(57)【要約】キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを含むナノ粒子を含む組成物であって、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が約６：１未満である、組成物と、当該ナノ粒子を作製する方法および使用する方法とが、本明細書中で開示されている。さらに、化学療法薬抵抗性癌などの癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含む組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬を含む、方法が記載されている。また、記載されるナノ粒子を含む医薬組成物、製造品、およびキットも記載されている。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを含むナノ粒子を含む組成物であって、前記キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、
前記ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が約６：１未満である、
組成物。
【請求項２】
前記ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約４：１から約６：１未満である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物中のナノ粒子の大きさの平均が、約５０ｎｍ以下である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約４：１から約６：１未満である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記二本鎖オリゴヌクレオチドがＤＮＡである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記二本鎖オリゴヌクレオチドがＲＮＡである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記二本鎖オリゴヌクレオチドが、約１０塩基対〜約１００塩基対の長さである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記二本鎖オリゴヌクレオチドが、小分子薬物に結合している、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記小分子薬物が、前記二本鎖オリゴヌクレオチドにインターカレートしている、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ナノ粒子組成物中の二本鎖オリゴヌクレオチドの小分子薬物に対するモル比が、約１：１〜約１：６０である、請求項９または１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記小分子薬物が化学療法剤である、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記小分子薬物が、アントラサイクリンまたはタキサンである、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記小分子薬物がドキソルビシンである、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記細胞標的化セグメントが、癌細胞に結合する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記細胞標的化セグメントが、細胞表面に発現したＨＥＲ３に結合する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記細胞標的化セグメントが、ヘレグリン配列またはそのバリアントを含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ペントンベースセグメントが、変異体のペントンベースポリペプチドを含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ペントンベースセグメントが、切断型のペントンベースポリペプチドを含む、請求項１８または１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記オリゴヌクレオチド結合セグメントが、正に荷電している、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記オリゴヌクレオチド結合セグメントが、ポリリジンを含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記オリゴヌクレオチド結合セグメントが、デカリジン（ｄｅｃａｌｙｓｉｎｅ）を含む、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２４】
請求項１〜２３のいずれか１項に記載の組成物と、使用説明書とを含むキット。
【請求項２５】
対象の癌を治療する方法であって、請求項１２〜２４のいずれか１項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２６】
前記癌が、ＨＥＲ３＋癌である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記癌が、薬物抵抗性癌である、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記癌が、乳癌、グリアの癌、卵巣癌、または前立腺癌である、請求項２５〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記癌が、トリプルネガティブ乳癌である、請求項２５〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記癌が転移性である、請求項２５〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記癌が、ＨＥＲ２＋抗体化学療法剤、ラパチニブ、タキサン、またはアントラサイクリンに抵抗性である、請求項２５〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記癌が、ドキソルビシンまたはリポソーマルドキソルビシンに抵抗性である、請求項２５〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記癌が、トラスツズマブまたはペルツズマブに抵抗性である、請求項２５〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記癌が、ラパチニブに抵抗性である、請求項２５〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
化学療法薬抵抗性癌細胞を殺滅する方法であって、前記化学療法薬抵抗性癌細胞を、複数のナノ粒子と接触させることを含み、前記ナノ粒子が、
細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；
前記オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド；ならびに
前記二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬
を含む、方法。
【請求項３６】
化学療法薬抵抗性癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含む組成物を前記対象に投与することを含み、前記ナノ粒子が、
細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；
前記オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド；ならびに
前記二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬
を含む、方法。
【請求項３７】
前記化学療法薬が、前記二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートしている、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記化学療法薬抵抗性癌が、ＨＥＲ３＋癌である、請求項３５〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記化学療法薬抵抗性癌が、乳癌、グリアの癌、卵巣癌、または前立腺癌である、請求項３５〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記化学療法薬抵抗性癌が、トリプルネガティブ乳癌である、請求項３５〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記化学療法薬抵抗性癌が転移性である、請求項３５〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記化学療法薬抵抗性癌が、ＨＥＲ２＋抗体化学療法剤、ラパチニブ、タキサン、またはアントラサイクリンに抵抗性である、請求項３５〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記化学療法薬抵抗性癌が、ドキソルビシンまたはリポソーマルドキソルビシンに抵抗性である、請求項３５〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記化学療法薬抵抗性癌細胞が、トラスツズマブまたはペルツズマブに抵抗性である、請求項３５〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記化学療法薬抵抗性癌細胞が、ラパチニブに抵抗性である、請求項３５〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
前記ナノ粒子の大きさの平均が、約５０ｎｍ以下である、請求項３５〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
前記二本鎖オリゴヌクレオチドがＤＮＡである、請求項３５〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
前記二本鎖オリゴヌクレオチドがＲＮＡである、請求項３５〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
ナノ粒子組成物を作製する方法であって、
キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを約６：１未満のモル比で組み合わせることにより、複数のナノ粒子を形成すること
を含み、
前記キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含む、
方法。
【請求項５０】
前記キャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約４：１から約６：１未満である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記キャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約４：１である、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記二本鎖オリゴヌクレオチドおよび前記キャリアポリペプチドを組み合わせる前に、前記二本鎖オリゴヌクレオチドおよび小分子薬物を組み合わせることをさらに含む、請求項４９〜５１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
前記二本鎖オリゴヌクレオチドおよび前記小分子薬物を、約１：１〜約１：６０のモル比で組み合わせる、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記二本鎖オリゴヌクレオチドおよび前記小分子薬物を、約１：１０または約１：４０のモル比で組み合わせる、請求項５２または５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記二本鎖オリゴヌクレオチドおよび前記キャリアポリペプチドを組み合わせる前に、前記二本鎖オリゴヌクレオチドから未結合の小分子薬物を分離することをさらに含む、請求項５２〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
前記複数のナノ粒子から、未結合のキャリアポリペプチドまたは未結合の二本鎖オリゴヌクレオチドを分離することをさらに含む、請求項４９〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
前記ナノ粒子組成物を濃縮することをさらに含む、請求項４９〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
前記二本鎖オリゴヌクレオチドがＤＮＡである、請求項４９〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
前記二本鎖オリゴヌクレオチドがＲＮＡである、請求項４９〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
前記二本鎖オリゴヌクレオチドが、約１０塩基対〜約１００塩基対の長さである、請求項４９〜５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６１】
前記小分子薬物が化学療法剤である、請求項４９〜６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
前記小分子薬物が、アントラサイクリンまたはタキサンである、請求項４９〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６３】
前記小分子薬物がドキソルビシンである、請求項４９〜６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
前記細胞標的化セグメントが、ヘレグリン配列またはそのバリアントを含む、請求項４９〜６３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６５】
前記細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む、請求項４９〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６６】
前記ペントンベースセグメントが、変異体のペントンベースを含む、請求項４９〜６５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
前記ペントンベースセグメントが、切断型のペントンベースを含む、請求項４９〜６６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
前記オリゴヌクレオチド結合セグメントが、正に荷電している、請求項４９〜６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
前記オリゴヌクレオチド結合セグメントが、ポリリジンを含む、請求項４９〜６８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７０】
前記オリゴヌクレオチド結合セグメントが、デカリジンを含む、請求項４９〜６９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７１】
請求項４９〜７０のいずれか１項に記載の方法により作製したナノ粒子組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１６年５月２７日に出願した、表題「ＤＲＵＧ−ＤＥＬＩＶＥＲＹ  ＮＡＮＯＰＡＲＴＩＣＬＥＳ  ＡＮＤ  ＴＲＥＡＴＭＥＮＴＳ  ＦＯＲ  ＤＲＵＧ−ＲＥＳＩＳＩＴＡＮＴ  ＣＡＮＣＥＲ」の米国仮特許出願第６２／３４２，８２９号に対する優先権を主張するものであり、これはすべての目的のため本明細書中参照として援用されている。
【０００２】
連邦政府助成研究に関する声明
本発明は、米国国立衛生研究所により与えられた助成金番号第ＣＡ１２９８２２号の下、政府の支援を受けてなされたものである。米国政府は、本発明に特定の権利を有している。
【０００３】
ＡＳＣＩＩテキストファイルとしての配列表の提出
以下のＡＳＣＩＩテキストファイルでの提出物の内容全体は、本明細書中参照として援用されている：コンピュータ可読形態（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７６１５４２０００７４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、記録日：２０１７年５月２６日、大きさ：１９ＫＢ）。
【０００４】
技術分野
本発明は、化学療法薬抵抗性癌を含む癌の治療のための方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００５】
小分子化学療法剤または抗体化学療法剤などの化学療法薬治療に対する癌の抵抗性は、癌のタイプにより起こり得るか、または薬物への曝露後に生じ得る。薬物抵抗性は、たとえば、薬物代謝の変化または細胞表面受容体などの薬物標的の発現の多様性により生じ得る。薬物の用量の増大は、ある程度有効であるに過ぎず、多くの場合では、薬物の望ましくない副作用を高める。よって、多くの場合、薬物療法は、特定の期間でのみ有効であるとしても、薬物がその有効性を失う前の患者または特定の癌のタイプに限られる。
【０００６】
ドキソルビシンは、複製している細胞のＤＮＡにインターカレートし、それらの分裂を防止することにより治療効果を発揮する、例示的な小分子化学療法薬である。しかしながらドキソルビシンは、いくつかの有害事象を有し、そのうち最も顕著な事象は、心毒性（ｃａｒｄｉａｃ  ｎａｔｕｒｅ）および手足症候群であり、ヒトへの投与に関するその使用および／または用量の上限が限定されている。ドキソルビシンを患者にとってより好ましいものにするためにいくつかの試みがなされてきた。最も成功したドキソルビシンの製剤の１つは、リポソーマル製剤であり、ＤＯＸＩＬ（登録商標）、または「ＬｉｐｏＤｏｘ」としてのジェネリックのリポソーマルドキソルビシンとして商品化されている。しかしながら、この製剤は、この投与に応答すべき疾患の治療においてドキソルビシンの使用を限定する欠点を有する。
【０００７】
トラスツズマブは、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）として販売されており、多くの（全てではない）乳癌細胞タイプの表面に存在するＨＥＲ２に結合する抗体化学療法剤である。しかしながらまた、トラスツズマブ抵抗性癌が治療開始後に生じ得ることから、治療の有効性が限定される。
【０００８】
本明細書中参照されるすべての刊行物、特許、および特許出願の開示の全体は、本明細書中参照として援用されている。
【発明の概要】
【０００９】
本明細書中、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを含むナノ粒子を含む組成物であって、上記キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、上記ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が約６：１未満である、組成物を記載する。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約４：１から約６：１未満である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約４：１である。
【００１０】
一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００１１】
一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満である。一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約４：１から約６：１未満である。一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約４：１または約５：１である。一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約４：１である。
【００１２】
一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドはＤＮＡである。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドはＲＮＡである。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約１０塩基対〜約１００塩基対の長さである。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基対の長さである。
【００１３】
一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは小分子薬物に結合している。一部の実施形態では、小分子薬物は、二本鎖オリゴヌクレオチドにインターカレートしている。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中の二本鎖オリゴヌクレオチドの小分子薬物に対するモル比は、約１：１〜約１：６０である。一部の実施形態では、小分子薬物は化学療法剤である。一部の実施形態では、小分子薬物はアントラサイクリンである。一部の実施形態では、小分子薬物はドキソルビシンである。
【００１４】
一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、哺乳類細胞に結合する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、疾患細胞に結合する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは癌細胞に結合する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、細胞の表面に発現したＨＥＲ３に結合する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、ヘレグリン配列またはそのバリアントを含む。
【００１５】
一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む。一部の実施形態では、ペントンベースセグメントは、変異体のペントンベースポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ペントンベースセグメントは、切断型のペントンベースポリペプチドを含む。
【００１６】
一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド結合セグメントは、正に荷電している。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド結合セグメントは、ポリリジンを含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド結合セグメントは、デカリジン（ｄｅｃａｌｙｓｉｎｅ）を含む。
【００１７】
一部の実施形態では、本組成物は無菌性である。一部の実施形態では、本組成物は液体の組成物である。一部の実施形態では、本組成物は、乾燥した組成物である。一部の実施形態では、本組成物は凍結乾燥されている。
【００１８】
一部の実施形態では、記載の組成物のいずれか１つをバイアル中に含む製造品を提供する。一部の実施形態では、このバイアルは密閉されている。
【００１９】
一部の実施形態では、記載の組成物のいずれか１つと、使用説明書とを含むキットを提供する。
【００２０】
一部の実施形態では、対象の癌を治療する方法であって、本明細書中記載の組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は薬物抵抗性癌である。一部の実施形態では、この癌は、乳癌、グリアの癌、卵巣癌、または前立腺癌である。一部の実施形態では、この癌はトリプルネガティブ乳癌である。一部の実施形態では、この癌は転移性である。一部の実施形態では、この癌は、ＨＥＲ２＋抗体化学療法剤、ラパチニブ、またはアントラサイクリンに抵抗性である。一部の実施形態では、この癌は、ドキソルビシンまたはリポソーマルドキソルビシンに抵抗性である。一部の実施形態では、この癌は、トラスツズマブまたはペルツズマブに抵抗性である。一部の実施形態では、この癌は、ラパチニブに抵抗性である。
【００２１】
また本明細書中、化学療法薬抵抗性癌細胞を殺滅する方法であって、上記化学療法薬抵抗性癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬を含む、方法を提供する。
【００２２】
別の態様では、本明細書中、化学療法薬抵抗性癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含む組成物を上記対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬を含む、方法を提供する。
【００２３】
一部の実施形態では、化学療法薬は、二本鎖オリゴヌクレオチドにインターカレートしている。
【００２４】
一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は、乳癌、グリアの癌、卵巣癌、または前立腺癌である。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌はトリプルネガティブ乳癌である。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は転移性である。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は、アントラサイクリンまたはラパチニブに抵抗性である。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は、ドキソルビシンまたはリポソーマルドキソルビシンに抵抗性である。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌細胞は、ＨＥＲ２＋抗体化学療法剤に抵抗性である。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌細胞は、トラスツズマブまたはペルツズマブに抵抗性である。
【００２５】
一部の実施形態では、化学療法剤はアントラサイクリンである。一部の実施形態では、化学療法剤はドキソルビシンである。
【００２６】
一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００２７】
一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドはＤＮＡである。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドはＲＮＡである。
【００２８】
別の態様では、ナノ粒子組成物を作製する方法であって、約６：１未満のモル比でキャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを組み合わせることにより、複数のナノ粒子を形成することを含み、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、キャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約４：１から約６：１未満である。一部の実施形態では、キャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約４：１である。
【００２９】
一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００３０】
一部の実施形態では、本方法は、二本鎖オリゴヌクレオチドおよびキャリアポリペプチドを組み合わせる前に、二本鎖オリゴヌクレオチドおよび小分子薬物を組み合わせることをさらに含む。一部の実施形態では、小分子薬物は、二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートする。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドおよび小分子薬物を、約１：１〜約１：６０のモル比で組み合わせる。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドおよび小分子薬物を、約１：１０または約１：４０のモル比で組み合わせる。
【００３１】
一部の実施形態では、本方法は、二本鎖オリゴヌクレオチドおよびキャリアポリペプチドを組み合わせる前に、二本鎖オリゴヌクレオチドから未結合の小分子薬物を分離することをさらに含む。
【００３２】
一部の実施形態では、本方法は、複数のナノ粒子から、未結合のキャリアポリペプチドまたは未結合の二本鎖オリゴヌクレオチドを分離することをさらに含む。
【００３３】
一部の実施形態では、本方法は、ナノ粒子組成物を濃縮することをさらに含む。
【００３４】
一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドはＤＮＡである。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドはＲＮＡである。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約１０塩基対〜約１００塩基対の長さである。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基対の長さである。
【００３５】
一部の実施形態では、小分子薬物は化学療法剤である。一部の実施形態では、小分子薬物はアントラサイクリンである。一部の実施形態では、小分子薬物はドキソルビシンである。
【００３６】
一部の実施形態では、細胞標的化セグメントはヘレグリン配列またはそのバリアントを含む。一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む。一部の実施形態では、ペントンベースセグメントは、変異体ペントンベースを含む。一部の実施形態では、ペントンベースセグメントは、切断型のペントンベースを含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド結合セグメントは、正に荷電している。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド結合セグメントは、ポリリジンを含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド結合セグメントは、デカリジンを含む。
【００３７】
さらに、本明細書中記載の方法のいずれか１つにより作製したナノ粒子組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】細胞標的化ドメイン、細胞貫通ドメイン、およびオリゴヌクレオチド結合ドメインを含むキャリアポリペプチドの図を例示する。キャリアポリペプチドを二本鎖オリゴヌクレオチドと組み合わせると、ナノ粒子が形成される。任意選択で、二本鎖オリゴヌクレオチドは、小分子薬物とあらかじめ結合している。
【図２】例示的なＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドを二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド（ドキソルビシンと結合）と、２：１、３：１、４：１、５：１、または６：１のモル比で組み合わせた後の平均粒径（動的光散乱法により決定）を表している。ＨｅｒＰＢＫ１０単独およびドキソルビシンに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド単独を、比較として示す。
【図３】例示的なＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドと、ドキソルビシンと結合した二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドを、４：１：１０、４：１：４０、および６：１：１０（ＨｅｒＰＢＫ１０対ｄｓＤＮＡ対ドキソルビシン）のモル比で組み合わせた後に形成されたナノ粒子の低温電子顕微鏡（「ｃｒｙｏＥＭ」）の画像を示している。形成された粒子は、ほぼ等しい大きさおよび形態である。
【図４】ドキソルビシンを有さないナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡのモル比が４：１であり、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ」と呼ぶ）、ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンのモル比が４：１：４０であるナノ粒子（「Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）」と呼ぶ）、ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンのモル比が６：１：１０であるナノ粒子（「Ｅｏｓ−００１（６：１：１０）」と呼ぶ）、またはＬｉｐｏＤｏｘに曝露した後の、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５ヒト癌細胞の生存に及ぼす効果を示す。薬物の濃度は、ドキソルビシンの濃度を表す。「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ」の投入量は、様々なＥＯＳ−００１処置濃度でのＥＯＳ−００１（４：１：４０）の相対的なタンパク質含有量に基づき正規化した。挿入図は、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞の表面のＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４の相対量を表している。
【図５Ａ】ドキソルビシンを有さないナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡのモル比が４：１であり、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ」と呼ぶ）、ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンのモル比が４：１：４０であるナノ粒子「Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）」と呼ぶ）、ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンのモル比が６：１：１０であるナノ粒子（「Ｅｏｓ−００１（６：１：１０）」と呼ぶ）、またはＬｉｐｏＤｏｘに曝露した後の、ＢＴ４７４ヒト乳癌細胞の生存に及ぼす効果を示す。薬物の濃度は、ドキソルビシンの濃度（または「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ」の場合では、同じ量のＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドに関してＥｏｓ−００１（４：１：４０）に存在するドキソルビシンの当量）を表す。挿入図は、ＢＴ４７４細胞の表面のＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４の相対量を表している。
【図５Ｂ】ドキソルビシンを有さないナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡのモル比が４：１であり、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（４：１）」と呼ぶ；もしくはＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡのモル比が６：１、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（６：１）」と呼ぶ）、ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンのモル比が４：１：４０であるナノ粒子（「Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）」と呼ぶ）、ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンのモル比が６：１：１０であるナノ粒子（「Ｅｏｓ−００１（６：１：１０）」と呼ぶ）、またはＬｉｐｏＤｏｘに曝露した後の、ＢＴ４７４−Ｒトラスツズマブ抵抗性ヒト乳癌細胞の生存に及ぼす効果を示す。薬物の濃度は、ドキソルビシンの濃度（または「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（４：１）」の場合では、同じ量のＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドに関してＥｏｓ−００１（４：１：４０）に存在するドキソルビシンの当量、および、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（６：１）」の場合では、同じ量のＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドに関して「Ｅｏｓ−００１（６：１：１０）」に存在するドキソルビシンの当量）を表す。挿入図は、ＢＴ４７４細胞およびＢＴ４７４−Ｒ細胞の表面のＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４の相対量を表している。
【図６】ドキソルビシンを有さないナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡのモル比が４：１であり、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（４：１）」と呼ぶ；もしくはＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡのモル比が６：１であり、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（６：１）」と呼ぶ）、ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンのモル比が４：１：４０であるナノ粒子（「Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）」と呼ぶ）、ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンのモル比が６：１：１０であるナノ粒子（「Ｅｏｓ−００１（６：１：１０）」と呼ぶ）、またはＬｉｐｏＤｏｘに曝露した後の、ＪＩＭＴ１ヒト乳癌細胞の生存に及ぼす効果を示す。薬物の濃度は、ドキソルビシンの濃度（または「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（４：１）」の場合では、同じ量のＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドに関してＥｏｓ−００１（４：１：４０）に存在するドキソルビシンの当量、および、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（６：１）」の場合では、同じ量のＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドに関してＥｏｓ−００１（６：１：１０）に存在するドキソルビシンの当量）を表す。挿入図は、ＪＩＭＴ１細胞の表面のＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４の相対量を表している。
【図７】ドキソルビシンを有さないナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡのモル比が４：１であり、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（４：１）」と呼ぶ；もしくはＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡのモル比が６：１であり、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（６：１）」と呼ぶ）、ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンのモル比が４：１：４０であるナノ粒子（「Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）」と呼ぶ）、ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンのモル比が６：１：１０であるナノ粒子（「Ｅｏｓ−００１（６：１：１０）」と呼ぶ）、またはＬｉｐｏＤｏｘに曝露した後の、Ｕ２５１ヒトグリオーマ細胞の生存に及ぼす効果を示す。薬物の濃度は、ドキソルビシンの濃度（または「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（４：１）」の場合では、同じ量のＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドに関してＥｏｓ−００１（４：１：４０）に存在するドキソルビシンの当量、および、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（６：１）」の場合では、同じ量のＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドに関してＥｏｓ−００１（６：１：１０）に存在するドキソルビシンの当量）を表す。挿入図は、Ｕ２５１細胞の表面のＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４の相対量を表している。
【図８】ドキソルビシンを有さないナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡのモル比が４：１であり、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ」と呼ぶ）、ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンのモル比が４：１：４０であるナノ粒子（「Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）」と呼ぶ）、またはＬｉｐｏＤｏｘに曝露した後の、Ａ２７８０−ＡＤＲドキソルビシン抵抗性ヒト卵巣癌細胞の生存に及ぼす効果を示す。薬物の濃度は、ドキソルビシンの濃度（または「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ」の場合では、同じ量のＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドに関してＥｏｓ−００１（４：１：４０）に存在するドキソルビシンの当量）を表す。
【図９】ドキソルビシンを有さないナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡのモル比が４：１であり、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ」と呼ぶ）、ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンのモル比が４：１：４０であるナノ粒子（「Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）」と呼ぶ）、またはＬｉｐｏＤｏｘに曝露した後の、４Ｔ１マウストリプルネガティブ乳癌細胞の生存に及ぼす効果を示す。薬物の濃度は、ドキソルビシンの濃度（または「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ」の場合では、同じ量のＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドに関してＥｏｓ−００１（４：１：４０）に存在するドキソルビシンの当量）を表す。
【図１０】ドキソルビシンを有さないナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡのモル比が４：１であり、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ」と呼ぶ）、ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンのモル比が４：１：４０であるナノ粒子（「Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）」と呼ぶ）、またはＬｉｐｏＤｏｘに曝露した後の、ＳＫＯＶ３ヒト卵巣癌細胞の生存に及ぼす効果を示す。薬物の濃度は、ドキソルビシンの濃度（または「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ」の場合では、同じ量のＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドに関してＥｏｓ−００１（４：１：４０）に存在するドキソルビシンの当量）を表す。
【図１１Ａ】ドキソルビシンを有さないナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡのモル比が４：１であり、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ」と呼ぶ）、ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンのモル比が４：１：４０であるナノ粒子（「Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）」と呼ぶ）、またはＬｉｐｏＤｏｘに曝露した後の、ＬＮＣａＰ−ＧＦＰヒト前立腺癌細胞の生存に及ぼす効果を示す。薬物の濃度は、ドキソルビシンの濃度（または「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ」の場合では、同じ量のＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドに関してＥｏｓ−００１（４：１：４０）に存在するドキソルビシンの当量）を表す。
【図１１Ｂ】ドキソルビシンを有さないナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡのモル比が４：１であり、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ」と呼ぶ）、ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンのモル比が４：１：４０であるナノ粒子（「Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）」と呼ぶ）、またはＬｉｐｏＤｏｘに曝露した後の、ＲＡＮＫＬヒト骨転移性前立腺癌細胞の生存に及ぼす効果を示す。薬物の濃度は、ドキソルビシンの濃度（または「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ」の場合では、同じ量のＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドに関してＥｏｓ−００１（４：１：４０）に存在するドキソルビシンの同等量）を表す。
【図１１Ｃ】ＬＮＣａＰ−ＧＦＰヒト前立腺癌細胞およびＲＡＮＫＬヒト骨転移性前立腺癌細胞の表面に発現したＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４の相対量を示す。
【図１２Ａ】ドキソルビシンを有さないナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡのモル比が４：１であり、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ」と呼ぶ）、Ｅｏｓ−００１のナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンが４：１：４０）、またはＬｉｐｏＤｏｘに曝露した後の、ＢＴ５４９ヒトトリプルネガティブ乳癌細胞の生存に及ぼす効果を示す。薬物の濃度は、ドキソルビシンの濃度を表す（または「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ」の場合では、投入量は、様々なＥｏｓ−００１処置でのＥｏｓ−００１（４：１：４０）の相対的なタンパク質含有量に基づき正規化した）。
【図１２Ｂ】ＢＴ５４９細胞におけるＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４の相対的な発現を示す。
【図１３】ＢＴ４７４細胞またはＢＴ４７４−ＴＲ細胞に及ぼす、Ｅｏｓ−００１ナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０、ｄｓＤＮＡ、およびドキソルビシン）、トラスツズマブ、またはトラスツズマブおよびペルツズマブの組み合わせの効果を示す。
【図１４】ペルツズマブ、トラスツズマブ、Ｅｏｓ−００１ナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０、ｄｓＤＮＡ、およびドキソルビシン）、Ｅｏｓ−００１ナノ粒子およびペルツズマブの組み合わせ、またはペルツズマブでの４時間の前処置の後のＥｏｓ−００１ナノ粒子による処置の後の、トラスツズマブ抵抗性ＢＴ４７４−ＴＲ細胞の相対的な細胞生存を示す。
【図１５Ａ】ＢＴ４７４細胞株およびＳＫＢＲ３細胞株に関する親（すなわち非トラスツズマブ抵抗性）細胞およびトラスツズマブ抵抗性細胞における細胞表面での相対的なＨＥＲ３のレベルを示す。ＨＥＲ３は、親細胞株と比較してトラスツズマブ抵抗性細胞株で過剰発現している。
【図１５Ｂ】Ｅｏｓ−００１ナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０、ｄｓＤＮＡ、およびドキソルビシン）の、標的化の毒性に対するＨＥＲ３の寄与を示す。トラスツズマブ抵抗性または非トラスツズマブ抵抗性のＢＴ４７４細胞またはＳＫＢＲ３細胞を、ヒトＨＥＲ３ブロッキングペプチド（Ｐｒｏｓｐｅｃ）の存在下または非存在下で、Ｅｏｓ−００１によって処置した。
【図１６】トラスツズマブ、Ｅｏｓ−００１ナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０、ｄｓＤＮＡ、およびドキソルビシン）、または、４時間もしくは２４時間のトラスツズマブでの前処置の後のＥｏｓ−００１ナノ粒子による処置に応答した、非トラスツズマブ抵抗性細胞株（ＳＫＢＲ３（図１６Ａ）、ＢＴ４７４（図１６Ｂ）、またはＭＤＡ−ＭＢ−４３５（図１６Ｃ））、ならびにトラスツズマブ抵抗性細胞株（ＳＫＢＲ３−ＴＲ（図１６Ｄ）およびＢＴ４７４−ＴＲ（図１６Ｅおよび図１６Ｆ））の相対的な細胞生存を例示する。
【図１７】ラパチニブまたはＥｏｓ−００１ナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０、ｄｓＤＮＡ、およびドキソルビシン）による処置に応答した、ＢＴ−４７４細胞もしくはＳＫＢＲ３細胞、またはトラスツズマブ抵抗性のＢＴ４７４−ＴＲ細胞、ＳＫＢＲ３−ＴＲ細胞、もしくはＪＩＭＴ−１細胞の相対的な細胞生存を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
本明細書中、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを含むナノ粒子を含むナノ粒子組成物であって、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含む、ナノ粒子組成物を記載する。
【００４０】
一態様では、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを含むナノ粒子を含むナノ粒子組成物であって、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が約６：１未満である、ナノ粒子組成物を提供する。任意選択で、化学療法薬などの小分子薬物が、二本鎖オリゴヌクレオチドに結合している。キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを組み合わせることにより、安定したナノ粒子の形成がもたらされる。本明細書中さらに記載されるように、これら安定したナノ粒子が、本組成物（および／またはナノ粒子）中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が６：１未満である場合であっても形成できることが、見いだされている。ナノ粒子組成物は、たとえば、化学療法薬抵抗性癌を含む癌の治療において有用であり得る。
【００４１】
別の態様では、化学療法薬抵抗性癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含む組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬を含む、方法を提供する。多くのタイプの癌は、特定の化学療法薬、たとえばドキソルビシン、ラパチニブ、またはＨＥＲ２＋抗体（トラスツズマブもしくはペルツズマブなど）に抵抗性である。薬物の濃度の増大は、多くの場合、有効ではなく、有意な望ましくない副作用をもたらし得る。本明細書中さらに記載されるように、本ナノ粒子組成物は、化学療法薬抵抗性癌細胞を殺滅するため、および化学療法薬抵抗性癌を有する患者を治療するために使用することができる。
【００４２】
ドキソルビシンは、様々な悪性腫瘍を治療するために使用できる例示的な化学療法薬である。しかしながらその有用性は、細胞における薬物排出機構により限定されている。細胞の排出の課題を克服するためにドキソルビシンを高用量にすることは、心筋症を含む有意な副作用のため一般的には得策ではない。また、リポソーマルドキソルビシン（「ＬｉｐｏＤｏｘ」とも呼ばれている）は、細胞の取り込みを高めるために使用されているが、投与を続けていると有意な副作用がある。
【００４３】
本明細書中記載のナノ粒子を含む組成物が、リポソーマルドキソルビシンよりも標的とする癌細胞の殺滅に有効であることが、見いだされた。このナノ粒子はまた、抗体化学療法剤（抗ＨＥＲ２抗体、すなわちトラスツズマブなど）、または小分子化学療法剤、たとえばドキソルビシン（たとえばＬｉｐｏＤｏｘ）を含む化学療法薬に抵抗性がある癌細胞の殺滅にも有効である。よって、本明細書中記載のナノ粒子および組成物は、化学療法薬抵抗性癌を含む癌の治療に特に有用である。
【００４４】
定義
本明細書中使用される単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、特段文脈で明記されない限り複数形を含む。
【００４５】
本明細書中の「約」値またはパラメータへの言及は、この値またはパラメータ自体に対する変動を含む（および記載する）。たとえば、「約Ｘ」と表されている記載は、「Ｘ」の記載を含む。
【００４６】
用語「有効な」は、特段他の記載がない限り、これを使用する文脈の中で使用する場合に、意図した結果が、感染症もしくは疾患状態の治療、または本明細書中記載の別のものに関連するかどうかに関わらず、この結果をもたらすまたは生じさせる、ある量の化合物または構成要素を説明するために本明細書中で使用されている。
【００４７】
基準のポリペプチド配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、最大のパーセント配列同一性が得られるように配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後に、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮しない場合の、基準のポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義されている。パーセントアミノ酸配列同一性を決定することを目的とするアライメントは、当該分野の技能の範囲内にある様々な方法で、たとえば公開されているペアワイズシークエンスのコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者は、比較される配列の完全長にわたり最大のアライメントを達成するために必要とされるいずれかのアルゴリズムを含む、配列を整列させるための適切なパラメータを決定することができる。所定のアミノ酸配列Ｂに対する（ｔｏ、ｗｉｔｈ、またはａｇａｉｎｓｔ）、所定のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性（％）（あるいは、所定のアミノ酸配列Ｂに対して（ｔｏ、ｗｉｔｈ、またはａｇａｉｎｓｔ）特定の％アミノ酸配列同一性を有するまたは含む所定のアミノ酸配列Ａと表現することができる）を、以下のように計算する：
１００×分数Ｘ／Ｙ
（式中、Ｘは、配列アライメントプログラムによるＡおよびＢのそのプログラムのアライメントにおける同一のマッチとしてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂのアミノ酸残基の総数である）。  アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性と等しくないことが認識されている。
【００４８】
本明細書中使用される用語「薬学的に許容される」は、化合物または組成物が、疾患の重症度および治療の必要性の観点から、過度に有害な副作用を伴うことなく本明細書中記載の治療を達成するために、ヒトを含む対象への投与に適していることを意味している。
【００４９】
用語「対象」または「患者」は、哺乳類を説明するために本明細書中同義で使用されている。対象の例として、ヒト、または動物（限定するものではないが、イヌ、ネコ、げっ歯類（マウス、ラット、もしくはハムスターなど）、ウマ、ヒツジ、ウシ、ブタ、ヤギ、ロバ、ウサギ、もしくは霊長類（サル、チンパンジー、オランウータン、ヒヒ、もしくはマカクザルなど）を含む）が、挙げられる。
【００５０】
用語「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、および「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、少なくとも１つの症状の緩和、阻害、抑制、もしくは除去を介した病態の改善、疾患進行の遅延、疾患の再発の遅延、または疾患の阻害を含む、疾患状態または病態を罹患した対象に利益を提供するいずれかの作用を表すように本明細書中同義で使用されている。
【００５１】
本明細書中記載の本発明の態様および多様性は、態様および多様性「からなる」および／または「から本質的になる」ことを含むことが、理解されている。
【００５２】
本明細書中記載の様々な実施形態の特性のうちの１つ、一部、またはすべてが、本発明の他の実施形態を形成するために組み合わせてもよいことを、理解すべきである。
【００５３】
本明細書中使用される節の見出しは、単に構成を目的とするものであり、記載の主題を限定するように解釈すべきではない。
【００５４】
ナノ粒子組成物
本明細書中記載のナノ粒子組成物は、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチドセグメントを含む、キャリアポリペプチドを含む。このナノ粒子はさらに二本鎖オリゴヌクレオチドを含む。二本鎖オリゴヌクレオチドはオリゴヌクレオチド結合セグメントに結合することができる。一部の実施形態では、小分子薬物が、二本鎖オリゴヌクレオチドに結合している。一部の実施形態では、本組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対する比は、約６：１未満である。
未満である。
【００５５】
細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントは、単一のキャリアポリペプチドにおいて共に融合している。本明細書中記載のこれらセグメントはモジュール状であり、様々な組み合わせで組み合わせることができる。すなわち、キャリアポリペプチドは、記載の細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、またはオリゴヌクレオチド結合セグメントのいずれかを含むことができる。図１は、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを有するキャリアポリペプチドを例示している。図１にさらに示されているように、二本鎖オリゴヌクレオチドとキャリアポリペプチドを組みわせることにより、ナノ粒子が形成される。任意選択で、ナノ粒子を形成する前に、二本鎖オリゴヌクレオチドを、小分子薬物とあらかじめ結合させる。
【００５６】
ナノ粒子は、二本鎖オリゴヌクレオチドとキャリアポリペプチドを組み合わせることにより、形成できる。一部の実施形態では、キャリアポリペプチドを二本鎖オリゴヌクレオチドと、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、たとえば約４：１〜約４．５：１、約４．５：１〜約５：１、約５：１〜約５．５：１、約５．５：１から約６：１未満、約４：１、約４．５：１、約５：１、または約５．５）のモル比で組み合わせることにより、ナノ粒子組成物を形成する。よって、一部の実施形態では、ナノ粒子組成物は、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、たとえば約４：１〜約４．５：１、約４．５：１〜約５：１、約５：１〜約５．５：１、約５．５：１から約６：１未満、約４：１、約４．５：１、約５：１、または約５．５：１）のモル比で含む。ナノ粒子組成物における構成要素の比は、これら構成要素がナノ粒子に集合するかどうかに関わらず、組成物中の構成要素の全体的な比を表す。
【００５７】
一部の実施形態では、ナノ粒子組成物は、キャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対する相同なモル比を有するナノ粒子を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを、約６：１、約５：１、または約４：１のモル比で含む。ナノ粒子中の構成要素の比は、組成物の残りからナノ粒子を分離（たとえば組成物を遠心分離し、上清をデカントする）し、単離したナノ粒子中の構成要素を測定することにより、決定することができる。
【００５８】
細胞標的化セグメントは、細胞の表面に存在する分子と結合することができる。細胞標的化セグメントによるこの分子との結合により、ナノ粒子を、この細胞に標的化することができる。よって、細胞に存在する標的化した分子は、標的化した細胞に依存し得る。一部の実施形態では、標的化した分子は、癌抗原などの抗原である。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、抗体、抗体フラグメント、サイトカイン、または受容体のリガンドである。
【００５９】
一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、標的とする細胞の表面の標的に結合する。たとえば一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、受容体などの細胞表面タンパク質と結合する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、４−ＩＢＢ、５Ｔ４、腺癌抗原、α−フェトプロテイン、ＢＡＦＦ、Ｃ２４２抗原、ＣＡ−１２５、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、ｃ−ＭＥＴ、ＣＣＲ４、ＣＤ１５２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２００、ＣＤ２２、ＣＤ２２１、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＥＡ、ＣＮＴ０８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ５、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３、ＦＡＰ、フィブロネクチンエクストラドメイン−Ｂ、葉酸受容体１、ＧＤ２、ＧＤ３ガングリオシド、糖タンパク質７５、ＧＰＮＭＢ、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、ヒト細胞分散因子受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧ１、Ｌｌ−ＣＡＭ、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンα５β１、インテグリンανβ３、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ムチン  ＣａｎＡｇ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒ  ａ、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺癌細胞、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ  ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ＴＡＧ−７２、テネイシンＣ、ＴＧＦβ２、ＴＧＦ−β、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、ビメンチン、インターナリンＢ、細菌のインベイシン（Ｉｎｖ）タンパク質、またはそれらのフラグメントに結合する。
【００６０】
一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、ヘレグリンまたはその受容体結合フラグメントであり、「Ｈｅｒ」と呼ぶことができる。ヘレグリンは、たとえばヘレグリンαであり得る。配列番号２は、例示的な野生型のＨｅｒ配列である。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、配列番号２、または配列番号２と約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９２％以上、約９３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、もしくは約９９％以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドである。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、ヘレグリン受容体、たとえばＨＥＲ３と結合する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、たとえば配列番号２の約５０％以下、約６０％以下、約７０％以下、約８０％以下、約９０％以下、または約９５％以下の長さを有する、配列番号２の切断型である。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、配列番号１の約５０％〜約１００％（配列番号１の約６０％〜約９５％または約７０％〜約９０％など）の長さを有する。細胞標的化セグメントの切断型は、ＨＥＲ３標的化特性を保持している。
【００６１】
一部の実施形態では、細胞標的化セグメントにより標的化された細胞は、ヒト細胞などの哺乳類の細胞である。一部の実施形態では、この細胞は、癌細胞などの疾患細胞である。一部の実施形態では、この細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、この細胞は乳癌細胞（たとえばトリプルネガティブ乳癌細胞）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞である。細胞標的化セグメントは、ナノ粒子を標的細胞に標的化する、標的化細胞の表面に存在する分子と結合することができる。
【００６２】
キャリアポリペプチドの細胞貫通セグメントは、細胞標的化セグメントにより標的化される細胞へのナノ粒子の流入を促進する。一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、ペントンベース（「ＰＢ」）タンパク質またはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ペントンベース（「ＰＢ」）タンパク質またはそのバリアントである）。例として、一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、アデノウイルス血清型５（Ａｄ５）のペントンベースタンパク質を含む（および一部の実施形態では、アデノウイルス血清型５（Ａｄ５）のペントンベースタンパク質である）。一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、アミノ酸の多様性または欠失を伴うペントンベースタンパク質を含む（および一部の実施形態では、アミノ酸の多様性または欠失を伴うペントンベースタンパク質である）。アミノ酸の多様性は、保存的変異であり得る。一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、切断型のペントンベースタンパク質である。配列番号１は、例示的なペントンベースタンパク質である。一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、配列番号１、または配列番号１と約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９２％以上、約９３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、もしくは約９９％以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドである。一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、たとえば配列番号１の約５０％以下、約６０％以下、約７０％以下、約８０％以下、約９０％以下、または約９５％以下の長さを有する、配列番号１の切断型である。一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、配列番号１の約５０％〜約１００％（たとえば配列番号１の約６０％〜約９５％、または約７０％〜９０％）の長さを有する。
【００６３】
細胞貫通セグメントは、キャリアポリペプチドの細胞内局在を高める１つまたは複数のバリアントを含むことができる。たとえば、一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、キャリアポリペプチドを細胞質または核に優先的に局在化させる１つまたは複数のバリアントを含む。キャリアポリペプチドが（それ自体が小分子薬物に結合し得る）オリゴヌクレオチドと結合している実施形態では、バリアントの細胞貫通セグメントは、オリゴヌクレオチドおよび／または小分子薬物を細胞質または核に優先的に局在化させる。優先的な細胞下局在は、特定の小分子薬物に特に有益であり得る。たとえば、多くの化学療法剤は、癌細胞の核に局在化するＤＮＡに結合することにより、機能する。核を優先的に標的とすることにより、結合した薬物は、機能する位置で濃縮される。他の小分子薬物は、細胞質で機能することができ、細胞質を優先的に標的とすることにより、薬物の効力を高めることができる。
【００６４】
細胞下局在を高める例示的な細胞貫通セグメントの変異は、国際特許公開公報第２０１４／０２２８１１号に論述されている。ペントンベースタンパク質におけるＬｅｕ６０Ｔｒｐ変異は、細胞の細胞質に優先的に局在することが示されている。よって、一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、Ｌｅｕ６０Ｔｒｐ変異を含むペントンベースタンパク質である。Ｌｙｓ３７５Ｇｌｕ、Ｖａｌ４４９Ｍｅｔ、およびＰｒｏ４６９Ｓｅｒ変異は、細胞の核に優先的に局在することが示されている。よって、一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、Ｌｙｓ３７５Ｇｌｕ、Ｖａｌ４４９Ｍｅｔ、およびＰｒｏ４６９Ｓｅｒ変異を含む、ペントンベースタンパク質である。一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、Ｌｙｓ３７５Ｇｌｕ、Ｖａｌ４４９Ｍｅｔ、およびＰｒｏ４６９Ｓｅｒ変異を含む、ペントンベースタンパク質である。アミノ酸の番号付けは、配列番号１の野生型のペントンベースポリペプチドを参照して行う。
【００６５】
オリゴヌクレオチド結合セグメントは、本ナノ粒子の二本鎖オリゴヌクレオチド構成要素と結合する。オリゴヌクレオチド結合セグメントは、たとえば静電結合、水素結合、またはイオン結合を介して、二本鎖オリゴヌクレオチドと結合する。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド結合セグメントは、ＤＮＡ結合ドメインまたは二本鎖ＲＮＡ結合ドメインである。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド結合セグメントは、カチオン性ドメインである。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド結合ドメインは、ポリリジン配列を含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド結合セグメントは、約３〜約３０アミノ酸長、たとえば約３〜約１０、約５〜約１５、約１０〜約２０、約１５〜約２５、または約２０〜約３０アミノ酸長である。１つの例示的な実施形態では、オリゴヌクレオチド結合セグメントは、デカリジン（すなわち、配列番号４に示されている、１０個の連続したリジンアミノ酸、または「Ｋ１０」）を含む（および一部の実施形態では、デカリジンである）。
【００６６】
例示的なキャリアポリペプチドは、Ｈｅｒ、ペントンベース（またはそのバリアント）、および正に荷電したオリゴヌクレオチド結合セグメントを含む。一部の実施形態では、キャリアポリペプチドは、Ｈｅｒ、ペントンベースセグメント、およびポリリジンオリゴヌクレオチド結合セグメントを含む。一部の実施形態では、キャリアポリペプチドは、Ｈｅｒ、ペントンベースセグメント、およびデカリジンオリゴヌクレオチド結合セグメント、たとえばＨｅｒＰＢＫ１０（配列番号３）を含む。一部の実施形態では、キャリアポリペプチドは、配列番号３と約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９２％以上、約９３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、または約９９％以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドである。
【００６７】
キャリアポリペプチドは、二本鎖オリゴヌクレオチドと結合してナノ粒子を形成する。二本鎖オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡまたはＤＮＡであり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはｍｉｃｒｏＲＮＡを含む。二本鎖オリゴヌクレオチドは、たとえば、ステムループ構造を含み得るか、または２つの別々のＲＮＡ鎖を含み得る。二本鎖オリゴヌクレオチドは、完全に塩基対を形成する必要はなく、一部の実施形態では、１つまたは複数のバルジ、ループ、ミスマッチ、または他の二次構造を含む。一部の実施形態では、塩基のうち約８０％以上が対形成しており、塩基のうち約８５％以上が対形成しており、塩基のうち約９０％以上が対形成しており、または塩基のうち約９５％が対形成しており、または塩基のうち約１００％が対形成している。一部の実施形態では、ＲＮＡは、Ｔ７−転写ＲＮＡなどの、三リン酸塩の５’末端を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡは合成により生産されている。
【００６８】
一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１０塩基長〜約１０００塩基長、たとえば約１０塩基長〜約３０塩基長、約２０塩基長〜約４０塩基長、約３０塩基長〜約５０塩基長、約４０塩基長〜約６０塩基長、約５０塩基長〜約７０塩基長、約６０塩基長〜約８０塩基長、約７０塩基長〜約９０塩基長、約８０塩基長〜約１００塩基長、約１００塩基長〜約２００塩基長、約２００塩基長〜約３００塩基長、約３００塩基長〜約４００塩基長、約４００塩基長〜約５００塩基長、約５００塩基長〜約７００塩基長、または約７００塩基長〜約１０００塩基長である。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約２５塩基長〜約３５塩基長、たとえば約２５塩基長、約２６塩基長、約２７塩基長、約２８塩基長、約２９塩基長、約３０塩基長、約３１塩基長、約３２塩基長、約３３塩基長、約３４塩基長、または約３５塩基長である。
【００６９】
一部の実施形態では、小分子化合物（小分子薬物など）は、たとえば静電相互作用により、または二本鎖オリゴヌクレオチドにインターカレートすることにより、二本鎖オリゴヌクレオチドに結合している。小分子薬物は、ドキソルビシンなどの化学療法剤であり得る。他の小分子化学療法剤として、他のアントラサイクリン（ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、バルルビシンなど）、アルキル化剤もしくはアルキル化様作用剤（カルボプラチン、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、メルファラン、プロカルバジン、もしくはチオテパなど）、またはタキサン（パクリタキセル、ドセタキセル、もしくはタキソテールなど）を挙げることができる。一部の実施形態では、小分子化合物は、約１０００ダルトン以下、約９００ダルトン以下、約８００ダルトン以下、約７００ダルトン以下、約６００ダルトン以下、約５００ダルトン以下、約４００ダルトン以下、または約３００ダルトン以下である。
【００７０】
一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中の小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６０：１以下、たとえば約５０：１以下、約４０：１以下、約３０：１以下、約２０：１以下、約１０：１以下、約５：１以下、約４：１以下、約３：１以下、約２：１以下、または約１：１以下である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中の小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１、たとえば約１：１〜約１０：１、約５：１〜約２０：１、約１０：１〜約３０：１、約２０：１〜約４０：１、約３０：１〜約５０：１、または約４０：１〜約６０：１、約１：１、約１：１０、約１：２０、約１：３０、約１：４０、約１：５０、または約１：６０である。
【００７１】
一部の実施形態では、本ナノ粒子は、動的光散乱法によって測定した場合、一般的に直径５０ｎｍ以下（たとえば、直径約４５ｎｍ以下、約４０ｎｍ以下、約３５ｎｍ以下、約３０ｎｍ以下、約２５ｎｍ〜約５０ｎｍ、約２５ｎｍ〜約３０ｎｍ、約３０ｎｍ〜約３５ｎｍ、約３５ｎｍ〜約４０ｎｍ、または約４５ｎｍ〜約５０ｎｍ）である。小分子薬物は、存在する場合には、それ自体がオリゴヌクレオチド結合セグメントに結合している二本鎖オリゴヌクレオチドに結合している。
【００７２】
一部の実施形態では、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）を含むナノ粒子を含む組成物であって、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である、組成物を提供する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、ＨＥＲ３＋癌細胞などの癌細胞と結合する。一部の実施形態では、この癌細胞は、化学療法薬抵抗性癌細胞である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、アントラサイクリン（たとえばドキソルビシン）などの小分子薬物と結合している。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００７３】
一部の実施形態では、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）を含むナノ粒子を含む組成物であって、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である、組成物を提供する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、ＨＥＲ３＋癌細胞などの癌細胞と結合する。一部の実施形態では、この癌細胞は、化学療法薬抵抗性癌細胞である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、アントラサイクリン（たとえばドキソルビシン）などの小分子薬物と結合している。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００７４】
一部の実施形態では、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）を含むナノ粒子を含む組成物であって、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントである）、組成物を提供する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、ＨＥＲ３＋癌細胞などの癌細胞と結合する。一部の実施形態では、この癌細胞は、化学療法薬抵抗性癌細胞である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、アントラサイクリン（たとえばドキソルビシン）などの小分子薬物と結合している（たとえば小分子薬物がインターカレートしている）。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００７５】
一部の実施形態では、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）を含むナノ粒子を含む組成物であって、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントである）、組成物を提供する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、ＨＥＲ３＋癌細胞などの癌細胞と結合する。一部の実施形態では、この癌細胞は、化学療法薬抵抗性癌細胞である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、アントラサイクリン（たとえばドキソルビシン）などの小分子薬物と結合している（たとえば小分子薬物がインターカレートしている）。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００７６】
一部の実施形態では、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）を含むナノ粒子を含む組成物であって、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが正に荷電している、組成物を提供する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、ＨＥＲ３＋癌細胞などの癌細胞と結合する。一部の実施形態では、この癌細胞は、化学療法薬抵抗性癌細胞である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、アントラサイクリン（たとえばドキソルビシン）などの小分子薬物と結合している（たとえば小分子薬物がインターカレートしている）。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００７７】
一部の実施形態では、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）を含むナノ粒子を含む組成物であって、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが正に荷電している、組成物を提供する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、ＨＥＲ３＋癌細胞などの癌細胞と結合する。一部の実施形態では、この癌細胞は、化学療法薬抵抗性癌細胞である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、アントラサイクリン（たとえばドキソルビシン）などの小分子薬物と結合している（たとえば小分子薬物がインターカレートしている）。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００７８】
一部の実施形態では、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）を含むナノ粒子を含む組成物であって、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが正に荷電しており、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態ではヘレグリンまたはそのバリアントである）、組成物を提供する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、ＨＥＲ３＋癌細胞などの癌細胞と結合する。一部の実施形態では、この癌細胞は、化学療法薬抵抗性癌細胞である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、アントラサイクリン（たとえばドキソルビシン）などの小分子薬物と結合している（たとえば小分子薬物がインターカレートしている）。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００７９】
一部の実施形態では、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）を含むナノ粒子を含む組成物であって、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが正に荷電しており、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態ではヘレグリンまたはそのバリアントである）、組成物を提供する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、ＨＥＲ３＋癌細胞などの癌細胞と結合する。一部の実施形態では、この癌細胞は、化学療法薬抵抗性癌細胞である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、アントラサイクリン（たとえばドキソルビシン）などの小分子薬物と結合している（たとえば小分子薬物がインターカレートしている）。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００８０】
一部の実施形態では、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）を含むナノ粒子を含む組成物であって、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、デカリジンを含み（および一部の実施形態ではデカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態ではヘレグリンまたはそのバリアントである）、組成物を提供する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、ＨＥＲ３＋癌細胞などの癌細胞と結合する。一部の実施形態では、この癌細胞は、化学療法薬抵抗性癌細胞である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、アントラサイクリン（たとえばドキソルビシン）などの小分子薬物と結合している（たとえば小分子薬物がインターカレートしている）。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００８１】
一部の実施形態では、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）を含むナノ粒子を含む組成物であって、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、デカリジンを含み（および一部の実施形態ではデカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態ではヘレグリンまたはそのバリアントである）、組成物を提供する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、ＨＥＲ３＋癌細胞などの癌細胞と結合する。一部の実施形態では、この癌細胞は、化学療法薬抵抗性癌細胞である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、アントラサイクリン（たとえばドキソルビシン）などの小分子薬物と結合している（たとえば小分子薬物がインターカレートしている）。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００８２】
一部の実施形態では、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）を含むナノ粒子を含む組成物であって、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、デカリジンを含み（および一部の実施形態ではデカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態ではヘレグリンまたはそのバリアントであり）、化学療法薬（ドキソルビシンなど）が、二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートしている、組成物を提供する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、ＨＥＲ３＋癌細胞などの癌細胞と結合する。一部の実施形態では、この癌細胞は、化学療法薬抵抗性癌細胞である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、化学療法薬：二本鎖オリゴヌクレオチドのモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００８３】
一部の実施形態では、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）を含むナノ粒子を含む組成物であって、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり、オリゴヌクレオチド結合セグメントがデカリジンであり、細胞標的化セグメントがヘレグリンまたはそのバリアントであり、化学療法薬（ドキソルビシンなど）が、二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートしている、組成物を提供する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、ＨＥＲ３＋癌細胞などの癌細胞と結合する。一部の実施形態では、この癌細胞は、化学療法薬抵抗性癌細胞である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、化学療法薬：二本鎖オリゴヌクレオチドのモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００８４】
一部の実施形態では、キャリアポリペプチドおよび二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドを含むナノ粒子を含む組成物であって、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約４：１であり、キャリアポリペプチドがＨｅｒＰＢＫ１０であり、ドキソルビシンが、二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートしている、組成物を提供する。一部の実施形態では、細胞標的化セグメントは、ＨＥＲ３＋癌細胞などの癌細胞と結合する。一部の実施形態では、この癌細胞は、化学療法薬抵抗性癌細胞である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、化学療法薬：二本鎖オリゴヌクレオチドのモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００８５】
ナノ粒子の生産
本明細書中記載のナノ粒子は、複数の二本鎖オリゴヌクレオチドと複数のキャリアポリペプチドを組み合わせることにより、生産することができる。一部の実施形態では、キャリアポリペプチド、二本鎖オリゴヌクレオチド、および任意選択で小分子薬物をインキュベートして、ナノ粒子を形成する。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドを、キャリアポリペプチドと組み合わせる前に、小分子薬物とプレインキュベートする。キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを組み合わせると、ナノ粒子は自然に集合する。
【００８６】
一部の実施形態では、ナノ粒子組成物を作製する方法であって、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを約６：１未満のモル比で組み合わせることにより、複数のナノ粒子を形成することを含み、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、本方法は、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを組み合わせる前に、二本鎖オリゴヌクレオチドおよび小分子薬物を組み合わせることをさらに含む。
【００８７】
一部の実施形態では、一本鎖の相補的（または部分的に相補的）なオリゴヌクレオチドをアニールして、二本鎖オリゴヌクレオチドを形成する。オリゴヌクレオチドのアニーリングは、たとえば、おおよそ等モル量の一本鎖オリゴヌクレオチドそれぞれを組み合わせ、オリゴヌクレオチドを（たとえば約９０℃以上に）加熱し、この混合物を（たとえばおよそ室温に）冷却することにより、起こり得る。
【００８８】
小分子薬物（化学療法剤、たとえばドキソルビシンなど）は、小分子薬物および二本鎖オリゴヌクレオチドを組み合わせることにより、二本鎖オリゴヌクレオチドに結合することができる。一部の実施形態では、小分子薬物および二本鎖オリゴヌクレオチドは、約６０：１以下、約５０：１以下、約４０：１以下、約３０：１以下、約２０：１以下、約１０：１以下、約５：１以下、約４：１以下、約３：１以下、約２：１以下、または約１：１以下のモル比で組み合わせる。一部の実施形態では、小分子薬物および二本鎖オリゴヌクレオチドは、約１：１〜約６０：１、たとえば約１：１〜約１０：１、約５：１〜約２０：１、約１０：１〜約３０：１、約２０：１〜約４０：１、約３０：１〜約５０：１、または約４０：１〜約６０：１、約１：１、約１：１０、約１：２０、約１：３０、約１：４０、約１：５０、または約１：６０のモル比で組み合わせる。小分子薬物および二本鎖オリゴヌクレオチドを組み合わせると、小分子薬物は、たとえば二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートすることにより、二本鎖オリゴヌクレオチドに結合する。
【００８９】
任意選択で小分子薬物と結合している二本鎖オリゴヌクレオチドを、キャリアポリペプチドと組み合わせてナノ粒子を形成する。一部の実施形態では、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドは、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、たとえば約４：１〜約４．５：１、約４．５：１〜約５：１、約５：１〜約５．５：１、約５．５：１から約６：１未満、約４：１、約４．５：１、約５：１、または約５．５）のモル比で組み合わせる。一部の実施形態では、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを、約４℃〜約２２℃、たとえば約４℃〜約１５℃、または約４℃〜約１０℃でインキュベートする。一部の実施形態では、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを、約３０分未満、約３０分以上、約１時間以上、または約２時間以上、インキュベートする。二本鎖オリゴヌクレオチドとキャリアポリペプチドを組み合わせた後、ナノ粒子が自然に形成する。
【００９０】
一部の実施形態では、過剰量のオリゴヌクレオチド、小分子薬物、またはキャリアポリペプチドは、ナノ粒子を含む本組成物から除去される。たとえば、一部の実施形態では、ナノ粒子組成物を、サイズ排除クロマトグラフィーなどの精製ステップに供する。一部の実施形態では、未結合の構成要素を、超遠心分離によりナノ粒子から分離する。たとえば、一部の実施形態では、本組成物を、約１００ｋＤ以下、約８０ｋＤ以下、約７０ｋＤ以下、約６０ｋＤ以下、約５０ｋＤ以下、約４０ｋＤ以下、約３０ｋＤ以下、または約２０ｋＤ以下の分子量カットオフの遠心分離フィルターに加える。
【００９１】
任意選択で、得られたナノ粒子組成物を、透析、超遠心分離、またはタンジェンシャルフロー・フィルトレーションにより、バッファー交換に供する。一部の実施形態では、ナノ粒子は、たとえば超遠心分子により濃縮される。
【００９２】
一部の実施形態では、ナノ粒子組成物を作製する方法であって、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）を約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、または約４：１）のモル比で組み合わせることにより、複数のナノ粒子を形成することを含み、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントである）。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド結合ドメインは、正に荷電している（デカリジンなど）。一部の実施形態では、細胞標的化ドメインは、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）。一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり、オリゴヌクレオチド結合ドメインは、正に荷電しており（デカリジンなど）、細胞標的化ドメインは、ヘレグリンまたはそのバリアントである。一部の実施形態では、得られた本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００９３】
一部の実施形態では、ナノ粒子組成物を作製する方法であって、二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）および小分子薬物（化学療法薬、たとえばドキソルビシンなど）を組み合わせることと、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、または約４：１）のモル比で組み合わせることにより、複数のナノ粒子を形成することとを含み、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントである）。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド結合ドメインは、正に荷電している（デカリジンなど）。一部の実施形態では、細胞標的化ドメインは、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）。一部の実施形態では、細胞貫通セグメントはペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり、オリゴヌクレオチド結合ドメインは正に荷電しており（デカリジンなど）、細胞標的化ドメインは、ヘレグリンまたはそのバリアントである。一部の実施形態では、得られた本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００９４】
一部の実施形態では、ナノ粒子組成物を作製する方法であって、二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）および小分子薬物（化学療法薬、たとえばドキソルビシンなど）を組み合わせることと、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを約６：１未満（たとえば約４：１から６：１未満、または約４：１）のモル比で組み合わせることにより、複数のナノ粒子を形成することと、上記複数のナノ粒子から、未結合のキャリアポリペプチドまたは二本鎖オリゴヌクレオチドを分離することとを含み、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントである）。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド結合ドメインは、正に荷電している（デカリジンなど）。一部の実施形態では、細胞標的化ドメインは、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）。一部の実施形態では、細胞貫通セグメントはペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり、オリゴヌクレオチド結合ドメインは正に荷電しており（デカリジンなど）、細胞標的化ドメインは、ヘレグリンまたはそのバリアントである。一部の実施形態では、得られた本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００９５】
一部の実施形態では、ナノ粒子組成物を作製する方法であって、二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）および小分子薬物（化学療法薬、たとえばドキソルビシンなど）を組み合わせることと、二本鎖オリゴヌクレオチドから未結合の小分子薬物を分離することと、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、または約４：１）のモル比でキャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを組み合わせることにより、複数のナノ粒子を形成することと、上記複数のナノ粒子から、未結合のキャリアポリペプチドまたは二本鎖オリゴヌクレオチドを分離することとを含み、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントである）。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド結合ドメインは、正に荷電している（デカリジンなど）。一部の実施形態では、細胞標的化ドメインは、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）。一部の実施形態では、細胞貫通セグメントは、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり、オリゴヌクレオチド結合ドメインは正に荷電しており（デカリジンなど）、細胞標的化ドメインはヘレグリンまたはそのバリアントである。一部の実施形態では、得られた本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【００９６】
癌治療
ナノ粒子組成物は、ナノ粒子を含む組成物の有効量を対象に投与することによって癌細胞を殺滅することにより、対象の癌の治療に有用であり得る。キャリアポリペプチドの細胞標的化セグメントは、癌細胞の表面の分子を標的とすることにより、化学療法剤（二本鎖オリゴヌクレオチドに結合できる）を癌細胞に送達することができる。一部の実施形態では、この癌は転移性である。一部の実施形態では、この癌は、本明細書中さらに記載されているように、化学療法薬抵抗性癌である。
【００９７】
一態様では、癌細胞を殺滅する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬を含み、複数のナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満である、方法を提供する。
【００９８】
別の態様では、癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬を含み、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が約６：１未満である、方法を提供する。
【００９９】
別の態様では、癌細胞に化学療法剤を送達する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬を含み、複数のナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が約６：１未満である、方法を提供する。
【０１００】
一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。ＨＥＲ細胞標的化セグメントは、たとえば、ナノ粒子を癌細胞に標的化するために、ＨＥＲ３＋癌細胞の表面に存在するＨＥＲ３に結合することができる。
【０１０１】
一部の実施形態では、ナノ粒子を含む組成物の有効量を、グリオーマ、乳癌、卵巣癌、または前立腺癌を治療するために対象に投与する。一部の実施形態では、これら癌のいずれか１つはＨＥＲ３＋である。一部の実施形態では、癌は、プロゲステロン受容体（ＰＲ）、エストロゲン受容体（ＥＲ）、またはＨＥＲ２のうちの１つまたは複数に対してネガティブ（たとえばＰＲ−、ＥＲ−、ＨＥＲ２−、ＰＲ−／ＥＲ−など）である。一部の実施形態では、この癌はトリプルネガティブ乳癌である。
【０１０２】
一部の実施形態では、ナノ粒子を含む組成物は、グリオーマ細胞、乳癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞などの癌細胞を殺滅するために使用する。一部の実施形態では、これら癌細胞のうちのいずれか１つはＨＥＲ３＋である。一部の実施形態では、癌細胞は、プロゲステロン受容体（ＰＲ）、エストロゲン受容体（ＥＲ）、またはＨＥＲ２のうちの１つまたは複数に対してネガティブ（たとえばＰＲ−、ＥＲ−、ＨＥＲ２−、ＰＲ−／ＥＲ−など）である。一部の実施形態では、この癌細胞はトリプルネガティブ乳癌細胞である。
【０１０３】
一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、リポソーマルドキソルビシン（または「ＬｉｐｏＤｏｘ」、たとえば商標名Ｄｏｘｉｌ（登録商標）として販売される組成物）よりも効力が高い。例示的なナノ粒子は、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを、平均４：１から約６：１未満のモル比（キャリアポリペプチド対二本鎖オリゴヌクレオチド）で含み、小分子薬物（ドキソルビシンなど）を、平均約１：１〜約６０：１のモル比（小分子薬物対オリゴヌクレオチド）で含む。たとえば、一部の実施形態では、ナノ粒子は、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを、平均約４：１のモル比（キャリアポリペプチド対二本鎖オリゴヌクレオチド）で含み、かつ、小分子薬物（ドキソルビシンなど）を、平均約１０：１のモル比（小分子薬物：オリゴヌクレオチド）で含む。別の例では、一部の実施形態では、ナノ粒子は、キャリアポリペプチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドを、平均約４：１のモル比（キャリアポリペプチド：二本鎖オリゴヌクレオチド）で含み、かつ、小分子薬物（ドキソルビシンなど）を、平均約４０：１のモル比（小分子薬物：オリゴヌクレオチド）で含む。
【０１０４】
一部の実施形態では、癌細胞は、薬物の存在下で増殖する。一部の実施形態では、癌細胞の培養物は、薬物の存在下で縮小しない。一部の実施形態では、癌細胞は、薬物の存在下で殺滅されない。一部の実施形態では、癌細胞株の相対的な細胞の生存は、同じ癌細胞タイプの非薬物抵抗性細胞株が約０．５以下（たとえば約０．４以下、約０．３以下、または約０．２以下）の相対的な細胞生存を有する用量および時間の長さで、約０．７以上（たとえば約０．８以上、または約０．９以上）である。
【０１０５】
一部の実施形態では、治療または殺滅すべき癌または癌細胞は、小分子薬物または抗体などの化学療法薬に非応答性である。一部の実施形態では、治療または殺滅すべき癌または癌細胞は、リポソーマルアントラサイクリンなどの化学療法薬のリポソーム製剤に非応答性である。一部の実施形態では、治療または殺滅すべき癌または癌細胞は、ＨＥＲ２＋抗体化学療法剤、ラパチニブ、またはアントラサイクリンに対して非応答性である。一部の実施形態では、治療または殺滅すべき癌または癌細胞は、ドキソルビシン（ナノ粒子ドキソルビシンの形態、たとえばリポソーマルドキソルビシン、または非ナノ粒子製剤のドキソルビシンであり得る）に対して非応答性である。一部の実施形態では、治療または殺滅すべき癌または癌細胞は、ラパチニブに対して非応答性である。一部の実施形態では、治療または殺滅すべき癌または癌細胞は、トラスツズマブおよび／またはペルツズマブに対して非応答性である。
【０１０６】
一部の実施形態では、記載の方法は、化学療法剤に対して非応答性である癌を有する対象を同定することと、本明細書中記載のナノ粒子を含む組成物の有効量を投与することとを含む。一部の実施形態では、癌または癌細胞は、抗ＨＥＲ２治療（抗ＨＥＲ２抗体、またはＨＥＲ２の小分子阻害剤（たとえばラパチニブ））に対して非応答性である。一部の実施形態では、癌または癌細胞は、トラスツズマブおよび／またはペルツズマブなどの抗ＨＥＲ２抗体の治療に対して非応答性である。一部の実施形態では、癌または癌細胞は、ドキソルビシン（ドキソルビシンのリポソーム製剤、またはドキソルビシンの非ナノ粒子製剤など）に対して非応答性である。
【０１０７】
一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、ＨＥＲ３＋癌細胞、たとえばＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞の殺滅において、リポソーマルドキソルビシンよりも有効である。一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、ＨＥＲ３＋癌細胞（ＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞など）の殺滅に関して約１０μＭ未満、たとえば約５μＭ未満のＩＣ５０を有する。一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、ＨＥＲ３＋癌細胞（ＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞など）の殺滅に関して、約２μＭ〜約１０μＭのＩＣ５０を有する。
【０１０８】
一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、乳癌細胞、たとえばＢＴ４７４乳癌細胞またはＪＩＭＴ１乳癌細胞の殺滅において、リポソーマルドキソルビシンよりも有効である。一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、乳癌細胞（ＢＴ４７４乳癌細胞またはＪＩＭＴ１乳癌細胞など）の殺滅に関して約１０μＭ未満、たとえば約５μＭ未満、約１μＭ未満、または約０．５μＭ未満のＩＣ５０を有する。一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、乳癌細胞（ＢＴ４７４乳癌細胞またはＪＩＭＴ１乳癌細胞など）の殺滅に関して約０．１μＭ〜約１０μＭ、たとえば約０．５μＭ〜約１０μＭ、または約０．５μＭ〜約１μＭのＩＣ５０を有する。
【０１０９】
一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、トリプルネガティブ乳癌細胞、たとえば４Ｔ１トリプルネガティブ乳癌細胞の殺滅において、リポソーマルドキソルビシンよりも有効である。一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、トリプルネガティブ乳癌細胞（４Ｔ１トリプルネガティブ乳癌細胞など）の殺滅に関して約１０μＭ未満、たとえば約５μＭ未満、約１μＭ未満、または約０．５μＭ未満のＩＣ５０を有する。一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、トリプルネガティブ乳癌細胞（４Ｔ１トリプルネガティブ乳癌細胞など）の殺滅に関して約０．１μＭ〜約１０μＭ、たとえば約０．５μＭ〜約１０μＭ、または約０．５μＭ〜約１μＭのＩＣ５０を有する。
【０１１０】
一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、グリオーマ細胞、たとえばＵ２５１グリオーマ細胞の殺滅において、リポソーマルドキソルビシンよりも有効である。一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、グリオーマ細胞（Ｕ２５１グリオーマ細胞など）の殺滅に関して約１０μＭ未満、たとえば約５μＭ未満、約１μＭ未満、または約０．５μＭ未満のＩＣ５０を有する。一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、グリオーマ細胞（Ｕ２５１グリオーマ細胞など）の殺滅に関して約０．１μＭ〜約１０μＭ、たとえば約０．５μＭ〜約１０μＭ、または約０．５μＭ〜約１μＭのＩＣ５０を有する。
【０１１１】
一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、卵巣癌細胞、たとえばＳＫＯＶ３卵巣癌細胞の殺滅において、リポソーマルドキソルビシンよりも有効である。一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、卵巣癌細胞（ＳＫＯＶ３卵巣癌細胞など）の殺滅に関して約１０μＭ未満、たとえば約５μＭ未満、または約１μＭ未満のＩＣ５０を有する。一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、卵巣癌細胞（ＳＫＯＶ３卵巣癌細胞など）の殺滅に関して約０．１μＭ〜約１０μＭ、たとえば約０．５μＭ〜約１０μＭ、または約０．５μＭ〜約１μＭのＩＣ５０を有する。
【０１１２】
一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、前立腺癌細胞、たとえばＬＮＣａＰ−ＧＦＰ前立腺癌細胞の殺滅において、リポソーマルドキソルビシンよりも有効である。一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、前立腺癌細胞（ＬＮＣａＰ−ＧＦＰ前立腺癌細胞など）の殺滅に関して約１０μＭ未満、たとえば約５μＭ未満、約１μＭ未満、または約０．５μＭ未満のＩＣ５０を有する。一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、前立腺癌細胞（ＬＮＣａＰ−ＧＦＰ前立腺癌細胞など）の殺滅に関して約０．１μＭ〜約１０μＭ、たとえば約０．５μＭ〜約１０μＭ、または約０．５μＭ〜約１μＭのＩＣ５０を有する。
【０１１３】
一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、転移性癌細胞、たとえば骨転移性前立腺癌細胞（たとえばＲＡＮＫＬヒト骨転移性前立腺癌細胞）の殺滅において、リポソーマルドキソルビシンよりも有効である。一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、転移性癌細胞、たとえば骨転移性前立腺癌細胞（たとえばＲＡＮＫＬヒト骨転移性前立腺癌細胞）の殺滅に関して約１０μＭ未満、たとえば約５μＭ未満、約１μＭ未満、または約０．５μＭ未満のＩＣ５０を有する。一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、転移性癌細胞、たとえば骨転移性前立腺癌細胞（たとえばＲＡＮＫＬヒト骨転移性前立腺癌細胞）の殺滅に関して約０．１μＭ〜約１０μＭ、たとえば約０．５μＭ〜約１０μＭ、または約０．５μＭ〜約１μＭのＩＣ５０を有する。
【０１１４】
一部の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法は、放射線療法または外科手術などの二次的な治療をさらに含む。よって、一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子を含む組成物は、ネオアジュバント療法および／またはアジュバント療法として、癌を有する対象に投与される。たとえば、一部の実施形態では、トラスツズマブおよび／またはペルツズマブを、本明細書中記載のナノ粒子組成物を投与することを含む抗癌療法に対するアジュバントとして、使用する。
【０１１５】
一部の実施形態では、対象は、本明細書中記載のナノ粒子の投与の前に、化学療法または放射線療法を経験していない。一部の実施形態では、対象は、化学療法または放射線療法を経験している。
【０１１６】
一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子組成物を対象に投与する。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物を、標的とする細胞へｉｎ  ｖｉｖｏで送達するために、対象に投与する。一般的に、ナノ粒子組成物の用量および投与経路は、標準的な医薬の実務に従い、対象の体格状態によって決定される。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物を、経口投与、経皮投与、吸入による投与、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、創傷部位への直接的な適用、外科施術部位への適用、腹腔内投与、坐薬による投与、皮下投与、皮内投与、経皮投与、吸入投与、胸膜内投与、脳室内投与、関節内投与、眼内投与、または脊髄内投与を含むいずれかの経路を介して、対象に投与する。一部の実施形態では、本組成物を、対象に静脈内投与する。
【０１１７】
一部の実施形態では、本ナノ粒子組成物の投与量は、単回用量または反復用量である。一部の実施形態では、用量を、１日１回、１日２回、１日３回、または１日４回以上対象に提供する。一部の実施形態では、約１回以上（たとえば約２回以上、約３回以上、約４回以上、約５回以上、約６回以上、または約７回以上）の用量を１週間で提供する。一部の実施形態では、本組成物を、１週間に１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、４週間ごとに１回、３週間のうち２週間の間週１回、または４週間のうち３週間の間週１回、投与する。一部の実施形態では、複数回の用量を、数日、数週間、数ケ月、または数年にわたり提供する。一部の実施形態では、一連の治療は、約１回以上の投与（たとえば約２回以上の投与、約３回以上の投与、約４回以上の投与、約５回以上の投与、約７回以上の投与、約１０回以上の投与、約１５回以上の投与、約２５回以上の投与、約４０回以上の投与、約５０回以上の投与、または約１００回以上の投与）である。
【０１１８】
一部の実施形態では、投与されるナノ粒子組成物の用量は、約２００ｍｇ／ｍ２以下の小分子薬物（ドキソルビシンなど）、約１５０ｍｇ／ｍ２以下の小分子薬物（ドキソルビシンなど）、約１００ｍｇ／ｍ２以下の小分子薬物（ドキソルビシンなど）、約８０ｍｇ／ｍ２以下の小分子薬物（ドキソルビシンなど）、約７０ｍｇ／ｍ２以下の小分子薬物（ドキソルビシンなど）、約６０ｍｇ／ｍ２以下の小分子薬物（ドキソルビシンなど）、約５０ｍｇ／ｍ２以下の小分子薬物（ドキソルビシンなど）、約４０ｍｇ／ｍ２以下の小分子薬物（ドキソルビシンなど）、約３０ｍｇ／ｍ２以下の小分子薬物（ドキソルビシンなど）、約２０ｍｇ／ｍ２以下の小分子薬物（ドキソルビシンなど）、約１５ｍｇ／ｍ２以下の小分子薬物（ドキソルビシンなど）、約１０ｍｇ／ｍ２以下の小分子薬物（ドキソルビシンなど）、約５ｍｇ／ｍ２以下の小分子薬物（ドキソルビシンなど）、または約１ｍｇ／ｍ２以下の小分子薬物（ドキソルビシンなど）である。一部の実施形態では、投与される本ナノ粒子組成物の用量は、おおよそ同じ治療効果に関してリポソーマルドキソルビシンの用量よりも低い。一部の実施形態では、本ナノ粒子組成物の投与用量は、ほぼ同じ用量のリポソーマルドキソルビシンの治療効果と比較して、増大した治療効果を提供する。
【０１１９】
一部の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は、乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１２０】
一部の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１２１】
一部の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１２２】
一部の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１２３】
一部の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが正に荷電している、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１２４】
一部の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが正に荷電している、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１２５】
一部の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが正に荷電しており、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１２６】
一部の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが正に荷電しており、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１２７】
一部の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントがデカリジンを含み（および一部の実施形態ではデカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１２８】
一部の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントがデカリジンを含み（および一部の実施形態ではデカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１２９】
一部の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントがデカリジンを含み（および一部の実施形態ではデカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントであり）、化学療法薬（ドキソルビシンなど）が、二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートしている、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１３０】
一部の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントがデカリジンを含み（および一部の実施形態ではデカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントであり）、化学療法薬（ドキソルビシンなど）が、二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートしている、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１３１】
一部の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、キャリアポリペプチドおよび二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドを含み、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が約４：１であり、キャリアポリペプチドがＨｅｒＰＢＫ１０であり、ドキソルビシンが二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートしている、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１３２】
一部の実施形態では、癌細胞を殺滅する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、複数のナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１３３】
一部の実施形態では、癌細胞を殺滅する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１３４】
一部の実施形態では、癌細胞を殺滅する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、複数のナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１３５】
一部の実施形態では、癌細胞を殺滅する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１３６】
一部の実施形態では、癌細胞を殺滅する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、複数のナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、正に荷電している、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１３７】
一部の実施形態では、癌細胞を殺滅する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、正に荷電している、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１３８】
一部の実施形態では、癌細胞を殺滅する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、複数のナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、正に荷電しており、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１３９】
一部の実施形態では、癌細胞を殺滅する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、正に荷電しており、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１４０】
一部の実施形態では、癌細胞を殺滅する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、複数のナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、デカリジンを含み（および一部の実施形態ではデカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１４１】
一部の実施形態では、癌細胞を殺滅する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、デカリジンを含み（および一部の実施形態ではデカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１４２】
一部の実施形態では、癌細胞を殺滅する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、複数のナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、デカリジンを含み（および一部の実施形態ではデカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントであり）、化学療法薬（ドキソルビシンなど）が、二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートしている、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１４３】
一部の実施形態では、癌細胞を殺滅する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、デカリジンを含み（および一部の実施形態ではデカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントであり）、化学療法薬（ドキソルビシンなど）が、二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートしている、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１４４】
一部の実施形態では、癌細胞を殺滅する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、キャリアポリペプチドおよび二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドを含み、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が約４：１であり、キャリアポリペプチドがＨｅｒＰＢＫ１０であり、ドキソルビシンが、二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートしている、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１４５】
一部の実施形態では、癌細胞に化学療法剤を送達する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、複数のナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１４６】
一部の実施形態では、癌細胞に化学療法剤を送達する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１４７】
一部の実施形態では、癌細胞に化学療法剤を送達する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、複数のナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１４８】
一部の実施形態では、癌細胞に化学療法剤を送達する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１４９】
一部の実施形態では、癌細胞に化学療法剤を送達する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、複数のナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、正に荷電している、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１５０】
一部の実施形態では、癌細胞に化学療法剤を送達する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、正に荷電している、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１５１】
一部の実施形態では、癌細胞に化学療法剤を送達する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、複数のナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、正に荷電しており、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１５２】
一部の実施形態では、癌細胞に化学療法剤を送達する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、正に荷電しており、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１５３】
一部の実施形態では、癌細胞に化学療法剤を送達する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、複数のナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、デカリジンを含み（および一部の実施形態では、デカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１５４】
一部の実施形態では、癌細胞に化学療法剤を送達する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、デカリジンを含み（および一部の実施形態では、デカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１５５】
一部の実施形態では、癌細胞に化学療法剤を送達する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、複数のナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、デカリジンを含み（および一部の実施形態では、デカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントであり）、化学療法薬（ドキソルビシンなど）が、二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートしている、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１５６】
一部の実施形態では、癌細胞に化学療法剤を送達する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）であり、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、デカリジンを含み（および一部の実施形態では、デカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントであり）、化学療法薬（ドキソルビシンなど）が、二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートしている、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１５７】
一部の実施形態では、癌細胞に化学療法剤を送達する方法であって、癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、キャリアポリペプチドおよび二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドを含み、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が約４：１であり、キャリアアポリペプチドがＨｅｒＰＢＫ１０であり、ドキソルビシンが、二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートしている、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１５８】
薬物抵抗性癌を治療する方法
また、ナノ粒子組成物は、化学療法薬抵抗性癌の殺滅および化学療法薬抵抗性癌を有する対象の治療に有用であり得る。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌細胞を殺滅する方法であって、化学療法薬抵抗性癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬を含む、方法を提供する。
【０１５９】
一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌を有する対象を治療する方法であって、複数のナノ粒子を含む組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬を含む、方法を提供する。
【０１６０】
一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌に化学療法剤を送達する方法であって、化学療法薬抵抗性癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬を含む、方法を提供する。
【０１６１】
また本明細書中記載の方法は、薬物（化学療法剤など）による前治療によって治療時に病状が進行している対象の治療にも有用である。たとえば、対象は、前治療による治療からおよそ１ケ月以内、２ケ月以内、３ケ月以内、４ケ月以内、５ケ月以内、６ケ月以内、７ケ月以内、８ケ月以内、９ケ月以内、１０ケ月以内、１１ケ月以内、または１２ケ月以内に、病状が進行している。一部の実施形態では、癌を有する対象は、前治療による治療に対して、当初応答性であったが、前治療の休止からおよそ６ケ月後、７カ月後、８ケ月後、９カ月後、１０カ月後、１１カ月後、１２カ月後、２４カ月後、または３６カ月後に、再発癌を発症する。
【０１６２】
以下の説明は、例示的な実施形態として、前治療（ドキソルビシンベースの治療など）に対して抵抗性のある対象を説明しているが、本明細書中の説明は、前治療によって病状が進行している対象（たとえば応答できなかったため、および／または毒性のために）、前治療を続行することが適切ではない対象、前治療後に再発癌を有する対象、前治療に対して非応答性の対象、望ましい応答性の度合いが低い対象、および／または増強された応答性を呈する対象にも当てはまると理解される。本明細書中記載の方法は、本明細書中記載のナノ粒子組成物の投与を含む、癌を治療するためのすべての二次治療を含む。
【０１６３】
本ナノ粒子は、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏのいずれかで、化学療法薬抵抗性癌細胞を殺滅することができる。また、本ナノ粒子は、たとえば本ナノ粒子を含む組成物を薬物抵抗性癌細胞と混合することにより、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで薬物抵抗性癌細胞を殺滅することができる。キャリアポリペプチドの細胞標的化セグメントは、癌細胞の表面に存在する分子に結合することができる。たとえば、一部の実施形態では、薬物抵抗性癌細胞は、ＨＥＲ３＋細胞であり、細胞標的化セグメントは、ＨＥＲ３に結合する。また、本ナノ粒子は、たとえば薬物抵抗性癌を有する対象に本ナノ粒子を含む組成物を投与することにより、化学療法薬抵抗性癌をｉｎ  ｖｉｖｏで殺滅するために使用することもできる。一部の実施形態では、本ナノ粒子を、たとえば薬物抵抗性癌を有する対象に本ナノ粒子を含む組成物の有効量を投与することにより、上記対象を治療するために使用する。
【０１６４】
一部の実施形態では、薬物抵抗性癌は、抗体に対して抵抗性である。たとえば、一部の実施形態では、薬物抵抗性癌は、抗ＨＥＲ２抗体、たとえばトラスツズマブ（商標名Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）でも知られている）に対して抵抗性である。一部の実施形態では、薬物抵抗性癌は、ペルツズマブに対して抵抗性である。多くの場合、トラスツズマブまたはペルツズマブは、治療過程の間に、特定の癌のタイプにおいてその有効性を喪失する。このことは、乳癌の治療中に頻繁に起こる。しかしながら、記載のナノ粒子は、トラスツズマブ抵抗性癌細胞またはペルツズマブ抵抗性癌細胞をなおも標的とすることができ、よって、これら癌細胞の殺滅、またはトラスツズマブ抵抗性癌もしくはペルツズマブ抵抗性癌を有する患者の治療に有効である。
【０１６５】
一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、リポソーマルドキソルビシンに抵抗性がある癌の治療に有効である。一部の実施形態では、本ナノ粒子は、ＨＥＲ２抗体（たとえばトラスツズマブまたはペルツズマブ）抵抗性癌の殺滅に有効である。一部の実施形態では、本ナノ粒子は、ＨＥＲ２抗体（たとえばトラスツズマブまたはペルツズマブ）抵抗性癌細胞、たとえばトラスツズマブ抵抗性ＢＴ４７４−ＴＲ乳癌細胞の殺滅に、リポソーマルドキソルビシンよりも有効である。一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、ＨＥＲ２抗体（たとえばトラスツズマブ）抵抗性乳癌細胞（たとえばトラスツズマブ抵抗性ＢＴ４７４−ＴＲ乳癌細胞）の殺滅に関して約１０μＭ未満、たとえば約５μＭ未満、約１μＭ未満、または約０．５μＭ未満のＩＣ５０を有する。一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、ＨＥＲ２抗体（たとえばトラスツズマブ）抵抗性乳癌細胞（たとえばトラスツズマブ抵抗性ＢＴ４７４−ＴＲ乳癌細胞）の殺滅に関して約０．０１μＭ〜約１０μＭ、たとえば約０．１μＭ〜約１μＭ、または約０．５μＭ〜約１μＭのＩＣ５０を有する。
【０１６６】
一部の実施形態では、薬物抵抗性癌は、小分子化学療法剤、たとえばアントラサイクリン（たとえば、商標名Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）でも知られている、ドキソルビシン）、またはチロシンキナーゼ阻害剤（たとえばラパチニブ）に抵抗性である。一部の実施形態では、薬物抵抗性癌は、ＬｉｐｏＤｏｘに対して抵抗性である。
【０１６７】
本明細書中記載のナノ粒子は、リポソーマルドキソルビシンとしてのドキソルビシンの当量で、ドキソルビシン抵抗性細胞株の細胞死を増大させ、このことは、本ナノ粒子が、ドキソルビシンに抵抗性を呈する患者の治療においてリポソーマルドキソルビシンよりも有効であることを表している。一部の実施形態では、本明細書中記載のナノ粒子は、小分子化学療法剤、たとえばドキソルビシンに対して抵抗性がある癌細胞（たとえば、Ａ２７８０−ＡＤＲアドリアマイシン抵抗性のヒト卵巣癌細胞）の殺滅に、リポソーマルドキソルビシンよりも有効である。
【０１６８】
一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含む、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は、ＨＥＲ２＋抗体（たとえばトラスツズマブまたはペルツズマブ）、アントラサイクリン（ドキソルビシンなど）、またはチロシンキナーゼ阻害剤（ラパチニブなど）に対して抵抗性である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１６９】
一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は、ＨＥＲ２＋抗体（たとえばトラスツズマブまたはペルツズマブ）、アントラサイクリン（ドキソルビシンなど）、またはチロシンキナーゼ阻害剤（ラパチニブなど）に対して抵抗性である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１７０】
一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、正に荷電している、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は、ＨＥＲ２＋抗体（たとえばトラスツズマブまたはペルツズマブ）、アントラサイクリン（ドキソルビシンなど）、またはチロシンキナーゼ阻害剤（ラパチニブなど）に対して抵抗性である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１７１】
一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、正に荷電しており、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は、ＨＥＲ２＋抗体（たとえばトラスツズマブまたはペルツズマブ）、アントラサイクリン（ドキソルビシンなど）、またはチロシンキナーゼ阻害剤（ラパチニブなど）に対して抵抗性である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１７２】
一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、デカリジンを含み（および一部の実施形態では、デカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は、ＨＥＲ２＋抗体（たとえばトラスツズマブまたはペルツズマブ）、アントラサイクリン（ドキソルビシンなど）、またはチロシンキナーゼ阻害剤（ラパチニブなど）に対して抵抗性である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１７３】
一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、デカリジンを含み（および一部の実施形態では、デカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントであり）、化学療法薬（ドキソルビシンなど）が、二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートしている、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は、ＨＥＲ２＋抗体（たとえばトラスツズマブまたはペルツズマブ）、アントラサイクリン（ドキソルビシンなど）、またはチロシンキナーゼ阻害剤（ラパチニブなど）に対して抵抗性である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１７４】
一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌を有する対象を治療する方法であって、ナノ粒子を含むナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、上記ナノ粒子が、キャリアポリペプチドおよび二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドを含み、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が、約４：１であり、キャリアポリペプチドがＨｅｒＰＢＫ１０であり、ドキソルビシンが、二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートしている、方法を提供する。一部の実施形態では、この癌はＨＥＲ３＋癌である。一部の実施形態では、この癌は乳癌（トリプルネガティブ乳癌など）、グリオーマ、卵巣癌、または前立腺癌であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は、ＨＥＲ２＋抗体（たとえばトラスツズマブまたはペルツズマブ）、アントラサイクリン（ドキソルビシンなど）、またはチロシンキナーゼ阻害剤（ラパチニブなど）に対して抵抗性である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１７５】
一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌細胞を殺滅する方法であって、化学療法薬抵抗性癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含む、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は、ＨＥＲ２＋抗体（たとえばトラスツズマブまたはペルツズマブ）、アントラサイクリン（ドキソルビシンなど）、またはチロシンキナーゼ阻害剤（ラパチニブなど）に対して抵抗性である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本組成物中のナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。一部の実施形態では、本ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１７６】
一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌細胞を殺滅する方法であって、化学療法薬抵抗性癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は、ＨＥＲ２＋抗体（たとえばトラスツズマブまたはペルツズマブ）、アントラサイクリン（ドキソルビシンなど）、またはチロシンキナーゼ阻害剤（ラパチニブなど）に対して抵抗性である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１７７】
一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌細胞を殺滅する方法であって、化学療法薬抵抗性癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが正に荷電している、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は、ＨＥＲ２＋抗体（たとえばトラスツズマブまたはペルツズマブ）、アントラサイクリン（ドキソルビシンなど）、またはチロシンキナーゼ阻害剤（ラパチニブなど）に対して抵抗性である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１７８】
一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌細胞を殺滅する方法であって、化学療法薬抵抗性癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが正に荷電しており、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は、ＨＥＲ＋２抗体（たとえばトラスツズマブまたはペルツズマブ）、アントラサイクリン（ドキソルビシンなど）、またはチロシンキナーゼ阻害剤（ラパチニブなど）に対して抵抗性である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１７９】
一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌細胞を殺滅する方法であって、化学療法薬抵抗性癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、デカリジンを含み（および一部の実施形態ではデカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含む（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントである）、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は、ＨＥＲ２＋抗体（たとえばトラスツズマブまたはペルツズマブ）、アントラサイクリン（ドキソルビシンなど）、またはチロシンキナーゼ阻害剤（ラパチニブなど）に対して抵抗性である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１８０】
一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌細胞を殺滅する方法であって、化学療法薬抵抗性癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド；オリゴヌクレオチド結合セグメントに結合した二本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡなど）；ならびに二本鎖オリゴヌクレオチドに結合した化学療法薬（アントラサイクリン、たとえばドキソルビシンなど）を含み、細胞貫通セグメントが、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ペントンベースポリペプチドまたはそのバリアントであり）、オリゴヌクレオチド結合セグメントが、デカリジンを含み（および一部の実施形態ではデカリジンであり）、細胞標的化セグメントが、ヘレグリンまたはそのバリアントを含み（および一部の実施形態では、ヘレグリンまたはそのバリアントであり）、化学療法薬（ドキソルビシンなど）が、二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートしている、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は、ＨＥＲ２＋抗体（たとえばトラスツズマブまたはペルツズマブ）、アントラサイクリン（ドキソルビシンなど）、またはチロシンキナーゼ阻害剤（ラパチニブなど）に対して抵抗性である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１８１】
一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌細胞を殺滅する方法であって、化学療法薬抵抗性癌細胞を複数のナノ粒子と接触させることを含み、上記ナノ粒子が、キャリアポリペプチドおよび二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドを含み、キャリアポリペプチドが、細胞標的化セグメント、細胞貫通セグメント、およびオリゴヌクレオチド結合セグメントを含み、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比が約４：１であり、キャリアポリペプチドがＨｅｒＰＢＫ１０であり、ドキソルビシンが、二本鎖オリゴヌクレオチドの中にインターカレートしている、方法を提供する。一部の実施形態では、癌細胞はＨＥＲ３＋癌細胞である。一部の実施形態では、癌細胞は、乳癌細胞（トリプルネガティブ乳癌細胞など）、グリアの癌細胞、卵巣癌細胞、または前立腺癌細胞であり、このうちのいずれか１つがＨＥＲ３＋であり得る。一部の実施形態では、化学療法薬抵抗性癌は、ＨＥＲ２＋抗体（たとえばトラスツズマブまたはペルツズマブ）、アントラサイクリン（ドキソルビシンなど）、またはチロシンキナーゼ阻害剤（ラパチニブなど）に対して抵抗性である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば４：１から約６：１未満、または約４：１）である。一部の実施形態では、ナノ粒子中のキャリアポリペプチドの二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約６：１未満（たとえば約４：１から約６：１未満、約５：１、または約４：１）である。一部の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、約２０〜約５０塩基長である。一部の実施形態では、小分子薬物の二本鎖オリゴヌクレオチドに対するモル比は、約１：１〜約６０：１（たとえば約１０：１または約４０：１）である。一部の実施形態では、本ナノ粒子の大きさの平均は、約５０ｎｍ以下である。
【０１８２】
医薬組成物
一部の実施形態では、本明細書中記載の組成物は、本明細書中記載の複数のナノ粒子および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物として、製剤化されている。
【０１８３】
一部の実施形態では、本医薬組成物は、散剤などの固体である。散剤は、たとえばナノ粒子を含む溶液を凍結乾燥することにより、形成することができる。散剤は、たとえば散剤を水系の液体（たとえば水またはバッファー）と混合することにより、再構成することができる。一部の実施形態では、本医薬組成物は、液体、たとえば水溶液（生理食塩水またはリンガー溶液など）に懸濁したナノ粒子である。一部の実施形態では、本医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤、たとえば充填剤、結合剤、コーティング剤、保存剤、滑沢剤、香料、甘味料、着色剤、溶媒、緩衝剤、キレート剤、または安定剤を含む。
【０１８４】
薬学的に許容される充填剤の例として、セルロース、二塩基性リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、結晶セルロース、スクロース、ラクトース、グルコース、マンニトール、ソルビトール、マルトール、アルファ化デンプン、コーンスターチ、またはポテトスターチが挙げられる。薬学的に許容される結合剤の例として、ポリビニルピロリドン、スターチ、ラクトース、キシリトール、ソルビトール、マルチトール、ゼラチン、スクロース、ポリエチレングリコール、メチルセルロース、またはセルロースが挙げられる。薬学的に許容されるコーティング剤の例として、ヒドロキシルプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、シェラック、コーンタンパク質ゼイン、またはゼラチンが挙げられる。薬学的に許容される崩壊剤の例として、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、またはデンプングリコール酸ナトリウムが挙げられる。薬学的に許容される潤沢剤の例として、ポリエチレングリコール、ステアリン酸マグネシウム、またはステアリン酸が挙げられる。薬学的に許容される保存剤の例として、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、またはソルビン酸が挙げられる。薬学的に許容される甘味料の例として、スクロース、サッカリン、アスパルテーム、またはソルビトールが挙げられる。薬学的に許容される緩衝剤の例として、炭酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、または酒石酸塩が挙げられる。
【０１８５】
製造品およびキット
同様に、適切なパッケージにある本明細書中記載の組成物を含む製造品を、提供する。本明細書中記載の組成物に適したパッケージは、当該分野で知られており、たとえば、バイアル（密閉したバイアルなど）、容器、アンプル、ビン、ジャー、可撓性パッケージ（たとえば密閉したマイラーバッグまたはプラスチックバッグ）などが挙げられる。これら製造品は、さらに滅菌かつ／または密閉されていてもよい。
【０１８６】
本発明はまた、本明細書中記載の組成物（または製造物品）を含むキットを提供し、本明細書中記載される使用などの、本組成物を使用する方法に関する説明書（複数可）をさらに含んでもよい。本明細書中記載されるキットは、他のバッファー、希釈剤、フィルター、ニードル、シリンジ、および本明細書中記載のいずれかの方法を行うための説明書を含む添付文書を含む、商業上の観点および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
【０１８７】
実施例
本明細書中提供される実施例は、単に例示の目的のために含まれており、本発明の範囲の範囲を限定するようには意図されていない。
【０１８８】
実施例１：ナノ粒子の作製
キャリアポリペプチド、二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド、およびドキソルビシン（「ＨｅｒＤｏｘ」粒子と呼ぶ）を含むナノ粒子を、以下の方法を使用して作製した。
【０１８９】
一本鎖の相補的ＤＮＡオリゴヌクレオチド（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ  Ｏｐｅｒｏｎ；配列は以下の通りである：ＬＬＡＡ−５：５’−ＣＧＣＣＴＧＡＧＣＡＡＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＡＴＣＣＧＣＡＡＧ−３’（配列番号５）およびＬＬＡＡ−３：３’−ＧＣＧＧＡＣＴＣＧＴＴＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＴＡＧＧＣＧＴＴＣ−５’）（配列番号６））を、等モル比の各オリゴヌクレオチドを沸騰水で５分間インキュベートすることにより、アニールした。次に、オリゴヌクレオチドを、室温で３０分間冷却した。
【０１９０】
次に、アニールした二本鎖のＤＮＡオリゴヌクレオチドを、ドキソルビシンＨＣｌと１：４０（ＤＮＡ：Ｄｏｘ）のモル比で、室温で３０分間インキュベートした。
【０１９１】
次に、ドキソルビシンと結合した二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドを、Ｈｅｒ細胞標的化セグメント、ＰＢ細胞貫通セグメント、およびデカリジン（「Ｋ１０」）オリゴヌクレオチド結合セグメントを含むキャリアポリペプチド（「ＨｅｒＰＢＫ１０」）と、ＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水（ＨＢＳ）中４：１（ＨｅｒＰＢＫ１０：ＤＮＡ−ドキソルビシン）のモル比（よって、４：１：４０（ＨｅｒＰＢＫ１０：ＤＮＡ：ドキソルビシン）のモル比）でインキュベートした。キャリアポリペプチドおよびドキソルビシンと結合した二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドの混合物を、氷中で２時間揺動することにより、ＨｅｒＤｏｘ粒子を形成した。
【０１９２】
次に、得られたナノ粒子に、超遠心分離を行った。具体的には、滅菌ＨＢＳ  １２ｍｌを、滅菌の１０％グリセロールで２４時間プレインキュベートした５０ｋＤカットオフの遠心フィルター（Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｆｉｌｔｅｒ）（Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５）に添加した。ＨｅｒＤｏｘ混合物を、遠心フィルター中の冷却したＨＢＳに添加した。次に、フィルターチューブを、最終的な体積が２００μＬ〜５００μＬｎとなるまで、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｊ６−ＨＣ遠心分離機で、２５００ＲＰＭ（５０００×ｇ）で１０〜２０分間回転させた。次に、濃縮したＨｅｒＤｏｘを、１．７ｍＬのマイクロチューブに移した。
【０１９３】
空のナノ粒子を、ＨｅｒＤｏｘナノ粒子で記載されている通りではあるが、二本鎖オリゴヌクレオチドをドキソルビシンとインキュベートしていない二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド（ドキソルビシンなし）と、ＨｅｒＰＢＫ１０をインキュベートすることにより、調製した。同様の混合物を、ＨｅｒＰＢＫ１０対ＤＮＡのモル比２：１、３：１、４：１、５：１、および６：１を使用し、および／またはｄｓＤＮＡ対ドキソルビシンのモル比約１：１０または約１：４０を使用して作製することができる。
【０１９４】
以下に記載の実施例に関する治療用量は、ＨｅｒＤｏｘ中のドキソルビシンの濃度を反映しており、これは、測定された吸光度（Ａ４８０）をＤｏｘの吸光度の検量線に対して外挿することにより決定した（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  ＭＡ；  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）。空のナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０−ＤＮＡ）に関する治療濃度の正規化は、ＨｅｒＤｏｘと比較したＨｅｒＰＢＫ１０の含有量に基づいた。
【０１９５】
実施例２：ナノ粒子の大きさ
ＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドを、ドキソルビシンをインターカレートした二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ対ドキソルビシンのモル比１：１０）と、２：１、３：１、４：１、５：１、または６：１のモル比で組み合わせた。次に、この混合物を動的光散乱法（ＤＬＳ）に供し、得られたナノ粒子の直径を決定した。ＨｅｒＰＢＫ１０（オリゴヌクレオチドまたはドキソルビシンを含まない）およびドキソルビシンをインターカレートした二本鎖ＤＮＡ（ＨｅｒＰＢＫ１０を含まない）の溶液も、同様にＤＬＳにより測定した。結果を、図２に提示する。図２でわかるように、４：１、５：１、および６：１（ＨｅｒＰＢＫ１０対ｄｓＤＮＡ）のモル比で組み合わせた場合に、約３５ｎｍのナノ粒子が形成された。
【０１９６】
実施例３：ナノ粒子のＣｒｙｏＥＭ
ドキソルビシンを、二本鎖ＤＮＡと組み合わせた後、この混合物をＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドと、４：１：１０、４：１：４０、または６：１：１０（ＨｅｒＰＢＫ１０対ｄｓＤＮＡ対ドキソルビシン）のモル比で組み合わせた。次に、この混合物を、ＣｒｙｏＥＭを使用してイメージングし、図３に提示した。図３に示されているように３つ全ての混合物が、同様の大きさおよび形態のナノ粒子を生産する。
【０１９７】
実施例４：癌細胞および化学療法薬抵抗性癌細胞を殺滅するためのナノ粒子の使用
ドキソルビシンを含まないナノ粒子（ＨｅｒＰＢＫ１０対ｄｓＤＮＡのモル比が４：１、この実施例では「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ」と呼ぶ）、ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンのモル比が４：１；４０のナノ粒子（この実施例では、Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）と呼ぶ）、またはＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシンのモル比が６：１；１０であるナノ粒子（この実施例ではＥｏｓ−００１（６：１：１０）と呼ぶ）を、様々なタイプの癌細胞を殺滅する能力に関して、ＬｉｐｏＤｏｘと比較した。
【０１９８】
様々な用量のナノ粒子を、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５（ヒト癌）細胞、ＢＴ４７４（ヒト乳癌）細胞、ＢＴ４７４−Ｒ（トラスツズマブ抵抗性ヒト乳癌）細胞、ＪＩＭＴ１（トラスツズマブに生来抵抗性である患者由来のヒト乳癌細胞）、Ｕ２５１（ヒトグリオーマ）細胞、Ａ２７８０−ＡＤＲ（ドキソルビシン抵抗性ヒト卵巣癌）細胞、４Ｔ１（マウストリプルネガティブ乳癌）細胞、ＳＫＯＶ３（ヒト卵巣癌）細胞、ＬＮＣａＰ−ＧＦＰ（ヒト前立腺癌）細胞、ＲＡＮＫＬ（ヒト骨転移性前立腺癌細胞）、またはＢＴ−５４９（ヒトトリプルネガティブ乳癌）細胞のいずれかと、インキュベートした。
【０１９９】
細胞
ＳＫＢＲ３細胞およびＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞を、ＡＴＣＣから得た。ＢＴ−４７４細胞およびＪＩＭＴ１細胞を、シダーズ・サイナイ医療センター（Ｃｅｄａｒｓ−Ｓｉｎａｉ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ）から得た。ＪＩＭＴ１細胞を除くすべての細胞を、完全培地ＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地）、１０％熱失活ウシ胎児血清および１００Ｕ／ｍＬペニシリン／１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン中、５％ＣＯ２下、３７℃で維持した。ＪＩＭＴ１細胞を、ＲＰＭＩ（ロズウェルパーク記念研究所培地）、１０％熱失活ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍＬペニシリン／１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、および１ｍＭピルビン酸ナトリウム中、５％ＣＯ２下で維持した。
【０２００】
細胞表面のＥＬＩＳＡアッセイ
様々な細胞株の表面に存在するＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、またはＨＥＲ４の相対量を、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して決定した。ウェルあたり８，０００または１０，０００個の細胞を、壁が黒で底が透明な９６ウェルプレートに播種し、５％ＣＯ２下３７℃で４８時間生育させた。細胞を、ＰＢＳ＋（１％ＭｇＣｌ２および１％ＣａＣｌ２を含む１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ））で１回洗浄し、ＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で１２分間揺動させながら固定し、次に、ＰＢＳ中３％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と共に軽く攪拌しながら３時間ブロックした。ブロッキング溶液を除去し、表記の一次抗体（ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、またはＨＥＲ４の抗体）を、ＰＢＳ中３％ＢＳＡで希釈した１：５００の希釈でプレートに添加し、揺動させながら４℃で一晩インキュベートした。プレートをＰＢＳで３回洗浄し、この洗浄間に軽く攪拌しながら５分間インキュベートを行った。適切な二次抗体を、ＰＢＳ中３％ＢＳＡで希釈した１：１０００の希釈で添加し、プレートを軽く攪拌しながら室温で１時間インキュベートした。細胞をＰＢＳで３回洗浄し、洗浄間に軽く攪拌しながら５分間インキュベートを行い、次にｄｉＨ２Ｏで１回洗浄した。すべての液体をウェルから除去し、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）１００μＬを各ウェルに添加し、プレートを、暗所で軽く攪拌しながら約３０分発色させた。十分青い色が発色した後、反応を、プレートリーダーを使用して６５０ｎｍで吸光度を測定することにより、定量化した。１ＮＨＣｌ  １００μＬをプレートの各ウェルに添加して反応を停止させ、再度プレートを４５０ｎｍで読み取った。ＴＭＢ／ＨＣｌ溶液を除去し、プレートを、１×ＰＢＳで２回洗浄した。１００％エタノール中０．１％クリスタルバイオレット５０μＬを各ウェルに添加した。プレートを、軽く揺動させながら暗所で３０分間インキュベートした。プレートをＰＢＳで十分に洗浄し、９５％エタノール１００μＬを各ウェルに添加して、細胞からクリスタルバイオレットを放出させた。次にプレートを５９０ｎｍで読み取った。クリスタルバイオレットは、ウェルあたりの細胞数に近似しており、各アッセイの正規化およびプレート間の比較を可能にする。
【０２０１】
細胞生存率アッセイ
記載の組成物へ曝露した後の相対的な細胞生存を、細胞生存率アッセイを使用して測定した。ウェルあたり１５，０００、１０，０００、または８，０００個の細胞を、壁が黒く底が透明な９６ウェルプレートに播種した。４８時間後に、培地を吸引し、完全培地、および表記の濃度のＥｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ、Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）、Ｅｏｓ−００１（６：１：１０）、またはＬｉｐｏＤｏｘと全量４０μＬで交換した。プレートを５％ＣＯ２下、３７℃で４時間揺動させ、次に、完全培地６０μＬを各ウェルに添加し、全量を１００μＬにし、揺動させることなく、５％ＣＯ２下、３７℃でインキュベーションを４４時間継続した。インキュベーションの終了時に、相対的な細胞生存率を、製造社の説明の通りのＭＴＳアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を介して、決定した。具体的には、培地をウェルから除去し、新鮮な完全培地１００μＬを各ウェルに添加した。調製したＭＴＳ試薬２０μＬを各ウェルに添加した。次に、プレートを、５％ＣＯ２下、３７℃で揺動させながらインキュベートし、１時間目、２時間目、および３時間目に、分光光度計を使用して４９０ｎｍで読み取りを行った。この結果を、以下の比に関して示す：無処置のグループの生存細胞数により除算した処置グループの生存細胞数。よって、細胞生存１．０は、処置した細胞および無処置の細胞が同じ度合で生存したことを表している。対して、０．２の比は、無処置の細胞のグループと比較して、処置した細胞のうち２０％のみが生存したことを意味している。
【０２０２】
結果
この結果を、図面に示す。図面を通して、「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（４：１）」は、ＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドおよび二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドを４：１（ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ）のモル比で含むが、ドキソルビシンを含まないナノ粒子を表し；「Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（６：１）」は、ＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチドおよび二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドを６：１（ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ）のモル比で含むが、ドキソルビシンを含まないナノ粒子を表し；「Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）」は、ＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチド、二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド、およびドキソルビシンを、４：１：４０（ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシン）のモル比で含むナノ粒子を表し；「Ｅｏｓ−００１（６：１：１０）」は、ＨｅｒＰＢＫ１０キャリアポリペプチド、二本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド、およびドキソルビシンを、６：１：１０（ＨｅｒＰＢＫ１０：ｄｓＤＮＡ：ドキソルビシン）のモル比で含むナノ粒子を表し；「ＬｉｐｏＤｏｘ」は、市販のリポソーマルドキソルビシンを表す。各図面の挿入図は、各細胞タイプの表面に存在するＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、またはＨＥＲ４の相対量である。
【０２０３】
図４を見ると、ＬｉｐｏＤｏｘおよびＥｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（４：１）は、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞の生存において特筆すべき効果を有していないことが示されている。対照的に、Ｅｏｓ−００１（６：１：１０）粒子は、１μＭ超のドキソルビシンの濃度で、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞生存の有意な減少を実証している。Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）粒子は、１μＭ超のドキソルビシンの濃度で、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞生存のさらにより有意な減少を実証し、約１０μＭのドキソルビシンの濃度で生存しているのは細胞の２０％未満である。挿入されたグラフは、様々なＨＥＲ受容体の細胞表面のレベルを比較しており、ＨＥＲ３が、最も量が多い受容体であることが示されている。
【０２０４】
図５Ａを見ると、Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（４：１）が、ＢＴ４７４ヒト乳癌細胞の生存において特筆すべき効果を有していないことが示されている。ＬｉｐｏＤｏｘ、Ｅｏｓ−００１（６：１：１０）、およびＥｏｓ−００１（４：１：４０）は、それぞれ、ＢＴ４７４細胞の生存を減少させたが、Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）がＢＴ−４７４細胞の生存を最も有意に減少させた。図５Ｂを見ると、Ｅｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（４：１）またはＥｍｐｔｙ  Ｅｏｓｏｍｅｓ（６：１）のいずれも、ＢＴ４７４−Ｒトラスツズマブ抵抗性ヒト乳癌細胞の生存において特筆すべき効果を有していなかったことが示されている。ＬｉｐｏＤｏｘは、約１μＭドキソルビシンの投与後に、部分的に細胞生存を減少させた。しかしながら、Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）またはＥｏｓ−００１（６：１：１０）の投与は、おおよそ同じ濃度で、相対的な細胞生存をさらに大きく減少させた。
【０２０５】
図６を見ると、ＪＩＭＴ１細胞に及ぼすＬｉｐｏＤｏｘの効果は、薬物濃度を約１０倍増加させたにも関わらず、約４０％生存で定常に達することが示されている。しかしながら、Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）およびＥｏｓ−００１（６：１：１０）は、より低い濃度でＪＩＭＴ１細胞の生存を低減し、１０％未満の生存率を達成した。挿入されたグラフは、様々なＨＥＲ受容体の細胞表面でのレベルを比較している。
【０２０６】
図７を見ると、ＬｉｐｏＤｏｘが、Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）またはＥｏｓ−００１（６：１：１０）よりも有意に高い濃度のドキソルビシンで、Ｕ２５１ヒトグリオーマ細胞の生存を低減させることが示されている。Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）またはＥｏｓ−００１（６：１：１０）はいずれも、約１０μＭドキソルビシンの濃度で、約２０％未満の生存をもたらしている。対照的に、ＬｉｐｏＤｏｘの投与は、同じ濃度で約４０％細胞生存をもたらしている。挿入されたグラフは、様々なＨＥＲ受容体の細胞表面でのレベルを比較しており、ＨＥＲ３が最も量の多い受容体であることが示されている。
【０２０７】
図８を見ると、Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）が、ＬｉｐｏＤｏｘよりもＡ２７８０−ＡＤＲドキソルビシン抵抗性ヒト卵巣癌細胞の細胞生存の減少に有意に高い効果を有することが示されている。
【０２０８】
図９を見ると、Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）が、ＬｉｐｏＤｏｘよりも４Ｔ１マウストリプルネガティブ乳癌細胞の細胞生存の減少に有意に高い効果を有することが示されている。
【０２０９】
図１０を見ると、Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）が、ＬｉｐｏＤｏｘよりもＳＫＯＶ３ヒト卵巣癌細胞の細胞生存の減少に有意に高い効果を有することが示されている。
【０２１０】
図１１Ａを見ると、Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）が、ＬｉｐｏＤｏｘよりもＬＮＣａＰ−ＧＦＰヒト前立腺癌細胞の細胞生存の減少に有意に高い効果を有することが示されている。図１１Ｂを見ると、Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）が、ＬｉｐｏＤｏｘよりもＲＡＮＫＬヒト骨転移性前立腺癌細胞の細胞生存の減少に有意に高い効果を有することが示されている。図１１Ｃは、ＬＮＣａＰ−ＧＦＰ細胞およびＲＡＮＫＬ細胞におけるＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４の相対的な発現を示している。
【０２１１】
図１２Ａは、Ｅｏｓ−００１（４：１：４０）が、ＬｉｐｏＤｏｘよりも、ＢＴ５４９トリプルネガティブ乳癌細胞の生存の減少に有意に高い効果を有することを示している。図１２Ｂは、ＢＴ５４９細胞におけるＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４の相対的な発現を示している。
【０２１２】
実施例５：化学療法薬抵抗性癌細胞の殺滅における抗ＨＥＲ２抗体の治療とナノ粒子の比較
ＢＴ４７４（ヒト乳癌）細胞、ＢＴ４７４−ＴＲ（トラスツズマブ抵抗性ヒト乳癌）細胞、ＳＫＢＲ３（ヒト乳癌）細胞、およびＳＫＢＲ３−ＴＲ（トラスツズマブ抵抗性乳癌）細胞を、様々な濃度のＥｏｓ−００１、トラスツズマブ、またはトラスツズマブおよびペルツズマブの組み合わせとインキュベートした。Ｅｏｓ−００１の濃度は、μＭドキソルビシンで報告し、トラスツズマブまたはペルツズマブの濃度は、μＭ抗体で報告する。ウェルあたりの細胞を、壁が黒く底が透明な９６ウェルプレートに播種した。４８時間後に、培地を吸引し、完全培地、および表記の濃度のＥｏｓ−００１、トラスツズマブ（Ｔｚ）、もしくはトラスツズマブとペルツズマブとの組み合わせ（Ｔｚ＋Ｐｚ）、または未処置の対照と全量４０μＬで交換した。プレートを、５％ＣＯ２下、３７℃で４時間揺動させ、次に完全培地６０μＬを各ウェルに添加して全量を１００μＬにし、揺動させることなく、５％ＣＯ２下、３７℃で４４時間インキュベーションを継続した。インキュベートの終了時に、相対的な細胞生存率を、製造社の説明の通りのＭＴＳアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を介して、決定した。具体的には、培地をウェルから除去し、新鮮な完全培地１００μＬを各ウェルに添加した。調製したＭＴＳ試薬２０μＬを各ウェルに添加した。次に、プレートを、５％ＣＯ２下、３７℃で揺動させながらインキュベートし、１時間目、２時間目、および３時間目に、分光光度計を使用して４９０ｎｍで読み取りを行った。この結果を、以下の比に関して示す：無処置のグループの生存細胞数により除算した処置グループの生存細胞数。
【０２１３】
結果を、図１３に示す。トラスツズマブ、ならびにトラスツズマブおよびペルツズマブの組み合わせによる処置はＢＴ−４７４細胞の殺滅に有効であったがＢＴ−４７４−ＴＲ細胞には有効ではなかった。Ｅｏｓ−００１は、ＢＴ４７４細胞およびＢＴ４７４−ＴＲ細胞の両方の殺滅に有効であり、Ｅｏｓ−００１ナノ粒子が、トラスツズマブ、ならびにトラスツズマブおよびペルツズマブの組み合わせに抵抗性のある細胞の殺滅に有効であることを実証している。トラスツズマブもトラスツズマブおよびペルツズマブの組み合わせも、ＳＫＢＲ３細胞またはＳＫＢＲ３−ＴＲ細胞の殺滅に有効ではなかった。しかしながら、Ｅｏｓ−００１ナノ粒子は、ＳＫＢＲ３細胞株およびＳＫＢＲ３−ＴＲ細胞株の殺滅に有効であった。
【０２１４】
実施例６：トラスツズマブ、ペルツズマブ、およびＥｏｓ−００１ナノ粒子に対するＢＴ４７４−ＴＲ細胞の感受性
ＢＴ−４７４−ＴＲ細胞のトラスツズマブまたはペルツズマブによる処置を、Ｅｏｓ−００１による処置、Ｅｏｓ−００１およびペルツズマブでの併用処置、または４時間のペルツズマブでの前処置後のＥｏｓ−００１による処置と比較した。ウェルあたりの細胞を、壁が黒く底が透明な９６ウェルプレートにプレーティングした。４８時間後に、培地を吸引し、完全培地、および表記の濃度のトラスツズマブ（Ｔｚ）、ペルツズマブ（Ｐｚ）、Ｅｏｓ−００１、またはＥｏｓ−００１およびペルツズマブの組み合わせと、全量４０μＬで交換した。プレートを、５％ＣＯ２下、３７℃で４時間揺動させ、次に完全培地６０μＬを各ウェルに添加して、全量を１００μＬにし、揺動させることなく、５％ＣＯ２下、３７℃で４４時間インキュベーションを継続した。Ｅｏｓ−００１への曝露の前にペルツズマブで前処置した試料では、細胞を、表記の量のペルツズマブに全量４０μＬで４時間曝露し、細胞を、５％ＣＯ２下、３７℃で４時間揺動させ、次に完全培地６０μＬおよび表記の量のＥｏｓ−００１を添加して全量を１００μＬにした。インキュベーションの終了時に、相対的な細胞生存率を、製造社の説明の通りのＭＴＳアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を介して、決定した。具体的には、培地をウェルから除去し、新鮮な完全培地１００μＬを各ウェルに添加した。調製したＭＴＳ試薬２０μＬを各ウェルに添加した。次に、プレートを、５％ＣＯ２下、３７℃で揺動させながらインキュベートし、分光光度計を使用して４９０ｎｍで読み取りを行った。これらの結果を図１４に示し、Ｅｏｓ−００１が、トラスツズマブまたはペルツズマブよりも有効であることを表している。Ｅｏｓ−００１とペルツズマブを組み合わせても、Ｅｏｓ−００１の作用の競合阻害が起こらず、このことはＥｏｓ−００１の抗癌作用が、ＨＥＲ３への結合を介して仲介されるが、ペルツズマブが妨害するＨＥＲ−２−ＨＥＲ３相互作用に依存していないことを示唆している。
【０２１５】
実施例７：Ｅｏｓ−００１ナノ粒子は、トラスツズマブ抵抗性細胞においてアップレギュレートしているＨＥＲ３を標的とする。
トラスツズマブ抵抗性ＢＴ−４７４−ＴＲ細胞およびトラスツズマブ抵抗性ＳＫＢＲ３−ＴＲ細胞は、非抵抗性親細胞株と比較して、表面のＨＥＲ３が増加している（図１５Ａ参照）。Ｅｏｓ−００１ナノ粒子の、ＨＥＲ標的化の毒性の寄与を検証するために、ＨＥＲ３ペプチドを、競合阻害剤として使用した。ＨＥＲ３ペプチドを、ヘレグリン標的化ドメインと結合している、Ｅｏｓ−００１粒子とプレインキュベートした。ＢＴ−４７４細胞、ＢＴ−４７４−ＴＲ細胞、ＳＫＢＲ３細胞、またはＳＫＢＲ３−ＴＲ細胞を、Ｅｏｓ−００１ナノ粒子の存在下、およびＨＥＲ３ブロッキングペプチドの存在下または非存在下で、インキュベートした。ＨＥＲ３ブロッキングペプチドと共にＥｏｓ−００１によって処置した試料では、ナノ粒子およびＨＥＲ３ブロッキングペプチドを、等モル比のＨＥＲ３：ＨＥＰＢＫ１０で、冷却ＰＢＳ中で１時間、組み合わせた。Ｅｏｓ−００１ナノ粒子またはＨＥＲ３ブロッキングペプチドによって処置したＥｏｓ−００１ナノ粒子を使用して、０．１２５μＭ（ＢＴ４７４細胞またはＢＴ−４７４−ＴＲ細胞）または１μＭ（ＢＳＫＢＲ３細胞またはＳＫＢＲ３−ＴＲ細胞）の最終濃度で細胞を処置した。細胞の生存を、４８時間後に測定し、偽処置生理食塩水によって処置した細胞と比較した。これらの結果を、図１６Ｂに示す（Ｎ＝３、＊は、偽処置と比較してｐ＜０．０５を表す）。図１５Ｂに示されているように、Ｅｏｓ−００１ナノ粒子は単独で、４つすべての細胞タイプを殺滅した。驚くべきことに、Ｅｏｓ−００１は、ＢＴ−４７４細胞よりもＢＴ−４７４−ＴＲ細胞の殺滅に有効であった。ＨＥＲ３ペプチドの存在は、全ての細胞タイプの殺滅において、Ｅｏｓ−００１の有効性を限定しており、Ｅｏｓ−００１粒子のＨＥＲ３の標的化を示している。
【０２１６】
実施例８：トラスツズマブとのプレインキュベーションは、Ｅｏｓ−００１ナノ粒子の活性を増強する。
ＨＥＲ３は、ＨＥＲ２阻害のわずか４時間後に、転写および翻訳によって増加する。非抵抗性細胞と比較してトラスツズマブ抵抗性細胞におけるＥｏｓ−００１ナノ粒子の高い効力は、トラスツズマブが、Ｅｏｓ−００１ナノ粒子のアジュバントとして作用し、Ｈｅｒ３の増加を誘導して抵抗性細胞に対するＥｏｓ−００１の標的化を増大させ得ることを示唆している。このことを試験するために、非トラスツズマブ抵抗性のＳＫＢＲ３細胞、ＢＴ−４７４細胞、およびＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞、ならびにトラスツズマブ抵抗性のＳＫＢＲ３−ＴＲ細胞およびＢＴ−４４７−ＴＲ細胞を、トラスツズマブにより４時間または２４時間前処置した後に、Ｅｏｓ−００１による処置を行った。Ｅｏｓ−００１は、トラスツズマブと比較してすべての細胞株において細胞の殺滅の改善を示したが、トラスツズマブによる４時間または１２時間の前処置により、非抵抗性細胞株においてもＥｏｓ−００１の有効性が増大した。結果を、図１６に示す。非トラスツズマブ抵抗性ＳＫＢＲ３細胞では、Ｅｏｓ−００１単独では、最高投与濃度でも中程度の細胞死であったが、トラスツズマブによる４時間または２４時間の前処置により、有効性が５０％増加した。同様に、非トラスツズマブ抵抗性ＢＴ−４７４細胞は、トラスツズマブと比較して、Ｅｏｓ−００１ナノ粒子により細胞死の中程度の増加を示したが、トラスツズマブによる処置と比較して、トラスツズマブによって４時間前処置した後では５０％近く増加し、またはトラスツズマブによって２４時間前処置した後では７５％増加した。同様の結果が、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５細胞で見られた。トラスツズマブ抵抗性細胞株（ＳＫＢＲ３−ＴＲおよびＢＴ４７４−ＴＲ）では、トラスツズマブによる前処置によって、Ｅｏｓ−００１に関して有効性の中程度の増加をもたらした。しかしながら、トラスツズマブ抵抗性ＢＲ３−ＴＲ細胞株およびＢＴ−４７４−ＴＲ細胞株は、トラスツズマブによる前処置がなくともＥｏｓ−００１により効率的に殺滅される。これらの結果は、トラスツズマブなどのＨＥＲ２阻害剤またはＨＥＲ２抗体が、特に非トラスツズマブ抵抗性細胞株において、Ｅｏｓ−００１による処置にとって有用なアジュバントとして作用できることを表している。
【０２１７】
実施例９：化学療法薬抵抗性癌細胞の殺滅におけるラパチニブによる処置とナノ粒子の比較
ＢＴ４７４（ヒト乳癌）細胞、ＢＴ４７４−ＴＲ（トラスツズマブ抵抗性ヒト乳癌）細胞、ＳＫＢＲ３（ヒト乳癌）細胞、ＳＫＢＲ３−ＴＲ（トラスツズマブ抵抗性乳癌）細胞、およびＪＩＭＴ−１（トラスツズマブ抵抗性、ペルツズマブ抵抗性ヒト乳癌）細胞を、様々な濃度のＥｏｓ−００１またはラパチニブとインキュベートした。Ｅｏｓ−００１の濃度は、μＭドキソルビシンで報告し、ラパチニブの濃度は、μＭラパチニブで報告する。ウェルあたりの細胞を、壁が黒く底が透明な９６ウェルプレートに播種した。４８時間後に、培地を吸引し、完全培地、および表記の濃度のＥｏｓ−００１、ラパチニブ、または無処置の対照と、全量が４０μＬとなるように交換した。プレートを、５％ＣＯ２下、３７℃で４時間揺動させ、次に、完全培地６０μＬを各ウェルに添加し、全量１００μＬにし、揺動させることなく、５％ＣＯ２下、３７℃で４４時間インキュベーションを継続した。インキュベーションの終了時に、相対的な細胞生存率を、製造社の説明の通りのＭＴＳアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を介して、決定した。具体的には、培地をウェルから除去し、新鮮な完全培地１００μＬを各ウェルに添加した。調製したＭＴＳ試薬２０μＬを各ウェルに添加した。次に、プレートを、５％ＣＯ２下、３７℃で揺動させながらインキュベートし、１時間目、２時間目、および３時間目に、分光光度計で、読み取りを４９０ｎｍで行った。この結果を、以下の比に関して示す：無処置のグループの生存細胞数により除算した処置グループの生存細胞数。
【０２１８】
結果を、図１７に示す。Ｅｏｓ−００１（破線、白丸）およびラパチニブ（実線）は、ＢＴ−４７４細胞およびＳＫＢＲ３細胞の処置に同様に有効であった。ラパチニブは、トラスツマブ抵抗性細胞株ＢＴ−４７４−ＴＲおよびＳＫＢＲ３−ＴＲの殺滅にわずかに有効であったが、Ｅｏｓ−００１は、ＢＴ−４７４−ＴＲ細胞株およびＳＫＢＲ３−ＴＲ細胞株の殺滅に有意により有効であった。Ｅｏｓ−００１は、非抵抗性細胞株よりもトラスツズマブ抵抗性細胞株の殺滅に有効であった。さらに、ラパチニブは、トラスツズマブ抵抗性ＪＩＭＴ−１細胞株を殺滅することができなかったが、対してＥｏｓ−００１は、これら細胞の殺滅に有効であった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６】
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【図１７】
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【手続補正書】
【提出日】平成31年1月28日(2019.1.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
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2019517477.tif 000026