(57)【要約】  検体中の微生物数を、簡便かつ正確に計測する方法を提供する。（ａ）加熱による溶解を経ずに、かつ冷却によらず、流動性のない透明なゲルを形成しうる高分子化合物、及び（ｂ）栄養成分を含有する、微生物数計測用培地を調製するための組成物に、検体を加えて混和する工程、前記検体に含まれる微生物を培養する工程、及び前記微生物のコロニー数を計測する工程を含む、微生物数の計測方法。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）加熱による溶解を経ずに、かつ冷却によらず、流動性のない透明なゲルを形成しうる高分子化合物、及び（ｂ）栄養成分を含有する、微生物数計測用培地を調製するための組成物。
【請求項２】
前記高分子化合物が、自重の１０倍以上抱水できるものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ゲルが離水を生じない、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記高分子化合物が、アクリル酸をモノマー単位として有するものである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記高分子化合物が、ポリアクリル酸及び／又はその塩である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
さらに（ｃ）呈色試薬を含有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物と、培養容器とを含む、微生物数計測用キット。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物に検体を加えて混和する工程、
前記検体に含まれる微生物を培養する工程、及び
前記微生物のコロニー数を計測する工程を含む、微生物数の計測方法。
【請求項９】
前記検体中の微生物量が、０．１ＣＦＵ／ｍＬ以下である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記検体重量が、前記組成物中の前記高分子化合物の重量の１０〜１００００倍である、請求項８又は９記載の方法。
【請求項１１】
（ａ）加熱による溶解を経ずに、かつ冷却によらず、流動性のない透明なゲルを形成しうる高分子化合物、及び（ｂ）栄養成分を含有する組成物の、微生物数計測のための使用。
【請求項１２】
（ａ）加熱による溶解を経ずに、かつ冷却によらず、流動性のない透明なゲルを形成しうる高分子化合物、及び（ｂ）栄養成分を含有する組成物の、微生物数計測用培地を調製するための組成物の製造における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、検体中の微生物数を簡便に計測する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
飲料水、清涼飲料水、工業用水、製薬用水、透析水等には、微生物による汚染度が小さいことが求められ、通常は存在する微生物数が非常に少ないことが知られている。特に、飲料水には生菌１００ＣＦＵ／ｍＬ以下、透析用水には生菌１０ＣＦＵ／ｍＬ以下の基準が設けられており、これらの基準を管理する上で、定期的に正確な微生物数を把握するためのモニタリングは重要である（非特許文献１）。
【０００３】
通常、食品等における微生物検出では、１ｍＬの検体懸濁液等を混釈培養する方法が採られる。しかしながら、存在する微生物数が非常に少ない飲料水等の検体に対しては、前記方法では微生物数を正確に計測できない場合がある。例えば、１００ｍＬ中に１０ＣＦＵ以下の菌が存在する場合に、検体として１ｍＬのみを供試すると、微生物を検出できないことがあり、汚染状況を正確に把握できない。
【０００４】
かかる問題を解決するために、従来はメンブレンフィルター法が用いられている。すなわち、液体検体の全量をメンブレンフィルターで濾過して、検体中の微生物をメンブレンフィルターの表面に捕捉した後、寒天培地平板に乗せて培養する方法である（非特許文献２）。該方法では、大容量の検体中に存在する少量の微生物であっても、その数を正確に計測することができる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】第１７改正  日本薬局方  参考資料Ｇ８水関連
【非特許文献２】透析清浄化ガイドラインVer. 2.01 日本臨床工学士会  2014年3月11日
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、メンブレンフィルター法では、濾過するためのファンネルや吸引ポンプ等の機器が必要で、これらを使用の度に滅菌する煩雑さがある。また、濾過後のメンブレンフィルターを寒天培地に乗せる際にメンブレンフィルターと寒天培地表面の間に気泡が生じると、捕捉された菌が培地に触れず検出できなくなる問題が生じるため、操作上ある程度の熟練が必要になる。
【０００７】
このような状況を鑑みて、本発明は特殊な機器を使用せずとも、液体検体中の微生物数を、特に大容量の液体検体中に存在する少量の微生物数を、簡便かつ正確に計測する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決するべく鋭意研究の末、液体検体をそのまま培地を構成する溶媒として利用することによって操作を簡便にすること、また、検体中の微生物を培養することによってコロニーを出現させて可視化することに想到した。そして、かかる培地を構成するゲル化剤として、ポリアクリル酸及び／又はその塩が、微生物数計測の際の操作の簡便性や目視のしやすさの観点から好適であることを見出し、本発明を完成させた。
【０００９】
すなわち、本発明は以下の通りである。
［１］（ａ）加熱による溶解を経ずに、かつ冷却によらず、流動性のない透明なゲルを形成しうる高分子化合物、及び（ｂ）栄養成分を含有する、微生物数計測用培地を調製するための組成物（以降、「本発明の組成物」と記す）。
［２］前記高分子化合物が、自重の１０倍以上抱水できるものである、［１］に記載の組成物。
［３］前記ゲルが離水を生じない、［１］又は［２］に記載の組成物。
［４］前記高分子化合物が、アクリル酸をモノマー単位として有するものである、［１］〜［３］のいずれかに記載の組成物。
［５］前記高分子化合物が、ポリアクリル酸及び／又はその塩である［４］に記載の組成物。
［６］さらに（ｃ）呈色試薬を含有する、［１］〜［５］のいずれかに記載の組成物。
［７］［１］〜［６］のいずれかに記載の組成物と、培養容器とを含む、微生物数計測用キット。
［８］［１］〜［６］のいずれかに記載の組成物に検体を加えて混和する工程、
前記検体に含まれる微生物を培養する工程、及び
前記微生物のコロニー数を計測する工程を含む、微生物数の計測方法（以降、「本発明の計測方法」と記す）。
［９］前記検体中の微生物量が、０．１ＣＦＵ／ｍＬ以下である、［８］に記載の方法。［１０］前記検体重量が、前記組成物中の前記高分子化合物の重量の１０〜１００００倍である、［８］又は［９］に記載の方法。
［１１］（ａ）加熱による溶解を経ずに、かつ冷却によらず、流動性のない透明なゲルを形成しうる高分子化合物、及び（ｂ）栄養成分を含有する組成物の、微生物数計測のための使用。
［１２］（ａ）加熱による溶解を経ずに、かつ冷却によらず、流動性のない透明なゲルを形成しうる高分子化合物、及び（ｂ）栄養成分を含有する組成物の、微生物数計測用培地を調製するための組成物の製造における使用。
【００１０】
なお、本明細書において検体とは、特に限定されないが、通常は、液体検体であり、具体的には飲料水、清涼飲料水、工業用水、製薬用水、透析水、尿等の水性の液体検体等である。
また、本明細書において微生物とは、通常は、大腸菌群、ブドウ球菌、ビブリオ属細菌、腸球菌、真菌、枯草菌などをいう。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、検体中の微生物数を、簡便かつ正確に計測することが可能になる。特に大容量の検体中に存在する少量の微生物数であっても、定量的な検出を実現することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】本発明の組成物を袋状の培養容器（容量１００ｍＬ）で使用する態様の一例を表す写真。
【図２】実施例１におけるゲル１００ｍＬ中の赤色コロニーの写真。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の組成物は、（ａ）加熱による溶解を経ずに、かつ冷却によらず、流動性のない透明なゲルを形成しうる高分子化合物、及び（ｂ）栄養成分を必須に含有する。
本発明の組成物は、微生物数計測用培地を調製するためのものである。前記調製は、通常、計測対象の微生物を含む液体検体をそのまま培地を構成するゲルの溶媒として添加し
混和することにより行われる。かかる使用態様において、本発明の組成物及びこれを用いて調製された培地は、従来の微生物用の培地とは異なる。
なお、本発明は別の観点から、（ａ）加熱による溶解を経ずに、かつ冷却によらず、流動性のない透明なゲルを形成しうる高分子化合物、及び（ｂ）栄養成分を含有する組成物の、微生物数計測のための使用、ということもできる。
【００１４】
（ａ）加熱による溶解を経ずに、かつ冷却によらず、流動性のない透明なゲルを形成しうる高分子化合物は、対象微生物の培養及び計測のための培地を構成するゲル化剤の役割を担う。前記高分子化合物は、液体検体と混和することにより、前記ゲルを形成する。
前記高分子化合物としては、自重の好ましくは１０倍以上、より好ましくは２０倍以上、さらに好ましくは３０倍以上、抱水できるものが適する。かかる抱水により、培地の調製に適したゲルが形成され得る。
【００１５】
形成されるゲルに流動性がないことにより、微生物の存在数を正確に計測することができる。また、該ゲルからは離水が生じないことが好ましい。離水が生じると、微生物のコロニーの存在を定性的には検出することはできるが、その存在数を正確に計測することが難しくなる場合がある。ここで、離水とはゲルが抱えていた水が該ゲルから分離することをいう。また、「離水が生じない」とは、具体的には例えば、室温で６０分間静置した後に、ゲルから分離する水が当初抱水量の好ましくは０．５％以下、より好ましくは０．１％以下であることをいう。
【００１６】
また、形成されるゲルが透明であることにより、微生物のコロニーを目視で正確に検出することができる。なお、ここで透明とは、形成されるゲルが流動しない濃度で蒸留水に高分子化合物を添加した場合に、分光光度計測定（光路長１ｃｍ）した可視光透過率が、７０％以上（蒸留水の同透過率を１００％とする）であることが好ましいが、これに限定されない。
また、前記高分子化合物は、加熱による溶解を経ずに、また冷却によらず、ゲルを形成しうるものであるため、操作を簡便にし、また対象微生物の生育を妨げない。なお、本明細書において加熱とは、室温から上昇させることをいい、具体的には微生物が生存不能となる例えば６０℃を超える温度にまで上昇させることをいう。また、冷却とは、高分子化合物を液体検体に溶解した時の温度から降下させることをいう。また、本明細書において室温とは、通常は１〜４０℃、好ましくは１〜３０℃、さらに好ましくは２０〜３０℃をいう。
【００１７】
そのような高分子化合物としては、アクリル酸をモノマー単位として有するものが好ましく挙げられ、アクリル酸をモノマー単位として有していればホモポリマーに限らずコポリマーでもよく、また架橋ポリマーであってもよい。具体的には、ポリアクリル酸及び／又はその塩やそれらの誘導体が好ましく、特にポリアクリル酸ナトリウムが好適である。
ポリアクリル酸ナトリウムは、いわゆる高吸水性高分子であり、加熱や冷却を行うことなく室温で液体を固化させることができ、しかも軽く振とうする等の簡便な混和操作で、均一に固化状態にさせることができるため、培地の作製操作が簡便である。
また、ポリアクリル酸ナトリウムで作製したゲルの透明度は高い。また、廉価で入手しやすい点からも、本発明に適したゲル化剤であるといえる。
【００１８】
一般に、微生物用培地等には、寒天、カラギーナン、ローカストビーンガム等のゲル化剤が用いられるが、これらは液体溶媒を均一に固化させる際に加熱が必要であるため、微生物を含む液体検体をそのまま固化させるのには適さない。また、前記ゲル化剤を用いて固化させたゲルは透明性が低い点も適さない。
また、ポリビニルアルコールは、液体溶媒と均一に混和させるのが難しいうえ、離水しやすいという問題がある。また、キサンタンガムも、液体溶媒と均一に混和させるのが難
しくダマになりやすいうえ、固化させたゲルが不透明になりやすい。
カルボキシメチルセルロースは、液体検体を固化することができず、流動性のあるゲルとなるため、微生物の定量的な検出に適さない。
なお、ヒアルロン酸は、抱水性が高く流動性のない透明なゲルを形成しうるので、本発明に適用できる。ただし、コストの面からポリアクリル酸及び／又はその塩の方が好ましい。
【００１９】
本発明において（ａ）高分子化合物としてポリアクリル酸ナトリウムを用いる場合は、固化能の観点から、重合度１０，０００以上のものが好ましく、重合度２２，０００以上のものがより好ましい。また、架橋されていてもされていなくてもよい。
【００２０】
本発明におけるポリアクリル酸ナトリウムの使用時の濃度は、特に限定されないが、例えば１０ｇ〜０．０１ｇ／１００ｍＬが好ましく、５ｇ〜０．５ｇ／１００ｍＬがより好ましい。
また、他の（ａ）高分子化合物を用いる場合は、本発明の効果を阻害しない限りにおいて、使用時の濃度は固形ゲルが形成される範囲とすればよい。
【００２１】
（ｂ）栄養成分は、対象微生物を発育させるためものである。
栄養成分としては、特に限定されないが、ペプトン、獣肉エキス、酵母エキス、魚肉エキス等を好ましく挙げられる。
非特許文献１に記載されているように、上水試験では標準寒天培地、製薬用水や透析水の試験ではＲ２Ａ寒天培地を用いることが推奨されている。そのため、これら寒天培地の寒天を排除したブイヨン培地かそれと同等の成分を、本発明の組成物の含有成分とすることが好ましい。
【００２２】
本発明の組成物は、さらに（ｃ）呈色試薬を含有することが好ましい。これは、培養によって生じた微生物のコロニーを有色のものとしてより検出・計測しやすくするためである。
呈色試薬としては、例えば、２,３,５−トリフェニルテトラゾリウムクロライド（ＴＴＣ）やテトラゾリウムバイオレット等をはじめとする酸化還元指示薬が挙げられる。これは、検体中に存在する全ての種類の微生物を計測したい場合に好ましく用いることができる。ＴＴＣを用いる場合は使用時の濃度として１００ｍｇ〜１ｍｇ／Ｌが好ましく、５０〜１０ｍｇ／Ｌがより好ましい。
【００２３】
また、呈色試薬としては、特定の微生物種のみが保有する酵素に対する基質（以下、酵素基質という）であって、分解されることにより色素化合物を遊離し得る化合物を用いてもよい。これは、該特定の微生物を計測したい場合に好ましく用いることができる。
ここで色素化合物とは、可視光下で有色のもの及び蛍光発色するものの何れでもよい。可視光下で有色の化合物として遊離され得る官能基としては、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル基等が挙げられ、遊離した５−ブロモ−４−クロロ−３−インドールは酸化縮合して５，５’−ジブロモ−４，４’−ジクロロ−インディゴとなり、青色を呈する。蛍光発色する化合物として遊離され得る官能基としては、４−メチルウンベリフェリル基等が挙げられ、遊離した４−メチルウンベリフェロンは紫外線照射下で蛍光を発する。
【００２４】
酵素基質の例を挙げると、対象微生物が大腸菌群の場合は、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（Ｘ−ＧＡＬ）や５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル−β−Ｄ−グルクロン酸等を、黄色ブドウ球菌の場合は、リン酸５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル（Ｘ−ｐｈｏｓ）等を、腸球菌等の場合は、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル−β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｘ−ＧＬＵＣ）
等を、真菌の場合は、Ｘ−ｐｈｏｓ、酢酸５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルや酪酸５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル等を、それぞれ好ましく用いることができる。さらに、全ての微生物種を検出したい場合には、これら全てを組み合わせて使用してもよい。
これらの酵素基質の使用時の濃度は、例えば、０．０１〜１．０ｇ／Ｌが好ましく、０．２〜１．０ｇ／Ｌがより好ましい。
【００２５】
本発明の組成物は、本発明の効果を妨げない限りにおいて、さらに、選択物質、抗菌性物質、無機塩類、糖類、増粘剤、ｐＨ調整剤、等を任意に含有してもよい。
選択物質としては、例えば、ポリミキシンＢやバンコマイシンなどの抗生物質や、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、Ｔｗｅｅｎ８０、コール酸ナトリウム等の胆汁酸塩等の界面活性剤が挙げられる。
抗菌性物質としては、例えば、ポリリジン、プロタミン硫酸塩、グリシン、ソルビン酸等が挙げられる。
無機塩類としては、例えば、塩化ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム等の無機酸金属塩、ピルビン酸ナトリウム、クエン酸鉄アンモニウム、クエン酸ナトリウム等の有機酸金属塩が挙げられる。
糖類としては、例えば、グルコース、ラクトース、スクロース、キシロース、セロビオース、マルトースが挙げられる。
増粘剤としては、例えば、デンプン及びその誘導体、ヒアルロン酸、アクリル酸誘導体、ポリエーテル、コラーゲン等が挙げられる。
ｐＨ調整剤としては、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムが挙げられる。なお、本発明の組成物は、対象微生物の生育の観点から、使用時のｐＨが好ましくは６．０〜８．０に、より好ましくは６．５〜７．５になるような組成である。
【００２６】
本発明の組成物は、培養容器と組み合わせて、微生物数計測用キットとして提供されてもよい。
かかる培養容器は、液体検体を、通常は濃縮や希釈等の処理をすることなく、そのまま収容し、その中で本発明の組成物と混和して、前記組成物が含有する高分子化合物をゲル化させて培地を形成し、微生物を培養するためのものである。
培養容器の形態は特に限定されず、必要量の液体検体を十分に収容できるものであればよい。例えば、本発明の組成物と液体検体とを振とうにより混和させるのには、円筒形等の形状で、変形しにくい材料の容器が好ましい。また、例えば本発明の組成物と液体検体とを容器ごと揉んだり押圧したりして混和させるのには、変形しやすい、柔軟性のある材料の容器が好ましい。例えば、ポリビニル系やポリエチレン系ポリマー等の袋状容器が好ましく挙げられ、蓋やジッパー等の封入具があればより好ましい（図１参照）。また、培養容器は透明であることが、微生物のコロニーを容器外から計測しやすいことから、好ましい。これらの収容可能用量としては、特に限定されないが、１００〜１０００ｍＬが好ましく挙げられ、少量の微生物を含む大容量の検体に適用するのに適する。
従来のキットではあらかじめ形成されている培地に検体を接触させて培養及び計測を行うものであったのに対し、本発明の微生物数計測用キットにおいては、培養容器内で液体検体そのものを溶媒として前記高分子化合物をゲル化させ、検体中の微生物がゲル内部で培養され計測に供されるという使用態様に好適である点で異なる。
【００２７】
また、培養容器を小型の平板（シート）状としてもよく、例えば１ｍＬ程度の少量の検体を用いて検出を行うのに適する。
例えば、一般的なシャーレや、凹型の皿状シートと平型又は凸型のシートとを重ねた収容容器の形態が挙げられる。平板状の形態とすることで、微生物のコロニーがより計測しやすくなる。また、小型化することにより、一度に複数の検体を並行して処理しやすくなる。
このような小型の平板状の培養容器の場合は、希釈した検体にも使用が可能となるため、検体中の微生物量が、例えば３００ＣＦＵ／ｍＬ以下である場合にも好適となる。
【００２８】
上記説明した本発明の微生物数計測用培地を調製するための組成物は、本発明の計測方法に好適に用いることができる。
本発明の計測方法は、本発明の組成物に検体を加えて混和する工程、前記検体に含まれる微生物を培養する工程、及び前記微生物のコロニー数を計測する工程を含む。
本発明の組成物と液体検体との混和は、任意の方法で行うことができ、例えば容器ごと振とうしたり揉んだり、又は滅菌した器具でかき混ぜればよい。
微生物の培養条件は、特に限定されないが、対象微生物の種類により適正に選ばれるが、例えば３５±２℃で２４〜４８時間が好ましい。
培養後の培地中には、対象微生物の生育コロニーが出現し、目視等で確認することができ、正確に数を計測することができる。
【００２９】
本発明の計測方法は、微生物の存在量が少ない、すなわち清浄度の高い検体に好適に用いることができる。例えば、検体中の微生物量が、通常の１ｍＬの検査では検出できない０．１ＣＦＵ／ｍＬ以下である場合に好適である。
一般に、微生物の存在量が大きい検体であれば、検出方法に適するように適当に希釈して計測することができるが、存在量が小さい場合は濃縮が繁雑であったり困難であったりする。本発明の計測方法は、そのような場合でも、簡便かつ正確に微生物数を検出できる点で有用である。
【００３０】
また、本発明の計測方法は、量の大きい液体検体であっても、前処理することなくそのまま計測に供することができる点でも有用である。例えば、検体重量が、本発明の組成物中の前記（ａ）高分子化合物の抱水能に応じた大量の、例えばポリアクリル酸ナトリウムである場合はその重量の１０〜１００００倍である場合に好適である。あるいは、大量の、例えば１００ｍＬ以上の検体の場合に好適である。
【００３１】
本発明の計測方法を適用しうる検体としては、特に限定されないが、飲料水、清涼飲料水、工業用水、製薬用水、透析水、尿等の液体検体等が好ましく挙げられる。また、これらの検体を予めトリプトソイブイヨン等で培養した培養液であってもよい。
【実施例】
【００３２】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３３】
（実施例１）
（１）微生物計測用培地を調製するための組成物の作製
表１に示す組成の原料を、１５０ｍＬの円筒形透明プラスチック容器内で混合し、本発明の組成物を作製した。
【００３４】
【表１】
2019513404.tif 000003
【００３５】
（２）菌株の供試
供試菌株はBacillus subtilis NBRC3134、及びEscherichia coli NBRC102203を使用した。これらをそれぞれ、トリプトソイ寒天培地で２４時間前培養した後、マクファーランド比濁＃１相当（約３．０×１０８ＣＦＵ／ｍＬ）になるように滅菌綿棒を用いて滅菌生理食塩水に懸濁し、菌原液とした。各菌原液を用いて、滅菌生理食塩水にて１０倍段階希釈を１０−８まで繰り返し、数ＣＦＵ／１ｍＬの菌希釈液を作製した。該菌希釈液１ｍＬを９９ｍＬの滅菌水に加えて、数ＣＦＵ／１００ｍＬの、ごく少量しか微生物が存在しない試料液とした。各試料液を、上記作製した組成物に１００ｍＬずつ加え、数分間上下に振とうして混和し、室温にて固化させた。固化した培地を静置し、３５℃で２４時間培養した後、発育の有無を確認した。
【００３６】
（比較例１及び比較例２）
実施例１のポリアクリル酸ナトリウムに代えて、ポリビニルアルコール（重量平均分子量５０００〜２０００００、鹸化度８５〜９０％）３０ｇ、又はキサンタンガム（分子量２００００００以上、製品元製品番号０２９６００２１、製造元ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、販売元、和光純薬工業（株））１０ｇを混合した組成物を、それぞれ同様に作製し、比較例１及び比較例２として、実施例１と同様に菌株を供試し、評価した。
【００３７】
（評価結果）
図２に実施例１のBacillus subtilisのコロニーを示す。
本発明の組成物を用いた実施例１は、いずれの菌種の試料液でも速やかに固化し、培養後は図２に示すように透明のゲルの中に赤色のコロニーが確認でき、容易にその数を計測することができた。
一方、ゲル化剤としてポリビニルアルコールを使用した組成物を用いた比較例１は、いずれの菌種の試料液も一部しか固化せず、液体成分の分離が認められた。また、ゲル化剤としてキサンタンガムを使用した比較例２では、キサンタンガム自体が塊状になって均一に液体成分が固化せず、多数の不溶物が認められ、かつ固化した部分は不透明であった。
【産業上の利用可能性】
【００３８】
本発明によれば、検体中の微生物数を、簡便かつ正確に計測することが可能になる。特に大容量の検体中に存在する少量の微生物数であっても、定量的な検出を実現することができるため、飲料水等の清浄度の高い検体に対しても、その中に存在する微量な微生物の数を漏らさず計測することができるため有用である。
【図１】
2019513404.tif 000004
【図２】
2019513404.tif 000005
【手続補正書】
【提出日】平成30年10月15日(2018.10.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）加熱による溶解を経ずに、かつ冷却によらず、流動性のない透明なゲルを形成しうる高分子化合物、及び（ｂ）栄養成分を含有する、微生物数計測用培地を調製するための組成物。
【請求項２】
前記高分子化合物が、自重の１０倍以上抱水できるものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ゲルが離水を生じない、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記高分子化合物が、アクリル酸をモノマー単位として有するものである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記高分子化合物が、ポリアクリル酸及び／又はその塩である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
さらに（ｃ）呈色試薬を含有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物と、培養容器とを含む、微生物数計測用キット。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物に検体を加えて混和する工程、
前記検体に含まれる微生物を培養する工程、及び
前記微生物のコロニー数を計測する工程を含む、微生物数の計測方法。
【請求項９】
前記検体中の微生物量が、０．１ＣＦＵ／ｍＬ以下である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記検体重量が、前記組成物中の前記高分子化合物の重量の１０〜１００００倍である、請求項８又は９記載の方法。
【国際調査報告】
2019513404.tif 000006
2019513404.tif 000007
2019513404.tif 000008