(57)【要約】本発明は、（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を提供する。本発明はまた、（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法も提供する。さらに、その使用方法、医薬組成物、薬、およびキットを提供する。本発明は、効率的なナノ粒子産生ならびに疎水性薬物および免疫治療剤の両方を含有する高品質のアルブミンに基づくナノ粒子がなおも必要であるという課題を解決するものである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）前記アルブミンにコンジュゲートした生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物。
【請求項２】
前記生物活性ポリペプチドが、前記アルブミンに共有結合で架橋している、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記生物活性ポリペプチドが、化学架橋剤を介して前記アルブミンに共有結合で架橋している、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記生物活性ポリペプチドが、ジスルフィド結合を介してアルブミンに共有結合で架橋している、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
前記生物活性ポリペプチドが、非共有結合性架橋剤を介してアルブミンにコンジュゲートしている、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記生物活性ポリペプチドが、前記非共有結合性架橋剤の第１の構成要素を含み、前記アルブミンが、前記非共有結合性架橋剤の第２の構成要素を含み、前記第１の構成要素が、前記第２の構成要素に特異的に結合する、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記非共有結合性架橋剤が、核酸分子を含み、前記核酸分子の少なくとも一部が、相補的である、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
（ａ）疎水性薬物を含む固体コアと、（ｂ）前記ナノ粒子の表面に会合したアルブミンと、（ｃ）前記ナノ粒子の表面または前記固体コアに埋め込まれた生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物。
【請求項９】
前記生物活性ポリペプチドが、前記ナノ粒子の表面に埋め込まれている、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記生物活性ポリペプチドが、前記固体コアに埋め込まれている、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物中の前記生物活性ポリペプチドの少なくとも７５％が、前記ナノ粒子に会合している、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ナノ粒子が、少なくとも約１００個の生物活性ポリペプチドを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記生物活性ポリペプチドが、抗体またはその断片である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記生物活性ポリペプチドが、ベバシズマブ、トラスツズマブ、ＢＧＢ−Ａ３１７、またはトシリズマブである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物中の前記ナノ粒子における前記疎水性薬物の前記生物活性ポリペプチドに対する重量比が、約１：１〜約１００：１である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記組成物中の前記ナノ粒子における前記アルブミンの前記生物活性ポリペプチドに対する重量比が、約１：１〜約１０００：１である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物中の前記ナノ粒子における前記アルブミンの前記疎水性薬物に対する重量比が、約１：１〜約２０：１である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記疎水性薬物の重量が、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって決定され、前記生物活性ポリペプチドおよび前記アルブミンの重量が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定されるか、または
前記疎水性薬物の重量が、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって決定され、前記アルブミンの重量が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定され、前記生物活性ポリペプチドの重量が、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定される、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ナノ粒子に会合していない生物活性ポリペプチドをさらに含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物の前記ナノ粒子部分における前記アルブミンの少なくとも約４０％が、ジスルフィド結合によって架橋している、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
動的光散乱によって測定した前記ナノ粒子の平均直径が、約２００ｎｍ以下である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記ナノ粒子に会合していないアルブミンをさらに含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記疎水性薬物が、タキサンまたはリムス系薬物である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記疎水性薬物が、パクリタキセルである、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記疎水性薬物が、ラパマイシンである、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって：
ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
前記有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した前記疎水性薬物を含み、
前記水溶液が、前記アルブミンおよび前記生物活性ポリペプチドを含む、ステップ；および
ｉｉ）前記１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部を前記エマルジョンから除去し、それによって前記組成物を形成するステップ
を含む、方法。
【請求項２７】
前記生物活性ポリペプチドが、前記水溶液中で前記アルブミンにコンジュゲートしている、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって：
ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
前記有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、
前記水溶液が、前記アルブミンを含む、ステップ；
ｉｉ）前記生物活性ポリペプチドを前記エマルジョンに添加するステップ；および
ｉｉｉ）前記１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部を前記エマルジョンから除去し、それによって前記組成物を形成するステップ
を含む、方法。
【請求項２９】
疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって：
ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
前記有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、
前記水溶液が、前記アルブミンを含む、ステップ；
ｉｉ）前記１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部を前記エマルジョンから除去して、蒸発後懸濁液を得るステップ；および
ｉｉｉ）前記生物活性ポリペプチドを前記蒸発後懸濁液に添加し、それによって前記組成物を形成するステップ
を含む、方法。
【請求項３０】
疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、
ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
前記有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、
前記水溶液が、前記アルブミンを含む、ステップ；
ｉｉ）前記１つまたは複数の有機溶媒の全てではない少なくとも一部を前記エマルジョンから除去して、エマルジョン−懸濁液中間体を得るステップ；
ｉｉｉ）前記エマルジョン−懸濁液中間体に前記生物活性ポリペプチドを添加するステップ、ならびに
ｉｖ）前記生物活性ポリペプチドを含むエマルジョン−懸濁液中間体から前記１つまたは複数の有機溶媒の追加の一部を除去し、それによって組成物を形成するステップ
を含む、方法。
【請求項３１】
疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、
ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
前記有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、
前記水溶液が、アルブミンを含み、前記アルブミンが、架橋剤によって誘導体化されている、ステップ；
ｉｉ）前記１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部を前記エマルジョンから除去して、蒸発後懸濁液を得るステップ；および
ｉｉｉ）前記蒸発後懸濁液に前記生物活性ポリペプチドを添加し、それによって組成物を形成するステップするステップであって、前記生物活性ポリペプチドが、架橋剤部分によって誘導体化されている、ステップ
を含む、方法。
【請求項３２】
前記ナノ粒子に会合していない前記誘導体化アルブミンを、非誘導体化アルブミンに交換するステップをさらに含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって：
ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
前記有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、
前記水溶液が、アルブミンを含み、前記アルブミンの少なくとも一部が、前記生物活性ポリペプチドにコンジュゲートしている、ステップ；および
ｉｉ）前記１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部を前記エマルジョンから除去し、それによって前記組成物を形成するステップ
を含む、方法。
【請求項３４】
前記ナノ粒子に会合していない生物活性ポリペプチドコンジュゲートアルブミンを、非コンジュゲートアルブミンに交換するステップをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
疎水性薬物と、アルブミンと、前記アルブミンにコンジュゲートした生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、前記疎水性薬物およびアルブミンを含むナノ粒子に、前記生物活性ポリペプチドをコンジュゲートさせるステップを含む、方法。
【請求項３６】
前記組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む、請求項２６〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記生物活性ポリペプチドが、抗体またはその断片である、請求項２６〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記生物活性ポリペプチドが、ベバシズマブ、トラスツズマブ、ＢＧＢ−Ａ３１７、またはトシリズマブである、請求項２６〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
請求項２６〜３８のいずれか一項に記載の方法によって得られる組成物。
【請求項４０】
請求項１〜２５および３９のいずれか一項に記載の組成物と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項４１】
請求項１〜２５、３９、および４０のいずれか一項に記載の組成物の有効量を個体に投与するステップを含む、個体における疾患を処置する方法。
【請求項４２】
前記疾患が、がんである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記個体が、ヒトである、請求項４１または４２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１６年１０月１０日に出願された米国仮特許出願番号第６２／４０６，３６７号からの優先権を主張しており、その内容は、その全体が参考として本明細書中に援用される。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイル上の配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出物の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：コンピューター可読形態（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名６３８７７２０２１７４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、記録された日時：２０１７年１０月９日、サイズ：６ＫＢ）。
【０００３】
発明の分野
本開示は、（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００４】
背景
アルブミンに基づくナノ粒子組成物は、タキサンなどの疎水性薬物を送達するための薬物送達システムとして開発されている。例えば、米国特許第５，９１６，５９６号；第６，５０６，４０５号；第６，７４９，８６８号；第６，５３７，５７９号；第７，８２０，７８８号；および第７，９２３，５３６号を参照されたい。Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）は、パクリタキセルのアルブミン安定化ナノ粒子製剤であり、転移性乳がんの処置に関して２００５年に米国において承認され、その後他の様々な国で承認された。これはまた、局所進行性または転移性の非小細胞肺がんおよび転移性膵臓がんの処置に関しても、米国、ヨーロッパ、および他の世界規模の市場において最近承認された。
【０００５】
ベバシズマブは、商品名Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）として販売され、血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦ−Ａ）を標的とする抗血管新生抗体であり、いくつかのがんの処置にとって有効である。アルブミンに基づくナノ粒子組成物の治療能を抗体治療と組み合わせる試みが過去に行われている（例えば、米国特許第９，４２７，４７７号；米国特許第９，４４６，１４８号；およびＰＣＴ出願国際公開第２０１４／０５５４１５号を参照されたい）。しかし、効率的なナノ粒子産生ならびに疎水性薬物および免疫治療剤の両方を含有する高品質のアルブミンに基づくナノ粒子がなおも必要である。
本明細書において言及した全ての刊行物、特許、特許出願、および公開された特許出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第５，９１６，５９６号明細書
【特許文献２】米国特許第６，５０６，４０５号明細書
【特許文献３】米国特許第６，７４９，８６８号明細書
【特許文献４】米国特許第６，５３７，５７９号明細書
【特許文献５】米国特許第７，８２０，７８８号明細書
【特許文献６】米国特許第７，９２３，５３６号明細書
【特許文献７】米国特許第９，４２７，４７７号明細書
【特許文献８】米国特許第９，４４６，１４８号明細書
【特許文献９】国際公開第２０１４／０５５４１５号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の簡単な要旨
本明細書において、（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）アルブミンにコンジュゲートした生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を記載する。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、抗体またはその断片である。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、ナノ粒子のアルブミンにコンジュゲートされている（共有結合または非共有結合のいずれかにより）。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、ナノ粒子に埋め込まれている。本明細書では、そのようなナノ粒子組成物を製造する方法をさらに記載する。
【０００８】
一つの態様では、（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）アルブミンにコンジュゲートした生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を提供する。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドが、アルブミンに共有結合で架橋している。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドが、化学架橋剤を介してアルブミンに共有結合で架橋している。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドが、ジスルフィド結合を介してアルブミンに共有結合で架橋している。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドが、非共有結合性架橋剤を介してアルブミンにコンジュゲートしている。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドが、非共有結合性架橋剤の第１の構成要素を含み、アルブミンが、非共有結合性架橋剤の第２の構成要素を含み、第１の構成要素が、第２の構成要素に特異的に結合する。一部の実施形態では、非共有結合性架橋剤が、核酸分子を含み、核酸分子の少なくとも一部が、相補的である。
【０００９】
別の態様では、（ａ）疎水性薬物を含む固体コアと、（ｂ）ナノ粒子の表面に会合したアルブミンと、（ｃ）ナノ粒子の表面または固体コアに埋め込まれた生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を提供する。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドが、ナノ粒子の表面に埋め込まれている。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドが、固体コアに埋め込まれている。
【００１０】
上記のナノ粒子の一部の実施形態では、組成物中の生物活性ポリペプチドの少なくとも７５％が、ナノ粒子に会合している。一部の実施形態では、ナノ粒子が、少なくとも約１００個の生物活性ポリペプチドを含む。
【００１１】
上記のナノ粒子の一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドが、抗体またはその断片である。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドが、ベバシズマブ、トラスツズマブ、ＢＧＢ−Ａ３１７、またはトシリズマブである。
【００１２】
上記のナノ粒子の一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子における疎水性薬物の生物活性ポリペプチドに対する重量比が、約１：１〜約１００：１である。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子におけるアルブミンの生物活性ポリペプチドに対する重量比が、約１：１〜約１０００：１である。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子におけるアルブミンの疎水性薬物に対する重量比が、約１：１〜約２０：１である。一部の実施形態では、疎水性薬物の重量が、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって決定され、生物活性ポリペプチドおよびアルブミンの重量が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定されるか、または疎水性薬物の重量が、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって決定され、アルブミンの重量が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定され、生物活性ポリペプチドの重量が、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定される。
【００１３】
上記のナノ粒子の一部の実施形態では、ナノ粒子に会合していない生物活性ポリペプチドをさらに含む。
【００１４】
一部の実施形態では、組成物のナノ粒子部分におけるアルブミンの少なくとも約４０％が、ジスルフィド結合によって架橋している。
【００１５】
一部の実施形態では、動的光散乱によって測定したナノ粒子の平均直径が、約２００ｎｍ以下である。
【００１６】
一部の実施形態では、ナノ粒子に会合していないアルブミンをさらに含む。
【００１７】
一部の実施形態では、疎水性薬物が、タキサンまたはリムス系薬物である。一部の実施形態では、疎水性薬物が、パクリタキセルである。一部の実施形態では、疎水性薬物が、ラパマイシンである。
【００１８】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって：
（ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、
水溶液が、アルブミンおよび生物活性ポリペプチドを含む、ステップ；および
（ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去し、それによって組成物を形成するステップ
を含む、方法を提供する。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドが、水溶液中でアルブミンにコンジュゲートしている。
【００１９】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって：
（ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、
水溶液が、アルブミンを含む、ステップ；
（ｉｉ）生物活性ポリペプチドをエマルジョンに添加するステップ；および
（ｉｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去し、それによって組成物を形成するステップ
を含む、方法を提供する。
【００２０】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって：
（ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、
水溶液が、アルブミンを含む、ステップ；
（ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去して、蒸発後懸濁液を得るステップ；および
（ｉｉｉ）生物活性ポリペプチドを蒸発後懸濁液に添加し、それによって組成物を形成するステップ
を含む、方法を提供する。
【００２１】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、
（ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、
水溶液が、アルブミンを含む、ステップ；
（ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の全てではない少なくとも一部をエマルジョンから除去して、エマルジョン−懸濁液中間体を得るステップ；
（ｉｉｉ）エマルジョン−懸濁液中間体に生物活性ポリペプチドを添加するステップ、ならびに
ｉｖ）生物活性ポリペプチドを含むエマルジョン−懸濁液中間体から１つまたは複数の有機溶媒の追加の一部を除去し、それによって組成物を形成するステップ
を含む、方法を提供する。
【００２２】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、
（ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、
水溶液が、アルブミンを含み、アルブミンが、架橋剤によって誘導体化されている、ステップ；
（ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去して、蒸発後懸濁液を得るステップ；および
（ｉｉｉ）蒸発後懸濁液に生物活性ポリペプチドを添加し、それによって組成物を形成するステップするステップであって、生物活性ポリペプチドが、架橋剤部分によって誘導体化されている、ステップ
を含む、方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、ナノ粒子に会合していない誘導体化アルブミンを、非誘導体化アルブミンに交換するステップをさらに含む。
【００２３】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって：
（ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、
水溶液が、アルブミンを含み、アルブミンの少なくとも一部が、生物活性ポリペプチドにコンジュゲートしている、ステップ；および
（ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去し、それによって組成物を形成するステップ
を含む、方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、ナノ粒子に会合していない生物活性ポリペプチドコンジュゲートアルブミンを、非コンジュゲートアルブミンに交換するステップをさらに含む。
【００２４】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、アルブミンにコンジュゲートした生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、疎水性薬物およびアルブミンを含むナノ粒子に、生物活性ポリペプチドをコンジュゲートさせるステップを含む、方法を提供する。
【００２５】
上記の方法の一部の実施形態では、方法は、組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。
【００２６】
上記の方法の一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドが、抗体またはその断片である。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドが、ベバシズマブ、トラスツズマブ、ＢＧＢ−Ａ３１７、またはトシリズマブである。
【００２７】
本明細書において、上記の方法のいずれか１つの方法によって得た組成物がさらに提供される。
【００２８】
同様に、本明細書において、上記の組成物のいずれか１つと、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物が提供される。
【００２９】
別の態様では、個体における疾患を処置する方法であって、上記の組成物のいずれかの有効量を個体に投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、疾患はがんである。一部の実施形態では、個体はヒトである。
【００３０】
本発明のこれらおよび他の態様および利点は、以下の詳細な説明および添付の特許請求の範囲から明らかとなるであろう。本明細書に記載されている様々な実施形態の特性の１つ、一部、または全てを、本発明の他の実施形態を形成するために組み合わせてもよいことが理解される。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、生物活性ポリペプチドおよびアルブミンを水溶液に含めることにより、本明細書に記載されているナノ粒子を含む組成物を製作するための方法の一実施形態を説明する概略図を示す。
【００３２】
【図２】図２は、生物活性ポリペプチドを、水溶液（アルブミンおよび水を含む）および有機溶液（１つまたは複数の有機溶媒および疎水性薬物を含む）を含む粗混合物に添加することにより、本明細書に記載されているナノ粒子を含む組成物を製作するための方法の一実施形態を説明する概略図を示す。
【００３３】
【図３】図３は、生物活性ポリペプチドを、水溶液（アルブミンおよび水を含む）および有機溶液（１つまたは複数の有機溶媒および疎水性薬物を含む）を含むエマルジョンに添加することにより、本明細書に記載されているナノ粒子を含む組成物を製作するための方法の一実施形態を説明する概略図を示す。
【００３４】
【図４】図４は、生物活性ポリペプチドを、蒸発後ナノ粒子懸濁液に添加するステップであって、ナノ粒子がアルブミンおよび疎水性薬物を含む、ステップにより、本明細書に記載されているナノ粒子を含む組成物を製作するための方法の一実施形態を示す。
【００３５】
【図５】図５は、生物活性ポリペプチドを、アルブミンおよび疎水性薬物を含む予め製造したナノ粒子に添加することにより、本明細書に記載されているナノ粒子を含む組成物を製作するための方法の一実施形態を説明する概略図を示す。
【００３６】
【図６】図６は、生物活性ポリペプチドを、ナノ粒子懸濁液に添加するステップであって、ナノ粒子が誘導体化アルブミンおよび疎水性薬物を含む、ステップにより、本明細書に記載されているナノ粒子を含む組成物を製作するための方法の一実施形態を説明する概略図を示す。生物活性ポリペプチドは、ナノ粒子と会合した誘導体化アルブミンにコンジュゲートする。
【００３７】
【図７Ａ】図７Ａは、１００％Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）緩衝剤（リン酸ナトリウム緩衝剤およびα，α−トレハロースを含有するが、ポリソルベート２０は除く）を用いて１０ｍｇ／ｍＬに再構成し、室温で２４時間インキュベートした後ｐＨを調整していない（ｐＨは６．４と測定された）Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）の、光学顕微鏡により撮影した画像である。
【００３８】
【図７Ｂ】図７Ｂは、２０％Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）緩衝剤（リン酸ナトリウム緩衝剤およびα，α−トレハロースを含有するが、ポリソルベート２０は除く）および８０％生理食塩水を用いて１０ｍｇ／ｍＬに再構成し、５８℃で２４時間インキュベートした後ｐＨを５に調整したＡｂｒａｘａｎｅ（登録商標）の、光学顕微鏡により撮影した画像である。
【００３９】
【図７Ｃ】図７Ｃは、１００％Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）緩衝剤（リン酸ナトリウム緩衝剤およびα，α−トレハロースならびにポリソルベート２０の各々を含有する）を用いて１０ｍｇ／ｍＬに再構成し、室温で２４時間インキュベートした後ｐＨを調整していない（ｐＨは６．８と測定された）Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）の、光学顕微鏡により撮影した画像である。
【００４０】
【図８】図８Ａは、ナノ粒子製造プロセス中の種々の時点における、アルブミンを用いないベバシズマブのサイズ排除クロマトグラフィー測定の結果を示す。図８Ｂは、製造プロセスの開始時に添加された初期濃度に対する、製造プロセスの各ステップ後に回収されたベバシズマブ（アルブミンを用いない）の画分を示す。
【００４１】
【図９Ａ】図９Ａは、ナノ粒子製造プロセス中の種々の時点における、１０％ヒトアルブミンを用いたベバシズマブのサイズ排除クロマトグラフィー測定の結果を示す。
【００４２】
【図９Ｂ−Ｃ】図９Ｂは、ベバシズマブが初期水溶液に提供される場合の、製造プロセスの開始時に添加された初期濃度に対する、製造プロセスの各ステップ後に回収されたベバシズマブの画分を示す（０％、１％、２．５％、５％、または１０％ヒトアルブミンを用いた）。図９Ｃは、ベバシズマブが初期水溶液に提供される場合の、製造プロセスの開始時に添加された初期濃度に対する、製造プロセスの各ステップ後に残留するベバシズマブ単量体の画分を示す（０％、１％、２．５％、５％、または１０％ヒトアルブミンを用いた）。
【００４３】
【図１０】図１０Ａは、ベバシズマブが、５％ヒトアルブミンを有する初期水溶液に提供されるか、またはアルブミン水溶液および有機溶液の高圧ホモジナイゼーション後のエマルジョンに提供される場合の、提供されたベバシズマブの量に対する、製造プロセスの各ステップ後に回収されたベバシズマブの画分を示す。図１０Ｂは、ベバシズマブが、５％ヒトアルブミンを有する初期水溶液に提供されるか、またはアルブミン水溶液および有機溶液の高圧ホモジナイゼーション後のエマルジョンに提供される場合の、提供されたベバシズマブの量に対する、製造プロセスの各ステップ後に残留するベバシズマブ単量体の画分を示す。
【００４４】
【図１１】図１１は、ｎａｂ−パクリタキセル（「Ａｂｘ」）、異なる比のベバシズマブおよびｎａｂ−パクリタキセルの混和物（「Ｂｅｖ：Ａｂｘ（８：１０）」および「Ｂｅｖ：Ａｂｘ（８：１０）」）、異なる比のトラスツズマブおよびｎａｂ−パクリタキセルの混和物（「Ｔｒａｓ：Ａｂｘ（８：１０）」および「Ｔｒａｓ：Ａｂｘ（８：１０）」）、ならびに異なる食塩水濃度のベバシズマブ単独（「Ｂｅｖ」）の、ナノ粒子サイズ（動的光散乱により決定された）を示す。
【００４５】
【図１２】図１２は、ｎａｂ−パクリタキセルおよびベバシズマブの混和物（「ＡＢ１６０」）、同日に（「ＢＥＶ１２＋ＡＢＸ３０  −  同日」）または１日離間して（「ＢＥＶ１２＋ＡＢＸ３０  −  １日離間」）投与したベバシズマブおよびｎａｂ−パクリタキセル、ベバシズマブ単独（「ＢＥＶ１２」）、ｎａｂ−パクリタキセル単独（「ＡＢＸ３０」）、または媒体対照（「媒体」）を投与した７日後の腫瘍体積のパーセント変化を示す。
【００４６】
【図１３】図１３は、抗体および遊離ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）のコンジュゲーションの概略図を示す。
【００４７】
【図１４Ａ】図１４Ａ〜１４Ｃは、トラスツズマブおよびＳＭ（ＰＥＧ）６活性化トラスツズマブ種のデコンボリューション質量スペクトルを示す。図１４Ａは、トラスツズマブの質量スペクトルを示す。図１４Ｂは、１：５のトラスツズマブ：リンカー比を使用したＳＭ（ＰＥＧ）６活性化トラスツズマブの質量スペクトルを示す。図１４Ｃは、１：１０のトラスツズマブ：リンカー比を使用したＳＭ（ＰＥＧ）６活性化トラスツズマブの質量スペクトルを示す。
【００４８】
【図１４Ｂ】図１４Ａ〜１４Ｃは、トラスツズマブおよびＳＭ（ＰＥＧ）６活性化トラスツズマブ種のデコンボリューション質量スペクトルを示す。図１４Ａは、トラスツズマブの質量スペクトルを示す。図１４Ｂは、１：５のトラスツズマブ：リンカー比を使用したＳＭ（ＰＥＧ）６活性化トラスツズマブの質量スペクトルを示す。図１４Ｃは、１：１０のトラスツズマブ：リンカー比を使用したＳＭ（ＰＥＧ）６活性化トラスツズマブの質量スペクトルを示す。
【００４９】
【図１４Ｃ】図１４Ａ〜１４Ｃは、トラスツズマブおよびＳＭ（ＰＥＧ）６活性化トラスツズマブ種のデコンボリューション質量スペクトルを示す。図１４Ａは、トラスツズマブの質量スペクトルを示す。図１４Ｂは、１：５のトラスツズマブ：リンカー比を使用したＳＭ（ＰＥＧ）６活性化トラスツズマブの質量スペクトルを示す。図１４Ｃは、１：１０のトラスツズマブ：リンカー比を使用したＳＭ（ＰＥＧ）６活性化トラスツズマブの質量スペクトルを示す。
【００５０】
【図１５】図１５は、１：１トラスツズマブ−ＨＳＡコンジュゲート、トラスツズマブ、およびＨＳＡのＳＥＣクロマトグラムを示す。
【００５１】
【図１６】図１６は、トラスツズマブ−ＨＳＡコンジュゲーション産物のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（４〜１２％）を示す。
【００５２】
【図１７】図１７は、トラスツズマブ−ＨＳＡコンジュゲーション産物およびトラスツズマブコンジュゲーション産物の未変性ゲルを示す。
【００５３】
【図１８】図１８は、活性化抗体および単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のコンジュゲーションの概略図を示す。
【００５４】
【図１９】図１９は、活性化抗体およびチオール化単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のコンジュゲーションの概略図を示す。
【００５５】
【図２０】図２０は、単離ｎａｂ−パクリタキセルナノ粒子またはｎａｂ−パクリタキセル製剤（ＡＢＸ）およびトラスツズマブのコンジュゲーション反応からの試料の３〜８％Ｔｒｉｓ−酢酸ＳＤＳ  ＰＡＧＥゲルを示す。
【００５６】
【図２１】図２１は、銅フリークリックケミストリーを使用した、抗体および単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のコンジュゲーションの概略図を示す。
【００５７】
【図２２】図２２は、単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のボロン酸修飾の概略図を示す。
【００５８】
【図２３】図２３は、ＤＮＡ架橋剤を使用した、活性化抗体および活性化単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のコンジュゲーションの概略図を示す。
【００５９】
【図２４】図２４は、ニボルマブおよび活性化ニボルマブの種のＬＣ−ＭＳ分析からのデコンボリューション質量スペクトルを示す。
【００６０】
【図２５Ａ】図２５Ａ〜２５Ｄは、処置投与後の時点での、小型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２５Ａおよび２５Ｂは、０日目の処置投与後７日目での、小型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２３Ｃ〜Ｄは、０日目および７日目の処置投与後１４日目での、小型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。
【図２５Ｂ】図２５Ａ〜２５Ｄは、処置投与後の時点での、小型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２５Ａおよび２５Ｂは、０日目の処置投与後７日目での、小型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２３Ｃ〜Ｄは、０日目および７日目の処置投与後１４日目での、小型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。
【図２５Ｃ】図２５Ａ〜２５Ｄは、処置投与後の時点での、小型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２５Ａおよび２５Ｂは、０日目の処置投与後７日目での、小型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２３Ｃ〜Ｄは、０日目および７日目の処置投与後１４日目での、小型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。
【図２５Ｄ】図２５Ａ〜２５Ｄは、処置投与後の時点での、小型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２５Ａおよび２５Ｂは、０日目の処置投与後７日目での、小型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２３Ｃ〜Ｄは、０日目および７日目の処置投与後１４日目での、小型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。
【００６１】
【図２６Ａ】図２６Ａ〜２６Ｂは、処置投与後の時点での、大型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２６Ａは、０日目の処置投与後７日目での、大型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２６Ｂは、０日目および７日目の処置投与後１４日目での、大型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。
【００６２】
【図２６Ｂ】図２６Ａ〜２６Ｂは、処置投与後の時点での、大型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２６Ａは、０日目の処置投与後７日目での、大型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２６Ｂは、０日目および７日目の処置投与後１４日目での、大型腫瘍研究のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。
【００６３】
【図２７Ａ】図２７Ａ〜２７Ｂは、処置投与後の時点での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２７Ａは、０日目の処置投与後７日目での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２７Ｂは、０日目および７日目の処置投与後１４日目での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。
【図２７Ｂ】図２７Ａ〜２７Ｂは、処置投与後の時点での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２７Ａは、０日目の処置投与後７日目での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２７Ｂは、０日目および７日目の処置投与後１４日目での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。
【００６４】
【図２８Ａ】図２８Ａ〜２８Ｄは、処置投与後の時点での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２８Ａおよび２８Ｂは、０日目の処置投与後７日目での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２８Ｃおよび２８Ｄは、０日目および７日目の処置投与後１４日目での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。
【図２８Ｂ】図２８Ａ〜２８Ｄは、処置投与後の時点での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２８Ａおよび２８Ｂは、０日目の処置投与後７日目での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２８Ｃおよび２８Ｄは、０日目および７日目の処置投与後１４日目での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。
【図２８Ｃ】図２８Ａ〜２８Ｄは、処置投与後の時点での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２８Ａおよび２８Ｂは、０日目の処置投与後７日目での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２８Ｃおよび２８Ｄは、０日目および７日目の処置投与後１４日目での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。
【図２８Ｄ】図２８Ａ〜２８Ｄは、処置投与後の時点での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２８Ａおよび２８Ｂは、０日目の処置投与後７日目での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。図２８Ｃおよび２８Ｄは、０日目および７日目の処置投与後１４日目での、ＢＴ−４７４異種移植腫瘍のパーセンテージ腫瘍体積変化を示す。
【発明を実施するための形態】
【００６５】
発明の詳細な説明
本出願は、（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチド（例えば、抗体またはその断片）とを含むナノ粒子を含む組成物を提供する。例えば、一部の実施形態では、（ａ）疎水性薬物（例えばタキサン、例えばパクリタキセル）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミンまたは誘導体化アルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチド（例えば抗体、例えば治療抗体）とを含むナノ粒子を含む組成物を提供する。一部の実施形態では、組成物はさらに別の治療剤を含む。一部の実施形態では、組成物は、組成物のナノ粒子部分に会合していないアルブミンおよび／または生物活性ポリペプチドをさらに含む。
【００６６】
ある特定の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、ナノ粒子の中に埋め込まれている。埋め込まれた生物活性ポリペプチドは、ナノ粒子の表面アルブミンの中に埋め込まれていてもよく、またはナノ粒子の疎水性コアの中に埋め込まれていてもよい。生物活性ポリペプチドは、生物活性ポリペプチドを予め形成された凍結乾燥ナノ粒子組成物と混合する（すなわち混合物）のではなく、ナノ粒子の１つまたは複数の製造段階に生物活性ポリペプチドを含めることによって、ナノ粒子の中に埋め込むことができる。本明細書にさらに詳細に記載されるように、ある特定の実施形態では、ナノ粒子がアルブミンと疎水性薬物とを含有するナノ粒子懸濁液の製造は、ｉ）疎水性薬物を含有する有機溶媒とアルブミンを含有する水溶液とのエマルジョンを形成する（例えば、高圧ホモジナイゼーションによる）ステップ、およびｉｉ）エマルジョンから有機溶媒の少なくとも一部を除去して（例えば、蒸発によって）ナノ粒子懸濁液を形成するステップを含む。ある特定の実施形態では、製造プロセスは、ナノ粒子懸濁液を製剤化する（例えば、アルブミンまたは水を添加することによって）ステップ、および／または懸濁液を凍結乾燥してナノ粒子組成物を形成するステップをさらに含み得る。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、１つまたは複数のナノ粒子組成物前駆物、例えばエマルジョンを形成する前のアルブミンを含有する水溶液、形成されたエマルジョン（有機溶媒の除去前または除去の間のいずれか）、または有機溶媒の除去後の懸濁液（すなわち、「蒸発後懸濁液」）に添加される。
【００６７】
ある特定の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、例えば共有結合性架橋剤または非共有結合性架橋剤であり得る架橋剤を介してナノ粒子にコンジュゲートする。架橋は、生物活性ポリペプチドの一区分をアルブミンの一区分に連結させ、それによって生物活性ポリペプチドをアルブミン（したがってナノ粒子）に会合させることができる。一部の実施形態では、架橋剤は、生物活性ポリペプチドとアルブミンの間に共有結合による連結をもたらす。すなわち、架橋剤は、生物活性ポリペプチドに共有結合で連結し、かつアルブミンと共有結合で連結し、それによって２つの実体の間で共有結合の橋をもたらす。ある特定の態様では、架橋剤は、生物活性ポリペプチドとアルブミンとの間で非共有結合による連結をもたらす。例えば、アルブミンを、第１の架橋剤構成要素に共有結合でコンジュゲートさせることができ、生物活性ポリペプチドを第２の架橋剤構成要素に共有結合でコンジュゲートさせることができ、第１の架橋剤構成要素と第２の架橋剤構成要素（例えば、相補的核酸分子、例えば相補的ＤＮＡ）が共に結合する。
【００６８】
本出願は、（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法をさらに提供する。一部の実施形態では、方法は、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンと生物活性ポリペプチドとを含む、ステップ；およびｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去し、それによって組成物を形成するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンを含む、ステップ；ｉｉ）生物活性ポリペプチドをエマルジョンに添加するステップ；およびｉｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去し、それによって組成物を形成するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンを含む、ステップ；ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去して、蒸発後懸濁液を得るステップ；およびｉｉｉ）生物活性ポリペプチドを蒸発後懸濁液に添加し、それによって組成物を形成するステップを含む。
【００６９】
ある特定の実施形態では、ナノ粒子製造プロセスの際の水溶液に含まれるアルブミンの少なくとも一部は、生物活性ポリペプチドにコンジュゲートしている。例えば、一部の実施形態では、方法は、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンを含み、アルブミンの少なくとも一部が生物活性ポリペプチドにコンジュゲートしている、ステップ；およびｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも１つをエマルジョンから除去し、それによって組成物を形成するステップを含む。
【００７０】
ある特定の実施形態では、ナノ粒子製造プロセスの際の水溶液に含まれるアルブミンの少なくとも一部は、誘導体化されている（例えば、アルブミンのチオール化によって、または非共有結合性架橋剤の第１の区分をアルブミンに共有結合させることによって）。一部の実施形態では、方法は、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンを含み、アルブミンの少なくとも一部が誘導体化されている、ステップ；ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去して、蒸発後懸濁液を得るステップ；およびｉｉｉ）生物活性ポリペプチドを蒸発後懸濁液に添加するステップを含む。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは誘導体化されている。例えば、一部の実施形態では、方法は、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンを含み、アルブミンの少なくとも一部が誘導体化されている、ステップ；ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去して、蒸発後懸濁液を得るステップ；およびｉｉｉ）誘導体化生物活性ポリペプチドを蒸発後懸濁液に添加するステップを含む。
【００７１】
ある特定の実施形態では、ナノ粒子は、予め形成されたナノ粒子に、生物活性ポリペプチドをコンジュゲートすることによって製造され、ここで予め形成されたナノ粒子は、凍結乾燥されていてもよいし、または懸濁液（例えば、ナノ粒子が予め凍結乾燥された再構成された懸濁液、または蒸発後のナノ粒子懸濁液）中に存在していてもよい。
【００７２】
本明細書に開示されている組成物（例えば、医薬組成物）は、がんなどの様々な疾患を処置するために有用である。したがって、本出願は、（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物（例えば、医薬組成物）、ならびにがんを含む疾患を処置するためにそのような組成物を使用する方法を提供する。さらに、本明細書において、本明細書に記載されている組成物の有効量と、別の治療剤（例えば、化学療法剤）の有効量とを投与するステップを含む組合せ処置が提供される。同様に、本明細書に記載されている組成物を含む、キット、薬、医薬、使用のための組成物、単位投与剤形、医薬組成物（例えば、凍結乾燥組成物）も提供される。
【００７３】
以下に提供する節の見出しは、構成上の目的のためにのみ提供され、本発明の範囲を制限しないと意図される。
【００７４】
定義
本明細書で使用される場合、「処置」または「処置すること」は、臨床での結果を含む、有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチである。本発明の目的に関して、有益なまたは所望の臨床結果には、以下の１つまたは複数が挙げられるがこれらに限定されない：疾患に起因する１つまたは複数の症状を緩和すること、疾患の程度を低下させること、疾患を安定化すること（例えば、疾患の悪化を防止するまたは遅延させること）、疾患の広がり（例えば、転移）を防止するもしくは遅延させること、疾患の再発を防止するもしくは遅延させること、疾患の進行を遅延させるもしくは遅くすること、疾患状態を改善すること、疾患の寛解（部分または完全）をもたらすこと、疾患を処置するために必要な１つもしくは複数の他の薬物治療の用量を減少させること、疾患の進行を遅延させること、クオリティオブライフを増大させること、および／または生存を延長させること。同様に、疾患（例えば、がん）の病理的結末の低減も「処置」に包含される。本発明の方法は、処置のこれらの態様のうちの任意の１つまたは複数を企図する。
【００７５】
用語「個体」は、哺乳動物を指し、これにはヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、齧歯類、または霊長類が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、個体はヒトである。一部の実施形態では、ヒトは男性である。一部の実施形態では、ヒトは女性である。
【００７６】
本明細書で使用される場合、用語「抗体」には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド連結Ｆｖ、ｓｃＦｖ、シングルドメイン抗体（ｄＡｂ）、ダイアボディ、多特異性抗体、二重特異性抗体、抗イディオタイプ抗体、二特異性抗体、その機能的に活性なエピトープ結合断片、二官能性ハイブリッド抗体、一本鎖抗体、およびＦｃ含有ポリペプチド、例えば免疫接着が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、抗体は、任意の重鎖アイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、またはＩｇＤ）の抗体であり得る。一部の実施形態では、抗体は任意の軽鎖アイソタイプ（例えば、カッパまたはガンマ）の抗体であり得る。抗体は、非ヒト（例えば、マウス、ヤギ、または他の任意の動物に由来する）、完全なヒト、ヒト化、またはキメラであり得る。一部の実施形態では、抗体は、誘導体化された抗体である。
【００７７】
本明細書で使用される場合、「リスクがある」個体は、疾患（例えば、がん）を発症するリスクがある個体である。「リスクがある」個体は、検出可能な疾患を有していてもよくまたは有していなくてもよく、本明細書に記載されている処置方法の前に検出可能な疾患を示していてもよくまたは示していなくてもよい。「リスクがある」とは、個体が、本明細書に記載されている疾患の発症に相関する測定可能なパラメータである１つまたは複数のいわゆる危険因子を有することを指す。これらの危険因子の１つまたは複数を有する個体は、これらの危険因子を有しない個体より疾患を発症する確率が高い。
【００７８】
「アジュバント療法」は、個体が病歴を有し、一般的に、手術（例えば、外科的切除）、放射線療法、および／または化学療法を含むがこれらに限定されない治療が奏効している（ただし必ずしもその必要はない）臨床状況を指す。しかし、その病歴のために、これらの個体は、疾患発症のリスクがあると考えられる。「アジュバント療法」での処置または投与は、その後の処置の様式を指す。リスクの程度（例えば、アジュバント療法中の個体が「高リスク」または「低リスク」であると考えられる場合）は、いくつかの要因に依存し、ほとんどの場合、最初に処置した疾患の程度に依存する。
【００７９】
本明細書で使用される場合、「生物活性ポリペプチド」は、リガンドもしくは受容体の結合に関連する活性、または別の薬剤がリガンドもしくは受容体に結合するのを阻害することに関連する活性を有するその一部を含む、ペプチド（アミド）結合によって連結される２つまたはそれより多くのアミノ酸を含む分子を指す。生物活性ポリペプチドには、オリゴペプチド、ペプチド、ポリペプチドアプタマー、タンパク質、多量体タンパク質、融合タンパク質、抗体、またはその断片が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、アルブミン−疎水性薬物ナノ粒子に会合するための部分を含む。
【００８０】
「ネオアジュバント療法」は、方法が一次／根治治療の前に実施される臨床状況を指す。
【００８１】
本明細書で使用される場合、疾患の発症を「遅延させること」とは、疾患の発症を繰り延べる、妨害する、遅くする、遅らせる、安定化する、および／または延期することを意味する。この遅延は、病歴および／または処置される個体に応じた様々な長さの時間の遅延であり得る。当業者には明白であるように、十分または有意な遅延は、実際に個体が疾患を発症しないという点において予防を包含し得る。疾患の発生を「遅延させる」方法は、方法を使用していない場合と比較して、所定の時間枠での疾患発症の確率を低減させる、および／または所定の時間枠で疾患の程度を低減させる方法である。そのような比較は典型的に、統計学的に有意な数の対象を使用する臨床試験に基づく。疾患の発症は、コンピューター化体軸断層撮影（ＣＡＴスキャン）、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、腹部超音波、凝固試験、血管造影、または生検が挙げられるがこれらに限定されない標準的な方法を使用して検出可能であり得る。発症はまた、当初検出不能であり得る疾患の進行も指し、発生、再発、および開始を含む。
【００８２】
本明細書で使用される用語「有効量」は、その症状の１つまたは複数を改善する、緩和する、弱める、および／または遅延させるなどの、特定の障害、状態、または疾患を処置するために十分な化合物または組成物の量を指す。がんなどの疾患に関連して、有効量は、腫瘍を退縮させるためおよび／または腫瘍の成長速度を減少させるために（腫瘍の成長を抑制させるためなど）、またはがんにおける他の望ましくない細胞増殖を防止するもしくは遅延させるために十分な量を含む。一部の実施形態では、有効量は、がんの発症を遅延させるために十分な量である。一部の実施形態では、有効量は、再発を防止するまたは遅延させるために十分な量である。有効量は、１回または複数回の投与で投与することができる。がんの場合、薬物または組成物の有効量は、（ｉ）類上皮細胞の数を低減させ得る；（ｉｉ）腫瘍サイズを低減させ得る；（ｉｉｉ）末梢臓器へのがん細胞の浸潤を阻害し得る、遅らせ得る、ある程度遅くし得る、および好ましくは停止し得る；（ｉｖ）腫瘍の転移を阻害し得る（例えば、ある程度遅らせ得る、および好ましくは停止させ得る）；（ｖ）腫瘍の成長を阻害し得る；（ｖｉ）腫瘍の発生および／もしくは再発を防止し得るもしくは遅延させ得る；ならびに／または（ｖｉｉ）がんに関連する症状の１つもしくは複数をある程度軽減し得る。
【００８３】
本明細書で使用される場合、「併用療法」とは、第１の薬剤が別の治療剤と共に投与されることを意味する。「と共に」とは、１つの処置モダリティに加えて別の処置モダリティを投与すること、例えば、本明細書に記載されているナノ粒子組成物の投与に加えて別の治療剤を同じ個体に投与することを指す。そのため、「共に」は、１つの処置モダリティを、他の処置モダリティの送達の前、間、または後に個体に投与することを指す。
【００８４】
本明細書で使用される場合、用語「同時投与」は、併用処置における第１の治療と第２の治療が約１５分以下、例えば約１０、５、または１分以下のうちのいずれかの間隔で投与されることを意味する。第１および第２の治療が同時に投与される場合、第１および第２の治療は、同じ組成物に含有されてもよく（例えば、第１および第２の治療の両方を含む組成物）、または個別の組成物（例えば、１つの組成物に第１の治療および別の組成物に第２の治療が含有される）に含有されてもよい。
【００８５】
本明細書で使用される場合、用語「連続投与」は、併用療法における第１の治療と第２の治療が約１５分より長い間隔、例えば、約２０分もしくはそれを超える分数、３０分もしくはそれを超える分数、４０分もしくはそれを超える分数、５０分もしくはそれを超える分数、６０分もしくはそれを超える分数、２時間もしくはそれを超える時間数、４時間もしくはそれを超える時間数、６時間もしくはそれを超える時間数、１２時間もしくはそれを超える時間数、または２４時間もしくはそれを超える時間数のうちのいずれかより長い間隔で投与されることを意味する。第１の治療または第２の治療のいずれを最初に投与してもよい。第１および第２の治療は、個別の組成物に含有されるが、これらは同じまたは異なる包装またはキットに含有されてもよい。
【００８６】
本明細書で使用される場合、用語「同時投与」は、併用療法における第１の治療の投与と第２の治療の投与が互いに重なり合うことを意味する。
【００８７】
本明細書で使用される場合、用語「ｎａｂ」はナノ粒子アルブミン結合体を表す。例えば、ｎａｂ−パクリタキセルは、パクリタキセルのナノ粒子アルブミン結合製剤である。
【００８８】
本明細書で使用される場合、用語「エマルジョン」は、連続水相において約１マイクロメートルまたはそれ未満の平均直径を有する液滴を含む分散有機相を有する液体を指す。
【００８９】
用語「疎水性薬物」は、約２５℃のｐＨ７の水中で約１ｍｇ／ｍＬまたはそれ未満の溶解度を有する薬物を指す。
【００９０】
本明細書に記載されている本発明の態様および実施形態は、態様および実施形態「からなる」および／または「から本質的になる」を含むと理解される。
【００９１】
本明細書における「約」値またはパラメータの言及は、その値またはパラメータそれ自体に向けられる変形形態を含む（および記載する）。例えば、「約Ｘ」という記載は、「Ｘ」の記載を含む。さらに、任意の一連の数値の前の「約」の使用は、その一連の列挙した数字のそれぞれの「約」を含む。例えば、「約Ｘ、Ｙ、またはＺ」という記載は、「約Ｘ、約Ｙ、または約Ｚ」を記載すると意図される。
【００９２】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの」、「または」、および「その」は、文脈上明らかな別段の指示がない限り複数形を含む。
【００９３】
ナノ粒子を含む組成物
本明細書に記載されている組成物は、（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されている組成物は、ナノ粒子に会合していないアルブミンおよび／または生物活性ポリペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されている組成物は、別の治療剤をさらに含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されている組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む。
【００９４】
本明細書に記載されているナノ粒子は、疎水性薬物を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、疎水性薬物を含む固体コアを含む。本明細書で使用される場合、「コア」は、ナノ粒子に会合した疎水性薬物の実質的に全てが位置するナノ粒子の内側部分を指す。一部の実施形態では、ナノ粒子は、疎水性薬物を含む固体コアを含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、疎水性薬物の固体コアを含む。
【００９５】
一部の実施形態では、ナノ粒子中の疎水性薬物は、ナノ粒子の約５０重量％、６０重量％、７０重量％、８０重量％、９０重量％、９５重量％、または９９重量％より多くを構成する。一部の実施形態では、ナノ粒子は、非ポリマーマトリクスを有する。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ポリマー材料（例えば、ポリマーマトリクス）を実質的に含まない疎水性薬物の固体コアを含む。
【００９６】
ナノ粒子中の疎水性薬物の固体コアは、一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドの一部をさらに含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、疎水性薬物と生物活性ポリペプチドの一部とを含む固体コアを含む。
【００９７】
本明細書に記載されている場合、ナノ粒子はアルブミンを含む。本発明では、ヒトアルブミン、ヒト血清アルブミン、組換えアルブミン、およびその誘導体が挙げられるがこれらに限定されないアルブミンが企図される。一部の実施形態では、アルブミンはヒトアルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンはヒト血清アルブミンである。一部の実施形態では、ヒトアルブミンはヒト血清アルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは組換えアルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンはヒト組換えアルブミンである。一部の実施形態では、組み変えアルブミンはヒト組換えアルブミンである。
【００９８】
アルブミン、例えばヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）は、高度に溶解性の球状タンパク質である。例えば、ヒト血清アルブミンは、５８５個のアミノ酸からなり、分子量約６６ｋＤａを有する。ＨＳＡは、ヒト血清中の最も豊富なタンパク質であり、ヒト血漿のコロイド浸透圧の７０〜８０％を占める。ＨＳＡのアミノ酸配列は、全体で１７個のジスルフィド架橋、１つの遊離のチオール（Ｃｙｓ３４）、および１つのトリプトファン（Ｔｒｐ２１４）を含有する。ＨＳＡ溶液の静脈内使用は、循環血液量減少性ショックの予防および処置のために（例えば、Tullis,  JAMA、２３７巻、３５５〜３６０頁、４６０〜４６３頁（１９７７年）；Houserら、Surgery,  Gynecology  and  Obstetrics、１５０巻、８１１〜８１６頁（１９８０年）を参照されたい）、ならびに新生児高ビリルビン血症の処置において交換輸血と共に（例えば、Finlayson,  Seminars  in  Thrombosis  and  Hemostasis、６巻、８５〜１２０頁（１９８０年）を参照されたい）適応されている。
【００９９】
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）などのアルブミンは、複数の疎水性結合部位を有する。ＨＳＡは、８個の脂肪酸結合部位を有し、中性および負に荷電した疎水性化合物を含む多様な組の疎水性薬物、例えばタキサンに結合する（Goodmanら、The  Pharmacological  Basis  of  Therapeutics、第９版、McGraw-Hill  New  York（１９９６年））。２つの高親和性結合部位が、ＨＳＡのサブドメインＩＩＡおよびＩＩＩＡにおいて提唱されており、これらは、極性リガンド特徴の結合点として機能する表面近くの荷電リシンおよびアルギニン残基を有する高度に伸長した疎水性ポケットである（例えば、Fehskeら、Biochem.  Pharmcol.、３０巻、６８７〜９２頁（１９８ａ）、Vorum、Dan.  Med.  Bull.、４６巻、３７９〜９９頁（１９９９年）、Kragh-Hansen、Dan.  Med.  Bull.、１４４１巻、１３１〜４０頁（１９９０年）、Curryら、Nat.  Struct.  Biol.、５巻、８２７〜３５頁（１９９８年）、Sugioら、Protein.  Eng.、１２巻、４３９〜４６頁（１９９９年）、Heら、Nature、３５８巻、２０９〜１５頁（１９９ｂ）、およびCarterら、Adv.  Protein.  Chem.、４５巻、１５３〜２０３頁（１９９４年）を参照されたい）。パクリタキセルおよびプロポフォルは、ＨＳＡに結合することが示されている（例えば、Paalら、Eur.  J.  Biochem.、２６８巻（７号）、２１８７〜９１頁（２００ａ）、Purcellら、Biochim.  Biophys.  Acta、１４７８巻（ａ）、６１〜８頁（２０００年）、Altmayerら、Arzneimittelforschung、４５巻、１０５３〜６頁（１９９５年）、およびGarridoら、Rev.  Esp.  Anestestiol.  Reanim.、４１巻、３０８〜１２頁（１９９４年）を参照されたい）。さらに、ドセタキセルは、ヒト血漿タンパク質に結合することが示されている（例えば、Urienら、Invest.  New  Drugs、１４巻（ｂ）、１４７〜５１頁（１９９６年）を参照されたい）。
【０１００】
他のアルブミン、例えばウシ血清アルブミンが企図される。そのような非ヒトアルブミンの使用は、例えば、獣医学（家庭用ペットおよび農業関連のものを含む）などの非ヒト哺乳動物におけるこれらの組成物の使用の状況において適切であり得る。
【０１０１】
同様に、誘導体化アルブミンも本開示の範囲内であると企図される。本明細書で使用される場合、「誘導体化アルブミン」は、アルブミンの発現後に修飾されているアルブミンである。一部の実施形態では、誘導体化アルブミンは、化学架橋剤にコンジュゲートしたアルブミンである。一部の実施形態では、誘導体化アルブミンは、生物活性ポリペプチドにコンジュゲートした別の化学架橋剤部分に反応性（例えば、特異的に反応性）である化学架橋剤部分にコンジュゲートしたアルブミンである。例えば、一部の実施形態では、誘導体化アルブミンは、アルキン部分を含む化学架橋剤にコンジュゲートし、誘導体化生物活性ポリペプチドは、アジド部分を含む化学架橋剤にコンジュゲートしている。一部の実施形態では、誘導体化アルブミンは、アジド部分を含む化学架橋剤にコンジュゲートし、誘導体化生物活性ポリペプチドはアルキン部分を含む化学架橋剤にコンジュゲートしている。アルブミンと生物活性ポリペプチドとを会合させるために有用な架橋部分の他の組には、歪みアルキンとアジド、歪みアルキンとニトロン（例えば、１，３−ニトロン）、歪みアルケンとアジド、歪みアルケンとテトラジン、および歪みアルケンとテトラゾールが挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、誘導体化アルブミンは、例えばアルブミンの１つまたは複数のアミンを反応させてスルフヒドリル基（例えば、しかしアミンを２−イミノチオラン（Ｔｒａｕｔ試薬）、または他のチオール化試薬と反応させる）を形成することによってチオール化される。一部の実施形態では、誘導体化アルブミンは、非共有結合性架橋剤の第１の構成要素（例えば、核酸分子、例えばＤＮＡ）に共有結合し、生物活性ポリペプチドは、架橋剤の第１の構成要素（例えば、架橋剤の第１の構成要素の核酸鎖と相補的な核酸鎖）に特異的に結合する非共有結合性架橋剤の第２の構成要素に架橋することができる。一部の実施形態では、誘導体化アルブミンは、誘導体化ヒトアルブミンである。一部の実施形態では、誘導体化アルブミンは、誘導体化ヒト血清アルブミンである。一部の実施形態では、誘導体化ヒトアルブミンは、誘導体化ヒト血清アルブミンである。一部の実施形態では、誘導体化アルブミンは、誘導体化組換えアルブミンである。一部の実施形態では、誘導体化アルブミンは、誘導体化ヒト組換えアルブミンである。一部の実施形態では、誘導体化組換えアルブミンは、誘導体化ヒト組換えアルブミンである。
【０１０２】
一部の実施形態では、アルブミンは、ジスルフィド結合を形成することができるスルフヒドリル（sulfhydral）基を有する。一部の実施形態では、アルブミンは、別のアルブミンと分子間ジスルフィド結合を形成する。一部の実施形態では、アルブミンは、生物活性ポリペプチドと分子間ジスルフィド結合を形成する。一部の実施形態では、組成物のナノ粒子部分におけるアルブミンの少なくとも約５％（例えば、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％を含む）が架橋される（例えば、１つまたは複数のジスルフィド結合を介して架橋される）。一部の実施形態では、組成物はナノ粒子部分を含み、組成物のナノ粒子部分におけるアルブミンの少なくとも約４０％、５０％、６０％、７０％、または８０％がジスルフィド結合によって架橋される。一部の実施形態では、組成物のナノ粒子部分におけるアルブミンの約４０％、５０％、６０％、７０％、または８０％が、ジスルフィド結合によって架橋される。一部の実施形態では、組成物のナノ粒子部分におけるアルブミンの約４０％〜約８０％、約４０％〜約７０％、または約５０％〜約８０％がジスルフィド結合によって架橋される。
【０１０３】
ある特定の実施形態では、ナノ粒子におけるアルブミンは、生物活性ポリペプチドをアルブミン上のチオール基（例えば、Ｃｙｓ３４）に結合させることによって生物活性ポリペプチドにコンジュゲートする。一部の実施形態では、疎水性薬物と、アルブミンと、アルブミンにコンジュゲートした生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子は、疎水性薬物とアルブミンとを含み、生物活性ポリペプチドがアルブミンにコンジュゲートしていないナノ粒子より少ない遊離のチオールを有する。一部の実施形態では、疎水性薬物と、アルブミンと、アルブミンにコンジュゲートした生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子上の遊離のチオールは、疎水性薬物とアルブミンとを含み、生物活性ポリペプチドがアルブミンにコンジュゲートしていないナノ粒子と比較して、約５％またはそれより多く（例えば約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、４５％、または５０％またはそれより多く）減少する。一部の実施形態では、疎水性薬物と、アルブミンと、アルブミンにコンジュゲートした生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子は、疎水性薬物とアルブミンとを含み、生物活性ポリペプチドがアルブミンにコンジュゲートしていないナノ粒子より少ない遊離の表面チオールを有する。一部の実施形態では、疎水性薬物と、アルブミンと、アルブミンにコンジュゲートした生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子の表面上の遊離のチオールは、疎水性薬物とアルブミンとを含み、生物活性ポリペプチドがアルブミンにコンジュゲートしていないナノ粒子と比較して約５％またはそれより多く（例えば、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、４５％、または５０％またはそれより多く）減少する。一部の実施形態では、疎水性薬物と、アルブミンと、アルブミンにコンジュゲートした生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子は、疎水性薬物とアルブミンとを含み、生物活性ポリペプチドがアルブミンにコンジュゲートしていないナノ粒子より少ないアルブミン単量体（すなわち、別のアルブミン、生物活性ポリペプチド、または他の任意のポリペプチドにコンジュゲートしていないアルブミン）を有する。一部の実施形態では、疎水性薬物と、アルブミンと、アルブミンにコンジュゲートした生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子に会合するアルブミン単量体の量は、疎水性薬物とアルブミンとを含み、生物活性ポリペプチドがアルブミンにコンジュゲートしていないナノ粒子に会合するアルブミン単量体の量と比較して約５％またはそれより多く（例えば、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、４５％、または５０％またはそれより多く）減少する。
【０１０４】
一部の実施形態では、ナノ粒子は、（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含み、ナノ粒子上の生物活性ポリペプチドの生物活性部分は、露出したままである。例えば、一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、生物活性ポリペプチドの一部がリガンドまたは受容体に結合することができるようにナノ粒子上に位置する。一部の実施形態では、ナノ粒子は、治療活性を有する生物活性ポリペプチドを含む。
【０１０５】
一部の実施形態では、組成物中の生物活性ポリペプチドの少なくとも約１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％が、ナノ粒子に会合している。一部の実施形態では、組成物中の生物活性ポリペプチドの約１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％が、ナノ粒子に会合している。一部の実施形態では組成物中の生物活性ポリペプチドの約１５％〜約９０％、約２０％〜約８５％、約３０％〜約８０％、約４０％〜約８０％、約５０％〜約７５％、約６０％〜約８５％、約６５％〜約８０％、または約７０％〜約８０％が、ナノ粒子に会合している。
【０１０６】
一部の実施形態では、ナノ粒子は、少なくとも約５０、１００、１５０、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１０５０、１１００、１１５０、または１２００個の生物活性ポリペプチを含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、約５０、１００、１５０、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１０５０、１１００、１１５０、または１２００個の生物活性ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、約１００〜約９００、約１００〜約５００、約１５０〜約７００、約１００〜約８００、約３００〜約６００、約２００〜約９００、約５００〜約１０００、約５００〜約８００、約６００〜約８００個の生物活性ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、組成物は、ナノ粒子を含み、ナノ粒子当たりの生物活性ポリペプチドの平均数は、少なくとも約５０、１００、１５０、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１０５０、１１００、１１５０、または１２００個の生物活性ポリペプチドである。一部の実施形態では、組成物はナノ粒子を含み、ナノ粒子当たりの生物活性ポリペプチドの平均数は、約５０、１００、１５０、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１０５０、１１００、１１５０、または１２００個の生物活性ポリペプチドである。
【０１０７】
組成物中のナノ粒子における疎水性薬物の生物活性ポリペプチドに対する重量比は、意図される治療的使用に関して最適化され得る。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子における疎水性薬物の生物活性ポリペプチドに対する重量比は、約１：１〜２００：１の間（例えば、約１：１〜約１００：１の間、約１：１〜約８０：１の間、約１：１〜約６０：１の間、約１：１〜約５０：１の間、約２：１〜約４０：１の間、約４：１〜約３０：１の間、または約６：１〜約２０：１の間）である。一部の実施形態では、疎水性薬物の重量は、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によって決定される。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドの重量は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）または酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定される。ＥＬＩＳＡは、ナノ粒子に会合した生物活性ポリペプチドの直接評価を可能にし、機能的な生物活性ポリペプチドと非機能的な（例えば、変性した）生物活性ポリペプチドとの識別を可能にする。
【０１０８】
組成物中のナノ粒子におけるアルブミンの疎水性薬物に対する重量比は、疎水性薬物、アルブミン、生物活性ポリペプチド、別の治療剤、またはその組合せの存在に基づいて最適化され得る。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子におけるアルブミンの疎水性薬物に対する重量比は、約１：１〜約５０：１、約１：１〜約２０：１、約１：１〜約１８：１、約１：１〜約１５：１、約１：１〜約１２：１、約１：１〜約１０：１、約１：１〜約９：１、約１：１〜約８：１、約１：１〜約７：１、約１：１〜約６：１、約１：１〜約５：１、約１：１〜約４：１、約１：１〜約３：１、または約１：１〜約２：１である。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子におけるアルブミンの疎水性薬物に対する重量比は、約１８：１未満、１５：１未満、または１０：１未満である。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子におけるアルブミンの疎水性薬物に対する重量比は、約１：１〜約１８：１、約２：１〜約１５：１、約３：１〜約１３：１、約４：１〜約１２：１、約５：１〜約１０：１である。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子におけるアルブミンの疎水性薬物に対する重量比は、約１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、または１：１５である。一部の実施形態では、アルブミンの重量は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定される。一部の実施形態では、疎水性薬物の重量は、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によって決定される。
【０１０９】
組成物中のナノ粒子における生物活性ポリペプチドのアルブミンに対する重量比は、疎水性薬物、アルブミン、生物活性ポリペプチド、別の治療剤、またはその組合せの存在に基づいて最適化され得る。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子における生物活性ポリペプチドのアルブミンに対する重量比は、約１：１〜約１：１０００、約１：１〜約１：８００、約１：１〜約１：６００、約１：１〜約１：５００、約１：１〜約１：４００、約１：１〜約１：３００、約１：１〜約１：２５０、約２：１〜約１：２００、約２：１〜約１：１５０、約４：１〜約１：１００、または約４：１〜約１：５０である。一部の実施形態では、アルブミンの重量は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定される。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドの重量は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）または酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定される。
【０１１０】
一部の実施形態では、組成物は、約１０００ナノメートル（ｎｍ）以下、例えば約９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００、および１００ｎｍ以下のうちのいずれかの平均直径を有するナノ粒子を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均直径は、約２００ｎｍ以下である。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均直径は、約１５０ｎｍ以下である、一部の実施形態では、ナノ粒子の平均直径は、約１００ｎｍ以下である。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均直径は、約２０〜約４００ｎｍである。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均直径は、約４０〜約２００ｎｍである。一部の実施形態では、ナノ粒子は濾過滅菌可能である。ナノ粒子の平均直径は、動的光散乱法（ＤＬＳ）によって測定することができる。
【０１１１】
一部の実施形態では、本明細書に記載されている組成物中のナノ粒子は、例えば約１９０、１８０、１７０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７０、または６０ｎｍ以下のうちのいずれか１つを含む約２００ｎｍ以下の平均直径を有する。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子の少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％のうちのいずれか１つ）が、例えば約１９０、１８０、１７０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７０、または６０ｎｍ以下のうちのいずれか１つを含む約２００ｎｍ以下の直径を有する。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子の少なくとも約５０％（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％のうちの少なくともいずれか１つ）が、例えば約２０〜約２００ｎｍ、約４０〜約２００ｎｍ、約３０〜約１８０ｎｍ、ならびに約４０〜約１５０、約５０〜約１２０、および約６０〜約１００ｎｍを含む約２０〜約４００ｎｍの範囲内に入る。
【０１１２】
疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含有するナノ粒子の例示的な実施形態を以下にさらに詳述する。そのようなナノ粒子は、ナノ粒子の中に埋め込まれた（例えば、ナノ粒子の表面またはコアに埋め込まれた）生物活性ポリペプチド、またはナノ粒子においてアルブミンにコンジュゲートした（例えば、共有結合性または非共有結合性架橋剤を介して）生物活性ポリペプチドを含むナノ粒子を含み得る。ナノ粒子上の生物活性ポリペプチドとアルブミンの会合は、非共有結合性または共有結合性であり得る。一部の実施形態では、ナノ粒子はアルブミンに会合した疎水性薬物を含み、生物活性ポリペプチドは、アルブミンに非共有結合で会合する。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、ナノ粒子の表面の中に埋め込まれている。一部の実施形態では、ナノ粒子はアルブミンによってコーティングされた疎水性薬物の固体コアを含み、生物活性ポリペプチドは、アルブミンに非共有結合で会合する。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合によって会合する。一部の実施形態では、アルブミンは、誘導体化アルブミンであり、アルブミンは、生物活性ポリペプチドに非共有結合する部分によって誘導体化される。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、アルブミンに非共有結合する部分を含む。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、誘導体化アルブミンに非共有結合する部分を含む。ナノ粒子に関する上記の特徴は、本開示を考慮して当業者によって理解されるように、以下に記載されている特定の実施形態に適用することができる。
【０１１３】
生物活性ポリペプチドが埋め込まれたナノ粒子
疎水性薬物を含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンに会合している（例えば、吸着またはコーティングされる）か、または疎水性薬物がアルブミンおよび生物活性ポリペプチド（例えば、抗体またはその断片）に会合している（例えば、吸着またはコーティングされる）ナノ粒子は本発明の範囲内であると企図される。ある特定の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、以下により詳細に考察されるように、１つまたは複数のナノ粒子前駆物に含まれる。製造プロセスの間、生物活性ポリペプチドの少なくとも一部は、生物活性ポリペプチドがナノ粒子の表面に埋め込まれるか、またはナノ粒子の疎水性コアに埋め込まれるように、ナノ粒子に会合する。
【０１１４】
例えば、一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンに会合した疎水性薬物を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンに会合した疎水性薬物の固体コアを含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンによってコーティングされた疎水性薬物を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンによってコーティングされた疎水性薬物の固体コアを含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンによって実質的にコーティングされた疎水性薬物を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンによって実質的にコーティングされた疎水性薬物の固体コアを含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンによってコーティングされた疎水性薬物と、生物活性ポリペプチドとを含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンによってコーティングされた疎水性薬物の固体コアと、生物活性ポリペプチドとを含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、疎水性薬物の固体コアを含み、生物活性ポリペプチドは、疎水性薬物の固体コアの表面に会合し、疎水性薬物の固体コアはアルブミンによってコーティングされている。一部の実施形態では、ナノ粒子は、疎水性薬物の固体コアを含み、生物活性ポリペプチドの一部は疎水性薬物の固体コアに埋め込まれており、疎水性薬物の固体コアは、アルブミンによってコーティングされている。
【０１１５】
一部の実施形態では、ナノ粒子に会合する生物活性ポリペプチドの約１％またはそれより多く（例えば、約２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、または２５％、またはそれより多く）が、ナノ粒子の固体コアに埋め込まれている。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドの約２５％またはそれ未満（例えば、約２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、または１％、またはそれ未満）がナノ粒子の固体コアに埋め込まれている。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドの約１％〜約２５％の間（例えば、約１％〜約２％の間、約２％〜約３％の間、約３％〜約４％の間、約４％〜約５％の間、約５％〜約１０％の間、約１０％〜約１５％の間、約１５％〜約２０％の間、または約２０％〜約２５％の間）がナノ粒子の固体コアに埋め込まれている。
【０１１６】
一部の実施形態では、ナノ粒子はアルブミンに会合した疎水性薬物を含み、生物活性ポリペプチドは、ナノ粒子上のアルブミンに会合している。本明細書に記載されている場合、生物活性ポリペプチドとアルブミンとの間の接触（例えば、会合）は、例えばナノ粒子の外側のアルブミン表面、ナノ粒子のアルブミンコーティング内、ナノ粒子の内側のアルブミン表面（例えば、疎水性薬物の固体コアとアルブミンのコーティングの間の界面）、またはその組合せであり得る。一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンでコーティングされた疎水性薬物を含み、生物活性ポリペプチドは、ナノ粒子上のアルブミンに会合する。一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンでコーティングされた疎水性薬物の固体コアを含み、生物活性ポリペプチドは、ナノ粒子上のアルブミンに会合している。
【０１１７】
一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、疎水性薬物およびアルブミンに会合している。したがって、例えば一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンでコーティングされた疎水性薬物の固体コアを含み、生物活性ポリペプチドの少なくとも一部は、疎水性薬物の固体コアに会合しており、生物活性ポリペプチドの少なくとも一部は、アルブミンに会合している。一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンによってコーティングされた疎水性薬物の固体コアを含み、生物活性ポリペプチドの少なくとも一部が疎水性薬物の固体コアに埋め込まれており、生物活性ポリペプチドの少なくとも一部がアルブミンに会合している。一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンによってコーティングされた疎水性薬物の固体コアを含み、生物活性ポリペプチドの少なくとも一部は、疎水性薬物の固体コアに部分的に埋め込まれており、アルブミンに部分的に会合している。一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンによってコーティングされた疎水性薬物の固体コアを含み、少なくとも１つの生物活性ポリペプチドの疎水性部分が、疎水性薬物の固体コアに埋め込まれており、同じ生物活性ポリペプチドの第２の部分がアルブミンに会合している。一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンによってコーティングされた疎水性薬物の固体コアを含み、生物活性ポリペプチドの疎水性部分は疎水性薬物の固体コアに埋め込まれており、同じ生物活性ポリペプチドの親水性部分がアルブミンに会合している。
【０１１８】
生物活性ポリペプチドがコンジュゲートしたナノ粒子
ある特定の実施形態では、生物活性ポリペプチド（例えば、抗体またはその断片）は、ナノ粒子（例えば、ナノ粒子のアルブミン構成要素）にコンジュゲートしている。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドとアルブミンの会合は、直接会合（例えば、アルブミンに直接結合する生物活性ポリペプチド）である。例えば、ある特定の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、例えばジスルフィド結合の形成を介してアルブミンに直接結合する。一部の実施形態では、コンジュゲーションは、生物活性ポリペプチドおよびアルブミンに共有結合することができる架橋剤を介して起こる。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドとアルブミンの会合は、共有結合性会合（例えば、生物活性ポリペプチドおよびアルブミンをコンジュゲートするための化学架橋剤の使用）である。ある特定の実施形態では、架橋剤は、アルブミンに共有結合する第１の構成要素と、ポリペプチドに共有結合する第２の構成要素とを含み、第１の構成要素と第２の構成要素は、非共有結合性相互作用を介して特異的に結合する。
【０１１９】
一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンに会合する疎水性薬物を含み、生物活性ポリペプチドは、アルブミンに共有結合で会合する（すなわち、生物活性ポリペプチドは、アルブミンにコンジュゲートする）。一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンによってコーティングされた疎水性薬物の固体コアを含み、生物活性ポリペプチドは、アルブミンに共有結合で会合する。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、ナノ粒子上のアルブミンに共有結合で会合する。
【０１２０】
一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、直接共有結合を介してナノ粒子上のアルブミンに会合する。例えば、一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、生物活性ポリペプチドとアルブミンとの間でのジスルフィド結合の形成を介してナノ粒子上のアルブミンに会合する。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、アルブミン上の遊離のチオール（例えば、Ｃｙｓ３４）を介してナノ粒子上のアルブミンに会合する。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、生物活性ポリペプチドとアルブミン上の遊離のチオール（例えば、Ｃｙｓ３４）との間のジスルフィド結合の形成を介してナノ粒子上のアルブミンに会合する。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、アルブミン上の遊離のチオール、例えば遊離のシステイン（例えば、Ｃｙｓ３４）に共有結合する（ジスルフィド結合を介して）遊離のチオール、例えば遊離のシステインを含む。一部の実施形態では、アルブミンは誘導体化アルブミンであり、アルブミン上のチオールは、誘導される（例えば、２−イミノチオランなどのチオール化剤の使用を介してアミンから誘導される）。
【０１２１】
一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、化学架橋剤（例えば、非ゼロ長の架橋剤または任意の適した長さの架橋剤）を介してナノ粒子上のアルブミンに会合する。一部の実施形態では、架橋剤は、単官能性架橋剤である。一部の実施形態では、架橋剤は、二官能性架橋剤である。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、１つより多くの化学架橋剤を介してナノ粒子上の１つより多くのアルブミンに会合する。共有結合性の結合を介しての２つまたはそれより多くのタンパク質の会合（例えば、共有結合性コンジュゲーションまたは複合体の形成）、またはタンパク質に会合するアミノ酸残基もしくは他の官能基、例えばグリカンとの複合体の形成にとって適した架橋剤は、当技術分野で公知である。例えば、一部の実施形態では、架橋剤は、アルブミン上の遊離のチオール（例えば、Ｃｙｓ３４または誘導体化チオール）に結合してもよく、架橋剤の別の末端は、生物活性ポリペプチドに結合するために利用可能である。一部の実施形態では、架橋剤は、アルブミン上の遊離のチオールに結合してもよく、架橋剤の別の末端は、生物活性ポリペプチドに結合している。一部の実施形態では、架橋剤は、アルブミン上の遊離のチオール（例えば、Ｃｙｓ３４）に結合してもよく、架橋剤の別の末端は、生物活性ポリペプチドに結合した架橋剤に結合するために利用可能であるか、または結合している。一部の実施形態では、架橋剤は、アルブミン上の遊離のアミン（例えば、リシン残基）に結合してもよい。一部の実施形態では、架橋剤は、アルブミン上の遊離のリシンに結合してもよく、架橋剤の別の末端は、生物活性ポリペプチドに結合している。一部の実施形態では、架橋剤は、アルブミン上の遊離のリシンに結合してもよく、架橋剤の別の末端は、生物活性ポリペプチドに結合した架橋剤に結合するために利用可能である。一部の実施形態では、架橋剤は、アルブミン上の遊離のリシンに結合してもよく、架橋剤の別の末端は、生物活性ポリペプチドに結合した架橋剤に結合するために利用可能であるか、または結合している。
【０１２２】
一部の実施形態では、架橋剤は、マレイミド官能基（例えば、マレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）またはガンマ−マレイミド−ブチルアミド（butyralamide）（ＧＭＢＡ））を含む。一部の実施形態では、架橋剤は、スクシンイミジルエステル基、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルを含む。一部の実施形態では、架橋剤の長さは、架橋剤の化学反応基を架橋するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などのポリマーによって決定される。例えば、一部の実施形態では、架橋剤は、ＮＨＳ−（ポリエチレングリコール）ｎ−マレイミド（ＳＭ（ＰＥＧ）ｎ）であり、式中、ｎは２またはそれより多い。例えば、一部の実施形態では、架橋剤は、（ＳＭ（ＰＥＧ）２）、（ＳＭ（ＰＥＧ）４）、（ＳＭ（ＰＥＧ）６）、（ＳＭ（ＰＥＧ）８）、（ＳＭ（ＰＥＧ）１２）、または（ＳＭ（ＰＥＧ）２４）である。一部の実施形態では、架橋剤は、スクシンイミジル  ４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）である。
【０１２３】
一部の実施形態では、架橋剤は、ボロン酸エステル（ボロン酸から誘導され得る）などのホウ素部分を含む。ボロン酸は、炭水化物、例えばグリコシル化生物活性タンパク質（例えば、グリコシル化抗体）上のグリカンと反応して、ボロン酸エステルを形成することができる。一部の実施形態では、架橋剤は、ボロン酸およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルを含む。一部の実施形態では、架橋剤は、ボロン酸およびＮＨＳエステルを連結する化学架橋を含み、架橋は、架橋剤の長さを決定する。例示的な架橋剤は、例えば、ＤＭＦ中で４−（２−カルボキシエチル）ベンゼンボロン酸、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、およびＮＮ−ジシクロヘキシルカルボジイミドを組み合わせて、活性化エステル架橋剤を形成することによって形成することができる。ＮＨＳ部分は、アルブミンと反応することができ、ボロン酸部分は、生物活性ポリペプチド上のグリカンと反応することができる。
【０１２４】
一部の実施形態では、架橋剤は、クリックケミストリー（例えば、銅フリークリックケミストリー）架橋剤である。例えば、一部の実施形態では、架橋剤は、トリアゾール部分を含み、これはシクロオクテン誘導体部分（例えば、ジベンゾシクロオクチン（ＤＢＣＯ）部分）を、歪み促進型アルキンアジド環化付加反応を介してアジドと反応させることによって形成することができる。アルブミンまたは抗体は、例えばシクロオクテン誘導体部分（例えば、ＤＢＣＯ−ＰＥＧｎ−ＮＨＳ、式中、ｎは２またはそれより大きい）に架橋したＮＨＳと反応させることによってシクロオクテン誘導体部分に共有結合で連結することができ、他の架橋部分（すなわち、アルブミンまたは抗体）をアジドにより官能化することができる。
【０１２５】
一部の実施形態では、架橋剤は、アルブミンに共有結合した第１の構成要素と、生物活性ポリペプチドに共有結合した第２の構成要素とを含み、第１の構成要素と第２の構成要素は互いに特異的に結合する。例えば、第１の構成要素または第２の構成要素は、ＤＮＡなどの一本鎖ポリヌクレオチド、または合成ポリマー、例えばモルフォリノであり得る。一部の実施形態では、架橋剤は、実質的に相補的である２つの一本鎖ポリヌクレオチドを含み、１つの一本鎖ポリヌクレオチドは生物活性ポリペプチドにコンジュゲートし、他の一本鎖ポリヌクレオチドはアルブミンにコンジュゲートしている。例えば、一部の実施形態では、第１の構成要素または第２の構成要素は、配列番号１（５’−ＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡ−３’）に従う分子などの複数の「ＣＡ」リピートを含む一本鎖ＤＮＡを含み、他の構成要素（すなわち、第１の構成要素または第２の構成要素）は、配列番号２（５’−ＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧ−３’）に従うＤＮＡ分子などの複数の「ＧＴ」リピートを含む一本鎖ＤＮＡ分子を含む。アルブミンおよび生物活性ポリペプチドを組み合わせると、ＤＮＡ鎖が特異的に結合し、それによってアルブミンを生物活性ポリペプチドにコンジュゲートさせる。
【０１２６】
アルブミンおよび生物活性ポリペプチドにコンジュゲートした場合の架橋剤の長さは、任意の適した長さであり得る。一部の実施形態では、架橋剤の長さは、コンジュゲートしている当初は個別の２つの架橋剤の長さであり、例えばアルブミンに結合した架橋剤は、例えばクリックケミストリーまたは相補的ＤＮＡ塩基対形成を介して、生物活性ポリペプチドに結合した架橋剤に会合するかまたはコンジュゲートする。一部の実施形態では、架橋剤の長さは、約２００オングストロームであるか、またはそれより短く、例えば約１７５、１５０、１２５、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、または１０オングストロームのうちのいずれかであるか、またはそれより短い。一部の実施形態では、架橋剤の長さは、約１０オングストロームであるか、またはそれより長く、例えば約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００オングストロームのうちのいずれかであるか、またはそれより長い。一部の実施形態では、架橋剤の長さは、約８．３オングストローム、約１７．６オングストローム、約２４．６オングストローム、約３２．５オングストローム、約３９．２オングストローム、約５３．４オングストローム、または約９５．２オングストロームである。
【０１２７】
上記の実施形態の一部では、ナノ粒子上のアルブミンは、誘導体化アルブミン（例えば、化学架橋剤によって誘導体化されたアルブミン）である。一部の実施形態では、ナノ粒子上の誘導体化アルブミンの量は、ナノ粒子上の総アルブミンの約５０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、または５％未満である。一部の実施形態では、ナノ粒子上の誘導体化アルブミンの量は、ナノ粒子上の総アルブミンの約５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、または１％未満である。一部の実施形態では、ナノ粒子上の誘導体化アルブミンの量は、ナノ粒子上の総アルブミンの約２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％である。一部の実施形態では、ナノ粒子上の誘導体化アルブミンの量は、ナノ粒子上の総アルブミンの約１％〜約３％の間、約１％〜約５％の間、約１％〜約７％の間、約１％〜約１０％の間、約３％〜約７％の間、約３％〜約１０％の間、または約５％〜約１５％の間である。
【０１２８】
一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、１つまたは複数の架橋剤にコンジュゲートしている。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、１〜２０個の架橋剤、例えば、１〜１０、１〜５、１〜４、１〜３、２〜５、３〜５、および２〜４個の架橋剤のうちのいずれかにコンジュゲートしている。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、１０個未満の架橋剤、例えば９個未満、８個未満、７個未満、６個未満、５個未満、４個未満、３個未満、および２個未満の架橋剤のうちのいずれかにコンジュゲートしている。
【０１２９】
一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中の生物活性ポリペプチド当たりの架橋剤の平均数は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の架橋剤である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中の生物活性ポリペプチド当たりの架橋剤の平均数は、約１〜１０個の架橋剤、例えば１〜５、１〜４、１〜３、２〜５、３〜５、および２〜４個の架橋剤のうちのいずれかである。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中の生物活性ポリペプチド当たりの架橋剤の平均数は、約１０個未満の架橋剤、例えば約９個未満、８個未満、７個未満、６個未満、５個未満、４個未満、３個未満、および２個未満の架橋剤のうちのいずれかである。
【０１３０】
一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、１つまたは複数のアルブミンにコンジュゲートしている。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、１〜１０個のアルブミン、例えば１〜３、１〜４、１〜５、１〜６、２〜４、および２〜５個のアルブミンのうちのいずれかにコンジュゲートしている。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、１０個未満のアルブミン、例えば９個未満、８個未満、７個未満、６個未満、５個未満、４個未満、３個未満、および２個未満のアルブミンのうちのいずれかにコンジュゲートしている。
【０１３１】
一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中の生物活性ポリペプチド当たりのコンジュゲートしたアルブミンの平均数は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個である。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中の生物活性ポリペプチド当たりのコンジュゲートしたアルブミンの平均数は、約１〜１０個、例えば１〜５、１〜４、１〜３、２〜５、３〜５、および２〜４個のうちのいずれかである。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物中の生物活性ポリペプチド当たりのコンジュゲートしたアルブミンの平均数は、約１０未満、例えば約９個未満、８個未満、７個未満、６個未満、５個未満、４個未満、３個未満、および２未満のうちのいずれかである。
【０１３２】
ナノ粒子組成物
ナノ粒子を含む組成物は、本明細書に記載されているナノ粒子の任意の組合せを含み得ると企図される。さらに一部の実施形態では、ナノ粒子は、本明細書に記載されている特徴の任意の組合せを含み得る。
【０１３３】
本明細書に記載されている場合、一部の実施形態では、組成物は、組成物のナノ粒子および非ナノ粒子部分の両方にアルブミンを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されている組成物は、組成物中のナノ粒子に会合していないアルブミンをさらに含む。本明細書に記載されている組成物中のアルブミンの量は、組成物中の他の構成要素（例えば、疎水性薬物または生物活性ポリペプチド）に応じて変化する。一部の実施形態では、組成物は、水性懸濁液、例えば安定なコロイド状懸濁液（例えば、ナノ粒子の安定な懸濁液）の形態で疎水性薬物を安定化させるために十分な量のアルブミンを含む。一部の実施形態では、アルブミンは、水性媒体中の疎水性薬物の沈降速度を低減させる量で存在する。粒子含有組成物に関して、アルブミンの量はまた、ナノ粒子のサイズおよび密度にも依存する。一部の実施形態では、組成物中のアルブミンの少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％が組成物の非ナノ粒子部分に存在する。
【０１３４】
疎水性薬物は、水性媒体において長期間、例えば少なくとも約０．１、０．２、０．２５、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、２４、３６、４８、６０、または７２時間のうちのいずれかの間、懸濁状態のままであれば（例えば、目に見える沈殿または沈降を有しない）、水性懸濁液中で「安定化されて」いる。懸濁液は一般的に、個体（例えば、ヒト）に投与するために適切であるが、必ずしもその必要はない。懸濁液の安定性は一般的に、貯蔵温度（例えば、室温（例えば、２０〜２５℃）または冷蔵条件（例えば４℃））で評価される（が、必ずしもその必要はない）。例えば、懸濁液は、懸濁液の調製の約１５分後に肉眼または倍率４００倍の光学顕微鏡下で観察した場合に見える綿状沈殿または粒子凝集を示さなければ貯蔵温度で安定である。安定性はまた、加速試験条件、例えば４０℃または約４０℃より高い温度で評価することができる。
【０１３５】
組成物の非ナノ粒子部分にアルブミンを使用することにより、疎水性薬物および／またはナノ粒子を溶解するための毒性溶媒（または界面活性剤）の使用を回避することができ、それによって疎水性薬物の個体（例えば、ヒト）への投与の１つまたは複数の副作用を低減させることができる。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載されている組成物は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（登録商標）（ＢＡＳＦ）を含む）などの界面活性剤を実質的に含まない（例えば、含まない）。一部の実施形態では、組成物は、界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０などのポリソルベート）を実質的に含まない（例えば、含まない）。組成物は、組成物中のＣｒｅｍｏｐｈｏｒまたは界面活性剤の量が約０．０２％未満である場合、「Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒを実質的に含まない」または「界面活性剤を実質的に含まない」。「Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒを実質的に含まない」または「界面活性剤を実質的に含まない」とは、約０．０１％未満のＣｒｅｍｏｐｈｏｒまたは界面活性剤を有することを指す。一部の実施形態では、組成物は、約０．００５％未満、約０．０００１％未満、約０．００００５％未満、または約０．００００１％未満のＣｒｅｍｏｐｈｏｒまたは界面活性剤を有する。
【０１３６】
一部の実施形態では、アルブミンは、ある特定の濃度で水性懸濁液中の疎水性薬物を安定化するために十分である量で組成物中に存在する。例えば、組成物中の疎水性薬物の濃度は、例えば約０．１〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．１〜約２０ｍｇ／ｍｌ、約１〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約８ｍｇ／ｍｌ、約４〜約６ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌのうちのいずれかを含む約０．１〜約１００ｍｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、疎水性薬物の濃度は、少なくとも約１．３ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、および５０ｍｇ／ｍｌのうちのいずれかである。一部の実施形態では、アルブミンは、組成物が界面活性剤（例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ、ポリソルベート２０、またはポリソルベート８０）を含まないまたは実質的に含まないように、界面活性剤（例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ、ポリソルベート２０、またはポリソルベート８０）の使用を回避する量で存在する。
【０１３７】
一部の実施形態では、組成物は、リン酸ナトリウムを実質的に含まない（または含まない）。本明細書で使用される場合、「リン酸ナトリウムを実質的に含まない」とは、約０．１ｍｇ／ｍＬ未満のリン酸ナトリウムを有することを指す。一部の実施形態では、組成物は、約０．０５ｍｇ／ｍＬ未満、約０．０１ｍｇ／ｍＬ未満、約０．００５ｍｇ／ｍＬ未満、約０．００１ｍｇ／ｍＬ未満、または約０．０００１ｍｇ／ｍＬ未満のリン酸ナトリウムを有する。一部の実施形態では、組成物はリン酸ナトリウムを含む。
【０１３８】
一部の実施形態では、組成物は、トレハロースを実質的に含まない（または含まない）。本明細書で使用される場合、「トレハロースを実質的に含まない」とは、約１ｍｇ／ｍＬ未満のトレハロースを有することを指す。一部の実施形態では、組成物は、約０．５ｍｇ／ｍＬ未満、約０．１ｍｇ／ｍＬ未満、約０．０５ｍｇ／ｍＬ未満、約０．０１ｍｇ／ｍＬ未満、または約０．００１ｍｇ／ｍＬ未満のトレハロースを有する。一部の実施形態では、組成物はトレハロースを含む。
【０１３９】
一部の実施形態では、液体形態のナノ粒子組成物は、約０．１％〜約５０％（ｗ／ｖ）（例えば、約０．５％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）、約１０％（ｗ／ｖ）、約１５％（ｗ／ｖ）、約２０％（ｗ／ｖ）、約３０％（ｗ／ｖ）、約４０％（ｗ／ｖ）、または約５０％（ｗ／ｖ））のアルブミンを含む。一部の実施形態では、液体形態のナノ粒子は、約０．５％〜約１０％（ｗ／ｖ）のアルブミンを含む。
【０１４０】
一部の実施形態では、組成物は、組成物のナノ粒子および非ナノ粒子部分の両方に疎水性薬物を含む。一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物の１％以下、２％以下、３％以下、４％以下、５％以下、１０％以下、または２０％以下が、組成物の非ナノ粒子部分に存在する。一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物の少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％が組成物のナノ粒子部分に存在する。
【０１４１】
一部の実施形態では、組成物は、組成物のナノ粒子および非ナノ粒子部分の両方に生物活性ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、組成物は、ナノ粒子に会合していない生物活性ポリペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、組成物中の生物活性ポリペプチドの１％以下、２％以下、３％以下、４％以下、５％以下、１０％以下、または２０％以下が組成物の非ナノ粒子部分に存在する。一部の実施形態では、組成物中の生物活性ポリペプチドの少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％が、組成物のナノ粒子部分に存在する。
【０１４２】
組成物中のアルブミンの疎水性薬物に対する重量比は、疎水性薬物、アルブミン、生物活性ポリペプチド、別の治療剤、またはその組合せの存在に基づいて最適化され得る。一部の実施形態では、組成物中のアルブミンの疎水性薬物に対する重量比は、約１：１〜約５０：１、約１：１〜約２０：１、約１：１〜約１８：１、約１：１〜約１５：１、約１：１〜約１２：１、約１：１〜約１０：１、約１：１〜約９：１、約１：１〜約８：１、約１：１〜約７：１、約１：１〜約６：１、約１：１〜約５：１、約１：１〜約４：１、約１：１〜約３：１、または約１：１〜約２：１である。一部の実施形態では、組成物中のアルブミンの疎水性薬物に対する重量比は、約１８：１未満、１５：１未満、または１０：１未満である。一部の実施形態では、組成物中のアルブミンの疎水性薬物に対する重量比は、約１：１〜約１８：１、約２：１〜約１５：１、約３：１〜約１３：１、約４：１〜約１２：１、約５：１〜約１０：１である。一部の実施形態では、組成物中のアルブミンの疎水性薬物に対する重量比は、約１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、または１：１５である。一部の実施形態では、アルブミンの重量は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定される。一部の実施形態では、疎水性薬物の重量は、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によって決定される。
【０１４３】
組成物中の疎水性薬物の生物活性ポリペプチドに対する重量比は、疎水性薬物、アルブミン、生物活性ポリペプチド、別の治療剤、またはその組合せの存在に基づいて最適化され得る。一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物の生物活性ポリペプチドに対する重量比は、約１：１〜２００：１の間（例えば１：１〜約１００：１の間、約１：１〜約８０：１の間、約１：１〜約６０：１の間、約１：１〜約５０：１の間、約２：１〜約４０：１の間、約４：１〜約３０：１の間、または約６：１〜約２０：１の間）である。一部の実施形態では、疎水性薬物の重量は、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によって決定される。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドの重量は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）または酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定される。
【０１４４】
組成物中の生物活性ポリペプチドのアルブミンに対する重量比は、疎水性薬物、アルブミン、生物活性ポリペプチド、別の治療剤、またはその組合せの存在に基づいて最適化され得る。一部の実施形態では、組成物中の生物活性ポリペプチドのアルブミンに対する重量比は、約１：１〜約１：１０００、約１：１〜約１：８００、約１：１〜約１：６００、約１：１〜約１：５００、約１：１〜約１：４００、約１：１〜約１：３００、約１：１〜約１：２５０、約２：１〜約１：２００、約２：１〜約１：１５０、約４：１〜約１：１００、または約４：１〜約１：５０である。一部の実施形態では、アルブミンの重量は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定される。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドの重量は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）または酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定される。
【０１４５】
疎水性薬物
本明細書に記載されている疎水性薬物は、例えば約０．５、０．２、０．１、０．０５、０．０２、または０．０１ｍｇ／ｍｌ未満のうちのいずれかの溶解度を有する薬物を含む、約２５℃の水（ｐＨ７）中で約１ｍｇ／ｍｌ未満の溶解度を有する薬物であり得る。一部の実施形態では、疎水性薬物は抗腫瘍剤である。一部の実施形態では、疎水性薬物は化学療法剤である。適した疎水性薬物には、タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、オルタタキセル、および他のタキサン）、リムス系薬物（例えば、シロリムス）、１７−アリルアミノゲルダナマイシン（ｌ７−ＡＡＧ）、またはチオコルヒチン二量体（例えば、ＩＤＮ５４０４）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１４６】
一部の実施形態では、疎水性薬物はタキサンである。一部の実施形態では、タキサンはパクリタキセルである。一部の実施形態では、疎水性薬物はパクリタキセルである。
【０１４７】
一部の実施形態では、疎水性薬物は、ラパマイシン（シロリムス）およびそのアナログを含むリムス系薬物である。リムス系薬物の例には、テムシロリムス（ＣＣＩ−７７９）、エベロリムス（ＲＡＤ００１）、リダフォロリムス（ＡＰ−２３５７３）、デフォロリムス（ＭＫ−８６６９）、ゾタロリムス（ＡＢＴ−５７８）、ピメクロリムス、およびタクロリムス（ＦＫ−５０６）が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、リムス系薬物は、テムシロリムス（ＣＣＩ−７７９）、エベロリムス（ＲＡＤ００１）、リダフォロリムス（ＡＰ−２３５７３）、デフォロリムス（ＭＫ−８６６９）、ゾタロリムス（ＡＢＴ−５７８）、ピメクロリムス、およびタクロリムス（ＦＫ−５０６）からなる群から選択される。一部の実施形態では、疎水性薬物はラパマイシン（シロリムス）である。
【０１４８】
したがって、一部の実施形態では、組成物は、（ａ）タキサンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）タキサンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子であって、タキサンがアルブミンによってコーティングされている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）タキサンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子であって、タキサンがアルブミンによってコーティングされており、生物活性ポリペプチドがタキサンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）タキサンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子であって、タキサンがアルブミンによってコーティングされており、生物活性ポリペプチドがアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）タキサンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子であって、タキサンがアルブミンによってコーティングされており、生物活性ポリペプチドがタキサンおよびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、生物活性ポリペプチドがパクリタキセルに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、生物活性ポリペプチドがアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、生物活性ポリペプチドがパクリタキセルおよびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。
【０１４９】
一部の実施形態では、組成物は、（ａ）タキサンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）タキサンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子であって、タキサンがアルブミンによってコーティングされている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）タキサンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子であって、タキサンがアルブミンによってコーティングされており、生物活性ポリペプチドがタキサンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）タキサンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子であって、タキサンがアルブミンによってコーティングされており、生物活性ポリペプチドがアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）タキサンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子であって、タキサンがアルブミンによってコーティングされており、抗体がタキサンおよびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、抗体がパクリタキセルに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、抗体がアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、抗体がパクリタキセルおよびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。
【０１５０】
したがって、一部の実施形態では、組成物は、（ａ）リムス系薬物と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）リムス系薬物と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子であって、リムス系薬物がアルブミンによってコーティングされている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）リムス系薬物と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子であって、リムス系薬物がアルブミンによってコーティングされており、生物活性ポリペプチドがリムス系薬物に会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）リムス系薬物と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子であって、リムス系薬物がアルブミンによってコーティングされており、生物活性ポリペプチドがアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）リムス系薬物と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子であって、リムス系薬物がアルブミンによってコーティングされており、生物活性ポリペプチドがリムス系薬物およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、生物活性ポリペプチドがラパマイシンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、生物活性ポリペプチドがアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、生物活性ポリペプチドがラパマイシンおよびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。
【０１５１】
したがって、一部の実施形態では、組成物は、（ａ）リムス系薬物と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）リムス系薬物と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子であって、リムス系薬物がアルブミンによってコーティングされている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）リムス系薬物と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子であって、リムス系薬物がアルブミンによってコーティングされており、抗体がリムス系薬物に会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）リムス系薬物と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子であって、リムス系薬物がアルブミンによってコーティングされており、抗体がアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）リムス系薬物と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子であって、リムス系薬物がアルブミンによってコーティングされており、抗体がリムス系薬物およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、抗体がラパマイシンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、抗体がアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）抗体とを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、抗体がラパマイシンおよびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。
【０１５２】
生物活性ポリペプチド
一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、抗体またはその断片である。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、抗原を特異的に認識する抗体またはその断片である。
【０１５３】
一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、アレムツズマブ、ベバシズマブ、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブ、セツキシマブ、デノスマブ、ジヌツキシマブ、デュルバルマブ、イピリムマブ、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、パニツムマブ、ペンブロリズマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、デュルバルマブ、およびリツキシマブからなる群からなる群から選択される。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、ＢＧＢ−Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ）である。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドはトシリズマブである。
【０１５４】
一部の実施形態では、本明細書に記載されている組成物の生物活性ポリペプチド（例えば、ナノ粒子上の生物活性ポリペプチド）は、個体（例えば、ヒト）において免疫応答を誘発することができる。本明細書に記載されている組成物は、個体においてＡＤＣＣとＣＤＣ効果のバランスをとるように最適化され得る。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、個体において抗体依存性細胞媒介性（ＡＤＣＣ）効果を誘発する。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、個体において補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）効果を誘発する。一部の実施形態では、ナノ粒子を含む組成物は、個体においてＡＤＣＣ効果を誘発する。一部の実施形態では、ナノ粒子を含む組成物は、個体においてＣＤＣ効果を誘発する。一部の実施形態では、ナノ粒子を含む組成物は、個体においてＡＤＣＣおよびＣＤＣ効果を誘発する。
【０１５５】
一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、抗原を特異的に認識（例えば、結合）する。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、がん抗原１２５（ＣＡ−１２５）、ムチン１（ＭＵＣ１）、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、チロシナーゼ、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｇｐ１００、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＥＧＦＲ、ＰＳＡ、ＰＭＳＡ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｈＴＥＲＴ、ＭＡＲＴ１、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ｒａｓ、ＢＲＡＦ、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、Ｆｌｔ−３、ＩＬ−６受容体、またはＳｍａｄ４に特異的に結合する抗体である。一部の実施形態では、抗原は腫瘍抗原である。腫瘍関連抗原には、がん組織（例えば、がん細胞）または腫瘍関連組織（例えば、腫瘍関連間質）を標的とするための基礎として役立ち得る腫瘍構成要素が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、腫瘍関連抗原には、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、がん抗原１２５（ＣＡ−１２５）、ムチン１（ＭＵＣ１）、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、チロシナーゼ、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｇｐ１００、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＥＧＦＲ、ＰＳＡ、ＰＭＳＡ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｈＴＥＲＴ、ＭＡＲＴ１、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ｒａｓ、ＢＲＡＦ、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、Ｆｌｔ−３、およびＳｍａｄ４が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１５６】
一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、化学コンジュゲーションのための部位を含む。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、架橋剤の会合のための部位、例えばアミノ酸残基またはグリカン構造を含む。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、化学連結剤をさらに含む。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、誘導体化生物活性ポリペプチド（例えば、化学架橋剤部分を含む抗体）である。一部の実施形態では、誘導体化生物活性ポリペプチドは、アルブミンにコンジュゲートした別の化学架橋剤（またはその一部）と反応性である（例えば、特異的に反応性である）化学架橋剤（またはその一部）にコンジュゲートした生物活性ポリペプチドである。例えば、一部の実施形態では、誘導体化生物活性ポリペプチドは、アルキン部分を含む化学架橋剤にコンジュゲートし、誘導体化アルブミンは、アジド部分を含む化学架橋剤にコンジュゲートしている。一部の実施形態では、誘導体化生物活性ポリペプチドは、アジド部分を含む化学架橋剤にコンジュゲートし、誘導体化アルブミンは、アルキン部分を含む化学架橋剤にコンジュゲートしている。生物活性ポリペプチドおよびアルブミンを会合させるために有用な架橋部分の他の対には、歪みアルキンとアジド、歪みアルキンとニトロン（例えば、１，３−ニトロン）、歪みアルケンとアジド、歪みアルケンとテトラジン、および歪みアルケンとテトラゾールが挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、組成物中の生物活性ポリペプチドの実質的に全てが、化学架橋剤（またはその一部）によって誘導体化（例えば、コンジュゲート）されている。一部の実施形態では、組成物中の生物活性ポリペプチドの少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％が、化学架橋剤（またはその一部）によって誘導体化（例えば、コンジュゲート）されている。一部の実施形態では、誘導体化生物活性ポリペプチドは、誘導体化アルブミンに特異的に架橋し、それによって生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートを形成する。コンジュゲーション（架橋）は、例えば、誘導体化アルブミンを含む水溶液および有機溶液を組み合わせる前に起こり得る。一部の実施形態では、コンジュゲーションは、誘導体化生物活性ポリペプチドを、誘導体化アルブミンアルブミンを含むナノ粒子と組み合わせることによって起こる。一部の実施形態では、コンジュゲーションは、誘導体化生物活性ポリペプチドを、単離ナノ粒子と組み合わせることによって起こる。一部の実施形態では、コンジュゲーションは、誘導体化生物活性ポリペプチドを、誘導体化アルブミンを含む単離ナノ粒子と組み合わせることによって起こる。
【０１５７】
一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ベバシズマブが、疎水性薬物に会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ベバシズマブが、疎水性薬物の固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ベバシズマブが、疎水性薬物の固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ベバシズマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、ベバシズマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、ベバシズマブが、ナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、ベバシズマブが、ナノ粒子上の疎水性薬物（例えば、疎水性薬物の固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ベバシズマブがパクリタキセルに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ベバシズマブがパクリタキセルの固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ベバシズマブが、パクリタキセルの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ベバシズマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、ベバシズマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、ベバシズマブがナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、ベバシズマブがナノ粒子上のパクリタキセル（例えば、パクリタキセルの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ベバシズマブが、ラパマイシンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ベバシズマブが、ラパマイシンの固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ベバシズマブが、ラパマイシンの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ベバシズマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、ベバシズマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、ベバシズマブが、ナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ベバシズマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、ベバシズマブが、ナノ粒子上のラパマイシン（例えば、ラパマイシンの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子の平均直径は、動的光散乱によって測定した場合に、約２００ｎｍ以下である。
【０１５８】
一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、セツキシマブが、疎水性薬物に会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、セツキシマブが、疎水性薬物の固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、セツキシマブが、疎水性薬物の固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、セツキシマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、セツキシマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、セツキシマブが、ナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、セツキシマブが、ナノ粒子上の疎水性薬物（例えば、疎水性薬物の固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、セツキシマブがパクリタキセルに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、セツキシマブがパクリタキセルの固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、セツキシマブが、パクリタキセルの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、セツキシマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、セツキシマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、セツキシマブがナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、セツキシマブがナノ粒子上のパクリタキセル（例えば、パクリタキセルの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、セツキシマブが、ラパマイシンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、セツキシマブが、ラパマイシンの固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、セツキシマブが、ラパマイシンの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、セツキシマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、セツキシマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、セツキシマブが、ナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）セツキシマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、セツキシマブが、ナノ粒子上のラパマイシン（例えば、ラパマイシンの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子の平均直径は、動的光散乱によって測定した場合に、約２００ｎｍ以下である。
【０１５９】
一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、イピリムマブが、疎水性薬物に会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、イピリムマブが、疎水性薬物の固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、イピリムマブが、疎水性薬物の固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、イピリムマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、イピリムマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、イピリムマブが、ナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、イピリムマブが、ナノ粒子上の疎水性薬物（例えば、疎水性薬物の固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、イピリムマブがパクリタキセルに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、イピリムマブがパクリタキセルの固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、イピリムマブが、パクリタキセルの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、イピリムマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、イピリムマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、イピリムマブがナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、イピリムマブがナノ粒子上のパクリタキセル（例えば、パクリタキセルの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、イピリムマブが、ラパマイシンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、イピリムマブが、ラパマイシンの固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、イピリムマブが、ラパマイシンの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、イピリムマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、イピリムマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、イピリムマブが、ナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）イピリムマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、イピリムマブが、ナノ粒子上のラパマイシン（例えば、ラパマイシンの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子の平均直径は、動的光散乱によって測定した場合に、約２００ｎｍ以下である。
【０１６０】
一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ニボルマブが、疎水性薬物に会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ニボルマブが、疎水性薬物の固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ニボルマブが、疎水性薬物の固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ニボルマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、ニボルマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、ニボルマブが、ナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、ニボルマブが、ナノ粒子上の疎水性薬物（例えば、疎水性薬物の固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ニボルマブがパクリタキセルに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ニボルマブがパクリタキセルの固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ニボルマブが、パクリタキセルの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ニボルマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、ニボルマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、ニボルマブがナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、ニボルマブがナノ粒子上のパクリタキセル（例えば、パクリタキセルの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ニボルマブが、ラパマイシンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ニボルマブが、ラパマイシンの固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ニボルマブが、ラパマイシンの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ニボルマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、ニボルマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、ニボルマブが、ナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ニボルマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、ニボルマブが、ナノ粒子上のラパマイシン（例えば、ラパマイシンの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子の平均直径は、動的光散乱によって測定した場合に、約２００ｎｍ以下である。
【０１６１】
一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、パニツムマブが、疎水性薬物に会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、パニツムマブが、疎水性薬物の固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、パニツムマブが、疎水性薬物の固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、パニツムマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、パニツムマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、パニツムマブが、ナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、パニツムマブが、ナノ粒子上の疎水性薬物（例えば、疎水性薬物の固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、パニツムマブがパクリタキセルに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、パニツムマブがパクリタキセルの固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、パニツムマブが、パクリタキセルの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、パニツムマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、パニツムマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、パニツムマブがナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、パニツムマブがナノ粒子上のパクリタキセル（例えば、パクリタキセルの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、パニツムマブが、ラパマイシンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、パニツムマブが、ラパマイシンの固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、パニツムマブが、ラパマイシンの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、パニツムマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、パニツムマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、パニツムマブが、ナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）パニツムマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、パニツムマブが、ナノ粒子上のラパマイシン（例えば、ラパマイシンの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子の平均直径は、動的光散乱によって測定した場合に、約２００ｎｍ以下である。
【０１６２】
一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、リツキシマブが、疎水性薬物に会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、リツキシマブが、疎水性薬物の固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、リツキシマブが、疎水性薬物の固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、リツキシマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、リツキシマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、リツキシマブが、ナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、リツキシマブが、ナノ粒子上の疎水性薬物（例えば、疎水性薬物の固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、リツキシマブがパクリタキセルに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、リツキシマブがパクリタキセルの固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、リツキシマブが、パクリタキセルの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、リツキシマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、リツキシマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、リツキシマブがナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、リツキシマブがナノ粒子上のパクリタキセル（例えば、パクリタキセルの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、リツキシマブが、ラパマイシンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、リツキシマブが、ラパマイシンの固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、リツキシマブが、ラパマイシンの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、リツキシマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、リツキシマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、リツキシマブが、ナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）リツキシマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、リツキシマブが、ナノ粒子上のラパマイシン（例えば、ラパマイシンの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子の平均直径は、動的光散乱によって測定した場合に、約２００ｎｍ以下である。
【０１６３】
一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、デュルバルマブが、疎水性薬物に会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、デュルバルマブが、疎水性薬物の固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、デュルバルマブが、疎水性薬物の固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、デュルバルマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、デュルバルマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、デュルバルマブが、ナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、デュルバルマブが、ナノ粒子上の疎水性薬物（例えば、疎水性薬物の固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、デュルバルマブがパクリタキセルに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、デュルバルマブがパクリタキセルの固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、デュルバルマブが、パクリタキセルの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、デュルバルマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、デュルバルマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、デュルバルマブがナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、デュルバルマブがナノ粒子上のパクリタキセル（例えば、パクリタキセルの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされている（例えば実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、デュルバルマブが、ラパマイシンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、デュルバルマブが、ラパマイシンの固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、デュルバルマブが、ラパマイシンの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、デュルバルマブが、ナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、デュルバルマブが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、デュルバルマブが、ナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）デュルバルマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、デュルバルマブが、ナノ粒子上のラパマイシン（例えば、ラパマイシンの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子の平均直径は、動的光散乱によって測定した場合に、約２００ｎｍ以下である。
【０１６４】
したがって、一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされている（例えば、実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ＢＧＢ−Ａ３１７が疎水性薬物に会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ＢＧＢ−Ａ３１７が疎水性薬物の固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ＢＧＢ−Ａ３１７が疎水性薬物の固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、ＢＧＢ−Ａ３１７がナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、ＢＧＢ−Ａ３１７がナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、ＢＧＢ−Ａ３１７がナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、ＢＧＢ−Ａ３１７が、ナノ粒子上の疎水性薬物（例えば、疎水性薬物の固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされている（例えば、実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ＢＧＢ−Ａ３１７がパクリタキセルに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ＢＧＢ−Ａ３１７がパクリタキセルの固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ＢＧＢ−Ａ３１７がパクリタキセルの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、ＢＧＢ−Ａ３１７がナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、ＢＧＢ−Ａ３１７がナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、ＢＧＢ−Ａ３１７がナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、ＢＧＢ−Ａ３１７が、ナノ粒子上のパクリタキセル（例えば、パクリタキセルの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７を含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされている（例えば、実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ＢＧＢ−Ａ３１７がラパマイシンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ＢＧＢ−Ａ３１７がラパマイシンの固体コアに会合しているナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、ＢＧＢ−Ａ３１７がラパマイシンの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７を含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、ＢＧＢ−Ａ３１７がナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、ＢＧＢ−Ａ３１７がナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、ＢＧＢ−Ａ３１７がナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）ＢＧＢ−Ａ３１７とを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、ＢＧＢ−Ａ３１７が、ナノ粒子上のラパマイシン（例えば、ラパマイシンの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子の平均直径は、動的光散乱によって測定した場合に、約２００ｎｍ以下である。
【０１６５】
したがって、一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされている（例えば、実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、トシリズマブが疎水性薬物に会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、トシリズマブが疎水性薬物の固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、トシリズマブが疎水性薬物の固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、トシリズマブがナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、トシリズマブがナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、トシリズマブがナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）疎水性薬物（例えば、タキサンまたはリムス系薬物）と、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、疎水性薬物がアルブミンによってコーティングされており、トシリズマブが、ナノ粒子上の疎水性薬物（例えば、疎水性薬物の固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされている（例えば、実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、トシリズマブがパクリタキセルに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、トシリズマブがパクリタキセルの固体コアに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、トシリズマブがパクリタキセルの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、トシリズマブがナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、トシリズマブがナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、トシリズマブがナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）パクリタキセルと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、パクリタキセルがアルブミンによってコーティングされており、トシリズマブが、ナノ粒子上のパクリタキセル（例えば、パクリタキセルの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）、（ｃ）トシリズマブを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされている（例えば、実質的にコーティングされている）、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、トシリズマブがラパマイシンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、トシリズマブがラパマイシンの固体コアに会合しているナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており（例えば、実質的にコーティングされており）、トシリズマブがラパマイシンの固体コアに埋め込まれている、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、トシリズマブがナノ粒子上のアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、トシリズマブがナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、トシリズマブがナノ粒子上のアルブミンに共有結合で（例えば、ジスルフィド結合または化学架橋を介して）会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ａ）ラパマイシンと、（ｂ）アルブミン（例えば、ヒトアルブミン）と、（ｃ）トシリズマブとを含むナノ粒子であって、ラパマイシンがアルブミンによってコーティングされており、トシリズマブが、ナノ粒子上のラパマイシン（例えば、ラパマイシンの固体コア）およびアルブミンに会合している、ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子の平均直径は、動的光散乱によって測定した場合に、約２００ｎｍ以下である。
【０１６６】
ナノ粒子を含む組成物または製造前駆物中の他の構成要素
本明細書に記載されている組成物は、本明細書に記載されている組成物を、本明細書に記載されている処置方法、投与方法、および投薬量レジメンにおいて使用するために当技術分野で公知である、薬学的に許容される担体、賦形剤、安定剤、増量剤、および／または他の薬剤と組み合わせることによって、医薬組成物または製剤において使用され得る。薬学的に許容される薬剤はまた、アルブミンもしくは生物活性ポリペプチドを含む水溶液、または粗混合物、エマルジョン、もしくはナノ粒子懸濁液に添加される水溶液を含む製造前駆物溶液のいずれかに、製造プロセスの間の様々な時点で含めることができる。
【０１６７】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」または「薬理学的に適合性」とは、生物学的またはそれ以外の状況において有害ではない材料を指し、例えば材料は、いかなる有意な望ましくない生物作用を引き起こすことなく、またはそれが含有される組成物の他の構成要素のいずれかと有害に相互作用することなく、患者に投与される医薬組成物に組み入れられ得る。薬学的に許容される担体または賦形剤は、好ましくは必要な毒性および製造試験の標準を満たし、ならびに／または米国食品医薬品局が作成した不活性成分ガイドに含まれている。例えば、一部の実施形態では、薬学的に許容される材料は、賦形剤、安定剤、抗菌剤、または増量剤である。
【０１６８】
本明細書に記載されている組成物におけるナノ粒子の安定性を増大させるために、ある特定の負に荷電した構成要素などの、ナノ粒子の負のゼータ電位を増大させる材料を添加してもよい。そのような負に荷電した構成要素には、胆汁酸塩、胆汁酸、グリココール酸、コール酸、ケノデオキシコール酸、タウロコール酸、グリコケノデオキシコール酸、タウロケノデオキシコール酸、リトコール酸、ウルソデオキシコール酸、デヒドロコール酸およびその他；以下のホスファチジルコリン：パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、パルミトイルリノレオイルホスファチジルコリン、ステアロイルリノレオイルホスファチジルコリン、ステアロイルオレオイルホスファチジルコリン、ステアロイルアラキドイルホスファチジルコリン、およびジパルミトイルホスファチジルコリンを含むレシチン（卵黄）系リン脂質を含むリン脂質が挙げられるがこれらに限定されない。他のリン脂質は、Ｌ−α−ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、水素化ダイズホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、および他の関連化合物を含む。負に荷電した界面活性剤または乳化剤、例えばコレステリル硫酸ナトリウム等もまた、添加剤として適している。
【０１６９】
適した薬学的に許容される担体には、滅菌水、食塩水、デキストロース；デキストロースの水溶液または食塩水溶液；ヒマシ油１モル当たりエチレンオキシド約３０〜約３５モルを組み合わせるヒマシ油とエチレンオキシドの縮合産物；液体酸；低級アルカノール；コーン油、落花生油、ゴマ油等などの油を、脂肪酸のモノもしくはジグリセリド、またはホスファチド、例えばレシチン等などの乳化剤と共に含むもの；グリコール、ポリアルキレングリコール；懸濁液、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、アルギン酸ナトリウム、ポリ（ビニルピロリドン）の存在下での水性媒体等を、単独またはレシチン、ステアリン酸ポリオキシエチレン等などの適した分散剤と共に含むものが挙げられる。担体はまた、浸透増強剤と共に、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤等などのアジュバントも含有し得る。最終形態は無菌的であり得て、同様に中空の針などの注射デバイスの中を容易に通過することができる。適切な粘度は、溶媒または賦形剤の適切な選択によって達成および維持され得る。その上、レシチンなどの分子コーティングまたは微粒子コーティングの使用、分散液における粒子サイズの適切な選択、または界面活性剤の特性を有する材料の使用を利用してもよい。
【０１７０】
本明細書に記載されている組成物は、組成物の特性を改善するために、他の薬剤、賦形剤、または安定剤を含み得る。適した賦形剤および希釈剤の例には、ラクトース、デキストロース、スクロース、トレハロース（α，α−トレハロースを含む）、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、食塩水溶液、シロップ、メチルセルロース、メチルおよびプロピルヒドロキシ安息香酸、および鉱物油が挙げられるがこれらに限定されない。製剤はさらに、潤滑剤、湿潤剤、乳化剤および懸濁液、ならびに保存剤を含み得る。乳化剤の例には、コハク酸トコフェリルポリエチレングリコール等などのトコフェロールエステル、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）、ポリオキシエチレン化合物に基づく乳化剤、Ｓｐａｎ８０および関連化合物、ならびに当技術分野で公知のおよび動物またはヒトの剤形としての使用が承認されている他の乳化剤が挙げられる。組成物は、当技術分野で周知の手順を使用することによって患者に投与した後に活性成分の急速な、持続的な、または遅延放出を提供するように製剤化することができる。
【０１７１】
一部の実施形態では、組成物は、例えば約５．０〜約８．０、約６．５〜約７．５、および約６．５〜約７．０のうちのいずれか１つのｐＨ範囲を含む約４．５〜約９．０の範囲のｐＨを有するように製剤化される。一部の実施形態では、組成物のｐＨは、例えば約６．５、７、または８のいずれか１つ（例えば、約８）以上を含む、約６以上となるように製剤化される。一部の実施形態では、組成物は、緩衝剤、例えばＴｒｉｓ、リン酸塩（例えば、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウム）、クエン酸塩、コハク酸塩、ヒスチジン、または酢酸塩の緩衝剤をさらに含む。組成物はまた、グリセロールなどの適した等張性調節剤の添加によって血液と等張にすることができる。
【０１７２】
一部の実施形態では、ナノ粒子組成物は、ヒトへの投与に適している。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物は、獣医学的な状況におけるペットおよび農業用動物などの哺乳動物への投与に適している。組成物の広く多様で適した製剤が存在する（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，９１６，５９６号および第６，０９６，３３１号を参照されたい）。以下の製剤および方法は単なる例示に過ぎず、決して制限的ではない。
【０１７３】
非経口投与にとって適した製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および製剤を意図されるレシピエントの血液と適合性にする溶質を含有し得る水性および非水性の等張滅菌注射溶液、ならびに懸濁液、溶解剤、濃化剤、安定剤、および保存剤を含み得る水性および非水性の滅菌懸濁液が挙げられる。製剤は、アンプルおよびバイアルなどの単位用量または複数用量密閉コンテナーに保存することができ、使用直前に注射用の滅菌液体賦形剤、例えば水を添加するだけでよいフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存することができる。即時調製注射溶液および懸濁液は、既に記載した種類の滅菌粉末、顆粒剤、および錠剤から調製することができる。注射用製剤が好ましい。
【０１７４】
一部の実施形態では、組成物は、生物活性ポリペプチドの医薬製剤において見出される望ましくない構成要素を実質的に含まない（例えば、含まない）。例えば、一部の実施形態では、組成物は、界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０）を実質的に含まない（例えば、含まない）。一部の実施形態では、組成物は、ポリソルベート２０を実質的に含まない（例えば、含まない）。一部の実施形態では、組成物は、ポリソルベート８０を実質的に含まない（例えば、含まない）。一部の実施形態では、組成物は、緩衝塩を実質的に含まない（例えば、含まない）。一部の実施形態では、組成物は、界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０）を含む。一部の実施形態では、組成物は、ポリソルベート２０を含む。一部の実施形態では、組成物は、ポリソルベート８０を含む。一部の実施形態では、組成物は緩衝塩を含む。
【０１７５】
ナノ粒子製剤を作製する方法
本出願はまた、本明細書に記載されているナノ粒子組成物を作製する方法も提供する。疎水性薬物およびアルブミンを含有するナノ粒子は、高せん断力（例えば、超音波、高圧ホモジナイゼーション、またはその他）の条件下で調製することができる。これらの方法は、例えば、米国特許第５，９１６，５９６号；第６，０９６，３３１号；第６，７４９，８６８号；第６，５３７，５７９号；およびＰＣＴ出願国際公開ＷＯ９８／１４１７４号；ＷＯ９９／００１１３号；ＷＯ０７／０２７９４１号；およびＷＯ０７／０２７８１９号に開示されている。これらの刊行物の内容は、特にナノ粒子組成物の作製方法に関して、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。これらの方法を、本明細書に記載されているように変更して、疎水性薬物と、アルブミン（例えば、誘導体化アルブミン）と、生物活性ポリペプチド（例えば、抗体）とを含むナノ粒子を作製することができる。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドの少なくとも一部が、アルブミンポリペプチドにコンジュゲートする（すなわち、生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲート）。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドまたは生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートは、製造プロセスの間の１つまたは複数のステップで添加される。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、疎水性薬物、およびアルブミンを含有する予め形成されたナノ粒子にコンジュゲートする。
【０１７６】
一態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンおよび生物活性ポリペプチドを含む、ステップ；およびｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去し（例えば、蒸発によって）、それによって組成物を形成するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物に生物活性ポリペプチドを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１７７】
一部の実施形態では、疎水性薬物と、アルブミンと、抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンおよび抗体を含む、ステップ；およびｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去し（例えば、蒸発によって）、それによって組成物を形成するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物に抗体を添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１７８】
一部の実施形態では、タキサン（例えば、パクリタキセル）と、アルブミンと、抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解したタキサン（例えば、パクリタキセル）を含み、水溶液がアルブミンおよび抗体を含む、ステップ；およびｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去し（例えば、蒸発によって）、それによって組成物を形成するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物に抗体を添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１７９】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンを含む、ステップ；ｉｉ）生物活性ポリペプチドをエマルジョンに添加するステップ；およびｉｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去し（例えば、蒸発によって）、それによって組成物を形成するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、生物活性ポリペプチドをエマルジョンに添加するステップと、１つまたは複数の有機溶媒の除去を開始するステップとの間にいかなるインキュベーション時間も防止することを含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物に生物活性ポリペプチドを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１８０】
一部の実施形態では、疎水性薬物と、アルブミンと、抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンを含む、ステップ；ｉｉ）抗体をエマルジョンに添加するステップ；およびｉｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去し（例えば、蒸発によって）、それによって組成物を形成するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、生物活性ポリペプチドをエマルジョンに添加するステップと、１つまたは複数の有機溶媒の除去を開始するステップとの間にいかなるインキュベーション時間も防止することを含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物に抗体を添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１８１】
別の実施形態では、タキサン（例えば、パクリタキセル）と、アルブミンと、抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解したタキサン（例えば、パクリタキセル）を含み、水溶液がアルブミンを含む、ステップ；ｉｉ）抗体をエマルジョンに添加するステップ；およびｉｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去し（例えば、蒸発によって）、それによって組成物を形成するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、生物活性ポリペプチドをエマルジョンに添加するステップと、１つまたは複数の有機溶媒の除去を開始するステップとの間にいかなるインキュベーション時間も防止することを含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物に抗体を添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１８２】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンを含む、ステップ；ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去して（例えば、蒸発によって）、蒸発後懸濁液を得るステップ；およびｉｉｉ）蒸発後懸濁液に生物活性ポリペプチドを添加し、それによって組成物を形成するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物に生物活性ポリペプチドを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１８３】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンを含む、ステップ；ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去して（例えば、蒸発によって）、蒸発後懸濁液を得るステップ；およびｉｉｉ）蒸発後懸濁液に抗体を添加し、それによって組成物を形成するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物に抗体を添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１８４】
別の態様では、タキサン（例えば、パクリタキセル）と、アルブミンと、抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解したタキサン（例えば、パクリタキセル）を含み、水溶液がアルブミンを含む、ステップ；ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去して（例えば、蒸発によって）、蒸発後懸濁液を得るステップ；およびｉｉｉ）蒸発後懸濁液に抗体を添加し、それによって組成物を形成するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物に抗体を添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１８５】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンを含む、ステップ；ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の全てではない少なくとも一部をエマルジョンから除去して（例えば、蒸発によって）、エマルジョン−懸濁液中間体を得るステップ；ｉｉｉ）エマルジョン−懸濁液中間体に生物活性ポリペプチドを添加するステップ、およびｉｖ）生物活性ポリペプチドを含むエマルジョン−懸濁液中間体から１つまたは複数の有機溶媒の追加の一部を除去し（例えば、蒸発によって）、それによって組成物を形成するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物に生物活性ポリペプチドを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１８６】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンを含む、ステップ；ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の全てではない少なくとも一部をエマルジョンから除去し（例えば、蒸発によって）、エマルジョン−懸濁液中間体を得るステップ；ｉｉｉ）エマルジョン−懸濁液中間体に生物活性ポリペプチドを添加するステップ、およびｉｖ）生物活性ポリペプチドを含むエマルジョン−懸濁液中間体から１つまたは複数の有機溶媒の追加の一部を除去し（例えば、蒸発によって）、それによって組成物を形成するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物に抗体を添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１８７】
別の態様では、タキサン（例えば、パクリタキセル）と、アルブミンと、抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解したタキサン（例えば、パクリタキセル）を含み、水溶液がアルブミンを含むステップ；ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の全てではない少なくとも一部をエマルジョンから除去し（例えば、蒸発によって）、エマルジョン−懸濁液中間体を得るステップ；ｉｉｉ）エマルジョン−懸濁液中間体に生物活性ポリペプチドを添加するステップ、ならびにｉｖ）生物活性ポリペプチドを含むエマルジョン−懸濁液中間体から１つまたは複数の有機溶媒の追加の一部を除去し（例えば、蒸発によって）、それによって組成物を形成するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物に抗体を添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１８８】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンを含み、アルブミンの少なくとも一部が生物活性ポリペプチドにコンジュゲートしている、ステップ；およびｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去し（例えば、蒸発によって）、それによって組成物を形成するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、例えばジスルフィド結合または化学架橋剤を介してアルブミンに共有結合でコンジュゲートしており、そのような架橋剤は、マレイミド官能基および／またはＮＨＳ部分、ＳＭＣＣ架橋剤、ボロン酸エステルを含む架橋剤、またはクリックケミストリー（例えば、銅フリークリックケミストリー、例えばトリアゾール部分）から誘導される部分を含む。一部の実施形態では、アルブミンおよび生物活性ポリペプチドは、非共有結合でコンジュゲートしている。例えば、一部の実施形態では、架橋剤は、アルブミンに共有結合した第１の構成要素と、生物活性ポリペプチドに共有結合した第２の構成要素とを含み、第１の構成要素および第２の構成要素は、互いに特異的に結合する（例えば、相補的核酸分子）。一部の実施形態では、方法は、例えば透析、緩衝液交換（例えば、タンジェント流濾過）によって、または遠心分離によってナノ粒子に会合していない生物活性ポリペプチドコンジュゲートアルブミンからナノ粒子を分離し、非コンジュゲートアルブミンを含む溶液にナノ粒子を再懸濁することによって、ナノ粒子に会合していない生物活性ポリペプチドコンジュゲートアルブミンを、非コンジュゲートアルブミンに置き換えるステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物に生物活性ポリペプチドを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１８９】
一部の実施形態では、疎水性薬物と、アルブミンと、抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンを含み、アルブミンの少なくとも一部が抗体にコンジュゲートしている、ステップ；およびｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去し（例えば、蒸発によって）、それによって組成物を形成するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、例えばジスルフィド結合または化学架橋剤を介してアルブミンに共有結合でコンジュゲートしており、そのような架橋剤は、マレイミド官能基および／またはＮＨＳ部分、ＳＭＣＣ架橋剤、ボロン酸エステルを含む架橋剤、またはクリックケミストリー（例えば、銅フリークリックケミストリー、例えばトリアゾール部分）から誘導される部分を含む。一部の実施形態では、アルブミンおよび生物活性ポリペプチドは、非共有結合でコンジュゲートしている。例えば、一部の実施形態では、架橋剤は、アルブミンに共有結合した第１の構成要素と、生物活性ポリペプチドに共有結合した第２の構成要素とを含み、第１の構成要素および第２の構成要素は、互いに特異的に結合する（例えば、相補的核酸分子）。一部の実施形態では、方法は、例えば透析、緩衝液交換（例えば、タンジェント流濾過）によって、または遠心分離によってナノ粒子に会合していない抗体コンジュゲートアルブミンからナノ粒子を分離し、非コンジュゲートアルブミンを含む溶液にナノ粒子を再懸濁することによって、ナノ粒子に会合していない抗体コンジュゲートアルブミンを、非コンジュゲートアルブミンに置き換えるステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物に抗体を添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１９０】
別の態様では、タキサン（例えば、パクリタキセル）と、アルブミンと、抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解したタキサン（例えば、パクリタキセル）を含み、水溶液がアルブミンを含み、アルブミンの少なくとも一部が抗体にコンジュゲートしている、ステップ；およびｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去し（例えば、蒸発によって）、それによって組成物を形成するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、例えばジスルフィド結合または化学架橋剤を介してアルブミンに共有結合でコンジュゲートしており、そのような架橋剤は、マレイミド官能基および／またはＮＨＳ部分、ＳＭＣＣ架橋剤、ボロン酸エステルを含む架橋剤、またはクリックケミストリー（例えば、銅フリークリックケミストリー、例えばトリアゾール部分）から誘導される部分を含む。一部の実施形態では、アルブミンおよび生物活性ポリペプチドは、非共有結合でコンジュゲートしている。例えば、一部の実施形態では、架橋剤は、アルブミンに共有結合した第１の構成要素と、生物活性ポリペプチドに共有結合した第２の構成要素とを含み、第１の構成要素および第２の構成要素は、互いに特異的に結合する（例えば、相補的核酸分子）。一部の実施形態では、方法は、例えば透析、緩衝液交換（例えば、タンジェント流濾過）によって、または遠心分離によってナノ粒子に会合していない抗体コンジュゲートアルブミンからナノ粒子を分離し、非コンジュゲートアルブミンを含む溶液にナノ粒子を再懸濁することによって、ナノ粒子に会合していない抗体コンジュゲートアルブミンを、非コンジュゲートアルブミンに置き換えるステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物に抗体を添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１９１】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンを含み、アルブミンの少なくとも一部が誘導体化されている、ステップ；ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去して（例えば、蒸発によって）、蒸発後懸濁液を得るステップ；およびｉｉｉ）蒸発後懸濁液に生物活性ポリペプチドを添加するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは誘導体化されている。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物に生物活性ポリペプチドを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１９２】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンを含み、アルブミンの少なくとも一部が誘導体化されている、ステップ；ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去して（例えば、蒸発によって）、ナノ粒子を含む蒸発後懸濁液を得るステップ；ｉｉｉ）ナノ粒子に会合していない誘導体化アルブミンを、非誘導体化アルブミンに置き換えるステップ；およびｉｖ）生物活性ポリペプチドをナノ粒子に添加するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは誘導体化されている。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１９３】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、水溶液がアルブミンおよび生物活性ポリペプチドを含む、ステップ；ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去して（例えば、蒸発によって）、ナノ粒子を含む蒸発後懸濁液を得るステップ；ｉｉｉ）ナノ粒子に会合していない誘導体化アルブミンを、非誘導体化アルブミンに置き換えるステップ；およびｉｖ）抗体をナノ粒子に添加するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、抗体は誘導体化されている。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１９４】
別の態様では、タキサン（例えば、パクリタキセル）と、アルブミンと、抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、有機溶液が１つまたは複数の有機溶媒に溶解したタキサン（例えば、パクリタキセル）を含み、水溶液がアルブミンを含み、アルブミンの少なくとも一部が誘導体化されている、ステップ；ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去して（例えば、蒸発によって）、ナノ粒子を含む蒸発後懸濁液を得るステップ；ｉｉｉ）ナノ粒子に会合していない誘導体化アルブミンを、非誘導体化アルブミンに置き換えるステップ；およびｉｖ）抗体をナノ粒子に添加するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、抗体は誘導体化されている。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、有機溶媒の除去後に組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を１つまたは複数のバイアルに充填するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、組成物を凍結乾燥するステップをさらに含む。
【０１９５】
疎水性薬物を、有機溶媒（または有機溶媒の混合物）に溶解して、疎水性薬物を含む有機溶液を形成する。適した有機溶媒には、例えばアルカン、シクロアルカン、ケトン、アルコール、エステル、エーテル、塩素化溶媒、および当技術分野で公知の他の溶媒が挙げられる。一部の実施形態では、有機溶媒は水混和性有機溶媒、水不溶性有機溶媒、または水混和性有機溶媒と水不溶性有機溶媒の混合物を含む。一部の実施形態では、有機溶液中の水混和性有機溶媒の水不溶性有機溶媒に対する比率は、約２０：１〜約１：２０の間（例えば、約２０：１〜約１５：１の間、約１５：１〜約１２：１の間、約１２：１〜約１０：１の間、約１０：１〜約８：１の間、約８：１〜約６：１の間、約６：１〜約４：１の間、約４：１〜約２：１の間、約２：１〜約１：１の間、約１：１〜約１：２の間、約１：２〜約１：４の間、約１：４〜約１：６の間、約１：６〜約１：８の間、約１：８〜約１：１０の間、約１：１０〜約１：１２の間、約１：１２〜約１：１５の間、または約１：１５〜約１：２０の間）である。例示的な有機溶媒には、例えばクロロホルム、ジクロロメタン、塩化メチレン、酢酸エチル、エタノール、ｔ−ブタノール、メタノール、イソプロパノール、プロパノール、ｎ−ブタノール、テトラヒドロフラン、シクロヘキサン、ジオキサン、アセトニトリル、アセトン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、メチルピロリドンが挙げられる。一部の実施形態では、疎水性薬物は、有機溶媒に、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ（例えば、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、または約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ）の濃度で溶解する。
【０１９６】
疎水性薬物を含む有機溶液を水溶液と組み合わせる。一部の実施形態では、水溶液は、水に溶解したアルブミン（例えば、組換えアルブミン）を含む。アルブミンは、例えばヒトアルブミンであり得る。一部の実施形態では、水溶液は１つまたは複数の塩、緩衝剤、または安定剤をさらに含む。一部の実施形態では、水溶液は、界面活性剤（例えば、ポリソルベート）を実質的に含まない（例えば、含まない）。一部の実施形態では、水溶液のｐＨは、約５〜約８の間である。一部の実施形態では、水溶液中のアルブミン（任意の生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートのアルブミン部分を含む）の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬの間（例えば、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬの間、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの間、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬの間、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの間、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの間、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの間、約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、または約２００ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬの間）である。一部の実施形態では、水溶液は、生物活性ポリペプチドまたは生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートを含む。すなわち、水溶液は、ｉ）アルブミン、ｉｉ）生物活性ポリペプチド、ｉｉｉ）生物活性ポリペプチド-アルブミンコンジュゲート、またはｉｖ）２つもしくはそれより多くの組合せを含み得る。一部の実施形態では、アルブミンは、例えば架橋部分（例えば、アミン反応性スクシンイミジルエステルまたはマレイミド部分）を含めることによって誘導体化される。一部の実施形態では、水溶液中の生物活性ポリペプチド（生物活性−アルブミンコンジュゲートの生物活性ポリペプチド部分を含む）の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの間（例えば、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬの間、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの間、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの間、または約２０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの間）である。一部の実施形態では、水溶液は、アルブミンおよび生物活性ポリペプチドを（アルブミン：生物活性ポリペプチド）約１：１〜約２０：１のｗ／ｗ比で含む。
【０１９７】
一部の実施形態では、生物活性ポリペプチド（または生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲート）は、個別の水溶液で提供される（すなわち、アルブミンを含む水溶液またはアルブミンおよび生物活性ポリペプチドを含む水溶液とは別の水溶液）。個別の水溶液（「生物活性ポリペプチド溶液」と呼ぶことができる）は、水に溶解した生物活性ポリペプチド（または生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲート、またはその組合せ）を含む。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチド溶液はさらに１つまたは複数の塩、緩衝剤、または安定剤を含む。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチド溶液は、界面活性剤（例えば、ポリソルベート）を実質的に含まない（例えば、含まない）。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチド溶液のｐＨは、約４〜約８の間である。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチド溶液中の生物活性ポリペプチド（生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートの生物活性ポリペプチド部分を含む）の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ（例えば、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬの間、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの間、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの間、または約２０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの間）である。
【０１９８】
一部の実施形態では、有機溶液および水溶液（生物活性ポリペプチドまたは生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートを含んでもよく、または含まなくてもよい）を、例えば高せん断ミキサー（例えば、ローター−ステーター式ミキサー）を使用して混合して、粗混合物を形成する。例えば、一部の実施形態では、水溶液と、疎水性薬物を含む有機溶液とを組み合わせ、組み合わせた水溶液と有機溶液を混合して粗混合物を形成する。一部の実施形態では、水溶液を高せん断ミキサーによって混合し、有機溶液を、水溶液を混合している間に水溶液に添加して、粗混合物を形成する。一部の実施形態では、水溶液と、生物活性ポリペプチド溶液と、有機溶液とを組み合わせ、組み合わせた水溶液、生物活性ポリペプチド溶液、有機溶液を混合して、粗混合物を形成する。一部の実施形態では、水溶液を高せん断ミキサーによって混合し、水溶液を混合している間に、生物活性ポリペプチド溶液および有機溶液を水溶液と組み合わせる。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチド溶液を高せん断ミキサーによって混合し、生物活性ポリペプチド溶液を混合している間に、水溶液および有機溶液を生物活性ポリペプチド溶液と組み合わせることができる。
【０１９９】
一部の実施形態では、アルブミンまたは生物活性ポリペプチド（または生物活性ポリペプチド-アルブミンコンジュゲート）を、粗混合物に添加することができる。例えば、一部の実施形態では、追加の水溶液（アルブミン、生物活性ポリペプチド、および／または生物活性ポリペプチドコンジュゲートのうちの１つまたは複数を含む）を、例えば有機溶液と第１の水溶液の混合の完了後に粗混合物に添加する。一部の実施形態では、追加の水溶液を粗混合物と混合し、これは、高せん断ミキサーまたは低せん断ミキサーを使用して実施してもよい。一部の実施形態では、追加の水溶液を、粗混合物と組み合わせて、粗混合物中のアルブミン（任意の生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートのアルブミン部分を含む）の濃度を、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬの間（例えば、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬの間、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの間、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬの間、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの間、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの間、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの間、約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、または約２００ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬの間）に調整する。一部の実施形態では、追加の水溶液を、粗混合物と組み合わせて、粗混合物中の生物活性ポリペプチド（任意の生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートの生物活性ポリペプチド部分を含む）の濃度を、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの間（例えば、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬの間、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの間、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの間、または約２０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの間）に調整する。一部の実施形態では、追加の水溶液を、粗混合物と組み合わせて、アルブミンの生物活性ポリペプチドに対する比率（ｗ／ｗ）を１：１〜約１０００：１の間に調整する。一部の実施形態では、追加の水溶液を粗混合物と組み合わせて、アルブミンの疎水性薬物に対する比率（ｗ／ｗ）を約２．５：１〜約２０：１に調整する。
【０２００】
有機溶液および水溶液の粗混合物（粗混合物は、粗混合物の形成後に添加される追加の水溶液を含んでもよく、または含まなくてもよい）を、高圧ホモジナイゼーションに供してエマルジョンを形成する。一部の実施形態では、エマルジョンを、高圧ホモジナイザーの中で約２〜約１００サイクル、例えば約５〜約５０サイクル、または約８〜約２０サイクル（例えば、約８、１０、１２、１４、１６、１８、または２０サイクルのうちのいずれか１つ）の間サイクルする。
【０２０１】
一部の実施形態では、追加のアルブミンまたは生物活性ポリペプチド（または生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲート）を、エマルジョンに添加することができる。例えば、一部の実施形態では、追加の水溶液（アルブミン、生物活性ポリペプチド、および／または生物活性ポリペプチドコンジュゲートのうちの１つまたは複数を含む）をエマルジョンに添加する。一部の実施形態では、追加の水溶液を、高圧ホモジナイザーの中の流路の間のエマルジョンに添加する。一部の実施形態では、追加の水溶液を、ホモジナイゼーションプロセスの完了後にエマルジョンに添加する。一部の実施形態では、追加の水溶液をエマルジョンと混合し、これは、高せん断ミキサーまたは低せん断ミキサーを使用して実施してもよい。一部の実施形態では、追加の水溶液を、エマルジョンに添加して、エマルジョン中のアルブミン（任意の生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートのアルブミン部分を含む）の濃度を、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬの間（例えば、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬの間、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの間、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬの間、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの間、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの間、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの間、約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、または約２００ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬの間）に調整する。一部の実施形態では、追加の水溶液をエマルジョンと組み合わせて、エマルジョン中の生物活性ポリペプチド（任意の生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートの生物活性ポリペプチド部分を含む）の濃度を、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの間（例えば、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬの間、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの間、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの間、または約２０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの間）に調整する。一部の実施形態では、追加の水溶液をエマルジョンと組み合わせて、アルブミンの生物活性ポリペプチドに対する比率（ｗ／ｗ）を１：１〜約１０００：１の間に調整する。一部の実施形態では、追加の水溶液をエマルジョンと組み合わせて、アルブミンの疎水性薬物に対する比率（ｗ／ｗ）を約２．５：１〜約５０：１に調整する。
【０２０２】
少なくとも一部の有機溶媒（例えば、有機溶媒の実質的に全て）を、ロータリーエバポレーター、流下膜式蒸発器、薄膜蒸発器、噴霧乾燥器等を含むがこれらに限定されない、この目的に関して公知の適した機器を利用して、蒸発によって除去することができる。有機溶媒の蒸発によって、ナノ粒子の形成が起こり、これは、蒸発後に十分な水が残っている場合には、ナノ粒子懸濁液の形態となり得る（および「蒸発後懸濁液」と呼ぶことができる）。溶媒は、減圧下（例えば、約２５ｍｍＨｇ、３０ｍｍＨｇ、４０ｍｍＨｇ、５０ｍｍＨｇ、１００ｍｍＨｇ、２００ｍｍＨｇ、または３００ｍｍＨｇのうちのいずれか１つ）で除去され得る。減圧下で溶媒を除去するために使用される時間の長さは、製剤の体積に基づいて調整され得る。例えば、３００ｍＬの規模で産生される製剤の場合、溶媒を、約１〜約３００ｍｍＨｇ（例えば、約５〜１００ｍｍＨｇ、１０〜５０ｍｍＨｇ、２０〜４０ｍｍＨｇ、または２５ｍｍＨｇのうちのいずれか１つ）で約５〜約６０分間（例えば、約７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、２０、２５、または３０分間のいずれか１つ）除去することができる。
【０２０３】
一部の実施形態では、追加のアルブミンおよび／または生物活性ポリペプチド（または生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲート）をナノ粒子（例えば、蒸発後懸濁液）に添加することができる。例えば、一部の実施形態では、追加の水溶液（アルブミン、生物活性ポリペプチド、および／または生物活性ポリペプチドコンジュゲートのうちの１つまたは複数を含む）をナノ粒子に添加する。一部の実施形態では、追加の水溶液を蒸発後懸濁液に添加して、ナノ粒子懸濁液中のアルブミン（任意の生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートのアルブミン部分を含む）の濃度を、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬの間（例えば、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬの間、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの間、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬの間、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの間、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの間、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの間、約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの間、または約２００ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬの間）に調整する。一部の実施形態では、追加の水溶液をナノ粒子懸濁液と組み合わせて、ナノ粒子懸濁液中の生物活性ポリペプチド（任意の生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートの生物活性ポリペプチド部分を含む）の濃度を、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの間（例えば、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬの間、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの間、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの間、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬの間、または約２０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬの間）に調整する。一部の実施形態では、追加の水溶液を、ナノ粒子懸濁液と組み合わせて、アルブミンの生物活性ポリペプチドに対する比率（ｗ／ｗ）を１：１〜約１０００：１に調整する。一部の実施形態では、追加の水溶液をナノ粒子懸濁液と組み合わせて、アルブミンの疎水性薬物に対する比率（ｗ／ｗ）を約２．５：１〜約５０：１に調整する。一部の実施形態では、例えば１つまたは複数の賦形剤（例えば、安定剤、緩衝剤、増量剤、抗菌剤、オスモライト、または再構成増強剤）をナノ粒子（例えば、蒸発後懸濁液）に添加することによって、ナノ粒子を投与のために製剤化する。１つまたは複数の賦形剤を、水溶液とは個別にナノ粒子に添加してもよく、または水溶液に含めてもよい。一部の実施形態では、ナノ粒子懸濁液のｐＨを、約４〜約９の間（例えば、約４〜約５の間、約５〜約６の間、約６〜約７の間、約７〜約８の間、または約８〜約９の間）に調整する。蒸発後懸濁液をアルブミンまたは生物活性ポリペプチド（または生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲート）と共に所望の時間の長さ（例えば、約１５分間〜約４８時間）インキュベートすることができる。一部の実施形態では、インキュベーションは、約３℃〜約３０℃で行う。このインキュベーション期間により、生物活性ポリペプチド（または生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲート）は、ナノ粒子と会合することができる。例えば、一部の実施形態では、ナノ粒子に会合したアルブミンの一部を誘導体化し、インキュベーション期間により、誘導体化アルブミンを生物活性ポリペプチドにコンジュゲートすることができる。
【０２０４】
一部の実施形態では、アルブミンを、生物活性ポリペプチドにコンジュゲートして生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートを形成する。生物活性ポリペプチドのアルブミンへのコンジュゲーションは、製造プロセスの間の様々な時点で起こり得る。例えば、一部の実施形態では、水溶液を有機溶液と組み合わせる前に、生物活性ポリペプチドをアルブミンにコンジュゲートする。一部の実施形態では、ポリペプチドをナノ粒子懸濁液と組み合わせる際に、生物活性ポリペプチドをアルブミンにコンジュゲートする。一部の実施形態では、アルブミン（またはアルブミンの一部）を誘導体化し、生物活性ポリペプチドへのコンジュゲーションを提供することができる。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドを誘導体化し、アルブミンへのコンジュゲーションを提供することができる。一部の実施形態では、アルブミン（またはアルブミンの一部）および生物活性ポリペプチドを誘導体化して、コンジュゲーションを提供する。
【０２０５】
生物活性ポリペプチドは、例えばクリックケミストリーまたは他の公知の架橋剤を使用して、アルブミンにコンジュゲートすることができる。例えば、一部の実施形態では、アルブミンまたは生物活性ポリペプチドを、歪みアルケンまたは歪みアルキンによって誘導体化し、アルブミンおよび生物活性ポリペプチドを、環化付加反応を介してコンジュゲートすることができる。一部の実施形態では、アルブミンまたは生物活性ポリペプチド上のリシン残基を、例えばアミン反応性スクシンイミジルエステル（例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ−エステル））、イソシアネート、またはイソチオシアネートによって誘導体化する。一部の実施形態では、アルブミンまたは生物活性ポリペプチド上のシステイン残基を、例えばマレイミドまたはヨードアセトアミドによって誘導体化する。アルブミンのシステイン３４は、誘導体化され得る例示的なシステインである。他のコンジュゲーション方法は、当技術分野で公知である。誘導体化アルブミンを、生物活性ポリペプチドと共にインキュベートして、または誘導体化生物活性ポリペプチドをアルブミンと共にインキュベートして、生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートを形成することができる。生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートは、生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートを水溶液、粗混合物、エマルジョン、または蒸発後懸濁液に添加する前に形成することができる。例えば、生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートをナノ粒子製造プロセスに含める前に、生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートを非コンジュゲートアルブミンまたは生物活性ポリペプチドから分離することができる。同様にまたはあるいは、生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートを、ナノ粒子の形成後に形成することができる。例えば、一部の実施形態では、誘導体化アルブミンを、水溶液、粗混合物、またはエマルジョンに含め、生物活性ポリペプチドを、ナノ粒子懸濁液に添加する。ナノ粒子に会合した誘導体化アルブミンは、生物活性ポリペプチドと反応して生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートを形成する。一部の実施形態では、誘導体化生物活性ポリペプチドを、アルブミンを含む水溶液、粗混合物、エマルジョン、蒸発後懸濁液、または他のナノ粒子懸濁液に添加し、アルブミンと反応させて、生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートを形成する。
【０２０６】
一部の実施形態では、ナノ粒子に会合していない生物活性ポリペプチド、生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲート、または誘導体化アルブミン（存在する場合）を、ナノ粒子懸濁液から除去する。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートまたは誘導体化アルブミンを、非誘導体化または非コンジュゲートアルブミンに置き換える。例えば、一部の実施形態では、ナノ粒子懸濁液を遠心分離し、上清を除去し、ナノ粒子を新しい水溶液（非誘導体化または非コンジュゲートアルブミンであり得る）に懸濁する。一部の実施形態では、ナノ粒子懸濁液を透析して、ナノ粒子に会合していない生物活性ポリペプチド、生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲート、または誘導体化アルブミン（存在する場合）を除去し、これらを非誘導体化または非コンジュゲートアルブミンに置き換えることができる。一部の実施形態では、ナノ粒子に会合していない生物活性ポリペプチド、生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲート、または誘導体化アルブミン（存在する場合）を、緩衝液交換（例えば、タンジェント流濾過によって）によって除去し、これらを非誘導体化または非コンジュゲートアルブミンに置き換えることができる。
【０２０７】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、アルブミンにコンジュゲートした生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、生物活性ポリペプチドを、疎水性薬物およびアルブミンを含むナノ粒子にコンジュゲートするステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、生物活性ポリペプチドをアルブミンに共有結合で架橋するステップを含む。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、例えばジスルフィド結合または化学架橋剤を介してアルブミンに共有結合でコンジュゲートしており、そのような架橋剤は、マレイミド官能基および／またはＮＨＳ部分、ＳＭＣＣ架橋剤、ボロン酸エステルを含む架橋剤、またはクリックケミストリー（例えば、銅フリークリックケミストリー、例えばトリアゾール部分）から誘導される部分を含む。一部の実施形態では、方法は、生物活性ポリペプチドをアルブミンに非共有結合で架橋するステップであって、アルブミンが、架橋剤の第１の構成要素に共有結合し、生物活性ポリペプチドが、架橋剤の第２の構成要素に共有結合し、架橋剤の第１の構成要素が、架橋剤の第２の構成要素（例えば、少なくとも部分的に相補的である核酸分子）に特異的に結合する、ステップを含む。
【０２０８】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、アルブミンにコンジュゲートした抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、抗体を、疎水性薬物およびアルブミンを含むナノ粒子にコンジュゲートするステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、抗体をアルブミンに共有結合で架橋するステップを含む。一部の実施形態では、抗体は、例えばジスルフィド結合または化学架橋剤を介してアルブミンに共有結合でコンジュゲートしており、そのような架橋剤は、マレイミド官能基および／またはＮＨＳ部分、ＳＭＣＣ架橋剤、ボロン酸エステルを含む架橋剤、またはクリックケミストリー（例えば、銅フリークリックケミストリー、例えばトリアゾール部分）から誘導される部分を含む。一部の実施形態では、方法は、抗体をアルブミンに非共有結合で架橋するステップであって、アルブミンが、架橋剤の第１の構成要素に共有結合し、抗体が、架橋剤の第２の構成要素に共有結合し、架橋剤の第１の構成要素が、架橋剤の第２の構成要素（例えば、少なくとも部分的に相補的である核酸分子）に特異的に結合する、ステップを含む。
【０２０９】
別の態様では、タキサン（例えば、パクリタキセル）と、アルブミンと、アルブミンにコンジュゲートした抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、抗体を、タキサンおよびアルブミンを含むナノ粒子にコンジュゲートするステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、抗体をアルブミンに共有結合で架橋するステップを含む。一部の実施形態では、抗体は、例えばジスルフィド結合または化学架橋剤を介してアルブミンに共有結合でコンジュゲートしており、そのような架橋剤は、マレイミド官能基および／またはＮＨＳ部分、ＳＭＣＣ架橋剤、ボロン酸エステルを含む架橋剤、またはクリックケミストリー（例えば、銅フリークリックケミストリー、例えばトリアゾール部分）から誘導される部分を含む。一部の実施形態では、方法は、抗体をアルブミンに非共有結合で架橋するステップであって、アルブミンが、架橋剤の第１の構成要素に共有結合し、抗体が、架橋剤の第２の構成要素に共有結合し、架橋剤の第１の構成要素が、架橋剤の第２の構成要素（例えば、少なくとも部分的に相補的である核酸分子）に特異的に結合する、ステップを含む。
【０２１０】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、アルブミンにコンジュゲートした生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）生物活性ポリペプチドを架橋剤によって官能化するステップ、ならびにｉｉ）活性化生物活性ポリペプチドを、疎水性薬物およびアルブミンを含むナノ粒子と組み合わせるステップを含む、方法が提供される。図１８は、そのような方法の一例を例証する。一部の実施形態では、架橋剤は、マレイミド官能基および／またはＮＨＳ部分、ＳＭＣＣ架橋剤、ボロン酸、クリックケミストリー架橋試薬を含む。
【０２１１】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、アルブミンにコンジュゲートした抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）抗体を架橋剤によって官能化するステップ、ならびにｉｉ）活性化抗体を、疎水性薬物およびアルブミンを含むナノ粒子と組み合わせるステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、架橋剤は、マレイミド官能基および／またはＮＨＳ部分、ＳＭＣＣ架橋剤、ボロン酸、クリックケミストリー架橋試薬を含む。
【０２１２】
別の態様では、タキサン（例えば、パクリタキセル）と、アルブミンと、アルブミンにコンジュゲートした抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）抗体を架橋剤によって官能化するステップ、ならびにｉｉ）活性化抗体を、タキサンおよびアルブミンを含むナノ粒子と組み合わせるステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、架橋剤は、マレイミド官能基および／またはＮＨＳ部分、ＳＭＣＣ架橋剤、ボロン酸、クリックケミストリー架橋試薬を含む。
【０２１３】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、アルブミンにコンジュゲートした生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）生物活性ポリペプチドを架橋剤によって官能化するステップ、ｉｉ）アルブミンおよび疎水性薬物を含むナノ粒子の表面に会合したアルブミンの少なくとも一部を誘導体化するステップ、ならびにｉｉｉ）活性化生物活性ポリペプチドを、誘導体化アルブミンを含むナノ粒子と組み合わせるステップを含む、方法が提供される。図１９、２１、および２３は、ナノ粒子の表面に会合したアルブミンを誘導体化し、官能化生物活性ポリペプチドを誘導体化アルブミンにコンジュゲートさせる例示的な方法を例証する。一部の実施形態では、アルブミンを誘導体化するステップは、例えばアルブミンおよび疎水性薬物を含むナノ粒子を、チオール化剤（例えば、２−イミノチオラン）と組み合わせることによって、アルブミンをチオール化するステップを含む。一部の実施形態では、架橋剤は、マレイミド官能基および／またはＮＨＳ部分、ＳＭＣＣ架橋剤、ボロン酸、クリックケミストリー架橋試薬を含む。
【０２１４】
別の態様では、疎水性薬物と、アルブミンと、アルブミンにコンジュゲートした抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）抗体を架橋剤によって官能化するステップ、ｉｉ）アルブミンおよび疎水性薬物を含むナノ粒子の表面に会合したアルブミンの少なくとも一部を誘導体化するステップ、ならびにｉｉｉ）活性化抗体を、誘導体化アルブミンを含むナノ粒子と組み合わせるステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、アルブミンを誘導体化するステップは、例えばアルブミンおよび疎水性薬物を含むナノ粒子を、チオール化剤（例えば、２−イミノチオラン）と組み合わせることによって、アルブミンをチオール化するステップを含む。一部の実施形態では、架橋剤は、マレイミド官能基および／またはＮＨＳ部分、ＳＭＣＣ架橋剤、ボロン酸、クリックケミストリー架橋試薬を含む。
【０２１５】
別の態様では、タキサン（例えば、パクリタキセル）と、アルブミンと、アルブミンにコンジュゲートした抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体、例えばベバシズマブ）、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）、および抗ＰＤ−１抗体（例えば、ＢＧＢ−Ａ３１７）、または抗ＩＬ−６受容体抗体（例えば、トシリズマブ））とを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、ｉ）抗体を架橋剤によって官能化するステップ、ｉｉ）アルブミンおよびタキサンを含むナノ粒子の表面に会合したアルブミンの少なくとも一部を誘導体化するステップ、ならびにｉｉｉ）活性化抗体を、誘導体化アルブミンを含むナノ粒子と組み合わせるステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、アルブミンを誘導体化するステップは、例えばアルブミンおよび疎水性薬物を含むナノ粒子を、チオール化剤（例えば、２−イミノチオラン）と組み合わせることによって、アルブミンをチオール化するステップを含む。一部の実施形態では、架橋剤は、マレイミド官能基および／またはＮＨＳ部分、ＳＭＣＣ架橋剤、ボロン酸、クリックケミストリー架橋試薬を含む。
【０２１６】
一部の実施形態では、ナノ粒子懸濁液を、ナノ粒子懸濁液を滅菌し得る１つまたは複数のフィルターを介して濾過（すなわち、濾過滅菌）する。ナノ粒子懸濁液を、複数のフィルターを介して連続的に濾過してもよい。
【０２１７】
一部の実施形態では、ナノ粒子をバイアルに分配する。一部の実施形態では、バイアルを密封する。一部の実施形態では、バイアルは単回使用バイアルである。一部の実施形態では、バイアルは複数回使用バイアルである。ナノ粒子懸濁液はまた、バイアルの内部または外部のいずれかで凍結乾燥することができる。一部の実施形態では、凍結乾燥されたナノ粒子を、水溶液（例えば、水または食塩水）によって再構成する。一部の実施形態では、水溶液は、アルブミン、生物活性ポリペプチド、および／または生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートのうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、再構成されたナノ粒子を、水溶液中でインキュベートすることができ、濾過することができ、生物活性ポリペプチドもしくは生物活性ポリペプチド−アルブミンコンジュゲートを除去することができるか、または例えば上記のように再度凍結乾燥することができる。一部の実施形態では、再構成されたナノ粒子を対象に投与する。
【０２１８】
以下の実施形態は、本明細書に記載されているナノ粒子の製造に関する例示的な方法であり、制限すると考えるべきではない。図１は、本明細書に記載されているナノ粒子を作製する方法の一実施形態を例証するフローチャートである。水に溶解したアルブミンおよび生物活性ポリペプチド（例えば、抗体）を含有する水溶液を容器に移し、ステップ１０２で高せん断ミキサーによって混合する。１つまたは複数の有機溶媒（例えば、水混和性の溶媒および水不溶性の溶媒）および疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）を含有する有機溶液を、ステップ１０４で高せん断ミキサーによって水溶液を混合している間、水溶液を含有する容器に添加し、それによって粗混合物を形成する。ステップ１０６で、粗混合物を高圧ホモジナイザーの中に通過させることによって、粗混合物をホモジナイズし、それによってエマルジョンを形成する。任意選択で、エマルジョンを、高圧ホモジナイザーの中に２回またはそれより多く通過させる。ステップ１０８で、１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部を、蒸発によってエマルジョンから除去し、それによって蒸発後ナノ粒子懸濁液を形成する。任意選択で、ステップ１１０では、蒸発後ナノ粒子懸濁液を、例えばアルブミンまたは１つもしくは複数の賦形剤を含有する水溶液を添加することによって製剤化する。製剤化されたナノ粒子懸濁液を任意選択で、ステップ１１２で濾過滅菌し、滅菌ナノ粒子懸濁液を任意選択で、ステップ１１４で１つまたは複数のバイアルに充填する。任意選択で、ステップ１１６で、バイアルを凍結乾燥および／または密封する。
【０２１９】
図２は、本明細書に記載されているナノ粒子を作製する方法の別の実施形態を例証するフローチャートである。水に溶解したアルブミンを含有する水溶液を容器に移し、ステップ２０２で高せん断ミキサーによって混合する。１つまたは複数の有機溶媒（例えば、水混和性の溶媒および水不溶性の溶媒）および疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）を含有する有機溶液を、ステップ２０４で高せん断ミキサーによって水溶液を混合している間、水溶液を含有する容器に添加し、それによって粗混合物を形成する。ステップ２０６で、生物活性ポリペプチド（第２の水溶液に含有させることができる）を粗混合物に添加する。ステップ２０８で、粗混合物を高圧ホモジナイザーの中に通過させることによって、粗混合物をホモジナイズし、それによってエマルジョンを形成する。任意選択で、エマルジョンを、高圧ホモジナイザーの中に２回またはそれより多く通過させる。ステップ２１０で、１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部を、蒸発によってエマルジョンから除去し、それによって蒸発後ナノ粒子懸濁液を形成する。任意選択で、ステップ２１２では、蒸発後ナノ粒子懸濁液を、例えばアルブミンまたは１つもしくは複数の賦形剤を含有する水溶液を添加することによって製剤化する。製剤化されたナノ粒子懸濁液を任意選択で、ステップ２１４で濾過滅菌し、滅菌ナノ粒子懸濁液を任意選択で、ステップ２１６で１つまたは複数のバイアルに充填する。任意選択で、ステップ２１８で、バイアルを凍結乾燥および／または密封する。
【０２２０】
図３は、本明細書に記載されているナノ粒子を作製する方法の別の実施形態を例証するフローチャートである。水に溶解したアルブミンを含有する水溶液を容器に移し、ステップ３０２で高せん断ミキサーによって混合する。１つまたは複数の有機溶媒（例えば、水混和性の溶媒および水不溶性の溶媒）および疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）を含有する有機溶液を、ステップ３０４で高せん断ミキサーによって水溶液を混合している間、水溶液を含有する容器に添加し、それによって粗混合物を形成する。ステップ３０６で、粗混合物を高圧ホモジナイザーの中に通過させることによって、粗混合物をホモジナイズし、それによってエマルジョンを形成する。任意選択で、エマルジョンを、高圧ホモジナイザーの中に２回またはそれより多く通過させる。ステップ３０８で、生物活性ポリペプチド（第２の水溶液に含有させることができる）をエマルジョンに添加する。ステップ３１０で、１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部を、蒸発によってエマルジョンから除去し、それによって蒸発後ナノ粒子懸濁液を形成する。任意選択で、ステップ３１２では、蒸発後ナノ粒子懸濁液を、例えばアルブミンまたは１つもしくは複数の賦形剤を含有する水溶液を添加することによって製剤化する。製剤化されたナノ粒子懸濁液を任意選択で、ステップ３１４で濾過滅菌し、滅菌ナノ粒子懸濁液を任意選択で、ステップ３１６で１つまたは複数のバイアルに充填する。任意選択で、ステップ３１８で、バイアルを凍結乾燥および／または密封する。
【０２２１】
図４は、本明細書に記載されているナノ粒子を作製する方法の別の実施形態を例証するフローチャートである。水に溶解したアルブミンを含有する水溶液を容器に移し、ステップ４０２で高せん断ミキサーによって混合する。１つまたは複数の有機溶媒（例えば、水混和性の溶媒および水不溶性の溶媒）および疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）を含有する有機溶液を、ステップ４０４で高せん断ミキサーによって水溶液を混合している間、水溶液を含有する容器に添加し、それによって粗混合物を形成する。ステップ４０６で、粗混合物を高圧ホモジナイザーの中に通過させることによって、粗混合物をホモジナイズし、それによってエマルジョンを形成する。任意選択で、エマルジョンを、高圧ホモジナイザーの中に２回またはそれより多く通過させる。ステップ４０８で、１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部を、蒸発によってエマルジョンから除去し、それによって蒸発後ナノ粒子懸濁液を形成する。ステップ４１０で、生物活性ポリペプチド（第２の水溶液に含有させることができる）を蒸発後ナノ粒子懸濁液に添加する。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドおよびナノ粒子懸濁液を一定期間インキュベートする。任意選択で、ステップ４１２で、蒸発後ナノ粒子懸濁液を、例えばアルブミンまたは１つもしくは複数の賦形剤を含有する水溶液を添加することによって製剤化する。一部の実施形態では、ステップ４１０および４１２を単一のステップに組み合わせる。例えば、生物活性ポリペプチドをナノ粒子懸濁液に添加するのと同時に、アルブミンまたは１つもしくは複数の賦形剤を添加する。生物活性ポリペプチド、アルブミン、または賦形剤を同じ水溶液または異なる水溶液中で組み合わせることができる。製剤化されたナノ粒子懸濁液を任意選択で、ステップ４１４で濾過滅菌し、滅菌ナノ粒子懸濁液を任意選択で、ステップ４１６で１つまたは複数のバイアルに充填する。任意選択で、ステップ４１８でバイアルを凍結乾燥および／または密封する。
【０２２２】
図５は、本明細書に記載されているナノ粒子を作製する方法の別の実施形態を例証するフローチャートである。ステップ５０２で、生物活性ポリペプチド（例えば、水溶液中）を、アルブミンおよび疎水性薬物を含むナノ粒子を含む組成物と組み合わせる。予め作製したナノ粒子は、例えば先に製造した濾過したナノ粒子懸濁液または凍結乾燥ナノ粒子組成物（再構成してもよく、しなくてもよい）に由来し得る。例示的な予め作製したナノ粒子は、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（Ｎａｂ−パクリタキセル）である。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドを含む水溶液を使用して、凍結乾燥ナノ粒子組成物を懸濁する。任意選択で、ステップ５０４で、含有するナノ粒子懸濁液を、例えば、アルブミンまたは１つもしくは複数の賦形剤を含有する水溶液を添加することによって製剤化する。一部の実施形態では、ステップ５０２および５０４を単一のステップに組み合わせる。例えば、生物活性ポリペプチドをナノ粒子懸濁液に添加するのと同時に、アルブミンまたは１つもしくは複数の賦形剤を添加する。生物活性ポリペプチド、アルブミン、または賦形剤を同じ水溶液または異なる水溶液中で組み合わせることができる。製剤化されたナノ粒子懸濁液を任意選択で、ステップ５０６で濾過滅菌し、滅菌ナノ粒子懸濁液を任意選択で、ステップ５０８で１つまたは複数のバイアルに充填する。任意選択で、ステップ５１０で、バイアルを凍結乾燥および／または密封する。
【０２２３】
図６は、本明細書に記載されているナノ粒子を作製する方法の別の実施形態を例証するフローチャートである。水に溶解した誘導体化アルブミンを含有する水溶液を容器に移し、ステップ６０２で高せん断ミキサーによって混合する。一部の実施形態では、水溶液は、非誘導体化アルブミンをさらに含む。１つまたは複数の有機溶媒（例えば、水混和性の溶媒および水不溶性の溶媒）および疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）を含有する有機溶液を、ステップ６０４で高せん断ミキサーによって水溶液を混合している間、水溶液を含有する容器に添加し、それによって粗混合物を形成する。ステップ６０６で、粗混合物を高圧ホモジナイザーの中に通過させることによって、粗混合物をホモジナイズし、それによってエマルジョンを形成する。任意選択で、エマルジョンを、高圧ホモジナイザーの中に２回またはそれより多く通過させる。ステップ６０８で、１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部を、蒸発によってエマルジョンから除去し、それによって蒸発後ナノ粒子懸濁液を形成する。ナノ粒子に会合していない誘導体化アルブミンを、ステップ６１０で、例えばナノ粒子の透析、遠心分離、および再懸濁によって、またはタンジェント流濾過によって非誘導体化アルブミンと置き換えることができる。ステップ６１２で、生物活性ポリペプチド（第２の水溶液に含有させることができる）をナノ粒子懸濁液に添加する。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドを誘導体化する（コンジュゲーションの方法に応じて）。任意選択で、ステップ６１４では、例えばアルブミンまたは１つもしくは複数の賦形剤を含有する水溶液を添加することによって、懸濁液を製剤化する。一部の実施形態では、ステップ６１０および６１４、または６１２および６１４を単一のステップに組み合わせる。例えば、生物活性ポリペプチドをナノ粒子懸濁液に添加するのと同時に、アルブミンまたは１つもしくは複数の賦形剤を添加する。生物活性ポリペプチド、アルブミン、または賦形剤を同じ水溶液または異なる水溶液中で組み合わせることができる。製剤化されたナノ粒子懸濁液を任意選択で、ステップ６１６で濾過滅菌し、滅菌ナノ粒子懸濁液を任意選択で、ステップ６１８で１つまたは複数のバイアルに充填する。任意選択で、ステップ６２０で、バイアルを凍結乾燥および／または密封する。
【０２２４】
使用方法
本明細書に記載されている組成物は、細胞増殖または過増殖に関連する疾患、例えばがんを処置するために使用され得る。
【０２２５】
したがって、一部の実施形態では、それを必要とする個体における疾患（例えば、がん）を処置する方法であって、（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物の有効量を個体に投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンによってコーティングされた疎水性薬物の固体コアを含む。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、疎水性薬物の固体コアの表面に会合している。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドの一部は、疎水性薬物の固体コアに埋め込まれている。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、ナノ粒子上のアルブミンに会合している。一部の実施形態では、組成物中の生物活性ポリペプチドの少なくとも約７５％がナノ粒子に会合している。一部の実施形態では、ナノ粒子は、少なくとも約１００個の生物活性ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子における疎水性薬物と生物活性ポリペプチドの重量比は、約４：１である。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子におけるアルブミンと疎水性薬物の重量比は、約１：１未満〜約９：１である。一部の実施形態では、動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定したナノ粒子の平均直径は、約２００ｎｍ以下である。一部の実施形態では、組成物は、ナノ粒子に会合していない生物活性ポリペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、疎水性薬物は、タキサンである。一部の実施形態では、タキサンはパクリタキセルである。一部の実施形態では、疎水性薬物は、リムス系薬物である。一部の実施形態では、リムス系薬物はラパマイシンである。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは治療抗体である。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、ベバシズマブ、セツキシマブ、イピリムマブ、ニボルマブ、パニツムマブ、およびリツキシマブからなる群から選択される。
【０２２６】
本明細書に記載されている組成物によって処置されるがんには、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫、および白血病が挙げられるがこれらに限定されない。本明細書に記載されている組成物によって処置することができるがんの例には、扁平上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺癌、および扁平上皮ＮＳＣＬＣを含む肺の扁平上皮癌）、腹膜がん、肝細胞がん、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）がんまたは胃（ｓｔｏｍａｃｈ）がん（消化器がんを含む）、膵臓がん（例えば、進行膵臓がん）、膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん（例えば、肝細胞癌）、膀胱がん、肝腫、乳がん、結腸がん、黒色腫、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）がんまたは腎臓（ｒｅｎａｌ）がん、肝臓がん、前立腺がん（例えば、進行前立腺がん）、外陰がん、甲状腺がん、肝臓癌、頭頸部がん、結腸直腸がん、直腸がん、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、Ｂ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中間悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中間悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、およびヴァルデンストレームマクログロブリン血症を含む）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、骨髄腫、ヘアリーセル白血病、慢性骨髄芽球性白血病、および移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連する浮腫）、およびメグズ症候群に関連する異常な血管増殖が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、転移性がん（すなわち、原発腫瘍から転移しているがん）を処置する方法が提供される。一部の実施形態では、細胞増殖および／または細胞遊走を低減させる方法が提供される。一部の実施形態では、過形成、例えば再狭窄が起こり得る血管系の過形成、または動脈もしくは静脈高血圧症が起こりうる過形成を処置する方法が提供される。
【０２２７】
一部の実施形態では、進行ステージのがんを処置する方法が提供される。一部の実施形態では、例えば進行乳がん、ステージＩＶ乳がん、局所進行乳がん、および転移性乳がんを含む乳がん（ＨＥＲ２陽性またはＨＥＲ２陰性であり得る）を処置する方法が提供される。一部の実施形態では、がんは、例えば非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ、例えば進行ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ、例えば進行ＳＣＬＣ）、および肺の進行固形腫瘍悪性疾患を含む肺がんである。一部の実施形態では、がんは、卵巣がん、頭頸部がん、胃の悪性疾患、黒色腫（転移性黒色腫を含む）、結腸直腸がん、膵臓がん、および固形腫瘍（例えば、進行固形腫瘍）である。一部の実施形態では、がんは、乳がん、結腸直腸がん、直腸がん、非小細胞肺がん、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞がん、前立腺がん、肝臓がん、膵臓がん、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド腫瘍、頭頸部がん、黒色腫、卵巣がん、中皮腫、神経膠腫、膠芽腫、神経芽腫、および多発性骨髄腫のうちのいずれかである（および一部の実施形態では、からなる群から選択される）。一部の実施形態では、がんは固形腫瘍である。
【０２２８】
一部の実施形態では、処置されるがんは、転移性乳がんなどの乳がんである。一部の実施形態では、処置されるがんは、進行ステージの非小細胞肺がんを含む非小細胞肺がんなどの肺がんである。一部の実施形態では、処置されるがんは、膵臓がん、例えば初期膵臓がんまたは進行もしくは転移性膵臓がんである。一部の実施形態では、処置されるがんは、黒色腫、例えばステージＩＩＩまたはＩＶ黒色腫である。
【０２２９】
一部の実施形態では、増殖性疾患に関して処置される個体は、本明細書に記載されている疾患の１つまたは複数を有すると同定されている。当業者の医師による本明細書に記載されている状態の同定は、当技術分野でルーチンであり（例えば、血液検査、Ｘ線、ＣＴスキャン、内視鏡、生検、血管造影、ＣＴ−血管造影等を介して）、同様に例えば腫瘍の成長、出血、潰瘍形成、疼痛、リンパ節肥大、咳、黄疸、腫脹、体重減少、カヘキシア、発汗、貧血、腫瘍随伴症候群、血栓等により、個体または他者によって疑われ得る。一部の実施形態では、個体は、本明細書に記載されている状態の１つまたは複数に罹りやすいと同定されている。個体の罹りやすさは、遺伝子プロファイリング、家族の病歴、および病歴（例えば、関連疾患の出現）、生活様式または習慣が挙げられるがこれらに限定されない、当業者によって認識される複数の危険因子および／または診断アプローチのうちの任意の１つまたは複数に基づき得る。
【０２３０】
一部の実施形態では、本明細書で使用される方法および／または組成物は、処置前の同じ個体における対応する症状と比較して、または方法および／もしくは組成物を投与していない他の個体における対応する症状と比較して少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％のうちのいずれか１つ、増殖性疾患（例えば、がん）に関連する１つまたは複数の症状の重症度を低減させる。
【０２３１】
一部の実施形態では、本明細書に記載されている組成物（例えば、医薬組成物）は、別の投与モダリティまたは処置と組み合わせて使用される。
【０２３２】
併用処置
本明細書に記載されている組成物は、細胞増殖または過増殖、例えばがんに関連する疾患を処置するための併用処置の構成要素として使用され得る。
【０２３３】
したがって、一部の実施形態では、それを必要とする個体における疾患（例えば、がん）を処置する方法であって、個体に、（１）（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物の有効量；および（２）１つまたは複数の追加の治療剤の有効量を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載されている組成物は、（１）（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子；および（２）１つまたは複数の追加の治療剤を含む。
【０２３４】
一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の治療剤は、水溶性薬剤である。一部の実施形態では、他の治療剤は、化学療法剤である。一部の実施形態では、他の治療剤は、白金系薬剤である。一部の実施形態では、白金系薬剤は、カルボプラチンである。一部の実施形態では、白金系薬剤はシスプラチンである。一部の実施形態では、他の治療剤は抗代謝剤である。一部の実施形態では、他の治療剤は、ゲムシタビンである。一部の実施形態では、他の治療剤は、デュルバルマブである。一部の実施形態では、他の治療剤は、カペシタビンである。一部の実施形態では、他の治療剤は、５−フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン、および／またはオキサリプラチンである。一部の実施形態では、他の治療剤は、イパフリセプトである。一部の実施形態では、他の治療剤は、バンチクツマブである。一部の実施形態では、他の治療剤はＰＥＧＰＨ２０である。一部の実施形態では、他の治療剤はニボルマブである。一部の実施形態では、他の治療剤は、ネシツムマブである。
【０２３５】
したがって、一部の実施形態では、それを必要とする個体における疾患（例えば、がん）を処置する方法であって、個体に、（１）（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物の有効量；および（２）別の治療剤の有効量を投与するステップを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ナノ粒子は、アルブミンによってコーティングされた疎水性薬物の固体コアを含む。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、疎水性薬物の固体コアの表面に会合している。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドの一部は、疎水性薬物の固体コアに埋め込まれている。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、ナノ粒子上のアルブミンに会合する。一部の実施形態では、組成物中の生物活性ポリペプチドの少なくとも約７５％がナノ粒子に会合している。一部の実施形態では、ナノ粒子は、少なくとも約１００個の生物活性ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子における疎水性薬物と生物活性ポリペプチドの重量比は、約４：１である。一部の実施形態では、組成物中のナノ粒子におけるアルブミンと疎水性薬物の重量比は、約１：１未満〜約９：１である。一部の実施形態では、動的光散乱によって測定したナノ粒子の平均直径は、約２００ｎｍ以下である。一部の実施形態では、組成物は、ナノ粒子に会合していない生物活性ポリペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、疎水性薬物は、タキサンである。一部の実施形態では、タキサンはパクリタキセルである。一部の実施形態では、疎水性薬物は、リムス系薬物である。一部の実施形態では、リムス系薬物はラパマイシンである。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは治療抗体である。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチドは、ベバシズマブ、セツキシマブ、イピリムマブ、ニボルマブ、パニツムマブ、およびリツキシマブからなる群から選択される。一部の実施形態では、他の治療剤は化学療法剤である。一部の実施形態では、他の治療剤は白金系薬剤である。一部の実施形態では、白金系薬剤はカルボプラチンである。一部の実施形態では、白金系薬剤はシスプラチンである。一部の実施形態では、他の治療剤は、ゲムシタビンである。
【０２３６】
ナノ粒子組成物を投与する投薬量および方法
個体（例えば、ヒト）に投与される組成物の用量は、特定の組成物、投与様式、および処置されている疾患のタイプに応じて変化し得る。一部の実施形態では、ナノ粒子の量は、客観的応答（例えば、部分奏効または完全奏効）をもたらすために有効である。一部の実施形態では、組成物の量は、個体において完全奏効をもたらすために十分である。一部の実施形態では、組成物の量は、個体において部分奏効をもたらすために十分である。一部の実施形態では、投与される組成物の量（例えば、単独で投与する場合）は、組成物によって処置される個体の集団において約４０％、５０％、６０％、または６４％のうちのいずれかより大きい全奏効率を生じるために十分である。本明細書に記載されている方法の処置に対する個体の応答は、例えばＲＥＣＩＳＴレベルに基づいて決定することができる。
【０２３７】
一部の実施形態では、組成物の量は、個体の無増悪生存を延長させるために十分である。一部の実施形態では、組成物の量は、個体の全生存を延長させるために十分である。一部の実施形態では、組成物の量（例えば、単独で投与される場合）は、組成物によって処置される個体集団において約５０％、６０％、７０％、または７７％のうちのいずれかより大きい臨床での恩典を生じるために十分である。
【０２３８】
一部の実施形態では、組成物、第１の治療、第２の治療、または併用療法の量は、処置前の同じ対象における対応する腫瘍サイズ、がん細胞の数、もしくは腫瘍の成長速度と比較して、または処置を受けていない他の対象における対応する活性と比較して、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または１００％のうちのいずれかだけ腫瘍のサイズを減少させる、がん細胞の数を減少させる、または腫瘍の成長速度を減少させるために十分な量である。標準的な方法、例えば精製酵素によるｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、細胞に基づくアッセイ、動物モデル、またはヒトの試験を使用して、この効果の程度を測定することができる。
【０２３９】
一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）は、毒性作用（すなわち、臨床的に許容可能な毒性レベルを超える効果）を誘導するレベルより下であるか、または組成物を個体に投与した場合に、起こり得る副作用を制御もしくは忍容できるレベルである。
【０２４０】
一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）の量は、以下の範囲のうちのいずれかに含まれる：約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約２．５ｍｇ、約０．５〜約５ｍｇ、約５〜約１０ｍｇ、約１０〜約１５ｍｇ、約１５〜約２０ｍｇ、約２０〜約２５ｍｇ、約２０〜約５０ｍｇ、約２５〜約５０ｍｇ、約５０〜約７５ｍｇ、約５０〜約１００ｍｇ、約７５〜約１００ｍｇ、約１００〜約１２５ｍｇ、約１２５〜約１５０ｍｇ、約１５０〜約１７５ｍｇ、約１７５〜約２００ｍｇ、約２００〜約２２５ｍｇ、約２２５〜約２５０ｍｇ、約２５０〜約３００ｍｇ、約３００〜約３５０ｍｇ、約３５０〜約４００ｍｇ、約４００〜約４５０ｍｇ、または約４５０〜約５００ｍｇ。一部の実施形態では、組成物の有効量（例えば、単位投与剤形）における疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）の量は、約５ｍｇ〜約５００ｍｇ、例えば約３０ｍｇ〜約３００ｍｇまたは約５０ｍｇ〜約２００ｍｇの範囲である。一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）の濃度は、薄いか（約０．１ｍｇ／ｍｌ）または濃く（約１００ｍｇ／ｍｌ）、例えば約０．１〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．１〜約２０ｍｇ／ｍｌ、約１〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約８ｍｇ／ｍｌ、約４〜約６ｍｇ／ｍｌ、または約５ｍｇ／ｍｌのうちのいずれかを含む。一部の実施形態では、疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）の濃度は、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ、１．３ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、または５０ｍｇ／ｍｌのうちのいずれかである。
【０２４１】
組成物中の疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）の例示的な有効量には、少なくとも約２５ｍｇ／ｍ２、３０ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２、６０ｍｇ／ｍ２、７５ｍｇ／ｍ２、８０ｍｇ／ｍ２、９０ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、１２０ｍｇ／ｍ２、１２５ｍｇ／ｍ２、１５０ｍｇ／ｍ２、１６０ｍｇ／ｍ２、１７５ｍｇ／ｍ２、１８０ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、２１０ｍｇ／ｍ２、２２０ｍｇ／ｍ２、２５０ｍｇ／ｍ２、２６０ｍｇ／ｍ２、３００ｍｇ／ｍ２、３５０ｍｇ／ｍ２、４００ｍｇ／ｍ２、５００ｍｇ／ｍ２、５４０ｍｇ／ｍ２、７５０ｍｇ／ｍ２、１０００ｍｇ／ｍ２、または１０８０ｍｇ／ｍ２の疎水性薬物のうちのいずれかが挙げられるがこれらに限定されない。様々な実施形態では、組成物は、約３５０ｍｇ／ｍ２、３００ｍｇ／ｍ２、２５０ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、１５０ｍｇ／ｍ２、１２０ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、９０ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２、または３０ｍｇ／ｍ２未満の疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）のうちのいずれかを含む。一部の実施形態では、投与当たりの疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）の量は、約２５ｍｇ／ｍ２、２２ｍｇ／ｍ２、２０ｍｇ／ｍ２、１８ｍｇ／ｍ２、１５ｍｇ／ｍ２、１４ｍｇ／ｍ２、１３ｍｇ／ｍ２、１２ｍｇ／ｍ２、１１ｍｇ／ｍ２、１０ｍｇ／ｍ２、９ｍｇ／ｍ２、８ｍｇ／ｍ２、７ｍｇ／ｍ２、６ｍｇ／ｍ２、５ｍｇ／ｍ２、４ｍｇ／ｍ２、３ｍｇ／ｍ２、２ｍｇ／ｍ２、または１ｍｇ／ｍ２未満のうちのいずれかである。一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）の有効量は、以下の範囲のいずれかに含まれる：約１〜約５ｍｇ／ｍ２、約５〜約１０ｍｇ／ｍ２、約１０〜約２５ｍｇ／ｍ２、約２５〜約５０ｍｇ／ｍ２、約５０〜約７５ｍｇ／ｍ２、約７５〜約１００ｍｇ／ｍ２、約１００〜約１２５ｍｇ／ｍ２、約１２５〜約１５０ｍｇ／ｍ２、約１５０〜約１７５ｍｇ／ｍ２、約１７５〜約２００ｍｇ／ｍ２、約２００〜約２２５ｍｇ／ｍ２、約２２５〜約２５０ｍｇ／ｍ２、約２５０〜約３００ｍｇ／ｍ２、約３００〜約３５０ｍｇ／ｍ２、または約３５０〜約４００ｍｇ／ｍ２。一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）の有効量は、約５〜約３００ｍｇ／ｍ２、例えば約１００〜約１５０ｍｇ／ｍ２、約１２０ｍｇ／ｍ２、約１３０ｍｇ／ｍ２、または約１４０ｍｇ／ｍ２である。
【０２４２】
上記の態様のいずれかの一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）の有効量は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、５５ｍｇ／ｋｇ、または６０ｍｇ／ｋｇのうちのいずれかを含む。様々な実施形態では、組成物中の疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）の有効量は、約３５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、または１ｍｇ／ｋｇ未満の疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）のうちのいずれかを含む。
【０２４３】
一部の実施形態では、組成物中の生物活性ポリペプチド（例えば、治療抗体）の量は、以下の範囲のうちのいずれかに含まれる：約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約２．５ｍｇ、約０．５〜約５ｍｇ、約５〜約１０ｍｇ、約１０〜約１５ｍｇ、約１５〜約２０ｍｇ、約２０〜約２５ｍｇ、約２０〜約５０ｍｇ、約２５〜約５０ｍｇ、約５０〜約７５ｍｇ、約５０〜約１００ｍｇ、約７５〜約１００ｍｇ、約１００〜約１２５ｍｇ、約１２５〜約１５０ｍｇ、約１５０〜約１７５ｍｇ、約１７５〜約２００ｍｇ、約２００〜約２２５ｍｇ、約２２５〜約２５０ｍｇ、約２５０〜約３００ｍｇ、約３００〜約３５０ｍｇ、約３５０〜約４００ｍｇ、約４００〜約４５０ｍｇ、または約４５０〜約５００ｍｇ。一部の実施形態では、組成物の有効量（例えば、単位投与剤形）における生物活性ポリペプチド（例えば、治療抗体）の量は、約５ｍｇ〜約５００ｍｇ、例えば約３０ｍｇ〜約３００ｍｇまたは約５０ｍｇ〜約２００ｍｇの範囲である。一部の実施形態では、組成物中の生物活性ポリペプチド（例えば、治療抗体）の濃度は、薄いか（約０．１ｍｇ／ｍｌ）または濃く（約１００ｍｇ／ｍｌ）、例えば約０．１〜約５０ｍｇ／ｍｌ、約０．１〜約２０ｍｇ／ｍｌ、約１〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約８ｍｇ／ｍｌ、約４〜約６ｍｇ／ｍｌ、または約５ｍｇ／ｍｌのうちのいずれかを含む。一部の実施形態では、生物活性ポリペプチド（例えば、治療抗体）の濃度は、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌ、１．３ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、または５０ｍｇ／ｍｌのうちのいずれかである。
【０２４４】
組成物中の生物活性ポリペプチド（例えば、治療抗体）の例示的な有効量には、少なくとも約２５ｍｇ／ｍ２、３０ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２、６０ｍｇ／ｍ２、７５ｍｇ／ｍ２、８０ｍｇ／ｍ２、９０ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、１２０ｍｇ／ｍ２、１２５ｍｇ／ｍ２、１５０ｍｇ／ｍ２、１６０ｍｇ／ｍ２、１７５ｍｇ／ｍ２、１８０ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、２１０ｍｇ／ｍ２、２２０ｍｇ／ｍ２、２５０ｍｇ／ｍ２、２６０ｍｇ／ｍ２、３００ｍｇ／ｍ２、３５０ｍｇ／ｍ２、４００ｍｇ／ｍ２、５００ｍｇ／ｍ２、５４０ｍｇ／ｍ２、７５０ｍｇ／ｍ２、１０００ｍｇ／ｍ２、または１０８０ｍｇ／ｍ２の生物活性ポリペプチドのうちのいずれかが挙げられるがこれらに限定されない。様々な実施形態では、組成物は、約３５０ｍｇ／ｍ２、３００ｍｇ／ｍ２、２５０ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、１５０ｍｇ／ｍ２、１２０ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、９０ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２、または３０ｍｇ／ｍ２未満の生物活性ポリペプチド（例えば、治療抗体）のうちのいずれかを含む。一部の実施形態では、投与当たりの生物活性ポリペプチド（例えば、治療抗体）の量は、約２５ｍｇ／ｍ２、２２ｍｇ／ｍ２、２０ｍｇ／ｍ２、１８ｍｇ／ｍ２、１５ｍｇ／ｍ２、１４ｍｇ／ｍ２、１３ｍｇ／ｍ２、１２ｍｇ／ｍ２、１１ｍｇ／ｍ２、１０ｍｇ／ｍ２、９ｍｇ／ｍ２、８ｍｇ／ｍ２、７ｍｇ／ｍ２、６ｍｇ／ｍ２、５ｍｇ／ｍ２、４ｍｇ／ｍ２、３ｍｇ／ｍ２、２ｍｇ／ｍ２、または１ｍｇ／ｍ２未満のうちのいずれかである。一部の実施形態では、組成物中の生物活性ポリペプチド（例えば、治療抗体）の有効量は、以下の範囲のいずれかに含まれる：約１〜約５ｍｇ／ｍ２、約５〜約１０ｍｇ／ｍ２、約１０〜約２５ｍｇ／ｍ２、約２５〜約５０ｍｇ／ｍ２、約５０〜約７５ｍｇ／ｍ２、約７５〜約１００ｍｇ／ｍ２、約１００〜約１２５ｍｇ／ｍ２、約１２５〜約１５０ｍｇ／ｍ２、約１５０〜約１７５ｍｇ／ｍ２、約１７５〜約２００ｍｇ／ｍ２、約２００〜約２２５ｍｇ／ｍ２、約２２５〜約２５０ｍｇ／ｍ２、約２５０〜約３００ｍｇ／ｍ２、約３００〜約３５０ｍｇ／ｍ２、または約３５０〜約４００ｍｇ／ｍ２。一部の実施形態では、組成物中の生物活性ポリペプチド（例えば、治療抗体）の有効量は、約５〜約３００ｍｇ／ｍ２、例えば約１００〜約１５０ｍｇ／ｍ２、約１２０ｍｇ／ｍ２、約１３０ｍｇ／ｍ２、または約１４０ｍｇ／ｍ２である。
【０２４５】
上記の態様のいずれかの一部の実施形態では、組成物中の生物活性ポリペプチド（例えば、治療抗体）の有効量は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、５５ｍｇ／ｋｇ、または６０ｍｇ／ｋｇのうちのいずれかを含む。様々な実施形態では、組成物中の生物活性ポリペプチド（例えば、治療抗体）の有効量は、約３５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、または１ｍｇ／ｋｇ未満の生物活性ポリペプチドのうちのいずれかを含む。
【０２４６】
一部の実施形態では、組成物の非ナノ粒子部分に会合する組成物中の生物活性ポリペプチドの量は、処置されている疾患（例えば、がん）および／または個体に関して最適化される。一部の実施形態では、組成物のナノ粒子部分に会合する組成物中の生物活性ポリペプチドの量は、処置されている疾患（例えば、がん）および／または個体に関して最適化される。
【０２４７】
一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物と生物活性ポリペプチドの比率は、処置される疾患（例えば、がん）および／または処置されている個体に関して最適化される。
【０２４８】
一部の実施形態では、組成物の量は、同じ投薬レジメンに従う組成物の最大忍容量（ＭＴＤ）に近い。一部の実施形態では、組成物の量は、ＭＴＤの約８０％、９０％、９５％、または９８％のうちのいずれかより大きい。
【０２４９】
本明細書に記載されている組成物の投与に関する例示的な投薬頻度には、１日１回、２日毎に１回、３日毎に１回、４日毎に１回、５日毎に１回、６日毎に１回、中断なく週に１回、４週のうち３回、３週間毎に１回、２週間毎に１回、または３週のうち２回が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、組成物は、約２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、６週間毎に１回、または８週間毎に１回投与される。一部の実施形態では、組成物は、１週間に少なくとも約１回、２回、３回、４回、５回、６回、または７回（すなわち、１日１回）のうちのいずれかの回数投与される。一部の実施形態では、各投与の間の間隔は、約６ヶ月間、３ヶ月間、１ヶ月間、２０日間、１５日間、１４日間、１３日間、１２日間、１１日間、１０日間、９日間、８日間、７日間、６日間、５日間、４日間、３日間、２日間、または１日のうちのいずれかより短い。一部の実施形態では、各投与間の間隔は、約１ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、８ヶ月間、または１２ヶ月間のうちのいずれかより長い。一部の実施形態では、投薬スケジュールに中断はない。一部の実施形態では、各投与間の間隔は、約１週間以下である。
【０２５０】
一部の実施形態では、投薬頻度は、２日毎に１回を１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、および１１回である。一部の実施形態では、投薬頻度は、２日毎に１回を５回である。一部の実施形態では、組成物は、少なくとも１０日間投与され、各投与間の間隔は、約２日以下であり、各投与時の組成物の用量は、組成物中の疎水性薬物の量によって測定した場合に、約０．２５ｍｇ／ｍ２〜約２５０ｍｇ／ｍ２、約０．２５ｍｇ／ｍ２〜約１５０ｍｇ／ｍ２、約０．２５ｍｇ／ｍ２〜約７５ｍｇ／ｍ２、例えば約０．２５ｍｇ／ｍ２〜約２５ｍｇ／ｍ２、または約２５ｍｇ／ｍ２〜約５０ｍｇ／ｍ２である。
【０２５１】
組成物の投与は、長期間、例えば約１ヶ月間から約７年間まで延長することができる。一部の実施形態では、組成物は、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４、３０、３６、４８、６０、７２、または８４ヶ月間のうちのいずれかの期間にわたって投与される。
【０２５２】
一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）の投薬量は、３週間のスケジュールで投与する場合に５〜４００ｍｇ／ｍ２の範囲、または週に１回のスケジュールで投与する場合に５〜２５０ｍｇ／ｍ２（例えば、８０〜１５０ｍｇ／ｍ２、例えば１００〜１２０ｍｇ／ｍ２）の範囲であり得る。例えば、疎水性薬物（例えば、タキサン、例えばパクリタキセル）の量は、３週間のスケジュールで約６０〜約３００ｍｇ／ｍ２（例えば、約２６０ｍｇ／ｍ２）である。
【０２５３】
組成物の投与の他の例示的な投薬スケジュールは、組成物中の疎水性薬物の量によって測定した場合に、１００ｍｇ／ｍ２、週に１回、中断なし；７５ｍｇ／ｍ２、週に１回、４週のうち３回；１００ｍｇ／ｍ２、週に１回、４週のうち３回；１２５ｍｇ／ｍ２、週に１回、４週のうち３回；１２５ｍｇ／ｍ２、週に１回、３週のうち２回；１３０ｍｇ／ｍ２、週に１回、中断なし；１７５ｍｇ／ｍ２、２週間毎に１回；２６０ｍｇ／ｍ２、２週間毎に１回；２６０ｍｇ／ｍ２、３週間毎に１回；１８０〜３００ｍｇ／ｍ２、３週間毎；６０〜１７５ｍｇ／ｍ２、週に１回、中断なし；２０〜１５０ｍｇ／ｍ２を週に２回；および１５０〜２５０ｍｇ／ｍ２を週に２回が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２５４】
ナノ粒子組成物の投薬数は、投与する医師の判断に基づいて処置の経過にわたって調整され得る。
【０２５５】
一部の実施形態では、個体は、少なくとも約１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、または１０回の処置サイクルのうちのいずれかの間処置される。
【０２５６】
本明細書に記載されている組成物は、約２４時間より短い注入期間の間、個体への組成物の注入を可能にする。例えば、一部の実施形態では、組成物は、約２４時間、１２時間、８時間、５時間、３時間、２時間、１時間、３０分、２０分、または１０分のうちのいずれかより短い注入期間にわたって投与される。一部の実施形態では、組成物は、約３０分間の注入期間にわたって投与される。
【０２５７】
組成物中の疎水性薬物の他の例示的な用量には、組成物中の疎水性薬物の量によって測定した場合に、約５０ｍｇ／ｍ２、６０ｍｇ／ｍ２、７５ｍｇ／ｍ２、８０ｍｇ／ｍ２、９０ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、１２０ｍｇ／ｍ２、１６０ｍｇ／ｍ２、１７５ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、２１０ｍｇ／ｍ２、２２０ｍｇ／ｍ２、２６０ｍｇ／ｍ２、および３００ｍｇ／ｍ２のうちのいずれかが挙げられるがこれらに限定されない。例えば、一部の実施形態では、組成物中のパクリタキセルの投薬量は、３週間のスケジュールで投与する場合に約１００〜４００ｍｇ／ｍ２の範囲であり、週に１回のスケジュールで投与する場合に約５０〜２５０ｍｇ／ｍ２の範囲であり得る。
【０２５８】
本明細書に記載されている組成物は、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、小胞内、皮下、髄腔内、肺内、筋肉内、気管内、眼内、経皮、皮内、経口、門脈内、肝臓内、肝動脈注入、または吸入を含む様々な経路を介して個体（例えば、ヒト）に投与することができる。一部の実施形態では、組成物の持続的連続放出製剤を使用してもよい。一部の実施形態では、組成物は、静脈内に投与される。一部の実施形態では、組成物は、門脈内に投与される。一部の実施形態では、組成物は、動脈内に投与される。一部の実施形態では、組成物は、腹腔内に投与される。一部の実施形態では、組成物は、肝臓内に投与される。
【０２５９】
併用処置の投与様式
本明細書に記載されている組成物の投薬レジメンは、単剤療法および併用処置の状況の両方に適用される。併用療法の方法の投与様式を以下にさらに記載する。
【０２６０】
一部の実施形態では、組成物および他の治療剤（本明細書に記載されている特定の化学療法剤）は、同時投与される。薬物を同時に投与する場合、組成物中の薬物および他の治療剤は、同じ組成物（例えば、ナノ粒子組成物と他の治療剤の両方を含む組成物）または異なる組成物（例えば、組成物と他の治療剤は個別の組成物に含有される）に含有されてもよい。
【０２６１】
一部の実施形態では、組成物および他の治療剤は、連続的に投与される。組成物または他の治療剤のいずれを先に投与してもよい。一部の実施形態では、組成物および他の治療剤は個別の組成物に含有され、これらは同じまたは異なる包装に含有されてもよい。
【０２６２】
一部の実施形態では、組成物および他の治療剤の投与は同時であり、すなわち組成物の投与期間と他の治療剤の投与期間は互いに重なる。一部の実施形態では、組成物は、他の治療剤の投与前に少なくとも１サイクル（例えば、少なくとも２、３、または４サイクルのうちのいずれか）投与される。一部の実施形態では、他の治療剤は、少なくとも１、２、３、または４週のうちのいずれかの間投与される。一部の実施形態では、組成物および他の治療剤の投与は、ほぼ同時に（例えば、１、２、３、４、５、６、または７日以内のいずれか１つ）開始される。一部の実施形態では、組成物および他の治療剤の投与は、ほぼ同時に（例えば、１、２、３、４、５、６、または７日以内のいずれか１つ）終了する。一部の実施形態では、他の治療剤の投与は、組成物の投与の終了後も（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヶ月間のうちのいずれか１つ）継続する。一部の実施形態では、他の治療剤の投与は、組成物の投与の開始後に（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヶ月後のうちのいずれか１つ）開始される。一部の実施形態では、組成物および他の治療剤の投与は、ほぼ同時に開始および終了する。一部の実施形態では、組成物および他の治療剤の投与は、ほぼ同時に開始され、他の治療剤の投与は組成物の投与の終了後も（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヶ月間のうちのいずれか１つ）継続する。一部の実施形態では、組成物および他の治療剤の投与は、ほぼ同時に終了し、他の治療剤の投与は、組成物の投与開始後に（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヶ月後のうちのいずれか１つ）開始される。
【０２６３】
一部の実施形態では、組成物および他の治療剤の投与は、非同時である。例えば、一部の実施形態では、組成物の投与は、他の治療剤が投与される前に終了する。一部の実施形態では、他の治療剤の投与は、組成物が投与される前に終了する。これらの２つの非同時投与の間の期間は、約２〜８週間の範囲、例えば約４週間であり得る。
【０２６４】
組成物および他の治療剤の投薬頻度は、投与する医師の判断に基づいて、処置の経過の間に調整され得る。個別に投与する場合、組成物および他の治療剤を、異なる投薬頻度または投薬間隔で投与することができる。例えば、組成物を、週に１回投与することができ、別の薬剤を、それより多いまたは少ない頻度で投与することができる。一部の実施形態では、組成物および／または他の薬剤の持続的連続放出製剤を使用してもよい。持続的放出を達成するための様々な製剤およびデバイスが、当技術分野で公知である。本明細書に記載されている投与構成の組合せも同様に使用することができる。
【０２６５】
組成物および他の治療剤は、同じ投与経路または異なる投与経路を使用して投与することができる。一部の実施形態（同時および連続投与の両方）では、組成物および他の治療剤は、既定の比率で投与される。例えば、一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物と他の治療剤の重量比は、約１対１である。一部の実施形態では、重量比は約０．００１〜約１から約１０００〜約１の間、または約０．０１〜約１から１００〜約１の間である。一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物と他の治療剤の重量比は、約１００：１、５０：１、３０：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、および１：１のうちのいずれかより小さい。一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物と他の治療剤の重量比は、約１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、３０：１、５０：１、１００：１のいずれかより大きい。他の比も企図される。
【０２６６】
疎水性薬物、生物活性ポリペプチド、および／または他の治療剤に関して必要な用量は、各薬剤を単独で投与する場合、または生物活性ポリペプチドが疎水性薬物ナノ粒子組成物の一部ではない場合に通常必要である量より低い量であり得る（が、必ずしもその必要はない）。したがって、一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物および／または他の治療剤の治療量以下の量が投与される。「治療量以下の量」または「治療量以下のレベル」は、治療量より少ない量、すなわち組成物中の疎水性薬物および／もしくは生物活性ポリペプチドならびに／または他の治療剤を単独で投与する場合に通常使用される量より少ない量を指す。低減は、所定の投与で投与される量および／または所定の投与期間の間に投与される量（少ない頻度）に関して反映され得る。
【０２６７】
一部の実施形態では、同じ程度の処置をもたらすために必要な組成物中の疎水性薬物および／または生物活性ポリペプチドの通常の用量を、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれより大きい値のうちのいずれかだけ低減させるために、他の化学療法剤を投与する。一部の実施形態では、同じ程度の処置をもたらすために必要な他の治療剤の通常の用量を、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれより大きい値のうちのいずれかだけ低減させるために十分な組成物中の疎水性薬物および／または生物活性ポリペプチドを投与する。
【０２６８】
一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物および／または生物活性ポリペプチドならびに他の治療剤の両方の用量を、各々を単独で投与する場合の対応する通常の用量と比較して低減する。一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物および／または生物活性ポリペプチドならびに他の治療剤の両方を、治療量以下のレベル、すなわち低減されたレベルで投与する。一部の実施形態では、組成物および／または他の治療剤の用量は、確立された最大毒性量（ＭＴＤ）より実質的に低い。例えば、ナノ粒子組成物および／または他の治療剤の用量は、ＭＴＤの約５０％、４０％、３０％、２０％、または１０％未満である。
【０２６９】
本明細書に記載されている投与構成の組合せを使用することができる。本明細書に記載されている併用療法の方法は、単独で、または化学療法、放射線療法、手術、ホルモン療法、遺伝子治療、免疫療法、化学免疫療法、肝動脈に基づく治療、凍結療法、超音波療法、肝臓移植、局所焼灼療法、ラジオ波焼灼療法、光線力学療法等などの別の治療と共に実施することができる。さらに、疾患（例えば、がん）を発症するリスクがより高い人に、疾患の発症を阻害するおよび／または遅延させる処置を行ってもよい。
【０２７０】
本明細書に記載されている他の治療剤は、様々な経路、例えば静脈内、動脈内、腹腔内、肺内を含む非経口、経口、吸入、小胞内、筋肉内、気管内、皮下、眼内、髄腔内、または経皮経路によって個体（例えば、ヒト）に投与することができる。一部の実施形態では、他の治療剤は、静脈内投与される。一部の実施形態では、ナノ粒子組成物は、経口投与される。
【０２７１】
他の治療剤の投薬頻度は、組成物の投薬頻度と同じまたは異なり得る。例示的な頻度を上記に提供する。さらなる例として、他の治療剤は、１日３回、１日２回、１日１回、週に６回、週に５回、週に４回、週に３回、週に２回、週に１回投与され得る。一部の実施形態では、他の治療剤は、１日２回または１日３回投与される。他の治療剤の例示的な量には、以下の範囲のうちのいずれかが挙げられるがこれらに限定されない：約１〜約２０００ｍｇ、約５００〜約１５００ｍｇ、約７００〜約１２００ｍｇ、約８００〜約１０００ｍｇ、約０．５〜約５ｍｇ、約５〜約１０ｍｇ、約１０〜約１５ｍｇ、約１５〜約２０ｍｇ、約２０〜約２５ｍｇ、約２０〜約５０ｍｇ、約２５〜約５０ｍｇ、約５０〜約７５ｍｇ、約５０〜約１００ｍｇ、約７５〜約１００ｍｇ、約１００〜約１２５ｍｇ、約１２５〜約１５０ｍｇ、約１５０〜約１７５ｍｇ、約１７５〜約２００ｍｇ、約２００〜約２２５ｍｇ、約２２５〜約２５０ｍｇ、約２５０〜約３００ｍｇ、約３００〜約３５０ｍｇ、約３５０〜約４００ｍｇ、約４００〜約４５０ｍｇ、または約４５０〜約５００ｍｇ。例えば、他の治療剤は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ（例えば、約１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ〜約６０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ〜約８０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ〜約１２０ｍｇ／ｋｇ、約１２０ｍｇ／ｋｇ〜約１４０ｍｇ／ｋｇ、約１４０ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇを含む）の用量で投与され得る。
【０２７２】
一部の実施形態では、例えば白金系薬剤を投与する場合、他の治療剤は、約８、７、６、５、４、３、２、または１ＡＵＣ未満の用量で投与される。一部の実施形態では、他の治療剤は、約１、２、３、４、５、６、７、または８ＡＵＣの用量で投与される。一部の実施形態では、他の治療剤は、約４ＡＵＣの用量で投与される。一部の実施形態では、他の治療剤は、約５ＡＵＣの用量で投与される。一部の実施形態では、他の治療剤は、約６ＡＵＣの用量で投与される。一部の実施形態では、他の治療剤は、約４〜約７ＡＵＣ、約５〜約６ＡＵＣ、約３〜約６ＡＵＣ、約４〜約５ＡＵＣ、または約５〜約７ＡＵＣの用量で投与される。
【０２７３】
一部の実施形態では、他の治療剤の適切な用量は、おおよそ、臨床治療で既に使用されている用量であり、他の治療剤は、単独でまたは他の治療剤と組み合わせて投与される。
【０２７４】
医薬組成物および単位投薬量
本明細書に記載されている組成物は、本明細書に記載されている組成物を、本明細書に記載されている処置方法、投与方法、および投薬量レジメンにおいて使用するために、薬学的に許容される担体、賦形剤、安定剤、および／または当技術分野で公知の他の薬剤と組み合わせることによって、医薬組成物または製剤において使用され得る。さらに、本明細書に記載されている組成物の単位投薬量が提供される。
【０２７５】
一部の実施形態では、アルブミンにより、組成物を有意な副作用なく個体（例えば、ヒト）に投与することができる。一部の実施形態では、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）は、疎水性薬物または生物活性ポリペプチドの個体（例えば、ヒト）への投与の１つまたは複数の副作用を低減するために有効な量で存在する。「投与の１つまたは複数の副作用を低減する」という用語は、例えば疎水性薬物または生物活性ポリペプチドなどの薬剤の投与によって引き起こされる１つまたは複数の望ましくない作用、ならびに送達のために使用される送達媒体（例えば、薬剤を注射に適切にする界面活性剤および溶媒）によって引き起こされる副作用を低減、緩和、除去、または回避することを指す。そのような副作用には、例えば骨髄抑制、神経毒性、過敏症、炎症、静脈刺激、静脈炎、疼痛、皮膚刺激、末梢神経障害、神経疼痛性発熱、アナフィラキシー反応、静脈血栓症、血管外漏出、およびその組合せが挙げられる。しかし、これらの副作用は単なる例示であり、疎水性薬物および／または生物活性ポリペプチドに関連する他の副作用または副作用の組合せを低減することができる。
【０２７６】
本明細書に記載されている組成物は、乾燥製剤（例えば、凍結乾燥組成物）として存在してもよく、または生物適合性の媒体に懸濁してもよい。適した生物適合性の媒体には、水、緩衝水性培地、食塩水、緩衝食塩水、任意選択でアミノ酸の緩衝溶液、任意選択でタンパク質の緩衝溶液、任意選択で糖の緩衝溶液、任意選択でビタミンの緩衝溶液、任意選択で合成ポリマーの緩衝溶液、脂質含有エマルジョン等が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２７７】
本明細書に記載されている組成物はまた、密封バイアルに存在し得る。一部の実施形態では、密封バイアルは単回使用のためである。一部の実施形態では、密封バイアルは複数回使用のためである。
【０２７８】
同様に、本明細書に記載されている組成物および製剤を含む単位剤形が提供される。これらの単位剤形は、単一または複数の単位投薬量での適切な包装で保存することができ、さらに滅菌および密封してもよい。一部の実施形態では、組成物（例えば、医薬組成物）はまた、がんを処置するために有用である１つまたは複数の他の化合物（またはその薬学的に許容される塩）を含む。様々な変形形態では、組成物中の疎水性薬物の量は、以下の範囲のいずれか１つに含まれる：約５〜約５０ｍｇ、約２０〜約５０ｍｇ、約５０〜約１００ｍｇ、約１００〜約１２５ｍｇ、約１２５〜約１５０ｍｇ、約１５０〜約１７５ｍｇ、約１７５〜約２００ｍｇ、約２００〜約２２５ｍｇ、約２２５〜約２５０ｍｇ、約２５０〜約３００ｍｇ、約３００〜約３５０ｍｇ、約３５０〜約４００ｍｇ、約４００〜約４５０ｍｇ、または約４５０〜約５００ｍｇ。一部の実施形態では、組成物中の疎水性薬物の量（例えば、剤形または単位剤形）は、約５ｍｇ〜約５００ｍｇの範囲、例えば約３０ｍｇ〜約３００ｍｇまたは約５０ｍｇ〜約２００ｍｇの誘導体である。一部の実施形態では、担体は、非経口投与（例えば、静脈内投与）に適している。
【０２７９】
一部の実施形態では、本明細書に記載されている組成物（例えば、医薬組成物）のいずれか１つを含むがんの処置のための剤形（例えば、単位剤形）が提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載されている処置方法、投与方法、および投薬量レジメンに使用するために適した包装で、本明細書に記載されている組成物、製剤、および単位投薬量を含む製品が提供される。本明細書に記載されている組成物のための適した包装は当技術分野で公知であり、これには例えば、バイアル（例えば、密封バイアル）、容器（例えば、密封容器）、アンプル、ボトル、ジャー、フレキシブルパッケージ（例えば、密封Ｍｙｌａｒまたはプラスチックバッグ）等が挙げられる。これらの製品は、さらに滅菌および／または密封され得る。
【０２８０】
キット、薬、医薬、および組成物
本発明はまた、本明細書に記載されている方法のいずれかで使用するためのキット、薬、医薬、および組成物も提供する。
【０２８１】
本発明のキットは、組成物または本明細書に記載されている１つもしくは複数の組成物（または単位剤形および／または製品）および／または別の治療剤（例えば、本明細書に記載されている薬剤）を含む１つまたは複数のコンテナーを含み、一部の実施形態では、本明細書に記載されている方法のいずれかに従って使用するための使用説明書をさらに含む。キットは、治療に適切な個体の選択に関する記載をさらに含み得る。本発明のキットに供給される使用説明書は典型的に、ラベルまたは添付文書での書面の説明書（例えば、キットに含まれる紙のシート）であるが、機械読み取り可能な使用説明書（例えば、磁気または光学保存ディスク上の使用説明書）も同様に許容可能である。
【０２８２】
例えば、一部の実施形態では、キットは、（１）（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含む組成物；および（２）疾患（例えば、がん）を処置するために組成物を投与するための使用説明書を含む。一部の実施形態では、キットは、（１）（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物；（２）別の治療剤の有効量；ならびに（３）疾患（例えば、がん）を処置するために組成物および他の治療剤を投与するための使用説明書を含む。組成物および他の治療剤は、個別のコンテナーまたは単一のコンテナーに存在し得る。
【０２８３】
本発明のキットは適した包装で存在する。適した包装には、バイアル、ボトル、ジャー、フレキシブルパッケージ（例えば、密封Ｍｙｌａｒまたはプラスチックバッグ）等が挙げられるがこれらに限定されない。キットは任意選択で緩衝剤および説明情報などの追加の構成要素を提供し得る。したがって本出願は、バイアル（例えば、密封バイアル）、ボトル、ジャー、フレキシブルパッケージ等を含む製品も提供する。
【０２８４】
本明細書に記載されている組成物の使用に関する使用説明書は一般的に、意図される処置に関する投薬量、投薬スケジュール、および投与経路に関する情報を含む。コンテナーは、単位用量、バルク包装（例えば、多用量包装）、またはサブユニット用量であり得る。例えば、長期間、例えば１週間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、またはそれより長いのうちのいずれかの期間、個体に有効な処置を提供するために本明細書に開示される組成物の十分な投薬量を含有するキットを提供してもよい。キットはまた、本明細書に記載されている組成物の複数単位用量および使用説明書も含み、薬局、例えば病院薬局および調剤薬局において貯蔵および使用するために十分な量で包装され得る。
【０２８５】
本明細書に記載されている方法において使用するための、薬、医薬、組合せ、および組成物も同様に提供される。一部の実施形態では、（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む、疾患（例えば、がん）の処置に使用するための薬（または組成物）が提供される。一部の実施形態では、（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む、疾患（例えば、がん）の処置に使用するための薬（または組成物）であって、別の治療剤と共にさらに投与される薬（または組成物）が提供される。一部の実施形態では、個体における疾患（例えば、がん）の医薬を製造するための、（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物の使用が提供される。一部の実施形態では、個体における疾患（例えば、がん）の医薬を製造するための、（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物の使用であって、医薬が別の治療剤と共にさらに投与される、使用が提供される。一部の実施形態では、個体における疾患（例えば、がん）の医薬の組合せを製造するための、（１）（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物；および（２）別の治療剤の使用が提供される。一部の実施形態では、それを必要とする個体における疾患（例えば、がん）の処置に使用するための、（１）（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物；および（２）別の治療剤を含む組合せが提供される。
【０２８６】
当業者は、いくつかの実施形態が本発明の範囲および精神において起こり得ることを認識するであろう。本発明を、以下の非制限的な実施例を参照することによってより詳細に記載する。以下の実施例は、本発明をさらに例証するが、当然のこととして本発明の範囲をいかなるようにも制限すると解釈すべきではない。
【０２８７】
例示的な実施形態
以下の例示的な実施形態は、単に説明目的のためであり、本発明の範囲を制限しないと意図される。
【０２８８】
実施形態１。（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）アルブミンと、（ｃ）生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物。
【０２８９】
実施形態２。生物活性ポリペプチドがアルブミンにコンジュゲートしている、実施形態１に記載の組成物。
【０２９０】
実施形態３。生物活性ポリペプチドが、アルブミンに共有結合で架橋している、実施形態２に記載の組成物。
【０２９１】
実施形態４。生物活性ポリペプチドが、化学架橋剤を介してアルブミンに共有結合で架橋している、実施形態３に記載の組成物。
【０２９２】
実施形態５。生物活性ポリペプチドが、ジスルフィド結合を介してアルブミンに共有結合で架橋している、実施形態３に記載の組成物。
【０２９３】
実施形態６。生物活性ポリペプチドが、非共有結合性架橋剤を介してアルブミンにコンジュゲートしている、実施形態２に記載の組成物。
【０２９４】
実施形態７。生物活性ポリペプチドが、非共有結合性架橋剤の第１の構成要素を含み、アルブミンが、非共有結合性架橋剤の第２の構成要素を含み、第１の構成要素が、第２の構成要素に特異的に結合する、実施形態６に記載の組成物。
【０２９５】
実施形態８。非共有結合性架橋剤が、核酸分子を含み、核酸分子の少なくとも一部が、相補的である、実施形態７に記載の組成物。
【０２９６】
実施形態９。ナノ粒子が、アルブミンによってコーティングされた疎水性薬物の固体コアを含む、実施形態１〜８のいずれか１つに記載の組成物。
【０２９７】
実施形態１０。生物活性ポリペプチドが疎水性薬物の固体コアの表面に会合している、実施形態１または９に記載の組成物。
【０２９８】
実施形態１１。生物活性ポリペプチドの一部が疎水性薬物の固体コアに埋め込まれている、実施形態９または１０に記載の組成物。
【０２９９】
実施形態１２。生物活性ポリペプチドがナノ粒子上のアルブミンに会合している、実施形態１〜１１のいずれか１つに記載の組成物。
【０３００】
実施形態１３。生物活性ポリペプチドがナノ粒子の表面に埋め込まれている、実施形態１２に記載の組成物。
【０３０１】
実施形態１４。生物活性ポリペプチドが、ナノ粒子上のアルブミンに非共有結合で会合している、実施形態１２または１３に記載の組成物。
【０３０２】
実施形態１５。生物活性ポリペプチドがナノ粒子上のアルブミンに共有結合で会合している、実施形態１２〜１４のいずれか１つに記載の組成物。
【０３０３】
実施形態１６。組成物中の生物活性ポリペプチドの少なくとも７５％がナノ粒子に会合している、実施形態１〜１５のいずれか１つに記載の組成物。
【０３０４】
実施形態１７。ナノ粒子が、少なくとも約１００個の生物活性ポリペプチドを含む、実施形態１〜１６のいずれか１つに記載の組成物。
【０３０５】
実施形態１８。組成物中のナノ粒子における疎水性薬物の生物活性ポリペプチドに対する重量比が、約１：１〜約１００：１である、実施形態１〜１７のいずれか１つに記載の組成物。
【０３０６】
実施形態１９。ナノ粒子におけるアルブミンの生物活性ポリペプチドに対する重量比が、約１：１〜約１０００：１である、実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の組成物。
【０３０７】
実施形態２０。疎水性薬物の重量が、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって決定され、生物活性ポリペプチドおよびアルブミンの重量が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定されるか、または
疎水性薬物の重量が、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって決定され、アルブミンの重量が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定され、生物活性ポリペプチドの重量が、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定される、実施形態１８または１９に記載の組成物。
【０３０８】
実施形態２１。ナノ粒子に会合していない生物活性ポリペプチドをさらに含む、実施形態１〜２０のいずれか１つに記載の組成物。
【０３０９】
実施形態２２。生物活性ポリペプチドが、抗体またはその断片である、実施形態１〜２１のいずれか１つに記載の組成物。
【０３１０】
実施形態２３。抗体またはその断片が腫瘍関連抗原に特異的に結合する、実施形態２２に記載の組成物。
【０３１１】
実施形態２４。抗体またはその断片が、完全長の抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド連結Ｆｖ、ｓｃＦｖ、シングルドメイン抗体（ｄＡｂ）、ダイアボディ、多特異性抗体、二重特異性抗体、抗イディオタイプ抗体、二特異性抗体、その機能的に活性なエピトープ結合断片、二官能性ハイブリッド抗体、および一本鎖抗体からなる群から選択される、実施形態２２または２３のいずれかに記載の組成物。
【０３１２】
実施形態２５。抗体またはその断片がＦｃ断片である、実施形態２４に記載の組成物。
【０３１３】
実施形態２６。生物活性ポリペプチドが、ベバシズマブ、トラスツズマブ、ＢＧＢ−Ａ３１７、またはトシリズマブである、実施形態１〜１３のいずれか１つに記載の組成物。
【０３１４】
実施形態２７。（ａ）疎水性薬物と、（ｂ）架橋剤部分によって誘導体化されたアルブミンとを含むナノ粒子を含む組成物。
【０３１５】
実施形態２８。ナノ粒子が、アルブミンによってコーティングされた疎水性薬物の固体コアを含む、実施形態２７に記載の組成物。
【０３１６】
実施形態２９。組成物中のナノ粒子におけるアルブミンの疎水性薬物に対する重量比が、約１：１〜約２０：１である、実施形態１〜１９のいずれか１つに記載の組成物。
【０３１７】
実施形態３０。疎水性薬物の重量が、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって決定され、アルブミンの重量が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定される、実施形態２９に記載の組成物。
【０３１８】
実施形態３１。組成物のナノ粒子部分におけるアルブミンの少なくとも約４０％が、ジスルフィド結合によって架橋している、実施形態１〜３０のいずれか１つに記載の組成物。
【０３１９】
実施形態３２。動的光散乱によって測定したナノ粒子の平均直径が、約２００ｎｍ以下である、実施形態１〜３１のいずれか１つに記載の組成物。
【０３２０】
実施形態３３。ナノ粒子に会合していないアルブミンをさらに含む、実施形態１〜３２のいずれか１つに記載の組成物。
【０３２１】
実施形態３４。疎水性薬物が、タキサンである、実施形態１〜３３のいずれか１つに記載の組成物。
【０３２２】
実施形態３５。疎水性薬物が、パクリタキセルである、実施形態１〜３４のいずれか１つに記載の組成物。
【０３２３】
実施形態３６。疎水性薬物がリムス系薬物である、実施形態１〜３３のいずれか１つに記載の組成物。
【０３２４】
実施形態３７。疎水性薬物が、ラパマイシンである、実施形態３３および３６のいずれか１つに記載の組成物。
【０３２５】
実施形態３８。疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって：
ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、
水溶液が、アルブミンおよび生物活性ポリペプチドを含む、ステップ；および
ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去し、それによって組成物を形成するステップ
を含む、方法。
【０３２６】
実施形態３９。生物活性ポリペプチドが、水溶液中でアルブミンにコンジュゲートしている、実施形態３８に記載の方法。
【０３２７】
実施形態４０。疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって：
ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、
水溶液が、アルブミンを含む、ステップ；
ｉｉ）生物活性ポリペプチドをエマルジョンに添加するステップ；および
ｉｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去し、それによって組成物を形成するステップ
を含む、方法。
【０３２８】
実施形態４１。疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって：
ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、
水溶液が、アルブミンを含む、ステップ；
ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去して、蒸発後懸濁液を得るステップ；および
ｉｉｉ）生物活性ポリペプチドを蒸発後懸濁液に添加し、それによって組成物を形成するステップ
を含む、方法。
【０３２９】
実施形態４２。疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、
ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、
水溶液が、アルブミンを含む、ステップ；
ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の全てではない少なくとも一部をエマルジョンから除去して、エマルジョン−懸濁液中間体を得るステップ；
ｉｉｉ）エマルジョン−懸濁液中間体に生物活性ポリペプチドを添加するステップ、ならびに
ｉｖ）生物活性ポリペプチドを含むエマルジョン−懸濁液中間体から１つまたは複数の有機溶媒の追加の一部を除去し、それによって組成物を形成するステップ
を含む、方法。
【０３３０】
実施形態４３。疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、
ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、
水溶液が、アルブミンを含み、アルブミンが、架橋剤によって誘導体化されている、ステップ；
ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去して、蒸発後懸濁液を得るステップ；および
ｉｉｉ）蒸発後懸濁液に生物活性ポリペプチドを添加し、それによって組成物を形成するステップするステップであって、生物活性ポリペプチドが、架橋剤部分によって誘導体化されている、ステップ
を含む、方法。
【０３３１】
実施形態４４。ナノ粒子に会合していない誘導体化アルブミンを、非誘導体化アルブミンに置き換えるステップをさらに含む、実施形態４３に記載の方法。
【０３３２】
実施形態４５。置き換えが透析によって行われる、実施形態４４に記載の方法。
【０３３３】
実施形態４６。置き換えが緩衝液交換によって行われる、実施形態４４に記載の方法。
【０３３４】
実施形態４７。置き換えるが、遠心分離によって、ナノ粒子に会合していない誘導体化アルブミンからナノ粒子を分離し、非誘導体化アルブミンを含む溶液にナノ粒子を再懸濁することによって行われる、実施形態４４に記載の方法。
【０３３５】
実施形態４８。疎水性薬物と、アルブミンと、生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって：
ｉ）有機溶液と水溶液の混合物を高圧ホモジナイゼーションに供し、それによってエマルジョンを形成するステップであって、
有機溶液が、１つまたは複数の有機溶媒に溶解した疎水性薬物を含み、
水溶液が、アルブミンを含み、アルブミンの少なくとも一部が、生物活性ポリペプチドにコンジュゲートしている、ステップ；および
ｉｉ）１つまたは複数の有機溶媒の少なくとも一部をエマルジョンから除去し、それによって組成物を形成するステップ
を含む、方法。
【０３３６】
実施形態４９。ナノ粒子に会合していない生物活性ポリペプチドコンジュゲートアルブミンを、非コンジュゲートアルブミンに置き換えるステップをさらに含む、実施形態４８に記載の方法。
【０３３７】
実施形態５０。置き換えが透析によって行われる、実施形態４８に記載の方法。
【０３３８】
実施形態５１。置き換えが緩衝液交換によって行われる、実施形態４８に記載の方法。
【０３３９】
実施形態５２。交換が、ナノ粒子に会合していない生物活性ポリペプチドコンジュゲートアルブミンからナノ粒子を遠心分離によって分離し、非コンジュゲートアルブミンを含む溶液にナノ粒子を再懸濁することによって行われる、実施形態４８に記載の方法。
【０３４０】
実施形態５３。疎水性薬物と、アルブミンと、アルブミンにコンジュゲートした生物活性ポリペプチドとを含むナノ粒子を含む組成物を作製する方法であって、疎水性薬物およびアルブミンを含むナノ粒子に、生物活性ポリペプチドをコンジュゲートさせるステップを含む、方法。
【０３４１】
実施形態５４。有機溶媒の除去前にエマルジョンにアルブミンを添加するステップをさらに含む、実施形態３８〜５３のいずれか１つに記載の方法。
【０３４２】
実施形態５５。有機溶媒の除去後に組成物にアルブミンを添加するステップをさらに含む、実施形態３８〜５４のいずれか１つに記載の方法。
【０３４３】
実施形態５６。有機溶媒の除去後に組成物に生物活性ポリペプチドを添加するステップをさらに含む、実施形態３８〜５５のいずれか１つに記載の方法。
【０３４４】
実施形態５７。組成物を濾過滅菌するステップをさらに含む、実施形態３８〜５６のいずれか１つに記載の方法。
【０３４５】
実施形態５８。疎水性薬物がタキサンである、実施形態３８〜５７のいずれか１つに記載の方法。
【０３４６】
実施形態５９。疎水性薬物がパクリタキセルである、実施形態３８〜５８のいずれか１つに記載の方法。
【０３４７】
実施形態６０。疎水性薬物がリムス系薬物である、実施形態３８〜５９のいずれか１つに記載の方法。
【０３４８】
実施形態６１。疎水性薬物がラパマイシンである、実施形態３８〜５７および６０のいずれか１つに記載の方法。
【０３４９】
実施形態６２。生物活性ポリペプチドが抗体またはその断片である、実施形態３８〜６１のいずれか１つに記載の方法。
【０３５０】
実施形態６３。抗体またはその断片が腫瘍関連抗原に特異的に結合する、実施形態６２に記載の方法。
【０３５１】
実施形態６４。抗体またはその断片が、完全長の抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド連結Ｆｖ、ｓｃＦｖ、シングルドメイン抗体（ｄＡｂ）、ダイアボディ、多特異性抗体、二重特異性抗体、抗イディオタイプ抗体、二特異性抗体、その機能的に活性なエピトープ結合断片、二官能性ハイブリッド抗体、および一本鎖抗体からなる群から選択される、実施形態６２または６３に記載の方法。
【０３５２】
実施形態６５。抗体またはその断片がＦｃ断片である、実施形態６４に記載の方法。
【０３５３】
実施形態６６。生物活性ポリペプチドが、ベバシズマブ、トラスツズマブ、ＢＧＢ−Ａ３１７、またはトシリズマブである、実施形態３８〜６５のいずれか１つに記載の方法。
【０３５４】
実施形態６７。実施形態３７〜６７のいずれか１つに記載の方法によって得られる組成物。
【０３５５】
実施形態６８。界面活性剤を実質的に含まない、実施形態１〜３７および６７のいずれか１つに記載の組成物。
【０３５６】
実施形態６９。水性懸濁液である、実施形態１〜３７、６７、および６８のいずれか１つに記載の組成物。
【０３５７】
実施形態７０。乾燥組成物である、実施形態１〜３７、６７、および６８のいずれか１つに記載の組成物。
【０３５８】
実施形態７１。凍結乾燥されている、実施形態７０に記載の組成物。
【０３５９】
実施形態７２。１つまたは複数の追加の治療剤をさらに含む、実施形態１〜３７および６７〜７１のいずれか１つに記載の組成物。
【０３６０】
実施形態７３。実施形態１〜３７および６７〜７２のいずれか１つに記載の組成物と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【０３６１】
実施形態７４。実施形態１〜３７および６７〜７３のいずれか１つに記載の組成物を含む密封バイアル。
【０３６２】
実施形態７５。単回使用のためである、実施形態７４に記載の密封バイアル。
【０３６３】
実施形態７６。複数回使用のためである、実施形態７４に記載の密封バイアル。
【０３６４】
実施形態７７。ａ）１つまたは複数の有機溶媒と疎水性薬物とを含むナノ液滴を含む分散有機相、およびｂ）アルブミンと生物活性ポリペプチドとを含む連続水相を含むエマルジョン。
【０３６５】
実施形態７８。アルブミンの少なくとも一部が生物活性ポリペプチドにコンジュゲートしている、実施形態７７に記載のエマルジョン。
【０３６６】
実施形態７９。エマルジョン中のアルブミンの生物活性ポリペプチドに対する重量比が、約１：１〜約１０００：１である、実施形態７７または７８に記載のエマルジョン。
【０３６７】
実施形態８０。エマルジョン中の疎水性薬物の生物活性ポリペプチドに対する重量比が、約１：１〜約１００：１である、実施形態７７〜７９のいずれか１つに記載のエマルジョン。
【０３６８】
実施形態８１。ａ）１つまたは複数の有機溶媒と疎水性薬物のうちの１つまたは複数を含むナノ液滴を含む分散有機相、およびｂ）架橋剤部分によって誘導体化されたアルブミンを含む連続水相を含むエマルジョン。
【０３６９】
実施形態８２。エマルジョン中のアルブミンの疎水性薬物に対する重量比が、約１：１〜約２０：１である、実施形態７７〜８１のいずれか１つに記載のエマルジョン。
【０３７０】
実施形態８３。ａ）１つまたは複数の有機溶媒と疎水性薬物とを含む有機溶液、およびｂ）架橋剤部分によって誘導体化されたアルブミンを含む連続水相を含む粗混合物。
【０３７１】
実施形態８４。粗混合物中のアルブミンの疎水性薬物に対する重量比が、約１：１〜約２０：１である、実施形態８４に記載の粗混合物。
【０３７２】
実施形態８５。実施形態１〜３７および６７〜７３のいずれか１つに記載の組成物の有効量を個体に投与するステップを含む、個体における疾患を処置する方法。
【０３７３】
実施形態８６。別の治療剤の有効量を個体に投与するステップをさらに含む、実施形態８５に記載の方法。
【０３７４】
実施形態８７。疾患が、がんである、実施形態８５または８６に記載の方法。
【０３７５】
実施形態８８。組成物が個体に静脈内投与される、実施形態８５〜８７のいずれか１つに記載の方法。
【０３７６】
実施形態８９。個体が、ヒトである、実施形態８５〜８８のいずれか１つに記載の方法。
【実施例】
【０３７７】
（実施例１）
ｎａｂ−パクリタキセル組成物に対するＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）賦形剤の効果
Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ）内に含有されている賦形剤としては、リン酸ナトリウム緩衝剤、ｐＨ６．２；α，α−トレハロース；およびポリソルベート２０が挙げられる。これら賦形剤の存在下での種々の温度およびｐＨにおける、アルブミンおよびパクリタキセルを含むナノ粒子の安定性を、動的光散乱による粒径分布および一部の場合では０．２μｍ膜を使用した濾過性を測定することにより決定した。アルブミンおよびパクリタキセルを含む予め製造したナノ粒子（すなわち、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標））を、１０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル濃度で再構成し、以下の条件に供した。
【０３７８】
１．Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）を、生理食塩水溶液を用いて１０ｍｇ／ｍＬに再構成し、ｐＨを７に調整した。室温で２４時間後、ナノ粒子は安定していた（動的光散乱により決定した粒径分布に著しい変更がないことにより、ならびに微粒子、凝集体、および沈降の目視および顕微鏡観察により判断した。
【０３７９】
２．Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）を、生理食塩水溶液を用いて１０ｍｇ／ｍＬに再構成し、ｐＨを５に調整した。室温で２４時間後、ナノ粒子は、安定ではなかった。これは、５付近であるアルブミンの等電点（ｐＩ）付近での凝集によるものである可能性が最も高い。
【０３８０】
３．Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）を、２０％Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）緩衝剤（５．８ｍｇ／ｍＬリン酸ナトリウム（一塩基性、一水和物）、１．２ｍｇ／ｍＬリン酸ナトリウム（二塩基性、無水）、ｐＨ６．２、６０ｍｇ／ｍＬ  α，α−トレハロース（trehalsoe））、しかしポリソルベート２０を除く）および８０％生理食塩水を用いて、１０ｍｇ／ｍＬに再構成し、ｐＨを７に調整した。室温で２４時間後、ナノ粒子は、安定しており、粒径分布に著しい変更はなかった。リン酸ナトリウムおよびα，αトレハロースは、ナノ粒子安定性に著しい影響を及ぼさないと結論付けられた。
【０３８１】
４．Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）を、２０％Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）緩衝剤（リン酸ナトリウム緩衝剤およびα，α−トレハロースを含有するが、ポリソルベート２０は除く）および８０％生理食塩水を用いて１０ｍｇ／ｍＬに再構成し、ｐＨを５に調整した。室温で２４時間後、ナノ粒子は、安定ではなかった。
【０３８２】
５．Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）を、２０％Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）緩衝剤（リン酸ナトリウム緩衝剤およびα，α−トレハロースを含有するが、ポリソルベート２０は除く）および８０％生理食塩水を用いて１０ｍｇ／ｍＬに再構成し、ｐＨを５に調整した。５８℃で２４時間後、ナノ粒子は安定ではなく、ナノ粒子凝集体が検出された。図７Ｂを参照されたい。
【０３８３】
６．Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）を、１００％Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）緩衝剤（リン酸ナトリウム緩衝剤およびα，α−トレハロースを含有するが、ポリソルベート２０は除く）を用いて１０ｍｇ／ｍＬに再構成し、ｐＨは調整しなかった（ｐＨは６．４と測定された）。室温で２４時間後、ナノ粒子は安定しており、粒径分布の著しい変更はなかった。図７Ａを参照されたい。リン酸ナトリウムおよびα，α−トレハロースは、ナノ粒子安定性に著しい影響を及ぼさないと結論付けられた。
【０３８４】
７．Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）を、１００％Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）緩衝剤（リン酸ナトリウム緩衝剤およびα，α−トレハロースならびにポリソルベート２０の各々を含有する）を用いて１０ｍｇ／ｍＬに再構成し、ｐＨは調整しなかった（ｐＨは６．８と測定された）。光学顕微鏡で見るとナノ粒子は直ちに凝集し（図７Ｃ）、室温で２４時間のインキュベーション後、懸濁液の微視的微粒子および可視的沈降がもたらされた。したがって、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）製剤に提供されている濃度のポリソルベート界面活性剤自体が、ナノ粒子安定性に影響を及ぼしている。
【０３８５】
８．Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）を、１００％Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）緩衝剤（リン酸ナトリウム緩衝剤およびα，α−トレハロースならびにポリソルベート２０（０．０４％）の各々を含有する）を用いて１０ｍｇ／ｍＬに再構成し、ｐＨを５に調整した。ナノ粒子は、調製後直ちに凝集し（平均粒径が、１４３ｎｍから１５９ｎｍへと成長した）、ナノ粒子は、室温で２４時間後、不安定であり続けた。
【０３８６】
これらの研究は、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）緩衝剤に存在するポリソルベート２０が、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）ナノ粒子の凝集を引き起こすことを示す。さらに、ｐＨを５に低下させると、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）粒子凝集がもたらされる。
【０３８７】
（実施例２）
アルブミンの存在無しでのベバシズマブの安定性に対するナノ粒子製造プロセスステップの効果
一部の実施形態では、アルブミンおよび疎水性薬物を含むナノ粒子は、水溶液中のアルブミンを、１つまたは複数の溶媒および疎水性薬物を含む有機溶液と混合して、粗混合物を形成すること、粗混合物を高圧ホモジナイズして、エマルジョンを形成すること、有機溶媒を蒸発させて、蒸発後ナノ粒子懸濁液を形成すること、ナノ粒子懸濁液を希釈すること、ならびにナノ粒子懸濁液を濾過することを含む。ベバシズマブが、アルブミンおよびポリソルベート２０の非存在下でこれらの製造ステップの各々に耐える能力を、ベバシズマブを各製造ステップに供することにより決定した。各製造ステップからの試料を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により分析して、残留ベバシズマブの量およびその凝集状態を決定した（すなわち、高分子量種への変換を測定することにより）。
【０３８８】
４００ｍｇのベバシズマブを、イオン交換クロマトグラフィーによりＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）（２５ｍｇ／ｍＬベバシズマブ、４００ｍｇ／バイアル）から精製して、ポリソルベート２０を除去した。４００ｍｇのベバシズマブを、８５ｍＬ  Ｃａｐｔｏ  Ｓ  Ｉｍｐａｃｔカラムを有する分取ＦＰＬＣ（ＡＴＫＡ  Ｐｕｒｉｆｉｅｒ）にローディングした。カラムを、５Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ５．０で洗浄し、２５ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ５．０、１Ｍ  ＮａＣｌで溶出した。精製したベバシズマブを、５℃の１Ｌの透析緩衝剤（５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝剤、ｐＨ６．２）に対して２回緩衝液交換した。１０．０５９ｍＬのトレハロースストック（４００ｍｇ／ｍＬ  α，α−トレハロース二水和物を含有する５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝剤、ｐＨ６．２）を添加することにより、透析したベバシズマブを製剤化した。製剤化されたベバシズマブの最終組成は、５．９８ｍｇ／ｍＬ（理論値）、５０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．２、６０ｍｇ／ｍＬ  α，α−トレハロース二水和物であった。製剤化されたベバシズマブ中のベバシズマブ濃度は、１．６６１の理論吸光係数を使用してＡ２８０により決定したところ、５．９６６ｍｇ／ｍＬであった。
【０３８９】
６．７ｍＬの精製ベバシズマブストック溶液（５．９６６ｍｇ／ｍＬ）を１１．７ｍＬの水と混合することにより、１８．４ｍＬの２．１８ｍｇ／ｍＬベバシズマブ溶液を調製した。ベバシズマブ溶液を、５４００ｒｐｍに設定した高剪断ミキサーを使用して混合した。ベバシズマブ溶液の混合中に、９０ｖ／ｖ％クロロホルムおよび１０ｖ／ｖ％エタノールを含有する１．５ｍＬの有機溶液を添加した。有機溶液および水溶液を５分間混合して粗混合物を作成し、これをサンプリングし、沈殿させて、沈殿上清をＳＥＣ測定に使用した。粗混合物を、高圧ホモジナイザーの容器に移した。高圧ホモジナイザーを使用して、粗混合物を数回通過させてホモジナイズし、それによりエマルジョンを形成した。エマルジョンをサンプリングし、沈殿させて、沈殿上清をＳＥＣ測定に使用した。およそ１８ｍＬの高圧ホモジナイズエマルジョンを、２Ｌ丸底蒸発フラスコを備えたロータリーエバポレーターに移した。蒸発フラスコの真空圧力を維持し、蒸発を、４０℃に設定した水浴に部分的に浸漬した。有機溶媒（および水の一部分）をエマルジョンから蒸発させ、必要に応じて、フラスコの回転速度および圧力を変化させることにより、フラスコ内部の発泡を制御した。およそ１５分間の蒸発後、結果として得られた体積は、約２ｍＬであった。蒸発後ナノ粒子懸濁液を別のコンテナーに移し、３ｍＬの水を添加した。希釈した蒸発後ナノ粒子懸濁液を、ＳＥＣ測定のためにサンプリングした。およそ０．５ｍＬの希釈した蒸発後ナノ粒子懸濁液を、濾過滅菌し、ＳＥＣ測定のためにサンプリングした。
【０３９０】
サイズ排除クロマトグラフィー測定からの結果を、図８Ａに示す。これらの測定は、未処理ベバシズマブ、粗混合物からの上清、高圧ホモジナイズエマルジョンからの上清、希釈した蒸発後懸濁液、および濾過試料を含む。後期溶出ピーク（図の右側）は、ベバシズマブ単量体を示し、より早期の溶出ピークは、ベバシズマブのより高い分子量の種を表す。処理が進行すると共に、ベバシズマブ単量体の量は減少した。プロセスの開始時に添加された初期濃度のベバシズマブに対する、各ステップでのベバシズマブ回収の画分を、図８Ｂに示し、ベバシズマブのほとんどが、高圧ホモジナイゼーションステップで分解または凝集することが示されている。
【０３９１】
（実施例３）
製造プロセスにおける、ベバシズマブの安定性に対するアルブミンの効果
ベバシズマブが、ポリソルベート２０の非存在下だが、種々の量のヒトアルブミン（ＨＡ）を含む製造ステップの各々に耐える能力を、ベバシズマブを各製造ステップに供することにより決定した。製造プロセスの開始時に１％、２．５％、５％、または１０％ヒトアルブミンがベバシズマブ調製物に含まれていたことを除いて、実施例２に記載されているようにベバシズマブを調製した。各製造ステップからの試料を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により分析して、残留ベバシズマブの量およびその凝集状態を決定した（すなわち、高分子量種への変換を測定することにより）。
【０３９２】
１％ＨＡ含有調製物の場合、０．９４５ｍＬの２０％ヒトアルブミン、６．９ｍＬのベバシズマブストック溶液（５．９６６ｍｇ／ｍＬ、実施例２）、および１１．１ｍＬの水を合わせて、処理のための水溶液を製作した。２．５％ＨＡ含有調製物の場合、２．３６３ｍＬの２０％ヒトアルブミン、６．９ｍＬのベバシズマブストック溶液（５．９６６ｍｇ／ｍＬ、実施例２）、および９．６ｍＬの水を合わせて、処理のための水溶液を製作した。５％ＨＡ含有調製物の場合、４．８５ｍＬの２０％ヒトアルブミン、７ｍＬのベバシズマブストック溶液（５．９６６ｍｇ／ｍＬ、実施例２）、および７．５５ｍＬの水を合わせて、処理のための水溶液を製作した。１０％ＨＡ含有調製物の場合、９．４５ｍＬの２０％ヒトアルブミン、６．９ｍＬのベバシズマブストック溶液（５．９６６ｍｇ／ｍＬ、実施例２）、および２．５５ｍＬの水を合わせて、処理のための水溶液を製作した。
【０３９３】
ベバシズマブ溶液を、５４００ｒｐｍに設定した高剪断ミキサーを使用して混合した。ベバシズマブ溶液の混合中に、９０ｖ／ｖ％クロロホルムおよび１０ｖ／ｖ％エタノールを含有する１．５ｍＬの有機溶液を添加した。有機溶液および水溶液を５分間混合して粗混合物を作成し、これをＳＥＣ測定のためにサンプリングした。粗混合物を、高圧ホモジナイザーの容器に移した。高圧ホモジナイザーを使用して、粗混合物を数回通過させてホモジナイズし、それによりエマルジョンを形成した。エマルジョンを、ＳＥＣ測定のためにサンプリングした。およそ１８ｍＬの高圧ホモジナイズエマルジョンを、２Ｌ丸底蒸発フラスコを備えたロータリーエバポレーターに移した。蒸発フラスコの真空圧力を維持し、蒸発を、４０℃に設定した水浴に部分的に浸漬した。有機溶媒（および水の一部分）をエマルジョンから蒸発させ、必要に応じて、フラスコの回転速度および圧力を変化させることにより、フラスコ内部の発泡を制御した。およそ３〜５分間の蒸発後、結果として得られた体積を測定した。この蒸発後ナノ粒子懸濁液を、ＳＥＣ測定のためにサンプリングした。この懸濁液の一部分を濾過し、ＳＥＣ測定のためにサンプリングした。
【０３９４】
１０％ＨＡ溶液のサイズ排除クロマトグラフィー測定からの結果を、図９Ａに示す。最後期の溶出ピーク（約１８．３分）は、ＨＡ単量体を含有し、約１７．６分で溶出するピークは、ベバシズマブ単量体を含有する。より早期の溶出ピークは、ヒトアルブミンおよび／またはベバシズマブのより高い分子量の種を表す。各種の量を、ピーク下面積により定量化した。
【０３９５】
図９Ｂは、ＨＡを含有しない製剤（実施例２）を含む、プロセスの各ステップ後に回収された、ＨＡ濃度が異なる製剤の各々のベバシズマブの量を示す。０％および１％ＨＡ含有製剤は、製剤に添加された初期ベバシズマブの大部分を喪失する。２．５％、５％、および１０％ＨＡ含有製剤の各々の場合、大半のベバシズマブが、製造プロセスの全体にわたって保持され、これは、製剤中少なくとも２．５％のＨＡの存在が、重度の分解および凝集によるベバシズマブの喪失を防ぐことを示す。
【０３９６】
図９Ｃは、ベバシズマブ単量体ピークのみを積分することによる、プロセスの各ステップで残留する、製剤の各々のベバシズマブ単量体の量を示す。非凝集ベバシズマブ単量体の画分の尺度によると、製剤中のＨＡ濃度が増加すると共に、処理中に不利に分解しないベバシズマブの画分は単調に増加する（後の処理ステップでの０％ＨＡを有する製剤の結果は、それらの試料中に存在するベバシズマブが少量であるため、不確定である。１０％ＨＡでは、およそ１００％のベバシズマブが、製造プロセスの全体にわたって単量体のままであり、このＨＡ濃度が、ナノ粒子製造中にベバシズマブを分解から完全に保護することができることを示している。
【０３９７】
（実施例４）
製造プロセスの異なる段階でのベバシズマブの添加
アルブミンを含有する水相および有機溶媒を含有する有機相を含むエマルジョンにベバシズマブを添加することの影響を、ナノ粒子製造プロセスのより初期でベバシズマブを包むことと比較した。各製造ステップからの試料を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により分析して、残留ベバシズマブの量およびその凝集状態を決定した（すなわち、高分子量種への変換を測定することにより）。
【０３９８】
１８．４ｍＬの５％ヒトアルブミン（ＨＡ）溶液（水溶液）を、４．６ｍＬのＨＡストック溶液（２０％）および１３．８ｍＬの水を混合することにより調製した。対照試料では、４．８５ｍＬの２０％ヒトアルブミン、７ｍＬのベバシズマブストック溶液（５．９６６ｍｇ／ｍＬ、実施例２）、および７．５５ｍＬの水を合わせて、水溶液を製作した。水溶液を、５４００ｒｐｍに設定した高剪断ミキサーを使用して混合した。ベバシズマブ溶液の混合中に、９０ｖ／ｖ％クロロホルムおよび１０ｖ／ｖ％エタノールを含有する１．５ｍＬの有機溶液を添加した。有機溶液および水溶液を５分間混合して、粗混合物を作成した。粗混合物を、高圧ホモジナイザーの容器に移した。高圧ホモジナイザーに数回通過させて、粗混合物をホモジナイズし、それによりエマルジョンを形成した。６．０ｍＬのベバシズマブストック溶液（５．９６６ｍｇ／ｍＬ、実施例２）を、粗エマルジョンに添加し、エマルジョンを、ＳＥＣ測定のためにサンプリングした。およそ２４ｍＬの高圧ホモジナイズエマルジョンを、２Ｌ丸底蒸発フラスコを備えたロータリーエバポレーターに移した。蒸発フラスコの真空圧力を維持し、蒸発を、４０℃に設定した水浴に部分的に浸漬した。有機溶媒（および水の一部分）をエマルジョンから蒸発させ、必要に応じて、フラスコの回転速度および圧力を変化させることにより、フラスコ内部の発泡を制御した。およそ６分間の蒸発後、結果として得られた体積は、約３ｍＬと測定された。２ｍＬの水を蒸発後ナノ粒子懸濁液に添加し、蒸発後ナノ粒子懸濁液を、ＳＥＣ測定のためにサンプリングした。この懸濁液の一部分を濾過し、ＳＥＣ測定のためにサンプリングした。
【０３９９】
図１０Ａは、ベバシズマブが初期水溶液に添加される場合（対照）およびベバシズマブがエマルジョンの形成後に添加される場合の両製剤のプロセスの各ステップで残留するベバシズマブの量を示す。図１０Ｂは、ベバシズマブ単量体ピークのみを積分することによる、２つの製剤のプロセスの各ステップで残留するベバシズマブ単量体の量を示す。ベバシズマブをエマルジョンに添加することにより作成した製剤の場合、ベバシズマブを初期水溶液に添加することにより製作した製剤（対照）の場合のおよそ８５％と比較して、プロセスの終了時に９６％よりも多くのベバシズマブ単量体が保持される。この結果は、エマルジョンの作成後にベバシズマブを添加すると、ナノ粒子製造中の過度の分解からベバシズマブを保護しつつ、ベバシズマブが、粒子形成の完了前にエマルジョン液滴表面と接触および会合する機会を依然として提供することができることを示す。
【０４００】
（実施例５）
アルブミン、パクリタキセル、およびベバシズマブを含有するナノ粒子の製造
９０ｖ／ｖ％クロロホルムおよび１０ｖ／ｖ％エタノールを含有する有機混合物中、１．６ｍＬの１００ｍｇ／ｍＬパクリタキセル溶液を調製した（有機溶液）。別々に、４．７２５ｍＬのＨＡストック溶液、６．９ｍＬのベバシズマブストック溶液、および７．２７５ｍＬの水を混合することにより、５％ＨＡ溶液および２．２ｍｇ／ｍＬベバシズマブを含有する１８．４ｍＬの水溶液を調製した。水溶液を、５４００ｒｐｍに設定した高剪断ミキサーを使用して混合した。水溶液の混合中に、１．６ｍＬのパクリタキセル含有有機溶液を添加した。水溶液および有機溶液を５分間混合して、粗混合物を作成した。粗混合物を、ＳＥＣ測定のためにサンプリングしてもよい。粗混合物を、高圧ホモジナイザーの容器に移した。次いで、高圧ホモジナイザーに数回通過させることにより、粗混合物をホモジナイズした。およそ２４ｍＬのエマルジョンを、２Ｌ丸底蒸発フラスコおよび４０℃に設定した水浴を備えたロータリーエバポレーターに移した。有機溶媒および水の一部分を、真空圧力を印加および維持し、回転丸底フラスコを水浴に部分的に浸漬することにより、エマルジョンから蒸発させた。必要に応じてフラスコの回転速度および圧力を変化させることにより、フラスコ内部の発泡を制御した。およそ５分間の蒸発後、結果として得られた体積は約４ｍＬであり、これを、４ｍＬの水か添加された別のコンテナーに移した。この蒸発懸濁液を、ＳＥＣ測定のためにサンプリングしてもよい。次いで、この懸濁液の総残留体積を、濾過滅菌した。結果として得られた粒子懸濁液を、動的光散乱およびＳＥＣ測定による粒径のためにサンプリングしてもよい。超遠心分離により粒子を回収した。ナノ粒子と会合したベバシズマブの量を決定してもよい。
【０４０１】
（実施例６）
ｎａｂ−パクリタキセルおよびベバシズマブの混和物製造
ｎａｂ−パクリタキセルおよびベバシズマブの混和物を、以下のプロトコールに従って種々のベバシズマブ濃度で形成した。
【０４０２】
バッチ１。１．６ｍＬのＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブおよび賦形剤、２５ｍｇ／ｍＬ）および３．４ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水（Ｇ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、バイアル中の凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）に添加した。バイアルの内容物を、混合せずに５分間再構成し、その後穏やかに混合して、完全な再構成を保証した。混合物を、室温（約２０℃）で１時間インキュベートしてから、５ｍＬの生理食塩水をバイアルに添加した。混合物を穏やかに混合して、均質性を保証した。パクリタキセルの終濃度は、１０ｍｇ／ｍＬであり（９０ｍｇ／ｍＬアルブミンを有する）、ベバシズマブの終濃度は、４ｍｇ／ｍＬであった。
【０４０３】
バッチ２。３．２ｍＬのＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブおよび賦形剤、２５ｍｇ／ｍＬ）および１．８ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水（Ｇ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、バイアル中の凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）に添加した。バイアルの内容物を、混合せずに５分間再構成し、その後穏やかに混合して、完全な再構成を保証した。混合物を、室温（約２０℃）で１時間インキュベートしてから、５ｍＬの生理食塩水をバイアルに添加した。混合物を穏やかに混合して、均質性を保証した。パクリタキセルの終濃度は、１０ｍｇ／ｍＬであり（９０ｍｇ／ｍＬアルブミンを有する）、ベバシズマブの終濃度は、８ｍｇ／ｍＬであった。
【０４０４】
バッチ３。６ｍＬのＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブおよび賦形剤、２５ｍｇ／ｍＬ）を、バイアル中の凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）に添加した。バイアルの内容物を、混合せずに５分間再構成し、その後穏やかに混合して、完全な再構成を保証した。混合物を、室温（約２０℃）で１時間インキュベートしてから、４ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水（Ｇ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）をバイアルに添加した。混合物を穏やかに混合して、均質性を保証した。パクリタキセルの終濃度は、１０ｍｇ／ｍＬであり（９０ｍｇ／ｍＬアルブミンを有する）、ベバシズマブの終濃度は、１５ｍｇ／ｍＬであった。
【０４０５】
対照バッチ  ４．５ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水（Ｇ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、バイアル中の凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）に添加した。バイアルの内容物を、混合せずに５分間再構成し、その後穏やかに混合して、完全な再構成を保証した。混合物を、室温（約２０℃）で１時間インキュベートしてから、５ｍＬの生理食塩水をバイアルに添加した。混合物を穏やかに混合して、均質性を保証した。パクリタキセルの終濃度は１０ｍｇ／ｍＬであった。
【０４０６】
各懸濁液の試料を、（１）０．９％ＮａＣｌ生理食塩水、（２）注射用水（ＷＦＩ）、（３）リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（Ａｍｒｅｓｃｏ、１０×ＰＢＳから希釈）、（４）ＷＦＩを試料に添加し、室温で５分間インキュベートし、次いで１０×ＰＢＳのスパイクを添加することにより形成された、ＷＦＩおよび１０×ＰＢＳの９：１混合物、または（５）１０×ＰＢＳを試料に添加し、室温で５分間インキュベートし、次いでＷＦＩを添加することにより形成された、１０×ＰＢＳおよびＷＦＩの１：９混合物を使用して１０倍希釈した。Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）を使用して動的光散乱（ＤＬＳ）により、希釈後の粒径および粒径分布を測定した。結果を、表１に示す。
【表１】
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【０４０７】
（実施例７）
ベバシズマブは、混和後にｎａｂ−パクリタキセルと会合する
６ｍＬのＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブおよび賦形剤、２５ｍｇ／ｍＬ）を、バイアル中の凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）に添加した。バイアルの内容物を、混合せずに５分間再構成し、その後穏やかに混合して、完全な再構成を保証した。混合物を、室温（約２０℃）で１時間インキュベートしてから、４ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水（Ｇ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）をバイアルに添加した。混合物を穏やかに混合して、均質性を保証した。パクリタキセルの終濃度は、１０ｍｇ／ｍＬであり（９０ｍｇ／ｍＬアルブミンを有する）、ベバシズマブの終濃度は、１５ｍｇ／ｍＬであった。
【０４０８】
試料を、２０℃で７０分間３９，０００ＲＰＭ（１７６，３５１×ｇ）で遠心分離した（Ｔｉ４５ローターおよびＴｅｆｌｏｎインサートを有するＢｅｃｋｍａｎ  Ｏｐｔｉｍａ  ＬＥ−８０超遠心分離機）。上清を保持した（試料「Ｓ」）。ペレットを、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で５回洗浄した（試料「Ｗ１」〜「Ｗ５」）。２００プルーフのエタノールを、遠心分離管に添加し、ペレットを超音波処理して、パクリタキセルを溶解した。エタノールで洗浄した試料を、２０℃で２０分間１０，０００ＲＰＭ（１４，０２９．３×ｇ）で遠心分離し、上清をデカントし、試料を凍結乾燥により乾燥した。凍結乾燥ペレットをＰＢＳに再懸濁した（試料「Ｐ」）。
【０４０９】
保持した試料を、免疫ブロット分析に供した。試料を、ＭＯＰＳ緩衝剤中の４〜１％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ  ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに流した。タンパク質を、ニトロセルロース膜に移し、抗ＨＳＡ（ヒト血清アルブミン、１：５０００マウス）および抗ヒトＩｇＧ（１：２０００ウサギ）一次抗体、ならびにＩＲＤｙｅ標識抗マウス（１：２０，０００）および抗ウサギ（１：２０，０００）二次抗体を使用して染色した。
免疫ブロットは、ベバシズマブおよびアルブミンが両方とも、パクリタキセル抽出後のペレットに保持されていたことを示した。これは、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）およびｎａｂ−パクリタキセルの混和後の、ベバシズマブのｎａｂ−パクリタキセルとの会合を示す。
【０４１０】
（実施例８）
ｎａｂ−パクリタキセルおよびトラスツズマブの混和物製造
ｎａｂ−パクリタキセルおよびトラスツズマブの混和物を、以下のプロトコールに従って種々のトラスツズマブ濃度で形成した。Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブおよび賦形剤）を、２０ｍＬの０．９％ＮａＣｌ注射用食塩水をバイアルに添加することにより再構成し、内容物を溶解させて２１ｍｇ／ｍＬ溶液を調製した。次いでバイアルを穏やかに混合して、確実に完全に再構成した。
【０４１１】
バッチ１。０．４７６ｍＬの再構成Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（２１ｍｇ／ｍＬ）および９．５２４ｍＬの０．９％ＮａＣｌ注射用食塩水を、バイアル中の凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）に添加した。バイアルの内容物を１５分間溶解させてから、バイアルを穏やかに旋回させて確実に完全に溶解させた。次いで、溶解した内容物を、室温で１時間静置した。次いで、１０ｍＬの０．９％ＮａＣｌ注射用食塩水をバイアルに添加した。パクリタキセルの終濃度は、５ｍｇ／ｍＬであり、トラスツズマブの終濃度は、０．５ｍｇ／ｍＬであった。
【０４１２】
バッチ２。３．８０８ｍＬの再構成Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（２１ｍｇ／ｍＬ）および６．１９２ｍＬの０．９％ＮａＣｌ注射用食塩水を、バイアル中の凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）に添加した。バイアルの内容物を１５分間溶解させてから、バイアルを穏やかに旋回させて確実に完全に溶解させた。次いで、溶解した内容物を、室温で１時間静置した。次いで、１０ｍＬの０．９％ＮａＣｌ注射用食塩水をバイアルに添加した。パクリタキセルの終濃度は、５ｍｇ／ｍＬであり、トラスツズマブの終濃度は、４ｍｇ／ｍＬであった。
【０４１３】
バッチ３。７．１４ｍＬの再構成Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（２１ｍｇ／ｍＬ）および２．８６ｍＬの０．９％ＮａＣｌ注射用食塩水を、バイアル中の凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）に添加した。バイアルの内容物を１５分間溶解させてから、バイアルを穏やかに旋回させて確実に完全に溶解させた。次いで、溶解した内容物を、室温で１時間静置した。次いで、１０ｍＬの０．９％ＮａＣｌ注射用食塩水をバイアルに添加した。パクリタキセルの終濃度は、５ｍｇ／ｍＬであり、トラスツズマブの終濃度は、７．５ｍｇ／ｍＬであった。
【０４１４】
（実施例９）
ベバシズマブまたはトラスツズマブと混和されたｎａｂ−パクリタキセルのイオン強度影響
ｎａｂ−パクリタキセルを、実施例６および８に記載されているプロトコールに従って、ベバシズマブまたはトラスツズマブのいずれかと混和した（８：１０または１５：１０の抗体とｎａｂ−パクリタキセルとの比）。ナノ粒子懸濁液を、ＷＦＩまたは種々の濃度のＮａＣｌ食塩水のいずれかで希釈した。Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）を使用して動的光散乱（ＤＬＳ）により、希釈後の粒径（ナノメートルでのＺ平均直径）を測定した。結果を、表１１に示す。
【０４１５】
ベバシズマブ単独またはｎａｂ−パクリタキセル単独の低イオン強度媒体中の１０倍希釈は、粒径増加を引き起こさない。しかしながら、ｎａｂ−パクリタキセルおよび抗体の混和物の低イオン強度媒体中の１０倍希釈は、粒径の増加を引き起こす。粒子は、１５：１０のトラスツズマブのパクリタキセルに対する比でｎａｂ−パクリタキセルと混和したトラスツズマブの場合、０．１５％（２５ｍＭ）未満のＮａＣｌで、８：１０のトラスツズマブのパクリタキセルに対する比でｎａｂ−パクリタキセルと混和したトラスツズマブの場合、０．０７５％（１２．５ｍＭ）未満のＮａＣｌで、サイズが増加する。ｎａｂ−パクリタキセルと混和したベバシズマブの場合（１５：１０のベバシズマブのパクリタキセルに対する比）、粒子は、０．０５％（９ｍＭ）未満のＮａＣｌでサイズが増加する。図１１に示されている結果から理解することができるように、低イオン強度媒体（例えば、ＷＦＩ）は、粒径の増加を引き起こし、より高いイオン強度の媒体は、対照試料のサイズに到達するまで粒径を減少させる。粒径の変化は、抗体の、遊離アルブミンまたはｎａｂ−パクリタキセルナノ粒子の表面に結合したアルブミンとの静電気的会合による可能性が高い。サイズ増加は、媒体のイオン強度、抗体（例えば、ベバシズマブまたはトラスツズマブ）のタイプ、および混和物中の抗体の濃度に依存する。イオン強度を増加させると、粒径の増加は可逆的である。
【０４１６】
（実施例１０）
ベバシズマブと混和したｎａｂ−パクリタキセルによるＡ３７５マウス異種移植片の処置
Ａ３７５ヒト黒色腫細胞をマウスに皮下注射して、異種移植モデルを生成した。以下のプロトコールに従って、腫瘍を、処置前に約６００ｍｍ３に成長させた。９匹のマウスを、注記した以外は、各プロトコールの通りに処置した。
【０４１７】
コホート１  −  媒体対照（「媒体」）。Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）緩衝剤を、無菌３０ｍＬ  ＰＥＴＧコンテナー中で、９６０ｍｇ  α，α−トレハロース無水物、９２．８ｍｇのリン酸ナトリウム（一塩基性、一水和物）、１９．２ｍｇのリン酸ナトリウム（二塩基性、無水）、６．４ｍｇのポリソルベート２０、および１６ｍＬの注射用水（ＷＦＩ）と共に混合することにより調製した。次いで、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）緩衝剤を、０．２μｍ滅菌フィルターに通した。９６μＬのＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）緩衝剤を、２７０μＬの２００ｍｇ／ｍＬヒトアルブミン溶液および８３４μＬの０．９％ＮａＣｌ注射用食塩水と混合した。媒体対照を、実験の２日目に１２０μＬ／マウスの投薬量で各マウスに投与した。
【０４１８】
コホート２  −  ３０ｍｇ／ｋｇパクリタキセル用量のｎａｂ−パクリタキセル（「ＡＢＸ３０」）。２０ｍＬの０．９％ＮａＣｌ注射用食塩水を使用して、凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）を、５ｍｇ／ｍＬパクリタキセルの濃度に再構成した。各マウスは、体重がおよそ０．０２ｋｇであり、再構成ｎａｂ−パクリタキセルを、実験の２日目に１２０μＬ／マウスの投薬量で各マウスに投与した。
【０４１９】
コホート３  −  １２ｍｇ／ｋｇ用量のベバシズマブ（「ＢＥＶ１２」）。９６μＬのベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）、２５ｍｇ／ｍＬ）を、９０４μＬの０．９％ＮａＣｌ注射用食塩水で、２．４ｍｇ／ｍＬベバシズマブの終濃度に希釈した。各マウスは、体重がおよそ０．０２ｋｇであり、希釈Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）を、実験の２日目に１００μＬ／マウスの投薬量で各マウスに投与した。
【０４２０】
コホート４  −  同日のＢＥＶ１２およびＡＢＸ３０（「ＢＥＶ１２＋ＡＢＸ３０  −  同日」）。コホート３のために調製した１００μＬ／マウスの希釈Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（「ＢＥＶ１２」）およびコホート２のために調製した１２０μＬ／マウスのｎａｂ−パクリタキセル（「ＡＢＸ３０」）を、実験の２日目に各マウスに投与した。
【０４２１】
コホート５  −  ＢＥＶ１２、その後１日後にＡＢＸ３０（「ＢＥＶ１２＋ＡＢＸ３０  −  １日離間」）；８匹のマウスを処置した。コホート３のために調製した１００μＬ／マウスの希釈Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（「ＢＥＶ１２」）を、実験の初日に各マウスに投与した。コホート２のために調製した１２０μＬ／マウスのｎａｂ−パクリタキセル（「ＡＢＸ３０」）を、実験の２日目に各マウスに投与した。
【０４２２】
コホート６  −  ベバシズマブ（１２ｍｇ／ｋｇ）と混和したｎａｂ−パクリタキセル（３０ｍｇ／ｋｇパクリタキセル）（「ＡＢ１６０」）。凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）を、１．６ｍＬのベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）、２５ｍｇ／ｍＬ）および３．４ｍＬの０．９％ＮａＣｌ注射用食塩水で再構成した。混合物を、室温で１時間インキュベートしてから、１５ｍＬの０．９％ＮａＣｌ注射用食塩水を添加して、５ｍｇ／ｍＬパクリタキセルおよび２ｍｇ／ｍＬベバシズマブの終濃度をもたらした。混和物を、実験の２日目に１２０μＬ／マウスの投薬量で各マウスに投与した。
【０４２３】
実験の７日目に腫瘍体積を測定した。各コホートの各マウスのパーセント腫瘍体積変化を、図１２に示す。ｎａｂ−パクリタキセルおよびベバシズマブの混和物（「ＡＢ１６０」）と、同日（「ＢＥＶ１２＋ＡＢＸ３０  −  同日」）または１日離間（「ＢＥＶ１２＋ＡＢＸ３０  −  １日離間」）投与のいずれかとの間に、有意差は見られなかった。しかしながら、ｎａｂ−パクリタキセルおよびベバシズマブの混和物（「ＡＢ１６０」）は、ｎａｂ−パクリタキセル単独（「ＡＢＸ３０」；ｐ＝０．００３４）、ベバシズマブ単独（「ＢＥＶ１２」；ｐ＝０．００６）、または媒体対照（「媒体」；ｐ＜０．０００１）の投与と比較して、統計的に有意な腫瘍成長の減少をもたらした。Ｐ値は、独立ｔ検定を使用して決定した。
【０４２４】
また、処置マウスの生存期間も再コード化した。２０００ｍｍ３よりも大きな腫瘍を有するマウスを安楽死させた。生存期間中央値および関連ｐ値を、表２に示す。ｐ値により示されているように、ｎａｂ−パクリタキセルおよびベバシズマブの混和物（「ＡＢ１６０」）で処置したマウスの生存と、別々に投与したｎａｂ−パクリタキセルおよびベバシズマブ（「ＢＥＶ１２＋ＡＢＸ３０  −  同日」または「ＢＥＶ１２＋ＡＢＸ３０  −  １日離間」）とに有意差はない。
【表２】
2019533665.tif 000003
【０４２５】
（実施例１１）
トラスツズマブ、パクリタキセル、およびアルブミンが埋め込まれたナノ粒子の製造
２７．６ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液（水中）を、２．４ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬパクリタキセル溶液（ＣＨＣｌ３およびエタノールの９０／１０混合物）と混合しながら合わせて、混合物を形成した。混合物を、Ａｖｅｓｔｉｎホモジナイザーに移し、２０〜２２ｋｐｓｉでホモジナイズした。追加の５ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡをホモジナイザーに通して、３５ｍＬの最終体積を収集した。混合物を数回のサイクルでホモジナイザーに通してから、追加の２０ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡをホモジナイザーに添加して、エマルジョンを薄めた。合計４０ｍＬの微細エマルジョンを収集した。０．７１４ｍＬの２１ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））および３．４２６ｍＬの０．９％ＮａＣｌを微細エマルジョンに添加してから、微細エマルジョンを回転蒸発に供した。９．３ｍＬの試料が蒸発後懸濁液として残るまで、ロータリーエバポレーターを使用して、微細エマルジョンから液体を除去した。蒸発後懸濁液を、シンチレーションバイアルに移し、ロータリーエバポレーターを１．５ｍＬアリコートの注射用水（ＷＦＩ）で２回洗浄し、それらを、シンチレーションバイアルに添加した（１２．３ｍＬ最終体積）。結果として得られた蒸発後懸濁液を、５℃で一晩保管した。
【０４２６】
蒸発後懸濁液を、冷却保管から取り出し、室温に平衡化した。１２ｍＬの蒸発後懸濁液を、１０．８４ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡおよび３３．８２ｍＬの０．９％ＮａＣｌと混合した。次いで、混合物を濾過してから、粒径およびパクリタキセル濃度を測定した。粒径および分布は、５０μＬの蒸発後懸濁液を１．５ｍＬの０．９％ＮａＣｌ食塩水で希釈し、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）を使用して動的光散乱（ＤＬＳ）により測定した。濾過懸濁液のＺ平均直径は１４５．５ｎｍであり、多分散指数（ＰＤＩ）は０．１５９であった。濾過懸濁液のパクリタキセル濃度は、ＲＰ−ＨＰＬＣにより測定したところ、６．２１ｍｇ／ｍＬであった。濾過懸濁液を、−８０℃で一晩凍結した。
【０４２７】
凍結濾過懸濁液を、冷却保管から取り出し、室温へ解凍し、平衡化させた。０．８２９ｍＬの２１ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））および１０．７８７ｍＬの０．９％ＮａＣｌを、４８ｍＬの濾過懸濁液に添加し、５ｍｇ／ｍＬパクリタキセルおよび０．５ｍｇ／ｍＬトラスツズマブを含むように懸濁液の濃度を調整した。最終懸濁液を、バイアルに等分し（１バイアル当たり３ｍＬ）、−８０℃で保管した。１つの試料アリコートは凍結せず、粒径（ＤＬＳにより、１４５．６ｎｍのＺ平均直径）、粒径分布（ＤＬＳにより、０．１３０のＰＤＩ）、パクリタキセル濃度（ＲＰ−ＨＰＬＣにより、５．０ｍｇ／ｍＬ）、トラスツズマブ濃度（ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより、０．５３ｍｇ／ｍＬ）、およびオスモル濃度（２６６ｍＯＳｍ）を分析した。
【０４２８】
（実施例１２）
トラスツズマブ、パクリタキセル、およびアルブミンが埋め込まれたナノ粒子の製造
埋込みトラスツズマブを含むｎａｂ−パクリタキセルの４つのバッチを、製造プロセス中の異なる時点でトラスツズマブを含ませることにより製造した。トラスツズマブを、（１）微細エマルジョンに添加し、１０分間インキュベートしてから回転蒸発により処理したか、（２）微細エマルジョンに添加し、それを直ちに回転蒸発により処理したか、（３）約３分間の回転蒸発後に微細エマルジョンに添加したか、または（４）回転蒸発直後に蒸発後懸濁液に添加した。トラスツズマブを含まないｎａｂ−パクリタキセルの対照バッチ（５）も製造した。
【０４２９】
バッチ１。２７．６ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液（水中）を、２．４ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬパクリタキセル溶液（ＣＨＣｌ３およびエタノールの９０／１０混合物）と混合しながら合わせて、混合物を形成した。混合物を、Ａｖｅｓｔｉｎホモジナイザーに移し、２０〜２２ｋｐｓｉでホモジナイズした。混合物を、数回のサイクルでホモジナイザーに通してから、追加の２０ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡをホモジナイザーに添加して、エマルジョンを薄めた。２．１４ｍＬの２１ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ（０．９％ＮａＣｌ食塩水中のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））および２．００ｍＬの０．９％ＮａＣｌ食塩水を、エマルジョンに添加し、室温で１０分間インキュベートしてから、回転蒸発によりエマルジョンを処理した。エマルジョンを回転蒸発に供して、体積を５．０ｍＬに低減した。次いで、蒸発後懸濁液をシンチレーションバイアルに移した。ロータリーエバポレーターフラスコを、２．５ｍＬの注射用水（ＷＦＩ）で洗浄し、洗浄物をバイアルに添加した。ロータリーエバポレーターフラスコを、２．５ｍＬのＷＦＩで再び洗浄し、次いで、それをバイアルに添加した。
【０４３０】
バッチ２。２７．６ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液（水中）を、２．４ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬパクリタキセル溶液（ＣＨＣｌ３およびエタノールの９０／１０混合物）と混合しながら合わせて、混合物を形成した。混合物を、Ａｖｅｓｔｉｎホモジナイザーに移し、２０〜２２ｋｐｓｉでホモジナイズした。混合物を、数回のサイクルでホモジナイザーに通してから、追加の２０ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡをホモジナイザーに添加して、エマルジョンを薄めた。２．１４ｍＬの２１ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ（０．９％ＮａＣｌ食塩水中のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））および２．００ｍＬの０．９％ＮａＣｌ食塩水を、エマルジョンに添加し、短時間旋回させ、回転蒸発により直ちに処理した。エマルジョンを、回転蒸発に供して、体積を６．０ｍＬに低減した。次いで、蒸発後懸濁液をシンチレーションバイアルに移した。ロータリーエバポレーターフラスコを、２．０ｍＬの注射用水（ＷＦＩ）で洗浄し、洗浄物をバイアルに添加した。ロータリーエバポレーターフラスコを、２．０ｍＬのＷＦＩで再び洗浄し、次いで、それをバイアルに添加した。
【０４３１】
バッチ３。２７．６ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液（水中）を、２．４ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬパクリタキセル溶液（ＣＨＣｌ３およびエタノールの９０／１０混合物）と混合しながら合わせて、混合物を形成した。混合物を、Ａｖｅｓｔｉｎホモジナイザーに移し、２０〜２２ｋｐｓｉでホモジナイズした。混合物を、数回のサイクルでホモジナイザーに通してから、追加の２０ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡをホモジナイザーに添加して、エマルジョンを薄めた。エマルジョンを、ロータリーエバポレーターを使用して直ちに３分間処理してから、２．１４ｍＬの２１ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ（０．９％ＮａＣｌ食塩水中のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））および２．００ｍＬの０．９％ＮａＣｌ食塩水を、エマルジョンに添加した。トラスツズマブおよび食塩水をエマルジョンに添加したら、直ちに、ロータリーエバポレーターを使用した処理を、試料の体積が６．８ｍＬになるまで継続した。次いで、蒸発後懸濁液をシンチレーションバイアルに移した。ロータリーエバポレーターフラスコを、１．６ｍＬの注射用水（ＷＦＩ）で洗浄し、洗浄物をバイアルに添加した。ロータリーエバポレーターフラスコを、１．６ｍＬのＷＦＩで再び洗浄し、次いで、それをバイアルに添加した。
【０４３２】
バッチ４。２７．６ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液（水中）を、２．４ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬパクリタキセル溶液（ＣＨＣｌ３およびエタノールの９０／１０混合物）と混合しながら合わせて、混合物を形成した。混合物を、Ａｖｅｓｔｉｎホモジナイザーに移し、２０〜２２ｋｐｓｉでホモジナイズした。混合物を、数回のサイクルでホモジナイザーに通してから、追加の２０ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡをホモジナイザーに添加して、エマルジョンを薄めた。エマルジョンを、ロータリーエバポレーターを使用して直ちに処理して、体積を約１０ｍＬに低減した。２．１４ｍＬの２１ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ（０．９％ＮａＣｌ食塩水中のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））および２．００ｍＬの０．９％ＮａＣｌ食塩水を、蒸発後溶液に添加し、それを、ロータリーエバポレーターを使用してさらに処理して、体積を７．０ｍＬに低減した。次いで、蒸発後懸濁液をシンチレーションバイアルに移した。ロータリーエバポレーターフラスコを、１．５ｍＬの注射用水（ＷＦＩ）で洗浄し、洗浄物をバイアルに添加した。ロータリーエバポレーターフラスコを、１．５ｍＬのＷＦＩで再び洗浄し、次いで、それをバイアルに添加した。
【０４３３】
バッチ５（ｎａｂ−パクリタキセル対照）。２７．６ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液（水中）を、２．４ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬパクリタキセル溶液（ＣＨＣｌ３およびエタノールの９０／１０混合物）と混合しながら合わせて、混合物を形成した。混合物を、Ａｖｅｓｔｉｎホモジナイザーに移し、２０〜２２ｋｐｓｉでホモジナイズした。混合物を、数回のサイクルでホモジナイザーに通してから、追加の２０ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡをホモジナイザーに添加して、エマルジョンを薄めた。４．１４ｍＬの０．９％ＮａＣｌ食塩水をエマルジョンに添加し、結果として得られた蒸発後懸濁液の体積が６．４ｍＬになるまで、エマルジョンを回転蒸発に供した。次いで、蒸発後懸濁液をシンチレーションバイアルに移した。ロータリーエバポレーターフラスコを、１．８ｍＬの注射用水（ＷＦＩ）で洗浄し、洗浄物をバイアルに添加した。ロータリーエバポレーターフラスコを、１．８ｍＬのＷＦＩで再び洗浄し、次いで、それをバイアルに添加した。
【０４３４】
各バッチの蒸発後懸濁液（ロータリーエバポレーターを洗浄し、洗浄物を試料に添加した後）の平均粒子直径および多分散性指数を、動的光散乱（ＤＬＳ）により測定した。結果を表３に示す。ＤＬＳ測定は、５０μＬの蒸発後懸濁液を１．５ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水で希釈することにより、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）を使用して実施した。
【表３】
2019533665.tif 000004
【０４３５】
最終バッチの粒径（ＤＬＳにより測定した）は、抗体が製造プロセスのより初期に添加されたバッチの粒径がより大きいという傾向を示した。抗体を添加しなかった対照バッチ（バッチ５）と比較して、抗体を含有するバッチはすべて、より大きな粒径を有した。最も大きな粒径は、バッチ１で観察され（抗体をエマルジョンに添加し、次いで、室温で１０分間インキュベートしてから回転蒸発を開始した）、これは、回転蒸発により液滴中の溶媒が除去されて固形粒子が生成される前に、エマルジョン液滴が合体することによる可能性がある。他のバッチ（バッチ２、３、４）は、回転蒸発による溶媒除去前にインキュベーションの時間を一切含んでおらず、これらバッチでは、対照（バッチ１）と比べてより小さな粒径増加が観察された。
【０４３６】
蒸発後懸濁液中のパクリタキセルおよびトラスツズマブの濃度を決定した。パクリタキセル濃度は、ＲＰ−ＨＰＬＣにより決定し、トラスツズマブ濃度は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより決定した。結果を、表４に示す。
【表４】
2019533665.tif 000005
【０４３７】
２ｍＬの蒸発後懸濁液を遠心分離して粒子をペレットにし、上清を除去して、未結合トラスツズマブをナノ粒子から分離した。ペレットを、新しい２ｍＬのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に再懸濁した。再懸濁したナノ粒子中のトラスツズマブの濃度を、ＳＥＣ−ＨＰＬＣおよびＥＬＩＳＡ（トラスツズマブＥＬＩＳＡアッセイキット、＃１Ｇ−ＡＡ１０５、Ｅａｇｌｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）により測定した。結果を、表５に示す。表５には、蒸発後懸濁液中のトラスツズマブ（transtuzumab）の濃度および洗浄したナノ粒子懸濁液中のトラスツズマブの濃度に基づき、ナノ粒子と会合している蒸発後懸濁液中のトラスツズマブのパーセンテージも示す（ＳＥＣ−ＨＰＬＣおよびＥＬＩＳＡ測定の平均。蒸発の直前にインキュベーションを行わずにトラスツズマブを添加することにより、懸濁液中でナノ粒子と会合したトラスツズマブの部分が５．７６％と最大になった。
【表５】
2019533665.tif 000006
【０４３８】
（実施例１３）
ホモジナイゼーション前にトラスツズマブを水溶液に添加することによる、トラスツズマブ、パクリタキセル、およびアルブミンが埋め込まれたナノ粒子の製造
トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））を、注射用水（ＷＦＩ）で２１ｍｇ／ｍＬの濃度に再構成した。７．１４ｍＬの２１ｍｇ／ｍＬトラスツズマブを、５ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、２．８６ｍＬの水、および５ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水と混合して、５０ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡおよび７．５ｍｇ／ｍＬトラスツズマブの溶液を形成した。１８．４ｍＬのＨＳＡ／トラスツズマブ溶液を、１．６ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬパクリタキセル溶液（９０／１０のＣＨＣｌ３／エタノールに溶解）と混合して、混合物を形成した。混合物を、Ａｖｅｓｔｉｎホモジナイザーに移し、２０〜２２ｋｐｓｉにて数回のサイクルでホモジナイズして、微細エマルジョンを形成した。１５ｍＬの５０ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ溶液を、ホモジナイザーに添加して微細エマルジョンを薄め、２５．５ｍＬの微細エマルジョンを収集した。微細エマルジョンを、直ちにロータリーエバポレーターに移し、７．３ｍＬの蒸発後体積を得た。
【０４３９】
動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、蒸発後懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）および多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。ＤＬＳ測定は、２０μＬの蒸発後懸濁液を１．５ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水で希釈することにより、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）を使用して実施した。蒸発後懸濁液の平均粒子直径は、１４７．８ｎｍであると決定され、ＰＤＩは、０．１３１であると決定された。
【０４４０】
蒸発後溶液中のパクリタキセル濃度は、ＲＰ  ＨＰＬＣにより２５．８８ｍｇ／ｍＬであると決定された。総ＨＳＡ濃度およびトラスツズマブ濃度は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより、それぞれ１１７ｍｇ／ｍＬおよび１６．２ｍｇ／ｍＬと測定された。
【０４４１】
蒸発後懸濁液を、−２０℃で一晩凍結してから、解凍し、室温へ平衡化させた。動的光散乱（ＤＬＳ）を再び使用し、０．９％ＮａＣｌ生理食塩水またはＷＦＩのいずれかを希釈剤として使用して、蒸発後懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）および多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。０．９％ＮａＣｌ生理食塩水を希釈剤として使用した場合、平均粒子直径は、１４７．８ｎｍであると決定され、ＰＤＩは０．１４５であると決定された。ＷＦＩを希釈剤として使用した場合、平均粒子直径は２３５４ｎｍであると決定され、ＰＤＩは０．５００であると決定された。
【０４４２】
解凍蒸発後懸濁液を、２．７ｍＬのＷＦＩで１０ｍＬの最終体積に希釈した。８ｍＬの希釈蒸発後懸濁液（２つに分割した）を、Ｔｉ４５ローターおよびＴｅｆｌｏｎインサートを有するＢｅｃｋｍａｎ  Ｏｐｔｉｍａ  ＬＥ−８０遠心分離機を使用して、２０℃で７０分間３９，０００ＲＰＭで遠心分離して、ナノ粒子をペレットにした。上清の上部３ｍＬを上清１として取り出し、上清の底部約１ｍＬを上清２として取り出した。ペレットを、４．０ｍＬのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄して、洗浄物１、洗浄物２、および洗浄物３とした。第１の遠心分離管中のペレットを、３．０ｍＬエタノールに再懸濁し、ボルテックスし、超音波処理して、パクリタキセルをペレットから抽出した。試料を再び遠心分離し、上清をペレット１として取り出した。第２の遠心分離管のペレットを、４．０ｍＬのＰＢＳに再懸濁し、ボルテックスし、超音波処理して、ペレット２として取り出した。試料を、パクリタキセル含有量についてはＲＰ  ＨＰＬＣにより、ＨＳＡまたはトラスツズマブ含有量についてはＳＥＣ−ＨＰＬＣにより分析した。結果を、表６に示す。
【表６】
2019533665.tif 000007
【０４４３】
（実施例１４）
ホモジナイゼーション後にトラスツズマブをエマルジョンに添加することによる、トラスツズマブ、パクリタキセル、およびアルブミンが埋め込まれたナノ粒子の製造
１８．４ｍＬの５０ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を、１．６ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬパクリタキセル溶液（９０／１０のＣＨＣｌ３／エタノールに溶解）と混合して、混合物を形成した。混合物を、Ａｖｅｓｔｉｎホモジナイザーに移し、２０〜２２ｋｐｓｉにて数回のサイクルでホモジナイズして、微細エマルジョンを形成した。１５ｍＬの５０ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ溶液をホモジナイザーに添加して、微細エマルジョンを薄め、２２ｍＬの微細エマルジョンを収集した。収集した微細エマルジョンを、７．１５ｍＬの２１ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ（注射用水（ＷＦＩ）に溶解したＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））および５ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水を含有する丸底フラスコに直ちに移した。丸底フラスコをロータリーエバポレーターに移し、エマルジョンの体積を、蒸発後懸濁液の１０ｍＬに低減した。
【０４４４】
動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、蒸発後懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）および多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。ＤＬＳ測定は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）を使用して実施した。１．５ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水希釈液を、１ｃｍ角の使い捨てキュベット中で２０μＬの蒸発後懸濁液と混合した。測定は、機器が選択した減衰器レベルおよび１．１５ｍｍの固定測定位置を使用し、１７３°の検出角を用いて２分間の平衡後に２５℃で行った。測定は、各測定に対して６０秒間の持続時間で、三連で行った。サイズ分布は、一般的分析モデル、１．４６５＋０ｉの粒子屈折率、０．８８７２ｃＰの分散剤粘度、および１．３３０＋０ｉの分散剤屈折率を使用して算出した。蒸発後懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）は、１４１．６ｎｍであると決定され、ＰＤＩは、０．１１０であると決定された。
【０４４５】
蒸発後懸濁液のパクリタキセル濃度は、ＲＰ−ＨＰＬＣにより１８．１８ｍｇ／ｍＬであると決定された。総ＨＳＡ濃度およびトラスツズマブ濃度は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより、それぞれ７６ｍｇ／ｍＬおよび１５．６ｍｇ／ｍＬであると測定された。
【０４４６】
蒸発後懸濁液を−２０℃で一晩凍結してから、解凍し、室温へ平衡化させた。動的光散乱（ＤＬＳ）を再び使用し、０．９％ＮａＣｌ生理食塩水またはＷＦＩのいずれかを希釈剤として使用して、蒸発後懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）および多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。０．９％ＮａＣｌ生理食塩水を希釈剤として使用した場合、平均粒子直径は、１４２．２ｎｍであると決定され、ＰＤＩは０．１２５であると決定された。ＷＦＩを希釈剤として使用した場合、平均粒子直径は、２２９５ｎｍであると決定され、ＰＤＩは０．５８７であると決定された。
【０４４７】
解凍蒸発後懸濁液を、２．７ｍＬのＷＦＩで１０ｍＬの最終体積に希釈した。８ｍＬの希釈蒸発後懸濁液（２つに分割した）を、Ｔｉ４５ローターおよびＴｅｆｌｏｎインサートを有するＢｅｃｋｍａｎ  Ｏｐｔｉｍａ  ＬＥ−８０遠心分離機を使用して、２０℃で７０分間３９，０００ＲＰＭで遠心分離して、ナノ粒子をペレットにした。上清の上部３ｍＬを上清１として取り出し、上清の底部約１ｍＬを上清２として取り出した。ペレットを、４．０ｍＬのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄して、洗浄物１、洗浄物２、および洗浄物３とした。第１の遠心分離管からのペレットを、３．０ｍＬのエタノールに再懸濁し、ボルテックスし、超音波処理して、パクリタキセルをペレットから抽出した。試料を再び遠心分離し、上清をペレット１として取り出した。第２の遠心分離管からのペレットを、４．０ｍＬのＰＢＳに再懸濁し、ボルテックスし、超音波処理して、ペレット２として取り出した。試料を、パクリタキセル含有量についてはＲＰ−ＨＰＬＣにより、ＨＳＡまたはトラスツズマブ含有量についてはＳＥＣ−ＨＰＬＣにより分析した。これらの結果を、表７に示す。
【表７】
2019533665.tif 000008
【０４４８】
（実施例１５）
トラスツズマブを蒸発後懸濁液に添加することによる、トラスツズマブ、パクリタキセル、およびアルブミンが埋め込まれたナノ粒子の製造
１８．４ｍＬの５０ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を、１．６ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬパクリタキセル溶液（９０／１０のＣＨＣｌ３／エタノールに溶解）と混合して、混合物を形成した。混合物を、Ａｖｅｓｔｉｎホモジナイザーに移し、２０〜２２ｋｐｓｉにて数回のサイクルでホモジナイズして、微細エマルジョンを形成した。１５ｍＬの５０ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ溶液をホモジナイザーに添加して、微細エマルジョンを薄め、２０ｍＬの微細エマルジョンを収集した。収集した微細エマルジョンを、直ちに丸底フラスコに移し、７．９ｍＬの最終蒸発後懸濁液体積が得られるまでロータリーエバポレーターを使用して処理した。
【０４４９】
動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、蒸発後懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）および多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。ＤＬＳ測定は、１５０μＬの蒸発後懸濁液を１．５ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水で希釈することにより、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）を使用して実施した。蒸発後懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）は、１４０．２ｎｍであると決定され、ＰＤＩは、０．０８８であると決定された。
【０４５０】
蒸発後懸濁液のパクリタキセル濃度は、ＲＰ−ＨＰＬＣにより２０．７３ｍｇ／ｍＬであると決定された。蒸発後懸濁液のＨＳＡ濃度は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより、７７．７ｍｇ／ｍＬと測定された。
【０４５１】
蒸発後懸濁液を−２０℃で一晩凍結してから、解凍し、室温へ平衡化させた。動的光散乱（ＤＬＳ）を再び使用して、蒸発後懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）および多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。平均粒子直径は、１３２．３ｎｍであると決定され、ＰＤＩは、０．０９４であると決定された。
【０４５２】
蒸発後懸濁液を再び−２０℃で一晩凍結してから、解凍し、室温へ平衡化させた。懸濁液には、解凍時に乳白色が観察された。解凍蒸発後懸濁液のパクリタキセル濃度は、ＲＰ−ＨＰＬＣにより２０．７０ｍｇ／ｍＬであると決定された。３．４７ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡおよび１１．３７ｍＬの２１．５ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ（０．９％ＮａＣｌ生理食塩水中のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））を、７．９ｍＬの蒸発後懸濁液に添加した。混合物を室温で１時間インキュベートした。動的光散乱（ＤＬＳ）を再び使用して、トラスツズマブを有する懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）および多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。平均粒子直径は１３９．９ｎｍであると決定され、ＰＤＩは０．１０５であると決定された。解凍懸濁液のパクリタキセル濃度は、ＲＰ−ＨＰＬＣにより、７．２ｍｇ／ｍＬであると決定された。
【０４５３】
トラスツズマブを有する懸濁液を、１．２μｍフィルターを使用して濾過した。動的光散乱（ＤＬＳ）を再び使用して、濾過懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）および多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。平均粒子直径は１３６．９ｎｍであると決定され、ＰＤＩは０．１１９であると決定された。解凍懸濁液のパクリタキセル濃度は、ＲＰ−ＨＰＬＣにより、７．１ｍｇ／ｍＬであると決定された。濾過懸濁液を、ＶｉｒＴｉｓ  Ｇｅｎｅｓｉｓ  ＥＬ２５棚式凍結乾燥機（ＳＰ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｇａｒｄｉｎｅｒ、ＮＹ）を使用して、４つの２ｍＬアリコートとして凍結乾燥し、−８０℃で保管した。
【０４５４】
濾過懸濁液の第１の凍結乾燥アリコートを、−８０℃から取り出し、室温に平衡化し、２ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水で再構成し、室温で２４時間インキュベートした。動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、トラスツズマブを有する懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）および多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。平均粒子直径は、１４１．４ｎｍであると決定され、ＰＤＩは、０．０８１であると決定された。
【０４５５】
濾過懸濁液の第２の凍結乾燥アリコートを、−８０℃から取り出し、室温に平衡化し、２ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水で再構成した。１０〜１５分後、動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、トラスツズマブを有する懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）および多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。平均粒子直径は、１４１．８ｎｍであると決定され、ＰＤＩは、０．１１２であると決定された。
【０４５６】
（実施例１６）
ホモジナイゼーション前にトラスツズマブを水溶液に添加することによる、トラスツズマブ、パクリタキセル、およびアルブミンが埋め込まれたナノ粒子の製造
１５ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）および１５ｍｇ／ｍＬトラスツズマブを含有する溶液を初期混合物の水溶液に含ませることにより、第１のバッチのナノ粒子組成物を製造した。３０ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）および１５ｍｇ／ｍＬトラスツズマブを含有する溶液を初期混合物の水溶液に含ませることにより、第２のバッチのナノ粒子組成物を製造した。対照として、１５ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡを使用し、トラスツズマブを使用せずに、第３のバッチのナノ粒子組成物を製造した。
【０４５７】
バッチ１。４．０１ｍＬの注射用水（ＷＦＩ）、１．４２５ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、１３．５７ｍＬの２１ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ（注射用水（ＷＦＩ）中のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、および８７．３ｍｇのＮａＣｌを合わせて、１５ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡおよび１５ｍｇ／ｍＬトラスツズマブを含有する１９ｍＬの溶液を得た。１．６ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬパクリタキセル（９０／１０のＣＨＣｌ３／エタノールに溶解）を１８．４ｍＬのＨＳＡ／トラスツズマブ溶液に添加して、混合物を形成した。混合物を、Ａｖｅｓｔｉｎホモジナイザーに移し、２０〜２２ｋｐｓｉにて数回のサイクルでホモジナイズして、微細エマルジョンを形成した。１５ｍＬのＷＦＩをホモジナイザーに添加して微細エマルジョンを薄め、２０ｍＬの微細エマルジョンを収集した。結果として得られた蒸発後懸濁液の体積が５．６ｍＬになるまで、微細エマルジョンを、ロータリーエバポレーターにより処理した。動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、蒸発後懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）および多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。ＤＬＳ測定は、５０μＬの蒸発後懸濁液を１．５ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水で希釈することにより、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）を使用して実施した。蒸発後懸濁液の平均粒子直径は、１３４．８ｎｍであると決定され、ＰＤＩは、０．０８４であると決定された。
【０４５８】
バッチ２。８５．５ｍｇのＮａＣｌを２．８５ｍＬの注射用水（ＷＦＩ）に溶解して、３％ＮａＣｌ食塩水溶液を形成した。２．８５ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）および１３．５７ｍＬの２１ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ（注射用水（ＷＦＩ）中のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）を、３％ＮａＣｌ食塩水溶液と合わせて、３０ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡおよび１５ｍｇ／ｍＬトラスツズマブを含有する１９ｍＬの溶液を得た。１．６ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬパクリタキセル（９０／１０のＣＨＣｌ３／エタノールに溶解）を１８．４ｍＬのＨＳＡ／トラスツズマブ溶液に添加して、混合物を形成した。混合物を、Ａｖｅｓｔｉｎホモジナイザーに移し、２０〜２２ｋｐｓｉにて数回のサイクルでホモジナイズして、エマルジョンを形成した。１５ｍＬの０．０４５％ＮａＣｌ食塩水をホモジナイザーに添加して、微細エマルジョンを薄め、２０ｍＬの微細エマルジョンを収集した。結果として得られた蒸発後懸濁液の体積が５．４ｍＬになるまで、微細エマルジョンを、ロータリーエバポレーターにより処理した。バッチ１について記載されているように、動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、蒸発後懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）および多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。蒸発後懸濁液の平均粒子直径は、１５３．８ｎｍであると決定され、ＰＤＩは、０．１２４であると決定された。
【０４５９】
バッチ３。１８．４ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡを、１．６ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬパクリタキセル（９０／１０のＣＨＣｌ３／エタノールに溶解）と混合して、混合物を形成した。混合物を、Ａｖｅｓｔｉｎホモジナイザーに移し、２０〜２２ｋｐｓｉにて数回のサイクルでホモジナイズして、エマルジョンを形成した。１５ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬを、ホモジナイザーに添加して微細エマルジョンを薄め、２０ｍＬの微細エマルジョンを収集した。結果として得られた蒸発後懸濁液の体積が７．２ｍＬになるまで、微細エマルジョンを、ロータリーエバポレーターにより処理した。バッチ１について記載されているように、動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、蒸発後懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）および多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。蒸発後懸濁液の平均粒子直径は、１４２．９ｎｍであると決定され、ＰＤＩは、０．１３３であると決定された。
【０４６０】
バッチ１、バッチ２、およびバッチ３からの蒸発後懸濁液のパクリタキセル濃度を、ＲＰ−ＨＰＬＣにより測定した。バッチ１からの蒸発後懸濁液中のパクリタキセルの濃度は２９．１９ｍｇ／ｍＬであり、バッチ２からのものは３５．５９ｍｇ／ｍＬであり、およびバッチ３らのものは２２．７７ｍｇ／ｍＬであった。各バッチからの蒸発後懸濁液を、７．００ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル濃度に到達するように、０．９％ＮａＣｌ生理食塩水で希釈した。
【０４６１】
各バッチからの８ｍＬの希釈蒸発後懸濁液を、２つの遠心分離管に分割した。未使用部分を−２０℃で凍結した。試料を、Ｔｉ４５ローターおよびＴｅｆｌｏｎインサートを有するＢｅｃｋｍａｎ  Ｏｐｔｉｍａ  ＬＥ−８０遠心分離機を使用して、２０℃で７０分間３９，０００ＲＰＭで遠心分離して、ナノ粒子をペレットにした。上清の上部３ｍＬを各試料から上清１として取り出し、上清の底部約１ｍＬを上清２として取り出した。ペレットを４．０ｍＬのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄し、洗浄物１および洗浄物２とした。２つの遠心分離管の第１からのペレットを、３．０ｍＬエタノールに再懸濁し、ボルテックスし、超音波処理して、ペレットからパクリタキセルを抽出した。試料を再び遠心分離し、上清をペレット１として取り出した。２つの遠心分離管の第２からのペレットを、４．０ｍＬのＰＢＳに再懸濁し、ボルテックスし、超音波処理して、ペレット２として取り出した。試料を、パクリタキセル含有量についてはＲＰ−ＨＰＬＣにより、ＨＳＡまたはトラスツズマブ含有量についてはＳＥＣ−ＨＰＬＣにより分析した。これらの結果を、表８および９に示す。
【表８】
2019533665.tif 000009
【表９】
2019533665.tif 000010
【０４６２】
（実施例１７）
凍結乾燥前にトラスツズマブを添加することによる、トラスツズマブ、パクリタキセル、およびアルブミンが埋め込まれたナノ粒子の製造
３６．８ｍＬの５０ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を、３．２ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬパクリタキセル溶液（９０／１０のＣＨＣｌ３／エタノールに溶解）と混合して、混合物を形成した。混合物を、Ａｖｅｓｔｉｎホモジナイザーに移し、２０〜２２ｋｐｓｉにて数回のサイクルでホモジナイズして、微細エマルジョンを形成した。２０ｍＬの５０ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ溶液をホモジナイザーに添加して、微細エマルジョンを薄め、４３ｍＬの微細エマルジョンを収集した。エマルジョンを、直ちにロータリーエバポレーターに移し、体積を、１１．５ｍＬの蒸発後懸濁液体積に低減した。動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、蒸発後懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）および多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。ＤＬＳ測定は、５０μＬの蒸発後懸濁液を１．５ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水で希釈することにより、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）を使用して実施した。蒸発後懸濁液の平均粒子直径は、１４９．１ｎｍであると決定され、ＰＤＩは、０．１５１であると決定された。蒸発後懸濁液のパクリタキセル濃度はＲＰ−ＨＰＬＣにより３５．７９ｍｇ／ｍＬであると決定され、蒸発後懸濁液のＨＳＡ濃度は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより１２６．０ｍｇ／ｍＬであると決定された。蒸発後懸濁液を、２つの別々のバッチで以下のようにさらに処理した。
【０４６３】
バッチ１。４．６０ｍＬの蒸発後懸濁液を、０．８８８ｍＬの１８１．６３ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ（注射用水（ＷＦＩ）中）および１０．９８ｍＬの２．７ｍｇ／ｍＬ  ＮａＣｌと混合して、１：４．５のパクリタキセル：アルブミン比を含有する（およびトラスツズマブを含有しない）１６．４６ｍＬの最終溶液を形成した。
【０４６４】
バッチ２。４．６０ｍＬの蒸発後懸濁液を、０．８８８ｍＬの１８１．６３ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ（ＷＦＩ中）および１０．９８ｍＬの２２．５ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ（２．７ｍｇ／ｍＬ  ＮａＣｌに再構成したＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））と混合して、１：４．５：１．５のパクリタキセル：アルブミン：トラスツズマブ比を含有する１６．４６ｍＬの最終溶液を形成した。
【０４６５】
バッチ１またはバッチ２の４ｍＬアリコートをバイアルに分配し、ＶｉｒＴｉｓ  Ｇｅｎｅｓｉｓ  ＥＬ２５棚式凍結乾燥機（ＳＰ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｇａｒｄｉｎｅｒ、ＮＹ）を使用して凍結乾燥した。
【０４６６】
（実施例１８）
凍結乾燥前にトラスツズマブを添加することによる、トラスツズマブ、パクリタキセル、およびアルブミンが埋め込まれたナノ粒子の製造
３６．８ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を、３．２ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬパクリタキセル溶液（９０／１０のＣＨＣｌ３／エタノールに溶解）と混合して、混合物を形成した。混合物を、Ａｖｅｓｔｉｎホモジナイザーに移し、２０〜２２ｋｐｓｉにて数回のサイクルでホモジナイズして、微細エマルジョンを形成した。２０ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ溶液をホモジナイザーに添加して、微細エマルジョンを薄め、約４０ｍＬの微細エマルジョンを収集した。エマルジョンを、直ちにロータリーエバポレーターに移し、体積を、９．９ｍＬの蒸発後懸濁液体積に低減した。動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、蒸発後懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）および多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。ＤＬＳ測定は、５０μＬの蒸発後懸濁液を１．５ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水で希釈することにより、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）を使用して実施した。蒸発後懸濁液の平均粒子直径は、１６１．８ｎｍであると決定され、ＰＤＩは、０．１１８であると決定された。蒸発後懸濁液のパクリタキセル濃度はＲＰ−ＨＰＬＣにより４２．４３ｍｇ／ｍＬであると決定され、蒸発後懸濁液のＨＳＡ濃度は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより５０．３３ｍｇ／ｍＬであると決定された。蒸発後懸濁液を、２つの別々のバッチで以下のようにさらに処理した。
【０４６７】
バッチ１。３．９０ｍＬの蒸発後懸濁液を、１．６２ｍＬの３２．１４ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ（注射用水（ＷＦＩ）中）および１１．０３ｍＬの２．７ｍｇ／ｍＬ  ＮａＣｌと混合して、１：４．５のパクリタキセル：アルブミン比を含有する（およびトラスツズマブを含有しない）１６．５５ｍＬの最終溶液を形成した。
【０４６８】
バッチ２。３．９０ｍＬの蒸発後懸濁液を、１．６２ｍＬの３２．１４ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ（ＷＦＩ中）および１１．０３ｍＬの２２．５ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ（２．７ｍｇ／ｍＬ  ＮａＣｌに再構成したＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））と混合して、１：１．５：１．５のパクリタキセル：アルブミン：トラスツズマブ比を含有する１６．５５ｍＬの最終溶液を形成した。
【０４６９】
バッチ１またはバッチ２の４ｍＬアリコートをバイアルに分配し、ＶｉｒＴｉｓ  Ｇｅｎｅｓｉｓ  ＥＬ２５棚式凍結乾燥機（ＳＰ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｇａｒｄｉｎｅｒ、ＮＹ）を使用して凍結乾燥した。
【０４７０】
（実施例１９）
ｎａｂ−パクリタキセルおよびトラスツズマブの時間経過混和物と比較した、凍結乾燥前にトラスツズマブを添加することにより製造した、トラスツズマブ、パクリタキセル、およびアルブミンが埋め込まれたナノ粒子
この実施例では、表１０に記載されている特徴を有する凍結乾燥ナノ粒子を使用した。
【表１０】
2019533665.tif 000011
【０４７１】
５．４ｍｇ／ｍＬ  ＮａＣｌに溶解した４ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））を、試料１および試料３からのバイアルに添加した。試料を、１０分間インキュベートしてから、試料を特徴付けおよび遠心分離したか、７０分間インキュベートしてから試料を特徴付けおよび遠心分離したか、または２５０分間インキュベートしてから試料を特徴付けおよび遠心分離した。４ｍＬの７．２ｍｇ／ｍＬ  ＮａＣｌを試料２および試料４に添加した。試料を室温で１０分間インキュベートしてから、特徴付けおよび遠心分離した。試料の特徴付けは、凝固点降下（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍｉｃｒｏ浸透圧計モデル３３００（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．））によるオスモル濃度、動的光散乱（Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  ｎａｎｏ  ＺＳ、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）による平均粒径（直径）および多分散性指数（ＰＤＩ）、パクリタキセル含有量（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、ならびにＨＳＡおよびトラスツズマブ（Ｔｚ）含有量（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）を決定することを含んでいた。粒径（Ｚ平均直径）、ＰＤＩ、およびオスモル濃度を、表１１に示す。
【表１１】
2019533665.tif 000012
【０４７２】
遠心分離分析では、３．６ｍＬの試料を、Ｔｉ４５ローターおよびＴｅｆｌｏｎインサートを有するＢｅｃｋｍａｎ  Ｏｐｔｉｍａ  ＬＥ−８０遠心分離機を使用して、２０℃で７０分間３９，０００ＲＰＭで遠心分離して、ナノ粒子をペレットにした。各試料から上清を取り出した。ペレットを４．０ｍＬのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄し、洗浄物１および洗浄物２とした。ペレットを、３．０ｍＬのエタノールに再懸濁し、ボルテックスし、超音波処理して、ペレットからパクリタキセルを抽出した。試料を再び遠心分離し、上清をペレット１として取り出した。他の遠心分離管中のペレットを、４．０ｍＬのＰＢＳに再懸濁し、ボルテックスし、超音波処理し、ペレット２として取り出した。各画分中のパクリタキセルの量をＲＰ−ＨＰＬＣにより決定し、各画分中のＨＳＡおよびトラスツズマブ（Ｔｚ）の量をＳＥＣ−ＨＰＬＣにより決定した。結果を、表１２に示す。
【表１２−１】
2019533665.tif 000013
【表１２−２】
2019533665.tif 000014
【０４７３】
（実施例２０）
ホモジナイゼーション後にトラスツズマブをエマルジョンに添加することによる、トラスツズマブ、パクリタキセル、およびアルブミンが埋め込まれたｉｎ  ｖｉｖｏ投与用のナノ粒子の製造
２７．６ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液（水中）を、２．４ｍＬの２００ｍｇ／ｍＬパクリタキセル溶液（ＣＨＣｌ３およびエタノールの９０／１０混合物）と混合しながら合わせて、混合物を形成した。混合物を、Ａｖｅｓｔｉｎホモジナイザーに移し、２０〜２２ｋｐｓｉでホモジナイズした。追加の５ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡを使用して、混合物を保持するコンテナーを洗浄し、それをホモジナイザーに添加した。混合物を、数回のサイクルでホモジナイザーに通してから、追加の２０ｍＬの１５ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡをホモジナイザーに添加して、エマルジョンを薄めた。合計４２ｍＬの微細エマルジョンを収集した。１．２ｍＬの２１ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ（０．９％ＮａＣｌ食塩水中のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））および１０ｍＬの０．９％ＮａＣｌ食塩水を微細エマルジョンと合わせてから、微細エマルジョンを回転蒸発に供した。蒸発後懸濁液の体積を約１０ｍＬに低減したら、蒸発後懸濁液をシンチレーションバイアルに移した。ロータリーエバポレーターフラスコを１．５ｍＬアリコートの注射用水（ＷＦＩ）で２回洗浄し、それらを、シンチレーションバイアルに添加し、１２．５ｍＬの最終体積の蒸発後懸濁液を生成した。
【０４７４】
動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、蒸発後懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）および多分散性指数（ＰＤＩ）を測定した。ＤＬＳ測定は、５０μＬの蒸発後懸濁液を１．５ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水で希釈することにより、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）を使用して実施した。蒸発後懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）は、１４９．１ｎｍであると決定され、ＰＤＩは、０．１３３であると決定された。蒸発後懸濁液のパクリタキセル濃度はＲＰ−ＨＰＬＣにより２８．７ｍｇ／ｍＬであると決定され、蒸発後懸濁液のＨＳＡおよびトラスツズマブ濃度は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣによりそれぞれ４１．６１ｍｇ／ｍＬおよび２．０７ｍｇ／ｍＬであると決定された。次いで、蒸発後懸濁液を、５℃で一晩保管した。
【０４７５】
蒸発後懸濁液を、冷却保管から取り出し、室温へ平衡化させた。１１．２７ｍｌの２００ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡおよび３４．０３ｍＬの０．９％ＮａＣｌ食塩水を、１２ｍＬの蒸発後懸濁液と混合して、５７．３ｍＬの体積を得た。希釈懸濁液を、一連の滅菌フィルターを使用して濾過して、４９．７ｍＬの濾過後体積を得た。ＤＬＳにより、濾過懸濁液の平均粒子直径（Ｚ平均）は、１４９．２ｎｍであると決定され、ＰＤＩは、０．１３であると決定された。濾過懸濁液のパクリタキセル濃度は、ＲＰ−ＨＰＬＣにより５．６９３ｍｇ／ｍＬであると決定された。
【０４７６】
０．３２ｍＬの２１ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））および６．５６ｍＬの０．９％ＮａＣｌ食塩水を、４９．７ｍＬの濾過懸濁液に添加して、５ｍｇ／ｍＬパクリタキセルおよび０．５ｍｇ／ｍＬトラスツズマブを含有する５６．５８ｍＬの懸濁液を得、穏やかに混合し、室温で１０分間インキュベートした。較正された濾過懸濁液を再び分析した。ＤＬＳにより、平均粒子直径（Ｚ平均）は、１４９ｎｍであると決定され、ＰＤＩは、０．１３であると決定された。濾過懸濁液のパクリタキセル濃度は、ＲＰ−ＨＰＬＣにより５．４ｍｇ／ｍＬであると決定された。トラスツズマブ濃度は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより０．５ｍｇ／ｍＬであると決定された。オスモル濃度は、２８８ｍＯｓｍである決定された。懸濁液を、３ｍＬアリコートに分配し、−８０℃で保管した。
【０４７７】
（実施例２１）
コンジュゲーション製剤特徴付け方法
以下の実施例における免疫ブロット、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル、およびＥＬＩＳＡアッセイは、別様の指示がない限り、この実施例に詳述されているプロトコールに従って実施される。
【０４７８】
未変性ゲル免疫ブロット
このプロトコールで使用した材料としては、試料緩衝剤：Ｎｏｖｅｘ（商標）Ｔｒｉｓ−グリシン未変性試料緩衝剤（２×）（カタログ番号ＬＣ２６７３）；ランニング緩衝剤：Ｎｏｖｅｘ（商標）Ｔｒｉｓ−グリシン未変性ランニング緩衝剤（１０×）（カタログ番号ＬＣ２６７２）；タンパク質ゲル：ＮｕＰＡＧＥ（商標）３〜８％Ｔｒｉｓ−酢酸タンパク質ゲル、１．０ｍｍ、１０ウェル（カタログ番号ＥＡ０３７５ＢＯＸ）；およびウエスタンブロットキット：Ｔｒａｎｓ−Ｂｌｏｔ  Ｔｕｒｂｏ  ＲＴＡ  Ｍｉｎｉ  Ｎｉｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒキット（カタログ番号１７０４２７０）が含まれた。
【０４７９】
試料を、ＰＢＳで０．１〜２ｍｇ／μＬの濃度範囲に希釈した。希釈試料を、ｔｒｉｓ−グリシン未変性試料緩衝剤で１：１（ｖ／ｖ）混合し、次いで、短時間ボルテックスした。１つのタンパク質ゲルを有するゲルタンクを準備した（試料の数によっては、２つのタンパク質ゲルを使用してもよい）。試料をウェルにローディングした（１ウェル当たり約１６〜２０μＬ）。ゲルを、２００Ｖ、１２０ｍＡで９０分間流した。ゲルを流した後、ゲルを、そのケースから取り出し、水で洗浄した。
【０４８０】
ゲル中のタンパク質をニトロセルロース膜に移した。膜をＴＢＳＴで洗浄し、２０ｍＬのＬｉｃｏｒブロッキング溶液中で、１時間室温でインキュベートした。次いで、膜をＴＢＳＴで３回洗浄し、抗ＨＳＡ（１：５０００、マウス）および抗ヒトＩｇＧ（１：５０００、ウサギ）一次抗体と共に４℃で一晩インキュベートした。（任意選択で、このインキュベーションは、室温にて１時間で実施することができた可能性がある。）
【０４８１】
膜を、ＴＢＳＴで３回洗浄した（各回、５分間インキュベートした）。膜を、抗マウス（１：２００００、６８０ｎｍ）および抗ウサギ（１：２００００、８００ｎｍ）と共に室温で４５分間インキュベートした。
【０４８２】
膜を、ＴＢＳＴで３回洗浄した（各回、５分間インキュベートした）。膜を、脱イオン水で短時間洗浄し、次いでＬｉｃｏｒで画像化した。
【０４８３】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ免疫ブロット
このプロトコールで使用した材料としては、ＳＤＳランニング緩衝剤：ＬＤＳ試料緩衝剤、非還元（４×）（カタログ番号８４７８８）；ゲルランニング緩衝剤：Ｎｏｖｅｘ（商標）ＭＯＰＳ  ＳＤＳランニング緩衝剤（２０×）（カタログ番号ＮＰ０００１）；ゲルランニング緩衝剤：Ｎｏｖｅｘ（商標）Ｔｒｉｓ−酢酸ＳＤＳランニング緩衝剤（２０×）（カタログ番号ＬＡ００４１）；タンパク質ゲル：ＮｕＰＡＧＥ（商標）３〜８％Ｔｒｉｓ−酢酸タンパク質ゲル、１．０ｍｍ、１０ウェル（カタログ番号ＥＡ０３７５ＢＯＸ）；タンパク質ゲル：ＮｕＰＡＧＥ（商標）４〜１２％、１．０ｍｍ、１０ウェル（カタログ番号ＮＰ０３２１ＰＫ２）；およびウエスタンブロットキット：Ｔｒａｎｓ−Ｂｌｏｔ  Ｔｕｒｂｏ  ＲＴＡ  Ｍｉｎｉ  Ｎｉｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒキット（カタログ番号１７０４２７０）が含まれた。
【０４８４】
試料を、ＰＢＳで１〜２ｍｇ／ｍＬの濃度範囲に希釈した。２５０ｍＭ  ＮＥＭ溶液を調製した（１ｍＬ水中３１μｇのＮＥＭ）。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（非還元）マスターミックスを調製した（６０μＬの１×ＳＤＳランニング緩衝剤＋１００μＬの４×ＳＤＳローディング緩衝剤＋４０μＬの２５０ｍＭ  ＮＥＭ）。希釈タンパク質試料を、マスターミックスで１：１（ｖ／ｖ）混合し、次いで、短時間ボルテックスした。試料を、７０℃で１０分間インキュベートした。
【０４８５】
１つのタンパク質ゲルを有するゲルタンクを準備した（試料の数によっては、２つのタンパク質ゲルを使用してもよい）。試料をウェルにローディングした（１ウェル当たり約１６〜２０μＬ）。ゲルを、２００Ｖ、１２０ｍＡで４５分間流した。ゲルを流した後、ゲルを、そのケースから取り出して、水で洗浄した。
【０４８６】
ゲル中のタンパク質をニトロセルロース膜に移した。膜をＴＢＳＴで洗浄し、２０ｍＬのＬｉｃｏｒブロッキング溶液中で、１時間室温でインキュベートした。次いで、膜をＴＢＳＴで３回洗浄し、抗ＨＳＡ（１：５０００、マウス）および抗ヒトＩｇＧ（１：５０００、ウサギ）一次抗体と共に４℃で一晩インキュベートした。任意選択で、このインキュベーションは、室温にて１時間で実施することができた可能性がある。
【０４８７】
膜を、ＴＢＳＴで３回洗浄した（各回、５分間インキュベートした）。膜を、抗マウス（１：２００００、６８０ｎｍ）および抗ウサギ（１：２００００、８００ｎｍ）と共に室温で４５分間インキュベートした。
【０４８８】
膜を、ＴＢＳＴで３回洗浄した（各回、５分間インキュベートした）。膜を、脱イオン水で短時間洗浄し、次いでＬｉｃｏｒで画像化した。
【０４８９】
ＥＬＩＳＡ
このプロトコールで使用した材料としては、ＥＬＩＳＡアッセイキット（＃ＩＧ−ＡＡ１０５、Ｅａｇｌｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）が含まれた。
【０４９０】
提供された標準試料を希釈して、１００ｎｇ／ｍＬ、６０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ、６ｎｇ／ｍＬ、およびブランクの標準物質を生成した。Ｍａｂコンジュゲート粒子溶液を、様々な形式の試料に応じて、希釈緩衝剤により１：１０００〜１：１００００に直接希釈した。
【０４９１】
１００μＬのアッセイ緩衝剤を、使用しようとするウェルの各々にピペットした。１００μＬの標準物質または試料を、マイクロタイタープレートのそれぞれのウェルにピペットした。プレートを接着シールで覆い、室温で６０分間インキュベートした。
【０４９２】
接着シールを取り外し、インキュベーション溶液をデカントした。プレートを、１ウェル当たり３×３００μＬの洗浄緩衝剤で洗浄した。ペーパータオル上に逆さまにしたプレートを軽くタッピングすることにより、過剰な溶液を除去した。１００μＬの酵素コンジュゲートを、各ウェルにピペットした。プレートを接着シールで覆い、室温で３０分間インキュベートした。
【０４９３】
接着シールを取り外し、インキュベーション溶液をデカントした。プレートを、１ウェル当たり３×３００μＬの洗浄緩衝剤で洗浄した。ペーパータオル上に逆さまにしたプレートを軽くタッピングすることにより、過剰な溶液を除去した。１００μＬのＴＭＢ基質溶液を、各ウェルにピペットした。プレートを接着シールで覆い、暗所で２０分間インキュベートした。
【０４９４】
接着シールを取り外し、１００μＬの停止液を、各ウェルにピペットした。停止液をピペットした後、吸光度を測定した（４５０ｎｍ）。
【０４９５】
（実施例２２）
ＳＭ（ＰＥＧ）６活性化トラスツズマブによるトラスツズマブおよび遊離ヒト血清アルブミンのコンジュゲーション
この例に記載されている抗体および遊離ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）のコンジュゲーションの概略図を、図１３に示す。生理食塩水中１ｍＬの２１ｍｇ／ｍＬＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）を、１５ｍＬ遠心濃縮器（ＭＷカットオフ３０，０００ＫＤａ）に等分した。遠心濃縮器を１００ｍＭリン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ６．６）で満たし、３７５０ｒｐｍで３５分間遠心分離した。遠心濃縮器をもう一度リン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）で満たし、３７５０ｒｐｍで３５分間遠心分離した。結果として得られたトラスツズマブ溶液をファルコン管にピペットし、２ｍＬの総体積に希釈した。トラスツズマブ溶液濃度を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により測定し、必要に応じて１０．５ｍｇ／ｍＬに調整した。
【０４９６】
ＳＭ（ＰＥＧ）６パッケージを−２０℃から取り出し、室温で１時間加温した。１２２μＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を、８．３ｍｇのＳＭ（ＰＥＧ）６に添加した（１１２ｍＭ終濃度）。リンカーが完全に溶解するまで、リンカー溶液をボルテックスした。１ｍＬのトラスツズマブ溶液をエッペンドルフ管に等分した。各管に、３．４μＬのリンカー溶液をゆっくりと添加した（リンカー：トラスツズマブの化学量論比は、５：１であった）。溶液を光から依然として保護しつつ、リンカー／トラスツズマブ溶液を、振盪機で２時間反応させた。５ｍＬ脱塩カラムを、リン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）で４回洗浄した（各遠心分離は１，０００ＲＣＦで６分間）。リンカー／トラスツズマブ溶液を、脱塩カラムで濾過して、任意の未反応リンカーを除去した。活性化トラスツズマブ溶液を収集し、０．８ｍＬアリコートをエッペンドルフ管にピペットした。２００μＬの２００ｍｇ／ｍＬ（３ｍＭ）ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液を、４ｍＬ遠心濃縮器（ＭＷカットオフ１０，０００ｋＤａ）内で４ｍＬに希釈した。試料を、製造業者の使用説明書に従って２０分間遠心分離した。この希釈および遠心分離をもう一度繰り返した。結果として得られた溶液をファルコン管にピペットし、０．８ｍＬの最終体積に希釈した。続いて、０．８ｍＬの活性化トラスツズマブ溶液（０．０７ｍＭ）を、０．８ｍＬのＨＳＡ溶液（０．７５ｍＭ）に添加した。溶液を一晩インキュベートした。
【０４９７】
同様のプロトコールを使用し、種々のリンカーローディング比およびリンカー反応条件（コンジュゲーション反応の様々なｐＨ条件など）を使用して、活性化トラスツズマブをさらに生成した。リン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）および１０×リンカーローディングを使用してＳＭ（ＰＥＧ）６と架橋した活性化トラスツズマブについて、ＳＥＣ分析を実施した。ｐＨ６．６および１０×リンカーローディングでは、トラスツズマブ凝集は、総抗体量の約２％未満であった。ＰＢＳ食塩水（ｐＨ７．４）および２０×リンカーローディングを使用してＳＭ（ＰＥＧ）６と架橋した活性化トラスツズマブについても、ＳＥＣ分析を実施した。ｐＨ７．４および２０×リンカーローディングでは、トラスツズマブ凝集は、総抗体量の約３０％であった。
【０４９８】
ＳＭ（ＰＥＧ）６活性化トラスツズマブおよび非コンジュゲートトラスツズマブを比較するために、ＳＥＣ分析を実施した。ＳＭ（ＰＥＧ）６およびトラスツズマブを１０：１比で使用した場合、コンジュゲーションは、高分子量（ＨＭＷ）種のトラスツズマブの量を大幅に増加させなかった（トラスツズマブ：総抗体の０．６％がＨＭＷ；ＳＭ（ＰＥＧ）６活性化トラスツズマブ：総抗体の１．７％がＨＭＷ）。
【０４９９】
図１４Ａ〜１４Ｃは、トラスツズマブ（図１４Ａ）、１：５のトラスツズマブ：リンカー比を使用したＳＭ（ＰＥＧ）６活性化トラスツズマブ（図１４Ｂ）、および１：１０のトラスツズマブ：リンカー比を使用したＳＭ（ＰＥＧ）６活性化トラスツズマブ（図１４Ｃ）のデコンボリューション質量スペクトルを示す。ＳＭ（ＰＥＧ）６コンジュゲーションをしなかったトラスツズマブを表す同位体クラスターが示されており（１：０；トラスツズマブ：ＳＭ（ＰＥＧ）６）、トラスツズマブのＮ−グリカンは切断されなかったことが観察された（図１４Ａ）。１：５のトラスツズマブ：リンカー比を使用すると、活性化トラスツズマブの最も代表的な種は、１：０、１：１、１：２、および１：３である（トラスツズマブ：ＳＭ（ＰＥＧ）６）（図１４Ｂ）。１：１０のトラスツズマブ：リンカー比を使用すると、活性化トラスツズマブの最も代表的な種は、１：１、１：２、１：３、および１：４である（トラスツズマブ：ＳＭ（ＰＥＧ）６）（図１４Ｃ）。
【０５００】
トラスツズマブおよびＨＳＡの１：１  ＳＭ（ＰＥＧ）６コンジュゲートを、ＳＥＣを使用して単離した（図１５；コンジュゲート、トラスツズマブ、およびＨＳＡの分離ピークを示す）。コンジュゲートの質量は、質量分析を使用して２１５４９８．５２Ｄａと確認された。
【０５０１】
５：１および１０：１のリンカー：抗体反応比からのＳＭ（ＰＥＧ）６トラスツズマブ−ＨＳＡコンジュゲートを、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにより確認し、これは、１：１のトラスツズマブ：ＨＳＡ、ならびに例えば１：２および１：３を含むより高次のコンジュゲートの存在を示した（図１６）。トラスツズマブ：ＨＳＡコンジュゲートを、免疫ブロットにより確認した（データは示さず）。
【０５０２】
未変性ゲルを実施して、ＳＭ（ＰＥＧ）６コンジュゲートトラスツズマブの試料を分析した（図１７）。トラスツズマブのｐＩは８．５であり、トラスツズマブは、コンジュゲートしていない限り、ゲルに遊走しない（レーンＤ；図１７）。レーンＡでは、１：１のトラスツズマブ−ＨＳＡコンジュゲートを、矢印で示す（図１７）。レーンＢおよびＣは、それぞれ、１０：１のリンカー：抗体比および５：１のリンカー：抗体比を示す（アルブミンとコンジュゲーションしていない）（図１７）。
【０５０３】
（実施例２３）
ＳＭ（ＰＥＧ）６活性化トラスツズマブによる、トラスツズマブおよび単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のコンジュゲーション
この実施例に記載されている、活性化抗体および単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のコンジュゲーションの概略図を、図１８に示す。このプロトコールで使用された材料は以下の通りであった：（ａ）ｎａｂ−パクリタキセル（１００ｍｇのパクリタキセルバイアル、ロット番号０１３３９７）；（ｂ）  Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ、４４０ｍｇのバイアル、２１ｍｇ／ｍＬ、ロット番号３１５７９７１）；（ｃ）生理食塩水、ＵＳＰ等級（ＲＭＢＩＯ  ロット番号２０６０７１６１）；（ｄ）ＭｉｌｌｉＱ水、１８．４ＭＯｈｍｓ・ｃｍおよび４ｐｐｂ  ＴＯＣ；（ｅ）シンチレーションバイアル（ＶＷＲ、２０ｍＬ使い捨てシンチレーションバイアル）；（ｆ）１５ｍＬポリプロピレンコニカル管（Ｆａｌｃｏｎ、Ｐ／Ｎ３５２０９７）；（ｇ）Ｚｅｐａスピン脱塩カラム７Ｋ  ＭＷＣＯ、５ｍＬｓ（カタログ番号８９８９２、ロット番号ＳＣ２４５０８７）；（ｈ）ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｄ２４３８−５０ｍＬ、ロット番号ＲＮＢＧ００１２）；（ｉ）ＳＭ（ＰＥＧ）６（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２２１０５、ロット番号ＳＤ２４９１５１）；ならびに（ｊ）リン酸緩衝食塩水錠剤（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｐ４４１７−５０ＴＡＢ、ロット番号ＳＬＢＳ４２２３）。
【０５０４】
ｎａｂ−パクリタキセルナノ粒子を、凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）の１つのバイアルから単離した。２０ｍＬの生理食塩水をバイアルに添加してナノ粒子を再構成し、１．２ｍＬの再構成ｎａｂ−パクリタキセル製剤を、エッペンドルフ管に等分した。エッペンドルフ管を、穏やかに２０分間混合した。ＲＰ−ＨＰＬＣを使用してパクリタキセル含有量を決定し、粒径を測定するために、１つのエッペンドルフ管を使用した。残りのエッペンドルフ管を、２０℃で８０分間２１，０００ＲＣＦで遠心分離した。遠心分離後、管を直ちにデカントして上清を除去した。０．６ｍＬの生理食塩水を残留ペレットに添加して、ナノ粒子を再構成した（パクリタキセルの終濃度は１０ｍｇ／ｍＬ）。
【０５０５】
生理食塩水を使用して、２１ｍｇ／ｍＬ  Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）溶液を調製した。１．２ｍＬのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）溶液を２つの１５ｍＬ遠心濃縮器に等分した。無エンドトキシン水を使用して１００ｍＭリン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ６．６）を調製し、濾過した。遠心濃縮器をｐＨ６．６リン酸緩衝剤で満たし、製造業者の使用説明書に従って３０分間遠心分離した。これを１回繰り返した。残留トラスツズマブ溶液を、１５ｍＬファルコン管にピペットし、２．４ｍＬの総体積に希釈した。トラスツズマブ濃度を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により測定した。トラスツズマブ濃度を、必要に応じて１０．５ｍｇ／ｍＬに調整した。
【０５０６】
ＳＭ（ＰＥＧ）６パッケージを−２０℃の冷凍庫から取り出し、１時間室温に加温した。２ｍＬの無菌ＤＭＳＯ溶液をエッペンドルフ管に等分した。１．５１ｍＬのＤＭＳＯを、このエッペンドルフ管から、１００ｍｇのＳＭ（ＰＥＧ）６を含有するバイアルに移した（１１２ｍＭ終濃度）。リンカーがＤＭＳＯに完全に溶解するまで、リンカー溶液をボルテックスした。
【０５０７】
１ｍＬの１０．５ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ溶液をエッペンドルフ管に等分した。１ｍＬのトラスツズマブ溶液を含有する各エッペンドルフ管に、５．１μＬのリンカー溶液をゆっくりと添加した（リンカーの抗体に対する比は、７．５：１であり、１５：１よりも大きな比を使用すると、抗体凝集が引き起こされた）。この手順中、溶液を光から保護した。光から依然として保護しつつ、リンカー／抗体溶液を、振盪機で２時間反応させた。粒径は、動的光散乱により１５７ｎｍであると決定された。
【０５０８】
５ｍＬ脱塩カラムを、リン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）で４回洗浄した（各遠心分離は１０００Ｇで５分間）。活性化抗体溶液を、脱塩カラムで濾過して、未反応リンカーを除去した。濾液を収集し、プールした。トラスツズマブおよびリンカーの比を、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）により決定した。６００μＬの活性化トラスツズマブを、６００μＬのナノ粒子溶液にゆっくりと添加した。次いで、溶液を、４℃で一晩インキュベートした（振盪またはかき回しを回避した）。
【０５０９】
コンジュゲーション溶液を冷蔵庫から取り出した。溶液は、エッペンドルフ管の表面に凝集体を有していなかった。
【０５１０】
コンジュゲーション溶液を、８０分間２１，０００Ｇで遠心分離した。遠心分離後、管を直ちにデカントして上清を除去し、各管をＰＢＳ食塩水で１回洗浄した。
【０５１１】
４０ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液を、ＰＢＳ食塩水（ｐＨ７．４）で調製した。８００μＬの４０ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ溶液を各管に等分した。次いで、管を２０秒間超音波処理し、次いで混合した（ナノ粒子が完全に再懸濁されるまで、このステップを数回繰り返した）。
【０５１２】
パクリタキセル含有量を、ＲＰ−ＨＰＬＣにより測定した。次いで、結果として得られた溶液をバイアルに移し、−８０℃で保管した。
【０５１３】
単離ｎａｂ−パクリタキセルナノ粒子およびトラスツズマブコンジュゲート粒子からの試料について免疫ブロットを実施して、１：１トラスツズマブ−ＨＳＡコンジュゲートならびに１：２、１：３、および１：４を含むより高次のコンジュゲートの存在を確認した。免疫ブロットを実施する前に、まず粒子試料を、エタノールに溶解してパクリタキセルを可溶化し、次いで、１０，０００ＲＣＦで遠心分離した。結果として得られたペレットを、免疫ブロット分析のためにＰＢＳに再懸濁した。
【０５１４】
トラスツズマブへのコンジュゲーション前後の単離ｎａｂ−パクリタキセルナノ粒子からの粒子のアルブミン異性体プロファイル（例えば、アルブミン単量体の量）を、ＳＥＣを使用して決定した。単離ｎａｂ−パクリタキセルナノ粒子およびトラスツズマブとコンジュゲートした単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子についての、アルブミン単量体の総アルブミンに対する比を、表１３に提供する。
【表１３】
2019533665.tif 000015
【０５１５】
単離ｎａｂ−パクリタキセルナノ粒子のアリコート、および粒子単離無しのｎａｂ−パクリタキセル（paclitxel）製剤（ＡＢＸ）のアリコートへのＳＭ（ＰＥＧ）６のコンジュゲーションの比較を実施した。コンジュゲーション反応および標準物質からの試料のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを、図２０に示し、ここで、レーン１、２、および３は、トラスツズマブ−ＨＳＡコンジュゲートの存在を示す。レーン３および５の比較は、１：１トラスツズマブ：ＨＳＡコンジュゲートならびにより高次のコンジュゲートを含む、本明細書に記載されている方法を使用したトラスツズマブのＨＳＡコンジュゲーションの存在を示す。免疫ブロットを実施し、より高次のトラスツズマブ：ＨＳＡコンジュゲートを含むトラスツズマブ：ＨＳＡコンジュゲートの存在を確認した。
【０５１６】
（実施例２４）
異なるスペーサー長を有するリンカーを使用した、抗体および単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のコンジュゲーション
この実施例は、ＳＭ（ＰＥＧ）６（３２．６オングストローム）、ＳＭ（ＰＥＧ）２（１７．５オングストローム）、およびＳＭＣＣ（８オングストローム）活性化抗体による、抗体および単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のコンジュゲーションを示す。
【０５１７】
コンジュゲート粒子を、示されているリンカーを使用した以外は、実質的に実施例２３に記載されているように調製した。１０ｍｇ／ｍＬ抗体−リンカーコンジュゲート（５：１のリンカーと抗体との比で調製した）を、食塩水中１０ｍｇ／ｍＬの再構成ｎａｂ−パクリタキセルに添加した。ＥＬＩＳＡを使用して抗体濃度を測定し、遠心分離および５％ＨＳＡでの再懸濁後、ＲＰ−ＨＰＬＣを使用してパクリタキセル含有量を測定した。ナノ粒子製剤のパクリタキセル／トラスツズマブ（Ｔｚ）質量比は、表１４に報告する。
【０５１８】
ｎａｂ−パクリタキセル粒子表面の総遊離スルフヒドリル基は、４．５ｍｇ／ｍＬ  ｎａｂ−パクリタキセル懸濁液では０．６６μＭと測定された。これは、４％モル比のＨＳＡを表す（未変性遊離ＨＳＡは、４０％遊離スルフヒドリルを含有する）。
【表１４】
2019533665.tif 000016
【０５１９】
（実施例２５）
単離ｎａｂ−パクリタキセルナノ粒子の活性化およびトラスツズマブの活性化による、トラスツズマブおよび単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のコンジュゲーション
この実施例に記載されている、活性化抗体およびチオール化単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のコンジュゲーションの概略図を、図１９に示す。
【０５２０】
ｎａｂ−パクリタキセル製剤からナノ粒子を単離するために、２０ｍＬの生理食塩水を、凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）の１つのバイアルに添加した。１．２ｍＬのｎａｂ−パクリタキセル製剤を、１．５ｍＬエッペンドルフ管に等分した。エッペンドルフ管を、穏やかに２０分間混合した。ＲＰ−ＨＰＬＣを使用してパクリタキセル含有量を決定し、粒径を測定するために、１つのエッペンドルフ管を使用した。平均粒径は１４７ｎｍであった。残りのエッペンドルフ管を、２０℃で８０分間２１，０００ＲＣＦで遠心分離した。遠心分離後、管を直ちにデカントして上清を除去した。結果として得られたペレットに、５００μＬ酢酸ナトリウム（ｐＨ８．０）および１５０ｍＭ塩化ナトリウムを添加して、ナノ粒子を再構成した（ｎａｂ−パクリタキセル粒子濃度は、１０ｍｇ／ｍＬパクリタキセルであった。２．５ｍｇ／ｍＬ（０．０３７６ｍＭ）ＨＳＡを含有していた）。
【０５２１】
Ｔｒａｕｔ試薬を、２ｍｇ／ｍＬ（１４．５ｍＭ）の濃度でＷＦＩに溶解した。所望のチオール化度に応じて、１５μＬ〜６０μＬのＴｒａｕｔ試薬（リンカー：ＨＳＡ比は、それぞれ１０：１〜４０：１）を、単離ナノ粒子溶液にゆっくりと添加し、４℃で７０分間反応させた。２．４μＬの５００ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）を添加し、４℃で１０分間インキュベートした。試料を、４℃で８０分間２１，０００ＲＣＦで遠心分離した。管を遠心分離機から取り出し、デカントし、ＰＢＳ食塩水で２回洗浄した。単離活性化ｎａｂ−パクリタキセル粒子を、５００μＬのＰＢＳ食塩水に再懸濁し、１分間超音波処理して、粒子を再懸濁した。粒径は、１５０ｎｍと測定された。
【０５２２】
異なる化学量論のＴｒａｕｔ試薬による単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のチオール化後、粒子を、タンパク質チオ蛍光検出キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）により分析した。４．６ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル濃度を有するナノ粒子について、チオール基の濃度を決定した（表１５）。
【表１５】
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【０５２３】
生理食塩水を使用して、２１ｍｇ／ｍＬ  Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）溶液を調製した。１ｍＬのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）溶液を、各１５ｍＬ遠心濃縮器に等分した。無エンドトキシン水を使用して１００ｍＭリン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ６．６）を調製し、濾過した。遠心濃縮器をリン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）で満たし、３７５０ｒｐｍで３５分間遠心分離した。これを１回繰り返した。残留溶液を、１５ｍＬファルコン管にピペットし、２．４ｍＬの総体積に希釈した。トラスツズマブ濃度を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により測定した。トラスツズマブ濃度を、必要に応じて１０．５ｍｇ／ｍＬに調整した。
【０５２４】
ＳＭ（ＰＥＧ）６パッケージを−２０℃の冷凍庫から取り出し、１時間室温に加温した。２ｍＬの無菌ＤＭＳＯ溶液をエッペンドルフ管に等分した。１２２μＬのＤＭＳＯを、このエッペンドルフ管から、８．３ｍｇのＳＭ（ＰＥＧ）６を含有するバイアルに移した（１１２ｍＭ終濃度）。リンカーがＤＭＳＯに完全に溶解するまで、リンカー溶液をボルテックスした。
【０５２５】
１ｍＬのトラスツズマブ溶液を、各エッペンドルフ管に等分した。３．４μＬのＳＭ（ＰＥＧ）６リンカー溶液を、１ｍＬのトラスツズマブを含有する各管にゆっくりと添加した。この手順中、溶液を光から保護した。光から依然として保護しつつ、リンカー／抗体溶液を、振盪機で２時間反応させた。
【０５２６】
５ｍＬ脱塩カラムを、リン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）で４回洗浄した（各遠心分離は１０００Ｇで６分間）。活性化抗体溶液を、脱塩カラムで濾過して、未反応リンカーを除去した。濾液を収集し、プールした。トラスツズマブおよびリンカーの比を、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）により決定した。
【０５２７】
５００μＬの活性化トラスツズマブを、５００μＬのナノ粒子溶液にゆっくりと添加した。次いで、溶液を、４℃で一晩インキュベートした（振盪またはかき回しを回避した）。
【０５２８】
コンジュゲーション溶液を、４℃から取り出した。溶液は、エッペンドルフ管の表面に凝集体を有していなかった。粒径を測定した。１０：１チオール化リンカーの平均粒径：ＨＳＡは１５９ｎｍであり、２０：１チオール化リンカー：ＨＳＡは１６６ｎｍであり、３０：１チオール化リンカー：ＨＳＡは２１５．９ｎｍであり、４０：１チオール化リンカー：ＨＳＡは７３４．１ｎｍであった。
【０５２９】
コンジュゲーション溶液を、８０分間２１，０００Ｇで遠心分離した。遠心分離後、管を直ちにデカントして上清を除去し、各管をＰＢＳ食塩水で２回洗浄した。
【０５３０】
４０ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液を、ＰＢＳ食塩水で調製した。８００μＬの４０ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ溶液を各管に等分した。次いで、管を２０秒間超音波処理し、混合した（ナノ粒子が完全に再懸濁されるまで、このステップを数回繰り返した）。
【０５３１】
パクリタキセル含有量を、ＲＰ−ＨＰＬＣを使用して測定した。次いで、パクリタキセル濃度を、必要とされる濃度に従って調整した。最終製剤の粒径およびパクリタキセル濃度を測定した。１０：１チオール化リンカーの平均粒径：ＨＳＡは１５９．８ｎｍであり、２０：１チオール化リンカー：ＨＳＡは１７１．５ｎｍであり、３０：１チオール化リンカー：ＨＳＡは１７５．８ｎｍであり、４０：１チオール化リンカー：ＨＳＡは１９６．４ｎｍであった。次いで、結果として得られた溶液をバイアルに移し、−８０℃で保管した。
【０５３２】
最終コンジュゲートトラスツズマブ（Ｔｚ）濃度を、ＥＬＩＳＡにより測定し、パクリタキセル（ＰＴＸ）濃度を、ＲＰ−ＨＰＬＣにより測定した。（表１６）。
【表１６−１】
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【０５３３】
（実施例２６）
銅フリークリックケミストリーを使用した、トラスツズマブおよび単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のコンジュゲーション
銅フリークリックケミストリーを使用した、抗体および単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のコンジュゲーションの概略図を、図２１に示す。
【０５３４】
ｎａｂ−パクリタキセル組成物からナノ粒子を単離するために、２０ｍＬの生理食塩水を、凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル（１００ｍｇパクリタキセル）の１つのバイアルに添加した。１．２ｍＬのｎａｂ−パクリタキセル製剤を、１６個のエッペンドルフ管に等分した。エッペンドルフ管を、穏やかに２０分間混合した。ＲＰ−ＨＰＬＣを使用してパクリタキセル含有量を決定するために、１つのエッペンドルフ管をＨＰＬＣアッセイに使用した。残りのエッペンドルフ管を、２０℃で８０分間２１，０００ＲＣＦで遠心分離した。遠心分離後、管を直ちにデカントして上清を除去した。結果として得られたペレットに、６００μＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４）を添加して、ナノ粒子を再構成した（ｎａｂ−パクリタキセル濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬパクリタキセルであった）。
【０５３５】
２９ｍＭジアリールシクロオクチン（ＤＢＣＯ）−ＰＥＧ５−ＮＨＳ溶液を、１５０μＬのＤＭＳＯ中に３ｍｇのリンカー試薬を溶解することにより製作した。１５μＬ（２０：１；リンカー：ＨＳＡ）または３０μＬ（４０：１；リンカー：ＨＳＡ）のいずれかのＤＢＣＯ溶液を、単離ナノ粒子の各アリコートに添加し、室温で７０分間の懸濁液を反応させて。次いで、試料を、４℃で７０分間２１，０００ＲＣＦで遠心分離した。遠心分離後、試料をデカントして上清を除去し、ＰＢＳ食塩水で２回洗浄した。５００μＬのＰＢＳ食塩水をペレット化されたナノ粒子に添加し、次いで、試料を超音波処理してナノ粒子を再懸濁した。
【０５３６】
生理食塩水を使用して、２１ｍｇ／ｍＬのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）溶液を調製した。６ｍＬの抗体溶液を、２つの１５ｍＬ遠心濃縮器に等分した。遠心濃縮器を１００ｍＭリン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ６．６）で満たし、製造業者の使用説明書に従って３０分間遠心分離した。これを１回繰り返した。残留トラスツズマブ溶液を、１５ｍＬファルコン管にピペットし、１２ｍＬの総体積に希釈した。トラスツズマブ濃度を、必要に応じて１０．５ｍｇ／ｍＬに調整した。
【０５３７】
アジド−ＰＥＧ５−ＮＨＳを、−２０℃から取り出し、室温に１時間加温した。４．０３ｍｇのアジド−ＰＥＧ５−ＮＨＳをバイアルに秤量し、８２μＬのＤＭＳＯを添加した（１１２ｍＭ溶液）。リンカーが完全に溶解するまで、溶液をボルテックスした。
【０５３８】
１．５ｍＬの抗体溶液を別々の管に等分した。５．１μＬ（５：１  リンカー：抗体比）または１０．２μＬ（１０：１  リンカー：抗体比）のいずれかを、抗体溶液を含有する各管にゆっくりと添加した。溶液を、２時間振盪機で反応させた。
【０５３９】
２つの５ｍＬ脱塩カラムを、リン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）で４回洗浄した（各遠心分離は１０００Ｇで６分間）。活性化抗体溶液を、脱塩カラムで濾過して、未反応リンカーを除去した。濾液を収集し、プールした。トラスツズマブおよびリンカーの比を、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）により決定した。
【０５４０】
５００μＬの活性化トラスツズマブを、５００μＬのナノ粒子溶液にゆっくりと添加した。溶液を室温で３０分間インキュベートし、次いで４℃で一晩インキュベートした。コンジュゲーション溶液を、４℃から取り出した。溶液は、エッペンドルフ管の表面に凝集体を有していなかった。粒径を測定した。
【０５４１】
コンジュゲーション溶液を、８０分間２１，０００Ｇで遠心分離した。遠心分離後、管を直ちにデカントして上清を除去し、各管をＰＢＳ食塩水で２回洗浄した。
【０５４２】
４０ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液を、ＰＢＳ食塩水で調製した。８００μＬの４０ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ溶液を各管に等分した。次いで、ナノ粒子が完全に再懸濁されるまで、管を超音波処理した。次いで、結果として得られた溶液をバイアルに移し、−８０℃で保管した。
【０５４３】
粒径は１６９ｎｍであると決定された。粒子と会合した最終パクリタキセル濃度は、５．７３ｍｇ／ｍＬ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）であると決定され、最終トラスツズマブ濃度は、０．１１ｍｇ／ｍＬであると決定された。
【０５４４】
（実施例２７）
ボロン酸修飾ｎａｂ−パクリタキセル
この実施例に記載されている、単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のボロン酸修飾の概略図を、図２２に示す。活性化ＮＨＳエステルを調製するために、４−（２−カルボキシエチル）ベンゼンボロン酸（１６ｍｇ、８２．４μｍｏｌ、ＭＷ＝１９３．９９）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、１７．０４ｍｇ、８２．４μｍｏｌ）、およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ、９．５２ｍｇ、８２．４μｍｏｌ）を、１ｍＬのＤＭＦに溶解し、室温で２時間撹拌した。
【０５４５】
粒子を６００μＬのＰＢＳ緩衝剤（ｐＨ７．４）に再懸濁して、１０ｍｇ／ｍＬナノ粒子懸濁液を製作した。
【０５４６】
３つの比の活性化ＮＨＳエステルを試験した（２０：１、４０：１、および８０：１のＮＨＳエステル対表面アルブミン、ナノ粒子重量の２５％がアルブミンによると仮定した）。各比（２０：１、４０：１、および８０：１）に到達するために必要な濃度は、それぞれ０．７５ｍＭ、１．５ｍＭ、および３ｍＭであった。したがって、５．５μＬ、１１μＬ、および２２のＮＨＳエステルを、各エッペンドルフ管（６００μＬのナノ粒子懸濁液を含有する）に添加して、２０：１、４０：１、および８０：１の比を製作した。反応物を室温で２時間インキュベートし、次いで、管を、７０分間２１，０００ＲＣＦで遠心分離した。ペレットを３回洗浄してから、５００μＬのＰＢＳ緩衝剤（ｐＨ７．４）に再懸濁した。
【０５４７】
粒子表面のボロン酸の量は、アリザリンレッドＳと反応させ、５９０ｎｍの蛍光シグナルを決定することにより測定した。濃度を、４−（２−カルボキシエチル）ベンゼンボロン酸標準物質と比較した。２０：１、４０：１、および８０：１比の場合、ボロン酸の量は、５ｍｇ／ｍＬ  ｎａｂ−パクリタキセル当たり、それぞれ１．４ｍＭ、２．０ｍＭ、および２．６ｍＭと決定された。未修飾ナノ粒子ならびに２０：１および４０：１修飾ナノ粒子は安定していたが、８０：１ナノ粒子は凝集し始めた。
【０５４８】
（実施例２８）
相補的ＤＮＡを使用した、トラスツズマブおよび単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のコンジュゲーション
相補的ＤＮＡを使用した、活性化抗体および活性化単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のコンジュゲーションの概略図を、図２３に示す。手短に述べると、第１の鎖を、ｎａｂ−パクリタキセルナノ粒子にコンジュゲートさせ、第１の鎖に相補的な第２の鎖を抗体にコンジュゲートさせる。ナノ粒子および抗体を混合することにより、相補鎖の対合を可能にし、それにより抗体をｎａｂ−パクリタキセルナノ粒子にコンジュゲートさせる。
【０５４９】
一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）を、ｎａｂ−パクリタキセルの製剤からの単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子にコンジュゲートさせた。２０ｍＭ  ＴＣＥＰ溶液を製作した。３ｍｇのｓｓＤＮＡ（５ＴｈｉｏＭＣ６−ＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡ；配列番号１；「ＣＡ２０」）を秤量し、１ｍＬのｄｄＨ２Ｏに溶解した（ｓｓＤＮＡの４４７μＭ溶液）。２０ｍＭ  ＴＣＥＰ溶液を、３：７の体積比で４４７μＭ  ｓｓＤＮＡ溶液に添加し、混合し、次いで室温で２時間反応させた。反応混合物を、ＮＡＰ−１０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号１７−０８５４−０１）を使用して精製した。収集したＣＡ２０  ｓｓＤＮＡの測定濃度は、ＵＶ分光法（２６０ｎｍ）により決定したところ、２１６μＭであった。
【０５５０】
６．８３ｍｇのＳＭ（ＰＥＧ）６を秤量し、０．５ｍＬのＤＭＳＯ（２２．４ｍＭ  ＳＭ（ＰＥＧ）６溶液）に溶解した。１１μＬの２２．４ｍＭ  ＳＭ（ＰＥＧ）６溶液を、１．２ｍＬのＣＡ２０  ｓｓＤＮＡ溶液に添加し、２０分間反応させた。
【０５５１】
６００μＬの単離ｎａｂ−パクリタキセル懸濁液を、エッペンドルフ管に等分した。６００μＬのＣＡ２０−ＳＭ（ＰＥＧ）６を、ナノ粒子溶液の各アリコートに添加した。反応混合物を一晩インキュベートした。
【０５５２】
エッペンドルフ管を遠心分離してナノ粒子をペレットにし、上清をデカントした。ペレットを、ＰＢＳで３回洗浄した。５００μＬのＰＢＳを各管に添加し、ペレットを超音波処理により再懸濁した（５秒間、および粒子が再懸濁されるまで繰り返した）。動的光散乱を使用して、粒径を決定した。対照ｎａｂ−パクリタキセル製剤からのｎａｂ−パクリタキセル標準物質の粒径は、１５２ｎｍであり、ＣＡ２０コンジュゲートｎａｂ−パクリタキセルは、１５２ｎｍであった。
【０５５３】
ｓｓＤＮＡを、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）の製剤からのトラスツズマブにコンジュゲートさせた。４ｍＭ  ＴＣＥＰ溶液を調製した。ｓｓＤＮＡ（５ＴｈｉｏＭＣ６−ＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧ；配列番号２；「ＧＴ１５」）をｄｄＨ２Ｏに溶解して、５００ｍＭ  ｓｓＤＮＡ溶液を製作した。４ｍＭ  ＴＣＥＰ溶液を、１：２の体積比で５００μＭ  ｓｓＤＮＡ溶液に添加し、混合し、その後室温で２時間反応させた。反応混合物を、ＮＡＰ−１０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号１７−０８５４−０１）を使用して精製した。
【０５５４】
１ｍＬのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（生理食塩水で２１ｍｇ／ｍＬに再構成）を、１５ｍＬ遠心濃縮器に等分した。ＰＢＳ緩衝剤（ｐＨ７．４）を調製した。遠心濃縮器をＰＢＳ緩衝剤で満たし、製造業者の使用説明書に従って３０分間遠心分離した。遠心濃縮器をＰＢＳでもう一度満たし、遠心分離した。結果として得られたトラスツズマブ溶液を取り出し、必要に応じて、濃度をＰＢＳ緩衝剤で１０．５ｍｇ／ｍＬに調整した。
【０５５５】
６．８ｍｇのＳＭ（ＰＥＧ）６を秤量し、１００μＬのＤＭＳＯに溶解した（１１２ｍＭ  ＳＭ（ＰＥＧ）６溶液）。２．３μＬの１１２ｍＭ  ＳＭ（ＰＥＧ）６溶液を、５００μＬのトラスツズマブ溶液に添加し、１．５時間反応させた。脱塩カラムを使用して、未反応リンカーを除去した。
【０５５６】
結果として得られた活性化トラスツズマブに、脱保護ＧＴ１５溶液を添加し、２時間インキュベートした。混合物を遠心濃縮器に添加し、ＰＢＳ緩衝剤（ｐＨ７．４）で満たした。混合物を遠心分離し、通過画分をｓｓＤＮＡの存在について分析した。ｓｓＤＮＡが通過画分に検出されなくなるまで、遠心濃縮器をＰＢＳで再び満たし、５回遠心分離した。
【０５５７】
トラスツズマブ−ＧＴ１５溶液およびＣＡ２０−ｎａｂ−パクリタキセル溶液をエッペンドルフ管中で混合し、２時間インキュベートした。次いで、反応混合物を、２１，０００ＲＣＦで遠心分離した。管を、直ちに遠心分離機から取り出し、上清をデカントし、結果として得られたペレットをＰＢＳで３回洗浄した。ペレットを、ＰＢＳ中４％ＨＳＡ溶液に再懸濁し、超音波処理して、粒子を再懸濁させた。コンジュゲート粒子を、−８０℃で保管した。
【０５５８】
（実施例２９）
ベバシズマブおよび単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のコンジュゲーション
この実施例で使用した材料としては、（ａ）ｎａｂ−パクリタキセル、１００ｍｇのパクリタキセル；（ｂ）Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ベバシズマブ；２５ｍｇ／ｍＬ、ロット番号３０３９１９６）；（ｃ）生理食塩水（ＲＭＢＩＯ、ＵＳＰ等級、ロット番号２０６０７１６１）；（ｄ）ＭｉｌｌｉＱ水（１８．４ＭＯｈｍｓ・ｃｍおよび４ｐｐｂ  ＴＯＣ）；（ｅ）シンチレーションバイアル（ＶＷＲ、２０ｍＬ使い捨てシンチレーションバイアル）；（ｆ）１５ｍＬポリプロピレンコニカル管（Ｆａｌｃｏｎ、Ｐ／Ｎ３５２０９７）；（ｇ）Ｚｅｐａスピン脱塩カラム（７Ｋ  ＭＷＣＯ、５ｍＬｓ、カタログ番号８９８９２、ロット番号ＳＣ２４５０８７）；（ｈ）ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｄ２４３８−５０ｍＬ、ロット番号ＲＮＢＧ００１２）；（ｉ）ＳＭ（ＰＥＧ）６（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２２１０５、ロット番号ＳＤ２４９１５１）；および（ｊ）リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）錠剤（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｐ４４１７−５０ＴＡＢ、ロット番号ＳＬＢＳ４２２３）が挙げられる。
【０５５９】
２０ｍＬの生理食塩水を、凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）の１つのバイアルに添加した。１．２ｍＬのｎａｂ−パクリタキセル溶液のアリコートを、４つのエッペンドルフ管に添加した。管をインキュベートし、２０分間穏やかに旋回させた。ＲＰ−ＨＰＬＣを使用してパクリタキセル含有量を決定するために、１つの管をパクリタキセルＨＰＬＣアッセイの実施に使用した。ｎａｂ−パクリタキセル懸濁液を含有する残りのエッペンドルフ管を、２０℃で８０分間２１，０００ＲＣＦで遠心分離した。遠心分離後、各管を直ちに取り出し、各管の上清を除去した。ナノ粒子のペレットを、０．５ｍＬの生理食塩水で穏やかに再構成し、１２ｍｇ／ｍＬのパクリタキセルの最終ナノ粒子溶液を製作した。
【０５６０】
１ｍＬのＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）（ＷＦＩで２５ｍｇ／ｍＬに再構成）を、１５ｍＬ遠心濃縮器に等分した。１００ｍＭリン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ６．６）を調製した。遠心濃縮器をリン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）で満たし、製造業者の使用説明書に従って３０分間遠心分離した。遠心濃縮器をリン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）でもう一度満たし、製造業者の使用説明書に従って３０分間遠心分離した。残留ベバシズマブ溶液を、１５ｍＬファルコン管にピペットし、２．５ｍＬの総体積に希釈した。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して濃度を確認した。
【０５６１】
ＳＭ（ＰＥＧ）６パッケージを−２０℃から取り出し、室温で１時間加温した。６．８３ｍｇのＳＭ（ＰＥＧ）６を、１００μＬのＤＭＳＯに溶解した（１１２ｍＭリンカー溶液）。リンカーが完全に溶解するまで、リンカー溶液をボルテックスした。
【０５６２】
０．５ｍＬのベバシズマブ溶液を、４つのエッペンドルフ管に等分した。エッペンドルフ管の２つに、１．６５μＬおよび３．３μＬのリンカー溶液をゆっくりと添加して、リンカーと抗体との５：１および１０：１モル比を生成した。混和物対照管は、リンカー修飾せずに取っておいた。この手順中、溶液を光から保護した。溶液を、２時間振盪機で反応させた。
【０５６３】
脱塩カラムをリン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）で４回洗浄することにより、２つの５ｍＬ脱塩カラムを調製した（各遠心分離は１０００Ｇで５分間）。次いで、活性化ベバシズマブ溶液をカラムで濾過して、任意の未反応リンカーを除去した。
【０５６４】
次いで、５００μＬの各リンカー比の活性化ベバシズマブ溶液を、５００μＬのナノ粒子溶液にゆっくりと添加した。５００μＬの非活性化ベバシズマブ溶液を、５００μＬのナノ粒子溶液に添加した。次いで、結果として得られた溶液を、振盪またはかき回し無しに４℃で一晩インキュベートした。
【０５６５】
コンジュゲーション溶液を、４℃保管から取り出し（溶液は、表面に凝集体を有しているようには見えなかった）、８０分間２１，０００Ｇで遠心分離した。次いで、管を、直ちに遠心分離機から取り出し、上清を除去した。各管を、ＰＢＳ食塩水で３回洗浄した。
【０５６６】
４０ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液を、ＰＢＳ食塩水（ｐＨ７．４）で調製した。５００μＬの４０ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ溶液を、ペレット化されたナノ粒子を含有する各管に添加した。管を、２０秒間超音波処理し、混合した。ナノ粒子が完全に再懸濁されるまで、超音波処理ステップを数回繰り返した。特徴付けのための試料を取り出した後、溶液をバイアルに移し、−８０℃で保管した。
【０５６７】
試料の粒径を測定した。平均粒径は以下の通りであった：ｎａｂ−パクリタキセル、１４６ｎｍ；ベバシズマブ混和物対照、１４８ｎｍ；５：１  リンカー：抗体ベバシズマブナノ粒子、１５２ｎｍ；および１０：１  リンカー：抗体ベバシズマブナノ粒子、１５３ｎｍ。
【０５６８】
試料のベバシズマブ含有量を、ＥＬＩＳＡにより測定し、試料のパクリタキセル含有量を、ＲＰ−ＨＰＬＣにより測定した（表１６）。
【表１６−２】
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【０５６９】
試料の免疫ブロット分析を実施し、単離ｎａｂ−パクリタキセルナノ粒子のコンジュゲーション反応から、より高次のコンジュゲートの存在を含む、粒子上におけるベバシズマブおよびＨＳＡのコンジュゲーションを確認した。
【０５７０】
（実施例３０）
セツキシマブおよび単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のコンジュゲーション
この方法で使用した材料としては、（ａ）ｎａｂ−パクリタキセル、１００ｍｇパクリタキセル；（ｂ）Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（セツキシマブ、ロット番号ＩＭＧ３９５）；（ｃ）生理食塩水（ＲＭＢＩＯ、ＵＳＰ等級、ロット番号２０６０７１６１）；（ｄ）ＭｉｌｌｉＱ水（１８．４ＭＯｈｍｓ・ｃｍおよび４ｐｐｂ  ＴＯＣ）；（ｅ）シンチレーションバイアル（ＶＷＲ、２０ｍＬ使い捨てシンチレーションバイアル）；（ｆ）１５ｍＬポリプロピレンコニカル管（Ｆａｌｃｏｎ、Ｐ／Ｎ３５２０９７）；（ｇ）Ｚｅｐａスピン脱塩カラム（７Ｋ  ＭＷＣＯ、５ｍＬｓ、カタログ番号８９８９２、ロット番号ＳＣ２４５０８７）；（ｈ）ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｄ２４３８−５０ｍＬ、ロット番号ＲＮＢＧ００１２）；（ｉ）ＳＭ（ＰＥＧ）６（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２２１０５、ロット番号ＳＤ２４９１５１）；および（ｊ）リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）錠剤（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｐ４４１７−５０ＴＡＢ、ロット番号ＳＬＢＳ４２２３）が挙げられる。
【０５７１】
２０ｍＬの生理食塩水を、凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物の１つのバイアルに添加した。１．２ｍＬのｎａｂ−パクリタキセル懸濁液のアリコートを、４つのエッペンドルフ管に添加した。管をインキュベートし、２０分間穏やかに旋回させた。ＲＰ−ＨＰＬＣを使用してパクリタキセル含有量を決定するために、１つの管をパクリタキセルＨＰＬＣアッセイの実施に使用した。
【０５７２】
ｎａｂ−パクリタキセル懸濁液を含有する残りのエッペンドルフ管を、２０℃で８０分間２１，０００ＲＣＦで遠心分離した。遠心分離後、各管を直ちに取り出し、各管の上清を除去した。ナノ粒子のペレットを、０．５ｍＬの生理食塩水で穏やかに再構成し、最終１２ｍｇ／ｍＬナノ粒子溶液を製作した。
【０５７３】
１ｍＬのＥｒｂｉｔｕｘ溶液（ＷＦＩで２５ｍｇ／ｍＬに再構成）を、１５ｍＬ遠心濃縮器に等分した。１００ｍＭリン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ６．６）を調製した。遠心濃縮器をリン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）で満たし、製造業者の使用説明書に従って３０分間遠心分離した。遠心濃縮器をリン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）でもう一度満たし、製造業者の使用説明書に従って３０分間遠心分離した。残留セツキシマブ溶液を、１５ｍＬファルコン管にピペットし、２．５ｍＬの総体積に希釈した。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して濃度を確認した。
【０５７４】
ＳＭ（ＰＥＧ）６パッケージを−２０℃から取り出し、室温で１時間加温した。６．８３ｍｇのＳＭ（ＰＥＧ）６を、１００μＬのＤＭＳＯに溶解した（１１２ｍＭリンカー溶液）。リンカーが完全に溶解するまで、リンカー溶液をボルテックスした。
【０５７５】
０．５ｍＬのセツキシマブ溶液を、４つのエッペンドルフ管に等分した。エッペンドルフ管の２つに、１．６５μＬおよび３．３μＬのリンカー溶液をゆっくりと添加して、リンカーと抗体との５：１および１０：１モル比を生成した。混和物対照管は、リンカー修飾せずに取っておいた。この手順中、溶液を光から保護した。溶液を、２時間振盪機で反応させた。
【０５７６】
脱塩カラムをリン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）で４回洗浄することにより、２つの５ｍＬ脱塩カラムを調製した（各遠心分離は１０００Ｇで５分間）。次いで、活性化セツキシマブ溶液をカラムで濾過して、任意の未反応リンカーを除去した。
【０５７７】
次いで、５００μＬの各リンカー比の活性化セツキシマブ溶液を、５００μＬのナノ粒子溶液にゆっくりと添加した。５００μＬの非活性化セツキシマブ溶液を、５００μＬのナノ粒子溶液に添加した。次いで、結果として得られた溶液を、振盪またはかき回しせずに４℃で一晩インキュベートした。
【０５７８】
コンジュゲーション溶液を、冷蔵庫から取り出し（溶液は、表面に凝集体を有しているようには見えなかった）、８０分間２１，０００Ｇで遠心分離した。次いで、管を、直ちに遠心分離機から取り出し、上清を除去した。各管を、ＰＢＳ食塩水で３回洗浄した。
【０５７９】
４０ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液を、ＰＢＳ食塩水（ｐＨ７．４）で調製した。５００μＬの４０ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ溶液を、ペレット化されたナノ粒子を含有する各管に添加した。管を２０秒間超音波処理し、混合した。ナノ粒子が完全に再懸濁されるまで、超音波処理ステップを数回繰り返した。
【０５８０】
特徴付けのための試料を取り出した後、溶液をバイアルに移し、−８０℃で保管した。
【０５８１】
試料の粒径を測定した。平均粒径は以下の通りであった：ｎａｂ−パクリタキセル、１４６ｎｍ；セツキシマブ混和物対照、１４８ｎｍ；５：１  リンカー：抗体セツキシマブナノ粒子、１４９ｎｍ；および１０：１  リンカー：抗体セツキシマブナノ粒子、１４７ｎｍ。
【０５８２】
試料のセツキシマブ含有量を、ＥＬＩＳＡにより測定し、試料のパクリタキセル含有量を、ＲＰ−ＨＰＬＣにより測定した（表１７）。
【表１７】
2019533665.tif 000020
【０５８３】
試料の免疫ブロット分析を実施し、単離ｎａｂ−パクリタキセルナノ粒子のコンジュゲーション反応から、より高次のコンジュゲートの存在を含む、粒子上におけるセツキシマブおよびＨＳＡのコンジュゲーションを確認した。
【０５８４】
（実施例３１）
ニボルマブおよび単離ｎａｂ−パクリタキセル粒子のコンジュゲーション
この方法で使用した材料としては、（ａ）ｎａｂ−パクリタキセル、１００ｍｇバイアル；（ｂ）Ｏｐｄｉｖｏ（ニボルマブ、ロッド番号ＡＡＬ６３０５）；（ｃ）生理食塩水（ＲＭＢＩＯ、ＵＳＰ等級、ロット番号２０６０７１６１）；（ｄ）ＭｉｌｌｉＱ水（１８．４ＭＯｈｍｓ・ｃｍおよび４ｐｐｂ  ＴＯＣ）；（ｅ）シンチレーションバイアル（ＶＷＲ、２０ｍＬ使い捨てシンチレーションバイアル）；（ｆ）１５ｍＬポリプロピレンコニカル管（Ｆａｌｃｏｎ、Ｐ／Ｎ３５２０９７）；（ｇ）Ｚｅｐａスピン脱塩カラム（７Ｋ  ＭＷＣＯ、５ｍＬｓ、カタログ番号８９８９２、ロット番号ＳＣ２４５０８７）；（ｈ）ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｄ２４３８−５０ｍＬ、ロット番号ＲＮＢＧ００１２）；（ｉ）ＳＭ（ＰＥＧ）６（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２２１０５、ロット番号ＳＤ２４９１５１）；および（ｊ）リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）錠剤（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｐ４４１７−５０ＴＡＢ、ロット番号ＳＬＢＳ４２２３）が挙げられる。
【０５８５】
２０ｍＬの生理食塩水を、凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物の１つのバイアルに添加した。１．２ｍＬのｎａｂ−パクリタキセル懸濁液のアリコートを、４つのエッペンドルフ管に添加した。管をインキュベートし、２０分間穏やかに旋回させた。ＲＰ−ＨＰＬＣを使用してパクリタキセル含有量の測定を実施するために、１つの管を使用した。
【０５８６】
ｎａｂ−パクリタキセル懸濁液を含有する残りのエッペンドルフ管を、２０℃で８０分間２１，０００ＲＣＦで遠心分離した。遠心分離後、各管を直ちに取り出し、各管の上清を除去した。ナノ粒子のペレットを、０．５ｍＬの生理食塩水で穏やかに再構成し、最終１２ｍｇ／ｍＬナノ粒子溶液を製作した。
【０５８７】
２ｍＬのＯｐｄｉｖｏ（ＷＦＩで１０ｍｇ／ｍＬに再構成）を、１５ｍＬ遠心濃縮器に等分した。１００ｍＭリン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ６．６）を調製した。遠心濃縮器をリン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）で満たし、製造業者の使用説明書に従って３０分間遠心分離した。遠心濃縮器をリン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）でもう一度満たし、製造業者の使用説明書に従って３０分間遠心分離した。残留ニボルマブ溶液を、１５ｍＬファルコン管にピペットし、２ｍｌの総体積に希釈した。
【０５８８】
ＳＭ（ＰＥＧ）６パッケージを−２０℃から取り出し、室温で１時間加温した。６．８３ｍｇのＳＭ（ＰＥＧ）６を、１００μＬのＤＭＳＯに溶解した（１１２ｍＭリンカー溶液）。リンカーが完全に溶解するまで、リンカー溶液をボルテックスした。
【０５８９】
０．５ｍＬのニボルマブ溶液を、４つのエッペンドルフ管に等分した。エッペンドルフ管の３つに、１．７μＬ、３．４μＬ、および５．１μＬのリンカー溶液をゆっくりと添加して、リンカーと抗体との５：１、１０：１、または１５：１モル比を生成した。混和物対照管は、リンカー修飾せずに取っておいた。この手順中、溶液を光から保護するべきである。溶液を、２時間振盪機で反応させた。
【０５９０】
脱塩カラムをリン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）で４回洗浄することにより、３つの５ｍＬ脱塩カラムを調製した（各遠心分離は１０００Ｇで５分間）。次いで、活性化ニボルマブ溶液をカラムで濾過して、任意の未反応リンカーを除去した。
【０５９１】
次いで、５００μＬの各濃度の活性化ニボルマブ溶液を、５００μＬのナノ粒子溶液にゆっくりと添加した。５００μＬの非活性化ニボルマブ溶液を、５００μＬのナノ粒子溶液に添加した。次いで、結果として得られた溶液を、振盪またはかき回しせずに４℃で一晩インキュベートした。
【０５９２】
コンジュゲーション溶液を、冷蔵庫から取り出し（溶液は、表面に凝集体を有しているようには見えなかった）、８０分間２１，０００Ｇで遠心分離した。次いで、管を、直ちに遠心分離機から取り出し、上清を除去した。各管を、ＰＢＳ食塩水で３回洗浄した。
【０５９３】
４０ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液を、ＰＢＳ食塩水（ｐＨ７．４）で調製した。５００μＬの４０ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ溶液を、ペレット化されたナノ粒子を含有する各管に添加した。管を２０秒間超音波処理し、混合した。ナノ粒子が完全に再懸濁されるまで、超音波処理ステップを数回繰り返した。
【０５９４】
特徴付けのために試料を取り出した後、溶液をバイアルに移し、−８０℃で保管した。
【０５９５】
試料の粒径を測定した。平均粒径は以下の通りであった：ｎａｂ−パクリタキセル、１４５ｎｍ；ニボルマブ混和物対照、１４５ｎｍ；５：１  リンカー：抗体ニボルマブナノ粒子、１４９ｎｍ；１０：１  リンカー：抗体ニボルマブナノ粒子、１４７ｎｍ；および１５：１  リンカー：抗体ニボルマブナノ粒子、１５０ｎｍ。
【０５９６】
試料のニボルマブ含有量を、ＥＬＩＳＡにより測定し、試料のパクリタキセル含有量を、ＲＰ−ＨＰＬＣにより測定した（表１８）。
【表１８】
2019533665.tif 000021
【０５９７】
試料の免疫ブロット分析を実施し、単離ｎａｂ−パクリタキセルナノ粒子のコンジュゲーション反応から、より高次のコンジュゲートの存在を含む、粒子上におけるニボルマブおよびＨＳＡのコンジュゲーションを確認した。
【０５９８】
図２４は、５：１、１０：１、および１５：１のリンカー：抗体反応比でのニボルマブおよび活性化ニボルマブのＬＣ−ＭＳ分析からのデコンボリューション質量スペクトルを示す。抗体：コンジュゲートリンカーとして各同位体クラスター下に示されているように、リンカー：抗体の反応比を増加させることにより、ニボルマブにコンジュゲートされたリンカーの数が増加した（図２４）。
【０５９９】
（実施例３２）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ研究のための混和トラスツズマブ−ナノ粒子製剤の調製
バッチ１。０．３９ｍＬのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブおよび賦形剤、２１ｍｇ／ｍＬ）および９．６１ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水（Ｇ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、バイアル中の凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）に添加した。バイアルの内容物を、混合せずに５分間再構成し、その後穏やかに混合して、完全な再構成を保証した。混合物を、室温（約２０℃）で１時間インキュベートしてから、１０ｍＬの生理食塩水をバイアルに添加した。混合物を穏やかに混合して、均質性を保証した。パクリタキセルの終濃度は、５ｍｇ／ｍＬであり（４５ｍｇ／ｍＬアルブミンを有する）、トラスツズマブの終濃度は、０．４１ｍｇ／ｍＬであった。
【０６００】
バッチ２。０．１５２ｍＬのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブおよび賦形剤、２１ｍｇ／ｍＬ）および９．８４８ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水（Ｇ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、バイアル中の凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）に添加した。バイアルの内容物を、混合せずに５分間再構成し、その後穏やかに混合して、完全な再構成を保証した。混合物を、室温（約２０℃）で１時間インキュベートしてから、１０ｍＬの生理食塩水をバイアルに添加した。混合物を穏やかに混合して、均質性を保証した。パクリタキセルの終濃度は、５ｍｇ／ｍＬであり（４５ｍｇ／ｍＬアルブミンを有する）、トラスツズマブの終濃度は、０．１６ｍｇ／ｍＬであった。
【０６０１】
バッチ３。０．０９３ｍＬのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブおよび賦形剤、２１ｍｇ／ｍＬ）および９．９０７ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水（Ｇ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、バイアル中の凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）に添加した。バイアルの内容物を、混合せずに５分間再構成し、その後穏やかに混合して、完全な再構成を保証した。混合物を、室温（約２０℃）で１時間インキュベートしてから、１０ｍＬの生理食塩水をバイアルに添加した。混合物を穏やかに混合して、均質性を保証した。パクリタキセルの終濃度は、５ｍｇ／ｍＬであり（４５ｍｇ／ｍＬアルブミンを有する）、トラスツズマブの終濃度は、０．０９８ｍｇ／ｍＬであった。
【０６０２】
バッチ４。０．０５１ｍＬのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブおよび賦形剤、２１ｍｇ／ｍＬ）および９．９４９ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水（Ｇ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、バイアル中の凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）に添加した。バイアルの内容物を、混合せずに５分間再構成し、その後穏やかに混合して、完全な再構成を保証した。混合物を、室温（約２０℃）で１時間インキュベートしてから、１０ｍＬの生理食塩水をバイアルに添加した。混合物を穏やかに混合して、均質性を保証した。パクリタキセルの終濃度は、５ｍｇ／ｍＬであり（４５ｍｇ／ｍＬアルブミンを有する）、トラスツズマブの終濃度は、０．０５４ｍｇ／ｍＬであった。
【０６０３】
バッチ５。０．４７６ｍＬのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブおよび賦形剤、２１ｍｇ／ｍＬ）および９．５２４ｍＬの０．９％ＮａＣｌ生理食塩水（Ｇ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、バイアル中の凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）に添加した。バイアルの内容物を、混合せずに５分間再構成し、その後穏やかに混合して、完全な再構成を保証した。混合物を、室温（約２０℃）で１時間インキュベートしてから、１０ｍＬの生理食塩水をバイアルに添加した。混合物を穏やかに混合して、均質性を保証した。パクリタキセルの終濃度は、５ｍｇ／ｍＬであり（４５ｍｇ／ｍＬアルブミンを有する）、トラスツズマブの終濃度は、０．５ｍｇ／ｍＬであった。
【０６０４】
（実施例３３）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ研究のためのコンジュゲートトラスツズマブ−ナノ粒子製剤の調製
ｎａｂ−パクリタキセルナノ粒子を単離するために、２０ｍＬの生理食塩水を、凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）を含有する１つのバイアルに添加した。１．２ｍＬのｎａｂ−パクリタキセル懸濁液を、１６個の１．５ｍＬエッペンドルフ管に等分した。エッペンドルフ管を、穏やかに２０分間混合した。１つのエッペンドルフ管をＨＰＬＣアッセイに使用して、パクリタキセル含有量を決定し、粒径を測定した。平均粒径は１４７ｎｍであった。残りのエッペンドルフ管を、２０℃で８０分間２１，０００ＲＣＦで遠心分離した。遠心分離後、管を直ちにデカントして上清を除去した。結果として得られたペレットに、５００μＬの酢酸ナトリウム（ｐＨ８．０）および１５０ｍＭ塩化ナトリウムを添加して、ナノ粒子を再構成した（ｎａｂ−パクリタキセル粒子濃度は、１０ｍｇ／ｍＬパクリタキセルであった）。
【０６０５】
Ｔｒａｕｔ試薬を、２ｍｇ／ｍＬ（１４．５ｍＭ）の濃度でＷＦＩに溶解した。３０μＬのＴｒａｕｔ試薬（リンカー：ＨＳＡ比は２０：１）を、単離ナノ粒子溶液にゆっくりと添加し、４℃で７０分間反応させた。２．４μＬの５００ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）を添加し、４℃で１０分間インキュベートした。試料を、４℃で８０分間２１，０００ＲＣＦで遠心分離した。管を遠心分離機から取り出し、デカントし、ＰＢＳ食塩水で２回洗浄した。単離活性化ｎａｂ−パクリタキセル粒子を、５００μＬのＰＢＳ食塩水に再懸濁し、１分間超音波処理して、粒子を再懸濁した。
【０６０６】
生理食塩水を使用して、２１ｍｇ／ｍＬのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）溶液を調製した。６ｍＬのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）溶液を、３つの１５ｍＬ遠心濃縮器に等分した。
【０６０７】
無エンドトキシン水を使用して１００ｍＭリン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ６．６）を調製し、濾過した。遠心濃縮器をｐＨ６．６リン酸緩衝剤で満たし、３７５０ｒｐｍで３５分間遠心分離した。これを１回繰り返した。残留溶液を、１５ｍＬファルコン管にピペットし、１２ｍＬの総体積に希釈した。トラスツズマブ濃度を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により測定した。トラスツズマブ濃度を、必要に応じて１０．５ｍｇ／ｍＬに調整した。
【０６０８】
ＳＭ（ＰＥＧ）６パッケージを−２０℃の冷凍庫から取り出し、１時間室温に加温した。２ｍＬの無菌ＤＭＳＯ溶液をエッペンドルフ管に等分した。１２２μＬのＤＭＳＯを、このエッペンドルフ管から、８．３ｍｇのＳＭ（ＰＥＧ）６を含有するバイアルに移した（１１２ｍＭ終濃度）。リンカーがＤＭＳＯに完全に溶解するまで、リンカー溶液をボルテックスした。
【０６０９】
２ｍＬのトラスツズマブ溶液を、６つの１５ｍＬファルコン管の各々に等分した。６．８μＬのＳＭ（ＰＥＧ）６リンカー溶液を、１ｍＬのトラスツズマブを含有する各２ｍＬの管にゆっくりと添加した。この手順中、溶液を光から保護した。光から依然として保護しつつ、リンカー／抗体溶液を、振盪機で２時間反応させた。
【０６１０】
５ｍＬ脱塩カラムを、リン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）で４回洗浄した（各遠心分離は１０００Ｇで６分間）。活性化抗体溶液を、脱塩カラムで濾過して、未反応リンカーを除去した。濾液を収集し、プールした。トラスツズマブおよびリンカーの比を、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）により決定した。
【０６１１】
５００μＬの活性化トラスツズマブを、５００μＬのナノ粒子溶液にゆっくりと添加した。次いで、溶液を、４℃で一晩インキュベートした（振盪またはかき回しを回避した）。
【０６１２】
コンジュゲーション溶液を、４℃から取り出した。溶液は、エッペンドルフ管の表面に凝集体を有していなかった。コンジュゲーション溶液を、８０分間２１，０００Ｇで遠心分離した。遠心分離後、管を直ちにデカントして上清を除去し、各管をＰＢＳ食塩水で２回洗浄した。
【０６１３】
４０ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液を、ＰＢＳ食塩水で調製した。５００μＬの４０ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ溶液を各管に等分した。次いで、管を２０秒間超音波処理し、混合した（ナノ粒子が完全に再懸濁されるまで、このステップを数回繰り返した）。
【０６１４】
パクリタキセル含有量を、ＲＰ−ＨＰＬＣにより測定し、次いで５．３３ｍｇ／ｍＬに調整した。粒径をＤＬＳにより測定した。粒径は１７５ｎｍであった。次いで、結果として得られた溶液をバイアルに移し、−８０℃で保管した。
【０６１５】
最終コンジュゲート粒子のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ濃度を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞結合アッセイにより分析した。濃度は０．４３ｍｇ／ｍＬである。
【０６１６】
（実施例３４）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ研究のためのコンジュゲートトラスツズマブ−ナノ粒子製剤の調製
ｎａｂ−パクリタキセルナノ粒子を単離するために、２０ｍＬの生理食塩水を、凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）を含有する１つのバイアルに添加した。１．２ｍＬのｎａｂ−パクリタキセル懸濁液を、１６個の１．５ｍＬエッペンドルフ管に等分した。エッペンドルフ管を、穏やかに２０分間混合した。１つのエッペンドルフ管をＨＰＬＣアッセイに使用して、パクリタキセル含有量を決定し、粒径を測定した。平均粒径は１４７ｎｍであった。残りのエッペンドルフ管を、２０℃で８０分間２１，０００ＲＣＦで遠心分離した。遠心分離後、管を直ちにデカントして上清を除去した。結果として得られたペレットに、５００μＬの酢酸ナトリウム（ｐＨ８．０）および１５０ｍＭ塩化ナトリウムを添加して、ナノ粒子を再構成した（ｎａｂ−パクリタキセル粒子濃度は、１０ｍｇ／ｍＬパクリタキセルであった）。
【０６１７】
Ｔｒａｕｔ試薬を、２ｍｇ／ｍＬ（１４．５ｍＭ）の濃度でＷＦＩに溶解した。１５μＬのＴｒａｕｔ試薬（リンカー：ＨＳＡ比は１０：１）を、単離ナノ粒子溶液にゆっくりと添加し、４℃で７０分間反応させた。２．４μＬの５００ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）を添加し、４℃で１０分間インキュベートした。試料を、４℃で８０分間２１，０００ＲＣＦで遠心分離した。管を遠心分離機から取り出し、デカントし、ＰＢＳ食塩水で２回洗浄した。単離活性化ｎａｂ−パクリタキセル粒子を、５００μＬのＰＢＳ食塩水に再懸濁し、１分間超音波処理して、粒子を再懸濁した。
【０６１８】
生理食塩水を使用して、２１ｍｇ／ｍＬのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）溶液を調製した。６ｍＬのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）溶液を３つの１５ｍＬ遠心濃縮器に等分した。
【０６１９】
無エンドトキシン水を使用して１００ｍＭリン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ６．６）を調製し、濾過した。遠心濃縮器をｐＨ６．６リン酸緩衝剤で満たし、３７５０ｒｐｍで３５分間遠心分離した。これを１回繰り返した。残留溶液を、１５ｍＬファルコン管にピペットし、１２ｍＬの総体積に希釈した。トラスツズマブ濃度を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により測定した。トラスツズマブ濃度を、必要に応じて１０．５ｍｇ／ｍＬに調整した。
【０６２０】
ＳＭ（ＰＥＧ）６パッケージを−２０℃の冷凍庫から取り出し、１時間室温に加温した。２ｍＬの無菌ＤＭＳＯ溶液をエッペンドルフ管に等分した。１２２μＬのＤＭＳＯを、このエッペンドルフ管から、８．３ｍｇのＳＭ（ＰＥＧ）６を含有するバイアルに移した（１１２ｍＭ終濃度）。リンカーがＤＭＳＯに完全に溶解するまで、リンカー溶液をボルテックスした。
【０６２１】
２ｍＬのトラスツズマブ溶液を、６つの１５ｍＬファルコン管に等分した。６．８μＬのＳＭ（ＰＥＧ）６リンカー溶液を、１ｍＬのトラスツズマブを含有する各管にゆっくりと添加した。この手順中、溶液を光から保護した。光から依然として保護しつつ、リンカー／抗体溶液を、振盪機で２時間反応させた。
【０６２２】
５ｍＬ脱塩カラムを、リン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）で４回洗浄した（各遠心分離は１０００Ｇで６分間）。活性化抗体溶液を、脱塩カラムで濾過して、未反応リンカーを除去した。濾液を収集し、プールした。トラスツズマブおよびリンカーの比を、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）により決定した。
【０６２３】
５００μＬの活性化トラスツズマブを、５００μＬのナノ粒子溶液にゆっくりと添加した。次いで、溶液を、４℃で一晩インキュベートした（振盪またはかき回しを回避した）。
【０６２４】
コンジュゲーション溶液を４℃から取り出した。溶液は、エッペンドルフ管の表面に凝集体を有していなかった。コンジュゲーション溶液を、８０分間２１，０００Ｇで遠心分離した。遠心分離後、管を直ちにデカントして上清を除去し、各管をＰＢＳ食塩水で２回洗浄した。
【０６２５】
４０ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液を、ＰＢＳ食塩水で調製した。５００μＬの４０ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ溶液を各管に等分した。次いで、管を２０秒間超音波処理し、混合した（ナノ粒子が完全に再懸濁されるまで、このステップを数回繰り返した）。
【０６２６】
パクリタキセル含有量をＲＰ−ＨＰＬＣにより測定し、次いで５．５６ｍｇ／ｍＬに調整した。粒径をＤＬＳにより測定した。粒径は１６４ｎｍであった。次いで、結果として得られた溶液をバイアルに移し、−８０℃で保管した。
【０６２７】
最終コンジュゲート粒子のＨｅｒｃｅｐｔｉｎ濃度を、ＥＬＩＳＡにより分析した。濃度は０．１８ｍｇ／ｍＬである。
【０６２８】
（実施例３５）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ研究のためのコンジュゲートトラスツズマブ−ナノ粒子製剤の調製
ｎａｂ−パクリタキセルナノ粒子を単離するために、２０ｍＬの生理食塩水を、凍結乾燥ｎａｂ−パクリタキセル組成物（１００ｍｇパクリタキセル）を含有する１つのバイアルに添加した。１．２ｍＬのｎａｂ−パクリタキセル懸濁液を、２５個のエッペンドルフ管に等分した。エッペンドルフ管を、穏やかに２０分間混合した。１つのエッペンドルフ管をＲＰ−ＨＰＬＣアッセイに使用して、パクリタキセル含有量を決定し、粒径を測定した。残りのエッペンドルフ管を、２０℃で８０分間２１，０００ＲＣＦで遠心分離した。遠心分離後、管を直ちにデカントして上清を除去した。０．６ｍＬの生理食塩水を残留ペレットに添加して、ナノ粒子を再構成した（パクリタキセルの終濃度は１０ｍｇ／ｍＬ）。粒径は、１４９ｎｍと測定された。
【０６２９】
生理食塩水を使用して、２１ｍｇ／ｍＬのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）溶液を調製した。８ｍＬのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）溶液を２つの１５ｍＬ遠心濃縮器に等分した。無エンドトキシン水を使用して１００ｍＭリン酸カリウム緩衝剤（ｐＨ６．６）を調製し、濾過した。遠心濃縮器をｐＨ６．６リン酸緩衝剤で満たし、製造業者の使用説明書に従って３０分間遠心分離した。これを１回繰り返した。残留トラスツズマブ溶液を、１５ｍＬファルコン管にピペットし、２．４ｍＬの総体積に希釈した。トラスツズマブ濃度を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により測定した。トラスツズマブ濃度を、必要に応じて１０．５ｍｇ／ｍＬに調整した。
【０６３０】
ＳＭ（ＰＥＧ）６パッケージを−２０℃の冷凍庫から取り出し、１時間室温に加温した。２ｍＬの無菌ＤＭＳＯ溶液をエッペンドルフ管に等分した。１．５１ｍＬのＤＭＳＯを、このエッペンドルフ管から、１００ｍｇのＳＭ（ＰＥＧ）６を含有するバイアルに移した（１１２ｍＭ終濃度）。リンカーがＤＭＳＯに完全に溶解するまで、リンカー溶液をボルテックスした。
【０６３１】
１ｍＬの１０．５ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ溶液を１６個のエッペンドルフ管に等分した。１ｍＬのトラスツズマブ溶液を含有する各エッペンドルフ管に、５．１μＬのリンカー溶液をゆっくりと添加した（リンカーの抗体に対する比は７．５：１である）。この手順中、溶液を光から保護した。光から依然として保護しつつ、リンカー／抗体溶液を、振盪機で２時間反応させた。
【０６３２】
５ｍＬ脱塩カラムを、リン酸緩衝剤（ｐＨ６．６）で４回洗浄した（各遠心分離は１０００Ｇで５分間）。活性化抗体溶液を、脱塩カラムで濾過して、未反応リンカーを除去した。濾液を収集し、プールした。トラスツズマブおよびリンカーの比を、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）により決定した。６００μＬの活性化トラスツズマブを、６００μＬのナノ粒子溶液にゆっくりと添加した。次いで、溶液を、４℃で一晩インキュベートした（振盪またはかき回しを回避した）。
【０６３３】
コンジュゲーション溶液を冷蔵庫から取り出した。溶液は、エッペンドルフ管の表面に凝集体を有していなかった。粒径は、１６４ｎｍと測定された。
【０６３４】
コンジュゲーション溶液を、８０分間２１，０００Ｇで遠心分離した。遠心分離後、管を直ちにデカントして上清を除去し、各管をＰＢＳ食塩水で２回洗浄した。
【０６３５】
４０ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液を、ＰＢＳ食塩水（ｐＨ７．４）で調製した。８００μＬの４０ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡ溶液を各管に等分した。次いで、管を２０秒間超音波処理し、次いで混合した（ナノ粒子が完全に再懸濁されるまで、このステップを数回繰り返した）。
【０６３６】
パクリタキセル含有量を、ＲＰ−ＨＰＬＣにより測定し、次いで、４０ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎの溶液を添加することにより、５．０５ｍｇ／ｍＬパクリタキセルおよび０．５ｍｇ／ｍＬ  Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎの最終に調整した。粒径は１５７ｎｍと決定された。次いで、結果として得られた溶液をバイアルに移し、−８０℃で保管した。
【０６３７】
免疫ブロットを、単離ｎａｂ−パクリタキセルナノ粒子およびトラスツズマブコンジュゲート粒子に対して実施して、抗体コンジュゲーションを確認した。
【０６３８】
（実施例３６）
混和、埋込み、コンジュゲートトラスツズマブ−ナノ粒子製剤のｉｎ  ｖｉｔｒｏ有効性
抗体−ｎａｂ−パクリタキセルの種々の製剤を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗増殖効果およびｐ（Ｔｙｒ１２４８）／全ＥｒｂＢ２結合の阻害について試験した。
【０６３９】
抗増殖アッセイ。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ成長阻害活性を、抗増殖アッセイを使用して評価した。４０μＬ／ウェルの細胞を、それらの最適密度で３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、３７１２）に播種し、３７℃および５％のＣＯ２で一晩インキュベートさせた。翌日、細胞を試験トラスツズマブ−ナノ粒子製剤で処置し、３７℃および５％ＣＯ２で３日間インキュベーターに戻し入れた。３日間の処置後、２０μＬ／ウェルのＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ７５７３）を添加することにより、細胞生存率を評価した。３０分間のインキュベーション後、プレートを、ルミネセンス検出用のＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎで読み取った。
【０６４０】
ホスホ（Ｔｙｒ１２４８）／全ＥｒｂＢ２結合アッセイ。試験トラスツズマブ−ナノ粒子製剤を、ｐＹ１２４８／全ＥｒｂＢ２全細胞溶解物アッセイキット（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｋ１５１２５Ｄ）により、ＥｒｂＢ２結合について特徴付けた。２５，０００細胞／ウェルを一晩播種し、３７℃および５％ＣＯ２で９６ウェル培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ３７０４）へ付着させた。翌日、細胞を試験トラスツズマブ−ナノ粒子製剤で２時間処置した。２時間の処置後、６５μＬ／ウェルのＭＳＤ溶解緩衝剤を添加することにより細胞を溶解し、４℃で１時間揺動振盪機に配置した。この間、ＭＳＤ捕捉プレートを、ＭＳＤブロッキング緩衝剤Ａでブロッキングした。１時間後、ＭＳＤ捕捉プレートをＭＳＤ洗浄緩衝剤で洗浄した。次いで、３５μＬ／ウェルの細胞溶解物を、ＭＳＤ捕捉プレートに移し、室温で１時間、揺動振盪機でインキュベートさせた。次いで、捕捉されたタンパク質量を、まず細胞溶解物を廃棄し、ＭＳＤ捕捉プレートをＭＳＤ洗浄緩衝剤で洗浄することにより、それらのＥｒｂ２レベルについて評価した。２５μＬ／ウェルの抗体希釈緩衝剤中ＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ抗全ＥｒｂＢ２抗体を添加し、次いで揺動振盪機で１時間室温にてＭＳＤプレートとインキュベートさせた。１時間後、ＭＳＤプレートをＭＳＤ洗浄緩衝剤で洗浄した。次いで、１５０μＬ／ウェルのＭＳＤ読み取り緩衝剤を添加し、直ちにプレートをＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｓ６００機器で読み取った。
【０６４１】
結合研究からのデータをは表１９に提供し、増殖研究からのデータを表２０に提供する。
【表１９】
2019533665.tif 000022
【表２０】
2019533665.tif 000023
【０６４２】
（実施例３７）
混和、埋込み、およびコンジュゲートトラスツズマブ−ナノ粒子製剤のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性
この実施例は、ＢＴ−４７４異種移植マウスに投与された、混和、埋込み、およびコンジュゲートｎａｂ−パクリタキセル−トラスツズマブ製剤の処置有効性を示す。
【０６４３】
重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウスに、１７β−エストラジオールペレット（９０日間放出、０．３６ｍｇ／ペレット）を、腫瘍細胞接種の前日（−１日目）に皮下に移植した。０日目に、ＢＴ−４７４細胞（ＡＴＣＣから入手）をマウスに皮下接種した。小型腫瘍研究の場合、ＢＴ−４７４細胞接種の約２週間後に、腫瘍を測定し、マウスを研究群に無作為化した。大型腫瘍研究の場合、ＢＴ−４７４細胞接種の約４週間後に、腫瘍を測定し、マウスを、以下で特定されている研究群に無作為化した。
【０６４４】
小型腫瘍研究の場合（約１５０ｍｍ３〜１８０ｍｍ３の腫瘍サイズ）、７〜８匹のＳＣＩＤマウスを、以下の研究群の各々に割り当て、（１）媒体；（２）ｎａｂ−パクリタキセル：５０ｍｇ／ｋｇ（「ＡＢＸ５０」）；（３）ｎａｂ−パクリタキセル：２５ｍｇ／ｋｇ（「ＡＢＸ２５」）；（４）Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）：５ｍｇ／ｋｇ（「Ｔｒａｔｓｕ５」）；（５）Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）：２．５ｍｇ／ｋｇ（「Ｔｒａｔｓｕ２．５」）；（６）ｎａｂ−パクリタキセル−トラスツズマブコンジュゲート（１ｋｇ当たり５０ｍｇ  ｎａｂ−パクリタキセル／５ｍｇトラスツズマブ）（「コンジュゲート（５０／５）」）（実施例３５による）；（７）ｎａｂ−パクリタキセル−トラスツズマブコンジュゲート（１ｋｇ当たり２５ｍｇ  ｎａｂ−パクリタキセル／２．５ｍｇトラスツズマブ）（「コンジュゲート（２５／２．５）」）（実施例３５による）；（８）埋込みｎａｂ−パクリタキセル−トラスツズマブ（１ｋｇ当たり５０ｍｇ  ｎａｂ−パクリタキセル／５ｍｇトラスツズマブ）（「埋込み（５０／５）」）（実施例２０による）；（９）埋込みｎａｂ−パクリタキセル−トラスツズマブ（１ｋｇ当たり２５ｍｇ  ｎａｂ−パクリタキセル／２．５ｍｇトラスツズマブ）（「埋込み（２５／２．５）」）（実施例２０による）；（１０）ｎａｂ−パクリタキセルおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）の混和物（１ｋｇ当たり５０ｍｇのｎａｂ−パクリタキセルおよび５ｍｇのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））（「混和物５０／５」）（実施例３２、バッチ５による）；ならびに（１１）ｎａｂ−パクリタキセルおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）の混和物（１ｋｇ当たり２５ｍｇのｎａｂ−パクリタキセルおよび２．５ｍｇのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））（「混和物２５／２．５」）（実施例３２、バッチ５による）の週１回投与を受けさせた。
【０６４５】
大型腫瘍研究の場合（約５００ｍｍ３〜７５０ｍｍ３の腫瘍サイズ）、７匹のＳＣＩＤマウスを、以下の研究群の各々に割り当て、（１）媒体；（２）ｎａｂ−パクリタキセル：５０ｍｇ／ｋｇ；（３）Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）：５ｍｇ／ｋｇ；（４）ｎａｂ−パクリタキセル−トラスツズマブコンジュゲート（１ｋｇ当たり５０ｍｇ  ｎａｂ−パクリタキセル／５ｍｇトラスツズマブ）（実施例３５による）；（５）埋込みｎａｂ−パクリタキセル−トラスツズマブ（１ｋｇ当たり５０ｍｇ  ｎａｂ−パクリタキセル／５ｍｇトラスツズマブ）（実施例２０による）；ならびに（６）Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）およびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）の混和物（１ｋｇ当たり５０ｍｇのｎａｂ−パクリタキセルおよび５ｍｇのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））（実施例３２、バッチ５による）の週１回投与を受けさせた。
【０６４６】
動物の腫瘍測定および体重を、週２回測定した。最後の腫瘍測定は、元の群割当てを盲検化した。
【０６４７】
小型腫瘍研究からのパーセント腫瘍体積変化結果を、図２５Ａ〜２５Ｂ（処置の７日後）および図２５Ｃ〜２５Ｄ（処置の１４日後）に示す。１４日目までに、より高い用量のｎａｂ−パクリタキセル−トラスツズマブコンジュゲート群（１ｋｇ当たり５０ｍｇ  ｎａｂ−パクリタキセル／５ｍｇトラスツズマブ）は、単剤ｎａｂ−パクリタキセルと比較して、抗腫瘍活性の大幅な向上を達成した（図２５Ｃ）。
【０６４８】
大型腫瘍研究の結果を、図２６Ａ（処置の７日後）および図２６Ｂ（処置の１４日後）に示す。１４日目までに、埋込みｎａｂ−パクリタキセル−トラスツズマブ（１ｋｇ当たり５０ｍｇ  ｎａｂ−パクリタキセル／５ｍｇトラスツズマブ）は、単剤ｎａｂ−パクリタキセルまたは単剤トラスツズマブと比較して、抗腫瘍活性の大幅な向上を達成した。さらに、処置の１４日後、コンジュゲートｎａｂ−パクリタキセル−トラスツズマブ（１ｋｇ当たり５０ｍｇ  ｎａｂ−パクリタキセル／５ｍｇトラスツズマブ）は、単剤トラスツズマブと比較して、抗腫瘍活性の大幅な向上を達成した。
【０６４９】
（実施例３８）
混和、埋込み、およびコンジュゲートトラスツズマブ−ナノ粒子製剤のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性
この実施例は、ＢＴ−４７４異種移植マウスモデルに対する、混和、埋込み、およびコンジュゲートｎａｂ−パクリタキセル−トラスツズマブ製剤の処置有効性を示す。
【０６５０】
重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウスを、実施例３１に記載されているように準備した。ＢＴ−４７４細胞接種の約４週間後に腫瘍を測定し（およそ６００ｍｍ３）、マウスを、以下で特定されている研究群に無作為化した。
【０６５１】
８匹のＳＣＩＤマウスを、以下の研究群の各々に割り当て、（１）媒体（５％ＨＳＡ）；（２）ｎａｂ−パクリタキセル：５０ｍｇ／ｋｇ（「ＡＢＸ５０」）；（３）Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）：４．１ｍｇ／ｋｇ（「Ｔｒａｔｓｕ４．１」）；（４）ｎａｂ−パクリタキセル−トラスツズマブコンジュゲート（１ｋｇ当たり５０ｍｇ  ｎａｂ−パクリタキセル／４．１ｍｇトラスツズマブ）（「コンジュゲート５０／４．１＝１２：１」）（実施例３３による）；（５）ｎａｂ−パクリタキセル−トラスツズマブコンジュゲート（１ｋｇ当たり５０ｍｇ  ｎａｂ−パクリタキセル／０．５４ｍｇトラスツズマブ）（「コンジュゲート５０／０．５４＝９２．５：１」）（実施例２３による）；（６）ｎａｂ−パクリタキセルおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）の混和物（１ｋｇ当たり５０ｍｇのｎａｂ−パクリタキセルおよび４．１ｍｇのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））（「混和物（５０／４．１＝１２：１）」）（実施例３６、バッチ１による）；（７）ｎａｂ−パクリタキセルおよびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）の混和物（１ｋｇ当たり５０ｍｇのｎａｂ−パクリタキセルおよび０．５４ｍｇのＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））（「混和物（５０／０．５４＝９２．５：１）」）（実施例３６、バッチ４による）；ならびに（８）ｎａｂ−パクリタキセル（５０ｍｇ／ｋｇ）およびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（４．１ｍｇ／ｋｇ）の逐次投与（「逐次（５０／４．１」）の週１回投与を受けさせた。
【０６５２】
研究からのパーセント腫瘍体積変化結果を、図２７Ａ（０日目処置の７日後）および図２７Ｂ（０日目および７日目処置の１４日後）に示す。
【０６５３】
（実施例３９）
混和、埋込み、およびコンジュゲートトラスツズマブ−ナノ粒子製剤のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性
この実施例は、ＢＴ−４７４異種移植マウスモデルに対する、埋込みおよびコンジュゲートｎａｂ−パクリタキセル−トラスツズマブ製剤の処置有効性を示す。
【０６５４】
重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウスを、実施例Ｍに記載されているように準備した。ＢＴ−４７４細胞接種の約４週間後に腫瘍を測定し（およそ６００ｍｍ３）、マウスを、以下で特定されている研究群に無作為化した。
【０６５５】
８匹のＳＣＩＤマウスを、１ｍｇ／ｋｇ  Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）研究群の以下の研究群の各々に割り当て、（１）媒体（５％ＨＳＡ）；（２）ｎａｂ−パクリタキセル：３０ｍｇ／Ｋｇ；（３）Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）：１ｍｇ／ｋｇ；（４）ｎａｂ−パクリタキセル（３０ｍｇ／ｋｇ）およびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（１ｍｇ／ｋｇ）の逐次投与；ならびに（５）ｎａｂ−パクリタキセル−トラスツズマブコンジュゲート（１ｋｇ当たり３０ｍｇのｎａｂ−パクリタキセル／１ｍｇのトラスツズマブ）（実施例３４による）；（６）Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）：０．６ｍｇ／ｋｇ；（７）ｎａｂ−パクリタキセル（３０ｍｇ／ｋｇ）およびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（０．６ｍｇ／ｋｇ）の逐次投与；ならびに（８）ｎａｂ−パクリタキセル−トラスツズマブコンジュゲート（１ｋｇ当たり３０ｍｇのｎａｂ−パクリタキセル／０．６ｍｇのトラスツズマブ）（実施例２６による）の週１回投与を受けさせた。
【０６５６】
０日目での上で特定されている単一用量の処置後の７日目に腫瘍体積を測定した。７日目でのパーセンテージ腫瘍体積変化の結果を、図２８Ａ〜２８Ｂに示す。
【０６５７】
０日目および７日目での上で特定されている２つ用量の処置後の１４日目に腫瘍体積を測定した。１４日目でのパーセンテージ腫瘍体積変化の結果を、図２８Ｃ〜２８Ｄに示す。
【図１】
2019533665.tif 000024
【図２】
2019533665.tif 000025
【図３】
2019533665.tif 000026
【図４】
2019533665.tif 000027
【図５】
2019533665.tif 000028
【図６】
2019533665.tif 000029
【図７Ａ】
2019533665.tif 000030
【図７Ｂ】
2019533665.tif 000031
【図７Ｃ】
2019533665.tif 000032
【図８】
2019533665.tif 000033
【図９Ａ】
2019533665.tif 000034
【図９Ｂ−Ｃ】
2019533665.tif 000035
【図１０】
2019533665.tif 000036
【図１１】
2019533665.tif 000037
【図１２】
2019533665.tif 000038
【図１３】
2019533665.tif 000039
【図１４Ａ】
2019533665.tif 000040
【図１４Ｂ】
2019533665.tif 000041
【図１４Ｃ】
2019533665.tif 000042
【図１５】
2019533665.tif 000043
【図１６】
2019533665.tif 000044
【図１７】
2019533665.tif 000045
【図１８】
2019533665.tif 000046
【図１９】
2019533665.tif 000047
【図２０】
2019533665.tif 000048
【図２１】
2019533665.tif 000049
【図２２】
2019533665.tif 000050
【図２３】
2019533665.tif 000051
【図２４】
2019533665.tif 000052
【図２５Ａ】
2019533665.tif 000053
【図２５Ｂ】
2019533665.tif 000054
【図２５Ｃ】
2019533665.tif 000055
【図２５Ｄ】
2019533665.tif 000056
【図２６Ａ】
2019533665.tif 000057
【図２６Ｂ】
2019533665.tif 000058
【図２７Ａ】
2019533665.tif 000059
【図２７Ｂ】
2019533665.tif 000060
【図２８Ａ】
2019533665.tif 000061
【図２８Ｂ】
2019533665.tif 000062
【図２８Ｃ】
2019533665.tif 000063
【図２８Ｄ】
2019533665.tif 000064
【配列表】
2019533665000001.app
【国際調査報告】
2019533665.tif 000065
2019533665.tif 000066
2019533665.tif 000067