(57)【要約】  本開示は、少なくとも１種の液体の分離流を促進するマイクロ流体チップ上に疎水性コーティングを提供する方法に関する。それは、マイクロ流体チップの領域上に疎水性コーティングを塗布することを含む。本開示は、少なくとも１種の液体の分離流を提供するマイクロ流体チップを更に含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種の液体の分離流を促進するマイクロ流体チップ上に疎水性コーティングを設ける方法であって、
該前記疎水性コーティングを該マイクロ流体チップの領域上に適用することを含み、ここで、該疎水性コーティングが、該マイクロ流体チップの該領域について該液体の分離流を促進する、上記方法。
【請求項２】
前記疎水性コーティングが、ワックス、ナノ粒子、非共有結合分子、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される一時的コーティングである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記疎水性コーティングが、有機官能性アルコキシシラン分子、別の共有結合分子、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される半永久的コーティングである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記疎水性コーティングが、ミクロンサイズのピラーを含む永久的コーティングである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記疎水性コーティングが、細胞との生体適合性がある、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記疎水性コーティングが、フルオロポリマーを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記フルオロポリマーが、ペルフルオロトリブチルアミン及びポリ−１，１，２，４，４，５，５，６，７，７−デカフルオロ−３−オキサ−１，６−ヘプタジエンを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記フルオロポリマーが、約８５〜９９％のペルフルオロトリブチルアミン及び約１〜１５％のポリ−１，１，２，４，４，５，５，６，７，７−デカフルオロ−３−オキサ−１，６−ヘプタジエンを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記領域が、出口区域を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記領域が、前記出口区域内のチャネルを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記領域が、前記マイクロ流体チップの表面及び／又は前記マイクロ流体チップの薄い側面を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記マイクロ流体チップを加熱すること；及び
前記マイクロ流体チップを冷却すること、
を更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記マイクロ流体チップを加熱することが、５５℃で、そして次に２０５℃で加熱すること、を更に含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記５５℃で、そして次に２０５℃で加熱することが、約５５℃で、次に約１０５℃で、次に約１５５℃で、そして次に約２０５℃で段階的に加熱すること、を更に含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記約１０５℃で加熱することが約１時間にわたり、前記約１０５℃で加熱することが約２０分間にわたり、前記約１５５℃で加熱することが約２０分間にわたり、そして前記約２０５℃で加熱することが少なくとも約２０分間にわたる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
突起を有する前記疎水性コーティングによるいかなる望ましくない閉塞物をも清浄化すること、を更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
少なくとも１種の液体の分離流を提供するマイクロ流体チップであって、該マイクロ流体チップの領域に適用された疎水性コーティングを含む、上記マイクロ流体チップ。
【請求項１８】
前記疎水性コーティングが、フルオロポリマーを含む、請求項１７に記載のマイクロ流体チップ。
【請求項１９】
前記フルオロポリマーが、ペルフルオロトリブチルアミン及びポリ−１，１，２，４，４，５，５，６，７，７−デカフルオロ−３−オキサ−１，６−ヘプタジエンを含む、請求項１８に記載のマイクロ流体チップ。
【請求項２０】
前記フルオロポリマーが、約８５〜９９％のペルフルオロトリブチルアミン及び約１〜１５％のポリ−１，１，２，４，４，５，５，６，７，７−デカフルオロ−３−オキサ−１，６−ヘプタジエンを含む、請求項１７に記載のマイクロ流体チップ。
【請求項２１】
前記領域が、出口区域を含む、請求項１７に記載のマイクロ流体チップ。
【請求項２２】
前記領域が、前記出口区域内のチャネルを含む、請求項２１に記載のマイクロ流体チップ。
【請求項２３】
前記領域が、前記マイクロ流体チップの表面及び／又は前記マイクロ流体チップの薄い側面を含む、請求項１７に記載のマイクロ流体チップ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
米国特許法第１１９条及び／又は第１２０条、並びに任意の他の適用可能な法令又は規則に準拠して、本出願は、２０１６年９月１２日に出願された米国出願第６２／３９３，６２４号の利益及びこれに対する優先権を主張し、その開示内容全体を参照により援用する。
【背景技術】
【０００２】
技術分野：本出願は、一般的には、マイクロ流体チップのコーティングに関し、特に、非限定的に、液体がチップを通過するとき、出口からの分離流を促進するマイクロ流体チップの疎水性コーティングに関する。
【発明の概要】
【０００３】
マイクロ流体チップ製造における一般的な種々の材料は親水性であるため、液体がチップを通過するとき、複数の出口から分離流が得られるマイクロ流体チップを製造することは困難である。単一のチップの各出口からの分離流を促進するために、マイクロ流体チップの外面を改変して、マイクロ流体チップの疎水性を改変することができる。疎水性の改変により、マイクロ流体チップの各出口からの分離流を促進する効果が得られる。
【０００４】
発明の簡単な説明
本発明の一実施形態は、マイクロ流体チップの出口からの液体の分離流を促進するマイクロ流体チップのための疎水性コーティングであり、液体には１つ以上の生細胞が含まれており、また液体と接触するコーティングは生細胞の生存可能性に適合する。換言すると、疎水性物質は生体適合性である。
【０００５】
定義
本明細書で使用する場合、以下の用語は、示した意味を有する。
【０００６】
コーティングについて「疎水性」は、液体溶液へのバリアを実質的に形成することを意味する。一実施形態では、該液体溶液には主に水が含まれる。
【０００７】
「マイクロ流体チップ（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ  ｃｈｉｐ）」は、材料（例えば、ガラス、ケイ素、又はＰＤＭＳ、ポリジメチルシロキサン等のポリマー）にエッチング又はモールド成形された、１組のマイクロチャネルを意味する。マイクロチャネルは、所望の特徴（例えば、生化学的環境物の混合、ポンピング、選別、又は制御）を達成するために互いに接続される。
【０００８】
「ワックス」は、水に不溶性の炭化水素又は脂肪酸のエステルからなる任意の物質を意味する。
【０００９】
コーティングについて「シラン化」は、有機官能性アルコキシシラン分子で表面を覆うことを意味する。
【００１０】
コーティングについて「一時的（ｔｅｍｐｏｒａｒｙ）」は、水及び洗浄剤で洗い落とすことができるコーティングを意味する。
【００１１】
コーティングについて「半永久的」は、共有結合によって表面に結合しており、且つ溶媒で除去することができるコーティングを意味する。
【００１２】
コーティングについて「永久的」は、表面に物理的に結合しており、且つ水、洗浄剤、又は溶媒によっては実質的に除去することができないコーティングを意味する。
【００１３】
「ナノ粒子」は、サイズ（直径）が一般的に１から１００ナノメートル（ｎｍ）の間の粒子である。ナノテクノロジーでは、粒子はその移送及び特性について、単位全体として挙動する小さな物体として定義される。粒子は直径によって更に分類される。
【００１４】
コーティングについて「Ｃｙｔｏｐ  ８０９Ｍ」（ＭＳＤＳ番号：Ｚ−１５９０ＨＣＳ）は、Ａｓａｈｉ  Ｇｌａｓｓ  ＡＧＣ  Ｇｒｏｕｐ（日本、１００−８４０５、東京都千代田区丸の内１−５−１）の製品である。それは高い透明性を有する非晶質、低分子量のフルオロポリマーである。それはまた、過フッ素化溶媒としても分類される。また、それには以下の成分が含まれる：ペルフルオロトリブチルアミン（ＣＡＳ番号３１１−８９−７；約８５〜９９％）及びポリ−１，１，２，４，４，５，５，６，７，７−デカフルオロ−３−オキサ−１，６−ヘプタジエン（ＣＡＳ番号１０１１８２−８９−２；約１〜１５％）。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、流出物付近のガラスチップの表面に堆積した疎水性コーティングを概略的に示し、これは液体が流出物から吸い上げるのを防ぐと共に、別の流出物と合流するのを防ぐ。
【００１６】
【図２】図２は、検出窓の周囲のガラスチップ表面に堆積した疎水性コーティングを概略的に示す。コーティングにより、こぼれた液体が、励起ビーム又は蛍光発光のいずれかに影響を与える、封止領域への入り込みを防ぐことができる。
【００１７】
【図３】図３は、コーティングしていないチップ（左）、コーティングしたチップ（影で描かれている、中央）、及び液滴を導くチャネルとして作用するコーティングを有するチップ（開口部近くの長方形のバリアとして描かれている；右）を概略的に示す。
【００１８】
【図４】図４は、ＣｙｔｏＰ  ８０９Ｍ溶液が入っているガラスビーカーを示す。
【００１９】
【図５】図５は、先端から約１ｍｍ離れた両側の出口上のコーティング区域を示す（先端の長さは約０．５ｍｍである）。
【００２０】
【図６】図６は、ガラスチップの両側の出口上への疎水性コーティングの塗布を示す。
【００２１】
【図７】図７は、１００ｍｍの直径のペトリ皿のスライドガラス上に置いた２つのガラスチップを示す。
【００２２】
【図８】図８は、片側のコーティングをプレベーキングするための５５℃のホットプレート上の、２つのガラスチップを有するペトリ皿を示す。
【００２３】
【図９】図９は、疎水性コーティングを施した出口区域上の１００μｌのＤｉ水を示す。
【００２４】
発明の詳細な説明
本開示は、少なくとも１種の液体の分離流を促進するマイクロ流体チップ上に疎水性コーティングを提供する方法に関する。それは、マイクロ流体チップの領域上に疎水性コーティングを塗布することを含む。本開示は、少なくとも１種の液体の分離流を提供するマイクロ流体チップを更に含む。
【００２５】
マイクロ流体チップを製造する一般的な材料、例えばガラス、ホウケイ酸塩、溶融シリカ、石英、及び特定のポリマーは、実際、非常に疎水性であるか又は非常に親水性であるかのいずれかである。しかしながら、材料が親水性の場合、チップからの分離出口流の達成は困難になり得る。従って、外表面の親水性の性質を改変して、マイクロ流体チップの出口からの分離流を促進するのが有利であり得る。
【００２６】
例えば、水溶液がチップを通って流れるガラスチップの場合、溶液と固体基材との間に生じる接触角は、約３０〜５０°である。１出口が真下を向く垂直の位置にマイクロ流体チップがある場合であっても、水溶液はなおチップの外面のものを吸い上げる可能性がある。分離させておくことが望まれる複数の出口がある場合であっても、これらの出口流は合流し得る。出口流の合流を防止するために、より大きい接触角を作り出すようにチップの外表面を改変する必要があり得る。
【００２７】
改変は、一時的改変、半永久的改変、又は永久的改変の形態で行うことができる。一時的改変は、非限定的に、物理的方法によって容易に除去されるコーティングであり得る。このような例には、ワックスコーティング、ナノ粒子堆積物、及び非共有結合分子が含まれる。半永久的改変は、非限定的に、共有結合分子、例えばガラス表面のシラン化処理であり得る。永久的な解決策は、非限定的に、マイクロ流体チップの表面の疎水性の性質を変えるミクロンサイズのピラーを作成することによってマイクロ流体チップの表面を物理的に改変することであり得る。
【００２８】
マイクロ流体チップ表面の疎水性の性質の変更により、チップの表面上に「チャネル（流路）」を作ることもまた可能になる。親水性／疎水性の改変は、マイクロ流体チップの外表面に沿って流体を導くガイドとして作用することができる。これらは、各出口及び各流れを混合するのにも、またそれらを分離させておくのにも使用できる。
【００２９】
上記の改変は、マイクロ流体チップ全体に適用することができる。或いは、改変をマイクロ流体チップの一部に適用して、改変をバリアとして作用させることができる。
【００３０】
上記の改変は、分離流がマイクロ流体チップから生じることを可能にするので、既存の装置に対する改良である。改変なしでは、出口流が合流して、所望の出口からの生成物が希釈されるか又は接触することを想定していなかった成分による有害な反応が生じる可能性がある。
【００３１】
上記の本発明の商業的可能性は大きい。種々の出口流れを分離させておくことができることにより、原料製品の希釈を大幅に減少させることが可能になる。希釈をできるだけ低く抑えることによって、下流工程の消耗品のコストを最小限に抑えられる。これらの消耗品は、製造される製品の生産のためのＣＯＧに対する主要な変動要因である。
【００３２】
本技術の少なくとも１つの態様は、マイクロ流体チップの１つ以上の出口（タインとしても知られる）からの１種以上の液体の分離流を促進する少なくとも１つの疎水性コーティング、組成物又は疎水性物質である。疎水性コーティング、組成物又は物質は、雄性配偶子（ｓｐｅｒｍ  ｃｅｌｌｓ）等の１つ以上の生細胞を有する少なくとも１の液体と接触する場合、それらの生細胞の生存可能性に適合していなければならない。換言すると、本技術の実施形態の少なくとも幾つかでは、疎水性物質、組成物又はコーティングは生体適合性である。他の実施形態では、本技術のコーティング、物質又は組成物は、他の用途、とりわけ化学的用途から医薬の用途に及ぶ用途、に利用できることを当業者は理解すべきである。他の業界、分野及び産業における更なる用途もまた予想される。例証すると、本技術の幾つかの例は、非限定的に、少なくとも１つのワックスコーティング、少なくとも１つのナノ粒子堆積物、少なくとも１種の非共有結合分子、それらの組合せ、又はそれらの誘導体を含む、本技術の少なくとも１種の一時的疎水性コーティング、組成物、又は物質を非限定的に含む。或いは、本特許請求の範囲に記載の技術の少なくとも１種の半永久的疎水性コーティング、組成物又は物質の更なる例には、例えば、非限定的に、少なくとも１種の共有結合分子、例えばとりわけ有機官能性アルコキシシラン分子が含まれる。
【００３３】
更に、本特許請求の範囲に記載の技術には、シラン化もまた含むことができ、これには、例えば、ガラス表面等の少なくとも１つの表面上への少なくとも１種の有機官能性アルコキシシラン分子（単数又は複数）の１つ以上の適用を含むことができる。本明細書に記載及び特許請求の範囲に記載の技術の適用はまた、所望の分野又は用途に応じて他の表面にも適用できることを理解するべきである。更に、本特許請求の範囲に記載の技術の他の実施形態では、マイクロ流体チップの表面の疎水性の性質を変えることができる１つ以上のミクロンサイズのピラーを含むことができる永久疎水性コーティング、組成物又は物質の少なくとも１つの例を提供する。疎水性コーティング、組成物、又は物質は、マイクロ流体チップの表面の一部に、或いはその全体に適用することができる。従って、当業者は、本明細書に記載及び特許請求の範囲に記載のコーティング、組成物、又は物質技術が、出口部分、構成要素等のマイクロ流体チップの一部分の一部に適用され得るか又はその一部であり得ることを理解するであろう。例えば、本特許請求の範囲に記載及び本明細書に記載の技術は、少なくとも１つのマイクロ流体チップの出口部分、タイン等の全体又は部分に適用することができる。
【００３４】
本特許請求の範囲に記載及び本明細書に記載の技術の別の態様は、化学的流体、生物的流体、生体適合性流体、医薬的流体、工業的流体等であり得る少なくとも１種の液体の分離流を促進するマイクロ流体チップ上に疎水性コーティング又は疎水性物質を塗布又は含む少なくとも１つの方法である。コーティング、組成物、又は物質の塗布は、本技術のコーティング、組成物又は物質と一緒に又はそれらと関連して利用される物質に応じて、１回又は複数回であり得る。本特許請求の範囲に記載の技術の方法によって製造された少なくとも１つの製品もまた予想されることもまた当業者は理解するべきである。
【００３５】
本出願の更なる態様は、本特許請求の範囲に記載の技術の少なくとも１種の疎水性コーティング、組成物、又は物質でコーティングされたマイクロ流体チップである。或いは、非限定的に、少なくとも１つのワックスコーティング、少なくとも１種のナノ粒子堆積物、少なくとも１種の非共有結合分子、有機官能性アルコキシシラン分子等の共有結合分子、それらの組み合わせ及びそれらの誘導体を含む、少なくとも１種以上の一時的又は半永久的疎水性コーティング、組成物、又は物質を塗布する方法によって製造されるマイクロ流体チップもまた予想される。更に、マイクロ流体チップは、マイクロ流体チップの表面の疎水性の性質を変えることができるミクロンサイズのピラーを含む、永久的な疎水性コーティング、組成物、又は物質を塗布することによって作製することができる。
【００３６】
更に、本特許請求の範囲に記載の技術では、少なくとも１種の有機官能性アルコキシシラン分子等の共有結合分子を含む少なくとも１つの半永久的疎水性コーティング又は物質を塗布する少なくとも１つのステップを含む本技術の工程の少なくとも１つによって作製された本技術の少なくとも１つの疎水性コーティング、組成物又は物質で線を描いた、コーティングした、覆った等の少なくとも１つのマイクロ流体チップもまた予想される。或いは、この態様の別の実施形態は、マイクロ流体チップの表面の疎水性の性質を変えることができる１つ以上のミクロンサイズのピラーを含む永久的な疎水性コーティング、組成物、又は物質を塗布又は加える方法によって作製された少なくとも１種の疎水性コーティング又は物質でコーティングされた少なくとも１つのマイクロ流体チップであり得る。本明細書に記載及び特許請求の範囲に記載の技術のこの態様は、とりわけバイオテクノロジー、製薬、化学、電気、機械の分野で利用することができることを理解するべきである。
【００３７】
本発明を一実施形態に関して説明したが、本明細書に記載の本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、多くの他の可能な改変及び変形を行うことができることを理解するべきである。
【００３８】
更に、一般に、本明細書に記載のプロセス、システム、方法等に関して、このようなプロセス等のステップは特定の順序付けされた順序に従って行われるように記載されているが、このようなプロセスを、本明細書に記載された順序以外の順序で、記載されたステップを行なって、実行することができることを理解するべきである。更に、特定の複数のステップを同時に実行し得ること、他のステップを追加し得ること、又は本明細書に記載の特定のステップを省略し得ることを理解するべきである。換言すると、本明細書のプロセスの説明は、特定の実施形態を例示する目的で提供されており、決して特許請求の範囲に記載の発明を限定するように解釈されるべきではない。
【００３９】
更に、上記の説明は例示的であり、限定的ではないことを意図していることを理解するべきである。提供した例以外の多くの実施形態及び用途は、上記の説明を読めば当業者には明らかであろう。本発明の範囲は上記の説明に関して決定されるのではなく、その代わりに、添付の特許請求の範囲に記載の各請求項に関して、及びこのような特許請求の範囲に記載の各請求項によってもたらされる均等のものの全範囲内と共に、決定されるべきである。本明細書で論じた技術に将来、開発が行われること、及び開示したシステム及び方法がそのような将来の実施形態に組み込まれることは予想されており、また意図されている。要するに、本発明は改変及び変形が可能であり、以下の特許請求の範囲に記載の各請求項によってのみ限定されることを理解するべきである。
【００４０】
最後に、本出願で使用した全ての定義された用語には、本明細書で提供した定義と一致するそれらの最も広い妥当な解釈が与えられることを意図している。特許請求の範囲に記載の各請求項で使用した未定義の用語の全てには、本明細書で反対の明示的な指示がない限り、当業者によって理解されるそれらの通常の意味と一致するそれらの最も広い妥当な解釈が与えられることを意図している。特に、「１つ（ａ）」、「その（ｔｈｅ）」、「前記（ｓａｉｄ）」等の単数形の冠詞を使用している場合、特許請求の範囲に記載の請求項がそれとは反対に明確な限定を列挙していない限り、示された要素の１つ以上を列挙していると読み取るべきである。
【実施例】
【００４１】
例１  チップ疎水性コーティング手順
使用前に、ガラスチップは、チップの外表面から水溶性の汚染物質又は大きなごみを除去するためにＤＩ水中で超音波処理することによって清浄化される。ガラスチップをＤＩ水から取り出す。余分な水分はレンズペーパーで拭き取り、家庭用圧縮空気を使用してチャネルから水を吹き飛ばす。
【００４２】
ＣｙｔｏＰコーティング溶液（例えば、ＣｙｔｏＰ  ８０９Ｍ）を、使用前に約１時間室温に温める。
【００４３】
ガラスビーカー（１４０ｍｌ以下のサイズ、図４参照）に約２ｍＬのＣｙｔｏｐ  ８０９Ｍを入れる。代わりに、直径３５ｍｍ、高さ１０ｍｍのガラスペトリ皿もＣｙｔｏ  ８０９Ｍを保持する、この目的の機能を果たす。マイクロスワブをＣｙｔｏｐ  ８０９Ｍに浸し、チップの両側の出口区域を塗布する。コーティング塗布区域については図５を参照されたい。両側（前面、背面、及び薄い側面（ｅｄｇｅ））をコーティングする。
【００４４】
ホットプレート等のヒーターをオンにし、温度を約５５℃に調整する。次に、ガラスチップの片側にマイクロコットンスワブ等のアプリケーターを使用して、先ず、図５に示す区域にコーティングを注意深く塗布する。この時点ではチップの全ての側はコーティングせず、面の１つのみをコーティングする。チップの出口端は、コーティング溶液が広がるのを防ぐためにわずかに傾斜している。（図６を参照）。
【００４５】
コーティングは、コーティング溶液が毛細管力によってマイクロチャネル内に充填されるのを防ぐために、先端の端から約１ｍｍ離れていなければならない。中央のサンプル出口とその周辺区域のコーティングは避けるべきである（図５を参照）。
【００４６】
片側のコーティングを行った後、コーティングしたチップを、図７に示すように、ペトリ皿等の容器内の２つのスライドガラスの上面上にピンセットで置く。次に、ホットプレート等のヒーターの頂部にペトリ皿全体を置き、コーティングした側のコーティングを５５℃前後でプレベーキングする（図８を参照）。この手順は、過剰量のコーティング溶液が落下するか又はガラスチップの裏側に幾つかの小さな液滴を形成するのを効果的に防止するのに役立ち得る。
【００４７】
スライドガラスとガラスチップのコーティングした区域との間にはある程度の隙間がある。コーティング材料は、ベーキング温度で完全に硬化し、ガラス層に接着する接着剤（ｅｐｏｘｙ）としてうまく機能する。
【００４８】
約３〜５分後、ピンセットでガラスチップを取り出し、同じステップに従って、ガラスチップの他の側及び薄い側面（ｅｄｇｅ）をコーティングする。次に、ペトリ皿を覆い、約１時間ベーキングする。
【００４９】
ホットプレートを約５５℃から約１０５℃まで約２０分間、約１５５℃で約２０分間、約２０５℃で約２０分間、温度勾配に付す。約２０５℃で更に約５０分間ベーキングする。次に、熱を切り、ペトリ皿をケミカルフードの涼しい場所に注意深く移して、冷却させる。
【００５０】
一旦冷却した後、顕微鏡下で閉塞された出口がないかチップを検査する。出口チャネルが塞がれている場合は、直径が約１２０μｍの鍼治療針等の針又は突起を、出口チャネルを開けるのに使用することができ、次に超音波装置に入れて残留しているごみを取り除く。最後に、圧縮空気を使用してチェナル内の水とごみを吹き飛ばす。
【００５１】
最後に、ピペットを使用して、約１００μＬのＤＩ水を吸い上げ、２つのコーティングした出口先端に滴下し、疎水性コーティングの効果を調べるために、接触角を観察する（図９参照）。
【００５２】
例２  チップ疎水性コーティング手順
電源ボタンを押すことによって対流式オーブンの電源を入れる。ファンを最低速度に設定し、ダンパーを完全に閉じて、温度を約５５°Ｃに設定する。
【００５３】
ピペット等のディスペンサーを使用して、約２〜３滴のＣｙｔｏｐ  ８０９Ｍを計量ボート等の容器に入れる。
【００５４】
チップをその容器から注意深く取り出す。スワブを使用してチップのタインにコーティングを塗布するが、図５に示すように、両側の出口から約１〜２ｍｍ以内にコーティングが入らないように注意する。チップの側面（ｅｄｇｅ）を確実にコーティングする。
【００５５】
コーティングが何にも触れないように注意しながら、チップをペトリ皿の支持棒の上に置く。
【００５６】
全てのチップがコーティングされたら、ペトリ皿をオーブンに注意深く移動させる。ドアを閉めて、温度＃４（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ対流式オーブン）を選択する。プログラムは自動的に起動し、完了までに約３時間かかる。チップを一晩冷却させた後、それらをオーブンから取り出す。
【００５７】
ベーキングが完了した後、ペトリ皿を注意深く取り出す。チップを検査した後、それらを容器に戻す。
【００５８】
参考文献
１．Ｓｋｌｏｄｏｗａｋａ、Ａ．、Ｗｏｚｎｉａｋ、Ｍ．、Ｍａｔｌａｋｏｗｓｋａ、Ｒ．、“Ｔｈｅ  ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  ｃｏｎｔａｃｔ  ａｎｇｌｅ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｗｏｒｋ  ｏｆ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｉｎ  ｂｉｏｌｅａｃｈｉｎｇ  ｏｆ  ｍｅｔａｌｓ．”Ｂｉｏｌ．Ｐｒｏｃ．Ｏｎｌｉｎｅ、１（３）、１１４−１２１、１９９９。
【図１】
2019531884.tif 000003
【図２】
2019531884.tif 000004
【図３】
2019531884.tif 000005
【図４】
2019531884.tif 000006
【図５】
2019531884.tif 000007
【図６】
2019531884.tif 000008
【図７】
2019531884.tif 000009
【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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2019531884.tif 000013
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2019531884.tif 000015
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