(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）：Ａｂ−［Ｌ−Ｄｎ］ｘ  （I)  式中：  Ａｂは、広域中和抗ＨＩＶ抗体を含んでなり；  Ｌは、前記広域中和抗ＨＩＶ抗体と共有結合したリンカー分子を含んでなり；  Ｄは、前記リンカー分子Ｌと共有結合したＨＩＶ治療用化合物を含んでなる１つ以上の薬物を含んでなり、前記１つ以上の広域中和抗ＨＩＶ抗体ＡｂはＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と特異的に結合し、前記１つ以上の薬物ＤはＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と特異的に結合し；  ｎは、１〜４から選択され；および  ｘは、１〜１２から選択される、の抗体薬物複合体を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
Ａｂ−Ｌ−Ｄ  （Ｉ）
式中：
Ａｂは、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質に対する結合親和性を有する広域中和抗体を含んでなり；
Ｌは、前記広域中和抗体と共有結合したリンカー分子を含んでなり；および
Ｄは、前記リンカー分子と共有結合した１つ以上の薬物を含んでなり、前記１つ以上の薬物は前記ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と結合することができる、
の抗体薬物複合体。
【請求項２】
前記広域中和抗体がＣＤ４結合部位と結合する、請求項１に記載の抗体薬物複合体。
【請求項３】
前記広域中和抗体が、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０１  ＬＳ、ＶＲＣ０７、ＶＲＣ０７−５２３、３ＢＮＣ１１７、ＮＩＨ４５−４６、ＰＧＶ０４、ｂ１２、ＣＨ３１、およびＣＨ１０３からなる群から選択される、請求項２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項４】
前記広域中和抗体がＶＲＣ０１である、請求項２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項５】
前記広域中和抗体がＶＲＣ０１  ＬＳである、請求項２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項６】
前記広域中和抗体がＶＲＣ０７である、請求項２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項７】
前記広域中和抗体がｇｐ１２０−ｇｐ４１接合部分と結合する、請求項１に記載の抗体薬物複合体。
【請求項８】
前記広域中和抗体が、８ＡＮＣ１９５、３５Ｏ２２、およびＰＧＴ１５１からなる群から選択される、請求項７に記載の抗体薬物複合体。
【請求項９】
前記広域中和抗体が、ｇｐ４１膜貫通部位近傍（ＭＰＥＲ）と結合する、請求項１に記載の抗体薬物複合体。
【請求項１０】
前記広域中和抗体が、４Ｅ１０、１０Ｅ８、２Ｆ５、Ｚ１３ｅ１からなる群から選択される、請求項９に記載の抗体薬物複合体。
【請求項１１】
前記広域中和抗体が１０Ｅ８である、請求項１０に記載の抗体薬物複合体。
【請求項１２】
前記リンカー分子が、開裂できないリンカーである、請求項１に記載の抗体薬物複合体。
【請求項１３】
前記開裂できないリンカーが、
【化１】
2019524687.tif 000054
からかる群から選択される前記抗体薬物複合体中に存在する、請求項１２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項１４】
前記１つ以上の薬物が、付着阻害剤である、請求項１に記載の抗体薬物複合体。
【請求項１５】
前記１つ以上の薬物が、
【化２】
2019524687.tif 000055
からなる群から選択される、請求項１に記載の抗体薬物複合体。
【請求項１６】
前記１つ以上の薬物が、式：
【化３】
2019524687.tif 000056
の化合物である、請求項１に記載の抗体薬物複合体。
【請求項１７】
前記１つ以上の薬物が、ペプチド：
Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ＧｌｕＬｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２
である、請求項１に記載の抗体薬物複合体。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体、および薬剤的に許容可能な賦形剤を含んでなる、医薬組成物。
【請求項１９】
１つ以上の追加の薬剤を含んでなる、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体を、対象に投与することを含む前記対象のＨＩＶ感染症の治療方法。
【請求項２１】
請求項１８または１９に記載の医薬製剤を、対象に投与することを含む前記対象のＨＩＶ感染症の治療方法。
【請求項２２】
式（Ｉ）：
Ａｂ−［Ｌ−Ｄｎ］ｘ  （I)
式中：
Ａｂは、広域中和抗ＨＩＶ抗体を含んでなり；
Ｌは、前記広域中和抗ＨＩＶ抗体と共有結合したリンカー分子を含んでなり；
Ｄは、前記リンカー分子Ｌと共有結合したＨＩＶ治療用化合物を含んでなる１つ以上の薬物を含んでなり、前記１つ以上の広域中和抗ＨＩＶ抗体ＡｂはＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と特異的に結合し、前記１つ以上の薬物ＤはＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と特異的に結合し；
ｎは、１〜４から選択され；および
ｘは、１〜１２から選択される、
の抗体薬物複合体。
【請求項２３】
前記広域中和抗体Ａｂが、ｇｐ１６０、ｇｐ１２０およびｇｐ４１からなる群から選択されるＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と結合する、請求項２２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項２４】
前記広域中和抗体Ａｂが、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０と結合する、請求項２２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項２５】
前記広域中和抗体Ａｂが、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１と結合する、請求項２２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項２６】
前記広域中和抗体Ａｂが、ｇｐ１２０／ｇｐ４１接合部分においてＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と結合する、請求項２２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項２７】
前記広域中和抗体Ａｂが、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０と結合する、請求項２２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項２８】
前記広域中和抗体Ａｂが、ＣＤ４結合部位においてＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と結合する、請求項２２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項２９】
前記広域中和抗体が、ｇｐ４１膜貫通部位近傍（ＭＰＥＲ）と結合する、請求項２２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項３０】
前記広域中和抗体が、２Ｇ１２、２Ｆ５、３ＢＣ１７６、３ＢＮＣ６０、３ＢＮＣ１１７、４Ｅ１０、８ＡＮＣ１３１、８ＡＮＣ１９５、１０Ｅ８、１０−１０７４、１２Ａ１２、３５Ｏ２２、ｂ１２、Ｂ２５３０、ＣＨ０１−０４、ＣＨ１０３、ＣＨ３１、ＨＪ１６、Ｍ６６．６、Ｎ６、Ｎ６−ＬＳ、ＮＩＨ４５−４６、ＰＧ９、ＰＧ１６、ＰＧＤＭ１４００、ＰＧＴ１２１、ＰＧＴ１２８、ＰＧＴ１３５、ＰＧＴ１４１−ＰＧＴ１４５、ＰＧＴ１５１、ＰＧＶ０４、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０１−ＬＳ、ＶＲＣ０７、ＶＲＣ０７−５２３、ＶＲＣ０７−ＬＳ、およびＺ１３からなる群から選択される、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体。
【請求項３１】
前記広域中和抗体Ａｂが、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０１−ＬＳ、ＶＲＣ０７、ＶＲＣ０７−５２３、ＶＲＣ０７−ＬＳ、３ＢＮＣ１１７、ＮＩＨ４５−４６、ＰＧＶ０４、ｂ１２、ＣＨ３１、ＣＨ１０３、Ｎ６およびＮ６−ＬＳからなる群から選択される、請求項２３に記載の抗体薬物複合体。
【請求項３２】
前記広域中和抗体がＶＲＣ０１である、請求項２３に記載の抗体薬物複合体。
【請求項３３】
前記広域中和抗体がＶＲＣ０１−ＬＳである、請求項２３に記載の抗体薬物複合体。
【請求項３４】
前記広域中和抗体がＶＲＣ０７である、請求項２３に記載の抗体薬物複合体。
【請求項３５】
前記広域中和抗体が、８ＡＮＣ１９５、３５Ｏ２２、およびＰＧＴ１５１からなる群から選択される、請求項３０に記載の抗体薬物複合体。
【請求項３６】
前記広域中和抗体が、４Ｅ１０、１０Ｅ８、２Ｆ５、Ｚ１３ｅ１からなる群から選択される、請求項３０に記載の抗体薬物複合体。
【請求項３７】
前記広域中和抗体が、Ｎ６である、請求項３０に記載の抗体薬物複合体。
【請求項３８】
前記広域中和抗体が、次の６つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１（配列番号３）、ＣＤＲＨ２（配列番号４）、ＣＤＲＨ３（配列番号５）、ＣＤＲＬ１（配列番号６）、ＣＤＲＬ２（配列番号７）およびＣＤＲＬ３（配列番号８）を含んでなる、請求項３２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項３９】
前記広域中和抗体が、配列番号９と少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖および配列番号１０と少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖を含んでなる、請求項３２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項４０】
前記広域中和抗体が、配列番号９の重鎖可変領域および配列番号１０の軽鎖可変領域を含んでなる、請求項３２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項４１】
前記広域中和抗体が、重鎖の４２８位におけるロイシン残基および重鎖の４３４位におけるセリン残基を含んでなる、請求項３２、および３８〜４０のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体。
【請求項４２】
前記広域中和抗体が、配列番号１１の重鎖を含んでなり、必要に応じて配列番号１３の軽鎖を含んでなる、請求項３２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項４３】
前記広域中和抗体が、次の６つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１（配列番号１４）、ＣＤＲＨ２（配列番号１５）、ＣＤＲＨ３（配列番号１６）、ＣＤＲＬ１（配列番号１７）、ＣＤＲＬ２（配列番号１８）およびＣＤＲＬ３（配列番号１９）を含んでなる、請求項３７に記載の抗体薬物複合体。
【請求項４４】
前記広域中和抗体が、配列番号２０と少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖および配列番号２１と少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖を含んでなる、請求項４３に記載の抗体薬物複合体。
【請求項４５】
前記広域中和抗体が、配列番号２０の重鎖可変領域および配列番号２１の軽鎖可変領域を含んでなる、請求項４３に記載の抗体薬物複合体。
【請求項４６】
前記広域中和抗体が、重鎖の４２８位におけるロイシン残基および重鎖の４３４位におけるセリン残基を含んでなる、請求項３７、および４３〜４５のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体。
【請求項４７】
前記リンカー分子が、開裂できないリンカーである、請求項２２〜４６のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体。
【請求項４８】
前記開裂できないリンカーが、
【化４】
2019524687.tif 000057
からなる群から選択される、請求項４７に記載の抗体薬物複合体。
【請求項４９】
前記リンカーが、
【化５】
2019524687.tif 000058
【化６】
2019524687.tif 000059
【化７】
2019524687.tif 000060
【化８】
2019524687.tif 000061
からなる群から選択される、請求項４７に記載の抗体薬物複合体。
【請求項５０】
前記薬物Ｄが、ｇｐ１６０、ｇｐ１２０およびｇｐ４１からなる群から選択されるＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と特異的に結合する、請求項２２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項５１】
前記薬物Ｄが、付着阻害剤である、請求項２２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項５２】
前記付着阻害剤が、ｇｐ１２０付着阻害剤、ｇｐ１６０付着阻害剤、またはｇｐ４１付着阻害剤である、請求項５１に記載の抗体薬物複合体。
【請求項５３】
前記付着阻害剤が、ｇｐ１２０付着阻害剤またはｇｐ１６０付着阻害剤である、請求項５１に記載の抗体薬物複合体。
【請求項５４】
前記薬物Ｄが、式：
【化９】
2019524687.tif 000062
の化合物である、請求項２２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項５５】
前記薬物Ｄが、式：
【化１０】
2019524687.tif 000063
の化合物である、請求項２２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項５６】
前記薬物Ｄが、ＣＤ４と結合するペプチドである、請求項２２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項５７】
前記１つ以上の薬物が、配列番号２を含んでなるアミノ酸配列を有するペプチドである、請求項５６に記載の抗体薬物複合体。
【請求項５８】
前記薬物ＤおよびリンカーＬが、次の構造：
【化１１】
2019524687.tif 000064
である、請求項２２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項５９】
前記薬物Ｄが、式Ａ：
【化１２】
2019524687.tif 000065
式中：
ＸおよびＹは、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、ハロ、オキソ、ハロアルキル、ビハロアルキル、トリハロアルキル、ハロアルコキシ、ビハロアルコキシ、トリハロアルコキシ、ヒドロキシル、アミノ、アミドおよび（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−（Ｃ＝Ｏ）からなる群から独立して選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、各々、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから独立して選択され；
ｍは、０〜５の範囲にあり；
ｎは、０〜５の範囲にあり；
ｒは、１〜６の範囲にあり；
ｐは、１〜６の範囲にあり；および
ｑは、１〜６の範囲にある、
である、請求項２２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項６０】
Ｘは、ＣｌおよびＦから選択され；
Ｙは、Ｈであり；
ｍは、２であり；
ｎは、１であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、各々、Ｈであり；
ｒは、１〜4の範囲にあり；
ｐは、１〜4の範囲にあり；および 
ｑは、１〜4の範囲にある、
請求項５９に記載の抗体薬物複合体。
【請求項６１】
【化１３】
2019524687.tif 000066
【化１４】
2019524687.tif 000067
【化１５】
2019524687.tif 000068
【化１６】
2019524687.tif 000069
式中、ｔは１〜１２の範囲にある、
からなる群から選択される、抗体薬物複合体。
【請求項６２】
式（Ｉ）：
Ａｂ−［Ｌ−Ｄｎ］ｘ  （I)
式中：
Ａｂは、広域中和抗ＨＩＶ抗体を含んでなり；
Ｌは、前記広域中和抗ＨＩＶ抗体と共有結合したリンカー分子を含んでなり；
Ｄは、前記リンカー分子Ｌと共有結合したＨＩＶ治療用化合物を含んでなる１つ以上の薬物を含んでなり、前記１つ以上の広域中和抗ＨＩＶ抗体ＡｂはＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と特異的に結合し、前記１つ以上の薬物ＤはＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と特異的に結合し；
ｎは、１〜４から選択され；
ｘは、１〜１２から選択され、抗体薬物複合体は、（１）前記広域中和抗体と共有結合している、第一リンカー分子Ｌと共有結合した第一薬物Ｄおよび（２）前記広域中和抗体と共有結合している、第二リンカー分子Ｌと共有結合した第二薬物Ｄを含んでなる、
の抗体薬物複合体。
【請求項６３】
第一薬物Ｄが、第二薬物Ｄと同じである、請求項６２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項６４】
第一薬物Ｄが、第二薬物Ｄと異なる、請求項６２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項６５】
前記２つの薬物が、ｇｐ１２０付着阻害剤、ｇｐ１６０付着阻害剤およびその組合せからなる群から選択される、請求項６２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項６６】
前記抗体薬物複合体が、重鎖および／または軽鎖のＣ末端と融合された１つ以上のペプチドを含んでなる融合タンパク質であり、前記リンカーが、１〜５０アミノ酸長である、請求項２２に記載の抗体薬物複合体。
【請求項６７】
請求項２２〜６６のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体、および薬剤的に許容可能な賦形剤を含んでなる、医薬組成物。
【請求項６８】
１つ以上の追加のＨＩＶ治療薬を含んでなる、請求項６７に記載の医薬組成物。
【請求項６９】
請求項２２〜６６のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体を対象に投与することを含む、前記対象のＨＩＶ感染症の治療方法。
【請求項７０】
請求項６７〜６８のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、前記対象のＨＩＶ感染症の治療方法。
【請求項７１】
請求項２２〜６６のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体を対象に投与することを含む、前記対象のＨＩＶ感染症の治癒方法。
【請求項７２】
請求項２２〜６６のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、前記対象のＨＩＶ感染症の治癒方法。
【請求項７３】
請求項２２〜６６のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体を対象に投与することを含む、前記対象のＨＩＶ感染症の予防方法。
【請求項７４】
請求項６７〜６８のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、前記対象のＨＩＶ感染症の予防方法。
【請求項７５】
医薬品用途の請求項２２〜６６のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体、または請求項６７〜６８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７６】
ＨＩＶ感染症治療に使用するための請求項２２〜６６のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体、または請求項６７〜６８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７７】
ＨＩＶ感染症治療用医薬品の製造における請求項２２〜６６のいずれか一項に記載の抗体薬物複合体、または請求項６７〜６８のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２０１６年７月１日に出願された米国特許仮出願第６２／３５７，４１０号の優先権を主張する。この出願の内容はその全文を参照することにより本明細書に組み入れられるものとする。
【０００２】
配列表
本願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に出願された配列表を含み、その全文を参照することにより本明細書に組み入れられるものとする。２０１７年６月２９二位に作成された前記ＡＳＣＩＩ複製物はＰＲ６６１１７＿ＳＬ．ｔｘｔというファイル名であり、３７，１３３バイトの大きさである。
【０００３】
技術分野
本発明は、抗体薬物複合体、医薬組成物、およびＨＩＶ感染した個体に関連したその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ１型および２型）は、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の収縮をもたらす。残念ながら、ＨＩＶの症例数は増加し続けており、現在、世界で２５百万超の個体がこのウイルスに苦しんでいる。現在、抗レトロウイルス薬によるウイルス複製の長期抑制がＨＩＶ感染症の治療のための唯一の選択肢である。事実、米国食品医薬品局は、患者の生存率および生活の質をかなり向上させることを示された６つの異なる阻害剤分類にわたる２５の薬物を認可した。しかしながら、これに限定されないが、望ましくない薬物と薬物の相互作用；薬物と食物の相互作用；治療に忠実でないこと；ウイルス標的の変異による薬物耐性；およびＨＩＶ感染により引き起こされる免疫障害に関連する炎症を含む多くの問題のため、今なお、さらなる治療法を必要としている。
【０００５】
現在、ほとんど全てのＨＩＶポジティブ患者は、高活性抗レトロウイルス剤療法（「ＨＡＡＲＴ」）と呼ばれる抗レトロウイルス合剤の治療レジメンで治療される。しかしながら、ＨＡＡＲＴ治療は、異なる薬物合剤が薬物耐性ＨＩＶ変異体の急速出現を避けるために患者に毎日投与されなければならないことが多いので、しばしば複雑である。患者の生存率に対するＨＡＡＲＴのプラス効果にもかかわらず、薬物耐性はまだ起こることがあり、生存率および生活の質は未感染の者と比較して正常化されていない［Lohse Ann Intern Med 2007 146;87-95］。事実、循環器疾患、虚弱、および神経認知障害などのいくつかの非ＡＩＤＳ罹患率および死亡率の発生率は、ＨＡＡＲＴ抑制されＨＩＶ感染した対象において増加している［Deeks Annu Rev Med 2011;62:141-155］。非ＡＩＤＳ罹患率／死亡率の発生率増加は、ＨＩＶ感染が原因である免疫障害に関連する全身炎症悪化に関連して起こり、かつ、潜在的に引き起こされる［Hunt J Infect Dis 2014］［Byakagwa J Infect Dis 2014］［Tenorio J Infect Dis 2014］。
【０００６】
現代の抗レトロウイルス剤療法（ＡＲＴ）は、ＨＩＶ複製を効果的に抑制する能力を有し、ＨＩＶ感染者の健康転帰を向上するが、個体内のＨＩＶウイルスリザーバーを完全に取り除くことはできないと考えられている。ＨＩＶゲノムは、感染個体内のほとんどの免疫細胞内に潜在的に残ることができ、ＡＲＴの中断後、ウイルス複製は通常数週間のうちに再開するように、いつでも再活性化し得る。わずかの個体では、このウイルスリザーバーの大きさは著しく減少し、ＡＲＴの休止時、ウイルス複製の回復は遅延させられる［Henrich TJ J Infect Dis 2013］［Henrich TJ Ann Intern Med 2014］。一例では、ウイルスリザーバーは白血病治療中に取り除かれ、数年の経過観察中にウイルスの回復は観察されなかった［Hutter G N Engl J Med 2009］。これらの例は、ウイルスリザーバーの減少または除去は可能である場合があり、ウイルス寛解または治癒することができるという概念を示唆している。このようなものとして、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムを用いたウイルスゲノムの切除を含む直接分子的手段によるウイルスリザーバーの除去、または潜在細胞が除去されるようにＡＲＴ中の潜在リザーバーの再活性化の誘発の方法が探求された。潜在リザーバーの誘導は通常ウイルスが可視化された後に潜在的に感染された細胞の直接死または免疫系による誘導細胞の殺生のいずれかをもたらす。ＡＲＴ中にこれを行うとき、産生されたウイルスゲノムは、新しい細胞の感染をもたらさず、リザーバーの大きさは減衰し得ると考えられている。
【０００７】
ＨＡＡＲＴの成功にもかかわらず、長い期間をかけてウイルスは最終的に耐性を生じ、将来のＡＲＴの必要性を永続化させる。ＨＩＶの生体異物治療に加えて、免疫系は、ＨＩＶエンベロープタンパク質、ｇｐ１６０を主に標的とした感染経過中にＨＩＶに対する抗体を産生する。これらの抗体は、ビリオンと結合し、さらなる標的細胞を感染するビリオンの能力を中和する。最近の技術は、感染個体由来の中和抗体を単離するためのプラットフォームを提供し、時間とともにｇｐ１６０の多様な配列を中和するより良好な抗体が発見された。様々な広域中和抗体（ｂＮＡｂ）は、ＨＩＶ感染個体または関連モデルへの注入により、ＡＲＴとして探求されている。このようなｂｎＡｂは、既存ＡＲＴ小分子と比較して、そのより長期の循環半減期が理由で、患者のコンプライアンスなどの問題にも取り組むことができ、毎月１回あるいはより長い用法さえもたらすことができる。
【０００８】
上記観点では、ＨＩＶ感染個体の治療のためのさらなる治療アプローチを開発し、患者コンプライアンスおよびＡＲＴ投薬回数の可能な減少などの問題に取り組むことの継続的なニーズが当技術分野において存在する。さらに、阻害されたｇｐ１６０の多様性の広さを増やし、複数の小分子により提供されるＨＡＡＲＴに類似した１つの薬剤における複数の抗ウイルス標的を提供することにより耐久性を向上しようとするためのｇｐ１６０を標的とする改良手段を使用するニーズがある。
【発明の概要】
【０００９】
１つの態様では、本発明は、式（Ｉ）：
Ａｂ−Ｌ−Ｄ  （Ｉ）
式中：
Ａｂは、広域中和抗体を含んでなり；
Ｌは、前記広域中和抗体と共有結合したリンカー分子を含んでなり；および
Ｄは、前記リンカー分子と共有結合した１つ以上の薬物を含んでなり、前記１つ以上の薬物は前記ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と特異的に結合する、
の抗体薬物複合体を提供する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、式（ＩＩ）：
Ａｂ−［Ｌ−Ｄｎ］ｘ  （ＩＩ）
式中：
Ａｂは、広域中和抗ＨＩＶ抗体を含んでなり；
Ｌは、前記広域中和抗ＨＩＶ抗体と共有結合したリンカー分子を含んでなり；
Ｄは、前記リンカー分子と共有結合したＨＩＶ付着阻害剤化合物を含んでなる１つ以上の薬物を含んでなり、前記１つ以上の広域中和抗ＨＩＶ抗体はＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と特異的に結合し；
ｎは、１〜４から選択され；および
ｘは、１〜１２から選択される、
の抗体薬物複合体を提供する。
【００１１】
式（Ｉ）および（ＩＩ）の抗体薬物複合体を含んでなる医薬組成物および式（Ｉ）および（ＩＩ）の抗体薬物複合体を用いたＨＩＶ感染患者の治療方法も提供する。
【００１２】
これらおよび他の態様は、本明細書に記載されているように本発明に包含される。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】広域中和抗体ＶＲＣ０１のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）分析を示し；
【図２】広域中和抗体ＶＲＣ０１のドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を示す。
【図３】図３Ａおよび３Ｂは、本発明の抗体薬物複合体の構造を示し；
【図４】図４Ａおよび図４Ｂは、本発明の抗体薬物複合体の構造を示し；および
【図５】図５Ａおよび５Ｂは、本発明の抗体薬物複合体の構造を示し；
【図６】抗体薬物複合体を用いて使用するための薬物リンカーの構造を示し；
【図７】抗体薬物複合体を用いて使用するための薬物の構造を示し；
【図８】抗体薬物複合体を用いて使用するための薬物リンカーの構造を示し；
【図９】抗体薬物複合体を用いて使用するための薬物の構造を示し；および
【図１０】ｇｐ１６０付着阻害剤リンカーのサロゲート化合物の構造を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本願全体を通して、化合物、組成物、および方法に関連する様々な実施形態を参照する。記載されている様々な実施形態は種々の例証となる実施例を提供することを意図しており、代替の種の記載と解釈されるべきでない。むしろ、本明細書で提供される様々な実施形態の記載は重複する範囲であってもよいことに注目すべきである。本明細書で考察される実施形態は単に例証であり、本発明の範囲を限定することを意図していない。
【００１５】
本明細書で使用される用語は特定の実施形態を説明する目的だけのためであり、本発明の範囲を限定することを意図していないと理解されるべきである。本明細書および続く特許請求の範囲では、下記の意味を有すると定義されるべき多くの用語を参照するだろう。
【００１６】
本明細書で参照される全ての発行された特許、公開特許出願および他の出版物は、その全文を参照することにより本明細書に組み入れられるものと見なされる。
【００１７】
１つの態様では、本発明は、式（Ｉ）：
Ａｂ−Ｌ−Ｄ  （Ｉ）
式中：
Ａｂは、広域中和抗体を含んでなり；
Ｌは、前記広域中和抗体と共有結合したリンカー分子を含んでなり；および
Ｄは、前記リンカー分子と共有結合した１つ以上の薬物を含んでなり、前記１つ以上の薬物は前記ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と特異的に結合する、
の抗体薬物複合体を提供する。
【００１８】
別の態様では、本発明は、式（ＩＩ）：
Ａｂ−［Ｌ−Ｄｎ］ｘ  （ＩＩ）
式中：
Ａｂは、広域中和抗ＨＩＶ抗体を含んでなり；
Ｌは、前記広域中和抗ＨＩＶ抗体と共有結合したリンカー分子を含んでなり；
Ｄは、前記リンカー分子と共有結合したＨＩＶ付着阻害剤化合物を含んでなる１つ以上の薬物を含んでなり、前記１つ以上の広域中和抗ＨＩＶ抗体はＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と特異的に結合し；
ｎは、１〜４から選択され；および
ｘは、１〜１２から選択される、
の抗体薬物複合体を提供する。
【００１９】
さらに別の態様では、本発明は、式（ＩＩ）：
Ａｂ−［Ｌ−Ｄｎ］ｘ  （ＩＩ）
式中：
Ａｂは、広域中和抗ＨＩＶ抗体を含んでなり；
Ｌは、前記広域中和抗ＨＩＶ抗体と共有結合したリンカー分子を含んでなり；
Ｄは、前記リンカー分子と共有結合したＨＩＶ付着阻害剤化合物を含んでなる１つ以上の薬物を含んでなり、前記１つ以上の広域中和抗ＨＩＶ抗体はＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と特異的に結合し；
ｎは、１〜２から選択され；および
ｘは、２〜４から選択される、
の抗体薬物複合体を提供する。
【００２０】
さらに別の態様では、本発明は、式（ＩＩ）：
Ａｂ−［Ｌ−Ｄｎ］ｘ  （ＩＩ）
式中：
Ａｂは、広域中和抗ＨＩＶ抗体を含んでなり；
Ｌは、前記広域中和抗ＨＩＶ抗体と共有結合したリンカー分子を含んでなり；
Ｄは、前記リンカー分子と共有結合したＨＩＶ付着阻害剤化合物を含んでなる１つ以上の薬物を含んでなり、前記１つ以上の広域中和抗ＨＩＶ抗体はＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と特異的に結合し；
ｎは、１であり；および
ｘは、２である、
の抗体薬物複合体を提供する。
【００２１】
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）：
Ａｂ−Ｌ−Ｄ  （Ｉ）
式中：
Ａｂは、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質に対する結合親和性を有する広域中和抗体を含んでなり；
Ｌは、前記広域中和抗体と共有結合した１つ以上のリンカー分子を含んでなり；および
Ｄは、前記１つ以上のリンカー分子と共有結合した１つ以上の薬物を含んでなり、前記１つ以上の薬物は前記ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と結合可能である、
の抗体薬物複合体を提供する。
【００２２】
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）：
Ａｂ−［Ｌ−Ｄｎ］ｘ  （Ｉ）
式中：
Ａｂは、広域中和抗ＨＩＶ抗体を含んでなり；
Ｌは、前記広域中和抗ＨＩＶ抗体と共有結合したリンカー分子を含んでなり；
Ｄは、前記リンカー分子Ｌと共有結合したＨＩＶ治療用化合物を含んでなる１つ以上の薬物を含んでなり、前記１つ以上の広域中和抗ＨＩＶ抗体ＡｂはＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と特異的に結合し、前記１つ以上の薬物ＤはＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と特異的に結合し；
ｎは、１〜４から選択され；および
ｘは、１〜１２から選択される、
の抗体薬物複合体を提供する。
好ましくは、ｎは、１〜２から選択され；および
ｘは、２〜４から選択される。
より好ましくは、ｎは、１であり；および
ｘは、１または２である。
【００２３】
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）：
Ａｂ−［Ｌ−Ｄｎ］ｘ  （Ｉ）
式中：
Ａｂは、広域中和抗ＨＩＶ抗体を含んでなり；
Ｌは、前記広域中和抗ＨＩＶ抗体と共有結合したリンカー分子を含んでなり；
Ｄは、前記リンカー分子Ｌと共有結合したＨＩＶ治療用化合物を含んでなる１つ以上の薬物を含んでなり、前記１つ以上の広域中和抗ＨＩＶ抗体ＡｂはＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と特異的に結合し、前記１つ以上の薬物ＤはＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と特異的に結合し；
ｎは、１〜４から選択され；
ｘは、１〜１２から選択され、抗体薬物複合体は、（１）前記広域中和抗体と共有結合している、第一リンカー分子Ｌと共有結合した第一薬物Ｄおよび（２）前記広域中和抗体と共有結合している、第二リンカー分子Ｌと共有結合した第二薬物Ｄを含んでなる、
の抗体薬物複合体を提供する。
【００２４】
１つの実施形態では、第一薬物Ｄは、第二薬物Ｄと同じである。
【００２５】
１つの実施形態では、第一薬物Ｄは、第二薬物Ｄと異なる。
【００２６】
１つの実施形態では、第一リンカーおよび第二リンカーは、同じでも異なっていてもよい。１つの実施形態では、第一薬物および第一リンカーは第二薬物および第二リンカーと異なる位置で広域中和抗体と結合している。
【００２７】
「抗体」は、抗原のエピトープ、またはそのフラグメントを特異的に認識し結合する少なくとも軽鎖または重鎖免疫グロブリン領域を含むポリペプチドと定義される。抗体は、重鎖および軽鎖からなり、その各々は可変重量（ＶＨ）領域および可変軽（ＶＬ）領域と呼ばれる可変領域を有する。一緒に、ＶＨ領域およびＶＬ領域は抗体により認識された抗原との結合に関与している。抗体という語は、未変化の免疫グロブリン、ならびに単一可変ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＨＨ、ＶＬ、ドメイン抗体（ＤＡＢ））、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ）’２フラグメント、単鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）、二重特異性抗体、ＴＡＮＤＡＢＳ、他、および上記のいずれかの改変型などの変異体およびその部分を含む。ｓｃＦｖタンパク質は、免疫グロブリンの軽鎖可変領域および免疫グロブリンの重鎖可変領域がリンカーにより結合している融合タンパク質であり、ｄｓＦｖ中、鎖が変異し、ジスルフィド結合を誘導して鎖の会合を安定化する。用語は、キメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）、ヘテロコンジュゲート抗体（二重特異性抗体など）などの遺伝子改変した形態も含む。Pierce Catalog and Handbook, 1994-1995 (Pierce Chemical Co., Rockford, IL); Kuby, J., Immunology, 3rd Ed., W.H. Freeman & Co., New York, 1997も参照。
【００２８】
用語「単一可変ドメイン」は、抗体可変ドメインを特徴とする配列を含んでなる折り畳みポリペプチドドメインを表す。したがって、この用語は、ＶＨ、ＶＨＨおよびＶＬなどの完全抗体可変ドメインならびに、例えば、１つ以上のループが抗体可変ドメインを特徴としない配列により置換された改変抗体可変ドメイン、またはＮ末端もしくはＣ末端延長、ならびに少なくとも完全長ドメインの結合活性および特異性を保持する可変ドメインの折り畳みフラグメントを短縮化もしくは含んでなる抗体可変ドメインを含む。単一可変ドメインは、異なる可変領域またはドメインの抗原またはエピトープと独立して結合することができる。「ドメイン抗体」または「ＤＡＢ」は、「単一可変ドメイン」と同じと見なしてよい。単一可変ドメインはヒト単一可変ドメインであってよいが、げっ歯類、テンジクザメおよびラクダ科の動物ＶＨＨ  ＤＡＢＳなどの他の種由来の単一可変ドメインも含む。ラクダ科の動物ＶＨＨは、ラクダ、ラマ、アルパカ、ヒトコブラクダ、およびグアナコを含む種由来の免疫グロブリン単一可変ドメインポリペプチドであり、天然に軽鎖を欠いている重鎖抗体を産生する。このようなＶＨＨドメインは、当技術分野で利用可能な標準的技術によりヒト化してもよく、このようなドメインは「単一可変ドメイン」であると見なされる。本明細書で使用されるとき、ＶＨは、ラクダ科の動物ＶＨＨドメインを含む。
【００２９】
通常、天然免疫グロブリンは、ジスルフィド結合で相後接続した重（Ｈ）鎖および軽（Ｌ）鎖を有する。軽鎖の２つのタイプ、ラムダ（λ）およびカッパ（κ）がある。抗体分子の機能活性を決定する５つの主要な重鎖分類（またはアイソタイプ）がある：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥ。
【００３０】
各重鎖および軽鎖は、定常領域および可変領域を含む（領域は「ドメイン」としても知られる）。組み合わせて、重鎖および軽鎖可変領域は抗原と特異的に結合する。軽鎖および重鎖可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ｝とも呼ばれる３つの超可変領域が割り込んだ「フレームワーク」領域を含む。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は定義されている（Kabat et al., Sequences of Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, 1991参照）。現在、Ｋａｂａｔデータベースはオンラインで維持されている。異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域のヘア手得は、種内で比較的保存されている。構成軽鎖および重鎖の組合せフレームワーク領域である、抗体のフレームワーク領域は、三次元空間におけるＣＤＲを位置決めし整列する働きをする。
【００３１】
ＣＤＲは、主に、抗原のエピトープとの結合に関与している。各鎖のＣＤＲは、通常、Ｎ末端から始まって順番に番号付与されたＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と呼ばれ、通常、特定のＣＤＲが位置する鎖により識別される。したがって、ＶＨＣＤＲ３は、別名ＣＤＲＨ３として知られているが、見出される抗体の重鎖の可変ドメイン中に位置するＣＤＲ３であるが、ＶＬＣＤＲ１は、それ以外ＣＤＲＬ１として知られるが、見出される抗体の軽鎖の可変ドメインからのＣＤＲ１である。標的タンパク質と結合する抗体は、特定のＶＨ領域およびＶＬ領域配列、したがって、特定のＣＤＲ配列を有するだろう。異なる特異性（異なる抗原に対する異なる結合など）を有する抗体は、異なるＣＤＲを有する。これは抗体から抗体へ変わるＣＤＲであるが、ＣＤＲ内の限られた数のみのアミノ酸位置は抗原結合に直接関与する。ＣＤＲ内のこれらの位置は、特異性決定残基（ＳＤＲ）と呼ばれる。本明細書全体を通して、可変ドメイン配列および完全長抗体配列中のアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔ番号付与規則に従って番号付与される。同様に、用語「ＣＤＲ」、「ＶＤＲＬ１」、「ＣＤＲＬ２」、ＣＤＲＬ３」、「ＣＤＲＨ１」、「ＣＤＲＨ２」、「ＣＤＲＨ３」は、特に断りがない限り、Ｋａｂａｔ番号付与規則に従う。可変ドメイン配列および完全長抗体配列中のアミノ酸残基に関する代替の番号付与規則があることは、当業者には明白であろう。ＣＤＲ配列に関する代替の番号付与規則もあり、例えば、Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883で立案されたものがある。抗体の構造およびタンパク質折り畳みは、他の残基がＣＤＲ配列の一部と見なされ、当業者もそうであると理解しているだろう。当業者が利用可能なＣＤＲ配列に関する他の番号付与規則としては、「ＡｂＭ」（バース大学）および「コンタクト」（ユニバーシティ・カレッジ・ロンドン）の方法が挙げられる。Ｋａｂａｔ法、Ｃｈｏｔｈｉａ法、ＡｂＭ法およびコンタクト法のうち少なくとも２つを用いた最小重複領域を決定し、「最小結合単位」を得ることができる。最小結合単位は、ＣＤＲのサブポーションであってよい。
【００３２】
下表１は、各ＣＤＲまたは結合単位に関する各番号付与規則を用いた１つの定義を示している。Ｋａｂａｔ番号付与スキームを使用して、表１中に可変ドメインアミノ酸配列を番号付与している。なお、ＣＤＲ定義のいくつかは、使用された個別の出版物により異なり得る。
【００３３】
【表１】
2019524687.tif 000002
【００３４】
「ＶＨ」または「ＶＨ」への言及は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖまたはＦａｂのものを含む免疫グロブリン重鎖の可変領域を表す。「ＶＬ」または「ＶＬ」への言及は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖまたはＦａｂのものを含む免疫グロブリン軽鎖の可変領域を表す。
【００３５】
結合特異性は絶対ではないが相対的特性であるので、抗原および１つ以上の参照抗原間の識別ができるならば、抗体または他の活性剤は、抗体と「結合（例えば、特異的に）」し、抗体に対して「特異的」であり、または抗体を「認識」する。その最も一般的形態（および定義される基準を指定しない場合）では、「結合」は、例えば、次の方法に従って決定されるとき、抗体または活性剤が対象の抗原および関係のない抗原間を識別する能力を表している。かかる方法は、これに限定されないが、ウェスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ法、ＲＩＡ−ＥＣＬ法、ＩＲＭＡ法およびペプチドスキャンを含む。採点を、標準発色（例えば、ホースラディッシュペルオキシドを用いた二次抗体および過酸化水素を用いたテトラメチルベンジジン）により行ってもよい。特定のウェル中の反応を、例えば、４５０ｎｍにおける光学密度により採点する。通常、バックグラウンド（＝ネガティブ反応）は０．１ＯＤであり；通常のポジティブ反応は１ＯＤであり得る。これは、ポジティブ／ネガティブの差は、１０倍超であり得ることを意味する。通常、結合特異性の決定を、単一参照抗原ではなく、粉乳、ＢＳＡ、トランスフェリンまたは同様のものなど、一組の約３〜５つの関連のない抗原を用いることにより行う。加えて、「結合」、より特に「特異的結合」は、抗原の、標的抗原および参照点として使用される１つ以上の密接に関係する抗原間を識別する能力を言う。加えて、「結合」は、抗体の、その標的抗原の異なる部分、例えば、異なるドメインもしくは領域間、または１つ以上の主要アミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の伸縮間を識別する能力に関し得る。
【００３６】
「親和性」または「結合親和性」は、例えば、活性剤（例えば、抗体または分子）の一重結合部位およびその結合パートナー（例えば、抗原）間の非共有相互作用の合計の強度を表す。本明細書で使用されるとき、特に指示がない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体および抗原）のメンバー間の１：１相互作用を反映する固有結合親和性を表す。親和性を、平衡法（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）または放射免疫アッセイ（ＲＩＡ））、または反応速度論（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ分析）を含む、当技術分野で公知の一般的方法により測定することができる。親和性を測定するための特定方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）である。
【００３７】
用語「結合親和性」に関して、例えば、指定条件下、特定の標的タンパク質（例えば、ｇｐ１２０またはｇｐ１６０）と選択的に結合し、サンプルまたは対象中に存在する他のタンパク質または多糖類と有意な量で結合しない抗体は、その標的と特異的に結合する抗体を表す。１つの実施形態では、親和性は、Frankel et al., Mol. Immunol., 16: 101-106, 1979に記載されているＳｃａｔｃｈａｒｄ法の変法により算出される。別の実施形態では、結合親和性は、抗原／抗体解離速度により測定される。さらに別の実施形態では、結合親和性は、競合放射免疫アッセイにより測定される。いくつかの例では、高結合親和性は、約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−１２Ｍ、より好ましくは約１×１０−８Ｍ〜約１×１０−１２Ｍ（１０ｎＭ〜１ｐＭ）の範囲であり得る。（例えば、国際公開第２０１２／１０６５７８号参照）
【００３８】
「親和性」は、例えば、相互作用の結合価を考慮して、複数の部位における２つの分子の互いとの結合強度の合計である。
【００３９】
問い合わせ核酸配列および対象核酸配列間の「同一性パーセント」は、ペアワイズＢＬＡＳＴＮアライメントを行った後に対象核酸配列が問い合わせ核酸配列で１００％問い合わせを網羅している場合、ＢＬＡＳＴＮアルゴリズムにより算出されるパーセンテージとして表される「同一性」の値である。問い合わせ核酸配列および対象核酸配列間のこのようなペアワイズＢＬＡＳＴＮアライメントは、低複雑度領域のフィルターをオフにして、米国立バイオテクノロジー情報センタ（National Center for Biotechnology Institute）のウェブサイトで利用可能なＢＬＡＳＴＮアルゴリズムの初期設定を用いることにより行う。重要なことに、問い合わせ核酸配列は、本明細書の１つ以上のクレーム中に確認される核酸配列により記載されていてもよい。
【００４０】
問い合わせアミノ酸配列および対象アミノ酸配列間の「同一性パーセント」は、ペアワイズＢＬＡＳＴＰアライメントを行った後に対象アミノ酸配列が問い合わせアミノ酸配列と１００％問い合わせカバレッジを有する場合、ＢＬＡＳＴＰアルゴリズムにより算出されるパーセンテージとして表される「同一性」の値である。問い合わせアミノ酸配列および対象アミノ酸配列間のこのようなペアワイズＢＬＡＳＴＰアライメントは、低複雑度領域のフィルターをオフにして、米国立バイオテクノロジー情報センタ（National Center for Biotechnology Institute）のウェブサイトで利用可能なＢＬＡＳＴＰアルゴリズムの初期設定を用いることにより行う。重要なことに、問い合わせアミノ酸配列は、本明細書の１つ以上のクレーム中に確認されるアミノ酸配列により記載されていてもよい。
【００４１】
問い合わせ配列は、対象配列と１００％同一性であってもよく、同一性％が１００％未満になるように対象配列と比較したとき、特定の整数以下のアミノ酸またはヌクレオチド変化を含んでもよい。例えば、問い合わせ配列は、対象配列と少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性である。このような変化は、少なくとも１つのアミノ酸欠失、置換（保存置換および非保存置換を含む）、または挿入を含み、前記変化は、問い合わせ配列のアミノ末端もしくはカルボキシ末端の位置または問い合わせ配列中のアミノ酸もしくはヌクレオチド中または問い合わせ配列内の１つ以上の近接基中にいずれか個別に散在した末端位間のどこで起こってもよい。
【００４２】
同一性％は、ＣＤＲを含む問い合わせ配列の全長にわたって決定してもよい。あるいは、同一性％はＣＤＲを除外してもよく、例えば、ＣＤＲが対象配列と１００％同一性であり、同一性％の変動が問い合わせ配列の残りの部分にある結果、ＣＤＲ配列は固定／インタクトである。
【００４３】
ＶＨまたはＶＬ配列は１０以下のアミノ酸置換、付加または欠失を有する変異体配列であってよい。例えば、変異体配列は、９以下、８つ、７つ、６つ、５つ、４つ、３つ、２つまたは１つのアミノ酸置換、付加または欠失を有してもよい。
【００４４】
配列変動はＣＤＲを除外してもよく、例えば、ＣＤＲがＶＨもしくはＶＬ（またはＨＣもしくはＬＣ）と同じであり、変動がＶＨもしくはＶＬ（またはＨＣもしくはＬＣ）配列の残りの部分にある結果、ＣＤＲ配列は固定／インタクトである。
【００４５】
いくつかの実施形態では、抗体の定常領域は、１つ以上のアミノ酸置換を含み、抗体のインビボ半減期を最適化する。ＩｇＧ  Ａｂの血清半減期は、胎児性Ｆｅ受容体（ＦｃＲｎ）により調節し得る。したがって、いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲｎとの結合を増加するアミノ酸置換を含む。いくつかのこのような置換は、ＩｇＧ定常領域Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ（例えば、Hinton et al., J Immunol., 176:346-356, 2006参照）；Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ（「ＬＳ］変異、例えば、Zalevsky, et al., Nature Biotechnology, 28:157-159, 2010参照）；Ｎ４３４Ａ（例えば、Petkova et al., Int. Immunol., 18: 1759-1769, 2006参照）；Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ、およびＮ４３４Ａ（例えば、Petkova et al., Int. Immunol., 18:1759-1769, 2006参照）；ならびにＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ（例えば、Dall' Acqua et al., J. Biol. Chem., 281:23514-23524, 2006参照）における置換など、当業者に公知である。開示された抗体は、上記置換のいずれかを含むＦｃポリペプチドを含んでなることができ、例えば、ＦｃポリペプチドはＭ４２８ＬおよびＮ４３４を含むことができる。議論されているように、開示による抗体は、インビボでの血清半減期の増加、結果としてより体内の抗体の機能的活性のより長期の持続、または残留、時間を提供するようになされ得るかまたは改変され得る。適切に、このような改変された分子は、非適応分子（non-adapted molecule）と比較してクリアランスの増加および平均滞留時間の増加を有する。半減期の増加は、治療分子の薬物動態特性および薬力学特性を向上することができる。
【００４６】
他の適切な半減期延長ストラテジー：ＰＥＧ化、ポリシアル化、ＨＥＳ化、組換えＰＥＧ擬態、Ｎ−グリコシル化、Ｏ−グリコシル化、Ｆｃ融合、人工改変Ｆｃ、ＩｇＧ結合、アルブミン融合、アルブミン結合、アルブミンカップリングおよびナノ粒子を含む。
【００４７】
理論に束縛されるものではないが、ＩｇＧ抗体の長い半減期はＦｃＲｎとのその結合に依存することが報告されている。したがって、定常領域の人工改変による相互作用のｐＨ依存性を維持しながら、ｐＨ６．０においてＩｇＧのＦｃＲｎとの結合親和性を向上する置換が研究されてきた（KUO, T. T. & AVESON, V. G. 2011. Neonatal Fc receptor and IgG-based therapeutics. MAbs, 3, 422-30）。
【００４８】
成体哺乳類では、胎児性Ｆｃ受容体としても公知のＦｃＲｎは、ＩｇＧアイソタイプの抗体と結合し分解から救助する保護受容体としての作用により血清抗体レベルを維持する主要な役割を果たすことができる。ＩｇＧ分子は内皮細胞により形質膜陥入され、ＦｃＲｎと結合する場合、循環中に再利用される。対照的に、ＦｃＲｎと結合しないＩｇＧ分子は細胞に入り、これらが分解されるリソソーム経路を標的とされる。
【００４９】
胎児性ＦｃＲｎ受容体は、抗体クリアランスおよび組織を横断するトランスサイトーシスの双方に関与すると考えられている、Kuo and Aveson, (2011)。ヒトＦｃＲｎと相互作用し得るヒトＩｇＧ１残基としては、Ｉｌｅ２５３、Ｓｅｒ２５４、Ｌｙｓ２８８、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｎ３１１、Ａｓｎ４３４およびＨｉｓ４３５が挙げられる。この節に記載されたこれらの位置のいずれかにおけるスイッチは、本発明の抗体の血清半減期増加および／またはエフェクター特性の変更を可能とし得る。
【００５０】
本明細書に記載されているように、本発明の方法の使用に適した抗体は、ＦｃＲｎの定常ドメインまたはそのフラグメントの親和性を向上し得るアミノ酸修飾を有し得る。治療用および診断用ＩｇＧポリペプチドおよび他の生理活性分子の半減期増加は、例えば、これらの分子の投与の量および／または頻度の低減を含む利点を提供することができる。したがって、１つの実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾を有するＩｇＧ定常ドメインの全部または一部（ＦｃＲｎ結合部分）を含んでなる本発明による抗体を提供する。
【００５１】
アラニンスキャニング変異誘発、ランダム変異誘発およびＦｃＲｎとの結合および／またはインビボ挙動を評価するためのスクリーニングを含む技術により生成され得るアミノ酸修飾を含む半減期増加をもたらすことができる多くの方法は公知である（Kuo and Aveson, (2011)）。計算戦略、それに次ぐ変異誘発を使用して変異するアミノ酸変異の１つを選択してもよい。
【００５２】
定常領域における置換は治療用ＩｇＧ抗体の機能を向上させることができるが、厳密に保存された定常領域における置換は、ヒトの免疫原性の潜在的危険性を有することがあり、多様性に富む可変領域配列における置換はより免疫原性でないであろう。可変領域に関する報告は、ＣＤＲ残基を人工改変して抗原に対する結合親和性を向上させるもの、ならびにＣＤＲおよびフレームワーク残基を人工改変して安定性を向上させて免疫原性の危険性を低減するものを含む。抗原に対する向上された親和性は、ランダム化されたライブラリーのファージディスプレイまたはリボソームディスプレイを用いた親和性成熟により行っても良い。
【００５３】
改良された安定性は、配列ベースおよび構造ベースの合理的設計から得られる可能性がある。免疫原性の危険性（脱免疫化）の低減は、様々なヒト化の手法およびシリコ技術で使用して予測され得るかまたはビトロアッセイにより決定され得るＴ細胞エピトープの除去により行うことができる。加えて、可変領域はより低いｐｌに人口改変された。より長期の半減期は同等なＦｃＲｎ結合にもかかわらず野生型抗体と比較してこれらの抗体に関して観察された。ｐＨ依存性抗原結合を有する抗体を人工改変または選択して抗体および／または抗原半減期、例えば、ＩｇＧ２抗体半減期を改変することは、抗原介在クリアランス機序が抗原に結合されている場合の抗体を正常に分解する場合に短縮化され得る。同様に、抗原：抗体複合体は抗原の半減期に影響することができ、通常の分解過程から抗原を保護することにより半減期を延長するか、または抗体介在分解による半減期の短縮化のいずれかである。
【００５４】
抗体の産生時、特に、使用されるセルラインおよび抗原結合タンパク質の特定のアミノ酸配列に依存して、翻訳後修飾が起こり得る。例えば、翻訳後修飾としては、特定のリーダー配列の開裂、様々なグリコシル化およびリン酸化パターンにおける様々な糖部分の付加、脱アミド化、酸化、ジスルフィド結合スクランブリング、異性化、Ｃ末端リジンクリッピング、ならびにＮ末端グルタミン環化を挙げることができる。本発明は、１つ以上の翻訳後修飾に付されたか、または翻訳後修飾が行われた抗原結合タンパク質の使用を包含する。したがって、本発明の「抗体」は、上記に定義されたように、本明細書で記載されているような翻訳後修飾を行った「抗体」を含む。
【００５５】
脱アミド化は、本来、アスパラギン（Ｎ）をイソアスパラギン酸（イソアスパラギン酸塩）およびアスパラギン酸（アスパラギン酸塩）に約３：１の比で変換する酵素反応である。したがって、この脱アミド化反応は、アスパラギン酸塩（Ｄ）のイソアスパラギン酸塩への異性化に関している。アスパラギンの脱アミド化およびアスパラギン酸塩の異性化の双方は、スクシンイミド中間体を含む。ずっと少ない程度、脱アミド化は同様にグルタミン残基でも起こり得る。ＣＤＲ、Ｆａｂ（非ＣＤＲ領域）、またはＦｃ領域において脱アミド化は起こり得る。
【００５６】
産生および貯蔵中（すなわち、参加条件の存在下）、酸化が起こることができ、反応性酸素種により直接的または酸化的ストレスの二次副産物との反応により間接的のいずれかで誘導されたタンパク質の共有結合修飾をもたらす。主にメチオニン残基で酸化は起こるが、トリプトファンおよび遊離システイン残基において起こり得る。ＣＤＲ、Ｆａｂ（非ＣＤＲ）領域、またはＦｃ領域において酸化は起こり得る。
【００５７】
ジスルフィド結合スクランブリングは、産生および塩基性貯蔵条件中に起こり得る。特定の環境下、ジスルフィド結合は開裂または不正確に形成して、対でないシステイン残基（−ＳＨ）をもたらす。これらの遊離（対でない）スルフヒドリル（−ＳＨ）はシャフリングを促進し得る。
【００５８】
重鎖および／または軽鎖におけるＮ末端グルタミン（Ｑ）およびグルタミン酸塩（グルタミン酸）（Ｅ）は、環化によりピログルタミン酸（ｐＧｌｕ）を生成する可能性がある。ほとんどのｐＧｌｕ生成は、製造バイオリアクターで起こるが、処理条件および貯蔵条件のｐＨおよび温度に依存して非酵素的に生成することができる。Ｎ末端ＱまたはＥの環化は通常、天然のヒト抗体において観察される。
【００５９】
Ｃ末端リジンクリッピングは、カルボキシペプチダーゼにより触媒された酵素反応であり、組換えおよび天然ヒト抗体において通常に観察される。この処理の異型は、組換え宿主細胞の細胞酵素による１つまたは双方の重鎖からリジンを除去することを含む。ヒトへの投与時、対象／患者は、いずれかの残りのＣ末端リジンの除去をもたらす可能性がある。
【００６０】
「リンカー」（「Ｌ」）は、抗体を１つ以上の薬物と結合させる物質（例えば、分子）を表す。リンカーは開裂可能なリンカーであってもよく、開裂できない可能なリンカーであってもよい。リンカーは好ましくは開裂できない。開裂できないリンカーは抗体に結合した薬物を保持する。あるいは、本発明の目的のため、リンカーは抗体を、例えば、１つ以上の薬物とカップリング、抱合、連結、接続、繋留などをし得る。他の実施形態では、リンカーの抗体および薬物との結合は共有結合によるものである。
【００６１】
「ｇｐ１２０」は、ＨＩＶ由来のエンベロープタンパク質と定義される。このエンベロープタンパク質は、ｇｐ１６０と命名された８４５〜８７０アミノ酸の大きさのより長い前駆体タンパク質として最初に合成される。ｇｐ１６０は、細胞タンパク質分解酵素により開裂し、ｇｐ１２０およびｇｐ４１となる。ｇｐ１２０は、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質複合体の外部の表面露出したドメインのほとんどを含み、細胞ＣＤ４受容体および細胞ケモカイン受容体（ＣＣＲ５など）の両方と結合するｇｐ１２０である。例えば、米国特許出願公開第２０１６／０００９７８９号参照。
【００６２】
「ｇｐ４１」は、膜貫通ドメインを含み、三量体構成を保持するＨＩＶタンパク質と定義され；非共有結合的にｇｐ１２０と相互作用する。ＨＩＶ−１のエンベロープタンパク質は、ｇｐ１６０と命名された８４５〜８７０アミノ酸の大きさのより長い前駆体タンパク質として最初に合成される。ｇｐ１６０はホモ三量体を生成し、ゴルジ体内でグリコシル化する。それから、インビボで、細胞タンパク質分解酵素により開裂してｇｐ１２０およびｇｐ４１となる。ｇｐ４１の例のアミノ酸配列は、ＧＥＮＢＡＮＫ．ＲＴＭ．受託番号ＣＡＤ２０９７５（２００９年１０月１６日に入手可能）（参照により本明細書に組み入れられる）に記述されている（配列番号１）。ｇｐ４１の配列は、ＧＥＮＢＡＮＫ．ＲＴＭ．受託番号ＣＡＤ２０９７５で与えられたものから変わり得ると理解される。ｇｐ４１は、膜貫通ドメインを含み、通常、三量体構成を保持し；非共有結合的にｇｐ１２０と相互作用する。例えば、米国特許出願公開第２０１６／０００９７８９号参照（ｇｐ１２０対ｇｐ４１）。
【００６３】
用語「ｇｐ１６０」は、１６０ｋＤａの分子量を有するエンベロープタンパク質を表し、様々なグリコシル化部位を含む。ｇｐ１６０は、ｇｐ４１およびｇｐ１２０双方の前駆体となる。本発明の目的のため、ｇｐ１６０は代表的エンベロープタンパク質であり、ＨＸＢ２Ｄはエンベロープ配列の非限定的例である。例えば、ＨＸＢ２Ｄに関して、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｈｉｖ．ｌａｎｌ．ｇｏｖ／ｃｏｎｔｅｎｔ／ｓｅｑｕｅｎｃｅ／ＨＩＶ／ＲＥＶＩＥＷＳ／ＨＸＢ２．ｈｔｍｌ（この内容は参照により組み入れられる）参照。
【００６４】
用語「エンベロープ糖タンパク質」または「糖タンパク質」または「ＥｎＶ」は、ポリペプチド側鎖と共有結合したオリゴ糖鎖（グリカン）を含み、ＨＩＶエンベロープの表面に曝されているタンパク質を表す。本発明の目的のため、対象への抗体薬物複合体の投与後、ＨＩＶ  ｇｐ１６０エンベロープ糖タンパク質は抗体薬物複合体により制約される。いくつかの実施形態では、ＨＩＶ  ｇｐ１６０エンベロープ糖タンパク質は、抗体薬物複合体の抗体部分と結合する。
【００６５】
用語「広域中和抗体」（ｂＮＡｂ）は、非限定的例として、ＨＩＶ−１エンベロープシュードタイプウイルスおよびウイルス分離株の大きなパネル（１００超）の５０％超、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％以上で、インビトロ感染５０％阻害によりＨＩＶエンベロープ糖タンパク質（Ｅｎｖ）（例えば、ｇｐ１６０）との結合によるウイルス付着および細胞侵入を阻害する抗体として定義される。例えば、米国特許出願公開第２０１２／０１２１５９７号参照。
【００６６】
用語「薬物」は、例えば、適切に対象または細胞に投与された場合にＨＩＶに関して所望の治療（therapeutic）効果、治療（treatment）効果、または予防効果を誘導することができる化学化合物または大きな分子（例えば、タンパク質またはペプチド）を包含するＨＩＶ治療薬を表す。例として、１つの実施形態では、抗体薬物複合体は、重鎖および／または軽鎖のＣ末端と融合された１つ以上のペプチドを含んでなる融合タンパク質であり、リンカーは１〜５０アミノ酸長である。
【００６７】
本発明の目的のため、標的とされる１つの結合部位はＣＤ４結合部位である。様々な実施形態では、広域中和抗体Ａｂは、ＣＤ４結合視界におけるＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と結合する。本明細書で定義されるように、ＣＤ４は、分化因子４ポリペプチドのクラスター；ＭＨＣ分類ＩＩ分子との相互作用を介在するＴ細胞表面タンパク質である。ＣＤ４は、ＨＩＶ−Ｉ感染中の細胞上のＨＩＶに対する一次受容体部位としての役割を果たす。ＣＤ４は、ＨＩＶ由来のｇｐ１２０と結合することが知られている。ＣＤ４前駆体の公知配列は、疎水性シグナルペプチド、約３７０アミノ酸の細胞外領域、分類ＩＩ  ＭＨＣベータ鎖の膜貫通ドメインと有意な同一性を有する高度に疎水性のストレッチ、および４０の高度に荷電した細胞内配列を有する（Maddon, Cell 42:93, 1985）。用語「ＣＤ４」は、化学的（例えば、酵素）消化または遺伝子工学の手段のいずれかにより生成したＣＤ４のフラグメントを含むＣＤ４由来のポリペプチド分子を含む。このようなフラグメントは、１つ以上の全体のＣＤ４タンパク質ドメインであり得る。ＣＤ４の細胞外ドメインは、４つの隣接する免疫グロブリン様領域（Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、およびＤ４、Sakihama et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 92:6444, 1995；米国特許第６，１１７，６５５号参照）からなり、アミノ酸１〜１８３は、ｇｐ１２０結合に含まれることが分かった。例えば、ＣＤ４由来の結合分子または結合ドメインは、ＣＤ４の結合フラグメントおよび天然またはウイルス結合部位間の特異的かつ機能的相互作用を介在するのにＣＤ４タンパク質の充分な部分を含んでなるだろう。１つのこのような結合フラグメントは、より小さなフラグメントも特異的かつ機能的ＣＤ４様結合を提供し得るが、ＣＤ４のＤ１およびＤ２細胞外ドメイン（ＤＩＤ２も可溶性ＣＤ４のフラグメント、またはＤ１、Ｄ２、Ｄ３およびＤ４からなるｓＣＤ４である）の両方を含む。ｇｐ１２０結合部位はＣＤ４のＤ１にマッピングされている。例えば、米国特許出願公開第２０１２／０２８２２６４号参照。
【００６８】
別の実施形態では、本発明は、ｇｐ１２０−ｇｐ４１接合部分においてＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と結合する抗体を含む。このような抗体としては、８ＡＮＣ１９５、３５Ｏ２２、およびＰＧＴ１５１から選択される抗体が挙げられるが、これに限定されない。８ＡＮＣ１９５の例は、米国特許出願公開第２０１５／０３６１１６０号に記載されている。３５Ｏ２２の例は、米国特許出願公開第２０１６／００２２８０３号に記載されている。ＰＧＴ１５１の例は、米国特許出願公開第２０１５／０１５２１６７号に記載されている。
【００６９】
別の実施形態では、本発明は、これに限定されないが、４Ｅ１０、１０Ｅ８、２Ｆ５およびＺ１３ｅ１を含むｇｐ４１膜貫通部位近傍（ＭＰＥＲ）と結合する抗体を含む。４Ｅ１０の例は、米国特許出願公開第２０１６／０００９７８９号に記載されている。１０Ｅ８の例は、国際公開第２０１３／０７０７７６号に記載されている。２Ｆ５の例は、米国特許出願公開第２０１５／０１５８９３４号に記載されている。Ｚ１３ｅ１の例は、米国特許出願公開第２０１２／０２６９８２１号に記載されている。この群中の好ましい抗体は、１０Ｅ８である。
【００７０】
ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質との結合において使用される好ましい抗体としては、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０７、ＶＲＣ０７−５２３、３ＢＮＣ１１７、ＮＩＨ４５−４６、ＰＧＶ０４、ｂ１２、ＣＨ３１、およびＣＨ１０３が挙げられるが、これに限定されない。他の実施形態では、好ましい抗体としては、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０１−ＬＳ、ＶＲＣ０７、ＶＲＣ０７−ＬＳ、ＶＲＣ０７−５２３、３ＢＮＣ１１７、ＮＩＨ４５−４６、ＰＧＶ０４、ｂ１２、ＣＨ３１、ＣＨ１０３、Ｎ６、およびＮ６−ＬＳが挙げられるが、これに限定されない。特に好ましい抗体はＶＲＣ０１であり、この例は、Zhou et al., “Structural Basis for Broad and Potent Neutralization of HIV-1 by Antibody VRC01”, Science Express, 8 July 2010, pp. 1-102、ｗｗｗ．ｓｃｉｅｎｃｅｍａｇ．ｏｒｇ／ｃｇｉ／ｃｏｎｔｅｎｔ／ｆｕｌｌ／ｓｃｉｅｎｃｅ．１１９２８１９／ＤＣ１に開示されている。より詳細には、ＶＲＣ０１は、ｇｐ１２０と結合し得る。ＶＲＣ０１は、ＨＩＶ系統／サブタイプの９０％を中和することができる。ｇｐ１２０と結合するこのような抗体の別の例は、国際公開第２０１２／１０６５７８号に開示されているようにＶＲＣ０１−ＬＳである。ｇｐ１２０と結合するこのような抗体の別の例は、国際公開第２０１３／０８６５３３号に開示されているようにＶＲＣ０７である。
【００７１】
ＶＲＣ０７−５２３の例は、J. Virol, 88(21): pp. 12669-12682 (Nov. 2014)に記載されている。３ＢＮＣ１１７の例は、米国特許出願公開第２０１４／０２１２４５８号に記載されている。ＮＩＨ４５−４６の例は、米国特許出願公開第２０１５／０２７４８１３号に記載されている。ＰＧＶ０４の例は、米国特許出願公開第２０１３／０２５１７２６号に記載されている。ｂ１２の例は、米国特許出願公開第２０１６／０００９７８９号に記載されている。ＣＨ３１の例は、米国特許出願公開第２０１３／０２５１７２６号に記載されている。ＣＨ１０３の例は、米国特許出願公開第２０１４／０２１２４５８号に記載されている。
【００７２】
様々な実施形態では、広域中和抗体Ａｂは、２Ｇ１２、２Ｆ５、３ＢＣ１７６、３ＢＮＣ６０、３ＢＮＣ１１７、４Ｅ１０、８ＡＮＣ１３１、８ＡＮＣ１９５、１０Ｅ８、１０−１０７４、１２Ａ１２、３５Ｏ２２、ｂ１２、Ｂ２５３０、ＣＨ０１−０４、ＣＨ１０３、ＣＨ３１、ＨＪ１６、Ｍ６６．６、Ｎ６、Ｎ６−ＬＳ、ＮＩＨ４５−４６、ＰＧ９、ＰＧ１６、ＰＧＤＭ１４００、ＰＧＴ１２１、ＰＧＴ１２８、ＰＧＴ１３５、ＰＧＴ１４１−ＰＧＴ１４５、ＰＧＴ１５１、ＰＧＶ０４、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０１−ＬＳ、ＶＲＣ０７、ＶＲＣ０７−５２３、ＶＲＣ０７−ＬＳ、およびＺ１３からなる群から選択される。
【００７３】
上記観点では、特に好ましい抗体は、ＶＲＣ０１、ＶＲＣ０１−ＬＳ、Ｎ６、Ｎ６−ＬＳ、ＶＲＣ０７およびＶＲＣ０７−５２３である。上記に加えて、ＶＲＣ０１の開示の例は、米国特許第８，６３７，０３６号に記載されている。ＶＲＣ０１−ＬＳの開示の例は、国際公開第２０１２／１０６５７８号に記載されている。Ｎ６およびＮ６−ＬＳの開示の例は、国際公開第２０１６／１９６９７５号に記載されている。ＶＲＣ０７およびＶＲＣ０７−５２３の開示の例は、米国特許第８，６３７，０３６号、米国特許出願公開第２０１４／０３２２１６３（Ａ１）号、国際公開第２０１６／１９６９７５号および国際公開第２０１７／７９４７９号に記載されている。
【００７４】
１つの実施形態では、広域中和抗体Ａｂは、ｇｐ１６０、ｇｐ１２０およびｇｐ４１からなる群から選択されるＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と結合する。
【００７５】
１つの実施形態では、広域中和抗体Ａｂは、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０と結合する。
【００７６】
１つの実施形態では、広域中和抗体Ａｂは、ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１と結合する。
【００７７】
本発明の態様では、広域中和抗体は、次のＣＤＲ：ＣＤＲＨ１（配列番号３）、ＣＤＲＨ２（配列番号４）、ＣＤＲＨ３（配列番号５）、ＣＤＲＬ１（配列番号６）、ＣＤＲＬ２（配列番号７）およびＣＤＲＬ３（配列番号８）のうちいずれか１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは全てを含んでなる。本発明の実施形態では、広域中和抗体は、配列番号９の重鎖可変領域および／または配列番号１０の軽鎖可変領域を含んでなる。本発明の実施形態では、広域中和抗体は、重鎖の４２８位におけるロイシン残基および重鎖の４３４位におけるセリン残基を含んでなる。本発明の実施形態では、広域中和抗体は、配列番号１１と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する重鎖および／または配列番号１３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する軽鎖を含んでなる。本発明の実施形態では、広域中和抗体は、配列番号１２の重鎖を含んでなる。
【００７８】
実施形態では、広域中和抗体は、配列番号９と少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖および配列番号１０と少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖を含んでなる。
【００７９】
実施形態では、広域中和抗体は、配列番号１１の重鎖を含んでなり、必要に応じて配列番号１３の軽鎖を含んでなる。
【００８０】
本発明の態様では、広域中和抗体は、次のＣＤＲ：ＣＤＲＨ１（配列番号１４）、ＣＤＲＨ２（配列番号１５）、ＣＤＲＨ３（配列番号１６）、ＣＤＲＬ１（配列番号１７）、ＣＤＲＬ２（配列番号１８）およびＣＤＲＬ３（配列番号１９）のうちいずれか１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは全てを含んでなる。実施形態では、広域中和抗体は、配列番号２０と少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖および配列番号２１と少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖を含んでなる。本発明の実施形態では、広域中和抗体は、配列番号２０の重鎖可変領域および配列番号２１の軽鎖可変領域を含んでなる。本発明の実施形態では、広域中和抗体は、重鎖の４２８位におけるロイシン残基および重鎖の４３４位におけるセリン残基を含んでなる。本発明の実施形態では、広域中和抗体は、配列番号２２と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する重鎖および配列番号２３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の配列同一性を有する軽鎖を含んでなる。
【００８１】
本発明によれば、リンカー分子は、広域中和抗体と共有結合している。このようなリンカーの例は当技術分野において公知であり、好ましくは、例えば、開裂可能リンカーおよび開裂しないリンカーが挙げられる。開裂しないリンカーの例としては、酸または塩基に敏感である（リンカーを含むヒドラゾンなど）、還元剤または酸化剤に敏感でない（ジスルフィド結合を含むものなど）、および細胞もしくは循環系内で見られ得る酵素に敏感でないポリエチレングリコール鎖またはポリエチレン鎖を含むリンカーが挙げられ得る。例えば、米国特許第８，４７０，９８０号および米国特許出願公開第２００９／０２０２５３６号参照。特に好ましいリンカーの例としては、これに限定されないが、下記の次の構造から選択されるものが挙げられる。これらの実施形態では、リンカーは、本発明による様々な抗体薬物複合体との関連で例証される。「ｂＮＡｂ」と示される化学部分は、各リンカーがリンカーの位置と結合し、該位置にある広域中和抗体を表す。同様に、用語「薬物」は、各リンカーがリンカーの位置と結合し、該位置にあるＨＩＶ付着阻害剤化合物を表す。
【００８２】
【化１】
2019524687.tif 000003
【００８３】
リンカーの他の例としては、これに限定されないが、下記のものが挙げられる：
【００８４】
【化２】
2019524687.tif 000004
【００８５】
【化３】
2019524687.tif 000005
【００８６】
【化４】
2019524687.tif 000006
【００８７】
および
【００８８】
【化５】
2019524687.tif 000007
【００８９】
上記実施形態では、ｂＮＡｂおよび薬物は、各々、様々な抱合によりリンカーと結合している（例えば、システインおよびリジン）。適切な他のものを使用してもよい。
【００９０】
特に適切なリンカーおよび抗体薬物複合体との結合方法の例は、Perez et al., Drug Discovery Today, Vol. 19, No. 7, (2014), pp. 869-881に開示されている。その中に記載されているように、化学結合の１つの非限定的例では、薬物−リンカーにペンダントした反応部分は、アミノ酸残基鎖、通常リジンのε−アミンにより抗体と共有結合し得る。マイロターグ１で示されるように、ゲムツズマブのリジン残基の直接結合を、安定な結合を生成するために薬物−リンカーに付加されたＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルを用いて行うことが出来る（例えば、Bros, P.F., et al., Approval summary: gemtuzumab ozogamicin in relapsed acute myeloid leukemia, Clin. Cancer Res., 17, pp. 1490-1496 (2001)参照）。抗体の表面リジンが最初に修飾されてマレイミドなどの反応性基を導入し、それから、適切な反応性ハンドル（例えば、チオール）を含む薬物−リンカーと抱合する二工程過程も用いることができる（例えば、Junutula, J.R. et al., Site-specific conjugation of a cytotoxic drug to an antibody improves the therapeutic index, Nat. Biotechnol., 26: pp. 925-932 (2008)参照）。当技術分野で公知の様々な確立された部位特異的抱合方法を、ＡＤＣの製造に使用することができる。例えば、チオマブ（thiomab）薬物抱合、トランスグルタミナーゼによる抗体薬物複合体、抗体薬物複合体の非天然アミノ酸、スマータグ（SmarTag）など［例えば、Christopher R Behrens & Bin Liu, Methods for site-specific drug conjugation to antibodies, mAbs, Vol 6, No. 1, pp. 46-53 (2014)参照]。
【００９１】
本発明によれば、抗体薬物複合体は、前記リンカー分子と共有結合した１つ以上の薬物を含み、前記１つ以上の薬物は前記ＨＩＶエンベロープ糖タンパク質と結合可能である。１つの非限定的例として、該１つ以上の薬物は付着阻害剤から選択される。これは、ｂＮＡｂと共有結合した第一リンカー分子と共有結合した第一薬物、およびｂＮＡｂと共有結合した第二リンカー分子と共有結合した第二薬物を有する実施形態も包含する。本明細書で使用されるとき、用語「付着阻害剤」は、ＨＩＶビリオンのヒト細胞との結合、融合およびＨＩＶビリオンのヒト細胞への侵入を干渉することによるＨＩＶ感染症の治療のために使用される薬物または薬剤（例えば、抗レトロウイルス剤）を表す。付着阻害剤の例としては、ｇｐ１２０付着阻害剤およびｇｐ１６０付着阻害剤が挙げられるが、これに限定されない。付着阻害剤の例としては、ｇｐ１２０付着阻害剤、ｇｐ１６０付着阻害剤、およびgp41付着阻害剤が挙げられるが、これに限定されない。理論に束縛されるものではないが、１つの実施形態では、付着阻害剤はｇｐ１６０エンベロープタンパク質を標的とする（ｇｐ１２０＋ｇｐ４１）。付着阻害剤の例は、アザインドールオキソアセチルピペラジン誘導体、および特に好ましい付着阻害剤は、米国特許第７，５０１，４２０号；同第７，３５４，９２４号、および同第７，６６２，８２３号に記載されているような式：
【００９２】
【化６】
2019524687.tif 000008
【００９３】
である。
【００９４】
薬物の他の例としては、例えば、米国特許第６，１３３，４１８号および同第６，４７５，４９１号に記載されているようなペプチド類が挙げられるが、これに限定されない。例えば、薬物はＣＤ４と結合するペプチドであってよい。このような薬物の好ましい例は、下記配列番号２に記載されている：
Ａｃ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２
【００９５】
配列番号２は、Ｒｏｃｈｅ社から市販されている商品名フューゼオン（ＦＵＺＥＯＮ）（登録商標）Ｔ−２０として公知である。
【００９６】
適切な化合物の他の例としては、例えば、ｇｐ１６０付着阻害剤である下記に記載のもの：
【００９７】
【化７】
2019524687.tif 000009
【００９８】
【化８】
2019524687.tif 000010
【００９９】
が挙げられる
【０１００】
本発明は、本明細書で開示される抗体薬物複合体における薬物として使用してもよい式Ａの化合物も提供する：
【０１０１】
【化９】
2019524687.tif 000011
【０１０２】
式中：
ＸおよびＹは、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、ハロ、オキソ、ハロアルキル、ビハロアルキル、トリハロアルキル、ハロアルコキシ、ビハロアルコキシ、トリハロアルコキシ、ヒドロキシル、アミノ、アミドおよび（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−（Ｃ＝Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ６）からなる群から独立して選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、各々、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから独立して選択され；
ｍは、０〜５；より好ましくは１〜４の範囲にあり；
ｎは、０〜５；より好ましくは１〜４の範囲にあり；
ｒは、０〜６、より好ましくは１〜６、最も好ましくは１〜４の範囲にあり；
ｐは、０〜６、より好ましくは１〜６、最も好ましくは１〜４の範囲にあり；および
ｑは、０〜６、より好ましくは１〜６、最も好ましくは１〜４の範囲にあり；
式Ａの化合物は、Ｒ４もしくはＲ５；またはＹによりリンカーと結合することができる。
【０１０３】
式Ａの化合物に関する１つの実施形態では：
Ｘは、ＣｌおよびＦから選択され；ｍは、２であり；
Ｙは、Ｈであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、各々、Ｈであり；
ｒは、１〜４の範囲にあり；最も好ましくは１であり；
ｐは、１〜４の範囲にあり；最も好ましくは１であり；および
ｑは、１〜４の範囲にあり；最も好ましくは２である。
【０１０４】
式Ａの好ましい化合物は：
【０１０５】
【化１０】
2019524687.tif 000012
【０１０６】
である。
このような化合物を次の合成により製造してもよい。
【０１０７】
【化１１】
2019524687.tif 000013
【０１０８】
式中、Ｘ、Ｙ、ｍ、ｎ、Ｒ１およびＲ４は本明細書中上記に定義されている。
本発明による抗体と共に使用してもよい薬物−リンカー対の例としては、これに限定されないが、次のものである：
【０１０９】
【化１２】
2019524687.tif 000014
【０１１０】
：
【０１１１】
【化１３】
2019524687.tif 000015
【０１１２】
：
【０１１３】
【化１４】
2019524687.tif 000016
【０１１４】
および
【０１１５】
【化１５】
2019524687.tif 000017
【０１１６】
式中、
【０１１７】
【化１６】
2019524687.tif 000018
【０１１８】
はｂＮＡｂとの結合を表す。
【０１１９】
抗体薬物複合体の特定の実施形態は次のものである：
【０１２０】
【化１７】
2019524687.tif 000019
【０１２１】
【化１８】
2019524687.tif 000020
【０１２２】
【化１９】
2019524687.tif 000021
【０１２３】
【化２０】
2019524687.tif 000022
【０１２４】
式中、ｔは１〜１２の範囲にある。
【０１２５】
ＨＩＶ治療のための現在の化合物および薬剤の例としては、ＡＭＤ０７０、ＢＭＳ−４８８０４３、フォジブジンチドキシル（Fozivudine tidoxil）、ＧＳＫ−８７３、１４０（アプラビロック）、ＰＲＯ  １４０、ＰＲＯ  ５４２、ペプチドＴ、ＳＣＨ−Ｄ（ビクリビロック）、ＴＮＸ−３５５、およびＵＫ−４２７，８５７（マラビロック）などの様々な他の侵入および融合阻害薬；米国特許第９，２５９，４３３号に記載されているようなＧＳ  ９１３７、ＭＫ−０５１８などのインテグラーゼ阻害薬が挙げられる。
【０１２６】
１つの非限定的態様では、本発明は、抗体または抗原結合分子内の特定のアミノ酸における結合により、リンカーが抗体を薬剤と結合させる抗体薬物複合体を包含する。例えば、米国特許第９，３０２，０１５号参照。本発明のこの態様との関連で使用することができる例となるアミノ酸結合としては、例えば、リジン（例えば、米国特許第５，２０８，０２０号；米国特許出願公開第２０１０／０１２９３１４号；Hollander et al., Bioconjugate Chem., 2008, 19:358-361；国際公開第２００５／０８９８０８号；米国特許第５，７１４，５８６号；米国特許出願公開第２０１３／０１０１５４６号；および米国特許出願公開第２０１２／０５８５５９２号参照）、システイン（例えば、米国特許出願公開第２００７／０２５８９８７号；国際公開第２０１３／０５５９９３号；国際公開第２０１３／０５５９９０号；国際公開第２０１３／０５３８７３号；国際公開第２０１３／０５３８７２号；国際公開第２０１１／１３０５９８号；米国特許出願公開第２０１３／０１０１５４６号；および米国特許第７，７５０，１１６号参照）、セレノシステイン（例えば、国際公開第２００８／１２２０３９号；およびHofer et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2008, 105:12451-12456参照）、ホルミルグリシン（例えば、Carrico et al., Nat. Chem. Biol., 2007, 3:321-322；Agarwal et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2013, 110:46-51,、およびRabuka et al., Nat. Protocols, 2012, 10:1052-1067参照）、非天然アミノ酸（例えば、国際公開第２０１３／０６８８７４号、および国際公開第２０１２／１６６５５９号参照）、および酸性アミノ酸（例えば、国際公開第２０１２／０５９８２号参照）が挙げられる。リンカーは、炭水化物（例えば、米国特許出願公開第２００８／０３０５４９７号、国際公開第２０１４／０６５６６１号、およびRyan et al., Food & Agriculture Immunol., 2001, 13:127-130参照）およびジスルフィドリンカー（例えば、国際公開第２０１３／０８５９２５号、国際公開第２０１０／０１０３２４号、国際公開第２０１１／０１８６１１号、およびShaunak et al., Nat. Chem. Biol., 2006, 2:312-313参照）との結合によっても抗原結合タンパク質と抱合することができる。
【０１２７】
抗体薬物複合体中の薬物がペプチドまたはポリペプチド、例えば、ＤＡＢである実施形態では、リンカーは、融合タンパク質をもたらす抗体重鎖の１つもしくは両方または抗体軽鎖の１つもしくは両方と薬物ペプチドもしくは薬物ポリペプチドを結合させるアミノ酸リンカーであってよい。実施形態では、薬物ペプチドまたは薬物ポリペプチドを、抗体の重鎖の１つまたは両方のC末端と融合する。実施形態では、アミノ酸リンカーは、０〜１５０アミノ酸長であり、より特に、別の実施形態の例として、０〜５０アミノ酸長である。
【０１２８】
別の態様では、本明細書で定義されたように、本発明は、１つ以上の薬物が２つ以上の別々の位置において抗体と結合している抗体薬物複合体を包含する。このような態様は、これに限定されないが、本明細書で定義された抗体、リンカーおよび薬物のいずれかを包含し得る。
【０１２９】
このような抗体薬物複合体の特定の例は、これに限定されないが：
【０１３０】
【化２１】
2019524687.tif 000023
【０１３１】
【化２２】
2019524687.tif 000024
【０１３２】
式中、ｔおよびｔ’は各々、独立して、１〜１２の範囲にある、
である。
【０１３３】
患者の疾病を「治癒」または「治癒すること」は、定められた期間、ヒト免疫不全ウイルスもしくは症状の根絶、停止、休止もしくは終了、または症状もしくはウイルスの進行を示すために使用される。例として、１つの実施形態では、「治癒」または「治癒すること」は、他の治療介入なく、例として最短１年または２年後、ヒト免疫不全ウイルスの持続的ウイルス制御（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）試験、ｂＤＮＡ（分岐鎖ＤＮＡ）試験またはＮＡＳＢＡ（核酸配列ベース増幅）試験による血漿ウイルス血症の検出不能レベル）を、単独または１つ以上の薬剤と併用して誘導して維持する治療投与または投与の組合せを表す。上記ＰＣＲ、ｂＤＮＡおよびＮＡＳＢＡ試験は、当業者に公知でありなじみがある技術を用いて行われる。例として、ヒト免疫不全ウイルスもしくは症状の根絶、停止、休止もしくは終了、または症状もしくはウイルスの進行は、最短２年間持続し得る。
【０１３４】
患者の疾病の「治療すること」または「治療」は、１）病気に罹患することもしくは疾病症状をまだ示さない患者に疾病が起こることを防止すること；２）疾病を抑制もしくはその発症を抑止すること；または３）疾病を寛解させるもしくは疾病を軽減させることを表す。
【０１３５】
本発明の１つの実施形態によれば、本明細書に記載されている抗体薬物複合体および薬剤的に許容可能な賦形剤を含んでなる医薬組成物を提供する。
【０１３６】
本発明の１つの実施形態によれば、対象に、本明細書に記載されている抗体薬物複合体を投与することを含む、対象のＨＩＶ感染症の治癒方法を提供する。
【０１３７】
本発明の１つの実施形態によれば、対象に、本明細書に記載されている医薬組成物を投与することを含む、対象のＨＩＶ感染症の治癒方法を提供する。
【０１３８】
本発明の１つの実施形態によれば、対象に、本明細書に記載されている抗体薬物複合体を投与することを含む、対象のＨＩＶ感染症の治療方法を提供する。
【０１３９】
本発明の１つの実施形態によれば、対象に、本明細書に記載されている医薬組成物を投与することを含む、対象のＨＩＶ感染症の治療方法を提供する。
【０１４０】
本発明の１つの実施形態によれば、対象に、本明細書に記載されている抗体薬物複合体を投与することを含む、ＨＩＶ感染症を発症する危険性のある対象のＨＩＶ感染症の予防方法を提供する。
【０１４１】
本発明の１つの実施形態によれば、対象に、本明細書に記載されている医薬組成物を投与することを含む、ＨＩＶ感染症を発症する危険性のある対象のＨＩＶ感染症の予防方法を提供する。
【０１４２】
本発明の別の実施形態では、医薬品として使用するための、本明細書に記載されている抗体薬物複合体を提供する。
【０１４３】
本発明の別の実施形態では、ＨＩＶ感染症の治癒に使用するための、本明細書に記載されている抗体薬物複合体を提供する。
【０１４４】
本発明の別の実施形態では、ＨＩＶ感染症の治療に使用するための、本明細書に記載されている抗体薬物複合体を提供する。
【０１４５】
本発明の別の実施形態では、ＨＩＶ感染の予防に使用するための、本明細書に記載されている抗体薬物複合体を提供する。
【０１４６】
本発明の別の実施形態では、抗体薬物複合体を提供し、該抗体薬物複合体をヒトのＨＩＶ感染症の治療に使用するための、医薬品製造に使用する。
【０１４７】
本発明の別の実施形態では、抗体薬物複合体を提供し、該抗体薬物複合体をヒトのＨＩＶ感染の予防に使用するための、医薬品製造に使用する。
【０１４８】
本発明の別の実施形態では、抗体薬物複合体を提供し、該抗体薬物複合体またはこの化合物の塩をヒトのＨＩＶ感染症の治療に使用するための、医薬品製造に使用する。
【０１４９】
１つの実施形態では、抗体薬物複合体を含有する医薬製剤は、非経口投与に適した製剤である。別の実施形態では、製剤は長時間作用性の非経口用製剤である。
【０１５０】
本発明の抗体薬物複合体を、単独で使用してもよく、他の治療薬と併用して使用してもよい。したがって、他の実施形態では、対象のＨＩＶ感染症の治療方法および／または予防方法は、抗体薬物複合体の投与に加えて、１つ以上の追加のＨＩＶに対して活性を有する医薬品の投与をさらに含む。
【０１５１】
かかる実施形態では、ＨＩＶに対して活性を有する１つ以上の追加の薬剤は、ジドブジン、ジダノシン、ラミブジン、ザルシタビン、アバカビル、スタブジン、アデホビル、アデホビルピボキシル、ホジブジン、トドキシル、エムトリシタビン、アロブジン、アムドキソビル、エルブシタビン、ネビラピン、デラビルジン、エファビレンツ、ロビリド、イムノカル、オルチプラズ、カプラビリン、レルシビリン、ＧＳＫ２２４８７６１、ＴＭＣ−２７８、ＴＭＣ−１２５、エトラビリン、サキナビル、リトナビル、インジナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、ホスアンプレナビル、ブレカナビル、ダルナビル、アタザナビル、チプラナビル、パリナビル、ラシナビル、エンフビルチド、Ｔ−２０、Ｔ−１２４９、ＰＲＯ−５４２、ＰＲＯ−１４０、ＴＮＸ−３５５、ＢＭＳ−８０６、ＢＭＳ−６６３０６８およびＢＭＳ−６２６５２９、５−ヘリックス、ラルテグラビル、エルビテグラビル、ドルテグラビル、カボテグラビル、ビクリビロック（Ｓｃｈ−Ｃ）、Ｓｃｈ−Ｄ、ＴＡＫ７７９、マラビロック、ＴＡＫ４４９、ジダノシン、テノホビル、ロピナビル、およびダルナビルからなる群から選択される。
【０１５２】
このように、本発明の抗体薬物複合体および他の医薬活性剤を、一緒にまたは別々に投与してもよく、別々に投与する場合、いずれもの順番で同時にまたは順次投与を行ってもよい。本発明の抗体薬物複合体および他の医薬活性剤ならびに投与の相対的タイミングは、所望の組合せた治療効果を達成するように選択され得る。抗体薬物複合体と他の治療薬剤とを併用した投与は、（１）両方の化合物を含む１つになった医薬組成物；または（２）各々が化合物の１つを含む別々の医薬組成物で同時に投与することにより組み合わせてもよい。あるいは、１つに治療薬を最初に投与して他の２番目を投与するかその逆の場合、組合せは、順番に別々で投与してもよい。このような順番の投与は、時間を空けずに行ってもよく、時間的に遠くてもよい。抗体薬物複合体および他の医薬活性剤ならびに投与の相対的タイミングは、所望の組み合せた治療効果を達成するように選択され得る。
【０１５３】
加えて、抗体薬物複合体を、ＨＩＶの予防、治療または治癒に有用であり得る１つ以上の他の薬剤と併用して使用してもよい。このような薬剤の例としては：
ジドブジン、ジダノシン、ラミブジン、ザルシタビン、アバカビル、スタブジン、アデホビル、アデホビルピボキシル、ホジブジン、トドキシル、エムトリシタビン、アロブジン、アムドキソビル、エルブシタビン、ＴＤＦ、ＴＡＦなどのヌクレオチド系逆転写酵素阻害薬および同様の薬剤；
ネビラピン、デラビルジン、エファビレンツ、ロビリド、イムノカル、オルチプラズ、カプラビリン、レルシビリン、ＧＳＫ２２４８７６１、ＴＭＣ−２７８、ＴＭＣ−１２５、エトラビリン、および同様の薬剤などの非ヌクレオチド系逆転写酵素阻害薬（イムノカル、オルチプラズ、その他などの抗酸化活性を有する薬剤を含む）；
サキナビル、リトナビル、インジナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、ホスアンプレナビル、ブレカナビル、ダルナビル、アタザナビル、チプラナビル、パリナビル、ラシナビル、および同様の薬剤などのプロテアーゼ阻害薬；
ラルテグラビル、エルビテグラビル、ビクテグラビル、ドルテグラビル、カボテグラビルおよび同様の薬剤などのインテグラーゼ阻害薬；
ＰＡ−３４４およびＰＡ−４５７、ならびに同様の薬剤などの成熟阻害薬；ならびにＧＳＫ２８３８２３２。
ビクリビロック（Ｓｃｈ−Ｃ）、Ｓｃｈ−Ｄ、ＴＡＫ７７９、マラビロック（ＵＫ  ４２７，８５７）、ＴＡＫ４４９などのＣＸＣＲ４および／またはＣＣＲ５阻害薬、ならびに国際公開第０２／７４７６９号、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０３／３９６４４号、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０３／３９９７５号、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０３／３９６１９号、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０３／３９６１８号、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０３／３９７４０号、および国際出願ＰＣＴ／ＵＳ０３／３９７３２号に開示されているもの、および同様の薬剤が挙げられる。
【０１５４】
本発明の抗体薬物複合体をＨＩＶの予防または治療に有用な１つ以上の薬剤と併用して使用してもよいさらなる例は、表２に示している。
【０１５５】
【表２】
2019524687.tif 000025
2019524687.tif 000026
【０１５６】
本発明の抗体薬物複合体とＨＩＶ薬剤との併用の範囲は、上記のものに限定されないが、原則的に、ＨＩＶの治癒、治療および／または予防に有用ないずれもの医薬組成物との併用を含む。上述の通り、このような併用において、本発明の抗体薬物複合体および他のＨＩＶ薬剤を別々にまたは併せて投与してもよい。加えて、１つの薬剤は他の薬剤の前でもよく、他の薬剤と同時でもよく、他の薬剤の後でもよい。
【０１５７】
本発明を、ＨＩＶの予防または治療のために薬品作用増強剤として有用な１つ以上の薬剤と、ならびに追加の化合物があってもなくても、併用して使用してもよい。このような薬品作用増強剤（または薬物動態ブースター）の例としては、リトナビル、ＧＳ−９３５０、およびＳＰＩ−４５２が挙げられるが、これに限定されない。
【０１５８】
リトナビルは、１０−ヒドロキシ−２−メチル−５−（１−メチルエチル）−１−１［２−（１−メチルエチル）−４−チアゾリル］−３，６−ジオキソ−８，１１−ビス（フェニルメチル）−２，４，７，１２−テトラアザトリデカン−１３−酸５−チアゾリルメチルエステル、［５Ｓ−（５Ｓ＊，８Ｒ＊，１０Ｒ＊，１１Ｒ＊）］であり、ノルビル（Ｎｏｒｖｉｒ）として、米国イリノイ州アボットパークのＡｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社から入手可能である。リトナビルは、ＨＩＶ感染症の治療のための他の抗レトロウイルス薬と共に指示されるＨＩＶプロテアーゼ阻害薬である。リトナビルも、Ｐ−糖タンパク質（Ｐｇｐ）細胞輸送系だけでなくＰ４５０介在薬物代謝を阻害し、それにより、生体内の活性化合物濃度を増加させる。
【０１５９】
ＧＳ−９３５０は、薬品作用増強剤として米国カリフォルニア州フォスターシティのＧｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社により開発された化合物である。
【０１６０】
ＳＰＩ−４５２は、薬品作用増強剤として、米国メリーランド州ゲイザースバーグのＳｅｑｕｏｉａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社により開発された化合物である。
【０１６１】
本明細書に記載されている化学成分との併用で使用される場合、上記他の治療薬を、例えば、医薬品便覧（ＰＤＲ）に示された量、さもなければ当業者により決定された量で使用してもよい。
【０１６２】
本発明の別の実施形態では、ウイルスのレトロウイルスファミリーのウイルスにより少なくとも部分的に介在される哺乳類のウイルス感染の治療方法を提供し、該方法は前記ウイルス感染と診断された哺乳類または前記ウイルス感染の発症の危険性を有する哺乳類に抗体薬物複合体を投与することを含む。
【０１６３】
本発明の別の実施形態では、ウイルスのレトロウイルスファミリーのウイルスにより少なくとも部分的に介在される哺乳類のウイルス感染の治療方法を提供し、該方法は前記ウイルス感染と診断された哺乳類または前記ウイルス感染の発症の危険性を有する哺乳類に抗体薬物複合体を投与することを含み、前記ウイルスはＨＩＶウイルスである。いくつかの実施形態では、ＨＩＶウイルスはＨＩＶ−１ウイルスである。
【０１６４】
本発明の別の実施形態では、ウイルスのレトロウイルスファミリーのウイルスにより少なくとも部分的に介在される哺乳類のウイルス感染の治療方法を提供し、該方法は前記ウイルス感染と診断された哺乳類または前記ウイルス感染の発症の危険性を有する哺乳類に抗体薬物複合体を投与することを含み、ＨＩＶウイルスに対する活性を有する１つ以上の薬剤の治療効果量を投与することをさらに含む。
【０１６５】
本発明の別の実施形態では、ウイルスのレトロウイルスファミリーのウイルスにより少なくとも部分的に介在される哺乳類のウイルス感染の治療方法を提供し、該方法は前記ウイルス感染と診断された哺乳類または前記ウイルス感染の発症の危険性を有する哺乳類に抗体薬物複合体を投与することを含み、ＨＩＶウイルスに対する活性を有する１つ以上の薬剤の治療効果量を投与することをさらに含み、前記ＨＩＶウイルスに対する活性を有する薬剤はヌクレオチド系逆転写酵素阻害薬；非ヌクレオチド系逆転写酵素阻害薬；プロテアーゼ阻害薬；侵入、付着および融合阻害薬；インテグラーゼ阻害薬；成熟阻害薬；ＣＸＣＲ４阻害薬；ならびにＣＣＲ５阻害薬から選択される。
【０１６６】
本発明の別の実施形態では、ウイルスのレトロウイルスファミリーのウイルスにより少なくとも部分的に介在される哺乳類のウイルス感染の予防方法を提供し、該方法は前記ウイルス感染と診断された哺乳類または前記ウイルス感染の発症の危険性を有する哺乳類に抗体薬物複合体を投与することを含む。
【０１６７】
本発明の別の実施形態では、ウイルスのレトロウイルスファミリーのウイルスにより少なくとも部分的に介在される哺乳類のウイルス感染の予防方法を提供し、該方法は前記ウイルス感染と診断された哺乳類または前記ウイルス感染の発症の危険性を有する哺乳類に抗体薬物複合体を投与することを含み、前記ウイルスはＨＩＶウイルスである。いくつかの実施形態では、ＨＩＶウイルスはＨＩＶ−１ウイルスである。
【０１６８】
本発明の別の実施形態では、ウイルスのレトロウイルスファミリーのウイルスにより少なくとも部分的に介在される哺乳類のウイルス感染の予防方法を提供し、該方法は前記ウイルス感染と診断された哺乳類または前記ウイルス感染の発症の危険性を有する哺乳類に抗体薬物複合体を投与することを含み、ＨＩＶウイルスに対する活性を有する１つ以上の薬剤の治療効果量を投与することをさらに含む。
【０１６９】
本発明の別の実施形態では、ウイルスのレトロウイルスファミリーのウイルスにより少なくとも部分的に介在される哺乳類のウイルス感染の治癒方法を提供し、該方法は前記ウイルス感染と診断された哺乳類または前記ウイルス感染の発症の危険性を有する哺乳類に抗体薬物複合体を投与することを含む。
【０１７０】
本発明の別の実施形態では、ウイルスのレトロウイルスファミリーのウイルスにより少なくとも部分的に介在される哺乳類のウイルス感染の治癒方法を提供し、該方法は前記ウイルス感染と診断された哺乳類または前記ウイルス感染の発症の危険性を有する哺乳類に抗体薬物複合体を投与することを含み、前記ウイルスはＨＩＶウイルスである。いくつかの実施形態では、ＨＩＶウイルスはＨＩＶ−１ウイルスである。
【０１７１】
本発明の別の実施形態では、ウイルスのレトロウイルスファミリーのウイルスにより少なくとも部分的に介在される哺乳類のウイルス感染の治癒方法を提供し、該方法は前記ウイルス感染と診断された哺乳類または前記ウイルス感染の発症の危険性を有する哺乳類に抗体薬物複合体を投与することを含み、ＨＩＶウイルスに対する活性を有する１つ以上の薬剤の治療効果量を投与することをさらに含む。
【０１７２】
本発明の別の実施形態では、ウイルスのレトロウイルスファミリーのウイルスにより少なくとも部分的に介在される哺乳類のウイルス感染の治癒方法を提供し、該方法は前記ウイルス感染と診断された哺乳類または前記ウイルス感染の発症の危険性を有する哺乳類に抗体薬物複合体を投与することを含み、ＨＩＶウイルスに対する活性を有する１つ以上の薬剤の治療効果量を投与することをさらに含み、前記ＨＩＶウイルスに対する活性を有する薬剤はヌクレオチド系逆転写酵素阻害薬；非ヌクレオチド系逆転写酵素阻害薬；プロテアーゼ阻害薬；侵入、付着および融合阻害薬；インテグラーゼ阻害薬；成熟阻害薬；ＣＸＣＲ４阻害薬；ならびにＣＣＲ５阻害薬から選択される。
【０１７３】
別の実施形態では、薬剤的に許容可能な希釈剤および抗体薬物複合体の治療有効量を含んでなる医薬組成物を提供する。
【０１７４】
本明細書で使用されるとき、用語「薬剤的に許容可能な」は、健全な医療判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、または他の問題もしくは副作用なしで、ヒトおよび動物の組織と接触して使用するのに適している抗体薬物複合体、薬剤、化合物、物質、組成、および剤形を表す。
【０１７５】
本明細書に記載されている薬物の投与は、これに限定されないが、経口、舌下、皮下、静脈内、経鼻、局所、経皮、腹腔内、筋肉内、肺内、腟内、直腸内、または眼内を含む同様な有用性を果たす薬剤投与の許容される方法のいずれかによることができる。いくつかの実施形態では、経口投与を使用してもよく非経口投与を使用してもよい。投与の１つの例は静脈内投与であり、そのような場合、静脈内投与に適した医薬製剤を使用する。投与の別の例は筋肉内投与であり、そのような場合、筋肉内投与に適した医薬製剤を使用する。投与の別の例は、皮下投与であり、そのような場合、皮下投与に適した医薬製剤を使用する。
【０１７６】
医薬組成物または医薬製剤としては、上記投与のいずれかに有用な、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、液剤、懸濁剤、坐薬、エアロジル剤または同様のものなどの固体、半固体、液体およびエアロジル剤形が挙げられる。抗体薬物複合体を、所定の速度での長時間および／または時限投与、パルス投与のための、デポ注射剤、浸透圧ポンプ、丸剤、経皮（エレクトロトランスポートを含む）パッチ剤、および同様のものを含む持続放出または制御放出剤形でも投与することができる。特定の実施形態では、組成物を、正確な用量の単回投与に適した単位剤形で提供する。
【０１７７】
本明細書に記載されている抗体薬物複合体を、単独またはより通常、従来の医薬担体、賦形剤または同様のもの（例えば、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、滑石、セルロース、クロスカルメロースナトリウム、グルコース、ゼラチン、ショ糖、炭酸マグネシウム等）と組合せで投与することができる。必要に応じて、医薬組成物は、湿潤剤、乳化剤、可溶化剤、ｐＨ緩衝剤および同様のもの（例えば、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、シクロデキストリン誘導体、ソルビタンラウリン酸モノエステル、酢酸トリエタノールアミン、オレイン酸トリエタノールアミン等）などの無毒性助剤物質を少量含むこともできる。概して、目的の投与方法に依存して、医薬組成物は、約０．００５重量％〜９５重量％；特定の実施形態では、約０．５重量％〜５０重量％のＡＤＣを含むだろう。このような剤形の実際の製造方法は公知であり、または当業者に明白であろう；例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania参照。
【０１７８】
特定の実施形態では、組成物は丸剤または錠剤の形態をとり、したがって、組成物は、有効成分と共に、ラクトース、ショ糖、リン酸二カルシウム等の希釈剤；ステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤；およびデンプン、アカシアゴム、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、セルロース、セルロース誘導体等のバインダーを含むだろう。別の固体剤形では、散剤、マルメ（marume）、液剤または懸濁剤（例えば、炭酸プロピレン、植物油またはトリグリセリド中）をゼラチンカプセル内にカプセル化する。
【０１７９】
液体の薬剤的に管理できる組成物を、例えば、溶解、分散、その他により、担体（例えば、水、生理食塩水、水性デキストリン、グリセロール、グリコール、エタノール等）中に少なくとも１つの抗体薬物複合体および必要に応じて医薬アジュバントを製剤して液剤または懸濁剤を製造する。注射剤を、液体の液剤または懸濁剤として、乳化剤として、または注射前に液体中に溶解もしくは懸濁するのに適した固体のいずれか、従来の形態で製剤することができる。このような非経口用組成物に含有される抗体薬物複合体のパーセントは、その特定の性質、ならびに化学成分の活性および対象のニーズに大きく依存する。しかしながら、液剤中、０．０１％〜１０％の有効成分のパーセントを使用することができ、組成物を後で上記パーセントまで希釈する固形剤である場合はより高くなるだろう。特定の実施形態では、組成物は、液剤中、約０．２〜２％の活性薬を含んでなるだろう。
【０１８０】
本明細書に記載されている抗体薬物複合体の医薬組成物を、単独またはラクトースなどの不活性担体と併用して、エアロゾルもしくはネブライザー用液剤、または吸入剤用極微小散剤として気道に投与してもよい。このような場合、医薬組成物の粒子は、５０ミクロン未満の径、特定の実施形態では、１０ミクロン未満の径を有する。
【０１８１】
概して、提供される抗体薬物複合体は、類似の有用性をもたらす薬剤に対する許容される投与方法のいずれかにより、治療有効量で投与されるだろう。抗体薬物複合体の実際の量は、治療される疾病の重度、対象の年齢および相対的健康、使用される抗体薬物複合体の作用強度、投与経路および形態、ならびに他の因子に依存するだろう。抗体薬物複合体を、１日１回または２回など、１日に１回以上投与することができる。
【０１８２】
本明細書に記載されている抗体薬物複合体の治療有効量は、約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、例えば、約０．０１〜５０ｍｇ／ｋｇ／日など１日当たりレシピエントの体重キログラム当たり約０．０１〜２００ｍｇの範囲であってよい。したがって、７０ｋｇの人への投与のため、投薬量範囲は、１日約１〜１０００ｍｇであってよい。
【０１８３】
概して、抗体薬物複合体を、次の経路のいずれか１つにより医薬組成物として投与するだろう：経口、全身（例えば、経皮、鼻内または坐薬により）、または非経口（例えば、筋肉内、静脈内または皮下）投与。特定の実施形態では、病気の程度に応じて調節することができる簡便な毎日の用法で経口投与を使用してよい。組成物は、錠剤、丸剤、カプセル剤、半固体剤、散剤、徐放製剤、液剤、懸濁剤、エリキシル剤、エアロゾル剤、または他の適切な組成物の形態をとることができる。提供された化学成分を投与するための別の方法は吸入である。
【０１８４】
製剤の選択は、薬物投与の方法および抗体薬物複合体のバイオアベイラビリティなどの様々な因子に依存する。吸入による送達のため、化学成分を、液体の液剤、懸濁剤、エアロゾル噴霧剤または乾燥散剤として製剤して、適切な投与用ディスペンサーに収容することができる。いくつかの種類の医薬用吸入デバイス−ネブライザー吸入器、定量噴霧式吸入器（ＭＤＩ）およびドライパウダー吸入器（ＤＰＩ）がある。ネブライザーデバイスは、治療薬剤（液体で製剤されている）を患者の気道に運ぶミストとして噴霧させる高速エアーの流れを生成する。ＭＤＩは、通常、圧縮ガスでパッケージ化された製剤である。作動時、デバイスは、圧縮ガスにより測定された量の治療薬を放出し、したがって、設定量の薬剤の信頼ある投与方法を得る。ＤＰＩは、デバイスによる呼吸中の患者の吸気の気流で分散することができる易流動性散剤の形態で治療薬を分配する。易流動性散剤を得るために、治療薬をラクトースなどの賦形剤と共に製剤する。測定された量の治療薬をカプセルの形態で収容し、各操作により分配する。
【０１８５】
近年、医薬組成物は、バイオアベイラビリティは表面積の増加、すなわち、粒子径の減少により増大することができるという原理に基づいて不良なバイオアベイラビリティを示す薬物のために開発されてきた。例えば、米国特許第４，１０７，２８８号は、活性物質が高分子の架橋マトリックスで支持されている１０〜１，０００ｎｍの範囲の大きさの粒子を有する医薬製剤を記載している。米国特許第５，１４５，６８４号は、薬物物質が表面改質剤の存在下でナノ粒子（４００ｎｍの平均粒子径）に微粉砕されてから、液体媒体で分散されて極めて高いバイオアベイラビリティを示す医薬製剤を得る、医薬製剤の製造を記載している。
【０１８６】
組成物は、概して、少なくとも１つの薬剤的に許容可能な賦形剤と組み合わせて、本明細書に記載されている少なくとも１つの抗体薬物複合体からなる。許容可能な賦形剤は無毒性であり、投与を助け、本明細書に記載されている少なくとも１つの活性薬の治療効果に悪影響を及ぼさない。このような賦形剤は、当業者が通常に入手可能である、いずれもの固体、液体、半固体またはエアロゾル組成物の場合ガス状賦形剤であってよい。
【０１８７】
固体医薬品賦形剤としては、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、塩化ナトリウム、乾燥スキンミルクなどが挙げられる。液体および半固体賦形剤は、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールおよび石油、動物、植物または合成起源のもの、例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、ミネラルオイル、ゴマ油などを含む様々な油から選択され得る。注射液用の液体担体としては、水、生理食塩水、水性デキストロース、およびグリコール類が挙げられる。
【０１８８】
圧縮ガスを使用して、エアロゾルの形態で本明細書に記載されている抗体薬物複合体を分散してもよい。この目的のための不活性ガスは、窒素、二酸化炭素などである。他の適切な医薬品賦形剤およびその製剤は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎにより編集されたRemington's Pharmaceutical Sciences（Mack Publishing Company, 18th ed., 1990）に記載されている。
【０１８９】
組成物中の抗体薬物複合体の量は、当業者により使用される最大範囲内で変わり得る。通常、組成物は、１つ以上に適切な医薬品賦形剤とバランスをとりながら、重量パーセント（重量％）基準で、全組成物に対して、約０．０１〜９９．９９重量％の本明細書に記載されている抗体薬物複合体成分を含有するだろう。特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体薬物複合体は、約１〜８０重量％のレベルで存在する。
【０１９０】
様々な広域中和抗体（ｂｎＡｂ）は、ＨＩＶ感染個体または関連モデルへの注入により、ＡＲＶとして、大した成果もなく探求されてきた。用語「ＡＲＶ」は、レトロウイルス、すなわち、ＨＩＶによる感染をかかるウイルスの繁殖を阻止するように治療するための薬物である「抗レトロウイルス薬を表す。ｂｎＡｂｓに対する耐性は、小分子ＡＲＶで観察されるものと同様な治療中に生成する。この目的を達成するために、ｂｎＡｂおよび本発明によるｇｐ１６０を標的とする小分子付着阻害剤からなる二官能性分子は、阻害されるｇｐ１６０多様性の広さを増大することができ、複数の小分子により提供されるＨＡＡＲＴと類似した１つの分子における複数の抗ウイルス標的を得ることにより耐久性を向上すると考えられる。用語「ＨＡＡＲＴ」は、ＨＩＶ治療のための１つより多い（例えば、２、３または４）薬物の組合せである「極めて活性な抗ウイルス療法」を表す。
【実施例】
【０１９１】
実施例１
ｇｐ１６０付着阻害剤の合成
次の経路を使用して、本発明による抗体薬物複合体において使用される薬物を製造した（スキーム１）：
【０１９２】
【化２３】
2019524687.tif 000027
【０１９３】
【化２４】
2019524687.tif 000028
【０１９４】
【化２５】
2019524687.tif 000029
【０１９５】
【化２６】
2019524687.tif 000030
【０１９６】
実施例２
実験手順
ｇｐ１６０およびリンカーと共にＶＲＣ０１へのコンジュゲーターＡを次のスキーム１〜４で製造した。この実施例では、リジン抱合をＶＲＣ０１と行い；したがって、サクシニミジルエステルをコンジュゲーターに組み入れた。これら全ての修飾後、生理活性を検証する試みを行う代理として、化合物Ｂも製造した。
スキーム２
【０１９７】
【化２７】
2019524687.tif 000031
【０１９８】
スキーム３
【０１９９】
【化２８】
2019524687.tif 000032
【０２００】
スキーム４
【０２０１】
【化２９】
2019524687.tif 000033
【０２０２】
スキーム５
【０２０３】
【化３０】
2019524687.tif 000034
【０２０４】
例えば、システイン抱合および他の部位特異的抱合方法などの他の抱合も考え得る。これらの様々な抱合に関して、適切なコンジュゲーターを本明細書に記載された類似の化学スキームに従って製造することができる。
【０２０５】
実施例３
ｇｐ１６０付着阻害剤の合成
ｇｐ１６０付着阻害剤を次の合成経路により製造した：
【０２０６】
【化３１】
2019524687.tif 000035
【０２０７】
Ｎ１−（４−（（４−クロロ−３−フルオロフェニル）カルバモイル）−２−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ２−（３−（ジメチルアミノ）プロピル）オキサルアミド
【０２０８】
【化３２】
2019524687.tif 000036
【０２０９】
工程１
４−ニトロ−３−（ピペリジン−１−イルメチル）安息香酸メチル
１，２−ジクロロエタン（ＤＣＥ）（１５０ｍＬ）中の３−ホルミル−４−ニトロ安息香酸メチル（１５ｇ、７１．７ｍｍｏｌ）およびピペリジン（１４．１７ｍＬ、１４３ｍｍｏｌ）の溶液を酢酸（８．２１ｍＬ、１４３ｍｍｏｌ）で処理した。３０分後、反応混合物をトリアセトキシ水素化ホウ素（２４．３２ｇ、１１５ｍｍｏｌ）で処理し、一夜撹拌した。反応を飽和ＮａＨＣＯ３で停止し、ＤＣＭで抽出し、飽和ＮａＨＣＯ３、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過して濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）により精製して、４−ニトロ−３−（１−ピペリジニルメチル）安息香酸メチル（１６．１４ｇ、５８．０ｍｍｏｌ、収率８１％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋＝２７９．３（Ｍ＋１）＋
【０２１０】
工程２
Ｎ−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−４−ニトロ−３−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンズアミド
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１００ｍＬ）中の４−ニトロ−３−（１−ピペリジニルメチル）安息香酸メチル（１６．０５ｇ、５７．７ｍｍｏｌ）の溶液およびメタノール（１００ｍＬ）をＬｉＯＨ（２５０ｍＬ、２５０ｍｍｏｌ）で処理し、周囲温度において４時間撹拌した。混合物を濃縮して粗４−ニトロ−３−（１−ピペリジニルメチル）安息香酸（２０．５１ｇ）を得た。酸中間体をＳＯＣｌ２（５０ｍＬ、６８５ｍｍｏｌ）中に懸濁し、１．５時間還流し、濃縮して塩化４−ニトロ−３−（１−ピペリジニルメチル）ベンゾイル（ＭｅＯＨ中ＬＣＭＳ、ＥＳ＋２７９、メチルエステル）を得た。塩化アシルをジクロロメタン（ＤＣＭ）（１００ｍＬ）中に懸濁し、４−クロロ−３−フルオロアニリン（７．９７ｇ、５４．８ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（１２．０６ｍＬ、８７ｍｍｏｌ）で処理し、周辺温度で一夜撹拌した。さらにＥｔ３Ｎ（４ｍＬ）、ＤＣＭ（１１ｍＬ）、およびアニリン（４１８ｍｇ）を添加し、反応物を一夜撹拌した。懸濁液を飽和ＮａＨＣＯ３で停止し、ＤＣＭ（２×）で抽出し、飽和ＮａＨＣＯ３（１×）、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過して濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（０〜５０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、黄色固体のＮ−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−４−ニトロ−３−（１−ピペリジニルメチル）ベンズアミド（１３．８６ｇ、３５．４ｍｍｏｌ、収率６１．３％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋＝２７９．３（Ｍ＋１）＋
【０２１１】
工程３
４−アミノ−Ｎ−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−３−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンズアミド
メタノール（１３０ｍＬ）中のＮ−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−４−ニトロ−３−（１−ピペリジニルメチル）ベンズアミド（１３ｇ、３３．２ｍｍｏｌ）溶液を、メタノール（１３０ｍＬ）中のヒドラジン水化物（１６．１４ｍＬ、３３２ｍｍｏｌ）およびラネー２８００ニッケル（４．２ｇ、３３．２ｍｍｏｌ）の還流混合物中にゆっくりと添加した。反応物を１時間還流し、周囲温度まで冷却し、セライトによりろ過し、ＭｅＯＨおよびＤＣＭで洗浄してから、濃縮して淡黄色固体の粗４−アミノ−Ｎ−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−３−（１−ピペリジニルメチル）ベンズアミド（１１．５６ｇ、３１．９ｍｍｏｌ、収率９６％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋＝３６２．３（Ｍ＋１）＋
【０２１２】
工程４
４−ブロモ−Ｎ−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−３−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンズアミド
アセトニトリル（２０ｍＬ）中の臭化銅（ＩＩ）（０．６４８ｇ、２．９０ｍｍｏｌ）の氷冷した混合物を亜硝酸ｔ−ブチル（０．７３０ｍＬ、５．５３ｍｍｏｌ）で処理した後、４−アミノ−Ｎ−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−３−（１−ピペリジニルメチル）ベンズアミド（１．０００ｇ、２．７６ｍｍｏｌ）で処理し、得られた暗混合物を周囲温度で一夜撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３を添加して、酢酸エチルで希釈した。混合物をセライトパッドによりろ過し、水層をＥＡで抽出した。抽出物を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過して濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（０〜１０％  ＭｅＯＨ／ＤＣＭ勾配）により精製して暗残渣（４８２ｍｇ、３２％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）  ｄ  ｐｐｍ  １．５０（ｄ，Ｊ＝５．０７Ｈｚ，２Ｈ），１．５６〜１．７１（ｍ，４Ｈ），２．５３（ｂｒ．ｓ．，４Ｈ），３．６７（ｓ，２Ｈ），７．３７〜７．４８（ｍ，２Ｈ），７．６８〜７．７６（ｍ，２Ｈ），７．７８〜７．８７（ｍ，１Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝１．９５Ｈｚ，１Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋＝４２５（Ｍ＋１）。
【０２１３】
工程５
Ｎ−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−４−シアノ−３−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンズアミド
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（２３．４９ｍｌ）中の４−ブロモ−Ｎ−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−３−（１−ピペリジニルメチル）ベンズアミド（２ｇ、４．７０ｍｍｏｌ）およびＺｎ（ＣＮ）２（０．３８６ｇ、３．２９ｍｍｏｌ）の懸濁液をＮ２で５分間脱気してから、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．２７１ｇ、０．２３５ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を１２０℃で２０分間、マイクロ波で照射した。反応混合物を水に注ぎ入れてＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた抽出物を塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、ろ過して濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（０〜５０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン類）により精製して、Ｎ−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−４−シアノ−３−（１−ピペリジニルメチル）ベンズアミド（１．６６ｇ、４．４６ｍｍｏｌ、収率９５％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋＝３７２．３（Ｍ＋１）。
【０２１４】
工程６
４−（アミノメチル）−Ｎ−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−３−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンズアミド
アンモニアガスを飽和したエタノール（１００ｍＬ）中のＮ−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−４−シアノ−３−（１−ピペリジニルメチル）ベンズアミド（５．００ｇ、１３．４５ｍｍｏｌ）の混合物をラネー２８００ニッケル（１２ｍＬ、１３．４５ｍｍｏｌ）で処理してから、水素ガス５０ｐｓｉ下７２時間撹拌した。混合物をセライトでろ過し、酢酸エチル、ＤＣＭ、およびＭｅＯＨで洗浄した。ろ液を濃縮して淡緑色の色合いを帯びた固体として表題の化合物生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）ｄ  ｐｐｍ  １．５６（ｂｒ．ｓ．，６Ｈ），２．４８（ｂｒ．ｓ．，４Ｈ），３．６１（ｓ，２Ｈ），３．９０（ｓ，２Ｈ），７．３８〜７．５５（ｍ，３Ｈ），７．７６〜７．９０（ｍ，３Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋＝３７６（Ｍ＋１）。
【０２１５】
工程７
２−（（４−（（４−クロロ−３−フルオロフェニル）カルバモイル）−２−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンジル）アミノ）−２−オキソ酢酸メチル
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（２０ｍＬ）中の４−（アミノメチル）−Ｎ−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−３−（１−ピペリジニルメチル）ベンズアミド（１．０００ｇ、２．６６ｍｍｏｌ）およびヒューニッヒ塩基（０．６９７ｍＬ、３．９９ｍｍｏｌ）の氷冷した混合物を、塩化メチルオキサリル（０．２７０ｍＬ、２．９３ｍｍｏｌ）でゆっくりと処理した。混合物を５分間撹拌し、ＬＣＭＳにより反応完了したことを判断した。混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３、それから塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過して濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（０〜１０％  ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製して淡黄色固体として表題化合物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）ｄ  ｐｐｍ  １．３３〜１．４６（ｍ，２Ｈ），１．４６〜１．５７（ｍ，４Ｈ），２．３７（ｂｒ．ｓ．，４Ｈ），３．５７（ｓ，２Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），４．５６（ｄ，Ｊ＝６．０６Ｈｚ，２Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝８．０１Ｈｚ，１Ｈ），７．５１〜７．６２（ｍ，２Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝１．５６Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄｄ，Ｊ＝８．０１，１．７６Ｈｚ，１Ｈ），７．９１〜７．９７（ｍ，１Ｈ），９．５１（ｔ，Ｊ＝６．０６Ｈｚ，１Ｈ），１０．４９（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋＝４６２（Ｍ＋１）。
【０２１６】
工程８
２−（（４−（（４−クロロ−３−フルオロフェニル）カルバモイル）−２−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンジル）アミノ）−２−オキソ酢酸
ＭｅＯＨ（５ｍＬ）およびＴＨＦ（５ｍＬ）中の２−（（４−（（４−クロロ−３−フルオロフェニル）カルバモイル）−２−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンジル）アミノ）−２−オキソ酢酸メチル（２８８ｍｇ、０．６２３ｍｍｏｌ）の溶液を、１Ｍ  ＬｉＯＨ（１ｍＬ）で処理した。２時間後、反応混合物を真空で濃縮し、表題の化合物を得た（２７９ｍｇ、１０６％）。ＬＣ／ＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋＝４４８．３（Ｍ＋１）。
【０２１７】
工程９
Ｎ１−（４−（（４−クロロ−３−フルオロフェニル）カルバモイル）−２−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンジル）−Ｎ２−（３−（ジメチルアミノ）プロピル）オキサルアミド
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（１．０ｍＬ）中の（｛［４−｛［４−クロロ−３−フルオロフェニル）アミノ］カルボニル｝−２−（１−ピペリジニルメチル）フェニル］メチル｝アミノ）（オキソ）酢酸（３０．０ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１，３−プロパンジアミン（０．０１７ｍＬ、０．１３２ｍｍｏｌ）およびヒューニッヒ塩基（０．０３５ｍＬ、０．１９８ｍｍｏｌ）の混合物をＴ３Ｐ（０．０７９ｍＬ、０．１３２ｍｍｏｌ）で処理してから、周囲温度で５分間撹拌した。混合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＴＦＡ修飾）により精製してわずかに不純物を含む所望の生成物を得て、これをＲＰ−ＨＰＬＣ（ＮＨ４ＯＨ修飾）によりさらに精製して白色固体として所望の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）ｄ  ｐｐｍ  １．４０（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），１．４９〜１．６４（ｍ，  ６  Ｈ），２．０９（ｓ，６Ｈ），２．１８（ｔ，Ｊ＝７．０２Ｈｚ，２Ｈ），２．３７（ｂｒ．ｓ．，４Ｈ），３．１５（ｑ，Ｊ＝６．５７Ｈｚ，２Ｈ），３．５７（ｓ，２Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝６．２４Ｈｚ，２Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝７．８０Ｈｚ，１Ｈ），７．５２〜７．６６（ｍ，２Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｄｄ，Ｊ＝７．９０，１．４６Ｈｚ，１Ｈ），７．８９〜８．００（ｍ，１Ｈ），８．８５（ｔ，Ｊ＝５．９５Ｈｚ，１Ｈ），９．２３〜９．３６（ｍ，１Ｈ），１０．４８（ｓ，１Ｈ）；ＬＣ／ＭＳ（ｍ／ｚ）ＥＳ＋＝５３２（Ｍ＋１）。
【０２１８】
実施例４〜８
抗体薬物複合体の製造
下記記載されている抗体薬物複合体を下記に記載の通り製造した。
実験材料：
ＶＲＣ０１はＣＨＯ細胞内で発現された。細胞培養上澄みを回収し、タンパク質ＡカラムおよびＳＥＣカラムで精製した。広域中和抗体ＶＲＣ０１を２０ｍＭヒスチジン緩衝液（５％ショ糖を含む、ｐＨ６．０）中で貯蔵した。純度をサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ、図１）分析およびドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、図２）により確認した。
【０２１９】
【表３】
2019524687.tif 000037
【０２２０】
抱合に使用される４つの異なるペイロード−リンカー（ＰＬ）を設計し次のように製造した：
化合物＃１（ペイロードＡ、化合物ＬＡ）
化合物＃２（ペイロードＡ、化合物ＳＡ）
化合物＃３（ペイロードＢ、化合物ＳＢ）
化合物＃４（ペイロードＢ、化合物ＬＢ）
式中：
ＬＡ：長いリンカーペイロードＡ
ＳＡ：短いリンカーペイロードＡ
ＳＢ：短いリンカーペイロードＢ
ＬＢ：長いリンカーペイロードＢ
【０２２１】
【化３３】
2019524687.tif 000038
【０２２２】
【化３４】
2019524687.tif 000039
【０２２３】
分析方法
ＨＰＬＣ法
ＳＥＣ分析方法
【０２２４】
【表４】
2019524687.tif 000040
【０２２５】
遊離薬物アッセイを、実施例４で示された詳細と共に表５に記載されている。
【０２２６】
【表５】
2019524687.tif 000041
【０２２７】
ＤＡＲを決定するためのＵＶ法：ランベルト・ベールの法則Ａ＝Ｅ＊ｃ＊ｌに基づいたＵＶ／可視およびＳＥＣ（ＵＶ検出器） 
Ａ２８０＝ＥｍＡｂ２８０＊［ｍＡｂ］＊ｌ＋ＥＰＬ２８０＊［ＰＬ］＊ｌ 
Ａ３１５＝ＥｍＡｂ３１５＊［ｍＡｂ］＊ｌ＋ＥＰＬ３１５＊［ＰＬ］＊ｌ 
［ｍＡｂ］：ｍＡｂ濃度
ＰＬ：ペイロード−リンカー
［ＰＬ］：ペイロード−リンカー濃度
Ｅ：モル吸光係数 
ｃ：濃度 
Ｉ：光路（ナノドロップ：０．１ｃｍ）
【０２２８】
実施例４
ジメチルアセトアミド中の化合物ＳＢの溶液（ＤＭＡ、１０ｍｇ／ｍＬ）を、１．２ｍｇの化合物ＳＢ（化合物＃３）を０．１２ｍＬのＤＭＡに溶解することにより製造した。ＤＭＡ中の化合物ＬＢの溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を、２．１ｍｇの化合物ＬＢ（化合物＃４）を０．２１ｍＬのＤＭＡに溶解することにより製造した。アセトニトリル中の化合物ＬＡの溶液（ＡＣＮ、１０ｍｇ／ｍＬ）を、１．７ｍｇの化合物ＬＡを０．１７ｍＬのＡＣＮに溶解することにより製造した。ＡＣＮ中化合物ＳＡの溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を、１．３ｍｇの化合物ＳＡ（化合物＃２）を０．１３ｍＬのＡＣＮに溶解することにより製造した。
【０２２９】
ペイロード−リンカーの保持時間を決定するため、上記製造されたＬＡ、ＳＡおよびＬＢ、ＳＢの溶液を、希釈緩衝液（５０％  １００ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃ＋５０％アセトニトリル）で１ｍｇ／ｍＬまで希釈した。ＬＡ、ＳＡおよびＬＢ、ＳＢ全て、ＨＰＬＣにおいて２つのピークを示した（親Ｏ−Ｓｕおよび加水分解した−ＣＯＯＨ）。最終の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）サンプルをＨＰＬＣ（混合モデルＲＰカラム）に付して、遊離ペイロード−リンカーレベルを決定した。全ＡＤＣ生成物は３．３分（抗体関連）において目立つピークを有し、スペクトル中に他のピークは現れなかった。結果は、ＡＤＣ溶液中の残りの遊離ペイロード−リンカー濃度は検出限界未満であった。
【０２３０】
遊離ペイロード−リンカー検出限界を決定するために、ＬＡ、ＳＡおよびＬＢ、ＳＢの異なる濃度を製造し、これらをＨＰＬＣ（混合モデルＲＰカラム）に付し、結果は、全４つのペイロード−リンカーの検出限界は０．００２４μｇ／ｍＬ未満であることを示した。 
薬物抗体比（本明細書で「ＤＡＲ」と言う）ＭＳ
【０２３１】
実施例５ 
サンプル調製 
１００μｇのタンパク質サンプルを１．５ｍＬチューブに添加し、２μＬの１モル／Ｌのトリス−ＨＣｌ緩衝液、２．５μＬのＰＮＧａｓｅ  Ｆ溶液およびミリＱ水を用いて１００μＬに調製した。これを充分に混合し、３７℃、４時間インキュベートした。 
【０２３２】
４００μＬの５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液を、限外ろ過管を用いてサンプルに添加し、次いで１３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。それから、サンプルを１．５ｍＬチューブに移し、５０ｍＭのリン酸ナトリウムを添加して最終体積を１００μＬとした。１μＬのシアリダーゼＡおよび２μＬのＯ−グリカナーゼを添加し、３７℃、２時間インキュベートした。 
【０２３３】
【表６】
2019524687.tif 000042
【０２３４】
【表７】
2019524687.tif 000043
【０２３５】
実施例６
ＶＲＣ０１−ＬＡおよびＶＲＣ０１−ＳＡの製造
反応セットアップ（ＬＡおよびＳＡ）：ＶＲＣ０１−ＬＡおよびＶＲＣ０１−ＳＡ、それぞれ、図３Ａおよび図３Ｂ参照、ＶＲＣ０１−ＬＡおよびＶＲＣ０１−ＳＡを製造した。ＣＨ３ＣＮを、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．５）中のＶＲＣ０１溶液に添加し、反応物を混合して、ＣＨ３ＣＮ中のＬＡまたはＳＡ溶液を添加した。抱合溶液中の全ＣＨ３ＣＮ含有率は、ペイロード−リンカー添加後２０％であった。それから、反応混合物を２２℃インキュベーター内のショッカー（１５０回転毎分）中に２時間入れた。２時間後、反応混合物を取り出し、緩衝液を貯蔵用緩衝液に交換し、スピン脱塩カラムおよびアミコン限外ろ過（３０ｋＤａ）を用いて遊離ペイロード−リンカーを除去した。約２０〜２５ｍｇの最終製品を得て、反応変換は約６０％および９０％であった。
【０２３６】
【表８】
2019524687.tif 000044
【０２３７】
実施例７
ＶＲＣ０１−ＬＢおよびＶＲＣ０１−ＳＢの製造
反応セットアップ（ＬＢおよびＳＢ）：ＶＲＣ０１−ＬＢおよびＶＲＣ０１−ＳＢ、それぞれ、図４Ａおよび図４Ｂ参照、ＤＭＡをＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．５）中のＶＲＣ０１溶液に添加し、反応物を適宜混合し、ＤＭＡ中のＬＢまたはＳＢ溶液を添加した。抱合溶液中の全ＤＭＡ含有率は、ペイロード−リンカー添加後１０％であった。それから、反応混合物を２２℃インキュベーター内のショッカー（１５０回転毎分）中に２時間入れた。２時間後、反応混合物を取り出し、緩衝液を貯蔵用緩衝液に交換し、スピン脱塩カラムを用いて遊離薬物を除去した。約２０〜２５ｍｇの最終製品を得て、反応変換率は約７０％および８０％であった。
【０２３８】
【表９】
2019524687.tif 000045
【０２３９】
遊離ペイロード−リンカーの除去
透析カセット（０．５〜３ｍＬ容量、ＭＷＣＯ：１０，０００）中の全４  ＡＤＣ製品（１．９ｍＬのＶＲＣ０１−ＳＢ、２．１ｍＬのＶＲＣ０１−ＬＢ、１．６５ｍＬのＶＲＣ０１−ＬＡおよび１．１５ｍＬのＶＲＣ０１−ＳＡ）を、それぞれ、５００ｍＬの緩衝液（２０ｍＭヒスチジン、ｐＨ６．０）に対して６回透析し、遊離ペイロード−リンカーを除去した。透析後、得られたＡＤＣ製品の濃度、遊離薬物含有率およびエンドトキシンを、ＵＶ／可視、ＨＰＬＣ（混合モデルＲＰカラム）およびマイクロプレートリーダーにより決定した。それから、５％ショ糖をＡＤＣ溶液それぞれに添加した。ＡＤＣ製品のＤＡＲおよびアグリゲート含有率をＳＥＣ−ＨＰＬＣにより決定した。
【０２４０】
【表１０】
2019524687.tif 000046
【０２４１】
実施例８
ＶＲＣ０１−ＬＡ−ＳＢおよびＶＲＣ０１−ＬＡ−ＬＢの製剤
反応セットアップ：下記合成から得られた最終構造生成物は、図５Ａおよび図５Ｂに表している。ＣＨ３ＣＮを、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．５）中のＶＲＣ０１溶液に添加し、反応物を適宜混合して、ＣＨ３ＣＮ中のＬＡ溶液を添加した。抱合溶液中の全ＣＨ３ＣＮ含有率は２０％であり、反応物の最終ｍＡｂ濃度は１０ｍｇ／ｍＬであった。ペイロード−リンカーの添加後、反応混合物をインキュベーター内で２２℃、２時間、ロータリープラットフォーム（１０回転毎分）に置いた。それから、反応混合物を取り出し、遊離ペイロード−リンカー（ＬＡ）を、アミコン限外ろ過（５０ｋＤａ）を用いて取り除いた。約２ｍｇのＡＤＣを、ＤＡＲ測定およびアグリゲーション決定のためインタクトＭＳおよびＳＥＣに付した。
【０２４２】
残りの１８ｍｇの反応混合物を２つのバイアルに分割（各９．０ｍｇ）し、それぞれ、ＳＢおよびＬＢとの次の抱合に付した。ＤＭＡおよびＤＭＡ中のＳＢ溶液、ＬＢ溶液を、上記調製されたＡＤＣ  ＰＢＳ緩衝液に添加した。抱合反応物中、ＤＭＡ含有率は２０％であり、ＡＤＣ濃度は１０ｍｇ／ｍＬであった。抱合溶液を、２２℃インキュベーター内に２時間、ロータリープラットフォーム（１０回転毎分）に置いた。それから、反応混合物に対して、緩衝液を貯蔵用緩衝液に交換し、アミコン限外ろ過（５０ｋＤａ）を用いて遊離ペイロード−リンカーを取り除いた。最後に、反応混合物を透析し、検出不能レベルまで遊離ペイロード−リンカーをさらに取り除き、緩衝液を交換した（３日、６回緩衝液交換）。約４．５ｍｇ（各）の最終製品を得て、反応変換率は約５０％であった。
【０２４３】
これらのＡＤＣ製品における遊離薬物レベルの決定
ｍＡｂおよび遊離ペイロード−リンカーの保持時間を決定するため、ＬＡ、ＬＢ、およびＳＢの溶液（薬物の全濃度は１０ｍｇ／ｍＬであった）を希釈用緩衝液（５０％  １００ｍＭ  ＮＨ４Ａｃ＋５０％アセトニトリル）で０．２ｍｇ／ｍＬまで希釈した。それから、ペイロード−リンカー溶液をｍＡｂと混合し、サンプル中の最終薬物濃度およびｍＡｂ濃度は、それぞれ、０．１ｍｇ／ｍＬおよび１ｍｇ／ｍＬであった。ＬＡ、ＬＢ、およびＳＢは、ＨＰＬＣにおいて２つのピークを示した（Ｓｕｐｅｌｃｏ  ＨＩＳＥＰ、４．６＊２５０ｍｍ、５μｍ、ＣＪ−００００５１０５）。サンプル中のｍＡｂ濃度が１ｍｇ／ｍＬである場合、３．３分に示すピークはなかった。ｍＡｂ濃度が３ｍｇ／ｍＬまで増加する場合、３．３分において観察される対応するピークがあり、これはｍＡｂ保持時間が３．３分でることを示した。
【０２４４】
ＡＤＣサンプルをＨＰＬＣに付し、遊離ペイロード−リンカーレベルを決定した。ＡＤＣ製品は３．３分にピークを有し、他観察されたピークはないが、これは該ＡＤＣ中の遊離ペイロード−リンカー濃度が検出限界未満であったことを示した。検出限界を決定するために、ＬＡ、ＬＢ、およびＳＢの異なる濃度を調製し、ＨＰＬＣに付し、結果は、ＬＡ、ＬＢ、およびＳＢの検出限界が全て０．００６μｇ／ｍＬ未満であることを示した。
【０２４５】
【表１１】
2019524687.tif 000047
【０２４６】
【表１２】
2019524687.tif 000048
【０２４７】
生物学データ手順
シュードタイプウイルスアッセイ（ＰＳＶ）を使用して、様々なＨＩＶ侵入阻害剤の作用強度を評価した。複製欠損ウイルスを、ＮＬ４−３プロウイルス［エンベロープオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）における変異およびｎｅｆ  ＯＲＦを置換するルシフェラーゼレポーター遺伝子を含む］を含むプラスミドおよび様々なＨＩＶ  ｇｐ１６０エンベロープクローンのＯＲＦを含むＣＭＶ−プロモーター発現プラスミドの同時トランスフェクションにより製造した。収穫されたウイルスを、小さなアリコートに−８０℃で貯蔵し、ウイルス価を測定し抗ウイルスアッセイのための強いシグナルを得た。
【０２４８】
安定に形質転換してヒトＣＤ４を発現するＵ３７３細胞、ＨＩＶ侵入のための一次受容体および感染のための標的細胞としてＨＩＶ侵入を必要とするコレセプターであるＣＸＣＲ４あるいはヒトＣＣＲ５のいずれかを用いて、ＰＳＶアッセイを行った。対象の分子（これに限定されないが、ＨＩＶの小分子阻害剤、ＨＩＶの中和抗体、ＨＩＶの抗体薬物複合体阻害剤、ＨＩＶのペプチド阻害剤、および様々なコントロールが挙げられる）を組織培養培地中に希釈し、段階希釈により希釈して投与範囲の濃度を作製した。この投与範囲をＵ３７３細胞に適用し、前以て製造されたシュードタイプウイルスを添加した。培養３日後に得たルシフェラーゼシグナル量を使用してシュードタイプウイルス感染レベルを反映した。ＩＣ５０、または阻害剤を含まない感染からＰＳＶ感染を５０％低減するのに要する阻害剤の濃度を算出した。細胞傷害性を測定するアッセイを同時に行い、阻害剤に対して観察された抗ウイルス活性が標的細胞生存率の低下と見分けられることを確認した。
【０２４９】
表１３に、下表１４〜１６に記載されている結果および各構造を詳細に示す図に参照される材料（すなわち、薬物、リンカー、抗体、抗体薬物複合体（「ＡＤＣ」））を示す。
【０２５０】
【表１３】
2019524687.tif 000049
【０２５１】
表１４に、薬物および薬物−リンカー材料の作用強度値を示す。
【０２５２】
【表１４】
2019524687.tif 000050
【０２５３】
表１５に、薬物、薬物−リンカー材料およびＡＤＣ（モノペイロード）の様々な値を示す。
【０２５４】
【表１５】
2019524687.tif 000051
【０２５５】
表１６に、薬物、薬物−リンカー材料およびＡＤＣ（二重ペイロード）の様々な値を示す。
【０２５６】
【表１６】
2019524687.tif 000052
【０２５７】
本発明は有利であり、当技術分野に貢献する。ＡＤＣ技術により、この双方が相補的ウイルスカバレッジプロファイルを有すると考えられる、ｂＮＡｂおよびエンベロープ標的小分子を繋ぐことにより、広いウイルスカバレッジを達成することができる。ｂＮＡｂ（好ましくは半減期延長変異を有する）の薬物動態特性を有利に利用することができる。理論に束縛されるものではないが、単一のｂＮＡｂを用いたＨＩＶ治療は、耐性発現に対する効果を有すると考えられる。ＡＤＣは、エスケープ変異体の選択を妨げ、耐性プロファイルを向上し得るウイルスエンベロープを全標的とする複数の抗ウイルス作用機序（ＭｏＡ）を有することができる。ｂＮＡｂに繋がっている小分子ＡＲＶは、ウイルス以外の他の細胞／組織による最小限の望ましくない取込みを有してもよく、これは、その安全性プロファイル、耐容性、および効果的投与量の低減を改善する能力を有する。
【０２５８】
要約すれば、本発明は、抗体薬物複合体が二重特異性分子として機能するという極めて有利である。より詳細には、リンカーにより連結された抗体および薬物は、２つの別々で独立した作用機序を使用して、ＨＩＶエンベロープを標的とする。したがって、本発明は他の抗体薬物複合体と比較して独自のものであり、ＨＩＶの治療、予防または治癒に有用である。
【０２５９】
【表１７】
2019524687.tif 000053
【０２６０】
配列番号１
ＡＶＧＩＧＡＬＦＬＧＦＬＧＡＡＧＳＴＭＧＡＡＳＭＴＬＴＶＱＡＲＱＬＬＳＧＩＶＱＱＱＮＮＬＬＲＡＩＥＡＱＱＨＬＬＱＬＴＶＷ
ＧＩＫＱＬＱＡＲＩＬＡＶＥＲＹＬＫＤＱＱＬＬＧＩＷＧＣＳＧＫＬＩＣＴＴＡＶＰＷＮＡＳＷＳＮＫＳＬＥＱＩＷＮＨＴＴＷＭＥＷ
ＤＲＥＩＮＮＹＴＳＬＩＨＳＬＩＥＥＳＱＮＱＱＥＫＮＥＱＥＬＬＥＬＤＫＷＡＳＬＷＮＷＦＮＩＴＮＷＬＷＹＩＫＬＦＩＭＩＶＧＧ
ＬＶＧＬＲＩＶＦＡＶＬＳＩＶＮＲＶＲＱＧＹＳＰＬＳＦＱＴＨＬＰＴＰＲＧＰＤＲＰＥＧＩＥＥＥＧＧＥＲＤＲＤＲＳＩＲＬＶＮＧ
ＳＬＡＬＩＷＤＤＬＲＳＬＣＬＦＳＹＨＲＬＲＤＬＬＬＩＶＴＲＩＶＥＬＬＧＲＲＧＷＥＡＬＫＹＷＷＮＬＬＱＹＷＳＱＥＬＫＮＳＡ
ＶＳＬＬＮＡＴＡＩＡＶＡＥＧＴＤＲＶＩＥＶＶＱＧＡＣＲＡＩＲＨＩＰＲＲＩＲＱＧＬＥＲＩＬＬ
配列番号２
Ａｃ−ＹＴＳＬＩＨＳＬＩＥＥＳＱＮＱＱＥＫＮＥＱＥＬＬＥＬＤＫＷＡＳＬＷＮＷＦ−ＮＨ２
配列番号３
ＤＣＴＬＮＷ
配列番号４
ＬＫＰＲＧＧＡＶＮＹＡＲＰＬＱＧ
配列番号５
ＧＫＮＣＤＹＮＷＤＦＥＨ
配列番号６
ＲＴＳＱＹＧＳＬＡ
配列番号７
ＳＧＳＴＲＡＡ
配列番号８
ＱＱＹＥＦ
配列番号９
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＱＭＫＫＰＧＥＳＭＲＩＳＣＲＡＳＧＹＥＦＩＤＣＴＬＮＷＩＲＬＡＰＧＫＲＰＥＷＭＧＷＬＫＰＲＧＧＡ  ＶＮＹＡＲＰＬＱＧＲＶＴＭＴＲＤＶＹＳＤＴＡＦＬＥＬＲＳＬＴＶＤＤＴＡＶＹＦＣＴＲＧＫＮＣＤＹＮＷＤＦＥＨＷＧＲＧＴＰＶＩＶＳ
配列番号１０
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＴＡＩＩＳＣＲＴＳＱＹＧＳＬＡＷＹＱＱＲＰＧＱＡＰＲＬＶＩＹＳＧＳＴＲＡＡＧＩＰＤＲＦＳＧＳＲＷＧＰＤＹＮＬＴＩＳＮＬＥＳＧＤＦＧＶＹＹＣＱＱＹＥＦＦＧＱＧＴＫＶＱＶＤＩＫＲＴ
配列番号１１
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＱＭＫＫＰＧＥＳＭＲＩＳＣＲＡＳＧＹＥＦＩＤＣＴＬＮＷＩＲＬＡＰＧＫＲＰＥＷＭＧＷＬＫＰＲＧＧＡＶＮＹＡＲＰＬＱＧＲＶＴＭＴＲＤＶＹＳＤＴＡＦＬＥＬＲＳＬＴＶＤＤＴＡＶＹＦＣＴＲＧＫＮＣＤＹＮＷＤＦＥＨＷＧＲＧＴＰＶＩＶＳＳＰＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１２
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＱＭＫＫＰＧＥＳＭＲＩＳＣＲＡＳＧＹＥＦＩＤＣＴＬＮＷＩＲＬＡＰ
ＧＫＲＰＥＷＭＧＷＬＫＰＲＧＧＡＶＮＹＡＲＰＬＱＧＲＶＴＭＴＲＤＶＹＳＤＴＡＦＬＥＬＲＳＬＴＶＤＤＴＡＶＹＦＣＴＲＧＫＮＣＤＹＮＷＤＦＥＨＷＧＲＧＴＰＶＩＶＳＳＰＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＳＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１３
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＴＡＩＩＳＣＲＴＳＱＹＧＳＬＡＷＹＱＱＲＰＧＱＡＰＲＬＶＩＹＳＧＳＴＲＡＡＧＩＰＤＲＦ
ＳＧＳＲＷＧＰＤＹＮＬＴＩＳＮＬＥＳＧＤＦＧＶＹＹＣＱＱＹＥＦＦＧＱＧＴＫＶＱＶＤＩＫＲ
配列番号１４
ＡＨＩＬＦ
配列番号１５
ＷＩＫＰＱＹＧＡＶＮＦＧＧＧＦＲＤ
配列番号１６
ＤＲＳＹＧＤＳＳＷＡＬＤＡ
配列番号１７
ＱＴＳＱＧＶＧＳＤＬＨ
配列番号１８
ＨＴＳＳＶＥＤ
配列番号１９
ＱＶＬＱＦ
配列番号２０
ＲＡＨＬＶＱＳＧＴＡＭＫＫＰＧＡＳＶＲＶＳＣＱＴＳＧＹＴＦＴＡＨＩＬＦＷＦＲＱＡＰＧＲＧＬＥＷＶＧＷＩＫＰＱＹＧＡＶＮＦＧＧＧＦＲＤＲＶＴＬＴＲＤＶＹＲＥＩＡＹＭＤＩＲＧＬＫＰＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＳＹＧＤＳＳＷＡＬＤＡＷＧＱＧＴＴＶＶＶＳＡ
配列番号２１
ＹＩＨＶＴＱＳＰＳＳＬＳＶＳＩＧＤＲＶＴＩＮＣＱＴＳＱＧＶＧＳＤＬＨＷＹＱＨＫＰＧＲＡＰＫＬＬＩＨＨＴＳＳＶＥＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＦＨＴＳＦＮＬＴＩＳＤＬＱＡＤＤＩＡＴＹＹＣＱＶＬＱＦＦＧＲＧＳＲＬＨＩＫ
配列番号２２
ＲＡＨＬＶＱＳＧＴＡＭＫＫＰＧＡＳＶＲＶＳＣＱＴＳＧＹＴＦＴＡＨＩＬＦＷＦＲＱＡＰＧＲＧＬＥＷＶＧＷＩＫＰＱＹＧＡＶＮＦＧＧＧＦＲＤＲＶＴＬＴＲＤＶＹＲＥＩＡＹＭＤＩＲＧＬＫＰＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＳＹＧＤＳＳＷＡＬＤＡＷＧＱＧＴＴＶＶＶＳＡＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号２３
ＹＩＨＶＴＱＳＰＳＳＬＳＶＳＩＧＤＲＶＴＩＮＣＱＴＳＱＧＶＧＳＤＬＨＷＹＱＨＫＰＧＲＡＰＫＬＬＩＨＨＴＳＳＶＥＤＧＶＰＳ
ＲＦＳＧＳＧＦＨＴＳＦＮＬＴＩＳＤＬＱＡＤＤＩＡＴＹＹＣＱＶＬＱＦＦＧＲＧＳＲＬＨＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱ
ＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２４
ＲＡＨＬＶＱＳＧＴＡＭＫＫＰＧＡＳＶＲＶＳＣＱＴＳＧＹＴＦＴＡＨＩＬＦＷＦＲＱＡＰＧＲＧＬＥＷＶＧＷＩＫＰＱＹＧＡＶＮＦＧＧＧＦＲＤＲＶＴＬＴＲＤＶＹＲＥＩＡＹＭＤＩＲＧＬＫＰＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＳＹＧＤＳＳＷＡＬＤＡＷＧＱＧＴＴＶＶＶＳＡＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＳＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号２５
ＫＬＷＶＴＶＹＹＧＶＰＶＷＫＥＡＴＴＴＬＦＣＡＳＤＡＫＡＹＤＴＥＶＨＮＶＷＡＴＨＡＣＶＰＴＤＰＮＰＱＥＶＶＬＶＮＶＴＥＮ
ＦＮＭＷＫＮＤＭＶＥＱＭＨＥＤＩＩＳＬＷＤＱＳＬＫＰＣＶＫＬＴＰＬＣＶＳＬＫＣＴＤＬＫＮＤＴＮＴＮＳＳＳＧＲＭＩＭＥＫＧ
ＥＩＫＮＣＳＦＮＩＳＴＳＩＲＧＫＶＱＫＥＹＡＦＦＹＫＬＤＩＩＰＩＤＮＤＴＴＳＹＫＬＴＳＣＮＴＳＶＩＴＱＡＣＰＫＶＳＦＥＰ
ＩＰＩＨＹＣＡＰＡＧＦＡＩＬＫＣＮＮＫＴＦＮＧＴＧＰＣＴＮＶＳＴＶＱＣＴＨＧＩＲＰＶＶＳＴＱＬＬＬＮＧＳＬＡＥＥＥＶＶＩ
ＲＳＶＮＦＴＤＮＡＫＴＩＩＶＱＬＮＴＳＶＥＩＮＣＴＲＰＮＮＮＴＲＫＲＩＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫＩＧＮＭＲＱＡＨＣＮ
ＩＳＲＡＫＷＮＮＴＬＫＱＩＡＳＫＬＲＥＱＦＧＮＮＫＴＩＩＦＫＱＳＳＧＧＤＰＥＩＶＴＨＳＦＮＣＧＧＥＦＦＹＣＮＳＴＱＬＦＮ
ＳＴＷＦＮＳＴＷＳＴＥＧＳＮＮＴＥＧＳＤＴＩＴＬＰＣＲＩＫＱＩＩＮＭＷＱＫＶＧＫＡＭＹＡＰＰＩＳＧＱＩＲＣＳＳＮＩＴＧＬ
ＬＬＴＲＤＧＧＮＳＮＮＥＳＥＩＦＲＰＧＧＧＤＭＲＤＮＷＲＳＥＬＹＫＹＫＶＶＫＩＥＰＬＧＶＡＰＴＫＡＫＲＲＶＶＱＲＥＫＲ
配列番号２６
ＱＶＲＬＳＱＳＧＧＱＭＫＫＰＧＤＳＭＲＩＳＣＲＡＳＧＹＥＦＩＮＣＰＩＮＷＩＲＬＡＰＧＫＲＰＥＷＭＧＷＭＫＰＲＨＧＡＶＳＹＡＲＱＬＱＧＲＶＴＭＴＲＤＭＹＳＥＴＡＦＬＥＬＲＳＬＴＳＤＤＴＡＶＹＦＣＴＲＧＫＹＣＴＡＲＤＹＹＮＷＤＦＥＨＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳ
配列番号２７
ＳＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＴＡＩＩＳＣＲＴＳＱＹＧＳＬＡＷＹＱＱＲＰＧＱＡＰＲＬＶＩＹＳＧＳＴＲＡＡＧＩＰＤＲＦＳＧＳＲＷＧＰＤＹＮＬＴ  ＩＳＮＬＥＳＧＤＦＧＶＹＹＣＱＱＹＥＦＦＧＱＧＴＫＶＱＶＤＩＫ
【図１】
2019524687.tif 000070
【図２】
2019524687.tif 000071
【図３Ａ】
2019524687.tif 000072
【図３Ｂ】
2019524687.tif 000073
【図４Ａ】
2019524687.tif 000074
【図４Ｂ】
2019524687.tif 000075
【図５Ａ】
2019524687.tif 000076
【図５Ｂ】
2019524687.tif 000077
【図６】
2019524687.tif 000078
【図７】
2019524687.tif 000079
【図８】
2019524687.tif 000080
【図９】
2019524687.tif 000081
【図１０】
2019524687.tif 000082
【配列表】
2019524687000001.app
【国際調査報告】
2019524687.tif 000083
2019524687.tif 000084
2019524687.tif 000085