(57)【要約】  本発明は、イヌテロメラーゼ逆転写酵素（ｄＴＥＲＴ）抗原をコードする核酸分子を含むワクチン、及びＴＥＲＴに対する免疫応答を誘導し、哺乳動物のがんを処置するためにワクチンを使用する方法を提供する。【選択図】図１
2019508403.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１のポリヌクレオチド配列、配列番号１と少なくとも９５％同一であるポリヌクレオチド配列；配列番号２のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列；及び配列番号２と９５％同一であるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるポリヌクレオチド配列を含む核酸分子を含むワクチン。
【請求項２】
前記核酸分子が、配列番号１のポリヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のワクチン。
【請求項３】
前記核酸分子が、配列番号１と９５％同一であるポリヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のワクチン。
【請求項４】
前記核酸分子が、配列番号２のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のワクチン。
【請求項５】
前記核酸分子が、配列番号２と９５％同一であるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のワクチン。
【請求項６】
前記核酸分子がプラスミドである、請求項１〜５のいずれか１項に記載のワクチン。
【請求項７】
前記プラスミドが、配列番号３の核酸配列を含む、請求項６に記載のワクチン。
【請求項８】
アジュバントをさらに含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載のワクチン。
【請求項９】
前記アジュバントが、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２８、またはＲＡＮＴＥＳである、請求項８に記載のワクチン。
【請求項１０】
哺乳動物においてテロメラーゼ逆転写酵素（ＴＥＲＴ）に対する免疫応答を誘導する方法であって、請求項１〜９のいずれか１項に記載のワクチンを、それを必要とする哺乳動物に投与することを包含し、それによって前記核酸分子が前記哺乳動物において発現され、かつ以下の免疫応答：
（ａ）ＴＥＲＴに特異的な体液性免疫応答、
（ｂ）ワクチンを投与されていない哺乳動物と比較して腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）及びインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）のレベルの上昇を含む炎症反応、及び
（ｃ）ＴＥＲＴに特異的な細胞性免疫応答、
のうちの１つ以上が誘導される、方法。
【請求項１１】
前記ＴＥＲＴがイヌＴＥＲＴ（ｄＴＥＲＴ）である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記哺乳動物ががんを有する、請求項１０〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
哺乳動物のがんを処置する方法であって、請求項１〜９のいずれか１項に記載のワクチンと薬学的に許容される担体とを含む組成物を、それを必要とする哺乳動物に投与することを包含する、前記核酸分子が哺乳動物で発現され、がんが処置される方法。
【請求項１４】
前記ワクチンがエレクトロポレーションによって投与される、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記哺乳動物がイヌである、請求項１０〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記がんが、黒色腫、前立腺癌、肝臓癌、子宮頸癌、再発性呼吸乳頭腫症（ＲＲＰ）、肛門癌、頭頸部癌、血液癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、肺癌、非小細胞肺癌、食道扁平上皮癌、膀胱癌、結腸直腸癌、胃癌、肝細胞癌、脳腫瘍、グリア芽細胞腫、膵臓癌、滑膜癌、精巣癌、及び胃癌、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
配列番号１のポリヌクレオチド配列または配列番号１と少なくとも９５％同一であるポリヌクレオチド配列を含む核酸分子。
【請求項１８】
配列番号２のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子。
【請求項１９】
配列番号３のポリヌクレオチド配列を含む、請求項１７または請求項１８に記載の核酸分子。
【請求項２０】
配列番号２のアミノ酸配列または配列番号２と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
本特許出願は、２０１６年２月５日に出願された米国仮特許出願第６２／２９１，６０１号の優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
電子的に提出された資料の参照による組込み
本明細書と同時に提出され、以下のように、２０１７年２月３日に作成された「ＶＧＸ０１５１ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」という名前の１つの４７，９３１バイトのＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイルとして特定された、コンピュータ読取り可能なヌクレオチド／アミノ酸配列リストは、その全体が参照により組み込まれる。
【０００３】
技術分野
本明細書中に開示されるのは、がんを処置する組成物及び方法、ならびに腫瘍増殖を処置し、そしてその腫瘍増殖を予防するためのワクチンである。
【背景技術】
【０００４】
がんは世界的に主要な死亡原因の１つであり、米国では死亡原因の２番目に多く、４人の死亡についてほぼ１人を占めている。がんは、正常細胞から腫瘍細胞に形質転換した単一細胞から生じる。このような形質転換は、しばしば多段階のプロセスであり、前癌病変から悪性腫瘍に進行する。多数の要因、例としては、老化、遺伝的寄与、ならびに物理的発癌性物質（例えば紫外線及び電離放射線）、化学発癌物質（例えば、アスベスト、タバコ煙の成分など）、および生物学的発ガン物質（例えば、特定のウイルス、細菌、及び寄生虫）などの外部因子への曝露がこの進行に寄与する。
【０００５】
がんの予防、診断及び処置は、多くの異なる形態を取る場合がある。予防には、事前の素因のある要因（例えば、特定の遺伝的バリアント）、行動の変化（例えば、喫煙、食餌及び身体活動の量）、及びウイルス（例えば、ヒトパピローマウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス）に対するワクチン接種に関するスクリーニングを含む場合がある。処置には、化学療法、放射線療法、及び腫瘍または癌組織の外科的除去が含まれる場合がある。数多くの予防及び治療法が利用可能であるにもかかわらず、このような方法は、しばしば手近のがんを効果的に予防及び／または処置することには、成功が限られたものである。
【０００６】
したがって、がんの予防及び／または処置のための組成物及び方法の同定及び開発の必要性が存在する。さらに、がんに罹患している対象における疾患の進行を遅延させ、及び／または死亡率を低下させるには、より効果的な処置が必要とされる。
【発明の概要】
【０００７】
本発明の態様は、テロメラーゼ逆転写酵素癌抗原をコードする核酸分子を含むワクチンを包含する。このワクチンは、以下：配列番号１のポリヌクレオチド配列、配列番号１と少なくとも９５％同一であるポリヌクレオチド配列；配列番号２のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列；及び配列番号２と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列、またはそれらの任意の組み合わせ、からなる群より選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
【０００８】
本発明の他の態様は、哺乳動物においてテロメラーゼ逆転写酵素（ＴＥＲＴ）に対する免疫応答を誘導する方法を包含し、この方法は、その必要がある哺乳動物に請求項１に記載のワクチンを投与し、それによって、その核酸分子がその哺乳動物において発現され、以下の免疫応答のうちの１つ以上がその哺乳動物で誘導されることを包含する：（ａ）ＴＥＲＴに特異的な体液性免疫応答、（ｂ）腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）及びインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）のレベルの上昇を含む炎症反応、及び（ｃ）ＴＥＲＴに特異的な細胞性免疫応答。
【０００９】
本発明のいくつかの態様は、哺乳動物においてがんを処置する方法をさらに包含し、この方法は、それを必要とする哺乳動物に、上記ワクチン及び薬学的に許容される担体を含む組成物を投与し、そのポリヌクレオチドが哺乳動物で発現され、がんが治療されることを包含する。
【００１０】
本明細書に開示され、さらに図面に記載される配列は以下のとおりである：
配列番号１は、合成コンセンサス（ＳＹＮＣＯＮ）ｄＴＥＲＴに相当する。
配列番号２は、配列番号１によってコードされるアミノ酸配列に相当する。
配列番号３は、プラスミドｐＧＸ１４１４（挿入物として配列番号１を含むｐＧＸ０００１）の核酸配列に相当する。
配列番号４は、テロメラーゼ活性を破壊する７つの点突然変異を有するイヌテロメラーゼ逆転写酵素（ｄＴＥＲＴ）ポリペプチドである、ｄＴＥＲＴ−ＰＬ（配列番号５）をコードする核酸配列（置換：Ｒ５７９Ｙ、Ｄ９９６Ｙ、Ｋ６３３Ａ、Ｒ６３８Ａ、Ｄ７１９Ａ、Ｙ７２４Ａ及びＤ８７６Ａ）に相当する。配列番号４はｐＧＸ１４１５挿入物である。
配列番号５（ｄＴＥＲＴ−ＰＬ）は、配列番号４によってコードされるアミノ酸配列に相当する。
配列番号６は、配列番号５の免疫優性なエピトープに相当する。
配列番号７は、ｄＴＥＲＴのアミノ酸配列に相当する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、実施例１に記載のプラスミドベクターｐＧＸ１４１４（配列番号３）の図である。
【図２】図２は、実施例１に記載したプラスミドベクターｐＧＸ０００１の図である。
【図３】図３Ａは、実施例２に記載のマウスにおけるｐＧＸ１４１４（配列番号３）免疫スケジュールの図である。図３Ｂは、ｐＧＸ１４１４（配列番号３）によって誘導される、総ＳＹＮＣＯＮ  ｄＴＥＲＴ（配列番号１）特異的ＩＦＮ−γ応答を示すグラフである。図３Ｃは、ｐＧＸ１４１４によって誘導された、総天然ｄＴＥＲＴ特異的ＩＦＮ−γ応答を示すグラフである。ｐＧＸ１４１４で４回免疫した後のＩＦＮ−γ分泌細胞／１０６脾細胞の頻度を、ＩＦＮ−γＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって決定した。各マウス（１群あたり５匹のマウス）由来の脾細胞を、ＳＹＮＣＯＮ  ｄＴＥＲＴペプチド（配列番号２）、または天然ｄＴＥＲＴペプチド（配列番号７）のいずれかで刺激した。結果を平均±ＳＥＭとして示す。
【図４】図４は、イヌＴＥＲＴワクチン接種プログラムからの酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳｐｏｔ）の結果を示す。７匹のイヌを、１０ｍｇ／ｍｌのｐＧＸ１４１４で免疫した。結果は、０週目（免疫なし、事前採血）、４週目（事前採血後免疫１回）、８週目（事前採血後免疫２回）及び１２週目（事前採血免疫３回）で示す。結果は、ＴＥＲＴ  ＤＮＡワクチン接種が、イヌで細胞媒介免疫応答を誘導することを示す。
【図５】図５Ａは、挿入物として配列番号４を含むプラスミドベクターｐＧＸ０００１である、プラスミドベクターｐＧＸ１４１５の図である。図５Ｂは、指定の酵素で消化したプラスミドｐＧＸ１４１５のゲル電気泳動の結果を示す。
【図６】図６は、トランスフェクトされた細胞におけるイヌＴＥＲＴ−ＰＬ（配列番号５をコードする配列番号４）の高レベルの発現を示す。２９３Ｔ細胞に、配列番号５をコードするｐＶａｘ１またはイヌＴＥＲＴ−ＰＬ  ＤＮＡ構築物（１０μｇ）をトランスフェクトした。トランスフェクションの２日後、細胞を固定し、トランスフェクトされた細胞中でＴＥＲＴの発現のために抗ＴＥＲＴ抗体で染色した。
【図７】図７は、ｄＴＥＲＴ−ＰＬ（ｐＧＸ１４１５として投与）の免疫スケジュールの図である。
【図８】図８は、マウスにおけるｄＴＥＲＴ−ＰＬ（ｐＧＸ１４１５として投与）ワクチンによる細胞性免疫応答の誘導を示す。ｄＴＥＲＴ−ＰＬ（ｐＧＸ１４１５）によって誘導された細胞性免疫応答を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスで調べた。ワクチン（２５μｇ）からの３回目の免疫の１週間後の総ｄＴＥＲＴ特異的ＩＦＮ−γ応答。各マウス由来の脾細胞（１群あたり４匹のマウス）を、ｄＴＥＲＴペプチドプールで別々に刺激した。データは、ｄＴＥＲＴ−ＰＬ  ＤＮＡワクチン接種後の免疫応答の長期持続性を示唆している。結果は、平均±ＳＥＭとしてペプチドプールを合わせて提示する。
【図９】図９は、Ｃ５７／ＢＬ６マウスにおけるｄＴＥＲＴ−ＰＬ（ｐＧＸ１４１５）ＤＮＡワクチンの優性な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープの予測を示す。イヌ特異的ｄＴＥＲＴ−ＰＬ  ＤＮＡプラスミドは、エレクトロポレーションによる３回のワクチン接種後にマウスにおいて有意な細胞性免疫応答を誘発する。イヌＴＥＲＴの高レベルのＩＦＮ−γＴ細胞特異的な免疫優性なエピトープ及び亜優性エピトープが脾臓で観察された。ｄＴＥＲＴ−ＰＬ  ＤＮＡワクチンの免疫優性なエピトープとして、エピトープＦＮＳＶＨＬＲＥＬＳＥＡＥＶＲ（配列番号６）を同定した（ＥＬＩｓｐｏｔを用いたエピトープマッピングを介して）。マトリクスプールの数は、Ｘ軸上で特定される。
【図１０】図１０は、イヌＴＥＲＴ（配列番号５）を発現するＤＮＡ構築物（ｐＧＸ１４１５）による免疫後の体液性免疫応答を示す。（Ａ）酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって示される、免疫マウスの血清中の総ＩｇＧ抗体力価。各群のマウス（ｎ＝５）を５０μｇのｄＴＥＲＴ−ＰＬのＤＮＡで免疫した。（Ｂ）特異性は、マウス由来の免疫血清で処理した、ｄＴＥＲＴをコードするＤＮＡプラスミドワクチンでトランスフェクトした２９３Ｔ細胞における免疫蛍光アッセイ（ＩＦＡ）によって検出した。ＥＬＩＳＡによる抗ＴＥＲＴ総ＩｇＧレベル及びＩＦＡによる特異性は、ｄＴＥＲＴ−ＰＬワクチン接種マウス血清においてｐＶａｘ１血清と比較して観察した。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
詳細な説明
本発明の態様は、特定のがん及び腫瘍を処置または予防するためにカスタマイズすることができるワクチンを含む。抗原は、本明細書ではイヌＴＥＲＴ、イヌ−ＴＥＲＴ、またはｄＴＥＲＴと呼ばれる、Ｃａｎｉｓ  ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ（イヌ）から単離された癌関連抗原テロメラーゼ逆転写酵素のために設計された。例えば、癌関連抗原ｄＴＥＲＴのための抗原コンセンサス（例えば、配列番号５をコードする配列番号４）配列が設計されている。イヌの癌は、ヒトと同様の発生率で起こり、例えば、組織学的外観、腫瘍遺伝学、生物学的行動、及び従来の療法に対する応答を含み、ヒト癌との多くの特徴を共有する。ヒトで観察されるように、ＴＥＲＴ活性は主に腫瘍組織に限定され、大部分の正常なイヌ組織には存在しない。このように、本発明は、哺乳動物、特にイヌにおける癌免疫療法のための抗原としてｄＴＥＲＴコンセンサス配列を利用する。ｄＴＥＲＴ抗原は、例えば、チロシナーゼ（Ｔｙｒ）（黒色腫で優先的に発現される抗原（ＰＲＡＭＥ））、チロシナーゼ関連タンパク質１（Ｔｙｒｐ１）、癌精巣抗原（ＮＹ−ＥＳＯ−１）、Ｂ型肝炎ウイルス抗原、及びウィルムス腫瘍１抗原（ＷＴ−１）などの他の癌関連抗原と組み合わせて、本発明のワクチン中で使用して、カスタマイズされたワクチン予防及び特定のがんの処置を可能にし得る。このワクチンは、処置を必要とする対象のがんの特定の予防または処置のための特定の癌抗原の任意の組み合わせを提供し得る。
【００１３】
組換え癌抗原は、抗原特異的Ｔ細胞応答及び／または高力価抗体応答を誘導し得、それにより、抗原を発現するがんまたは腫瘍に対して誘導されるか、または反応する免疫応答を誘導または誘発し得る。いくつかの実施形態では、誘導または誘発された免疫応答は、細胞性、体液性、または細胞性及び体液性の両方の免疫応答であってもよい。いくつかの実施形態では、誘導または誘発された細胞性免疫応答は、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）及び／または腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）の誘導または分泌を含んでもよい。他の実施形態では、誘導または誘発された免疫応答は、抗原を発現する腫瘍またはがんの増殖を促進する１つ以上の免疫抑制因子、例えば、限定するものではないが、ＭＨＣ提示をダウンレギュレートする因子、抗原特異的調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）をアップレギュレートする因子、ＰＤ−Ｌ１、ＦａｓＬ、サイトカイン、例えば、ＩＬ−１０及びＴＦＧ−β、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連線維芽細胞、免疫抑制細胞によって産生される可溶性因子、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＭＤＳＣ、ＭＣＰ−１、及び免疫チェックポイント分子を低減または阻害し得る。
【００１４】
１．定義
他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、定義を含む本文書が優先する。好ましい方法及び材料は以下に記載されるが、本明細書に記載された方法及び材料と類似または等価な方法及び材料を本発明の実際または試験に使用してもよい。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献は、その全体が参照により組み込まれる。本明細書に開示された材料、方法及び実施例は、例示的なものに過ぎず、限定することを意図するものではない。本明細書で使用する用語は、特定の実施形態のみを説明するためのものであり、限定することを意図するものではない。
【００１５】
本明細書で使用する用語「含む、備える、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む、備える、包含する（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「有している」、「有する」、「し得る」、「含む」、及びそれらの変形は、追加の行為または構造の可能性を排除しない無制限の移行型のフレーズ、用語、または単語であるものとする。単数形「１つの、ある（ａ：不定冠詞）」、「及び（ａｎｄ）」及び「この、その（ｔｈｅ：定冠詞）」は、文脈上他に明確に指示されていない限り、複数の言及を包含する。本開示はまた、明示的に示されているか否かに関わらず、本明細書に提示された実施形態または要素「を備える、含む」、「〜からなる」及び「本質的に〜からなる」他の実施形態も企図する。
【００１６】
本明細書の数値範囲を詳述するために、同じ程度の精度でその間に介在する各数字を明示的に考慮する。例えば、６〜９の範囲については、６と９に加えて７と８の数値が考慮され、６．０〜７．０の範囲では、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、及び７．０の数値が明示的に検討されている。
【００１７】
本明細書で使用される「アジュバント」とは、ＤＮＡプラスミド及び本明細書の以降に記載されるコード核酸配列によってコードされる抗原の免疫原性を増強するために、本明細書に記載のＤＮＡプラスミドワクチンに添加される任意の分子を意味する。
【００１８】
本明細書中で使用される場合、「抗体」とは、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤもしくはＩｇＥクラスの抗体またはその断片、あるいはその誘導体、例としては、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、及び一本鎖抗体、ダイアボディ、二重特異性抗体、二機能性抗体及びそれらの誘導体を意味する。抗体は、哺乳動物の血清試料から単離された抗体、ポリクローナル抗体、アフィニティー精製抗体、またはそれらの混合物（所望のエピトープまたはそれらに由来する配列に対して十分な結合特異性を示す）であってもよい。
【００１９】
本明細書で使用する「コード配列」または「コード核酸」は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸（ＲＮＡまたはＤＮＡ分子）を意味する。コード配列は、核酸が投与される個体または哺乳動物の細胞において発現を指向し得るプロモーター及びポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された開始シグナル及び終結シグナルをさらに含んでもよい。
【００２０】
本明細書で使用する「相補体」または「相補的」とは、ある核酸が、核酸分子のヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体間のワトソン−クリック（例えば、Ａ−Ｔ／Ｕ及びＣ−Ｇ）またはフーグスティーン塩基対形成を意味し得ることを意味する。
【００２１】
本明細書で使用される「コンセンサス」または「コンセンサス配列」は、異なる生物からの同じ遺伝子に対する複数の配列のアライメントの分析に基づくポリペプチド配列を意味する。コンセンサスポリペプチド配列をコードする核酸配列を調製してもよい。コンセンサス配列を含むタンパク質及び／またはそのようなタンパク質をコードする核酸分子を含むワクチンを使用して、抗原に対する幅広い免疫を誘導し得る。
【００２２】
本明細書において交換可能に使用される「エレクトロポレーション」、「電気浸透増強」または「電気運動増強」（「ＥＰ」）は、生体膜における微視的経路（細孔）を誘導するための膜貫通電場パルスの使用を意味する；その存在により、プラスミド、オリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、薬物、イオン、及び水などの生体分子が、細胞膜の一方の側から他方の側へ通過することが可能になる。
【００２３】
核酸配列に関して本明細書で使用される「断片」は、本明細書に開示される抗原と交差反応する哺乳動物において免疫応答を誘発し得るポリペプチドをコードする核酸配列またはその一部を意味する。断片は、以下に示すタンパク質断片をコードする種々のヌクレオチド配列の少なくとも１つから選択されるＤＮＡ断片であってもよい。断片は、下記の核酸配列の１つ以上のうち少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％を含んでもよい。
【００２４】
ポリペプチド配列に関する「断片」または「免疫原性断片」とは、本明細書に開示される抗原と交差反応する哺乳動物において免疫応答を誘発し得るポリペプチドを意味する。断片は、以下の様々なアミノ酸配列の少なくとも１つから選択されるポリペプチド断片であってもよい。コンセンサスタンパク質の断片は、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％のコンセンサスタンパク質を含んでもよい。
【００２５】
本明細書で使用する「遺伝子構築物」という用語は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡまたはＲＮＡ分子を指す。コード配列は、核酸分子が投与される個体の細胞において発現を指向し得るプロモーター及びポリアデニル化シグナルを含む調節エレメントに作動可能に連結された開始シグナル及び終結シグナルを含む。本明細書中で使用される場合、「発現可能な形態」という用語は、個体の細胞中に存在する場合、コード配列が発現されるように、タンパク質をコードするコード配列に作動可能に連結された必要な調節エレメントを含む遺伝子構築物を指す。
【００２６】
本明細書で使用される用語「相同性」とは、ある程度の相補性を指す。部分的相同性または完全相同性（すなわち、同一性）が存在し得る。完全に相補的な配列が標的核酸にハイブリダイズするのを少なくとも部分的に阻害する部分的に相補的な配列は、「実質的に相同」という機能的用語を用いて言及される。ｃＤＮＡまたはゲノムクローンのような二本鎖核酸配列に対して、参照中で用いる場合、「実質的に相同な」という用語は、本明細書中で使用される場合、低ストリンジェンシーの条件下で二本鎖核酸配列の鎖にハイブリダイズし得るプローブを指す。一本鎖核酸配列に関して使用される場合、「実質的に相同な」という用語は、本明細書中で使用される場合、低ストリンジェンシーの条件で、１本鎖核酸鋳型配列にハイブリダイズし得る（すなわち、それに相補的である）プローブを指す。
【００２７】
本明細書で使用される「免疫チェックポイント阻害剤」という用語は、免疫系の任意の構成要素、例えば、ＭＨＣクラス提示、Ｔ細胞提示及び／または分化、Ｂ細胞提示及び／または分化の抑制、ならびに免疫細胞の増殖及び／または分化のためのサイトカイン、ケモカインもしくはシグナル伝達を防止する任意の核酸またはタンパク質を指す。
【００２８】
２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈において本明細書で使用される「同一の」または「同一性」とは、配列が指定された領域にわたって同一である残基の特定のパーセンテージを有することを意味する。パーセンテージは、２つの配列を最適に整列させること、指定された領域にわたって２つの配列を比較すること、一致する位置の数を得るために両方の配列に同一の残基が存在する位置の数を決定すること、適合した位置の総数を指定された領域内の位置の総数で割ること、および結果に１００を掛けて配列同一性のパーセンテージを得ることによって算出され得る。２つの配列が異なる長さであるか、またはアラインメントが１つ以上の互い違いの末端を生成し、比較の特定の領域が単一の配列のみを含む場合、単一配列の残基は、計算の分子ではなく分母に含まれる。ＤＮＡとＲＮＡを比較する場合、チミン（Ｔ）及びウラシル（Ｕ）は同等と見なすことができる。同一性は、手動で行ってもよいし、またはＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ  ２．０のようなコンピュータ配列アルゴリズムを使用して行ってもよい。
【００２９】
本明細書で使用する「免疫応答」は、抗原の導入に応答した宿主の免疫系、例えば哺乳動物の免疫系の活性化を意味する。免疫応答は、細胞性応答もしくは体液性応答、またはその両方の形態であり得る。
【００３０】
本明細書で使用する「核酸」または「オリゴヌクレオチド」または「ポリヌクレオチド」は、互いに共有結合した少なくとも２つのヌクレオチドを意味する。一本鎖の描写はまた、相補鎖の配列を規定する。従って、核酸はまた、示された一本鎖の相補鎖を包含する。所定の核酸と同じ目的のために、核酸の多くのバリアントを使用してもよい。したがって、核酸はまた、実質的に同一の核酸及びその相補物を包含する。一本鎖は、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で標的配列にハイブリダイズし得るプローブを提供する。したがって、核酸はまた、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするプローブも包含する。
【００３１】
核酸は、一本鎖もしくは二本鎖であってもよいし、または二本鎖及び一本鎖配列の両方の部分を含んでもよい。核酸は、ＤＮＡ、ゲノム及びｃＤＮＡ両方、ＲＮＡまたはハイブリッドであってもよく、ここでこの核酸は、デオキシリボヌクレオチドとリボヌクレオチドとの組み合わせ、及びウラシル、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、キサンチンヒポキサンチン、イソシトシン及びイソグアニンを含む塩基の組み合わせを含んでもよい。核酸は、臨床合成法によって得られても、または組み換え法によって得られてもよい。
【００３２】
本明細書で使用する「作動可能に連結された」とは、遺伝子の発現が、それが空間的に連結されているプロモーターの制御下にあることを意味する。プロモーターは、その制御下に遺伝子の５’側（上流）または３’側（下流）に位置してもよい。そのプロモーターとある遺伝子との間の距離は、そのプロモーターと、そのプロモーターが由来する遺伝子において制御する遺伝子との間の距離とほぼ同じであり得る。当技術分野で知られているように、この距離の変動は、プロモーター機能の損失なしで適合され得る。
【００３３】
本明細書で使用される「ペプチド」、「タンパク質」または「ポリペプチド」とは、アミノ酸の連結された配列を意味し得、天然、合成、または天然及び合成の修飾もしくは組み合わせであってもよい。
【００３４】
本明細書で使用される「プロモーター」とは、細胞内の核酸の発現を付与、活性化または増強し得る合成または天然に由来する分子を意味する。プロモーターは、１つ以上の特異的転写調節配列を、発現をさらに増強するため、ならびに／またはそれの空間的発現及び／もしくは一時的発現を改変するために、含んでもよい。プロモーターはまた、転写の開始部位から数千塩基対程度に位置し得る遠位のエンハンサーまたはリプレッサーエレメントを含んでもよい。プロモーターは、ウイルス、細菌、真菌、植物、昆虫及び動物を含む供給源由来であってもよい。プロモーターは、発現が生じる細胞、組織もしくは器官、または発現が生じる発達段階に関して、または生理学的ストレス、病原体、金属イオンもしくは誘発剤などの外部刺激に応答して、構成的にまたは示差的に遺伝子構成要素の発現を調節し得る。プロモーターの代表例としては、バクテリオファージＴ７プロモーター、バクテリオファージＴ３プロモーター、ＳＰ６プロモーター、ｌａｃオペレーター−プロモーター、ｔａｃプロモーター、ＳＶ４０後期プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ＲＳＶ−ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶ  ＩＥプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーターまたはＳＶ４０後期プロモーター、及びＣＭＶ  ＩＥプロモーターが挙げられる。
【００３５】
「シグナルペプチド」及び「リーダー配列」は、本明細書では互換的に使用され、本明細書に記載のタンパク質のアミノ末端に連結され得るアミノ酸配列を指す。シグナルペプチド／リーダー配列は、典型的には、タンパク質の局在化を指向する。本明細書中で使用されるシグナルペプチド／リーダー配列は、好ましくは、それが産生される細胞からのタンパク質の分泌を促進する。シグナルペプチド／リーダー配列は、細胞から分泌される際に、しばしば成熟タンパク質と呼ばれるタンパク質の残りから切断される場合が多い。シグナルペプチド／リーダー配列は、タンパク質のアミノ末端（すなわち、Ｎ末端）に連結されている。
【００３６】
本明細書で使用される「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」とは、核酸の複雑な混合物中などの第１の核酸配列（例えば、プローブ）が第２の核酸配列（例えば、標的）にハイブリダイズする条件を意味する。ストリンジェントな条件は、配列に依存し、異なる状況では異なる。ストリンジェントな条件は、規定されたイオン強度ｐＨで特定の配列の熱融点（Ｔｍ）よりも約５〜１０℃低いように選択され得る。Ｔｍとは、標的に相補的なプローブの５０％が標的配列と平衡状態でハイブリダイズする温度（規定されたイオン強度、ｐＨ及び核酸濃度の下で）であり得る（標的配列は、過剰に存在するので、Ｔｍでプローブの５０％が、平衡状態で占有される）。ストリンジェントな条件とは、塩濃度がｐＨ約７．０〜８．３でナトリウムイオン濃度約０．０１〜１．０Ｍ（または他の塩）などの約１．０Ｍ未満のナトリウムイオンであり、温度は、短いプローブ（例えば、約１０〜５０ヌクレオチド）については少なくとも約３０℃及び長いプローブ（例えば、約５０ヌクレオチド超）について少なくとも約６０℃である条件であり得る。ストリンジェントな条件はまた、ホルムアミドのような不安定化剤の添加によっても達成することができる。選択的または特異的ハイブリダイゼーションの場合、陽性シグナルは、バックグラウンドハイブリダイゼーションの少なくとも２〜１０倍であり得る。例示的なストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は以下を含む：５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、及び１％ＳＤＳで４２℃でインキュベート、または５×ＳＳＣ、１％ＳＤＳ、６５℃でインキュベート、０．２×ＳＳＣ及び０．１％ＳＤＳを用いて、６５℃で洗浄。
【００３７】
本明細書で使用される「対象」とは、本明細書に記載のワクチンで免疫することを望むか、またはその必要がある哺乳動物を意味し得る。哺乳動物は、イヌ、ヒト、チンパンジー、ネコ、ウマ、ウシ、マウスまたはラットであってもよい。
【００３８】
「実質的に相補性」とは、本明細書において用いる場合、第一の配列が、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１８０、２７０、３６０、４５０、５４０、またはそれを超えるヌクレオチドもしくはアミノ酸のある領域にまたがって第二の配列の相補体に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一であることを意味する。
【００３９】
「実質的に同一」とは、本明細書において用いる場合、第一の配列及び第二の配列が、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１８０、２７０、３６０、４５０、５４０、またはそれを超えるヌクレオチドもしくはアミノ酸のある領域にまたがって少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一であるか、または核酸に関しては、第一の配列が第二の配列の相補体に対して実質的に相補性である場合を意味する。
【００４０】
「処置」または「処置する」とは、本明細書において用いる場合、疾患を予防、抑制、抑圧または完全に排除する手段によって疾患から動物を保護することを意味し得る。疾患を予防することは、疾患の発症前に動物に本発明のワクチンを投与することを包含する。疾患を抑制することは、本発明のワクチンを、疾患の誘導後であるがその臨床的出現の前に動物に投与することを包含する。疾患を抑圧することは、疾患の臨床的出現後に動物に本発明のワクチンを投与することを包含する。
【００４１】
核酸に関して本明細書で使用される「バリアント」とは、（ｉ）参照ヌクレオチド配列の一部もしくは断片；（ｉｉ）参照ヌクレオチド配列もしくはその相補体の一部；（ｉｉｉ）参照核酸もしくはその相補体と実質的に同一である核酸；または（ｉｖ）参照核酸、その相補体もしくはそれと実質的に同一な配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸。
【００４２】
アミノ酸の挿入、欠失、または保存的置換によってアミノ酸配列が異なるが、少なくとも１つの生物学的活性を保持するペプチドまたはポリペプチドに関する「バリアント」。バリアントはまた、少なくとも１つの生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有する参照タンパク質と実質的に同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質を意味し得る。アミノ酸の保存的置換、すなわち、アミノ酸を類似の特性（例えば、荷電領域の親水性、程度及び分布）の異なるアミノ酸で置換することは、典型的には軽微な変化を伴うものとして当技術分野で認識されている。これらの小さな変化は、当分野で理解されているように、アミノ酸の疎水性指数を考慮することによって部分的には同定することができる（例えば、Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１５７：１０５−１３２（１９８２）を参照のこと）。アミノ酸の疎水性指数は、その疎水性及び電荷の考慮に基づく。類似の疎水性指数のアミノ酸が置換され得、なおもタンパク質機能を保持し得ることは当該分野で公知である。一態様では、±２の疎水性指数を有するアミノ酸が置換される。またアミノ酸の親水性を用いて、タンパク質が生物学的機能を保持する置換を明らかにしてもよい。ペプチドの文脈におけるアミノ酸の親水性の考慮は、そのペプチドの最大局所平均親水性の計算を可能にし、抗原性及び免疫原性と十分に相関することが報告されている有用な手段である（例えば、米国特許第４，５５４，１０１号を参照のこと）。同様の親水性値を有するアミノ酸の置換は、当技術分野で理解されるように、生物学的活性、例えば免疫原性を保持するペプチドをもたらし得る。互いの±２以内の親水性値を有するアミノ酸で置換を行ってもよい。アミノ酸の疎水性指数及び親水性値の両方とも、そのアミノ酸の特定の側鎖によって影響される。その観察と一致して、生物学的機能に適合するアミノ酸置換は、疎水性、親水性、電荷、サイズ、及び他の特性によって明らかにされるように、アミノ酸、特にそれらのアミノ酸の側鎖の相対的類似性に依存すると理解される。
【００４３】
バリアントは、全遺伝子配列の全長またはその断片にわたって実質的に同一である核酸配列であってもよい。核酸配列は、その遺伝子配列の全長またはその断片にわたって８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり得る。バリアントは、アミノ酸配列の全長またはその断片にわたって実質的に同一であるアミノ酸配列であってもよい。このアミノ酸配列は、そのアミノ酸配列の全長またはその断片にわたって８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であり得る。
【００４４】
「ベクター」とは、本明細書において用いる場合、複製起点を含む核酸配列を意味する。ベクターは、ウイルスベクター、バクテリオファージ、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、または酵母人工染色体（ＹＡＣ）であってもよい。ベクターは、ＤＮＡベクターであっても、またはＲＮＡベクターであってもよい。ベクターは自己複製染色体外ベクターであってもよく、好ましくはＤＮＡプラスミドである。ベクターは、１つ以上の異種核酸配列を含んでもよく、または備えてもよい。
【００４５】
２．ワクチン
本発明は、抗癌ワクチンに関する。このワクチンは、本明細書に記載の１つ以上の癌抗原または１つ以上の癌抗原をコードする１つ以上の核酸分子を含んでもよい。このワクチンは、腫瘍の増殖を防ぎ得る。このワクチンは、腫瘍増殖を低減し得る。ワクチンは、腫瘍細胞の転移を防ぎ得る。いくつかの例では、このワクチンは、肝臓癌、前立腺癌、黒色腫、血液癌（例えば、リンパ腫、多発性骨髄腫及び白血病）、頭頸部癌、グリア芽細胞腫、再発性呼吸器乳頭腫症（ＲＲＰ）、肛門癌、子宮頸癌、脳腫瘍、腎細胞癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、膀胱癌、乳癌、子宮癌、精巣癌、結腸癌、胆嚢癌、喉頭癌、甲状腺癌、胃癌、唾液腺癌、または膵臓癌を処置するために標的され得る。
【００４６】
ワクチンの開発の第一段階は、免疫系によって認識されない自己抗原である癌抗原を同定することである。同定された癌抗原は、免疫系によって認識されるように、自己抗原から外来抗原に変化する。自己抗原から外来抗原への組換え癌抗原の核酸及びアミノ酸の配列の再設計は、免疫系による抗原の寛容を破壊する。寛容を解消するために、以下に記載するように、いくつかの再設計手段を癌抗原に適用してもよい。
【００４７】
コンセンサスな癌抗原をコードする組換え核酸配列を設計するための１つの方法は、天然癌抗原の全体的なアミノ酸配列において特定のアミノ酸を変化させる変異を導入することである。突然変異の導入は、動物対象全体に普遍的に適用することができないほど癌抗原を大幅に変えるわけではないが、結果として生じるアミノ酸配列が寛容を破壊するかまたは免疫応答を生じるために外来抗原とみなされるように十分に変化させる。別の方法は、相当する天然癌抗原に対して９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超える核酸またはアミノ酸配列同一性を有するコンセンサス組換え癌抗原を作製することであり得る。天然癌抗原は、特定のがんまたは癌腫瘍に通常関連する抗原である。癌抗原によって、癌抗原のコンセンサス配列は、哺乳動物種にまたがって、または種のサブタイプ内に、またはウイルス株もしくは血清型にまたがって存在し得る。いくつかの癌抗原は、癌抗原の野生型アミノ酸配列と大きく変化しない。いくつかの癌抗原は、種間で非常に異なる核酸／アミノ酸配列を有し、コンセンサス配列を生成することができない。これらの例では、相当する天然癌抗原に対して９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の核酸またはアミノ酸配列同一性を有する、寛容を破壊し、免疫応答を生成する組換え癌抗原が生成される。
【００４８】
ワクチンの組換え癌抗原は、自己と認識されることはなく、したがって、寛容を破壊する。寛容の破壊は、抗原特異的Ｔ細胞応答及び／または高力価抗体応答を誘導し得、それにより抗原を発現するがんまたは腫瘍に向けられるかまたはそれに対して反応性である免疫応答を誘導または誘発する。いくつかの実施形態では、誘導または誘発された免疫応答とは、細胞性応答、体液性応答、または細胞性及び体液性免疫応答の両方であってもよい。いくつかの実施形態では、誘導または誘発された細胞性免疫応答は、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）及び／または腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）の誘導または分泌を含んでもよい。これに関して、本発明のワクチンは、ワクチンを受けていない未処置の哺乳動物と比較して、増大したレベルの腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）及びインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）を含む哺乳動物における免疫応答を誘導し得る。他の実施形態では、誘導または誘発された免疫応答は、抗原を発現する腫瘍またはがんの増殖を促進する１つ以上の免疫抑制因子、例えば、限定するものではないが、ＭＨＣ提示をダウンレギュレートする因子、抗原特異的調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）をアップレギュレートする因子、ＰＤ−Ｌ１、ＦａｓＬ、サイトカイン、例えば、ＩＬ−１０及びＴＦＧ−β、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連線維芽細胞、免疫抑制細胞によって産生される可溶性因子、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＭＤＳＣ、ＭＣＰ−１、及び免疫チェックポイント分子を低減または阻害し得る。
【００４９】
特定の実施形態では、ワクチンは、（１）単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）産生をブロックする抗体を生成するためにＢ細胞応答を介した体液性免疫を誘導し、それによって骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）を遅らせ腫瘍増殖を抑制することによって、腫瘍細胞の消滅を媒介し、腫瘍細胞の増殖を妨げ；（２）ＣＤ８＋（ＣＴＬ）のような細胞傷害性Ｔリンパ球を増大させて、腫瘍細胞を攻撃し殺傷し；（３）Ｔヘルパー細胞応答を増大させ；（４）ＩＦＮ−γ及びＴＦＮ−α、または好ましくは上記の全てを介して炎症反応を増大し得る。ワクチンは、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、及び４５％まで無腫瘍生存を延長し得る。このワクチンは、免疫後、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％及び６０％まで無腫瘍生存を延長し得る。このワクチンは、骨髄由来免疫抑制細胞によって分泌されるサイトカインである単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１）の増大を予防及び阻止し得る。ワクチンは、腫瘍生存を３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％及び６０％まで延長し得る。
【００５０】
このワクチンは、ワクチンを投与された対象における細胞性免疫応答を、ワクチンを投与されていない対象における細胞性免疫応答と比較して、約５０倍〜約６０００倍、約５０倍〜約５５００倍、約５０倍〜約５０００倍、約５０倍〜約４５００倍、約１００倍〜約６０００倍、約１５０倍〜約６０００倍、約２００倍〜約６０００倍、約２５０倍〜約６０００倍、または約３００倍〜約６０００倍増大し得る。いくつかの実施形態では、このワクチンは、ワクチンを投与されていない対象における細胞性免疫応答と比較して、約５０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍、４００倍、４５０倍、５００倍、５５０倍、６００倍、６５０倍、７００倍、７５０倍、８００倍、８５０倍、９００倍、９５０倍、１０００倍、１１００倍、１２００倍、１３００倍、１４００倍、１５００倍、１６００倍、１７００倍、１８００倍、１９００倍、２０００倍、２１００倍、２２００倍、２３００倍、２４００倍、２５００倍、２６００倍、２７００倍、２８００倍、２９００倍、３０００倍、３１００倍、３２００倍、３３００倍、３４００倍、３５００倍、３６００倍、３７００倍、３８００倍、３９００倍、４０００倍、４１００倍、４２００倍、４３００倍、４４００倍、４５００倍、４６００倍、４７００倍、４８００倍、４９００倍、５０００倍、５１００倍、５２００倍、５３００倍、５４００倍、５５００倍、５６００倍、５７００倍、５８００倍、５９００倍、または６０００倍までワクチンを投与された対象における細胞性免疫応答を増大し得る。
【００５１】
このワクチンは、ワクチンを投与されていない対象におけるＩＦＮ−γレベルと比較して、約５０倍〜約６０００倍、約５０倍〜約５５００倍、約５０倍〜約５０００倍、約５０倍〜約４５００倍、約１００倍〜約６０００倍、約１５０倍〜約６０００倍、約２００倍〜約６０００倍、約２５０倍〜約６０００倍、または約３００倍〜約６０００倍まで、ワクチンを投与された対象において、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）レベルを増大し得る。いくつかの実施形態では、このワクチンは、ワクチンを投与されていない対象におけるＩＦＮ−γレベルと比較して、約５０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍、４００倍、４５０倍、５００倍、５５０倍、６００倍、６５０倍、７００倍、７５０倍、８００倍、８５０倍、９００倍、９５０倍、１０００倍、１１００倍、１２００倍、１３００倍、１４００倍、１５００倍、１６００倍、１７００倍、１８００倍、１９００倍、２０００倍、２１００倍、２２００倍、２３００倍、２４００倍、２５００倍、２６００倍、２７００倍、２８００倍、２９００倍、３０００倍、３１００倍、３２００倍、３３００倍、３４００倍、３５００倍、３６００倍、３７００倍、３８００倍、３９００倍、４０００倍、４１００倍、４２００倍、４３００倍、４４００倍、４５００倍、４６００倍、４７００倍、４８００倍、４９００倍、５０００倍、５１００倍、５２００倍、５３００倍、５４００倍、５５００倍、５６００倍、５７００倍、５８００倍、５９００倍、または６０００倍までこのワクチンを投与された対象のＩＦＮ−γレベルを増大し得る。
【００５２】
ワクチンは、ＤＮＡワクチンであってもよい。ＤＮＡワクチンは、例えば、米国特許第５，５９３，９７２号、同第５，７３９，１１８号、同第５，８１７，６３７号、同第５，８３０，８７６号、同第５，９６２，４２８号、同第５，９８１，５０５号、同第５，５８０，８５９号、同第５，７０３，０５５号、及び同第５，６７６，５９４号に開示されている。ＤＮＡワクチンは、染色体への組込みを阻害する要素または試薬をさらに含んでもよい。
【００５３】
ワクチンは、１つ以上の癌抗原のＲＮＡ分子であってもよい。ＲＮＡワクチンを細胞に導入してもよい。
【００５４】
本発明のワクチンは、ワクチン自体が病気も死も引き起こさないように安全である；病気に対して防御する；中和抗体を誘導する；保護Ｔ細胞応答を誘導する；ならびに、投与の容易さ、副作用の少ない、生物学的安定性、及び１回当たりの低コストを提供するなどの有効なワクチンに必要な特徴を有し得る。このワクチンは、本明細書に記載の癌抗原を含有することにより、これらの特徴のいくつかまたは全てを達成し得る。
【００５５】
ａ．ｄＴＥＲＴ
本発明のワクチンは、癌抗原ｄＴＥＲＴ、その断片、またはそのバリアントを含んでもよい。ｄＴＥＲＴは、テロメア末端にＴＴＡＧＧＧタグを合成して染色体短縮による細胞死を防ぐ、イヌ（Ｃａｎｉｓ  ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）テロメラーゼ逆転写酵素である。ｄＴＥＲＴタンパク質は、１１２３個のアミノ酸残基からなり、ＴＥＲＴファミリーメンバーの全ての特徴モチーフを含む。以前に同定された哺乳動物のＴＥＲＴタンパク質との配列比較によって、ｄＴＥＲＴがヒトＴＥＲＴ（ｈＴＥＲＴ）タンパク質と最高レベルの配列類似性を示すことが実証される（例えば、Ｎａｓｉｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｇｅｎｅ、３３６（１）：１０５−１３（２００４）を参照のこと）。ｄＴＥＲＴアミノ酸配列が同定されており、そのいくつかはＧｅｎＢａｎｋデータベースに寄託されている（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１０２６８００、ＮＰ＿００１０２６８００．１、ＸＰ＿００４４１１６８６、ＸＰ＿００４７６８４４６、ＸＰ＿００４８１２５５６、ＥＦＢ１４７８１、ＸＰ＿００４８１２５５４、ＸＰ＿００４７６８４４７、ＸＰ＿００４４４００９３、ＸＰ＿００４４１１６８７、ＸＰ＿００４８１２５５５、ＸＰ＿００４２７４５５８、ＮＰ＿９３７９８３、ＡＡＣ５１７２４、ＮＰ＿００１１７７８９６、ＸＰ＿００４３８０３４０、ＮＰ＿００１０３９７０７、ＸＰ＿００３９５０５４３、ＮＰ＿００１２３１２２９、及びＤＡＡ１７７５６を参照のこと）。過剰増殖性イヌ細胞及びヒト細胞は、それぞれｄＴＥＲＴ及びｈＴＥＲＴの異常に高い発現を有し得る。ｈＴＥＲＴ癌抗原は、例えば、米国特許出願公開第２０１４／０１８６３８４号及び国際特許出願公開第２０１４／１４４８８５号にさらに記載されている。
【００５６】
さらに、ｈＴＥＲＴ遺伝子でトランスフェクトされた樹状細胞におけるｈＴＥＲＴ発現は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞を誘導し、ＣＤ４＋Ｔ細胞を抗原特異的様式で誘発し得るので、これによって、ｄＴＥＲＴ抗原は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）内で発現されて、老化を遅延させ、本明細書中に記載されるような免疫療法方法において選択された抗原を提示する能力を維持することが示唆される。
【００５７】
ｄＴＥＲＴ抗原は、限定するものではないが、黒色腫、前立腺癌、肝臓癌、子宮頸癌、再発性呼吸乳頭腫症（ＲＲＰ）、肛門癌、頭頸部癌、血液癌（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫）、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、食道扁平上皮癌、膀胱癌、結腸直腸癌、胃癌、肝細胞癌、脳腫瘍（例えば、グリア芽細胞腫）、膵臓癌、滑膜癌、精巣癌及び胃癌を含む多数のイヌの癌に関連するか、またはそれらによって発現され得る。したがって、本発明のワクチンは、本明細書に記載のｄＴＥＲＴ抗原を含む場合、任意の前述のがんに罹患している哺乳動物対象（例えば、イヌ）の処置に使用してもよい。
【００５８】
ｄＴＥＲＴ抗原は、抗原特異的Ｔ細胞応答及び／または高力価抗体応答を誘導し得、それにより抗原を発現するがんまたは腫瘍に向かうか、またはそれに反応する免疫応答を誘導または誘発し得る。いくつかの実施形態では、誘導または誘発された免疫応答は、細胞性応答、体液性応答、または細胞性及び体液性免疫応答の両方であり得る。いくつかの実施形態では、誘導または誘発された細胞性免疫応答は、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）及び／または腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）の誘導または分泌を含んでもよい。これに関して、本発明のワクチンは、ワクチンを受けていない未処置の哺乳動物と比較して、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）及びインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）のレベルの上昇を含む哺乳動物において炎症応答を誘導し得る。他の実施形態では、誘導または誘発された免疫応答は、抗原を発現する腫瘍またはがんの増殖を促進する１つ以上の免疫抑制因子、例えば、限定するものではないが、ＭＨＣ提示をダウンレギュレートする因子、抗原特異的調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）をアップレギュレートする因子、ＰＤ−Ｌ１、ＦａｓＬ、サイトカイン、例えば、ＩＬ−１０及びＴＦＧ−β、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連線維芽細胞、免疫抑制細胞によって産生される可溶性因子、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＭＤＳＣ、ＭＣＰ−１、及び免疫チェックポイント分子を、低減または阻害し得る。
【００５９】
ｄＴＥＲＴ抗原は、それらを抗ｄＴＥＲＴ免疫応答が誘導され得る免疫原として特に有効にするエピトープを含んでもよい。例えば、このエピトープは、アミノ酸配列ＦＮＳＶＨＬＲＥＬＳＥＡＥＶＲ（配列番号６）を含んでもよい。このエピトープは、配列番号６であってもよい。ｄＴＥＲＴ抗原は、全長ｄＴＥＲＴ翻訳産物、そのバリアント、その断片、またはそれらの組み合わせを含んでもよい。一実施形態では、ｄＴＥＲＴ抗原は、コンセンサスアミノ酸配列を含む。
【００６０】
ｄＴＥＲＴ抗原またはコンセンサスｄＴＥＲＴ抗原をコードする核酸配列は、コドン用法及び相当するＲＮＡ転写物に関して最適化することができる。ｄＴＥＲＴ抗原またはコンセンサスｄＴＥＲＴ抗原をコードする核酸は、宿主細胞、好ましくは哺乳動物細胞における発現のためにコドン最適化及び／またはＲＮＡ最適化することができる。いくつかの実施形態では、ｄＴＥＲＴ抗原またはコンセンサスｄＴＥＲＴ抗原をコードする核酸配列は、翻訳の効率を高めるためにＫｏｚａｋ配列（例えば、ＧＣＣ  ＡＣＣ）を含んでもよい。ｄＴＥＲＴ抗原またはコンセンサスｄＴＥＲＴ抗原をコードする核酸は、翻訳終結の効率を高めるために複数の停止コドン（例えば、ＴＧＡ  ＴＧＡ）を含んでもよい。
【００６１】
ｄＴＥＲＴ抗原またはコンセンサスｄＴＥＲＴ抗原をコードする核酸はまた、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）リーダー配列をコードし得る。ｄＴＥＲＴ抗原またはコンセンサスｄＴＥＲＴ抗原をコードする核酸は、ＩｇＥリーダー配列のアミノ酸配列が、ペプチド結合によってｄＴＥＲＴ抗原またはコンセンサスｄＴＥＲＴ抗原のアミノ酸配列に連結されるように、ＩｇＥリーダー配列をさらにコードし得る。いくつかの実施形態では、ｄＴＥＲＴ抗原またはコンセンサスｄＴＥＲＴ抗原をコードする核酸は、ＩｇＥリーダー配列をコードするヌクレオチド配列がないか、または含まない。
【００６２】
いくつかの実施形態では、ｄＴＥＲＴ抗原またはコンセンサスｄＴＥＲＴ抗原をコードする核酸は、異種核酸配列であるか、及び／または１つ以上の異種核酸配列を含んでもよい。ｄＴＥＲＴ抗原またはコンセンサスｄＴＥＲＴ抗原をコードする核酸は、ｄＴＥＲＴ抗原またはコンセンサスｄＴＥＲＴ抗原のアミノ酸配列中の１つ個以上のアミノ酸または残基がそれぞれ置換されるか、または別のアミノ酸もしくは残基で置換されるように、野生型ｄＴＥＲＴ抗原に対して変異されてもよい。ｄＴＥＲＴ抗原またはコンセンサスｄＴＥＲＴ抗原をコードする核酸は、ｄＴＥＲＴ抗原またはコンセンサスｄＴＥＲＴ抗原のアミノ酸配列中の１つ以上の残基が、それぞれ別の残基に置換または置換され、これにより、ｄＴＥＲＴ抗原もしくはコンセンサスｄＴＥＲＴ抗原、ｄＴＥＲＴ抗原もしくはコンセンサスｄＴＥＲＴ抗原、またはそれらの組み合わせをコードする核酸を投与された哺乳動物のｄＴＥＲＴに免疫系がもはや寛容でなくなるように、野生型ｄＴＥＲＴ抗原に対して変異されてもよい。一実施形態では、例えば、ｄＴＥＲＴ抗原またはコンセンサスｄＴＥＲＴ抗原をコードする核酸は、ｄＴＥＲＴアミノ酸配列が以下のアミノ酸置換：Ｒ５７９Ｙ、Ｄ９９６Ｙ、Ｋ６３３Ａ、Ｒ６３８Ａ、Ｄ７１９Ａ、Ｙ７２４Ａ及び／またはＤ８７６Ａのうちの１つ以上を含むように野性型ｄＴＥＲＴ抗原に対して変異されてもよい。好ましくは、ｄＴＥＲＴ抗原またはコンセンサスｄＴＥＲＴ抗原をコードする核酸は、ｄＴＥＲＴアミノ酸配列が、以下のアミノ酸置換：Ｒ５７９Ｙ、Ｄ９９６Ｙ、Ｋ６３３Ａ、Ｒ６３８Ａ、Ｄ７１９Ａ、Ｙ７２４Ａ及びＤ８７６Ａの全てを含むように、野生型ｄＴＥＲＴ抗原に対して変異される。いかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、置換Ｒ５７９Ｙ及びＤ９９６Ｙは、寛容破壊に関与し（例えば、Ｇｒｏｓｓら、Ｊ  Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１１３：４２５−４３３（２００４））、Ｋ６３３Ａ、Ｒ６３８Ａ、Ｄ７１９Ａ、Ｙ７２４Ａ及びＤ８７６Ａの置換は、テロメラーゼ活性の消失に関与している（例えば、Ｗｅｉｎｒｉｃｈら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、１７：４９８−５０２（１９９７）参照）と考えられている。
【００６３】
コンセンサスｄＴＥＲＴ抗原をコードする核酸配列は、例えば配列番号２のアミノ酸配列をコードする配列番号１を含んでもよい。配列番号１は、ＩｇＥリーダー配列に連結されたｄＴＥＲＴタンパク質をコードする。他の実施形態では、ｄＴＥＲＴタンパク質は、ＩｇＥリーダー配列を含まなくてもよいし、または結合していなくてもよい。配列番号１は図１に示され、配列番号２は図２に示される。
【００６４】
いくつかの実施形態では、ｄＴＥＲＴ抗原をコードする核酸配列は、配列番号１に記載の核酸配列の全長にわたって、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を含んでもよい。他の実施形態では、ｄＴＥＲＴ抗原をコードする核酸配列は、配列番号２に記載のアミノ酸配列の全長にわたり、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする核酸配列であってもよい。ｄＴＥＲＴ抗原のアミノ酸配列は、配列番号２に記載のアミノ酸配列の全長にわたり、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列であってもよい。
【００６５】
いくつかの実施形態は、ｄＴＥＲＴタンパク質に相同なタンパク質、ｄＴＥＲＴタンパク質の免疫原性断片、及び相同タンパク質の免疫原性断片をコードする核酸配列に関する。他の実施形態では、本発明は、配列に対して最大９５％の相同性、配列に対して最大９６％の相同性、配列に対して最大９７％の相同性、配列に対して最大９８％の相同性、及び配列に対して最大９９％の相同性を有する免疫原性タンパク質をコードする核酸分子を提供する。同様に、本明細書に記載の免疫原性断片をコードする核酸配列及び本明細書に記載のタンパク質に相同なタンパク質の免疫原性断片も提供される。
【００６６】
いくつかの実施形態は、本明細書の核酸コード配列と９５％の相同性を有する免疫原性タンパク質をコードする核酸分子に関する。いくつかの実施形態は、本明細書の核酸コード配列と９６％の相同性を有する免疫原性タンパク質をコードする核酸分子に関する。いくつかの実施形態は、本明細書における核酸コード配列と９７％の相同性を有する免疫原性タンパク質をコードする核酸分子に関する。いくつかの実施形態は、本明細書における核酸コード配列と９８％の相同性を有する免疫原性タンパク質をコードする核酸分子に関する。いくつかの実施形態は、本明細書における核酸コード配列と９９％の相同性を有する免疫原性タンパク質をコードする核酸分子に関する。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示されるコンセンサスタンパク質のコード配列と相同である、本明細書に開示されるコード配列を有する核酸分子は、本明細書に開示される相同タンパク質配列をコードするコード配列の５’末端に連結されたＩｇＥリーダー配列をコードする配列を含む。
【００６７】
いくつかの実施形態は、全長ｄＴＥＲＴタンパク質、ｄＴＥＲＴタンパク質の免疫原性断片、及びｄＴＥＲＴタンパク質と同一性を有するタンパク質の免疫原性断片と特定のパーセント同一性を有するタンパク質をコードする核酸配列に関する。他の実施形態では、本発明は、全長ｄＴＥＲＴ配列に対して最大８０％の同一性、全長ｄＴＥＲＴ配列に対して最大８５％の同一性、全長ｄＴＥＲＴ配列に対して最大９０％の同一性、全長ｄＴＥＲＴ配列に対して最大９１％の同一性、全長ｄＴＥＲＴ配列に対して最大９２％の同一性、全長ｄＴＥＲＴ配列に対して最大９３％の同一性、全長ｄＴＥＲＴ配列に対して最大９４％の同一性、全長ｄＴＥＲＴ配列に対して最大９５％の同一性、全長ｄＴＥＲＴ配列に対して最大９６％の同一性、全長ｄＴＥＲＴ配列に対して最大９７％の同一性、全長ｄＴＥＲＴ配列に対して９８％の同一性、全長配列に対して最大９９％の同一性を有する免疫原性タンパク質をコードする核酸分子を提供する。同様に、本明細書に記載の免疫原性断片をコードする核酸配列、及び本明細書に記載のｄＴＥＲＴタンパク質に対して上記で示したものと同様の同一性パーセントを有するタンパク質の免疫原性断片も提供される。
【００６８】
いくつかの実施形態は、配列番号１の断片に関する。断片は、配列番号１の少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％であってもよい。断片は、配列番号１の断片に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％相同であってもよい。断片は、配列番号１の断片に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であってもよい。いくつかの実施形態では、断片は、例えばＩｇＥリーダーのような免疫グロブリンリーダーなどのリーダー配列をコードする配列を含む。いくつかの実施形態において、断片は、リーダー配列をコードするコード配列を含まない。いくつかの実施形態では、断片は、例えばＩｇＥリーダーのようなリーダー配列をコードするコード配列を含まない。
【００６９】
別の実施形態では、ｄＴＥＲＴ抗原のアミノ酸配列は、ＩｇＥリーダーに連結されたｄＴＥＲＴタンパク質のアミノ酸配列を含む配列番号２を含む。ＩｇＥリーダーに連結されたｄＴＥＲＴタンパク質のアミノ酸配列はまた、ヒトインフルエンザヘマグルチニン（ＨＡ）タグに連結されてもよい。
【００７０】
本発明のいくつかの実施形態は、配列番号２に相同であるタンパク質に関する。いくつかの実施形態は、配列番号２に示されるアミノ酸配列と９５％相動性を有する免疫原性タンパク質に関する。いくつかの実施形態は、配列番号２に記載のアミノ酸配列と９６％の相同性を有する免疫原性タンパク質に関する。いくつかの実施形態は、配列番号２に記載のアミノ酸配列と９７％の相同性を有する免疫原性タンパク質に関する。いくつかの実施形態は、配列番号２に記載のアミノ酸配列と９８％の相同性を有する免疫原性タンパク質に関する。いくつかの実施形態は、いくつかの実施形態は、配列番号２に記載のアミノ酸配列と９９％の相同性を有する免疫原性タンパク質に関する。
【００７１】
いくつかの実施形態は、配列番号２と同一であるタンパク質に関する。いくつかの実施形態は、配列番号２に記載の全長アミノ酸配列と８０％同一であるアミノ酸配列を有する免疫原性タンパク質に関する。いくつかの実施形態は、配列番号２に記載の全長アミノ酸配列と８５％同一であるアミノ酸配列を有する免疫原性タンパク質に関する。いくつかの実施形態は、配列番号２に記載の全長アミノ酸配列と９０％同一であるアミノ酸配列を有する免疫原性タンパク質に関する。いくつかの実施形態は、配列番号２に記載の全長アミノ酸配列と９１％同一であるアミノ酸配列を有する免疫原性タンパク質に関する。いくつかの実施形態は、配列番号２に記載の全長アミノ酸配列と９２％同一であるアミノ酸配列を有する免疫原性タンパク質に関する。いくつかの実施形態は、配列番号２に記載の全長アミノ酸配列と９３％同一であるアミノ酸配列を有する免疫原性タンパク質に関する。いくつかの実施形態は、配列番号２に記載の全長アミノ酸配列と９４％同一であるアミノ酸配列を有する免疫原性タンパク質に関する。いくつかの実施形態は、配列番号２に記載の全長アミノ酸配列と９５％同一であるアミノ酸配列を有する免疫原性タンパク質に関する。いくつかの実施形態は、配列番号２に記載の全長アミノ酸配列と９６％同一であるアミノ酸配列を有する免疫原性タンパク質に関する。いくつかの実施形態は、配列番号２に記載の全長アミノ酸配列と９７％同一であるアミノ酸配列を有する免疫原性タンパク質に関する。いくつかの実施形態は、配列番号２に記載の全長アミノ酸配列と９８％同一であるアミノ酸配列を有する免疫原性タンパク質に関する。いくつかの実施形態は、配列番号２に記載の全長アミノ酸配列と９９％同一であるアミノ酸配列を有する免疫原性タンパク質に関する。いくつかの実施形態では、このタンパク質はリーダー配列を含まない。いくつかの実施形態では、このタンパク質はＩｇＥリーダー配列を含まない。
【００７２】
タンパク質の断片は、タンパク質のうち少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を含んでもよい。配列番号２の免疫原性断片が提供されてもよい。免疫原性断片は、配列番号２のうち少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％を含んでもよい。いくつかの実施形態では、断片は、例えば、ＩｇＥリーダーのような免疫グロブリンリーダーなどのリーダー配列を含む。いくつかの実施形態では、断片はリーダー配列を含まない。いくつかの実施形態では、断片は、例えばＩｇＥリーダー配列のようなリーダー配列を含まない。
【００７３】
配列番号２の免疫原性断片と相同なアミノ酸配列を有するタンパク質の免疫原性断片が提供され得る。このような免疫原性断片は、配列番号２に対して９５％以上相同であるタンパク質のうち、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を含んでもよい。いくつかの実施形態は、本明細書中のタンパク質配列の免疫原性断片と９６％の相同性を有する免疫原性断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書中のタンパク質配列の免疫原性断片と９７％の相同性を有する免疫原性断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のタンパク質配列の免疫原性断片と９８％の相同性を有する免疫原性断片に関する。いくつかの実施形態は、本明細書のタンパク質配列の免疫原性断片と９９％の相同性を有する免疫原性断片に関する。いくつかの実施形態では、断片は、例えば、ＩｇＥリーダーのような免疫グロブリンリーダーなどのリーダー配列を含む。いくつかの実施形態では、断片はリーダー配列を含まない。いくつかの実施形態では、断片は、例えばＩｇＥリーダーのようなリーダー配列を含まない。
【００７４】
配列番号２の免疫原性断片と同一のアミノ酸配列を有するタンパク質の免疫原性断片が提供され得る。このような免疫原性断片は、配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるタンパク質の少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％を含んでもよい。いくつかの実施形態では、断片は、例えば、ＩｇＥリーダーのような免疫グロブリンリーダーなどのリーダー配列を含む。いくつかの実施形態では、断片はリーダー配列を含まない。いくつかの実施形態では、断片は、例えばＩｇＥリーダーのようなリーダー配列を含まない。
【００７５】
シグナルペプチドまたはリーダー配列をタンパク質のＮ末端に連結することに関して本明細書で言及するように、シグナルペプチド／リーダー配列は、シグナルペプチドコード配列なしでタンパク質をコードする核酸の配列の開始コドンによってコードされる、タンパク質のＮ末端メチオニンを置換する。
【００７６】
配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む４５以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む６０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む７５以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む９０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１２０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１５０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１８０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２１０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２４０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２７０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３００以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３６０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む４２０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む４８０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む５４０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む６００以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３００以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む６６０個以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む７２０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む７８０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む８４０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む９００以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む９６０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１０２０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１０８０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１１４０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１２００以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１２６０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１３２０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１３８０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１４４０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、好ましくは、免疫優性なエピトープをコードする配列を含む１５００以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１５６０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１６２０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１６８０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１７４０個またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１８００またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１８６０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１９２０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１９８０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２０４０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２１００またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２１６０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２２２０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２２８０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２３４０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２４００またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２４６０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２５２０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２５８０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２６４０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２７００またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２７６０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２８２０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２８８０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２９４０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３０００以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３０６０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３１２０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３１８０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３２４０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３３００またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３３６０以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３４２０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３４８０またはそれ以上のヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、ＩｇＥリーダー配列のコード配列を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号１の断片は、ＩｇＥリーダー配列のコード配列を含まない。
【００７７】
断片は、３０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では４０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では５０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では６０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では７５ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では９０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１２０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１５０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１８０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では２１０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では２４０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では２７０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では３００ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では３６０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では４２０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では４８０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では５４０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では６００ヌクレオチド未満、６６０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では７２０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では７８０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では８４０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では９００ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では９６０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１０２０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１０８０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１１４０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１２００ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１２６０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１３２０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１３８０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１４４０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１５００ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１５６０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１６２０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１６８０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１７４０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１８００ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では１８６０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では、１９２０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では、１９８０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では、２０４０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では２１００ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では２１６０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では２２２０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では２２８０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では２３４０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態ではより少ない２４００ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では２４６０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では２５２０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では２５８０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では２６４０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では２７００ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では２７６０未満、いくつかの実施形態では２８２０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では２８６０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では２９４０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では３０００ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では３０６０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では３１２０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では３１８０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では３２４０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では３３００ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では３３６０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では３４２０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では３４８０ヌクレオチド未満、いくつかの実施形態では３５１０ヌクレオチド未満を含んでもよい。
【００７８】
配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１５個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２または配列番号５の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２５個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む、３５個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む４０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む４５個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む５０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む６０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む６５個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む７０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む９０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１２０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１５０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１８０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２１０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２４０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む２７０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３００個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３３０またはそれ個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３６０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む３９０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む４２０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む４５０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む４８０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む５１０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む５４０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む５７０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む６００個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む６３０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む６６０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む６９０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、好ましくは、免疫優性なエピトープをコードする配列を含む、７２０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む７５０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む７８０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む８１０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む８４０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む８７０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む９００個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む９３０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む９６０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む９９０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１０２０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１０５０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、免疫優性なエピトープをコードする配列を好ましくは含む１０８０個以上のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、ＩｇＥリーダー配列のコード配列を含んでもよい。いくつかの実施形態では、配列番号２の断片は、ＩｇＥリーダー配列のコード配列を含まない。
【００７９】
断片は、１５アミノ酸未満、いくつかの実施形態では２０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では２４アミノ酸未満、いくつかの実施形態では３０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では３６アミノ酸未満、いくつかの実施形態では４２アミノ酸未満、いくつかの実施形態では４８アミノ酸未満、いくつかの実施形態では５４アミノ酸未満、いくつかの実施形態では６０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では７２アミノ酸未満、いくつかの実施形態では９０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では１２０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では１５０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では１８０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では２１０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では２４０アミノ酸未満、２６０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では２９０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では３２０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では３５０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では３８０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では４１０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では４４０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では４７０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では５００アミノ酸未満、いくつかの実施形態では５３０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では５６０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では５９０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では６２０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では６５０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では６８０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では７１０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では７４０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では７７０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では８００アミノ酸未満、いくつかの実施形態では８３０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では８６０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では８９０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では９２０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では９５０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では９８０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では１０１０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では、１０４０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では１０７０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では１２００アミノ酸未満、いくつかの実施形態では１２３０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では１２６０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では１２９０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では１３２０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では１３５０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では１３８０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では１４１０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では１４４０アミノ酸未満、いくつかの実施形態では１４７０個未満のアミノ酸、およびいくつかの実施形態では１５００個未満のアミノ酸を含んでもよい。
【００８０】
ｂ．追加の癌抗原
本発明のワクチンは、上記のｄＴＥＲＴ抗原に加えて、１つ以上の癌抗原を含んでもよいし、またはコードしてもよい。これに関して、１つ以上のさらなる癌抗原は、核酸配列、アミノ酸配列、またはそれらの組み合わせであってもよい。核酸配列は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、その改変体、その断片、またはそれらの組み合わせであってもよい。核酸配列はまた、ペプチド抗原結合によって癌抗原に連結されたリンカーまたはタグ配列をコードするさらなる配列を含んでもよい。アミノ酸配列は、タンパク質、ペプチド、そのバリアント、その断片、またはそれらの組み合わせであってもよい。１つ以上のさらなる癌抗原は、組換え癌抗原であってもよい。
【００８１】
３．免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせたワクチン
免疫チェックポイント分子の阻害剤は、核酸配列、アミノ酸配列、低分子、またはそれらの組み合わせであってもよい。核酸配列は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、そのバリアント、その断片、またはそれらの組み合わせであってもよい。核酸はまた、ペプチド結合によって免疫チェックポイントインヒビターに連結されたリンカーまたはタグ配列をコードするさらなる配列を含んでもよい。低分子は、低分子量、例えば８００ダルトン未満のもの、酵素基質として作用し得る有機または無機の化合物、タンパク質または核酸によって結合されたリガンド（またはその類似体）、または生物学的プロセスのレギュレーターであってもよい。アミノ酸配列は、タンパク質、ペプチド、そのバリアント、その断片、またはそれらの組み合わせであってもよい。
【００８２】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗体、そのバリアント、その断片、またはそれらの組み合わせをコードする１つ以上の核酸配列であってもよい。他の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗体、そのバリアント、その断片、またはそれらの組み合わせであってもよい。
【００８３】
４．ワクチン構築物及びプラスミド
本発明のワクチンは、上記の抗原及び／または抗体をコードする核酸構築物またはプラスミドを含んでもよい。核酸構築物またはプラスミドは、１つ以上の異種核酸配列を包含しても、または含んでもよい。本明細書において、上記の抗原及び／または抗体をコードする核酸配列を含み得る遺伝子構築物が提供される。遺伝子構築物は、機能する染色体外分子として細胞内に存在してもよい。遺伝子構築物は、セントロメア、テロメアまたはプラスミドまたはコスミドを含む線状ミニ染色体であってもよい。遺伝子構築物は、１つ以上の異種核酸配列を包含しても、または含んでもよい。
【００８４】
遺伝子構築物は、上記の抗原及び／または抗体を任意の順序で発現するプラスミドの形態であってもよい。
【００８５】
遺伝子構築物はまた、組換えアデノウイルス、組換えアデノウイルス関連ウイルス（ＡＡＶ）及び組換えワクシニアウイルスを含む組換えウイルスベクターのゲノムの一部であってもよい。遺伝子構築物は、弱毒化された生きた微生物中の遺伝物質の一部であってもまたは細胞中に存在する組換え微生物のベクターであってもよい。
【００８６】
遺伝子構築物は、核酸のコード配列の遺伝子発現のための調節エレメントを含んでもよい。調節エレメントは、プロモーター、エンハンサー、開始コドン、停止コドン、またはポリアデニル化シグナルであってもよい。
【００８７】
核酸配列は、ベクターであってもよい遺伝子構築物を構成し得る。ベクターは、哺乳動物の免疫応答を誘発するのに有効な量で、哺乳動物の細胞において上記の抗原及び／または抗体を発現し得る。ベクターは組換え体であってもよい。ベクターは、上記の抗原及び／または抗体をコードする１つ以上の異種核酸分子を含んでもよい。ベクターはプラスミドであってもよい。ベクターは、上記の抗原及び／または抗体をコードする１つ以上の核酸分子で宿主細胞をトランスフェクトするために有用であり得、このトランスフェクトされた宿主細胞は、上記の抗原及び／または抗体が発現される条件下で培養及び維持される。
【００８８】
コード配列は、安定性及び高レベルの発現のために最適化してもよい。ある場合には、コドンは、分子内結合に起因して形成されるようなＲＮＡにおける二次構造形成を減少させるように選択される。
【００８９】
ベクターは、上記の抗原及び／または抗体をコードする１つ以上の異種核酸分子を含んでもよく、かつ１つ以上の癌抗原コード配列（複数可）の上流であり得る開始コドン、ならびに上記の抗原及び／または抗体のコード配列（複数可）の下流であり得る終止コドンをさらに含んでもよい。開始コドン及び終止コドンは、上記の抗原及び／または抗体のコード配列（複数可）とインフレームであってもよい。ベクターはまた、上記の抗原及び／または抗体のコード配列（複数可）に作動可能に連結されたプロモーターを含んでもよい。上記の抗原及び／または抗体のコード配列（複数可）に作動可能に連結されたプロモーターは、任意の適切なプロモーター、例としては、限定するものではないが、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）由来のプロモーター、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）プロモーター、例えば、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）長末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、モロニーウイルスプロモーター、トリ白血病ウイルス（ＡＬＶ）プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、例えば、ＣＭＶ前初期プロモーター、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）プロモーター、またはラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーターであってもよい。プロモーターはまた、例えば、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、筋クレアチンプロモーター、またはメタロチオネインプロモーターなどの哺乳動物プロモーター由来のプロモーターであってもよい。プロモーターはまた、天然または合成である筋肉特異的または皮膚特異的プロモーターなどの組織特異的プロモーターであってもよい（例えば、米国特許出願公開第２００４／０１７５７２７号を参照のこと）。
【００９０】
ベクターはまた、上記の抗原及び／または抗体のコード配列（複数可）の下流にあり得るポリアデニル化シグナルを含んでもよい。ポリアデニル化シグナルは、例えばＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、ＬＴＲポリアデニル化シグナル、ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリアデニル化シグナル、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリアデニル化シグナル、またはヒトβ−グロビンポリアデニル化シグナルを含む任意の適切なポリアデニル化シグナルであってもよい。ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルは、ｐＣＥＰ４ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）由来のポリアデニル化シグナルであってもよい。
【００９１】
ベクターはまた、上記の抗原及び／または抗体の上流にエンハンサーを含んでもよい。エンハンサーは、ＤＮＡ発現のために必要であり得る。エンハンサーは、任意の適切な哺乳動物遺伝子、例えば、アクチン、ミオシン、ヘモグロビン、筋クレアチンなど、またはウイルス、例えばＣＭＶ、ＨＡ、ＲＳＶまたはＥＢＶなどから単離しても、または誘導してもよい。ポリヌクレオチド機能エンハンサーは、例えば、米国特許第５，５９３，９７２号及び第５，９６２，４２８号、ならびに国際特許出願公開第９４／０１６７３７号に記載されている。
【００９２】
ベクターはまた、ベクターを染色体外で維持し、そして細胞内にベクターの複数のコピーを作製するために、哺乳動物の複製起点を含んでもよい。このベクターは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）のｐＶＡＸ１、ｐＣＥＰ４またはｐＲＥＰ４であってもよく、これは、Ｅｐｓｔｅｉｎ  Ｂａｒｒウイルス複製起点及び核抗原ＥＢＮＡ−１コード領域を含んでもよく、これは組込みなしで高コピーエピソーム複製を生じ得る。ベクターは、ｐＶＡＸ１であっても、またはそのバリアントであってもよい。例えば、ｐＶＡＸ１バリアントプラスミドｐＧＸ０００１は、バックボーンベクタープラスミドｐＶＡＸ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ  ＣＡ）の２９９８塩基対バリアントである。ｐＧＸ０００１プラスミドは、以下のエレメントを含む：（ａ）塩基１３７〜７２４に位置するＣＭＶプロモーター、（ｂ）塩基６６４〜６８３に位置するＴ７プロモーター／プライミング部位、（ｃ）塩基６９６〜８１１に位置する複数のクローニング部位、（ｄ）塩基８２９〜１０５３に位置するウシＧＨポリアデニル化シグナル、（ｅ）塩基１２２６〜２０２０に位置するカナマイシン耐性（ＫａｎＲ）遺伝子、及び（ｆ）塩基２３２０〜２９９３に位置するｐＵＣ複製起点。
【００９３】
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能なｐＶＡＸ１の配列に基づいて、本発明のワクチンを作製するために、ｐＶＡＸ１にさらなる突然変異を作製してもよい。一実施形態では、以下の突然変異をｐＶＡＸ１の核酸配列において作製してもよい：
【００９４】
ＣＭＶプロモーターにおけるＣ＞Ｇ２４１
【００９５】
ウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル（ｂＧＨポリＡ）の下流にある、Ｃ＞Ｔ  １１５８骨格。
【００９６】
カナマイシン耐性遺伝子（ＫａｎＲ）の下流にある、Ａ＞−２０９２の骨格。
【００９７】
ｐＵＣの複製開始点（ｐＵＣ  ｏｒｉ）におけるＣ＞Ｔ  ２４９３。
【００９８】
ＲＮＡＳｅＨ部位の上流のｐＵＣ  Ｏｒｉの再末端におけるＧ＞Ｃ  ２９６９、及び。
【００９９】
塩基対２、３及び４は、ＣＭＶプロモーターの上流である骨格において、ＡＣＴからＣＴＧに変化させてもよい。
【０１００】
このベクターはまた、ベクターが投与される哺乳動物（例えば、イヌ）細胞における遺伝子発現によく適合し得る調節配列を含んでもよい。本明細書に開示される１つ以上の癌抗原配列は、特定の宿主細胞においてコード配列のより効率的な転写を可能にする１つ以上のコドンを含んでもよい。
【０１０１】
このベクターは、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（Ｅ．ｃｏｌｉ）におけるタンパク質産生のために使用され得るｐＳＥ４２０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）であってもよい。このベクターはまた、酵母のサッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）株におけるタンパク質産生のために使用され得る、ｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）であってもよい。このベクターはまた、昆虫細胞におけるタンパク質産生のために使用され得るＭＡＸＢＡＣ（商標）完全バキュロウイルス発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）であってもよい。このベクターはまた、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳動物細胞におけるタンパク質産生のために使用され得るｐｃＤＮＡ  ＩまたはｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）であってもよい。このベクターは、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄ．、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ（１９８９）に記載されているような、日常的な技術及び容易に入手可能な出発物質を用いて生成してもよい。
【０１０２】
一実施形態では、本発明のワクチンは、配列番号３のポリヌクレオチド配列を含むプラスミドベクターである。
【０１０３】
５．ワクチンの医薬組成物
このワクチンは、医薬組成物、すなわちワクチンと薬学的に許容される担体とを含む組成物の形態であってもよい。この医薬組成物は、ワクチンを含んでもよい。この医薬組成物は、約５ナノグラム〜約１０ｍｇのワクチンのＤＮＡを含んでもよい。いくつかの実施形態では、本発明による医薬組成物は、約２５ナノグラム〜約５ｍｇのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、約５０ナノグラム〜約１ｍｇのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、約０．１〜約１，５００マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、約１〜約８００マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、約５〜約５００マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、約１０〜約２５０マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、約１５〜約１５０マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、約２０〜約１００マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、約２５〜約７５マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、約３０〜約５０マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、約３５〜約４０マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、約１００〜約２００マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、約１０μｇ〜約１００μｇのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、約２０μｇ〜約８０μｇのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、約２５マイクログラム〜約６０マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、約３０ナノグラム〜約５０マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、約３５ナノグラム〜約４５マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの好ましい実施形態では、この医薬組成物は、約０．１〜約８００マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの好ましい実施形態では、この医薬組成物は、約１〜約５００マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの好ましい実施形態では、この医薬組成物は、約２５〜約３００マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。いくつかの好ましい実施形態では、この医薬組成物は、約１００〜約２００マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、本発明による医薬組成物は、少なくとも１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５，１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、６０５、６１０、６１５、６２０、６２５、６３０、６３５、６４０、６４５、６５０、６５５、６６０、６６５、６７０、６７５、６８０、６８５、６９０、６９５、７００、７０５、７１０、７１５、７２０、７２５、７３０、７３５、７４０、７４５、７５０、７５５、７６０、７６５、７７０、７７５、７８０、７８５、７９０、７９５、８００、８０５、８１０、８１５、８２０、８２５、８３０、８３５、８４０、８４５、８５０、８５５、８６０、８６５、８７０、８７５、８８０、８８５、８９０、８９５、９００、９０５、９１０、９１５、９２０、９２５、９３０、９３５、９４０、９４５、９５０、９５５、９６０、９６５、９７０、９７５、９８０、９８５、９９０、９９５、１０００、１００５、１０１０、１０１５、１０２０、１０２５、１０３０、１０３５、１０４０、１０４５、１０５０、１０５５、１０６０、１０６５、１０７０、１０７５、１０８０、１０８５、１０９０、１０９５、１１００、１１０５、１１１０、１１１５、１１２０、１１２５、１１３０、１１３５、１１４０、１１４５、１１５０、１１５５、１１６０、１１６５、１１７０、１１７５、１１８０、１１８５、１１９０、１１９５、１２００、１２０５、１２１０、１２１５、１２２０、１２２５、１２３０、１２３５、１２４０、１２４５、１２５０、１２５５、１２６０、１２６５、１２７０、１２７５、１２８０、１２８５、１２９０、１２９５、１３００、１３０５、１３１０、１３１５、１３２０、１３２５、１３３０、１３３５、１３４０、１３４５、１３５０、１３５５、１３６０、１３６５、１３７０、１３７５、１３８０、１３８５、１３９０、１３９５、１４００、１４０５、１４１０、１４１５、１４２０、１４２５、１４３０、１４３５、１４４０、１４４５、１４５０、１４５５、１４６０、１４６５、１４７０、１４７５、１４８０、１４８５、１４９０、１４９５、１５００、１５０５、１５１０、１５１５、１５２０、１５２５、１５３０、１５３５、１５４０、１５４５、１５５０、１５５５、１５６０、１５６５、１５７０、１５７５、１５８０、１５８５、１５９０、１５９５、１６００、１６０５、１６１０、１６１５、１６２０、１６２５、１６３０、１６３５、１６４０、１６４５、１６５０、１６５５、１６６０、１６６５、１６７０、１６７５、１６８０、１６８５、１６９０、１６９５、１７００、１７０５、１７１０、１７１５、１７２０、１７２５、１７３０、１７３５、１７４０、１７４５、１７５０、１７５５、１７６０、１７６５、１７７０、１７７５、１７８０、１７８５、１７９０、１７９５、または１８００マイクログラムのワクチンのＤＮＡを含む。
【０１０５】
他の実施形態では、医薬組成物は、最大でかつ１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５，１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、６０５、６１０、６１５、６２０、６２５、６３０、６３５、６４０、６４５、６５０、６５５、６６０、６６５、６７０、６７５、６８０、６８５、６９０、６９５、７００、７０５、７１０、７１５、７２０、７２５、７３０、７３５、７４０、７４５、７５０、７５５、７６０、７６５、７７０、７７５、７８０、７８５、７９０、７９５、８００、８０５、８１０、８１５、８２０、８２５、８３０、８３５、８４０、８４５、８５０、８５５、８６０、８６５、８７０、８７５、８８０、８８５、８９０、８９５、９００、９０５、９１０、９１５、９２０、９２５、９３０、９３５、９４０、９４５、９５０、９５５、９６０、９６５、９７０、９７５、９８０、９８５、９９０、９９５、１０００、１００５、１０１０、１０１５、１０２０、１０２５、１０３０、１０３５、１０４０、１０４５、１０５０、１０５５、１０６０、１０６５、１０７０、１０７５、１０８０、１０８５、１０９０、１０９５、１１００、１１０５、１１１０、１１１５、１１２０、１１２５、１１３０、１１３５、１１４０、１１４５、１１５０、１１５５、１１６０、１１６５、１１７０、１１７５、１１８０、１１８５、１１９０、１１９５、１２００、１２０５、１２１０、１２１５、１２２０、１２２５、１２３０、１２３５、１２４０、１２４５、１２５０、１２５５、１２６０、１２６５、１２７０、１２７５、１２８０、１２８５、１２９０、１２９５、１３００、１３０５、１３１０、１３１５、１３２０、１３２５、１３３０、１３３５、１３４０、１３４５、１３５０、１３５５、１３６０、１３６５、１３７０、１３７５、１３８０、１３８５、１３９０、１３９５、１４００、１４０５、１４１０、１４１５、１４２０、１４２５、１４３０、１４３５、１４４０、１４４５、１４５０、１４５５、１４６０、１４６５、１４７０、１４７５、１４８０、１４８５、１４９０、１４９５、１５００、１５０５、１５１０、１５１５、１５２０、１５２５、１５３０、１５３５、１５４０、１５４５、１５５０、１５５５、１５６０、１５６５、１５７０、１５７５、１５８０、１５８５、１５９０、１５９５、１６００、１６０５、１６１０、１６１５、１６２０、１６２５、１６３０、１６３５、１６４０、１６４５、１６５０、１６５５、１６６０、１６６５、１６７０、１６７５、１６８０、１６８５、１６９０、１６９５、１７００、１７０５、１７１０、１７１５、１７２０、１７２５、１７３０、１７３５、１７４０、１７４５、１７５０、１７５５、１７６０、１７６５、１７７０、１７７５、１７８０、１７８５、１７９０、１７９５、または１８００マイクログラム以下のワクチンのＤＮＡを含んでもよい。
【０１０６】
医薬組成物は、使用される投与様式に応じた製剤目的のための他の薬剤をさらに含んでもよい。医薬組成物が注射可能な医薬組成物である場合、それらは滅菌され、発熱物質を含まず、粒子状ではない。等張性製剤が好ましくは使用される。一般に、等張性のための添加剤は、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール及びラクトースを含んでもよい。ある場合には、リン酸緩衝食塩水のような等張溶液が好ましい。安定剤としては、ゼラチン及びアルブミンが挙げられる。いくつかの実施形態では、血管収縮剤が製剤に添加される。
【０１０７】
ワクチンまたは医薬組成物は、薬学的に許容される担体または賦形剤をさらに含んでもよい。薬学的に許容される担体または賦形剤は、ビヒクル、アジュバント、担体または希釈剤としての機能性分子であってもよい。薬学的に許容される担体または賦形剤は、トランスフェクション促進剤であってもよく、これには、界面活性剤、例えば、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）、フロイント不完全アジュバント、モノホスホリル脂質Ａを含むＬＰＳ類似体、ムラミルペプチド、キノン類似体、ベシクル、例えば、スクアラン及びスクアレン、ヒアルロン酸、脂質、リポソーム、カルシウムイオン、ウイルスタンパク質、ポリアニオン、ポリカチオン、もしくはナノ粒子、または他の公知のトランスフェクション促進剤が挙げられる。
【０１０８】
トランスフェクション促進剤は、ポリアニオン、ポリカチオン、例としては、ポリ−Ｌ−グルタミン酸（ＬＧＳ）、または脂質であってもよい。トランスフェクション促進剤は、ポリ−Ｌ−グルタミン酸であってもよく、より好ましくは、ポリ−Ｌ−グルタミン酸は、６ｍｇ／ｍｌ未満の濃度でワクチン中に存在してもよい。トランスフェクション促進剤はまた、界面活性剤、例えば、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）、フロイント不完全アジュバント、ＬＰＳ類似体、例としては、モノホスホリル脂質Ａ、ムラミルペプチド、キノン類似体及びベシクル、例えば、スクアラン及びスクアレン、及びヒアルロン酸を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物はまた、１つ以上のトランスフェクション促進剤、例えば、脂質、リポソーム（例えば、レシチンリポソームまたは当該分野で公知の他のリポソーム）をＤＮＡリポソーム混合物として（例えば、国際特許出願公開ＷＯ９３／２４６４０を参照のこと）、カルシウムイオン、ウイルスタンパク質、ポリアニオン、ポリカチオンもしくはナノ粒子、または他の公知のトランスフェクション促進剤なども含んでもよい。好ましくは、トランスフェクション促進剤は、ポリアニオン、ポリカチオン、例としては、ポリ−Ｌ−グルタミン酸（ＬＧＳ）または脂質であってもよい。ワクチン中のトランスフェクション剤の濃度は、４ｍｇ／ｍｌ未満、２ｍｇ／ｍｌ未満、１ｍｇ／ｍｌ未満、０．７５０ｍｇ／ｍｌ未満、０．５００ｍｇ／ｍｌ未満、０．２５０ｍｇ／ｍｌ未満、０．１００ｍｇ／ｍｌ未満、０．０５０ｍｇ／ｍｌ未満、または０．０１０ｍｇ／ｍｌ未満である。
【０１０９】
薬学的に許容される担体または賦形剤は、アジュバントであってもよい。アジュバントは、別のプラスミドで発現されるか、またはワクチンにおいて上記プラスミドと組み合わせてタンパク質として送達される他の遺伝子であってもよい。アジュバントは、以下からなる群より選択され得る：α−インターフェロン（ＩＦＮ−α）、β−インターフェロン（ＩＦＮ−β）、γ−インターフェロン、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＧＭ−ＣＳＦ、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）、粘膜Ｔ細胞誘引ケモカイン（ＣＴＡＣＫ）、上皮胸腺発現ケモカイン（ＴＥＣＫ）、粘膜関連上皮ケモカイン（ＭＥＣ）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＭＨＣ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、例としては、シグナル配列が欠失され、必要に応じてＩｇＥ由来のシグナルペプチドを含むＩＬ−１５。アジュバントは、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２８、ＣＴＡＣＫ、ＴＥＣＫ、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＧＭ−ＣＳＦ、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、またはそれらの組み合わせであってもよい。例示的な実施形態において、アジュバントはＩＬ−１２である。
【０１１０】
有用なアジュバントであり得る他の遺伝子としては、以下をコードする遺伝子が挙げられる：ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１ｐ、ＩＬ−８、ＲＡＮＴＥＳ、Ｌ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチン、ＣＤ３４、ＧｌｙＣＡＭ−１、ＭａｄＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１、ＶＬＡ−１、Ｍａｃ−１、ｐｌ５０．９５、ＰＥＣＡＭ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−３、ＣＤ２、ＬＦＡ−３、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１８の突然変異型、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、血管成長因子、線維芽細胞増殖因子、ＩＬ−７、神経成長因子、血管内皮増殖因子、Ｆａｓ、ＴＮＦ受容体、Ｆｌｔ、Ａｐｏ−１、ｐ５５、ＷＳＬ−１、ＤＲ３、ＴＲＡＭＰ、Ａｐｏ−３、ＡＩＲ、ＬＡＲＤ、ＮＧＲＦ、ＤＲ４、ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＩＣＫ２、ＤＲ６、カスパーゼＩＣＥ、Ｆｏｓ、ｃ−ｊｕｎ、Ｓｐ−１、Ａｐ−１、Ａｐ−２、ｐ３８、ｐ６５Ｒｅｌ、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＴＲＡＦ６、ＩｋＢ、不活性ＮＩＫ、ＳＡＰ  Ｋ、ＳＡＰ−１、ＪＮＫ、インターフェロン応答遺伝子、ＮＦｋＢ、Ｂａｘ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬｒｅｃ、ＴＲＡＩＬｒｅｃＤＲＣ５、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＲＡＩＬ−Ｒ４、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫ  ＬＩＧＡＮＤ、Ｏｘ４０、Ｏｘ４０  ＬＩＧＡＮＤ、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｂ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｆ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、及びその機能的フラグメント。
【０１１１】
６．特定のがんを処置するためのワクチン
本発明のワクチンは、哺乳動物の特定のがんまたは腫瘍を処置するための唯一の癌抗原としてｄＴＥＲＴ抗原をコードするポリヌクレオチド配列を含んでもよい。あるいは、本発明のワクチンは、哺乳動物（例えば、イヌ）における特定のがんまたは腫瘍を処置するための１つ以上のさらなる癌抗原をコードする１つ以上のさらなるポリヌクレオチド配列を含んでもよい。別の実施形態では、ｄＴＥＲＴ抗原をコードするポリヌクレオチドを含む本発明のワクチンを、１つ以上の別個のワクチンと組み合わせて哺乳動物に投与してもよく、その各々が本明細書に記載されるような１つ以上のさらなる癌抗原をコードするか、または含み、哺乳動物における特定のがんまたは腫瘍を処置する。
【０１１２】
がんまたは腫瘍を治療する本発明の方法が、ＴＥＲＴ抗原単独を標的するか、または１つ以上のさらなる癌抗原と組み合わせたＴＥＲＴ抗原を標的とするかに応じて、様々ながんまたは他の腫瘍型をワクチンで標的としてもよい。このようながんとしては、例えば、黒色腫、前立腺癌、肝臓癌、子宮頸癌、再発性呼吸器乳頭腫症（ＲＲＰ）、肛門癌、頭頸部癌、血液癌（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫）、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、食道扁平上皮癌、膀胱癌、結腸直腸癌、胃癌、肝細胞癌、脳腫瘍（例えば、グリア芽細胞腫）、膵臓癌、滑膜癌、精巣癌、及び胃癌が挙げられる。
【０１１３】
７．ワクチン接種の方法
本明細書では、本発明のワクチンを、好ましくは薬学的に許容される組成物の一部として、それを必要とする哺乳動物に投与することを包含する、がんを処置または予防する方法が提供される。ワクチンを投与する方法、またはワクチン接種は、治療的及び／または予防的免疫応答を誘導するために提供され得る。ワクチン接種プロセスは、哺乳動物において、本明細書に開示されている癌抗原の１つ以上に対する免疫応答を生じさせ得る。ワクチンは、哺乳動物の免疫系の活性を調節し、免疫応答を増強するために個体に投与されてもよい。ワクチンの投与は、細胞において発現され、したがって免疫系がそれを認識して細胞性、体液性または細胞性及び体液性の応答を誘導する細胞の表面に送達される核酸分子として本明細書に開示されるような１つ以上の癌抗原のトランスフェクションであってもよい。ワクチンの投与は、本明細書に考察されるワクチンを哺乳動物に投与することによって、１つ以上の癌抗原に対する哺乳動物における免疫応答を誘導または誘発するために使用してもよい。
【０１１４】
哺乳動物へのワクチンの投与の際、及びその結果哺乳動物の細胞へベクターを投与する際に、トランスフェクトされた細胞は、本明細書に開示されるような１つ以上の癌抗原を発現し分泌する。これらの分泌されたタンパク質または合成抗原は、免疫系（以下を含み得る免疫応答を増強する：１つ以上の癌抗原に対して作製された抗体及び／または１つ以上の癌抗原に対して特異的なＴ細胞応答）によって外来性であると認識される。いくつかの例では、本明細書で考察されるワクチンでワクチン接種された哺乳動物は、このプライミングされた免疫系を有し、本明細書に開示される１つ以上の癌抗原を用いてチャレンジされた場合、このプライミングされた免疫系によって、体液性免疫応答、細胞性免疫応答、または細胞性及び体液性免疫応答の両方のいずれかを通じて、本明細書に開示されるような引き続く癌抗原の急速な消滅が可能になる。ワクチンは、個体の免疫系の活性を調節し、それにより免疫応答を増強するために個体に投与されてもよい。
【０１１５】
ＤＮＡワクチンを投与する方法は、例えば、米国特許第４，９４５，０５０号及び同第５，０３６，００６号に記載されている。
【０１１６】
ワクチンは、哺乳動物において免疫応答を誘発するために哺乳動物に投与してもよい。哺乳動物は、イヌ（犬）、ヒト、非ヒト霊長類、牛、ブタ、ヒツジ、ヤギ、アンテロープ、バイソン、水牛、ウシ、鹿、ハリネズミ、象、ラマ、アルパカ、マウス、ラット、またはニワトリであってもよい。好ましくは、哺乳動物はイヌ、ヒト、ウシ、ブタまたはニワトリである。
【０１１７】
ワクチン用量は、有効成分が１μｇ〜１０ｍｇ／体重ｋｇ／時間の間であってもよく、成分が２０μｇ〜１０ｍｇ／体重ｋｇ／時間であってもよい。このワクチンは、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日または３１日ごとに投与され得る。効果的な処置のためのワクチン用量の数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の用量であってもよい。
【０１１８】
ａ．ワクチンによる免疫応答の生成方法
ワクチンは、治療的または予防的免疫応答を含む、哺乳動物における免疫応答を生成するために使用してもよい。免疫応答は、本明細書に開示されるような１つ以上の癌抗原に向けられる抗体及び／またはキラーＴ細胞を生成し得る。このような抗体及びＴ細胞は単離されてもよい。一実施形態において、本発明は、哺乳動物においてテロメラーゼ逆転写酵素（ＴＥＲＴ）（例えば、ｈＴＥＲＴまたはｄＴＥＲＴ）に対する免疫応答を誘導する方法を提供し、この方法は、本明細書に記載のワクチンを、それを必要とする哺乳動物に投与することを包含し、それによって、この核酸分子がその哺乳動物で発現され、以下の免疫応答のうちの１つ以上が誘導される：（ａ）ＴＥＲＴに特異的な体液性免疫応答、（ｂ）ワクチンを投与されていない哺乳動物に比較して腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）及びインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）レベルの増大を含む炎症反応、ならびに（ｃ）ＴＥＲＴに特異的な細胞性免疫応答。
【０１１９】
いくつかの実施形態は、ワクチンを、それを必要とする哺乳動物に投与することを包含する、本明細書に開示された癌抗原の１つ以上に対する免疫応答を生成する方法を提供する。いくつかの実施形態は、ワクチンを、それを必要とする哺乳動物に投与することを包含する、上記のような癌抗原の１つ以上を発現するがんまたは腫瘍に対して哺乳動物を予防的にワクチン接種する方法を提供する。いくつかの実施形態は、それを必要とする哺乳動物にワクチンを投与することを包含する、癌抗原の１つ以上を発現するがんまたは腫瘍に罹患している哺乳動物に治療的にワクチン接種する方法を提供する。ワクチンの投与前に本明細書に開示されているような１つ以上の癌抗原を発現するがんまたは腫瘍の診断は、日常的な診断方法を用いて行ってもよい。
【０１２０】
ｂ．ワクチンによる癌処置の方法
ワクチンは、その必要な哺乳動物または対象において、がんまたは腫瘍（例えば、黒色腫、頭頸部、子宮頸部、肝臓、前立腺、血液癌、食道扁平上皮、胃癌など）に反応性であるかまたは指向性である哺乳動物における免疫応答を生成または誘発するために使用され得る。誘発された免疫応答は、がんまたは腫瘍の増殖を防ぎ得る。
【０１２１】
誘発された免疫応答は、癌細胞または腫瘍細胞の転移を予防及び／または低減し得る。したがって、ワクチンは、そのワクチンを投与された哺乳動物または対象のがんまたは腫瘍を処置及び／または予防する方法において使用されてもよい。ワクチンに使用される抗原によって、処置されるがんまたは腫瘍は、限定されるものではないが、黒色腫、血液癌（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫）、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、食道扁平上皮癌、膀胱癌、結腸直腸癌、食道癌、胃癌、肝細胞癌、頭頸部癌、脳腫瘍（例えば、グリア芽細胞腫）、肛門癌、膵臓癌、滑膜癌腫、前立腺癌、精巣癌、肝臓癌、子宮頸癌、再発性呼吸乳頭腫（ＲＲＰ）、皮膚癌及び胃癌などの当該分野で公知及び本明細書で記載の任意の種類のがんであってもよい。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、投与されたワクチンは、（１）単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）産生をブロックする抗体を生成するためにＢ細胞応答を介した体液性免疫を誘導し、それにより、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）を阻害し、腫瘍増殖を抑制すること；（２）ＣＤ８＋（ＣＴＬ）のような細胞傷害性Ｔリンパ球を増加させて腫瘍細胞を攻撃し殺傷すること；（３）ヘルパーＴ細胞応答を増大させること；（４）未処理の哺乳動物と比較してＩＦＮ−γ及びＴＦＮ−αを介して炎症反応を、または好ましくは上記応答の全てを増大させることによって、腫瘍細胞の消滅を媒介するか、または増殖を妨げ得る。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、免疫応答は、種々の組織または系（例えば、脳または神経系など）の損傷または炎症を引き起こさない体液性免疫応答及び／または抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答を、ワクチン投与された対象において生成し得る。
【０１２４】
いくつかの実施形態において、投与されたワクチンは、対象において腫瘍のない生存を増大し得るか、腫瘍の質量を低減し得るか、腫瘍の生存を増大し得るか、またはそれらの組み合わせであってもよい。投与されたワクチンは、対象において、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％及び６０％まで腫瘍なしの生存を増大し得る。投与されたワクチンは、免疫後の対象において、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、及び７０％まで腫瘍質量を低減し得る。投与されたワクチンは、対象における骨髄由来免疫抑制細胞によって分泌されるサイトカインである単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１）の増大を予防及び阻止し得る。いくつかの実施形態では、投与されたワクチンは、対象の癌組織または腫瘍組織内のＭＣＰ−１の増大を予防及び遮断し、それにより対象の癌組織または腫瘍組織の血管新生を減少し得る。
【０１２５】
投与されたワクチンは、被験体において、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、及び７０％まで腫瘍増殖を増大し得る。いくつかの実施形態では、ワクチンは、がんまたは腫瘍細胞または組織を標的とする抗原特異的免疫応答を確立して、ワクチンを投与された対象を傷害することも、または病気もしくは死を引き起こすこともなく１つ以上の癌抗原を発現するがんまたは腫瘍を消滅または排除するために、末梢に投与されてもよい（詳細は後述する）。
【０１２６】
投与されたワクチンは、対象の細胞性免疫応答を、約５０倍〜約６０００倍、約５０倍〜約５５００倍、約５０倍〜約５０００倍、約５０倍〜約４５００倍、約１００倍〜約６０００倍、約１５０倍〜約６０００倍、約２００倍〜約６０００倍、約２５０倍〜約６０００倍、または約３００倍〜約６０００倍まで増大し得る。いくつかの実施形態では、投与されたワクチンは、対象における細胞免疫応答を、約５０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍、４００倍、４５０倍、５００倍、５５０倍、６００倍、６５０倍、７００倍、７５０倍、８００倍、８５０倍、９００倍、９５０倍、１０００倍、１１００倍、１２００倍、１３００倍、１４００倍、１５００倍、１６００倍、１７００倍、１８００倍、１９００倍、２０００倍、２１００倍、２２００倍、２３００倍、２４００倍、２５００倍、２６００倍、２７００倍、２８００倍、２９００倍、３０００倍、３１００倍、３２００倍、３３００倍、３４００倍、３５００倍、３６００倍、３７００倍、３８００倍、３９００倍、４０００倍、４１００倍、４２００倍、４３００倍、４４００倍、４５００倍、４６００倍、４７００倍、４８００倍、４９００倍、５０００倍、５１００倍、５２００倍、５３００倍、５４００倍、５５００倍、５６００倍、５７００倍、５８００倍、５９００倍、または６０００倍まで増大し得る。
【０１２７】
投与されたワクチンは、本発明のワクチンで処置されていない対象と比較して、約５０倍〜約６０００倍、約５０倍〜約５５００倍、約５０倍〜約５０００倍、約５０倍〜約４５００倍、約１００倍〜約６０００倍、約１５０倍〜約６０００倍、約２００倍〜約６０００倍、約２５０倍〜約６０００倍、または約３００倍〜約６０００倍まで対象におけるインターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）レベルを増大し得る。いくつかの実施形態では、投与されたワクチンは、本発明のワクチンで処置されていない対象と比較して、約５０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍、４００倍、４５０倍、５００倍、５５０倍、６００倍、６５０倍、７００倍、７５０倍、８００倍、８５０倍、９００倍、９５０倍、１０００倍、１１００倍、１２００倍、１３００倍、１４００倍、１５００倍、１６００倍、１７００倍、１８００倍、１９００倍、２０００倍、２１００倍、２２００倍、２３００倍、２４００倍、２５００倍、２６００倍、２７００倍、２８００倍、２９００倍、３０００倍、３１００倍、３２００倍、３３００倍、３４００倍、３５００倍、３６００倍、３７００倍、３８００倍、３９００倍、４０００倍、４１００倍、４２００倍、４３００倍、４４００倍、４５００倍、４６００倍、４７００倍、４８００倍、４９００倍、５０００倍、５１００倍、５２００倍、５３００倍、５４００倍、５５００倍、５６００倍、５７００倍、５８００倍、５９００倍、または６０００倍まで対象におけるＩＦＮ−γレベルを増大し得る。
【０１２８】
ワクチン用量は、活性成分１μｇ〜１０ｍｇ／体重ｋｇ／時間の間であってもよく、成分２０μｇ〜１０ｍｇ／体重ｋｇ／時間であってもよい。このワクチンは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、３０、または３１日ごとに投与され得る。効果的な治療のためのワクチン用量の数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であってもよい。
【０１２９】
８．投与経路
このワクチンまたは医薬組成物は、例えば、経口、非経口、舌下、経皮、直腸、経粘膜、局所、吸入、頬側投与、胸膜内、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、鼻腔内、くも膜下腔内、関節内、またはそれらの組み合わせを含む種々の経路によって投与され得る。獣医学的使用のために、組成物は、通常の獣医学的実施に従った、適切に許容される製剤として投与され得る。獣医師は、特定の動物にとって最も適切な投与レジメン及び投与経路を容易に決定し得る。このワクチンは、伝統的な注射器、無針注射装置、「マイクロプロジェクタイルボンバードメントガン」、またはエレクトロポレーション（「ＥＰ」）、「流体力学的方法」または超音波などの他の物理的方法によって投与してもよい。
【０１３０】
ワクチンは、インビボエレクトロポレーションの有無のＤＮＡ注入（ＤＮＡワクチン接種とも呼ばれる）、リポソーム媒介、ナノ粒子促進、組み換えベクター、例えば、組み換えアデノウイルス、組換えＡＡＶ及び組換えワクシニアウイルスを含むいくつかの周知の技術によって哺乳動物に投与されてもよい。ワクチンの１つ以上の癌抗原は、ＤＮＡ注入及び／またはインビボエレクトロポレーションによって投与されてもよい。
【０１３１】
ａ．エレクトロポレーション
ワクチンまたは医薬組成物は、エレクトロポレーションによって投与してもよい。エレクトロポレーションによるワクチンの投与は、哺乳動物の所望の組織に、細胞膜に可逆的な孔を形成させるのに効果的なエネルギーのパルスを送達するように構成することができるエレクトロポレーションデバイスを用いて達成してもよく、好ましくは、エネルギーのパルスは、ユーザによって入力されるプリセットの電流と同様である一定電流である。エレクトロポレーションデバイスは、エレクトロポレーション構成要素と、電極アセンブリまたはハンドルアセンブリを備えてもよい。エレクトロポレーション構成要素は、以下を含むエレクトロポレーションデバイスの種々の要素のうちの１つ以上を備え、組み込んでもよい：コントローラ、電流波形発生器、インピーダンステスタ、波形ロガー、入力要素、状態報告要素、通信ポート、メモリ構成要素、電源、及び電源スイッチ。エレクトロポレーションは、プラスミドによる細胞のトランスフェクションを容易にするインビボエレクトロポレーションデバイス、例えば、ＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）ＥＰシステム（Ｉｎｏｖｉｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｉｎｃ．、Ｐｌｙｍｏｕｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、ＰＡ）またはＥｌｇｅｎ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｏｒ（Ｉｎｏｖｉｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｉｎｃ．）を使用して達成され得る。
【０１３２】
本発明のＤＮＡワクチンの投与を容易にし得るエレクトロポレーションデバイス及びエレクトロポレーション法の例としては、例えば、米国特許第７，２４５，９６３号及び米国特許出願公開第２００５／００５２６３０号に記載されている方法が挙げられる。ＤＮＡワクチンの投与を促進するために使用することができる他のエレクトロポレーションデバイス及びエレクトロポレーション法としては、例えば、米国特許出願公開第２００８／００９１１３５号に記載されている方法が挙げられる。
【０１３３】
米国特許第７，２４５，９６３号は、身体または植物中の選択された組織の細胞への生体分子の導入を促進するためのモジュール式電極システム及びそれらの使用を記載している。モジュール式電極システムは、複数の針状電極；皮下注射針；プログラム可能な定電流パルスコントローラから複数の針状電極に導電性リンクを提供する電気コネクタ；及び電源を備えてもよい。操作者は、支持構造に取り付けられた複数の針状電極を把持し、それらを体または植物の選択された組織にしっかりと挿入し得る。その後、生体分子は、皮下注射針を介して選択された組織に投与される。プログラム可能な定電流パルスコントローラが起動され、定電流パルスが複数の針状電極に加えられる。印加された定電流電気パルスは、複数の電極間の細胞内への生体分子の導入を容易にする。
【０１３４】
米国特許出願公開第２００５／００５２６３０号は、身体または植物における選択された組織の細胞への生体分子の導入を効果的に促進するために使用され得るエレクトロポレーションデバイスを記載している。エレクトロポレーションデバイスは、その動作がソフトウェアまたはファームウェアによって特定される電気運動デバイス（「ＥＫＤデバイス」）を備える。ＥＫＤデバイスは、ユーザ制御及びパルスパラメータの入力に基づいてアレイ内の電極間に一連のプログラム可能な定電流パルスパターンを生成し、電流波形データの記憶及び取得を可能にする。エレクトロポレーションデバイスはまた、針状電極のアレイと、注射針用の中央注射チャネルと、取り外し可能なガイドディスクとを有する交換可能な電極ディスクも備える。
【０１３５】
米国特許第７，２４５，９６３号及び米国特許出願公開第２００５／００５２６３０号に記載されている電極アレイ及び方法は、筋肉のような組織だけでなく、他の組織または器官への深い浸透にも適用することができる。電極アレイの構成のために、注射針はまた標的臓器に完全に挿入され、注入は標的箇所に対して電極によって予め画定された領域において垂直に施される。米国特許第７，２４５，９６３号及び米国特許出願公開第２００５／００５２６３号に記載される電極は、好ましくは、長さ２０ｍｍ及び２１ゲージである。
【０１３６】
さらに、いくつかの実施形態において、エレクトロポレーションデバイスは、例えば、米国特許第５，２７３，５２５号；同第６，１１０，１６１号；同第６，２６１，２８１号；同第６，９５８，０６０号；及び同第６，９３９，８６２号に記載のデバイスであってもよい。さらに、種々のデバイスのいずれかを使用するＤＮＡの投与に関する米国特許第６，６９７，６６９号及びＤＮＡを注入する方法に関連する米国特許第７，３２８，０６４号に記載された方法も本発明の文脈で使用してもよい。
【０１３７】
９．ワクチンの調製方法
本明細書で考察されるワクチンを含むＤＮＡプラスミドを調製する方法が本明細書に提供される。哺乳動物発現プラスミドへの最後のサブクローニング工程の後、ＤＮＡプラスミドを使用して、当該分野で公知の方法を用いて大規模発酵タンクに細胞培養物を接種してもよい。
【０１３８】
本発明のＥＰデバイスと共に使用するためのＤＮＡプラスミドは、公知のデバイス及び技術の組合せを用いて製剤化しても、または製造してもよいが、好ましくは、例えば米国特許出願公開第２００９／０００４７１６号に記載の最適化プラスミド製造技術を用いて製造される。いくつかの実施形態では、これらの研究で使用されるＤＮＡプラスミドは、１０ｍｇ／ｍＬ以上の濃度で製剤化され得る。製造技術はまた、米国特許出願公開第２００９／０００４７１６号及び米国特許第７，２３８，５２２号に記載されている技術に加えて、当業者に一般的に公知である様々なデバイス及びプロトコルを含むかまたは組み込む。
【０１３９】
本発明は、以下の非限定的な実施例によって例示される複数の態様を有する。
【０１４０】
１０．実施例
【実施例１】
【０１４１】
この実施例は、ｄＴＥＲＴ抗原をコードするポリヌクレオチド配列を含むプラスミドワクチンを生成する方法を記載する。
【０１４２】
ｐＧＸ１４１４は、ヒトＣＭＶプロモーター（ｈＣＭＶプロモーター）及びウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル（ｂＧＨポリＡ）に作動可能に連結された、合成コンセンサスイヌテロメラーゼ逆転写酵素（ＳＹＮＣＯＮ  ｄＴＥＲＴ）をコードする配列番号１のポリヌクレオチド配列を含む、配列番号３のポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡプラスミドである。このプラスミド骨格は、カナマイシン耐性遺伝子（ＫａｎＲ）及びプラスミド複製起点（ｐＵＣ  ｏｒｉ）を含む。ｐＧＸ１４１４の遺伝的エレメントを表１に示しており、ｐＧＸ１４１４の模式図を図１に示す。
【表１】
2019508403.tif 000003
【０１４３】
ｐＧＸ１４１４は、合成コンセンサスイヌテロメラーゼ逆転写酵素（ＳＹＮＣＯＮ  ｄＴＥＲＴ）を、ＢａｍＨＩ及びＮｏｔＩ部位でｐＧＸ０００１にクローニングすることによって生成した。コンセンサスイヌＴＥＲＴ配列を生成するために、ＧｅｎＢａｎｋから１９のＴＥＲＴ配列を収集し、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗ（ＤＮＡＳＴＡＲ）を用いて配列アライメントを行った後にコンセンサス配列を得た。多様性の高い残基（ソフトウェアによって「不一致レベル１及び２」と定義される）を含む位置では、天然のイヌＴＥＲＴに対してアミノ酸の選択を重み付けした。
【０１４４】
コンセンサスイヌＴＥＲＴ配列を生成するために使用されるＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号は以下のとおりである：ＮＰ＿００１０２６８００、ＮＰ＿００１０２６８００．１、ＸＰ＿００４４１１６８６、ＸＰ＿００４７６８４４６、ＸＰ＿００４８１２５５６、ＥＦＢ１４７８１、ＸＰ＿００４８１２５５４、ＸＰ＿００４７６８４４７、ＸＰ＿００４４４００９３、ＸＰ＿００４４１１６８７、ＸＰ＿００４８１２５５５、ＸＰ＿００４２７４５５８、ＮＰ＿９３７９８３、ＡＡＣ５１７２４、ＮＰ＿００１１７７８９６、ＸＰ＿００４３８０３４０、ＮＰ＿００１０３９７０７、ＸＰ＿００３９５０５４３、ＮＰ＿００１２３１２２９、及びＤＡＡ１７７５６。
【０１４５】
一旦、コンセンサスｄＴＥＲＴ配列が得られれば、２つの突然変異（Ｒ５７９Ｙ及びＤ９９６Ｙ）を組み込んで、寛容を破壊するのを補助した（例えば、Ｇｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ  １１３：４２５−４３３（２００４））。さらに、５つの突然変異（Ｋ６３３Ａ、Ｒ６３８Ａ、Ｄ７１９Ａ、Ｙ７２４Ａ及びＤ８７６Ａ）を、テロメラーゼ活性を廃止するために導入した（例えば、Ｗｅｉｎｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、１７：４９８−５０２（１９９７）を参照のこと）。最終改変コンセンサスｄＴＥＲＴ配列は、天然のイヌＴＥＲＴアミノ酸配列と９５．４％の配列同一性を共有する。上流のＫｏｚａｋ配列及びＩｇＥリーダー配列を、発現を増大させるためにＮ末端に付加した。発現レベルを最大にするために、コンセンサスｄＴＥＲＴ配列のコドン使用を、哺乳動物遺伝子のコドンバイアスに適合させた。ＲＮＡの翻訳のためのＤＮＡの最適化も行った：非常に高い（＞８０％）または極めて低い（＜３０％）ＧＣ含量の領域、及びシス作用配列モチーフ、例えば、内部ＴＡＴＡボックス、カイ部位及びリボソーム侵入部位が回避された。合成されたＳＹＮＣＯＮ  ｄＴＥＲＴを、ＢａｍＨＩ及びＮｏｔＩで消化し、発現ベクターｐＧＸ０００１にクローニングした。
【０１４６】
コンセンサスｄＴＥＲＴコード配列（配列番号１）を、ヒトサイトメガロウイルス前初期プロモーター（ｈＣＭＶプロモーター）とｂＧＨポリＡとの間でｐＧＸ０００１（修飾されたｐＶＡＸ１発現ベクター）にクローニングした。元のｐＶＡＸ１発現ベクターは、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）から入手した。修飾されたｐＶＡＸ１（ｐＧＸ０００１）発現ベクターのマップを図２に示す。
【０１４７】
ｐＧＸ０００１を作製するためにｐＶＡＸ１に導入された修飾は、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能なｐＶＡＸ１の報告された配列に基づいていた。これらの改変は以下に記載されており、プラスミドの増幅または抗原の転写及び翻訳を妨げない。ｐＧＸ０００１の配列のそれ以上の変化は、ｐＧＸ０００１を骨格として使用しているプラスミド産物のいずれにも今日まで観察されていない。
【０１４８】
ＣＭＶプロモーターにおけるＣ＞Ｇ  ２４１。
【０１４９】
ウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル（ｂＧＨポリＡ）の下流のＣ＞Ｔ  １１５８骨格。
【０１５０】
カナマイシン耐性遺伝子（ＫａｎＲ）の下流のＡ＞−２０９２の骨格。
【０１５１】
ｐＵＣの複製起点（ｐＵＣ  ｏｒｉ）におけるＣ＞Ｔ  ２４９３。
【０１５２】
ＲＮＡＳｅＨ部位の上流のｐＵＣ  Ｏｒｉの最末端のＧ＞Ｃ  ２９６９、及び
【０１５３】
塩基対２，３及び４を、ＣＭＶプロモーターの上流である骨格においてＡＣＴからＣＴＧに変化させた。
【０１５４】
この実施例の結果は、本発明のワクチンの生成を実証する。
【実施例２】
【０１５５】
この実施例は、マウスにおける本発明のｄＴＥＲＴ発現ワクチンの免疫原性を実証する。
【０１５６】
Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける細胞媒介免疫応答を誘導するｐＧＸ１４１４（実施例１に記載）の能力を調べた。簡単に述べると、８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝５）を２つの群に分けた：ナイーブ群及び大腿四頭筋に筋肉内注射（ＩＭ）によって２５μｇのｐＧＸ１４１４で免疫し、続いてＣＥＬＬＥＣＴＲＡ（登録商標）適応定電流デバイス（Ｉｎｏｖｉｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．、Ｐｌｙｍｏｕｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，ＰＡ）を用いて、エレクトロポレーション（ＥＰ）した群。このデバイスは、１秒の遅延によって離間された５２ｍｓパルス幅の２つの０．１アンペアパルスを送出するように構成されていた。マウスは２週間間隔で４回の免疫を受けた。最後の免疫から１週間後、マウスを屠殺し、脾臓を回収し、脾細胞を単離し、マウスＩＦＮ−γＥＬＩＳｐｏｔアッセイを行って抗原特異的細胞応答を前に記載のとおり評価した（Ｙａｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１３））（図３Ａを参照のこと）。要するに、ＥＬＩＳｐｏｔ  ９６ウェルプレートを、ＰＢＳ中で希釈したマウスＩＦＮ−γ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）に対するモノクローナル抗体でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。翌日、プレートを洗浄し、１％ＢＳＡ及び５％スクロースを補充したＰＢＳを用いて室温で２時間ブロックした。両方の研究グループからのマウス脾細胞を、完全培養培地（１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ１６４０）に再懸濁した１ウェルあたり２×１０５の細胞の投入細胞数で３回ずつ独立して添加した。ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）によって合成され、実施例１に記載されている天然のイヌＴＥＲＴ（ｄＴＥＲＴ）タンパク質またはＳＹＮＣＯＮ  ｄＴＥＲＴタンパク質のいずれかを表す、９アミノ酸ずつ重複する１５アミノ酸をそれぞれ含む２セットのペプチドを、２μｇ／ｍｌペプチドの濃度で４つのプールへプールした。５μｇ／ｍｌのコンカバリンＡを陽性対照として用い、完全培地を陰性対照としてそれぞれ使用した。プレートを含む脾細胞及びペプチドを、３７℃で、５％ＣＯ２雰囲気のインキュベーター中で２４時間インキュベートした。次いで、プレートを洗浄し、ビオチン化抗マウスＩＦＮ−γ検出抗体を添加し、プレートを４℃で一晩インキュベートした。プレートを洗浄し、製造業者の説明書（ＥＬＩＳｐｏｔ  Ｂｌｕｅ  Ｃｏｌｏｒ  Ｍｏｄｕｌｅ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）に従って発色を追跡した。自動ＥＬＩＳＰＯＴリーダー（Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓｈａｋｅｒ  Ｈｅｉｇｈｔｓ、ＯＨ）を用いてプレート上のスポットをカウントした。Ｓｐｏｔ  Ｆｏｒｍｉｎｇ  Ｕｎｉｔｓ（ＳＦＵ）の平均数を、データ表示のために１×１０６個の脾細胞に調整した。
【０１５７】
図３Ｂに示すように、ｐＧＸ１４１４免疫マウスにおけるＳＹＮＣＯＮ  ｄＴＥＲＴペプチドの４つのプールに対する全応答は、４４８±１０３ＳＦＵ／１０６脾細胞であり、これはナイーブ群のバックグラウンド応答よりも有意に高かった（１７±８ＳＦＵ／１０６脾臓細胞）（ｐ＜０．０５）。さらに、天然のｄＴＥＲＴペプチドに対するｐＧＸ１４１４によって誘導された免疫応答を評価した。ｐＧＸ１４１４免疫マウスにおける天然のｄＴＥＲＴペプチドの４つのプールに対する相加的な応答は、２６６±９８ＳＦＵ／１０６脾細胞であったが、ナイーブ群のバックグラウンド応答は、図３Ｃに示すように、１４±４ＳＦＵ／１０６脾臓細胞（ｐ＜０．０５）であった。
【０１５８】
この実施例の結果により、本発明のｄＴＥＲＴをコードするワクチンが、マッチしたＳＹＮＣＯＮ  ｄＴＥＲＴ及び天然のｄＴＥＲＴペプチドの両方に対してマウスにおいて免疫応答を生じることができたことが実証される。
【０１５９】
この実施例の結果、本発明のワクチンの生成が実証される。
【実施例３】
【０１６０】
ｐＧＸ１４１５は、配列番号５をコードする配列番号４のポリヌクレオチド配列を含むＤＮＡプラスミドである。配列番号５は、ヒトＣＭＶプロモーター（ｈＣＭＶプロモーター）及びウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル（ｂＧＨポリＡ）に作動可能に連結された、テロメラーゼ活性を破壊する７つの点突然変異（置換：Ｒ５７９Ｙ、Ｄ９９６Ｙ、Ｋ６３３Ａ、Ｒ６３８Ａ、Ｄ７１９Ａ、Ｙ７２４Ａ及びＤ８７６Ａを生じる）を有するイヌテロメラーゼ逆転写酵素（ｄＴＥＲＴ）ポリペプチドである。このプラスミド骨格は、カナマイシン耐性遺伝子（ＫａｎＲ）及びプラスミド複製起点（ｐＵＣ  ｏｒｉ）を含む。ｐＧＸ１４１５の遺伝的エレメントを表２に示し、ｐＧＸ１４１５の模式図を図５に示す。
【表２】
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【０１６１】
ｐＧＸ１４１５は、配列番号４を、ＢａｍＨＩ及びＸｈｏＩ部位でｐＧＸ０００１にクローニングすることによって生成した。
【０１６２】
前述の詳細な説明及び添付の実施例は、単なる例示に過ぎず、添付の特許請求の範囲及びその等価物によってのみ定義される、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではないことが理解される。
【０１６３】
開示された実施形態に対する様々な変更及び修正は、当業者には明らかであろう。本発明の化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成物、組成物、処方物、または使用方法に関するものを含むが、これらに限定されるものではない、このような変化及び改変は、本発明の精神及び範囲から逸脱することなくなされてもよい。
【０１６４】
完全性の理由から、本開示の様々な態様は、以下の番号の条項に記載されている。
【０１６５】
条項１．
配列番号１のポリヌクレオチド配列、配列番号１と少なくとも９５％同一であるポリヌクレオチド配列；配列番号２のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列；及び配列番号２と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列、またはそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるポリヌクレオチド配列を含む核酸分子を含むワクチン。
【０１６６】
条項２．上記核酸分子が、配列番号１のポリヌクレオチド配列を含む、条項１に記載のワクチン。
【０１６７】
条項３．上記核酸分子が、配列番号１と９５％同一であるポリヌクレオチド配列を含む、条項１に記載のワクチン。
【０１６８】
条項４．上記核酸分子が、配列番号２のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む、条項１に記載のワクチン。
【０１６９】
条項５．上記核酸分子が、配列番号２と９５％同一であるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む、条項１に記載のワクチン。
【０１７０】
条項６．上記核酸分子がプラスミドである、条項１〜５のいずれか１項に記載のワクチン。
【０１７１】
条項７．上記プラスミドが、配列番号３の核酸配列を含む、条項６に記載のワクチン。
【０１７２】
条項８．アジュバントをさらに含む、条項１〜７のいずれか１項に記載のワクチン。
【０１７３】
条項９．上記アジュバントが、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２８、またはＲＡＮＴＥＳである、条項８に記載のワクチン。
【０１７４】
条項１０．哺乳動物においてテロメラーゼ逆転写酵素（ＴＥＲＴ）に対する免疫応答を誘導する方法であって、条項１〜９のいずれか１項に記載のワクチンを、それを必要とする哺乳動物に投与することを包含し、これによって上記核酸分子が上記哺乳動物において発現され、かつ以下の免疫応答：
（ａ）ＴＥＲＴに特異的な体液性免疫応答、
（ｂ）ワクチンを投与されていない哺乳動物と比較して腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）及びインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）のレベルの上昇を含む炎症反応、及び
（ｃ）ＴＥＲＴに特異的な細胞性免疫応答、
のうちの１つ以上が誘導される、方法。
【０１７５】
条項１１．上記ＴＥＲＴがイヌＴＥＲＴ（ｄＴＥＲＴ）である、条項１０に記載の方法。
【０１７６】
条項１２．上記哺乳動物ががんを有する、条項１０〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【０１７７】
条項１３．哺乳動物のがんを処置する方法であって、条項１〜９のいずれか１項に記載のワクチンと薬学的に許容される担体とを含む組成物を、それを必要とする哺乳動物に投与することを包含し、上記核酸分子が哺乳動物で発現され、がんが処置される方法。
【０１７８】
条項１４．上記ワクチンがエレクトロポレーションによって投与される、条項１０〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【０１７９】
条項１５．上記哺乳動物がイヌである、条項１０〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【０１８０】
条項１６．上記がんが、黒色腫、前立腺癌、肝臓癌、子宮頸癌、再発性呼吸乳頭腫症（ＲＲＰ）、肛門癌、頭頸部癌、血液癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、肺癌、非小細胞肺癌、食道扁平上皮癌、膀胱癌、結腸直腸癌、胃癌、肝細胞癌、脳腫瘍、グリア芽細胞腫、膵臓癌、滑膜癌、精巣癌、及び胃癌からなる群より選択される、条項１３〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【０１８１】
条項１７．配列番号１のポリヌクレオチド配列または配列番号１と少なくとも９５％同一であるポリヌクレオチド配列を含む核酸分子。
【０１８２】
条項１８．配列番号２のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子。
【０１８３】
条項１９．配列番号３のポリヌクレオチド配列を含む、条項１７または条項１８に記載の核酸分子。
【０１８４】
条項２０．配列番号２のアミノ酸配列、配列番号５のアミノ酸配列、配列番号２と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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