(57)【要約】  本開示は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置のための、抗ＣＤ１９抗体およびＢＣＬ−２阻害剤の医薬品の組み合わせについて記載する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）を含むＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）を含むＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）を含むＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）を含むＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）を含むＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）を含むＬＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ１９に特異的な抗体と、ベネトクラクスとを含む組み合わせにおいて、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置に使用されることを特徴とする組み合わせ。
【請求項２】
請求項１に記載の組み合わせにおいて、前記抗体は、ＡＤＣＣ活性を有することを特徴とする組み合わせ。
【請求項３】
請求項１または２に記載の組み合わせにおいて、前記抗体は、配列
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を含む可変重鎖および配列
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の可変軽鎖を含むことを特徴とする組み合わせ。
【請求項４】
請求項１乃至３の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、前記抗体は、配列
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を含む重鎖定常ドメインを含むことを特徴とする組み合わせ。
【請求項５】
請求項１乃至４の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、前記抗体は、配列
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を含む軽鎖定常ドメインを含むことを特徴とする組み合わせ。
【請求項６】
請求項１乃至５の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、ＣＤ１９に特異的な前記抗体およびベネトクラクスは、別々に投与されることを特徴とする組み合わせ。
【請求項７】
請求項１乃至６の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、ベネトクラクスは、ＣＤ１９に特異的な前記抗体の投与前に投与されることを特徴とする組み合わせ。
【請求項８】
請求項１乃至７の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、ＣＤ１９に特異的な前記抗体およびベネトクラクスは、同時に投与されることを特徴とする組み合わせ。
【請求項９】
請求項１乃至８の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、ＣＤ１９に特異的な前記抗体およびベネトクラクスは、患者において両方の薬剤が同時に有効であるときに投与されることを特徴とする組み合わせ。
【請求項１０】
請求項１乃至９の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、慢性リンパ球性白血病の前記処置に使用されることを特徴とする組み合わせ。
【請求項１１】
請求項１乃至１０の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、急性リンパ芽球性白血病の前記処置に使用されることを特徴とする組み合わせ。
【請求項１２】
請求項１乃至１１の何れか１項に記載の組み合わせにおいて、非ホジキンリンパ腫の前記処置に使用され、前記非ホジキンリンパ腫は、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織、辺縁帯、びまん性大細胞型Ｂ細胞、バーキット細胞およびマントル細胞からなる群から選択されることを特徴とする組み合わせ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置のための、抗ＣＤ１９抗体およびＢＣＬ−２阻害剤の医薬品の組み合わせに関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｂ細胞は、液性免疫反応において大きい役割を果たすリンパ球である。Ｂ細胞は、ほとんどの哺乳動物の骨髄で産生され、循環血中のリンパ球プールの５〜１５％に相当する。Ｂ細胞の主な機能は、様々な抗原に対する抗体を作ることであり、Ｂ細胞は適応免疫系の本質的な成分である。
【０００３】
免疫系の調節におけるその決定的な役割のため、Ｂ細胞の調節異常は、リンパ腫および白血病などの種々の障害に関連する。これらには、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）および急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）が含まれる。
【０００４】
ＮＨＬは、リンパ球から生じる不均一な悪性腫瘍である。米国（Ｕ．Ｓ．）における発生率は年間６５，０００人、死亡率は約２０，０００人と推定される（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，２００６；およびＳＥＥＲ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  Ｒｅｖｉｅｗ）。本疾患はすべての年齢で起こる可能性があり、通常の発症は４０歳を超える成人から始まり、発生率は年齢と共に増加する。ＮＨＬは、リンパ節、血液、骨髄および脾臓に蓄積するリンパ球のクローン増殖を特徴とするが、主要な臓器の何れも関係し得る。病理学者および臨床医により使用される現在の分類体系は、ＮＨＬを前駆体および成熟Ｂ細胞新生物または成熟Ｔ細胞新生物にまとめた、腫瘍の世界保健機関（ＷＨＯ）分類（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｕｒｓ）である。ＰＤＱは、現在、臨床試験への組み入れのためＮＨＬを低悪性度（ｉｎｄｏｌｅｎｔ）または高悪性度（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ）に分類している。低悪性度ＮＨＬ群は、主に濾胞性亜型、小リンパ球性リンパ腫、ＭＡＬＴ（粘膜関連リンパ組織）および辺縁帯からなり、低悪性度は、新たに診断されたＢ細胞ＮＨＬ患者の約５０％を包含する。高悪性度ＮＨＬは、主にびまん性大細胞型Ｂ細胞（ＤＬＢＬ、ＤＬＢＣＬまたはＤＬＣＬ）（新たに診断された全患者の４０％がびまん性大細胞を有する）、バーキット細胞およびマントル細胞と組織学的に診断された患者を含む。ＮＨＬの臨床経過はばらつきが大きい。臨床経過の主要な決定因子は、組織学的サブタイプである。大部分の低悪性度型のＮＨＬは、不治の疾患と考えられる。患者は、最初に化学療法または抗体療法の何れかに反応するが、大部分は再発する。これまでの研究からは、早期介入による生存期間の改善が立証されていない。無症候性患者では、患者が症状を示すようになるか、または疾患の進行速度が加速していると思われるまで「経過観察を行う（ｗａｔｃｈ  ａｎｄ  ｗａｉｔ）」ことが容認される。本疾患は、時間経過と共により高悪性度の組織型に変化することがある。生存期間中央値は８〜１０年であり、低悪性度患者は、多くの場合、その疾患の処置段階において３つ以上の処置を受ける。症状を示す低悪性度ＮＨＬ患者の初期処置は、歴史的に併用化学療法であった。最も多く使われている薬として、シクロホスファミド、ビンクリスチンおよびプレドニゾン（ＣＶＰ）；またはシクロホスファミド、アドリアマイシン、ビンクリスチン、プレドニゾン（ＣＨＯＰ）が挙げられる。患者の約７０％〜８０％は、それらの初期化学療法に反応し、寛解の期間は２〜３年程度持続する。最終的に患者の大半が再発する。抗ＣＤ２０抗体、リツキシマブの発見および臨床使用により、反応率および生存率が著しく改善されている。大部分の患者の現在の標準治療は、リツキシマブ＋ＣＨＯＰ（Ｒ−ＣＨＯＰ）またはリツキシマブ＋ＣＶＰ（Ｒ−ＣＶＰ）である。インターフェロンがアルキル化剤と併用してＮＨＬの初期処置として承認されているが、米国では使用が限定される。リツキシマブ療法は、いくつかのタイプのＮＨＬにおいて有効であることが示されており、現在低悪性度（濾胞性リンパ腫）および高悪性度ＮＨＬ（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）の両方の第１選択治療として承認されている。しかしながら、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体（ｍＡｂ）には、一次耐性（再発した低悪性度患者で５０％の奏効）、獲得耐性（再処置時の奏効率５０％）、稀な完全奏効（再発した母集団で完全奏効率２％）および再発パターンの継続を含め、かなりの限界がある。最後に、多くのＢ細胞はＣＤ２０を発現せず、したがって多くのＢ細胞障害は抗ＣＤ２０抗体療法を用いて処置できない。
【０００５】
ＮＨＬに加えて、Ｂ細胞の調節異常に起因するいくつかのタイプの白血病が存在する。慢性リンパ球性白血病（「慢性リンパ性白血病」または「ＣＬＬ」とも呼ばれる）は、Ｂリンパ球の異常蓄積により引き起こされる成人白血病の一種である。ＣＬＬでは、悪性リンパ球は正常かつ成熟しているように見えることがあるが、効率的に感染に対処することができない。ＣＬＬは、成人における白血病の最も一般的な形態である。男性の方が女性よりもＣＬＬを２倍発症しやすい。しかしながら、重要な危険因子は年齢である。新規症例の７５％超が５０歳を超える患者で診断される。毎年１０，０００例超が診断され、死亡数は年間ほぼ５，０００例である（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，２００６；およびＳＥＥＲ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  Ｒｅｖｉｅｗ）。ＣＬＬは不治の疾患であるが、ほとんどの場合にゆっくりと進行する。ＣＬＬの多くの人は、何年間も通常の活動的な生活を送る。初期ＣＬＬは、一般に、その発症が遅いために処置されない。早期介入により生存時間または生活の質が改善されないと考えられるからである。代わりに、その状態が時間経過と共にモニターされる。初期のＣＬＬ処置は、正確な診断および疾患の進行に応じて様々である。ＣＬＬ療法に使用される薬は数十存在する。併用化学療法レジメン、たとえばＦＣＲ（フルダラビン、シクロホスファミドおよびリツキシマブ）およびＢＲ（イブルチニブおよびリツキシマブ）は、新たに診断されたＣＬＬおよび再発したＣＬＬの両方に効果的である。同種異系骨髄（幹細胞）移植は、そのリスクのためにＣＬＬの第１選択治療として使用されることが稀である。
【０００６】
もう１つのタイプの白血病は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）であり、急性リンパ性白血病とも呼ばれる。ＡＬＬは、骨髄における悪性の幼若白血球（リンパ芽球とも呼ばれる）の過剰産生および連続的増殖を特徴とする。「急性」は、循環血中のリンパ球（「芽球」）が未分化、未成熟状態であること、および疾患が急速に進行し、処置しないまま放置した場合、平均余命が数週間〜数カ月であることを指す。ＡＬＬは小児期に最も多く見られ、発生率のピークは４〜５歳である。１２〜１６歳の小児は、他の年齢の小児よりＡＬＬで死亡しやすい。現在、小児ＡＬＬの少なくとも８０％は治癒可能と考えられる。診断される症例は毎年４，０００例未満であり、死亡数は年間ほぼ１，５００である（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，２００６；およびＳＥＥＲ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  Ｒｅｖｉｅｗ）。
【０００７】
ヒトＣＤ１９分子は、以下に限定されるものではないが、プレＢ細胞、発生初期のＢ細胞｛すなわち、未成熟Ｂ細胞）、最終分化を経て形質細胞となる成熟Ｂ細胞および悪性Ｂ細胞など、ヒトＢ細胞の表面上に発現する構造的に異なる細胞表面受容体である。ＣＤ１９は、大部分のプレＢ急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、通常の急性リンパ性白血病および一部のヌル細胞型急性リンパ芽球性白血病に発現する（Ｎａｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３１：２４４−２５０（１９８３），Ｌｏｋｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，７０：１３１６−１３２４（１９８７），Ｕｃｋｕｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，７１：１３−２９（１９８８），Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，１９８４．Ｂｌｏｏｄ，６３：１４２４−１４３３（１９８４），Ｓｃｈｅｕｅｒｍａｎｎ，Ｌｅｕｋ．Ｌｙｍｐｈｏｍａ，１８：３８５−３９７（１９９５））。形質細胞上のＣＤ１９の発現から、ＣＤ１９が多発性骨髄腫、形質細胞腫、ワルデンシュトレーム腫瘍などの分化したＢ細胞腫瘍上に発現し得ることがさらに示唆される（Ｇｒｏｓｓｂａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ，１０２：５０９−１５（１９９８）；Ｔｒｅｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ，３０：２４８−５２（２００３））。
【０００８】
したがって、ＣＤ１９抗原は、非ホジキンリンパ腫（本明細書に記載の各サブタイプを含む）、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置における免疫療法の標的となる。
【０００９】
いくつかのＣＤ１９療法が示されてきた。ＣＤ３−ζおよび４−ＢＢ共刺激ドメインの両方を含む抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞が進行ＣＬＬの患者に投与された。その全体を援用するＫａｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  Ｈａｖｅ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ａｎｄ  Ｃａｎ  Ｅｓｔａｂｌｉｓｈ  Ｍｅｍｏｒｙ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ．３，ｎｏ．９５（１０  Ａｕｇｕｓｔ  ２０１１）。その全体を援用するＳａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｐｒｏｍｉｓｅ  ａｎｄ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｐｉｔｆａｌｌｓ  ｏｆ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，ｖｏｌ．２１，ｎｏ．２，２  Ａｐｒｉｌ  ２００９にも、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が記載されている。しかしながら、Ｋａｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．もＳａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．も、本明細書に例示されるようなＢＣＬ−２阻害剤と併用した、ＣＤ１９に特異的な抗体を記載していない。
【００１０】
非特異的Ｂ細胞リンパ腫におけるＣＤ１９抗体の使用は、何れもその全体を援用する国際公開第２００７０７６９５０号パンフレット（米国特許第２００７１５４４７３号明細書）において、考えられる併用相手の長いリスト内でイブルチニブの粗略な言及と共に考察されているが、本明細書に例示される抗体を教示しておらず、また本明細書に例示されるような非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置における組み合わせの相乗効果も示唆していない。
【００１１】
ＣＬＬ、ＮＨＬおよびＡＬＬにおけるＣＤ１９抗体の使用は、その全体を援用するＳｃｈｅｕｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＣＤ１９  Ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｎ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｌｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｖｏｌ．１８，３８５−３９７（１９９５）に記載されているが、本明細書に例示される組み合わせを示唆していない。
【００１２】
ＣＤ１９に特異的な別の抗体は、すべてその全体を援用する国際公開第２００５０１２４９３号パンフレット（米国特許第７１０９３０４号明細書）、国際公開第２０１００５３７１６号パンフレット（米国特許出願公開第１２／２６６，９９９号明細書）（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；国際公開第２００７００２２２３号パンフレット（米国特許第８０９７７０３号明細書）（Ｍｅｄａｒｅｘ）；国際公開第２００８０２２１５２号パンフレット（米国特許出願公開第１２／３７７，２５１号明細書）および国際公開第２００８１５０４９４号パンフレット（Ｘｅｎｃｏｒ）、国際公開第２００８０３１０５６号パンフレット（米国特許出願公開第１１／８５２，１０６号明細書）（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；国際公開第２００７０７６９５０号パンフレット（米国特許出願公開第１１／６４８，５０５号明細書）（Ｍｅｒｃｋ  Ｐａｔｅｎｔ  ＧｍｂＨ）；国際公開第２００９／０５２４３１号パンフレット（米国特許出願公開第１２／２５３，８９５号明細書）（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）；ならびに国際公開第２０１００９５０３１号パンフレット（米国特許出願公開第１２／７１０，４４２号明細書）（Ｇｌｅｎｍａｒｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、国際公開第２０１２０１０５６２号パンフレットおよび国際公開第２０１２０１０５６１号パンフレット（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、国際公開第２０１１１４７８３４号パンフレット（Ｒｏｃｈｅ  Ｇｌｙｃａｒｔ）ならびに国際公開第２０１２／１５６４５５号パンフレット（Ｓａｎｏｆｉ）に記載されている。
【００１３】
ＣＤ１９に特異的な抗体および他の薬の組み合わせは、その全体を援用する国際公開第２０１０１５１３４１号パンフレット（米国特許出願公開第１３／３７７，５１４号明細書）（Ｔｈｅ  Ｆｅｉｎｓｔｅｉｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）；米国特許第５６８６０７２号明細書（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ）ならびに国際公開第２００２０２２２１２号パンフレット（国際出願ＰＣＴ／米国特許出願公開第０１／２９０２６号明細書）（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、国際公開第２０１３／０２４０９７号パンフレット（米国特許出願公開第１４／１２６，９２８号明細書）（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ  ＡＧ）および国際公開第２０１３／０２４０９５号パンフレット（米国特許出願公開第１４／１２７，２１７号明細書）（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ  ＡＧ）に記載されている。
【００１４】
いくつかのＢＣＬ−２阻害剤が市販されている。ＧＤＣ−０１９９、ＡＢＴ−１９９およびＲＧ７６０１とも呼ばれるＶＥＮＣＬＥＸＴＡ（商標）（ベネトクラクス）は、ＦＤＡに承認された試験により見出されたように、少なくとも１つの前治療を受けたことがある、１７ｐを有する慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）の患者の処置に適応されるＢＣＬ−２阻害剤である。ベネトクラクスは、すべてその全体が参照により援用される米国特許第８，５４６，３９９号明細書および同第９，１７４，９８２号明細書に記載されている。
【００１５】
抗癌剤の発見および開発における近年の進展にもかかわらず、ＣＤ１９発現腫瘍に関係する癌の多くの形態は依然として予後不良である。したがって、そうした形態の癌を処置するための改良された方法が求められている。
【発明の概要】
【００１６】
従来技術は、単独でも組み合わせでも、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置における、例示した抗体およびベネトクラクスの組み合わせの相乗効果を示唆していない。
【００１７】
一態様では、本開示は、ＣＤ１９に特異的な抗体およびＢＣＬ−２阻害剤の相乗効果のある組み合わせに関する。こうした組み合わせは、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病などのＢ細胞悪性腫瘍の処置に有用である。
【００１８】
インビトロモデルは、ある化合物または化合物の組み合わせがヒトにおいてどのように挙動するかを示唆すると考えられる。
【００１９】
ＭＥＣ−１細胞（ＤＳＭＺ＃  ＡＣＣ４９７）は、慢性Ｂ細胞白血病細胞株である。このインビトロモデルのＭＥＣ−１細胞は、本組み合わせがヒトの慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の処置においてどのように作用するかを示唆する。
【００２０】
さらに、化合物がインビトロで組み合わされると、組み合わせが相加作用のみを有することが予想される。驚くべきことに、本発明者らは、ＣＤ１９に特異的な特定の抗体およびベネトクラクスの組み合わせが、抗体およびベネトクラクス単独と比較してインビトロで相乗効果レベルの特異的な細胞殺傷に関与することを見出した。具体的には、本発明者らは、ＭＯＲ００２０８およびベネトクラクスの組み合わせが、ＭＥＣ−１細胞において、抗体およびベネトクラクス単独と比較してインビトロで相乗効果レベルの特異的な細胞殺傷に関与することを見出した。
【００２１】
要約すると、例示した抗ＣＤ１９抗体およびベネトクラクスの組み合わせは、ＣＬＬに関係するモデルにおいて相乗的に挙動した。ＣＬＬはＢ細胞関連障害であり、かつＣＤ１９がＢ細胞上に高度に発現するため、例示した組み合わせは、同じ作用機序を有すると考えられ、他のＢ細胞関連障害、たとえばＡＬＬおよびＮＨＬの処置でも相乗的に挙動するはずである。
【００２２】
したがって、例示したＣＤ１９に特異的な抗体およびベネトクラクスの組み合わせは、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病のヒトの処置において効果的であるはずである。例示したＣＤ１９に特異的な抗体およびベネトクラクスの組み合わせの予想される有効性は、臨床試験において確認されるであろう。
【００２３】
ベネトクラクスおよび他のＢＣＬ−２阻害剤は、抗アポトーシスＢ細胞リンパ腫−２（Ｂｃｌ−２）タンパク質を阻害して、細胞のプログラム細胞死を引き起こすことにより作用するため、ベネトクラクスおよび他のＢＣＬ−２阻害剤の作用機序は類似していることから、例示した抗ＣＤ１９抗体およびベネトクラクス以外のＢＣＬ−２阻害剤の組み合わせで非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病を有するヒトを処置したときも相乗作用が見られるはずであると考えられる。
【００２４】
例示した抗ＣＤ１９抗体および他の抗ＣＤ１９抗体はＣＤ１９に結合するため、任意の抗ＣＤ１９抗体およびＢＣＬ−２阻害剤、たとえばベネトクラクスの組み合わせで非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病を有するヒトを処置するときも相乗作用が見られるはずであると考えられる。
【００２５】
本開示の態様は、ＣＤ１９に特異的な抗体が配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域ならびにベネトクラクスを含む組み合わせを含む。実施形態では、この組み合わせは、相乗効果を有する。好ましい態様では、この組み合わせは、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置に使用される。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびベネトクラクスの組み合わせの細胞毒性を示す。ＭＥＣ−１細胞は、ベネトクラクスで２４時間にわたり前処理した。
【図２】図２は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびベネトクラクスの組み合わせの細胞毒性を示す。ＭＥＣ−１細胞は、ベネトクラクスで２４時間にわたり前処理した。
【図３】図３は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびベネトクラクスの組み合わせの細胞毒性を示す。ＭＥＣ−１細胞は、ベネトクラクスで２４時間にわたり前処理した。
【図４】図４は、ＭＯＲ００２０８の可変ドメインのアミノ酸配列を示す。
【図５】図５は、ＭＯＲ００２０８のＦｃ領域のアミノ酸配列を示す。
【図６】図６は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびベネトクラクスのＣｈｏｕ−Ｔａｌａｙの併用係数（Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｉｎｄｅｘ）曲線を示す。
【図７】図７は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびベネトクラクスのＣｈｏｕ−Ｔａｌａｙの併用係数曲線を示す。
【図８】図８は、ＭＥＣ−１細胞株におけるＭＯＲ００２０８およびベネトクラクスのＣｈｏｕ−Ｔａｌａｙの併用係数曲線を示す。
【図９】図９は、ＡＢＴ−１９９と併用したＭＯＲ００２０８が、ｓ．ｃ．Ｔｏｌｅｄｏ  ＳＣＩＤマウスモデルにおいて、何れかの単独療法と比較して腫瘍成長の優れた抑制を示したことを示す。群平均値±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を図示する。アスタリスクは、ＭＯＲ００２８単独処置またはそれぞれのＡＢＴ−１９９単独処置に対する組み合わせ処置の腫瘍倍加時間の統計的有意性を示す：＊ｐ値＜０．０５、＊＊ｐ値＜０．０１および＊＊＊＊ｐ値＜０．０００１。処置は、腫瘍注射から２３日後の腫瘍容積中央値２６６ｍｍ３（１２３〜４０６ｍｍ３）でランダム化時に開始した。ＭＯＲ００２０８（１１ｍｇ／ｋｇ）は、腹腔内注射（ｉ．ｐ．）により週２回投与した。ＡＢＴ−１９９（２０または４０ｍｇ／ｋｇ）は、毎日経口（ｐ．ｏ．）投与した。
【図１０】図１０は、ＡＢＴと併用したＭＯＲ００２０８が、ｓ．ｃ．Ｔｏｌｅｄｏ  ＳＣＩＤマウスモデルにおいて、何れかの単独療法と比較して腫瘍成長の優れた生存率中央値を示したことを示す。カプランマイヤー曲線は、ランダム化から人道的エンドポイント（腫瘍容積２０００ｍｍ３）までの生存率を図示する。処置は、腫瘍注射から２３日後の腫瘍容積中央値２６６ｍｍ３（１２３〜４０６ｍｍ３）でランダム化時に開始した。ＭＯＲ００２０８（１１ｍｇ／ｋｇ）は、腹腔内注射（ｉ．ｐ．）により週２回投与した。ＡＢＴ−１９９（２０または４０ｍｇ／ｋｇ）は、毎日経口（ｐ．ｏ．）投与した。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
「相乗作用」、「協力作用」または「相乗的」は、組み合わせの予想される相加作用を超えるものを意味する。インビトロ研究に関して、ある組み合わせの「相乗作用」、「協力作用」または「相乗的」作用は、本明細書ではＣｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．および／またはＷｅｂｂ  ｅｔ  ａｌ．の方法により決定される。その全体を援用するＴｉｎｇ−Ｃｈａｏ  Ｃｈｏｕ，Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ  ａｎｄ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｓｔｕｄｉｅｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｖ  ５８：６２１−６８１（２００６）を参照されたい。さらにその全体を援用するＣｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｓｓｕｅｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｅｎｄｐｏｉｎｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｍｏｄｅｌｓ，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ４６：２５５−２７８（１９９７）も参照されたい。さらにその全体を援用するＷｅｂｂ，Ｊ．Ｌ．（１９６３）Ｅｎｚｙｍｅ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋも参照されたい。
【００２８】
「抗体」という用語は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥなどの任意のアイソタイプを含むモノクローナル抗体を意味する。ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合により連結された２つの同一重鎖および２つの同一軽鎖からなる。重鎖および軽鎖は、それぞれ定常領域および可変領域を含む。各可変領域は、抗原のエピトープへの結合を主に担う「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）または「超可変領域」と呼ばれる３つのセグメントを含む。それらは、Ｎ末端から順に番号が付されＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と呼ばれる。ＣＤＲの外側の可変領域のより高度に保存された部分は、「フレームワーク領域」と呼ばれる。「抗体フラグメント」は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントまたはそれぞれＣＤＲおよびフレームワーク領域を含む少なくとも１つの可変重鎖または可変軽鎖を含む他のフラグメントを意味する。
【００２９】
ヒトのＢＣＬ２遺伝子によりコードされるＢｃｌ−２（Ｂ細胞リンパ腫２）は、（アポトーシス促進性）アポトーシスの誘導または（抗アポトーシス性）アポトーシスの阻害の何れかにより、細胞死（アポトーシス）を調節するレギュレータータンパク質のＢｃｌ−２ファミリーの最初のメンバーである。Ｂｃｌ−２は、ＮＣＢＩ遺伝子番号５９６により参照される。Ｂｃｌ−２は、特に重要な抗アポトーシスタンパク質と考えられており、したがってオンコジーンに分類される。Ｂｃｌ−２の名称は、Ｂｃｌ−２が、濾胞性リンパ腫の染色体１４および１８が関与する染色体転座において最初に記載された一連のタンパク質の２番目のメンバーであるため、Ｂ細胞リンパ腫２に由来する。完全なゲノムデータが利用可能な多くの哺乳動物において、オーソログ（マウスのＢｃｌ２など）が同定されている。
【００３０】
「ＢＣＬ−２阻害剤」は、抗アポトーシス性Ｂ細胞リンパ腫−２（Ｂｃｌ−２）タンパク質を阻害し、細胞のプログラム細胞死を引き起こすことにより機能する薬剤のクラスである。ＢＣＬ−２阻害剤は、ベネトクラクスを含む。ベネトクラクスは、ＡｂｂｖｉｅおよびＧｅｎｅｎｔｅｃｈ（商標名ＶＥＮＣＬＥＸＴＡ（商標）、ＧＤＣ−０１９９、ＡＢＴ−１９９およびＲＧ７６０１としても知られる）により販売されている。ベネトクラクスは、現在、ＦＤＡに承認された試験により見出されたように、少なくとも１つの前治療を受けたことがある、１７ｐ欠失を有する慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）の患者の処置用というラベルが貼付されている。ベネトクラクスの式は、４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチル−１−シクロヘキセン−１−イル］メチル｝−１−ピペラジニル）−Ｎ−（｛３−ニトロ−４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］フェニル｝スルホニル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）ベンズアミドであり、以下の構造を有する。
2019533682.tif 000003
【００３１】
「ベネトクラクス」、「ＡＢＴ」および「ＡＢＴ−１９９」は、本明細書において同義語として使用される。
【００３２】
他のＢＣＬ−２阻害剤として以下が挙げられる：
ゲナセンス（Ｇｅｎａｓｅｎｓｅ）：アンチセンスオリゴヌクレオチド薬剤ゲナセンス（Ｇ３１３９）は、Ｂｃｌ−２を標的とするようにＧｅｎｔａ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄにより開発された。アンチセンスＤＮＡ鎖またはＲＮＡ鎖は、非コードであり、コード鎖と相補的である（それぞれＲＮＡまたはタンパク質を産生するための鋳型である）。アンチセンス薬剤は、ｍＲＮＡとハイブリダイズして不活性化し、タンパク質が形成されないようにするＲＮＡの短い配列である。ヒトリンパ腫細胞増殖（ｔ（１４；１８）転座を有する）は、Ｂｃｌ−２  ｍＲＮＡの開始コドン領域を標的とするアンチセンスＲＮＡにより阻害することができる。インビトロ研究から、Ｂｃｌ−２  ｍＲＮＡの最初の６コドンと相補的であるゲナセンスの同定に至った。これらは、リンパ腫の第Ｉ／ＩＩ相試験において好成績を示した。大きい第ＩＩＩ相試験が２００４年に開始された。２０１６年時点で、本薬剤は、承認されておらず、その開発企業は倒産した。
【００３３】
ＡＢＴ−７３７およびＡＢＴ−２６３：２０００年代半ばに、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓは、ＡＢＴ−７３７として知られるＢｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘＬおよびＢｃｌ−ｗの新規な阻害剤を開発した。この化合物は、これらのＢｃｌ−２ファミリータンパク質を標的とするが、Ａ１またはＭｃｌ−１を標的としないＢＨ３模倣小分子阻害剤（ＳＭＩ）のグループの一部である。ＡＢＴ−７３７は、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘＬおよびＢｃｌ−ｗに対するそのより高い親和性を考慮すると、これまでのＢＣＬ−２阻害剤より優れている。インビトロ研究から、Ｂ細胞悪性腫瘍を有する患者由来の初代細胞がＡＢＴ−７３７に感受性があることが示された。動物モデルでは、ＡＢＴ−７３７は、生存率を改善し、腫瘍退縮を引き起こし、高いパーセンテージのマウスを治癒する。患者の異種移植片を利用する前臨床試験では、ＡＢＴ−７３７は、リンパ腫および他の血液癌の処置に有効性を示した。その好ましくない薬理学的特性のため、ＡＢＴ−７３７は、臨床試験に適さない一方、その誘導体ＡＢＴ−２６３は、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）細胞株に対して類似の活性を有し、臨床試験に入っている。
【００３４】
「ＶＨ」は、抗体の免疫グロブリン重鎖の可変領域または抗体フラグメントを指す。「ＶＬ」は、抗体の免疫グロブリン軽鎖の可変領域または抗体フラグメントを指す。
【００３５】
「ＣＤ１９」という用語は、ＣＤ１９として知られるタンパク質を指し、以下の同義語：Ｂ４、Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４、ＣＶＩＤ３、分化抗原ＣＤ１９、ＭＧＣ１２８０２およびＴ細胞表面抗原Ｌｅｕ−１２を有する。
【００３６】
ヒトＣＤ１９は、下記のアミノ酸配列を有する。
2019533682.tif 000004
【００３７】
「ＭＯＲ００２０８」は抗ＣＤ１９抗体である。可変ドメインのアミノ酸配列は、図４に記載される。ＭＯＲ００２０８の重鎖および軽鎖のＦｃ領域のアミノ酸配列は、図５に示される。「ＭＯＲ００２０８」および「ＸｍＡｂ  ５５７４」は、図４および５に示される抗体を表す同義語として使用される。ＭＯＲ００２０８抗体は、その全体を援用する米国特許出願公開第１２／３７７，２５号明細書に記載される。
【００３８】
米国特許出願公開第１２／３７７，２５号明細書には、以下のような４Ｇ７  Ｈ１．５２  Ｈｙｂｒｉｄ  Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／４Ｇ７  Ｌ１．１５５と命名された抗体が記載される（後にＭＯＲ００２０８と命名される）。
＞４Ｇ７  Ｈ１．５２  Ｈｙｂｒｉｄ  Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ
2019533682.tif 000005
＞４Ｇ７  Ｌ１．１５５
2019533682.tif 000006
【００３９】
ＣＤ１９に特異的な別の抗体は、その全体を援用する米国特許第７，１０９，３０号明細書（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；その全体を援用する米国特許出願公開第１１／９１７，７５号明細書（Ｍｅｄａｒｅｘ）；その全体を援用する米国特許出願公開第１１／８５２，１０号明細書（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；その全体を援用する米国特許出願公開第１１／６４８，５０号明細書（Ｍｅｒｃｋ  Ｐａｔｅｎｔ  ＧｍｂＨ）；その全体を援用する米国特許第７，９６８，６８号明細書（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）；およびその全体を援用する米国特許出願公開第１２／７１０，４４号明細書（Ｇｌｅｎｍａｒｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）に記載される。
【００４０】
「Ｆｃ領域」は、抗体の定常領域を意味し、ヒトではＩｇＧ１、２、３、４サブクラスまたは他の定常領域であり得る。ヒトＦｃ領域の配列は、ＩＭＧＴ，Ｈｕｍａｎ  ＩＧＨ  Ｃ−ＲＥＧＩＯＮｓ，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＩＭＧＴｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ／Ｐｒｏｔｅｉｎｓ／ｐｒｏｔｅｉｎ／ｈｕｍａｎ／ＩＧＨ／ＩＧＨＣ／Ｈｕ＿ＩＧＨＣａｌｌｇｅｎｅｓ．ｈｔｍｌ（２０１１年５月１６日に検索）で入手可能である。
【００４１】
「ＲｅｆｍＡｂ３３」は、アミノ酸配列が以下の通りである抗体である。
Ｆｃ領域を含む重鎖：
2019533682.tif 000007
Ｆｃ領域を含む軽鎖：
2019533682.tif 000008
【００４２】
ＲｅｆｍＡｂ３３はＲＳＶに特異的であり、ＭＯＲ００２０８と同じＦｃ領域を共有するため、アイソタイプコントロールとして使用される。
【００４３】
「組み合わせ」は、品目、たとえば抗体およびベネトクラクスなどの化合物の２つ以上を意味する。
【００４４】
本開示は、記載された組み合わせを含む組み合わせ、医薬品および医薬組成物にさらに関する。本発明の組み合わせの２つの成分、たとえばＣＤ１９に特異的な抗体およびベネトクラクスは、物理的にまたは時間的に一緒に、同時に、別々にまたは続けて投与され得る。
【００４５】
ベネトクラクスは、現在、経口摂取され、１日１回投与されるのが現状である。ＭＯＲ００２０８は、現在、静脈内投与され、週１回または２週間に１回投与されるのが現状である。
【００４６】
好ましくは、両方の薬剤の投与により、両方の薬剤が患者に同時に有効であり得る。たとえば、ＭＯＲ２０８が週１回投与され、ベネトクラクスが１日１回投与される場合、両方の薬剤の活性物質が同時に患者に存在する。一実施形態では、ベネトクラクスは、ＣＤ１９に特異的な抗体、たとえばＭＯＲ００２０８の投与前および／または別々に投与される。
【００４７】
同時にとは、２つの成分が、両方の成分（薬剤）が同時に患者に有効であるときに投与されることを意味する。「協力作用」は、両方の薬剤が同時に患者に有効であることを意味する。
【００４８】
一緒に投与するとは、同時に投与することを意味し得る。
【００４９】
組み合わせの成分は、異なる医薬組成物中で製剤化され得る。医薬組成物は、有効な作用物質、たとえばヒトの治療に使用するための抗体を含む。医薬組成物は、許容可能キャリアまたは賦形剤を含み得る。
【００５０】
「投与される」または「投与」は、以下に限定されるものではないが、たとえば、静脈内経路、筋肉内経路、皮内経路もしくは皮下経路または粘膜経路などの注射用形態による送達、たとえば吸入用の鼻スプレーもしくはエアロゾルとしての送達または摂取可能な溶液、カプセルもしくは錠剤としての送達を含む。
【００５１】
化合物または組み合わせの「治療有効量」は、既定の疾患または障害およびその合併症の臨床症状を治癒させるか、軽減するか、または部分的に阻止するのに十分な量を指す。特定の治療目的に効果的である量は、被検体の疾患または傷害の重症度ならびに体重および全身状態によって異なる。適切な投与量の決定は、通常の実験を用いて数値のマトリックスを構築し、マトリックス内の様々な点を試験することにより達成され得ることが理解されるであろう。これらは、すべて訓練を受けた医師または臨床科学者の通常の技術の範囲内である。
【００５２】
「交差競合」は、抗体または他の結合剤が標準的な競合結合アッセイにおいて他の抗体または結合剤のＣＤ１９への結合に干渉する能力を意味する。抗体または他の結合剤が別の抗体または結合分子のＣＤ１９への結合に干渉できる能力または程度と、したがってそれが本発明による交差競合とされ得るかどうかとは、標準的な競合結合アッセイを用いて決定することができる。１つの好適なアッセイは、表面プラズモン共鳴技術を用いて相互作用の程度を測定できるＢｉａｃｏｒｅ技術（たとえば、ＢＩＡｃｏｒｅ  ３０００装置（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）の使用による）を使用するものである。交差競合を測定するための別のアッセイは、ＥＬＩＳＡ系アプローチを使用する。抗体をその交差競合に基づき「エピトープビニング」するためのハイスループットプロセスは、国際公開第２００３／４８７３１号パンフレットに記載される。
【００５３】
「エピトープ」という用語は、抗体に特異的に結合できるまたは他の方法で分子と相互作用できる任意のタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は、一般に、アミノ酸または炭水化物もしくは糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面分子群からなり、特定の三次元構造特徴および特定の荷電特徴を有し得る。エピトープは、「リニア」または「コンフォメーショナル」であり得る。「リニアエピトープ」という用語は、タンパク質と相互作用分子（抗体など）との間の相互作用点のすべてがタンパク質の一次アミノ酸配列に沿って直線状に生じるエピトープを指す（連続的）。「コンフォメーショナルエピトープ」という用語は、不連続アミノ酸が三次元構造で集合したエピトープを指す。コンフォメーショナルエピトープでは、相互作用点は、タンパク質上の互いに離されたアミノ酸残基を横断して生じる。
【００５４】
「同じエピトープに結合する」は、ある抗体または他の結合剤が、ＣＤ１９および例示した抗体と同じエピトープに結合する能力を意味する。例示した抗体およびＣＤ１９に対する他の抗体のエピトープは、標準的なエピトープマッピング技術を用いて決定することができる。エピトープマッピング技術は、当該技術分野において周知であり、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６（Ｇｌｅｎｎ  Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．，１９９６）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙを含む。たとえば、リニアエピトープは、たとえば、タンパク質分子の一部に対応する大量のペプチドを固体支持体上に同時に合成し、ペプチドを依然として支持体に結合させたままペプチドを抗体と反応させることにより決定され得る。こうした技術は当該技術分野において公知であり、たとえば、米国特許第４，７０８，８７号明細書；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８：３９９８−４００２；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：７８−１８２；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，（１９８６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９−７１５に記載される。同様に、コンフォメーショナルエピトープも、たとえば、水素／重水素交換、Ｘ線結晶解析および二次元核磁気共鳴などにより、アミノ酸の空間構造を決定することによって容易に同定される。たとえば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｓｕｐｒａを参照されたい。タンパク質の抗原性領域も、たとえば、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐから入手可能なＯｍｉｇａ  ｖｅｒｓｉｏｎ  １．０ソフトウェアプログラムを用いて計算されたものなど、標準的な抗原性およびハイドロパシープロットを用いて同定することができる。このコンピュータープログラムは、抗原性プロファイルの決定にＨｏｐｐ／Ｗｏｏｄｓ  ｍｅｔｈｏｄ、Ｈｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ，（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８：３８２４−３８２８を、ハイドロパシープロットにＫｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ技術、Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ，（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２を利用する。
【００５５】
実施形態
本開示の態様は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置に使用される、ＣＤ１９に特異的な抗体およびＢＣＬ−２阻害剤を含む組み合わせである。実施形態において本組み合わせは相乗的である。
【００５６】
本明細書において、例示した抗ＣＤ１９抗体およびベネトクラクスの組み合わせは、ＣＬＬに関係するインビトロモデルにおいて相乗的に挙動した。ＣＬＬはＢ細胞関連障害であり、ＣＤ１９がＢ細胞上に高度に発現するため、例示した組み合わせは同じ作用機序を有するはずであり、他のＢ細胞関連障害、たとえばＡＬＬおよびＮＨＬの処置でも相乗的に挙動するはずである。したがって、例示したＣＤ１９に特異的な抗体およびベネトクラクスの組み合わせは、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病のヒトの処置において効果的であるはずである。例示したＣＤ１９に特異的な抗体およびベネトクラクスの組み合わせの予想される有効性は、臨床試験において確認されるであろう。
【００５７】
慢性Ｂ細胞白血病細胞株ＭＥＣ−１細胞（ＤＳＭＺ＃  ＡＣＣ４９７）を試験した。このインビトロモデルのＭＥＣ−１細胞は、本組み合わせがヒトの慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の処置においてどのように作用するかを示唆する。Ｃｈｏｕインデックスの値は、ＭＯＲ００２０８およびベネトクラクス単独と比較して、ＭＥＣ−１細胞の特異的殺傷においてＭＯＲ００２０８およびベネトクラクスの組み合わせの明らかな協力作用を示す。
【００５８】
要約すると、例示した抗ＣＤ１９抗体およびベネトクラクスの組み合わせは、ＣＬＬに関係するモデルにおいて相乗的に挙動する。
【００５９】
したがって、例示したＣＤ１９に特異的な抗体およびベネトクラクスの組み合わせは、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病のヒトの処置において効果的であるはずである。
【００６０】
ベネトクラクスおよび他のＢＣＬ−２阻害剤の作用機序は、類似しているため、例示した抗ＣＤ１９抗体およびベネトクラクス以外のＢＣＬ−２阻害剤の組み合わせで非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病を有するヒトを処置するときも相乗作用が見られるはずであると考えられる。
【００６１】
例示した抗ＣＤ１９抗体および他の抗ＣＤ１９抗体はＣＤ１９に結合するため、たとえば、すべてその全体を援用する米国特許出願公開第１２／３７７，２５号明細書（Ｘｅｎｃｏｒ）、国際公開第２００５０１２４９３号パンフレット、国際公開第２０１００５３７１６号パンフレット（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；国際公開第２００７００２２２３号パンフレット（Ｍｅｄａｒｅｘ）；国際公開第２００８０２２１５２号パンフレット（Ｘｅｎｃｏｒ）；国際公開第２００８０３１０５６号パンフレット（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；国際公開第２００７／０７６９５０号パンフレット（Ｍｅｒｃｋ  Ｐａｔｅｎｔ  ＧｍｂＨ）；国際公開第２００９／０５２４３１号パンフレット（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）；および国際公開第２０１００９５０３１号パンフレット（Ｇｌｅｎｍａｒｋ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）に記載される任意の抗ＣＤ１９抗体とＢ細胞リンパ腫−２（Ｂｃｌ−２）タンパク質阻害剤との組み合わせを用いて、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病を有するヒトを処置するときも相乗作用が見られるはずであると考えられる。
【００６２】
実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む抗体と交差競合する抗体を含む。
【００６３】
実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む。
【００６４】
実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む。
【００６５】
実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、細胞障害活性を有する。実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、ＡＤＣＣ誘導活性を有する定常領域を含む。実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、ＡＤＣＣを誘導する。
【００６６】
実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、ＡＤＣＣを誘導し、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む。
【００６７】
実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域と、ＡＤＣＣ誘導活性を有する定常領域とを含む。
【００６８】
実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列
2019533682.tif 000009
の可変重鎖および配列
2019533682.tif 000010
の可変軽鎖を含む。
【００６９】
ある種の実施形態では、前記抗体は、配列
2019533682.tif 000011
の重鎖定常ドメインを含む。
【００７０】
実施形態では、ＣＤ１９に特異的な抗体は、配列
2019533682.tif 000012
の軽鎖定常ドメインを含む。
【００７１】
実施形態では、ＢＣＬ−２阻害剤は、ベネトクラクスである。
【００７２】
実施形態では、組み合わせの成分、ＣＤ１９に特異的な抗体およびベネトクラクスは、別々に投与される。一実施形態では、ベネトクラクスは、ＣＤ１９に特異的な抗体の投与前に投与される。
【００７３】
実施形態では、組み合わせの成分は、両方の成分（薬剤）が患者において同時に有効であるときに投与される。「協力作用」は、両方の薬剤が同時に患者において有効であることを意味する。実施形態では、組み合わせの成分は、物理的にまたは時間的に一緒に、同時に、別々にまたは続けて投与される。実施形態では、組み合わせの成分は同時に投与される。
【００７４】
実施形態では、組み合わせは、医薬組成物である。実施形態では、組成物は、許容可能なキャリアを含む。実施形態では、組み合わせは、有効量で投与される。
【００７５】
本開示の態様は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置のための、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ１９に特異的な抗体であって、ベネトクラクスとの相乗効果のある組み合わせで使用される抗体を含む。
【００７６】
本開示の態様は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置のための、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ１９に特異的な抗体であって、ベネトクラクスと併用して使用される抗体を含む。一実施形態では、前記抗体は、ベネトクラクスと併用して投与される。別の実施形態では、前記抗体は、ベネトクラクスと併用して使用され、前記抗体およびベネトクラクスは、別々に投与される。さらなる実施形態では、前記抗体は、ベネトクスラクスより前に投与される。さらなる実施形態では、ベネトクラクスは、前記抗体より前に投与される。
【００７７】
本開示の態様は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置のための、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ１９に特異的な抗体と、ベネトクラクスとの相乗効果のある組み合わせを含む。実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織、辺縁帯、びまん性大細胞型Ｂ細胞、バーキット細胞およびマントル細胞からなる群から選択される。
【００７８】
実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、濾胞性リンパ腫である。実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、小リンパ球性リンパ腫である。実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、粘膜関連リンパ組織である。実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、辺縁帯リンパ腫である。実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、バーキットリンパ腫である。実施形態では、非ホジキンリンパ腫は、マントル細胞リンパ腫である。
【００７９】
実施形態では、組み合わせは、慢性リンパ球性白血病の処置のためのものである。実施形態では、組み合わせは、急性リンパ芽球性白血病の処置のためのものである。
【００８０】
もう１つの態様は、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置を必要とする個体の、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病を処置する方法であって、ＣＤ１９に特異的な抗体およびＢＣＬ−２阻害剤の投与を含む方法を含む。本方法の実施形態では、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ１９に特異的な抗体を含む。本方法の実施形態では、抗体は、例示したＣＤ１９に特異的な抗体を含む。本方法の実施形態では、ＢＣＬ−２阻害剤は、ベネトクラクスである。
【００８１】
もう１つの態様は、ベネトクラクスとの相乗効果のある組み合わせでの、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病および／または急性リンパ芽球性白血病の処置のための薬物の製造における、配列ＳＹＶＭＨ（配列番号１）のＨＣＤＲ１領域、配列ＮＰＹＮＤＧ（配列番号２）のＨＣＤＲ２領域、配列ＧＴＹＹＹＧＴＲＶＦＤＹ（配列番号３）のＨＣＤＲ３領域、配列ＲＳＳＫＳＬＱＮＶＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号４）のＬＣＤＲ１領域、配列ＲＭＳＮＬＮＳ（配列番号５）のＬＣＤＲ２領域および配列ＭＱＨＬＥＹＰＩＴ（配列番号６）のＬＣＤＲ３領域を含むＣＤ１９に特異的な抗体の使用を含む。
【実施例】
【００８２】
実施例１：ＭＯＲ００２０８およびベネトクラクスの単独および組み合わせによるＭＥＣ−１細胞の細胞毒性
材料
試験対象の細胞株：ＭＥＣ−１細胞（ＤＳＭＺ＃  ＡＣＣ４９７）。使用した細胞株の培養条件は、供給者の情報に従う。細胞培地：イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号：３１９８０；ＲＰＭＩ１６４０、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号：３１８７０；ＧｌｕｔａＭＡＸ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号：３５０５０；ＦＣＳ：Ｓｉｇｍａカタログ番号：Ｆ７５２４ロット番号：１１１Ｍ３３９６。ＮＫ：ＲＰＭＩ１６４０、ＧｌｕｔａＭＡＸ含有、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号：３１８７０、１０％ＦＣＳ；Ｂｉｏｃｏｌｌ：Ｂｉｏｃｈｒｏｍｅ  ＡＧカタログ番号：Ｌ６１１５ロット番号：００３４Ｄ；ＭＡＣＳ  ＮＫ細胞アイソレーションキット：Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃカタログ番号：１３０−０９２−６５７ロット番号：５１５０４０２３２７；ベネトクラクス：Ｓｅｌｌｅｃｋ  Ｃｈｅｍ．カタログ番号：Ｓ８０４８ロット番号：Ｓ８０４８０３；ＦＣＳ：Ｓｉｇｍａカタログ番号：Ｆ７５２４ロット番号：１１１Ｍ３３９６；およびＭＯＲ００２０８と同じＦｃ領域を含むＲｅｆｍＡｂ３３（抗ＲＳＶ）。
【００８３】
方法
ＭＥＣ−１細胞株（ＣＬＬ）を対象として、ＭＯＲ００２０８およびベネトクラクスの単独および組み合わせの細胞毒性能を試験した。標的細胞殺傷を、以下のパラメーター：３μＭ、６．５μＭおよび１０μＭの濃度でのベネトクラクス単独処置；０．０１ｐＭ、０．１ｐＭ、１ｐＭ、１０ｐＭ、１００ｐＭおよび１０ｎＭの濃度でのＭＯＲ００２０８単独処置および列挙したベネトクラクス濃度およびＭＯＲ００２０８濃度の組み合わせ処置を用いて測定する。以下：ＲｅｆｍＡｂ３３、ＮＫ細胞単独、ＭＥＣ−１細胞単独またはＤＭＳＯを対照として使用する。ベネトクラクス単独群およびＭＯＲ００２０８＋ベネトクラクス組み合わせ群では、標的細胞をベネトクラクスまたはＤＭＳＯ対照で２４時間にわたり前処理し、続いてＡＤＣＣアッセイより前に死細胞を除去する。死細胞除去キットを使用して、ベネトクラクスの細胞毒性作用により死滅した細胞を除去した。死細胞除去キットは、インビボでも生じる死細胞の除去を模倣し、その後のＡＤＣＣアッセイにおける死細胞の偽陰性妨害を防止するため実施した。ＡＤＣＣアッセイの場合、標的細胞をカウントし、１μｇ／ｍＬの最終濃度でＣＦＳＥを用いて染色した。対照群、すなわちＤＭＳＯ処理した標的細胞の場合、エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）細胞比を２：１、すなわち１×１０Ｅ６／ｍＬエフェクター細胞（ＮＫ細胞）および５×１０Ｅ５／ｍＬ標的細胞（ＭＥＣ−１細胞）に調整した。ベネトクラクス単独群およびＭＯＲ００２０８＋ベネトクラクス組み合わせ群の場合、２４時間の処置中に観察されたベネトクラクスの細胞毒性作用に従って標的細胞の数が減少した一方、エフェクター細胞の数は、１×１０６／ｍＬで一定に維持された。ＡＤＣＣアッセイは、以下の通り実施した。９６ウェルプレートを使用し、１００μＬのＭＥＣ−１標的細胞懸濁液を各ウェルに加え、続いて１００μＬのＮＫエフェクター細胞濁液を各ウェルに加えた。混合した細胞懸濁液を遠心し、１００μＬの抗体を含む培地または対応する対照溶液に再懸濁した。抗体を培地で１０ｎＭ〜０．０１ｐＭ（１．５μｇ／ｍＬ〜１．５ｐｇ／ｍＬに対応する）の範囲に希釈した。ＡＤＣＣアッセイは、ＣＯ２インキュベーター中、３７℃で２時間インキュベートした。氷上で１０分のインキュベーション後、５０μＬのＤＡＰＩ溶液を各ウェルに加え（最終濃度１μｇ／ｍＬ）、氷上でさらに１０分間インキュベートした。ＡＤＣＣ測定は、ＢＤ  ＦＡＣＳＶｅｒｓｅ装置を用いて行った。死標的細胞をＤＡＰＩ陽性細胞と判定した。
【００８４】
データ
ＭＯＲ００２０８およびベネトクラクスの組み合わせの細胞毒性能を判定するため、全体で３つの独立した実験を行った。３つの実験のすべての個々の生データの表を表１〜６に示す。３つの実験のすべての個々のＡＤＣＣ用量反応曲線を図１〜３に示す。各ベネトクラクス濃度につき３つの実験のすべての平均（＋／−ＳＥＭ）併用係数曲線を図６〜８に示す。
【００８５】
実験１：
2019533682.tif 000013
2019533682.tif 000014
【００８６】
実験２：
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2019533682.tif 000016
【００８７】
実験３：
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2019533682.tif 000018
【００８８】
協力作用の計算
ＭＯＲ００２０８およびベネトクラクス単独と比較して例示した抗ＣＤ１９抗体およびベネトクラクスの組み合わせの相乗作用を判定するため、併用係数（ＣＩ）の計算を完了させる。そうした計算は、その全体を援用するＴｉｎｇ−Ｃｈａｏ  Ｃｈｏｕ，  Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ  ａｎｄ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｓｔｕｄｉｅｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｖ  ５８：６２１−６８１（２００６）およびその全体を援用するＣｈｏｕ  ＴＣ，Ｔａｌａｌａｙ  Ｐ，Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｄｏｓｅ−ｅｆｆｅｃｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ：ｔｈｅ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｒｕｇｓ  ｏｒ  ｅｎｚｙｍｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ａｄｖ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ  ２２：２７−５５（１９８４）に記載される。Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙの方法は、ＣＩ−ｉｓｏｂｏｌ法を用いて行う。
【００８９】
半数影響式（Ｍｅｄｉａｎ  ｅｆｆｅｃｔ  ｅｑｕａｔｉｏｎ）
半数影響式は、阻害剤（薬剤など）の作用をＦａ／Ｆｕ＝（Ｄ／Ｄ５０）＾ｍとしてモデル化する。式中、Ｄは用量であり、ＦａおよびＦｕは、用量Ｄにより影響を受けたまたは受けない系の割合であり（Ｆａ＋Ｆｕ＝１）；Ｄ５０は、半数影響を発揮する用量（たとえば、ＩＣ５０、ＥＤ５０、ＬＤ５０）である。定数ｍは、用量作用曲線の形状を決定する。本発明者らは、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用して非線形回帰計算を行い、パラメーターｍおよびＤ５０を推定した。
【００９０】
ＣＩ−ｉｓｏｂｏｌ法
ＣＩ−ｉｓｏｂｏｌ法は、薬剤間の協力作用の定量的評価を与える。併用係数（ＣＩ）は、単独および組み合わせた薬剤処理の用量作用データから推定する。ＣＩが１未満であると協力作用を示し；ＣＩ＝１であると相加作用を示し；ＣＩ＞１であると拮抗作用を示す。薬剤相互作用（協力作用または拮抗作用）が顕著であるほど、ＣＩ値は１から離れる。形式的には、組み合わせ薬剤処理の併用係数（ＣＩ）は、ＣＩ＝Ｄ１／Ｄｘ１＋Ｄ２／Ｄｘ２と定義される。ここで、Ｄ１およびＤ２は、それぞれ組み合わせの薬剤１および薬剤２の用量であり；Ｄｘ１およびＤｘ２は、組み合わせの作用と同じ作用を与えると考えられる薬剤１および薬剤２のみを用いた処理の用量である。用量Ｄｘ１およびＤｘ２は、単独の薬剤処理の用量作用データから推定する必要がある。本質的には、半数影響式は各薬剤のデータにフィッティングさせる。薬剤の半数影響式から、本発明者らは、作用（すなわちＦａ、Ｆｕ）を発揮するのに必要な用量（すなわちＤ）を推定することができる。ある点が相加作用を示す線から離れているほど、１とそのＣＩとの差が大きくなり、したがって（相乗または拮抗）作用が強くなる。
【００９１】
結果
ベネトクラクス濃度ごとの３つの実験のすべての平均（＋／−ＳＥＭ）併用係数曲線を図６〜８に示す。併用係数の値は、ＭＯＲ００２０８およびベネトクラクス単独と比較して、ＭＥＣ−１細胞の特異的殺傷においてＭＯＲ００２０８およびベネトクラクスの組み合わせの明らかな協力作用を示す。非常に低用量のＭＯＲ００２０８は、例示したＡＤＣＣ細胞殺傷アッセイにおいてほとんどまたはまったく作用を有さない。したがって、非常に低用量のＭＯＲ００２０８のＣＩ値は、ベネトクラクスの活性のみを表す１または１をやや上回る値を示す。ＭＯＲ００２０８が単独で通常の細胞殺傷活性を示すＭＯＲ００２０８濃度では、ＭＯＲ００２０８およびベネトクラクスの活性を表す１未満のＣＩ値により、明らかな協力作用が示される。本明細書に例示したＭＯＲ００２０８の最高濃度は、ＭＯＲ００２０８が１２ｍｇ／ｋｇで週１回投与される進行中の臨床試験で得られている。そのため、例示したインビトロモデルから、ヒトにおける活性が予測されると考えられる。したがって、ＭＯＲ００２０８およびベネトクラクスの組み合わせは、ヒトの非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）および急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の処置においても相乗的に挙動するはずである。
【００９２】
本記述、具体的な例およびデータは例示的な実施形態を示しているが、例示として提示しており、本発明を限定することを意図するものではないことが理解されるであろう。本明細書に含まれる考察、開示およびデータから本発明における様々な変更形態および修正形態が明らかになり、したがってこれらは本発明の一部と見なされる。
【００９３】
実施例２：ＳＣＩＤマウスのヒト皮下リンパ腫細胞異種移植モデルにおけるＡＢＴ−１９９と併用したＭＯＲ００２０８の有効性
ベネトクラクス（ＡＢＴ−１９９）と併用したＭＯＲ００２０８の有効性利益をヒト皮下ＴＯＬＥＤＯリンパ腫細胞腫瘍のＳＣＩＤマウスモデルにおいてさらに研究した。腫瘍成長および死亡率を評価した。
【００９４】
材料および方法
Ｔｏｌｅｄｏ細胞株および培養基を購入し、Ｏｎｃｏｄｅｓｉｇｎから提供を受けた。腫瘍細胞は、３７℃、湿潤雰囲気（５％ＣＯ２、９５％空気）で単層として成長させた。培養基は、１０％ウシ胎仔血清（ｒｅｆ：Ｐ３０−１５０６、Ｌｏｎｚａ）、ＨＢＳＳ（ｒｅｆ：ＢＥ１０−５４３Ｆ）、グルコース（ｒｅｆ：Ｇ８７６９、Ｓｉｇｍａ、Ｆｒａｎｃｅ）、Ｈｅｐｅｓ（ｒｅｆ：ＢＥ１７−７３７Ｅ、Ｌｏｎｚａ）およびピルビン酸ナトリウム（ｒｅｆ：ＢＥ１３−１１５Ｅ、Ｌｏｎｚａ）を補充した、２ｍＭのＬ−グルタミン（ｒｅｆ：ＢＥ１２−７０２Ｆ，Ｌｏｎｚａ，Ｖｅｒｖｉｅｒｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を含むＲＰＭＩ  １６４０であった。細胞は、プラスチックフラスコに付着している。実験に使用するため、カルシウムまたはマグネシウム（ｒｅｆ：ＢＥ１０−５４３Ｆ、Ｌｏｎｚａ）を含まないハンクス培地中、ｔｒｙｐｓｉｎ−ｖｅｒｓｅｎｅ（ｒｅｆ：ＢＥ０２−００７Ｅ、Ｌｏｎｚａ）で５分処理して腫瘍細胞を培養フラスコから剥離させ、完全培養基の添加により中和させた。細胞を血球計数器でカウントし、その生存状況を０．２５％トリパンブルー排除アッセイにより評価した。
【００９５】
腫瘍は、マトリゲルを含む２００μｌのＲＰＭＩ  １６４０（５０：５０、ｖ：ｖ、ｒｅｆ：３５６２３７，ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｒａｎｃｅ）中のＴｏｌｅｄｏ細胞１０×１０６個をＳＣＩＤマウスの右側腹部に皮下注射することにより誘発した。腫瘍が平均容積２５６±６８ｍｍ３になった２３日目に、Ｖｉｖｏ  Ｍａｎａｇｅｒ（登録商標）ソフトウェア（Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｅｓ，Ｃｏｕｔｅｒｎｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）を用いて６０匹のマウスをその個々の腫瘍容積に従って動物１０匹ずつ６群にランダム化した。群間の均一性を検討するため、統計的検定（分散分析、ＡＮＯＶＡ）を行った。ＭＯＲ２０８をマウスの腹膜腔に腹腔内（ＩＰ）注射した。組み合わせた物質を胃管により強制経口（経口（ｐｅｒ  ｏｓ）、ＰＯ）投与した。
【００９６】
２３日目に開始した処置スケジュールは、以下の通りであった。
【００９７】
群１の動物には、ＰＥＰの１日１回ＰＯ投与、ＰＢＳの単回ＩＰ注射を週２回行った。
【００９８】
群２の動物には、２０ｍｇ／ｋｇ／ａｄｍでＡＢＴ−１９９のＰＯ投与を毎日行った。
【００９９】
群３の動物には、４０ｍｇ／ｋｇ／ａｄｍでＡＢＴ−１９９のＰＯ投与を毎日行った。
【０１００】
群４の動物には、１１ｍｇ／ｋｇ／ｉｎｊでＭＯＲ２０８の単回ＩＰ注射を２３日目、２７日目、３０日目、３４日目、３７日目および４１日目に、続いて１１ｍｇ／ｋｇ／ｉｎｊでＭＯＲ２０８の単回ＩＰ注射を４８日目（週２回）に行った。
【０１０１】
群５の動物には、２３日目、２７日目、３０日目、３４日目、３７日目および４１日目と、４８日目、５１日目、５５日目および５８日目の１１ｍｇ／ｋｇ／ｉｎｊのＭＯＲ２０８のＩＰ注射とを併用して２０ｍｇ／ｋｇ／ａｄｍのＡＢＴ−１９９のＰＯ投与を毎日行った。
【０１０２】
群６の動物には、２３日目、２７日目、３０日目、３４日目、３７日目および４１日目と、４８日目、５１日目、５５日目および５８日目との１１ｍｇ／ｋｇ／ｉｎｊのＭＯＲ２０８の単回ＩＰ注射２サイクルとを併用して４０ｍｇ／ｋｇ／ａｄｍのＡＢＴ−１９９のＰＯ投与を毎日行った。
【０１０３】
動物体重の測定、臨床記録および死亡率記録ならびに処置を含むすべての研究データは、Ｖｉｖｏ  Ｍａｎａｇｅｒ（登録商標）データベース（Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｅｓ，Ｄｉｊｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）でスケジュールおよび記録した。生存状況および挙動を毎日記録した。体重および腫瘍容積は、週２回測定した。腫瘍の長さおよび幅は、カリパスで週２回測定し、腫瘍の容積は、式：
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より推定した。
【０１０４】
結果
２０ｍｇ／ｋｇおよび４０ｍｇ／ｋｇの用量でのＭＯＲ００２０８およびＡＢＴ−１９９の組み合わせ処置では、ビヒクル対照および両方の単独療法レジメンと比較して、Ｔｏｌｅｄｏリンパ腫細胞の成長の優れた統計学的に有意な阻害が得られた。ランダム化から人道的エンドポイント（腫瘍容積２０００ｍｍ３）までのマウスの生存率を解析すると、ＡＢＴ−１９９と併用したＭＯＲ００２０８の抗腫瘍作用は、さらに一層顕著であることを示す。組み合わせ群の生存期間中央値およびそれぞれの寿命の延長は、それぞれの単独療法と比較して優れていた。組み合わせ作用のさらなるキャラクタリゼーションにより、ＭＯＲ００２０８の組み合わせの結果は、組み合わせの作用がそれぞれの単独療法の合計よりも大きいため、相乗に分類される（図９、表７、図１０、表８）。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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