(57)【要約】抗原、例えば、がんおよび微生物抗原に対する免疫応答を惹起するための方法および組成物が、本明細書で提供されている。本発明の主題は、免疫応答をモジュレートするためのデバイス、生体材料、組成物および方法を提供する。このデバイスは、（ａ）足場組成物を含む送達ビヒクル、ならびに（ｂ）（ｉ）ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）；（ｉｉ）遊離ＰＥＩ；（ｉｉｉ）ＰＥＩおよび抗原；または（ｉｖ）抗原に付着したＰＥＩを含み得る。
2019524766.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）足場組成物を含む送達ビヒクル、ならびに
（ｂ）（ｉ）ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）；（ｉｉ）遊離ＰＥＩ；（ｉｉｉ）ＰＥＩおよび抗原；または（ｉｖ）抗原に付着したＰＥＩ
を含む、デバイス。
【請求項２】
抗原に付着したＰＥＩを含み、前記抗原は腫瘍抗原を含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
前記ＰＥＩが、前記抗原に、静電相互作用を介して付着している、請求項２に記載のデバイス。
【請求項４】
前記ＰＥＩが、前記抗原に共有結合している、請求項２に記載のデバイス。
【請求項５】
前記ＰＥＩが、分岐鎖または直鎖である、請求項１に記載のデバイス。
【請求項６】
分岐鎖ＰＥＩおよび直鎖ＰＥＩの両方を含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項７】
前記ＰＥＩが、分岐鎖デンドリマーＰＥＩを含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項８】
前記ＰＥＩが、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０または３０個の１級、２級および／または３級アミノ基を含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項９】
前記ＰＥＩが、（ａ）少なくとも約１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、１００、１２５、１５０、１７５もしくは２００キロダルトン（ｋＤａ）；（ｂ）約２００、１７５、１５０、１２５、１００、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、３５、２５、２０、１５、１０、５、４、３、２もしくは１ｋＤａ未満；または（ｃ）約１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、１〜１０、２〜２５、２５〜６０、２５〜７５、５０〜１００もしくは１００〜２００ｋＤａの分子量を含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１０】
前記ＰＥＩが、約２５ｋＤａの分子量を有する直鎖ＰＥＩまたは約６０ｋＤａの分子量を有する分岐鎖ＰＥＩを含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１１】
前記送達ビヒクルが、少なくとも約０．１、０．５、１、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍｍ３の体積を含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１２】
前記足場組成物が、（ｉ）開放型の相互接続されたマクロ細孔を含むか；または（ｉｉ）細孔形成性足場組成物である、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１３】
前記足場組成物が、ヒドロゲルまたはクリオゲルを含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１４】
前記足場組成物が、アニオン性またはカチオン性である、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１５】
前記足場組成物が、メタクリル化されたポリマーまたはコポリマーを含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１６】
前記足場組成物が、（ｉ）がん細胞の化学誘引物質および細胞傷害誘導性組成物を含む第１のゾーン、ならびに（ｉｉ）免疫細胞動員組成物を含む第２のゾーンを含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１７】
前記足場組成物が、メソ多孔性シリカロッドを含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１８】
（ａ）免疫賦活性化合物；
（ｂ）前記送達ビヒクルに、または前記送達ビヒクル中に、免疫細胞を誘引する化合物；
（ｃ）腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する化合物；
（ｄ）Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する化合物；
（ｅ）免疫阻害性タンパク質を阻害する化合物
またはそれらの任意の組合せ
をさらに含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１９】
前記免疫賦活性化合物が、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストおよび／またはメソ多孔性シリカを含む、請求項１８に記載のデバイス。
【請求項２０】
抗原を含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項２１】
前記抗原が、腫瘍抗原または非腫瘍抗原を含む、請求項２０に記載のデバイス。
【請求項２２】
前記抗原が腫瘍抗原ペプチドを含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項２３】
それを必要とする対象においてがんを処置する方法であって、請求項１から２２のいずれかに記載のデバイスを前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項２４】
前記デバイスが、樹状細胞の活性化を刺激する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記デバイスが、前記腫瘍抗原に対する細胞傷害性Ｔ細胞媒介性免疫応答を惹起する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
抗原の免疫原性を増加させる方法であって、前記抗原をＰＥＩと組み合わせるステップを含む、方法。
【請求項２７】
前記抗原がネオ抗原を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記抗原がポリペプチドを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記ポリペプチドが、腫瘍抗原または病原体関連抗原の少なくとも約１０アミノ酸のストレッチと同一な配列中のアミノ酸を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
複数のメソ多孔性シリカロッドを含むメソ多孔性シリカロッドのライブラリーであって、前記複数のメソ多孔性シリカロッドは、別々のメソ多孔性シリカロッドを含み、各別々のメソ多孔性シリカロッドは、抗原を含み、各別々のメソ多孔性シリカロッドは、他の別々のメソ多孔性シリカロッドのそれぞれの抗原と異なる抗原を含む、ライブラリー。
【請求項３１】
前記複数のメソ多孔性シリカロッドが、少なくとも約１０個の別々のメソ多孔性シリカロッドを含む、請求項３０に記載のライブラリー。
【請求項３２】
２つまたはそれよりも多くのメソ多孔性シリカロッドの混合物であって、前記混合物中の各メソ多孔性シリカロッドは異なる抗原を含む、混合物。
【請求項３３】
前記メソ多孔性シリカロッドの各々が、ほぼ同じ長さを含む、請求項３２に記載の混合物。
【請求項３４】
前記メソ多孔性シリカロッドの各々が、異なる長さを含む、請求項３２に記載の混合物。
【請求項３５】
前記混合物中の各メソ多孔性シリカロッドが、異なる腫瘍抗原を含む、請求項３２に記載の混合物。
【請求項３６】
前記混合物中の各メソ多孔性シリカロッドが、異なる病原体関連抗原を含む、請求項３２に記載の混合物。
【請求項３７】
前記メソ多孔性シリカロッドが、ＰＥＩで表面修飾されている、請求項３０から３６のいずれかに記載のライブラリーまたは混合物。
【請求項３８】
前記メソ多孔性シリカロッドが、ＰＥＩで表面修飾されている、請求項１７に記載のデバイス。
【請求項３９】
前記足場組成物が、Ｄ，Ｌ−ラクチドおよびグリコリド（ＰＬＧ）を含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項４０】
前記ＰＬＧが、ＰＥＩで表面修飾されている、請求項３９に記載のデバイス。
【請求項４１】
ＰＥＩで表面修飾されたデバイスを作製する方法であって、ポリマー組成物をＰＥＩでコーティングするステップ、それに続き、前記コーティングされたポリマー組成物に抗原を吸着させて、ＰＥＩで表面修飾されたＭＰＳデバイスを作製するステップを含む、方法。
【請求項４２】
ＰＥＩで表面修飾されたＭＰＳデバイスを作製する方法であって、複数のＭＰＳロッドをＰＥＩでコーティングするステップ、それに続き、前記コーティングされたＭＰＳロッドに抗原を吸着させて、ＰＥＩで表面修飾されたＭＰＳデバイスを作製するステップ、方法。
【請求項４３】
前記コーティングされたＭＰＳロッドを、
（ａ）免疫賦活性化合物；
（ｂ）前記送達ビヒクルに、または前記送達ビヒクル中に、免疫細胞を誘引する化合物；
（ｃ）腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する化合物；
（ｄ）Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する化合物；
（ｅ）免疫阻害性タンパク質を阻害する化合物
またはそれらの任意の組合せ
と接触させるステップをさらに含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
ＰＥＩで表面修飾されたＰＬＧデバイスを作製する方法であって、複数のＰＬＧスフェアをＰＥＩでコーティングするステップ、それに続き、前記コーティングされたＰＬＧスフェアに抗原を吸着させるステップを含み、それによって、ＰＥＩで表面修飾されたＰＬＧデバイスを作製する、方法。
【請求項４５】
前記コーティングされたＰＬＧスフェアを、
（ｆ）免疫賦活性化合物；
（ｇ）前記送達ビヒクルに、または前記送達ビヒクル中に、免疫細胞を誘引する化合物；
（ｈ）腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する化合物；
（ｉ）Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する化合物；
（ｊ）免疫阻害性タンパク質を阻害する化合物
またはそれらの任意の組合せ
と接触させるステップをさらに含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
がんを処置するための、本明細書に実質的に記載された通りのデバイス、ライブラリーまたは混合物の使用。
【請求項４７】
対象において腫瘍負荷を低減させるための、本明細書に実質的に記載された通りのデバイス、ライブラリーまたは混合物の使用。
【請求項４８】
感染症を処置するための、本明細書に実質的に記載された通りのデバイス、ライブラリーまたは混合物の使用。
【請求項４９】
腫瘍抗原または腫瘍ネオ抗原に対する免疫応答を惹起するための、本明細書に実質的に記載された通りのデバイス、ライブラリーまたは混合物の使用。
【請求項５０】
抗原の免疫原性を増強するための、本明細書に実質的に記載された通りのデバイス、ライブラリーまたは混合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１７年３月２０日に出願された米国仮出願番号第６２／４７３，６９９号、２０１７年２月１７日に出願された米国仮出願番号第６２／４６０，６５２号、および２０１６年８月２日に出願された米国仮出願番号第６２／３７０，２１１号への米国特許法第１１９条（ｅ）項の下での優先権の利益を主張しており、これら出願の各々の全体の内容は、それらの全体が参考として本明細書中に援用される。
【０００２】
政府支援
本発明は、国立衛生研究所によって授与された認可番号Ｒ０１ＥＢ０１５４９８の下、政府支援でなされた。政府は、本発明において特定の権利を有する。
【０００３】
配列表への参照
２０１７年８月２日に作成された名称「２９２９７−１３２００１ＷＯ＿ＳＥＱＵＥＮＣＥ＿ＬＩＳＴＩＮＧ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」のテキストファイルの内容は、サイズが２９２キロバイトであり、本出願の一部として提出され、その全体がこれにより本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００４】
背景
樹状細胞（ＤＣ）は、Ｔ細胞への提示のために抗原を収集およびプロセシングする。ＤＣは、抗原提示細胞の中で最も強力な、免疫系の活性化因子である。樹状細胞はまれであり、単離が困難であるので、治療利益のために樹状細胞を使用することに焦点を当てた研究は、緩慢なものであった。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
簡単な要旨
本発明の主題は、免疫応答をモジュレートするためのデバイス、生体材料、組成物および方法を提供する。
【０００６】
ある態様では、足場組成物を含む送達ビヒクルおよび本明細書に開示されている１種または複数の化合物（例えば、１種もしくは複数のアジュバントおよび／または１種もしくは複数の抗原）の任意の組合せを含むデバイスが、本明細書で提供されている。実施形態では、このデバイスはＰＥＩを含む。実施形態では、このデバイスは、ＰＥＩを含まない。実施形態では、１種もしくは複数のアジュバントおよび／または１種もしくは複数の抗原は、ＰＥＩに（例えば、共有結合または非共有結合により）付着（例えば、それと縮合）される。足場組成物および以下のうちいずれか１つまたは以下の任意の組合せ（例えば、足場組成物中またはその上の）を含むデバイスが、本明細書に含まれる：（ａ）少なくとも１種の抗原；（ｂ）少なくとも１種の免疫賦活性化合物；（ｃ）送達ビヒクルに、または送達ビヒクル中に、免疫細胞を誘引する少なくとも１種の化合物；（ｄ）腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する少なくとも１種の化合物；（ｅ）Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する少なくとも１種の化合物；および／または（ｆ）免疫阻害性タンパク質を阻害する少なくとも１種の化合物。
【０００７】
ある態様では、免疫応答を増加、増強もしくは促進するための方法であって、１つまたは複数の免疫細胞（例えば、樹状細胞またはＴ細胞）を本明細書で提供されているデバイスと接触させるステップを含む方法が、本明細書に含まれる。本発明の主題の態様は、対象において免疫応答を増加、増強もしくは促進するための方法（例えば、ワクチン接種）であって、本明細書で提供されているデバイスを対象に投与するステップを含む方法を含む。実施形態では、この免疫応答は、がん抗原（例えば、ネオ抗原）に対するものである。実施形態では、この免疫応答は、病原体または寄生生物（例えば、ウイルス、細菌、真菌もしくは原生動物病原体または寄生生物）に対するものである。
【０００８】
ある態様では、対象においてがんを処置する方法であって、本明細書に開示されているデバイスを対象に投与するステップを含む方法が提供される。
【０００９】
ある態様では、抗原の免疫原性を増加させる方法が、本明細書に含まれる。実施形態では、この方法は、抗原をＰＥＩと組み合わせるステップを含む。実施形態では、この方法は、抗原を、以下のうち１つもしくは複数または以下の任意の組合せと組み合わせるステップをさらに含む：（ａ）少なくとも１種の免疫賦活性化合物；（ｂ）送達ビヒクルに、または送達ビヒクル中に、免疫細胞を誘引する少なくとも１種の化合物；（ｃ）腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する少なくとも１種の化合物；（ｄ）Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する少なくとも１種の化合物；および／または（ｅ）免疫阻害性タンパク質を阻害する少なくとも１種の化合物。実施形態では、この組合せは、足場組成物をさらに含むデバイス中にある。実施形態では、この組合せは、足場組成物中またはその上にある。
【００１０】
ある態様では、複数のメソ多孔性シリカロッド（例えば、異なる群または型のメソ多孔性シリカロッド）を含むメソ多孔性シリカロッドのライブラリーが、本明細書で提供されている。実施形態では、この複数のメソ多孔性シリカロッドは、異なるメソ多孔性シリカロッドを含み、各メソ多孔性シリカロッド（例えば、各異なる群または型のメソ多孔性シリカロッド）は、以下のうちいずれか１つを含む：（ａ）少なくとも１種の抗原；（ｂ）少なくとも１種の免疫賦活性化合物；（ｃ）送達ビヒクル、または送達ビヒクル中に、免疫細胞を誘引する少なくとも１種の化合物；（ｄ）腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する少なくとも１種の化合物；（ｅ）Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する少なくとも１種の化合物；および／または（ｆ）免疫阻害性タンパク質を阻害する少なくとも１種の化合物。実施形態では、各メソ多孔性シリカロッド（例えば、各異なる群または型のメソ多孔性シリカロッド）は、他の別々のメソ多孔性シリカロッドのそれぞれ（例えば、他の別々の群または型のメソ多孔性シリカロッドのそれぞれ）と異なる抗原を含む。実施形態では、このライブラリーは、本明細書に開示されている任意のメソ多孔性シリカロッドの１つまたは複数を含む。
【００１１】
ある態様では、２つまたはそれよりも多くのメソ多孔性シリカロッド（例えば、異なる群または型のメソ多孔性シリカロッド）を含むメソ多孔性シリカロッドの混合物が、本明細書に含まれる。実施形態では、この２つまたはそれよりも多くのメソ多孔性シリカロッドは、異なるメソ多孔性シリカロッドを含み、各メソ多孔性シリカロッド（例えば、各異なる群または型のメソ多孔性シリカロッド）は、以下のうちいずれか１つを含む：（ａ）少なくとも１種の抗原；（ｂ）少なくとも１種の免疫賦活性化合物；（ｃ）送達ビヒクルに、または送達ビヒクル中に、免疫細胞を誘引する少なくとも１種の化合物；（ｄ）腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する少なくとも１種の化合物；（ｅ）Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する少なくとも１種の化合物；および／または（ｆ）免疫阻害性タンパク質を阻害する少なくとも１種の化合物。実施形態では、各メソ多孔性シリカロッド（例えば、各異なる群または型のメソ多孔性シリカロッド）は、他の別々のメソ多孔性シリカロッドのそれぞれ（例えば、他の別々の群または型のメソ多孔性シリカロッドのそれぞれ）とは異なる抗原を含む。実施形態では、この混合物は、本明細書に開示されている任意のメソ多孔性シリカロッドの１つまたは複数を含む。
【００１２】
ある態様では、デバイス（例えば、ワクチンデバイス）を作製する方法であって、足場組成物（例えば、ポリマー組成物、例えば、本明細書に開示されている任意のポリマー組成物）をＰＥＩおよび／または以下のうちいずれか１つと組み合わせるステップ：（ａ）少なくとも１種の抗原；（ｂ）少なくとも１種の免疫賦活性化合物；（ｃ）送達ビヒクルに、または送達ビヒクル中に、免疫細胞を誘引する少なくとも１種の化合物；（ｄ）腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する少なくとも１種の化合物；（ｅ）Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する少なくとも１種の化合物；および／または（ｆ）免疫阻害性タンパク質を阻害する少なくとも１種の化合物を含む方法が、本明細書で提供されている。実施形態では、このＰＥＩは、ＰＥＩを足場組成物と組み合わせる前に、以下のうちいずれか１つと組み合わされる：（ａ）少なくとも１種の抗原；（ｂ）少なくとも１種の免疫賦活性化合物；（ｃ）送達ビヒクルに、または送達ビヒクル中に、免疫細胞を誘引する少なくとも１種の化合物；（ｄ）腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する少なくとも１種の化合物；（ｅ）Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する少なくとも１種の化合物；および／または（ｆ）免疫阻害性タンパク質を阻害する少なくとも１種の化合物。実施形態では、この足場組成物は、以下のうちいずれか１つ：（ａ）少なくとも１種の抗原；（ｂ）少なくとも１種の免疫賦活性化合物；（ｃ）送達ビヒクルに、または送達ビヒクル中に、免疫細胞を誘引する少なくとも１種の化合物；（ｄ）腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する少なくとも１種の化合物；（ｅ）Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する少なくとも１種の化合物；および／または（ｆ）免疫阻害性タンパク質を阻害する少なくとも１種の化合物、と組み合わされる前に、ＰＥＩと組み合わされる。
【００１３】
本発明の主題は、がんを処置するため、腫瘍負荷を低減させるため、腫瘍抗原に対する免疫応答を惹起するため、抗原の免疫原性を増加させるため、および／または感染症を処置するための、本明細書で提供されているデバイス、ライブラリーまたは混合物を含む。
【００１４】
本発明の主題の態様は、（ａ）足場組成物を含む送達ビヒクル、ならびに（ｂ）（ｉ）ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）；（ｉｉ）遊離ＰＥＩ；（ｉｉｉ）ＰＥＩおよび抗原；または（ｉｖ）抗原に付着したＰＥＩを含むデバイスに関する。様々な実施形態では、このＰＥＩは、例えば、遊離ＰＥＩとして、または別の化合物に付着したＰＥＩとして存在し得る。本明細書で使用される場合、「遊離ＰＥＩ」は、別の化合物に付着していないＰＥＩであるが、遊離ＰＥＩが、足場組成物の構造的構成要素（例えば、ポリマーまたはメソ多孔性シリカロッド）との静電相互作用、例えば、デバイスのアニオン性ポリマーと会合したカチオン性ＰＥＩを任意選択で有し得る場合を除く。別の化合物に「付着した」ＰＥＩは、化合物に、例えば共有結合または静電相互作用を介して結合していてもよい。例えば、ＰＥＩは、１種または複数の抗原に、共有結合または静電相互作用を介して付着していてもよい。一部の実施形態では、ＰＥＩは、１種または複数の抗原と静電気的に相互作用して、ナノ粒子を形成する。ある特定の実施形態では、このナノ粒子はカチオン性ナノ粒子である。
【００１５】
ある態様では、足場組成物を含む送達ビヒクルを含むデバイスが、本明細書で提供されている。実施形態では、この足場組成物は、アジュバント（例えば、ＣｐＧまたはポリ（Ｉ：Ｃ））、例えば、ＰＥＩなどの物質が縮合したアジュバントを含まない。実施形態では、このデバイスは、足場組成物およびＰＥＩを含む、本質的にそれらからなる、またはそれらからなる。実施形態では、このデバイスは、ＴＬＲアゴニストを含まない。実施形態では、このデバイスは、抗原を含むがＴＬＲアゴニストは含まない。
【００１６】
本発明の主題は、ＰＥＩで表面修飾されたデバイス（例えば、ワクチンデバイス）を作製する方法であって、ポリマー組成物をＰＥＩでコーティングするステップ、それに続き、コーティングされたポリマー組成物に抗原（例えば、本明細書に記載されている抗原）を吸着させるステップを含み、それによって、ＰＥＩで表面修飾されたデバイスを作製する方法もまた含む。ある態様では、ＰＥＩで表面修飾されたＭＰＳデバイス（例えば、ワクチンデバイス）を作製する方法であって、複数のＭＰＳロッドをＰＥＩでコーティングするステップ、それに続き、コーティングされたＭＰＳロッドに抗原（例えば、本明細書に記載されている抗原）を吸着させるステップを含み、それによって、ＰＥＩで表面修飾されたＭＰＳデバイスを作製する方法が、本明細書に含まれる。ＰＥＩで表面修飾されたＰＬＧデバイス（例えば、ワクチンデバイス）を作製する方法であって、複数のＰＬＧスフェア（例えば、ミクロスフェア）をＰＥＩでコーティングするステップ、それに続き、コーティングされたＰＬＧスフェアに抗原（例えば、本明細書に記載されている抗原）を吸着させるステップを含み、それによって、ＰＥＩで表面修飾されたＰＬＧデバイスを作製する方法もまた、本明細書に含まれる。実施形態では、この方法は、コーティングされたＭＰＳロッドまたはコーティングされたＰＬＧスフェアを、（ａ）免疫賦活性化合物；（ｂ）送達ビヒクルに、または送達ビヒクル中に、免疫細胞を誘引する化合物；（ｃ）腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する化合物；（ｄ）Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する化合物；（ｅ）免疫阻害性タンパク質を阻害する化合物、またはそれらの任意の組合せと接触させるステップをさらに含む。
【００１７】
ＰＥＩがカチオン性ナノ粒子中のＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ−ＯＤＮ）またはポリ（Ｉ：Ｃ）に静電相互作用を介して付着する実施形態では、本明細書で提供されているデバイスまたは足場は、（ｉ）遊離ＰＥＩ、（ｉｉ）抗原に付着したＰＥＩ、または（ｉｉｉ）ＣｐＧ−ＯＤＮもしくはポリ（Ｉ：Ｃ）以外の免疫賦活性化合物に付着したＰＥＩをさらに含む。ある特定の実施形態では、この免疫賦活性化合物は、ポリヌクレオチドではない。
【００１８】
一部の実施形態では、ＰＥＩは、ＣｐＧ−ＯＤＮ、ポリ（Ｉ：Ｃ）またはポリアデニル酸−ポリウリジル酸（ポリ（Ａ：Ｕ））に、例えば静電相互作用を介して付着している。一部の実施形態では、ＰＥＩは、ＣｐＧ−ＯＤＮにもポリ（Ｉ：Ｃ）にもポリ（Ａ：Ｕ）にも、静電相互作用を介して付着していない。様々な実施形態では、デバイス、生体材料、組成物または方法は、ＰＥＩおよびポリヌクレオチドを含むナノ粒子（例えば、カチオン性ナノ粒子）を含まない。ある特定の実施形態では、このデバイス、生体材料、組成物または方法は、ＰＥＩおよびＣｐＧ−ＯＤＮ、ポリ（Ｉ：Ｃ）またはポリ（Ａ：Ｕ）を含むナノ粒子（例えば、カチオン性ナノ粒子）を含まない。ＰＥＩがカチオン性ナノ粒子中のＣｐＧ−ＯＤＮ、ポリ（Ｉ：Ｃ）またはポリ（Ａ：Ｕ）に静電相互作用を介して付着する一部の実施形態では、本明細書で提供されているデバイスまたは足場は、（ｉ）遊離ＰＥＩ、（ｉｉ）抗原に付着したＰＥＩ、および／または（ｉｉｉ）ＣｐＧ−ＯＤＮ、ポリ（Ｉ：Ｃ）もしくはポリ（Ａ：Ｕ）以外の免疫賦活性化合物に付着したＰＥＩをさらに含む。ある特定の実施形態では、ＰＥＩは、ポリヌクレオチドに、静電相互作用を介して付着していない。様々な実施形態では、ＰＥＩは、カチオン性ナノ粒子中のポリヌクレオチドに付着していない。一部の実施形態では、本明細書で提供されているデバイス、生体材料、組成物または方法は、ポリヌクレオチドを含まない。一部の実施形態では、本明細書で提供されているデバイス、生体材料、組成物または方法は、ＣｐＧ−ＯＤＮもポリ（Ｉ：Ｃ）もポリ（Ａ：Ｕ）も含まない。
【００１９】
ある特定の実施形態では、ＰＥＩは、抗原、例えば、腫瘍抗原または微生物抗原に付着している。一部のインプリメンテーションでは、この抗原は腫瘍ペプチド抗原である。例えば、腫瘍抗原は、腫瘍細胞溶解物、精製された抗原、例えば、タンパク質または腫瘍抗原ペプチド（例えば、５、６、７、８、９、０、１５、２０、５０、７５、１００、２００またはそれよりも多くのアミノ酸長）を含み得る。一部の例では、この抗原は、糖タンパク質も病原体由来の抗原、例えば、ウイルス［例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはインフルエンザウイルス］抗原も含まない。好ましい実施形態では、この腫瘍抗原／ＰＥＩ組合せは、腫瘍／腫瘍抗原に対する細胞傷害性Ｔ細胞応答を惹起し、それによって、腫瘍退縮をもたらすまたは腫瘍退縮に寄与する。様々な実施形態では、ＰＥＩは、腫瘍抗原などの抗原に付着している。例えば、ＰＥＩは、抗原に、静電相互作用を介して付着していてもよいし、または抗原に共有結合していてもよい。一部の実施形態では、本明細書で提供されているデバイスまたは足場は、カチオン性ＰＥＩポリマーおよびペプチド抗原を含む免疫賦活性複合体を含む。あるいはまたはさらに、このデバイスまたは足場は、抗原、および抗原に付着していない遊離ＰＥＩを含む。一部の実施形態では、抗原は、病原体関連抗原（例えば、タンパク質もしくは病原性因子、またはそれらのアミノ酸配列もしくは断片）を含む。
【００２０】
様々な実施形態では、この抗原はネオ抗原を含む。一部の実施形態では、このネオ抗原は、腫瘍抗原またはオンコプロテイン［例えば、Ｈｅｒ２、Ｅ７、チロシナーゼ関連タンパク質２（Ｔｒｐ２）、Ｍｙｃ、Ｒａｓまたは血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）］内のアミノ酸の配列と同一な、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、１０〜２５０、５０〜２５０、１００〜２５０もしくは５０〜１５０アミノ酸（または少なくとも約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、１００、１５０、２００もしくは２５０アミノ酸）のストレッチを含むポリペプチドを含む。ネオ抗原の非限定的な例には、トラスツズマブなどの治療的抗がん抗体が結合するタンパク質の結合ドメインまたは結合ドメインの一部の配列中のアミノ酸を含むポリペプチドを含む。様々な実施形態では、抗原は、（ｉｉ）病原体（例えば、麻疹などのウイルス）または別の高度に免疫原性のポリペプチドに由来するエピトープ（例えば、ＣＤ４エピトープ）と組み合わせて、（ｉ）オンコプロテイン内に見出される配列中のアミノ酸を含むポリペプチドを含む、融合ペプチドを含む。非限定的な例では、この融合ペプチドは、オンコプロテイン（例えば、Ｈｅｒ２、Ｅ７、Ｔｒｐ２、Ｍｙｃ、ＲａｓまたはＶＥＧＦ）由来のポリペプチドに連結された、麻疹に由来するＣＤ４エピトープを含む。一部の実施形態では、病原体に由来するエピトープは、麻疹に由来し、配列：ＫＬＬＳＬＩＫＧＶＩＶＨＲＬＥＧＶＥＧ（配列番号３８）中のアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、抗原は、Ｈｅｒ２上のトラスツズマブ結合ドメイン内の短い（例えば、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、１００、５０〜１００または５０〜１５０アミノ酸の）直鎖ドメインに連結された、麻疹に由来するＣＤ４エピトープを含む、融合ペプチドを含む。一部の実施形態では、この抗原は、配列ＫＦＰＤＥＥＧＡＣＱＰ中のアミノ酸を含むＨｅｒ２上のトラスツズマブ結合ドメイン内の直鎖ドメインを含む。ある特定の実施形態では、この抗原は、（ｉ）オンコプロテイン内で見出される配列中のアミノ酸を含むポリペプチド、および（ｉｉ）病原体（例えば、麻疹などのウイルス）または別の高度に免疫原性のポリペプチドに由来するエピトープ（例えば、ＣＤ４エピトープ）を含み、（ｉ）および（ｉｉ）は、リンカーによって接続される。一部の実施形態では、このリンカーは、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０アミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、このリンカーは、配列ＧＰＳＬ中のアミノ酸を含む。様々な実施形態では、このネオ抗原は、Ｂ１６ネオ抗原を含む。一部の実施形態では、抗原は、以下のアミノ酸配列のうちいずれか１つを含む：（ｉ）ＭＶＰ−Ｈｅｒ２のアミノ酸配列：ＫＬＬＳＬＩＫＧＶＩＶＨＲＬＥＧＶＥＧＰＳＬＩＷＫＦＰＤＥＥＧＡＣＱＰＬ（配列番号３９）（式中、ＫＬＬＳＬＩＫＧＶＩＶＨＲＬＥＧＶＥＧ（配列番号３８）は麻疹由来であり、ＧＰＳＬは可撓性リンカーであり、ＩＷＫＦＰＤＥＥＧＡＣＱＰＬ（配列番号４０）はＨｅｒ２／ｎｅｕ由来である）；（ｉｉ）Ｈｅｒ２のトラスツズマブ結合ドメインに由来するアミノ酸配列：ＫＦＰＤＥＥＧＡＣＱＰ（配列番号４１）；（ｉｉｉ）Ｅ７オンコプロテインに由来するアミノ酸配列：ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦＣＣＫＣＤＳＴＬＲＬＣＶＱＳＴＨＶＤＩＲ（配列番号４２）；（ｉｖ）Ｅ７オンコプロテインに由来するアミノ酸配列：ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号４３）；（ｖ）Ｂ１６−Ｍ２７ネオ抗原由来のアミノ酸配列：ＲＥＧＶＥＬＣＰＧＮＫＹＥＭＲＲＨＧＴＴＨＳＬＶＩＨＤ（配列番号４４）；Ｂ１６−Ｍ３０ネオ抗原由来のアミノ酸配列：ＰＳＫＰＳＦＱＥＦＶＤＷＥＮＶＳＰＥＬＮＳＴＤＱＰＦＬ（配列番号４５）；Ｂ１６−Ｍ４７ネオ抗原由来のアミノ酸配列：ＧＲＧＨＬＬＧＲＬＡＡＩＶＧＫＱＶＬＬＧＲＫＶＶＶＶＲ（配列番号４６）；Ｍ４８ネオ抗原由来のアミノ酸配列：ＳＨＣＨＷＮＤＬＡＶＩＰＡＧＶＶＨＮＷＤＦＥＰＲＫＶＳ（配列番号４７）；またはＴｒｐ２ネオ抗原由来のアミノ酸：ＳＶＹＤＦＦＶＷＬＫＦＦＨＲＴＣＫＣＴＧＮＦＡＧＧＤＤＤ（配列番号４８）。ネオ抗原のさらなる非限定的な例には、
【化１】
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【化２】
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【化３】
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【化４】
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【化５】
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【化６】
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【化７】
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【化８】
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、またはそれらの断片が含まれる。
【００２１】
様々な実施形態では、がんネオ抗原は、身体中の他の宿主細胞によっては共有されない、がん細胞上での抗原発現をもたらす突然変異から生じる。したがって、一部の実施形態では、がんネオ抗原は、宿主ゲノム（即ち、対象中の非がん性細胞のゲノム）によってはコードされない。ある特定の実施形態では、これらのネオ抗原は、それらの免疫原性を増強することを目指すワクチン接種などの免疫療法技術の前に、免疫系によって以前に認識されてもされなくてもよい。様々な実施形態では、ネオ抗原は、突然変異体エピトープ配列を含むタンパク質またはペプチド（典型的には、８またはそれよりも多くのアミノ酸）である。一部の実施形態では、この突然変異体配列は、単一の点突然変異から生じる。ある特定の実施形態では、この突然変異は、ＡＴＰ結合カセット，サブファミリーＢ（ＭＤＲ／ＴＡＰ），メンバー５（ＡＢＣＢ５）、アシル−ＣｏＡシンテターゼ短鎖ファミリーメンバー３（ＡＣＳＳ３）、アクチン，ガンマ１（ＡＣＴＧ１）、後期促進複合体サブユニット１６（ＡＮＡＰＣ１６）、小胞体タンパク質２９（ＥＲＰ２９）、配列類似性を有するファミリー１０１，メンバーＢ（ＦＡＭ１０１Ｂ）、核プレラミンＡ認識因子様（ＮＡＲＦＬ）、ＰＷＷＰドメイン含有２Ａ（ＰＷＷＰ２Ａ）、ペルオキシダシン（peroxidasin）ホモログ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）（ＰＸＤＮ）、小核ＲＮＡ活性化複合体，ポリペプチド２，４５ｋＤａ（ＳＮＡＰＣ２）、１３Ａ１型ＡＴＰａｓｅ、ヘプシン、マトリックスメタロペプチダーゼ２（ゼラチナーゼＡ、７２ｋＤａゼラチナーゼ、７２ｋＤａ  ＩＶ型コラゲナーゼ）、プレクストリン相同ドメイン含有ファミリーＦ（ＦＹＶＥドメインを有する）メンバー２、タンパク質チロシンホスファターゼ受容体ｆ型ポリペプチド（ＰＴＰＲＦ）相互作用タンパク質（リプリン（liprin）），アルファ４（ＰＰＦＩＡ４）、レティキュロン（reticulon）４受容体（ＲＴＮ４Ｒ）、セブンレスの息子ホモログ１（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）（ＳＯＳ１）、コイルドコイルおよびＣ２ドメイン含有１Ａ（ＣＣ２Ｄ１Ａ）、ＣＤＫ５調節サブユニット関連タンパク質１（ＣＤＫ５ＲＡＰ１）、デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ，末端，相互作用タンパク質１（ＤＮＴＴＩＰ１）、インスリン誘導性遺伝子１（ＩＮＳＩＧ）、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ１、ＮＡＤ（可溶性）（ＭＤＨ１）、ムスケリン（muskelin）１、ケルチモチーフ含有細胞内メディエーター（ＭＫＬＮ１）、骨髄性／リンパ性もしくは混合系統白血病３（ＭＬＬ３）、プレクストリン相同様ドメインファミリーＢメンバー２（ＰＨＬＤＢ２）、リン脂質輸送タンパク質（ＰＬＴＰ）、トランスケトラーゼ（ＴＫＴ）、補体成分７（Ｃ７）、細胞分裂サイクル３７様１（ＣＤＣ３７Ｌ１）、ダイサー１、リボヌクレアーゼＩＩＩ型（ＤＩＣＥＲ１）、ドペイ（dopey）ファミリーメンバー２（ＤＯＰＥＹ２）、デルマタン硫酸エピメラーゼ（ＤＳＥ）、フィラミンＡアルファ（ＦＬＮＡ）、ヒドロキシステロイド（１７−ベータ）デヒドロゲナーゼ４（ＨＳＤ１７Ｂ４）、神経芽腫ＲＡＳウイルス（ｖ−ｒａｓ）癌遺伝子ホモログ（ＮＲＡＳ）、ステライルアルファモチーフドメイン含有９様（ＳＡＭＤ９Ｌ）、カリン関連お���びＮＥＤＤ化解離１（ＣＡＮＤ１）、デヒドロゲナーゼ／レダクターゼ（ＳＤＲファミリー）メンバー１（ＤＨＲＳ１）、ジストロブレビン，ベータ（ＤＴＮＢ）、配列類似性を有するファミリー１３５，メンバーＢ（ＦＡＭ１３５Ｂ）、ＭＭＳ１９ヌクレオチド除去修復ホモログ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）（ＭＭＳ１９）、ＭＡＸ結合タンパク質（ＭＮＴ）、核受容体サブファミリー４，Ａ群，メンバー１（ＮＲ４Ａ１）、ホスファチジルイノシトール−５−リン酸４−キナーゼ，ＩＩ型，アルファ（ＰＩＰ４Ｋ２Ａ）、タウチューブリンキナーゼ２（ＴＴＢＫ２）、ＷＡＳ／ＷＡＳＬ相互作用タンパク質ファミリーメンバー１（ＷＩＰＦ１）、カドヘリン１８  ２型（ＣＤＨ１８）、クリスタリン，ゼータ（キノンレダクターゼ）（ＣＲＹＺ）、フォリスタチン様１（ＦＳＴＬ１）、ヘパラン硫酸プロテオグリカン２（ＨＳＰＧ２）、Ｋ（リシン）アセチルトランスフェラーゼ７（ＫＡＴ７）、キネシンファミリーメンバー２６Ｂ（ＫＩＦ２６Ｂ）、ＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ（ユビキノン）１アルファサブ複合体８  １９ｋＤａ（ＮＤＵＦＡ８）、プロテアソーム（プロソーム（prosome）、マクロペイン（macropain））サブユニットベータ７型（ＰＳＭＢ７）、チロシナーゼ関連タンパク質１（ＴＹＲＰ１）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３３（ＵＳＰ３３）、ＡＤＰリボシル化因子３（ＡＲＦ３）、ＡＴＰａｓｅファミリー，ＡＡＡドメイン含有２（ＡＴＡＤ２）、セロイドリポフスチン沈着症，ニューロン３（ＣＬＮ３）、ＤＩＲＡＳファミリーＧＴＰ結合ＲＡＳ様１（ＤＩＲＡＳ１）、グルタチオンペルオキシダーゼ１（ＧＰＸ１）、ＨＣＬＳ１関連タンパク質Ｘ−１（ＨＡＸ１）、ヒアルロノグルコサミニダーゼ２（ＨＹＡＬ２）、骨髄性／リンパ性もしくは混合系統白血病４（ＭＬＬ４）、ジンクフィンガータンパク質２８７（ＺＮＦ２８７）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼカッパ１（ＧＳＴＫ１）、主要組織適合複合体，クラスＩＩ，ＤＰアルファ１（ＨＬＡＤＰＡ１）、マンノシダーゼ，アルファ，クラス１Ａ，メンバー２（ＭＡＮ１Ａ２）、神経前駆細胞発現，発生的に下方調節８（ＮＥＤＤ８）、ＴＥＡドメインファミリーメンバー３（ＴＥＡＤ３）、アラニル−ｔＲＮＡシンテターゼ（ＡＡＲＳ）、ＡＴＰ結合カセット，サブファミリーＢ（ＭＤＲ／ＴＡＰ）メンバー６（ＡＢＣＢ６）、ＲｈｏＧＡＰドメインアンキリンリピートおよびＰＨドメインを有するＡｒｆＧＡＰ  １（ＡＲＡＰ１）、ジンクフィンガードメインに隣接するブロモドメイン１Ａ（ＢＡＺ１Ａ）、キャッピングタンパク質（アクチンフィラメント）筋肉Ｚ線ベータ（ＣＡＰＺＢ）、グルコシドキシロシルトランスフェラーゼ１（ＧＸＹＬＴ１）、ヒアルロナンおよびプロテオグリカンリンクタンパク質３（ＨＡＰＬＮ３）、インターフェロン，ガンマ誘導性タンパク質１６（ＩＦＩ１６）、セマドメイン，免疫グロブリンドメイン（Ｉｇ）膜貫通ドメイン（ＴＭ）および短い細胞質ドメイン（セマフォリン）４Ｃ（ＳＥＭＡ４Ｃ）、Ｔａｘ１（ヒトＴ細胞白血病ウイルスＩ型）結合タンパク質１（ＴＡＸ１ＢＰ１）、コイルドコイルドメイン含有１１１（ＣＣＤＣ１１１）、サイクリン依存的キナーゼ４（ＣＤＫ４）、Ｇタンパク質共役受容体１７２Ａ（ＧＰＲ１７２Ａ）、Ｇタンパク質共役受容体５６（ＧＰＲ５６）、イノシトールポリリン酸−５−ホスファターゼ，７５ｋＤａ（ＩＮＰＰ５Ｂ）、ＫＩＡＡ０４１５（ＫＩＡＡ０４１５）、ロイシンカルボキシルメチルトランスフェラーゼ１（ＬＣＭＴ１）、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ８（ＭＡＰＫ８）、メチルトランスフェラーゼ様１７（ＭＥＴＴＬ１７）、スペックル（speckle）型ＰＯＺタンパク質（ＳＰＯＰ）、コイルドコイルドメイン含有８０（ＣＣＤＣ８０）、二重亜鉛リボン（double  zinc  ribbon）およびアンキリンリピートドメイン１（ＤＺＡＮＫ１）、フコキナーゼ（ＦＵＫ）、黒色腫抗原ファミリーＣ，２（ＭＡＧＥＣ２）、メディエーター複合体サブユニット２４（ＭＥＤ２４）、マエストロ（maestro）（ＭＲＯ）、ヌクレオビンディン１（ＮＵＣＢ１）、ホスホリパーゼＡ１メンバーＡ（ＰＬＡ１Ａ）、セナタキシン（senataxin）（ＳＥＴＸ）、膜貫通タンパク質１２７（ＴＭＥＭ１２７）、サイクリンＧ関連キナーゼ（ＧＡＫ）、グアニル酸結合タンパク質１，インターフェロン誘導性（ＧＢＰ１）、糖タンパク質（膜貫通）ｎｍｂ（ＧＰＮＭＢ）、グリコホリンＣ（Ｇｅｒｂｉｃｈ式血液型）（ＧＹＰＣ）、主要組織適合複合体，クラスＩＩ，ＤＲアルファ（ＨＬＡ−ＤＲＡ）、ミオシンＩＥ（ＭＹＯ１Ｅ）、レチノールサチュラーゼ（オール−トランス−レチノール１３，１４−レダクターゼ）（ＲＥＴＳＡＴ）、ＲＷＤドメイン含有３（ＲＷＤＤ３）、シグナルペプチドＣＵＢドメインＥＧＦ様２（ＳＣＵＢＥ２）、転座したプロモーター領域（活性化されたＭＥＴ癌遺伝子へ）（ＴＰＲ）、クラスリン相互作用物質１（ＣＬＩＮＴ１）、チトクロムｃオキシダーゼサブユニットＶＩＩａポリペプチド２（肝臓）（ＣＯＸ７Ａ２）、ＩＭＰ（イノシン５’−一リン酸）デヒドロゲナーゼ２（ＩＭＰＤＨ２）、タンパク質キナーゼ，ＤＮＡ活性化，触媒性ポリペプチド（ＰＲＫＤＣ）、リボソームＬ１ドメイン含有１（ＲＳＬ１Ｄ１）、スペクトリン，
アルファ，非赤血球１（アルファ−フォドリン）（ＳＰＴＡＮ１）、ＳＬＩＴ−ＲＯＢＯ  Ｒｈｏ  ＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質１（ＳＲＧＡＰ１）、腫瘍形成性の抑制５（ＳＴ５）、チューブリン，ガンマ複合体関連タンパク質２（ＴＵＢＧＣＰ２）、ＵＴＰ６，小サブユニット（ＳＳＵ）プロセソーム（processome）成分ホモログ（酵母）（ＵＴＰ６）、前立腺酸性ホスファターゼ（ＡＣＰＰ）、デホスホ−ＣｏＡキナーゼドメイン含有（ＤＣＡＫＤ）、ＤＥＡＤボックスヘリカーゼ３，Ｘ連鎖（ＤＤＸ３Ｘ）、カスパーゼ１（ＣＡＳＰ１）、カスパーゼ５（ＣＡＳＰ５）、プロリンリッチコイルドコイル２Ｃ（ＰＲＲＣ２Ｃ）、ルミカン（ＬＵＭ）、ＲＵＮおよびＳＨ３ドメイン含有２（ＲＵＳＣ２）、アドレノメデュリン２（ＡＤＭ２）、サイクリン依存的キナーゼ１３（ＣＤＫ１３）、プロトカドヘリン１（ＰＣＤＨ１）、ジャンクトフィリン１（ＪＰＨ１）、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）、膜貫通タンパク質２６０（Ｃ１４ｏｒｆ１０１）、シトロンＲｈｏ相互作用性セリン／スレオニンキナーゼ（ＣＩＴ）、ＤＥＡＨボックスヘリカーゼ４０（ＤＨＸ４０）、配列類似性を有するファミリー２００メンバーＡ（ＦＡＭ２００Ａ）、イオンチャネル型グルタミン酸受容体ＮＭＤＡ型サブユニット２Ｂ（ＧＲＩＮ２Ｂ）、ＸＸＩＩ型コラーゲンアルファ１鎖（ＣＯＬ２２Ａ１）、ＲＡＬＧＡＰＢ（Ｒａｌ  ＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質非触媒性ベータサブユニット）、配列類似性を有するファミリー５０メンバーＢ（ＦＡＭ５０Ｂ）、配列類似性を有するファミリー１９０，メンバーＡ（ＦＡＭ１９０Ａ）、プロトゲニン（Protogenin）（ＰＲＴＧ）、ＮＬＲファミリーＣＡＲＤドメイン含有４（ＮＬＲＣ４）、アデノシンデアミナーゼ，ＲＮＡ特異的Ｂ１（ＡＤＡＲＢ１）、基本転写因子ＩＩＩＣサブユニット２（ＧＴＦ３Ｃ２）、カリウム電位開口型チャネルサブファミリーＣメンバー３（ＫＣＮＣ３）、液胞型タンパク質選別タンパク質１６（ＶＰＳ１６）、クリプトクロム概日時計１（ＣＲＹ１）、トロンボスポンジン１型モチーフを有するＡＤＡＭメタロペプチダーゼ７（ＡＤＡＭＴＳ７）、Ｒｈｏ  ＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質２９（ＡＲＨＧＡＰ２９）、ＭＡＰキナーゼ相互作用性セリン／スレオニンキナーゼ１（ＭＫＮＫ１）、ミトコンドリア転写終結因子４（ＭＴＥＲＦＤ２）、ＭＡＸ遺伝子関連タンパク質（ＭＧＡ）、シェーグレン症候群抗原Ｂ（ＳＳＢ）、染色体の構造的維持可撓性ヒンジドメイン含有１（ＳＭＣＨＤ１）、テネイシンＲ（ＴＮＲ）、活性化転写因子７相互作用タンパク質（ＡＴＦ７ＩＰ）、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＮＡＤＰ（＋））２ミトコンドリア（ＩＤＨ２）、マトリックスメタロペプチダーゼ１７（ＭＭＰ１７）、ＲＮＦ４０（リングフィンガータンパク質４０）、Ｔボックス４（ＴＢＸ４）、ムチン５Ｂオリゴマー粘液／ゲル形成性（ＭＵＣ５Ｂ）、フィジェチン（Fidgetin）、微小管切断因子（ＦＩＧＮ）、ジンクフィンガーＦＹＶＥ型含有２６（ＺＦＹＶＥ２６）、ジンクフィンガータンパク質２８１（ＺＮＦ２８１）、ホスホイノシチド−３−キナーゼ調節サブユニット２（ＰＩＫ３Ｒ２）、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼファミリーＡメンバー６（ＰＤＩＡ６）、染色体の構造的維持４（ＳＭＣ４）、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）、Ｋｒｅｖ相互作用トラップ１（ＫＲＩＴ１）、マンノシル（アルファ−１，３−）−糖タンパク質ベータ−１，４−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼアイソザイムＢ（ＭＧＡＴ４Ｂ）、ＳＥＴ結合タンパク質１（ＳＥＴＢＰ１）、核受容体コアクチベーター６（ＮＣＯＡ６）、テンシン１（ＴＮＳ１）、カリンＮＥＤＤ化における欠損１ドメイン含有４（ＤＣＵＮ１Ｄ４）、Ｈｅｒ２、Ｔｒｐ２、Ｍｙｃ、Ｒａｓ、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、真核生物翻訳伸長因子２（ＥＥＦ２）、ＤＥＡＤボックスヘリカーゼ２３（ＤＤＸ２３）、ＧＮＡＳ複合体遺伝子座（ＧＮＡＳ）、トランスポーチン３（ＴＮＰＯ３）、チューブリンベータ３クラスＩＩＩ（Ｔｕｂｂ３）、ＡＴＰａｓｅリン脂質輸送１１Ａ（ＡＴＰ１１Ａ）、抗サイレンシング機能１Ｂヒストンシャペロン（ＡＳＦ１Ｂ）、ジストログリカン１（ＤＡＧ１）、プロコラーゲン−リシン，２−オキソグルタル酸５−ジオキシゲナーゼ１（ＰＬＯＤ１）、オブスキュリン（Obscurin）様１（ＯＢＳＬ１）、タンパク質ホスファターゼ１調節サブユニット７（ＰＰＰ１Ｒ７）、メチレンテトラヒドロ葉酸デヒドロゲナーゼ（ＮＡＤＰ＋依存的）１様（ＭＴＨＦＤ１Ｌ）、キネシンファミリーメンバー１８Ｂ（ＫＩＦ１８Ｂ）、ＰＤＺ結合キナーゼ（ＰＢＫ）、膜貫通９スーパーファミリーメンバー３（ＴＭ９ＳＦ３）、切断およびポリアデニル化特異的因子３（ＣＰＳＦ３Ｌ）、マコリン（Makorin）リングフィンガータンパク質１（ＭＫＲＮ１）、アクチニンアルファ４（ＡＣＴＮ４）、リボソームタンパク質Ｌ１３ａ（ＲＰＬ１３Ａ）、ＦＤＣＰにおいて差示的に発現８ホモログ（ＤＥＦ８）、セマフォリン３Ｂ（ＳＥＭＡ３Ｂ）、溶質輸送体ファミリー２０メンバー１（ＳＬＣ２０Ａ１）、グリピカン１（ＧＰＣ１）、ネフロシスチン（Nephrocystin）３（ＮＰＨＰ３）、膜貫通タンパク質８７Ａ（ＴＭＥＭ８７Ａ）、溶質輸送体ファミリー４メンバー３（ＳＬＣ４Ａ３）、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）受容体７（ＣＸＣＲ７）、Ｅ２Ｆ転写因子８（Ｅ２Ｆ８）、アラニン−グリオキシル酸アミノトランスフェラーゼ２様２（ＡＧＸＴ２Ｌ２）、ヌクレオソームアセンブリタンパク質１様４（ＮＡＰ１Ｌ４）、ＤＥＡＨボックスヘリカーゼ３５（ＤＨＸ３５）、筋萎縮性側索硬化症２染色体領域候補遺伝子６タンパク質（ＡＬＳ２）、ＤＥＰドメイン含有ＭＴＯＲ相互作用タンパク質（ＤＥＰＴＯＲ）、チミンＤＮＡグリコシラーゼ（ＴＤＧ）、ディコフ（Dickkopf）ＷＮＴシグナル伝達経路阻害剤２（ＤＫＫ２）、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ関連タンパク質２（ＲＰＡＰ２）、ＳＴＥＡＰ２メタロレダクターゼ（Metalloreductase）（ＳＴＥＡＰ２）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２６（ＵＳＰ２６）、ニューロビーチン（ＮＢＥＡ）、アルデヒドデヒドロゲナーゼ１８ファミリーメンバーＡ１（ＡＬＤＨ１８Ａ１）、ジンクフィンガーＣＣＣＨ型含有１４（ＺＣ３Ｈ１４）、ドローシャ（Drosha）リボヌクレアーゼＩＩＩ（ＤＲＯＳＨＡ）、Ｇｅｎエンドヌクレアーゼホモログ１（ＧＥＮ１）、ＲＮＡポリメラーゼＩＩサブユニットＡ（ＰＯＬＲ２Ａ）、膜貫通およびテトラトリコペプチドリピート含有２（ＴＭＴＣ２）、ジンクフィンガーＲＮＡ結合タンパク質（ＺＦＲ）、中心体タンパク質１２０（ＣＥＰ１２０）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫転座遺伝子１（ＭＡＬＴ１）、ＷＤリピートドメイン１１（ＷＤＲ１１）、ケルチリピートおよびＢＴＢドメイン含有２（ＫＢＴＢＤ２）、トロンボスポンジン１型モチーフを有するＡＤＡＭメタロペプチダーゼ９（ＡＤＡＭＴＳ９）、妊娠ゾーン（Pregnancy-Zone）タンパク質（ＰＺＰ）、Ｇタンパク質共役受容体クラスＣ群５メンバーＡ（ＧＰＲＣ５Ａ）、エネルギー恒常性関連（ＥＮＨＯ）、ダブルセックス（Doublesex）−およびＭａｂ−３関連転写因子５（ＤＭＲＴＡ２）、Ｒａｓ関連ＧＴＰ結合Ｄ（ＲＲＡＧＤ）、ジンクフィンガーＺＺ型含有３（ＺＺＺ３）、ＩＬＫ関連セリン／スレオニンホスファターゼ（ＩＬＫＡＰ）、またはこの遺伝子によってコードおよび発現されるタンパク質中に突然変異体アミノ酸配列（例えば、置換または挿入）を生じるセントロメアタンパク質Ｆ（ＣＥＮＰＦ）遺伝子中にある。ネオ抗原配列、およびネオ抗原がそこから生じ得る遺伝子のさらなる非限定的な例、ならびにネオ抗原配列を同定するための例示的な方法は、その各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Kreiterら（２０１５年）Nature  ５２０巻（７５４９号）：６９２〜６９６頁、Ottら（２０１７年）Nature  ５４７巻：２１７〜２２１頁およびSahinら（２０１７年）Nature  ５４７巻：２２２〜２２６頁に記載されている。
【００２２】
本明細書で使用される場合、用語「抗原」は、免疫応答を誘導する物質である。
【００２３】
本明細書で使用される場合、用語「ネオ抗原」は、それを対応する野生型親形態の抗原とは別のものにする、少なくとも１つの変更を有する抗原である。例えば、ネオ抗原は、腫瘍細胞における突然変異または腫瘍細胞に対して特異的な翻訳後修飾を介して生じ得る。様々な実施形態では、ネオ抗原は遺伝子産物である。ネオ抗原は、ポリペプチド配列またはヌクレオチド配列を含み得る。突然変異は、フレームシフトもしくは非フレームシフトインデル、点突然変異、ミスセンスもしくはナンセンス置換、スプライス部位変更、ゲノム再編成もしくは遺伝子融合、または対応する野生型ＤＮＡもしくはＲＮＡとは別個のＤＮＡもしくはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）分子を生じる任意のゲノムもしくは発現変更を含み得る。突然変異は、スプライスバリアントもまた含み得る。腫瘍細胞に対して特異的な翻訳後修飾は、異常なリン酸化を含み得る。腫瘍細胞に対して特異的な翻訳後修飾は、プロテアソーム生成されたスプライスされた抗原もまた含み得る。その全内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、Liepeら、A  large  fraction  of  HLA  class  I  ligands  are  proteasome-generated  spliced  peptides；Science.  ２０１６年１０月２１日；３５４巻（６３１０号）：３５４〜３５８頁を参照のこと。
【００２４】
本明細書で使用される場合、用語「腫瘍ネオ抗原」は、対象の腫瘍細胞または組織中には存在するが、対象の対応する正常細胞または組織中には存在しないネオ抗原である。
【００２５】
メソ多孔性シリカ（ＭＰＳ）ナノ粒子またはマイクロ粒子が本明細書に含まれる。非限定的な例には、ＭＰＳロッドが含まれる。一部の実施形態では、このＭＰＳロッドは、表面修飾を含む（例えば、このＭＰＳロッドは、グリコール酸もしくは乳酸などの物質で処置されている、アミン、チオール、クロロもしくはホスホン酸基にコンジュゲートされている、またはＰＥＩなどの化合物がＭＰＳロッドに付加されている）。様々な実施形態では、表面修飾されたＭＰＳロッドは、遊離ＰＥＩが付加されたＭＰＳロッドである。ロッドは、縦長の、まっすぐな実質的に円柱状の構造である。
【００２６】
一部の実施形態では、遊離ＰＥＩは、別の化合物、例えば、抗原（例えば、がんまたは病原体と関連するポリペプチドを含む抗原）免疫賦活性化合物（例えば、ＴＬＲアゴニストまたはＳＴＩＮＧアゴニスト）および／または免疫抑制阻害剤とは別に、足場（例えば、ＭＰＳ、例えば、ＭＰＳロッド、またはポリマー）に付加される。ある特定の実施形態では、遊離ＰＥＩは、別の化合物（単数または複数）の前に（例えば、少なくとも約１、６、１２、１５、３０、６０、１２０もしくは１〜１２０秒もしくは分前、または約１、６、１２、１５、３０、６０、１２０もしくは１〜１２０秒未満もしくは分未満前に）足場に付加される。様々な実施形態では、遊離ＰＥＩは、別の化合物（単数または複数）の後に（例えば、少なくとも約１、６、１２、１５、３０、６０、１２０もしくは１〜１２０秒もしくは分後、または約１、６、１２、１５、３０、６０、１２０もしくは１〜１２０秒未満もしくは分未満後に）足場に付加される。ある特定の実施形態では、ＰＥＩは、別の化合物（単数または複数）と同時発生的に足場に付加される。
【００２７】
ＰＥＩは、例えば、分岐鎖または直鎖ＰＥＩを含み得る。一部の実施形態では、本明細書で提供されているデバイスまたは足場組成物は、分岐鎖ＰＥＩおよび直鎖ＰＥＩの両方を含む。様々な実施形態では、このＰＥＩは、分岐鎖デンドリマーＰＥＩを含む。ある特定の実施形態では、このＰＥＩは、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０または３０個の１級、２級および／または３級アミノ基を含む。一部の実施形態では、このＰＥＩは、（ａ）少なくとも約１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、１００、１２５、１５０、１７５もしくは２００キロダルトン（ｋＤａ）；（ｂ）約２００、１７５、１５０、１２５、１００、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、３５、２５、２０、１５、１０、５、４、３、２もしくは１ｋＤａ未満；または（ｃ）約１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、１〜１０、２〜２５、２５〜６０、２５〜７５、５０〜１００もしくは１００〜２００ｋＤａの分子量を含む。例えば、このＰＥＩは、約２５ｋＤａの分子量を有する直鎖ＰＥＩおよび／または約６０ｋＤａの分子量を有する分岐鎖ＰＥＩを含み得る。
【００２８】
一部の実施形態では、ＰＥＩは、構造：
【化９】
2019524766.tif 000011
【化１０】
2019524766.tif 000012
を含み、式中、ｎは、少なくとも約１、２、３、４、５、１０、１５もしくは２０；（ｂ）約２０、１５、１０、５、４、３、２もしくは１ｋＤａ未満；または（ｃ）約１、２、３、４、５、１０、１５もしくは２０である。
【００２９】
一部の実施形態では、このＰＥＩは、抗原提示、例えば、交差提示を増加させるのに有効な量で存在する。ある特定の実施形態では、対象を処置することは、抗原または抗原を含む細胞もしくはウイルス（例えば、がん細胞または病原性微生物）に対する体液性および／またはＴ細胞媒介性免疫を増加させる。様々な実施形態では、このＰＥＩは、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）に対する主要組織適合複合体（ＭＨＣ）クラスＩ拘束された抗原提示を増加させるのに有効な量で存在する。ある特定の実施形態では、このＰＥＩは、ＰＥＩなしの対応する条件（例えば、投与）と比較して、抗原のＭＨＣクラスＩ  ＣＴＬ提示を増加させるのに有効な量で存在し、この増加は、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、７５％、１００％、１５０％または２００％である。
【００３０】
ある特定の実施形態では、このＰＥＩは、抗原に対して特異的な１種または複数の抗体の力価を増加させるのに有効な量で存在する。実施形態では、抗原に対して「特異的な」抗体は、別の分子と比較して、標的抗原に対して、１０倍よりも高い、好ましくは１００倍よりも高い、最も好ましくは１０００倍よりも高い親和性を有する。当業者は、試料中に存在する他の生体分子が、標的抗原に対して特異的な抗体には顕著に結合しないことを示すために、用語特異的が使用されることを理解する。好ましくは、標的抗原以外の生体分子への結合のレベルは、標的分子に対する親和性の、それぞれ、多くても１０％もしくはそれ未満のみ、５％もしくはそれ未満のみ、２％もしくはそれ未満のみ、または１％もしくはそれ未満のみである結合親和性を生じる。好ましい特異的抗体は、親和性についてならびに特異性について、共に上記最小限の基準を満たす。例えば、抗体は、その特異的標的抗原に対して、低マイクロモル濃度（１０−６）、ナノモル濃度（１０−７〜１０−９）の結合親和性を有し、高親和性抗体は、低ナノモル濃度（１０−９）またはピコモル濃度（１０−１２）範囲（またはそれ未満）の結合親和性を有する。一部の実施形態では、この抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２抗体である。様々な実施形態では、この抗体はＩｇＧ２ａ抗体である。ある特定の実施形態では、このＰＥＩは、ＰＥＩなしの対応する条件（例えば、投与）と比較して、抗原に対して特異的な１種または複数の抗体の力価を増加させるのに有効な量で存在し、この増加は、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、７５％、１００％、１５０％または２００％である。様々な実施形態では、このＰＥＩは、Ｂ細胞活性化を増加させるのに有効な量で存在する。ある特定の実施形態では、このＰＥＩは、ＰＥＩなしの対応する条件（例えば、投与）と比較して、Ｂ細胞活性化を増加させるのに有効な量で存在し、この増加は、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、７５％、１００％、１５０％または２００％である。
【００３１】
ある特定の実施形態では、送達ビヒクルは、約５、１０、１５、２０、２５、５０、１００、２００、３００、４００、５００、１０００または１００００μｍよりも大きい寸法を含む。非限定的な例では、この送達ビヒクルは、少なくとも約０．１、０．５、１、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍｍ３の体積を含む。
【００３２】
一部の実施形態では、ＰＥＩは、ＰＥＩを含まない対応するデバイスと比較して、対象において、免疫細胞による顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、マクロファージ炎症性タンパク質−１ａ（ＭＩＰ−１ａ）、活性化により調節，正常Ｔ細胞発現および分泌（ＲＡＮＴＥＳ）、ケラチノサイト化学誘引物質（ＫＣ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、マクロファージ炎症性タンパク質−１ｂ（ＭＩＰ−１ｂ）および／またはインターロイキン１２（ＩＬ−１２）の産生を増加させるのに有効な量で存在する。ある特定の実施形態では、ＰＥＩは、ＰＥＩを含まない対応するデバイスと比較して、デバイスを出る活性樹状細胞のレベルを、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１または２２倍増加させるのに有効な量で存在する。
【００３３】
様々な実施形態では、この足場組成物は、（ｉ）開放型の相互接続されたマクロ細孔を含むか；または（ｉｉ）細孔形成性足場組成物である。一部の実施形態では、この足場組成物は、ヒドロゲルまたはクリオゲルを含む。ある特定の実施形態では、この足場組成物は、針を介した圧縮による変形後の形状記憶によって特徴付けられるクリオゲルを含む。例えば、クリオゲルは、クリオゲルが、針を介した圧縮の１、２、３、４または５秒未満後にその元の未変形の３次元形状に戻るような、針を介した圧縮による変形後の形状記憶によって特徴付けられ得る。
【００３４】
一部の実施形態では、この足場組成物は、アニオン性またはカチオン性である。
【００３５】
様々な実施形態では、この足場組成物は、アルギネート、アルギネート誘導体、ゼラチン、コラーゲン、アガロース、フィブリン、デキストラン、キトサン、カルボキシメチルセルロース、プルラン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＰＥＧ誘導体、ペプチド両親媒性物質、絹、フィブロネクチン、キチン、ヒアルロン酸、ラミニンリッチゲル、天然もしくは合成のポリサッカライド、ポリアミノ酸、ポリペプチド、ポリエステル、ポリ乳酸、ポリグルタミン酸、ポリグリコール酸、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）、ポリリシン、ポリヒドロキシブチレート、ポリ［（カルボキシフェノキシ）プロパン−セバシン酸］、ポリ［ピロメリチルイミドアラニン（pyromellitylimidoalanine）−コ−１，６−ビス（ｐ−カルボキシフェノキシ）ヘキサン］、ポリホスファゼン、デンプン、キサンタンガム（xantham  gum）、ジェラン、エマルサン（emulsan）、セルロース、アルブミン、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリ−イプシロン−カプロラクトン、ポリカプロラクトン、ポリジオキサノン、ポリグリコネート、ポリホスファジン（polyphosphazine）、ポリビニルアルコール、ポリアルキレンオキシド、ポリエチレンオキシド、ポリアリルアミン（ＰＡＭ）、ポリ（オルトエステルＩ）、ポリ（オルトエステル）ＩＩ、ポリ（オルトエステル）ＩＩＩ、ポリ（オルトエステル）ＩＶ、ポリアクリレート、ポリ（４−アミノメチルスチレン）、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリ（ジメチルシロキサン）、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）、ポリプロピレンフマレート、ポリテトラフルオロエチレン、ポリエチレン、ポリウレタン  修飾されたスチレンポリマー、プルロニックポリオール、ポロキサマー（polyoxamer）、ポリウロン酸、ポリ酸無水物、ポリアクリル酸および／またはポリビニルピロリドンのポリマーまたはコポリマーを含む。ある特定の実施形態では、このポリマーまたはコポリマーは、メタクリル化される。一部の実施形態では、このアニオン性足場組成物は、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）、アルギネート、キサンタンガム、ジェランまたはエマルサンを含む。
【００３６】
足場組成物の非限定的な例には、Ｄ，Ｌ−ラクチドおよびグリコリド（ＰＬＧ）のコポリマーを含む足場組成物が含まれる。一部の実施形態では、このＰＬＧは、８５：１５の、Ｄ，Ｌ−ラクチドおよびグリコリドの１２０ｋＤａコポリマーを含む。様々な実施形態では、このＰＬＧは、約５０：５０、５５：４５、６０：４０、６５：３５、７０：３０、７５：２５、８０：２０、８５：１５、９０：１０または９５：５の、Ｄ，Ｌ−ラクチドのグリコリドに対する比を含む。ある特定の実施形態では、このコポリマーは、約５ｋＤａ、６ｋＤａ、７ｋＤａ、８ｋＤａ、９ｋＤａ、１０ｋＤａ、１５ｋＤａ、２０ｋＤａ、２５ｋＤａ、３０ｋＤａ、３５ｋＤａ、４０ｋＤａ、４５ｋＤａ、５０ｋＤａ、６０ｋＤａ、７０ｋＤａ、８０ｋＤａ、９０ｋＤａ、１００ｋＤａ、１１０ｋＤａ、１２０ｋＤａ、１３０ｋＤａ、１４０ｋＤａ、１５０ｋＤａ、１６０ｋＤａ、１７０ｋＤａ、１８０ｋＤａ、１９０ｋＤａ、２００ｋＤａ、２１０ｋＤａ、２２０ｋＤａ、２３０ｋＤａ、２４０ｋＤａ、２５０ｋＤａ、５〜２５０ｋＤａ、７〜２４０ｋＤａ、５０〜１００ｋＤａ、５０〜１５０ｋＤａ、５０〜２００ｋＤａ、１００〜１５０ｋＤａ、１００〜２００ｋＤａ、１５０〜２５０ｋＤａの分子量を含む。一部の実施形態では、このＰＬＧは、約０．１６〜２．２ｄｌ／ｇ、０．１６〜１．５ｄｌ／ｇ、０．１６〜１ｄｌ／ｇ、０．１６〜０．５ｄｌ／ｇもしくは１．５〜２．２ｄｌ／ｇの範囲の粘度、または約０．１６ｄｌ／ｇ、０．１８ｄｌ／ｇ、０．２ｄｌ／ｇ、０．３ｄｌ／ｇ、０．４ｄｌ／ｇ、０．５ｄｌ／ｇ、０．６ｄｌ／ｇ、０．７ｄｌ／ｇ、０．８ｄｌ／ｇ、０．９ｄｌ／ｇ、１．０ｄｌ／ｇ、１．１ｄｌ／ｇ、１．２ｄｌ／ｇ、１．３ｄｌ／ｇ、１．４ｄｌ／ｇ、１．５ｄｌ／ｇ、１．６ｄｌ／ｇ、１．７ｄｌ／ｇ、１．８ｄｌ／ｇ、１．９ｄｌ／ｇ、２．０ｄｌ／ｇ、２．１ｄｌ／ｇもしくは２．２ｄｌ／ｇの粘度を有する。
【００３７】
一部の実施形態では、この足場組成物は、開放型の相互接続されたマクロ細孔を含む。あるいはまたはさらに、この足場組成物は、細孔形成性足場組成物を含む。ある特定の実施形態では、この細孔形成性足場組成物は、犠牲的なポロゲンヒドロゲルおよびバルクヒドロゲルを含み得、この細孔形成性足場組成物は、マクロ細孔を欠く。例えば、この犠牲的なポロゲンヒドロゲルは、バルクヒドロゲルよりも少なくとも１０％速く分解して、対象への前記細孔形成性足場の投与後にその場所にマクロ細孔を残し得る。一部の実施形態では、この犠牲的なポロゲンヒドロゲルは、分解して前記マクロ細孔を形成するポロゲンの形態である。例えば、これらのマクロ細孔は、例えば、約１０〜４００μｍの直径を有する細孔を含み得る。
【００３８】
ある特定の実施形態では、この足場組成物は、（ｉ）がん細胞の化学誘引物質および細胞傷害誘導性組成物を含む第１のゾーン、ならびに（ｉｉ）免疫細胞動員組成物を含む第２のゾーンを含む。非限定的な例では、この第２のゾーンは、細胞傷害誘導性組成物を含まない。
【００３９】
様々な実施形態では、この足場組成物は、メソ多孔性シリカロッドを含む。一部の実施形態では、このメソ多孔性シリカロッドは、約１００ｎｍ、１５０ｎｍ、２００ｎｍ、２５０ｎｍ、３００ｎｍ、３５０ｎｍ、４００ｎｍ、４５０ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１００〜２５０ｎｍ、２５０〜５００ｎｍ、５００〜７５０ｎｍ、７５０〜１０００ｎｍ、１μｍ、２μｍ、３μｍ、４μｍ、５μｍ、６μｍ、７μｍ、８μｍ、９μｍ、１０μｍ、１５μｍ、２５μｍ、３０μｍ、３５μｍ、４０μｍ、４５μｍ、５０μｍ、５５μｍ、６０μｍ、６５μｍ、７０μｍ、７５μｍ、８０μｍ、８５μｍ、９０μｍ、９５μｍ、１００μｍ、１５０μｍ、２００μｍ、２５０μｍ、３００μｍ、３５０μｍ、４００μｍ、４５０μｍ、５００μｍ、１〜５μｍ、１〜５００μｍ、５〜５００μｍ、２５〜５０μｍ、２５〜１００μｍ、５０〜１００μｍ、２５〜５００μｍまたは５０〜５００μｍの長さを含む。ある特定の実施形態では、このメソ多孔性シリカロッドは、１００ｎｍ、１５０ｎｍ、２００ｎｍ、２５０ｎｍ、３００ｎｍ、３５０ｎｍ、４００ｎｍ、４５０ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１００〜２５０ｎｍ、２５０〜５００ｎｍ、５００〜７５０ｎｍ、７５０〜１０００ｎｍ、１μｍ、２μｍ、３μｍ、４μｍ、５μｍ、６μｍ、７μｍ、８μｍ、９μｍ、１０μｍ、１５μｍ、２５μｍ、３０μｍ、３５μｍ、４０μｍ、４５μｍまたは５０μｍから、５５μｍ、６０μｍ、６５μｍ、７０μｍ、７５μｍ、８０μｍ、８５μｍ、９０μｍ、９５μｍ、１００μｍ、１５０μｍ、２００μｍ、２５０μｍ、３００μｍ、３５０μｍ、４００μｍ、４５０μｍまたは５００μｍまでの長さを含む。様々な実施形態では、このメソ多孔性シリカロッドは、約１００ｎｍ、１５０ｎｍ、２００ｎｍ、２５０ｎｍ、３００ｎｍ、３５０ｎｍ、４００ｎｍ、４５０ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１００〜２５０ｎｍ、２５０〜５００ｎｍ、５００〜７５０ｎｍ、７５０〜１０００ｎｍ、１μｍ、２μｍ、３μｍ、４μｍ、５μｍ、６μｍ、７μｍ、８μｍ、９μｍ、１０μｍ、１５μｍ、２５μｍ、３０μｍ、３５μｍ、４０μｍ、４５μｍ、５０μｍ、５５μｍ、６０μｍ、６５μｍ、７０μｍ、７５μｍ、８０μｍ、８５μｍ、９０μｍ、９５μｍ、１００μｍ、１５０μｍ、２００μｍ、２５０μｍ、１〜５００μｍ、５〜５００μｍ、２５〜５０μｍ、２５〜１００μｍ、５０〜１００μｍ、２５〜５００μｍもしくは５０〜５００μｍであるが５５０μｍ未満の長さ、または少なくとも約１００ｎｍ、１５０ｎｍ、２００ｎｍ、２５０ｎｍ、３００ｎｍ、３５０ｎｍ、４００ｎｍ、４５０ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１００〜２５０ｎｍ、２５０〜５００ｎｍ、５００〜７５０ｎｍ、７５０〜１０００ｎｍ、１μｍ、２μｍ、３μｍ、４μｍ、５μｍ、６μｍ、７μｍ、８μｍ、９μｍ、１０μｍ、１５μｍ、２５μｍ、３０μｍ、３５μｍ、４０μｍ、４５μｍ、５０μｍ、５５μｍ、６０μｍ、６５μｍ、７０μｍ、７５μｍ、８０μｍ、８５μｍ、９０μｍ、９５μｍ、１００μｍ、１５０μｍ、２００μｍ、２５０μｍ、１〜５００μｍ、５〜５００μｍ、２５〜５０μｍ、２５〜１００μｍ、５０〜１００μｍ、２５〜５００μｍもしくは５０〜５００μｍであるが５５０μｍ未満のいずれかの長さを含む。一部の実施形態では、このメソ多孔性シリカロッドは、約７５ｎｍ、１００ｎｍ、１５０ｎｍ、２００ｎｍ、２５０ｎｍ、３００ｎｍ、３５０ｎｍ、４００ｎｍ、４５０ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１００〜１０００ｎｍ、１００〜５００ｎｍ、１００〜２５０ｎｍ、２５０〜５００ｎｍ、５００〜７５０ｎｍもしくは７５０〜１０００ｎｍの直径、または少なくとも約７５ｎｍ、１００ｎｍ、１５０ｎｍ、２００ｎｍ、２５０ｎｍ、３００ｎｍ、３５０ｎｍ、４００ｎｍ、４５０ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１００〜１０００ｎｍ、１００〜５００ｎｍ、１００〜２５０ｎｍ、２５０〜５００ｎｍ、５００〜７５０ｎｍもしくは７５０〜１０００ｎｍのいずれかの直径を含み、ただし、メソ多孔性シリカロッドは、その直径よりも少なくとも１０％大きい長さを含む。ある特定の実施形態では、このメソ多孔性シリカロッドは、７５ｎｍ、１００ｎｍ、１５０ｎｍ、２００ｎｍ、２５０ｎｍ、３００ｎｍ、３５０ｎｍ、４００ｎｍ、４５０ｎｍまたは５００ｎｍから、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍまたは１０００ｎｍまでの直径を含む。一部の実施形態では、このメソ多孔性シリカロッドは、メソ多孔性シリカロッドの直径よりも少なくとも約１０、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００または１５０％大きい長さを含む。一部の実施形態では、このメソ多孔性シリカロッドは、メソ多孔性シリカロッドの直径の少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００または５００倍の長さを含む。ある特定の実施形態では、このメソ多孔性シリカロッドは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５もしくは５０ｎｍ、または約１〜１０、１〜１５、１〜５、２〜５、２〜１０、３〜１０、４〜１０、５〜１０、５〜１５もしくは１０〜２５ｎｍの直径、あるいは少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５もしくは５０ｎｍ、または約１〜１０、１〜１５、１〜５、２〜５、２〜１０、３〜１０、４〜１０、５〜１０、５〜１５もしくは１０〜２５ｎｍの直径を有する細孔を含む。ある特定の実施形態では、このメソ多孔性シリカロッドは、８０〜１２０μｍの長さである。例えば、このメソ多孔性シリカロッドは、（ａ）２〜５０ｎｍ、３〜５０ｎｍ、５〜５０ｎｍ、５〜２５ｎｍ、５〜１０ｎｍの間の直径を有する細孔；および／または（ｂ）約５〜２５μｍ、８０〜１２０μｍの長さを含み得る。一部の実施形態では、このメソ多孔性シリカロッドは、異なる長さを有するロッドおよび／または異なるサイズの範囲（例えば、上に開示された範囲のうち１つ内、または上に開示された範囲のうち１、２、３、４、５もしくはそれよりも多く内）を有するロッドの���合せを含み得る。一部の実施形態では、約１００ｎｍ、１５０ｎｍ、２００ｎｍ、２５０ｎｍ、３００ｎｍ、３５０ｎｍ、４００ｎｍ、４５０ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１００〜２５０ｎｍ、２５０〜５００ｎｍ、５００〜７５０ｎｍまたは７５０〜１０００ｎｍの長さを有するロッドは、約５μｍ、６μｍ、７μｍ、８μｍ、９μｍ、１０μｍ、１５μｍ、２５μｍ、３０μｍ、３５μｍ、４０μｍ、４５μｍ、５０μｍ、５５μｍ、６０μｍ、６５μｍ、７０μｍ、７５μｍ、８０μｍ、８５μｍ、９０μｍ、９５μｍ、１００μｍ、１５０μｍ、２００μｍ、２５０μｍ、３００μｍ、３５０μｍ、４００μｍ、４５０μｍ、５００μｍ、５〜５００μｍ、２５〜５０μｍ、２５〜１００μｍ、５０〜１００μｍ、２５〜５００μｍまたは５０〜５００μｍの長さを有するロッドと組み合わされる。ある特定の実施形態では、このロッドは、約０．５μｍ、１μｍ、１．５μｍ、２μｍ、２．５μｍ、３μｍ、３．５μｍ、４μｍ、４．５μｍ、５μｍ、５．５μｍ、６μｍ、６．５μｍ、７μｍ、７．５μｍ、８μｍ、８．５μｍ、９μｍ、９．５μｍ、１０μｍ、１１μｍ、１２μｍ、１３μｍ、１４μｍ、１５μｍ、１６μｍ、１７μｍ、１８μｍ、１９μｍ、２０μｍ、１〜２０μｍ、１〜１０μｍ、５〜１０μｍ、１〜５μｍ、０．５〜２０μｍ、７．５〜１２．５μｍまたは５〜１５μｍの幅を有する。一部の実施形態では、１つのセットのロッドは、免疫細胞、例えば、樹状細胞またはマクロファージによって貪食されるのに十分に小さく、別のセットのロッドは、免疫細胞によって貪食されるには大きすぎる。様々な実施形態では、本明細書に開示されている異なる抗原または他の化合物を有するロッドが混合される。したがって、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれよりも多くのクラスのメソ多孔性シリカロッドの混合物が本明細書で提供され、各クラスのロッドは、異なる抗原（例えば、抗原性ペプチド、例えば、精製されたペプチド）を有する。例えば、混合物は、第１の抗原を含む第１のクラスのロッド、第２の抗原を含む第２のクラスのロッド、第３の抗原を含む第３のクラスのロッドなどを含み得る。ロッドの混合物は、同じもしくは類似のサイズまたはサイズの範囲を有し得、あるいは、特定の抗原（単数または複数）を有する１つまたは複数のロッド（例えば、貪食されるのに十分に小さいロッド）および別の抗原（単数または複数）を有する別の１つまたは複数のロッド（例えば、貪食されるには大きすぎるロッド）を含み得る。ある特定の実施形態では、貪食されるには大きすぎるロッドは、対象中への投与（例えば、注射）の際に足場を形成する。注射可能なメソ多孔性シリカロッドは、ランダムに自己アセンブリして、３次元（３Ｄ）足場をｉｎ  ｖｉｖｏで形成する。この系は、免疫細胞（例えば、樹状細胞）を動員し、それらを一過的に収容し、それらに抗原を提示し、それらを（例えば、ＰＥＩなどの免疫賦活性化合物を用いて）活性化するように設計される。動員および構造中での細胞の一時的な収容または存在の後、これらの免疫細胞は、デバイス構造の外に遊走して、リンパ節にホーミングする。したがって、この組成物は、細胞がそれを出入りして通行／���環する組成物であり、それらの免疫活性化の状態は、デバイスを介した通行の結果として変更／モジュレートされる。様々な実施形態では、このメソ多孔性シリカロッドは、注射のために、水溶液、例えば、緩衝剤［例えば、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）または別の生理学的に（例えば、薬学的に）許容される緩衝剤］中に懸濁される。一部の実施形態では、このメソ多孔性シリカロッドは、水中で注射される。メソ多孔性シリカロッドは、様々な濃度で注射され得る。一部の実施形態では、このロッドは、約１ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１１ｍｇ／ｍｌ、１２ｍｇ／ｍｌ、１３ｍｇ／ｍｌ、１４ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、１６ｍｇ／ｍｌ、１７ｍｇ／ｍｌ、１８ｍｇ／ｍｌ、１９ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２１ｍｇ／ｍｌ、２２ｍｇ／ｍｌ、２３ｍｇ／ｍｌ、２４ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、３５ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、４５ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、５５ｍｇ／ｍｌ、６０ｍｇ／ｍｌ、１０〜４０ｍｇ／ｍｌ、２０〜３５ｍｇ／ｍｌ、２０〜４０ｍｇ／ｍｌ、２５〜３５ｍｇ／ｍｌ、２５〜５０ｍｇ／ｍｌ、２５〜４５ｍｇ／ｍｌ、２５〜３０ｍｇ／ｍｌ、３０〜５０ｍｇ／ｍｌ、１〜３０ｍｇ／ｍｌ、１〜４０ｍｇ／ｍｌ、１〜５０ｍｇ／ｍｌ、１〜６０ｍｇ／ｍｌ、５〜５０ｍｇ／ｍｌまたは５〜６０ｍｇ／ｍｌの濃度で注射される。
【００４０】
１種または複数の抗原は、対象のがんまたは病原体の抗原性プロファイルに基づいて選択され得る。メソ多孔性シリカロッドのライブラリーが、本明細書に含まれる。様々な実施形態では、メソ多孔性シリカロッドのライブラリーは、各々が異なる抗原を含む、複数のロッドを含む。異なるロッドが選択され得、任意選択で組み合わされ得るように、特定の抗原を有するロッドは、別の抗原を含むロッドとは別であり得る。態様は、対象のがん細胞もしくは腫瘍上および／またはがん細胞もしくは腫瘍中に存在する１種または複数の抗原を検出すること、ならびに次いで、対象のがん細胞または腫瘍中／上の１種または複数の抗原と類似〜同じである抗原（またはその一部）を含む１つまたは複数のロッドを選択することに関する。したがって、メソ多孔性シリカロッドの組合せは、この組合せが対象の抗原性プロファイルを考慮して選択されるように、ライブラリーから引き出され得る。様々な実施形態では、このロッドは、ＰＥＩをさらに含む。同様に、対象由来のがん細胞または腫瘍中／上に存在する抗原に基づいて、ヒドロゲルまたはクリオゲル、例えば、ＰＬＧ、アルギネートおよび／またはゼラチン（または当該分野で公知のおよび／もしくは本明細書に開示されている任意の他のポリマー）を含む足場中に含めるために抗原がそこから選択され得る抗原ライブラリーが提供される。一部の実施形態では、これらの足場は、ＰＥＩをさらに含む。非限定的な例では、ロッドまたは抗原のライブラリーは、少なくとも約５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５または５０の型のロッド（例えば、各々が異なる抗原を含む、別々の群のロッド）または抗原を含む。一部の実施形態では、このライブラリーは、アレイとしてアレンジされるか、または別々のコンテナー（例えば、各々が異なるロッドまたは抗原を含む管または容器）の収集である。
【００４１】
一部の実施形態では、このデバイスは注射可能である。様々な実施形態では、このデバイスは、（ａ）免疫賦活性化合物；（ｂ）送達ビヒクルに、または送達ビヒクル中に、免疫細胞を誘引する化合物；（ｃ）腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する化合物；（ｄ）Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する化合物；（ｅ）免疫阻害性タンパク質を阻害する化合物、またはそれらの任意の組合せをさらに含む。
【００４２】
ある特定の実施形態では、この免疫賦活性化合物は、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストおよび／またはメソ多孔性シリカを含む。一部の実施形態では、免疫賦活性化合物は、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を含む。一部の実施形態では、このＳＴＩＮＧアゴニストは、環状ジヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、このＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２またはＴＬＲ１３アゴニストを含む。非限定的な例では、このデバイスは、ＴＬＲアゴニスト、例えば、トリアシルリポタンパク質、糖脂質、リポペプチド、ヘパラン硫酸、ジアシルリポペプチド、ブロピリミン、リポタンパク質、リポテイコ酸、ヒートショックタンパク質７０（ＨＳＰ７０）、ザイモサン、プロフィリン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、二本鎖リボ核酸（ＲＮＡ）、ポリ（Ｉ：Ｃ）、ポリ（Ｉ：Ｃ）、ポリ（Ａ：Ｕ）、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）、リポポリサッカリド（ＬＰＳ）、ヒートショックタンパク質、フィブリノーゲン、ヘパリン硫酸（heparin  sulfate）もしくはその断片、ヒアルロン酸もしくはその断片、ニッケル、オピオイド、α１−酸性糖タンパク質（ＡＧＰ）、ＲＣ−５２９、マウスβ−デフェンシン２、フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）、フラジェリン、一本鎖ＲＮＡ、グアノシンアナログ、イミダゾキノリン（imidazoqinoline）、ロキソリビン（loxorbine）、真菌ベータ−グルカン、イミキモド、ＣＲＸ−５２７またはＯＭ−１７４を含む。
【００４３】
様々な実施形態では、このデバイスは、送達ビヒクルにまたは送達ビヒクル中に免疫細胞を誘引する化合物を含み、この免疫細胞は、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞または樹状細胞を含む。送達ビヒクルにまたは送達ビヒクル中に免疫細胞を誘引するのに有用な化合物の非限定的な例は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３Ｌ）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド１９（ＣＣＬ−１９）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２０（ＣＣＬ２０）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２１（ＣＣＬ−２１）、Ｎ−ホルミルペプチド、フラクタルカイン、単球走化性タンパク質−１およびマクロファージ炎症性タンパク質−３（ＭＩＰ−３α）を含む。
【００４４】
一部の実施形態では、Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する化合物は、免疫阻害性タンパク質を阻害する化合物を含む。ある特定の実施形態では、この免疫阻害性タンパク質は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）、プログラム細胞死タンパク質１リガンド（ＰＤＬ１）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４またはＴ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３）である。
【００４５】
様々な実施形態では、このデバイスは、抗原をさらに含む。例えば、一部の実施形態では、デバイスは、遊離ＰＥＩおよび抗原の両方を含む。一部の実施形態では、この抗原は、腫瘍抗原または非腫瘍抗原を含む。ＰＥＩは、抗原の前に、抗原と一緒に（例えば、ＰＥＩおよび抗原を含む水性組成物または混合物中で）、または抗原の後に、送達ビヒクルに添加され得る。一部の実施形態では、ＰＥＩは、抗原を含む送達ビヒクルの外側をコーティングする。ある特定の実施形態では、ＰＥＩが送達ビヒクルに添加され、次いで、抗原が送達ビヒクルに添加される。様々な実施形態では、抗原が送達ビヒクルに添加され、次いで、ＰＥＩが送達ビヒクルに添加される。一部のインプリメンテーションは、ＰＥＩと、ＰＥＩが静電気的に相互作用しない抗原との組合せに関する。一部の実施形態では、遊離ＰＥＩは、送達ビヒクル内の抗原に付着していない（例えば、静電気的に付着していない）。ある特定の実施形態では、遊離ＰＥＩは、送達ビヒクル内の抗原に付着している（例えば、静電気的に付着している）。様々な実施形態では、ＰＥＩは、抗原に付着しており（例えば、静電気的に付着しており）、次いで、送達ビヒクルに添加される。化合物（例えば、ＰＥＩまたは抗原）を送達ビヒクル上に添加する非限定的な例には、化合物を含む組成物を送達ビヒクル上に添加する（例えば、滴下する）ことによって、または化合物を含む組成物中に送達ビヒクルを浸漬することによって、化合物を、その産生の間（例えば、ヒドロゲルまたはクリオゲルの重合またはクリオゲル化の間またはその前）に送達ビヒクル中に取り込むことが含まれる。
【００４６】
ある特定の実施形態では、このデバイスは、対象への投与の前には腫瘍抗原を欠く。一部の実施形態では、このデバイスはイムノコンジュゲートを含み、このイムノコンジュゲートは、抗原に共有結合により連結された免疫賦活性化合物を含む。様々な実施形態では、この抗原は、腫瘍抗原、例えば、中枢神経系（ＣＮＳ）がん抗原、ＣＮＳ胚細胞腫瘍抗原、肺がん抗原、白血病抗原、急性骨髄性白血病抗原、多発性骨髄腫抗原、腎がん抗原、悪性神経膠腫抗原、髄芽腫抗原、乳がん抗原、前立腺がん抗原、カポジ肉腫抗原、卵巣がん抗原、腺癌抗原または黒色腫抗原を含む。一部の実施形態では、対象を処置することは、対象において転移を低減させることを含む。
【００４７】
ある特定の実施形態では、この抗原は、微生物抗原などの非腫瘍抗原を含む。例えば、この微生物抗原は、細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、古細菌抗原または原生動物抗原を含み得る。一部の実施形態では、この微生物抗原は、ウイルス抗原以外、例えば、ＨＩＶまたはインフルエンザ抗原以外である。様々な実施形態では、この抗原は、糖タンパク質またはその断片以外である。
【００４８】
本発明の主題の態様は、対象においてがんを処置する方法であって、本明細書に開示されているデバイスまたは生体材料を対象に投与するステップを含む方法もまた提供する。
【００４９】
様々な実施形態では、可撓性の注射可能な生体材料クリオゲルまたはヒドロゲル（例えば、クリックヒドロゲル）は、全身送達（これは、有害な副作用と関連し得る）を迂回しながら、患者への投与、例えば注射の前に送達デバイス中に腫瘍抗原または腫瘍溶解物をローディングすることなく、がん免疫療法を容易にするために成長中の腫瘍の部位に免疫モジュレート剤を直接送達するために、腫瘍中に、または腫瘍の近位、例えば、腫瘍と直接接触した／腫瘍と触れている解剖学的位置に、腫瘍の約１０、９、８、７、６、５、４、３、２もしくは１ｍｍ以内に、あるいは腫瘍塊自体中に投与される。したがって、デバイス／生体材料（例えば、クリオゲルまたはヒドロゲル）は、腫瘍周囲または腫瘍内様式で投与される。腫瘍周囲送達は、直接的な物理的接触によって、または腫瘍塊境界に近接することによって、腫瘍をデバイス／生体材料で実質的に取り囲む（腫瘍塊の外周の５０、７５、８５、９５、９９〜１００％）。腫瘍内送達は、腫瘍組織と正常組織との間の境界を介した、腫瘍塊中への直接的投与によって実施される。例えば、この生体材料は、例えば、固形腫瘍の場合、腫瘍嚢（tumor  capsule）に隣接するがその完全性を損なうことなく、例えば、穴をあけることなく、投与され得る。あるいは、腫瘍嚢は、損なわれるまたは穴をあけられる（腫瘍内注射）。一部の実施形態では、この腫瘍は、腫瘍と触れてまたは腫瘍の近位に配置されるデバイスまたは足場を、完全にまたは部分的に包む。かかる実施形態では、このデバイスまたは足場は、腫瘍においてまたは腫瘍内で免疫細胞局在を作り変える。本発明の主題は、例えば針を使用する、腫瘍中への直接的な（腫瘍内）生体材料の投与にも関する。針生検を行うことによって診断できる任意の腫瘍が、この様式で処置され得る。例えば、処置される腫瘍には、乳房、脳、肺、前立腺、肝臓、骨、甲状腺、皮膚、子宮頸部、口腔、卵巣、子宮内膜、結腸、膀胱、および以下に記載されるさらなる腫瘍型が含まれる。
【００５０】
様々な実施形態では、この腫瘍は、固形腫瘍、または規定された検出可能な境界内の別個の腫瘍である。したがって、本発明の主題は、腫瘍媒介性免疫回避を低減させる方法であって、Ｔ細胞または樹状細胞抑制の阻害剤を含む生分解性多孔性ポリマーデバイスを、腫瘍部位に（例えば、腫瘍中に（触れて）、または固形もしくは別個の腫瘍塊に隣接したもしくはその近位の部位に）投与するステップを含む方法を提供する。例えば、この阻害剤は、トランスフォーミング増殖因子−ベータ（ＴＧＦ−β）経路阻害剤、シグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ３）経路阻害剤またはインドールアミン−ピロール２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯまたはＩＮＤＯ  ＥＣ  １．１３．１１．５２）阻害剤を含む。一部の例では、この阻害剤は、少なくとも１種の小分子、例えば、ＴＧＦ−β経路阻害剤ＬＹ２１５７２９９、ＧＷ７８８３８８、ＬＹ３６４９４７、Ｒ２６８７１２、ＲｅｐＳｏｘ、ＳＢ５２５３３４およびＳＤ２０８；ならびに／またはＳＴＡＴ３経路阻害剤ＢＰ−１−１０２、Ｓ３Ｉ−Ｍ２００１、ＳＴＡ−２１、Ｓ３Ｉ−２０１、Ｓｔａｔｔｉｃ、Ｇａｌｉｅｌｌａｌａｃｔｏｎｅ、配列ＰＹ＊ＬＫＴＫ（式中、Ｙ＊はホスホチロシンを示す；配列番号１）を有するポリペプチドおよび配列Ｙ＊ＬＰＱＴＶ（式中、Ｙ＊はホスホチロシンを示す；配列番号２）を有するポリペプチド；ならびに／またはＩＤＯ阻害剤ＩＮＣＢ２４３６０、ＮＬＧ９１９（ＧＤＣ−０９１９としても公知）、Ｎｏｒｈａｒｍａｎｅ、ロスマリン酸、１−メチルトリプトファンおよびインドキシモド（indoximod）を含む。別の例では、この阻害剤は、免疫チェックポイントタンパク質のブロッカー、例えば、プログラム細胞死１タンパク質（ＰＤ−１）、ＰＤ−１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）、分化抗原群２７６（ＣＤ２７６；Ｂ７−Ｈ３としても公知）ならびに／またはＴ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ３）阻害剤を含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイントタンパク質の阻害剤には、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体および／または抗ＣＴＬＡ−４抗体が含まれる。好ましい実施形態では、このデバイスは、対象の腫瘍位置への投与の前には、腫瘍抗原、例えば、患者由来の腫瘍抗原または腫瘍細胞溶解物（または他の腫瘍抗原）を含まない。
【００５１】
様々な実施形態では、この生体材料／デバイスは、ナノ細孔、ミクロ細孔、マクロ細孔、またはそれらの組合せを含む。ミクロ細孔およびマクロ細孔のサイズは、ミクロ細孔およびマクロ細孔を介した細胞の遊走または移動（例えば、送達ビヒクル中への免疫細胞、例えばＤＣの遊走および／または送達ビヒクルからの脱出）を可能にする。例えば、この組成物は、１〜６００μｍ（例えば、１０〜６００μｍ、２０〜６００μｍ、５０〜６００μｍ、１０〜５００μｍ、２０〜５００μｍ、５０〜５００μｍまたは１０〜３００μｍ）の直径によって特徴付けられる細孔を含む。
【００５２】
一部の状況では、このデバイスは、腫瘍細胞の死、例えば、免疫原性細胞死を誘導する化学療法剤をさらに含む。免疫原性細胞死は、免疫系によって認識され、（ほとんどの他の化学療法薬で見られるようなアポトーシスとは逆に）免疫活性化を生じる、細胞死の一形態である。この形態の細胞死では、カルレティキュリンが瀕死細胞の表面上に提示されて、腫瘍抗原が飲み込まれるのを可能にする；高移動度群ボックス１タンパク質（ＨＭＧＢ１）が放出され、それらの成熟化を引き起こすような樹状細胞に対するｔｏｌｌ様受容体−４（ＴＬＲ−４）刺激を生じる；瀕死細胞からのＡＴＰの放出は、腫瘍母地中への抗原提示細胞の動員を生じる。かかる化学療法剤には、アントラサイクリンクラスの化合物のメンバー、例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシンおよびバルルビシン、ならびにミトキサントロン、アントラサイクリンアナログが含まれる。このクラスの化合物は、がん細胞を直接死滅させることに加えて、免疫系を活性化するそれらの能力に起因して、好ましい。薬剤オキサリプラチンおよびシクロホスファミドもまた、免疫原性細胞死をもたらす。免疫原性細胞死を誘導する化合物の他の非限定的な例には、シコニン、プロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ、７Ａ７（上皮増殖因子受容体特異的抗体）、強心配糖体およびボリノスタット（ヒストンデアセチラーゼ阻害剤）が含まれる。例えば、その全内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、H  InoueおよびK  Tani（２０１４年）Cell  Death  and  Differentiation  ２１巻、３９〜４９頁を参照のこと。化学療法薬物に加えて、このデバイスは、これもまた免疫原性細胞死をもたらす放射線治療、ならびに腫瘍に対する免疫応答を活性化しつつ腫瘍細胞を死滅させる他のアプローチと組み合わせて利用される。
【００５３】
任意選択で、このデバイスまたは足場は、体温上昇誘導性組成物をさらに含む。適切な体温上昇誘導性組成物には、磁性ナノ粒子または近赤外（ＮＩＲ）吸収性ナノ粒子が含まれる。一部の場合には、このナノ粒子は磁性であり、この方法は、磁性ナノ粒子を交流磁場（ＡＭＦ）と接触させて、局所的体温上昇をｉｎ  ｓｉｔｕで誘導し、それによって、がん細胞を変更または破壊し、プロセシングされた腫瘍抗原を産生するステップをさらに含む。別の例では、この方法は、ＮＩＲナノ粒子をＮＩＲ照射と接触させて、局所的体温上昇をｉｎ  ｓｉｔｕで誘導し、それによって、がん細胞を変更または破壊し、プロセシングされた腫瘍抗原を産生するステップをさらに含む。体温上昇は、３７セルシウス度（℃）よりも高い局所的温度によって特徴付けられる。例えば、デバイスの温度は、約４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、８５、９０、９５℃またはそれよりも高くまで、一時的に加熱される。一部の実施形態では、この体温上昇誘導性組成物は、本発明のデバイスまたは足場の表面上にあり、例えば、デバイスまたは足場は、この体温上昇誘導性組成物でコーティングされる。様々な実施形態では、この体温上昇誘導性組成物は、デバイスもしくは足場内にまたはそれらの至る所にある。
【００５４】
一部の実施形態では、このデバイスまたは足場は、放射性同位体をさらに含む。適切な放射性同位体には、ヨウ素−１３１、ヨウ素−１２５、レニウム−１８５、リン−３３、リン−３２、パラジウム−１００、パラジウム−１０１、パラジウム−２０１、パラジウム−１０３、パラジウム−１０５、パラジウム−１０６、パラジウム−１０８、パラジウム−１０９、パラジウム−１１０、パラジウム−１１１、パラジウム−１１２、セシウム−１３７、イリジウム−１９２、コバルト−６０、ルテチウム−１７７、イットリウム−９０、タリウム−２０１、ガリウム−６７、テクネチウム−９９ｍ、ストロンチウム−９０またはストロンチウム−８９が含まれる。一部の実施形態では、この放射性同位体は、本発明のデバイスまたは足場の表面上にあり、例えば、デバイスまたは足場は、放射性同位体でコーティングされる。様々な実施形態では、この放射性同位体組成物は、デバイスもしくは足場内にまたはそれらの至る所にある。
【００５５】
様々な実施形態では、このデバイスは、ポリペプチドをコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡもしくはウイルスゲノムまたはそれらの一部）またはＤＮＡ分子（例えば、プラスミドもしくはウイルスゲノムまたはそれらの一部）をさらに含む。実施形態では、このポリペプチドは抗原性ポリペプチドである。一部の実施形態では、このペプチドは、対象のゲノムによってコードされるいずれのポリペプチド中にも存在しないアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、このペプチドは、対象中の正常細胞のゲノムによってコードされるいずれのポリペプチド中にも存在しないアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、このポリペプチドは、がん性細胞の表面上に存在する。実施形態では、このポリペプチドは、微生物病原体または寄生生物（例えば、ウイルス、真菌、細菌もしくは原生動物病原体または寄生生物）によって産生されるポリペプチドのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、このペプチドは、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞または抗原提示細胞を含む自己反応性免疫細胞上に提示され得る。ある特定の実施形態では、このペプチドは、治療化合物内に存在し得る。
【００５６】
一部の例では、この腫瘍は、規定された境界を有する別個の腫瘍を含む。様々な実施形態では、この腫瘍は、固形腫瘍または局在化した腫瘍塊である。例えば、生体材料含有デバイスは、腫瘍塊から離れた部位（例えば、腫瘍塊から１０ｍｍよりも遠い）のではなく、例えば、腫瘍から離れた部位において皮膚の下に配置されるのではなく、腫瘍塊上に、腫瘍塊中に、または腫瘍塊に隣接して（即ち、物理的に、腫瘍塊自体と接触してまたは腫瘍塊自体と近接して）直接配置される。瀕死腫瘍細胞自体が、適応免疫細胞応答の生成に必要な任意の抗原を提供するので、上記系を使用すると、腫瘍抗原として機能するデバイスの構成要素として、患者由来の材料、例えば、患者由来のまたは生検された腫瘍溶解物またはプロセシングされた抗原は必要とされない。一部の実施形態では、この足場またはデバイスは、対象に投与される前には腫瘍抗原を含まない。
【００５７】
本発明の主題の態様は、固形腫瘍の処置に関する。例えば、この腫瘍は、血液細胞のがん、例えば白血病以外のがんである。ある特定の実施形態では、このがんは転移性である。様々な実施形態では、この腫瘍は、皮膚がん、例えば黒色腫である。本発明の主題のインプリメンテーションは、腫瘍が生検され得る（例えば、腫瘍細胞溶解物などの腫瘍抗原を産生するための生検の必要がない）がんの処置に関する。一部の実施形態では、この腫瘍は、肉腫または癌腫腫瘍である。本発明の主題の実施形態において標的化され得る非限定的な腫瘍には、乳がん、精巣がん、前立腺がん、卵巣がん、膵臓がん、肺がん、甲状腺がん、肝臓がん（例えば、非小細胞肺がん）、結腸、食道がん、胃がん、子宮頸がん、口腔がん、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）などのウイルスと関連するがん、脳がん、腎がん、網膜芽細胞腫、急性骨髄性白血病、骨肉腫、骨肉腫、軟骨芽細胞腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、ウィルムス腫瘍、悪性ラブドイド、肝芽腫、肝細胞癌、神経芽腫、髄芽腫、神経膠芽腫、副腎皮質癌、上咽頭癌、横紋筋肉腫、デスモイド、線維肉腫または脂肪肉腫腫瘍が含まれる。生体材料デバイスまたは足場の注射に関する一部の実施形態では、針は、視覚的に、および／またはイメージングデバイス、例えば、Ｘ線（例えば、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）スキャンを使用する）、超音波、内視鏡もしくは腹腔鏡デバイスの助けにより、ガイドされ得る。
【００５８】
本発明の主題の方法および生体材料デバイスは、腫瘍に罹っている任意の脊椎動物対象を処置するために有用である。様々な実施形態では、この対象は、両生類、爬虫類、ウマ、哺乳動物、げっ歯類、イヌ、ネコ、トリ、ブタまたは霊長類対象である。例えば、本発明の主題のヒト医療および獣医師インプリメンテーションが提供される。ある特定の実施形態では、この対象は、イヌ、ネコ（例えば、イエネコ、またはライオン、トラ、ヒョウもしくはチーターなどのネコ）、モルモット、ブタ、ウマ、ロバ、ラバ、マウス、ラット、ヒト、サル、チンパンジー、ゴリラ、オランウータン、クマ（例えば、ジャイアントパンダ）またはラクダである。本発明の主題は、本明細書に開示されている生体材料デバイスを含むヒト以外の動物もまた提供する。
【００５９】
本明細書に記載されている活性構成要素を含む生体材料デバイスもまた、本発明の主題の範囲内である。一部の実施形態では、この生体材料デバイスはＰＥＩを含む。ある特定の実施形態では、この生体材料は、（ｉ）免疫賦活性化合物；（ｉｉ）腫瘍細胞の免疫学的細胞死を引き起こす化合物；（ｉｉｉ）Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する化合物；（ｉｖ）免疫阻害性タンパク質を阻害する化合物、および（ｖ）サイトカイン（例えば、樹状細胞などの免疫細胞の化学誘引物質）のうち１つまたは複数をさらに含む。
【００６０】
一部の実施形態では、この免疫賦活性化合物は、ＴＬＲアゴニストまたはＳＴＩＮＧリガンドである。一部の実施形態では、免疫学的細胞死を引き起こす化合物は、ドキソルビシン、ミトキサントロン、オキサリプラチンまたはパクリタキセルである。一部の実施形態では、Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する化合物は、ＴＧＦ−β阻害剤、ＳＴＡＴ３阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、抗ＰＤ−１抗体または抗ＣＴＬＡ−４抗体である。一部の実施形態では、デバイスまたは足場は、サイトカイン、例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｆｌｔ３Ｌ、ＸＣＬ１、ＩＬ−２またはＩＬ−１２を含む。様々な実施形態では、本発明の主題のデバイスまたは足場は、免疫賦活性化合物またはサイトカインなどのタンパク質をコードするｍＲＮＡまたは発現ベクターを含む。このｍＲＮＡまたは発現ベクターは、デバイスまたは足場中で、それがコードするポリペプチドと組み合わされても、それがコードするポリペプチドと組み合わされなくてもよい。一部の実施形態では、デバイスまたは足場は、本明細書に記載されているサイトカイン、例えば、デバイスまたは足場中に樹状細胞を誘引するサイトカインをコードするｍＲＮＡ分子または発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、このｍＲＮＡまたは発現ベクターは、対象の細胞への送達を容易にするために縮合される。様々な実施形態では、このｍＲＮＡまたは発現ベクターは、トランスフェクション剤と共にデバイスまたは足場中に存在し得る。例えば、このｍＲＮＡまたは発現ベクターは、ポリエチレンイミン（polyethylimine）（ＰＥＩ）、ポリ−Ｌ−リシン（ＰＬＬ）またはポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーと縮合され得る。例えば、Huangら（２００５年）Human  Gene  Therapy  １６巻：６０９〜６１７頁を参照のこと。トランスフェクション剤のさらなる非限定的な例には、リポソーム（例えば、リポフェクタミン）が含まれる。一部の実施形態では、このデバイスは、Ｔ細胞または樹状細胞抑制の阻害剤を含む。一部の実施形態では、このデバイスは、免疫賦活性化合物を含む。一部の実施形態では、前記阻害剤は、トランスフォーミング増殖因子−ベータ（ＴＧＦ−β）経路阻害剤またはシグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ３）経路阻害剤を含む。一部の実施形態では、前記阻害剤は、小分子、アプタマー、タンパク質、ＲＮＡｉ分子、抗体または抗体断片を含む。一部の実施形態では、この小分子は、１０００ダルトン未満の分子量を有する有機化合物である。一部の実施形態では、前記ＴＧＦ−β経路阻害剤は、ＬＹ２１５７２９９、ＧＷ７８８３８８、ＬＹ３６４９４７、Ｒ２６８７１２、ＲｅｐＳｏｘ、ＳＢ５２５３３４またはＳＤ２０８を含み、前記ＳＴＡＴ３経路阻害剤は、ＢＰ−１−１０２、Ｓ３Ｉ−Ｍ２００１、ＳＴＡ−２１、Ｓ３Ｉ−２０１、Ｓｔａｔｔｉｃ、Ｇａｌｉｅｌｌａｌａｃｔｏｎｅ、配列ＰＹ＊ＬＫＴＫ（配列番号１）（式中、Ｙ＊はホスホチロシンを示す）を有するポリペプチドおよび配列Ｙ＊ＬＰＱＴＶ（配列番号２）（式中、Ｙ＊はホスホチロシンを示す）を有するポリペプチドを含む。一部の実施形態では、前記阻害剤は、免疫チェックポイントの阻害剤を含む。一部の実施形態では、免疫チェックポイントの阻害剤は、ＰＤ−１経路阻害���、ＬＡＧ−３経路阻害剤、ＩＤＯ経路阻害剤、Ｂ７−Ｈ３経路阻害剤またはＴＩＭ３経路阻害剤である。一部の実施形態では、前記阻害剤は、小分子、アプタマー、タンパク質、ＲＮＡｉ分子、抗体または抗体断片である。一部の実施形態では、この小分子は、１０００ダルトン未満の分子量を有する有機化合物である。一部の実施形態では、この阻害剤は抗体である。一部の実施形態では、前記抗体は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体または抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む。一部の実施形態では、この抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブまたはピディリズマブである。一部の実施形態では、この抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＢＭＳ−９３６５５９またはＭＰＤＬ３２８０Ａである。一部の実施形態では、この抗ＣＴＬＡ−４抗体はイピリムマブである。一部の実施形態では、この抗体は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖抗体またはｓｃＦｖである。一部の実施形態では、この抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。一部の実施形態では、前記阻害剤はＩＤＯ阻害剤である。一部の実施形態では、前記ＩＤＯ阻害剤はＩＤＯ１阻害剤である。一部の実施形態では、前記阻害剤は、小分子、アプタマー、タンパク質、ＲＮＡｉ分子、抗体または抗体断片である。一部の実施形態では、この小分子は、１０００ダルトン未満の分子量を有する有機化合物である。一部の実施形態では、この小分子は、ＩＮＣＢ２４３６０またはＮＬＧ９１９である。一部の実施形態では、前記デバイスは、免疫原性細胞死誘導性化学療法剤をさらに含む。一部の実施形態では、前記化学療法剤は、アントラサイクリンクラスの化合物のメンバーを含む。一部の実施形態では、前記化学療法剤は、ドキソルビシンを含む。一部の実施形態では、前記腫瘍は、固形腫瘍または局在化した腫瘍塊を含む。一部の実施形態では、前記デバイスは、前記腫瘍部位への投与の前には、精製された腫瘍抗原も腫瘍細胞溶解物も含まない。一部の実施形態では、前記デバイスは、ヒドロゲルを含む。一部の実施形態では、前記デバイスは、クリオゲルを含む。一部の実施形態では、前記クリオゲルは、細孔を含む。一部の実施形態では、前記デバイスは、メタクリル化されたゼラチンクリオゲル、メタクリル化されたアルギネートクリオゲルまたはクリックアルギネートクリオゲルを含む。一部の実施形態では、前記デバイスは、アルギネートヒドロゲルを含む。一部の実施形態では、このアルギネートヒドロゲルは、アルギネートクリオゲルである。一部の実施形態では、前記アルギネートヒドロゲルは、クリックアルギネートを含む。一部の実施形態では、このデバイスは、注射を介して投与される。一部の実施形態では、このデバイスは、腫瘍中に注射される。一部の実施形態では、このデバイスは、腫瘍から約０．１〜１０ｍｍ以内の、対象中の部位に注射される。一部の実施形態では、このデバイスは、サイトカインまたはサイトカインをコードするｍＲＮＡもしくは発現ベクターをさらに含む。一部の実施形態では、このサイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド���Ｆｌｔ３Ｌ）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２０（ＣＣＬ２０）、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）、ケモカイン（Ｃモチーフ）リガンド１（ＸＣＬ１）、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１０（ＣＸＣＬ１０）、インターフェロンアルファ１（ＩＦＮ−アルファ）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−ベータ）またはインターロイキン１２（ＩＬ−１２）である。一部の実施形態では、このデバイスは、免疫賦活性化合物をさらに含む。一部の実施形態では、この免疫賦活性化合物は、ＴＬＲアゴニスト、ＳＴＩＮＧリガンドまたは免疫賦活性抗体である。一部の実施形態では、このデバイスは、約５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００もしくは５０〜５００μｌの体積、または約５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００もしくは５０〜５００μｌ未満の体積を有する。一部の実施形態では、前記デバイスは、ラポナイト（laponite）をさらに含む。
【００６１】
本発明の主題の態様は、腫瘍に罹患した対象を処置する方法であって、本明細書に開示されている生分解性多孔性ポリマーデバイスを腫瘍部位に投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、このデバイスは、Ｔ細胞または樹状細胞抑制の阻害剤を含む。一部の実施形態では、このデバイスは、免疫賦活性化合物を含む。一部の実施形態では、対象を処置することは、（ａ）腫瘍の体積を低減させること；（ｂ）腫瘍の成長を低減させること；（ｃ）腫瘍の転移を低減させること；（ｄ）対象の生存を増加させること；（ｅ）対象の無増悪生存期間を増加させること；（ｆ）腫瘍内の抗原に対するＴ細胞応答を増加させること；および／または（ｇ）腫瘍内の抗原に対して対象をワクチン接種することを含む。一部の実施形態では、対象を処置することは、腫瘍の体積を、少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９または１００％低減させることを含む。一部の実施形態では、対象を処置することは、腫瘍の体積を、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１４、２１、２８、３５、４１、４８、１８０、３６５もしくは１〜３６５日以内に、または約１〜１２ヶ月以内に、少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９または１００％低減させることを含む。一部の実施形態では、（ａ）１つのかかる生分解性多孔性ポリマーデバイスが、対象に投与される；または（ｂ）２つのかかる生分解性多孔性ポリマーデバイスが、対象に投与される。一部の実施形態では、前記デバイスは、アルギネートヒドロゲルを含む。一部の実施形態では、前記アルギネートヒドロゲルは、クリックアルギネートを含む。一部の実施形態では、このデバイスは、注射を介して投与される。一部の実施形態では、このデバイスは、腫瘍中に注射される。一部の実施形態では、このデバイスは、腫瘍から約０〜１０ｍｍ以内の、対象中の部位に注射される。一部の実施形態では、このデバイスは、サイトカインをさらに含む。一部の実施形態では、このサイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３Ｌ）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２０（ＣＣＬ２０）、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）、ケモカイン（Ｃモチーフ）リガンド１（ＸＣＬ１）、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１０（ＣＸＣＬ１０）、インターフェロンアルファ１（ＩＦＮ−アルファ）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−ベータ）またはインターロイキン１２（ＩＬ−１２）である。一部の実施形態では、このデバイスは、免疫賦活性化合物をさらに含む。一部の実施形態では、この免疫賦活性化合物は、ＣｐＧ、ポリイノシン−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））、ＰＥＩ−ポリ（Ｉ：Ｃ）、ポリアデニル酸−ポリウリジル酸（ポリ（Ａ：Ｕ））、ＰＥＩ−ポリ（Ａ：Ｕ）、二本鎖リボ核酸（ＲＮＡ）、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）またはイミキモドである。一部の実施形態では、このデバイスは、約５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００もしくは５０〜５００μｌの体積、または約５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００もしくは５０〜５００μｌ未満の体積を有する。一部の実施形態では、前記対象は、固形腫瘍を含むと同定されている。
【００６２】
本発明の主題の態様は、本発明の主題のデバイスを含む非ヒト哺乳動物またはシリンジを提供する。一部の実施形態では、このシリンジは、事前にローディングされ、デバイスと共に包装される。一部の実施形態では、この腫瘍は、照射と接触される。一部の実施形態では、化学療法剤は、対象に全身投与される。
【００６３】
化合物、例えば、ポリペプチドを含む抗原の免疫原性を増加させるためのデバイス、生体材料、方法および組成物もまた、本明細書に含まれる。化合物の免疫原性を増加させることは、細胞型または動物（例えば、哺乳動物）において、その化合物に対して特異的な１種または複数の抗体の産生を増加させることを含み得る。一部の実施形態では、この抗体は、化合物に対して特異的であることが決定される前または後に、ヒトであるまたはヒト化される。様々な実施形態では、化合物の免疫原性を増加させることは、その化合物をＰＥＩと組み合わせることを含む。一部の実施形態では、この化合物およびＰＥＩは、足場などの送達ビヒクルを含むデバイス中に存在する。ある特定の実施形態では、この化合物は、ＰＥＩに静電気的に付着している。
【００６４】
特異的免疫応答（例えば、腫瘍および／または病原体に対する）を惹起するための生体材料および組成物の非限定的な記載は、その各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１５年９月１５日に発行された米国特許第９，１３２，２１０号；２０１２年４月２６日に公開された米国特許出願公開第２０１２−０１００１８２号；２０１６年６月２１日に発行された米国特許第９，３７０，５５８号；２０１５年５月１１日に公開されたＰＣＴ国際特許出願公開番号ＷＯ２０１５／１６８３７９；２０１６年４月１日に出願されたＰＣＴ国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２５７１７に提供される。
【００６５】
特異的免疫応答を惹起するための注射可能な細孔形成性生体材料に関する非限定的な特色は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１４年３月２０日に公開された米国特許出願公開第２０１４−００７９７５２号に記載されている。
【００６６】
特異的免疫応答（例えば、腫瘍および／または病原体に対する）を惹起するための注射可能なクリオゲル生体材料の非限定的な記載は、その各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１４年４月２４日に公開された米国特許出願公開第２０１４−０１１２９９０号；および２０１４年８月１４日に公開された米国特許出願公開第２０１４−０２２７３２７号に記載されている。
【００６７】
ｉｎ  ｓｉｔｕ抗原生成性抗がん生体材料の非限定的な態様は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１４年７月１０日に公開された米国特許出願公開第２０１４−０１９３４８８号に記載されている。
【００６８】
免疫応答をモジュレートするためのメソ多孔性シリカ組成物の例示的な記載は、その各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Kimら、（２０１５年）Nature  Biotechnology  ３３巻、６４〜７２頁；２０１５年３月１２日に公開された米国特許出願公開第２０１５−００７２００９号；およびBjoerkら（２０１３年）Langmuir、２９巻（４４号）：１３５５１〜１３５６１頁に提供される。様々な実施形態では、メソ多孔性シリカナノ粒子は、オルトケイ酸テトラエチルを、ミセルロッドでできた鋳型と反応させることによって合成される。結果は、規則正しいアレンジメントの細孔で満たされたナノサイズのスフェアまたはロッドの収集である。次いで、この鋳型は、適切なｐＨに調整された溶媒で洗浄することによって除去され得る。別の非限定的な技術では、このメソ多孔性粒子は、単純なゾル−ゲル法またはスプレー乾燥法を使用して合成される。一部の実施形態では、オルトケイ酸テトラエチルは、さらなるポリマーモノマー（鋳型としての）と共に使用される。他の非限定的な方法には、これにより参照により本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２０１２０２６４５９９号および同第２０１２０２５６３３６号に記載されるものが含まれる。非限定的な例では、ロッドは、酸性溶液中に界面活性剤を溶解させ、次いで加熱するステップ、シリケート（例えば、オルトケイ酸テトラエチル）を添加して加熱するステップ、およびロッド粒子を収集するステップを含むプロセスで産生される。例えば、ロッドは、１．６Ｍ  ＨＣｌ中にＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｐ−１２３（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）界面活性剤を室温で溶解させ、４０℃に加熱するステップ；４２ｍｍｏｌのオルトケイ酸テトラエチル（ＴＥＯＳ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加し、撹拌（６００ｒｐｍ）下で４０℃で２０時間加熱するステップ；１００℃に２４時間加熱するステップ；濾過によってロッド粒子を収集し、室温で風乾するステップ；およびエタノール／ＨＣｌ（５００部のＥｔＯＨに対して５部のＨＣｌ）中で８０℃で一晩粒子を抽出するステップを含むプロセスで産生され得る。一部の実施形態では、このＭＰＳ組成物は、化合物（例えば、動員、活性化、抗原および免疫抑制阻害剤化合物）を添加する前または後の使用のために、貯蔵および出荷され得る。例えば、１種または複数の化合物、例えば抗原は、患者への投与の直前に、プロセシングされ、ＭＰＳ粒子に添加され得る。
【００６９】
腫瘍免疫抑制機構を低減、逆転および／または克服するための生体材料に関する非限定的な特色は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１６年１月２９日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０１５８２５に記載されている。
【００７０】
本発明は、対象においてがんを処置するため、対象において腫瘍負荷を低減させるため、対象において感染症を処置するため、および／または対象において腫瘍抗原もしくは腫瘍ネオ抗原に対する免疫応答を惹起するため、ならびに免疫応答をｅｘ  ｖｉｖｏもしくはｉｎ  ｖｉｔｒｏで刺激するための、本明細書に記載されているデバイス、ライブラリーまたは混合物の使用を包含する。本明細書に開示されている各実施形態は、開示された他の実施形態の各々に適用可能であることが企図される。したがって、本明細書に記載されている様々な要素の全ての組合せは、本発明の範囲内である。
【００７１】
本発明の他の特色および利点は、その好ましい実施形態についての以下の記載から、および特許請求の範囲から明らかとなる。特に定義しない限り、本明細書で使用されている全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載されている方法および材料と類似または等価な方法および材料が本発明の実施および試験において使用され得るが、適切な方法および材料は以下に記載される。本明細書で引用される全ての公開された外国特許および特許出願は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で引用される受託番号によって示されるＧｅｎｂａｎｋおよびＮＣＢＩの提出は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で引用される全ての他の公開された参考文献、文書、原稿および科学論文は、参照により本明細書に組み込まれる。矛盾する場合、定義を含む本明細書が支配するものとする。さらに、材料、方法および例は、例示に過ぎず、限定を意図しない。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１ＡＢＣ】図１Ａ〜Ｉは、ＰＥＩが、メソ多孔性シリカロッド（ＭＳＲ）内にｉｎ  ｖｉｔｒｏで吸収されることができること、ならびにＰＥＩが、ネズミＢＭＤＣおよびヒトＤＣをｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化することを示すグラフである。（Ａ）様々な濃度のＰＥＩで１８時間刺激した後のＢＭＤＣにおける主要組織適合性複合体クラスＩＩ（ＭＨＣ−ＩＩ）および分化抗原群８６（ＣＤ８６）発現のフローサイトメトリー分析。（Ｂ）および（Ｃ）様々な濃度のＰＥＩで１８時間刺激した後の骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）上清中のＴＮＦ−αおよびＩＬ−６濃度の酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）分析。（Ｄ）ＭＳＲへのＰＥＩの装填効率。（Ｅ）様々な濃度のＰＥＩ−ＭＳＲで１８時間刺激した後のＢＭＤＣにおけるＭＨＣ−ＩＩおよびＣＤ８６発現のフローサイトメトリー分析。（Ｆ）様々な濃度のＰＥＩ−ＭＳＲで１８時間刺激した後のＢＭＤＣ上清中の腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）濃度のＥＬＩＳＡ分析。ＰＢＳ＝リン酸緩衝食塩水；ＭＰＳ＝メソ多孔性シリカ；Ｌ２５＝２５ｋＤａの分子量を有する直鎖ＰＥＩ。（Ｇ）様々な濃度のＰＥＩをＴＬＲ５レポーター細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ＨＥＫ  Ｂｌｕｅ  ＴＬＲ−５）に加え、活性をヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）−Ｂｌｕｅ検出（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を使用してモニタリングした。（Ｈ）ＭＳＲ−ＰＥＩで刺激した後のネズミＢＭＤＣ上清中のＴＮＦ−α濃度のＥＬＩＳＡ分析。（Ｉ）ＯＶＡおよびＯＶＡ＋ＰＥＩで刺激した後のＳＩＩＮＦＥＫＬ提示ネズミＢＭＤＣのフローサイトメトリー分析。Ｂ６０＝６０ｋＤａの分子量を有する分岐鎖ＰＥＩ。ＯＶＡ＝オボアルブミン。ＭＳＲは、本明細書の図面を通してＭＰＳ（メソ多孔性シリカ）と互換的に使用されうる。
【図１ＤＥ】図１Ａ〜Ｉは、ＰＥＩが、メソ多孔性シリカロッド（ＭＳＲ）内にｉｎ  ｖｉｔｒｏで吸収されることができること、ならびにＰＥＩが、ネズミＢＭＤＣおよびヒトＤＣをｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化することを示すグラフである。（Ａ）様々な濃度のＰＥＩで１８時間刺激した後のＢＭＤＣにおける主要組織適合性複合体クラスＩＩ（ＭＨＣ−ＩＩ）および分化抗原群８６（ＣＤ８６）発現のフローサイトメトリー分析。（Ｂ）および（Ｃ）様々な濃度のＰＥＩで１８時間刺激した後の骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）上清中のＴＮＦ−αおよびＩＬ−６濃度の酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）分析。（Ｄ）ＭＳＲへのＰＥＩの装填効率。（Ｅ）様々な濃度のＰＥＩ−ＭＳＲで１８時間刺激した後のＢＭＤＣにおけるＭＨＣ−ＩＩおよびＣＤ８６発現のフローサイトメトリー分析。（Ｆ）様々な濃度のＰＥＩ−ＭＳＲで１８時間刺激した後のＢＭＤＣ上清中の腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）濃度のＥＬＩＳＡ分析。ＰＢＳ＝リン酸緩衝食塩水；ＭＰＳ＝メソ多孔性シリカ；Ｌ２５＝２５ｋＤａの分子量を有する直鎖ＰＥＩ。（Ｇ）様々な濃度のＰＥＩをＴＬＲ５レポーター細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ＨＥＫ  Ｂｌｕｅ  ＴＬＲ−５）に加え、活性をヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）−Ｂｌｕｅ検出（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を使用してモニタリングした。（Ｈ）ＭＳＲ−ＰＥＩで刺激した後のネズミＢＭＤＣ上清中のＴＮＦ−α濃度のＥＬＩＳＡ分析。（Ｉ）ＯＶＡおよびＯＶＡ＋ＰＥＩで刺激した後のＳＩＩＮＦＥＫＬ提示ネズミＢＭＤＣのフローサイトメトリー分析。Ｂ６０＝６０ｋＤａの分子量を有する分岐鎖ＰＥＩ。ＯＶＡ＝オボアルブミン。ＭＳＲは、本明細書の図面を通してＭＰＳ（メソ多孔性シリカ）と互換的に使用されうる。
【図１ＦＧ】図１Ａ〜Ｉは、ＰＥＩが、メソ多孔性シリカロッド（ＭＳＲ）内にｉｎ  ｖｉｔｒｏで吸収されることができること、ならびにＰＥＩが、ネズミＢＭＤＣおよびヒトＤＣをｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化することを示すグラフである。（Ａ）様々な濃度のＰＥＩで１８時間刺激した後のＢＭＤＣにおける主要組織適合性複合体クラスＩＩ（ＭＨＣ−ＩＩ）および分化抗原群８６（ＣＤ８６）発現のフローサイトメトリー分析。（Ｂ）および（Ｃ）様々な濃度のＰＥＩで１８時間刺激した後の骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）上清中のＴＮＦ−αおよびＩＬ−６濃度の酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）分析。（Ｄ）ＭＳＲへのＰＥＩの装填効率。（Ｅ）様々な濃度のＰＥＩ−ＭＳＲで１８時間刺激した後のＢＭＤＣにおけるＭＨＣ−ＩＩおよびＣＤ８６発現のフローサイトメトリー分析。（Ｆ）様々な濃度のＰＥＩ−ＭＳＲで１８時間刺激した後のＢＭＤＣ上清中の腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）濃度のＥＬＩＳＡ分析。ＰＢＳ＝リン酸緩衝食塩水；ＭＰＳ＝メソ多孔性シリカ；Ｌ２５＝２５ｋＤａの分子量を有する直鎖ＰＥＩ。（Ｇ）様々な濃度のＰＥＩをＴＬＲ５レポーター細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ＨＥＫ  Ｂｌｕｅ  ＴＬＲ−５）に加え、活性をヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）−Ｂｌｕｅ検出（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を使用してモニタリングした。（Ｈ）ＭＳＲ−ＰＥＩで刺激した後のネズミＢＭＤＣ上清中のＴＮＦ−α濃度のＥＬＩＳＡ分析。（Ｉ）ＯＶＡおよびＯＶＡ＋ＰＥＩで刺激した後のＳＩＩＮＦＥＫＬ提示ネズミＢＭＤＣのフローサイトメトリー分析。Ｂ６０＝６０ｋＤａの分子量を有する分岐鎖ＰＥＩ。ＯＶＡ＝オボアルブミン。ＭＳＲは、本明細書の図面を通してＭＰＳ（メソ多孔性シリカ）と互換的に使用されうる。
【図１Ｈ】図１Ａ〜Ｉは、ＰＥＩが、メソ多孔性シリカロッド（ＭＳＲ）内にｉｎ  ｖｉｔｒｏで吸収されることができること、ならびにＰＥＩが、ネズミＢＭＤＣおよびヒトＤＣをｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化することを示すグラフである。（Ａ）様々な濃度のＰＥＩで１８時間刺激した後のＢＭＤＣにおける主要組織適合性複合体クラスＩＩ（ＭＨＣ−ＩＩ）および分化抗原群８６（ＣＤ８６）発現のフローサイトメトリー分析。（Ｂ）および（Ｃ）様々な濃度のＰＥＩで１８時間刺激した後の骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）上清中のＴＮＦ−αおよびＩＬ−６濃度の酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）分析。（Ｄ）ＭＳＲへのＰＥＩの装填効率。（Ｅ）様々な濃度のＰＥＩ−ＭＳＲで１８時間刺激した後のＢＭＤＣにおけるＭＨＣ−ＩＩおよびＣＤ８６発現のフローサイトメトリー分析。（Ｆ）様々な濃度のＰＥＩ−ＭＳＲで１８時間刺激した後のＢＭＤＣ上清中の腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）濃度のＥＬＩＳＡ分析。ＰＢＳ＝リン酸緩衝食塩水；ＭＰＳ＝メソ多孔性シリカ；Ｌ２５＝２５ｋＤａの分子量を有する直鎖ＰＥＩ。（Ｇ）様々な濃度のＰＥＩをＴＬＲ５レポーター細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ＨＥＫ  Ｂｌｕｅ  ＴＬＲ−５）に加え、活性をヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）−Ｂｌｕｅ検出（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を使用してモニタリングした。（Ｈ）ＭＳＲ−ＰＥＩで刺激した後のネズミＢＭＤＣ上清中のＴＮＦ−α濃度のＥＬＩＳＡ分析。（Ｉ）ＯＶＡおよびＯＶＡ＋ＰＥＩで刺激した後のＳＩＩＮＦＥＫＬ提示ネズミＢＭＤＣのフローサイトメトリー分析。Ｂ６０＝６０ｋＤａの分子量を有する分岐鎖ＰＥＩ。ＯＶＡ＝オボアルブミン。ＭＳＲは、本明細書の図面を通してＭＰＳ（メソ多孔性シリカ）と互換的に使用されうる。
【図１Ｉ】図１Ａ〜Ｉは、ＰＥＩが、メソ多孔性シリカロッド（ＭＳＲ）内にｉｎ  ｖｉｔｒｏで吸収されることができること、ならびにＰＥＩが、ネズミＢＭＤＣおよびヒトＤＣをｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化することを示すグラフである。（Ａ）様々な濃度のＰＥＩで１８時間刺激した後のＢＭＤＣにおける主要組織適合性複合体クラスＩＩ（ＭＨＣ−ＩＩ）および分化抗原群８６（ＣＤ８６）発現のフローサイトメトリー分析。（Ｂ）および（Ｃ）様々な濃度のＰＥＩで１８時間刺激した後の骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）上清中のＴＮＦ−αおよびＩＬ−６濃度の酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）分析。（Ｄ）ＭＳＲへのＰＥＩの装填効率。（Ｅ）様々な濃度のＰＥＩ−ＭＳＲで１８時間刺激した後のＢＭＤＣにおけるＭＨＣ−ＩＩおよびＣＤ８６発現のフローサイトメトリー分析。（Ｆ）様々な濃度のＰＥＩ−ＭＳＲで１８時間刺激した後のＢＭＤＣ上清中の腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）濃度のＥＬＩＳＡ分析。ＰＢＳ＝リン酸緩衝食塩水；ＭＰＳ＝メソ多孔性シリカ；Ｌ２５＝２５ｋＤａの分子量を有する直鎖ＰＥＩ。（Ｇ）様々な濃度のＰＥＩをＴＬＲ５レポーター細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ＨＥＫ  Ｂｌｕｅ  ＴＬＲ−５）に加え、活性をヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）−Ｂｌｕｅ検出（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を使用してモニタリングした。（Ｈ）ＭＳＲ−ＰＥＩで刺激した後のネズミＢＭＤＣ上清中のＴＮＦ−α濃度のＥＬＩＳＡ分析。（Ｉ）ＯＶＡおよびＯＶＡ＋ＰＥＩで刺激した後のＳＩＩＮＦＥＫＬ提示ネズミＢＭＤＣのフローサイトメトリー分析。Ｂ６０＝６０ｋＤａの分子量を有する分岐鎖ＰＥＩ。ＯＶＡ＝オボアルブミン。ＭＳＲは、本明細書の図面を通してＭＰＳ（メソ多孔性シリカ）と互換的に使用されうる。
【００７３】
【図２Ａ】図２Ａ〜Ｈは、ＭＳＲワクチンにおけるＰＥＩがＢＭＤＣの活性化およびトラフィッキングを増強することを示すグラフである。図２Ｉは、一連のＭＲＳの画像である。（Ａ）ＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）の概略図。（Ｂ）免疫化後３日目の外植されたワクチン部位における総細胞数。免疫化後３日目にワクチン部位に動員されたＣＤ１１ｃ＋ＣＤ８６＋活性化ＤＣ（Ｃ）、ＣＤ１１ｃ＋ＣＣＲ７＋ＬＮホーミングＤＣ（Ｄ）、およびオボアルブミン（ＯＶＡ）モデル抗原ペプチドＳＩＩＮＦＥＫＬ提示ＤＣ（Ｅ）の数。（Ｆ）免疫化後３日目および５日目の流入領域リンパ節（ｄＬＮ）における総細胞数。免疫化後３日目および５日目のｄＬＮにおけるＣＤ１１ｃ＋ＣＤ８６＋またはＣＤ１１ｃ＋ＭＨＣ−ＩＩ＋活性化ＤＣ（Ｇ）、ならびに抗原提示ＤＣ（Ｈ）の数。（Ｉ）ローダミン−ＰＥＩおよびＡＦ４８８−ＯＶＡを装填したＭＳＲの蛍光顕微鏡画像。Ｖ＝ＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、１００μｇの抗原（ＯＶＡタンパク質）；ＶＰ＝ＰＥＩを含むＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１０μｇのＰＥＩ、１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、１００μｇの抗原（ＯＶＡタンパク質）。１００μｇのＯＶＡタンパク質をこれらの実験のために使用した。抗原を、ＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。簡単に述べると、ＰＥＩを、３７℃で１５分間、ＭＰＳに吸着させ、ＰＥＩ−ＭＰＳを作製した。次いで１００μｇの抗原を、ＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。
【図２ＢＣＤＥ】図２Ａ〜Ｈは、ＭＳＲワクチンにおけるＰＥＩがＢＭＤＣの活性化およびトラフィッキングを増強することを示すグラフである。図２Ｉは、一連のＭＲＳの画像である。（Ａ）ＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）の概略図。（Ｂ）免疫化後３日目の外植されたワクチン部位における総細胞数。免疫化後３日目にワクチン部位に動員されたＣＤ１１ｃ＋ＣＤ８６＋活性化ＤＣ（Ｃ）、ＣＤ１１ｃ＋ＣＣＲ７＋ＬＮホーミングＤＣ（Ｄ）、およびオボアルブミン（ＯＶＡ）モデル抗原ペプチドＳＩＩＮＦＥＫＬ提示ＤＣ（Ｅ）の数。（Ｆ）免疫化後３日目および５日目の流入領域リンパ節（ｄＬＮ）における総細胞数。免疫化後３日目および５日目のｄＬＮにおけるＣＤ１１ｃ＋ＣＤ８６＋またはＣＤ１１ｃ＋ＭＨＣ−ＩＩ＋活性化ＤＣ（Ｇ）、ならびに抗原提示ＤＣ（Ｈ）の数。（Ｉ）ローダミン−ＰＥＩおよびＡＦ４８８−ＯＶＡを装填したＭＳＲの蛍光顕微鏡画像。Ｖ＝ＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、１００μｇの抗原（ＯＶＡタンパク質）；ＶＰ＝ＰＥＩを含むＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１０μｇのＰＥＩ、１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、１００μｇの抗原（ＯＶＡタンパク質）。１００μｇのＯＶＡタンパク質をこれらの実験のために使用した。抗原を、ＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。簡単に述べると、ＰＥＩを、３７℃で１５分間、ＭＰＳに吸着させ、ＰＥＩ−ＭＰＳを作製した。次いで１００μｇの抗原を、ＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。
【図２ＦＧＨ】図２Ａ〜Ｈは、ＭＳＲワクチンにおけるＰＥＩがＢＭＤＣの活性化およびトラフィッキングを増強することを示すグラフである。図２Ｉは、一連のＭＲＳの画像である。（Ａ）ＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）の概略図。（Ｂ）免疫化後３日目の外植されたワクチン部位における総細胞数。免疫化後３日目にワクチン部位に動員されたＣＤ１１ｃ＋ＣＤ８６＋活性化ＤＣ（Ｃ）、ＣＤ１１ｃ＋ＣＣＲ７＋ＬＮホーミングＤＣ（Ｄ）、およびオボアルブミン（ＯＶＡ）モデル抗原ペプチドＳＩＩＮＦＥＫＬ提示ＤＣ（Ｅ）の数。（Ｆ）免疫化後３日目および５日目の流入領域リンパ節（ｄＬＮ）における総細胞数。免疫化後３日目および５日目のｄＬＮにおけるＣＤ１１ｃ＋ＣＤ８６＋またはＣＤ１１ｃ＋ＭＨＣ−ＩＩ＋活性化ＤＣ（Ｇ）、ならびに抗原提示ＤＣ（Ｈ）の数。（Ｉ）ローダミン−ＰＥＩおよびＡＦ４８８−ＯＶＡを装填したＭＳＲの蛍光顕微鏡画像。Ｖ＝ＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、１００μｇの抗原（ＯＶＡタンパク質）；ＶＰ＝ＰＥＩを含むＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１０μｇのＰＥＩ、１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、１００μｇの抗原（ＯＶＡタンパク質）。１００μｇのＯＶＡタンパク質をこれらの実験のために使用した。抗原を、ＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。簡単に述べると、ＰＥＩを、３７℃で１５分間、ＭＰＳに吸着させ、ＰＥＩ−ＭＰＳを作製した。次いで１００μｇの抗原を、ＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。
【図２Ｉ】図２Ａ〜Ｈは、ＭＳＲワクチンにおけるＰＥＩがＢＭＤＣの活性化およびトラフィッキングを増強することを示すグラフである。図２Ｉは、一連のＭＲＳの画像である。（Ａ）ＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）の概略図。（Ｂ）免疫化後３日目の外植されたワクチン部位における総細胞数。免疫化後３日目にワクチン部位に動員されたＣＤ１１ｃ＋ＣＤ８６＋活性化ＤＣ（Ｃ）、ＣＤ１１ｃ＋ＣＣＲ７＋ＬＮホーミングＤＣ（Ｄ）、およびオボアルブミン（ＯＶＡ）モデル抗原ペプチドＳＩＩＮＦＥＫＬ提示ＤＣ（Ｅ）の数。（Ｆ）免疫化後３日目および５日目の流入領域リンパ節（ｄＬＮ）における総細胞数。免疫化後３日目および５日目のｄＬＮにおけるＣＤ１１ｃ＋ＣＤ８６＋またはＣＤ１１ｃ＋ＭＨＣ−ＩＩ＋活性化ＤＣ（Ｇ）、ならびに抗原提示ＤＣ（Ｈ）の数。（Ｉ）ローダミン−ＰＥＩおよびＡＦ４８８−ＯＶＡを装填したＭＳＲの蛍光顕微鏡画像。Ｖ＝ＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、１００μｇの抗原（ＯＶＡタンパク質）；ＶＰ＝ＰＥＩを含むＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１０μｇのＰＥＩ、１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、１００μｇの抗原（ＯＶＡタンパク質）。１００μｇのＯＶＡタンパク質をこれらの実験のために使用した。抗原を、ＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。簡単に述べると、ＰＥＩを、３７℃で１５分間、ＭＰＳに吸着させ、ＰＥＩ−ＭＰＳを作製した。次いで１００μｇの抗原を、ＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。
【００７４】
【図３ＡＢＣ】図３Ａ〜Ｆは、ＭＳＲワクチン中のＰＥＩが、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞応答を増強することを示すタイムラインおよびグラフである。（Ａ）免疫化の概略図ならびに７日目の末梢血中のテトラマー＋Ｔ細胞の分析およびパーセンテージ。（Ｂ）７日目の末梢血中のＳＩＩＮＦＥＫＬで刺激した後のＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｃ）１１日目のワクチン部位でのＣＤ８＋エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）のＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）に対する比。（Ｄ）７日目の末梢血中のテトラマー＋Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｅ）様々なタイプのＰＥＩを含有するＭＳＲ−ＰＥＩワクチンで免疫化後７日目の末梢血中のＳＩＩＮＦＥＫＬで刺激した後のＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｆ）様々な用量のＢ６０  ＰＥＩを含有するＭＳＲ−ＰＥＩワクチンで免疫化後７日目の末梢血中のＳＩＩＮＦＥＫＬで刺激した後のＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞のパーセンテージ。Ｌ２＝２ｋＤａの分子量を有する直鎖ＰＥＩ；Ｂ２＝２ｋＤａの分子量を有する分岐鎖ＰＥＩ；Ｎ＝ナイーブ動物；Ｖ＝ＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、１００μｇの抗原（ＯＶＡタンパク質）；ＶＰ＝ＰＥＩを含むＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１０μｇのＰＥＩ、１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、１００μｇの抗原（ＯＶＡタンパク質）。１００μｇのＯＶＡタンパク質をこれらの実験のために使用した。抗原を、ＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。簡単に述べると、ＰＥＩを、３７℃で１５分間、ＭＰＳに吸着させて、ＰＥＩ−ＭＰＳを作製した。次いで、１００μｇの抗原を、ＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。
【図３ＤＥＦ】図３Ａ〜Ｆは、ＭＳＲワクチン中のＰＥＩが、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞応答を増強することを示すタイムラインおよびグラフである。（Ａ）免疫化の概略図ならびに７日目の末梢血中のテトラマー＋Ｔ細胞の分析およびパーセンテージ。（Ｂ）７日目の末梢血中のＳＩＩＮＦＥＫＬで刺激した後のＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｃ）１１日目のワクチン部位でのＣＤ８＋エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）のＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）に対する比。（Ｄ）７日目の末梢血中のテトラマー＋Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｅ）様々なタイプのＰＥＩを含有するＭＳＲ−ＰＥＩワクチンで免疫化後７日目の末梢血中のＳＩＩＮＦＥＫＬで刺激した後のＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｆ）様々な用量のＢ６０  ＰＥＩを含有するＭＳＲ−ＰＥＩワクチンで免疫化後７日目の末梢血中のＳＩＩＮＦＥＫＬで刺激した後のＩＦＮ−γ＋Ｔ細胞のパーセンテージ。Ｌ２＝２ｋＤａの分子量を有する直鎖ＰＥＩ；Ｂ２＝２ｋＤａの分子量を有する分岐鎖ＰＥＩ；Ｎ＝ナイーブ動物；Ｖ＝ＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、１００μｇの抗原（ＯＶＡタンパク質）；ＶＰ＝ＰＥＩを含むＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１０μｇのＰＥＩ、１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、１００μｇの抗原（ＯＶＡタンパク質）。１００μｇのＯＶＡタンパク質をこれらの実験のために使用した。抗原を、ＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。簡単に述べると、ＰＥＩを、３７℃で１５分間、ＭＰＳに吸着させて、ＰＥＩ−ＭＰＳを作製した。次いで、１００μｇの抗原を、ＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。
【００７５】
【図４Ａ】図４Ａ〜Ｃは、ＭＳＲ  ＰＥＩ−ＣｐＧワクチンが、増強されたＣＤ８  Ｔ細胞応答を導かないことを示すグラフである。（Ａ）ＭＳＲ−ＰＥＩからの累積的ＣｐＧ放出。（Ｂ）ＭＳＲワクチン（Ｖ）、１μｇのＧＭ−ＣＳＦと１００μｇのＯＶＡと１０μｇのＰＥＩに吸着させた１００μｇのＣｐＧとを含有するＭＳＲワクチン（Ｖ  ＰＣ）、および１μｇのＧＭ−ＣＳＦと１０μｇのＰＥＩに吸着させた１００μｇのオボアルブミン（ＯＶＡ）と１００μｇのＣｐＧとを含有するＭＳＲワクチン（Ｖ  ＰＯ）で免疫化した後の末梢血中のＩＦＮ＋  Ｔ細胞のパーセンテージ。驚くべきことに、抗原（ＯＶＡ）をＰＥＩに吸収（つまり、静電相互作用を介して付着）させた場合の方が、ＣｐＧ−ＯＤＮをＰＥＩに吸収させた場合よりも、免疫刺激が大きかった。（Ｃ）１μｇのＧＭ−ＣＳＦと１００μｇのＯＶＡと様々な量のＢ６０  ＰＥＩに吸着させた１００μｇのＣｐＧとを含有するＭＳＲワクチンで免疫化した後の末梢血中のテトラマー＋Ｔ細胞のパーセント。
【図４ＢＣ】図４Ａ〜Ｃは、ＭＳＲ  ＰＥＩ−ＣｐＧワクチンが、増強されたＣＤ８  Ｔ細胞応答を導かないことを示すグラフである。（Ａ）ＭＳＲ−ＰＥＩからの累積的ＣｐＧ放出。（Ｂ）ＭＳＲワクチン（Ｖ）、１μｇのＧＭ−ＣＳＦと１００μｇのＯＶＡと１０μｇのＰＥＩに吸着させた１００μｇのＣｐＧとを含有するＭＳＲワクチン（Ｖ  ＰＣ）、および１μｇのＧＭ−ＣＳＦと１０μｇのＰＥＩに吸着させた１００μｇのオボアルブミン（ＯＶＡ）と１００μｇのＣｐＧとを含有するＭＳＲワクチン（Ｖ  ＰＯ）で免疫化した後の末梢血中のＩＦＮ＋  Ｔ細胞のパーセンテージ。驚くべきことに、抗原（ＯＶＡ）をＰＥＩに吸収（つまり、静電相互作用を介して付着）させた場合の方が、ＣｐＧ−ＯＤＮをＰＥＩに吸収させた場合よりも、免疫刺激が大きかった。（Ｃ）１μｇのＧＭ−ＣＳＦと１００μｇのＯＶＡと様々な量のＢ６０  ＰＥＩに吸着させた１００μｇのＣｐＧとを含有するＭＳＲワクチンで免疫化した後の末梢血中のテトラマー＋Ｔ細胞のパーセント。
【００７６】
【図５ＡＢＣ】図５Ａ〜Ｋは、ＭＳＲ−ＰＥＩワクチンが、ペプチドワクチンの免疫原性および治療有効性を増強することを示すグラフおよびタイムラインである。（Ａ）７日目の末梢血中のテトラマー＋Ｔ細胞のパーセンテージおよび（Ｂ）７日目の末梢血中のＩＦＮγ＋Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｃ）治療的ＴＣ−１皮下腫瘍試験の概略図。（Ｄ）免疫化の２４時間後の血清ＴＮＦ−αのＥＬＩＳＡ分析および（Ｅ）免疫化の２４時間後のＩＦＮ−γのレベルのＥＬＩＳＡ分析。（Ｆ）免疫化の７日後のＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋循環調節性Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｇ）３×１０５個のＴＣ−１を接種したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍成長。マウスをＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）でワクチン接種した。（Ｈ）３×１０５個のＴＣ−１を接種したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍成長。マウスを、５μｇのＰＥＩもしくは２０μｇのＰＥＩのＭＳＲ−ＰＥＩワクチン、またはボーラスワクチン（ボーラス）で処置した。（Ｉ）ＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）で処置した、３×１０５個のＴＣ−１細胞を接種したマウスの生存。（Ｊ）最初の接種の６ヶ月後に３×１０５個の細胞で再チャレンジしたマウスの生存。（Ｋ）ＭＳＲワクチンまたはＭＳＲ−ＰＥＩワクチンでワクチン接種した後の循環調節性Ｔ細胞。Ｎ＝ナイーブ動物；Ｖ＝ＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、５０μｇのＥ７ペプチド；ＶＰ＝ＰＥＩを含むＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１０（または別段の指示があれば具体的用量の）μｇのＰＥＩ、１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、５０μｇのＥ７ペプチド。Ｅ７ペプチドのアミノ酸配列は、ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦＣＣＫＣＤＳＴＬＲＬＣＶＱＳＴＨＶＤＩＲ（配列番号４２）であった。５０μｇのＥ７ペプチドを使用した。ペプチドをＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。
【図５ＤＥＦ】図５Ａ〜Ｋは、ＭＳＲ−ＰＥＩワクチンが、ペプチドワクチンの免疫原性および治療有効性を増強することを示すグラフおよびタイムラインである。（Ａ）７日目の末梢血中のテトラマー＋Ｔ細胞のパーセンテージおよび（Ｂ）７日目の末梢血中のＩＦＮγ＋Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｃ）治療的ＴＣ−１皮下腫瘍試験の概略図。（Ｄ）免疫化の２４時間後の血清ＴＮＦ−αのＥＬＩＳＡ分析および（Ｅ）免疫化の２４時間後のＩＦＮ−γのレベルのＥＬＩＳＡ分析。（Ｆ）免疫化の７日後のＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋循環調節性Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｇ）３×１０５個のＴＣ−１を接種したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍成長。マウスをＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）でワクチン接種した。（Ｈ）３×１０５個のＴＣ−１を接種したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍成長。マウスを、５μｇのＰＥＩもしくは２０μｇのＰＥＩのＭＳＲ−ＰＥＩワクチン、またはボーラスワクチン（ボーラス）で処置した。（Ｉ）ＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）で処置した、３×１０５個のＴＣ−１細胞を接種したマウスの生存。（Ｊ）最初の接種の６ヶ月後に３×１０５個の細胞で再チャレンジしたマウスの生存。（Ｋ）ＭＳＲワクチンまたはＭＳＲ−ＰＥＩワクチンでワクチン接種した後の循環調節性Ｔ細胞。Ｎ＝ナイーブ動物；Ｖ＝ＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、５０μｇのＥ７ペプチド；ＶＰ＝ＰＥＩを含むＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１０（または別段の指示があれば具体的用量の）μｇのＰＥＩ、１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、５０μｇのＥ７ペプチド。Ｅ７ペプチドのアミノ酸配列は、ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦＣＣＫＣＤＳＴＬＲＬＣＶＱＳＴＨＶＤＩＲ（配列番号４２）であった。５０μｇのＥ７ペプチドを使用した。ペプチドをＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。
【図５Ｇ】図５Ａ〜Ｋは、ＭＳＲ−ＰＥＩワクチンが、ペプチドワクチンの免疫原性および治療有効性を増強することを示すグラフおよびタイムラインである。（Ａ）７日目の末梢血中のテトラマー＋Ｔ細胞のパーセンテージおよび（Ｂ）７日目の末梢血中のＩＦＮγ＋Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｃ）治療的ＴＣ−１皮下腫瘍試験の概略図。（Ｄ）免疫化の２４時間後の血清ＴＮＦ−αのＥＬＩＳＡ分析および（Ｅ）免疫化の２４時間後のＩＦＮ−γのレベルのＥＬＩＳＡ分析。（Ｆ）免疫化の７日後のＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋循環調節性Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｇ）３×１０５個のＴＣ−１を接種したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍成長。マウスをＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）でワクチン接種した。（Ｈ）３×１０５個のＴＣ−１を接種したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍成長。マウスを、５μｇのＰＥＩもしくは２０μｇのＰＥＩのＭＳＲ−ＰＥＩワクチン、またはボーラスワクチン（ボーラス）で処置した。（Ｉ）ＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）で処置した、３×１０５個のＴＣ−１細胞を接種したマウスの生存。（Ｊ）最初の接種の６ヶ月後に３×１０５個の細胞で再チャレンジしたマウスの生存。（Ｋ）ＭＳＲワクチンまたはＭＳＲ−ＰＥＩワクチンでワクチン接種した後の循環調節性Ｔ細胞。Ｎ＝ナイーブ動物；Ｖ＝ＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、５０μｇのＥ７ペプチド；ＶＰ＝ＰＥＩを含むＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１０（または別段の指示があれば具体的用量の）μｇのＰＥＩ、１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、５０μｇのＥ７ペプチド。Ｅ７ペプチドのアミノ酸配列は、ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦＣＣＫＣＤＳＴＬＲＬＣＶＱＳＴＨＶＤＩＲ（配列番号４２）であった。５０μｇのＥ７ペプチドを使用した。ペプチドをＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。
【図５Ｈ】図５Ａ〜Ｋは、ＭＳＲ−ＰＥＩワクチンが、ペプチドワクチンの免疫原性および治療有効性を増強することを示すグラフおよびタイムラインである。（Ａ）７日目の末梢血中のテトラマー＋Ｔ細胞のパーセンテージおよび（Ｂ）７日目の末梢血中のＩＦＮγ＋Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｃ）治療的ＴＣ−１皮下腫瘍試験の概略図。（Ｄ）免疫化の２４時間後の血清ＴＮＦ−αのＥＬＩＳＡ分析および（Ｅ）免疫化の２４時間後のＩＦＮ−γのレベルのＥＬＩＳＡ分析。（Ｆ）免疫化の７日後のＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋循環調節性Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｇ）３×１０５個のＴＣ−１を接種したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍成長。マウスをＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）でワクチン接種した。（Ｈ）３×１０５個のＴＣ−１を接種したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍成長。マウスを、５μｇのＰＥＩもしくは２０μｇのＰＥＩのＭＳＲ−ＰＥＩワクチン、またはボーラスワクチン（ボーラス）で処置した。（Ｉ）ＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）で処置した、３×１０５個のＴＣ−１細胞を接種したマウスの生存。（Ｊ）最初の接種の６ヶ月後に３×１０５個の細胞で再チャレンジしたマウスの生存。（Ｋ）ＭＳＲワクチンまたはＭＳＲ−ＰＥＩワクチンでワクチン接種した後の循環調節性Ｔ細胞。Ｎ＝ナイーブ動物；Ｖ＝ＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、５０μｇのＥ７ペプチド；ＶＰ＝ＰＥＩを含むＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１０（または別段の指示があれば具体的用量の）μｇのＰＥＩ、１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、５０μｇのＥ７ペプチド。Ｅ７ペプチドのアミノ酸配列は、ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦＣＣＫＣＤＳＴＬＲＬＣＶＱＳＴＨＶＤＩＲ（配列番号４２）であった。５０μｇのＥ７ペプチドを使用した。ペプチドをＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。
【図５ＩＪ】図５Ａ〜Ｋは、ＭＳＲ−ＰＥＩワクチンが、ペプチドワクチンの免疫原性および治療有効性を増強することを示すグラフおよびタイムラインである。（Ａ）７日目の末梢血中のテトラマー＋Ｔ細胞のパーセンテージおよび（Ｂ）７日目の末梢血中のＩＦＮγ＋Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｃ）治療的ＴＣ−１皮下腫瘍試験の概略図。（Ｄ）免疫化の２４時間後の血清ＴＮＦ−αのＥＬＩＳＡ分析および（Ｅ）免疫化の２４時間後のＩＦＮ−γのレベルのＥＬＩＳＡ分析。（Ｆ）免疫化の７日後のＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋循環調節性Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｇ）３×１０５個のＴＣ−１を接種したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍成長。マウスをＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）でワクチン接種した。（Ｈ）３×１０５個のＴＣ−１を接種したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍成長。マウスを、５μｇのＰＥＩもしくは２０μｇのＰＥＩのＭＳＲ−ＰＥＩワクチン、またはボーラスワクチン（ボーラス）で処置した。（Ｉ）ＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）で処置した、３×１０５個のＴＣ−１細胞を接種したマウスの生存。（Ｊ）最初の接種の６ヶ月後に３×１０５個の細胞で再チャレンジしたマウスの生存。（Ｋ）ＭＳＲワクチンまたはＭＳＲ−ＰＥＩワクチンでワクチン接種した後の循環調節性Ｔ細胞。Ｎ＝ナイーブ動物；Ｖ＝ＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、５０μｇのＥ７ペプチド；ＶＰ＝ＰＥＩを含むＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１０（または別段の指示があれば具体的用量の）μｇのＰＥＩ、１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、５０μｇのＥ７ペプチド。Ｅ７ペプチドのアミノ酸配列は、ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦＣＣＫＣＤＳＴＬＲＬＣＶＱＳＴＨＶＤＩＲ（配列番号４２）であった。５０μｇのＥ７ペプチドを使用した。ペプチドをＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。
【図５Ｋ】図５Ａ〜Ｋは、ＭＳＲ−ＰＥＩワクチンが、ペプチドワクチンの免疫原性および治療有効性を増強することを示すグラフおよびタイムラインである。（Ａ）７日目の末梢血中のテトラマー＋Ｔ細胞のパーセンテージおよび（Ｂ）７日目の末梢血中のＩＦＮγ＋Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｃ）治療的ＴＣ−１皮下腫瘍試験の概略図。（Ｄ）免疫化の２４時間後の血清ＴＮＦ−αのＥＬＩＳＡ分析および（Ｅ）免疫化の２４時間後のＩＦＮ−γのレベルのＥＬＩＳＡ分析。（Ｆ）免疫化の７日後のＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋循環調節性Ｔ細胞のパーセンテージ。（Ｇ）３×１０５個のＴＣ−１を接種したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍成長。マウスをＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）でワクチン接種した。（Ｈ）３×１０５個のＴＣ−１を接種したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍成長。マウスを、５μｇのＰＥＩもしくは２０μｇのＰＥＩのＭＳＲ−ＰＥＩワクチン、またはボーラスワクチン（ボーラス）で処置した。（Ｉ）ＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）で処置した、３×１０５個のＴＣ−１細胞を接種したマウスの生存。（Ｊ）最初の接種の６ヶ月後に３×１０５個の細胞で再チャレンジしたマウスの生存。（Ｋ）ＭＳＲワクチンまたはＭＳＲ−ＰＥＩワクチンでワクチン接種した後の循環調節性Ｔ細胞。Ｎ＝ナイーブ動物；Ｖ＝ＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、５０μｇのＥ７ペプチド；ＶＰ＝ＰＥＩを含むＭＰＳワクチン製剤：５ｍｇのＭＰＳ＋１０（または別段の指示があれば具体的用量の）μｇのＰＥＩ、１μｇのＧＭ−ＣＳＦ、１００μｇのＣｐＧ、５０μｇのＥ７ペプチド。Ｅ７ペプチドのアミノ酸配列は、ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦＣＣＫＣＤＳＴＬＲＬＣＶＱＳＴＨＶＤＩＲ（配列番号４２）であった。５０μｇのＥ７ペプチドを使用した。ペプチドをＰＥＩ−ＭＰＳに吸着させた。
【００７７】
【図６】図６は、例示的なナノ粒子および足場ベースのがんワクチンに関連する非限定的態様を示す図である。
【００７８】
【図７】図７は、免疫細胞をプログラムするための非限定的な生体材料システムを示す図である。
【００７９】
【図８】図８は、分岐鎖、直鎖およびデンドリマーＰＥＩの非限定的な例を示す図である。破線は、例示的な構造が連続しうることを示す。ＰＥＩは、直鎖、分岐鎖またはデンドリマー、および高または低分子量種を含む様々な形態で合成されるカチオン性ポリマーである。
【００８０】
【図９Ａ】図９Ａは、ＰＥＩによる自然および適応免疫活性化の非限定的な態様を示す一連のイラストであり、図９Ｂは、ＰＥＩを含むＭＰＳが免疫活性化を増加させることを示す一組のグラフである。Ｂ＝Ｂ細胞；Ｔｈ２＝ヘルパーＴ２細胞。
【図９Ｂ】図９Ａは、ＰＥＩによる自然および適応免疫活性化の非限定的な態様を示す一連のイラストであり、図９Ｂは、ＰＥＩを含むＭＰＳが免疫活性化を増加させることを示す一組のグラフである。Ｂ＝Ｂ細胞；Ｔｈ２＝ヘルパーＴ２細胞。
【００８１】
【図１０】図１０は、クリオゲル形成の非限定的な例を示すイラストである。クリオゲルは、形状記憶特性を有するマクロ多孔性足場である。ヒドロゲルは、それらの構造的完全性を維持しながら、大量の水を吸収することができる３次元（３Ｄ）ネットワークである。ヒドロゲルは、典型的にはナノ多孔性ネットワーク構造を示すが、細胞浸潤および展開を可能にするため、ならびに細胞の付着および相互作用のための増大した表面積を提供するためには、大きな相互接続細孔（＞１０μｍ）を有する親水性ネットワークを使用することが有利である。マクロ多孔性ヒドロゲル足場を作製するための１つの技術は、クリオゲル化である。例示的な合成プロセスでは、（ｉ）アルギネート（天然に存在する生体適合性多糖）を、ラジカル重合を可能にするように化学的に修飾する、（ｉｉ）メタクリル化（ＭＡ）−アルギネートを過硫酸アンモニウム（ＡＰＳ）／テトラメチルエチレンジアミン（ＴＥＭＥＤ）開始剤系に添加した後−２０℃でインキュベートして氷晶の形成を可能にする、（ｉｉｉ）氷晶形成での相分離ステップ、フリーラジカル架橋ステップ、および重合、それに続く氷晶（ポロゲン）融解ステップを介してクリオゲル化プロセスを行って、相互接続マクロ多孔性クリオゲルネットワークを形成する、ならびに（ｉｖ）カルシウムステップを行う。ＭＡ−アルギネートクリオゲルは、大きいレベルの歪みを受け入れることができる一方、そのサイズの一画に容易に圧縮され、送達用の手術針を通して注射することができる。皮下組織に一旦注射されると、これらの足場はすぐに元の記憶形状を回復する。
【００８２】
【図１１Ａ】図１１Ａは、ワクチンプラットフォームとしてのＭＳＲの使用を示すイラストである。図１１Ｂは、ＭＳＲの注射後のマクロ多孔性足場形成を示す一組の画像である。図１１Ｃは、ＭＰＳワクチン部位浸潤を示すグラフである。メソ多孔性シリカは、大きな表面積によって特徴付けられる。合成非晶質シリカは、臨床応用のための多目的プラットフォームとしてのその発展を支える優れた生体適合性を有することが公知である。針で注射された高アスペクト比ＭＳＲは、ｉｎ  ｖｉｖｏで自発構築して、宿主免疫細胞のための３Ｄ細胞微小環境を提供するマクロ多孔性構造を形成する。樹状細胞の動員およびその後のリンパ節へのホーミングは足場からのシグナル伝達分子の持続放出によってモジュレートすることができる。ＭＳＲは注射可能であり、外科的に移植しなければならない足場に関する制限を克服する。ＭＳＲは、体内で樹状細胞のための３Ｄ微小環境を直接構築することができる。一部の実施形態では、１個の免疫細胞のサイズより数桁大きい長いロッド様微粒子が使用される。ある特定の実施形態では、これらの微粒子は皮膚などの組織へ注射され、それらのサイズにより、注射部位から拡散しない。様々な実施形態では、ロッドは、高アスペクト比であることによって、互いの上に積み重なり、細胞浸潤を可能にする粒子間の細孔を形成する。一部の実施形態では、メソ多孔性シリカを使用してマイクロロッドが作製される。ある特定の実施形態では、ワクチンは、標準的な２３ゲージ（Ｇ）の針を介して注射される。図１１ＡおよびＢに示されるように、そのようなロッドを動物に皮膚下に注射した後、足場が速やかに形成され、数百万個の免疫細胞を足場に浸潤させることができた。非限定的な例では、ＧＭ−ＣＳＦおよびＣｐＧを組み込んで宿主ＤＣを動員および活性化し、ＭＰＳワクチンを製剤化してもよい。様々な実施形態では、ワクチンは分解性であり、一般的に約２ヶ月以内に注射部位から除去される。一部の実施形態では、そのようなＭＰＳワクチンシステムを使用して、体液性およびＴ細胞駆動経路の両方を通じた抗腫瘍免疫を生成する。
【図１１Ｂ】図１１Ａは、ワクチンプラットフォームとしてのＭＳＲの使用を示すイラストである。図１１Ｂは、ＭＳＲの注射後のマクロ多孔性足場形成を示す一組の画像である。図１１Ｃは、ＭＰＳワクチン部位浸潤を示すグラフである。メソ多孔性シリカは、大きな表面積によって特徴付けられる。合成非晶質シリカは、臨床応用のための多目的プラットフォームとしてのその発展を支える優れた生体適合性を有することが公知である。針で注射された高アスペクト比ＭＳＲは、ｉｎ  ｖｉｖｏで自発構築して、宿主免疫細胞のための３Ｄ細胞微小環境を提供するマクロ多孔性構造を形成する。樹状細胞の動員およびその後のリンパ節へのホーミングは足場からのシグナル伝達分子の持続放出によってモジュレートすることができる。ＭＳＲは注射可能であり、外科的に移植しなければならない足場に関する制限を克服する。ＭＳＲは、体内で樹状細胞のための３Ｄ微小環境を直接構築することができる。一部の実施形態では、１個の免疫細胞のサイズより数桁大きい長いロッド様微粒子が使用される。ある特定の実施形態では、これらの微粒子は皮膚などの組織へ注射され、それらのサイズにより、注射部位から拡散しない。様々な実施形態では、ロッドは、高アスペクト比であることによって、互いの上に積み重なり、細胞浸潤を可能にする粒子間の細孔を形成する。一部の実施形態では、メソ多孔性シリカを使用してマイクロロッドが作製される。ある特定の実施形態では、ワクチンは、標準的な２３ゲージ（Ｇ）の針を介して注射される。図１１ＡおよびＢに示されるように、そのようなロッドを動物に皮膚下に注射した後、足場が速やかに形成され、数百万個の免疫細胞を足場に浸潤させることができた。非限定的な例では、ＧＭ−ＣＳＦおよびＣｐＧを組み込んで宿主ＤＣを動員および活性化し、ＭＰＳワクチンを製剤化してもよい。様々な実施形態では、ワクチンは分解性であり、一般的に約２ヶ月以内に注射部位から除去される。一部の実施形態では、そのようなＭＰＳワクチンシステムを使用して、体液性およびＴ細胞駆動経路の両方を通じた抗腫瘍免疫を生成する。
【図１１Ｃ】図１１Ａは、ワクチンプラットフォームとしてのＭＳＲの使用を示すイラストである。図１１Ｂは、ＭＳＲの注射後のマクロ多孔性足場形成を示す一組の画像である。図１１Ｃは、ＭＰＳワクチン部位浸潤を示すグラフである。メソ多孔性シリカは、大きな表面積によって特徴付けられる。合成非晶質シリカは、臨床応用のための多目的プラットフォームとしてのその発展を支える優れた生体適合性を有することが公知である。針で注射された高アスペクト比ＭＳＲは、ｉｎ  ｖｉｖｏで自発構築して、宿主免疫細胞のための３Ｄ細胞微小環境を提供するマクロ多孔性構造を形成する。樹状細胞の動員およびその後のリンパ節へのホーミングは足場からのシグナル伝達分子の持続放出によってモジュレートすることができる。ＭＳＲは注射可能であり、外科的に移植しなければならない足場に関する制限を克服する。ＭＳＲは、体内で樹状細胞のための３Ｄ微小環境を直接構築することができる。一部の実施形態では、１個の免疫細胞のサイズより数桁大きい長いロッド様微粒子が使用される。ある特定の実施形態では、これらの微粒子は皮膚などの組織へ注射され、それらのサイズにより、注射部位から拡散しない。様々な実施形態では、ロッドは、高アスペクト比であることによって、互いの上に積み重なり、細胞浸潤を可能にする粒子間の細孔を形成する。一部の実施形態では、メソ多孔性シリカを使用してマイクロロッドが作製される。ある特定の実施形態では、ワクチンは、標準的な２３ゲージ（Ｇ）の針を介して注射される。図１１ＡおよびＢに示されるように、そのようなロッドを動物に皮膚下に注射した後、足場が速やかに形成され、数百万個の免疫細胞を足場に浸潤させることができた。非限定的な例では、ＧＭ−ＣＳＦおよびＣｐＧを組み込んで宿主ＤＣを動員および活性化し、ＭＰＳワクチンを製剤化してもよい。様々な実施形態では、ワクチンは分解性であり、一般的に約２ヶ月以内に注射部位から除去される。一部の実施形態では、そのようなＭＰＳワクチンシステムを使用して、体液性およびＴ細胞駆動経路の両方を通じた抗腫瘍免疫を生成する。
【００８３】
【図１２】図１２は、ＰＥＩが、２４時間後にＢＭＤＣによって完全に取り込まれることを示すグラフである。骨髄由来ＤＣ（ＢＭＤＣ）を、ローダミン標識ＰＥＩで０、２、６、２４または７２時間刺激し、フローサイトメトリーを使用して取り込みを数量化した。
【００８４】
【図１３】図１３は、漸増用量の遊離ＰＥＩで処置したＢＭＤＣが、増加した炎症誘発性プロファイルを示すことを示す一連のグラフである。様々な濃度のＰＥＩで１８時間刺激した後のＢＭＤＣ上清中のＴＮＦ−α、ＩＬ−６およびＩＦＮ−γ濃度のＥＬＩＳＡ分析。
【００８５】
【図１４】図１４は、漸増用量の遊離ＰＥＩで処置されたＢＭＤＣが、増加した活性化および成熟を示すことを示す、グラフおよび一組の蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）チャートである。様々な濃度のＰＥＩで１８時間刺激した後のＢＭＤＣでのＣＤ１１ｃおよびＣＤ８６発現のフローサイトメトリー分析を示す。データは、Ｌ２５Ｋ群についての、およびＢ６０Ｋの最初の２回の用量についての明確な線形上昇傾向を示す。Ｌ１＝２５ＫＤの直鎖ＰＥＩ、１μｇ；Ｌ７＝２５ｋＤの直鎖ＰＥＩ、７μｇ；Ｂ１＝６０ｋＤの分岐鎖ＰＥＩ、１μｇ；Ｂ７＝６０ｋＤの分岐鎖ＰＥＩ、７μｇ。
【００８６】
【図１５】図１５は、クリオゲルへのＰＥＩ装填の非限定的最適化に関連する一連の画像およびグラフである。直接播種および浸漬方法を使用した。ＰＥＩを強靭なアルギネートクリオゲルへ装填する２つの方法を検討した。ＰＥＩを小体積で希釈し、クリオゲルへ直接加えた（播種方法）。代替的に、アルギネートクリオゲルを最初に部分的に崩壊させた後、小体積のＰＥＩで再水和した（浸漬方法）。「浸漬」方法：遊離の溶液をクリオゲルから抽出して部分的に細孔を崩壊させた後、ＰＥＩ含有溶液内に滴下し、細孔の増大を利用して、静電相互作用を介してＰＥＩを組み込む。「浸漬」方法の非限定的な例：（ｉ）所望の質量のＰＥＩを含有する３０μＬのＰＥＩ溶液を作製する（ゲルごとに１つのエッペンドルフ管）；（ｉｉ）ゲルの周りの約２５μＬの水を除去する；（ｉｉｉ）ゲルをそれぞれ３０μＬのＰＥＩ溶液に滴下する；（ｉｖ）３７℃で３０分間インキュベートする；（ｉｖ）ゲルを回収し、１００μＬの蒸留（ｄＨ２Ｏ）で洗浄し、ペトリ皿に入れる；（ｖ）１００μＬの洗液およびゲル残渣を元のエッペンドルフ管内に格納し、失われたＰＥＩの量を数量化する。クリオゲル中の標識されていないＰＥＩ装填効率の数量化は、ＬａｖａＰｅｐ（商標）ペプチド数量化キット（Ｇｅｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して実施した。「播種」方法の非限定的な例では、小体積（例えば、１〜３０μｌ）のＰＥＩ溶液を直接ゲルに加えた。
【００８７】
【図１６】図１６ＡおよびＢは、ＰＥＩを装填したクリオゲルに封入されたＢＭＤＣが、炎症誘発性プロファイルを増加させたことを示すグラフである。ブランクのクリオゲルにおいて活性化もあるが、おそらくは免疫応答を誘発しうる（ＰＢＳまたは培地との相互作用による）リン酸カルシウム微粒子を形成する過剰のカルシウムから生じるものである。（Ａ）ＢＭＤＣをアルギネートクリオゲル−ＰＥＩで１８時間培養し、ＣＤ１１ｃおよびＣＤ８６の表面発現を、フローサイトメトリーを使用して分析した。（Ｂ）ＢＭＤＣをアルギネートクリオゲル−ＰＥＩで１８時間培養し、上清をＴＮＦ−α産生について測定した。
【００８８】
【図１７】図１７は、ＰＥＩを装填したクリオゲルに封入されたＢＭＤＣが、増加した炎症誘発性プロファイルを示しうることを示す一組のグラフである。右側のパネル：ＢＭＤＣを、アルギネートクリオゲル−ＰＥＩ（示されている「播種」または「浸漬」方法を使用して合成）で１８時間培養し、上清を回収し、ＥＬＩＳＡを使用してＴＮＦ−αについて分析した。
【００８９】
【図１８】図１８ＡおよびＢは、ＰＥＩを装填したＭＰＳに封入されたＢＭＤＣが、増加した活性化、成熟および炎症誘発性プロファイルを示すことを示すグラフである。（Ａ）様々な濃度のＰＥＩ−ＭＳＲで１８時間刺激した後のＢＭＤＣにおけるＣＤ１１ｃおよびＣＤ８６発現のフローサイトメトリー分析。（Ｂ）様々な濃度のＰＥＩ−ＭＳＲで１８時間刺激した後のＢＭＤＣ上清中のＴＮＦ−α濃度のＥＬＩＳＡ分析。
【００９０】
【図１９】図１９ＡおよびＢは、ＰＬＧ足場に組み込まれたＰＥＩによるｉｎ  ｖｉｔｒｏ刺激を示すグラフである。（Ａ）ｈＴＬＲ５遺伝子を同時トランスフェクトし、ＮＦ−κＢ依存性分泌胚性アルカリホスファターゼレポータープラスミドを保有するＨＥＫ２９３細胞を、ＰＬＧ足場（ＰＬＧ）または直鎖（Ｌ２５）もしくは分岐鎖ＰＥＩ（Ｂ６０）のいずれかを含有する足場に播種した。（Ｂ）ＰＬＧ対照に対して正規化された、分岐鎖ＰＥＩ足場に播種したＢＭＤＣによる、ＩＬ−１２およびＩＦＮ−αサイトカイン産生。
【００９１】
【図２０ＡＢ】図２０Ａ〜Ｃは、ＰＥＩ装填ＰＬＧワクチンを用いた、ｉｎ  ｖｉｖｏサイトカインおよび活性化ＤＣ誘導ならびに予防的ワクチン接種を示すグラフである。（Ａ）ＰＥＩワクチン部位でのサイトカイン濃度の対照ワクチンに対する対数差（ｎ＝５）。（Ｂ）ＰＬＧワクチン（対照）およびＰＥＩ−ＰＬＧワクチン（ＰＥＩ）の移植後７日目のＭＨＣＩＩ＋およびＣＤ８６＋の数（Ｎ＝５）。（Ｃ）マウスを、Ｂ１６−Ｆ１０黒色腫腫瘍チャレンジ（１０５細胞）の１４日前に、ＰＬＧワクチンでワクチン接種した。未処置のマウス（対照）と、Ｂ１６溶解物（ＰＬＧ）またはＰＥＩと組み合わせた溶解物（ＰＥＩ−ＰＬＧ）のいずれかと組み合わせたＧＭ−ＣＳＦを装填したＰＬＧワクチンで処置したマウスとの生存の比較。ｎ＝１０。＊＊他の全ての実験条件と比較してＰ＜０．０１。
【図２０Ｃ】図２０Ａ〜Ｃは、ＰＥＩ装填ＰＬＧワクチンを用いた、ｉｎ  ｖｉｖｏサイトカインおよび活性化ＤＣ誘導ならびに予防的ワクチン接種を示すグラフである。（Ａ）ＰＥＩワクチン部位でのサイトカイン濃度の対照ワクチンに対する対数差（ｎ＝５）。（Ｂ）ＰＬＧワクチン（対照）およびＰＥＩ−ＰＬＧワクチン（ＰＥＩ）の移植後７日目のＭＨＣＩＩ＋およびＣＤ８６＋の数（Ｎ＝５）。（Ｃ）マウスを、Ｂ１６−Ｆ１０黒色腫腫瘍チャレンジ（１０５細胞）の１４日前に、ＰＬＧワクチンでワクチン接種した。未処置のマウス（対照）と、Ｂ１６溶解物（ＰＬＧ）またはＰＥＩと組み合わせた溶解物（ＰＥＩ−ＰＬＧ）のいずれかと組み合わせたＧＭ−ＣＳＦを装填したＰＬＧワクチンで処置したマウスとの生存の比較。ｎ＝１０。＊＊他の全ての実験条件と比較してＰ＜０．０１。
【００９２】
【図２１ＡＢ】図２１Ａ〜Ｃは、ＰＥＩコンジュゲート溶解物を含有するＰＬＧ足場による治療的ワクチン接種を示すグラフである。コンジュゲーション（付着）は、静電相互作用によって起こる。未処置（対照）のまたは腫瘍溶解物（ＰＬＧ）もしくは組込み前にＰＥＩと組み合わせた溶解物とＧＭ−ＣＳＦとの組合せを装填したＰＬＧワクチンで処置した樹立Ｂ１６−Ｆ１０腫瘍（５×１０５個のＢ１６−Ｆ１０細胞を接種し、９日間発達させたもの）を保持するマウスにおける（Ａ）１７日目の腫瘍サイズの比較、および（Ｂ）の腫瘍成長動態。（Ｃ）単一の細胞懸濁液を１７日目にＢ１６腫瘍から調製し、活性化細胞傷害性Ｔ細胞マーカーＩＦＮγおよびＣＤ１０７ａについて染色した。未処置マウス（ナイーブ）またはＰＬＧワクチン（ＰＬＧ）もしくはＰＥＩ−ＰＬＧワクチン（ＰＥＩ−ＰＬＧ）でワクチン接種したマウスにおけるＩＦＮγまたはＣＤ１０７ａのいずれかについて陽性のＣＤ３＋ＣＤ８＋腫瘍浸潤Ｔ細胞の数。特に断りのない限り、＊対照と比較してＰ＜０．０５、＊＊対照と比較してＰ＜０．０１。
【図２１Ｃ】図２１Ａ〜Ｃは、ＰＥＩコンジュゲート溶解物を含有するＰＬＧ足場による治療的ワクチン接種を示すグラフである。コンジュゲーション（付着）は、静電相互作用によって起こる。未処置（対照）のまたは腫瘍溶解物（ＰＬＧ）もしくは組込み前にＰＥＩと組み合わせた溶解物とＧＭ−ＣＳＦとの組合せを装填したＰＬＧワクチンで処置した樹立Ｂ１６−Ｆ１０腫瘍（５×１０５個のＢ１６−Ｆ１０細胞を接種し、９日間発達させたもの）を保持するマウスにおける（Ａ）１７日目の腫瘍サイズの比較、および（Ｂ）の腫瘍成長動態。（Ｃ）単一の細胞懸濁液を１７日目にＢ１６腫瘍から調製し、活性化細胞傷害性Ｔ細胞マーカーＩＦＮγおよびＣＤ１０７ａについて染色した。未処置マウス（ナイーブ）またはＰＬＧワクチン（ＰＬＧ）もしくはＰＥＩ−ＰＬＧワクチン（ＰＥＩ−ＰＬＧ）でワクチン接種したマウスにおけるＩＦＮγまたはＣＤ１０７ａのいずれかについて陽性のＣＤ３＋ＣＤ８＋腫瘍浸潤Ｔ細胞の数。特に断りのない限り、＊対照と比較してＰ＜０．０５、＊＊対照と比較してＰ＜０．０１。
【００９３】
【図２２ＡＢ】図２２Ａ〜Ｃは、ＰＬＧ足場に播種したヒト樹状細胞によるＨＬＡおよびＣＤ８３発現を示すグラフである。（Ａ）ＣｐＧまたはＰＥＩを装填したＰＬＧ足場に播種したｉｎ  ｖｉｔｒｏヒト樹状細胞におけるＨＬＡ−ＤＲ発現の代表的ＦＡＣＳヒストグラム。ブランクのＰＬＧ足場（非刺激）、あるいはＣｐＧ−ＯＤＮ（ＣｐＧ）、ポリＩ：Ｃ（Ｐ（ＩＣ））、ＰＥＩ単独、またはＰＥＩとｐ（ＩＣ）との組合せ［ＰＥＩ−ｐ（ＩＣ）］もしくはＣｐＧとの組合せ（ＰＥＩ−ＣｐＧ）を装填した足場に播種したｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＤＣにおける（Ｂ）ＨＬＡ−ＤＲおよび（Ｃ）ＣＤ８３の発現。特に断りのない限り、＊対照と比較してＰ＜０．０５、＊＊対照と比較してＰ＜０．０１。
【図２２Ｃ】図２２Ａ〜Ｃは、ＰＬＧ足場に播種したヒト樹状細胞によるＨＬＡおよびＣＤ８３発現を示すグラフである。（Ａ）ＣｐＧまたはＰＥＩを装填したＰＬＧ足場に播種したｉｎ  ｖｉｔｒｏヒト樹状細胞におけるＨＬＡ−ＤＲ発現の代表的ＦＡＣＳヒストグラム。ブランクのＰＬＧ足場（非刺激）、あるいはＣｐＧ−ＯＤＮ（ＣｐＧ）、ポリＩ：Ｃ（Ｐ（ＩＣ））、ＰＥＩ単独、またはＰＥＩとｐ（ＩＣ）との組合せ［ＰＥＩ−ｐ（ＩＣ）］もしくはＣｐＧとの組合せ（ＰＥＩ−ＣｐＧ）を装填した足場に播種したｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＤＣにおける（Ｂ）ＨＬＡ−ＤＲおよび（Ｃ）ＣＤ８３の発現。特に断りのない限り、＊対照と比較してＰ＜０．０５、＊＊対照と比較してＰ＜０．０１。
【００９４】
【図２３】図２３Ａ〜Ｃは、ＰＬＧ足場に播種したヒト樹状細胞によるサイトカイン産生を示すグラフである。ｉｎ  ｖｉｔｒｏのヒトＤＣ単独（細胞のみ）、またはｈＧＭ−ＣＳＦ装填ＰＬＧ足場（ＧＭ足場）、もしくはｈＧＭ−ＣＳＦとＰＥＩとの組合せを装填した足場（ＧＭ＋ＰＥＩ足場）、もしくはＣｐＧ−ＯＤＮを装填した足場（フル足場）に播種したＤＣによる（Ａ）ＩＬ−２、（Ｂ）ＴＮＦ−アルファ、および（Ｃ）ＩＬ−６の産生。特に断りのない限り、＊対照と比較してＰ＜０．０５、＊＊対照と比較してＰ＜０．０１。
【００９５】
【図２４Ａ】図２４ＡおよびＢは、樹状細胞によるローダミン標識ＰＥＩの取り込み動態を示すグラフである。（Ａ）０時間から７２時間までの樹状細胞によるローダミン標識ＰＥＩの取り込み動態を示すフローサイトメトリーグラフ。（Ｂ）（Ａ）におけるデータの定量コンパイル。
【図２４Ｂ】図２４ＡおよびＢは、樹状細胞によるローダミン標識ＰＥＩの取り込み動態を示すグラフである。（Ａ）０時間から７２時間までの樹状細胞によるローダミン標識ＰＥＩの取り込み動態を示すフローサイトメトリーグラフ。（Ｂ）（Ａ）におけるデータの定量コンパイル。
【００９６】
【図２５】図２５Ａ〜Ｃは、免疫活性化を示すグラフである。ＭＳＲワクチン（Ｖ）またはＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）で免疫化した後のワクチン流入領域リンパ節における（Ａ）マクロファージおよび（Ｂ）活性化マクロファージのパーセンテージ。（Ｃ）ＭＳＲワクチン（Ｖ）またはＧＭ−ＣＳＦ、ＰＥＩおよび抗原ＯＶＡのみを含有するワクチン（ＰＥＩ−ＯＶＡ）で免疫化した後の循環ＳＩＩＮＦＥＫＬ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞。
【００９７】
【図２６ＡＢ】図２６Ａ〜Ｄは、ＭＳＲ−ＰＥＩワクチンの特徴付けを示すグラフである。ＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＰＥＩがＣｐＧと共に組み込まれたＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（Ｖ  ＰＣ）で免疫化した後のワクチン流入領域リンパ節における（Ａ）総細胞数、（Ｂ）ＣＤ１１ｃ  ＤＣのパーセンテージ、および（Ｃ）活性化ＤＣのパーセンテージ。（Ｄ）３×１０５個のＴＣ−１細胞を接種し、ＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＰＥＩがＣｐＧと共に組み込まれたＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（Ｖ  ＰＣ）で処置した後の腫瘍成長動態。
【図２６ＣＤ】図２６Ａ〜Ｄは、ＭＳＲ−ＰＥＩワクチンの特徴付けを示すグラフである。ＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＰＥＩがＣｐＧと共に組み込まれたＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（Ｖ  ＰＣ）で免疫化した後のワクチン流入領域リンパ節における（Ａ）総細胞数、（Ｂ）ＣＤ１１ｃ  ＤＣのパーセンテージ、および（Ｃ）活性化ＤＣのパーセンテージ。（Ｄ）３×１０５個のＴＣ−１細胞を接種し、ＭＳＲワクチン（Ｖ）およびＰＥＩがＣｐＧと共に組み込まれたＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（Ｖ  ＰＣ）で処置した後の腫瘍成長動態。
【００９８】
【図２７】図２７Ａは、がんワクチンを増強する例示的な操作ポリマー足場に関連するイラストであり、図２７Ｂは一組の画像である。本明細書において、生体材料を使用して、免疫細胞の機能をｉｎ  ｖｉｖｏでモジュレートする戦略が提供される。科学的理論によって何ら限定されることなく、図２７Ａは、がんワクチン接種を増強する操作されたポリマー（ＰＬＧなどの）足場を使用した免疫細胞の動員、プログラミングおよび分散の例示的なプロセスを示す。図２７Ｂは、相互接続された細孔を含有し、樹状細胞機能を支持する因子を放出する、プラスチックの錠剤サイズ片の例示的な生体材料ワクチンを示す。この操作された生体材料は、ワクチンとして腫瘍担持宿主の皮膚下に外科的に移植して、離れた腫瘍に対する抗腫瘍免疫を生ずることができる。Ｂ１６−Ｆ１０黒色腫モデルの治療で試験したとき、生体材料ワクチンは、樹立された腫瘍からマウスの大部分を治した。一部の実施形態では、本明細書で提供される足場は、外科的に移植または注射することができる。ある特定の実施形態では、腫瘍溶解物または特定の精製された腫瘍抗原は、足場内または足場上に組み込まれる。
【００９９】
【図２８Ａ】図２８ＡおよびＢは、ＭＰＳワクチンが持続的な胚中心反応を誘導することを示すグラフであり、図２８Ｃは一組の画像である。有効な体液性応答の生成に関する課題の１つは、堅牢な胚中心Ｂ細胞反応を生成することである。ＯＶＡにカップリングされた自己ペプチドに対するＭＰＳワクチンの単回注射は、１ヶ月を超えて持続的な胚中心Ｂ細胞反応を誘発した。比較として、同じアジュバントＣｐＧおよびＧＭ−ＣＳＦを使用するボーラスワクチン戦略は、一過性の胚中心反応を誘発したが、この反応は１週間後にすぐに消失した。（Ａ）１４日目の時点のパネルＢの主要なフローサイトメトリープロット。（Ｂ）左のパネルは、リンパ節における総細胞数を示す。右のパネルは、活性化Ｂ細胞のマーカーを有する細胞を示す。（Ｃ）蛍光画像は、ボーラス処置マウスと比較して、Ｖａｘ処置マウスのリンパ節の胚中心において活性化を受けたＢ細胞が増加していることを示す。Ｂ２２０は、Ｂ細胞のマーカーであり、ＧＬ７は、胚中心Ｂ細胞のマーカーである。画像は、７、１４および２５日目でボーラスと比較してＶａｘにおいてＧＬ７のレベルが高いことを示す。
【図２８Ｂ】図２８ＡおよびＢは、ＭＰＳワクチンが持続的な胚中心反応を誘導することを示すグラフであり、図２８Ｃは一組の画像である。有効な体液性応答の生成に関する課題の１つは、堅牢な胚中心Ｂ細胞反応を生成することである。ＯＶＡにカップリングされた自己ペプチドに対するＭＰＳワクチンの単回注射は、１ヶ月を超えて持続的な胚中心Ｂ細胞反応を誘発した。比較として、同じアジュバントＣｐＧおよびＧＭ−ＣＳＦを使用するボーラスワクチン戦略は、一過性の胚中心反応を誘発したが、この反応は１週間後にすぐに消失した。（Ａ）１４日目の時点のパネルＢの主要なフローサイトメトリープロット。（Ｂ）左のパネルは、リンパ節における総細胞数を示す。右のパネルは、活性化Ｂ細胞のマーカーを有する細胞を示す。（Ｃ）蛍光画像は、ボーラス処置マウスと比較して、Ｖａｘ処置マウスのリンパ節の胚中心において活性化を受けたＢ細胞が増加していることを示す。Ｂ２２０は、Ｂ細胞のマーカーであり、ＧＬ７は、胚中心Ｂ細胞のマーカーである。画像は、７、１４および２５日目でボーラスと比較してＶａｘにおいてＧＬ７のレベルが高いことを示す。
【図２８Ｃ】図２８ＡおよびＢは、ＭＰＳワクチンが持続的な胚中心反応を誘導することを示すグラフであり、図２８Ｃは一組の画像である。有効な体液性応答の生成に関する課題の１つは、堅牢な胚中心Ｂ細胞反応を生成することである。ＯＶＡにカップリングされた自己ペプチドに対するＭＰＳワクチンの単回注射は、１ヶ月を超えて持続的な胚中心Ｂ細胞反応を誘発した。比較として、同じアジュバントＣｐＧおよびＧＭ−ＣＳＦを使用するボーラスワクチン戦略は、一過性の胚中心反応を誘発したが、この反応は１週間後にすぐに消失した。（Ａ）１４日目の時点のパネルＢの主要なフローサイトメトリープロット。（Ｂ）左のパネルは、リンパ節における総細胞数を示す。右のパネルは、活性化Ｂ細胞のマーカーを有する細胞を示す。（Ｃ）蛍光画像は、ボーラス処置マウスと比較して、Ｖａｘ処置マウスのリンパ節の胚中心において活性化を受けたＢ細胞が増加していることを示す。Ｂ２２０は、Ｂ細胞のマーカーであり、ＧＬ７は、胚中心Ｂ細胞のマーカーである。画像は、７、１４および２５日目でボーラスと比較してＶａｘにおいてＧＬ７のレベルが高いことを示す。
【０１００】
【図２９Ａ】図２９Ａは、ＭＰＳワクチンが、Ｈｅｒ２のトラスツズマブ結合領域に対する高力価の抗体を誘発し、反応性を示すことを示す、表およびグラフであり、図２９Ｂは一組のグラフである。本明細書には、抗体を生成するための方法および組成物が含まれる。例えば、抗体は、Ｈｅｒ２タンパク質のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）結合ドメインに対するものであって、複数のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ投与の必要性を回避し、Ｈｅｒ２に対する記憶を生成するようにしてもよい。ある特定の実施形態では、Ｈｅｒ２のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ結合ドメイン内の短い直鎖ドメインに連結された麻疹に由来するＣＤ４エピトープを含有する融合ペプチドを使用して免疫応答を生成する。図２９ＡおよびＢは、ＭＰＳワクチンで免疫化したマウスが、足場なしのボーラスワクチンと比較して１桁を超えて高い抗Ｈｅｒ２力価応答を示したことを示す。さらに、データは、抗Ｈｅｒ２血清が、ヒトＨｅｒ２陽性乳がん細胞上のＨｅｒ２タンパク質を認識することができ、一方で、ボーラスワクチン接種マウスからの血清が、対照血清と比較して有意な結合を示さなかったことを示す。様々な実施形態では、メソ多孔性シリカロッドおよびＨｅｒ２に由来するポリペプチドを含むワクチンは、乳がん細胞に対する免疫応答を誘発して、例えば、乳がんを処置するために使用される。ＳＫ−ＢＲ−３細胞は、Ｈｅｒ２＋である。ＣＴ２６細胞は、Ｈｅｒ２−である。ＰＥ＝フィコエリトリン。
【図２９Ｂ】図２９Ａは、ＭＰＳワクチンが、Ｈｅｒ２のトラスツズマブ結合領域に対する高力価の抗体を誘発し、反応性を示すことを示す、表およびグラフであり、図２９Ｂは一組のグラフである。本明細書には、抗体を生成するための方法および組成物が含まれる。例えば、抗体は、Ｈｅｒ２タンパク質のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）結合ドメインに対するものであって、複数のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ投与の必要性を回避し、Ｈｅｒ２に対する記憶を生成するようにしてもよい。ある特定の実施形態では、Ｈｅｒ２のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ結合ドメイン内の短い直鎖ドメインに連結された麻疹に由来するＣＤ４エピトープを含有する融合ペプチドを使用して免疫応答を生成する。図２９ＡおよびＢは、ＭＰＳワクチンで免疫化したマウスが、足場なしのボーラスワクチンと比較して１桁を超えて高い抗Ｈｅｒ２力価応答を示したことを示す。さらに、データは、抗Ｈｅｒ２血清が、ヒトＨｅｒ２陽性乳がん細胞上のＨｅｒ２タンパク質を認識することができ、一方で、ボーラスワクチン接種マウスからの血清が、対照血清と比較して有意な結合を示さなかったことを示す。様々な実施形態では、メソ多孔性シリカロッドおよびＨｅｒ２に由来するポリペプチドを含むワクチンは、乳がん細胞に対する免疫応答を誘発して、例えば、乳がんを処置するために使用される。ＳＫ−ＢＲ−３細胞は、Ｈｅｒ２＋である。ＣＴ２６細胞は、Ｈｅｒ２−である。ＰＥ＝フィコエリトリン。
【０１０１】
【図３０】図３０は、表面修飾されたワクチンが、腫瘍ペプチド免疫原性を増強することを示すイラストである。抗体応答に加えて、抗腫瘍応答は、しばしばペプチドの形態であるネオ抗原に対するＴ細胞応答によって駆動されうる。しかしながら、これらのペプチドは体内で非常に速やかに除去され、一般的にあまり免疫原性ではないので、これらのペプチドに対して有効な応答を生成することは困難である。ＭＰＳロッドを含むワクチンなどの、本明細書で提供されるワクチンは、この問題に対処することができる。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ワクチンに受動的に組み込まれる。ある特定の実施形態では、ワクチンの表面を、ペプチドにとって足場（例えば、ＭＰＳロッド）をより粘着性にする単純な静電相互作用を使用して修飾し、ペプチドが足場内または足場上により長く留まるように、またさらにペプチドがより免疫原性になるようにする。様々な実施形態では、そのような修飾は、何ら化学物質を使用せずに、異なる物理的特性を有する広範なペプチドの組込みを可能にする。複数の実施形態では、このことは重要であり、その理由は、ペプチドの化学修飾では、提示能力が潜在的に変化する可能性があるからである。非限定的な例では、表面修飾は、足場をＰＥＩに接触させることを含む。
【０１０２】
【図３１Ａ】図３１Ａは、表面修飾されたＭＰＳワクチンの単回注射が、樹立された腫瘍の退縮の増強を導くことを示す配列、タイムライン、一組のグラフ、および画像である。図３１Ｂは、腫瘍再チャレンジ後の長期記憶応答を示す一組のグラフである。表面修飾されたワクチンを、子宮頸がんおよび口腔がんなどのいくつかの腫瘍で発現されるＨＰＶ由来のＥ７オンコプロテインからのペプチドを使用して試験した。図３１Ａに示されるように、マウスにＥ７発現ＴＣ−１細胞系を接種し、８日目に表面修飾されたまたは修飾されていないワクチンで免疫化した。表面修飾されたワクチンは、修飾されていないワクチンと比較して、はるかに優れた腫瘍退縮を示した。さらに、表面修飾されたＭＰＳワクチンをボーラスワクチン戦略と比較すると、ＭＰＳワクチンは完全腫瘍退縮を誘導したが、ボーラスワクチンは部分退縮に至ったのみであったことが示された。この図の画像は、完全な退縮前に大きな（１ｃｍ×１ｃｍ）腫瘍を有していた、ＶＰワクチンを使用した処置を受けているマウスの一例を示す。図３１Ｂに示されるように、表面修飾されたＭＰＳワクチンで処置したマウスの８０％超が長期生存した。生存マウスに、６ヶ月後にＥ７発現腫瘍を再接種し、そのマウスの１００％で腫瘍がないことが示され、ワクチンによって長期記憶応答が生成されていることが示唆された。
【図３１Ｂ】図３１Ａは、表面修飾されたＭＰＳワクチンの単回注射が、樹立された腫瘍の退縮の増強を導くことを示す配列、タイムライン、一組のグラフ、および画像である。図３１Ｂは、腫瘍再チャレンジ後の長期記憶応答を示す一組のグラフである。表面修飾されたワクチンを、子宮頸がんおよび口腔がんなどのいくつかの腫瘍で発現されるＨＰＶ由来のＥ７オンコプロテインからのペプチドを使用して試験した。図３１Ａに示されるように、マウスにＥ７発現ＴＣ−１細胞系を接種し、８日目に表面修飾されたまたは修飾されていないワクチンで免疫化した。表面修飾されたワクチンは、修飾されていないワクチンと比較して、はるかに優れた腫瘍退縮を示した。さらに、表面修飾されたＭＰＳワクチンをボーラスワクチン戦略と比較すると、ＭＰＳワクチンは完全腫瘍退縮を誘導したが、ボーラスワクチンは部分退縮に至ったのみであったことが示された。この図の画像は、完全な退縮前に大きな（１ｃｍ×１ｃｍ）腫瘍を有していた、ＶＰワクチンを使用した処置を受けているマウスの一例を示す。図３１Ｂに示されるように、表面修飾されたＭＰＳワクチンで処置したマウスの８０％超が長期生存した。生存マウスに、６ヶ月後にＥ７発現腫瘍を再接種し、そのマウスの１００％で腫瘍がないことが示され、ワクチンによって長期記憶応答が生成されていることが示唆された。
【０１０３】
【図３２Ａ】図３２Ａは、表面修飾されたＭＰＳワクチンが、マウスの腫瘍微小環境中のＢ１６ネオ抗原およびエフェクターリンパ球表現型を使用して腫瘍制御を増強したことを示す、タイムライン、一組の配列およびグラフであり、図３２Ｂは一組のグラフである。ＭＰＳワクチン（ＰＥＩを含む）を、最近発見されたネオ抗原（図３２Ａに示される配列）を使用して、Ｂ１６モデルで試験した。図３２Ａに示されるように、治療皮下モデルにおいて、表面修飾されたワクチンは、修飾されていないワクチン（ＰＥＩを欠く）と比較して、良好な腫瘍成長制御を示した。さらに、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）集団を、未処置マウスでそのサイズが最大に達した接種後１５日目に分析した。図３２Ｂに示されるように、表面修飾されたワクチンは、腫瘍において、より多くのグランザイムＢ＋、ＩＦＮ＋およびＴＮＦａ＋リンパ球を生成した。ＣＤ８およびＣＤ４コンパートメントをより注意深く見ると、興味深いことに、応答のほとんどが、ＣＤ４リンパ球から来ている。ＶＰ＝表面修飾されたワクチン。Ｖ＝修飾されていないワクチン。
【図３２Ｂ】図３２Ａは、表面修飾されたＭＰＳワクチンが、マウスの腫瘍微小環境中のＢ１６ネオ抗原およびエフェクターリンパ球表現型を使用して腫瘍制御を増強したことを示す、タイムライン、一組の配列およびグラフであり、図３２Ｂは一組のグラフである。ＭＰＳワクチン（ＰＥＩを含む）を、最近発見されたネオ抗原（図３２Ａに示される配列）を使用して、Ｂ１６モデルで試験した。図３２Ａに示されるように、治療皮下モデルにおいて、表面修飾されたワクチンは、修飾されていないワクチン（ＰＥＩを欠く）と比較して、良好な腫瘍成長制御を示した。さらに、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）集団を、未処置マウスでそのサイズが最大に達した接種後１５日目に分析した。図３２Ｂに示されるように、表面修飾されたワクチンは、腫瘍において、より多くのグランザイムＢ＋、ＩＦＮ＋およびＴＮＦａ＋リンパ球を生成した。ＣＤ８およびＣＤ４コンパートメントをより注意深く見ると、興味深いことに、応答のほとんどが、ＣＤ４リンパ球から来ている。ＶＰ＝表面修飾されたワクチン。Ｖ＝修飾されていないワクチン。
【０１０４】
【図３３Ａ】図３３Ａ〜Ｃは、ネオ抗原を使用するＢ１６Ｆ１０皮下マウスモデルの治療効果を示す。図３３Ａは、人工肺の転移がナイーブ（未処置）マウスと比較して減少したことを示す、一組の例示的なネオ抗原配列、タイムライン、画像およびグラフである。Ｂ１６細胞をＣ５７マウスの血流に注射し、２４時間後ＶＰワクチンで処置した。肺を１６日目に摘出し、転移の数を肺で計数した。図３３Ｂは、Ｍ２７およびＭ３０ペプチドを使用する治療Ｂ１６モデルにおけるプライム−ブースト処置レジメン（ワクチンを複数回注射）を示す一組の例示的な配列、タイムライン、およびグラフである。ブースト後、約５日間、樹立された黒色腫腫瘍の一過性の退縮がある。図３３Ｃは、抗ＣＴＬＡ４処置との治療的相乗効果を示す一組の例示的配列、タイムラインおよびグラフである。表面修飾されたワクチンと抗ＣＴＬＡ４治療との組合せを評価した。抗ＣＴＬＡ４抗体単独で処置したマウスは、未処置動物と比較して、良好な腫瘍制御は示さなかった。比較して、ワクチンおよび抗ＣＴＬＡ４の両方で処置したマウスは、印象的な腫瘍成長制御を示した。
【図３３Ｂ】図３３Ａ〜Ｃは、ネオ抗原を使用するＢ１６Ｆ１０皮下マウスモデルの治療効果を示す。図３３Ａは、人工肺の転移がナイーブ（未処置）マウスと比較して減少したことを示す、一組の例示的なネオ抗原配列、タイムライン、画像およびグラフである。Ｂ１６細胞をＣ５７マウスの血流に注射し、２４時間後ＶＰワクチンで処置した。肺を１６日目に摘出し、転移の数を肺で計数した。図３３Ｂは、Ｍ２７およびＭ３０ペプチドを使用する治療Ｂ１６モデルにおけるプライム−ブースト処置レジメン（ワクチンを複数回注射）を示す一組の例示的な配列、タイムライン、およびグラフである。ブースト後、約５日間、樹立された黒色腫腫瘍の一過性の退縮がある。図３３Ｃは、抗ＣＴＬＡ４処置との治療的相乗効果を示す一組の例示的配列、タイムラインおよびグラフである。表面修飾されたワクチンと抗ＣＴＬＡ４治療との組合せを評価した。抗ＣＴＬＡ４抗体単独で処置したマウスは、未処置動物と比較して、良好な腫瘍制御は示さなかった。比較して、ワクチンおよび抗ＣＴＬＡ４の両方で処置したマウスは、印象的な腫瘍成長制御を示した。
【図３３Ｃ】図３３Ａ〜Ｃは、ネオ抗原を使用するＢ１６Ｆ１０皮下マウスモデルの治療効果を示す。図３３Ａは、人工肺の転移がナイーブ（未処置）マウスと比較して減少したことを示す、一組の例示的なネオ抗原配列、タイムライン、画像およびグラフである。Ｂ１６細胞をＣ５７マウスの血流に注射し、２４時間後ＶＰワクチンで処置した。肺を１６日目に摘出し、転移の数を肺で計数した。図３３Ｂは、Ｍ２７およびＭ３０ペプチドを使用する治療Ｂ１６モデルにおけるプライム−ブースト処置レジメン（ワクチンを複数回注射）を示す一組の例示的な配列、タイムライン、およびグラフである。ブースト後、約５日間、樹立された黒色腫腫瘍の一過性の退縮がある。図３３Ｃは、抗ＣＴＬＡ４処置との治療的相乗効果を示す一組の例示的配列、タイムラインおよびグラフである。表面修飾されたワクチンと抗ＣＴＬＡ４治療との組合せを評価した。抗ＣＴＬＡ４抗体単独で処置したマウスは、未処置動物と比較して、良好な腫瘍制御は示さなかった。比較して、ワクチンおよび抗ＣＴＬＡ４の両方で処置したマウスは、印象的な腫瘍成長制御を示した。
【０１０５】
【図３４Ａ】図３４Ａは、例示的なｉｎ  ｖｉｖｏ応答を示す表であり、図３４Ｂは、対象へのパーソナライズされた腫瘍ワクチンを投与するための例示的なプロセスを示すイラストである。図３４Ａに示されるように、いくつかの疾患関連抗原を、タンパク質形態、ペプチド形態、および小分子形態で試験した。試験した抗原は、ＴおよびＢ細胞エピトープの両方を含む（Ｔ細胞エピトープは、ＭＨＣ−ＩまたはＭＨＣ−ＩＩクラス分子に結合することができるエピトープであり、Ｂ細胞エピトープは、抗体が認識することができるドメインである）。Ｔ細胞エピトープとＢ細胞エピトープとは相互に排他的でない。陽性応答が、４つの独立した腫瘍モデルを使用して見られた。本明細書には、低侵襲性で非常に汎用性があり、有効な生体材料ワクチンプラットフォームである、ワクチンプラットフォームが含まれる。図３４Ｂに示されるように、ＭＰＳワクチンは個々の粒子から構築されるので、異なる抗原（腫瘍抗原など）のライブラリーを、個々の粒子に組み込むことができる。そのような粒子は、混合し、適合させ、容易にスケールアップして、個別化されたがんワクチンを作製することができる。各ワクチンは、複数の腫瘍抗原を含有することができ、その後、単純な注射を介して患者に投与することができる。非限定的な例では、ワクチンは、単回注射または複数回注射として（例えば、同時に、または時間をかけて）投与される。様々な実施形態では、抗原は、例えば、腫瘍溶解物から精製することができ、または組換え的に（例えば、抗原を産生する細胞で）もしくは合成的に（細胞なしに化学合成を介して）製造することができる。
【図３４Ｂ】図３４Ａは、例示的なｉｎ  ｖｉｖｏ応答を示す表であり、図３４Ｂは、対象へのパーソナライズされた腫瘍ワクチンを投与するための例示的なプロセスを示すイラストである。図３４Ａに示されるように、いくつかの疾患関連抗原を、タンパク質形態、ペプチド形態、および小分子形態で試験した。試験した抗原は、ＴおよびＢ細胞エピトープの両方を含む（Ｔ細胞エピトープは、ＭＨＣ−ＩまたはＭＨＣ−ＩＩクラス分子に結合することができるエピトープであり、Ｂ細胞エピトープは、抗体が認識することができるドメインである）。Ｔ細胞エピトープとＢ細胞エピトープとは相互に排他的でない。陽性応答が、４つの独立した腫瘍モデルを使用して見られた。本明細書には、低侵襲性で非常に汎用性があり、有効な生体材料ワクチンプラットフォームである、ワクチンプラットフォームが含まれる。図３４Ｂに示されるように、ＭＰＳワクチンは個々の粒子から構築されるので、異なる抗原（腫瘍抗原など）のライブラリーを、個々の粒子に組み込むことができる。そのような粒子は、混合し、適合させ、容易にスケールアップして、個別化されたがんワクチンを作製することができる。各ワクチンは、複数の腫瘍抗原を含有することができ、その後、単純な注射を介して患者に投与することができる。非限定的な例では、ワクチンは、単回注射または複数回注射として（例えば、同時に、または時間をかけて）投与される。様々な実施形態では、抗原は、例えば、腫瘍溶解物から精製することができ、または組換え的に（例えば、抗原を産生する細胞で）もしくは合成的に（細胞なしに化学合成を介して）製造することができる。
【０１０６】
【図３５】図３５は、ネズミ黒色腫ネオ抗原特異Ｔ細胞応答を示す一対のグラフである。動物を、ＭＳＲワクチン（Ｖ）または５０μｇのＢ１６−Ｍ２７もしくはＢ１６−Ｍ３０ネオ抗原ペプチドを使用したＭＳＲ−ＰＥＩワクチン（ＶＰ）でワクチン接種し、あるいはワクチン接種しないまま（ナイーブ）にした。１４日後、マウスに０．１×１０６個のＢ１６Ｆ１０細胞を接種した。１０日後、ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞を脾臓から採集し、腫瘍流入領域ＬＮをカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で染色し、ペプチドパルスした脾臓ＤＣと共培養した。増殖したＩＦＮγ分泌集団（ＩＦＮ＋  ＣＦＳＥ−）を、その後、フローサイトメトリーを使用して分析した。
【発明を実施するための形態】
【０１０７】
詳細な説明
本発明の主題の態様は、ポリエチレンイミン（polyethyleinemine）（ＰＥＩ）が、細胞傷害性Ｔリンパ球応答を増強し、腫瘍に対する強力な免疫を誘導するために、生体材料足場ワクチン中のアジュバントとして有用であるという発見に関する。例えば、ＰＥＩを含む注射可能なクリオゲルおよび注射可能なメソ多孔性シリカロッドは、ＰＥＩを欠くクリオゲルまたはメソ多孔性シリカロッドよりも、抗腫瘍免疫を顕著に（例えば、約１０％、２０％、２５％、５０％、７５％、１００％、２倍、５倍、１０倍またはそれよりも高く）増加させる。驚くべきことに、ＰＥＩに付着した抗原を含むメソ多孔性シリカロッドは、ＰＥＩに付着したＣｐＧ−ＯＤＮを含む対応するメソ多孔性シリカロッドよりも、実質的に免疫原性がより高かった（例えば、図４Ｂを参照のこと）。さらに、ＰＥＩに付着した抗原を含むメソ多孔性シリカロッドは、ＰＥＩを欠く対応するメソ多孔性シリカロッドよりも、ｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍サイズを低減させるのにより有効であった（例えば、図５Ｇを参照のこと）。
【０１０８】
免疫療法
免疫療法は、がん処置の有効なモダリティとして確立されてきた。がん免疫療法とは、悪性腫瘍を攻撃、低減または排除するために免疫系を利用する任意の介入を指す。免疫系を利用することは、過去５年間でヒトのがんを処置するための実行可能な戦略になっている。免疫系の理解における最近の進歩−例えば、免疫応答の生成における重要な分子プレーヤー、例えば、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）およびそれらのリガンドの発見−は、抗がん免疫を促進するように免疫応答を正確に調整するためのプラットフォームの開発を可能にした。首尾よい免疫療法の顕著な例には、いくつかの進行期がんの処置のための免疫チェックポイント阻害剤、ならびにある特定の血液悪性腫瘍のための養子細胞治療（ＡＣＴ）が含まれる。
【０１０９】
免疫療法による最近の臨床的成功は、それらの潜在力を実証しているが、現行のがん免疫療法戦略の欠点はそのままである。例えば、治療薬は一般に、可溶性注射として投与され、典型的には、標的組織において生物学的に適切な濃度を達成するために、高い用量および頻繁な再投薬を必要とし、これは全身毒性を生じる場合が多い。最も可溶性のボーラスベースのワクチン製剤もまた、持続性の治療的成功を達成するのに十分にロバストな免疫応答を惹起することができず、これが、がんに対するそれらの有効な使用を制限している。
【０１１０】
生体材料は、これらの制限を克服し、したがって、ワクチンおよび他の免疫療法の有効性を増強するために有用である。免疫調節薬物を送達するために合理的に設計された生体材料戦略は、多機能性の時空間的に制御されたシグナルを免疫細胞に提供してそれらの抗がん活性を改善しつつ、改善された安全性プロファイルを潜在的に示し得る。がん細胞の排除を生じる生産的抗がん免疫応答の生成は、反復性かつ自己持続性の様式で起こるはずの、協調した一連の事象に依存する。
【０１１１】
いずれの科学理論に束縛されることも望まないが、抗原（例えば、がん細胞から得られたまたは放出されたもの）は、適応免疫の主要なメディエーターであるＤＣによって捕捉される。細胞表面共刺激分子およびサイトカイン産生の上方調節と関連するＤＣ活性化は、Ｔ細胞応答の効率的な下流プライミングに必要であり、「損傷関連分子パターン」と広く称され得る、瀕死がん細胞によって放出される因子によって内因性の状況で促進され得る。ＤＣ活性化は、取り込まれた抗原の効率的なプロセシングおよびそれに続く細胞表面ＭＨＣ分子上での抗原性ペプチドの提示を容易にする。流入領域リンパ節では、活性化されたＤＣは、がん抗原をナイーブＴ細胞に提示し、がん抗原特異的Ｔ細胞のプライミングおよび活性化を生じ、そのサブセットは、長寿命のメモリー細胞へと分化する。活性化されたＴ細胞、特に、エフェクターＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）は引き続いて、腫瘍へと通行しそれに浸潤し、同族抗原決定基を提示するがん細胞を認識し、これらのがん細胞を死滅させる。
【０１１２】
がん患者では、がん免疫サイクルは、これらのステップのうち１つまたは複数において遮断され、抗がん免疫応答を弱め、免疫回避を可能にする。がん免疫療法は、このサイクル中の特定のステップを強化することによって抗がん免疫を促進することを目指す。本明細書で提供されている治療ワクチンは、よりロバストなＴ細胞のプライミングおよび活性化（例えば、図６、ステップ３）ならびに引き続くＣＴＬエフェクター機能を促進するために、がん抗原提示（例えば、図６、ステップ２）を容易にするためにＤＣを標的化する。
【０１１３】
ＰＥＩアジュバントウイルス糖タンパク質抗原は、粘膜経路を介して、ＰＥＩと共製剤化した適切な抗原の単回の鼻腔内投与後に、インフルエンザおよび単純ヘルペスウイルス−２に対するロバストで保護的な免疫を活性化する（Wegmannら、Nat  Biotechnol.  ２０１２年、３０巻（９号）：８８３〜８８８頁）。
【０１１４】
自然免疫経路は、細胞質ＤＮＡセンサーを介してＩｒｆ３インターフェロン経路を誘発する損傷関連分子パターンとして作用する細胞内ｄｓＤＮＡの放出によって活性化される。ＰＥＩによって活性化される別の自然免疫経路は、潜在的には、ＰＥＩ３のリソソーム不安定化活性を介してまたは尿酸などの他の損傷関連分子パターンの放出を介してのいずれかの、インフラマソームである。ＰＥＩは、免疫化の部位における抗原提示細胞（ＡＰＣ）の流入を誘発し、抗原と会合して、ＡＰＣによって効率的に取り込まれるナノ粒子を形成する。Sheppardら（２０１４年）は、ＰＥＩがウイルス糖タンパク質のための全身免疫刺激活性もまた有することを実証した（Sheppardら、International  Immunology、２０１４年、２６巻、１０号、５３１〜５３８頁）。ＰＥＩは、免疫化の皮下モデルおよび腹腔内モデルの両方において試験されてきた。様々な形態のＰＥＩが、アラム（アルミニウムベースの臨床的に適切なアジュバント）と比較して、天然に折り畳まれた抗原に対する抗体のより高い力価を誘導する強力な全身アジュバントとして作用する。分岐鎖２５ｋＤａ  ＰＥＩのさらなる特徴付けにより、これが、全身適用された場合、マウスおよびウサギにおけるロバストな抗体産生と共に、混合Ｔｈ１／Ｔｈ２型適応免疫応答を駆動することが明らかになった。ＰＥＩによって誘導される混合Ｔｈ１／Ｔｈ２応答は、高い力価の抗体応答を惹起するのに適切であり、ＰＥＩは、これらの研究者によって、Ｔｈ１サイトカイン環境を必要とする細胞傷害性Ｔ細胞の共誘導に最適である可能性は低いと特徴付けられた。ＰＥＩとＴＬＲリガンドＣｐＧ  ＯＤＮとの共製剤化は相乗的に、適応免疫応答の大きさを増加させ、この応答をＴｈ１に向けて偏らせる。したがって、ＰＥＩは、糖タンパク質抗原のためにアジュバント活性を送達するために複数のレベルで作用する。これは、本明細書で提供されている生体材料デバイス、例えば、クリオゲルを含むデバイスにとって高度に適切である。
【０１１５】
本明細書の図面に示されるように、ＰＥＩは、ＤＣ成熟化および炎症促進性サイトカイン産生を誘導した。ＰＥＩは、高い効率で、ＭＳＲ／ＭＰＳ足場および丈夫なアルギネートクリオゲル足場中にローディングされた。ＭＰＳ／ＭＳＲ−ＰＥＩは、ＤＣ成熟化および炎症促進性サイトカイン産生を誘導した。ＰＥＩは、クリオゲルにおける増加した炎症促進性プロファイルもまたもたらす。
【０１１６】
腫瘍微小環境（ＴＭＥ）における免疫寛容原性シグナル、および共刺激シグナルの欠如を克服することは、がんワクチン設計における重要な課題である。がんワクチン設計における重要な課題は、全身炎症毒性を誘発することなく、腫瘍微小環境における共刺激シグナルの欠如および免疫寛容原性シグナルの存在を克服することであり、それによって、がんワクチンの臨床的範囲を、免疫原性が低い悪性腫瘍へと拡大する。本明細書で提供されているデバイスおよび生体材料は、抗がん免疫応答を刺激および／または惹起するために有用である。例示的な方法は、足場組成物を含むデバイスを対象に投与するステップを含む、連続的ｉｎ  ｓｉｔｕ樹状細胞プログラミングを含み、この足場組成物は、樹状細胞を誘引し、１種または複数の免疫原性因子（例えば、ＰＥＩ単独、あるいは（ａ）免疫賦活性化合物；（ｂ）送達ビヒクルに、または送達ビヒクル中に、免疫細胞を誘引する化合物；（ｃ）腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する化合物；（ｄ）Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する化合物；（ｅ）免疫阻害性タンパク質を阻害する化合物；または（ｆ）抗原、あるいはそれらの任意の組合せとの組合せを含む）を樹状細胞に導入して、樹状細胞活性化を促進し、樹状細胞を足場組成物から離れて遊走するように誘導する。このデバイスは、樹状細胞の不均一な集団（各サブセットは専門化され、免疫応答の生成に顕著に寄与する）を動員および刺激し得る。
【０１１７】
一部の実施形態では、樹状細胞をｉｎ  ｓｉｔｕでプログラミングする方法は、足場組成物および被包された動員組成物を含むデバイスを対象に導入することによって実施される。ある特定の実施形態では、動員組成物のパルスが、例えば、デバイスの導入の１〜７日以内にデバイスから放出されて、デバイス中またはデバイス上に残余量の動員組成物を残し得る。このパルスには、数週間にわたる残余量の緩徐な放出が続き得る。動員組成物の局所濃度および放出の時間的パターンは、樹状細胞の動員、保持およびデバイスからの引き続く放出を媒介する。例えば、このパルスは、デバイスと関連する動員組成物の量の少なくとも５０、６０、７５、９０または９５％を含み得る。例示的な時間的放出プロファイルは、対象へのデバイスの導入後約１〜５日の、デバイスと関連する動員組成物の量の少なくとも６０％の放出によって特徴付けられるパルスを含む。パルス後、残余量は、パルス期間後、延長された期間（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２日間もしくは２、３、４、５週間またはそれよりも長く）にわたって緩徐に放出される。当該分野で公知のおよび／または本明細書に開示されている動員化合物は、個々に、または組み合わせて使用され得る。
【０１１８】
本発明の主題の態様は、足場組成物および１種または複数の化合物、例えばＰＥＩ（例えば、単独、あるいは（ａ）免疫賦活性化合物；（ｂ）送達ビヒクルに、または送達ビヒクル中に、免疫細胞を誘引する化合物；（ｃ）腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する化合物；（ｄ）Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する化合物；（ｅ）免疫阻害性タンパク質を阻害する化合物；または（ｆ）抗原、あるいはそれらの任意の組合せと組み合わせた）を含むデバイスを対象に投与するステップを含む、ワクチン有効性を増加させることもまた含み、これらの化合物は、足場組成物中に取り込まれまたは足場組成物上にコンジュゲートされ、このデバイスは、樹状細胞を誘引し、１種または複数の化合物を樹状細胞に導入し、それによって樹状細胞を活性化し、樹状細胞を足場組成物から離れて遊走するように誘導し、それによってワクチン接種手順の有効性を増加させる。本発明の主題は、足場組成物および１種または複数の化合物、例えばＰＥＩ（例えば、単独、あるいは（ａ）免疫賦活性化合物；（ｂ）送達ビヒクルに、または送達ビヒクル中に、免疫細胞を誘引する化合物；（ｃ）腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する化合物；（ｄ）Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する化合物；（ｅ）免疫阻害性タンパク質を阻害する化合物；または（ｆ）抗原、あるいはそれらの任意の組合せと組み合わせた）を含むデバイスを対象に投与するステップを含む、がんに対して対象をワクチン接種するステップを含む方法もまた提供し、この足場組成物は、樹状細胞を誘引し、１種または複数の化合物を樹状細胞に導入し、それによって樹状細胞を活性化し、樹状細胞を足場組成物から離れて遊走するように誘導し、それによって対象に、抗腫瘍免疫、例えばＩＬ−１２産生、および低減された腫瘍負荷を付与する。
【０１１９】
様々な実施形態では、ＰＥＩ、抗原および／または他の因子と遭遇した後にデバイスを離れる細胞（および／またはデバイスを離れる細胞と接触する細胞）は、活性化されて、免疫応答が開始される身体中で腫瘍細胞を捜索する。デバイスを離れる細胞の活性は、デバイスに進入する前の活性とは異なる。一部の実施形態では、細胞はデバイス中に動員され、一定期間、例えば、数分間；０．２、０．５、１、２、４、６、１２、２４時間；２、４、６日間；１〜４週間；２、４、６、８、１０もしくは１２ヶ月間；または数年間にわたってデバイス中に存在し続け、その期間の間、細胞は、構造的要素、および細胞の活性または活性のレベルにおける変化をもたらす生理活性化合物に曝露される。任意選択で、免疫応答が望まれる標的に対応する抗原は、足場構造中にまたは足場構造上に取り込まれる。サイトカインもまた、免疫活性化を増幅するためおよび／またはプライムされた細胞のリンパ節への遊走を誘導するための、デバイスの構成要素であり得る。デバイスおよび足場中に含まれ得る様々な化合物（例えば、ＰＥＩ単独、あるいは（ａ）免疫賦活性化合物；（ｂ）送達ビヒクルに、または送達ビヒクル中に、免疫細胞を誘引する化合物；（ｃ）腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する化合物；（ｄ）Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する化合物；（ｅ）免疫阻害性タンパク質を阻害する化合物；または（ｆ）抗原、あるいはそれらの任意の組合せと組み合わせた）は、本明細書に記載されている。デバイス中の抗原および他の化合物に遭遇することは、変更された（再教育されたまたは再プログラムされた）細胞の脱出を誘導し、これらの細胞は、腫瘍細胞などの罹患細胞を捜索し、それに対する免疫を媒介するために、デバイスから出て、周辺組織または離れた標的位置へと遊走する。例えば、抗原を摂取すると、ＤＣは活性化され、リンパ節、脾臓および他の解剖学的位置に遊走し、その場所で、ＤＣはＴ細胞と接触して、抗がん応答などの抗原特異的免疫応答をさらに広める。個体の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞または樹状細胞（ＤＣ）は、デバイス中に動員され、プライミングされ、活性化されて、抗原特異的標的に対する免疫応答を開始させ得る。
【０１２０】
様々な実施形態では、本明細書で提供されている生体材料は、１）サイトカイン、例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３Ｌ）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２０（ＣＣＬ２０）、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）、ケモカイン（Ｃモチーフ）リガンド１（ＸＣＬ１）、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１０（ＣＸＣＬ１０）、インターフェロンアルファ１（ＩＦＮ−アルファ）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−ベータ）もしくはインターロイキン１２（ＩＬ−１２）；２）免疫賦活性化合物、例えば、ＴＬＲアゴニスト、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、ポリイノシン−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））、ＰＥＩ−ポリ（Ｉ：Ｃ）、ポリアデニル酸−ポリウリジル酸（ポリ（Ａ：Ｕ））、ＰＥＩ−ポリ（Ａ：Ｕ）、二本鎖リボ核酸（ＲＮＡ）、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）、イミキモド、ＣＲＸ−５２７およびＯＭ−１７４；３）小分子免疫抑制阻害剤、例えば、ＬＹ２１５７２９９、ＧＷ７８８３８８、ＬＹ３６４９４７、Ｒ２６８７１２、ＲｅｐＳｏｘ、ＳＢ５２５３３４、ＳＤ２０８、ＢＰ−１−１０２、Ｓ３Ｉ−Ｍ２００１、ＳＴＡ−２１、Ｓ３Ｉ−２０１、Ｓｔａｔｔｉｃ、Ｇａｌｉｅｌｌａｌａｃｔｏｎｅ、ＩＮＣＢ２４３６０、ＮＬＧ９１９、Ｎｏｒｈａｒｍａｎｅ、ロスマリン酸、１−メチルトリプトファンおよびインドキシモド；ならびに／または４）免疫抑制を阻害する抗体を含む。上に列挙したサイトカインの各々のアイソフォームについてのヒトアミノ酸配列の非限定的な例は、以下の受託番号を使用して、公に入手可能である：ＧＭ−ＣＳＦ−ＧｅｎＢａｎｋ番号：ＡＡＡ５２５７８．１（配列番号３）；Ｆｌｔ３Ｌ−ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ番号：Ｐ４９７７１．１（配列番号４）；ＣＣＬ２０−ＧｅｎＢａｎｋ番号：ＡＡＨ２０６９８．１（配列番号５）；ＩＬ−１５−ＧｅｎＢａｎｋ番号：ＡＡＩ００９６３．１（配列番号６）；ＸＣＬ１−ＧｅｎＢａｎｋ番号：ＡＡＨ６９８１７．１（配列番号７）；ＣＸＣＬ１０−ＧｅｎＢａｎｋ番号：ＥＡＸ０５６９３．１（配列番号８）；ＩＦＮ−アルファ−ＧｅｎＢａｎｋ番号：ＡＡＩ１２３０３．１（配列番号９）；ＩＦＮ−ベータ−ＧｅｎＢａｎｋ番号：ＡＡＣ４１７０２．１（配列番号１０）；ならびにＩＬ−１２−ＮＣＢＩ受託番号１Ｆ４５＿Ａ（Ａ鎖）（配列番号１１）およびＮＣＢＩ受託番号１Ｆ４５＿Ｂ（Ｂ鎖）（配列番号１２）。
【０１２１】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供されている患者特異的免疫化デバイスの利点は、免疫調節剤および／または化学療法剤の毒性の低減であるが、それは、これらのデバイスが、腫瘍部位において局所的に薬剤を送達し、および／またはより低い濃度の薬剤の使用を可能にするからである。免疫原性細胞死の誘導剤、例えば、化学療法剤／腫瘍細胞傷害剤は、デバイス媒介性免疫モジュレーションと一緒に作用して、副作用を低減させつつ、改善された腫瘍退縮／低減をもたらす。一例では、クリオゲルまたはヒドロゲルは、免疫細胞富化組成物および免疫賦活剤（患者投与の前には腫瘍抗原の非存在下）と一緒に、ＰＥＩ、アントラサイクリンまたは別の免疫原性細胞死誘導剤を含む。別の例では、このクリオゲルまたはヒドロゲルは、アントラサイクリンまたは他の免疫原性細胞死誘導剤なしで、ＰＥＩ、免疫細胞富化組成物、およびＴＬＲリガンドまたはＳＴＩＮＧリガンドを含み、このアントラサイクリンまたは他の免疫原性細胞死は、患者に全身投与される。
【０１２２】
本発明のデバイスまたは足場が外科的移植なしに投与される様々な実施形態では、このデバイスまたは足場は、針を使用して注射される。例えば、このデバイスまたは足場は、１６ゲージ、１８ゲージ、２０ゲージ、２２ゲージ、２４ゲージ、２６ゲージ、２８ゲージ、３０ゲージ、３２ゲージまたは３４ゲージの針を介して注射され得る。
【０１２３】
本明細書で使用される場合、「腫瘍部位」への注射または他の投与は、（ｉ）デバイスもしくは足場の少なくとも一部が腫瘍内にあるような、（ｉｉ）デバイスもしくは足場全体が腫瘍内にあるような、（ｉｉｉ）デバイスもしくは足場の少なくとも一部が腫瘍と接触するような、または（ｉｖ）デバイスもしくは足場が腫瘍の近位にあるような、本発明のデバイスまたは足場の配置を意味し得る。ある特定の実施形態では、このデバイスまたは足場は、それが腫瘍周囲に（即ち、腫瘍と直接接触してまたは腫瘍に近接して）あるように、投与される。あるいは、このデバイスまたは足場を腫瘍塊中に直接送達するために、腫瘍嚢が穿刺される。一部の実施形態では、腫瘍は、デバイスとも足場とも接触しない。本発明の主題の様々なインプリメンテーションは、腫瘍を穿刺することまたは腫瘍を他の方法で物理的に破壊することを回避する。したがって、本発明の態様は、腫瘍嚢を物理的に邪魔することも破壊することもなしに、免疫応答を生成することに関する。非限定的な例では、このデバイスまたは足場は、腫瘍の０（即ち、腫瘍と触れている）〜１０ｍｍ以内に配置され得る。様々な実施形態では、腫瘍に最も近いデバイスまたは足場の点は、腫瘍塊境界から約０（即ち、腫瘍塊と直接接触している）、０．１、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｍｍである。一部の実施形態では、腫瘍に最も近いデバイスまたは足場の点は、腫瘍から約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ｍｍ未満である。ある特定の実施形態では、腫瘍に最も近いデバイスまたは足場の点は、腫瘍から少なくとも約１、２、３または５ｍｍかつ約６、７、８、９または１０ｍｍ未満である。
【０１２４】
本発明の主題の様々な実施形態は、患者由来の材料（例えば、患者由来の腫瘍抗原）の必要性をなくす。様々な実施形態では、デバイスおよび足場は、投与の時点では腫瘍抗原（対象または別の源由来）を含まない。抗腫瘍ワクチン接種は、例えば針を用いて、デバイスまたは足場を腫瘍中に挿入することによって、または針で腫瘍塊を邪魔することなくデバイスまたは足場を腫瘍近傍に送達することによって、達成され得る。したがって、本発明の実施形態は、（ｉ）投与されたときに腫瘍抗原を含むことも、（ｉｉ）腫瘍嚢を破壊することもなく、ｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍に対する免疫活性化を促進するデバイスおよび足場に関する。
【０１２５】
腫瘍部位への免疫調節因子（例えば、Ｔ細胞チェックポイント中の標的をモジュレートする薬剤）の送達は、腫瘍における／腫瘍近傍の免疫抑制局所微小環境を直接低減させる。
【０１２６】
送達のための例示的な化合物
ポリエチレンイミン
ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）またはポリアジリジンは、アミン基および２炭素脂肪族ＣＨ２ＣＨ２スペーサーから構成される反復単位を有するポリマーである。直鎖ポリエチレンイミンは、１級、２級および３級アミノ基を含む分岐鎖ＰＥＩとは対照的に、全て２級アミンを含む。全体的に分岐鎖のデンドリマー形態が入手可能である。ＰＥＩは、様々な分子量、例えば、１〜６０ｋＤａで入手可能である。
【０１２７】
分岐鎖ＰＥＩは、アジリジンの開環重合によって合成され得る（Zhukら、Russian  Chemical  Reviews；３４巻：７号．１９６５年）。反応条件に依存して、異なる程度の分岐が達成され得る。直鎖ＰＥＩは、他のポリマー、例えば、ポリ（２−オキサゾリン）（Tanakaら、Macromolecules、１９８３年、１６巻（６号）：８４９〜８５３頁）またはＮ置換ポリアジリジン（Weytsら、Polymer  Bulletin、１９８８年、１９巻（１号）：１３〜１９頁）の事後修飾によって入手可能である。直鎖ＰＥＩは、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）の加水分解によって合成され得る（Brissaultら、Bioconjugate  Chemistry、２００３年、１４巻：５８１〜５８７頁）。直鎖ＰＥＩを合成するための方法の非限定的な例は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１０年８月５日に公開された米国特許出願公開第２０１０−０１９７８８８号にも記載されている。分岐鎖６０ｋＤａ  ＰＥＩは、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）から市販されており、直鎖２５ｋＤａ  ＰＥＩは、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ、ＰＡ、ＵＳＡ）からである。分岐鎖２ｋＤａ  ＰＥＩおよび直鎖２ｋＤａ  ＰＥＩは、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈから市販されている。
【０１２８】
本発明の前には、ＰＥＩは、プラスミドＤＮＡ、ならびにＣｐＧおよびポリ（Ｉ：Ｃ）などの核酸を縮合するために使用された。
【０１２９】
化学療法剤
本発明の主題の態様には、免疫原性細胞死を誘導する化合物が含まれる。かかる化学療法剤には、アントラサイクリンクラスの化合物のメンバー、例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシンおよびバルルビシン、ならびにミトキサントロン、アントラサイクリンアナログが含まれる。
【０１３０】
化学療法剤は、抗原を生成し、免疫系をプライミングするために使用され得る。アントラサイクリンクラスの化学療法剤は、免疫系のプライミングを引き起こす方法で、腫瘍細胞を死滅させる（免疫原性細胞死）。アントラサイクリンは、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．に元々由来する抗がん化合物である。アントラサイクリンは、赤色の芳香族ポリケチドであり、アグリコンにおける構造的差異および異なる付着した糖残基に起因して、様々な形態で存在する。
【化１１】
2019524766.tif 000013
【０１３１】
免疫原性細胞死を惹起する例示的な化学療法剤は、以下に示される三環式化合物である。一実施形態では、本発明は、式（Ｉ）：
【化１２】
2019524766.tif 000014
の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物に関し、式中、Ｒ１およびＲ２は、−ＯＣＨ３、−ＯＨまたは−Ｈから独立して選択され；Ｒ３およびＲ４は、−ＯＨまたは−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＨから独立して選択され；Ｒ５およびＲ６は、Ｈから選択され、あるいは一緒になって、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９で置換された６員不飽和炭素環を形成し；Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、−ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＯＨ、
【化１３】
2019524766.tif 000015
から独立して選択される。
【０１３２】
例えば、１つのセットの式（Ｉ）の化合物は、Ｒ３およびＲ４がＯＨである化合物を含む。さらに、このセットの化合物は、Ｒ３およびＲ４がＯＨであり、Ｒ１がＨである、式（Ｉ）の化合物のサブセットを含み得る。
【０１３３】
別のセットの式（Ｉ）の化合物は、Ｒ１およびＲ２がＯＨである化合物を含む。このセットの化合物は、Ｒ１およびＲ２がＯＨであり、Ｒ３およびＲ４がＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＨである、式（Ｉ）の化合物のサブセットもまた含み得る。別のサブセットの式（Ｉ）の化合物は、Ｒ１およびＲ２がＯＨであり、Ｒ３およびＲ４がＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ５およびＲ６がＨである化合物を含む。
【０１３４】
別の一実施形態では、本発明は、式（ＩＩ）：
【化１４】
2019524766.tif 000016
の化合物のサブセットまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物に関し、式中、Ｒ１０は、Ｈまたは−ＯＣＨ３であり；Ｒ１１は、−Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＯＨまたは−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３であり；Ｒ１２は、
【化１５】
2019524766.tif 000017
である。
【０１３５】
例えば、１つのセットの式（ＩＩ）の化合物は、Ｒ１１がＯＣＨ３である化合物を含む。
【０１３６】
「アントラサイクリン」とは、化学療法剤として一般に使用される薬物のクラスを意味する。実施形態では、アントラサイクリンは、三環式コア（例えば、ミトキサントロン）または四環式コアを有する。実施形態では、アントラサイクリンは、以下の式
【化１６】
2019524766.tif 000018
に従う構造を有し、式中、
Ｒ１は、−Ｈ、−ＯＨまたは−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）であり；
Ｒ２は、−Ｈまたは−ＯＣＨ３であり；
Ｒ３は、アミノ糖である。例示的なアントラサイクリンであるドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシンおよびバルルビシンは、表１に記載される。なおさらなる例示的なアントラサイクリンには、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１０７，９６２号の式ＩおよびＩＩとして記載されるものが含まれる。
【表１】
2019524766.tif 000019
【０１３７】
免疫原性細胞死を誘導する他のクラスの化学療法化合物には、アルキル化剤、例えば、白金含有抗がん薬物（例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン）、ならびに（ＲＳ）−Ｎ，Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−１，３，２−オキサザホスフィナン（oxazaphosphinan）−２−アミン２−オキシド（シクロホスファミド）および関連代謝物４−ヒドロキシシクロホスファミドが含まれる。
【０１３８】
免疫原性細胞死は、強心配糖体、例えば、オレアンドリン、ウアバイン、ブファリン、ジギトキシン、ジゴキシン、シノブファタリン（cinobufatalin）、シノブファギンおよびレジブフォゲニンによっても誘導され得る。
【０１３９】
免疫原性細胞死のかかる誘導剤の活性は、デバイス注射部位において瀕死腫瘍細胞を飲み込むために動員されている抗原提示細胞を生じる。
【０１４０】
免疫応答抑制の阻害剤
腫瘍により生成された免疫抑制微小環境の阻害剤は、腫瘍部位において免疫抑制を下方調節して、上に列挙した薬剤の作用を高めるために使用される。阻害剤は、例えば、タンパク質、ペプチド、抗体、小分子、または標的タンパク質の発現を低減させるＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子を含み得る。
【０１４１】
腫瘍抗原提示および抗腫瘍免疫応答を抑制する多くの阻害経路が、腫瘍内に存在する。例えば、ＴＧＦ−βは、腫瘍免疫監視を弱め、最適な抗腫瘍免疫を防止する未成熟分化状態に向けて自然免疫細胞を極性化する。さらに、ＳＴＡＴ３経路は、腫瘍内の免疫阻害性サイトカインの産生を促進し、抗腫瘍Ｔ−ヘルパー１媒介性免疫を弱め、樹状細胞成熟化を阻害する。また、インドールアミン−ピロール２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯまたはＩＮＤＯ  ＥＣ  １．１３．１１．５２）。ＩＤＯは、ヒトではＩＤＯ１遺伝子によってコードされる酵素であり、必須アミノ酸Ｌ−トリプトファンのＮ−ホルミルキヌレニンへの分解を触媒する。ＩＤＯは、腫瘍微小環境中のトリプトファンを枯渇させて、Ｔ細胞および樹状細胞の活性を阻害し得る。これら（ＴＧＦ−β、ＳＴＡＴ３およびＩＤＯ）および他の免疫抑制経路の小分子阻害剤が開発されており、臨床試験中である。かかる阻害剤の例には、ＴＧＦ−β経路阻害剤（ＬＹ２１５７２９９）、ＳＴＡＴ３経路阻害剤（ＢＰ−１−１０２）、ＩＤＯ経路阻害剤（ＮＬＧ９１９）；ＰＤ−１経路阻害剤、ＣＴＬＡ−４経路阻害剤、ＬＡＧ−３経路阻害剤、Ｂ７−Ｈ３経路阻害剤および／またはＴＩＭ３経路阻害剤が含まれる。
【０１４２】
タンパク質阻害剤および抗体ベースの阻害剤に加えて、小分子阻害剤が、デバイス中にまたはデバイス上にローディングされ、腫瘍／腫瘍部位の位置に送達されて、局所腫瘍媒介性免疫抑制を阻害する。小分子は、１０００ダルトン未満、例えば、５００ダルトンまたはそれ未満、２５０ダルトンまたはそれ未満、１００ダルトンまたはそれ未満の分子質量を有する化合物である。例示的な小分子免疫調節化合物、例えば、免疫抑制の阻害剤は、以下に記載される。多くは一般に疎水性である。
【０１４３】
ＴＧＦ−β阻害剤
ＴＧＦ−β阻害剤の非限定的な例には、ＬＹ２１５７２９９、ＧＷ７８８３８８、ＬＹ３６４９４７、Ｒ２６８７１２、ＲｅｐＳｏｘ、ＳＢ５２５３３４およびＳＤ２０８が含まれる。
【０１４４】
ＬＹ２１５７２９９は、以下の構造を有する：
【化１７】
2019524766.tif 000020
【０１４５】
ＬＹ２１５７２９９は、ガルニセルチブ（galunisertib）としても公知であり、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Maier  Aら（２０１５年）Cell  Oncol  ３８巻：１３１〜１４４頁に記載される。この化合物は、肝臓がん（例えば、肝細胞癌）などの固形腫瘍を処置するために使用されており（clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02240433?term=LY2157299&rank=2）、進行した（転移性および／または切除不能な）神経膠芽腫、肝細胞癌および非小細胞肺がんにおいて、Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｅｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂの抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて使用されてきた。news.bms.com/press-release/rd-news/bristol-myers-squibb-and-lilly-enter-clinical-collaboration-agreement-evaluate。
【０１４６】
ＴＧＦ−β阻害剤のこれらおよび他の非限定的な例は、その各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２００７年９月４日に発行された米国特許第７，２６５，２２５号；２０１０年１１月１６日に発行された米国特許第７，８３４，０２９号；および２０１１年１月８日に発行された米国特許第７，８７２，０２０号に記載されている。
【０１４７】
ＧＷ７８８３８８は、以下の構造を有する：
【化１８】
2019524766.tif 000021
【０１４８】
ＧＷ７８８３８８は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Gellibertら（２００６年）Discovery  of  4-{4-[3-(pyridin-2-yl)-1H-pyrazol-4-yl]pyridin-2-yl}-N-(tetrahydro-2H-  pyran-4-yl)benzamide  (GW788388):  a  potent,  selective,  and  orally  active  transforming  growth  factor-β  type  I  receptor  inhibitor.  J.Med.Chem.  ４９巻、２２１０頁に記載されている。
【０１４９】
ＬＹ３６４９４７は、以下の構造を有する：
【化１９】
2019524766.tif 000022
【０１５０】
ＬＹ３６４９４７は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Sawyerら（２００３年）Synthesis  and  activity  of  new  aryl-  and  heteroaryl-substituted  pyrazole  inhibitors  of  the  transforming  growth  factor-μ  type  I  receptor  kinase  domain.  Journal  of  Medicinal  Chemistry、４６巻（１９号）、３９５３〜３９５６頁に記載されている。
【０１５１】
Ｒ２６８７１２は、以下の構造を有する：
【化２０】
2019524766.tif 000023
【０１５２】
Ｒ２６８７１２は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Terashimaら（２０１４年）R-268712,  an  orally  active  transforming  growth  factor-β  type  I  receptor  inhibitor,  prevents  glomerular  sclerosis  in  a  Thy1  nephritis  model.  Eur.J.Pharmacol.  ７３４巻：６０頁に記載されている。
【０１５３】
ＲｅｐＳｏｘは、以下の構造を有する：
【化２１】
2019524766.tif 000024
【０１５４】
ＲｅｐＳｏｘは、Ｅ−６１６４５２、ＳＪＮ  ２５１１およびＡＬＫ５阻害剤ＩＩとしても公知である。ＲｅｐＳｏｘは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Gellibertら（２００４年）Identification  of  1,5-naphthyridine  derivatives  as  a  novel  series  of  potent  and  selective  TGF-γ  type  I  receptor  inhibitors.  J.Med.Chem.  ４７巻（１８号）、４４９４〜４５０６頁に記載されている。
【０１５５】
ＳＢ５２５３３４は、以下の構造を有する：
【化２２】
2019524766.tif 000025
【０１５６】
ＳＢ５２５３３４は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Grygielkoら（２００５年）Inhibition  of  gene  markers  of  fibrosis  with  a  novel  inhibitor  of  transforming  growth  factor-β  type  I  receptor  kinase  in  puromycin-induced  nephritis.  J.Pharmacol.Exp.Ther.  ３１３巻、９４３頁に記載されている。
【０１５７】
ＳＤ２０８は、以下の構造を有する：
【化２３】
2019524766.tif 000026
【０１５８】
ＳＤ２０８は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Uhlら（２００４年）SD-208,  a  novel  transforming  growth  factor  β  feceptor  I  kinase  inhibitor,  inhibits  growth  and  invasiveness  and  enhances  immunogeneicity  of  murine  and  human  glioma  cells  in  vitro  and  in  vivo.  Cancer  Res.  ６４巻（２１号）、７９５４〜７９６１頁に記載されている。
【０１５９】
ＴＧＦ−βをアンタゴナイズする抗体の非限定的な例には、メテリムマブ（metelimumab）（ＣＡＴ−１９２としても公知）およびフレソリムマブ（fresolimumab）（ＧＣ１００８としても公知）が含まれる。フレソリムマブは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Grutterら（２００８年）「A  cytokine-neutralizing  antibody  as  a  structural  mimetic  of  2  receptor  interactions」  Proceedings  of  the  National  Academy  of  Sciences  １０５巻（５１号）：２０２５１〜２０２５６頁に記載されている。
【０１６０】
ＳＴＡＴ３阻害剤
ＳＴＡＴ３阻害剤の非限定的な例には、ＢＰ−１−１０２、Ｓ３Ｉ−Ｍ２００１、ＳＴＡ−２１、Ｓ３Ｉ−２０１、Ｓｔａｔｔｉｃ、Ｇａｌｉｅｌｌａｌａｃｔｏｎｅ、配列ＰＹ＊ＬＫＴＫ（配列番号１）（式中、Ｙ＊はホスホチロシンを示す）を有するポリペプチドおよび配列Ｙ＊ＬＰＱＴＶ（配列番号２）（式中、Ｙ＊はホスホチロシンを示す）を有するポリペプチドが含まれる。ＳＴＡＴ３阻害剤のさらなる非限定的な例は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、YueおよびTurkson  Expert  Opin  Investig  Drugs.  ２００９年１月；１８巻（１号）：４５〜５６頁に記載されている。
【０１６１】
Ｓ３Ｉ−Ｍ２００１は、以下の構造を有する：
【化２４】
2019524766.tif 000027
【０１６２】
Ｓ３Ｉ−Ｍ２００１は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１３年１２月１７日に発行された米国特許第８，６０９，６３９号に記載されている。
【０１６３】
ＳＴＡ−２１は、以下の構造を有する：
【化２５】
2019524766.tif 000028
【０１６４】
ＳＴＡ−２１は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Miyoshiら、J  Invest  Dermatol.  ２０１１年１月；１３１巻（１号）：１０８〜１７頁に記載されている。
【０１６５】
Ｓ３Ｉ−２０１は、以下の構造を有する：
【化２６】
2019524766.tif 000029
【０１６６】
Ｓ３Ｉ−２０１は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Siddiquee  Kら、Proc  Natl  Acad  Sci  U  S  A、２００７年、１０４巻（１８号）、７３９１〜７３９６頁に記載されている。
【０１６７】
Ｓｔａｔｔｉｃは、以下の構造を有する：
【化２７】
2019524766.tif 000030
【０１６８】
Ｓｔａｔｔｉｃは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Schust  Jら、Chem  Biol、２００６年、１３巻（１１号）、１２３５〜１２４２頁に記載されている。
【０１６９】
Ｇａｌｉｅｌｌａｌａｃｔｏｎｅは、以下の構造を有する：
【化２８】
2019524766.tif 000031
【０１７０】
Ｇａｌｉｅｌｌａｌａｃｔｏｎｅは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Don-Doncowら、J  Biol  Chem.  ２０１４年６月６日；２８９巻（２３号）：１５９６９〜７８頁に記載されている。
【０１７１】
ＢＰ−１−１０２は、以下の構造を有する：
【化２９】
2019524766.tif 000032
【０１７２】
シグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ３）は、ヒトではＳＴＡＴ３遺伝子によってコードされる転写因子である。ＳＴＡＴ３阻害剤であるＢＰ−１−１０２は、動物において、ヒト肺がんおよび乳がんなどの腫瘍（例えば、固形腫瘍）に対して活性である（PNAS  ２０１２年、１０９巻（２４号）９６２３〜９６２８頁）。別の小分子ＳＴＡＴ３阻害剤は、ＯＰＢ−３１１２１である（Cancer  Lett.  ２０１３年７月１０日；３３５巻（１号）：１４５〜５２頁．doi:  10.1016/j.canlet.2013.02.010.  ２０１３年２月１０日に電子出版）。
【０１７３】
別の非限定的な例は、ＯＰＢ−３１１２１、clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00955812、clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT01406574であり、ＯＰＢ−３１１２１は、抗新生物活性を有する、ＳＴＡＴ３の経口的に生体利用可能な阻害剤である。ＯＰＢ−３１１２１は、ＳＴＡＴ３のリン酸化を阻害し、これが、様々なＳＴＡＴ３応答性プロモーター上のＤＮＡ配列へのＳＴＡＴ３の結合を防止し、ＳＴＡＴ３媒介性転写の阻害および潜在的には腫瘍細胞増殖の阻害を生じる。ＳＴＡＴ３は、様々ながんにおいて構成的に活性化され、細胞成長制御の喪失および新生物形質転換に寄与する。ＯＰＢ−３１１２１は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Kimら（２０１３年）OPB-31121,  a  novel  small  molecular  inhibitor,  disrupts  the  JAK2/STAT3  pathway  and  exhibits  an  antitumor  activity  in  gastric  cancer  cells.  Cancer  Lett  ３３５巻：１４５〜１５２頁に記載されている。
【０１７４】
他の阻害剤は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Miklossyら、２０１３年  Nat.  Rev.  Drug  Discov.１２巻：６１１〜６２９頁に記載されている。
【０１７５】
ＩＤＯ阻害剤
ＩＤＯは、様々な腫瘍型中のがん細胞によって発現される。高いＩＤＯ発現は、いくつかのがん、例えば、卵巣がん、子宮内膜がん、結腸がんおよび黒色腫における転帰不良と相関する。ＩＤＯ阻害剤の非限定的な例には、ＩＮＣＢ２４３６０、ＩＮＣＢ２４３６０アナログ、ＮＬＧ９１９（ＧＤＣ−０９１９としても公知）、Ｎｏｒｈａｒｍａｎｅ、ロスマリン酸、１−メチルトリプトファンおよびインドキシモドが含まれる。
【化３０】
2019524766.tif 000033
【０１７６】
ＩＮＣＢ２４３６０
これもまたＩＤＯを阻害するＩＮＣＢ２４３６０アナログの構造は、以下の構造を有する：
【化３１】
2019524766.tif 000034
【０１７７】
このアナログは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Yueら  J  Med  Chem.  ２００９年、５２巻（２３号）、７３６４〜７３６７頁に記載されている。
【化３２】
2019524766.tif 000035
【０１７８】
ＮＬＧ９１９
ＩＮＣＢ２４３６０、上に示したそのアナログおよびＮＬＧ９１９は、ＩＤＯ１阻害剤である。ＩＤＯ１の選択的阻害は、抗腫瘍免疫のメディエーターを効果的に調節する（参照により本明細書に組み込まれる、Liuら、Blood、２０１０年、１１５巻：３５２０〜３５３０頁）。これらの薬物は、腫瘍媒介性免疫回避または抑制を阻害するのに有用であり、免疫チェックポイントブロッカー、例えば、抗体ベースの阻害剤、例えば、抗ＰＤ１と任意選択で組み合わされる（参照により本明細書に組み込まれるclinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02327078）。
【０１７９】
Ｎｏｒｈａｒｍａｎｅは、ＩＤＯ阻害剤の別の例であり、以下の構造を有する：
【化３３】
2019524766.tif 000036
【０１８０】
Ｎｏｒｈａｒｍａｎｅは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Chiarugiら（２０００年）Journal  of  Leukocyte  Biology  ６８巻（２号）：２６０〜６頁に記載されている。
【０１８１】
ロスマリン酸は、ＩＤＯ阻害剤のさらなる一例であり、以下の構造を有する：
【化３４】
2019524766.tif 000037
【０１８２】
ロスマリン酸は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Leeら（２００７年）Biochemical  Pharmacology  ７３巻（９号）：１４１２〜２１頁に記載されている。
【０１８３】
１−メチルトリプトファンは、ＩＤＯ阻害剤のさらなる一例であり、以下の構造を有する：
【化３５】
2019524766.tif 000038
【０１８４】
１−メチルトリプトファンは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Houら（２００７年）Cancer  Res.  ６７巻（２号）：７９２〜８０１頁に記載されている。
【０１８５】
インドキシモドの構造は、
【化３６】
2019524766.tif 000039
である。
【０１８６】
インドキシモドは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Soliman  HH、Jackson  E、Neuger  Tら、A  first  in  man  phase  I  trial  of  the  oral  immunomodulator,  indoximod,  combined  with  docetaxel  in  patients  with  metastatic  solid  tumors.  Oncotarget.  ２０１４年９月３０日；５巻（１８号）：８１３６〜４６頁に記載されている。
【０１８７】
ＩＤＯ阻害剤のさらなる非限定的な例は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１４年１０月２３日に公開された米国特許出願公開第２０１４３１５９６２号に記載されている。
【０１８８】
ＰＤ−１経路阻害剤
ＰＤ−１は、感染症に対する炎症性応答の時点で、末梢組織中のＴ細胞の活性を制限し、自己免疫ＰＤ−１遮断をｉｎ  ｖｉｔｒｏで制限することは、特異的抗原標的によるまたは混合リンパ球反応における同種細胞によるチャレンジに応答して、Ｔ細胞増殖およびサイトカイン産生を増強する。ＰＤ−１発現と応答との間の強い相関が、ＰＤ−１の遮断を用いて示された（Pardoll、Nature  Reviews  Cancer、１２巻：２５２〜２６４頁、２０１２年）。ＰＤ−１遮断は、ＰＤ−１またはそのリガンドであるＰＤ−Ｌ１を結合する抗体を含む様々な機構によって達成され得る。ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１ブロッカーの例は、その各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，４８８，８０２号；同第７，９４３，７４３号；同第８，００８，４４９号；同第８，１６８，７５７号；同第８，２１７，１４９号ならびにＰＣＴ公開特許出願番号ＷＯ０３０４２４０２、ＷＯ２００８１５６７１２、ＷＯ２０１００７７６３４、ＷＯ２０１００８９４１１、ＷＯ２０１００３６９５９、ＷＯ２０１１０６６３４２、ＷＯ２０１１１５９８７７、ＷＯ２０１１０８２４００、ＷＯ２０１１１６１６９９およびＷＯ２０１３１８１４５２に記載されている。ある特定の実施形態では、このＰＤ−１ブロッカーには、抗ＰＤ−Ｌ１抗体が含まれる。
【０１８９】
ＰＤ−１経路阻害剤の非限定的な例には、ＡＭＰ−２２４、ニボルマブ（ＭＤＸ−１１０６；ＯＮＯ−４５３８としても公知）、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、ＢＭＳ  ９３６５５９（ＭＤＸ−１１０５としても公知）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブとしても公知）、ＭＥＤＩ４７３６およびＭＳＢ００１０７１８Ｃが含まれる。ＰＤ−１経路阻害剤の非限定的な例は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、DolanおよびGupta、Cancer  Control.  ２０１４年７月；２１巻（３号）：２３１〜７頁にも記載されている。
【０１９０】
Ｂ７−ＤＣＩｇとしても公知のＡＭＰ−２２４は、ＰＤ−Ｌ２−Ｆｃ融合可溶性受容体である。ＡＭＰ−２２４は、Ｕ．Ｓ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ（ＮＩＨ）臨床試験番号ＮＣＴ０２２９８９４６で使用されている。ＡＭＰ−２２４は、その各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１１年９月１５日に公開された米国特許出願公開第２０１１／０２２３１８８号；２０１３年１月１７日に公開された米国特許出願公開第２０１３／００１７１９９号；およびSmothersら、Ann  Oncol（２０１３年）２４巻（補遺１）：ｉ７頁に記載されている。
【０１９１】
ニボルマブは、ＯＮＯ−４５３８、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ１１０６およびＯｐｄｉｖｏとしても公知である。ニボルマブは、その各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１１年８月３０日に発行された米国特許第８，００８，４４９号；およびSundar  R、Cho  BC、Brahmer  JR、Soo  RA（２０１５年）．「Nivolumab  in  NSCLC:  latest  evidence  and  clinical  potential」Ther  Adv  Med  Oncol  ７巻（２号）：８５〜９６頁に記載されている。
【０１９２】
ペムブロリズマブは、ＭＫ−３４７５、ランブロリズマブおよびＫｅｙｔｒｕｄａとしても公知である。ペムブロリズマブは、その各々の全内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、２０１５年２月１０日に発行された米国特許第８，９５２，１３６号；２０１２年５月１日に発行された米国特許第８，１６８，７５７号；Hamidら（２０１３年）「Safety  and  tumor  responses  with  lambrolizumab  (anti-PD-1)  in  melanoma」New  England  Journal  of  Medicine  ３６９巻（２号）：１３４〜４４頁にも記載されている。
【０１９３】
ＣＴ−０１１としても公知のピディリズマブは、その各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１４年６月１０日に発行された米国特許第８，７４７，８４７号；Westinら（２０１４年）「Safety  and  Activity  of  PD1  Blockade  by  Pidilizumab  in  Combination  with  Rituximab  in  Patients  with  Relapsed  Follicular  Lymphoma:  a  Single  Group,  Open-label,  Phase  2  Trial」、Lancet  Oncol.  １５巻：６９〜７７頁に記載されている。
【０１９４】
ＢＭＳ  ９３６５５９は、ＭＤＸ−１１０５としても公知である。ＢＭＳ  ９３６５５９は、その各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１１年５月１７日に発行された米国特許第７，９４３，７４３号；およびBrahmer,  J.  R.ら、Safety  and  activity  of  anti-PD-L1  antibody  in  patients  with  advanced  cancer.  N.  Engl.  J.  Med.  ３６６巻、２４５５〜２４６５頁（２０１２年）に記載されている。
【０１９５】
ＭＰＤＬ３２８０Ａは、アテゾリズマブとしても公知である。ＭＰＤＬ３２８０Ａは、ＣＡＳ登録番号１４２２１８５−０６−５を有する。ＭＰＤＬ３２８０Ａは、McDermottら、Atezolizumab,  an  Anti-Programmed  Death-Ligand  1  Antibody,  in  Metastatic  Renal  Cell  Carcinoma:  Long-Term  Safety,  Clinical  Activity,  and  Immune  Correlates  From  a  Phase  Ia  Study、J  Clin  Oncol.  ２０１６年１月１１日．pii:  JCO637421（印刷前の電子出版）PMID:  26755520に記載されている。
【０１９６】
ＭＥＤＩ４７３６は、その各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１４年７月１５日に発行された米国特許第８，７７９，１０８号；およびIbrahimら、Semin  Oncol.  ２０１５年６月；４２巻（３号）：４７４〜８３頁に記載されている。
【０１９７】
ＭＳＢ００１０７１８Ｃは、アベルマブとしても公知である。ＭＳＢ００１０７１８ＣのＣＡＳ登録番号は、１５３７０３２−８２−８である。ＭＳＢ００１０７１８Ｃは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Boyerinas  B、Jochems  C、Fantini  M、Heery  CR、Gulley  JL、Tsang  KY、Schlom  J.  Cancer  Immunol  Res.  ２０１５年１０月；３巻（１０号）：１１４８〜５７頁に記載されている。
【０１９８】
ＣＴＬＡ−４阻害剤
ＣＴＬＡ−４阻害剤の非限定的な例には、トレメリムマブおよびイピリムマブが含まれる。例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Pardoll  DM（２０１２年４月）．「The  blockade  of  immune  checkpoints  in  cancer  immunotherapy」.  Nat.  Rev.  Cancer  １２巻（４号）：２５２〜６４頁を参照のこと。
【０１９９】
トレメリムマブは、チシリムマブ（ticilimumab）およびＣＰ−６７５，２０６としても公知である。トレメリムマブは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Antoni  Ribas（２０１２年６月２８日）．「Tumor  immunotherapy  directed  at  PD-1」.  New  England  Journal  of  Medicine  ３６６巻（２６号）：２５１７〜９頁に記載されている。
【０２００】
イピリムマブは、Ｙｅｒｖｏｙ、ＭＤＸ−０１０およびＭＤＸ−１０１としても公知である。イピリムマブは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Antoni  Ribas（２０１２年６月２８日）．「Tumor  immunotherapy  directed  at  PD-1」.  New  England  Journal  of  Medicine  ３６６巻（２６号）：２５１７〜９頁に記載されている。
【０２０１】
ＬＡＧ−３阻害剤
ＬＡＧ−３阻害剤の非限定的な例は、ＩＭＰ３２１である。ＩＭＰ３２１は、腫瘍に対する免疫応答を増加させるために使用される、可溶性バージョンの免疫チェックポイント分子ＬＡＧ−３である。ＩＭＰ３２１は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Brignoneら（２００７年）「IMP321  (sLAG-3),  an  immunopotentiator  for  T  cell  responses  against  a  HBsAg  antigen  in  healthy  adults:  a  single  blind  randomised  controlled  phase  I  study」  J  Immune  Based  Ther  Vaccines  ５巻（１号）：５頁に記載されている。
【０２０２】
本発明の実施形態において有用であり得るＬＡＧ−３タンパク質の可溶性画分の非限定的な例は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、１９９９年９月２１日に発行された米国特許第５，９５５，３００号に記載されている。
【０２０３】
抗ＬＡＧ−３抗体の非限定的な例には、ＢＭＳ−９８６０１６およびＧＳＫ２８３１７８１が含まれる。
【０２０４】
ＧＳＫ２８３１７８１は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１４年９月２５日に公開された米国特許出願公開第２０１４／０２８６９３５号に記載されている。
【０２０５】
ＢＭＳ−９８６０１６は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１５年３月２６日に公開されたＰＣＴ国際特許出願番号ＷＯ２０１５／０４２２４６に記載されている。
【０２０６】
抗ＬＡＧ−３抗体の非限定的な例は、その各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１４年９月２５日に公開された米国特許出願公開第２０１４／０２８６９３５号；２０１５年１０月２９日に公開された米国特許出願公開第２０１５／０３０７６０９号；２００８年１１月６日に公開されたＰＣＴ国際特許出願公開番号ＷＯ２００８１３２６０１に記載されている。
【０２０７】
Ｂ７−Ｈ３阻害剤
Ｂ７−Ｈ３阻害剤の非限定的な例は、ＭＧＡ２７１として公知の抗体である。ＭＧＡ２７１は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Looら（２０１２年）Cancer  Res.  ２０１２年７月１５日；１８巻（１４号）：３８３４〜４５頁に記載されている。
【０２０８】
抗Ｂ７−Ｈ３阻害剤のさらなる非限定的な例は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１４年８月１２日に発行された米国特許第８，８０２，０９１号に記載されている。
【０２０９】
ＴＩＭ３阻害剤
ＴＩＭ３阻害剤の非限定的な例には、その各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１４年９月２３日に発行された米国特許第８，８４１，４１８号；および２０１３年１０月８日に発行された米国特許第８，５５２，１５６号に記載された抗体が含まれる。
【０２１０】
免疫賦活性化合物
本明細書で使用される場合、さらに文脈によって、用語「免疫賦活性化合物」は、抗原に対する対象の免疫応答を増加させる化合物を含む。免疫賦活性化合物の例には、免疫賦活薬および免疫細胞活性化化合物が含まれる。本発明の主題のデバイスは、リガンドを認識し抗原提示を増強するように免疫細胞をプログラムするのを助ける免疫賦活性化合物を含み得る。
【０２１１】
免疫賦活性化合物の一例は、ＰＥＩである。
【０２１２】
免疫賦活性化合物には、ＳＴＩＮＧリガンド、例えば、環状ジヌクレオチド（例えば、環状プリンジヌクレオチド）もまた含まれる。一部の実施形態では、この環状ジヌクレオチドは、２つのプリン（例えば、アデニンおよび／またはグアニン）ヌクレオチド間に２’−５’および／または３’−５’ホスホジエステル連結を含む化合物である。ＳＴＩＮＧリガンドの非限定的な例は、その各々の全内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、２０１５年５月２８日に公開されたＰＣＴ国際特許出願公開番号ＷＯ２０１５／０７７３５４；２０１０年５月４日に発行された米国特許第７，７０９，４５８号；２００９年９月２２日に発行された米国特許第７，５９２，３２６号；および２０１４年６月１９日に公開された米国特許出願公開第２０１４／０２０５６５３号に記載されている。環状ジヌクレオチド（ＣＤＮ）には、ｃ−ジアデノシン一リン酸（ＡＭＰ）、ｃ−ジグアノシン一リン酸（ＧＭＰ）、ｃ−ジイノシン一リン酸（ＩＭＰ）、ｃ−ＡＭＰ−ＧＭＰ、ｃ−ＡＭＰ−ＩＭＰおよびｃ−ＧＭＰ−ＩＭＰ、ならびに本明細書で「チオホスフェート」と呼ばれるホスホロチオエートアナログが含まれるがこれらに限定されないそれらのアナログが含まれるがこれらに限定されない。ホスホロチオエートは、非架橋酸素のうち１つが硫黄で置き換えられた正常ヌクレオチドのバリアントである。ヌクレオチド間結合の硫化は、５’から３’へのおよび３’から５’へのＤＮＡポリメラーゼ１エキソヌクレアーゼ、ヌクレアーゼＳ１およびＰ１、ＲＮａｓｅ、血清ヌクレアーゼならびにヘビ毒ホスホジエステラーゼを含む、エンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼの作用を劇的に低減させる。さらに、脂質二重層を横断する可能性が増加する。ホスホロチオエート連結は、本質的にキラルである。当業者は、この構造中のホスフェートが、各々ＲまたはＳ形態で存在し得ることを認識する。したがって、Ｒｐ，Ｒｐ、Ｓｐ，ＳｐおよびＲｐ，Ｓｐ形態が可能である。各場合において、これらの分子の実質的に純粋なＲｐ，ＲｐおよびＲｐ，Ｓｐジアステレオマーが好ましい。かかるＣＤＮチオホスフェート分子の例には、チオホスフェート形態のＲｐ，Ｒｐ−ｃ−ジアデノシン一リン酸；Ｒｐ，Ｓｐ−ｃ−ジアデノシン一リン酸；Ｒｐ，Ｒｐ−ｃ−ジグアノシン一リン酸およびＲｐ，Ｓｐ−ｃ−ジグアノシン一リン酸が含まれる。
【０２１３】
ＴＬＲアゴニスト、例えば、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２およびＴＬＲ１３アゴニストもまた、免疫賦活性化合物である。ＴＬＲは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）と呼ばれる構造的に保存された分子を認識する単一膜貫通ドメインの非触媒性受容体のクラスである。ＰＡＭＰは微生物上に存在し、宿主分子から識別可能である。ＴＬＲは、全ての脊椎動物に存在する。１３種のＴＬＲ（連続的にＴＬＲ１〜１３と呼ばれる）が、ヒトおよびマウスにおいて同定されている。ヒトは、ＴＬＲ１〜１０を含む。例示的なＴＬＲアゴニストには、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）、例えば、感染模倣組成物、例えば、細菌由来の免疫モジュレーターが含まれる。ＴＬＲアゴニストには、核酸または脂質組成物［例えば、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）］が含まれる。
【０２１４】
ヒトＴＬＲ１をコードする核酸配列の非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００３２６３．３（ＧＩ：４１３５０３３６）（配列番号２６７）に提供される。ヒトＴＬＲ１のアミノ酸配列の一例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００３２５４．２（ＧＩ：４１３５０３３７）（配列番号２６８）に提供される。ＴＬＲ１アゴニストの非限定的な例には、トリアシルリポペプチドが含まれる。
【０２１５】
ヒトＴＬＲ２をコードする核酸配列の非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００３２６４．３（ＧＩ：６８１６０９５６）（配列番号２６９）に提供される。ヒトＴＬＲ２のアミノ酸配列の一例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００３２５５．２（ＧＩ：１９７１８７３４）（配列番号２７０）に提供される。ＴＬＲ２アゴニストの非限定的な例には、細菌ペプチドグリカン、細菌ペプチドグリカンの糖脂質、細菌ペプチドグリカンのリポペプチド、細菌ペプチドグリカンのリポタンパク質、リポテイコ酸、ヒートショックタンパク質７０およびザイモサンが含まれる。
【０２１６】
ヒトＴＬＲ３をコードする核酸配列の非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００３２６５．２（ＧＩ：１９７１８７３５）（配列番号２７１）に提供される。ヒトＴＬＲ３のアミノ酸配列の一例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＢＣ８６９１０．１（ＧＩ：８６１６１３３０）（配列番号２７２）に提供される。ＴＬＲ３アゴニストの非限定的な例には、二本鎖ＲＮＡ、ポリＩ：Ｃおよびポリ（Ａ：Ｕ）が含まれる。
【０２１７】
ヒトＴＬＲ４をコードする核酸配列の非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿１３８５５４．４（ＧＩ：３７３４３２６００）（配列番号２７３）に提供される。ヒトＴＬＲ４のアミノ酸配列の一例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿６１２５６４．１（ＧＩ：１９９２４１４９）（配列番号２７４）に提供される。ＴＬＲ４アゴニストの非限定的な例には、リポポリサッカリド（ＬＰＳ）、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）、ヒートショックタンパク質、フィブリノーゲン、ヘパリン硫酸またはその断片、ヒアルロン酸またはその断片、ニッケル、オピオイド、α１−酸性糖タンパク質（ＡＧＰ）、ＲＣ−５２９、マウスβ−デフェンシン２およびフロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）が含まれる。
【０２１８】
ヒトＴＬＲ５をコードする核酸配列の非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００３２６８．５（ＧＩ：２８１４２７１３０）（配列番号２７５）に提供される。ヒトＴＬＲ５のアミノ酸配列の一例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００３２５９．２（ＧＩ：１６７５１８４３）（配列番号２７６）に提供される。ＴＬＲ５アゴニストの非限定的な例には、細菌フラジェリン、およびＴｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ由来のプロフィリン（proflin）が含まれる。
【０２１９】
ヒトＴＬＲ６をコードする核酸配列の非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００６０６８．４（ＧＩ：３１８０６７９５３）（配列番号２７７）に提供される。ヒトＴＬＲ６のアミノ酸配列の一例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００６０５９．２（ＧＩ：２０１４３９７１）（配列番号２７８）に提供される。ＴＬＲ６アゴニストの非限定的な例には、マイコプラズマ由来のジアシルリポペプチドが含まれる。
【０２２０】
ヒトＴＬＲ７の核酸配列の非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０１６５６２．３（ＧＩ：６７９４４６３８）（配列番号２７９）に提供される。ヒトＴＬＲ７のアミノ酸配列の一例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０５７６４６．１（ＧＩ：７７０６０９３）（配列番号２８０）に提供される。ＴＬＲ７アゴニストの非限定的な例には、イミダゾキノリン類、例えば、イミダゾキノリン、グアノシンアナログ、例えば、ロキソリビン、イミキモド、ガーディキモド、レシキモド、ブロピリミン、および一本鎖ＲＮＡが含まれる。
【０２２１】
ヒトＴＬＲ８をコードする核酸配列の非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿１３８６３６．４（ＧＩ：２５７１９６２５３）（配列番号２８１）に提供される。ヒトＴＬＲ８のアミノ酸配列の一例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿６１９５４２．１（ＧＩ：２０３０２１６８）（配列番号２８２）に提供される。ＴＬＲ８アゴニストの非限定的な例には、小合成化合物、一本鎖ウイルスＲＮＡおよび貪食された細菌ＲＮＡが含まれる。
【０２２２】
ヒトＴＬＲ９アイソフォームＡをコードする核酸配列の非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＮＣＢＩ受託番号ＮＭ＿０１７４４２（配列番号２８３）に提供される。ヒトＴＬＲ９アイソフォームＡのアミノ酸配列は、参照により本明細書に組み込まれる、ＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿０５９１３８（配列番号２８４）に提供される。ＴＬＲ９オリゴヌクレオチドの非限定的な例には、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドが含まれる。
【０２２３】
ヒトＴＬＲ１０をコードする核酸配列の非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０３０９５６．３（ＧＩ：３０６１４０４８８）（配列番号２８５）に提供される。ヒトＴＬＲ１０のアミノ酸配列の一例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿１１２２１８．２（ＧＩ：６２８６５６１８）（配列番号２８６）に提供される。
【０２２４】
マウスＴＬＲ１１をコードする核酸配列の非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿２０５８１９．３（ＧＩ：４０８６８４４１２）（配列番号２８７）に提供される。マウスＴＬＲ１１のアミノ酸配列の一例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿９９１３８８．２（ＧＩ：４０８６８４４１３）（配列番号２８８）に提供される。ＴＬＲ１１アゴニストの非限定的な例には、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ由来のプロフィリンが含まれる。
【０２２５】
マウスＴＬＲ１２をコードする核酸配列の非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿２０５８２３．２（ＧＩ：１４８５３９９００）（配列番号２８９）に提供される。マウスＴＬＲ１２のアミノ酸配列の一例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿９９１３９２．１（ＧＩ：４５４３０００１）（配列番号２９０）に提供される。ＴＬＲ１２アゴニストの非限定的な例には、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ由来のプロフィリンが含まれる。
【０２２６】
マウスＴＬＲ１３をコードする核酸配列の非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿２０５８２０．１（ＧＩ：４５４２９９９８）（配列番号２９１）に提供される。マウスＴＬＲ１３のアミノ酸配列の一例は、参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿９９１３８９．１（ＧＩ：４５４２９９９９）（配列番号２９２）に提供される。ＴＬＲ１３アゴニストの非限定的な例には、リボソームＲＮＡ配列「ＣＧＧＡＡＡＧＡＣＣ」（配列番号３４）が含まれる。
【０２２７】
ＴＬＲアゴニスト（合成および天然の両方のリガンド）の代表的リストは、それらの対応する受容体と共に、以下の表２に提供される。
【表２】
2019524766.tif 000040
【０２２８】
様々な実施形態では、このＴＬＲリガンドは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドまたはポリＩ：Ｃポリヌクレオチドを含む。ポリＩ：Ｃは、一方の鎖がイノシン酸のポリマーであり、他方の鎖がシチジル酸のポリマーである、ミスマッチした二本鎖ＲＮＡである。ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ポリＩ：Ｃと略される）は、免疫賦活薬またはアジュバントでもある。一部の実施形態では、このポリＩ：Ｃポリヌクレオチドは、少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１、０．１〜１、０．２〜１、１〜１．５、０．５〜１．５、０．５〜２、１〜５、１．５〜５または１．５〜８キロベースの長さを有する。ある特定の実施形態では、このポリＩ：Ｃポリヌクレオチドは、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１、０．１〜１、０．２〜１、１〜１．５、０．５〜１．５、０．５〜２、１〜５、１．５〜５、１．５〜８またはそれよりも多くのキロベースの長さを有する。任意選択で、これは、そのナトリウム塩の形態で使用される。ポリＩ：Ｃは、Ｂ細胞、マクロファージおよび樹状細胞の膜において発現されるＴＬＲ３と相互作用する（即ち、ポリＩ：ＣはＴＬＲ３リガンドである）。任意選択で、ＣｐＧまたはポリＩ：Ｃは縮合される。例えば、アジュバントが縮合され、次いで、抗原に連結される；あるいはアジュバントが抗原に連結され、次いで、コンジュゲートが縮合される。例示的な縮合剤には、ポリ−Ｌ−リシン（ＰＬＬ）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ヘキサミンコバルト塩化物およびＴＡＴ４７−５７ペプチド（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ  配列番号２９３）が含まれる。
【０２２９】
免疫賦活性化合物には、イミキモド、ＣＲＸ−５２７およびＯＭ−１７４が含まれる。
【０２３０】
イミキモドは、以下の構造を有する：
【化３７】
2019524766.tif 000041
【０２３１】
この化合物は、その各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２００８年１月２９日に発行された米国特許第７，３２３，５６８号；２００４年２月４日に発行された米国特許第８，６４２，６１６号；Walterら（２０１３年）Nat  Commun  ４巻：１５６０頁；BiluおよびSauder（２００３年）Br.  J.  Dermatol.  １４９巻、補遺６６：５〜８頁；ならびにMillerら（１９９９年）Int  J  Immunopharmacol  ２１巻（１号）：１〜１４頁に記載されている。
【０２３２】
ＴＬＲアゴニストのさらなる非限定的な例には、ＣＲＸ−５２７およびＯＭ−１７４が含まれる。
【０２３３】
ＣＲＸ−５２７は、その全内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、Lemboら、J  Immunol.  ２００８年６月１日；１８０巻（１１号）：７５７４〜８１頁；およびHennessyら、Nature  Reviews  Drug  Discovery  ９巻、２９３〜３０７頁（２０１０年４月）に記載されている。ＣＲＸ−５２７は、化学名（２Ｓ）−２−［［（３Ｒ）−３−デカノイルオキシテトラデカノイル］アミノ］−３−［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−３−［［（３Ｒ）−３−デカノイルオキシテトラデカノイル］アミノ］−４−［（３Ｒ）−３−デカノイルオキシテトラデカノイル］オキシ−６−（ヒドロキシメチル）−５−ホスホノオキシオキサン（phosphonooxyoxan）−２−イル］オキシプロパン酸を有する。
【０２３４】
ＯＭ−１７４は、化学名［（３Ｒ）−１−［［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−２−［［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−［［（３Ｒ）−３−ヒドロキシテトラデカノイル］アミノ］−６−ホスホノオキシオキサン−２−イル］メトキシ］−４−ヒドロキシ−６−（ヒドロキシメチル）−５−ホスホノオキシオキサン−３−イル］アミノ］−１−オキソテトラデカン−３−イル］ドデカノエートを有する。ＯＭ−１７４は、それらの各々の全内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、Onierら、Int  J  Cancer.  １９９９年５月３１日；８１巻（５号）：７５５〜６０頁；Isambertら、BMC  Cancer（２０１３年）１３巻：１７２頁；およびHennessyら、Nature  Reviews  Drug  Discovery  ９巻、２９３〜３０７頁（２０１０年４月）に記載されている。
【０２３５】
シトシン−グアノシン（ＣｐＧ）オリゴヌクレオチド（ＣｐＧ−ＯＤＮ）配列
ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（即ち、ＣｐＧ  ＯＤＮ）は、シトシン三リン酸デオキシヌクレオチド（「Ｃ」）とその後ろのグアニン三リン酸デオキシヌクレオチド（「Ｇ」）とを含む短い一本鎖合成デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）分子である。「ｐ」とは、連続ヌクレオチド間のホスホジエステル連結を指すが、一部のＯＤＮは、その代わりに、修飾されたホスホロチオエート（ＰＳ）骨格を有する。一部の実施形態では、このＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドは、少なくとも約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、２６、２７、２８、２９、３０、１５〜３０、２０〜３０、２０〜２５またはそれよりも多くのヌクレオチド長である。
【０２３６】
ＣｐＧ部位は、遺伝子発現をサイレンシングするために細胞が使用するいくつかの内因性機構の１つであるＤＮＡメチル化において、重要な役割を果たす。プロモーターエレメント内のＣｐＧ部位のメチル化は、遺伝子サイレンシングをもたらし得る。がんの場合、腫瘍サプレッサー遺伝子はサイレンシングされる場合が多いが、癌遺伝子またはがん誘導性遺伝子は発現されることが公知である。腫瘍サプレッサー遺伝子（これはがん形成を防止する）のプロモーター領域中のＣｐＧ部位はメチル化されるが、癌遺伝子のプロモーター領域中のＣｐＧ部位は、ある特定のがんでは低メチル化されるまたはメチル化されないことが示されている。ＴＬＲ−９受容体は、ＤＮＡ中の非メチル化ＣｐＧ部位を結合する。
【０２３７】
本明細書に記載されている様々な組成物は、ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、内因性の源から単離され、またはｉｎ  ｖｉｖｏもしくはｉｎ  ｖｉｔｒｏで合成される。内因性ＣｐＧオリゴヌクレオチドの例示的な源には、微生物、細菌、真菌、原生動物、ウイルス、カビまたは寄生生物が含まれるがこれらに限定されない。あるいは、内因性ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、哺乳動物の良性または悪性新生物腫瘍から単離される。合成ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、宿主生物中への鋳型ＤＮＡのトランスフェクションまたは形質転換後に、ｉｎ  ｖｉｖｏで合成される。あるいは、合成ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）または他の当該分野で認識された方法によって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで合成される（参照により本明細書に組み込まれる、Sambrook,  J.、Fritsch,  E.F.およびManiatis,  T.、Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual.  Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press、NY、１巻、２巻、３巻（１９８９年））。
【０２３８】
ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、樹状細胞による細胞取り込みのために提示される。例えば、ネイキッドＣｐＧオリゴヌクレオチドが使用される。用語「ネイキッド」は、さらなる置換基を有さない、単離された内因性または合成ポリヌクレオチド（またはオリゴヌクレオチド）を記述するために使用される。別の実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、細胞取り込みの効率を増加させるために、１種または複数の化合物に結合される。あるいは、またはさらに、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、足場および／または樹状細胞内のオリゴヌクレオチドの安定性を増加させるために、１種または複数の化合物に結合される。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、任意選択で、細胞取り込みの前に縮合される。例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、樹状細胞中への細胞取り込みの効率を増加させるカチオン性ポリマーであるポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を使用して縮合されて、カチオン性ナノ粒子を生じ得る。ＣｐＧオリゴヌクレオチドはまた、他のポリカチオン性試薬を使用して縮合されて、カチオン性ナノ粒子を生じ得る。使用され得るポリカチオン性試薬のさらなる非限定的な例には、ポリ−Ｌ−リシン（ＰＬＬ）およびポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーが含まれる。
【０２３９】
ＴＬＲ９への送達およびその局在化を増強するためにＤＣ中へのＣｐＧ内在化を促進するベクター系が開発されている。アミンリッチなポリカチオンであるポリエチレンイミン（ＰＥＩ）は、ＤＮＡのリン酸基との会合を介してプラスミドＤＮＡを縮合して、細胞膜会合および細胞中へのＤＮＡ取り込みを容易にする小さい正に荷電した縮合物を得るために、広く使用されてきた（各々が参照により本明細書に組み込まれる、Godbey  W.  T.、Wu  K.  K.およびMikos,  A.  G.、J.  of  Biomed  Mater  Res、１９９９年、４５巻、２６８〜２７５頁；Godbey  W.  T.、Wu  K.  K.およびMikos,  A.  G.、Proc  Natl  Acad  Sci  USA.  ９６巻（９号）、５１７７〜８１頁（１９９９年））。ＣｐＧ−ＯＤＮを縮合するための例示的な方法は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１３年８月８日に公開された米国特許出願第２０１３０２０２７０７号Ａ１に記載されている。結果的に、ＰＥＩは、遺伝子トランスフェクションを増強するため、および宿主細胞においてｉｎ  ｓｉｔｕで長期遺伝子発現を促進したＰＥＩ−ＤＮＡがローディングされたＰＬＧマトリックスを製造するために、非ウイルスベクターとして利用されてきた（参照により本明細書に組み込まれる、Huang  Y  C、Riddle  F、Rice  K  GおよびMooney  D  J.、Hum  Gene  Ther.  ５巻、６０９〜１７頁（２００５年））。
【０２４０】
ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、複数のクラスに分割され得る。例えば、本発明の組成物、方法およびデバイスによって包含される例示的なＣｐＧ−ＯＤＮは、刺激性、中性または抑制性である。用語「刺激性」は、ＴＬＲ９を活性化するＣｐＧ−ＯＤＮ配列のクラスを記述する。用語「中性」は、ＴＬＲ９を活性化しないＣｐＧ−ＯＤＮ配列のクラスを記述する。用語「抑制性」は、ＴＬＲ９を阻害するＣｐＧ−ＯＤＮ配列のクラスを記述する。用語「ＴＬＲ９を活性化する」は、ＴＬＲ９が細胞内シグナル伝達を開始させるプロセスを記述する。
【０２４１】
刺激性ＣｐＧ−ＯＤＮは、それらの免疫賦活活性が異なる３つの型、Ａ、ＢおよびＣへとさらに分割され得る。Ａ型刺激性ＣｐＧ  ＯＤＮは、ホスホジエステル中心ＣｐＧ含有パリンドロームモチーフおよびホスホロチオエート３’ポリ−Ｇストリングによって特徴付けられる。ＴＬＲ９の活性化後、これらのＣｐＧ  ＯＤＮは形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）からの高いＩＦＮ−α産生を誘導する。Ａ型ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＴＬＲ９依存的ＮＦ−κＢシグナル伝達を弱く刺激する。
【０２４２】
Ｂ型刺激性ＣｐＧ  ＯＤＮは、１つまたは複数のＣｐＧジヌクレオチドと共に完全ホスホロチオエート骨格を含む。ＴＬＲ９活性化後、これらのＣｐＧ−ＯＤＮは、Ｂ細胞を強く活性化する。Ａ型ＣｐＧ−ＯＤＮとは対照的に、Ｂ型ＣｐＧ−ＯＤＮは、ＩＦＮ−α分泌を弱く刺激する。
【０２４３】
Ｃ型刺激性ＣｐＧ  ＯＤＮは、Ａ型およびＢ型の特色を含む。Ｃ型ＣｐＧ−ＯＤＮは、完全ホスホロチオエート骨格およびＣｐＧ含有パリンドロームモチーフを含む。Ａ型ＣｐＧ  ＯＤＮと同様に、Ｃ型ＣｐＧ  ＯＤＮは、ｐＤＣからの強いＩＦＮ−α産生を誘導する。Ｂ型ＣｐＧ  ＯＤＮと同様に、Ｃ型ＣｐＧ  ＯＤＮは、強いＢ細胞刺激を誘導する。
【０２４４】
例示的な刺激性ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＯＤＮ  １５８５（５’−ｇｇＧＧＴＣＡＡＣＧＴＴＧＡｇｇｇｇｇｇ−３’）（配列番号２１）、ＯＤＮ  １６６８（５’−ｔｃｃａｔｇａｃｇｔｔｃｃｔｇａｔｇｃｔ−３’）（配列番号２２）、ＯＤＮ  １８２６（５’−ｔｃｃａｔｇａｃｇｔｔｃｃｔｇａｃｇｔｔ−３’）（配列番号２３）、ＯＤＮ  ２００６（５’−ｔｃｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔｔｔｇｔｃｇｔｔ−３’）（配列番号２４）、ＯＤＮ  ２００６−Ｇ５（５’−ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＧＧＧＧＧ−３’）（配列番号２５）、ＯＤＮ  ２２１６（５’−ｇｇＧＧＧＡＣＧＡ：ＴＣＧＴＣｇｇｇｇｇｇ−３’）（配列番号２６）、ＯＤＮ  ２３３６（５’−ｇｇｇＧＡＣＧＡＣ：ＧＴＣＧＴＧｇｇｇｇｇｇ−３’）（配列番号２７）、ＯＤＮ  ２３９５（５’−ｔｃｇｔｃｇｔｔｔｔｃｇｇｃｇｃ：ｇｃｇｃｃｇ−３’）（配列番号２８）、ＯＤＮ  Ｍ３６２（５’−ｔｃｇｔｃｇｔｃｇｔｔｃ：ｇａａｃｇａｃｇｔｔｇａｔ−３’）（配列番号２９）（全てＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を含むがこれらに限定されない。本発明は、前述のＣｐＧ  ＯＤＮの任意のヒト化バージョンもまた包含する。好ましい一実施形態では、本発明の組成物、方法およびデバイスは、ＯＤＮ  １８２６（その配列は、５’から３’に向かってｔｃｃａｔｇａｃｇｔｔｃｃｔｇａｃｇｔｔであり、配列中、ＣｐＧエレメントには下線が付される、配列番号２３）を含む。
【０２４５】
ＴＬＲ９を刺激しない中性または対照ＣｐＧ  ＯＤＮは、本発明によって包含される。これらのＯＤＮは、それらの刺激性対応物と同じ配列を含むが、ＣｐＧジヌクレオチドの代わりにＧｐＣジヌクレオチドを含む。
【０２４６】
本発明によって包含される例示的な中性または対照ＣｐＧ  ＯＤＮは、ＯＤＮ  １５８５対照、ＯＤＮ  １６６８対照、ＯＤＮ  １８２６対照、ＯＤＮ  ２００６対照、ＯＤＮ  ２２１６対照、ＯＤＮ  ２３３６対照、ＯＤＮ  ２３９５対照、ＯＤＮ  Ｍ３６２対照（全てＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を含むがこれらに限定されない。本発明は、前述のＣｐＧ  ＯＤＮの任意のヒト化バージョンもまた包含する。
【０２４７】
免疫賦活性抗体
さらなる非限定的な免疫賦活性化合物には、免疫賦活性抗体が含まれる。本発明の主題の態様は、免疫系の細胞を刺激または活性化するための免疫賦活性抗体の使用に関する。腫瘍微小環境内の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞および樹状細胞に刺激を提供することは、抗腫瘍免疫応答を改善する。一部の実施形態では、刺激は、Ｔ細胞または樹状細胞上の表面受容体を結合しそれをアゴナイズする免疫賦活性抗体を使用して提供される。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞機能は、１種または複数の共刺激細胞表面分子、例えば、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）およびＯＸ４０（ＣＤ１３４）に標的化された１種または複数の抗体を使用して増強され、増強されたＴ細胞増殖および生存をもたらす。一部の実施形態では、樹状細胞活性化は、１種または複数のアゴニスト性ＣＤ４０抗体を用いて容易になされる。それらの免疫賦活性の性質に一般に起因して、これらの抗体は、全身適用された場合には的外れの免疫関連毒性をもたらし得る。本発明の主題のデバイスまたは足場を使用した、作用の部位におけるこれらの抗体の適用は、作用の所望の部位における用量に焦点を当てることによって、この問題を回避する。さらに、免疫賦活性抗体の臨床活性は、本明細書に開示されているデバイスまたは足場を使用して、腫瘍部位においてその用量を濃縮することによって改善される。
【０２４８】
ＣＤ１３７抗体
ＣＤ１３７は、これらの細胞に共刺激を提供する、活性化されたＴ細胞上で見出される表面分子である。ＣＤ１３７の刺激は、増加したＴ細胞増殖を生じ、活性化誘導される細胞死からＴ細胞を保護する。ＣＤ１３７は抗腫瘍活性をもたらすことが、いくつかの前臨床モデルにおいて示されている。抗ＣＤ１３７抗体の非限定的な一例であるＢＭＳ−６６５１３（ウレルマブ）は、いくつかの臨床試験で試験されており、疾患における部分的寛解をもたらすが、他の自己免疫性後遺症の中で、肝臓毒性を伴うことが示されている（Asciertoら、２０１０年、Seminars  in  Oncology）。ＰＦ−０５０８２５６６は、臨床開発中のＣＤ１３７抗体の別の例である。ＰＦ−０５０８２５６６は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Fisherら（２０１２年）Cancer  Immunol  Immunother.  ６１巻（１０号）：１７２１〜３３頁に記載されている。上に示したように、全身送達には適切でないものを含む様々な抗ＣＤ１３７抗体が、本発明の主題のデバイスおよび足場において使用され得る。
【０２４９】
ＣＤ１３７のアミノ酸配列の例示的な非限定的な例は、ＧｅｎＢａｎｋ番号：ＡＡＨ０６１９６．１（配列番号３５）として公に入手可能である。
【０２５０】
ＣＤ１３４抗体
ＣＤ１３４は、活性化されたＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞上で主に発現され、結合した場合に共刺激を提供する。ＣＤ１３４とリガンド、例えば抗ＣＤ１３４抗体との結合は、Ｔ細胞の生存および増大を促進する。ＣＤ１３４抗体の非限定的な例には、９Ｂ１２およびＭＥＤＩ６４６９が含まれる。９Ｂ１２は、その全内容が参照により組み込まれる、Curtiら（２０１３年）Cancer  Res  ７３巻：７１８９頁に記載されている。ＭＥＤＩ６４６９は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Leidnerら  Journal  of  Clinical  Oncology、2015  ASCO  Annual  Meeting（２０１５年５月２９日〜６月２日）．３３巻、１５号＿補遺（５月２０日に補足）、２０１５年：ＴＰＳ６０８３に記載されている。
【０２５１】
ＣＤ１３４のアミノ酸配列の例示的な非限定的な例は、ＧｅｎＢａｎｋ番号：ＡＡＩ０５０７１．１（配列番号３６）として公に入手可能である。
【０２５２】
ＣＤ４０抗体
ＣＤ４０は、樹状細胞などの抗原提示細胞上で見出される表面受容体である。ＣＤ４０の結合は、それらの機能にとって重要なプロセスである抗原提示細胞の活性化を生じる。樹状細胞のこの活性化は、共刺激受容体の上方調節および炎症促進性サイトカインの産生をもたらし、Ｔ細胞をプライミングする能力の増強をもたらす。アゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、クリニックにおいて限定的な活性を示している（VonderheideおよびGlennie、２０１３年、Clinical  Cancer  Research）。ＣＤ４０抗体の非限定的な例には、ＨＣＤ１２２（ルカツムマブ（Lucatumumab））、ＣＰ−８７０，８９３、ＳＧＮ−４０  ｈｕＳ２Ｃ６（ダセツズマブ）およびＣｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４が含まれる。これらの抗体は、臨床開発中である。上で説明したように、全身使用に適切でない抗体であっても、有害な副作用をほとんどまたは全く伴わずに、本発明の主題の実施形態において利用され得る。ルカツムマブは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Fanaleら（２０１４年）Br  J  Haematol.  １６４巻（２号）：２５８〜６５頁に記載されている。ＣＰ−８７０，８９３は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Glaudeら（２０１１年）Cancer  Immunol.  Immunother.  ６０巻、１００９〜１０１７頁（２０１１年）に記載されている。ダセツズマブは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、de  Vosら（２０１４年）Journal  of  Hematology  &  Oncology  ２０１４年、７巻：４４頁に記載されている。Ｃｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、VonderheideおよびGlennie（２０１３年）Clin  Cancer  Res.  １９巻（５号）：１０３５〜１０４３頁に記載されている。
【０２５３】
ＣＤ４０のアミノ酸配列の例示的な非限定的な例は、ＧｅｎＢａｎｋ番号：ＡＡＨ１２４１９．１（配列番号３７）として公に入手可能である。
【０２５４】
阻害剤および免疫チェックポイント遮断
本発明の主題の様々なインプリメンテーションは、Ｔ細胞または樹状細胞抑制の阻害剤、およびＴ細胞または樹状細胞抑制の阻害剤を含む足場またはデバイスの投与に関する。かかる阻害剤の非限定的な例には、ＴＧＦ−β経路阻害剤、ＳＴＡＴ３経路阻害剤およびＩＤＯ経路阻害剤、ならびに免疫チェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１経路阻害剤、ＣＴＬＡ−４経路阻害剤、ＬＡＧ−３経路阻害剤、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３としても公知）経路阻害剤およびＴＩＭ３経路阻害剤が含まれる。
【０２５５】
腫瘍抗原提示および抗腫瘍免疫応答を抑制する多くの阻害経路が、腫瘍内に存在する。例えば、ＴＧＦ−βは、腫瘍免疫監視を弱め、最適な抗腫瘍免疫を防止する未成熟分化状態に向けて自然免疫細胞を極性化する。さらに、ＳＴＡＴ３経路は、腫瘍内の免疫阻害性サイトカインの産生を促進し、抗腫瘍Ｔ−ヘルパー１媒介性免疫を弱め、樹状細胞成熟化を阻害する。上に記載されたこれらの経路および他の免疫抑制経路の小分子阻害剤は、クリオゲルまたはヒドロゲルデバイスを使用して腫瘍に送達される。腫瘍微小環境を変更するための他のアプローチ、例えば、免疫チェックポイントタンパク質に対する抗体もまた利用され得る。
【０２５６】
細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）は、Ｔ細胞活性化の経路を下方調節する免疫チェックポイントタンパク質である（Fongら、Cancer  Res.  ６９巻（２号）：６０９〜６１５頁、２００９年；Weber  Cancer  Immunol.  Immunother、５８巻：８２３〜８３０頁、２００９年）。ＣＴＬＡ−４の遮断は、Ｔ細胞の活性化および増殖を強化することが示されている。ＣＴＬＡ−４の阻害剤には、抗ＣＴＬＡ−４抗体が含まれる。抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ＣＴＬＡ−４に結合し、抗原提示細胞上で発現されるそのリガンドＣＤ８０／ＣＤ８６とＣＴＬＡ−４との相互作用を遮断し、それによって、これらの分子の相互作用によって惹起される免疫応答の負の下方調節を遮断する。抗ＣＴＬＡ−４抗体の例は、米国特許第５，８１１，０９７号；同第５，８１１，０９７号；同第５，８５５，８８７号；同第６，０５１，２２７号；同第６，２０７，１５７号；同第６，６８２，７３６号；同第６，９８４，７２０号；および同第７，６０５，２３８号に記載されている。１つの抗ＣＤＬＡ−４抗体は、トレメリムマブ（チシリムマブ、ＣＰ−６７５，２０６）である。一実施形態では、この抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ＣＴＬＡ−４に結合する完全ヒトモノクローナルＩｇＧ抗体であるイピリムマブ（１０Ｄ１、ＭＤＸ−Ｄ０１０としても公知）である。イピリムマブは、Ｙｅｒｖｏｙ（商標）の名の下で市販され、切除不能なまたは転移性の黒色腫の処置について承認されている。
【０２５７】
他の免疫チェックポイント阻害剤には、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）阻害剤、例えば、可溶性Ｉｇ融合タンパク質であるＩＭＰ３２１が含まれる（Brignoneら、２００７年、J.  Immunol.  １７９巻：４２０２〜４２１１頁）。他の免疫チェックポイント阻害剤には、Ｂ７阻害剤、例えば、Ｂ７−Ｈ３およびＢ７−Ｈ４阻害剤が含まれる。特に、抗Ｂ７−Ｈ３抗体ＭＧＡ２７１（Looら、２０１２年、Clin.  Cancer  Res.  ７月１５日（１８巻）３８３４頁）。ＴＩＭ３（Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３）阻害剤もまた含まれる（Fourcadeら、２０１０年、J.  Exp.  Med.  ２０７巻：２１７５〜８６頁およびSakuishiら、２０１０年、J.  Exp.  Med.  ２０７巻：２１８７〜９４頁）。
【０２５８】
がん処置のための標的として調査されてきたリガンド−受容体相互作用は、膜貫通プログラム細胞死１タンパク質（ＰＤＣＤ１、ＰＤ−１；ＣＤ２７９としても公知）とそのリガンドＰＤ−１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ２７４）との間の相互作用である。正常な生理学では、細胞の表面上のＰＤ−Ｌ１は、免疫細胞の表面上のＰＤ１に結合し、免疫細胞の活性を阻害する。がん細胞表面上のＰＤ−Ｌ１の上方調節は、さもなければ腫瘍細胞を攻撃し得るＴ細胞を阻害することによって、がん細胞が宿主免疫系を逃れるのを可能にし得る。ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１のいずれかに結合し、したがって相互作用を遮断する抗体は、Ｔ細胞が腫瘍を攻撃するのを可能にし得る。ニボルマブと呼ばれるＩｇＧ４  ＰＤ１抗体が記載されている（Pardoll,  DM、２０１２年、Nature  reviews.  Cancer  １２巻（４号）：２５２〜６４頁）。免疫チェックポイントの多くは、リガンド−受容体相互作用によって開始される；したがって、これらは、抗体によって容易に遮断され得、または組換え形態のリガンドもしくは受容体によってモジュレートされ得る。抗体ベースのブロッカーの他の例には、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）特異的抗体が含まれる。
【０２５９】
様々な実施形態では、この抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。
【０２６０】
一部の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブまたはピディリズマブである。ニボルマブは、それらの各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Johnsonら（２０１５年）Ther  Adv  Med  Oncol  ７巻（２号）：９７〜１０６頁；およびSundar  Rら（２０１５年）Ther  Adv  Med  Oncol  ７巻（２号）：８５〜９６頁に記載されている。ペムブロリズマブは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Hamidら（２０１３年）New  England  Journal  of  Medicine  ３６９巻（２号）：１３４〜４４頁に記載されている。ピディリズマブは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Westinら（２０１４年）「Safety  and  Activity  of  PD1  Blockade  by  Pidilizumab  in  Combination  with  Rituximab  in  Patients  with  Relapsed  Follicular  Lymphoma:  a  Single  Group,  Open-label,  Phase  2  Trial」、doi:10.1016/S1470-2045(13)70551-5に記載されている。
【０２６１】
ある特定の実施形態では、この抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＢＭＳ−９３６５５９またはＭＰＤＬ３２８０Ａである。ＢＭＳ−９３６５５９は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Brahmer  JRら（２０１２年）N  Engl  J  Med.  ２０１２年；３６６巻：２４５５頁に記載されている。ＭＰＤＬ３２８０Ａは、それらの各々の全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Herbst  RSら（２０１３年）J  Clin  Oncol.  ３１巻（補遺；抄録３０００）；Soria  JCら（２０１３年）European  Cancer  Congress  Amsterdam（抄録３４０８）；Hamid  Oら（２０１３年）J  Clin  Oncol  ３１巻（補遺；抄録９０１０）；およびKohrt  Hら（２０１３年）J  Immunother  Cancer.  ２０１３年；１巻（補遺１）：Ｏ１２頁に記載されている。
【０２６２】
さらなる抗ＰＤ１および抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１５年２月１０日に発行された米国特許第８，９５２，１３６号に記載されている。
【０２６３】
様々な実施形態では、この抗ＣＴＬＡ−４抗体はイピリムマブである。イピリムマブは、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、「Ｙｅｒｖｏｙ（イピリムマブ）（添付文書）」Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ：Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏｍｐａｎｙ；２０１３年１２月、２０１４年１０月２９日に検索、に記載されている。
【０２６４】
顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）
顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）は、マクロファージ、Ｔ細胞、肥満細胞、内皮細胞および線維芽細胞によって分泌されるタンパク質である。具体的には、ＧＭ−ＣＳＦは、白血球増殖因子として機能するサイトカインである。ＧＭ−ＣＳＦは、幹細胞を刺激し、顆粒細胞および単球を生成する。単球は、血流を出て、組織内に遊走し、その後、マクロファージへと成熟する。
【０２６５】
本明細書に記載されている様々な足場デバイスは、デバイスに宿主ＤＣを誘引するＧＭ−ＣＳＦポリペプチドを含み、それを放出する。企図されるＧＭ−ＣＳＦポリペプチドは、内在性源から単離され、またはｉｎ  ｖｉｖｏもしくはｉｎ  ｖｉｔｒｏで合成される。内在性ＧＭ−ＣＳＦポリペプチドは、健常なヒト組織から単離される。合成ＧＭ−ＣＳＦポリペプチドは、鋳型ＤＮＡを、宿主生物または細胞、例えば哺乳動物または培養されたヒト細胞系にトランスフェクションまたは形質転換した後、ｉｎ  ｖｉｖｏで合成される。代替的に合成ＧＭ−ＣＳＦポリペプチドは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）または他の当技術分野で認識されている方法（参照により本明細書に組み込まれるSambrook,  J.、Fritsch,  E.F.およびManiatis,  T.、Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual.、Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press、NY、１、２、３巻（１９８９年））によってｉｎ  ｖｉｔｒｏで合成される。
【０２６６】
ＧＭ−ＣＳＦポリペプチドは、ｉｎ  ｖｉｖｏでタンパク質の安定性を増加させるように修飾される。代替的に、ＧＭ−ＣＳＦポリペプチドは、免疫原性がより強くまたは弱くなるように操作される。内在性成熟ヒトＧＭ−ＣＳＦポリペプチドは、報告によれば、アミノ酸残基２３位（ロイシン）、２７位（アスパラギン）および３９位（グルタミン酸）でグリコシル化されている（米国特許第５，０７３，６２７号を参照）。本発明のＧＭ−ＣＳＦポリペプチドは、グリコシル化状態に関して、これらのアミノ酸残基の１つまたは複数が修飾されている。
【０２６７】
ＧＭ−ＣＳＦポリペプチドは、組換え体である。代替的に、ＧＭ−ＣＳＦポリペプチドは、哺乳動物ＧＭ−ＣＳＦポリペプチドのヒト化誘導体である。ＧＭ−ＣＳＦポリペプチドが由来する例示的な哺乳動物種としては、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、フェレット、ネコ、イヌ、サル、または霊長類が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦは、組換えヒトタンパク質（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ、カタログ番号３００−０３）である。代替的に、ＧＭ−ＣＳＦは、組換えネズミ（マウス）タンパク質（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ、カタログ番号３１５−０３）である。最後に、ＧＭ−ＣＳＦは、組換えマウスタンパク質のヒト化誘導体である。
【０２６８】
ヒト組換えＧＭ−ＣＳＦ（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ、カタログ番号３００−０３）は、以下のポリペプチド配列（配列番号３０）によってコードされる：
【化３８】
2019524766.tif 000042
【０２６９】
ネズミ組換えＧＭ−ＣＳＦ（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ、カタログ番号３１５−０３）は、以下のポリペプチド配列（配列番号３１）によってコードされる：
【化３９】
2019524766.tif 000043
【０２７０】
ヒト内在性ＧＭ−ＣＳＦは、以下のｍＲＮＡ配列（ＮＣＢＩ受託番号ＮＭ＿０００７５８および配列番号３２）によってコードされる：
【化４０】
2019524766.tif 000044
【０２７１】
ヒト内在性ＧＭ−ＣＳＦは、以下のアミノ酸配列（ＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿０００７４９．２および配列番号３３）によってコードされる：
【化４１】
2019524766.tif 000045
【０２７２】
がん抗原
本発明の組成物、方法、およびデバイスは、そのようなデバイスを投与された対象にワクチン接種するおよび／または保護免疫を与える手段と共にがん抗原を含む。一部の実施形態では、がん／腫瘍抗原は、本明細書で提供されるデバイスを投与される対象由来のものである。ある特定の実施形態では、がん／腫瘍抗原は、異なる対象由来のものである。様々な実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍細胞溶解物に存在する。例えば、腫瘍細胞溶解物は、生検からの１つまたは複数の溶解された細胞を含んでいてもよい。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、弱毒化された生がん細胞に存在する。例えば、弱毒化された生がん細胞は、照射されたがん細胞でありうる。
【０２７３】
本発明の組成物、方法、およびデバイスによって包含される例示的ながん抗原には、生検から抽出された腫瘍溶解物、照射された腫瘍細胞、ＭＡＧＥシリーズの抗原（一例はＭＡＧＥ−１である）、ＭＡＲＴ−１／メランＡ（melana）、チロシナーゼ、ガングリオシド、ｇｐ１００、ＧＤ−２、Ｏ−アセチル化ＧＤ−３、ＧＭ−２、ムチン１、Ｓｏｓ１、プロテインキナーゼＣ結合タンパク質、逆転写酵素タンパク質、ＡＫＡＰタンパク質、ＶＲＫ１、ＫＩＡＡ１７３５、Ｔ７−１、Ｔ１１−３、Ｔ１１−９、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓテロメラーゼ処理物（ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ  ｆｅｒｍｅｎｔ）（ｈＴＲＴ）、サイトケラチン−１９（ＣＹＦＲＡ２１−１）、扁平上皮癌抗原１（ＳＣＣＡ−１）、タンパク質Ｔ４−Ａ、扁平上皮癌抗原２（ＳＣＣＡ−２）、卵巣癌抗原ＣＡ１２５（１Ａ１−３Ｂ）（ＫＩＡＡ００４９）、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ１−１、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ１４−３、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ２０−４、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ２０−９、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ３３−１、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ３７−２、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ５７−１、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ８９−１、前立腺特異的膜抗原、５Ｔ４腫瘍胎児トロホブラスト糖タンパク質、Ｏｒｆ７３カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ＭＡＧＥ−Ｃ１（がん／精巣抗原ＣＴ７）、ＭＡＧＥ−Ｂ１抗原（ＭＡＧＥ−ＸＰ抗原）、ＤＡＭ１０、ＭＡＧＥ−Ｂ２抗原（ＤＡＭ６）、ＭＡＧＥ−２抗原、ＭＡＧＥ−４ａ抗原、ＭＡＧＥ−４ｂ抗原、結腸がん抗原ＮＹ−ＣＯ−４５、肺がん抗原ＮＹ−ＬＵ−１２バリアントＡ、がん関連表面抗原、腺癌抗原ＡＲＴ１、傍腫瘍性関連脳−精巣−がん抗原、腫瘍神経細胞（ｏｎｃｏｎｅｕｒｏｎａｌ）抗原ＭＡ２、傍腫瘍性神経細胞抗原、神経腫瘍学腹（ｎｅｕｒｏ−ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｖｅｎｔｒａｌ）抗原２（ＮＯＶＡ２）、肝細胞癌抗原遺伝子５２０、腫瘍関連抗原ＣＯ−０２９、腫瘍関連抗原ＭＡＧＥ−Ｘ２、滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原、血清学的に定義される結腸がん抗原１、血清学的に定義される乳がん抗原ＮＹ−ＢＲ−１５、血清学的に定義される乳がん抗原ＮＹ−ＢＲ−１６、ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ−１ペプチド）、クロモグラニンＡ、副甲状腺分泌タンパク質１、ＤＵＰＡＮ−２、ＣＡ１９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡ１９５、または癌胎児性抗原（ＣＥＡ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０２７４】
微生物抗原
一部の実施形態では、抗原は、細菌、ウイルス、原生動物、古細菌、または真菌などの微生物に由来する。様々な実施形態は、細菌、ウイルス、または真菌感染に対する、またはそれらを処置するワクチン接種に関する。様々な実施形態では、送達ビヒクルは、病原体からの抗原を含む。例えば、病原体には、真菌、細菌（例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ種、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ種、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ種、Ｂｒｕｃｅｌｌａ種、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ種、Ｂｏｒｒｅｌｉａ種、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ種、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ種、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ種、Ｃｌｏｓｔｒｉｕｍ種、Ｃｌｏｓｔｒｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ種、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ種、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ種、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ種、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ種、Ｖｉｂｒｉｏ種、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ種、またはＹｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）、ウイルス（例えば、アデノウイルス、エプスタイン−バー・ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス１、２もしくは８型、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、麻疹、おたふく風邪、ヒトパピローマウイルス、ポリオウイルス、狂犬病、呼吸器合胞体ウイルス、風疹ウイルス、または水痘帯状疱疹ウイルス）、寄生虫または原生動物（例えば、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ、Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｌｉａ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ、または寄生原虫、例えば、マラリアを引き起こすＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ）が含まれるが、これらに限定されない。例えば、病原体抗原は、本明細書に記載されている病原体細胞または粒子に由来する。
【０２７５】
抗体
「抗体」という用語は最も広い意味で使用され、具体的には、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、一価抗体、多価抗体、および所望の生物活性を示す限りでの抗体断片（例えば、Ｆａｂおよび／または単腕抗体）が含まれる。
【０２７６】
「抗体断片」は、無傷抗体が結合する抗原に結合する無傷抗体の一部を含む無傷抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；直鎖抗体；単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；および抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【０２７７】
「全長抗体」、「無傷抗体」および「全抗体」という用語は、本明細書において、天然の抗体の構造と実質的に類似の構造を有する、またはＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指す目的で互換的に使用される。
【０２７８】
「Ｆｖ」断片は、完全な抗原認識および結合部位を含有する抗体断片である。この領域は、緊密に会合している、例えばｓｃＦｖにおいて、本質的に共有結合している場合がある、１本の重鎖および１本の軽鎖の可変ドメインの二量体からなる。この構成において、各可変ドメインの３つの超可変領域（ＨＶＲ）が相互作用し、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面での抗原結合部位を規定している。集合的に、６つのＨＶＲまたはそのサブセットは、抗原結合特異性を抗体に付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＨＶＲのみを含むＦｖの半分）であっても、親和性は結合部位全体より通常低いものの、抗原を認識し、結合する能力を有する。
【０２７９】
「Ｆａｂ」断片は、軽鎖の可変および定常ドメイン、ならびに重鎖の可変ドメインおよび第１の定常ドメイン（ＣＨＩ）を含有する。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、一対のＦａｂ断片を含み、それら断片は、一般的に、それらの間にあるヒンジシステインによってカルボキシ末端近くで共有結合により連結されている。抗体断片の他の化学的カップリングも当技術分野で公知である。
【０２８０】
「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖に存在する。一般的に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨおよびＬドメイン間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これにより、ｓｃＦｖは、抗原結合のための所望の構造を形成することができる。ｓｃＦｖの概説については、参照によりその内容全体が本明細書に組み込まれるPluckthun、The  Pharmacology  of  Monoclonal  Antibodies、１１３巻、RosenburgおよびMoore編、Springer-Verlag、New  York、２６９〜３１Ｓ頁（１９９４年）を参照。
【０２８１】
「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小さい抗体断片を指し、この断片は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を同じポリペプチド鎖に含む（ＶＨおよびＶＬ）。同じ鎖上の２つのドメイン間で対形成するには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは、別の鎖の相補的ドメインと対形成することを余儀なくされ、２つの抗原結合部位を生じる。ダイアボディは、例えば、ＢＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；および参照によりその内容全体が本明細書に組み込まれるHollingerら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、９０巻：６４４４〜６４４８頁（１９９３年）においてさらに十分に記載されている。
【０２８２】
「直鎖抗体」という表現は、参照によりその内容全体が本明細書に組み込まれるZapataら、Protein  Eng.、８巻（１０号）：１０５７〜１０６２頁（１９９５年）に記載されている抗体を指す。簡単に述べると、これらの抗体は、相補的軽鎖ポリペプチドと一緒に、一対の抗原結合領域を形成する、一対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む。直鎖抗体は、二重特異性または単一特異性であることができる。
【０２８３】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、つまり、可能性のあるバリアント抗体、例えば一般的に少量で存在する天然に存在する突然変異を含有するバリアント抗体またはモノクローナル抗体調製物の産生の間に生じるバリアント抗体を除いて、集団を構成する個々の抗体は同一であるおよび／または同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対して向けられた異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して向けられている。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均質な抗体集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきでない。例えば、使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ方法、組換えＤＮＡ方法、ファージディスプレイ方法、およびヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製することができ、そのような方法、およびモノクローナル抗体を作製するための他の例示的な方法は、本明細書で記載されている。
【０２８４】
「キメラ」抗体という用語は、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の源または種に由来し、一方で重鎖および／または軽鎖の残部が異なる源または種に由来する抗体を指す。
【０２８５】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基と、ヒトＦＲ由来のアミノ酸残基とを含むキメラ抗体を指す。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここでＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全ては非ヒト抗体のＨＶＲに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てはヒト抗体のＦＲに対応する。ヒト化抗体は、任意選択で、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
【０２８６】
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生される抗体、またはヒト抗体レパートリーもしくは他のヒト抗体コード配列を利用して非ヒト源に由来する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を保有する抗体である。ヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特異的に排除する。
【０２８７】
ＲＮＡ干渉
本明細書で使用される場合、「ＲＮＡ干渉誘導化合物」または「ＲＮＡｉ化合物」とは、状況に応じてタンパク質発現のＲＮＡ干渉または「ＲＮＡｉ」を誘導することができる化合物を指す。ＲＮＡｉは、ｍＲＮＡ分解を伴うが、この干渉の根底にある生化学的機構の大部分は未知である。ＲＮＡｉの使用は、参照によりその内容が本明細書に組み込まれるFireら、１９９８年、Carthewら、２００１年およびElbashirら、２００１年に記載されている。
【０２８８】
単離されたＲＮＡ分子は、ＲＮＡｉを媒介することができる。つまり、本発明の単離されたＲＮＡ分子は、標的遺伝子とも呼ばれる遺伝子の転写産物であるｍＲＮＡの分解を媒介または発現を阻止する。便宜上、そのようなｍＲＮＡは、本明細書において、分解されるｍＲＮＡとも呼ばれうる。ＲＮＡ、ＲＮＡ分子、ＲＮＡセグメントおよびＲＮＡ断片という用語は、ＲＮＡ干渉を媒介するＲＮＡを指すために互換的に使用されうる。これらの用語は、二本鎖ＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ヘアピンＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、単離ＲＮＡ（部分的に精製されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換え的に産生されるＲＮＡ）、ならびに１つまたは複数のヌクレオチドの付加、欠失、置換および／または変更によって天然に存在するＲＮＡとは異なっている変更されたＲＮＡを含む。そのような変更は、非ヌクレオチド材料の、例えば、ＲＮＡの末端または内部への（ＲＮＡの１つまたは複数のヌクレオチドでの）付加を含むことができる。本発明のＲＮＡ分子のヌクレオチドはまた、非標準ヌクレオチド、例えば、天然に存在しないヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドを含むことができる。集合的に、そのような変更されたＲＮＡｉ分子は全て、アナログ、または天然に存在するＲＮＡのアナログと呼ばれる。本発明のＲＮＡは、ＲＮＡｉを媒介する能力を有するという点で天然のＲＮＡに十分に類似していればよい。
【０２８９】
本明細書で使用される場合、「ＲＮＡｉを媒介する」という表現は、どのｍＲＮＡ分子が、ＲＮＡｉ機構またはプロセスを受けるかを識別する能力を指し、それを示す。ＲＮＡｉを媒介するＲＮＡは、特定のｍＲＮＡを分解するか、そうでなければ、標的タンパク質の発現を減少させるように機構を指示するようにＲＮＡｉ機構と相互作用する。一実施形態では、本発明は、その配列が対応する特定のｍＲＮＡの切断を指示するＲＮＡ分子に関する。配列が完全に対応している必要はないが、対応は、切断によるＲＮＡｉの阻害または標的ｍＲＮＡの発現の阻止をＲＮＡに指示することができるために十分でなければならない。
【０２９０】
上述したように、本発明のＲＮＡ分子は、一般的に、ＲＮＡの部分と一部の追加的部分、例えばデオキシリボヌクレオチドの部分とを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ分子は、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３ヌクレオチド、約１６〜２９ヌクレオチド、約１８〜２３ヌクレオチド、または約２１〜２３ヌクレオチドを含む。様々な実施形態では、デバイスまたは足場は、Ｔ細胞または樹状細胞抑制を阻害する１つまたは複数の遺伝子のＲＮＡｉを媒介する１つまたは複数のＲＮＡｉ分子を含む。一部の実施形態では、標的遺伝子は、免疫チェックポイント遺伝子である。一部の実施形態では、標的遺伝子は、免疫抑制遺伝子である。ある特定の実施形態では、標的遺伝子は、ＴＧＦ−β、ＳＴＡＴ３、ＩＤＯ、ＰＤ−１、ＰＤ−１リガンド１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ−３またはＴＩＭ３タンパク質をコードする。これらの標的のそれぞれのためのヌクレオチド配列の非限定的な例は、以下の通りである：ＴＧＦ−β（ＧｅｎＢａｎｋ番号：Ｍ６０３１６．１、配列番号１３）；ＳＴＡＴ３（ＮＣＢＩ参照配列番号：ＮＭ＿１３９２７６．２、配列番号１４）；ＩＤＯ１（ＮＣＢＩ参照配列番号：ＮＭ＿００２１６４．５、配列番号１５）；ＰＤ−１（ＮＣＢＩ参照配列番号：ＮＭ＿００５０１８．２、配列番号１６）；ＰＤ−Ｌ１（ＮＣＢＩ参照配列番号：ＮＭ＿０１４１４３．３、配列番号１７）；ＣＴＬＡ−４（ＮＣＢＩ参照配列番号：ＮＭ＿００１０３７６３１．２、配列番号１８）；ＬＡＧ−３（ＧｅｎＢａｎｋ番号：Ｘ５１９８５．３、配列番号１９）；およびＴＩＭ３（ＧｅｎＢａｎｋ番号：ＡＦ４５０２４２．１、配列番号２０）。これらの配列は限定的なものではなく、各タンパク質の追加のバリアントおよびアイソフォームを標的にしてもよい。
【０２９１】
様々な実施形態では、ＲＮＡｉ分子は、トランスフェクション剤を有するデバイスまたは足場に存在していてもよい。例えば、ＲＮＡｉ分子は、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ポリ−Ｌ−リシン（ＰＬＬ）、またはポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーで濃縮されてもよい。例えば、Huangら、（２００５年）、Human  Gene  Therapy、１６巻：６０９〜６１７頁を参照。トランスフェクション剤の追加の非限定的な例には、リポソーム（例えば、リポフェクタミン）が含まれる。
【０２９２】
樹状細胞
樹状細胞（ＤＣ）は、哺乳動物免疫系内の免疫細胞であり、造血骨髄前駆細胞に由来する。より詳細には、樹状細胞は、リンパ系（または形質細胞様）または骨髄前駆体細胞からそれぞれ生じるリンパ系（または形質細胞様）樹状細胞（ｐＤＣ）および骨髄樹状細胞（ｍＤＣ）区分に分類することができる。前駆細胞から、前駆細胞の種類にかかわらず、未成熟樹状細胞が生じる。未成熟樹状細胞は、高いエンドサイトーシス活性および低いＴ細胞活性化電位によって特徴付けられる。したがって、未成熟樹状細胞は、構成的に、病原体に対してすぐ傍の周囲環境をサンプリングする。例示的な病原体には、ウイルスまたは細菌が含まれるが、これらに限定されない。サンプリングは、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）などのパターン認識受容体（ＰＲＲ）によって達成される。病原体が、ｔｏｌｌ様受容体などのパターン認識受容体によって認識されると、樹状細胞は活性化し、成熟する。
【０２９３】
成熟樹状細胞は、病原体を貪食し、それを分解するだけでなく、病原体のタンパク質を分解し、抗原とも呼ばれるこれらタンパク質の小片を、ＭＨＣ（主要組織適合性複合体）分子（クラスＩ、ＩＩおよびＩＩＩ）を使用して、細胞表面に提示する。成熟樹状細胞は、Ｔ細胞活性化のための共受容体として機能する細胞表面受容体をアップレギュレートする。例示的な共受容体としては、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＣＤ４０が挙げられるが、これらに限定されない。同時に、成熟樹状細胞はＣＣＲ７などの走化性受容体をアップレギュレートし、細胞を、血流またはリンパ系を通じてそれぞれ脾臓またはリンパ節へ遊走させる。
【０２９４】
樹状細胞は、皮膚などの外部環境と接触している外部の組織に存在する（皮膚に存在する樹状細胞はランゲルハンス細胞とも呼ばれる）。代替的に、樹状細胞は、外部環境と接触している内部組織、例えば、鼻、肺、胃、および腸の内壁に存在する。最後に、未成熟樹状細胞は、血流に存在する。一旦活性化されると、これらの組織から離れた全ての樹状細胞がリンパ系組織に遊走し、ここで抗原を提示して、Ｔ細胞およびＢ細胞と相互作用し、免疫応答を開始する。本発明のために特に重要な１つのシグナル伝達システムは、高濃度の免疫細胞に向かって成熟樹状細胞の遊走を誘引する、樹状細胞の表面に発現するケモカイン受容体ＣＣＲ７とリンパ節構造によって分泌されるケモカイン受容体リガンドＣＣＬ１９とを含む。成熟樹状細胞との接触によって活性化される例示的な免疫細胞には、ヘルパーＴ細胞、キラーＴ細胞、およびＢ細胞が含まれるが、これらに限定されない。マクロファージおよびＢリンパ球を含め、免疫系内の複数の細胞型が抗原を提示するが、樹状細胞が全ての抗原提示細胞のうちで最も強力な活性化因子である。
【０２９５】
樹状細胞は、細胞体から伸びる複数の樹状突起を含む特徴的な細胞形状からその名前を得た。この細胞形状の機能的利点は、細胞の体積に比べて細胞表面および周囲への接触面積が顕著に増加していることである。未成熟樹状細胞は、特徴的な樹状突起の形成を欠く場合があり、ベール細胞と呼ばれる。ベール細胞は、樹状突起ではなく、細胞質に大きなベールを保有する。
【０２９６】
形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）は、血液中を循環する自然免疫細胞であり、末梢リンパ器官で見出される。それらは、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の０．４％未満を構成する。ヒトにおいて、これらの細胞は、表面マーカーＣＤ１２３、ＢＤＣＡ−２（ＣＤ３０３）およびＢＤＣＡ−４（ＣＤ３０４）を発現するが、ＣＤ１１ｃまたはＣＤ１４を高レベルで発現せず、それにより、それぞれ従来の樹状細胞または単球とは区別される。マウスｐＤＣは、ＣＤ１１ｃ、Ｂ２２０、ＢＳＴ−２（ｍＰＤＣＡ）およびＳｉｇｌｅｃ−Ｈを発現し、ＣＤ１１ｂについては陰性である。自然免疫系の構成要素として、これらの細胞は、ｓｓＲＮＡおよびＣｐＧ  ＤＮＡモチーフをそれぞれ検出する細胞内Ｔｏｌｌ様受容体７および９を発現する。刺激およびその後の活性化の際に、これらの細胞は、広範囲の作用を媒介する重要な多面的な抗ウイルス化合物であるＩ型インターフェロン（主にＩＦＮ−α（アルファ）およびＩＦＮ−β（ベータ））を大量に産生する。ＣＤ８−サブセットは、クラスＩＩ経路を使用して、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞へ抗原を提示する。ＣＤ８＋サブセットは、クラスＩ経路を使用して、抗原を提示する。ペプチド／ＭＨＣクラスＩ分子は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）になるＣＤ８＋Ｔ細胞へ提示される。マウスのＣＤ８細胞表面タンパク質は、ヒトのＣＤ１４１細胞表面タンパク質に対応する。ＣＤ８／ＣＤ１４１陽性細胞は、ＴＬＲ３を発現し、ＴＬＲ３アゴニストによって優先的に活性化される。
【０２９７】
材料システム
足場組成物は、生分解性および／または非生分解性材料を含むことができる。例示的な非生分解性材料には、金属、プラスチックポリマー、またはシルクポリマーが含まれるが、これらに限定されない。様々な実施形態では、足場組成物は、非毒性または非免疫原性である生体適合性材料を含む。一部の実施形態では、足場組成物は、炎症性材料、例えば、メソ多孔性シリカを含む。ある特定の実施形態では、足場組成物は、温度、ｐＨ、水和状態および多孔度からなる群から選択される物理的パラメーター、架橋密度、タイプならびに主鎖連結の分解に対する化学性もしくは感受性に基づく所定の速度で分解し、または化学ポリマーの比率に基づく所定の速度で分解する。例えば、ラクチドのみで構成される高分子量ポリマーは、典型的に数年の期間にわたって、例えば、１〜２年間で分解し、一方、ラクチドとグリコリドとの５０：５０混合物で構成される低分子量ポリマーは、典型的に数週間のうちに、例えば、１、２、３、４、６、１０週間で分解する。高分子量の高グルロン酸アルギネートで構成されるカルシウム架橋ゲルは、典型的には、数ヶ月（１、２、４、６、８、１０、１２ヶ月）から数年（１、２、５年）にわたってｉｎ  ｖｉｖｏで分解し、一方で、低分子量アルギネートおよび／または部分的に酸化されたアルギネートで構成されるゲルは、数週間のうちに分解する。
【０２９８】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される１つまたは複数の化合物は、共有結合または非共有結合により、足場組成物に連結または付着されている。様々な実施形態では、本明細書に開示される１つまたは複数の化合物は、足場組成物の構造もしくは細孔に組み込まれる、足場組成物の構造もしくは細孔内に存在する、または足場組成物に組み込まれる。
【０２９９】
様々な実施形態では、任意の種類のクリオゲルまたはヒドロゲルが、送達デバイスとして適切である。
【０３００】
ヒドロゲル（アクアゲルとも呼ばれる）は、親水性であるポリマー鎖のネットワークであり、水が分散媒であるコロイド状ゲルとして見出されることもある。ヒドロゲルは、その顕著な水分含有量により、天然の組織と非常に類似した自由度を保有する高吸収性（９９％を超える水分を含有することができる）の天然または合成ポリマーである。従来のヒドロゲルとは異なり、本明細書に記載されているデバイスの特有の特徴は、適切な剪断応力が印加されると、変形可能なヒドロゲルが大幅にかつ可逆的に圧縮され（その体積の９５％まで）、注射可能なマクロ多孔性の予備成形足場をもたらすことである。この特性により、デバイスは、シリンジを介して、高精度で、標的部位へ送達されることが可能である。
【０３０１】
本発明の主題の複数の態様は、クリック−ヒドロゲルおよびクリック−クリオゲルに関する。クリックヒドロゲルまたはクリオゲルは、ヒドロゲルまたはクリオゲルポリマー間の架橋が、ポリマー間のクリック反応によって容易になされるゲルである。各ポリマーは、クリック反応に有用な１つまたは複数の官能基を含有することができる。クリック反応における官能基対の高レベルの特異性を考慮すると、活性化合物は、クリックケミストリーによるヒドロゲルデバイス形成の前または同時に、予備成形されたデバイスに加えてもよい。クリック−ヒドロゲルの形成に使用しうるクリック反応の非限定的な例には、第一銅触媒アジド−アルキン付加環化、歪み促進型アジド−アルキン（assize-alkyne）付加環化、チオール−エン光カップリング、ディールス・アルダー反応、逆電子要請型ディールス・アルダー反応、テトラゾール−アルケン光クリック反応、オキシム反応、チオール−マイケル付加、およびアルデヒド−ヒドラジドカップリングが含まれる。クリックヒドロゲルの非限定的な態様は、参照によりその内容全体が本明細書に組み込まれるJiangら、（２０１４年）、Biomaterials、３５巻：４９６９〜４９８５頁に記載されている。
【０３０２】
様々な実施形態では、クリックアルギネートが利用される（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、２０１５年１０月８日に公開されたＰＣＴ国際特許出願公開番号ＷＯ２０１５／１５４０７８を参照）。
【０３０３】
例示的なクリック−ヒドロゲルデバイスおよび足場材料は、第１のポリマーおよび第２のポリマーを含むヒドロゲルを含み、ここで第１のポリマーは、式（Ａ）：
【化４２】
2019524766.tif 000046
（式中、
結合
【化４３】
2019524766.tif 000047
は、単結合または二重結合であり；
Ｒ１は、−Ｃ０〜Ｃ６アルキル−ＮＲ２Ｎ−、−Ｃ０〜Ｃ６アルキル−Ｏ−、または−Ｃ０〜Ｃ３アルキル−Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ２は、結合、アリールまたはヘテロアリールであり、ここでアリールおよびヘテロアリールは、任意選択で、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）アミノ、またはジ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）アミノで置換されており；
Ｒ３は、−Ｃ０〜Ｃ６アルキル−ＮＲ２Ｎ−、−Ｃ０〜Ｃ６アルキル−Ｏ−、または−Ｃ０〜Ｃ３アルキル−Ｃ（Ｏ）−であり；Ｒ４は、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、ここでアリールおよびヘテロアリールは、任意選択で、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）アミノ、またはジ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）アミノで置換されている）
のリンカーによって第２のポリマーに接続されている。
Ｒ２Ｎは、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｒ２Ｎ、またはＲ２であり、ここでＣ１〜Ｃ６アルキル、アリールおよびヘテロアリールは、任意選択で、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）アミノ、またはジ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）アミノで置換されている。一実施形態では、本開示のヒドロゲルは、式（Ａ）のリンカーが、
式（Ｉ）：
【化４４】
2019524766.tif 000048
または式（ＩＩ）：
【化４５】
2019524766.tif 000049
または式（ＩＩＩ）：
【化４６】
2019524766.tif 000050
の形態のリンカーであり、
ここで、式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＩＩ）のリンカーは、任意選択で、任意の適切な位置で置換されている。
【０３０４】
別の実施形態は、先行するいずれかの実施形態による式（Ａ）のリンカーであって、ここで、Ｒ１が、
ａ．  −ＮＲ２Ｎ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲ２Ｎ−、−Ｏ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、または−Ｃ１〜Ｃ３アルキル−Ｃ（Ｏ）−；
ｂ．  −Ｃ０〜Ｃ６アルキル−ＮＲ２Ｎ−；
ｃ．  −Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲ２Ｎ−；
ｄ．  −Ｃ１〜Ｃ３アルキル−ＮＲ２Ｎ−；
ｅ．  −メチル−ＮＨ−または−ペンチル−ＮＨ−；
ｆ．  −Ｃ０〜Ｃ６アルキル−Ｏ−；
ｇ．  −Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｏ−；
ｈ．  −Ｃ１〜Ｃ３アルキル−Ｏ−；
ｉ．  −メチル−Ｏ−または−ペンチル−Ｏ−；
ｊ．  −Ｃ０〜Ｃ３アルキル−Ｃ（Ｏ）−；
ｋ．  −Ｃ（Ｏ）−；
ｌ．  −メチル−Ｃ（Ｏ）−；
ｍ．  Ｒ３と同じ
である、リンカーを提供する。
Ｒ２Ｎは、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｒ２Ｎ、またはＲ２であり、ここでＣ１〜Ｃ６アルキル、アリールおよびヘテロアリールは、任意選択で、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）アミノ、またはジ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）アミノで置換されている。
【０３０５】
別の実施形態は、先行するいずれかの実施形態による式（Ａ）のリンカーであって、ここでＲ２が、結合である、リンカーを提供する。
【０３０６】
一実施形態では、先行するいずれかの実施形態による式（Ａ）のリンカーは、Ｒ２が
ａ．  それぞれ任意選択で置換されているアリールもしくはヘテロアリール；
ｂ．  任意選択で置換されているアリール；
ｃ．  フェニル；
ｄ．  任意選択で置換されているヘテロアリール；または
ｅ．  ピリジル、ピリミジル、もしくはピラジニル
である、リンカーである。
【０３０７】
別の実施形態は、先行するいずれかの実施形態による式（Ａ）のリンカーであって、ここで、Ｒ３が、
ａ．  −ＮＲ２Ｎ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲ２Ｎ−、−Ｏ−、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、または−Ｃ１〜Ｃ３アルキル−Ｃ（Ｏ）−；
ｂ．  −Ｃ０〜Ｃ６アルキル−ＮＲ２Ｎ−；
ｃ．  −Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ＮＲ２Ｎ−；
ｄ．  −Ｃ１〜Ｃ３アルキル−ＮＲ２Ｎ−；
ｅ．  −メチル−ＮＨ−または−ペンチル−ＮＨ−；
ｆ．  −Ｃ０〜Ｃ６アルキル−Ｏ−；
ｇ．  −Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｏ−；
ｈ．  −Ｃ１〜Ｃ３アルキル−Ｏ−；
ｉ．  −メチル−Ｏ−または−ペンチル−Ｏ−；
ｊ．  −Ｃ０〜Ｃ３アルキル−Ｃ（Ｏ）−；
ｋ．  −Ｃ（Ｏ）−；
ｌ．  −メチル−Ｃ（Ｏ）−；または
ｍ．  Ｒ１と同じ
である、リンカーを提供する。
【０３０８】
Ｒ２Ｎは、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｒ２Ｎ、またはＲ２であり、ここでＣ１〜Ｃ６アルキル、アリールおよびヘテロアリールは、任意選択で、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）アミノ、またはジ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）アミノで置換されている。一実施形態では、先行するいずれかの実施形態による式（Ａ）のリンカーは、Ｒ４が水素である、リンカーである。
【０３０９】
一実施形態では、先行するいずれかの実施形態による式（Ａ）のリンカーは、Ｒ４が
ａ．  Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリールもしくはヘテロアリールであり、ここでアリールおよびヘテロアリールは、任意選択で置換されており；
ｂ．  アリールもしくはヘテロアリールであり、ここでアリールおよびヘテロアリールは、任意選択で置換されており；
ｃ．  任意選択で置換されているアリール；
ｄ．  フェニル；
ｅ．  任意選択で置換されているヘテロアリール；または
ｆ．  ピリジル、ピリミジル、もしくはピラジニル
である、リンカーである。
【０３１０】
別の実施形態は、先行するいずれかの実施形態による式（Ａ）のリンカーであって、ここでＲ４が、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、またはメチルである、リンカーを提供する。
【０３１１】
一部の実施形態では、ヒドロゲルは、式（Ａ）、または式（Ｉ）、式（ＩＩ）、もしくは式（ＩＩＩ）の複数のリンカーを含む。
【０３１２】
また本発明は、例えば、第１のポリマーおよび第２のポリマーを含む複数のポリマーの相互接続ネットワークを含むヒドロゲルを含む。例えば、ポリマーは、式（Ａ）、または式（Ｉ）、式（ＩＩ）、もしくは式（ＩＩＩ）の複数のリンカーを介して接続されている。
【０３１３】
本開示の一部の実施形態は、第１のポリマーおよび第２のポリマーが独立して可溶性ポリマーである、ヒドロゲルを提供する。他の実施形態では、第１のポリマーおよび第２のポリマーは、独立して水溶性ポリマーである。
【０３１４】
一部の場合では、ヒドロゲルあたりの架橋（例えば、各架橋が式Ｉを含む場合）の濃度は、少なくとも約１０％（ｗ／ｗ）、例えば、少なくとも約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９９％、または約１００％（ｗ／ｗ）である。
【０３１５】
第１のポリマーおよび第２のポリマーは、同じでも異なってもよい。一部の実施形態では、第１のポリマーおよび第２のポリマーは、同じ種類のポリマーである。他の実施形態では、第１のポリマーおよび／または第２のポリマーは、多糖を含む。例えば、第１のポリマーおよび第２のポリマーは、両方とも多糖を含むことができる。一部の実施形態では、第１のポリマーおよび／または第２のポリマーは、独立して、アルギネート、キトサン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ゼラチン、ヒアルロン酸、コラーゲン、コンドロイチン、アガロース、ポリアクリルアミド、およびヘパリンからなる群から選択される。一部の実施形態では、第１のポリマーおよび第２のポリマーは、独立して、アルギネート、キトサン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ゼラチン、ヒアルロン酸、コラーゲン、コンドロイチン、アガロース、ポリアクリルアミド、およびヘパリンからなる群から選択される、同じポリマーである。
【０３１６】
そのような足場および足場材料、ならびにそのような足場を製造するための方法は、参照によりその内容全体が本明細書に組み込まれる、２０１５年１０月８日に公開された、ＰＣＴ国際特許出願公開番号ＷＯ２０１５／１５４０７８に記載されている。例えば、クリックヒドロゲルは、ａ）第１のクリック反応部分を含む第１のポリマーと第２のクリック反応部分を含む第２のポリマーとを提供するプロセスで調製することができる。非限定的な例では、第１のクリック反応部分と第２のクリック反応部分とは、第一銅触媒アジド−アルキン付加環化、歪み促進型アジド−アルキン付加環化、チオール−エン光カップリング、ディールス・アルダー反応、逆電子要請型ディールス・アルダー反応、テトラゾール−アルケン光クリック反応、オキシム反応、チオール−マイケル付加において、およびアルデヒド−ヒドラジドカップリングを介して互いに反応することができる。一実施形態では、第１のクリック反応部分は、ジエン部分であり、第２のクリック反応部分はジエノフィル部分である。一実施形態では、第１のクリック反応部分は、テトラジン部分であり、第２のクリック反応部分は、ノルボルネン部分である。本明細書で使用される場合、「テトラジン」および「テトラジン部分」という用語は、ポリマー（例えば、メチルアミンまたはペンチルアミンのようなアルキルアミン）に連結するための適切なスペーサーで置換され、任意選択で任意の利用可能な位置において１つまたは複数の置換基でさらに置換されている１，２，４，５−テトラジンを含む分子を含む。本開示の組成物および方法に適切な例示的なテトラジン部分は、Karverら、Bioconjugate  Chem.、２２巻（２０１１年）：２２６３〜２２７０頁およびＷＯ２０１４／０６５８６０（いずれも参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。本明細書で使用される場合、「ノルボルネン」および「ノルボルネン部分」という用語は、ポリマー（例えば、メチルアミンまたはペンチルアミンのようなアルキルアミン）に連結するための適切なスペーサーをさらに含み、任意選択で任意の利用可能な位置において１つまたは複数の置換基でさらに置換されているノルボルナジエンおよびノルボルネン基を含むが、これらに限定されない。そのような部分には、例えば、ノルボルネン−５−メチルアミンおよびノルボルナジエンメチルアミンが含まれる。
【０３１７】
したがって、一部の実施形態は、開放型の相互接続された細孔を含む、細胞適合性の、および任意選択で細胞接着性の、高度に架橋されたヒドロゲル（例えば、クリオゲル）ポリマー組成物であって、ヒドロゲル（例えば、クリオゲル）が、圧縮または脱水による変形後の形状記憶によって特徴付けられるポリマー組成物を特長とする。デバイスは、高密度の開放型の相互接続された細孔を有する。また、ヒドロゲル（例えば、クリオゲル）は、架橋されたゼラチンポリマーまたは架橋されたアルギネートポリマーを含む。
【０３１８】
一部の実施形態では、クリオゲルシステムは、（抗原担持腫瘍細胞と共に）ＧＭ−ＣＳＦおよび特異的ＴＬＲアゴニスト（ＣｐＧ−ＯＤＮなど）を送達することができ、一方で、ＤＣ浸潤およびトラフィッキングのための空間を作製することができる。ＧＭ−ＣＳＦは、ＤＣ増強／動員因子として作用するサイトカインであり、ＣｐＧ  ＯＤＮは、特異的ＴＬＲアゴニスト（ＤＣ活性化因子）であるアジュバントである。
【０３１９】
ＭＡ−アルギネートクリオゲルデバイスは、局所的免疫原性ニッチを生じることにより、ワクチンプラットフォームとして機能することができる。全体的に、クリオゲルは、強力かつ持続的な抗腫瘍免疫応答の誘導に有利に、ＤＣと腫瘍細胞との出会いが厳密に制御されている局所的免疫原性ニッチを生じる。クリオゲルワクチンは、アジュバントと抗原の両方の送達を空間的および時間的に調整するように操作することができ、因子の送達を、より密接にＤＣ−Ｔ細胞のプライミングおよび活性化の動態に適合させることによって、潜在的に全体的なワクチン性能を増強する。ワクチンプラットフォームは、ＤＣが免疫調節因子の存在下で腫瘍細胞と調和することができる局所空間を作製することを通じて、適切なＤＣ共刺激を提供するように設計される。具体的に、マクロ細孔は、ＤＣおよび腫瘍細胞のための物理的空間を作製し、腫瘍床における寛容原性環境の存在なしに、放出された免疫調節因子の存在下で相互作用する。腫瘍細胞およびアジュバントのボーラス送達と異なり、細胞および免疫調節剤が小体積に局在化され、空間的および時間的に因子の送達を定量的に制御することができる。免疫調節因子は局所的に放出されるので、免疫チェックポイント遮断抗体などの全身的に送達される薬剤とは対照的に、全身作用はほとんど予期されない。
【０３２０】
クリオゲルまたはヒドロゲルが作製されるポリマー組成物の例は、本開示全体を通して記載されており、アルギネート、ヒアルロン酸、ゼラチン、ヘパリン、デキストラン、カロブガム、ＰＥＧ、ならびにＰＥＧ−ｃｏ−ＰＧＡおよびＰＥＧ−ペプチドコンジュゲートを含むＰＥＧ誘導体が含まれる。技術は、任意の生体適合性ポリマー、例えば、コラーゲン、キトサン、カルボキシメチルセルロース、プルラン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）（ＰＨＥＭＡ）、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）（ＰＮＩＰＡＡｍ）またはポリ（アクリル酸）（ＰＡＡｃ）に適用することができる。例えば、組成物は、アルギネートベースのヒドロゲル／クリオゲルを含む。別の例では、組成物は、ゼラチンベースのヒドロゲル／クリオゲルを含む。
【０３２１】
クリオゲルは、低温ゲル化（ｃｒｙｏｔｒｏｐｉｃ  ｇｅｌａｔｉｏｎ）（またはクリオゲル化）技術を使用して製造される高度に多孔性の相互接続構造を有する材料のクラスに属する。クリオゲルも高度な多孔構造を有している。典型的に、活性化合物は、クリオゲルの細孔／壁構造の凍結形成後に、クリオゲルデバイスに添加される。クリオゲルは、高密度のポリマー架橋によって特徴付けられる薄い細孔壁を有する、例えば少なくとも約５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、または９５％細孔の高い多孔度によって特徴付けられる。クリオゲルの壁は、典型的には、緻密で高度に架橋され、恒久的変形または実質的な構造的損傷なしに、針を通して対象内に圧縮されることができる。様々な実施形態では、細孔壁は、少なくとも約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、１０〜４０％またはそれより多くのポリマーを含む。一部の実施形態では、約０．５〜４％のポリマー濃度（クリオゲル化の前）が使用され、濃度は、クリオゲル化の完了により実質的に増加する。クリオゲルのゲル化の非限定的な態様およびクリオゲル化後のポリマー濃度の増加は、参照によりその内容全体が本明細書に組み込まれるBeduerら、（２０１５年）、Advanced  Healthcare  Materials、第４巻、第２号、３０１〜３１２頁で検討されている。様々なインプリメンテーションでは、クリオゲル化は、重合架橋反応が準凍結反応液中で実施される技術を含む。クリオゲル化技術の非限定的な例は、参照によりその内容全体が本明細書に組み込まれる、２０１４年８月１４日に公開された米国特許出願公開第２０１４／０２２７３２７号に記載されている。相分離によって得られる従来のマクロ多孔性ヒドロゲルと比較したクリオゲルの利点は、その高い可逆的変形性である。クリオゲルは、非常に柔軟でありうるが、変形させることができ、その形状を再形成することができる。クリオゲルは、非常に強靭で、伸びや捻じれなどの高レベルの変形に耐えることができる；さらに機械的な力で圧迫して、中に含まれた溶媒を排出することができる。様々な実施形態では、アルギネートクリオゲルの向上した変形特性は、反応系の非凍結液体チャネルの高架橋密度から生じている。
【０３２２】
クリオゲルが作製されるポリマー組成物の例には、アルギネート、ヒアルロン酸、ゼラチン、ヘパリン、デキストラン、カロブガム、ＰＥＧ、ならびにＰＥＧ−ｃｏ−ＰＧＡおよびＰＥＧ−ペプチドコンジュゲートを含むＰＥＧ誘導体が含まれる。技術は、任意の生体適合性ポリマー、例えば、コラーゲン、キトサン、カルボキシメチルセルロース、プルラン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）（ＰＨＥＭＡ）、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）（ＰＮＩＰＡＡｍ）またはポリ（アクリル酸）（ＰＡＡｃ）に適用することができる。例えば、組成物は、アルギネートベースのヒドロゲル／クリオゲルを含む。別の例では、組成物は、ゼラチンベースのヒドロゲル／クリオゲルを含む。
【０３２３】
一部の実施形態では、本発明は、生体材料に基づく治療のための細胞応答プラットフォームであるゼラチン足場、例えば、ゼラチンクリオゲルなどのゼラチンヒドロゲルも特長とする。ゼラチンは、部分的加水分解によりコラーゲンから誘導されるポリペプチドの混合物である。これらのゼラチン足場は、他の種類の足場およびヒドロゲル／クリオゲルを超える明確な利点を有する。例えば、本発明のゼラチン足場は、細胞の付着、増殖および生存を支援し、細胞によって、例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）（例えば、組換え型マトリックスメタロプロテイナーゼ−２および−９）などの酵素の作用によって分解される。
【０３２４】
予め作製されたゼラチンクリオゲルは、対象（例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ブタ、またはウマなどの哺乳動物）に皮下注射されたとき、急速にその元の形状を取り戻し（「形状記憶」）、注射後に有害な宿主免疫応答（例えば、免疫拒絶）をほとんどまたは全く惹起しない。
【０３２５】
一部の実施形態では、ヒドロゲル（例えば、クリオゲル）は、修飾されたポリマーを含み、例えば、ポリマー分子上の部位はメタクリル酸基（メタクリレート（ＭＡ））またはアクリル酸基（アクリレート）で修飾されている。例示的な修飾ヒドロゲル／クリオゲルは、ＭＡ−アルギネート（メタクリル化アルギネート）またはＭＡ−ゼラチンである。ＭＡ−アルギネートまたはＭＡ−ゼラチンの場合には、アルギネートまたはゼラチンのメタクリル化度は５０％に相当する。このことは、繰り返し単位が１つおきにメタクリル化基を含有することを意味する。メタクリル化度は、１％から９０％まで変動しうる。９０％を超えると、化学的修飾は、ポリマーの水溶解性の溶解度を減少させうる。
【０３２６】
ポリマーは、メタクリル化基の代わりにアクリル化基で修飾されていてもよい。その場合、生成物は、アクリル化ポリマーと呼ばれる。メタクリル化（またはアクリル化）度は、ほとんどのポリマーで変動させることができる。しかしながら、一部のポリマー（例えば、ＰＥＧ）は、１００％化学修飾した場合でさえ、その水溶解特性を維持する。架橋後、ポリマーは、通常、およそ１００％の架橋効率を示すほぼ完全なメタクリレート基変換に達する。例えば、ヒドロゲル中のポリマーは、５０〜１００％が架橋（共有結合）されている。架橋の程度はヒドロゲルの耐久性と相関する。したがって、架橋レベルの高い（９０〜１００％）修飾ポリマーが望ましい。
【０３２７】
例えば、高度に架橋したヒドロゲル／クリオゲルポリマー組成物は、少なくとも５０％のポリマー架橋（例えば、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％）によって特徴付けられる。高レベルの架橋は、構造に機械的堅牢性を付与する。ただし、架橋％は、一般的に１００％未満である。組成物は、フリーラジカル重合プロセスおよびクリオゲル化プロセスを使用して形成される。例えば、クリオゲルは、メタクリル化ゼラチンまたはメタクリル化アルギネートのクリオ重合（ｃｒｙｏｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）によって形成される。一部の場合では、クリオゲルは、１．５％（ｗ／ｖ）またはそれ未満（例えば、１．５％、１．４％、１．３％、１．２％、１．１％、１％  ０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％またはそれ未満）のメタクリル化ゼラチンマクロモノマーまたはメタクリル化アルギネートマクロモノマー濃度を含む。例えば、メタクリル化ゼラチンまたはアルギネートマクロモノマー濃度は、約１％（ｗ／ｖ）である。
【０３２８】
一部の実施形態では、架橋されたゼラチンヒドロゲル／クリオゲルはペンダントメタクリレート基を有するゼラチンの修飾によって形成される。例えば、架橋は、ラジカル重合を介して起こる。一部の例では、ゼラチンのアミノ酸組成の２〜６％（例えば、３〜４％）はリシンである。一部の場合では、ゼラチン中のリシンは反応性メタクリレート基に変換される。一部の場合では、ゼラチン中のリシンの７０〜９０％（例えば、８０％）が反応性メタクリレート基に変換される。ゼラチン上のこれらの反応性メタクリレート基を、次いで、例えばラジカル重合によって架橋する。一部の実施形態では、本発明のゼラチンポリマー（例えば、ラジカル重合によって架橋）は、ラジカル重合することなく室温でインキュベートしたゼラチンポリマー（例えば、メタクリレートによる修飾なし）と比較して、より多数の架橋を含有する。
【０３２９】
クリオゲルは、少なくとも７５％の細孔、例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％、またはそれより多くの細孔を含む。細孔は、相互接続されている。相互接続は、組成物の機能に重要であり、相互接続なしでは、水がゲル内に捕捉される。細孔の相互接続は、構造の内外への水（ならびに細胞および化合物などの他の組成物）の通過を可能にする。完全に水和した状態において、組成物は、少なくとも９０％の水（例えば、９０〜９９％の間、少なくとも９２％、９５％、９７％、９９％またはそれより多くの）水を含む。例えば、クリオゲルの体積の少なくとも９０％（例えば、少なくとも９２％、９５％、９７％、９９％またはそれより多く）は、細孔に含有される液体（例えば、水）から作られる。圧縮または脱水ヒドロゲルでは、水の最大５０％、６０％、７０％が存在せず、例えば、クリオゲルは、２５％未満（２０％、１５％、１０％、５％またはそれ未満）の水を含む。
【０３３０】
本発明のクリオゲルは、細胞が通過するために十分な大きさの細孔を含む。例えば、クリオゲルは、直径２０〜５００μｍ、例えば、２０〜３００μｍ、３０〜１５０μｍ、５０〜５００μｍ、５０〜４５０μｍ、１００〜４００μｍ、２００〜５００μｍの細孔を含有する。一部の場合では、水和細孔サイズは、１〜５００μｍ（例えば、１０〜４００μｍ、２０〜３００μｍ、５０〜２５０μｍ）である。
【０３３１】
一部の実施形態では、注射用ヒドロゲルまたはクリオゲルは、アミノ、ビニル、アルデヒド、チオール、シラン、カルボキシル、アジド、アルキンからなる群から選択される官能基の付加によってさらに官能化される。代替的にまたはさらに、クリオゲルは、さらなる架橋剤（例えば、マルチプルアームポリマー、塩、アルデヒドなど）の付加によってさらに官能化される。溶媒は、水性、特に酸性またはアルカリ性であることができる。水性溶媒は、水混和性溶媒（例えば、メタノール、エタノール、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、アセトン、ジオキサンなど）を含むことができる。
【０３３２】
クリオゲルのため、低温架橋が金型内で行われてもよく、クリオゲル（注入されたものでありうる）は分解性であることができる。細孔サイズは、使用する主な溶媒の選択、ポロゲンの組込み、適用される凍結温度および速度、架橋条件（例えば、ポリマー濃度）、ならびに使用するポリマーの種類および分子量によって制御することができる。クリオゲルの形状は、金型によって規定することができ、したがって製作者によって所望される任意の形状をとることができ、例えば、様々なサイズおよび形状（ディスク、円筒、正方形、紐状など）が低温重合によって調製される。注射用クリオゲルは、マイクロメートルスケールからミリメートルスケールで調製することができる。例示的な体積は、数百μｍ３（例えば、１００〜５００μｍ３）から１００ｍｍ３を超えるまで変動する。例示的な足場組成物は、１００μｍ３〜１００ｍｍ３の間のサイズ（例えば、１ｍｍ３〜１０ｍｍ３の間のサイズ）である。一部の用途では、クリオゲルは、水和され、化合物で装填され、シリンジ内または他の送達装置へ装填される。例えば、シリンジは、予め充填され、使用するまで冷蔵される。別の例では、クリオゲルは、任意選択でゲルに装填された化合物（ＰＥＩなど）と共に、脱水され、例えば、凍結乾燥され、乾燥または冷蔵で保存される。投与前に、クリオゲル装填シリンジまたは装置を、送達される化合物を含有する溶液と接触させてもよい。例えば、クリオゲルを予め装填したシリンジのバレルに、生理学的に適合性の溶液、例えば、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を充填する。一部の実施形態では、クリオゲルを、所望の解剖学的部位に投与し、続いて、他の成分、例えばＰＥＩを単独でまたは本明細書に開示される１つもしくは複数の化合物と共に任意選択で含有する所定体積の溶液を投与してもよい。クリオゲルは、その後、再水和され、ｉｎ  ｓｉｔｕでその形状の完全性を回復する。クリオゲル配置後に投与されるＰＢＳまたは他の生理学的溶液の体積は、一般的にクリオゲル自体の体積の約１０倍である。またクリオゲルは、圧縮時に、クリオゲル組成物が、構造的完全性および形状記憶特性を維持するという利点を有する。例えば、クリオゲルは、中空の針を通して注射可能である。例えば、クリオゲルは、針（例えば、１６ゲージ（Ｇ）針、例えば、内径１．６５ｍｍを有する針）を通って移動した後に、元の形状に戻る。他の例示的な針のサイズは、１６ゲージ、１８ゲージ、２０ゲージ、２２ゲージ、２４ゲージ、２６ゲージ、２８ゲージ、３０ゲージ、３２ゲージまたは３４ゲージの針である。注射用クリオゲルは、中空構造、例えば、１８〜３０Ｇ針などの非常に細い針を通過するように設計されている。注射用クリオゲルは、ロッド、正方形、ディスク、スフェア、立方体、繊維、発泡体の形態で、所望の形状に成形することができる。一部の場合では、クリオゲルは、ディスク、円筒、正方形、長方形、または紐の形状を含む。例えば、クリオゲル組成物は、１００μｍ３〜１００ｍｍ３の間のサイズ、例えば、１ｍｍ３〜５０ｍｍ３の間のサイズである。例えば、クリオゲル組成物は、直径１ｍｍ〜直径５０ｍｍの間（例えば、およそ５ｍｍ）である。任意選択で、クリオゲルの厚さは、０．２ｍ��〜５０ｍｍの間（例えば、およそ２ｍｍ）である。
【０３３３】
一部の例では、足場組成物は、ポリマーに化学的に連結された、例えば共有結合により付着した細胞接着組成物を含む。例えば、細胞接着組成物は、ＲＧＤアミノ酸配列を含むペプチドを含む。非限定的な例では、ヒドロゲルまたはクリオゲル組成物（例えば、ゼラチン）は、細胞接着特性を有する。一部の場合では、足場組成物は、アルギニン−グリシン−アスパルテート（ＲＧＤ）などの細胞接着分子で修飾されていない。
【０３３４】
３つの例示的なクリオゲル材料システムが以下に記載される。
ａ）メタクリル化ゼラチンクリオゲル（ＣｒｙｏＧｅｌＭＡ）−例示的なクリオゲル利用メタクリル化ゼラチンであり、その成果は、参照によりその内容全体が本明細書に組み込まれる２０１４年８月１４日に公開された米国特許出願公開第２０１４−０２２７３２７号に詳細に記載されている。
ｂ）メタクリル化アルギネートクリオゲル（ＣｒｙｏＭＡＡｌｇｉｎａｔｅ）−例示的なクリオゲル利用メタクリル化アルギネートであり、その成果は、参照によりその内容全体が本明細書に組み込まれる２０１４年８月１４日に公開された米国特許出願公開第２０１４−０２２７３２７号に詳細に記載されている。
ｃ）ラポナイトナノ小板を有するクリックアルギネートクリオゲル（ＣｒｙｏＣｌｉｃｋ）−基材がクリックアルギネート（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる２０１５年１０月８日に公開されたＰＣＴ国際特許出願公開番号ＷＯ２０１５／１５４０７８）である。一部の例では、基材はラポナイト（化粧品などの多くの消費者製品で使用される市販のシリケートクレー）を含有する。ラポナイトは、大きな表面積および高い負電荷密度を有し、これにより静電相互作用によって、様々なタンパク質および他の生物学的に活性な分子の正に荷電した部分に吸着することが可能であり、薬物装填が可能である。薬物が低濃度の環境に置かれたとき、吸着された薬物が、持続的な様式でラポナイトから放出される。このシステムは、基材単独と比較して、より柔軟な配列の免疫調節剤の放出を可能にする。
【０３３５】
本発明の主題の様々な実施形態は、細孔形成足場組成物を含む送達ビヒクルを含む。例えば、細孔（マクロ細孔など）は、対象へのヒドロゲル注射後にｉｎ  ｓｉｔｕでヒドロゲル内で形成される。周囲のヒドロゲル（バルクヒドロゲル）内の犠牲的なポロゲンヒドロゲルの分解を介してｉｎ  ｓｉｔｕで形成される細孔は、細胞の動員およびトラフィッキング、ならびにＰＥＩ、免疫賦活性化合物；送達ビヒクルにもしくは送達ビヒクル中に免疫細胞を誘引する化合物；腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する化合物；Ｔ細胞もしくは樹状細胞抑制を阻害する化合物；免疫阻害性タンパク質を阻害する化合物；または抗原、あるいはそれらの任意の組合せなどの化合物の放出を容易にする。一部の実施形態では、犠牲的なポロゲンヒドロゲル、バルクヒドロゲル、または犠牲的なポロゲンヒドロゲルとバルクヒドロゲルの両方は、ＰＥＩ、免疫賦活性化合物、送達ビヒクルにもしくは送達ビヒクル中に免疫細胞を誘引する化合物、腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する化合物、Ｔ細胞もしくは樹状細胞抑制を阻害する化合物、免疫阻害性タンパク質を阻害する化合物、および／または抗原、あるいはそれらの任意の組合せを含む。
【０３３６】
様々な実施形態では、細孔形成性組成物は、哺乳動物対象などのレシピエント動物の体内に常駐するとき、時間をかけてマクロ多孔性となる。例えば、細孔形成性組成物は、犠牲的なポロゲンヒドロゲルおよびバルクヒドロゲルを含むことができ、ここで犠牲的なポロゲンヒドロゲルは、バルクヒドロゲルよりも、少なくとも１０％速く（例えば、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％または少なくとも５０％速く）分解する。犠牲的なポロゲンヒドロゲルは、その場所にマクロ細孔を残して分解しうる。ある特定の実施形態では、マクロ細孔は、開放型の相互接続されたマクロ細孔である。一部の実施形態では、犠牲的なポロゲンヒドロゲルは、バルクヒドロゲルよりも急速に分解することができるが、その理由は、犠牲的なポロゲンヒドロゲルが、（ｉ）水により溶けやすい（より低い溶解指数を有する）、（ｉｉ）２００５年６月２日に公開された米国特許出願公開第２００５−０１１９７６２号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、プロテアーゼ媒介分解モチーフに架橋している、（ｉｉｉ）より長いバルクヒドロゲルポリマーに比べてより迅速に分解するより短いポリマーを含む、（ｉｖ）バルクヒドロゲルより多く加水分解的に分解するように（例えば、酸化によって）修飾されている、および／または（ｖ）バルクヒドロゲルと比較して酵素的に分解されやすい。
【０３３７】
様々な実施形態では、デバイスまたは足場は、重合後に、１つまたは複数の活性化合物で装填される（例えば、浸漬される）。ある特定の実施形態では、デバイスまたは足場ポリマー形成材料は、重合前に１つまたは複数の活性化合物と混合される。一部の実施形態では、デバイスまたは足場ポリマー形成材料は、１つまたは複数の活性化合物と混合された後、重合され、次いで、重合後に、同じまたは１つもしくは複数の追加の活性化合物で装填される。
【０３３８】
一部の実施形態では、デバイスまたは足場の細孔サイズまたは全細孔体積は、化合物のデバイスまたは足場からの放出に影響するように選択される。例示的な多孔度（例えば、ナノ多孔性、マイクロ多孔性、およびマクロ多孔性の足場およびデバイス）および全細孔体積（例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０または９５％）が、本明細書に記載される。細孔サイズおよび全細孔体積の増加は、腫瘍内へまたは腫瘍の近くへ送達することができる化合物の量を増加させる。一部の実施形態では、細孔サイズまたは全細孔体積は、活性成分がデバイスまたは足場を出る速度を増加させるように選択される。様々な実施形態では、活性成分は、ヒドロゲルまたはクリオゲルの足場材料に組み込まれて、例えば、細孔キャビティから拡散しうる活性成分と比較して、長期間、足場またはデバイスからの活性成分の持続的放出を達成しうる。
【０３３９】
多孔度は、デバイスおよび足場への細胞の動員、ならびにデバイスおよび足場からの物質の放出に影響する。細孔は、例えば、ナノ多孔性、マイクロ多孔性、またはマクロ多孔性でありうる。例えば、ナノ細孔の直径は、約１０ｎｍ未満である。マイクロ細孔は、直径約１００ｎｍ〜約２０μｍの範囲である。マクロ細孔は、約２０μｍを超える（例えば、約１００μｍを超えるまたは約４００μｍを超える）。例示的なマクロ細孔サイズには、５０μｍ、１００μｍ、１５０μｍ、２００μｍ、２５０μｍ、３００μｍ、３５０μｍ、４００μｍ、４５０μｍ、５００μｍ、５５０μｍ、および６００μｍが含まれる。マクロ細孔は、真核細胞が、組成物の中へまたは外へ移行することを可能にするサイズの細孔である。一例では、マクロ多孔性組成物は、直径約４００μｍ〜５００μｍの細孔を有する。好適な細孔サイズは用途に依存する。
【０３４０】
様々な実施形態では、デバイスは、１つの層またはコンパートメントが作製され、１つまたは複数の化合物が注入またはコーティングされる、１段階で作製される。例示的な生物活性組成物には、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドが含まれる。ある特定の代替的実施形態では、デバイスは、１つの層またはコンパートメントが作製され、１つまたは複数の化合物が注入またはコーティングされ、続いて、第２、第３、第４、またはそれより多くの層が構築され、次々に１つまたは複数の化合物が順に注入またはコーティングされる、２つまたはそれより多く（３、４、５、６、．．．１０またはそれより多く）の段階で作製される。一部の実施形態では、各層またはコンパートメントは、他と同一であるか、または生物活性組成物の数もしくは混合物ならびに異なる化学的、物理的および生物学的特性によって互いに異なっている。分子量、分解速度、および足場形成の方法を制御することによって、特定の用途のために製剤化することができるポリマー。カップリング反応を使用して、ポリマー骨格に、細胞接着配列ＲＧＤなどの生物活性エピトープを共有結合により付着させることができる。
【０３４１】
一部の実施形態では、１つまたは複数の化合物は、表面吸収、物理的固定化を含む公知の方法を使用して、例えば、足場材料中に物質を捕捉するための相変化を使用して、足場組成物に加えられる。例えば、免疫賦活性化合物を、水性相または液相である足場組成物と混合し、環境条件（例えば、ｐＨ、温度、イオン濃度）が変化した後、液体がゲル化または固化して生物活性物質を捕捉する。一部の実施形態では、例えば、アルキル化またはアシル化剤を使用する共有結合カップリングを使用して、規定のコンホメーションの足場で化合物の安定した長期提示を提供する。そのような物質の共有結合カップリングのための例示的な試薬を以下の表に示す。
ペプチド／タンパク質をポリマーに共有結合によりカップリングするための方法
【表３】
2019524766.tif 000051
【０３４２】
メソ多孔性シリカロッド
本発明の主題の様々な実施形態は、メソ多孔性シリカロッドを含む送達ビヒクルの使用を含む。注射用メソ多孔性シリカロッドはランダムにｉｎ  ｖｉｖｏで自発構築して３Ｄ足場構造を形成する。３Ｄ足場構造は、免疫細胞（例えば、樹状細胞）の浸潤および／またはトラフィッキングを可能にする微小空間を含む。本明細書に開示される他の足場組成物と同様に、メソ多孔性シリカロッドは、例えば、ＰＥＩを単独で、あるいは免疫賦活性化合物；送達ビヒクルにもしくは送達ビヒクル中に免疫細胞を誘引する化合物；腫瘍細胞の免疫原性細胞死を誘導する化合物；Ｔ細胞もしくは樹状細胞抑制を阻害する化合物；免疫阻害性タンパク質を阻害する化合物；または抗原、あるいはそれらの任意の組合せと共に含むことができる。一部の実施形態では、メソ多孔性シリカロッド自体が、免疫賦活性化合物として機能する。
【０３４３】
一部の実施形態では、ロッドまたはロッドを含む足場は、直径１〜５０ｎｍの間の細孔、例えば、約１〜５０、２〜５０、３〜５０、４〜５０、５〜５０、６〜５０、７〜５０、８〜５０、９〜１０、１０〜５０、１５〜５０、２５〜５０、１〜２５、２〜２５、３〜２５、４〜２５、５〜２５、６〜２５、７〜２５、８〜２５、９〜２５、１０〜２５または１５〜２５ｎｍの範囲内を含む細孔を含む。様々な実施形態では、メソ多孔性シリカロッドの長さは、５μｍ〜５００μｍの範囲である。一例では、ロッドは、５〜２５μｍ、例えば、１０〜２０μｍの長さを含む。他の例では、ロッドは、５０μｍ〜２５０μｍ、または８０μｍ〜１２０μｍの長さを含む。ある特定の実施形態では、メソ多孔性シリカロッドは、約２５〜１００、２５〜２５０、２５〜５００、５０〜２５０もしくは５０〜５００μｍの長さ、または少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、もしくは１００μｍであるが約５００μｍ以下である長さを含む。
【０３４４】
ＰＥＩと他の化合物との連結
様々な実施形態では、ＰＥＩは、抗原および／または別の免疫賦活剤などの別の化合物と、共有結合により連結される。共有結合またはリンカーによる共有結合的コンジュゲーションは、両方の分子（例えば、ＰＥＩおよび抗原）を同じ細胞に送達させることを容易にする。リンカーの非限定的な例には、例えば、１〜１０またはそれより多くのアミノ酸のペプチドリンカー、クリックケミストリーリンカーおよび当技術分野で公知の様々な他のリンカーが含まれる。他の例には、カルバメート、マレイミド、トリアゾール環、ジスルフィド、チオエステル、アミド、エステル結合、またはカルボジイミド連結（数個の原子から所望する限り多数の原子）が含まれる。追加のカップリング反応ケミストリー、例えば、ＮＨＳ−エステル（アミン−アミン）、イミドエステル（アミン−アミン）、ヒドラジド（アルデヒド−ヒドラジド）、マレイミド（スルフヒドリル−スルフヒドリル）、アジド・アルキン・ヒュスゲン付加環化、およびストレプトアビジン−ビオチンコンジュゲーション、ならびにクリックケミストリーを利用して、ＰＥＩを抗原に連結することができる。一部の場合では、リンカーは切断可能である。例えば、リンカーは、酵素、求核／塩基性試薬、還元／酸化剤（例えば、細胞内）、光照射、熱、求電子／酸性試薬、または有機金属／金属試薬によって切断可能である。一部の実施形態では、ＰＥＩは、リンカーおよび／またはクリック反応によって形成された結合を介して別の化合物と連結される。共有結合カップリングは、ＰＥＩを取り込む細胞が抗原も取り込む可能性を増加させる。
【０３４５】
本発明の主題の複数の態様は、ＰＥＩが、抗原または別の免疫調節剤に、例えば、共有結合を介して直接、または任意選択でリンカーもしくはスペーサーを介してコンジュゲートされている、例えば共有結合により連結されている、イムノコンジュゲートに関する。共有結合は、様々な長さを有しうる。共有結合の長さの非限定的な例には、約１オングストローム〜３オングストロームの長さが含まれる。様々な実施形態では、リンカーまたはスペーサーは、ＰＥＩおよび抗原もしくは免疫調節剤コンジュゲートと単一の細胞との会合を促進するため、またはＰＥＩおよび抗原もしくは免疫調節剤と単一の細胞との会合を制限するために十分に短い。例えば、リンカーまたはスペーサーは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、１〜５、５〜１０、５〜１５、５〜２５、１０〜３０または５〜５０オングストローム長未満でありうる。したがって、一部の実施形態では、抗原は、免疫調節剤から、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、１〜５、５〜１０、５〜１５、５〜２５、１０〜３０または５〜５０オングストロームを超えて離れていない。一部の実施形態では、抗原および免疫調節剤は、共有結合を介して［スペーサーリンカー化合物なしで］直接連結されている。ある特定の実施形態では、リンカーまたはスペーサーは、１個のアミノ酸、または約２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸を含むポリペプチドである。一部の実施形態では、ポリペプチドは、約２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のグリシンを含む。単一の細胞を本発明の主題のＰＥＩ含有または他のイムノコンジュゲートと接触させることは、異なる細胞にイムノコンジュゲートの構成要素を送達させることから生じうるオフターゲット効果を減少させる。
【０３４６】
本発明の主題の態様は、抗原に共有結合により連結されたＰＥＩ分子を提供する。一部の実施形態では、ＰＥＩは、１つより多くの抗原分子に共有結合により連結され、例えば、直鎖ＰＥＩは、その末端の各々で共有結合により連結され、分岐鎖ＰＥＩは、複数の分岐鎖末端で共有結合により連結される。一部の実施形態では、単一のＰＥＩ分子は、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の抗原分子に共有結合により連結されている。「共有結合により連結された」分子は、１つの共有結合、または１つより多くの（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれより多くの）共有結合によって連結された、例えば、リンカーまたはスペーサーによって連結された分子を含む。一部の場合では、ＰＥＩと抗原とは、結合、例えば、カルバメート、アミド、マレイミド、トリアゾール環、ジスルフィド、チオエステルまたはエステル結合によって、共有結合により付着される。一部の実施形態では、ＰＥＩと抗原とは、クリック反応によって形成された結合によって連結される。一部の場合では、ＰＥＩと抗原とは、リンカーまたはスペーサーによって共有結合により付着される。一部の場合では、ＰＥＩと抗原とは、カルボジイミド連結によって接続される。例示的なリンカーは、任意選択で１つまたは複数のセリンも含む、２、３、４、５またはそれより多くのグリシンのストレッチを含む。一部の実施形態では、ＰＥＩは、二官能性マレイミド（アミン−スルフヒドリル）、カルボジイミド（アミン−カルボン酸）または光クリック（ノルボルネン−チオール）リンカーを介して、抗原に共有結合により連結される。一部の例では、１つまたは複数、例えば、複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多く）の抗原が、一緒に混合され、例えば、ＰＥＩにカップリングされ、例えば、１つの抗原単独との場合よりも広範な抗原性カバレッジを提供する免疫原性カクテルを形成する。
【０３４７】
一部の実施形態では、ＰＥＩは、生体直交型クリック反応などの生体直交型化学反応を介して、別の化合物（例えば、抗原または別の免疫賦活性化合物）と連結される。「生体直交型」とは、天然の生物学的または生化学的プロセスを妨げることなく、生体細胞、組織または生物の内部で生じうる官能基または化学反応を意味する。しかしながら、本発明の主題は、ＰＥＩと別の化合物とのコンジュゲーションが、生体細胞、組織または生物の存在下でまたは内部で生じていることを必要としない。生体直交型の官能基または反応は、細胞に対して毒性でない。例えば、生体直交型反応は、生物学的条件下、例えば、生体生物または細胞内の生物学的ｐＨ、水性環境および温度で機能することができる。例えば、生体直交型反応は、２つの官能基間の共有結合ライゲーションが、代謝および／または官能基の１つもしくは複数の生物からの除去の前に行われることを確実にするために急速に起こらなければならない。他の例では、２つの官能基の間に形成される共有結合は、生体細胞、組織および生物における生物学的反応に不活性でなければならない。
【０３４８】
生体直交型官能基および標的認識分子は、相補的官能基を含み、生体直交型官能基は、相補的官能基と化学的に反応して、共有結合を形成することができる。
【０３４９】
例示的な生体直交型官能基／相補的官能基対には、アジドとホスフィン；アジドとシクロオクチン；ニトロンとシクロオクチン；ニトリルオキシドとノルボルネン；オキサノルボルナジエンとアジド；ｔｒａｎｓ−シクロオクテンとｓ−テトラジン；クアドリシクランとビス（ジチオベンジル）ニッケル（ＩＩ）が含まれる。例えば、生体直交型官能基は、クリックケミストリーによって、相補的官能基と反応することができる。一部の場合では、生体直交型官能基は、ｔｒａｎｓシクロオクテン（ＴＯＣ）またはノルボルネン（ＮＯＲ）を含み、相補的官能基が、テトラジン（Ｔｚ）を含む。一部の例では、生体直交型官能基は、ジベンゾシクロオクチン（ＤＢＣＯ）を含み、相補的官能基は、アジド（Ａｚ）を含む。他の例では、生体直交型官能基は、Ｔｚを含み、相補的官能基は、ｔｒａｎｓシクロオクテン（ＴＯＣ）またはノルボルネン（ＮＯＲ）を含む。代替的にまたは加えて、生体直交型官能基はＡｚを含み、相補的官能基はジベンゾシクロオクチン（ＤＢＣＯ）を含む。
【０３５０】
例えば、標的は、生体直交型官能基を含み、標的認識分子は相補的官能基を含み、生体直交型官能基は、相補的官能基と化学的に反応して、例えば、下記の表に記載される反応型を使用して、例えば、クリックケミストリーを介して、共有結合を形成することができる。
【０３５１】
例示的な生体直交型官能基／相補的官能基対を、下記の表に示す。
【表４−１】
2019524766.tif 000052
【表４−２】
2019524766.tif 000053
【０３５２】
一部の例では、標的分子は、ｔｒａｎｓ−シクロオクテン（ＴＣＯ）、ジベンジルシクロオクチン（dibenzycyclooctyne）（ＤＢＣＯ）、ノルボルネン、テトラジン（Ｔｚ）またはアジド（Ａｚ）などの生体直交型官能基を含む。他の例では、（例えば、デバイス上の）標的認識分子は、ｔｒａｎｓ−シクロオクテン（ＴＣＯ）、ジベンジルシクロオクチン（ＤＢＣＯ）、ノルボルネン、テトラジン（Ｔｚ）、またはアジド（Ａｚ）などの生体直交型官能基を含む。ＴＣＯは、クリックケミストリー反応で、テトラジン（Ｔｚ）部分と特異的に反応する。ＤＢＣＯは、クリックケミストリー反応で、アジド（Ａｚ）部分と特異的に反応する。ノルボルネンは、クリックケミストリー反応で、テトラジン（Ｔｚ）部分と特異的に反応する。例えば、ＴＣＯは、標的／標的認識分子として、テトラジン部分と対形成する。例えば、ＤＢＣＯは、標的／標的認識分子として、アジド部分と対形成する。例えば、ノルボルネンは、標的／標的認識分子として、テトラジン部分と対形成する。
【０３５３】
例示的なクリックケミストリー反応は、高い特異性、効率的な動態を有し、生理学的条件下、ｉｎ  ｖｉｖｏで生じる。例えば、Baskinら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、１０４巻（２００７年）：１６７９３頁；Onetoら、Acta  biomaterilia（２０１４年）；Nevesら、Bioconjugate  chemistry、２４巻（２０１３年）：９３４頁；Kooら、Angewandte  Chemie、５１巻（２０１２年）：１１８３６頁；およびRossinら、Angewandte  Chemie、４９巻（２０１０年）：３３７５頁を参照。
【０３５４】
前述したように、クリックケミストリー反応は、生体分子をコンジュゲートするために特に有効である。さらに、クリックケミストリー反応は、高収率で、生物学的な条件で進行する。例示的なクリックケミストリー反応は、以下のスキームに示される（ａ）アジド−アルキン付加環化、（ｂ）銅フリーアジドアルキン付加環化、および（ｃ）シュタウディンガー・ライゲーションである。
【化４７】
2019524766.tif 000054
【０３５５】
一般的定義
他に特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、当技術分野（例えば、細胞培養、分子遺伝学、および生化学）の当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有するものとする。
【０３５６】
本明細書で使用される場合、数値または範囲の文脈における「約」という用語は、文脈がより限定された範囲を必要としない限り、列挙または主張された数値または範囲の±１０％を意味する。
【０３５７】
上記の記載および特許請求の範囲で、「〜の少なくとも１つ」または「〜の１つまたは複数」などの表現は、それに続いて要素または特長の連続的リストが記載される場合がある。「および／または」という用語も、２つまたはそれより多くの要素または特長のリストの中に記載される場合がある。使用される文脈で暗示的または明示的に矛盾が生じない限り、そのような表現は、個別の列挙されている要素もしくは特長のいずれか、または列挙されている要素もしくは特長のいずれかと他の列挙されている要素もしくは特長のいずれかとの組合せを意味することが意図されている。例えば、「ＡおよびＢの少なくとも１つ」、「ＡおよびＢの１つまたは複数」ならびに「Ａおよび／またはＢ」という表現は、それぞれ「Ａのみ、Ｂのみ、またはＡおよびＢ共に」を意味することが意図されている。同様の解釈が、３つまたはそれより多くのアイテムを含むリストについても意図される。例えば、「Ａ、Ｂ、およびＣの少なくとも１つ」、「Ａ、Ｂ、およびＣの１つまたは複数」、ならびに「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」は、それぞれ「Ａのみ、Ｂのみ、Ｃのみ、ＡおよびＢ共に、ＡおよびＣ共に、ＢおよびＣ共に、またはＡおよびＢおよびＣ共に」を意味することが意図されている。加えて、上記および特許請求の範囲における「に基づいて」という用語の使用は、列挙されていない特長または要素も許容されるように、「に少なくとも一部基づいて」を意味することが意図されている。
【０３５８】
パラメーターの範囲が提供されている場合、その範囲内の全ての整数およびそれらの１０分の１の値も本発明によって提供されていると理解される。例えば、「０．２〜５ｍｇ」は、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇなどの５．０ｍｇまでの値および５．０ｍｇを含む開示である。
【０３５９】
小分子は、質量で２０００ダルトン未満の化合物である。小分子の分子質量は、好ましくは１０００ダルトン未満、より好ましくは６００ダルトン未満であり、例えば、化合物は、５００ダルトン、４００ダルトン、３００ダルトン、２００ダルトン、または１００ダルトン未満である。
【０３６０】
ポリヌクレオチド、ポリペプチド、または他の薬剤は、精製および／または単離することができる。具体的に、本明細書で使用される場合、「単離された」または「精製された」核酸分子、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはタンパク質は、組換え技術によって産生されるとき、他の細胞材料または培養培地を実質的に含まず、化学的に合成されたとき、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まない。精製された化合物は、目的の化合物の少なくとも６０重量％（乾燥重量）である。好ましくは、調製物は、目的の化合物の少なくとも７５重量％、より好ましくは少なくとも９０重量％、最も好ましくは少なくとも９９重量％である。例えば、精製された化合物は、所望の化合物の少なくとも９０重量％、９１重量％、９２重量％、９３重量％、９４重量％、９５重量％、９８重量％、９９重量％、または１００重量％（ｗ／ｗ）である。純度は、任意の適切な標準的方法、例えば、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析によって測定される。精製または単離されたポリヌクレオチド（リボ核酸（ＲＮＡ）またはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ））は、その天然に存在する状態でそれに隣接する遺伝子または配列を含まない。精製または単離されたポリペプチドは、その天然に存在する状態でそれに隣接するアミノ酸または配列を含まない。精製されていることは、ヒト対象への投与のために安全である、例えば、感染性または毒性物質のない、無菌の程度を定義しうる。
【０３６１】
同様に、ヌクレオチドまたはポリペプチドに関して「実質的に純粋」とは、それに天然に付随する構成要素から分離されたヌクレオチドまたはポリペプチドを意味する。典型的に、ヌクレオチドおよびポリペプチドは、それらが天然に関わっているタンパク質および天然に存在する有機分子が少なくとも６０重量％、７０重量％、８０重量％、９０重量％、９５重量％、またさらには９９重量％除去されている場合に、実質的に純粋である。
【０３６２】
「単離された核酸」とは、核酸が由来する生物の天然に存在するゲノムにおいてそれに隣接している遺伝子を含まない核酸を意味する。この用語は、例えば、（ａ）天然に存在するゲノムＤＮＡ分子の一部であるが、それが天然に存在する生物のゲノムにおいて分子のその部分に隣接する核酸配列の両方によって隣接されていないＤＮＡ；（ｂ）得られる分子が任意の天然に存在するベクターまたはゲノムＤＮＡと同一でない様式で、ベクター、または原核生物もしくは真核生物のゲノムＤＮＡに組み込まれた核酸；（ｃ）ｃＤＮＡ、ゲノム断片、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって生成された断片、または制限断片などの別個の分子；および（ｄ）ハイブリッド遺伝子、つまり融合タンパク質をコードする遺伝子の一部である組換えヌクレオチド配列を包含する。本発明による単離された核酸分子は、合成的に製造された分子、ならびに化学的に変更されたおよび／または修飾された骨格を有する任意の核酸をさらに含む。例えば、単離された核酸は、精製されたｃＤＮＡまたはＲＮＡポリヌクレオチドである。単離された核酸分子は、メッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）分子も含む。
【０３６３】
「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」または「によって特徴付けられる」と同義である「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という移行句は、包括的またはオープンエンドであり、列挙されていない追加の要素または方法ステップを排除するものではない。対照的に、「からなる」という移行句は、請求項で指定されていない任意の要素、ステップ、または成分を排除する。「から本質的になる」という移行句は、請求項の範囲を、指定された材料またはステップ「および請求された発明の根本的かつ新規な特徴に実質的に影響を与えないもの」に限定する。
【０３６４】
本明細書で使用される場合、「発現ベクター」は、細胞を形質転換することができ、１つまたは複数の指定されたポリヌクレオチドの発現をもたらすことができるＤＮＡまたはＲＮＡベクターである。好ましくは、発現ベクターは、宿主細胞内で複製することもできる。発現ベクターは、例えば、真核生物であってもよいが、典型的にはウイルスまたはプラスミドである。本発明の発現ベクターは、転写制御配列、翻訳制御配列、複製起点、および宿主細胞（例えば、腫瘍細胞、免疫細胞、または投与後のデバイスもしくは足場の周辺の細胞などの対象の細胞）と適合性であり、本発明のポリヌクレオチドの発現を制御する他の調節配列などの調節配列を含有する。特に、本発明の発現ベクターは、転写制御配列を含む。転写制御配列は、転写の開始、伸長、および終結を制御する配列である。特に重要な転写制御配列は、プロモーター、エンハンサー、オペレーターおよびリプレッサー配列など、転写開始を制御するものである。適切な転写制御配列は、対象の細胞内で機能することができる任意の転写制御配列を含む。そのような調節配列は、例えば、ウイルスもしくは真核生物から得ることができ、または化学的に合成することができる。様々なそのような転写制御配列が、当業者に公知である。特に好ましい転写制御配列は、構成的におよび／または１つもしくは複数の特定の組織のいずれかで、対象の細胞における転写の指示に活性なプロモーターである。様々な実施形態では、発現ベクターは、一過性に発現される。
【実施例】
【０３６５】
本発明の理解をより完全にするため、以下に実施例を示す。以下の実施例は、本発明を作製および実施するための例示的な様式を例証するものである。しかしながら、本発明の範囲は、これらの実施例に開示される特定の実施形態に限定されず、代替方法を用いて同様の結果を得ることができることから、これらの実施形態は例証を目的とするものにすぎない。
【０３６６】
（実施例１）
抗腫瘍免疫を増強するメソ多孔性シリカ（ＭＰＳ）ワクチン
生体材料は、現行のがんワクチン戦略と相乗的に統合され、それらの有効性を増強する大きな可能性を示している。我々は最近、メソ多孔性シリカ（ＭＰＳ）微粒子の３Ｄ足場へのｉｎ  ｖｉｖｏ自発構築を介する注射用の生体材料ワクチンを開発した。ＭＰＳワクチンは、ＧＭ−ＣＳＦおよびＣｐＧと共に製剤化されるとき、宿主の樹状細胞（ＤＣ）の活性化およびトラフィッキングをモジュレートする。ここでは、ＭＰＳワクチンの単回注射が、持続的な胚中心活性を、例えば、流入領域リンパ節において、３０日間を超えて誘導することを実証する。結果として、トラスツズマブ結合ドメイン内で小さな直鎖Ｈｅｒ２／ｎｅｕペプチドで免疫化した場合、ＭＰＳワクチンは、ボーラスワクチンと比較して２桁を超えて高いＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ抗体力価を誘発し、抗体は、乳がん細胞の天然のＨｅｒ２構造に対して反応性を示した。腫瘍抗原に対するＣＴＬ応答をさらに増強するために、我々は、ＭＰＳワクチンにおいて、抗原とポリエチレンイミン（ＰＥＩ）とを共提示した。ＰＥＩは、ネズミＤＣにおける抗原交差提示、ならびにｉｎ  ｖｉｔｒｏでのネズミおよびヒトＤＣの両方におけるＴＮＦ−ａおよびＩＬ−６産生を増加させた。ＭＰＳワクチンと比較して、ＭＰＳ−ＰＥＩワクチンは、ワクチンおよびワクチンｄＬＮにおける活性化ＤＣを約２倍増強させた。全身的に、ＭＰＳ−ＰＥＩワクチンは、ＩＦＮ−ｙ産生抗原特異的循環ＣＤ８＋Ｔ細胞を、ＭＰＳワクチンと比較して約２．５倍高く誘導した。印象的なことに、ＨＰＶ−Ｅ７発現腫瘍モデルを使用して、我々は、ＭＰＳ−ＰＥＩワクチンの単回注射が、８０％を上回るマウスで、大きな樹立された腫瘍を完全に根絶することを実証した。最後に、最近配列決定されたＢ１６黒色腫ネオ抗原ペプチドのプールで免疫化したとき、ＭＰＳ−ＰＥＩワクチンは、治療的腫瘍成長制御、および抗ＣＴＬＡ４治療との相乗効果を誘導した。これらの知見は、ＭＰＳワクチンが、宿主の免疫細胞機能をモジュレートし、パーソナライズされた抗腫瘍免疫を強化するための、容易な多機能およびマルチエピトーププラットフォームとして機能することを示している。
【０３６７】
（実施例２）
ＰＥＩを含むＤ，Ｌ−ラクチドおよびグリコリド（ＰＬＧ）足場
ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）でＰＬＧ足場をコーティングすることは、樹状細胞（ＤＣ）の活性化を増強する。抗原吸着の前にＰＬＧシステムにＰＥＩを適用することは、がんワクチンモデルにおける抗腫瘍応答を増強させる。
【０３６８】
ＰＥＩ装填足場は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ＴＬＲ５活性を、対照に対して３〜４倍大きく促進した（図１９Ａ）。さらに、ＰＥＩ−ＰＬＧ足場に播種したネズミＤＣは、ＰＥＩなしの足場に播種した細胞よりも、３倍を超えて多いＩＬ−１２およびほぼ３０倍多いＩＦＮ−アルファを産生した（図１９Ｂ）。これらの結果は、ＰＥＩ修飾されたＰＬＧが、おそらくはＴＬＲ５経路を介して、ＤＣおよび他の抗原提示細胞ＡＰＣを局所的に活性化しうることを示唆する。
【０３６９】
Ｂ１６−Ｆ１０黒色腫腫瘍溶解物由来の抗原を、ＰＥＩ−ＰＬＧシステムに吸着させ、がんワクチンを作製した。ＰＥＩ−抗原コーティングされたワクチンのマウスへの移植は、Ｇ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−ａ、ＲＡＮＴＥＳ、ＫＣ、ＩＬ−２、ＭＩＰ−１ｂ、ＩＬ−１２を含むｉｎ  ｓｉｔｕの免疫賦活性サイトカインの局所産生を誘導した（図２０Ａ）。さらに、ＰＥＩ−抗原装填足場は、ＰＥＩでコーティングされていないＰＬＧシステムによって誘導されるＩＬ−１０およびＧＭ−ＣＳＦなどの潜在的に抑制性のサイトカインを阻害した（図２０Ａ）。またＰＥＩ修飾ＰＬＧワクチンは、ＭＨＣ−ＩＩおよびＣＤ８６発現によって示されるように、足場部位に動員された活性化ＤＣの１１〜２２倍の増加をもたらした（図２０Ｂ）。
【０３７０】
致死Ｂ１６−Ｆ１０黒色腫モデルにおいて予防的ワクチンとして利用される場合、ＰＥＩ−抗原足場は、５０％のマウスを腫瘍発生から保護し、一方で、ＰＥＩコーティングのない抗原装填足場は１０％のマウスしか保護しなかった（図２０Ｃ）。この正のワクチン有効性は、治療設定を拡張させ、ここで、ＰＥＩ−抗原ワクチンは、腫瘍成長に影響を与えなかったブランク対照と比較して、腫瘍成長を有意に遅くすることができた（図２１Ａおよび２１Ｂ）。この有効性は、腫瘍塊に浸潤する活性化Ｔ細胞の大きさと相関し、ＰＥＩ−抗原提示ＰＬＧワクチンは、腫瘍部位で、ＰＥＩ−抗原コーティングを使用しなかったシステムと比較して１５〜３２倍多くの活性化Ｔ細胞を生じた（図２１Ｃ）。これらのデータは、ＰＬＧシステムのＰＥＩ−抗原コーティングが、樹状細胞による抗原提示および活性化を増強し、特異的な抗腫瘍有効性を生じることを示す。
【０３７１】
また我々は、ＰＥＩ−ＰＬＧシステムが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでヒトＤＣの活性化を促進することができるかどうかを調査した。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）由来ＤＣのＰＥＩ−ＰＬＧ足場への播種は、対照に対して、活性化マーカーＨＬＡ−ＤＲおよびＣＤ８３のＤＣ発現を有意に増強した（図２２）。興味深いことに、ＰＥＩ装填足場によるＤＣ活性化の大きさは、ＣｐＧ−ＯＤＮおよびＰ（Ｉ：Ｃ）アジュバントによって誘導される活性化レベルと類似していた。さらに、ＰＥＩ足場に播種したＰＢＭＣは、対照ならびにＣｐＧ−ＯＤＮおよびＰ（Ｉ：Ｃ）アジュバントを含有する足場と比較して有意に高いレベルのＩＬ−６、ＩＬ−２およびＴＮＦ−アルファ産生を誘導した。
【０３７２】
材料と方法
細胞株
Ｂ１６−Ｆ１０黒色腫細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（カタログ：ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−６４７５）：２０１０年および２０１２年から取得した。取得してすぐに、細胞を３回継代培養し、等分し、液体窒素で冷凍した。腫瘍実験のために、Ｂ１６−Ｆ１０細胞を解凍し、１０％のウシ胎児血清（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、１００単位／ｍｌのペニシリン、および１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含有するＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）中で培養した。細胞を、加湿した５％ＣＯ２／９５％空気雰囲気中３７℃で維持し、早期継代細胞（４〜９の間）を実験に利用した。
【０３７３】
ＤＣ単離および培養
公知の方法、例えば、Ｌｕｔｚらによって開発されたプロトコールを使用して、一次骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）を生成した（Lutz、１９９９年、J  Immunol  Methods、２２３巻（１号）：７７〜９２頁）。簡潔に述べると、骨髄細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの大腿骨からフラッシュし、１００ｍｍの細菌学的ペトリ皿（Ｆａｌｃｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  １０２９／Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で培養した。細胞培養培地ＲＰＭＩ−１６４０（Ｒ１０）（Ｓｉｇｍａ）を、１％のペニシリン−ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、２ｍＭのｌ−グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、５０μＭの２−メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ）および１０％の熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で補足した。０日目に、骨髄白血球を、２０ｎｇ／ｍｌの顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を含有する１０ｍｌのＲ１０培地中に、１００ｍｍの皿１つあたり２×１０６個の細胞で播種した。３日目に、２０ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦを含有する別の１０ｍｌのＲ１０培地をプレートに加えた。６日目および８日目に、培養上清の半分を回収し、遠心分離し、細胞ペレットを、２０ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦを含有する１０ｍｌの新鮮なＲ１０に再懸濁し、そして元のプレートに戻した。全ての実験のために、８日目〜１２日目の間の培養上清からの非接着性細胞集団を使用した。
【０３７４】
ヒトリンパ球単離のために、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を患者から取得した。樹状細胞を、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４培養を用いて、接着性ＰＢＭＣから生成した。
【０３７５】
ＰＬＧワクチン作製
Ｄ，Ｌ−ラクチドおよびグリコリドの８５：１５の１２０ｋＤａコポリマー（ＰＬＧ）（Ａｌｋｅｒｍｅｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）をガス発泡プロセスで利用して多孔性ＰＬＧマトリックス（Harrisら、１９９８年、J.  Biomed.  Mater.  Res.、４２巻、３９６〜４０２頁）を形成した。ＰＬＧポリマーをＰＥＩでコーティングするために、４０μＭのＰＬＧマイクロスフェア（ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｘ）を、分岐鎖６０Ｋおよび直鎖２５ＫのポリエチレンイミンのｄｄＨ２Ｏ溶液と共に、最終重量％が４％ＰＥＩとなるまでインキュベートした。ＰＥＩ−ＰＬＧマイクロスフェアを凍結および凍結乾燥し、抗原吸着まで４℃で保存した。抗原または抗原を含有する腫瘍溶解物を、ＰＥＩ−ＰＬＧスフェアに組み込むために、タンパク質抗原をボルテックスし、ｄｄＨ２０中で室温で１５分間インキュベートして、吸着および凍結乾燥を可能にした。黒色腫抗原を作製するために、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｍａｉｎｅ）の背で皮下的に成長したＢ１６−Ｆ１０腫瘍の生検を、コラゲナーゼ（２５０Ｕ／ｍｌ）（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ、Ｌａｋｅｗｏｏｄ、ＮＪ）で消化し、４０μｍのセルストレーナーに通して濾過した後、１ｍｌあたり１０７個の細胞に相当する濃度で懸濁した。ＧＭ−ＣＳＦは、標準的な二重エマルジョンプロセスを使用してＰＬＧマイクロスフェアに組み込まれる。腫瘍細胞懸濁液を、液体窒素での急速凍結および解凍（３７℃）の４サイクルに付し、次いで４００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。腫瘍溶解物を含有する上清（１ｍｌ）を回収し、凍結乾燥した。ＣｐＧ−ＯＤＮまたはポリ（Ｉ：Ｃ）をＰＬＧ足場に組み込むために、ＣｐＧ−ＯＤＮ１８２６（マウス試験のため）、ＨＭＷ  Ｐ（Ｉ：Ｃ）およびＣｐＧ−ＯＤＮ２２１６（ヒトＤＣ試験のため）（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を、最初にポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩ、Ｍｎ約６０，０００、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）で、ＣｐＧ−ＯＤＮ１８２６溶液をＰＥＩ溶液に滴下しながら混合物をボルテックスすることによって濃縮した。ＰＥＩのＣｐＧ−ＯＤＮに対する電荷比（ＮＨ３＋：ＰＯ４−）は、濃縮の間、７で一定に保った。濃縮液を、次いで６０μｌの５０％（重量／体積）スクロース溶液でボルテックスし、凍結乾燥し、１５０ｍｇの最終重量となるまで乾燥スクロースと混合した。
【０３７６】
ＰＥＩコーティングありまたはなしのＰＬＧマイクロスフェアを、次いでスクロース含有ＰＥＩ−ＣｐＧ−ＯＤＮ濃縮物、ＰＥＩ−Ｐ（Ｉ：Ｃ）または腫瘍溶解物と混合し、圧縮成形した。得られたディスクを、高圧ＣＯ２環境内で平衡化した。圧力の急激な減少は、ポリマー粒子を増大させ、相互接続構造へと融合させる。水に浸漬することによって、足場からスクロースを浸出させ、多孔性が８０〜９０％の足場を得た。
【０３７７】
ワクチンアッセイ
予防的ワクチン接種のために、動物に、ＰＥＩ−コーティングありまたはなしのＢ１６溶解物装填ＰＬＧワクチンでワクチン接種し、１４日後、１０５個のＢ１６−Ｆ１０黒色腫細胞（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＮＪ）で腫瘍チャレンジした。治療的ワクチン接種のために、動物に、１０５個のＢ１６−Ｆ１０黒色腫細胞（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＮＪ）を首の後ろに皮下注射してチャレンジした。腫瘍チャレンジ後９日目に、ＰＥＩコーティングありまたはなしのＰＬＧワクチンを使用して黒色腫腫瘍溶解物抗原を組み込んだ。動物を、腫瘍成長の開始（およそ１ｍｍ３）についてモニタリングし、腫瘍が２０〜２５ｍｍ（最長直径）に成長したとき、人道的理由のために屠殺した。
【０３７８】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞活性化およびサイトカイン産生
ＰＬＧワクチンを、示される５×１０６個のヒトＰＢＭＣまたはネズミ細胞に播種し、１０％のＦＢＳを補足したＲＰＭＩ培地に直接入れた。示された時点で、足場を機械的にかき混ぜ、細胞表面マーカーの分析のために細胞を放出させ、培地を回収してサイトカイン産生を調査した。フローサイトメトリー染色および分析を、ＦＩＴＣ−ＭＨＣＩＩに結合されたＡＰＣ−ＣＤ１１ｃ抗体とＡＰＣ−ＣＤ８６とを使用して行い、ネズミＤＣ活性化を決定した。ヒト細胞活性化は、ＦＩＴＣ−ＨＬＡ−ＤＲおよびＡＰＣ−ＣＤ８３染色を使用して分析した。全ての抗体は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡから入手した。細胞を、アイソタイプ対照を使用して、単一の陽性ＦＩＴＣ、ＡＰＣおよびＰＥ染色に従ってゲートした。各表面抗原について染色陽性細胞のパーセンテージを記録した。炎症性サイトカインの産生を、ネズミＩＬ１２もしくはＩＦＮ−ａに対するＥＬＩＳＡを使用して、またはヒトＩＬ−２、ＴＮＦ−ａおよびＩｌ−６  ＥＬＩＳＡを使用して分析した。
【０３７９】
ＰＥＩコーティングされた足場によるＴＬＲ活性化を調査するために、ｈＴＬＲ５遺伝子を同時トランスフェクトし、ＮＦ−κＢ依存性分泌胚性アルカリホスファターゼレポータープラスミドを保有するＨＥＫ２９３細胞を、ＰＬＧ足場（ＰＬＧ）または直鎖（Ｌ２５）もしくは分岐鎖ＰＥＩ（Ｂ６０）のいずれかを含有する足場に播種した。３次元ＰＬＧ培養で３６時間後、分泌されたアルカリホスファターゼをＱｕａｎｔｉｂｌｕｅ（登録商標）試薬（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を使用して発色させ、値を非刺激細胞に対して正規化した。
【０３８０】
ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＤＣおよびＴ細胞の浸潤および活性化ならびにサイトカイン産生
ＰＬＧワクチンを、示された時点で除去し、中に食い込んだ組織を、３７℃で４５分間かき混ぜたコラゲナーゼ溶液（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ、２５０Ｕ／ｍｌ）を使用して、単一の細胞懸濁液に消化した。次いで、細胞懸濁液を、足場粒子から細胞を単離するために４０μｍのセルストレーナーを通して注ぎ、細胞をペレット化し、冷ＰＢＳで洗浄し、Ｚ２コールターカウンター（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して計数した。示された日に、Ｂ１６−Ｆ１０腫瘍もマウスから取り出し、１ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼＩＩ（２５０Ｕ／ｍｌ）（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ、Ｌａｋｅｗｏｏｄ、ＮＪ）および０．１ｍｇ／ｍＬのＤＮａｓｅを用いて１時間３７℃で消化し、解離した細胞を４０μｍフィルターで濾過した。陰性Ｔ細胞の分離は、主に懸濁液から残屑および壊死細胞と共に自然免疫細胞およびＡＰＣを除去する、ネズミ汎Ｔ細胞分離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して行った。
【０３８１】
ワクチン部位から単離したＤＣを調査するために、単離した細胞を、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析による表現型特徴付けのために抗体で直接染色した。ＡＰＣコンジュゲートＣＤ１１ｃ染色を、ＦＩＴＣコンジュゲートＭＨＣ−ＩＩおよびＰＥ−コンジュゲートＣＤ８６染色と併せて行い、ＤＣ活性化をマークするためにフローサイトメトリーで分析した。腫瘍浸潤白血球を、活性化マーカーＦＩＴＣ−抗ＩＦＮγおよびＰＥ−抗ＣＤ１０７ａと共に、Ｔ細胞同定のためのＰＥ−Ｃｙ７  ＣＤ３ｅ、ＡＰＣ  ＣＤ８ａを用いて共染色した。全ての抗体は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡから入手した。細胞を、アイソタイプ対照を使用して、単一の陽性ＦＩＴＣ、ＡＰＣおよびＰＥ染色に従ってゲートした。各表面抗原について染色陽性細胞のパーセンテージを記録した。
【０３８２】
マトリックス移植部位での炎症性サイトカインのｉｎ  ｖｉｖｏ濃度を決定するために、隣接組織を切除し、組織タンパク質抽出試薬（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて消化した。遠心分離後、次いで、上清におけるサイトカイン濃度を、製造業者の使用説明書に従って、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）、およびＢｉｏ−Ｐｌｅｘ  Ｐｒｏ（商標）マウスサイトカイン２３−ｐｌｅｘアッセイ（Ｂｉｏｒａｄ）を用いて分析した。ワクチン部位での局所サイトカイン分析を、野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス、Ｂａｔｆ３−／−マウスおよびＣＤ８  Ｔ細胞ノックアウトマウスで行った。
【０３８３】
統計分析
本研究では全ての値は平均±Ｓ．Ｄ．として表した。群間の差の統計的有意性は、両側スチューデントｔ検定によって分析し、０．０５未満のＰ値を有意とみなした。
【０３８４】
他の実施形態
本発明を、その詳細な説明と併せて記載してきたが、上記の説明は例証を意図するものであり、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定するものではない。他の態様、利点、および修飾も、以下の特許請求の範囲内にある。
【０３８５】
本明細書で参照されている特許および科学文献は、当業者が利用可能な知識を確立するものである。本明細書に引用される全ての米国特許および公開または未公開の米国特許出願が、参照により組み込まれる。本明細書で引用される全ての公開された外国特許および特許出願が、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で引用される受託番号によって指定されるＧｅｎｂａｎｋおよびＮＣＢＩ提出物が、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で引用される他の全ての公開された参考文献、文書、原稿および科学文献が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０３８６】
本発明を、その好ましい実施形態を参照して具体的に示し、記載しているが、当業者は、形態および詳細における様々な変更が、添付の特許請求の範囲に包含される本発明の範囲から逸脱することなく行いうることを理解するであろう。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１ＤＥ】
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【図１ＦＧ】
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【図１Ｈ】
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【図１Ｉ】
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【図２Ａ】
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【図２ＢＣＤＥ】
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【図２ＦＧＨ】
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【図２Ｉ】
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【図３ＡＢＣ】
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【図３ＤＥＦ】
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【図４Ａ】
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【図４ＢＣ】
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【図５ＡＢＣ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図５Ｆ】
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【図５Ｇ】
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【図５Ｈ】
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【図５ＩＪ】
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【図５Ｋ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０ＡＢ】
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【図２０Ｃ】
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【図２１ＡＢ】
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【図２１Ｃ】
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【図２２ＡＢ】
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【図２２Ｃ】
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【図２３】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２５】
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【図２６ＡＢ】
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【図２６ＣＤ】
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【図２７】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２８Ｃ】
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【図２９Ａ】
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【図２９Ｂ】
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【図３０】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【図３２Ａ】
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【図３２Ｂ】
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【図３３Ａ】
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【図３３Ｂ】
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【図３３Ｃ】
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【図３４Ａ】
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【図３４Ｂ】
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【図３５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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