(57)【要約】  本発明は、膣症を治療又は予防するための有効成分として塩と、糖と、乳酸菌との本発明の組合せを含む組成物に関する。本発明の組成物は、様々な実験、例えば、（１）ｐＨ及び乳酸レベルの変化を特定することによる膣症原因菌の増殖からの間接阻害活性試験（実験例１）、（２）試験試料の感受性を判定することによる膣症原因菌の増殖からの直接阻害活性試験（実験例２）、（３）簡略臨床試験により強力な抗菌活性を示し、最終的に、上記組合せが上記試験において強力な抗菌活性を示すことを確認した。したがって、本発明の組合せは、医薬組成物、健康機能性食品、食品添加物、局所組成物、及び洗浄剤組成物の形態で、膣症を緩和、治療、又は予防するのに有用となり得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
膣症の治療及び予防に対する有効成分として塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む医薬組成物。
【請求項２】
前記塩が、精製塩、加工塩、及び未精製塩からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記糖が、単糖、二糖、オリゴ糖、及び多糖からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記糖が、キシロース、アラビノース、グルコース、マンノース、フルクトース、ガラクトース、ラクツロース、ラクチトール、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、フルクトオリゴ糖、ラフィノース、スタキオース、マルトデキストリン、アミロース、セルロース、及びペクチンからなる群から選択される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記乳酸菌が、ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・ペントーサス、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・カゼイ亜種パラカゼイ、ラクトバチルス・ラムノーサス、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・デルブリュッキ、ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種ブルガリカス、ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキ、ラクトバチルス・ファーメンタム、ラクトバチルス・ガセリ、ラクトバチルス・ロイテリ、ラクトバチルス・ブレビス、ラクトバチルス・セロビオスス、ラクトバチルス・クリスパタス、ラクトバチルスＧＧ、ラクトバチルス・ジョンソニイ、ラクトバチルス・ラクチス、ラクトバチルス・サリバリウス等のラクトバチルス属菌；ビフィドバクテリウム・ロングム、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータム、ビフィドバクテリウム・カテヌラータム、ビフィドバクテリウム・インファンティス、ビフィドバクテリウム・テルモフィルム等のビフィドバクテリウム属菌；バチルス・セレウストヨイ、バチルス・セレウス等のバチルス属菌；ストレプトコッカス・サーモフィルス、ストレプトコッカス・クレモリス、ストレプトコッカス・インファンタリウス、ストレプトコッカス・インターメジウス、ストレプトコッカス・ラクチス、ストレプトコッカス・サリバリウス亜種サーモフィルス等のストレプトコッカス属菌；エンテロコッカス・フェカーリス、エンテロコッカス・フェシウム等のエンテロコッカス属菌；サッカロミセス・セレビシエ、サッカロミセス・ブラウディ等のサッカロミセス属菌；ロイコノストック・シトレウム、ロイコノストック・メセンテロイデス等のロイコノストック属菌からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記乳酸菌が、ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・ペントーサス、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・カゼイ亜種パラカゼイ、ラクトバチルス・ラムノーサス、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・デルブリュッキ、ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種ブルガリカス、ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキ、ラクトバチルス・ファーメンタム、ラクトバチルス・ガセリ、ラクトバチルス・ロイテリ、ラクトバチルス・ブレビス、ラクトバチルス・セロビオスス、ラクトバチルス・クリスパタス、ラクトバチルスＧＧ、ラクトバチルス・ジョンソニイ、ラクトバチルス・ラクチス、ラクトバチルス・サリバリウス等のラクトバチルス属菌、及びビフィドバクテリウム・ロングム、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータム、ビフィドバクテリウム・カテヌラータム、ビフィドバクテリウム・インファンティス、ビフィドバクテリウム・テルモフィルム等のビフィドバクテリウム属菌からなる群から選択される、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記塩と、糖と、乳酸菌との組合せが、１：１００〜０．０１：１００〜０．０１重量部（重量／重量）の混合比率の塩と、糖と、乳酸菌との組合せである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記膣症が、細菌性腟症、真菌性腟炎、及びトリコモナス腟炎からなる群から選択される、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
膣症の緩和及び予防に対する有効成分として塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む健康機能性食品。
【請求項１０】
食品、健康飲料、又は栄養補助食品の形態である、請求項９に記載の健康機能性食品。
【請求項１１】
食品学的に許容可能な添加剤とともに、塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む、膣症の予防又は緩和に対するヘルスケア食品。
【請求項１２】
哺乳動物における膣症の治療又は予防に用いられる医薬の製造における、塩と、糖と、乳酸菌との組合せの使用。
【請求項１３】
哺乳動物において膣症を治療又は予防する方法であって、有効量の塩と、糖と、乳酸菌との組合せを、その薬学的に許容可能な担体とともに該哺乳動物に投与することを含む、方法。
【請求項１４】
膣症を治療又は予防するための有効成分として塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む局所組成物。
【請求項１５】
薬学的に許容可能な担体とともに、塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む、膣症を治療又は予防するクレンジング溶液又は腟錠組成物。
【請求項１６】
膣症を緩和又は予防するための有効成分として塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む、洗浄剤組成物。
【請求項１７】
水溶液、非水性溶媒、懸濁物、エマルジョン、凍結乾燥調剤、坐剤調剤、クレンジング液、ゲル、ゼリー、フォーム、クリーム、軟膏、ローション、バーム、パッチ、ペースト、スプレー溶液、エアロゾル等の局所調剤、又は腟錠、膣クリーム、膣軟膏、創傷用ドレッシング溶液、スプレー調剤、膣カプセル、膣フィルム、膣スポンジ等の挿入調剤、タンポン、生理用ナプキン、おむつ、ショーツ等の衛生用品用のスプレッド調剤若しくはスプレー調剤の形態である、請求項１６に記載の洗浄剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、膣症を予防及び治療するための有効成分として塩と、糖と、乳酸菌とを含む組成物、並びにその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
腟炎は、特に妊娠中、外陰部又は膣の掻痒と並んで、腟の分泌物、炎症及び刺激を引き起こす膣において生じる状態である。また、腟炎の主な原因には、最も一般的な３種の腟の感染症及び疾患がある。一般的な３種の腟感染症として、細菌性腟症、膣カンジダ症、及びトリコモナス症が挙げられる。
【０００３】
ヒト膣には、微生物感染から守るためのｐＨ４．５〜ｐＨ５．１の範囲の弱酸性環境をもたらす様々な微生物、酵母及び細菌、例えば約１０４個／ｍｌ（膣流体）を超えるラクトバチルス・クリスパタス（Lactobacillus crispatus）、及びラクトバチルス・ジェンセニイ（Lactobacillus jensenii）等のラクトバチルス属菌が定着しており、ヒト膣は、女性の健康及び彼女らの新生児に大いに影響を及ぼし得る、非常に多目的な臓器である。膣の微小環境（vaginal niche）に、ナイセリア・ゴノレア（Neiseria gonorrhea）、ウレアプラズマ属種、マイコプラズマ・ゲニタリウム（Mycoplasma genitalium）、ストレプトコッカス属種、エシェリキア・コリ（Escherichia coli）、クラミジア・トラコマーティス（Chlamydia trachomatis）、及びトリコモナス・ヴァジナリス（Trichomonas vaginalis）等の多くの重要な病原体が存在することが報告されている。
【０００４】
特に、最も流行し最も有害な膣症である細菌性腟症（ＢＶ）は、ＢＶを有する女性に悪臭のある腟分泌物又は局所刺激を生じさせ、早産、骨盤内炎症性疾患、及びＨＩＶ感染の発症（acquisition）を含む幾つかのより重篤な有害な結果と関連する。条件（condition）細菌性腟症（ＢＶ）を有する女性は、多くのラクトバチルス属種（Ｌ．イナース（L. iners）以外）を失い、様々な嫌気性菌及び通性嫌気性菌が生じる。ＢＶを有する女性に由来する膣流体のグラム染色は、グラム陽性の桿菌の喪失と、グラム陰性及びグラム不定の球菌及び桿菌によるそれらの置換を示す。ＢＶを有する被験体に由来する膣流体の培養は、典型的にはガードネレラ・ヴァギナリス（Gardnerella vaginalis）と、ペプトストレプトコッカス（Peptostreptococcus）種、モビルンカス（Mobiluncus）種、バクテロイデス（Bacteroides）種、プレボテラ（Prevotella）種、ポルフィロモナス（Porphyromonas）種、モビルンカス種、及びマイコプラズマ種（Mycoplasma）を含み得る他の細菌の混合物とを生じる（非特許文献１）。
【０００５】
ヒト又は動物の腸、発酵食品等にしばしば見られる乳酸菌は、プロバイオティック剤として有用であり、またＦＤＡ（食品医薬品局）によって安全な細菌として承認されている代表的な細菌と報告されている（非特許文献２）。腸上皮細胞に付着し、寄生する乳酸菌は、腸微生物叢の環境を改善し、例えば腸微生物叢の安定化、腸の有害菌の付着を阻害する力（dint of inhibiting from the adherence）による腐敗物の減少、有害な疾患の予防、免疫活性化の活性、抗癌活性、コレステロール降下活性等の様々な有益な利点を宿主動物に提供する。様々な腐敗微生物及び病原微生物の増殖を阻害する乳酸菌の活性は、抗菌性因子、例えば有機酸、過酸化水素、ロイテリン、ジアセチル、アセトアルデヒド、バクテリオシン等を放出するそれらの代謝産物の代謝特性に起因すると報告されている（非特許文献３、特許文献１）。
【０００６】
これまで、腟炎を治療する有効な治療法、例えば、メトロニダゾール等の経口投与される広域スペクトル抗生物質を開発するため研究が行われてきた。しかしながら、上記治療法は、抗生物質不耐性、長期的な投与の場合の全身毒性、及びラクトバチルス属菌の数の減少等の二次的な合併症を引き起こす膣における正常細菌叢の破壊の可能性、膣ｐＨの増加、並びに嫌気性微生物の増殖等の多くの不利益を示す。
【０００７】
したがって、これまで、膣症を治療するために安全であり、有害反応がほとんどない、長期的な治療活性を示す新規な治療用組成物を開発することが必要とされてきた。
【０００８】
本発明者らは、これまでに、有効成分として塩と糖との組合せを含む組成物が、強力な抗菌活性及び増殖活性（特許文献２、特許文献３）、また膣弛緩症（lax vagina syndrome）又は腟乾燥症（特許文献４、特許文献５）に対する強力な治療効果を示すことを見出した。
【０００９】
しかしながら、塩と、糖と、乳酸菌との組合せの膣症に対する治療効果に関しては、それらの開示が引用することにより本明細書の一部をなす上記の引用文献のいずれにも報告も開示もされていない。
【００１０】
膣症に対する塩と、糖と、乳酸菌との組合せの阻害効果を調査するため、本発明の発明者らは、（１）ｐＨ及び乳酸レベルの変化を特定することによる膣症原因菌の増殖からの間接阻害活性試験（実験例１）、（２）試験試料の感受性を判定することによる膣症原因菌の増殖からの直接阻害活性試験（実験例２）、（３）簡略臨床試験を行い、最終的に、上記組合せが上記試験において強力な抗菌活性を示したことを確認することによって本発明を完成させた。
【００１１】
本発明のこれら及びその他の目的は、以下に提供される本発明の詳細な開示から明らかとなるであろう。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】韓国特許出願公開第１０−２０１５−００７５４４７号
【特許文献２】韓国特許第１０−１１３３７２３号
【特許文献３】国際公開第２０１１／０４９３２７号
【特許文献４】韓国特許第１０−１４７０２８２号
【特許文献５】国際公開第２０１５／０５０３２４号
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Sujatha srinivasan and David N. Fedricks, Review Article, The Human Vaginal Bacterial Biota and Bacterial Vaginosis, Interdisciplinary Perspectives on Infectious Diseases, Vol., 2008, Article ID 750479, p1-3
【非特許文献２】Orrhge, K. et al., 2000, Bifidobateria and lactobacilli in human health, Drug Experimental Clinical Research., 26, pp95-111
【非特許文献３】Fuller, K., 1989, Probiotics in man and animals, J. Appl. Bacteriol., 66, pp365-378
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
したがって、膣症を治療又は予防するための有効成分として塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む医薬組成物を提供することは、本発明の別の目的である。
【００１５】
哺乳動物における膣症の治療又は予防に用いられる医薬の製造における、塩と、糖と、乳酸菌との組合せの使用を提供することは、本発明の別の目的である。
【００１６】
哺乳動物において膣症を治療又は予防する方法であって、有効量の塩と、糖と、乳酸菌との組合せを、その薬学的に許容可能な担体とともに該哺乳動物に投与することを含む、方法を提供することは、本発明の他の目的である。
【００１７】
膣症を緩和又は予防するための有効成分として塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む健康機能性食品を提供することは、本発明の他の目的である。
【００１８】
膣症を緩和又は予防するための有効成分として塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含むヘルスケア食品を提供することは、本発明の他の目的である。
【００１９】
膣症を緩和又は予防するための有効成分として塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む食品添加物を提供することは、本発明の他の目的である。
【００２０】
膣症を治療又は予防するための有効成分として塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む局所組成物を提供することは、本発明の他の目的である。
【００２１】
膣症を緩和又は予防するための有効成分として塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む洗浄剤組成物を提供することは、本発明の他の目的である。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
本発明の一実施の形態において、本発明は、膣症の治療及び予防に対する有効成分として塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む医薬組成物を提供する。
【００２３】
本発明は、薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とともに、膣症の治療及び予防に対する有効成分として塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む医薬組成物を提供する。
【００２４】
さらに、本発明は、哺乳動物における膣症の治療又は予防に用いられる医薬の製造における、塩と、糖と、乳酸菌との組合せの使用を提供する。
【００２５】
さらに、本発明は、哺乳動物における腟症を治療又は予防する方法であって、有効量の塩と、糖と、乳酸菌との組合せを、その薬学的に許容可能な担体とともに該哺乳動物に投与することを含む、方法を提供する。
【００２６】
本明細書において定義する「塩」という用語は、精製塩、溶融塩等の加工塩、又は海塩、岩塩等の未精製塩を含み、好ましくは塩化ナトリウム等の精製塩、又は竹塩等の溶融塩であり、より好ましくは未精製塩を２００℃〜２０００℃、好ましくは８００℃〜１２００℃に及ぶ温度で、２時間〜７日間、好ましくは１２時間〜４８時間に及ぶ期間に亘り溶融することにより調製される溶融塩である。
【００２７】
本明細書において定義する「糖」という用語は、当該技術分野において有用なプレバイオティクスとして知られているサッカライド化合物、好ましくは単糖、二糖、オリゴ糖、多糖等、より好ましくはキシロース、アラビノース等のペントースを含む単糖；グルコース、マンノース、フルクトース、ガラクトース等のヘキソース；ラクツロース、ラクチトール、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース等の二糖；フルクトオリゴ糖、ラフィノース、スタキオース、マルトデキストリン等のオリゴ糖；アミロース、セルロース、ペクチン等の多糖、より好ましくは、グルコース、フルクトース、ガラクトース、ラクツロース、ラクチトール、スクロース、ラクトース、又はフルクトオリゴ糖から選択されるサッカライドを含む。
【００２８】
本明細書において定義する「乳酸菌」という用語は、当該技術分野においてプロバイオティクスとして一般に知られている、又は入手可能な任意の乳酸、好ましくは、国際寄託当局（ＩＤＡ：International depository authority）等の国際的に承認された寄託機関、例えば韓国におけるＫＣＴＣ（Korean Collection for Type Cultures）、ＫＣＣＭ（Korean Culture Center of Microorganisms）、又はＫＡＣＣ（Korean Agricultural Culture Collection）；米国におけるＮＲＲＬ（Agricultural Research Service Culture Collection）又はＡＴＣＣ（American Type Culture Collection）、ＮＣＭＡ（Provasoli-Guillard National Center for Marine Algae and Microbiota）；英国におけるＣＣＡＰ（Culture Collection of Algae and protozoa）、ＥＣＡＣＣ（European Collection of Cell Cultures）、ＩＭＩ（International Mycological Institute）、ＮＣＴＣ（National Collection of Type Culture）、ＮＣＹＣ（National Collection of Yeast Cultures）、ＮＣＩＭＢ（National Colections of Industria, Food and marine Bacteria）、又はＮＩＢＳＣ（National Institute for Biological Standards and Controls）；フランスにおけるＣＮＣＭ（Collection Nationale De Cultures de Micro-organisms）；ドイツにおけるＤＳＭＺ（Lebniz-Institu DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH）；日本におけるＩＰＯＤ（登録商標）（国際特許生物寄託センター：International patent organism Depository）、ＮＰＭＤ（独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター：National Institute of Technology and Evaluation, Patent Microorganism Depository）；中国におけるＣＣＴＣＣ（China Center for Culture Collection）、ＣＧＭＣＣ（China General Microbiological Culture Collection Center）等からプロバイオティクスとして従来入手可能な任意の乳酸、具体的には、ラクトバチルス属菌、ビフィドバクテリウム属菌、バチルス属菌、ストレプトコッカス属菌、エンテロコッカス属菌、サッカロミセス属菌、ロイコノストック属菌等に属する任意の乳酸菌、より具体的にはラクトバチルス・プランタルム（lactobacillus plantarum）、ラクトバチルス・ペントーサス（lactobacillus pentosus）、ラクトバチルス・カゼイ（lactobacillus casei）、ラクトバチルス・カゼイ亜種パラカゼイ（lactobacillus casei ssp. paracasei）、ラクトバチルス・ラムノーサス（lactobacillus rhamnosus）、ラクトバチルス・アシドフィルス（lactobacillus acidophilus）、ラクトバチルス・デルブリュッキ（lactobacillus delbrueckii）、ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種ブルガリカス（lactobacillus delbrueckii, ssp. bulgaricus）、ラクトバチルス・デルブリュッキ亜種デルブリュッキ（lactobacillus delbrueckii, ssp. delbrueckii）、ラクトバチルス・ファーメンタム（lactobacillus fermentum）、ラクトバチルス・ガセリ（lactobacillus gasseri）、ラクトバチルス・ロイテリ（lactobacillus reuteri）、ラクトバチルス・ブレビス（lactobacillus brevis）、ラクトバチルス・セロビオスス（lactobacillus cellobiosus）、ラクトバチルス・クリスパタス（lactobacillus crispatus）、ラクトバチルスＧＧ（lactobacillus GG）、ラクトバチルス・ジョンソニイ（lactobacillus johnsonii）、ラクトバチルス・ラクチス（lactobacillus lactis）、ラクトバチルス・サリバリウス（lactobacillus salivarius）等のラクトバチルス属菌；ビフィドバクテリウム・ロングム（Bifidobacterium longum）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス（Bifidobacterium animalis ssp, lactis）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium adolescentis）、ビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）、ビフィドバクテリウム・カテヌラータム（Bifidobacterium catenulatum）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis）、ビフィドバクテリウム・テルモフィルム（Bifidobacterium thermophilum）等のビフィドバクテリウム属菌；バチルス・セレウストヨイ（Bacillus cereus toyoi）、バチルス・セレウス（Bacillus cereus）等のバチルス属菌；ストレプトコッカス・サーモフィルス（Streptococcus thermophilus）、ストレプトコッカス・クレモリス（Streptococcus cremoris）、ストレプトコッカス・インファンタリウス（Streptococcus infantarius）、ストレプトコッカス・インターメジウス（Streptococcus intermedius）、ストレプトコッカス・ラクチス（Streptococcus lactis）、ストレプトコッカス・サリバリウス亜種サーモフィルス（Streptococcus salivarius subsp. thermophilus）等のストレプトコッカス属菌；エンテロコッカス・フェカーリス（Enterococcus faecalis）、エンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faecium）等のエンテロコッカス属菌；サッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）、サッカロミセス・ブラウディ（Saccharomyces boulardii）等のサッカロミセス属菌；ロイコノストック・シトレウム（Leuconostoc citreum）、ロイコノストック・メセンテロイデス（Leuconostoc mesenteroides）等のロイコノストック属菌；より具体的には、ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・ペントーサス、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・カゼイ亜種パラカゼイ、ラクトバチルス・ラムノーサス又はラクトバチルス・アシドフィルス等のラクトバチルス属菌；ビフィドバクテリウム・ロングム、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、又はビフィドバクテリウム・ブレーベ等のビフィドバクテリウム属菌；バチルス・セレウストヨイ、又はバチルス・セレウス等のバチルス属菌；ストレプトコッカス・サーモフィルス、ストレプトコッカス・クレモリス、ストレプトコッカス・インファンタリウス、ストレプトコッカス・インターメジウス、又はストレプトコッカス・ラクチス等のストレプトコッカス属菌からなる群から選択される任意の乳酸菌を含む。
【００２９】
本明細書において定義する「塩と、糖と、乳酸菌との組合せ」という用語は、１：１００〜０．０１：１００〜０．０１重量部（重量／重量）、好ましくは１：５０〜０．５：５０〜０．５重量部（重量／重量）、より好ましくは１：３０〜０．３：３０〜０．３重量部（重量／重量）、より一層好ましくは１：１０〜０．１：１０〜０．１重量部（重量／重量）、最も好ましくは１：５〜１：５〜１重量部（重量／重量）の混合比率の塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む。
【００３０】
本発明の組成物は、他の抗生物質、色素、香料等を、組成物の総重量に対して、上記組成物の約０．１重量％〜２０重量％の量で更に含有することができる。
【００３１】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００３２】
塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む本発明の組成物は、詳細には以下の手順によって調製することができる。
【００３３】
例えば、本発明のクレンジング用の組合せは、精製塩、溶融塩等の加工塩、又は海塩、岩塩等の未精製塩、好ましくは、精製塩、又は未精製塩を２００℃〜２０００℃、好ましくは８００℃〜１２００℃に及ぶ温度で、２時間〜７日、好ましくは１２時間〜４８時間に及ぶ期間に亘り溶融することにより調製される加工塩を準備して、第１の工程で溶融塩を得て、該溶融塩と、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖等の糖化合物と、ラクトバチルス属菌、ビフィドバクテリウム属菌、バチルス属菌、ストレプトコッカス属菌、エンテロコッカス属菌、サッカロミセス属菌、ロイコノストック属菌等に属する乳酸菌とを、１：１００〜０．０１：１００〜０．０１重量部（重量／重量）、好ましくは１：５０〜０．５：５０〜０．５重量部（重量／重量）、より好ましくは１：３０〜０．３：３０〜０．３重量部（重量／重量）、より一層好ましくは１：１０〜０．１：１０〜０．１重量部（重量／重量）、最も好ましくは１：５〜１：５〜１重量部（重量／重量）の混合比率で混合して本発明の組合せを得て、必要に応じて他の抗生物質、色素、香料等の適量の他の添加剤とともに、蒸留水、バッファー、又は等張溶液等の適量の薬学的に許容可能な担体若しくは賦形剤、食品学的に許容可能な添加剤、又は局所的に許容可能な担体に該組合せを溶解して、本発明の組成物を得ることによって調製され得る。
【００３４】
したがって、本発明の別の実施の形態では、本発明は、精製塩、溶融塩等の加工塩、又は海塩、岩塩等の未精製塩、好ましくは、精製塩、又は未精製塩を２００℃〜２０００℃、好ましくは８００℃〜１２００℃に及ぶ温度で、２時間〜７日、好ましくは１２時間〜４８時間に及ぶ期間に亘り溶融することにより調製される加工塩を準備して、第１の工程で溶融塩を得る工程と、該塩と、単糖、二糖、オリゴ糖、多糖等の糖化合物と、ラクトバチルス属菌、ビフィドバクテリウム属菌、バチルス属菌、ストレプトコッカス属菌、エンテロコッカス属菌、サッカロミセス属菌、ロイコノストック属菌等に属する乳酸菌とを、１：１００〜０．０１：１００〜０．０１重量部（重量／重量）、好ましくは１：５０〜０．５：５０〜０．５重量部（重量／重量）、より好ましくは１：３０〜０．３：３０〜０．３重量部（重量／重量）、より一層好ましくは１：１０〜０．１：１０〜０．１重量部（重量／重量）、最も好ましくは１：５〜１：５〜１重量部（重量／重量）の混合比率で混合して、第２の工程で本発明の組合せを得る工程と、必要に応じて他の抗生物質、色素、香料等の適量の他の添加剤とともに、適量の蒸留水、バッファー、又は等張溶液に上記組合せを溶解して、第３の工程で本発明のクレンジング組成物を得る工程とを含む、本発明のクレンジング用の組合せを調製する方法を提供する。
【００３５】
本明細書において定義する「膣症」という用語は、細菌性腟症、真菌性腟炎又はトリコモナス腟炎、好ましくは、ガードネレラ・ヴァギナリス（Gardnerella vaginalis）、バクテロイデス・フラジリス（Bacteroides fragilis）、トリコモナス・ヴァギナリス（Tricomonas vaginalis）、カンジダ・アルビカンス（Candida albicans）、ストレプトコッカス・アガラクティエ（Streptococcus agalactiae）、ストレプトコッカス・アウレウス（Streptococcus aureus）、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）、ナイセリア・ゴノレア（Neisseria gonorrhoeae）、エシェリキア・コリ（Escherichia coli）、エンテロバクター・クロアカ（Enterobacter cloacae）、シュードモナス・エルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）、又はサルモネラ・ティフィムリウム（Salmonella typhimurium）等によって引き起こされる膣症から選択される膣症を含む。
【００３６】
本発明の組成物は、他の抗生物質、色素、香料等を、組成物の総重量に対して、上記組成物の約０．１重量％〜２０重量％の量で更に含有することができる。
【００３７】
上記方法によって調製される塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む本発明の組成物は、様々な実験、例えば（１）ｐＨ及び乳酸レベルの変化を特定することによる膣症原因菌の増殖からの間接阻害活性試験（実験例１）、（２）試験試料の感受性を判定することによる膣症原因菌の増殖からの直接阻害活性試験（実験例２）、（３）簡略臨床試験により強力な抗菌活性を示したことが証明され、最終的に、上記組合せが上記試験において強力な抗菌活性を示すことが確認された。
【００３８】
したがって、本発明の組成物は、上記の方法によって調製される、腟症を治療又は予防する塩と、糖と、乳酸菌との組合せを薬学的に許容可能な担体とともに含む。
【００３９】
さらに、本発明は、哺乳動物における腟症疾患（vaginosis disease）の治療又は予防に用いられる医薬の製造における上記の方法によって調製される塩と、糖と、乳酸菌との組合せの使用を提供する。
【００４０】
さらに、本発明は、哺乳動物における腟症疾患を治療又は予防する方法であって、上記の方法によって調製される有効量の塩と、糖と、乳酸菌との組合せを、その薬学的に許容可能な担体とともに該哺乳動物に投与することを含む、方法を提供する。
【００４１】
本明細書において定義する「予防する」という用語は、上記のような疾患に罹患しやすい哺乳動物における上記のような疾患の阻害を意味し、本明細書において使用される「治療する」という用語は、（ａ）疾患若しくは病気の進展の阻害；（ｂ）疾患若しくは病気の緩和；又は（ｃ）疾患若しくは病気の排除を意味する。
【００４２】
本明細書において定義する「薬学的に許容可能な担体又は賦形剤」という用語は、「医薬を構成するために使用される非有効成分である医薬品添加剤」を含む。上記用語は、色素、香料、結合剤、皮膚軟化剤、充填剤、滑沢剤、保存料、及び更に多くの分類を含む。一般的な賦形剤として、コーンスターチ、ラクトース、タルク、ステアリン酸マグネシウム、スクロース、ゼラチン、ステアリン酸カルシウム、二酸化ケイ素、シェラック、及びグレーズが挙げられ、それは当該技術分野（食品医薬品局のホームページ又はオンラインの医薬品情報を参照されたい）、又は先の文献（例えばRowe, Raymond C et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, Pharmaceutical Press, 7th Edition, 2012）においてよく知られている。
【００４３】
膣症疾患を治療及び予防する本発明の組成物は、該組成物の総重量に対して、０．１重量％〜９９重量％、好ましくは０．１重量％〜５０重量％で上記の組合せを含み得る。
【００４４】
本発明による組成物は、薬学的に許容可能な担体、補助剤、又は希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、及びミネラルオイルを含む医薬組成物として提供され得る。上記製剤は、充填剤、抗凝集剤（anti-agglutinating agents）、滑沢剤、湿潤剤、香味料、乳化剤、保存料等を更に含み得る。本発明の組成物は、当該技術分野において知られているあらゆる手順を用いることにより、患者への本発明の組成物の投与の後に、有効成分の即時放出、持続放出又は遅延放出を提供するように製剤化することができる。
【００４５】
例えば、本発明の組成物は、注射剤を製造するため、油、プロピレングリコール、又は一般的に使用される他の溶媒に溶解され得る。担体の好適な例として、生理食塩水、ポリエチレングリコール、エタノール、植物油、ミリスチン酸イソプロピル等が挙げられるが、それらに限定されない。局所投与について、本発明の抽出物は、軟膏及びクリームの形態で製剤化され得る。
【００４６】
本発明の組成物を含む医薬製剤は、経口投薬形態（粉体、錠剤、カプセル、軟カプセル、水性薬剤、シロップ剤、エリキシル剤、丸剤、粉体、サッシェ、顆粒）、又は局所調剤（クリーム、軟膏、ローション、ゲル、バーム、パッチ、ペースト、スプレー溶液、エアロゾル等）、又は注射用調剤（溶液、懸濁物、エマルジョン）等の任意の形態で調製され得る。
【００４７】
医薬剤形における本発明の組成物は、それらの薬学的に許容可能な塩の形態で使用することができ、また、単独で使用することも、又は他の薬学的に活性な化合物と適切に共同させて、また他の薬学的に活性な化合物と組み合わせて使用することもできる。
【００４８】
本発明の組合せの望ましい用量は、対象の状態及び体重、重症度、薬物形態、投与経路及び投与期間に応じて変動し、当業者が選択することができる。しかしながら、望ましい効果を得るためには、１日当たり０．０００１ｍｇ／体重ｋｇ〜１０００ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは０．００１ｍｇ／体重ｋｇ〜１００ｍｇ／体重ｋｇの範囲の量の本発明の組合せを投与することが概して推奨される。用量は、１日当たり１回で投与することもできるし、１日当たり数回に分割して投与することもできる。
【００４９】
本発明の医薬組成物は、様々な経路を介して哺乳動物（ラット、マウス、家畜、又はヒト）等の対象動物に投与することができる。あらゆる投与様式が考えられ、例えば、投与は、経口、経直腸により行うことができ、又は静脈内、筋肉内、皮下、皮内、髄腔内、硬膜外若しくは脳室内注射により行うことができる。
【００５０】
また、本発明の組成物は、様々な健康機能性食品及びヘルスケア食品の調製において、主成分又は添加剤及び助剤として使用され得る。
【００５１】
したがって、塩と、糖と、乳酸菌とを含む、膣症疾患の予防又は緩和に対する健康機能性食品を提供することは、本発明の他の目的である。
【００５２】
本明細書において定義する「健康機能性食品」という用語は、ヒト又は哺乳動物において目的の疾患を予防又は改善するため、本発明の組成物を従来の食品に添加することにより、物理的機能性又は生理学的機能性等の機能性が増強された機能性食品を含む。
【００５３】
食品学的に許容可能な添加剤とともに、塩と、糖と、乳酸菌とを含む、膣症疾患の予防又は緩和に対するヘルスケア食品を提供することは、本発明の他の目的である。
【００５４】
本明細書において定義する「ヘルスケア食品」という用語は、添加剤の形態としての小量で、又は粉体、顆粒、カプセル、丸剤、錠剤等の形態として全体量で特定の意図される効果ではなく、一般的に意図される効果を示す、本発明の組合せを含む食品を含む。
【００５５】
本明細書において定義する「食品学的に許容可能な添加剤」という用語は、「直接又は間接的に、その成分となるか、そうでなければ任意の食品の性質に影響を及ぼす、又はそうすることが合理的に予想され得る用途の任意の物質」を含み、またその起源に従い３つのグループ、すなわち、（１）ケトン、グリシン、クエン酸カリウム、ニコチン酸等の化学合成添加剤；（２）カキ色素、カンゾウ抽出物、結晶セルロース、グアーガム等の天然添加剤；（３）Ｌ−グルタミン酸ナトリウム、保存料、タール色素等のそれらによる混合添加剤、又は例えば、当該技術分野若しくは先の文献（GSFA Onlineのホームページの"Codex General Standard for Food Additives" (GSFA, Codex STAN 192-1995)を参照されたい）でよく知られている粘稠化剤、熟成剤（maturing agent）、漂白剤、金属イオン封鎖剤、保水剤、固化防止剤、清澄剤、硬化剤、乳化剤、安定剤、増粘剤、塩基及び酸、起泡剤、栄養素、着色剤、香味料、甘味料、保存料、酸化防止剤等の食品におけるその機能による様々なカテゴリーに分類され得る。
【００５６】
或る物質が、その食品における特定の目的のために食品に添加される場合、それは直接添加物と称され、間接食品添加物は、その包装、保管、又は他の取り扱いに起因して微量で食品の一部となるものである。
【００５７】
本明細書において開示する「ヘルスケア食品又は健康機能性食品」という用語は、食物、健康飲料、栄養補助食品等に含めることができ、目的の疾患の予防又は改善のため、粉体、顆粒、錠剤、懸濁物、エマルジョン、シロップ剤、チューイングタブレット、カプセル、飲料等の医薬剤形、又は食品形態、例えばパン、餅、ドライフルーツ、キャンディー、チョコレート、チューインガム、アイスクリーム、低脂肪乳、ラクトース分解乳、ヤギ乳、加工乳等のミルク、発酵乳、バター、濃縮乳、ミルククリーム、バターオイル、ナチュラルチーズ、プロセスチーズ、粉乳、乳清等の乳製品、ハンバーガー、ハム、ソーセージ、ベーコン等の加工肉製品、加工卵製品、魚肉練り製品（fish cake）等の魚肉製品、即席麺、乾麺、生麺、揚げ麺、ノンフライ麺、ゼラチン化乾麺、調理済み麺、冷凍麺、パスタ等の麺製品、ティーバッグ、浸出茶（leached tea）等の茶製品、果実飲料、野菜飲料、炭酸清涼飲料、豆乳飲料、乳酸飲料混合飲料等の健康ドリンク、醤油、大豆ペースト、赤トウガラシペースト、チュンジャン（chunjang）（カラメルで着色された発酵大豆製品の一種）、チョングッチャン（cheonggukjang）（Ｂ．サブチリス（B.subtillis）による天然発酵大豆）、ミックスペースト、酢、ソース、ケチャップ、カレー、ドレッシング等の調味食品、マーガリン、ショートニング、ピザ等であるが、それらに限定されない形態に製剤化され得る。
【００５８】
また、上記組合せは、目的の障害の予防及び改善のため食品又は飲料に添加することもできる。機能性健康食品又はヘルスケア食品としての食物又は飲料における上記組合せの量は概して、機能性健康食品組成物用の食品の総重量の約０．０１重量／重量％〜１００重量／重量％の範囲とすることができる。特に、機能性健康食品、ヘルスケア食品、又は特定栄養食品における本発明の組合せの好ましい量は各食品の意図される目的に応じて変化し得るが、概して、１００％の食品組成物の比率に対して、麺等の食品中約０．０１％〜５％、ヘルスケア食品中４０％〜１００％の範囲の量で本発明の組合せを添加剤として使用することが好ましい。
【００５９】
本発明の健康飲料組成物が必須成分として指定される比率で上記の組合せを含む限り、他の液体成分には特に制限はなく、他の成分とは、従来の飲料のような様々な脱臭剤又は天然炭水化物等とすることができる。前述の天然炭水化物の例は、グルコース、フルクトース等の単糖；マルトース、スクロース等の二糖；デキストリン、シクロデキストリン等の従来の糖；及びキシリトール、エリスリトール等の糖アルコールである。前述のもの以外の脱臭剤として、ソーマチン等の天然脱臭剤、レバウジオシドＡ、グリチルリチン等のステビア抽出物、及びサッカリン、アスパルテーム等の合成脱臭剤が有利に有用な場合がある。上記天然炭水化物の量は概して、１００ｍｌの本発明の飲料組成物の比率で約１ｇ〜２０ｇ、好ましくは５ｇ〜１２ｇの範囲である。
【００６０】
前述の組成物以外の成分は、様々な栄養素、ビタミン、ミネラル又は電解質、合成香味料、チーズ、チョコレート等の場合の着色剤及び品質改良剤、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護コロイド粘着剤、ｐＨ調整剤、安定剤、保存料、グリセリン、アルコール、炭酸飲料で使用される炭化剤（carbonizing agent）等である。前述のもの以外の成分は、天然果汁、果汁飲料、及び野菜飲料の調製用の果汁であってもよく、その成分を独立して、又は組み合わせて使用することができる。上記成分の比率はそれほど重要ではないが、概して、１００重量／重量％の本発明の組成物当たり、約０重量／重量％〜２０重量／重量％の範囲である。上述の抽出物又は化合物をそこに含む添加可能な食品の例は、様々な食品、飲料、ガム、ビタミン複合体、健康改善食品等である。
【００６１】
本発明の組合せには毒性及び有害作用がないことから、安全に使用することができる。
【００６２】
膣症を治療又は予防するための有効成分として塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む局所組成物を提供することは、本発明の他の目的である。
【００６３】
本発明の局所組成物は、使用方法に従って従来の担体、補助剤又は希釈剤を更に含むことができる。該担体は、使用法及び適用法に従って適切な物質として使用するのが好ましいが、限定されるものではない。適切な希釈剤は、Remington's Pharmaceutical Science (Mack Publishing co, Easton PA)という文書で列挙されている。
【００６４】
以下、下記の製剤化方法及び賦形剤は、単に例示的なものであり、本発明をいかなるようにも限定するものではない。
【００６５】
本発明による組成物は、薬学的に許容可能な担体、補助剤又は希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム及びミネラルオイルを含有する、本発明の局所組成物として提供することができる。製剤は、充填剤、抗凝集剤、滑沢剤、湿潤剤、香味料、乳化剤、保存料等を更に含むものとすることができる。本発明の組成物は、当該技術分野において知られているあらゆる手順を用いることにより、患者への本発明の組成物の投与の後に、有効成分の即時放出、持続放出又は遅延放出を提供するように製剤化することができる。
【００６６】
例えば、本発明の局所組成物は、蒸留水、ｐＨバッファー、油、プロピレングリコール、又は当該技術分野において一般的に使用されている他の溶媒に溶解することができる。担体の好適な例としては、生理食塩水、ポリエチレングリコール、エタノール、植物油、ミリスチン酸イソプロピル等が挙げられるが、これらに限定されない。局所投与について、本発明の化合物は、軟膏及びクリームの形態で製剤化され得る。
【００６７】
本発明の組成物は、例えば、水溶液、非水性溶媒、懸濁物、エマルジョン、凍結乾燥調剤、坐剤調製、クレンジング液、ゲル、ゼリー、フォーム、クリーム、軟膏、ローション、バーム、パッチ、ペースト、スプレー溶液、エアロゾル等の局所調剤、又は腟錠、膣クリーム、膣軟膏、創傷用ドレッシング溶液（dressing solution）、スプレー調剤、膣カプセル、膣フィルム、膣スポンジ等の挿入調剤、タンポン、生理用ナプキン、おむつ、ショーツ等の衛生用品用のスプレッド調剤若しくはスプレー調剤、好ましくは、溶解補助剤、乳化剤、ｐＨ調整剤等が添加される腟錠組成物又はクレンジング液組成物の任意の形態で調製され得る。
【００６８】
上記の非水性溶媒及び懸濁物は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイル等の植物油、オレイン酸エチル等を含み得る。
【００６９】
上記の坐剤調剤は、ウィテップゾール（witepsol）、マクロゴール、ｔｗｅｅｎ  ６１、カカオバター、ラウリン酸、グリセロールゼラチン等を含み得る。
【００７０】
したがって、本発明は、塩と、糖と、乳酸菌との組合せを薬学的に許容可能な担体とともに含む、腟症を治療又は予防する、クレンジング液溶液又は腟錠組成物を提供する。
【００７１】
医薬剤形における本発明の局所組成物は、それらの薬学的に許容可能な塩の形態で使用することができ、また単独で使用することもでき、又は抗菌化合物若しくは当該技術分野において知られた植物、動物若しくは鉱物に由来する抽出物等の他の薬学的に活性な化合物と適切に共同させて、また他の薬学的に活性な化合物と組み合わせて使用することもできる。
【００７２】
本発明の組合せの望ましい用量は、対象の状態及び体重、重症度、薬物形態、投与経路及び投与期間に応じて変動し、当業者が選択することができる。しかしながら、望ましい効果を得るためには、１日当たり０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量の本発明の組合せを投与することが概して推奨される。用量は１日当たり１回で投与することもできるし、１日当たり数回に分割して投与することもできる。組成物に関しては、本発明の組合せは、組成物の総重量に対して、０．０１重量％〜９９．９９重量％、好ましくは０．１重量％〜９９重量％、より好ましくは１重量％〜２０重量％、最も好ましくは５重量％〜１０重量％で存在するものとする。
【００７３】
本発明の組成物は、様々な経路を介して哺乳動物（ラット、マウス、家畜、又はヒト）等の対象動物に投与することができる。あらゆる投与様式が考えられ、例えば、投与は、外用、局所、経口、経直腸により行うことができ、又は静脈内、筋肉内、皮下、皮内、髄腔内、硬膜外若しくは脳室内注射により行うことができ、外用若しくは局所により行うのが好ましい。
【００７４】
膣症を緩和又は予防するための有効成分として塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む洗浄剤組成物を提供することは、本発明の他の目的である。
【００７５】
任意の従来のクリーニング成分を、本発明の組成物の一部として使用することができる。与えられるレベルは重量パーセントであり、これは組成物全体を指す（内包組成物を施す場合の水溶性フィルムを除く）。洗浄剤組成物は、ビルダーを含んでいても（built）、ビルダーが含まれていなくても（unbuilt）よく、漂白剤、漂白活性化剤、漂白触媒、界面活性剤、アルカリ源、酵素、ポリマー分散剤、耐食剤（例えばケイ酸ナトリウム）、及びケア剤から選択され得る、１以上の洗浄活性成分を含む。非常に好ましい洗浄剤成分として、ビルダー化合物、アルカリ源、再付着防止剤、スルホン化ポリマー、酵素、及び追加の漂白剤が挙げられる。
【００７６】
本発明の洗浄剤組成物は、例えば、水溶液、非水性溶媒、懸濁物、エマルジョン、凍結乾燥調剤、坐剤調剤、クレンジング液、ゲル、ゼリー、フォーム、クリーム、軟膏、ローション、バーム、パッチ、ペースト、スプレー溶液、エアロゾル等の局所調剤、又は腟錠、膣クリーム、膣軟膏、創傷用ドレッシング溶液、スプレー調剤、膣カプセル、膣フィルム、膣スポンジ等の挿入調剤、タンポン、生理用ナプキン、おむつ、ショーツ等の衛生用品用のスプレッド調剤又はスプレー調剤、好ましくは、溶解補助剤、乳化剤、ｐＨ調整剤等が添加される腟錠組成物又はクレンジング液組成物の任意の形態で調製され得る。
【００７７】
本明細書において使用に適したビルダーとして、クエン酸塩、及びポリリン酸塩、例えばトリポリリン酸ナトリウム、トリポリリン酸ナトリウム六水和物、トリポリリン酸カリウム、及びトリポリリン酸のナトリウム塩とカリウム塩との混合塩等の硬水イオン複合体（water-soluble hardness ion complexes）を形成するビルダー（金属イオン封鎖ビルダー（sequestering builder））、及び炭酸塩、例えば炭酸ナトリウム等の硬質沈殿（hardness precipitates）を形成するビルダー（沈殿ビルダー）が挙げられる。
【００７８】
単位用量形態の製品として、錠剤、カプセル、サッシェ、パウチ等が挙げられる。
【００７９】
本発明の趣旨又は範囲から逸脱することなく、様々な改変及び変更を、本発明の組成物、使用及び調剤においてなすことができることは当業者に明らかであろう。
【発明の効果】
【００８０】
上記方法によって調製される塩と、糖と、乳酸菌との組合せを含む本発明の組成物は、様々な実験、例えば（１）ｐＨ及び乳酸レベルの変化を特定することによる膣症原因菌の増殖からの間接阻害活性試験（実験例１）、（２）試験試料の感受性の判定による、膣症原因菌の増殖からの直接阻害活性試験（実験例２）、（３）簡略臨床試験により強力な抗菌活性を示し、最終的に、上記組合せが上記試験において強力な抗菌活性を示すことが確認された。したがって、本発明の組合せは、医薬組成物、健康機能性食品、食品添加物、局所組成物、及び洗浄剤組成物の形態で、膣症を緩和、治療、又は予防するのに有用となり得る。
【発明を実施するための形態】
【００８１】
本発明の趣旨又は範囲から逸脱することなく、様々な改変及び変更を、本発明の組成物、使用及び調剤においてなすことができることは当業者に明らかであろう。
【００８２】
本発明を以下の実施例によってより具体的に説明する。しかしながら、本発明はいかなるようにもこれら実施例に限定されるものではないということが理解されるべきである。
【実施例】
【００８３】
以下の参考例、実施例及び実験例は、本発明の範囲を限定することなく、本発明を更に例証する意図のものである。
【００８４】
実施例１．本発明の組合せの調製
１−１．塩の準備
１−１−１．溶融塩の準備
９００ｍｇの未精製塩（５８８５７大韓民国全羅南道新安郡新衣面上台東里トンニソンチャクチャンギル８８−６のShinan salt coop）を、ヒーター（ＭＳ−Ｅ１０４、TOPS Co. Ltd.）を使用することによって、８５０℃〜１０００℃で２４時間溶融し、４００ｍｇの溶融塩（以下「ＭＳ」と示す）を得た。
【００８５】
１−１−２．精製塩の準備
４００ｍｇの精製塩（ＮａＣｌ、化学式量５８．４４）は、企業（ＳＰＰＯ−９１７０１、韓国京畿道安山市檀園区１３３番ボンギル新院路５３のDuksan Pure Chemicals, Co., Ltd）から調達した（以下「ＲＳ」と示す）。
【００８６】
１−１−３．未精製塩の準備
４００ｍｇの未精製塩（天然塩）は、企業（５８８５７大韓民国全羅南道新安郡新衣面上台東里トンニソンチャクチャンギル８８−６のShinan salt coop）から調達した（以下「ＵＳ」と示す）。
【００８７】
１−２．糖の準備
１−２−１．グルコースの準備
８００ｍｇのグルコース（Ｄ（＋）−グルコース）は、企業（カタログ番号ｊｂ０１、J.T. Baker Chemical Company）から調達した（以下「ＧＬ」と示す）。
【００８８】
１−２−２．フルクトオリゴ糖の準備
８００ｍｇのフルクトオリゴ糖（チコリー由来）は、企業（カタログ番号Ｆ８０５２０５０ｇ、Sigma-Aldrich Co. LLC）から調達した（以下「ＦＯ」と示す）。
【００８９】
１−２−３．ラクツロースの準備
８００ｍｇのラクツロースは、企業（カタログ番号１２６−０３７３２、Wako Pure Chemical Industries）から調達した（以下「ＬＳ」と示す）。
【００９０】
１−２−４．フルクトースの準備
８００ｍｇのフルクトースは、企業（カタログ番号６４５０５−０４１０、Junsei Chemical Co. Ltd）から調達した（以下「ＦＳ」と示す）。
【００９１】
１−２−５．ラクチトールの準備
８００ｍｇのラクチトールは、企業（カタログ番号ｓｃ４８８６８６、Santa Cruz Biotechnology, Inc）から調達した（以下「ＬＴ」と示す）。
【００９２】
１−３．乳酸菌の準備及び培養
１−３−１．乳酸菌の準備
表１に列挙される様々な乳酸菌は、ＫＣＴＣ（韓国のKorean Collection for Type Cultures）から分配されたものであり、以下の実験で使用した。
【００９３】
【表１】
2019524636.tif 000002
【００９４】
１−３−２．細菌の培養
（１）通性嫌気性及び微好気性の菌、すなわち、ラクトバチルス・アシドフィルス（ＫＣＴＣ番号３１６４）、ストレプトコッカス属菌（ＫＣＴＣ番号５６４４）、ビフィドバクテリウム・ロングム亜種ロングム（ＫＣＴＣ番号３１２８）等、並びに好気性菌、すなわち、バチルス・セレウス（ＫＣＴＣ番号１３１２３）等を実験で使用した。
【００９５】
（２）上記の乳酸菌に加えて、膣症原因菌、すなわち、バクテロイデス・フラジリス（ＫＣＴＣ番号５０１３）、及びガードネレラ・ヴァギナリス（ＫＣＴＣ番号５０９７）を実験で使用した。
【００９６】
（３）膣症原因菌、すなわち、バクテロイデス・フラジリス（ＫＣＴＣ番号５０１３）及びガードネレラ・ヴァギナリス（ＫＣＴＣ番号５０９７）を、５％ヒツジ血液を添加したキャスマン培地（トリプトン１２ｇ、肉ペプトン５ｇ、塩化ナトリウム５ｇ、酵母抽出物３ｇ、牛肉エキス３ｇ、デンプンカゼイン１ｇ、Ｄ−グルコース０．５ｇ、ニコチンアミド０．０５ｇ、ｐ−アミノ安息香酸０．００５ｇ、蒸留水１Ｌ、ｐＨ７．３）に播種し、ＧａｓＰａｋ（商標）ＥＺ  Ｐｏｕｃｈ  ｓｙｓｔｅｍ（ＢＤ、カタログ番号２６０８３、米国）を使用して、１５０ｒｐｍの速度で３７℃の振盪インキュベーション（shaking incubation）に供した。
【００９７】
（４）通性嫌気性及び微好気性の菌、すなわちラクトバチルス・アシドフィルス（ＫＣＴＣ番号３１６４）、ストレプトコッカス属菌（ＫＣＴＣ番号５６４４）、ビフィドバクテリウム・ロングム亜種ロングム（ＫＣＴＣ番号３１２８）等、及び好気性菌、すなわちバチルス・セレウス（ＫＣＴＣ番号１３１２３）等をＭＲＳ培地（プロテアーゼペプトン１０ｇ、牛肉エキス１０ｇ、酵母抽出物５ｇ、Ｄ−グルコース２０ｇ、Ｔｗｅｅｎ  ８０  １ｍｌ、Ｋ２ＨＰＯ４  ２ｇ、酢酸ナトリウム５ｇ、クエン酸水素二アンモニウム２ｇ、ＭｇＳＯ４７Ｈ２Ｏ  ０．２ｇ、ＭｎＳＯ４Ｈ２Ｏ  ０．２ｇ、蒸留水１Ｌ、ｐＨ６．２〜ｐＨ６．５）に播種し、１５０ｒｐｍの速度で３７℃の振盪インキュベーションに供した。
【００９８】
１−４．本発明の組合せの調製
上記の工程で用意した５０ｍｇの溶融塩を、上記の工程で用意した乾燥グルコース５ｍｇ及び乾燥ラクトバチルス・アシドフィルス１ｍｇとともに完全に混合し、本発明の組合せ（以下「ＣＬ１」と示す）を得た。
【００９９】
組合せを冷蔵庫中において−７５℃で保持し、使用前に蒸留水に溶解することによって以下の実験に使用した。
【０１００】
表２に列挙される本発明の他の組合せを、上記と同様の方法に従って調製した。
【０１０１】
【表２】
2019524636.tif 000003
【０１０２】
実施例２．本発明の腟錠組成物の調製
溶融塩４００ｍｇと、グルコース８００ｍｇと、乾燥ラクトバチルス・アシドフィルス４０ｍｇとを含む、実施例１において調製した組合せをステアリン酸マグネシウム２ｍｇと混合することで、打錠（entableting）装置（ＫＴ２０００、Kumsungkigong）を使用して本発明の腟錠組成物の組合せ（以下「ＳＧＬ２」と示す）へと製剤化した。
【０１０３】
実施例３．本発明の膣クレンジング溶液組成物の調製
精製塩４００ｍｇと、グルコース８００ｍｇと、乾燥ビフィドバクテリウム・ロングム亜種ロングム４０ｍｇとを含む、実施例１において調製した組合せを含む膣クレンジング溶液組成物を表３に示される以下の原料と４８時間撹拌して混合することにより調製した（以下「ＳＧＬ３」と示す）。
【０１０４】
【表３】
2019524636.tif 000004
【０１０５】
実験例１．膣症原因菌の増殖に対する阻害効果
実施例１において調製した本発明の組合せの膣症原因株の増殖に対する阻害効果を間接的に判定するため、文献（Choi, J.G. et al, Antibacterial activity of Ecklonia cava against methicillin-resistant Staphylococcus aureus and Salmonella spp., Foodborne Pathog. Dis., 2010 (Apr.): 7(4), pp435-441）に開示される手順に従って、以下の試験を行った。
【０１０６】
１−１．試験株
膣症原因菌、すなわちバクテロイデス・フラジリス（ＫＣＴＣ番号５０１３）及びガードネレラ・ヴァギナリス（ＫＣＴＣ番号５０９７）を、５％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）を添加したキャスマン培地（トリプトン１２ｇ、肉ペプトン５ｇ、塩化ナトリウム５ｇ、酵母抽出物３ｇ、牛肉エキス３ｇ、デンプンカゼイン１ｇ、Ｄ−グルコース０．５ｇ、ニコチンアミド０．０５ｇ、ｐ−アミノ安息香酸０．００５ｇ、蒸留水１Ｌ、ｐＨ７．３、５％ＦＢＳ）に播種し、引用文献（D.D. charles, et al., identification of haemophilus vaginalis, 1960, Journal of bacteriology p277, R. P. Morgan et al., Amniotic fluid and maternalrace influence responsiveness of fetal membranes to bacteria, Journal of reproductive immunology, 96 (2012) 68-78）に従って、ＧａｓＰａｋ（商標）ＥＺ  Ｐｏｕｃｈ ｓｙｓｔｅｍ（表示器を備えるＡｎａｅｒｏｂｉｃ  Ｇａｓ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｐｏｕｃｈ  Ｓｙｓｔｅｍ、ＢＤ、カタログ番号２６０８３、米国）を使用して、１５０ｒｐｍの速度で３７℃の振盪インキュベーションに供した。
【０１０７】
１−２．実験材料
表２に示される本発明の組合せを試験試料として使用し、乳酸を企業（カタログ番号２５２４７６、ＡＣＳ試薬、８５％〜９０％、水中のＬ−乳酸、Sigma-Aldrich Co. LLC）から購入した。
【０１０８】
１−３．実験目的
実験の目的は、膣症原因株のみで処理した対照群と比較した、実施例１において調製した試験試料で処理した試験群におけるＯＤ（光学密度）、ｐＨ、及び乳酸のレベルの変化を特定することである。
【０１０９】
１−４．実験手順
１−４−１．対照群
実施例１において調製した試験試料を、膣症原因株、すなわちバクテロイデス・フラジリス（ＫＣＴＣ番号５０１３）及びガードネレラ・ヴァギナリス（ＫＣＴＣ番号５０９７）の培養培地に添加した。予備培養した膣症原因株（吸光度：ＯＤ６６０＝１．０Ａ、１／１００体積／体積）を、ＦＢＳを含有するキャスマン培地に再び播種し、１５０ｒｐｍの速度にて３７℃で１２時間の振盪インキュベーションに供した。対照群を、実施例１において調製した試験試料で処理した。
【０１１０】
１−４−２．比較群
表１に示される様々な乳酸菌のみを、膣症原因株すなわち、バクテロイデス・フラジリス（ＫＣＴＣ番号５０１３）及びガードネレラ・ヴァギナリス（ＫＣＴＣ番号５０９７）の培養培地に添加した。予備培養した膣症原因株（吸光度：ＯＤ６６０＝１．０Ａ、１／１００体積／体積）を、ＦＢＳを含有するキャスマン培地に再び播種し、１５０ｒｐｍの速度で３７℃にて１２時間の振盪インキュベーションに供した。比較群は、乳酸菌単独で処理した。
【０１１１】
１−４−３．試験試料群
乳酸菌１ｍｇと実施例１において調製した試験試料との組合せを、膣症原因株、すなわちバクテロイデス・フラジリス（ＫＣＴＣ番号５０１３）及びガードネレラ・ヴァギナリス（ＫＣＴＣ番号５０９７）の培養チューブに添加し、１５０ｒｐｍの速度で３７℃にて１８時間の振盪インキュベーションに供した。試験試料群は、乳酸菌１ｍｇ及び実施例１において調製した試験試料で処理した。
【０１１２】
１−４−４．ｐＨ値の特定
対照群及び試験試料群のｐＨ値の変化を以下の通り特定した。
【０１１３】
対照群及び試験試料群における培養細胞溶液のｐＨを、装置（ｐＨメーター、ＳｅｖｅｎＥａｓｙ、スイス国のMettler Toledo）を使用して特定した。
【０１１４】
１−４−５．乳酸のレベルの特定
対照群及び試験試料群における乳酸のレベルを、以下の通りアッセイキット（Ｄ−／Ｌ−乳酸（迅速）アッセイキット、megazyme、カタログ番号Ｋ−ＤＬＡＴＥ）を使用して特定した。
【０１１５】
蒸留水１．５ｍｌ、試験試料０．１ｍｌ、及びバッファー溶液（バッファー＋Ｄ−グルタメート及びアジ化ナトリウム（０．０２％重量／体積））０．０２ｍｌ、ＮＡＤ  ０．１ｍｌ、ＤＧＰ（Ｄ−グルタメート−ピルベートトランスアミナーゼ懸濁物）をキュベットに注ぎ、３分間ともに混合した。分光光度計（Ｓｐｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｇｅｎｅｓｙｓ  ２、米国のThermo）を使用してＡ１値（波長：３４０ｎｍ）の吸光度を特定し、Ｄ−ＬＤＬ（Ｄ−乳酸脱水素酵素懸濁物、Ｄ−／Ｌ−乳酸キット、アイルランドのMegazyme）０．０２ｍｌを上記溶液に添加して５分間ともに混合した。
【０１１６】
Ａ２値（波長：３４０ｎｍ）の吸光度を、分光光度計（Ｓｐｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｇｅｎｅｓｙｓ  ２、米国のThermo）を使用して特定する。
【０１１７】
最後に、０．０２ｍｌのＤ−ＬＤＬ（Ｄ−乳酸脱水素酵素懸濁物、Ｄ−／Ｌ−乳酸キット、アイルランドのMegazyme）を上記溶液に添加して１０分間ともに混合し、Ａ３値（波長：３４０ｎｍ）の吸光度を分光光度計（Ｓｐｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｇｅｎｅｓｙｓ  ２、米国のThermo）を使用して特定する。
【０１１８】
対照群及び試験試料群における乳酸のレベルを、ソフトウェア（Ｍｅｇａ−Ｃａｌｃ（商標）、アイルランドＡ９８ＹＶ２９、Ｃｏ.ウィックロー、ＩＤＡビジネスパークのMegazyme）及びＡ１〜Ａ３の得られた吸光度の値を使用して特定した。
【０１１９】
１−５．試験結果
膣症原因株単独で処理した対照群と比較した、実施例１において調製した試験試料で処理した試験群におけるＯＤ（光学密度）、ｐＨ及び乳酸のレベルの変化に関する試験結果を、表４、表５（ガードネレラ・ヴァギナリス株）、表６、表７（バクテロイデス・フラジリス株）に示した。
【０１２０】
１−５−１．ガードネレラ・ヴァギナリス株（表４、表５を参照されたい）
ガードネレラ・ヴァギナリス株に対して処理した実験の場合、本発明の組合せで処理した試験群は、酸性環境、すなわち４．０〜４．９のｐＨ範囲を示し、膣におけるガードネレラ・ヴァギナリス株の増殖を阻害する環境がもたらされたのに対し、本発明の組合せを含まない対照群は５．１９〜５．５２のｐＨ範囲を示した。
【０１２１】
膣における有害細菌の増殖からの阻害活性を有する乳酸のレベルに関し、本発明の組合せで処理した試験群における乳酸のレベルは０．９７０ｍｇ／ｍｌ〜１．７１２ｍｇ／ｍｌの範囲であり、乳酸菌単独で処理した比較群と比べて膣におけるガードネレラ・ヴァギナリス株の増殖からのより強力な阻害活性がもたらされたのに対し、本発明の組合せを含まない対照群は０．７１１ｍｇ／ｍｌ〜０．７６５ｍｇ／ｍｌの範囲の乳酸のレベルを示した。
【０１２２】
１−５−２．バクテロイデス・フラジリス株（表６、表７を参照されたい）
バクテロイデス・フラジリス株に対して処理した実験の場合、本発明の組合せで処理した試験群は、酸性環境、すなわち４．４〜４．９のｐＨ範囲を示し、膣におけるバクテロイデス・フラジリス株の増殖を阻害する環境がもたらされたのに対し、本発明の組合せを含まない対照群は５．２１〜５．６２のｐＨ範囲を示した。
【０１２３】
膣における有害細菌の増殖からの阻害活性を有する乳酸のレベルに関し、本発明の組合せで処理した試験群における乳酸のレベルは０．４４２０ｍｇ／ｍｌ〜１．０４９ｍｇ／ｍｌの範囲であり、乳酸菌単独で処理した比較群と比べて膣におけるバクテロイデス・フラジリス株の増殖からのより強力な阻害活性がもたらされたのに対し、本発明の組合せを含まない対照群は０．０００ｍｇ／ｍｌの乳酸のレベルを示した。
【０１２４】
したがって、本発明の組合せが、必要な栄養素を提供することにより乳酸菌の増殖を促進し、膣を酸性環境に維持する乳酸の再生産が賦活されたことが確認された。
【０１２５】
【表４】
2019524636.tif 000005
【０１２６】
【表５】
2019524636.tif 000006
【０１２７】
【表６】
2019524636.tif 000007
【０１２８】
【表７】
2019524636.tif 000008
【０１２９】
実験例２．膣症原因株の増殖に対する直接阻害効果
膣症原因株の増殖に対する、実施例１において調製した本発明の組合せの直接阻害効果を再確認するため、以下の通り、下記試験を行った。
【０１３０】
２−１．予備試験の目的
膣症原因株及び乳酸菌の様々な抗生物質耐性を使用することにより、実験で使用される膣症原因株及び乳酸菌の感受性を判定し、また膣症原因株に対する本発明の組合せの阻害活性又は促進効果を、定量的かつ直接的に判定することができる。
【０１３１】
様々な濃度の様々な抗生物質、すなわち、アンピシリン（カタログ番号ＡＭ０５１０、米国のGeorgia Chem.）５０マイクログラム／ｍＬ、カナマイシン（カタログ番号ＫＡ２００３、米国のGeorgia Chem.）５０マイクログラム／ｍＬ、クロラムフェニコール（品番３８８６．２、ドイツ国）３４マイクログラム／ｍＬ、テトラサイクリン（品番ＨＰ６３．１、ドイツ国）１５マイクログラム／ｍＬ、ストレプトマイシン（カタログ番号Ｓ１０２７、韓国のBiosesang）５０マイクログラム／ｍＬ、ゲンタマイシン（カタログ番号ＧＳ３００７、米国のGeorgia Chem.）２０マイクログラム／ｍＬ、及びリファンピシン（カタログ番号Ｒ３５０１、米国のSigma-Aldrich）２５マイクログラム／ｍＬを実験で使用した。
【０１３２】
２−２．膣症原因株の感受性に関する予備試験
２−２−１．実験手順
膣症原因株、すなわち、バクテロイデス・フラジリス（ＫＣＴＣ番号５０１３）及びガードネレラ・ヴァギナリス（ＫＣＴＣ番号５０９７）を５％ヒツジ血液及び１．５％寒天を添加したキャスマン培地に播種し、ＧａｓＰａｋ（商標）ＥＺ  Ｇａｓ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｐｏｕｃｈ  ｓｙｓｔｅｍ（ＢＤ、カタログ番号２６０８３、米国）を使用して、嫌気条件下で３６時間の振盪インキュベーションに供した。
【０１３３】
インキュベーションの後、コロニーを白金耳によって収集し、５％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）を添加したキャスマン培地（トリプトン１２ｇ、肉ペプトン５ｇ、塩化ナトリウム５ｇ、酵母抽出物３ｇ、牛肉エキス３ｇ、デンプンカゼイン１ｇ、Ｄ−グルコース０．５ｇ、ニコチンアミド０．０５ｇ、ｐ−アミノ安息香酸０．００５ｇ、蒸留水１Ｌ、ｐＨ７．３、５％ＦＢＳ）に播種した。引用文献（Treatment of Gardnella vaginalis infection., JI. Adinma et al., J. Obstetrics and Gynaecology, 17(6), pp.573-575, 1997、Treatment of urinary tract infection by Gardnella vaginalis; a composition of oral metronidazole versus ampicillin, AG. PA., et al., Rev Latioam Microbiol. 2001, 43(2): pp65-69、Antimicrobial susceptibilities of Gardnella vaginalis., Kharsany AB., et al., antimicrobial agents and chemotherapy, 1993, pp2733-2735.、Susceptibilities of Bacteroides fragilis to six antibiotics determined by standardized antimicrobial disc susceptibility testing., Sutter VL., et al., antimicrobial agents and chemotherapy, 1973, pp188-193）に従い、ＧａｓＰａｋ（商標）ＥＺ  Ｐｏｕｃｈ  ｓｙｓｔｅｍ（表示器を備えるＡｎａｅｒｏｂｉｃ  Ｇａｓ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｐｏｕｃｈ  Ｓｙｓｔｅｍ、ＢＤ、カタログ番号２６０８３、米国）を使用して、培地を１５０ｒｐｍの速度にて３７℃で２４時間の振盪インキュベーションに供した。
【０１３４】
２−２−２．試験結果
結果、膣症原因菌に対する様々な抗生物質の抗生物質感受性を表８に示した。
【０１３５】
【表８】
2019524636.tif 000009
【０１３６】
２−３．乳酸菌株の感受性に関する予備試験
２−２−１．実験手順
乳酸を豊富に再生産する乳酸菌株、すなわちラクトバチルス・アシドフィルス（ＫＣＴＣ番号３１６４）、ビフィドバクテリウム・ロングム亜種ロングム（ＫＣＴＣ番号３１２８）等の抗生物質耐性を判定するため、ＭＲＳ培地（プロテアーゼペプトン１０ｇ、牛肉エキス１０ｇ、酵母抽出物５ｇ、Ｄ−グルコース２０ｇ、Ｔｗｅｅｎ８０  １ｍｌ、Ｋ２ＨＰＯ４  ２ｇ、酢酸ナトリウム５ｇ、クエン酸水素二アンモニウム２ｇ、ＭｇＳＯ４７Ｈ２Ｏ  ０．２ｇ、ＭｎＳＯ４Ｈ２Ｏ  ０．２ｇ、蒸留水１Ｌ、ｐＨ６．２〜ｐＨ６．５）に細菌を播種し、１５０ｒｐｍの速度で３７℃の振盪インキュベーションに供した。
【０１３７】
嫌気性インキュベーションについて、引用文献（Antibiotic susceptibility of members of the lactobacillus acidophilus group using broth microdilution and molecular identification of their resistance determinants, M. Sigrids et al., International Journal of Food Microbiology 144 (2010), pp81-87、Antibiotic sensitivity of acid stressed probiotic Lactobacillus acidophilus ncdc 291, NNK, GS., The internet Journal of microbiology Vol. 9 (2010)、Antimicrobial susceptibility of bifidobacteria., F. CM., et al., Journal of antimicrobial Chemotherapy (2005) 55, pp.38-44)に従い、ＧａｓＰａｋ（商標）ＥＺ  Ｐｏｕｃｈ  ｓｙｓｔｅｍ（表示器を備えるＡｎａｅｒｏｂｉｃ  Ｇａｓ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｐｏｕｃｈ  Ｓｙｓｔｅｍ、ＢＤ、カタログ番号２６０８３、米国）を使用して、培地を１５０ｒｐｍの速度にて３７℃で２４時間の振盪インキュベーションに供した。
【０１３８】
２−２−２．試験結果
結果、乳酸菌株に対する様々な抗生物質の抗生物質感受性を表９に示した。
【０１３９】
【表９】
2019524636.tif 000010
【０１４０】
２−３．抗生物質感受性に関する主な実験
２−３−１．実験手順
乳酸を豊富に再生産する様々な乳酸菌株、すなわちラクトバチルス・アシドフィルス（ＫＣＴＣ番号３１６４）、ビフィドバクテリウム・ロングム亜種ロングム（ＫＣＴＣ番号３１２８）等と同様に、膣症原因株、すなわちバクテロイデス・フラジリス（ＫＣＴＣ番号５０１３）及びガードネレラ・ヴァギナリス（ＫＣＴＣ番号５０９７）の抗生物質耐性を判定するため、以下の実験を行った。
【０１４１】
バクテロイデス・フラジリスの増殖速度を、バクテロイデス・フラジリスと様々なラクトバチルス株の両方で処理した群に５０マイクログラム／ｍｌのアンピシリンを処理することによって特定した結果、様々なラクトバチルス株の増殖阻害が生じた。
【０１４２】
バクテロイデス・フラジリスの増殖速度を、バクテロイデス・フラジリスと様々なビフィドバクテリウム株の両方で処理した群に５０マイクログラム／ｍｌのアンピシリンを処理することによって特定した結果、様々なビフィドバクテリウム株の増殖阻害が生じた。
【０１４３】
ガードネレラ・ヴァギナリスの増殖速度を、ガードネレラ・ヴァギナリスと様々なラクトバチルス株の両方で処理した群に２０マイクログラム／ｍｌのアンピシリンを処理することによって特定した結果、様々なラクトバチルス株の増殖阻害が生じた。
【０１４４】
ガードネレラ・ヴァギナリスの増殖速度を、バクテロイデス・フラジリスと様々なビフィドバクテリウム株の両方で処理した群に２０マイクログラム／ｍｌのアンピシリンを処理することによって特定した結果、様々なビフィドバクテリウム株の増殖阻害を生じた。
【０１４５】
予備試験による試験結果に基づいて、試験群を５群、すなわち、（ａ）精製塩とグルコースとの組合せ（１：１、重量／重量）で処理したＩ群、ＣＬ１、ＣＦ１、ＣＢ１、ＣＳ１等、（ｂ）溶融塩とフルクトオリゴ糖との組合せ（１：２、重量／重量）で処理したＩＩ群、ＣＬ２、ＣＦ２、ＣＢ２、ＣＳ２等、（ｃ）未精製塩とラクツロースとの組合せ（１：５、重量／重量）で処理したＩＩＩ群、ＣＬ３、ＣＦ３、ＣＢ３、ＣＳ３等、（ｄ）精製塩とフルクトースとの組合せ（２：１、重量／重量）で処理したＩＶ群、ＣＬ４、ＣＦ４、ＣＢ４、ＣＳ４等、及び（ｅ）溶融塩とラクチトールとの組合せ（５：１、重量／重量）で処理したＶＩ群、ＣＬ５、ＣＦ５、ＣＢ５、ＣＳ５等に分けた。希釈した試験試料を、アンピシリン５０マイクログラム／ｍｌ又はゲンタマイシン２０マイクログラムを含む選択培地に再び播種した。液体培地中で予めインキュベートした培地２０マイクロリットルを、５％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）を添加したキャスマン培地（トリプトン１２ｇ、肉ペプトン５ｇ、塩化ナトリウム５ｇ、酵母抽出物３ｇ、牛肉エキス３ｇ、デンプンカゼイン１ｇ、Ｄ−グルコース０．５ｇ、ニコチンアミド０．０５ｇ、ｐ−アミノ安息香酸０．００５ｇ、蒸留水１Ｌ、ｐＨ７．３、５％ＦＢＳ）１０００マイクロリットルに希釈し、２０マイクロリットルの培地を収集して、選択された抗生物質を含む、５％ＦＢＳを添加したキャスマン培地３ｍｌに再び播種した。アガー含有固体培地と液体培地をいずれも、ＧａｓＰａｋ（商標）ＥＺ  Ｐｏｕｃｈ  ｓｙｓｔｅｍ（表示器を備えるＡｎａｅｒｏｂｉｃ  Ｇａｓ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｐｏｕｃｈ  Ｓｙｓｔｅｍ、ＢＤ、カタログ番号２６０８３、米国）を使用して、１５０ｒｐｍの速度で３７℃にて２４時間の振盪インキュベーションに供した。
【０１４６】
液体培地中で培養された細菌の増殖速度を、分光光度計（Ｓｐｅｃｔｒｏｎｉｃ  ｇｅｎｅｓｉｓ  ２、米国のThermo、波長６００ｎｍでのＯ．Ｄ．値）を使用して特定し、また固体培地中の増殖速度を、コロニー数を計数することにより特定した。
【０１４７】
２−３−２．試験結果
選択培地（キャスマン培地：５０マイクログラム／ｍｌのアンピシリンを含むＭＲＳ培地（体積／体積））におけるバクテロイデス・フラジリスの試験結果を示す表１０で見られるように、様々なラクトバチルス株とともに培養されたＩ群、ＩＩＩ群、及びＶ群においてバクテロイデス・フラジリスの増殖が阻害されたことが確認され、Ｏ．Ｄ（光学密度）値及びコロニー計数に関する試験結果を表１０に示した。
【０１４８】
【表１０】
2019524636.tif 000011
【０１４９】
選択培地（キャスマン培地：５０マイクログラム／ｍｌのアンピシリンを含むＭＲＳ培地（体積／体積））におけるバクテロイデス・フラジリスの試験結果を示す表１１で見られるように、ビフィドバクテリウム株とともに培養されたＩ群、ＩＩ群、ＩＩＩ群、ＩＶ群、及びＶ群においてバクテロイデス・フラジリスの増殖が阻害されたことが確認され、Ｏ．Ｄ（光学密度）値及びコロニー計数に関する試験結果を表１１に示した。
【０１５０】
【表１１】
2019524636.tif 000012
【０１５１】
選択培地（キャスマン培地：５０マイクログラム／ｍｌのアンピシリンを含むＭＲＳ培地（体積／体積））におけるバクテロイデス・フラジリスの試験結果を示す表１２で見られるように、バチルス・セレウス株とともに培養されたＩ群、ＩＩ群、ＩＩＩ群、ＩＶ群、及びＶ群においてバクテロイデス・フラジリスの増殖が阻害されたことが確認され、Ｏ．Ｄ（光学密度）値及びコロニー計数に関する試験結果を表１２に示した。
【０１５２】
【表１２】
2019524636.tif 000013
【０１５３】
選択培地（キャスマン培地：５０マイクログラム／ｍｌのアンピシリンを含むＭＲＳ培地（体積／体積））におけるバクテロイデス・フラジリスの試験結果を示す表１３で見られるように、ストレプトコッカス属菌株とともに培養されたＩ群、ＩＩ群、ＩＩＩ群、ＩＶ群、及びＶ群においてバクテロイデス・フラジリスの増殖が阻害されたことが確認され、Ｏ．Ｄ（光学密度）値及びコロニー計数に関する試験結果を表１３に示した。
【０１５４】
【表１３】
2019524636.tif 000014
【０１５５】
選択培地（キャスマン培地：２０マイクログラム／ｍｌのゲンタマイシンを含むＭＲＳ培地（体積／体積））におけるガードネレラ・ヴァギナリスの試験結果を示す表１４で見られるように、様々なラクトバチルス株とともに培養されたＩＩＩ群においてガードネレラ・ヴァギナリスの増殖が阻害されたことが確認され、Ｏ．Ｄ（光学密度）値及びコロニー計数に関する試験結果を表１４に示した。
【０１５６】
【表１４】
2019524636.tif 000015
【０１５７】
選択培地（キャスマン培地：５０マイクログラム／ｍｌのアンピシリンを含むＭＲＳ培地（体積／体積））におけるガードネレラ・ヴァギナリスの試験結果を示す表１５で見られるように、様々なビフィドバクテリウム株とともに培養されたＩ群、ＩＩ群、ＩＩＩ群、ＩＶ群、及びＶ群においてガードネレラ・ヴァギナリスの増殖が阻害されたことが確認され、Ｏ．Ｄ（光学密度）値及びコロニー計数に関する試験結果を表１５に示した。
【０１５８】
【表１５】
2019524636.tif 000016
【０１５９】
選択培地（キャスマン培地：５０マイクログラム／ｍｌのアンピシリンを含むＭＲＳ培地（体積／体積））におけるガードネレラ・ヴァギナリスの試験結果を示す表１６で見られるように、バチルス・セレウス株とともに培養されたＩ群、ＩＩ群、ＩＩＩ群、ＩＶ群、及びＶ群においてガードネレラ・ヴァギナリスの増殖が阻害されたことが確認され、Ｏ．Ｄ（光学密度）値及びコロニー計数に関する試験結果を表１６に示した。
【０１６０】
【表１６】
2019524636.tif 000017
【０１６１】
選択培地（キャスマン培地：５０マイクログラム／ｍｌのアンピシリンを含むＭＲＳ培地（体積／体積））におけるガードネレラ・ヴァギナリスの試験結果を示す表１７で見られるように、ストレプトコッカス属菌株とともに培養されたＩ群、ＩＩ群、ＩＩＩ群、ＩＶ群、及びＶ群においてガードネレラ・ヴァギナリスの増殖が阻害されたことが確認され、Ｏ．Ｄ（光学密度）値及びコロニー計数に関する試験結果を表１７に示した。
【０１６２】
【表１７】
2019524636.tif 000018
【０１６３】
したがって、本発明の組合せは、上記の実験により、乳酸菌の単独処理、及び塩と糖との組合せと比較して、膣症原因菌に対してより強力な阻害効果を示すことが確認された。
【０１６４】
実験例３．簡略臨床試験（１）
実施例２において調製した腟錠組成物（ＳＧＬ２）１２００ｍｇを、韓国在住の２０歳〜５０歳に及ぶ、膣症を患う３５名の患者及び６５名の健常な女性からなる１００名のボランティアに対して５日間に亘り１日１回、外部投与して、アンケート調査を行い、様々な内容の違い、すなわち（ａ）不快な匂いの防止効果、（ｂ）爽快感のレベル、及び（ｃ）皮膚乾癬の緩和活性を調査した。
【０１６５】
調査結果を、（１）非常に満足、（２）満足、（３）普通、及び（４）不満の４群に分類し、調査結果を表１８に示した。
【０１６６】
【表１８】
2019524636.tif 000019
【０１６７】
結果、表１８で見られるように、（ａ）不快な匂いの防止効果に関し、本発明の組成物による処理後、ボランティアの９４％が満足し、特にボランティアの７９％は非常に満足であった。
【０１６８】
（ｂ）爽快感のレベルに関し、本発明の組成物による処理後、ボランティアの８６％が満足し、特にボランティアの７２％は非常に満足であった。
【０１６９】
皮膚乾癬の緩和活性に関し、本発明の組成物による処理後、ボランティアの８５％が満足し、特にボランティアの６７％は非常に満足であった。
【０１７０】
したがって、本発明の腟錠組成物が強力で好ましい効果、例えば、（ａ）不快な匂いの防止効果、（ｂ）爽快感のレベル、及び（ｃ）皮膚乾癬の緩和活性等を有することが証明され、膣の膣症から患者を治療又は予防する腟錠組成物として有用となり得る。
【０１７１】
本発明を以上のように記載したが、本発明を様々に変更し得ることは明らかであろう。かかる変更は本発明の趣旨と範囲とを逸脱するものとみなすべきではなく、かかる改変の全ては、当業者に明白であろうように、添付の特許請求の範囲内に含まれるべきことが意図される。
【０１７２】
実験例４．簡略臨床試験（２）
実施例３において調製した膣クレンジング組成物（ＳＧＬ４）２００ｍｌを、韓国在住の２０歳〜５０歳に及ぶ、膣症を患う４２名の患者及び５８名の健常な女性からなる１００名のボランティアに対して５日間に亘り１日１回、外部投与して、本発明の組成物で処理される前のｐＨ（Ａ）と後のｐＨ（Ｂ）との間の膣ｐＨの違いをｐＨメーター（ＭＰ−１０３、www.yuyuinst.co.kr）を使用して特定した。
【０１７３】
結果、表１９で見られるように、試験群の８５％の膣ｐＨは本発明の組成物による処理前で５．５超に達したが、本発明の組成物で処理した後は、試験群の９０％が正常なｐＨ範囲に到達した。
【０１７４】
【表１９】
2019524636.tif 000020
【０１７５】
したがって、本発明のクレンジング組成物ＳＧＬ４は、膣アルカリ化に悩む患者の膣ｐＨを減少させるのに有用となり得ることが証明された。
【０１７６】
本発明を以上のように記載したが、本発明を様々に変更し得ることは明らかであろう。かかる変更は本発明の趣旨と範囲とを逸脱するものとみなすべきではなく、かかる改変の全ては、当業者に明白であろうように、添付の特許請求の範囲内に含まれるべきことが意図される。
【０１７７】
実験例５．ラットにおける経口投与の急性毒性試験
６週間齢のＳＰＦ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに本発明の組合せ（ＳＧＬ２及びＳＧＬ４）を投与することにより、急性毒性試験を行った。
【０１７８】
２５０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ、５０００ｍｇ／ｋｇの本発明の組合せを、２匹のラットからなる各群に経口投与し、ラットの症状を１４日間観察した。本発明の組合せを投与した後、全ての臨床上の変化、すなわち、死亡率、臨床兆候、体重変化を観察し、血液学検査及び血液生化学検査等の血液検査を行った。腹部臓器及び胸郭臓器の異常な変化を検死後に観察した。
【０１７９】
いずれの群又はいずれの性別においても、死亡率、臨床兆候、体重変化、及び肉眼所見のいかなる変化も示されなかった。さらに、本発明の組合せ５０００ｍｇ／ｋｇで処理した試験群で何らの毒性も示さなかった。
【０１８０】
したがって、本発明において調製した本発明の組合せは強力であり、経口投与でＬＤ５０（５０００ｍｇ／ｋｇ超）を示す安全な物質であることが確認された。
【０１８１】
［発明の態様］
以下に、製剤化方法及び賦形剤の種類を記載するが、本発明はそれらに限定されない。代表的な調製例を以下に記載する。
【０１８２】
注射剤の調製
ＣＢ５の組合せ（１００ｍｇ）
ピロ亜硫酸ナトリウム（３．０ｍｇ）
メチルパラベン（０．８ｍｇ）
プロピルパラベン（０．１ｍｇ）
注射剤に最適量の蒸留水
【０１８３】
注射剤の調製を、有効成分を溶解し、ｐＨを約７．５に調整した後、全ての成分を２ｍｌ容のアンプルに充填し、従来の注射剤の調製方法によって滅菌して行った。
【０１８４】
粉体の調製
ＣＬ１の組合せ（５００ｍｇ）
コーンスターチ（１００ｍｇ）
ラクトース（１００ｍｇ）
タルク（１０ｍｇ）
【０１８５】
粉体の調製を、上記の成分を混合し、密閉したパッケージを充填することにより行った。
【０１８６】
錠剤の調製
ＣＬ３の組合せ（２００ｍｇ）
コーンスターチ（１００ｍｇ）
ラクトース（１００ｍｇ）
ステアリン酸マグネシウム  最適量
【０１８７】
錠剤の調製を、上記の成分を混合し打錠することにより行った。
【０１８８】
カプセルの調製
ＣＢ３の組合せ（１００ｍｇ）
ラクトース（５０ｍｇ）
コーンスターチ（５０ｍｇ）
タルク（２ｍｇ）
ステアリン酸マグネシウム  最適量
【０１８９】
錠剤の調製を、上記の成分を混合し、従来のゼラチン調製方法によってゼラチンカプセルを充填することにより行った。
【０１９０】
液体の調製
ＣＳ３の組合せ（１０００ｍｇ）
糖（２０ｇ）
多糖（２０ｇ）
レモン香料（２０ｇ）
【０１９１】
液体の調製を、有効成分を溶解した後、全ての成分を１０００ｍｌ容のアンプルに充填して、従来の液体調製方法によって滅菌して行った。
【０１９２】
健康食品の調製
ＣＳ５の組合せ（１０００ｍｇ）
ビタミン混合物（最適量）
ビタミンＡ酢酸塩（７０ｇ）
ビタミンＥ（１．０ｍｇ）
ビタミンＢ１０（１３ｍｇ）
ビタミンＢ２（０．１５ｍｇ）
ビタミンＢ６（０．５ｍｇ）
ビタミンＢ１（２０．２ｍｇ）
ビタミンＣ（１０ｍｇ）
ビオチン（１０ｍｇ）
ニコチン酸アミド（１．７ｍｇ）
葉酸（５０ｍｇ）
パントテン酸カルシウム（０．５ｍｇ）
ミネラル混合物（最適量）
硫酸第一鉄（１．７５ｍｇ）
酸化亜鉛（０．８２ｍｇ）
炭酸マグネシウム（２５．３ｍｇ）
リン酸一カリウム（１５ｍｇ）
リン酸二カルシウム（５５ｍｇ）
クエン酸カリウム（９０ｍｇ）
炭酸カルシウム（１００ｍｇ）
塩化マグネシウム（２４．８ｍｇ）
【０１９３】
上記のビタミン及びミネラルの混合物は、様々な値をとることができる。かかる変更は、本発明の趣旨及び範囲から逸脱するものとはみなされない。
【０１９４】
健康飲料の調製
ＣＬ４の組合せ（１０００ｍｇ）
クエン酸（１０００ｍｇ）
オリゴ糖（１００ｇ）
アプリコット濃縮物（２ｇ）
タウリン（１ｇ）
蒸留水（９００ｍｌ）
【０１９５】
健康飲料の調製を、有効成分を溶解し、混合し、８５℃で１時間撹拌し、濾過した後、１０００ｍｌ容のアンプルに全ての成分を充填し、従来の健康飲料調製方法によって滅菌して行った。
【０１９６】
本発明を以上のように記載したが、本発明を様々に変更し得ることは明らかであろう。かかる変更は本発明の趣旨と範囲とを逸脱するものとみなすべきではなく、かかる改変の全ては、当業者に明白であろうように、添付の特許請求の範囲内に含まれるべきことが意図される。
【産業上の利用可能性】
【０１９７】
本発明に記載されるように、本発明は、膣症を治療又は予防するための有効成分として塩と、糖と、乳酸菌との本発明の組合せを含む組成物を提供する。本発明の組成物は、様々な実験、例えば、（１）ｐＨ及び乳酸レベルの変化を特定することによる膣症原因菌の増殖からの間接阻害活性試験（実験例１）、（２）試験試料の感受性の判定による、膣症原因菌の増殖からの直接阻害活性試験（実験例２）、（３）簡略臨床試験により強力な抗菌活性を示し、最終的に、組合せが上記試験において強力な抗菌活性を示すことが確認された。したがって、本発明の組合せは、医薬組成物、健康機能性食品、食品添加物、局所組成物、及び洗浄剤組成物の形態で、膣症を緩和、治療、又は予防するのに有用となり得る。
【国際調査報告】
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