(57)【要約】  本開示の態様及び実施形態は、置換免疫療法薬としてインターロイキン１２（ＩＬ−１２）を含む治療方法を提供する。該方法は、外因性ＩＬ−１２の生理学的投与量を被験体に投与する工程を含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
置換免疫療法薬としてＩＬ−１２を投与する方法であって、該方法は：
（ａ）必要とする被験体を同定する工程であって、被験体は、内因性ＩＬ−１２発現の抑制をもたらす疾患又は創傷に苦しんでいる、工程；及び
（ｂ）被験体に外因性ＩＬ−１２の１つ以上の生理学的投与量を投与する工程
を含む方法。
【請求項２】
外因性ＩＬ−１２の１つ以上の生理学的投与量の投与前に、被験体には、約５ｐｇ／ｍｌ未満のＩＬ−１２発現レベルがある、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
被験体には約３ｐｇ／ｍｌ未満又は約１ｐｇ／ｍｌ未満のＩＬ−１２発現レベルがある、ことを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ＩＬ−１２の外因性の生理学的投与量は、ＩＬ−１２  ｐ７０について標準のＥＬＩＳＡにより測定されるように、１ｍｌ当たり約１ピコグラムを超え且つ１ｍｌ当たり約２００ピコグラム未満の、被験体の末梢血中のＮＭ−ＩＬ−１２の範囲をもたらす、ことを特徴とする請求項１乃至３の何れか１つに記載の方法。
【請求項５】
（ａ）被験体の末梢血中のＩＬ−１２の測定可能なレベルが、末梢血中のＩＦＮ−ガンマの増加も示し；及び／又は
（ｂ）被験体の末梢血中のＩＬ−１２の測定可能なレベルが末梢血中のＩＦＮ−ガンマの付随的な増加も示し、ここで、ＩＬ−１２の投薬後のＩＦＮ−ガンマの付随的なレベルは約２０ｐｇ／ｍｌから約１０００ｐｇ／ｍｌの範囲にある
ことを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ＩＬ−１２の外因性の生理学的投与量が約１μｇを超え且つ約２０μｇ未満である、ことを特徴とする請求項１乃至５の何れか１つに記載の方法。
【請求項７】
ＩＬ−１２の外因性の生理学的投与量が約８μｇを超え且つ最大約１５μｇである、ことを特徴とする請求項１乃至６の何れか１つに記載の方法。
【請求項８】
ＩＬ−１２の外因性の生理学的投与量が約１０μｇを超え且つ最大約１２μｇである、ことを特徴とする請求項１乃至７の何れか１つに記載の方法。
【請求項９】
疾患又は創傷のための処置の経過中に、被験体は２つの生理学的投与量レベルのＩＬ−１２：１つ以上の処置量のＩＬ−１２及び１つ以上の維持量のＩＬ−１２を与えられる、ことを特徴とする請求項１乃至８の何れか１つに記載の方法。
【請求項１０】
（ａ）ＩＬ−１２の処置量は、約１μｇを超え且つ約２０μｇ未満であり；及び
（ｂ）ＩＬ−１２の維持量は、約１μｇを超え且つ約１０μｇ未満である
ことを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
（ａ）ＩＬ−１２の処置量は、約２週ごと、約３週ごと、又は約４週ごとに与えられ；及び／又は
（ｂ）ＩＬ−１２の維持量は、約１か月ごと、約２か月ごと、又は約３か月ごとに与えられる
ことを特徴とする請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
（ａ）ＩＬ−１２の１つ以上の生理学的投与量は任意の薬学的に許容可能な手段により投与され；及び／又は
（ｂ）ＩＬ−１２の１つ以上の生理学的投与量は、局所、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、硬膜外、又は非経口で投与される
ことを特徴とする請求項１乃至１１の何れか１つに記載の方法。
【請求項１３】
ＩＬ−１２はｒＨｕＩＬ−１２である、ことを特徴とする請求項１乃至１２の何れか１つに記載の方法。
【請求項１４】
（ａ）内因性ＩＬ−１２発現の抑制は、抗原提示細胞及び樹状細胞を含む、主要な免疫細胞の抑制をもたらし；及び／又は
（ｂ）外因性ＩＬ−１２の投与は、被験体の必要性に基づいて、内因性ＩＬ−１２発現に関連する多面的で、修復的で、抗感染性で、且つ非腫瘍性の反応を含む、内因性ＩＬ−１２の多面的な免疫効果及び造血効果を回復し；及び／又は
（ｃ）前記方法が、疾患及び／又は創傷を抱える被験体のための結果の改善をもたらす
ことを特徴とする請求項１乃至１３の何れか１つに記載の方法。
【請求項１５】
被験体は慢性腎疾患（ＣＫＤ）を抱え、外因性ＩＬ−１２の投与は、腎臓の修復及び再生をもたらし、それによりＣＫＤの進行を遅くする、ことを特徴とする請求項１乃至１４の何れか１つに記載の方法。
【請求項１６】
（ａ）ＣＫＤの進行は、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約１００％遅くされ；及び／又は
（ｂ）ＣＫＤの進行の遅延は、被験体において、クレアチニンの減少、血中尿素窒素（ＢＵＮ）の減少、タンパク尿の減少、又は糸球体濾過率（ＧＦＲ）の増加の１以上によって実証され；及び／又は
（ｃ）外因性ＩＬ−１２の投与は、ＣＫＤの従来の処置と組み合わせて使用される
ことを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
被験体は創傷を抱え、外因性ＩＬ−１２の投与は、創傷治癒と組織修復を補助するために組織への細胞の容易な移動をもたらし、それにより創傷の治癒の加速をもたらす、ことを特徴とする請求項１乃至１４の何れか１つに記載の方法。
【請求項１８】
（ａ）被験体は高齢であり；
（ｂ）被験体は糖尿病であり；
（ｃ）被験体は高齢であり、且つ褥瘡を抱え；
（ｄ）被験体は糖尿病であり、且つ足潰瘍を抱え；及び／又は
（ｅ）創傷は外科的創傷である
ことを特徴とする請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
（ａ）外因性ＩＬ−１２の投与は結果として、外因性ＩＬ−１２の投与が無い状態で観察される治癒の速度と比較して、創傷治癒を、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約１００％速め；及び／又は
（ｂ）外因性ＩＬ−１２の投与は、創傷の従来の処置と組み合わせて使用される
ことを特徴とする請求項１７又は１８に記載の方法。
【請求項２０】
被験体は加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を抱え、外因性ＩＬ−１２の投与は、ＡＭＤの進行の遅延又は逆転をもたらす、ことを特徴とする請求項１乃至１４の何れか１つに記載の方法。
【請求項２１】
（ａ）ＡＭＤの進行は、（ｉ）ＩＬ−１２が多数の血管新生因子に対する広範な抗血管新生効果を持つことから、新生血管形成を減らし；及び／又は（ｉｉ）老化マクロファージの補充により免疫平衡を回復させるＩＬ−１２の効果によって遅くされ又は逆転され；及び／又は
（ｂ）外因性ＩＬ−１２の投与は結果として、外因性ＩＬ−１２の投与が無い状態で観察されるものと比較して、ＡＭＤの進行を、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約１００％遅くし又は逆転し；及び／又は
（ｃ）外因性ＩＬ−１２の投与は、ＡＭＤの従来の処置と組み合わせて使用される、ことを特徴とする請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
（ａ）被験体は、眼内以外の任意の経路を介してＩＬ−１２を投与され；
（ｂ）被験体は皮下注射を介してＩＬ−１２を投与され；又は
（ｃ）被験体は眼内注射を介してＩＬ−１２を投与される
ことを特徴とする請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２３】
被験体は骨粗鬆症に苦しみ、外因性ＩＬ−１２の投与は、結果として造血幹細胞に骨髄中の細胞を再生成且つ動員させる、ことを特徴とする請求項１乃至１４の何れか１つに記載の方法。
【請求項２４】
（ａ）外因性ＩＬ−１２の投与は結果として骨損失を減らし；
（ｂ）外因性ＩＬ−１２の投与は結果として破骨細胞形成を減らし；及び／又は
（ｃ）外因性ＩＬ−１２の投与は結果として、外因性ＩＬ−１２の投与が無い状態で観察されるものと比較して、骨損失及び／又は破骨細胞形成を、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約１００％減らし；及び／又は
（ｄ）外因性ＩＬ−１２の投与は、骨粗鬆症の従来の処置と組み合わせて使用される
ことを特徴とする請求項２３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１６年７月１８日出願の米国仮特許出願第６２／３６３，６８４号の優先権の利益を主張するものであり、その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。
技術分野
【０００２】
本開示は通常、置換免疫療法（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ）においてＩＬ−１２を利用する方法及び組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
以下には、本開示の様々な態様と実施形態を理解するのに役立ち得る情報が含まれる。本明細書に提供される情報の何れかが先行技術である、或いは現在記載又は請求される発明に関連するものであること、或いは、具体的又は暗黙に言及されるあらゆる刊行物又は文書が先行技術であることは、認められるものではない。
【０００４】
インターロイキン１２（ＩＬ−１２）は、免疫における役割が周知であるｐ４０とｐ３５両方のサブユニットを含む、ヘテロ二量体サイトカインである。約２０年間におよぶ多数の報告において、ＩＬ−１２は、炎症反応、先天性の感染抵抗性、及び適応免疫の調節による免疫の先天性及び適応性のアーム間の相互作用において不可欠な役割を持つことが示されている。内因性ＩＬ−１２は、多くの病原体、及び移植可能であり且つ化学的に誘導された腫瘍に対する抵抗性のために、必要とされる。免疫におけるＩＬ−１２の顕著な効果は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、及びＴ細胞からのインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）の産生を刺激する能力である。更に、９０年代初期から中期での様々なインビトロの研究は、ＩＬ−１２が他のサイトカインにより造血を相乗的に刺激可能であることを報告した。ＩＬ−１２の造血促進活性は、使用されたこれらの研究が高度に精製された前駆細胞又は単細胞をも使用したため、骨髄幹細胞に対する直接作用によるものと思われる。様々な研究が造血の促進及び抑制の両方をＩＦＮガンマに関連づけたため、ＩＬ−１２の造血活性におけるＩＦＮガンマの役割は不明確である。
【０００５】
ＩＬ−１２は、全身放射への暴露の前又はその直後に使用された時、放射線防護機能を持つと示されている。ＩＬ−１２は、電離放射線から骨髄を保護し、且つ電離放射線に対して腸管を敏感にする。ＩＬ−１２は、電離放射後の内因性造血の回復及び幹細胞の移植の両方を容易にする。
【０００６】
ＩＬ−１２は十分に特徴づけられたサイトカインである。１９８９年、ＩＬ−１２は独立的に、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，  Ｉｎｃ．及びＴｈｅ  Ｗｉｓｔａｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｎａｔｏｍｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙによってナチュラルキラー刺激因子（ＮＫＳＦ）であると同定された。１９９０年、ＩＬ−１２は独立的に、Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ，  Ｉｎｃにより細胞障害性リンパ球成熟因子（ＣＬＭＦ）であると同定された。１９９１年、ＩＬ−１２  ｃＤＮＡは、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，  Ｉｎｃによりクローン化され且つインターロイキン１２と命名された。１９９３年、先天免疫及び適応免疫を調節し且つ架橋する際のＩＬ−１２の中心的な役割が発見された。１９９５年、ＩＬ−１２の抗血管新生特性が発見された。１９９６年、ＩＬ−１２受容体はＨｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ，  Ｉｎｃにより特徴づけられた。１９９３−２００２年に、ＩＬ−１２の抗腫瘍活性及び抗転移活性が、黒色腫、乳癌、結腸癌、腎癌、及び肉腫を含むマウスモデルにおいて広範囲に示された。１９９７−２００４年に、ＩＬ−１２の主に単独療法が、癌患者において調査された。ＣＴＣＬ、ＡＩＤＳ関連性カポジ肉腫、ＮＨＬ、及び黒色腫を除き、効能は単一の薬剤として最小であった。癌患者における限定的な臨床的効能の理由は、タキフィラキシー（脱感作）を引き起こす、利用された高度且つ繰り返しの投与量レジメンによるものであった。
【０００７】
２００３−２００７年に、Ｎｅｕｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  Ｉｎｃは、ＩＬ−１２の単一の低投与量がマウスにおける致命的な電離放射後に内因性造血の回復を容易にすることを発見した。２００５−２００８年に、Ｎｅｕｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  Ｉｎｃは、骨髄抑制された（ｍｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ）、癌を抱えるマウスモデルのシステムにおいて、抗造血（ｐｒｏ−ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ）及び抗腫瘍活性（造血性免疫治療効果）の両方を実証した。２００８年−現在、ＮｅｕｍｅｄｉｃｉｎｅｓとＢＡＲＤＡの共同により、放射線医学の対策としてＩＬ−１２の開発が開始された。２００９−２０１４年に、Ｎｅｕｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  Ｉｎｃは、サルにおける放射線医学の対策としてＩＬ−１２の効能（造血効果）を実証し、且つ健康なボランティアにおける安全性を実証した。
【０００８】
内因性のＩＬ−１２の発現の抑制をもたらすという点で関連づけられる、基礎的な免疫抑制により様々な疾患及び創傷を処置する方法が、当該技術分野で必要とされている。
【発明の概要】
【０００９】
本開示は、置換免疫療法薬（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）としてＩＬ−１２を投与する方法を提供し、該方法は、（ａ）必要とする被験体を同定する工程であって、被験体は内因性ＩＬ−１２発現の抑制をもたらす疾患又は創傷に苦しんでいる、工程；及び（ｂ）被験体に外因性ＩＬ−１２の１つ以上の生理学的投与量を投与する工程を含む。内因性ＩＬ−１２発現の抑制は、抗原提示細胞及び樹状細胞を含む、主要な抑制免疫細胞の抑制をもたらすことができる。
【００１０】
本発明の１つの態様において、外因性ＩＬ−１２の１つ以上の生理学的投与量の投与前に、処置される患者集団は、約５ｐｇ／ｍｌ未満又は約１ｐｇ／ｍｌ未満のＩＬ−１２発現レベルを持つ。一般的に、処置される患者は、１ｐｇ／ｍｌ未満のＩＬ−１２発現レベルを持ち、或いは検出下限値（ＬＬＯＤ）より下の発現レベルを持つ。
【００１１】
本発明の１つの実施形態において、外因性ＩＬ−１２の生理学的投与量の投与は、内因性ＩＬ−１２発現に関連する多面的で、修復的で、抗感染性で、且つ非腫瘍性の反応を含む、内因性ＩＬ−１２の多面的な免疫効果及び造血効果を回復する。更に、外因性ＩＬ−１２の生理学的投与量の投与は、慢性疾患及び創傷を抱える被験体のための結果の改善をもたらし得る。
【００１２】
本発明の別の実施形態において、ＩＬ−１２の外因性の生理学的投与量は、ＩＬ−１２  ｐ７０について標準のＥＬＩＳＡにより評価されるように、１ｍｌ当たり約５ピコグラムを超え且つ１ｍｌ当たり約２００ピコグラム未満の、末梢血中のＮＭ−ＩＬ−１２の範囲をもたらす。被験体の末梢血中のＩＬ−１２の測定可能なレベルはまた、末梢血中のＩＦＮ−ガンマの付随的な増加を示すことができ、更には、投薬後のＩＦＮ−ガンマの付随的なレベルは、約２０ｐｇ／ｍｌから最大約１０００ｐｇ／ｍｌの範囲にあり得る。
【００１３】
更に、ＩＬ−１２の外因性の生理学的投与量は、約１μｇを超え且つ約２０μｇ未満、約８μｇを超え且つ最大約１５μｇ、或いは約１０μｇを超え且つ最大約１２μｇであり得る。
【００１４】
また別の実施形態において、疾患又は創傷のための処置の経過中、被験体は、ＩＬ−１２の２つの生理学的投与量レベル：処置量及び維持量を与えられ得る。投与量の２つのタイプは同じ又は異なるものであり得る。例えば、ＩＬ−１２の処置量は、約１μｇを超え且つ約２０μｇ未満であり；及び／又は、ＩＬ−１２の維持量は、約１μｇを超え且つ約１０μｇ未満であり得る。更に、ＩＬ−１２の処置量は、約２週ごと、約３週ごと、又は約４週ごとに与えられ；及び／又はＩＬ−１２の維持量は、約１か月ごと、約２か月ごと、又は約３か月ごとに与えられ得る。
【００１５】
ＩＬ−１２の１つ以上の生理学的投与量は、局所、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、硬膜外、又は非経口的を含むがこれらに限定されない任意の薬学的に許容可能な手段により投与することができる。
【００１６】
ＮＭ−ＩＬ−１２は、組み換え型ヒトＩＬ−１２、例えばｒＨｕＩＬ−１２であり得る。
【００１７】
本発明の１つの実施形態において、被験体は慢性腎疾患を抱え、外因性ＩＬ−１２の投与は、腎臓の修復及び再生をもたらし、それによりＣＫＤの進行を遅くする。ＣＫＤの進行の遅れは、例えば下記の被験体の１以上によって実証され得る：クレアチニンの減少、血中尿素窒素（ＢＵＮ）の減少、タンパク尿の減少、又は糸球体濾過率（ＧＦＲ）の増加。例えば、外因性ＮＭ−ＩＬ−１２の投与は、外因性ＩＬ−１２の投与が無い状態で観察される進行と比較して、ＣＫＤの進行を、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約１００％遅くすることができる。外因性ＩＬ−１２の投与は、ＣＫＤの従来の処置と組み合わせて使用することができる。
【００１８】
本発明の別の実施形態において、被験体は創傷を抱え、外因性ＩＬ−１２の投与は、創傷治癒と組織修復を補助するために組織への細胞の容易な移動をもたらし、それにより創傷の治癒の加速をもたらす。被験体は、高齢の被験体、糖尿病患者、又は外科的創傷を抱える被験体を含むがこれらに限定されずない、創傷を抱える人であり得る。他の実施形態において、被験体は高齢であり且つ褥瘡を抱え、或いは、被験体は糖尿病であり且つ足潰瘍を抱える。外因性ＮＭ−ＩＬ−１２の投与は、外因性ＩＬ−１２の投与が無い状態で観察される治癒の速度と比較して、治癒を、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約１００％速くすることができる。外因性ＩＬ−１２の投与は、創傷の従来の処置と組み合わせて使用することができる。
【００１９】
１つの実施形態において、被験体は加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を抱え、外因性ＩＬ−１２の投与は、ＡＭＤの進行の遅延又は逆転をもたらす。例えば、ＡＭＤの進行は、（ｉ）ＩＬ−１２が多数の血管新生因子に対する広範囲の抗血管新生効果を持つことにより新生血管形成（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）を減少させる、及び／又は（ｉｉ）老化マクロファージの補充により免疫平衡を回復させる、ＩＬ−１２の効果によって遅延又は逆転され得る。外因性ＩＬ−１２の投与は、ＡＭＤの従来の処置と組み合わせて使用することができる。１つの実施形態において、外因性ＩＬ−１２の投与は、外因性ＩＬ−１２の投与が無い状態で観察されるものと比較して、ＡＭＤの進行を、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約１００％遅延又は逆転する。別の実施形態において、ＩＬ−１２は、（ｉ）任意の経路を介して；（ｉｉ）眼内以外の経路を介して、（ｉｉｉ）皮下注射を介して、又は（ｉｖ）眼内注射を介して投与され得る。
【００２０】
別の実施形態において、被験体は骨粗鬆症に苦しみ、外因性ＩＬ−１２の投与は、結果として造血幹細胞に骨髄中の細胞を再生成且つ動員させる。外因性ＩＬ−１２の投与は、骨損失の減少及び／又は破骨細胞形成の減少をもたらし得る。例えば、外因性ＩＬ−１２の投与は、外因性ＩＬ−１２の投与が無い状態で観察されるものと比較して、骨損失及び／又は破骨細胞形成を、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約１００％減少させることができる。外因性ＩＬ−１２の投与は、骨粗鬆症の従来の処置と組み合わせて使用することができる。
【００２１】
本明細書に記載且つ請求される本発明は、多くの特質及び実施形態を有しており、限定されないが、この概要に説明、記載、又は参照されるものが含まれる。これは、全てを含むようには意図されておらず、本明細書に記載且つ請求される本発明は、制限ではなく単なる例示目的のために含まれる、この概要において識別される特徴又は実施形態に、或いはそれによって制限されるものではない。付加的な実施形態は、以下の詳細な説明に開示され得る。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】ＮＭ−ＩＬ−１２が、再生する（血液細胞系を全て補充するよう機能する、幹細胞及び前駆細胞を介して）、根絶する（先天免疫（ＮＫ細胞）及び適応免疫（ＣＤ８＋及びＣＤ４＋細胞）を介した、ウイルス、細菌、及び腫瘍）、及び修復する（創傷治癒、組織修復、及び免疫学的監視）、幹細胞、造血細胞因子、及び免疫細胞因子であることを図解で実証する。
【図２】放射線暴露（例えば骨髄切断）（Ａ）の後のＮＭ−ＩＬ−１２を評価し、細胞の再生（Ｂ）が著しく増強したことを実証する、非ヒト霊長類における非臨床研究の写真を示す。更に、ＮＭ−ＩＬ−１２は、組織損傷（Ｃ）の修復を実証する際にストーマ閉鎖した（ｓｔｏｍａ  ｔａｋｅｄｏｗｎ）患者において臨床的な成功が見られ、分子は、外科的切開により引き起こされた組織損傷の著しく速められた閉鎖（１００％）（Ｄ）を実証する。最後に、ＮＭ−ＩＬ−１２は、腫瘍増殖の根絶における臨床的な成功が見られ、ＩＬ−１２は、根絶において結果として生じる皮膚Ｔ細胞リンパ腫患者を処置し（Ｅ）、その結果、根絶、及び完全な持続的反応（Ｆ）をもたらすために使用される。
【図３】どのようにしてＮＭ−ＩＬ−１２が、ＣＤ３４＋細胞、幹細胞、前駆細胞、巨核球、リンパ芽球、肉芽性芽細胞、未熟なＮＫ細胞、及び網状赤血球などの骨髄中の細胞の刺激によって造血を刺激するかを、図解で表す。ＮＭ−ＩＬ−１２はまた、創傷治癒と組織修復を補助するために血液から組織への細胞の移動を容易にする。
【図４】３つの典型的な疾患条件：糖尿病性足部潰瘍（ＤＦＵ）、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、及び骨粗鬆症において再生、根絶、及び修復を誘導する時の、ＮＭ−ＩＬ−１２の効果を図解で示す。
【図５】２つの典型的な疾患状態：びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）及び加齢黄斑変性（ＡＭＤ）におけるＮＭ−ＩＬ−１２が再生、根絶、及び修復を誘導する時の、ＮＭ−ＩＬ−１２の効果を図解で示す。
【図６】どのようにして慢性疾患又は老化が、主な免疫細胞、即ち抗原提示細胞／樹状細胞を抑制し、ＩＬ−１２産生を阻害し、それにより免疫能力を減少させるかを、図解で表す。
【図７】図６で提供される問題の解決策を図解で示すものであり、前記解決策は、重要な免疫能力を回復させ、それにより慢性疾患、癌、感染、及び加齢を抱える患者に関する結果を改善することによって、外因性ＮＭ−ＩＬ−１２が、多面的で修復的な抗感染性反応及び抗腫瘍性反応を再発させる（ｒｅｉｇｎｉｔｅｓ）時の、ＩＬ−１２の使用である。
【図８】どのようにしてＮＭ−ＩＬ−１２が置換免疫療法薬として、全ての重要な免疫エフェクター細胞に、及び骨髄の未熟な前駆細胞と幹細胞に見出される特有のＩＬ−１２受容体との相互作用を介して、（Ｌａｓｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，  ６３：４１９  （２０１４）から採用される）内因性ＩＬ−１２の多面的な免疫効果及び造血効果を回復するかを視覚的に表す。
【図９】ＥＰＯの発現が腎臓の骨髄性細管（ｋｉｄｎｅｙ  ｍｅｄｕｌｌａｒｙ  ｔｕｂｕｌｅｓ）から生じると示されることを示している。ヒトの皮質及び髄質からのスライドが、アカゲザルの髄質からのスライドと共に示されており、ヒトの皮質の細管ではなくヒト及びアカゲザルにおける骨髄性細管におけるＩＬ−１２Ｒベータ２の発現を例示する。
【図１０】単一の低用量のＮＭ−ＩＬ−１２がアカゲザルにおいてＥＰＯを誘導し、網状赤血球、即ち赤血球の前駆体の増加を引き起こすことを示す。ＥＰＧ（ｐｇ／ｍＬ）対時間が３つの処置群について示される：群１＝０ｎｇ／ｋｇのＮＭ−ＩＬ−１２（ｎ＝３）；群２＝５０ｎｇ／ｋｇのＮＭ−ＩＬ−１２（ｎ＝３）；及び群３＝５００ｎｇ／ｋｇのＮＭ−ＩＬ−１２（ｎ＝４）。また図面には、同じ３つの処置群についての網状赤血球（％変化）対時間のグラフが示される。
【図１１】単一の低用量のＮＭ−ＩＬ−１２（１２μｇ）がヒトにおいてＥＰＯを直接誘導することを示す。グラフは２つの処置群についての経時的なＥＰＯ（ｐｇ／ｍＬ）を表している：群１＝ＮＭ−ＩＬ−１２を、１２μｇの単回投与でＳＣ投与された、ｎ＝４の被験体；及び群２＝プラセボを投与した、ｎ＝８の被験体。
【図１２】ＮＭ−ＩＬ−１２の単一の低用量のＳＣ注射が、身体に必要とされるような、組織修復と再生のための循環する成熟末梢血赤血球及び未熟のＣＤ３４＋造血前駆細胞を動員すると見出されたことを示す。Ａ−Ｆは、健康なボランティアにおける１２μｇのＮＭ−ＩＬ−１２（４８の被験体）又はプラセボ（１２の被験体）による血液学的変化を示しており、Ａ＝網状赤血球、Ｂ＝血小板、Ｃ＝ＣＤ３４＋細胞、Ｄ＝リンパ球、Ｅ＝好中球、及びＦの＝ＮＫ細胞である。
【図１３】創傷が治癒していない糖尿病患者及び高齢者における遅い創傷治癒の閉鎖を速める際のＩＬ−１２の予期される有用性を視覚的に表す。
【図１４】創傷治癒の刺激におけるＩＬ−１２の以前に確認されていない役割が、標準の皮膚組織（Ａ）、創傷を受けた皮膚組織（Ｂ）、及び照射された皮膚組織（Ｃ）において実証される。照射された皮膚において、ＩＬ−１２Ｒベータ２受容体は、真皮の基底膜（ＢＭ）及び毛嚢の下にある皮脂（ＳＥ）腺における前駆細胞に高度に発現されることが見出される。
【図１５】オスとメス両方のマウスへのビヒクル又は組換え型マウスＩＬ−１２（１５ｎｇ）の局所投与で得られる結果の比較による、創傷面積（０日目の％として表される）対損傷後の日の図を示す。全身照射（ＴＢＩ、５００ｃＧｙ）及び全層皮膚損傷がもたらされた、オスとメスのマウスへの組換え型マウスＩＬ−１２（ｒＭｕＩＬ−１２、１５ｎｇ、局所）の投与は、損傷の時点及び損傷の３日後と６日後に、ビヒクルで処置したマウスと比較して、創傷治癒が著しく速められ、完全な創傷の閉鎖がもたらされた。スチューデントｔ検定による統計分析、＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．０１。
【図１６】糖尿病の背景を抱えるＺｕｋｅｒラットにおけるビヒクル及び２つの異なる用量の組換え型マウスＩＬ−１２（ｒＭｕＩＬ−１２、１５及び４７４ｎｇ、局所）の局所投与で得られる結果の比較による、創傷面積（０日目の％として表される）対損傷後の日の図を示す。ｒＭｕＩＬ−１２の単回投与により、全層損傷の治癒が著しく速められた。スチューデントｔ検定による統計分析、＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．０１。
【図１７】４つの処置群についての創傷面積（０日目の％として表される）対損傷後の日の図を示す：ビヒクル（局所）、１５ｎｇのｒＭｕＩＬ−１２局所３ｘ／日、１５ｎｇのｒＭｕＩＬ−１２局所１ｘ／日、及び２０ｎｇのｒＭｕＩＬ−１２皮下（ＳＣ）１ｘ／日。２０ｎｇのｒＭｕＩＬ−１２  ＳＣ  １ｘ／日を受けた動物は著しく最も速い創傷治癒を示し、１５ｎｇのｒＭｕＩＬ−１２局所３ｘ／日を受ける動物は次の最も速い治癒速度を示した。スチューデントｔ検定による統計分析、＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．０１、＊＊＊ｐ≦０．００１。
【図１８】Ａはビヒクルの局所投与後の創傷の写真を示し、一方でＢは創傷の著しい治癒を示し、ＳＣ  ｒＭｕＩＬ−１２で得られた結果（２０ｎｇ、図１７のデータから生成）を表している。
【図１９】蛍光寿命顕微鏡検査を使用した、治癒中に創傷のある皮膚における代謝活性の動力学を示す。蛍光寿命（ｐｓ）対研究日のグラフは、治療中に創傷のある皮膚における代謝活性の動力学を示す。２日目の創傷のあるプラセボ群と比較して、ＳＣ  ｒＭｕＩＬ−１２＋創傷群には著しく長い蛍光寿命がある（‡、ｐ＜０．０５）。３日目の創傷のない群と比較して、ＳＣ  ｒＭｕＩＬ−１２＋創傷群には著しく長い蛍光寿命がある（‡、ｐ＜０．０５）。最後に、０日目と比較して、ｒＭｕＩＬ−１２＋創傷群には、２及び３日目に著しく長い蛍光寿命がある（＊、ｐ＜０．０５）。
【図２０】どのようにしてＮＭ−ＩＬ−１２が置換療法薬として、感染症と戦い且つ創傷を治癒する、内因性のＩＬ−１２の多面的な免疫効果と造血効果を回復するのかを、図解で表す（Ｌａｓｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，  ６３：４１９  （２０１４）から採択される）。
【図２１】どのようにしてＡＭＤにおけるＮＭ−ＩＬ−１２の多面的効果が、（ｉ）ＩＬ−１２が複数の血管新生因子に広範囲の抗血管新生効果を持つことから新生血管形成を少なくすること；（ｉｉ）目における「免疫融解」の重要な媒介物質であるＩＬ−１７を抑えること；及び（ｉｉｉ）初老のマクロファージの補充により免疫平衡を回復させることによって、進行を逆転させると予測されるのかを、図解で表す。
【図２２】塩基性線維芽細胞増殖因子で誘導された（ペレットＰ）マウス角膜新生血管形成に対する組換え型マウスＩＬ−１２の効果を示す。Ａ−Ｆは、塩基性線維芽細胞増殖因子ペレット（Ｐ）の移植の５日後の、ビヒクル処置した（対照）Ｃ５７  ＢＬ／６マウス（Ａ）、ＳＣＩＤマウス（Ｂ）、及びベージュマウス（Ｃ）、又は１２−処置したＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｄ）、ＳＣＩＤマウス（Ｅ）、及びベージュマウス（Ｆ）の角膜を表す写真を表す。図面は、ｒＭｕＩＬ−１２が血管新生の阻害剤であることを示す。
【図２３】レーザーで誘導された眼損傷モデル（実験的な脈絡膜新生血管形成）における平均病変体積に基づく眼内の組換え型マウスＩＬ−１２に関する用量応答を示す。０．１及び１ｎｇ／目でのｒＭｕＩＬ−１２は、（蛍光標識した抗コラーゲンＩＶ抗体染色の分析から判定される）平均血管病変体積を著しく減らした。スチューデントｔ検定による統計分析、＊ｐ≦０．０２、０．１及び１ｎｇ／目のｒＭｕＩＬ−１２の両方に関するビヒクル単独と比較される。
【図２４】レーザーで誘導された眼損傷モデルにおける、ビヒクルの眼内投与又は組換え型マウスＩＬ−１２の投与後の蛍光の血管病変の可視化を示す（Ａ＝ビヒクル；Ｂ＝０．１ｎｇのＩＬ−１２；Ｃ＝０．１ｎｇのＩＬ−１２；及びＤ＝１ｎｇのＩＬ−１２）。
【図２５】レーザーで誘導された眼損傷モデルにおける、ビヒクル（約２．６）、抗ＶＥＧＦ抗体（約１．７）、及びｒＭｕＩＬ−１２（約１．７５）での処置後の平均血管病変体積（μｍ３ｘ１０６）のグラフを示す。ｒＭｕＩＬ−１２及び抗ＶＥＧＦ抗体は、血管新生の同様に著しい阻害をもたらした。スチューデントｔ検定による統計分析、＊ｐ≦０．０５、ビヒクル単独と比較される。
【図２６】レーザーで誘導された眼損傷モデルにおける、ビヒクル（約１１２）、抗ＶＥＧＦ（約６０）、及びＩＬ−１２（約６０）での処置後の平均Ｉｂａ−１正体積（μｍ３ｘ１０３）のグラフを示す。ｒＭｕＩＬ−１２及び抗ＶＥＧＦ抗体は、血管新生の同様に著しい阻害をもたらした。スチューデントｔ検定による統計分析、＊ｐ≦０．０５、ビヒクル単独と比較される。
【図２７】ＮＭ−ＩＬ−１２がインビトロでＩＬ−１７を有意に抑える。ＰＢＭＣに加えられたＮＭ−ＩＬ−１２は、病原性のＴｈ１７／ＩＬ−１７反応を制限するのに有効である。この研究において、ヒトＰＢＭＣは２日間、０、１、及び１０ｐＭのＮＭ−ＩＬ−１２で培養された。溶解物を調製し、ＩＦＮ−γ及びＩＬ−１７のためのｍＲＮＡについて探索した（ＰＣＲ）。データは平均±ＳＥＭであり、ｐ値はスチューデントｔ検定である。予測されたように、ＩＬ−１２での処置は、抗血管新生ＩＦＮ−γを有意に増大させ（Ａ）、且つ破壊的なＩＬ−１７を有意に減らす（Ｂ）と示される。
【図２８】目の新生血管形成における標準対老化のマクロファージの役割を示す。網膜のレーザーで誘導された損傷の後、マクロファージ浸透が、若い（＜２か月）及び高齢（＞１８か月）のマウス両方に生じる。高齢のマウスにおいて、ＩＬ−１２の減少及びＩＬ−１０の増加は、目における損傷により誘導された新生血管形成を減らす能力を制限する。
【図２９】どのようにしてＮＭ−ＩＬ−１２が、ＲＡＮＫＬの天然の阻害剤として骨損失を減らし、骨髄中の骨芽細胞を増加させ、且つ、抗原提示を促進し且つ腫瘍への細胞輸送を増強することの他、ＣＤ８＋及びＮＫ細胞を活性化することによって抗腫瘍効果を持つのかを、図解で表す。
【図３０】ＴＲＡＰの数−大腿骨、例えば、非ヒト霊長類における２つの処置群（０ｎｇ／ｋｇ及び２５０ＮＭ−ＩＬ−１２ｎｇ／ｋｇ）に関する総大腿骨面積のＴＲＡＰ（酒石酸耐性酸フォスファターゼ）画分を示す。ＮＭ−ＩＬ−１２のＳＣ投与は、大腿骨において測定された破骨細胞形成の著しい減少をもたらした。スチューデントｔ検定による統計分析、＊ｐ≦０．０１、ビヒクルと比較される。
【図３１】同様に、ＴＲＡＰの数−肋骨、例えば、非ヒト霊長類における２つの処置群（０ｎｇ／ｋｇ及び２５０ＮＭ−ＩＬ−１２ｎｇ／ｋｇ）に関する総肋骨面積のＴＲＡＰ酒石酸画分を示す。ＮＭ−ＩＬ−１２のＳＣ投与は、肋骨において測定された破骨細胞形成の著しい減少をもたらした。スチューデントｔ検定による統計分析、＊ｐ≦０．０５、ビヒクルと比較される。
【図３２】マウスＩＬ−１２は、照射されたマウスにおける造血の回復を促進する。ＩＬ−１２Ｒβ２のために染色された照射されず且つ未処置のマウスの大腿部の骨髄の代表的な部分は、ＡとＢに示される。動物はＴＢＩ（８．０Ｇｙ）にさらされ、続いて、照射後の示された時間でビヒクルを皮下投与（ＣとＤ）又はｒＭｕＩＬ−１２（２０ｎｇ／マウス）を皮下投与された（ＥとＦ）。大腿部の骨髄は、照射の１２日後にＩＬ−１２Ｒβ２（橙色）について免疫組織化学的に染色された。ビヒクルで処置されたマウスの骨髄（ＣとＤ）はＩＬ−１２Ｒβ２発現細胞を欠いており、且つ造血の再生の兆候を示さなかった一方、ｒＭｕＩＬ−１２で処置されたマウス（ＥとＦ）は、造血再構成、及びＩＬ−１２Ｒβ２発現巨核球、骨髄性前駆細胞、並びに骨芽細胞の存在を示した。倍率＝１００ｘ。
【図３３】骨髄におけるＩＬ−１２、ＩＦＮ−ガンマ、及びＩＬ−１８で誘導された破骨細胞アポトーシスの機構、それによる骨損失の減少を視覚的に表す。
【図３４】健康なヒト被験体へのＮＭ＿ＩＬ−１２又はプラセボのＳＣ投与後の、時間に対するＩＦＮ−ガンマ及びＩＬ−１８の両方の循環濃度のグラフを示す。ＩＬ−１２及びその誘導された下流因子であるＩＦＮ−ガンマとＩＬ−１２は、ＲＡＮＫＬの天然阻害剤であり、それにより骨損失を減らす。＊プラセボで処置した被験体におけるＩＦＮ−ガンマの循環濃度は、定量化の制限未満であった。
【図３５】ＩＬ−１２とＩＦＮ−ガンマのベースライン値を示す。ＡとＢに示される箱ひげ図は、１１０の被験体のＩＬ−１２（３５Ａ）及びＩＦＮ−ガンマ（３５Ｂ）のベースライン値を記載し、ひげ（ｗｈｉｓｋｅｒｓ）はベースライン値の５−９５パーセンタイルをカバーする。ＩＬ−１２のベースライン値はキットの標準曲線を使用して定義された。Ａに示されるように、１１０の被験体に関する投与前ＩＬ−１２レベルは全て、定量限界未満（ＢＬＱ）（ＬＬＯＱ＝０．３６７ｐｇ／ｍｌ）であった。Ｂに示されるように、ＩＦＮ−ガンマのレベルの略全ては、ＬＬＯＱ（ＬＬＯＱ＝１．０８ｐｇ／ｍｌ）より上、大半は低いｐｇ／ｍｌ範囲で定量可能であった。被験体１０３３及び１０５５を含む５つの上限外れ値が、２３ｐｇ／ｍｌを超えるＩＦＮ−γのベースラインレベルを示した。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
Ｉ．ＮＭ−ＩＬ−１２：置換免疫療法
本発明の前に存在する問題は、慢性疾患、損傷又は創傷、老化、感染症、及び癌などの疾患に関連する外見上異なる状態が、ＩＬ−１２発現の抑制をもたらし、それにより無数の望ましくない効果をもたらしたという点で関連していたことを認識することができないというものであった。驚くことに、内因性ＩＬ−１２の産生の欠如に関連付けられる望ましくない効果は、ＩＬ−１２の生理学的投与量の投与によって対処され得ることが発見された。具体的に、慢性疾患、損傷又は創傷、及び老化などの疾患は、重大な免疫細胞、即ち抗原提示細胞／樹状細胞を抑制し、且つＩＬ−１２産生を阻害する。図６を参照。この問題の解決策は、外因性ＮＭ−ＩＬ−１２の生理学的投与量が、多面的で修復的な抗感染性及び抗腫瘍性反応を再発させ、それにより重要な免疫効果を回復し、疾患及び創傷を抱える患者の結果を改善することから、外因性ＩＬ−１２の生理学的投与量の投与である。図７を参照。また、どのようにしてＮＭ−ＩＬ−１２が置換免疫療法薬として、内因性ＩＬ−１２の多面的な免疫効果と造血効果を回復するのかを視覚的に表す、図８も参照。要するに、ＮＭ−ＩＬ−１２は、健康な場合に身体が送達可能なものを回復させる（ｇｉｖｅｓ  ｂａｃｋ）、置換免疫療法薬である。多くの病状、損傷、及び老化は、内因性ＩＬ−１２を産生する細胞を機能障害にし、且つＩＬ−１２を産生できなくする。本発明は、多くの様々な病状における置換免疫療法薬として機能し得る主要因としてのＩＬ−１２の発見に関するものである。
【００２４】
本発明の１つの態様において、外因性ＩＬ−１２の１つ以上の生理学的投与量の投与前に、処置される患者集団には、約５ｐｇ／ｍｌ未満、約４ｐｇ／ｍｌ未満、約３ｐｇ／ｍｌ未満、約２ｐｇ／ｍｌ未満、又は約１未満ｐｇ／ｍｌのＩＬ−１２発現レベルがある。一般的に、患者集団には、検出又は定量の限界未満（ＬＬＰＱ）であるＩＬ−１２レベルがある。慢性疾患、又は創傷などの疾患を抱える患者集団におけるそのようなＩＬ−１２発現レベルは、所望の又は必要なレベルの内因性ＩＬ−１２を産生できない被験体を示す。
【００２５】
内生要因の置換として役立つ画期的なタンパク薬物は、インスリン（１９６０年代に導入）、ヒト成長ホルモン（ＨＧＨ）（１９８０年代に導入）、及びＥＰＯ（１９９０年代に導入）を含む。ＮＭ−ＩＬ−１２は、独立型の処置として、又は、慢性疾患、損傷、及び老化のケア処置の標準と組み合わせて、２０２０年代にこの同じ役割の役目を果たすと構想されている。
【００２６】
修復、再生、及び根絶：様々なモデルの指標が、修復、再生、及び根絶においてＩＬ−１２の広がりを実証し、且つ、有用な置換免疫療法薬として機能することができる。具体的に、修復と再生は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、創傷治癒、及び骨粗鬆症（以下に詳述）を処置する際のＩＬ−１２の有効性によって実証され得る。樹状細胞は、身体のＩＬ−１２を産生する主要なものであるが、特定の病状において、これら細胞は、機能障害となり、そしてＩＬ−１２を放出できなくなるか、或いは十分な量で放出することができなくなる。外因性ＩＬ−１２は、ＡＭＤの治療、創傷治癒、骨粗鬆症、及びＣＫＤなど、インビボのＩＬ−１２産生の欠如に悩む疾病において修復及び再生を刺激するために内因性ＩＬ−１２（例えば「置換免疫療法薬」）を置換することができる。
【００２７】
安全性：ＩＬ−１２は特有のサイトカインである。組換え型のヒトＩＬ−１２（本明細書で「ＮＭ−ＩＬ−１２」、「ＩＬ−１２」、及びＨｅｍａＭａｘ（商標）（ｒＨｕＩＬ−１２）とも称される）は、安全であると実証されている。例えば、ＩＬ−１２の安全性は、３つの研究における＞２００の健康なボランティア、及び様々な臨床試験における患者において実証された。例えば、（ｉ）「ＮＭ−ＩＬ−１２  ｉｎ  Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  （ＣＴＣＬ）  Ｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇ  Ｔｏｔａｌ  Ｓｋｉｎ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｂｅａｍ  Ｔｈｅｒａｐｙ  （ＴＳＥＢＴ）」に係るＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ  Ｉｄｅｎｄｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．ＮＣＴ０２５４２１２４（進行中の臨床試験）；（ｉｉ）「ＮＭ−ＩＬ−１２  （ｒＨｕＩＬ−１２）  ｉｎ  Ｓｕｂｊｅｃｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｏｐｅｎ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｗｏｕｎｄｓ」に係るＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．  ＮＣＴ０２５４４０６１（進行中の臨床試験）；（ｉｉｉ）「Ｓａｆｅｔｙ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ＨｅｍａＭａｘ＊  （ｒＨｕＩＬ−１２）  ｔｏ  Ｔｒｅａｔ  Ａｃｕｔｅ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ」に係るＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．  ＮＣＴ０２３４３１３３（完了した臨床試験）；及び（ｉｖ）「Ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  Ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ＨｅｍａＭａｘ（商標）  （ｒＨｕＩＬ−１２）  ａｓ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｃｏｕｎｔｅｒｍｅａｓｕｒｅ」に係るＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  Ｎｏ．  ＮＣＴ０１７４２２２１（完了した臨床試験）を参照。ＮＭ−ＩＬ−１２は、汎血球減少症に対し強力な効果を持ち、骨髄再生を介した骨髄切除後の生存を著しく増強すると証明された、唯一の分子である。更に、ＩＬ−１２は、感染と出血を減らすと示され、直接研究（ｈｅａｄ  ｔｏ  ｈｅａｄ  ｓｔｕｄｙ）におけるＮｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）の生存上の利益をもたらし、今では第３相臨床研究にある。効能研究は、米国生物学的製剤承認申請（ＢＬＡ）の承認のために完了した。
【００２８】
ＮＭ−ＩＬ−１２は安全且つ十分に耐性があるが、製剤分野の一般通念はＩＬ−１２が有毒であるということであった。これは主に２人の患者の死亡をもたらした第２相試験設計における誤差によるものであったが、ＮＭ−ＩＬ−１２の最大耐用量及び投薬スケジュールを判定した第１相試験は成功裡に終わった。初期の製薬の研究者は、試験設計における誤差につながるＩＬ−１２の生物学を理解しなかった。その御、ＩＬ−１２は、４０以上の臨床試験において調査者により評価されており、耐性が十分（１３８９人の患者）であると見出されている。
【００２９】
損傷／修復／再生における新たな効果：ＩＬ−１２は、免疫と造血の主要なレギュレーターである。主要なレギュレーターであることから、ＩＬ−１２は、身体中で構造的に産生されない。ＩＬ−１２は、損傷後必要とされる時にのみ産生され、故に身体中で高度に調節される。しかし、老化、損傷、癌及び感染症などの多くの疾患状態、特に慢性疾患状態などは、ＩＬ−１２を生成する細胞に影響を及ぼし、その産生を阻害する。故に、ＣＫＤ、骨粗鬆症、ＡＭＤ、並びに糖尿病性創傷治癒などの、慢性疾患、損傷、及び老化（ａｇｅｄ）において、外因性ＩＬ−１２は、損傷した組織を修復するために内生要因の代わりとして機能することができる。
【００３０】
ＮＭ−ＩＬ−１２には放射線暴露（例えば、骨髄切除）において臨床的な成功が見られ、有意に増強された生存を実証する（図２）。更に、ＮＭ−ＩＬ−１２には、組織損傷の修復を実証する際に臨床的な成功が見られ、分子は、外科的切開（Ｄ）により引き起こされた組織損傷の著しく速められた閉鎖（１００％）を実証する（図２）。最後に、ＮＭ−ＩＬ−１２には、癌増殖の根絶における臨床的な成功が見られ、ＩＬ−１２は、根絶において結果として生じる皮膚リンパ腫を処置し、その結果、根絶、及び完全な持続的反応をもたらすために使用される（図２）。
【００３１】
ＮＭ−ＩＬ−１２には特有の作用機構がある。具体的には、ＩＬ−１２は、骨髄中の細胞を再生成し、且つ、骨髄から末梢血へ、そして損傷した組織及び臓器へとこれら前駆細胞と幹細胞を移動させるための造血幹細胞のレベルで作用する。更に、分子は増殖し、感染及び癌などの病理学的侵入物と戦うために重要な細胞傷害性免疫細胞、即ちＣＤ８＋及びＮＫ細胞を活性化する。それ故、ＮＭ−ＩＬ−１２は、骨髄の造血再生と共に、強力な抗感染性且つ抗腫瘍性の効果を固有に提供する。更に、特有のＩＬ−１２受容体が、成熟した及び未熟な免疫エフェクター細胞、即ちＣＤ８＋、ＣＤ４＋、ＮＫ細胞及びＢ細胞、並びに、幼若骨骨髄前駆細胞及び幹細胞上にあるという事実は、新たな前駆細胞が骨髄から生じて、免疫活性の繰り返しのために成熟したエフェクター細胞に至ることを可能にする、身体におけるその重要性を強調する。
【００３２】
図１に示されるように、ＮＭ−ＩＬ−１２は、再生する（血液細胞系を全て補充するよう機能する、幹細胞及び前駆細胞を介して）、根絶する（先天免疫（ＮＫ細胞）及び適応免疫（ＣＤ８＋及びＣＤ４＋細胞）を介した、ウイルス、細菌、及び腫瘍）、及び修復する（創傷治癒、組織修復、及び免疫学的監視）、幹細胞、造血細胞因子、及び免疫細胞因子である。従って、ＮＭ−ＩＬ−１２は、ＣＤ３４＋細胞、幹細胞、前駆細胞、巨核球、リンパ芽球、肉芽性芽細胞、未熟ＮＫ細胞、及び網状赤血球などの、骨髄中の細胞の刺激によって造血を刺激する。ＮＭ−ＩＬ−１２はまた、創傷治癒と組織修復を補助するために組織への細胞の移動を容易にする。図３を参照。
【００３３】
置換免疫療法薬としてのＩＬ−１２の有効性の例として、ＮＭ−ＩＬ−１２は、糖尿病性足部潰瘍（ＤＦＵ）における創傷治癒を速め、慢性腎疾患（ＣＫＤ）の進行を遅くし、且つ骨粗鬆症における骨損失を少なくすることが分かっている。具体的に、ＤＦＵにおいて、ＮＭ−ＩＬ−１２は、（ｉ）免疫細胞、血小板、幹細胞、及び前駆細胞を再生（例えば再生体）し、（ｉｉ）感染を減少（例えば根絶）し、及び（ｉｉｉ）創傷閉鎖を改善し、創傷側での代謝活性を増大させ、且つコラーゲン沈着を増大（例えば修復）することが分かっている。同様に、ＣＫＤにおいて、ＮＭ−ＩＬ−１２は、（ｉ）免疫細胞、幹細胞、及び前駆細胞を再生成（例えば再生）し、（ｉｉ）ＣＫＤ関連性貧血を減少させてＥＰＯ耐性を減少（例えば根絶）し、及び（ｉｉｉ）ＩＬ−１２Ｒベータ２陽性細管細胞からＥＰＯを増大させ、腎臓修復を増大させ、且つ再生（例えば修復）することが分かっている。最後に、骨粗鬆症の処置において、ＮＭ−ＩＬ−１２は、（ｉ）骨芽細胞増殖を誘発（例えば再生）し；（ｉｉ）骨損失を減少（例えば根絶）し、及び（ｉｉｉ）ＮＦ−カッパＢリガンド（ＲＡＮＫＬ）の阻害を増大させ且つ骨芽細胞数を増加させることが分かっている。図４を参照。
【００３４】
ＮＭ−ＩＬ−１２はまた、治癒の速度を上げ、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ又はＤＬＢＬ）における化学療法関連の毒性を減らし、且つ加齢黄斑変性（ＡＭＤ）の進行を阻害することが分かっている。具体的には、ＤＬＢＣＬにおいて、ＩＬ−１２は、（ｉ）免疫能力を回復させ、造血を増大し、且つ免疫細胞を動員（例えば、再生）し；（ｉｉ）Ｂ細胞リンパ腫を減らし、抗原提示細胞及びＴ細胞のクローンを増大させ、且つ細胞毒性を増大（例えば根絶（ｅｒａｄｉａｔｅ））し；及び（ｉｉｉ）完全寛解を増大させ且つ血液毒性を減少（例えば修復）することが分かっている。更に、ＡＭＤに関して、ＮＭ−ＩＬ−１２は、（ｉ）免疫平衡を増大させ且つ老化マクロファージの置換を増大（例えば再生）し；（ｉｉ）ＩＬ−１７産生を減らし且つ血管新生と新生血管形成を減少（例えば根絶）し；及び（ｉｉｉ）視力喪失を最小限にし且つＩＬ−１７で誘導された網膜細胞死を減少（例えば修復）することが分かっている。図５を参照。
【００３５】
故に、ＮＭ−ＩＬ−１２は、３つの主な効果、再生、根絶、及び修復による、革新的な再生方法を提供する。血液学において、ＮＭ−ＩＬ−１２は、例えば汎血球減少症、好中球減少症、貧血、血小板減少、及び／又はリンパ球減少症を（同時に、又はそれらを組み合わせて）を処置することができる。ＩＬ−１２は、初期治療により引き起こされる血液毒性を軽減するだけでなく、腫瘍患者における相乗的な根絶（抗腫瘍）反応を提供する。患者はまた更なる利益を受け、毒性は、併用処置で使用した時に初期治療にわたってほとんど又は全く存在しない。ＮＭ−ＩＬ−１２での処置は、初期治療のみにわたり延命効果をもたらすと予測される。他の要因は、これら革新的な効果があるとは知られていない。
【００３６】
置換免疫療法薬としての外因性ＩＬ−１２の投与は、処置される疾病のためのあらゆる従来の処置と組み合わせることができる。併用処置は、連続投与、同時投与、或いは、時間、日、週、又は月を含むあらゆる望ましい期間に分けられる共投与を含み得る。
【００３７】
Ａ．慢性腎臓疾患
上述のように、ＣＫＤは、置換免疫療法薬としてＩＬ−１２の有用性を実証するモデル指標である。現在まで、ＣＫＤの進行を実際に遅くすることが可能な薬剤は、ＣＫＤの市場又は供給経路において存在していない。故にＮＭ−ＩＬ−１２は当該技術分野での満たされていない必要性を供給する。ＮＭ−ＩＬ−１２は、内因性ＥＰＯ産生を誘導し、正常なヒト及び猿における網状赤血球及び赤血球を増大させ、且つ、非ヒト霊長類における致死性の放射線後に網状赤血球及び赤血球を増大させる。しかし、ＮＭ−ＩＬ−１２は赤血球集団を増大させるためにＥＰＯを送達するだけでなく、ＮＭ−ＩＬ−１２の多面的効果は、腎臓の修復及び再生に通じるとも予測され、それによりＣＫＤの進行を遅くする。予備データは、ＮＭ−ＩＬ−１２が、ＣＫＤ患者、具体的に初期ステージの患者における腎性貧血の新たな処置であり、それによりＣＫＤの進行が遅くされ得ることを示す。ＣＫＤにおけるＮＭ−ＩＬ−１２の多面的効果は、特に骨髄中のその幹細胞活性、並びに、修復と再生のために骨髄から末梢組織へとＣＤ３４＋及び間葉細胞（ｍｅｓｅｎｃｙｈｍａｌ  ｃｅｌｌｓ）などの幹細胞を動員する能力により、ＣＫＤの進行を遅くすると予測される。ＮＭ−ＩＬ−１２はまた、ＩＬ−１２Ｒベータ２＋ｖｅ腎尿細管細胞からＥＰＯ放出を誘導し、ＣＫＤ関連性の貧血を減らす。更に、ＮＭ−ＩＬ−１２は、造血前駆細胞、幹細胞、及び成熟免疫細胞を動員して、腎臓の修復及び再生を引き起こす。最後に、ＮＭ−ＩＬ−１２は、免疫平衡を回復させ、ＥＰＯ耐性を減らして、感染速度を下げる。
【００３８】
ＮＭ−ＩＬ−１２を使用するＣＫＤの成功的な処置のための測定可能なエンドポイントは、遅くされたＣＫＤの進行である。代替的に、ＥＰＯの生成、及び、ヘモグロビンレベルなどの血液パラメータにおける関連する変化も、臨床的エンドポイントとして利用可能である。ＣＫＤの進行の遅れは、例えば下記の被験体の１以上によって実証され得る：クレアチニンの減少、血中尿素窒素（ＢＵＮ）の減少、タンパク尿の減少、又は糸球体濾過率（ＧＦＲ）の増加。本発明の１つの実施形態において、ＮＭ−ＩＬ−１２での処置は、例えば腎臓機能の測定、クレアチニン測定、ヘモグロビンレベル、ＥＰＯの生成、ＢＵＮ、ＧＦＲ、アルブミン尿、或いはそれらの任意の組み合わせにより、ＣＫＤの進行を約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約１００％遅くする。
【００３９】
以下の表１は慢性腎疾患の５つの段階を詳述するものであり、各段階で残る腎機能の量の他、各段階に関連する記載及び症状が含まれている。
【００４０】
【表１】
2019524753.tif 000003
【００４１】
上述のように、ＣＫＤの進行の遅延は、例えば、被験体において、クレアチニンの減少、血中尿素窒素（ＢＵＮ）の減少、タンパク尿の減少、又は糸球体濾過率（ＧＦＲ）の増加の１以上によって実証することができる。以下の表２は、ＧＦＲ及びアルブミン尿のカテゴリーごとに判定されるようなＣＫＤの予後を詳述するものである。
【００４２】
【表２】
2019524753.tif 000004
【００４３】
ＩＬ−１２受容体（ＩＬ−１２Ｒｂ２）の特有のサブユニットは、ヒトとアカゲザルにおける腎臓の骨髄性細管細胞上に発現される。ＩＬ−１２Ｒベータ２は、ネフロンを含む骨髄性細管細胞（皮質尿細管ではない）において極度に染色される。これは、ＥＰＯの発現が腎臓の骨髄性細管（ｋｉｄｎｅｙ  ｍｅｄｕｌｌａｒｙ  ｔｕｂｕｌｅｓ）から生じると示されることにおいて、著しいものである。図９を参照。単一の低用量のＮＭ−ＩＬ−１２がアカゲザルにおいてＥＰＯを誘導し、網状赤血球、即ち赤血球の前駆体の増加を引き起こす。図１０を参照。更に、単一の低用量のＮＭ−ＩＬ−１２は、支援的ケアがない状態で、サルにおける骨髄破壊（致死性の放射線）後に主要な血液細胞型のナディア（ｎａｄｉｒ）を著しく減らす。ＮＭ−ＩＬ−１２は、造血幹細胞に対する活性を介した特有の多系列の再生効果、及び赤血球形成に対する正の効果を示す。表３を参照。
【００４４】
【表３】
2019524753.tif 000005
【００４５】
更に、単一の低用量のＮＭ−ＩＬ−１２（１２ｍｇ）は、ヒトにおいてＥＰＯを直接誘導する。図１１を参照。ＮＭ−ＩＬ−１２の単一の低用量のＳＣ注射が、身体に必要とされるような、組織修復と再生のために全ての成熟末梢血赤血球及び未熟ＣＤ３４＋造血前駆細胞を動員することが分かった。図１２を参照。これらの結果は、ＮＭ−ＩＬ−１２の特有の分化多能性且つ一貫した動員効果を実証する。故に、ＥＰＯはＣＫＤのための現行の標準的な処置であるが、ＮＭ−ＩＬ−１２はＣＫＤにおいてＥＰＯよりも広範で特有の多面的な利益を提供する。表４を参照。
【００４６】
【表４】
2019524753.tif 000006
【００４７】
本発明の１つの実施形態において、ＮＭ−ＩＬ−１２は、ＥＰＯなどのＣＫＤの従来の処置と組み合わせて使用される。
【００４８】
本明細書で詳述されるようなＩＬ−１２活性の実証を裏付ける例示的な文献には、例えば、（１）「Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｉｍｍａｔｕｒｅ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ」、Ｃｌｉｎ．  ａｎｄ  Ｅｘｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  １６５：  ２０２−２１０  （２０１１）；及び「Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ  ｉｎ  ｈｅｍｏｄｉａｌｙｓｉｓ  ｐａｔｉｅｎｔｓ」、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  ５４：１３３７−４３  （１９９８）を含む、ＩＬ−１２とＥＰＯが内因性フィードバックループに存在しないこと、及び、低いＩＬ−１２レベルとＥＰＯ耐性との間に負の相関があることを教示する刊行物；（２）「Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｃａｕｓｅｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｕｒｅｍｉａ  ａｎｄ  ｄｉａｌｙｓｉｓ．」Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  ３ｒｄ  Ａｓｉａｎ  Ｃｈａｐｔｅｒ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  ＩＳＰＤ，  ２８（３）  Ｊｕｎｅ  ２００８，  ａｎｄ  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  ５４：１３３７−４３  （１９９８）を含む、尿毒症の毒性が、適応免疫及び先天性免疫の応答並びにＩＬ−１２の放出を損ない、免疫機能障害を引き起こすことを教示する刊行物；及び（３）「Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ａｎｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｈａｅｍｏｄｉａｌｙｓｉｓ  ｐａｔｉｅｎｔｓ」、Ｎｅｐｈｒｏｌ．  Ｄｉａｌ．  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，  ２５：  １２３９−１２４３  （２０１０）を含む、内因性ＩＬ−１２を発現可能な透析患者がより長く生存することを教示する刊行物が、挙げられる。
【００４９】
Ｂ．創傷免疫療法
ＩＬ−１２はまた組織修復に有用であり、特に創傷治癒を補助及び改善するのに有用である。組織修復におけるＩＬ−１２の有用性を実証するために使用されるモデル損傷は、特に処置が困難であり得る糖尿病患者及び高齢患者における創傷である。他の実施形態において、被験体は高齢であり且つ褥瘡を抱え、或いは、被験体は糖尿病であり且つ足潰瘍を抱える。現在まで、糖尿病患者及び高齢患者における遅い創傷治癒を著しく改善する薬物は存在しない。本明細書に記載される新たな発見は、ＩＬ−１２受容体が皮膚の前駆細胞に見出されること、この受容体が創傷面においてアップレギュレートされること、及び、マウスＩＬ−１２が、免疫無防備状態且つ糖尿病性のマウスモデルにおける創傷閉鎖を速めることを示している。これらの発見は、一般的に創傷免疫療法、具体的には糖尿病患者と高齢患者に見出される遅い創傷治癒における、ＮＭ−ＩＬ−１２の使用のための方法を築く。例えば、糖尿病患者及び高齢患者における遅い創傷治癒の終了を速める際にＩＬ−１２の予期された有用性を視覚的に表す図１３を参照。特に、ＩＬ−１２は、（ｉ）ＮＫ細胞、細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）、及びマクロファージなどの免疫細胞に対する重要な効果を介して感染を減らす；（ｉｉ）創傷部位でのコラーゲン沈着及び代謝活性を増加する；及び（ｉｉｉ）免疫細胞、血小板、及び骨髄の前駆細胞と幹細胞を創傷へと動員することが予測される。
【００５０】
ストーマ閉鎖した患者における手術後の速められた創傷治癒は、創傷免疫療法におけるＮＭ−ＩＬ−１２の効果に関する概念実証を表し、これは、糖尿病性足部潰瘍患者（ＤＦＵ）における第２ｂ相試験のための方法を築くことができる。糖尿病性足部潰瘍を効果的に予防又は処置可能な、利用可能な薬物は存在しない。ＤＦＵ患者における創傷閉鎖の改善の臨床的エンドポイントは、多くの満たされていない必要性を考慮して、迅速条件付承認に適格である。
【００５１】
本発明の１つの実施携帯において、外因性ＩＬ−１２の投与は結果として、外因性ＩＬ−１２の投与が無い状態で観察される治癒の速度と比較して、創傷治癒を、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約１００％速める。
【００５２】
創傷免疫療法における科学的な裏付け：ＩＬ−１２受容体は、真皮及び脂線における前駆細胞に発現され、且つ創傷及び放射線の後に創傷面においてアップレギュレートされる。創傷治癒の刺激におけるＩＬ−１２の以前に確認されていない役割が、標準の皮膚組織（図１４のＡ）、創傷を受けた皮膚組織（図１４のＢ）、及び照射された皮膚組織（図１４のＣ）において実証される。通常の損傷を受けていない皮膚において、ＩＬ−１２受容体は、真皮の基底膜（ＢＭ）及び毛嚢の下にある皮脂（ＳＥ）腺における前駆細胞に高度に発現されることが見出される。これらの前駆細胞は、皮膚損傷後の再上皮化の主な媒介物質である。第３度熱傷と同等である全層の損傷後、ＩＬ−１２受容体は、創傷面での発現において高度にアップレギュレートされることが確認される。これらのデータは、皮膚損傷後のＮＭ−ＩＬ−１２による創傷治癒の刺激のための基礎を提供する。
【００５３】
更に、局所ＮＭ−ＩＬ−１２は、全層の免疫抑制されたマウスモデルにおける創傷治癒を速めることが分かっている。図１５を参照。具体的に、図１５は、オスとメス両方のマウスのための、ビヒクル（オスとメス）及び組換え型マウスＩＬ−１２（１５ｎｇ）の局所投与で得られる結果の比較による、創傷面積（０日目の％）対損傷後の日のグラフを示す。ＴＢＩ（５００ｃＧｙ）及び全層皮膚損傷がもたらされた、オスとメスのマウスへのｒＭｕＩＬ−１２（１５ｎｇ、局所）の投与は、損傷の時点及び損傷の３日後と６日後に、ビヒクルで処置したマウスと比較して、創傷治癒が速められ、完全な創傷の閉鎖がもたらされた。
【００５４】
追加のデータは、局所ＮＭ−ＩＬ−１２が全層の糖尿病マウスモデルにおける創傷治癒を速めることを示した。具体的に、図１６に示されるように、全層皮膚損傷を抱える糖尿病ラットへのｒＭｕＩＬ−１２（１５ｎｇ及び４７４ｎｇ、局所）の投与は、ビヒクルで処置したラットと比較して、損傷の時の創傷治癒を速めた。具体的に、図１６は、ビヒクル及び２つの異なる用量の組換え型マウスＩＬ−１２の局所投与で得られる結果の比較による、創傷面積（０日目の％）対損傷後の日のグラフを示す。
【００５５】
創傷治癒データは局所投与に限定されない。特に、マウスＮＭ−ＩＬ−１２の単回ＳＣ注射は、全層のマウスモデルにおける創傷治癒を速めることが分かり、局所投与よりも優れている。例えば、図１７及び１８を参照。全層皮膚損傷投与の２４時間後のｒＭｕＩＬ−１２（２０ｎｇ）の単回投与（ｓｃ）、又はｒＭｕＩＬ−１２（１５ｎｇ、損傷の２４時間、３日、及び５日後）の３回の投与（局所）は、ビヒクルの単回投与（局所）と比較して創傷治癒を速めた。図１７は、４つの群についての創傷面積（０日目の％）対損傷後の日の図を示す：ビヒクル、１５ｎｇのｒＭｕＩＬ−１２局所３ｘ／日、１５ｎｇのｒＭｕＩＬ−１２局所１ｘ／日、及び２０ｎｇのｒＭｕＩＬ−１２  ＳＣ  １ｘ／日。２０ｎｇのｒＭｕＩＬ−１２  ＳＣ  １ｘ／日を受けた動物は最も速い創傷治癒を示し、１５ｎｇのｒＭｕＩＬ−１２局所３ｘ／日を受ける動物は次に最も速い治癒速度を示した。図１８のＡはビヒクルの局所投与後の創傷の写真を示し、一方でＢは創傷の著しい治癒を示し、ＳＣ  ｒＭｕＩＬ−１２で得られた結果を表している。
【００５６】
マウスＮＭ−ＩＬ−１２の単回注射が、全層のマウス切除創傷（ｅｘｃｉｓｉｏｎａｌ  ｗｏｕｎｄ）における、著しくより速く且つ大きな代謝反応を引き起こすことも分かった。蛍光寿命（ｐｓ）対研究日のグラフを示す図１９は、治療中に創傷のある皮膚における代謝活性の動力学を示す。（‡）２日目の創傷のあるプラセボ群と比較して、ＳＣ  ｒＭｕＩＬ−１２＋創傷群には著しく長い蛍光寿命がある（ｐ＜０．０５）。（†）３日目の創傷のない群と比較して、ＳＣ  ｒＭｕＩＬ−１２＋創傷群には著しく長い蛍光寿命がある（ｐ＜０．０５）。最後に、（＊）０日目と比較して、ｒＭｕＩＬ−１２＋創傷群には、２及び３日目に著しく長い蛍光寿命がある（ｐ＜０．０５）。例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｏｐｔｉｃｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓ，  ６：２４３４７７  （２０１５）を参照。
【００５７】
現在、人工肛門分解後の外科的創傷を抱える患者における第２ａ相の概念実証の研究が行なわれている。人工肛門分解後の外科的創傷が開いている被験体は、二次的な意図により治癒が可能である。研究は、手術の２４−３６時間後に投与される、単回の１２μｇのユニットＳＣを利用する。副次的評価項目は、５０％を超える外科的ストーマ部位（創傷）閉鎖までの中央の時間である。図２０は、どのようにしてＮＭ−ＩＬ−１２が置換療法薬として、創傷を治癒するために内因性のＩＬ−１２の多面的な免疫効果と造血効果を回復するのかを、図解で表す（Ｌａｓｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，  ６３：４１９  （２０１４）から採択される）。
【００５８】
他の研究は、創傷治癒を補助及び速める際の、具体的には遅い創傷治癒のためのＩＬ−１２の有用性及び有効性に関する分析と推定を裏付けている。例えば、（ｉ）「Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２  ｉｎ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ｄｉｓｅａｓｅｓ」、Ｃｌｉｎ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｖ．，  １０（４）：６１１−３６  （１９９７）を含む、ＩＬ−１２には強力な抗感染性効果があることを詳述する引用文献；（ｉｉ）「Ｓｉｎｇｌｅ  ｌｏｗ−ｄｏｓｅ  ｒＨｕＩＬ−１２  ｓａｆｅｌｙ  ｔｒｉｇｇｅｒｓ  ｍｕｌｔｉｌｉｎｅａｇｅ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｅｆｆｅｃｔｓ」、Ｅｘｐ．  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，  ３：１１  （２０１４）を含む、ＣＤ３４＋骨髄細胞を含む組織へと全ての主要な末梢血赤血球を動員するという点でＮＭ−ＩＬ−１２が独特であることを詳述する引用文献；（ｉｉｉ）「Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｃｏｌｏｎｙ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒｓ  ａｓ  ａｄｊｕｎｃｔｉｖｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｆｏｏｔ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ」、Ｃｏｃｈｒａｎｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ  ｏｆ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，  Ｉｓｓｕｅ  ８．  Ａｒｔ．  Ｎｏ．：  ＣＤ００６８１０．  ＤＯＩ：  １０．１００２／１４６５１８５８．ＣＤ００６８１０．ｐｕｂ３  （２０１３）を含む、Ｇ−ＣＳＦの動員は感染又は創傷治癒に影響しないが、ＤＦＵにおける下肢の外科的介入の減少を示すことを詳述する引用文献；（ｉｖ）「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２，  ｂｕｔ  ｎｏｔ  Ｇ−ＣＳＦ，  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｌｅｔｈａｌｌｙ  ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ  ｎｏｎｈｕｍａｎ  ｐｒｉｍａｔｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｂｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ｓｕｐｐｏｒｔｉｖｅ  ｃａｒｅ」、２２  Ｍａｙ  ２０１４  ｉｎ  Ｗｉｌｅｙ  Ｏｎｌｉｎｅ  Ｌｉｂｒａｒｙ  （ｗｉｌｅｙｏｎｌｉｎｅｌｉｂｒａｒｙ．ｃｏｍ）  ＤＯＩ：  １０．１００２／ａｊｈ．２３７７０を含む、ＮＭ−ＩＬ−１２が致死性の放射線照射後の骨髄の再生における強力な効果を示すことを詳述する引用文献；及び（ｖ）「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｒＩＬ−１２  ｏｎ  ｍｕｒｉｎｅ  ｓｋｉｎ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｄｙｎａｍｉｃｓ  ｕｓｉｎｇ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｍｕｌｔｉｍｏｄａｌ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ」、Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｏｐｔｉｃｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓ，  ６（１１）  （Ｎｏｖ．  ２０１５）  ＤＯＩ：１０．１３６４／ＢＯＥ．６．００４２７７を含む、マウスＩＬ−１２が全層創傷後の代謝活性とコラーゲン沈着の増加を示すことを詳述する引用文献。
【００５９】
Ｃ．加齢黄斑変性
加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、具体的に滲出型ＡＭＤ）は、年齢を重ねる目における血管の成長異常（血管新生）によりもたらされると考えられている。滲出型ＡＭＤにおける現行の承認された製品は、抗ＶＥＧＦ抗体（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ，Ｅｙｅｌｅａ）である。これら薬剤は、効能が制限されており、且つ、処置した集団の３分の１において結果が乏しく且つ視力が低下すると示されている。開発における後続の滲出型ＡＭＤ製品はまた、関連する抗血管新生因子、即ち抗ＰＤＧＦ抗体を備えたＰＤＧＦを標的とする。
【００６０】
ＩＬ−１２は、癌モデル及び癌患者における血管新生を減らす（ＶＥＧＦ及び関連する因子を減らす）、並びに様々なモデルシステムにおける角膜新生血管形成（滲出型ＡＭＤ）を減らす際に活性であると示された、強力な抗血管新生効果を持つ。免疫機能障害がＡＭＤのコアに存在する場合があり、老化マクロファージはＩＬ−１２の産生において減少するという報告も存在する。故に、ＮＭ−ＩＬ−１２は、単一の薬剤として、或いは他の薬物と組み合わせての何れかで、ＡＭＤ患者を処置するための追加の機構をもたらす、魅力的な新たな薬物である。図２１に視覚的に表されるように、ＡＭＤにおけるＮＭ−ＩＬ−１２の多面的効果は、（ｉ）ＩＬ−１２が多数の血管新生因子に対する広範な抗血管新生効果をもつことから新生血管形成を減らすことにより；及び（ｉｉ）老化マクロファージの補充により免疫平衡を回復させることによって、進行を遅くする又は逆転させると予測される。
【００６１】
本発明の１つの実施形態において、外因性ＩＬ−１２の投与は結果として、外因性ＩＬ−１２の投与が無い状態で観察されるものと比較して、ＡＭＤの進行を、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約１００遅くする又は逆転させる。他の実施形態において、ＩＬ−１２は、（ｉ）眼内以外の任意の経路を介して、（ｉｉ）皮下注射を介して、又は（ｉｉｉ）眼内注射を介して投与され得る。
【００６２】
ＡＭＤの処置の改善のための重要な必要性が存在する。具体的に、長期的な評価は、〜７年のｏｍラニビズマブ治療の後、患者の３分の１の結果が乏しかったことを明らかにした。また、ベースラインと比較して、目のほぼ半分は安定していたが、３分の１は１５文字（ｌｅｔｔｅｒｓ）以上低下していた。「Ｓｅｖｅｎ−Ｙｅａｒ  Ｏｕｔｃｏｍｅｓ  ｉｎ  Ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ−Ｔｒｅａｔｅｄ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｉｎ  ＡＮＣＨＯＲ，  ＭＡＲＩＮＡ，  ａｎｄ  ＨＯＲＩＺＯＮ．」  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，  １ｅ８  （２０１３）。故に、治療経過の後期でさえ、滲出性ＡＭＤ患者は、実質的な視力低下のリスクを抱えたままである。現在、滲出型ＡＭＤのための承認薬は、ＶＥＧＦの阻害を介して血管新生を標的とする。明白に、この手法は全ての患者を助けるものではなく、新たな薬物のための必要性の大部分が満たされていないままである。ＮＭ−ＩＬ−１２は、多面的な免疫効果と造血効果と共に抗血管新生効果を提供する、滲出型ＡＭＤの処置における新たな方向性、並びに作用の特有且つ新たな機構を提供し；これら総合的な効果は、ＶＥＧＦ阻害剤の機械学的な達成、或いは単一の標的治療の範囲外にある。
【００６３】
他のデータは、ＩＬ−１２がＡＭＤを処置及び改善するのに有用であるという、本明細書で提供される分析と推定を裏付ける。具体的には、癌における血管新生の役割を最初に解明したＪｕｄａｈ  Ｆｏｌｋｍａｎは１９９５年に、ＩＬ−１２が角膜新生血管形成モデルにおける血管新生の強力な阻害剤であるという証拠を提供した。塩基性線維芽細胞増殖因子で誘導されたマウス角膜新生血管形成に対する組換え型マウスＩＬ−１２の効果を示す、図２２のＡ−Ｆを参照。図２２のＡ−Ｆは、塩基性線維芽細胞増殖因子ペレット（Ｐ）の移植の５日後の、ビヒクル処置した（対照）Ｃ５７  ＢＬ／６マウス（Ａ）、ＳＣＩＤマウス（Ｂ）、及びベージュマウス（Ｃ）、又は１２−処置したＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｄ）、ＳＣＩＤマウス（Ｅ）、及びベージュマウス（Ｆ）の角膜を表す写真を表す。対照の角膜には顕著な新たな血管が存在する一方、血管反応はＩＬ−１２での処置後にほとんど見られなかった。Ｊ．  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎ．  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，  ８７（８）  （Ａｐｒｉｌ  １９，  １９９５）。ほぼ２０年後、本発明は、マウスＩＬ−１２が、１つの目につき０．１ｎｇの単一の低用量を使用して、レーザーで誘導された眼外傷（実験上の脈絡膜新生血管形成）を保護することができることを示す。図２３は、平均病変体積でのマウスＩＬ−１２のための用量応答を示す。図２４のＡ−Ｄは、マウスＩＬ−１２の与えられた投与量での病変の視覚化を示す（０．１及び１ｎｇの両方について、０ｎｇのＩＬ−１２に対して＊ｐ＜０．０２）（Ａ＝ビヒクル；Ｂ＝０．１ｎｇのＩＬ−１２；Ｃ＝０．１ｎｇのＩＬ−１２；及びＤ＝１ｎｇのＩＬ−１２）。
【００６４】
発明者は、マウスＩＬ−１２（１つの目につき０．１ｎｇ）が、実験上の脈絡膜新生血管形成マウスモデルにおいて抗ＶＥＧＦ（１つの目につき１５ｍｃｇ）と同等の、レーザーで誘導された眼損傷の効果を弱めることができることを示している。Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）（ラニビズマブ注射）又はＥｙｌｅａ（登録商標）（アフリベルセプト）などの従来のＡＭＤ処置とのＮＭ−ＩＬ−１２の組み合わせは、相乗作用又は少なくとも相加作用を提供すると予測される。例えば、ビヒクル（約２．６）、抗ＶＥＧＦ（約１．７）、及びＩＬ−１２（約１．７５）での処置後の平均血管病変体積（μｍ３ｘ１０６）のグラフを示す図２５を参照。また、ビヒクル（約１１２）、抗ＶＥＧＦ（約６０）、及びＩＬ−１２（約６０）での処置後の平均Ｉｂａ−１正体積（μｍ３ｘ１０３）のグラフを示す図２６も参照。
【００６５】
ＮＭ−ＩＬ−１２はインビトロでＩＬ−１７を有意に抑える。ＰＢＭＣに加えられたＮＭ−ＩＬ−１２は、病原性のＴｈ１７／ＩＬ−１７反応を制限するのに有効である。この研究において、ヒトＰＢＭＣは２日間、０、１、及び１０ｐＭのＮＭ−ＩＬ−１２で培養された。溶解物を調製し、ＩＦＮ−γ及びＩＬ−１７のためのｍＲＮＡについて探索した（ＰＣＲ）。データは平均±ＳＥＭであり、ｐ値はスチューデントｔ検定である。予測されたように、ＩＬ−１２での処置は、抗血管新生ＩＦＮ−γを有意に増大させ（図２７のＡ）、且つ破壊的なＩＬ−１７を有意に減らす（図２７のＢ）と示され；これらの効果は、血管新生を減少させ且つインビボで免疫平衡を回復させると予測される。
【００６６】
故に、ＩＬ−１２は、加齢した目における「ミッシングリンク」であり；外因性ＮＭ−ＩＬ−１２による免疫平衡の回復は、先行技術におけるＡＭＤ処置に遭遇する問題に対処する。図２８は、目の新生血管形成における標準対老化のマクロファージの役割を示す。網膜のレーザーで誘導された損傷の後、マクロファージ浸透が、若い（＜２か月）及び高齢（＞１８か月）のマウス両方に生じる。しかし、このマクロファージ浸透は、高齢のマウスのみにおける新生血管形成に関連する。高齢のマウスの網膜から単離されたマクロファージのＲＴ−ＰＣＲ分析は、若いマウスの網膜におけるマクロファージにおけるものよりも低い発現レベルのＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、ＦａｓＬ、及びＩＬ−６を明らかにした。ＩＬ−１０発現の増加は全てのマウスの網膜において観察されたが、ベースライン値は高齢のマウスの方が高かった。これらのデータは、マウスが加齢するにつれて、ＩＬ−１０の発現の増大、及びサイトカイン発現の改変が、目における損傷で誘導された新生血管形成を調節する老化マクロファージの能力を制限することを示唆している。以下の表５に要約されるように、現在市場に出された製品と比較して、ＮＭ−ＩＬ−１２はＡＭＤにおける広範且つ特有の機械学的な利益を提供する。
【００６７】
【表５】
2019524753.tif 000007
【００６８】
Ｄ．骨粗鬆症
癌処置、即ち、放射線、化学療法、ステロイドは、骨密度の減少を引き起こし得る。加えて、高齢者、及び特定の薬剤を摂取する被験体などの、他の患者集団は、骨密度の減少及び骨粗鬆症に苦しむ場合がある。発明者は、低投与量のＮＭ−ＩＬ−１２の単回注射が、高線量の全身照射（ＴＢＩ）後のサルの骨における破骨細胞レベルを有意に減少させることができること、及び、マウスにおけるＴＢＩの後、ＩＬ−１２受容体が、再生の効果を暗示する骨髄中の骨芽細胞上に見出されることを、示している。ＩＬ−１２は、骨芽細胞形成を増大させ、且つ破骨細胞形成の強固な阻害剤であると報告されており、それによりＩＬ−１２が骨形成の主要調節因子かもしれないと示唆されている。しかし、老化、及び抗原と酸化ストレスに対する一生の暴露の効果は、ＩＬ−１２の放出が骨吸収を阻害することを可能にする、生理的な逆の調節性免疫プロセスを損なう。発明者のデータは、老化又は他の因子による骨質量の欠損を抱える患者と同様に、癌の処置を受ける患者におけるＮＭ−ＩＬ−１２の使用を示唆する。
【００６９】
本発明の１つの実施形態において、外因性ＩＬ−１２の投与は、外因性ＩＬ−１２の投与が無い状態で観察されるものと比較して、骨損失及び／又は破骨細胞形成を、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は約１００％減らす。
【００７０】
図２９に図解で表されるように、ＮＭ−ＩＬ−１２は、ＲＡＮＫＬの天然の阻害剤として骨損失を減らし、骨髄中の骨芽細胞を増加させ、且つ、抗原提示及び腫瘍への輸送の他、ＣＤ８＋及びＮＫ活性化における抗腫瘍効果を持つ。
【００７１】
癌患者は、癌処置、即ち放射線、化学療法、及びステロイドの他、基礎疾患により、より高度の骨損失速度を経験する。ＮＭ−ＩＬ−１２は、癌処置を受ける癌患者において２重の利益持つと予測される：（１）骨損失と骨折を減らし、（２）癌処置、即ち放射線又は化学療法により相乗的な抗腫瘍機構を提供する。骨盤部への放射を受ける癌患者における骨損失の減少の臨床的エンドポイントは、骨折速度の減少のためのサロゲートエンドポイントとして、速められた条件付承認に適格であり得る。癌に付随する抗腫瘍効果による骨損失の減少の２重の利益を提供することが可能な薬物の満たされていない必要性は、市場への比較的短い経路がＮＭ−ＩＬ−１２に利用可能であり得ると予測する。
【００７２】
放射線は破骨細胞形成を誘導する。低薬量のＮＭ−ＩＬ−１２の単回ＳＱ注射は、対照と比較して、サルにおけるＴＢＩの骨を損傷させる投与量（ｂｏｎｅ  ｄａｍａｇｉｎｇ  ｄｏｓｅｓ）の後に、破骨細胞形成を減少させる。ＴＲＡＰの数−大腿骨、例えば、非ヒトにおける２つの処置群（０ｎｇ／ｋｇ及び２５０ＮＭ−ＩＬ−１２ｎｇ／ｋｇ）に関する総大腿骨面積のＴＲＡＰ（酒石酸耐性酸フォスファターゼ）画分を示す、図３０を参照。ＴＲＡＰは破骨細胞の酵素マーカーである。同様に、図３１は、ＴＲＡＰの数−肋骨、例えば、非ヒトにおける２つの処置群（０ｎｇ／ｋｇ及び２５０ＮＭ−ＩＬ−１２ｎｇ／ｋｇ）に関する総肋骨面積のＴＲＡＰ酒石酸画分を示す。ＩＬ−１２の投与の結果、大腿骨及び肋骨の両方で評価された破骨細胞形成が著しく減少した（図３０及び３１）。
【００７３】
ＩＬ−１２Ｒベータ２は、骨髄中の通常のマウス骨芽細胞上に見出され、受容体は致死性の放射線の後に存在する。しかし、受容体は、放射線を受ける対照マウスには存在せず、このことは、放射後に、ＮＭ−ＩＬ−１２はその受容体を介して骨芽細胞を活性化／増殖することができると示している。例えば、ＩＬ−１２Ｒベータ２のために染色された大腿部の骨髄の代表的な部分を示す図３２を参照。図３２は、ｍＮＭ−ＩＬ−１２が、照射されたマウスの造血の回復を促進することを示す。具体的に、図３２のＡとＢは、照射及び処置を行わない通常の大腿部の骨部分を示し、成熟及び未熟な巨核球が、後骨髄球と共に視認可能である。図３２のＣとＤは、照射及びビヒクルでの処置後の大腿部の骨部分を示す。最後に、図３２のＥとＦは、照射及びｍＮＭ−ＩＬ−２での処置後の大腿部の骨部分を示す。骨芽細胞は、図３２のＥではっきりと視認可能である。照射されたマウスでは、ｍＮＭ−ＩＬ−１２は、造血再構成、及び、ＩＬ−１２Ｒベータ２＋ｖｅ巨核球、前駆細胞、及び骨芽細胞の存在をもたらした。
【００７４】
ＩＬ−１２及びその誘導された下流因子であるＩＦＮ−ガンマとＩＬ−１８は、ＲＡＮＫＬの天然阻害剤である。図３３は、骨髄中のＩＬ−１２、ＩＦＮガンマ、及びＩＬ−１８で誘導された破骨細胞アポトーシスの機構を視覚的に表す。健康なヒトにおけるＮＭ−ＩＬ−１２（１２ｍｇ）の単回ＳＱ注射は、ＩＮＦガンマとＩＬ−１８の両方を誘導することができ、故にＩＬ−１２だけがＲＡＮＫＬの阻害に必要とされる。以下の処置群のためのＩＦＮガンマ対時間のグラフを示す図３４を参照：同じ処置群に関して、プラセボ及びＮＭ−ＩＬ−１２、及びＩＬ−１２対時間。故に、表６に要約されるように、ＮＭ−ＩＬ−１２は、癌患者に付随する抗腫瘍効果による骨保全の２重の利益を特有に提示する。また、癌処置を受けていない被験体において、ＩＬ−１２は、骨粗鬆症の初期から後期の人々における骨損失を予防又は減少させるために与えることができる。
【００７５】
【表６】
2019524753.tif 000008
【００７６】
ＩＩ．ＮＭ−ＩＬ−１２
ＮＭ−ＩＬ−１２（ＨｅｍａＭａｘ（商標）（ｒＨｕＩＬ−１２）としても知られる）は、ジスルフィド結合により結合された２つのサブユニットから成るヘテロ二量体タンパク質である。２つのサブユニットはそれぞれ、ｐ３５及びｐ４０と称されるＡサブユニット及びＢサブユニットである。ヘテロ二量体ＩＬ−１２は５０３のアミノ酸を含んでいる。タンパク質は、約７５．０ｋＤａの総分子量を備えたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞の組換え型タンパク質生成技術により生成することができ、且つ、内因性ＩＬ−１２のように、その最終形態での糖タンパク質である。ＮＭ−ＩＬ−１２の糖鎖付加パターンは内因性ＩＬ−１２とは異なる。ＮＭ−ＩＬ−１２は、インビトロでヒト免疫細胞、及びインビトロとインビボの両方で非ヒト霊長類（アカゲザル）において、薬力学反応（インターフェロン−γ［ＩＦＮ−γ］）を誘発する。表７は、ＮＭ−ＩＬ−１２の治験薬の用量／投与を提供する。
【００７７】
【表７】
2019524753.tif 000009
【００７８】
ＮＭ−ＩＬ−１２（ｒＨｕＩＬ−１２）：ＮＭ−ＩＬ−１２は、マウスモデルの他、骨髄破壊処置後の非ヒト霊長類（ＮＨＰ）モデルにおける血小板回復、即ち、骨髄抑制治療又は骨髄破壊治療後の回復を含む、優れた血液細胞回復を実証した。実際に、概念実証の致死性の放射線のＮＨＰ研究において、ビヒクルで処置したサルの８０％は血小板輸血を必要とした一方、ＮＭ−ＩＬ−１２で処置したサルは２５％しか血小板輸血を必要としなかった（ｐ＜０．００７、カイ二乗検定）。ＮＭ−ＩＬ−１２の作用機構（ＭＯＡ）は造血幹細胞（ＨＳＣ）のレベルで造血を再生成することに関与する。このＭＯＡの裏付けにおいて、新薬（Ｎｅｕｍｅｄｉｃｉｎｅｓ）は、ヒトＨＳＣの様々な重要な部分集団上にＩＬ−１２受容体を見出し、これはＣＤ３４、ｃ−Ｋｉｔ、及びＫＤＲなどの既知の幹細胞マーカーと共に共発現されると。
【００７９】
ＨｅｍａＭａｘの作用機構と周知の造血成長因子の作用機構との間に重複は存在しない。ＨｅｍａＭａｘの作用機構は、他の造血因子の活性の造血幹細胞上流の活性化に関与する。結果的に、ＨｅｍａＭａｘは切除後に造血及び免疫系を補充且つ再生成することができるが、これら下流の作用因子は、単一の血液細胞型をもたらすために前駆細胞を標的とするため、補充も再生成もできない。この初期の作用（上流）機構を介して、初期の造血幹細胞のＨｅｍａＭａｘの活性化は、主要な血液細胞型を全て回復させることができる。
【００８０】
特有のＩＬ−１２受容体は、骨髄の前駆細胞及び幹細胞上にあり、且つ、ＣＤ８＋、ＣＤ４＋、ＮＫ、及びＢ細胞などの成熟免疫エフェクター細胞、並びに好酸球など他の細胞にもある。この特有の受容体は、多くの組織の細胞上にもあり、且つ、図１４に表されるような創傷治癒の文脈に観察されたものなどの、組織及び臓器の損傷後に存在する。外因性ＩＬ−１２と相互作用する特有のＩＬ−１２受容体の役割は、置換免疫療法薬としてのＩＬ−１２のコアにある。全体的に、損傷後又は疾患の間など、身体に必要とされる場合のＩＬ−１２受容体のアップレギュレーションは、身体に必要とされるように、根絶、修復、及び再生のためにＩＬ−１２の外因性送達と組み合わせて、本発明の基礎となる。
【００８１】
１つの態様において、ＨｅｍａＭａｘ（ｒＭｕＩＬ−１２）に対するマウス対照物は、致死量以下又は致死性の全身照射（ＴＢＩ）に晒された通常のマウスと癌を抱えるマウス両方における、白血球、赤血球、及び血小板を含む完全な系列血液細胞回復を促進する。ＨｅｍａＭａｘの活性は、骨髄区画に存在する原始細胞（造血細胞及び非造血幹細胞）のレベルで開始される。これら原始細胞の活性化は、放射又は化学療法により引き起こされた骨髄破壊又は骨髄抑制後の骨髄区画の再生を引き起こす。
【００８２】
「インターロイキン−１２」（ＩＬ−１２）は、本明細書に開示される造血特性の少なくとも１つをもたらすＩＬ−１２分子を指し、当該技術分野で既知の様式又は将来的に開発される様式で産生される、現在既知の又は将来的に開発される、天然ＩＬ−１２分子、変異体ＩＬ−１２分子、及び共有結合的に修飾されたＩＬ−１２分子が挙げられる。
【００８３】
ＩＬ−１２分子は、実質的に単離された形態で存在し得る。産物は、産物の意図した目的に干渉しない担体又は希釈剤と混合されてもよく、実質的に単離されると今なお見なされることが、理解される。本発明の産物は実質的に精製された形態で存在してもよく、その場合は通常、ペプチド又は調製物の乾燥質量の、例えば少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％を含む、約８０％、８５％、又は９０％を含む。
【００８４】
通常、本発明の実施形態で使用されるＩＬ−１２分子のアミノ酸配列は、本発明の方法により処置される特定の哺乳動物に由来する。故に、例示目的のために、ヒトについて、通常はヒトＩＬ−１２又は組換え型のヒトＩＬ−１２は、本発明の方法においてヒトに投与され、及び同様に、ネコ科動物について、例えばネコＩＬ−１２又は組換え型ネコのＩＬ−１２は、本発明の方法においてネコ科動物に投与される。
【００８５】
しかし、本発明にはまた、ＩＬ−１２分子が本発明の治療方法の被験体である哺乳動物からそのアミノ酸配列を引き出さない実施形態も含まれる。例示目的のために、ヒトＩＬ−１２又は組換え型ヒトＩＬ−１２は、ネコ科哺乳動物に利用されてもよい。本発明のまた他の実施形態は、ＩＬ−１２の天然アミノ酸配列が天然配列から改変されるが、ＩＬ−１２分子は本明細書に開示されるＩＬ−１２の造血特性をもたらすように機能する、ＩＬ−１２分子を含む。ＩＬ−１２の天然の種に特異的なアミノ酸配列からの改変は、ＩＬ−１２の一次配列の変化を含み、且つ、変異体ＩＬ−１２分子をもたらすために一級アミノ基酸配列に対する欠失及び付加を包含する。高度に誘導されたＩＬ−１２分子の一例は、Ｍａｘｙｇｅｎ，  Ｉｎｃ．（Ｌｅｏｎｇ  Ｓ  Ｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ＵＳＡ．，  １００  （３）：  １１６３−８  （２００３））により生成された再設計ＩＬ−１２分子であり、そこでは、変異体ＩＬ−１２分子がＤＮＡシャフリング方法により生成される。また、修飾されたＩＬ−１２分子は、米国特許第４，６４０，８３５号；第４，４９６，６８９号；第４，３０１，１４４号；第４，６７０，４１７号；第４，７９１，１９２号又は第４，１７９，３３７号で説明される様式で、その貯蔵寿命、半減期、効能、溶解性、送達などを増大させるＩＬ−１２分子に対する共有結合性修飾、ポリエチレングリコール基やポリプロピレングリコールなどの付加といった、本発明の方法に含まれる。ＩＬ−１２分子の共有結合性修飾の一種は、ＩＬ−１２ポリペプチドの標的アミノ酸残基を、ＩＬ−１２ポリペプチドの側鎖或いはＮ末端又はＣ末端残基と反応させることが可能な有機誘導化剤と反応させることによって、分子へと導入される。天然配列ＩＬ−１２及びＩＬ−１２のアミノ酸配列変異体の両方は、共有結合的に修正されてもよい。また、本明細書で言及されるように、ＩＬ−１２分子は、組換え法を含む、当該技術分野で既知の様々な方法によって生成することができる。本開示に含まれる他のＩＬ−１２変異体は、標準の配列が翻訳語修飾、例えばグリコシル化されるものである。特定の実施形態において、ＩＬ−１２は、哺乳動物発現系又は細胞株において発現される。１つの実施形態において、ＩＬ−１２は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞の発現により生成される。
【００８６】
様々なＩＬ−１２ポリペプチドの特徴を前もって予測することはしばしば困難であるので、最適な変異体を選択するためには回収された変異体の何らかのスクリーニングが必要とされることが理解されるであろう。変異ＩＬ−１２分子の血液学的刺激または増強特性の変化を評価する好ましい方法は、以下に開示される致死照射救助プロトコル（ｌｅｔｈａｌ  ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｒｅｓｃｕｅ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ）によるものである。レドックスもしくは熱安定性、疎水性、タンパク質分解に対する感受性、または、担体とのもしくは多量体への凝集の傾向などのタンパク質またはポリペプチド特性の他の可能な調節は、当技術分野において周知の方法によってアッセイされる。
【００８７】
一般的に、ＩＬ−１２の産生は、ＩＮＦ−γの産生を刺激し、これは順にＩＬ−１２の産生を増強し、従って正のフィードバックループを形成する。インビトロのシステムにおいて、ＩＬ−１２は他のサイトカイン（例えばＩＬ−３およびＳＣＦ）と相乗作用して初期の造血前駆細胞の増殖と分化を刺激することが報告されている（Ｊａｃｏｂｓｅｎ  Ｓ  Ｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３，  Ｊ．  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２：  ４１３−８；  Ｐｌｏｅｍａｃｈｅｒ  Ｒ  Ｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３，  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ７：  １３８１−８；  Ｈｉｒａｏ  Ａ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  １３：  ４７−５３）。
【００８８】
ＮＭ−ＩＬ−１２の投与の方法
【００８９】
本開示は、所望の治療効果を達成するために一定の期間にわたって１つ以上の生理学的投与量のＩＬ−１２を被験体に投与することによる治療方法を提供する。被験体は、好ましくは、ウシ、ブタ、ウマ、トリ、ネコ、イヌなどの動物を含むがこれらに限定されない哺乳動物であり、最も好ましくはヒトである。
【００９０】
ＮＭ−ＩＬ−１２の「生理学的投与量」は、投与経路にかかわらず、ＩＬ−１２  ｐ７０について標準的なＥＬＩＳＡにより測定される、１ｍｌ当たり約１ピコグラムより多いが、好ましくは１ｍｌ当たり約１０から約１００ピコグラムの間の範囲のＮＭ−ＩＬ−１２を末梢血においてもたらす投与量である。本発明の他の実施形態において、外因性のＩＬ−１２の生理学的投与量は、１ｍｌ当たり約１ピコグラムより多く、または約１０ｐｇ／ｍｌより多く、かつ、約１００未満、約９５未満、約９０未満、８５未満、約８０未満、約７５未満、約７０未満、約６５未満、約６０未満、約５５未満、約５０未満、約４５未満、約４０未満、約３５未満、約３０未満、約２５未満、約２０未満、約１５未満、約１０未満、もしくは約５ピコグラム未満、またはそれらの任意の組み合わせの、末梢血におけるＮＭ−ＩＬ−１２の量をもたらし、これは例えば、約１ｐｇ／ｍｌより多く約５０ｐｇ／ｍｌより少なく；または、約１ｐｇ／ｍｌより多く約１５ｐｇ／ｍｌより少なく；または、約１ｐｇ／ｍｌより多く約１０ｐｇ／ｍｌより少なく；または、約１０ｐｇ／ｍｌより多く約５０ｐｇ／ｍｌより少なく；または、約１０ｐｇ／ｍｌより多く約２０ｐｇ／ｍｌより少ない、などである。
【００９１】
様々な送達システムが知られており、例えば、リポソームでのカプセル化（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）、微粒子、マイクロカプセル、ＩＬ−１２を発現することができる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシス（例えばＷｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，  １９８７，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６２：４４２９−４４３２を参照）、レトロウイルスまたは他のベクターなどの一部としてのＩＬ−１２の遺伝子を含む核酸の構築、などの本発明の方法に従ってＩＬ−１２を投与するために使用することができる。導入の方法は、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口の経路を含むがこれらに限定されない。
【００９２】
ＩＬ−１２は、任意の好都合な経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または粘膜の裏層（ｌｉｎｉｎｇｓ）（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）を通した吸収によって投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与することができる。投与は全身的または局所的であり得る。局所送達の一例は、ＡＭＤの例における眼への送達である。加えて、脳室内およびクモ膜下注入を含む、任意の適切な経路による中枢神経系へのＩＬ−１２を含む医薬組成物の導入が望ましい場合がある；脳室内注入は、たとえば、オマヤリザーバ（Ｏｍｍａｙａ  ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）などのリザーバに取り付けられた脳室内カテーテルによって促進され得る。例えば、吸入器またはネブライザーの使用、およびエアロゾル化剤を用いた製剤によって、肺内投与もまた使用され得る。ＩＬ−１２を含む医薬組成物を、処置を必要とする領域に局所的に投与することが望ましい場合がある；これは、例えば、限定されないが、局所適用、注射、カテーテル、坐薬、またはインプラントによって達成されることができ、前記インプラントは、シラスティック膜などの膜または繊維を含む、多孔質、非多孔質、またはゼラチン状材料のものである。
【００９３】
ＩＬ−１２の投与の他のモードは、小胞、特にリポソーム、における送達を含む。（以下参照Ｌａｎｇｅｒ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３  （１９９０）：  Ｔｒｅａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｎ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，  Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｆｉｄｌｅｒ  （ｅｄｓ．），  Ｌｉｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ｐｐ．  ３５３−３６５  （１９８９）；  Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，  ｉｂｉｄ．，  ｐｐ．  ３１７−３２７；  一般に同書を参照のこと）
【００９４】
ＩＬ−１２の投与のなお他のモードは制御放出システムにおける送達を含む。ある実施形態において、ポンプが使用されてもよい（以下参照：Ｌａｎｇｅｒ，  ｓｕｐｒａ；  Ｓｅｆｔｏｎ，  ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｆ．  Ｂｉｏｍｅｄ．  Ｅｎｇ．  １４：２０１  （１９８７）；  Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７  （１９８０）；  Ｓａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３２１：５７４  （１９８９））．加えて、高分子材料を使用することができる  （以下参照：Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ  （ｅｄｓ．），  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ，  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，  Ｆｌａ．  （１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，  Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ  （ｅｄｓ．），  Ｗｉｌｅｙ．Ｎ．Ｙ．  （１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，  Ｊ．  Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．  Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２３：６１  （１９８３；  ｓｅｅ  ａｌｓｏ  Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０  （１９８５）；  Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ２５：３５１  （１９８９）；  Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．  ７１：１０５  （１９８９））、または、制御放出システムは治療標的、すなわち脳の近くに配置することができ、したがって全身投与量のほんの一部しか必要としない（例えば、  Ｇｏｏｄｓｏｎ，  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  ｓｕｐｒａ，  ｖｏｌ．  ２，  ｐｐ．  １１５−１３８  （１９８４）を参照）。他の制御放出システムはＬａｎｇｅｒによるレビューで議論されている（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３  （１９９０））。
【００９５】
一態様において、１以上の有効量のＩＬ−１２は、局所、皮下、皮内、静脈内、腹腔内、筋肉内、硬膜外、非経口、眼内、鼻腔内、および／または頭蓋内に投与される。
【００９６】
ＮＭ−ＩＬ−１２の形態および用量
【００９７】
本発明の実施形態で使用されるＮＭ−ＩＬ−１２の適切な剤形は、本質的に無毒かつ非治療的な生理学的に許容可能な担体を包含する。そのような担体の例としては、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩など緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和野菜脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩、あるいは硫酸プロタミンなどの電解液、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三珪酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、および、ＰＥＧ、が含まれる。ＩＬ−１２ポリペプチドの局所用形態またはゲル系形態のための担体には、ナトリウムカルボキシメチルセルロースまたはメチルセルロースなどの多糖類、ポリビニルピロリドン、ポリアクリレート、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ＰＥＧ、およびウッドワックスアルコール、が含まれる。すべての投与については、従来のデポ形態が適切に使用される。そのような形態は例えば、マイクロカプセル、ナノカプセル、リポソーム、硬膏剤、吸入形態、鼻スプレー、舌下錠および徐放性製剤を含む。
【００９８】
徐放性製剤の適切な例としては、ポリペプチドを含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、このマトリックスは例えばフィルム、またはマイクロカプセルなどの造形品の形態である。徐放性のマトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、上記Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．および上記Ｌａｎｇｅｒに記載のポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール）、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸およびガンマエチルＬ−グルタミン酸のコポリマー（上記Ｓｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ）、非分解性のエチレン酢酸ビニル（上記Ｌａｎｇｅｒ）、Ｌｕｐｒｏｎ  Ｄｅｐｏｔ（商標）などの分解性の乳酸グリコール酸コポリマー、（乳酸グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドからなる注射可能なミクロスフィア）、および、ポリＤ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸、が含まれる。エチレン酢酸ビニルおよび乳酸グリコール酸などのポリマーは、１００日を超えて分子の放出を可能にするが、ある種のヒドロゲルはより短い期間でタンパク質を放出する。カプセルに封入されたＩＬ−１２ポリペプチドが体に長期間残る場合、それらは３７℃の水分にさらされた結果として変性または凝集し、その結果、生物学的活性が失われ免疫原性が変化する可能性がある。関与するメカニズムに応じて安定化のための合理的な戦略を考案することができる。例えば、凝集メカニズムがチオジスルフィド交換による分子間Ｓ−−Ｓ結合形成であることが発見された場合、スルフヒドリル残基の修飾、酸性溶液からの凍結乾燥、含水量の制御、適切な添加剤の使用、および、特定のポリマーマトリックス組成物の開発により、安定化を達成することができる。
【００９９】
徐放性のＩＬ−１２含有組成物はまた、リポソームに封入されたポリペプチドを含む。ＩＬ−１２ポリペプチドを含有するリポソームは、Ｅｐｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：３６８８−３６９２  （１９８５）；Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０  （１９８０）；および米国特許第４，４８５，０４５号、第４，５４４，５４５号；に記載のように当技術分野で既知の方法により調製されている。通常、リポソームは、小さい（約２００−８００オングストローム）単層型（ｕｎｉｌａｍｅｌａｒ  ｔｙｐｅ）であり、その中の脂質含量は約３０モル％コレステロールより多く、選択された割合は、最適なＷｎｔポリペプチド療法のために調整されている。循環時間が向上したリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。
【０１００】
疾患の治療について、ＩＬ−１２ポリペプチドの適切な用量は、上に定義されるように、処置される疾患のタイプ、その疾患の重症度および経過、以前の治療、患者の病歴および本明細書に開示されたＩＬ−１２治療方法に対する反応、および、主治医の判断に応じて変わるだろう。本発明に従って、ＩＬ−１２は、患者に一度でまたは一連の処置にわたり適切に投与される。
【０１０１】
重量ベースまたは固定のＮＭ−ＩＬ−１２の投与：その疾患のタイプおよび重症度に応じて、ＩＬ−１２の約１０ｎｇ／ｋｇ〜２０００ｎｇ／ｋｇが、例えば１回以上の別々の投与によるかまたは持続注入によるかにかかわらず、患者への投与のための初期の候補となる用量である。あるいは、約４０μｇ、約３５μｇ、約３０μｇ、約２５μｇ、約２０μｇ、約１９μｇ、約１８μｇ、約１７μｇ、約１６μｇ、約１５μｇ、約１４μｇ、約１３μｇ約１２μｇ約１１μｇ約１０μｇ約９μｇ、約８μｇ、約７μｇ、約６μｇ、約５μｇ、約４μｇ、約３μｇ、約２μｇ、または約１μｇなどの固定投与量のＮＭ−ＩＬ−１２を利用することができる。典型的な投与量の範囲は、限定されないが、（ｉ）約１μｇより大きく約２０μｇ未満；（ｉｉ）約８μｇから最大約１５μｇまで；および、（ｉｉｉ）約１０μｇから約１２μｇ、を含む。初期投与後のＮＭ−ＩＬ−１２の例示的な維持量は、約５μから約１０μｇであるが、本明細書に記載の任意の用量を初期量または維持量に使用することができる。ヒトは約５００ｎｇ／ｋｇの反復用量に安全に耐えることができるが、最大約２００ｎｇ／ｋｇの単回投与は有毒な副作用を起こすべきではない。例えば、投与量は、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＥＰＯなど他のサイトカインについての投与量と同じであってもよい。数日またはより長い反復投与については、状態に応じて、疾患症状の所望の抑制が生じるまで処置を持続させる。しかしながら、他の投与レジメンも有用でありうる。この治療の進行は、従来の技術およびアッセイにより容易にモニタリングされる。
【０１０２】
本発明の別の態様は、置換免疫療法薬として外因性ＩＬ−１２を必要とする被験体を同定する方法に関する。身体において細胞、組織または臓器の根絶、修復または再生（ｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎ，  ｒｅｐａｉｒ  ｏｒ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｌｌｓ，  ｔｉｓｓｕｅｓ  ｏｒ  ｏｒｇａｎｓ）のいずれかについての必要性が同定された被験体は、本明細書に記載のように、外因性ＩＬ−１２を受けることが適切である。しかし、必要とする被験体のＩＬ−１２発現のベースラインレベルは、約５ｐｇ／ｍｌ未満、または約３ｐｇ／ｍｌ未満、または約１ｐｇ／ｍｌ未満である。一般的に、必要としている被験体は、ＩＬ−１２  ｐ７０の検出に関して、本明細書に記載のように、検証されたアッセイを用いた検出限界を下回るベースラインレベルを有する。したがって、本発明は、本明細書に記載されている方法から利益を得る特定の患者集団を同定した。
【０１０３】
本発明の一態様において、治療方法は、（ｉ）ＩＬ−１２の処置量および（ｉｉ）ＩＬ−１２の維持量について、異なるかまたは同じであり得る２つの生理学的投与量レベルのＩＬ−１２を使用する工程を含む。一実施形態において、本明細書に記載の任意のＩＬ−１２投与量を処置用ＩＬ−１２投与量として使用することができるが、ＩＬ−１２の処置量は約１μｇより多く約２０μｇ未満である。別の実施形態では、本明細書に記載の任意のＩＬ−１２投与量を維持用ＩＬ−１２投与量として使用することができるが、ＩＬ−１２の維持量は約１μｇより多く約１０μｇ未満である。典型的な実施形態では、ＩＬ−１２の処置量は、外因性ＩＬ−１２の投与開始時に定期的に、例えば１週間に１回、約２週間ごと、約３週間ごと、約４週間ごと、約５週間ごと、または約６週間ごとなどに投与することができる。典型的な実施形態では、最初の投与期間の完了後に維持量のＩＬ−１２が与えられ、約１ヶ月ごと、約２ヶ月ごと、約３ヶ月ごと、約４ヶ月ごと、約５ヶ月ごと、または約６ヶ月ごとなどの頻度で与えられる。
【０１０４】
本発明の別の態様において、必要としている被験体に投与される外因性のＩＬ−１２の生理学的投与量は、ＩＬ−１２  ｐ７０についての標準的なＥＬＩＳＡによる測定のように、１ｍｌ当たり約１ピコグラムより多く１ｍｌ当たり約２００ピコグラム未満である、末梢血におけるＮＭ−ＩＬ−１２の範囲をもたらす。末梢血におけるＩＬ−１２  ｐ７０の２００ｐｇ／ｍｌを越えるレベルが有用ではない場合があることには留意する価値がある。他の実施形態では、末梢血におけるＮＭ−ＩＬ−１２の範囲は、約１ｐｇ／ｍｌより多く、および、約２００ｐｇ／ｍｌ未満、約１７５ｐｇ／ｍｌ未満、約１５０ｐｇ／ｍｌ未満、約１２５ｐｇ／ｍｌ未満、約１００ｐｇ／ｍｌ未満、約７５ｐｇ／ｍｌ未満、約５０ｐｇ／ｍｌ未満、約２５ｐｇ／ｍｌ未満、約１５ｐｇ／ｍｌ、または、約１０ｐｇ／ｍｌである。本発明のなお別の態様において、ＩＬ−１２の投与後、被験体の末梢血におけるＩＬ−１２の測定可能なレベルに加えて、末梢血中のＩＦＮ−γも同時に増加する：および／または、被験体の末梢血におけるＩＬ−１２の測定可能なレベルはまた、末梢血中のＩＦＮ−γの増加を示し、ここでＩＬ−１２投与後の付随するＩＦＮ−γのレベルは約２０ｐｇ／ｍｌから約１０００ｐｇ／ｍｌの範囲内である。他の態様において、ＩＬ−１２投与後のＩＦＮ−ガンマの範囲は、約１０００ｐｇ／ｍｌ以下、約９００ｐｇ／ｍｌ以下、約８００ｐｇ／ｍｌ以下、約７００ｐｇ／ｍｌ以下、約６００ｐｇ／ｍｌ以下、約５００ｐｇ／ｍｌ以下、約４００ｐｇ／ｍｌ以下、約３００ｐｇ／ｍｌ以下、約２００ｐｇ／ｍｌ以下、約１００ｐｇ／ｍｌ以下、約７５ｐｇ／ｍｌ以下、または約５０ｐｇ／ｍｌ以下になりうる。
【０１０５】
本発明の別の態様は、末梢血中のＩＬ−１２ｐ７０とＩＦＮ−γの両方の随伴性のレベルは、置換免疫療法としての有効性のマーカーと見なすことができる、というものである。いずれかの因子のレベルが、ＮＭ−ＩＬ−１２を投与した後の血中の初期のレベルから実質的に減少する場合、置換の有効性はそれほど治療的ではない場合がある。この場合、その後のＮＭ−ＩＬ−１２の投与量を減らすことができる。
【０１０６】
以下の表８は、１２μｇの単回ＩＬ−１２投与後に患者の血液中に観察されたＩＬ−１２の量の範囲を示す。（これは健常な被験体で行われた薬物動態学／薬力学分析の一部である。）
【０１０７】
【表８】
2019524753.tif 000010
【０１０８】
任意の従来のアッセイはヒト血漿におけるＩＬ−１２の濃度を測定するために使用することができる。一例として、限定する意図はないが、ヒト血漿中のＩＬ−１２（例えばＮＭ−ＩＬ−１２）の濃度は、酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）または電気化学発光免疫測定法（ＭＳＤ）によって抑制することができる。ＥＬＩＳＡ：この方法は、ヒトＫ２  ＥＤＴＡ血漿中でＮＭ−ＩＬ−１２の濃度を測定するために定量的サンドイッチ酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）を利用する。基準、対照、およびＮＭ−ＩＬ−１２を含む試験サンプルは、ＩＬ−１２捕捉抗体で予めコーティングされている９６ウェルプレートでインキュベートする。インキュベーション後、次いで、未結合物質を洗い流し、ＮＭ−ＩＬ−１２をヒトＩＬ１２検出抗体コンジュゲート（Ｈｕｍａｎ  ＩＬ  １２  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）で検出する。インキュベーション後、次いで、未結合物質を洗い流し、基質溶液をウェルに加える。最後に、増幅溶液を全てのウェルに加えると、最初の工程で結合したＮＭ−ＩＬ−１２の量に比例して発色する。発色を停止させ、色の強度を、波長補正を６５０ｎｍに設定して、４９０ｎｍで測定する。ＭＳＤ：典型的なアッセイにおいて、５０マイクロリットルの基準および検証サンプルを、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｖ−ＰＬＥＸ  Ｈｕｍａｎ  ＩＬ−１２ｐ７０プレートの適切なウェルに加えた。プレートを蓋で覆い、プレートシェーカー（設定２−４）上で室温で約２時間インキュベートした。次にプレートを１ウェルあたり約３００μＬのＭＳＤ洗浄緩衝液で３回洗浄した。２５マイクロリットルの検出抗体をプレートに加えた。プレートを蓋で覆い、プレートシェーカー（設定２−４）上で室温で約２時間インキュベートした。検出抗体を用いたインキュベーション後、プレートを１ウェルあたり約３００μＬのＭＳＤ洗浄緩衝液で３回洗浄し、そして２ｘ  Ｒｅａｄ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｔをプレートの各ウェルに分注する。プレートをＳｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ６０００（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）プレートリーダーで直ちに読み取った。標準曲線を、ｌｏｇ１０変換データの４パラメータロジスティック曲線適合（Ｇｅｎ５  Ｓｅｃｕｒｅソフトウェア、ＢｉｏＴｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して生成した。
【０１０９】
さらなる任意の従来のアッセイがＩＦＮガンマのレベルを測定するために本発明の方法に使用できる。例は以下のとおりである：電気化学発光免疫測定法（ＭＳＤ）によるＩＦＮ−γ検出。５０マイクロリットルの基準およびヒト血漿サンプルを、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｐａｎｅｌ  １（ヒト）プレートの適切なウェルに加えた。プレートを蓋で覆い、プレートシェーカー（設定２−４）上で室温で約２時間インキュベートした。次にプレートを１ウェルあたり約３００μＬのＭＳＤ洗浄緩衝液で３回洗浄した。２５マイクロリットルのＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ抗ｈｕ−ＩＦＮ−γ抗体検出抗体をプレートに加えた。プレートを蓋で覆い、プレートシェーカー（設定２−４）上で室温で約２時間インキュベートした。検出抗体を用いたインキュベーション後、プレートを１ウェルあたり約３００μＬのＭＳＤ洗浄緩衝液で３回洗浄し、そして２ｘ  Ｒｅａｄ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｔをプレートの各ウェルに分注する。プレートをＳｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ６０００（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）プレートリーダーで直ちに読み取った。標準曲線を、ｌｏｇ１０変換データの４パラメータロジスティック曲線適合（Ｇｅｎ５  Ｓｅｃｕｒｅソフトウェア、ＢｉｏＴｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して生成した。
【０１１０】
ＩＬ−１２は直接的な共投与または連続投与のいずれかにより他のサイトカインと共に投与されてもよい。１つ以上のサイトカインがＩＬ−１２で共投与される場合、より少ない投与量のＩＬ−１２が利用されうる。他のサイトカイン、すなわちＩＬ−１２以外のサイトカインの適切な投与量は、約１μｇ／ｋｇから約１５ｍｇ／ｋｇのサイトカインである。例えば、投与量は、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＥＰＯなど他のサイトカインについての投与量と同じであってもよい。他方のサイトカインは、ＩＬ−１２の投与の前、同時、または後に投与されてもよい。サイトカインおよびＩＬ−１２を組み合わせて、哺乳動物への同時投与のための医薬組成物を形成してもよい。ある実施形態において、ＩＬ−１２およびサイトカインの量は、ＩＬ−１２および他のサイトカインの投与時に、哺乳動物において血球の相乗的な再増殖（または造血細胞の増殖および／または分化の相乗的な増加）が起こるような量である。言いかえれば、血球の再増殖（または造血細胞の増殖／分化）に関する２つ以上の薬剤（すなわち、ＩＬ−１２および１つ以上のサイトカイン）の協調作用は、これらの分子の個々の効果の合計よりも大きい。
【０１１１】
ＩＬ−１２の治療用製剤は、凍結乾燥ケーキまたは水溶液の形態で、所望の純度を有するＩＬ−１２を任意の生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定化剤と混合することによって保存用に調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｏｓｏｌ，  Ａ．，  Ｅｄ．，  （１９８０））。許容される担体、賦形剤、または安定化剤は、使用される用量および濃度ではレシピエントに無毒であり、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸を含む酸化防止剤；低分子量（約１０未満の残基）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、および、グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールまたはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩を形成する対イオン；および／または、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）、ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標）、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤、を含む。
【０１１２】
本明細書に使用されるように、用語「緩衝剤」は、医薬製剤のｐＨを安定させる、薬学的に許容可能な賦形剤を表わす。適切な緩衝剤は当技術分野において周知であり、文献に見出すことができる。薬学的に許容可能な緩衝剤は、ヒスチジン緩衝剤、クエン酸緩衝剤、コハク酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、アルギニン緩衝剤、またはこれらの混合物を含むが、これらに限定されない。上述の緩衝剤は、一般に、約１ｍＭ〜約１００ｍＭ、約５ｍＭ〜約５０ｍＭ、および約１０〜２０ｍＭの量で使用される。緩衝液のｐＨは、少なくとも４．０、少なくとも４．５、少なくとも５．０、少なくとも５．５、または、少なくとも６．０であってもよい。緩衝液のｐＨは、７．５未満、７．０未満、または６．５未満であってもよい。緩衝液のｐＨは当技術分野で知られている酸または塩基、例えば、塩酸、酢酸、リン酸、硫酸およびクエン酸、水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムで、約４．５〜約７．５、約５．５〜約７．５、約５．０〜約６．５、および約５．５〜約６．５であってもよい。ｐＨを記載するときに本明細書中で使用されるとき、「約」は、プラスまたはマイナス０．２ｐＨ単位を意味する。
【０１１３】
本明細書で使用されているように、用語「界面活性剤」は、撹拌と剪断などの機械的ストレスに対してタンパク質製剤を保護するために使用される、薬学的に許容可能な賦形剤を含みうる。薬学的に許容可能な界面活性剤の例には、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Ｔｗｅｅｎ）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（Ｂｒｉｊ）、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）およびドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）が含まれる。適切な界面活性剤は、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標）の商標で販売）およびポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０（登録商標）の商標で販売）などのポリオキシエチレンソルビタンエステルを含む。適切なポリエチレン−ポリプロピレンコポリマーは、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８またはポロクサマー１８８（登録商標）の名称で販売されたものである。適切なポリオキシエチレンアルキルエーテルはＢｒｉｊ（登録商標）の商標で販売されたものである。適切なアルキルフェノールポリオキシエチレンエステルはＴｒｉｔｏｎ−Ｘの商標で販売されている。ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標））およびポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０（登録商標））が使用される場合、それらは、一般に、約０．００１〜約１％、約０．００５〜約０．２％および約０．０１％〜約０．１％ｗ／ｖ（重量／容量）の濃度範囲で使用される。
【０１１４】
本明細書で使用されているように、用語「安定剤」は、薬学的に許容可能な賦形剤を含んでいてもよく、これは、製造、貯蔵および適用中に活性医薬成分および／または製剤を化学的および／または物理的劣化から保護する。タンパク質製剤の化学的および物理的な分解経路は以下によりレビューされる：Ｃｌｅｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｖ．  Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．，  ７０（４）：３０７−７７  （１９９３）；Ｗａｎｇ，  Ｉｎｔ．Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．，  ７Ｓ５（２）：１２９−８８  （１９９９）；Ｗａｎｇ，  Ｉｎｔ．Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．，  ２０３（１−２）：１−６０  （２０００）；ａｎｄ  Ｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ，  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．，  ２０（９）：１３２５−３６  （２００３）。安定化剤は、限定されないが、糖、アミノ酸、ポリオール、シクロデキストリン、例えばヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリン、スルホブチルエチル−ベータ−シクロデキストリン、ベータ−シクロデキストリン、ポリエチレングリコール、例えばＰＥＧ３０００、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ４０００、ＰＥＧ６０００、アルブミン、人血清アルブミン（ＨＳＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、塩、例えば塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、キレート化剤、例えば以後定義されるＥＤＴＡ、を含む。上記に言及されるように、安定化剤は、製剤中に約１０〜約５００ｍＭの量、約１０〜約３００ｍＭの量、または約１００ｍＭ〜約３００ｍＭの量で存在することができる。いくつかの実施形態において、例示的なＩＬ−１２は、安定している適切な医薬製剤に溶解することができる。
【０１１５】
ＩＬ−１２は、例えば、コアセルベーション技術または界面重合（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース、またはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル）により、調製されたマイクロカプセル中に、コロイド状薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）中に、またはマクロエマルジョン中に封入されてもよい。前記技術は前出のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓに開示されている。
【０１１６】
インビボでの投与のために使用されるＩＬ−１２は無菌でなければならない。これは、凍結乾燥および再構成の前または後に、滅菌濾過膜を通して濾過することによって容易に達成される。ＩＬ−１２は凍結乾燥された形態または溶液で保存される。治療的なＩＬ−１２組成物は、一般的に、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針が貫通可能なストッパーを有する、静脈内注射用の溶液バッグまたはバイアルに入れられる。
【０１１７】
局所適用された時、ＩＬ−１２は適切に担体および／またはアジュバントなどの他の成分と組み合わせられる。そのような他の成分の性質には、意図される投与に対して生理学的に許容されかつ有効でなければならず、組成物の活性成分の活性を低下させてはならないことを除いて制限はない。適切な賦形剤の例には、精製されたコラーゲンの含むまたは含まない軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤または懸濁液を含む。組成物はまた、好ましくは液体または半液体形態で、経皮パッチ、硬膏剤、および包帯に含浸されてもよい。
【０１１８】
ゲル製剤を得るために、液体組成物中に製剤されたＩＬ−１２は、有効量の水溶性多糖類または合成ポリマー、例えばＰＥＧ、と混合して、局所適用されるべき適切な粘度のゲルを形成し得る。使用されてもよい多糖類は、例えば、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロースおよびアルキルヒドロキシアルキルセルロース、例えばメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、および、ヒドロキシプロピルセルロース、を含むエーテル化されたセルロース誘導体などのセルロース誘導体；デンプンおよび分画されたデンプン（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ  ｓｔａｒｃｈ）；寒天；アルギン酸およびアルギン酸塩；アラビアゴム；プルラン；アガロース；カラギーナン；デキストラン；デキストリン；フルクタン；イヌリン；マンナン；キシラン；アラビナン；キトサン；グリコーゲン；グルカン；および合成生体高分子；ならびにキサンタンガムなどのガム；グアーガム；ローカストビーンガム；ガムアラブル（ｇｕｍ  ａｒａｂｌｅ）；トラガカントゴム；および、カラヤゴム；および、それらの誘導体および混合物を含む。本明細書における好ましいゲル化剤は、生物学的システムに対して不活性であり、無毒で、調製が簡単で、そして流れすぎたり粘性が高すぎたりしないものであり、その中に保持されているＩＬ−１２分子を不安定化させない。
【０１１９】
多糖類は好ましくは、エーテル化セルロース誘導体であり、より好ましくは、ＵＳＰに明確に定義され、精製され、列挙されているものであり、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、およびヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのメチルセルロースおよびヒドロキシアルキルセルロース誘導体である。本明細書で最も好ましいものはメチルセルロースである。
【０１２０】
ゲル化に有用なポリエチレングリコールは、典型的には、適切な粘度を得るための低分子量ＰＥＧおよび高分子量ＰＥＧの混合物である。例えば、分子量４００〜６００のＰＥＧと分子量１５００のＰＥＧとの混合物は、ペーストを得るために適切な比率で混合された時、この目的に対し有効となるであろう。
【０１２１】
多糖類とＰＥＧに適用されるような用語「水溶性」は、コロイド溶液（ｃｏｌｌｏｉｄａｌ  ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）と分散液（ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎｓ）を含むと意図される。一般に、セルロース誘導体の溶解性は、エーテル基の置換の程度によって判定され、本明細書で有用な安定化誘導体は、誘導体を水溶性にするために、セルロース鎖中の無水グルコース単位当たり十分な量のそのようなエーテル基を有するべきである。無水グルコース単位当たり少なくとも０．３５のエーテル基のエーテル置換度であれば、一般的に十分である。さらに、セルロース誘導体は、アルカリ金属塩、例えばＬｉ、Ｎａ、Ｋ、Ｃｓ塩の形態である場合がある。
【０１２２】
メチルセルロースがゲルの中で利用される場合、好ましくは、メチルセルロースはゲルの約２−５％、より好ましくは約３％含み、ＩＬ−１２は、ゲル１ｍｌ当たり約３００−１０００ｍｇの量で存在する。
【０１２３】
治療上利用されるＩＬ−１２の有効量は、例えば治療対象、投与経路および患者の状態に依存する。したがって、療法士は、最適な治療効果を得るために必要に応じて用量を滴定し（ｔｉｔｅｒ）、投与経路を変更することが必要である。典型的には、臨床医は、所望の効果を達成する投与が達成されるまで、ＩＬ−１２を投与する。全身の処置のための典型的な用量は、上記の要因に応じて、約１０ｎｇ／ｋｇから２０００ｎｇ／ｋｇまで、またはそれ以上の範囲となる。いくつかの実施形態では、投与量の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９から、約２０まで；約３０まで；約５０まで；約１００まで、約２００まで、約３００まで、または約５００ｎｇ／ｋｇまで、である。一態様では、投与量は５００ｎｇ／ｋｇ未満である。別の態様では、投与量は３００ｎｇ／ｋｇ未満である。別の態様では、投与量は約２００ｎｇ／ｋｇ未満である。別の態様では、投与量は約１００ｎｇ／ｋｇ未満である。別の態様では、投与量は約５０ｎｇ／ｋｇ未満である。他の態様では、投与量は、約１０〜３００ｎｇ／ｋｇ、２０〜４０ｎｇ／ｋｇ、２５〜３５ｎｇ／ｋｇ、５０〜１００ｎｇ／ｋｇまで変動することができる。
【０１２４】
一態様において、本明細書に記載されている典型的な治療的な組成物は、分割投与量で（ｉｎ  ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ  ｄｏｓｅｓ）投与することができる。一実施形態において、治療上有効量は各分割（ｅａｃｈ  ｆｒａｃｔｉｏｎ）の前に与えられる。一実施形態において、治療上有効量は、個々の化学療法の投与または投与量分割の投与とおおよそ同じ時に与えられる。一実施形態において、治療上有効量は、各分割前５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、または６０分；または、各分割後２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２時間；または、各分割前１、２、３、４、５、６、７日、の範囲の各分割前に与えられる。一実施形態では、治療上有効量は、各分割後５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、または６０分；または、各分割後２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２時間；または、各分割後１、２、３、４、５、６、７日；または、毎週１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、２週に１回、隔月、化学療法および／または化学療法／放射線治療の組み合わせ中もしくはその後、の範囲の各分割後に与えられる。別の実施形態では、ＩＬ−１２の１以上の典型的な投与量は、個々の化学療法的な投与の前後に、約５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０分、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日で、（１〜１００ｎｇ／ｋｇを）投与される。
【０１２５】
代替的な一般命題として、ＩＬ−１２受容体は、有効であるが過度に毒性ではない最大量にまで、組織内で約０．１ｎｇ／ｃｃより高いＩＬ−１２レベルを確立することができる用量で製剤され、標的部位または組織に送達される。この組織内濃度は、可能であれば、連続注入、持続放出、局所適用、または経験的に決定された頻度での注射によることを含む投与レジメンによって維持されるべきである。この治療の進行は、従来のアッセイにより容易にモニタリングされる。
【０１２６】
「処置の投与の時間近く」（“Ｎｅａｒ  ｔｈｅ  ｔｉｍｅ  ｏｆ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ”）とは、例えば、約１ヶ月、約３週間、約２週間、約１週間、数日間、約１２０時間、約９６時間、約７２時間、約４８時間、約２４時間、約２０時間、数時間、約１時間、または数分、などの処置の投与の前および／または後のいずれかの妥当な期間でのＩＬ−１２の投与を指す。「処置の投与の時間近く」とはまた、処置およびＩＬ−１２の同時またはほぼ同時の投与、すなわち数分から１日以内のことを指すこともある。
【０１２７】
ＩＩＩ．定義
本開示の目的のために、以下の定義は、その全体が、技術用語を定義し、そして特許請求の範囲において保護が求められる物質の組成の範囲を定義するために使用されるものとする。
【０１２８】
本明細書で使用されているように、用語「約」は当業者により理解され、それが使用される文脈に応じてある程度異なる。使用される文脈を考慮して当業者には明らかではない用語の使用がある場合、「約」は特定の用語の最大プラスマイナス１０％を意味するであろう。
【０１２９】
「骨髄保存」とは、それによって、放射線、化学療法、疾患または毒素によって損傷を受けた骨髄がその正常な状態、またはほぼ正常な状態に維持されるプロセスを意味する。「骨髄回復」とは、それによって、放射線、化学療法、疾患または毒素により損傷を受けた骨髄が、その正常な状態、ほぼ正常な状態、または骨髄機能の測定可能な改善が得られた状態に回復するプロセスを意味する。骨髄機能は、それによって、適正なレベルの様々な血液細胞型またはその系列が造血（血液）幹細胞から生成されるプロセスである。
【０１３０】
「骨髄不全」は、放射線、化学療法、疾患または毒素によって損傷を受けた骨髄が正常に回復することができず、従って哺乳動物において適切な造血を維持するのに十分な血球を生成することができない、病理学的プロセスである。
【０１３１】
「化学療法」は、現在知られているかまたは医学分野で開発されている天然または合成の薬剤を含む任意の療法を指す。化学療法の例は、現在利用可能な多数の抗癌剤を含む。しかし、化学療法はまた、病状を処置することを意図されている、天然または合成の任意の薬物を含む。本発明のある実施形態において、化学療法は、病状を処置することを意図したいくつかの最先端技術の薬剤の投与を含んでいてもよい。例としては、頭部の局所進行性扁平上皮癌患者に対するドセタキセル、シスプラチン、５−フルオロウラシルの併用化学療法（Ｔｓｕｋｕｄａ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．  ２００４  Ｊｕｎｅ；  ９  （３）：  １６１−６）、および、難治性および再発性無痛性リンパ腫におけるルダラビンとベンダムスチン（Ｋｏｎｉｇｓｍａｎｎ  Ｍ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ．  ２００４；  ４５  （９）：  １８２１−１８２７）が含まれる。
【０１３２】
「放射線療法」は、病状を処置するために任意の形態の放射線が使用されるあらゆる治療を指す。放射線療法のための放射線を生産する機器は、現在利用可能であるかまたは将来利用可能となる機器のいずれかである。
【０１３３】
本明細書で使用されているように、放射線療法「処置モダリティ」（ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  “ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｍｏｄａｌｉｔｙ”）は、電離および非電離放射線ソースを含みうる。典型的な電離放射線処置モダリティは、例えば、外部照射療法；強度変調放射線治療（ＩＭＲＴ）；画像誘導放射線治療（ＩＧＲＴ）；Ｘ線照射（例えば光子線治療）；電子ビーム（例えばβ線照射）；プロトン照射；高線形エネルギー（ＬＥＴ）粒子；定位放射線照射；ガンマナイフ；線形加速器媒介性フレームレス定位放射線照射；ロボットアーム制御Ｘ線照射送達システム；臓器特異的または癌細胞特異的取り込みのための放射性同位体放射線療法；腫瘍標的放射線療法（または放射免疫治療、ＲＩＴ）のためのモノクローナル抗体に結合した放射性同位元素；近距離照射療法（間室内または腔内）高線量率放射線源刺入；臓器特異的線量送達のための永久放射性シード刺入、を含むことができる。
【０１３４】
「欠乏を改善する」とは、造血の欠乏の減少、すなわち欠乏症の改善、または、現在の医療行為によって定義されているような正常状態の部分的もしくは完全な回復を意味する。したがって、造血の欠乏の改善とは、造血の全般的または特異的な増加、刺激、増強または促進を指す。造血の欠乏の改善は、全般的であること、即ち２つ以上の造血細胞型またはその系列を増加させること、または、特異的であること、即ち１つの造血細胞型またはその系列を増加させること、が観察され得る。
【０１３５】
「骨髄細胞」は、一般的に哺乳動物の骨髄区画に存在し、および／または本拠とする（ｈｏｍｅ  ｔｏ）細胞を指す。用語「骨髄細胞」に含まれるのは、造血再増殖細胞、造血幹細胞および／または前駆細胞を含むがこれらに限定されない造血の起源の細胞のみならず、内皮細胞、間葉系細胞、骨細胞、神経細胞、支持細胞（間質細胞）などの骨髄由来の任意の細胞（これらおよび他の細胞型および系統の関連する幹細胞および／または前駆細胞を含むがこれらに限定されない）である。
【０１３６】
「造血細胞型」は、一般に、様々な種類の分化した造血細胞を指すが、幹細胞、前駆細胞、および骨髄細胞、リンパ球などの様々な系列細胞を含む、血球産生に関連するすべての細胞型を指す様々な芽細胞などの、特定の造血細胞型が由来する造血前駆細胞も含まれ得る。  
【０１３７】
「造血細胞系列」は、一般的に、骨髄またはリンパ球などの分化した造血細胞の特定の系列を指すが、樹状細胞、赤血球などのより分化した系列を指すこともあり得る。
【０１３８】
細胞の「ＩＬ−１２促進増殖」（“ＩＬ−１２  ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｄ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ”）は、一般的に、造血前駆細胞および／または幹細胞などの哺乳動物の骨髄に一般的に存在するまたは本拠とする細胞の拡大または増加に少なくとも部分的に起因する造血の増加、刺激または増強を指すが、骨髄の隙間の微小環境を構成する他の細胞を含む。
【０１３９】
「造血の刺激または増大」は、一般に、１つ以上の造血細胞型またはその系列の増加を指し、特に、哺乳動物が１つ以上の造血細胞型またはその系列が欠乏している時の１つ以上の造血細胞型またはその系列の刺激または増大に関する。
【０１４０】
「造血長期再増殖細胞（Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ）」は一般に骨髄中で最も原始的な血液細胞である；これらは、様々な血液細胞型およびその系列の長期間の産生を提供する原因となる血液幹細胞である。
【０１４１】
「造血幹細胞」は一般的に血液幹細胞である；２つのタイプが存在する：上記で定義された「長期再増殖」、短期間（哺乳動物に応じて数週間、数ヶ月または時には数年間さえも）で「前駆細胞」を生成することができる「短期再増殖」と、である。
【０１４２】
「造血前駆細胞」（Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ）は、一般的に血液幹細胞から分化する（すなわちそれから成熟する）最初の細胞であり；その後、それらは様々な血液細胞型およびその系列に分化する（成熟する）。
【０１４３】
「造血支持細胞」（Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｓｕｐｐｏｒｔ  ｃｅｌｌｓ）は骨髄の非血液細胞である；これらの細胞は、血液細胞産生の「支持」をする。これらの細胞も骨髄間質細胞と呼ばれる。
【０１４４】
本明細書に使用されるように、「被験体」は、処置、観察、または実験の対象である動物を指す。「動物」は魚、甲殻類、爬虫類および特に哺乳動物などの、冷血脊椎動物および温血脊椎動物ならびに無脊椎動物を含む。「哺乳動物」には以下を含むがこれらに限定されない；マウス；ラット；ウサギ；モルモット；イヌ；ネコ；ヒツジ；ヤギ；ウシ；ウマ；サル、チンパンジー、類人猿、出生前のヒト、小児、および成人などの霊長類。
【０１４５】
本明細書で使用されるように、「予防」または「保護」は、全体的または部分的に予防すること、または改善もしくは制御することを意味する。
【０１４６】
本明細書で使用されているように、用語「処置」は、治療的処置と予防的または防止的手段の両方、または、治療的可能性を有すると思われる薬剤を投与することを指す。
【０１４７】
用語「治療上有効な量」は、本明細書で使用されるように、処置されている疾患の症状の緩和または寛解を含む、研究者、獣医、医師、または他の臨床医に求められる、組織、システム、動物、またはヒトにおける生物学的または医学的な反応を誘発させる、活性化合物または医薬品の量を意味する。
【０１４８】
本明細書で使用されているように、本開示の医薬組成物に関する「有効量」とは、有用性を有し、所望の治療エンドポイントを提供するのに十分な量を指す。
【０１４９】
一実施形態において、治療モダリティ／レジメンは加速分割照射治療（ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）である。加速分割照射治療において、１日当たりの投与量を増やしても、１画分（ｆｒａｃｔｉｏｎ）あたりの投与量は変わらず、処置のための合計時間は短くなる。
【０１５０】
併用療法（連続的または同時）は、同時投与または同時処方であり得る。
【実施例】
【０１５１】
以下の実施例を参照しながら本発明を説明する。これらの実施例は例証の目的のためだけに提供され、そして本発明はこれらの実施例に限定されず、むしろここに提供される教示の結果として明白であるすべての変形を包含する。
【０１５２】
実施例１：
【０１５３】
図３２は、マウスＩＬ  −１２が、照射されたマウスの造血の回復を促進することを説明する。ＩＬ−１２Ｒβ２について染色された（橙色）、照射されていない未処理マウスからの大腿骨髄の代表的な切片を図３２のＡおよび３２のＢに示す。動物をＴＢＩ（８．０Ｇｙ）に供し、続いて、照射後の示されている時間にビヒクル（図３２のＢおよびＣ）またはｒＭｕＩＬ−１２（２０ｎｇ／マウス）（図３２のＤおよび３２のＥ）を皮下投与した。大腿骨髄を、照射して１２日後にＩＬ−１２Ｒβ２について免疫組織化学的に染色した（橙色）。ビヒクルで処置したマウスからの骨髄はＩＬ−１２Ｒβ２発現細胞を欠いており、造血再生の徴候を示さなかった（図３２のＣ）が、ｒＭｕＩＬ−１２で処置したマウスは造血再構成、ならびにＩＬ−１２Ｒβ２発現巨核球、骨髄前駆細胞、および骨芽細胞の存在を示した（図３２のＥおよび３２のＦ）。
【０１５４】
実施例２：
【０１５５】
典型的なファーストインヒューマン（ＦＩＨ）臨床研究の要約および設計
【０１５６】
健康成人ボランティア（ＩＮＤ１０４，０９１）におけるＨｅｍａＭａｘ（商標）（ｒＨｕＩＬ−１２）の安全性、耐容性、薬物動態、および薬力学に関する第１相二重盲検プラセボ対照単回漸増投与試験と題される試験は、健康成人被験体におけるＨｅｍａＭａｘ（商標）の単回漸増皮下（ＳＣ）投与の薬物動態および免疫原性を評価するための二次的目的とともに、安全性および耐容性を判定するように設計された。
【０１５７】
１８−４５歳の最大３０人の健康な女性の成人の被験体が、それぞれ６人の被験体の４つの連続したコホートに登録され、被験体は各投与量レベルで使用される。治験薬（ＨｅｍａＭａｘ（商標）またはプラセボのいずれか）の単回ＳＣ注入は、２、５、１０および２０μｇの服用レベルで腹部に投与される。６人の被験体のコホートを、投与量レベル（プラセボについてはｎ＝２、ＨｅｍａＭａｘ（商標）についてはｎ＝４）ごとに二重盲検法で評価する。ｎ＝６被験体の追加の拡大コホート（２人のプラセボと４人のＨｅｍａＭａｘ（商標））が、試験の漸増投与量部分において投与された最高投与量（またはプラセボ）を受けるために登録してもよい。
【０１５８】
実施例３：ＮＭ−ＩＬ−１２
【０１５９】
薬剤師は、被験体への注入のためにシリンジに充填された形態のＨｅｍａＭａｘ（商標）投与溶液を調製する。この試験において、治験薬（ＩＰ）は、２ｍＬ透明バイアル中のＨｅｍａＭａｘ（ｒＨｕＩＬ−１２）医薬品からなる。ＨｅｍａＭａｘ（ｒＨｕＩＬ−１２）医薬品バイアルは、０．６５ｍＬの、０．１％（ｗ／ｖ）ポロクサマー１８８を含むｐＨ６．０の１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム中に２０μｇ／ｍＬ  ｒＨｕＩＬ−１２タンパク質を含む（回収容量０．５０ｍＬ）。これらの溶液は透明で無色である。
【０１６０】
冷蔵庫からバイアルを取り出し、投与量の調製前の少なくとも１５分間、室温で置いておく。２５Ｇ  ５／８針が外されたポリプロピレン製バレル付きのＢＤシリンジまたはＢＤツベルクリンシリンジ（ＢＤ  Ｔｕｂｅｒｃｕｌｉｎ  Ｓｙｒｉｎｇｅ）（カタログ番号３０５５５３、２７ｇ  １／２針取り付け）は適合性があることが示されている。調製した溶液を備えたシリンジは６時間室温で維持することができる。より長い保存時間を所望する場合、シリンジは２４時間の間、２〜８度で保存することができる。別の針を備えたシリンジが使用される場合、投与シリンジに約０．１ｍＬを充填し、次に針を取り外して新しい針と交換し、適切な投与量に達するまでゆっくりと排出する。
【０１６１】
実施例４：
【０１６２】
この例により実証されるように、ＩＬ−１２は身体中では恒常的に生成されない。１１０人の被験体が試験され、定量下限（ＬＬＯＱ）を超えるレベルのＩＬ−１２を有する人はいなかった。
【０１６３】
ＩＬ−１２およびＩＦＮガンマのベースラインレベル：図３５のＡおよびＢで示される箱ひげ図は、ベースライン値の５〜９５パーセンタイルをカバーするひげで１１０人の被験者のＩＬ−１２およびＩＦＮ−γベースラインレベルを記載する。ＩＬ−１２ベースラインレベルは、キット標準曲線を使用して定義された。図３５のＡで示されるように、１１０人の被験体についての投与前ＩＬ−１２レベルはすべて、定量下限未満（ＢＬＱ）（ＬＬＯＱ＝０．３６７ｐｇ／ｍｌ）だった。ほとんどすべてのＩＦＮ−ガンマレベルは、ＬＬＯＱ（ＬＬＯＱ＝１．０８ｐｇ／ｍｌ）より上で定量化でき、ほとんどが低ｐｇ／ｍｌ範囲にあった。被験体１０３３および１０５５を含む５つの上限外れ値（ｈｉｇｈ  ｅｎｄ  ｏｕｔｌｉｅｒｓ）が、２３ｐｇ／ｍｌを超えるＩＦＮ−γのベースラインレベルを示した。
【０１６４】
本発明は特定の実施形態に関して開示されているが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、当業者が本発明の他の実施形態および変種を考案することができることは明白である。添付された請求項はそのような実施形態および等価物をすべて含む。
【０１６５】
本明細書で参照または言及したすべての特許、刊行物、科学論文、ウェブサイト、ならびに他の文書および資料は、本発明が属する技術分野の当業者の技術水準を示すものであり、そのような参照された文書および資料はそれぞれ、あたかもその全体が個々に参照により組み込まれているか、またはその全体が本明細書に記載されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。出願人は、このような特許、刊行物、科学論文、ウェブサイト、電子的に利用可能な情報、および他の参照資料または文書からのあらゆる資料および情報を本明細書に物理的に組み込む権利を留保する。
【０１６６】
本明細書に記載の特定の方法および組成物は好ましい実施形態の代表例であり、例示的なものであり、本発明の範囲に対する限定として意図されるものではない。本明細書を考慮すると、他の目的、態様、および実施形態が、当業者には思い浮かぶであろうし、これらは特許請求の範囲によって定義されるように本発明の精神の範囲内に包含される。本発明の範囲および精神から逸脱することなく、本明細書に開示された本発明に対して様々な置換および改変がなされ得ることが当業者には容易に明らかとなるであろう。本明細書に例示的に記載された本発明は、実質的に本明細書に具体的に開示されていないいずれかの要素（複数可）の非存在下で適切に実施され得る。したがって、例えば、本明細書中の各例において、本発明の実施形態または実施例において、用語「含む」、「から本質的になる」、および「からなる」はいずれも、本明細書における他の２つの用語のいずれかと置き換えられ得る。また、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」などは、限定的ではなく拡大的に読まれるべきである。本明細書に例示的に説明された方法およびプロセスは、異なる工程の順序で適切に実施される場合があり、それらは必ずしも本明細書または特許請求の範囲に示される工程の順序に限定されない。本明細書および添付の請求項に使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明確に別段に指定していない限り、複数形の参照を含むこともある。いかなる状況下でも、本特許は、本明細書に具体的に開示された特定の実施例または実施形態または方法に限定されると解釈されてはならない。いかなる状況下でも、特許審査官、または特許商標庁の他の職員もしくは従業員による声明が、出願人による応答書面で明示的にかつ無制限に採用されている場合を除き、本特許は、そのようないかなる声明によっても限定されるとは解釈されてはならない。
【０１６７】
使用されてきた用語および表現は、記載の用語として使用され、限定するものではなく、そのような用語および表現を使用することに、示され説明された特徴またはその一部の均等物を除外する意図はなく、特許請求の範囲に記載の本発明の範囲内で様々な修正が可能であることが認識される。したがって、本発明は、好ましい実施形態および任意選択の特徴によって具体的に開示されているが、本明細書に開示された概念の修正および変形は当業者に頼られること、および、そのような修正および変形は添付の特許請求の範囲によって定義されるような本発明の範囲内にあると見なされることが理解されよう。
【０１６８】
本発明は、幅広く一般的に本明細書に記述された。一般的な開示の範囲内に含まれるより狭い種および亜属のグループ分けのそれぞれもまた本発明の一部を形成する。これは、取り除かれた材料が本明細書に具体的に記載されているか否かにかかわらず、属から任意の対象を除去するという条件付きまたは否定的な限定を伴う本発明の一般的な説明を含む。
【０１６９】
他の実施形態は以下の請求項内にある。加えて、本発明の特徴または態様がマーカッシュグループで説明されている場合、当業者は、これにより、マーカッシュグループの任意の個々の部分または部分のサブグループに関しても本発明が説明されることを認識するであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【国際調査報告】
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