(57)【要約】  本発明は、乾燥抽出物の重量に対して０．２重量％未満のシリマリンを含んでなるマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン抽出物、ならびにそれを含有する医薬組成物および化粧用組成物、その調製方法および医薬品、特に座瘡、脂漏症、脂漏性皮膚炎および／または酒さの処置におけるその使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
座瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置における使用のための、乾燥抽出物の重量に対して０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含んでなる、マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果抽出物。
【請求項２】
有利には０．４未満、特に０．０７未満のシリマリン／β−シトステロール質量比での、乾燥抽出物の重量に対して０．５重量％〜２．５重量％、特に１．０重量％〜２．０重量％、例えばおよそ１．５重量％のβ−シトステロールと、乾燥抽出物の重量に対して特に２〜７重量％、特に３〜６重量％、例えば３〜５重量％のステロールとを含有することを特徴とする、請求項１に記載の使用のための抽出物。
【請求項３】
乾燥抽出物の重量に対して３重量％〜１５重量％、特に４重量％〜１０重量％、特に４重量％〜６重量％、例えばおよそ５重量％の遊離リノール酸と、乾燥抽出物の重量に対して特に１０重量％〜５０重量％、特に１０重量％〜３０重量％、特に１５重量％〜２５重量％の遊離脂肪酸とを含有することを特徴とする、請求項１および２のいずれか一項に記載の使用のための抽出物。
【請求項４】
乾燥抽出物の重量に対して０．０１重量％〜０．５重量％、特に０．０５重量％〜０．２重量％、例えばおよそ０．１重量％のトコフェロールを有利には１未満、特に０．１未満のシリマリン／トコフェロール質量比で含有することを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のための抽出物。
【請求項５】
乾燥抽出物であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための抽出物。
【請求項６】
乾燥抽出物の重量に対して０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含んでなる、マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果抽出物。
【請求項７】
有利には０．４未満、特に０．０７未満のシリマリン／β−シトステロール質量比での、乾燥抽出物の重量に対して０．５重量％〜２．５重量％、特に１．０重量％〜２．０重量％、例えばおよそ１．５重量％のβ−シトステロールと、乾燥抽出物の重量に対して特に２〜７重量％、特に３〜６重量％、例えば３〜５重量％のステロールとを含有することを特徴とする、請求項６に記載の抽出物。
【請求項８】
乾燥抽出物の重量に対して３重量％〜１５重量％、特に４重量％〜１０重量％、特に４重量％〜６重量％、例えばおよそ５重量％の遊離リノール酸と、乾燥抽出物の重量に対して特に１０重量％〜５０重量％、特に１０重量％〜３０重量％、特に１５重量％〜２５重量％の遊離脂肪酸とを含有することを特徴とする、請求項６および７のいずれか一項に記載の抽出物。
【請求項９】
乾燥抽出物の重量に対して０．０１重量％〜０．５重量％、特に０．０５重量％〜０．２重量％、例えばおよそ０．１重量％のトコフェロールを、有利には１未満、特に０．１未満のシリマリン／トコフェロール質量比で含有することを特徴とする、請求項６〜８のいずれか一項に記載の抽出物。
【請求項１０】
乾燥抽出物であることを特徴とする、請求項６〜９いずれか一項に記載の抽出物。
【請求項１１】
請求項６〜１０のいずれか一項に記載の抽出物の調製方法であって、マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイルを、場合により、水との混合物中に、ハイドロトロープ水溶液、亜臨界水またはマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイルと不混和性の有機溶媒を含んでなる、特に前記のものからなる、抽出溶媒で抽出する工程を含んでなる、方法。
【請求項１２】
以下の連続工程を含んでなる、請求項１１に記載の方法：
（ｉ）場合によりマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果からオイルを抽出する工程、
（ｉｉ）マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイルを抽出溶媒で抽出する工程、
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）で得られた抽出相を回収する工程、および
（ｉｖ）本発明による濃縮または乾燥抽出物を得るために前記抽出相を部分的にまたは完全に乾燥させる工程。
【請求項１３】
工程（ｉ）がマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果を圧搾、特に低温圧搾することによって行われることを特徴とする、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイルと不混和性の有機溶媒がメタノール、エタノール、イソプロパノール、およびそれらの混合物から選択される、好ましくは、イソプロパノールであることを特徴とする、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記抽出溶媒がおよそ９０／１０の容量比のイソプロパノール／水混合物であることを特徴とする、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１１〜１５のいずれか一項に記載の方法を用いて得られるに適した抽出物。
【請求項１７】
医薬品としての使用のための、請求項６〜１０および１６のいずれか一項に記載の抽出物。
【請求項１８】
請求項６〜１０および１６のいずれか一項に記載の抽出物を少なくとも１種類の薬学上または化粧上許容可能な賦形剤との混合物中に含んでなる、医薬組成物または化粧用組成物。
【請求項１９】
局所適用、具体的には、皮膚への局所適用に意図されることを特徴とする、請求項１８に記載の医薬組成物または化粧用組成物。
【請求項２０】
請求項６〜１０および１６のいずれか一項に記載の抽出物、イソプロパノールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含んでなり、特に前記のものからなり、前記ポリエチレングリコールは有利には２００〜６００ｇ／ｍｏｌ、特に２００〜５００ｇ／ｍｏｌ、特に２００〜４００ｇ／ｍｏｌ、例えば２５０〜３５０ｇ／ｍｏｌ、特におよそ３００ｇ／ｍｏｌの数平均分子量を有することを特徴とする、請求項１８〜１９のいずれか一項に記載の医薬組成物または化粧用組成物。
【請求項２１】
組成物の総容量に対して０．００１〜１５重量％、特に０．０１〜１５重量％、好ましくは０．１〜１０重量％の、請求項６〜１０および１６のいずれか一項に記載の抽出物を含んでなることを特徴とする、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の医薬組成物または化粧用組成物。
【請求項２２】
座瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置における使用のための、請求項１８〜２１のいずれか一項に記載の医薬組成物または化粧用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン(Silybum marianum (L.) Gaertn)痩果抽出物、ならびにより詳しくは局所適用に意図されるそれらを含有する医薬組成物および化粧用組成物、その調製方法、および皮膚科学または美容術における、特に座瘡、脂漏症、脂漏性皮膚炎および／または酒さの処置におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
科学名マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトンは、高さ１メートルに達し得るだけでなく強健な茎を有する一年生または二年生のキク科に属す植物を表す。その大きく、光沢のある、托葉を欠いた互生葉は、白い斑入りを持ち、堅く鋭い棘に囲まれている。花は頭状花序に群生し、頻繁に単頂花序となる。花は、極めて鋭い先端を持つ大きな有棘包葉により囲まれている。小管と５片を有する花は紫色である。実は、光沢のある黒色または黄色の斑入りの痩果であり、その基部に輪状に配置された歯状刺毛を有する冠毛を頂部に持つ。この植物の俗名はミルクシスルである。
【０００３】
マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトンの痩果（文献ではよく誤って種子と呼ばれている）およびその調製物は、肝臓に起因する消化器系機能障害の対症療法として伝統的に経口使用されている。
【０００４】
マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトンの痩果の主要な有効成分は、複数のフラボノリグナン（特に、シリビン、イソシリビン、シリクリスチンおよびシリジアニン）の混合物であるシリマリンである。痩果は、最大３重量％のシリマリンを含有する。痩果はまたオイル（２０〜３０重量％）、粘液およびタンパク質からなる。
【０００５】
シリマリンは、多くの研究（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏおよび臨床）の対象となっており、抗酸化特性、肝臓保護特性、消化特性または抗炎症特性が実証されている。
【０００６】
現在、シリマリンが高いマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果抽出物は、種々の肝臓および胆汁障害の処置に意図される、レガロン（登録商標）などの複数の医薬製剤で存在している。
【０００７】
さらに、シリマリンは、座瘡の処置(Sahib et al. 2012)、ならびにメチルスルホニルメタン（ＭＳＭ）と組み合わせた紅斑毛細血管拡張性酒さ(erythematoteleangiectatic rosacea)の処置(Berardesca et al. 2008)の研究の対象となっている。
【０００８】
オメガ６とビタミンＥに富んだマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトンオイルは、基本的に料理で使用される。このオイルは慣例的に低温圧搾によって痩果から得られる。
【０００９】
しかしながら、経口投与されるこのようなミルクシスルオイルの抗酸化特性および肝臓保護特性に関する研究は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてはラットまたはマウスで行われてきた(Hermenean et al. 2015; Zhu et al. 2014)。
【発明の概要】
【００１０】
本出願人らは、驚くことに、シリマリンが低いマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果抽出物が座瘡、脂漏症、酒さまたは脂漏性皮膚炎の処置に極めて興味深い特性を呈したことを示した。
【００１１】
よって、本発明の１つの主題は、座瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置における使用のための、乾燥抽出物の重量に対して０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含んでなるマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果抽出物に関する。
【００１２】
本発明のさらなる主題は、座瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置に意図される医薬品の製造のための、乾燥抽出物の重量に対して０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含んでなるマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果抽出物の使用に関する。
【００１３】
本発明のさらなる主題は、座瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置における、乾燥抽出物の重量に対して０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含んでなるマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトンの使用に関する。
【００１４】
本発明のさらなる主題は、必要とする対象に、乾燥抽出物の重量に対して０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含んでなるマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果抽出物の有効量を投与することを含んでなる、座瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置のための方法に関する。
【００１５】
本発明のさらなる主題は、乾燥抽出物の重量に対して０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含んでなるマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果抽出物に関する。
【００１６】
本発明のさらなる主題は、医薬品としての使用のための、乾燥抽出物の重量に対して０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含んでなるマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果抽出物に関する。
【００１７】
本発明のさらなる主題は、乾燥抽出物の重量に対して０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含んでなるマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果抽出物を、少なくとも１種類の薬学上または化粧上許容可能な賦形剤との混合物中に含んでなる、医薬（特に皮膚科）組成物または化粧用（特にデルモコスメティック）組成物に関する。
【００１８】
本発明のさらなる主題は、座瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置における使用のための、乾燥抽出物の重量に対して０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含んでなるマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果抽出物を、少なくとも１種類の薬学上または化粧上許容可能な賦形剤との混合物中に含んでなる医薬（特に皮膚科）組成物または化粧用（特にデルモコスメティック）組成物に関する。
【００１９】
本発明のさらなる主題は、座瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置における、乾燥抽出物の重量に対して０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含んでなるマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果抽出物を、少なくとも１種類の薬学上または化粧上許容可能な賦形剤との混合物中に含んでなる医薬（特に皮膚科）組成物または化粧用（特にデルモコスメティック）組成物の使用に関する。
【００２０】
本発明のさらなる主題は、必要とする対象に、乾燥抽出物の重量に対して０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含んでなるマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果抽出物を、少なくとも１種類の薬学上または化粧上許容可能な賦形剤との混合物中に含んでなる医薬（特に皮膚科）組成物または化粧用（特にデルモコスメティック）組成物の有効量を投与すること、好ましくは局所経路によって投与することを含んでなる、座瘡、脂漏症、酒さおよび／または脂漏性皮膚炎の処置のための方法に関する。
【００２１】
本発明のさらなる主題は、乾燥抽出物の重量に対して０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含んでなるマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果抽出物の調製方法であって、マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイルを、場合により水との混合物中に、ハイドロトロープ水溶液(hydrotropic aqueous solution)、亜臨界水またはマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイルと不混和性の有機溶媒を含んでなる、特に前記のものからなる、抽出溶媒で抽出する工程を含んでなる方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１Ａ、１Ｂおよび１Ｃはそれぞれ、シリマリン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、プロトコール１に従って得られた、本発明によるマリアアザミ痩果抽出物Ｉ、および従来技術によるマリアアザミ痩果抽出物ＡのＵＰＬＣクロマトグラムを表す。
【図２】図２Ａ、２Ｂおよび２Ｃはそれぞれ、プロトコール２に従って得られた、本発明によるメタノール抽出物Ｍ、本発明によるエタノール９０抽出物Ｅ、および本発明によるイソプロパノール９０抽出物ＩのＵＰＬＣクロマトグラムを表す。
【図３】図３Ａ、３Ｂおよび３Ｃはそれぞれ、リノール酸、プロトコール２に従って得られた、本発明によるマリアアザミ痩果抽出物Ｉ、および従来技術によるマリアアザミ痩果抽出物ＡのＵＰＬＣクロマトグラムを表す。
【図４】図４Ａ、４Ｂおよび４Ｃは、プロトコール３に従って得られた、本発明によるエタノール９０抽出物Ｅ、本発明によるメタノール抽出物Ｍ、および本発明によるイソプロパノール９０抽出物ＩのＧＣ−ＭＳクロマトグラムの１０〜２８分領域（脂肪酸およびステロール領域に相当）を表す。
【図５】図５Ａ、５Ｂおよび５Ｃはそれぞれ、図４Ａ、４Ｂおよび４Ｃのクロマトグラムの２２〜２８分領域（ステロール領域に相当）を表す。
【図６】図６Ａ、６Ｂおよび６Ｃはそれぞれ、図４Ａ、４Ｂおよび４Ｃのクロマトグラムの１０〜２２分領域（脂肪酸領域に相当）を表す。
【図７】図７は、シリマリンが低い本発明によるマリアアザミ痩果抽出物（抽出物Ｉ、ＭおよびＥ）ならびにシリマリンが豊富な従来技術によるマリアアザミ痩果抽出物（抽出物Ａ）を用いた連続処置の後にＩＧＡ法により決定された７名の座瘡患者に対する平均治療効果を示す。
【図８】図８は、本発明によるマリアアザミ痩果抽出物を用いた処置後にＩＧＡ法により決定された１１名の成人座瘡患者の治療効果を示す。
【図９】図９は、本発明によるマリアアザミ痩果抽出物を用いた処置後にＩＧＡ法により決定された１０名の十代座瘡患者の治療効果を示す。
【図１０】図１０は、本発明によるマリアアザミ痩果抽出物を用いた処置後にＩＧＡ法により決定された９名の脂漏症伴う酒さ患者の治療効果を示す。
【図１１】図１１は、本発明によるマリアアザミ痩果抽出物、および従来技術によるマリアアザミ痩果抽出物による、２つの皮脂産生酵素遺伝子(sebogenic enzyme genes)ＦＡＤＳ２およびＳＣＤ１の平均阻害（倍率）を表す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
詳細な説明
本明細書において、マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン植物は、マリアアザミの略語を用いて言及される場合がある。
【００２４】
用語「シリマリン」は、本発明によれば、主として（少なくとも９５重量％の）以下の４つのフラボノリグナン：シリビン、イソシリビン、シリクリスチンおよびシリジアニンの混合物を含んでなる精製されたマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果抽出物を表す(Kuki et al. 2012)。その０．２重量％未満のシリマリン含量は、シリマリンの成分の総量が０．２重量％未満であることを意味する。このような含量は、特に、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）またはＵＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）により、これらのピークの位置を決定するために特に、例えばＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈから入手可能な参照シリマリンサンプルを用いて、シリマリンの総ての成分に相当するピークの総面積を計算することによって決定することができる。
【００２５】
用語「シリビン」は、当技術分野ではシリビニンとも呼ばれ、本発明によれば、シリビンＡ、シリビンＢ、２，３−シス−シリビンＡおよび２，３−シス−シリビンＢの４つのジアステレオ異性体を表す。
【００２６】
用語「イソシリビン」は、本発明によれば、イソシリビンＡおよびイソシリビンＢの２つのジアステレオ異性体を表す。
【００２７】
用語「シリクリスチン」は、本発明によれば、シリクリスチンＡおよびシリクリスチンＢの２つのジアステレオ異性体を表す。
【００２８】
用語「およそ」は、本明細書において、対象とする値が示された値の１０％、特に５％、特には１％小さくてもまたは大きくてもよいことを表す。
【００２９】
用語「乾燥抽出物」は、本発明によれば、抽出溶媒を含まないかまたはそれを有意でない微量レベルで含有するに過ぎない抽出物を表す。よって、このような乾燥抽出物は、マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトンから得られたもののみを含有する。乾燥抽出物はまた、有意でない微量の抽出溶媒を含有してもよい。
【００３０】
用語「マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイルと不混和性の有機溶媒」は、本発明によれば、マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトンアルケン類(alkenes)から得られたオイルと混合することができない、または部分的に混合できるに過ぎない有機溶媒を表し、従って、有機溶媒とマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイルの混合物は、少なくとも２つの分離した相が見られる不均質な混合物を生成する。
【００３１】
本発明による抽出物
本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量に対して０．２重量％未満、好ましくは０．１重量％未満のシリマリンを含んでなるマリアアザミ痩果抽出物である。
【００３２】
一つの特定の実施形態によれば、本発明による抽出物は、乾燥抽出物に対して少なくとも０．５重量％、好ましくは少なくとも１．０重量％のβ−シトステロールを含有する。具体的には、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量に対して０．５重量％〜２．５重量％、特に１．０重量％〜２．０重量％、例えばおよそ１．５重量％のβ−シトステロールを含有する。本発明による抽出物のシリマリン／β−シトステロールの質量比は、具体的には０．４未満、特に０．０７未満であり得る。本発明による抽出物はさらに、乾燥抽出物の重量に対して２〜７重量％、特に３〜６重量％、例えば３〜５重量％のステロールを含んでなり得る。
【００３３】
用語「ステロール」は、本発明によれば、炭素３がヒドロキシル基ＯＨを担持するステラン核を有する分子を表し、このステランは下記の構造を有する。
【００３４】
【化１】
2019524677.tif 000002
【００３５】
一つの特定の実施形態によれば、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量に対して少なくとも３重量％、好ましくは少なくとも４重量％の遊離リノール酸を含有する。具体的には、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量に対して３重量％〜１５重量％、特に４重量％〜１０重量％、特には４重量％〜６重量％、例えばおよそ５重量％の遊離リノール酸を含有する。本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量に対して１０重量％〜７０重量％、特には１０重量％〜３０重量％、特に１５重量％〜２５重量％の遊離脂肪酸をさらに含んでなってもよい。
【００３６】
用語「脂肪酸」は、本発明によれば、カルボン酸Ｒ１ＣＯ２Ｈを表し、ここで、鎖Ｒ１は、飽和または二重Ｃ＝Ｃ結合を含んでなる直鎖または分岐炭化水素鎖であり、前記カルボン酸は、１６〜２２個の炭素原子（カルボン酸官能基の炭素原子を含む）を含んでなる。
【００３７】
用語「遊離」脂肪酸（リノール酸を含む）は、本発明によれば、他の分子と結合されてない（例えば、グリセロールまたはその誘導体を結合されてグリセリドを形成していない、またはアルコールと結合されて脂肪エステルを形成していない）脂肪酸を表す。
【００３８】
さらなる特定の実施形態によれば、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量に対して０．５重量％〜２．５重量％、特に１．０重量％〜２．０重量％、例えばおよそ１．５重量％のβ−シトステロールと、乾燥抽出物の重量に対して３重量％〜１５重量％、特に４重量％〜１０重量％、特には４重量％〜６重量％、例えばおよそ５重量％の遊離リノール酸とを含有する。本発明による抽出物のシリマリン／β−シトステロールの質量比は、具体的には０．４未満、特に０．０７未満であり得る。本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量に対して２〜７重量％、特に３〜６重量％、例えば３〜５重量％のステロールと、乾燥抽出物の重量に対して１０重量％〜５０重量％、特には１０重量％〜３０重量％、特に１５重量％〜２５重量％の遊離脂肪酸とをさらに含んでなり得る。
【００３９】
一つの特定の実施形態によれば、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量に対して少なくとも０．０１重量％、特に少なくとも０．０５重量％のトコフェロールを含有する。具体的には、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量に対して０．０１重量％〜０．５重量％、特に０．０５重量％〜０．２重量％、例えばおよそ０．１重量％のトコフェロールを含有する。本発明による抽出物のシリマリン／トコフェロールの質量比は、具体的には１未満、特に０．１未満であり得る。
【００４０】
用語「トコフェロールは、本発明によれば、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロールおよびδ−トコフェロールを表す。
【００４１】
さらなる特定の実施形態によれば、本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量に対して０．５重量％〜２．５重量％、特に１．０重量％〜２．０重量％、例えばおよそ１．５重量％のβ−シトステロール；乾燥抽出物の重量に対して；乾燥抽出物の重量に対して３重量％〜１５重量％、特に４重量％〜１０重量％、特には４重量％〜６重量％、例えばおよそ５重量％の遊離リノール酸；ならびに０．０１重量％〜０．５重量％、特に０．０５重量％〜０．２重量％、例えばおよそ０．１重量％のトコフェロールを含有する。本発明による抽出物は、乾燥抽出物の重量に対して２〜７重量％、特に３〜６重量％、例えば３〜５重量％のステロールと、乾燥抽出物の重量に対して１０重量％〜５０重量％、特には１０重量％〜３０重量％、特に１５重量％〜２５重量％の遊離脂肪酸をさらに含んでなり得る。本発明による抽出物のシリマリン／β−シトステロールの質量比は、具体的には０．４未満、特に未満０．０７であり得る。本発明による抽出物のシリマリン／トコフェロールの質量比は、具体的には１未満、特に０．１未満であり得る。
【００４２】
好ましくは、本発明による抽出物は乾燥抽出物である。
【００４３】
好ましい実施形態によれば、本発明による抽出物は、以下に記載の本発明による方法の手段によって得られるに好適である。
【００４４】
本発明による抽出物の調製方法
本発明による抽出物の調製方法は、マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイルを、場合により水との混合物中に、ハイドロトロープ水溶液、亜臨界水またはマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイルと不混和性の有機溶媒を含んでなる、特に前記のものからなる、抽出溶媒で抽出する工程を含んでなる。
【００４５】
一つの特定の実施形態によれば、有機溶媒は、場合により水との混合物中に、マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイルと不混和性の有機溶媒を含んでなる、特に前記有機溶媒からなる。
【００４６】
マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイルと不混和性の有機溶媒は、特にＣ１〜Ｃ３アルコールであり得る。
【００４７】
抽出溶媒は、場合により水との混合物中の特にＣ１〜Ｃ３アルコールであり得る。
【００４８】
用語「Ｃ１〜Ｃ３アルコール」は、本発明によれば、アルコールＲ２ＯＨを表し、ここで、鎖Ｒ２は、１〜３個の炭素原子を含んでなる飽和、直鎖または分岐炭化水素鎖である。前記アルコールは、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノールまたはイソプロパノール、特には、メタノール、エタノールまたはイソプロパノールからなり得る。好ましくは、前記アルコールはイソプロパノールであろう。
【００４９】
マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイルと不混和性の有機溶媒、具体的には、メタノール、エタノールまたはイソプロパノールなどのＣ１〜Ｃ３アルコールは、水との混合物中で、特に、８０／２０〜１００／０、特に８５／１５〜９５／５、特にはおよそ９０／１０の有機溶媒／水の容量比で使用され得る。
【００５０】
抽出溶媒は、特に、メタノール、メタノール／水混合物、エタノール、エタノール／水混合物、イソプロパノールおよびイソプロパノール／水混合物から選択され得る。
【００５１】
好ましい実施形態によれば、抽出溶媒は、メタノール、およそ９０／１０の容量比のエタノール／水混合物、またはおよそ９０／１０の容量比のイソプロパノール／水混合物、好ましくはおよそ９０／１０の容量比のイソプロパノール／水混合物であろう。
【００５２】
マリアアザミ痩果から得られたオイルを抽出するための工程は、具体的には、マリアアザミ痩果から得られたオイルを抽出溶媒と１〜１２時間、具体的には、１５〜２５℃、特におよそ２０℃の温度で混合することによって行われよう。この抽出を行うために使用される抽出溶媒の量は、マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイル１ｇに対して有利には０．５〜３ｇ、特には１〜３ｇであろう。
【００５３】
次に、抽出相および脂質相がこの抽出の終了時に得られよう。抽出相は有利には脂質相から分離され、回収された後に部分的にまたは完全に、特に真空下で乾燥させて多少とも抽出溶媒を除去し、溶媒が完全に除去される場合には乾燥抽出物、または残留溶媒で希釈されている場合には濃縮抽出物を得る。
【００５４】
マリアアザミ痩果から得られたオイルは、有利には、マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果（これらの痩果はホールであってもピースであってもよい）からの抽出によって、特に、圧搾、有利には低温圧搾（すなわち、加熱せずに周囲温度で）によって得られ得る。
【００５５】
本発明による一実施形態によれば、本発明による方法は、以下の２つの連続工程を含んでなるであろう：
（ｉ）マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果からオイルを抽出する工程、および
（ｉｉ）マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイルを、場合により水との混合物中に、ハイドロトロープ水溶液、亜臨界水またはマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果抽出物から得られたオイルと不混和性の有機溶媒を含んでなる、特に前記有機溶媒からなる、抽出溶媒で抽出する工程。
【００５６】
本発明による好ましい実施形態によれば、本発明による方法は、以下の連続工程を含んでなるであろう
（ｉ）場合によりマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果からオイルを抽出する工程、および
（ｉｉ）マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイルを、場合により水との混合物中に、ハイドロトロープ水溶液、亜臨界水またはマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果抽出物から得られたオイルと不混和性の有機溶媒を含んでなる、特に前記のものからなる、抽出溶媒で抽出する工程、
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）で得られた抽出相を回収する工程、および
（ｉｖ）本発明による濃縮または乾燥抽出物を得るために前記抽出相を部分的にまたは完全に乾燥させる工程。
【００５７】
工程（ｉ）は、有利には、ホールまたはピースのマリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果を低温圧搾することにより行われよう。
【００５８】
工程（ｉｉ）は、有利には、上記に定義されるような、特にメタノール、メタノール／水混合物、エタノール、エタノール／水混合物、イソプロパノールおよびイソプロパノール／水混合物から選択される抽出溶媒で行われよう。
【００５９】
マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイルと不混和性の有機溶媒、具体的には、メタノール、エタノールまたはイソプロパノールなどのＣ１〜Ｃ３アルコールは、水との混合物中で、特に、８０／２０〜１００／０、特に８５／１５〜９５／５、特にはおよそ９０／１０の有機溶媒／水の容量比で使用され得る。有利な抽出溶媒は、およそ９０／１０の容量比のイソプロパノール／水混合物である。
【００６０】
抽出工程（ｉｉ）は、マリアアザミ痩果から得られたオイルを、抽出溶媒で１〜１２時間、具体的には、１５〜２５℃、特におよそ２０℃の温度で混合することによってよい。この抽出を行うために使用される抽出溶媒の量は、マリアアザミ（Ｌ．）ガエルトン痩果から得られたオイル１ｇに対して有利には０．５〜３ｇ、特には１〜３ｇであろう。この抽出工程（ｉｉ）は、終了時に目的の抽出相と脂質相とを得ることを可能とする。
【００６１】
工程（ｉｉｉ）は、有利には、脂質相から抽出相を分離することによって行われよう。
【００６２】
工程（ｉｖ）は、有利には、真空下で行われよう。
【００６３】
本発明による医薬組成物または化粧用組成物
本発明による医薬組成物または化粧用組成物は、少なくとも１種類の薬学上または化粧上許容可能な賦形剤との混合物中に上記で定義されるような本発明による抽出物を含んでなる。前記組成物は好ましくは、局所用組成物からなる。
【００６４】
本発明において、用語「薬学上または化粧上許容可能な」は、医薬組成物または化粧用組成物の調製において有用であり、一般に安全、非毒性であり、生物学的にも他の点でも望ましくないものではなく、かつ、医薬用途または化粧品用途、および具体的には、皮膚科またはデルモコスメティック、特に局所適用による用途に許容されるものを表す。
【００６５】
本発明による組成物は、有利には、局所適用に、具体的には、皮膚に対する局所適用に意図される。
【００６６】
よって、本発明による組成物は、局所投与に関して通常知られている形態、すなわち、特にローション、フォーム、ゲル、分散物、エマルション、スプレー、漿液、マスクまたはクリームで、有効成分の特性および利用率を高めるために、特に皮膚浸透に好適な賦形剤とともに提供され得る。有利には、これはクリームであろう。
【００６７】
これらの組成物は一般に、本発明による抽出物の他、一般に水または溶媒に基づく生理学的に許容可能な媒体、例えば、アルコール、エーテルまたはグリコールを含有する。これらの組成物はまた、界面活性剤、錯化剤、保存剤、安定剤、乳化剤、増粘剤、ゲル化剤、湿潤剤、皮膚軟化剤、微量元素、精油、香料、着色剤、艶消し剤、ケミカルフィルターまたはミネラルフィルター、保湿剤、ミネラルウォーターなども含有してよい。
【００６８】
一つの特定の実施形態によれば、本発明による組成物は、艶消し剤、保湿剤、およびそれらの混合物から選択される少なくとも１種類の薬学上または化粧上許容可能な賦形剤を含有する。別の実施形態によれば、本発明による組成物は、少なくとも１種類の艶消し剤および／または少なくとも１種類の保湿剤を、場合により少なくとも１つのケミカルフィルターまたはミネラルフィルター（ＵＶフィルター）とともに含有する。
【００６９】
保湿剤は、皮膚の水分含量を増し、皮膚を柔軟かつ滑らかに保つ。保湿剤は例えば、尿素、アミノ酸、グリセロール（グリセリンとも呼ばれる）、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、マンニトール、ポリデキストロース、コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸およびその塩（例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩）、ペクチン、ゼラチン、キトサン、アロエベラ、蜂蜜、またはそれらの混合物であり得る。
【００７０】
艶消し剤は、皮膚を無光沢にする成分であり、皮膚をてかりから保護する。艶消し剤は、例えば、タルク、シリカ、米粉、またはそれらの混合物であってよく、特に微粉形態である。
【００７１】
ＵＶフィルターは、特に日光紫外線から(frum sun UVs)皮膚を保護するために紫外（ＵＶ）線を遮断または吸収する化合物である。ＵＶフィルターは、例えば、ＵＶＡフィルター、ＵＶＢフィルター、広域スペクトルフィルターまたはそれらの混合物であり得る。
【００７２】
別の特定の実施形態によれば、本発明による組成物は、薬学上または化粧上許容可能な賦形剤として、イソプロパノール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはそれらの混合物を含んでなる。従って、有利には、本発明による組成物は、本発明による抽出物、イソプロパノールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含んでなる、特に前記のものからなるであろう。この組成物はまた、本発明による抽出物、イソプロパノール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ならびに艶消し剤、保湿剤、ＵＶフィルターおよびそれらの混合物から選択される少なくとも１つの成分を含んでなり得る。この組成物はまた、本発明による抽出物、イソプロパノール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、少なくとも１種類の艶消し剤および／または少なくとも別の保湿剤および場合により少なくとも１種類のケミカルフィルターまたはミネラルフィルター（ＵＶフィルター）を含んでなり得る。艶消し剤、保湿剤およびＵＶフィルターは上記で定義される通りである。
【００７３】
イソプロパノール／ＰＥＧの質量比は、有利には１／２〜２／１、特に１／１．５〜１．５／１であり、特には、およそ１／１であろう。
【００７４】
ポリエチレングリコールは、具体的には、２００〜６００ｇ／ｍｏｌ、特に２００〜５００ｇ／ｍｏｌ、特には２００〜４００ｇ／ｍｏｌ、例えば２５０〜３５０ｇ／ｍｏｌ、特にはおよそ３００ｇ／ｍｏｌの数平均分子量を有してよい。よって、ポリエチレングリコールは、具体的には、ＰＥＧ３００であり得る。
【００７５】
これらの組成物は、相補作用または場合により相乗作用を生じるさらなる有効成分をさらに含有してもよい。
【００７６】
有利には、本発明による組成物は、組成物の総容量に対して少なくとも０．００１重量％、特に０．００１〜１５重量％、０．００１〜１０重量％または０．００１〜５重量％、特には０．０１〜１５重量％、０．０１〜１０重量％または０．０１〜５重量％、好ましくは０．１〜１０重量％、特に０．１〜５重量％の本発明による抽出物を含んでなるであろう。
【００７７】
好ましくは、上記で定義されるような本発明による組成物は、いずれの植物油も、特にいずれのオイルも含有しないであろう。
【００７８】
治療適用
本発明による抽出物、およびそれらを含有する医薬組成物は、座瘡（例えば、十代座瘡としても知られる若年性座瘡、または成人座瘡、これらは嚢胞性であり得る）、脂漏症、脂漏性皮膚炎および／または酒さの処置において、好ましくは、局所適用、特に皮膚への局所適用に使用するために好適である。
【実施例】
【００７９】
１．抽出物の調製
方法Ａ：  高シリマリン含量を含んでなる抽出物Ａを生産する従来技術による方法：
・マリアアザミ痩果を９６％エタノールで、痩果１グラム当たり１０ｍｌのエタノールを用いた還流下で１時間抽出、
・混合物の濾過、
・エタノール相の回収、および
・溶媒の蒸発。
【００８０】
方法Ｂ：  低シリマリン含量を含んでなるイソプロパノール９０抽出物（抽出物Ｉ）を生産する本発明による方法：
・マリアアザミ痩果からオイルを得るためのマリアアザミ痩果の低温圧搾、
・マリアアザミ痩果から得られたオイルを、イソプロパノール／水混合物（９０／１０  ｖ／ｖ）で、オイル１グラム当たり１グラムのイソプロパノール／水混合物を用いて、２時間２０℃で抽出、
・イソプロパノール相の回収、および
・溶媒の蒸発。
【００８１】
メタノール（抽出物Ｍ）およびエタノール９０（抽出物Ｅ）抽出物は、イソプロパノール／水混合物（９０／１０  ｖ／ｖ）をそれぞれメタノールおよびエタノール／水混合物（９０／１０  ｖ／ｖ）に置き換えることによって同様に得られた。マリアアザミ痩果から得られたオイルの抽出はそれぞれ、１容量のオイルに対して３容量のメタノールおよび３容量のエタノール／水混合物（９０／１０  ｖ／ｖ）を用い、２時間２０℃で行う。
【００８２】
これらの異なる抽出物を、以下に記載するプロトコールに従い、ＵＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）またはＧＣ−ＭＳ（ガスクロマトグラフ−質量分析）により特性評価した。
【００８３】
得られた抽出物の評価プロトコール：
プロトコール１：  ＵＰＬＣによるシリマリン含量の評価
○サンプルおよび標準的調製：
−シリマリン標品：  １０ｍｌのメタノール／水混合物（６０：４０）（ｖ／ｖ）中５ｍｇを含有するシリマリン溶液を調製する。
−サンプル：
・抽出物Ａ：  １０ｍｌのメタノール／ジクロロメタン混合物（７０：３０）（ｖ／ｖ）中１００ｍｇの被分析抽出物を含有する溶液を調製する。
・抽出物Ｍ、Ｅ、Ｉ：  被分析乾燥抽出物を、透明な均質の溶液が得られるまで撹拌下で３５℃に加熱する。２００ｍｇ（ｐｅ）の抽出物を正確に秤量し、それを抽出物の完全な可溶化を可能とする１０ｍｌのメタノール／ジクロロメタン混合物中で可溶化し、その溶液を均質化する。この混合物は、メタノール／ジクロロメタン（１：１）（ｖ／ｖ）比から純粋メタノールまでの範囲である。
【００８４】
○分析条件：
−カラム：  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｓｈｉｅｌｄ  Ｃ１８  １５０ｍｍ×２．１ｍｍ−１．７μｍ（Ｗａｔｅｒｓ）
−移動相：
○Ａ：水＋０．１％ギ酸
○Ｂ：アセトニトリル＋０．１％ギ酸
−勾配：
【００８５】
【表１】
2019524677.tif 000003
【００８６】
−カラム温度：  ４０℃
−流速：  ０．４ｍｌ／分
−検出：  ２８７ｎｍ
−注入容量：  １μｌ
【００８７】
プロトコール２：  ＵＰＬＣによるリノール酸含量の評価
○サンプルおよび標準的調製：
−リノール酸標品：  １０ｍｌのメタノール／ジクロロメタン混合物（１：１）（ｖ／ｖ）中１０ｍｇを含有するリノール酸溶液を調製する。
−サンプル：
・抽出物Ｍ、Ｅ、Ｉ：  被分析乾燥抽出物を、透明な均質の溶液が得られるまで撹拌下で３５℃に加熱する。５０ｍｇ（ｐｅ）の抽出物を正確に秤量し、それを抽出物の完全な可溶化を可能とする１ｍｌのメタノール／ジクロロメタン混合物中で可溶化し、その溶液を均質化する。この混合物は、メタノール／ジクロロメタン（１：１）（ｖ／ｖ）比から純粋メタノールまでの範囲である。
【００８８】
○分析条件：
−カラム：  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｓｈｉｅｌｄ  Ｃ１８  １５０ｍｍ×２．１ｍｍ−１．７μｍ（Ｗａｔｅｒｓ）
−移動相：
○Ａ：水＋０．１％ギ酸
○Ｂ：アセトニトリル＋０．１％ギ酸
−勾配：
【００８９】
【表２】
2019524677.tif 000004
【００９０】
−カラム温度：  ４０℃
−流速：  ０．４ｍｌ／分
−検出：  ２１５ｎｍ
−注入容量：  １μｌ
【００９１】
プロトコール３：  ＧＣ−ＭＳによる脂肪酸およびステロール含量の評価
○サンプル調製：
−被分析乾燥抽出物を、透明な均質の溶液が得られるまで撹拌しながら３５℃に加熱する。
−２０ｍｇの抽出物を８００μＬのメタノール／ジクロロメタン混合物（１：１）（ｖ／ｖ）中で可溶化する。
−２００μＬの誘導体化薬剤Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）トリフルオロアセトアミド（ＢＳＴＦＡ）＋トリメチルクロロシラン（ＴＭＣＳ）（９９：１）（Ｓｕｐｅｌｃｏ−Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を加える。
−１分間ボルテックスで撹拌する。
【００９２】
○ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）条件
−カラム：  ＤＢ−５ｍｓ（Ａｇｉｌｅｎｔ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）；３０ｍ×０．２５ｍｍ；０．２５μｍ
−注入：  Ｔ＝３００℃；モード＝スプリット；スプリット比＝１００：１
−オーブン：  温度勾配（℃）：
○初期温度＝１５０℃
○勾配＝７℃／分  最終温度＝３４０℃まで
○３４０℃で１０分間維持
−キャリアガス流速：  １ｍｌ／分
−検出：  ＭＳ−ＥＩ；Ｔ＝３００℃；スキャン時間＝０．２秒；フルスキャンスタートマス＝４０；フルスキャンエンドマス＝６００
−注入容量：  １μｌ
【００９３】
結果：
シリマリンが豊富な従来技術によるマリアアザミ痩果抽出物Ａは、ＵＰＬＣにより６〜１４分の保持時間を有するシリマリン成分を本質的に含有する（図１Ｃおよび１Ａ参照）。
【００９４】
シリマリンが低い本発明によるマリアアザミ痩果抽出物Ｉは、ＵＰＬＣにより１３〜３０分の保持時間を有する物質を主として含有する（図１Ｂ参照）。
【００９５】
よって、方法Ａは、極性化合物、具体的には、シリマリンフラボノリグナンの抽出に有利であり、一方、方法Ｂは、遊離脂肪酸、ステロール、トコフェロールおよび他の無極性化合物などの親油性化合物の抽出に有利である。
【００９６】
抽出物ＡおよびＩのシリマリン含量は、標準的な市販シリマリン溶液（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）で較正した後にＵＰＬＣにより決定した（図１参照）。
【００９７】
抽出物Ａは、２８質量％のシリマリンを含有する。
【００９８】
抽出物Ｉは、０．０６質量％のシリマリンを含有する。
【００９９】
抽出物Ｉ中の遊離脂肪酸（およびより詳しくはリノール酸）およびステロール（およびより詳しくはβ−シトステロール）含量は、ＵＰＬＣ（図３Ｂ参照）およびＧＣ（図４Ｃ、５Ｃおよび６Ｃ参照）により決定した。
【０１００】
【表３】
2019524677.tif 000005
【０１０１】
本発明者らは、メタノール抽出（抽出物Ｍ）、エタノール９０抽出（抽出物Ｅ）およびイソプロパノール９０抽出（抽出物Ｉ）により得られた本発明による３種類の痩果抽出物のＵＰＬＣ（図２参照）およびＧＣ（図４、５および６参照）が同様であると決定することができた。
【０１０２】
結論：
ＵＰＬＣおよびＧＣ−ＭＳにより行われた種々の分析は、以下の特徴を実証することを可能とした。
・「シリマリンクロマトグラム」（図１参照）：  これらのクロマトグラムの比較は以下のことを実証する：
→本発明によるイソプロパノール９０痩果抽出物（抽出物Ｉ）は、事実上、シリマリン、特に極性フラボリグナンを含有しない；
→従来技術によるエタノール抽出物（抽出物Ａ）は、それに関する限りシリマリンが豊富である。それは２８質量％のシリマリンと滴定される。
・「リノール酸クロマトグラム」（図３参照）：  リノール酸は７．７４２分にピークがある。従来技術によるエタノール痩果抽出物（抽出物Ａ）は、本発明によるイソプロパノール９０抽出物（抽出物Ｉ）と異なり、事実上リノール酸を欠くことに留意されたい。
・さらに、本発明者らはまた、メタノール、エタノール９０およびイソプロパノール９０抽出により得られた本発明による３種類の痩果抽出物（抽出物Ｍ、ＥおよびＩ）のＵＰＬＣ（図２参照）およびＧＣ（図４、５および６参照）プロフィールは極めて類似していることを実証することができた。
【０１０３】
２．本発明による組成物
実施例１で調製された抽出物は、イソプロパノール／ＰＥＧ  ３００混合物（１：１）（ｗ／ｗ）中７％（ｗ／ｖ）で処方された。得られた組成物は、皮膚への局所適用により種々の臨床試験で使用された（以下の実施例３〜６参照）。
【０１０４】
本発明による抽出物はまた、以下の処方に従って、例えば、漿液の形態で処方することができる。
【０１０５】
【表４】
2019524677.tif 000006
【０１０６】
３．座瘡の処置における比較臨床試験
７名の座瘡患者を、以下の計画に従い、シリマリンが低い本発明によるマリアアザミ痩果抽出物（抽出物Ｉ、ＭまたはＥ）またはシリマリンが豊富な従来技術によるマリアアザミ痩果抽出物（抽出物Ａ）を含んでなる実施例２から得られた組成物で順次処置した：
−第１相：シリマリンが低い（５．６４±０．０１μｇ／ｇ）本発明によるマリアアザミ痩果抽出物Ｍを含有する組成物で１８週間処置、その後、
−第２相：シリマリンが豊富な（２３．２１±２．０３ｍｇ／ｇ）従来技術によるマリアアザミ痩果抽出物Ａを含有する組成物で１２週間処置、その後
−第３相：シリマリンが低い本発明によるマリアアザミ痩果抽出物Ｅを含有する組成物で１８週間処置、その後、
−第４相：シリマリンが豊富な従来技術によるマリアアザミ痩果抽出物Ａを含有する組成物で６週間処置、その後、
−第５相：シリマリンが低い本発明によるマリアアザミ痩果抽出物Ｉを含有する組成物で６週間処置。
【０１０７】
得られた治療効果の分析は、ＦＤＡ（米国食品医薬品局）により承認され、臨床皮膚科専門家により適用される(Guidance for Industry Acne Vulgaris: Developing Drugs for Treatment)全般的臨床状態分析法ＩＧＡ（治験医師による全般的評価(Investigator Global Assessment)）に従って行った。
【０１０８】
このような方法によれば、診察された座瘡の重篤度に従って以下のＩＧＡグレードが割り当てられる。
【０１０９】
【表５】
2019524677.tif 000007
【０１１０】
７名の患者に関して見られた平均結果を図７に示す。
【０１１１】
この図は、シリマリンが低い本発明によるマリアアザミ痩果抽出物による第１の処置相中に、ＦＤＡ基準に従って「奏効」に相当する座瘡の臨床状態の顕著な改善が見られることを示し、処置の例外的な期間（１８週間）を考慮すれば効果の顕著な安定性を伴う。
【０１１２】
シリマリンが豊富な従来技術によるマリアアザミ痩果抽出物による第２の処置相に移行すると、ＦＤＡ基準に従って「奏効無し」に相当する、病変の再発を伴う有効性の低下が見られる。
【０１１３】
同じ所見が続いての第３相、第４相および第５相でも得られた。
【０１１４】
これらの臨床所見は、微量のシリマリン濃度を含有する組成物は顕著な臨床治療効果を示すが、高シリマリン濃度を含有する組成物は臨床状態を増悪させて再発を引き起こす傾向があるので、見られた臨床治療効果がシリマリンに関連しないことを明らかに示す。
【０１１５】
よって、シリマリンが豊富な従来技術によるマリアアザミ痩果抽出物による処置は、臨床状態の劣化を引き起こすが、シリマリンが低い本発明によるマリアアザミ痩果抽出物による処置は著しい改善を提供する。
【０１１６】
よって、見られた臨床結果は、座瘡の再発をもたらすシリマリンが豊富な従来技術による抽出物に比べて、無視できる量のシリマリンを含有する本発明による抽出物を用いた場合に有効性が優れていることを実証する。
【０１１７】
４．成人座瘡の処置における臨床試験
１１名の成人座瘡患者を、シリマリンが低い本発明によるマリアアザミ痩果抽出物を含んでなる実施例２から得られた組成物で１８週間処置した。
【０１１８】
得られた治療効果の分析は、実施例３と同様に、ＦＤＡ（米国食品医薬品局）により承認され、臨床皮膚科専門家により適用される(Guidance for Industry Acne Vulgaris: Developing Drugs for Treatment)全般的臨床状態分析法ＩＧＡ（治験医師による全般的評価(Investigator Global Assessment)）に従って行った。
【０１１９】
得られた結果を図８および下表に示す。
【０１２０】
【表６】
2019524677.tif 000008
【０１２１】
これらの結果は、成人座瘡の臨床状態において顕著な改善を示し、１１名中７名で、ＦＤＡ基準に従って「奏効」に相当する２グレードの軽減ならびに処置の例外的な期間（１８週間）を考慮すれば効果の顕著な安定性を伴った。
【０１２２】
これらの臨床所見は、成人座瘡に対する本発明による抽出物の明白な臨床治療効果を示す。
【０１２３】
５．十代座瘡の処置における臨床試験
十代座瘡を患う１０名の十代患者（１５〜１８歳）を、シリマリンが低い本発明によるマリアアザミ痩果抽出物を含んでなる、実施例２から得られた組成物で１８週間処置した。
【０１２４】
得られた治療効果の分析は、実施例３と同様に、ＦＤＡ（米国食品医薬品局）により承認され、臨床皮膚科専門家により適用される(Guidance for Industry Acne Vulgaris: Developing Drugs for Treatment)全般的臨床状態分析法ＩＧＡ（治験医師による全般的評価(Investigator Global Assessment)）に従って行った。
【０１２５】
得られた結果を図９および下表に示す。
【０１２６】
【表７】
2019524677.tif 000009
【０１２７】
これらの結果は、十代座瘡の臨床状態における顕著な改善を示し、１０名中８名で、ＦＤＡ基準に従って「奏効」に相当する２グレードの軽減ならびに処置の例外的な期間（１８週間）を考慮すれば効果の顕著な安定性を伴った。
【０１２８】
これらの臨床所見は、十代座瘡に対する本発明による抽出物の明白な臨床治療効果を示す。
【０１２９】
６．場合により脂漏症を伴う酒さの処置における臨床試験
場合により脂漏症を伴う酒さを患う９名の患者を、シリマリンが低い本発明によるマリアアザミ痩果抽出物を含んでなる、実施例２から得られた組成物で１８週間処置した。
【０１３０】
得られた治療効果の分析は、実施例３と同様に、座瘡に関するＦＤＡ（米国食品医薬品局）により承認され、臨床皮膚科専門家により酒さに適合された(Guidance for Industry Acne Vulgaris: Developing Drugs for Treatment)全般的臨床状態分析法ＩＧＡ（治験医師による全般的評価(Investigator Global Assessment)）に従って行った。
【０１３１】
得られた結果を図１０および下表に示す。
【０１３２】
【表８】
2019524677.tif 000010
【０１３３】
これらの結果は、総ての患者に関して酒さの臨床状態の顕著な改善ならびに処置の例外的な期間（１８週間）を考慮すれば効果の顕著な安定性を示す。この全般的な改善は、この病態の種々の臨床パラメーター(Wilkin et al. 2004)：血管成分、炎症成分、丘疹濃胞成分に対する、およびさらにこれらの症例では「混合型顔面皮膚炎」型の脂漏性皮膚炎（ＳＤ）を具体的に示す脂漏性成分に対する顕著な効果に相当する。この脂漏性皮膚炎は、この病態の典型的な領域、すなわち、顔面の凸部に酒さ病変を、また、B. Cribier in Traite Francophone de Dermatologie 第5版(Cribier B. Dermatoses faciales page 861 in Dermatologie et IST, 第5版Elsevier Masson 2009)に記載されているようなひだ領域に脂漏性皮膚炎病変を関連付ける。
【０１３４】
これらの臨床所見は、場合により脂漏症を伴う酒さに対する本発明による抽出物の明白な臨床治療効果を示す。
【０１３５】
７．ｉｎ  ｖｉｔｒｏ比較試験
本試験では、培養培地中０．０３％（ｗ／ｖ）濃度のイソプロパノールマリアアザミ痩果抽出物、すなわち、本発明によるマリアアザミ痩果抽出物、および従来技術によるマリアアザミ痩果抽出物Ａを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて初代ヒト皮脂細胞培養物（Ｚｅｎｂｉｏ，Ｉｎｃ．  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，ＮＣ）で連続３日間試験した（毎日培地を交換）。最終処置の２４時間後に、細胞を採取し、ＲＮＡを抽出した。
【０１３６】
ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）分析は、２つの皮脂産生酵素遺伝子ＦＡＤＳ２およびＳＣＤ１の発現レベルの測定を可能とした。これら２つの酵素は、皮脂の特定の脂質の合成に関与し、その阻害は皮脂腺活性に低下を誘導することが知られている。少なくとも５回の実験から得られた、その溶媒（その培養培地中での濃度が１％であるイソプロパノール）に関するこれら２つの遺伝子の平均阻害結果（変化倍率）を図１１に示し、２倍の阻害が有意であると見なされる。
【０１３７】
よって、これらの結果は、シリマリンが豊富な従来技術によるマリアアザミ痩果抽出物とは異なり、シリマリンが低い本発明によるマリアアザミ痩果抽出物は、これら２つの遺伝子の発現を有意に阻害することを示す。
【０１３８】
書誌参照
Berardesca et al. “Combined effects of silymarin and methylsulfonylmethane in the management of rosacea: clinical and instrumental evaluation” Journal of Cosmetic Dermatology 2008, 7, 8_14 Cribier B. Dermatoses faciales page 861 in Dermatologie et IST, 5th edition Elsevier Masson 2009 
“Guidance for Industry Acne Vulgaris: Developing Drugs for Treatment” Draft guidance, U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research (CDER), September 2005.
Hermenean et al. “Antioxidant and hepatoprotective activity of milk thistle (Silybum marianum L. Gaertn.) seed oil” Open Life Sci. 2015, 10(1), 225-236.
Kuki et al. “Identification of Silymarin Consituents: An Improved HPLC-MS Method” Chromatographia 2012, 75:175-180.
Sahib et al. “Effects of Oral Antioxidants on Lesion Counts Associated with Oxidative Stress and Inflammation in Patients with Papulopustular Acne” J. Clin. Exp. Dermatol. Res. 2012, 3:5.
Wilkin et al. “Standard grading system for rosacea: Report of the National Rosacea Society Expert Committee on the Classification and Staging of Rosacea” J. Am. Acad. Dermatol. 2004, 50:907-12.
Zheng et al. “Application of response surface methodology to optimize microwave-assisted extraction of silymarin from milk thistle seeds” Sep. Purif. Technol. 2009, 70:34-40.
Zhu et al. “Silybum marianum oil attenuates oxidative stress and ameliorates mitochondrial dysfunction in mice treated with D-galactose” Pharmacogn Mag. 2014, 10 (Suppl. 1), S92-S99.
【図１】
2019524677.tif 000011
【図２】
2019524677.tif 000012
【図３】
2019524677.tif 000013
【図４】
2019524677.tif 000014
【図５】
2019524677.tif 000015
【図６】
2019524677.tif 000016
【図７】
2019524677.tif 000017
【図８】
2019524677.tif 000018
【図９】
2019524677.tif 000019
【図１０】
2019524677.tif 000020
【図１１】
2019524677.tif 000021
【国際調査報告】
2019524677.tif 000022
2019524677.tif 000023
2019524677.tif 000024