(57)【要約】本開示は、肝疾患を予防および／または処置する方法であって、それを必要とする患者に、ＡＳＫ１阻害剤を、ＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与することを含む、方法に関する。本明細書において、肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防する方法であって、患者に、治療有効量のアポトーシスシグナル調節キナーゼ１（ＡＳＫ１）阻害剤を、治療有効量のファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）アゴニストと組み合わせて投与することを含む方法が開示される。
2019533706.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防する方法であって、該患者に、治療有効量のＡＳＫ１阻害剤を、治療有効量のＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与することを含み、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（Ｉ）：
【化５】
2019533706.tif 000009
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＩＩ）：
【化６】
2019533706.tif 000010
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、方法。
【請求項２】
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防する方法であって、該患者に、治療有効量のＡＳＫ１阻害剤を、治療有効量のＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与することを含み、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（Ｉ）：
【化７】
2019533706.tif 000011
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＶ）：
【化８】
2019533706.tif 000012
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、方法。
【請求項３】
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防する方法であって、該患者に、治療有効量のＡＳＫ１阻害剤を、治療有効量のＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与することを含み、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（ＩＩ）：
【化９】
2019533706.tif 000013
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＩＩ）：
【化１０】
2019533706.tif 000014
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、方法。
【請求項４】
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防する方法であって、該患者に、治療有効量のＡＳＫ１阻害剤を、治療有効量のＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与することを含み、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（ＩＩ）：
【化１１】
2019533706.tif 000015
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＶ）：
【化１２】
2019533706.tif 000016
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、方法。
【請求項５】
前記ＡＳＫ１阻害剤および前記ＦＸＲアゴニストが、一緒に投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ＡＳＫ１阻害剤および前記ＦＸＲアゴニストが、別々に投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記肝疾患が、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
治療有効量のＡＳＫ１阻害剤および治療有効量のＦＸＲアゴニストを含む医薬組成物であって、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（Ｉ）：
【化１３】
2019533706.tif 000017
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＩＩ）：
【化１４】
2019533706.tif 000018
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、医薬組成物。
【請求項９】
治療有効量のＡＳＫ１阻害剤および治療有効量のＦＸＲアゴニストを含む医薬組成物であって、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（Ｉ）：
【化１５】
2019533706.tif 000019
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＶ）：
【化１６】
2019533706.tif 000020
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、医薬組成物。
【請求項１０】
治療有効量のＡＳＫ１阻害剤および治療有効量のＦＸＲアゴニストを含む医薬組成物であって、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（ＩＩ）：
【化１７】
2019533706.tif 000021
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＩＩ）：
【化１８】
2019533706.tif 000022
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、医薬組成物。
【請求項１１】
治療有効量のＡＳＫ１阻害剤および治療有効量のＦＸＲアゴニストを含む医薬組成物であって、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（ＩＩ）：
【化１９】
2019533706.tif 000023
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＶ）：
【化２０】
2019533706.tif 000024
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、医薬組成物。
【請求項１２】
薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、肝疾患を予防および／または処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
肝疾患は、一般に、疾患の持続期間に基づいて、急性または慢性に分類される。肝疾患は、感染、傷害、薬物もしくは毒性化合物への曝露、アルコール、食品中の不純物、および血液中における通常の物質の異常な蓄積、自己免疫プロセス、遺伝的欠陥（ヘモクロマトーシスなど）、または未知の原因（複数可）により、引き起こされ得る。
【０００３】
肝疾患は、世界中で、死亡の主要な原因である。特に、高脂肪の食事は、肝炎と驚くほど類似する方法で、肝臓に損傷を与えることが分かっている。アメリカ肝臓財団は、人口の２０パーセントより多くが、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を有すると推定している。肥満、不健康な食事および座りがちな生活様式が、ＮＡＦＬＤの高い有病率に寄与し得ることを示唆している。処置せずに放置すると、ＮＡＦＬＤは、深刻な有害作用を引き起こす非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に進行し得る。ＮＡＳＨが発生すると、ＮＡＳＨは、肝臓を、時間の経過とともに、腫脹および瘢痕化（すなわち、肝硬変）を引き起こす。
【０００４】
予備的な報告は、ポジティブな生活様式の変化が、肝臓の損傷を予防または回復させ得ることを示唆しているが、ＮＡＦＬＤに対する効果的な医学的処置は存在しない。したがって、肝疾患を処置するための新たな効果的な医薬品を提供する必要性が残されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本明細書において、肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防する方法であって、患者に、治療有効量のアポトーシスシグナル調節キナーゼ１（ＡＳＫ１）阻害剤を、治療有効量のファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）アゴニストと組み合わせて投与することを含む方法が開示される。肝疾患は、限定されるものではないが、慢性および／または代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）ならびに非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含む、任意の肝疾患であり得る。
【０００６】
ある特定の実施形態では、本明細書において、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を処置および／または予防することを必要とする患者において、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を処置および／または予防する方法であって、患者に、治療有効量のＡＳＫ１阻害剤を、治療有効量のＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与することを含む方法が提供される。
【０００７】
本明細書において提供される方法において、ＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストは、共投与することができる。このような実施形態では、ＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストは、単一の医薬組成物として一緒に、または１つより多くの医薬組成物で別々に、投与することができる。したがって、本明細書において、治療有効量のＡＳＫ１阻害剤および治療有効量のＦＸＲアゴニストを含む医薬組成物も提供される。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、形態計測画像解析によって定量されたＰＳＲ染色（肝臓の面積％）を示す。グラフは、平均±ＳＥＭを示す。
【０００９】
【図２】図２は、肝臓組織のグラムあたりのヒドロキシプロリンのマイクログラムとして表される、肝臓のヒドロキシプロリン含量を示す。グラフは、平均±ＳＥＭを示す。
【００１０】
【図３】図３は、形態計測画像解析によって定量されたデスミン＋染色（肝臓の面積％）を示す。グラフは、平均±ＳＥＭを示す。
【００１１】
【図４】図４は、定量的ＲＴ−ＰＣＲによって測定された、肝線維化遺伝子Ｃｏｌ１ａ１の肝臓の発現を示す。グラフは、平均±ＳＥＭを示す。
【００１２】
【図５】図５は、定量的ＲＴ−ＰＣＲによって測定された、肝線維化遺伝子ＴＩＭＰ−１の肝臓の発現を示す。グラフは、平均±ＳＥＭを示す。
【００１３】
【図６】図６は、形態計測画像解析によって定量された肝臓脂肪症（肝臓の空胞化面積％）を示す。グラフは、平均±ＳＥＭを示す。
【００１４】
【図７】図７は、肝臓組織のグラムあたりのコレステロールのミリグラムとして表される、肝臓の肝臓コレステロール含量を示す。グラフは、平均±ＳＥＭを示す。
【００１５】
【図８】図８は、血漿のミリリットルあたりの胆汁酸のナノグラムとして表される、血漿中の胆汁酸の総レベルを示す。グラフは、平均±ＳＥＭを示す。
【００１６】
【図９】図９は、定量的ナノストリングによって測定された、肝臓における炎症遺伝子ＩＬ１−βの肝臓の発現を示す。グラフは、平均±ＳＥＭを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
定義および一般的なパラメーター
本明細書で使用される場合、以下の用語および語句は、一般に、これらが使用される文脈が他のものを示す範囲を除いて、下記に示す意味を有することを意図する。
【００１８】
本明細書で使用される場合、定量的測定の文脈で使用される「約」という用語は、表示した量±１０％、またはあるいは、表示した量±５％もしくは±１％を意味する。
【００１９】
「薬学的に許容される塩」という用語は、本明細書に開示される化合物の塩であって、基本となる化合物（underlying  compound）の生物学的有効性および性質を保持し、生物学的にまたは別段有害ではないものを指す。酸付加塩および塩基付加塩が存在する。薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸および有機酸から調製され得る。
【００２０】
薬学的に許容される塩（それぞれ、酸付加塩または塩基付加塩）を形成するための基本となる化合物との反応に有用な酸および塩基は、当業者に公知である。同様に、基本となる化合物（開示されたもの）から薬学的に許容される塩を調製する方法は、当業者に公知であり、例えば、Bergeら、Journal  of  Pharmaceutical  Science、１９７７年１月、６６巻、１号、および他の資料に開示されている。
【００２１】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、賦形剤、または開示される化合物またはその使用に有害ではない、溶媒、希釈剤、分散媒、コーティング剤、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などのような剤を含む。薬学的に活性な物質の組成物を調製するためのこのような担体および剤の使用は、本技術分野において周知である（例えば、Remington's  Pharmaceutical  Sciences、Mace  Publishing  Co.、Philadelphia、PA、第１７版（１９８５年）；およびModern  Pharmaceutics、Marcel  Dekker,  Inc.、第３版（G.S.  BankerおよびC.T.  Rhodes編）を参照のこと）。
【００２２】
「治療有効量」および「有効量」という用語は、互換的に（interchangibly）使用され、１回または複数の用量で、そのような処置を必要とする患者（例えば、ヒト）に投与された場合に、下記に定義する処置を達成するのに十分な化合物の量を指す。治療有効量は、患者、処置される疾患、患者の体重および／もしくは年齢、疾患の重症度、または資格のある処方者もしくは介護士によって決定された投与の方法に応じて、変化する。
【００２３】
「処置」または「処置すること」という用語は、（ｉ）疾患の発病を遅らせる、すなわち、疾患の臨床症状を発生させないか、もしくはその発生を遅らせる；（ｉｉ）疾患を阻害する、すなわち、臨床症状の発生を阻む、および／または（ｉｉｉ）疾患を緩和する、すなわち、臨床症状もしくはその重症度の軽減をもたらす、という目的のために、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容される塩を投与することを意味する。
【００２４】
肝疾患
肝疾患は、疾患の持続期間に基づく、肝臓に対する急性または慢性の損傷である。肝臓の損傷は、感染、傷害、薬物またはアルコールもしくは食品中の不純物などの毒性化合物への曝露、血液中における通常の物質の異常な蓄積、自己免疫プロセス、遺伝的欠陥（ヘモクロマトーシスなど）、あるいは他の未知の原因により、引き起こされ得る。例示的な肝疾患としては、これらに限定されるものではないが、肝硬変、肝線維症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性脂肪性肝炎（ＡＳＨ）、肝虚血再灌流傷害、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、ならびにウイルス性およびアルコール性肝炎の両方を含む肝炎が挙げられる。
【００２５】
非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、アルコールが原因ではない、肝細胞中の余分な脂肪の蓄積である。ＮＡＦＬＤは、肝臓を、腫脹させ（すなわち、脂肪性肝炎）、次には、時間の経過とともに、瘢痕化（すなわち、肝硬変）を引き起こし、肝臓がんまたは肝不全をもたらし得る。ＮＡＦＬＤは、肝細胞（hepatocye）中の脂肪の蓄積によって特徴付けられ、しばしば、メタボリックシンドロームのいくつかの態様（例えば、２型糖尿病、インスリン抵抗性、高脂血症、高血圧症）と関連する。この疾患の頻度は、炭水化物に富んだ高脂肪の食事の摂取に起因して、ますます一般的になっている。ＮＡＦＬＤ患者の一部（約２０％）は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を生じる。
【００２６】
脂肪肝疾患のサブタイプであるＮＡＳＨは、より重症型のＮＡＦＬＤである。これは、大滴性脂肪症（macrovesicular  steatosis）、肝細胞の球状変性、および／または最終的に肝瘢痕化（すなわち、線維症）をもたらす炎症によって特徴付けられる。ＮＡＳＨと診断された患者は、進行した段階の肝線維症、および最終的には、肝硬変に進行する。末期疾患の肝硬変のＮＡＳＨ患者のための現在の処置は、肝臓移植である。
【００２７】
研究は、診断されたＮＡＳＨ患者のかなりの割合（３９％）が、診断を確定するための肝生検を受けていないことを示している。文献で報告されているよりも多くの割合の診断されたＮＡＳＨ患者が、メタボリックシンドロームのパラメーターを有している（２型糖尿病が５４％、肥満が７１％、メタボリックシンドロームが５９％）。８２％の医師が、診療指針の推奨と比較して、有意なアルコール摂取を定義するために、より低い閾値を使用している。８８％の医師が、ＮＡＳＨのために、ある形態の薬理学的処置を処方している（ビタミンＥ：ＮＡＳＨ患者の５３％に処方、スタチン類：５７％、メトホルミン：５０％）。したがって、介入（intervention）をサポートする確定診断または有意なデータの欠如にもかかわらず、患者の大多数が、医薬を処方されており、ＮＡＳＨを排除するアルコールの閾値は、予想されるよりも低い。
【００２８】
別の一般的な肝疾患は、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）である。これは、肝臓の内側および外側の胆管にゆっくりと損傷を与える、慢性または長期間にわたる肝疾患である。ＰＳＣの患者において、胆管の閉塞に起因して肝臓中に胆汁が蓄積し、それが、徐々に肝細胞に損傷を与え、肝硬変または肝臓の瘢痕化を引き起こす。現在、ＰＳＣを治癒するための有効な処置は存在しない。ＰＳＣを有する多くの患者は、典型的には、上記疾患と診断されてから約１０年後に、肝不全に起因して、肝臓移植が、最終的に必要である。ＰＳＣは、胆管がんももたらし得る。
【００２９】
肝線維症は、ほとんどの種類の慢性肝疾患で生じる、コラーゲンを含む細胞外マトリックスタンパク質の過剰な蓄積である。進行した肝線維症は、肝硬変、肝不全および門脈圧亢進症をもたらし、しばしば、肝臓移植を必要とする。
【００３０】
方法
本明細書において、肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防する方法であって、患者に、治療有効量のＡＳＫ１阻害剤を、治療有効量のＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与することを含む方法が開示される。活動性の肝疾患の存在は、血液中の酵素レベルの上昇の存在によって検出することができる。詳細には、臨床的に認められた正常範囲を上回るアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の血中レベルは、現在進行中の肝臓の損傷を示すことが公知である。ＡＬＴおよびＡＳＴの血中レベルについての肝疾患患者の日常的モニタリングが、医学的処置の間、肝疾患の進行を測定するために、臨床的に使用される。上昇したＡＬＴおよびＡＳＴの認められた正常範囲内への減少は、患者の現在進行中の肝臓の損傷の重症度の減少を反映する臨床的証拠と取られる。
【００３１】
ある特定の実施形態では、肝疾患は、慢性肝疾患である。慢性肝疾患は、肝臓実質の進行性の破壊および再生が関与し、線維症および肝硬変をもたらす。一般に、慢性肝疾患は、ウイルス（Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）またはエプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）など）、毒性作用物質（toxic  agent）または薬物（アルコール、メトトレキサートまたはニトロフラントインなど）、代謝性疾患（非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、ヘモクロマトーシスまたはウィルソン病など）、自己免疫疾患（自己免疫性慢性肝炎、原発性胆汁性胆管炎（以前は、原発性胆汁性肝硬変として公知）または原発性硬化性胆管炎など）、または他の原因（右心不全など）によって引き起こされ得る。
【００３２】
一実施形態では、本明細書において、肝硬変のレベルを減少させるための方法が提供される。一実施形態では、肝硬変は、線維症および結節再生を伴う、通常の微細な小葉構造の喪失によって、病理学的に特徴付けられる。肝硬変の程度を測定するための方法は、本技術分野において周知である。一実施形態では、肝硬変のレベルは、約５％〜約１００％減少する。一実施形態では、肝硬変のレベルは、対象において、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％減少する。
【００３３】
ある特定の実施形態では、肝疾患は、代謝性肝疾患である。一実施形態では、肝疾患は、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）である。ＮＡＦＬＤは、インスリン抵抗性およびメタボリックシンドローム（肥満、複合型高脂血症、糖尿病（２型）および高血圧）と関連している。ＮＡＦＬＤは、疾患の活動性の範囲を網羅していると考えられ、肝臓における脂肪蓄積として始まる（肝臓脂肪症）。
【００３４】
肥満およびインスリン抵抗性の両方が、おそらく、ＮＡＦＬＤの疾患の経過において強い役割を果たすことが示されている。質の悪い食事に加えて、ＮＡＦＬＤには、いくつかの他の公知の原因がある。例えば、ＮＡＦＬＤは、アミオダロン、抗ウイルス薬（例えば、ヌクレオシドアナログ）、アスピリン（まれに、小児におけるライ症候群の部分として）、コルチコステロイド、メトトレキサート、タモキシフェンまたはテトラサイクリンなどのある特定の医薬によって引き起こされ得る。ＮＡＦＬＤはまた、腹部における脂肪沈着の増加を引き起こし得る高フルクトースのコーンシロップの存在によって、ソフトドリンクの摂取と関連しているが、スクロースの摂取は同様の効果を示す（スクロースのフルクトースへの分解に起因する可能性がある）。この感受性に対する２つの遺伝子変異が同定されているように、遺伝的特質も、役割を果たすことが公知である。
【００３５】
未処置のまま放置すると、ＮＡＦＬＤは、脂肪症が炎症および線維症と組み合わされた状態である、ＮＡＦＬＤの最も極度の形態である非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に発展し得る。ＮＡＳＨは、肝臓の肝硬変の主な原因とみなされる。したがって、本明細書において、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を処置および／または予防することを必要とする患者において、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を処置および／または予防する方法であって、患者に、治療有効量のＡＳＫ１阻害剤を、治療有効量のＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与することを含む方法が提供される。
【００３６】
本明細書において、肝線維症を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝線維症を処置および／または予防する方法であって、患者に、治療有効量のＡＳＫ１阻害剤を、治療有効量のＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与することを含む方法も提供される。肝線維症は、ほとんどの種類の慢性肝疾患で生じる、コラーゲンを含む細胞外マトリックスタンパク質の過剰な蓄積である。ある特定の実施形態では、進行した肝線維症は、肝硬変および肝不全をもたらす。線維症、小葉の肝炎および門脈周辺の架橋壊死の程度の変化などの肝臓の組織構造を測定するための方法は、本技術分野において周知である。
【００３７】
一実施形態では、線維性組織、フィブロイドまたは線維性変性の形成である、肝線維症のレベルは、約９０％より多く（more  that）減少する。一実施形態では、線維性組織、フィブロイドまたは線維性変性の形成である、線維症のレベルは、少なくとも約９０％、少なくとも約８０％、少なくとも約７０％、少なくとも約６０％、少なくとも約５０％、少なくとも約４０％、少なくとも約３０％、少なくとも約２０％、少なくとも約１０％、少なくとも約５％または少なくとも約２％減少する。
【００３８】
一実施形態では、本明細書において提供される化合物は、肝臓における線維化のレベルを減少させる。肝臓の線維化は、線維症として公知の、肝臓における過剰な細胞外マトリックス成分の沈着をもたらすプロセスである。これは、例えば、慢性のウイルス性Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎、アルコール性肝疾患、薬物誘発性肝疾患、ヘモクロマトーシス、自己免疫性肝炎、ウィルソン病、原発性胆汁性胆管炎（以前は、原発性胆汁性肝硬変として公知）、硬化性胆管炎、肝臓の住血吸虫症などのいくつかの状態において観察される。一実施形態では、線維化のレベルは、約９０％より多く減少する。一実施形態では、線維化のレベルは、少なくとも約９０％、少なくとも約８０％、少なくとも約７０％、少なくとも約６０％、少なくとも約５０％、少なくとも４０％、少なくとも約３０％、少なくとも約２０％、少なくとも約１０％、少なくとも約５％または少なくとも２％減少する。
【００３９】
さらに他の実施形態では、本明細書において、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）を処置および／または予防することを必要とする患者において、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）を処置および／または予防する方法であって、患者に、治療有効量のＡＳＫ１阻害剤を、治療有効量のＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与することを含む方法が提供される。
【００４０】
ＮＡＳＨを有する患者は、エピジェネティック検査において、健康な患者よりも、平均して約２．８歳、老けていることが観察されている。したがって、一実施形態では、ＮＡＳＨの処置に有用な化合物は、ＮＡＳＨに起因する老化のエピジェネティック年齢または効果を、遅らせるか、改善するか、または回復させるのに有用であろう。別の実施形態では、例えば、本明細書に開示されるＡＳＫ１阻害剤のＦＸＲアゴニストとの組合せなどのＮＡＳＨの処置のための組合せ治療は、ＮＡＳＨに起因する老化効果の改善または回復に有用であり得る。
【００４１】
一実施形態では、ＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストは、組み合わせ製剤または別の医薬組成物で、一緒に投与されてもよく、それぞれの阻害剤は、任意の適切な剤形に製剤化されていてもよい。ある特定の実施形態では、本明細書において提供される方法は、ＡＳＫ１阻害剤および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物、ならびにＦＸＲアゴニストおよび薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物を、別々に投与することを含む。本開示による組み合わせ製剤は、ＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストと一緒に、１つまたは複数の薬学的に許容される担体または賦形剤、および必要に応じて、他の治療剤を含む。有効成分を含有する組み合わせ製剤は、意図する投与の方法に適した任意の形態であり得る。
【００４２】
ＡＳＫ１阻害剤
本明細書に開示される方法および医薬組成物のある特定の実施形態では、ＡＳＫ１阻害剤は、式（Ｉ）：
【化１】
2019533706.tif 000003
の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【００４３】
本明細書に開示される方法および医薬組成物のある特定の実施形態では、ＡＳＫ１阻害剤は、式（ＩＩ）：
【化２】
2019533706.tif 000004
の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【００４４】
式（Ｉ）および式（ＩＩ）の化合物は、米国特許出願公開第２０１１／０００９４１０号および同第２０１３／０１９７０３７号に記載のものなどの、当業者に公知の方法を使用して、合成および特徴付けることができる。一実施形態では、ＡＳＫ１阻害剤は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩である。一実施形態では、ＡＳＫ１阻害剤は、式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩である。
【００４５】
ＦＸＲアゴニスト
本明細書に開示される方法および医薬組成物のある特定の実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、式（ＩＩＩ）：
【化３】
2019533706.tif 000005
の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【００４６】
本明細書に開示される方法および医薬組成物のある特定の実施形態では、ＦＸＲアゴニストは、式（ＩＶ）：
【化４】
2019533706.tif 000006
の構造を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
【００４７】
式（ＩＩＩ）および式（ＩＶ）の化合物は、米国公開第２０１４／０２２１６５９号に記載のものなどの、当業者に公知の方法を使用して、合成および特徴付けることができる。
【００４８】
投薬および投与
有効成分を単独で投与することが可能であるが、有効成分を、下記に記載の医薬製剤または医薬組成物として提供することが好ましいことがある。本開示の動物（veterinary）用およびヒト用の両方の使用のための製剤は、有効成分の少なくとも１つと一緒に、１つまたは複数の許容されるそれらのための担体、および必要に応じて他の治療成分を含む。担体（複数可）は、製剤の他の成分と適合性であり、かつその受容者にとって生理学的に無害であるという意味で、「許容され」なければならない。
【００４９】
有効成分のそれぞれは、従来の担体および賦形剤を用いて製剤化することができ、担体および賦形剤は、通常の慣行に従って、選択される。錠剤は、賦形剤、流動促進剤、増量剤、結合剤などを含有することができる。水性製剤は、無菌の形態で調製され、経口投与以外による送達を意図する場合は、一般に、等張性である。すべての製剤は、必要に応じて、Handbook  of  Pharmaceutical  Excipients（１９８６年）に示されているものなどの賦形剤を含有する。賦形剤としては、アスコルビン酸および他の抗酸化剤、ＥＤＴＡなどのキレート剤、デキストリンなどの炭水化物、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロース、ステアリン酸などが挙げられる。製剤のｐＨは、約３〜約１１の範囲であるが、通常、約７〜１０である。
【００５０】
有効成分の治療有効量は、従来の用量漸増研究を使用して、熟練の臨床医によって、容易に決定することができる。典型的には、有効成分は、０．０１ミリグラム〜２グラムの用量で投与される。一実施形態では、投薬量は、約１０ミリグラム〜４５０ミリグラムである。別の実施形態では、投薬量は、約２５〜約２５０ミリグラムである。別の実施形態では、投薬量は、約５０または１００ミリグラムである。一実施形態では、投薬量は、約１００ミリグラムである。一実施形態では、１８ｍｇのＡＳＫ１阻害剤が投与される。特定の実施形態では、１８ｍｇの式（ＩＩ）の化合物が投与される。一実施形態では、３０ｍｇのＦＸＲアゴニストが投与される。特定の実施形態では、３０ｍｇの式（ＩＩＩ）の化合物が投与される。有効成分は、１日に１回、２回または３回、投与することができると想定される。また、有効成分は、１週間に１回または２回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、４週間ごとに１回、５週間ごとに１回、または６週間ごとに１回投与することができる。
【００５１】
有効成分のための医薬組成物は、前述の投与経路に適したものを含むことができる。製剤は、好都合には、単位剤形で提供することができ、薬剤学の分野において周知の方法のいずれかによって、調製されてもよい。技術および製剤は、一般に、Remington's  Pharmaceutical  Sciences（Mack  Publishing  Co.、Easton、PA）に見出される。このような方法は、有効成分を、１つまたは複数の補助成分を構成する担体と組み合わせるステップを含む。一般に、製剤は、有効成分を、液体担体もしくは微粉化された固体担体または両方と、均一および緊密に組み合わせ、次いで、必要により、生成物を成形することによって、調製される。
【００５２】
経口投与に適した製剤は、有効成分の所定の量をそれぞれ含有する、カプセル剤、カシェ剤もしくは錠剤などの別々の単位として；粉剤・散剤（powder）もしくは顆粒剤として；水性もしくは非水性液体中の液剤もしくは懸濁剤として；または水中油型液体エマルジョンもしくは油中水型液体エマルジョンとして、提供することができる。有効成分はまた、ボーラス、舐剤またはペースト剤として、投与されてもよい。ある特定の実施形態では、有効成分は、皮下注射剤として、投与されてもよい。
【００５３】
錠剤は、必要に応じて、１つまたは複数の補助成分とともに、圧縮または成形することによって、作製することができる。圧縮錠剤は、適切な機械中で、必要に応じて、結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤または界面活性剤と混合した、粉末または顆粒などの自由流動形態の有効成分を圧縮することにより調製することができる。成形錠剤は、適切な機械中で、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末状の有効成分の混合物を成形することによって、作製することができる。錠剤は、必要に応じて、コーティングまたは切れ目が入れられていてもよく、必要に応じて、有効成分の錠剤からの遅延放出または徐放（controlled  release）を提供するように、製剤化される。
【００５４】
有効成分は、状態に対して適切な任意の経路によって、投与することができる。適切な経路としては、経口、直腸、経鼻、局所（頬側および舌下を含む）、経膣および非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、髄腔内および硬膜外を含む）などが挙げられる。好ましい経路は、例えば、受容者の状態によって、変わり得ることが理解される。ある特定の実施形態では、有効成分は、経口で生物学的に利用可能であり、したがって、経口で投薬することができる。一実施形態では、患者は、ヒトである。
【００５５】
本明細書に開示される方法における組合せで使用される場合、ＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストは、単一の医薬組成物で一緒に、または１つより多くの医薬組成物で別々に（同時にまたは逐次的に、のいずれか）、投与することができる。ある特定の実施形態では、ＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストは、一緒に投与される。他の実施形態では、ＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストは、別々に投与される。一部の態様では、ＡＳＫ１阻害剤は、ＦＸＲアゴニストの前に投与される。一部の態様では、ＦＸＲアゴニストは、ＡＳＫ１阻害剤の前に投与される。別々に投与される場合、ＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストは、同一または異なる送達経路によって、患者に投与することができる。
【００５６】
医薬組成物
本開示の医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物および式（ＩＩ）の化合物からなる群から選択される有効量のＡＳＫ１阻害剤、ならびに式（ＩＩＩ）の化合物および式（ＩＶ）の化合物からなる群から選択される有効量のＦＸＲアゴニストを含む。
【００５７】
経口使用のために使用される場合、例えば、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ、水性もしくは油性懸濁剤、分散性粉剤・散剤もしくは顆粒剤、エマルジョン、ハードもしくはソフトカプセル剤、シロップ剤またはエリキシル剤を調製してもよい。経口使用を意図する組成物は、医薬組成物の製造のための本技術分野で公知の任意の方法に従って、調製してもよく、このような組成物は、口当たりがよい調製物を提供するために、甘味剤、香味剤、着色剤および保存剤を含む１つまたは複数の剤を含有していてもよい。有効成分を錠剤の製造に適した非毒性の薬学的に許容される賦形剤との混合物で含有する錠剤は、許容される。例えば、これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウムもしくは炭酸ナトリウム、ラクトース、ラクトース一水和物、クロスカルメロースナトリウム、ポビドン、リン酸カルシウムもしくはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；例えば、トウモロコシデンプンまたはアルギン酸などの造粒剤および崩壊剤；例えば、セルロース、微結晶性セルロース、デンプン、ゼラチンまたはアカシアなどの結合剤；ならびに、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクなどの滑沢剤であってもよい。錠剤は、コーティングされていなくてもよく、または消化管中での崩壊および吸着を遅らせ、それによって、長期間にわたる持続的な作用を提供するために、マイクロカプセル化を含む公知の技術により、コーティングされていてもよい。例えば、時間を遅らせる材料、例えば、モノステアリン酸グリセリンもしくはジステアリン酸グリセリンなどを、単独でまたはワックスとともに、用いてもよい。
【００５８】
経口使用のための製剤はまた、有効成分が、不活性固体希釈剤、例えば、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合されたハードゼラチンカプセル剤として、あるいは、有効成分が、水、または例えば、ピーナッツ油、流動パラフィンもしくはオリーブ油などの油性媒体と混合されたソフトゼラチンカプセル剤として、提供されてもよい。
【００５９】
本開示の水性懸濁剤は、活性材料を、水性懸濁剤の製造に適した賦形剤との混合物で、含有する。このような賦形剤としては、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガムおよびアカシアガムなどの懸濁化剤、ならびに、例えば、天然に存在するホスファチド（例えば、レシチン）、アルキレンオキシドと脂肪酸の縮合生成物（例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、エチレンオキシドと、脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来する部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）などの分散化剤または湿潤剤が挙げられる。水性懸濁剤はまた、例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルまたはｐ−ヒドロキシ安息香酸ｎ−プロピルなどの１つまたは複数の保存剤、１つまたは複数の着色剤、１つまたは複数の香味剤、および例えば、スクロースまたはサッカリンなどの１つまたは複数の甘味剤を含有していてもよい。
【００６０】
油性懸濁剤は、有効成分を、例えば、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油もしくはココナツ油などの植物油、または、例えば、流動パラフィンなどの鉱油に懸濁させることによって、製剤化してもよい。経口懸濁剤は、例えば、ミツロウ、固形パラフィンまたはセチルアルコールなどの増粘剤を含有していてもよい。例えば、上記で説明したものなどの甘味剤、および香味剤を、口当たりの良い経口調製物を提供するために、添加してもよい。これらの組成物は、例えば、アスコルビン酸などの抗酸化剤の添加により、保存され得る。
【００６１】
水の添加による水性懸濁剤の調製に適した本開示の分散性粉末および顆粒は、有効成分を、分散化剤または湿潤剤、懸濁化剤および１つまたは複数の保存剤との混合物で、提供する。適切な分散化剤または湿潤剤および懸濁化剤は、上記に開示されたものが例示される。追加の賦形剤、例えば、甘味剤、香味剤および着色剤も、存在していてもよい。
【００６２】
本開示の医薬組成物はまた、水中油型エマルジョンの形態であってもよい。油性相は、例えば、オリーブ油もしくはラッカセイ油などの植物油、例えば、流動パラフィンなどの鉱油、またはこれらの混合物であってもよい。適切な乳化剤としては、例えば、アカシアガムおよびトラガカントガムなどの天然に存在するガム、例えば、ダイズレシチンなどの天然に存在するホスファチド、例えば、ソルビタンモノオレエートなどの脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来するエステルまたは部分エステル、ならびに、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなどのこれらの部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物が挙げられる。エマルジョンはまた、甘味剤および香味剤を含有していてもよい。シロップ剤およびエリキシル剤は、例えば、グリセロール、ソルビトールまたはスクロースなどの甘味剤とともに製剤化され得る。このような製剤はまた、鎮痛剤、保存剤、香味剤または着色剤を含有していてもよい。
【００６３】
本開示の医薬組成物は、例えば、無菌の注射用水性または油性懸濁剤などの、無菌の注射用調製物の形態であってもよい。この懸濁剤は、上記で言及した適切な分散化剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して、公知の技術に従って、製剤化されてもよい。無菌の注射用調製物はまた、例えば、１，３−ブタン−ジオール中の溶液などの非毒性の非経口に許容される希釈剤もしくは溶媒中の無菌の注射用液剤もしくは懸濁剤であってもよく、または凍結乾燥粉剤として調製されてもよい。用いられ得る許容されるビヒクルおよび溶媒には、水、リンゲル液および等張の塩化ナトリウム溶液がある。加えて、無菌の固定油は、慣例的に、溶媒または懸濁化媒体として用いられてもよい。この目的のために、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の無菌性の固定油が用いられてもよい。加えて、例えば、オレイン酸などの脂肪酸を、同様に、注射剤の調製において使用してもよい。
【００６４】
単一の剤形を生成するために担体材料と組み合わされ得る有効成分の量は、処置される宿主および経口投与または皮下注射などの投与の特定の様式に応じて、変化する。例えば、ヒトに対する経口投与を意図する持続放出型製剤は、およそ１〜１０００ｍｇの活性材料を、総組成物の約５〜約９５％（重量：重量）まで変化し得る適切で好都合な量の担体材料と配合して含有していてもよい。医薬組成物は、投与のために容易に測定可能な量を提供するように、調製することができる。例えば、静脈内注入を意図する水性液剤は、約３０ｍＬ／時間の速度で、適切な容量の注入が起こり得るように、液剤１ミリリットルあたり約３〜５００μｇの有効成分を含有していてもよい。皮下投与のために製剤化される場合、製剤は、典型的には、約２〜約４カ月の期間にわたって、１カ月に約２回、投与される。
【００６５】
非経口投与のために適切な製剤としては、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および製剤を意図する受容者の血液と等張にする溶質を含有していてもよい、水性および非水性の無菌の注射液剤；ならびに懸濁化剤および増粘剤を含んでいてもよい、水性および非水性の無菌の懸濁剤が挙げられる。
【００６６】
製剤は、単位用量または複数回用量の容器、例えば、密封されたアンプルおよびバイアルで提供することができ、使用の直前に、無菌の液体担体、例えば、注射用水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保管されてもよい。即時注射液剤および懸濁剤は、先に記載した種類の、無菌の粉末、顆粒および錠剤から調製される。好ましい単位投薬量製剤は、有効成分の、本明細書の上記に列挙したような日用量もしくは単位一日部分用量（unit  daily  sub-dose）、またはこれらの適切な小部分を含有する製剤である。
【実施例】
【００６７】
（実施例１）
ＮＡＳＨのラットモデルにおける有効性
以下の研究を、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）のげっ歯類モデルにおけるＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストの組合せの有効性を、このモデルにおける個々の薬剤単独の有効性と比較して、評価するために実施した。ＮＡＳＨを、コリン欠乏高脂肪食（ＣＤＨＦＤ）を亜硝酸ナトリウムの長期投与と組み合わせて（ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２）与えることによって、雄ウィスターラットにおいて誘発した。このモデルは、肝臓における代謝機能不全（ＣＤＨＦＤ）および酸化的ストレス（ＮａＮＯ２）の両方を誘発することによって、進行したＮＡＳＨの患者において見られる肝線維症と特徴および重症度が類似している肝線維症をもたらす、ＮＡＳＨの「ツーヒット理論」を利用している。
【００６８】
ラットに、合計で１４週間ＣＤＨＦＤを給餌し、４〜１４週目まで、ＮａＮＯ２を投与した。式（ＩＩＩ）の化合物（３０ｍｇ／ｋｇ／日を送達するように調整して、食事中の混合物として与えた）、式（Ｉ）の化合物（食事中の０．２％の混合物として投与した）またはビヒクルを、４〜１４週目まで投与した。以下の評価項目を、１４週間の研究の終了のときに評価した：ｉ）肝臓のヒドロキシプロリン（ＯＨＰ）含量によって、およびピクロシリウスレッド（Picosirius  red）（ＰＳＲ）染色によるコラーゲン含量の定量的形態計測分析によって、測定される肝線維症；ｉｉ）筋線維芽細胞マーカーであるデスミンの定量的ＩＨＣによって測定される、肝臓切片における筋線維芽細胞の活性化；ならびにｉｉｉ）ＲＴ−ＰＣＲによって測定される、肝臓組織におけるＣｏｌ１ａ１およびＴｉｍｐ１。
【００６９】
方法
動物
雄のウィスターラット（研究開始時に、６〜８週齢）であり、研究に使用した。すべての動物は、標準的な動物施設の条件下で飼育し、研究開始前に１４日間、順応させた。
【００７０】
ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２ラットモデルについての生存中の実験プロトコール
実験デザインを表１に示す。すべてのＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２動物に、コリン欠乏高脂肪食（ＣＤＨＦＤ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ，Ｉｎｃ）を１４週間給餌し、ＮａＮＯ２（１週間あたり３回注射；Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、番号３１４４３）の腹腔内注射も、２５ｍｇ／ｋｇの用量（４〜１０週目まで）および１２．５ｍｇ／ｋｇの用量（１０〜１４週目まで）で、投与した。
【００７１】
式（ＩＩＩ）（３０ｍｇ／ｋｇ／日を送達するように調整して、ＣＤＨＦＤ食事中の混合物として与えた、群あたりｎ＝１０匹の動物）および式（Ｉ）（ＣＤＨＦＤ食事中の０．２％の混合物として与えた、群あたりｎ＝１０匹）は、４〜１４週目までに投与した薬物であった。ビヒクル対照動物には、薬物が添加されていない同じＣＤＨＦＤ食事（ビヒクル；群あたりｎ＝１０匹の動物）を、４〜１４週目までに、投与した。健康な対照動物には、通常の固形飼料を与え、ＮａＮＯ２を受けさせなかった（対照、群あたりｎ＝１０匹）。研究の最終日に、ラットに、３０ｍｇ／ｋｇの用量で、式（Ｉ）または式（ＩＩＩ）のいずれかの単回の経口強制栄養を受けさせ、その４時間後にラットを安楽死させ、分析のために組織を回収した。すべての評価項目を、１４週間の研究プロトコールの終了のときに評価した。
【表１】
2019533706.tif 000007
【００７２】
ＰＳＲおよびデスミンＩＨＣの定量的形態計測分析
ピクロシリウスレッド（ＰＳＲ）およびデスミン染色スライドの全スライド画像を、４０倍の倍率で、ＬｅｉｃａＡＴ２スキャナーを使用して、キャプチャーした。デジタルスライド画像を、スキャン品質についてチェックし、注釈を付け、Ｌｅｉｃａ  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｉｍａｇｅ  Ｈｕｂアーカイブ内の適切なネットワークフォルダにエクスポートした。定量的画像解析を、Ｄｅｆｉｎｉｅｎｓ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｓｔｕｄｉｏ  Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ  ＸＤ（Ｄｅｆｉｎｉｅｎｓ  Ｉｎｃ．）を使用して、全スライドスキャン画像に対して行い、ＰＳＲおよびデスミンの程度および強度を決定した。Ｄｅｆｉｎｉｅｎｓ  Ｃｏｍｐｏｓｅｒ機能を使用して、肝臓組織を周囲のスライドガラスから識別し、光学的異常および組織欠陥を分離および除去した。ＰＳＲ総染色面積およびデスミンＩＨＣ染色を測定し、染色された肝臓の総面積の百分率として表した。
【００７３】
ｑＲＴ−ＰＣＲによる遺伝子発現
２つの標的臓器である回腸および肝臓を、ｑＲＴ−ＰＣＲによる遺伝子発現解析に付した。磨砕した凍結組織２５ｍｇからの総ＲＮＡを、ＲＮＡｚｏｌ  ＲＴ試薬（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｒ４５３３）およびＲＮＡ単離キット（Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号７４１８２）を使用して、製造者の指示に従って、単離した。ｃＤＮＡを、５０ｐｍｏｌのランダムヘキサマーでプライミングしたＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＩＩＴＭ逆転写酵素（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１８０６４−０１４）を使用して、０．５μｇの総ＲＮＡから合成した。定量的ＰＣＲを、Ａｂｓｏｌｕｔｅ  ＱＰＣＲ  Ｒｏｘ  Ｍｉｘ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号ＡＢ−１１３２）および３８４−ｆｏｒｍａｔ  ＡＢＩ  ７９００ＨＴ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、行い、解析した。肝臓組織において、リバースおよびフォワード特異的プライマーおよびプローブ（Ｉｎｔｅｇｒａｄｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＳＡ）を、Ｃｏｌ１Ａ１およびＴＩＭＰ１の発現解析のために使用した。
【００７４】
肝臓のヒドロキシプロリンのカウント
肝臓のヒドロキシプロリンを、存在するヒドロキシプロリンに比例して、比色（５６０ｎｍ）生成物をもたらす、酸化ヒドロキシプロリンの４−（ジメチルアミノ）ベンズアルデヒド（ＤＭＡＢ）との反応による酵素法によって、定量した。瞬間凍結した肝臓試料を、液体窒素下で、粉末化し、次いで、水（１００μｌ／１０ｍｇ）中でホモジナイズし、１２ＮのＨＣｌ溶液中、１２０℃で１８時間、加水分解した。加水分解が終了した後、試料を、室温で、１３，０００ｇで５分間、遠心分離し、次いで、９６ウェルプレートに移し、６０℃で乾燥させた。乾燥した試料を、１００μｌのクロラミン−Ｔで酸化し、室温で２０分間、インキュベートした。１００μｌの新たに作製したＤＭＡＢ溶液を、各ウェルに添加し、試料を、３０分間、インキュベートした。ヒドロキシプロリン含量を、５６０ｎｍの吸光度を測定することによって、測光法で決定した。検量曲線を使用して、各試料についてのヒドロキシプロリン含量を決定した。
【００７５】
結果
ＰＳＲによる肝臓ＯＨＰ含量およびコラーゲンの定量的形態計測分析
組織学的肝臓切片を、ピクロシリウスレッド（ＰＳＲ）で染色して、１２週間のＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２後の、肝臓のコラーゲン含量を可視化した。ＰＳＲ染色を、形態計測画像解析によって定量した。データを図１に示す。ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２を投与したラットは、健康な対照ラットと比較して、肝臓のコラーゲンが、５倍増加した（ＰＳＲ面積は、健康な対照ラットでの１．７±０．３％から、ビヒクル処置ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２ラットでの８．５±０．６％まで増加した、ｐ＜０．００１）。式（Ｉ）の化合物による処置は、肝臓のコラーゲンを、２７％減少させた（ＰＳＲ面積は、ビヒクル処置ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２ラットでの８．５±０．６％から６．２±１．１％まで減少した、ｐ＜０．０５）。式（ＩＩＩ）の化合物による処置は、肝臓のコラーゲンを、２２％減少させた（ＰＳＲ面積は、ビヒクル処置ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２ラットでの８．５±０．６％から６．６±０．９％まで減少した、ｐ＜０．０５）。式（Ｉ）の化合物および式（ＩＩＩ）の化合物の組合せによる処置は、コラーゲンを、５４％減少させた（ＰＳＲ面積は、ビヒクル処置ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２ラットでの８．５±０．６％から３．９±０．６％まで減少した、ｐ＜０．００１）。肝臓のコラーゲンを減少させる式（Ｉ）の化合物および式（ＩＩＩ）の化合物の組合せ処置の効果は、いずれかの薬剤の単独投与よりも、有意に良好であった（ｐ＜０．０５）。
【００７６】
肝線維症の生化学的評価を、肝臓のヒドロキシプロリン含量を測定することによって、行った。データを図２に示す。ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２を投与したラットは、健康な対照ラットと比較して、肝臓のヒドロキシプロリン含量が、１．６倍増加した（肝臓のヒドロキシプロリンは、健康な対照ラットでの４．０±０．３μｍｏｌ／ｇからビヒクル処置ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２ラットでの６．５±０．５μｍｏｌ／ｇまで増加した、ｐ＜０．００１）。単一の薬剤として投与された、式（Ｉ）の化合物または式（ＩＩＩ）の化合物のいずれかによる処置は、肝臓のヒドロキシプロリン含量を、有意に減少させなかった。式（Ｉ）の化合物および式（ＩＩＩ）の化合物の組合せによる処置は、肝臓のヒドロキシプロリンを、３３％減少させた（肝臓のヒドロキシプロリン含量は、ビヒクル処置ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２ラットでの６．５±０．５μｍｏｌ／ｇから４．４±０．５μｍｏｌ／ｇまで減少した、ｐ＜０．０１）。肝臓のヒドロキシプロリンを減少させる式（Ｉ）の化合物および式（ＩＩＩ）の化合物の組合せ処置の効果は、式（ＩＩＩ）の化合物の単独投与よりも、有意に大きかった（ｐ＜０．０５、対式（ＩＩＩ）の化合物単独）。
【００７７】
筋線維芽細胞マーカーであるデスミンの定量的ＩＨＣ
組織学的肝臓切片を、活性化した筋線維芽細胞のマーカー（a  marker  of  a  marker  of）であるデスミンについて、染色した。データを図３に示す。デスミン染色を、形態計測画像解析によって定量し、デスミンマーカー面積％として表した。ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２を投与したラットは、健康な対照ラットと比較した場合、肝臓におけるデスミン染色が、１５倍増加した（肝臓のデスミンマーカー面積％は、健康な対照ラットでの０．７±０．１％からビヒクル処置ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２ラットでの１０．３±０．８％まで増加した、ｐ＜０．００１）。式（Ｉ）の化合物による処置は、肝臓のデスミン染色を、４６％減少させた（肝臓のデスミンマーカー面積％は、ビヒクル処置ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２ラットでの１０．３±０．８％から５．６±０．７％まで減少した、ｐ＜０．００１）。式（ＩＩＩ）の化合物による処置は、肝臓のデスミン染色を、４３％減少させた（肝臓のデスミンマーカー面積％は、ビヒクル処置ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２ラットでの１０．３±０．８％から５．９±０．７％まで減少した、ｐ＜０．００１）。式（Ｉ）の化合物および式（ＩＩＩ）の化合物の組合せによる処置は、肝臓のデスミン染色を、３９％減少させた（肝臓のデスミンマーカー面積％は、ビヒクル処置ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２ラットでの１０．３±０．８％から６．２±１．０％まで減少した、ｐ＜０．００１）。
【００７８】
Ｃｏｌ１ａ１およびＴｉｍｐ１の肝臓の発現
肝線維化遺伝子のＣｏｌ１ａ１およびＴＩＭＰ−１の肝臓の発現は、１２週間の研究の最後に、健康な対照ラットと比較した場合、ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２投与後、それぞれ、４０倍および１３倍増加した（ｐ＜０．００１）。Ｃｏｌ１ａ１についてのデータを図４に示し、ＴＩＭＰ−１についてのデータを図５に示す。式（Ｉ）の化合物による処置は、ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２によって誘導されたＣｏｌ１ａ１を、６５％減少させ（ｐ＜０．０１、対ビヒクル）、ＴＩＭＰ−１を、２８％減少させた（ｐ＜０．０５、対ビヒクル）。式（ＩＩＩ）の化合物による処置は、ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２によって誘導された肝臓のＣｏｌ１ａ１発現を、４４％減少させたが（ｐ＜０．０５、対ビヒクル）、ＴＩＭＰ−１は有意に減少させなかった。式（Ｉ）の化合物および式（ＩＩＩ）の化合物の組合せ処置は、ＣＤＨＦＤ／ＮａＮＯ２によって誘導された肝臓のＣｏｌ１ａ１発現を、８０％減少させた（ｐ＜０．００１、対ビヒクル）。Ｃｏｌ１ａ１遺伝子発現を減少させる式（Ｉ）の化合物および式（ＩＩＩ）の化合物の組合せ処置の効果は、式（Ｉ）の化合物または式（ＩＩＩ）の化合物の単独投与のいずれかと比較して、統計的に有意に大きかった（ｐ＜０．０５、対ビヒクル）。ＴＩＭＰ−１遺伝子発現を減少させる式（Ｉ）の化合物および式（ＩＩＩ）の化合物の組合せ処置の効果は、式（Ｉ）の化合物の単独処置によって観察された減少と比較して、統計的に有意差はなかった。
【００７９】
要約すると、この研究からのデータは、ＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストによる組合せ処置が、ＮＡＳＨのげっ歯類モデルにおける、いずれかの薬剤の単独投与よりも高い抗線維化の有効性をもたらしたことを実証する。
【００８０】
（実施例２）
ＮＡＳＨのマウスモデルにおける有効性
以下の研究を、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）のマウスモデルにおけるＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストの組合せの有効性を、このモデルにおける個々の薬剤単独の有効性と比較して、評価するために実施した。ＮＡＳＨを、飽和脂肪、コレステロールおよび砂糖が多い「ファーストフード」食事（ＦＦＤ）を合計で１０カ月、長期投与することによって、雄のＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて誘発したのに対し、痩せた対照動物は、通常の固形飼料で維持した。ＮＡＳＨの表現型を、７カ月までに、対照マウスと比較してＦＦＤマウスで確立し、肥満、高コレステロール血症およびＡＳＴ／ＡＬＴ上昇によって、ならびに肝細胞の大滴性脂肪症および球状変性などのＮＡＳＨの組織学的特徴によって、特徴付けた。Charlton  Mら、Fast  food  diet  mouse:  novel  small  animal  model  of  NASH  with  ballooning,  progressive  fibrosis,  and  high  physiological  fidelity  to  the  human  condition.  American  journal  of  physiology.  Gastrointestinal  and  liver  physiology、２０１１年；３０１巻（５号）：Ｇ８２５〜３４頁を参照のこと。
【００８１】
７カ月後、ＦＦＤマウスを、プラセボ（ビヒクル）、ＡＳＫ１阻害剤（式（Ｉ））、ＦＸＲアゴニスト（式（ＩＩＩ））または式（Ｉ）および式（ＩＩＩ）と組み合わせて、その後、３カ月間処置した。対照マウスは、全体で１０カ月の研究期間中、通常の固形飼料のままとした。評価項目の解析は、肝臓脂肪症の形態計測の定量（脂肪症領域（steatotic  area）の％）、肝臓のコレステロール含量、血清ＡＬＴ／ＡＳＴレベル、血清胆汁酸レベル、および遺伝子発現のナノストリング評価を含んでいた。
【００８２】
方法
動物
雄のＣ５７ＢＬ／６マウス（研究開始時に、１２週齢）であり、研究に使用した。すべての動物は、標準的な動物施設の条件下で飼育し、研究開始前に７日間、順応させた。
【００８３】
ＦＦＤマウスモデルについての生存中の実験プロトコール
実験デザインを表２に示す。動物に、ファーストフード食事（ＦＦＤ）を表す、市販の高脂肪高コレステロール食事（Ｄ１２０７９Ｂ；Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ）、ならびに１０００ｍＬの水道水あたり２３．１ｇのフルクトース（Ｓｉｇｍａ、Ｆ２５４３）および１７．２ｇのグルコース（Ｓｉｇｍａ、４９１５８）を含有する飲用水を、合計で１０カ月間、投与した。すべての研究マウスは、１匹ずつケージに入れた（１マウス／ケージ）。式（Ｉ）の化合物もしくは式（ＩＩＩ）の化合物単独、または式（Ｉ）および式（ＩＩＩ）の化合物の組合せによる処置は、研究の最後の３カ月間（７カ月目〜１０カ月目）施行した。通常の対照群を表す、年齢を一致させた別の群のマウスに、全研究期間の間、標準的なげっ歯類用の餌を与えた（Ｔｅｋｌａｄ  ｄｉｅｔ  ＴＤ２０１４、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）。
【００８４】
式（Ｉ）の化合物は、ＦＦＤ食事中の０．１５％混合物として投与し（群あたり、ｎ＝ｘ）、式（ＩＩＩ）の化合物は、１日１回、経口強制栄養で投与した（１０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、ＱＤ）。式（ＩＩＩ）の化合物の投与のためのビヒクルは、ＣＭＣナトリウム、１％ｗ／ｗのエタノール、９８．５％ｗ／ｗの５０ｍＭトリス緩衝液、ｐＨ８で構成されていた。ビヒクル対照動物には、薬物が添加されていない同じビヒクルを投与した。
【表２】
2019533706.tif 000008
【００８５】
肝臓脂肪症の測定
ヘマトキシリン＆エオシン（Ｈ＆Ｅ）およびピクロシリウスレッド（ＰＳＲ）染色スライドの全スライドスキャン画像を、４０倍の倍率で、ＬｅｉｃａＳＣＮ４００スキャナーを使用して、キャプチャーした。デジタルスライド画像を、スキャン品質についてチェックし、注釈を付け、Ｌｅｉｃａ  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｉｍａｇｅ  Ｈｕｂアーカイブ内の適切なネットワークフォルダにエクスポートした。脂肪症の程度を、Ｈ＆Ｅ染色組織切片において、Ｄｅｆｉｎｉｅｎｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐｅｒソフトウェアパッケージを使用して、決定した。解析パラメーターは、光学的異常および損傷した組織領域を除外しながら、総組織断面積の適切な測定を可能にした。肝実質内の脂肪症脂質空胞（Steatotic  lipid  vacuole）が、低い光学密度（白色）の領域として観察できた。これらの領域の数およびサイズを数え、総脂肪症領域を、総肝臓組織断面積の百分率として表した。肝臓内の管（門脈および中心静脈の分枝など）を、管のサイズおよび直径に基づいて、この解析から除外した。自動解析の結果を、結果の正確さを決定するために、手作業でレビューした。所定のＱＣ基準（組織の不正確な同定および脂肪症領域の不正確な同定）に不合格の試料は、報告から除外した。
【００８６】
総肝臓コレステロールの決定
組織試料（２５±５ｍｇ、凍結状態で秤量）を、ホモジナイズし、有機相に遊離コレステロール画分およびエステル化コレステロール画分を抽出する、水不混和性の有機溶媒混合物で抽出した。遠心分離の後、コレステロールおよびコレステロールエステルを含有する、有機上層のアリコートを分析した。
【００８７】
内部標準溶液（コレステロール−ｄ６）および１Ｍのエタノール性水酸化カリウム溶液を、適切な試料希釈物のアリコートに添加した。混合物を、コレステロールエステルを遊離脂肪酸およびコレステロールに加水分解するために、７０℃で１時間、インキュベートした。その後、反応混合物を、氷酢酸で酸性化し、ヘキサンで抽出した。ヘキサン層を取り出し、蒸発させ、アセトニトリル中で再構成した。次いで、再構成された抽出物のアリコートを、Ｃ１８逆相カラムを備えたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ／ＡＢ  Ｓｃｉｅｘ  ＱＴｒａｐ  ４０００  ＬＣ  ＭＳ／ＭＳシステムに注入した。ｍ／ｚ３６９［Ｍ−Ｈ２Ｏ］＋→１６１＋のコレステロールの生成物イオンのピーク面積を、ｍ／ｚ３７５［Ｍ−Ｈ２Ｏ］＋→１６７＋のコレステロール−Ｄ６の生成物イオンのピーク面積に対して、測定した。定量を、参照標準としてオレイン酸コレステリルを使用して、強化較正標準から作成した、加重（１／ｘ）線形最小二乗回帰分析を使用して、行った。較正標準試料は、組織試料と同じ抽出および加水分解ステップによって、取得した。生データを、収集し、ＡＢ  ＳＣＩＥＸ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ａｎａｌｙｓｔ  １．５．１を使用して、処理した。データ整理（data  reduction）、重量の補正、コレステロールの加水分解に対するオレイン酸コレステリルについての補正、および濃度計算を、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ２０１３を使用して、行った。最終の組織含量を、ｍｇ総コレステロール／ｇ肝臓組織で提供する。
【００８８】
胆汁酸の測定
血漿試料を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる一次および二次胆汁酸ならびにこれらのコンジュゲートの定量のために、Ｍｅｔａｂｏｌｏｎ，Ｉｎｃ．（Ｄｕｒｈａｍ、ＮＣ）に送付した。
【００８９】
遺伝子発現
ＲＮＡの単離、逆転写およびｑＰＣＲを、ＤＣ３  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏで行った。肝臓を、製造者の指示に従って、Ｐｒｅｃｅｌｌｙｓ  ２４ホモジナイザーを使用して、ホモジナイズした。ＲＮＡを、製造者の指示に従って、Ｅ．Ｚ．Ｎ．Ａ．ＨＰ  Ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ  Ｋｉｔ（Ｏｍｅｇａ  Ｂｉｏｔｅｋ、番号Ｒ６８１２）とＤＮａｓｅ  Ｉ  Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ  Ｓｅｔ（Ｏｍｅｇａ  Ｂｉｏｔｅｋ、番号Ｅ１０９１）を使用して、単離した。Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ  ｎＣｏｕｎｔｅｒ  ＸＴ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  ＣｏｄｅＳｅｔおよびＣａｐｔｕｒｅ  ＰｒｏｂｅＳｅｔを、室温で解凍した。マスターミックスを、７０μＬのハイブリダイゼーション緩衝液を、Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  ＣｏｄｅＳｅｔのチューブに添加することによって、作製した。次いで、８μＬのマスターミックスを、１２個のハイブリダイゼーションストリップチューブのそれぞれに添加した。５μＬのＲＮＡを、それぞれのチューブに添加し、続いて、２μＬのＣａｐｔｕｒｅ  ＰｒｏｂｅＳｅｔを添加した。次いで、チューブを、あらかじめ加熱した６５℃のサーマルサイクラー（Ｖｅｒｉｔｉ、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に、１６時間、置いた。次いで、ハイブリダイゼーションストリップチューブを、試料を処理するために、ｎＣｏｕｎｔｅｒ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｋｉｔの試薬および消耗品とともに、ｎＣｏｕｎｔｅｒ  Ｐｒｅｐ  Ｓｔａｔｉｏｎ（ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、カタログ番号ＮＣＴ−ＰＲＥＰ−１２０）に置き、データを取得するために、Ｄｉｇｉｔａｌ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ、カタログ番号ＮＣＴ−ＤＩＧＡ−１２０）に置いた。データを、ｎＳｏｌｖｅｒ解析ソフトウェア（Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ）を使用して解析し、倍数変化として示した。
【００９０】
結果
Ｈ＆Ｅ染色された肝臓切片の定量は、式（Ｉ）の化合物、式（ＩＩＩ）の化合物、ならびに式（Ｉ）および式（ＩＩＩ）の化合物の組合せが、それぞれ、３９％、２７％および７５％の脂肪症の減少をもたらしたことを実証した（図６）。加えて、肝臓のコレステロール含量は、式（Ｉ）の化合物、式（ＩＩＩ）の化合物、ならびに式（Ｉ）および式（ＩＩＩ）の化合物の組合せについて、それぞれ、７４％、３６％および８８％減少した（図７）。式（Ｉ）および式（ＩＩＩ）の化合物の組合せによる処置は、いずれかの薬剤単独による処置と比較して、空胞化面積および肝臓のコレステロール含量の統計的により大きな減少をもたらした。
【００９１】
血漿胆汁酸のレベルは、対照ＦＦＤマウスにおいて、有意に上昇した。式（Ｉ）の化合物、式（ＩＩＩ）の化合物、ならびに式（Ｉ）および式（ＩＩＩ）の化合物の組合せの投与は、それぞれ、５２％、４６および８２％の血漿胆汁酸レベルの減少をもたらした（図８）。式（Ｉ）および式（ＩＩＩ）の化合物の組合せによる処置は、胆汁酸レベルの最大の低下をもたらした。加えて、炎症遺伝子であるＩＬ１−βの肝臓の発現は、式（Ｉ）および式（ＩＩＩ）の化合物の組合せによる処置によって、有意に低下した（図９）。
【００９２】
要約すると、この研究からのデータは、ＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストによる組合せ処置が、ＮＡＳＨのげっ歯類モデルにおいて、いずれかの薬剤の単独投与よりも高い抗脂肪症有効性（anti-steatotic  efficacy）をもたらしたことを実証する。
【図１】
2019533706.tif 000025
【図２】
2019533706.tif 000026
【図３】
2019533706.tif 000027
【図４】
2019533706.tif 000028
【図５】
2019533706.tif 000029
【図６】
2019533706.tif 000030
【図７】
2019533706.tif 000031
【図８】
2019533706.tif 000032
【図９】
2019533706.tif 000033
【手続補正書】
【提出日】令和1年7月2日(2019.7.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防するための、ＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストを含む組合せ物であって、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（Ｉ）：
【化５】
2019533706.tif 000034
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＩＩ）：
【化６】
2019533706.tif 000035
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、組合せ物。
【請求項２】
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防するための、ＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストを含む組合せ物であって、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（Ｉ）：
【化７】
2019533706.tif 000036
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＶ）：
【化８】
2019533706.tif 000037
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、組合せ物。
【請求項３】
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防するための、ＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストを含む組合せ物であって、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（ＩＩ）：
【化９】
2019533706.tif 000038
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＩＩ）：
【化１０】
2019533706.tif 000039
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、組合せ物。
【請求項４】
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防するための、ＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストを含む組合せ物であって、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（ＩＩ）：
【化１１】
2019533706.tif 000040
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＶ）：
【化１２】
2019533706.tif 000041
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、組合せ物。
【請求項５】
前記ＡＳＫ１阻害剤および前記ＦＸＲアゴニストが、一緒に投与されることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項６】
前記ＡＳＫ１阻害剤および前記ＦＸＲアゴニストが、別々に投与されることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項７】
前記肝疾患が、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項８】
治療有効量のＡＳＫ１阻害剤および治療有効量のＦＸＲアゴニストを含む医薬組成物であって、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（Ｉ）：
【化１３】
2019533706.tif 000042
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＩＩ）：
【化１４】
2019533706.tif 000043
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、医薬組成物。
【請求項９】
治療有効量のＡＳＫ１阻害剤および治療有効量のＦＸＲアゴニストを含む医薬組成物であって、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（Ｉ）：
【化１５】
2019533706.tif 000044
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＶ）：
【化１６】
2019533706.tif 000045
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、医薬組成物。
【請求項１０】
治療有効量のＡＳＫ１阻害剤および治療有効量のＦＸＲアゴニストを含む医薬組成物であって、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（ＩＩ）：
【化１７】
2019533706.tif 000046
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＩＩ）：
【化１８】
2019533706.tif 000047
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、医薬組成物。
【請求項１１】
治療有効量のＡＳＫ１阻害剤および治療有効量のＦＸＲアゴニストを含む医薬組成物であって、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（ＩＩ）：
【化１９】
2019533706.tif 000048
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＶ）：
【化２０】
2019533706.tif 000049
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、医薬組成物。
【請求項１２】
薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防するための、ＡＳＫ１阻害剤を含む組成物であって、該組成物は、ＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与されることを特徴とし、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（Ｉ）：
【化５】
2019533706.tif 000050
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＩＩ）：
【化６】
2019533706.tif 000051
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、組成物。
【請求項１４】
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防するための、ＦＸＲアゴニストを含む組成物であって、該組成物は、ＡＳＫ１阻害剤と組み合わせて投与されることを特徴とし、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＩＩ）：
【化６】
2019533706.tif 000052
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（Ｉ）：
【化５】
2019533706.tif 000053
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、組成物。
【請求項１５】
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防するための、ＡＳＫ１阻害剤を含む組成物であって、該組成物は、ＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与されることを特徴とし、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（Ｉ）：
【化７】
2019533706.tif 000054
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＶ）：
【化８】
2019533706.tif 000055
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、組成物。
【請求項１６】
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防するための、ＦＸＲアゴニストを含む組成物であって、該組成物は、ＡＳＫ１阻害剤と組み合わせて投与されることを特徴とし、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＶ）：
【化８】
2019533706.tif 000056
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（Ｉ）：
【化７】
2019533706.tif 000057
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、組成物。
【請求項１７】
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防するための、ＡＳＫ１阻害剤を含む組成物であって、該組成物は、ＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与されることを特徴とし、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（ＩＩ）：
【化９】
2019533706.tif 000058
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＩＩ）：
【化１０】
2019533706.tif 000059
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、組成物。
【請求項１８】
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防するための、ＦＸＲアゴニストを含む組成物であって、該組成物は、ＡＳＫ１阻害剤と組み合わせて投与されることを特徴とし、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＩＩ）：
【化１０】
2019533706.tif 000060
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（ＩＩ）：
【化９】
2019533706.tif 000061
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、組成物。
【請求項１９】
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防するための、ＡＳＫ１阻害剤を含む組成物であって、該組成物は、ＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与されることを特徴とし、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（ＩＩ）：
【化１１】
2019533706.tif 000062
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＶ）：
【化１２】
2019533706.tif 000063
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、組成物。
【請求項２０】
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防するための、ＦＸＲアゴニストを含む組成物であって、該組成物は、ＡＳＫ１阻害剤と組み合わせて投与されることを特徴とし、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＶ）：
【化１２】
2019533706.tif 000064
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（ＩＩ）：
【化１１】
2019533706.tif 000065
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、組成物。
【請求項２１】
前記組成物および前記ＦＸＲアゴニストが、一緒に投与されることを特徴とする、請求項１３、１５、１７および１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物および前記ＡＳＫ１阻害剤が、一緒に投与されることを特徴とする、請求項１４、１６、１８および２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記組成物および前記ＦＸＲアゴニストが、別々に投与されることを特徴とする、請求項１３、１５、１７および１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記組成物および前記ＡＳＫ１阻害剤が、別々に投与されることを特徴とする、請求項１４、１６、１８および２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記肝疾患が、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、請求項１３〜２４のいずれか一項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
本明細書において提供される方法において、ＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストは、共投与することができる。このような実施形態では、ＡＳＫ１阻害剤およびＦＸＲアゴニストは、単一の医薬組成物として一緒に、または１つより多くの医薬組成物で別々に、投与することができる。したがって、本明細書において、治療有効量のＡＳＫ１阻害剤および治療有効量のＦＸＲアゴニストを含む医薬組成物も提供される。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防する方法であって、該患者に、治療有効量のＡＳＫ１阻害剤を、治療有効量のＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与することを含み、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（Ｉ）：
【化５】
2019533706.tif 000066
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＩＩ）：
【化６】
2019533706.tif 000067
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、方法。
（項目２）
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防する方法であって、該患者に、治療有効量のＡＳＫ１阻害剤を、治療有効量のＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与することを含み、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（Ｉ）：
【化７】
2019533706.tif 000068
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＶ）：
【化８】
2019533706.tif 000069
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、方法。
（項目３）
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防する方法であって、該患者に、治療有効量のＡＳＫ１阻害剤を、治療有効量のＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与することを含み、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（ＩＩ）：
【化９】
2019533706.tif 000070
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＩＩ）：
【化１０】
2019533706.tif 000071
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、方法。
（項目４）
肝疾患を処置および／または予防することを必要とする患者において、肝疾患を処置および／または予防する方法であって、該患者に、治療有効量のＡＳＫ１阻害剤を、治療有効量のＦＸＲアゴニストと組み合わせて投与することを含み、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（ＩＩ）：
【化１１】
2019533706.tif 000072
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＶ）：
【化１２】
2019533706.tif 000073
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、方法。
（項目５）
前記ＡＳＫ１阻害剤および前記ＦＸＲアゴニストが、一緒に投与される、項目１〜４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
前記ＡＳＫ１阻害剤および前記ＦＸＲアゴニストが、別々に投与される、項目１〜４のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記肝疾患が、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、項目１〜６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
治療有効量のＡＳＫ１阻害剤および治療有効量のＦＸＲアゴニストを含む医薬組成物であって、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（Ｉ）：
【化１３】
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の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＩＩ）：
【化１４】
2019533706.tif 000075
の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、医薬組成物。
（項目９）
治療有効量のＡＳＫ１阻害剤および治療有効量のＦＸＲアゴニストを含む医薬組成物であって、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（Ｉ）：
【化１５】
2019533706.tif 000076
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＶ）：
【化１６】
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の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、医薬組成物。
（項目１０）
治療有効量のＡＳＫ１阻害剤および治療有効量のＦＸＲアゴニストを含む医薬組成物であって、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（ＩＩ）：
【化１７】
2019533706.tif 000078
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＩＩ）：
【化１８】
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の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、医薬組成物。
（項目１１）
治療有効量のＡＳＫ１阻害剤および治療有効量のＦＸＲアゴニストを含む医薬組成物であって、該ＡＳＫ１阻害剤が、式（ＩＩ）：
【化１９】
2019533706.tif 000080
の化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、該ＦＸＲアゴニストが、式（ＩＶ）：
【化２０】
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の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、医薬組成物。
（項目１２）
薬学的に許容される担体をさらに含む、項目８〜１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
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