１５を含む組成物と接触させる。
【０７１５】
一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ｈｅｔＩＬ−１５を含む組成物と接触させる。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ＩＬ−１５ポリペプチドを含む組成物と接触させる。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ増殖中、ＩＬ−１５ポリペプチド及びＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両方を含む組成物と接触させる。一実施形態において、接触は、リンパ球亜集団、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞の生存及び増殖をもたらす。
【０７１６】
種々の刺激時間に曝されているＴ細胞は、異なる特徴を示し得る。例えば、典型的な血液又はアフェレーシスした末梢血単核細胞産物は、細胞毒性又はサプレッサーＴ細胞集団（ＴＣ、ＣＤ８＋）より大きいヘルパーＴ細胞集団（ＴＨ、ＣＤ４＋）を有する。ＣＤ３及びＣＤ２８受容体での刺激によるＴ細胞のエクスビボ増殖は、約８〜９日目前まで主にＴＨ細胞からなるＴ細胞集団を産生するが、約８〜９日目後、Ｔ細胞集団は、徐々に大きくなるＴＣ細胞集団を含む。従って、処置の目的により、主にＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することは有利であり得る。同様に、ＴＣ細胞の抗原特異的サブセットが単離されている場合、このサブセットを大きい程度まで増殖させることが有利であり得る。
【０７１７】
更に、ＣＤ４及びＣＤ８マーカーに加えて、他の表現型マーカーは、細胞増殖過程の経過中、有意に、しかし、主に再現性よく変化する。そうして、このような再現性は、特定の目的のために活性化Ｔ細胞産物をもたらす能力を可能とする。
【０７１８】
本明細書に記載のＣＡＲが構築されると、適切なインビトロ及び動物モデルにおける抗原刺激後にＴ細胞を増殖させる能力、再刺激の非存在下でのＴ細胞増殖の持続及び抗癌活性など、しかし、これらに限定されない分子の活性を評価するために種々のアッセイが使用され得る。本発明のＣＡＲの効果を評価するためのアッセイは、以下に更に詳細に記載する。
【０７１９】
初代Ｔ細胞におけるＣＡＲ発現のウェスタンブロット分析を、単量体及び二量体の存在を検出するために使用できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。極めて簡潔には、ＣＡＲを発現するＴ細胞（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の１：１混合物）をインビトロで１０日超増殖させ、続いて溶解及び還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥを行う。全長ＴＣＲ−ζ細胞質ドメイン及び内因性ＴＣＲ−ζ鎖を含むＣＡＲを、ＴＣＲ−ζ鎖に対する抗体を使用するウェスタンブロッティングにより検出する。同じＴ細胞サブセットを、共有結合性二量体形成の評価を可能とするために非還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析に使用する。
【０７２０】
抗原刺激後のＣＡＲ＋Ｔ細胞のインビトロ増殖をフローサイトメトリーにより測定できる。例えば、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の混合物をαＣＤ３／αＣＤ２８  ａＡＰＣで刺激し、続いて分析すべきプロモーターの制御下において、ＧＦＰを発現するレンチウイルスベクターで形質導入する。代表的プロモーターは、ＣＭＶ  ＩＥ遺伝子、ＥＦ−１α、ユビキチンＣ又はホスホグリセロキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターを含む。ＧＦＰ蛍光を、ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞サブセットの培養６日目にフローサイトメトリーにより評価する。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。代わりに、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の混合物を０日目にαＣＤ３／αＣＤ２８被覆磁気ビーズで刺激し、２Ａリボソームスキッピング配列を使用するＣＡＲとｅＧＦＰを発現するバイシストロニックレンチウイルスベクターを使用して、１日目にＣＡＲを形質導入する。培養物を、本明細書に記載の癌関連抗原＋Ｋ５６２細胞（本明細書に記載の癌関連抗原を発現するＫ５６２）、野生型Ｋ５６２細胞（Ｋ５６２野生型）又は抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体存在下でｈＣＤ３２及び４−１ＢＢＬを発現するＫ５６２細胞（Ｋ５６２−ＢＢＬ−３／２８）でのいずれかで再刺激し、続いて洗浄する。外来性ＩＬ−２を１００ＩＵ／ｍｌにおいて隔日で培養物に添加する。ＧＦＰ＋Ｔ細胞を、ビーズベースの計数を使用するフローサイトメトリーにより数える。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。
【０７２１】
再刺激非存在下の持続するＣＡＲ＋Ｔ細胞増殖も測定できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。簡潔には、平均Ｔ細胞体積（ｆｌ）を、０日目のαＣＤ３／αＣＤ２８被覆磁気ビーズでの刺激及び１日目の記載するＣＡＲの形質導入後、培養８日目にＣｏｕｌｔｅｒ  Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ  ＩＩＩ粒子カウンター、Ｎｅｘｃｅｌｏｍ  Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒ  Ｖｉｓｉｏｎ又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｃｅｐｔｅｒを使用して測定する。
【０７２２】
動物モデルもＣＡＲＴ活性の測定に使用できる。例えば、免疫欠損マウスにおける初代ヒトプレＢ  ＡＬＬを処置するための、本明細書に記載のヒトの癌関連抗原に特異的なＣＡＲ＋Ｔ細胞を使用する異種移植モデルを使用できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。極めて簡潔には、ＡＬＬ確立後、マウスを処置群に無作為化する。異なる数の癌関連抗原特異的ＣＡＲ操作Ｔ細胞を、Ｂ−ＡＬＬを担持するＮＯＤ−ＳＣＩＤ−γ−／−マウスに１：１の比で共注射する。マウスからの脾臓ＤＮＡにおける癌関連抗原特異的ＣＡＲベクターのコピー数をＴ細胞注射後種々の時点で評価する。動物を１週間間隔で白血病について評価する。本明細書に記載の末梢血癌関連抗原ＣＤ１９＋Ｂ−ＡＬＬ芽細胞数を、本明細書に記載の癌関連抗原−ζ  ＣＡＲ＋Ｔ細胞又は偽形質導入Ｔ細胞を注射したマウスで測定する。ログ・ランク検定を使用して、群の生存曲線を比較する。更に、ＮＯＤ−ＳＣＩＤ−γ−／−マウスへのＴ細胞注射４週間後の絶対的末梢血ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞数も分析し得る。マウスに白血病性細胞を注射し、３週間後、ｅＧＦＰに連結したＣＡＲをコードするバイシストロニックレンチウイルスベクターによりＣＡＲを発現するように操作されたＴ細胞を注射する。Ｔ細胞を、注入ＧＦＰ＋Ｔ細胞の４５〜５０％に、注射前に偽形質導入細胞と混合することにより標準化し、フローサイトメトリーにより確認する。動物を１週間間隔で白血病について評価する。ＣＡＲ＋Ｔ細胞群の生存曲線を、ログ・ランク検定を使用して比較する。
【０７２３】
用量依存的ＣＡＲ処置応答を評価できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。例えば、２１日目にＣＡＲ  Ｔ細胞、等しい数の偽形質導入Ｔ細胞で処置した又はＴ細胞処置なしの、マウスにおいて白血病が確立した後３５〜７０日後に末梢血を得る。各群からのマウスを、本明細書に記載の末梢血癌関連抗原＋ＡＬＬ芽細胞数の決定のために無作為に採血し、３５日目及び４９日目に屠殺する。残りの動物を５７日目及び７０日目に評価する。
【０７２４】
細胞増殖及びサイトカイン産生の評価は、例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）に以前に記載されている。簡潔には、ＣＡＲ介在増殖の評価を、洗浄したＴ細胞と、本明細書に記載の癌関連抗原（Ｋ１９）又はＣＤ３２及びＣＤ１３７（ＫＴ３２−ＢＢＬ）を発現するＫ５６２細胞とを最終Ｔ細胞：Ｋ５６２比２：１で混合することによりマイクロタイタープレートにおいて実施する。Ｋ５６２細胞を使用前にガンマ線で照射する。抗ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）及び抗ＣＤ２８（クローン９．３）モノクローナル抗体を、これらのシグナルがエクスビボでの長期ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を支持するため、刺激Ｔ細胞増殖について陽性対照として役立つＫＴ３２−ＢＢＬ細胞の培養物に添加する。Ｔ細胞を、製造者により記載のとおりＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ（商標）蛍光ビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）及びフローサイトメトリーを使用して培養において数える。ＣＡＲ＋Ｔ細胞を、ｅＧＦＰ−２Ａ連結ＣＡＲ発現レンチウイルスベクターで操作されたＴ細胞を使用するＧＦＰ発現により同定する。ＧＦＰを発現しないＣＡＲ＋Ｔ細胞について、ＣＡＲ＋Ｔ細胞を、本明細書に記載のビオチニル化組み換え癌関連抗原タンパク質及び二次アビジン−ＰＥコンジュゲートにより検出する。Ｔ細胞のＣＤ４＋及びＣＤ８＋発現も、特異的モノクローナル抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して同時に検出する。サイトカイン測定を、製造業者の指示に従ってヒトＴＨ１／ＴＨ２サイトカイン細胞数測定ビーズアレイキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して再刺激２４時間後に回収した上清で実施する。ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒフローサイトメーターを使用して蛍光を評価し、データを製造業者の指示に従って分析する。
【０７２５】
細胞毒性を標準的５１Ｃｒ放出アッセイにより評価できる。例えば、Ｍｉｌｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １７（８）：１４５３−１４６４（２００９）を参照されたい。簡潔には、標的細胞（Ｋ５６２株及び初代プロＢ−ＡＬＬ細胞）に５１Ｃｒ（ＮａＣｒＯ４として、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を３７℃で２時間、頻繁に撹拌しながら充填し、完全ＲＰＭＩで２回洗浄し、マイクロタイタープレートに播種する。エフェクターＴ細胞をウェル中で完全ＲＰＭＩ中に標的細胞と種々のエフェクター細胞：標的細胞（Ｅ：Ｔ）比で混合する。更なる培地のみ（自発的放出、ＳＲ）又はｔｒｉｔｏｎ−Ｘ  １００洗剤１％溶液（全放出、ＴＲ）を含むウェルも調製する。３７℃で４時間のインキュベーション後、各ウェルから上清を回収する。放出された５１Ｃｒを、次いでガンマ粒子カウンター（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用して測定する。各条件を少なくとも３回行い、溶解のパーセントを式：溶解％＝（ＥＲ−ＳＲ）／（ＴＲ−ＳＲ）（式中、ＥＲは、各実験条件で放出された平均５１Ｃｒを示す）を使用して計算する。
【０７２６】
造影技術を使用して、腫瘍担持動物モデルにおけるＣＡＲの特異的輸送及び増殖を評価できる。このようなアッセイは、例えば、Ｂａｒｒｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２２：１５７５−１５８６（２０１１）に記載されている。簡潔には、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／γｃ−／−（ＮＳＧ）マウスにＮａｌｍ−６細胞をＩＶ注射し、７日後、ＣＡＲ構築物でエレクトロポレーションから４時間後にＴ細胞を注射する。Ｔ細胞は、ホタルルシフェラーゼを発現するようにレンチウイルス構築物で安定にトランスフェクトされ、マウスをバイオルミネセンスについて造影する。代わりに、Ｎａｌｍ−６異種移植モデルにおけるＣＡＲ＋Ｔ細胞の単回注射の治療有効性及び特異性を次のように測定できる。ＮＳＧマウスに、ホタルルシフェラーゼを安定に発現するように形質導入したＮａｌｍ−６を注射し、続いて７日後に本発明のＣＡＲで電気穿孔したＴ細胞を１回尾静脈注射する。動物を注射後の種々の時点で造影する。例えば、５日目（処置２日前）及び８日目（ＣＡＲ＋ＰＢＬ後２４時間）に代表的マウスにおけるホタルルシフェラーゼ陽性白血病の光子密度ヒートマップを作成できる。
【０７２７】
本明細書の実施例の節に記載のもの並びに当技術分野で公知のものを含む他のアッセイも本明細書に記載のＣＡＲの評価に使用できる。
【０７２８】
処置／組み合わせ治療の方法
別の態様において、本発明は、治療として、本発明のＬＳＤ１阻害剤を、例えば、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。典型的には、このような投与は、ＣＡＲを発現する細胞（例えば、自己又は同種異系宿主細胞）の形態で行われ、ＬＳＤ１阻害剤の別個の投与である。或いは、ＬＳＤ１阻害剤は、ＣＡＲ分子を発現するように操作された細胞と同じ組成物中で投与され得る。或いは、ＣＡＲ分子を発現するように操作された細胞は、ＬＳＤ１阻害剤を発現するようにも操作され得る。一実施形態において、対象は、本明細書に記載の障害を有し、例えば、対象は、癌を有し、例えば、対象は、本明細書に記載の標的抗原を発現する癌を有する。一実施形態において、対象は、ヒトである。
【０７２９】
ＬＳＤ１阻害剤及び本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞の投与を含む本明細書に記載の方法は、他の公知の薬剤及び治療と組み合わせて使用され得る。
【０７３０】
本明細書で使用する「組み合わせて」投与するとは、２つ（又はそれを超える）の異なる処置を、対象が障害を患っている過程中に対象に送達することを意味し、例えば、２つ以上の処置を、対象が障害と診断された後に且つ障害が治癒又は除去される前に、又は処置が他の理由で中止される前に送達される。一部の実施形態において、投与期間の重複があるように、一方の処置の送達は、第２の処置の送達開始時に依然として行われている。これは、本明細書では「同時（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ）」又は「同時（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ）送達」と称されることがある。他の実施形態において、一方の処置の送達は、他の処置の送達が始まる前に終わる。いずれかの場合の一部の実施形態において、処置は、組み合わせ投与のためにより有効である。例えば、第２の処置剤は、より有効である、例えば等しい効果が少ない第２の処置剤で見られるか、又は第２の処置剤は、第２の処置剤を第１の処置剤の非存在下で投与したときに見られるよりも大きい程度で症状を軽減するか又は第１の処置剤で同様の状況が見られる。一部の実施形態において、送達は、障害と関係する症状又は他のパラメータの減少が、他方の処置剤の非存在下において一方の処置剤の送達で観察されるより大きいようなものである。２つの処置の効果は、一部相加的、完全相加的又は相加的より大きいものであり得る。送達は、送達した第１の処置の効果が第２剤の送達時になお検出可能であるようなものであり得る。
【０７３１】
本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞、ＬＳＤ１阻害剤及び少なくとも１つの更なる治療剤を同時に、同じ又は別の組成物で又は逐次的に投与できる。３つの薬剤は、任意の順番で投与することができる。例えば、逐次的投与において、本明細書に記載のＬＳＤ１阻害剤及びＣＡＲ発現細胞をまず投与し得、更なる薬剤を次に投与し得、又は投与の順番が逆であり得る。
【０７３２】
ＣＡＲ治療及び／又は他の治療剤、方法又はモダリティを活動性障害の期間又は寛解又は低活動性疾患の期間に投与できる。ＣＡＲ治療を別の処置の処置前、処置と同時に、処置後に、又は障害の寛解中に投与できる。
【０７３３】
別の態様において、本発明は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子を含む有効量の細胞を対象に投与することを含む、本明細書に記載の癌関連抗原の発現と関連する疾患を有する対象を処置する方法に関する。
【０７３４】
一態様において、本発明は、本明細書に記載の癌関連抗原の発現と関連する疾患を処置する方法を提供する。方法は、ＬＳＤ１阻害剤の投与及び例えばＣＡＲを発現するか又は発現できる細胞、例えばＴ細胞の投与を含む。
【０７３５】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＸＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによる癌の処置方法を提供し、Ｘは、本明細書に記載の腫瘍マーカー（又は癌関連抗原；本明細書で使用される場合、用語ＸＣＡＲ及びＣＡＲＸは互換的に使用され、例えばＣＡＲ１９又はＣＡＲＣＤ１９はＣＤ１９  ＣＡＲと同一である）を表し、前記癌細胞は、前記Ｘ腫瘍マーカー（又は癌関連抗原）を発現する。
【０７３６】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＤ１９  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ１９を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、ＡＬＬ（急性リンパ芽球性白血病）、ＣＬＬ（慢性リンパ性白血病）、ＤＬＢＣＬ（びまん性大Ｂ細胞リンパ腫）、ＭＣＬ（マントル細胞リンパ腫又はＭＭ（多発性骨髄腫）である。
【０７３７】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＥＧＦＲｖＩＩＩを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、神経膠芽腫である。
【０７３８】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びメソテリンＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、メソテリンを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、中皮腫、膵臓癌又は卵巣癌である。
【０７３９】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＤ１２３  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ１２３を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、ＡＭＬである。
【０７４０】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＤ２２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ２２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、Ｂ細胞悪性腫瘍である。
【０７４１】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＳ−１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＳ−１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、多発性骨髄腫である。
【０７４２】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＬＬ−１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＬＬ−１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、ＡＭＬである。
【０７４３】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＤ３３  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ３３を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、ＡＭＬである。
【０７４４】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＧＤ２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＧＤ２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、神経芽細胞腫である。
【０７４５】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＢＣＭＡ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＢＣＭＡを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、多発性骨髄腫である。
【０７４６】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＴｎ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、Ｔｎ抗原を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、卵巣癌である。
【０７４７】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＰＳＭＡ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＰＳＭＡを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、前立腺癌である。
【０７４８】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＲＯＲ１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＲＯＲ１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、Ｂ細胞悪性腫瘍である。
【０７４９】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＦＬＴ３  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＦＬＴ３を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、ＡＭＬである。
【０７５０】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＴＡＧ７２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＴＡＧ７２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、胃腸癌である。
【０７５１】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＤ３８  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ３８を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、多発性骨髄腫である。
【０７５２】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＤ４４ｖ６  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ４４ｖ６を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、子宮頸癌、ＡＭＬ又はＭＭである。
【０７５３】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＥＡ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＥＡを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、消化器癌又は膵臓癌である。
【０７５４】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＥＰＣＡＭ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＥＰＣＡＭを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、胃腸癌である。
【０７５５】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＢ７Ｈ３  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、Ｂ７Ｈ３を発現する、方法を提供する。
【０７５６】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＫＩＴ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＫＩＴを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、胃腸癌である。
【０７５７】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＩＬ−１３Ｒａ２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＩＬ−１３Ｒａ２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、神経膠芽腫である。
【０７５８】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＤ３０  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ３０を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、リンパ腫又は白血病である。
【０７５９】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＧＤ３  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＧＤ３を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、黒色腫である。
【０７６０】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＤ１７１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ１７１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、神経芽細胞腫、卵巣癌、黒色腫、乳癌、膵臓癌、結腸癌又はＮＳＣＬＣ（非小細胞肺癌）である。
【０７６１】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＩＬ−１１Ｒａ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＩＬ−１１Ｒａを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、骨肉腫である。
【０７６２】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＰＳＣＡ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＰＳＣＡを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、前立腺癌である。
【０７６３】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＶＥＧＦＲ２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＶＥＧＦＲ２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、固形腫瘍である。
【０７６４】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びルイスＹ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ルイスＹを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、卵巣癌又はＡＭＬである。
【０７６５】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＤ２４  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ２４を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、膵臓癌である。
【０７６６】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＰＤＧＦＲ−β  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＰＤＧＦＲ−βを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、乳癌、前立腺癌、ＧＩＳＴ（胃腸間質腫瘍）、ＣＭＬ、ＤＦＳＰ（隆起性皮膚線維肉腫）又は神経膠腫である。
【０７６７】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＳＳＥＡ−４  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＳＳＥＡ−４を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、神経膠芽腫、乳癌、肺癌又は幹細胞癌である。
【０７６８】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＤ２０  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ２０を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、Ｂ細胞悪性腫瘍である。
【０７６９】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及び葉酸受容体αＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、葉酸受容体αを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、卵巣癌、ＮＳＣＬＣ、子宮内膜癌、腎臓癌又は他の固形腫瘍である。
【０７７０】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＥＲＢＢ２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、乳癌、胃癌、結腸直腸癌、肺癌又は他の固形腫瘍である。
【０７７１】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＭＵＣ１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＭＵＣ１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、乳癌、肺癌又は他の固形腫瘍である。
【０７７２】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＥＧＦＲ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＥＧＦＲを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、神経膠芽腫、ＳＣＬＣ（小細胞肺癌）、ＳＣＣＨＮ（頭頸部の扁平上皮癌）、ＮＳＣＬＣ又は他の固形腫瘍である。
【０７７３】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＮＣＡＭ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＮＣＡＭを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、神経芽細胞腫又は他の固形腫瘍である。
【０７７４】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＡＩＸ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＡＩＸを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、腎臓癌、ＣＲＣ、子宮頸癌又は他の固形腫瘍である。
【０７７５】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＥｐｈＡ２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＥｐｈＡ２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、ＧＢＭである。
【０７７６】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＧＤ３  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＧＤ３を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、黒色腫である。
【０７７７】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びフコシルＧＭ１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、フコシルＧＭを発現する、方法を提供する。
【０７７８】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びｓＬｅ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ｓＬｅを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、ＮＳＣＬＣ又はＡＭＬである。
【０７７９】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＧＭ３  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＧＭ３を発現する、方法を提供する。
【０７８０】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＴＧＳ５  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＴＧＳ５を発現する、方法を提供する。
【０７８１】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＨＭＷＭＡＡ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＨＭＷＭＡＡを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、黒色腫、神経膠芽腫又は乳癌である。
【０７８２】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びｏ−アセチル−ＧＤ２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ｏ−アセチル−ＧＤ２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、神経芽細胞腫又は黒色腫である。
【０７８３】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及び葉酸受容体βＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ１９を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、ＡＭＬ又は骨髄腫である。
【０７８４】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＴＥＭ１／ＣＤ２４８  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、固形腫瘍である。
【０７８５】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＴＥＭ７Ｒ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＴＥＭ７Ｒを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、固形腫瘍である。
【０７８６】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＬＤＮ６  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＬＤＮ６を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、卵巣癌、肺癌又は乳癌である。
【０７８７】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＴＳＨＲ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＴＳＨＲを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、甲状腺癌又は多発性骨髄腫である。
【０７８８】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＧＰＲＣ５Ｄ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＧＰＲＣ５Ｄを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、多発性骨髄腫である。
【０７８９】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＸＯＲＦ６１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＸＯＲＦ６１を発現する、方法を提供する。
【０７９０】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＤ９７  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ９７を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、Ｂ細胞悪性腫瘍、胃癌、膵臓癌、膵臓癌、食道癌、神経膠芽腫、乳癌又は結腸直腸癌である。
【０７９１】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＤ１７９ａ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ１７９ａを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、Ｂ細胞悪性腫瘍である。
【０７９２】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＡＬＫ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＡＬＫを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、ＮＳＣＬＣ、ＡＬＣＬ（未分化大細胞リンパ腫）、ＩＭＴ（炎症性筋線維芽細胞腫瘍）又は神経芽細胞腫である。
【０７９３】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びプリシアル酸（ｐｌｙｓｉａｌｉｃ  ａｃｉｄ）ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、プリシアル酸（ｐｌｙｓｉａｌｉｃ  ａｃｉｄ）を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、小細胞肺癌である。
【０７９４】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＰＬＡＣ１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＰＬＡＣ１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、ＨＣＣ（肝細胞癌）である。
【０７９５】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＧｌｏｂｏＨ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＧｌｏｂｏＨを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、卵巣癌、胃癌、前立腺癌、肺癌、乳癌又は膵臓癌である。
【０７９６】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＮＹ−ＢＲ−１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＮＹ−ＢＲ−１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、乳癌である。
【０７９７】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＵＰＫ２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＵＰＫ２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、膀胱癌である。
【０７９８】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＨＡＶＣＲ１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＨＡＶＣＲ１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、腎臓癌である。
【０７９９】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＡＤＲＢ３  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＡＤＲＢ３を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、ユーイング肉腫である。
【０８００】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＰＡＮＸ３  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＰＡＮＸ３を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、骨肉腫である。
【０８０１】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＧＰＲ２０  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＧＰＲ２０を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、ＧＩＳＴである。
【０８０２】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＬＹ６Ｋ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＬＹ６Ｋを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、乳癌、肺癌、卵巣癌又は子宮頸癌である。
【０８０３】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＯＲ５１Ｅ２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＯＲ５１Ｅ２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、前立腺癌である。
【０８０４】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＴＡＲＰ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＴＡＲＰを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、前立腺癌である。
【０８０５】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＷＴ１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＷＴ１を発現する、方法を提供する。
【０８０６】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＮＹ−ＥＳＯ−１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＮＹ−ＥＳＯ−１を発現する、方法を提供する。
【０８０７】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＬＡＧＥ−１ａ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＬＡＧＥ−１ａを発現する、方法を提供する。
【０８０８】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＭＡＧＥ−Ａ１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＭＡＧＥ−Ａ１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、黒色腫である。
【０８０９】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＭＡＧＥ  Ａ１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＭＡＧＥ  Ａ１を発現する、方法を提供する。
【０８１０】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＥＴＶ６−ＡＭＬ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＥＴＶ６−ＡＭＬを発現する、方法を提供する。
【０８１１】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及び精子タンパク質１７  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、精子タンパク質１７を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、卵巣癌、ＨＣＣ又はＮＳＣＬＣである。
【０８１２】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＸＡＧＥ１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＸＡＧＥ１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、ユーイング又はｒｈａｂｄｏ癌である。
【０８１３】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＴｉｅ  ２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、Ｔｉｅ  ２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、固形腫瘍である。
【０８１４】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＭＡＤ−ＣＴ−１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＭＡＤ−ＣＴ−１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、前立腺癌又は黒色腫である。
【０８１５】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＭＡＤ−ＣＴ−２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＭＡＤ−ＣＴ−２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、前立腺癌、黒色腫である。
【０８１６】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＦｏｓ関連抗原１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、Ｆｏｓ関連抗原１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、神経膠腫、扁平上皮癌又は膵臓癌である。
【０８１７】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びｐ５３  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ｐ５３を発現する、方法を提供する。
【０８１８】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びプロステインＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、プロステインを発現する、方法を提供する。
【０８１９】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びサバイビン及びテロメラーゼＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、サバイビン及びテロメラーゼを発現する、方法を提供する。
【０８２０】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＰＣＴＡ−１／ガレクチン８  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＰＣＴＡ−１／ガレクチン８を発現する、方法を提供する。
【０８２１】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１を発現する、方法を提供する。
【０８２２】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＲａｓ変異体ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、Ｒａｓ変異体を発現する、方法を提供する。
【０８２３】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びｐ５３変異体ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ｐ５３変異体を発現する、方法を提供する。
【０８２４】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びｈＴＥＲＴ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ｈＴＥＲＴを発現する、方法を提供する。
【０８２５】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及び肉腫転座切断点ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、肉腫転座切断点を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、肉腫である。
【０８２６】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＭＬ−ＩＡＰ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＭＬ−ＩＡＰを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、黒色腫である。
【０８２７】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＥＲＧ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合遺伝子）を発現する、方法を提供する。
【０８２８】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＮＡ１７  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＮＡ１７を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、黒色腫である。
【０８２９】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＰＡＸ３  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＰＡＸ３を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、胞巣状横紋筋肉腫である。
【０８３０】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びアンドロゲン受容体ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、アンドロゲン受容体を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、転移性前立腺癌である。
【０８３１】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びサイクリンＢ１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、サイクリンＢ１を発現する、方法を提供する。
【０８３２】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＭＹＣＮ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＭＹＣＮを発現する、方法を提供する。
【０８３３】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＲｈｏＣ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＲｈｏＣを発現する、方法を提供する。
【０８３４】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＴＲＰ−２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＴＲＰ−２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、黒色腫である。
【０８３５】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＹＰ１Ｂ１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＹＰ１Ｂ１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、乳癌、結腸癌、肺癌、食道癌、皮膚癌、リンパ節癌、脳腫瘍又は精巣癌である。
【０８３６】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＢＯＲＩＳ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＢＯＲＩＳを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、肺癌である。
【０８３７】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＳＡＲＴ３  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＳＡＲＴ３を発現する、方法を提供する。
【０８３８】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＰＡＸ５  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＰＡＸ５を発現する、方法を提供する。
【０８３９】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＯＹ−ＴＥＳ１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＯＹ−ＴＥＳ１を発現する、方法を提供する。
【０８４０】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＬＣＫ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＬＣＫを発現する、方法を提供する。
【０８４１】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＡＫＡＰ−４  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＡＫＡＰ−４を発現する、方法を提供する。
【０８４２】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＳＳＸ２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＳＳＸ２を発現する、方法を提供する。
【０８４３】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＲＡＧＥ−１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＲＡＧＥ−１を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、ＲＣＣ（腎細胞癌）又は他の固形腫瘍である。
【０８４４】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びヒトテロメラーゼ逆転写酵素ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、固形腫瘍である。
【０８４５】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＲＵ１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＲＵ１を発現する、方法を提供する。
【０８４６】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＲＵ２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＲＵ２を発現する、方法を提供する。
【０８４７】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及び腸カルボキシルエステラーゼＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、腸カルボキシルエステラーゼを発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、甲状腺癌、ＲＣＣ、ＣＲＣ（結腸直腸癌）、乳癌又は他の固形腫瘍である。
【０８４８】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びプロスターゼＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、プロスターゼを発現する、方法を提供する。
【０８４９】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＰＡＰ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＰＡＰを発現する、方法を提供する。
【０８５０】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びＩＧＦ−Ｉ受容体ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＩＧＦ−Ｉ受容体を発現する、方法を提供する。
【０８５１】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びｇｐ１００  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ｇｐ１００を発現する、方法を提供する。
【０８５２】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びｂｃｒ−ａｂｌ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ｂｃｒ−ａｂｌを発現する、方法を提供する。
【０８５３】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びチロシナーゼＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、チロシナーゼを発現する、方法を提供する。
【０８５４】
一態様において、本発明は、フコシルＧＭ１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、フコシルＧＭ１を発現する、方法を提供する。
【０８５５】
一態様において、本発明は、ＬＳＤ１阻害剤及びｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２を発現する、方法を提供する。一実施形態において、処置される癌は、黒色腫である。
【０８５６】
一態様において、本発明は、ＣＤ７９ａ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ７９ａを発現する、方法を提供する。
【０８５７】
一態様において、本発明は、ＣＤ７９ｂ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ７９ｂを発現する、方法を提供する。
【０８５８】
一態様において、本発明は、ＣＤ７２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ７２を発現する、方法を提供する。
【０８５９】
一態様において、本発明は、ＬＡＩＲ１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＬＡＩＲ１を発現する、方法を提供する。
【０８６０】
一態様において、本発明は、ＦＣＡＲ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＦＣＡＲを発現する、方法を提供する。
【０８６１】
一態様において、本発明は、ＬＩＬＲＡ２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＬＩＬＲＡ２を発現する、方法を提供する。
【０８６２】
一態様において、本発明は、ＣＤ３００ＬＦ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＤ３００ＬＦを発現する、方法を提供する。
【０８６３】
一態様において、本発明は、ＣＬＥＣ１２Ａ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＣＬＥＣ１２Ａを発現する、方法を提供する。
【０８６４】
一態様において、本発明は、ＢＳＴ２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＢＳＴ２を発現する、方法を提供する。
【０８６５】
一態様において、本発明は、ＥＭＲ２  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＥＭＲ２を発現する、方法を提供する。
【０８６６】
一態様において、本発明は、ＬＹ７５  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＬＹ７５を発現する、方法を提供する。
【０８６７】
一態様において、本発明は、ＧＰＣ３  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＧＰＣ３を発現する、方法を提供する。
【０８６８】
一態様において、本発明は、ＦＣＲＬ５  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＦＣＲＬ５を発現する、方法を提供する。
【０８６９】
一態様において、本発明は、ＩＧＬＬ１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、それを必要とする対象に提供することによって癌を処置する方法であって、癌細胞は、ＩＧＬＬ１を発現する、方法を提供する。
【０８７０】
ある態様において、本発明は、癌性腫瘍の増殖が阻害されるように、対象をＬＳＤ１阻害剤及びＰＤ１  ＣＡＲを使用してインビボで処置することに関する。ＰＤ１  ＣＡＲは、癌性腫瘍の増殖を阻害するために単独で使用され得る。或いは、ＰＤ１  ＣＡＲを他のＣＡＲ、免疫原性物質、標準的な癌処置又は他の抗体と組み合わせて使用し得る。一実施形態において、対象は、ＰＤ１  ＣＡＲ及び本明細書に記載のＸＣＡＲで処置される。一実施形態において、ＰＤ１  ＣＡＲは、別のＣＡＲ、例えば本明細書に記載のＣＡＲ及びキナーゼ阻害剤、例えば本明細書に記載のキナーゼ阻害剤と組み合わせて使用される。
【０８７１】
別の態様において、対象を処置する、例えば対象における過増殖性状態又は障害（例えば、癌）、例えば固形腫瘍、軟部組織腫瘍、血液癌又は転移性病変を軽減又は緩和する方法が提供される。一実施形態において、方法は、ＬＳＤ１阻害剤及びＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の集団の投与を含む。
【０８７２】
更に別の態様において、本発明は、対象に、有効量の、ＣＡＲ分子を含む細胞、例えば免疫エフェクター細胞（例えば、免疫エフェクター細胞の集団）を投与することを含む、腫瘍抗原（例えば、本明細書に記載の抗原）の発現と関連する疾患を有する対象を処置する方法を特徴とし、ＣＡＲ分子は、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含み、前記細胞内ドメインは、共刺激ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメインを含み、前記抗原結合ドメインは、疾患と関連する腫瘍抗原、例えば本明細書に記載の腫瘍抗原に結合する。
【０８７３】
関連する態様において、本発明は、腫瘍抗原の発現と関連する疾患を有する対象を処置する方法を特徴とする。本方法は、対象に、有効量の、細胞、例えばＣＡＲ分子を含む細胞免疫エフェクター細胞（例えば、免疫エフェクター細胞の集団）を、免疫細胞の有効性を増加させる薬剤と（ＬＳＤ１阻害剤に加えて）組み合わせて投与することを含み、免疫細胞の有効性を高める薬剤は、
（ｉ）タンパク質ホスファターゼ阻害剤、
（ｉｉ）キナーゼ阻害剤、
（ｉｉｉ）サイトカイン、
（ｉｖ）免疫阻害分子の阻害剤、又は
（ｖ）ＴＲＥＧ細胞のレベル又は活性を低下させる薬剤
の１つ以上から選択される。
【０８７４】
別の態様において、本発明は、腫瘍抗原の発現と関連する疾患、例えば本明細書に記載の障害を有する対象の処置に使用するための、ＣＡＲ分子（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ分子）を含む免疫エフェクター細胞（例えば、免疫エフェクター細胞の集団）を含む組成物を特徴とする。
【０８７５】
前記方法又は使用のいずれかの一実施形態において、腫瘍抗原、例えば本明細書に記載の腫瘍抗原と関連する疾患は、癌、又は悪性腫瘍、又は骨髄異形成、骨髄異形成症候群又は前白血病などの前癌状態などの増殖性疾患から選択されるか、又は本明細書に記載の腫瘍抗原の発現と関連する非癌関連の適応症である。一実施形態において、疾患は、本明細書に記載の癌、例えば本明細書に記載の標的と関連すると本明細書に記載される癌である。一実施形態において、疾患は、血液癌である。一実施形態において、血液癌は、白血病である。一実施形態において、癌は、これらに限定されないが、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を含む１つ以上の急性白血病；これらに限定されないが、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含む１つ以上の慢性白血病；これらに限定されないが、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリーセル白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性のリンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症及び骨髄の血液細胞の無効な産生（又は異形成）を併せもつ血液学的な状態の多様な集合体である「前白血病状態」を含む、追加の血液癌又は血液学的状態からなる群から選択され、本明細書に記載の腫瘍抗原の発現に関連する疾患としては、これらに限定されないが、本明細書に記載の腫瘍抗原を発現する非定型的及び／又は非典型的な癌、悪性腫瘍、前癌状態又は増殖性疾患並びにそれらのあらゆる組合せが挙げられる。別の実施形態において、本明細書に記載の腫瘍抗原と関連する疾患は、固形腫瘍である。
【０８７６】
一実施形態において、方法又は使用は、免疫エフェクター細胞の有効性を高める薬剤、例えば本明細書に記載の薬剤と組み合わせて実施される。
【０８７７】
前述の方法又は使用のいずれかにおいて、腫瘍抗原の発現に関連する疾患は、増殖性疾患、前癌状態、癌及び腫瘍抗原の発現に関連する非癌関連の適応症からなる群から選択される。
【０８７８】
癌は、血液癌、例えば慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性白血病、急性リンパ系白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｂ細胞急性リンパ系白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ系白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリーセル白血病、小細胞型若しくは大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性のリンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質芽細胞リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症又は前白血病の１つ以上から選択される癌であり得る。
【０８７９】
癌は、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺の非小細胞癌、小腸癌、食道癌、黒色腫、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚又は眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣の癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、膀胱癌、腎臓癌又は尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境的に誘発された癌、前記癌の組み合わせ及び前記癌の転移性病変からも選択され得る。
【０８８０】
本明細書に記載の方法又は使用の実施形態において、ＣＡＲ分子は、免疫エフェクター細胞の有効性を高める薬剤（ＬＳＤ１阻害剤に加えて）、例えばタンパク質ホスファターゼ阻害剤、キナーゼ阻害剤、サイトカイン、免疫阻害分子の阻害剤の１つ以上；又はＴＲＥＧ細胞のレベル又は活性を減少させる薬剤と組み合わせて投与される。
【０８８１】
本明細書に記載の方法又は使用の一実施形態において、タンパク質ホスファターゼ阻害剤は、ＳＨＰ−１阻害剤及び／又はＳＨＰ−２阻害剤である。
【０８８２】
本明細書に記載の方法又は使用の他の実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＣＤＫ４阻害剤、ＣＤＫ４／６阻害剤（例えば、パルボシクリブ）、ＢＴＫ阻害剤（例えば、イブルチニブ又はＲＮ−４８６）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、ラパマイシン又はエベロリムス（ＲＡＤ００１））、ＭＮＫ阻害剤又はデュアルＰ１３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤の１つ以上から選択される。一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、インターロイキン−２−誘導性キナーゼ（ＩＴＫ）のキナーゼ活性を低減又は阻害しない。
【０８８３】
本明細書に記載の方法又は使用の他の実施形態において、免疫阻害分子を阻害する薬剤は、阻害分子の発現を阻害する抗体又は抗体フラグメント、阻害性核酸、クラスター化等間隔短回文反復配列（ＣＲＩＳＰＲ）、転写アクティベータ様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又は亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を含む。
【０８８４】
本明細書に記載の方法又は使用の別の実施形態において、ＴＲＥＧ細胞のレベル又は活性を低下させる薬剤は、シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５枯渇又はこれらの組み合わせから選択される。
【０８８５】
本明細書に記載の方法又は使用の一実施形態において、免疫阻害分子は、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦβ、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及びＣＥＡＣＡＭ−５からなる群から選択される。
【０８８６】
他の実施形態において、阻害分子を阻害する薬剤は、阻害分子又はそのフラグメントを含む第１のポリペプチド及び細胞に正のシグナルを提供する第２のポリペプチドを含み、第１及び第２のポリペプチドはＣＡＲ含有免疫細胞上に発現され、（ｉ）第１のポリペプチドは、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦβ、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及びＣＥＡＣＡＭ−５又はそのフラグメントを含み；及び／又は（ｉｉ）第２のポリペプチドは、一次シグナル伝達ドメイン及び／又は共刺激シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの機能的ドメインを含み、及び／又は共刺激シグナル伝達ドメインは、４１ＢＢ、ＣＤ２７及びＣＤ２８から選択されるタンパク質の機能的ドメインを含む。
【０８８７】
他の実施形態において、サイトカインは、ＩＬ−７、ＩＬ−１５若しくはＩＬ−２１又はこれらの組み合わせから選択される。
【０８８８】
別の実施形態において、ＣＡＲ分子を含む免疫エフェクター細胞及び第２の例えば本明細書に開示される組み合わせ治療のいずれか（例えば、免疫エフェクター細胞の有効性を高める薬剤）は、実質的に同時に又は逐次的に投与される。
【０８８９】
他の実施形態において、ＣＡＲ分子を含む免疫細胞は、ＧＩＴＲを標的とし且つ／又はＧＩＴＲ機能を調節する分子と組み合わせて投与される。一実施形態において、ＧＩＴＲを標的とし且つ／又はＧＩＴＲ機能を調節する分子は、ＣＡＲ発現細胞若しくは細胞の集団の前又はアフェレーシスの前に投与される。
【０８９０】
一実施形態において、リンパ球注入、例えば同種異系リンパ球注入が癌の処置に使用され、リンパ球注入は、少なくとも１つの本発明のＣＡＲ発現細胞を含む。一実施形態において、自己リンパ球注入が癌の処置に使用され、自己リンパ球注入は、少なくとも１つの本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞を含む。
【０８９１】
一実施形態において、細胞は、Ｔ細胞であり、このＴ細胞は、ジアシルグリセロールキナーゼ（ＤＧＫ）欠損である。一実施形態において、細胞は、Ｔ細胞であり、このＴ細胞は、イカロス欠損である。一実施形態において、細胞は、Ｔ細胞であり、このＴ細胞は、ＤＧＫ及びイカロスの両方が欠損している。
【０８９２】
一実施形態において、方法は、本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現する細胞を、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤と組み合わせて投与することを含み、薬剤は、サイトカイン、例えばＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１又はこれらの組み合わせである。サイトカインは、ＣＡＲ発現細胞の投与と組み合わせて、例えば同時に又は直後に送達することができる。或いは、サイトカインは、ＣＡＲ発現細胞の投与後の長期間後、例えばＣＡＲ発現細胞に対する対象の応答の評価後に送達され得る。一実施形態において、サイトカインは、請求項６１〜８０のいずれか一項に記載の細胞又は細胞の集団の投与と同時（例えば、同日に投与される）又は投与直後（例えば、投与の１日、２日、３日、４日、５日、６日又は７日後）に対象に投与される。他の実施形態において、サイトカインは、請求項６１〜８０のいずれか一項に記載の細胞又は細胞の集団の投与後の長時間（例えば、少なくとも２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、１０週間又はそれを超えて）後又は細胞に対する対象の応答の評価後に対象に投与される。
【０８９３】
他の実施形態において、ＣＡＲ分子を発現する細胞を、ＣＡＲ分子を発現する細胞の投与と関連する１つ以上の副作用を軽減する薬剤と組み合わせて投与する。ＣＡＲ発現細胞と関連する副作用は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又は血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）から選択され得る。
【０８９４】
上記の方法又は使用のいずれかの実施形態において、ＣＡＲ分子を発現する細胞は、腫瘍抗原の発現と関連する疾患を処置する薬剤、例えば本明細書に開示される第二又は第三選択治療のいずれかと組み合わせて投与される。更なる例示的な組み合わせは、以下の１つ以上を含む。
【０８９５】
別の実施形態において、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものを発現する細胞を別の薬剤、例えば本明細書に記載のキナーゼ阻害剤及び／又はチェックポイント阻害剤と組み合わせて投与し得る。一実施形態において、ＣＡＲ分子を発現する細胞は、別の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を更に発現できる。
【０８９６】
例えば、一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤（例えば、免疫阻害剤分子）であり得る。阻害分子の例は、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４及びＴＧＦβを含む。
【０８９７】
一実施形態において、阻害分子を阻害する薬剤は、阻害性核酸であり、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡである。実施形態において、阻害性核酸は、ＣＡＲ分子の成分をコードする核酸に連結されている。例えば、阻害分子は、ＣＡＲ発現細胞上に発現され得る。
【０８９８】
別の実施形態において、阻害分子を阻害する薬剤は、例えば、本明細書に記載の分子、例えば細胞に正のシグナルを提供する第２のポリペプチド、例えば本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインに結合した第１のポリペプチド、例えば阻害分子を含む薬剤である。一実施形態において、薬剤は、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４若しくはＴＧＦβ又はこれらのいずれかのフラグメント（例えば、これらのいずれかの細胞外ドメインの少なくとも一部）などの阻害分子の第１のポリペプチド及び本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインである第２のポリペプチド（例えば、共刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載される例えば４１ＢＢ、ＣＤ２７又はＣＤ２８）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む）を含む。一実施形態において、薬剤は、ＰＤ１又はそのフラグメント（例えば、ＰＤ１の少なくとも細胞外ドメインの部分）の第１のポリペプチド及び本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインの第２のポリペプチド（例えば、本明細書に記載のＣＤ２８シグナル伝達ドメイン及び／又は本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）を含む。
【０８９９】
一実施形態において、本発明のＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞は、先の幹細胞移植、例えば自己幹細胞移植を受けた対象に投与される。
【０９００】
一実施形態において、本発明のＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞は、先にメルファランの投与を受けた対象に投与される。
【０９０１】
一実施形態において、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現する細胞を、ＣＡＲ分子を発現する細胞の有効性を高める薬剤、例えば本明細書に記載の薬剤と組み合わせて投与する。
【０９０２】
一実施形態において、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現する細胞は、ＬＳＤ１阻害剤と組み合わせて投与される。理論に拘束されることを望まないが、ＬＳＤ１阻害剤による処置は、ＰＤ−１陽性Ｔ細胞減少又はＰＤ−１陰性細胞の増加を伴うと考えられる。ＰＤ−１陰性Ｔ細胞ではなく、ＰＤ−１陽性Ｔ細胞が、ＰＤ−１リガンド、例えばＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２を発現する細胞との結合により枯渇され得る。
【０９０３】
一実施形態において、このアプローチを使用して、対象における本明細書に記載のＣＡＲ細胞の性能を最適化できる。理論に拘束されることを望まないが、一実施形態において、内在性、非修飾免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞の性能が改善されると考えられる。理論に拘束されることを望まないが、一実施形態において、標的抗原ＣＡＲ発現細胞の性能が改善されると考えられる。他の実施形態において、ＣＡＲを発現するように操作されているか又は操作される細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞を、ＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の数を増やすか又はＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の比を増やす量のＬＳＤ１阻害剤と接触させることにより、エクスビボで処置できる。
【０９０４】
一実施形態において、ＬＳＤ１阻害剤の投与は、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞投与前に開始される。一実施形態において、ＣＡＲ細胞を、ＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞のレベル又はＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の比が少なくとも一過性に増加するようにＬＳＤ１阻害剤の十分な時間又は十分な投与後に投与する。
【０９０５】
一実施形態において、ＣＡＲを発現するように操作される細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞を、対象又は対象から採取したＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞のレベル又はＰＤ１陰性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞／ＰＤ１陽性免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞の比が少なくとも一過性に増加するようにＬＳＤ１阻害剤の投薬から十分な時間後又は十分な用量の後に採取する。
【０９０６】
一実施形態において、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現する細胞を、ＣＡＲ分子を発現する細胞の投与と関連する１つ以上の副作用を軽減する薬剤、例えば本明細書に記載の薬剤と組み合わせて投与する。
【０９０７】
一実施形態において、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現する細胞を、本明細書に記載の癌関連抗原と関連する疾患を処置する薬剤、例えば本明細書に記載の薬剤と組み合わせて投与する。
【０９０８】
一実施形態において、例えば、本明細書に記載の２つ以上のＣＡＲ分子を発現する細胞を、癌を処置するためにそれを必要とする対象に投与する。一実施形態において、例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ発現細胞を含む細胞の集団は、癌を処置するためにそれを必要とする対象に投与される。
【０９０９】
一実施形態において、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現する細胞は、本明細書に記載の用量及び／又は投与スケジュールで投与される。
【０９１０】
一実施形態において、ＣＡＲ分子は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）に例えばインビトロ転写を用いて導入され、及び対象（例えば、ヒト）は、ＣＡＲ分子を含む細胞の最初の投与、及びＣＡＲ分子を含む細胞の１回以上の後続の投与を受け、１回以上の後続の投与は、前回の投与から１５日未満、例えば１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３又は２日後に投与される。一実施形態において、ＣＡＲ分子を含む細胞の２回以上の投与が１週間当たりで対象（例えば、ヒト）に投与され、例えばＣＡＲ分子を含む細胞の２、３又は４回の投与が１週間当たりで投与される。一実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、１週間当たりにＣＡＲ分子を含む細胞の２回以上の投与（例えば、１週間当たりに２、３又は４回の投与）を受け（本明細書ではサイクルとも称される）、続く１週間ではＣＡＲ分子を含む細胞の投与がなく、次いでＣＡＲ分子を含む細胞の１回以上の更なる投与（例えば、１週間当たりにＣＡＲ分子を含む細胞の２回以上の投与）が対象に投与される。別の実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、２サイクル以上のＣＡＲ分子を含む細胞を受け、各サイクル間の時間は、１０、９、８、７、６、５、４又は３日未満である。一実施形態において、ＣＡＲ分子を含む細胞は、１週間当たり３回の投与のために隔日投与される。一実施形態において、ＣＡＲ分子を含む細胞は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８週間又はそれを超えて投与される。
【０９１１】
一実施形態において、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現する細胞は、疾患、例えば癌、例えば本明細書に記載の癌に対する第一選択治療として投与される。別の実施形態において、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現する細胞は、疾患、例えば癌、例えば本明細書に記載の癌に対する第二、第三、第四選択治療として投与される。
【０９１２】
一実施形態において、本明細書に記載の細胞の集団が投与される。
【０９１３】
別の態様において、本発明は、医薬としての使用のための、本発明のＣＡＲをコードする単離核酸分子、本発明のＣＡＲの単離ポリペプチド分子、本発明のＣＡＲを含むベクター及び本発明のＣＡＲを含む細胞に関する。
【０９１４】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載するような癌関連抗原を発現する疾患の処置に使用するための、本発明のＣＡＲをコードする単離核酸分子、本発明のＣＡＲの単離ポリペプチド分子、本発明のＣＡＲを含むベクター及び本発明のＣＡＲを含む細胞に関する。
【０９１５】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載のサイトカイン、例えばＩＬ−７、ＩＬ−１５及び／又はＩＬ−２１と組み合わせた、医薬としての使用のための、本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現する細胞に関する。別の態様において、本発明は、本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現する細胞と組み合わせた、医薬としての使用のための、本明細書に記載のサイトカインに関する。
【０９１６】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載のキナーゼ阻害剤及び／又はチェックポイント阻害剤と組み合わせた、医薬としての使用のための、本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現する細胞に関する。別の態様において、本発明は、本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現する細胞と組み合わせた、医薬としての使用のための、本明細書に記載のキナーゼ阻害剤及び／又はチェックポイント阻害剤に関する。
【０９１７】
別の態様において、本発明は、ＣＡＲが標的とする腫瘍抗原を発現する疾患の治療における、本明細書に記載のサイトカイン、例えばＩＬ−７、ＩＬ−１５及び／又はＩＬ−２１と組み合わせた使用のための、本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現する細胞に関する。別の態様において、本発明は、ＣＡＲが標的とする腫瘍抗原を発現する疾患の処置における、本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現する細胞と組み合わせて使用するための本明細書に記載のサイトカインに関する。
【０９１８】
別の態様において、本発明は、ＣＡＲが標的とする腫瘍抗原を発現する疾患の治療における、本明細書に記載のキナーゼ阻害剤及び／又はチェックポイント阻害剤と組み合わせた使用のための、本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現する細胞に関する。別の態様において、本発明は、ＣＡＲが標的とする腫瘍抗原を発現する疾患の治療における、本明細書に記載のＣＡＲ分子を発現する細胞と組み合わせた使用のための、本明細書に記載のキナーゼ阻害剤及び／又はチェックポイント阻害剤に関する。
【０９１９】
別の態様において、本発明は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子又はＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子をコードする核酸を含む細胞を投与することを含む、方法を提供する。一実施形態において、対象は、本明細書に記載の障害を有し、例えば、対象は、癌を有し、例えば、対象は、癌を有し且つ本明細書に記載の腫瘍支持抗原を発現する腫瘍支持細胞を有する。一実施形態において、対象は、ヒトである。
【０９２０】
別の態様において、本発明は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子を含む有効量の細胞を対象に投与することを含む、本明細書に記載の腫瘍支持抗原の発現と関連する疾患を有する対象を処置する方法に関する。
【０９２１】
更に別の態様において、本発明は、対象に、有効量の、ＣＡＲ分子を含む細胞、例えば免疫エフェクター細胞（例えば、免疫エフェクター細胞の集団）を投与することを含む、腫瘍支持抗原の発現と関連する疾患を有する対象を処置する方法を特徴とし、ＣＡＲ分子は、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含み、前記細胞内ドメインは、共刺激ドメイン及び／又は一次シグナル伝達ドメインを含み、前記抗原結合ドメインは、疾患と関連する腫瘍支持抗原、例えば本明細書に記載の腫瘍支持抗原に結合する。
【０９２２】
別の態様において、本発明は、腫瘍支持抗原の発現と関連する疾患、例えば本明細書に記載の障害を有する対象の処置に使用するための、ＣＡＲ分子（例えば、本明細書に記載のＣＡＲ分子）を含む免疫エフェクター細胞（例えば、免疫エフェクター細胞の集団）を含む組成物を特徴とする。
【０９２３】
前述の方法又は使用のいずれかにおいて、腫瘍支持抗原の発現に関連する疾患は、増殖性疾患、前癌状態、癌及び腫瘍支持抗原の発現に関連する非癌関連の適応症からなる群から選択される。一実施形態において、本明細書に記載の腫瘍支持抗原と関連する疾患は、固形腫瘍である。
【０９２４】
本明細書に記載の方法又は使用の一実施形態において、ＣＡＲ分子は、別の薬剤と組み合わせて投与される。一実施形態において、薬剤は、キナーゼ阻害剤、例えばＣＤＫ４／６阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＭＮＫ阻害剤又はデュアルＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤及びこれらの組み合わせであり得る。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＣＤＫ４阻害剤、例えば本明細書に記載のＣＤＫ４阻害剤、例えば６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−（５−ピペラジン−１−イル−ピリジン−２−イルアミノ）−８Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、ヒドロクロライド（パルボシクリブ又はＰＤ０３３２９９１とも呼ばれる）など、例えばＣＤ４／６阻害剤である。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＢＴＫ阻害剤、例えばイブルチニブのような例えば本明細書に記載のＢＴＫ阻害剤である。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシン、ラパマイシン類似体、ＯＳＩ−０２７など、例えば本明細書に記載のｍＴＯＲ阻害剤である。ｍＴＯＲ阻害剤は、例えば、ｍＴＯＲＣ１阻害剤及び／又はｍＴＯＲＣ２阻害剤、例えば本明細書に記載のｍＴＯＲＣ１阻害剤及び／又はｍＴＯＲＣ２阻害剤であり得る。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＭＮＫ阻害剤、例えば４−アミノ−５−（４−フルオロアニリノ）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンなど、例えば本明細書に記載のＭＮＫ阻害剤である。ＭＮＫ阻害剤は、例えば、ＭＮＫ１ａ、ＭＮＫ１ｂ、ＭＮＫ２ａ及び／又はＭＮＫ２ｂ阻害剤であり得る。デュアルＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤は、例えば、ＰＦ−０４６９５１０２であり得る。
【０９２５】
本明細書に記載の方法又は使用の一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、アロイシンＡ；フラボピリドール又はＨＭＲ−１２７５、２−（２−クロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−１−メチル−４−ピペリジニル］−４−クロメノン；クリゾチニブ（ＰＦ−０２３４１０６６；２−（２−クロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−［（２Ｒ，３Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−１−メチル−３−ピロリジニル］−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン、ヒドロクロライド（Ｐ２７６−００）；１−メチル−５−［［２−［５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−４−ピリジニル］オキシ］−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−アミン（ＲＡＦ２６５）；インジスラム（Ｅ７０７０）；ロスコビチン（ＣＹＣ２０２）；パルボシクリブ（ＰＤ０３３２９９１）；ジナシクリブ（ＳＣＨ７２７９６５）；Ｎ−［５−［［（５−ｔｅｒｔ−ブチルオキサゾール−２−イル）メチル］チオ］チアゾール−２−イル］ピペリジン−４−カルボキサミド（ＢＭＳ  ３８７０３２）；４−［［９−クロロ−７−（２，６−ジフルオロフェニル）−５Ｈ−ピリミド［５，４−ｄ］［２］ベンズアゼピン−２−イル］アミノ］−安息香酸（ＭＬＮ８０５４）；５−［３−（４，６−ジフルオロ−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］−Ｎ−エチル−４−メチル−３−ピリジンメタンアミン（ＡＧ−０２４３２２）；４−（２，６−ジクロロベンゾイルアミノ）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸Ｎ−（ピペリジン−４−イル）アミド（ＡＴ７５１９）；４−［２−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］−Ｎ−［４−（メチルスルホニル）フェニル］−２−ピリミジンアミン（ＡＺＤ５４３８）；及びＸＬ２８１（ＢＭＳ９０８６６２）から選択されるＣＤＫ４阻害剤である。
【０９２６】
本明細書に記載の方法又は使用の一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＣＤＫ４阻害剤、例えばパルボシクリブ（ＰＤ０３３２９９１）であり、パルボシクリブをある期間にわたり１日約５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１０５ｍｇ、１１０ｍｇ、１１５ｍｇ、１２０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１３５ｍｇ（例えば、７５ｍｇ、１００ｍｇ又は１２５ｍｇ）の用量で例えば２８日サイクルの１４〜２１日間連日又は２１日サイクルの７〜１２日間連日投与する。一実施形態において、１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル、８サイクル、９サイクル、１０サイクル、１１サイクル、１２サイクル又はそれを超えるパルボシクリブを投与する。
【０９２７】
本明細書に記載の方法又は使用の一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、イブルチニブ（ＰＣＩ−３２７６５）；ＧＤＣ−０８３４；ＲＮ−４８６；ＣＧＩ−５６０；ＣＧＩ−１７６４；ＨＭ−７１２２４；ＣＣ−２９２；ＯＮＯ−４０５９；ＣＮＸ−７７４；及びＬＦＭ−Ａ１３から選択されるＢＴＫ阻害剤である。一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、インターロイキン−２−誘導性キナーゼ（ＩＴＫ）のキナーゼ活性を低減又は阻害せず、ＧＤＣ−０８３４；ＲＮ−４８６；ＣＧＩ−５６０；ＣＧＩ−１７６４；ＨＭ−７１２２４；ＣＣ−２９２；ＯＮＯ−４０５９；ＣＮＸ−７７４；及びＬＦＭ−Ａ１３から選択される。
【０９２８】
本明細書に記載の方法又は使用の一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＢＴＫ阻害剤、例えばイブルチニブ（ＰＣＩ−３２７６５）であり、イブルチニブをある期間にわたり１日約２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４２０ｍｇ、４４０ｍｇ、４６０ｍｇ、４８０ｍｇ、５００ｍｇ、５２０ｍｇ、５４０ｍｇ、５６０ｍｇ、５８０ｍｇ、６００ｍｇ（例えば、２５０ｍｇ、４２０ｍｇ又は５６０ｍｇ）の用量で例えば２１日サイクルの連日又は２８日サイクルの連日投与する。一実施形態において、１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル、８サイクル、９サイクル、１０サイクル、１１サイクル、１２サイクル又はそれを超えるイブルチニブを投与する。
【０９２９】
本明細書に記載の方法又は使用の一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＩＴＫのキナーゼ活性を阻害しないＢＴＫ阻害剤、例えばＲＮ−４８６であり、ＲＮ−４８６をある期間にわたり１日約１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ（例えば、１５０ｍｇ、２００ｍｇ又は２５０ｍｇ）の用量で、例えば２８日サイクルの連日投与する。一実施形態において、１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル又はそれを超えるＲＮ−４８６を投与する。
【０９３０】
本明細書に記載の方法又は使用の一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、テムシロリムス；リダフォロリムス（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）−４−［（２Ｒ）−２−［（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ、２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｚ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）−１，１８−ジヒドロキシ−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３、２９，３５−ヘキサメチル−２，３，１０，１４，２０−ペンタオキソ−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−１２−イル］プロピル］−２−メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート、ＡＰ２３５７３及びＭＫ８６６９としても知られる；エベロリムス（ＲＡＤ００１）；ラパマイシン（ＡＹ２２９８９）；セマピモド；（５−｛２，４−ビス［（３Ｓ）−３−メチルモルホリン−４−イル］ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−２−メトキシフェニル）メタノール（ＡＺＤ８０５５）；２−アミノ−８−［トランス−４−（２−ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］−６−（６−メトキシ−３−ピリジニル）−４−メチル−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（ＰＦ０４６９１５０２）；及びＮ２−［１，４−ジオキソ−４−［［４−（４−オキソ−８−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−２−イル）モルホリニウム−４−イル］メトキシ］ブチル］−Ｌ−アルギニルグリシル−Ｌ−α−アスパルチルＬ−セリン−、分子内塩（ＳＦ１１２６）（配列番号１９３７）；及びＸＬ７６５から選択されるｍＴＯＲ阻害剤である。
【０９３１】
本明細書に記載の方法又は使用の一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシンであり、ラパマイシンを約３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ（例えば、６ｍｇ）の用量で連日、ある期間、例えば２１日サイクルで連日又は２８日サイクルで連日投与する。一実施形態において、１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル、８サイクル、９サイクル、１０サイクル、１１サイクル、１２サイクル又はそれを超えるラパマイシンを投与する。一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばエベロリムスであり、エベロリムスをある期間にわたり１日約２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ（例えば、１０ｍｇ）の用量において例えば２８日サイクルで連日投与する。一実施形態において、１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、５サイクル、６サイクル、７サイクル、８サイクル、９サイクル、１０サイクル、１１サイクル、１２サイクル又はそれを超えるエベロリムスを投与する。
【０９３２】
本明細書に記載の方法又は使用の一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、ＣＧＰ０５２０８８；４−アミノ−３−（ｐ−フルオロフェニルアミノ）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（ＣＧＰ５７３８０）；セルコスポラミド；ＥＴＣ−１７８０４４５〜２；及び４−アミノ−５−（４−フルオロアニリノ）−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンから選択されるＭＮＫ阻害剤である。
【０９３３】
本明細書に記載の方法又は使用の一実施形態において、キナーゼ阻害剤は、２−アミノ−８−［トランス−４−（２−ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］−６−（６−メトキシ−３−ピリジニル）−４−メチル−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７（８Ｈ）−オン（ＰＦ−０４６９１５０２）；Ｎ−［４−［［４−（ジメチルアミノ）−１−ピペリジニル］カルボニル］フェニル］−Ｎ’−［４−（４，６−ジ−４−モルホリニル−１，３，５−トリアジン−２−イル）フェニル］尿素（ＰＦ−０５２１２３８４、ＰＫＩ−５８７）；２−メチル−２−｛４−［３−メチル−２−オキソ−８−（キノリン−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］フェニル｝プロパンニトリル（ＢＥＺ−２３５）；アピトリシブ（ＧＤＣ−０９８０、ＲＧ７４２２）；２，４−ジフルオロ−Ｎ−｛２−（メチルオキシ）−５−［４−（４−ピリダジニル）−６−キノリニル］−３−ピリジニル｝ベンゼンスルホンアミド（ＧＳＫ２１２６４５８）；８−（６−メトキシピリジン−３−イル）−３−メチル−１−（４−（ピペラジン−１−イル）−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２（３Ｈ）−オンマレイン酸（ＮＶＰ−ＢＧＴ２２６）；３−［４−（４−モルホリニルピリド［３’，２’：４，５］フロ［３，２−ｄ］ピリミジン−２−イル］フェノール（ＰＩ−１０３）；５−（９−イソプロピル−８−メチル−２−モルホリノ−９Ｈ−プリン−６−イル）ピリミジン−２−アミン（ＶＳ−５５８４、ＳＢ２３４３）；及びＮ−［２−［（３，５−ジメトキシフェニル）アミノ］キノキサリン−３−イル］−４−［（４−メチル−３−メトキシフェニル）カルボニル］アミノフェニルスルホンアミド（ＸＬ７６５）から選択されるデュアルホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）及びｍＴＯＲ阻害剤である。
【０９３４】
本明細書に記載の方法又は使用の一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞をタンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤、例えば本明細書に記載のタンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤と組み合わせて対象に投与する。一実施形態において、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤は、ＳＨＰ−１阻害剤、例えばスチボグルコン酸ナトリウムなど、例えば本明細書に記載のＳＨＰ−１阻害剤である。一実施形態において、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤は、ＳＨＰ−２阻害剤である。
【０９３５】
本明細書に記載の方法又は使用の一実施形態において、ＣＡＲ分子は、別の薬剤と組み合わせて投与され、薬剤は、サイトカインである。サイトカインは、例えば、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１又はこれらの組み合わせであり得る。別の実施形態において、ＣＡＲ分子をチェックポイント阻害剤、例えば本明細書に記載のチェックポイント阻害剤と組み合わせて投与する。例えば、一実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４及びＴＧＦβから選択される阻害分子を阻害する。
【０９３６】
一態様において、本発明のＣＡＲを本明細書に記載の腫瘍抗原を発現する正常細胞の根絶に使用でき、それにより細胞移植前の細胞コンディショニング治療としての使用が適用可能である。一態様において、本明細書に記載の腫瘍抗原を発現する正常細胞は、正常幹細胞であり、細胞移植は、幹細胞移植である。
【０９３７】
治療適用
別の態様において、対象を処置する、例えば対象における過増殖性状態又は障害（例えば、癌）、例えば固形腫瘍、軟部組織腫瘍又は転移性病変を軽減又は緩和する方法が提供される。本明細書で使用される用語「癌」は、病理組織学的型又は侵襲性のステージとは無関係に、全ての型の癌性増殖又は発癌過程、転移性組織又は悪性形質転換細胞、組織又は臓器を含むことを意味する。固形腫瘍の例は、肝臓、肺、乳房、リンパ系、消化管（例えば、結腸）、尿生殖路（例えば腎細胞、尿路上皮細胞）、前立腺及び咽頭に影響を及ぼすものなどの種々の臓器系の悪性腫瘍、例えば肉腫、腺癌及び癌腫を含む。腺癌は、大部分の結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺の非小細胞癌、小腸の癌及び食道の癌などの悪性腫瘍を含む。一実施形態において、癌は、黒色腫、例えば進行したステージの黒色腫である。前述の癌の転移性病変も本発明の方法及び組成物を使用して処置又は予防することができる。処置され得る他の癌の例としては、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚又は眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣の癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病を含む慢性又は急性白血病、小児固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓癌又は尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストにより誘発された癌を含む環境的に誘発された癌及び前記癌の組み合わせが挙げられる。転移性癌、例えばＰＤ−Ｌ１を発現する転移性癌（Ｉｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：１３３−１４４）の処置は、本明細書に記載の抗体分子を使用して達成され得る。
【０９３８】
増殖が阻害され得る例示的な癌は、典型的には免疫療法に応答性の癌を含む。処置のための癌の非限定的な例は、黒色腫（例えば、転移性悪性黒色腫）、腎臓癌（例えば、明細胞癌）、前立腺癌（例えば、ホルモン難治性前立腺腺癌）、乳癌、結腸癌及び肺癌（例えば、非小細胞性肺癌）を含む。更に、難治性又は再発性悪性腫瘍は、本明細書に記載の分子を使用して処置することができる。
【０９３９】
一態様において、本発明は、哺乳動物免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）における発現のために、プロモーターと操作可能に連結したＣＡＲを含むベクターに関する。一態様において、本発明は、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する癌の処置における使用のための、本発明のＣＡＲを発現する組換え免疫エフェクター細胞を提供する。ある態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞は、ＣＡＲ発現細胞が癌細胞を標的とし、癌の増殖が阻害されるように、腫瘍細胞をその表面に発現される少なくとも１つの癌関連抗原と接触させることができる。
【０９４０】
一態様において、本発明は、ＣＡＲＴが抗原に応答して活性化され、癌細胞を標的とするように、癌細胞を本発明のＣＡＲ発現細胞と接触させ、腫瘍の増殖が阻害されることを含む、癌の増殖を阻害する方法に関する。
【０９４１】
一態様において、本発明は、対象における癌を処置する方法に関する。この方法は、癌が対象において処置されるように、対象に本発明のＣＡＲ発現細胞を投与することを含む。一態様において、本明細書に記載の癌関連抗原の発現と関連する癌は、血液癌である。一態様において、血液癌は、白血病又はリンパ腫である。一態様において、本明細書に記載の癌関連抗原の発現に関連する癌は、限定されないが、例えばＢ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を例えば含むがそれに限定されない１つ以上の急性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を例えば含むがそれに限定されない１つ以上の慢性白血病を含めた癌及び悪性腫瘍を含む。本明細書に記載の癌関連抗原の発現に関連する更なる癌又は血液学的病態は、限定されないが、例えばＢ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞型又は大細胞型濾胞性リンパ腫、悪性リンパ球増殖性病態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄形成異常及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症及び骨髄性血球細胞の無効な産生（又は異形成）によってまとめられる様々な血液学的病態の群である「前白血病」などを含む。更に、本明細書に記載の癌関連抗原に関連する疾患としては、これらに限定されないが、例えば、本明細書に記載の癌関連抗原の発現に関連する、非定型的及び／又は非典型的な癌、悪性腫瘍、前癌状態又は増殖性疾患が挙げられる。
【０９４２】
一部の実施形態において、本発明のＣＡＲ発現細胞で処置され得る癌は、多発性骨髄腫である。一般的に、骨髄腫細胞は、フローサイトメトリーにより、本明細書に記載の癌関連抗原の発現について陰性であると考えられる。従って、一部の実施形態において、例えば、本明細書に記載のＣＤ１９  ＣＡＲを、骨髄腫細胞を標的とするために使用し得る。一部の実施形態において、本発明のＣＡＲ治療を、１つ以上の更なる治療、例えばレナリドマイド処置と組み合わせて使用することができる。
【０９４３】
本発明は、ある種の細胞治療を含み、免疫エフェクター細胞（例えばＴ細胞、ＮＫ細胞）は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝的に改変され、ＣＡＲ発現Ｔ細胞又はＮＫ細胞は、それを必要とするレシピエントに注入される。注入された細胞は、レシピエントで腫瘍細胞を殺傷することができる。抗体療法と異なり、ＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、インビボで複製でき、持続した腫瘍制御をもたらし得る長期残留性をもたらす。種々の態様において、患者に投与された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）又はその子孫は、患者において、患者にＴ細胞又はＮＫ細胞を投与した後に少なくとも４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２年、３年、４年又は５年持続する。
【０９４４】
本発明は、ある種の細胞治療も含み、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を一過性に発現するように例えばインビトロ転写ＲＮＡにより改変され、ＣＡＲ  Ｔ細胞又はＮＫ細胞は、それを必要とするレシピエントに注入される。注入された細胞は、レシピエントで腫瘍細胞を殺傷することができる。そのため、種々の態様において、患者に投与した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、患者にＴ細胞又はＮＫ細胞投与後、１ヶ月、例えば３週間、２週間、１週間未満持続する。
【０９４５】
何らかの特定の理論に拘束されないが、ＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）により惹起される抗腫瘍免疫応答は、能動的又は受動的免疫応答であり得るか又は代わりに直接的対間接的免疫応答によるものであり得る。一態様において、ＣＡＲ形質導入免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、本明細書に記載の癌関連抗原を発現するヒト癌細胞に応答して特定の炎症誘発性サイトカイン分泌及び強力な細胞溶解性活性を示し、可溶性の本明細書に記載の癌関連抗原の阻害に抵抗し、バイスタンダー死滅に介在し、確立されたヒト腫瘍の退縮に介在する。例えば、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する腫瘍の不均一な場における抗原低腫瘍細胞は、近辺の抗原陽性癌細胞に対して先に反応している癌関連抗原の本明細書に記載の癌関連抗原に再指向された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）による間接的破壊を受け得る。
【０９４６】
一態様において、本発明の完全ヒトＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、哺乳動物におけるエクスビボ免疫化及び／又はインビボ治療のための１種のワクチンである。一態様において、哺乳動物は、ヒトである。
【０９４７】
エクスビボ免疫化に関して、次の少なくとも１つは、哺乳動物に細胞を投与する前にインビトロで起こる。ｉ）細胞の増殖、ｉｉ）細胞へのＣＡＲをコードする核酸の導入又はｉｉｉ）細胞の凍結保存。
【０９４８】
エクスビボ過程は、当技術分野で周知であり、下により詳細に記載する。簡潔には、細胞を哺乳動物（例えば、ヒト）から単離し、本明細書に記載するＣＡＲを発現するベクターで遺伝的に改変（即ちインビトロで形質導入又はトランスフェクト）される。ＣＡＲ修飾細胞を哺乳動物レシピエントに投与して、治療効果を提供できる。哺乳動物レシピエントは、ヒトであり得、ＣＡＲ修飾細胞は、レシピエントに対して自己であり得る。代わりに、細胞は、レシピエントに対して同種、同系又は異種であり得る。
【０９４９】
参照により本明細書に援用される米国特許第５，１９９，９４２号明細書に記載する造血幹細胞及び前駆細胞のエクスビボ増殖のための方法を本発明の細胞に適用できる。他の適当な方法は、当技術分野で知られ、従って、本発明は、細胞のエクスビボ増殖の特定の方法に限定されない。簡潔には、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）のエクスビボ培養及び増殖は、（１）哺乳動物からの採取した末梢血又は髄外植体からのＣＤ３４＋造血幹細胞及び前駆細胞回収、及び（２）エクスビボでのこのような細胞の増殖を含む。米国特許第５，１９９，９４２号明細書に記載される細胞増殖因子に加えて、ｆｌｔ３Ｌ、ＩＬ−１、ＩＬ−３及びｃ−ｋｉｔリガンドなどの他の因子を細胞の培養及び増殖に使用できる。
【０９５０】
エクスビボ免疫化の点で細胞ベースのワクチンを使用するのに加えて、本発明は、患者における抗原に対する免疫応答を惹起するための、インビボ免疫化のための組成物及び方法も提供する。
【０９５１】
一般に、本明細書に記載の細胞活性化及び増殖は、免疫不全状態である個体で惹起する疾患の処置及び予防に利用し得る。特に、本発明のＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、本明細書に記載の癌関連抗原の発現と関連する疾患、障害及び状態の処置に使用する。ある態様において、本発明の細胞を、本明細書に記載の癌関連抗原の発現と関連する疾患、障害及び状態を発症するリスクのある患者の処置に使用する。そのため、本発明は、処置を必要とする対象に本発明のＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の治療有効量を投与することを含む、本明細書に記載の癌関連抗原の発現と関連する疾患、障害及び状態の処置又は予防のための方法を提供する。
【０９５２】
一態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞を癌又は悪性腫瘍などの増殖性疾患又は脊髄形成異常症、骨髄異形成症候群又は前白血病状態などの前癌状態の処置に使用し得る。更に、本明細書に記載の癌関連抗原に関連する疾患としては、これらに限定されないが、例えば本明細書に記載の癌関連抗原を発現する非定型的及び／又は非典型的な癌、悪性腫瘍、前癌状態又は増殖性疾患が挙げられる。本明細書に記載の癌関連抗原の発現に関連する非癌関連の適応症は、限定されないが、例えば自己免疫疾患（例えば、狼瘡）、炎症性障害（アレルギー及び喘息）及び移植を含む。
【０９５３】
本発明のＣＡＲ修飾免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を単独で又は希釈剤及び／又はＩＬ−２又は他のサイトカイン又は細胞集団のような他の成分と組み合わせて医薬組成物として投与し得る。
【０９５４】
血液癌
血液癌状態は、白血病、リンパ腫並びに血液、骨髄及びリンパ系に影響する悪性リンパ増殖状態などの癌の型である。
【０９５５】
白血病は、急性白血病及び慢性白血病に分類できる。急性白血病は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）として更に分類され得る。慢性白血病は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）及び慢性リンパ系白血病（ＣＬＬ）を含む。他の関連する状態は、骨髄球性血液細胞の産生不良（又は異形成）によりまとめられる血液学的状態の多様な集合であり、ＡＭＬに形質転換するリスクがある骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、以前は「前白血病状態」として知られる）を含む。
【０９５６】
リンパ腫は、リンパ球から生じる血液細胞腫瘍の群である。例示的なリンパ腫は、非ホジキンリンパ腫及びホジキンリンパ腫を含む。
【０９５７】
本発明は、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する細胞集団の増殖を阻害又は低減する方法も提供し、本方法は、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する細胞を含む細胞の集団を、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する細胞に結合する本発明のＣＡＲ発現Ｔ細胞又はＮＫ細胞に接触させることを含む。特定の態様において、本発明は、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する癌細胞の集団の増殖を阻害又は低減する方法を提供し、本方法は、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する癌細胞集団を、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する細胞に結合する本発明のＣＡＲ発現Ｔ細胞又はＮＫ細胞に接触させることを含む。ある態様において、本発明は、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する癌細胞の集団の増殖を阻害又は低減する方法を提供し、本方法は、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する癌細胞集団を、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する細胞に結合する本発明のＣＡＲ発現Ｔ細胞又はＮＫ細胞に接触させることを含む。ある態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞Ｔ細胞又はＮＫ細胞は、細胞及び／又は癌細胞の含量、数、量又はパーセンテージを、陰性対照と比較して、骨髄性白血病又は本明細書に記載の癌関連抗原を発現する細胞と関連する別の癌を有する対象又は動物モデルで少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％減少させる。一態様において、対象は、ヒトである。
【０９５８】
本発明は、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する細胞（例えば、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する血液癌又は非定型癌）と関連する疾患を予防、処置及び／又は管理する方法も提供し、本方法は、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する細胞に結合する本発明のＣＡＲ  Ｔ細胞又はＮＫ細胞を、必要とする対象に投与することを含む。一態様において、対象は、ヒトである。本明細書に記載の癌関連抗原を発現する細胞と関係する障害の非限定的な例は、自己免疫性障害（狼瘡など）、炎症性障害（アレルギー及び喘息など）及び癌（本明細書に記載の癌関連抗原を発現する血液癌又は非定型癌など）を含む。
【０９５９】
本発明は、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する細胞と関連する疾患を予防、処置及び／又は管理する方法も提供し、本方法は、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する細胞に結合する本発明のＣＡＲ  Ｔ細胞又はＮＫ細胞を、必要とする対象に投与することを含む。一態様において、対象は、ヒトである。
【０９６０】
本発明は、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する細胞と関連する癌の再発を予防する方法を提供し、本方法は、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する細胞に結合する本発明のＣＡＲ  Ｔ細胞又はＮＫ細胞を、それを必要とする対象に投与することを含む。一態様において、方法は、処置を必要とする対象に、本明細書に記載の癌関連抗原を発現する細胞と結合する有効量の本明細書に記載のＣＡＲ発現Ｔ細胞又はＮＫ細胞を有効量の別の治療と組み合わせて投与することを含む。
【０９６１】
医薬組成物及び処置：ＬＳＤ１阻害剤及びＣＡＲ発現細胞の組み合わせ
本発明の医薬組成物は、本明細書に記載のように、ＣＡＲ発現細胞、例えば複数のＣＡＲ発現細胞を１つ以上の薬学的に又は生理学的に許容される担体、希釈剤又は添加物と組み合わせて含む。医薬組成物は、１つ以上、例えば１つのＬＳＤ１阻害剤を更に含み得る。このような組成物は、中性緩衝化食塩水、リン酸緩衝化食塩水などの緩衝液；グルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；グリシンなどのポリペプチド又はアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；及び防腐剤を含み得る。本発明の組成物は、１つの態様において静脈内投与用に製剤される。
【０９６２】
本発明の医薬組成物を、処置する（又は予防する）疾患に適する方法で投与し得る。投与の量及び頻度は、患者の状態及び患者の疾患のタイプ及び重症度などの因子により決定されるが、適切な用量は、臨床試験により決定され得る。
【０９６３】
一実施形態において、医薬組成物は、例えば、エンドトキシン、マイコプラズマ、複製可能レンチウイルス（ＲＣＬ）、ｐ２４、ＶＳＶ−Ｇ核酸、ＨＩＶ  ｇａｇ、残留抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８被覆ビーズ、マウス抗体、貯留ヒト血清、ウシ血清アルブミン、ウシ血清、培養培地要素、ベクターパッケージング細胞又はプラスミド成分、細菌及び真菌からなる群から選択される汚染物が実質的になく、例えば検出可能なレベルで存在しない。一実施形態において、細菌は、アルガリゲネス・フェカリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）及びストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ａ群からなる群から選択される少なくとも１つである。
【０９６４】
「免疫学的に有効量」、「抗腫瘍有効量」、「腫瘍阻害有効量」又は「治療量」が示されるとき、本発明の組成物の投与すべき正確な量は、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染の程度又は転移及び患者（対象）の状態の個体差を考慮して医師が決定できる。本明細書に記載の免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を含む医薬組成物を、１０４〜１０９細胞／ｋｇ体重、いくつかの例において１０５〜１０６細胞／ｋｇ体重の範囲の用量（これらの範囲内の全整数値を含む）で投与し得ると一般に述べることができる。Ｔ細胞組成物をまたこの用量で複数回投与し得る。細胞を、免疫療法において一般に知られる注入技術を使用して投与できる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照されたい）。
【０９６５】
ある態様において、活性化免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を対象に投与し、次いで血液を採り（又はアフェレーシスを実施し）、本発明に従ってそれからの免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を活性化し、これらの活性化し、且つ増殖させた免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を患者に再注入することが望ましいことがある。この過程を数週間ごとに複数回実施できる。一態様において、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を１０ｃｃ〜４００ｃｃの採血した血液から活性化できる。一態様において、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ又は１００ｃｃの採血した血液から活性化する。
【０９６６】
対象組成物の投与は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸注、留置又は移植を含む任意の簡便な方法により実施し得る。本明細書に記載の組成物を患者に経動脈的に、皮下に、皮内に、腫瘍内に、節内に、髄内に、筋肉内に、静脈内（ｉ．ｖ．）注射により又は腹腔内に投与し得る。１つの態様において、本発明のＴ細胞組成物を患者に皮内又は皮下注射により投与する。１つの態様において、本発明のＴ細胞組成物をｉ．ｖ．注射により投与する。免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の組成物を腫瘍、リンパ節又は感染部位に直接注射し得る。
【０９６７】
特定の例示的態様において、対象は、白血球を採取し、エクスビボで富化又は枯渇させて、目的の細胞、例えばＴ細胞を選択及び／又は単離する白血球除去を受け得る。これらのＴ細胞単離体を当技術分野で知られる方法により増殖させ、１つ以上の本発明のＣＡＲ構築物が導入され、それにより本発明のＣＡＲ  Ｔ細胞が創製されるように処理し得る。処置を必要とする対象を、その後、高用量の化学療法剤と続く末梢血幹細胞移植の標準的処置に付し得る。一態様において、移植後又は移植と同時に、対象は、増殖させた本発明のＣＡＲ  Ｔ細胞の注入を受ける。更なる態様において、増殖細胞を手術前又は後に投与する。
【０９６８】
患者に投与すべき上記の処置の用量は、処置する状態の正確な性質及び処置のレシピエントにより変わる。ヒト投与のためのスケーリングは、当技術分野で認識されている習慣に従って実施できる。ＣＡＭＰＡＴＨの用量は、例えば、概して成人患者に１〜約１００ｍｇの範囲であり、通常、連日で１〜３０日の期間にわたって投与する。好ましい１日用量は、１〜１０ｍｇ／日であるが、いくつかの例において最大４０ｍｇ／日までの高用量を使用し得る（米国特許６，１２０，７６６号明細書に記載）。
【０９６９】
一実施形態において、ＣＡＲを、例えば、インビトロ転写を使用して免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）に導入し、対象（例えば、ヒト）は、本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の初期投与と、その後の本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の１回以上の投与とを受け、その後の１回以上の投与は、先の投与後、１５日、例えば１４日、１３日、１２日、１１日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日又は２日未満で行う。一実施形態において、本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の１回を超える投与を対象（例えば、ヒト）に１週間当たりに行い、例えば本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の２回、３回又は４回投与を１週間当たりに投与する。一実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の１週間当たり１回を超える投与を受け（例えば、１週間当たり２回、３回又は４回投与）（本明細書ではサイクルとも称される）、続いて１週間、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を投与されず、次いで更にＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の１回以上の更なる投与（例えば、１週間当たりでＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の１回を超える投与）を対象に投与する。別の実施形態において、対象（例えば、ヒト対象）は、２サイクル以上のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｅ細胞、ＮＫ細胞）を受け、各サイクル間の時間は、１０、９、８、７、６、５、４又は３日未満である。一実施形態において、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、１週間当たり３回の投与のために隔日投与される。一実施形態において、本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）を、少なくとも２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間又はそれを超えて投与する。
【０９７０】
一態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞は、レンチウイルスなどのレンチウイルスウイルスベクターを使用して産生される。この方法で産生された細胞、例えばＣＡＲＴは、安定なＣＡＲ発現を有する。
【０９７１】
一態様において、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲＴを、γレトロウイルスベクター、例えば本明細書に記載のγレトロウイルスベクターなどのウイルスベクターを使用して産生する。これらのベクターを使用するＣＡＲＴ産生は、安定なＣＡＲ発現を有し得る。
【０９７２】
一態様において、ＣＡＲＴは、形質導入後４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５日間、ＣＡＲベクターを一過性に発現する。ＣＡＲの一過性発現は、ＲＮＡ  ＣＡＲベクター送達により行われ得る。一態様において、ＣＡＲ  ＲＮＡを電気穿孔法によりＴ細胞に形質導入する。
【０９７３】
一過性に発現されるＣＡＲ免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）（特にマウスｓｃＦｖ担持ＣＡＲＴを伴う）を使用して処置される患者で生じ得る可能性のある問題は、複数処置後のアナフィラキシーである。
【０９７４】
この理論に拘束されることを望まないが、このようなアナフィラキシー応答は、液性抗ＣＡＲ応答を発達させる患者、即ち抗ＩｇＥアイソタイプを有する抗ＣＡＲ抗体が原因であると考えられる。細胞を産生する患者の抗体は、抗原への暴露の１０〜１４日の中断があるとき、ＩｇＧアイソタイプ（これはアナフィラキシーを生じない）からＩｇＥアイソタイプへのクラススイッチを受けると考えられる。
【０９７５】
患者が一過性ＣＡＲ治療（例えば、ＲＮＡ形質導入により完成されたものなど）中に抗ＣＡＲ抗体応答を産生する高リスクにある場合、ＣＡＲＴ注入中断は、１０〜１４日を超えて継続してはならない。
【０９７６】
ＣＡＲ発現細胞を作製する方法
別の態様において、本発明は、細胞、例えば本明細書に記載のＴ細胞又はＮＫ細胞に、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子をコードする核酸を含むベクター；又はＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸を導入（例えば、形質導入）することを含む、細胞（例えば、免疫エフェクター細胞又はその集団）を作製する方法に関する。
【０９７７】
本方法における細胞は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞又はそれらの組み合わせ）である。一部の実施形態において、方法における細胞は、ジアグリセロールキナーゼ（ＤＧＫ）及び／又はイカロス欠損である。
【０９７８】
一部の実施形態において、ＣＡＲ分子をコードする核酸分子の導入は、ＣＡＲ分子をコードする核酸分子を含むベクターの形質導入又はＣＡＲ分子をコードする核酸分子のトランスフェクトを含み、核酸分子は、インビトロ転写ＲＮＡである。
【０９７９】
一部の実施形態において、方法は、
免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の集団を提供することと、
集団からＴ調節細胞を除去し、それによりＴ調節枯渇細胞の集団を提供することと
を更に含み、工程ａ）及びｂ）は、ＣＡＲ分子をコードする核酸を集団に導入する前に実施される。
【０９８０】
方法の実施形態において、Ｔ調節細胞は、ＣＤ２５＋Ｔ細胞を含み、抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメントを使用して細胞集団から除去される。抗ＣＤ２５抗体又はそのフラグメントは、基質、例えばビーズにコンジュゲートされ得る。
【０９８１】
他の実施形態において、工程（ｂ）から提供されるＴ制御性枯渇細胞集団は、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％未満のＣＤ２５＋細胞を含む。
【０９８２】
更に他の実施形態において、方法は、ＣＡＲ分子をコードする核酸の集団への導入前に、Ｔ調節枯渇及び腫瘍抗原枯渇細胞の集団を提供するために、ＣＤ２５を含まない腫瘍抗原を発現する細胞を集団から除去することを更に含む。腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ２０、ＣＤ１４又はＣＤ１１ｂ又はこれらの組み合わせから選択され得る。
【０９８３】
他の実施形態において、方法は、ＣＡＲ分子をコードする核酸の集団への導入前に、Ｔ調節枯渇及び阻害分子枯渇細胞の集団を提供するために、チェックポイント阻害剤を発現する細胞を集団から除去することを更に含む。チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ３、Ｂ７−Ｈ１、ＣＤ１６０、Ｐ１Ｈ、２Ｂ４、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＴＩＧＩＴ、ＣＴＬＡ−４、ＢＴＬＡ及びＬＡＩＲ１から選択され得る。
【０９８４】
本明細書に開示される更なる実施形態は、免疫エフェクター細胞の集団の提供を包含する。提供される免疫エフェクター細胞の集団は、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ及び／又はＣＤ４５ＲＯの１つ以上の発現に基づいて選択することができる。一実施形態において、提供される免疫エフェクター細胞の集団は、ＣＤ３＋及び／又はＣＤ２８＋である。
【０９８５】
方法の一実施形態において、方法は、ＣＡＲ分子をコードする核酸分子が導入された後に細胞の集団を増殖させることを更に含む。
【０９８６】
一実施形態において、細胞の集団は、８日以下の期間増殖される。
【０９８７】
実施形態において、細胞の集団は、５日の培養により増殖され、得られた細胞は、同じ培養条件において９日間培養で増殖された同じ細胞よりも強力である。
【０９８８】
他の実施形態において、５日間培養物中で増殖された細胞の集団は、同じ培養条件下において９日間培養で増殖された同じ細胞と比較して、抗原刺激による細胞倍加の少なくとも１倍、２倍、３倍又は４倍増加を示す。
【０９８９】
更に他の実施形態において、細胞の集団は、５日間の培養で増殖され、得られた細胞は、同じ培養条件下、９日間の培養により増殖された同じ細胞と比較してより高い炎症誘発性ＩＦＮ−γ及び／又はＧＭ−ＣＳＦレベルを示す。
【０９９０】
他の実施形態において、細胞の集団は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤及び／又は細胞表面の共刺激分子を刺激するリガンドの存在下、細胞を培養することにより増殖させる。薬剤は、抗ＣＤ３抗体、又はそのフラグメント及び／又は抗ＣＤ２８抗体、又はそのフラグメントとコンジュゲートしたビーズであり得る。
【０９９１】
他の実施形態において、細胞の集団は、フローサイトメトリーにより測定して、１４日の増殖期間にわたり、細胞の少なくとも２００倍、２５０倍、３００倍又は３５０倍の増加をもたらす１つ以上のインターロイキンを含む適切な培地で増殖させる。
【０９９２】
他の実施形態において、細胞の集団は、ＩＬ−１５及び／又はＩＬ−７存在下で増殖される。
【０９９３】
一実施形態において、方法は、適切な増殖期間後、細胞の集団を凍結保存することを更に含む。
【０９９４】
更に他の実施形態において、本明細書に開示される作製方法は、免疫エフェクター細胞集団を、テロメラーゼサブユニットをコードする核酸、例えばｈＴＥＲＴと接触させることを更に含む。テロメラーゼサブユニットをコードする核酸は、ＤＮＡであり得る。
【０９９５】
本発明は、外因性ＲＮＡを一過性に発現するＲＮＡ操作細胞、例えば本明細書に記載の細胞、例えば免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）の集団を産生する方法も提供する。方法は、インビトロ転写ＲＮＡ又は合成ＲＮＡを細胞に導入することを含み、ＲＮＡは、本明細書に記載のＣＡＲ分子をコードする核酸を含む。
【０９９６】
別の態様において、本発明は、対象に、有効量の、ＣＡＲ分子を発現する細胞、例えば本明細書に記載のＣＡＲ分子を含む細胞を投与することを含む、対象に抗腫瘍免疫を提供する方法に関する。一実施形態において、細胞は、自己Ｔ細胞又はＮＫ細胞である。一実施形態において、細胞は、同種異系Ｔ細胞又はＮＫ細胞である。一実施形態において、対象は、ヒトである。
【０９９７】
一態様において、本発明は、ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のものをコードする核酸分子を含むベクターでトランスフェクト又は形質導入された自己細胞の集団を含む。一実施形態において、ベクターは、レトロウイルスベクターである。一実施形態において、ベクターは、本明細書の他の箇所に記載する自己不活性化レンチウイルスベクターである。一実施形態において、ベクターは、細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞に送達（例えば、トランスフェクト又は電気穿孔により）され、ベクターは、本明細書に記載の本発明のＣＡＲ分子をコードする核酸分子を含み、これは、ｍＲＮＡ分子として転写され、本発明のＣＡＲがＲＮＡ分子から翻訳され、細胞表面に発現される。
【０９９８】
別の態様において、本発明は、ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の集団を提供する。一部の実施形態において、ＣＡＲ発現細胞集団は、種々のＣＡＲを発現する細胞の混合物を含む。例えば、一実施形態において、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の集団は、本明細書に記載の腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現する第１の細胞、及び本明細書に記載の第２の腫瘍抗原に結合する、異なる抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現する第２の細胞を含み得る。別の例として、ＣＡＲ発現細胞の集団は、本明細書に記載の腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第１の細胞、及び本明細書に記載の腫瘍抗原以外の標的に対する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第２の細胞を含み得る。一実施形態において、ＣＡＲ発現細胞集団は、例えば、初代細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第１の細胞及び二次シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第２の細胞、例えば共刺激シグナル伝達ドメインを含む。
【０９９９】
別の態様において、本発明は細胞の集団を提供し、集団内の少なくとも１つの細胞は、本明細書に記載の腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現し、第２の細胞は別の薬剤、例えばＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を発現する。例えば、一実施形態において、薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤であり得る。阻害分子の例は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４及びＴＧＦβを含む。一実施形態において、阻害分子を阻害する薬剤は、例えば、本明細書に記載の分子、例えば細胞に正のシグナルを提供する第２のポリペプチド、例えば本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインに結合した第１のポリペプチド、例えば阻害分子を含む薬剤である。一実施形態において、薬剤は、例えば、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ１６０、ＢＴＬＡ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３及び／又はＣＥＡＣＡＭ−５）、２Ｂ４及びＴＩＧＩＴ又はこれらのいずれかのフラグメントなどの阻害分子の第１のポリペプチド及び本明細書に記載の細胞内シグナル伝達ドメインである第２のポリペプチド（例えば、共刺激ドメイン（例えば、本明細書に記載される、例えば４１ＢＢ、ＣＤ２７又はＣＤ２８）及び／又は一次シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載のＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む）を含む。一実施形態において、薬剤は、ＰＤ−１又はそのフラグメントの第１のポリペプチド並びに本明細書に記載する細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、本明細書に記載するＣＤ２８、ＣＤ２７、ＯＸ４０又は４−ＩＢＢシグナル伝達ドメイン及び／又は本明細書に記載するＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン）の第２のポリペプチドを含む。
【１０００】
一実施形態において、例えば、本明細書に記載される、本発明のＣＡＲ分子をコードする核酸分子は、ｍＲＮＡ分子として発現される。一実施形態において、遺伝子改変された本発明のＣＡＲを発現する細胞、例えば免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞）は、所望のＣＡＲ（例えば、ベクター配列を伴わない）をコードするＲＮＡ分子を細胞にトランスフェクト又は電気穿孔することにより産生され得る。一実施形態において、本発明のＣＡＲ分子は、組換え細胞に組み込まれ、表面に発現されると、ＲＮＡ分子から翻訳される。
【１００１】
トランスフェクションに使用するためのｍＲＮＡの作成方法は、特別に設計したプライマーによる鋳型のインビトロ転写（ＩＶＴ）と、続くポリＡ付加とを含み、それにより、３’及び５’非翻訳配列（「ＵＴＲ」）（例えば、本明細書に記載の３’及び／又は５’ＵＴＲ）、５’キャップ（例えば、本明細書に記載の５’キャップ）及び／又は配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）（例えば、本明細書に記載のＩＲＥＳ）、発現させようとする核酸及びポリＡテールを含む構築物、典型的には５０〜２０００塩基長（配列番号３２）が産生される。このように産生されたＲＮＡは、様々な種類の細胞を効率的にトランスフェクトすることができる。一実施形態において、鋳型は、ＣＡＲの配列を含む。一実施形態において、ＲＮＡ  ＣＡＲベクターは、電気穿孔によって細胞、例えばＴ細胞又はＮＫ細胞に形質導入される。
【１００２】
【表９５】
2019532953.tif 000120
【１００３】
【表９６】
2019532953.tif 000121
【１００４】
【表９７】
2019532953.tif 000122
【１００５】
【表９８】
2019532953.tif 000123
【１００６】
【表９９】
2019532953.tif 000124
【実施例】
【１００７】
実施例１
ナイーブＴ細胞、例えばＴＳＣＭ細胞、増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）及び増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）において重要な遺伝子の同定。バーコード化ｓｈＲＮＡライブラリで形質導入したＴ細胞の次世代配列決定を実施して、ｓｈＲＮＡで阻害した場合、ナイーブＴ細胞、例えばｍＴＳＣＭ細胞の増殖を促進する遺伝子を発見した。標的上において、ＬＳＤ１は、阻害されるとよりナイーブなＴ細胞表現型を生じる遺伝子として出現した。Ｔ細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ細胞、表現型及び／又は機能に対するＬＳＤ１阻害の効果を更に下記のとおり試験した。
【１００８】
ＦＬ−ＬＳＤ１  ＬＣ−ＭＳアッセイ
本開示の代表的化合物をＤＭＳＯ中で連続的及び別々に３倍に希釈して、合計１２の濃度を得た。次いで、各濃度の試験化合物（各１００ｎＬ）を３８４ウェルＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＰｒｏｘｉＰｌａｔｅ  ３８４プラスプレートに０．８ｎＭ、完全長ＬＳＤ１のＭｏｓｑｕｉｔｏ（商標）溶液（５μＬ）によって移し、反応緩衝液（４０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００、１０ｍＭ  ＫＣｌ，１ｍＭ  ＤＴＴ）中の０．５μＭ  ＦＡＤをウェルに添加し、次いで試験化合物と３０分間インキュベートした。反応緩衝液中の１μＭのペプチド基質Ｈ３Ｋ４ｍｅ１（ヒストンＨ３［１−２１］−ビオチン）の溶液５μＬを添加し、それぞれ反応を開始させた。反応溶液中の最終成分は、０．４ｎＭ  ＦＬ−ＬＳＤ１、０．２５μＭ  ＦＡＤ及び０．５μＭ  Ｈ３Ｋ４ｍｅ１ペプチドと、種々の濃度の化合物とを含む。陽性対照は、試験化合物非存在下の酵素、０．２５μＭのＦＡＤ及び０．５μＭの基質からなり、陰性対照は、０．５μＭの基質のみからなった。各反応物を室温で６０分インキュベートし、次いで３μＬのクエンチ溶液（２．５％ＴＦＡと３２０ｎＭ  ｄ４−ＳＡＨ）の添加により、停止させた。反応混合物を１分間、２０００ｒｐｍで遠心分離（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ  ５８１０，Ｒｏｔｏｒ  Ａ−４−６２）し、Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ  ＵＦＬＣ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）に連結したＴｕｒｂｕｌｏｎ  Ｓｐｒａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ）を有するＡＰＩ  ４０００三連四重極質量分析で読み取った。Ｈ３Ｋ４ｍｅ１基質のＨ３Ｋ４ｍｅ０産物への変換率は、これらのペプチドのイオン化効率が同じであると仮定して、Ｈ３Ｋ４ｍｅ０ペプチドのピーク面積をこれらの２つのペプチドの総ピーク面積で除することにより計算した。次いで、データを、プログラムＨｅｌｉｏｓを使用して用量応答式に当てはめて、試験化合物のＩＣ５０値を得た。この方法により決定したＩＣ５０値を表３に示す。
【１００９】
実施例２
５−（６−クロロ−４’−（メチルスルホニル）ビフェニル−３−イル）−２−（ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボニトリル（１）の調製：
【化２５】
2019532953.tif 000125
中間体２−ブロモ−１−（３−ブロモ−４−クロロフェニル）エタノン（１ｂ）の調製：
【化２６】
2019532953.tif 000126
１−（３−ブロモ−４−クロロフェニル）エタノン（０．４ｇ、１．７１３ｍｍｏｌ）（１ａ）のＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）及びＣＨＣｌ３（１０．００ｍｌ）の混合物中の溶液に臭化銅（ＩＩ）（０．６８９ｇ、３．０８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を加熱還流し、３時間撹拌した。室温に冷却後、混合物に１０ｍＬのＮＨ４Ｃｌ（ａｑ）を添加し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機相を食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４（無水）で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥＡ／ＰＥ＝０：１００〜３：１００）で精製して、表題化合物（０．２３ｇ、５０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  ４．３９（ｓ，２Ｈ），７．５２−７．６５（ｍ，１Ｈ），７．７９−７．９６（ｍ，１Ｈ），８．１４−８．３７（ｍ，１Ｈ）．
【１０１０】
中間体ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（３−ブロモ−４−クロロフェニル）−３−シアノ−１Ｈ−ピロール−２−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１ｃ）の調製：
【化２７】
2019532953.tif 000127
（Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（１−アミノ−２−シアノビニル）ピペラジン−１−カルボキシレート（２４２ｍｇ、０．９６０ｍｍｏｌ）の無水ＥｔＯＨ（６ｍｌ）溶液に２−ブロモ−１−（３−ブロモ−４−クロロフェニル）エタノン（３００ｍｇ、０．９６０ｍｍｏｌ）（１ｂ）及び炭酸水素ナトリウム（３２３ｍｇ、３．８４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を加熱還流し、３時間撹拌した。室温に冷却後、混合物に１０ｍＬのＮＨ４Ｃｌ（ａｑ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機相を食塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４（無水）で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥＡ／ＰＥ＝０：１００〜２０：８０）で精製して、表題化合物（１８０ｍｇ、３６％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４６７．０．
【１０１１】
中間体ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（６−クロロ−４’−（メチルスルホニル）ビフェニル−３−イル）−３−シアノ−１Ｈ−ピロール−２−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１ｄ）の調製：
【化２８】
2019532953.tif 000128
ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（３−ブロモ−４−クロロフェニル）−３−シアノ−１Ｈ−ピロール−２−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（５０ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）（１ｃ）のＨ２Ｏ（０．０５０ｍｌ）及びｎ−プロパノール（０．５ｍｌ）の混合物中の溶液に４−（メチルスルホニル）フェニルボロン酸（４２．９ｍｇ、０．２１５ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）（７．５６ｍｇ、１０．７３μｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（２８．４ｍｇ、０．２６８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１００℃で１時間、Ｎ２下、マイクロ波で加熱した。室温に冷却後、混合物に５ｍＬのＮＨ４Ｃｌ（ａｑ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機相を食塩水（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４（無水）で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥＡ／ＰＥ＝０：１００〜３５：６５）で精製して、表題化合物（４０ｍｇ、６２％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．４７（ｓ，９Ｈ），３．０８（ｓ，３Ｈ），３．３３（ｂｒ  ｓ．，４Ｈ），３．５３（ｔ，Ｊ＝４．８９Ｈｚ，４Ｈ），６．２６−６．６７（ｍ，１Ｈ），７．３８−７．５３（ｍ，３Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝８．２８Ｈｚ，２Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝８．２８Ｈｚ，２Ｈ），８．８７−９．０５（ｍ，１Ｈ）．
【１０１２】
５−（６−クロロ−４’−（メチルスルホニル）ビフェニル−３−イル）−２−（ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ピロール−３−カルボニトリル（１）の調製：
【化２９】
2019532953.tif 000129
ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（６−クロロ−４’−（メチルスルホニル）ビフェニル−３−イル）−３−シアノ−１Ｈ−ピロール−２−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１ｄ）（３０ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）及びＨＣｌのＥｔＯＡｃ（２ｍｌ、２．０００ｍｍｏｌ）中の混合物を２５℃で１時間撹拌した。沈殿を濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄して、所望の生成物（２５ｍｇ、９７％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ−ｄ４）δ  ｐｐｍ  ３．２０（ｓ，３Ｈ），３．３９−３．４２（ｍ，４Ｈ），３．６４−３．６６（ｍ，４Ｈ），６．６７（ｓ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８．６８Ｈｚ，１Ｈ），７．６０−７．６３（ｍ，２Ｈ），７．７４−７．７６（ｍ，２Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝８．２０Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４４１．１．
【１０１３】
実施例３
Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−（（４−（４−（４−（ピペリジン−４−イル）フェニル）−１Ｈ−インダゾール−１−イル）フェニル）スルホニル）ピペリジン−４−アミン（２）の調製：
【化３０】
2019532953.tif 000130
中間体ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）ピペリジン−１−カルボキシレート（２ａ）の調製：
【化３１】
2019532953.tif 000131
ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−ブロモフェニル）ピペリジン−１−カルボキシレート（５１０ｍｇ、１．４９９ｍｍｏｌ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）（７６１ｍｇ、３ｍｍｏｌ）及びＫＯＡｃ（４４１ｍｇ、４．５ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（２０ｍｌ）中の混合物をＮ２で脱気し、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２（１２２ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を再びＮ２で脱気し、８０℃で一晩加熱した。室温に冷却後、混合物に１０ｍＬのＮＨ４Ｃｌ（ａｑ）を添加し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機相を食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４（無水）で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＥＡ／ヘキサン＝０：１００〜１：５）で精製して、表題化合物（５００ｍｇ、８６％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．２７（ｓ，９Ｈ），１．３４（ｓ，１２Ｈ），１．５７−１．７２（ｍ，２Ｈ），１．８２（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１３．０５Ｈｚ，２Ｈ），２．６６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），２．８０（ｂｒ  ｔ，Ｊ＝１２．０５Ｈｚ，２Ｈ），４．２５（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１２．８０Ｈｚ，２Ｈ），７．１１−７．４２（ｍ，２Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．０３Ｈｚ，２Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ−１００］＋＝２８８．２．
【１０１４】
中間体１−（（４−ヨードフェニル）スルホニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルピペリジン−４−アミン（２ｂ）の調製：
【化３２】
2019532953.tif 000132
４−ヨードベンゼン−１−スルホニルクロライド（２ｇ、６．６１ｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジメチルピペリジン−４−アミン（０．８４８ｇ、６．６１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍｌ）溶液にＴＥＡ（１．１１５ｍｌ、７．９３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳは、反応が完了したことを示した。混合物を濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＤＣＭ＝０：１００〜１０：１００）で精製して、表題化合物（２．８５ｇ、９８％）を白色固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ−ｄ４）δ  ｐｐｍ  １．３８−１．６１（ｍ，２Ｈ），１．８６（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．８０Ｈｚ，２Ｈ），２．１９−２．５６（ｍ，６Ｈ），３．０１（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝６．５３Ｈｚ，３Ｈ），３．６１（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．８０Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，２Ｈ），８．０２（ｓ，２Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３９４．９．
【１０１５】
中間体１−（（４−（４−ブロモ−１Ｈ−インダゾール−１−イル）フェニル）スルホニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルピペリジン−４−アミン（２ｃ）の調製：
【化３３】
2019532953.tif 000133
１−（（４−ヨードフェニル）スルホニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルピペリジン−４−アミン（２ｂ）（５５０ｍｇ、１．２５５ｍｍｏｌ）、４−ブロモ−１Ｈ−インダゾール（２９７ｍｇ、１．５０７ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（５２１ｍｇ、３．７７ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１０ｍｌ）中の混合物をＮ２で脱気し、Ｌ−プロリン（１１６ｍｇ、１．００４ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（９６ｍｇ、０．５０２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を再びＮ２で脱気し、１０５℃で１８時間加熱した。室温に冷却後、混合物に１０ｍＬのＮＨ４Ｃｌ（ａｑ）を添加し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機相を食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４（無水）で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物（１７０ｍｇ、２９．２％）を白色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４６３．０；［Ｍ＋Ｈ＋２］＋＝４６５．０．
【１０１６】
中間体ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（１−（４−（（４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル）スルホニル）フェニル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル）フェニル）ピペリジン−１−カルボキシレート（２ｄ）の調製：
【化３４】
2019532953.tif 000134
ジオキサン（８ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１．６ｍＬ）の混合物中のｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）ピペリジン−１−カルボキシレート（２ａ）（２５１ｍｇ、０．６４７ｍｍｏｌ）、１−（（４−（４−ブロモ−１Ｈ−インダゾール−１−イル）フェニル）スルホニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルピペリジン−４−アミン（２ｃ）（２００ｍｇ、０．４３２ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（１７９ｍｇ、１．２９５ｍｍｏｌ）の混合物にＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）．ＣＨ２Ｃｌ２付加物（３５．２ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）をＮ２雰囲気下で添加した。反応混合物をマイクロ波下、１００℃で３０分間加熱した。室温に冷却後、混合物に１０ｍＬのＮＨ４Ｃｌ（ａｑ）を添加し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機相を食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４（無水）で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物（１２０ｍｇ、４３．２％）を白色固体として得た。ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６４４．３．
【１０１７】
Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−（（４−（４−（４−（ピペリジン−４−イル）フェニル）−１Ｈ−インダゾール−１−イル）フェニル）スルホニル）ピペリジン−４−アミン（２）の調製：
【化３５】
2019532953.tif 000135
ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−（１−（４−（（４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル）スルホニル）フェニル）−１Ｈ−インダゾール−４−イル）フェニル）ピペリジン−１−カルボキシレート（２ｄ）（４９０ｍｇ、０．７６１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液にＥｔＯＡｃ中１ＭのＨＣｌ（１０ｍＬ）を添加した。混合物を４０℃で３時間撹拌した。混合物を濃縮し、減圧乾燥して、表題化合物（４８６ｍｇ、９６％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ  ｐｐｍ  １．６７−１．７８（ｍ，２Ｈ），１．８７−２．１５（ｍ，６Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝１１．４２Ｈｚ，２Ｈ），２．６６（ｄ，Ｊ＝４．５２Ｈｚ，６Ｈ），２．８９−３．１１（ｍ，３Ｈ），３．１９（ｂｒ  ｓ．，１Ｈ），３．４０（ｄ，Ｊ＝１２．５５Ｈｚ，２Ｈ），３．８５（ｄ，Ｊ＝１１．５４Ｈｚ，２Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝７．７８Ｈｚ，２Ｈ），７．６６（ｔ，Ｊ＝７．９１Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．０３Ｈｚ，２Ｈ），７．９２−８．０４（ｍ，３Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，２Ｈ），８．５６（ｓ，１Ｈ）８．７３−８．８９（ｍ，１Ｈ）１０．５２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５４４．２．
【１０１８】
実施例４  −  ＬＳＤ１阻害剤の検討
ＣＡＲ１９レンチウイルス構築物の産生
実施例で評価したＣＡＲ１９構築物において使用したｓｃＦｖは、抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ配列に基づいて個々に合成した（国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに記載のとおり）。ｓｃＦｖを、ＶＬ及びＶＨドメインを結合する可動性リンカーを用いて、４−１ＢＢ分子及びＣＤ３ζ分子と共にＣＤ８ヒンジ領域を含むベクター骨格に軽鎖から重鎖の方向にクローン化した。
【１０１９】
細胞株及び細胞形質導入
ヒトＴ細胞を、ＣＡＲ１９プラスミドＤＮＡでトランスフェクトした２９３Ｔ細胞からのレンチウイルス上清を用いたスピノキュレーションにより形質導入した。
【１０２０】
癌細胞
ＮＡＬＭ６及びＫ５６２細胞株をＡＴＣＣから得て、供給元の推奨に従って培地中で維持した。Ｔ細胞死滅アッセイのための生物発光モデルを産生するために、全ての細胞をルシフェラーゼレンチウイルス構築物で形質導入し、抗生物質選択下に維持した。
【１０２１】
フローサイトメトリー
細胞をインビトロ培養物から単離し、ＭＡＣＳ＋０．５％ＢＳＡ緩衝液で１回洗浄し、蛍光色素コンジュゲートストレプトアビジン試薬とのインキュベーションが後続するビオチニル化タンパク質Ｌ又は所与の標的抗原を認識する抗体を使用して氷上で染色した。全検体において、目的の集団を前方対側方散乱光特徴に基づき、続いて一重項ゲーティングによりゲーティングし、生存細胞をゲーティングした。フローサイトメトリーを４レーザーＦｏｒｔｅｓｓａ（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で実施した。
【１０２２】
化合物処置
全ての場合において、化合物を化合物の溶解度に応じて水（Ｈ２Ｏ）又はＤＭＳＯのいずれかに再懸濁させた。全ての場合において、化合物を、Ｔ細胞培養を通して添加し、Ｔ細胞をアッセイ前に徹底的に洗浄した。使用した化合物及び濃度は、５ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−７及び５ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−１５（組換えタンパク質；Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）、５μＭ  ＴＷＳ１１９（ＧＳＫ３ｂｉ又はＧＳＫ３β−ｉとも称される）（ＧＳＫ３−β阻害剤；ＣＡＳ番号６０１５１４−１９−６；Ｃａｙｍａｎ）、１μＭ  Ａｋｔ  Ｉ／ＩＩｉ（ＡＫＴｉ又はＡｋｔＩ／ＩＩ  ｉｎｈとも称される）（Ａｋｔ阻害剤ＶＩＩＩ、アイソザイム選択的、Ａｋｔｉ−１／２；ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、１００ｎＭ  ＬＳＤ１ｉ−ＧＳＫ（ＧＳＫ−ＬＳＤ１阻害剤、ＣＡＳ番号１４３１３６８−４８−７、Ｓｉｇｍａ）、２００ｎＭ  ＬＳＤ１ｉ−ＥＭＤ（ＬＳＤ１阻害剤ＩＶ、ＲＮ−１、ＨＣｌ；ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、１００ｎＭ化合物Ａ（ＬＳＤ１阻害剤；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、１００ｎＭ化合物Ｂ（ＬＳＤ１阻害剤；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）又は１００ｎＭ化合物Ｃ（ＬＳＤ１阻害剤；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）が使用された。図において、「対照」は、更なる化合物を添加していないビヒクルを指す。ＩＬ７／ＩＬ１５、ＴＷＳ１１９及びＡｋｔ  Ｉ／Ｉｉｉは、ＴＳＣＭＴ細胞を増殖させることが当技術分野において公知である、公開された化合物である（ＩＬ７／ＩＬ１５：Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２３（２４）：３７５０−９；ＡＫＴｉ：Ｃｒｏｍｐｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１５；７５（２）：２９６−３０５及びｖａｎ  ｄｅｒ  Ｗａａｒｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２０１４；１２４（２３）：３４９０−５００；ＴＷＳ１１９：Ｇａｔｔｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１１；１７（１０）：１２９０−１２９）。
【１０２３】
死滅アッセイ
Ｔ細胞死滅は、ルシフェラーゼを安定に発現するＣＡＲ１９発現ＮＡＬＭ６細胞株に指向された。非形質導入細胞（ＵＴＤ）及び非標的アイソタイプ対照ｓｃＦｖ  ＣＡＲＴ（ＩｓｏＣＡＲ）を使用して、非特異的バックグラウンド死滅レベルを決定した。ＣＡＲ１９の細胞溶解活性は、エフェクターが全Ｔ細胞として定義される場合、エフェクター：標的細胞比１０：１の力価及びＴ細胞の２倍下方希釈として測定され、ＣＡＲ担持Ｔ細胞のパーセンテージは、ＵＴＤ  Ｔ細胞の添加によって正規化した。アッセイを適切な数のＴ細胞と一定数の標的細胞の混合により開始した。２０時間後、ルシフェラーゼシグナルを、ＥｎＶｉｓｉｏｎ装置でＢｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイを使用して測定した。ルシフェラーゼ活性喪失は、特異的死滅を示す。
【１０２４】
サイトカイン分泌
Ｔ細胞死滅は、ルシフェラーゼを安定に発現するＣＡＲ１９発現ＮＡＬＭ６細胞株に指向された。非形質導入細胞（ＵＴＤ）及び非標的アイソタイプ対照ｓｃＦｖ  ＣＡＲＴ（ＩｓｏＣＡＲ）を使用して、非特異的バックグラウンドサイトカインレベルを決定した。エフェクター及び標的細胞を１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩで３：１比において１８時間インキュベートした。上清を製造業者の説明書（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に従って３重アレイによって分析した。
【１０２５】
増殖アッセイ
ＣＡＲ１９  Ｔ細胞を、標的細胞上の抗原への暴露に応答して増殖する能力について試験した。標的細胞は、ＮＡＬＭ６、Ｒａｊｉ及びＫ５６２４細胞を含んでいた。非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）及び非標的アイソタイプ対照ｓｃＦｖ  ＣＡＲＴ（ＩｓｏＣＡＲ）をバックグラウンドＴ細胞効果について非特異的対照として使用した。アッセイの日（０日目）、標的細胞を計数し、６ｍＬのＴ細胞培地中、３ｅ６細胞／ｍｌで、５０ｍｌチューブへ移した。標的細胞を氷上において１０，０００ｒａｄで照射した。照射後、標的細胞をＴ細胞培地中で２回洗浄し、計数し、氷上でＴ細胞培地中、５ｅ５細胞／ｍｌに再懸濁した。
【１０２６】
凍結形質導入Ｔ細胞を解凍し、１０ｍＬの完全Ｔ細胞培地中で洗浄し、３００ｇで１０分間回転させ、室温で３ｍＬの完全Ｔ細胞培地中に穏やかに再懸濁させた。次いで、Ｔ細胞をｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒで計数し、１０ｍＬの培地中、２．５ｅ６／ｍＬに再懸濁した。９６ウェルＵ底プレートにおいて、２５，０００の照射標的細胞及び２５，０００の形質導入ＣＡＲ  Ｔ細胞（１：１比）を二連のウェルにおいて組み合わせた。個別のウェルにおいて、７５，０００抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを、陽性対照として、２５，０００の形質導入Ｔ細胞が１：３の細胞対ビーズ比を生成するように培地１００μｌ中に添加し、別のウェルにおいて、培地のみ対照として、１００μｌの培地を２５，０００の形質導入Ｔ細胞に単独で添加した。細胞を４日間にわたって３７℃において５％ＣＯ２でインキュベートした。
【１０２７】
４日目に、細胞を採取し、タンパク質Ｌを使用してＣＤ３及びＣＡＲのＦＡＣＳについて染色するため、ピペッティング及びＵ底プレート上の同じウェルに移すことによって複製物を合わせた。染色後、細胞を１２０μｌ  ＭＡＣＳ＋０．５％ＢＳＡ緩衝液に再懸濁させ、２０μｌ／ウェルのｃｏｕｎｔｂｒｉｇｈｔビーズを各ウェルに添加した。増殖は、２５００個のビーズを計数するために使用された期間中に検出されたＦＡＣＳ陽性細胞の数として測定した。
【１０２８】
結果
ｓｈＲＮＡによるＬＳＤ１の阻害は、ＴＳＣＭ細胞の増殖を促進する
Ｔ細胞を陰性選択により単離し、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。１日目に、蛍光タンパク質ｍＣｈｅｒｒｙを共発現したＬＳＤ１  ｓｈＲＮＡ標的配列を含むレンチウイルス発現ベクターでＴ細胞を形質導入した。増殖後、ｍＣｈｅｒｒｙ＋Ｔ細胞のＴ細胞表現型をフローサイトメトリーにより評価した。ＬＳＤ１阻害は、スクランブルｓｈＲＮＡ配列を有する対照と比較してＣＤ８＋（図１）及びＣＤ４＋（図２）Ｔ細胞におけるナイーブ（Ｔｎ）及び幹様記憶細胞（ＴＳＣＭ）細胞のパーセンテージを有意に増強した。
【１０２９】
結果をＣＤ８＋Ｔ細胞について図１に示す。ＣＤ８＋Ｔ細胞を普通に増殖させたとき、得られるＴ細胞のおよそ１０％がＴＳＣＭ表現型（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋ＣＣＲ７＋ＣＤ２７＋ＣＤ９５＋）について陽性である。対照的に、ＣＤ８＋Ｔ細胞を、ｓｈＲＮＡ分子をコードするＤＮＡでＬＳＤ１  １Ａ、１Ｂ又は２にトランスフェクトした場合、得られたＴ細胞集団は、ＴＳＣＭ（例えば、ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋ＣＣＲ７＋ＣＤ２７＋ＣＤ９５＋）に富み、細胞の５０％近くがＴＳＣＭ（例えば、ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋ＣＣＲ７＋ＣＤ２７＋ＣＤ９５＋）表現型を有していた。
【１０３０】
結果をＣＤ４＋Ｔ細胞について図２に示す。ＣＤ４＋Ｔ細胞を普通に増殖させたとき、得られるＴ細胞の２％未満がＴＳＣＭ表現型（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋ＣＣＲ７＋ＣＤ２７＋ＣＤ９５＋）について陽性である。対照的に、ＣＤ４＋Ｔ細胞を、ｓｈＲＮＡ分子をコードするＤＮＡでＬＳＤ１  １Ａ、１Ｂ又は２にトランスフェクトした場合、得られたＴ細胞集団は、ＴＳＣＭ（例えば、ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋ＣＣＲ７＋ＣＤ２７＋ＣＤ９５＋）に富み、ｓｈＲＮＡ  １Ｂの場合、Ｔ細胞の最大２０％がＴＳＣＭ（例えば、ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋ＣＣＲ７＋ＣＤ２７＋ＣＤ９５＋）表現型を有していた。
【１０３１】
【表１００】
2019532953.tif 000136
【１０３２】
小分子によるＬＳＤ１の阻害は、ＴＳＣＭ細胞の増殖を促進する
示された化合物が所与の表現型のＴ細胞を産生する能力を評価した。ナイーブヒトＴ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の存在下、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。化合物を２日ごとに補充した。増殖後、Ｔ細胞表現型をＦＡＣＳ染色により決定した。ＬＳＤ１阻害は、対照と比較して及び当技術分野でＴＳＣＭ増殖に影響を与えると考えられる他の分子に対してＴＳＣＭ細胞のパーセンテージを有意に増強し、ＣＤ４＋（図３Ａ）及びＣＤ８＋（図３Ｂ）Ｔ細胞におけるＴＥＭ細胞の割合を制限する。
【１０３３】
小分子によるＬＳＤ１の阻害は、ＴＳＣＭ対ＴＥＭＴ細胞の優れた比率を促進する
示された化合物が所与の表現型のＴ細胞を産生する能力を評価した。ナイーブヒトＴ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の存在下、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。化合物を２日ごとに補充した。増殖後、Ｔ細胞表現型をＦＡＣＳ染色により決定した。ＬＳＤ１阻害は、対照に対して及び当技術分野でＴＳＣＭ増殖に影響を与えると考えられる他の分子に対して、ＣＤ４＋（図４Ａ）及びＣＤ８＋（図４Ｂ）Ｔ細胞における優れたＴ機能性と一致してＴＳＣＭ対ＴＥＭの比率を促進する。
【１０３４】
ＬＳＤ１阻害の存在下でのＴ細胞増殖
示された化合物の存在下でＴ細胞が増殖する能力を評価した。ナイーブヒトＴ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の存在下、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。化合物を２日ごとに補充した。増殖後、Ｔ細胞数を計数し、１日目に対する増殖倍率を評価した。ＬＳＤ１阻害は、対照と比較して及び当技術分野でＴＳＣＭ増殖に影響を与えると考えられる他の分子と比較してＴ細胞増殖を有意に損なわない（図５）。
【１０３５】
Ｔ細胞におけるチェックポイント受容体の発現
理論に拘束されないが、複数のチェックポイント受容体の共発現は、Ｔ細胞機能不全と関連すると考えられる。示された化合物がＴ細胞におけるチェックポイント受容体の発現を減少させる能力を評価した。ナイーブヒトＴ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の存在下、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。化合物を２日ごとに補充した。増殖後、Ｔ細胞表現型をＦＡＣＳ染色により決定した。ＬＳＤ１阻害は、対照と比較してＴ細胞におけるＰＤ１、Ｔｉｍ３及びＬＡＧ３の共発現を減少させる（図６）。
【１０３６】
ＬＳＤ１阻害は、ＣＡＲＴ１９細胞発現に対して効果がない
全ヒトＴ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の存在下、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。化合物を２日ごとに補充した。増殖後、ＣＡＲ１９発現を、タンパク質Ｌを用いたＦＡＣＳ染色により決定した。ＬＳＤ１阻害は、ＣＡＲ１９発現に効果がない（図７）。
【１０３７】
ＬＳＤ１阻害は、ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞比率に効果がない
全ヒトＴ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の存在下、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。化合物を２日ごとに補充した。増殖後、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージをフローサイトメトリーにより評価決定した。ＬＳＤ１阻害は、非形質導入対照（ＵＴＤ）又はＣＡＲ１９形質導入Ｔ細胞のいずれにおいてもＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージに影響を及ぼさない（図８）。
【１０３８】
ＬＳＤ１阻害は、ＣＡＲＴ１９細胞の増殖に効果がない
全ヒトＴ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の存在下、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。化合物を２日ごとに補充した。増殖後、Ｔ細胞数を計数し、１日目に対する増殖倍率を評価した。ＣＡＲ１９  Ｔ細胞は、ＬＳＤ１阻害剤の存在下、エクスビボで増殖することができ、これは、ＬＳＤ１阻害が非形質導入対照（ＵＴＤ）又はＣＡＲ１９形質導入Ｔ細胞においてＴ細胞増殖を有意に損なわないことを示す（図９）。
【１０３９】
ＬＳＤ１阻害は、ＣＡＲＴ１９からのサイトカイン産生を増強する
Ｔ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の存在下又は処置なし（対照）で、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。Ｔ細胞を１日目に抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖで形質導入した。化合物を１０日目まで２日ごとに補充し、機能的アッセイ前に洗い流し、次いでＴ細胞を凍結させた。Ｔ細胞を解凍し、ＮＡＬＭ６細胞と２０時間インキュベートした。上清を採取し、サイトカインビーズアレイにより解析した。ＬＳＤ１阻害は、ＣＡＲ１９  Ｔ細胞からのサイトカイン産生を有意に増強する（図１０）。
【１０４０】
ＬＳＤ１阻害は、ＣＡＲＴ１９細胞の増殖を増強する
Ｔ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の存在下又は処置なし（対照）で、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。Ｔ細胞を１日目に抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖで形質導入した。化合物を１０日目まで２日ごとに補充し、機能的アッセイ前に洗い流し、次いでＴ細胞を凍結させた。次いで、Ｔ細胞を解凍し、ＣＤ１９＋腫瘍細胞株ＮＡＬＭ６及びＲａｊｉ並びにＣＤ１９−腫瘍細胞株Ｋ５６２と混合した。腫瘍細胞を照射し、Ｔ細胞及び腫瘍細胞を、１：１の比率で混合した。インキュベーション後４日目に、Ｔ細胞を、タンパク質Ｌを使用してＣＡＲについて染色し、ＣＡＲ＋Ｔ細胞数を、ｃｏｕｎｔｂｒｉｇｈｔビーズを使用してＦＡＣＳにより決定した。増殖は、２５００個のビーズを計数するために使用された期間中に検出されたＦＡＣＳ陽性細胞の数として測定した。データを無標的対照（Ｋ５６２）の倍率として表した。ＬＳＤ１阻害は、ＣＤ１９＋腫瘍標的に対するＣＡＲ１９  Ｔ細胞の増殖能を増強する（図１１）。
【１０４１】
ＣＡＲＴ１９細胞の死滅能力におけるＬＳＤ１阻害の効果
Ｔ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の存在下又は処置なし（対照）で、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。Ｔ細胞を１日目に抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖで形質導入した。化合物を１０日目まで２日ごとに補充し、機能的アッセイ前に洗い流し、次いでＴ細胞を凍結させた。Ｔ細胞を解凍し、示されたルシフェラーゼ化細胞株標的と２０時間インキュベートした。死滅パーセントを残存ルシフェラーゼ活性の解析により決定した。これらのデータは、ＬＳＤ１阻害が低Ｅ：Ｔ比でＣＡＲ１９  Ｔ細胞の死滅能力を増大させることができるが、高Ｅ：Ｔ比では死滅能力に有意な影響を与えないことを示す（図１２）。
【１０４２】
ＬＳＤ１の阻害は、インビボでＣＡＲＴ１９細胞の有効性を促進増強する
Ｔ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の存在下又は処置なし（対照）で、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。Ｔ細胞を１日目に抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖで形質導入した。化合物を１０日目まで２日ごとに補充し、機能的アッセイ前に洗い流し、次いでＴ細胞を凍結させた。Ｔ細胞を解凍し、確立されたルシフェラーゼ化ＮＡＬＭ６腫瘍を担持するマウスに一度注射した。示される用量は、注射した総ＣＡＲ＋細胞数を表す。これらのデータは、インビトロでの増殖の過程におけるＬＳＤ１の阻害がインビボでのＣＡＲ１９  Ｔ細胞の抗腫瘍エフェクター機能を有意に増強し得ることを示す（図１３）。
【１０４３】
複数のＬＳＤ１阻害剤は、ＴＳＣＭ細胞の増殖を促進する
Ｔ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の存在下又は処置なし（対照）で、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。化合物を２日ごとに補充した。増殖後、Ｔ細胞表現型をフローサイトメトリーにより決定した。複数の阻害剤によるＬＳＤ１阻害は、対照と比較してＣＤ４＋（図１４Ａ）及びＣＤ８＋（図１４Ｂ）Ｔ細胞におけるＴＳＣＭ細胞のパーセンテージを有意に増強することができる。
【１０４４】
Ｔ細胞におけるチェックポイント受容体の発現
Ｔ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の存在下又は処置なし（対照）で、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。化合物を２日ごとに補充した。増殖後、Ｔ細胞チェックポイント受容体発現をフローサイトメトリーにより決定した。複数のＬＳＤ１阻害剤は、対照と比較してＣＤ４＋（図１５Ａ）及びＣＤ８＋（図１５Ｂ）Ｔ細胞上のＰＤ１、Ｔｉｍ３及びＬＡＧ３の共発現を減少させることができる。
【１０４５】
実施例５：
化合物６５（「実施例６５」）；本明細書では「ＮＶＳ化合物２」とも称する
３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリル
中間体６５．１：１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリル
【化３６】
2019532953.tif 000137
６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリル（１ｇ、６．４０３ｍｍｏｌ）、１−ブロモ−４−メトキシベンゼン（１．８ｇ、９．６０５ｍｍｏｌ）、１，１０−フェナントロリン（４６１ｍｇ、２．５６１ｍｍｏｌ）、Ｃｕ２Ｏ（１８３ｍｇ、１．２８１ｍｍｏｌ）及び１９．２ｍＬの１Ｎ  ＴＢＡＦ溶液のＴＨＦ中の混合物を減圧濃縮して溶媒を除去した。次いで、残渣をＮ２雰囲気下で６．５時間、１５０℃に加熱した。次いで、混合物を冷却し、水及びＥＡで希釈し、濾過して無機固体を除去した。濾液を分離し、水相をＥＡで２回抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して粗生成物を得て、それをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＰＥ／ＥＡ＝１０：１〜８：１）で精製して、表題化合物（４８６ｍｇ、２９％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  ７．９９（ｓ，１Ｈ），７．４５−７．３４（ｍ，２Ｈ），７．３２（ｄ，１Ｈ），７．２９（ｓ，１Ｈ），７．１３−７．０２（ｍ，２Ｈ），６．６８（ｄ，１Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），２．６２（ｓ，３Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６３．２．
【１０４６】
中間体６５．２：３−ブロモ−１−（４−メトキシフェニル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリル
【化３７】
2019532953.tif 000138
２０℃で、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の化合物６５．１（４８５ｍｇ、１．８４９ｍｍｏｌ）の溶液にＮＢＳ（３６２ｍｇ、２．０３４ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。添加後、溶液を室温で１時間撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＥＡで３回抽出した。有機層を合わせて食塩水で３回洗浄した。これを無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して粗生成物を得て、それをシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＰＥ／ＥＡ、ＥＡ％＝８％）で精製して、表題化合物（５２６ｍｇ、８３％）を固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  ７．９４（ｓ，１Ｈ），７．３８−７．３３（ｍ，３Ｈ），７．２９（ｓ，１Ｈ），７．１０−７．０４（ｍ，２Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），２．６２（ｓ，３Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３４１．３，３４３．３．
【化３８】
2019532953.tif 000139
【１０４７】
ｉ−ＰｒＯＨ／Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ、１０：１）の共溶媒中の化合物６５．２（５００ｍｇ、１．４６５ｍｍｏｌ）及び２−メチル−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）アニリン（４４４ｍｇ、１．９０５ｍｍｏｌ）の混合物に２Ｎ  Ｎａ２ＣＯ３水溶液（４．４ｍＬ、８．８ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（８２ｍｇ、０．１１７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ２雰囲気下、１００℃で１．５時間撹拌した。次いで、反応混合物を食塩水で希釈し、ＥＡで３回抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して粗生成物を得て、それをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＰＥ／ＥＡ＝４：１〜３：１）で精製して、５００ｍｇの粗生成物を得た。粗生成物の３００ｍｇを分取ＨＰＬＣ（０．１％ＮＨ３．Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ）により精製し、凍結乾燥して、表題化合物（１２５ｍｇ、３９％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ７．７４（ｓ，１Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ），７．６２−７．５４（ｍ，２Ｈ），７．４９（ｓ，１Ｈ），７．２２−７．１３（ｍ，２Ｈ），６．９９（ｔ，１Ｈ），６．７４−６．６７（ｍ，１Ｈ），６．６６−６．６０（ｍ，１Ｈ），４．９４（ｓ，２Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），２．５５（ｓ，３Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３６８．２．
【１０４８】
実施例６：
化合物９３（「実施例９３」）；本明細書では「ＮＶＳ化合物１」とも称する
トランス−３−（３−アミノ−２−メチルフェニル）−１−（４−ヒドロキシシクロヘキシル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリル
中間体９３．１：３−ブロモ−６−メチル−１−（１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−８−イル）−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリル
【化３９】
2019532953.tif 000140
化合物７４．１（９６０ｍｇ、３．０７ｍｍｏｌ）、化合物４（４１５ｍｇ、１．７７ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（１．７３ｇ、５．３１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中の混合物を一晩１００℃に加熱した。次いで、これを水で希釈し、ＥＡで３回抽出した。合わせた有機相を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して粗生成物を得て、それをシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＰＥ／ＥＡ、ＥＡ％＝１０〜２０％）で精製して、表題化合物（７２６ｍｇ）を８０％純度で白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  ７．８４（ｓ，１Ｈ），７．２９（ｓ，１Ｈ），７．２６（ｓ，１Ｈ），４．３５−４．２０（ｍ，１Ｈ），４．００（ｓ，４Ｈ），２．６６（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｄｄ，４Ｈ），１．９３（ｄ，２Ｈ），１．８４−１．７６（ｍ，２Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７５．２９，３７７．２４．
【１０４９】
中間体９３．２：３−ブロモ−６−メチル−１−（４−オキソシクロヘキシル）−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリル
【化４０】
2019532953.tif 000141
ＡｃＯＨ（７．５ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１．５ｍＬ）の共溶媒中の化合物９３．１（４８０ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）の混合物を６０℃で３．５時間加熱した。室温に冷却後、１０ｍＬの水を添加した。大量の固体が沈殿し、これを濾過し、水で洗浄して、表題化合物（３５７ｍｇ、８４％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  ７．８７（ｓ，１Ｈ），７．３０（ｓ，１Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），４．７３（ｍ，１Ｈ），２．６７（ｓ，３Ｈ），２．６５−２．６０（ｍ，４Ｈ），２．４６−２．３９（ｍ，２Ｈ），２．２０（ｄｄ，２Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３１．２．
【１０５０】
中間体９３．３：３−ブロモ−１−（４−ヒドロキシシクロヘキシル）−６−メチル−１Ｈ−インドール−５−カルボニトリル
【化４１】
2019532953.tif 000142
室温でメタノール（１０ｍＬ）中の化合物９３．２（３４０ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）の混合物にＮａＢＨ４（１５６ｍｇ、４．１ｍｍｏｌ）を数回に分けて添加した。混合物は、徐々に透明に変わり、室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧下除去し、残渣をＥＡに溶解し、食塩水で２回洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（３４５ｍｇ）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  ７．８５（ｓ，１Ｈ），７．２３（ｓ，２Ｈ），４．２２（ｍ，１Ｈ），３．７８（ｍ，１Ｈ），２．６６（ｓ，３Ｈ），２．１６（ｔ，４Ｈ），１．８０（ｄ，２Ｈ），１．６４（ｓ，２Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３３．２，３３５．３．
【１０５１】
【化４２】
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ｉ−ＰｒＯＨ／Ｈ２Ｏ（６ｍＬ、１０：１）の共溶媒中の化合物９３．３（２００ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）及び２−メチル−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）アニリン（１６８ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）の混合物に２Ｎ  Ｎａ２ＣＯ３水溶液（１．８ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（４２ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をマイクロ波反応器により、Ｎ２雰囲気下、１００℃で３０分間撹拌した。反応混合物を水で希釈し、ＥＡで３回抽出した。合わせた有機相を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝１０：１〜２：１）で精製して、Ｐｈ３Ｐ＝Ｏを含む粗生成物を得た。これを分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ／ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ）により精製し、凍結乾燥して、表題化合物（７３．２ｍｇ、３４％）を桃色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ７．７６（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｄ，１Ｈ），７．６４（ｓ，１Ｈ），７．２１（ｔ，１Ｈ），７．０７（ｄ，２Ｈ），４．４７（ｄ，２Ｈ），３．８４（ｓ，１Ｈ），３．５８（ｔ，２Ｈ），２．５９（ｓ，３Ｈ），２．１３（ｄ，３Ｈ），１．９４（ｔ，６Ｈ），１．５３−１．４４（ｍ，２Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３６０．３．
【１０５２】
実施例７：
Ｔ細胞に対するチェックポイントタンパク質発現におけるＬＳＤ１阻害の効果を試験するために、ヒトＴ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の存在下、７日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。化合物を２日ごとに補充した。７日間の増殖後、細胞をＣＤ４、ＣＤ８、ＰＤ１、Ｌａｇ３及びＴｉｍ３に対する抗体で染色し、フローサイトメトリーにより分析した。解析は、各タンパク質の個々の発現（図１６、左パネル）又はＰＤ１及びＬａｇ３（ＰＤ１＋Ｌａｇ３＋）又はＰＤ１、Ｌａｇ３及びＴｉｍ３（ＰＤ１＋Ｌａｇ３＋Ｔｉｍ３＋）の同時発現（図１６、右パネル）の評価を含んでいた。理論に拘束されないが、チェックポイントマーカーの発現及び特に複数のチェックポイントマーカーの共発現は、より枯渇し、より少ない多機能Ｔ細胞を示すと考えられる。データは、ＬＳＤ１阻害剤が対照と比較してＴ細胞におけるＴｉｍ３単独の発現、又はＰＤ１とＬａｇ３の共発現、又はＰＤ１、Ｔｉｍ３及びＬＡＧ３の共発現を減少させ得ることを示す。（図１６、左及び右パネル）。
【１０５３】
次に、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞集団のいずれかにおけるチェックポイントマーカー発現及びＴｓｃｍ  Ｔ細胞の割合をＬＳＤ１阻害剤の存在下又は非存在下でのＴ細胞培養に応答して評価した。簡潔には、Ｔ細胞を陰性選択により単離し、示された化合物の示された用量での存在下又は処置なし（対照）で、１０日間、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズと３：１の比率で増殖させた。化合物をビーズ添加の翌日に添加し、２日ごとに補充した。増殖後、ＴＳＣＭ細胞のパーセンテージを、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２７及びＣＤ９５に対する抗体を使用するフローサイトメトリーにより、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞サブセットにおいて決定した。これらのデータは、ＬＳＤ１阻害（複数の分子クラスからの様々なＬＳＤ１阻害剤のいずれか１つによる）は、対照と比較して、ＣＤ４＋（図１７、左パネル）及びＣＤ８＋（図１７、右パネル）Ｔ細胞におけるＴＳＣＭ細胞のパーセンテージを有意に増強できることを示す。同様に、増殖後、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｔｉｍ３、Ｌａｇ３及びＰＤ１に対する抗体を使用するフローサイトメトリーにより、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞サブセットにおけるＴ細胞チェックポイント受容体発現を決定した。これらのデータは、ＬＳＤ１阻害（複数の分子クラスからの様々なＬＳＤ１阻害剤のいずれか１つによる）が対照と比較してＣＤ４＋Ｔ細胞（図１８、左パネル）及びＣＤ８＋（図１８、右パネル）Ｔ細胞におけるＰＤ１、Ｔｉｍ３及びＬａｇ３の共発現を有意に減少させ得ることを示す。
【１０５４】
前述の本明細書の記載は、当業者が本発明を実施することを可能とするのに十分であると考えられる。本発明は、提供された構築物の範囲に限定されるものではない。これは、本発明の提供された実施形態が本発明のある態様のみを説明することを意図しており、機能的に均等な全ての構築物が本発明の範囲内にあるからである。本明細書における材料の寄託は、本明細書に含有される記載が、その最良の態様を含む、本発明の任意の態様の実施を可能とするのに不十分であるという承認を構成するものではなく、特許請求の範囲の限定するものとして解釈されるべきでもない。実際に、本明細書に示し、記載したものに加えて、本発明の種々の修飾が前述の記載から当業者に明らかとなり、添付の特許請求の範囲の範囲内に入る。
【１０５５】
特定の課題又は状況に対する本発明の教示の適用は、本明細書に含まれる教示に鑑みて、当業者の能力の範囲内であろうことが理解される。
【１０５６】
本明細書中のそれぞれの及び全ての引用文献の開示は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【１０５７】
均等物
本明細書に引用するそれぞれの及び全ての特許、特許出願及び刊行物の開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。本発明は、具体的態様を参照して開示しているが、本発明の他の態様及び変形形態は、本発明の真の趣旨及び範囲から逸脱することなく他の当業者によって考案され得ることが明らかである。下記の特許請求の範囲は、全てのこのような態様及び均等な変形形態を含むと解釈されることを意図する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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