(57)【要約】  本発明は、低分子ＲＮＡ分子のターゲティング配列を用いて花成性ＦＴ遺伝子または導入遺伝子の発現を減弱及び／または改良するのに有用な組換えＤＮＡ構築物、ベクター及び分子を提供する。トランスジェニック植物、植物細胞及び組織、ならびに組換え構築物、ベクター、及び分子を含む植物部分も提供する。花成性ＦＴ導入遺伝子を有するトランスジェニック植物は、サプレッションを介して、トランスジェニック植物上の結節あたりの丸莢、長角果、果実、木の実、またはさやを対照植物または野生型植物に比べてより多く産生し得る。さらに、組換えＤＮＡ構築物、ベクター、及び分子を植物に導入する方法、ならびにより高密度での方法を含む、圃場においてトランスジェニック植物を植栽する方法を提供する。本発明のトランスジェニック植物は、野生型または対照植物に比べて高い収量可能性を提供し得る。【選択図】図１Ａ
2019536443.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の発現カセット及び第２の発現カセットを含む組換えＤＮＡ構築物であって、前記第１の発現カセットが、第１の植物発現性プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を有し、前記第２の発現カセットが、前記第１の発現カセットの前記ポリヌクレオチド配列の少なくとも１５連続ヌクレオチドに少なくとも８０％相補的であるターゲティング配列を含むＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を有し、前記転写可能なＤＮＡ配列が、第２の植物発現性プロモーターに作動可能に連結される、前記組換えＤＮＡ構築物。
【請求項２】
前記ＲＮＡ分子の前記ターゲティング配列が、前記第１の発現カセットの前記ポリヌクレオチド配列の少なくとも１５連続ヌクレオチドまたは前記第１の発現カセットの前記ポリヌクレオチド配列によってコードされるｍＲＮＡに少なくとも８５％相補的である、請求項１に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項３】
前記転写可能なＤＮＡ配列が、配列番号６５、６８、または６９に対して少なくとも８０％相補的な配列を有する、請求項１に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項４】
前記花成性ＦＴタンパク質が、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、及び３０、またはその機能的断片からなる群から選択される配列に対して少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項５】
前記花成性ＦＴタンパク質が、以下のアミノ酸：配列番号１４のアミノ酸位置８５に対応する前記花成性ＦＴタンパク質のアミノ酸位置におけるチロシンまたは他の非荷電極性または非極性残基；配列番号１４のアミノ酸位置１２８に対応する前記花成性ＦＴタンパク質のアミノ酸位置におけるロイシンまたは他の非極性残基；及び配列番号１４のアミノ酸位置１３８に対応する前記花成性ＦＴタンパク質のアミノ酸位置におけるトリプトファンまたは他の大きな非極性残基のうちの１つ以上をさらに含む、請求項４に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項６】
前記花成性ＦＴタンパク質が、以下のアミノ酸：配列番号１４の８５位に対応するアミノ酸位置のリジンまたはアルギニンに対応するアミノ酸位置のヒスチジン；配列番号１４の１２８位に対応するアミノ酸位置のリジンまたはアルギニン；及び配列番号１４の１３８位に対応するアミノ酸位置のセリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジンまたはアルギニンのうちの１つ以上を有さない、請求項４に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項７】
前記ポリヌクレオチド配列が、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、及び２９からなる群から選択される配列に対し、少なくとも６０％同一である、請求項１に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項８】
前記第１の植物発現性プロモーターが、配列番号３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３及び６４、またはその機能的部分からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列に対し、少なくとも７０％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、請求項１に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項９】
前記第２の植物発現性プロモーターが、配列番号４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、またはその機能的部分からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列に対し、少なくとも７０％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、請求項１に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項１０】
前記第２の植物発現性プロモーターが、配列番号７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、及び９４、またはその機能的部分からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列に対し、少なくとも７０％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、請求項１に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項１１】
前記第１の植物発現性プロモーターが栄養期プロモーターであり、前記第２の植物発現性プロモーターが後期栄養期プロモーター及び／または生殖期プロモーターである、請求項１に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項１２】
前記第１の植物発現性プロモーターが早期栄養期プロモーターである、請求項１１に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項１３】
前記第２の植物発現性プロモーターが生殖期優先型プロモーターである、請求項１１に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項１４】
前記第２の植物発現性プロモーターが前記転写可能なＤＮＡ配列の検出可能な発現を開始するよりも早い発育段階において、前記第１の植物発現性プロモーターが、前記花成性ＦＴタンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド配列の検出可能な発現を開始する、請求項１に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項１５】
トランスジェニック植物の少なくとも１つの細胞のゲノムへの、請求項１に記載の組換えＤＮＡ構築物の挿入を含む、前記トランスジェニック植物。
【請求項１６】
前記トランスジェニック植物がダイズである、請求項１５に記載のトランスジェニック植物。
【請求項１７】
前記トランスジェニックダイズ植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、結節あたりのさやをより多く産生する、請求項１６に記載のトランスジェニック植物。
【請求項１８】
前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、結節あたりの花をより多く産生する、請求項１５に記載のトランスジェニック植物。
【請求項１９】
前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、前記トランスジェニック植物の結節あたりの種子、丸莢、長角果、果実、木の実またはさやをより多く産生する、請求項１５に記載のトランスジェニック植物またはその一部。
【請求項２０】
前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて早く開花する、請求項１５に記載のトランスジェニック植物またはその一部。
【請求項２１】
前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、結節あたりの総状花序をより多く有する、請求項１５に記載のトランスジェニック植物またはその一部。
【請求項２２】
植物発現性プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む組換えＤＮＡ構築物であって、前記ポリヌクレオチド配列が、前記ポリヌクレオチド配列によってコードされるｍＲＮＡ転写産物中の標的部位をコードする配列を含み、前記ｍＲＮＡ転写産物の前記標的部位が内在性ＲＮＡ分子に対して少なくとも８０％相補的である、前記組換えＤＮＡ構築物。
【請求項２３】
前記ｍＲＮＡ転写産物の前記標的部位が少なくとも１７ヌクレオチド長である、請求項２２に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項２４】
前記ｍＲＮＡ転写産物の前記標的部位が前記内在性ＲＮＡ分子に対して少なくとも８０％相補的である、請求項２２に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項２５】
前記ｍＲＮＡ転写産物の前記標的部位が、配列番号９５、９６、９７、１０３、１０４、または１０５に対して少なくとも８０％相補的である、請求項２２に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項２６】
前記花成性ＦＴタンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド配列が、配列番号９８、９９、１００、１０１、１０６、１０７、１０８、１０９または１１０に対して少なくとも８０％同一である配列を有する、請求項２２に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項２７】
前記ｍＲＮＡ転写産物の前記標的部位が、配列番号９９または１０７と少なくとも８０％同一である、請求項２２に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項２８】
前記花成性ＦＴタンパク質が、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、及び３０、またはその機能的断片からなる群から選択される配列に対して少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項２９】
前記植物発現性プロモーターが栄養期プロモーターである、請求項２２に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項３０】
前記植物発現性プロモーターが、分裂組織優先型または分裂組織特異的プロモーターである、請求項２２に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項３１】
前記植物発現性プロモーターが、配列番号３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３または６４、またはその機能的部分からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列と少なくとも７０％同一であるポリヌクレオチド配列を含む、請求項２２に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【請求項３２】
トランスジェニック植物の少なくとも１つの細胞のゲノムへの、請求項２２に記載の組換えＤＮＡ構築物の挿入を含む、前記トランスジェニック植物。
【請求項３３】
前記トランスジェニック植物がダイズである、請求項３２に記載のトランスジェニック植物。
【請求項３４】
前記トランスジェニックダイズ植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、結節あたりのさやをより多く産生する、請求項３３に記載のトランスジェニック植物。
【請求項３５】
前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、結節あたりの花をより多く産生する、請求項３２に記載のトランスジェニック植物。
【請求項３６】
前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、前記トランスジェニック植物の結節あたりの丸莢、長角果、果実、木の実またはさやをより多く産生する、請求項３２に記載のトランスジェニック植物またはその一部。
【請求項３７】
前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて早く開花する、請求項３２に記載のトランスジェニック植物またはその一部。
【請求項３８】
前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、結節あたりの総状花序をより多く有する、請求項３２に記載のトランスジェニック植物またはその一部。
【請求項３９】
栄養期プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含むトランスジェニック植物であって、前記花成性ＦＴタンパク質の発現が、後期栄養組織及び／または生殖組織において抑制される、前記トランスジェニック植物。
【請求項４０】
前記花成性ＦＴタンパク質の発現が、低分子ＲＮＡ分子によって抑制される、請求項３９に記載のトランスジェニック植物。
【請求項４１】
花成性ＦＴタンパク質をコードし、栄養期プロモーターに作動可能に連結されたポリヌクレオチド配列、及び前記ポリヌクレオチド配列の少なくとも一部に相補的なターゲティング配列を含むＲＮＡ分子をコードする少なくとも１つの転写可能なＤＮＡ配列を有する組換えＤＮＡ構築物。
【請求項４２】
トランスジェニック植物の少なくとも１つの細胞のゲノムへの、請求項４１に記載の組換えＤＮＡ構築物の挿入を含む、前記トランスジェニック植物。
【請求項４３】
栄養期プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードする組換えポリヌクレオチド配列を含み、前記ポリヌクレオチド配列の発現が、低分子ＲＮＡ分子によって空間的及び時間的に制限される、トランスジェニック植物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年１０月１９日に出願された米国仮出願第６２／４１０，３５５号及び２０１６年１０月２１日に出願された米国仮出願第６２／４１１，４０８号の優先権の利益を主張し、両文献はその全体を参照として本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は、作物植物の遺伝子改変によって花芽発達及び栄養生長を調節し、収量を増加させるための組成物及び方法に関する。
【０００３】
配列表の援用
２０１７年１０月１８日に作成された１７７，７９９バイト（ＭＳ−Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）で測定）のＰ３４４６１ＷＯ００＿ＳＥＱ．ｔｘｔという名称のファイルに含まれる配列表は、１１０個のヌクレオチド配列を有し、配列表は、その全体を参照として本明細書に援用する。
【背景技術】
【０００４】
栄養生長から開花への転換は、植物発生中の極めて重要なプロセスであり、作物植物における穀粒収量の生産に必要である。自律的な（環境的に独立した）経路に加えて、光周期性（すなわち日長）、春化（すなわち冬の寒さに対する応答）、及び植物ホルモン（例えば、ジベレリンまたはＧＡ）を含む、陸生植物の開花時期を制御するいくつかの主要な経路が存在する。植物の開花時期を制御する分子ネットワークには、春化経路及び光周期性経路が含まれる。誘導光周期条件下では、ソース葉におけるＣＯＮＳＴＡＮＳ（ＣＯ）活性はＦＬＯＷＥＲＩＮＧ  ＬＯＣＵＳ  Ｔ（ＦＴ）の発現を増加させ、これは分裂組織に移行してＬＥＡＦＹ（ＬＦＹ）、ＡＰＥＴＡＬＡ１（ＡＰ１）及びＳＵＰＰＲＥＳＳＯＲ  ＯＦ  ＯＶＥＲＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＯＦ  ＣＯ１（ＳＯＣ１）を含む下流の開花活性化遺伝子の発現を誘発する。ＦＬＯＷＥＲＩＮＧ  ＬＯＣＵＳ  Ｃ（ＦＬＣ）及びＴＥＲＭＩＮＡＬ  ＦＬＯＷＥＲ１（ＴＦＬ１）などの他の遺伝子は、これらの遺伝子の発現または活性を阻害するように作用する。
【０００５】
中日性植物を除くほとんどの顕花植物は一日の光周期に応答し、開花の誘導に必要とされる光周期条件に基づいて短日（ＳＤ）または長日（ＬＤ）植物として分類される。光周期とは、２４時間周期内の明期間と暗期間の相対的な長さまたは期間を指す。一般的に、長日植物は、日長が光周期の閾値を上回る場合に（例えば、春期において日が長くなるにつれて）開花する傾向にあり、短日植物は、日長が光周期の閾値を下回る場合に（例えば、夏至以降、日が短くなるにつれて）開花する傾向にある。言い換えれば、ＳＤ植物は日が短くなるにつれて開花するのに対し、ＬＤ植物は日が長くなるにつれて開花する。ダイズは、植物がより短い日光条件にさらされると開花が誘発される短日（ＳＤ）植物の一例である。
【０００６】
植物農家は、植物の収量を操作する、特に農学的に重要な作物の種子収量を高める新しい方法を常に模索している。したがって、当技術分野においては、様々な作物の収量を増加させる改良された組成物及び方法が常に求められている。現在、開花及び生殖発育に関連する農業形質を高めることにより、作物収量を向上させ得ることが提案されている。
【発明の概要】
【０００７】
一態様によれば、本開示は、第１の発現カセット及び第２の発現カセットを有する組換えＤＮＡ構築物を提供し、第１の発現カセットは、第１の植物発現性プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２の発現カセットは、第１の発現カセットのポリヌクレオチド配列の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対し、少なくとも８０％相補的なターゲティング配列を含むＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含み、転写可能なＤＮＡ配列は、第２の植物発現性プロモーターに作動可能に連結される。
【０００８】
一態様によれば、本開示は、植物発現性プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む組換えＤＮＡ構築物を提供し、ポリヌクレオチド配列は、ポリヌクレオチド配列によってコードされるｍＲＮＡ転写産物中の標的部位またはセンサーをコードする配列を含み、ｍＲＮＡ転写産物の標的部位は、内在性ＲＮＡ分子、例えば、内在性ｍｉＲＮＡまたはｓｉＲＮＡ分子に対して少なくとも８０％相補的である。
【０００９】
一態様によれば、本開示は、花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対し、少なくとも８０％相補的なターゲティング配列を含むＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡ構築物を提供し、転写可能なＤＮＡ配列は、植物発現性プロモーターに作動可能に連結される。
【００１０】
一態様によれば、本開示は、本開示の組換えＤＮＡ構築物を、植物、植物細胞、植物組織、及び植物部分のゲノムへ挿入したトランスジェニック植物、植物細胞、植物組織、及び植物部分を提供する。
【００１１】
一態様によれば、本開示は、（ａ）本開示の組換えＤＮＡ構築物を用いて外植片の少なくとも１つの細胞を形質転換し、（ｂ）形質転換した外植片からトランスジェニック植物を再生または発生させることを含む、トランスジェニック植物の産生方法を提供する。本方法はさらに、（ｃ）組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物と比較して、以下の形質または表現型：早い開花、長い生殖期間または開花期間、結節あたりの花の数の増加、結節あたりの総状花序の数の増加、結節あたりのさや、丸莢、長角果、果実、または木の実、及び結節あたりの種子の数の増加の１つ以上を有するトランスジェニック植物を選択することを含み得る。
【００１２】
一態様によれば、本開示は、農場においてトランスジェニック作物をより高密度で栽培することを含む、トランスジェニック作物の栽培方法を提供し、その場合、トランスジェニック作物には本開示の組換えＤＮＡ構築物を挿入する。
【００１３】
一態様によれば、本開示は、第１の植物発現性プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列をコードするポリヌクレオチド配列を含むトランスジェニック植物を提供し、第２の発現カセットは、第１の発現カセットの少なくとも１５連続ヌクレオチドに対し、少なくとも８０％相補的なターゲティング配列を含むＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含み、転写可能なＤＮＡ配列は、第２の植物発現性プロモーターに作動可能に連結される。一態様によれば、本開示は、花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対し、少なくとも８０％相補的なターゲティング配列を含むＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を有するトランスジェニック植物を提供し、転写可能なＤＮＡ配列は植物発現性プロモーターに作動可能に連結される。
【００１４】
一態様によれば、本開示は、非トランスジェニック対照植物に比べて、平均で、結節あたりより多くの種子、さや、丸莢、長角果、果実、木の実または塊茎、例えば、非トランスジェニック対照植物に比べて、結節あたり、平均で少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも１７５％、少なくとも２００％、少なくとも２５０％、少なくとも３００％、少なくとも３５０％、または少なくとも４００％多くの種子、さや、丸莢、長角果、果実、木の実または塊茎を有し得るトランスジェニック植物を提供する。一態様によれば、トランスジェニック植物は、非トランスジェニック対照植物に比べて、結節あたり平均で、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、または少なくとも１０以上の種子、さや、丸莢、長角果、果実、木の実または塊茎を有し得る。一態様によれば、トランスジェニック植物は、非トランスジェニック対照植物に比べて、結節あたり平均で、２〜１０、２〜９、２〜８、２〜７、２〜６、２〜５、２〜４、２〜３、３〜１０、３〜９、３〜８、３〜７、３〜６、３〜５、３〜４、４〜１０、４〜９、４〜８、４〜７、４〜６、または４〜５以上の種子、さや、丸莢、長角果、果実、木の実または塊茎を有し得る。一態様によれば、トランスジェニック植物は、野生型または非トランスジェニック対照植物に比べて、結節あたり平均で、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、または少なくとも１０以上の種子、さや、丸莢、長角果、果実、木の実または塊茎を有し得る。一態様によれば、トランスジェニック植物は、非トランスジェニック対照植物に比べて、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、少なくとも１４日、少なくとも１５日、少なくとも２０日、少なくとも２５日、少なくとも３０日、少なくとも３５日、少なくとも４０日、または少なくとも４５日早く開花し得る。
【００１５】
一態様によれば、本開示は、栄養期プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含むトランスジェニック植物を提供し、花成性ＦＴタンパク質の発現は、後期の栄養組織及び／または生殖組織において抑制される。
【００１６】
一態様によれば、本開示は、花成性ＦＴタンパク質をコードし、栄養期プロモーターに作動可能に連結されたポリヌクレオチド配列、及びそのポリヌクレオチド配列の少なくとも一部に相補的なＲＮＡターゲティング配列をコードする少なくとも１つの配列を含む組換えＤＮＡ構築物を提供する。
【００１７】
一態様によれば、本開示は、栄養期プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードする組換えポリヌクレオチド配列を含むトランスジェニック植物を提供し、そのポリヌクレオチド配列の発現は、低分子ＲＮＡ分子によって空間的及び時間的に制限される。
【００１８】
一態様によれば、本開示は、発現カセットを含む組換えＤＮＡ構築物を提供し、発現カセットは、プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含み、プロモーターは、配列番号３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３または５４、またはそれらの機能部分からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列に対し、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一である。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１Ａ】様々なＦＴ遺伝子の各組み合わせについてのそれらの同一性の割合を含むヌクレオチド配列の比較を示すマトリックス表を提供する。
【図１Ｂ】様々なＦＴタンパク質の各組合せについてのそれらの同一性の割合を含むタンパク質配列の比較を示すマトリックス表を提供する。
【図１Ｃ】配列番号２のＧｍ．ＦＴ２ａ、配列番号６のＧｍ．ＦＴ２ｂ、配列番号１２のＬｅ．ＦＴ、及び配列番号２０のＰｔ．ＦＴ、配列番号１８のＯｓ．ＨＤ３ａ、配列番号１４のＡｔ．ＦＴ、配列番号１６のＡｔ．ＴＳＦ、配列番号１０のＮｔ．ＦＴ、配列番号４のＧｍ．ＦＴ５ａ及び配列番号８のＺｍ．ＺＣＮ８として識別される様々なＦＴタンパク質のＣＬＵＳＴＡＬ２．０．９多重配列アラインメントを提供する。
【図２】短日または長日の光照射の１、３及び５日後に収集したダイズの葉及び頂端組織における全ＦＴ転写レベルを示す。
【図３】早期ダイズ発育時のＧＵＳ活性のモニタリングによるｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターの発現パターンを示す。Ａ〜Ｏは染色組織の白黒画像のセットである。Ａ〜Ｃは、３日齢の発芽苗における発現を示す。Ｄ〜Ｉは、１０日齢の栄養シュート（１４時間の明期／１０時間の暗期の光周期で生長）における発現を示す。Ｊ〜Ｌは、１６日齢の生殖シュートにおける発現を示す。Ｍ〜Ｏは、３０日齢の生殖シュートの成熟葉及び未成熟葉における発現を示す。バーは１００μｍである。
【図４】早期ダイズ発育時のＧＵＳ活性のモニタリングによるｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターの発現パターンを示す。Ａ〜Ｏは、図３Ａ〜Ｏに対応しているが、青色ＧＵＳ染色に対してフィルタリングしている。Ａ〜Ｃは、３日齢の発芽苗における発現を示す。Ｄ〜Ｉは、１０日齢の栄養シュート（１４時間の明期／１０時間の暗期の光周期で生長）における発現を示す。Ｊ〜Ｌは、１６日齢の生殖シュートにおける発現を示す。Ｍ〜Ｏは、３０日齢の生殖シュートの成熟葉及び未成熟葉における発現を示す。バーは１００μｍである。
【図５】Ａ〜Ｆは、発育のＲ１期及び開花期（発芽後３５〜４０日）の間のｐＡＴ．Ｅｒｅｃｔａプロモーター存在下でのＧＵＳ発現パターンを示す。染色組織の白黒画像のセットである。Ａは、花序の茎または小花柄での発現を示す（矢印）。Ｂは、花梗での発現を示す（矢印）。脈管構造及び柔組織細胞においても発現は示される（図５Ｃ）。雄ずいの花糸（矢印）においても発現は示される（図５Ｄ）。非受粉胚珠（矢印）においても発現は示される（図５Ｅ、図５Ｆ）。バーは１ｍｍである。
【図６】発育のＲ１期及び開花期（発芽後３５〜４０日）の間のｐＡＴ．Ｅｒｅｃｔａプロモーター存在下でのＧＵＳ発現パターンを示す。Ａ〜Ｆは、図５Ａ〜Ｆに対応しているが、青色ＧＵＳ染色に対してフィルタリングしている。Ａは、花序の茎または小花柄での発現を示す（矢印）。Ｂは、花梗での発現を示す（矢印）。脈管構造及び柔組織細胞においても発現は示される（図６Ｃ）。雄ずいの花糸（矢印）においても発現は示される（図６Ｄ）。非受粉胚珠（矢印）においても発現は示される（図６Ｅ、図６Ｆ）。バーは１ｍｍである。
【図７】走査型電子顕微鏡（ｅＳＥＭ）分析を用いた、植え付け後７日目の野生型対ＧｍＦＴ２ａ発現トランスジェニック植物由来の茎頂分裂組織（ＳＡＭ）の切片画像を示す。
【図８】Ｇｍ．ＦＴ２ａを発現するトランスジェニック事象由来の腋生花序原基（植え付けの９日後に収集）と比較した、野生型植物由来の腋生花序原基（植え付けの２７日後に収集）の走査型電子顕微鏡（ｅＳＥＭ）顕微鏡写真を示す。
【図９】ダイズにおけるＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターによって駆動されるＧｍ．ＦＴ２ａ発現の効果を示す。Ａは、正常な腋芽を示すヌル分離体を示す。それに対してＢ及びＣ（Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子についてホモ接合性またはヘミ接合性の植物に対応する）は、ヌル分離個体に比べて、早期開花及び結節あたりのさやの増加を示す。
【図１０】示すように、Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子についてヘミ接合性及びホモ接合性の植物の隣に、野生型ヌル分離個体の植物全体画像を示す。
【図１１】示すように、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ−Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子についてホモ接合性またはヘミ接合性の植物の主茎の画像を、ヌル分離個体と比較して示す。
【図１２】ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａまたはｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ／ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ａｐｘのいずれかで形質転換した植物の植物全体画像を示す。
【図１３】ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ単独またはｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ＋ｍｉＲ１７２標的部位のいずれかで形質転換した植物の植物全体画像を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
詳細な説明
収量を向上させるという目標は、農業全般にわたって全ての作物に共通である。本発明は、開花時期、生殖発育、及び栄養生長に関連する形質を改変し、一つ以上の開花及び／または収量関連形質または表現型、例えば、植物あたりの花、種子及び／またはさやの数、及び／または植物の結節あたりの（及び／または主茎あたりの）花、種子及び／またはさやの数を改善することによって、開花（被子植物）または種子植物の収量を向上させる方法及び組成物を含む。いかなる理論にも拘泥するものではないが、本発明の組成物及び方法は、花の分裂組織の数を増加させ、側生分裂組織の解放の同期を高め、及び／または植物のさやまたは種子の発育期間（生殖期間など）を延長することによって、植物の収量を向上させるように作用し得る。
【００２１】
従前に、ダイズなどの短日植物を長日条件下（例えば、１日あたり約１４〜１６時間の光照）で生長させ、次いでそれらの植物を短日生長条件（例えば、約３〜２１日間にわたって１日当たり約９〜１１時間の光照）にさらした後、植物を長日（無誘導）生長条件に戻すと、植物あたりのさや／種子数（ならびに結節あたり及び／または枝あたりのさや／種子数）が増加した植物が産生されたことが見出された。例えば、その全体の内容及び開示を参照として本明細書に援用する、米国特許第８，９３５，８８０号及び米国特許出願公開第２０１４／０２５９９０５号参照。栄養生長期における人工的な「短日」誘導光照射は、一つ以上の収量関連形質または表現型を変化させる（例えば、植物の結節あたりのさやまたは種子の数を増加させることによって）ように開花時期を変更することができるだけでなく、これらの照射の効果が、植物あたりの（及び／または植物の結節あたりの）花、種子及び／またはさやの数について、（ｉ）短日曝露期間（すなわち、花成誘導シグナル用量）及び（ｉｉ）長日条件下での短日後の光周期の長さ（すなわち、短日誘導シグナル後の栄養生長誘導シグナルの用量または長さ）に応じた用量依存的なものであったことも明らかにした。より弱いかまたはより延長期間の短い早期短日誘導（ｅＳＤＩ）照射を受けている（長日生長条件に戻す前に）ダイズ植物は、植物あたりの花、さや及び種子が多く、より正常な草高及び成熟度を有していた一方で、より強いかまたはより長期間のｅＳＤＩ照射に曝露させたダイズ植物では、植物あたりのさや及び種子の数がより少なく（おそらくは、結節あたりのさや及び／または種子の数は増加しているにもかかわらず）、より短く、より早く生長が停止する植物が生じた。
【００２２】
ダイズにおけるこの短日誘導表現型を用いて、これらの植物において発現が変化した遺伝子を転写プロファイリングにより同定した。これらの研究により、短日誘導照射に応答して発現が増加した内在性ＦＴ遺伝子Ｇｍ．ＦＴ２ａを含む、これらの照射ダイズ植物において発現が変化したいくつかの遺伝子を同定した。したがって、トランスジェニックＦＴ発現を短日誘導の代わりに用いて、種子の収量を増加させるか、植物の生殖形質もしくは表現型を改変するか、またはその両方を成し得ることが提案される。顕花植物または種子植物におけるＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子もしくは他のＦＴ配列、またはその機能的断片、ホモログもしくはオルソログの異所性発現を用いて、種子の収量を増加させ、及び／または植物あたりのさや／種子の数（及び／または植物の結節もしくは主茎あたりのさや／種子の数）の増加を含み得る１つ以上の生殖表現型もしくは形質を改変してもよい。以下にさらに説明するように、特定の植物種に応じて、これらの収量関連のまたは生殖の表現型または形質は、マメ科植物のさやに類似する他の植物構造、例えば、丸莢、長角果、果実、木の実、塊茎などにも適用し得る。したがって、ＦＴ配列を異所的に発現する植物は、代わりに、植物の結節（複数可）、主茎、及び／または枝（複数可）あたり、より多くの丸莢、長角果、果実、木の実、塊茎などを、または植物あたり、より多くの丸莢、長角果、果実、木の実、塊茎などを有し得る。
【００２３】
Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ｌｏｃｕｓ  Ｔ（ＦＴ）遺伝子は、高等植物において重要な役割を果たし、開花経路を統合するように機能する。ＦＴタンパク質は、葉から茎頂端に移動し、多様な種における生殖発育の開始を誘発する移動性シグナルまたはフロリゲンとして機能することが示されている。例えば、その内容及び開示の全体を参照として本明細書に援用する、Ｊａｅｇｅｒ，Ｋ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｎｔｅｒｌｏｃｋｉｎｇ  ｆｅｅｄｂａｃｋ  ｌｏｏｐｓ  ｇｏｖｅｒｎ  ｔｈｅ  ｄｙｎａｍｉｃ  ｂｅｈａｖｉｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆｌｏｒａｌ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｉｎ  Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ，”Ｔｈｅ  Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ，［２５］：８２０−８３３（２０１３）；Ｃｏｒｂｅｓｉｅｒ，Ｌ  ｅｔ  ａｌ．，“ＦＴ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｍｏｖｅｍｅｎｔ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｌｏｎｇ  ｄｉｓｔａｎｃｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｆｌｏｒａｌ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ，”Ｓｃｉｅｎｃｅ  ［３１６］：１０３０−１０３３（２００７）；Ｊａｅｇｅｒ，ＫＥ  ｅｔ  ａｌ．，“ＦＴ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｃｔｓ  ａｓ  ａ  ｌｏｎｇ  ｒａｎｇｅ  ｓｉｇｎａｌ  ｉｎ  Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ，”Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ  ［１７］：１０５０−１０５４（２００７）；及びＡｍａｓｉｎｏ，Ｒ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  Ｔｉｍｉｎｇ  ｏｆ  Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ，”Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，［１５４］（２）：５１６−５２０（２０１０）参照。Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓでは、ＦＴタンパク質は、分裂組織内の１４−３−３及びＦｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ｌｏｃｕｓ  Ｄ（ＦＤ）タンパク質と結合して開花複合体を形成し、茎頂でＡＰＥＴＡＴＡＬ１（ＡＰ１）及びＳＯＣ１などの主要な開花分裂組織の同一性遺伝子の活性化を引き起こす。例えば、Ｔａｏｋａ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，“１４−３−３  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｃｔ  ａｓ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｒｉｃｅ  Ｈｄ３ａ  ｆｌｏｒｉｇｅｎ．”Ｎａｔｕｒｅ  ［４７６］：３３２−３３５（２０１１）参照。ＴＥＲＭＩＮＡＬ  ＦＬＯＷＥＲ１（ＴＦＬ１）遺伝子は、茎頂分裂組織（ＳＡＭ）の中心を栄養状態に維持するＦＴ標的の重要なリプレッサーである。ＴＦＬ１は、ＬＥＡＦＹ（ＬＦＹ）及びＡＰ１遺伝子を抑制することによって作用する。したがって、標的組織中のＦＴ及びＴＦＬ１の相対濃度が競合的に作用して、分裂組織の栄養相から、さらなる栄養生長を停止させ得る生殖相への転換のタイミングを制御する。例えば、Ａｂｅ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ［３０９］：１０５２−１０５５（２００５）；及びＭｃＧａｒｒｙ，ＲＣ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ［１８８］／［１８９］：７１−８１（２０１２）参照。
【００２４】
ＦＴ遺伝子は多くの様々な種から同定されており、異所性ＦＴ発現は早期開花を誘導することが報告されている。例えば、その内容及び開示の全体を参照として本明細書に援用する、Ｋｏｎｇ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｗｏ  Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  Ｈｏｍｏｌｏｇｓ  ｏｆ  Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ｌｏｃｕｓ  Ｔ  Ａｒｅ  Ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  Ｐｈｏｔｏｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ  ｉｎ  Ｓｏｙｂｅａｎ，”Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ［１５４］：１２２０−１２３１（２０１０）；Ｔｕｒｃｋ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｄｅｎｔｉｔｙ  ｏｆ  ｆｌｏｒｉｇｅｎ：Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ｌｏｃｕｓ  Ｔ  ｍｏｖｅｓ  ｃｅｎｔｅｒ  ｓｔａｇｅ，”Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｐｌａｎｔ  Ｂｉｏｌ  ［５９］：５７３−５９４（２００８）；Ｂｌａｃｋｍａｎ，ＢＫ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｒｅｃｅｎｔｌｙ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ＦＴ  ｐａｒａｌｏｇｓ  ｉｎ  ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａｔｉｏｎ，”Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ  ［２０］：６２９−６３５（２０１０）；Ｌｉｆｓｃｈｉｔｚ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  ｔｏｍａｔｏ  ＦＴ  ｏｒｔｈｏｌｏｇｓ  ｔｒｉｇｇｅｒｓ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｓｉｇｎａｌｓ  ｔｈａｔ  ｒｅｇｕｌａｔｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ  ａｎｄ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  ｄｉｖｅｒｓｅ  ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  ｓｔｉｍｕｌｉ，”ＰＮＡＳ  ［１０３］：６３９８−６４０３（２００６）；Ｔｒａｎｋｎｅｒ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｏｖｅｒ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ＦＴ−ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｇｅｎｅ  ｏｆ  ａｐｐｌｅ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｅａｒｌｙ  ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ  ｉｎ  ａｎｎｕａｌ  ａｎｄ  ｐｅｒｅｎｎｉａｌ  ｐｌａｎｔｓ，”Ｐｌａｎｔａ  ［２３２］：１３０９−１３２４（２０１０）；及びＸｉａｎｇ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ｌｏｃｕｓ  Ｔ  ｏｒｔｈｏｌｏｇｓ  ｆｒｏｍ  ｓｐｒｉｎｇ  ｏｒｃｈｉｄ  （Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ  ｇｏｅｒｉｎｇｉｉ  Ｒｃｈｂ．ｆ．）ｔｈａｔ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ  ｔｏ  ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，”Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  ＆  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ［５８］：９８−１０５（２０１２）参照。しかしながら、ＦＴ導入遺伝子の発現を用いた先行研究は、非常に重度の表現型、非細胞自律（全身）表現型、または対照よりも早く開花し、発育の早期に生長が停止する植物または実生を伴う自律葉特異的表現型のいずれかを生じる構成的または組織特異的プロモーターを使用していた。これらの知見をもとに、異所性ＦＴ発現は、開花の誘導または開花時期の変更による植物の収量増加の実行可能なアプローチとして一般的に見なされてはいなかった。
【００２５】
理論に拘泥するものではないが、早期花成シグナル（例えば、ダイズ及び他のＳＤ植物については短日）は、植物における栄養相から生殖相への早期の転換を誘発し得るが、その主要な分裂組織のサブセットの生長停止も引き起こし得る。しかしながら、これらの植物を初期ＳＤシグナルの後に非誘導的生長条件（例えば、ＳＤ植物については長日）に戻すことによって、植物の残りの分裂組織の予備を保存して植物の継続的な栄養生長を可能にし得る。したがって、より長期の生殖相の間に、結節あたり（及び／または植物あたり）の生産的な花、さや及び／または種子がより多く発育し得る。早期花成誘導では、植物の生殖発育と栄養生長との間に、より大きな重複もまた生成される場合があり、それはさらに生殖期間及び／または開花期間の延長を促進するかまたはそれと同時に起こり得る。本明細書中で使用する場合、「生殖期間」とは、開花の開始から種子／さやの発育の終了及び／または結莢までの期間の長さを指し、「開花期間」または「開花の期間」とは、最初の開花の出現から、最後の開花が閉じるまでの期間の長さを指す。分裂生長の停止及び植物の成熟に起因して、後に植物資源の減少と同時に起こり得る、短日植物における通常の花芽発達とは異なり、早期の花成誘導後に非誘導的な生長条件に戻すことによって、より豊富な資源が利用可能であり、より早期に同期化した成功裏の（すなわち、生長停止しない）花、さや及び／または種子を、植物あたり、より多く産生することに向かわせ得る。
【００２６】
しかしながら、上述のように、花成誘導シグナル（例えば、早期の短日条件）はまた、早期開花に加えて植物の早期生長停止を引き起こし得る。したがって、花成誘導シグナルの最適な用量及びタイミングは、（ｉ）早期花成誘導シグナルによる栄養相から生殖相への早期転換及び／または開花の同期（植物の各結節での潜在的な収量をもたらす）を、（ｉｉ）より早期の生長停止（節間部の数が少なく、分枝が少なく、植物あたりの結節及び／または花がより少ない、より小さな植物をもたらす）に対してバランスさせることによって収量を最大にするために必要とされ得る。植物の早期生長停止を低減または最小化する一方で開花を誘導するのに、より低い用量の花成誘導シグナルで十分である可能性があり、それにより、結節あたり（及び／または植物あたり）の花、さや及び／または種子の数が増加してより大きな植物が産生される。他方、より高い用量の花成誘導シグナルは、（早期開花に加えて）植物の早期生長停止を引き起こして、通常の生長条件下での野生型または対照植物に比べて、おそらく結節あたり（及び／または植物あたり）の花、さや及び／または種子の数が多いにもかかわらず、植物あたりの節間部及び／または枝がより少ない、より小さい植物サイズであるために、植物あたりの花、さや及び／または種子が比較的少ない、より小さい植物を産生し得る。上記のように、異所性ＦＴ発現のこれらの効果には、特定の植物種に応じて、結節あたり（及び／または植物あたり）の、より多くの丸莢、長角果、果実、木の実、塊茎などが含まれ得る。
【００２７】
ダイズにおける上記の「短日」光誘導表現型を用いて、転写プロファイリングを介してそれらの植物において発現が変化した遺伝子をスクリーニングし、その結果、短日誘導処理に応答して発現が増加した内在性ＦＴ遺伝子Ｇｍ．ＦＴ２ａを同定した。したがって、Ｇｍ．ＦＴ２ａのような植物由来のＦＴ導入遺伝子の発現を花成誘導シグナルとして使用することにより、ＦＴ導入遺伝子を有さない野生型または対照植物に比べて、早期開花ならびに結節あたり（及び／または植物あたり）の花、さや及び／または種子の増加を引き起こし得る。本発明の実施形態によれば、栄養生長期の間の花成性ＦＴ発現のタイミング、位置及び用量の適切な制御を用いて、開花を誘導し、ＦＴ導入遺伝子を有さない野生型または対照植物に比べて結節あたりの花、さや及び／または種子が増加した植物を産生することができる。ｅＳＤＩ光線照射の代わりに、ＦＴを栄養芽分裂組織において低レベルで発現させ、早期花成誘導シグナルを提供してもよい。したがって、栄養生長期の間により低い分裂組織発現を有するＥｒｅｃｔａ遺伝子由来のプロモーター（ｐＥｒｅｃｔａまたはｐＥｒ）を、Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子を用いた初期試験のために選択した。しかしながら、構成的ＦＴ発現が重度の早期生長停止表現型を有する植物を産生すること、さらには末梢で産生され葉から転位するＦＴの作用部位が分裂組織内にあることを示した先行研究を考慮すると、分裂組織でＦＴを直接発現させることにより、構成的ＦＴ発現に比べて、さらに強力で重度の表現型（及び／または生存不能な植物）を生み出し得る可能性があった。
【００２８】
ｐＥｒｅｃｔａプロモーターを用いたＧｍ．ＦＴ２ａ過剰発現の効果はＲ0形質転換ダイズ植物において直ちに認められ、このダイズ植物が、早期開花、種子収量の減少（例えば、約８種子／植物のみ）、及び非常に早期の生長停止を示したことは、花成誘導と花成抑制／栄養生長のバランスが開花と早期生長停止を強く選好していたことを示唆した。しかしながら、これらの植物から、さらなる実験を実施できる、十分なＲ１種子を回収した。温室内で長日（花成抑制）の光周期条件下でＲ1ダイズ種子を生長させることにより、Ｒ0植物で観察される早期開花及び生長停止表現型を遅延させ得ることを提案した。理論的な用量反応を考慮し、ＦＴ２ａホモ接合型、ヘミ接合型、及びヌルダイズ植物の分離を温室内で一緒に試験し、ＦＴ過剰発現から生じる用量反応を評価することをさらに提案した。これらの実験において（以下にさらに記載するように）、分離植物は異なる表現型を有することが観察された：ヌル植物が、植物アーキテクチャー及び結節あたり（及び植物あたり）のさやの点で野生型植物と類似していた一方で、ホモ接合型は、重度の矮性表現型を伴って（おそらくは結節あたりのさや数の増加を伴うが）早期に生長停止した。しかしながら、ヘミ接合型植物は、より大きく、ヌルまたは野生型植物とより類似していたが、結節あたり（及び／または植物あたり）のさやの数の増加と共に開花表現型の増加を示した。これらの知見は、花成性ＦＴ導入遺伝子の栄養相及び／または分裂期発現を用いて高収量植物（ｅＳＤＩ照射と同様）を産生し得ること、ならびに、弱い分裂促進プロモーターの制御下にあるＦＴ２ａ導入遺伝子についてヘミ接合型であるダイズ植物が、長日（栄養相）条件下で生長させた場合にホモ接合型ＦＴ２ａ植物で観察される、より重度の早期生長停止及び短い草高表現型を伴わずに、結節あたりのさやの増加の高収率表現型を示したことから、ＦＴ発現の効果が用量依存的であり得ることを示す。
【００２９】
したがって、適切な用量レベルでのＦＴ導入遺伝子の栄養期での発現を用いて、ＦＴ導入遺伝子を有さない野生型または対照植物に比べて、早期の開花を誘導し、結節あたりの花、さや、丸莢、長角果、果実、木の実、塊茎及び／または種子を増加させる植物を産生し得る。ＦＴの適切な用量レベルは、ＦＴ導入遺伝子の発現を駆動するために選択するプロモーターに基づいて達成され得る。栄養芽分裂組織におけるより弱いかまたはより低い発現レベルのＦＴ導入遺伝子を用いて、生殖発育及び／または花芽発達の持続期間を維持または延長し、植物生長の停止を早めさせすぎないようにする一方で、早期花成誘導シグナルを提供し得る。ここでも、栄養生長期の間に低い分裂組織発現を有するＥｒｅｃｔａ遺伝子由来のプロモーター（ｐＥｒｅｃｔａまたはｐＥｒ）を、ダイズ植物におけるＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子を用いた初期試験のために選択した。以下にさらに記載するように、栄養芽分裂組織において類似のパターン及び発現レベルを有する他のプロモーターは、ダイズ植物において早期開花及び／または結節あたりのさやの増加などの類似の効果を有していた。導入遺伝子の発現レベルに影響を及ぼすためのプロモーター選択とは別に、またはそれに加えて、ダイズまたは他の種由来の異なるＦＴ導入遺伝子を使用してもよく、それは植物細胞におけるトランスジェニックＦＴタンパク質の活性のレベルに応じて栄養芽分裂組織に送達される早期ＦＴシグナルの「用量」を減らし得る。実際、ダイズ及び他の植物種由来のいくつかのＦＴ導入遺伝子を試験し、ダイズ植物においてトランスジェニック発現させると開花及び他の生殖形質に様々な影響を与えることが示された。
【００３０】
理論に拘泥するものではないが、トランスジェニックＦＴ植物における結節あたりのさやの数の増加は、影響を受けたそれぞれの結節（複数可）における栄養茎頂及び腋芽分裂組織から誘導される花序及び花芽分裂組織の数の増加に少なくとも部分的には起因する可能性があり、それは、それらの結節（複数可）においてより多くの花及び／または総状花序の解放を生じさせ得る。ＦＴ過剰発現に応答して植物の各結節で誘導される花芽分裂組織の数のそのような増加は、開花時期及び／または生殖期間とは無関係であり得る１つ以上の機構または経路を通じて作用し得る。しかしながら、分裂組織の変化は、最初は微視的である可能性があるため、分裂組織への生殖変化がすでに生じ始めている場合でも、単純な目視検査ではそのような段階で「早期開花」の誘発は観察されない。早期の栄養相でのＦＴ発現は、トランスジェニック植物の１つ以上の結節（複数可）において、より生殖性の分裂組織を正常より早く形成及び発生させる可能性がある。その後、これらの生殖分裂組織は、各結節において、より多くの総状花序を形成させ、花と共に伸長させることができる可能性がある。理論に拘泥するものではないが、生殖相の間の後期ＦＴ発現は、各結節でのさらなる花芽発達を抑制するように機能し得ることがさらに理論づけられる。したがって、それぞれの総状花序内で後期に発達する花は生長停止する可能性があり、したがって、より多くの植物資源を総状花序内でより早く発達する花及び生殖構造に向かわせ、より大型のさやをより効果的に産生し得る。早期花成誘導シグナルはまた、既存の潜在的分裂組織の大部分を生殖性にし、花芽発達を引き起こし得る。したがって、花芽発達の同調性の増加が、植物の結節あたりに形成されるより多数の成熟型のさやと共に生じ得る。
【００３１】
しかしながら、上記のように、花成誘導シグナルはまた、早期開花に加えて植物発育の早期生長停止を引き起こす。ｐＥｒｅｃｔａプロモーターなどの栄養期分裂組織プロモーターを有する様々なＦＴ導入遺伝子（複数可）を発現するダイズ植物は、植物の主茎上に結節あたりのさやをより多く有するが、これらのトランスジェニックＦＴ植物の多くは、依然として植物の草高及び／または分枝の低下を示し、その結果、植物、主茎及び／または枝（複数可）あたりの結節数の低下を示す。したがって、植物におけるＦＴ発現のレベルを、特定の栄養期プロモーターの選択によって制御し、発育異型を軽減し、早期生長停止を遅らせることによって収量を増強し得る一方で、トランスジェニックＦＴ発現ダイズ植物では依然として開花結節数が減少する可能性があり、それは、主茎上に存在する結節あたりのさやの数を増加させるものの、植物の全体的な収量を低下させ得る。
【００３２】
したがって、現在、栄養期にＦＴ発現を有するダイズ植物において、結節あたりのさやの増加は観察されるものの、ＦＴ導入遺伝子発現のレベルをさらに減弱、制御または制限し、これらの早期生長停止表現型を軽減し、それによってより最適な収率を達成する必要があり得ることを提案する。早期生長停止を回避または遅延することなどによって、植物あたりの結節数を増加させる一方で、植物の結節あたりのさや（または他の植物構造、例えば、丸莢、長角果、果実、木の実、塊茎など）の数の増加を維持できる場合、その結果として植物の全収量はさらに最適化または向上する可能性がある。
【００３３】
本発明の実施形態により、現在、サプレッションによりＦＴ導入遺伝子発現のレベル及び／またはタイミングを減弱または改変することによって、植物の収量を増加または増強し得ることを提案する。以下にさらに記載するように、サプレッションのためにトランスジェニックＦＴを標的とする天然及び／または人工的に作製されたＲＮＡ分子を介して、トランスジェニックＦＴの量及び／または時空間パターンを低減及び／または改良してもよい。腋芽分裂組織及び頂端分裂組織におけるトランスジェニックＦＴ発現は、それらの花芽分裂組織への転換を開始し得るが、生殖生長期の間などにおける継続的なＦＴ発現は、分裂組織の早期生長停止ならびに全体的な草高及び分枝の阻害を引き起こし得ると考えられる。ＦＴ導入遺伝子を発現するための栄養期プロモーターを選択して使用し、早期生長停止表現型を減少させ、植物の栄養生長及び生殖期間を維持または延長し得るが、ＦＴ導入遺伝子のさらなるサプレッションは、早期生長停止表現型をさらに軽減し、植物の生長、発育及び生殖期間を向上または強化し得る。実際、本発明者らは、ダイズにおけるＦＴ導入遺伝子のサプレッションが、トランスジェニックＦＴ発現単独（すなわち、サプレッションなし）に比べて、より正常な草高及び植物あたりのより多数の結節を有する分枝をもたらし得ることを観察した。ＦＴ導入遺伝子の複合発現／サプレッションを有するこれらのダイズ植物は、結節あたりのより多数のさやを依然として維持する一方で、トランスジェニックＦＴ発現のみで早期生長停止表現型をさらに軽減する。
【００３４】
ＦＴ導入遺伝子のサプレッションは様々な方法で達成し得る。第１のアプローチによれば、第１の発現カセットのＦＴ導入遺伝子を、サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする第２の発現カセットによって抑制してもよい。ＲＮＡ分子は、植物発現性プロモーターに作動可能に連結された転写可能なＤＮＡ配列によってコードされていてもよく、転写可能なＤＮＡ配列は、ＦＴ導入遺伝子の少なくとも一部及び／またはそれに相補的な配列に対応するターゲティング配列を含む。第２のアプローチによれば、ＦＴ導入遺伝子は、内在性ＲＮＡ分子の標的部位をコードしていてもよく、標的部位は内在性ＲＮＡ分子と相補的であり、それにより、内在性ＲＮＡ分子はサプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とする。内在性ＲＮＡ分子は、ＦＴ導入遺伝子を発現する植物細胞中に天然に存在し得る。このアプローチによれば、サプレッションのために第２の発現カセットはなくてもよい。これらの抑制アプローチは、両方を一緒に使用してもよい。例えば、ＦＴ導入遺伝子が第１の発現カセット中に存在し、これを、ＦＴ導入遺伝子の少なくとも一部（及び／またはそれに相補的な配列）（すなわち、第１の標的部位）に対応するターゲティング配列を含むＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む第２の発現カセットと組み合わせて使用してもよく、それによりＲＮＡ分子はサプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とし、ＦＴ導入遺伝子は、サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とする内在性ＲＮＡ分子のための第２の標的部位をさらに含む。第１及び第２の標的部位は、配列が同じでも異なっていてもよく、ＦＴ転写産物内の同じまたは異なる位置（複数可）に存在してもよい。本明細書中で使用する場合、第１の配列または分子が第２の配列または分子と類似、同一、及び／または相補的である場合、例えば、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％超、９５％超または１００％同一及び／または相補的である場合、第１のポリヌクレオチド配列または分子は、第２のポリヌクレオチド配列または分子に「対応する」。
【００３５】
本発明の一態様によれば、第１の発現カセット及び第２の発現カセットを含む少なくとも２つの発現カセットを有する組換えＤＮＡ分子、ベクターまたは構築物を提供し、第１の発現カセットは、第１の植物発現性プロモーターに作動可能に連結されたＦＴタンパク質（すなわち、ＦＴ導入遺伝子）を含み、第２の発現カセットは、第２の植物発現性プロモーターに作動可能に連結された転写可能ＤＮＡ配列を含み、転写可能なＤＮＡ配列は、ＦＴ導入遺伝子の少なくとも一部に対応する配列を有する。転写可能なＤＮＡ配列は、第１の発現カセットのＦＴタンパク質（すなわち、ＦＴ導入遺伝子）をコードするポリヌクレオチド配列によってコードされるＲＮＡ前駆体または成熟ｍＲＮＡの少なくとも一部に相補的なターゲティング配列を含むＲＮＡ分子をコードしていてもよく、それにより、ＲＮＡ分子はＦＴ導入遺伝子を抑制するように機能する。転写可能なＤＮＡ配列によってコードされるＲＮＡ分子の「ターゲティング配列」は、ＲＮＡ分子の全部または一部を有していてもよく、ＦＴ導入遺伝子の少なくとも一部及び／またはそれに相補的な配列に対応する転写可能なＤＮＡ配列の配列によってコードされる。したがって、転写可能なＤＮＡ配列は、ＦＴ導入遺伝子のｍＲＮＡ転写産物の少なくとも一部に相補的なターゲティング配列を含むＲＮＡ分子をコードしていてもよい。特定のＦＴ導入遺伝子及び／または転写可能なＤＮＡ配列によってコードされるＲＮＡ分子のターゲティング配列に応じて、内在性ＦＴ遺伝子は、ＦＴ導入遺伝子に加えて第２の発現カセットによっても抑制され得るか、または内在性ＦＴ遺伝子は、ＦＴ導入遺伝子の代わりに第２の発現カセットによって抑制され得る。ＦＴ遺伝子及びタンパク質配列の多くは、形質転換される植物中の１つ以上の天然または内在性ＦＴ遺伝子（複数可）と同一であるかまたは類似していてもよく、したがってＲＮＡ分子の設計及びそれらの天然及び内在性遺伝子（複数可）のサプレッションのためのターゲティング配列の基礎として役立ち得る。転写可能なＤＮＡ配列が、ＦＴ導入遺伝子、内在性ＦＴ遺伝子、またはその両方を標的とし、抑制するＲＮＡ分子をコードするかどうかにかかわらず、ＦＴ遺伝子及び導入遺伝子の全発現レベル及び活性を、トランスジェニック植物の１つ以上の組織において制御、制限または低減してもよい。一態様では、ターゲティング配列を含む核酸分子は、相補的核酸配列（例えば標的部位）とハイブリダイズして二本鎖核酸（例えばｄｓＲＮＡ）を形成することができる。一態様では、第１の核酸分子（例えば、サプレッションＲＮＡ分子）のターゲティング配列の第２の核酸分子（例えば、ＦＴ導入遺伝子のｍＲＮＡ転写産物）の標的部位配列へのハイブリダイゼーションは、第２の核酸分子のサプレッションをもたらすことができる。例えば、ＦＴ導入遺伝子のポリヌクレオチド配列が、それを発現する植物に固有の（または密接に関連する）ものである場合、特にＲＮＡ分子がＦＴ導入遺伝子のコード（エキソン）配列を標的とする場合、ＲＮＡ分子はさらに、対応する天然ＦＴ遺伝子をサプレッションのために標的とする。そのような場合、転写可能なＤＮＡ配列によってコードされるＲＮＡ分子を介した天然及びトランスジェニックＦＴ遺伝子の複合的なサプレッションは、植物の関連する組織におけるＦＴタンパク質の用量をさらに低減する可能性がある。しかしながら、天然ＦＴ遺伝子のトランスジェニック発現を用いても、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、リーダー、及び／またはイントロン配列（複数可）などの非タンパク質コード配列は、そのコードされたＦＴタンパク質の配列に影響を及ぼすことなく変化させることができる。本明細書中で使用する場合、導入遺伝子の「ポリヌクレオチドコード配列」または「ポリヌクレオチド配列」は、タンパク質コード（またはエキソン）配列（複数可）だけでなく、コードされたＲＮＡ前駆体または成熟ｍＲＮＡ配列の一部、例えば、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、リーダー、及び／またはイントロン配列（複数可）などを形成し得る、導入遺伝子のコード配列に関連する他の転写可能な配列も含み得る。したがって、本明細書中で使用する場合、ＦＴ導入遺伝子の「ポリヌクレオチドコード配列」及びＦＴタンパク質をコードする「ポリヌクレオチド配列」は同じ意味で使用され得る。
【００３６】
本発明の実施形態によれば、第１の発現カセットと第２の発現カセットを、同じ組換えＤＮＡ分子、ベクターまたは構築物中に存在させてもよく、あるいは第１の発現カセットと第２の発現カセットを、別々の組換えＤＮＡ分子、ベクター及び／または構築物中に存在させてもよい。したがって、いくつかの実施形態によれば、第１の組換えＤＮＡ分子、ベクターまたは構築物、及び第２の組換えＤＮＡ分子、ベクターまたは構築物を含む、２つの組換えＤＮＡ分子、ベクターまたは構築物を提供してもよく、その場合、第１の組み換えＤＮＡ分子、ベクターまたは構築物は、第１の植物発現性プロモーターに作動可能に連結されたＦＴタンパク質（すなわちＦＴ導入遺伝子）をコードするポリヌクレオチド配列を有する第１の発現カセットを含み、第２の組み換えＤＮＡ分子、ベクターまたは構築物は、第２の植物発現性プロモーターに作動可能に連結された転写可能なＤＮＡ配列を有する第２の発現カセットを含み、転写可能なＤＮＡ配列は、ＦＴ導入遺伝子の少なくとも一部、及び／またはそれに相補的な配列に対応する。転写可能なＤＮＡ配列は、第１の発現カセットのＦＴ導入遺伝子によってコードされるＲＮＡ前駆体または成熟ｍＲＮＡの少なくとも一部に相補的なターゲティング配列を含むＲＮＡ分子をコードしていてもよく、それにより、ＲＮＡ分子は、ＦＴ導入遺伝子を抑制するように機能する。
【００３７】
本明細書中に提供するようなＦＴ導入遺伝子を含む組換えＤＮＡ分子、ベクターまたは構築物を植物の形質転換に用いて、ＦＴ導入遺伝子を有するトランスジェニック植物を生成してもよい。いくつかの実施形態によれば、ＦＴ導入遺伝子は、第１の発現カセット中に存在し、これを、ＦＴ導入遺伝子の少なくとも一部及び／またはそれに相補的な配列に対応するターゲティング配列を有するＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む第２の発現カセットと組み合わせて用いてもよく、その場合、第１及び第２の発現カセットの両方を、同じまたは別々の形質転換事象（複数可）として植物に形質転換する。いくつかの実施形態によれば、植物に形質転換されたＦＴ導入遺伝子は、ＦＴ導入遺伝子を標的とし、サプレッションを引き起こし得る内在性ＲＮＡ分子の標的部位を有していてもよい。
【００３８】
ＦＴ導入遺伝子のポリヌクレオチドコード配列は、Ｇｍ．ＦＴ２ａ（配列番号１）、またはＧｍ．ＦＴ２ａタンパク質をコードする任意のポリヌクレオチド配列（配列番号２）を有していてもよい。ＦＴ導入遺伝子のポリヌクレオチドコード配列はまた、ダイズまたは他の植物における他のＦＴ遺伝子に対応していてもよい。例えば、本実施形態によるＦＴ導入遺伝子として使用してもよいダイズ由来の他のポリヌクレオチドコード配列として：Ｇｍ．ＦＴ５ａ（配列番号３）もしくはＧｍ．ＦＴ５ａタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号４）、またはＧｍ．ＦＴ２ｂ（配列番号５）もしくはＧｍ．ＦＴ２ｂタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号６）が挙げられる。さらに、使用してもよい他の植物種由来のポリヌクレオチドコード配列の例として：トウモロコシ由来のＺｍ．ＺＣＮ８（配列番号７）もしくはＺｍ．ＺＣＮ８タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号８）、タバコ由来Ｎｔ．ＦＴ様もしくはＮｔ．ＦＴ４（配列番号９）またはＮｔ．ＦＴ様もしくはＮｔ．ＦＴ４タンパク質（配列番号１０）をコードするポリヌクレオチド配列、トマト由来Ｌｅ．ＦＴもしくはＳＦＴ（配列番号１１）またはＬｅ．ＦＴもしくはＳＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１２）、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ由来Ａｔ．ＦＴ（配列番号１３）またはＡｔ．ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１４）、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ由来Ａｔ．ＴＳＦ（配列番号１５）またはＡｔ．ＴＳＦタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１６）、イネ由来Ｏｓ．ＨＤ３ａ（配列番号１７）またはＯｓ．ＨＤ３ａタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１８）、あるいはＰｏｐｕｌｕｓ  ｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａ由来Ｐｔ．ＦＴ（配列番号１９）またはＰｔ．ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号２０）が挙げられる。使用してもよいＦＴ導入遺伝子及びタンパク質のポリヌクレオチドコード配列のさらなる例として、以下のものが挙げられる：ダイズ由来Ｇｍ．ＦＴ５ｂ（配列番号２１）、またはＧｍ．ＦＴ５ｂタンパク質をコードする任意のポリヌクレオチド配列（配列番号２２）；ワタ由来Ｇｈ．ＦＴ１（配列番号２３）、またはＧｈ．ＦＴ１タンパク質をコードする任意のポリヌクレオチド配列（配列番号２４）；キャノーラ由来Ｂｎ．ＦＴＡ２ａ（配列番号２５）、またはＢｎ．ＦＴＡ２ａタンパク質をコードする任意のポリヌクレオチド配列（配列番号２６）；コムギ由来Ｔａ．ＦＴ３Ｂ１（配列番号２７）、またはＴａ．ＦＴ３Ｂ１タンパク質をコードする任意のポリヌクレオチド配列（配列番号２８）、あるいはエンドウ由来Ｐｓ．ＦＴａ１（配列番号２９）、またはＰｓ．ＦＴａ１タンパク質をコードする任意のポリヌクレオチド配列（配列番号３０）。公知のアミノ酸配列を有する他の種由来のさらなるＦＴタンパク質をコードするＦＴ導入遺伝子のポリヌクレオチドコード配列もまた、本発明の実施形態に従って使用してもよく、これには例えば以下のもの：リンゴ（Ｍａｌｕｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）由来Ｍｄ．ＦＴ１及びＭｄ．ＦＴ２；オオムギ（Ｈｏｒｄｅｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ）由来Ｈｖ．ＦＴ２及びＨｖ．ＦＴ３；キク由来Ｃｓ．ＦＴＬ３；レタス（Ｌａｃｔｕｃａ  ｓａｔｉｖａ）由来Ｌｓ．ＦＴ；セイヨウハコヤナギ（Ｐｏｐｕｌｕｓ  ｎｉｇｒａ）由来Ｐｎ．ＦＴ１及びＰｎ．ＦＴ２；モミジバスズカケノキ（Ｐｌａｔａｎｕｓ  ａｃｅｒｉｆｏｌｉａ）由来Ｐａ．ＦＴ；リュウガン（Ｄｉｍｏｃａｒｐｕｓ  ｌｏｎｇａｎ）由来Ｄｌ．ＦＴ１；エンドウ（Ｐｉｓｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ）由来Ｐｓ．ＦＴａ１、Ｐｓ．ＦＴａ２、Ｐｓ．ＦＴｂ１、Ｐｓ．ＦＴｂ２、及びＰｓ．ＦＴｃ；パイナップル（Ａｎａｎａｓ  ｃｏｍｏｓｕｓ）由来Ａｃ．ＦＴ；カボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ  ｍａｘｉｍａ）由来のＣｍ−ＦＴＬ１及びＣｍ−ＦＴＬ２；バラ由来Ｒｏ．ＦＴ；シュンラン（Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ）由来Ｃｇ．ＦＴ；イチゴ（Ｆｒａｇａｒｉａ  ｖｅｓｃａ）由来Ｆｖ．ＦＴ１；サトウダイコン（Ｂｅｔａ  Ｖｕｌｇａｒｉｓ）由来Ｂｖ．ＦＴ２；ヒマワリ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ａｎｎｕｕｓ）由来Ｈａ．ＦＴ４；及びコムギ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）由来Ｔａ．ＦＴまたはＴａＦＴ１、ならびにそのような公知のポリヌクレオチド及び／またはタンパク質配列のうちの１つ以上と少なくとも６０％同一、少なくとも６５％同一、少なくとも７０％同一、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一であるか、または少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である配列が含まれ得る。例えば、その内容及び開示を参照として本明細書に援用するＷｉｃｋｌａｎｄ，ＤＰ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ｌｏｃｕｓ  Ｔ／Ｔｅｒｍｉｎａｌ  Ｆｌｏｗｅｒ  １  Ｇｅｎｅ  Ｆａｍｉｌｙ：Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ”，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｌａｎｔ  ［８］：９８３−９９７（２０１５）参照。
【００３９】
特に明記しない限り、本明細書中に記載の核酸またはポリヌクレオチド配列は５’から３’方向に提供する（左から右へ）ものとし、アミノ酸またはタンパク質配列はＮ末端からＣ末端方向に提供する（左から右へ）ものとする。本発明の実施形態によれば、これらの種または他の種由来のさらなる公知のまたは後に発見されるＦＴ遺伝子及びタンパク質もまた使用してもよい。これらのＦＴ遺伝子は、公知であるかまたはそれらのヌクレオチド及び／またはタンパク質配列から推測してもよく、それらは、目視検査によって、または公知のＦＴ配列、構造ドメインなどとの比較アルゴリズムに基づく、及びＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡなどの任意の公知の配列アラインメント技術による、コンピュータベースの検索及び同定ツールもしくはソフトウェア（及びデータベース）を使用することによって決定してもよい。
【００４０】
本発明の実施形態によれば、組換えＤＮＡ分子、ベクターまたは構築物のＦＴ導入遺伝子は、上記のポリヌクレオチドＦＴコード配列（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または２９）に対し、または任意の他の公知の花成性ＦＴコード配列に対し、少なくとも６０％同一、少なくとも６５％同一、少なくとも７０％同一、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、または少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一（最適にアラインメントした場合に）のポリヌクレオチド配列を含み得る。上記のＦＴ遺伝子の全長コード配列のポリヌクレオチド配列間の配列同一性の割合を図１Ａに示す。図１Ａの表の各セルは、対応する列（対象配列）のＦＴ遺伝子と比較した対応する行（クエリ配列）のＦＴ遺伝子の同一性の割合を、クエリ配列の全長で割ったものを示し、括弧内の数字はクエリ配列と対象配列の間の同一塩基の総数である。この図に示すように、これらのサンプリングしたＦＴ遺伝子についてのポリヌクレオチド配列間の同一性の割合は、約６０％〜約９０％の同一性の範囲である。したがって、これらの配列同一性範囲のうちの１つ以上の範囲内にあるか、またはより高い配列同一性を有するポリヌクレオチド配列を本発明の実施形態に従って使用して、開花を誘導し、収量を増加させ、及び／または植物の１つ以上の生殖形質を改変してもよい。ＦＴについての類似のポリヌクレオチドコード配列を、公知のＦＴタンパク質配列、保存されたアミノ酸残基及びドメイン、遺伝暗号の縮重、ならびに形質転換する特定の植物種についての任意の公知のコドン最適化に基づいて設計または選択してもよい。
【００４１】
本発明の実施形態によれば、ＦＴ導入遺伝子は、上記のＦＴタンパク質もしくはアミノ酸配列（例えば、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、または３０）または任意の他の公知の花成性ＦＴタンパク質配列、またはその機能断片に対し、少なくとも６０％同一、少なくとも６５％同一、少なくとも７０％同一、少なくとも７５％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、または少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一（最適にアラインメントした場合に）のアミノ酸またはタンパク質配列をコードするポリヌクレオチド配列を含み得る。そのような「機能断片」は、植物においてトランスジェニックに発現する場合に、全長タンパク質と同様の１つ以上の表現型効果または変化を引き起こすことについて断片が活性を維持する限り、全長ＦＴタンパク質と同一または非常に類似しているが、全長ＦＴタンパク質の１つ以上のアミノ酸残基、部分、タンパク質ドメインなどを欠くポリペプチド配列を有するタンパク質として定義される。上記の全長ＦＴタンパク質の間の配列同一性の割合を、図１Ｂに示す。割合は、図１Ａを参照して、クエリと対象のＦＴタンパク質配列との間の同一アミノ酸残基の数（括弧内）に基づいて上記のように計算される。これらのＦＴタンパク質の多重配列アラインメントもまた図１Ｃに示す。これらの図から分かるように、これらのＦＴ遺伝子についてのタンパク質配列間の同一性の割合は、約６０％〜約９０％の同一性の範囲である。したがって、これらの配列同一性範囲の１つ以上の範囲内にあるか、またはより高い配列同一性を有するアミノ酸またはタンパク質配列をコードするポリヌクレオチド配列を本発明の実施形態に従って使用して、開花を誘導し、種子収量を増加させ、及び／または植物の１つ以上の生殖形質を変化させてもよい。本発明のポリヌクレオチド配列によってコードされるこれらのＦＴタンパク質配列を、公知のＦＴタンパク質配列ならびにそれらの保存されたアミノ酸残基及びドメインに基づいて設計または選択してもよい。
【００４２】
以下に記載するように、上記のコード配列のいずれか１つを含むＦＴ導入遺伝子は、エンハンサー（複数可）、プロモーター（複数可）、リーダー（複数可）、イントロン（複数可）などの１つ以上の発現及び／または調節エレメント（複数可）をさらに有してもよく、ＦＴ導入遺伝子は、ＦＴタンパク質をコードするゲノム配列もしくはアミノ酸配列、またはその断片もしくは一部を含み得る。
【００４３】
本明細書中で使用する場合、用語「配列同一性」または「同一性の割合」とは、２つの最適にアラインメントしたＤＮＡまたはタンパク質配列が同一である程度を指す。２つ以上の配列間、例えば、２つ以上のＦＴ遺伝子もしくはタンパク質間、またはＦＴ遺伝子（ヌクレオチド）もしくはタンパク質配列と他のヌクレオチドもしくはタンパク質配列との間の配列同一性または類似性を比較するために使用され得る、ＣｌｕｓｔａｌＷなどの様々なペアワイズ配列アラインメントまたは多重配列アラインメントアルゴリズム及びプログラムが当該分野で公知である。例えば、１つの配列（クエリ）と他の配列（対象）との同一性の割合は、図１Ａ及び図１Ｂを参照して上述したように計算してもよい（すなわち、配列を最適にアラインメントした状態で、クエリ配列について同一の塩基または残基の数を塩基または残基の総数で除算し、１００％を掛ける）。他のアラインメント及び比較方法が当該分野で公知であるものの、２つの配列間のアラインメント及び同一性の割合（上記の同一性の割合の範囲を含む）は、ＣｌｕｓｔａｌＷアルゴリズムによって決定される通りであってもよく、例えば、その内容及び開示の全体を参照として本明細書に援用するＣｈｅｎｎａ  Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  Ｃｌｕｓｔａｌ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒａｍｓ，”Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ［３１］：３４９７−３５００（２００３）；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ＪＤ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗ：Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ，  ｐｏｓｉｔｉｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｇａｐ  ｐｅｎａｌｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｗｅｉｇｈｔ  ｍａｔｒｉｘ  ｃｈｏｉｃｅ，”Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ［２２］：４６７３−４６８０（１９９４）；及びＬａｒｋｉｎ  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗ  ａｎｄ  Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｘ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．０，”Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ［２３］：２９４７−４８（２００７）参照。本発明の目的のために、２つの配列を最適にアラインメントする場合（それらのアラインメントにおけるギャップを考慮して）、クエリ配列についての「同一性の割合」は、図１Ａ及び１Ｂを参照して上述したように計算される。すなわち、同一性の割合＝（クエリ配列と対象配列との間の同一位置の数／クエリ配列中の位置の総数）×１００％であり、各配列は一連の位置（ヌクレオチド塩基またはアミノ酸残基）からなる。２つの最適にアラインメントされた配列はまた、一定の同一性の割合として記載され得る。場合により、２つの配列間の定義された比較ウィンドウ（例えば、アラインメントウィンドウ）に関して同一性の割合を代わりに記載してもよく、その場合、比較ウィンドウ内の同一位置の数を比較ウィンドウのヌクレオチド長で除算し、１００％を掛ける。アラインメントウィンドウは、２つの配列間の同一、類似または重複領域として定義してもよい。
【００４４】
組換えポリヌクレオチドもしくはタンパク質分子、構築物またはベクターは単離されていてもよい。本明細書中で使用する場合、用語「単離された」とは、分子を、その天然状態で通常それと会合している他の分子から少なくとも部分的に分離することを指す。一実施形態では、用語「単離された」とは、その天然状態のＤＮＡ分子に通常隣接する核酸から分離されているＤＮＡ分子を指す。例えば、細菌中に天然に存在するタンパク質をコードするＤＮＡ分子は、そのタンパク質をコードするＤＮＡ分子が天然に見出される細菌のＤＮＡ内にそのＤＮＡ分子がない場合、単離されたＤＮＡ分子であろう。したがって、例えば組換えＤＮＡまたは植物形質転換技術の結果として、自然界では関連しないであろう１つ以上の他のＤＮＡ分子（複数可）に融合または作動可能に連結されたＤＮＡ分子は、本明細書中では単離されていると見なされる。そのような分子は、宿主細胞の染色体に組み込まれている場合、または他のＤＮＡ分子と共に核酸溶液中に存在している場合でも単離されていると見なされる。
【００４５】
本発明のポリヌクレオチド配列または導入遺伝子によってコードされるＦＴタンパク質配列はまた、化学的及び／または構造的に保存的であることが知られている１つ以上のアミノ酸置換（複数可）（例えば、類似の化学的または物理的特性、例えば、疎水性、極性、電荷、立体効果、酸／塩基化学、類似の側鎖基、例えば、ヒドロキシル、スルフヒドリル、アミノなどを有する別のアミノ酸への置換）を有するように設計または選択し、その機能に影響を与える可能性があるタンパク質への構造変化を回避または最小化させてもよい。例えば、バリンはしばしばアラニンの保存的置換基であり、トレオニンはセリンの保存的置換基であり得る。タンパク質中の保存的アミノ酸置換のさらなる例として：バリン／ロイシン、バリン／イソロイシン、フェニルアラニン／チロシン、リジン／アルギニン、アスパラギン酸／グルタミン酸、及びアスパラギン／グルタミンが挙げられる。本発明のポリヌクレオチド配列または導入遺伝子によってコードされるＦＴタンパク質配列はまた、１つ以上のアミノ酸を含む欠失（複数可）及び／または挿入（複数可）の結果として公知のＦＴタンパク質または類似の配列のものとは１つ以上のアミノ酸が異なるタンパク質を含み得る。
【００４６】
本発明において使用するために、異なる植物種由来の様々なＦＴ遺伝子及びタンパク質を同定し、それらが少なくとも１つの公知のＦＴ遺伝子またはタンパク質と類似の核酸及び／またはタンパク質配列を有し、保存されたアミノ酸及び／または構造ドメイン（複数可）を共有する場合、それらをＦＴ相同体またはオルソログとみなしてもよい。本明細書中で使用する場合、ＦＴ遺伝子またはタンパク質に関する用語「相同体」は、ＦＴ遺伝子またはタンパク質の任意の相同体、類似体、オルソログ、パラログなどを集合的に含むことを意図し、ＦＴ遺伝子またはタンパク質配列に関する用語「相同的な」は、合成、人工または改変ポリヌクレオチドまたはタンパク質配列を含む類似または同一の配列を意味することを意図している。そのようなＦＴ相同体はまた、公知のＦＴ遺伝子と同じまたは類似の生物学的機能を有する（例えば、植物において異所性に発現する場合、開花及び／または他の生殖または収量関連形質または表現型に同様に影響を及ぼすように作用する）ものと定義され得る。
【００４７】
異なる植物種由来のＦＴタンパク質配列の配列分析及びアラインメントはさらに、多数の保存アミノ酸残基及び少なくとも１つの保存構造ドメインを明らかにする。Ｐｆａｍデータベース（例えば、２０１１年１１月にリリースされたＰｆａｍバージョン２６．０、またはそれ以降のバージョン）を使用して、様々なアラインメントＦＴタンパク質配列（例えば、図１Ｂ及び１Ｃ参照）をタンパク質ドメイン同定ツールに供することによって、これらのＦＴタンパク質が、推定ホスファチジルエタノールアミン結合タンパク質（ＰＥＢＰ）ドメイン（Ｐｆａｍドメイン名：ＰＢＰ＿Ｎ；登録番号：ＰＦ０１１６１）の少なくとも一部を含み、共有することがわかっている。例えば、その内容及び開示の全体を参照として本明細書に援用するＢａｎｆｉｅｌｄ，ＭＪ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｔｉｒｒｈｉｎｕｍ  ｃｅｎｔｒｏｒａｄｉａｌｉｓ  ｐｒｏｔｅｉｎ  （ＣＥＮ）  ｓｕｇｇｅｓｔｓ  ａ  ｒｏｌｅ  ａｓ  ａ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，”Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，［２９７］（５）：１１５９−１１７０（２０００）参照。このＰＥＢＰドメインは、例えば全長Ｇｍ．ＦＴ２ａタンパク質のアミノ酸２８〜１６２に対応することが判明した（下記表５参照）。したがって、本発明の実施形態によって包含されるＦＴタンパク質は、Ｐｆａｍ分析に従って少なくともＰＥＢＰドメイン（登録番号：ＰＦ０１１６１）を有するかまたは含むとして同定または特徴付けられるものを含み得る。したがって、本発明は、少なくともＰＥＢＰドメインを有するＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列（複数可）をさらに含み得る。当技術分野において公知のように、「Ｐｆａｍ」データベースは、多数の一般的なタンパク質ファミリーをカバーし、様々なタンパク質ファミリー及びそれらのドメイン構造（複数可）に関する情報を含む多数の配列アラインメント及び隠れマルコフモデルの大規模なコレクションである。所与のタンパク質配列について推定上のＰｆａｍ構造ドメイン（複数可）を同定することによって、タンパク質の分類及び機能を推測または決定してもよい。例えば、その内容及び開示の全体を参照として本明細書に援用するＦｉｎｎ，ＲＤ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  Ｐｆａｍ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆａｍｉｌｉｅｓ  ｄａｔａｂａｓｅ，”Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （Ｄａｔａｂａｓｅ  Ｉｓｓｕｅ），［４２］：Ｄ２２２−Ｄ２３０（２０１４）参照。
【００４８】
本発明の実施形態はさらに、誘導性または花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列（複数可）を含み得る。ポリヌクレオチド配列によってコードされるＦＴタンパク質は、そのＦＴタンパク質が植物中で異所性に発現する場合に、早期開花、及び／または植物の１つ以上の結節（複数可）あたりの花、さや、丸莢、長角果、果実、木の実、塊茎、及び／または種子の数についての多産性の増加を生じ得る場合、「誘導性」または「花成性」であり得る。理論に拘泥するものではないが、植物の結節（複数可）あたりの花、さや、丸莢、長角果、果実、木の実、塊茎、及び／または種子の数のそのような多産性の増加は、栄養相から生殖相への転換を経て花を産生するそれらの結節（複数可）における分裂組織数の増加から生じ得る。「花成性」ＦＴの異所性発現による各結節でのそのような多産性の増加は、各結節での早期総状花序及び側生分裂組織の解放及び花芽発達の同時性の増加に起因し得る。「花成性」ＦＴタンパク質は、植物中で異所性に発現する場合に早期開花を誘導するように機能し得るが、トランスジェニックに発現する「花成性」ＦＴタンパク質は、開花時期及び／または生殖期間に関連する任意の花成性の効果とは独立した、またはそれに加えて、１つ以上の経路または機構を介して、植物の結節（複数可）あたりの花、さや、丸莢、長角果、果実、木の実、塊茎及び／または種子の数を増加させ得る。
【００４９】
様々な植物種由来の花成性ＦＴ様遺伝子は一般的によく保存されている。しかしながら、ＰＥＢＰファミリーの多くのタンパク質は、花成性ＦＴタンパク質と実質的に類似しているが、フロリゲンとして挙動しないアミノ酸配列を有する。例えば、様々な植物種由来のＴｅｒｍｉｎａｌ  Ｆｌｏｗｅｒ（ＴＦＬ）遺伝子は、花成性ＦＴ遺伝子と同様のタンパク質配列を有するが、実際には開花を遅延させる。最近の研究において、花成性ＦＴタンパク質とＴＦＬなどの他のＰＥＢＰタンパク質との間で一般的に共有されていない特定のアミノ酸残基が同定され、これらの位置の多くにおける置換が花成性ＦＴタンパク質を花成レプレッサータンパク質に変換することが示された。例えば、その内容及び開示の全体を参照として本明細書に援用するＨｏ  ａｎｄ  Ｗｅｉｇｅｌ，Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  ２６：５５２−５６４（２０１４）；Ｄａｎｉｌｅｖｓｋａｙａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ［１４６］（１）：２５０−２６４（２００８）；Ｈａｒｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ［７２］：９０８−９２１（２０１２）；Ｈｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  ［１８］：１８４６−１８６１（２００６）；Ｋｏｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ［４３］（１０）：１０９６−１１０５（２００２）；Ｋｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ［１５４］：１２２０−１２３１（２０１０）；Ｍｏｌｉｎｅｒｏ−Ｒｏｓａｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔａ  ［２１８］：４２７−４３４（２００４）；Ｚｈａｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ，［９］（２）：ｅ８９０３０  （２０１４）、及びＷｉｃｋｌａｎｄ  ＤＰ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）、上記参照。したがって、これらのアミノ酸残基を、本発明の花成性ＦＴタンパク質をさらに定義及び識別するためのシグネチャーとして役立てることができる。
【００５０】
本発明の実施形態によれば、「誘導性」または「花成性」ＦＴタンパク質は、さらに、以下のアミノ酸残基（複数可）のうちの１つ以上を含むものとして定義されるかまたは特徴付けられ得る（アミノ酸位置とは、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓの全長ＦＴタンパク質（配列番号１４）の対応する位置または最適にアラインメントした位置を指す）：アミノ酸位置２１のプロリン（Ｐ２１）；アミノ酸位置４４のアルギニンまたはリジン（Ｒ４４またはＫ４４）；アミノ酸位置５７のグリシン（Ｇ５７）；アミノ酸位置５９のグルタミン酸またはアスパラギン酸（Ｅ５９またはＤ５９）；アミノ酸位置８５のチロシン（Ｙ８５）；アミノ酸位置１２８のロイシン（Ｌ１２８）；アミノ酸位置１２９のグリシン（Ｇ１２９）；アミノ酸位置１３２のトレオニン（Ｔ１３２）；アミノ酸位置１３５のアラニン（Ａ１３５）；アミノ酸位置１３８のトリプトファン（Ｗ１３８）；アミノ酸位置１４６のグルタミン酸またはアスパラギン酸（Ｅ１４６またはＤ１４６）；及び／またはアミノ酸位置１６４のシステイン（Ｃ１６４）。他のＦＴタンパク質の対応するアミノ酸位置は、ＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓのＦＴ配列とのアラインメントによって決定することができる（例えば、図１Ｃ参照）。当業者であれば、それらの配列アラインメントに基づいて他のＦＴタンパク質の対応するアミノ酸位置を同定することができよう。これらの重要な残基のいくつかは、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓの全長ＦＴ配列（配列番号１４）のアミノ酸１２８〜１４５及び他のＦＴタンパク質の対応する配列として定義される、ＦＴ様タンパク質の外部ループドメイン内に位置する（例えば、図１Ｃ）。したがって、本発明のポリヌクレオチドは、これらの保存されたアミノ酸残基のうちの１つ以上を有する花成性ＦＴタンパク質をコードし得る。
【００５１】
本発明の花成性ＦＴタンパク質はまた、上記で同定した残基位置のうちの１つ以上に、１つ以上の他のアミノ酸を有してもよい。例えば、ＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓのＦＴ（Ａｔ．ＦＴ）タンパク質配列（配列番号１４）の上記のアミノ酸位置に関して、花成性ＦＴタンパク質は、代替的に、以下のアミノ酸のうちの１つ以上を有してもよい：Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の２１位に対応する位置のアラニン（プロリンに代えて）（Ｐ２１Ａ）、またはこの位置のグリシンもしくはバリンなどのおそらく他の小さい非極性残基；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の４４位に対応するアミノ酸位置のヒスチジン（リジンまたはアルギニンに代えて）、またはこの位置の他の極性アミノ酸；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の５７位に対応するアミノ酸位置のアラニンもしくはシステイン（グリシンに代えて）、またはこの位置のプロリンもしくはバリンなどのおそらく他の小さい非極性残基；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の５９位に対応するアミノ酸位置のアスパラギンまたはセリン（グルタミン酸またはアスパラギン酸に代えて）、またはこの位置のグルタミン、システイン、またはトレオニンなどの他の小さい極性残基；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の８５位に対応するアミノ酸位置の様々な極性及び非極性非荷電残基（チロシン以外）；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１２８位に対応するアミノ酸位置のイソロイシン、バリン、またはメチオニンなどの無極性または疎水性の非荷電残基（ロイシン以外）；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１２９位に対応するアミノ酸位置のアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニンなどの様々なより小さな非極性及び非荷電残基（グリシン以外）、ただしいくつかの極性及び荷電残基がこの位置で許容され得る；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１３２位に対応するアミノ酸位置の極性非荷電残基（トレオニン以外）；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１３５位に対応するアミノ酸位置のトレオニンなどのプロリン以外の様々なアミノ酸；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１３８位に対応するアミノ酸位置のメチオニンまたはフェニルアラニンなどの様々な他のかさばらない非極性または疎水性アミノ酸（トリプトファンに代えて）；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１４６位に対応するアミノ酸位置のアスパラギンまたはセリンなどの様々な他の極性または非荷電アミノ酸；及び／またはＡｔ．ＦＴタンパク質配列の１６４位に対応するアミノ酸位置のイソロイシンなどの様々な他の極性または非極性アミノ酸（システインに代えて）。当業者であれば、ＦＴタンパク質の対応するアミノ酸位置及び置換を、ＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓのＦＴタンパク質配列に対するこれらの配列アラインメントに基づいて同定することができよう。さらに、タンパク質生化学の当業者の知識に基づいて、花成性ＦＴタンパク質の範囲内において他の化学的に保存的なアミノ酸置換もまた企図される。実際、本発明のポリヌクレオチドによってコードされる花成性ＦＴタンパク質には、天然配列及び１つ以上の保存的アミノ酸置換を含む人工的な配列、ならびにその機能的断片が含まれる。
【００５２】
本発明の花成性ＦＴタンパク質はまた、ＴＦＬまたは他の非花成性または抗花成性タンパク質に特徴的であるかまたは関連し得る１つ以上のアミノ酸置換を除外する（すなわち、有さない）ものとして定義され得る。例えば、ＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓのＦＴタンパク質配列（配列番号１４）のアミノ酸位置に関して、花成性ＦＴタンパク質は、以下のアミノ酸の１つ以上を除外し得る（すなわち、花成性ＦＴタンパク質配列の対応する位置または最適にアラインメントした位置において）：Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の２１位に対応する位置のフェニルアラニンまたはセリン（例えば、プロリンまたはアラニンに代えて）；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の４４位に対応する位置のフェニルアラニン（例えば、アルギニンまたはリジンに代えて）；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の５７位に対応する位置のヒスチジン、グルタミン酸、またはアスパラギン酸（例えば、グリシンに代えて）；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の５９位に対応する位置のグリシンまたはアラニン（例えば、グルタミン酸またはアスパラギン酸に代えて）；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の８５位に対応する位置のヒスチジン（例えば、チロシンに代えて）；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１０９位に対応する位置のリジン、アルギニン、アラニン、またはメチオニン；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１２８位に対応する位置のリジンまたはアルギニン（例えば、ロイシンに代えて）；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１２９位に対応する位置のグルタミンまたはアスパラギン（例えば、グリシンに代えて）；ＦＴタンパク質配列の１３２位に対応する位置のバリンまたはシステイン（例えば、トレオニンに代えて）；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１３４位に対応する位置のリジン、アルギニン、またはアラニン（例えば、チロシンに代えて）；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１３５位に対応する位置のプロリン（例えば、アラニンまたはトレオニンに代えて）；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１３８位に対応する位置のセリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アラニン、リジン、またはアルギニン（例えば、トリプトファンまたはメチオニンに代えて）；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１４０位に対応する位置のリジンまたはアルギニン；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１４６位に対応する位置のリジンまたはアルギニン（例えば、酸性または非荷電極性残基に代えて）；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１５２位に対応する位置のリジンまたはアルギニン；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１６４位に対応する位置のアラニン（例えばシステインまたはイソロイシンに代えて）。当業者であれば、他のＦＴタンパク質の対応するアミノ酸位置及び置換を、これらの配列アラインメントに基づいて同定することができよう。したがって、本発明の実施形態は、ＴＦＬまたは他の抗フロリゲンに関連する上記のアミノ酸置換のうちの１つ以上を有するＦＴ様タンパク質をコードするポリヌクレオチドを除外し得る。しかしながら、ＦＴタンパク質は、依然として花成活性を維持する一方で、これらのアミノ酸置換のうちの１つまたはいくつかを許容し得る。
【００５３】
本発明の花成性ＦＴタンパク質はまた、上記のシグネチャーまたは保存されたアミノ酸残基のうちの１つ以上を有することに加えて、公知のＦＴタンパク質と同様であると定義され得る。例えば、花成性タンパク質は、以下のシグネチャー残基の１つ以上に加えて、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、及び３０、またはその機能断片からなる群から選択される配列に対して、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するものとして定義され得る：Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の８５位に対応するアミノ酸位置のチロシンまたは他の非荷電の極性もしくは非極性残基（例えば、アラニン、トリプトファン、メチオニン、ロイシン、トレオニン、システイン、セリン、またはアスパラギン）；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１２８位に対応するアミノ酸位置のロイシンまたは他の非極性または疎水性残基（例えば、イソロイシン、バリン、またはメチオニン）；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１３８位に対応するアミノ酸位置のトリプトファンまたは他の大きな非極性もしくは疎水性残基（例えば、メチオニンまたはフェニルアラニン）。そのような花成性ＦＴタンパク質はさらに、以下の１つ以上のようなさらなるシグネチャーアミノ酸残基（複数可）を有するものとして定義され得る：ＡＴ．ＦＴタンパク質配列の１２９位に対応するアミノ酸位置のグリシンまたは他の小さい非極性及び非荷電残基（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、またはメチオニン）；及び／またはＡＴ．ＦＴタンパク質配列の１３２位に対応するアミノ酸位置のトレオニン。
【００５４】
本発明の花成性ＦＴタンパク質はまた、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、及び３０からなる群から選択される配列に対し、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するが、以下のうちの１つ以上のような、１つ以上の非花成性または抗花成性残基を有さない（すなわち除外する）ものとして定義され得る：Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の８５位に対応するアミノ酸位置のヒスチジン；Ａｔ．ＦＴタンパク質配列の１２８位に対応するアミノ酸位置のリジンまたはアルギニン；ＡＴ．ＦＴタンパク質配列の１３８位に対応するアミノ酸位置のセリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジンまたはアルギニン。そのような花成性ＦＴタンパク質はさらに、以下の１つ以上のような、１つ以上の追加の残基を有さない（すなわち除外する）ものとして定義され得る：Ａｔ．ＦＴタンパク質の１２９位に対応するアミノ酸位置のグルタミンまたはアスパラギン；及び／またはＡＴ．ＦＴタンパク質配列の１３２位に対応するアミノ酸位置のバリンまたはシステイン。
【００５５】
本発明の実施形態により、植物に形質転換した場合にＦＴ発現のタイミング及び／または位置を制御するかまたは偏らせるために植物細胞内で作動可能な、１つ以上のプロモーター（複数可）及び／または他の調節エレメント（複数可）に作動可能に連結されたＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を有する組換えＤＮＡ分子、ベクターまたは構築物を提供する。いくつかの実施形態によれば、ＦＴ導入遺伝子は第１の発現カセット中に存在し、ＦＴ導入遺伝子の少なくとも一部、及び／またはそれに相補的な配列に対応し、サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む第２の発現カセットと共に使用してもよい。いくつかの実施形態によれば、ＦＴ導入遺伝子は、ＦＴ導入遺伝子を標的とし、サプレッションを引き起こし得る内在性ＲＮＡ分子の標的部位を含み得る。
【００５６】
当技術分野で一般的に理解されているように、用語「プロモーター」とは、一般的に、ＲＮＡポリメラーゼ結合部位、転写開始部位、及び／またはＴＡＴＡボックスを含み、関連する転写可能なポリヌクレオチド配列及び／または遺伝子（または導入遺伝子）の転写及び発現を、引き起こし、開始し、指示し、支援し、及び／または促進するＤＮＡ配列を指し得る。プロモーターは、公知のまたは天然のプロモーター配列または他のプロモーター配列（例えば本明細書に提供するような）をもとに、合成的に製造、改変、変更、及び／またはそれに由来し得る。プロモーターはまた、２つ以上の異種配列の組み合わせを含むキメラプロモーターを含み得る。したがって、本発明のプロモーターは、組成は類似しているが、公知のまたは本明細書において提供する他のプロモーター配列（複数可）と同一ではないプロモーター配列の変異体を含み得る。本明細書中で使用する場合、用語「作動可能に連結された」とは、プロモーターまたは他の調節エレメントと、関連する転写可能なポリヌクレオチド配列または遺伝子（または導入遺伝子）のコード配列との間の機能的連結を指し、その結果、それらのプロモーター類は、少なくとも特定の組織（複数可）、発育段階（複数可）、及び／または特定の条件（複数可）下で、関連するコードまたは転写可能なポリヌクレオチド配列の転写及び発現を、開始し、支援し、影響を及ぼし、引き起こし、指示し、及び／または促進するために作動する。「植物発現性プロモーター」とは、植物、植物細胞及び／または植物組織において、プロモーターに作動可能に連結された関連するコード配列、導入遺伝子または転写可能なポリヌクレオチド配列を発現させるために使用し得るプロモーターを指す。
【００５７】
プロモーターは、構成的、発生的、組織特異的、誘導性などの、プロモーターに作動可能に連結されたコード配列または遺伝子（導入遺伝子を含む）の発現パターンに関する様々な基準に従って分類し得る。植物の全てまたはほとんどの組織において転写を開始するプロモーターは、「構成的」プロモーターと呼ばれる。発生の特定の期間または段階の間に転写を開始するプロモーターは、「発生的」プロモーターと呼ばれる。その発現が他の植物組織と比較して植物の特定の組織において増強されるプロモーターは、「組織増強型」または「組織優先型」プロモーターと呼ばれる。したがって、「組織優先型」プロモーターは、植物の特定の組織（複数可）において比較的高いまたは優先的な発現を引き起こすが、植物の他の組織（複数可）においてはより低いレベルの発現を伴う。植物の特定の組織内で発現し、他の植物組織ではほとんどまたは全く発現しないプロモーターは、「組織特異的」プロモーターと呼ばれる。植物の特定の細胞型において発現するプロモーターは、「細胞型特異的」プロモーターと呼ばれる。「誘導性」プロモーターは、寒さ、干ばつ、熱もしくは光などの環境刺激、または創傷もしくは化学的塗布などの他の刺激に応答して転写を開始するプロモーターである。プロモーターはまた、その起源に関して、例えば、異種、同種、キメラ、合成などで分類され得る。関連ポリヌクレオチド配列に関連するプロモーターまたは他の調節配列に関しての用語「異種」（例えば、転写可能なＤＮＡ配列、コード配列、遺伝子または導入遺伝子）は、天然においては実際にそのような関連ポリヌクレオチド配列に作動可能に連結されていないプロモーターまたは調節配列である―例えば、プロモーターまたは調節配列はその関連ポリヌクレオチド配列に対して異なる起源を有し、及び／またはそのプロモーターまたは調節配列を形質転換しようとする植物種において天然には存在しない。用語「異種」は、２つ以上のＤＮＡ分子または配列の組み合わせを、そのような組み合わせが通常天然には見られない場合、より広く含む。本明細書中で使用するように、語句「通常天然に見出されない」とは、人の手によって導入されなければ自然界に見出されることがないことを意味する。例えば、２つ以上のＤＮＡ分子または配列は、それらが異なるゲノムまたは同じゲノム内の異なる遺伝子座に通常見出される場合、またはそれらが本質的に同一に組み合わされていない場合、互いに対して異種であろう。多くの実施形態によれば、ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列に作動可能に連結された植物発現性プロモーターは、ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列に関して異種である。
【００５８】
本発明の実施形態により、植物の、開花、生殖及び／または収量に関連した形質または表現型を変化させるために植物に導入または形質転換し得る、植物内で機能するプロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴ導入遺伝子またはコード配列を含む組換えＤＮＡ分子、ベクターまたは構築物を提供する。本発明の実施形態は、植物への導入または形質転換時に植物の発育の早い段階で（すなわち、植物の栄養成長期の間に）ＦＴ導入遺伝子の発現を引き起こし、同じ発育段階の野生型植物においてそうでなければ生じるであろうレベルよりも高いレベルのＦＴを標的組織中に生成するための「栄養期」プロモーターに機能的に連結されたＦＴ導入遺伝子またはコード配列を含む組換えＤＮＡ分子を提供する。栄養生長期（複数可）におけるＦＴ導入遺伝子発現のタイミングは、植物の１つ以上の結節（複数可）においてより多数の花芽分裂組織を産生し、首尾よく花を産生するために適時の誘導シグナルを提供することによって１つ以上の生殖、開花及び／または収量関連形質または表現型に影響を及ぼすために重要であり得る。栄養期発現は、早期開花を引き起こし、植物の結節あたりの生殖、開花及び／または収量関連形質または表現型の改良、例えば花、さやなどの増加を可能にするために必要であり得る。いかなる理論にも拘泥するものではないが、植物におけるＦＴ導入遺伝子の栄養期発現は、１つ以上の結節（複数可）において早期開花を同期化及び／または増加させるように作用し、植物の結節あたりの花をより多く産生し得る。本発明の一部として以下に記載するプロモーターは、ＦＴ発現をタイミング調整するための選択肢を提供する。
【００５９】
本明細書中で使用する場合、「栄養期」プロモーターには、植物発育の１つ以上の栄養期（複数可）の間、例えば、Ｖｅ、Ｖｃ、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４などのうちの１つ以上、及び／または後期の任意のまたは全ての栄養生長期（例えば、最大Ｖn期）の間に、その関連遺伝子、導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の転写または発現を開始する、引き起こす、駆動するなどを行う任意のプロモーターが含まれる。言い換えれば、用語「栄養期」は、植物全体の栄養生長期（複数可）を指す。そのような「栄養期」プロモーターはさらに、植物の１つ以上の栄養組織（複数可）、例えば、１つ以上の栄養芽分裂組織（複数可）におけるその関連遺伝子／導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の転写または発現を、開始する、引き起こす、駆動するなどを行うものとして定義され得る。そのような「栄養期」プロモーターは、さらにその関連遺伝子、導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の転写または発現を、少なくとも優先的に、または多くの場合、排他的でないにしても、植物発育の１つ以上の栄養期（複数可）の間に、開始する、引き起こす、駆動するなどを行う「栄養期優先型」プロモーターとして定義される（生殖期とは対照的に）。しかしながら、「栄養期」及び「栄養期優先型」プロモーターはまた、それぞれが、植物の１つ以上の細胞または組織において、例えば、１つ以上の花芽組織または生殖組織（複数可）において、生殖相（複数可）または生殖生長期（複数可）の間のその関連遺伝子、導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の転写または発現を、可能にし、許容し、引き起こし、駆動するなどを行い得る。実際、植物発育の１つ以上の栄養期（複数可）の間に、「栄養期」プロモーターがその関連遺伝子、導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の転写または発現をも、開始し、引き起こし、駆動するなどする限りにおいて、「栄養期」プロモーターは、１つ以上の生殖組織または花芽組織において、栄養組織（複数可）におけるよりも高いレベルまたは程度で、その関連遺伝子、導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の転写または発現などを許容し、可能にし、引き起こし、駆動することさえ行い得る。
【００６０】
所与の植物種についての栄養生長期に関連する特性及び特徴は、当技術分野において公知である。双子葉植物の場合、栄養生長期における植物の栄養形態学的特性及び特徴として、子葉形態、栄養芽分裂組織（頂端、側生／腋芽、及び根端）、葉序、葉形、葉縁、葉脈、葉柄、托葉、葉鞘、胚軸、及び根が挙げられる。本発明の実施形態によれば、「栄養期」プロモーターはまた、その関連遺伝子（または導入遺伝子）の観察可能な、または明白な転写または発現が最初に引き起こされる、開始されるなどの特定の栄養期によってさらに定義され得る。例えば、栄養期プロモーターは、Ｖｃ期プロモーター、Ｖ１期プロモーター、Ｖ２期プロモーター、Ｖ３期プロモーターなどであり得る。かくして、「Ｖｃ期」プロモーターは、その関連遺伝子、導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の、植物発育のＶｃ期中の転写を最初に開始するかまたは引き起こす栄養期プロモーターとして定義され、「Ｖ１期」プロモーターは、その関連遺伝子、導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の、植物発育のＶ１期中の転写を最初に開始または引き起こす栄養期プロモーターとして定義され、「Ｖ２期」プロモーターは、その関連遺伝子、導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の、植物発育のＶ２期中の転写を最初に開始または引き起こす栄養期プロモーターとして定義される、などであるが、関連遺伝子、導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の発現は、後の栄養生長期（及び／または生殖期）（複数可）の間における１つ以上の組織において連続的または不連続的に存在し得る。当業者であれば、当技術分野において公知の様々な分子アッセイ及び技術を使用して、植物発育中の所与の遺伝子、導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の発現のタイミングを決定することができるだろう。
【００６１】
本発明の実施形態によれば、「栄養期」プロモーターには、構成的プロモーター、組織優先型プロモーター、または組織特異的プロモーターが含まれ得る。例えば、栄養期プロモーターは、その関連するＦＴ遺伝子／導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の発現を、植物発育の栄養期（複数可）中に、１つ以上の根（複数可）、茎（複数可）、葉（複数可）、分裂組織（複数可）などの１つ以上の植物組織（複数可）において駆動し得る。しかしながら、そのような栄養期プロモーターは、その関連するＦＴ導入遺伝子またはコード配列または転写可能なＤＮＡ配列の発現を、好ましくは植物の１つ以上の分裂組織（複数可）において駆動し得る。多くの実施形態によれば、「栄養期」プロモーターは、「分裂組織特異的」または「分裂組織優先型」プロモーターであり、分裂組織においてＦＴ導入遺伝子またはコード配列もしくは転写可能なＤＮＡ配列の発現を引き起こし得る。ＦＴタンパク質は、植物の分裂組織内で、葉からのＦＴタンパク質の移行後に作用し、栄養生長から生殖生長への転換を引き起こすことを補助することが知られている。対照的に、本発明の実施形態は、植物の分裂組織内で直接ＦＴ導入遺伝子の発現を提供し、開花を誘導し、生殖及び／または収量関連形質の変化または表現型の変化を植物に誘導する。したがって、本発明の実施形態により、植物に形質転換した場合に植物の１つ以上の分裂組織において少なくとも優先的にＦＴ導入遺伝子の発現を駆動する「分裂組織特異的」または「分裂組織優先型」プロモーターに作動可能に連結されたＦＴ導入遺伝子またはコード配列を含む組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターを提供する。本明細書中で使用する場合、「分裂組織優先型プロモーター」とは、植物の少なくとも１つの分裂組織、例えば、頂端分裂組織、及び／または腋芽分裂組織において、関連遺伝子、導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の発現を、他の植物組織に比べて優先的に引き起こすプロモーターを指し、一方、「分裂組織特異的プロモーター」とは、関連遺伝子、導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列を植物の少なくとも１つの分裂組織において排他的に（またはほぼ排他的に）発現させるプロモーターを指す。
【００６２】
本発明の実施形態により、分裂組織優先型及び／または分裂組織特異的プロモーターでもあり得る栄養期プロモーターに作動可能に連結されたＦＴコード配列を含む組換えＤＮＡ分子を提供する。例えば、プロモーターは、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ由来ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーター（配列番号３１）、またはその機能的断片もしくは部分を有していてもよい。本発明の実施形態によるｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターの短縮部分の２つの例を、配列番号３２及び配列番号４８として提供する。例えば、Ｙｏｋｏｙａｍａ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ＥＲＥＣＴＡ  ｇｅｎｅ  ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｈｏｏｔ  ａｐｉｃａｌ  ｍｅｒｉｓｔｅｍ  ａｎｄ  ｏｒｇａｎ  ｐｒｉｍｏｒｄｉａ，”Ｔｈｅ  Ｐｌａｎｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ［１５］（３）：３０１−３１０（１９９８）参照。ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａは、分裂組織優先型でもある栄養期プロモーターの一例である。他の栄養期、分裂組織優先型または分裂組織特異的プロモーターは、それらの特徴付けられた発現特性（例えば、下記の実施例４及び７参照）に基づいて同定されており、それらもまた、本発明の実施形態に従ってＦＴ発現を駆動するために用いてもよい。例えば、栄養期分裂組織優先型プロモーターとして使用することができる以下のダイズ受容体様キナーゼ（ＲＬＫ）遺伝子由来プロモーター：Ｇｌｙｍａ１０ｇ３８７３０（配列番号３３）、Ｇｌｙｍａ０９ｇ２７９５０（配列番号３４）、Ｇｌｙｍａ０６ｇ０５９００（配列番号３５）、及びＧｌｙｍａ１７ｇ３４３８０（配列番号３６）、ならびにその任意の機能的部分が同定された。本発明の実施形態による栄養期、分裂組織優先型プロモーターには、ジャガイモ由来受容体様キナーゼ（ＲＬＫ）遺伝子プロモーター：ＰＧＳＣ０００３ＤＭＰ４０００３２８０２（配列番号３７）及びＰＧＳＣ０００３ＤＭＰ４０００５４０４０（配列番号３８）、ならびにその任意の機能的部分が含まれ得る。ＦＴ発現を駆動するｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーター及び他のＲＬＫ、ＥｒｅｃｔａまたはＥｒｅｃｔａ様（Ｅｒｌ）遺伝子について同定された類似の発現特性の本明細書中に提供する特徴付けを考慮すると、本発明の栄養期、分裂組織優先型または分裂組織特異的プロモーターはさらに、植物の分裂組織において栄養期の発現パターンを有する他の双子葉種由来のＲＬＫ、Ｅｒｅｃｔａ及びＥｒｅｃｔａ様遺伝子の任意の公知のまたは後に同定されるプロモーター配列を有していてもよい。
【００６３】
栄養期、分裂組織優先型または分裂組織特異的プロモーターのさらなる例として、以下のＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ遺伝子：Ｐｉｎｈｅａｄ（Ａｔ．ＰＮＨ）（配列番号３９）、Ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ３またはＡｔ．ＡＮ３（配列番号４０）；ＡＴ．ＭＹＢ１７（Ａｔ．ＬＭＩ２またはＬａｔｅ  Ｍｅｒｉｓｔｅｍ  Ｉｄｅｎｔｉｔｙ２；Ａｔ３ｇ６１２５０）（配列番号４１）、キネシン様遺伝子（Ａｔ５ｇ５５５２０）（配列番号４２）、Ａｔ．ＲＥＭ１７（配列番号４３）またはＡｔ．ＲＥＭ１９、ならびにＥｒｅｃｔａ様１及び２遺伝子、Ａｔ．Ｅｒｌ１（配列番号４４）及びＡｔ．Ｅｒｌ２（配列番号４５）を含むＡＰ２／Ｂ３様遺伝子に由来するプロモーター、ならびにその任意の機能的部分が挙げられ得る。別の例は、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ(配列番号４９)由来のＡｔ．ＡＰ１プロモーター（ｐＡｔ．ＡＰ１またはｐＡＰ１）、またはその機能的部分である。しかしながら、ｐＡｔ．ＡＰ１プロモーターは、むしろ、より後期の栄養期及び生殖期プロモーターであるとみなし得る。後期の栄養期及び生殖期発現のパターンを考えると、ｐＡｔ．ＡＰ１及び関連プロモーターは、ＦＴ導入遺伝子及び／またはＦＴサプレッションエレメントの発現を駆動するのに有用であり得る。同様の遺伝子及び／またはそれらの天然植物種におけるｐＡｔ．ＡＰ１プロモーターと同様の発現パターンを有する遺伝子から同定されるさらなる例として、以下の遺伝子：Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ由来のＡＴ１Ｇ２６３１０．１（配列番号５０）、ＡＴ３Ｇ３０２６０．１（配列番号５１）、もしくはＡＴ５Ｇ６０９１０．１（配列番号５２）；ダイズ由来のＧｌｙｍａ０１ｇ０８１５０（配列番号５３）、Ｇｌｙｍａ０２ｇ１３４２０（配列番号５４）、Ｇｌｙｍａ０８ｇ３６３８０（配列番号５５）、もしくはＧｌｙｍａ１６ｇ１３０７０（配列番号５６）；トマト由来のＳｏｌｙｃ０２ｇ０６５７３０（配列番号５７）、Ｓｏｌｙｃ０２ｇ０８９２１０（配列番号５８）、Ｓｏｌｙｃ０３ｇ１１４８３０（配列番号５９）、もしくはＳｏｌｙｃ０６ｇ０６９４３０（配列番号６０）；またはトウモロコシ由来のＧＲＭＺＭ２Ｇ１４８６９３（配列番号６１）、ＧＲＭＺＭ２Ｇ５５３３７９（配列番号６２）、ＧＲＭＺＭ２Ｇ０７２５８２（配列番号６３）、もしくはＧＲＭＺＭ２Ｇ１４７７１６（配列番号６４）のうちの１つに由来するプロモーター、またはその任意の機能的部分が挙げられ得る。
【００６４】
分裂組織優先型プロモーターまたは分裂組織特異的プロモーターでもあり得る栄養期プロモーターには、栄養生長期の間のそれらの発現パターンに応じた早期及び後期両方の栄養期プロモーターが含まれ得る。「早期栄養期」プロモーターは、１つ以上の早期栄養期（すなわち、Ｖｅ〜Ｖ５期）の間に、最初にその関連遺伝子／導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の観察可能または検出可能な転写または発現を開始するかまたは引き起こすが、一方、「後期栄養期」プロモーターは、１つ以上の後期栄養期（すなわちＶ６期以降）の間に、最初にその関連遺伝子／導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の観察可能または検出可能な転写または発現を開始するかまたは引き起こす。早期または後期栄養期プロモーターはまた、早期または後期栄養期優先型プロモーターでもあり得る。「早期栄養期優先型」プロモーターは、１つ以上の早期栄養期（すなわちＶｅ〜Ｖ５）の間に、その関連遺伝子／導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の転写または発現を、後期栄養期に比べてより優先的にまたは大規模に、開始する、引き起こす、駆動する、などを行う。同様に、「後期栄養期優先型」プロモーターは、１つ以上の後期栄養期（すなわちＶ６期以降）の間に、その関連遺伝子／導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の転写または発現を、早期栄養期に比べてより優先的にまたは大規模に、開始する、引き起こす、駆動する、などを行う。したがって、早期栄養期の間にプロモーターがその関連遺伝子／導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の観察可能または検出可能な転写または発現を最初に開始するかまたは引き起こすが、後期栄養期の間にも、その関連遺伝子／導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の転写または発現をより優先的にまたはより大規模に開始する、引き起こす、駆動する、などを行う場合、早期栄養期プロモーターは後期栄養期優先型プロモーターでもあり得る。上記の栄養期プロモーターの例には、早期及び後期栄養期プロモーターが含まれてもよく、それらはまた、早期栄養期優先型または後期栄養期優先型でもあり得る。
【００６５】
栄養期プロモーター（またはその機能的断片もしくは部分）のポリヌクレオチド配列はまた、プロモーターに機能的に連結された関連する転写可能なＤＮＡ配列、遺伝子または導入遺伝子の類似または同一の発現パターンを依然として維持する一方で、その配列同一性は前述の栄養期プロモーターのいずれかに対して緩和されていてもよい。例えば、栄養期プロモーターは、上記の配列番号３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、もしくは６４、またはその機能的部分から選択されるポリヌクレオチド配列に対し、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のポリヌクレオチド配列を有していてもよい。公知のまたは提供するプロモーター配列の「機能的部分」とは、その関連遺伝子、導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の発現を、公知のまたは提供するプロモーター配列と同一または類似の様式で機能的に駆動する、引き起こす、促進する、などを行い得る、公知のまたは提供するプロモーター配列の１つ以上の連続または不連続部分（複数可）として定義される。本開示に基づいて、当業者であれば、公知のまたは提供するプロモーター配列、及び／またはより短い配列及び／または公知のまたは提供するプロモーター配列に比べて緩和された配列同一性を有する配列のうちの１つ以上の部分（複数可）を含むプロモーターが、その関連するレポーター遺伝子またはＦＴ導入遺伝子の植物内での発現に際して、公知のまたは提供するプロモーター配列に比べて類似の発現パターン及び／または類似の表現型もしくは効果を引き起こすかどうかを判断することができよう。
【００６６】
いくつかの実施形態によれば、「生殖期」プロモーター（下記に定義）は、栄養生長期（複数可）の間に生殖期プロモーターが少なくともある程度のレベルのＦＴ導入遺伝子の発現を提供する（すなわち、開始する、引き起こす、駆動する、など）限り、これを作動可能に連結して使用し、ＦＴ導入遺伝子またはＦＴコード配列を発現させ、早期花成誘導シグナルを提供してもよい。生殖期プロモーターの例を以下に提供する。所与のプロモーターを、早期または後期栄養期プロモーター及び／または生殖期プロモーターとして分類すべきかどうかは、そのプロモーターを使用する特定の植物種に依存する。所与のプロモーターを用いた発現パターンは、異なる植物種の間でほとんどの場合類似している（同一ではないにしても、ほぼ同一である）と予想されるものの、１つの植物種、例えばその天然植物種において、規定された発現パターンを有するプロモーターは、異なる植物種において（例えば、異なる植物種において異種的に）発現する場合、異なった、変化したまたはシフトした発現パターンを有する場合がある。例えば、１つの植物種における生殖期プロモーターは、別の植物種において導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列を発現させるために使用する場合、早期栄養期プロモーターとして機能し得る。したがって、いくつかの場合には生殖期プロモーターを異種的に使用し、ＦＴ導入遺伝子を発現させ、早期開花を誘導してもよい。例えば、ｐＡｔ．ＡＰ１プロモーター（配列番号４９）は、その野生型Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ植物種においては、より生殖期優先型の発現パターンを有するが、ダイズ植物において異種的に使用する場合、生殖期の発現を駆動することに加えて、分裂組織において早期栄養期の発現パターンを駆動し得る。
【００６７】
上記のように、本発明の組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターは、分裂組織優先型または分裂組織特異的プロモーターでもあり得る栄養期プロモーターに作動可能に連結されたＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列（すなわちＦＴ導入遺伝子）を含む発現カセットを有していてもよい。ＦＴ導入遺伝子または発現カセットのポリヌクレオチドコード配列はまた、ＦＴ導入遺伝子またはカセットの発現を調節するかまたは可能にして植物細胞内で効果的にＦＴタンパク質を産生するのに適しているかまたは必要な、エンハンサー（複数可）、リーダー、転写開始部位（ＴＳＳ）、リンカー、５’及び３’非翻訳領域（複数可）、イントロン（複数可）、ポリアデニル化シグナル、終止領域または終止配列などの１つ以上のさらなる調節エレメントに作動可能に連結させてもよい。そのような追加の調節エレメント（複数可）は任意であってよく、導入遺伝子の発現を増強または最適化するために使用してもよい。本発明の目的のために、「エンハンサー」は、エンハンサーが一般的に、転写開始部位、ＴＡＴＡボックス、または同等の配列を欠き、したがって転写を駆動するのに十分ではないという点において「プロモーター」と区別され得る。本明細書中で使用する場合、「リーダー」は、一般的に、転写開始部位（ＴＳＳ）とタンパク質コード配列開始部位との間の遺伝子（または導入遺伝子）の非翻訳５’領域（５’ＵＴＲ）のＤＮＡ配列として定義され得る。
【００６８】
ポリヌクレオチドに関して本明細書中で使用する場合、「構築物」は、コード配列または転写可能なＤＮＡ配列などの１つ以上の配列エレメントと、プロモーター、エンハンサーなどの１つ以上の発現または調節エレメントとを含むポリヌクレオチドセグメントまたは配列である。「発現カセット」は、植物または細菌細胞などの適切な宿主細胞においてコード配列または転写可能なＤＮＡ配列を発現することができるコード配列または転写可能なＤＮＡ配列、ならびにコード配列または転写可能なＤＮＡ配列に作動可能に連結された１つ以上のプロモーター及び／または調節エレメントを含む構築物の一種である。「ベクター」は、１つ以上の構築物及び／または発現カセットを有し得るとともに、安定性、保存、または他の用途もしくは目的、例えば、植物または宿主細胞への送達、形質転換、及び／または維持に適するポリヌクレオチドまたはＤＮＡ分子である。「ベクター」には、プラスミドまたは環状ＤＮＡ分子、直鎖状ＤＮＡ分子、植物の形質転換に適した形質転換ベクターなどが含まれ得る。ＤＮＡ分子またはベクターは、１つ以上の構築物（複数可）、発現カセット（複数可）、選択可能なマーカー（複数可）、複製及び／または維持エレメント（複数可）などを含み得る。
【００６９】
本発明の実施形態によれば、ポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）分子、タンパク質、構築物、ベクターなどに関しての用語「組換え」とは、ヒトの介入を伴わなければ天然には連続してまたは近接して一緒には存在しないであろう２つ以上のポリヌクレオチドまたはタンパク質配列の組み合わせを有するポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）分子、タンパク質、構築物など、及び／または互いに対して異種である少なくとも２つのＤＮＡ配列を有するＤＮＡ分子、構築物などを含む、通常、天然に見出されず、及び／または通常、天然に見出されない状況で存在する、ポリヌクレオチドまたはタンパク質分子もしくは配列を指す。組換えＤＮＡ分子、構築物などは、天然においてそのようなＤＮＡ配列（複数可）に近接して存在する他のポリヌクレオチド配列（複数可）から分離されているＤＮＡ配列（複数可）、及び／または天然には互いに近接していない他のポリヌクレオチド配列（複数可）に近接する（または連続する）ＤＮＡ分子を含み得る。組換えＤＮＡ分子、構築物などはまた、遺伝子改変され、細胞の外側で構築されたＤＮＡ分子または配列を指す場合もある。例えば、組換えＤＮＡ分子は、任意の適切なプラスミド、ベクターなどを含み得、直鎖状または環状のＤＮＡ分子を含み得る。そのようなプラスミド、ベクターなどは、おそらく植物選択マーカー遺伝子などに加えて、原核生物の複製起点及び選択マーカー、ならびにＦＴ発現導入遺伝子または発現カセットを含む、様々な維持エレメントを含み得る。
【００７０】
本発明の実施形態により、植物発現性プロモーターに作動可能に連結された転写可能なポリヌクレオチドまたはＤＮＡ配列を含む第２の発現カセットを提供し、転写可能なＤＮＡ配列は、ＦＴ導入遺伝子の少なくとも一部に対応する配列及び／またはそれに相補的な配列を有し、サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とする。転写可能なＤＮＡ配列は、ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列（すなわち、ＦＴ導入遺伝子）によってコードされるＲＮＡ前駆体または成熟ｍＲＮＡの少なくとも一部に相補的なターゲティング配列を含むＲＮＡ分子をコードしてもよく、それにより、ＲＮＡ分子はＦＴ導入遺伝子を抑制する。したがって、組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターを、第２の発現カセットを有する植物への形質転換のために提供する。そのような組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターは、第１の植物発現性プロモーターに作動可能に連結されたＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチドコード配列（すなわちＦＴ導入遺伝子）を含む第１の発現カセットをさらに有してもよく、その場合、第２の発現カセットは、第２の植物発現性プロモーターに作動可能に連結された転写可能なＤＮＡ配列を含む。あるいは、第１の組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターと、第２の組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターを含む、２つの組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターを、植物の形質転換のために提供してもよく、第１の組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターは、ＦＴ導入遺伝子を含む発現カセットを有し、第２の組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターは、ＦＴ導入遺伝子の少なくとも一部に対応する配列及び／またはそれに相補的な配列を含む転写可能なＤＮＡ配列を有する第２の発現カセットを含む。いくつかの実施形態によれば、ＦＴ遺伝子または導入遺伝子のサプレッションのためのＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列に作動可能に連結された植物発現性プロモーターは、転写可能なＤＮＡ配列に関して異種である。
【００７１】
本発明の実施形態により、アンチセンスＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）または逆方向反復ＲＮＡ配列の発現、または、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、トランス作用性ｓｉＲＮＡ（ｔａ−ｓｉＲＮＡ）、またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）の発現によるコサプレッションすなわちＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を含む、標的遺伝子のサプレッションのための当技術分野で公知の任意の方法を使用して、ＦＴ導入遺伝子を抑制してもよい。例えば、その内容及び開示を参照として本明細書に援用する、米国特許出願公開第２００９／００７０８９８号、第２０１１／０２９６５５５号、及び第２０１１／００３５８３９号参照。したがって、転写可能なＤＮＡ配列によってコードされるＲＮＡ分子は、アンチセンスＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）または逆方向反復ＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、トランス作用性ｓｉＲＮＡ（ｔａ−ｓｉＲＮＡ）、またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）であってもよく、成熟ｓｉＲＮＡまたは成熟ｍｉＲＮＡなどの成熟ＲＮＡ分子にプロセシングまたは切断され得るｓｉＲＮＡ前駆体またはｍｉＲＮＡ前駆体などのＲＮＡ前駆体が含まれる。本明細書中で使用する用語「サプレッション」とは、植物、植物細胞または植物組織における標的遺伝子及び／または導入遺伝子によってコードされるｍＲＮＡ及び／またはタンパク質の発現レベルの低下、減少または排除を指し、ＲＮＡ分子を発現するために使用するプロモーターに依存して、特定の組織及び／または植物発育期に限定され得る。
【００７２】
本発明の実施形態により、サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子もしくはＲＮＡ配列をコードする転写可能なＤＮＡ配列及び／またはサプレッションエレメント（複数可）を含む、組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターを提供し、転写可能なＤＮＡ配列は、植物発現性プロモーターに作動可能に連結される。ＲＮＡ分子はサプレッション用であるため、転写可能なＤＮＡ配列によってコードされるＲＮＡ分子は非コードＲＮＡ分子であってもよい。本発明の目的のために、「非コードＲＮＡ分子」は、タンパク質をコードしないＲＮＡ分子である。いくつかの実施形態によれば、組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターは、ＦＴ導入遺伝子を含む第１の発現カセット及びサプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む第２の発現カセットを有してもよい。あるいは、ＦＴ導入遺伝子を含む第１の発現カセット、及びＦＴ導入遺伝子のサプレッションのための転写可能なＤＮＡ配列を含む第２の発現カセットを、２つの異なる組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクター中に存在させてもよい。
【００７３】
転写可能なＤＮＡ配列は、少なくとも１５ヌクレオチド長、例えば約１５ヌクレオチド長〜約２７ヌクレオチド長、または１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、または２７ヌクレオチド長のサプレッションエレメントを含む場合があり、サプレッションエレメントは、抑制する標的ＦＴ導入遺伝子の少なくとも一部、及び／またはそれに相補的なＤＮＡ配列に対応する。多くの実施形態において、転写可能なＤＮＡ配列またはサプレッションエレメントは、少なくとも１７、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３ヌクレオチド長（またはそれ以上）であり得る（例えば、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも５００、少なくとも１０００、少なくとも１５００、少なくとも２０００、少なくとも３０００、少なくとも４０００、または少なくとも５０００ヌクレオチド長）。転写可能なＤＮＡ配列またはサプレッションエレメントの長さ及び配列に応じて、１つ以上の配列ミスマッチまたは非相補的塩基がサプレッションを失うことなく許容され得る。実際、長さが約１５ヌクレオチド〜約２７ヌクレオチドの範囲のより短いＲＮＡｉサプレッションエレメントでさえも、１つ以上のミスマッチまたは非相補的塩基を有し得るが、それでもなお標的ＦＴ導入遺伝子の抑制に有効である。したがって、センスまたはアンチセンスサプレッションエレメントは、標的とするＦＴ導入遺伝子の少なくとも１つのセグメントもしくは部分の対応する配列、またはその相補的配列に対して、それぞれ、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％同一または相補的な配列を有してもよい。
【００７４】
ＦＴ導入遺伝子を標的とするサプレッションのための本発明の転写可能なＤＮＡ配列は、以下のサプレッションエレメント（複数可）及び／または標的配列（複数可）のうちの１つ以上を含み得る：（ａ）標的とするＦＴ導入遺伝子の少なくとも１つのセグメントもしくは部分に対し、アンチセンスすなわち相補的である少なくとも１つのアンチセンスＤＮＡ配列を含むＤＮＡ配列；（ｂ）標的とするＦＴ導入遺伝子の少なくとも１つのセグメントもしくは部分に対し、アンチセンスすなわち相補的である少なくとも１つのアンチセンスＤＮＡ配列の複数のコピーを含むＤＮＡ配列；（ｃ）標的とするＦＴ導入遺伝子の少なくとも１つのセグメントまたは部分を含む少なくとも１つのセンスＤＮＡ配列を含むＤＮＡ配列；（ｄ）それぞれ、標的とするＦＴ導入遺伝子の少なくとも１つのセグメントまたは部分を含む少なくとも１つのセンスＤＮＡ配列の複数のコピーを含むＤＮＡ配列；（ｅ）標的とするＦＴ導入遺伝子のセグメントまたは部分の逆方向反復配列を有し、及び／または二本鎖ＲＮＡを形成することによって標的とするＦＴ導入遺伝子を抑制するためにＲＮＡに転写されるＤＮＡ配列であり、転写されるＲＮＡ配列が、標的とするＦＴ導入遺伝子の少なくとも１つのセグメントまたは部分に対してアンチセンスすなわち相補的である少なくとも１つのアンチセンスＤＮＡ配列、及び標的とするＦＴ導入遺伝子の少なくとも１つのセグメントまたは部分を含む少なくとも１つのセンスＤＮＡ配列を含み；（ｆ）単一の二本鎖ＲＮＡを形成することによって標的とするＦＴ導入遺伝子を抑制するためにＲＮＡに転写され、それぞれが標的とするＦＴ導入遺伝子の少なくとも１つのセグメントまたはその一部に対してアンチセンスすなわち相補的な複数の連続的なアンチセンスＤＮＡ配列、及びそれぞれが標的とするＦＴ導入遺伝子の少なくとも１つのセグメントまたは部分を含む複数の連続的なセンスＤＮＡ配列を含むＤＮＡ配列；（ｇ）複数の二本鎖ＲＮＡを形成することによって標的とするＦＴ導入遺伝子を抑制するためにＲＮＡに転写され、それぞれが標的とするＦＴ導入遺伝子の少なくとも１つのセグメントまたはその一部に対してアンチセンスすなわち相補的な複数の連続的なアンチセンスＤＮＡ配列、及びそれぞれが標的とするＦＴ導入遺伝子の少なくとも１つのセグメントまたは部分を含む複数の連続的なセンスＤＮＡ配列を含むＤＮＡ配列であって、複数のアンチセンスＤＮＡセグメント及び複数のセンスＤＮＡセグメントは、一連の逆方向反復配列として配置され；（ｈ）ｍｉＲＮＡ、好ましくは植物ｍｉＲＮＡに由来するヌクレオチドを含むＤＮＡ配列；（ｉ）ｓｉＲＮＡのヌクレオチドを含むＤＮＡ配列；（ｊ）リガンドに結合することができるＲＮＡアプタマーに転写されるＤＮＡ配列；ならびに（ｋ）リガンドに結合することができるＲＮＡアプタマーに転写されるＤＮＡ配列、及び標的とするＦＴ導入遺伝子の発現を調節することができる調節ＲＮＡに転写されるＤＮＡであり、標的とするＦＴ導入遺伝子の調節は、調節ＲＮＡの立体構造に依存し、調節ＲＮＡの立体構造は、リガンドによるＲＮＡアプタマーの結合状態によってアロステリックに影響を受ける。転写可能なＤＮＡ配列は、１つ以上の上記サプレッションエレメント及び／またはターゲティング配列（複数可）を有してもよく、それらは、ＦＴ導入遺伝子の１つ以上の配列及び／またはその相補的配列に対応するものであってよい。
【００７５】
１つより多いＦＴ導入遺伝子標的配列についての転写可能なＤＮＡ配列の複数のセンス及び／またはアンチセンスサプレッション配列は、直列に連続して配置するか、または直列逆方向反復配列などの直列セグメントまたは反復配列として配置してもよく、それらはさらに、１つ以上のスペーサー配列（複数可）によって中断されていてもよい。さらに、転写可能なＤＮＡ配列またはサプレッションエレメントのセンスまたはアンチセンス配列は、転写可能なＤＮＡ配列またはサプレッションエレメントの配列及び長さに応じて、標的ＦＴ導入遺伝子配列と完全に一致または完全に相補的でなくてもよい。実際、約１５ヌクレオチド〜約２７ヌクレオチド長のより短いＲＮＡｉサプレッションエレメントは、サプレッションエレメントまたはターゲティング配列の長さに応じて、１つ以上のミスマッチまたは非相補的塩基、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個（またはそれ以上）のミスマッチを有してもよく、それでもなお標的ＦＴ導入遺伝子を抑制するのに有効である。したがって、センスまたはアンチセンスサプレッションエレメントは、標的ＦＴ導入遺伝子の少なくとも１つのセグメントもしくは部分の対応する配列、またはその相補的配列に対して、それぞれ、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％同一または相補的な配列を含み得る。
【００７６】
アンチセンスサプレッションのために、転写可能なＤＮＡ配列は、標的とするＦＴ導入遺伝子の少なくとも一部またはセグメントに対し、アンチセンスすなわち相補的な配列を含み得る。転写可能なＤＮＡ配列及び／またはサプレッションエレメント（複数可）は、標的とするＦＴ導入遺伝子の１つ以上の部分またはセグメントに相補的な複数のアンチセンス配列、または標的とするＦＴ導入遺伝子に相補的な複数コピーのアンチセンス配列を含み得る。アンチセンス配列は、標的とするＦＴ導入遺伝子のｍＲＮＡの少なくとも一部またはセグメントに相補的なＤＮＡ配列に対し、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％同一であってもよい。言い換えれば、アンチセンス配列は、標的とするＦＴ導入遺伝子に対し、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％相補的であってもよい。
【００７７】
２つのヌクレオチド配列に関して本明細書中で使用する用語「相補性の割合」または「〜の割合で相補的な」とは、同一性の割合の概念に類似しているが、２つの配列を直線的に配置し、ループ、ステムまたはヘアピンなどの二次折り畳み構造を伴わずに最適に塩基対を形成させるが、２つの配列間の塩基対形成におけるミスマッチ及びギャップを許容する場合の、ヌクレオチド参照配列に対して最適に塩基対形成またはハイブリダイズする配列のヌクレオチドの割合を指す。そのような相補性の割合は、２本のＤＮＡ鎖、２本のＲＮＡ鎖、または１本のＤＮＡ鎖と１本のＲＮＡ鎖の間であってもよい。「相補性の割合」は、（ｉ）比較ウィンドウ（例えば、アラインメントウィンドウ）にわたって、直線的かつ完全に伸ばした配置（すなわち、折り畳み構造または二次構造を伴わない）で２つのヌクレオチド配列を最適に塩基対形成またはハイブリダイズさせ；（ｉｉ）比較ウィンドウにわたって２つの配列間の塩基対形成の位置の数を測定して相補的な位置の数を取得し、（ｉｉｉ）相補的な位置の数を、比較ウィンドウにおける位置の総数で割り、及び（ｉｖ）この商に１００％を掛けて、２つの配列の相補性の割合を得る。これらの目的のために、アラインメントウィンドウを、２つの配列間の相補性の領域として定義する。２つの配列の最適な塩基対合は、水素結合を介したＧ−Ｃ、Ａ−Ｔ、及びＡ−Ｕなどのヌクレオチド塩基の既知の対合に基づいて決定してもよい。参照またはクエリ配列に関して特定の比較ウィンドウを指定せずに「相補性の割合」を計算している場合、同一性の割合は、２つの直線配列間の相補的な位置の数を参照配列の全長で割ることによって決定される。本発明の目的のために、２つの配列（クエリ及び対象）を最適に塩基対合させる場合（ギャップ及びミスマッチまたは非塩基対形成ヌクレオチドを考慮して）、クエリ配列の「相補性の割合」（比較ウィンドウを定義しない場合）は、その長さにわたる２つの配列間の塩基対合の位置の数を、クエリ配列内の位置の総数で割り、その後１００％を掛けたものに等しい。
【００７８】
逆方向反復配列または転写されたｄｓＲＮＡを用いたＦＴ導入遺伝子のサプレッションのために、転写可能なＤＮＡ配列は、標的とするＦＴ導入遺伝子のセグメントまたは部分を含むセンス配列及び標的とするＦＴ導入遺伝子のセグメントまたは部分に相補的なアンチセンス配列を有してもよく、その場合、センス及びアンチセンスＤＮＡ配列を直列に配置する。センス及び／またはアンチセンス配列はそれぞれ、上記のように標的とするＦＴ導入遺伝子のセグメントまたは部分に対して１００％未満の同一性または相補性であってよい。センス及びアンチセンス配列をスペーサー配列によって分離してもよく、それにより、転写可能なＤＮＡ配列から転写されたＲＮＡ分子は、センス配列とアンチセンス配列との間にステム、ループまたはステム−ループ構造を形成する。転写可能なＤＮＡ配列は、直列に配置された複数のセンス及びアンチセンス配列を代わりに含んでもよく、それらもまた１つ以上のスペーサー配列によって分離されていてもよい。複数のセンス及びアンチセンス配列を含む転写可能なＤＮＡ配列は、一連のセンス配列とそれに続く一連のアンチセンス配列として、または一連の直列に配列されたセンス及びアンチセンス配列として配置してもよい。
【００７９】
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）を用いたＦＴ導入遺伝子のサプレッションのために、転写可能なＤＮＡ配列は、ウイルスもしくは真核生物、例えば動物もしくは植物の天然のｍｉＲＮＡ配列に由来するか、またはそのような天然ｍｉＲＮＡ配列を改変するかもしくはそれに由来するＤＮＡ配列を有していてもよい。そのような天然または天然由来のｍｉＲＮＡ配列は、フォールドバック構造を形成し、ｍｉＲＮＡ前駆体のための骨格として機能する場合があり、例えば天然（または天然由来）ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡまたはｐｒｅ−ｍｉＲＮＡ配列に由来する天然ｍｉＲＮＡ前駆体配列のステム領域に対応し得る。しかしながら、これらの天然または天然由来のｍｉＲＮＡ骨格またはプレプロセシングされた配列に加えて、本発明の遺伝子改変ｍｉＲＮＡはさらに、標的とするＦＴ導入遺伝子のセグメントまたは部分に対応する配列を含む。したがって、プレプロセシングされた配列または骨格配列に加えて、１つ以上の配列ミスマッチを許容し得るものの、標的とするＦＴ導入遺伝子のセグメントまたは部分に対応するセンス及び／またはアンチセンス配列、及び／またはそれに相補的な配列を含むように、サプレッションエレメントをさらに改変してもよい。
【００８０】
遺伝子改変型ｍｉＲＮＡは、高い特異性での標的遺伝子のサプレッションに有用である。例えば、その内容及び開示を参照として本明細書に援用するＰａｒｉｚｏｔｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１８：２２３７−２２４２（２００４）、ならびに米国特許出願公開第２００４／００５３４１１号、第２００４／０２６８４４１号、第２００５／０１４４６６９号、及び第２００５／００３７９８８号参照。ｍｉＲＮＡは非コードＲＮＡである。ｍｉＲＮＡ前駆体分子が切断されると成熟ｍｉＲＮＡが形成され、これは、一般的に約１９〜約２５ヌクレオチド長（通常、植物では約２０〜約２４ヌクレオチド長）、例えば、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ヌクレオチド長であり、サプレッションの標的となる遺伝子に対応する配列及び／またはその相補配列を有する。成熟ｍｉＲＮＡは、標的ｍＲＮＡ転写産物とハイブリダイズし、標的転写産物へのタンパク質複合体の結合を誘導し、これは翻訳を阻害し、及び／または転写産物の分解をもたらすように機能し、したがって標的遺伝子の発現を負に調節または抑制し得る。ｍｉＲＮＡ前駆体はまた、植物において、標的遺伝子のサプレッションを引き起こすためにＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを必要とするプロセスにおいてｓｉＲＮＡ、トランス作用性ｓｉＲＮＡ（ｔａ−ｓｉＲＮＡ）をインフェーズ産生するうえで有用である。例えば、その内容及び開示を参照として本明細書に援用するＡｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １２１：２０７−２２１（２００５），Ｖａｕｃｈｅｒｅｔ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＳＴＫＥ，２００５：ｐｅ４３（２００５）、及びＹｏｓｈｉｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．，１９：２１６４−２１７５（２００５）参照。
【００８１】
本発明の実施形態によれば、ＦＴ導入遺伝子の標的化サプレッションのためのｍｉＲＮＡまたは前駆体ｍｉＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターを提供する。そのような転写可能なＤＮＡ配列は、ＦＴ導入遺伝子に対応する少なくとも１９ヌクレオチド長の配列及び／またはＦＴ導入遺伝子に相補的な配列を有し得るが、１つ以上の配列ミスマッチ及び／または非塩基対ヌクレオチドを許容し得る。
【００８２】
ＦＴ導入遺伝子はまた、１つ以上の低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を使用して抑制してもよい。ｓｉＲＮＡ経路は、より長い二本鎖ＲＮＡ中間体（「ＲＮＡ二本鎖」）から低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）への非段階的切断を含む。ｓｉＲＮＡのサイズまたは長さは、一般的には約１９〜約２５ヌクレオチドまたは塩基対の範囲であるが、一般的なクラスのｓｉＲＮＡは２１塩基対または２４塩基対を有する。したがって、本発明の転写可能なＤＮＡ配列は、少なくとも約１９〜約２５ヌクレオチド長、例えば、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ヌクレオチド長のＲＮＡ分子をコードしてもよい。ｓｉＲＮＡサプレッションについては、ＦＴ導入遺伝子の標的化サプレッションのためのｓｉＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列及び／またはサプレッションエレメントを含む、組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターを提供する。
【００８３】
本発明の実施形態により、植物細胞中の標的ｍＲＮＡの配列、例えば、標的ｍＲＮＡのコード（エキソン）配列及び／または非翻訳（ＵＴＲ）配列に、結合またはハイブリダイズする非コードＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡ分子、ベクターまたは構築物を提供し、標的ｍＲＮＡ分子はＦＴタンパク質をコードし、転写可能なＤＮＡ配列は植物発現性プロモーターに作動可能に連結される。成熟ｍＲＮＡ配列を標的とすることに加えて、転写可能なＤＮＡ配列によってコードされる非コードＲＮＡ分子は、ＦＴ導入遺伝子または転写産物のイントロン配列を標的としてもよい。他の実施形態により、植物細胞内で標的ｍＲＮＡに結合またはハイブリダイズする成熟非コードＲＮＡ分子に切断またはプロセシングされる非コードＲＮＡ（前駆体）分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡ分子、ベクターまたは構築物を提供し、標的ｍＲＮＡ分子はＦＴタンパク質をコードし、転写可能なＤＮＡ配列は、組織特異的、組織優先的、発生的、及び／または他のプロモーター型であり得る植物発現性プロモーターに作動可能に連結される。
【００８４】
本発明の実施形態により、非コードＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡ分子、ベクターまたは構築物を提供し、（ｉ）ＦＴ導入遺伝子から発現し、及び／または（ｉｉ）植物または植物細胞中のＦＴタンパク質をコードするｍＲＮＡ分子の少なくともセグメントまたは部分に対し、非コードＲＮＡ分子は、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％相補的であり、転写可能なＤＮＡ配列は植物発現性プロモーターに作動可能に連結される。非コードＲＮＡ分子は、成熟ｍＲＮＡもしくはｍＲＮＡ前駆体配列、５’もしくは３’非翻訳領域（ＵＴＲ）、コード（エキソン）配列及び／またはＦＴ導入遺伝子もしくは転写産物のイントロンもしくはイントロン配列を標的とし得る。いくつかの実施形態によれば、非コードＲＮＡ分子は、サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とし、ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド（コード）配列（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または２９）、または任意の他の公知の花成性ＦＴコード配列の、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、または少なくとも２７連続ヌクレオチドに対し、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％相補的である。他の実施形態によれば、非コードＲＮＡ分子は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、もしくは３０、または他の任意の公知の花成性ＦＴタンパク質、あるいはその機能的断片に対し、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％同一のＦＴタンパク質をコードするｍＲＮＡ分子の、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、または少なくとも２７連続ヌクレオチドに対し、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％相補的である。本明細書中で使用する場合、ポリヌクレオチドまたはタンパク質配列に関しての用語「連続的」とは、その配列中に欠失またはギャップがないことを意味する。本発明の実施形態によれば、本明細書において提供する組換えＤＮＡ分子、ベクターまたは構築物の転写可能なＤＮＡ配列によってコードされる非コードＲＮＡ分子は、成熟ｍｉＲＮＡもしくはｓｉＲＮＡ、または植物細胞内でプロセシングもしくは切断されて成熟ｍｉＲＮＡまたはｓｉＲＮＡを形成し得るｍｉＲＮＡもしくはｓｉＲＮＡの前駆体であり得る。
【００８５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、転写可能なＤＮＡ配列は、ＲＮＡ分子のターゲティング配列をコードする配列を有し、この配列は、特定のＧｍ．ＦＴ２ａ遺伝子または導入遺伝子のｍＲＮＡに相補的であり、及び／またはハイブリダイズし、サプレッションのためにＧｍ．ＦＴ２ａ遺伝子または導入遺伝子を標的とする。転写可能なＤＮＡ配列は、転写可能なＤＮＡ配列によってコードされ、それから転写されるＲＮＡ分子のターゲティング配列（例えば、配列番号６６）をコードする配列（例えば、配列番号６５）を有してもよい。ＲＮＡ分子のターゲティング配列は、ＦＴ導入遺伝子によってコードされるｍＲＮＡのセグメントまたは部分に相補的な、十分な長さの任意の配列であってよく、転写可能なＤＮＡ配列は、ＲＮＡ分子のターゲティング配列をコードするかまたは転写元となる配列を有してもよい。例えば、ｍｉＲＮＡ前駆体をコードする転写可能なＤＮＡ配列は配列番号６７を有してもよく、転写可能なＤＮＡ配列は、サプレッションのためにＧｍ．ＦＴ２ａ遺伝子または導入遺伝子を標的とする、配列番号６７を有する成熟ｍｉＲＮＡへとプロセシングされ得る。標的とするＦＴ遺伝子または導入遺伝子によってコードされるｍＲＮＡは、転写可能なＤＮＡ配列によってコードされるＲＮＡ分子のための標的部位を有してもよい。ＦＴ導入遺伝子のｍＲＮＡ中のそのような標的部位は、例えば、ＦＴ遺伝子または導入遺伝子の配列（例えば、配列番号６９）によってコードされ得る配列番号６８を有してもよい。したがって、ＦＴ導入遺伝子のポリヌクレオチドコード配列は、ＲＮＡ分子の標的部位をコードする配列を有してもよい。
【００８６】
植物発現性プロモーターに加えて、ＦＴ導入遺伝子のサプレッションのための非コードＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡ分子、構築物、ベクターまたは発現カセットもまた、植物細胞または組織中の転写可能なＤＮＡ配列の発現を調節または可能にするために適切な、必要な、または好適な１つ以上のさらなる調節エレメント（複数可）、例えばエンハンサー（複数可）、転写開始部位（ＴＳＳ）、リンカー、ポリアデニル化シグナル、５’及び／または３’骨格または骨格配列、終止領域または終止配列などに作動可能に連結させてもよい。そのような追加の調節エレメント（複数可）は任意であってよく、転写可能なＤＮＡ配列の発現を増強または最適化するために使用してもよい。
【００８７】
いくつかの実施形態によれば、転写可能なＤＮＡ配列は、ＦＴ導入遺伝子の非コード配列の少なくとも部分に対応する配列及び／またはそれに相補的な配列、例えばＦＴ導入遺伝子の５’または３’非翻訳領域（ＵＴＲ）の配列またはイントロン配列を有してもよく、これは内在性ＦＴ遺伝子よりもＦＴ導入遺伝子を選択的にサプレッションすることを可能にし得る。ＦＴ導入遺伝子の「非コード」配列（ＦＴ遺伝子または導入遺伝子のサプレッションのために、転写可能なＤＮＡ配列によってコードされる「非コードＲＮＡ分子」と混同しないように）は、転写されるＦＴ導入遺伝子の配列であり、プレｍＲＮＡ及び／または成熟ｍＲＮＡの一部を形成するが、トランスジェニックＦＴタンパク質をコードしない。したがって、転写可能なＤＮＡ配列は、ＦＴ導入遺伝子の非コード配列の少なくとも部分に対応するターゲティング配列及び／またはそれに相補的な配列を含むＲＮＡ分子をコードしてもよい。したがって、転写可能なＤＮＡ配列は、ＦＴ導入遺伝子によってコードされるプレｍＲＮＡまたは成熟ｍＲＮＡの少なくとも部分に対応する配列を含み得る。転写可能なＤＮＡ配列の配列及びコードされたＲＮＡ分子のターゲティング配列は、ＦＴ導入遺伝子の特定の非コード配列に依存し、これは、内在性ＦＴ遺伝子（複数可）と同じかまたは異なるもしくは固有であり得る。いくつかの実施形態により、ＦＴ導入遺伝子の非コード配列の少なくとも部分に対応する配列及び／またはそれに相補的な配列を有する転写可能なＤＮＡ配列を含む発現カセットを含む、組換えＤＮＡ分子、ベクターまたは構築物を提供する。上記と同様に、第１の発現カセット及び第２の発現カセットを含む２つ以上の発現カセットを提供してもよく、第１の発現カセットは、第１の植物発現性プロモーターに作動可能に連結されたＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列（すなわちＦＴ導入遺伝子）を含み、第２の発現カセットは、第２の植物発現性プロモーターに作動可能に連結された転写可能なＤＮＡ配列を含み、転写可能なＤＮＡ配列は、ＦＴ導入遺伝子の非コード配列の少なくとも部分に対応する配列及び／またはそれに相補的な配列を有する。第１及び第２の発現カセットは、同じＤＮＡ分子、ベクターもしくは構築物中に、または別々のＤＮＡ分子、ベクターもしくは構築物中に存在してもよい。
【００８８】
サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列は、植物発現性プロモーターに作動可能に連結させてもよい。ＲＮＡ分子の発現パターンは、特定の植物発現性プロモーターに依存し得る。上記のように、栄養期プロモーターの制御下でのＦＴ導入遺伝子の発現を用いて、早期開花を引き起こし、植物の結節あたりの花、さやなどの数を増加させ得るが、同時に、植物の早期生長停止を引き起こし得る。サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子のさらなる発現を用いて、ＦＴ導入遺伝子の発現のパターン及びレベルを改良及び／または減弱させて早期生長停止表現型をさらに緩和することが現在提案されている。これは、ＦＴ導入遺伝子由来の転写産物及びタンパク質の量の減少（すなわちその発現レベルの減少）及び／またはその発現パターンの改変（すなわちトランスジェニックＦＴ発現パターンの改良または制限）によって起こり得る。理論に拘泥するものではないが、ＦＴ導入遺伝子の発現低下は、早期生長停止表現型を軽減する一方で早期開花を誘導するのに十分であり得る。同様に、ＦＴ発現の時空間パターンの制限は、トランスジェニックＦＴが早期生長停止を引き起こし得る特定の組織及び／または発育段階におけるＦＴ発現を減少させ得る。したがって、本発明の実施形態によれば、ＦＴ導入遺伝子及びＲＮＡ分子（サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とする）の発現のタイミング及びパターンは、同じであっても、重なっていても、またはより明確であってもよい。
【００８９】
上述の多くの実施形態によれば、第１の発現カセット及び第２の発現カセットを含む、少なくとも２つの発現カセットを提供してもよく、第１の発現カセットは第１の植物発現性プロモーターに作動可能に連結されたＦＴ導入遺伝子を含み、第２の発現カセットは、第２の植物発現性プロモーターに作動可能に連結された転写可能なＤＮＡ配列を含み、転写可能なＤＮＡ配列は、サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする。２つの発現カセットは、同じ組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクター中に存在してもよく、または別々の組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクター中に存在してもよい。上記のように、ＦＴ導入遺伝子に作動可能に連結された第１の植物発現性プロモーターは栄養期プロモーターであってもよく、これは分裂組織特異的または分裂組織優先型プロモーターでもあり得る。転写可能なＤＮＡ配列に作動可能に連結された第２の植物発現性プロモーターは、構成的、誘導的、発生的、組織特異的、組織優先型、栄養期、生殖期などを含む様々な異なるプロモーター型を有してもよいが、ＲＮＡ分子の発現のタイミング及びパターンは、ＦＴ導入遺伝子の発現のタイミング及びパターンと少なくとも部分的に重複すべきである。いくつかの実施形態によれば、第２の植物発現性プロモーターは、構成的または栄養期プロモーターであり、ＦＴ導入遺伝子の発現レベルを低下させ得る。そのような構成的または栄養期プロモーターはまた、組織特異的または組織優先型プロモーターであってもよく、及び／またはＦＴ導入遺伝子の発現のタイミング及びパターンと広範に重複し得る。実際、ＦＴ導入遺伝子に関する転写可能なＤＮＡ配列（及びＲＮＡサプレッション分子）の構成的または重複する発現パターンは、特にＦＴ導入遺伝子のサプレッションが不完全または不十分である場合、ＦＴ発現の量または用量を減らすのに有効であり得る。いくつかの場合では、ＦＴ導入遺伝子及びサプレッション構築物を、同一または類似のプロモーターに作動可能に連結させてもよい。例えば、ＦＴ導入遺伝子の発現を駆動する第１の植物発現性プロモーターは、早期または後期栄養期及び／または生殖期プロモーターであってもよく、サプレッションのためのＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列の発現を駆動する第２の植物発現性プロモーターもまた、早期または後期栄養期及び／または生殖期プロモーターであってよい。
【００９０】
構成的プロモーターの多くの例、例えば、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）３５Ｓ及び１９Ｓプロモーター（例えば、米国特許第５，３５２，６０５号参照）、オメガ領域を有するＣａＭＶ  ３５Ｓプロモーターなどの増強型ＣａＭＶ  ３５Ｓプロモーター（例えば、Ｈｏｌｔｏｒｆ，Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２９：６３７−６４６（１９９５）参照、または二重増強ＣａＭＶプロモーター（例えば、米国特許第５，３２２，９３８号参照）、ゴマノハグサモザイクウイルス（ＦＭＶ）３５Ｓプロモーター（例えば米国特許第６，３７２，２１１号参照）、ミラビリスモザイクウイルス（ＭＭＶ）プロモーター（例えば米国特許第６，４２０，５４７号参照）、ピーナッツ退緑条斑カリモウイルスプロモーター（例えば米国特許第５，８５０，０１９号参照）、ノパリンまたはオクトピンプロモーター、ダイズポリユビキチンプロモーターなどのユビキチンプロモーター（例えば、米国特許第７，３９３，９４８号参照）、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  Ｓ−アデノシルメチオニンシンテターゼプロモーター（例えば、８，８０９，６２８号参照）など、または前述のプロモーターのいずれかの機能的部分が当技術分野で公知であり、上記参考文献のそれぞれの内容及び開示は参照として本明細書に援用される。あるいは、第２の植物発現性プロモーターは、栄養期及び／または生殖期プロモーターであってもよく、その例を本明細書中に提供する。
【００９１】
他の実施形態によれば、第２の植物発現性プロモーターは、異なる植物組織及び／または発育段階などにおいて、ＦＴ導入遺伝子に比べてより明確なタイミング及び／または発現パターンを有してもよい。したがって、ＦＴ導入遺伝子と、ＦＴ導入遺伝子のサプレッションのためのＲＮＡ分子（ならびにＲＮＡ分子の特異的ターゲティング配列）をコードする転写可能なＤＮＡ配列との相対的発現タイミング及びパターンに応じて、ＦＴ導入遺伝子の有効な時空間発現パターンを改変、変更及び／または改良してもよい。しかしながら、多くの実施形態によれば、転写可能なＤＮＡ配列（及びＲＮＡ分子）は、ＦＴ導入遺伝子の発現の開始に比べて、後期の発育段階または組織において発現させてもよく、それにより、ＦＴ導入遺伝子は、ＲＮＡサプレッション分子のその後の発現によって抑制される前に、依然として早期花成誘導シグナルを提供することができ、または別の言い方をすれば、早期花成誘導シグナルの後にＦＴ導入遺伝子を抑制して早期生長停止を低減または軽減してもよい。例えば、ＦＴ導入遺伝子の発現を駆動する第１の植物発現性プロモーターは早期栄養期プロモーターであってもよく、サプレッションのためにＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列の発現を駆動する第２植物発現性プロモーターは後期栄養期及び／また生殖期プロモーターであってもよく、または第１の植物発現性プロモーターは後期栄養期プロモーターであってもよく、第２の植物発現性プロモーターは生殖期プロモーターであってもよい。より広くは、第２の植物発現性プロモーターは、第１の植物発現性プロモーターよりも後の発育段階において、その関連する導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の発現を開始し、引き起こし、及び／または駆動してもよく、それにより、通常、サプレッション構築物は、早期の栄養生長期（複数可）における初期ＦＴ花成誘導シグナルの後に発現する。したがって、第２の植物発現性プロモーターは、第１の植物発現性プロモーターよりも後期の発育段階のプロモーターであり得る。例えば、第２の植物発現性プロモーターは、第１の植物発現性プロモーターよりも後期の発育段階において、しかし第１の植物発現性プロモーターと同じ組織型または発生系統で（例えば分裂組織内で）発現を駆動し得る。そのような後期栄養期及び／または生殖期プロモーターはまた、組織特異的または組織優先型プロモーター、例えば、分裂組織特異的または分裂組織優先型プロモーターであってもよい。後期栄養期プロモーターの例は上記に提供されている。
【００９２】
ＦＴ導入遺伝子に対する植物発育の１つ以上の後期の段階（複数可）において、ＦＴ導入遺伝子のサプレッションのための転写可能なＤＮＡ配列及びＲＮＡ分子を発現させることによって、ＦＴ導入遺伝子の有効発現特性を、ＦＴ導入遺伝子単独の発現に比べて、より早い発育段階及び／または組織へと改変、変更及び改良してもよい。いくつかの場合では、ＦＴ導入遺伝子の栄養期の発現は、植物における後期栄養期及び／または生殖期または組織において、持続するかまたは継続し得る。したがって、サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子の後期の発現は、それらの後期の段階（複数可）及び／または組織（複数可）中のＦＴ導入遺伝子のレベルを低下させて、ＦＴ導入遺伝子の発現レベルをより早い発育段階（複数可）及び／または組織（複数可）に効果的に限定または制限し得る。結果として、早期花成誘導シグナルを維持または保存し得る一方で、後期のＦＴ発現を減弱または減少させて、植物の残存する分裂組織の早期生長停止を回避または遅延させ、植物の栄養生長及び発育を開花後に継続させ得る。
【００９３】
本明細書中で使用する場合、「生殖期」プロモーターは、植物の１つ以上の生殖生長期（複数可）の間、例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及び／またはＲ８の発育段階のうちの１つ以上の間にその関連遺伝子、導入遺伝子、または転写可能なＤＮＡ配列の転写または発現を、開始する、引き起こす、駆動する、などを行う任意のプロモーターとして定義される。そのような「生殖期」プロモーターは、その関連遺伝子／導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の転写または発現を、少なくとも優先的に、または多くの場合、排他的でないにしても、植物発育の１つ以上の生殖期（複数可）の間に（栄養期とは対照的に）、開始する、引き起こす、駆動する、などを行う「生殖期優先型」プロモーターとしてさらに定義され得る。しかしながら、「生殖期」及び「生殖期優先型」プロモーターはまた、それぞれが、植物の１つ以上の細胞または組織において、栄養生長相（複数可）または栄養生長期（複数可）におけるその関連遺伝子、導入遺伝子、または転写可能なＤＮＡ配列の転写または発現を、開始する、許可する、許容する、引き起こす、駆動する、などを行い得る。したがって、生殖期プロモーターはまた、両方の発育相の間（すなわち、栄養生長期と生殖生長期の両方の間）に発現する場合、栄養期プロモーターでもあり得る。そのような生殖期プロモーターはまた、組織特異的または組織優先型プロモーター、例えば、分裂組織特異的または分裂組織優先型プロモーターであってもよい。「生殖期」プロモーターは、植物の１つ以上の生殖組織（複数可）におけるその関連遺伝子／導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の転写または発現を、開始する、引き起こす、駆動する、などを行うものとしてさらに定義され得る。そのような「生殖期」プロモーターはまた、少なくとも１つの花成または生殖組織、例えば花芽分裂組織において、その関連遺伝子／導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の転写または発現を、少なくとも優先的に、または多くの場合、排他的でないにしても、開始する、引き起こす、駆動する、などを行う「花成優先型」プロモーターとして、あるいは少なくとも１つの花成または生殖組織において、その関連遺伝子／導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の転写または発現を、排他的に（またはほとんど排他的に）開始する、引き起こす、駆動する、などを行う「花成特異的」プロモーターとしても定義され得る。所与の植物種に対するこれらの生殖期の特性及び特徴は、当技術分野において公知である。
【００９４】
所定の植物種におけるそれらの発現パターンに応じて早期または後期栄養期プロモーターでもあり得る生殖期プロモーターの例として、トマト遺伝子由来の以下のプロモーターが挙げられ得る：Ｓｌ．Ｎｏｄプロモーター（ｐＳｌ．Ｎｏｄ、ｐＬｅ．ＮｏｄまたはｐＮｏｄ）（配列番号７０）、Ｓｌ．ＭＡＤＳ５プロモーター（ｐＳｌ．ＭＡＤＳ５、ｐＬｅ．ＭＡＤＳ５またはｐＭＡＤＳ５）（配列番号７１）、またはＳｌ．ＭＡＤＳ−ＲＩＮプロモーター（ｐＳｌ．ＭＡＤＳ−ＲＩＮ、ｐＬｅ．ＭＡＤＳ−ＲＩＮもしくはｐＭＡＤＳ−ＲＩＮ）（配列番号７２）、またはその任意の機能的部分。それらの天然植物種においてｐＳｌ．ＭＡＤＳ５及び／またはｐＳｌ．ＭＡＤＳ−ＲＩＮプロモーターと相同及び／または類似の発現パターンを有すると同定されたさらなる例として、以下の遺伝子のうちの１つに由来するプロモーターが挙げられ得る：Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ由来のＡＴ１Ｇ２４２６０．１（配列番号７３）、ＡＴ２Ｇ４５６５０．１（配列番号７４）、ＡＴ３Ｇ０２３１０．１（配列番号７５）、もしくはＡＴ５Ｇ１５８００．１（配列番号７６）、もしくはＡＴ２Ｇ０３７１０．１（配列番号７７）；ダイズ由来のＧｌｙｍａ０５ｇ２８１４０（配列番号７８）、Ｇｌｙｍａ０８ｇ１１１２０（配列番号７９）、Ｇｌｙｍａ１１ｇ３６８９０（配列番号８０）、Ｇｌｙｍａ０８ｇ２７６７０（配列番号８１）、Ｇｌｙｍａ１３ｇ０６７３０（配列番号８２）、もしくはＧｌｙｍａ１９ｇ０４３２０（配列番号８３）；トマト由来のＳｏｌｙｃ０２ｇ０８９２００（配列番号８４）、Ｓｏｌｙｃ０３ｇ１１４８４０（配列番号８５）、Ｓｏｌｙｃ１２ｇ０３８５１０（配列番号８６）、Ｓｏｌｙｃ０４ｇ００５３２０（配列番号８７）もしくはＳｏｌｙｃ０５ｇ０５６６２０（配列番号８８）；またはトウモロコシ由来のＧＲＭＺＭ２Ｇ１５９３９７（配列番号８９）、ＧＲＭＺＭ２Ｇ００３５１４（配列番号９０）、ＧＲＭＺＭ２Ｇ１６０５６５（配列番号９１）、ＧＲＭＺＭ２Ｇ０９７０５９（配列番号９２）、ＧＲＭＺＭ２Ｇ０９９５２２（配列番号９３）もしくはＧＲＭＺＭ２Ｇ０７１６２０（配列番号９４）、または前述のプロモーターのいずれかの機能的部分。
【００９５】
本発明の実施形態によれば、「生殖期」プロモーターはまた、その関連遺伝子、導入遺伝子、または転写可能なＤＮＡ配列の観察可能な、または顕著な転写または発現が最初に引き起こされる、開始される、などの特定の生殖期によってさらに定義してもよい。例えば、生殖期プロモーターは、Ｒ１期プロモーター、Ｒ２期プロモーター、Ｒ３期プロモーターなどであってもよい。したがって、「Ｒ１期」プロモーターは、植物発育のＲ１期中に、その関連遺伝子、導入遺伝子、または転写可能なＤＮＡ配列の転写を、最初に開始するか引き起こす生殖期プロモーターとして定義され、「Ｒ２期」プロモーターは、植物発育のＲ２期中に、その関連遺伝子、導入遺伝子、または転写可能なＤＮＡ配列の転写を、最初に開始するか引き起こす生殖期プロモーターとして定義され、以下も同様であるが、関連遺伝子、導入遺伝子、または転写可能なＤＮＡ配列の発現は、後期生殖生長期（複数可）において、１つ以上の組織で継続的または断続的に存在し得る。栄養生長期から生殖期への転換（及びＲ１期の開始）は、所与の作物植物について当技術分野における標準的な慣例（すなわち、一般的にはダイズと同様に、植物上の最初の開花の目に見える外観）に従って定義される。そのような発現のタイミングが未知である場合、当業者であれば、当技術分野で公知の様々な分子アッセイ及び技術を用いて、植物発育中の所与の遺伝子、導入遺伝子、または転写可能なＤＮＡ配列の発現のタイミングを決定できよう。
【００９６】
本発明の実施形態によれば、「生殖期」プロモーターには、構成的プロモーター、組織優先型プロモーター、または組織特異的プロモーターが含まれ得る。例えば、生殖期プロモーターは、植物の生殖生長期（複数可）の間に、１つ以上の植物組織（複数可）、例えば、１つ以上の根（複数可）、茎（複数可）、葉（複数可）、分裂組織（複数可）などにおけるその関連遺伝子、導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の発現を駆動し得る。しかしながら、そのような生殖期プロモーターは、好ましくは、植物の１つ以上の分裂組織（複数可）におけるその関連遺伝子、導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の発現を駆動し得る。多くの実施形態によれば、「生殖期」プロモーターは、「分裂組織特異的」または「分裂組織優先型」プロモーターであり、分裂組織におけるその関連遺伝子、導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の発現を引き起こし、ＦＴ導入遺伝子の発現パターンに少なくとも部分的に対応し、ＦＴ導入遺伝子の発現を減弱及び／または改良し得る。
【００９７】
これらのプロモーターのポリヌクレオチド配列（またはその機能的部分）はまた、プロモーターに作動可能に連結された関連遺伝子、導入遺伝子または転写可能なＤＮＡ配列の類似または同一の発現パターンをなお維持する一方で、緩和された配列同一性を有してもよい。例えば、後期栄養期及び／または生殖期プロモーターは、配列番号７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、もしくは９４、またはその任意の機能的部分から選択されるポリヌクレオチド配列に対し、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有してもよい。本明細書で公知のまたは提供するプロモーター配列の「機能的部分」は上記に定義されている。
【００９８】
本発明の実施形態によれば、第２の植物発現性プロモーターに作動可能に連結された転写可能なＤＮＡ配列を含む第２の発現カセットによってコードされるＲＮＡ分子は、１つ以上の植物組織において、ＦＴ導入遺伝子のサプレッションを介して、ＦＴ導入遺伝子によってコードされるｍＲＮＡ転写産物及び／またはタンパク質の発現レベルの低下または排除を引き起こし得る。第２の発現カセットを用いると、トランスジェニックＦＴ転写産物及び／またはタンパク質の発現レベルは、１つ以上の植物組織、例えば１つ以上の分裂組織において、第２の発現カセットなしで同じ植物組織（複数可）に存在するであろうＦＴ導入遺伝子のｍＲＮＡ転写産物及び／またはタンパク質レベル（複数可）に比べて、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％低下し得る。ＦＴ導入遺伝子のｍＲＮＡ転写産物及び／またはタンパク質レベル（複数可）は、１つ以上の植物組織において、第２の発現カセットなしで同じ植物組織（複数可）に存在するであろうＦＴ導入遺伝子のｍＲＮＡ転写産物及び／またはタンパク質レベル（複数可）に比べて、１％〜１００％、１％〜７５％、１％〜５０％、１％〜２５％、５％〜１００％、５％〜９５％、５％〜９０％、５％〜８５％、５％〜８０％、５％〜７５％、５％〜７０％、５％〜６５％、５％〜６０％、５％〜５５％、５％〜５０％、５％〜４５％、５％〜４０％、５％〜３５％、５％〜３０％、５％〜２５％、５％〜２０％、５％〜１５％、５％〜１０％、１０％〜１００％、１０％〜９０％、１０％〜８０％、１０％〜７０％、１０％〜６０％、１０％〜５０％、１０％〜４０％、１０〜３０％、１０％〜２０％、２５％〜１００％、２５％〜７５％、２５％〜５０％、５０％〜１００％、５０％〜７５％、または７５％〜１００％低下し得る。
【００９９】
なおさらなる実施形態によれば、第２の発現カセットは、代わりに、サプレッションのために内在性ＦＴ遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードするように設計してもよい。ＦＴ導入遺伝子が内在性遺伝子とは異なるコード配列を有する場合、そのコード配列を標的とすることによって内在性ＦＴ遺伝子の選択的サプレッションが達成され得る（すなわち、ＲＮＡ分子は内在性ＦＴ遺伝子のコード配列の少なくとも部分に相補的なターゲティング配列を含み得る）。あるいは、ＦＴ導入遺伝子と内在性ＦＴ遺伝子のコード配列が同一または類似である場合でさえ、第２の発現カセットは、それらの配列がＦＴ導入遺伝子において異なるか、または欠けている場合、内在性ＦＴ遺伝子によってコードされるｍＲＮＡの、例えば、内在性ＦＴ  ｍＲＮＡ転写産物の５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、イントロン、及び／またはリーダー配列（複数可）内の非翻訳配列または非コード配列を標的とするＲＮＡ分子をコードするように設計してもよい（すなわち、ＲＮＡ分子は、内在性ＦＴ遺伝子の非翻訳配列または非コード配列の少なくとも部分に相補的なターゲティング配列を含み得る）。これらの実施形態によれば、第２の発現カセットの転写可能なＤＮＡ配列は、ＦＴ導入遺伝子によってコードされるｍＲＮＡ配列の代わりに、サプレッションのために内在性ＦＴ遺伝子によってコードされるｍＲＮＡの特定のコードまたは非翻訳（非コード）配列を標的とするように、本明細書に提供する原理に従って設計してもよい。
【０１００】
本発明の別の広い態様により、植物発現性プロモーターに作動可能に連結されたＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列（すなわちＦＴ導入遺伝子）を含む、組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターを提供し、ポリヌクレオチド配列は、内在性ＲＮＡ分子、例えば、内在性ｍｉＲＮＡまたはｓｉＲＮＡに対する標的部位またはセンサーをコードする配列をさらに含み、標的部位またはセンサーは、ＦＴ導入遺伝子によってコードされるプレｍＲＮＡ及び／または成熟ｍＲＮＡ転写産物内、例えば、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、イントロン、及び／またはリーダー配列（複数可）内に存在する。本明細書中で使用する場合、「センサー」は、内在性ＲＮＡ分子、例えば、内在性ｍｉＲＮＡまたはｓｉＲＮＡに相補的な、ＦＴ導入遺伝子のｍＲＮＡ転写産物中の短い非コードＲＮＡ標的部位である。内在性ＲＮＡ分子は、植物細胞または組織中に天然に存在し得、内在性ＲＮＡ分子のための標的部位を有する１つ以上の標的遺伝子を抑制するように機能し得る。ｍＲＮＡ標的部位または内在性ＲＮＡ分子のセンサーをコードする配列を有するようにＦＴ導入遺伝子をさらに改変してもよく、それにより、ＦＴ導入遺伝子を内在性ＲＮＡ分子によって抑制することが現在提案されている。したがって、ＦＴ導入遺伝子のサプレッションを用いて、ＲＮＡサプレッション分子をコードする第２の発現カセットによるサプレッションと同様に、トランスジェニックＦＴ発現単独で（すなわちサプレッションを伴わずに）観察される早期生長停止表現型を軽減し得る。内在性ＲＮＡ分子は、植物細胞中の１つ以上の標的遺伝子のサプレッションを誘発するように機能する、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡなどの任意の公知の天然の低分子ＲＮＡ分子であり得る。多くの実施形態によれば、内在性ＲＮＡ分子を、後期栄養生長及び／または生殖生長期の間（例えば、１つ以上の後期栄養、生殖、及び／または花成組織（複数可））において天然に発現させてもよく、それにより、内在性ＲＮＡ分子は、最初の花成誘導シグナルを提供した後にＦＴ導入遺伝子のサプレッションを引き起こす。多くの実施形態によれば、ＦＴ導入遺伝子の植物発現性プロモーター、標的部位、またはその両方は、ＦＴ導入遺伝子のポリヌクレオチドコード配列に関して異種である。
【０１０１】
いくつかの実施形態によれば、内在性ＲＮＡ分子は、１つ以上の内在性ｍｉＲＮＡ分子、例えば、１つ以上のｍｉＲ１５６及び／またはｍｉＲ１７２ＲＮＡ分子（複数可）であってもよい。内在性ｍｉＲ１５６及びｍｉＲ１７２分子（複数可）の配列は、ＦＴ導入遺伝子が発現するであろう特定の植物種に依存するであろう。ＦＴ導入遺伝子は、目的の植物種に存在するｍｉＲ１５６またはｍｉＲ１７２分子のｍＲＮＡ標的部位またはセンサーをコードするように設計してもよく、これは、１つ以上のｍｉＲ１５６及びｍｉＲ１７２分子（複数可）の発現レベル及びタイミングに基づいて選択してもよい。ダイズには、栄養相から生殖相への転換に近いタイミングでより高レベルに発現する３つのｍｉＲ１７２分子、ｍｉＲＮＡ１７２ａ（配列番号９５）、ｍｉＲＮＡ１７２ｃ（配列番号９６）、またはｍｉＲＮＡ１７２ｋ（配列番号：９７）が存在し、幼若相から花熟相への転換において豊富な３つのｍｉＲ１５６分子、ｍｉＲ１５６ａ（配列番号１０３）、ｍｉＲ１５６ｃ（配列番号１０４）、またはｍｉＲ１５６ｑ（配列番号１０５）が存在する。したがって、ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、そのような内在性ｍｉＲ１５６またはｍｉＲ１７２ＲＮＡ分子（複数可）のうちの１つ以上のための１つ以上の標的部位（複数可）またはセンサー（複数可）をコードする配列をさらに有してもよい。ｍｉＲ１５６またはｍｉＲ１７２標的部位（複数可）またはセンサー（複数可）のそれぞれは、ＦＴ導入遺伝子によってコードされるプレｍＲＮＡ及び／または成熟ｍＲＮＡ転写産物内、例えば、ＦＴ導入遺伝子のポリヌクレオチド配列によってコードされる、コーディング、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、及び／またはイントロンｍＲＮＡ配列内に存在し得るが、より一般的には、ｍｉＲ１５６またはｍｉＲ１７２標的部位（複数可）またはセンサー（複数可）は、非コード及び／または非翻訳配列内に存在するであろう。ダイズｍｉＲ１５６分子についての標的部位またはセンサーをコードする配列の例として、配列番号１０６、１０８、１０９、及び１１０が挙げられ、これらは１つ以上のｍｉＲ１５６分子に相補的である。例えば、配列番号１０６として示す配列は、ｍｉＲ１５６のｍＲＮＡ標的部位またはセンサーとして、配列番号１０７をコードする。ダイズｍｉＲ１７２の標的部位またはセンサーをコードする配列の例として、配列番号９８、１００、及び１０１が挙げられ、これらは１つ以上のｍｉＲ１７２分子に相補的である。例えば、配列番号９８として示す配列は、ｍｉＲ１７２のｍＲＮＡ標的部位またはセンサーとして、配列番号９９をコードする。しかしながら、ＦＴ導入遺伝子の標的部位またはセンサーの配列は、公知のｍｉＲ１５６またはｍｉＲ１７２分子の相補的配列に基づいて決定してもよい。実際、所与の植物種に天然に存在する１つ以上の内在性ｍｉＲ１５６、ｍｉＲ１７２及び／または他の低分子ＲＮＡ分子（複数可）の配列に応じて、そのような植物種に形質転換したトランスジェニックＦＴ発現カセットを改変し、そのような内在性ｍｉＲ１５６、ｍｉＲ１７２、または他の低分子ＲＮＡ分子のための標的部位またはセンサーをコードする配列を含ませてもよい。いくつかの実施形態によれば、サプレッションのために同じＦＴ導入遺伝子をさらに標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む第２の発現カセットが同じ組換えＤＮＡ分子構築物もしくはベクター、または同じトランスジェニック植物中に存在する場合でも、ＦＴ導入遺伝子を含む第１の発現カセットを改変して、内在性ｍｉＲ１５６、ｍｉＲ１７２、または他の低分子ＲＮＡ分子に対する標的部位またはセンサーをコードする配列を含ませてよい。
【０１０２】
本発明の実施形態によれば、内在性ＲＮＡ分子の標的部位は、ＦＴ導入遺伝子を発現させる植物に依存するであろう。ｍｉＲ１５６及びｍｉＲ１７２配列（及びそれらの標的部位またはセンサー）は、様々な双子葉植物種について知られている。内在性ＲＮＡ分子に相補的なトランスジェニックＦＴ  ｍＲＮＡの標的部位またはセンサーは、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６または２７ヌクレオチド長（またはそれ以上）であり得る。一般的には、ＦＴ導入遺伝子の標的部位またはセンサーは、内在性ｍｉＲ１５６またはｍｉＲ１７２に対して１００％相補的であるように設計されるであろう。しかしながら、内在性ＲＮＡサプレッション分子の標的部位またはセンサーは、有効であるために（すなわち、ｍｉＲ１５６またはｍｉＲ１７２によってハイブリダイズされ、サプレッションのための標的となるために）内在性ｍｉＲ１５６またはｍｉＲ１７２に対して１００％相補的である必要はない場合がある。例えば、完全な相補性を下回ることにより、複数のｍｉＲ１５６、ｍｉＲ１７２及び／または他の内在性ＲＮＡ分子が、標的部位またはセンサーにハイブリダイズできるようになる可能性がある。任意の所与の植物種について、ＦＴ導入遺伝子のポリヌクレオチドコード配列によってコードされる標的部位またはセンサーは、多少のばらつきがあってもよく、それでもなお、植物細胞内で発現する場合に、内在性ＲＮＡ分子、例えば内在性ｍｉＲ１５６またはｍｉＲ１７２ＲＮＡ分子によって結合またはハイブリダイズされるようになり得る。したがって、ＦＴ導入遺伝子によってコードされるｍＲＮＡ転写産物の標的部位は、内在性ＲＮＡ分子（例えば、ｍｉＲ１５６、ｍｉＲ１７２）とｍＲＮＡ転写産物とのアラインメントの長さに応じて、１つ以上のミスマッチ、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８個またはそれ以上のミスマッチを含んでいてもよい。実際、ＦＴ導入遺伝子のポリヌクレオチドコード配列によってコードされる標的部位は、内在性ＲＮＡ分子（例えば、ｍｉＲ１５６またはｍｉＲ１７２）の標的配列、例えばダイズ中のｍｉＲ１７２分子に対する標的部位もしくはセンサー（配列番号９８、１００または１０１）、またはダイズ中のｍｉＲ１５６分子に対する標的部位またはセンサー（配列番号１０６、１０８、１０９または１１０）に対し、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％または１００％相補的であり得る。
【０１０３】
本発明の別の広い態様によれば、トランスジェニック植物を産生するために、本明細書において提供する組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターを用いて、植物細胞、組織または外植片を形質転換する方法を提供する。組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターは、ＦＴ導入遺伝子または発現カセットを含み得る。サプレッションの様式に応じて、ＦＴ導入遺伝子は内在性ＲＮＡ分子のための標的部位をさらに有してもよい。組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターは、サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む第２の発現カセットを有してもよい。あるいは、ＦＴ導入遺伝子及びＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を、代わりに、植物に同時に形質転換するかまたは別々に形質転換し得る２つの別々のＤＮＡ分子、構築物またはベクター中に存在させてもよい。ＦＴ導入遺伝子及びサプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターを植物に形質転換してもよい。他の実施形態によれば、ＦＴ導入遺伝子を含む第１の組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターと、サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む第２の組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターを、それぞれ同時に植物に形質転換してもよい。他の実施形態によれば、ＦＴ導入遺伝子を含む第１の発現カセットで形質転換した植物を、サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む第２の発現カセットで形質転換してもよく、または、サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む第１の発現カセットで形質転換した植物を、ＦＴ導入遺伝子を含む第２の発現カセットで形質転換してもよい。なおさらなる実施形態によれば、（ｉ）ＦＴ導入遺伝子、または（ｉｉ）サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む第１の発現カセットを有する第１のトランスジェニック植物を、（ｉ）サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列、または（ｉｉ）ＦＴ導入遺伝子を含む第２の発現カセットを有する第２の植物と交雑してもよく、それにより、第１及び第２の発現カセットの両方（すなわち、ＦＴ導入遺伝子及び転写可能なＤＮＡ配列の両方）を含む１つ以上の子孫植物を産生してもよい。
【０１０４】
組換えＤＮＡ分子、構築物またはベクターを用いて植物細胞中の染色体を形質転換するための多数の方法が当技術分野で公知であり、これらを本発明の方法に従って使用して、トランスジェニック植物細胞、植物部分及び植物を産生してもよい。当技術分野で公知の植物細胞の形質転換のための任意の適切な方法または技術を、本方法に従って使用してもよい。植物の形質転換のための有効な方法として、細菌を介した形質転換、例えば、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ媒介性またはＲｈｉｚｈｏｂｉｕｍ媒介性の形質転換、及び微粒子銃を介した形質転換が挙げられる。細菌を介した形質転換または微粒子銃により、外植片を形質転換ベクターで形質転換し、続いてそれらの外植片を培養してトランスジェニック植物を再生または発育させるための様々な方法が当技術分野において公知である。マイクロインジェクション、電気穿孔法、減圧浸潤、加圧、超音波処理、炭化ケイ素繊維撹拌、ＰＥＧを介した形質転換などの植物形質転換のための他の方法もまた当技術分野で公知である。これらの形質転換方法によって産生されるトランスジェニック植物は、方法及び使用する外植片に応じて、形質転換事象についてキメラまたは非キメラであり得る。組換えＤＮＡ分子または構築物によるプラスチド形質転換のための適切な方法もまた当技術分野において公知である。
【０１０５】
分裂組織優先型プロモーターまたは分裂組織特異的プロモーターでもあり得る栄養期プロモーターの制御下で、１つ以上の植物細胞または組織においてＦＴ導入遺伝子を発現させるための方法をさらに提供する。ＦＴ導入遺伝子の発現は、ＦＴ導入遺伝子によってコードされるｍＲＮＡ中の、内在性ＲＮＡ分子に対する標的部位またはセンサーの存在によって、改変、減弱、及び／または改良してもよく、その結果、内在性ＲＮＡ分子はサプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とする。ＦＴ導入遺伝子に加えて、サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子もまた、植物に形質転換した転写可能なＤＮＡ配列から発現させることができる。そのような方法を用いて、ＦＴ導入遺伝子を有さない野生型または対照植物に比べて、植物の開花時期及び／または植物の結節あたりの生産的もしくは成功裏の花、果実、さや、及び／または種子の数を変化させてもよい。実際、本発明の方法を用いて、トランスジェニック植物の生殖または収量に関連する表現型（複数可）または形質（複数可）を改変してもよい。
【０１０６】
標的植物物質または外植片の形質転換は、例えば細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで増殖させることを可能にする栄養素の混合物などの栄養培地上での組織培養において実施してもよい。レシピエント細胞標的または外植片として、分裂組織、茎端、プロトプラスト、胚軸、カルス、未成熟または成熟胚、茎、芽、結節部、葉、小胞子、配偶子細胞、例えば、花粉細胞、精細胞及び卵細胞など、またはその任意の適切な部分が挙げられるがこれらに限定されない。稔性植物を再生または生長／発育させることができる任意の形質転換可能な細胞または組織を、形質転換のための標的として使用し得ることが企図される。形質転換した外植片、細胞または組織を、当技術分野において公知のように、カルス誘導、選択、再生などのさらなる培養工程に供してもよい。組換えＤＮＡインサートを有する形質転換細胞、組織または外植片を、当技術分野で公知の方法に従って、培養、プラグまたは土壌中において、トランスジェニック植物に生長、発育または再生させてもよい。トランスジェニック植物を、それら自体または他の植物とさらに交雑させ、トランスジェニック種子及び子孫を産生してもよい。トランスジェニック植物はまた、組換えＤＮＡ配列または形質転換事象を有する第１の植物を、インサートを欠く第２の植物と交雑することによって調製してもよい。例えば、組換えＤＮＡ配列を、形質転換を受けやすい第１の植物系統に導入してもよく、次いでこれを第２の植物系統と交雑させ、組換えＤＮＡ配列を第２の植物系統に遺伝子移入してもよい。これらの交雑の子孫に対し、さらに複数回の戻し交雑、例えば６〜８世代の戻し交雑を行ってより望ましい系統とし、組換えＤＮＡ配列が導入されていることを除けば元の親の系統と実質的に同じ遺伝子型を有する子孫植物を産生することができる。
【０１０７】
本発明の組換えＤＮＡ構築物または発現カセットは、標的植物細胞、組織または外植片の形質転換に使用するためのＤＮＡ形質転換ベクター内に含まれていてもよい。本発明のそのような形質転換ベクターは、一般的に、転写可能なＤＮＡ配列及び／またはＦＴ導入遺伝子または発現カセットに加えて、効果的な形質転換に必要または有益な配列またはエレメントを含み得る。Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換の場合、形質転換ベクターは、少なくとも転写可能なＤＮＡ配列及び／またはＦＴ導入遺伝子に隣接する、２つの境界配列、左境界（ＬＢ）及び右境界（ＲＢ）を有する改変型の転移ＤＮＡ（またはＴ−ＤＮＡ）セグメントまたは領域を有してもよく、それにより、植物ゲノムへのＴ−ＤＮＡの挿入は、転写可能なＤＮＡ配列及び／またはＦＴ導入遺伝子についての形質転換事象を生じさせるであろう。言い換えれば、転写可能なＤＮＡ配列及び／またはＦＴ導入遺伝子は、おそらくは追加の導入遺伝子（複数可）または発現カセット（複数可）、例えば、農学的に関心のある形質または表現型を植物に付与し得る、植物選択マーカー導入遺伝子及び／または農学的に関心のある他の遺伝子（複数可）とともに、Ｔ−ＤＮＡの左右の境界の間に位置するであろう。タンパク質コード配列に加えて、農学的に関心のある遺伝子は、ＲＮＡサプレッションエレメントをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含み得る。いくつかの実施形態によれば、転写可能なＤＮＡ配列及び／またはＦＴ導入遺伝子ならびに植物選択マーカー導入遺伝子（または農学的に関心のある他の遺伝子）は、例えば同時形質転換のための、同じまたは異なる組換えＤＮＡ分子（複数可）上の別々のＴ−ＤＮＡセグメントに存在し得る。形質転換ベクターまたは構築物は、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換ではＴ−ＤＮＡ領域（複数可）の外側のベクター骨格に位置し得る原核生物維持エレメントをさらに含み得る。
【０１０８】
いくつかの実施形態によれば、ＦＴ導入遺伝子を含む第１の発現カセット及びサプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む第２の発現カセットは、形質転換ベクターの同じＴ−ＤＮＡ中に（すなわち、同じ左右のＴ−ＤＮＡ境界の間に）存在してもよく；またはＦＴ導入遺伝子を含む第１の発現カセットは、第１のＴ−ＤＮＡ（第１の右境界及び第１の左境界を含む）に存在してもよく、サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む第２の発現カセットは、第２のＴ−ＤＮＡ（第２の右境界と第２の左境界を含む）に存在してもよく、第１と第２のＴ−ＤＮＡは同じ形質転換ベクター中に存在し；またはＦＴ導入遺伝子を含む第１の発現カセットは、第１の形質転換ベクターの第１のＴ−ＤＮＡに存在してもよく、サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む第２の発現カセットは、第２の形質転換ベクターの第２のＴ−ＤＮＡに存在してもよい。１つまたは２つの形質転換ベクター中に存在する第１及び第２の発現カセットを植物細胞に同時形質転換してもよく、または第１及び第２の発現カセットを２つの別々の形質転換ベクターに存在させて別々に植物細胞に形質転換してもよい。第１または第２の発現カセットは、もう一方の発現カセットに対する形質転換事象をすでに有する１つ以上の植物細胞に形質転換してもよく、または第１及び第２の発現カセットを、第１及び第２のトランスジェニック植物へ発育もしくは再生し得る異なる植物細胞に形質転換してもよい。第１及び第２のトランスジェニック植物及び／またはそれらの子孫を互いに交雑させ、それにより、第１及び第２の発現カセットを一緒にし、同じ植物中に存在させてもよい。
【０１０９】
本発明の形質転換ベクターまたは構築物中の植物選択マーカー導入遺伝子を用いて、抗生物質または除草剤などの選択剤の存在による形質転換細胞または組織の選択を補助してもよく、選択マーカー導入遺伝子は、選択剤に対する耐性または抵抗性を提供する。したがって、選択剤は、植物選択マーカー遺伝子を発現する形質転換細胞の生存、発生、成長、増殖などを偏らせる、すなわち有利にして、例えばＲ0植物中の形質転換細胞または組織の割合を増加させ得る。一般的に使用される植物選択マーカー遺伝子として、例えば、カナマイシン及びパロモマイシン（ｎｐｔＩＩ）、ハイグロマイシンＢ（ａｐｈ  ＩＶ）、ストレプトマイシンもしくはスペクチノマイシン（ａａｄＡ）ならびにゲンタマイシン（ａａｃ３及びａａｃＣ４）などの抗生物質に対する耐性もしくは抵抗性を付与するもの、またはグルホシネート（ｂａｒまたはｐａｔ）、ジカンバ（ＤＭＯ）及びグリホサート（ａｒｏＡまたはＥＰＳＰＳ）などの除草剤に対する耐性もしくは抵抗性を付与するものが挙げられる。形質転換体を視覚的にスクリーニングする能力を提供する植物スクリーニング可能なマーカー遺伝子、例えば、ルシフェラーゼもしくは緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、または様々な発色基質が知られているβグルクロニダーゼもしくはｕｉｄＡ遺伝子（ＧＵＳ）を発現する遺伝子もまた使用してもよい。
【０１１０】
本発明の実施形態によれば、植物細胞、組織または外植片を組換えＤＮＡ分子または構築物で形質転換する方法は、部位特異的組込みまたは標的化組込みをさらに含み得る。これらの方法によれば、組換えＤＮＡドナー鋳型分子の一部（すなわち挿入配列）を植物ゲノム内の所望の部位または遺伝子座に挿入または組み込むことができる。ドナー鋳型の挿入配列は、導入遺伝子または構築物、例えば（ｉ）栄養期プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含むＦＴ導入遺伝子または構築物、及び／または（ｉｉ）サプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とし、分裂組織優先型プロモーターまたは分裂組織特異的プロモーターでもあり得る栄養期プロモーター及び／または生殖期プロモーターに作動可能に連結されたＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を有してもよい。ドナー鋳型はまた、相同組換え及び／または相同組換え修復を介して標的化挿入事象を促進するための挿入配列に隣接する１つまたは２つの相同アームを有してもよい。したがって、本発明の組換えＤＮＡ分子は、導入遺伝子または構築物、例えば、ＦＴ導入遺伝子または構築物の、植物のゲノムへの部位特異的または標的化組込みのためのドナー鋳型をさらに有してもよい。
【０１１１】
本発明の導入遺伝子または構築物の部位特異的組込みのために、植物のゲノム内の任意の部位または遺伝子座を潜在的に選択し得る。部位特異的組込みのために、部位特異的ヌクレアーゼ、例えばジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、メガヌクレアーゼ、転写アクチベーター様ヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、アルゴノート（アルゴノートタンパク質の非限定的な例として、Ｔｈｅｒｍｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓアルゴノート（ＴｔＡｇｏ）、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆｕｒｉｏｓｕｓアルゴノート（ＰｆＡｇｏ）、Ｎａｔｒｏｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｒｅｇｏｒｙｉアルゴノート（ＮｇＡｇｏ）が挙げられる）、ＲＮＡ誘導ヌクレアーゼ（ＲＮＡ誘導ヌクレアーゼの非限定的な例として、Ｃａｓ１、Ｃａｓ１Ｂ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９  （Ｃｓｎ１及びＣｓｘ１２としても知られる）、Ｃａｓ１０、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４、Ｃｐｆ１、その同族体、もしくはその改変体が挙げられる）；リコンビナーゼ（限定するものではないが、例えば、ＤＮＡ認識モチーフに結合したチロシンリコンビナーゼ（例えば、Ｃｒｅリコンビナーゼ、Ｆｌｐリコンビナーゼ、Ｔｎｐ１リコンビナーゼ）、ＤＮＡ認識モチーフに結合したセリンリコンビナーゼ（例えば、ＰｈｉＣ３１インテグラーゼ、Ｒ４インテグラーゼ、ＴＰ−９０１インテグラーゼ）；トランスポザーゼ（限定するものではないが、例えば、ＤＮＡ結合ドメインに結合したＤＮＡトランスポザーゼ）；またはその任意の組み合わせを用いて、選択したゲノム遺伝子座に最初に二本鎖切断またはニックを作成してもよい。ＲＮＡ誘導ヌクレアーゼを使用する方法に有用なガイドＲＮＡ（例えば、ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）、トランス活性化ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、シングルガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ））もまた提供する。部位特異的組込みについて当技術分野において公知の任意の方法を使用してもよい。次いで、ドナー鋳型分子の存在下で、二本鎖切断またはニックを、ドナー鋳型の相同性アーム（複数可）と植物ゲノムとの間の相同組換えによって、または非相同末端結合（ＮＨＥＪ）によって修復し、植物ゲノムへの挿入配列の部位特異的組込みをもたらし、二本鎖切断またはニックの部位またはその付近に標的化挿入事象を生じさせてもよい。このようにして、導入遺伝子または構築物の部位特異的挿入または組込みが達成され得る。
【０１１２】
本明細書中で使用する場合、植物の形質転換または部位特異的組込みに関する用語「挿入」は、外来性ポリヌクレオチドまたはＤＮＡ構築物、ＤＮＡ分子もしくはＤＮＡ配列、例えば形質転換ベクターまたはＴ−ＤＮＡ配列またはドナー鋳型の挿入配列の、植物のゲノムへの挿入または組込みを指す。これに関連して、用語「外来性」とは、当技術分野において公知の任意の適切な植物形質転換方法もしくはゲノム編集方法または技術を用いて植物細胞または組織に導入するポリヌクレオチドまたはＤＮＡ構築物、ＤＮＡ分子もしくはＤＮＡ配列を指す。
【０１１３】
本発明の実施形態によれば、ＦＴ導入遺伝子及び／またはサプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡ分子または形質転換ベクターで形質転換し得る植物として様々な顕花植物または被子植物、例えば、ダイズ、ワタ、アルファルファ、キャノーラ、テンサイ、アルファルファ及び他のマメ科植物が挙げられ、これらは、様々な双子葉類の（双子葉）植物種を含むものとしてさらに定義され得る。双子葉植物は、Ｂｒａｓｓｉｃａ種の一員（例えば、Ｂ．ｎａｐｕｓ、Ｂ．ｒａｐａ、Ｂ．ｊｕｎｃｅａ）、特に種子油の供給源として有用なＢｒａｓｓｉｃａ種であるアルファルファ（Ｍｅｄｉｃａｇｏ  ｓａｔｉｖａ）、ヒマワリ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ａｎｎｕｕｓ）、ベニバナ（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ  ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ）、アブラヤシ（Ｅｌａｅｉｓ菌種）、ゴマ（Ｓｅｓａｍｕｍ菌種）、ココナッツ（Ｃｏｃｏｓ菌種）、ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ）、タバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ｔａｂａｃｕｍ）、ジャガイモ（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、ピーナッツ（Ａｒａｃｈｉｓ  ｈｙｐｏｇａｅａ）、ワタ（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ  ｂａｒｂａｄｅｎｓｅ、Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ  ｈｉｒｓｕｔｕｍ）、サツマイモ（Ｉｐｏｍｏｅａ  ｂａｔａｔｕｓ）、キャッサバ（Ｍａｎｉｈｏｔ  ｅｓｃｕｌｅｎｔａ）、コーヒー（Ｃｏｆｆｅａ菌種）、茶（Ｃａｍｅｌｌｉａ菌種）、果樹、例えば、リンゴ（Ｍａｌｕｓ菌種）、セイヨウスモモ、アンズ、モモ、サクランボなどのＰｒｕｎｕｓ菌種、セイヨウナシ（Ｐｙｒｕｓ菌種）、イチジク（Ｆｉｃｕｓ  ｃａｓｉｃａ）、バナナ（Ｍｕｓａ菌種）など、柑橘類（Ｃｉｔｒｕｓ菌種）、ココア（Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ  ｃａｃａｏ）、アボカド（Ｐｅｒｓｅａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）、オリーブ（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａｅａ）、アーモンド（Ｐｒｕｎｕｓ  ａｍｙｇｄａｌｕｓ）、クルミ（Ｊｕｇｌａｎｓ菌種）、イチゴ（Ｆｒａｇａｒｉａ菌種）、スイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ  ｌａｎａｔｕｓ）、コショウ（Ｃａｐｓｉｃｕｍ菌種）、テンサイ（Ｂｅｔａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）、ブドウ（Ｖｉｔｉｓ，Ｍｕｓｃａｄｉｎｉａ）、トマト（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ，Ｓｏｌａｎｕｍ  ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ）、及びキュウリ（Ｃｕｃｕｍｉｓ  ｓａｔｉｖｉｓ）とすることができる。マメ科植物には、マメ及びエンドウマメが含まれる。マメには、例えば、グアー、イナゴマメ、コロハ、ダイズ、ソラマメ、ササゲマメ、リョクトウ、アオイマメ、ソラマメ、レンズマメ、及びヒヨコマメが含まれる。本発明が広範囲の植物種に適用し得ることを考慮すると、本発明はさらに、マメ科植物のさやに類似する他の植物構造、例えば、丸莢、長角果、果実、木の実、塊茎などにも適用される。
【０１１４】
本発明の実施形態によれば、形質転換した特定の植物種に応じて、本明細書で提供するように、サプレッションを介して改変し得る花成性ＦＴ配列を異所的に発現する植物は、ＦＴ導入遺伝子を有さない野生型または対照植物に比べて、植物の結節（複数可）、主茎、及び／または枝（複数可）あたりの、変更されたまたはより多数の丸莢、長角果、果実、木の実、塊茎など、及び／または植物あたりの変更されたまたはより多数の丸莢、長角果、果実、木の実、塊茎などを有し得る。
【０１１５】
本発明の別の広い態様によれば、その少なくとも１つの植物細胞の１つ以上の形質転換事象またはゲノムへの挿入を含むトランスジェニック植物（複数可）、植物細胞（複数可）、種子（複数可）、及び植物部分（複数可）を提供し、形質転換事象または挿入は、（ｉ）Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ  ＬｏｃｕｓＴ（ＦＴ）導入遺伝子を含む組換えＤＮＡ配列、構築物またはポリヌクレオチドを含み、ＦＴ導入遺伝子は、分裂組織優先型プロモーターまたは分裂組織特異的プロモーターであり得る栄養期プロモーターに作動可能に連結されたＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含み、及び／または（ｉｉ）分裂組織優先型または分裂組織特異的プロモーターでもあり得る栄養期及び／または生殖期プロモーターに作動可能に連結され、サプレッションのためのＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を有する。本明細書中に提供するように、ＦＴ導入遺伝子は、トランスジェニック発現性及び／または内在性ＲＮＡ分子により、サプレッションのために標的化され得る。ＲＮＡ分子は、転写可能なＤＮＡ配列によってコードされていてもよく、これもまた、植物、植物部分、植物種子または植物細胞に形質転換する。ポリヌクレオチド配列によってコードされるＦＴタンパク質は、ポリヌクレオチドコード配列で形質転換したトランスジェニック植物中の天然のＦＴ遺伝子に対応するか、またはトランスジェニック植物に固有のＦＴタンパク質と相同であるか、そうでなければ類似のものである（すなわち、トランスジェニック植物に対して異種であるが、天然または内在性のＦＴタンパク質と同様である）か、またはトランスジェニック植物に対して異種であってもよい。そのようなトランスジェニック植物を任意の適切な形質転換方法によって産生してもよく、所望により、または必要に応じて、続けて選択、培養、再生、発育などを行い、トランスジェニックＲ0植物を産生してもよく、その後、自家交配または他の植物と交雑させてＲ１植物を生成し、さらなる交雑により、続く子孫世代及び種子を生成してもよい。同様に、本発明の実施形態は、ＦＴ導入遺伝子及び／またはサプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡまたはポリヌクレオチド配列の形質転換事象またはゲノム挿入を有する１つ以上のトランスジェニック細胞を含む植物細胞、組織、外植片などをさらに含む。
【０１１６】
本発明のトランスジェニック植物、植物細胞、種子、及び植物部分は、その少なくとも１つの植物細胞のゲノムへのＦＴ導入遺伝子及び／または転写可能なＤＮＡ配列のトランスジェニック事象または挿入に関して、ホモ接合性またはヘミ接合性であってよく、あるいは、ＦＴ導入遺伝子及び／または転写可能なＤＮＡ配列を含むトランスジェニック事象（複数可）または挿入物（複数可）の任意の数のコピーを含んでいてもよい。ＦＴ導入遺伝子の用量または発現量は、その接合性及び／またはコピー数によって変更してもよく、それはトランスジェニック植物などにおける表現型の変化の程度または範囲に影響を与え得る。いくつかの実施形態によれば、本明細書に提供するように改変、減弱及び／または改良してもよいＦＴ導入遺伝子及び／またはＦＴサプレッションエレメントを有するトランスジェニック植物を、１つ以上の改変した開花または生殖表現型または形質を有するものとしてさらに特徴付けてもよく、それは、ＦＴ導入遺伝子を有さない（及び／またはＦＴサプレッションエレメントを有さない）野生型または対照植物に比べて、改変された収量関連表現型または形質、例えば、植物あたり（及び／または植物の結節あたり）の花、さやなど、及び／または種子の数の増加を有する。そのようなトランスジェニック植物は、野生型または対照植物に比べて、植物の草高、分枝パターン、花の結節数などが変化したために、構造、形態、及び／またはアーキテクチャーが変化しているとさらに特徴付けてもよい。実際、トランスジェニック植物におけるＦＴ過剰発現によって改変される収量関連表現型または形質として：ＦＴ導入遺伝子を有さない（及び／またはＦＴサプレッションエレメントを有さない）野生型または対照植物に比べての、開花時期、生殖期間、開花期間、花、さや、長角果、丸莢、果実、木の実などの落ちる量または時期、結節あたりの花の数、結節あたりの総状花序の数、植物あたりの枝の数、植物あたりの結節の数、主茎上の結節の数、枝の結節の数、植物あたりのさや、丸莢、長角果、果実、木の実などの数、結節あたりのさや、丸莢、長角果、果実、木の実などの数、主茎上のさや、丸莢、長角果、果実、木の実などの数、枝上のさや、種子、丸莢、長角果、果実、木の実などの数、種子の重さ（１０００種子重など）、植物あたりの種子の数、主茎上の種子の数、結節あたりの種子の数、及び／または改変された植物アーキテクチャーが挙げられる。本明細書中で使用する場合、ＦＴ導入遺伝子に関しての用語「過剰発現」は、導入遺伝子の異所性発現を含む。
【０１１７】
本発明の目的のために、「植物」には、再生または発育の任意の段階における外植片、実生、小植物または植物全体が含まれ得る。本明細書中で使用する場合、「トランスジェニック植物」とは、そのゲノムが組換えＤＮＡ分子、構築物または配列の組込みまたは挿入によって改変されている植物を指す。トランスジェニック植物には、最初に形質転換した植物細胞（複数可）から発育または再生させたＲ0植物、ならびにＲ0トランスジェニック植物に由来する後の世代または交雑種における子孫トランスジェニック植物が含まれる。本明細書中で使用する場合、「植物部分」とは、植物の任意の器官またはインタクトな組織、例えば、分裂組織、シュート器官／構造（例えば、葉、茎及び塊茎）、根、花もしくは花器／構造（例えば、包葉、萼片、花弁、雄ずい、心皮、葯及び胚珠）、種子（例えば、胚、胚乳、及び種皮）、果実（例えば、成熟卵巣）、ムカゴ、または他の植物組織（例えば、脈管組織、基本組織など）、あるいはその任意の部分を指す。本発明の植物部分は、生存可能、生存不可能、再生可能、及び／または再生不可能であってもよい。「ムカゴ」は、植物全体に生長することができる任意の植物部分を含み得る。本発明の目的のために、本発明の実施形態によるＦＴ導入遺伝子及び／またはＦＴサプレッションエレメントで形質転換する植物細胞には、形質転換方法に基づいて当技術分野で理解されているように、形質転換に適格な任意の植物細胞、例えば、分裂細胞、胚細胞、カルス細胞などが含まれ得る。本明細書中で使用する場合、「トランスジェニック植物細胞」とは、単に、安定に組み込まれた組換えＤＮＡ分子または配列で形質転換した任意の植物細胞を指す。トランスジェニック植物細胞は、最初に形質転換した植物細胞、再生もしくは発育したＲ0植物のトランスジェニック植物細胞、または、植物の種子もしくは胚、または培養植物もしくはカルス細胞などの細胞（複数可）を含む、任意の子孫植物もしくは形質転換したＲ0植物の子孫に由来するトランスジェニック植物細胞を含み得る。
【０１１８】
多くの実施形態によれば、トランスジェニック植物は、栄養期プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含み得る。いくつかの実施形態によれば、トランスジェニック植物における花成性ＦＴタンパク質の発現は、トランスジェニック植物の栄養及び／または生殖期及び／または組織において、例えば内在性の、及び／またはトランスジェニックにまたは異所的に発現するＲＮＡ分子を介して抑制され得る。いくつかの実施形態によれば、トランスジェニック植物における花成性ＦＴタンパク質の発現は、低分子ＲＮＡ分子によって空間的及び／または時間的に制限され得る。いくつかの実施形態によれば、トランスジェニック植物は、花成性ＦＴ遺伝子またはサプレッションのために導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含み得る。
【０１１９】
本発明の実施形態は、形質転換、交雑などによって、生殖及び／または収量関連形質または表現型が変化したトランスジェニック植物を作製または産生するための方法をさらに含んでもよく、その方法は、ＦＴ導入遺伝子及び／またはサプレッションのためにＦＴ導入遺伝子を標的とするＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡ分子、構築物または配列を、植物細胞へ導入し、次いで形質転換した植物細胞からトランスジェニック植物を再生または発育させることを含み、その場合、それをトランスジェニック事象に有利な選択圧で行ってもよい。そのような方法は、ＦＴ導入遺伝子及び／または転写可能なＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡ分子または配列で植物細胞を形質転換し、１つ以上の改変された表現型または形質、例えば以下の１つ以上を有する植物を選択することを含み得る：ＦＴ導入遺伝子を有さない（及び／またはＦＴサプレッションエレメントを有さない）野生型または対照植物に比べての、開花時期、生殖期間、開花期間、花、さや、丸莢、長角果、果実、木の実などの落ちる量または時期、結節あたりの花の数、結節あたりの総状花序の数、植物あたりの枝の数、植物あたりの結節の数、主茎上の結節の数、枝の結節の数、植物あたりのさや、丸莢、長角果、果実、木の実などの数、結節あたりのさや、丸莢、長角果、果実、木の実などの数、主茎上のさや、丸莢、長角果、果実、木の実などの数、枝上のさや、種子、丸莢、長角果、果実、木の実などの数、種子の重さ（１０００種子重など）、植物あたりの種子の数、主茎上の種子の数、結節あたりの種子の数、及び／または改変された植物アーキテクチャー。例えば、本発明の実施形態は、植物あたりの花、さや、及び／または種子の数が増加した（及び／または植物の結節あたりの花、さや、及び／または種子の数が増加した）トランスジェニック植物の作製方法を含んでもよく、その方法は、ＦＴ導入遺伝子及び／または転写可能なＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡ分子を植物細胞に導入し、次いで植物細胞からトランスジェニック植物を再生または発育させることを含む。次いで、トランスジェニック植物を、上記の生殖及び／または収量関連形質または表現型のうちの１つ以上に基づいて選択してもよい。トランスジェニック植物、植物細胞または植物組織はまた、ＤＮＡ配列決定、ハイブリダイゼーション、抗体結合、及び／または他の分子技術などの当技術分野において公知の１つ以上の方法またはキットを用いて、ＦＴ導入遺伝子及び／またはＦＴサプレッションエレメントの存在に基づいて選択してもよい。
【０１２０】
本発明の実施形態によれば、トランスジェニック植物は、非トランスジェニック対照植物に比べて、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも１７５％、少なくとも２００％、少なくとも２５０％、少なくとも３００％、少なくとも３５０％、または少なくとも４００％多くの花、さや、丸莢、長角果、果実、木の実または塊茎を有し得る。いくつかの実施形態によれば、トランスジェニック植物は、非トランスジェニック対照植物に比べて、平均で少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも１７５％、少なくとも２００％、少なくとも２５０％、少なくとも３００％、少なくとも３５０％、または少なくとも４００％多くの結節あたりの花、さや、種子、丸莢、長角果、果実、木の実または塊茎を有し得る。トランスジェニック植物は、結節あたり、平均で、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個のさや、丸莢、長角果、果実、木の実または塊茎を有し得る。トランスジェニック植物は、結節あたり、平均で、２〜１０、２〜９、２〜８、２〜７、２〜６、２〜５、２〜４、２〜３、３〜１０、３〜９、３〜８、３〜７、３〜６、３〜５、３〜４、４〜１０、４〜９、４〜８、４〜７、４〜６、または４〜５個のさや、丸莢、長角果、果実、木の実または塊茎を有し得る。トランスジェニック植物は、非トランスジェニック対照植物に比べて、結節あたり、平均で、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個またはそれ以上の花、さや、種子、丸莢、長角果、果実、木の実または塊茎を有し得る。トランスジェニック植物はダイズ植物であってもよく、トランスジェニック植物は非トランスジェニック対照植物に比べて、平均で、結節あたりのより多くのさや及び／または種子を有し得る。トランスジェニック植物は、非トランスジェニック対照植物に比べて、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、少なくとも１４日、少なくとも１５日、少なくとも２０日、少なくとも２５日、少なくとも３０日、少なくとも３５日、少なくとも４０日、または少なくとも４５日早く開花し得る。
【０１２１】
本発明の実施形態により、栄養期プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含むトランスジェニック植物を提供し、ポリヌクレオチドコード配列の発現を、低分子非コードＲＮＡ分子であってもよいＲＮＡ分子によって、空間的及び／または時間的に減弱し、制限し、修飾し、及び／または改良する。トランスジェニック植物における花成性ＦＴ  ｍＲＮＡ及び／またはタンパク質の発現または翻訳のレベルは、１つ以上の分裂組織、生殖組織及び／または花芽組織において及び／または１つ以上の生殖期の間に抑制または低下させてもよい。いくつかの実施形態によれば、本明細書において提供するようなＦＴ導入遺伝子及び／またはＦＴサプレッションエレメントを有するトランスジェニック植物の生殖期間及び／または開花期間は、野生型植物または対照植物の生殖期間及び／または開花期間に比べて、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、少なくとも１４日、少なくとも１５日、少なくとも２０日、少なくとも２５日、少なくとも３０日、少なくとも３５日、少なくとも４０日、または少なくとも４５日長くてもよいが、野生型または対照植物の生殖期間及び／または開花期間に比べて、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、または６０日長いだけ（すなわち、それ以下であるかまたはそれ以内）であってもよい。いくつかの実施形態によれば、本明細書において提供するようなＦＴ導入遺伝子及び／またはＦＴサプレッションエレメントを有するトランスジェニック植物の開花の開始（すなわち、最初の開花の出現）は、例えば、野生型もしくは対照植物に比べて、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、少なくとも１４日、少なくとも１５日、少なくとも２０日、少なくとも２５日、少なくとも３０日、少なくとも３５日、少なくとも４０日、もしくは少なくとも４５日早いか、または早く生じ得るが、野生型または対照植物の開花の開始に比べて、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、または６０日前を超えない範囲（すなわち、それ以下であるかまたはそれ以内）であってもよい。
【０１２２】
いくつかの実施形態によれば、本明細書に提供するようなＦＴ導入遺伝子及び／またはＦＴサプレッションエレメントを有するトランスジェニック植物上の花、種子、丸莢、長角果、果実、木の実、さやまたは塊茎の数は、野生型または対照植物に比べて、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも１７５％、少なくとも２００％、少なくとも２５０％、少なくとも３００％、少なくとも３５０％、または少なくとも４００％多くなり得る。いくつかの実施形態によれば、本明細書に提供するようなＦＴ導入遺伝子及び／またはＦＴサプレッションエレメントを有するトランスジェニック植物の主茎上の花、種子、丸莢、長角果、果実、木の実またはさやの数は、野生型または対照植物に比べて、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも１７５％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、少なくとも３００％、少なくとも３５０％、または少なくとも４００％多くなり得る。いくつかの実施形態によれば、本明細書に提供するようなＦＴ導入遺伝子及び／またはＦＴサプレッションエレメントを有するトランスジェニック植物の主茎上の結節あたりの花、種子、丸莢、長角果、果実、木の実またはさやの数は、野生型または対照植物に比べて、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも１７５％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、少なくとも３００％、少なくとも３５０％、または少なくとも４００％多くなり得る。
【０１２３】
植物、主茎または枝あたりのこれらの形質の量または数、例えば、植物、主茎または枝あたりの花、丸莢、種子、長角果、果実、木の実またはさやの数は、２つ以上の植物の平均として計算するか、または１つの植物について測定してもよく、結節あたりの花、丸莢、種子、長角果、果実、木の実またはさやの量または数は、１つ以上の植物についての平均として計算してもよい。したがって、変化率は、２つの植物間、１つの植物と２つ以上の植物の平均との間、または２つの平均間（各平均は２つ以上の植物からなる）で計算してもよい。
【０１２４】
いくつかの実施形態によれば、本明細書において提供するようなＦＴ導入遺伝子及び／またはＦＴサプレッションエレメントを有するトランスジェニック植物上の結節あたりの花、丸莢、種子、長角果、果実、木の実、さやまたは塊茎の数は、野生型または対照植物に比べて、平均で、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも１７５％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、少なくとも３００％、少なくとも３５０％、または少なくとも４００％多くなり得る。いくつかの実施形態によれば、本明細書において提供するようなＦＴ導入遺伝子及び／またはＦＴサプレッションエレメントを有するトランスジェニック植物は、結節あたり、平均で、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個の花、さや、丸莢、種子、長角果、果実、木の実、さやまたは塊茎を有し得る。いくつかの実施形態によれば、本明細書において提供するようなＦＴ導入遺伝子及び／またはＦＴサプレッションエレメントを有するトランスジェニック植物は、平均で、２〜１０、２〜９、２〜８、２〜７、２〜６、２〜５、２〜４、２〜３、３〜１０、３〜９、３〜８、３〜７、３〜６、３〜５、４〜１０、４〜９、４〜８、４〜７、４〜６、または４〜５個のさや、または結節あたり、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、または約１０個の花、丸莢、長角果、果実、木の実、さやまたは塊茎を有し得る。いくつかの実施形態によれば、本明細書において提供するようなＦＴ導入遺伝子及び／またはＦＴサプレッションエレメントを有するトランスジェニック植物は、非トランスジェニック野生型または対照植物に比べて、平均で、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個多くの、花、丸莢、種子、長角果、果実、木の実、さやまたは塊茎を有し得る。
【０１２５】
いくつかの実施形態によれば、結節あたりの丸莢、長角果、種子、果実、木の実、さやまたは塊茎の平均数、及び／または結節あたりの花、丸莢、長角果、種子、果実、木の実、さやまたは塊茎の平均数は、本明細書において提供するようなＦＴ導入遺伝子及び／またはＦＴサプレッションエレメントを有するトランスジェニック植物上（またはそのようなトランスジェニック植物の主茎上）において、野生型または対照植物に比べて、１％〜４００％、１％〜３５０％、１％〜３００％、１％〜２５０％、１％〜２００％、１％〜１５０％、１％〜１００％、１％〜７５％、１％〜５０％、１％〜２５％、５％〜４００％、５％〜３５０％、５％〜３００％、５％〜２５０％、５％〜２００％、５％〜１５０％、５％〜１００％、５％〜９５％、５％〜９０％、５％〜８５％、５％〜８０％、５％〜７５％、５％〜７０％、５％〜６５％、５％〜６０％、５％〜５５％、５％〜５０％、５％〜４５％、５％〜４０％、５％〜３５％、５％〜３０％、５％〜２５％、５％〜２０％、５％〜１５％、５％〜１０％、１０％〜４００％、１０％〜３５０％、１０％〜３００％、１０％〜２５０％、１０％〜２００％、１０％〜１５０％、１０％〜１００％、１０％〜９０％、１０％〜８０％、１０％〜７０％、１０％〜６０％、１０％〜５０％、１０％〜４０％、１０％〜３０％、１０％〜２０％、２５％〜４００％、２５％〜３５０％、２５％〜３００％、２５％〜２５０％、２５％〜２００％、２５％〜１５０％、２５％〜１００％、２５％〜７５％、２５％〜５０％、５０％〜４００％、５０％〜３５０％、５０％〜３００％、５０％〜２５０％、５０％〜２００％、５０％〜１５０％、５０％〜１００％、５０％〜７５％、７５％〜４００％、７５％〜３５０％、７５％〜３００％、７５％〜２５０％、７５％〜２００％、７５％〜１５０％、７５％〜１００％、１００％〜４００％、１００％〜３５０％、１００％〜３００％、１００％〜２５０％、１００％〜２００％、または１００％〜１５０％多くなり得る。いくつかの実施形態によれば、本明細書において提供するようなＦＴ導入遺伝子及び／またはＦＴサプレッションエレメントを有するトランスジェニック植物の生殖期間は、野生型または対照植物に比べて、日数に関して、１％〜４００％、１％〜３５０％、１％〜３００％、１％〜２５０％、１％〜２００％、１％〜１５０％、１％〜１００％、１％〜７５％、１％〜５０％、１％〜２５％、５％〜４００％、５％〜３５０％、５％〜３００％、５％〜２５０％、５％〜２００％、５％〜１５０％、５％〜１００％、５％〜９５％、５％〜９０％、５％〜８５％、５％〜８０％、５％〜７５％、５％〜７０％、５％〜６５％、５％〜６０％、５％〜５５％、５％〜５０％、５％〜４５％、５％〜４０％、５％〜３５％、５％〜３０％、５％〜２５％、５％〜２０％、５％〜１５％、５％〜１０％、１０％〜４００％、１０％〜３５０％、１０％〜３００％、１０％〜２５０％、１０％〜２００％、１０％〜１５０％、１０％〜１００％、１０％〜９０％、１０％〜８０％、１０％〜７０％、１０％〜６０％、１０％〜５０％、１０％〜４０％、１０％〜３０％、１０％〜２０％、２５％〜４００％、２５％〜３５０％、２５％〜３００％、２５％〜２５０％、２５％〜２００％、２５％〜１５０％、２５％〜１００％、２５％〜７５％、２５％〜５０％、５０％〜４００％、５０％〜３５０％、５０％〜３００％、５０％〜２５０％、５０％〜２００％、５０％〜１５０％、５０％〜１００％、５０％〜７５％、７５％〜４００％、７５％〜３５０％、７５％〜３００％、７５％〜２５０％、７５％〜２００％、７５％〜１５０％、７５％〜１００％、１００％〜４００％、１００％〜３５０％、１００％〜３００％、１００％〜２５０％、１００％〜２００％、または１００％〜１５０％長くなり得る。いくつかの実施形態によれば、本明細書において提供するようなＦＴ導入遺伝子及び／またはＦＴサプレッションエレメントを有するトランスジェニック植物の開花の開始は、野生型または対照植物に比べて、日数に関して、１％〜４００％、１％〜３５０％、１％〜３００％、１％〜２５０％、１％〜２００％、１％〜１５０％、１％〜１００％、１％〜７５％、１％〜５０％、１％〜２５％、５％〜４００％、５％〜３５０％、５％〜３００％、５％〜２５０％、５％〜２００％、５％〜１５０％、５％〜１００％、５％〜９５％、５％〜９０％、５％〜８５％、５％〜８０％、５％〜７５％、５％〜７０％、５％〜６５％、５％〜６０％、５％〜５５％、５％〜５０％、５％〜４５％、５％〜４０％、５％〜３５％、５％〜３０％、５％〜２５％、５％〜２０％、５％〜１５％、５％〜１０％、１０％〜４００％、１０％〜３５０％、１０％〜３００％、１０％〜２５０％、１０％〜２００％、１０％〜１５０％、１０％〜１００％、１０％〜９０％、１０％〜８０％、１０％〜７０％、１０％〜６０％、１０％〜５０％、１０％〜４０％、１０％〜３０％、１０％〜２０％、２５％〜４００％、２５％〜３５０％、２５％〜３００％、２５％〜２５０％、２５％〜２００％、２５％〜１５０％、２５％〜１００％、２５％〜７５％、２５％〜５０％、５０％〜４００％、５０％〜３５０％、５０％〜３００％、５０％〜２５０％、５０％〜２００％、５０％〜１５０％、５０％〜１００％、５０％〜７５％、７５％〜４００％、７５％〜３５０％、７５％〜３００％、７５％〜２５０％、７５％〜２００％、７５％〜１５０％、７５％〜１００％、１００％〜４００％、１００％〜３５０％、１００％〜３００％、１００％〜２５０％、１００％〜２００％、または１００％〜１５０％早くなり得る。
【０１２６】
本発明の実施形態によれば、本明細書において提供するトランスジェニック植物は、本明細書に記載する２つ以上の形質または表現型の組み合わせ、例えば、野生型植物または対照植物に比べて、増加した結節あたりのさや、丸莢、長角果、種子、果実、木の実もしくは塊茎、増加した主茎上のさや、丸莢、長角果、種子、果実、木の実もしくは塊茎、増加した生殖期間、より早期の開花開始、最低草高、例えば、ダイズの場合、少なくとも９００ミリメートル以上（すなわち０．９メートル以上）、及び／または減少した分枝のうちの２つ以上を有し得る。いくつかの実施形態によれば、トランスジェニック植物は、野生型植物または対照植物に比べて、結節あたりのさや、丸莢、長角果、種子、果実、または木の実の平均数が増加し、開花がより早期に開始する場合がある。そのようなトランスジェニック植物はさらに、野生型または対照植物に比べて、主茎上のさや、丸莢、長角果、種子、果実、木の実または塊茎の数の増加及び／または生殖期間の増加を有し得る。
【０１２７】
例えば、本明細書において提供するトランスジェニック植物は、野生型または対照植物に比べて、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも１７５％、少なくとも２００％、少なくとも２５０％、少なくとも３００％、少なくとも３５０％、または少なくとも４００％多くの結節あたりの花、さや、種子、丸莢、長角果、果実、木の実を有し、開花の開始が、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、少なくとも１４日、少なくとも１５日、少なくとも２０日、少なくとも２５日、少なくとも３０日、少なくとも３５日、少なくとも４０日、または少なくとも４５日早くなり得る。本明細書において提供するトランスジェニック植物は、野生型または対照植物に比べて、平均で、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個多くの、結節あたりの花、さや、種子、丸莢、長角果、果実、木の実または塊茎を有し、開花の開始が、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、少なくとも１４日、少なくとも１５日、少なくとも２０日、少なくとも２５日、少なくとも３０日、少なくとも３５日、少なくとも４０日、または少なくとも４５日早くなり得る。そのようなトランスジェニック植物はさらに、野生型または対照植物の生殖期間及び／または開花期間に比べて、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、少なくとも１４日、少なくとも１５日、少なくとも２０日、少なくとも２５日、少なくとも３０日、少なくとも３５日、少なくとも４０日、または少なくとも４５日長い生殖期間及び／または開花期間を有し、及び／または野生型または対照植物に比べて、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも１７５％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、少なくとも３００％、少なくとも３５０％、または少なくとも４００％多い、トランスジェニック植物の主茎上の花、さや、種子、丸莢、長角果、果実または木の実の数の増加を有し得る。
【０１２８】
本発明の実施形態によれば、本明細書において提供するトランスジェニック植物は、最小の草高及び減少した分枝を有する改変された植物アーキテクチャーを有してもよく、それは植物あたりの結節数の減少の緩和を伴い得る。ＦＴ導入遺伝子単独を発現するトランスジェニック植物は、早期生長停止に起因する重度の矮性表現型を有する場合があり、それは植物あたりの分枝及び結節の減少と共に、短い草高を有する。ＦＴ導入遺伝子を、ｍｉＲＮＡセンサー、またはＦＴ導入遺伝子を標的とする第２のサプレッションエレメントと共に発現させることによって、これらの重度の早期生長停止表現型は、結節あたりのさやの増加を維持する一方で、より正常な草高を生じるように緩和され得る。これらの実施形態によれば、トランスジェニック植物は、（ｉ）野生型または対照植物に比べて、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％以下の最小草高の減少（すなわち、トランスジェニック植物と野生型または対照植物との間の草高の差は、これらの割合のうちの１つ以上を超えない）、（ｉｉ）野生型または対照植物に比べて、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％少ない枝の総数、及び／または（ｉｉｉ）野生型または対照植物に比べて、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または４０％以下の範囲で少ない植物あたり（及び／または主茎あたり）の結節数の最小数（すなわち、トランスジェニック植物と野生型または対照植物との間の植物あたり（及び／または主茎あたり）の結節数の差は、これらの割合のうちの１つ以上を超えない）を有し得る。ダイズの場合、本明細書において提供するトランスジェニック植物は、少なくとも７００ミリメートル（ｍｍ）、少なくとも７５０ｍｍ、少なくとも８００ｍｍ、少なくとも８５０ｍｍ、少なくとも９００ｍｍ、少なくとも９５０ｍｍ、少なくとも１０００ｍｍ、少なくとも１０５０ｍｍ、少なくとも１１００ｍｍ、少なくとも１１５０ｍｍ、少なくとも１２００ｍｍ、少なくとも１２５０ｍｍ、少なくとも１３００ｍｍ、少なくとも１３５０ｍｍ、または少なくとも１４００ｍｍの最小草高；少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、少なくとも３５０、少なくとも３７５、または少なくとも４００以上の植物あたりの結節の総数；及び／または野生型もしくは対照植物に比べて、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％少ない枝の総数を有し得る。植物についての前述の数、割合、及び差異のすべては、同じ種類の複数の植物の平均から計算した値をさらに含む。
【０１２９】
本発明の別の広い態様によれば、本発明のトランスジェニック植物を圃場で通常の密度または高密度で植えるための方法を提供する。いくつかの実施形態によれば、本発明のトランスジェニック植物をより高い密度で圃場に植えることにより、１エーカーあたり（または土地面積あたり）の作物植物の収量を高め得る。本明細書中に記載するように、栄養生長期（複数可）の間に、及び／またはＦＴ導入遺伝子のサプレッションの存在下で、花成性ＦＴタンパク質を発現する本発明のトランスジェニック植物は、結節あたり（特に主茎上）のさや及び／または種子の増加を示し得るが、分枝数の減少及び枝あたりの結節数の減少を伴う植物アーキテクチャーの変化も有し得る。したがって、本発明のトランスジェニック植物をより高い密度で植えて、圃場における１エーカーあたりの収量を高め得ると提案されている。条播作物では、列の長さあたりに多数の種子／植物を植えることによって、及び／または列間の間隔を狭めることによって、より高い密度を達成し得る。いくつかの実施形態によれば、本発明のトランスジェニック作物植物を、標準的な農学的慣行によるその作物植物の通常の植栽密度に比べて、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、５０％、７５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２２５％、または２５０％高いかまたは大きい密度（１土地／圃場面積あたりの植物）で圃場に植栽してもよい。
【０１３０】
ダイズの場合、一般的な植栽密度は、１エーカー当たり約１００，０００〜１５０，０００種子の範囲内であり、一般的な列間隔は、約２６〜約４０インチの範囲内、例えば、３０インチまたは３６インチの列間隔である。所与の列内には、通常、１フィートあたり約６〜８個のダイズ種子を植え付け得る。対照的に、ダイズの高密度植栽は、１エーカーあたりおよそ１５０，０００〜２５０，０００個の種子の範囲を有してもよく、列間隔は、約１０インチ以下〜約２５インチの範囲内、例えば、１０インチ、１５インチまたは２０インチの間隔であってもよい。高密度植栽の場合、おそらくはより狭い列間隔と組み合わせて、１フィートあたり約９〜１２個のダイズ種子を各列に植え付け得る。しかしながら、高い作物密度は、各列内の植栽密度を増加させずに狭い列間隔によって達成してもよい。
【０１３１】
ワタについては、一般的な植栽密度は、１エーカーあたり約２８，０００〜４５，０００種子の範囲であり、一般的な列間隔は、約３８〜約４０インチの範囲、例えば、３８インチまたは４０インチの列間隔である。所与の列内には、通常、１フィートあたり約２〜３個の綿実を植え付け得る。対照的に、ダイズの高密度植栽は、１エーカーあたりおよそ４８，０００〜６０，０００個の種子の範囲を有してもよく、列間隔は、約３０インチ以下〜約３６インチの範囲内であってよい。高密度植栽の場合、おそらくはより狭い列間隔と組み合わせて、１フィートあたり約３〜５個の綿実を各列に植え付け得る。しかしながら、ワタの高い作物密度は、各列内の植栽密度を増加させずに狭い列間隔によって達成してもよい。
【０１３２】
キャノーラの場合、一般的な栽植密度は１エーカーあたり約３６０，０００〜５５０，０００種子の範囲であり、オープナーの間の一般的な列間隔は約６インチ〜約１６インチの範囲である。所与の列内には、通常、１フィートあたり約８〜１２個のキャノーラ種子を植え付け得る。対照的に、ダイズの高密度植栽は、１エーカーあたり約４５０，０００〜６８０，０００個の種子の範囲を有してもよく、列間隔は、約５インチ以下〜約１０インチの範囲内であってよい。高密度植栽の場合、おそらくはより狭い列間隔と組み合わせて、１フィートあたり約１０〜１６個のキャノーラ種子を各列に植え付け得る。しかしながら、キャノーラの高い作物密度は、各列内の植栽密度を増加させずに狭い列間隔によって達成してもよい。
【０１３３】
以下は、本開示の非限定的な例示的実施形態である：
１．第１の発現カセット及び第２の発現カセットを含む組換えＤＮＡ構築物であって、前記第１の発現カセットが、第１の植物発現性プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を有し、前記第２の発現カセットが、前記第１の発現カセットの前記ポリヌクレオチド配列の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対して少なくとも８０％相補的であるターゲティング配列を含むＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を有し、前記転写可能なＤＮＡ配列が、第２の植物発現性プロモーターに作動可能に連結される、前記組換えＤＮＡ構築物。
【０１３４】
２．前記ＲＮＡ分子の前記ターゲティング配列が、約１５〜約２７ヌクレオチド長である、実施形態１の組換えＤＮＡ構築物。
【０１３５】
３．前記ＲＮＡ分子の前記ターゲティング配列が、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６または２７ヌクレオチド長である、実施形態１または２に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１３６】
４．前記ＲＮＡ分子の前記ターゲティング配列が、前記第１の発現カセットの前記ポリヌクレオチド配列の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対し、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％相補的である、実施形態１〜３のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１３７】
５．前記ＲＮＡ分子の前記ターゲティング配列が、前記第１の発現カセットの前記ポリヌクレオチド配列によりコードされるｍＲＮＡ転写産物の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対して少なくとも８０％相補的である、実施形態１〜４のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１３８】
６．前記ＲＮＡ分子の前記ターゲティング配列が、前記ｍＲＮＡ転写産物のエキソン配列またはコード配列の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対して少なくとも８０％相補的である、実施形態１〜５のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１３９】
７．前記ＲＮＡ分子の前記ターゲティング配列が、前記ｍＲＮＡ転写産物の非コード配列の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対して少なくとも８０％相補的である、実施形態１〜５のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１４０】
８．前記転写可能なＤＮＡ配列によってコードされる前記ＲＮＡ分子が、ｍｉＲＮＡまたはｓｉＲＮＡ前駆体である、実施形態１〜７のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１４１】
９．前記転写可能なＤＮＡ配列が、配列番号６８または６９に対し、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％相補的である配列を有する、実施形態１〜８のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１４２】
１０．前記転写可能なＤＮＡ配列が、配列番号６５に対し、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を有する、実施形態１〜９のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１４３】
１１．前記第１の発現カセットの前記ポリヌクレオチド配列が、配列番号６９に対し、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を有する、実施形態１〜１０のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１４４】
１２．前記花成性ＦＴタンパク質が、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、及び３０からなる群から選択される配列、またはその機能的断片に対して、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、実施形態１〜１１のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１４５】
１３．前記花成性ＦＴタンパク質が、さらに、以下のアミノ酸：配列番号１４のアミノ酸位置８５に対応する前記花成性ＦＴタンパク質のアミノ酸位置におけるチロシンまたは他の非荷電極性または非極性残基；配列番号１４のアミノ酸位置１２８に対応する前記花成性ＦＴタンパク質のアミノ酸位置におけるロイシンまたは他の非極性残基；及び配列番号１４のアミノ酸位置１３８に対応する前記花成性ＦＴタンパク質のアミノ酸位置におけるトリプトファンまたは他の大きな非極性残基のうちの１つ以上をさらに含む、実施形態１２に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１４６】
１４．前記花成性ＦＴタンパク質が、以下のアミノ酸：配列番号１４の８５位に対応するアミノ酸位置のリジンまたはアルギニンに対応するアミノ酸位置のヒスチジン；配列番号１４の１２８位に対応するアミノ酸位置のリジンまたはアルギニン；及び配列番号１４の１３８位に対応するアミノ酸位置のセリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジンまたはアルギニンのうちの１つ以上を有さない、実施形態１２に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１４７】
１５．前記花成性ＦＴタンパク質が、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、及び３０、またはその機能的断片からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、実施形態１２に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１４８】
１６．前記ポリヌクレオチド配列が、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、及び２９からなる群から選択される配列に対し、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性である、実施態様１〜１５のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１４９】
１７．前記第１の植物発現性プロモーターが栄養期プロモーターである、実施形態１〜１６のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１５０】
１８．前記第１の植物発現性プロモーターが、分裂組織優先型または分裂組織特異的プロモーターである、実施形態１〜１７のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１５１】
１９．前記第１の植物発現性プロモーターが、配列番号３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５または４８からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列、またはその機能的部分と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、実施形態１〜１８のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１５２】
２０．前記第１の植物発現性プロモーターが、配列番号３１に記載の化合物、またはその機能的部分と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、実施形態１９に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１５３】
２１．前記第１の植物発現性プロモーターが、配列番号３２または配列番号４８と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、実施形態１９に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１５４】
２２．前記第１の植物発現性プロモーターが、配列番号４４、またはその機能的部分と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、実施形態１９に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１５５】
２３．前記第１の植物発現性プロモーターが、配列番号４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３または６４からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列、またはその機能的部分と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、実施形態１〜２２のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１５６】
２４．前記第１の植物発現性プロモーターが、配列番号４９、またはその機能的部分と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、実施形態２３に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１５７】
２５．前記第２の植物発現性プロモーターが、配列番号４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３または６４からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列、またはその機能的部分と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、実施形態１〜２４のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１５８】
２６．前記第２の植物発現性プロモーターが、配列番号４９、またはその機能的部分と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、少なくとも９９．５％  ％または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、実施態様１〜２５のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１５９】
２７．前記第２の植物発現性プロモーターが、配列番号７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、もしくは９４からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列、またはその機能部分と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、少なくとも９９．５％％または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、実施形態１〜２６のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１６０】
２８．前記第１の植物発現性プロモーターが栄養期プロモーターであり、前記第２の植物発現性プロモーターが後期栄養期プロモーター及び／または生殖期プロモーターである、実施形態１〜２７のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１６１】
２９．前記第１の植物発現性プロモーターが早期栄養期プロモーターである、実施形態２８の組換えＤＮＡ構築物。
【０１６２】
３０．前記第２の植物発現性プロモーターが生殖期優先型プロモーターである、実施形態２８の組換えＤＮＡ構築物。
【０１６３】
３１．前記第２の植物発現性プロモーターが前記転写可能なＤＮＡ配列の検出可能な発現を開始するよりも早い発育段階において、前記第１の植物発現性プロモーターが、前記花成性ＦＴタンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド配列の検出可能な発現を開始する、実施形態１〜３０のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１６４】
３２．実施形態１〜３１のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物を含むＤＮＡ分子またはベクター。
【０１６５】
３３．実施形態１〜３１のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物を含む、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換用のプラスミドベクター。
【０１６６】
３４．実施形態１〜３１のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物を含む部位特異的組込みのためのドナーテンプレート分子。
【０１６７】
３５．トランスジェニック植物の少なくとも１つの細胞のゲノムへの、実施形態１〜３１のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物の挿入を含む、前記トランスジェニック植物。
【０１６８】
３６．前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物の前記挿入に関してホモ接合性である、実施形態３５のトランスジェニック植物。
【０１６９】
３７．前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物の前記挿入に関してヘミ接合性である、実施形態３５のトランスジェニック植物。
【０１７０】
３８．前記トランスジェニック植物が短日植物である、実施形態３５〜３７のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０１７１】
３９．前記トランスジェニック植物が双子葉植物である、実施形態３５〜３８のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０１７２】
４０．前記トランスジェニック植物がマメ科植物である、実施形態３５〜３９のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０１７３】
４１．前記トランスジェニック植物がダイズである、実施形態３５〜４０のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０１７４】
４２．前記トランスジェニックダイズ植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、結節あたりのさやをより多く産生する、実施形態４１のトランスジェニック植物。
【０１７５】
４３．前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、結節あたりの花をより多く産生する、実施形態３５〜４２のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０１７６】
４４．前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、前記トランスジェニック植物の結節あたりの種子、丸莢、長角果、果実、木の実またはさやをより多く産生する、実施形態３５〜４３のいずれか一項のトランスジェニック植物またはその一部。
【０１７７】
４５．前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて早く開花する、実施形態３５〜４４のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物またはその一部。
【０１７８】
４６．前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、結節あたりの総状花序をより多く有する、実施形態３５〜４５のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物またはその一部。
【０１７９】
４７．トランスジェニック植物部分の少なくとも１つの細胞のゲノムへの、実施形態１〜３１のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物の挿入を含む、前記トランスジェニック植物部分。
【０１８０】
４８．前記トランスジェニック植物部分が：種子、果実、葉、子葉、胚軸、分裂組織、胚、胚乳、根、シュート、茎、さや、花、花序、葉柄、小花柄、花柱、柱頭、花床、花弁、萼片、花粉、葯、花糸、卵巣、胚珠、果皮、師部、または脈管組織のうちの１つである、実施形態４４〜４７のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物部分。
【０１８１】
４９．植物発現性プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む組換えＤＮＡ構築物であって、前記ポリヌクレオチド配列が、前記ポリヌクレオチド配列によってコードされるｍＲＮＡ転写産物中の標的部位をコードする配列を含み、前記ｍＲＮＡ転写産物の前記標的部位が、内在性ＲＮＡ分子に対して少なくとも８０％相補的である、前記組換えＤＮＡ構築物。
【０１８２】
５０．前記ｍＲＮＡ転写産物の前記標的部位が、少なくとも１７ヌクレオチド長である、実施形態４９に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１８３】
５１．前記ｍＲＮＡ転写産物の前記標的部位が、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６または２７ヌクレオチド長である、実施形態４９または５０に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１８４】
５２．前記ｍＲＮＡ転写産物の前記標的部位が、前記内在性ＲＮＡ分子に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％相補的である、実施形態４９〜５１のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１８５】
５３．前記標的部位が、前記ｍＲＮＡ転写産物の非コード配列中に存在する、実施形態４９〜５２のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１８６】
５４．前記ｍＲＮＡ転写産物の前記標的部位が、配列番号９５、９６、９７、１０３、１０４、または１０５に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％相補的である、実施形態４９〜５３のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１８７】
５５．前記ｍＲＮＡ転写産物の標的部位が、配列番号９５または１０３に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％相補的である、実施形態４９〜５４のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１８８】
５６．前記花成性ＦＴタンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド配列が、配列番号９８、９９、１００、１０１、１０６、１０７、１０８、１０９または１１０と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である配列を有する、実施形態４９〜５５のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１８９】
５７．前記ｍＲＮＡ転写産物の前記標的部位が、配列番号９９または１０７と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である、実施形態４９〜５４または５６のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１９０】
５８．前記花成性ＦＴタンパク質が、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、及び３０からなる群から選択される配列、またはその機能的断片に対して、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、実施形態４９〜５７のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１９１】
５９．前記花成性ＦＴタンパク質が、以下のアミノ酸：配列番号１４のアミノ酸位置８５に対応する前記花成性ＦＴタンパク質のアミノ酸位置のチロシンまたは他の非荷電極性または非極性残基；配列番号１４のアミノ酸位置１２８に対応する前記花成性ＦＴタンパク質のアミノ酸位置のロイシンまたは他の非極性残基；配列番号１４のアミノ酸位置１３８に対応する前記花成性ＦＴタンパク質のアミノ酸位置のトリプトファンまたは他の大きな非極性残基のうちの１つ以上をさらに含む、実施形態４９〜５８のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１９２】
６０．前記花成性ＦＴタンパク質が、以下のアミノ酸：配列番号１４の８５位に対応するアミノ酸位置のリジンまたはアルギニンに対応するアミノ酸位置のヒスチジン；配列番号１４の１２８位に対応するアミノ酸位置のリジンまたはアルギニン；配列番号１４の１３８位に対応するアミノ酸位置のセリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジンまたはアルギニンのうちの１つ以上を有さない、実施形態４９〜５８のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１９３】
６１．前記花成性ＦＴタンパク質が、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、及び３０、またはその機能的断片からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、実施形態４９〜６１のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１９４】
６２．前記ポリヌクレオチド配列が、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、及び２９からなる群から選択される配列に対して、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性である、実施形態４９〜６２のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１９５】
６３．前記植物発現性プロモーターが栄養期プロモーターである、実施形態４９〜６２のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１９６】
６４．前記植物発現性プロモーターが分裂組織優先型または分裂組織特異的プロモーターである、実施形態４９〜６３のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１９７】
６５．前記植物発現性プロモーターが、配列番号３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５または４８からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列、またはその機能的部分と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、実施形態４９〜６４のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１９８】
６６．植物発現性プロモーターが、配列番号３１、またはその機能的部分と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、実施形態４９〜６５のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０１９９】
６７．前記植物発現性プロモーターが、配列番号３２または配列番号４８と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、実施形態４９〜６５のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２００】
６８．前記植物発現性プロモーターが、配列番号４４、またはその機能的部分と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、実施形態４９〜６５のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２０１】
６９．前記植物発現性プロモーターが、配列番号４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３または６４からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列、またはその機能的部分と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、実施形態４９〜６８のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２０２】
７０．実施形態４９〜６９のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物を含むＤＮＡ分子またはベクター。
【０２０３】
７１．実施形態４９〜６９のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物を含む、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換用のプラスミドベクター。
【０２０４】
７２．実施形態４９〜６９のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物を含む、部位特異的組込み用のドナー鋳型分子。
【０２０５】
７３．トランスジェニック植物の少なくとも１つの細胞のゲノムへの、実施形態４９〜６９のいずれか一項の組換えＤＮＡ構築物の挿入を含む、前記トランスジェニック植物。
【０２０６】
７４．前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物の挿入に関してホモ接合性である、実施形態７３のトランスジェニック植物。
【０２０７】
７５．前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物の挿入に関してヘミ接合性である、実施形態７３のトランスジェニック植物。
【０２０８】
７６．前記トランスジェニック植物が短日植物である、実施形態７３〜７５のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２０９】
７７．前記トランスジェニック植物が双子葉植物である、実施形態７３〜７６のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２１０】
７８．前記トランスジェニック植物がマメ科植物である、実施形態７３〜７７のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２１１】
７９．前記トランスジェニック植物がダイズである、実施形態７３〜７８のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２１２】
８０．前記トランスジェニックダイズ植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、結節あたりのさやをより多く産生する、実施形態７３〜７９のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２１３】
８１．前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、結節あたりの花をより多く産生する、実施形態７３〜８０のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２１４】
８２．前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、トランスジェニック植物の結節あたりの丸莢、長角果、果実、木の実またはさやをより多く産生する、実施形態７３〜８１のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物またはその一部。
【０２１５】
８３．前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて早く開花する、実施形態７３〜８２のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物またはその一部。
【０２１６】
８４．前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、結節あたりの総状花序をより多く有する、実施形態７３〜８３のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物またはその一部。
【０２１７】
８５．トランスジェニック植物部分の少なくとも１つの細胞のゲノムへの、実施形態４９〜６９のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物の挿入を含む、前記トランスジェニック植物部分。
【０２１８】
８６．前記トランスジェニック植物部分が：種子、果実、葉、子葉、胚軸、分裂組織、胚、胚乳、根、シュート、茎、さや、花、花序、葉柄、小花柄、花柱、柱頭、花床、花弁、萼片、花粉、葯、花糸、卵巣、胚珠、果皮、師部、または脈管組織のうちの１つである、実施形態８２〜８５のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物部分。
【０２１９】
８７．前記花成性ＦＴタンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド配列の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対して少なくとも８０％相補的なターゲティング配列を含むＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡ構築物であって、前記転写可能なＤＮＡ配列が植物発現性プロモーターに作動可能に連結される、前記組換えＤＮＡ構築物。
【０２２０】
８８．前記ＲＮＡ分子の前記ターゲティング配列が約１５〜約２７ヌクレオチド長である、実施形態８７に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２２１】
８９．前記ＲＮＡ分子の前記ターゲティング配列が、前記花成性ＦＴタンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド配列の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対し、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％相補的である、実施形態８７または８８に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２２２】
９０．前記ＲＮＡ分子の前記ターゲティング配列が、前記花成性ＦＴタンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド配列によってコードされるｍＲＮＡ転写産物の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対して少なくとも８０％相補的である、実施形態８７〜８９のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２２３】
９１．前記ＲＮＡ分子の前記ターゲティング配列が、前記ｍＲＮＡ転写産物のエキソン配列またはコード配列の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対して少なくとも８０％相補的である、実施形態８７〜９０のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２２４】
９２．前記ＲＮＡ分子のターゲティング配列が、前記ｍＲＮＡ転写産物の非コード配列の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対して少なくとも８０％相補的である、実施形態８７〜９１のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２２５】
９３．前記転写可能なＤＮＡ配列によってコードされる前記ＲＮＡ分子が、ｍｉＲＮＡまたはｓｉＲＮＡ前駆体である、実施形態８７〜９２のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２２６】
９４．前記ポリヌクレオチド配列によってコードされる前記花成性ＦＴタンパク質が、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、及び３０からなる群から選択される配列、またはその機能的断片に対して、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、実施形態８７〜９３のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２２７】
９５．前記花成性ＦＴタンパク質が、以下のアミノ酸：配列番号１４のアミノ酸位置８５に対応する前記花成性ＦＴタンパク質のアミノ酸位置のチロシンまたは他の荷電極性残基または非極性残基；配列番号１４のアミノ酸位置１２８に対応する前記花成性ＦＴタンパク質のアミノ酸位置のロイシンまたは他の非極性残基；配列番号１４のアミノ酸位置１３８に対応する前記花成性ＦＴタンパク質のアミノ酸位置のトリプトファンまたは他の大きな非極性残基のうちの１つ以上をさらに含む、実施形態８７〜９４のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２２８】
９６．前記花成性  ＦＴタンパク質が、以下のアミノ酸：配列番号１４の８５位に対応するアミノ酸位置のリジンまたはアルギニンに対応するアミノ酸位置のヒスチジン；配列番号１４の１２８位に対応するアミノ酸位置のリジンまたはアルギニン；配列番号１４の１３８位に対応するアミノ酸位置のセリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジンまたはアルギニンのうちの１つ以上を有さない、実施形態８７〜９４のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２２９】
９７．前記花成性ＦＴタンパク質が、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、及び３０からなる群から選択されるアミノ酸配列、またはその機能的断片を有する、実施形態８７〜９６のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２３０】
９８．前記花成性ＦＴタンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド配列が、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、及び２９からなる群から選択される配列に対し、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性である、実施形態８７〜９７のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２３１】
９９．前記植物発現性プロモーターが、配列番号４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３または６４からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列、またはその機能的部分と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む、実施形態８７〜９８のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２３２】
１００．前記植物発現性プロモーターが、配列番号４９、またはその機能的部分と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、実施形態８７〜９９のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２３３】
１０１．前記植物発現性プロモーターが、配列番号７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、もしくは９４からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列、またはその機能的部分と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、少なくとも９９．５％または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、実施形態８７〜１００のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２３４】
１０２．前記植物発現性プロモーターが栄養期プロモーターである、実施形態８７〜１０１のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２３５】
１０３．前記植物発現性プロモーターが、後期栄養期プロモーター及び／または生殖期プロモーターである、実施形態８７〜１０２のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２３６】
１０４．前記植物発現性プロモーターが、前記転写可能なＤＮＡ配列に関して異種である、実施形態８７〜１０３のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２３７】
１０５．実施形態８７〜１０４のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物を含む、ＤＮＡ分子またはベクター。
【０２３８】
１０６．トランスジェニック植物の少なくとも１つの細胞のゲノムへの、実施形態８７〜１０４のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物の挿入を含む、前記トランスジェニック植物。
【０２３９】
１０７．前記トランスジェニック植物が短日植物である、実施形態１０６に記載のトランスジェニック植物。
【０２４０】
１０８．前記トランスジェニック植物が双子葉植物である、実施形態１０６または１０７に記載のトランスジェニック植物。
【０２４１】
１０９．前記トランスジェニック植物がマメ科植物である、実施形態１０６〜１０８のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２４２】
１１０．前記トランスジェニック植物がダイズである、実施形態１０６〜１０９のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２４３】
１１１．トランスジェニック植物部分の少なくとも１つの細胞のゲノムへの、実施形態８７〜１０３のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物の挿入を含む、前記トランスジェニック植物部分。
【０２４４】
１１２．前記トランスジェニック植物部分が：種子、果実、葉、子葉、胚軸、分裂組織、胚、胚乳、根、シュート、茎、さや、花、花序、葉柄、小花柄、花柱、柱頭、花床、花弁、萼片、花粉、葯、花糸、卵巣、胚珠、果皮、師部、または脈管組織のうちの１つである、実施形態１１１に記載のトランスジェニック植物部分。
【０２４５】
１１３．（ａ）外植片の少なくとも１つの細胞を、実施形態１〜３１、４９〜６９または８７〜１０４のいずれか一項に記載の組換えＤＮＡ構築物で形質転換し；及び
（ｂ）前記形質転換外植片からトランスジェニック植物を再生または発育させることを含む、前記トランスジェニック植物の産生方法。
【０２４６】
１１４．（ｃ）以下の形質または表現型：前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、より早い開花、より長い生殖または開花期間、結節あたりの花の数の増加、結節あたりの総状花序の数の増加、結節当たりのさや、丸莢、長角果、果実、または木の実の数の増加、及び結節あたりの種子の数の増加のうちの１つ以上を有するトランスジェニック植物を選択することをさらに含む、実施形態１１３に記載の方法。
【０２４７】
１１５．前記形質転換工程（ａ）を、前記外植片のＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換または微粒子銃を介して実施する、実施形態１１３または１１４に記載の方法。
【０２４８】
１１６．前記形質転換工程（ａ）が、前記組換えＤＮＡ構築物の部位特異的組込みを含む、実施形態１１３〜１１５のいずれか一項に記載の方法。
【０２４９】
１１７．圃場においてトランスジェニック作物植物をより高密度で植え付けることを含む、前記トランスジェニック作物植物の植栽方法であって、前記トランスジェニック作物植物が、実施形態１〜３１、４９〜６９または８７〜１０４のうちのいずれか１つの組換えＤＮＡ構築物の挿入を含む、前記植栽方法。
【０２５０】
１１８．前記トランスジェニック作物植物がダイズであり、前記トランスジェニックダイズ植物の約１５０，０００〜２５０，０００個の種子を１エーカーあたりに植え付ける、実施形態１１７に記載の方法。
【０２５１】
１１９．前記トランスジェニック作物植物がワタであり、前記トランスジェニックワタ植物の約４８，０００〜６０，０００個の種子を１エーカーあたりに植え付ける、実施形態１１７に記載の方法。
【０２５２】
１２０．前記トランスジェニック作物植物がキャノーラであり、前記トランスジェニックキャノーラ植物の約４５０，０００〜６８０，０００個の種子を１エーカーあたりに植え付ける、実施形態１１７に記載の方法。
【０２５３】
１２１．前記トランスジェニック植物が、非トランスジェニック対照植物に比べて、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも１７５％、少なくとも２００％、少なくとも２５０％、少なくとも３００％、少なくとも３５０％、または少なくとも４００％多くの種子、さや、丸莢、長角果、果実、木の実または塊茎を有する、実施形態３５〜４６、７３〜８４、または１０６〜１１０のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２５４】
１２２．前記トランスジェニック植物が、結節あたりの種子、さや、丸莢、長角果、果実、木の実または塊茎を、非トランスジェニック対照植物に比べて、平均で、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも１７５％、少なくとも２００％、少なくとも２５０％、少なくとも３００％、少なくとも３５０％、または少なくとも４００％多く有する、実施形態３５〜４６、７３〜８４、または１０６〜１１０のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２５５】
１２３．前記トランスジェニック植物が、結節あたりのさや、丸莢、長角果、果実、木の実または塊茎を、平均で、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個有する、実施形態３５〜４６、７３〜８４または１０６〜１１０のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２５６】
１２４．前記トランスジェニック植物が、結節あたりのさや、丸莢、長角果、果実、木の実または塊茎を、平均で、２〜１０、２〜９、２〜８、２〜７、２〜６、２〜５、２〜４、３〜１０、３〜９、３〜８、３〜７、３〜６、３〜５、４〜１０、４〜９、４〜８、４〜７、４〜６、または４〜５個有する、実施形態３５〜４６、７３〜８４または１０６〜１１０のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２５７】
１２５．前記トランスジェニック植物が、結節あたりの丸莢、長角果、果実、木の実またはさやを、非トランスジェニック対照植物に比べて、平均で、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、または少なくとも１０個多く有する、実施形態３５〜４６、７３〜８４、または１０６〜１１０のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２５８】
１２６．前記トランスジェニック植物が、非トランスジェニック対照植物に比べて、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも７日、少なくとも８日、少なくとも９日、少なくとも１０日、少なくとも１１日、少なくとも１２日、少なくとも１３日、少なくとも１４日、少なくとも１５日、少なくとも２０日、少なくとも２５日、少なくとも３０日、少なくとも３５日、少なくとも４０日、または少なくとも４５日早く開花する、実施形態３５〜４６、７３〜８４または１０６〜１１０のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２５９】
１２７．前記トランスジェニック植物がダイズ植物であり、前記トランスジェニック植物が、非トランスジェニック対照植物に比べて、結節あたりのさやを平均でより多く有する、実施形態１２１、１２２、１２３、１２４、１２５または１２６のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２６０】
１２８．栄養期プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含むトランスジェニック植物であって、前記花成性ＦＴタンパク質の発現が、後期栄養組織及び／または生殖組織において抑制される、前記トランスジェニック植物。
【０２６１】
１２９．前記花成性ＦＴタンパク質の発現が低分子ＲＮＡ分子によって抑制される、実施形態１２８に記載のトランスジェニック植物。
【０２６２】
１３０．花成性ＦＴタンパク質をコードし、栄養期プロモーターに作動可能に連結されたポリヌクレオチド配列、及び前記ポリヌクレオチド配列の少なくとも部分に相補的なターゲティング配列を有するＲＮＡ分子をコードする少なくとも１つの転写可能なＤＮＡ配列を含む、組換えＤＮＡ構築物。
【０２６３】
１３１．トランスジェニック植物の少なくとも１つの細胞のゲノムへの、実施形態１３０に記載の組換えＤＮＡ構築物の挿入を含む、前記トランスジェニック植物。
【０２６４】
１３２．栄養期プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードする組換えポリヌクレオチド配列を含むトランスジェニック植物であって、前記ポリヌクレオチド配列の発現が、低分子ＲＮＡ分子によって空間的及び時間的に制限される、前記トランスジェニック植物。
【０２６５】
１３３．発現カセットを含む組換えＤＮＡ構築物であって、前記発現カセットが、植物発現性プロモーターに作動可能に連結された花成性ＦＴタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含み、前記植物発現性プロモーターが、配列番号４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３または６４からなる群から選択されるポリヌクレオチド配列、またはその機能的部分と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を有する、前記組換えＤＮＡ構築物。
【０２６６】
１３４．前記花成性ＦＴタンパク質が、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８及び３０からなる群から選択される配列、またはその機能的断片に対し、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、実施形態１３０または１３３に記載の組換えＤＮＡ構築物。
【０２６７】
１３５．実施形態１３０または１３３に記載の組換えＤＮＡ構築物を含む、ＤＮＡ分子またはベクター。
【０２６８】
１３６．実施形態１３０または１３３に記載の組換えＤＮＡ構築物を含む、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換用のプラスミドベクター。
【０２６９】
１３７．実施形態１３０または１３３に記載の組換えＤＮＡ構築物を含む、部位特異的組込み用のドナー鋳型分子。
【０２７０】
１３８．トランスジェニック植物の少なくとも１つの細胞のゲノムへの、実施形態１３０または１３３に記載の組換えＤＮＡ構築物の挿入を含む、前記トランスジェニック植物。
【０２７１】
１３９．前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物の挿入に関してホモ接合性である、実施形態１３１、１３２、または１３８のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２７２】
１４０．前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物の挿入に関してヘミ接合性である、実施形態１３１、１３２、１３８、または１３９のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２７３】
１４１．前記トランスジェニック植物が短日植物である、実施形態１３１、１３２、または１３８〜１４０のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２７４】
１４２．前記トランスジェニック植物が双子葉植物である、実施形態１３１、１３２、または１３８〜１４１のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２７５】
１４３．前記トランスジェニック植物がマメ科植物である、実施形態１３１、１３２、または１３８〜１４２のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２７６】
１４４．前記トランスジェニック植物がダイズである、実施形態１３１、１３２、または１３８〜１４３のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２７７】
１４５．前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて、前記トランスジェニック植物の結節あたりの種子、丸莢、長角果、果実、木の実またはさやをより多く産生する、実施形態３５〜４６、７３〜８４、１０６〜１１０、１３１、１３２、または１３８〜１４４のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２７８】
１４６．前記トランスジェニック植物が、前記組換えＤＮＡ構築物を有さない対照植物に比べて早く開花する、実施形態３５〜４６、７３〜８４、１０６〜１１０、１３１、１３２、または１３８〜１４５のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２７９】
１４７．前記トランスジェニック植物が、Ｒ８期において少なくとも７００ミリメートルの草高を有するダイズ植物である、実施形態３５〜４６、７３〜８４、１０６〜１１０、１３１、１３２、または１３８〜１４６のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２８０】
１４８．前記トランスジェニック植物が、Ｒ８期において植物あたり少なくとも１００個の結節を有するダイズ植物である、実施形態３５〜４６、７３〜８４、１０６〜１１０、１３１、１３２、または１３８〜１４７のいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
【０２８１】
１４９．トランスジェニック植物部分の少なくとも１つの細胞のゲノムへの、実施形態１３０または１３３の組換えＤＮＡ構築物の挿入を含む、前記トランスジェニック植物部分。
【実施例】
【０２８２】
実施例１．ダイズ短日誘導処理及び転写プロファイリングによるＦｌｏｗｅｒｉｎｇ  ＬｏｃｕｓＴ（ＦＴ）遺伝子の同定
本実施例は、同時係属中の米国特許出願第１５／１３１，９８７号及び国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２８１３０号において以前に記載されており、それらの全体を参照として本明細書に援用する。光周期光照射（すなわち、植物における開花の短日誘導）のための方法は、参照としてその全体を本明細書に援用する米国特許第８，９３５，８８０号及び米国特許出願公開第２０１４／０２５９９０５号に記載されている。前記文献にさらに記載されているように、早期短日誘導照射により、植物あたりのさや／種子数の増加を含む、生殖形質が変化したダイズ植物が産生した。遺伝子発現マイクロアレイを用いて転写プロファイリング実験を行い、これらの光誘導植物において特定の転写産物が上方制御されたかどうかを決定して短日誘導表現型の媒介を担い得る遺伝子を同定した。これらの実験では、短日誘導光照射を受けた植物（短日）から１、３及び５日後に採取したダイズの葉及び花の花茎頂組織について、誘導照射を受けなかった植物（長日）由来の組織と比較して、転写産物の分析を行った。
【０２８３】
図２に示すように、早期短日誘導（ｅＳＤＩ）照射の３日後及び５日後に収穫した葉組織において、（ｉ）同じ短日誘導植物の花茎頂組織、または（ｉｉ）代わりに長日処理を行ったダイズ植物の葉の組織及び花茎頂組織のいずれかから採取した試料に比べて、特定のＦｌｏｗｅｒｉｎｇ  ＬｏｃｕｓＴ遺伝子Ｇｍ．ＦＴ２ａ（配列番号１）について、転写産物の蓄積の増加が観察された。これらのデータは、ｅＳＤＩ照射を受けている植物の葉組織においてＧｍ．ＦＴ２ａ発現が誘導されるという結論を支持しており、これは長日条件下で生長した植物においては認められなかった。Ｇｍ．ＦＴ２ａ発現はｅＳＤＩ照射植物の花茎頂においても観察されず、これは、誘導光周期条件に応答して末梢の葉の組織において誘導され、次いで分裂組織内のその作用部位に移動して開花を誘導するというＦＴタンパク質発現のモデルと一致する。しかしながら、転写産物のより高感度のＲＮＡ配列決定分析を用いたさらなる実験により、茎頂及び腋芽において、ｅＳＤＩ照射に応答していくらかのＧｍ．ＦＴ２ａ誘導が示された（データは示さず）。
【０２８４】
実施例２．ダイズにおけるｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーター発現パターンの特徴付け
トランスジェニックアプローチによって望ましい形質または表現型を達成するには、異所性ＦＴ遺伝子発現の時間的及び空間的パターンの制御が必要であり得る。短日導入処理後の栄養組織におけるＧｍ．ＦＴ２ａ発現を同定するダイズ生理学実験（図２参照）により、収量陽性形質の達成が栄養期中の早期ＦＴ発現に依存し得ることが示された。他方では、たとえＦＴ転写産物が栄養茎頂で検出されなくても、ＦＴタンパク質は、葉から頂端組織まで長距離移動し、そこで栄養相から生殖相への転換を引き起こすことが示されている。例えば、上記のＬｉｆｓｃｈｉｔｚ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，（２００６）；及びＣｏｒｂｅｉｓｅｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，“ＦＴ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｏｖｅｍｅｎｔ  Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  Ｌｏｎｇ−Ｄｉｓｔａｎｃｅ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｆｌｏｒａｌ  Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ［３１６］：１０３０−１０３３（２００７）参照。したがって、本発明者ら自身の観察によると、本発明者らは、植物における異所性ＦＴ発現を制御するために、分裂組織において活性である栄養期プロモーターを用いることを提案した。所望の発育段階で分裂組織において形態形成ＦＴシグナルを直接発現させることによって、複数の内在性経路及び調節フィードバック（例えば、葉におけるＦＴ伝達の制御及びＦＴシグナルの長距離の移行）を迂回または回避し得る。短日誘導照射（実施例１で上述した）を用いた以前の実験により、ダイズ植物の分裂組織におけるＧｍ．Ｅｒｅｃｔａ遺伝子の上方制御が明らかになった。Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ由来ｐＥｒｅｃｔａプロモーター（配列番号３１）は、栄養生長期の間に植物の分裂組織（複数可）において弱い発現を有することが示されていた。したがって、最初のＦＴ発現実験にｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターを選択した。
【０２８５】
追加の実験を行い、ＧＵＳレポーター遺伝子に融合させたｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａの栄養及び花芽分裂組織における発現パターンをさらに特徴付けた。ダイズ実生の発育中のＧＵＳ発現パターンの分析により、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターが、好ましくは栄養生長期の間の分裂組織において時間的及び空間的発現パターンを示すことが明らかになった。図３Ａ〜３Ｏ、及び４Ａ〜４Ｏならびに図５Ａ〜５Ｆ及び６Ａ〜６Ｆは、２組の画像を含み、ＧＵＳ染色のパターンを示す。図３Ａ〜３Ｏ及び５Ａ〜５Ｆは、染色した組織の白黒画像を示す。図４Ａ〜４Ｏ及び６Ａ〜６Ｆは、それぞれ、図３Ａ〜３Ｏ及び５Ａ〜５Ｆに対応する白黒画像を示し、図４Ａ〜４Ｏ及び６Ａ〜６Ｆは、それぞれ、図３Ａ〜３Ｏ及び５Ａ〜５Ｆに対応する白黒画像を示すが、青色ＧＵＳ染色のパターン及び強度を示すために色分けされている。したがって、これらの白黒画像を用いて、図３Ａ〜３Ｏ及び４Ａ〜４Ｏまたは図５Ａ〜５Ｆ及び６Ａ〜６Ｆの対応する画像を比較することによって、発現のＧＵＳ染色パターンを見ることができる。図３Ａ〜３Ｏ及び４Ａ〜４Ｏに示すように、播種／発芽後３日目に、ＧＵＳ染色が、ダイズ未成熟単葉の葉身及び葉柄において検出された（図４Ａ及び４Ｂ）。ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：ＧＵＳ発現はまた、この早期栄養期における三小葉原基、茎頂分裂組織（ＳＡＭ）及び腋芽分裂組織部位において広く検出された（図４Ｃ）。ＧＵＳ活性は、発芽または植栽後１０日目に、完全に拡大した単葉及び三小葉において検出されなかった（図４Ｄ及び４Ｅ）。しかしながら、ＧＵＳ活性は、未成熟、未拡大の、しかし完全に発育した三小葉の葉身の近位部、及び葉柄の向軸側で検出された（図４Ｆ）。発育中の頂端組織の詳細な観察により、発育中の未成熟葉原基、腋芽分裂組織及び茎頂分裂組織において広範な発現が保持されていることが示された（図４Ｇ〜Ｉ）。
【０２８６】
早期生殖期においては、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーター活性は成熟した葉身では検出されず、発育中の葉原基では減少した。ＧＵＳシグナルは、いったんこれらの組織が花序を形成し始めると、茎頂分裂組織（ＳＡＭ）または腋芽分裂組織（ＡＭ）の未決定の栄養茎頂では検出されなかった（図４Ｊ〜４Ｌ）。その後のすべての段階で、頂端、腋生または花の原基では、追加の分裂活性は検出できなかった。しかしながら、ＧＵＳ発現は、葉柄の向軸側及び未成熟葉身の近位部分（図４Ｍ及び４Ｎ）では継続したが、完全に拡大した葉身（図４Ｏ）では継続しなかった。ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターを用いたＧＵＳ発現パターンもまた、後期Ｒ１生長期（発芽後３５〜４０日）において分析した。早期生長期と同様に、成熟した葉または茎には発現は検出されなかった。しかしながら、強いプロモーター活性が、花序の茎（図５Ａ及び６Ａ；矢印参照）及び花の小花柄（図５Ｂ及び６Ｂ；矢印参照）において検出された。両方の組織において、脈管構造及び柔組織細胞で発現が検出された（図５Ｃ及び６Ｃ）。この段階では、雄ずいの花糸（図５Ｄ及び６Ｄ；矢印参照）及び非受粉胚珠でも発現が検出された（図５Ｅ、５Ｆ、６Ｅ及び６Ｆ；６Ｆの矢印参照）。
【０２８７】
以前に、ｐＡｔ．ＥｒｅｃｔａプロモーターがＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓにおいて特徴付けられた。興味深いことに、ＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓのｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａの発現パターンは栄養期の間にダイズで観察されたパターンと同等であったが、後期生殖期の間では同等ではなかった。対照的に、ダイズにおけるｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａの発現パターンは、早期の生殖組織では減少するが、花序の茎や花の小花柄を含むいくつかの後期の生殖器官や組織では再出現する。例えば、その内容及び開示の全体を参照として本明細書に援用する、Ｃｈｅｎ，Ｍ−Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ［５８８］：３９１２−１７（２０１４）；Ｙｏｋｏｙａｍａ，Ｒ  ｅｔ  ａｌ．；Ｓｈｐａｋ，ＥＤ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ［３０９］：２９０−２９３（２００５）；及びＹｏｋｏｙａｍａ，Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｎｔ  Ｊ  ［１５］（３）：３０１−３１０（１９９８）参照。したがって、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターはダイズにおいて新規発現パターンを提供する。
【０２８８】
実施例３．ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターの制御下でのＦｌｏｗｅｒｉｎｇ  ＬｏｃｕｓＴ遺伝子Ｇｍ．ＦＴ２ａの発現は、ダイズの開花時期及び結節あたりのさやを変化させる
Ｇｍ．ＦＴ２ａ遺伝子に作動可能に連結されたｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターを含む組換えＤＮＡ分子（すなわち、Ｔ−ＤＮＡ形質転換ベクター）を用いて、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ媒介形質転換を介してダイズ外植片を形質転換することによってトランスジェニックダイズ植物を産生し、４つのｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ事象を生成し、これをさらなる試験のために繰り越した。ＦＴ２ａ過剰発現の効果はＲ0植物において直ちに認められ、それは非常に早い開花と、種子収量の減少（例えば、わずかに約８種子／植物）を伴う生長停止を示した。これらのトランスジェニックＧｍ．ＦＴ２ａ植物はまた、草高が低く、枝があるとしてもごくわずかであった。分離したＲ1植物及びそれらの子孫を、その後、最初の研究及び特徴決定のために、長日条件下で温室内において生長させた。これらの植物を長日の条件下で生長させることによって、Ｇｍ．ＦＴ２ａトランスジェニックＲ0植物で観察された重度の矮性表現型が改善された。これらの実験では、１６時間の長日条件下（すなわち、１６／８時間の日中／夜間の光周期）で温室内において生長させたホモ接合性及びヘミ接合性植物の両方が野生型ヌル分離個体よりもはるかに早く開花した。Ｇｍ．ＦＴ２ａトランスジェニック植物は、植栽または播種の約１９〜２２日後に開花した）。（例えば、図９Ａ〜９Ｃ参照）。これらの生長条件下で、Ｇｍ．ＦＴ２ａを発現するトランスジェニックダイズ植物では、野生型対照に比べて、主茎上の結節あたりのさやの数がさらに増加した（例えば、以下でさらに考察する図１０及び１１参照）。
【０２８９】
制御された環境条件下で生長させたｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａトランスジェニック事象（事象１）の１つを含む植物を、走査電子顕微鏡分析（ｅＳＥＭ）によってさらに分析した。これらのトランスジェニック植物の茎頂分裂組織（ＳＡＭ）（植栽後７日目に集めた）の分析により、ＳＡＭの花序分裂組織（ＩＭ）及び花芽分裂組織（ＦＭ）への早期転換が明らかになった（図７）。対照的に、野生型ダイズ植物のＳＡＭは、この成育段階ではＩＭに分化しなかった。同様に、ＦＴ２ａ形質転換体の腋生分裂組織（植栽後９日目に集めた）の画像化の結果、休眠花序分裂組織（ｄＩＭ）（または側生総状花序原基）からＩＭ及びＦＭへ発育させることにより、これらのトランスジェニック植物において結節あたりの花の枝（総状花序）がより早く発育することが示された（図８）。さらなる表現型の特徴付けにより、Ｇｍ．ＦＴ２ａを発現するダイズ植物におけるＶ１期での早期開花が明らかになり、それはヌル分離植物において花成が生じるよりもずっと前であった（図９Ａ〜９Ｃ）。上記のｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：ＧＵＳ発現パターンと組み合わせたこれらのデータは、早期開花、そしてより詳細には花序及び花芽分裂組織の形成が、実生の葉原基ならびに茎頂分裂組織及び腋生分裂組織における栄養期の間のＧｍ．ＦＴ２ａの異所性発現によって誘導されたことを示す。より多数の花序及び花芽分裂組織が形成されることにより、二次及び三次総状花序の早期の解放及び伸長がさらに引き起こされ、結節あたりの生産的な花及びさやがより多く形成されると考えられる。
【０２９０】
Ｇｍ．ＦＴ２ａトランスジェニックダイズ植物が、より早い開花を経験し、主茎上の結節あたりのさやをより多く産生する（ヌル植物を分離することに比べて）だけでなく、トランスジェニック植物における異所性Ｇｍ．ＦＴ２ａ発現の効果が用量依存的であることも明らかになった。ホモ接合型植物とヘミ接合型植物のいずれも、草高が低く分枝が少なかったが、おそらくは、ヘミ接合型植物が１コピーである（すなわち低用量である）のに対し、ホモ接合型植物が２コピーの導入遺伝子を含む（すなわち、より高用量である）ことから、Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子に関してホモ接合型の植物は、ヘミ接合型植物よりも重度の影響を受けた。長日生長条件下では、導入遺伝子に関してヘミ接合型である植物に比べて、ホモ接合型植物は、より早く生長停止し、全体の高さはより短く、主茎上の結節及び枝はより少なかった（図１０）。野生型及びホモ接合型植物に比べて主茎上の枝が非常に少ない（存在する場合）いくつかの最適以下の矮性表現型を示したホモ接合型植物とは異なり、ヘミ接合型植物は、それらの栄養生長、草高、及び主茎上に存在する結節数に関して、野生型及びホモ接合型植物に比べて中間的な表現型を有していた。１６時間の長日条件下では、ヘミ接合型植物は、ホモ接合型植物に比べて、ある程度の分枝度及びより長い開花期間とともに、より正常な草高を有していた（図１０）。ヘミ接合型植物はまた、Ｒ１の開始後４０〜６４日間、開花したが、ホモ接合型植物は、それらがより早期に生長停止したためにわずか１６〜２４日間の開花であった。
【０２９１】
長日（１６時間）制御環境条件においてＧｍ．ＦＴ２ａ構築物（３事象）で形質転換した植物を用いてさらなる実験を行い、ヘミ接合型植物とホモ接合型植物との間の用量応答をさらに特徴付けた。３つのホモ接合型事象（Ｈｏｍｏ−Ｅｖｅｎｔ２、Ｈｏｍｏ−Ｅｖｅｎｔ３、Ｈｏｍｏ−Ｅｖｅｎｔ４）及び３つのヘミ接合型事象（Ｈｅｍｉ−Ｅｖｅｎｔ２、Ｈｅｍｉ−Ｅｖｅｎｔ３、Ｈｅｍｉ−Ｅｖｅｎｔ４）について、主茎及び枝上の結節及びさやの数、ならびに結節あたりの平均さや数と植物あたりの平均草高における差異を表１に示す。これらの事象は上記の事象１とは区別される。
表１．ホモ接合型及びヘミ接合型Ｇｍ．ＦＴ２ａトランスジェニック植物の事象レベルデータ
2019536443.tif 000003
【０２９２】
表２に示すように、へテロ接合型植物は、主茎（ＭＳ）及び枝（ＢＲ）上に一貫してより多数の結節を有し、ホモ接合型植物よりも高い草高を有していた。このように、ヘミ接合型植物は一般的にホモ接合型植物よりも影響が少なく、野生型植物により類似していた。ヘミ接合型植物はまた、ホモ接合型植物に比べて、結節あたりのさやをより多く、また、主茎及び枝上により多数のさやを有していた。したがって、ヘミ接合型植物は一般的に、おそらくそれらのより低いＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子用量に起因して、結節あたり（及び植物あたり）のさやをより多く有する、より標準に近い植物アーキテクチャーを有していた。導入遺伝子の接合性に基づくＧｍ．ＦＴ２ａの相対用量レベルは、Ｇｍ．ＦＴ２ａ転写産物レベルがヘミ接合型植物由来の組織よりもホモ接合型植物由来の組織においてより高いことを示すさらなる実験によってさらに確認された（データは示さず）。
【０２９３】
これらのＧｍ．ＦＴ２ａトランスジェニック植物における開花の早期誘導は、ヘミ接合型及びホモ接合型植物の両方において、主茎上の結節あたりのより多くのさや（及び種子）と関連していた。Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子を含むホモ接合型及びヘミ接合型植物はそれぞれ、野生型分離個体に比べて植物の主茎上の結節あたりのさや／種子の数が増加していた（図１１）。主茎上のさやの分布はまた、Ｇｍ．ＦＴ２ａトランスジェニック植物と野生型ヌル植物との間で異なることが見出された。野生型ヌル植物に比べて、長日条件下で生育させたホモ接合型植物及びヘミ接合型植物の両方が、少なくとも主茎のより低い結節により多くのさや及び平均で結節あたりのより多くのさやを有することがわかった（データは示さず）。Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子に関してヘミ接合型の植物は、主茎の長さにわたって結節あたり最高数のさやを有していた。しかしながら、これらの効果は日長などを含む特定の生育条件に依存していた。一般的に、より長日条件下でダイズを用いて行った実験はトランスジェニック植物とヌル植物との間により大きな差異を生じる傾向があった。
【０２９４】
トランスジェニックＧｍ．ＦＴ２ａ発現の用量依存的効果もまた圃場試験において観察した。圃場試験では、２つのＧｍ．ＦＴ２ａ事象（上記の事象１及び２）についてヘミ接合型のダイズ植物は、主茎上の結節あたり平均約２．６８個のさやを示し、これらの事象についてホモ接合型の植物は、結節あたり平均約１．４０個のさやを示したが、一方、ヌル分離植物は結節あたり約１．６３個のさやを有していた。しかしながら、早期の圃場試験では、トランスジェニックＧｍ．ＦＴ２ａ（事象２）についてヘミ接合型の植物は、ホモ接合型植物における結節あたり約３．０５個及びヌル分離植物における結節あたり約２．１９個のさやの平均に比べて、結節あたり約３．２１個のさやの平均数を有することがわかった。異なる圃場で実施した別のマイクロプロット実験では、Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子（事象１）についてヘミ接合型の植物は、ホモ接合型植物における結節あたり約２．０５個のさや、及びヌル分離植物における結節あたり約１．３０個のさやの平均に比べて、結節あたり平均約２．１７個のさやを有することがわかった。したがって、Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子について、Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子を有する植物の結節あたりのさやの数は、ＦＴ導入遺伝子の用量、環境条件及び圃場条件、ならびにおそらく農学的慣習の違いなど、さまざまな要因に左右される可能性がある。しかしながら、温室内で生育させたトランスジェニックＧｍ．ＦＴ２ａ植物と同様に、圃場条件下で生育させたホモ接合型及びヘミ接合型Ｇｍ．ＦＴ２ａトランスジェニック植物は、主茎上の結節がより少なく、全体の草高が短く、及び／またはトランスジェニック植物の分枝がより少なかった。実際、野生型植物は、通常、ヘミ接合型及びホモ接合型のＧｍ．ＦＴ２ａ植物に比べて、植物あたりの分枝数がより多く、全結節数がより多かった。
【０２９５】
１４時間の長日条件下で温室内において生育させたホモ接合型Ｇｍ．ＦＴ２ａトランスジェニック植物及び野生型（ＷＴ）対照植物から、追加の生理学的データを収集した（表２参照）。これらのデータは、各事象についての６つのＧｍ．ＦＴ２ａトランスジェニック植物、または８つの野生型植物から得られた測定値の平均を示す。
【０２９６】
これらの植物の表現型の特徴付けのために、以下のマトリックスを収集した：Ｒ１で開花するまでの日数（ＤＯＦＲ１）；Ｒ７までの日数（ＤＯＲ７）；Ｒ１からＲ７までの日の生殖期間（ＰＤＲ１Ｒ７）；植物あたりの枝数（ＢＲＰＰ）；枝の稔性結節の合計（ＦＮＢＲ）；植物あたりの稔性結節の合計（ＦＮＬＰ）；主茎上の稔性結節の合計（ＦＮＳＴ）；枝上の結節数（ＮＤＢＲ）；主茎上の結節数（ＮＤＭＳ）；結節／植物数（ＮＤＰＬ）；枝上の稔性結節の割合（ＰＦＮＢ）；稔性結節の合計の割合（ＰＦＮＮ）；主茎上の稔性結節の割合（ＰＦＮＳ）；植物あたりのさやの数（ＰＤＰＰ）；主茎上のさやの数（ＰＯＤＭＳ）；枝上のさやの数（ＰＯＤＢＲ）；平均さや／結節数；Ｒ８での植物あたりの種子（ＳＤＰＰＲ８）；及び１０００種子の重量（ＳＷ１０００）。別の時点が指定されていない限り、これらの測定値はそれぞれ収穫時に取得したものである。
表２．トランスジェニックホモ接合型Ｇｍ．ＦＴ２ａ及びＷＴ植物についての構築レベルの表現型データ
2019536443.tif 000004
【０２９７】
上記の観察と一致して、ホモ接合型Ｇｍ．ＦＴ２ａトランスジェニック植物はＷＴ植物に比べて早期に花成誘導を受けた（ＤＯＦＲ1  野生型植物での約３３〜３４日に代わって、植栽の約２１日後）。これらの測定はさらに、枝の数（及び枝上の結節またはさやの数などの分枝に関連する他の測定）が大幅に減少したことを示した。トランスジェニック植物は非常に少ない分枝でより短い草高を有するため、植物あたりの結節またはさやの合計数もまた大幅に減少した。しかしながら、主茎上の結節あたりのさやの数は、野生型ヌル植物（例えば、約２．４個のさや／結節）に比べてトランスジェニック植物（例えば、約３．８個の平均さや／結節）において増加した。
【０２９８】
いかなる理論にも拘泥するものではないが、栄養生長期の間に分裂組織においてＦＴ２ａを発現するトランスジェニックダイズ植物で観察される結節あたりのより多数のさやは、少なくとも部分的には、早期開花と、早期二次及び／または三次総状花序の解放及び／またはより良い資源利用との同期によって引き起こされ得るものであって、結節あたりのさやをより多く産生する花を産生する。分裂組織における早期のＦＴ発現（例えば、図３及び４参照）は、休眠花序分裂組織の早期解放を引き起こして、植物の結節あたりの総状花序の数を高め、その結果、より多くの総状花序が、成熟した花及び各結節において完全に発育したさやを産生する。しかしながら、生殖組織におけるその後のＦＴ発現（例えば、図５及び６参照）は、各結節において後に発育する花の花成を生長停止させ、より早く発育する総状花序、花及びさやへのより効率的な資源配分をもたらし得る。野生型ダイズ植物では、一次総状花序に比べてはるかに低い割合の二次及び三次総状花序が花及び十分に発達したさやを産生し、後期発育中の一次総状花序の花は、通常、落花前に成熟した花及び／またはフルサイズのさやを産生しない。このように、植物の１つ以上の結節（複数可）における花の早期発育を側生総状花序の早期解放と同期させることによって、結節あたりより多くのさやが栄養芽分裂組織においてＦＴタンパク質を発現する植物において生成され得ると理論づけられる。少なくともｐＡｔ．ＥｒｅｃｔａプロモーターがＦＴ発現を駆動する場合、後に発育する花（さもなければ完全に発育した、すなわちフルサイズのさやを産生しない可能性がある）もＦＴの後期生殖期発現によって生長停止するようになり、より早く発育する花へと資源を向かわせ得る。
【０２９９】
実施例４．ダイズにおける代替的栄養期プロモーターの制御下でのＦｌｏｗｅｒｉｎｇ  ＬｏｃｕｓＴ遺伝子Ｇｍ．ＦＴ２ａの発現
前述の実施例３で観察された表現型に基づいて、栄養期葉優先型プロモーターと考えられたＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子発現を駆動するための２つのプロモーター：ｐＡｔ．ＢＬＳ（配列番号４６）及びｐＡｔ．ＡＬＭＴ６（配列番号４７）も提案した。本明細書中で使用する場合、「葉優先型」プロモーターとは、他の植物組織に比べて葉組織においてその関連遺伝子の転写を優先的に開始するプロモーターを指す。ＦＴは可動性フロリゲンとして機能すると考えられているため、葉優先型または葉特異的プロモーターを有する葉などの末梢組織における栄養期中の早期ＦＴ発現は、分裂組織優先型ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ発現と同様の表現型をもたらし得る。栄養期葉プロモーターを用いたＦＴ発現もまた花成誘導シグナルを減弱させ、それにより分裂組織におけるホモ接合型ＦＴ発現で観察される早期生長停止表現型を緩和し、草高及び分枝を増加させ得る。
【０３００】
これらの実験において、ｐＡｔ．ＡＬＭＴ６：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ及びｐＡｔ．ＢＬＳ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａのための形質転換ベクターを構築し、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換によってダイズ系統を形質転換するために使用した。ｐＡｔ．ＢＬＳプロモーターを用いた発現は、葉原基数５（ｐ５）で始まり、開花への転換までの間だけソース葉脈において発現することが示されており、ｐＡｔ．ＡＬＭＴ６プロモーターもまた、ｐＡｔ．ＢＬＳに比べて後期の発育段階での発現を伴う栄養葉プロモーターである。例えば、Ｅｆｒｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａ  Ｐｒｏｔｒａｃｔｅｄ  ａｎｄ  Ｄｙｎａｍｉｃ  Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  Ｓｃｈｅｄｕｌｅ  Ｕｎｄｅｒｌｉｅｓ  Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  Ｌｅａｆ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，”Ｔｈｅ  Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  ［２０］（９）：２２９３−２３０６（２００８）；及びＳｈａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｔａｇｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｏｌａｎｕｍ  ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ  Ｌｅａｆ  Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｃｌａｓｓ  １  ＫＮＯＴＴＥＤ１−ＬＩＫＥ  ＨＯＭＥＯＢＯＸ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，”Ｔｈｅ  Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  ［２１］（１０）：３０７８−３０９２（２００９）参照。トランスジェニックダイズ植物をこれらのベクター構築物のそれぞれについて作製し、１４時間の光周期条件下、グロースチャンバー中で、表現型について野生型植物と比較して特徴付けた。各ｐＡｔ．ＢＬＳプロモーター構築物については、６つのトランスジェニック事象を試験し（１事象あたり５植物）、ｐＡｔ．ＡＬＭＴ６プロモーターについては、７つのトランスジェニック事象（１事象につき５植物）を試験した。これらの構築物のそれぞれについて、対照データを５つの野生型植物から収集した。
【０３０１】
これらのトランスジェニック植物の表現型の特徴付けのために、以下のマトリックスを集めた（表３及び４）。個々の測定値は上に定義した通りであり、表現型の特徴付けは導入遺伝子についてホモ接合型の植物について行った。
表３．ｐＡｔ．ＡＬＭＴ６：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ及びＷＴ植物についての構築物レベルの表現型データ
2019536443.tif 000005
表４．ｐＡｔ．ＢＬＳ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ及びＷＴ植物の構築物レベルの表現型データ
2019536443.tif 000006
【０３０２】
代替のｐＡｔ．ＡＬＭＴ６及びｐＡｔ．ＢＬＳプロモーターの制御下でＧｍ．ＦＴ２ａを発現するトランスジェニック植物は、ｐＡＴ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａトランスジェニック植物よりも表現型的に野生型（ＷＴ）植物と類似していた。ｐＡｔ．ＡＬＭＴ６：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ及びｐＡｔ．ＢＬＳ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ構築物で形質転換した植物は、野生型対照植物と同様の開花時期及び栄養生長特性を有し、おそらくは野生型植物に比べて枝上の結節数がわずかに増加していた（表３及び４）。これらのデータは、野生型植物とは異なる生殖及び収量関連形質または表現型を産生するために、トランスジェニックＦＴ発現のタイミング及び位置の両方が重要であることを示すと解釈され得る。より早期の栄養生長期の間に（例えば、葉の組織において）ＦＴ導入遺伝子を単に発現させることは、植物の生殖または収量関連表現型（例えば、結節あたりのさや）を改変するのに十分ではない可能性がある。したがって、本発明の実施形態によれば、花成性ＦＴ導入遺伝子に作動可能に連結されたプロモーターは、植物の栄養生長期中に発現を駆動することに加えて、好ましくは分裂組織特異的または分裂組織優先型プロモーターであってもよい。しかしながら、上記の２つの葉優先型プロモーターの発現特性をダイズ植物において試験した場合、発育中の葉においてｐＡｔ．ＢＬＳプロモーターによるＧＵＳ染色は観察されず、また、ｐＡｔ．ＡＬＭＴ６プロモーターは、葉において後期栄養期まで検出可能なＧＵＳ発現を生じさせることはなく、早期生殖期の間にはるかに高い発現を有していた。したがって、異なる組織特異的プロモーターを用いた早期栄養期の間の末梢（葉）組織におけるＦＴ導入遺伝子の発現は、いくつかの場合には早期開花を誘発し、及び／または他の生殖または収量関連形質または表現型を引き起こすのに十分であり得、これはまた試験する特定の植物種にも依存し得る。
【０３０３】
実施例５．Ｐｆａｍ分析によるＦＴ相同体のタンパク質ドメインの同定
配列分析及び文献レビューによってＧｍ．ＦＴ２ａオルソログを同定し、これらのＦＴ相同体のいくつかの例をＧｍ．ＦＴ２ａと共に表５に記載する。これらは他のダイズＦＴ遺伝子及び他の植物種由来のいくつかのＦＴ遺伝子を含んでいた。ＨＭＭＥＲソフトウェア及びＰｆａｍデータベース（バージョン２７．０）を使用して、これらのＦＴタンパク質のアミノ酸配列を分析して、任意のＰｆａｍタンパク質ドメインを同定した。これらのＦＴタンパク質配列（配列番号２、４、６、８、１０及び１２）は、Ｐｆａｍドメイン名「ＰＢＰ＿Ｎ」及びＰｆａｍ登録番号ＰＦ０１１６１を有するホスファチジルエタノールアミン結合ドメインタンパク質（ＰＥＢＰ）と同じ同定されたＰｆａｍドメインを有することが見出された。これらの各ＦＴタンパク質配列中のＰＢＰ＿Ｎドメインの位置も表５に記載する。他のＦＴタンパク質中のＰＢＰ＿Ｎドメインの位置は配列アラインメントにより決定することができる。したがって、対応するＦＴタンパク質を植物の分裂組織内で異所性に発現させた場合に、それが花成活性を有する限り、ＰＢＰ＿Ｎドメインを含む少なくとも１つのＦＴタンパク質をコードする任意のＤＮＡ配列を、本発明の組換えＤＮＡ分子に使用してもよい。
表５．ＦＴタンパク質配列におけるＰＢＰ＿Ｎ（Ｐｆａｍ）ドメインの位置
2019536443.tif 000007
【０３０４】
実施例６．ダイズにおけるｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターの制御下でのＦＴ相同体の発現
ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターの制御下にある他のＦＴ相同体（表６）を含む追加の形質転換ベクターを構築し、これを用いてＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換によりダイズを形質転換した。これらの事象から生成されたトランスジェニック植物を、それらの表現型について、１４〜１４．５時間の自然昼光期間を用いて温室内で特徴決定した。各構築物について、６つの事象を試験した（１事象あたり６植物）。野生型（ＷＴ）対照植物についても６つの植物を試験し、平均化した。表６に示すように、別々の野生型対照を用いて異なる実験群（Ａ〜Ｅ）を実施した。
表６．いくつかのＧｍ．ＦＴ２ａ及びその相同体の構築物とそれらのタンパク質配列のリスト
2019536443.tif 000008
【０３０５】
上記のＧｍ．ＦＴ２ａ構築物について収集したデータに加えて、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターを用いて他のＦＴ相同体を発現させるために表６に記載した構築物のそれぞれで形質転換した植物の表現型の特徴決定のために、以下のマトリックスを収集した。個々の測定は上記で定義した通りであり、形質転換体の表現型の特徴決定は、導入遺伝子についてホモ接合型の植物で行った。
【０３０６】
ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターの制御下でＺｍ．ＺＣＮ８及びＮｔ．ＦＴ様導入遺伝子を発現する植物について、表現型データを収集した（表７及び８参照）。表７及び８の各事象についての形質値は、その事象を含む試験した全植物の平均である。また、各形質の事象値の平均を示す列も提供する。
表７．Ｚｍ．ＺＣＮ８及び野生型植物についての構築物及び事象レベルの表現型データ
2019536443.tif 000009
表８．Ｎｔ．ＦＴ様及び野生型植物の構築物及び事象レベルの表現型データ
2019536443.tif 000010
【０３０７】
Ｚｍ．ＺＣＮ８及びＮｔ．ＦＴ様タンパク質を発現するトランスジェニックダイズ植物は、野生型対照植物よりも早く開花し、結節あたりのさやの数が増加していた（Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子を発現する植物と同様に）。実際、Ｚｍ．ＺＣＮ８及びＮｔ．ＦＴ様導入遺伝子を発現するダイズ植物は、野生型対照に比べて、結節あたりのさや数の増加と、植物あたりの種子数の減少とともに、開花までの日数（ＤＯＦＲ１）の減少、枝数の減少（ＢＲＰＰ）、植物あたりの結節（ＮＤＰＬ）が少ない、枝上の結節（ＮＤＢＲ）が少ない、枝あたりのさや数（ＰＤＰＰ）の減少、及び枝上のさや数（ＰＯＤＢＲ）の減少などの、Ｇｍ．ＦＴ２ａトランスジェニック植物と同様のいくつかの表現型を有していた（表７及び８）。しかしながら、ホモ接合型Ｇｍ．ＦＴ２ａ植物において観察されたいくつかのネガティブ表現型は、Ｚｍ．ＺＣＮ８及びＮｔ．ＦＴ様発現トランスジェニック植物においてはそれほど顕著ではなかった。全体として、Ｚｍ．ＺＣＮ８導入遺伝子を発現する植物は、より短い草高及びより少ない分枝を有していたが、主茎上に結節あたりのさやをより多く有していた。同様に、Ｎｔ．ＦＴ様導入遺伝子を発現する植物は、野生型の対照植物に比べて、草高が短く、主茎上の分枝が減少し、結節あたりのさやが増加していた。
【０３０８】
上記の２つのトランスジェニックＺｍ．ＺＣＮ８事象及び４つのＮｔ．ＦＴ様事象についても、２つの異なる場所での圃場試験において試験した。ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターの制御下でＺｍ．ＺＣＮ８及びＮｔ．ＦＴ様導入遺伝子を発現する植物について、表現型データを収集した（表９及び１０）。圃場測定の場合、形質は、ＤＯＲ８及びＰＤＲ１Ｒ８が、Ｒ８までの日数及びＲ１とＲ８の間の生殖期間であることを除いて、温室でのデータ表について上記に記載したものと同様である。さらに、他のすべての形質は、Ｒ７期ではなく収穫時（すなわち、Ｒ８期）に測定する。表９の事象１と２は表７の事象２と３に対応し、表１０の事象１〜４は表８の事象１〜４にそれぞれ対応する。Ｒ１で開花するまでの日数（ＤＯＦＲ１）及びＲ１からＲ８までの日における生殖期間（ＰＤＲ１Ｒ８）を除いて、すべての表現型の測定値は２つの場所から収集したデータに基づいて導き出した。温室での観察と同様に、Ｚｍ．ＺＣＮ８及びＮｔ．ＦＴ様タンパク質を発現するトランスジェニックダイズ植物もまた、圃場において野生型対照植物より早く開花した。Ｚｍ．ＺＣＮ８トランスジェニック植物では、結節あたりのさや数が増加していた一方で、Ｎｔ．ＦＴ様植物では、圃場試験において結節あたりのさやの増加が明白に示されることはなかった。
表９．Ｚｍ．ＺＣＮ８及び野生型植物の圃場試験の表現型データ
2019536443.tif 000011
（*−単一場所のデータ）
表１０．Ｎｔ．ＦＴ様及び野生型植物の圃場試験の表現型データ
2019536443.tif 000012
（*−単一場所のデータ）
【０３０９】
ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターの制御下でＧｍ．ＦＴ２ｂ導入遺伝子を発現する植物について追加の表現型データを収集した（表１１）。
表１１．Ｇｍ．ＦＴ２ｂ及び野生型植物についての構築物及び事象レベルの表現型データ
2019536443.tif 000013
【０３１０】
Ｇｍ．ＦＴ２ｂ導入遺伝子を発現するトランスジェニックダイズ植物は、より早く開花し、野生型対照植物よりも分枝が少なかった。Ｇｍ．ＦＴ２ｂを発現するダイズ植物は、開花までの日数（ＤＯＦＲ１）の減少、植物の枝数（ＢＲＰＰ）の減少、植物あたりの結節（ＮＤＰＬ）の減少、植物あたりの結節（ＮＤＢＲ）の減少、植物あたりのさや数（ＰＤＰＰ）の減少、及び枝上のさや（ＰＯＤＢＲ）の減少を有していた（表９）。しかしながら、トランスジェニックＧｍ．ＦＴ２ｂ植物は、結節あたりのさや数の増加を示さなかった。全体として、Ｇｍ．ＦＴ２ｂ導入遺伝子を発現する植物は、野生型の対照植物に比べて、草高が短く、分枝が少なかった。Ｇｍ．ＦＴ２ｂ導入遺伝子の４つの異なる事象を発現するトランスジェニックダイズ植物もまた、圃場試験において試験した。ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターの制御下でＧｍ．ＦＴ２ｂ導入遺伝子を発現する植物について、表現型データを収集した（表１２）。表１１の事象１〜４は、表１２の事象３、２、１、及び４にそれぞれ対応する。温室での観察と同様に、ダイズ植物を発現するＧｍ．ＦＴ２ｂは、圃場での開花までの日数（ＤＯＦＲ１）の減少を示した。他の表現型の測定もまた、野生型の対照植物と比較して温室で観察されたものと同様の形質を示した。
表１２．Ｇｍ．ＦＴ２ｂ及び野生型植物の圃場試験の表現型データ
2019536443.tif 000014
【０３１１】
ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターの制御下でＬｅ．ＳＦＴ導入遺伝子を発現する植物からさらなる表現型データを収集した（表１３）。
表１３．Ｌｅ．ＳＦＴ及び野生型植物についての構築物及び事象レベルの表現型データ
2019536443.tif 000015
【０３１２】
全体として、Ｌｅ．ＳＦＴ導入遺伝子を発現するダイズ植物は、野生型植物に比べて、草高が低く、分枝が少なく、結節あたりの平均さや数が増加していた（表１３）。しかしながら、これらの影響は様々で事象特異的なものであった。例えば、事象１、３及び４が早期開花（ＤＯＦＲ１）を示した一方で、他の事象は中立であるかまたは実際には開花が遅れていた。さらに、いくつかのＬｅ．ＳＦＴトランスジェニック事象が様々な程度で結節あたりのさやの平均を増加させていた一方で、２つの事象は結節あたりのさやの平均数に関して中立的であった。興味深いことに、２つの事象（事象５及び６）は、開花に遅延があったにも関わらず、結節あたりのさや数の平均が最大であった。
【０３１３】
ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターの制御下でＧｍ．ＦＴ５ａ導入遺伝子を発現する植物からさらなる表現型データを収集した（表１４）。
表１４．Ｇｍ．ＦＴ５ａ及び野生型植物についての構築物及び事象レベルの表現型データ
2019536443.tif 000016
【０３１４】
Ｇｍ．ＦＴ５ａ導入遺伝子を発現するトランスジェニックダイズ植物は、野生型対照植物に比べて有意に早く開花し、結節あたりのさやの数が増加していた（Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子を発現する植物と同様に）。実際、Ｇｍ．ＦＴ５ａ導入遺伝子を発現するダイズ植物は、結節あたりのさや数の増加、植物あたりの種子数の減少とともに、開花までの日数（ＤＯＦＲ１）の減少、枝数（ＢＲＰＰ）の減少、植物あたりの結節（ＮＤＰＬ）の減少、枝上の結節（ＮＤＢＲ）の減少、植物あたりのさや数（ＰＤＰＰ）の減少、及び枝上のさや（ＰＯＤＢＲ）の減少などのいくつかの表現型を有していた（Ｇｍ．ＦＴ２ａトランスジェニック植物と同様に）（表１４）。全体として、Ｇｍ．ＦＴ５ａ導入遺伝子を発現する植物は、野生型対照植物に比べて、より低い草高及びより少ない分枝を有していたが、結節あたりの（特に主茎上の）さやをより多く有していた。
【０３１５】
いかなる理論にも拘泥するものではないが、これらのデータは、（ｉ）ＦＴ発現のレベル及びタイミング、（ｉｉ）ＦＴ発現の組織特異性、及び（ｉｉｉ）発現している特定のＦＴタンパク質の相対活性及び標的特異性に依存した関連する表現型（例えば、早期開花、結節あたりのさやの増加、及び植物アーキテクチャーの変化）の程度または範囲で用量依存的に作用するＦＴ過剰発現のモデルを裏付けるものである。例えば、ダイズにおける他の植物種由来のＦＴタンパク質オルソログの発現は、ダイズにおける内在性ＦＴタンパク質（Ｇｍ．ＦＴ２ａ）の過剰発現に比べて、より減弱化された効果を生じる場合があり、これはダイズにおいてより低い活性を有する非天然ＦＴタンパク質相同体に起因し得る。しかしながら、いくつかの天然ＦＴタンパク質の発現は、それらがそれらの天然の状態または状況において異なるまたは特殊な役割を有する場合、有意な表現型効果を生じない場合がある。異なるＦＴタンパク質はまた、異なる組織標的及び受容体に作用する場合があり、したがって、様々な植物アーキテクチャーならびに開花形質及び表現型に対して異なる効果を及ぼし得る。
【０３１６】
特定のＦＴ相同体の活性レベルにかかわらず、変化した生殖表現型及び植物アーキテクチャー表現型は、ＦＴ発現のタイミング及び位置と相関するように思われる。ＦＴ導入遺伝子の栄養期における発現は、早期開花を誘導し、及び／または植物の節あたりの花芽分裂組織、花、さやなどの数を増加させるために必要であり得る。実際、栄養生長期における分裂組織のＦＴ発現は、ＦＴ導入遺伝子の適切な投与により、結節あたりの花、さや、及び／または種子の数の増加をもたらす植物の生殖変化を引き起こすことが示されている。対照的に、葉優先型プロモーターの制御下でのＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子の発現は、野生型植物に比べて、表現型の変化があったとしても非常にわずかしか生じなかった。これらのデータは、ＦＴ発現のタイミング及び組織特異性（または組織優先性）の両方が、トランスジェニック植物における生殖及び／または収量に関連する表現型の変化に影響を与える重要な要因であることを示している。
【０３１７】
本データは、同じｐＥｒｅｃｔａプロモーターを用いて発現させているにもかかわらず、異なるＦＴタンパク質が異なる活性レベル及び／または標的特異性を有する可能性があることを示唆している。Ｇｍ．ＦＴ２ａ、Ｚｍ．ＺＣＮ８、Ｎｔ．ＦＴ様、及びＧｍ．ＦＴ５ａを発現するいくつかの構築物はそれぞれ、結節あたりのさや数の増加に加えて早期の開花及び生長停止を引き起こしたが、Ｇｍ．ＦＴ２ｂ及びＬｅ．ＳＦＴを発現する他の構築物は開花に対する異なる相関効果を有していた。Ｇｍ．ＦＴ２ｂの発現は、植物の早期開花及び生長停止を引き起こしたが、結節あたりのさや数の有意な増加はなかった。一方、Ｌｅ．ＳＦＴ発現は、開花を遅延させたにもかかわらず、結節あたりのさや数の増加及び早期生長停止を示した。興味深いことに、トランスジェニックＦＴ植物における結節あたりのさやの数の増加は、生殖期間（ＰＤＲ１Ｒ７）の延長と相関せず、また上記のように早期開花（ＤＯＦＲ１）と必ずしも一致しなかった。これらのデータは、分裂組織におけるＦＴタンパク質の栄養期における発現に応じた生殖変化が、１つ以上の独立したメカニズムまたは経路を介して機能している可能性があることを示唆している。トランスジェニックＦＴ植物における結節あたりのさやの数の増加は、各結節における栄養芽分裂組織から誘導される花序分裂組織及び花芽分裂組織の数に依存する可能性があり、それは開花時期及び／または生殖期間とは無関係に生じ得る。しかしながら、上記のように、生殖期間は必ずしも開花期間と相関しない場合がある。
【０３１８】
実施例７．追加の栄養期分裂組織プロモーターの同定
栄養期の分裂組織優先型プロモーターｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａの制御下でのＧｍ．ＦＴ２ａの発現による表現型効果が観察されたことから、他の栄養期、分裂組織優先型（または分裂組織特異的）プロモーターを用いて、ＦＴタンパク質の発現を駆動し、植物における生殖または収量関連形質または表現型、例えば、結節あたり（及び／または植物または主茎あたり）のさやの数の増加などを引き起こしてもよい。ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターの特徴的な発現パターン（実施例２参照）を用いて、他の栄養期、分裂組織優先型（または分裂組織特異的）プロモーターをダイズ、ジャガイモ、及びＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓから同定した。２つのバイオインフォマティクスアプローチ：ＢＡＲ  Ｅｓｐｒｅｓｓｏｌｏｇ及びＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎｇｌｅｒを利用し、例えば、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ、ダイズ、Ｍｅｄｉｃａｇｏ、ジャガイモ及びトマトを含む、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａと同様の発現特性を有する他の双子葉植物種由来の候補遺伝子を同定した。例えば、ＢＡＲ  ｅｘｐｒｅｓｓｏｌｏｇ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｅ  ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ  ｒａｎｋｉｎｇ  ｏｆ  ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｐｌａｎｔ  ｓｐｅｃｉｅｓ，”Ｐｌａｎｔ  Ｊ  ［７１］（６）：１０３８−５０（２０１２）；及びＴｏｕｆｉｇｈｉ，Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  Ｂｏｔａｎｙ  Ａｒｒａｙ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ：ｅ−Ｎｏｒｔｈｅｒｎｓ，Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎｇｌｉｎｇ，ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ａｎａｌｙｓｅｓ，”Ｐｌａｎｔ  Ｊ  ［４３］（１）：１５３−１６３（２００５）参照。したがって、これらの遺伝子由来のプロモーター配列を、本発明の実施形態によるＦＴ導入遺伝子の発現における使用のために提案する。
【０３１９】
この分析によって同定された遺伝子プロモーターの例として、以下のもの：Ｇｌｙｍａ１０ｇ３８７３０（配列番号３３）、Ｇｌｙｍａ０９ｇ２７９５０（配列番号３４）、Ｇｌｙｍａ０６ｇ０５９００（配列番号３５）、及びＧｌｙｍａ１７ｇ３４３８０（配列番号３６）を含むダイズ由来の４つの受容体様キナーゼ（ＲＬＫ）遺伝子が挙げられる。さらなる例として、ジャガイモ由来の受容体様キナーゼ（ＲＬＫ）遺伝子プロモーターＰＧＳＣ０００３ＤＭＰ４０００３２８０２（配列番号３７）及びＰＧＳＣ０００３ＤＭＰ４０００５４０４０（配列番号３８）が挙げられる。これらのＲＬＫ遺伝子は、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ及び他の種由来のＥｒｅｃｔａ及びＥｒｅｃｔａ様遺伝子に構造的及び／または機能的に関連している可能性があり、なぜならそれらはＲＬＫ遺伝子でもあるからである。Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ遺伝子由来の他の栄養期、分裂組織優先型プロモーターとして以下のもの：Ａｔ．ＭＹＢ１７（Ａｔ．ＬＭＩ２；Ａｔ３ｇ６１２５０）（配列番号４１）、キネシン様遺伝子（Ａｔ５ｇ５５５２０）（配列番号４２）、Ａｔ．ＲＥＭ１７（配列番号４３）またはＡｔ．ＲＥＭ１９を含むＡＰ２／Ｂ３様遺伝子、ならびにＥｒｅｃｔａ様１及び２遺伝子Ａｔ．Ｅｒｌ１（配列番号４４）及びＡｔ．Ｅｒｌ２（配列番号４５）が挙げられる。これらのプロモーター及び類似の機能的配列のそれぞれは、ＦＴ遺伝子に作動可能に連結し、少なくとも栄養生長期（複数可）の間、植物の１つ以上の分裂組織（複数可）においてＦＴ遺伝子の異所性発現を引き起こし得る。
【０３２０】
Ａｔ．ＭＹＢ１７（Ａｔ．ＬＭＩ２）遺伝子に関しては、その内容及び開示の全体を参照として本明細書に援用するＰａｓｔｏｒｅ，ＪＬ  ｅｔ  ａｌ．，“ＬＡＴＥ  ＭＥＲＩＳＴＥＭ  ＩＤＥＮＴＩＴＹ  ２  ａｃｔｓ  ｔｏｇｅｔｈｅｒ  ｗｉｔｈ  ＬＥＡＦＹ  ｔｏ  ａｃｔｉｖａｔｅ  ＡＰＥＴＡＬＡ１，”Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ［１３８］：３１８９−３１９８（２０１１）参照。キネシン様遺伝子に関しては、その内容及び開示の全体を参照として本明細書に援用するＦｌｅｕｒｙ，Ｄ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｔｈａｌｉａｎａ  Ｈｏｍｏｌｏｇ  ｏｆ  Ｙｅａｓｔ  ＢＲＥ１  Ｈａｓ  ａ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  Ｅａｒｌｙ  Ｌｅａｆ  ａｎｄ  Ｒｏｏｔ  Ｇｒｏｗｔｈ，”Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ，［１９］（２）：４１７−４３２（２００７）参照。ＲＥＭ１７及びＲＥＭ１９  Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ遺伝子に関しては、その内容及び開示の全体を参照として本明細書に援用するＭａｎｔｅｇａｚｚａ，Ｏ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ＲＥＭ  ｇｅｎｅ  ｆａｍｉｌｙ  ｐｒｅｄｉｃｔｓ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｆｌｏｗｅｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，”Ａｎｎ  Ｂｏｔ  ［１１４］（７）：１５０７−１５１５（２０１４）参照。さらに、Ａｔ．Ｅｒｌ２遺伝子については、その内容及び開示の全体を参照として本明細書に援用する“Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｉｓｓｕｅ：  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｌｉｋｅ  Ｋｉｎａｓｅｓ，”ＪＩＰＢ  ［５５］（１２）：１１８１−１２８６  （２０１３）、及び特に、Ｓｈｐａｋ，Ｅ．，“Ｄｉｖｅｒｓｅ  Ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ＥＲＥＣＴＡ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  Ｐｌａｎｔ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，”ＪＩＰＢ  ［５５］（１２）：１２５１−１２６３（２０１３）参照。
【０３２１】
実施例８：ｐＡｔ．Ｅｒｌ１プロモーターの制御下でのＦｌｏｗｅｒｉｎｇ  ＬｏｃｕｓＴ遺伝子、Ｇｍ．ＦＴ２ａの発現は、ダイズの開花時間及び結節あたりのさやを変化させる
栄養期、分裂組織優先型ｐＡｔ．Ｅｒｌ１プロモーター（配列番号４４）の制御下でＧｍ．ＦＴ２ａを含有する形質転換ベクターを構築し、これを用いてＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換によりダイズを形質転換した。これらの事象から生成したトランスジェニック植物を、それらの表現型について、１４〜１４．５時間の自然昼光期間を用いて温室内で特徴決定した。各ｐＡｔ．Ｅｒｌ１：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ構築物について、温室内で６つの事象を試験した（１事象あたり６植物）。野生型（ＷＴ）対照植物についても、６つの植物を試験し、平均した。１事象あたり１２の複製圃場プロットで４つの事象を圃場試験し、同じ圃場での野生型対照と比較した。これらの植物の表現型の特徴決定のために、以下のマトリックスを収集し、温室内（表１５参照）及び圃場内（表１６参照）で生長させた各事象（及び野生型植物）の平均として表した。形質ごとのすべての事象の平均を示す列をさらに提供する。
表１５．温室で生長させたｐＡｔ．Ｅｒｌ１：Ｇｍ．ＦＴ２ａ及び野生型植物の表現型データ
2019536443.tif 000017
表１６．圃場で生長させたｐＡｔ．Ｅｒｌ１：Ｇｍ．ＦＴ２ａ及び野生型植物の表現型データ
2019536443.tif 000018
【０３２２】
ｐＡｔ．Ｅｒｌ１：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ構築物を発現するトランスジェニックダイズ植物は野生型対照植物より早く開花し、結節あたりのさやの数が増加した（ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターの制御下でＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子を発現する植物と同様に）。実際、ｐＡｔ．Ｅｒｌ１：：Ｇｍ．ＦＴ２ａを発現するダイズ植物は、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａトランスジェニック植物と同様のいくつかの表現型を有し、これには、野生型対照植物に対する、結節あたりのさや数の増加とともに、開花までの日数（ＤＯＦＲ１）の減少、Ｒ７までの日数（ＤＯＲ７）の減少、植物あたりの枝数（ＢＲＰＰ）の減少、植物あたりの節（ＮＤＰＬ）の減少、植物あたりのさや数（ＰＤＰＰ）の減少が含まれる（表１５）。しかしながら、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ植物で観察されたいくつかの表現型、例えば、主茎上のさやの数（ＰＯＤＭＳ）、枝上のさやの数（ＰＯＤＢＲ）、及び１０００個の種子の重量（ＳＷ１０００）は、ｐＡｔ．Ｅｒｌ１：：Ｇｍ．ＦＴ２ａを発現するトランスジェニック植物ではあまり明白ではなかった。２年目の圃場試験での早期の結果もまた、早期開花を示し、同様の生殖形質を示している。推測されるように、これらの形質測定値は、植物あたりのさやについてはＰＤＰＰまたはＰＯＤＰＰ、主茎上のさやについてはＰＤＭＳまたはＰＯＤＭＳ、枝上のさやについてはＰＤＢＲまたはＰＯＤＢＲ、枝上のさやの合計についてはＴＰＢＲなど、異なって省略される場合がある。
【０３２３】
ＧＵＳ染色によって測定された、ダイズにおけるＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  Ｅｒｅｃｔａ様１プロモーター（ｐＡｔ．Ｅｒｌ１）の発現パターンは、上記のダイズにおけるｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａの発現パターンよりも制限されている。ｐＡｔ．Ｅｒｌ１は、栄養腋芽分裂組織において、及び腋生組織由来の早期花芽分裂組織において、ＧＵＳ発現を駆動する。しかしながら、ＧＵＳ染色は、発育中の植物の他の分裂組織と区別することができる任意の段階の茎頂分裂組織において観察されない。ｐＡｔ．Ｅｒｌ１プロモーターの制御下にあるＧＵＳレポーターの発現は、任意の段階の葉組織、茎または根において観察されない（データは示さず）。ｐＡｔ．ＥｒｅｃｔａまたはｐＡｔ．Ｅｒｌ１プロモーターのいずれかの制御下でのＦＴ発現が早期開花及び結節あたりのさやの増加を誘導したと仮定すると、植物の分裂組織（複数可）またはその近傍でのＦＴ導入遺伝子の栄養期発現は、通常、これらの生殖及び収量関連表現型または形質の誘導に十分であり得る。
【０３２４】
実施例９．サプレッションのためのＧｍ．ＦＴ２ａを標的とするｍｉＲＮＡの発現
ＲＮＡサプレッションによる生殖組織または花芽組織における栄養期プロモーターの制御下でのＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子の発現レベルの低下は、ダイズ植物における生殖期間を延長し得ると仮定される。内在性Ｇｍ．ＦＴ２ａのサプレッションがダイズ植物の生殖表現型または形態学的表現型に影響を及ぼすかどうかを試験するために、後期栄養期及び／または生殖期プロモーターｐＡｔ．ＡＰ１プロモーター（配列番号４９）またはｐＳｌ．ＭＡＤＳ−ＲＩＮプロモーター（配列番号７２）のいずれかの制御下で、内在性Ｇｍ．ＦＴ２ａ発現を標的とするｍｉＲＮＡ分子をコードする転写可能なＤＮＡ配列（ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ；配列番号６７）を含む形質転換ベクターを構築し、これを用いてＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換によりダイズ植物を形質転換した。これらの事象から生成されたトランスジェニック植物を、１４〜１４．５時間の昼光の光周期条件下、温室内で特徴決定した。１事象あたり６つの植物を試験し、平均化して、野生型（ＷＴ）対照植物と比較した。温室内のｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ及び野生型植物から収集した平均表現型データを表１７に示す。表１８は、温室内のトランスジェニックｐＭＡＤＳ−ＲＩＮ：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ及び野生型植物から収集し、各事象の平均として、及び事象と野生型植物にわたっての平均として表した表現型観察結果を示す。
表１７．温室で生長させたｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ及び野生型植物の表現型データ
2019536443.tif 000019
【０３２５】
温室条件下でのｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ構築物を発現する植物における開花のタイミング及び開始は、野生型対照植物とほぼ同じであった。ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａまたはｐＭＡＤＳ−ＲＩＮ：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ構築物を発現するトランスジェニック植物は、圃場条件下でも生長させた。ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ構築物の４つの異なる事象を含む６つの植物を試験し、平均化して野生型（ＷＴ）対照植物と比較した。圃場実験の場合、他に示されない限り、測定は収穫時（Ｒ８期）に行った。ＳＤＡＲＲ８は、Ｒ８期における面積あたり（すなわち平方フィートあたり）の種子である。圃場栽培植物から収集した平均表現型データを、ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ構築物については表１８に、及びｐＭＡＤＳ−ＲＩＮ：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ構築物については表２０に示す。
表１８．圃場栽培したｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ及び野生型植物の表現型データ
2019536443.tif 000020
【０３２６】
圃場条件下では、トランスジェニックｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ構築物で形質転換したダイズ植物は、この場合も、野生型対照植物とほぼ同じ開花及び生殖形質を有していたが、トランスジェニックｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ植物は、Ｒ８期での野生型対照植物に比べて、わずかに少ないさや（ＰＤＰＰＲ８、ＰＤＭＳＲ８、ＴＰＢＲ８、さや／結節）を有していた可能性がある。
【０３２７】
実施例１０．ｐＡＰ１プロモーターによって駆動される人工ｍｉＲＮＡによるＧｍ．ＦＴ２ａ発現の改変は、温室条件下での生殖表現型を変化させる
トランスジェニックＧｍ．ＦＴ２ａの初期異所性発現後の後期栄養及び／または生殖組織におけるＧｍ．ＦＴ２ａのサプレッションが、ダイズ植物における生殖期間を延ばし、及び／または早期生長停止に対抗し得ることを示すために、栄養期分裂組織優先型ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーター（配列番号３１）の制御下、ＡｐｘまたはＬｈｃｂ２ターミネーター領域（Ｔ−Ａｐｘ及びＴ−Ｌｈｃｂ２）のいずれかを有するＧｍ．ＦＴ２ａ、ならびにサプレッションのためにＧｍ．ＦＴ２ａを標的とし、ｐＡｔ．ＡＰ１プロモーター（配列番号：４９）の制御下、ＧＡＰＤＨターミネーター領域を有する人工ｍｉＲＮＡをコードする転写可能なＤＮＡ配列（配列番号６７）を含む形質転換ベクター（各構築物をｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａと命名する）を構築し、これを用いてＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換によりダイズを形質転換した。これらの事象から生成されたトランスジェニック植物を、１４〜１４．５時間の昼光の光周期を用いて温室内で特徴決定した。各ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ構築物について、６つの事象を試験し（１事象あたり６植物）、データを平均化した。各構築物についての平均データは、すべての事象にわたっても平均化した。６つの野生型（ＷＴ）対照植物もまた試験し、対照として平均化した。６つの事象について収集した表現型データ、ならびに野生型及び２つの異なるターミネーター領域（Ｔ−Ａｐｘ及びＴ−Ｌｈｃｂ２）を有するｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ植物の平均値を表１９及び表２０に示す。
表１９．温室条件下でのｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ａｐｘ｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ及び野生型植物の表現型データ
2019536443.tif 000021
表２０．温室条件下でのｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｃｂ２｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ及び野生型植物の表現型データ
2019536443.tif 000022
【０３２８】
この温室実験では、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ構築物のいずれかを含むトランスジェニックダイズ植物は、野生型対照植物に比べて、開花開始（ＤＯＦＲ１）が早く、結節あたり（及び主茎あたり）のさや数（さや／結節、ＰＯＤＭＳ）が増加していた。ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａの組み合わせ構築物を有するトランスジェニック植物は、ｍｉＲＮＡサプレッションカセットを含まないｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子のみを有するダイズ植物に比べて、草高及び分枝の増加、ならびに植物あたり（及び主茎あたり）の結節数の増加、及び植物あたり（及び主茎あたり）の結節の増加を有していた（例えば表２参照）。図１２は、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａまたはｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ／ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａのいずれかについてホモ接合性の植物の全体画像を示しており、Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子のさらなるサプレッションが、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子単独で観察される低い草高及び分枝の減少を含む早期生長停止表現型の緩和に有効であることを示している。
【０３２９】
このデータは、Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子の早期異所性投与後の後期栄養及び／または生殖組織におけるＧｍ．ＦＴ２ａのサプレッションが、Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子単独を有する植物で観察される早期生長停止表現型を緩和する一方で、早期開花の誘発及び結節あたりのさや数の増加の維持に有効であることを示している。興味深いことに、これらの植物の結節あたりのさやの数の増加は、生殖期間の明白な増加を伴わずに観察された。
【０３３０】
実施例１１．ｐＡＰ１プロモーターにより駆動される人工ｍｉＲＮＡによるＧｍ．ＦＴ２ａ発現の改変は、圃場条件下での生殖表現型を変化させる
実施例１０に記載のｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ａｐｘ｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ構築物の３つまたは４つの形質転換事象（年に応じて）を２年連続して圃場条件下で栽培及び試験した。各事象及び野生型対照について、表現型データを収集して平均化した（一貫性のために事象を番号付けしている）。表２１及び２２は、これらの植物から収集した表現型データの平均、ならびに３つの事象にわたる平均を示す。
【０３３１】
実施例１０に記載したｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｂｃ２｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ構築物の４つの形質転換事象を、圃場条件下で２年間連続して栽培し、試験した。各事象及び野生型対照について、複数の植物から表現型データを収集し、平均化した。表２３及び２４に、これらの植物から収集した表現型データの平均、ならびに４つの事象にわたる平均を示す。
表２１．圃場栽培したｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ａｐｘ｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ及び野生型植物の表現型データ（１年目）
2019536443.tif 000023
表２２．圃場栽培したｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ａｐｘ｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ及び野生型植物の表現型データ（２年目）
2019536443.tif 000024
表２３．圃場栽培したｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｂｃ２｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ及び野生型植物の表現型データ（１年目）
2019536443.tif 000025
表２４．圃場栽培したｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｂｃ２｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ及び野生型植物の表現型データ（２年目）
2019536443.tif 000026
【０３３２】
ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ構築物のいずれか（いずれかのターミネーターを含む）を有するダイズ植物は、圃場条件下で生長させた場合、野生型対照植物に比べて、より早く開花し（ＤＯＦＲ１）、Ｒ１期とＲ８期の間の生殖期間（日）（ＰＤＲ１Ｒ８）がわずかに延長され、Ｒ８期における結節あたり（及び植物あたり）のさや数（ＰＤＰＰＲ８、さや／結節）が増加していた。しかしながら、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ構築物を有するダイズ植物もまた、野生型対照植物に比べて分枝（ＢＲＰＰＲ８）が減少していた。ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ構築物を有する植物の３年目の圃場試験の早期の結果もまた、早期開花を示しており、このことは同様の生殖形質であることを示している。
【０３３３】
これらの圃場試験の結果は、異なるターミネーターを有するｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ構築物の両方が、圃場条件下で収量形質を高め、早期生長停止表現型を緩和することができることを示しており（例えば、上記実施例３参照）、これは実施例１０で示した温室データと一致する。このデータはさらに、Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子のサプレッションが、Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子単独の発現に比べて、草高、植物あたりの（または主茎あたりの）分枝及び結節数の減少を含む、早期生長停止及び植物アーキテクチャー表現型の軽減または緩和に役立つというモデルを裏付けるものである。
【０３３４】
実施例１２．ｐＳｌ．ＭＡＤＳ５プロモーターによって駆動される人工ｍｉＲＮＡによるＧｍ．ＦＴ２ａ発現の改変は、温室条件下での生殖表現型を変化させる
ｐＡＰ１プロモーターに加えて、他の生殖期プロモーターを用いて、サプレッションのためにＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子を標的とするｍｉＲＮＡ分子を発現させた。一組の実験において、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターの制御下にあるＧｍ．ＦＴ２ａ、及びＧｍ．ＦＴ２ａを標的とする人工ｍｉＲＮＡをコードし、Ｓｏｌａｎｕｍ  ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ  ＭＡＤＳ５プロモーター（ｐＳｌ．ＭＡＤＳ５；配列番号７１）の制御下にある転写可能なＤＮＡ配列を含む形質転換ベクターを構築し、これを用いてＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換によりダイズを形質転換した。これらの事象から生成されたトランスジェニック植物を、それらの温室内での表現型について、１４〜１４．５時間の昼光の光周期を用いて温室内で特徴決定した。ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｃｂ２｜ｐＳｌ．ＭＡＤＳ５：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ構築物については、６つの事象を試験した（１事象あたり６植物）。野生型（ＷＴ）対照植物についても６つの植物を試験し、平均化した。
【０３３５】
表２５は、各事象及び野生型植物についての表現型データの平均、ならびに試験した全事象にわたる各形質の平均を示す。（“−−”は未収集データを意味する。）
表２５．温室条件下でのｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｃｂ２｜ｐＳｌ．ＭＡＤＳ５：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ及び野生型植物の表現型データ
2019536443.tif 000027
【０３３６】
前述の実施例と同様に、生殖組織において発現させた人工ｍｉＲＮＡを用いてＧｍ．ＦＴ２ａの異所性発現を制限することにより、野生型対照植物に比べてより早く開花する（ＤＯＦＲ１）ダイズ植物が得られた。しかしながら、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｃｂ２｜ｐＳｌ．ＭＡＤＳ５：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ構築物を含むトランスジェニックダイズ植物は、野生型対照植物に比べて、植物あたりのさや（ＰＤＰＰ）の減少、植物あたりの結節（ＮＤＰＬ）の減少、枝数（ＢＲＰＰ）の減少、Ｒ８期における植物あたりの種子（ＳＤＰＰ８）の減少、Ｒ１期とＲ７期の間の生殖期間（ＰＤＲ１Ｒ７）の減少を有していたが、これらのトランスジェニック植物は、野生型対照植物に比べて、結節あたりの（及び主茎あたりの）さや数（さや／結節、ＰＯＤＭＳ）をより多く有し、また、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ発現単独に比べて改善された植物アーキテクチャー表現型を有していた（例えば表２参照）。
【０３３７】
このデータは、Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子単独を用いる場合の早期生長停止表現型の軽減または緩和にＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子のサプレッションが役立つというモデルをさらに裏付けるものであるが、ｐＭＡＤＳ５プロモーターを用いたｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａの発現は、早期生長停止表現型の緩和においてｐＡＰ１プロモーターほど効果的ではない可能性がある。
【０３３８】
実施例１３．ｐＳｌ．ＭＡＤＳ５プロモーターにより駆動される人工ｍｉＲＮＡによるＧｍ．ＦＴ２ａ発現の改変は、圃場における生殖表現型を変化させる
実施例１２に記載したｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ｜ｐＳｌ．ＭＡＤＳ５：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ構築物の３つまたは４つの事象を含むトランスジェニック植物を、圃場条件下で２年間連続して栽培し、試験した。各事象及び野生型対照について６つの植物でデータを収集した（一貫性のために事象を番号付けしている）。表２６及び２７は、各事象及び野生型対照から収集した表現型データの平均、ならびに全事象にわたる各形質の平均を示す。
表２６．圃場栽培したｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｃｂ２｜ｐＳｌ．ＭＡＤＳ５：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ及び野生型植物の表現型データ（１年目）
2019536443.tif 000028
表２７．圃場栽培したｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｃｂ２｜ｐＳｌＬｅ．ＭＡＤＳ５：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ及び野生型植物の表現型データ（２年目）
2019536443.tif 000029
【０３３９】
ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ｜ｐＳｌ．ＭＡＤＳ５：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ構築物を有するダイズ植物は、圃場条件下で、野生型対照植物に比べて、より早く開花し（ＤＯＦＲ１）、Ｒ１期とＲ８期の間の生殖期間（日）（ＰＤＲ１Ｒ８）がわずかに延長され、Ｒ８期における結節あたりのさや数（さや／結節）が増加していた。しかしながら、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ｜ｐＳｌ．ＭＡＤＳ５：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ構築物を有するダイズ植物もまた、野生型対照植物に比べて分枝（ＢＲＰＰＲ８）が減少していた。
【０３４０】
実施例１４．ｐＳｌ．ＮＯＤプロモーターによって駆動される人工ｍｉＲＮＡによるＧｍ．ＦＴ２ａ発現の改変は、温室条件下での生殖表現型を変化させる
ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａの発現を制御する第３のプロモーター（ｐＳｌ．ＮＯＤ）も温室条件下で試験した。ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーター（配列番号３１）の制御下にあるＧｍ．ＦＴ２ａ、及びＳｏｌａｎｕｍ  ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ  ＮＯＤプロモーター（ｐＳｌ．ＮＯＤ；配列番号７０）の制御下にあるｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａをコードする転写可能なＤＮＡ配列（配列番号６７）を含む形質転換ベクターを構築し、これを用いてＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換によりダイズを形質転換した。このｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ｜ｐＳｌ．ＮＯＤ：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ構築物の６つの事象を含むトランスジェニック植物（１事象あたり６つの植物）を、１４〜１４．５時間の昼光の光周期を用いて温室内で生長させた。各事象及び野生型（ＷＴ）対照について６つの植物からデータを収集した。表２８は、各事象及び野生型対照から収集した表現型データの平均、ならびに全事象にわたる各形質の平均を示す。
表２８．温室栽培したｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ｜ｐＳｌ．ＮＯＤ：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ及び野生型植物の表現型データ
2019536443.tif 000030
【０３４１】
ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ｜ｐＳｌ．ＮＯＤ：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ構築物を含むダイズ植物は、野生型対照植物に比べてより早く開花し（ＤＯＦＲ１）、野生型対照植物に比べて温室内で、生殖期間（ＰＤＲ１Ｒ７）がより短く、植物あたりの枝（ＢＲＰＰ）がより少なく、植物あたりの結節（ＮＤＰＬ）がより少なく、植物あたりのさや（ＰＤＰＰ）がより少なかった。しかしながら、これらのトランスジェニック植物は、野生型植物に比べて、結節あたり（及び主茎あたり）のさや（さや／結節、ＰＯＤＭＳ）をより多数有しており、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ発現単独に比べて改善された植物アーキテクチャー表現型を有していた（例えば、表２参照）。
【０３４２】
このデータは、Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子のサプレッションが早期生長停止表現型の軽減または緩和に役立つというモデルをさらに裏付けるものであるが、これらのトランスジェニック植物が野生型対照植物に比べて結節あたりの（及び主茎あたりの）さや（さや／結節、ＰＯＤＭＳ）をより多数有していたという事実にもかかわらず、ｐＳｌ．ＮＯＤプロモーター下でのｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａの発現は、早期生長停止表現型の緩和においてｐＡＰ１プロモーターほど効果的ではない可能性がある。
【０３４３】
実施例１５．異種ｍｉＲ１７２標的部位を用いた異所性Ｇｍ．ＦＴ２ａ発現の改変は温室条件下での生殖表現型を変化させる
Ｇｍ．ＦＴ２ａをサプレッションするための代替的アプローチとして、Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子及びダイズの内在性ｍｉＲＮＡによって認識される遺伝子改変されたｍｉＲＮＡ標的もしくは結合部位（またはセンサー）を含み、Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子の異所性発現を減弱及び／または改良するように機能する構築物を作製した。ＡｐｘまたはＬｈｃｂ２ターミネーター領域（Ｔ−ＡｐｘまたはＴ−Ｌｈｃｂ２）のいずれかを有するｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーター（配列番号３１）の制御下にあるＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子を含み、さらにトランスジェニックＧｍ．ＦＴ２ａ  ｍＲＮＡ中のｍｉＲ１７２  ｍｉＲＮＡ標的部位（配列番号９９）をコードする配列（配列番号９８）を含む形質転換ベクターを構築し、これを用いてＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換によりダイズを形質転換した。これらの事象から生成されたトランスジェニック植物を、それらの表現型について、１４〜１４．５時間の昼光の光周期を用いて温室内で特徴決定した。ｍｉＲ１７２結合部位を有する２つのｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ構築物のそれぞれについて、６つの事象を試験した（１事象あたり６植物）。野生型（ＷＴ）対照植物についても、６つの植物を試験し、平均化した。表２９及び３０は、２つの構築物のそれぞれについて各事象及び野生型対照から収集した表現型データの平均、ならびに試験した全事象にわたる各形質の平均を示す。
表２９．ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ａｐｘ／ｍｉＲ１７２標的部位及び野生型植物の表現型データ
2019536443.tif 000031
表３０．ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｃｂ２／ｍｉＲ１７２標的部位及び野生型植物の表現型データ
2019536443.tif 000032
【０３４４】
２つのｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ／ｍｉＲ１７２標的部位構築物のいずれかを含むダイズ植物は、野生型対照植物に比べて、より早く開花した（ＤＯＦＲ１）が、植物あたりの分枝（ＢＲＰＰ）が減少し、植物あたりのさや及び結節（ＰＤＰＰ、ＮＤＰＬ）が少なかった。しかしながら、これらのトランスジェニック植物は、野生型対照植物に比べて結節あたりの（及び主茎あたりの）さや（さや／結節、ＰＯＤＭＳ）をより多数有しており、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ発現単独に比べて改善された植物アーキテクチャー表現型を有していた（表２参照）。
【０３４５】
このデータは、内在性ｍｉＲ１７２の標的部位を介したＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子のサプレッションが、Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子の発現で観察される早期生長停止の軽減または緩和に有効であるという仮説を裏付けるものであるが、ｍｉＲ１７２標的部位を含むＧｍ．ＦＴ２ａトランスジェニック植物が野生型対照植物に比べて結節あたりの（及び主茎あたりの）さや（さや／結節、ＰＯＤＭＳ）をより多数有し、Ｇｍ．ＦＴ２ａ発現単独に比べて植物アーキテクチャー表現型が改善されたという事実にもかかわらず、改変されたｍｉＲ１７２標的部位を介したＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子のサプレッションは、早期生長停止表現型の緩和において、ｐＡＰ１プロモーターなどの後期栄養期及び／または生殖期プロモーターを用いてＧｍ．ＦＴ２ａをサプレッションするための人工ｍｉＲＮＡの発現ほど効果的ではない可能性がある（少なくともいくつかの場合では）。図１３は、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａまたはｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ／ｍｉＲ１７２標的部位のいずれかについてホモ接合性の植物の全画像を示しており、内在性ｍｉＲ１７２標的部位を介したさらなるサプレッションが、低い草高及び分枝の減少を含む、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子単独で観察される早期生長停止表現型の緩和に有効であることを示している。
【０３４６】
実施例１６．ｍｉＲ１７２標的部位を用いた異所性Ｇｍ．ＦＴ２ａ発現の改変は圃場条件下での生殖表現型を変化させる
実施例１５に記載のｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ａｐｘ／ｍｉＲ１７２標的部位構築物の４つの事象を含むトランスジェニック植物を、圃場条件下で生長させ、試験した。表２９の事象１〜４は、表３１の事象１〜４にそれぞれ対応する。各事象及び野生型対照について６つの植物でデータを収集した。表３１は、各事象及び野生型対照から収集した表現型データの平均、ならびに全事象にわたる各形質の平均を示す。
表３１．圃場栽培したｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ａｐｘ／ｍｉＲ１７２標的部位及び野生型植物の表現型データ
2019536443.tif 000033
【０３４７】
温室データと同様に、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ａｐｘ／ｍｉＲ１７２標的部位構築物を有するダイズ植物は、野生型対照植物に比べて、圃場条件下で、より早く開花し（ＤＯＦＲ１）、Ｒ８期における結節あたりの（及び主茎あたりの）さや（ＰＤＰＰＲ８、さや／結節）数が増加していた。しかしながら、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ａｐｘ／ｍｉＲ１７２標的部位構築物を有するこれらのダイズ植物はまた、野生型対照植物に比べて、分枝（ＢＲＰＰＲ８）が減少し、植物あたりのさや及び結節（ＰＤＰＰＲ８、ＮＤＰＬＲ８）が減少していた。
【０３４８】
実施例１７．短縮型ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーター及び異種ｍｉＲ１７２標的部位を用いた異所性Ｇｍ．ＦＴ２ａ発現の改変は温室条件下での生殖表現型を変化させる
短縮型ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターを用いてＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子の発現レベルを減弱させ、場合により、ｍｉＲ１７２  ｍｉＲＮＡ標的部位とカップリングさせてＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子の異所性発現をさらに減弱させ、及び／または改良した。Ｌｈｃｂ２ターミネーター領域（Ｔ−Ｌｈｃｂ２）を有する短縮型ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーター（配列番号３２）の制御下のＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子を含み、さらにｍｉＲ１７２標的部位（配列番号９９）をコードする配列（配列番号９８）を含む形質転換ベクターを構築し、これを用いてＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換によりダイズ植物を形質転換した。これらの事象から生成されたトランスジェニック植物を、それらの表現型について、１４〜１４．５時間の昼光の光周期を用いて温室内で特徴決定した。ｍｉＲ１７２標的部位を有するｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ＿ｔｒｕｎｃａｔｅｄ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ構築物について、６つの事象を試験した（１事象あたり６植物）。野生型（ＷＴ）対照植物についても、６つの植物を試験し、平均化した。表３２は、各事象及び野生型対照から収集した表現型データの平均、ならびに試験した事象にわたる各形質についての平均を示す。
表３２．温室条件下でのｐＥｒｅｃｔａ＿ｔｒｕｎｃａｔｅｄ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｂｃ２／ｍｉＲ１７２標的部位及び野生型植物の表現型データ
2019536443.tif 000034
【０３４９】
ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ＿ｔｒｕｎｃａｔｅｄ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ／ｍｉＲ１７２標的部位構築物を含むダイズ植物は、野生型対照植物に比べて、より早く開花した（ＤＯＦＲ１）が、分枝（ＢＲＰＰ）がわずかに減少し、植物あたりの結節（ＮＤＰＬ）が減少していた。しかしながら、これらのトランスジェニック植物は、野生型対照植物に比べて結節あたりの（及び主茎あたりの）さや（さや／結節、ＰＯＤＭＳ）をより多数有し、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ発現単独に比べて改善された植物アーキテクチャー表現型を有していた（例えば、表２参照）。
【０３５０】
このデータは、内在性ｍｉＲ１７２の標的部位を有するＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子のサプレッションが、Ｇｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子の発現で観察される早期生長停止の軽減または緩和に有効であり、及び／または短縮型ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターを有するＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子の発現が、Ｇｍ．ＦＴ２ａ発現単独での早期生長停止表現型をさらに緩和し得るという仮説をさらに裏付けるものである。
【０３５１】
実施例１８．短縮型ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーター及びｍｉＲ１７２標的部位を用いた異所性Ｇｍ．ＦＴ２ａ発現の改変は圃場での生殖表現型を変化させる
実施例１８に記載したｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ＿ｔｒｕｎｃａｔｅｄ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｂｃ２／ｍｉＲ１７２標的部位構築物の３つの事象についてのトランスジェニック植物を、圃場条件下で生長させ、試験した。表３２の事象１、２、及び５は、それぞれ表３３の事象１〜３に対応する。各事象及び野生型対照について６つの植物でデータを収集した。表３３は、各事象及び野生型対照についての表現型データの平均、ならびに全事象にわたる各形質の平均を示す。
表３３．圃場におけるｐＥｒｅｃｔａ＿ｔｒｕｎｃａｔｅｄ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｂｃ２／ｍｉＲ１７２標的部位及び野生型植物の表現型データ
2019536443.tif 000035
【０３５２】
温室データと同様に、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ＿ｔｒｕｎｃａｔｅｄ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ／ｍｉＲ１７２標的部位構築物を有するダイズ植物は、野生型対照植物に比べて、圃場条件下で、より早く開花し（ＤＯＦＲ１）、Ｒ８期において結節あたり（及び主茎あたり）のさや数（ＰＤＭＳＲ８、さや／結節）が増加していた。しかしながら、ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ＿ｔｒｕｎｃａｔｅｄ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ／ｍｉＲ１７２標的部位構築物を有するダイズ植物はまた、野生型対照植物に比べて、分枝（ＢＲＰＰＲ８）の減少及び植物あたりの結節（ＮＤＰＬＲ８）の減少も有していた。
【０３５３】
実施例１９．人工ｍｉＲＮＡによるダイズにおける異所性Ｇｍ．ＦＴ２ａならびに天然Ｇｍ．ＦＴ２ａ、Ｇｍ．ＦＴ５ａ及びＧｍ．ＦＴ５ｂの発現の改変は生殖表現型を変化させる
形質転換ベクターを構築し、これを用いてＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換によりダイズ植物を形質転換したが、そのベクターは、栄養期分裂組織優先型ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーター（配列番号３１）の制御下で上記のようなＧｍ．ＦＴ２ａ導入遺伝子を有し、それと共に、Ｌｈｃｂ２ターミネーター領域（Ｔ−Ｌｈｃｂ２）を、ならびにサプレッションのためにＧｍ．ＦＴ２ａ（異所性及び内在性）だけでなく内在性Ｇｍ．ＦＴ５ａ及びＧｍ．ＦＴ５ｂ遺伝子も標的とする人工ｍｉＲＮＡ（配列番号１０２）をコードする転写可能なＤＮＡ配列を有し、そのｍｉＲＮＡをコードする転写可能なＤＮＡ配列は、ｐＡｔ．ＡＰ１プロモーター（配列番号４９）の制御下にあり、それと共に、ＧＡＰＤＨターミネーター領域を有する。これらの事象から生成されたトランスジェニック植物を、１４〜１４．５時間の昼光の光周期条件下、温室内で特徴決定した。各事象及び野生型対照について６つの植物でデータを収集した。表３４は、各事象及び野生型対照から収集した表現型データの平均、ならびに全事象にわたる各形質の平均を示す。
表３４．温室で生育したｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｂｃ２｜ｐＡＰ１：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ／ＦＴ５ａ／ＦＴ５ｂ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ及び野生型植物の表現型データ
2019536443.tif 000036
【０３５４】
Ｒ８期におけるＰＤＮＤＢＲＲ８（枝上の結節あたりのさや）及びＰＤＮＤＭＳＲ８（主茎上の結節あたりのさや）、ＰＨＴＲ８（Ｒ８期におけるミリメートルでの草高）、ＳＤＰＤＲ８（Ｒ８期におけるさやあたりの種子）、及びＳＮＵＭ（植物あたりの種子数）を含む、いくつかの追加の形質測定値を表３４に示す。Ｇｍ．ＦＴ２ａ、Ｇｍ．ＦＴ５ａ、及びＧｍ．ＦＴ５ｂの複合サプレッションとともにｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａカセットを発現するダイズ植物は、野生型対照植物に比べて、より早く開花し（ＤＯＦＲ１）、結節あたりのさや数が有意に増加していた（及び主茎上のさやが増加していた）が、分枝は減少していた。
【０３５５】
実施例２０．ｐＡＰ１プロモーターの制御下での異所性Ｇｍ．ＦＴ２ａの発現はダイズの開花時間及び結節あたりのさやを変化させる
ｐＡｔ．ＡＰ１プロモーターの制御下にあり、Ｌｈｃｂ２ターミネーター領域を有するＧｍ．ＦＴ２ａを含む形質転換ベクターを構築し、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換によりダイズを形質転換した。これらの事象から生成されたトランスジェニック植物を、１４〜１４．５時間の昼光の光周期を用いて温室内で特徴決定した。各事象及び野生型対照について６つの植物でデータを収集した。表３５は、各事象及び野生型対照から収集した表現型データの平均、ならびに全事象にわたる各形質の平均を示す。
表３５．温室内でのｐＡｔ．ＡＰ１：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｂｃ２及び野生型植物の表現型データ
2019536443.tif 000037
【０３５６】
ｐＡｔ．ＡＰ１：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｂｃ２カセットを発現するダイズ植物は、野生型対照植物に比べて、より早く開花し（ＤＯＦＲ１）、結節あたりのさやの数が有意に増加していた（及び主茎のさやが増加していた）が、分枝は減少していた。この構築物を用いた早期の圃場試験結果もまた、早期開花を示しており、したがって圃場条件下で生長させた植物において同様の生殖形質が観察されるであろうことを示している。
【０３５７】
実施例２１．ダイズにおけるｐＳｌ．Ｎｏｄプロモーターの制御下での異所性Ｇｍ．ＦＴ２ａの発現
ｐＳｌ．Ｎｏｄプロモーターの制御下にあり、Ｌｈｃｂ２ターミネーター領域を有するＧｍ．ＦＴ２ａを含む形質転換ベクターを構築し、これを用いてＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換によりダイズを形質転換した。これらの事象から生成されたトランスジェニック植物を、１４〜１４．５時間の昼光の光周期を用いて温室内で特徴決定した。各事象及び野生型対照について６つの植物でデータを収集した。表３６は、各事象及び野生型対照から収集した表現型データの平均、ならびに全事象にわたる各形質の平均を示す。
表３６．温室内でのｐＳｌ．Ｎｏｄ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｂｃ２及び野生型植物の表現型データ
2019536443.tif 000038
【０３５８】
これらの実験において、ｐＳｌ．Ｎｏｄ：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ｌｈｂｃ２植物とＷＴ植物との間に有意な変化は観察されなかった。この構築物を用いた早期の圃場試験結果はさらに、開花の開始に変化がないことを示している。
【０３５９】
実施例２２．ダイズにおいてｐＳｌ．ＭＡＤＳ−ＲＩＮプロモーターにより駆動される人工ｍｉＲＮＡを用いたｐＡｔ．Ｅｒｌ１プロモーターの制御下でのＧｍ．ＦＴ２ａの改変
トランスジェニックＧｍ．ＦＴ２ａの初期異所性発現後の後期栄養及び／または生殖組織におけるＧｍ．ＦＴ２ａのサプレッションが、ダイズ植物における生殖期間を延長し得るという仮説を検証するために、栄養期分裂組織優先型ｐＡｔ．Ｅｒｌ１プロモーター（配列番号４４）の制御下にあり、ＧＡＰＤＨターミネーター領域（Ｔ−ＧＡＰＤＨ）を有するＧｍ．ＦＴ２ａを含む形質転換ベクター、及びサプレッションのためにＧｍ．ＦＴ２ａを標的とする人工ｍｉＲＮＡ（配列番号６７）をコードし、ｐＳｌ．ＭＡＤＳ−ＲＩＮプロモーター（配列番号７２）の制御下にあり、Ｔ−Ａｐｘターミネーター領域を有する転写可能なＤＮＡ配列を構築し、これを用いてＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換によりダイズを形質転換した。これらの事象から生成されたトランスジェニック植物を、１４〜１４．５時間の昼光の光周期を用いて温室内で特徴決定した。各事象及び野生型対照について６つの植物でデータを収集した。表３７は、各事象及び野生型対照から収集した表現型データの平均、ならびに全事象にわたる各形質の平均を示す。
表３７．温室栽培したｐＡｔ．Ｅｒｌ１：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ｜ｐＳｌ．ＭＡＤＳ−ＲＩＮ：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａ：：Ｔ−Ａｐｘ及び野生型植物の表現型データ
2019536443.tif 000039
【０３６０】
ｐＡｔ．Ｅｒｌ１：：Ｇｍ．ＦＴ２ａ：：Ｔ−ＧＡＰＤＨ｜ｐＳｌ．ＭＡＳＳ−ＲＩＮ：：ｍｉＲＮＡ−ＦＴ２ａカセットを発現するダイズ植物は、野生型対照植物に比べて、わずかに早く開花し（ＤＯＦＲ１）、結節あたりのさや数がわずかに増加し（及び主茎上のさやがわずかに増加し）、分枝が中程度に減少していた。この構築物を用いた早期の圃場試験結果もまた、中程度に早い開花を示しており、これは圃場条件下で生長させた植物において、生殖形質における同様の中程度の変化がこの構築物を用いて観察されることを示している。
【０３６１】
実施例２３．ｐＡｔ．Ｅｒｌ１プロモーター及びｍｉＲ１５６センサーによる異所性Ｇｍ．ＦＴ２ａ発現の改変は開花時期を変化させる
栄養期分裂組織優先型ｐＡｔ．Ｅｒｌ１プロモーター（配列番号４４）の制御下にあり、ｍｉＲ１５６標的部位（配列番号１０６）及びＧＡＰＤＨターミネーター領域（Ｔ−ＧＡＰＤＨ）を有するＧｍ．ＦＴ２ａを含む形質転換ベクターを構築し、これを用いてＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換によりダイズを形質転換した。これらの事象から生成されたトランスジェニック植物を圃場で試験した。各事象及び野生型対照について６つの植物でデータを収集した。この構築物による早期の圃場試験結果は早期開花を示しており、これは圃場または温室で生長させる植物において、結節あたりのさやの増加を含む生殖形質の中程度の変化が、この構築物を用いて観察され得ることを示している。
【０３６２】
実施例２４．短縮型ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターを用いた異所性Ｇｍ．ＦＴ２ａ発現の改変は開花時期を変化させる
より短い短縮型ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーター（配列番号４８）の制御下にあり、Ｌｈｃｂ２ターミネーター領域（Ｔ−Ｌｈｃｂ２）を有するＧｍ．ＦＴ２ａを含む形質転換ベクターを構築し、これを用いてＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを介した形質転換によりダイズを形質転換した。これらの事象から生成されたトランスジェニック植物を圃場で試験した。各事象及び野生型対照について６つの植物でデータを収集した。この構築物を用いた早期の圃場試験結果はわずかに早い開花の開始を示しており、これは、圃場または温室で生長させる植物において、結節あたりのさやのわずかな増加を含む、生殖形質のわずかなまたは中程度の変化がこの構築物を用いて観察され得ることを示している。したがって、このより最小化された短縮型ｐＡｔ．Ｅｒｅｃｔａプロモーターを用いて、より弱毒化された生殖表現型及び早期生長停止効果の緩和を達成し得る（実施例３及び１７を比較されたい）。
【０３６３】
本開示を詳細に説明してきたが、本明細書及び添付の特許請求の範囲に記載の本開示の精神及び範囲から逸脱することなく、修正、改変、及び均等な実施形態が可能であることは明らかであろう。さらに、本開示における全ての実施例は、非限定的な例として提供されることを理解されたい。
【図１Ａ】
2019536443.tif 000040
【図１Ｂ】
2019536443.tif 000041
【図１Ｃ−１】
2019536443.tif 000042
【図１Ｃ−２】
2019536443.tif 000043
【図２】
2019536443.tif 000044
【図３−１】
2019536443.tif 000045
【図３−２】
2019536443.tif 000046
【図３−３】
2019536443.tif 000047
【図４−１】
2019536443.tif 000048
【図４−２】
2019536443.tif 000049
【図４−３】
2019536443.tif 000050
【図５】
2019536443.tif 000051
【図６】
2019536443.tif 000052
【図７】
2019536443.tif 000053
【図８】
2019536443.tif 000054
【図９】
2019536443.tif 000055
【図１０】
2019536443.tif 000056
【図１１】
2019536443.tif 000057
【図１２】
2019536443.tif 000058
【図１３】
2019536443.tif 000059
【配列表】
2019536443000001.app
【国際調査報告】
2019536443.tif 000060
2019536443.tif 000061
2019536443.tif 000062
2019536443.tif 000063
2019536443.tif 000064
2019536443.tif 000065