(57)【要約】本発明は、新規糖質コルチコイド化合物に関する。本発明は、これらの化合物を使用する方法、これらの化合物の合成、ならびに糖質コルチコイド化合物を含む組成物および製剤、ならびにそれらの使用にも関する。本発明の１つの態様において、薬学的に許容され得る組成物が提供され、ここで、これらの組成物は、本明細書中に記載されるような化合物のいずれかを含み、必要に応じて、薬学的に許容され得るキャリア、アジュバントまたはビヒクルを含む。ある特定の実施形態において、これらの組成物は、必要に応じて１つまたはそれを超えるさらなる治療薬をさらに含む。
2019532071.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物
【化３６】
2019532071.tif 000047
またはその薬学的に許容され得る塩であって、式中、
Ｘは、−Ｏ−または−Ｓ−であり；
【化３７】
2019532071.tif 000048
は、結合であるか、または存在せず；
Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、そのいずれもが、必要に応じて置換されており；
Ｒ２は、−Ｌ−Ｒ’−であり、Ｌは、結合または−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ’は、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ’は、必要に応じて置換されており；
Ｒ３は、水素または必要に応じて置換されているＣ１−６アルキルであり；
各Ｒ４は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、−ＯＨ、ハロ、ハロアルキル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）または−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）から選択され、Ｒ４は、必要に応じて置換されており；
Ｒ５およびＲ６の各々は、独立して、水素、ハロまたはＣ１−４アルキルであり；
ｎは、０、１、２、３、４または５である、
化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項２】
Ｒ１が、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、該アルキル、シクロアルキルまたはは、必要に応じて置換されている、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が、Ｃ１−６アルキルであり、該Ｃ１−６アルキルが、１〜３つのハロで必要に応じて置換されている、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルであり、そのいずれもが、１〜３つのハロで必要に応じて置換されている、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が、フルオロメチルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が、非置換Ｃ１−６アルキルである、請求項３に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１が、エチルである、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ１が、イソプロピルである、請求項７に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１が、ｔｅｒｔ−ブチルである、請求項７に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１が、必要に応じて置換されている３〜７員のシクロアルキル、フェニルまたはナフチルであり、そのいずれもが、必要に応じて置換されている、請求項２に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｌが、−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ’が、水素、Ｃ１−６アルキル、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアラルキルから選択され、Ｒ’は、ハロ、ＣＮ、カルボキシルまたはオキソで必要に応じて置換されている、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ’が、ヘテロアリールである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ２が、
【化３８】
2019532071.tif 000049
である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ３が、必要に応じて置換されているＣ１−６アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ３が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルであり、そのいずれもが、必要に応じて置換されている、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ３が、水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
各Ｒ４が、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、−ＯＨ、ハロ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）または−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）から選択され、Ｒ４のアルキル基は、ハロ、−ＣＮ、カルボキシルまたはオキソで必要に応じて置換されている、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９】
各Ｒ４が、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、ハロ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）または−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）から選択され、ここで、Ｒ４のアルキル基は、ハロ、カルボキシルまたはオキソで必要に応じて置換されている、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
各Ｒ４が、独立して、水素、Ｃ１−６アルキルまたはハロである、請求項１９に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ４が、水素である、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ４が、水素であり、Ｒ１が、水素、Ｃ１−６アルキルまたはハロアルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２３】
ｎが、０、１または２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２４】
ｎが、０である、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｘが、−Ｏ−である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｘが、−Ｓ−である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２７】
【化３９】
2019532071.tif 000050
が、結合である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２８】
【化４０】
2019532071.tif 000051
が、存在しない、請求項１に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｒ５およびＲ６が、各々独立して、水素またはハロである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｒ５およびＲ６が、両方とも−Ｆである、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３１】
前記式Ｉの化合物が、
【化４１】
2019532071.tif 000052
【化４２】
2019532071.tif 000053
から選択される、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項３２】
式Ｉの化合物
【化４３】
2019532071.tif 000054
またはその薬学的に許容され得る塩であって、式中、
Ｘは、−Ｏ−または−Ｓ−であり；
【化４４】
2019532071.tif 000055
は、結合であるか、または存在せず；
Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、そのいずれもが、必要に応じて置換されており；
Ｒ２は、−Ｌ−Ｒ’−であり、Ｌは、結合または−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ’は、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ’は、必要に応じて置換されており；
Ｒ３は、水素または必要に応じて置換されているＣ１−６アルキルであり；
各Ｒ４は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、−ＯＨ、ハロ、ハロアルキル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）または−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）から選択され、Ｒ４は、必要に応じて置換されており；
Ｒ５およびＲ６の各々は、独立して、水素、ハロまたはＣ１−４アルキルであり；
ｎは、０、１、２、３、４または５である、
化合物またはその薬学的に許容され得る塩、
および薬学的に許容され得るキャリアまたはアジュバント
を含む、薬学的組成物。
【請求項３３】
生物学的サンプル中の糖質コルチコイドレセプターの活性を調節する方法であって、該糖質コルチコイドレセプターを請求項１に記載の化合物または請求項３２に記載の薬学的組成物と接触させる工程を含む、方法。
【請求項３４】
患者において炎症性疾患を処置するかまたはその重症度を低下させる方法であって、有効量の請求項１に記載の化合物または請求項３２に記載の薬学的組成物を該患者に投与する工程を含む、方法。
【請求項３５】
前記疾患が、喘息、関節炎、狼瘡、クローン病、炎症性腸疾患、セリアック病、糸球体腎炎、尋常性ざ瘡、白血病および膵がんから選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記疾患が、喘息および関節炎から選択される、請求項３５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
連邦政府の資金援助
本発明は、国立糖尿病・消化器・腎疾病研究所／アメリカ国立衛生研究所により与えられた、ＤＫ０６６２０２およびＤＫ０７１６６２の下で、政府の支援を得てなされた。政府は、本発明に一定の権利を有する。
【０００２】
発明の技術分野
本発明は、新規糖質コルチコイド化合物に関する。本発明は、これらの化合物を使用する方法、これらの化合物の合成、ならびに糖質コルチコイド化合物を含む組成物および製剤、ならびにそれらの使用にも関する。
【０００３】
関連出願の引用
本願は、米国仮出願第６２／４０８，３１４号（２０１６年１０月１４日出願）に対する優先権を主張する。この米国仮出願の開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
プレドニゾン、デキサメタゾン（ＤＥＸ）およびブデソニドなどの糖質コルチコイドは、非常に有効な抗炎症薬である。これらは、炎症および自己免疫疾患（例えば、喘息、関節炎、狼瘡およびクローン病）を処置するために広く使用されている（１、２）。これらの薬物は、核内レセプタースーパーファミリーのリガンド活性化転写因子である糖質コルチコイドレセプター（ＧＲ）への結合を介して生理学的役割を発揮する。ＧＲは、糖質コルチコイドの非存在下では、細胞質に存在し、ｈｓｐ９０およびｈｓｐ７０などのシャペロンタンパク質と会合している。ホルモンが結合すると、ＧＲの立体構造変化が引き起こされ、核に移動して、核で転写調節活性である活性化（トランス活性化）または抑制（トランス抑制）を発揮する。トランス活性化では、ＧＲは、二量体化し、特異的な糖質コルチコイド応答エレメントに直接結合し、次いで、コアクチベーターをリクルートして、転写を活性化する。トランス抑制では、一般的なモデルは、ＧＲが、他の転写因子（例えば、ＮＦ−κＢ、ＡＰ−１）に結合して、タンパク質間相互作用を介してそれらの結合部位に間接的に繋ぎ止められるようになるというものである。ＧＲは、標的プロモーターの近くに繋ぎ止められると、下流の遺伝子発現を抑制する（３）。一般的に、トランス抑制は、ＧＲの二量体化を必要としないと考えられている（４、５）。
【０００５】
トランス抑制は、糖質コルチコイドが抗炎症剤として作用する主要な機構である（６）。ＧＲがＮＦ−κＢ／ＡＰ−１プロモーターに繋ぎ止められると、下流の主要な炎症促進性因子（炎症促進性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１βおよびＩＬ−６）、ケモカイン（例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ１９）および炎症の発生に関連する酵素（例えば、ＣＯＸ２、ＭＭＰ１３およびホスホリパーゼＡ２）を含む）の転写抑制がもたらされる（２）。それらの迅速な作用および持続可能な効果のおかげで、依然として糖質コルチコイドが炎症性疾患を処置するための第１候補である。しかしながら、糖質コルチコイドの特に高用量での長期使用は、真性糖尿病／グルコース不耐性、高血圧症、肥満症および骨粗鬆症をはじめとした多くの有害事象をもたらす（７、８）。これらの有害事象のほとんどが、ＧＲのトランス活性化に起因する。例えば、糖質コルチコイドは、肝臓における糖新生経路の律速酵素であるグルコース−６−ホスファターゼおよびホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼをコードする遺伝子を誘導する（９、１０）ので、グルコースのデノボ合成を増大させ、最終的には体重増加または糖尿病に至る。糖質コルチコイドは、骨発生の重要な制御遺伝子であるＤｉｃｋｋｏｐｆ−１（ＤＫＫ１）も誘導し、そのアップレギュレーションは、骨粗鬆症および骨減少に至る（１１）。糖質コルチコイドの副作用の多くは、糖質コルチコイドの高用量での使用に関連すると広く観察されている（１２〜１４）。例えば、プレドニゾンを使用した場合に「閾値パターン」が観察され、１日あたり７．５ｍｇで、それは緑内障、うつおよび高血圧を引き起こす（１２）。これらの副作用は、ＧＲのトランス活性化、ならびに鉱質コルチコイドレセプター（ＭＲ）などの他のレセプターの非標的活性化（その活性化は高血圧を引き起こす）によって引き起こされる（１５）。したがって、望まれない副作用を減少させるために、非常に強力かつ選択的な糖質コルチコイドを開発することが重要である。
【０００６】
効力および有効性が、糖質コルチコイドの重要な２つの薬物動態パラメータである。有効性は、所与の薬物が通常は最高濃度で到達し得る最大活性であり、効力は、最大半量の活性（ＥＣ５０）に達するために必要な所与の薬物の濃度である。同じ有効性を有する２つの糖質コルチコイドの場合、効力が高い方の糖質コルチコイドは、同じ処置効果を達成するために、より低い用量を必要とする（１４、１５）。重要なことに、糖質コルチコイドは、トランス活性化とトランス抑制とに対して異なる効力を有することがあり；例えば、ＤＥＸを介したＧＲによる遺伝子誘導は、遺伝子抑制よりも５〜６倍高い糖質コルチコイド濃度を必要とする（１６〜１８）。この応答の差によって、トランス活性化の活性および副作用が最小でありつつ炎症シグナルの完全な抑制を達成するために低用量で使用できる非常に強力な糖質コルチコイドを開発する機会が提供される。最後に、一般的な炎症性疾患（例えば、慢性閉塞性肺疾患、関節リウマチおよび炎症性腸疾患）の処置において、糖質コルチコイド治療への非感受性および抵抗性の発生は、大きな問題である（１９）。糖質コルチコイド抵抗性は、白血球のがん、特に、小児急性白血病に対する未解決の問題でもある（２０）。キナーゼ経路の変化、補因子の変化およびレセプターの喪失または変異をはじめとした、糖質コルチコイド抵抗性のいくつかの機構が、特定または提案されている（１９、２１）。共通する観察結果の１つは、レセプターに対するリガンドの親和性が、糖質コルチコイド抵抗性患者において低下している点である。非常に強力な糖質コルチコイドで処置されたそのような患者は、改善を示したが、その効果は徐々に低下した（２２）。ゆえに、新世代のより強力な糖質コルチコイドを開発する差し迫った必要がある。
【０００７】
コルチゾールは、副腎によって産生される内因性糖質コルチコイドである。コルチゾールは、ＤＥＸなどの最もよく使用される合成糖質コルチコイドと比べて低い効力およびレセプター結合能を有する（２３）。他方で、フロ酸モメタゾン（ＭＦ）は、炎症性皮膚障害（Ｅｌｏｃｏｎ）、喘息（Ａｓｍａｎｅｘ）および副鼻腔炎症（Ｎａｓｏｎｅｘ）を処置するために使用される強力な糖質コルチコイドである（２４、２５）。ＭＦは、ステロイドＤ環のＣ１７α位に親油性フロ酸エステルを有し、それが、高い効力の源であると考えられている（２６）。ここで、本発明者らは、ＭＦおよびコルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤの結晶構造を明らかにし、これにより、ＭＦとコルチゾールとの間でリガンドの効力を隔てる、根底にある機構が明らかになった。次いで、本発明者らは、観察された構造機構を用いて、炎症性疾患を処置するための治療薬の開発のための出発リードとして役立ち得る、効力および有効性がかなり改善されたいくつかの新規糖質コルチコイドをデザインした。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明の要旨
有益な抗炎症効果を維持しつつ、望まれない副作用を減少させたいという要求が、糖質コルチコイド薬の進化を推進した。多くの望ましくない副作用が高用量に関連するので、効力が、この進化の非常に重要な面である。それらの副作用は、より低用量で同じ処置効果を達成する非常に強力な糖質コルチコイドによって最小限に抑えることができる。この要求が、糖質コルチコイドを低効力から高効力への進化を推進した。コルチゾールは、比較的効力が低い内因性の糖質コルチコイドであり、フロ酸モメタゾン（ＭＦ）は、多くの炎症疾患の処置において使用されている非常に強力な合成糖質コルチコイドである。糖質コルチコイドの進化を推進する、根底にある機構を理解するために、本発明者らは、コルチゾールおよびＭＦに結合した糖質コルチコイドレセプター（ＧＲ）のリガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）のＸ線構造を決定した。コルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤは、ステロイドＡ環における１，２単結合の柔軟性が主にＧＲへのコルチゾールの低親和性に関与していることを明らかにした。一方、ＭＦに結合したＧＲ  ＬＢＤは、ＭＦの高い効力が、リガンド結合ポケットを完全に満たすので高親和性結合に対するさらなるアンカーの接触を提供する１７αフロ酸基によって達成されることを明らかにした。リガンド結合ポケットにおける単一のアミノ酸Ｑ６４２が、リガンド効力においてＭＦとコルチゾールとの間で差別的な役割を果たす。構造に基づくデザインによって、効力がかなり改善されたいくつかの新規糖質コルチコイドが合成された。これらの結果をまとめると、糖質コルチコイドの効力の重要な構造的機構が明らかになり、非常に強力な糖質コルチコイドの開発のための合理的根拠が提供される。
【０００９】
１つの態様において、本発明は、式Ｉの化合物
【化１】
2019532071.tif 000003
またはその薬学的に許容され得る塩を提供し、式中、Ｘは、−Ｏ−または−Ｓ−であり；
【化２】
2019532071.tif 000004
は、結合であるか、または存在せず；Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、そのいずれもが、必要に応じて置換されており；Ｒ２は、−Ｌ−Ｒ’−であり、Ｌは、結合または−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ’は、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ’は、必要に応じて置換されており；Ｒ３は、水素または必要に応じて置換されているＣ１−６アルキルであり；各Ｒ４は、独立して、Ｃ１−６アルキル、−ＯＨ、ハロ、ハロアルキル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）または−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）であり、Ｒ４のアルキルは、必要に応じて置換されており；Ｒ５およびＲ６の各々は、独立して、水素、ハロまたはＣ１−４アルキルから選択され；ｎは、０、１、２、３、４または５である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】コルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤおよびＭＦに結合したＧＲ  ＬＢＤの全体構造。（Ａ）コルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤおよびＭＦに結合したＧＲ  ＬＢＤのアーキテクチャ。（Ｂ）ＤＥＸに結合したＧＲ  ＬＢＤとＭＦに結合したＧＲ−ＬＢＤとの構造比較。矢印は、それらの２つの相違点を示しており、１：ヘリックス１の前のループ領域；２：ヘリックス５からヘリックス７の前のループ領域；３：ＡＦ２ヘリックスのＣ末端の配向。（Ｃ）ＧＲ  ＬＢＤのリガンド結合ポケットにおけるコルチゾールおよびＭＦの電子密度マップ。
【００１１】
【図２−１】コルチゾール、ＤＥＸおよびＭＦの効力。（Ａ）コルチゾール、ＤＥＸおよびＭＦの化学構造。ステロイド環（Ａ〜Ｄ）が示されている。重要な原子の番号付けが、正しい位置の近くに小さい文字で記されている。ＤＥＸとコルチゾールとの相違点が、ＤＥＸ構造に示されている。ＭＦのフロ酸基が示されている。（Ｂ〜Ｃ）ＡＤ２９３細胞における、誘導レポーターＭＭＴＶ−Ｌｕｃおよび抑制レポーターＡＰ１−Ｌｕｃに対するコルチゾール、ＤＥＸおよびＭＦの用量応答曲線。ＲＬＵ：相対的ルシフェラーゼ単位。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。（Ｄ）ＭＦ、ＤＥＸおよびコルチゾールに対するインビトロＧＲ結合アッセイ。ＣＰＭ：毎秒カウント数。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝２。
【図２−２】コルチゾール、ＤＥＸおよびＭＦの効力。（Ａ）コルチゾール、ＤＥＸおよびＭＦの化学構造。ステロイド環（Ａ〜Ｄ）が示されている。重要な原子の番号付けが、正しい位置の近くに小さい文字で記されている。ＤＥＸとコルチゾールとの相違点が、ＤＥＸ構造に示されている。ＭＦのフロ酸基が示されている。（Ｂ〜Ｃ）ＡＤ２９３細胞における、誘導レポーターＭＭＴＶ−Ｌｕｃおよび抑制レポーターＡＰ１−Ｌｕｃに対するコルチゾール、ＤＥＸおよびＭＦの用量応答曲線。ＲＬＵ：相対的ルシフェラーゼ単位。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。（Ｄ）ＭＦ、ＤＥＸおよびコルチゾールに対するインビトロＧＲ結合アッセイ。ＣＰＭ：毎秒カウント数。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝２。
【００１２】
【図３】１，２単結合の柔軟性はコルチゾールの低親和性に寄与する。（Ａ）ＧＲ  ＬＢＤのリガンド結合ポケットにおけるコルチゾールおよびＤＥＸの水素結合ネットワーク。（Ｂ）ＡＤ２９３細胞におけるＭＭＴＶ−Ｌｕｃに対するＧＲトランス活性化についてのコルチゾール、プレドニゾロンおよびＤＥＸの用量応答曲線。プレドニゾロンは、１，２二重結合だけがコルチゾールと異なる。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。
【００１３】
【図４】ＧＲリガンド結合ポケットにおける１７αフロ酸基の完全な占有。（Ａ、Ｂ）ＤＥＸおよびＭＦの３次元構造。（Ｃ）ＧＲ  ＬＢＤのリガンド結合ポケットにおけるＤＥＸおよびＭＦのアラインメント。ＭＦの１７αフロ酸基は、ＧＲリガンド結合ポケットを広げ、ステロイドＤ環の上の疎水性空洞を完全に占有する。（Ｄ）ＧＲ  ＬＢＤリガンド結合ポケットの疎水性空洞における残基と１７αフロ酸基の詳細な疎水性相互作用。
【００１４】
【図５】Ｑ６４２は、異なる効力のリガンドの認識において極めて重要な役割を果たす。（Ａ）種々のリガンドとＱ６４２の詳細な相互作用：ＤＥＸに結合したＧＲ−ＬＢＤおよびＭＦに結合したＧＲ−ＬＢＤ。（Ｂ）ステロイドの不飽和濃度（ＤＥＸ  １０ｎＭ；ＭＦ  １ｎＭ）におけるＱ６４２変異のトランス活性化の活性。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ≧３。（Ｃ）ＡＤ２９３細胞におけるＭＭＴＶ−Ｌｕｃに対する野生型（ＷＴ）ＧＲおよびＱ６４２Ｎ変異体のＭＦ、ＤＥＸおよびコルチゾールに対する用量応答曲線。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。
【００１５】
【図６−１】−Ｏ−または−Ｓ−エステル化合物のデザインおよびその後の肝臓加水分解。
【図６−２】−Ｏ−または−Ｓ−エステル化合物のデザインおよびその後の肝臓加水分解。
【００１６】
【図７】溶解性の変異および結晶化の変異の位置。上のパネル：ＧＲ  ＬＢＤを可溶化する変異の位置；下のパネル：ＧＲ  ＬＢＤの結晶化を促進する表面の変異。
【００１７】
【図８】選択されたＧＲ  ＬＢＤ変異のタンパク質の発現および精製。ＧＲ  ＬＢＤ変異体を、１０μＭコルチゾールの存在下において発現させ、精製した。
【００１８】
【図９】コルチゾールおよびＭＦに結合したＧＲ  ＬＢＤのタンパク質の結晶および回折マップ。（Ａ）コルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤ。（Ｂ）ＭＦに結合したＧＲ  ＬＢＤ。
【００１９】
【図１０】ＧＲ  ＡＹＶＴＩ変異の転写活性。（Ａ）ＡＤ２９３細胞におけるＭＭＴＶ−Ｌｕｃに対するＧＲ  ＡＹＶＴＩ変異のトランス活性化の活性。ＤＥＸ、１００ｎＭ。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。（Ｂ）ＡＤ２９３細胞におけるＡＰ１−Ｌｕｃに対するＧＲ  ＡＹＶＴＩ変異のトランス抑制の活性。ＤＥＸ、１００ｎＭ。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。
【００２０】
【図１１】ＧＲ  ＬＢＤのリガンド結合ポケットにおけるＤＥＸおよびコルチゾールのステロイドＣ−９α基およびＣ−１６基の詳細な構造比較。（Ａ）ＤＥＸのＣ−９α位におけるＦ原子は、ＧＲ  ＬＢＤのリガンド結合ポケットにおいてＦ６２３、Ｌ５６３およびＭ６４６と密接に接触する。（Ｂ）ＤＥＸのＣ−１６メチル基は、ＧＲ  ＬＢＤのリガンド結合ポケットにおいてＹ７３５、Ｌ７３２、Ｍ６４６およびＱ６４２と密接に接触する。
【００２１】
【図１２】Ｆ６２３およびＭ６３９変異は、ＭＦの活性とＤＥＸの活性を分けられない。（Ａ）ＡＤ２９３細胞におけるＭＭＴＶ−Ｌｕｃに対するＦ６２３変異のトランス活性化の活性。ＤＥＸ  １０ｎＭ、ＭＦ  １ｎＭ。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。（Ｂ）ＡＤ２９３細胞におけるＭＭＴＶ−Ｌｕｃに対するＭ６３９変異のトランス活性化の活性。ＤＥＸ  １０ｎＭ、ＭＦ  １ｎＭ。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。
【００２２】
【図１３−１】ＧＲ  Ｑ６４２Ａ変異体タンパク質のインビトロ結合アッセイ。（Ａ）野生型ＧＲまたはＱ６４２Ａ変異体ＧＲを発現したＡＤ２９３細胞由来のサイトゾルを用いるインビトロリガンド結合実験。ＣＰＭ：毎分カウント数。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝２。（Ｂ）ＭＭＴＶ−ＬｕｃレポーターアッセイにおけるＷＴ  ＧＲおよびＱ６４２Ａ  ＧＲのＤＥＸ用量応答曲線。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。（Ｃ）ＧＲ  Ｑ６４２Ａリガンド競合アッセイ。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝２。
【図１３−２】ＧＲ  Ｑ６４２Ａ変異体タンパク質のインビトロ結合アッセイ。（Ａ）野生型ＧＲまたはＱ６４２Ａ変異体ＧＲを発現したＡＤ２９３細胞由来のサイトゾルを用いるインビトロリガンド結合実験。ＣＰＭ：毎分カウント数。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝２。（Ｂ）ＭＭＴＶ−ＬｕｃレポーターアッセイにおけるＷＴ  ＧＲおよびＱ６４２Ａ  ＧＲのＤＥＸ用量応答曲線。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。（Ｃ）ＧＲ  Ｑ６４２Ａリガンド競合アッセイ。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝２。
【図１３−３】ＧＲ  Ｑ６４２Ａ変異体タンパク質のインビトロ結合アッセイ。（Ａ）野生型ＧＲまたはＱ６４２Ａ変異体ＧＲを発現したＡＤ２９３細胞由来のサイトゾルを用いるインビトロリガンド結合実験。ＣＰＭ：毎分カウント数。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝２。（Ｂ）ＭＭＴＶ−ＬｕｃレポーターアッセイにおけるＷＴ  ＧＲおよびＱ６４２Ａ  ＧＲのＤＥＸ用量応答曲線。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。（Ｃ）ＧＲ  Ｑ６４２Ａリガンド競合アッセイ。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝２。
【００２３】
【図１４】相対的ルシフェラーゼ単位として提供されている、本発明の化合物の活性の棒グラフ。
【００２４】
【図１５】フロ酸フルチカゾン（ＦＦ）と比べて化合物４の効力の８倍増加を示す折れ線グラフ。
【００２５】
【図１６】（Ａ）レポーターシステムにおける候補化合物の効力を提供する折れ線グラフ。（Ｂ）ＯＶＡ誘発マウス喘息モデルを用いた肺の炎症の抑制における候補化合物の効果の評価を提供する折れ線グラフ。
【００２６】
前述の図面は、例示目的で提供されているのであって、決して限定することを意味していない。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
詳細な説明
糖質コルチコイドは、ほぼ６０年間にわたって使用されており、依然として多くの炎症性疾患および自己免疫疾患を処置するための第１選択である。しかしながら、糖質コルチコイドの長期使用は、多くの有害作用を引き起こし得る。ＧＲの活性化および抑制の構造基盤を理解することが、より副作用が少ない新規糖質コルチコイドの開発にとって非常に重要である。しかしながら、細菌系における、特に低親和性リガンドに対するＧＲの発現レベルが低いせいで、この重要な細胞制御因子の構造研究は妨げてられていた。本発明者らは、ステロイドレセプターファミリー内の保存残基を比較することによって、レセプターの生理機能に影響せずにレセプターの発現を促進し得るアミノ酸変異の特定に成功した。この方法は、特に、次世代の糖質コルチコイドの将来を担う可能性がある、非ステロイドリガンドなどの低親和性リガンドに対するＧＲの構造研究を加速させる。
【００２８】
非常に強力な糖質コルチコイドの開発は、２つのタイプの緊急性によって促され、一方は、高用量での使用によって引き起こされる糖質コルチコイドの副作用であり、他方は、糖質コルチコイド抵抗性の臨床症候である。リガンドの親和性は、効力の決定要因であるが、それは唯一のものではない。細胞補因子も、リガンド結合によって引き起こされる表面の差異を認識することによって重大な役割を果たし、異なるリガンドの結合によって誘導されるわずかな変化が、補因子の選択性に対して甚大な影響を及ぼし得る。堅いコルチゾール骨格を改変して効力を高めるために、異なるストラテジーが適用され、ＤＥＸの開発につながった。コルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤおよびＤＥＸに結合したＧＲ  ＬＢＤの構造比較は、それらの改変のうち、Δ１二重結合が、Ｒ６１１と重要な水素結合を形成するＣ３ケトンを最適に位置づけるために極めて重要であることを示している。続いて、研究者らは、Ｃ−１７α位のアルキルエステルまたはプロピオン酸エステル（２６）などの親油性エステル基が、糖質コルチコイドの活性を大幅に増大させ得ることを見出した。最もよく使用される喘息薬の１つであるプロピオン酸フルチカゾン（ＦＰ）は、Ｃ−１７α位のヒドロキシル基をプロピオン酸エステルで置き換えることによって作製された。これらのデータから、リガンド結合ポケットにおいてステロイドＤ環の上に疎水性空洞が存在することが示唆された。プロピオン酸エステルを置き換えるためにフロ酸エステル基を用いるＦＰのさらなる最適化によって、非常に強力な糖質コルチコイドであるフロ酸フルチカゾン（ＦＦ）が作製されたことから、フロ酸基が、その空洞に最もフィットし得ることが示された。ＦＦに結合したＧＲ  ＬＢＤの構造は解明されたが（３５）、ＭＦの高効力の構造的機構は明らかになっていなかった。ここで、本発明者らは、ＭＦの高効力が、完全なリガンド結合ポケットを占有しているＣ−１７αフロ酸基と、リガンド結合によって引き起こされる表面立体配座の変化との両方に起因し得ることを発見した。本発明者らは、変異誘発を用いて、単一のアミノ酸残基であるＱ６４２が、Ｃ−１７αフロ酸基の認識および他のアミノ酸側鎖の位置決定の調整において重大な役割を果たすことを実証した。Ｑ６４２Ｎは、野生型タンパク質とただ１つのメチル基だけしか異ならないが、ＭＦ、ＤＥＸおよびコルチゾールの活性を完全に分けるのに十分であることから、レセプター活性がどれほど正確に制御されているかが示される。
【００２９】
本発明者らは、Ｃ−１７αフロ酸基が、低親和性リガンドを正確かつ堅固にリガンド結合ポケットに位置づける「アンカー」ポイントとして役立ち得ることを実証した。高い解離特性のためにデザインされたＤＡＣ誘導体の改変における成功は、解離した治療的な糖質コルチコイド、糖質コルチコイド抵抗性の臨床症候が低減した糖質コルチコイド、または非ステロイド糖質コルチコイド化合物（これらの化合物は、一般にレセプターに対して乏しい親和性を示す）をデザインするための頑強なストラテジーを説明する。要約すれば、本発明者らは、生理学的リガンドであり低効力の糖質コルチコイドであるコルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤの第１の結晶構造、および臨床上重要な高効力の合成リガンドであるＭＦに結合したＬＢＤの構造を解明した。本発明者らは、生化学的解析および変異解析と組み合わせて、糖質コルチコイドの親和性および効力の極めて重要な決定基を構造的に特定し、非常に強力な糖質コルチコイドの、構造に基づくデザインおよび合成を介してこれらの決定基を確認した。
【００３０】
Ｉ．定義
【００３１】
本発明の目的のために、化学元素は、ｔｈｅ  Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，７５ｔｈ  Ｅｄ．に従って特定される。さらに、有機化学の一般原理は、“Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓｏｌｉｔｏ：１９９９および“Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｅｄ．：Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：２００１（これらの全内容が参照により本明細書に援用される）に記載されている。
【００３２】
本発明の目的のために、式Ｉの化合物に対する炭素のナンバリングは、ステロイド構造に対して一般に認められた慣習のものである。したがって、式Ｉの化合物は、以下のとおりナンバリングされる。
【化３】
2019532071.tif 000005
【００３３】
本明細書中に記載されるように、本発明の化合物は、１つまたはそれを超える置換基（例えば、上記で広く例証されたものまたは本発明の特定のクラス、サブクラスおよび種によって例示されるもの）で必要に応じて置換され得る。
【００３４】
本明細書中に記載されるように、「保護基」とは、その後の化学反応において化学選択性を得るために、官能基の化学修飾によって分子に導入される部分または官能性のことを指す。標準的な保護基は、Ｗｕｔｓ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｅ：“Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”４ｔｈ  Ｅｄ，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：２００６（参照により本明細書中に援用される）に提供されている。
【００３５】
本明細書中で使用されるとき、用語「ヒドロキシル」または「ヒドロキシ」とは、−ＯＨ部分のことを指す。
【００３６】
本明細書中で使用されるとき、用語「脂肪族」は、用語アルキル、アルケニル、アルキニル（それらの各々は、下記に示されるように必要に応じて置換される）を包含する。
【００３７】
本明細書中で使用されるとき、「アルキル」基とは、１〜１２個（例えば、１〜８、１〜６または１〜４個）の炭素原子を含む飽和脂肪族炭化水素基のことを指す。アルキル基は、直鎖状または分枝状であり得る。アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘプチルまたは２−エチルヘキシルが挙げられるが、これらに限定されない。アルキル基は、１つまたはそれを超える置換基（例えば、ハロ、ホスホ、脂環式［例えば、シクロアルキルまたはシクロアルケニル］、ヘテロ脂環式［例えば、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロシクロアルケニル］、アリール、ヘテロアリール、アルコキシ、アロイル、ヘテロアロイル、アシル［例えば、（脂肪族）カルボニル、（脂環式）カルボニルまたは（ヘテロ脂環式）カルボニル］、ニトロ、シアノ、アミド［例えば、（シクロアルキルアルキル）カルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、（ヘテロシクロアルキル）カルボニルアミノ、（ヘテロシクロアルキルアルキル）カルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ  アルキルアミノカルボニル、シクロアルキルアミノカルボニル、ヘテロシクロアルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニルまたはヘテロアリールアミノカルボニル］、アミノ［例えば、脂肪族アミノ、脂環式アミノまたはヘテロ脂環式アミノ］、スルホニル［例えば、脂肪族−ＳＯ２−］、スルフィニル、スルファニル、スルホキシ、尿素、チオ尿素、スルファモイル、スルファミド、オキソ、カルボキシ、カルバモイル、脂環式オキシ、ヘテロ脂環式オキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アラルキルオキシ、ヘテロアリールアルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシまたはヒドロキシ）で置換され得る（すなわち、必要に応じて置換され得る）。限定されないが、置換アルキルのいくつかの例としては、カルボキシアルキル（例えば、ＨＯＯＣ−アルキル、アルコキシカルボニルアルキルおよびアルキルカルボニルオキシアルキル）、シアノアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アシルアルキル、アラルキル、（アルコキシアリール）アルキル、（スルホニルアミノ）アルキル（例えば、（アルキル−ＳＯ２−アミノ）アルキル）、アミノアルキル、アミドアルキル、（脂環式）アルキルまたはハロアルキルが挙げられる。
【００３８】
本明細書中で使用されるとき、「アルケニル」基とは、２〜８個（例えば、２〜１２、２〜６または２〜４個）の炭素原子および少なくとも１つの二重結合を含む脂肪族炭素基のことを指す。アルキル基のように、アルケニル基は、直鎖状または分枝状であり得る。アルケニル基の例としては、アリル、１−または２−イソプロペニル、２−ブテニルおよび２−ヘキセニルが挙げられるが、これらに限定されない。アルケニル基は、１つまたはそれを超える置換基（例えば、ハロ、ホスホ、脂環式［例えば、シクロアルキルまたはシクロアルケニル］、ヘテロ脂環式［例えば、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロシクロアルケニル］、アリール、ヘテロアリール、アルコキシ、アロイル、ヘテロアロイル、アシル［例えば、（脂肪族）カルボニル、（脂環式）カルボニルまたは（ヘテロ脂環式）カルボニル］、ニトロ、シアノ、アミド［例えば、（シクロアルキルアルキル）カルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、（ヘテロシクロアルキル）カルボニルアミノ、（ヘテロシクロアルキルアルキル）カルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ  アルキルアミノカルボニル、シクロアルキルアミノカルボニル、ヘテロシクロアルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニルまたはヘテロアリールアミノカルボニル］、アミノ［例えば、脂肪族アミノ、脂環式アミノ、ヘテロ脂環式アミノまたは脂肪族スルホニルアミノ］、スルホニル［例えば、アルキル−ＳＯ２−、脂環式−ＳＯ２−またはアリール−ＳＯ２−］、スルフィニル、スルファニル、スルホキシ、尿素、チオ尿素、スルファモイル、スルファミド、オキソ、カルボキシ、カルバモイル、脂環式オキシ、ヘテロ脂環式オキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アラルキルオキシ、ヘテロアラルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシまたはヒドロキシ）で必要に応じて置換され得る。限定されないが、置換アルケニルのいくつかの例としては、シアノアルケニル、アルコキシアルケニル、アシルアルケニル、ヒドロキシアルケニル、アラルケニル、（アルコキシアリール）アルケニル、（スルホニルアミノ）アルケニル（例えば、（アルキル−ＳＯ２−アミノ）アルケニル）、アミノアルケニル、アミドアルケニル、（脂環式）アルケニルまたはハロアルケニルが挙げられる。
【００３９】
本明細書中で使用されるとき、「アルキニル」基とは、２〜８個（例えば、２〜１２、２〜６または２〜４個）の炭素原子を含み、少なくとも１つの三重結合を有する脂肪族炭素基のことを指す。アルキニル基は、直鎖状または分枝状であり得る。アルキニル基の例としては、プロパルギルおよびブチニルが挙げられるが、これらに限定されない。アルキニル基は、１つまたはそれを超える置換基（例えば、アロイル、ヘテロアロイル、アルコキシ、シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アラルキルオキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、スルホ、メルカプト、スルファニル［例えば、脂肪族スルファニルまたは脂環式スルファニル］、スルフィニル［例えば、脂肪族スルフィニルまたは脂環式スルフィニル］、スルホニル［例えば、脂肪族−ＳＯ２−、脂肪族アミノ−ＳＯ２−または脂環式−ＳＯ２−］、アミド［例えば、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、アルキルカルボニルアミノ、シクロアルキルアミノカルボニル、ヘテロシクロアルキルアミノカルボニル、シクロアルキルカルボニルアミノ、アリールアミノカルボニル、アリールカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、（ヘテロシクロアルキル）カルボニルアミノ、（シクロアルキルアルキル）カルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノまたはヘテロアリールアミノカルボニル］、尿素、チオ尿素、スルファモイル、スルファミド、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、脂環式、ヘテロ脂環式、アリール、ヘテロアリール、アシル［例えば、（脂環式）カルボニルまたは（ヘテロ脂環式）カルボニル］、アミノ［例えば、脂肪族アミノ］、スルホキシ、オキソ、カルボキシ、カルバモイル、（脂環式）オキシ、（ヘテロ脂環式）オキシまたは（ヘテロアリール）アルコキシ）で必要に応じて置換され得る。
【００４０】
本明細書中で使用されるとき、「アミド」は、「アミノカルボニル」と「カルボニルアミノ」の両方を包含する。これらの用語は、単独でまたは別の基と接続して使用されるとき、アミド基（例えば、末端に使用されるとき、−Ｎ（ＲＸ）−Ｃ（Ｏ）−ＲＹまたは−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（ＲＸ）２、および内部で使用されるとき、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（ＲＸ）−または−Ｎ（ＲＸ）−Ｃ（Ｏ）−）のことを指し、ここで、ＲＸおよびＲＹは、水素、脂肪族、脂環式、アリール、芳香脂肪族（ａｒａｌｉｐｈａｔｉｃ）、ヘテロ脂環式、ヘテロアリールまたはヘテロ芳香脂肪族であり得る。アミド基の例としては、アルキルアミド（例えば、アルキルカルボニルアミノまたはアルキルアミノカルボニル）、（ヘテロ脂環式）アミド、（ヘテロアラルキル）アミド、（ヘテロアリール）アミド、（ヘテロシクロアルキル）アルキルアミド、アリールアミド、アラルキルアミド、（シクロアルキル）アルキルアミドまたはシクロアルキルアミド）が挙げられる。
【００４１】
本明細書中で使用されるとき、「アミノ」基とは、−ＮＲＸＲＹのことを指し、ここで、ＲＸおよびＲＹの各々は、独立して、水素、脂肪族、脂環式、（脂環式）脂肪族、アリール、芳香脂肪族、ヘテロ脂環式、（ヘテロ脂環式）脂肪族、ヘテロアリール、カルボキシ、スルファニル、スルフィニル、スルホニル、（脂肪族）カルボニル、（脂環式）カルボニル、（（脂環式）脂肪族）カルボニル、アリールカルボニル、（芳香脂肪族）カルボニル、（ヘテロ脂環式）カルボニル、（（ヘテロ脂環式）脂肪族）カルボニル、（ヘテロアリール）カルボニルまたは（ヘテロ芳香脂肪族）カルボニルであり、これらの各々は、本明細書中で定義され、必要に応じて置換される。アミノ基の例としては、アルキルアミノ、ジアルキルアミノまたはアリールアミノが挙げられる。用語「アミノ」が、末端基（例えば、アルキルカルボニルアミノ）ではないとき、それは、−ＮＲＸ−によって表され、ここで、ＲＸは、上で定義された意味と同じ意味を有する。
【００４２】
本明細書中で使用されるとき、単独で、または「アラルキル」、「アラルコキシ」もしくは「アリールオキシアルキル」におけるようにより大きな部分の一部として使用される「アリール」基とは、単環式（例えば、フェニル）；二環式（例えば、インデニル、ナフタレニル、テトラヒドロナフチル、テトラヒドロインデニル）；および三環式（例えば、フルオレニル  テトラヒドロフルオレニルまたはテトラヒドロアントラセニル、アントラセニル）環系のことを指し、ここで、その単環式環系は、芳香族であるか、またはその二環式もしくは三環式環系における環の少なくとも１つは、芳香族である。二環式および三環式基は、ベンゾ縮合２〜３員炭素環を含む。例えば、ベンゾ縮合基としては、２つまたはそれを超えるＣ４−８炭素環式部分と縮合したフェニルが挙げられる。アリールは、脂肪族［例えば、アルキル、アルケニルまたはアルキニル］；脂環式；（脂環式）脂肪族；ヘテロ脂環式；（ヘテロ脂環式）脂肪族；アリール；ヘテロアリール；アルコキシ；（脂環式）オキシ；（ヘテロ脂環式）オキシ；アリールオキシ；ヘテロアリールオキシ；（芳香脂肪族）オキシ；（ヘテロ芳香脂肪族）オキシ；アロイル；ヘテロアロイル；アミノ；オキソ（ベンゾ縮合二環式または三環式アリールの非芳香族炭素環上で）；ニトロ；カルボキシ；アミド；アシル［例えば、（脂肪族）カルボニル；（脂環式）カルボニル；（（脂環式）脂肪族）カルボニル；（芳香脂肪族）カルボニル；（ヘテロ脂環式）カルボニル；（（ヘテロ脂環式）脂肪族）カルボニル；または（ヘテロ芳香脂肪族）カルボニル］；スルホニル［例えば、脂肪族−ＳＯ２−またはアミノ−ＳＯ２−］；スルフィニル［例えば、脂肪族−Ｓ（Ｏ）−または脂環式−Ｓ（Ｏ）−］；スルファニル［例えば、脂肪族−Ｓ−］；シアノ；ハロ；ヒドロキシ；メルカプト；スルホキシ；尿素；チオ尿素；スルファモイル；スルファミド；またはカルバモイルを含む１つまたはそれを超える置換基で必要に応じて置換される。あるいは、アリールは、非置換であり得る。
【００４３】
置換アリールの非限定的な例としては、ハロアリール［例えば、モノ−、ジ（例えば、ｐ，ｍ−ジハロアリール）および（トリハロ）アリール］；（カルボキシ）アリール［例えば、（アルコキシカルボニル）アリール、（（アラルキル）カルボニルオキシ）アリールおよび（アルコキシカルボニル）アリール］；（アミド）アリール［例えば、（アミノカルボニル）アリール、（（（アルキルアミノ）アルキル）アミノカルボニル）アリール、（アルキルカルボニル）アミノアリール、（アリールアミノカルボニル）アリールおよび（（（ヘテロアリール）アミノ）カルボニル）アリール］；アミノアリール［例えば、（（アルキルスルホニル）アミノ）アリールまたは（（ジアルキル）アミノ）アリール］；（シアノアルキル）アリール；（アルコキシ）アリール；（スルファモイル）アリール［例えば、（アミノスルホニル）アリール］；（アルキルスルホニル）アリール；（シアノ）アリール；（ヒドロキシアルキル）アリール；（（アルコキシ）アルキル）アリール；（ヒドロキシ）アリール、（（カルボキシ）アルキル）アリール；（（（ジアルキル）アミノ）アルキル）アリール；（ニトロアルキル）アリール；（（（アルキルスルホニル）アミノ）アルキル）アリール；（（ヘテロ脂環式）カルボニル）アリール；（（アルキルスルホニル）アルキル）アリール；（シアノアルキル）アリール；（ヒドロキシアルキル）アリール；（アルキルカルボニル）アリール；アルキルアリール；（トリハロアルキル）アリール；ｐ−アミノ−ｍ−アルコキシカルボニルアリール；ｐ−アミノ−ｍ−シアノアリール；ｐ−ハロ−ｍ−アミノアリール；または（ｍ−（ヘテロ脂環式）−ｏ−（アルキル））アリールが挙げられる。
【００４４】
本明細書中で使用されるとき、「アラルキル」基などの「芳香脂肪族」とは、アリール基で置換された脂肪族基（例えば、Ｃ１−４アルキル基）のことを指す。「脂肪族」、「アルキル」および「アリール」は、本明細書中で定義されている。アラルキル基などの芳香脂肪族の例は、ベンジルである。
【００４５】
本明細書中で使用されるとき、「アラルキル」基とは、アリール基で置換されたアルキル基（例えば、Ｃ１−４アルキル基）のことを指す。「アルキル」と「アリール」の両方が、上で定義されたものである。アラルキル基の例は、ベンジルである。アラルキルは、１つまたはそれを超える置換基（例えば、脂肪族［例えば、アルキル、アルケニルまたはアルキニル（カルボキシアルキル、ヒドロキシアルキルまたはハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル）を含む）］、脂環式［例えば、シクロアルキルまたはシクロアルケニル］、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロシクロアルキル、（ヘテロシクロアルキル）アルキル、アリール、ヘテロアリール、アルコキシ、シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アラルキルオキシ、ヘテロアラルキルオキシ、アロイル、ヘテロアロイル、ニトロ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アミド［例えば、アミノカルボニル、アルキルカルボニルアミノ、シクロアルキルカルボニルアミノ、（シクロアルキルアルキル）カルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、（ヘテロシクロアルキル）カルボニルアミノ、（ヘテロシクロアルキルアルキル）カルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノまたはヘテロアラルキルカルボニルアミノ］、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、アシル、メルカプト、アルキルスルファニル、スルホキシ、尿素、チオ尿素、スルファモイル、スルファミド、オキソまたはカルバモイル）で必要に応じて置換される。
【００４６】
本明細書中で使用されるとき、「二環式環系」は、２つの環を形成する６〜１２（例えば、８〜１２または９、１０もしくは１１）員の構造を含み、ここで、それらの２つの環は、少なくとも１つの原子を共通して（例えば、２つの原子を共通して）有する。二環式環系には、ビシクロ脂肪族（例えば、ビシクロアルキルまたはビシクロアルケニル）、ビシクロヘテロ脂肪族、二環式アリールおよび二環式ヘテロアリールが含まれる。
【００４７】
本明細書中で使用されるとき、「脂環式」基は、「シクロアルキル」基および「シクロアルケニル」基を包含し、その各々は、下記に示されるように必要に応じて置換される。
【００４８】
本明細書中で使用されるとき、「シクロアルキル」基とは、３〜１０個（例えば、５〜１０個）の炭素原子の飽和炭素環式の単環式または二環式（縮合または架橋）環のことを指す。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、アダマンチル、ノルボルニル、キュビル（ｃｕｂｙｌ）、オクタヒドロ−インデニル、デカヒドロ−ナフチル、ビシクロ［３．２．１］オクチル、ビシクロ［２．２．２］オクチル、ビシクロ［３．３．１］ノニル、ビシクロ［３．３．２］デシル、ビシクロ［２．２．２］オクチル、アダマンチルまたは（（アミノカルボニル）シクロアルキル）シクロアルキルが挙げられる。
【００４９】
「シクロアルケニル」基は、本明細書中で使用されるとき、１つまたはそれを超える二重結合を有する３〜１０個（例えば、４〜８個）の炭素原子の非芳香族炭素環のことを指す。シクロアルケニル基の例としては、シクロペンテニル、１，４−シクロヘキサ−ジ−エニル、シクロヘプテニル、シクロオクテニル、ヘキサヒドロ−インデニル、オクタヒドロ−ナフチル、シクロヘキセニル、ビシクロ［２．２．２］オクテニルまたはビシクロ［３．３．１］ノネニルが挙げられる。
【００５０】
シクロアルキルまたはシクロアルケニル基は、１つまたはそれを超える置換基（例えば、ホスホ、脂肪族［例えば、アルキル、アルケニルまたはアルキニル］、脂環式、（脂環式）脂肪族、ヘテロ脂環式、（ヘテロ脂環式）脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アルコキシ、（脂環式）オキシ、（ヘテロ脂環式）オキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、（芳香脂肪族）オキシ、（ヘテロ芳香脂肪族）オキシ、アロイル、ヘテロアロイル、アミノ、アミド［例えば、（脂肪族）カルボニルアミノ、（脂環式）カルボニルアミノ、（（脂環式）脂肪族）カルボニルアミノ、（アリール）カルボニルアミノ、（芳香脂肪族）カルボニルアミノ、（ヘテロ脂環式）カルボニルアミノ、（（ヘテロ脂環式）脂肪族）カルボニルアミノ、（ヘテロアリール）カルボニルアミノまたは（ヘテロ芳香脂肪族）カルボニルアミノ］、ニトロ、カルボキシ［例えば、ＨＯＯＣ−、アルコキシカルボニルまたはアルキルカルボニルオキシ］、アシル［例えば、（脂環式）カルボニル、（（脂環式）脂肪族）カルボニル、（芳香脂肪族）カルボニル、（ヘテロ脂環式）カルボニル、（（ヘテロ脂環式）脂肪族）カルボニルまたは（ヘテロ芳香脂肪族）カルボニル］、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、メルカプト、スルホニル［例えば、アルキル−ＳＯ２−およびアリール−ＳＯ２−］、スルフィニル［例えば、アルキル−Ｓ（Ｏ）−］、スルファニル［例えば、アルキル−Ｓ−］、スルホキシ、尿素、チオ尿素、スルファモイル、スルファミド、オキソまたはカルバモイル）で必要に応じて置換され得る。
【００５１】
本明細書中で使用されるとき、用語「ヘテロ脂環式」は、ヘテロシクロアルキル基およびヘテロシクロアルケニル基を包含し、それらの各々は、下記に示されるように必要に応じて置換される。
【００５２】
本明細書中で使用されるとき、「ヘテロシクロアルキル」基とは、３〜１０員単環式または二環式（縮合または架橋）（例えば、５〜１０員単環式または二環式）飽和環構造のことを指し、ここで、１つまたはそれを超える環原子は、ヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ、Ｓまたはそれらの組み合わせ）である。ヘテロシクロアルキル基の例としては、ピペリジル、ピペラジル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフリル、１，４−ジオキソラニル、１，４−ジチアニル、１，３−ジオキソラニル、オキサゾリジル、イソオキサゾリジル、モルホリニル、チオモルホリル、オクタヒドロベンゾフリル、オクタヒドロクロメニル、オクタヒドロチオクロメニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロピリンジニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロベンゾ［ｂ］チオフェンイル、２−オキサ−ビシクロ［２．２．２］オクチル、１−アザ−ビシクロ［２．２．２］オクチル、３−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクチルおよび２，６−ジオキサ−トリシクロ［３．３．１．０３，７］ノニルが挙げられる。単環式ヘテロシクロアルキル基は、フェニル部分と縮合して、ヘテロアリールとして分類されるテトラヒドロイソキノリンなどの構造を形成し得る。
【００５３】
「ヘテロシクロアルケニル」基は、本明細書中で使用されるとき、１つまたはそれを超える二重結合を有する単環式または二環式（例えば、５〜１０員単環式または二環式）非芳香族環構造のことを指し、ここで、１つまたはそれを超える環原子は、ヘテロ原子（例えば、Ｎ、ＯまたはＳ）である。単環式および二環式ヘテロ脂環式は、標準的な化学命名法に従ってナンバリングされる。
【００５４】
ヘテロシクロアルキルまたはヘテロシクロアルケニル基は、１つまたはそれを超える置換基（例えば、ホスホ、脂肪族［例えば、アルキル、アルケニルまたはアルキニル］、脂環式、（脂環式）脂肪族、ヘテロ脂環式、（ヘテロ脂環式）脂肪族、アリール、ヘテロアリール、アルコキシ、（脂環式）オキシ、（ヘテロ脂環式）オキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、（芳香脂肪族）オキシ、（ヘテロ芳香脂肪族）オキシ、アロイル、ヘテロアロイル、アミノ、アミド［例えば、（脂肪族）カルボニルアミノ、（脂環式）カルボニルアミノ、（（脂環式）脂肪族）カルボニルアミノ、（アリール）カルボニルアミノ、（芳香脂肪族）カルボニルアミノ、（ヘテロ脂環式）カルボニルアミノ、（（ヘテロ脂環式）脂肪族）カルボニルアミノ、（ヘテロアリール）カルボニルアミノまたは（ヘテロ芳香脂肪族）カルボニルアミノ］、ニトロ、カルボキシ［例えば、ＨＯＯＣ−、アルコキシカルボニルまたはアルキルカルボニルオキシ］、アシル［例えば、（脂環式）カルボニル、（（脂環式）脂肪族）カルボニル、（芳香脂肪族）カルボニル、（ヘテロ脂環式）カルボニル、（（ヘテロ脂環式）脂肪族）カルボニルまたは（ヘテロ芳香脂肪族）カルボニル］、ニトロ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、メルカプト、スルホニル［例えば、アルキルスルホニルまたはアリールスルホニル］、スルフィニル［例えば、アルキルスルフィニル］、スルファニル［例えば、アルキルスルファニル］、スルホキシ、尿素、チオ尿素、スルファモイル、スルファミド、オキソまたはカルバモイル）で必要に応じて置換され得る。
【００５５】
「ヘテロアリール」基は、本明細書中で使用されるとき、４〜１５個の環原子を有する単環式、二環式または三環式環系のことを指し、ここで、１つまたはそれを超える環原子は、ヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ、Ｓまたはそれらの組み合わせ）であり、その単環式環系は、芳香族であるか、またはその二環式もしくは三環式環系における環の少なくとも１つは、芳香族である。ヘテロアリール基は、２〜３個の環を有するベンゾ縮合環系を含む。例えば、ベンゾ縮合基としては、１つまたは２つの４〜８員ヘテロ脂環式部分と縮合したベンゾ（例えば、インドリジル、インドリル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、インドリニル、ベンゾ［ｂ］フリル、ベンゾ［ｂ］チオフェン−イル、キノリニルまたはイソキノリニル）が挙げられる。ヘテロアリールのいくつかの例は、アゼチジニル、ピリジル、１Ｈ−インダゾリル、フリル、ピロリル、チエニル、チアゾリル、オキサゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフリル、イソキノリニル、ベンズチアゾリル、キサンテン、チオキサンテン、フェノチアジン、ジヒドロインドール、ベンゾ［１，３］ジオキソール、ベンゾ［ｂ］フリル、ベンゾ［ｂ］チオフェニル、インダゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンズチアゾリル、プリル、シンノリル、キノリル、キナゾリル、シンノリル、フタラジル、キナゾリル、キノキサリル、イソキノリル、４Ｈ−キノリジル、ベンゾ−１，２，５−チアジアゾリルまたは１，８−ナフチリジルである。
【００５６】
限定されないが、単環式ヘテロアリールとしては、フリル、チオフェン−イル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル（ｔｈａｚｏｌｙｌ）、イミダゾリル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、２Ｈ−ピラニル、４−Ｈ−ピラニル（ｐｒａｎｙｌ）、ピリジル、ピリダジル、ピリミジル、ピラゾリル、ピラジルまたは１，３，５−トリアジルが挙げられる。単環式ヘテロアリールは、標準的な化学命名法に従ってナンバリングされる。
【００５７】
限定されないが、二環式ヘテロアリールとしては、インドリジル、インドリル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、インドリニル、ベンゾ［ｂ］フリル、ベンゾ［ｂ］チオフェニル、キノリニル、イソキノリニル、インドリジル、イソインドリル、インドリル、ベンゾ［ｂ］フリル、ベキソ［ｂ］チオフェニル、インダゾリル、ベンゾイミダジル、ベンズチアゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジル、キノリル、イソキノリル、シンノリル、フタラジル、キナゾリル、キノキサリル、１，８−ナフチリジルまたはプテリジルが挙げられる。二環式ヘテロアリールは、標準的な化学命名法に従ってナンバリングされる。
【００５８】
ヘテロアリールは、１つまたはそれを超える置換基（例えば、脂肪族［例えば、アルキル、アルケニルまたはアルキニル］；脂環式；（脂環式）脂肪族；ヘテロ脂環式；（ヘテロ脂環式）脂肪族；アリール；ヘテロアリール；アルコキシ；（脂環式）オキシ；（ヘテロ脂環式）オキシ；アリールオキシ；ヘテロアリールオキシ；（芳香脂肪族）オキシ；（ヘテロ芳香脂肪族）オキシ；アロイル；ヘテロアロイル；アミノ；オキソ（二環式または三環式ヘテロアリールの非芳香族炭素環式または複素環式環上で）；カルボキシ；アミド；アシル［例えば、脂肪族カルボニル；（脂環式）カルボニル；（（脂環式）脂肪族）カルボニル；（芳香脂肪族）カルボニル；（ヘテロ脂環式）カルボニル；（（ヘテロ脂環式）脂肪族）カルボニル；または（ヘテロ芳香脂肪族）カルボニル］；スルホニル［例えば、脂肪族スルホニルまたはアミノスルホニル］；スルフィニル［例えば、脂肪族スルフィニル］；スルファニル［例えば、脂肪族スルファニル］；ニトロ；シアノ；ハロ；ヒドロキシ；メルカプト；スルホキシ；尿素；チオ尿素；スルファモイル；スルファミド；またはカルバモイル）で必要に応じて置換される。あるいは、ヘテロアリールは、非置換であり得る。
【００５９】
置換ヘテロアリールの非限定的な例としては、（ハロ）ヘテロアリール［例えば、モノ−およびジ−（ハロ）ヘテロアリール］；（カルボキシ）ヘテロアリール［例えば、（アルコキシカルボニル）ヘテロアリール］；シアノヘテロアリール；アミノヘテロアリール［例えば、（（アルキルスルホニル）アミノ）ヘテロアリールおよび（（ジアルキル）アミノ）ヘテロアリール］；（アミド）ヘテロアリール［例えば、アミノカルボニルヘテロアリール、（（アルキルカルボニル）アミノ）ヘテロアリール、（（（（アルキル）アミノ）アルキル）アミノカルボニル）ヘテロアリール、（（（ヘテロアリール）アミノ）カルボニル）ヘテロアリール、（（ヘテロ脂環式）カルボニル）ヘテロアリールおよび（（アルキルカルボニル）アミノ）ヘテロアリール］；（シアノアルキル）ヘテロアリール；（アルコキシ）ヘテロアリール；（スルファモイル）ヘテロアリール［例えば、（アミノスルホニル）ヘテロアリール］；（スルホニル）ヘテロアリール［例えば、（アルキルスルホニル）ヘテロアリール］；（ヒドロキシアルキル）ヘテロアリール；（アルコキシアルキル）ヘテロアリール；（ヒドロキシ）ヘテロアリール；（（カルボキシ）アルキル）ヘテロアリール；（（（ジアルキル）アミノ）アルキル］ヘテロアリール；（ヘテロ脂環式）ヘテロアリール；（脂環式）ヘテロアリール；（ニトロアルキル）ヘテロアリール；（（（アルキルスルホニル）アミノ）アルキル）ヘテロアリール；（（アルキルスルホニル）アルキル）ヘテロアリール；（シアノアルキル）ヘテロアリール；（アシル）ヘテロアリール［例えば、（アルキルカルボニル）ヘテロアリール］；（アルキル）ヘテロアリール；または（ハロアルキル）ヘテロアリール［例えば、トリハロアルキルヘテロアリール］が挙げられる。
【００６０】
「ヘテロ芳香脂肪族（例えば、ヘテロアラルキル基）は、本明細書中で使用されるとき、ヘテロアリール基で置換された脂肪族基（例えば、Ｃ１−４アルキル基）のことを指す。「脂肪族」、「アルキル」および「ヘテロアリール」は、上で定義されたものである。
【００６１】
「ヘテロアラルキル」基は、本明細書中で使用されるとき、ヘテロアリール基で置換されたアルキル基（例えば、Ｃ１−４アルキル基）のことを指す。「アルキル」と「ヘテロアリール」の両方が、上で定義されたものである。ヘテロアラルキルは、１つまたはそれを超える置換基（例えば、アルキル（カルボキシアルキル、ヒドロキシアルキルおよびハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル）を含む）、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロシクロアルキル、（ヘテロシクロアルキル）アルキル、アリール、ヘテロアリール、アルコキシ、シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アラルキルオキシ、ヘテロアラルキルオキシ、アロイル、ヘテロアロイル、ニトロ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アミノカルボニル、アルキルカルボニルアミノ、シクロアルキルカルボニルアミノ、（シクロアルキルアルキル）カルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、（ヘテロシクロアルキル）カルボニルアミノ、（ヘテロシクロアルキルアルキル）カルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、アシル、メルカプト、アルキルスルファニル、スルホキシ、尿素、チオ尿素、スルファモイル、スルファミド、オキソまたはカルバモイル）で必要に応じて置換される。
【００６２】
本明細書中で使用されるとき、「環式部分」および「環式基」とは、脂環式、ヘテロ脂環式、アリールまたはヘテロアリールを含む単環式、二環式および三環式環系のことを指し、それらの各々は、先に定義されたものである。
【００６３】
本明細書中で使用されるとき、「架橋二環式環系」とは、環が架橋されている、二環式のヘテロ脂環式（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃａｌｉｐａｈｔｉｃ）環系または二環式の脂環式環系のことを指す。架橋二環式環系の例としては、アダマンタニル、ノルボルナニル、ビシクロ［３．２．１］オクチル、ビシクロ［２．２．２］オクチル、ビシクロ［３．３．１］ノニル、ビシクロ［３．３．２］デシル、２−オキサビシクロ［２．２．２］オクチル、１−アザビシクロ［２．２．２］オクチル、３−アザビシクロ［３．２．１］オクチルおよび２，６−ジオキサ−トリシクロ［３．３．１．０３，７］ノニルが挙げられるが、これらに限定されない。架橋二環式環系は、１つまたはそれを超える置換基（例えば、アルキル（カルボキシアルキル、ヒドロキシアルキルおよびハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル）を含む）、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロシクロアルキル、（ヘテロシクロアルキル）アルキル、アリール、ヘテロアリール、アルコキシ、シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アラルキルオキシ、ヘテロアラルキルオキシ、アロイル、ヘテロアロイル、ニトロ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アミノカルボニル、アルキルカルボニルアミノ、シクロアルキルカルボニルアミノ、（シクロアルキルアルキル）カルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノ、（ヘテロシクロアルキル）カルボニルアミノ、（ヘテロシクロアルキルアルキル）カルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、ヘテロアラルキルカルボニルアミノ、シアノ、ハロ、ヒドロキシ、アシル、メルカプト、アルキルスルファニル、スルホキシ、尿素、チオ尿素、スルファモイル、スルファミド、オキソまたはカルバモイル）で必要に応じて置換され得る。
【００６４】
本明細書中で使用されるとき、「アシル」基とは、ホルミル基またはＲＸ−Ｃ（Ｏ）−（例えば、「アルキルカルボニル」とも称されるアルキル−Ｃ（Ｏ）−）のことを指し、ここで、ＲＸおよび「アルキル」は、先に定義されたものである。アセチルおよびピバロイルは、アシル基の例である。
【００６５】
本明細書中で使用されるとき、「アロイル」または「ヘテロアロイル」とは、アリール−Ｃ（Ｏ）−またはヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−のことを指す。アロイルまたはヘテロアロイルのアリールおよびヘテロアリール部分は、先に定義されたように必要に応じて置換される。
【００６６】
本明細書中で使用されるとき、「アルコキシ」基とは、アルキル−Ｏ−基のことを指し、ここで、「アルキル」は、先に定義されたものである。
【００６７】
本明細書中で使用されるとき、「カルバモイル」基とは、構造−Ｏ−ＣＯ−ＮＲＸＲＹまたは−ＮＲＸ−ＣＯ−Ｏ−ＲＺを有する基のことを指し、ここで、ＲＸおよびＲＹは、上で定義されたものであり、ＲＺは、脂肪族、アリール、芳香脂肪族、ヘテロ脂環式、ヘテロアリールまたはヘテロ芳香脂肪族であり得る。
【００６８】
本明細書中で使用されるとき、「カルボキシ」基とは、末端基として使用されるとき、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲＸ、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）ＲＸ；または内部基として使用されるとき、−ＯＣ（Ｏ）−もしくは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−のことを指す。
【００６９】
本明細書中で使用されるとき、「ハロ脂肪族」基とは、１〜３個のハロゲンで置換された脂肪族基のことを指す。例えば、用語ハロアルキルは、基−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、および−ＣＨ２Ｆを含む。
【００７０】
本明細書中で使用されるとき、「メルカプト」基とは、−ＳＨのことを指す。
【００７１】
本明細書中で使用されるとき、「スルホ」基とは、末端に使用されるとき、−ＳＯ３Ｈもしくは−ＳＯ３ＲＸ、または内部で使用されるとき、−Ｓ（Ｏ）３−のことを指す。
【００７２】
本明細書中で使用されるとき、「スルファミド」基とは、末端に使用されるとき、構造−ＮＲＸ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲＹＲＺ、および内部で使用されるとき、−ＮＲＸ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲＹ−のことを指し、ここで、ＲＸ、ＲＹおよびＲＺは、上で定義されたものである。
【００７３】
本明細書中で使用されるとき、「スルファモイル」基とは、構造−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲＹＲＺのことを指し、ここで、ＲＹおよびＲＺは、上で定義されたものである。
【００７４】
本明細書中で使用されるとき、「スルホンアミド」基とは、末端に使用されるとき、構造−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲＸＲＹもしくは−ＮＲＸ−Ｓ（Ｏ）２−ＲＺ；または内部で使用されるとき、−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲＸ−もしくは−ＮＲＸ−Ｓ（Ｏ）２−のことを指し、ここで、ＲＸ、ＲＹおよびＲＺは、上で定義されている。
【００７５】
本明細書中で使用されるとき、「スルファニル」基とは、末端に使用されるとき、−Ｓ−ＲＸ、および内部で使用されるとき、−Ｓ−のことを指し、ここで、ＲＸは、上で定義されたものである。スルファニルの例としては、脂肪族−Ｓ−、脂環式−Ｓ−、アリール−Ｓ−などが挙げられる。
【００７６】
本明細書中で使用されるとき、「スルフィニル」基とは、末端に使用されるとき、−Ｓ（Ｏ）−ＲＸ、および内部で使用されるとき、−Ｓ（Ｏ）−のことを指し、ここで、ＲＸは、上で定義されたものである。例示的なスルフィニル基としては、脂肪族−Ｓ（Ｏ）−、アリール−Ｓ（Ｏ）−、（脂環式（脂肪族））−Ｓ（Ｏ）−、シクロアルキル−Ｓ（Ｏ）−、ヘテロ脂環式−Ｓ（Ｏ）−、ヘテロアリール−Ｓ（Ｏ）−などが挙げられる。
【００７７】
本明細書中で使用されるとき、「スルホニル」基とは、末端に使用されるとき、−Ｓ（Ｏ）２−ＲＸ、および内部で使用されるとき、−Ｓ（Ｏ）２−のことを指し、ここで、ＲＸは、上で定義されたものである。例示的なスルホニル基としては、脂肪族−Ｓ（Ｏ）２−、アリール−Ｓ（Ｏ）２−、（脂環式（脂肪族））−Ｓ（Ｏ）２−、脂環式−Ｓ（Ｏ）２−、ヘテロ脂環式−Ｓ（Ｏ）２−、ヘテロアリール−Ｓ（Ｏ）２−、（脂環式（アミド（脂肪族）））−Ｓ（Ｏ）２−などが挙げられる。
【００７８】
本明細書中で使用されるとき、「スルホキシ」基とは、末端に使用されるとき、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−ＲＸまたは−Ｓ（Ｏ）−Ｏ−ＲＸ、および内部で使用されるとき、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−または−Ｓ（Ｏ）−Ｏ−のことを指し、ここで、ＲＸは、上で定義されたものである。
【００７９】
本明細書中で使用されるとき、「ハロゲン」または「ハロ」基とは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素のことを指す。
【００８０】
本明細書中で使用されるとき、単独でまたは別の基と接続して使用される、用語カルボキシによって包含される「アルコキシカルボニル」とは、アルキル−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−などの基のことを指す。
【００８１】
本明細書中で使用されるとき、「アルコキシアルキル」とは、アルキル−Ｏ−アルキル−などのアルキル基のことを指し、ここで、アルキルは、上で定義されたものである。
【００８２】
本明細書中で使用されるとき、「カルボニル」とは、−Ｃ（Ｏ）−のことを指す。
【００８３】
本明細書中で使用されるとき、「オキソ」とは、＝Ｏのことを指す。
【００８４】
本明細書中で使用されるとき、用語「ホスホ」とは、ホスフィネートおよびホスホネートのことを指す。ホスフィネートおよびホスホネートの例としては、−Ｐ（Ｏ）（ＲＰ）２が挙げられ、ここで、ＲＰは、脂肪族、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、（脂環式）オキシ、（ヘテロ脂環式）オキシ  アリール、ヘテロアリール、脂環式またはアミノである。
【００８５】
本明細書中で使用されるとき、「アミノアルキル」とは、構造（ＲＸ）２Ｎ−アルキル−のことを指す。
【００８６】
本明細書中で使用されるとき、「シアノアルキル」とは、構造（ＮＣ）−アルキル−のことを指す。
【００８７】
本明細書中で使用されるとき、「尿素」基とは、構造−ＮＲＸ−ＣＯ−ＮＲＹＲＺのことを指し、「チオ尿素」基とは、末端に使用されるとき、構造−ＮＲＸ−ＣＳ−ＮＲＹＲＺ、および内部で使用されるとき、−ＮＲＸ−ＣＯ−ＮＲＹ−または−ＮＲＸ−ＣＳ−ＮＲＹ−のことを指し、ここで、ＲＸ、ＲＹおよびＲＺは、上で定義されたものである。
【００８８】
本明細書中で使用されるとき、「グアニジン」基とは、構造−Ｎ＝Ｃ（Ｎ（ＲＸＲＹ））Ｎ（ＲＸＲＹ）または−ＮＲＸ−Ｃ（＝ＮＲＸ）ＮＲＸＲＹのことを指し、ここで、ＲＸおよびＲＹは、上で定義されたものである。
【００８９】
本明細書中で使用されるとき、用語「アミジノ」基とは、構造−Ｃ＝（ＮＲＸ）Ｎ（ＲＸＲＹ）のことを指し、ここで、ＲＸおよびＲＹは、上で定義されたものである。
【００９０】
一般に、用語「ビシナル」とは、２つまたはそれを超える炭素原子を含む基上の置換基の配置のことを指し、ここで、それらの置換基は、隣接する炭素原子に結合されている。
【００９１】
一般に、用語「ジェミナル」とは、２つまたはそれを超える炭素原子を含む基上の置換基の配置のことを指し、ここで、それらの置換基は、同じ炭素原子に結合されている。
【００９２】
用語「末端に」および「内部で」とは、置換基内の基の位置のことを指す。ある基が、化学構造の残部にさらに結合されない置換基の末端に存在するとき、その基は、末端基である。カルボキシアルキル、すなわち、ＲＸＯ（Ｏ）Ｃ−アルキルは、末端に使用されるカルボキシ基の例である。ある基が、化学構造の置換基の中央に存在するとき、その基は、内部基である。アルキルカルボキシ（例えば、アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−またはアルキル−ＯＣ（Ｏ）−）およびアルキルカルボキシアリール（例えば、アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール−またはアルキル−Ｏ（ＣＯ）−アリール−）は、内部で使用されるカルボキシ基の例である。
【００９３】
本明細書中で使用されるとき、「脂肪族鎖」とは、分枝状または直鎖状の脂肪族基（例えば、アルキル基、アルケニル基またはアルキニル基）のことを指す。いくつかの例において、直鎖状の脂肪族鎖は、構造−［ＣＨ２］ｖ−を有し、ここで、ｖは、１〜１２である。分枝状の脂肪族鎖は、１つまたはそれを超える脂肪族基で置換された直鎖状の脂肪族鎖である。いくつかの例において、分枝状の脂肪族鎖は、構造−［ＣＱＱ］ｖ−を有し、ここで、Ｑは、独立して、水素または脂肪族基であるが；しかしながら、Ｑは、少なくとも１つの場合において脂肪族基である。脂肪族鎖という用語は、アルキル鎖、アルケニル鎖およびアルキニル鎖を含み、ここで、アルキル、アルケニルおよびアルキニルは、上で定義されている。
【００９４】
句「必要に応じて置換されている」は、句「置換されているまたは非置換である」と交換可能に使用される。本明細書中に記載されるように、本発明の化合物は、１つまたはそれを超える置換基（例えば、上記で広く例示されたものまたは本発明の特定のクラス、サブクラスおよび種によって例証されるもの）で必要に応じて置換され得る。本明細書中に記載されるように、可変部Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＸならびに本明細書中に記載される式に含まれる他の可変部は、特定の基（例えば、アルキルおよびアリール）を含む。別段述べられない限り、それらの可変部に対する特定の基の各々は、本明細書中に記載される１つまたはそれを超える置換基で必要に応じて置換され得る。特定の基の各置換基はさらに、ハロ、シアノ、オキソ、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、アリール、脂環式、ヘテロ脂環式、ヘテロアリール、ハロアルキルおよびアルキルのうちの１〜３つで必要に応じて置換されている。例えば、アルキル基は、アルキルスルファニルで置換され得、そのアルキルスルファニルは、ハロ、シアノ、オキソ、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、アリール、ハロアルキルおよびアルキルのうちの１〜３つで必要に応じて置換され得る。さらなる一例として、（シクロアルキル）カルボニルアミノのシクロアルキル部分は、ハロ、シアノ、アルコキシ、ヒドロキシ、ニトロ、ハロアルキルおよびアルキルのうちの１〜３つで必要に応じて置換され得る。２つのアルコキシ基が、同じ原子または隣接する原子に結合しているとき、それらの２つのアルコキシ（ａｌｋｘｏｙ）基は、それらが結合している原子（単数または複数）と一体となって、環を形成し得る。
【００９５】
一般に、用語「置換されている」は、用語「必要に応じて」が前に置かれるか否かを問わず、特定される置換基のラジカルによる、所与の構造における水素ラジカルの置き換えのことを指す。特定の置換基は、上記の定義および下記の化合物の説明およびその実施例に記載される。別段示されない限り、必要に応じて置換される基は、その基の置換可能な各位置に置換基を有し得、任意の所与の構造における１つより多い位置が、特定の基から選択される１つより多い置換基で置換され得るとき、その置換基は、すべての位置において同じであり得るかまたは異なり得る。ヘテロシクロアルキルなどの環置換基は、シクロアルキルなどの別の環に結合されて、スピロ二環式環系を形成し得、例えば、両方の環が、１つの共通の原子を共有する。当業者が認識するように、本発明が想定する置換基の組み合わせは、安定した化合物または化学的にあり得る化合物の形成をもたらす組み合わせである。
【００９６】
別段述べられない限り、本明細書中に描かれる構造は、その構造のすべての異性体（例えば、鏡像異性体、ジアステレオ異性体および幾何異性体（または配座異性体））；例えば、各不斉中心に対するＲおよびＳ配置、（Ｚ）および（Ｅ）二重結合異性体、ならびに（Ｚ）および（Ｅ）配座異性体を含むとも意味される。ゆえに、本化合物の単一の立体化学異性体、ならびに鏡像異性体混合物、ジアステレオ異性体混合物および幾何異性体（または配座異性体）混合物が、本発明の範囲内である。
【００９７】
さらに、別段述べられない限り、本明細書中に描かれる構造は、１つまたはそれを超える同位体的に富化された原子の存在だけが異なる化合物を含むとも意味される。例えば、重水素もしくは三重水素による水素の置き換え、または１３Ｃもしくは１４Ｃに富化された炭素による炭素の置き換え以外は本構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。そのような化合物は、例えば、生物学的アッセイにおけるプローブもしくは分析ツールとして、または治療剤として有用である。
【００９８】
ＩＩ．化合物
【００９９】
１つの態様において、本発明は、式Ｉの化合物
【化４】
2019532071.tif 000006
またはその薬学的に許容され得る塩を提供し、式中、
Ｘは、−Ｏ−または−Ｓ−であり；
【化５】
2019532071.tif 000007
は、結合であるか、または存在せず；
Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、そのいずれもが、必要に応じて置換されており；
Ｒ２は、−Ｌ−Ｒ’−であり、Ｌは、結合または−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ’は、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ’は、必要に応じて置換されており；
Ｒ３は、水素または必要に応じて置換されているＣ１−６アルキルであり；
各Ｒ４は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、−ＯＨ、ハロ、ハロアルキル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）または−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）から選択され、Ｒ４は、必要に応じて置換されており；
Ｒ５およびＲ６の各々は、独立して、水素、ハロまたはＣ１−４アルキルであり；
ｎは、０、１、２、３、４または５である。
［００１００］
いくつかの実施形態において、Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、該アルキル、シクロアルキルまたはアリールは、必要に応じて置換されている。例えば、Ｒ１は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、そのいずれもが、ハロで必要に応じて置換されている。他の例において、Ｒ１は、水素またはＣ１−６アルキルであり、該Ｃ１−６アルキルは、１〜３つのハロで必要に応じて置換されている。そして、いくつかの例において、Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルであり、そのいずれもが、１〜３つのハロで必要に応じて置換されている。例えば、Ｒ１は、フルオロメチルである。他の例において、Ｒ１は、非置換Ｃ１−６アルキルである。例えば、Ｒ１は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルである。いくつかの場合、Ｒ１は、エチルである。いくつかの場合、Ｒ１は、イソプロピルである。いくつかの場合、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−ブチルである。いくつかの場合、Ｒ１は、水素である。いくつかの実施形態において、Ｒ１は、必要に応じて置換されている３〜７員のシクロアルキル、フェニルまたはナフチルであり、そのいずれもが、必要に応じて置換されている。
【０１００】
いくつかの実施形態において、Ｌは、−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ’は、水素、Ｃ１−６アルキル、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアラルキルであり、Ｒ２は、ハロ、ＣＮ、カルボキシルまたはオキソで必要に応じて置換されている。例えば、Ｌは、−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ２は、ヘテロアリールである。他の例において、Ｒ２は、
【化６】
2019532071.tif 000008
である。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、Ｒ３は、必要に応じて置換されているＣ１−６アルキルである。例えば、Ｒ３は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルであり、そのいずれもが、必要に応じて置換されている。他の例において、Ｒ３は、水素である。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、各Ｒ４は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、−ＯＨ、ハロ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）または−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）から選択され、Ｒ４のアルキル基は、ハロ、−ＣＮ、カルボキシルまたはオキソで必要に応じて置換されている。いくつかの例において、各Ｒ４は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、ハロ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）または−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）から選択され、ここで、Ｒ４のアルキル基は、ハロ、カルボキシルまたはオキソで必要に応じて置換されている。いくつかの例において、各Ｒ４は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキルまたはハロである。他の例において、各Ｒ４は、水素である。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、Ｒ４は、水素であり、Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキルまたはハロアルキルである。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、ｎは、０、１または２である。例えば、ｎは、０である。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、Ｘは、−Ｏ−である。
【０１０６】
いくつかの実施形態において、Ｘは、−Ｓ−である。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、
【化７】
2019532071.tif 000009
は、結合である。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、
【化８】
2019532071.tif 000010
は、存在しない。
【０１０９】
いくつかの実施形態において、Ｒ５およびＲ６は、各々独立して、水素またはハロである。例えば、Ｒ５およびＲ６は、両方とも−Ｆである。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物は、下記の表１中の化合物から選択される。
【０１１１】
【表１】
2019532071.tif 000011
【０１１２】
ＩＩＩ．薬学的に許容され得る組成物
【０１１３】
本発明の１つの態様において、薬学的に許容され得る組成物が提供され、ここで、これらの組成物は、本明細書中に記載されるような化合物のいずれかを含み、必要に応じて、薬学的に許容され得るキャリア、アジュバントまたはビヒクルを含む。ある特定の実施形態において、これらの組成物は、必要に応じて１つまたはそれを超えるさらなる治療薬をさらに含む。
【０１１４】
本発明のある特定の化合物が、処置のために遊離型で、または適切な場合にはその薬学的に許容され得る誘導体もしくはプロドラッグとして存在し得ることも認識される。本発明によれば、薬学的に許容され得る誘導体またはプロドラッグには、薬学的に許容され得る塩、エステル、そのようなエステルの塩、あるいはそれらを必要とする患者に投与したとき、本明細書中に別途記載されるような化合物またはその代謝産物もしくは残基を直接または間接的に提供することができる他の任意の付加物または誘導体が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１５】
本明細書中で使用されるとき、用語「薬学的に許容され得る塩」とは、適切な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激作用、アレルギー反応など無くヒトおよび下等動物の組織との接触において使用するために適切であり、そして合理的な利益／危険比に釣り合う、塩のことを指す。「薬学的に許容され得る塩」は、レシピエントに投与したとき、本発明の化合物またはその阻害的に活性な代謝産物もしくは残基を直接または間接的に提供することができる、本発明の化合物の任意の無毒性の塩またはエステルの塩を意味する。
【０１１６】
薬学的に許容され得る塩は、当該分野で周知である。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅらは、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９７７，６６，１−１９（参照により本明細書中に援用される）に、薬学的に許容され得る塩を詳細に記載している。本発明の化合物の薬学的に許容され得る塩には、好適な無機および有機の酸および塩基から得られる塩が含まれる。薬学的に許容され得る無毒性の酸付加塩の例は、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸および過塩素酸）もしくは有機酸（例えば、酢酸（acetic  cit））と形成されるか、またはイオン交換などの当該分野において使用される他の方法を使用することによって形成されるアミノ基の塩である。
【０１１７】
他の薬学的に許容され得る塩としては、アジペート、アルギネート、アスコルベート、アスパルテート、ベンゼンスルホネート、ベンゾエート、ビスルフェート、ボレート、ブチレート、カンホレート、ショウノウスルホネート、シトレート、シクロペンタンプロピオネート、ジグルコネート、ドデシルスルフェート、エディシレート（ｅｄｉｓｙｌａｔｅ）（エタンジスルホネート）、エタンスルホネート、ホルメート、フマレート、グルコヘプトネート、グリセロホスフェート、グルコネート、ヘミスルフェート、ヘプタノエート、ヘキサノエート、ヒドロヨージド、２−ヒドロキシ−エタンスルホネート、ラクトビオネート、ラクテート、ラウレート、ラウリルスルフェート、マレート、マレエート、マロネート、メタンスルホネート、２−ナフタレンスルホネート、ニコチネート、ニトレート、オレエート、オキサレート、パルミテート、パモエート、ペクチネート、ペルスルフェート、３−フェニルプロピオネート、ホスフェート、ピクレート、ピバレート、プロピオネート、ステアレート、スクシネート、スルフェート、タルトレート、チオシアネート、ｐ−トルエンスルホネート、ウンデカノエート、バレレート塩などが挙げられる。適切な塩基から得られる塩としては、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩およびＮ＋（Ｃ１−４アルキル）４塩が挙げられる。本発明は、本明細書中に開示される化合物の任意の塩基性窒素含有基の四級化も想定する。そのような四級化によって、水溶性もしくは油溶性または水分散性もしくは油分散性の生成物が得られる場合がある。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが挙げられる。さらに薬学的に許容され得る塩としては、適切な場合、対イオンを用いて形成される無毒性のアンモニウム、四級アンモニウムおよびアミンカチオン（例えば、ハロゲン化物、水酸化物、カルボキシレート、スルフェート、ホスフェート、ニトレート、低級アルキルスルホネートおよびアリールスルホネート）が挙げられる。
【０１１８】
上に記載されたように、本発明の薬学的に許容され得る組成物は、化合物、および薬学的に許容され得るキャリア、佐剤またはビヒクルを含み、これらは、本明細書中で使用されるとき、所望の特定の剤形にふさわしい任意のおよびすべての溶媒、希釈剤または他の液状のビヒクル、分散助剤または懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、保存剤、固体結合剤、滑沢剤などを含む。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｉｘｔｅｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８０）には、薬学的に許容され得る組成物を製剤化する際に使用される様々なキャリア、およびそれを調製するための公知の手法が開示されている。任意の従来のキャリア媒体が、本発明の化合物と適合しない場合を除いて（例えば、任意の望ましくない生物学的作用をもたらすことによって、またはそうでなければ、薬学的に許容され得る組成物の他の任意の構成要素（単数または複数）と有害な様式で相互作用することによって）、その使用は、本発明の範囲内であると企図される。薬学的に許容され得るキャリアとして機能し得る材料のいくつかの例としては、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン）、緩衝物質（例えば、ホスフェート、グリシン、ソルビン酸またはソルビン酸カリウム）、植物性飽和脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質（例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩）、コロイダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、ポリアクリレート、ろう、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、羊毛脂、糖（例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース）；デンプン（例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン）；セルロースおよびその誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース）；トラガント粉末；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤（例えば、カカオバターおよび坐剤ろう）；油（例えば、落花生油、綿実油；ベニバナ油；ゴマ油；オリーブ油；トウモロコシ油およびダイズ油）；グリコール；例えば、（ｓｕｃｈ  ａ）プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール；エステル（例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル）；寒天；緩衝剤（例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム）；アルギン酸；発熱物質非含有水；等張食塩水；リンガー溶液；エチルアルコールおよびホスフェート緩衝液、ならびに他の無毒性で適合性の滑沢剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム）が挙げられるが、これらに限定されず、ならびに着色剤、放出剤（ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ）、コーティング剤、甘味料、香味料および芳香料、保存剤および酸化防止剤もまた、配合者の判断に従って組成物中に存在してもよい。
【０１１９】
ＩＶ．化合物の使用および投与
【０１２０】
別の態様において、本発明は、被験体において炎症を処置するかまたはその重症度を低下させる方法を提供し、その方法は、有効量の、式Ｉの化合物を含む組成物を、それを必要とする被験体、好ましくは哺乳動物に投与する工程を含む。本発明は、被験体において炎症性疾患を処置するかまたはその重症度を低下させる方法も提供し、その方法は、有効量の、式Ｉの化合物を含む組成物を、それを必要とする被験体、好ましくは哺乳動物に投与する工程を含む。
【０１２１】
なおも別の態様において、本発明は、糖質コルチコイドレセプターに関係する症状、疾患または障害を処置するかまたはその重症度を低下させる方法を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、糖質コルチコイドレセプターの活性の欠如に関係する症状、疾患または障害を処置する方法を提供し、その方法は、有効量の、式Ｉの化合物を含む組成物を、それを必要とする被験体、好ましくは哺乳動物に投与する工程を含む。ある特定の実施形態において、本発明は、被験体において炎症状態、炎症疾患または炎症障害を処置する方法を提供し、ここで、その被験体は、正常な糖質コルチコイドレセプター活性を有し、その方法は、有効量の、式Ｉの化合物を含む組成物を、それを必要とする被験体、好ましくは哺乳動物に投与する工程を含む。
【０１２２】
別の態様において、本発明は、糖質コルチコイドレセプターに関係する症状、疾患または障害を処置するかまたはその重症度を低下させる方法を提供し、ここで、その症状、疾患または障害は、喘息、関節炎、狼瘡、クローン病、炎症性腸疾患、セリアック病（Ｃｏｅｌｉａｃ  ｄｉｓｅａｓｅ）、糸球体腎炎、尋常性ざ瘡、白血病および膵がんから選択される。
【０１２３】
本発明によれば、化合物または薬学的に許容され得る組成物の「有効量」は、上記に列挙されたような疾患、障害または症状のうちの１つまたはそれより多くを処置するためまたはその重症度を低下させるために有効な量である。
【０１２４】
それらの化合物および組成物は、本発明の方法に従って、上記に列挙されたような疾患、障害または症状のうちの１つまたはそれより多くを処置するためまたはその重症度を低下させるために有効な任意の量および任意の投与経路を用いて投与され得る。
【０１２５】
必要とされる正確な量は、被験体の種、齢および全般的な状態、感染の重症度、特定の薬剤、投与様式などに応じて被験体ごとに異なる。本発明の化合物は、好ましくは、投与を容易にするためおよび投与量を均一にするために投薬単位形態（ｄｏｓａｇｅ  ｕｎｉｔ  ｆｏｒｍ）で製剤化される。表現「投薬単位形態」は、本明細書中で使用されるとき、処置される患者にとって適切な薬剤の物理的に不連続な単位のことを指す。しかしながら、本発明の化合物および組成物の１日の総使用量は、適切な医学的判断の範囲内で主治医によって決定されることが理解される。任意の特定の患者または生物のための具体的な有効用量レベルは、処置されている障害およびその障害の重症度；使用されている具体的な化合物の活性；使用されている具体的な組成物；患者の年齢、体重、全般的な健康状態、性別および食事；使用されている具体的な化合物の投与時間、投与経路および排出速度；処置の期間；使用されている具体的な化合物と併用してまたは同時に使用される薬物、ならびに医学分野において周知の同様の因子を含む種々の因子に依存する。用語「患者」は、本明細書中で使用されるとき、動物、好ましくは、哺乳動物、最も好ましくは、ヒトを意味する。
【０１２６】
本発明の薬学的に許容され得る組成物は、処置される感染症の重症度に応じて、ヒトおよび他の動物に、経口的に、直腸に、非経口的に、槽内に、膣内に、腹腔内に、局所的に（散剤、軟膏剤、液滴またはパッチによって）、頬側に（ｂｕｃａｌｌｙ）、経口スプレー剤または点鼻薬などとして、投与され得る。ある特定の実施形態において、本発明の化合物は、所望の治療効果を得るために、１日あたり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ被験体体重という投与量レベルで、１日に１回またはそれを超える回数で経口的または非経口的に投与され得る。
【０１２７】
経口投与用の液体剤形としては、薬学的に許容され得る乳剤、マイクロエマルジョン、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が挙げられるが、これらに限定されない。液体剤形は、有効な化合物に加えて、当該分野において通常使用される不活性な希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物を含み得る。経口組成物は、不活性な希釈剤のほかに、佐剤（例えば、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味料、香味料および芳香料）も含み得る。
【０１２８】
注射可能な調製物、例えば、滅菌された注射可能な水性または油性の懸濁剤は、好適な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて公知の技術に従って製剤化され得る。滅菌された注射可能な調製物は、無毒性の非経口的に許容され得る希釈剤または溶媒中の滅菌された注射可能な液剤、懸濁剤または乳剤、例えば、１，３−ブタンジオール中の液剤でもあり得る。使用され得る許容され得るビヒクルおよび溶媒は、水、リンガー溶液，Ｕ．Ｓ．Ｐ．および等張性塩化ナトリウム溶液である。さらに、滅菌された固定油が、溶媒または懸濁媒として従来法で使用される。この目的のために、合成モノグリセリドまたは合成ジグリセリドを含む任意の非刺激性の固定油が、使用され得る。さらに、オレイン酸などの脂肪酸が、注射可能物の調製において使用される。
【０１２９】
注射可能な製剤は、使用前に、例えば、細菌保持フィルターで濾過することによって、または滅菌水もしくは他の滅菌された注射可能な媒体に溶解され得るかもしくは分散され得る滅菌された固体組成物の形態に滅菌剤を組み込むことによって、滅菌され得る。
【０１３０】
本発明の化合物の効果を延長するために、皮下注射または筋肉内注射からの化合物の吸収を遅らせることが望ましいことが多い。これは、水溶性に乏しい結晶性材料または非晶質材料の液体懸濁剤を使用することによって達成され得る。化合物の吸収速度は、その溶解速度に依存し、さらにその溶解速度は、結晶サイズおよび結晶形に依存し得る。あるいは、非経口的に投与される化合物の形態の吸収の遅延は、その化合物を油性ビヒクルに溶解するかまたは懸濁することによって達成される。注射可能なデポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中にその化合物のマイクロカプセルマトリックス（ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌｅ  ｍａｔｒｉｃｅｓ）を形成することによって作製される。化合物とポリマーとの比および使用される特定のポリマーの性質に応じて、化合物の放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が挙げられる。注射可能なデポー製剤は、体組織と適合性であるリポソームまたはマイクロエマルジョンの中に化合物を封入することによっても調製される。
【０１３１】
直腸投与用または膣投与用の組成物は、好ましくは、周囲温度において固体であるが体温では液体であるがゆえに直腸または膣腔において融解して有効な化合物を放出する好適な非刺激性の賦形剤またはキャリア（例えば、カカオバター、ポリエチレングリコールまたは坐剤ろう）と本発明の化合物を混合することによって調製され得る坐剤である。
【０１３２】
経口投与用の固形剤形としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤が挙げられる。そのような固形剤形では、有効な化合物は、少なくとも１つの不活性な薬学的に許容され得る賦形剤もしくはキャリア（例えば、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウム）ならびに／またはａ）充填剤または増量剤（例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸）、ｂ）結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロースおよびアカシア）、ｃ）保水剤（例えば、グリセロール）、ｄ）崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のシリケートおよび炭酸ナトリウム）、ｅ）溶解遅延剤（例えば、パラフィン）、ｆ）吸収促進剤（例えば、四級アンモニウム化合物）、ｇ）湿潤剤（例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール）、ｈ）吸収剤（例えば、カオリンおよびベントナイト粘土）、およびｉ）滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびそれらの混合物）と混合される。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、その剤形は、緩衝剤も含み得る。
【０１３３】
類似のタイプの固体組成物は、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を使用する軟および硬ゼラチンカプセルにおいて充填剤としても使用され得る。錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固形剤形は、コーティングおよびシェル（例えば、腸溶コーティングおよび製剤配合の分野において周知の他のコーティング）を用いて調製され得る。それらは、必要に応じて不透明化剤を含むことがあり、ある特定の腸管部分において、必要に応じて遅延様式で、有効成分（単数または複数）だけを放出するかまたは有効成分（単数または複数）を優先的に放出する組成物でもあり得る。使用され得る包埋組成物の例としては、ポリマー物質およびろうが挙げられる。類似のタイプの固体組成物は、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量ポリエチレン（ｐｏｌｅｔｈｙｌｅｎｅ）グリコールなどのような賦形剤を使用する軟および硬ゼラチンカプセルにおいて充填剤としても使用され得る。
【０１３４】
有効な化合物は、上で述べたような１つまたはそれを超える賦形剤を有するマイクロカプセル化された形態でもあり得る。錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固形剤形は、コーティングおよびシェル（例えば、腸溶コーティング、放出制御コーティングおよび製剤配合の分野において周知の他のコーティング）を用いて調製され得る。そのような固形剤形において、有効な化合物は、少なくとも１つの不活性な希釈剤（例えば、スクロース、ラクトースまたはデンプン）と混和され得る。そのような剤形は、通常の慣行のように、不活性な希釈剤以外のさらなる物質、例えば、打錠滑沢剤および他の打錠助剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セルロース）も含み得る。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、それらの剤形は、緩衝剤も含み得る。それらは、必要に応じて不透明化剤を含むことがあり、ある特定の腸管部分において、必要に応じて遅延様式で、有効成分（単数または複数）だけを放出するかまたは有効成分（単数または複数）を優先的に放出する組成物でもあり得る。使用され得る包埋組成物の例としては、ポリマー物質およびろうが挙げられる。
【０１３５】
本発明の化合物の局所的投与用または経皮的投与用の剤形としては、軟膏剤、ペースト、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、散剤、液剤、スプレー剤、吸入剤または貼付剤が挙げられる。有効な構成要素は、必要とされ得るとき、薬学的に許容され得るキャリアおよび任意の必要とされる保存剤または緩衝剤と、滅菌された条件下において混和される。眼科用製剤、点耳剤および点眼剤もまた、本発明の範囲内であると企図される。さらに、本発明は、化合物を身体に制御して送達するという追加の利点を有する経皮貼付剤の使用を企図する。そのような剤形は、化合物を適切な媒体に溶解するかまたは分散することによって作製される。吸収促進剤もまた、皮膚を越える化合物の流入を増加させるために使用され得る。その速度は、速度制御された膜を提供することによって、または化合物をポリマーマトリックスもしくはゲルに分散することによって、制御され得る。
【０１３６】
糖質コルチコイドレセプターの調節因子として本発明において使用される化合物の活性は、当該分野において広く説明されている方法および本明細書中の実施例に説明されている方法に従ってアッセイされ得る。
【実施例】
【０１３７】
Ｖ．実施例
【０１３８】
本明細書中に提供される実施例は、本発明がより十分に理解され得るように提供されるものであって、決して限定することを意味していない。
【０１３９】
一般的合成スキーム
【０１４０】
スキーム１：
【化９】
2019532071.tif 000012
【０１４１】
スキーム２：
【化１０】
2019532071.tif 000013
【０１４２】
スキーム１および２は、商業的に入手可能なコルチゾールからの式１−Ｇの化合物の一般的合成スキーム（ｇｅｎｅｒａｌ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ）を提供しており、スキーム中、Ｒ１、Ｒ４およびＲ’は、上記で定義されている。スキーム１から、過ヨウ素酸などの試薬を用いてコルチゾールを酸化することにより、式１−Ａのカルボン酸が提供され、このカルボン酸は、この合成の後半段階においてさらに官能化することができる。１−Ａを塩基およびアルデヒド試薬で処理すること（例えば、ＮａＨ／ギ酸メチル条件）により、式１−Ｂの化合物が提供される。１−Ｂを、必要に応じて置換されているフェニルヒドラジンで処理する（スキーム１および２は、例としてメタ位に置換基を示している）ことにより、式１−Ｃの化合物が提供される。構造
【化１１】
2019532071.tif 000014
の塩化アシルを用いた１７αヒドロキシル置換基の官能化によって、式１−Ｄの化合物が提供される。
【０１４３】
スキーム２は、式１−Ｄの化合物のカルボン酸部分の官能化に関する一般的合成を提供している。エステルを得るために、式１−Ｄの化合物を塩基および式Ｒ１−ＬＧの化合物（式中、ＬＧは脱離基である）で処理して、式１−Ｅを提供することができる。１−Ｄのチオエステルは、Ｎ，Ｎ−ジメチルチオカルバモイルクロリドなどの好適な試薬による、カルボン酸部分から式１−Ｆのチオカルボン酸への第１の変換によって得ることができ、そのチオカルボン酸は、式Ｒ１−ＬＧの化合物（式中、ＬＧは脱離基である）とさらに反応することにより、式１−Ｇの化合物を提供することができる。
【０１４４】
スキーム３：
【化１２】
2019532071.tif 000015
【０１４５】
スキーム４：
【化１３】
2019532071.tif 000016
【０１４６】
式２−Ｉの化合物は、上記のスキーム３および４に従って、２−Ａなどの出発化合物から合成することができる。用いられる反応工程、それらの工程の順序および試薬は、例証的であると意味されているのであって、決して本発明を限定すると意味されていない。
【０１４７】
スキーム３によれば、２−Ｂを得るための２−Ａのα−ヒドロキシアセチル基のヒドロキシルメチル基の酸化的切断は、過ヨウ素酸を用いて達成することができる。例えば、水素ガスおよびＰｄ／Ｃ触媒を用いて、２−Ｂのオレフィン部分を還元することにより、飽和生成物２−Ｃが提供される。例えば分子の臭素を用いた、その後の臭素化によって、ビス−α，α’臭化物化合物２−Ｄが提供される。炭酸カルシウムなどの塩基および臭化リチウムなどの触媒を用いた２つの臭化物置換基の脱離によって、２−Ｅが提供される。水素化ナトリウムなどの塩基を用いて、２−Ｅのエノラートの生成が達成でき、その後、ギ酸メチルの求核付加によって、化合物２−Ｆを提供することができる。必要に応じて置換されているフェニルヒドラジンによって２−Ｆを処理する（スキーム３および４は、例としてメタ位に置換基を示している）ことによって、ピラジン化合物２−Ｇを提供することができる。その後、式Ｒ’−Ｃ（Ｏ）−Ｘ（式中、Ｘは塩化物などの脱離基である）の活性化カルボニル化合物を用いた２−Ｇの遊離ヒドロキシル基のエステル化によって、式２−Ｈの化合物を提供することができる。
【０１４８】
スキーム４は、式２−Ｈの化合物のカルボン酸部分の官能化に関する一般的合成を提供している。エステルを得るために、式２−Ｈの化合物を、塩基およびハロアルキルなどの好適な求電子剤で処理することにより、式２−Ｉを提供することができる。２−Ｈのチオエステルは、Ｎ，Ｎ−ジメチルチオカルバモイルクロリドなどの好適な試薬による、カルボン酸部分から式２−Ｊのチオカルボン酸への第１の変換によって得ることができ、そのチオカルボン酸は、式Ｒ１−ＬＧの化合物（式中、ＬＧ脱離基である）とさらに反応することにより、式２−Ｋを提供することができる。
【０１４９】
合成実施例
【０１５０】
化合物２−Ｂの合成：
【化１４】
2019532071.tif 000017
【０１５１】
商業的に入手可能な化合物２−Ａ（４．１ｇ，１０ｍｍｏｌ）をメタノール（６０ｍｌ）に溶解し、次いで、過ヨウ素酸（６０ｍｌの水中４．５ｇ，２０ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。その混合物を室温で２時間撹拌した。メタノールを濃縮し、Ｈ２Ｏ（１００ｍｌ）を加えた。沈殿物を濾過し、水で洗浄し（１５×３ｍｌ）、風乾して、化合物２−Ｂ（３．２ｇ）を白色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO)  δ:  12.47  (s,  1H),  7.26  (dd,  J  =  10.2,  1.2  Hz,  1H),  6.28  (dd,  J  =  10.2,  1.9  Hz,  1H),  6.09  (s,  1H),  5.63  (ddd,  J  =  48.5,  9.6,  6.7  Hz,  1H),  5.33  (dd,  J  =  3.8,  1.7  Hz,  1H),  4.71  (s,  1H),  4.17  -  4.09  (m,  1H),  3.34  (s,  1H),  2.84  (ddd,  J  =  11.1,  7.1,  4.1  Hz,  1H),  2.26  -  2.16  (m,  1H),  1.49  (s,  3H),  0.99  (s,  3H),  0.86  (d,  J  =  7.1  Hz,  3H).  ＬＲ−Ｍａｓｓ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３９７．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５２】
化合物２−Ｃの合成：
【化１５】
2019532071.tif 000018
【０１５３】
化合物２−Ｂ（１．９ｇ，５ｍｍｏｌ）をメタノール（２００ｍｌ）に溶解し、Ｐｂ／Ｃ（２００ｍｇ）を加えた。Ｈ２下、室温で１日間、撹拌した後、その溶液をセライトのパッドで濾過し、次いで、減圧下で濃縮して、精製なしでさらに使用するための２−Ｃ（１．８ｇ）を得た。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO)  δ:  5.20  -  4.99  (m,  1H),  4.93  (d,  J  =  2.6  Hz,  1H),  4.21  (m,  1H),  2.89  -  2.77  (m,  1H),  2.56  (m,  J  =  15.9  Hz,  1H),  1.24  (s,  3H),  0.93  (s,  3H),  0.86  (d,  J  =  7.1  Hz,  3H).  ＬＲ−Ｍａｓｓ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４０１．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５４】
化合物２−Ｄの合成：
【化１６】
2019532071.tif 000019
【０１５５】
酢酸（４０ｍｌ）中の化合物２−Ｃ（１．６ｇ）を、酢酸中の６．６Ｍ臭化水素（１．６ｍｌ）および酢酸中の臭素の溶液（４．５ｍｌ）で連続的に処理した。室温で４０分間撹拌した後、水で希釈することにより、粗２−Ｄを得た（２．１ｇ）。1H  NMR  (300  MHz,  DMSO)  δ:  5.32  -  4.96  (m,  3H),  4.69  (m,  2H),  4.18  (m,  1H),  3.07  (m,  1H),  2.95  (m,  1H),  2.81  (s,  1H),  1.31  (s,  3H),  0.88  (s,  3H),  0.84  (d,  J  =  7.1  Hz,  3H).  ＬＲ−Ｍａｓｓ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５５９．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５６】
化合物２−Ｅの合成：
【化１７】
2019532071.tif 000020
【０１５７】
化合物２−Ｄ（２．０ｇ）を、窒素下において１００℃で維持されたジメチルアセトアミド（１７ｍｌ）中の、炭酸カルシウム（１．１ｇ）および無水臭化リチウム（０．８ｇ）の激しく撹拌した懸濁液に加えた。３時間後、冷却した混合物を過剰な希塩酸に注ぎ込み、その混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。粗生成物をクロマトグラフィによって精製して、化合物２−Ｅを白色固体として得て、固体を得た（０．６ｇ，４３％）。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO)  δ:  5.85  (s,  1H),  5.62  (d,  J  =  14.8  Hz,  1H),  5.27  -  5.19  (m,  1H),  4.74  (m,  1H),  4.11  (m,  1H),  3.07  -  2.78  (m,  3H),  2.70  -  2.58  (m,  1H),  2.42  -  2.03  (m,  6H),  1.45  (s,  3H),  1.03  (s,  3H),  0.89  (d,  J  =  7.1  Hz,  3H).  ＬＲ−Ｍａｓｓ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３９７．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５８】
化合物２−Ｆの合成：
【化１８】
2019532071.tif 000021
【０１５９】
化合物２−Ｅ（０．５ｇ）を、乾燥トルエン（１５ｍｌ）およびギ酸メチル（２ｍｌ）に溶解した。次いで、ＮａＨ（９００ｍｇ，２０ｍｍｏｌ，鉱油中６０％分散物）を加えた。室温で４時間撹拌した後、１Ｎ  ＨＣｌ（１２０ｍｌ）を加え、その混合物をＥｔＯＡｃで数回抽出した。溶媒を乾燥させ、除去して、０．６ｇの２−Ｆを、精製なしでさらに使用するための黄色泡沫状物として得た。ＬＲ−Ｍａｓｓ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４２５．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１６０】
化合物２−Ｇ−１の合成：
【化１９】
2019532071.tif 000022
【０１６１】
化合物２−Ｆ（０．５０ｇ）をＡｃＯＨ（１５ｍｌ）およびＨ２Ｏ（３ｍｌ）に溶解し、フェニルヒドラジン（０．１４ｇ）を加えた。その混合物を室温で４時間撹拌した。冷水（１００ｍｌ）を加え、沈殿物を濾過し、Ｈ２Ｏで洗浄し（１０×３ｍｌ）、風乾して、化合物２−Ｇ−１（０．４４ｇ）を黄色固体として得た。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO)  δ:  7.61  (s,  1H),  7.58  -  7.49  (m,  4H),  7.42  (m,  1H),  6.54  (s,  1H),  5.33  -  5.20  (m,  2H),  4.16  (s,  1H),  2.38  -  2.29  (m,  1H),  2.10  (d,  J  =  14.1  Hz,  1H),  1.71  (q,  J  =  11.5  Hz,  1H),  1.53  (d,  J  =  13.7  Hz,  1H),  1.26  (s,  3H),  1.05  (s,  3H),  0.87  (d,  J  =  7.1  Hz,  3H).  ＬＲ−Ｍａｓｓ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４９７．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１６２】
実施例１：化合物１の合成：
【化２０】
2019532071.tif 000023
【０１６３】
乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の化合物２−Ｇ−１（４００ｍｇ，ＴＥＡ（３００ｍＬ）の溶液に、Ｎ２下、０℃においてα−フロイルクロリド（２００ｍｇ）を加えた。その混合物を室温で３０分間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させて、粗生成物を得て、それを、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（５０：１）を用いるクロマトグラフィによって精製して、化合物１を白色固体として得た（８２％）。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO)  δ:  8.01  -  7.98  (m,  1H),  7.64  (s,  1H),  7.60  -  7.51  (m,  5H),  7.45  (m,  1H),  7.16  (dd,  J  =  3.5,  0.6  Hz,  1H),  6.70  (dd,  J  =  3.5,  1.7  Hz,  1H),  6.59  (s,  1H),  5.38  (dd,  J  =  21.7,  8.8  Hz,  2H),  4.26  (s,  1H),  1.29  (s,  3H),  1.23  (s,  2H),  1.11  (s,  3H),  0.92  (d,  J  =  7.1  Hz,  3H).  ＬＲ−Ｍａｓｓ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５９１．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１６４】
実施例２：化合物２の合成：
【化２１】
2019532071.tif 000024
【０１６５】
化合物１（５０ｍｇ）を、ＤＭＦ（２ｍＬ）中の、炭酸カリウム（３０ｍｇ）およびヨードエタン（２０ｍｇ）の激しく撹拌した懸濁液に加え、得られた混合物を５０℃で３時間撹拌した。その反応溶液を水（３０ｍＬ）に注ぎ込み、ＥｔＯＡｃで抽出し（２０ｍＬ×３）、合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。粗生成物をＰｒｅｐ−ＴＬＣによって精製して、化合物２を白色固体として得た（４１ｍｇ，７９％）。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO)  δ:  8.00  (s,  1H),  7.65  (s,  1H),  7.61  -  7.51  (m,  4H),  7.45  (m,  1H),  7.19  (d,  J  =  3.6  Hz,  1H),  6.71  (dd,  J  =  3.2,  1.6  Hz,  1H),  6.58  (s,  1H),  5.47  -  5.28  (m,  2H),  4.27  (s,  1H),  4.23  -  4.06  (m,  2H),  1.20  (t,  3H).  ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６１９．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１６６】
実施例３：化合物３の合成：
【化２２】
2019532071.tif 000025
【０１６７】
化合物１（５０ｍｇ）を、ＤＭＦ（２ｍＬ）中の、炭酸カリウム（３０ｍｇ）および２−ブロモプロパン（１５ｍｇ）の激しく撹拌した懸濁液に加え、得られた混合物を５０℃で３時間撹拌した。その反応溶液を水（３０ｍＬ）に注ぎ込み、ＥｔＯＡｃで抽出し（２０ｍＬ×３）、合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。粗生成物をＰｒｅｐ−ＴＬＣによって精製して、化合物３を白色固体として得た（３９ｍｇ，７３％）。1H  NMR  (400  MHz,  CDCl3)  δ:  7.58  (s,  1H),  7.54  -  7.47  (m,  6H),  7.38  (m,  1H),  7.15  (d,  J  =  3.6  Hz,  1H),  6.75  (s,  1H),  6.48  (dd,  J  =  3.2,  1.6  Hz,  1H),  5.25  -  5.08  (m,  2H),  4.45  (s,  1H),  1.31  (d,  3H),  1.23  (d,  3H).  ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６３３．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１６８】
実施例４：化合物４の合成：
【化２３】
2019532071.tif 000026
【０１６９】
化合物１（５０ｍｇ）を、ＤＭＦ（２ｍＬ）中の、炭酸カリウム（３０ｍｇ）およびフルオロ−ヨード−メタン（１５ｍｇ）の激しく撹拌した懸濁液に加え、得られた混合物を５０℃で３時間撹拌した。その反応溶液を水（３０ｍＬ）に注ぎ込み、ＥｔＯＡｃで抽出し（２０ｍＬ×３）、合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。粗生成物をＰｒｅｐ−ＴＬＣによって精製して、化合物４を白色固体として得た（３８ｍｇ，７２％）。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO)  δ:  8.02  (s,  1H),  7.65  (s,  1H),  7.63  -  7.50  (m,  4H),  7.45  (m,  1H),  7.25  (d,  J  =  3.6  Hz,  1H),  6.73  (dd,  J  =  3.2,  1.6  Hz,  1H),  6.60  (s,  1H),  5.84  (d,  J  =  112.4  Hz,  1H),  5.83  (d,  1H),  5.54  (d,  1H),  5.37  (d,  1H),  4.28  (s,  1H).  ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６２３．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１７０】
実施例５：化合物５の合成：
【化２４】
2019532071.tif 000027
【０１７１】
パートＩ：２−ブタノン（５ｍＬ）中の化合物１（２００ｍｇ）の撹拌溶液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルチオカルバモイルクロリド（８３ｍｇ）、トリエチルアミン（１００ｍｇ）およびヨウ化ナトリウム（５ｍｇ）を加えた。その混合物を７５℃で２時間撹拌し、次いで、真空中で濃縮した。得られた残渣を水で洗浄し、乾燥させて、０．２ｇの生成物を得た。得られた化合物をモルホリン（３ｍＬ）に加え、得られた混合物を室温で一晩撹拌した。次いで、１０〜１５℃の水および酢酸エチルの混合物を、上記の反応溶液に加えた。最後に、氷酢酸（０．５ｍＬ）を滴下により添加して、ｐＨをｐＨ５〜７に調整した。沈殿した固体を濾過し、水で洗浄し、乾燥させて、１７０ｍｇの（１Ｒ，２Ｒ，１０ａＳ，１０ｂＲ，１１Ｓ，１２ａＳ）−５，１０ｂ−ジフルオロ−１−（（フラン−２−カルボニル）オキシ）−１１−ヒドロキシ−２，１０ａ，１２ａ−トリメチル−７−フェニル−１，２，３，３ａ，３ｂ，７，１０，１０ａ，１０ｂ，１１，１２，１２ａ−ドデカヒドロシクロペンタ［５，６］ナフト［１，２−ｆ］インダゾール−１−カルボチオＳ−酸（化合物２−Ｊ−１）を得て、それを次の工程で直接使用した。
【０１７２】
パートＩＩ：化合物２−Ｊ−１（５０ｍｇ）を、ＤＭＦ（２ｍＬ）中の、炭酸カリウム（３０ｍｇ）およびフルオロ−ヨード−メタン（１５ｍｇ）の激しく撹拌した懸濁液に加え、得られた混合物を５０℃で３時間撹拌した。次いで、得られた溶液を水（３０ｍＬ）に注ぎ込み、ＥｔＯＡｃで抽出し（２０ｍＬ×３）、合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、次いで濃縮し、そしてＰｒｅｐ−ＴＬＣによって精製して、化合物５を白色固体として得た（３５ｍｇ，６６％）。1H  NMR  (400  MHz,  DMSO)  δ:  8.05  (s,  1H),  7.65  (s,  1H),  7.61  -  7.51  (m,  4H),  7.45  (m,  1H),  7.25  (d,  J  =  3.6  Hz,  1H),  6.74  (dd,  J  =  3.2,  1.6  Hz,  1H),  6.60  (s,  1H),  6.04  (s,  1H),  5.92  (s,  1H),  5.54  (s,  1H),  5.39-5.31  (m,  1H),  4.28  (s,  1H).  ＬＲ−Ｍａｓｓ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６３９．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１７３】
実施例６：化合物６の合成：
【化２５】
2019532071.tif 000028
【０１７４】
化合物１（１８０ｍｇ）を、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の、炭酸カリウム（２００ｍｇ）および２−ブロモ−２−メチルプロパン（１０ｍＬ）の激しく撹拌した懸濁液に加え、得られた混合物を室温で８日間撹拌した。その反応溶液を水（３０ｍＬ）に注ぎ込み、ＥｔＯＡｃで抽出し（２０ｍＬ×３）、合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。粗生成物をＰｒｅｐ−ＴＬＣによって精製して、化合物６を白色固体として得た（１１ｍｇ，５．６％）。1H  NMR  (400  MHz,  CDCl3)  δ:  7.58  (s,  1H),  7.54  -  7.46  (m,  6H),  7.38  (m,  1H),  7.13  (d,  J  =  3.2  Hz,  1H),  6.75  (s,  1H),  6.48  (dd,  J  =  3.2,  1.6  Hz,  1H),  5.22  (d,  H),  4.45  (s,  1H),  1.50  (s,  9H).  ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６４７．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１７５】
方法および材料
【０１７６】
実施例７Ａ：タンパク質の発現および精製。フロ酸モメタゾンに対する変異Ｆ６０２Ａ、Ｃ６２２Ｙ、Ｔ６６８Ｖ、Ｓ６７４Ｔ、Ｖ６７５Ｉ、Ｋ６９９ＡおよびＫ７０３Ａならびにコルチゾールに対する変異Ｆ６０２Ａ、Ｃ６２２Ｙ、Ｔ６６８Ｖ、Ｓ６７４Ｔ、Ｖ６７５Ｉ、Ｅ６８４ＡおよびＥ６８８Ａを含むＧＲ  ＬＢＤ（残基５２５〜７７７）を、６ｘＨｉｓ−ＧＳＴ融合タンパク質として発現ベクターｐＥＴ２４ａ（Ｎｏｖａｇｅｎ）から発現させた。改変された融合タンパク質は、Ｎ末端にＨｉｓ６−タグ（ＭＫＫＧＨＨＨＨＨＨＧ）、およびＧＳＴとＧＲ  ＬＢＤとの間にトロンビンプロテアーゼ部位を含む。それらの発現プラスミドで形質転換されたＢＬ２１ＤＥ３細胞を、ＯＤ６００が約１になるまで１６℃のＬＢブロス中で生育し、０．１ｍＭ  ＩＰＴＧおよび５０μＭフロ酸モメタゾンまたはコルチゾールで誘導した。細胞を回収し、１２リットルの細胞あたり２００ｍｌの抽出緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ［ｐＨ８］、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２Ｍ尿素、１０％グリセロール＋１μＭリガンド）に再懸濁し、１０００Ｐａに設定された圧力でフレンチプレスに３回通した。溶解産物を２０，０００ｒｐｍで３０分間遠心し、上清を２５ｍｌのニッケルカラムにロードした。そのカラムを７００ｍｌの抽出緩衝液で洗浄し、３００ｍｌの５０％緩衝液Ｂ（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ［ｐＨ８］、５００ｍＭイミダゾール（Ｉｍｉｚａｄｏｌｅ）、１０％グリセロール、１μＭリガンド）で溶出した。ＧＲ  ＬＢＤを、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ［ｐＨ８］、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、１μＭリガンドに対して透析しつつ、トロンビンで１：１０００のプロテアーゼ／タンパク質比にて低温室において一晩切断した。Ｈ６ＧＳＴタグを、Ｎｉ−ＮＴＡニッケルカラムへの結合によって除去した。フロースルーをゲル濾過（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ［ｐＨ８］、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＤＴＴ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１０％グリセロール、１μＭリガンド）によってさらに精製した。フロ酸モメタゾンに結合したタンパク質を、より長いバージョンのＳＲＣ２−３ペプチド：ＳＰＫＫＫＥＮＡＬＬＲＹＬＬＤＫＤＤＴＫＤと複合体化し、６ｍｇ／ｍｌまで濾過濃縮した。コルチゾールＧＲ  ＬＢＤを、より短いバージョンのＳＲＣ２−３：ＫＥＮＡＬＬＲＹＬＬＤＫＤＤおよび０．２％Ｂ−オクチルグルコシドと複合体化し、７ｍｇ／ｍｌまで濾過濃縮した。
【０１７７】
実施例７Ｂ：結晶化。フロ酸モメタゾンＧＲ結晶を、１μｌの、ＧＰ２ペプチドと複合体化したタンパク質、ならびに０．１Ｍクエン酸ナトリウム［ｐＨ６］および２．２Ｍ塩化ナトリウムを含む２μｌのウェル溶液を含む懸滴において室温で成長させた。コルチゾールＧＲ結晶を、１μｌのタンパク質複合体、および０．１ＭイミダゾールｐＨ６．５、１Ｍ酢酸ナトリウム三水和物を含む１μｌのウェル溶液を含む懸滴において室温で成長させた。その両方に対してウェル緩衝液中の３０％スクロースを凍結保護物質として使用した。
【０１７８】
実施例７Ｃ：構造決定。ＣＣＰ４プログラムＰＨＡＳＥＲを、ＧＲ  ＬＢＤ／デキサメタゾン構造（ＰＤＢコード：１Ｍ２Ｚ）（２７）を検索モデルとして用いて、分子置換（３６）のために使用した。最初のモデルを手作業で復元し、ＣＮＳ（３７）およびＣＣＰ４プログラムＲＥＦＭＡＣ５（３８）を用いて洗練させた。すべての構造の図を、ＰｙＭＯＬ（Ｔｈｅ  ＰｙＭＯＬ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒａｐｈｉｃｓ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｖｅｒｓｉｏｎ  １．３，Ｓｃｈｒｏｅｄｉｎｇｅｒ  ＬＬＣ）を用いて作成した。
【０１７９】
実施例７Ｄ：細胞トランスフェクションおよびレポーターアッセイ。ＡＤ２９３細胞を、トランスフェクションの前日に、２４ウェルプレートにおいて２０，０００／ウェルで分割した。トランス活性化の場合、１ウェルあたり１００ｎｇのｐＨＨＬｕｃ（ＭＭＴＶ−Ｌｕｃ）プラスミド、０．１ｎｇのｐＲＳｈＧＲを、５ｎｇのｐｈＲＧｔｋＲｅｎｉｌｌａとともに、Ｘ−ｔｒｅｍｅＧＥＮＥ  ９（Ｒｏｃｈｅ）によってＡＤ２９３細胞にトランスフェクトした。トランス抑制の場合、１ウェルあたり１０ｎｇのＡＰ１−Ｌｕｃ、１００ｎｇのｐＲＳｈＧＲおよび５ｎｇのｐｈＲＧｔｋＲｅｎｉｌｌａを、ＡＤ２９３細胞にトランスフェクトした。トランスフェクションの翌日、細胞を異なる処置（ステロイドまたはビヒクル）によって一晩１６時間、誘導した。細胞を１×受動溶解緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって回収し、ルシフェラーゼ活性をＤｕａｌ−Ｇｌｏルシフェラーゼシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）によってアッセイした。データを、相対的ルシフェラーゼ単位（ＲＬＵ）としてルシフェラーゼ値／Ｒｅｎｉｌｌａ値によってプロットした。
【０１８０】
実施例７Ｅ：インビトロＧＲリガンド結合アッセイ。インビトロＧＲ結合アッセイは、以前に記載されたもの（３９）と似ている。放射標識リガンド［３Ｈ］ＤＥＸを２５ｎＭで固定し、ＴＡＰＳ緩衝液（ｐｈ８．８）中の５％ＧＲサイトゾル＋２０ｍＭモリブデン酸ナトリウムとともにインキュベートし、コールドリガンド（０．１ｎＭ〜１０μＭで変動）を加えることにより、ホットリガンド結合を競合させた。データをＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５によって標準的な競合曲線としてプロットした。
【０１８１】
生物学的実施例
【０１８２】
実施例８：コルチゾールおよびＭＦに結合したＧＲ  ＬＢＤの全体構造。
【０１８３】
ＧＲ  ＬＢＤの結晶化は、溶解性の問題のために常に難題であった。元のＧＲ  ＬＢＤ構造は、タンパク質の溶解性を改善するＦ６０２Ｓ変異を有するＧＲ  ＬＢＤに結合した高親和性リガンドＤＥＸを用いて決定された（２７）。しかしながら、コルチゾールは、ＤＥＸよりもかなり弱いリガンドであり、内因性ホルモンであるコルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤを安定化させるためには、Ｆ６０２Ｓ変異では十分ではない（図８、レーン１）。全体構造に影響せずにＧＲ  ＬＢＤの溶解度を高め得るアミノ酸を特定するために、本発明者らは、ステロイドホルモンファミリーの最も近いメンバーであるＭＲ、アンドロゲンレセプター（ＡＲ）およびプロゲステロンレセプター（ＰＲ）（これらはＧＲよりもかなり可溶性である）とＧＲをアラインメントした。Ｆ６０２に加えて、残基Ｃ６２２、Ｔ６６８、Ｓ６７４およびＶ６７５が、このファミリーの保存配列を区別するので、本発明者らは、それらのアミノ酸を保存残基に復帰変異させた（Ｆ６０２Ａ、Ｃ６２２Ｙ、Ｔ６６８Ｖ、Ｓ６７４ＴおよびＶ６７５Ｉ、ＡＹＶＴＩと呼ばれる）。これらの残基のほとんどがタンパク質の内側に見られ、ＰＲ残基は、ＰＲ  ＬＢＤ構造によりうまく充填されている（２８）。実際に、ＡＶＹＴＩ  ＧＲ  ＬＢＤは、コルチゾールに結合したとき、Ｆ６０２Ｓ  ＬＢＤよりもかなり良い溶解度を有する（図８、レーン２）。変異ＧＲ  ＬＢＤは、１リットルあたり５ｍｇを超える収量で、発現させ、精製することができる。しかしながら、本発明者らは、このコルチゾールまたはＭＦに結合した変異ＧＲ  ＬＢＤの結晶を得ることができなかった。このＧＲ  ＬＢＤは、そのヘリックスＨ９（その長い側鎖が結晶化に影響し得る）にいくつかのリジン残基およびグルタミン酸残基を有する。表面エントロピー低下変異としてこれらの残基のアラニン変異（ＭＦの場合、Ｋ６６９Ａ／Ｋ７０３Ａ、およびコルチゾールの場合、Ｅ６８４Ａ／Ｅ６８８Ａ）を有するＧＲ  ＬＢＤは、可溶性のままであり（図８、レーン３および４）、これによって、ＭＦおよびコルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤの結晶を得ることが可能であった（図９）。これらの変異のすべてが、リガンド結合ポケットから遠く離れており、リガンド媒介性のＧＲトランス活性化機能またはトランス抑制機能を変化させない（図１０）。
【０１８４】
ＭＦおよびコルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤの全体構造（図１Ａ）は、ＤＥＸに結合したＧＲ  ＬＢＤと似ており、１１個のヘリックスが３層のヘリックスサンドイッチバンドルに充填され、リガンドに結合する空洞がそのバンドルの下部に埋もれている。データ収集および洗練の統計結果を表Ｓ１に要約する。コルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤの全体アーキテクチャは、ＤＥＸに結合したＧＲ  ＬＢＤとほぼ同一であるのに対して、ＭＦに結合したＧＲ  ＬＢＤとＤＥＸに結合したＧＲ  ＬＢＤとの間に顕著な相違点がいくつか存在し、その相違点としては、ヘリックス１の前のループの配向（図１Ｂにおいて「１」とラベル）；ヘリックス５と６との間のループ領域の拡大（図１Ｂにおいて「２」とラベル）；およびＡＦ−２ヘリックスのＣ末端の配向の変化（図１Ｂにおいて「３」とラベル）が挙げられる。コルチゾールおよびＭＦのリガンド結合様式は、結合したリガンドおよび周囲のポケット残基の明確な電子密度マップによって十分に定義されている（図１Ｃ）。
【０１８５】
【表２】
2019532071.tif 000029
Ｒｍｓｄは、タンパク質の理想的な幾何学からの根平均２乗偏差である。
【０１８６】
実施例９：コルチゾール、ＤＥＸおよびＭＦの効力、親和性。
【０１８７】
コルチゾール、ＤＥＸおよびＭＦの化学構造の変化（図２Ａ）は、単純から複雑へのおよび１つのレベルから複数のレベルへの糖質コルチコイドの進化を映し出す。コルチゾールの構造は、基本的な４環ステロイド骨格を提供し；そしてＤＥＸは、１，２二重結合（ｄｏｕｂｌｅ  ｂｏｎｅ）、１６メチル化および９αハロゲン化を加え（図２Ａ）；ＭＦは、２２においてさらに塩化物になり、より重要なことには、１７αにおいて親油性フロ酸エステル基を加え（図２Ａ）、ＤＥＸおよびコルチゾールのヒドロキシル基を置換している。ＧＲの効力に対するそれらの化学的変化の影響を試験するために、本発明者らは、ＧＲのトランス活性化とトランス抑制との両方に対するＭＦ、ＤＥＸおよびコルチゾールの活性を完全な用量応答曲線の形式で並行して比較した。トランス活性化の場合、本発明者らは、ＭＭＴＶによって駆動されるルシフェラーゼレポーターシステムを使用した（図２Ｂ）。ＭＦおよびＤＥＸは、飽和濃度（１μＭ）においてほぼ同じ有効性（最大活性）を示したのに対して、コルチゾールは、飽和濃度（１０μＭ）において、ＤＥＸの８０％の有効性しか有しなかった。ＤＥＸと比べて、ＭＦの用量応答曲線は、大きく左にシフトしたことから、ＭＦが、ＤＥＸよりも２０倍強力であることが示される。他方で、コルチゾールの曲線は、大きく右にシフトしたことから、ＤＥＸよりも１０倍弱いことが示されている。トランス活性化におけるＭＦ、ＤＥＸおよびコルチゾールに対するＥＣ５０値は、それぞれ０．３３ｎＭ、６．７ｎＭおよび７０ｎＭであった。
【０１８８】
トランス抑制の場合、ＡＰ１によって駆動されるルシフェラーゼレポーターを使用した（図２Ｃ）。ＭＦ、ＤＥＸおよびコルチゾールは、それらの飽和濃度において同様の有効性を示した。また、ＭＦは、ＤＥＸよりもかなり高い（６０倍）効力を示し、コルチゾールは、ＤＥＸよりもかなり弱く；トランス抑制におけるＭＦ、ＤＥＸおよびコルチゾールに対するＥＣ５０値は、それぞれ０．００５ｎＭ、０．３２ｎＭおよび２．７ｎＭであった。誘導には、より高いステロイド濃度が必要であるという頻繁な観察結果と一致して、誘導効力は、各化合物について抑制効力よりも少なくとも１０倍低かった。この差異のおかげで、非常に低用量の糖質コルチコイドを使用することによってトランス活性化とトランス抑制とを区別する機会が提供される。例えば、０．１ｎＭでは、ＭＦは、トランス抑制有効性の９５％に到達するが、トランス活性化有効性の２５％にしか到達しない（図２Ｂおよび２Ｃ）。
【０１８９】
一般に、高効力は、レセプターに対する高親和性によって決定されるが、細胞補因子も重要な役割を果たす。ＧＲに対するＭＦの親和性を試験するために、本発明者らは、ＭＦ、ＤＥＸおよびコルチゾールについてのインビトロＧＲリガンド結合競合アッセイを行ったところ（図２Ｄ）、ＧＲ結合親和性の順序がＭＦ＞ＤＥＸ＞コルチゾールであることが示された。ＭＦ、ＤＥＸおよびコルチゾールについてのＫｉ値は、それぞれ０．７ｎＭ、８ｎＭおよび９１ｎＭであった。この結果は、効力に関する本発明者らの結果と一致した。しかしながら、ＭＦとＤＥＸとの間のインビトロ結合ＩＣ５０の差は、たった約１０倍しかなかったが、効力の差は、それよりかなり大きかった：誘導に対して２０倍および抑制に対して６０倍（図２Ｂおよび２Ｃ）。効力の差の他の構成要素は、異なるリガンドの結合によって引き起こされる表面の立体構造変化を認識する細胞因子との相互作用が原因であるはずである。
【０１９０】
実施例１０：１，２単結合の柔軟性はＧＲへのコルチゾールの低親和性に寄与した。
【０１９１】
コルチゾールの低親和性の根底にある機構を理解するために、本発明者らは、コルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤおよびＤＥＸに結合したＧＲ  ＬＢＤの構造比較を行った。コルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤの全体構造は、ＤＥＸに結合したＧＲ  ＬＢＤとほぼまったく同じであり、顕著な立体配座の変化はない。次いで、本発明者らは、リガンド結合の詳細を調べた。上で述べたように、ＤＥＸは、１，２二重結合、９αハロゲン化および１６メチル化だけがコルチゾールと異なる（図２Ａ）。ＤＥＸのＣ１−Ｃ２二重結合は、ステロイドＡ環およびＣ３−ケトン基が平面になるようにするので、Ｃ３−ケトンがＲ６１１およびＱ５７０と容易に相互作用できるようになる（図３Ａ）。対照的に、コルチゾールのＣ１−Ｃ２単結合の柔軟性が理由で、ステロイドＡ環は、Ｒ６１１およびＱ５７０と水素結合を形成するために曲がる必要がある。また、未結合のコルチゾールのＣ１−Ｃ２単結合は、２つの立体配座（Ａ環平面の上と下）の間で動くので、リガンドを適切な位置に保持するための水素結合ネットワークを形成するために水分子が必要である。これらの観察結果によって、ＧＲに対するコルチゾールの比較的低い親和性が説明された。Ｃ１−Ｃ２二重結合の重要性を確かめるために、本発明者らは、Ｃ１−Ｃ２二重結合の追加（図３Ｂ、茶色）だけがコルチゾールと異なるプレドニゾロンの効力をトランス活性化アッセイにおいて計測した。実際に、プレドニゾロンのＣ１−Ｃ２二重結合は、コルチゾール用量応答曲線を約５倍、左にシフトさせた（図３Ｂ）ので、ＤＥＸによってもたらされる左への総シフトの半分超を説明し得る。効力の残りの増加は、おそらくＣ−９αハロゲン化およびＣ−１６メチル化に起因し、この両方が、レセプターポケット内の相互作用表面を増大させる（図１１）。
【０１９２】
実施例１１：１７αフロ酸がＭＦの高親和性を決定した。
【０１９３】
ＤＥＸの化学構造は、ほぼ平らな２次元表面を形成する（図４Ａ）が、ＭＦでは、１７αフロ酸エステルが、その表面から環の面に対してほぼ９０°で突き出て、このリガンドを３次元の物体にしている（図４Ｂ）。ＤＥＸに結合したＧＲ  ＬＢＤでは、ステロイドＤ環の上に、ヘリックス３、ヘリックス５、β３−β４ターンおよびヘリックス６−７によって形成される疎水性空洞である何もない空間が存在する（図４Ｃ）。ＭＦに結合したＧＲ  ＬＢＤ構造では、突き出ている１７αフロ酸が、リガンド結合ポケットをわずかに広げ、その空洞のほとんどの空間をふさいでいる。親油性の１７αフロ酸は、ソケット継手内にしっかり嵌った球によく似て、その疎水性空洞にうまくフィットし、周囲のＦ６２３、Ｉ６２９、Ｍ６３９、Ｃ６４３、Ｉ５５９およびＬ５６３アミノ酸との広範な疎水性相互作用をもたらすので（図４Ｄ）、なぜＤＥＸよりもＭＦがＧＲに対する１０倍高い親和性を有するかが説明される。
【０１９４】
実施例１２：Ｑ６４２は異なる効力の糖質コルチコイドの認識において重要な役割を果たす。
【０１９５】
ＧＲ  ＬＢＤによる糖質コルチコイドの基本的な認識は報告されている（２７、３１、３２）。ＤＥＸに結合したＧＲ  ＬＢＤにおけるように、Ｑ５７０およびＲ６１１は、ステロイドＡ環のＣ−３ケト基と相互作用し、Ｎ５６４は、ステロイドＣ環のＣ−１１ヒドロキシル基と相互作用し、Ｔ７３９は、側鎖Ｃ−２１カルボニル基と相互作用する（図３Ａ）。これらの４対の重要な水素結合は、ステロイド骨格を適切な位置に堅固に保持する。ＤＥＸおよびコルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤと比べて、ＭＦの貫入Ｃ−１７αフロ酸基が、リガンド結合ポケットの内側のただ１つの大きな変化（その大きな変化は、ヘリックス７におけるＱ６４２の移動である）を引き起こす（図５Ａ）。ＤＥＸに結合したＧＲ  ＬＢＤ構造において、Ｑ６４２は、ヘリックス７の軸に対して直角であり、ＤＥＸのＣ−１７αヒドロキシル基と水素結合を形成する。ＭＦの結合の際、Ｃ−１７αフロ酸基は、Ｑ６４２を押しのけて、それをほぼ９０°曲げて、ヘリックス７の軸と平行な位置にする（図５Ａ）。
【０１９６】
Ｑ６４２の配向が、ＭＦの結合の際におけるリガンド結合ポケットの唯一の大きな変化であるので、本発明者らは、Ｑ６４２を変異させて、それをより小さくするか（Ｑ６４２Ａ）、より大きくするか（Ｑ６４２Ｆ）、疎水性にするか（Ｑ６４２Ｌ）、もしくは帯電させるか（Ｑ６４２Ｅ、Ｑ６４２Ｋ）、またはほんのわずかに変化させた（Ｑ６４２Ｎ）。本発明者らは、飽和未満の濃度（ＭＦ、１ｎＭ；ＤＥＸ、１０ｎＭ）でＭＦまたはＤＥＸを用いてそれらの変異を試験した。興味深いことに、１つの変異（Ｑ６４２Ｎ）について、ＤＥＸ活性は、ほぼ消滅したが、ＭＦ活性は、最大のままであった（図５Ｂ）。したがって、単一の変異が、ＭＦの活性をＤＥＸの活性と完全に分けることができた。他の変異は、ＤＥＸとＭＦとの両方に対する活性のほとんどを喪失させ；例外であるＱ６４２Ｌは、ＭＦとの活性を２分の１にしたが、ＤＥＸとの活性がないかまたは非常に低かった。ＭＦの１７αフロ酸は、Ｍ５６０およびＭ６３９の周囲の立体配座もわずかに変化させたが、それらの残基の変異は、Ｑ６４２Ｎ変異と同じ効果を有しなかった（図１２）。
【０１９７】
異なる効力のリガンドを認識する際のＱ６４２の卓越した役割を解析するために、本発明者らは、ＧＲトランス活性化アッセイにおいてＱ６４２Ｎへの結合における、ＭＦ、ＤＥＸおよびコルチゾール（それぞれ高い、中程度のおよび低い効力を表す）についての完全な用量応答曲線を測定した（図５Ｃ）。ＭＦの場合、Ｑ６４２Ｎの用量応答曲線は、野生型の用量応答曲線と区別できなかった。野生型と比べてＤＥＸの場合、Ｑ６４２Ｎは、曲線を大きく右にシフトさせ、ＥＣ５０は、７．５ｎＭから４０ｎＭに変化し、効力が５倍低下した。コルチゾールの場合、Ｑ６４２Ｎレセプターバリアントは、飽和濃度であっても不活性であった。したがって、単一の変異であるＱ６４２Ｎが、高い、中程度のおよび低い効力のリガンドを完全に区別する能力を有することから、Ｑ６４２が、異なる効力のリガンドを認識するセンサーとして役立つことが示唆される。Ｑ６４２は、中程度のまたは低い効力の糖質コルチコイド（例えば、ＤＥＸまたはコルチゾール）に結合すると、１７αヒドロキシル基と水素結合を形成して、結合したリガンドをリガンド結合ポケット内の適切な位置に繋ぎ止める。Ｑ６４２は、ＭＦなどの非常に強力なリガンドに結合すると、１７α親油性基によって押しのけられる。この変化は、リガンド結合によって引き起こされる他の小さな変化と協調して、ヘリックス６、６および７を乱し、ヘリックス５とヘリックス６との間のループを拡大させ、ＡＦ２ヘリックスのＣ末端の配向を変化させ（図１Ｂ）、高効力の特徴をもたらす。
【０１９８】
種々のリガンドの結合におけるＱ６４２の正確な役割を調べるために、本発明者らは、ＤＥＸが単一の不飽和濃度においてトランス活性化の活性をほとんど有しないＧＲ  Ｑ６４２Ａのリガンド結合能を試験した（図５Ｂ）。野生型ＧＲまたはＧＲ  Ｑ６４２Ａを発現するＡＤ２９３細胞由来のサイトゾルを用いるインビトロ結合アッセイにおいて、Ｑ６４２Ａ変異体は、野生型ＧＲと比べて、ＤＥＸに対する結合親和性の実質的な喪失を示した（Ｋｄ（ＷＴ）＝５．２ｎＭに対してＫｄ（Ｑ６４２Ａ）＝２２．３ｎＭ）が、高いリガンド濃度では、なおもいくらかの親和性を保持した（図１３Ａ）。他方で、Ｑ６４２Ａは、レポーターアッセイにおいて、ＤＥＸの飽和濃度であってもトランス活性化の活性をほとんど示さなかった（図１３Ｂ）。これらのデータは、ＧＲ  Ｑ６４２ＡのＤＥＸトランス活性化の喪失が、リガンド親和性の低下と、ＧＲ活性化を阻害する立体配座の変化との両方に起因することを示している。Ｑ６４２は、ＤＥＸおよびコルチゾールとは異なって、ＭＦと水素結合を形成しない。Ｑ６４２ＡがなおもＭＦに結合する能力を有するかを判定するために、本発明者らは、ＧＲ  Ｑ６４２Ａ変異体タンパク質を用いて競合結合実験を行った（図１３Ｃ）。ＭＦとコルチゾールとの両方が、ＧＲ  Ｑ６４２Ａへの３Ｈ−ＤＥＸの結合と競合することができたが、親和性が大幅に低下した（ＭＦおよびコルチゾールに対するＫｉは、それぞれ０．７ｎＭおよび９１ｎＭという野生型ＧＲのＫｉに対して、それぞれ９ｎＭおよび２５０ｎＭであった）。まとめると、これらの結果は、Ｑ６４２が、Ｃ−１７αフロ酸基を有するリガンドを押しのけつつ、Ｃ−１７αヒドロキシル基含有リガンドと水素結合を形成することによってヘリックス７の突起部を支える柱として作用することを示唆している。Ｑ６４２をアラニンのような小さい残基で置換することにより、ヘリックス７の突起部がもたらされ、すべてのトランス活性化が崩れるがゆえに失われることがある。
【０１９９】
実施例１３：誘導活性の測定。
【０２００】
ＡＤ２９３細胞を、２４ウェルプレートにおいて１ウェルあたり０．１ｎｇのｐＲＳｈＧＲ、１００ｎｇのＭＭＴＶ−Ｌｕｃレポーターおよび１０ｎｇのＴＫ−Ｒｅｎｉｌｌａ内部標準でトランスフェクトした。トランスフェクションの１日後、１０ｎｍまたは１ｕｍの濃度の候補化合物によって細胞を誘導した（図１４を参照のこと）。細胞を回収し、Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｄｕａｌ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｃｓｅキットによって、ルシフェラーゼ活性を計測した。化合物１は、１０ｎＭ濃度において、他のすべての候補化合物ならびにＶＳＧＣ１２と比べてかなり低い誘導活性を示す。Ｙｕａｎｚｈｅｎｇ  Ｈｅ，  Ｊｉｎｇｊｉｎｇ  Ｓｈｉ，  Ｗｅｉ  Ｙｉら、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ｈｉｇｈｌｙ  ｐｏｔｅｎｔ  ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ  ｆｏｒ  ａｓｔｈｍａ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  （２０１５）１，  １５０３５に報告されているように、ＶＳＧＣ１２は、以下の化学構造を有する。
【化２６】
2019532071.tif 000030
【０２０１】
実施例１４：抗炎症効果の決定。
【０２０２】
ＯＶＡ誘発マウス喘息モデルを用いて、候補化合物の抗炎症効果を調べた。７〜９週齢のＢａｌｂ／ｃマウスを、ＯＶＡ（オボアルブミン）で一次免疫した。１回目の免疫化の３週間後、マウスを鼻腔内ＯＶＡに曝露し、その間に、異なる処置（エタノール、または１０ｎＭもしくは１０００ｎＭの、以下：ＤＥＸ、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、化合物６、ＶＳＧＣ１２もしくはＦＦのうちの１つの投与）を行った。アセチルコリンに応答する関連肺（ＲＬ）機能を、ＦｌｅｘｉＶｅｎｔシステム（ＳＣＩＲＥＱ）を用いた強制振動法によって計測した。ＦＦと化合物４（ＣＭＰＤ４としてラベルされている）との並列比較である図１５は、化合物４が、マウス喘息モデルにおいて肺の炎症の抑制においてかなり強力であることを示している。
【０２０３】
実施例１５：効力および肺炎症抑制の決定。
【０２０４】
レポーターシステムにおいて候補化合物の効力を評価するために、ＭＭＴＶ−ルシフェラーゼレポーターを使用した。効力を、図１６Ａに示されているような０．０１ｎＭ〜１０００ｎＭの様々な用量における候補化合物の完全な用量応答曲線によって計測した（ＲＬＵ：相対的ルシフェラーゼ単位）。化合物４は、ＶＳＧＣ１２とＤＥＸとの両方より高い効力を示す。
【０２０５】
肺炎症の抑制における候補化合物の効果を評価するために、ＯＶＡ誘発マウス喘息モデルを使用した（ＲＬ：相対的肺機能）。０．１２５ｍｇ／ｋｇという同じ低用量において、化合物４は、図１６Ｂに提供されているように、肺炎症の抑制においてＶＳＧＣ１２よりもかなり高い抑制活性を示す。
【０２０６】
【表３−１】
2019532071.tif 000031
【表３−２】
2019532071.tif 000032
【表３−３】
2019532071.tif 000033
【０２０７】
他の実施形態
【０２０８】
本発明は、その詳細な説明と併せて記載されているが、前述の説明は、本発明の範囲を例証することを意図しているのであって、限定することを意図しておらず、本発明の範囲は、添付の請求項の範囲によって定義されることが理解されるべきである。他の態様、利点および変更が、請求項の範囲内である。
【０２０９】
参考文献
【表４】
2019532071.tif 000034
【表５】
2019532071.tif 000035
【表６】
2019532071.tif 000036
【表７】
2019532071.tif 000037
（項目１）  式Ｉの化合物
【化２７】
2019532071.tif 000038
またはその薬学的に許容され得る塩であって、式中、
Ｘは、−Ｏ−または−Ｓ−であり；
【化２８】
2019532071.tif 000039
は、結合であるか、または存在せず；
Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、そのいずれもが、必要に応じて置換されており；
Ｒ２は、−Ｌ−Ｒ’−であり、Ｌは、結合または−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ’は、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ’は、必要に応じて置換されており；
Ｒ３は、水素または必要に応じて置換されているＣ１−６アルキルであり；
各Ｒ４は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、−ＯＨ、ハロ、ハロアルキル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）または−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）から選択され、Ｒ４は、必要に応じて置換されており；
Ｒ５およびＲ６の各々は、独立して、水素、ハロまたはＣ１−４アルキルであり；
ｎは、０、１、２、３、４または５である、
化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
（項目２）  Ｒ１が、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、該アルキル、シクロアルキルまたはアリールは、必要に応じて置換されている、項目１に記載の化合物。
（項目３）  Ｒ１が、水素またはＣ１−６アルキルであり、該Ｃ１−６アルキルが、１〜３つのハロで必要に応じて置換されている、項目２に記載の化合物。
（項目４）  Ｒ１が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルであり、そのいずれもが、１〜３つのハロで必要に応じて置換されている、項目３に記載の化合物。
（項目５）  Ｒ１が、フルオロメチルである、項目４に記載の化合物。
（項目６）  Ｒ１が、非置換Ｃ１−６アルキルである、項目３に記載の化合物。
（項目７）  Ｒ１が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルである、項目６に記載の化合物。
（項目８）  Ｒ１が、エチルである、項目７に記載の化合物。
（項目９）  Ｒ１が、イソプロピルである、項目７に記載の化合物。
（項目１０）  Ｒ１が、ｔｅｒｔ−ブチルである、項目７に記載の化合物。
（項目１１）  Ｒ１が、水素である、項目３に記載の化合物。
（項目１２）  Ｒ１が、必要に応じて置換されている３〜７員のシクロアルキル、フェニルまたはナフチルであり、そのいずれもが、必要に応じて置換されている、項目２に記載の化合物。
（項目１３）  Ｌが、−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ’が、水素、Ｃ１−６アルキル、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアラルキルから選択され、Ｒ’は、ハロ、ＣＮ、カルボキシルまたはオキソで必要に応じて置換されている、項目１に記載の化合物。
（項目１４）  Ｒ’が、ヘテロアリールである、項目１３に記載の化合物。
（項目１５）  Ｒ２が、
【化２９】
2019532071.tif 000040
である、項目１４に記載の化合物。
（項目１６）  Ｒ３が、必要に応じて置換されているＣ１−６アルキルである、項目１に記載の化合物。
（項目１７）  Ｒ３が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルであり、そのいずれもが、必要に応じて置換されている、項目１６に記載の化合物。
（項目１８）  Ｒ３が、水素である、項目１に記載の化合物。
（項目１９）  各Ｒ４が、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、−ＯＨ、ハロ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）または−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）から選択され、Ｒ４のアルキル基は、ハロ、−ＣＮ、カルボキシルまたはオキソで必要に応じて置換されている、項目１に記載の化合物。
（項目２０）  各Ｒ４が、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、ハロ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）または−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）から選択され、ここで、Ｒ４のアルキル基は、ハロ、カルボキシルまたはオキソで必要に応じて置換されている、項目１９に記載の化合物。
（項目２１）  各Ｒ４が、独立して、水素、Ｃ１−６アルキルまたはハロである、項目２０に記載の化合物。
（項目２２）  Ｒ４が、水素である、項目２１に記載の化合物。
（項目２３）  Ｒ４が、水素であり、Ｒ１が、水素、Ｃ１−６アルキルまたはハロアルキルである、項目１に記載の化合物。
（項目２４）  ｎが、０、１または２である、項目１に記載の化合物。
（項目２５）  ｎが、０である、項目２４に記載の化合物。
（項目２６）  Ｘが、−Ｏ−である、項目１に記載の化合物。
（項目２７）  Ｘが、−Ｓ−である、項目１に記載の化合物。
（項目２８）  
【化３０】
2019532071.tif 000041
が、結合である、項目１に記載の化合物。
（項目２９）  
【化３１】
2019532071.tif 000042
が、存在しない、項目１に記載の化合物。
（項目３０）  Ｒ５およびＲ６が、各々独立して、水素またはハロである、項目１に記載の化合物。
（項目３１）  Ｒ５およびＲ６が、両方とも−Ｆである、項目３０に記載の化合物。
（項目３２）  前記式Ｉの化合物が、
【化３２】
2019532071.tif 000043
【化３３】
2019532071.tif 000044
から選択される、項目１に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
（項目３３）  式Ｉの化合物
【化３４】
2019532071.tif 000045
またはその薬学的に許容され得る塩であって、式中、
Ｘは、−Ｏ−または−Ｓ−であり；
【化３５】
2019532071.tif 000046
は、結合であるか、または存在せず；
Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、そのいずれもが、必要に応じて置換されており；
Ｒ２は、−Ｌ−Ｒ’−であり、Ｌは、結合または−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ’は、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ’は、必要に応じて置換されており；
Ｒ３は、水素または必要に応じて置換されているＣ１−６アルキルであり；
各Ｒ４は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、−ＯＨ、ハロ、ハロアルキル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）または−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）から選択され、Ｒ４は、必要に応じて置換されており；
Ｒ５およびＲ６の各々は、独立して、水素、ハロまたはＣ１−４アルキルであり；
ｎは、０、１、２、３、４または５である、
化合物またはその薬学的に許容され得る塩、
および薬学的に許容され得るキャリアまたはアジュバント
を含む、薬学的組成物。
（項目３４）  生物学的サンプル中の糖質コルチコイドレセプターの活性を調節する方法であって、該糖質コルチコイドレセプターを項目１に記載の化合物または項目３３に記載の薬学的組成物と接触させる工程を含む、方法。
（項目３５）  患者において炎症性疾患を処置するかまたはその重症度を低下させる方法であって、有効量の項目１に記載の化合物または項目３３に記載の薬学的組成物を該患者に投与する工程を含む、方法。
（項目３６）  前記疾患が、喘息、関節炎、狼瘡、クローン病、炎症性腸疾患、セリアック病、糸球体腎炎、尋常性ざ瘡、白血病および膵がんから選択される、項目３５に記載の方法。
（項目３７）  前記疾患が、喘息および関節炎から選択される、項目３６に記載の方法。
【図１】
2019532071.tif 000056
【図２−１】
2019532071.tif 000057
【図２−２】
2019532071.tif 000058
【図３】
2019532071.tif 000059
【図４】
2019532071.tif 000060
【図５】
2019532071.tif 000061
【図６−１】
2019532071.tif 000062
【図６−２】
2019532071.tif 000063
【図７】
2019532071.tif 000064
【図８】
2019532071.tif 000065
【図９】
2019532071.tif 000066
【図１０】
2019532071.tif 000067
【図１１】
2019532071.tif 000068
【図１２Ａ】
2019532071.tif 000069
【図１２Ｂ】
2019532071.tif 000070
【図１３−１】
2019532071.tif 000071
【図１３−２】
2019532071.tif 000072
【図１３−３】
2019532071.tif 000073
【図１４】
2019532071.tif 000074
【図１５】
2019532071.tif 000075
【図１６】
2019532071.tif 000076
【手続補正書】
【提出日】令和1年6月28日(2019.6.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2019532071000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年7月23日(2019.7.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
１つの態様において、本発明は、式Ｉの化合物
【化１】
2019532071.tif 000077
またはその薬学的に許容され得る塩を提供し、式中、Ｘは、−Ｏ−または−Ｓ−であり；
【化２】
2019532071.tif 000078
は、結合であるか、または存在せず；Ｒ１は、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、そのいずれもが、必要に応じて置換されており；Ｒ２は、−Ｌ−Ｒ’−であり、Ｌは、結合または−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ’は、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ’は、必要に応じて置換されており；Ｒ３は、水素または必要に応じて置換されているＣ１−６アルキルであり；各Ｒ４は、独立して、Ｃ１−６アルキル、−ＯＨ、ハロ、ハロアルキル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）または−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）であり、Ｒ４のアルキルは、必要に応じて置換されており；Ｒ５およびＲ６の各々は、独立して、水素、ハロまたはＣ１−４アルキルから選択され；ｎは、０、１、２、３、４または５である。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
式Ｉの化合物
【化３６】
2019532071.tif 000079
またはその薬学的に許容され得る塩であって、式中、
Ｘは、−Ｏ−または−Ｓ−であり；
【化３７】
2019532071.tif 000080
は、結合であるか、または存在せず；
Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、そのいずれもが、必要に応じて置換されており；
Ｒ２は、−Ｌ−Ｒ’−であり、Ｌは、結合または−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ’は、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ’は、必要に応じて置換されており；
Ｒ３は、水素または必要に応じて置換されているＣ１−６アルキルであり；
各Ｒ４は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、−ＯＨ、ハロ、ハロアルキル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）または−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）から選択され、Ｒ４は、必要に応じて置換されており；
Ｒ５およびＲ６の各々は、独立して、水素、ハロまたはＣ１−４アルキルであり；
ｎは、０、１、２、３、４または５である、
化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
（項目２）
Ｒ１が、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、該アルキル、シクロアルキルまたはは、必要に応じて置換されている、項目１に記載の化合物。
（項目３）
Ｒ１が、Ｃ１−６アルキルであり、該Ｃ１−６アルキルが、１〜３つのハロで必要に応じて置換されている、項目２に記載の化合物。
（項目４）
Ｒ１が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルであり、そのいずれもが、１〜３つのハロで必要に応じて置換されている、項目３に記載の化合物。
（項目５）
Ｒ１が、フルオロメチルである、項目４に記載の化合物。
（項目６）
Ｒ１が、非置換Ｃ１−６アルキルである、項目３に記載の化合物。
（項目７）
Ｒ１が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルである、項目６に記載の化合物。
（項目８）
Ｒ１が、エチルである、項目７に記載の化合物。
（項目９）
Ｒ１が、イソプロピルである、項目７に記載の化合物。
（項目１０）
Ｒ１が、ｔｅｒｔ−ブチルである、項目７に記載の化合物。
（項目１１）
Ｒ１が、必要に応じて置換されている３〜７員のシクロアルキル、フェニルまたはナフチルであり、そのいずれもが、必要に応じて置換されている、項目２に記載の化合物。
（項目１２）
Ｌが、−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ’が、水素、Ｃ１−６アルキル、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアラルキルから選択され、Ｒ’は、ハロ、ＣＮ、カルボキシルまたはオキソで必要に応じて置換されている、項目１に記載の化合物。
（項目１３）
Ｒ’が、ヘテロアリールである、項目１２に記載の化合物。
（項目１４）
Ｒ２が、
【化３８】
2019532071.tif 000081
である、項目１３に記載の化合物。
（項目１５）
Ｒ３が、必要に応じて置換されているＣ１−６アルキルである、項目１に記載の化合物。
（項目１６）
Ｒ３が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルであり、そのいずれもが、必要に応じて置換されている、項目１５に記載の化合物。
（項目１７）
Ｒ３が、水素である、項目１に記載の化合物。
（項目１８）
各Ｒ４が、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、−ＯＨ、ハロ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）または−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）から選択され、Ｒ４のアルキル基は、ハロ、−ＣＮ、カルボキシルまたはオキソで必要に応じて置換されている、項目１に記載の化合物。
（項目１９）
各Ｒ４が、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、ハロ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）または−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）から選択され、ここで、Ｒ４のアルキル基は、ハロ、カルボキシルまたはオキソで必要に応じて置換されている、項目１８に記載の化合物。
（項目２０）
各Ｒ４が、独立して、水素、Ｃ１−６アルキルまたはハロである、項目１９に記載の化合物。
（項目２１）
Ｒ４が、水素である、項目２０に記載の化合物。
（項目２２）
Ｒ４が、水素であり、Ｒ１が、水素、Ｃ１−６アルキルまたはハロアルキルである、項目１に記載の化合物。
（項目２３）
ｎが、０、１または２である、項目１に記載の化合物。
（項目２４）
ｎが、０である、項目２３に記載の化合物。
（項目２５）
Ｘが、−Ｏ−である、項目１に記載の化合物。
（項目２６）
Ｘが、−Ｓ−である、項目１に記載の化合物。
（項目２７）
【化３９】
2019532071.tif 000082
が、結合である、項目１に記載の化合物。
（項目２８）
【化４０】
2019532071.tif 000083
が、存在しない、項目１に記載の化合物。
（項目２９）
Ｒ５およびＲ６が、各々独立して、水素またはハロである、項目１に記載の化合物。
（項目３０）
Ｒ５およびＲ６が、両方とも−Ｆである、項目２９に記載の化合物。
（項目３１）
前記式Ｉの化合物が、
【化４１】
2019532071.tif 000084
【化４２】
2019532071.tif 000085
から選択される、項目１に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
（項目３２）
式Ｉの化合物
【化４３】
2019532071.tif 000086
またはその薬学的に許容され得る塩であって、式中、
Ｘは、−Ｏ−または−Ｓ−であり；
【化４４】
2019532071.tif 000087
は、結合であるか、または存在せず；
Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、そのいずれもが、必要に応じて置換されており；
Ｒ２は、−Ｌ−Ｒ’−であり、Ｌは、結合または−Ｃ（Ｏ）−であり、Ｒ’は、水素、Ｃ１−６アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ’は、必要に応じて置換されており；
Ｒ３は、水素または必要に応じて置換されているＣ１−６アルキルであり；
各Ｒ４は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、−ＯＨ、ハロ、ハロアルキル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−ＯＣ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）または−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）から選択され、Ｒ４は、必要に応じて置換されており；
Ｒ５およびＲ６の各々は、独立して、水素、ハロまたはＣ１−４アルキルであり；
ｎは、０、１、２、３、４または５である、
化合物またはその薬学的に許容され得る塩、
および薬学的に許容され得るキャリアまたはアジュバント
を含む、薬学的組成物。
（項目３３）
生物学的サンプル中の糖質コルチコイドレセプターの活性を調節する方法であって、該糖質コルチコイドレセプターを項目１に記載の化合物または項目３２に記載の薬学的組成物と接触させる工程を含む、方法。
（項目３４）
患者において炎症性疾患を処置するかまたはその重症度を低下させる方法であって、有効量の項目１に記載の化合物または項目３２に記載の薬学的組成物を該患者に投与する工程を含む、方法。
（項目３５）
前記疾患が、喘息、関節炎、狼瘡、クローン病、炎症性腸疾患、セリアック病、糸球体腎炎、尋常性ざ瘡、白血病および膵がんから選択される、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記疾患が、喘息および関節炎から選択される、項目３５に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
【図１】図１Ａ〜１Ｃ：コルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤおよびＭＦに結合したＧＲ  ＬＢＤの全体構造。（図１Ａ）コルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤおよびＭＦに結合したＧＲ  ＬＢＤのアーキテクチャ。（図１Ｂ）ＤＥＸに結合したＧＲ  ＬＢＤとＭＦに結合したＧＲ−ＬＢＤとの構造比較。矢印は、それらの２つの相違点を示しており、１：ヘリックス１の前のループ領域；２：ヘリックス５からヘリックス７の前のループ領域；３：ＡＦ２ヘリックスのＣ末端の配向。（図１Ｃ）ＧＲ  ＬＢＤのリガンド結合ポケットにおけるコルチゾールおよびＭＦの電子密度マップ。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
【図２−１】図２Ａ〜２Ｄ：コルチゾール、ＤＥＸおよびＭＦの効力。（図２Ａ）コルチゾール、ＤＥＸおよびＭＦの化学構造。ステロイド環（図２Ａ〜２Ｄ）が示されている。重要な原子の番号付けが、正しい位置の近くに小さい文字で記されている。ＤＥＸとコルチゾールとの相違点が、ＤＥＸ構造に示されている。ＭＦのフロ酸基が示されている。（図２Ｂ〜２Ｃ）ＡＤ２９３細胞における、誘導レポーターＭＭＴＶ−Ｌｕｃおよび抑制レポーターＡＰ１−Ｌｕｃに対するコルチゾール、ＤＥＸおよびＭＦの用量応答曲線。ＲＬＵ：相対的ルシフェラーゼ単位。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。（図２Ｄ）ＭＦ、ＤＥＸおよびコルチゾールに対するインビトロＧＲ結合アッセイ。ＣＰＭ：毎秒カウント数。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝２。
【図２−２】図２Ａ〜２Ｄ：コルチゾール、ＤＥＸおよびＭＦの効力。（図２Ａ）コルチゾール、ＤＥＸおよびＭＦの化学構造。ステロイド環（図２Ａ〜２Ｄ）が示されている。重要な原子の番号付けが、正しい位置の近くに小さい文字で記されている。ＤＥＸとコルチゾールとの相違点が、ＤＥＸ構造に示されている。ＭＦのフロ酸基が示されている。（図２Ｂ〜２Ｃ）ＡＤ２９３細胞における、誘導レポーターＭＭＴＶ−Ｌｕｃおよび抑制レポーターＡＰ１−Ｌｕｃに対するコルチゾール、ＤＥＸおよびＭＦの用量応答曲線。ＲＬＵ：相対的ルシフェラーゼ単位。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。（図２Ｄ）ＭＦ、ＤＥＸおよびコルチゾールに対するインビトロＧＲ結合アッセイ。ＣＰＭ：毎秒カウント数。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝２。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
【図３】図３Ａ〜３Ｂ：１，２単結合の柔軟性はコルチゾールの低親和性に寄与する。（図３Ａ）ＧＲ  ＬＢＤのリガンド結合ポケットにおけるコルチゾールおよびＤＥＸの水素結合ネットワーク。（図３Ｂ）ＡＤ２９３細胞におけるＭＭＴＶ−Ｌｕｃに対するＧＲトランス活性化についてのコルチゾール、プレドニゾロンおよびＤＥＸの用量応答曲線。プレドニゾロンは、１，２二重結合だけがコルチゾールと異なる。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
【図４】図４Ａ〜４Ｄ：ＧＲリガンド結合ポケットにおける１７αフロ酸基の完全な占有。（図４Ａ、４Ｂ）ＤＥＸおよびＭＦの３次元構造。（図４Ｃ）ＧＲ  ＬＢＤのリガンド結合ポケットにおけるＤＥＸおよびＭＦのアラインメント。ＭＦの１７αフロ酸基は、ＧＲリガンド結合ポケットを広げ、ステロイドＤ環の上の疎水性空洞を完全に占有する。（図４Ｄ）ＧＲ  ＬＢＤリガンド結合ポケットの疎水性空洞における残基と１７αフロ酸基の詳細な疎水性相互作用。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
【図５ＡＢ】図５Ａ〜５Ｃ：Ｑ６４２は、異なる効力のリガンドの認識において極めて重要な役割を果たす。（図５Ａ）種々のリガンドとＱ６４２の詳細な相互作用：ＤＥＸに結合したＧＲ−ＬＢＤおよびＭＦに結合したＧＲ−ＬＢＤ。（図５Ｂ）ステロイドの不飽和濃度（ＤＥＸ  １０ｎＭ；ＭＦ  １ｎＭ）におけるＱ６４２変異のトランス活性化の活性。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ≧３。（図５Ｃ）ＡＤ２９３細胞におけるＭＭＴＶ−Ｌｕｃに対する野生型（ＷＴ）ＧＲおよびＱ６４２Ｎ変異体のＭＦ、ＤＥＸおよびコルチゾールに対する用量応答曲線。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。
【図５Ｃ】図５Ａ〜５Ｃ：Ｑ６４２は、異なる効力のリガンドの認識において極めて重要な役割を果たす。（図５Ａ）種々のリガンドとＱ６４２の詳細な相互作用：ＤＥＸに結合したＧＲ−ＬＢＤおよびＭＦに結合したＧＲ−ＬＢＤ。（図５Ｂ）ステロイドの不飽和濃度（ＤＥＸ  １０ｎＭ；ＭＦ  １ｎＭ）におけるＱ６４２変異のトランス活性化の活性。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ≧３。（図５Ｃ）ＡＤ２９３細胞におけるＭＭＴＶ−Ｌｕｃに対する野生型（ＷＴ）ＧＲおよびＱ６４２Ｎ変異体のＭＦ、ＤＥＸおよびコルチゾールに対する用量応答曲線。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
【図６−１】図６：−Ｏ−または−Ｓ−エステル化合物のデザインおよびその後の肝臓加水分解。
【図６−２】図６：−Ｏ−または−Ｓ−エステル化合物のデザインおよびその後の肝臓加水分解。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
【図７】図７：溶解性の変異および結晶化の変異の位置。上のパネル：ＧＲ  ＬＢＤを可溶化する変異の位置；下のパネル：ＧＲ  ＬＢＤの結晶化を促進する表面の変異。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
【図８】図８：選択されたＧＲ  ＬＢＤ変異のタンパク質の発現および精製。ＧＲ  ＬＢＤ変異体を、１０μＭコルチゾールの存在下において発現させ、精製した。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
【図９】図９Ａ〜９Ｂ：コルチゾールおよびＭＦに結合したＧＲ  ＬＢＤのタンパク質の結晶および回折マップ。（図９Ａ）コルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤ。（図９Ｂ）ＭＦに結合したＧＲ  ＬＢＤ。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
【図１０】図１０Ａ〜１０Ｂ：ＧＲ  ＡＹＶＴＩ変異の転写活性。（図１０Ａ）ＡＤ２９３細胞におけるＭＭＴＶ−Ｌｕｃに対するＧＲ  ＡＹＶＴＩ変異のトランス活性化の活性。ＤＥＸ、１００ｎＭ。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。（図１０Ｂ）ＡＤ２９３細胞におけるＡＰ１−Ｌｕｃに対するＧＲ  ＡＹＶＴＩ変異のトランス抑制の活性。ＤＥＸ、１００ｎＭ。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｂ：ＧＲ  ＬＢＤのリガンド結合ポケットにおけるＤＥＸおよびコルチゾールのステロイドＣ−９α基およびＣ−１６基の詳細な構造比較。（図１１Ａ）ＤＥＸのＣ−９α位におけるＦ原子は、ＧＲ  ＬＢＤのリガンド結合ポケットにおいてＦ６２３、Ｌ５６３およびＭ６４６と密接に接触する。（図１１Ｂ）ＤＥＸのＣ−１６メチル基は、ＧＲ  ＬＢＤのリガンド結合ポケットにおいてＹ７３５、Ｌ７３２、Ｍ６４６およびＱ６４２と密接に接触する。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
【図１２】図１２Ａ〜１２Ｂ：Ｆ６２３およびＭ６３９変異は、ＭＦの活性とＤＥＸの活性を分けられない。（図１２Ａ）ＡＤ２９３細胞におけるＭＭＴＶ−Ｌｕｃに対するＦ６２３変異のトランス活性化の活性。ＤＥＸ  １０ｎＭ、ＭＦ  １ｎＭ。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。（図１２Ｂ）ＡＤ２９３細胞におけるＭＭＴＶ−Ｌｕｃに対するＭ６３９変異のトランス活性化の活性。ＤＥＸ  １０ｎＭ、ＭＦ  １ｎＭ。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
【図１３−１】図１３Ａ〜１３Ｂ：ＧＲ  Ｑ６４２Ａ変異体タンパク質のインビトロ結合アッセイ。（図１３Ａ）野生型ＧＲまたはＱ６４２Ａ変異体ＧＲを発現したＡＤ２９３細胞由来のサイトゾルを用いるインビトロリガンド結合実験。ＣＰＭ：毎分カウント数。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝２。（図１３Ｂ）ＭＭＴＶ−ＬｕｃレポーターアッセイにおけるＷＴ  ＧＲおよびＱ６４２Ａ  ＧＲのＤＥＸ用量応答曲線。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。（Ｃ）ＧＲ  Ｑ６４２Ａリガンド競合アッセイ。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝２。
【図１３−２】図１３Ａ〜１３Ｂ：ＧＲ  Ｑ６４２Ａ変異体タンパク質のインビトロ結合アッセイ。（図１３Ａ）野生型ＧＲまたはＱ６４２Ａ変異体ＧＲを発現したＡＤ２９３細胞由来のサイトゾルを用いるインビトロリガンド結合実験。ＣＰＭ：毎分カウント数。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝２。（図１３Ｂ）ＭＭＴＶ−ＬｕｃレポーターアッセイにおけるＷＴ  ＧＲおよびＱ６４２Ａ  ＧＲのＤＥＸ用量応答曲線。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。（Ｃ）ＧＲ  Ｑ６４２Ａリガンド競合アッセイ。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝２。
【図１３−３】図１３Ａ〜１３Ｂ：ＧＲ  Ｑ６４２Ａ変異体タンパク質のインビトロ結合アッセイ。（図１３Ａ）野生型ＧＲまたはＱ６４２Ａ変異体ＧＲを発現したＡＤ２９３細胞由来のサイトゾルを用いるインビトロリガンド結合実験。ＣＰＭ：毎分カウント数。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝２。（図１３Ｂ）ＭＭＴＶ−ＬｕｃレポーターアッセイにおけるＷＴ  ＧＲおよびＱ６４２Ａ  ＧＲのＤＥＸ用量応答曲線。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝３。（Ｃ）ＧＲ  Ｑ６４２Ａリガンド競合アッセイ。エラーバーは、標準偏差を表す。ｎ＝２。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
【図１４】図１４：相対的ルシフェラーゼ単位として提供されている、本発明の化合物の活性の棒グラフ。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
【図１５】図１５：フロ酸フルチカゾン（ＦＦ）と比べて化合物４の効力の８倍増加を示す折れ線グラフ。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
【図１６】図１６Ａ〜１６Ｂ：（図１６Ａ）レポーターシステムにおける候補化合物の効力を提供する折れ線グラフ。（図１６Ｂ）ＯＶＡ誘発マウス喘息モデルを用いた肺の炎症の抑制における候補化合物の効果の評価を提供する折れ線グラフ。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８３】
ＧＲ  ＬＢＤの結晶化は、溶解性の問題のために常に難題であった。元のＧＲ  ＬＢＤ構造は、タンパク質の溶解性を改善するＦ６０２Ｓ変異を有するＧＲ  ＬＢＤに結合した高親和性リガンドＤＥＸを用いて決定された（２７）。しかしながら、コルチゾールは、ＤＥＸよりもかなり弱いリガンドであり、内因性ホルモンであるコルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤを安定化させるためには、Ｆ６０２Ｓ変異では十分ではない（図８、レーン１）。全体構造に影響せずにＧＲ  ＬＢＤの溶解度を高め得るアミノ酸を特定するために、本発明者らは、ステロイドホルモンファミリーの最も近いメンバーであるＭＲ、アンドロゲンレセプター（ＡＲ）およびプロゲステロンレセプター（ＰＲ）（これらはＧＲよりもかなり可溶性である）とＧＲをアラインメントした。Ｆ６０２に加えて、残基Ｃ６２２、Ｔ６６８、Ｓ６７４およびＶ６７５が、このファミリーの保存配列を区別するので、本発明者らは、それらのアミノ酸を保存残基に復帰変異させた（Ｆ６０２Ａ、Ｃ６２２Ｙ、Ｔ６６８Ｖ、Ｓ６７４ＴおよびＶ６７５Ｉ、ＡＹＶＴＩと呼ばれる）。これらの残基のほとんどがタンパク質の内側に見られ、ＰＲ残基は、ＰＲ  ＬＢＤ構造によりうまく充填されている（２８）。実際に、ＡＶＹＴＩ  ＧＲ  ＬＢＤは、コルチゾールに結合したとき、Ｆ６０２Ｓ  ＬＢＤよりもかなり良い溶解度を有する（図８、レーン２）。変異ＧＲ  ＬＢＤは、１リットルあたり５ｍｇを超える収量で、発現させ、精製することができる。しかしながら、本発明者らは、このコルチゾールまたはＭＦに結合した変異ＧＲ  ＬＢＤの結晶を得ることができなかった。このＧＲ  ＬＢＤは、そのヘリックスＨ９（その長い側鎖が結晶化に影響し得る）にいくつかのリジン残基およびグルタミン酸残基を有する。表面エントロピー低下変異としてこれらの残基のアラニン変異（ＭＦの場合、Ｋ６６９Ａ／Ｋ７０３Ａ、およびコルチゾールの場合、Ｅ６８４Ａ／Ｅ６８８Ａ）を有するＧＲ  ＬＢＤは、可溶性のままであり（図８、レーン３および４）、これによって、ＭＦおよびコルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤの結晶を得ることが可能であった（図９Ａ〜Ｂ）。これらの変異のすべてが、リガンド結合ポケットから遠く離れており、リガンド媒介性のＧＲトランス活性化機能またはトランス抑制機能を変化させない（図１０Ａ〜Ｂ）。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９１】
コルチゾールの低親和性の根底にある機構を理解するために、本発明者らは、コルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤおよびＤＥＸに結合したＧＲ  ＬＢＤの構造比較を行った。コルチゾールに結合したＧＲ  ＬＢＤの全体構造は、ＤＥＸに結合したＧＲ  ＬＢＤとほぼまったく同じであり、顕著な立体配座の変化はない。次いで、本発明者らは、リガンド結合の詳細を調べた。上で述べたように、ＤＥＸは、１，２二重結合、９αハロゲン化および１６メチル化だけがコルチゾールと異なる（図２Ａ）。ＤＥＸのＣ１−Ｃ２二重結合は、ステロイドＡ環およびＣ３−ケトン基が平面になるようにするので、Ｃ３−ケトンがＲ６１１およびＱ５７０と容易に相互作用できるようになる（図３Ａ）。対照的に、コルチゾールのＣ１−Ｃ２単結合の柔軟性が理由で、ステロイドＡ環は、Ｒ６１１およびＱ５７０と水素結合を形成するために曲がる必要がある。また、未結合のコルチゾールのＣ１−Ｃ２単結合は、２つの立体配座（Ａ環平面の上と下）の間で動くので、リガンドを適切な位置に保持するための水素結合ネットワークを形成するために水分子が必要である。これらの観察結果によって、ＧＲに対するコルチゾールの比較的低い親和性が説明された。Ｃ１−Ｃ２二重結合の重要性を確かめるために、本発明者らは、Ｃ１−Ｃ２二重結合の追加（図３Ｂ、茶色）だけがコルチゾールと異なるプレドニゾロンの効力をトランス活性化アッセイにおいて計測した。実際に、プレドニゾロンのＣ１−Ｃ２二重結合は、コルチゾール用量応答曲線を約５倍、左にシフトさせた（図３Ｂ）ので、ＤＥＸによってもたらされる左への総シフトの半分超を説明し得る。効力の残りの増加は、おそらくＣ−９αハロゲン化およびＣ−１６メチル化に起因し、この両方が、レセプターポケット内の相互作用表面を増大させる（図１１Ａ〜Ｂ）。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９６】
Ｑ６４２の配向が、ＭＦの結合の際におけるリガンド結合ポケットの唯一の大きな変化であるので、本発明者らは、Ｑ６４２を変異させて、それをより小さくするか（Ｑ６４２Ａ）、より大きくするか（Ｑ６４２Ｆ）、疎水性にするか（Ｑ６４２Ｌ）、もしくは帯電させるか（Ｑ６４２Ｅ、Ｑ６４２Ｋ）、またはほんのわずかに変化させた（Ｑ６４２Ｎ）。本発明者らは、飽和未満の濃度（ＭＦ、１ｎＭ；ＤＥＸ、１０ｎＭ）でＭＦまたはＤＥＸを用いてそれらの変異を試験した。興味深いことに、１つの変異（Ｑ６４２Ｎ）について、ＤＥＸ活性は、ほぼ消滅したが、ＭＦ活性は、最大のままであった（図５Ｂ）。したがって、単一の変異が、ＭＦの活性をＤＥＸの活性と完全に分けることができた。他の変異は、ＤＥＸとＭＦとの両方に対する活性のほとんどを喪失させ；例外であるＱ６４２Ｌは、ＭＦとの活性を２分の１にしたが、ＤＥＸとの活性がないかまたは非常に低かった。ＭＦの１７αフロ酸は、Ｍ５６０およびＭ６３９の周囲の立体配座もわずかに変化させたが、それらの残基の変異は、Ｑ６４２Ｎ変異と同じ効果を有しなかった（図１２Ａ〜Ｂ）。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
2019532071.tif 000088
【図２−１】
2019532071.tif 000089
【図２−２】
2019532071.tif 000090
【図３】
2019532071.tif 000091
【図４】
2019532071.tif 000092
【図５ＡＢ】
2019532071.tif 000093
【図５Ｃ】
2019532071.tif 000094
【図６−１】
2019532071.tif 000095
【図６−２】
2019532071.tif 000096
【図７】
2019532071.tif 000097
【図８】
2019532071.tif 000098
【図９】
2019532071.tif 000099
【図１０】
2019532071.tif 000100
【図１１】
2019532071.tif 000101
【図１２】
2019532071.tif 000102
【図１３−１】
2019532071.tif 000103
【図１３−２】
2019532071.tif 000104
【図１３−３】
2019532071.tif 000105
【図１４】
2019532071.tif 000106
【図１５】
2019532071.tif 000107
【図１６】
2019532071.tif 000108
【国際調査報告】
2019532071.tif 000109