(57)【要約】  本発明は、哺乳動物の関節部状態を処置するために使用される組成物の効力を判定するための方法を提供する。本方法は、運動前及び運動後の哺乳動物における1つ又は複数の軟骨破壊バイオマーカーのレベルの変化を測定する工程、次いで、関節部状態を処置するために使用される組成物を哺乳動物に投与する工程、並びに運動前及び運動後の哺乳動物における1つ又は複数の軟骨破壊バイオマーカーのレベルの変化を測定する工程を含む。
2019517007.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の関節部状態を処置するために使用される組成物の効力を判定するための方法であって、
i.運動前及び運動後の前記哺乳動物における1つ又は複数の軟骨破壊バイオマーカーのレベルの変化を測定する工程、
ii.続いて、関節部状態を処置するために使用される組成物を前記哺乳動物に投与する工程、並びに
iii.続いて、運動前及び運動後の前記哺乳動物における1つ又は複数の軟骨破壊バイオマーカーのレベルの変化を測定する工程
を含み、
工程(i)における運動後の軟骨破壊バイオマーカーのレベルと比較した工程(iii)における運動後の前記バイオマーカーのレベルの変化の減少は、前記組成物が、前記哺乳動物の関節部状態を処置するために有効であることを指し示している、方法。
【請求項２】
哺乳動物の関節部状態を処置するために使用される組成物の効力を判定するための方法であって、
i.関節部状態を処置するために使用される組成物を、2つ以上の哺乳動物の群のうちの1つの群を除いたすべてに投与する工程、並びに
ii. 続いて、運動前及び運動後の哺乳動物の前記群における1つ又は複数の軟骨破壊バイオマーカーのレベルの変化を測定する工程
を含み、
工程(i)において組成物が投与されなかった群に関する工程(ii)における運動後の軟骨破壊バイオマーカーのレベルの変化と比較した、工程(i)において組成物が投与された1つ又は複数の群に関する工程(ii)における運動後の前記バイオマーカーのレベルの変化の減少は、前記組成物が、前記哺乳動物の関節部状態を処置するために有効であることを指し示している、方法。
【請求項３】
1つ又は複数の軟骨破壊バイオマーカーが、I型コラーゲンのc末端架橋テロペプチド(CTX-I)、II型コラーゲンのc末端架橋テロペプチド(CTX-II)、I型コラーゲンのN末端架橋テロペプチド(NTX-I)、軟骨オリゴマー基質タンパク質(COMP)、グリコサミノグリカン、II型コラーゲンネオエピトープ(TIINE)、コラーゲンII型切断産物(C2C)、コラーゲンII型特異的ネオエピトープ(C2M)、II型コラーゲンの9-アミノ酸ペプチド及びそのニトロ化形態(Coll 2-1及びColl 2-1-NO2)、フィブリン3ペプチド(Fib3-1及びFib3-2)、フォリスタチン様タンパク質1(FSTL-1)、軟骨糖タンパク質39(YKL-40)、I型及びII型コラーゲン切断ネオエピトープ(C1及びC2)、ピリジノリン(PYR)、グルコシル-ガラクトシル-ピリジノリン(Glc-Gal-PYR)並びにII型コラーゲンのらせん形ペプチド(HELIX-II)からなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
【請求項４】
軟骨破壊バイオマーカーが、前記哺乳動物の滑液、全血、血清又は尿から得られる、請求項1に記載の方法。
【請求項５】
関節部が、脊椎、肩、肘、手首、指、股関節、膝、足首及び足趾からなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
【請求項６】
運動が、関節部に対して衝撃の小さい適度な強度のものである、請求項1に記載の方法。
【請求項７】
運動が、歩行、ローラースケート、水泳、サイクリング、ヨガ、漕艇、アクアビクス、階段上り及びウェイトリフティングからなる群から選択される、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
運動が、数週間にわたって1日当たり短時間の間実施される、請求項1に記載の方法。
【請求項９】
哺乳動物が、関節部疾患を患っている、請求項1に記載の方法。
【請求項１０】
関節部疾患が、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、若年性関節炎、強直性脊椎炎、痛風、痛風性関節炎、腱炎、滑膜炎、シェーグレン症候群、敗血性関節炎又は全身性紅斑性狼瘡からなる群から選択される、請求項9に記載の方法。
【請求項１１】
哺乳動物が、罹患前であり、又は完全に無症候性であるが、内在する有害な関節部の構造的変化を有する、請求項1に記載の方法。
【請求項１２】
哺乳動物が、肥満の若しくは閉経した女性又はこれらの組合せである、請求項11に記載の方法。
【請求項１３】
哺乳動物が健康であり、いかなる関節部疾患の症状も経験しておらず、いかなる内在する有害な関節部の構造的変化も有さない、請求項1に記載の方法。
【請求項１４】
哺乳動物が、肥満の若しくは閉経した女性又はこれらの組合せである、請求項13に記載の方法。
【請求項１５】
組成物が、軟骨保護剤である、請求項1に記載の方法。
【請求項１６】
軟骨保護剤が、グルコサミン、グリコサミノグリカン、コンドロインチンスルフェート、メチルスルホニルメタン(MSM)、S-アデノシルメチオニン(SAMe)、卵殻膜若しくは卵殻膜加水分解物、オメガ-3若しくはオメガ-6多価不飽和脂肪酸、ボスウェリア種若しくはボスウェリア抽出物、ウコン又はウコン抽出物、クルクミン若しくはクルクミノイド、シロヤナギ樹皮若しくはシロヤナギ樹皮抽出物、タンパク質分解酵素、コラーゲン若しくはコラーゲン加水分解物、松樹皮抽出物、セチル化脂肪酸、植物抽出物、ビタミン若しくはビタミン前駆物質、鉱物又はこれらの組合せからなる群から選択される、請求項15に記載の方法。
【請求項１７】
組成物が、関節に関連する症候に影響し、又は影響することが意図されている、請求項1に記載の方法。
【請求項１８】
関節に関連する症候が、疼痛、熱傷、うずくような痛み、圧痛、不快感、硬直、腫れ、局所的な発熱若しくは温かさ、柔軟さのなさ、可動域の制限若しくは可動域の減少、軋音、機能の部分的な喪失、質量を支える能力の喪失若しくは弱さ、又はこれらの組合せからなる群から選択される、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
関節に関連する症候が、運動の最中若しくは直後、若しくは運動後ある程度の時間の期間、又はこれらの組合せにおいて評価される、請求項17に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、健康な又は罹患した個体における関節部治療薬を評価するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
大衆における最上位の2種の関節部疾患の世界的有病率に関する世界保健機関による見積もりによれば、60歳超の成人における変形性関節症(OA)の発生が、男性の9.6%及び女性の18.0%(合算するとおよそ8千4百万人)であり、25歳以上の成人における関節リウマチ(RA)の発生が1%(およそ4200万人)である。これらの発生率は、世界人口が加齢するにつれてほぼ指数関数的に増大することが予想されている。
【０００３】
OAとRAは両方とも、関節部が炎症した状態になり、この炎症した状態が、通常ならば関節を緩衝するであろう軟骨の破壊につながるという同じ基本的な疾患の病理を共有する。炎症及び後続の軟骨損耗は関節硬直及び疼痛につながるが、この時点において、人々は、これらの症状を処置するための薬学的介入を探求している。この段階において、患者はおそらくは、長年にわたって、全期間にわたって軟骨の破壊が無症候で起きている状態で関節炎症を有している。これにより、状態は処置が格段により困難になる。関節炎の進行を停止させ得る(即ち、疾患修飾性であり得る)薬物の欠乏は、関節炎がより重症になったときに診断されるという事実と相まって、OA及びRAは、世界的な医療制度にとっての多大な負担になっている。あまりに多くの人々がこれらの消耗性疾患を患っているため、関節治療薬が現在明らかに必要とされており、将来の必要性も大幅に増すことになる。
【０００４】
現在、承認された疾患修飾性変形性関節症薬(DMOAD)は存在せず、抗体等のほんの数えるほどの疾患修飾性抗リウマチ薬(DMARD)のみが承認されてはいるが、抗体は重大な副作用を伴い、一部の副作用は生死に関わるものである可能性さえある。新たな関節治療薬を評価する能力は、新たな分子要素の承認に関して、又は既存の薬物の新たな提示のために最重要である。
【０００５】
疾患のステータスに関する様々な指標(バイオマーカー)が、関節炎の進行及び/又は予後をより良く理解するため、並びに治療介入の推移をより良く誘導するために評価されてきた。研究者は、関節の免疫細胞パターン、血清学的パラメータ(例えば、コレステロール及びトリグリセリド)及び酸化的ストレスのマーカー(例えば、マロンジアルデヒド及びC反応性タンパク質(CRP)、滑液サイトカインレベル(例えば、TNF-α、IL-Ιβ、IL-6等)並びに滑液中の軟骨成分(例えば、コンドロインチンスルフェート、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸等)を考察してきた。これらのバイオマーカーの多くには、試料(例えば、滑液)の入手が困難になる特異性の欠乏(例えば、コレステロール)による、いくつかの欠点がつきまとう。関節炎を評価するために選択すべきバイオマーカーの多血症のため、National Institutes of Health/National Institute of Arthritis, Musculoskeletal, and Skin Disease (NIH/NIAMS)から資金提供を受けたOsteoarthritis Biomarkers Networkは、この領域における研究に関する情報交換のための一般的なフォーマットを提供するためのバイオマーカーの分類スキームを提案した。このスキームはBIPEDと呼ばれ、BIPEDは、Burden of disease、Investigative、Prognostic、Efficacy of intervention及びDiagnosticの頭文字である。これらの特徴は、関節炎の診断及び処置における臨床的な有用性に関してバイオマーカーをランク付けするために役立つ。これらの判断基準に基づいて、軟骨代謝(即ち、合成及び破壊)の指標が、おそらくは最も有用であるバイオマーカー候補のリストの最上位に移された。
【０００６】
軟骨は、それらのすべてが軟骨細胞として公知の軟骨の細胞によって合成及び分泌される、ヒアルロン酸及びコンドロインチンスルフェート等の負に帯電した多糖と相互作用するII型コラーゲン等のタンパク質の複合材料網目構造である、細胞外基質(ECM)から主に構成される。健康な関節部における清浄な軟骨代謝回転(代謝)中において、ECMの産生はECMの分解と釣り合っており、これにより、この重要な関節緩衝組織の連続的な復活を確実に行う。しかしながら、病理学的(疾患)状態下においては、ECM合成が破壊と同じペースを保つことができず、関節軟骨の構造的完全性の欠乏が起きる。この破壊が釣り合わない産物は、関節炎の患者の血液と尿との両方において見出すことができる。
【０００７】
軟骨代謝回転(即ち、破壊及び合成)に関するこれらのバイオマーカーのいくつかは、診断及び予後に関する特性について調査されてきた。最も幅広く研究されている軟骨破壊バイオマーカーの2つが、II型コラーゲン(CTX-II)のc末端架橋テロペプチド及び軟骨オリゴマー基質タンパク質(COMP)である。最も幅広く研究されている軟骨合成バイオマーカーのうちの2つが、プロコラーゲンIIA型N末端プロペプチド(PIIANP)及びプロコラーゲンII型のカルボキシペプチド(CPII)である。すべての軟骨代謝回転バイオマーカーの中でも、尿中CTX-IIは、BIPED系によれば、最も診断及び予後に関する潜在能力を示してきた。
【０００８】
CTX-IIは、複数の臨床試験において、変形性関節症(OA)の発生と進行との両方に関連付けられてきており、OAの進行を、5年以上をかけた2種の縦断研究を含むX線撮影によって予測することも、核磁気共鳴画像法によって予測することも可能である。尿中CTX-IIレベルは、関節部疾患(即ち、OA及びRA)を有する母集団の部分集合において大幅に高くなることが公知であるが、レベルは、種々の健康な母集団の部分集合においても同様に高くなることも公知である。
【０００９】
例えば、成長期の子供における尿中CTX-IIレベルは、成人の尿中CTX-IIレベルより約50倍高い。尿中CTX-IIレベルは、クロスカントリー走者等の健康な大学生相当の年齢のエンデュランスアスリートにおいては、衝撃の大きな激しい運動により、年齢及び質量を合わせた対照より約85%高くなることが示されたが、水泳競技者及び漕艇競技者のようなより衝撃の小さいエンデュランスアスリートにおいては、有意に高くならなかった。尿中CTX-IIは、年齢を合わせた閉経前の女性より閉経した女性の方が約2倍高く、正常な質量の対照(BMI 25kg/m2未満)より太りすぎの人々(BMI 25kg/m2以上)の方が適度に高くなっている(約25%)ことも示された。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、哺乳動物の関節部状態を処置するために使用される組成物の効力を判定するための方法を提供する。本方法は、運動前及び運動後の哺乳動物における1つ又は複数の軟骨破壊バイオマーカーのレベルの変化を測定する工程、次いで、関節部状態を処置するために使用される組成物を哺乳動物に投与する工程、並びに運動前及び運動後の哺乳動物における1つ又は複数の軟骨破壊バイオマーカーのレベルの変化を測定する工程を含む。
【００１１】
本発明によれば、運動後(且つ、関節部状態を処置するために使用される組成物の投与後)の軟骨破壊バイオマーカーのレベルと比較した運動後(ただし関節部状態を処置するために使用される組成物の投与前)の前記バイオマーカーのレベルの変化の減少は、組成物が、前記哺乳動物の関節部状態を処置するために有効であることを指し示している。
【００１２】
別の実施形態において、哺乳動物の関節部状態を処置するために使用される組成物の効力を判定するための方法が、提供される。本方法は、関節部状態を処置するために使用される組成物を、2つ以上の哺乳動物の群のうちの1つの群を除いたすべてに投与する工程、並びに続いて運動前及び運動後の哺乳動物の群における1つ又は複数の軟骨破壊バイオマーカーのレベルの変化を測定する工程を含む。この実施形態において、組成物が投与されなかった(無処置の)群における運動後の軟骨破壊バイオマーカーのレベルと比較した、化合物が投与された1つ又は複数の群における運動後の前記バイオマーカーのレベルの変化の減少は、組成物が、前記哺乳動物の関節部状態を処置するために有効であることを指し示している。
【００１３】
本発明の一実施形態において、1つ又は複数の軟骨破壊バイオマーカーは、I型コラーゲンのc末端架橋テロペプチド(CTX-I)、II型コラーゲンのc末端架橋テロペプチド(CTX-II)、I型コラーゲンのN末端架橋テロペプチド(NTX-I)、軟骨オリゴマー基質タンパク質(COMP)、グリコサミノグリカン、II型コラーゲンネオエピトープ(TIINE)、コラーゲンII型切断産物(C2C)、コラーゲンII型特異的ネオエピトープ(C2M)、II型コラーゲンの9-アミノ酸ペプチド及びそのニトロ化形態(Coll 2-1及びColl 2-1-NO2)、フィブリン3ペプチド(Fib3-1及びFib3-2)、フォリスタチン様タンパク質1(FSTL-1)、軟骨糖タンパク質39 (YKL-40)、I型及びII型コラーゲン切断ネオエピトープ(C1及びC2)、ピリジノリン(PYR)、グルコシル-ガラクトシル-ピリジノリン(Glc-Gal-PYR)並びにII型コラーゲンのらせん形ペプチド(HELIX-II)からなる群から選択される。
【００１４】
別の態様において、1つ又は複数の軟骨合成バイオマーカーは、プロコラーゲンIIA型N末端プロペプチド(PIIANP)、プロコラーゲンII型のカルボキシペプチド(CPII)又はII型プロコラーゲンのC末端プロペプチド(PIICP)及びアグリカン由来のコンドロインチンスルフェートエピトープ846(CS846)からなる群から選択される。
【００１５】
本発明によれば、軟骨破壊及び合成バイオマーカーは、前記哺乳動物の滑液、全血、血清又は尿から得られ、関節部は、例えば、脊椎、肩、肘、手首、指、股関節、膝、足首及び足趾から選択される。
【００１６】
一実施形態において、運動は、関節部に対して衝撃の小さい適度な強度のものである。衝撃の小さい運動は、例えば、歩行、ローラースケート、水泳、サイクリング、ヨガ、漕艇、アクアビクス、階段上り及びウェイトリフティングから選択される。
【００１７】
好ましい一実施形態において、運動は、数週間にわたって1日当たり短時間の間実施される。本発明によれば、哺乳動物は、関節部疾患を患っている。一態様において、関節部疾患は、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、若年性関節炎、強直性脊椎炎、痛風、痛風性関節炎、腱炎、滑膜炎、シェーグレン症候群、敗血性関節炎又は全身性紅斑性狼瘡からなる群から選択される。
【００１８】
別の実施形態において、哺乳動物は、罹患前であり、又は完全に無症候性であるが、内在する有害な関節部の構造的変化を有する。好ましい一実施形態において、内在する有害な関節部の構造的変化を有する罹患前の又は完全に無症候性の哺乳動物は、肥満の若しくは閉経した女性又はこれらの両方である。
【００１９】
更なる一実施形態において、哺乳動物は健康であり、いかなる関節部疾患の症状も経験しておらず、いかなる内在する有害な関節部の構造的変化も有さない。好ましい一実施形態において、健康であり、いかなる関節部疾患の症状も経験しておらず、いかなる内在する有害な関節部の構造的変化も有さない、哺乳動物は、肥満の若しくは閉経した女性又はこれらの両方である。
【００２０】
一態様において、組成物は軟骨保護剤であり、例えば、グルコサミン、グリコサミノグリカン、メチルスルホニルメタン(MSM)、S-アデノシルメチオニン(SAMe)、卵殻膜若しくは卵殻膜加水分解物、オメガ-3若しくはオメガ-6多価不飽和脂肪酸、ボスウェリア(Boswellia)種若しくはボスウェリア抽出物、ウコン又はウコン抽出物、クルクミン若しくはクルクミノイド、シロヤナギ樹皮若しくはシロヤナギ樹皮抽出物、タンパク質分解酵素、コラーゲン若しくはコラーゲン加水分解物、松樹皮抽出物、セチル化脂肪酸、植物抽出物、ビタミン若しくはビタミン前駆物質、鉱物又はこれらの組合せから選択される。
【００２１】
別の態様において、組成物は、関節に関連する症候に影響し、又は影響することが意図されている。一実施形態において、関節に関連する症候は、例えば、疼痛、熱傷、うずくような痛み、圧痛、不快感、硬直、腫れ、局所的な発熱若しくは温かさ、柔軟さのなさ、可動域の制限若しくは可動域の減少、軋音、機能の部分的な喪失、質量を支える能力の喪失若しくは弱さ、又はこれらの組合せである。
【００２２】
最後の実施形態において、関節に関連する症候が、運動の最中若しくは直後、若しくは運動後ある程度の時間の期間、又はこれらの組合せにおいて評価される。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】適度な強度の運動に起因した24時間にわたる尿中CTX-IIクリアランスの図である。
【図２】関節治療用組成物又はプラセボを消費しながら衝撃の小さい適度な強度の運動レジメンの直後又は12時間後における、経時的な疼痛及び硬直のレベルの図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明は、罹患した又は健康な個体中の関節部治療用組成物を迅速で体系的な態様で評価するための方法に関する。本発明は、哺乳動物の関節部状態を処置するために使用される組成物の効力を判定するための方法を提供する。「効力」は、組成物が、哺乳動物における軟骨破壊バイオマーカーのレベルを低減するために有効であることを意味する。
【００２５】
本方法は、運動前及び運動後の哺乳動物における1つ又は複数の軟骨破壊バイオマーカーのレベルの変化を測定する工程、次いで、関節部状態を処置するために使用される組成物を哺乳動物に投与する工程、並びに運動前及び運動後の哺乳動物における1つ又は複数の軟骨破壊バイオマーカーのレベルの変化を測定する工程を含む。
【００２６】
本発明によれば、運動後(且つ、関節部状態を処置するために使用される組成物の投与後)の軟骨破壊バイオマーカーのレベルと比較した運動後(ただし関節部状態を処置するために使用される組成物の投与前)の前記バイオマーカーのレベルの変化の減少は、組成物が、前記哺乳動物の関節部状態を処置するために有効であることを指し示している。
【００２７】
本発明は、関節部状態を処置するために使用される組成物を、2つ以上の哺乳動物の群のうちの1つの群を除いたすべてに投与する工程、並びに続いて運動前及び運動後の哺乳動物の群における1つ又は複数の軟骨破壊バイオマーカーのレベルの変化を測定する工程を含む、代替的な方法も提供する。この実施形態において、組成物が投与されなかった(無処置の)群における運動後の軟骨破壊バイオマーカーのレベルと比較した、化合物が投与された1つ又は複数の群における運動後の前記バイオマーカーのレベルの変化の減少は、組成物が、前記哺乳動物の関節部状態を処置するために有効であることを指し示している。
【００２８】
バイオマーカーのレベルの変化を測定するとき、バイオマーカーの減少の百分率がより高いことは、投与された化合物の効力がより大きいことと相関する。しかしながら、バイオマーカーのレベルのあらゆる減少は、化合物の有効性に換算される。
【００２９】
「関節部状態を処置するために使用される組成物」という用語又はその複数形の使用は、本発明の目的に関する場合、対象に投与されると、前記対象の任意の関節部に治療効果を付与する、任意の組成物又は作用物質を意味することが意図されている。このような組成物の例には、限定されるわけではないが、軟骨保護剤、例えばグルコサミン、グリコサミノグリカン、メチルスルホニルメタン(MSM)、S-アデノシルメチオニン(SAMe)、卵殻膜若しくは卵殻膜加水分解物、オメガ-3若しくはオメガ-6多価不飽和脂肪酸、ボスウェリア種若しくはボスウェリア抽出物、ウコン又はウコン抽出物、クルクミン若しくはクルクミノイド、シロヤナギ樹皮若しくはシロヤナギ樹皮抽出物、タンパク質分解酵素、コラーゲン若しくはコラーゲン加水分解物、松樹皮抽出物、セチル化脂肪酸、植物抽出物、ビタミン若しくはビタミン前駆物質、鉱物又はこれらの組合せが挙げられる。
【００３０】
上記組成物に加えて、関節部状態の処置において有効であることが知られた任意の医薬組成物が、本発明のために想定されている。例えば、組成物には、アセトアミノフェン、ジクロフェナク、イブプロフェン、セレコキシブ、プロポキシフェン、若しくは任意の他の鎮痛薬、非ステロイド系抗炎症薬(NSAID)若しくは麻薬、又はこれらの組合せが挙げられる。
【００３１】
本発明によれば、関節部状態には、例えば、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、若年性関節炎、強直性脊椎炎、痛風、痛風性関節炎、腱炎、滑膜炎、シェーグレン症候群、敗血性関節炎又は全身性紅斑性狼瘡が挙げられる。
【００３２】
治療用組成物は、対象に局所投与され、経口投与され、又は注射によって投与される。
【００３３】
「哺乳動物」は、あらゆる哺乳動物を含む。好ましくは、哺乳動物は、人間である。哺乳動物はまた、飼い慣らされた動物又は家畜であってもよい。飼育動物の例には、例えば、イヌ、ネコ及びウサギが挙げられる。家畜の例には、例えば、ウマ、乳牛及びブタが挙げられる。
【００３４】
「軟骨破壊バイオマーカー」は、生物学的プロセスによって軟骨破壊が起きたときに生成された、数多くの異なる種類の断片を含む。これらの断片化産物は、軟骨破壊を受けた対象の滑液、全血、血清及び尿において見出すことができる。これらの断片化産物の例には、例えば、I型コラーゲンのc末端架橋テロペプチド(CTX-I)、II型コラーゲンのc末端架橋テロペプチド(CTX-II)、I型コラーゲンのN末端架橋テロペプチド(NTX-I)、軟骨オリゴマー基質タンパク質(COMP)、グリコサミノグリカン(例えば、ケラタンスルフェート、デルマタンスルフェート、コンドロインチンスルフェート、ヒアルロン酸等)、II型コラーゲンネオエピトープ(TIINE)、コラーゲンII型切断産物(C2C)、コラーゲンII型特異的ネオエピトープ(C2M)、II型コラーゲンの9-アミノ酸ペプチド及びそのニトロ化形態(Coll 2-1及びColl 2-1-NO2)、フィブリン3ペプチド(Fib3-1及びFib3-2)、フォリスタチン様タンパク質1(FSTL-1)、軟骨糖タンパク質39(YKL-40)、I型及びII型コラーゲン切断ネオエピトープ(C1及びC2)、ピリジノリン(PYR)、グルコシル-ガラクトシル-ピリジノリン(Glc-Gal-PYR)並びにII型コラーゲンのらせん形ペプチド(HELIX-II)が挙げられる。
【００３５】
バイオマーカーはまた、PIIANP又はCPII等の軟骨合成バイオマーカーであってもよい。軟骨を合成及び/又は修復するために必要であることが知られた、いくつかのプロコラーゲン及び他のタンパク質断片が存在する。これらの合成断片は、軟骨の合成又は修復を受けた対象の滑液、血清及び尿において見出すことができる。これらの合成断片の例は、プロコラーゲンIIA型N末端プロペプチド(PIIANP)、プロコラーゲンII型のカルボキシペプチド(CPII)又はII型プロコラーゲンのC末端プロペプチド(PIICP)及びアグリカン由来のコンドロインチンスルフェートエピトープ846(CS846)である。
【００３６】
本発明の更に別の態様において、軟骨破壊バイオマーカーの軟骨合成バイオマーカーに対する比が利用され得る。軟骨代謝回転又は軟骨代謝は、有機体の内部における軟骨破壊と軟骨の合成又は修復との釣り合いである。これらの2種類のバイオマーカーの比は時折、別々にしたいずれかの種類のバイオマーカーの場合に比べて、総合的な関節軟骨の健康ステータスに関するより良好な指標であり得る。軟骨代謝回転比の例は、CTX-II/CPII、COMP/PIIANP、CTX-II/PIIANP及びCOMP/CPIIである。
【００３７】
「バイオマーカー」という用語又はその複数形の使用は、正常な生物学的プロセス、病理学的(疾患)プロセス又は薬学的応答の治療介入の指標として客観的に測定及び評価される、1種又は複数の特徴を意味することが意図されている。
【００３８】
運動
本発明によれば、対象は、連続する数週間にわたって隔日で1日当たり短い期間の間、階段上り又はウェイトの持ち上げ等の衝撃の小さい適度な強度の運動を実施する。各週の週末に対象が、それらからベースライン(運動前の)値と比較できるバイオマーカーレベルを得ることができる尿及び血液試料を提供する。慣例的な関節治療の治療薬臨床試験設計は、「短期的」研究の場合に3〜6か月の持続期間を有し、「長期的」研究の場合に1〜5年の持続期間を有する。
【００３９】
上記のようにすることは、関節部疾患に関連した生物学的変化を観察するために必要な感覚的に長い時間枠が理由である。上記のようにすることは、症状(即ち、疼痛、硬直、機能喪失等)の変化及び疾患進行(即ち、バイオマーカー、関節のスペースの幅等)の客観的な指標の変化を含む。衝撃の小さい適度な強度の運動からの軟骨バイオマーカーレベルの予期せぬ短期的な増大は、わずか24時間から2〜4週間で、軟骨保護型(軟骨節約型)関節治療薬の客観的な評価を可能にする。したがって、本発明は、従来技術に対して6倍以上の研究持続期間の低減につながる(即ち、2週間対12週間)。当業者は、代替的な研究持続期間(例えば、4週間、6週間、8週間等)の使用、又は、代替的なフォーマットへの本発明の研究設計の応用を想定することができる。例えば、対象に隔日ではなく毎日運動させること、又は、より長い期間にわたって運動レジメンへの対象の関節部の応答を比較するという目的で、2週間にわたって隔日で対象に運動させ、続いて活動なしの期間(例えば、2か月、6か月、12か月等)が後続し、次いで、2週間にわたって隔日で別の運動期間が後続すること。このような均等物及び代替物は、本発明の範囲に包含されることが意図されている。
【００４０】
「衝撃の小さい」という用語の使用は、その運動の最中に関節部が最小の軸力を受ける運動を意味することが意図されている。大抵の場合、これらの種類の運動に関しては、片方の足が常に地面の上に留まっており、不快感を与える動き(例えば、ジャンプ、ホップ、スキップ、ランニング等から生まれるようなもの)が存在しない。これらの種類の運動に関する別の態様は、水又はマシン若しくはデバイスが、運動している最中の身体の一部又はすべてを支える場合であり得る。衝撃の小さい運動の例には、限定されるわけではないが、歩行(平坦な表面、傾斜トレッドミル等)、ローラースケート、水泳、サイクリング、ヨガ、漕艇、アクアビクス、階段上り及び一部の形態のウェイトリフティングが挙げられる。
【００４１】
「適度な」という用語の使用は、高いレベルの労力又は強烈な移動を必要とせず、その最中に対象の心拍数が大幅に(即ち、20〜30%超)上昇しない、運動を意味することが意図されている。例えば、わずか5分間で同じ距離を歩行することに対して10分間で4分の1マイルを歩行することは、適度な歩行ペースであろう。他の例は、わずか5分間で一続きの5段の階段を上ることに対して10分間で一続きの5段の階段を上ること、又は、わずか5分間でプールを5往復泳ぐことに対して10分間でプールを5往復泳ぐことであろう。これらの非限定的な例は、用語の明確化のために提供されており、本発明の全範囲を包含することが意図されていない。
【００４２】
本発明の方法は、限定するわけではないが脊椎(首及び背中を含む)、肩、肘、手首、指、股関節、膝、足首及び足趾を含む、関節部の評価を対象とする。より好ましくは、本発明は、肩、股関節、肘及び膝等の大きな関節部を対象とする。本発明において実施される衝撃の小さい適度な強度の運動は、当該運動の結果として特定の関節部の接合様式(動き)が評価されるように選択しなければならないであろう。例えば、階段上りは、主に膝に影響するであろうが、頭より高くウェイトを持ち上げることは、主に肩に影響するであろう。これらの非限定的な例は、明確化のために提供されており、本発明の全範囲を包含することが意図されていない。
【００４３】
本発明の一態様において、本方法は、多種多様な関節症を含む関節部疾患を患っている個体と一緒に利用することができる。関節部疾患の例には、限定されるわけではないが、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、若年性関節炎、強直性脊椎炎、痛風、痛風性関節炎、腱炎、滑膜炎、シェーグレン症候群、敗血性(又は関節性)関節炎又は全身性紅斑性狼瘡が挙げられる。
【００４４】
本発明の別の態様において、本方法は、関節部疾患が存在するが無症候性である罹患前の個体と一緒に利用することができる。罹患前の状態は、関節軟骨損傷が生じている可能性があるが、このような疾患の診断を与え得るものでそれがない場合は対象の関節が健康であると考えられる、疾患の臨床学的症状が存在しない又は不十分である、状態である。この罹患前の状態のステータスを測定するために使用されるバイオマーカーは、同じ性別、年齢及び質量の対象における自然なバラつきに起因した水準からごくわずかに外れているが、罹患した状態だと考えられるのに十分なほどに異常ではない。これは一般に、測定可能なバイオマーカーの平均又は水準からプラス又はマイナス10〜20%の範囲であろう。本発明者らは、これらの対象の関節が、運動によって誘発された軟骨代謝回転に対して大幅により鋭敏であろうと考えている。対象は健康であると考えられるが、対象は、関節疾患の症状(即ち、疼痛、硬直、機能喪失等)の周期的な症例を経験する可能性があり、治療介入の施用から利益を受けるであろうが、このような処置はおそらくは、対象が、完全に症候性の罹患した状態に到達しないようにさえすることができる。
【００４５】
「周期的」という用語の使用は、時々再発するが、絶え間なく又は慢性的に再発することはない状態を意味することが意図されている。したがって、状態は、1週間当たり1日又は数日起き得るが、毎日起きるわけではない。より好ましくは、状態は、1か月当たり1日又は数日等、頻度を減じて起きる。
【００４６】
本発明の更に別の態様において、本方法は、関節部疾患が存在しない健康な個体と一緒に利用することができる。健康な関節のステータスを測定するために使用されるバイオマーカーは、同じ性別、年齢及び質量の対象における自然なバラつきに起因した水準に十分に収まるであろうが、これらの対象は、関節部疾患の臨床学的な兆候又は症状を有さないであろう(CTX-II範囲に関しては、表1を参照されたい)。
【００４７】
【表１】
2019517007.tif 000003
【００４８】
関節軟骨が、運動によって誘発される代謝回転に対して予想外なほどに鋭敏であることが本発明者らによって見出された、いくつかの特殊な健康な個体の従属群が存在する。これらの群は、閉経した女性(例1〜3を参照されたい)及び太りすぎの個体(いずれかの性別)(例4を参照されたい)。理論に束縛されることを望むわけではないが、本発明者らは、特に長期間の時間にわたって軟骨を特に損傷しやすくする生化学的変化が、閉経した女性及び太りすぎの個体において起きると考えている。これはおそらくは、これらの個体の従属群が、一生の間に関節部疾患を発症する可能性が有意に高まっている理由である。
【００４９】
軟骨代謝回転は運動によって誘発されるため、関節に関連する症状治療薬(関節の疼痛、硬直等を低減するであろうもの)の主観的な評価を同様に可能にする、関節の不快感(即ち、疼痛、硬直等)の付随的な増大も存在する。本発明の別の態様において、対象は、主観的な関節に関連する症状をグレード分けするために対象に質問する、調査書又は質問票を完了する。これは、運動の最中若しくは直後の評価、又は運動後から6時間、12時間、24時間又は48時間等、運動後ある程度の時間の期間が経ってからの評価を含み得る。主観的な関節に関連する症状の例には、限定されるわけではないが、疼痛、熱傷、うずくような痛み、圧痛、不快感、硬直(即ち、朝におけるような一時的なもの又は持続性のもの)、腫れ、局所的な発熱若しくは温かさ、柔軟さのなさ、可動域の制限若しくは可動域の減少、軋音(即ち、関節における喘鳴、有響音若しくは破裂音又は感覚)、機能の部分的な喪失(例えば、着席位置から起き上がるときの困難さ、車両を出入りするときの困難さ、階段上りのときの困難さ等)及び質量を支える能力の喪失又は弱さが挙げられる。これらの症状はすべて、一時的な、断続的な若しくは周期的なもの又は慢性的なものであり得る。
【００５０】
本発明の別の態様において、関節部治療薬は限定されるわけではないが非盲検、単純盲検、二重盲検、プラセボ対照、活性比較対象、優越性、非劣性又はこれらの任意の組合せ若しくは変更形態を含む、種々の臨床試験設計において評価することができる。「非盲検」という用語の使用は、調査対象治療薬が比較対象(即ち、プラセボ又は実薬)なしで評価され、研究対象及び調査者が治療薬の正体を知っている、試験を意味することが意図されている。「単純盲検」という用語の使用は、対象又は調査者のいずれかが処置の割当て(即ち、対象が調査対象治療薬を受け取っているか、プラセボ又は活性比較対象を受け取っているか)を知らない試験を意味することが意図されており、最も一般的には、この「単純盲検」という用語は、対象が処置の割当てを知らないことを記述するために使用される。「二重盲検」という用語の使用は、対象と調査者との両方が、処置の割当て(即ち、対象が調査対象治療薬を受け取っているか、プラセボ又は活性比較対象を受け取っているか)を知らない試験を意味することが意図されている。「プラセボ対照」という用語の使用は、調査対象治療薬が、プラセボ(即ち、治療用活性成分を欠いているが、活性治療薬を含有しない剤形と区別がつかない剤形)と比較されている試験を意味することが意図されており、プラセボは、一般的に、偽薬と呼ばれる。「活性比較対象」という用語の使用は、調査対象治療薬が、同じ又は類似の治療目的のために意図された調査対象ではない別の活性治療薬と比較されている試験を意味することが意図されている。「優越性」という用語の使用は、成功だと考えておくという目的で、調査対象治療薬が、比較対象(即ち、プラセボ又は実薬)より優れた又はより良好でなければならない試験を意味することが意図されている。「非劣位性」という用語の使用は、成功だと考えておくという目的で、調査対象治療薬が、比較対象(即ち、プラセボ又は実薬)より劣位でない又はより悪くないようにしなければならない、試験を意味することが意図されている。当業者は、上記研究設計の修正又は代替的な研究設計の使用を容易に想定することができる。このような均等物及び代替物は、本発明の範囲に包含されることが意図されている。
【００５１】
したがって、好ましい一実施形態において、軟骨保護型関節治療用組成物は、非盲検臨床試験設計において評価されることになる。この場合、対象は、連続する2週間にわたって隔日で1日当たり最大10分の間、膝に作用する衝撃の小さい適度に強烈な運動(例えば、傾斜トレッドミル、抵抗を用いる着席式ステップマシン、階段上り、ウェイトを持ち上げるシーテッドステッププレス等)を最初に実施することによって、自分たち自身の対照群として働くが、2週間の研究期間中において、対象は、運動の最中又は直後(最大1時間)におけるあらゆる膝の疼痛又は硬直をレート付けし、次いで再度、運動からおよそ12時間後(例えば、翌朝)におけるあらゆる膝の疼痛又は硬直をレート付けする、運動後用質問票を完了するように求められることになり、各週の週末に対象が、それらからバイオマーカーレベルを得ることになる尿及び血液試料を提供する。次いで、対象の膝が基礎状態に戻ることを可能にするために、2週間以上の休養期間が存在するであろう。同じ運動レジメンは、対象が、自分たちが軟骨保護型関節治療用組成物を消費していることを知っている状態で、繰り返されることになる(即ち、2週間にわたって隔日で1日当たり10分)。対照は、膝の疼痛及び硬直に関する運動後用質問票をもう一度完了し、バイオマーカー分析のための血液及び尿試料を毎週提供することになる。これらの研究手順のすべてが完了したらすぐに、処置期間(即ち、第2の運動期間)からのバイオマーカーレベル並びに疼痛及び硬直レベルは、軟骨保護型治療薬が運動レジメンによって誘導される軟骨代謝回転の量を低減したかどうか(即ち、軟骨破壊バイオマーカーの増大が減じたかどうか)、及び/又は関節治療用組成物が関連する膝の疼痛又は硬直を低減したかどうかを判定するために、対照期間(即ち、第1の運動期間)からのバイオマーカーレベル並びに疼痛及び硬直レベルと比較されることになる。
【００５２】
より好ましい実施形態において、軟骨保護型関節治療用組成物は、ランダム化二重盲検プラセボ対照臨床試験設計において、評価されることになる。この場合、対象は、二重盲検方式により、調査対象治療薬群又はプラセボ群にランダム化(コイントス又はサイコロ転がしと同様)されることになるが、次いで、両方の群の対象は、連続する2週間にわたって隔日で1日当たり最大10分の間、膝に作用する衝撃の小さい適度に強烈な運動(例えば、傾斜トレッドミル、抵抗を用いる着席式ステップマシン、階段上り、ウェイトを持ち上げるシーテッドステッププレス等)を実施することになるが、2週間の研究期間中において、対象は、運動の最中又は直後(最大1時間)におけるあらゆる膝の疼痛又は硬直をレート付けし、次いで再度、運動からおよそ12時間後(例えば、翌朝)におけるあらゆる膝の疼痛又は硬直をレート付けする、運動後用質問票を完了するように求められることになり、各週の週末に対象が、それらからバイオマーカーレベルを得ることになる尿及び血液試料を提供する。一旦研究手順が完了したら、処置群の割当ては非盲検であり、バイオマーカーレベル並びに疼痛及び硬直レベルは、軟骨保護型関節治療用組成物が運動レジメンによって誘発される軟骨代謝回転の量を低減したかどうか(即ち、軟骨破壊バイオマーカーの増大が減じたかどうか)、及び/又は治療薬が関連する膝の疼痛又は硬直を低減したかどうかを判定するために、2つの群の間(即ち、調査対象治療薬対プラセボ)で比較されることになる。
【００５３】
本発明は人間を対象とするが、当業者は、イヌ、ネコ、ウサギ、ウマ、乳牛、ヤギ、ブタ等の他の哺乳動物における同じ又は類似の研究設計の使用を想定し得る。更に、一部の例において、本出願は、軟骨代謝回転を誘発させるごく抑制的な回数の衝撃の小さい適度な強度の運動に関して、記述されてきた。当業者は、運動の強度を増大させること、又は関節が支える衝撃の程度を増大させること(即ち、衝撃の大きい運動)、又は運動の頻度を増大させること等によって、軟骨代謝回転を誘発させるであろう様々な運動方法を容易に確定することができる。すべてのこのような均等物及び代替物は、本発明の範囲に包含されることが意図されている。
【００５４】
本発明は、個人によって利用できる又は臨床の場において利用できる個人用検査キットにも関する。検査キットは、個別の個人から試料を収集するための手段、並びに、1つ若しくは複数の軟骨破壊及び/又は合成バイオマーカーについて試料を検査するための手段を含む。1つ又は複数の軟骨破壊の定量化のための手段及び/又は合成バイオマーカーもまた、キット内に存在する。このようなキットにより、個人は、運動作業の前及び後に自分自身の軟骨破壊及び/又は合成を査定すること、及び更には、消費されている任意のサプリメント(即ち、組成物、医薬等)を、軟骨破壊及び/又は合成への当該サプリメントの効果について評価することができるであろう。
【００５５】
キットと一緒にして使用するために収集される試料は、尿、血液又は唾液であってよい。前記1つ又は複数の軟骨破壊及び/又は合成バイオマーカーのための試料を検査するための手段は、例えば、酵素結合免疫吸着法(ELISA)を含む任意の適切なアッセイである。
【実施例】
【００５６】
下記の非限定的な例は、本発明の様々な実施形態を説明するために実施された。
【００５７】
(例1)
24時間にわたる健康な人間と関節炎の人間との両方における軟骨破壊バイオマーカーCTX-IIの時間的な尿クリアランスの判定
次の例は、24時間にわたる健康な人間と関節炎の人間との両方における軟骨破壊バイオマーカーCTX-IIの時間的な尿クリアランスの判定の説明に資するものである。血流中のタンパク質は、腎臓による尿に取り込ませた状態での排泄によって、人体が時間をかけて一掃することが知られている。このタンパク質のクリアランスは、異なる個体の場合、異なる速度で起き、したがって、クレアチニン等の尿中に常に存在する内在性タンパク質標準物質は、クリアランス速度を個体間又は個体の群の間で比較できるようにクリアランス速度を正規化するために使用されることが多い。したがって、ナノグラム毎デシリットル(ng/dL)として表示される尿中CTX-IIの、ミリモル毎デシリットル(mmol/dL)として表示される尿中クレアチニン(Cr)に対する比を計算したが、結果は、クレアチニン1ミリモル当たりのCTX-IIのナノグラム(ng/mmol Cr)として報告されている。尿中のCTX-IIレベルを、Immunodiagnostics Systems, Inc.の商用の酵素結合免疫吸着法(ELISA)(Urine CartiLaps(登録商標) EIA)を使用して製造業者の取扱説明書に従って評価した。ベースライン尿試料を朝から2回目の排尿から収集し、直ちに凍結させ(-20℃)、アッセイ処理のために必要とされるまで保持した。試料を解凍したら、試料は、異常な繰返しアッセイ値を生じさせる得る将来の凍結/解凍サイクルの繰返しを回避するために、アリコートに再分割した。
【００５８】
全員がBMI 25kg/m2未満で健康な膝関節を有する2人の女性(34歳及び37歳)及び1人の男性(34歳)が、基礎CTX-IIレベル判定のためのベースライン尿試料を提供した。続いて、対象は、排泄尿中CTX-IIのレベルを上昇させることが予想される運動(女性: 10〜15分間で脚1本当たり300段の階段、男性:約45分間で4マイルジョギングした)を実施した。対象は、CTX-IIクリアランスを時間的に(経時的に)追跡して、最大の運動後CTX-IIレベルがいつ観察されるかを判定するために、およそ2〜4時間毎に尿試料を提供した。
【００５９】
同様に、BMI 25kg/m2未満で右膝が変形性関節症であると診断された閉経した女性(60歳)が、基礎CTX-IIレベル判定のためのベースライン尿試料を提供した。続いて、対象は、排泄尿中CTX-IIのレベルを上昇させることが予想される運動(10〜15分間で脚1本当たり300段の階段)を実施した。対象は、CTX-IIクリアランスを時間的に(経時的に)追跡して、最大の運動後CTX-IIレベルがいつ観察されるかを判定するために、およそ2〜4時間毎に尿試料を提供した。クリアランス評価の結果は、図1にグラフ化されている。
【００６０】
運動(2〜4時間)後の第1の尿試料には、信頼性の高いCTX-IIの増大が存在するが、最も整合性があり、一般に最大の増大は、運動から24時間後において記録される(2回目の排尿)。対象A(37歳の健康な女性、脚1本当たり300段の階段)の場合、ベースラインから24時間までの増大は、37.6%だった。対象B(34歳の健康な女性、脚1本当たり300段の階段)の場合、ベースラインから24時間までの増大は、85.5%だった。対象C(34歳の健康な男性、4マイルジョギングした)の場合、ベースラインから24時間までの増大は、69.9%だった。対象D(60歳の閉経した関節炎の女性、脚1本当たり300段の階段)の場合、ベースラインから24時間までの増大は、139.7%だった。閉経した関節炎の対象(D)には、いずれの場合においても、健康な膝関節を有するより若い閉経前の女性の増大の1.5倍(対象B)〜3.5倍(対象A)の増大があった。
【００６１】
(例2)
衝撃の小さい適度な強度の運動レジメンに起因した閉経した関節炎の人間の女性における尿中の軟骨破壊バイオマーカーCTX-IIの増大
次の例は、衝撃の小さい適度な強度の運動レジメンに起因した閉経した関節炎の人間の女性における尿中の軟骨破壊バイオマーカーCTX-IIの増大の説明に資するものである。CTX-IIレベルは、例1の場合と同様に報告されているが、最後の運動を完了した後12〜24時間以内に収集した朝から2回目の排尿から判定した。1週間当たり2回より少ない運動を行った左膝が変形性関節症であると診断された閉経した女性(58歳)が、基礎CTX-IIレベル判定のためのベースライン尿試料(119ng/mmole Cr)を提供した。続いて、対象は、連続する2週間にわたって隔日で、着席式ステップマシン(NuStep(登録商標)という商標)により5.0の作業量及び1分当たりおよそ70ステップのペースで7〜10分間運動を実施した。各週の週末に対象は、ベースラインに対するCTX-IIレベルの比較のための尿試料を提供した。第1週において、CTX-IIは、ベースラインから77.9%(211ng/mmole Cr)増大しており、第2週において、CTX-IIは同様に、ベースラインから75.3%(208ng/mmole Cr)増大した。
【００６２】
(例3)
衝撃の小さい適度な強度の運動レジメンに起因した閉経した健康な人間の女性における尿中の軟骨破壊バイオマーカーCTX-IIの増大
次の例は、衝撃の小さい適度な強度の運動レジメンに起因した閉経した健康な人間の女性における尿中の軟骨破壊バイオマーカーCTX-IIの増大の説明に資するものである。CTX-IIレベルは、例1の場合と同様に報告されているが、最後の運動を完了した後12〜24時間以内に収集した朝から2回目の排尿から判定した。1週間当たり2回より少ない運動を行った健康な膝関節を有する(膝の疼痛又は硬直がない)閉経した女性(67歳)が、基礎CTX-IIレベル判定のためのベースライン尿試料(156ng/mmole Cr)を提供した。続いて、対象は、連続する2週間にわたって隔日で、14度の傾斜がついた傾斜トレッドミルにより1時間当たり1.7マイルのペースで7〜10分間運動を実施した。各週の週末に対象は、ベースラインに対するCTX-IIレベルの比較のための尿試料を提供した。第1週において、CTX-IIは、ベースラインから20.4%(188ng/mmole Cr)増大しており、第2週において、CTX-IIは同様に、ベースラインから27.1%(199ng/mmole Cr)増大した。
【００６３】
(例4)
衝撃の小さい適度な強度の運動レジメンに起因した健康な肥満の人間の男性における尿中の軟骨破壊バイオマーカーCTX-IIの増大
次の例は、衝撃の小さい適度な強度の運動レジメンに起因した健康な肥満の人間の男性における尿中の軟骨破壊バイオマーカーCTX-IIの増大の説明に資するものである。CTX-IIレベルは、例1の場合と同様に報告されているが、最後の運動を完了した後12〜24時間以内に収集した朝から2回目の排尿から判定した。BMI 25kg/m2超で1週間当たり2回より少ない運動を行った健康な膝関節を有する(膝の疼痛又は硬直がない)肥満の男性(43歳)が、基礎CTX-IIレベル判定のためのベースライン尿試料(70ng/mmole Cr)を提供した。続いて、対象は、1週間にわたって毎日およそ10分間脚1本当たり50段の階段(標準的な高さ)の運動を実施した。4日目及び8日目において、対象は、ベースラインに対するCTX- IIレベルの比較のための尿試料を提供した。4日目において、CTX-IIは、ベースラインから43.6%(100ng/mmole Cr)増大しており、8日目において、CTX-IIは、ベースラインから24.3%(87ng/mmole Cr)増大した。
【００６４】
(例5)
異なる3種の衝撃の小さい適度な強度の運動レジメンに起因した閉経した健康な人間の女性の群における尿中の軟骨破壊バイオマーカーCTX-IIの増大の比較
次の例は、異なる3種の衝撃の小さい適度な強度の運動レジメンに起因した閉経した健康な人間の女性の群における尿中の軟骨破壊バイオマーカーCTX-IIの増大の比較の説明に資するものである。CTX-IIレベルは、例1の場合と同様に報告されているが、最後の運動を完了した後12〜24時間以内に収集した朝から2回目の排尿から判定した。下記に記載の研究は、Good Clinical Practice(Title 21、Code of Federal Regulations、Parts 50 & 56及びICH E6)というU.S. Food & Drug Administrationsの基本方針及びDeclaration of Helsinkiに従って実施された。研究プロトコルは、正式な認可を受けた治験審査委員会(IRB)によって承認されており、すべての対象が、参加のために書面による同意書を提出した。
【００６５】
全員が1週間当たり2回より少ない運動を行った健康な膝関節(膝の疼痛又は硬直がない)を有する30人の閉経した女性(年齢範囲46〜72歳)の群が、異なる3つの衝撃の小さい適度な強度の運動レジメン群のうちの1つにランダム化された。群Aの対象は、連続する2週間にわたって隔日で、14度の傾斜トレッドミルにより1時間当たり1.7マイルのペースで最低7分間歩行した。群Bの対象は、連続する2週間にわたって隔日で、着席式ステップマシン(NuStep(登録商標)という商標)により7.0の作業量及び1分当たり30〜40ステップのペースで、最低7分間運動を実施した。群Cの対象は、連続する2週間にわたって隔日で、シーテッドステッププレス(Cybex(登録商標)という商標)により最大7分間、それぞれが90ポンド(41kg)の8回の持ち上げを3セット実施した。すべての対象が、基礎CTX-IIレベル判定のためのベースライン尿試料及びベースラインに対するCTX-IIレベルの比較のための各週の週末における尿試料を提供した。Table 2(表2)は、研究対象の3つの群に関するベースライン人口統計データを収載している。
【００６６】
【表２】
2019517007.tif 000004
【００６７】
3つの群は、複数の群のためのノンパラメトリックKruskal-Wallis検定を使用したベースライン人口統計データのいずれにおいても、統計学的に異なっていなかった。これらの群の尿中CTX-IIレベルが、関節炎の対象に関して予想され、且つ、女性の年齢及びホルモンステータスの予想正常範囲(上記Table 1(表1)を参照されたい)に十分に収まる範囲の厳密な下限において平均CTX-IIレベルを有する、健康な閉経した女性であることと整合することも、有意である。Table 3(表3)は、連続する2週間にわたって指定された運動レジメンを実施した後の3つの対象の群に関する尿中CTX-II結果を示している。
【００６８】
【表３】
2019517007.tif 000005
【００６９】
どの時点(ベースライン、第1週又は第2週)が相違したかを判定するために事後Conover分析と組み合わせられた、繰返し測定のためのノンパラメトリックFriedman検定を使用したとき、群Cは、第1週と第2週との両方において、ベースラインから統計学的に相違した(Pが0.05未満)ことが判定された。群Aは、第1週及び第2週にわたってベースラインと相違する、明瞭な統計学的傾向(Pが0.10未満)を示した。群Bは、いかなる時点においても統計学的に異なっていなかった。すべての群にわたるデータを審査すると、運動の激しさに関する性質(ウェイトの持ち上げ>着席式ステップマシン>傾斜トレッドミル)には、膝関節の軟骨代謝回転の度合いに影響する明瞭な傾向が存在する。関節への運動の衝撃(小さい対大きい)の性質から既知の効果と比較されるこの予想外の発見は、運動によって誘発される軟骨代謝回転の評価を可能にする。
【００７０】
群Aに含まれる1つのみの対象又は2つの対象が、(先述した)傾斜トレッドミルによる歩行から何らかの疼痛又は硬直を経験した。したがって、群B及び群Cに関する疼痛及び硬直の結果のみが、Table 4(表4)において報告されている。
【００７１】
【表４】
2019517007.tif 000006
【００７２】
運動の直後(500〜900%)と運動から12時間後(600〜900%)との両方において、両方の群に疼痛の大幅な増大があった。同様に、運動の直後(200〜350%)と運動から12時間後(233〜350%)との両方において、両方の群に硬直の大幅な増大があった。群Bの場合、これらの結果は、運動から12時間後の疼痛(第1週及び第2週)に関しては、統計学的に有意(Pが0.05未満)であり、即時の疼痛(両方の週)、即時の硬直(第1週)及び運動から12時間後の硬直(両方の週)に関しては、統計学的傾向(Pが約0.10)を示した。群Cの場合、これらの結果は、第1週におけるすべてのカテゴリー(即時の疼痛及び硬直並びに運動から12時間後の疼痛及び硬直)と、第2週における即時の疼痛及び硬直に関しては、統計学的に有意(Pが0.05未満)であり、第2週における運動から12時間後の疼痛及び硬直に関しては、統計学的傾向(Pが約0.10)を示した。
【００７３】
(例6)
単一の衝撃の小さい適度な強度の運動レジメンに起因した閉経した健康な人間の女性の群における尿中軟骨破壊バイオマーカーCTX-IIによる関節治療用組成物の非盲検評価
次の例は、単一の衝撃の小さい適度な強度の運動レジメンに起因した閉経した健康な人間の女性の群における尿中軟骨破壊バイオマーカーCTX-IIによる関節治療用組成物の非盲検評価の説明に資するものである。CTX-IIレベルは、例1の場合と同様に報告されているが、最後の運動を完了した後12〜24時間以内に収集した朝から2回目の排尿から判定した。下記に記載の研究は、Good Clinical Practice(Title 21、Code of Federal Regulations、Parts 50 & 56及びICH E6)というU.S. Food & Drug Administrationsの基本方針及びDeclaration of Helsinkiに従って実施された。研究プロトコルは、正式な認可を受けた治験審査委員会(IRB)によって承認されており、すべての対象が、参加のために書面による同意書を提出した。
【００７４】
全員が1週間当たり2回より少ない運動を行った健康な膝関節(膝の疼痛又は硬直がない)を有する30人の閉経した女性(年齢範囲46〜72歳)の同じ群(例5のもの)を、(3週間の休養期間後に)異なる2つの処置群のうちの1つに再ランダム化した。すべての対象が、同じ衝撃の小さい適度な強度の運動レジメン(連続する2週間にわたって隔日で、シーテッドステッププレス(Cybex(登録商標)という商標)により最大7分間、それぞれが90ポンド(41kg)の8回の持ち上げを3セット)を実施した。群1の対象は、運動レジメンを開始する前に、7日間にわたって、粉末状卵殻膜関節治療用組成物(NEM(登録商標)という商標の卵殻膜として市販)の500mgカプセルを1日当たり1個消費し、2週間の運動期間(合計3週間)の間処置を受け続けた。群2の対象は、同じ粉末状卵殻膜関節治療用組成物の500mgカプセルを1日当たり1個消費したが、2週間の運動期間の1日目に処置を受け始め、残りの時間(合計2週間)の全体を通してこのようにし続けた。すべての対象が、基礎CTX-IIレベル判定のためのベースライン尿試料及びベースラインに対するCTX-IIレベルの比較のための各週の週末における尿試料を提供した。Table 5(表5)は、研究対象の2つ群に関するベースライン人口統計データを収載している。
【００７５】
【表５】
2019517007.tif 000007
【００７６】
上記群は、独立した群のためのノンパラメトリックMann-Whitney U検定を使用したベースライン人口統計データのいずれにおいても、統計学的に異なっていなかった。これらの群の尿中CTX-IIレベルが、例5において3週間の休養期間後に見出されたものに類似したレベルに戻ったことも、有意である。やはり、CTX-IIレベルは、関節炎の対象に関して予想され、且つ、女性の年齢及びホルモンステータスの予想正常範囲(上記Table 1(表1)を参照されたい)に十分に収まる範囲の厳密な下限において平均CTX-IIレベルを有する、健康な閉経した女性であることと整合する。Table 6(表6)は、連続する2週間にわたって指定された運動レジメンを実施した後の2つの対象の群に関する尿中CTX-II結果を示している。
【００７７】
【表６】
2019517007.tif 000008
【００７８】
いずれの群にも、尿中CTX-IIに関するベースラインからの統計学的な差異が存在しておらず、これは、(同じ運動レジメンを実施した)例5の群Cにおいて見出された結果とは有意に異なり、NEM(登録商標)という商標の卵殻膜関節治療用組成物が、運動によって軟骨代謝回転を誘発させるように設計されたこの臨床試験において軟骨保護型(軟骨節約型)であることを指し示している。群1と群2とには、疼痛又は硬直のカテゴリーのいずれに関してもやはり統計学的に有意な差異が存在しなかったため(概要に関しては、Table 7(表7)を参照されたい)、群Cの例5のうちの同じ10人の対象を、関節治療用組成物を消費しながらではない場合の同じ運動レジメン(概要に関しては、Table 8(表8)を参照されたい)を実施することにより、例5において得られたこれらの対象の結果と直接比較した。
【００７９】
【表７】
2019517007.tif 000009
【００８０】
【表８】
2019517007.tif 000010
【００８１】
(例7)
単一の衝撃の小さい適度な強度の運動レジメンに起因した閉経した健康な人間の女性の群における尿中軟骨破壊バイオマーカーCTX-IIによる関節治療用組成物のランダム化二重盲検プラセボ対照評価。
次の例は、単一の衝撃の小さい適度な強度の運動レジメンに起因した閉経した健康な人間の女性の群における尿中軟骨破壊バイオマーカーCTX-IIによる関節治療用組成物のランダム化二重盲検プラセボ対照評価の説明に資するものである。CTX-IIレベルは、例1の場合と同様に報告されているが、最後の運動を完了した後12〜24時間以内に収集した朝から2回目の排尿から判定した。下記に記載の研究は、Good Clinical Practice(Title 21、Code of Federal Regulations、Parts 50 & 56及びICH E6)というU.S. Food & Drug Administrationsの基本方針及びDeclaration of Helsinkiに従って実施された。研究プロトコルは、正式な認可を受けた治験審査委員会(IRB)によって承認されており、すべての対象が、参加のために書面による同意書を提出した。
【００８２】
全員が1週間当たり2回より少ない運動を行った健康な膝関節(膝の疼痛又は硬直がない)を有する60人の閉経した女性(年齢範囲44〜71歳)の群を、2つの盲検処置群(500mgのNEM(登録商標)という商標の卵殻膜又は500mgのプラセボを毎日)のうちの1つにランダム化した。すべての対象が、同じ衝撃の小さい適度な強度の運動レジメン(連続する2週間にわたって隔日で10分未満の間、脚1本当たり50〜100回のステップ)を実施した。各参加者が実施することになるステップの数は、スクリーニングのときに決定されており、参加者は、試験全体を通して、このセット数のステップを実施した。すべての対象が、基礎CTX-IIレベル判定のためのベースライン尿試料及び処置群間CTX-IIレベルの比較(即ち、治療薬対プラセボ)のための各週の週末における尿試料を提供した。Table 9(表9)は、研究対象の2つの群に関するベースライン人口統計データを収載している。
【００８３】
【表９】
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【００８４】
上記群は、独立した群のためのパラメトリックなスチューデントのt検定を使用したベースライン人口統計データのいずれにおいても、統計学的に異なっていなかった。やはり、CTX-IIレベルは、関節炎の対象に関して予想され、且つ、女性の年齢及びホルモンステータスの予想正常範囲(上記Table 1(表1)を参照されたい)に十分に収まる範囲の厳密な下限において平均CTX-IIレベルを有する、健康な閉経した女性であることと整合する。Table 10(表10)は、連続する2週間にわたって指定された運動レジメンを実施した後の2つの対象の群に関する尿中CTX-II結果を示している。
【００８５】
【表１０】
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【００８６】
NEM処置群は、第1週と第2週の両方において、プラセボに対する統計学的に有意なCTX-IIの低減を示しており、NEM(登録商標)という商標の卵殻膜関節治療用組成物が、運動によって軟骨代謝回転を誘発させるように設計されたこの臨床試験において軟骨保護型(軟骨節約型)であることをやはり指し示している。NEM処置群もまた、7日目及び11日目における運動の直後、並びに、8〜14日目並びに4日目、8日目、12日目及び14日目のそれぞれにおける運動から12時間後の疼痛及び硬直において、統計学的に有意な硬直の低減を示した(図2を参照されたい)。これは、NEM(登録商標)という商標の卵殻膜関節治療用組成物もまた、運動に起因した症候(即ち、疼痛及び硬直)を低減し、運動からの回復を補助することを実証している。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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