(57)【要約】  式（Ｉ）の化合物が提供され、2019513829.tif 000101  式中、Ｒ２、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＱは、様々な異なる可能性を表すことができる。これらの化合物は、抗癌剤並びに抗炎症剤、抗増殖剤及び／又は抗転移剤として有用であり得る。
2019513829.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
【化１】
2019513829.tif 000046
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、アルキル又はハロゲンであり、
Ｒ２は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｑは、ＱＡ又はＱＢであり、
ＱＡ＝
【化２】
2019513829.tif 000047
であり、
ＱＢ＝
【化３】
2019513829.tif 000048
であり、
【化４】
2019513829.tif 000049
は単結合又は二重結合であり、
Ｒ５は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ６は、Ｈ、Ｂｏｃ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリル及びイソキノリルから選択される置換体又は非置換体であり、
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、−ＳＲ８及び−ＮＲ９Ｒ１０から選択されるか、
Ｒ３及びＲ４は、互いに接合して、Ｎ、Ｓ及びＯから選択されるヘテロ原子を場合により含む５〜７員環を形成し、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、−（ＣＨ２）ｎＮＨＢｏｃ又は−（ＣＨ２）ｎＮＨ２であり（式中、ｎ＝１〜６である）、
Ｒ９は、Ｈ又はＣ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル又はベンゾイルであり、
式中、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、置換されている場合、−ＯＲ９、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル、ベンゾイル、−ＮＯ２、Ｃ１−Ｃ８アルキル、メトキシカルボニル−又はアルキルオキシカルボニル−から選択される少なくとも１個の置換基で置換される）、
又はそれらの鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ混合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ
（前記化合物が下記式とは異なることを条件とする）。
【化５】
2019513829.tif 000050
【請求項２】
式（ＩＡ）の化合物であって、
【化６】
2019513829.tif 000051
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＱは、請求項１で定義した通りである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２は、Ｈ、アセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
ＱはＱＡであり、
Ｒ５は、Ｈ、アセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
Ｒ６は、Ｂｏｃ、Ｈ、又はアセチル及びプロピオリルから選択される非置換体である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
式（ＩＢ）の化合物であって、
【化７】
2019513829.tif 000052
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＱは、請求項１で定義した通りである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２は、Ｈ、アセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
ＱはＱＡであり、
Ｒ５は、Ｈ、アセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
Ｒ６は、Ｂｏｃ、Ｈ、又はアセチル及びプロピオリルから選択される非置換体である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
式（ＩＣ）の化合物であって、
【化８】
2019513829.tif 000053
式中、Ｒ２、Ｒ５及びＲ６は、請求項１で定義した通りである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２は、Ｈ、アセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
ＱはＱＡであり、
Ｒ５は、Ｈ、アセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
Ｒ６は、Ｂｏｃ、Ｈ、又はアセチル及びプロピオリルから選択される非置換体である、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
式（ＩＤ）の化合物であって、
【化９】
2019513829.tif 000054
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ７は、請求項１で定義した通りである、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２は、Ｈ、又はアセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリル及びイソキノリルから選択される非置換体である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
式（ＩＥ）の化合物であって、
【化１０】
2019513829.tif 000055
式中、Ｒ２及びＲ７は、請求項１で定義した通りである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ２は、Ｈ、又はアセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリル及びイソキノリルから選択される非置換体である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
下記式から選択される請求項１に記載の化合物。
【化１１】
2019513829.tif 000056
【請求項１３】
下記式から選択される請求項１に記載の化合物。
【化１２】
2019513829.tif 000057
【請求項１４】
式（ＩＩＡ）、（ＩＩＢ）又は（ＩＩＣ）の化合物
【化１３】
2019513829.tif 000058
（式中、
Ｑは、ＱＡ又はＱＢであり、
ＱＡ＝
【化１４】
2019513829.tif 000059
であり、
ＱＢ＝
【化１５】
2019513829.tif 000060
であり、
Ｒ２は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ５は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ６は、Ｈ、Ｂｏｃ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリル及びイソキノリルから選択される置換体又は非置換体であり、
Ｒ９は、Ｈ又はＣ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｘは、Ｏ、Ｓ又はＮＲ２であり、
ｎは、１、２又は３であり、
式中、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、置換されている場合、−ＯＲ９、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル、ベンゾイル、−ＮＯ２、Ｃ１−Ｃ８アルキル、メトキシカルボニル−又はアルキルオキシカルボニル−から選択される少なくとも１個の置換基で置換される）、
又はそれらの鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ混合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項１５】
医薬品に使用するための請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される少なくとも１つの癌を発症するリスクを低下させるのに使用するための請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される少なくとも１つの癌を治療するのに使用するための請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
抗癌剤として使用するための請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
抗炎症剤として使用するための請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２０】
抗転移剤として使用するための請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
抗増殖剤として使用するための請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される少なくとも１つの癌を治療するための請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項２３】
メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される少なくとも１つの癌を発症するリスクを低下させるための請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項２４】
メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される少なくとも１つの癌の癌細胞増殖を阻害するための請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項２５】
メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される少なくとも１つの癌の癌腫瘍の増殖及び／又は癌腫瘍の大きさを阻害するための請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項２６】
メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される少なくとも１つの癌の癌腫瘍の転移を低減及び／又は予防するための請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項２７】
メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される少なくとも１つの癌を治療するための薬剤の製造における請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項２８】
メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される少なくとも１つの癌を発症するリスクを低下させるための薬剤の製造における請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項２９】
メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される少なくとも１つの癌の癌細胞増殖を阻害するための薬剤の製造における請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項３０】
メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される少なくとも１つの癌の癌腫瘍の増殖及び／又は癌腫瘍の大きさを阻害するための薬剤の製造における請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項３１】
メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される少なくとも１つの癌の癌腫瘍の転移を低減及び／又は予防するための薬剤の製造における請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項３２】
抗癌剤として使用するための請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項３３】
抗炎症剤として使用するための請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項３４】
抗転移剤として使用するための請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項３５】
抗増殖剤として使用するための請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項３６】
メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される癌又は少なくとも１つの癌を治療する方法であって、前記方法が、それを必要とする対象に、請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の有効量を投与することを含む方法。
【請求項３７】
対象が癌を発症するリスクを低下させる方法又は対象が少なくとも１つの癌を発症するリスクを低下させる方法であって、前記癌が、例えば、メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択され、前記方法が、前記対象に、請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の有効量を投与することを含む方法。
【請求項３８】
癌細胞増殖を阻害する方法であって、前記方法が、それを必要とする対象に、請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の有効量を投与することを含む方法。
【請求項３９】
癌細胞増殖が、未治療の対象と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％阻害される請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
癌細胞増殖を阻害する方法であって、前記方法が、癌細胞と、請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の有効量とを接触させることを含む方法。
【請求項４１】
細胞の相対的なＳＴＡＴ１活性化が、未処理の癌細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％低下する請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
細胞の相対的なＳＴＡＴ３活性化が、未処理の癌細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％低下する請求項４０又は４１に記載の方法。
【請求項４３】
細胞のＣＤ４０発現が、未処理の癌細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％減少する請求項４０〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
細胞のＭＨＣ−ＩＩ発現が、未処理の癌細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％減少する請求項４０〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
細胞のＮＯ産生が、未処理の癌細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％低下する請求項４０〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
細胞のＴＮＦα／ＮＦκＢ及び／又はＩＬ６／ＳＴＡＴ３シグナル伝達経路が、未処理の細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％低減する請求項４０〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
細胞のＬＰＳ活性化ＮＦκＢシグナル伝達経路が、未処理の細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％低減する請求項４０〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
癌腫瘍の増殖及び／又は癌腫瘍の大きさを阻害する方法であって、前記方法が、それを必要とする対象に、請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の有効量を投与することを含む方法。
【請求項４９】
腫瘍の増殖及び／又は腫瘍の大きさが、未治療の対象と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％又は約９０％低減する請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
癌腫瘍の転移を低減及び／又は予防する方法であって、前記方法が、それを必要とする対象に、請求項１〜１４のいずれか一項で定義した少なくとも１つの化合物の有効量を投与することを含む方法。
【請求項５１】
腫瘍転移の数が、未治療の対象と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％又は約９０％減少する請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
式（Ｉ）の化合物
【化１６】
2019513829.tif 000061
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、アルキル又はハロゲンであり、
Ｒ２は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｑは、ＱＡ又はＱＢであり、
ＱＡ＝
【化１７】
2019513829.tif 000062
であり、
ＱＢ＝
【化１８】
2019513829.tif 000063
であり、
【化１９】
2019513829.tif 000064
は単結合又は二重結合であり、
Ｒ５は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ６は、Ｈ、Ｂｏｃ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリル及びイソキノリルから選択される置換体又は非置換体であり、
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、−ＳＲ８及び−ＮＲ９Ｒ１０から選択されるか、
Ｒ３及びＲ４は、互いに接合して、Ｎ、Ｓ及びＯから選択されるヘテロ原子を場合により含む５〜７員環を形成し、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、−（ＣＨ２）ｎＮＨＢｏｃ又は−（ＣＨ２）ｎＮＨ２であり（式中、ｎ＝１〜６である）、
Ｒ９は、Ｈ又はＣ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル又はベンゾイルであり、
式中、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、置換されている場合、−ＯＲ９、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル、ベンゾイル、−ＮＯ２、Ｃ１−Ｃ８アルキル、メトキシカルボニル−又はアルキルオキシカルボニル−から選択される少なくとも１個の置換基で置換される）、
又はそれらの鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ混合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグであって、
メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される少なくとも１つの癌を治療するのに使用するための式（Ｉ）の化合物又はそれらの鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ混合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項５３】
式（Ｉ）の化合物
【化２０】
2019513829.tif 000065
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、アルキル又はハロゲンであり、
Ｒ２は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｑは、ＱＡ又はＱＢであり、
ＱＡ＝
【化２１】
2019513829.tif 000066
であり、
ＱＢ＝
【化２２】
2019513829.tif 000067
であり、
【化２３】
2019513829.tif 000068
は単結合又は二重結合であり、
Ｒ５は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ６は、Ｈ、Ｂｏｃ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリル及びイソキノリルから選択される置換体又は非置換体であり、
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、−ＳＲ８及び−ＮＲ９Ｒ１０から選択されるか、
Ｒ３及びＲ４は、互いに接合して、Ｎ、Ｓ及びＯから選択されるヘテロ原子を場合により含む５〜７員環を形成し、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、−（ＣＨ２）ｎＮＨＢｏｃ又は−（ＣＨ２）ｎＮＨ２であり（式中、ｎ＝１〜６である）、
Ｒ９は、Ｈ又はＣ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル又はベンゾイルであり、
式中、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、置換されている場合、−ＯＲ９、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル、ベンゾイル、−ＮＯ２、Ｃ１−Ｃ８アルキル、メトキシカルボニル−又はアルキルオキシカルボニル−から選択される少なくとも１個の置換基で置換される）、
又はそれらの鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ混合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグであって、
癌細胞増殖を阻害するのに使用され、
癌が、メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される、式（Ｉ）の化合物又はそれらの鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ混合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項５４】
式（Ｉ）の化合物
【化２４】
2019513829.tif 000069
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、アルキル又はハロゲンであり、
Ｒ２は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｑは、ＱＡ又はＱＢであり、
ＱＡ＝
【化２５】
2019513829.tif 000070
であり、
ＱＢ＝
【化２６】
2019513829.tif 000071
であり、
【化２７】
2019513829.tif 000072
は単結合又は二重結合であり、
Ｒ５は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ６は、Ｈ、Ｂｏｃ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリル及びイソキノリルから選択される置換体又は非置換体であり、
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、−ＳＲ８及び−ＮＲ９Ｒ１０から選択されるか、
Ｒ３及びＲ４は、互いに接合して、Ｎ、Ｓ及びＯから選択されるヘテロ原子を場合により含む５〜７員環を形成し、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、−（ＣＨ２）ｎＮＨＢｏｃ又は−（ＣＨ２）ｎＮＨ２であり（式中、ｎ＝１〜６である）、
Ｒ９は、Ｈ又はＣ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル又はベンゾイルであり、
式中、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、置換されている場合、−ＯＲ９、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル、ベンゾイル、−ＮＯ２、Ｃ１−Ｃ８アルキル、メトキシカルボニル−又はアルキルオキシカルボニル−から選択される少なくとも１個の置換基で置換される）、
又はそれらの鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ混合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグであって、
癌腫瘍の増殖及び／又は癌腫瘍の大きさを阻害するのに使用され、癌が、メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される、式（Ｉ）の化合物又はそれらの鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ混合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項５５】
式（Ｉ）の化合物
【化２８】
2019513829.tif 000073
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、アルキル又はハロゲンであり、
Ｒ２は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｑは、ＱＡ又はＱＢであり、
ＱＡ＝
【化２９】
2019513829.tif 000074
であり、
ＱＢ＝
【化３０】
2019513829.tif 000075
であり、
【化３１】
2019513829.tif 000076
は単結合又は二重結合であり、
Ｒ５は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ６は、Ｈ、Ｂｏｃ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリル及びイソキノリルから選択される置換体又は非置換体であり、
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、−ＳＲ８及び−ＮＲ９Ｒ１０から選択されるか、
Ｒ３及びＲ４は、互いに接合して、Ｎ、Ｓ及びＯから選択されるヘテロ原子を場合により含む５〜７員環を形成し、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、−（ＣＨ２）ｎＮＨＢｏｃ又は−（ＣＨ２）ｎＮＨ２であり（式中、ｎ＝１〜６である）、
Ｒ９は、Ｈ又はＣ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル又はベンゾイルであり、
式中、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、置換されている場合、−ＯＲ９、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル、ベンゾイル、−ＮＯ２、Ｃ１−Ｃ８アルキル、メトキシカルボニル−又はアルキルオキシカルボニル−から選択される少なくとも１個の置換基で置換される）、
又はそれらの鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ混合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグであって、
癌腫瘍の転移を低減及び／又は予防するのに使用され、癌が、メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される式（Ｉ）の化合物又はそれらの鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ混合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ。
【請求項５６】
メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される癌又は少なくとも１つの癌を治療する方法であって、前記方法が、それを必要とする対象に、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物
【化３２】
2019513829.tif 000077
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、アルキル又はハロゲンであり、
Ｒ２は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｑは、ＱＡ又はＱＢであり、
ＱＡ＝
【化３３】
2019513829.tif 000078
であり、
ＱＢ＝
【化３４】
2019513829.tif 000079
であり、
【化３５】
2019513829.tif 000080
は単結合又は二重結合であり、
Ｒ５は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ６は、Ｈ、Ｂｏｃ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリル及びイソキノリルから選択される置換体又は非置換体であり、
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、−ＳＲ８及び−ＮＲ９Ｒ１０から選択されるか、
Ｒ３及びＲ４は、互いに接合して、Ｎ、Ｓ及びＯから選択されるヘテロ原子を場合により含む５〜７員環を形成し、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、−（ＣＨ２）ｎＮＨＢｏｃ又は−（ＣＨ２）ｎＮＨ２であり（式中、ｎ＝１〜６である）、
Ｒ９は、Ｈ又はＣ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル又はベンゾイルであり、
式中、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、置換されている場合、−ＯＲ９、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル、ベンゾイル、−ＮＯ２、Ｃ１−Ｃ８アルキル、メトキシカルボニル−又はアルキルオキシカルボニル−から選択される少なくとも１個の置換基で置換される）、
又はそれらの鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ混合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグの有効量を投与することを含む方法。
【請求項５７】
癌細胞増殖を阻害する方法であって、癌が、メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択され、前記方法が、それを必要とする対象に、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物
【化３６】
2019513829.tif 000081
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、アルキル又はハロゲンであり、
Ｒ２は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｑは、ＱＡ又はＱＢであり、
ＱＡ＝
【化３７】
2019513829.tif 000082
であり、
ＱＢ＝
【化３８】
2019513829.tif 000083
であり、
【化３９】
2019513829.tif 000084
は単結合又は二重結合であり、
Ｒ５は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ６は、Ｈ、Ｂｏｃ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリル及びイソキノリルから選択される置換体又は非置換体であり、
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、−ＳＲ８及び−ＮＲ９Ｒ１０から選択されるか、
Ｒ３及びＲ４は、互いに接合して、Ｎ、Ｓ及びＯから選択されるヘテロ原子を場合により含む５〜７員環を形成し、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、−（ＣＨ２）ｎＮＨＢｏｃ又は−（ＣＨ２）ｎＮＨ２であり（式中、ｎ＝１〜６である）、
Ｒ９は、Ｈ又はＣ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル又はベンゾイルであり、
式中、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、置換されている場合、−ＯＲ９、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル、ベンゾイル、−ＮＯ２、Ｃ１−Ｃ８アルキル、メトキシカルボニル−又はアルキルオキシカルボニル−から選択される少なくとも１個の置換基で置換される）、
又はそれらの鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ混合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグの有効量を投与することを含む方法。
【請求項５８】
癌腫瘍の増殖及び／又は癌腫瘍の大きさを阻害する方法であって、癌が、メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択され、前記方法が、それを必要とする対象に、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物
【化４０】
2019513829.tif 000085
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、アルキル又はハロゲンであり、
Ｒ２は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｑは、ＱＡ又はＱＢであり、
ＱＡ＝
【化４１】
2019513829.tif 000086
であり、
ＱＢ＝
【化４２】
2019513829.tif 000087
であり、
【化４３】
2019513829.tif 000088
は単結合又は二重結合であり、
Ｒ５は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ６は、Ｈ、Ｂｏｃ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリル及びイソキノリルから選択される置換体又は非置換体であり、
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、−ＳＲ８及び−ＮＲ９Ｒ１０から選択されるか、
Ｒ３及びＲ４は、互いに接合して、Ｎ、Ｓ及びＯから選択されるヘテロ原子を場合により含む５〜７員環を形成し、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、−（ＣＨ２）ｎＮＨＢｏｃ又は−（ＣＨ２）ｎＮＨ２であり（式中、ｎ＝１〜６である）、
Ｒ９は、Ｈ又はＣ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル又はベンゾイルであり、
式中、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、置換されている場合、−ＯＲ９、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル、ベンゾイル、−ＮＯ２、Ｃ１−Ｃ８アルキル、メトキシカルボニル−又はアルキルオキシカルボニル−から選択される少なくとも１個の置換基で置換される）、
又はそれらの鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ混合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグの有効量を投与することを含む方法。
【請求項５９】
癌腫瘍の転移を低減及び／又は予防する方法であって、癌が、メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択され、前記方法が、それを必要とする対象に、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物
【化４４】
2019513829.tif 000089
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、アルキル又はハロゲンであり、
Ｒ２は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｑは、ＱＡ又はＱＢであり、
ＱＡ＝
【化４５】
2019513829.tif 000090
であり、
ＱＢ＝
【化４６】
2019513829.tif 000091
であり、
【化４７】
2019513829.tif 000092
は単結合又は二重結合であり、
Ｒ５は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ６は、Ｈ、Ｂｏｃ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリル及びイソキノリルから選択される置換体又は非置換体であり、
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、−ＳＲ８及び−ＮＲ９Ｒ１０から選択されるか、
Ｒ３及びＲ４は、互いに接合して、Ｎ、Ｓ及びＯから選択されるヘテロ原子を場合により含む５〜７員環を形成し、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、−（ＣＨ２）ｎＮＨＢｏｃ又は−（ＣＨ２）ｎＮＨ２であり（式中、ｎ＝１〜６である）、
Ｒ９は、Ｈ又はＣ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル又はベンゾイルであり、
式中、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、置換されている場合、−ＯＲ９、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル、ベンゾイル、−ＮＯ２、Ｃ１−Ｃ８アルキル、メトキシカルボニル−又はアルキルオキシカルボニル−から選択される少なくとも１個の置換基で置換される）、
又はそれらの鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ混合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグの有効量を投与することを含む方法。
【請求項６０】
化合物が、式（ＩＡ）の化合物であり、
【化４８】
2019513829.tif 000093
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＱは、請求項５２〜５５のいずれか一項で定義した通りである、請求項５２〜５５のいずれか一項に記載の化合物又は請求項５６〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
請求項６０に記載の化合物又は方法であって、
Ｒ２は、Ｈ、アセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
ＱはＱＡであり、
Ｒ５は、Ｈ、アセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
Ｒ６は、Ｂｏｃ、Ｈ、又はアセチル及びプロピオリルから選択される非置換体である、化合物又は方法。
【請求項６２】
化合物が、式（ＩＢ）の化合物であり、
【化４９】
2019513829.tif 000094
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＱは、請求項１で定義した通りである、請求項５２〜５５のいずれか一項に記載の化合物又は請求項５６〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
請求項６２に記載の化合物又は方法であって、
Ｒ２は、Ｈ、アセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
ＱはＱＡであり、
Ｒ５は、Ｈ、アセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
Ｒ６は、Ｂｏｃ、Ｈ、又はアセチル及びプロピオリルから選択される非置換体である、化合物又は方法。
【請求項６４】
化合物が、式（ＩＣ）の化合物であり、
【化５０】
2019513829.tif 000095
式中、Ｒ２、Ｒ５及びＲ６は、請求項１で定義した通りである、請求項５２〜５５のいずれか一項に記載の化合物又は請求項５６〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
請求項６４に記載の化合物又は方法であって、
Ｒ２は、Ｈ、アセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
ＱはＱＡであり、
Ｒ５は、Ｈ、アセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
Ｒ６は、Ｂｏｃ、Ｈ、又はアセチル及びプロピオリルから選択される非置換体である、化合物又は方法。
【請求項６６】
化合物が、式（ＩＤ）の化合物であり、
【化５１】
2019513829.tif 000096
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ７は、請求項１で定義した通りである、請求項５２〜５５のいずれか一項に記載の化合物又は請求項５６〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
請求項６６に記載の化合物又は方法であって、
Ｒ２は、Ｈ、又はアセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリル及びイソキノリルから選択される非置換体である、化合物又は方法。
【請求項６８】
化合物が、式（ＩＥ）の化合物であり、
【化５２】
2019513829.tif 000097
式中、Ｒ２及びＲ７は、請求項１で定義した通りである、請求項５２〜５５のいずれか一項に記載の化合物又は請求項５６〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
請求項６８に記載の化合物又は方法であって、
Ｒ２は、Ｈ、又はアセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリル及びイソキノリルから選択される非置換体である、化合物又は方法。
【請求項７０】
化合物が、下記式から選択される請求項５２〜５５のいずれか一項に記載の化合物又は請求項５６〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【化５３】
2019513829.tif 000098
【請求項７１】
化合物が、下記式から選択される請求項５２〜５５のいずれか一項に記載の化合物又は請求項５６〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【化５４】
2019513829.tif 000099
【請求項７２】
化合物が、下記式から選択される請求項５２〜５５のいずれか一項に記載の化合物又は請求項５６〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【化５５】
2019513829.tif 000100
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年４月１１日に出願された米国仮特許出願第６２／３２０，６５４号の優先権を主張し、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示は、活性剤の分野に関する。さらに詳細には、本開示は、抗炎症剤、抗転移剤、抗増殖剤及び抗癌剤に関する。本開示は、これらの薬剤を用いて癌を治療するための方法にも関する。
【背景技術】
【０００３】
癌の治療にはいくつかの方法がある１。最も一般的なものは、手術、化学療法、放射線療法、標的療法、免疫療法である１〜６。その他の処置は、幹細胞移植、光線力学療法及び極低温療法に基づく１。今日では、レーザーが限局性癌の手術中の有用なツールとなっている。これらの方法の多くは非常に効果的である。しかし、ほとんどの場合、重大な副作用が現れる７、８。したがって、代替的な治療法を発見する必要がある。特に、多様な領域（開始、増殖、転移など）で同時に癌を攻撃することができる化合物及び治療プロトコールは非常に重要である。
【０００４】
尿路上皮膀胱癌（ＵＢＣ）は、北アメリカの癌全体のうち第５位に挙げられる悪性腫瘍である。検出可能な腫瘍のほとんどは、最初は筋層非浸潤性であり、一般的には外科的切除によって治癒可能であるが、その２７〜３０％は高い組織学的悪性度及び筋層浸潤を特徴とする致死的な表現型を示す。最近の試験ではまた、ＵＢＣの膀胱内治療応答が、主要な炎症細胞（主にマクロファージ）の浸潤及び主要な炎症性メディエーター（サイトカインＴＮＦα及びＩＬ６並びに転写因子ＮＦκＢ及びＳＴＡＴ３を含む）の活性化の影響を受けるという十分な証拠が提供された。ＵＢＣの増殖、転移、及び細胞死に対する抵抗性における炎症性メディエーターの重要な機能を考慮すると、炎症性メディエーターが、免疫療法及び化学療法剤の有効性を改善するための潜在的な薬物標的である可能性がある。
【発明の概要】
【０００５】
一態様によれば、式（Ｉ）の化合物
【化１】
2019513829.tif 000003
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、アルキル又はハロゲンであり、
Ｒ２は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｑは、ＱＡ又はＱＢであり、
ＱＡ＝
【化２】
2019513829.tif 000004
であり、
ＱＢ＝
【化３】
2019513829.tif 000005
であり、
【化４】
2019513829.tif 000006
は単結合又は二重結合であり、
Ｒ５は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ６は、Ｈ、Ｂｏｃ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリル及びイソキノリルから選択される置換体又は非置換体であり、
Ｒ３及びＲ４は、独立して、Ｈ、−ＳＲ８及び−ＮＲ９Ｒ１０から選択されるか、
Ｒ３及びＲ４は、互いに接合して、Ｎ、Ｓ及びＯから選択されるヘテロ原子を場合により含む５〜７員環を形成し、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、−（ＣＨ２）ｎＮＨＢｏｃ又は−（ＣＨ２）ｎＮＨ２であり（式中、ｎ＝１〜６である）、
Ｒ９は、Ｈ又はＣ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル又はベンゾイルであり、
式中、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、置換されている場合、−ＯＲ９、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル、ベンゾイル、−ＮＯ２、Ｃ１−Ｃ８アルキル、メトキシカルボニル−又はアルキルオキシカルボニル−から選択される少なくとも１個の置換基で置換される）、
又はそれらの鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ混合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグが含まれる。
【０００６】
別の態様によれば、式（ＩＩＡ）、（ＩＩＢ）もしくは（ＩＩＣ）の化合物
【化５】
2019513829.tif 000007
（式中、
Ｑは、ＱＡ又はＱＢであり、
ＱＡ＝
【化６】
2019513829.tif 000008
ＱＢ＝
【化７】
2019513829.tif 000009
Ｒ２は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ５は、Ｈ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ６は、Ｈ、Ｂｏｃ、又はアセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル及びベンゾイルから選択される置換体もしくは非置換体であり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリル及びイソキノリルから選択される置換体又は非置換体であり、
Ｒ９は、Ｈ又はＣ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｘは、Ｏ、Ｓ又はＮＲ２であり、
ｎは、１、２又は３であり、
式中、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、置換されている場合、−ＯＲ９、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、アセチル、プロピオリル、ブチリル、イソブチリル、ベンゾイル、−ＮＯ２、Ｃ１−Ｃ８アルキル、メトキシカルボニル−又はアルキルオキシカルボニル−から選択される少なくとも１個の置換基で置換される）、
又はそれらの鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ混合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグが提供される。
【０００７】
別の態様によれば、薬学的に許容される担体及び本開示の少なくとも１つの化合物を含む組成物が含まれる。
【０００８】
別の態様によれば、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌及びメラノーマから選択される癌又は少なくとも１つの癌を治療する方法が含まれ、該方法は、それを必要とする対象に、本開示の少なくとも１つの化合物の有効量を投与することを含む。
【０００９】
別の態様によれば、対象が癌を発症するリスクを低下させる方法又は対象が少なくとも１つの癌を発症するリスクを低下させる方法が含まれ、癌は、例えば、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌及びメラノーマから選択され、該方法は、対象に本開示の少なくとも１つの化合物の有効量を投与することを含む。
【００１０】
別の態様によれば、癌細胞増殖を阻害する方法が含まれ、該方法は、それを必要とする対象に、本開示の少なくとも１つの化合物の有効量を投与することを含む。例えば、癌は、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌及びメラノーマから選択され得る。
【００１１】
別の態様によれば、癌細胞増殖を阻害する方法が含まれ、該方法は、癌細胞と、本開示の少なくとも１つの化合物の有効量とを接触させることを含む。例えば、癌は、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌及びメラノーマから選択され得る。
【００１２】
別の態様によれば、癌腫瘍の増殖及び／又は癌腫瘍の大きさを阻害する方法が含まれ、該方法は、それを必要とする対象に、本開示の少なくとも１つの化合物の有効量を投与することを含む。例えば、癌は、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌及びメラノーマから選択され得る。
【００１３】
別の態様によれば、癌腫瘍の転移を低減及び／又は予防する方法が含まれ、該方法は、それを必要とする対象に、本開示の少なくとも１つの化合物の有効量を投与することを含む。例えば、癌は、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌及びメラノーマから選択され得る。
【００１４】
別の態様によれば、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌及びメラノーマから選択される癌又は少なくとも１つの癌を治療するために、本開示の少なくとも１つの化合物を使用することが含まれる。
【００１５】
別の態様によれば、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌及びメラノーマから選択される癌又は少なくとも１つの癌を発症するリスクを低下させるために、本開示の少なくとも１つの化合物を使用することが含まれる。
【００１６】
別の態様によれば、癌細胞増殖を阻害するために、本開示の少なくとも１つの化合物を使用することが含まれる。例えば、癌は、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌及びメラノーマから選択され得る。
【００１７】
別の態様によれば、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌及びメラノーマから選択される少なくとも１つの癌腫瘍の増殖及び／又は癌腫瘍の大きさを阻害するために、本開示の少なくとも１つの化合物を使用することが含まれる。
【００１８】
別の態様によれば、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌及びメラノーマから選択される少なくとも１つの癌の癌腫瘍の転移を低減及び／又は予防するために、本開示の少なくとも１つの化合物を使用することが含まれる。
【００１９】
別の態様によれば、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌及びメラノーマから選択される癌又は少なくとも１つの癌を治療するための薬剤の製造に、本開示の少なくとも１つの化合物を使用することが含まれる。
【００２０】
別の態様によれば、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌及びメラノーマから選択される癌又は少なくとも１つの癌を発症するリスクを低下させるための薬剤の製造に、本開示の少なくとも１つの化合物を使用することが含まれる。
【００２１】
別の態様によれば、癌細胞増殖を阻害するための薬剤の製造に、本開示の少なくとも１つの化合物を使用することが含まれる。例えば、癌は、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌及びメラノーマから選択され得る。
【００２２】
別の態様によれば、癌腫瘍の増殖及び／又は癌腫瘍の大きさを阻害するための薬剤の製造に、本開示の少なくとも１つの化合物を使用することが含まれる。例えば、癌は、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌及びメラノーマから選択され得る。
【００２３】
別の態様によれば、癌腫瘍の転移を低減及び／又は予防するための薬剤の製造に、本開示の少なくとも１つの化合物を使用することが含まれる。例えば、癌は、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌及びメラノーマから選択され得る。
【００２４】
以下の図面は、特定の実施形態の例を非限定的に示す。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は、ビヒクル（ＤＭＳＯ）又は化合物４及び５（ともに０、１０及び５０μＭ）を用いて３０分間前処理し、即時（ｔ＝０）又は５０Ｕ／ｍＬのＩＦＮγもしくは２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ６のいずれかによる３０分間の活性化後に洗浄及び回収したヒトマクロファージ（Ｍφ）のリン酸化ＳＴＡＴ１及びＳＴＡＴ３の発現レベルを決定するためのウェスタンブロット分析を示す画像（ａ）及びグラフ分析（ｂ）を示す。各サンプルの濃度測定分析から、リン酸化されたタンパク質／リン酸化されていないタンパク質の比を計算して、ｐＳＴＡＴ１又はｐＳＴＡＴ３の相対活性化を評価した。化合物４及び５は、ＩＦＮγ誘発性のＳＴＡＴ１活性化及びＩＬ６誘発性のＳＴＡＴ３活性化を効率的に阻害した。＊ｐ＜０．０５及び＊＊ｐ＜０．０１は処理間の有意差を示す。
【図２】図２は、未処理並びに化合物４（１０μＭ）及び５（２５μＭ）を用いて前処理した休止型（ｒｅｓｔｉｎｇ）ヒトマクロファージ及びＩＦＮγ活性化ヒトマクロファージのＭＨＣ−ＩＩ及びＣＤ４０表面抗原の発現レベルを決定するためのフローサイトメトリー分析を示す画像（ａ）及びグラフ分析（ｂ）を示す。化合物４及び５は、ＩＦＮγ誘発性のＣＤ４０及びＭＨＣ−ＩＩ発現を効率的に阻害した。＊ｐ＜０．０５及び＊＊ｐ＜０．０１は処理間の有意差を示す。
【図３】図３は、ビヒクル（ＤＭＳＯ）又は化合物４（１０μＭ）及び５（２５μＭ）を用いて３時間培養し、ビヒクル（ＰＢＳ）又は２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ６により４８時間活性化させたヒトマクロファージ単層の運動性を決定するためのスクラッチ創傷治癒アッセイを示す画像（ａ）及びグラフ分析（ｂ）を示す。スクラッチの画像は、蛍光顕微鏡によってｔ＝０時間及びｔ＝４８時間に取得した。それぞれの異なる処理に対して５つの領域を無作為に取得した。観察はいずれも５倍で実施した。細胞運動性は、ｔ＝０時間の運動性細胞に対するｔ＝４８時間の運動性細胞の対照のパーセント（％）（ｐｅｒｃｅｎｔ（％）ｏｆ  ｃｏｎｔｒｏｌ）として表した。化合物４及び５は、ＩＦＮγ誘発性のＳＴＡＴ１活性化及びＩＬ６誘発性のＳＴＡＴ３活性化を効率的に阻害した。＊ｐ＜０．０５及び＊＊ｐ＜０．０１は処理間の有意差を示す。
【図４】図４は、ビヒクル（ＤＭＳＯ）並びに誘導体４及び５による前処理に続くＩＦＮγ及びＴＮＦαによる炎症誘発性刺激後のマクロファージ様Ｊ７７４Ａ．１細胞におけるＮＯ産生のグラフ表示である。化合物４及び５は、ＩＦＮγ／ＴＮＦαを併用した場合に誘発されるＮＯ合成を効率的に阻害した。＊ｐ＜０．０５及び＊＊ｐ＜０．０１は処理間の有意差を示す。
【図５】図５は、ビヒクル（ＤＭＳＯ）並びに誘導体４及び５による前処理に続くＩＦＮγ及びＴＮＦαによる炎症誘発性刺激後の齧歯類ＵＢＣ細胞株ＭＢ４９−ＩによるＮＯ産生のグラフ表示である。１０及び５０μＭの化合物４及び５は、ＩＦＮγ／ＴＮＦαを併用した場合に誘発されるＮＯ合成を効率的に阻害した。＊ｐ＜０．０５及び＊＊ｐ＜０．０１は処理間の有意差を示す。
【図６】図６は、ビヒクル（ＤＭＳＯ）並びに異なる濃度の抗炎症性誘導体４及び５による前処理に続くＩＦＮγ及びＴＮＦαによる炎症誘発性刺激後の齧歯類ＵＢＣ細胞株ＭＢ４９−Ｉにみる相対的な細胞生存率のグラフ表示である。化合物４及び５は、低用量（１０、２５及び３７．５μＭ）では、ＭＢ４９−Ｉ細胞に対するＩＦＮγ＋ＴＮＦα併用の抗増殖活性にほとんど又は全く影響を及ぼさなかった。＊ｐ＜０．０５は、ＩＦＮγ＋ＴＮＦα併用及び化合物４又は５による処理と、ＩＦＮγ＋ＴＮＦα併用のみによる処理との間の有意差を示す。
【図７】図７は、異なる濃度（０、１０、１５、２０、３０及び５０μＭ）でビヒクル（ＤＭＳＯ）又は化合物４のいずれかを用いた処理（３時間）後２４時間のＭＢ４９及びＭＢ４９−Ｉ細胞株にみる相対的な細胞生存率を示す。細胞生存率に対する化合物４の負の効果は、ＵＢＣ  ＭＢ４９又はＭＢ４９−Ｉ細胞の細胞死の増加に起因するのではなく、むしろ細胞増殖の停止によるものであろう。＊ｐ＜０．０５は、対照（化合物４なし）と比較した有意差を示す。
【図８】図８は、（ａ）化合物４が１０μＭの低用量で、齧歯類ＵＢＣ  ＭＢ４９−Ｉ細胞のＴＮＦα／ＮＦκＢ及びＩＬ６／ＳＴＡＴ３シグナル伝達経路を効率的に阻害したウェスタンブロット分析と、（ｂ）５０μＭの化合物４が、ＮＦκＢ活性化を効率的に阻害したルシフェラーゼアッセイとを示す。ＣＭＶプロモーター、及びＮＦκＢ転写応答エレメントのタンデム反復の制御下で、ＭＢ４９−Ｉ細胞に、ホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子をコードするＮＦκＢ応答性ルシフェラーゼ構築物をトランスフェクトした。＊ｐ＜０．０１は、対照と比較した有意差を示す。
【図９】図９は、（ａ）化合物４が、Ｍ１誘発性のヒトＵＢＣ  Ｔ２４細胞浸潤（Ｂｏｙｄｅｎチャンバー内のマトリゲル）を効率的に阻害した微小浸潤アッセイと、（ｂ）３０μＭの化合物４が、ヒトＵＢＣ  Ｔ２４細胞のＩＬ６誘発性の運動性を効率的に阻害した（スクラッチアッセイ）運動性アッセイとを示す。＊ｐ＜０．０５は、対照（Ｍ１  ＤＭＳＯ）と比較した有意差を示す。
【図１０】図１０は、３０μＭの化合物４が、高度に浸潤性のヒト乳癌細胞株であるＭＤＡ−ＭＢ−２４１細胞の浸潤活性を効率的に阻害し、化合物４の抗浸潤効果が細胞特異的ではないことを実証する３Ｄスフェロイドベースの腫瘍浸潤アッセイの細胞分析を示す。＊ｐ＜０．０１は、０日目と比較した有意差を示す。
【図１１】図１１は、３週間にわたり、Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊマウス（ｎ＝４）に、異なる濃度（０、９０、１５０及び３００μＭ）で化合物４を一時的に腹腔内（ｉ．ｐ．）注入した急性毒性試験を示す。処理は、正常な発達及び生存率（ａ）並びに臓器重量（ｂ）及びヘマトクリット（ｃ）に明白な影響を及ぼさない。
【図１２】図１２は、３週間にわたり、異なる濃度（０、９０、１５０及び３００μＭ）で化合物４を定期的に腹腔内注入した処理終了時のＣ５７Ｂｌ／６Ｊマウスの肝組織学的分析を示す画像を示す。処理は、高用量であっても、肝細胞障害、炎症、線維症及び脂肪肝などの肝機能障害の特徴を誘発しない（ヘマトキシリン及びエオシン、１００倍及び４００倍）。これらの結果は、抗炎症処理由来の毒性の証拠を示さず、これらのマウスでは、化合物４の３００μＭまでの濃度で耐容性が良好であったことを示した。
【図１３】図１３は、右側腹部に異所移植したＭＢ４９−Ｉ腫瘍を有するＣ５７Ｂｌ／６Ｊ雄マウス（ｎ＝６）に、異なる濃度（０、９０及び１５０μＭ）で化合物４を一時的に腹腔内注入した場合の効果を示すインビボ標的化試験を示す。１５０μＭでの処理は、マウスに皮下移植されたＭＢ４９−Ｉ細胞の腫瘍進行に有意に影響を及ぼす。対照と比較して＊ｐ＜０．０１。
【図１４】図１４は、異所移植したＭＢ４９−Ｉ腫瘍を有するＣ５７Ｂｌ／６Ｊ雄マウス（ｎ＝６）に、異なる濃度（０、９０及び１５０μＭ）で化合物４を一時的に腹腔内注入した場合の抗転移効果を示す。１５０μＭでの処理は、皮下移植されたＭＢ４９−Ｉ腫瘍の大きさ（ａ）及び肺転移の数（ｂ）を有意に減少させる。肺標本の組織学的検査は、対照マウスの肺では、ＭＢ４９−Ｉ腫瘍細胞浸潤が多巣性の線維化病変を誘発したが（矢印によって示される）、１５０μＭの化合物４を用いて処理されたマウスの肺では、転移病巣及び十分に胞状化した（ｗｅｌｌ−ａｌｖｅｏｌｉｚｅｄ）正常組織は認められなかったことを実証した。対照と比較して＊ｐ＜０．０１。
【図１５】図１５は、膀胱に同所移植されたＭＢ４９−Ｉ腫瘍を有するＣ５７Ｂｌ／６Ｊ雌マウス（ｎ＝６）に、化合物４を一時的に腹腔内注入した場合の効果を示すインビボ標的化試験を示す。（ａ）週齢をマッチさせた正常マウスから得られた膀胱と、対照（Ｃｔｌ）腫瘍移植マウス及び処理された腫瘍移植マウスから試験終了時（腫瘍移植後１６日目）に外科的に回収された膀胱との画像を示す。（ｂ）２週間にわたり週２回１５０μＭの化合物４を腹腔内注入したところ、筋層浸潤性ＭＢ４９−Ｉ腫瘍の発現が完全に消失したことを示すグラフ表示（ｎ＝６）。対照と比較して＊ｐ＜０．５。
【図１６】図１６は、ＭＢ４９及びＭＢ４９−Ｉ細胞によるｉＮＯＳタンパク質（ａ）及びＮＯ分子（ｂ）の産生に対する炎症誘発性ＩＬ６及びＴＮＦαの調節効果を示す。これらの結果は、筋層非浸潤性ＵＢＣ  ＭＢ４９細胞が、ＴＮＦαに応答して高浸潤性ＭＢ４９−Ｉ細胞よりも低値のｉＮＯＳ及びＮＯを産生するが、ＩＬ６には応答しないことを示した。これらの結果は、炎症経路ＴＮＦα／ＮＦκＢを介したＮＯ産生が、インビボでＭＢ４９−Ｉ腫瘍進行にとって許容される環境を提供し得るという考えを強く裏付ける。対照と比較して＊ｐ＜０．０１。
【図１７】図１７は、ｓｈＲＮＡによる基礎的及びＴＮＦα誘発性のｉＮＯＳ発現（ａ）並びにＮＯ産生（ｂ）の喪失が、Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊ雌マウスの膀胱に異所移植されたルシフェラーゼ発現ＭＢ４９−Ｉ腫瘍の進行（ｃ）に影響を及ぼすことを示すインビボ試験を示す。これらの結果は、Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊマウスでは、ＭＢ４９−Ｉ腫瘍の進行が、機能的なｉＮＯＳ／ＮＯ系の存在にほぼ確実に大きく左右されることを強く示唆する。対照と比較して＊ｐ＜０．０１。
【図１８】図１８は、右側腹部に異所移植した筋層非浸潤性ＭＢ４９腫瘍を有するＣ５７Ｂｌ／６Ｊ雄マウス（ｎ＝６）に、異なる濃度（０、９０及び１５０μＭ）で化合物４を一時的に腹腔内注入した場合の効果を示すインビボ標的化試験を示す。９０及び１５０μＭでの処理は、皮下移植されたＭＢ４９腫瘍の大きさを有意に減少させる。これらの結果は、化合物４が、非常に低値のｉＮＯＳタンパク質及びＮＯ分子を産生するＵＢＣ腫瘍の進行を停止させるのにきわめて有効であることを示した。対照と比較して＊ｐ＜０．００１。
【図１９】図１９は、Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊ雄マウスに異所移植したＭＢ４９腫瘍のインビボ処理標的化後の腹腔マクロファージに対する化合物４の抗炎症効果を示す。９０及び１５０μＭでの処理は、腹腔マクロファージのＮＯ産生（ａ）並びに尿素合成及び放出（ｂ）を有意に減少させる。試験終了時（腫瘍移植後２６日目）に腹腔マクロファージを回収した。炎症誘発性Ｍ１マクロファージへの分極化は、ｉＮＯＳ活性によるＮＯ産生を特徴とし、アルギナーゼ−１活性による尿素合成は、抗炎症Ｍ２マクロファージへの分極化に関連する。これらの結果は、化合物４を用いた膀胱腫瘍のインビボ処理標的化が、正常な腸管マクロファージに通常観察されるプロセスである「炎症性アネルギー」状態の誘導をほぼ確実に介して、マウスのマクロファージ分極化に直接影響を及ぼすことを強く示唆する。＊ｐ＜０．０５及び＊＊ｐ＜０．０１は、処理間の有意差を示す。
【図２０】図２０は、化合物４の抗炎症活性に関する構造−機能関係試験を示す。（ａ）化合物４及び１２の化学構造。（ｂ）ビヒクル（ＤＭＳＯ）並びに化合物４（３０μＭ）及び異なる濃度（１０、２０、３７．５及び５０μＭ）の化合物１２を用いて前処理した後のＭＢ４９−Ｉ細胞のＬＰＳ／ＩＦＮγ誘発性のＮＯ産生のグラフ表示。化合物１２は、高濃度であってもＬＰＳ／ＩＦＮγ誘発性のＮＯ合成に影響を及ぼさない。これらの結果は、分子の左部分の複素環の二重結合が、マクロファージ及び腫瘍細胞によるＮＯ産生に対する化合物４の阻害効果にとって重要であることを示した。＊ｐ＜０．０１は、陽性対照（ＤＭＳＯ＋ＬＰＳ／ＩＦＮγ）と比較した有意差を示す。
【図２１】図２１は、ＭＢ４９−Ｉ細胞のＮＯ産生に対する化合物４、８、１０及び１１の比較効果を示す。（ａ）化合物４、８、１０及び１１の化学構造。（ｂ）ビヒクル（ＤＭＳＯ）並びに２０及び３７．５μＭの化合物４、８、１０及び１１を用いて前処理した後のＭＢ４９−Ｉ細胞のＩＦＮγ／ＬＰＳ誘発性のＮＯ産生のグラフ表示。これらの結果は、同じ濃度（２０及び３７．５μＭ）では、化合物８の方が化合物４よりもＮＯ産生を阻害するのに有効であることを示した。＊ｐ＜０．０５及び＊＊ｐ＜０．０１は処理間の有意差を示す。
【図２２】図２２は、ビヒクル（ＤＭＳＯ）又は化合物４、８、１０及び１１（２０及び３７．５μＭ）を用いて９０分間前処理し、５ｎｇ／ｍＬのＩＦＮγによる１５分間の活性化後に洗浄及び回収した齧歯類マクロファージ（ＲＡＷ２６４．７細胞）のリン酸化ＳＴＡＴ１の発現レベルを決定するためのウェスタンブロット分析を示す画像（ａ）及びグラフ分析（ｂ）を示す。各サンプルの濃度測定分析からｐ−ＳＴＡＴ１／ＳＴＡＴ１の比を計算して、転写因子ＳＴＡＴ１の相対活性化を評価した。これらの結果は、ＲＡＷ２６４．７細胞のＩＦＮγ活性化ＳＴＡＴ１シグナル伝達経路を阻害するのに、化合物８が他の化合物よりも有効であることを示した。＊ｐ＜０．０５及び＊＊ｐ＜０．０１は処理間の有意差を示す。
【図２３】図２３は、ビヒクル（ＤＭＳＯ）又は化合物４、８、１０及び１１（２０及び３７．５μＭ）を用いて９０分間前処理し、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳによる１５分間の活性化後に洗浄及び回収した齧歯類マクロファージ（ＲＡＷ２６４．７細胞）のリン酸化ＩκＢの発現レベルを決定するためのウェスタンブロット分析を示す画像（ａ）及びグラフ分析（ｂ）を示す。各サンプルの濃度測定分析からｐ−ＩｋＢ／ＩｋＢの比を計算して、転写因子ＮＦκＢの負の調節因子であるＩκＢタンパク質の相対不活性化を評価した。これらの結果は、ＲＡＷ２６４．７細胞のＬＰＳ活性化ＮＦκＢシグナル伝達経路を阻害するのに、化合物がいずれも有効であることを示した。＊ｐ＜０．０５及び＊＊ｐ＜０．０１は処理間の有意差を示す。
【図２４】図２４は、齧歯類ＵＢＣ  ＭＢ４９−Ｉ細胞（ａ）、齧歯類マクロファージＲＡＷ２６４．７細胞（ｂ）及びヒトマクロファージＴＨＰ−１細胞（ｃ）の細胞生存率に対する化合物４及び８の比較効果を示す画像及びグラフ分析を示す。ビヒクル（ＤＭＳＯ）並びに異なる濃度の化合物４及び８を用いて細胞を９０分間前処理し、次いで、２４時間のインキュベーション後に洗浄及び計数して、生細胞の数を評価した。これらの結果は、化合物８の細胞毒性効果が化合物４よりも低いことを実証した。＊ｐ＜０．０５は、処理間の有意差を示す。
【図２５】図２５は、Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊ雄マウスに異所移植したＭＢ４９−Ｉ腫瘍の進行に対する化合物４及び８の比較抗癌活性を示す。インビボ標的化試験は、同じ濃度（１５０μＭ）では、筋層浸潤性ＭＢ４９−Ｉ腫瘍（ｎ＝６）の腫瘍体積を減少させるのに、化合物４よりも、１８日間に化合物８を一時的に腹腔内注入する方が有効であることを示した。試験終了時（腫瘍移植後２０日目）に腫瘍を外科的に回収した。これらの結果は、化合物８の方が化合物４よりも高浸潤性ＭＢ４９−Ｉ腫瘍の進行を阻害するのに有効であることを示した。＊ｐ＜０．０５及び＊＊ｐ＜０．０１は、処理間の有意差を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本開示は、インビトロ及びインビボで抗炎症、抗転移、抗増殖及び抗癌特性を示す小さなアミノ安息香酸誘導体の発見に関する。本開示は、容易に入手できるオルト、メタ及びパラ安息香酸からこれらの誘導体を作製するための合成方法並びにいくつかのタイプの癌の治療のためのそれらの生物学的適用を記載する。さらに、本開示は、これらの化合物を含む様々な医薬組成物に関する。本開示の化合物及び医薬組成物は、様々なタイプの癌に対して抗癌活性を有することが示されている。さらに、本開示は、癌に対する新規の治療法を提供する。これらの化合物の独特な生物学的特性は、乳癌、前立腺癌、卵巣癌及び膀胱癌を含むがこれらに限定されない癌に対して抗癌活性を有する化合物を提供するために、有利に使用され得る。
【００２７】
用語、本開示の化合物の「治療有効量」、「有効量」又は「十分量」とは、哺乳動物、例えばヒトを含む対象に投与された場合に、臨床結果を含む有益な又は望ましい結果をもたらすのに十分な量であり、そのような「有効量」又はその同義語は、それが適用される状況に応じて決まる。例えば、癌を治療する状況では、例えば、化合物を投与することなく得られる応答と比較して、癌のそのような治療を達成するのに十分な化合物の量である。有効量に相当する本開示の所与の化合物の量は、様々な因子、例えば、所与の薬物又は化合物、医薬製剤、投与経路、疾患又は障害のタイプ、治療される対象又は宿主の固有性などに応じて変化するが、それにもかかわらず、当業者によって常套的に決定され得る。また、本明細書で使用される場合、本開示の化合物の「治療有効量」、「有効量」又は「十分量」とは、対照と比較して、対象の癌を（例えば、臨床症状又は癌細胞の量により決定されるように）阻害、抑制又は低減する量である。
【００２８】
本明細書で使用される場合、用語「対象」は、ヒトを含む動物界の全構成員を含む。一実施形態によれば、対象はヒトである。
【００２９】
本明細書で使用される場合、用語「アルキル」は、１〜ｎ個の炭素原子を含む直鎖及び／又は分岐鎖の飽和アルキル基を意味し、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、２，２−ジメチルブチル、ｎ−ペンチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、４−メチルペンチル、ｎ−ヘキシルなどを（ｎの固有性に応じて）含み、ここでｎは基中の炭素原子の最大数である。
【００３０】
本明細書で使用される場合、「天然に存在するアミノ酸のアルキル成分」という表現は、アミノ酸のカルボニル基の炭素とアミノ酸の窒素原子との間に含まれる天然に存在するアミノ酸の部分を指す。
【００３１】
本明細書で使用される場合、「本開示の化合物」という表現は、本開示に提示される式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＣ、ＩＤ、ＩＥ、ＩＩＡ、ＩＩＢ及びＩＩＣの化合物、その異性体、例えば、立体異性体（例えば、ラセミ混合物を含む鏡像異性体、ジアステレオ異性体）もしくは互変異性体、又はこれらの化合物の薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物及び／又はプロドラッグ、これらの後者の化合物の異性体もしくはこれらの後者の化合物のラセミ混合物を指す。「本開示の化合物」という表現はまた、本段落で言及した様々な化合物又は変異体の混合物を指す。
【００３２】
本明細書で使用される場合、用語「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを含む。
【００３３】
本開示が、本明細書に記載される化合物の異性体、ラセミ混合物、薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物及びプロドラッグ並びにそのような化合物のうち２つ以上を含む混合物を含むことは明らかである。
【００３４】
本開示の化合物は、少なくとも１つの不斉中心を有してもよい。本明細書の化合物が２つ以上の不斉中心を有する場合、それらはジアステレオマーとして存在してもよい。そのような異性体及び任意の割合のそれらの混合物のいずれもが、本開示の範囲内に包含されることが理解されるべきである。本開示の化合物の立体化学は、本明細書に列挙されるいずれかの所与の化合物に規定される通りであり得るが、本開示のそのような化合物はまた、代替の立体化学を有するある量（例えば、３０％未満、２０％未満、１０％未満又は５％未満）の本発明の化合物を含んでもよい。
【００３５】
例えば「好適な対アニオン」又は「好適な反応条件」などの「好適な」という用語は、特定の基又は条件の選択が、実施される特定の合成操作と、分子の固有性とに応じて決まり得るが、この選択が、当業者の技能の範囲内に十分に入り得ることを意味する。本明細書に記載されるプロセス工程はいずれも、示される製品を提供するのに適した条件下で実施されるべきである。当業者であれば、例えば、反応溶媒、反応時間、反応温度、反応圧力、反応物質比、及び反応を無水又は不活性雰囲気下で実施すべきかどうかなどのあらゆる反応条件は、所望の生成物の収率を最適化するために変化し得、それを行うのは当業者の技能の範囲内であることを理解するであろう。
【００３６】
「薬学的に許容される」という表現は、動物又はヒトなどの対象の治療に適合することを意味する。
【００３７】
「薬学的に許容される塩」という表現は、動物又はヒトなどの対象の治療に適しているか、それに適合する酸付加塩又は塩基付加塩を意味する。
【００３８】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される酸付加塩」という表現は、本開示のいずれかの化合物の任意の非毒性の有機塩もしくは無機塩又はその中間体のいずれかを意味する。好適な塩を形成する無機酸の例には、塩酸、臭化水素酸、硫酸及びリン酸、並びに金属塩、例えば、オルトリン酸一水素ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｍｏｎｏｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｏｒｔｈｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）及び硫酸水素カリウムが挙げられる。好適な塩を形成する有機酸の例には、モノ、ジ及びトリカルボン酸、例えば、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、安息香酸、フェニル酢酸、桂皮酸及びサリチル酸、並びにスルホン酸、例えばパラトルエンスルホン酸及びメタンスルホン酸が挙げられる。モノ又はジ酸塩のいずれかが形成され得、そのような塩は、水和、溶媒和又は実質的に無水形態で存在してもよい。一般に、本開示の化合物の酸付加塩は、水及び様々な親水性有機溶媒に比較的可溶性であり、一般に、それらの遊離塩基形態よりも高い融点を示す。適切な塩の選択は、当業者に公知である。他の薬学的に許容されない塩、例えば、シュウ酸塩は、例えば、本開示の化合物の単離、実験室での使用、又はその後の薬学的に許容される酸付加塩への変換に使用されてもよい。本開示の実施形態では、薬学的に許容される酸付加塩は、塩酸塩である。
【００３９】
本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される塩基付加塩」は、本開示のいずれかの酸化合物の任意の非毒性の有機もしくは無機塩基付加塩又はその中間体のいずれかを意味する。塩基付加塩を形成してもよい本開示の酸性化合物には、例えばＲがＣＯ２Ｈであるものが挙げられる。好適な塩を形成する無機塩基の例には、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム又は水酸化バリウムが挙げられる。好適な塩を形成する有機塩基の例には、脂肪族、脂環式又は芳香族有機アミン、例えばメチルアミン、トリメチルアミン及びピコリン又はアンモニアが挙げられる。適切な塩の選択は、当業者に公知である。他の薬学的に許容されない塩基付加塩は、例えば、本開示の化合物の単離、実験室での使用、又はその後の薬学的に許容される酸付加塩への変換に使用されてもよい。
【００４０】
所望の化合物塩の形成は、標準的な技術を用いて達成される。例えば、好適な溶媒中で酸又は塩基を用いて中性化合物を処理し、濾過、抽出又は他の好適な方法によって、形成された塩を単離する。
【００４１】
本明細書で使用される場合、用語「溶媒和物」は、好適な溶媒の分子が結晶格子に組み込まれている本開示の化合物を意味する。好適な溶媒は、投与される投与量で生理学的に許容可能である。好適な溶媒の例は、エタノール、水などである。水が溶媒である場合、その分子は「水和物」と呼ばれる。本開示の化合物の溶媒和物の形成は、化合物及び溶媒和物に応じて変化する。一般に、溶媒和物は、適切な溶媒に化合物を溶解させ、冷却するか逆溶剤を用いて溶媒和物を単離することによって形成される。溶媒和物は、典型的には周囲条件下で乾燥又は共沸させる。
【００４２】
本開示の化合物は、プロドラッグを含む。一般に、このようなプロドラッグは、それが概念的に由来する化合物にインビボで容易に変換可能な、これらの化合物の官能性誘導体である。本開示の化合物のプロドラッグは、利用可能なヒドロキシ又はアミノ基によって形成された従来のエステルであってよい。例えば、本開示の化合物中の利用可能なＯＨ又は窒素は、塩基の存在下、場合により不活性溶媒（例えばピリジン中の酸塩化物）中で活性化酸を用いてアシル化されてもよい。プロドラッグとして利用されているいくつかの一般的なエステルは、フェニルエステル、脂肪族（Ｃ８−Ｃ２４）エステル、アシルオキシメチルエステル、カルバメート及びアミノ酸エステルである。特定の例では、本開示の化合物のプロドラッグは、化合物中のヒドロキシ基のうち１つ以上が、インビボでヒドロキシ基に変換され得る基としてマスクされているものである。好適なプロドラッグの選択及び調製のための従来の手順は、例えば、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒにより編集された「Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」（１９８５）に記載されている。
【００４３】
本開示の化合物は、放射性標識された形態、例えば、構造２Ｈ、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ内に組み込むことによって標識された化合物、又は放射性ハロゲン、例えば１２５Ｉを含む。本開示の化合物の放射性標識化合物は、当業界で公知の標準的な方法を用いて調製されてもよい。
【００４４】
本明細書で使用される場合、当業界で十分に理解されるように、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」又は「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、臨床結果を含む有益な又は望ましい結果を得るための手法である。有益な又は望ましい臨床結果には、限定するものではないが、検出可能であるか検出不可能であるかにかかわらず、１つ以上の症状又は病態の緩和又は改善、疾患の程度の低下、疾患の状態の安定化（すなわち悪化しない）、疾患の広がりの予防、疾患の進行の遅延又は遅滞、疾患の状態の改善又は緩和、及び（部分的又は全体的であるかにかかわらず）寛解が含まれ得る。「治療」又は「治療する」はまた、治療を受けていない場合に予測される生存期間と比較して、生存期間を延ばすことを意味し得る。
【００４５】
疾患又は障害を「緩和する」とは、障害を治療しない場合と比較して、障害又は疾患状態の程度及び／又は望ましくない臨床症状が軽減され、及び／又は進行の時間的経過が遅くなるか、延びることを意味する。
【００４６】
本開示の範囲を理解する上で、本明細書で使用される場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」及びその派生語は、記載された特徴、要素、構成要素、群、整数及び／又は工程の存在を特定する非限定的な用語であることが意図されているが、他の記載されていない特徴、要素、構成要素、群、整数及び／又は工程の存在を排除するものではない。前述のものは、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」及びそれらの派生語などの類似の意味を有する単語にも適用される。最後に、本明細書で使用される場合、「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」、「約（ａｂｏｕｔ）」及び「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」などの程度に関する用語は、最終結果が大きく変化しないように、修飾された用語の妥当な逸脱量を意味する。程度に関するこれらの用語は、この逸脱が修飾する単語の意味を否定し得ない場合には、修飾された用語の少なくとも±５％の逸脱を含むと解釈されるべきである。
【００４７】
本開示の一実施形態では、式（ＩＡ）の化合物が含まれる。
【化８】
2019513829.tif 000010
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＱは先に定義した通りである。
【００４８】
本開示の別の実施形態では、式（ＩＢ）の化合物が含まれる。
【化９】
2019513829.tif 000011
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＱは先に定義した通りである。
【００４９】
本開示のさらなる実施形態では、式（ＩＣ）の化合物が含まれる。
【化１０】
2019513829.tif 000012
式中、Ｒ２、Ｒ５及びＲ６は先に定義した通りである。
【００５０】
本開示のなおさらなる実施形態では、式（ＩＤ）の化合物が含まれる。
【化１１】
2019513829.tif 000013
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ７は先に定義した通りである。
【００５１】
本開示のなおさらなる実施形態では、式（ＩＥ）の化合物が含まれる。
【化１２】
2019513829.tif 000014
式中、Ｒ２及びＲ７は先に定義した通りである。
【００５２】
本開示のなおさらなる実施形態では、
Ｒ２は、Ｈ、アセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
ＱはＱＡであり、
Ｒ５は、Ｈ、アセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
Ｒ６は、Ｂｏｃ、Ｈ、又はアセチル及びプロピオリルから選択される非置換体である。
【００５３】
本開示のなおさらなる実施形態では、
Ｒ２は、Ｈ、又はアセチル及びプロピオリルから選択される非置換体であり、
Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、フェニル、フラニル、チオフェニル、ピリジニル、ナフチル、キノリル及びイソキノリルから選択される非置換体である。
【００５４】
例えば、本開示のさらなる実施形態では、式Ｉの化合物は、化合物が下記式とは異なることを条件として、先に定義した通りである。
【化１３】
2019513829.tif 000015
【００５５】
しかし、一実施形態によれば、上記の３つの除外された化合物は、前述の様々な使用及び方法の範囲から除外されない。
【００５６】
別の実施形態によれば、上記の３つの除外された化合物は、前述の様々な使用及び方法の範囲から除外される。
【００５７】
本開示のなおさらなる実施形態では、下記式の化合物が含まれる。
【化１４】
2019513829.tif 000016
【００５８】
例えば、化合物は、下記式から選択され得る。
【化１５】
2019513829.tif 000017
【００５９】
例えば、化合物は、下記式から選択され得る。
【化１６】
2019513829.tif 000018
【００６０】
例えば、化合物は、下記式から選択され得る。
【化１７】
2019513829.tif 000019
【００６１】
例えば、化合物は、下記式から選択され得る。
【化１８】
2019513829.tif 000020
【００６２】
スキーム１〜４は、本開示の化合物の調製に使用される合成経路の例を示す。各工程の反応条件はスキームに直接示されている。
【００６３】
出発物質としてパラアミノ安息香酸（１）を使用して、３段階の反応順序で誘導体４を製造した（スキーム１）９〜１１。まずパラアミノ安息香酸（１又はＰＡＢＡ）と、無水マレイン酸（ＭＡ）の乾燥アセトン溶液とを反応させて、収率９０％で二酸（２）を得た。無水酢酸及び酢酸ナトリウムを用いて、マレイミドを形成する環化を達成して、混合無水物中間体の水による加水分解後に収率８９％で化合物３を得た。最後に、ピリジンの存在下で、イソ−ブチルクロロホルメートによる酸３の活性化を行った後、ｔｅｒｔ−ブチルカルバゼートを用いた処理により収率５４％で所望の抗炎症性誘導体４を得た。塩酸のエーテル溶液を用いて４を脱保護して、再結晶後に収率４６％で塩酸塩５を得た。例１は、化合物４及び５の調製を示す。この反応順序を使用して、非置換又は置換のオルト、メタ及びパラ安息香酸出発物質から出発する他の誘導体を生成することができる。したがって、この手法は、それぞれ例２及び３に示されるＮ’−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−４−クロロ−ベンゾイル］−ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４ａ）及びＮ’−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−２−クロロ−ベンゾイル］−ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４ｂ）の合成をもたらす。
【化１９】
2019513829.tif 000021
【００６４】
誘導体４をさらに変換すると、抗炎症、抗転移、抗増殖及び抗癌活性を有する新規化合物をもたらすことができる（スキーム２）。しかし、４の接触水素化は、その抗炎症活性を失った化合物１２をもたらした（例４参照）。さもなければ、トリフルオロ酢酸のジクロロメタン溶液により処理して、化合物４をトリフルオロ酢酸塩６に変換する。粗物質６と、塩化アセチル又は無水酢酸（又は任意の関連する無水物又は酸塩化物）とを反応させて、誘導体８を得ることができる。注目すべきは、例５では、誘導体７及び９が生成される可能性が高かったが、単離されなかったことである。あるいは、関連する無水物又は酸塩化物により化合物４をアシル化して、化合物１０及び１１を得ることができる。興味深いことに、塩化アセチルを使用すると化合物４がジアセチル化誘導体１１（Ｒ＝ＣＨ３）に効率的に変換され、無水酢酸による反応の主生成物は、モノアセチル化誘導体１０（Ｒ＝ＣＨ３）であった。誘導体１０を脱保護して７を得ることができ、誘導体１１は誘導体９をもたらすことができる。２段階の順序を介して、化合物７及び９を４から効率的に生成することが可能である。
【化２０】
2019513829.tif 000022
【００６５】
スキーム３は、Ｔａｈａら１２によって記載された手順に従って、アルキルヒドラゾン又はアリールヒドラゾン誘導体（１３）をもたらす方法を提示する。したがって、ブタノール（又は他の溶媒）中で還流しながら酸性条件下で、関連するアルデヒド（アルキルアルデヒド（直鎖又は分岐）、ベンズアルデヒドもしくは置換ベンズアルデヒド又は他のアリールアルデヒド）により化合物５を処理して、一般構造１３の所望の誘導体を得ることができる。
【化２１】
2019513829.tif 000023
【００６６】
スキーム４では、誘導体４（又は本明細書に記載の任意の他のマレイミド）と、適切なジエン（ブタジエン（非置換又は置換）、シクロペンタジエン、シクロヘキサジエン、シクロヘプタジエン、フラン、チオフェン、ピロール、Ｎ−アルキルピロール）とを反応させて、所望の環状付加物（ディールス・アルダー生成物）、例えば、１４、１５及び１６を得ることができる。この反応は、圧力の有無を問わず例１０に記載したように、純粋な試薬（ジエン及びジエノフィル）をそのまま又は溶液中で加熱することによって実施することができる。
【化２２】
2019513829.tif 000024
【００６７】
当業者によって理解され得るように、上記の合成スキームは、本出願に記載され特許請求される化合物が合成され得るあらゆる手段の包括的な列挙であることを意図するものではない。また、本開示の化合物を調製するために、追加の方法を使用することができ得る。
【００６８】
本開示の化合物は、適切な官能性を付加して選択的な生物学的特性を増強することによって、修飾されてもよい。そのような修飾は、当業界で公知であり、所定の生物学的系（例えば、血液、リンパ系、中枢神経系）への生物学的浸透を増加させ、経口アベイラビリティを高め、溶解性を高めて注入による投与を可能にし、代謝を変化させ、排泄率を変化させるものを含む。
【００６９】
本開示の化合物は、１つ以上の不斉炭素原子を含んでもよく、したがって、ラセミ化合物及びラセミ混合物、単一の鏡像異性体、ジアステレオマー混合物及び個々のジアステレオ異性体として存在してもよい。これらの化合物のそのような異性体のいずれもが、本開示に明示的に含まれる。各不斉炭素は、Ｒ又はＳ立体配置であってよい。
【００７０】
本明細書に開示されている小さなアミノ安息香酸誘導体は、抗炎症、抗転移、抗増殖及び／又は抗癌特性並びに好都合な毒性プロファイルを示し、例えばヒトの例えば悪性腫瘍、例えば筋層浸潤性及び表在型ＵＢＣ腫瘍の治療に使用し得ることが判明している。
【００７１】
本明細書に提供される態様は、メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される癌又は少なくとも１つの癌を治療する方法であって、該方法は、それを必要とする対象に、本明細書に定義される少なくとも１つの化合物の有効量を投与することを含む。
【００７２】
別の態様は、対象が癌を発症するリスクを低下させる方法又は対象が少なくとも１つの癌を発症するリスクを低下させる方法であって、癌は、例えば、メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択され、該方法は、対象に本明細書に定義される少なくとも１つの化合物の有効量を投与することを含む。
【００７３】
さらに別の態様は、癌細胞増殖を阻害する方法であって、該方法は、それを必要とする対象に、本明細書に定義される少なくとも１つの化合物の有効量を投与することを含む。
【００７４】
例えば、癌細胞増殖は、未治療の対象と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％阻害される。
【００７５】
別の態様は、腫瘍の増殖及び／又は腫瘍の大きさを阻害する方法であって、該方法は、それを必要とする対象に、本明細書に定義される少なくとも１つの化合物の有効量を投与することを含む。
【００７６】
例えば、腫瘍の大きさは、重量及び／又は体積単位で測定される。
【００７７】
例えば、腫瘍の増殖及び／又は腫瘍の大きさは、未治療の対象と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％又は約９０％低減する。
【００７８】
例えば、それを必要とする対象に、本明細書に開示される少なくとも１つの化合物の有効量を投与すると、メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される少なくとも１つの癌の進行までの時間が増大する。
【００７９】
例えば、本明細書に開示される化合物は、メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される少なくとも１つの癌を発症するリスクを低下させるのに使用するためのものである。
【００８０】
例えば、化合物は、メラノーマ、乳癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌及び膀胱癌から選択される少なくとも１つの癌を治療するのに使用するためのものである。
【００８１】
例えば、化合物は抗癌剤として使用するためのものである。
【００８２】
例えば、化合物は、抗炎症剤として使用するためのものである。
【００８３】
例えば、化合物は、抗転移剤として使用するためのものである。
【００８４】
本明細書に記載されるように、マクロファージ及びＵＢＣ細胞に対して、いくつかの化合物、すなわち誘導体４、５、８、１０、１１及び１２の抗炎症、抗転移及び／又は抗癌特性を試験した。
【００８５】
本明細書に示されるように、本明細書に開示される化合物は、抗炎症特性を示す。
【００８６】
図１〜図１０を参照して、化合物４及び５を用いて試験したヒトマクロファージ及びＵＢＣ細胞のインビトロ試験を実施して、炎症誘発性サイトカインに対する化合物の抗炎症特性を検討した。図１に示すように、前処理したヒトマクロファージでは、ＩＦＮγ誘発性のＳＴＡＴ１活性化及びＩＬ６誘発性のＳＴＡＴ３活性化が低下した。同様に、図２に示すように、化合物４及び５が、ＩＦＮγ誘発性のＣＤ４０及びＭＨＣ−ＩＩ発現を減少させるのに有効であることが見出された。また、図３を参照すると、スクラッチ創傷治癒アッセイを実施し、化合物４及び５が、ヒトマクロファージのＩＦＮγ誘発性のＳＴＡＴ１活性化及びＩＬ６誘発性のＳＴＡＴ３活性化を阻害するのに有効であることが見出された。
【００８７】
提供される態様は、癌細胞の抗炎症特性を低下させる方法であって、該方法は、癌細胞と、本明細書に定義される少なくとも１つの化合物とを接触させることを含む。
【００８８】
例えば、本明細書に開示される化合物によって処理された細胞の相対的なＳＴＡＴ１活性化は、未処理の細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％低下する。
【００８９】
例えば、本明細書に開示される化合物によって処理された細胞の相対的なＳＴＡＴ３活性化は、未処理の細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％低下する。
【００９０】
例えば、本明細書に開示される化合物によって処理された細胞のＣＤ４０発現は、未処理の細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％減少する。
【００９１】
例えば、本明細書に開示される化合物によって処理された細胞のＭＨＣ−ＩＩ発現は、未処理の細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％減少する。
【００９２】
ここで図４及び図５を参照すると、炎症シグナル、ＩＦＮγ／ＴＮＦαによって刺激された齧歯類マクロファージ様細胞の一酸化窒素（ＮＯ）産生を測定することにより、化合物４及び５の抗炎症活性を評価した。化合物４及び５は、ＩＦＮγ／ＴＮＦα誘発性のＮＯ産生を低下させるのに有効であることが見出された。
【００９３】
例えば、本明細書に開示される化合物によって処理された細胞のＮＯ産生は、未処理の細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％低下する。
【００９４】
図６及び図７を参照すると、化合物４及び５は、ＩＦＮγ／ＴＮＦαによって刺激されたＵＢＣ細胞では、抗増殖特性を有することが実証された。
【００９５】
提供される態様は、癌細胞の抗増殖特性を誘発する方法であって、該方法は、癌細胞と、本明細書に定義される少なくとも１つの化合物とを接触させることを含む。
【００９６】
例えば、本明細書に開示される化合物によって処理された細胞の生存率は、未処理の細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％低下する。
【００９７】
例えば、癌細胞増殖は、未処理の癌細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％阻害される。
【００９８】
ここで図８を参照すると、化合物４が、齧歯類ＵＢＣ細胞のＴＮＦα／ＮＦκＢ及びＩＬ６／ＳＴＡＴ３シグナル伝達経路を阻害することが示された。また、図９に示すように、ヒトＵＢＣ細胞に対して化合物４を試験し、化合物４がＩＬ６誘発性の運動性を阻害することが示された。同様に、図１０を参照すると、抗浸潤特性を示す化合物４によってヒト乳癌細胞株を処理して、化合物４が細胞特異的でないことを実証した。
【００９９】
例えば、本明細書に開示される化合物によって処理された細胞のＴＮＦα／ＮＦκＢ及び／又はＩＬ６／ＳＴＡＴ３シグナル伝達経路は、未処理の癌細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％低減する。
【０１００】
例えば、本明細書に開示される化合物を用いた細胞の浸潤性は、未処理の癌細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％低減する。
【０１０１】
また、インビボ試験を実施して、ＵＢＣの異所性及び同所性齧歯類モデルを用いて、化合物４の抗癌、抗増殖及び抗転移活性を評価した。
【０１０２】
図１１に示すように、マウスを用いた急性毒性試験は、化合物４による治療が、正常な発達及び生存率並びに臓器重量及びヘマトクリットに対して明らかな影響を示さず、マウスに対する耐容性が示唆されたことを実証した。同様に、図１２を参照すると、様々な濃度の化合物４によって治療されたマウスに対する肝組織学的分析では、化合物４に関連する毒性の証拠は見出されなかった。
【０１０３】
例えば、本明細書に開示される化合物によって治療された対象は、同等の未治療の対象と類似した体重を有する。本明細書で使用される場合、「類似した体重」は、体重減少の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％又は１％以下の差を意味する。
【０１０４】
例えば、本明細書に開示される化合物によって治療された対象は、同等の未治療の対象と類似したヘマトクリットを有する。本明細書で使用される場合、「類似したヘマトクリット」は、ヘマトクリット値の５％、４％、３％、２％又は１％以下の差を意味する。
【０１０５】
本明細書で実証されるように、本明細書に開示される化合物は、抗増殖及び抗転移活性を示す。
【０１０６】
図１３及び図１４を参照すると、ＵＢＣ腫瘍を異所移植され、化合物４によって治療された雄マウスでは、未治療のマウスと比較して、腫瘍増殖及び転移の数に有意な減少が認められた。また、図１５に示すように、同所移植された尿路上皮膀胱癌腫瘍を有する雌マウスでは、化合物４の抗増殖特性が認められた。さらに詳細には、治療の２週間後に腫瘍進行が停止した。同様に、図１８に示すように、尿路上皮膀胱癌腫瘍を異所移植され、化合物４によって治療されたマウスでは、腫瘍の大きさに有意な減少が認められた。
【０１０７】
例えば、本明細書に開示される化合物によって処置された腫瘍では、未処置の腫瘍と比較して、体積及び／又は腫瘍増殖が少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％又は約９０％低減する。
【０１０８】
別の態様は、腫瘍転移を低減及び／又は予防する方法であって、該方法は、それを必要とする対象に、本明細書に開示される少なくとも１つの化合物の有効量を投与することを含む。
【０１０９】
例えば、腫瘍転移の数は、未治療の対象と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％又は約９０％減少する。
【０１１０】
図１９を参照すると、化合物４の抗炎症特性のインビボ齧歯類試験をさらに実施し、腹腔マクロファージに、ＮＯ産生及び尿素合成の有意な減少が認められた。
【０１１１】
化合物４の誘導体はまた、抗炎症、抗癌、抗増殖及び抗転移特性を示すことが見出された。マクロファージ及びＵＢＣ細胞に対して、化合物４の誘導体、化合物８、１０及び１１の追加のインビトロ及びインビボ試験を実施した。
【０１１２】
図２１は、これらの化合物がＮＯ産生を阻害するのに有効であることを示す。化合物はまた、マクロファージ細胞のＩＦＮγ活性化ＳＴＡＴ１シグナル伝達経路及びＬＰＳ活性化ＮＦκＢシグナル伝達経路を阻害するのに有効であった（図２２及び図２３）。
【０１１３】
例えば、本明細書に開示される化合物によって処理された細胞のＬＰＳ活性化ＮＦκＢシグナル伝達経路は、未処理の細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％又は約８０％低減する。
【０１１４】
図２５を参照すると、化合物４及び８が、雄マウスに異所移植されたＵＢＣ腫瘍に対して抗増殖活性を有することが見出された。
【０１１５】
例えば、化合物は化合物４である。
【０１１６】
例えば、化合物は化合物８である。
【０１１７】
例えば、化合物は化合物１０である。
【０１１８】
例えば、化合物は化合物１１である。
【０１１９】
例えば、対象は哺乳動物である。例えば、対象はヒトである。
【０１２０】
例えば、細胞はインビトロである。
【０１２１】
例えば、細胞はインビボである。
【０１２２】
例えば、細胞は癌細胞である。
【０１２３】
例えば、癌は、メラノーマ、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌又は膀胱癌である。
【０１２４】
例えば、膀胱癌は、表在型ＵＢＣ又は筋層浸潤性ＵＢＣである。
【０１２５】
例えば、腫瘍は、メラノーマ腫瘍、子宮腫瘍、卵巣腫瘍、前立腺腫瘍又は膀胱腫瘍である。
【０１２６】
例えば、膀胱腫瘍は、表在型ＵＢＣ腫瘍又は筋層浸潤性ＵＢＣ腫瘍である。
【０１２７】
例えば、本明細書に開示される方法は、表在型ＵＢＣが筋層浸潤性ＵＢＣ腫瘍に進行するのを提示するのに有効である。
【０１２８】
本開示では、以下の略語が使用される。
略語 意味
Ａｃ２Ｏ  無水酢酸
ＡｃＯＮａ  酢酸ナトリウム
ＣＨ２Ｃｌ２  ジクロロメタン
Ｂｏｃ  ｔ−ブチルオキシカルボニル
Ｅｔ２Ｏ  ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ  酢酸エチル
Ｅｔ３Ｎ  トリエチルアミン
ｈ  時間
ＨＣｌ  塩酸
ｉ．ｐ．  腹腔内
ｍ  メタ
ＭＡ  無水マレイン酸
ＭｅＯＨ  メタノール
ｍｉｎ  分
ｍｍｏｌ  ミリモル
ＭＴＴ  ３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド
ＮＭＲ  核磁気共鳴
ｏ  オルト
ｐ  パラ
Ｐｈｅ  フェニル
ｓ．ｃ．  皮下
ＴＬＣ  薄層クロマトグラフィー
ＴＦＡ  トリフルオロ酢酸
ＵＢＣ  尿路上皮膀胱癌
【０１２９】
例
この項では、本明細書で提示されているいくつかの化合物の合成についても記載する。これらの例は、決して本開示の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【０１３０】
材料及び方法−化学
不活性雰囲気下で無水反応を実施し、装置を組み立て、乾燥窒素下で冷却した。特に明記しない限り、出発物質、反応物質及び溶媒は商業的に入手し、そのまま使用するか、標準的な方法により精製し、乾燥させた１３。有機溶液を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、減圧下でロータリーエバポレーターを用いて蒸発させた。反応はいずれも、ＵＶ蛍光、又はヨウ素による染色によってモニターした。市販のＴＬＣプレートはＳｉｇｍａ  Ｔ  ６１４５（ポリエステルシリカゲル６０Å、０．２５ｍｍ）であった。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、Ｍｅｒｃｋグレード６０シリカゲル、２３０〜４００メッシュを用いて、Ｓｔｉｌｌらの方法に従って実施した１４。クロマトグラフィーに使用した溶媒はいずれも、使用前に蒸留しておいた。
【０１３１】
Ｎｉｃｏｌｅｔ  Ｉｍｐａｃｔ  ４２０  ＦＴ−ＩＲを用いて赤外スペクトルを記録した。Ａｇｉｌｅｎｔ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙの機器、ＭＳモデル６２１０を使用して質量スペクトルアッセイを得た。正モード（ＥＳＩ＋）を用いたＥＳＩ（エレクトロスプレーイオン化）を用いたＴＯＦ（飛行時間）によって、高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）を得た。（Ｐｌａｔｅｆｏｒｍｅ  ａｎａｌｙｔｉｑｕｅ  ｐｏｕｒ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｏｒｇａｎｉｑｕｅｓ  ｄｅ  ｌ’Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｅ  ｄｕ  Ｑｕｅｂｅｃ  ａ  Ｍｏｎｔｒｅａｌ）．
【０１３２】
Ｖａｒｉａｎ  ２００ＭＨｚ  ＮＭＲ装置を用いて、核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを記録した。テトラメチルシラン又はクロロホルムを内部標準として用いてデータを取得するために（１Ｈ−ＮＭＲではＴＭＳ、δ０．０ｐｐｍ、１３Ｃ−ＮＭＲではＣＤＣｌ３  δ７７．０ｐｐｍ）、重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）、重水素化アセトン（アセトン−ｄ６）又は重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ６）にサンプルを溶解した。化学シフト（δ）は百万分率（ｐｐｍ）で表し、結合定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）で表す。以下の略語により多重度を記述する：シングレットはｓ、ダブレットはｄ、ダブレットのダブレットはｄｄ、トリプレットはｔ、トリプレットのダブレットはｄｔ、カルテットはｑ、カルテットのダブレットはｄｑ、マルチプレットはｍ、複数のマルチプレットは＃ｍ、ブロードシグナルはｂｒ。
【０１３３】
スキーム１、２、３又は４に要約した手順を用いて、関連するアミノ安息香酸誘導体から以下の化合物を調製した。
【０１３４】
例１  Ｎ’−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−ベンゾイル］−ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４）、その塩酸塩（５）及びそのトリフルオロ酢酸塩（６）の調製
工程Ａ  ４−（３−カルボキシ−アクリロイルアミノ）−安息香酸（２）の合成
４−アミノ安息香酸（１、５．３４ｇ、３８．９３ｍｍｏｌ）を乾燥アセトン（１２ｍＬ）に溶解し、メタノール（１ｍＬ）を加えた。乾燥アセトンに溶解した無水マレイン酸（１．０５当量）を第１の溶液に加えた。反応混合物を２時間撹拌し、二酸２の完全な沈殿のための十分な時間を与えた。沈殿物を濾過し、アセトン（２×２ｍＬ）で２回洗浄し、デシケーター内で一晩乾燥させた。粗二酸２（９．１６ｇ、９０％）は、次の工程でさらに精製することなく使用するのに十分純粋であった。
【数１】
2019513829.tif 000025
【０１３５】
工程Ｂ  ４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−安息香酸（３）の合成
二酸２（２．０１ｇ、８．５４ｍｍｏｌ）を無水酢酸（４．０ｍＬ、３６．２８ｍｍｏｌ）及び無水酢酸ナトリウム（３５０ｍｇ、４．２７ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を５０℃で２時間加熱した。その後、溶液を蒸発乾固させ、７０℃の水を入れて２時間撹拌した。得られた沈殿物を濾過し、デシケーター内で一晩乾燥させて１．６５ｇ（８９％）のマレイミド４を得た。この誘導体のスペクトルデータは、文献に報告されているものと一致する９、１１。
【数２】
2019513829.tif 000026
【０１３６】
工程Ｃ  Ｎ’−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−ベンゾイル］−ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４）の合成
誘導体４は、Ｌａｕら及びＨａｍｅｌｉｎ−Ｍｏｒｒｉｓｓｅｔｔｅら９〜１１によっても記載されているように、Ｗｉｌｌｎｅｒら１５によって報告された改変された手順を用いて合成した。分子３（２１１ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）の冷却懸濁液（０℃）の塩化メチレン溶液（４．５ｍＬ）をトリエチルアミン（１９０μＬ、１．３６ｍｍｏｌ）及びイソブチルクロロホルメート（１７５μＬ、１．３４ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を０℃で１時間、室温（２２℃）で約１時間撹拌した。その後、塩化メチレン（０．８ｍＬ）に溶解したｔｅｒｔ−ブチルカルバゼート（１２８ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）を混合物に滴下し、２２℃でさらに１２時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（５５ｍＬ）及び塩化メチレン（２０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（２×５０ｍＬ）で２回、０．１Ｎ  ＨＣｌ（２×５０ｍＬ）で２回、飽和ＮａＣｌ（２×５０ｍＬ）で２回、最後にＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、粗誘導体４を得た。ヘキサン／アセトン（３／２）の混合物を用いるフラッシュクロマトグラフィーにより生成物を精製して、１７３ｍｇ（５４％）の４を得た。この誘導体のスペクトルデータは、文献に報告されているものと一致する１０。
【数３】
2019513829.tif 000027
【０１３７】
工程Ｄ  ４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−安息香酸ヒドラジド塩酸塩（又は４−マレイミド安息香酸ヒドラジド塩酸塩）（５）の合成
マレイミド酢酸（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）ヒドラジドを塩酸によって開裂させるために、Ｈｅｉｎｄｅｌらによって報告されている同様の手順を用いて４の加水分解を行って、マレイミド酢酸ヒドラジド塩酸塩を形成した１６。乾燥ジオキサン（３０ｍＬ）に溶解した４（２．４１ｇ、７．２７ｍｍｏｌ）の溶液に、塩酸の溶液（６０ｍＬ、ジエチルエーテル中１．０Ｍ、６０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で５時間撹拌した。その後、１５０ｍＬのヘキサンを加えて、塩酸塩５の沈殿を完了させた。沈殿した粗生成物を濾過し、ヘキサンで洗浄し、メタノール／イソプロピルアルコール／ヘキサン（８／３／１０）の混合物を用いて２回再結晶させて、１．７ｇ（４６％）の所望の物質を得た。ＩＲ（ν，ｃｍ−１）：３２００−２５００（ＣＯ２Ｈ），３２６９（ＮＨ），１７０２（Ｃ＝Ｏ），１６９３（Ｃ＝Ｏ）；
【数４】
2019513829.tif 000028
【０１３８】
工程Ｅ  ４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−安息香酸ヒドラジドトリフルオロ酢酸塩（６）の合成
トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）に溶解した４（１０６ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で３０分間撹拌した。その後、２２℃、真空下で過剰のトリフルオロ酢酸を除去し、化合物６を定量的に得た。
【数５】
2019513829.tif 000029
例２  Ｎ’−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−４−クロロ−ベンゾイル］−ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４ａ）の調製
上記の例１の工程Ａ〜Ｃの手順に従い、４−アミノ安息香酸誘導体の代わりに３−アミノ−４−クロロ安息香酸を出発物質として使用して、４ａを効率的に調製した。
【０１３９】
工程Ａ  ３−（シス−３−カルボキシ−アクリロイルアミノ）−４−クロロ安息香酸（２ａ）の合成
２ａのスペクトルデータ：
【数６】
2019513829.tif 000030
【０１４０】
工程Ｂ  ３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−４−クロロ安息香酸（３ａ）の合成
３ａのスペクトルデータ：
【数７】
2019513829.tif 000031
【０１４１】
工程Ｃ  Ｎ’−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−４−クロロ−ベンゾイル］−ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４ａ）の合成
４ａのスペクトルデータ：
【数８】
2019513829.tif 000032
例３  Ｎ’−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−２−クロロ−ベンゾイル］−ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４ｂ）の調製
上記の例１の工程Ａ〜Ｃの手順に従い、４−アミノ安息香酸誘導体の代わりに４−アミノ−２−クロロ安息香酸を出発物質として使用して、４ｂを効率的に調製した。
【０１４２】
工程Ａ  ４−（シス−３−カルボキシ−アクリロイルアミノ）−２−クロロ安息香酸（２ｂ）の合成
２ｂのスペクトルデータ：
【数９】
2019513829.tif 000033
【０１４３】
工程Ｂ  ３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−４−クロロ安息香酸（３ｂ）の合成
３ｂのスペクトルデータ：
【数１０】
2019513829.tif 000034
【０１４４】
工程Ｃ  Ｎ’−［３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−４−クロロ−ベンゾイル］−ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４ｂ）の合成
４ｂのスペクトルデータ：
【数１１】
2019513829.tif 000035
【０１４５】
例４  Ｎ’−［４−（２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イル）−ベンゾイル］−ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１２）の調製
マレイミド４（１０３ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）をメタノール（１ｍＬ）に溶解し、５％Ｐｄ／Ｃ（１４ｍｇ）を加えた。３０秒間かけて、混合物中に若干の水素ガスをバブリングした。水素雰囲気下で懸濁液を３時間激しく撹拌した。注目すべきは、さらに大きな規模では、さらに長い時間を要することである。その後、溶離液としてヘキサン／アセトン（３／２）の混合物を用いて、懸濁液をシリカで濾過して、８７ｍｇ（８４％）の１２を得た。
【数１２】
2019513829.tif 000036
【０１４６】
例５  ４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−安息香酸Ｎ’−ジアセチル−ヒドラジド（８、Ｒ＝ＣＨ３）の調製
ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解した粗製６（４４４ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（１．０７ｍＬ、７８０ｍｇ、７．７ｍｍｏｌ）及び無水酢酸（０．６１ｍＬ、６５９ｍｇ、６．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２２℃で約３０分間撹拌した。その後、抽出漏斗に直接入れて酢酸エチル（７５ｍＬ）で有機相を希釈した。５％炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）、１０％塩化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）、最後に水（５０ｍＬ）で有機相を連続的に洗浄した。無水硫酸マグネシウムを用いて有機相を乾燥させ、濾過し、蒸発させて粗物質（１１１ｍｇ）とした。ヘキサン／アセトン（７／３）の混合物を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーにより生成物を精製して、７５ｍｇ（１８％）の所望の物質（８、Ｒ＝ＣＨ３）を得た。注目すべきは、様々な無水物又は塩化アルカロイルを使用して、この特定の誘導体のアナログを生成することができることである。
【数１３】
2019513829.tif 000037
【０１４７】
例６  Ｎ−アセチル−Ｎ’−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−ベンゾイル］−ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１０、Ｒ＝ＣＨ３）の調製
ジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解した４（１００ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（２５２μＬ、１８３ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）及び無水酢酸（７１μＬ、７６．７ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２２℃で約３０分間撹拌した。その後、抽出漏斗に直接入れて酢酸エチル（２５ｍＬ）で有機相を希釈した。５％炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）、１０％塩化ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）、最後に水（２０ｍＬ）で有機相を連続的に洗浄した。無水硫酸マグネシウムを用いて有機相を乾燥させ、濾過し、蒸発させて粗物質（１２３ｍｇ）とした。ヘキサン／アセトン（４／１）の混合物を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーにより生成物を精製して、２２ｍｇ（２０％）の所望の物質（１０、Ｒ＝ＣＨ３）を得た。反応時間が長くなれば（２時間）、所望の物質の収率がさらに高くなることに注目すべきである。しかし、若干のジアセチル化生成物（１１）も副生成物として存在する。
【数１４】
2019513829.tif 000038
【０１４８】
例７  Ｎ，Ｎ’−ジアセチル−Ｎ’−［４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−ベンゾイル］−ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１１、Ｒ＝ＣＨ３）の調製
ジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解した４（１００ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（２５２μＬ、１８３ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）及び塩化アセチル（５４μＬ、６０ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２２℃で約２時間撹拌した。その後、抽出漏斗に直接入れて酢酸エチル（２５ｍＬ）で有機相を希釈した。５％炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）、１０％塩化ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）、最後に水（２０ｍＬ）で有機相を連続的に洗浄した。無水硫酸マグネシウムを用いて有機相を乾燥させ、濾過し、蒸発させて粗物質（１１８ｍｇ）とした。ヘキサン／アセトン（４／１）の混合物を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーにより生成物を精製して、１００ｍｇ（８０％）の所望の物質（１１、Ｒ＝ＣＨ３）を得た。
【数１５】
2019513829.tif 000039
【０１４９】
例８  Ｎ’−｛４−［３−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチルスルファニル）−２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イル］−ベンゾイル｝−ヒドラジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１３）の調製
メタノール（３ｍＬ）に溶解した４（１１５ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）の溶液に、２−（Ｂｏｃ−アミノ）エタンチオール（７０μＬ、７３ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２２℃で２時間、５０℃で１時間撹拌した。抽出漏斗に直接入れて酢酸エチル（３０ｍＬ）で有機相を希釈し、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（２×１０ｍＬ）及び水（２×２０ｍＬ）で連続的に洗浄した。無水硫酸マグネシウムを用いて有機相を乾燥させ、濾過し、蒸発させて粗物質（１９１ｍｇ）とした。ヘキサン／アセトン（３／２）の混合物を用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーにより生成物を精製して、１０７ｍｇ（６１％）の所望の物質１５を得た。
【数１６】
2019513829.tif 000040
【０１５０】
例９  一般構造１３の誘導体の調製のための一般的手順（スキーム３参照）
Ｔａｈａら１２によって記載された手順に従って、ブタノール（又は他の溶媒）中で還流しながら酸性条件下で、関連するアルデヒド（アルキルアルデヒド（直鎖又は分岐）、ベンズアルデヒド又は置換ベンズアルデヒド）により化合物５を処理して、所望のアルキルヒドラゾン又はベンゾイルヒドラゾン誘導体を得ることができる。
【０１５１】
例１０  誘導体１４、１５又は１６の調製のための一般的手順（スキーム４参照）
誘導体４（又は本明細書に記載の任意の他のマレイミド）と、適切なジエン（ブタジエン（非置換又は置換）、シクロペンタジエン、シクロヘキサジエン、シクロヘプタジエン、フラン、チオフェン、ピロール、Ｎ−アルキルピロール）とを反応させて、所望の環状付加物（ディールス・アルダー生成物）、例えば、１４、１５及び１６を得ることができる。この反応は、圧力の有無を問わず、純粋な試薬（ジエン及びジエノフィル）をそのまま又は溶液中で加熱することによって実施することができる。
【０１５２】
例１１  Ｒ＝４−ヒドロキシ−３−メトキシベンゼンを有するヒドラゾン１３の調製のための具体的な手順（スキーム３参照）
例１、工程Ｅに記載のように、以下の量を用いて、中間体４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−安息香酸ヒドラジドトリフルオロ酢酸塩（６）を調製した：誘導体４（１００ｍｇ、０．３０３ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸２５０μＬ、ジクロロメタン（１ｍＬ）。中間体６をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、４−ヒドロキシ−３−メトキシベンズアルデヒド（バニリン、４６．１ｍｇ、０．３０３ｍｍｏｌ）及び炭酸水素ナトリウム（２５．４ｍｇ、０．３０３ｍｍｏｌ）を用いて処理した。ジクロロメタン（２〜３ｍＬ）を使用して、反応容器の壁に付着したアルデヒドを溶解させた。反応物を室温で１２時間撹拌した。その後、酢酸エチル（５０ｍＬ）を含む分液漏斗に反応混合物を移した。炭酸水素ナトリウムの３％水溶液（２×２０ｍＬ）及び水（３×１５ｍＬ）で有機相を２回洗浄した。無水硫酸マグネシウムを用いて有機相を乾燥させ、濾過し、蒸発させて粗ヒドラゾン１３、Ｒ＝４−ヒドロキシ−３−メトキシベンゼン（７９ｍｇ、７１％）とした。生成物は薄層クロマトグラフィーにより均一であった。
【数１７】
2019513829.tif 000041
【０１５３】
バニリンの代わりにイソ−バニリンを用いて、Ｒ＝４−メトキシ−３−ヒドロキシベンゼンを有するヒドラゾン１３を得た：
【数１８】
2019513829.tif 000042
【０１５４】
材料及び方法−生物学
インビトロ試験（誘導体４、５、８、１０、１１及び１２等について）
細胞培養−一般：ヒト単球細胞株ＴＨＰ１、齧歯類マクロファージ様細胞株Ｊ７７４Ａ．１及びＲＡＷ２６４．７並びに齧歯類ＵＢＣ細胞株ＭＢ４９及びＭＢ４９−Ｉを用いて、生物学的アッセイを実施した。１０％熱不活性化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）が補充され、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１０ｍＭの４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）及び５０μｇ／ｍＬのゲンタマイシンを含有する（１０％ＦＢＳ  ＲＰＭＩ−１６４０と呼ばれる）ＲＰＭＩ培地中で細胞を維持した。５％ＣＯ２を含有する水分飽和雰囲気中、３７℃で細胞を維持した。
ＴＨＰ１細胞、ＲＡＷ２６４．７細胞及びＪ７７４Ａ．１細胞は、様々な炎症性メディエーターに応答する単球及びマクロファージの機能及び分化を検討するのに最も広く使用されている細胞株である１７、１８。未分化のＴＨＰ１細胞は、健康なドナー又は糖尿病及びアテローム性動脈硬化症などの炎症性疾患を有するドナーから単離された初代単球／マクロファージに似ている１９。ホルボールエステルを用いて処理すると、ＴＨＰ１細胞は、いくつかの点で天然の単球由来マクロファージを模倣するマクロファージ様細胞に分化する２０。先に記載したように、５０ｎＭのホルボール１２−ミリステート１３−アセテート中で緑色蛍光タンパク質発現（ＧＦＰ）−ＴＨＰ１細胞を１８時間培養して、単球からマクロファージへの分化を誘導した２１〜２３。細胞株ＲＡＷ２６４．７及びＪ７７４Ａ．１は、Ｄｒ  Ｔａｔｉａｎａ  Ｓｃｏｒｚａ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｅ  ｄｕ  Ｑｕｅｂｅｃ  ａ  Ｍｏｎｔｒｅａｌ、Ｃａｎａｄａ）によって提供された。これらの細胞株は、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、細菌感染、及びリポ多糖（ＬＰＳ）などの細菌産物に応答して大量のＮＯを産生するマクロファージ様細胞モデルである１７。細胞株ＭＢ４９−Ｉは、ＭＢ４９原発腫瘍の連続したインビボ継代によって開発された高度に浸潤性で腫瘍原性のＵＢＣ細胞モデルである２４。
【０１５５】
細胞シグナル伝達試験：１０、２５又は５０μＭのビヒクル（ＤＭＳＯ）、化合物４及び５を用いて、ＴＨＰ１由来ヒトマクロファージ（７５０×１０３細胞／ｍＬ）及びＭＢ４９−Ｉ細胞（５００×１０３細胞／ｍＬ）を３０分間前処理した。次いで、即時（ｔ＝０分）又は５０Ｕ／ｍＬのＩＦＮγ、２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ６もしくは１０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαによる３０分間の活性化後に洗浄及び回収した。細胞溶解物を調製し、記載のようにイムノブロッティングにより分析した２１〜２３、２５。要約すると、還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによりタンパク質サンプルを分離し、ＰＶＤＦ膜に転写した。まず、ホスホ−ＳＴＡＴ１（ｐＳＴＡＴ１）、ｐＳＴＡＴ３又はｐ−ＩκＢ（いずれも１：２０００）に対して、ウサギポリクローナル抗体を用いて４℃で一晩ブロットをプローブした。次いでＨＲＰ結合ヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体（１：３０００）とともに、ブロットを室温で１時間インキュベートした。同じブロットをストリップし、次いで抗ＳＴＡＴ１抗体又は抗ＳＴＡＴ３抗体（いずれも１：１０００）を用いてプローブした。いずれの場合も、強化化学発光検出キット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、プローブされた分子を視覚化した。
【０１５６】
ルシフェラーゼアッセイ。ＴＮＦαに応答するＮＦκＢの転写活性を評価するために、ＣＭＶプロモーター、及びＮＦκＢ転写応答エレメントのタンデム反復の制御下で、単層（２４ウェルプレートで７．５×１０４細胞／ウェル）で培養したＭＢ４９−Ｉ細胞に、ホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子の転写を可能にする発現ベクターを一時的にトランスフェクトした。ルシフェラーゼ遺伝子は、ＡＴＰ、酸素及びＭｇ＋＋の存在下でＤ−ルシフェリンを酸化する６１ｋＤａの酵素をコードし、放出された光を測定することによって定量することができる蛍光産物を生じる。Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ還元血清培地及びＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてトランスフェクションを実施した。次いで、ビヒクル（ＤＭＳＯ）及び化合物４（１０μＭ又は３０μＭ）を用いてＭＢ４９−Ｉ細胞を３０分間前処理した。次いで、１０ｎｇ／ｍＬ又は５０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαによる活性化の２４時間後に洗浄及び回収した。細胞溶解物と、ルシフェラーゼアッセイ試薬（ルシフェリン、補酵素Ａ、ＡＴＰ及びＭｇ２＋の混合物）とを混合し、ルミノメーターを用いて、生成された光を測定した。
【０１５７】
表面抗原発現分析。膜受容体発現を検討するために、ＤＭＳＯ又は化合物４及び５を用いて、ＴＨＰ１由来ヒトマクロファージ（７５０×１０４細胞／ｍＬ）を３時間前処理し、次いで未処理（対照）のまま放置するか、５０Ｕ／ｍＬのＩＦＮγを用いて４８時間処理した。記載のようにフローサイトメトリーによって、ＭＨＣ−ＩＩ及びＣＤ４０の発現レベルを評価した２１〜２３。
【０１５８】
運動性アッセイ。記載のように、ＩＬ６誘発性のマクロファージ細胞移動に対する化合物４及び５の効果を検討するために、インビトロスクラッチ創傷治癒アッセイを実施した２６。要約すると、２４ウェル組織培養プレートにＴＨＰ１由来ヒトマクロファージ（７５０×１０３細胞／ｍＬ）を播種して、単層として約７０〜８０％コンフルエントに到達させた。細胞単層を一方向に直線状に掻き取って、ｐ２００ピペットチップを用いて「スクラッチ」を作成した。画像取得中に同じ領域を得るために、第１の創傷ラインに垂直に別の直線をスクラッチして、各ウェルに十字を作成した。細胞破片を除去し、１ｍＬのハンクス緩衝液で細胞を１回洗浄することにより、スクラッチの縁を平滑化した。ビヒクル（ＤＭＳＯ）又は化合物４（１０μＭ）及び５（２５μＭ）を用いて細胞単層を３時間前処理し、次いで未処理（対照）のまま放置するか、２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ６を用いて４８時間処理した。十字を基準点として使用して、倒立型蛍光顕微鏡下にプレートを置き、ｔ＝０時間及びｔ＝４８時間にスクラッチの画像を取得した。Ｊａｖａベースの画像処理プログラムＩｍａｇｅＪ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）を用いて運動性細胞の数を決定し、初期創傷（ｔ＝０時間）内の運動性細胞に対するｔ＝４８時間の運動性細胞の対照のパーセント（％）として相対的な細胞運動性を表した。
【０１５９】
微小浸潤アッセイ。改変Ｂｏｙｄｅｎチャンバー（ＨＴＳ  Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ  Ｓｙｓｔｅｍ）内の人工基底膜を通過するヒトＵＢＣ  Ｔ２４細胞移動率の評価によって、浸潤を測定した。要約すると、膜は、０．４μｍの孔径を有するポリカーボネートフィルターから構成され、無血清培地で１：２（ｖ／ｖ）に希釈したマトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を氷上で膜にコーティングした。チャンバーの上部ウェルのマトリゲルコートにＴ２４細胞（５０×１０３細胞）を播種したのに対して、下部ウェルに分極化Ｍ１マクロファージ（５０×１０３細胞）を播種した。０．４μｍの孔径を有するポリカーボネートフィルターは、細胞が下部ウェルの底に移動するには余りにも小さい。このように、４８時間のインキュベーション期間後に、マトリゲルコートに浸潤しない細胞を除去し、Ｈｏｅｓｃｈｔ  ３３２５８色素を用いて、ポリカーボネートフィルターに移動した細胞を染色し、蛍光顕微鏡により視覚化し、計数した。
【０１６０】
３Ｄスフェロイドベースの腫瘍浸潤アッセイの細胞分析。製造者の指示（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に従って、細胞の調製及びスフェロイドの形成を実施した。要約すると、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を採取し、１０％血清を補充した（完全）培養培地で５×１０４細胞／ｍＬの濃度に希釈した。次いで、適切な９６ウェルスフェロイド形成プレートに、１００μＬの細胞懸濁液をピペッティングし、３７℃／５％ＣＯ２で静置した。２４時間毎にスフェロイド形成をモニターした。典型的な細胞凝集期間は４８時間であった。スフェロイド形成完了時に、７０μＬの完全培地を各ウェルから除去し、７０μＬの無血清培地と交換した。これを毎日繰り返し、４８時間の血清飢餓期間を生じさせた。その後、マトリゲルマトリックス（１００μＬ）を各ウェルに加えた。スイングバケット遠心分離機を用いて、３００×ｇで５分間プレートを遠心分離した。次いで、３７℃／５％ＣＯ２インキュベーターにプレートを１時間かけて移して、ゲル形成を開始させた。１時間のゲル形成インキュベーション期間の後、適切なウェルにＤＭＳＯ又は化合物４を６０分かけて加えた。前処理後、培地を除去し、完全培地と交換し、その後、４日間毎日培地を交換した。０日目及び４日目の明視野画像を用いて、類腫瘍（ｔｕｍｏｒｏｉｄ）から離れて細胞外基質中に広がる浸潤性突起（浸潤突起（ｉｎｖａｄｏｐｏｄｉａ））を測定した。これらの突起の役割は、マトリゲルマトリックスの分解であり、したがって浸潤プロセスを助ける。これらの突起を識別し、ＩｍａｇｅＪソフトウェア（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）を使用して、それらの面積及び外周を適切に定量した。
【０１６１】
化学的方法によるＮＯ及び尿素産生の評価。示されているように、ＭＢ４９−Ｉ細胞及びＪ７７４Ａ．１細胞（２５×１０３細胞／ウェル）を増殖させ、様々な抗炎症性誘導体、前駆体及び単官能誘導体を用いて３時間前処理した。その後、１０％ＦＢＳ  ＲＰＭＩ−１６４０で細胞を２回洗浄し、次いでサイトカインＩＮＦγ及びＴＮＦαを用いて２４時間活性化させて、ＮＯを産生させた。ＮＯ産生は、前述のＧｒｉｅｓｓ試薬法を用いて測定した２７。この方法は、生理的条件下でＮＯの自発酸化によって形成された亜硝酸イオン（ＮＯ２−）の検出を含む。製造手順（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃Ｇ−７９２１）に従って、等量のスルファニル酸及びＮ−（１−ナフチル）エチレンジアミンを一緒に混合してＧｒｉｅｓｓ試薬を形成する。ＮＯ２−の存在下で、スルファニル酸をジアゾニウム塩に変換し、これをＮ−（１−ナフチル）エチレンジアミンとカップリングさせて、５４８ｎｍで分光光度計（Ｂｉｏｔｅｋ、ｓｙｎｅｒｇｙ  ＨＴ）によって測定されるピンク色の着色を生じさせる。同様に、市販のキットを用いて、アルギナーゼ−１活性による尿素合成を測定した。
【０１６２】
ＭＴＴアッセイによる細胞増殖の評価。以前に記載されたように、抗増殖活性を評価するために、細胞生存率／増殖ＭＴＴアッセイを実施した２１〜２３、２５、２８。要約すると、１００μＬの１０％ＦＢＳ  ＲＰＭＩ−１６４０を用いて９６ウェルプレートにＭＢ４９−Ｉ細胞（５×１０３細胞／ウェル）を播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。０、１０、２５、３７．５及び５０μＭのビヒクル（ＤＭＳＯ）又は誘導体１及び１Ａを用いて細胞を３時間前処理し、ＩＮＦγ及びＴＮＦαの非存在下又は存在下で２４時間インキュベートした。培養期間の終了時に、５ｍｇ／ｍＬのメチルチアゾリルジフェニル−テトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）溶液１０μＬを各ウェルに加えた。ＭＴＴ試薬を用いて３時間インキュベートした後、１００μＬのＭＴＴ可溶化緩衝液（１０ｍＭ  ＨＣｌ中１０％ＳＤＳ）を加え、細胞インキュベーター内にプレートを一晩静置してから吸光度を測定した。Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ  Ｍａｎａｇｅｒ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製）を用いて、５８０ｎｍで光学密度を読み取った。
【０１６３】
統計分析。いずれの生物学的アッセイについても、３つの独立した実験から得られたデータを平均±ＳＤとして提示した。一方向ＡＮＯＶＡ、続いてＰｒｉｓｍソフトウェア、バージョン３．０３（ＧｒａｐｈＰａｄ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を用いたＢｏｎｆｅｒｏｎｎｉポストテストによってデータを分析した。≦０．０５のｐ値は統計的有意性を示すと考えた。
【０１６４】
インビボ試験（誘導体４及び８について）
異所性ＵＢＣモデル。実験のために、それぞれ体重１５〜１８ｇの雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６〜８週齢）を使用した（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒによって供給された）。室温で２１℃に維持した１２：１２時間の明：暗サイクルの下、食餌及び水は自由に摂取させてマウスを飼育した。マウスの右側腹部に、ＭＢ４９細胞、ＭＢ４９−Ｉ細胞及びｉＮＯＳ欠損ＭＢ４９−Ｉ細胞（１００μＬのＰＢＳ中５×１０４）を皮下（ｓ．ｃ．）注入した。皮下腫瘍の増殖率をモニターした。２４〜２８日間にわたり３日毎にデジタルキャリパーを使用し、ＩＶＩＳイメージングシステムを用いて１５日目及び２５日目にルシフェリン発光を測定することにより、腫瘍の大きさを測定した。盲検の観察者が腫瘍の長さと幅とを測定した。腫瘍の体積は、式：長さ×幅２×０．５２から計算し、ここで、長さ及び幅とは、互いに直交する方向でキャリパーを用いて測定した腫瘍直径とした。約１０ｍｍ３の腫瘍の大きさで、マウスを異なる群に分けた。対照群には治療としてＰＢＳを投与した。示されているように、１８〜２０日間にわたり３〜４日毎に、異なる用量（９０、１５０又は３００μＭ）で化合物４又は８を腹腔内（ｉ．ｐ．）注入することにより、他の群を治療した２４、２７。
【０１６５】
同所性ＵＢＣモデル。それぞれ体重１５〜１８ｇの雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（６〜８週齢）を麻酔し、尿道を通して膀胱内腔に２４ゲージのテフロンカテーテルを導入した。腫瘍移植に向けて膀胱を準備するために、電気焼灼によって膀胱壁に点状の病変を誘導した。次いで、１００μｌのＰＢＳ中の１×１０５のＭＢ４９−Ｉ細胞を膀胱に注入した。必要であれば、対照マウスを電気焼灼し、ＰＢＳを膀胱に注入した。細胞懸濁液を含むシリンジをカテーテル内に２０分間維持して、膀胱壁に細胞を付着させた２４、２７。
【０１６６】
統計分析。Ｐｒｉｓｍソフトウェア、バージョン３．０３（ＧｒａｐｈＰａｄ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を用いて、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定を用いて腫瘍増殖を比較した。≦０．０５のｐ値は統計的有意性を示すと考えた。
インビトロ及びインビボ実験の結果を図１〜図２５に示す。
【０１６７】
引用文献
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【０１６８】
2019513829.tif 000044
【０１６９】
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【０１７０】
本開示は特定の例に関して記載されている。この説明は、その範囲を限定するのではなく、本開示の理解を助けることを意図したものである。本明細書に記載された本開示の範囲から逸脱することなく、本開示に様々な変更を加えることができ、そのような変更は本明細書によって包含されることが意図されていることは、当業者には明らかであろう。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１４−１】
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【図１４−２】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【国際調査報告】
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