(57)【要約】  幾つかの実施形態において、この発明は、生物学的流体中に存在するＩｇＧのような免疫グロブリンの少なくとも５５％を生物学的流体から抽出するための方法であって、免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体を、リガンドに対して免疫グロブリンを非共有結合するのに十分な条件下で、免疫グロブリンと特異的に結合するリガンドに共有結合した固体支持体と接触させ；非共有結合された免疫グロブリンがリガンドから溶出液中へと放出される条件下で、固体支持体を溶出液と接触させることを含み、生物学的流体中に存在する少なくとも５５％のＩｇＧが溶出液に抽出される方法を提供する。幾つかの実施形態において、この発明は、生物学的流体からの免疫グロブリンを富化させる方法であって、初期免疫グロブリンを含有すると見られる最初の生物学的流体を獲得し、最初の生物学的流体中で天然に存在する非免疫グロブリン成分を取り出して、非免疫グロブリン成分低減生物学的流体を得ることを含む方法を提供する。この発明はさらに、これらの方法を行いまたは使用するための、バッグおよびカラムのような容器、並びにアフェレーシスシステムを提供する。
2019513733.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物学的流体中に存在するＩｇＧのような免疫グロブリンの少なくとも５５％を生物学的流体から抽出するための方法であって：
(ａ)免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体を、生物学的流体中の免疫グロブリンがリガンドと非共有結合するのに十分な条件下で、免疫グロブリンと特異的に結合するリガンドに共有結合した固体支持体と接触させ；そして
(ｂ)非共有結合された免疫グロブリンがリガンドから溶出液中に放出される条件下で、固体支持体を溶出液と接触させることを含み、
生物学的流体中に存在する免疫グロブリンの少なくとも５５％が溶出液中に抽出される、方法。
【請求項２】
工程(ｂ)の前に工程(ａ)を少なくとも１度繰り返すことを含む、請求項１の方法。
【請求項３】
抽出された溶出液中の免疫グロブリンが精製免疫グロブリンである、請求項１の方法。
【請求項４】
生物学的流体中の免疫グロブリンの少なくとも７５％が生物学的流体から抽出される、請求項１の方法。
【請求項５】
工程(ａ)は、固体支持体を含有する容器を通して生物学的流体を流すことを含む、請求項１の方法。
【請求項６】
容器はバッグまたはカラムである、請求項５の方法。
【請求項７】
固体支持体は容器の内側表面である、請求項５の方法。
【請求項８】
固体支持体はビーズである、請求項１の方法。
【請求項９】
ビーズは個々に約３０μｍから約８０μｍの間の直径を有する、請求項８の方法。
【請求項１０】
リガンドはブドウ球菌またはレンサ球菌からなる群より選択されるバクテリアの科に由来するタンパク質、またはその誘導体である、請求項１の方法。
【請求項１１】
抽出された免疫グロブリンを含有する溶出液に中和バッファを添加することをさらに含み、約７.０から約８.０の間のｐＨを有し免疫グロブリンを含有する最終溶液が得られる、請求項１の方法。
【請求項１２】
溶出液は約２.０から約３.０の間のｐＨを有する、請求項１の方法。
【請求項１３】
容器を通って流れる生物学的流体が約２０ｍｌ／分から約１２０ｍｌ／分の間の流量を有する、請求項５の方法。
【請求項１４】
容器を通って流れる生物学的流体が約１０ｍｍＨｇから約１００ｍｍＨｇの間の背圧を有する、請求項５の方法。
【請求項１５】
容器は、工程(ａ)より前に生物学的流体中に存在する免疫グロブリンの少なくとも９０％に結合する能力を有する、請求項５の方法。
【請求項１６】
容器は、工程(ａ)より前に生物学的流体中に存在する免疫グロブリンの少なくとも５０％未満に結合する能力を有する、請求項５の方法。
【請求項１７】
ビーズが容器内に収容され、容器はバッグの内側表面をライニングしているメッシュを含むバッグであり、ビーズはバッグの内側表面とメッシュライニングの間に収容されている、請求項８の方法。  
【請求項１８】
生物学的流体は全血、多血小板血漿、血漿、および血清からなる群より選択される、請求項１の方法。
【請求項１９】
生物学的流体はヒト由来である、請求項１の方法。
【請求項２０】
免疫グロブリンはＩｇＧである、請求項１から１９のいずれかの方法。
【請求項２１】
ＩｇＧのような免疫グロブリンを最初の生物学的流体から濃縮するための方法であって、免疫グロブリンを含有すると見られる最初の生物学的流体を獲得し、この最初の生物学的流体を、最初の生物学的流体中の非免疫グロブリン成分がリガンドと非共有結合するのに十分な条件下で、最初の生物学的流体中の非免疫グロブリン成分と特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体と接触させ、そして結合した非免疫グロブリン成分を除去して、免疫グロブリンが富化された非免疫グロブリン成分低減生物学的流体を得ることを含む、方法。
【請求項２２】
非免疫グロブリン成分が、凝固カスケードタンパク質、脂質、炭水化物、アルブミン分子、および補体タンパク質からなる群より選択される、請求項２１の方法。
【請求項２３】
非免疫グロブリン成分低減生物学的流体中の免疫グロブリンが精製される、請求項２１の方法。
【請求項２４】
最初の生物学的流体中に存在する免疫グロブリンの少なくとも５５％が最初の生物学的流体から富化される、請求項２１の方法。
【請求項２５】
最初の生物学的流体が、全血、多血小板血漿、血漿、および血清からなる群より選択される、請求項２１の方法。
【請求項２６】
生物学的流体がヒト由来である、請求項２１の方法。
【請求項２７】
免疫グロブリンがＩｇＧである、請求項２１から２６のいずれかの方法。
【請求項２８】
血漿フェレーシス装置において使用するよう構成された容器であって、この容器はＩｇＧ分子、非ＩｇＧ分子、免疫グロブリン、および非免疫グロブリン分子からなる群より選択される標的分子に特異的に結合するリガンドと共有結合された固体支持体を含み、約２０ｍｌ／分から約１２０ｍｌ／分の間の流量で容器を介して通過する生物学的流体を支持するように構成されている、容器。
【請求項２９】
標的分子がＩｇＧ分子または免疫グロブリンであり、リガンドはブドウ球菌またはレンサ球菌からなる群より選択されるバクテリアの科に由来するタンパク質、またはその誘導体である、請求項２８の容器。
【請求項３０】
約１０ｍｍＨｇから約１００ｍｍＨｇの間の背圧で容器を通って流れる生物学的流体を支持するよう構成された、請求項２８の容器。
【請求項３１】
容器はカラムまたはバッグである、請求項２８の容器。
【請求項３２】
血漿フェレーシスシステムまたは血小板フェレーシスシステムのようなアフェレーシスシステムにおいて使用するよう構成されたバッグであって、このバッグは内側表面と、内側表面上のメッシュライニングを含み、それによって内側表面上にポケットを生成し、ＩｇＧ分子、非ＩｇＧ分子、免疫グロブリン、および非免疫グロブリン分子からなる群より選択された標的分子と特異的に結合するリガンドに共有結合したビーズがポケット内に配置されている、バッグ。
【請求項３３】
(ａ)免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体を、リガンドに対する免疫グロブリンの非共有結合に十分な条件下で、免疫グロブリンと特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体と容器内で接触させ；そして(ｂ)固体支持体を容器内において、非共有結合された免疫グロブリンがリガンドから溶出液中へと放出される条件下で溶出液と接触させて、免疫グロブリンを含有する溶出液を得ることを含む方法において、
免疫グロブリンと特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体を含む容器を使用して、生物学的流体中に存在するＩｇＧのような免疫グロブリンの少なくとも５５％を抽出するよう構成されたアフェレーシスシステム。
【請求項３４】
(ａ)免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体を、リガンドに対する非免疫グロブリン成分の非共有結合に十分な条件下で、容器内において固体支持体と接触させ；そして(ｂ)非免疫グロブリン欠乏生物学的流体を容器から収集し、この非免疫グロブリン欠乏生物学的流体が免疫グロブリンについて富化されている方法において、
生物学的流体中の非免疫グロブリン成分と特異的に結合するリガンドに共有結合した固体支持体を含む容器を使用して、生物学的流体中に存在する免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)の少なくとも５５％を富化するよう構成された、アフェレーシスシステム。
【請求項３５】
方法は部分的または全体的に自動化された方法である、請求項３３または３４のシステム。
【請求項３６】
固体支持体はビーズである、請求項３３または３４のシステム。
【請求項３７】
リガンドはブドウ球菌またはレンサ球菌からなる群より選択されるバクテリアの科に由来するタンパク質、またはその誘導体である、請求項３３のシステム。
【請求項３８】
リガンドはシバクロンブルーまたはその誘導体である、請求項３４のシステム。
【請求項３９】
免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体は、アフェレーシスシステムの成分によって製造された血液製剤である、請求項３３または３４のシステム。
【請求項４０】
血液製剤は多血小板血漿、血漿、または抗凝固剤が添加された全血である、請求項３９のシステム。
【請求項４１】
容器はカラムまたはバッグである、請求項３３または３４のシステム。
【請求項４２】
容器は約２０ｍｌ／分から約１２０ｍｌ／分の間の流量で容器を通って流れる生物学的流体を支持するよう構成されている、請求項３３または３４のシステム。
【請求項４３】
容器は約１０ｍｍＨｇから約１００ｍｍＨｇの間の背圧で容器を通って流れる生物学的流体を支持するよう構成されている、請求項３３または３４のシステム。
【請求項４４】
自動化された方法がさらに、(ｃ)ＩｇＧを含有する溶出液に中和バッファを添加することを含み、ＩｇＧを含み約７.０から約８.０の間のｐＨを有する最終溶液が得られる、請求項３３のシステム。
【請求項４５】
方法はシステムから容器を取り外さずに行われる、請求項３３または３４のシステム。
【請求項４６】
システムは閉鎖系である、請求項３３または３４のシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
この出願は、２０１６年４月５日に出願された米国仮出願シリアル第６２／３１８,６７７号、そしてまた２０１６年４月５日に出願された米国仮出願シリアル第６２／３１８,６６２号、そしてまた２０１６年４月５日に出願された米国仮出願シリアル第６２／３１８,６７９号、そしてまた２０１６年４月５日に出願された米国仮出願シリアル第６２／３１８,６８６号からの優先権の利益を主張するものであり、これらの各々の全開示は、ここでの参照によって本願に取り込まれるものとする。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、生物学および医学の分野に関する。特に、この発明はヒトの血液製剤およびその調製に関している。
【０００３】
血液はヒトおよび他の動物の体液であり、身体内の種々の細胞間を行き来する分子(酸素、二酸化炭素、養分、および代謝老廃物を含む)の運搬に関与している。脊椎動物において、血液は血球(赤血球および白血球を含む)と、血球および血液分子を懸濁して保持する血液の液体成分である血漿から構成されている。血漿は、身体の合計血液量の約５５％までを占めている。
【０００４】
血液は、１つの個体から別の個体へと移植することができる。かくしてヒトは、必要とする他のヒトが利用するように、献血を行ってきた。非ヒト動物からの血液(例えばネコやイヌのような脊椎動物)は、健康なドナー(供与者)から、必要とするレシピエント(授与者)へと移植することができる。供与された血液は、血液バンクに貯蔵されてよい。
【０００５】
供与された血液は、成分へと分離することができる。この場合、ドナーから直接に取り出された血液流体のすべてを含有している血液は、全血と呼ばれている。全血には物質(例えば凝固を防止するためのヘパリンまたはＥＤＴＡ)を添加してもよいが、成分(例えば液体または細胞)を除いたものは全血ではないことに留意されたい。
【０００６】
全血はまた、個々の成分を分離するために処理することができる。例えば、赤血球を分離し濃縮(富化)することができる。ヒトの白血球(赤血球ではない)は主要組織適合遺伝子複合体抗原を発現させるから、赤血球は、赤血球の白血球低減を行うことによってさらに処理して、濃厚赤血球集団中の白血球の数を低減させることができる。
【０００７】
アフェレーシス技術を使用して、ドナー(例えば健康なボランティア)の血液を収集し、全血の所望とする成分を分離する装置を通過させることができる。幾つかのアフェレーシスシステムでは、所望とする成分を取りだした後の全血の残部は、ドナーに返却される。例えば、血小板フェレーシス(トロンボシタフェレーシスまたはトロンバフェレーシスとも呼ばれる)においては、血小板が所望の成分である。かくして血小板フェレーシスにおいては、ドナーの全血は血小板を収集する装置を通過され、血小板低減血液(残部とも呼ばれてよい)がドナーに返却される。赤血球および血漿などの血液の他の所望の成分は、アフェレーシスを使用して選択的に収集することができる。
【０００８】
商業的に入手可能な種々の装置が、アフェレーシスを行うために使用されている。例えば、ＰＣＳ(登録商標(R))２血漿収集システムおよびＭＣＳ(R)＋９０００モービル血小板収集システムが、ヘモネティクス社(米国マサチューセッツ州ブレイントリー)から商業的に入手可能である。テルモＢＣＴ社もまた、Ｔｒｉｍａ Ａｃｃｅｌアフェレーシスシステム、ＣＯＢＥ ＳｐｅｃｔｒａアフェレーシスシステムおよびＳｐｅｃｔｒａＯｐｔｉａアフェレーシスシステムなどのアフェレーシスシステムを販売している。フェンオール社(米国イリノイ州レイクズーリック)もまた、Ａｍｉｃｕｓトロンバフェレーシスアフェレーシス装置を販売している。
【０００９】
全血から分離し濃縮することができる別の成分は、幹細胞である。図１は、アフェレーシス装置を使用して幹細胞を供与している患者(例えば健康なボランティアドナー)を概略的に示している。
【００１０】
全血から分離し濃縮することができる別の成分は、一種の白血球(ルーコサイトとも呼ばれる)である血小板である。殆どのルーコサイトとは異なり、血小板細胞には核が存在しない。図２は、ヘモネティクス社(米国マサチューセッツ州ブレイントリー)によって販売されているＭＣＳ(R)＋９０００モービル血小板収集システムを使用して、血小板を供与している患者を示している。
【００１１】
全血の血漿部分もまた収集可能である。図３は、血漿を収集するための非限定的な装置、すなわちヘモネティクス社(米国マサチューセッツ州ブレイントリー)によって市販されているＰＣＳ(R)２装置を示している。
【００１２】
一般に、アフェレーシスシステム(アフェレーシスユニットとも呼ばれる)は、患者から血液を引き出して遠心分離機および／またはフィルターを通して移動させて血液製剤を分離するために、可撓性のチューブ(例えばポリビニルのチューブ)を組み込んでいる。血液は次いでチューブを介して患者に戻されるか、または供与または処分のために、多くはポールから吊り下げられているバッグに収集される。アフェレーシスシステムは多くの場合、ディスプレイおよび制御パネルを含んでおり、オペレータ(例えば医師または看護師)がシステムをプログラムし、また進行および／または警告を視認できるようになっている。アフェレーシスシステムの安全に関する特徴には、圧力センサ、超音波気泡検出器、光学的流体レベル検出器、および乾熱流体加温器が含まれる。加温器は、低温の流体を輸注することによって生ずる低体温症を防止するのに役立つ。幾つかのアフェレーシスシステムは車輪付きであってよく、またはカート上に配置されてよい。
【００１３】
使用する場合、アフェレーシスシステムは典型的には、遠心分離機、ポンプ、および他の設定を自動的に制御する。例えば、回転式の蠕動ポンプが患者またはドナー(例えば健康なボランティア)から血液を引き出し、血液をフィルターまたは遠心分離機を通して給送する。一般に、フィルターは血液成分を寸法に基づいて分離し、遠心分離機は血液成分を密度によって分離する。幾つかのアフェレーシス装置は、血漿と細胞の界面を検出する光学的なセンサーを含んでおり、他の成分による汚染を最小限にする。遠心分離機は入口および出口を有し、また成分を分離状態に保つ区画を有する。ポンプは血液製剤を収集バッグへと移動させ、抗凝固剤を添加し、そして流体を再輸注する。置換用流体(例えば生理食塩水、血清アルブミン、血漿タンパク分画、新鮮凍結血漿)を患者またはドナーに輸注して、適切な循環血液量および圧力を維持することができる。
【００１４】
既存のアフェレーシスシステムは血液および血液製剤を処理するのに有用なものではあるが、ドナーまたは患者から血液製剤を得るための、改善されたアフェレーシスシステム、またはそうしたシステムを修正するための方法に対する必要性が残っている。
【発明の概要】
【００１５】
この発明は、血液および血液製剤からの免疫グロブリンを濃縮(富化)および／または抽出するための、改善された方法および装置を提供する。
【００１６】
従って１つの側面において、この発明は、生物学的流体中に存在するＩｇＧのような免疫グロブリンの少なくとも５５％を生物学的流体から抽出するための方法を提供し：(ａ)免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体を、生物学的流体中の免疫グロブリンがリガンドと非共有結合するのに十分な条件下で、免疫グロブリンと特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体と接触させ；そして(ｂ)非共有結合された免疫グロブリンがリガンドから溶出液中に放出される条件下で、固体支持体を溶出液と接触させることを含み、生物学的流体中に存在する免疫グロブリンの少なくとも５５％が溶出液中に抽出される。
【００１７】
幾つかの実施形態において、免疫グロブリンはＩｇＧである。
【００１８】
幾つかの実施形態において、この方法は工程(ｂ)に先立って、工程(ａ)を少なくとも１回繰り返すことを含む。幾つかの実施形態において、溶出液中の免疫グロブリンは精製される。幾つかの実施形態において、溶出液中の免疫グロブリンは、生物学的流体中で天然に存在する他の分子を少なくとも９０％含まない。
【００１９】
幾つかの実施形態においては、生物学的流体中の免疫グロブリンの少なくとも６０％が、生物学的流体から抽出される。幾つかの実施形態においては、生物学的流体中の免疫グロブリンの少なくとも７０％が、生物学的流体から抽出される。幾つかの実施形態においては、生物学的流体中の免疫グロブリンの少なくとも９０％が、生物学的流体から抽出される。
【００２０】
幾つかの実施形態において、工程(ａ)は、固体支持体を含む容器を介して生物学的流体を通過させることを含む。幾つかの実施形態において、固体支持体はビーズである。幾つかの実施形態において、固体支持体は容器の内側表面である。幾つかの実施形態において、容器はカラムである。幾つかの実施形態において、カラムはラジアルカラムである。幾つかの実施形態において、カラムはアキシアルカラムである。幾つかの実施形態において、容器はバッグである。幾つかの実施形態において、バッグはバッグの内側表面をライニングしているメッシュを含み、バッグの内側表面とメッシュライニングの間にビーズが収容されている。
【００２１】
幾つかの実施形態において、固体支持体はビーズである。幾つかの実施形態において、ビーズは約３０μｍから約８０μｍの間の個別直径を有している。
【００２２】
幾つかの実施形態において、リガンドはブドウ球菌またはレンサ球菌からなる群より選択されるバクテリアの科に由来するタンパク質、またはその誘導体である。幾つかの実施形態において、リガンドは黄色ブドウ球菌由来のプロテインＡまたはその誘導体である。
【００２３】
幾つかの実施形態において、この方法はさらに、抽出された免疫グロブリンを含む溶出液に中和バッファを添加することを含み、抽出された免疫グロブリンを含み約７.０から約８.０の間のｐＨを有する最終溶液が得られる。幾つかの実施形態において、溶出液は約２.０から約３.０の間のｐＨを有する。
【００２４】
幾つかの実施形態において、容器を介して通過される生物学的流体は、約５０ｍｌ／分から約１２０ｍｌ／分の間の流量を有する。
【００２５】
幾つかの実施形態において、容器を介して通過される生物学的流体は、約１０ｍｍＨｇから約１００ｍｍＨｇの間の背圧を有する。
【００２６】
幾つかの実施形態において、容器は、工程(ａ)より前に生物学的流体中に存在する免疫グロブリンの少なくとも９０％に結合する能力を有する。幾つかの実施形態において、工程(ａ)より前に生物学的流体中に存在する免疫グロブリンの５０％未満に結合する能力を有する。幾つかの実施形態において、生物学的流体は、全血、多血小板血漿、血漿、および血清からなる群より選択される。幾つかの実施形態において、生物学的流体はヒト由来である。
【００２７】
別の側面において、この発明は、最初の生物学的流体からの免疫グロブリンを濃縮するための方法を提供し、免疫グロブリンを含有すると見られる最初の生物学的流体を獲得し、最初の生物学的流体中で天然に存在する非免疫グロブリン成分を除去して、免疫グロブリンが濃縮された(最初の生物学的流体と比較して)非免疫グロブリン成分低減生物学的流体を得ることを含んでいる。幾つかの実施形態において、この方法は、免疫グロブリンを含有すると見られる最初の生物学的流体を獲得し、この最初の生物学的流体を、最初の生物学的流体中の非免疫グロブリン成分がリガンドと非共有結合するのに十分な条件下で、最初の生物学的流体中の非免疫グロブリン成分と特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体と接触させ、そして結合した非免疫グロブリン成分を除去して、免疫グロブリンが濃縮された非免疫グロブリン成分低減生物学的流体を得ることを含んでいる。幾つかの実施形態において、この非免疫グロブリン成分低減生物学的流体は、最初の生物学的流体中に存在する免疫グロブリンの少なくとも５５％を含んでいる。幾つかの実施形態においては、生物学的流体中の免疫グロブリンの少なくとも６０％が最初の生物学的流体から濃縮される。幾つかの実施形態においては、生物学的流体中の免疫グロブリンの少なくとも７０％が最初の生物学的流体から濃縮される。幾つかの実施形態においては、生物学的流体中の免疫グロブリンの少なくとも８０％が最初の生物学的流体から濃縮される。幾つかの実施形態においては、生物学的流体中の免疫グロブリンの少なくとも９０％が最初の生物学的流体から濃縮される。
【００２８】
幾つかの実施形態において、免疫グロブリンはＩｇＧである。幾つかの実施形態において、生物学的流体は、全血、多血小板血漿、血漿、および血清からなる群より選択される。幾つかの実施形態において、生物学的流体はヒト由来である。
【００２９】
幾つかの実施形態において、非免疫グロブリン成分は、凝固カスケードタンパク質、脂質、炭水化物、アルブミン、および補体タンパク質を含む。
【００３０】
別の側面において、この発明は血漿フェレーシス装置において使用するための容器を提供し、この容器はＩｇＧ分子、非ＩｇＧ分子、免疫グロブリン、および非免疫グロブリン分子からなる群より選択される標的分子に特異的に結合するリガンドと共有結合された固体支持体を含み、ここで容器は、約２０ｍｌ／分から約１２０ｍｌ／分の間の流量で容器を介して通過する生物学的流体を支持するように構成されている。幾つかの実施形態では、容器は、約１０ｍｍＨｇから約１００ｍｍＨｇの間の背圧でカラムを介して通過する生物学的流体を支持するように構成されている。
【００３１】
幾つかの実施形態において、リガンドはブドウ球菌またはレンサ球菌からなる群より選択されるバクテリアの科に由来するタンパク質、または免疫グロブリンに特異的に結合可能なその誘導体である。幾つかの実施形態において、リガンドは黄色ブドウ球菌由来のプロテインＡまたは免疫グロブリンに特異的に結合可能なその誘導体である。
【００３２】
幾つかの実施形態において、リガンドはシバクロンブルー、またはアルブミン分子に特異的に結合可能なその誘導体である。
【００３３】
幾つかの実施形態において、固体支持体はビーズである。幾つかの実施形態において、ビーズの各々は約３０μｍから約８０μｍの間の個別直径を有している。幾つかの実施形態において、容器はカラムである。幾つかの実施形態において、容器はバッグである。
【００３４】
別の側面において、この発明は血漿フェレーシス装置または血小板フェレーシス装置のようなアフェレーシスシステムにおいて使用するよう構成されたバッグを提供し、このバッグは内側表面と、内側表面上のメッシュライニングを含み、それによって内側表面上にポケットを生成し、ポケット内には、ＩｇＧ分子、非ＩｇＧ分子、免疫グロブリン、および非免疫グロブリン分子からなる群より選択された標的分子と特異的に結合するリガンドに共有結合したビーズが配置されている。
【００３５】
さらに別の側面において、この発明は、(ａ)免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体を、リガンドに対する免疫グロブリンの非共有結合に十分な条件下で、免疫グロブリンと特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体と容器内で接触させ；そして(ｂ)固体支持体を容器内において、非共有結合された免疫グロブリンがリガンドから溶出液中へと放出される条件下で溶出液と接触させて、免疫グロブリンを含有する溶出液を得ることを含む方法(例えば部分的または全体的に自動化された方法)において、ＩｇＧと特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体を含む容器を使用して、生物学的流体中に存在するＩｇＧのような免疫グロブリンの少なくとも５５％を抽出するよう構成されたアフェレーシスシステムを提供する。幾つかの実施形態において、このアフェレーシスシステムは閉鎖系である。幾つかの実施形態において、このアフェレーシスシステムは血小板フェレーシスシステムまたは血漿フェレーシスシステムである。幾つかの実施形態において、固体支持体はビーズである。リガンドはブドウ球菌またはレンサ球菌からなる群より選択されるバクテリアの科に由来するタンパク質、またはその誘導体である。幾つかの実施形態において、リガンドは黄色ブドウ球菌由来のプロテインＡまたはその誘導体である。幾つかの実施形態において、溶出液中の免疫グロブリンは精製される。
【００３６】
幾つかの実施形態において、生物学的流体中の免疫グロブリンの少なくとも６０％が生物学的流体から抽出される。幾つかの実施形態において、生物学的流体中の免疫グロブリンの少なくとも７０％が生物学的流体から抽出される。幾つかの実施形態において、生物学的流体中の免疫グロブリンの少なくとも９０％が生物学的流体から抽出される。
【００３７】
幾つかの実施形態において、このシステムの方法はさらに、(ｃ)中和バッファを免疫グロブリンを含有する溶出液に添加することを含み、約７.０から約８.０の間のｐＨを有する系を含む最終溶液が得られる。
【００３８】
別の側面において、この発明は、(ａ)容器内において、リガンドに対する非免疫グロブリン成分の非共有結合に十分な条件下で、免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体を固体支持体と接触させ；そして(ｂ)非免疫グロブリン欠乏生物学的流体を容器から収集し、この非免疫グロブリン欠乏生物学的流体が免疫グロブリンについて濃縮されている方法(例えば部分的または全体的に自動化された方法)において、生物学的流体中の非免疫グロブリン成分と特異的に結合するリガンドに共有結合した固体支持体を含む容器を使用して、生物学的流体中に存在する免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)の少なくとも５５％が濃縮されるよう構成された、アフェレーシスシステムを提供する。幾つかの実施形態において、このアフェレーシスシステムは閉鎖系である。幾つかの実施形態において、このアフェレーシスシステムは血小板フェレーシスシステムまたは血漿フェレーシスシステムである。幾つかの実施形態において、固体支持体はビーズである。幾つかの実施形態において、リガンドはシバクロンブルー、またはその誘導体(例えばアルブミンに特異的に結合する誘導体)である。
【００３９】
幾つかの実施形態においては、生物学的流体中の免疫グロブリンの少なくともが６０％が濃縮される。幾つかの実施形態においては、生物学的流体中の免疫グロブリンの少なくとも７０％が濃縮される。幾つかの実施形態においては、生物学的流体中の免疫グロブリンの少なくとも８０％が濃縮される。幾つかの実施形態においては、生物学的流体中の免疫グロブリンの少なくとも９０％が濃縮される。
【００４０】
幾つかの実施形態において、免疫グロブリン(ＩｇＧのような)を含有すると見られる生物学的流体は、アフェレーシスシステムの成分によって製造される血液製剤である。幾つかの実施形態において、血液製剤は多血小板血漿である。幾つかの実施形態において、血液製剤は血漿である。幾つかの実施形態において、血液製剤は抗凝固剤が添加された全血である。
【００４１】
幾つかの実施形態において、容器はカラムである。幾つかの実施形態において、容器はバッグである。
【００４２】
幾つかの実施形態において、容器は、約２０ｍｌ／分から約１２０ｍｌ／分の間の流量で容器を介して通過する生物学的流体を支持するように構成されている。幾つかの実施形態では、容器は、約１０ｍｍＨｇから約１００ｍｍＨｇの間の背圧で容器を介して通過する生物学的流体を支持するように構成されている。
【００４３】
幾つかの実施形態において、本願に記載のシステムは閉鎖系である。幾つかの実施形態において、この方法(例えば自動化された方法)は、容器をシステムから取り外すことなく行われる。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
上記した実施形態の特徴は、以下の詳細な説明を添付図面を参酌して参照することにより、より容易に理解される。添付図面において：
【００４５】
図１は、アフェレーシスの非限定的な実施形態を示す概略である。図１においては、幹細胞がドナーから取り出されており、全血の非幹細胞成分はドナーに戻される。
【００４６】
図２は使用中の非限定的な代表的なアフェレーシス装置、すなわちヘモネティクス社(マサチューセッツ州ブレイントリー)によって販売されているＭＣＳ(R)＋９０００モービル血小板収集システムの写真である。この図２において、示されているアフェレーシス装置は血小板を収集するように使用されている。
【００４７】
図３は、非限定的な代表的なアフェレーシス装置、すなわちヘモネティクス社(マサチューセッツ州ブレイントリー)によって販売されているＰＣＳ(R)２装置の写真である。この図３において、示されているアフェレーシス装置は血漿を収集するように使用可能である。
【００４８】
図４は、固体支持体に共有結合した非限定的な種類のリガンドであるＭabＣapture Ａビーズを使用して、１リットル(すなわち１０００ｍＬ)の血漿から回収可能なＩｇＧの量の表示を示す線グラフである。
【００４９】
図５は、通常のヒト血漿におけるＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＧの相対的な量(左側の列)、血漿フェレーシスにおいて収集されたヒト血漿中のＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＧの相対的な量(左から２番目の列)、実施例４で後述する本発明の非限定的な実施形態に従って収集されたヒト血漿から回収されたＩｇＡ(「通常」列では中央の棒)、ＩｇＭ(「通常」列では一番下の棒)、およびＩｇＧ(「通常」列では一番上の棒)の相対量(左から３番目の列「回収されたＩｇＧ」)、およびＩｇＡまたはＩｇＭがなく全部がＩｇＧである目標ゴール(一番右の「目標」列)を示す棒／列グラフである。この目標列はＩｇＧのみを有することに留意されたい。
【００５０】
図６Ａ〜図６Ｃは、患者(例えば健康なボランティアドナー)から取得された生物学的流体からＩｇＧを取り出すための工程(例えばデバイス)を取り入れるために、アフェレーシスシステムをどのように修正可能であるかを示す概略図である。図６Ａにおいては、まず血小板が全血から取り出され(そして次いで処理されて血小板製剤が製造され)、次に残余の細胞から血漿が取り出される。ＩｇＧは血漿から取り出され(そして次いで処理されてＩｇＧ製剤が製造され)、そしてＩｇＧ欠乏血漿は残りの細胞(すなわち赤血球および非血小板白血球)と合わせて患者に戻すよう投与される。図６Ｂでは、多血小板血漿が全血から取り出され、次いでＩｇＧが多血小板血漿から取り出され、これらは処理の後に、精製ＩｇＧ製剤およびＩｇＧ欠乏多血小板血漿製剤をもたらす。残った赤血球および非血小板白血球は等張食塩水と混合されて、図６Ｂの患者に戻される。図６Ｃにおいては、血漿が全血から取り出され、そしてこの血漿からＩｇＧが抽出される。さらに処理を行った後、精製ＩｇＧ製剤とＩｇＧ欠乏血漿製剤が製造される。残りの赤血球と白血球(血小板を含む)は等張食塩水と混合され、図６Ｃのドナーに戻される。
【００５１】
図７はアフェレーシスシステムの概略図であり、そこでは精製ＩｇＧは、アフェレーシスの間に全血から取り出された多くの製剤の１つである。図７に示されているように、描かれている方法においてドナーに返却される唯一の成分は、リンゲル液(等張液の１つ)に懸濁された非血小板白血球(例えばリンパ球および単球)である。
【００５２】
図８Ａは、この発明で使用可能なバッグの非限定的な表現の写真である。示されているバッグでは、入口ポートと出口ポートがバッグの上部に配置されている。
【００５３】
図８Ｂは、この発明で使用可能なバッグの非限定的な表現の写真である。示されているバッグでは、入口ポートはバッグの上部に配置され、出口ポートはバッグの下部に配置されている。
【００５４】
図９Ａ〜図９Ｃは、この発明で使用可能な非限定的なラジアルフローカラムの写真である。図９Ｂはカラムの外観を示している。図９Ａは図９Ｂのカラムを長手方向の部分を切除して示し、カラム内に充填されたビーズを見せている。図９Ｃは図９Ｂのカラムの断片(スライス)を示し、充填されたビーズの個々の層が断片の右側の切除部分において視認できる。
【００５５】
図１０Ａおよび図１０Ｂは、免疫グロブリンを特異的に結合するリガンドに共有結合した固体支持体を含む容器の非限定的な例であるラジアルカラムを組み込むための、ＰＣＳ(R)２システムのような血漿フェレーシスシステム(図１０Ａ)、およびＭＣＳ(R)＋９０００システムのような血小板フェレーシスシステム(図１０Ｂ)に対する修正の概略的な表示である。図１０Ａおよび図１０Ｂは、ＩｇＧに特異的に結合するリガンドに共有結合した固体支持体を含む非限定的な容器であるラジアルカラムを、ＰＣＳ(R)２システムのような血漿フェレーシスシステム(図１０Ａ)、およびＭＣＳ(R)＋９０００システムのような血小板フェレーシスシステム(図１０Ｂ)へとどのように取り入れることができるかを示す概略図である。血液適合性のあるチューブ(例えばポリプロピレンから作成される)が、各種のバッグ、ボウル、およびカラムを相互に接続している。図１０Ａおよび図１０Ｂは、ラジアルカラムを容器として示している；しかしながら、アキシアルカラムまたはバッグのような別の種類の容器もまた使用することができる。
【００５６】
図１０Ｃおよび図１０Ｄは、免疫グロブリンを特異的に結合するリガンドに共有結合した固体支持体を含む容器の非限定的な例であるバッグを組み込むための、ＰＣＳ(R)２システムのような血漿フェレーシスシステム(図１０Ｃ)、およびＭＣＳ(R)＋９０００システムのような血小板フェレーシスシステム(図１０Ｄ)に対する修正の概略的な表示である。図１０Ｃおよび図１０Ｄは、ＩｇＧに特異的に結合するリガンドに共有結合した固体支持体を含む非限定的な容器であるバッグを、ＰＣＳ(R)２システムのような血漿フェレーシスシステム(図１０Ｃ)、およびＭＣＳ(R)＋９０００システムのような血小板フェレーシスシステム(図１０Ｄ)へとどのように取り入れることができるかを示す概略図である。血液適合性のあるチューブ(例えばポリプロピレンから作成される)が、各種のバッグおよびボウルを相互に接続している。図１０Ｃおよび図１０Ｄは、図８Ａ〜図８Ｂに示されたようなバッグを容器として使用している；しかしながら、アキシアルカラムまたはバッグのような別の種類の容器もまた使用することができる。
【００５７】
図１０Ｅおよび図１０Ｆは、非ＩｇＧ血液成分を特異的に結合するリガンドに共有結合した固体支持体を含む容器の非限定的な例であるカラムを組み込むための、ＰＣＳ(R)２システムのような血漿フェレーシスシステム(図１０Ｅ)、およびＭＣＳ(R)＋９０００システムのような血小板フェレーシスシステム(図１０Ｆ)に対する修正の概略的な表示である。図１０Ｅおよび図１０Ｆは、非ＩｇＧ血液成分に特異的に結合するリガンドに共有結合した固体支持体を含む非限定的な容器であるラジアルカラムを、ＰＣＳ(R)２システムのような血漿フェレーシスシステム(図１０Ｅ)、およびＭＣＳ(R)＋９０００システムのような血小板フェレーシスシステム(図１０Ｆ)へとどのように取り入れることができるかを示す概略図である。血液適合性のあるチューブ(例えばポリプロピレンから作成される)が、各種のバッグおよびボウルを相互に接続している。図１０Ｅおよび図１０Ｆは、ラジアルカラムを容器として示している；しかしながら、アキシアルカラムまたはバッグのような別の種類の容器もまた使用することができることに留意されたい。
【００５８】
図１１は、ネガティブセレクション(負の選択)によってＩｇＧを精製する非限定的な実施形態を示すフローチャートである。取り出し工程の順序は変化させてよいことに留意すべきである。例えば、補体カスケードタンパク質はアルブミンの取り出し前に取り出すことができる。
【００５９】
図１２は、水についてのアキシアルカラム中の背圧(左側の最初の棒)を、ベッド高が３ｃｍのラジアルカラムに対して、水(２番目の棒)について、またはそこに示した粘度を有する水／グリセリン混合物(３番目、４番目、および５番目の棒)について比較して示す棒グラフである。
【００６０】
図１３は、水についてのアキシアルカラム中の背圧(左側の最初の棒)を、ベッド高が３ｃｍのラジアルカラムに対し水(２番目の棒)について、またはそこに示した粘度を有する水／グリセリン混合物(３番目、４番目、および５番目の棒)について、およびベッド高が１ｃｍのラジアルカラムに対し示された粘度を有する水／グリセリン混合物(６番目、７番目、および８番目の棒)について比較して示す棒グラフである。
【００６１】
図１４は、ラジアルカラム中(固体支持体を含む非限定的な種類の容器)において、ＭabＣapture Ａ(ＩｇＧに特異的に結合するリガンドと共有結合した非限定的な固体支持体)に結合することによって血漿から捕捉されたＩｇＧの量(暗赤色の線)、およびカラムから回収(すなわち溶出)液中へと回収されたＩｇＧの量(薄緑色の線)を示す線グラフである。示されているのは、５人の異なるドナーについて、ベッド高が３ｃｍのラジアルカラム中で、サイクル当たり１０００ｍｌを５サイクル行うテスト５回の平均量であり、カラムは５サイクルのすべてについて再使用した。血漿中のＩｇＧの初期量は表１に示されている。
【００６２】
図１５は、この発明の非限定的な実施形態において、プロテインＡで被覆されたビーズを充填した使い捨て式のカラムと共に使用可能な一連のバッグを示す概略図である。
【００６３】
図１６は、本発明に従いリガンドに共有結合した非限定的な固体支持体であるプロテインＡ被覆ビーズを使用して、血漿から回収液へと回収された(暗赤色の線)、２００ｍｌのヒト血漿中に存在するＩｇＧの量(薄緑色の線)を示す線グラフである。
【００６４】
図１７は、非限定的な生物学的流体、すなわちアフェレーシス手順を介してドナーから収集された多血小板血漿からの、ＩｇＧの取り出しを示す概略図である。示されているように、多血小板血漿からのＩｇＧの抽出後、さらに処理を行った後に、ＩｇＧ欠乏多血小板血漿および精製ＩｇＧ製剤の２つの製剤が得られる。
【００６５】
図１８は、非限定的な生物学的流体、すなわちアフェレーシス手順(例えばＰＣＳ(R)２装置を使用した血漿フェレーシス)を介してドナーから収集された血漿からの、ＩｇＧの取り出しを示す概略図である。示されているように、血漿からのＩｇＧの抽出後、さらに処理を行った後に、ＩｇＧ欠乏血漿および精製ＩｇＧ製剤の２つの製剤が得られる。
【００６６】
図１９は、非限定的な生物学的流体、すなわち全血(クエン酸のような抗凝固剤を含んでいてよい)からの、ＩｇＧの取り出しを示す概略図である。示されているように、ＩｇＧは全血から、本願に記載の方法および装置を用いて取り出される。血漿からのＩｇＧの抽出後、さらに処理を行った後に、精製ＩｇＧ製剤が得られる。残りの血液(すなわち、ＩｇＧ欠乏全血)はさらに処理を行って、赤血球(例えば濃厚赤血球)、ＩｇＧ欠乏血漿(または血漿製剤)、および血小板製剤などの血液製剤を最終的に得ることができる。
【発明を実施するための形態】
【００６７】
この発明は部分的には、血液のような生物学的流体から免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)の少なくとも６０％を抽出することを可能にする方法および装置を開発することに根ざしている。
【００６８】
本願で参照する発行済み特許、特許出願、ウェブサイト、会社名、および科学文献は、当業者に入手可能な知識を確立しており、各々が具体的および個別的に参照によって指定されたと同様にして、それらの全体が参照によって本願に取り入れられる。本願で引用する文献と本明細書の具体的な教示に対立がある場合には、後者に有利に解決される。
【００６９】
詳細な説明および請求項で定義または使用された用語は、文脈上他の意味に解釈すべき場合を除き、指定された意味を有する。本願で使用する技術用語および科学用語は、別様に定義しない限り、本発明の属する技術分野における当業者に通常理解される意味を有する。技術的に理解されている用語または言い回しの定義と、本明細書において具体的に教示されている用語または言い回しの定義の間に齟齬がある場合は、後者に有利に解決される。本願で使用するところでは、以下の用語は指定した意味を有している。本明細書において使用するところでは、単数形「ある」「あの」および「その」は、文脈上他の意味に解釈すべき場合を除き、参照されている用語の複数形をも含む。用語「約」は本願では、大体、おおよそ、大まかに、または辺りを意味するために使用される。用語「約」が数値範囲に関連して使用された場合、それは記載された数値の境界を上下に拡大することによって、その範囲を修正する。一般に、用語「約」は本願では、示された数値を上下に２０％の変動で修正するために使用される。
【００７０】
本願で使用するところでは、「血液」によって意味するのは全血および血液成分製剤である。全血は単純に、ヒトのような生物の全身を循環している流体である。全血は、細胞(例えば赤血球、白血球)、タンパク質(例えばインシュリン、免疫グロブリン、アルブミン)、脂肪酸および炭水化物(例えばコレステロールおよびグルコース)などの成分を含み、これらが血漿と呼ばれる液体に懸濁されている。血液は、抗凝固剤で処理することができる。従って用語「血液」は、限定するものではないが、クエン酸ナトリウム(抗凝固剤)で処理された全血、クエン酸で処理された多血小板血漿、およびヘパリンで処理された濃厚赤血球を含むものである。
【００７１】
全血は処理することにより、血液から個々の成分を分離および収集することができる。例えば、赤血球および白血球を取り出して、血漿中に懸濁された非細胞成分を後に残すことができる。上述したように、血小板フェレーシスシステムまたは血漿フェレーシスシステムのようなアフェレーシスシステムが一般的に利用可能であり、ドナーの全血から所望の成分(例えば血小板または血漿)を抽出するために使用されている。幾つかの実施形態において、成分が低減された血液は、アフェレーシスシステムによってドナーへと返却される。
【００７２】
細胞内に含有されておらず、および／または細胞の表面に付着されていない、すべての血液担持分子(例えばタンパク質、脂質、炭水化物、その他)は血漿中に懸濁されているから、血液の血漿部分はこれらの分子を含有することになる。血液血漿タンパク質または単に血漿タンパク質と呼ばれる、血漿中のタンパク質は多様であり、多くの役割を有している。例えば、凝固カスケードのすべての因子(例えばフィブリノーゲン、プラスミノーゲン、トロンビン、ファクタＸIII、ファクタＩＸ、ファクタＶIII、およびファクタＶ)は血漿タンパク質である。他の血漿タンパク質には、限定するものではないが、補体タンパク質(例えば補体成分３および補体成分４)、アルブミン、グロブリン(例えばα１グロブリンおよびガンマグロブリン)、Ｃ反応性タンパク質(ＣＲＰ)、リポタンパク質(例えばＨＤＬ、ＬＤＬ)、および各種のホルモンおよび酵素が含まれる。アルブミンは血漿タンパク質の５５％を占め、そしてフィブリノーゲンは別の７％を占める。
【００７３】
かくして、血液(例えば全血または血漿のような血液製剤)はさらに処理して、その血液から所望の成分を抽出することができる。例えば、血液血漿を処理してアルブミンを濃縮するための初期の方法が、ＥｄｗｉｎＣｏｈｎによって開発された(Ｃｏｈｎら、Ｊ. Ａｍ. Ｃｈｅｍ. Ｓｏｃ. ６８：４５９−４７５、１９４６年参照)。Ｃｏｈｎ法と呼ばれるこの方法では、濃度の異なる５つのエタノールを使用して(タンパク質の沈殿剤として使用される)血液血漿が５つの画分に分離され、種々の緩衝液でｐＨが７.２から４.６の間に変化されてアルブミンが抽出される。
【００７４】
グロブリンタンパク質は血液血漿タンパク質の３８％を占め、典型的にはｄＬ(デシリットル)当たり約２.６から約４.６グラムを構成する。グロブリンの１つの種類はガンマグロブリンであり、これには免疫グロブリン(抗体とも呼ばれる)が含まれる。ヒトには免疫グロブリンの５つのアイソタイプがあるが(すなわちＡ、Ｇ、Ｄ、ＥおよびＭ)、血液中で最も一般的な形態はＧタイプ(すなわちＩｇＧ)であり、これは血液血漿中に見られる免疫グロブリンの約７５％を占めている。ＩｇＡおよびＩｇＭもまた、血液血漿中で容易に見出すことができる。年齢が約１９歳から約５５歳の間の健康なヒトについて、１デシリットルの全血中には、以下の量の免疫グロブリンが循環していることを見出すことができる：０.５６０グラムから１.８グラムのＩｇＧ、７０ｍｇから４００ｍｇのＩｇＡ、および４０ｍｇから２５０ｍｇのＩｇＭ。
【００７５】
最近、免疫グロブリンは患者に対する治療の一環として投与可能であることが見出されている。この種の治療は、免疫グロブリン療法と呼ばれている。免疫グロブリンを治療剤として投与すると、レシピエントである患者に、感染に対する受動的耐性を与えることができる。免疫グロブリン療法は、静脈内、皮下、および筋肉内などの種々の経路によって投与可能である。免疫グロブリン療法は、健康状態を維持するために身体が自己の免疫グロブリンを十分に産生することのできない患者に投与するのに有用である。免疫グロブリン療法は、特定の疾病を治療し、または患者の免疫グロブリン量を一時的に増大させるために、一時的に行われるものであってよい。幾つかの実施形態においては、患者は生涯にわたって免疫グロブリン療法を必要としうる。原発性免疫不全症(例えばＸ連鎖無ガンマグロブリン血症(ＸＬＡ)および分類不能型免疫不全症(ＣＶＩＤ))、重症筋無力症、ヒト免疫不全ウイルス(ＨＩＶ)感染、自己免疫疾患(例えばギランバレー症候群および川崎病)、急性感染症などの疾病を有する患者、および臓器移植を受けた患者は、免疫グロブリン療法から利益を得られる非限定的な患者のリストに含まれる。
【００７６】
幾つかの実施形態において、血液から精製された免疫グロブリンはさらに処理されて(例えば凍結、貯蔵、または複数のドナーからプールされて)、その後レシピエントである患者に治療として投与される。例えば、本開示の非限定的な実施形態に従って精製される免疫グロブリンは、数人のドナーの全血から得ることができる。非限定的な例においては、まず血漿を全血の幾つかの源から収集することができ、そして血漿はプールされる(すなわち組み合わせられる)。次いで免疫グロブリンをプールされた血漿から精製することができる。別の非限定的な例では、免疫グロブリンは個々のドナーから精製することができ、そして次に、最初のドナーからの精製された免疫グロブリンは、２番目のドナーからの免疫グロブリンと(そして３番目のドナーから、４番目のドナーから等々)組み合わせる(すなわちプールする)ことができる。幾つかの実施形態において、治療として使用する前に、精製された免疫グロブリンはさらに貯蔵(例えば室温で、４℃で、または−２０℃で)によって処理可能である。
【００７７】
免疫グロブリン、特にＩｇＧは主たる血液血漿タンパク質であるから、幾つかの実施形態において、この発明は、ドナーから収集された血液(例えば全血または血漿のような血液製剤)からの免疫グロブリンを分離し精製することに向けられている。治療に関しては、ＩｇＧはＩｇＧとＩｇＡおよび／またはＩｇＭの混合物よりも好ましいことに留意すべきである。この好ましさに関する１つの非限定的な理由は、ＩｇＧはモノマーであるが(４つの鎖−２つの同じ重鎖と２つの同じ軽鎖を含む)、ＩｇＡおよびＩｇＭはそうでないことにある。正しくはＩｇＡはダイマーであって、４つの同じ重鎖と４つの同じ軽鎖を含み、そしてＩｇＭはペンタマーであって、１０の同じ重鎖と１０の同じ軽鎖を含んでいる。その結果として、ＩｇＡおよびＩｇＭは塊になりやすく、治療用組成物中では余り望ましくないものとなる。
【００７８】
「精製された」が意味するのは、特定したタンパク質(例えばＩｇＧ)が、そのタンパク質が天然に存在する生物学的流体中に見出される他の分子を少なくとも９０％、または少なくとも９２％、または少なくとも９５％含まないこと、あるいは少なくとも９８％含まないことである。例えば、タンパク質が免疫グロブリンである場合、精製された免疫グロブリンは、限定するものではないが、コレステロール、アルブミン、補体タンパク質、および凝固カスケードタンパク質などの他の血液タンパク質を少なくとも９０％、または少なくとも９２％、または少なくとも９５％含まず、あるいは少なくとも９８％含まない。タンパク質がＩｇＧである場合、精製されたＩｇＧは、限定するものではないが、ＩｇＡ、ＩｇＭ、コレステロール、アルブミン、補体タンパク質、および凝固カスケードタンパク質などの他の血液タンパク質を少なくとも９０％、または少なくとも９２％、または少なくとも９５％含まず、あるいは少なくとも９８％含まない。精製されたタンパク質(例えば精製ＩｇＧ)は、所望とするタンパク質が天然に存在する生物学的流体からその所望とするタンパク質を引き出しまたは抽出することにより、または所望とするタンパク質が天然に存在する生物学的流体から他のすべての望ましくないタンパク質および分子を除去することによって所望とするタンパク質のみを残し、かくして生物学的流体中で濃縮精製することによって、精製することができる。
【００７９】
すべての血清タンパク質はまた、血漿タンパク質であることに留意されたい。血清は、全血が凝固した場合に残る液体である。よって、血漿タンパク質のすべてが血清タンパク質である訳ではないが、それは血漿タンパク質は凝固過程を通じて固化するからである。しかしながら免疫グロブリンは凝固により固化せず、かくして血清中に残存する。免疫グロブリンは血液の凝固に際して固化して血餅の一部を形成する訳ではないが、少なくとも免疫グロブリンの幾らかは血餅が形成されるに際して捕捉されることに留意すべきである。従って、血清中の免疫グロブリンは血漿中の免疫グロブリンよりも少ない；とはいえ、血清中の免疫グロブリンは依然として生物学的に機能する(すなわち依然として、それらの特異的抗原に対して結合可能である)。通常の健康なヒトの大人から取り出された血清では(例えば約１８歳から約５０歳の間の大人)、約１１５８＋／−３０５ｍｇのＩｇＧが１デシリットルの血清中に存在している。
【００８０】
かくして、例えば治療剤のような最終的な用途のためにさらに処理を行うべく、生物学的流体(例えば全血、または血漿や血清のような血液製剤)からＩｇＧを抽出し、または生物学的流体(例えば血漿)中のＩｇＧを濃縮することが望ましい。血液血漿からアルブミンを分離するのに非常に良好であるＣｏｈｎ法は、血液からの免疫グロブリンを精製するように修正されている。Ｔａｎａｋａら、Ｂｒａｚ. Ｊ. Ｍｅｄ. Ｂｉｏｌ. Ｒｅｓ.(２０００年１月)３３(１)：２７−３０；Ｂｒｕｃｋｓｃｈｗａｉｇｅｒ, Ｌ.米国特許第８,９９３,７３４号；Ｂｒｕｃｋｓｃｈｗａｉｇｅｒ, Ｌ.米国特許公開第２０１５−０１３３６４４号を参照のこと。免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)を血液(例えば全血または血液血漿)から分離させるための他の方法も開発されている。しかしながら、従来技術の方法で、血液製剤用の血液から、全血中に存在する５０％を越えるＩｇＧを抽出することに成功したものはない。
【００８１】
本発明は部分的には、生物学的流体中に存在する５０％を超える免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)をその生物学的流体から抽出するための、または生物学的流体中に存在する５０％を超える免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)をその生物学的流体中で濃縮するための、方法および装置の発見に由来している。幾つかの実施形態においては、生物学的流体中に存在する５５％を超える免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)が、本願に記載の方法に従って、その生物学的流体から抽出される。幾つかの実施形態においては、生物学的流体中に存在する５５％を超える免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)が、本願に記載の方法に従って濃縮される。抽出または濃縮された免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)は次いで、さらに精製および／または処理することができる。
【００８２】
幾つかの実施形態において、血液(例えば全血または血漿や血清のような血液製剤)のような生物学的流体中に存在する５５％を超えるＩｇＧを抽出または濃縮するための方法および装置を提供する。換言すれば、本願に記載する方法を使用して、通常のヒトの大人からの１デシリットルの全血を処理した場合、この全血から少なくとも約０.３５グラムから０.８グラムのＩｇＧが抽出または濃縮される。幾つかの実施形態において、この方法および装置は、生物学的流体中に存在する６０％を超えるＩｇＧを抽出または濃縮する。幾つかの実施形態において、この方法および装置は、生物学的流体中に存在する７０％を超えるＩｇＧを抽出または濃縮する。幾つかの実施形態において、この方法および装置は、生物学的流体中に存在する８０％を超えるＩｇＧを抽出または濃縮する。幾つかの実施形態において、この方法および装置は、生物学的流体中に存在する９０％を超えるＩｇＧを抽出または濃縮する。幾つかの実施形態において、この方法および装置は、生物学的流体中に存在する９５％を超えるＩｇＧを抽出または濃縮する。幾つかの実施形態において、この方法および装置は、生物学的流体中に存在する９８％を超えるＩｇＧを抽出または濃縮する。幾つかの実施形態において、この方法および装置は、生物学的流体中に存在する９９％を超えるＩｇＧを抽出または濃縮する。
【００８３】
従って１つの側面において、この発明は、ＩｇＧのような免疫グロブリンを含有すると見られる最初の生物学的流体を入手し、そして最初の生物学的流体中で天然に存在する非免疫グロブリン(例えば非ＩｇＧ)成分を取り除いて、非免疫グロブリン成分が低減された生物学的流体を得ることを含む、ＩｇＧのような免疫グロブリンを最初の生物学的流体から濃縮するための方法を提供する。幾つかの実施形態において、この方法は、生物学的流体中の非免疫グロブリン成分がリガンドと非共有結合するのに十分な条件下において、最初の生物学的流体を、非免疫グロブリン成分(または非ＩｇＧ成分)と特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体と接触させ、そして結合した非免疫グロブリン成分を取り除いて、非免疫グロブリン成分が低減された生物学的流体を得る。幾つかの実施形態において、非免疫グロブリン成分が低減された生物学的流体は、最初の生物学的流体中に存在する免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)の少なくとも５５％を含んでいる。
【００８４】
幾つかの実施形態において、非ＩｇＧ成分は凝固カスケードタンパク質、脂質、炭水化物、アルブミン、および補体タンパク質を含んでいる。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)は、非免疫グロブリン成分が低減された生物学的流体中で精製される。
【００８５】
幾つかの実施形態においては、最初の生物学的流体中に存在する免疫グロブリン(ＩｇＧのような)の少なくとも６０％が、最初の生物学的流体から濃縮される。幾つかの実施形態においては、最初の生物学的流体中に存在する免疫グロブリン(ＩｇＧのような)の少なくとも７０％が濃縮される。幾つかの実施形態においては、最初の生物学的流体中に存在する免疫グロブリン(ＩｇＧのような)の少なくとも８０％が濃縮される。幾つかの実施形態においては、最初の生物学的流体中に存在する免疫グロブリン(ＩｇＧのような)の少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％が、最初の生物学的流体から濃縮される。幾つかの実施形態においては、最初の生物学的流体中に存在する免疫グロブリン(ＩｇＧのような)の少なくとも９８％が、最初の生物学的流体から濃縮される。
【００８６】
幾つかの実施形態において、最初の生物学的流体からの濃縮は、全血、多血小板血漿、血漿、および血清からなる群より選択される。幾つかの実施形態において、最初の生物学的流体からの濃縮はヒトから行われる。
【００８７】
幾つかの実施形態において、生物学的流体中に存在する免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)の量(または濃度)は、生物学的流体中の非ＩｇＧ血液成分をリガンドに非共有結合させるのに十分な条件下において、生物学的流体を非ＩｇＧ血液成分(または非免疫グロブリン血液成分)と特異的に結合するリガンドに共有結合した固体支持体と接触させる前に測定される。幾つかの実施形態において、生物学的流体中に存在する免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)の量(または濃度)は、非ＩｇＧ血液成分の抽出後に測定される。
【００８８】
流体中(例えば生物学的流体または溶出液)に存在する免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)の量または濃度は、ＥＬＩＳＡ、液体またはガスクロマトグラフィー、質量分光分析、ネフェロメトリー(比濁法)その他を含む、任意の標準的な方法によって求めることができる。例えば、免疫グロブリンの量は、例えばＢＮ−ＩＩ装置(ドイツ国マールブルグのデイドベーリング社)を使用して、製造業者の指示に従い、ネフェロメトリー分析により求めることができる。この製造業者は、健康なヒトの大人について、以下の標準範囲を示している：ＩｇＡは７０〜４００ｍｇ／ｄｌ血清、ＩｇＧは７００〜１６００ｍｇ／ｄｌ血清、そしてＩｇＭは４０〜２３０ｍｇ／ｄｌ血清。標準的なＥＬＩＳＡもまた使用可能である。例えばＨａｒｏｕｎおよびＥｌ−Ｓａｙｅｄ、Ｊ. Ｃｌｉｎ. Ｂｉｏｃｈｅｍ. Ｎｕｔｒ. ４０：５６−６１、２００７年参照。電気泳動試験もまた、生物学的流体中の免疫グロブリンの量を求めるために使用することができる。
【００８９】
幾つかの実施形態においては、非免疫グロブリン成分が抽出された後に残る生物学的流体(免疫グロブリン富化生物学的流体と称してよい)が収集される。免疫グロブリン富化生物学的流体は、さらに処理してよい(例えば凍結乾燥、冷凍、冷蔵、その他)。
【００９０】
別の側面においてこの発明は、生物学的流体から、生物学的流体中に存在する免疫グロブリン(ＩｇＧのような)の少なくとも５５％を抽出するための方法を提供し、これは免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体(ＩｇＧのような)を、免疫グロブリン(ＩｇＧのような)と特異的に結合するリガンドに共有結合した固体支持体と、生物学的流体中のＩｇＧをリガンドに対して非共有結合するのに十分な条件下で接触させ、そしてこの固体支持体を溶出液と、非共有結合された免疫グロブリン(ＩｇＧのような)がリガンドから溶出液中へと放出される条件下で接触させることを含み、ここで生物学的流体中に存在する少なくとも５５％の免疫グロブリン(ＩｇＧのような)が溶出液中へと抽出される。幾つかの実施形態においては、生物学的流体中に存在する少なくとも６０％の免疫グロブリン(ＩｇＧのような)がリガンドに非共有結合され、かくして生物学的流体から抽出される。幾つかの実施形態においては、生物学的流体中に存在する少なくとも７０％の免疫グロブリン(ＩｇＧのような)がリガンドに非共有結合され、かくして生物学的流体から抽出される。幾つかの実施形態においては、生物学的流体中に存在する少なくとも８０％の免疫グロブリン(ＩｇＧのような)がリガンドに非共有結合され、かくして生物学的流体から抽出される。幾つかの実施形態においては、生物学的流体中に存在する少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％の免疫グロブリン(ＩｇＧのような)がリガンドに非共有結合され、かくして生物学的流体から抽出される。幾つかの実施形態においては、生物学的流体中に存在する少なくとも９８％の免疫グロブリン(ＩｇＧのような)がリガンドに非共有結合され、かくして生物学的流体から抽出される。
【００９１】
幾つかの実施形態において、生物学的流体中に存在する免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)の量(または濃度)は、生物学的流体中でＩｇＧをそのリガンドに非共有結合するのに十分な条件下でＩｇＧと特異的に結合するリガンド、または非免疫グロブリン成分をそのリガンドに非共有結合するのに十分な条件下で非免疫グロブリン成分(例えばアルブミン)に特異的に結合するリガンドのいずれかに共有結合した固体支持体に対して、生物学的流体を接触させる前に測定される。幾つかの実施形態において、溶出液中に存在する免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)の量(または濃度)は、リガンドに結合したＩｇＧがリガンドから溶出液へと溶出した後に測定される。幾つかの実施形態において、生物学的流体中に存在する免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)の量(または濃度)は、生物学的流体から非免疫グロブリン成分を除去した後に測定される。
【００９２】
流体中(例えば生物学的流体または溶出液)に存在する免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)の量または濃度は、ＥＬＩＳＡ、液体またはガスクロマトグラフィー、質量分光分析、ネフェロメトリー(比濁法)その他を含む、任意の標準的な方法によって求めることができる。例えば、免疫グロブリンの量は、例えばＢＮ−ＩＩ装置(ドイツ国マールブルグのデイドベーリング社)を使用して、製造業者の指示に従い、ネフェロメトリー分析により求めることができる。この製造業者は、健康なヒトの大人について、以下の標準範囲を示している：ＩｇＡは７０〜４００ｍｇ／ｄｌ血清、ＩｇＧは７００〜１６００ｍｇ／ｄｌ血清、そしてＩｇＭは４０〜２３０ｍｇ／ｄｌ血清。標準的なＥＬＩＳＡもまた使用可能である。例えばＨａｒｏｕｎおよびＥｌ−Ｓａｙｅｄ、Ｊ. Ｃｌｉｎ. Ｂｉｏｃｈｅｍ. Ｎｕｔｒ. ４０：５６−６１、２００７年参照。電気泳動試験もまた、生物学的流体中の免疫グロブリンの量を求めるために使用することができる。
【００９３】
幾つかの実施形態においては、免疫グロブリン(例えば免疫グロブリンのＩｇＧアイソタイプ)が抽出された後に残る生物学的流体(ＩｇＧ低減またはＩｇＧ欠乏生物学的流体と称されてよい)が収集される。幾つかの実施形態においては、ＩｇＧ欠乏生物学的流体は廃棄される。幾つかの実施形態において、ＩｇＧ欠乏生物学的流体は廃棄されず、さらに処理を行って非免疫グロブリン成分(例えばアルブミン)を除去することができる。
【００９４】
幾つかの実施形態においては、免疫グロブリンを富化させるために、免疫グロブリン(例えば免疫グロブリンのＩｇＧアイソタイプ)を含有する生物学的流体から取り出された非免疫グロブリン成分は廃棄される。幾つかの実施形態においては、生物学的流体から取り出された非免疫グロブリン成分は廃棄されない。例えば、アルブミン(血液の非免疫グロブリン成分)はそれ自体価値があり、将来さらに処理して使用するために貯蔵しておいてよい。
【００９５】
本願で使用するところでは、「抽出する」は単純に、抽出された成分(例えばＩｇＧまたは非免疫グロブリン成分)がその成分を含有している組成物(例えば生物学的流体)から取り出されることを意味している。本願で記載する方法を使用すると、抽出は、リガンドに対して標的成分を非共有結合するのに十分な条件下で、生物学的流体を標的成分(例えばＩｇＧまたはアルブミン)に特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体と接触させることによって行うことができる。
【００９６】
「非共有結合するのに十分な条件下」は単純に、処理中の生物学的流体中にある標的成分(例えばＩｇＧ分子またはアルブミンのような非免疫グロブリン成分)が、その成分と特異的に結合するリガンドに対して非共有結合可能な条件を意味していることに留意すべきである。例えば、幾つかの実施形態において、リガンドがＩｇＧ分子に対して特異的に結合する場合、そのリガンドとＩｇＧ分子は液体(例えば生物学的流体)中にあってよく、そして非共有結合するのに十分な条件下では、その液体はリガンドおよびＩｇＧ分子のｋon／ｋoff値よりも速くは移動(例えば流動)せず、従ってＩｇＧ分子はリガンドに対して非共有結合することができる。別の例では、リガンドは全く流動せずともよく、そして非共有結合するのに十分な条件は単純に、リガンドおよび標的成分(例えばＩｇＧ分子またはアルブミン)が相互に非共有結合を結合することができる条件を意味する。かくして、非共有結合するのに十分な条件には、限定するものではないが、液体の適切な流速、リガンドが共有結合した固体支持体が容器内にある場合にはその容器を通過する液体の流れによって生成される適切な背圧、適切な温度(例えば約４℃から３７℃の間、または約２０℃から約２５℃の間)、適切なｐＨ(例えば約６.５と８.５の間、または約７.０と８.０の間)、および適切な浸透圧濃度(例えば等張または僅かに低張または高張)などが含まれる。
【００９７】
同様に、「非共有結合されたＩｇＧがリガンドから放出される条件下」によっては単純に、リガンドに非共有結合された標的成分(例えばＩｇＧ分子)がリガンドから離脱して、例えば溶出液中へと放出(すなわち溶出)可能であることが意味される。例えば、非共有結合されたＩｇＧがリガンドから放出される条件の幾つかの実施形態において、溶出液はリガンドおよびＩｇＧ分子のｋon／ｋoff値よりも速くは移動(例えば流動)せず、ＩｇＧ分子はリガンドから溶出液中へと離脱可能である。別の例では、非共有結合されたＩｇＧがリガンドから放出される条件は単純に、溶出液の適切な容積、溶出液の適切なｐＨ、および溶出液中のオスモライトの適切な濃度である。例えば、ＩｇＧとリガンドの間の非共有結合がイオン結合である場合、溶出液は、イオン結合中のイオンと競合し結合を破るのに十分に高い濃度の適切なイオン(例えばナトリウムイオンおよびクエン酸イオン)を有してよい。かくして非共有結合されたＩｇＧがリガンドから放出される条件には、限定するものではないが、溶出液の適切な流速、リガンドが共有結合した固体支持体が容器内にある場合にはその容器を通過する溶出液の流れによって生成される適切な背圧、溶出液の適切な温度(例えば約４℃から３７℃の間、または約２０℃から約２５℃の間)、溶出液の適切な容積、溶出液の適切なｐＨ(例えば約６.５と８.５の間、または約７.０と８.０の間)、および溶出液の適切な浸透圧濃度などが含まれる。
【００９８】
本願で使用するところでは、用語「免疫グロブリン」はＢリンパ球によって産生されるタンパク質を意味しており、その抗原結合部位を介して標的(抗原と呼ばれる)と特異的に結合可能である。用語「免疫グロブリン」は用語「抗体」と互換性がある。免疫グロブリンは、抗原結合部位および免疫グロブリンと免疫細胞および免疫系中の他のタンパク質との相互作用を媒介するＦｃ部位を含む、個別の部位を有している。例えば、ＩｇＥのＦｃ部位は、マスト細胞上に発現されるＦｃイプシロン受容体に対して高い親和性をもって結合する。ヒトの免疫グロブリンには５つのアイソタイプ、すなわちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがある。血液血漿中で最も一般的な種類の免疫グロブリンはＩｇＧであり、これは４つのサブクラスを有する(すなわちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４)。ＩｇＧは(その４つのサブクラスにおいて)、浸入してくる病原菌に対する抗原に基づく免疫の大部分を提供し、また母体の胎盤を通して胎児へと移って受動免疫を与えることができる。
【００９９】
用語「非免疫グロブリン」成分または分子は単純に、免疫グロブリンではない、生物学的流体中における任意の物質である。この発明の幾つかの実施形態において、これらの非免疫グロブリンは生物学的流体から取り出されて、免疫グロブリンの富化が行われる。非限定的な非免疫グロブリン成分には、アルブミン、凝固カスケードタンパク質(例えばファクタＸ、ファクタＶＩＩ)、フィブリノーゲン、ホルモン、インシュリン、脂質、ビタミン、補体カスケードタンパク質(例えば補体成分３)、およびＣ反応性タンパク質が含まれる。
【０１００】
本願で使用するところでは、「生物学的流体」は、ヒトまたは家畜(例えばウシ、ヤギ、ヒツジ、その他)のような脊椎動物から導出される任意の流体を意味している。生物学的流体には、限定するものではないが、全血、全血の成分(例えば血漿および血清)、唾液、乳、精液、涙、尿、および肝臓によって産生される胆汁およびリンパ液(例えば間質液から形成され毛細リンパ管に集められる)のような、種々の臓器からの流体が含まれる。これらの生物学的流体はすべてＩｇＧを含有しうるから、これらの流体もまた、ＩｇＧを含有すると見られる生物学的流体と称されてよい。
【０１０１】
「全血」は単純に、患者またはドナーから取り出された状態の血液を意味する。全血には成分を添加することができるが、全血に存在している成分はそこから除いてはならない。全血に添加することのできる成分には、限定するものではないが、ヘパリンまたはクエン酸ナトリウムのような抗凝固剤、および例えば米国特許第８,７０９,７０７号に記載の血液貯蔵液および添加溶液が含まれ、またＣＰＤ(クエン酸リン酸デキストロース)、ＡＣＤ(クエン酸デキストロース；アフェレーシス手順に際して一般的に添加される)、ＳＯＬＸ(R)が含まれる。全血から成分(例えば血小板または血漿)が取り出される場合、その成分は血液成分と称されてよく、残りの血液成分は「成分低減」または「成分欠乏」(例えば血小板低減血液血液またはＩｇＧ低減血液)と称されてよい。
【０１０２】
上記した任意の生物学的流体であって成分が欠乏されたものは、本願で用いられる用語では生物学的流体と見なされることに留意すべきである。従って、生物学的流体の１つの非限定的な例は、血小板が取り出された後の全血中に残る流体である。この流体(赤血球、非血小板ルーコサイト、および血漿を含む)は生物学的流体と見なされ、「血小板低減血液」または「血小板欠乏血液」と称されてよい。全血から特定の成分が取り出された場合、残る成分は富化される。かくして「多血小板血漿」は、本願でこの用語が用いられるところでは、別の生物学的流体である。別の非限定的な生物学的流体は、主として血漿を含む赤血球欠乏およびルーコサイト欠乏流体であるが、僅かな赤血球およびルーコサイトも含有している。別の非限定的な生物学的流体は血清(すなわち全血が凝固した後に残る液体)である。別の非限定的な生物学的流体は精子低減精液(例えば低減された数の精子細胞を有する精液)である。別の非限定的な生物学的流体は脂質低減乳(例えばスキムミルクに類似のもの)である。
【０１０３】
幾つかの実施形態において、生物学的流体は全血、または血漿、多血小板血漿または血清のような全血成分である。幾つかの実施形態においては、全血の成分(例えば血漿)はアフェレーシスの間にドナーから収集される。
【０１０４】
例えば、ヘモネティクス社のＭＣＳ(R)＋９０００モービル血小板収集システム(図１参照)またはヘモネティクス社のＰＣＳ(R)２システム(図２参照)のような商業的に入手可能なアフェレーシスシステムは現在、血小板および血漿をそれぞれ分離するために使用されている。血漿のような血液成分は、アフェレーシスの間に収集可能であり、そして免疫グロブリンは血液成分から精製可能である。
【０１０５】
「リガンド」によって意味するものは、タンパク質(例えば抗体またはバクテリアタンパク質)、炭水化物、糖のような分子、または固体支持体に共有結合した任意の有機分子または無機分子である。幾つかの実施形態において、固体支持体に対する共有結合は、リガンド上のカルボキシル基を介して行われる。幾つかの実施形態において、共有結合されたリガンドは、免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体と接触される固体支持体の表面を被覆する(すなわちリガンドが表面を被覆する)。幾つかの実施形態においては、共有結合したリガンドは、免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体と接触するようにされる固体支持体の表面の一部分だけを被覆する。
【０１０６】
本願で使用するところでは、「固体支持体」によって意味するものは、平坦、円形、球形、凹状、凸状その他を含む任意の形状の、プラスチック、繊維状高分子材料、多糖類、ガラス、または金属のような、任意の種類の固体である。幾つかの実施形態において、固体支持体は剛性であることができ、または可撓性であることができる。幾つかの実施形態において、固体支持体は平坦または比較的平坦である。例えば、スライド支持体は、スライドガラスまたはスライドプラスチックであってよい。もちろん、固体支持体が２つの表面を有し(例えばガラス板)、これらの表面の１つだけがＩｇＧを含有すると見られる生物学的流体と接触される場合には、生物学的流体と接触するその表面(またはその表面の一部)だけがリガンドと共有結合する。
【０１０７】
幾つかの実施形態において、固体支持体は繊維状高分子材料であり、限定するものではないが、ポリエステル繊維、ポリウレタン、ポリプロピレンオキシド(ＰＰＯ)およびポリエチレンオキシド(ＰＥＯ)の混合物、ＲＣＳ媒体(ポリエチレンオキシドとポリプロピレンオキシドのポリマーブレンド)、ポリエステル、その他が含まれる。
【０１０８】
リガンドと固体支持体の間の共有結合の種類は、使用されている固体支持体、特にリガンドが共有結合する固体支持体の表面の材料に依存することに留意すべきである。例えば、固体支持体(またはその表面)は、非常に高濃度のＨＥＭＡ(ヒドロキシメチルメタクリレート)および非常に少ない量のＭＡＡ(メタクリル酸)がグラフトした(ラジカル重合技術により)材料であるＬＲＦＸＬ Ｌａｙｅｒ ＃１であってよい。ＬＲＦＸＬ Ｌａｙｅｒ ＃１により作成された(または被覆された表面を有する)固体支持体における主たる官能基はカルボキシル基であり、また幾らかの少量のヒドロキシル基を有している。
【０１０９】
別の例では、固体支持体(またはその表面)はＬＲＦＸＬ Ｌａｙｅｒ ＃９であってよく、これは高濃度のＨＥＭＡおよび少しの量のＭＡＡがグラフトされた材料である。ＬＲＦＸＬＬａｙｅｒ ＃９により作成された(または被覆された表面を有する)固体支持体における主たる官能基はカルボキシル基であり、また幾らかの少量のヒドロキシル基を有している。
【０１１０】
別の例では、固体支持体(またはその表面)はＷＢＦであってよく、これはアルゴンおよびアンモニアでガスプラズマ処理された材料である。ＷＢＦにより作成された(または被覆された表面を有する)固体支持体における主たる官能基はアミンである。
【０１１１】
さらに別の例では、固体支持体(またはその表面)はＢＰＦ４であってよく、これは高濃度のメチルメタクリレート(ＭＭＡ)と低濃度のＨＥＭＡがグラフトされた材料である。ＢＰＦ４により作成された(または被覆された表面を有する)固体支持体における主たる官能基は殆どがヒドロキシル基であり、また幾らかの少量のカルボキシル基を有している。
【０１１２】
米国特許第５,３４４,５６１(参照によってその全体を本願に取り入れる)は、ＬＲＸＬ Ｌａｙｅｒ ＃１、ＬＲＦＸＬ Ｌａｙｅｒ ＃９、ＷＢＦ、およびＢＰＦ４に包含される化学作用を記載している。しかしながら当業者は、免疫グロブリンに対して特異的に非共有結合可能なリガンドに共有結合するために、任意の固体支持体または表面を使用可能であることを容易に理解するであろう。上記に羅列した材料の例(例えばＬＲＸＬ Ｌａｙｅｒ ＃１、ＬＲＦＸＬ Ｌａｙｅｒ ＃９、ＷＢＦ、およびＢＰＦ４)は非限定的なものであり、任意の材料(例えばプラスチック、ポリマー、ガラス、金属、その他)を本開示による固体支持体として使用可能である。例えば、参照によってそれらの全体を本願に取り入れるＰＣＴ国際公開第ＷＯ２００５／０７３７１１、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ２００４／０２４３１８；米国特許第６,４９８,２３６号、および米国特許第７,１４４,７４３を参照のこと。
【０１１３】
幾つかの実施形態において、固体支持体はカラムの側部の内側のように、凹状であることができる。幾つかの実施形態において、固体支持体は球形のビーズ(またはほぼ球形のビーズ)の表面のように、凸状であってよい。固体支持体は多孔質であってよいことに留意されたい。例えば、固体支持体は多孔性ビーズであってよく、固体支持体の幾らか(例えばビーズの表面)は凸状であってよく、固体支持体の幾らか(例えばビーズの細孔中)は凹状であることができる。
【０１１４】
幾つかの実施形態において、固体支持体はビーズである。非限定的なビーズの例は、金属ビーズ(例えば磁性ビーズ)、ポリマービーズ(例えばポリスチレンビーズまたはポリプロピレンビーズ)、多糖類ビーズ(例えばセルロースビーズまたはアガロースビーズ)、および他の有機材料のビーズ(澱粉ビーズ、寒天ビーズ、デキストランビーズを含む)、および置換または未置換のポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリビニルアルコールのようなポリビニル親水性ポリマー、ポリスチレン、ポリスルホン、およびスチレンとジビニルベンゼンのコポリマー、およびこれらの混合物などの親水性合成ポリマーである。これらのビーズはそれら自体が多孔質であってよい。ビーズのような固体支持体用の他の材料は、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ２０１２／１１８７３５に記載されており、これは参照によってその全体を本願に取り入れる。
【０１１５】
ビーズ(またはビーズでない固体支持体)の材料は、生物学的流体から免疫グロブリン(ＩｇＧのような)を抽出するため、または非免疫グロブリン成分(例えばアルブミン)を抽出するために、生物学的流体をどのように処理するかに依存していることが理解されよう。例えば、ポリスチレンビーズ(直径約４０ミクロン)は高い流量に耐えることが知られており、これは例えば、ビーズを収容している容器(バッグまたはカラムのような)を通して生物学的流体を高い流量で押し流す場合に有用でありう。幾つかの実施形態において、ビーズの直径は約５００マイクロメートル(μｍまたは「ミクロン」)未満である。幾つかの実施形態において、ビーズの直径は約３０ミクロンから約３００ミクロンの範囲にある。幾つかの実施形態において、ビーズの直径は約３０ミクロンから約１５０ミクロンの範囲にある。幾つかの実施形態において、ビーズの直径は約３５ミクロンから約１００ミクロンの範囲にある。幾つかの実施形態において、ビーズの直径は約３５ミクロンから約７５ミクロンの範囲にある。幾つかの実施形態において、ビーズの直径は約４０ミクロンから約６０ミクロンの範囲にある。もちろん、固体支持体がビーズである場合、ビーズの直径は３５ミクロンより小さくてよく、および／または１００ミクロンより大きくてよい。ビーズは固体または多孔質であってよい。ビーズが固体であるか多孔質であるかに関わらず、リガンドはビーズの表面の一部、またはビーズの表面の全部に共有結合してよい。同様に、任意の固体支持体について(例えばガラス板)、リガンドは、免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体(例えばＩｇＧ)と接触することになる、固体支持体の表面の一部または固体支持体の表面全部と共有結合してよい。
【０１１６】
これらの実施形態において、ビーズ、例えば多孔質のビーズは、例えば少なくとも約４０ｍ２／ｇから約７００ｍ２／ｇの表面積を有しうるが、幾つかの実施形態においては、表面積は約４０ｍ２／ｇ未満または約７００ｍ２／ｇを超えることができる。幾つかの実施形態において、ビーズは少なくとも約５０ｍ２／ｇの表面積を有する。
【０１１７】
幾つかの実施形態においては、例えば固体支持体をバッファ(例えばリン酸緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)、抗酸化剤(例えば生物学的流体の所望の成分、例えば赤血球に対する酸化損傷を低減させるための、Ｎ−アセチル−システイン(ＮＡＣ)酸化防止剤の如きであり、例えば約１から約５０ｎｍの範囲にある)、赤血球添加剤溶液(例えば米国特許第８,７０９,７０７号に記載された溶液の１つ)、および／または血小板添加剤溶液(例えば米国特許第４,６９５,４６０号；米国特許第４,４４７,４１５号；Ｏｓｓｅｌｅａｒら、Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ４８：１０６１−１０７１、２００８年；Ｏｓｓｅｌｅａｒら、Ｖｏｘ Ｓａｎｇ ９４：３１５−２０３、２００８年)で濡らすことにより、生物学的流体を固体支持体と接触状態に置く前に、固体支持体を濡らすことができる。
【０１１８】
免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体(例えばＩｇＧ)と接触することになる固体支持体の表面の全部または殆ど(例えば少なくとも約７５％またはそれ以上)がリガンドと共有結合されている場合には、その固体支持体はリガンドで被覆されていると称されてよいことに留意すべきである。リガンドで被覆されている固体支持体(例えばビーズ)とは、ＩｇＧのような免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体と接触することになる固体支持体の表面に対して、リガンドが共有結合されている(すなわち共有的に取着している)ことを意味していることが理解されよう。
【０１１９】
幾つかの実施形態において、免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)に特異的に結合するリガンド、または非免疫グロブリン成分(例えばアルブミン)と特異的に結合するリガンドと共有結合している固体支持体は、容器内にあってよい。適切な容器には、バッグ、カラム、ボックス、チューブ、その他が含まれる。容器は、免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体を受け入れるための入口開口と、生物学的流体が容器内で固体支持体と接触した後に免疫グロブリン欠乏(または低減)生物学的流体を放出するための出口開口とを有してよい。幾つかの実施形態において、固体支持体は、免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体と接触する、容器の内部表面である。幾つかの実施形態において、固体支持体は、ＩｇＧのような免疫グロブリンと特異的に結合するリガンドに共有結合されたビーズ(例えば磁性ビーズまたはポリマービーズ)である。
【０１２０】
かくして別の側面において、この発明はＩｇＧと特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体を含む容器を提供し、ここでその容器は、アフェレーシスシステム(またはアフェレーシス装置)において使用するように構成される。幾つかの実施形態において、容器はカラムである。幾つかの実施形態において、容器はバッグである。
【０１２１】
幾つかの実施形態において、非ＩｇＧ成分(例えばアルブミンまたはファクタＩＸ)と特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体は、容器内にあってよい。適切な容器には、バッグ、カラム、ボックス、チューブ、その他が含まれる。容器は、免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体を受け入れるための入口開口と、生物学的流体が容器内で固体支持体と接触した後に非ＩｇＧ欠乏(または低減)生物学的流体を放出するための出口開口とを有してよい。幾つかの実施形態において、固体支持体は、免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体と接触する、容器の内部表面である。幾つかの実施形態において、固体支持体は、非ＩｇＧ成分と特異的に結合するリガンド(例えばリガンドはアルブミン特異抗体である)に共有結合されたビーズ(例えば磁性ビーズまたはポリマービーズ)である。
【０１２２】
かくして、さらに別の側面において、この発明は、非ＩｇＧ成分に特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体を含む容器を提供する。幾つかの実施形態において、その容器は、アフェレーシスシステム(またはアフェレーシス装置)において使用するように構成される。幾つかの実施形態において、容器はカラムである。幾つかの実施形態において、容器はバッグである。
【０１２３】
「アフェレーシス装置またはシステムで使用するように構成される」によって単純に意味されるのは、その容器がシステムのチューブやアダプターと適合性のある開口を有しており、システムと「インライン」で使用可能であるということである。換言すれば、「構成される」は単純に、示された物体(例えばカラムまたはバッグ)が、目的に沿うように何らかの仕方で適合または修正されることを意味している。例えば、ある容器がＰＣＳ(R)２血漿フェレーシス装置で使えるように構成される場合、それは単純に、例えばＰＣＳ(R)２血漿フェレーシス装置のアダプターに接続可能なアダプター(例えばルアーロックアダプター)でカラムの入口ポートおよび出口ポートを修正することにより、その容器がＰＣＳ(R)２血漿フェレーシス装置に接続されるように適合されることを意味している。しかしながら、この容器は任意のアフェレーシス装置またはシステムについて使用可能であることが理解されねばならない。
【０１２４】
例えば、容器の入口開口および出口開口は、ルアーロックアダプターで適合されて、アフェレーシスシステムにおいて使用されるチューブを受け入れるようにしてよい。１つの非限定的な例として、ヘモネティクス社(米国マサチューセッツ州ブレイントリー)によって販売されているＰＣＳ(R)２血漿フェレーシスシステムでは、血液適合性のあるチューブが遠心分離ボウルを血漿収集バッグに接続している。免疫グロブリン(ＩｇＧのような)に特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体、または非免疫グロブリン成分(アルブミンの如き)と特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体を含む容器は、遠心ボウルからのチューブが容器の入口開口に取り付けられ、血漿収集バッグからのチューブが容器の出口開口に取り付けられるようにして、チューブに接続されてよい。そうした接続を示す１つの概略的な表示が、図１０Ａに描かれている。容器は従って、システムの他の部品と「インライン」または「オンライン」状態にあり、システムの１つの部品(例えば遠心ボウル)から出てくる流体は、閉鎖系内に存在しない状態に曝露されることなしに、容器に流入することができる。このことは、システムにおける生物学的流体および他の流体(例えば抗凝固剤流体、溶出液、その他)の無菌性の喪失を防止する。
【０１２５】
系(システム)に関して用語「閉鎖」は、系の無菌完全性を損なう必要なしに、生物学的流体(例えばドナーの血液、血液サンプル、および／または血液成分)の収集および処理(そして所望ならば操作、例えば一部の分離、成分への分離、濾過、貯蔵、および保存)を可能にする系を意味することに留意すべきである。閉鎖系は、当初から作成されたもの、または無菌ドッキング装置(例えば米国特許第４,５０７,１１９号、米国特許第４,７３７,２１４号、および米国特許第４,９１３,７５６参照、これらの全体は参照によって本願に取り入れられる)を使用して系の接続の結果であることができる。
【０１２６】
かくして、さらに別の側面において、この発明は、(ａ)免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)をリガンドに非共有結合するのに十分な条件下において、免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体(例えばＩｇＧ)を固体支持体と接触させ；そして(ｂ)非共有結合された免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)がリガンドから溶出液へと放出する条件下において容器内の固体支持体を溶出液と接触させて免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)を含有する溶出液を得ることを含む方法(例えば部分的に自動化された方法または全体的に自動化された方法)において、生物学的流体中に存在する少なくとも５５％の免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)を抽出するように構成されたアフェレーシスシステムを提供し、このシステムは免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)と特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体を含む容器を包含する。
【０１２７】
別の側面において、この発明は、(ａ)リガンドに対する非免疫グロブリン成分の非共有結合に十分な条件下において、免疫グロブリンを含有すると見られる生物学的流体(例えばＩｇＧ)を容器内の固体支持体と接触させ；そして(ｂ)非免疫グロブリン欠乏生物学的流体を容器から収集し、この非免疫グロブリン欠乏生物学的流体が免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)について富化されている方法(例えば部分的に自動化された方法または全体的に自動化された方法)において、生物学的流体中に存在する免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)の少なくとも５５％を富化させるよう構成されたアフェレーシスシステムを提供し、このシステムは非免疫グロブリン成分(アルブミンの如き)と特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体を含む容器を包含する。
【０１２８】
幾つかの実施形態において、容器はカラムである。幾つかの実施形態において、容器はバッグである。
【０１２９】
種々の実施形態において、容器の一方または双方、およびアフェレーシスシステムは、容器(例えばカラムまたはバッグ)を通って流れる流体を、約５０ｍｌ／分から約１５０ｍｌ／分の間の流量で支えるように構成される。例えば、容器を通って流れる流体の流量は、約６０ｍｌ／分から約１３０ｍｌ／分の間であってよい。幾つかの実施形態において、容器の一方または双方、およびアフェレーシスシステムは、容器(例えばカラムまたはバッグ)を通って流れる生物学的流体を、約５ｍｍＨｇから約３００ｍｍＨｇの間の背圧で支えるように構成される。例えば、背圧は約１０ｍｍＨｇから約１５０ｍｍＨｇの間、または約１０ｍｍＨｇから約１２０ｍｍＨｇの間、または約１０ｍｍＨｇから約１００ｍｍＨｇの間、または約３０ｍｍＨｇから約１２０ｍｍＨｇの間、または約５０ｍｍＨｇから約１００ｍｍＨｇの間であってよい。
【０１３０】
幾つかの実施形態において、アフェレーシスシステムは、生物学的流体中に存在するＩｇＧのような免疫グロブリンの少なくとも５５％を抽出または富化するように構成される。幾つかの実施形態において、アフェレーシスシステムは、生物学的流体中に存在するＩｇＧのような免疫グロブリンの少なくとも６０％を抽出または富化するように構成される。幾つかの実施形態において、アフェレーシスシステムは、生物学的流体中に存在するＩｇＧのような免疫グロブリンの少なくとも７０％を抽出または富化するように構成される。幾つかの実施形態において、アフェレーシスシステムは、生物学的流体中に存在するＩｇＧのような免疫グロブリンの少なくとも８０％を抽出または富化するように構成される。幾つかの実施形態において、アフェレーシスシステムは、生物学的流体中に存在するＩｇＧのような免疫グロブリンの少なくとも９０％を抽出または富化するように構成される。幾つかの実施形態において、アフェレーシスシステムは、生物学的流体中に存在するＩｇＧのような免疫グロブリンの少なくとも９５％を抽出または富化するように構成される。幾つかの実施形態において、アフェレーシスシステムは、生物学的流体中に存在するＩｇＧのような免疫グロブリンの少なくとも９８％を抽出または富化するように構成される。
【０１３１】
幾つかの実施形態において、容器の入口開口は、容器内への有核血液細胞(例えば未成熟赤血球または単球)の侵入を阻止するのに十分に小さな孔径のフィルターを含むように適合(例えば構成)されている。幾つかの実施形態において、容器の出口開口は、容器外への有核血液細胞(例えば未成熟赤血球または単球)の放出を阻止するのに十分に小さな孔径のフィルターを含むように適合(例えば構成)されている。幾つかの実施形態において、固体支持体が、免疫グロブリンと特異的に結合するリガンドに共有結合したビーズである場合、容器の入口開口または出口開口の一方または双方は、ビーズの流出を阻止するのに十分に小さな孔径のフィルターを含むように構成される。
【０１３２】
細胞(例えば有核白血球)を阻止するために、フィルターの孔径は、細胞の平均径よりも小さくてよいことに留意されたい。全血を循環している最大の白血球である単球の平均径は、１５μｍから約３０μｍである。従って、容器中への単球の通過を阻止するために、フィルターは直径が１５μｍより小さい孔径(例えば約１０〜１２μｍの間の孔径)を有してよい。もちろん、単球よりも小さな細胞(例えば２〜３μｍの平均径を有する血小板)が容器から出入りすることを阻止することが望ましい場合には、容器の入口または出口のそれぞれは、直径１μｍまたはそれ未満の孔径(例えば０.１μｍから１.０μｍの間の孔径)を有するフィルターを含むように適合されてよい。
【０１３３】
「特異的に結合」は、リガンドが特定の標的(例えばＩｇＧ分子のような免疫グロブリンまたはアルブミン分子のような非免疫グロブリン)に対し、約５×１０−８(すなわち５０ｎＭ)未満、約１×１０−８(すなわち１０ｎＭ)未満、または約５×１０−９(すなわち５ｎＭ)未満、または約１×１０−９(すなわち１ｎＭ)未満の平衡解離定数(ｋＤ)でもって非共有結合することを意味している。リガンドの標的(例えば免疫グロブリン)に対する特異的な結合は、標的分子の任意の部分(例えば免疫グロブリンのＦｃ部位または免疫グロブリンの抗原結合部位)で行われることができる。幾つかの実施形態において、リガンドは免疫グロブリンの重鎖の定常部に対して特異的に共有結合する。幾つかの実施形態において、リガンドは免疫グロブリンのＦｃ部位に対して特異的に非共有結合する。
【０１３４】
幾つかの実施形態において、リガンドは、免疫グロブリンに特異的に結合する抗体、免疫グロブリンの特定のアイソタイプに特異的に結合する(例えばヒトのＩｇＧまたはヒトのＩｇＭに特異的に結合する)抗体、またはアルブミンのような特定の非ＩｇＧまたは非免疫グロブリン血液成分に特異的に結合する抗体である。非ＩｇＧまたは非免疫グロブリン成分である他の血液成分には、限定するものではないが、Ｃ反応性タンパク質、トランスフェリン、補体タンパク質(例えば補体成分３)、プロトロンビン、血液凝固因子(例えばファクタＶIII、フィブロネクチン、フォンウィレブランド因子)および脂質やコレステロールなどの非タンパク質が含まれる。
【０１３５】
幾つかの実施形態において、リガンドはシバクロンブルーであり、またはアルブミンに特異的に結合可能なその誘導体である。
【０１３６】
シバクロンブルーに共有結合したビーズは商業的に入手可能である。
【０１３７】
ＩｇＧは血液中で、ＩｇＡおよびＩｇＭなどの他の免疫グロブリンアイソタイプよりも一般的である。これの富化を図５で概略的に示す。図５の左端の列(すなわち「通常」)は、技術文献に記載されているような、１リットルの血漿中における典型的なＩｇＧ(緑)、ＩｇＡ(赤)およびＩｇＭ(青)の百分率を示している。血漿フェレーシス(例えばヘモネティクス社により販売されているＰＣＳ(R)２装置を使用して)の後、全免疫グロブリン集団中のＩｇＡおよびＩｇＭの量はは僅かに減少するが、これは恐らく、ＩｇＡおよびＩｇＭが凝集して血漿から分離されてしまい、患者に戻される血漿低減血液中に残存することになるためである(図５の「予備濾過血漿」参照)。
【０１３８】
幾つかの実施形態において、リガンドはバクテリア由来のタンパク質であり、またはそうしたタンパク質から誘導される。幾つかの実施形態において、標的分子が免疫グロブリンである場合、リガンドはブドウ球菌またはレンサ球菌からなる群より選択されるバクテリア由来のタンパク質であり、またはそれらから誘導される。幾つかの実施形態において、標的分子が非免疫グロブリン分子(例えばアルブミン)である場合、リガンドはシバクロンブルーであってよい。
【０１３９】
幾つかの実施形態において、リガンドはプロテインＡ、またはＩｇＧと特異的に結合可能なその誘導体である。プロテインＡは５つのドメインを有する黄色ブドウ球菌のタンパク質であり、このバクテリアの細胞壁に存在し、これらの５つのドメインのそれぞれが免疫グロブリンに対して特異的に結合することができる。プロテインＡは例えば、ＩｇＧ免疫グロブリンのＦｃ部位に対して特異的に強く結合する。プロテインＡは５つのドメインを有することから、それぞれがＩｇＧ分子に対して特異的に結合可能であり、単独のドメイン(またはその誘導体または組換体)は、免疫グロブリンに特異的に結合する限りにおいて、非限定的なリガンドとして機能することができる。かくして用語「プロテインＡの誘導体」は、プロテインＡ誘導体がＩｇＧに特異的に結合可能である限りにおいて、プロテインＡの全長の誘導体、プロテインＡの５つのドメインの１つの誘導体、およびプロテインＡの全長またはプロテインＡのドメインの組換体の誘導体を含む。
【０１４０】
幾つかの実施形態において、リガンドはプロテインＧ、またはＩｇＧに特異的に結合可能なその誘導体である。プロテインＧはＣ群およびＧ群のレンサ球菌に存在する。幾つかの実施形態において、プロテインＧをリガンドとして使用する場合には、天然のプロテインＧは変性して、アルブミン結合ドメインをプロテインＧから取り除くようにされる。かくして用語「プロテインＧの誘導体」は、プロテインＧの誘導体がＩｇＧに特異的に結合可能である限りにおいて、プロテインＧ全長の誘導体および組換体の誘導体、またはアルブミン結合ドメインを欠くプロテインＧの変性種を含むものである。
【０１４１】
プロテインＡおよび／またはプロテインＧに共有結合したビーズは商業的に入手可能である。例えば、メルクミリポア社(マサチューセッツ州ビレリカ)はＥｓｈｍｕｎｏ Ａ媒体という製品を販売しているが、これは黄色ブドウ球菌の組換ドメインＣの５量体と共有結合した(すなわち共有連結した)ポリビニルエーテル系樹脂のビーズ(直径約５０μｍ)である。同様に、サーモフィッシャーサイエンティフィック社(マサチューセッツ州ウォルサム)はＰＯＲＯＳ ＭabＣapture Ａ媒体という製品を販売しているが、これは組換プロテインＡに共有結合した直径約４５μｍのビーズを含んでいる。
【０１４２】
例えば、ＭabＣapture Ａリガンドは血漿からＩｇＧを捕捉するのに非常に効率的であり、そうした捕捉されたＩｇＧは簡単に回収される。図４に示されており以下で実施例１により詳細に記載されるように、１０００ｍｌの血漿(９.８９ｍｇ／ｍｌのＩｇＧを含有)は、２３０ｍＬのＭabＣapture Ａ媒体(すなわち直径が約４５μｍでプロテインＡで被覆されたビーズを含んでいる)を収容しているカラムを通過された。図４中の赤線から理解されるように、ＭabＣapture Ａビーズに結合したＩｇＧはビーズの結合容量まで達せず、実際のところビーズの容量の９５％まで達しない(９５％での破過についての矢印参照)。ｐＨが３.０のクエン酸ナトリウム溶液(本発明の非限定的な溶出液)１００ｍＭを使用してビーズからＩｇＧを溶出させると、ＭabＣapture Ａビーズに捕捉されたＩｇＧの９２％が回収された(図４の緑線参照)。
【０１４３】
プロテインＡ被覆ビーズの使用は、ＩｇＧをＩｇＡおよびＩｇＭよりも著しく富化することが見出されている。この富化を図５に概略的に示す。図５の一番左の列(すなわち「通常」)は、科学文献に記載された１リットルの血漿中におけるＩｇＧ(緑)、ＩｇＡ(赤)およびＩｇＭ(青)の典型的な割合を示している。血漿フェレーシス(例えばヘモネティクス社により販売されているＰＣＳ(R)２装置を使用した)の後、免疫グロブリンの全集団中におけるＩｇＡおよびＩｇＭの量は僅かに減少するが、これは恐らく、ＩｇＡおよびＩｇＭが凝集して血漿から分離されてしまい、患者に戻される血漿低減血液中に残存することになるためである(図５の「予備濾過血漿」列参照)。実施例４において後述するように、プロテインＡ被覆ビーズ(例えばＭabＣapture Ａビーズ)と接触され次いで１００ｍＭのクエン酸ナトリウムで溶出される血漿は、溶出された(すなわち回収された)Ｉｇ集団中のＩｇＡおよびＩｇＭの量が大きく低減されている(図５の「回収されたＩｇＧ」列参照)。最終的に、標的(図５の一番右の列に示されている)はＩｇＡまたはＩｇＭを有しない。
【０１４４】
「精製(された)ＩｇＧ」におけるような「精製された」は、ＩｇＧがＩｇＧ免疫グロブリンの少なくとも９０％(重量で)を含まないことを意味する(例えばＩｇＡおよびＩｇＭの９０％を含まない)。幾つかの実施形態において、精製されたＩｇＧは、ＩｇＧが非ＩｇＧ免疫グロブリンの少なくとも９２％(重量で)を含まないことを意味する。幾つかの実施形態において、精製されたＩｇＧは、ＩｇＧが非ＩｇＧ免疫グロブリンの少なくとも９５％(重量で)を含まないことを意味する。幾つかの実施形態において、精製されたＩｇＧは、ＩｇＧが非ＩｇＧ免疫グロブリンの少なくとも９７％(重量で)を含まないことを意味する。幾つかの実施形態において、精製されたＩｇＧは、ＩｇＧが非ＩｇＧ免疫グロブリンの少なくとも９９％(重量で)を含まないことを意味する。非ＩｇＧ免疫グロブリンは単純に、ＩｇＧ以外の血清型の免疫グロブリンであることに留意されたい。非限定的な非ＩｇＧ免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥである。
【０１４５】
本願の幾つかの実施形態においてはプロテインＡが例示されているが、プロテインＡは単純に、リガンドの非限定的な例であることが理解されるべきである。本願の実施形態において使用するためのリガンドの別の非限定的な例は、シバクロンブルーである。ＭｅｌｏｎＧｅｌ(例えば米国マサチューセッツ州ウォルサムのサーモフィッシャー社によって販売されている特許化学品)のような他のリガンド、プロテインＧ、ラクダ(重鎖)抗体、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体(例えばマウス抗ヒト抗体)、およびメルカプトエチルピリジンのような混合モードリガンド(ＭＥＰ)もまた考慮される。
【０１４６】
図４および図５の結果は、１０００ｍｌの血漿から得られたものであることに留意すべきである。血漿は、標準的なアフェレーシスシステムから得ることができる。
【０１４７】
例えば図６Ａにおいて、精製免疫グロブリンは、血小板フェレーシス(例えばＭＣＳ(R)＋９０００装置を使用して)を受けている患者(またはドナー)から獲得可能である。図６Ａにおいて、血小板が取り出されたならば、残りの血液成分(例えば赤血球、非血小板白血球、および血漿)をさらに処理して(例えば遠心分離または濾過によって)、血漿を取り除くことができる。血漿からはＩｇＧを分離してさらに処理することができ(例えば冷凍または凍結乾燥により)、その結果として精製ＩｇＧ製剤が得られる。残ったＩｇ欠乏血漿(これはもちろん、幾らかのＩｇを依然として有していてよく、従って「Ｉｇ低減血漿」と呼ぶこともできる)は貯蔵し、廃棄し、または図６Ａに示されているように、赤血球および非血小板白血球と混合して、患者(またはドナー)に戻すことができる。
【０１４８】
リガンドと共有結合した固体支持体を、アフェレーシスプロセス自体に取り入れてよいことに留意すべきである。例えば図６Ａに概略的に示された方法においては、ＩｇＧの取り出しを行う工程(すなわち抽出工程)は、血漿をＩｇＧと特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体を含む容器と接触させて血漿からＩｇＧを取り除くことによって行うことができ、そこにおいて容器は、それ自体がアフェレーシスシステムの一部とされる。リガンドからのＩｇＧの溶出は、容器が依然としてアフェレーシスシステムに取着されていて(例えば血液適合性のチューブを介して)依然として「オンライン」である間に行わせることができ、または容器は取り外して「オフライン」とし、リガンドからＩｇＧを溶出させる前にシステムから脱着させることができる。溶出されたＩｇＧは次いでさらに処理して、精製されたＩｇＧ製剤が得られる。
【０１４９】
別の例では、免疫グロブリンは、多血小板血漿から精製し、および／または富化することができる。図６Ｂは、多血小板血漿(ＰＲＰ)を精製するアフェレーシスを受けている患者(またはドナー)から精製ＩｇＧを得ることを示しているが、患者は単純に全血を供与することができ、そこからＰＲＰを製造できることに留意すべきである。換言すれば、ＰＲＰの抽出の後、患者の全血のどの部分または成分も患者に戻す必要はない。各種の機器がＰＲＰを製造可能であり、それにはＢｉｏｍｅｔＧＰＳ ＩＩおよびIII(米国インディアナ州ワルシャウのジンマーバイオメット社)およびハーベスト社(米国コロラド州レイクウッド)のＳｍａｒｔＰｒｅｐ(R)多細胞処理システム等が含まれる。もちろん、標準的な実験室的方法もまた、ＰＲＰの製造に利用可能である。例えば、ＤｈｕｒａｔおよびＳｕｋｅｓｈら、Ｊ. Ｃｕｔａｎ. Ａｅｓｔｈｅｔ. Ｓｕｒｇ. ７(４)：１８９−１９７、２０１４年を参照。ＭＣＳ(R)＋９０００装置のようなアフェレーシスシステムもまた、多血小板血漿を製造し、非血小板細胞(赤血球の如き)を患者やドナーに戻すことができる。図６Ｂに示された非限定的なチェアサイド法は、ＩｇＧのような免疫グロブリンを多血小板血漿から抽出することができる。さらに処理を行った後(例えば凍結)、精製ＩｇＧ製品が得られる。この免疫グロブリン欠乏多血小板血漿は次いでさらに処理して(例えば濾過、バクテリア検出テスト、冷蔵、その他)Ｉｇ欠乏多血小板血漿製剤が製造され、等張食塩水が非血小板細胞と混合されて、これらの細胞が患者に戻される(図６Ｂ参照)。この筋書きにおいて、免疫グロブリンが細胞を含む生物学的流体から抽出される場合(すなわち免疫グロブリンがＰＲＰから抽出される)、ＩｇＧの抽出に使用される、ＩｇＧと特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体を含む容器は、ＰＲＰ中の血小板細胞が容器を閉塞しないように構成されてよい。例えばバッグであって、リガンドと共有結合した固体支持体がバッグの側面の内側表面であるバッグを用いることができる。そうした容器の別のものは、少なくとも２０μｍの直径を有するビーズが充填されたカラムであってよく、そこにおいてビーズは、リガンドが共有結合した固体支持体である。血小板は直径が僅かに約２〜３μｍであるから、血小板はカラムを閉塞することなく、ビーズの間を流動することができる。
【０１５０】
さらに別の例では、血漿フェレーシス(例えばＰＣＳ(R)２装置を用いて)を受けている患者(またはドナー)から、精製免疫グロブリンを得ることができる。図６Ｃの非限定的な例に示されているように、ＩｇＧが抽出される場合、血漿が全血から取り出されたならば、ＩｇＧを血漿から分離することができ、そしてこのＩｇ低減血漿は廃棄してもよく、赤血球および白血球(血小板を含む)と混合して患者(またはドナー)に戻すこともでき、または図６Ｃに示されているように、さらに処理を行って(例えば濾過またはバクテリアの存在に関するテストを行って)、ＩｇＧ欠乏血漿製剤を製造することができる。血漿から抽出されたＩｇＧはさらに処理(例えば凍結)して、精製ＩｇＧ製剤が得られる。
【０１５１】
もちろん、任意の血液供与システムまたはアフェレーシスシステムを修正して、精製免疫グロブリンを製造するようにできることに留意すべきである。図７に示すところでは、チェアサイドのアフェレーシスシステムが描かれており、そこでは全血が患者によって供与され、まずＩｇＧが取り出される。取り出された(抽出された)ＩｇＧは、アフェレーシスシステム内で(図７に示すようにして)、またはシステム外で(例えば血液銀行の設備で)さらに処理して、精製ＩｇＧ製剤を製造することができる。多血小板血漿が次いで、残部から取り出される(すなわち、ＩｇＧ欠乏血漿中の赤血球および白血球の組み合わせから取り出される)。次いで血小板が多血小板血漿から取り出され、これら２つの製剤はさらに処理されて、血小板製剤およびＩｇＧ欠乏血漿製剤が製造される。もちろん、アルブミンまたはファクタＶIIIのような血漿製剤を、ＩｇＧ欠乏血漿から精製することができる。図７のシステムでは、残った赤血球および非血小板白血球の混合物から赤血球が取り出されて、赤血球製剤(例えば濃厚赤血球製剤)が製造される。非血小板白血球のみが残されることになる。これらの白血球はＴリンパ球およびＢリンパ球を含み、これらは抗原特異免疫における中心的存在であるから、ドナーに戻されることが望ましい。図７では、この非血小板白血球はリンゲル液(等張液)と混合されて、アフェレーシスシステムを使用して患者ドナーへと戻るよう投与される。
【０１５２】
患者が自分の非血小板白血球の返血を選択しない場合には、図７の工程の全てはアフェレーシスシステムではなく、血液銀行の設備で行うことができることに留意すべきである。同様に、ＩｇＧを生物学的流体から精製するための本願記載の全ての方法は、アフェレーシスシステムまたは血液銀行の設備のいずれかで実行可能であることに留意すべきである。例えば図７において、患者は単純に、１パイント(０.４７３リットル)の献血を行って立ち去ることができる。この血液は次いで、血液銀行の設備へと移送され、所望の成分(例えばＩｇＧ、血小板、血漿、その他)を抽出することができる。ドナー患者からの血液はまた、他のドナー患者から供与された全血と共にプールすることができ、このプールされた全血から抽出が行われる。
【０１５３】
図６Ａから図６Ｃまたは図７で得られた血漿(例えばＩｇＧ欠乏血漿)が貯蔵され、患者に戻されない場合には、血漿は血漿分画装置またはシステムにおいて分画によってさらに処理し、アルブミン、ファクタＶIIIおよびファクタＩＸのような血液凝固因子、フィブロネクチン、その他を含む、血漿中の種々の成分を分離することができることに留意されたい。もちろん、血漿(例えば免疫グロブリン欠乏血漿)の処理には、バクテリアに関する検査、および／または何らかの残存細胞、分子の塊(例えばタンパク質または脂質)を除去するための濾過を含むことができる。この処理はまた、−２０℃での冷凍または４℃での貯蔵を含むことができる。
【０１５４】
本願に記載のように、固体支持体に共有結合した(「共有的に取着した」ともいう)リガンド(例えばプロテインＡまたはプロテインＧ、またはシバクロンブルー)を使用する任意の方法を使用して、免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)を生物学的流体から精製または抽出可能であり、または生物学的流体から免疫グロブリンを富化することができる。図４および図５に示す結果は(後述する実施例１でより詳細に説明するように)、カラム中のプロテインＡ被覆ビーズを使用して得られているが、本発明はこれに限定されるものではない。例えば、生物学的流体がカラムを通過されるとすれば、リガンドはカラムの内側表面(すなわち、生物学的流体と接触する表面)に共有結合することができる。別の例では、生物学的流体がチューブを通過されるとすれば、リガンドはチューブの内側表面(すなわち、生物学的流体と接触する表面)に共有結合することができる。別の例では、生物学的流体がバッグを通過されまたはバッグに貯蔵されるとすれば、リガンドはバッグの内側表面(すなわち、生物学的流体と接触する表面)に共有結合することができる。
【０１５５】
非限定的な実施形態では、リガンドが共有結合した固体支持体がビーズである場合には、ビーズも同様に、本発明に従って種々に用いることが可能である。例えば、生物学的流体がカラムを通過されるとすれば、ビーズはカラム内に収容することが可能であり、そこにおいてカラムは例えば、ビーズの直径よりも小さな孔径を有するフィルターを入口ポートおよび出口ポートに備える。別の例では、生物学的流体がバッグを通過されまたはバッグに貯蔵される場合には、ビーズは例えばバッグの内側ライニングとしてバッグ内に収容可能であり、ビーズの直径よりも小さな孔径を有するメッシュによってライニング内部に保持される。
【０１５６】
固体支持体がバッグの内側表面またはバッグ内に収容されたビーズのいずれかである場合、等張食塩水のような無菌液または生物学的流体(例えば全血またはその成分)を保持するよう構成された任意のバッグをそのように修正可能である。幾つかの実施形態において、バッグはアフェレーシスシステムにおいて使用するように構成されてよい(例えばバッグはルアーロックを用いるシステムにおいてルアーロックアダプターで改造されてよい)。免疫グロブリンはリアルタイムまたは「チェアサイド」で収集可能であり、その間ドナーは血液(または血小板や血漿のような血液製剤)を供与する処置下にある。標準的な生物学的流体バッグ(多くの場合、血液バッグと呼ばれる)は商業的に入手可能である(例えば米国イリノイ州レイクズーリックのフェンオール社から)。こうしたバッグは、ポリ塩化ビニル(ＰＶＣ)、エチレンブチルアセテートコポリマー(ＥＢＡＣ)樹脂、エチレンメチルアクリレートコポリマー(ＥＭＡＣ)樹脂、可塑化された超高分子ＰＶＣ樹脂、およびエチレンビニルアセテート(ＥＶＡ)のような種々のプラスチックおよび／またはポリマー材料から作成可能であり、および／または、例えばポリオレフィン、ポリウレタン、ポリエステル、およびポリカーボネートから形成可能である。こうしたバッグの非限定的な例が、図８Ａおよび図８Ｂに示されている。図８Ａにおいては、入口ポートおよび出口ポートは各々がバッグの上部に配置されている。図８Ｂにおいては、入口ポートはバッグの上部に配置され、そして出口ポートはバッグの下部に配置されている。
【０１５７】
幾つかの実施形態において、特にリガンドがバッグ内に配置されたビーズに共有結合している場合、バッグの一方または双方の内側表面は、ビーズをバッグ表面に(従ってバッグの空洞部から離して)保持する、多孔質のライニング(またはメッシュ)を有するように構成してよい。幾つかの実施形態において、メッシュライニングの孔径は、リガンド被覆ビーズの直径よりも小さい。同様に、幾つかの実施形態において、バッグの入口ポートおよび／または出口ポートは、ビーズの直径よりも小さな孔径を有するフィルター(フリスとも呼ばれる)で覆われるように適合される。幾つかの実施形態において、メッシュライニングの孔径および／またはフリスの孔径は、有核白血球(例えば単球)の直径よりも小さく、フィルターの孔径は細胞の平均径よりも小さくてよい。全血中を循環している最大の白血球である単球の平均径は、１５μｍから約３０μｍである。従って、フリスおよび／またはメッシュは、直径が１５μｍよりも小さい孔径(例えば約１０〜１２μｍの間の孔径)を有することができる。
【０１５８】
固体支持体が容器(バッグの如き)の内側表面またはバッグのような容器の内部に収容されたビーズのいずれかである場合、等張食塩水のような無菌液または生物学的流体(例えば全血またはその成分)を保持するように構成された任意の容器を改造することができる。幾つかの実施形態において、容器はアフェレーシスシステム(例えば図３に示したＰＣＳ(R)２システム)において使用することができる。幾つかの実施形態において、特に容器がリガンド被覆ビーズを収容している場合には、入口ポートおよび出口ポートは、ビーズの直径よりも小さな孔径を有するフィルター(フリスとも呼ばれる)で覆われるように適合される。免疫グロブリンはリアルタイムまたは「チェアサイド」で収集可能であり、その間ドナーは血液(または血小板や血漿のような血液製剤)を供与する処置下にある。
【０１５９】
容器(例えばバッグ)は任意の材料から構成可能であり、それには限定するものではないが、プラスチック、ポリカーボネート、ガラス(または強化ガラス)、ステンレス鋼、およびその他が含まれる。
【０１６０】
固体支持体がカラムの内側表面またはカラム内に収容されたビーズのいずれかである場合、等張食塩水のような無菌液または生物学的流体(例えば全血またはその成分)を保持するように構成された任意のカラムをそのように改造することができる。幾つかの実施形態において、カラムはアフェレーシスシステム(例えば図３に示したＰＣＳ(R)２システム)において使用することができる。幾つかの実施形態において、特にカラムがリガンド被覆ビーズを収容している場合には、入口ポートおよび出口ポートは、ビーズの直径よりも小さな孔径を有するフィルター(フリスとも呼ばれる)で覆われるように適合される。免疫グロブリンはリアルタイムまたは「チェアサイド」で収集可能であり、その間ドナーは血液(または血小板や血漿のような血液製剤)を供与する処置下にある。
【０１６１】
カラムは任意の材料から構成可能であり、それには限定するものではないが、プラスチック、ポリカーボネート、ガラス(または強化ガラス)、ステンレス鋼、およびその他が含まれる。
【０１６２】
幾つかの実施形態において、カラムはアキシアルカラム(例えばそこでは生物学的流体がカラムの長さに沿って流れる)であり、またはラジアルフローカラムであって、そこでは生物学的流体はカラムを円形のパターンで流れる。特に、カラムがアフェレーシスシステムにおいて使用するように構成されている場合、カラムを通って流れる生物学的流体によって生成される背圧は、ＩｇＧのリガンドに対する結合効率(非共有結合を介して)に影響しうる。例えば、固体支持体がリガンド被覆ビーズであり、そしてビーズがアキシアルカラム内に配置される場合には、背圧を高い可能性がある。例えば、直径がほぼ４０〜８０ミクロンのリガンド被覆ビーズを収容しているアキシアルカラムを通って、流量が５０ｍｌ／分から１２０ｍｌ／分の場合、背圧は大体１,０００ｍｍ水銀でありうる。
【０１６３】
アキシアルフローにおける決定因子の１つはカラム内の樹脂の大きさであるから、アキシアルフローカラムの高さおよび／または直径は重要でないことに留意すべきである。例えば２５０ｍＬの樹脂(例えばリガンド被覆ビーズを含む)がＧＥ５０／２０カラム(米国ペンシルバニア州ピッツバーグのＧＥヘルスケアライフサイエンス社から商業的に入手可能)内に充填される場合、１０００ｍＬの血漿を用いたプロセスの開始時点における背圧は１０００ｍｍＨｇを超える。従ってアキシアルフローについては、カラムは約１０から３００ｍｍの直径と、１０ｍｍから３００ｍｍの高さ(または長さ)を有することができる。アキシアルカラムにおける背圧は、５０ｍｍから２００ｍｍよりも大きな内径を有するカラムを使用することにより、潜在的に低減されうる。しかしながら、このような大きさのカラムは、ＰＣＳ(R)２装置(ヘモネティクス社、米国マサチューセッツ州ブレイントリー)のような血漿フェレーシス装置について使用するには実用的でない。幾つかの実施形態において、カラムがアキシアルカラムである場合、カラムは５０ｍｍの内径と、２００ｍｍの長さ(または高さ)を有する。幾つかの実施形態において、カラムがアキシアルカラムである場合、カラムは１０ｍｍの内径と、２０ｍｍの長さを有する。
【０１６４】
幾つかの実施形態においては、カラムはラジアルフローカラムである。ラジアルカラムでは、背圧は著しく低減され、従ってリガンドに対するＩｇＧの非常に良好な結合効率(非共有結合を介しての)を得ることができる。例えば、直径がほぼ４０〜８０ミクロンのリガンド被覆ビーズを収容したラジアルカラムを介した流量が５０ｍｌ／分から１２０ｍｌ／分である場合、背圧はおおよそ５０ｍｍ水銀、または５０〜１５０ｍｍ水銀の間にあってよい。図９Ａ〜図９Ｃは、本発明の種々の実施形態において使用することのできる、リガンド被覆ビーズで充填された非限定的なカラムの概略を示している。図９Ａ〜図９Ｃに示されたカラムは、血漿アフェレーシス装置または血小板フェレーシス装置のようなアフェレーシス装置と関連して作動するように設計されている。幾つかの実施形態において、カラムはＰＣＳ(R)２血漿フェレーシス装置(ヘモネティクス社より)と関連して作動するように構成されている。ＰＣＳ(R)２血漿フェレーシス装置における最大の背圧は１００ｍｍ水銀程度であるから、幾つかの実施形態において、ＰＣＳ(R)２装置について使用されるカラムはラジアルフローカラムである。幾つかの実施形態において、カラムはＭＣＳ(R)＋９０００血小板フェレーシス装置(ヘモネティクス社より)と関連して作動するように構成されている。「構成されている」は単純に、意図した対象物(例えばカラムまたはバッグ)が、目的に合うように何らかの仕方で適合または修正されていることを意味する。例えば、容器がＰＣＳ(R)２血漿フェレーシス装置について動作するように構成されている場合、それは単純に、例えば、容器の入口ポートおよび出口ポートをＰＣＳ(R)２血漿フェレーシス装置のアダプターに接続可能なアダプター(例えばルアーロックアダプター)で修正することにより、その容器がＰＣＳ(R)２血漿フェレーシス装置に接続されるよう適合されていることを意味する。しかしながら、この容器は任意のアフェレーシス装置またはシステムについて作動可能であることが理解されねばならない。
【０１６５】
図９Ａ〜図９Ｃについて見ると、非限定的なラジアルフローカラムが、それぞれ血漿を流入させ免疫グロブリン欠乏血漿を流出させるための入口ポートおよび出口ポートという２つのポートを備えて示されている(図９Ａおよび図９Ｂ参照)。図９Ａおよび図９Ｂに示されたカラムは大体、高さが１２ｃｍであり、直径が５ｃｍである。入口ポートおよび出口ポートは両方とも、大体２０〜３０ミクロンの平均孔径を有するフィルター(またはフリス)で改造されている。図９Ａおよび図９Ｂの概略図にはルアーロックアダプターが示されているが、そのカラムが共に使用されるアフェレーシス装置(またはシステム)のチューブシステムのアダプターと適合性のあるアダプターである限り、ポートは任意のアダプターを有することができる。免疫グロブリン欠乏血漿が患者に戻される実施形態においては(例えばアフェレーシスが血小板フェレーシスまたは血漿フェレーシスである場合)、免疫グロブリン欠乏血漿はドナーへと細胞を戻す前に、赤血球および他のドナー細胞(例えば非血小板白血球)と混合されてよい。こうした実施形態は図６および図７のフローチャートに示されている。
【０１６６】
図９Ａは、図９Ｂのカラムから一部を長手方向に除去して示しており、充填されたビーズを図９Ａに見ることかできる。ビーズのベッド高は、図９Ａに示された概略図において大体１ｃｍであり、この概略図は容積２４０ｍｌのＭａｂＣａｐｔｕｒｅＡビーズ(ビーズの平均粒径は約４５ミクロン)を表している。リガンド被覆されたアガロースビーズ(９０ミクロンの平均ビーズ径を有する)も使用可能であることに留意されたい。幾つかの実施形態において、おおよそ５０ミクロンまたはそれ未満のビーズ径が使用される。幾つかの実施形態において、約５０ミクロンまたはそれ未満のビーズ径は、約６０ミクロンよりも大きなビーズ径の場合よりも、より高い効率でのＩｇＧの抽出および回復を可能にする。
【０１６７】
図９Ａおよび図９Ｂのカラムのラジアル的な性質は、図９Ｃに示された図９Ａのスライスにおいて見ることができる。看取可能であるように、カラム内の１ｃｍの高さのベッドはカラムのチューブ状構造内にあり、このチューブ状構造はカラムの高さ全体にわたり、カラムの中心軸の周囲で螺旋をなす。このようにして、２４０ｍｌのＭａｂＣａｐｔｕｒｅＡビーズを、５ｃｍの直径を有する１２ｃｍの高さのカラム内に充填することができる。
【０１６８】
本発明のすべての実施形態において、リガンドに共有結合した固体支持体の量は、任意であってよいことに留意すべきである。幾つかの実施形態においては、処理される生物学的流体(例えば血漿)中のＩｇＧ(または他の免疫グロブリン血清型)の大部分が、生物学的流体から抽出され、またはその中で富化される。かくして種々の実施形態において、本願に記載の方法および装置は生物学的流体中の少なくとも５０％のＩｇＧを抽出または富化し、または生物学的流体中の少なくとも６６％のＩｇＧを抽出または富化し、または生物学的流体中の少なくとも７５％のＩｇＧを抽出または富化し、または生物学的流体中の少なくとも９０％のＩｇＧを抽出または富化し、または生物学的流体中の少なくとも９５％のＩｇＧを抽出または富化する。いったん抽出されたならば、大部分のＩｇＧは本発明に従って回収される。かくして種々の実施形態において、本願に記載の方法および装置は、抽出または富化されたＩｇＧの少なくとも５０％を回収し、または抽出または富化されたＩｇＧの少なくとも６６％を回収し、または抽出または富化されたＩｇＧの少なくとも７５％を回収し、または抽出または富化されたＩｇＧの少なくとも９０％を回収し、または抽出または富化されたＩｇＧの少なくとも９５％を回収する。
【０１６９】
例えば、リガンドに共有結合された固体支持体がプロテインＡ被覆ビーズである場合、そしてビーズがバッグまたはカラム内に収容されている場合、使用されるビーズの量は、最小限の量のリガンドを使用しながらも、最大の免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)を抽出するように修正可能である。リガンドの量を低減させれば、固体支持体から離脱して生物学的流体中へと放出されるリガンドの潜在量を低減させることができるから、このことは有用である。
【０１７０】
免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)が生物学的流体から抽出される、本願に記載の実施形態においては、固体支持体に共有結合したリガンドから放出させて免疫グロブリンを溶出させるために(例えばリガンド被覆ビーズから免疫グロブリンを溶出させるために)、２.０と３.０の間のｐＨを有する溶液が溶出液として使用される。例えば溶出液は、３.０のｐＨを有する１００ｍＭクエン酸ナトリウムであってよい。ＩｇＧが固体支持体に共有結合されたリガンドから溶出液中へと溶出されたなら、溶出液のｐＨは、中和バッファを添加することによって正規化される。「中和バッファ」は、中和バッファが添加される溶液において中性のｐＨ(すなわち６.０と７.０の間のｐＨ)を得るだけの十分に高いｐＨを有する溶液を意味している。幾つかの実施形態において、中和バッファの容積は、溶出された免疫グロブリンを含有している溶出液の容積よりも少ない。例えば、溶出されたＩｇＧが１００ｍｌの１００ｍＭクエン酸ナトリウム中にありｐＨ３.０である場合、ｐＨ８.８の１０ｍｌの１Ｍトリスのような１０％の容積の中和バッファを添加することができ、その結果ｐＨが６から７の間にあり最終容積が１１０ｍｌの回収ＩｇＧの溶液が得られる。非共有結合されたＩｇＧのリガンドから溶出液中への溶出は、免疫グロブリンのリガンドからの静電反発を通じて生じ、それによって免疫グロブリンとリガンドの間の非共有結合が破れて、免疫グロブリンは溶出液中へと放出され、固体支持体に依然として共有結合したリガンドが残される。
【０１７１】
幾つかの実施形態において、容器(例えばバッグまたはカラム)がアフェレーシスシステムの一部である場合、非共有結合された免疫グロブリンのリガンドから溶出液中への溶出は「オンライン」で生ずる(すなわち、溶出液が容器を通過して流れる場合に容器はシステムにまだ取着されている)。幾つかの実施形態において、免疫グロブリンが生物学的流体から抽出される場合、容器は取り外して「オフライン」とされ、従って溶出液が容器を通過して流され、非共有結合された免疫グロブリンをリガンドから溶出させる時点では、もはやアフェレーシスシステムに取着されていない。
【０１７２】
幾つかの実施形態において、溶出液はポンプ(例えば蠕動ポンプ)を使用して容器を通過して流される。幾つかの実施形態において、溶出液を容器を通過させて給送するポンプはアフェレーシスシステムの一部であり、容器を通して給送する前の溶出液を保持するリザーバは、アフェレーシスシステムに取着されておりその一部をなしている。幾つかの実施形態において、溶出液を容器を通過させて給送するポンプはアフェレーシスシステムの一部ではなく、容器を通して給送する前の溶出液を保持するリザーバは、アフェレーシスシステムの一部ではない。
【０１７３】
幾つかの実施形態において、溶出液は重力を使用して、容器を通過して流される。重力を使用して溶出液を容器を通過するよう押しやるためには(例えばクリーンベンチの下におけるような無菌条件で)、容器内の背圧は５０ｍｍＨｇ未満である(例えば０.１ｍｍＨｇ程度に低い)ことに留意すべきである。
【０１７４】
幾つかの実施形態において、溶出は、処理される生物学的流体の全容積が、リガンドに共有結合した固体支持体と接触した後に生ずる。非限定的な例において、図９Ａから図９Ｃに示されリガンド被覆ビーズを収容しているカラムが使用された場合、このカラムの容積は、１リットルの血漿(血漿フェレーシスで典型的に得られる容積)中の全てのＩｇＧに結合する(非共有結合を介して)のに十分なものである。従って、１リットルの血漿の全容積をカラムを通じて流すことができ、次いで溶出液(例えばｐＨ３.０の１００ｍＭクエン酸ナトリウム)を使用して、結合したＩｇＧをカラムから溶出させることができる。
【０１７５】
幾つかの実施形態において、溶出工程(すなわち、リガンドと共有結合した固体支持体に非共有結合した免疫グロブリンを溶出液と接触させる)は、免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)を含有すると見られる生物学的流体の全容積の一部との接触に続いて行われる。溶出工程に続いて、リガンドに共有結合した固体表面は、例えばその表面をｐＨ７.０の１００ｍＭトリス、またはｐＨ７.４のリン酸緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)のような、中性ｐＨを有する溶液(例えば７.０および８.０の間のｐＨを有する溶液)と接触させることにより中和される。中和工程の後、免疫グロブリンを含有する別の一部が、液体中の免疫グロブリンがリガンドと非共有結合可能な条件下において、固体表面と接触するようにされる。この第２の接触工程(第２の付着工程と呼んでよい)の後、第２の溶出工程が行われる。これには、第２の中和工程が続く。付着工程、溶出工程、および中和工程は繰り返して行うことができ、それによって、リガンドに共有結合した固体支持体は再使用またはリサイクルされる。もちろん、これらの工程を繰り返すことのできる回数は、リガンドに共有結合した固体支持体の安定性に依存している。例えば、プロテインＡ被覆ポリスチレンビーズは高い流量に耐え得ることが知られているから、リガンドと共有結合した固体支持体がプロテインＡ被覆ポリスチレンビーズである場合は、このビーズは少なくとも工程のサイクル(すなわち付着、溶出、および中和)３回分、または少なくとも工程の５サイクル分、または少なくとも工程の１０サイクル分、または少なくとも工程の１５サイクル分、または少なくとも工程１５サイクル分、または少なくとも工程２５サイクル分、または少なくとも工程の５０サイクル分、繰り返して使用してよい。固体支持体が血漿フェレーシスと関連して使用される場合には、幾つかの実施形態において、１つの固体支持体が１人のドナーについて使用される。
【０１７６】
例えば、幾つかの実施形態において、発明がリガンド被覆ビーズ(プロテインＡ被覆ビーズの如き)で充填されたカラムの使用を意図している場合、カラムはより小さくてよく、より少ないビーズが充填されていてよい、というのはビーズで充填されたカラムは再使用されるからである。１つの非限定的な例においては、血漿フェレーシス(例えばＰＣＳ(R)２装置を使用して)に際して得られる血漿の平均的な量は８００ｍＬから１０００ｍＬであるから、高さ１２センチメートル、直径５センチメートルで２３０ｍｌのＭabＣapture Ａビーズ(平均径４５ミクロン)を備えたカラムは、その容積の血漿中にある全ての循環免疫グロブリンに結合する能力を有する。カラムが再使用される場合には、カラムはより小さくてよく、使用するビーズの量も低減することができる。例えば、カラムは高さ３センチメートル、直径５センチメートルであってよい。
【０１７７】
リガンドに共有結合した固体支持体を再使用することにより、材料の顕著な低減を達成することが可能であり、その結果コストは低くなり、生物学的廃棄物も少なくなる。
【０１７８】
任意の既存のアフェレーシスシステムを改造して、本願記載の方法および／または装置を取り入れるようにすることができる。そうしたアフェレーシスシステムの２つの非限定的な例は、ヘモネティクス社(マサチューセッツ州ブレイントリー)によって販売されているＰＣＳ(R)２システム、およびヘモネティクス社(マサチューセッツ州ブレイントリー)によって販売されているＭＣＳ(R)＋９０００モービル血小板収集システムである。
【０１７９】
例えば、免疫グロブリンまたは特定のアイソタイプの免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)を分離するためには、ＰＣＳ(R)２システムを改造することができる。米国特許第４,０８６,９２４号、第４,９８３,１５８号、および第６,６２９,９１９号(参照によって本願に取り入れる)は、ＰＣＳ(R)２システムのような血漿フェレーシスシステムの幾つかの側面を記載している。基本的に、ＰＣＳ(R)２システムは、静脈針(例えば１６〜１７のゲージを有する)を介して患者ドナーから全血を採取し、それを抗凝固剤(例えばクエン酸ナトリウム)と混合し、そしてそれを血液適合性のあるチューブを通して遠心ボウル内へと給送する(蠕動ポンプを使用して)ことによって動作する。全血は各成分(例えば細胞および血漿)へと分離し、そしてより多くの全血が患者からボウルへと追加されるにつれて、血漿はボウルから押し出されて血漿収集バッグに入る。ＰＣＳ(R)２システム、または類似の血漿フェレーシスシステムを改造するについては、遠心ボウルを出てくる血漿は、血漿収集バッグへと移送されるのではなく、免疫グロブリン(ＩｇＧのような)に特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体を含むカラムまたはバッグのような容器を通る経路をまず搬送され、血漿からＩｇＧを抽出することができる。容器から出てくる血漿(すなわちＩｇＧ欠乏血漿)は次いで、収集のために血漿収集バッグへと移送されることができる。容器から溶出されるＩｇＧもまた、ＩｇＧ収集バッグに移送することができる。このように改造されたＰＣＳ(R)２システムをカラムと共に図１０Ａに概略的に示し、またバッグと共に図１０Ｃに概略的に示す。リガンドに非共有結合された免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)は、全ての血漿の通過に続いて、または継続的に(例えば複数回の溶出工程)、溶出させ収集することができる。
【０１８０】
別の側面において、この発明はネガティブセレクションを使用して、全血(例えばヒト由来の)からＩｇＧのような免疫グロブリンを富化させることを考慮している。例えば、全血は健康なボランティアドナーから採取可能であり、次いで細胞を取り出すことができる。細胞は、遠心分離または濾過(例えば血小板が直径約２ミクロンであることから、孔径２ミクロンのフィルターを使用して)などの任意の標準的な方法によって取り出し、血漿を生成することができる。別の方法は単純に、全血を凝固させて血清を収集することでありうる。血漿または血清は次いでさらに処理して、非免疫グロブリン成分を取り出すことができる。このネガティブセレクションを図１１に概略的に示している。図１１に示した工程は全てが必要なものではなく(すなわち、工程は省略可能である)、また工程の順序も重要でないことに留意すべきである。図１１の工程は合体可能であり、また追加工程を付加することができる。しかしながら、図１１は単純に、ネガティブセレクションプロセスの代表例である。
【０１８１】
例えば、アルブミンは一般的な血液タンパク質であるから、アルブミンは例えば、血漿または血清(または全血)を、アルブミンと特異的に結合する抗体に共有結合した固体支持体上を通過させることによって取り出し可能である。アルブミンはまた、全血(または血清または血漿)をシバクロンブルーと接触させることによっても取り出し可能である。例えば、バイオラッド社(米国カリフォルニア州ハーキュリーズ)は、シバクロンブルーに共有結合したアガロースビーズを含むクロマトグラフィー用ゲルを販売している。こうしたビーズはカラムに充填することができ、血液(または血清または血漿)がカラムを通過されてアルブミンが取り出される。凝固カスケードタンパク質(例えばフィブリノーゲン、ファクタＶIII、ファクタＶＩ、プロトロンビン、その他)および補体タンパク質(例えばＣ３転換酵素、マンナン結合レクチン、Ｃ１ｑ、その他)もまた取り出し可能である。非ＩｇＧ免疫グロブリンもまた取り出し可能であり、炭水化物および脂質もまた可能である。得られる(または残存する)生物学的流体は、全血(または血漿または血清)から非ＩｇＧ成分が取り出された後に残存するものである。従って、生物学的流体中に残存するＩｇＧは、ＩｇＧに特異的に結合するリガンドとは接触していない。さらにまた、ＩｇＧはそれを非共有結合しているリガンドから溶出される必要がないため、低いｐＨ(例えば２.０から３.０のｐＨ)におけるＩｇＧに対する何らかの潜在的な損傷は回避することができる。
【０１８２】
別の例では、ＰＣＳ(R)２システムを改造して免疫グロブリンを富化させることができる。米国特許第４,０８６,９２４号、第４,９８３,１５８号、および第６,６２９,９１９号(参照によって本願に取り入れる)は、ＰＣＳ(R)２システムのような血漿フェレーシスシステムの幾つかの側面について記載している。基本的に、ＰＣＳ(R)２システムは、静脈針(例えば１６〜１７のゲージを有する)を介して患者ドナーから全血を採取し、それを抗凝固剤(例えばクエン酸ナトリウム)と混合し、そしてそれを血液適合性のあるチューブを通して遠心ボウル内へと給送する(蠕動ポンプを使用して)ことによって動作する。全血は各成分(例えば細胞および血漿)へと分離し、そしてより多くの全血が患者からボウルへと追加されるにつれて、血漿はボウルから押し出されて血漿収集バッグに入る。ＰＣＳ(R)２システム、または類似の血漿フェレーシスシステムを改造するについては、遠心ボウルを出てくる血漿は、血漿収集バッグへと移送されるのではなく、非免疫グロブリン血液成分(アルブミンの如き)に特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体を含むカラムのような容器を通る経路をまず搬送され、血漿からアルブミンを抽出することができる。容器から出てくる、免疫グロブリンについて富化された血漿(例えばアルブミン欠乏血漿)は次いで、収集のために血漿収集バッグへと移送されることができる。このように改造されたＰＣＳ(R)２システムを図１０Ｅに概略的に示す。
【０１８３】
別の例では、ＭＣＳ(R)９０００システムを改造して、免疫グロブリンまたは特定のアイソタイプの免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)を分離することができる。米国特許第４,９８３,１５８号および第５,３８７,１８７号(参照によって本願に取り入れる)は、ＭＣＳ(R)９０００システムのようなアフェレーシスシステムの幾つかの側面について記載している。ＭＣＳ(R)９０００は多くの場合に血小板フェレーシスのために使用されるが、ＭＣＳ(R)９０００は血小板、赤血球、血漿、およびこれらの成分の組み合わせを含む、種々の全血細胞成分を分離することができる。基本的に、ＭＣＳ(R)９０００システムは、幾つかの蠕動ポンプをバルブと一緒に用いることで動作し、患者ドナー(例えば健康なボランティア)から静脈針(例えば１６〜１７のゲージを有する)を通じての血液(または血液成分)の方向および流れを制御する。抗凝固剤(例えばクエン酸ナトリウム)で処理した後、ドナーの血液は、血液適合性のあるチューブを介してボウル(例えば遠心ボウル)、バッグ、およびカラムのような種々の容器へと給送され、そしてドナーの血液成分の幾らか(例えば赤血球)は、同じ静脈針または異なる静脈針を介してドナーへと戻される。
【０１８４】
ＭＣＳ(R)９０００システム、または類似のアフェレーシスシステムを改造するについては、血漿を遠心ボウルから血漿収集バッグへと給送する前に、血漿はＩｇＧのような免疫グロブリンと特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体を含むカラムまたはバッグのような容器を通して給送されて、免疫グロブリンを血漿から取り出すことができる。このような改造の概略をカラムと共に図１０Ｂに概略的に示し、またバッグと共に図１０Ｄに概略的に示す。容器を出てくる血漿(すなわち免疫グロブリン欠乏血漿)は次いで、血漿収集バッグに収集することができ(図１０Ｂおよび図１０Ｄ参照)またはドナーに戻される。リガンドに非共有結合された免疫グロブリンはまた、溶出して図１０Ｂおよび図１０Ｄに示すようなＩｇＧ収集バッグに収集することができる。
【０１８５】
ＭＣＳ(R)９０００システム、または類似のアフェレーシスシステムの別の改造においては、血漿を遠心ボウルから血漿収集バッグへと給送する前に、血漿はアルブミンのような非免疫グロブリンと特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体を含むカラムまたはバッグのような容器を通して給送されて、アルブミンが血漿から取り出され、それによって残余のアルブミン欠乏血漿中の免疫グロブリンが富化される。このような改造の概略を図１０Ｆに示す。容器を出てくる血漿(すなわちアルブミン欠乏免疫グロブリン富化血漿)は次いで、血漿収集バッグに収集可能である(図１０Ｆ参照)。
【０１８６】
生物学的流体(例えば全血、血漿、または血清)からの、免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)の精製および富化に続いて、免疫グロブリンはさらに処理し、即座に使用し、または貯蔵することができる。例えば、免疫グロブリンは−２０℃または−７０℃で冷凍することができる。治療的に使用する前に冷凍された免疫グロブリンを解凍する場合、冷凍された免疫グロブリンは急速解凍(例えば２５℃または３７℃または４５℃、または６０℃の湯浴中)可能であり、またはゆっくりと解凍(例えば氷上で、間欠的に振盪させながら)することができる。ＩｇＧはまた凍結乾燥可能であり、凍結乾燥状態で貯蔵することができる。
【実施例】
【０１８７】
以下の実施例は、いかなる意味でも本発明を限定するものではない。
【０１８８】
実施例１
【０１８９】
２３０〜２５０ｍｌのＭabＣapture Ａ樹脂ビーズ(すなわちライフテクノロジー社(米国カリフォルニア州カールスバッド)から入手したプロテインＡ親和性リガンドＭabＣapture Ａ)をｐＨ７.４の無菌リン酸緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)中に再懸濁し、洗浄した。ＰＢＳに懸濁したビーズは次いで、無菌条件下において、図９Ａから図９Ｃに示すようなカラムに装填した。過剰のＰＢＳはカラムから流出させ、残った樹脂はビーズおよびカラムの表面張力に基づいて残存している残余のＰＢＳを通じて湿潤させた。カラムは高さ１２センチメートルで直径が５ｃｍであり、カラム内の樹脂の容積は１１.７ｃｍ、カラムの半径方向の湾曲部分の各々にあるベッドは１ｃｍであった。カラムの入口ポートおよび出口ポートには、孔径２０〜３０ミクロンのフリス(またはフィルター)が装着されていた。
【０１９０】
このカラムはＰＣＳ(R)２装置に装着し、ボランティアドナーを装置につないで、血漿の供血を開始する。ドナーから得た血漿は約５０ｍｌ／分の流量のような約２０ｍｌ／分から約１２０ｍｌ／分の間の流量において、ＰＣＳ(R)２装置の機構を通じ、ＭabＣaptureＡビーズが装填されたカラム内へと給送される。約８００〜９００ｍｌの血漿がＭabＣapture Ａ  ビーズ装填カラムを通して流される。幾つかの実施形態においては、ＩｇＧが欠乏された(または低減された量のＩｇＧを有する)血漿は、ドナーの細胞を含有するボウルへと戻るよう経路付けられる。これらの細胞およびＩｇＧ低減(場合によりＩｇＧ欠乏と呼ばれる)血漿は混合され、ＰＣＳ(R)２装置によってボランティアドナーへと戻される。
【０１９１】
血漿フェレーシス手順に続いて、ＩｇＧが付着されたＭabＣapture Ａビーズ装填カラムは、無菌条件下おいてＰＣＳ(R)２装置から取り外される。
【０１９２】
ｐＨ３.０の１００ｍＭクエン酸ナトリウムの溶出液が使用される。２５０〜５００ｍｌの溶出液が、ＩｇＧが付着されたＭabＣapture Ａビーズ装填カラムを通過される。幾つかの実施形態において、カラムを通る溶出液の流れは、重力によって設定される流量で流れる。幾つかの実施形態において、カラムを通る溶出液の流れは、この目的のために改造されたＰＣＳ(R)２装置のような装置によって設定される流量で流れる。かくして幾つかの実施形態において、付着(すなわちカラムに対する血漿の付加)および溶出(すなわちカラムに対する溶出液の付加)は完全に自動化される。幾つかの実施形態において、カラムを通る溶出液の流量は５０ｍｌ／分から１５０ｍｌ／分である。
【０１９３】
溶出の完了の後、１０％の中和バッファが、ＩｇＧを含有する溶出液へと添加される。例えば、ＩｇＧを含有している５００ｍｌの溶出液がカラムから得られる場合、５０ｍｌの中和バッファ(例えばｐＨ８.８の１Ｍトリス)が溶出液に添加され、その結果、ｐＨが６.０から７.０である５５０ｍｌの容積のＩｇＧ含有溶液が得られる。
【０１９４】
幾つかの実施形態においては、中和工程もまた完全に自動化される(例えばＰＣＳ(R)２装置のようなアフェレーシス装置の改造によって)。
【０１９５】
ＩｇＧ含有溶液は次いで、即時に使用可能であり(例えば、それを必要としている患者に治療的に投与される)またはさらに処理および／または貯蔵(例えば冷凍)を行うことができる。
【０１９６】
この実施例１の結果が示すところによれば、ドナー患者によってチェアサイドで使用されるＰＣＳ(R)２血漿フェレーシス装置からの１０００ｍＬの血漿中のＩｇＧの９０〜９５％を、２３０〜２５０ｍＬのプロテインＡ被覆ビーズ(すなわち５０ミクロンのポリスチレンビーズ上のＭabＣapture Ａ樹脂)を含有するカラム中に捕捉可能である。捕捉された免疫グロブリンの９０〜９０％は、溶出液(次いで中和される)中へと回収することができる。回収された(すなわち溶出された)免疫グロブリンは、少なくとも９０％がＩｇＧである。
【０１９７】
実施例２
【０１９８】
費用を低減し、効率と安全性を向上させるために、図９Ａから図９Ｃに示されたカラムの小型版にＭabＣapture Ａ樹脂を装填した。このカラムは高さが３ｃｍで直径が５ｃｍであり、使用した樹脂の量は５０ｍｌである。樹脂中のビーズは、実施例１で説明したようにして、ｐＨ７.４のＰＢＳで洗浄して再懸濁し、次いでカラムに装填した。
【０１９９】
幾つかの実施形態においては、カラムはＰＣＳ(R)２装置に装着し、ボランティアドナーをＰＣＳ(R)２装置につないで血漿フェレーシスを開始する。１００ｍｌの血漿が(例えば、標準的な蠕動ポンプまたはＰＣＳ(R)２装置に取り付けられているポンプを用いて給送され)カラムを通して流される。１００ｍｌの血漿がカラムを通って流されたなら、ドナー血漿からカラムの入口ポートおよび出口ポートへのチューブが閉じられ、ドナーからの血漿はＰＣＳ(R)２装置の血漿収集ボウル内に収集される。「取り外した」カラムは実際にはＰＣＳ(R)２装置から物理的に取り出される訳ではない；むしろ、カラムは(例えばクランプ切り換え装置を介して)流体の第２のリザーバに接続され(例えば溶出液のリザーバ)、２５ｍｌの溶出液がカラムを通して給送される。２.５ｍｌの中和バッファが、カラムから出る溶出液に添加される。溶出液含有リザーバおよび中和バッファ含有リザーバへのチューブは閉じられ、ドナーから血漿ボウルへのチューブは開かれる。別の１００ｍｌの血漿がカラムを通して給送される。
【０２００】
このサイクルは８〜１０回繰り返されて、ドナーから得られた８００〜１０００ｍｌの血漿が収容される。
【０２０１】
実施例３
【０２０２】
初期の検討では、ヒトの免疫グロブリンＧ(ＩｇＧ)の約９０〜９５％を１０００ｍＬの血漿から効率的に捕捉することができ、９０％を超える純度でもって、捕捉したＩｇＧを９０〜９５％の効率で放出できることが見出された。こうした初期の、チェアサイドでのＩｇＧ取り出しについての検討は、アキシアルカラム中約２３０〜２５０ｍＬのプロテインＡ親和性リガンド(樹脂５０ミクロンのポリスチレンビーズ上のＭabＣapture Ａ)で行われた。しかしながら、アキシアルカラムの使用は、１０００ｍｍＨｇを遙かに超える、著しい背圧の増大という結果を招いた。アキシアルカラムでのこの高い背圧は、ＰＣＳ(R)２血漿フェレーシスシステム(米国マサチューセッツ州ブレイントリーのヘモネティクス社販売)における最大許容限度である１００ｍｍＨｇより高い。従って、血漿からＩｇＧを取り出す血漿フェレーシス中に背圧を１００ｍｍＨｇより十分に低く保つことを許容する、代替的なカラムが評価された。この実施例３では、ラジアルフローカラムの性能が評価された。
【０２０３】
ここでの検討のために、水および高粘度のグリセリン溶液での評価が最初に行われた。簡単に言うと、水および粘度の異なるグリセリン溶液(２センチポアズ、３センチポアズ、および４センチポアズ(ｃＰ))が、アキシアルカラムまたはラジアルフローカラムのいずれかを通して、１５０ｍＬ／分の流量で流された。各々のカラムには、５０ミクロンのプロテインＡ親和性樹脂(ＭabＣapture Ａ、米国カリフォルニア州カールスバッドのライフテクノロジー社)が２００ｍＬ収容されていた。アキシアルカラムのベッド高は１０.５ｃｍであり、これはラジアルカラムの３.０ｃｍと対照される。
【０２０４】
アキシアルカラムおよびラジアルカラムの両者について、ベッド高は樹脂のベッド高を指しており、カラムの全高ではないことに留意されたい。例えば、アキシアルカラムの物理的な全高は、各種のアダプター(チューブ接続用のルアーロック、入口ポートおよび出口ポート、その他)にもよるが１２ｃｍまたは２０ｃｍであり、これに対して樹脂が占有する空間は５ｃｍ(幅)×１０.５ｃｍ(樹脂のベッド高)である。関連する唯一の寸法は、ベッド高およびカラムの幅または直径であり、これらは次いで、樹脂が占める容積を計算するために使用される。従って、樹脂の占有容積＝πｒ２ｈであり、ここでｒは半径、ｈは高さである。同様にラジアルカラムについて、１２.２ｃｍの幅のカラムにおける樹脂の高さは３ｃｍである。ラジアルカラムの物理的な全高は、カラムに装着された各種のアダプターにもよるが、１２ｃｍ程度でありうる。
【０２０５】
両方のカラムにおける入口圧力を、水銀圧力計で測定した。
【０２０６】
別の実験においては、ラジアルフローカラムの設計を変更して、ベッド高を３ｃｍに代えて１ｃｍとし、ラジアルカラムに２００ｍＬではなく２４５ｍＬの樹脂を充填した。
【０２０７】
その結果、ラジアルカラムとアキシアルフローカラムの間では背圧の相違が示された。図１２は、アキシアルフローカラムと、３ｃｍのベッドのラジアルフローカラムの間での背圧の比較を示している。図１２に表されたデータは、アキシアルカラムとラジアルフローカラムの間における背圧の著しい相違を示している。水および３ｃｍのベッド高のラジアルフローカラムを用いると、背圧(図１２では「圧力降下」について「ｐｄ」と示されている)は水について、アキシアルフローについての１０００ｍｍＨｇからラジアルフローカラムにおける約６７ｍｍＨｇｈへと減少した。示された粘度の水／グリセリン混合物についてのラジアルカラム中での圧力もまた示されており、圧力は粘度が増大するにつれて増大している(図１２参照)。４ｃＰの粘度であってさえも、ラジアルカラム中の圧力は依然として僅かに３２５ｍｍｇＨｇであったことに留意されたい。
【０２０８】
図１３は、アキシアルフローカラム(左の列)、ベッドの直径が３ｃｍのラジアルフローカラム(次の４つの列)、およびベッドの直径が１ｃｍのラジアルフローカラム(右端の３つの列)で生成された背圧の比較を示している。図１３が示しているように、ラジアルフローカラムのベッド高を１ｃｍに低減させると、２ｃＰの水／グリセリン溶液について背圧はさらに４０ｍｍＨ未満へとかなり低下した。
【０２０９】
図１３の結果は、ベッド高が３ｃｍで樹脂が２００ｍＬのラジアルフローカラムが、９５％を上回る効率でＩｇＧの捕捉および回復を可能にするのに非常に有効であり、それがサイクル当たりの血漿が１０００ｍｌの場合に５サイクルを通じて維持されることを示している。５つのサイクルの全てについて同じカラムが使用され(サイクルの間にクリーニングを行って)；かくして同じカラムを使用して５つのドナーサンプルが処理された。各々のサイクルにおいて１０００ｍＬの血漿が処理され、結果的に合計で５０００ｍＬの血漿が処理された。
【０２１０】
ヒトの血漿についてラジアルフローカラムの評価を行うために、クエン酸リン酸デキストロース(ＣＰＤ)またはクエン酸リン酸２デキストロース(ＣＰ２Ｄ)抗凝固剤中へと、血漿サンプルを健康な血液ドナーボランティアから得た。各々の試験について、合計で１０００ｍＬを収集した。試験の日に、血漿を１０００ｍＬの血液移送バッグ中へと移した。血漿バッグ上にある入口チューブを、ＰＣＳ２血漿フェレーシス装置の動作を模した試験ベッド上のポンプに接続した。試験ベッド上の輸注ポンプを介して、ベッド高が３ｃｍで２００ｍＬのＭabＣaptureプロテインＡ親和性樹脂を含有するラジアルカラムを、血漿バッグの入口ポートへと接続した。血漿はラジアルカラムを通して、１２０ｍＬ／分の流量で流した。１０００ｍＬの血漿全部をカラムを通過させて流すまでに、２５の(２５ｍＬ)画分を収集した。この初期濾過工程の後に、カラムはｐＨ７.４のリン酸緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)２００ｍＬで洗い流し、流出物は廃棄した。捕捉したＩｇＧを回収するために、ラジアルカラムをｐＨが２.９〜３.０の溶液である１００ｍＭのクエン酸ナトリウム１０００ｍＬを用いて１２０ｍＬ／分の流量で潅流した。同様にして、１０００ｍＬの溶出液全部をカラムを通過させて流すまでに、２５ｍＬの画分を収集した。この実験は、同じラジアルフローカラムを使用して５回繰り返した。
【０２１１】
図１４に示すように、２００ｍＬの樹脂をベッド高３ｃｍで備えたラジアルフローカラムはＩｇＧの捕捉および回収を可能にするのに非常に有効であり、９５％を上回る効率が５サイクル全体にわたって維持された。カラムに付着させる前に各々の試験サンプル中に存在するＩｇＧの量を表１に示す。
【０２１２】
【表１】
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【０２１３】
図１４の赤色の丸によって示されているように、カラムに注入された血漿中に存在するＩｇＧは全て、カラム中のＭabＣapture Ａリガンドに特異的に結合(非共有結合)した。図１４の緑色の丸が示すように、カラムに結合した全てのＩｇＧは次いで、１００ｍＭのクエン酸ナトリウム溶出液１０００ｍＬでＩｇＧをカラムから溶出させることによって回収された。図１４および表１における試験サイクルの各々において１０００ｍＬの血漿が処理され、結果的に合計で５０００ｍＬの血漿が処理されたことに留意すべきである。
【０２１４】
この実施例３は、アキシアルカラムにおいて処理中に生成された背圧が１０００ｍｍＨｇを超えることを示している。この背圧はラジアルフローカラムでは、１００ｍｍＨｇ未満へと著しく低減された(図１２〜図１３参照)。ラジアルフローカラムは、ＩｇＧの捕捉および捕捉されたＩｇＧの放出において、９５％を超える効率を有していた(図１４および表１参照)。
【０２１５】
この実施例３では、ＩｇＧ精製のための全ての工程(すなわち、ＩｇＧと特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体に対する生物学的流体の接触、リガンドからの結合したＩｇＧの溶出、および回収されたＩｇＧを含有する溶出液の中和による精製ＩｇＧを含有する溶液の獲得)は、自動化された仕方で実行可能である(すなわち機械によって実行される)ことに留意すべきである。回収されたＩｇＧは次いで、即時に使用可能であり(例えばそれを必要とする患者に対して治療的に投与される)またはさらに処理および／または貯蔵(例えば冷凍)可能である。
【０２１６】
実施例４
【０２１７】
この実施例４は、より小型のカラムの効率を判定するために行われた検討について記載する。この実施例４において使用されたカラムはラジアルフローカラムであることに留意されたい。
【０２１８】
詳細には、プロテインＡ親和性リガンドであるＭabＣapture Ａをライフテクノロジー社(米国カリフォルニア州カールスバッド)から入手した。５０ｍＬのＭabＣapture Ａ樹脂をＧＥ５０／２０カラム(米国ペンシルベニア州ピッツバーグのＧＥヘルスケアライフサイエンス社から市販品を購入)に２.５ｃｍのベッド高および５ｃｍの内径で移すことによってカラムを調製した。血漿サンプルを健康な血液ドナーボランティアから、標準量のクエン酸リン酸デキストロース(ＣＰＤ)抗凝固剤中へと得た。合計で１０００ｍＬの血漿を１０００ｍＬの血液移送バッグ中に移送し、図１５に概略的に描かれているような構成に示された血液適合性のあるチューブを介してポンプに接続した。図示のように、図１５は概略的に、６つのバッグまたはボウルと、カラム(「疑似使い捨てカラム」と表示)と、サイクル当たり２００ｍｌの容積とを示している。図１５において、工程は次のように行われる。
【０２１９】
簡単に言えば、工程１において、クランプ切り換え装置が開かれて血漿が「疑似使い捨てカラム」を通して１２０ｍＬ／分の流量で約１分４０秒間流されて、２００ｍＬの血漿がカラムを通って無ＩｇＧ血漿収集バッグ(バッグ４)に入るようにされ、その後クランプ切り換え装置は閉じられた。この流量は、５０ｍｌ／分から約２００ｍｌ／分の間であることができることに留意すべきである。工程１の間、ＰＢＳおよびクエン酸ナトリウム用のバルブは閉じたままである。工程２では、クランプ切り換え装置は開位置に切り換えられて、ｐＨ７.４のリン酸緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)１００ｍＬがカラムを通って１２０ｍＬ／分の流量で、バッグ３からバッグ６(「ＰＢＳ流出」バッグ)へと流された(合計時間は５０秒)。５０秒後、工程３において、クランプ切り換え装置は開位置に設定されて、１００ｍＬの１００ｍＭクエン酸ナトリウム(ｐＨ２.８)がカラムを通して１２０ｍＬ／分の流量で流され、捕捉されたＩｇＧがバッグ５(「１Ｍトリス緩衝液中の回収ＩｇＧ」バッグ)へと放出された。幾つかの実施形態において、バッグ５は既にｐＨ８.８の１Ｍトリスを含んでおり、その中へと溶出液中の捕捉されたＩｇＧが添加されることに留意されたい。５０秒後、切り換えクランプは開位置に戻るよう設定されて血漿が流れるようにされ、そして工程１〜３は４回繰り返されてサイクル合計で５回とされ、合計で１０００ｍＬの血漿が処理されるようにされた。
【０２２０】
回収されたＩｇＧを図１５でバッグ５内へと最初に放出させると、８.０よりも高いｐＨを有する溶液となることに留意すべきである。しかしながら５回目のサイクルの後には、最終溶液のｐＨは約７.０と８.０の間になる。しかしながら、各々のサイクルは僅か数分を要するだけであるから、最初のサイクルにおける高いｐＨは、回収されたＩｇＧに悪影響を及ぼすことはない。幾つかの実施形態においては、５回のサイクル全てが完了してバッグ５内にすべての捕捉ＩｇＧが収集された後に、ｐＨ８.８の１Ｍトリス５０ｍＬが添加される。
【０２２１】
図１５に示された構成を使用して得られた結果が図１６に要約されている。図１６に示すように、血漿はＩｇＧを初期濃度７.７ｍｇ／ｍＬで有しており、従って２００ｍＬ中のＩｇＧの合計量は１.５４ｇ(２００×７.７／１０００)であった。無ＩｇＧ血漿中の残留量は分析の検出限界未満であり、従って最初のサイクル中に捕捉されたＩｇＧの量は実際上、分析の検出限界にもよるが、９６〜１００％であった。従って、１００％の取り出しについては、血漿中のＩｇＧの残留量が０.１７１ｍｇ／ｍＬ未満という分析の検出限界未満であったことから、ＩｇＧの実際の濃度は分析の検出限界未満であり、最初のサイクル後の血漿中におけるＩｇＧの残留量は０であったと推定した。
【０２２２】
かくして、血漿中のＩｇＧの９５〜１００％がカラムによって捕捉されたのであるが、７３.７％のみが回収された。その計算を以下に示す。
２００ｍＬの血漿中のＩｇＧの初期量    ＝  １.５４ｇ
１００ｍＬの回収溶液中のＩｇＧの濃度  ＝  １.１
回収されたＩｇＧの百分率              ＝  (１.１３５／１.５４)×１００)
回収されたＩｇＧの百分率              ＝  ７３.７％
【０２２３】
同様のＩｇＧ捕捉効率が、続いて処理された２００ｍＬの血漿アリコートにおいても得られた(データは示されていない)。カラムをｐＨ２.８の１００ｍＭクエン酸ナトリウム流出液１００ｍＬで処理すると、捕捉されたＩｇＧの約７６.６％の回収という結果になった。免疫グロブリンアイソタイプは、回収された溶液中における著しいＩｇＧの増加を示し、ヒトの血漿中における約７３.７％という開始値と比較して、ＩｇＧは９１％を超えていた(図５参照)。
【０２２４】
この工程を５回繰り返した後、「疑似使い捨て」カラムは廃棄された。こうして、ドナー１人当たり１つの「疑似使い捨て」カラムが使用された。
【０２２５】
上述したように、各々のサイクルに要する時間は僅か数分である。従って、図１５に概略的に示された構成が血漿フェレーシス装置に取り込まれる場合、血漿フェレーシス手順の時間が相当に長くなることはない。さらに留意すべきことに、この実施例４においては、ＩｇＧを生成するための全ての工程(すなわち、ＩｇＧと特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体に対する生物学的流体の接触、リガンドからの結合したＩｇＧの溶出、および回収されたＩｇＧを含有する溶出液の中和による精製ＩｇＧを含有する溶液の獲得)は、自動化された仕方で実行可能である(すなわち機械によって実行される)。回収されたＩｇＧは次いで、即時に使用可能であり(例えばそれを必要とする患者に対して治療的に投与される)またはさらに処理および／または貯蔵(例えば冷凍)可能である。
【０２２６】
実施例５
【０２２７】
体重１５０ポンドの２５歳の健康な男性ボランティア(患者と称する場合がある)が、血液の幾らかを供与することに合意した。供与される血液の典型的な量は１パイント(０.４７３リットル)である。この健康なドナーは、本願に記載の改造を行った血漿アフェレーシス装置を使用して、彼の全血を供与することに同意した。この処置には典型的に１時間から２時間を要する。
【０２２８】
ボランティア患者の左腕の静脈に、１６ゲージの針を穿刺する。ボランティアの血液はまず、針に取着されたチューブ内の適切な量な抗凝固剤溶液と混合される。この段階の血液は抗凝固剤と混合されているが、血液からはまだ成分が取り出されていないことから、まだ全血であることに留意すべきである。抗凝固処理した全血は次いで収集ボウル内に引き入れられ、遠心力によって各種の成分へと分離される。収集ボウルがその収集容積に達した時点で、血漿成分が収集ボウルを出て、血漿収集容器内に入れられる。血漿収集容器内のこの血漿から、免疫グロブリンが抽出される。
【０２２９】
この実施例では、ドナーボランティアの血液から採取されない成分(例えば赤血球、および血小板を含む白血球)は、等張食塩水(例えば０.９％ｗ／ｖのＮａＣｌ溶液)と混合され、ドナーボランティアに戻される。
【０２３０】
この実施例５では、血漿収集容器はバッグである。バッグを準備するため(バッグを血漿フェレーシス装置に取り付ける前に)、バッグには入口ポートに２０〜３０ミクロンの孔径を有するフリス(またはフィルター)を装着する。バッグの内側表面は、２０〜３０ミクロンの孔径を有するメッシュ膜で被覆する。２３０〜２５０ｍｌのＭabＣapture Ａビーズをバッグに入れる。バッグは次いで少なくとも１度、ｐＨ７.４の無菌ＰＢＳで洗い流す。
【０２３１】
ビーズを収容しているバッグを血漿フェレーシス装置に取り付け、そしてドナーからの血漿をバッグに追加する。
【０２３２】
幾つかの実施形態においては、血漿が充填されたバッグは血漿フェレーシス装置から取り外され、室温でミキサー上に置かれて、バッグの内容物が混合される(例えばバッグを回転または振盪することにより)。バッグ内のＩｇＧがＭabＣaptureビーズに非共有結合することができる十分な長さの時間の後に(例えば１５分間)、ＩｇＧ欠乏(または低減)血漿はバッグから注ぎ出され、さらなる処理のために貯蔵されるか、または廃棄される。ＩｇＧ欠乏血漿はまた、ドナーに戻すことができる。２５０ｍｌの溶出液(例えば１００ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ３.０)がバッグに添加され、そしてバッグは再度ミキサー上に置かれる。約１５分の後、ｐＨ８.８の１Ｍトリス２５ｍｌがバッグに添加され、バッグの内容物全部が将来の使用(例えばさらなる処理、貯蔵、または必要とする患者に対する治療的な即時の使用)のために収集される。
【０２３３】
幾つかの実施形態においては、血漿が充填されたバッグは、バッグがまだ血漿フェレーシス装置に取り付けられている間に回転または振盪される。幾つかの実施形態においては、バッグは血漿で容積一杯まで充填された後に混合される。例えば混合は、バッグ内へのチューブを閉塞した後に開始できる(例えばクランプ切り替え装置を使用して閉鎖位置として)。幾つかの実施形態においては、バッグは血漿がバッグに添加されている間に回転または振盪される。幾つかの実施形態においては、バッグは連続的に充填されそして空にされ、血漿の一部はバッグが回転または振盪ている間に処理される。
【０２３４】
最終的に、血漿の全て(例えば１０００ｍｌ)がバッグを通って流されて、バッグ内でリガンドに共有結合した固体支持体に接触された後、まだアフェレーシス装置に取り付けられている間に(すなわち「オンライン」)またはバッグが装置から取り外された後に(すなわちオフライン)、バッグからはＩｇＧ低減血漿が放出される。もちろん、固体支持体(例えばビーズ)は表面張力によって、依然として濡れたままである。溶出液が次いでバッグに添加される。溶出液(脱離したＩｇＧを含有している)はオンラインまたはオフラインで収集することができ、そして中和バッファが添加される。バッグがオンラインである場合は、接触工程、溶出工程、および／または中和工程は全て、自動的に(例えばアフェレーシス装置によって)実行可能である。
【０２３５】
実施例６
【０２３６】
血液の引き出しによって全血(直接的な採血による)の供与が得られた後に、血液の種々の成分である多血小板血漿(血小板フェレーシス手順による)および血漿(血漿フェレーシス手順による)が４℃において、処理設備へと移送される。これらの製剤は全て、容器内にあってよいことに留意されたい(例えばバッグ)。これらの製剤は全て、クエン酸ナトリウムのような抗凝固剤を含有していてよいことに留意されたい。
【０２３７】
血液処理設備では、血液製剤が処理される。全血１マイクロリットル当たりには、およそ１５０,０００から４５０,０００の血小板がある。多血小板血漿は、全血の３倍から５倍の間の血小板を含有していてよい。本願に記載の方法および装置を使用して、ＩｇＧのような免疫グロブリンを多血小板血漿から取り出すことができる。幾つかの実施形態において、ＩｇＧは１人のドナーの多血小板血漿から抽出される。複数のドナーからの多血小板血漿はプールすることができ、プールした多血小板血漿からＩｇＧを取り出すことが可能であることに留意されたい。図１７に示すように、ＩｇＧの取り出しに続き、そしてさらなる処理に続いて、２つの製剤、すなわち精製ＩｇＧ製剤およびＩｇＧ欠乏多血小板血漿製剤が得られる。ＩｇＧ欠乏多血小板血漿製剤は、例えば変形性関節症の治療、慢性足裏筋膜炎の治療、腱炎の治療、および形成外科などを含めて、通常の(すなわちＩｇＧ含有)多血小板血漿製剤と同様にして使用してよい。
【０２３８】
また血液処理設備において、血漿フェレーシスから得られた、または血液から血漿を分離するように全血を処理することにより得られた血漿をさらに処理して、ＩｇＧのような免疫グロブリンを抽出することができる。ＩｇＧは１人のドナーの血漿から、または複数のドナーからプールされた血漿から抽出することができる。図１８に示すように、ＩｇＧの取り出しに続いて、そしてさらなる処理に続いて、２つの製剤、すなわち精製ＩｇＧ製剤およびＩｇＧ欠乏血漿製剤が得られる。ＩｇＧ欠乏血漿製剤は、限定するものではないが、アルブミンのような血漿タンパク質源および凝固因子(例えばファクタＩＸ)などを含めて、通常の(すなわちＩｇＧ含有)血漿製剤と同様に使用してよい。
【０２３９】
またやはり血液処理設備において、全血(例えば加クエン酸全血)を処理することができる。１人のドナーからの全血を処理することができ、または複数のドナーからの全血(例えばＡＢＯ抗原およびＲｈ因子が一致する)をプールして処理することができる。この処理を図１９に示している。図１９に示すように、全血は４つの最終製剤へと分離される−赤血球、ＩｇＧ欠乏血漿(またはアルブミンまたはフィブリノーゲンにような血漿製剤)、血小板、およびＩｇＧである。図１９に概略的に示したプロセスにおいては、有核白血球は単純に廃棄される。図１９において、多血小板ＩｇＧ欠乏血漿が所望の製剤であるとすると、血小板取り出し工程を省略し、そして多血小板ＩｇＧ欠乏血漿をさらに処理して(例えば濾過またはバクテリア存在検出)、多血小板ＩｇＧ欠乏血漿製剤を製造可能であることに留意すべきである。
【０２４０】
図１７から図１９の全部について、生物学的流体から免疫グロブリン(ＩｇＧのような)を取り出すための方法および装置(例えば容器)は、その生物学的流体が細胞を含有するか否かに応じて変更されてよいことが理解されよう。これと同じ考え方は、限定するものではないが、図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｃ、図７、および図１１に示された概略的なプロセスを含めて、本願に記載の全てのプロセスについて適用される。
【０２４１】
例えば、図１７(および図６Ｂ)に描かれた概略図において、ＩｇＧが抽出される生物学的流体は血小板を含有している。血小板は直径が僅か約２μｍから約３μｍであるから、生物学的流体からＩｇＧを取り出すために使用される、ＩｇＧと特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体を含む容器は、幾つかの実施形態において、ＩｇＧが抽出される(例えばリガンドに特異的に非共有結合によって結合することにより)間に、血小板が容器を通って容易に流れるように構成される。例えば、容器がバッグまたはカラムである場合、容器の入口および出口には、３μｍよりも大きな孔径(例えば５μｍの孔径または１０μｍの孔径のような、少なくとも３.５μｍの孔径)を有するフィルターを装着してよい。同様に、固体支持体がバッグまたはカラム内のビーズである場合には、ビーズ同士の間隙が十分に大きく直径３μｍの血小板が間隙を通って自由に流れることができるように、ビーズは十分に大きな直径(例えば５μｍまたは１０μｍ、または２５μｍ、または５０μｍ、または１００μｍのような)を有してよい。
【０２４２】
ＩｇＧが抽出される生物学的流体が赤血球および有核白血球(リンパ球または単球のような)を含有している場合は、免疫グロブリン(例えばＩｇＧ)を生物学的流体から抽出するための方法および装置は、流通するこれらの細胞を収容するよう同様に構成される。単球は最大の血液細胞であり、直径は約１５μｍから約３０μｍの範囲にありうる。従って、免疫グロブリンを全血から直接に取り出すための本願記載の方法において(例えば図７および図１９)、生物学的流体からＩｇＧを取り出すために使用される、ＩｇＧと特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体を含む容器は、幾つかの実施形態において、ＩｇＧが抽出される(例えばリガンドに特異的に非共有結合によって結合することにより)間に、単球(従って全ての血球)が容器を通って容易に流れるように構成される。例えば、容器がバッグまたはカラムである場合、容器の入口および出口には、３０μｍよりも大きな孔径(例えば５０μｍの孔径または１００μｍの孔径のような、少なくとも３５μｍの孔径)を有するフィルターを装着してよい。同様に、固体支持体がバッグまたはカラム内のビーズである場合には、ビーズ同士の間隙が十分に大きく直径３０μｍの単球が間隙を通って自由に流れることができるように、ビーズは十分に大きな直径(例えば５０μｍまたは１００μｍ、または２５０μｍのような)を有してよい。
【０２４３】
容器および方法は、ＩｇＧが抽出される生物学的流体中にある細胞の種類に応じて修正可能であることに留意すべきである。リンパ球の直径は、約７μｍから約２０μｍにわたり変動しうる。好酸球および好塩基球はそれぞれ、約１０μｍから約１２μｍの範囲の直径および約１２μｍから約１５μｍの範囲の直径である。赤血球の直径は、赤血球の成熟度に応じて変動する。成熟赤血球は核を持たず、典型的には約６μｍから約８μｍの直径であるが、これに対して成熟していない有核赤血球は約１０μｍから約１５μｍの間の直径を有しうる。かくして、容器およびリガンドに共有結合した固体支持体は、適宜修正可能である。
【０２４４】
例えば、本件開示は全ての有核血球(例えば非血小板白血球および成熟していない赤血球)が生物学的流体から取り出されるプロセスを考慮している。有核細胞は非有核細胞よりも高い質量を有しているから、これは遠心分離、または単純に重力によって実行することができる。かくして、非有核血小板および成熟血球のみが生物学的流体中にあり、成熟血球が最大である。本願に記載の方法および装置は、免疫グロブリン(この免疫グロブリンは後にリガンドから溶出可能である)を生物学的流体から抽出することにより、そして成熟赤血球を生物学的流体から抽出することにより、２つの役割を果たしてよい。例えば、成熟赤血球は約６〜８μｍの間の直径であるのに対して血小板は約２〜３μｍの間の直径であるから、ＩｇＧを生物学的流体から取り出すための、ＩｇＧと特異的に結合するリガンドと共有結合した固体支持体を含む容器は、幾つかの実施形態において、ＩｇＧが抽出されている間(例えばリガンドに特異的に非共有結合することにより)に、血小板は容器を通って容易に流れることができるが、成熟赤血球(または任意の他の有核赤血球または白血球)は流通できないように構成される。例えば、容器がバッグまたはカラムである場合、容器の入口および出口には、３μｍよりも大きく６μｍよりも小さな孔径(例えば約３.５μｍから約５.５μｍの孔径)を有するフィルターを装着してよい。同様に、固体支持体がバッグまたはカラム内のビーズである場合には、ビーズ同士の間隙が十分に大きく直径３μｍの血小板は間隙を通って自由に流れることが３μｍよりも大きな直径の細胞は捕捉されるように、ビーズは十分に大きな直径(例えば５μｍのような)を有してよい。もちろん、捕捉された細胞はカラムを閉塞させるから、幾つかの実施形態において、ビーズはより大きな直径を有するものであり(例えば５０μｍ)、３.０μｍよりも大きな直径の細胞の捕捉は容器の入口において行うことができる(例えば約３μｍから約６μｍの間の孔径のフィルターを通じて)。
【０２４５】
本願に記載した異なるプロセスの種々の実施形態において、選択した免疫グロブリン(例えばＩｇＧアイソタイプ)の初期濃度は、Ｉｇが直接的に抽出される生物学的流体中で決定することができる(例えば図１８に示された実施形態では血漿、また図１９に示された実施形態では全血)。幾つかの実施形態において、選択した免疫グロブリン(例えばＩｇＧアイソタイプ)の初期濃度は、Ｉｇが間接的に抽出される生物学的流体中で決定することができる(例えば図６Ａから図６Ｃに示された実施形態では全血)。
【０２４６】
以上に記載した発明の実施形態は、単に例示的であることを意図したものである；当業者には、数多くの変形および修正が自明である。そうした変形および修正は全て、添付の請求項のいずれかに規定された本発明の範囲内に属することが意図されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図１０Ｆ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【国際調査報告】
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