(57)【要約】  本発明は、新規なクラスのジチオカルバメート−金属錯体及び医学におけるそれらの使用を提供する。また、重金属の供給源と共にジスルフィラム等のジチオカルバメート（又はチウラムジスルフィド）及びシクロデキストリンを含む組み合わせ及び医薬組成物が、本発明によって提供される。驚いたことに、本発明者らは、ジチオカルバメート／重金属混合物をシクロデキストリンと組み合わせた場合に、抗腫瘍効果の相乗的な増強作用を見出した。本発明の化合物及び組み合わせは、腫瘍疾患及び他の障害の治療に特に有用である。上記化合物、組み合わせ、医薬組成物及びキットに加えて、本発明の組み合わせを作製する方法が提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
疾患の治療に使用される化合物であって、
前記化合物が、下記式（I）：
【化１】
2019536755.tif 000027
（式中、R1及びR2は、同一であるか若しくは異なり、又は接続されてN-複素環式の3員環〜6員環を形成し、水素、及び非置換又は置換のC1〜C10直鎖、分岐鎖又は環状のアルキル、非置換又は置換のC1〜C10直鎖、分岐鎖又は環状のアルケニル、非置換又は置換のアリール、及び非置換又は置換のヘテロアリールから選択され、ここで、Mは金属イオンである）による錯体、又はそのジアステレオマー、エナンチオマー、若しくは薬学的許容可能な塩から選択される、化合物。
【請求項２】
前記疾患が、腫瘍疾患、リウマチ性関節炎、又は持続性HIV感染症である、請求項1に記載の使用に対する化合物。
【請求項３】
前記化合物が以下の化合物：
【化２−１】
2019536755.tif 000028
【化２−２】
2019536755.tif 000029
のいずれか1つから選択される、請求項1又は2に記載の使用に対する化合物。
【請求項４】
前記治療が、シクロデキストリンと共に前記化合物を投与することを含み、又は、前記治療が、シクロデキストリンと共に前記化合物を含む医薬組成物として投与される、請求項1〜3のいずれか一項に記載の使用に対する化合物。
【請求項５】
前記疾患が、化学療法抵抗性腫瘍疾患から選択される腫瘍疾患、及び／又は小細胞肺癌（SCLC）若しくはリンパ腫である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の使用に対する化合物。
【請求項６】
シクロデキストリン及び薬学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤と共に、請求項1〜5のいずれか一項に記載の化合物を含む、疾患の治療に使用される医薬組成物。
【請求項７】
ジチオカルバメート、シクロデキストリン、及び重金属供給源の成分を含む、組み合わせ。
【請求項８】
前記ジチオカルバメート（又はジチオカルバメート供給源として対応する酸化チウラムジスルフィド）が、ジエチルジチオカルバメート、ピロリジンジチオカルバメート、(N-メチル, N-エチル)ジチオカルバメート、イミダゾリンジチオカルバメート、ジベンジルジチオカルバメート、ジメチルジチオカルバメート、ジプロピルジチオカルバメート、ジブチルジチオカルバメート、ジアミルジチオカルバメート、(N-メチル,N-シクロプロピルメチル)ジチオカルバメート、ビス(ヒドロキシルエチル)-ジチオカルバメート、及びN-メチルグルコサミンジチオカルバメートからなる群から選択される、請求項7に記載の組み合わせ。
【請求項９】
前記ジチオカルバメートが、テトラアルキルチウラムジスルフィド又はジスルフィラムである、請求項7又は8に記載の組み合わせ。
【請求項１０】
前記シクロデキストリンが、非置換又は置換のα-シクロデキストリン、β-シクロデキストリン、γ-シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン、及びジヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンから選択される、又はジヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン、スルホブチルエーテル-β-シクロデキストリン、又はメチル-β-シクロデキストリンである、請求項7〜9のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項１１】
前記重金属供給源が、ヒ素、ビスマス、コバルト、銅、クロム、ガリウム、金、鉄、マンガン、ニッケル、白金、銀、チタン、バナジウム、セレン、及び亜鉛の供給源から選択される、又は、オーラノフィン、金チオリンゴ酸、金チオグルコース、Au-ジチオカルバメート、塩化銅、及び硫酸銅の銅又は金の供給源から選択される、請求項7〜10のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項１２】
前記ジチオカルバメート及び重金属の供給源が、ジチオカルバメート−重金属錯体として提供される、請求項7〜11のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項１３】
少なくとも1つの追加の細胞毒性化合物を更に含む、請求項7〜12のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項１４】
前記組み合わせの成分が組み合わされた又は別々の医薬組成物（複数の場合もある）であり、前記医薬組成物（複数の場合もある）が薬学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤を更に含む、請求項7〜13のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項１５】
腫瘍疾患、リウマチ性関節炎、又は持続性HIV感染症の治療に使用される、請求項7〜14のいずれか一項に記載の組み合わせ。
【請求項１６】
前記腫瘍疾患が、肺癌又はSCLC、結腸癌、卵巣癌、肝臓癌、乳癌、膵臓癌、黒色腫、神経膠腫、T細胞リンパ腫、白血病、及びバーキットリンパ腫から選択される、請求項15に記載の使用に対する組み合わせ。
【請求項１７】
前記重金属供給源が、前記ジチオカルバメートとは別に被験体に投与される、請求項15又は16に記載の使用に対する組み合わせ。
【請求項１８】
前記ジチオカルバメート及び前記シクロデキストリンが1つの組成物として同時に投与される、請求項15〜17のいずれか一項に記載の使用に対する組み合わせ。
【請求項１９】
ジチオカルバメートとシクロデキストリンとを混合する工程を含む、ジチオカルバメート含有医薬組成物を作製する方法。
【請求項２０】
重金属供給源の添加に先立って、前記ジチオカルバメートとシクロデキストリンとの混合が行われる、請求項19に記載の方法。
【請求項２１】
構造I：
【化３】
2019536755.tif 000030
（式中、R1及びR2は、同一であるか、又は異なり、水素、及び非置換又は置換のアルキル、非置換又は置換のアルケニル、非置換又は置換のアリール、非置換又は置換のアルコキシ、及び非置換又は置換のヘテロアリールから選択され、又は  式中、R1及びR2はエチルであり、
Mは金属イオンである）の錯体を作製する方法であって、シクロデキストリンの存在下で、ジチオカルバメートと重金属供給源とを反応させる工程を含む、方法。
【請求項２２】
下記式：
【化４】
2019536755.tif 000031
のいずれか1つを有する化合物、又はその薬学的に許容可能な塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なクラスのジチオカルバメート−金属錯体及び医学におけるそれらの使用を提供する。また、重金属の供給源と共にジスルフィラム等のジチオカルバメート（又はチウラムジスルフィド）及びシクロデキストリンを含む組み合わせ及び医薬組成物が、本発明によって提供される。驚いたことに、本発明者らは、ジチオカルバメート／重金属混合物をシクロデキストリンと組み合わせた場合に、抗腫瘍効果の相乗的な増強作用を見出した。本発明の化合物及び組み合わせは、腫瘍疾患及び他の障害の治療に特に有用である。上記化合物、組み合わせ、医薬組成物及びキットに加えて、本発明の組み合わせを作製する方法が提供される。
【背景技術】
【０００２】
癌、すなわち悪性細胞の無制御増殖は、近代医学の時代に大きな健康問題となっている。乳房の腺癌等の幾つかの悪性腫瘍及びホジキン病等のリンパ腫は、現在の化学療法の抗癌薬レジメンに比較的良く反応するのに対し、他の癌、特に黒色腫、非小細胞肺癌、膵臓癌、肝臓癌、前立腺癌、及び結腸癌は化学療法に対する反応が不十分である。肺の小細胞癌は、初めは化学療法に感受性であるが、寛解後に広範囲の転移性の広がりを伴って元の状態に戻り、患者が死に至るといった傾向がある。したがって、より良好な治療アプローチがこれらの病気に必要とされている。
【０００３】
以下、ジスルフィラムと称されるジチオカルバメート又はテトラエチルチウラムジスルフィド等のチウラムジスルフィドは、重金属のキレート剤であり、治療剤として使用される。ジスルフィラムは、例えば、慢性アルコール依存症に対する嫌悪療法において長年使用されている薬物Antabuse（商標）の有効成分である。また、ジスルフィラムは新生物疾患の治療として使用される可能性を有する（非特許文献1、非特許文献2、非特許文献3）。「ジスルフィラムを含む医薬組成物（Pharmaceutical compositions comprising disulfiram）」を表題とする特許文献1は、ジスルフィラムが血管形成を阻害し、新生物を含む血管形成依存性障害の治療に有用であり、細胞の過剰増殖及び医療用デバイスに沿った又はその周りでの凝血塊の形成を予防することを開示している。特許文献1の全内容は、引用することにより本明細書の一部をなす。
【０００４】
表現型では、ジスルフィラムは、アポトーシスを誘導し（非特許文献4）、細胞増殖を阻害し、血管形成を減少させて（非特許文献5）、浸潤及び転移を減少させる（非特許文献6、非特許文献7）。これらの表現型効果の根底にある分子機構は、ジスルフィラムが複数の標的を阻害するように見えることから、複雑である（非特許文献8、非特許文献9、非特許文献10、非特許文献11、非特許文献12、非特許文献13、非特許文献14、非特許文献15、非特許文献16、非特許文献17、非特許文献18、非特許文献19、非特許文献20）。これは、ジスルフィラムが、乳癌、前立腺癌、骨髄腫、白血病、黒色腫、神経芽細胞腫、結腸直腸癌、子宮頚部腺癌、及び肺癌のような異種の前臨床モデルに有効な理由かもしれない（非特許文献21、非特許文献22、非特許文献23、非特許文献24、非特許文献25、非特許文献1、非特許文献12、非特許文献11）。
【０００５】
特許文献2は、06-メチルグアニンDNAメチルトランスフェラーゼを阻害する金属イオンとの錯体におけるジスルフィラムの活性による、脳腫瘍の治療におけるジスルフィラムの使用を記載する。さらに、銅（非特許文献26）、金（非特許文献27）、カドミウム（非特許文献15）、及び亜鉛（非特許文献28）のような金属と併せて使用される場合、ジスルフィラムの作用を様々な程度に増強することが可能であった。「ジチオカルバメート誘導体を使用する癌を治療する方法（Method of treating cancer using dithiocarbamate derivatives）」を表題とする特許文献3は、ジチオカルバメート、特にジスルフィラム及びチオカルバメート陰イオンが、様々な細胞型の癌細胞の増殖を強く阻害することを開示している。かかる阻害効果は、銅イオン等の重金属イオン、サイトカイン、及びセルロプラスミンによって増強され、ジスルフィラムを使用することで、腫瘍成長を減少させて、他の抗癌剤の効果を強化する方法が提示される。上記文献の全内容が、引用することにより本明細書の一部をなす。ジスルフィラムそれ自体が、細胞癌モデルにおいて、シスプラチン（非特許文献29）、5FU（非特許文献21）、ドキソルビシン（非特許文献17）、スニチニブ（非特許文献23）、ドセタキセル（非特許文献30）、パクリタキセル（非特許文献18）、ゲムシタビン（非特許文献31）、及びテモゾロミド（非特許文献10）のような化学療法薬の効能を増加させることが示された。また、ジスルフィラムは、in vitroモデルと比較して著しく高用量ではあるものの、動物モデルにおいても有効であることが示された（非特許文献26、非特許文献32、非特許文献11、非特許文献13）。また、この制限されたin vivo効能は、これまで完了した臨床試験のうちの1つしか有望な結果を報告していないという事実によって反映される（非特許文献33）。in vitroでの細胞毒性と患者における抗癌効能との間の矛盾は、おそらくは、癌に到達する薬物の治療量を制限する、消化管系、肝臓の初回通過効果及び血流中の急速な代謝（非特許文献34）におけるジスルフィラムの急速分解によるものであり、このことが癌治療におけるジスルフィラムの臨床的使用の成功に対する大きな障害となっている。特許文献4は、ジスルフィラム又はその誘導体のin vivo半減期を増加させる成分と共にジスルフィラム又はその誘導体を含むジスルフィラム製剤、及びその使用、特に癌の治療に対して別の銅製剤を伴う又はそれを伴わない使用を記載する。その薬物動態学的な制限に加えて、ジスルフィラムは、組み合わせのパートナー、特に金属と容易に錯体を形成する反応性化合物である。得られた反応生成物（非特許文献35）は、溶解度の減少（非特許文献36）、及び血清アルブミン結合の増加（非特許文献37）を示す。現在、ジスルフィラムと銅又は任意の他の重金属とを含む臨床的に使用可能な医薬製剤は記載されておらず、臨床状況でのその使用を妨げている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第6,288,110号
【特許文献２】国際公開第2015／120254号
【特許文献３】米国特許第6,548,540号
【特許文献４】国際公開第2012076897号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Wickstrom, Danielsson et al. 2007
【非特許文献２】Conticello, Martinetti et al. 2012
【非特許文献３】Triscott, Rose Pambid et al. 2015
【非特許文献４】Wang, Zhai et al. 2011
【非特許文献５】Shian, Kao et al. 2003
【非特許文献６】Hothi, Martins et al. 2012
【非特許文献７】Duan, Xiao et al. 2014
【非特許文献８】Trapp, Lee et al. 2009
【非特許文献９】Sauna, Peng et al. 2004
【非特許文献１０】Zhao, Xiao et al. 2015
【非特許文献１１】Brar, Grigg et al. 2004
【非特許文献１２】Yakisich, Siden et al. 2001
【非特許文献１３】Chen, Cui et al. 2006
【非特許文献１４】Cho, Lee et al. 2007
【非特許文献１５】Li, Yang et al. 2008
【非特許文献１６】Zhang, Chen et al. 2010
【非特許文献１７】Xu, Shi et al. 2011
【非特許文献１８】Yip, Fombon et al. 2011
【非特許文献１９】Liu, Brown et al. 2012
【非特許文献２０】Zha, Chen et al. 2014
【非特許文献２１】Wang, McLeod et al. 2003
【非特許文献２２】Lin, Haffner et al. 2011
【非特許文献２３】Ketola, Kallioniemi et al. 2012
【非特許文献２４】Morrison, Doudican et al. 2010
【非特許文献２５】Lovborg, Oberg et al. 2006
【非特許文献２６】Allensworth, Evans et al. 2015
【非特許文献２７】Huang, Liao et al. 2016
【非特許文献２８】Wiggins, Wymant et al. 2015
【非特許文献２９】Kadia and Shah 2016
【非特許文献３０】Budman and Calabro 2002
【非特許文献３１】Guo, Xu et al. 2010
【非特許文献３２】Liu, Wang et al. 2016
【非特許文献３３】Nechushtan, Hamamreh et al. 2015
【非特許文献３４】Johansson 1992
【非特許文献３５】Hogarth 2012
【非特許文献３６】Wehbe, Anantha et al. 2016
【非特許文献３７】Christodoulou, Sadler et al. 1995
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明を更に詳細に説明する前に、本発明は記載される特定の実施の形態に限定されず、したがって当然のことながら変化させることができることを理解すべきである。本発明の範囲は添付の特許請求の範囲のみによって限定されるため、本明細書中で使用される専門用語は特定の実施の形態を説明することのみを目的とするものであり、限定することを意図していないことも理解すべきである。
【０００９】
本明細書に引用される全ての刊行物及び特許は、個々の刊行物又は特許が各々引用することにより本発明の一部をなすことが具体的に及び個別に示されているかの如く引用することにより本明細書の一部をなし、それとの関連で刊行物が引用される方法及び／又は材料を開示及び記載するように引用することにより本明細書の一部をなす。いずれの刊行物の引用も、出願日前のその開示に関するものであり、本発明が先行発明を理由としてかかる刊行物に先行する権利がないことを承認するものと解釈すべきではない。さらに、提示される刊行日は、実際の刊行日と異なる可能性があり、実際の刊行日を個別に確認する必要がある可能性がある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記課題は、ジチオカルバメート及びシクロデキストリンの成分を含む組み合わせによって解決される。本発明の組み合わせは、幾つかの実施の形態において、好ましくは重金属に対する供給源を更に含む。本発明の他の好ましい実施の形態では、ジチオカルバメート及び重金属の供給源は、ジチオカルバメートチオレート陰イオンに結合された重金属を有する化合物である「ジチオカルバメート金属キレート」として提供される。結合の方式は変化してもよく、共有結合及び／又は非共有結合（例えば、静電結合、水素結合、双極子−双極子結合、及び供与結合等）を含んでもよい。驚いたことに、ジチオカルバメート／重金属錯体のシクロデキストリンとの組み合わせは、個々の単一の作用物質単独の活性と比較して、著しい相乗的な活性をもたらした。シクロデキストリンは、これまで薬学的な安定剤として使用されていたに過ぎず、かかる効果は期待されていなかった。
【００１１】
さらに、上記課題は、式（I）の構造の化合物として本明細書に以下に定義される新たなクラスの化合物の提供、及び疾患の治療におけるそれらの使用により解決される。これらの化合物及びそれらの医学適用の態様を本明細書において以下に開示する。
【００１２】
以下に本発明の組み合わせの成分の詳細な説明が提供される。各成分の好ましい実施の形態及び種は、本発明の組み合わせの他の成分の好ましい実施の形態及び種のいずれかと、任意の可能な方法で組み合わせられるものとする。
【００１３】
本発明によるジチオカルバメートは、好ましくは一般式：R1R2NCS2（式中、R1及びR2は、同一であるか又は異なり、水素、及び非置換又は置換のアルキル、非置換又は置換のアルケニル、非置換又は置換のアリール、及び非置換又は置換のヘテロアリールから選択される）を有する。
【００１４】
更により好ましくは、ジチオカルバメートは、式R1R2NCS2-S2CNR3R4（式中、R1、R2、R3及びR4は、同一であるか、若しくは異なり、水素、及び非置換若しくは置換のアルキル、非置換若しくは置換アルケニル（alkenyl）、非置換若しくは置換のアリール、及び非置換若しくは置換のヘテロアリールから選択され、又はR1とR2及び／又はR3とR4のいずれかが、隣接するN原子と共にN-複素環を形成する）のジチオカルバメートジスルフィドである。
【００１５】
ジチオカルバメートジスルフィドは、ジチオカルバメートのジスルフィド形態であり、本発明の目的上、ジエチルジチオカルバメート、ピロリジンジチオカルバメート、(N-メチル,N-エチル)ジチオカルバメート、イミダゾリンジチオカルバメート、ジベンジルジチオカルバメート、ジメチルジチオカルバメート、ジプロピルジチオカルバメート、ジブチルジチオカルバメート、ジアミルジチオカルバメート、(N-メチル,N-シクロプロピルメチル)ジチオカルバメート、ビス(ヒドロキシルエチル)-ジチオカルバメート、及びN-メチルグルコサミンジチオカルバメートからなる群から選択されることが好ましい。
【００１６】
本発明のジチオカルバメートの好ましい種は、テトラアルキルチウラムジスルフィドである。最も好ましくは、ジチオカルバメートは、ジスルフィラムであり、一般式R1R2NCS2-S2CNR3R4（式中、R1、R2、R3及びR4はエチルである）を有する。ジスルフィラムは、Antabuse（商標）又はテトラエチルチウラムジスルフィドとしても知られている化学物質であり、アルコール依存症の治療に広く使用される、FDAに認可された薬物である。
【００１７】
本発明によれば、ジチオカルバメートは、シクロデキストリンと組み合わされて、添付の実施例において示されるような驚くべき抗腫瘍活性をもたらす。シクロデキストリンの用語は、ここでは、α-1,4-グルコシド結合を介して接続されたグルコース分子から形成される環状オリゴ糖を表す。シクロデキストリンは、シクロデキストリンを構築するグルコース分子の数に応じて接頭語としてギリシャ文字を含む。6個、7個、8個又は9個のグルコース分子を有するα-、β-、γ-及びδ-シクロデキストリンは特に重要である。
【００１８】
また、本発明によるシクロデキストリンは、修飾シクロデキストリンを含む。特に、1以上の第一級及び／又は第二級ヒドロキシル基を修飾することによって、修飾シクロデキストリンを得ることができる。修飾シクロデキストリン及びそれらの合成方法は、当該技術分野でよく知られている。天然又は修飾のシクロデキストリンの間の選択は、本発明によればそれほど重要ではない。驚いたことに、現在、ジチオカルバメート／重金属組成物の製剤化のためにジチオカルバメートにシクロデキストリンを添加することで、優れた相乗的な抗腫瘍活性を有する生成物がもたらされることがわかっている。したがって、本明細書に開示される発明の驚くべき効果をもたらす天然又は好適に修飾されたシクロデキストリンのいずれを使用するかは当業者に委ねられる。
【００１９】
本発明に使用される好ましいシクロデキストリンは、非置換又は置換のα-シクロデキストリン、β-シクロデキストリン、γ-シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン、及びジヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンから選択される。最も好ましくは、ジヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン、スルホブチルエーテル-β-シクロデキストリン、又はメチル-β-シクロデキストリンである。
【００２０】
シクロデキストリンは、最も好ましくは、以下の商業的に入手可能なシクロデキストリンのいずれかから選択される。
アルファ-シクロデキストリン（CAS#:10016-20-3）
アルファ-シクロデキストリンリン酸ナトリウム塩（CAS#:199684-60-1）
アルファ-シクロデキストリン、硫酸化ナトリウム塩水和物（CAS#:699020-02-5）
ヘキサキス(2,3,6-トリ-O-アセチル)-アルファ-シクロデキストリン
ヘキサキス(2,3,6-トリ-O-メチル)-アルファ-シクロデキストリン
ヘキサキス(2,3,6-トリ-O-オクチル)-アルファ-シクロデキストリン（CAS#:140395-31-9）
ヘキサキス-6-ブロモ-6-デオキシ-アルファ-シクロデキストリン（CAS#:53784-82-0）
ヘキサキス-6-ヨード-6-デオキシ-アルファ-シクロデキストリン（CAS#:131105-41-4）
ヘキサキス(6-O-tertブチル-ジメチルシリル)-アルファ-シクロデキストリン
ブチル-アルファ-シクロデキストリン
スクシニル-アルファ-シクロデキストリン
(2-ヒドロキシプロピル)-アルファ-シクロデキストリン（CAS#:128446-33-3）
ベータ-シクロデキストリン（CAS#:7585-39-9）
ベータ-シクロデキストリン水和物（CAS#:68168-23-0）
ベータ-シクロデキストリンリン酸ナトリウム塩（CAS#:199684-61-2）
ベータ-シクロデキストリンスルフェート
ベータ-シクロデキストリン硫酸化ナトリウム塩（CAS#:37191-69-8）
ヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリン（CAS#:94035-02-6）
6-モノデオキシ-6-モノアミノ-ベータ-シクロデキストリン
6-O-アルファ-D-グルコシル-ベータ-シクロデキストリン（CAS#:92517-02-7）
6-O-アルファ-マルトシル-ベータ-シクロデキストリン水和物（CAS#:104723-60-6）
ヘプタキス-6-アジド-6-デオキシ-ベータ-シクロデキストリン
ヘプタキス(2,3-ジ-O-アセチル-6-O-スルホ)-ベータ-シクロデキストリンヘプタナトリウム塩（CAS#:196398-66-0）
ヘプタキス-(2,3-ジ-O-メチル-6-O-スルホ)-ベータ-シクロデキストリンヘプタナトリウム塩（CAS#:201346-23-8）
ヘプタキス(2,6-ジ-O-メチル)-ベータ-シクロデキストリン（CAS#:51166-71-3）
ヘプタキス-(2,6-ジ-O-エチル)-ベータ-シクロデキストリン（CAS#:111689-03-3）
ヘプタキス(2,3,6-トリ-O-メチル)-ベータ-シクロデキストリン（CAS#:55216-11-0）
ヘプタキス(2,3,6-トリ-O-アセチル)-ベータ-シクロデキストリン
ヘプタキス-(2,3,6-トリ-O-ベンゾイル)-ベータ-シクロデキストリン（CAS#:23666-43-5）
ヘプタキス-(2,3,6-トリ-O-エチル)-ベータ-シクロデキストリン（CAS#:111689-01-1）
ヘプタキス-6-ヨード-6-デオキシ-ベータ-シクロデキストリン（CAS#:30754-23-5）
ヘプタキス-6-(ジメチル-tert-ブチルシリル)-6-デオキシ-ベータ-シクロデキストリン
ヘプタキス-6-ブロモ-6-デオキシ-ベータ-シクロデキストリン
モノアセチル-ベータ-シクロデキストリン
ジアセチル-ベータ-シクロデキストリン
トリアセチル-ベータ-シクロデキストリン（CAS#:23739-88-0）
ヘプタキス(3-O-アセチル-2,6-ジ-O-メチル)-ベータ-シクロデキストリン（CAS#:131889-29-7）
ヘプタキス-(6-O-マルトシル)-ベータ-シクロデキストリン
ヘプタキス(6-O-スルホ)-ベータ-シクロデキストリンヘプタナトリウム塩（CAS#:197587-31-8）
ヘプタキス(6-O-t-ブチルジメチルシリル-2,3-ジ-O-アセチル)-ベータ-シクロデキストリン
スクシニル-(2-ヒドロキシプロピル)-ベータ-シクロデキストリン
(2,6-ジ-O-)エチル-ベータ-シクロデキストリン
(2-カルボキシエチル)-ベータ-シクロデキストリン
(2-ヒドロキシエチル)-ベータ-シクロデキストリン（CAS#:128446-32-2）
(2-ヒドロキシプロピル)-ベータ-シクロデキストリン（CAS#:128446-35-5）
ブチル-ベータ-シクロデキストリン
メチル-ベータ-シクロデキストリン（CAS#:128446-36-6）
シリル((6-O-tert-ブチルジメチル)-2,3,-ジ-O-アセチル)-ベータ-シクロデキストリン
スクシニル-ベータ-シクロデキストリン
ガンマ-シクロデキストリン（CAS#:17465-86-0）
ガンマ-シクロデキストリン水和物（CAS#:91464-90-3）
ガンマ-シクロデキストリンリン酸ナトリウム塩（CAS#:199684-62-3）
スルホプロピル-ベータ-シクロデキストリン
カルボキシメチル-ガンマ-シクロデキストリン
オクタキス(2,3,6-トリ-O-アセチル)-ガンマ-シクロデキストリン
オクタキス(2,3,6-トリ-O-メチル)-ガンマ-シクロデキストリン
オクタキス(2,6-ジ-O-ペンチル)-ガンマ-シクロデキストリン
オクタキス-6-(ジメチル-tert-ブチルシリル)-6-デオキシ-ガンマ-シクロデキストリン
オクタキス-6-ブロモ-6-デオキシ-ガンマ-シクロデキストリン（CAS#:53784-84-2）
オクタキス-6-ヨード-6-デオキシ-ガンマ-シクロデキストリン（CAS#:168296-33-1）
オクタキス(6-O-t-ブチルジメチルシリル)-ガンマ-シクロデキストリン
スクシニル-ガンマ-シクロデキストリン
(2-ヒドロキシプロピル)-ガンマ-シクロデキストリン（CAS#:128446-34-4）
アセチル-ガンマ-シクロデキストリン
ブチル-ガンマ-シクロデキストリン
ベタデックス（Betadex）スルホブチルエーテル
【００２１】
本発明の特に好ましいシクロデキストリンの1つは、ヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリン（CAS#:94035-02-6）又はメチル-ベータ-シクロデキストリン（CAS#:128446-36-6）、又はSBE-β-CD|スルホブチルエーテル-β-シクロデキストリン（CAS#:182410-00-0）である。
【００２２】
「重金属供給源」又は「重金属イオン供給源」は、重金属と本発明のジチオカルバメートとの錯体の形成に重金属原子を提供する任意の化合物を指すものとする。特に好ましい重金属は、ヒ素、ビスマス、コバルト、銅、クロム、ガリウム、金、鉄、マンガン、ニッケル、白金（platinum）、銀、チタン、バナジウム、セレン、及び亜鉛から選択され、上記供給源は好ましくは銅、又はより好ましくは金の供給源である。
【００２３】
幾つかの実施の形態では、重金属イオン供給源は、重金属イオンと、硫酸塩、塩化物塩、又はアセテート、ジチオカルバメート、ラクテート、グリシネート、シトレート、プロピオネート及びグルコネート等の有機陰イオンとのキレートである。既に上に言及されているように、幾つかの実施の形態では、本発明による重金属の供給源はジチオカルバメート−金属錯体である。この実施の形態では特に、金及び銅とジスルフィラムとの錯体が好ましい。ジチオカルバメートの金属錯体は、例えば、Hogarth G.: "Metal-dithiocarbamate complexes: chemistry andbiological activity." (Mini Rev Med Chem. 2012 Oct; 12(12):1202-15.Review. PubMed PMID: 22931592、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）、特に図9の構造から知られている。好ましい錯体は、以下の構造I：
【化１】
2019536755.tif 000002
（式中、R1及びR2は、同一であるか又は異なり、水素、及び非置換又は置換のアルキル、非置換又は置換のアルケニル、非置換又は置換のアリール、非置換又は置換のアルコキシ、及び非置換又は置換ヘテロアリールから選択され、好ましくはエチルであり、ここで、Mは金属イオンである）を有する。
【００２４】
幾つかの好ましい実施の形態では、本発明の化合物（錯体）は、重合体の形態、線形金属−金属相互作用によるいわゆるカテナ錯体である。
【００２５】
幾つかの態様では、本発明は、R1及びR2が、同一であるか又は異なり、水素、及び非置換又は置換のC1〜C10、好ましくはC1〜C5アルキル、非置換又は置換のC1〜C10、好ましくはC1〜C5アルケニル、非置換又は置換のアリール、非置換又は置換のアルコキシ、及び非置換又は置換のヘテロアリールから選択され、好ましくはエチルであり、ここで、MがAu又はCuから選択される金属イオンである、式(I)の錯体に更に関する。
【００２６】
アルキル又はアルケニルは、本発明に関して、直鎖、分岐鎖又は環状であってもよい。
【００２７】
本発明で使用される「置換（された）」の用語は、上記の部分に関して水素以外の置換基を指す。かかる置換基は、好ましくは、ハロゲン、-CF3、-C2F5、-C3F7、-C4F9、-C5F11、及び2個〜5個の炭素の他のフルオロアルキル、-OH、-NH2、-NO2、-CHO、-CN、-COOH、-SH、-SO2OH、-CONH2、-NHNH2、-OR、-NRR'、-C(O)R、-C(O)OR、-(CO)NRR'、-NR'C(O)R、-OC(O)R、5個〜10個の炭素原子を有するアリール、3個〜20個の炭素原子を有するシクロアルキル（シクロアルケニル）、3員〜8員のヘテロシクロアルキル（ヘテロシクロアルケニル）、及び5員〜10員のヘテロアリールからなる群から選択され、ここで、R及びR'は、水素、1個〜10個の炭素原子を有するアルキル、2個〜10個の炭素原子を有するアルケニル、2個〜10個の炭素原子を有するアルキニル、5個〜14個の炭素原子を有するアリール、3個〜20個の炭素原子を有するシクロアルキル（シクロアルケニル）、窒素、酸素及び硫黄から選択される1個〜4個のヘテロ原子を含む5員〜14員のヘテロアリール、並びに窒素、酸素及び硫黄から選択される1個〜4個のヘテロ原子を含む5員〜14員のヘテロシクロアルキル（ヘテロシクロアルケニル）から独立して選択される。幾つかの実施の形態では、これらの置換基のいずれかは再び置換されてもよいが、これらの置換基は非置換であることが好ましい。
【００２８】
幾つかの実施の形態では、R1及びR2は接続されて、置換されてもよい4員、5員、6員、7員又は8員のN-複素環系を形成し得る。
【００２９】
本明細書で使用される「アルキル」の用語は、メチル、エチル等の飽和炭化水素部分を指す。本明細書で使用される「アルケニル」及び「アルキニル」の用語は、少なくともそれぞれ1つの炭素-炭素の二重結合又は三重結合を有する脂肪族残基を含み、そうでなければ「アルキル」として定義される。
【００３０】
本明細書で使用される「シクロアルキル」の用語は、シクロペンタニル、シクロヘキサニル等の非芳香族炭素環式部分を指す。本明細書で使用される「シクロアルケニル」の用語は、少なくとも1つの炭素-炭素二重結合を含む、非芳香族炭素環式化合物を指す。
【００３１】
同様に、本明細書で使用される「ヘテロシクロアルキル（ヘテロシクロアルケニル）」の用語は、1個以上の環炭素原子が、好ましくは窒素、酸素及び硫黄から選択されるヘテロ原子によって置換されるシクロアルキル（シクロアルケニル）基に関する。
【００３２】
本明細書で使用される「アリール」の用語は、好ましくは単環式であるか又は縮合芳香環からなる、芳香環に関する。好ましいアリール置換基は、フェニル、ナフチル、アントラセニル、及びフェナントレニル等の6個〜14個の炭素原子を有する部分である。
【００３３】
本明細書で使用される「ヘテロアリール」の用語は、各アリール部分に対応する芳香族部分を指し、ここで、1個以上の環炭素原子は、窒素、硫黄、酸素、リン等のヘテロ原子によって置換されている。好ましいヘテロアリールは、ピロリル、イミダゾリル、フラニル、及びチオフェニル等である。
【００３４】
本明細書で使用される「金属イオン」の用語は、金属であって、中性金属元素に対して存在するよりも多くの又は少ない電子を価電子殻中に有する結果、負又は正に帯電している周期表の元素を指す。本発明において有用な金属として、土類金属、アルカリ土類金属、遷移金属、及びポスト遷移金属が挙げられる。アルカリ金属は、Li、Na、K、Rb、及びCsを含む。アルカリ土類金属は、Be、Mg、Ca、Sr、及びBaを含む。遷移金属は、Sc、Ti、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、Y、Zr、Nb、Mo、Tc、Ru、Rh、Pd、Ag、Cd、La、Hf、Ta、W、Re、Os、Ir、Pt、Au、Hg、及びAcを含む。ポスト遷移金属は、Al、Ga、In、Tl、Ge、Sn、Pb、Sb、Bi、及びPoを含む。当業者は、上に記載される金属が、いずれも本発明において有用な、幾つかの異なる酸化状態をそれぞれ取り得ることを十分に理解するであろう。好ましい金属はAu及びCuである。
【００３５】
本発明による好ましい錯体は、以下のいずれか1つの構造：
【化２−１】
2019536755.tif 000003
【化２−２】
2019536755.tif 000004
を有する。
【００３６】
本発明の別の態様では、本明細書中に別途開示される疾患の治療における、上記構造（I）による錯体の使用が提供される。
【００３７】
治療における使用に対する化合物が好ましく、該治療はシクロデキストリンと共に上記化合物を投与することを含み、好ましくは、前記化合物がシクロデキストリンと共に該化合物を含む医薬組成物として投与される。シクロデキストリンは、好ましくは本明細書中に別記されるように選択される。
【００３８】
次に、別の態様は、シクロデキストリンと、薬学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤と共に、本明細書に開示される化合物又は錯体を含む、疾患の治療における使用に対する医薬組成物にも関する。
【００３９】
別の態様では、本発明は、以下の化合物：
【化３】
2019536755.tif 000005
のいずれか1つを提供する。
【００４０】
本明細書に開示される発明の化合物は、他の化学療法剤に抵抗性の腫瘍疾患（化学療法抵抗性腫瘍疾患）の治療に特に有用である。かかる腫瘍抵抗性は、従来技術の化学療法による治療後に生じ得る。本明細書に提供される実施例では、本発明者らは、本発明の化合物を用いる後の治療によって、エトポシド又はシスプラチンに対する化学療法抵抗性を克服可能であったことを示すことができた。
【００４１】
本明細書で使用される「化学療法抵抗性腫瘍」の用語は、化学療法剤、例えばエトポシド又はプラチン（platin：白金）化合物による治療法等の化学療法による治療に対して難治性であるか又は難治性となる、腫瘍の個々の細胞を含めた、腫瘍疾患を指す。特定の実施の形態では、化学療法抵抗性腫瘍は、治療の開始後に抵抗性となる、また治療中に生じる場合もある。更に特定の実施の形態では、患者が化学療法を受けている間、化学療法に対する抵抗性は約2カ月〜24カ月で現われる。デノボ抵抗性（de novo resistance）では、患者は初期の治療法に反応しない。獲得抵抗性は、患者が治療中に転移性疾患を発症する場合である。化学療法に対する獲得抵抗性は、当該技術分野においてよく知られている。特に、小細胞肺癌患者は、化学療法による治療を受けている間、該疾患を再発し、通常患者は死に至る。特定の実施の形態では、上記疾患は、アントラサイクリン系化学療法による治療中に転移し、抵抗性の転移をもたらす。
【００４２】
本発明の好ましい金属供給源は、オーラノフィン、金チオリンゴ酸、Au-ジチオカルバメート、金チオグルコース、塩化銅、及び硫酸銅から選択され得る。
【００４３】
本発明によれば、好ましい組み合わせは、ジスルフィラム、銅又は金の錯体、及び本明細書において上に記載されるシクロデキストリンの組み合わせに関する。
【００４４】
本発明の好ましい実施の形態では、組み合わせは、ジチオカルバメート、重金属の供給源、及びシクロデキストリンが組み合わせられた混合物であり空間的に分離されていないことが好ましい。
【００４５】
幾つかの実施の形態では、本発明の組み合わせが少なくとも1つの追加の細胞毒性化合物を更に含むことが好ましい場合がある。癌治療法では、その疾患の抵抗性型の発症を回避するため、異なる様式の抗癌活性を有する癌治療薬を組み合わせることがしばしば有用である。少なくとも1つの追加の細胞毒性化合物は、シクロホスファミド、イホスファミド、ヘキサメチルメラミン、チラパジミン（tirapazimine）、セルテネフ（sertenef）、カケクチン、タソネルミン、ロニダミン、カルボプラチン、マイトマイシン、アルトレタミン、プレドニムスチン、ジブロモズルシトール、ラニムスチン、ホテムスチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、テモゾロミド、ドキソルビシン、ヘプタプラチン、エストラムスチン、トシル酸インプロスルファン、トロホスファミド、ニムスチン、塩化ジブロスピジウム、プミテパ、ロバプラチン、サトラプラチン、プロフィロマイシン、シスプラチン、イロフルベン、デキシホスファミド、シス-アミンジクロロ(2-メチル-ピリジン)白金、ベンジルグアニン、グルフォスファミド、GPX100、ジアリジジニルスペルミン、三酸化ヒ素、ゾルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ビスアントレン、ミトキサントロン、ピラルビシン、ピナフィド、バルルビシン、アムルビシン、アンチネオプラストン、アンナマイシン、ガラルビシン、エリナフィド、MEN10755、及び4-デメトキシ-3'-デアミノ-3'-アジリジニル-4-メチルスルホニルダウノルビシン、ラパマイシン及びその誘導体、シロリムス、テムシロリムス、エベロリムス、ゾタロリムス、並びにデフォロリムスから選択され得る。また、パクリタキセル、硫酸ビンデシン、3',4'-ジデヒドロ-4'-デオキシ-8'-ノルビンカロイコブラスチン、ドセタセル、リゾキシン、ドラスチン、イセチオン酸ミボブリン、オーリスタチン、セマドチン、RPR109881、BMS 184476、ビンフルニン、クリプトフィシン、2,3,4,5,6-ペンタフルオロ-N-(-3-フルオロ-4-メトキシフェニル)ベンゼンスルホンアミド、アンヒドロビンブラスチン、N,N-ジメチル-L-バリル-L-バリル-N-メチル-L-バリル-L-プロリル-L-プロリン-t-ブチルアミド、TDX258、BMS 188797、トポテカン、ヒカプタミン、イリノテカン、ルビテカン、7-[2-(N-イソプロピルアミノ)エチル]-(20S)-カンプトテシン、BNP1350、BNPI1100、BN80915、BN80942、リン酸エトポシド、テニポシド、ソブゾキサン、2'-ジメチルアミノ-2'-デオキシエトポシド、GL331、N-[2-(ジメチルアミノ)エチル]-9-ヒドロキシ-5,6-ジメチル-6H-ピリド[4,3-b]カルバゾール-1-カルボキサミド、アスラクリン（asulacrine）、6,9-ビス[(2-アミノ-エチル)アミノ]ベンゾ[g]イソキノリン-5,10-ジオン、N-[1-[2(ジエチルアミノ)エチルアミノ]-7-メトキシ-9-オキソ-9H-チオキサンテン-4-イルメチル]ホルムアミド、N-(2-(ジメチルアミノ)エチル)アクリジン-4-カルボキサミド、及びジメスナを含む微小管阻害剤（microtubulin inhibitors）も定義に含まれる。
【００４６】
ジスルフィラムとの組み合わせには、特にカルボプラチン、オキサリプラチン、シスプラチン及び／又はエトポシド、ビノレルビン、又は同様の化合物が好ましい。
【００４７】
本発明の好ましい実施の形態では、上記組み合わせは、ジチオカルバメート又はジチオカルバメート／金属錯体のそれぞれの量より多い量のシクロデキストリンを含む。したがって、本発明は、シクロデキストリン：ジチオカルバメート、又はシクロデキストリン：ジチオカルバメート／金属の（モル）比が、少なくとも0.1（1:10）〜500（500:1）の範囲である、本発明の組み合わせに関する。2、5、10、50、100の比がより好ましく、約500±50又は更にはそれよりも高い比が最も好ましい。
【００４８】
本発明の組み合わせは、別々又は混合されたいずれかの形態で、キットの形態の構成要素を含んでもよい。キットの構成要素は、液体形態、又は例えば、使用の直前に薬学的に許容可能な液体中の成分の懸濁又は溶解を可能とするような固体形態で提供され得る。本発明のキットは、幾つかの実施の形態では、重金属の供給源をジチオカルバメートとは別に（ジチオカルバメートと混合されずに）備えてもよい。
【００４９】
上記組み合わせの成分は、組み合わされてもよく、又は別々の医薬組成物（複数の場合もある）であり、ここで、単一の又は複数の成分の医薬組成物（複数の場合もある）は、薬学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤を更に含む。本発明の組み合わせを含む医薬組成物は、本発明の好ましい実施の形態である。
【００５０】
本発明の医薬組成物は、固体成分、凍結乾燥溶液、注射用溶液、又は注射用溶液、カプセル剤、錠剤、クリーム、軟膏、又は経口若しくは経鼻の吸入組成物の調製用の固体組成物（本発明の組み合わせの単一又は組み合わされた成分の凍結乾燥組成物）の形態であってもよい。
【００５１】
本明細書で使用される「医薬組成物」の用語は、活性剤と、組成物を、in vivo、in vitro又はex vivoにおける診断又は治療の用途に特に適したものにする不活性又は活性な担体との組み合わせを指す。
【００５２】
本明細書で使用される「薬学的に許容可能な担体」の用語は、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水、エマルジョン（例えば、油／水又は水／油のエマルジョン等）、及び様々な種類の湿潤剤等の標準的な薬学的担体のいずれかを指す。また、上記組成物は、安定剤及び防腐剤を含んでもよい。担体、安定剤、及びアジュバントの例については、例えば、Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ.Co., Easton, PA [1975]を参照されたい。
【００５３】
本明細書で使用される「薬学的に許容可能な塩」の用語は、被験体に対する投与によって、本発明の化合物、又はその活性な代謝物若しくは残留物を提供することができる本発明の化合物の任意の薬学的に許容可能な塩（例えば酸又は塩基）を指す。当業者に知られているように、本発明の化合物の「塩」は、無機酸又は有機酸、及び無機塩基又は有機塩基に由来し得る。酸の例として、限定されないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン-p-スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン-2-スルホン酸、ベンゼンスルホン酸等が挙げられる。シュウ酸等の他の酸は、それら自体は薬学的に許容可能ではないものの、本発明の化合物及びそれらの薬学的に許容可能な酸付加塩を得る際に中間体として有用な塩の作製に利用され得る。
【００５４】
治療的使用のため、本発明の化合物の塩は、薬学的に許容可能であるものとされる。しかしながら、薬学的に許容可能ではない酸及び塩基の塩も、例えば薬学的に許容可能な化合物の作製又は精製に有用である可能性がある。
【００５５】
本発明による組み合わせ又は化合物は、医学における使用に対する、好ましくは腫瘍疾患等の増殖性疾患、感染性疾患、心血管疾患、リウマチ性関節炎、又は持続性HIV感染症の治療に対するものである。
【００５６】
本発明の化合物は、上の障害のいずれかを治療するための医薬の作製において有用である。本発明の化合物の医薬を作製する方法及び技術は当該技術分野でよく知られている。例示的な医薬製剤及び送達経路は、本明細書中に別途記載される。
【００５７】
当業者は、多くの具体的な実施の形態を含む、本明細書に記載される化合物のいずれか1以上が、標準的な薬学的製造手順を適用することによって作製されることを十分理解する。かかる医薬は、薬学の技術分野でよく知られている送達方法を使用することによって被験体に送達され得る。
【００５８】
本発明によって治療される疾患は、癌であることが最も好ましい。本発明による癌は、固形又は液性の腫瘍疾患から選択され得て、好ましくは、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、結腸直腸癌、肛門癌、食道癌、胃癌（gastric cancer）、肝細胞癌、膀胱癌、子宮内膜癌、膵臓癌、脳腫瘍、乳癌（breastcancer）、卵巣癌、前立腺癌、胃癌（stomach cancer）、心房粘液腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、甲状及び副甲状腺の新生物、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌腫、肝臓癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、下垂体新生物、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、シュワン細胞腫、オリゴデンデログリオーム、髄膜腫、脊髄腫瘍、黒色腫、神経芽細胞腫、褐色細胞腫、1型〜3型の内分泌新生物、網膜芽細胞腫；白血病、例えば、急性リンパ球性白血病、及び急性骨髄性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、及び赤白血病）；慢性白血病（慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病及び慢性リンパ球性白血病）；並びに真性多血症、リンパ腫（ホジキン病及び非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、及び重鎖病から選択され得る。
【００５９】
本発明の組み合わせ、化合物及び組成物によって治療される腫瘍疾患の好ましい群は、肺癌、結腸癌、卵巣癌、肝臓癌、乳癌（mamma carcinoma）、膵臓癌、黒色腫、神経膠腫、T細胞リンパ腫、白血病、及びバーキットリンパ腫から選択される。
【００６０】
2つの特定の好ましい実施の形態では、本明細書に開示される発明に関して、治療される又は予防される癌は、SCLC（最も好ましい）或いはリンパ腫である。添付の実施例によって支持されるように、驚いたことに、本発明の化合物及び組成物は、有効な治療戦略がぜひとも必要とされるSCLCの治療に有効である。また、驚いたことに、リンパ腫も、本発明の化合物及び組成物で十分治療可能であった。
【００６１】
本発明の好ましい実施の形態は、化学療法抵抗性腫瘍疾患、例えばMDR1等のABC輸送体タンパク質の発現を特徴とする腫瘍疾患の治療における使用に対する、上記組み合わせ又は化合物の使用に関する。ジチオカルバメート／金属錯体とシクロデキストリンとの間の驚くべき相乗作用は、腫瘍障害における化学療法抵抗性を克服することを可能とし、したがって、疾患ステージが進行した患者に新たな治療の戦略を提供する。したがって、腫瘍疾患は、幾つかの実施の形態では、難治性腫瘍疾患である。
【００６２】
本発明の組み合わせ又は化合物の投与に対して多くの経路が本発明によって含まれるが、好ましい実施の形態は、非経口投与に適した本発明の組み合わせの製剤に関する。かかる製剤は、抗酸化剤、バッファー、静菌剤と、製剤を意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質とを含んでもよい水性及び非水性の等張無菌注射溶液；並びに懸濁化剤及び増粘剤と、化合物が血液成分又は1以上の臓器を標的とするように設計されているリポソーム又は他の微粒子系とを含んでもよい水性及び非水性の無菌懸濁液を含む。幾つかの実施の形態では、上記製剤は、単位容量又は複数用量の密閉容器、例えばアンプル及びバイアルにおいて提示され／製剤化され、使用の直前に無菌液体担体、例えば注射用水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保管され得る。先に記載される種類の無菌の粉末、顆粒、及び錠剤から即席の注射溶液及び懸濁液を作製してもよい。
【００６３】
好ましい単位投与量製剤は、本明細書において上に列挙されるように、作用物質の一日用量若しくは一日単位、一日部分用量（daily subdose）、又はその適切な分割量（appropriatefraction）を含むものである。
【００６４】
様々な送達システムが知られており、例えばリポソーム中のカプセル化、マイクロ粒子、マイクロカプセル、受容体依存性エンドサイトーシス等が治療剤（例えば本発明によるジスルフィラム／金属イオンとシクロデキストリンとの組み合わせ）を投与するために使用され得る。送達の方法として、限定されないが、動脈内、筋肉内、静脈内、鼻腔内、及び経口の経路が挙げられる。特定の実施の形態では、治療を必要とする領域に本発明の医薬組成物を局所投与することが望ましい場合があり、これは、例えば、限定ではなく、手術中の局所注入、注射、又はカテーテルによって達成され得る。
【００６５】
治療目的の本発明の組み合わせ及び化合物は、例えば、癌疾患と診断された被験体又は個体に投与され得る。マウス、ラット又はヒト患者等の被験体に作用物質が投与される場合、その作用物質は薬学的に許容可能な担体に添加され得て、被験体に全身投与又は局所投与され得る。
【００６６】
幾つかの実施の形態では、in vivo投与は、1回の投薬で、連続的に又は断続的に一連の治療を通して達成される。投与の最も有効な手段及び投薬量を決定する方法は当業者によく知られており、治療法に対して使用される組成物、治療目的、治療される標的細胞、及び治療される被験体によって変化する。主治医によって選択される投薬レベル及び投薬パターンによって、単回又は複数回の投与が行われる。
【００６７】
上記作用物質を投与するのに好適な投与製剤及び方法は、当業者によって容易に決定される。上記化合物は約0.01 mg/kg〜約500 mg/kg、より好ましくは約0.1 mg/kg〜約100 mg/kg、更により好ましくは約0.5 mg/kg〜約50 mg/kgで投与されることが好ましい。本明細書に記載される化合物が、（例えば、増感剤としての）別の作用物質と同時投与される場合、有効量は、その作用物質が単独で使用される場合よりも少なくなる場合がある。
【００６８】
より詳しくは、本明細書において有効成分とも称される本発明の作用物質は、限定されないが、経口、直腸内、経鼻、局所（経皮、エアロゾル、バッカル、及び舌下を含むがこれらに限定されない）、経膣、非経口（皮下、筋肉内、静脈内及び皮内を含むが、これらに限定されない）、及び経肺を含む、任意の好適な経路によって治療法に対して投与され得る。また、好ましい経路は、レシピエントの状態及び年齢、並びに治療される疾患によって変化することも十分理解される。
【００６９】
理想的には、上記作用物質は、疾患の部位において活性化合物のピーク濃度を達成するように投与されなければならない。これは、例えば、任意に生理食塩水中の作用物質の静脈内注射によって、又は例えば有効成分を含む錠剤、カプセル剤若しくはシロップ剤として経口投与されて達成され得る。作用物質の望ましい血液レベルは、疾患組織内に治療量の有効成分を提供するように持続点滴によって維持され得る。個々の治療用の化合物又は薬物がそれぞれ単独で使用される場合に必要とされ得るよりも低い各成分の総投与量を必要とする治療的組み合わせを提供し、それによって有害作用を減少させるように、最も適切な組み合わせの使用が熟考される。
【００７０】
本発明の化合物又は上記組み合わせの成分は、被験体に対して、別々に、又は1つの成分を別に、そして他の2つを合わせて、又は全て合わせて投与されるかのいずれかである。例えば、幾つかの実施の形態では、金属イオンの供給源は、ジチオカルバメートとは別に被験体に投与されることが好ましい場合がある。他の実施の形態では、ジチオカルバメート及びシクロデキストリンが1つの組成物として同時に投与される。
【００７１】
本発明の別の態様は、ジチオカルバメートとシクロデキストリンとを混合する工程を含む、ジチオカルバメート含有医薬組成物を作製する方法に関する。この態様において、上記組成物の全ての化合物は、本明細書中、上に定義される通りである。ジチオカルバメートとシクロデキストリンとの混合は、好ましくは金属の供給源の添加に先立って行われる。
【００７２】
次に、本発明の更なる態様は、ジチオカルバメートと金属イオンとの間の錯体形成を阻害又は減少する方法であって、シクロデキストリンの存在下で、ジチオカルバメートと金属イオンとを混合する工程を含む、方法を提供する。ジチオカルバメートを最初にシクロデキストリンと混合し、その後、重金属の供給源を混合物に添加することが好ましい。
【００７３】
別の態様では、本発明は、構造I：
【化４】
2019536755.tif 000006
（式中、R1及びR2は、同一であるか又は異なり、水素、及び非置換又は置換のアルキル、非置換又は置換のアルケニル、非置換又は置換のアリール、及び非置換又は置換のヘテロアリールから選択され、好ましくはエチルであり、
Mは金属イオンである）の錯体を製造する方法であって、
シクロデキストリンの存在下で、ジチオカルバメートと重金属イオン供給源とを反応させる工程を含む、方法に関する。ジチオカルバメートをシクロデキストリンと最初に混合し、その後、金属イオンを混合物に添加することが好ましい。
【００７４】
ここで、添付の図面及び配列を参照して、本発明について下記実施例で更に記載するが、これらに限定されない。本発明の目的で、本明細書中に引用する参照文献は全て、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす。実施例セクションにおいて、「,」又は「.」は小数点記号として使用される。
【図面の簡単な説明】
【００７５】
【図１】金属の抗腫瘍効力に対するジスルフィラムのシクロデキストリン製剤の効果を示す図である。
【図２】シクロデキストリンとの金チオリンゴ酸／ジスルフィラムの相乗的な抗腫瘍効果を示す図である。
【図３−１】A：正規化されたIC50をアイソボログラムにプロットした。B：ジスルフィラムのIC50を対数目盛で金チオリンゴ酸のIC50に対してプロットした。C：併用係数（CI）を金チオリンゴ酸／ジスルフィラムの比に対してプロットした。
【図３−２】同上
【図４−１】A：シクロデキストリン製剤中の金チオリンゴ酸／ジスルフィラムの抗腫瘍活性のスペクトル：金チオリンゴ酸のIC50濃度を、個々の試験した金チオリンゴ酸／ジスルフィラム比に対する個々の試験した細胞について、log目盛でジスルフィラムの対応する濃度に対してプロットした。曲線は、試験した全ての細胞による単一の処理のIC50の平均から計算した、相加作用の区域を示す。B：T細胞白血病／リンパ腫細胞に対するシクロデキストリン製剤中の金チオリンゴ酸／ジスルフィラムの選択性。正常ヒトPBL及び正常ヒト線維芽細胞の細胞と比較したT細胞白血病／リンパ腫のIC50。C：SCLC系統に対するシクロデキストリン製剤中の金チオリンゴ酸／ジスルフィラムの選択性。正常ヒトPBL及び正常ヒト線維芽細胞の細胞と比較したSCLCのIC50。D：T細胞白血病／リンパ腫の細胞及び正常ヒト細胞（PBL及び皮膚線維芽細胞）における様々な金チオリンゴ酸／ジスルフィラム比の併用係数の比較。正規化されたIC50:個々の合剤のそれぞれのIC50によって金チオリンゴ酸又はジスルフィラムのいずれかのIC50を割ることにより、単一の薬物のIC50に対してIC50を正規化した。CI＝金チオリンゴ酸濃度の正規化されたIC50＋ジスルフィラム濃度の正規化されたIC50。平均CI：平均値±標準偏差を、全てのT細胞白血病細胞又は全ての正常細胞のいずれかのCIから計算した。
【図４−２】同上
【図４−３】同上
【図４−４】同上
【図５】ビンクリスチン、オキサリプラチン、5-FU、ドキソルビシン、及びシクロデキストリン中の金チオリンゴ酸／ジスルフィラムに対する抵抗性係数（オキサリプラチン治療を生存するHT29細胞のIC50／ナイーブHT29細胞又は正常ヒト線維芽細胞のIC50）を示す図である。
【図６−１】A：Raji細胞株及びJurkat細胞株における試験した化合物に対するIC50値を示す。B：試験した化合物の選択性因子（selectivity factor）を示す。
【図６−２】同上
【図７−１】様々なSCLC、NSCLC及びHaCatの細胞における試験した化合物のIC50値を示す図である。また、SCLCに対する試験した化合物の選択性も示す。
【図７−２】同上
【図８−１】様々なSCLC細胞株におけるDKFZ-00608及びシスプラチンの相対的な選択性及び抵抗性を示す図である。
【図８−２】同上
【図９−１】DKFZ-00608の抗腫瘍活性を示す図である。A：経時的な腫瘍を有しない動物数。B：動物の平均腫瘍サイズ。C：生存動物の数。
【図９−２】同上
【発明を実施するための形態】
【実施例】
【００７６】
実施例1：シクロデキストリンは、ジスルフィラムと様々な重金属塩との組み合わせの抗腫瘍効果を刺激する
Jurkat T細胞白血病細胞を96ウェルプレート（3×104／ウェル）に蒔いた。24時間後、ヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリンの存在下又は不在下で、30倍モル比の様々な濃度（10 μM、3.33 μM、1.11 μM、0.37 μM、0.123 μM、0.041 μM、0.014 μM、0.0 μM）で、ジスルフィラム＋金属（比1:1）により細胞を処理した。さらに、細胞をシクロデキストリン単独（1500 μM、500 μM、166.7 μM、55.56 μM、18.5 μM、6.17 μM、0.0 μM）で処理した。全ての濃度を3回繰り返して試験した。37℃で72時間のインキュベーションの後、Cell-titer-blue（Promega）を添加した（10 μl／ウェル）。37℃で4時間のインキュベーションの後、蛍光（励起フィルター：550 nm、発光フィルター590 nm）をOptima ELISAリーダーで判定した。それぞれ3回の平均値を計算し、IC50をフィッティングしていない用量反応曲線から計算した。
【００７７】
「金属の正規化されたIC50濃度」を、シクロデキストリンの不在下でジスルフィラム＋金属で処理した細胞のIC50によってIC（シクロデキストリンの存在下又は不在下）を割ることにより、各金属の組み合わせ毎に計算した。
【００７８】
「シクロデキストリンの正規化されたIC50」を、シクロデキストリン単独のIC50によって実際のIC50を割ることにより、各金属の組み合わせ毎に決定した。
【００７９】
「併用係数」（CI：combination index）を、「シクロデキストリンの正規化されたIC」と「金属の正規化されたIC50濃度」とを足すことによって計算した。
【００８０】
図1に提示される結果：
3種類全ての金属（Au、Pt及びCu）について、シクロデキストリンの存在下で1未満の正規化されたIC50が見られた。
【００８１】
シクロデキストリンの不在下での金属の濃度に対して正規化されたIC50は、上の定義に従う。
【００８２】
シクロデキストリンの存在下で1の正規化されたIC50は、シクロデキストリンが効果を有しないことを示し得る。
【００８３】
シクロデキストリンの存在下で1超の正規化されたIC50は、シクロデキストリンが抗腫瘍活性に対して拮抗効果を有することを示し得る。
【００８４】
シクロデキストリンの存在下で1未満の正規化されたIC50は、シクロデキストリンが抗腫瘍効果を増強することを示す。
【００８５】
さらに、1未満のCIはいずれの金属（Cu、Pt、及びAu）について見られた。これは、シクロデキストリンと、全ての金属／ジスルフィラムの組み合わせとの間の相乗的な相互作用を示す。
【００８６】
実施例2：シクロデキストリンとジスルフィラム／金チオリンゴ酸との相乗的な抗腫瘍効果
96ウェルプレート中の10% FCS及び1%ペニシリン／ストレプトマイシンで補足したRPMI培地に2×104細胞／ウェルの密度で10種類の異なるヒト癌細胞株を蒔いた。様々な希釈倍数（1〜2-6）で変動し得る濃度のヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリン及び金チオリンゴ酸＋ジスルフィラム（金チオリンゴ酸＋ジスルフィラム／ヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリン比：1:0.037〜1:27）の存在下で、ジスルフィラム及び金チオリンゴ酸を1:1の固定比率で添加した。正規化のため、金チオリンゴ酸＋ジスルフィラム及びヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリンを、様々な希釈倍数（1〜2-6）で単独で試験した。全ての濃度を3回繰り返して適用した。37℃で72時間のインキュベーションの後、Cell-titer-blue（Promega）を添加した（10 μl／ウェル）。37℃で4時間のインキュベーションの後、蛍光（励起フィルター：550 nm、発光フィルター590 nm）をOptima ELISAリーダーで判定した。それぞれの処理について平均値を計算し、IC50をフィッティングしていない用量反応曲線から計算した。
【００８７】
正規化されたIC50：金チオリンゴ酸＋ジスルフィラムのIC50、又はヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリンのIC50のいずれかにより、組み合わせのIC50を割ることによって、単一の薬物のIC50に対してIC50を正規化した。
【００８８】
CI＝金チオリンゴ酸／ジスルフィラム濃度の正規化されたIC50＋ヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリン濃度の正規されたIC50
【００８９】
平均CI：平均値＋標準偏差を全ての腫瘍系統のCIから計算した。
【００９０】
図2に示される結果：
驚いたことに、ジスルフィラム＋金チオリンゴ酸とシクロデキストリンとの組み合わせは、1:3、1:9、及び1:27のジスルフィラム＋金チオリンゴ酸／シクロデキストリンの比で抗腫瘍効果の相乗的増加をもたした。仮定的な相加効果（CI＝1）に対する差は有意である（ステューデントのt検定（それぞれ、P<1×10-6、1×10-9、1×10-3））。
【００９１】
実施例3：シクロデキストリンの存在下でのジスルフィラム及び金チオリンゴ酸の相乗的な抗腫瘍効果
96ウェルプレートのRPMI培地（血清不含）に6×104細胞／ウェルの密度でヒトT細胞白血病Jurkat細胞を蒔いた。ヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリン（ジスルフィラム濃度の30倍の濃度）の存在下、様々な金チオリンゴ酸／ジスルフィラムの比（1：48〜1：4-8で）様々な希釈倍数（1〜4-6）のジスルフィラム及び金チオリンゴ酸を添加した。全ての濃度を3回繰り返して適用した。37℃で72時間のインキュベーションの後、Cell-titer-blue（Promega）を添加した（10 μl／ウェル）。37℃で4時間のインキュベーションの後、蛍光（励起フィルター：550 nm、発光フィルター590 nm）をOptima ELISAリーダーで判定した。それぞれ3回の平均値を計算し、IC50をフィッティングしていない用量反応曲線から計算した。IC50は、単一の薬物のIC50に対して正規化した。
【００９２】
図3Aに示される結果：
「相加効果」のラインは、両方の薬物が相加的に作用した場合に予想され得るIC50を示す。この線より下の測定点は相乗作用を示す。驚いたことに、全ての測定点は、x軸及びy軸に非常に接近している。これは、広い用量範囲に亘る非常に高度の相乗作用を示す。グラフ式表現の解像力を増すため、グラフを再描画し、軸を対数目盛に変換した（図3Bを参照されたい）。
【００９３】
図3Bに示される結果：
「相加効果」のラインの下及び左に位置する測定点は、この濃度での両方の薬物の相乗作用を示す。驚いたことに、相乗作用は、広い濃度範囲（500倍〜1250倍）の両方の化合物、すなわち、金チオリンゴ酸：80 nM〜100 μM（1250倍）、ジスルフィラム：20 nM〜10 μM（500倍）に亘って観察された。
【００９４】
図3Cに示される結果：
1未満のCIは相乗作用を示す。さらに、CIは、単一の薬物と比較して、組み合わせた薬物の全用量を減少させることができる係数（factor）を示す。
を示す。
【００９５】
驚いたことに、0.06〜16（250倍超の用量範囲）の金チオリンゴ酸／ジスルフィラムの比でCIは0.1未満であり、10倍超の効率の増加を示した。最適比0.25では、0.012のCIが見られ、活性の83倍の増加を示した。
【００９６】
予想外なことに、他の場合との相乗作用の比較では、上記効果は、5つの異なる比率で組み合わせた薬物に対して10超の相乗効果が観察された点で非常に強健であった。
【００９７】
実施例4：シクロデキストリン製剤中の金チオリンゴ酸／ジスルフィラムの抗腫瘍活性のスペクトル
35種類のヒト癌細胞株（ATCCから得た）のパネル、並びに2種類の正常細胞培養物（ヒト末梢血リンパ球（PBL、ハイデルベルクのPromocellから得た）及び正常ヒト皮膚線維芽細胞（ハイデルベルク大学のG.Daraiから得た）を、96ウェルプレートの10%ウシ胎仔血清及び1%抗生物質（ペニシリン／ストレプトマイシン）で補足したRPMI培地に2×104細胞／ウェルの密度で蒔いた。24時間後、ヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリン（ジスルフィラムの30倍の濃度）の存在下、（様々な金チオリンゴ酸／ジスルフィラム比：1：43〜1：4-4で）様々な希釈倍数（1〜2-7）のジスルフィラム及び金チオリンゴ酸を添加した。全ての濃度を3回繰り返して適用した。37℃で72時間のインキュベーションの後、Cell-titer-blue（Promega）を添加した（10 μl／ウェル）。37℃で4時間のインキュベーションの後、蛍光（励起フィルター：550 nm、発光フィルター590 nm）をELISAリーダー（Optima,BMG Labtec）で判定した。それぞれの処理について平均値を計算し、IC50をフィッティングしていない用量反応曲線から計算した。
【００９８】
図4Aに示される結果：
全ての測定点は、「相加効果ライン」より左下に位置する。これは、全ての試験した細胞においてシクロデキストリン製剤中の全てのジスルフィラム／金チオリンゴ酸比で相乗作用が得られたことを示す。
【００９９】
「相加効果ライン」からの測定点の距離は、異なる細胞株で変動する。「相加効果ライン」までの距離は、相乗作用の程度を示す。最も長い距離、したがって最も良好な相乗作用が、T細胞白血病細胞及び小細胞肺癌細胞において見られ、HeLa細胞で最低であった。
【０１００】
ジスルフィラムと金チオリンゴ酸との間の相乗作用は、試験した全ての細胞においてシクロデキストリン製剤で観察され得る。この効果は、或る細胞株から別の細胞株で最大4桁異なる。
【０１０１】
図4Bに示される結果：
T細胞リンパ腫／白血病の測定点群の中心（0.14 μM／0.1 μMの金チオリンゴ酸／ジスルフィラム（上記群の全ての測定点の金チオリンゴ酸又はジスルフィラムの濃度の平均値））は、正常細胞群の中心（4 μM／10 μMの金チオリンゴ酸／ジスルフィラム（上記群の全ての測定点の金チオリンゴ酸又はジスルフィラムの濃度の平均値））よりも両方の次元（金チオリンゴ酸濃度及びジスルフィラム濃度）で約100倍低いことがわかった。
【０１０２】
驚いたことに、3種類全てのT細胞リンパ腫／白血病細胞株は、正常細胞よりもシクロデキストリン製剤化された金チオリンゴ酸／ジスルフィラム処理に対しておよそ100倍感受性であった。
【０１０３】
図4Cに示される結果：
小細胞肺癌細胞の測定点群の中心（0.05 μM／0.05 μMの金チオリンゴ酸／ジスルフィラム（上記群の全ての測定点の金チオリンゴ酸又はジスルフィラムの濃度の平均値））は、正常細胞群の中心（4 μM／10 μMの金チオリンゴ酸／ジスルフィラム（上記群の全ての測定点の金チオリンゴ酸又はジスルフィラムの濃度の平均値））よりも両方の次元（金チオリンゴ酸濃度及びジスルフィラム濃度）で約50倍低いことがわかった。
【０１０４】
驚いたことに、3種類全てのSCLC細胞株は、正常細胞よりもシクロデキストリン製剤化された金チオリンゴ酸／ジスルフィラム処理に対しておよそ100倍感受性であった。
【０１０５】
図4Dに示される結果：
相乗作用の定量的分析にCIを使用することができる。0.1未満のCIは、50%の細胞を殺傷するのに必要な組み合わせた薬物の総量が、単一の薬物を別々に使用する場合よりも少なくとも10倍低いことを示す。
【０１０６】
0.1未満のCIは、生物学的に有意とされ得る。
0.01未満のCIは、生物学的に特に有意とされ得る。
【０１０７】
正常細胞では、2〜0.25のジスルフィラム／金チオリンゴ酸比で0.1未満の平均CIが見られた。
【０１０８】
T細胞リンパ腫／白血病細胞では、16〜0.125のジスルフィラム／金チオリンゴ酸比で0.01未満の平均CIが見られた。
【０１０９】
T細胞リンパ腫／白血病細胞及び正常細胞で見られるCIの差は、ジスルフィラム／金チオリンゴ酸比8及び16（それぞれステューデントのt検定、p＝0.02及び0.039）で統計的に有意であった。
【０１１０】
驚いたことに、シクロデキストリン製剤中のジスルフィラムと金チオリンゴ酸との間の相乗作用は、正常細胞と比較して、T細胞リンパ腫／白血病細胞及びSCLC細胞においておよそ10倍高い。
【０１１１】
表1：試験した全ての細胞に関する金チオリンゴ酸／ジスルフィラムの腫瘍型特異的効果
【表１】
2019536755.tif 000007
T検定
「試験した全ての細胞の平均IC50」を、個々の試験した金チオリンゴ酸／ジスルフィラム比毎に計算した。「相対IC50」を、対応する金チオリンゴ酸／ジスルフィラム比の「試験した全ての細胞の平均IC50」によってIC50を割ることにより計算した。「平均相対IC50」を、試験した全ての金チオリンゴ酸／ジスルフィラム比から各細胞株について計算した。「平均平均相対IC50」を、各腫瘍型及び全てのヒト正常細胞による全ての「平均相対IC50」から計算した。
【０１１２】
表1に示される結果：
NSCLC、子宮頚癌、及び乳癌の「平均「平均相対IC50」」を2超と決定した。
【０１１３】
ここで試験したNSCLC、子宮頚癌及び乳癌の細胞株は、シクロデキストリン製剤中の金チオリンゴ酸／ジスルフィラムによる処理に抵抗性である。
【０１１４】
T細胞リンパ腫／白血病、非T細胞白血病、及びSCLCの「平均「平均相対IC50」」を、それぞれ0.09、0.2及び0.37と決定した。試験した全ての細胞に対する差は有意であった（ステューデントのt検定、p＜2×10-4）。
【０１１５】
驚いたことに、試験したT細胞リンパ腫／白血病癌腫、非T細胞白血病、及びSCLC細胞は、シクロデキストリン製剤中の金チオリンゴ酸／ジスルフィラムによる処理に過敏性である。
【０１１６】
他の全ての腫瘍細胞型及び正常ヒト細胞の「平均「平均相対IC50」」はいずれも、0.68〜1.23範囲であった。
【０１１７】
試験した結腸腫瘍、卵巣腫瘍、肝臓腫瘍、乳房の腫瘍、膵臓腫瘍、黒色腫、神経膠腫、及びバーキットリンパ腫は、シクロデキストリン製剤中の金チオリンゴ酸／ジスルフィラム治療に感受性である。
【０１１８】
実施例5：シクロデキストリン製剤中の金チオリンゴ酸／ジスルフィラムは化学療法を生存する腫瘍細胞の抵抗性を克服する
1000万個のHT29ヒト結腸癌細胞を175mlのFalconフラスコに蒔いた。24時間後、10 μMのオキサリプラチンを添加した。37℃で48時間のインキュベーションの後、新たな培地を添加した。48時間後、細胞をトリプシン処理し、1ウェル当たり2×104細胞の密度で96ウェルプレートに蒔いた。ヒト皮膚線維芽細胞及び未処理のHT29細胞を同じ密度で96ウェルプレートに蒔いた。37℃で24時間のインキュベーションの後、ビンクリスチン（開始濃度1 μg／ml）、オキサリプラチン（開始濃度50 μg／ml）、5-FU（開始濃度500 μM）、ドキソルビシン（開始濃度10 μg／ml）、及びジスルフィラム／金チオリンゴ酸＋2 μMの金チオリンゴ酸中の10倍濃度のヒドロキシプロピル-ベータ-シクロデキストリンの1:2の段階希釈物により3回繰り返して細胞を処理した。37℃で72時間のインキュベーションの後、1ウェル当たり10 μlのCell-titer-blueを添加した。37℃で4時間のインキュベーションの後、蛍光（励起フィルター：550 nm、発光フィルター590 nm）をELISAリーダー（Optima,BMG Labtec）で判定した。それぞれの処理について平均値を計算し、IC50をフィッティングしていない用量反応曲線から計算した。
【０１１９】
「抵抗性係数」の計算：
各処理に対して、正常ヒト細胞におけるIC50及びオキサリプラチン処理を生存する細胞におけるIC50を、選択されていないHT29細胞における同じ処理で見られたIC50によって割った。
1超の抵抗性係数は「抵抗性」を示す。
1に等しい抵抗性係数は「抵抗性なし」を示す。
1未満の抵抗性係数は、「過敏性」を示す。過敏性は、標準化学療法に対して抵抗性の腫瘍細胞を選択的に殺傷する薬物によって得られる。
【０１２０】
図5に示される結果：
予め処理されていない細胞を試験した場合、全ての標準的な化学療法薬（ビンクリスチン、オキサリプラチン、5-FU、ドキソルビシン）は、正常ヒト線維芽細胞と比較して結腸癌細胞に対する選択性を示す。腫瘍細胞におけるIC50は、線維芽細胞におけるIC50よりも少なくとも100倍低い。
【０１２１】
オキサリプラチン処理を生存したHT29細胞は、全ての標準的な化学療法薬（ビンクリスチン、オキサリプラチン、5-FU、ドキソルビシン）に対して抵抗性であった。抵抗性係数（生存細胞におけるIC50／未処理の対照細胞におけるIC50）は10超〜100超であることがわかった。
【０１２２】
オキサリプラチン処理を生存したHT29細胞は、未処理のHT29細胞と同様にシクロデキストリン製剤中の金チオリンゴ酸／ジスルフィラムに対して感受性であるとわかった。抵抗性係数は1未満（0.71）であった。
【０１２３】
対照的に、正常ヒト線維芽細胞は、シクロデキストリン製剤中の金チオリンゴ酸／ジスルフィラムに抵抗性であることがわかった（抵抗性係数1000超）。
【０１２４】
驚いたことに、シクロデキストリン中のジスルフィラム／金チオリンゴ酸は、標準的な化学療法剤と交差抵抗性を示さない。したがって、ジスルフィラム／金チオリンゴ酸は、それ自体を、化学療法を生存する癌細胞を効率的に殺傷することよるサルベージ療法として提供する。
【０１２５】
実施例6：T細胞白血病に対するホモレプティックAu-DTC錯体の優れた選択的活性
7種類の異なるAu錯体のパネル、ATM／ジスルフィラム、及び標準化学療法用のシスプラチン、並びに良く知られている抗腫瘍CuDTC（表2を参照されたい）の抗腫瘍の効能をJurkatヒトT細胞白血病細胞及びRajiヒトB細胞リンパ腫細胞に対して試験した。96ウェルプレートの10%ウシ胎仔血清及び1%抗生物質（ペニシリン／ストレプトマイシン）で補足したRPMI培地に3×104細胞／ウェルの密度で細胞を蒔いた。24時間後、スルホブチルエーテル-β-シクロデキストリン（30倍の濃度のジスルフィラム）の存在下、様々な希釈率（100 μM〜0.01 μM）で試験化合物を添加した。全ての濃度を3回繰り返して適用した。37℃で72時間のインキュベーションの後、Cell-titer-blue（Promega）を添加した（10 μl／ウェル）。37℃で2〜8時間のインキュベーションの後、蛍光（励起フィルター：550 nm、発光フィルター590 nm）をELISAリーダー（Optima, BMG Labtec）で判定した。それぞれの処理について平均値を計算し、IC50をフィッティングしていない用量反応曲線から計算した。「T細胞白血病に対する選択性係数」を、Raji細胞に対するIC50／Jurkat細胞に対するIC50の商によって計算した。結果を表3、並びに図6A及び図6Bに示す。
【０１２６】
表2：試験した化合物：
【表２】
2019536755.tif 000008
【０１２７】
表3：本発明の選択された化合物のIC50（μM）：
【表３】
2019536755.tif 000009
【０１２８】
結論として、Au-ジチオカルバメートであるDKFZ-00608、DKFZ-00610、及びDKFZ-00609は、Jurkat細胞において高度に活性である。50 nM、280 nM、及び100 nMのIC50が見られた。同様に、ATMとジスルフィラム及びシクロデキストリンとの混合物は、110 nMのIC50を示した。さらに（Furthermore）、全てAu-ジチオカルバメートであるDKFZ-00608、DKFZ-00610、DKFZ-00609、及びATMとジスルフィラムとシクロデキストリンとの混合物は、Raji細胞においてそれほど活性ではなかった。それぞれ635、86.67、275及び153の「T細胞白血病に対する選択性係数の結果」が見られた。他の錯体はいずれも10未満の「T細胞白血病に対する選択性係数」を示した。
【０１２９】
実施例7：SCLC細胞に対するホモレプティックAuDTC錯体の優れた選択的活性
6種類の異なるAu錯体のパネル、及びSCLCの標準治療薬であるシスプラチンの抗腫瘍効能を、5種の異なるヒトSCLC、3種のヒトNSCLC、及びヒト非腫瘍化細胞株HaCatについて試験した（結果は図7）。96ウェルプレートの10%ウシ胎仔血清及び1%抗生物質（ペニシリン／ストレプトマイシン）で補足したRPMI培地に3×104細胞／ウェルの密度で細胞を蒔いた。24時間後、スルホブチルエーテル-β-シクロデキストリン（30倍の濃度のジスルフィラム）の存在下、様々な希釈率（100 μM〜0.01 μM）で試験化合物を添加した。全ての濃度を3回繰り返して適用した。37℃で72時間のインキュベーションの後、Cell-titer-blue（Promega）を添加した（10 μl／ウェル）。37℃で2〜8時間のインキュベーションの後、蛍光（励起フィルター：550 nm、発光フィルター590 nm）をELISAリーダー（Optima, BMG Labtec）で判定した。それぞれの処理について平均値を計算し、IC50をフィッティングしていない用量反応曲線から計算した。SCLC株及びNSCLC株に対する各試験化合物について平均IC50±標準偏差（SD）を計算した。「SCLC対NSCLCに対する平均選択性係数」を、NSCLC細胞に対する平均IC50／SCLC細胞に対する平均IC50の商によって計算した。「SCLC対非腫瘍原性細胞に対する平均選択性係数」を、HaCat細胞に対するIC50／SCLC細胞に対する平均IC50の商によって計算した。結果を図7に示す。
【０１３０】
DKFZ-00608は、試験した全ての化合物の中で最も活性（最も低いIC50）であることがわかった。IC50は、SCLCにおいて試験した全ての他の非AuDTC化合物のIC50よりも約10倍低かった。両方のAuDTC錯体について、100超の「SCLC対NSCLCに対する平均選択性係数」及び「SCLC対非腫瘍原性細胞に対する平均選択性係数」が見られた。他の錯体はいずれも、10未満の「SCLC対NSCLCに対する平均選択性係数」、及び「SCLC対非腫瘍原性細胞に対する平均選択性係数」のより低い選択性を示した。
【０１３１】
実施例8：DKFZ-00608のシスプラチンとの交差抵抗性の欠如
5つのヒトSCLC株のパネルをシスプラチン及びDKFZ-00608に対する感度について試験した。96ウェルプレートの10%ウシ胎仔血清及び1%抗生物質（ペニシリン／ストレプトマイシン）で補足したRPMI培地に3×104細胞／ウェルの密度で細胞を蒔いた。24時間後、スルホブチルエーテル-β-シクロデキストリン（30倍の濃度のジスルフィラム）の存在下、様々な希釈率（100 μM〜0.01 μM）で試験化合物を添加した。全ての濃度を3回繰り返して適用した。37℃で72時間のインキュベーションの後、Cell-titer-blue（Promega）を添加した（10 μl／ウェル）。37℃で2〜8時間のインキュベーションの後、蛍光（励起フィルター：550 nm、発光フィルター590 nm）をELISAリーダー（Optima, BMG Labtec）で判定した。それぞれの処理について平均値を計算し、IC50をフィッティングしていない用量反応曲線から計算した。それぞれのIC50／H209細胞で見られたIC50の商（of division）から、各細胞株に対して相対的IC50を計算した。結果を図8に示す。
【０１３２】
DKFZ-00608について、38 nM〜95 nMのIC50を見出した。相対IC50の変化は小さかった。相対IC50は、0.48〜1.18の間にあると決定された。シスプラチンについては、大きい変化が見られた。IC50は0.40 μM〜10.2 μMに見られた。相対IC50は0.4〜10に見られた。結論：SCLC細胞においてシスプラチンとDKFZ-00608との間に交差抵抗性はない。
【０１３３】
実施例9：DKFZ-00608はシスプラチン／エトポシド治療後の腫瘍再発を予防する
本発明者らは、in vivoでヒトSCLC腫瘍に対するDKFZ-00608の効能を標準的治療と比較しようとした。具体的には、SCLC治療における主な臨床上の合併症である、シスプラチン／エトポシドによる治療が成功した後の腫瘍再発に対する効果を目的とした。雌性 nu／nuマウスにH209 SCLC細胞（0.1 mlの等張食塩水中10×106細胞／マウス）を注入した。0.08 mm3〜0.12 mm3のサイズに増殖した後、10匹の動物群を以下の通り治療した。
9週間に亘る毎日のプラセボ（等張食塩水中の60 mMのスルホブチルエーテルベータ-シクロデキストリン）。
3週間のシスプラチン（3 mg/kg、週1回）＋エトポシド（7.5 mg/kg、週2回）。
3週間のシスプラチン（3 mg/kg、週1回）＋エトポシド（7.5 mg/kg、週2回）。続いて、6週間の60 mMスルホブチルエーテルベータ-シクロデキストリン中のDKFZ-00608（15 mg/kg、毎日）。
6週間の60 mMスルホブチルエーテルベータ-シクロデキストリン中のDKFZ-00608（15 mg/kg、毎日）。
【０１３４】
腫瘍サイズを、最初の9週間は1週間当たり2回、その後1週間当たり1回判定した。
【０１３５】
結果を図9A〜図9Cに提供する。全てのプラセボ腫瘍は急速に増殖し、この群の動物はいずれも42日以内に死なせなければならなかった。シスプラチン腫瘍は急速に退縮し、9／10及び10／10の腫瘍において治療終了後にはもはや触知できなかった。20日後、全ての動物において、腫瘍の再増殖が観察された。シスプラチン／エトポシド治療の後にDKFZ-00608治療が続いた場合、腫瘍の再発は、少なくとも50日間に亘って予防することができた。DKFZ-00608による6週間の治療後、10匹の動物のうちの6匹の動物において触知可能な腫瘍はなかった。4匹の動物において、腫瘍は完全には退縮しておらず、治療の終了後に増殖を再開して、平均腫瘍サイズの増加をもたらした。82日後、これらの腫瘍は、動物を安楽死させなければならないサイズに達した。腫瘍を持たない動物のみが生存した。結果的に、腫瘍を持つ動物を排除することにより、平均腫瘍サイズは0 mm3に再び減少した。これは、一見して、腫瘍サイズ曲線におけるパラドックスピークを説明する。
【０１３６】
したがって、DKFZ-00608治療は、最初に標準治療に成功した後に腫瘍再発を予防することができる。
【０１３７】
実施例10：本発明の化合物の合成
Au-DTC錯体の合成
【化５】
2019536755.tif 000010
式中、R'及びR''は接続されて、N-複素環系又はN、S、O、P等のヘテロ原子を含む直鎖／分岐鎖の脂肪族炭素鎖のいずれかをもたらす。
【０１３８】
リチウムジチオカルバメート塩の作製：
適切な第二級アミンを乾燥THFに溶解し、-78℃に冷却した。n-ブチルリチウムの等モル溶液（ヘキサン中2.5M）を上記溶液に滴加し、等モル量の二硫化炭素を添加しながら15分間撹拌した。得られた反応混合物を-78℃で15分間撹拌した後、室温まで温めた。合計3時間の反応時間の後、高真空下で一晩、溶液を濃縮し乾燥した。得られた灰白色の固体又は油（THFの残留物を含む）を、それ以上の精製せずに次の工程で使用した。
【０１３９】
ホモレプティック金（I）ジチオカルバメート錯体の作製：
金チオリンゴ酸（ATM）の水溶液、又はアセトニトリル中のクロロ（ジメチルスルフィド）金（I）等の好適な溶媒に溶解した別の金（I）供給源に、室温にて1:1〜2の金属／dtc（又はジチウラム）比で、適切なジチオカルバメート（dtc）塩（すなわちアンモニア、アルカリ又はアルカリ土類金属の塩、但し好ましくはナトリウム又はリチウム）又は適切なチウラムジスルフィドのいずれかのエタノール溶液又は水溶液を滴加した。これらの溶液を合わせる間に黄色から橙色に着色した沈殿物が形成した。懸濁液を室温で一晩（又は少なくとも3時間）撹拌した。その後、沈殿物をガラスフリットによって濾過した後に水、エタノール及びジエチルエーテルで洗浄するか、又は遠心分離のいずれかによって精製した。後者の方法に関しては、上清を取り去り、残渣を水に再懸濁して、繰り返し遠心分離を行った。その後、得られた固体を高真空下で一晩乾燥した。適用可能であれば、適切な有機溶媒又は溶媒混合物、好ましくはジメチルホルムアミド、1,2-ジクロロエタン、又はジクロロメタン／ヘキサンを使用して更に再結晶化した。
【０１４０】
MM-VI-81
【化６】
2019536755.tif 000011
【０１４１】
およそ20.0 mlの乾燥THF中のN-エチル,N-イソプロピルアミン（0.72 g、1.0ml、1当量）8.26 mmol、二硫化炭素（0.63 g、0.5 ml、1当量）8.26 mmol、及びn-ブチルリチウム（ヘキサン中2.5 M、4.67 ml、1当量）8.26mmolを使用し、基本手順使用に従って、リチウムN-エチル,N-イソプロピルジチオカルバメートを合成した。定量的収率で灰白色固体として生成物を得た。
1H NMR (400 MHz, D2O) δ 5.86 (hept, J = 6.8 Hz, 1H), 3.90 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.28 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.20 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
【０１４２】
MM-VI-109
【化７】
2019536755.tif 000012
【０１４３】
およそ50.0 mlの乾燥THF中のN-エチルメチルアミン（0.69 g、1.0 ml、1当量）11.67 mmol、二硫化炭素（0.89 g、0.7 ml、1当量）11.67 mmol、及びn-ブチルリチウム（ヘキサン中2.5 m、4.67 ml、1当量）11.67 mmolを使用し、基本手順使用に従って、リチウムN-エチル,N-メチルジチオカルバメートを合成した。定量的収率で赤みがかった固体として生成物を得た。
1H NMR (400 MHz, D2O) δ 4.09 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.45 (s, 3H),1.21 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
【０１４４】
MM-VI-106
【化８】
2019536755.tif 000013
【０１４５】
およそ50.0 mlの乾燥THF中のアゼチジン（0.85 g、1.0 ml、1当量）14.89 mmol、二硫化炭素（1.13 g、0.9 ml、1当量）14.89mmol、及びn-ブチルリチウム（ヘキサン中2.5 M溶液、6.0 ml、1当量）14.89mmolを使用し、基本手順使用に従って、リチウムアゼチジンジチオカルバメートを合成した。定量的収率で白色固体として生成物を得た。
1H NMR(400 MHz, D2O) δ 4.19 - 4.13 (m, 4H), 2.18 - 2.09 (m, 2H).
【０１４６】
MM-VI-102
【化９】
2019536755.tif 000014
【０１４７】
およそ20.0 mlの乾燥THF中のジプロピルアミン（1.11 g、1.5 ml、1当量）10.97 mmol、二硫化炭素（0.84 g、0.66 ml、1当量）10.97mmol、及びn-ブチルリチウム（ヘキサン中2.5 M溶液、4.4 ml、1当量）10.97mmolを使用し、基本手順使用に従って、リチウムジ-n-プロピルジチオカルバメートを合成した。定量的収率で灰白色固体として生成物を得た。
1H NMR(400 MHz, D2O) δ 3.99 - 3.90 (m, 4H), 1.79 - 1.68 (m, 4H), 0.89 (t, J = 7.5 Hz, 6H).
【０１４８】
MM-VI-112
【化１０】
2019536755.tif 000015
【０１４９】
およそ20.0 mlの乾燥THF中のN-メチルピペリジン（1.35 g、1.5 ml、1当量）13.48 mmol、二硫化炭素（1.03 g、0.81 ml、1当量）13.48mmol、及びn-ブチルリチウム（ヘキサン中2.5 M溶液、5.4 ml、1当量）13.48mmolを使用し、基本手順使用に従って、リチウム4-メチルピペラジニルジチオカルバメートを合成した。定量的収率で灰白色固体として生成物を得た。
1H NMR(400 MHz, D2O) δ 4.35 (br. s, 4H), 2.53 (br. s, 4H), 2.29 (s, 3H).
【０１５０】
DKFZ-00616
【化１１】
2019536755.tif 000016
【０１５１】
それぞれaqua dest. 10.0 mlに予め溶解したATM（352.7 mg、1.0当量）0.90mmol及びメタム（metam）（174.4 mg、1.5当量）1.35 mmolを使用し、基本手順に従って、錯体[Au(N-メチル)dtc]nを合成した。得られたわずかに緑がかった黄色の粉体を、水、少量のエタノール及びジエチルエーテルで続けて徹底的に洗浄し、高真空下で一晩乾燥した。収率68%（183.6 mg、0.61mmol）で生成物を得た。
【０１５２】
元素分析：計算値C、7.92；H、1.33；N、4.62；実測値C、8.10；H、1.49；N、4.59。
【０１５３】
DKFZ-00610
【化１２】
2019536755.tif 000017
【０１５４】
それぞれアセトニトリル20.0 mlに予め溶解したクロロ（ジメチルスルフィド）金（I）（325.1 mg、1.0当量）1.1mmol及びジメチルジチオカルバメート（157.5 mg、1.0当量）1.1 mmolを使用し、基本手順に従って、錯体[Au(N-ジメチル)dtc]nを合成した。得られた黄色の粉体を、水、少量のエタノール及びジエチルエーテルで続けて徹底的に洗浄し、高真空下で一晩乾燥した。黄色の粉体として収率35%（121.8 mg、0.38mmol）で生成物を得た。
【０１５５】
元素分析：計算値C、11.36；H、1.91；N、4.42；実測値C、11.61；H、2.00；N、4.43。
【０１５６】
DKFZ-00613
【化１３】
2019536755.tif 000018
【０１５７】
それぞれaqua dest. 10.0 mlに予め溶解したATM（527.0 mg、1.0当量）1.35mmol及び適切なジチオカルバメート（286.6 mg、1.5当量）2.03 mmolを使用し、基本手順に従って、錯体[Au(N-エチル,N-メチル)dtc]nを合成した。得られた橙色の粉体を水、少量のエタノール及びジエチルエーテルで続けて徹底的に洗浄し、真空下で一晩乾燥した。収率73%（327.6 mg、0.99mmol）で粗製生物を得た。この材料を高温の1,2-ジクロロエタンからの沈殿によって更に精製し、純生成物として綿毛状の橙色に着色した固体を得た。
【０１５８】
元素分析：計算値C、14.51；H、2.43；N、4.23；実測値C、14.59；H、2.66；N、4.15。
【０１５９】
DKFZ-00608
【化１４】
2019536755.tif 000019
【０１６０】
aqua dest. 100.0 mlに溶解したATM（2.0 g、1.0当量）5.13mmol及びエタノール100.0 mlに溶解したテトラエチルジチウラムジスルフィド（1.52 g、1.0当量）5.13mmolを使用し、基本手順に従って、錯体[Au(ジエチル)dtc]nを合成した。得られた橙色の粉体を濾過し、水で徹底的に洗浄して、高真空下で一晩乾燥した。この材料を高温のDMFから再結晶化し、収率68%（1.21  g、3.50 mmol）で純生成物として橙色の針状物を得た。
【０１６１】
元素分析：計算値C、17.39；H、2.92；N、4.06；実測値C、17.45；H、3.02；N、4.22。
【０１６２】
DKFZ-00617
【化１５】
2019536755.tif 000020
【０１６３】
それぞれaqua dest. 5.0 mlに溶解したATM（400.0 mg、1.0当量）1.03mmol及びアンモニウムピロリジンジチオカルバメート（336.8 mg、2.0当量）2.05 mmolを使用し、基本手順に従って、錯体[Au(ピロリジニル)dtc]nを合成した。得られた橙色の粉体に遠心分離を行った。上清を取り去り、残渣を水に再懸濁し、再び遠心分離を行った（手順を2回繰り返した）。得られた橙色の固体を高真空下で一晩乾燥した後、高温のDMFから再結晶化して、収率38%（133.8 mg、0.39mmol）で純生成物として橙色に着色した針状物を得た。
【０１６４】
元素分析：計算値C、17.50；H、2.35；N、4.08；実測値C、17.73；H、2.53；N、4.23。
【０１６５】
DKFZ-00609
【化１６】
2019536755.tif 000021
【０１６６】
それぞれaqua dest. 10.0 mlに溶解したATM（230.4 mg、1.0当量）0.59mmol及びリチウム（N-エチル,N-イソプロピル）ジチオカルバメート（150.0 mg、1.5当量）0.89mmolを使用し、基本手順に従って、錯体[Au(N-エチル,N-イソプロピル)dtc]nを合成した。得られた橙色から褐色の粉体を濾過し、水で徹底的に洗浄した。この材料をクロロホルム／ヘキサンから再結晶化し、収率19%（39.8 mg、0.11mmol）で純生成物として濃い橙色から褐色の結晶を得た。
【０１６７】
元素分析：計算値C、20.06；H、3.37；N、3.90；実測値C、19.61；H、3.44；N、3.80。
【０１６８】
DKFZ-00612
【化１７】
2019536755.tif 000022
【０１６９】
それぞれaqua dest. 10.0 mlに予め溶解したATM（478.0 mg、1.0当量）1.23mmol及び適切なジチオカルバメート（337.1 mg、1.5当量）1.84 mmolを使用し、基本手順に従って、錯体[Au(ジ-n-プロピル)dtc]nを合成した。得られた鮮黄色の粉体を水、エタノール及びジエチルエーテルで続けて徹底的に洗浄した。収率87%（400.9 mg、1.07mmol）で粗製生物を得た。高温の1,2-ジクロロエタンからの再結晶化により、純生成物として鮮黄色の針状物を得た。
【０１７０】
元素分析（レポート41176, [M]）：計算値C、22.52；H、3.78；N、3.75；実測値C、22.31；H、4.01；N、3.64。
【０１７１】
DKFZ-00614
【化１８】
2019536755.tif 000023
【０１７２】
それぞれaqua dest. 10.0 mlに予め溶解したATM（646.0 mg、1.0当量）1.66mmol及び適切なジチオカルバメート（345.7 mg、1.5当量）2.48 mmolを使用し、基本手順に従って、錯体[Au(アゼチジニル)dtc]nを合成した。得られた鮮黄色の粉体を水、少量のエタノール及びジエチルエーテルで続けて徹底的に洗浄し、真空下で一晩乾燥した。収率78%（427.9 mg、1.30mmol）で生成物を得た。
【０１７３】
元素分析：計算値C、14.59；H、1.84；N、4.25；実測値C、14.68；H、2.24；N、4.05。
【０１７４】
DKFZ-00618
【化１９】
2019536755.tif 000024
【０１７５】
aqua dest. 10.0 mlに予め溶解したATM（407.5 mg、1.0当量）1.04mmol及び適切なナトリウムジチオカルバメート（水溶液、45重量%；791.7 mg、0.73 ml、1.5当量）1.57 mmolを使用して、基本手順に従って、錯体[Au(ジ-n-ブチル)dtc]nを合成した。室温で一晩撹拌した後、反応混合物をクロロホルム（20 mlで2回）で抽出した。合わせた有機相をブライン（20 mlで1回）洗浄し、MgSO4で乾燥して濃縮した。残留物を高温の1,2-ジクロロエタンから再結晶化し、収率35%（145.6 mg、0.36 mmol）で純生成物として橙色の針状物を得た。
【０１７６】
元素分析：計算値C、26.93；H、4.52；N、3.49；実測値C、26.83；H、4.73；N、3.30。
【０１７７】
DKFZ-00611
【化２０】
2019536755.tif 000025
【０１７８】
aqua dest.に溶解したATM（505.1mg、1.0当量）1.29 mmol及びメタノール10.0 mlに溶解した適切なナトリウムジチオカルバメート（573.7 mg、1.5当量）1.94 mmolを使用し、基本手順に従って、錯体[Au(ジベンジル)dtc]nを合成した。得られた鮮黄色の粉体を、水、少量のエタノール及びジエチルエーテルで続けて徹底的に洗浄した。粗製生成物を収率64%（390.5 mg、0.83mmol）で得た。クロロホルム／ヘキサンからの再結晶化により、収率64%（390.5 mg、0.83 mmol）で純生成物として褐色の結晶を得た。
【０１７９】
元素分析（レポート40981, [M]）：計算値C、38.38；H、3.01；N、2.98；実測値C、38.31；H、3.28；N、2.86。
【０１８０】
DKFZ-00615
【化２１】
2019536755.tif 000026
【０１８１】
それぞれaqua dest. 10.0 mlに予め溶解したATM（502.0 mg、1.0当量）1.29mmol及び適切なジチオカルバメート（351.7 mg、1.5当量）1.93 mmolを使用し、基本手順に従って、錯体[Au(4-メチルピペラジニル)dtc]nを合成した。得られた鮮黄色の粉体を水、少量のエタノール及びジエチルエーテルで続けて徹底的に洗浄した。収率86%（414.8 mg、1.11mmol）で粗生成物を得た。高温の1,2-ジクロロエタンからの再結晶化は、純生成物として非常に細かい鮮黄色の針状物を得た。
【０１８２】
元素分析（レポート41228, [M]）：計算値C、19.36；H、2.98；N、7.53；実測値C、19.42；H、3.07；N、7.85。
【符号の説明】
【０１８３】
図面訳
図1
Anti-tumoractivity in the presence and absence of cyclodextrin  シクロデキストリンの存在下及び不在下での抗腫瘍活性
IC50 in theabsence of cyclodextrin  シクロデキストリンの不在下でのIC50
IC50 in thepresence of cyclodextrin  シクロデキストリンの存在下でのIC50
Combination Index  併用係数
normalized values  正規化値
Aurothiomalate  金チオリンゴ酸
Cisplatin  シスプラチン
図2
Synergisticanti-tumor effect of cyclodextrin with combination of disulfiram＋aurothiomalate  ジスルフィラム＋金チオリンゴ酸の組み合わせとシクロデキストリンとの相乗的な抗腫瘍効果
Mean CI  平均CI
Ratiocyclodextrin/combination of aurothiomalate＋disulfiram  シクロデキストリン／金チオリンゴ酸＋ジスルフィラムの組み合わせの比
図3A
Normalizeddisulfiram concentration  正規化したジスルフィラム濃度
Normalizedaurothiomalate concentration  正規化した金チオリンゴ酸濃度
図3B
Normalizeddisulfiram concentration  正規化したジスルフィラム濃度
Normalizedaurothiomalate concentration  正規化した金チオリンゴ酸濃度
図3C
Combination indexat different aurothiomalate/disulfiram ratios  種々の金チオリンゴ酸／ジスルフィラム比における併用係数
Aurothiomalate/disulfiramratio  金チオリンゴ酸／ジスルフィラム比
図4A
All tested cells  試験した全ての細胞
μM disulfiram  μMジスルフィラム
μM aurothiomalate  μM金チオリンゴ酸
Human fibroblasts  ヒト線維芽細胞
mean line ofadditive effect  相加効果の平均線
図4B
T-cell leukemia/lymphoma- compared with normal cells  T細胞白血病／リンパ腫−正常細胞との比較
human fibroblasts  ヒト線維芽細胞
mean normal cells  平均正常細胞
μM disulfiram  μMジスルフィラム
μM aurothiomalate  μM金チオリンゴ酸
図4C
Small cell lungcancer cells - compared with normal cells  小細胞肺癌細胞−正常細胞との比較
human fibroblasts  ヒト線維芽細胞
μM disulfiram  μMジスルフィラム
μM aurothiomalate  μM金チオリンゴ酸
図4D
Synergism inT-cell leukemia/lymphoma cells compared with normal cells  正常細胞と比較したT細胞白血病／リンパ腫の細胞における相乗作用
Mean normal  平均正常細胞
Mean T-cellleukemia/lymphoma  平均T細胞白血病／リンパ腫
Disulfiram/aurothiomalateratio  ジスルフィラム／金チオリンゴ酸比
図5
Effect onOxaliplatin resistant cancer cells  オキサリプラチン抵抗性癌細胞に対する効果
Oxaliplatintreatment surviving HT29 cells  オキサリプラチン処理生存HT29細胞
HT29 controlcells  HT29対照細胞
Human fibroblasts  ヒト線維芽細胞
Factor ofresistance  抵抗性係数
Vincristine  ビンクリスチン
Oxaliplatin  オキサリプラチン
Doxorubicin  ドキソルビシン
Aurothiomalate/disulfiram+cyclodextrin  金チオリンゴ酸／ジスルフィラム＋シクロデキストリン
図6A
IC50 in Jurkatand Raji cells  Jurkat細胞及びRaji細胞におけるIC50
Disulfiram  ジスルフィラム
Cisplatin  シスプラチン
図6B
Selectivity forJurkat cells  Jurkat細胞に対する選択性
Disulfiram  ジスルフィラム
Cisplatin  シスプラチン
図7A
Auranofin  オーラノフィン
Cisplatin  シスプラチン
T-test  T検定
図7B
Auranofin  オーラノフィン
Cisplatin  シスプラチン
図7C
Selectivity forSCLC  SCLCに対する選択性
IC50 ratio  IC50比
Auranofin  オーラノフィン
Cisplatin  シスプラチン
図8A
Relative IC50  相対IC50
Cisplatin  シスプラチン
図8B
Relative IC50ies ofSCLC  SCLCに対する相対IC50
CisPt  シスプラチン
図8C
IC50 SCLCs Cisplatinand DKFZ-00608  SCLCシスプラチン及びDKFZ-00608のIC50
CisPt  シスプラチン
図9A
Tumor freeanimals  腫瘍のない動物数
Placebo  プラセボ
Cisplatin/Etoposide  シスプラチン／エトポシド
図9B
Mean tumor size  平均腫瘍サイズ
tumor volume  腫瘍体積
weeks  週
Placebo  プラセボ
Cisplatin/Etoposide  シスプラチン／エトポシド
図9C
Surviving animals  生存動物数
days  日
Placebo  プラセボ
Cisplatin/Etoposide  シスプラチン／エトポシド
【図１】
2019536755.tif 000032
【図２】
2019536755.tif 000033
【図３−１】
2019536755.tif 000034
【図３−２】
2019536755.tif 000035
【図４−１】
2019536755.tif 000036
【図４−２】
2019536755.tif 000037
【図４−３】
2019536755.tif 000038
【図４−４】
2019536755.tif 000039
【図５】
2019536755.tif 000040
【図６−１】
2019536755.tif 000041
【図６−２】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【国際調査報告】
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