(57)【要約】  本発明は、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病の予防における使用のためのオキサジン誘導体ＢＡＣＥ−１阻害薬及びかかるオキサジン誘導体を含む医薬組成物であって、詳細には、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因する、オキサジン誘導体ＢＡＣＥ−１阻害薬及びかかるオキサジン誘導体を含む医薬組成物に関する。
2019524743.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病の予防における使用のための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある前記患者は、前記アルツハイマー病の臨床症状を発症する遺伝的素因を保因するか、又はダウン症候群を有する、請求項１に記載の使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３】
前記患者は、前記アルツハイマー病の臨床症状を発症する遺伝的素因を保因し、及び前記遺伝的素因は、
（ｉ）アミロイド前駆体タンパク質、プレセニリン−１若しくはプレセニリン−２の遺伝子における突然変異、又は
（ｉｉ）ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーの存在
である、請求項２に記載の使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある前記患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因する、請求項３に記載の使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５】
前記患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つのコピーを保因する、請求項４に記載の使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６】
前記患者は、ＡｐｏＥ４アレルの２つのコピーを保因する、請求項４に記載の使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項７】
前記患者は、アミロイド陽性である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項８】
前記アミロイド陽性は、ＰＥＴ又はＣＳＦ測定によって決定される、請求項７に記載の使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項９】
前記患者は、６０〜７５歳である、請求項３〜８のいずれか一項に記載の使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１０】
前記化合物は、２週間の化合物曝露後にＣＳＦ中のＡβ１−４０の少なくとも７０％の低下をもたらす１日用量で使用される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１１】
前記化合物は、２週間の化合物曝露後にＣＳＦ中のＡβ１−４０の少なくとも５０％の低下をもたらす１日用量で使用される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１２】
前記化合物は、１日１５ｍｇの用量で使用される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１３】
前記化合物は、１日５０ｍｇの用量で使用される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１４】
遊離形態である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項１５】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用のための遊離形態又は薬学的に許容可能な塩の形態における化合物を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病の予防における使用のためのオキサジン誘導体及びかかるオキサジン誘導体を含む医薬組成物であって、詳細には、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因する、オキサジン誘導体及びかかるオキサジン誘導体を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）は世界的に最も多く見られる神経障害の１つであり、最も一般的な消耗性の加齢に伴う病態であり、進行性の健忘、認知症、及び最終的に全般的な認知的不全及び死亡を引き起こす。現在、唯一の利用可能な薬理学的療法は、コリンエステラーゼ阻害薬などの対症的薬物又はＡＤの二次的行動症状を管理するために用いられる他の薬物である。ＡＤ発病カスケードを標的とする研究治療には、アミロイド−β（Ａβ）種の産生、蓄積、又は毒性の続発症を妨げることを意図したものが含まれる（Ｋｒａｍｐ  ＶＰ，Ｈｅｒｒｌｉｎｇ  Ｐ，２０１１）。（１）Ａβに対する能動又は受動免疫療法によるアミロイドクリアランスの亢進；（２）β部位ＡＰＰ切断酵素−１（ＢＡＣＥ−１、アミロイド前駆体タンパク質［ＡＰＰ］のプロセシングに関与する酵素）の阻害を通じた産生の減少によってＡβを減少させることを標的とする戦略には治療的価値がある可能性がある。
【０００３】
動物データ及びこの疾患の認知症ステージを標的とする最近の臨床試験で利益が限られていることに基づき、ＡＤの進行を予防するか又は遅延させるのにＡβ低減療法が発症前ステージで最も有効であり得るという考えが広まりつつある。この手法によれば、線維性Ａβのプラトー、タウ（神経原線維）病変の広範な出現及び不可逆的なシナプス又はニューロン欠損に先立ち、症状及び疾患の発症前又は最も初期の段階で当事者を治療することが可能となる。
【０００４】
ε４アレルのアポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ４）遺伝子は、アルツハイマー病（ＡＤ）の主要危険因子である。ＡＰＯＥ遺伝子は、３つの多型アレル、ε２、ε３及びε４で存在し、ε３が最も高頻度である。ＡＰＯＥアイソフォームによってＡβクリアランス、凝集及び沈着への影響が異なる。ε２は、保護的であるように見える一方、ε４保因者には病変の亢進及び年齢依存性認知機能低下の加速が認められる（レビューについては、Ｌｉｕ  ＣＣ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３を参照されたい））。
【０００５】
ヒトＡｐｏＥは、１９番染色体に位置し（遺伝子ＡＰＯＥ、Ｕｎｉｐｒｏｔ  Ｐ０２６４９、１８アミノ酸のプロペプチドを含む３１７アミノ酸の遺伝子コード）、成熟形態は、２９９アミノ酸で構成され、及び可動性リンカーによってつなぎ合わされた２つの別個のＮ末端及びＣ末端ドメインを有する。Ｎ末端ドメインが受容体結合の結合ドメイン（ａａ１３６〜１５０）を含む一方、脂質結合ドメイン（ａａ２４０〜２６０）がＣ末端部に位置する。ヒトでは３つの主要なアイソフォーム（ａｐｏＥ２、３及び４）が知られ、ＡｐｏＥ３（１１２位にＣｙｓ及び１５８位にＡｒｇを有する）のアレル頻度は、ヒトでは約５０〜９０％である。ヒトにおいて、ＡｐｏＥ２（１１２及び１５８位にＣｙｓを有する）は、アレル頻度が１〜５％であり、ＡｐｏＥ４（１１２及び１５８位にＡｒｇを有する）は、アレル頻度が５〜３５％である。ＡｐｏＥ３及び４は、高親和性でＬＤＬ受容体に結合する一方、ＡｐｏＥ２は、（Ｃｙｓ−１５８に起因して）低い親和性のみを有する。
【０００６】
ＡｐｏＥ４ホモ接合体は、一般集団の約２〜３％を占めると推定され、発症時年齢が平均６８歳であり、他のＡＰＯＥ遺伝子型の人と比べてＡＤ症状の発症リスクがはるかに高い（Ｃｏｒｄｅｒ  ＥＨ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）。８５歳までには、症候性ＡＤの生涯リスクは、男性ホモ接合体で５１％及び女性ホモ接合体で６０〜６８％もの高さとなり得る。対応する８５歳ＡｐｏＥ４ヘテロ接合体の危険率は、ＡｐｏＥ３／４遺伝子型を保因する男性及び女性についてそれぞれ２３％及び３０％、並びにＡｐｏＥ２／４遺伝子型を保因する男性及び女性についてそれぞれ２０％及び２７％である（Ｇｅｎｉｎ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。ＡｐｏＥ４遺伝子の存在がＡβクリアランス、凝集、及び沈着に影響を及ぼすことによってＡＤリスクを高めることが提唱されている（Ｌｉｕ  ＣＣ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＡｐｏＥ４ヘテロ接合体における脳アミロイド病変の存在は、ホモ接合体と比較してＡＤ臨床症状の発症リスクを有意に増加させると予想される。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本明細書において「化合物１」と称される化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミドは、国際公開第２０１２／０９５４６９  Ａ１号パンフレットに以前に記載された経口活性ＢＡＣＥ阻害薬であり、ＢＡＣＥ−２と比べてＢＡＣＥ−１に対する選択性が約３倍高く、及び関連するオフターゲット結合又は活性がない。
【０００８】
これまでのところ実地では挫折及び失望の割合が高いことを考えると（Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  ＪＬ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）、リスク患者において任意の実験的疾患修飾性ＡＤ療法が有効であると判明するかどうかに関しては不確実性の度合いが高い。しかしながら、本明細書で化合物１によって実証された、（ｉ）望ましくない副作用、例えば毛髪変色のない、ＡｐｏＥ４トランスジェニックマウス及びヒトＡｐｏＥ４保因者におけるＡβレベルの低減；（ｉｉ）ＡＰＰ２３マウスモデルにおけるアミロイド−β沈着の低下；及び特に（ｉｉｉ）基礎的ＡＤ病変への効果を示すものである脳脊髄液のＡβ４２／Ａβ４０比の上昇における有効性の度合いの高さは、ＡＤ臨床症状の発症リスクがある患者、詳細にはＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因する患者のＡＤの予防において化合物１が有効となるであろうことを強く示唆している。
【０００９】
本明細書には第ＩＩ相／第ＩＩＩ相臨床試験が記載され、この試験は、認知障害のないＡｐｏＥ４ホモ接合体患者又は認知障害のないアミロイド陽性ＡｐｏＥ４ヘテロ接合体患者のＡＤの予防における化合物１の有効性を実証するように設計された。現在の知識に基づき、ＢＡＣＥ阻害薬療法は、アミロイド沈着の複数の潜在的原因とは無関係にアミロイドプラーク蓄積を低下させ且つ／又は予防するものと思われるため、この提案される臨床試験からの知見及び本明細書に記載される結果は、ＡｐｏＥ４ホモ接合体及びヘテロ接合体を越えたリスク患者（例えば、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、プレセニリン−１及び−２の遺伝子に突然変異を保因する患者（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ＲＪ，Ｗｏｎｇ  ＰＣ，２０１１）又はダウン症候群患者（Ｈｅａｄ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２））のＡＤに一般化して適用可能であり得る。
【００１０】
従って、本発明の第１の態様において、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病の予防における使用のための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩が提供される。
【００１１】
本発明の第２の態様において、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病の予防における使用のためのＮ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物が提供される。
【００１２】
本発明の第３の態様において、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病を予防する方法であって、治療有効量の化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩をかかる患者に投与することを含む方法が提供される。
【００１３】
本発明の第４の態様において、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病を予防する方法であって、治療有効量の化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物をかかる患者に投与することを含む方法が提供される。
【００１４】
本発明の第５の態様において、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病を予防するための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩の使用が提供される。
【００１５】
本発明の第６の態様において、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病を予防するための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物の使用が提供される。
【００１６】
本発明の第７の態様において、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病の予防用医薬を製造するための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩の使用が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】化合物１又はＮＢ−３６０で８週間慢性治療したＣ５７ＢＬ／６マウスの毛色スコア（平均値±ＳＥＭ）である。
【図２】８及び５０μｍｏｌ／ｋｇの化合物１による治療時のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける最終投与後の脳Ａβ４０の減少（平均値±ＳＤ、ｎ＝４／群）である。
【図３】ＡＰＯＥ４−ＴＲ雄及び雌マウスの前脳Ａβ４０レベルに対する化合物１の急性投与の効果（３〜５ヵ月齢、平均値±ＳＥＭ）である。
【図４】ＡＰＯＥ４−ＴＲ雄及び雌マウス（３〜５ヵ月齢）のＣＳＦ  Ａβ４０レベルに対する化合物１の急性投与の効果（平均値±ＳＥＭ）である。
【図５】ＡＰＯＥ４−ＴＲ雄及び雌マウス（３〜５ヵ月齢）のＣＳＦ  Ａβ４２レベルに対する化合物１の急性投与の効果（平均値±ＳＥＭ）である。
【図６】ＡＰＯＥ４−ＴＲ雄及び雌マウスにおける化合物１急性曝露（３〜５ヵ月齢、平均値±ＳＤ）である。
【図７】脳ＰＫ／ＰＤ関係（個体データ）である。
【図８】脳ＰＫ／ＰＤ関係（平均値±ＳＤ）である。
【図９】ヒト対象の複数用量漸増経口投与試験における化合物１の２週間曝露後のＣＳＦ  Ａβ４０レベルに対する効果である。
【図１０】ヒト対象のＣＳＦ  Ａβ４０レベルに対する化合物１の効果−３ヵ月時におけるベースラインからの％変化率（最終投与後２４時間）である。
【図１１】Ｔｒｉｔｏｎ  ＴＸ−１００抽出ＡＰＰ２３脳のＡβ４０に対する化合物１の効果である。
【図１２】Ｔｒｉｔｏｎ  ＴＸ−１００抽出ＡＰＰ２３脳のＡβ４２に対する化合物１の効果である。
【図１３】Ｔｒｉｔｏｎ  ＴＸ−１００抽出ＡＰＰ２３脳のｓＡＰＰαに対する化合物１の効果である。
【図１４】Ｔｒｉｔｏｎ  ＴＸ−１００抽出ＡＰＰ２３脳のｓＡＰＰβ（Ｓｗｅ）に対する化合物１の効果である。
【図１５】ＡＰＰ２３マウスの脳脊髄液中のＡβ４０に対する化合物１治療の効果である。
【図１６】マウスにおけるギ酸可溶性Ａβ４０に対する化合物１の効果である（値は平均値±ＳＥＭである）。
【図１７】マウスにおけるギ酸可溶性Ａβ４２に対する化合物１の効果である（値は平均値±ＳＥＭである）。
【図１８】マウスにおけるギ酸可溶性全Ａβ（４０＋４２）に対する化合物１の効果である（値は平均値±ＳＥＭである）。
【図１９】マウスにおけるギ酸可溶性Ａβ４２／４０比に対する化合物１の効果である（値は平均値±ＳＥＭである）。
【図２０】プラーク組織像に対する化合物１の効果  −  小型プラークの数（総面積に対して正規化したデータ）である。
【図２１】プラーク組織像に対する化合物１の効果  −  中型プラークの数（総面積に対して正規化したデータ）である。
【図２２】プラーク組織像に対する化合物１の効果  −  大型プラークの数（総面積に対して正規化したデータ）である。
【図２３】プラーク組織像に対する化合物１の効果  −  総プラーク面積（総面積に対して正規化したデータ）である。
【図２４】総ＧＦＡＰ陽性面積（総面積に対して正規化）である。平均値±ＳＥＭを示す。比較はダネットの多重比較検定で行った。
【図２５】プラーク関連ＧＦＡＰ陽性面積（総面積に対して正規化）である。平均値±ＳＥＭを示す。比較はダネットの多重比較検定で行った。
【図２６】非プラーク関連ＧＦＡＰ陽性面積（総面積に対して正規化）である。平均値±ＳＥＭを示す。比較はダネットの多重比較検定で行った。
【図２７】近位ＧＦＡＰ陽性面積（総面積に対して正規化）である。平均値±ＳＥＭを示す。比較はダネットの多重比較検定で行った。
【図２８】遠位ＧＦＡＰ陽性面積（総面積に対して正規化）である。平均値±ＳＥＭを示す。比較はダネットの多重比較検定で行った。
【図２９】総ＩＢＡ１陽性面積に対する化合物１治療の効果である。個別のミクログリア集団を示す（試料面積によって正規化）。平均値±ＳＥＭを示す。比較はダネットの多重比較検定で行った。
【図３０】プラーク関連ＩＢＡ１陽性面積に対する化合物１治療の効果である。個別のミクログリア集団を示す（試料面積によって正規化）。平均値±ＳＥＭを示す。比較はダネットの多重比較検定で行った。
【図３１】非プラーク関連ＩＢＡ１＋面積に対する化合物１治療の効果である。個別のミクログリア集団を示す（試料面積によって正規化）。平均値±ＳＥＭを示す。比較はダネットの多重比較検定で行った。
【図３２】近位ＩＢＡ１＋面積に対する化合物１治療の効果である。個別のミクログリア集団を示す（試料面積によって正規化）。平均値±ＳＥＭを示す。比較はダネットの多重比較検定で行った。
【図３３】遠位ＩＢＡ１＋面積に対する化合物１治療の効果である。個別のミクログリア集団を示す（試料面積によって正規化）。平均値±ＳＥＭを示す。比較はダネットの多重比較検定で行った。
【図３４】単独投与時及び強力なＣＹＰ３Ａ４阻害薬イトラコナゾール又は強力なＣＹＰ３Ａ４誘導薬リファンピシンとの併用投与時の化合物１のＰＫを判定する健常対象における２パート、非盲検、２期、固定順序試験の設計である。
【図３５】ベースライン時にＣＳＦ  Ａβ４２／Ａβ４０比＜０．０９を有する非ＡｐｏＥ４保因者及びＡｐｏＥ４保因者健常高齢対象の化合物１による治療に応答したＣＳＦ  Ａβ４２／Ａβ４０比のベースラインからの変化倍数である。比較はダネットの多重比較検定で行った。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の様々な実施形態を本明細書において記載する。
【００１９】
本発明の第１の態様のシリーズＡ実施形態
実施形態Ａ１：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病の予防における使用のための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩。
【００２０】
実施形態Ａ２：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、アルツハイマー病の臨床症状を発症する遺伝的素因を保因するか、又はダウン症候群を有する、実施形態Ａ１に係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００２１】
実施形態Ａ３：患者は、アルツハイマー病の臨床症状を発症する遺伝的素因を保因し、及び遺伝的素因は、
（ｉ）アミロイド前駆体タンパク質、プレセニリン−１若しくはプレセニリン−２の遺伝子における突然変異、又は
（ｉｉ）ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーの存在
である、実施形態Ａ２に係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００２２】
実施形態Ａ４：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因する、実施形態Ａ３に係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００２３】
実施形態Ａ５：患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つのコピーを保因する、実施形態Ａ４に係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００２４】
実施形態Ａ６：患者は、ＡｐｏＥ４アレルの２つのコピーを保因する、実施形態Ａ４に係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００２５】
実施形態Ａ７：患者は、アミロイド陽性である、実施形態Ａ１〜Ａ６のいずれか１つに係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００２６】
実施形態Ａ８：アミロイド陽性は、ＰＥＴ又はＣＳＦ測定によって決定される、実施形態Ａ７に係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００２７】
実施形態Ａ９：患者は、６０〜７５歳である、実施形態Ａ３〜Ａ８のいずれか１つに係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００２８】
実施形態Ａ１０：化合物は、２週間の化合物曝露後にＣＳＦ中のＡβ１−４０の少なくとも７０％の低下をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ａ１〜Ａ９のいずれか１つに係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００２９】
実施形態Ａ１１：化合物は、２週間の化合物曝露後にＣＳＦ中のＡβ１−４０の少なくとも５０％の低下をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ａ１〜Ａ９のいずれか１つに係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００３０】
実施形態Ａ１２：化合物は、１日１０〜３０ｍｇの用量で使用される、実施形態Ａ１〜Ａ９のいずれか１つに係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００３１】
実施形態Ａ１３：化合物は、１日３０〜５０ｍｇの用量で使用される、実施形態Ａ１〜Ａ９のいずれか１つに係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００３２】
実施形態Ａ１４：化合物は、１日１５ｍｇの用量で使用される、実施形態Ａ１〜Ａ９のいずれか１つに係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００３３】
実施形態Ａ１５：化合物は、１日５０ｍｇの用量で使用される、実施形態Ａ１〜Ａ９のいずれか１つに係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００３４】
実施形態Ａ１６：化合物は、７０〜１７０ｎｇ／ｍｌの血漿定常状態Ｃｍａｘ値をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ａ１〜Ａ９のいずれか１つに係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００３５】
実施形態Ａ１７：化合物は、２００〜５００ｎｇ／ｍｌの血漿定常状態Ｃｍａｘ値をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ａ１〜Ａ９のいずれか１つに係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００３６】
実施形態Ａ１８：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病の予防における使用のための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩であって、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因する、化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００３７】
実施形態Ａ１９：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病の予防における使用のための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩であって、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因し、化合物は、１日１５又は５０ｍｇの用量で使用される、化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００３８】
実施形態Ａ２０：遊離形態である、実施形態Ａ１〜Ａ１９のいずれか１つに係る使用のための化合物。
【００３９】
実施形態Ａ２１：患者は、ＣＹＰ３Ａ４の阻害薬又は誘導薬で同時に治療されない、実施形態Ａ１〜Ａ２０のいずれか１つに係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００４０】
実施形態Ａ２２：患者は、３ヵ月より長い期間にわたってＣＹＰ３Ａ４阻害薬又は誘導薬で同時に治療されない、実施形態Ａ１〜Ａ２０のいずれか１つに係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００４１】
実施形態Ａ２３：ＣＹＰ３Ａ４阻害薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な、中程度の、又は弱い阻害薬であり、及びＣＹＰ３Ａ４誘導薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な、中程度の、又は弱い誘導薬である、実施形態Ａ２１又はＡ２２に係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００４２】
実施形態Ａ２４：ＣＹＰ３Ａ４阻害薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な阻害薬であり、及びＣＹＰ３Ａ４誘導薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な誘導薬である、実施形態Ａ２３に係る使用のための化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【００４３】
本発明の第２の態様のシリーズＢ実施形態
実施形態Ｂ１：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病の予防における使用のための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物。
【００４４】
実施形態Ｂ２：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、アルツハイマー病の臨床症状を発症する遺伝的素因を保因するか、又はダウン症候群を有する、実施形態Ｂ１に係る使用のための医薬組成物。
【００４５】
実施形態Ｂ３：患者は、アルツハイマー病の臨床症状を発症する遺伝的素因を保因し、及び遺伝的素因は、
（ｉ）アミロイド前駆体タンパク質、プレセニリン−１若しくはプレセニリン−２の遺伝子における突然変異、又は
（ｉｉ）ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーの存在
である、実施形態Ｂ２に係る使用のための医薬組成物。
【００４６】
実施形態Ｂ４：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因する、実施形態Ｂ３に係る使用のための医薬組成物。
【００４７】
実施形態Ｂ５：患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つのコピーを保因する、実施形態Ｂ４に係る使用のための医薬組成物。
【００４８】
実施形態Ｂ６：患者は、ＡｐｏＥ４アレルの２つのコピーを保因する、実施形態Ｂ４に係る使用のための医薬組成物。
【００４９】
実施形態Ｂ７：患者は、アミロイド陽性である、実施形態Ｂ１〜Ｂ６のいずれか１つに係る使用のための医薬組成物。
【００５０】
実施形態Ｂ８：アミロイド陽性は、ＰＥＴ又はＣＳＦ測定によって決定される、実施形態Ｂ７に係る使用のための医薬組成物。
【００５１】
実施形態Ｂ９：患者は、６０〜７５歳である、実施形態Ｂ３〜Ｂ８のいずれか１つに係る使用のための医薬組成物。
【００５２】
実施形態Ｂ１０：化合物は、２週間の化合物曝露後にＣＳＦ中のＡβ１−４０の少なくとも７０％の低下をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｂ１〜Ｂ９のいずれか１つに係る使用のための医薬組成物。
【００５３】
実施形態Ｂ１１：化合物は、２週間の化合物曝露後にＣＳＦ中のＡβ１−４０の少なくとも５０％の低下をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｂ１〜Ｂ９のいずれか１つに係る使用のための医薬組成物。
【００５４】
実施形態Ｂ１２：化合物は、１日１０〜３０ｍｇの用量で使用される、実施形態Ｂ１〜Ｂ９のいずれか１つに係る使用のための医薬組成物。
【００５５】
実施形態Ｂ１３：化合物は、１日３０〜５０ｍｇの用量で使用される、実施形態Ｂ１〜Ｂ９のいずれか１つに係る使用のための医薬組成物。
【００５６】
実施形態Ｂ１４：化合物は、１日１５ｍｇの用量で使用される、実施形態Ｂ１〜Ｂ９のいずれか１つに係る使用のための医薬組成物。
【００５７】
実施形態Ｂ１５：化合物は、１日５０ｍｇの用量で使用される、実施形態Ｂ１〜Ｂ９のいずれか１つに係る使用のための医薬組成物。
【００５８】
実施形態Ｂ１６：化合物は、７０〜１７０ｎｇ／ｍｌの血漿定常状態Ｃｍａｘ値をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｂ１〜Ｂ９のいずれか１つに係る使用のための医薬組成物。
【００５９】
実施形態Ｂ１７：化合物は、２００〜５００ｎｇ／ｍｌの血漿定常状態Ｃｍａｘ値をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｂ１〜Ｂ９のいずれか１つに係る使用のための医薬組成物。
【００６０】
実施形態Ｂ１８：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病の予防における使用のための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物であって、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因する、医薬組成物。
【００６１】
実施形態Ｂ１９：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病の予防における使用のための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物であって、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因し、化合物は、１日１５又は５０ｍｇの用量で使用される、医薬組成物。
【００６２】
実施形態Ｂ２０：化合物は、遊離形態である、実施形態Ｂ１〜Ｂ１９のいずれか１つに係る使用のための医薬組成物。
【００６３】
実施形態Ｂ２１：患者は、ＣＹＰ３Ａ４の阻害薬又は誘導薬で同時に治療されない、実施形態Ｂ１〜Ｂ２０のいずれか１つに係る使用のための医薬組成物。
【００６４】
実施形態Ｂ２２：患者は、３ヵ月より長い期間にわたってＣＹＰ３Ａ４阻害薬又は誘導薬で同時に治療されない、実施形態Ｂ１〜Ｂ２０のいずれか１つに係る使用のための医薬組成物。
【００６５】
実施形態Ｂ２３：ＣＹＰ３Ａ４阻害薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な、中程度の、又は弱い阻害薬であり、及びＣＹＰ３Ａ４誘導薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な、中程度の、又は弱い誘導薬である、実施形態Ｂ２１又はＢ２２に係る使用のための医薬組成物。
【００６６】
実施形態Ｂ２４：ＣＹＰ３Ａ４阻害薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な阻害薬であり、及びＣＹＰ３Ａ４誘導薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な誘導薬である、実施形態Ｂ２３に係る使用のための医薬組成物。
【００６７】
本発明の第３の態様のシリーズＣ実施形態
実施形態Ｃ１：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病を予防する方法であって、治療有効量の化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩をかかる患者に投与することを含む方法。
【００６８】
実施形態Ｃ２：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、アルツハイマー病の臨床症状を発症する遺伝的素因を保因するか、又はダウン症候群を有する、実施形態Ｃ１に係る方法。
【００６９】
実施形態Ｃ３：患者は、アルツハイマー病の臨床症状を発症する遺伝的素因を保因し、及び遺伝的素因は、
（ｉ）アミロイド前駆体タンパク質、プレセニリン−１若しくはプレセニリン−２の遺伝子における突然変異、又は
（ｉｉ）ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーの存在
である、実施形態Ｃ２に係る方法。
【００７０】
実施形態Ｃ４：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因する、実施形態Ｃ３に係る方法。
【００７１】
実施形態Ｃ５：患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つのコピーを保因する、実施形態Ｃ４に係る方法。
【００７２】
実施形態Ｃ６：患者は、ＡｐｏＥ４アレルの２つのコピーを保因する、実施形態Ｃ４に係る方法。
【００７３】
実施形態Ｃ７：患者は、アミロイド陽性である、実施形態Ｃ１〜Ｃ６のいずれか１つに係る方法。
【００７４】
実施形態Ｃ８：アミロイド陽性は、ＰＥＴ又はＣＳＦ測定によって決定される、実施形態Ｃ７に係る方法。
【００７５】
実施形態Ｃ９：患者は、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４又は７５歳超である、実施形態Ｃ３〜Ｃ８のいずれか１つに係る方法。
【００７６】
実施形態Ｃ１０：患者は、６０〜７５歳である、実施形態Ｃ３〜Ｃ８のいずれか１つに係る方法。
【００７７】
実施形態Ｃ１１：化合物は、２、１３、２６、５２、７８、１０４、１３０、１５６、１８２、２０８、２３４、２６０、２８６、３１２、３３８、３３２、３９０、又は４１６週間の化合物曝露後にＣＳＦ中、血中、又は血漿中のＡβ１−４０の少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０又は８０％の低下をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｃ１〜Ｃ１０のいずれか１つに係る方法。
【００７８】
実施形態Ｃ１２：化合物は、２、１３、２６、５２、７８、１０４、１３０、１５６、１８２、２０８、２３４、２６０、２８６、３１２、３３８、３３２、３９０、又は４１６週間の化合物曝露後にＣＳＦ中、血中、又は血漿中のＡβ１−４０の少なくとも７０％の低下をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｃ１〜Ｃ１０のいずれか１つに係る方法。
【００７９】
実施形態Ｃ１３：化合物は、２、１３、２６、５２、７８、１０４、１３０、１５６、１８２、２０８、２３４、２６０、２８６、３１２、３３８、３３２、３９０、又は４１６週間の化合物曝露後にＣＳＦ中、血中、又は血漿中のＡβ１−４０の少なくとも５０％の低下をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｃ１〜Ｃ１０のいずれか１つに係る方法。
【００８０】
実施形態Ｃ１４．化合物は、２、１３、２６、５２、７８、１０４、１３０、１５６、１８２、２０８、２３４、２６０、２８６、３１２、３３８、３３２、３９０、又は４１６週間の化合物曝露後に１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０又は８０％〜９９、９７、９５、９３、９０、８７、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、又は５０％の範囲のＣＳＦ中、血中又は血漿中のＡβ１−４０の低下をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｃ１〜Ｃ１０のいずれか１つに係る方法。
【００８１】
実施形態Ｃ１５．化合物は、少なくとも８０、８５、９０、９３、９５、９７又は９９％の患者、或いは８０、８５又は９０〜９９、９７、９５若しくは９３％の患者に４０〜７０％、４５〜６５％若しくは５０〜６０％の範囲、又は少なくとも５０％のＣＳＦ中、血中若しくは血漿中のＡβ１−４０の低下をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｃ１〜Ｃ１０のいずれか１つに係る方法。
【００８２】
実施形態Ｃ１６．化合物は、少なくとも８０、８５、９０、９３、９５、９７又は９９％の患者、或いは８０、８５又は９０〜９９、９７、９５若しくは９３％の患者に６５〜９５％、７５〜９０％若しくは８０〜９０％の範囲、又は少なくとも８０％のＣＳＦ中、血中若しくは血漿中のＡβ１−４０の低下をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｃ１〜Ｃ１０のいずれか１つに係る方法。
【００８３】
実施形態Ｃ１７：化合物は、１日５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜３５、３５〜４０、４５〜５０、５０〜５５ｍｇ、５５〜６０ｍｇ、６０〜１００ｍｇ、１００〜２００、２００〜３００ｍｇ、１５〜８５ｍｇ、５０〜８５ｍｇ、１５〜３００ｍｇ、又は５０〜３００ｍｇの用量で使用される、実施形態Ｃ１〜Ｃ１０のいずれか１つに係る方法。
【００８４】
実施形態Ｃ１８：化合物は、１日１０〜３０ｍｇの用量で使用される、実施形態Ｃ１〜Ｃ１０のいずれか１つに係る方法。
【００８５】
実施形態Ｃ１９：化合物は、１日３０〜５０ｍｇの用量で使用される、実施形態Ｃ１〜Ｃ１０のいずれか１つに係る方法。
【００８６】
実施形態Ｃ２０：化合物は、１日１５ｍｇの用量で使用される、実施形態Ｃ１〜Ｃ１０のいずれか１つに係る方法。
【００８７】
実施形態Ｃ２１：化合物は、１日５０ｍｇの用量で使用される、実施形態Ｃ１〜Ｃ１０のいずれか１つに係る方法。
【００８８】
実施形態Ｃ２２：化合物は、０〜５０、５０〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、２００〜２５０、２５０〜３００、３００〜３５０、３５０〜４００、４００〜４５０、４５０〜５００、５００〜５５０、５５０〜６００、６００〜６５０、又は６５０〜７００ｎｇ／ｍｌの血漿定常状態Ｃｍａｘ値をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｃ１〜Ｃ１０のいずれか１つに係る方法。
【００８９】
実施形態Ｃ２３：化合物は、７０〜１７０ｎｇ／ｍｌの血漿定常状態Ｃｍａｘ値をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｃ１〜Ｃ１０のいずれか１つに係る方法。
【００９０】
実施形態Ｃ２４：化合物は、２００〜５００ｎｇ／ｍｌの血漿定常状態Ｃｍａｘ値をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｃ１〜Ｃ１０のいずれか１つに係る方法。
【００９１】
実施形態Ｃ２５：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病を予防する方法であって、治療有効量の化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩をかかる患者に投与することを含み、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因する、方法。
【００９２】
実施形態Ｃ２６：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病を予防する方法であって、治療有効量の化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩をかかる患者に投与することを含み、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因し、化合物は、１日１５又は５０ｍｇの用量で使用される、方法。
【００９３】
実施形態Ｃ２７：化合物は、遊離形態である、実施形態Ｃ１〜Ｃ２６のいずれか１つに係る方法。
【００９４】
実施形態Ｃ２８：化合物１は、医薬組成物中に含まれる、実施形態Ｃ１〜Ｃ２７のいずれか１つに係る方法。
【００９５】
実施形態Ｃ２９：患者は、ＣＹＰ３Ａ４の阻害薬又は誘導薬で同時に治療されない、実施形態Ｃ１〜Ｃ２８のいずれか１つに係る方法。
【００９６】
実施形態Ｃ３０：患者は、３ヵ月より長い期間にわたってＣＹＰ３Ａ４阻害薬又は誘導薬で同時に治療されない、実施形態Ｃ１〜Ｃ２８のいずれか１つに係る方法。
【００９７】
実施形態Ｃ３１：ＣＹＰ３Ａ４阻害薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な、中程度の、又は弱い阻害薬であり、及びＣＹＰ３Ａ４誘導薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な、中程度の、又は弱い誘導薬である、実施形態Ｃ２９又はＣ３０に係る方法。
【００９８】
実施形態Ｃ３２：ＣＹＰ３Ａ４阻害薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な阻害薬であり、及びＣＹＰ３Ａ４誘導薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な誘導薬である、実施形態Ｃ３１に係る方法。
【００９９】
本発明の第５の態様のシリーズＤ実施形態
実施形態Ｄ１：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病を予防するための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
【０１００】
実施形態Ｄ２：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、アルツハイマー病の臨床症状を発症する遺伝的素因を保因するか、又はダウン症候群を有する、実施形態Ｄ１に係る使用。
【０１０１】
実施形態Ｄ３：患者は、アルツハイマー病の臨床症状を発症する遺伝的素因を保因し、及び遺伝的素因は、
（ｉ）アミロイド前駆体タンパク質、プレセニリン−１若しくはプレセニリン−２の遺伝子における突然変異、又は
（ｉｉ）ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーの存在
である、実施形態Ｄ２に係る使用。
【０１０２】
実施形態Ｄ４：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因する、実施形態Ｄ３に係る使用。
【０１０３】
実施形態Ｄ５：患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つのコピーを保因する、実施形態Ｄ４に係る使用。
【０１０４】
実施形態Ｄ６：患者は、ＡｐｏＥ４アレルの２つのコピーを保因する、実施形態Ｄ４に係る使用。
【０１０５】
実施形態Ｄ７：患者は、アミロイド陽性である、実施形態Ｄ１〜Ｄ６のいずれか１つに係る使用。
【０１０６】
実施形態Ｄ８：アミロイド陽性は、ＰＥＴ又はＣＳＦ測定によって決定される、実施形態Ｄ７に係る使用。
【０１０７】
実施形態Ｄ９：患者は、６０〜７５歳である、実施形態Ｄ３〜Ｄ８のいずれか１つに係る使用。
【０１０８】
実施形態Ｄ１０：化合物は、２週間の化合物曝露後にＣＳＦ中のＡβ１−４０の少なくとも７０％の低下をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｄ１〜Ｄ９のいずれか１つに係る使用。
【０１０９】
実施形態Ｄ１１：化合物は、２週間の化合物曝露後にＣＳＦ中のＡβ１−４０の少なくとも５０％の低下をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｄ１〜Ｄ９のいずれか１つに係る使用。
【０１１０】
実施形態Ｄ１２：化合物は、１日１０〜３０ｍｇの用量で使用される、実施形態Ｄ１〜Ｄ９のいずれか１つに係る使用。
【０１１１】
実施形態Ｄ１３：化合物は、１日３０〜５０ｍｇの用量で使用される、実施形態Ｄ１〜Ｄ９のいずれか１つに係る使用。
【０１１２】
実施形態Ｄ１４：化合物は、１日１５ｍｇの用量で使用される、実施形態Ｄ１〜Ｄ９のいずれか１つに係る使用。
【０１１３】
実施形態Ｄ１５：化合物は、１日５０ｍｇの用量で使用される、実施形態Ｄ１〜Ｄ９のいずれか１つに係る使用。
【０１１４】
実施形態Ｄ１６：化合物は、７０〜１７０ｎｇ／ｍｌの血漿定常状態Ｃｍａｘ値をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｄ１〜Ｄ９のいずれか１つに係る使用。
【０１１５】
実施形態Ｄ１７：化合物は、２００〜５００ｎｇ／ｍｌの血漿定常状態Ｃｍａｘ値をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｄ１〜Ｄ９のいずれか１つに係る使用。
【０１１６】
実施形態Ｄ１８：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病を予防するための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩の使用であって、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因する、使用。
【０１１７】
実施形態Ｄ１９：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病を予防するための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩の使用であって、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因し、化合物は、１日１５又は５０ｍｇの用量で使用される、使用。
【０１１８】
実施形態Ｄ２０：化合物は、遊離形態である、実施形態Ｄ１〜Ｄ１９のいずれか１つに係る使用。
【０１１９】
実施形態Ｄ２１：化合物は、医薬組成物中に含まれる、実施形態Ｄ１〜Ｄ２０のいずれか１つに係る使用。
【０１２０】
実施形態Ｄ２２：患者は、ＣＹＰ３Ａ４の阻害薬又は誘導薬で同時に治療されない、実施形態Ｄ１〜Ｄ２１のいずれか１つに係る使用。
【０１２１】
実施形態Ｄ２３：患者は、３ヵ月より長い期間にわたってＣＹＰ３Ａ４阻害薬又は誘導薬で同時に治療されない、実施形態Ｄ１〜Ｄ２１のいずれか１つに係る使用。
【０１２２】
実施形態Ｄ２４：ＣＹＰ３Ａ４阻害薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な、中程度の、又は弱い阻害薬であり、及びＣＹＰ３Ａ４誘導薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な、中程度の、又は弱い誘導薬である、実施形態Ｄ２２又はＤ２３に係る使用。
【０１２３】
実施形態Ｄ２５：ＣＹＰ３Ａ４阻害薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な阻害薬であり、及びＣＹＰ３Ａ４誘導薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な誘導薬である、実施形態Ｄ２４に係る使用。
【０１２４】
本発明の第７の態様のシリーズＥ実施形態
実施形態Ｅ１：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病の予防用医薬を製造するための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
【０１２５】
実施形態Ｅ２：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、アルツハイマー病の臨床症状を発症する遺伝的素因を保因するか、又はダウン症候群を有する、実施形態Ｅ１に係る使用。
【０１２６】
実施形態Ｅ３：患者は、アルツハイマー病の臨床症状を発症する遺伝的素因を保因し、及び遺伝的素因は、
（ｉ）アミロイド前駆体タンパク質、プレセニリン−１若しくはプレセニリン−２の遺伝子における突然変異、又は
（ｉｉ）ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーの存在
である、実施形態Ｅ２に係る使用。
【０１２７】
実施形態Ｅ４：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因する、実施形態Ｅ３に係る使用。
【０１２８】
実施形態Ｅ５：患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つのコピーを保因する、実施形態Ｅ４に係る使用。
【０１２９】
実施形態Ｅ６：患者は、ＡｐｏＥ４アレルの２つのコピーを保因する、実施形態Ｅ４に係る使用。
【０１３０】
実施形態Ｅ７：患者は、アミロイド陽性である、実施形態Ｅ１〜Ｅ６のいずれか１つに係る使用。
【０１３１】
実施形態Ｅ８：アミロイド陽性は、ＰＥＴ又はＣＳＦ測定によって決定される、実施形態Ｅ７に係る使用。
【０１３２】
実施形態Ｅ９：患者は、６０〜７５歳である、実施形態Ｅ３〜Ｅ８のいずれか１つに係る使用。
【０１３３】
実施形態Ｅ１０：化合物は、２週間の化合物曝露後にＣＳＦ中のＡβ１−４０の少なくとも７０％の低下をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｅ１〜Ｅ９のいずれか１つに係る使用。
【０１３４】
実施形態Ｅ１１：化合物は、２週間の化合物曝露後にＣＳＦ中のＡβ１−４０の少なくとも５０％の低下をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｅ１〜Ｅ９のいずれか１つに係る使用。
【０１３５】
実施形態Ｅ１２：化合物は、１日１０〜３０ｍｇの用量で使用される、実施形態Ｅ１〜Ｅ９のいずれか１つに係る使用。
【０１３６】
実施形態Ｅ１３：化合物は、１日３０〜５０ｍｇの用量で使用される、実施形態Ｅ１〜Ｅ９のいずれか１つに係る使用。
【０１３７】
実施形態Ｅ１４：化合物は、１日１５ｍｇの用量で使用される、実施形態Ｅ１〜Ｅ９のいずれか１つに係る使用。
【０１３８】
実施形態Ｅ１５：化合物は、１日５０ｍｇの用量で使用される、実施形態Ｅ１〜Ｅ９のいずれか１つに係る使用。
【０１３９】
実施形態Ｅ１６：化合物は、７０〜１７０ｎｇ／ｍｌの血漿定常状態Ｃｍａｘ値をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｅ１〜Ｅ９のいずれか１つに係る使用。
【０１４０】
実施形態Ｅ１７：化合物は、２００〜５００ｎｇ／ｍｌの血漿定常状態Ｃｍａｘ値をもたらす１日用量で使用される、実施形態Ｅ１〜Ｅ９のいずれか１つに係る使用。
【０１４１】
実施形態Ｅ１８：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病の予防用医薬を製造するための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩の使用であって、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因する、使用。
【０１４２】
実施形態Ｅ１９：アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者のアルツハイマー病の予防用医薬を製造するための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩の使用であって、アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者は、ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因し、化合物は、１日１５又は５０ｍｇの用量で使用される、使用。
【０１４３】
実施形態Ｅ２０：化合物は、遊離形態である、実施形態Ｅ１〜Ｅ１９のいずれか１つに係る使用。
【０１４４】
実施形態Ｅ２１：医薬は、医薬組成物である、実施形態Ｅ１〜Ｅ２０のいずれか１つに係る使用。
【０１４５】
実施形態Ｅ２２：患者は、ＣＹＰ３Ａ４の阻害薬又は誘導薬で同時に治療されない、実施形態Ｅ１〜Ｅ２１のいずれか１つに係る使用。
【０１４６】
実施形態Ｅ２３：患者は、３ヵ月より長い期間にわたってＣＹＰ３Ａ４阻害薬又は誘導薬で同時に治療されない、実施形態Ｅ１〜Ｅ２１のいずれか１つに係る使用。
【０１４７】
実施形態Ｅ２４：ＣＹＰ３Ａ４阻害薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な、中程度の、又は弱い阻害薬であり、及びＣＹＰ３Ａ４誘導薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な、中程度の、又は弱い誘導薬である、実施形態Ｅ２２又はＥ２３に係る使用。
【０１４８】
実施形態Ｅ２５：ＣＹＰ３Ａ４阻害薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な阻害薬であり、及びＣＹＰ３Ａ４誘導薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な誘導薬である、実施形態Ｅ２４に係る使用。
【０１４９】
更なる発明において、アルツハイマー病の治療又は予防方法が提供され、この方法は、治療有効量の化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩を、それを必要としている患者に投与することを含み、ここで、患者は、ＣＹＰ３Ａ４の阻害薬又は誘導薬で同時に治療されない。一実施形態において、患者は、３ヵ月より長い期間にわたってＣＹＰ３Ａ４の阻害薬又は誘導薬で同時に治療されない。一実施形態において、患者は、３ヵ月以下の期間にわたってＣＹＰ３Ａ４阻害薬又は誘導薬で同時に治療される。一実施形態において、ＣＹＰ３Ａ４阻害薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な、中程度の、又は弱い阻害薬であり、及びＣＹＰ３Ａ４誘導薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な、中程度の、又は弱い誘導薬である。一実施形態において、ＣＹＰ３Ａ４阻害薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な阻害薬であり、及びＣＹＰ３Ａ４誘導薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な誘導薬である。一実施形態において、患者は、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４又は７５歳超である。一実施形態において、患者は、６０〜７５歳である。一実施形態において、化合物は、２、１３、２６、５２、７８、１０４、１３０、１５６、１８２、２０８、２３４、２６０、２８６、３１２、３３８、３３２、３９０、又は４１６週間の化合物曝露後にＣＳＦ中、血中、又は血漿中のＡβ１−４０の少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０又は８０％の低下をもたらす１日用量で使用される。一実施形態において、化合物は、２、１３、２６、５２、７８、１０４、１３０、１５６、１８２、２０８、２３４、２６０、２８６、３１２、３３８、３３２、３９０、又は４１６週間の化合物曝露後にＣＳＦ中、血中、又は血漿中のＡβ１−４０の少なくとも７０％の低下をもたらす１日用量で使用される。一実施形態において、化合物は、２、１３、２６、５２、７８、１０４、１３０、１５６、１８２、２０８、２３４、２６０、２８６、３１２、３３８、３３２、３９０、又は４１６週間の化合物曝露後にＣＳＦ中、血中、又は血漿中のＡβ１−４０の少なくとも５０％の低下をもたらす１日用量で使用される。一実施形態において、化合物は、１日５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜３５、３５〜４０、４５〜５０、５０〜５５ｍｇ、５５〜６０ｍｇ、６０〜１００ｍｇ、１００〜２００、２００〜３００ｍｇ、１５〜８５ｍｇ、５０〜８５ｍｇ、１５〜３００ｍｇ、又は５０〜３００ｍｇの用量で使用される。一実施形態において、化合物は、１日１０〜３０ｍｇの用量で使用される。一実施形態において、化合物は、１日３０〜５０ｍｇの用量で使用される。一実施形態において、化合物は、１日１５ｍｇの用量で使用される。一実施形態において、化合物は、１日５０ｍｇの用量で使用される。一実施形態において、化合物は、０〜５０、５０〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、２００〜２５０、２５０〜３００、３００〜３５０、３５０〜４００、４００〜４５０、４５０〜５００、５００〜５５０、５５０〜６００、６００〜６５０、又は６５０〜７００ｎｇ／ｍｌの血漿定常状態Ｃｍａｘ値をもたらす１日用量で使用される。一実施形態において、化合物は、７０〜１７０ｎｇ／ｍｌの血漿定常状態Ｃｍａｘ値をもたらす１日用量で使用される。一実施形態において、化合物は、２００〜５００ｎｇ／ｍｌの血漿定常状態Ｃｍａｘ値をもたらす１日用量で使用される。更なる実施形態において、化合物は、遊離形態で使用される。
【０１５０】
更なる発明において、医薬としての使用のための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩が提供され、ここで、この医薬によって治療される患者は、ＣＹＰ３Ａ４阻害薬又は誘導薬で同時に治療されない。更なる本発明の別の態様において、アルツハイマー病の治療又は予防における使用のための化合物Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド又はその薬学的に許容可能な塩が提供され、ここで、患者は、ＣＹＰ３Ａ４の阻害薬又は誘導薬で同時に治療されない。更なる本発明の一実施形態において、患者は、３ヵ月より長い期間にわたってＣＹＰ３Ａ４の阻害薬又は誘導薬で同時に治療されない。更なる本発明の一実施形態において、患者は、３ヵ月以下の期間にわたってＣＹＰ３Ａ４阻害薬又は誘導薬で同時に治療される。更なる実施形態において、ＣＹＰ３Ａ４阻害薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な、中程度の、又は弱い阻害薬であり、及びＣＹＰ３Ａ４誘導薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な、中程度の、又は弱い誘導薬である。更なる実施形態において、ＣＹＰ３Ａ４阻害薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な阻害薬であり、及びＣＹＰ３Ａ４誘導薬は、ＣＹＰ３Ａ４の強力な誘導薬である。更なる実施形態において、化合物は、１日１５又は５０ｍｇの用量で使用される。更なる実施形態において、化合物は、遊離形態で使用される。別の実施形態において、化合物は、医薬組成物中に含まれる。
【０１５１】
定義
本明細書で使用されるとき、用語「化合物１」又は「Ｃｍｐｄ  １」は、以下の構造式：
【化１】
2019524743.tif 000003
を有するＮ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミドを指す。
【０１５２】
実施例１では、別の化学命名フォーマットを使用して、「化合物１」は、３−クロロ−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸［６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロメチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−５−フルオロ−ピリジン−２−イル］−アミドとも称される。
【０１５３】
用語「化合物１」、「Ｃｍｐｄ  １」及びその対応する完全な化学名は、本発明の記載全体を通じて同義的に使用される。この用語は、一方の形態の化合物のみを意図することが文脈上明らかに指示されない限り、遊離形態又は薬学的に許容可能な塩の形態のいずれの化合物も指すことが意図される。化合物１は、国際公開第２０１２／０９５４６９  Ａ１号パンフレット、実施例３４に記載される。国際公開第２０１２／０９５４６９  Ａ１号パンフレット、詳細には実施例３４の合成に関する開示は、全体として本明細書によって参照により援用される。
【０１５４】
本明細書で使用されるとき、用語「アルツハイマー病」又は「ＡＤ」は、発症前アルツハイマー病又は臨床的アルツハイマー病のいずれか一方のみを意図することが文脈上明らかにならない限り、発症前アルツハイマー病及び臨床的アルツハイマー病の両方を包含する。
【０１５５】
本明細書で使用されるとき、用語「臨床的アルツハイマー病」又は「臨床的ＡＤ」は、ＡＤに起因する軽度認知障害（ＭＣＩ）又はＡＤに起因する認知症のいずれか一方のみを意図することが文脈上明らかにならない限り、ＡＤに起因するＭＣＩ及びＡＤに起因する認知症の両方を包含する。
【０１５６】
本明細書で使用されるとき、用語「発症前アルツハイマー病」又は「発症前ＡＤ」は、臨床症状がない中でのＡＤのインビボ分子バイオマーカーの存在を指す。国立老化研究所（Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｎ  Ａｇｉｎｇ）及びアルツハイマー病協会（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）が、発症前ＡＤの異なるステージを規定する以下の表１に示すスキームを提供している（Ｓｐｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【０１５７】
【表１】
2019524743.tif 000004
【０１５８】
本明細書で使用されるとき、用語「アルツハイマー病の予防」は、ＡＤの予防的処置；又はＡＤの発症又は進行を遅延させることを指す。例えば、ＡＤの発症又は進行は、少なくとも０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０年遅延する。一実施形態において、「アルツハイマー病の予防」は、発症前ＡＤの予防的処置；又は発症前ＡＤの発症又は進行を遅延させることを指す。更なる実施形態において、発症前ＡＤの発症又は進行は、少なくとも０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０年遅延する。別の実施形態において、「アルツハイマー病の予防」は、臨床的ＡＤの予防的処置；又は臨床的ＡＤの発症又は進行を遅延させることを指す。更なる実施形態において、臨床的ＡＤの発症又は進行は、少なくとも０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０年遅延する。
【０１５９】
発症前ＡＤの発症又は進行の遅延は、例えば、以下を測定することによる、開始時ベースライン値と比べたインビボ分子バイオマーカーを測定することにより評価し得る：
（ａ）脳アミロイド沈着の減少。例えば、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）イメージングを使用して複合皮質アミロイド標準取込み値比（ＳＵＶＲ）のベースラインからの変化量を測定することによる。ＳＵＶＲ比の測定に好適なＰＥＴトレーサーは、１８Ｆ−フロルベタピル（（（Ｅ）−４−（２−（６−（２−（２−（２−（［１８Ｆ］−フルオロエトキシ）エトキシ）エトキシ）ピリジン−３−イル）ビニル）−Ｎ−メチルベンゼンアミン））である。この方法により、認知障害のない個体の独立した試料におけるアミロイド蓄積の経時的展開を測定し得る（Ｐａｌｍｑｖｉｓｔ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＳＵＶＲ測定は、予め定義した皮質脳関心領域（ＲＯＩ）において、予め定義した参照領域におけるトレーサー取込みと比べて計算し得る。皮質ＲＯＩには、限定はされないが、頭頂、後頭、外側側頭及び内側側頭新皮質領域、並びに初期ＡＤで典型的に冒される領域を含め、ＡＤで高いアミロイド沈着を有することが分かっている範囲が含まれる（Ｖｌａｓｓｅｎｋｏ  ＡＧ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。一実施形態において、開始時ベースライン値に対する脳アミロイド沈着は、治療１年当たり０、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０．０％未満の速度で減少する；
（ｂ）基礎タウ病変への効果、より具体的にはＰＥＴ及び好適なタウトレーサー、例えば１８Ｆ−ＴＨＫ５３５１（Ｈａｒａｄａ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）を使用して脳タウ病変のベースラインからのＳＵＶＲ変化量を測定するか、又は脳脊髄液（ＣＳＦ）を使用して総タウ及びリン酸化タウを測定する（Ｆｏｒｌｅｎｚａ  ＯＶ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。一実施形態において、ＣＳＦタウ又はリン酸化タウのレベルは開始時ベースライン値と比べて治療１年当たり少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５又は５０％減少する；
（ｃ）１８Ｆ−ＦＤＧ（２−デオキシ−２−［１８Ｆ］フルオログルコース）ＰＥＴ（各スキャンにつき２００ＭＢｑ）を使用した、ニューロンのグルコース代謝、密度及び／又は活性に対する効果。ＡＤ罹患脳領域の１８Ｆ−ＦＤＧ  ＰＥＴシグナルは、ＡＤにおける認知障害、続く認知低下及び神経病理に関連し、ＡＤの臨床的及び発症前ステージにおいて時間の経過に伴い進行することが示されており、疾患及び治療有効性バイオマーカーである（Ｆｏｓｔｅｒ  ＮＬ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。データの分析により、選択された参照領域と比べたグルコース代謝の変化が決定される。一実施形態において、開始時ベースライン値と比べて１８Ｆ−ＦＤＧ  ＰＥＴにより決定したときのＡＤ罹患脳領域におけるニューロングルコース代謝の低下は、治療１年当たり５、１０、１５、２０、２５又は３０％未満に限られる；
（ｄ）ボリューム磁気共鳴画像法（ｖＭＲＩ）により評価して脳容積のベースラインからの変化を測定したときの脳容積損失の低下の緩徐化。ｖＭＲＩを使用すると、海馬、側脳室、及び総脳容積の変化を測定することができる。一実施形態において、海馬容積損失は、治療１年当たり１、２、又は３％未満に限られる；又は
（ｅ）本明細書の実施例１０に記載されるとおり、皮質アミロイド沈着の指標となる、例えば０．０９未満のベースラインＣＳＦ  Ａβ１−４２／Ａβ１−４０比を有する対象における経時的ＣＳＦ  Ａβ１−４２／Ａβ１−４０比。一実施形態において、ＣＳＦ  Ａβ１−４２／Ａβ１−４０比は、少なくとも３、６、９、１２、１８、２４、又は３６ヵ月の期間で開始時ベースライン値と比べて少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、８０、１００、２００％増加する。
【０１６０】
発症前ＡＤの発症又は進行の遅延はまた、例えばアルツハイマー病予防イニシアチブ（ＡＰＩ）発症前複合認知（ＡＰＣＣ）検査バッテリーを使用した、疾患の発症前ステージの変化を追跡する高感度認知尺度を用いて開始時ベースライン値と比べて評価してもよい。ＡＰＣＣは、遅発性ＡＤ（ＬＯＡＤ）の臨床ステージへの進行リスクがある個体の認知低下を検出及び追跡する高感度ツールとして開発された（Ｌａｎｇｂａｕｍ  ＪＢ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０１６１】
臨床的ＡＤの発症の遅延は、ＡＤに起因する認知及び機能障害の遅延を測定することにより、例えばＡＤに起因する軽度認知障害（ＭＣＩ）及び／又はＡＤに起因する認知症の臨床診断までの時間の遅延を測定することにより評価してもよい。例えば、国立老化研究所−アルツハイマー病協会ワーキンググループによって提案されるコア臨床診断基準がＭＣＩ（Ａｌｂｅｒｔ  ＭＳ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）又は認知症（ＭｃＫｈａｎｎ  ＧＭ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）の診断に用いられてもよい。欧州医薬品庁（ＥＭＡ）は、その「Ｄｒａｆｔ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ＡＤ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｄｅｍｅｎｔｉａｓ」（Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｕｓｅ（ＣＨＭＰ）／５３９９３１／２０１４）において、ＡＤに起因するＭＣＩ及びＡＤ認知症の診断に向けた国立老化研究所基準を以下に示すとおり要約している。
【０１６２】
ＡＤに起因するＭＣＩの診断には、以下によって認められる個人内低下のエビデンスが必要である：
ａ）自己報告又は情報提供者の報告及び／又は臨床医の判断によって指摘されるとおりの、これまで達成されていたレベルからの認知の変化。
ｂ）年齢対応及び教育対応規範値と比べた少なくとも１つのドメイン（但し必ずしもエピソード記憶ではない）における認知障害；２つ以上の認知ドメインにおける障害は許容される。
ｃ）機能的能力の非依存性の維持、但しこの基準はまた、手段的日常生活動作（ＩＡＤＬ）の遂行における「軽度の問題」も、それが補助ありの場合のみであったとしても容認する（即ち非依存性が強く要求されるというよりむしろ、この基準は機能喪失に起因する軽度の依存性を許容する）。
ｄ）認知症がない、これは名目上、ｃ（上記）に応じたものとなる。
ｅ）他の潜在的に認知症性の障害がない場合のＡＤの表現型と一致する臨床像。以下によって診断の確信度を高めることが推奨され得る。
１）最適：陽性Ａβバイオマーカー及び陽性変性バイオマーカー
２）最適未満：
ｉ．陽性Ａβバイオマーカー、変性バイオマーカーなし
ｉｉ．陽性変性バイオマーカー、Ａβバイオマーカー検査なし
【０１６３】
ＡＤ認知症の診断には、以下が必要である：
ａ）認知及び機能の個人内低下によって決定されるとおりの認知症の存在。
ｂ）潜行性発症及び進行性認知低下。
ｃ）２つ以上の認知ドメインにおける障害；健忘症症状が最も一般的であるが、この基準では、非健忘症症状（例えば、実行機能及び視空間能力の障害）に基づく診断も許容される。
ｄ）他の認知症障害に関連する顕著な特徴がないこと。
ｅ）上記のＡＤに起因するＭＣＩの節で考察したバイオマーカーアルゴリズムによって診断の確信度を高めることが推奨され得る。
【０１６４】
ＡＤに起因するＭＣＩ及びＡＤ認知症の診断における認知障害及び低下は、例えば、以下を使用した、疾患の臨床ステージの変化を追跡する高感度認知尺度を使用して測定されてもよい：
ａ）臨床認知症評価（ＣＤＲ）尺度−評価項目合計（ＳＯＢ）。ＣＤＲは、認知及び機能的遂行を判定する全般的評価基準であり、ＡＤの臨床研究で広く用いられている（Ｍｏｒｒｉｓ  ＪＣ，１９９３）。この尺度は、６つのドメイン：記憶、見当識、判断力と問題解決、社会適応、家庭状況及び趣味、並びにセルフケアを評価する。各ドメインにスコアが割り当てられ、それらを合計して評価項目合計（ＳＯＢ）スコアが求められる；
ｂ）アーバンス神経心理検査（ＲＢＡＮＳ）。ＲＢＡＮＳ（Ｒａｎｄｏｌｐｈ  Ｃ，１９９８）は、診断目的及び神経認知状態の経時的変化の追跡の両方に向けて特別に設計された臨床ツールである。このバッテリーの主要な設計目標の１つは、最軽度認知症を検出して特徴付けることである；又は
ｃ）日常認知尺度（ＥＣｏｇ）。ＥＣｏｇは、６つの認知に関連性のあるドメイン：日常記憶、日常言語、日常視空間能力、日常計画、日常秩序維持、及び日常注意散漫を含む３９項目で構成される認知に関連性のある日常生活能力を測定する（Ｆａｒｉａｓ  ＳＴ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。
【０１６５】
ＡＤに起因するＭＣＩ及びＡＤ認知症の診断に用いるのに好適なＡβバイオマーカーには、例えば、上記に記載したとおり、ＣＳＦ  Ａβ１−４０、Ａβ１−４２又は脳βアミロイド老人斑のＰＥＴイメージングが含まれる。
【０１６６】
ＡＤに起因するＭＣＩ及びＡＤ認知症の診断に用いるのに好適な変性バイオマーカーは、発症前ＡＤの発症又は進行の遅延の評価に用いられるインビボ分子バイオマーカーに関連して上記に記載され、例えば、基礎タウ病変への効果；ニューロングルコース代謝への効果；又は脳容積損失の低下の緩徐化が挙げられる。
【０１６７】
本明細書で使用されるとき、用語「患者」は、ヒト対象を指す。
【０１６８】
本明細書で使用されるとき、用語「アルツハイマー病の臨床症状を発症するリスクがある患者」は、以下を指す：
（ａ）アルツハイマー病の臨床症状を発症する遺伝的素因を有するヒト対象、例えば、
ｉ．アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）若しくはプレセニリン−１及び−２の遺伝子に突然変異を保因する対象（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ＲＪ，Ｗｏｎｇ  ＰＣ，２０１１）、又は
ｉｉ．ＡｐｏＥ４アレルの１つ又は２つのコピーを保因する対象（Ｌｉｕ  ＣＣ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）、
（ｂ）ダウン症候群のヒト対象（Ｈｅａｄ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）、又は
（ｃ）８４歳超のヒト対象。
【０１６９】
本明細書で使用されるとき、用語「アミロイド陽性」は、検出可能なレベルの蓄積したＡβを脳に有する患者を指す。一実施形態において、ＣＳＦ中のＡβ若しくはアミロイドＰＥＴイメージング、又は両方の評価に基づき患者が検出可能なレベルの蓄積したＡβを脳に有する場合、その患者は、「アミロイド陽性」である。本明細書で使用されるとき、用語「ＰＥＴによって決定されるアミロイド陽性」は、バックグラウンドと比較したアミロイドＰＥＴトレーサー貯留レベルの増加を指す。アミロイド陽性の測定に好適なＰＥＴトレーサーとしては、１８Ｆ−フロルベタピル（Ｐａｌｍｑｖｉｓｔ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）、１８Ｆ−フロルベタベン（ＮｅｕｒａＣｅｑ）及び１８Ｆ−フルテメタモル（Ｖｉｚａｍｙｌ）が挙げられる。例えば、脳１８Ｆ−フロルベタピルＰＥＴスキャン（各スキャンにつき２６０ＭＢｑ）に関する１．１以上のＳＵＶＲをアミロイド陽性診断閾値として使用してもよい（Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。１．２又は１．３のＳＵＶＲも閾値として使用することができる。
【０１７０】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＳＦ測定によって決定されるアミロイド陽性」は、健常対照群で観察されるものと比較したＣＳＦ  Ａβ１−４２値の減少を指す。例えば、アミロイド陽性は、ＣＳＦ中１９２ｎｇ／Ｌ以下のＡβ１−４２値によって決定されてもよい（Ｍａｔｔｓｓｏｎ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。しかしながら、アミロイド陽性の決定に使用されるＣＳＦ  Ａβ１−４２カットオフ値は、用いられる詳細な技法に応じて変わることになる（Ｆｏｒｌｅｎｚａ  ＯＶ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。アミロイド陽性はまた、ＣＳＦ中０．０９未満のＡβ１−４２／Ａβ１−４０比によって決定されてもよい（Ｊａｎｅｌｉｄｚｅ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。一実施形態において、Ａβ１−４２／Ａβ１−４０比又はＡβ４２／Ａβ４０比は、０．２０、０．１５、０．１０、０．０９、０．０８、０．０７、０．０６又は０．０５未満又は０．２０〜０．０１、０．１５〜０．０１、０．１０〜０．０１、又は０．０５〜０．０１である。Ａβ１−４０及びＡβ１−４２値は、例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘプラットフォームでのモノクローナルシングル抗体サンドイッチ酵素結合免疫吸着（ＥＬＩＳＡ）アッセイ（Ｈｅｒｓｋｏｖｉｔｚ  ＡＺ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）又はＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）９６ウェルＭＵＬＴＩ−ＡＲＲＡＹヒト／げっ歯類（６Ｅ１０）Ａβ４０及び４２サンドイッチイムノアッセイ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）を使用した標準的なイムノアッセイ技法を用いて測定し得る。
【０１７１】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＹＰ３Ａ４」は、シトクロムＰ４５０  ３Ａ４を指す。ＣＹＰ３Ａ４は、多様な薬物の代謝において主要な役割を果たす酵素である（Ｌｕｏ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。
【０１７２】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＹＰ３Ａ４の誘導薬」は、ＣＹＰ３Ａ４活性レベルを増加させる薬物を指す。ＣＹＰ３Ａ４誘導薬の例としては、限定はされないが、カルバマゼピン、フェニトイン、リファンピシン、及びセント・ジョーンズ・ワートが挙げられる。ＣＹＰ３Ａ４活性の測定に好適な技法は周知である（例えば、Ｓｅｖｒｉｏｕｋｏｖａ  ＩＦ  ａｎｄ  Ｐｏｕｌｏｓ  ＴＬ，２０１５を参照されたい）。ＣＹＰ３Ａ４の「強力な」、「中程度の」、及び「弱い」誘導薬は、化合物１の血漿曲線下面積（ＡＵＣ）（０〜無限大の曲線下面積（ＡＵＣｉｎｆ）として計算する）をそれぞれ≧８０％、≧５０％〜＜８０％、及び≧２０％〜＜５０％だけ低下させる薬物である。一実施形態において、「ＣＹＰ３Ａ４の誘導薬」は、「ＣＹＰ３Ａ４の強力な誘導薬」である。ＣＹＰ３Ａの強力な誘導薬の例としては、限定はされないが、カルバマゼピン、エンザルタミド、ミトタン、フェニトイン、リファンピン（別名リファンピシン）、及びセント・ジョーンズ・ワートが挙げられる。ＣＹＰ３Ａの中程度の誘導薬の例としては、限定はされないが、ボセンタン、エファビレンツ、エトラビリン、及びモダフィニルが挙げられる。ＣＹＰ３Ａの弱い誘導薬の例としては、限定はされないが、アルモダフィニル及びルフィナミドが挙げられる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／Ｄｒｕｇｓ／ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＡｐｐｒｏｖａｌＰｒｏｃｅｓｓ／ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＲｅｓｏｕｒｃｅｓ／ＤｒｕｇＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓＬａｂｅｌｉｎｇ／ｕｃｍ０９３６６４．ｈｔｍ＃ｔａｂｌｅ３−３（最終表示日２０１６年１０月１１日）を参照されたい。
【０１７３】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＹＰ３Ａ４の阻害薬」は、ＣＹＰ３Ａ４活性レベルを低下させる薬物を指す。ＣＹＰ３Ａ４活性の測定に好適な技法は周知である（例えば、Ｓｅｖｒｉｏｕｋｏｖａ  ＩＦ  ａｎｄ  Ｐｏｕｌｏｓ  ＴＬ，２０１５を参照されたい）。ＣＹＰ３Ａ４阻害薬の例としては、限定はされないが、クラリスロマイシン、グレープフルーツジュース、及びイトラコナゾールが挙げられる。ＣＹＰ３Ａ４の「強力な」、「中程度の」、及び「弱い」阻害薬は、化合物１の血漿ＡＵＣ（０〜無限大の曲線下面積（ＡＵＣｉｎｆ）として計算する）をそれぞれ≧５倍、≧２〜＜５倍、及び≧１．２５〜＜２倍増加させる薬物である。一実施形態において「ＣＹＰ３Ａ４の阻害薬」は、「ＣＹＰ３Ａ４の強力な阻害薬」である。ＣＹＰ３Ａの強力な阻害薬の例としては、限定はされないが、ボセプレビル、コビシスタット、コニバプタン、ダノプレビル及びリトナビル、エルビテグラビル及びリトナビル、グレープフルーツジュース、インジナビル及びリトナビル、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ロピナビル及びリトナビル、パリタプレビル及びリトナビル及び（オムビタスビル及び／又はダサブビル）、ポサコナゾール、リトナビル、サキナビル及びリトナビル、テラプレビル、チプラナビル及びリトナビル、トロレアンドマイシン、ボリコナゾール、クラリスロマイシン、ジルチアゼム、イデラリシブ、ネファゾドン、及びネルフィナビルが挙げられる。ＣＹＰ３Ａの中程度の阻害薬の例としては、限定はされないが、アプレピタント、シメチジン、シプロフロキサシン、クロトリマゾール、クリゾチニブ、シクロスポリン、ドロネダロン、エリスロマイシン、フルコナゾール、フルボキサミン、イマチニブ、トフィソパム、及びベラパミルが挙げられる。ＣＹＰ３Ａの弱い阻害薬の例としては、限定はされないが、クロルゾキサゾン、シロスタゾール、ホスアプレピタント、イストラデフィリン、アイバカフトール、ロミタピド、ラニチジン、ラノラジン、タクロリムス、及びチカグレロルが挙げられる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／Ｄｒｕｇｓ／ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＡｐｐｒｏｖａｌＰｒｏｃｅｓｓ／ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＲｅｓｏｕｒｃｅｓ／ＤｒｕｇＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓＬａｂｅｌｉｎｇ／ｕｃｍ０９３６６４．ｈｔｍ＃ｔａｂｌｅ３−２（最終表示日２０１６年１０月１１日）を参照されたい。
【０１７４】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＹＰ３Ａ４の阻害薬又は誘導薬で同時に治療される」は、患者がＣＹＰ３Ａ４の阻害薬又は誘導薬による治療レジメンに供される一方で化合物１による治療レジメンにも供される状況を指す。一実施形態において、患者は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６週間より長くＣＹＰ３Ａ４の阻害薬又は誘導薬と化合物１とで同時に治療されることはない。別の実施形態において、患者は、１、２、３、４、５、７、１０、又は１２ヵ月より長くＣＹＰ３Ａ４の阻害薬又は誘導薬と化合物１とで同時に治療されることはない。特定の実施形態において、患者は、３ヵ月より長くＣＹＰ３Ａ４の阻害薬又は誘導薬と化合物１とで同時に治療されることはない。
【０１７５】
本明細書で使用されるとき、用語「薬学的に許容可能な塩」は、本発明の化合物の生物学的有効性を保持し、且つ典型的には生物学的に又は他に望ましくないものでない塩を指す（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ，２ｎｄ  Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２０１１）Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  Ｓｔａｈｌ，Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ）。
【０１７６】
本明細書で使用されるとき、「医薬組成物」は、経口投与に好適な固体形態（典型的にはゼラチンカプセル）で、本発明の化合物又はその薬学的に許容可能な塩と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体とを含む。
【０１７７】
本発明の化合物の「治療有効量」という用語は、開始時ベースライン値と比べたＣＳＦ又は血漿Ａβ１−４０レベルの減少から明らかなとおりの患者のＢＡＣＥ−１の阻害を誘発することになる本発明の化合物の量を指す。
【０１７８】
明確にするため、本明細書に範囲が提供されるときには常に、前記範囲が端点を含むことが意図される。例えば、１日３０〜５０ｍｇの用量範囲は、１日３０及び５０ｍｇの用量も含む。
【０１７９】
【表２】
2019524743.tif 000005
【０１８０】
【表３】
2019524743.tif 000006
【０１８１】
【表４】
2019524743.tif 000007
【実施例】
【０１８２】
以下の実施例は、どのように化合物１を調製し得るかを例示し（実施例１）；比較化合物ＮＢ−３６０で観察される望ましくない毛髪変色の副作用なしに野生型マウスのＡβレベルを減少させるのに化合物１が有効であることを実証し（実施例２）；ＡＰＯＥ４トランスジェニックマウスモデルで化合物１のＰＫ／ＰＤ効果を明らかにし（実施例３）；ファースト・イン・ヒューマン臨床試験で化合物１のＰＤ効果を明らかにし（実施例４）；３ヵ月臨床試験で化合物１の安全性及び忍容性を実証し（実施例５）；３ヵ月臨床試験で化合物１  ＰＤ応答に対するＡｐｏＥ４遺伝子型の効果を明らかにし（実施例６）；ＡＰＰ２３  ＡＤマウスモデルでアミロイドプラークの数及び面積の減少における化合物１の治療有効性を実証し（実施例７）；ＡｐｏＥ４ホモ接合体リスク患者において化合物有効性試験をどのように実施し得るかを例示し（実施例８）；ＣＹＰ３Ａ４の強力な阻害薬又は誘導薬と併用して投与したとき化合物１のＡＵＣがどのように影響を受けるかを明らかにし（実施例９）；及びＡｐｏＥ４保因患者及び非保因患者の両方で化合物１による治療が基礎ＡＤ病変にどのように影響を与えるかを実証する（実施例１０）。
【０１８３】
実施例１：化合物１の調製
化合物１の調製については、国際公開第２０１２／０９５４６９  Ａ１号パンフレット（実施例３４）に記載される。化合物１はまた、以下に記載するとおり調製されてもよい。
【０１８４】
ＮＭＲ法
プロトンスペクトルは、特に注記されない限り、Ｂｒｕｋｅｒ  ４００ＭＨｚ  ｕｌｔｒａｓｈｉｅｌｄ分光計で記録する。化学シフトは、メタノール（δ３．３１）、ジメチルスルホキシド（δ２．５０）、又はクロロホルム（δ７．２９）に対するｐｐｍ単位で報告する。少量の乾燥試料（２〜５ｍｇ）を適切な重水素化溶媒（０．７ｍＬ）に溶解する。シミングは、自動化され、スペクトルは、当業者に周知の手順に従って得られる。
【０１８５】
一般的クロマトグラフィー情報
ＨＰＬＣ方法Ｈ１（ＲｔＨ１）：
ＨＰＬＣ−カラム寸法：３．０ｘ３０ｍｍ
ＨＰＬＣ−カラムタイプ：ＺｏｒｂａｘＳＢ−Ｃ１８，１．８μｍ
ＨＰＬＣ−溶出液：Ａ）水＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ；Ｂ）ＡＣＮ＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ
ＨＰＬＣ−グラジエント：３０−１００％Ｂ  ３．２５分，流量＝０．７ｍｌ／分
ＬＣＭＳ方法Ｈ２（ＲｔＨ２）：
ＨＰＬＣ−カラム寸法：３．０ｘ３０ｍｍ
ＨＰＬＣ−カラムタイプ：ＺｏｒｂａｘＳＢ−Ｃ１８，１．８μｍ
ＨＰＬＣ−溶出液：Ａ）水＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ，Ｂ）ＡＣＮ＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ
ＨＰＬＣ−グラジエント：Ｂ１０−１００％３．２５分，流量＝０．７ｍｌ／分
ＵＰＬＣＭＳ方法Ｈ３（ＲｔＨ３）：
ＨＰＬＣ−カラム寸法：２．１ｘ５０ｍｍ
ＨＰＬＣ−カラムタイプ：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣＨＳＳ  Ｔ３，１．８μｍ
ＨＰＬＣ−溶出液：Ａ）水＋０．０５Ｖｏｌ．−％ギ酸＋３．７５ｍＭ酢酸アンモニウムＢ）ＡＣＮ＋０．０４Ｖｏｌ．−％ギ酸
ＨＰＬＣ−グラジエント：２−９８％Ｂ１．４分，９８％Ｂ０．７５分，流量＝１．２ｍｌ／分
ＨＰＬＣ−カラム温度：５０℃
ＬＣＭＳ方法Ｈ４（ＲｔＨ４）：
ＨＰＬＣ−カラム寸法：３．０ｘ３０ｍｍ
ＨＰＬＣ−カラムタイプ：Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８，１．８μｍ
ＨＰＬＣ−溶出液：Ａ）水＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ；Ｂ）ＡＣＮ＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ
ＨＰＬＣ−グラジエント：７０−１００％Ｂ３．２５分，流量＝０．７ｍｌ／分
ＬＣＭＳ方法Ｈ５（ＲｔＨ５）：
ＨＰＬＣ−カラム寸法：３．０ｘ３０ｍｍ
ＨＰＬＣ−カラムタイプ：ＺｏｒｂａｘＳＢ−Ｃ１８，１．８μｍ
ＨＰＬＣ−溶出液：Ａ）水＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ；Ｂ）ＡＣＮ＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ
ＨＰＬＣ−グラジエント：８０−１００％  Ｂ３．２５分，流量＝０．７ｍｌ／分
ＬＣＭＳ方法Ｈ６（ＲｔＨ６）：
ＨＰＬＣ−カラム寸法：３．０ｘ３０ｍｍ
ＨＰＬＣ−カラムタイプ：Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８，１．８μｍ
ＨＰＬＣ−溶出液：Ａ）水＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ；Ｂ）ＡＣＮ＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ
ＨＰＬＣ−グラジエント：４０−１００％  Ｂ３．２５分，流量＝０．７ｍｌ／分
【０１８６】
ａ）２−ブロモ−５−フルオロ−４−トリエチルシラニル−ピリジン
３７０ｍｌ  ＴＨＦ中ジイソプロピルアミン（２５．３ｇ、２５０ｍｍｏｌ）の溶液を−７５℃のドライアイスアセトン浴で冷却した。温度を−５０℃未満に維持しながらＢｕＬｉ（１００ｍｌ、２５０ｍｍｏｌ、ヘキサン中２．５Ｍ）を滴下して加えた。混合物の温度が再び−７５℃に達した後、４５ｍｌ  ＴＨＦ中２−ブロモ−５−フルオロピリジン（３６．７ｇ、２０８ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加えた。この混合物を−７５℃で１時間撹拌した。トリエチルクロロシラン（３９．２ｇ、２６０ｍｍｏｌ）を速やかに加えた。温度は、−５０℃未満のままであった。冷却浴を除去し、反応混合物を−１５℃に温まるまで放置し、ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１０％）に注いだ。ＴＢＭＥを加え、層を分離させた。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４・Ｈ２Ｏで乾燥させ、ろ過して蒸発させると、褐色の液体が得られ、これを０．５ｍｍＨｇで蒸留させて表題化合物を淡黄色の液体（ｂ．ｐ．１０５〜１１１℃）として得た。ＨＰＬＣ：ＲｔＨ４＝２．２８４ｍｉｎ；ＥＳＩＭＳ：２９０，２９２［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．１４（ｓ，１Ｈ），７．４０（ｄ，１Ｈ），１．００−０．８２（ｍ，１５Ｈ）．
【０１８７】
ｂ）１−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−トリエチルシラニル−ピリジン−２−イル）−エタノン
５００ｍｌ  ＴＨＦ中ジイソプロピルアミン（２５．４ｇ、２５０ｍｍｏｌ）の溶液を−７５℃に冷却した。温度を−５０℃未満に維持しながらＢｕＬｉ（１００ｍｌ、２５０ｍｍｏｌ、ヘキサン中２．５Ｍ）を滴下して加えた。反応温度が再び−７５℃に達した後、６０ｍｌ  ＴＨＦ中２−ブロモ−５−フルオロ−４−トリエチルシラニル−ピリジン（５６．０４ｇ、１９３ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加えた。この混合物をドライアイス浴中で７０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（２１．８７ｇ、２５０ｍｍｏｌ）を速やかに加え、反応温度が−５７℃に上昇した。この反応混合物をドライアイス浴中で１５分間撹拌し、次に−４０℃に温まるまで放置した。これを２Ｍ  ＨＣｌ水溶液（２５０ｍｌ、５００ｍｍｏｌ）、２５０ｍｌ水及び１００ｍｌブラインの混合物に注いだ。この混合物をＴＢＭＥで抽出し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４・Ｈ２Ｏで乾燥させ、ろ過して蒸発させると、黄色の油が得られ、これをシリカゲルカラムでヘキサン／０〜５％ＴＢＭＥによる溶出によって精製して５８．５ｇの表題化合物を黄色の液体として得た。ＴＬＣ（Ｈｅｘ／ＴＢＭＥ  ９９／１）：Ｒｆ＝０．２５；ＨＰＬＣ：ＲｔＨ４＝１．９２１ｍｉｎ；ＥＳＩＭＳ：３３２，３３４［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．５７（ｄ，１Ｈ），２．６８（ｓ，３Ｈ），１．００−０．８４（ｍ，１５Ｈ）．
【０１８８】
ｃ）（Ｓ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−トリエチルシラニル−ピリジン−２−イル）−２−トリメチルシラニルオキシ−プロピオニトリル
最初は、１００ｍｌ乾燥ＤＣＭ中に水（５４ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）を溶解させることにより触媒溶液を調製した（≦０．００１％水）。この湿潤ＤＣＭ（４４ｍｌ、１．３２ｍｍｏｌ含水量）を２０ｍｌ乾燥ＤＣＭ中チタン（ＩＶ）ブトキシド（５００ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）の十分に撹拌した溶液に加えた。得られた澄明な溶液を１時間還流した。次に、この溶液を室温に冷却し、２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−６−｛［（Ｅ）−（Ｓ）−１−ヒドロキシメチル−２−メチル−プロピルイミノ］−メチル｝−フェノール［ＣＡＳ  １５５０５２−３１−６］（４６９ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）を加えた。得られた黄色の溶液を室温で１時間撹拌した。この触媒溶液（０．０２３Ｍ、４６．６ｍｌ、１．０７ｍｍｏｌ）を２２３ｍｌ乾燥ＤＣＭ中１−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−トリエチルシラニル−ピリジン−２−イル）−エタノン（３５．５３ｇ、１０７ｍｍｏｌ）及びシアン化トリメチルシリル（１２．７３ｇ、１２８ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。この混合物を２日間撹拌し、蒸発させて、４７ｇの粗表題化合物をオレンジ色の油として得た。ＨＰＬＣ：ＲｔＨ５＝２．７７３ｍｉｎ；ＥＳＩＭＳ：４３１，４３３［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．４６（ｄ，１Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ），１．００（ｔ，９Ｈ），１．０３−０．８７（ｍ，１５Ｈ），０．２０（ｓ，９Ｈ）．
【０１８９】
ｄ）（Ｒ）−１−アミノ−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−トリエチルシラニル−ピリジン−２−イル）−プロパン−２−オールヒドロクロリド
ボラン・硫化ジメチル錯体（１６．５５ｇ、２１８ｍｍｏｌ）を４７０ｍｌ  ＴＨＦ中の粗（Ｓ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−トリエチルシラニル−ピリジン−２−イル）−２−トリメチルシラニルオキシ−プロピオニトリル（４７ｇ、１０９ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。この混合物を２時間還流した。加熱浴を除去し、ＭｅＯＨを慎重に滴下して加えることにより反応混合物をクエンチした。気体の発生が止んだ後、６Ｍ  ＨＣｌ水溶液（２３．６ｍｌ、１４２ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。得られた溶液を蒸発させて、残渣をＭｅＯＨ中に溶解して蒸発（２回）させて、以降の反応に十分な純度の４４．５ｇの黄色の泡を得た。ＨＰＬＣ：ＲｔＨ１＝２．６１７ｍｉｎ；ＥＳＩＭＳ：３６３，３６５［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．９３（ｓ，ｂｒ，３Ｈ），７．５３（ｄ，１Ｈ），６．１１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ），３．３６−３．２７（ｍ，１Ｈ），３．１８−３．０９（ｍ，１Ｈ），１．５３（ｓ，３Ｈ），０．９９−０．８１（ｍ，１５Ｈ）．
【０１９０】
ｅ）（Ｒ）−Ｎ−（２−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−（トリエチルシリル）ピリジン−２−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−４−ニトロベンゼンスルホンアミド
３３５ｍｌ  ＴＨＦ中の粗（Ｒ）−１−アミノ−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−トリエチルシラニル−ピリジン−２−イル）−プロパン−２−オールヒドロクロリド（４３．５ｇ、１０９ｍｍｏｌ）の溶液に５００ｍｌ水中ＮａＨＣＯ３（２１．０２ｇ、２５０ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。この混合物を０〜５℃に冷却し、１００ｍｌ  ＴＨＦ中４−ニトロベンゼンスルホニルクロリド（２６．５ｇ、１２０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加えた。温度を室温に到達させながら得られたエマルションを一晩撹拌した。この混合物をＴＢＭＥで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４・Ｈ２Ｏで乾燥させ、ろ過して蒸発させると、オレンジ色の樹脂が得られ、これをシリカゲルカラムでヘキサン／１０〜２０％ＥｔＯＡｃによる溶出により精製して、３７．５６ｇの表題化合物を黄色の樹脂として得た。ＴＬＣ（Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ  ３／１）：Ｒｆ＝０．３４；ＨＰＬＣ：ＲｔＨ４＝１．６７８ｍｉｎ；ＥＳＩＭＳ：５４８，５５０［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：８．４０（ｄ，２Ｈ），８．０６（ｔ，１Ｈ），７．９７（ｄ，２Ｈ），７．４５（ｄ，１Ｈ），５．４２（ｓ，１Ｈ），３．２３（ｄ，２Ｈ），１．４４（ｓ，３Ｈ）０．９７−０．８１（ｍ，１５Ｈ）；ＣｈｉｒａｌＨＰＬＣ（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ  １２１３，ＵＶ  ２１０ｎｍ）：９０％ｅｅ．
【０１９１】
ｆ）６−ブロモ−３−フルオロ−２−［（Ｓ）−２−メチル−１−（４−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アジリジン−２−イル］−４−トリエチルシラニル−ピリジン
５１０ｍｌ  ＴＨＦ中トリフェニルホスフィン（２１．５５ｇ、８２ｍｍｏｌ）及び（Ｒ）−Ｎ−（２−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−（トリエチルシリル）ピリジン−２−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−４−ニトロベンゼンスルホンアミド（３７．５６ｇ、６９ｍｍｏｌ）の溶液を４℃に冷却した。温度を１０℃未満に維持しながらトルエン中アゾジカルボン酸ジエチルの溶液（４０重量％、３８．８ｇ、８９ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。冷却浴を除去し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。この反応混合物を約１０００ｍｌトルエンで希釈し、ロータリーエバポレータにおける蒸発によってＴＨＦを除去した。得られた粗生成物のトルエン溶液をシリカゲルカラムでヘキサン／５〜１７％ＥｔＯＡｃによる溶出により予め精製した。最も純粋な画分を合わせ、蒸発させ、ＴＢＭＥ／ヘキサンから結晶化させて、２９．２ｇの表題化合物を白色の結晶として得た。ＨＰＬＣ：ＲｔＨ４＝２．５４６ｍｉｎ；ＥＳＩＭＳ：５３０，５３２［（Ｍ＋Ｈ）＋、１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．４０（ｄ，２Ｈ），８．１９（ｄ，２Ｈ），７．３９（ｄ，１Ｈ），３．１４（ｓ，１Ｈ），３．０２（ｓ，１Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ）１．０３−０．８３（ｍ，１５Ｈ）；α［Ｄ］−３５．７°（ｃ＝０．９７，ＤＣＭ）．
【０１９２】
ｇ）６−ブロモ−３−フルオロ−２−［（Ｓ）−２−メチル−１−（４−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アジリジン−２−イル］−ピリジン
フッ化カリウム（１．１ｇ、１８．８５ｍｍｏｌ）を２５ｍｌ  ＴＨＦ中６−ブロモ−３−フルオロ−２−［（Ｓ）−２−メチル−１−（４−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アジリジン−２−イル］−４−トリエチルシラニル−ピリジン（５ｇ、９．４３ｍｍｏｌ）及びＡｃＯＨ（１．１３ｇ、９．４３ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。ＤＭＦ（３５ｍｌ）を加え、懸濁液を室温で１時間撹拌した。反応混合物をＮａＨＣＯ３飽和水溶液及びＴＢＭＥの混合物に注いだ。層を分離し、ブライン及びＴＢＭＥで洗浄した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４・Ｈ２Ｏで乾燥させ、ろ過して蒸発させると、黄色の油が得られ、これをＴＢＭＥ／ヘキサンから結晶化させて、３．４５ｇの表題化合物を白色の結晶として得た。ＨＰＬＣ：ＲｔＨ６＝２．６１２ｍｉｎ；ＥＳＩＭＳ：４１６，４１８［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．４１（ｄ，２Ｈ），８．１９（ｄ，２Ｈ），７．４８（ｄｄ，１Ｈ），７．３５（ｔ，１Ｈ），３．１４（ｓ，１Ｈ），３．０３（ｓ，１Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ）；α［Ｄ］−３５．７°（ｃ＝０．８９，ＤＣＭ）．
【０１９３】
ｈ）（Ｒ）−２−［（Ｒ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２−（４−ニトロ−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロポキシ］−３，３，３−トリフルオロ−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル
ＤＭＦ（１５８ｍｌ）中（Ｒ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル（１１．９３ｇ、６４．１ｍｍｏｌ）の溶液の真空排気／窒素フラッシュを２回行った。水浴による冷却を用いて約２５℃の反応温度を維持しながらＤＭＦ（１７ｍｌ）中ＫＯｔＢｕ（６．２１ｇ、５５．５ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加えた。１５分後、固体の６−ブロモ−３−フルオロ−２−［（Ｓ）−２−メチル−１−（４−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アジリジン−２−イル］−ピリジン（１７．７８ｇ、４２．７ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を３時間継続した。この反応混合物を１Ｍ  ＨＣｌ（５６ｍｌ）、ブライン及びＴＢＭＥの混合物に注いだ。層を分離し、ブライン及びＴＢＭＥで洗浄した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４・Ｈ２Ｏで乾燥させ、ろ過して蒸発させた。粗反応生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン／２５〜３３％ＴＢＭＥ）によって精製すると１６．９３ｇの表題化合物が黄色の樹脂として得られ、これは、異性体副生成物により不純であった（１Ｈ−ＮＭＲによるとき７０：３０比）。
ＨＰＬＣ：ＲｔＨ６＝２．３８０ｍｉｎ；ＥＳＩＭＳ：６０２，６０４［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．３２（ｄ，２Ｈ），８．０７（ｄ，２Ｈ），７．４６−７．４１（ｍ，１Ｈ），７．３０−７．２３（ｍ，１Ｈ），６．９２（ｓ，１Ｈ），３．３９−４．３０（ｍ，２Ｈ），３．９５（ｄ，１Ｈ），３．８４（ｄ，１Ｈ），１．６８（ｓ，３Ｈ），１．５６（ｓ，３Ｈ），１．４０−１．３４（ｍ，３Ｈ）＋異性体副生成物．
【０１９４】
ｉ）（Ｒ）−２−［（Ｒ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２−（４−ニトロ−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロポキシ］−３，３，３−トリフルオロ−２−メチル−プロピオンアミド
ＮＨ３／ＭｅＯＨ（７Ｍ、４８２ｍｌ）中（Ｒ）−２−［（Ｒ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２−（４−ニトロ−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロポキシ］−３，３，３−トリフルオロ−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル（１６．９３ｇ、２８．１ｍｍｏｌ）の溶液を密閉容器内において５０℃で２６時間撹拌した。この反応混合物を蒸発させ、残渣をＤＣＭから結晶化させて、９．１１ｇの表題化合物を無色の結晶として得た。
ＨＰＬＣ：ＲｔＨ６＝２．４２２ｍｉｎ；ＥＳＩＭＳ：５７３，５７５［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．３３（ｄ，２Ｈ），８．０６（ｄ，２Ｈ），７．４２（ｄｄ，１Ｈ），７．３０−７．２６（ｍ，１Ｈ），７．１７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ），６．４１（ｓ，１Ｈ），５．５７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ），４．１５（ｍ，２Ｈ），１．６８（ｓ，３Ｈ），１．６５（ｓ，３Ｈ）．
【０１９５】
ｊ）Ｎ−［（Ｒ）−１−（６−ブロモ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２−（（Ｒ）−１−シアノ−２，２，２−トリフルオロ−１−メチル−エトキシ）−１−メチル−エチル］−４−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド
８５ｍｌ  ＤＣＭ中（Ｒ）−２−［（Ｒ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２−（４−ニトロ−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロポキシ］−３，３，３−トリフルオロ−２−メチル−プロピオンアミド（８．４３ｇ、１４．７０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（５．１２ｍｌ、３６．８ｍｍｏｌ）の懸濁液を０〜５℃に冷却した。無水トリフルオロ酢酸（２．４９ｍｌ、１７．６４ｍｍｏｌ）を３０分かけて滴下して加えた。更なるトリエチルアミン（１．５４ｍｌ、１１．０７ｍｍｏｌ）及び無水トリフルオロ酢酸（０．７５ｍｌ、５．２９ｍｍｏｌ）を加えて反応を完了させた。１４ｍｌアンモニア水（２５％）及び１４ｍｌ水を加えることにより反応混合物をクエンチした。このエマルションを１５分間撹拌し、更なる水及びＤＣＭを加え、層を分離した。有機層をＭｇＳＯ４  Ｈ２Ｏで乾燥させ、ろ過して蒸発させた。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／１０〜２５％ＥｔＯＡｃ）による精製により、８．０９ｇの表題化合物を黄色の樹脂として得た。
ＨＰＬＣ：ＲｔＨ６＝３．１２０ｍｉｎ；ＥＳＩＭＳ：５５５，５５７［（Ｍ＋Ｈ）＋、１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．３５（ｄ，２Ｈ），８．１１（ｄ，２Ｈ），７．５０（ｄｄ，１Ｈ），７．３２（ｄｄ，１Ｈ），６．７８（ｓ，１Ｈ），４．３９（ｄ  １Ｈ），４．２２（ｄ，１Ｈ），１．６８（ｓ，６Ｈ）．
【０１９６】
ｋ）（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−ブロモ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イルアミン
９２ｍｌエタノール中Ｎ−［（Ｒ）−１−（６−ブロモ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２−（（Ｒ）−１−シアノ−２，２，２−トリフルオロ−１−メチル−エトキシ）−１−メチル−エチル］−４−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド（９．１８ｇ、１６．５３ｍｍｏｌ）及びＮ−アセチルシステイン（５．４０ｇ、３３．１０ｍｍｏｌ）の溶液を真空排気し、窒素でフラッシュした。Ｋ２ＣＯ３（４．５７ｇ、３３．１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を８０℃で３日間撹拌した。反応混合物を元の容積の約１／４になるまで真空濃縮し、水とＴＢＭＥとに分配した。有機層を１０％Ｋ２ＣＯ３水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過して蒸発させると、黄色の油が得られた。シリカカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／１４〜５０％（ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ  ９５：５））により、４．５５ｇの表題化合物をオフホワイトの固体として得た。
ＨＰＬＣ：ＲｔＨ２＝２．７４１ｍｉｎ；ＥＳＩＭＳ：３７０，３７２［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．７１−７．６２（ｍ，２Ｈ），５．９７（ｓ，ｂｒ，２Ｈ），４．０２（ｄ  １Ｈ），３．７０（ｄ，１Ｈ），１．５１（ｓ，３Ｈ），１．４７（ｓ，３Ｈ）．
【０１９７】
ｌ）（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イルアミン
ガラス／ステンレス鋼オートクレーブを窒素でパージし、エチレングリコール（１３０ｍｌ）中Ｃｕ２Ｏ（０．４６４ｇ、３．２４ｍｍｏｌ）、アンモニア（１０１ｍｌ、２５％、ａｑ．、６４８ｍｍｏｌ、３０当量）及び（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−ブロモ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イルアミン（８ｇ、２１．６ｍｍｏｌ）を加えた。オートクレーブを閉じ、懸濁液を６０℃に加熱し、溶液を約４８時間撹拌した（最大圧力０．７バール、内部温度５９〜６０℃）。反応混合物を酢酸エチル及び水で希釈した。有機相を水で洗浄し、１２％アンモニア水で４回洗浄し、及び最後にブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過して蒸発させた。粗生成物（７ｇ、幾らかのエチレングリコールを含む、定量的収率）を更なる精製なしに次の工程で使用した。
ＨＰＬＣ：ＲｔＨ３＝０．６０ｍｉｎ；ＥＳＩＭＳ：３０７［（Ｍ＋Ｈ）＋］．
【０１９８】
ｍ）［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ジクロロメタン（１８５ｍｌ）中（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イルアミン（６．６２ｇ、２１．６ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ２Ｏ（４．７２ｇ、２１．６ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（５．６６ｍｌ、３２．４ｍｍｏｌ）の溶液を室温で１８時間撹拌した。反応混合物をＮａＨＣＯ３飽和水溶液及びブラインで洗浄した。水層をジクロロメタンで逆抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過して蒸発させると、淡緑色の固体が得られた（１４ｇ）。この粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（シクロヘキサン：酢酸エチル９５：５〜６０：４０）にかけて、７．６８ｇの表題化合物を得た。
ＴＬＣ（シクロヘキサン：酢酸エチル３：１）：Ｒｆ＝０．２１；ＨＰＬＣ：ＲｔＨ３＝１．１４ｍｉｎ；ＥＳＩＭＳ：４０８［（Ｍ＋Ｈ）＋］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：１１．４７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．２３（ｄｄ，Ｊ＝１０．４２，８．７８Ｈｚ，１Ｈ），６．４５（ｄｄ，Ｊ＝８．７８，２．６４Ｈｚ，１Ｈ），４．５０（ｂｒ．ｓ，２Ｈ），４．３２（ｄ，Ｊ＝２．３８Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｄ，Ｊ＝１１．８０Ｈｚ，１Ｈ），１．６９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３），１．６５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３），１．５５（ｓ，９Ｈ）．
【０１９９】
ｎ）（（２Ｒ，５Ｒ）−５−｛６−［（３−クロロ−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボニル）−アミノ］−３−フルオロ−ピリジン−２−イル｝−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３．３ｇ、８．１２ｍｍｏｌ）、３−クロロ−５−トリフルオロメチルピコリン酸（２．２ｇ、９．７４ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（１．９９ｇ、１４．６２ｍｍｏｌ）及び塩酸ＥＤＣ（２．３３ｇ、１２．１８ｍｍｏｌ）の混合物をＤＭＦ（８１ｍｌ）中、室温で４８時間撹拌した。この反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水及びブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過して蒸発させた。粗生成物（１２ｇ）をシリカゲルクロマトグラフィー（シクロヘキサン対シクロヘキサン：酢酸エチル１：１）にかけて、５．２ｇの表題化合物を得た。
ＴＬＣ（シリカ、シクロヘキサン：酢酸エチル３：１）：Ｒｆ＝０．４７；ＨＰＬＣ：ＲｔＨ３＝１．４０ｍｉｎ；ＥＳＩＭＳ：６１５，６１６［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｃｌ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：１１．６８（ｓ，１Ｈ），１０．４１（ｓ，１Ｈ），８．８１（ｄｄ，Ｊ＝１．８２，０．６９Ｈｚ，１Ｈ），８．４５（ｄｄ，Ｊ＝８．９１，３．１４Ｈｚ，１Ｈ），８．１９（ｄｄ，Ｊ＝１．８８，０．６３Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄｄ，Ｊ＝９．７９，９．１６Ｈｚ，１Ｈ），４．３８（ｄ，Ｊ＝２．１３Ｈｚ，１Ｈ），４．１８（ｄ，Ｊ＝１１．８０Ｈｚ，１Ｈ），１．７５（ｓ，３Ｈ），１．６２（ｓ，３Ｈ），１．６０（ｓ，９Ｈ）．
【０２００】
ｏ）３−クロロ−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸［６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロメチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−５−フルオロ−ピリジン−２−イル］−アミド
ジクロロメタン（８１ｍｌ）中（（２Ｒ，５Ｒ）−５−｛６−［３−クロロ−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボニル）−アミノ］−３−フルオロ−ピリジン−２−イル｝−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４．９９ｇ、８．１３ｍｍｏｌ）及びＴＦＡ（６．２６ｍｌ、８１ｍｍｏｌ）の混合物を室温で１８時間撹拌した。溶媒を蒸発させて、酢酸エチルなどの好適な有機溶媒及びアンモニア水で残渣を希釈した。氷を加え、有機相を水及びブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、蒸発させて、３．７８ｇの表題化合物を得た。
ＨＰＬＣ：ＲｔＨ３＝０．８７ｍｉｎ；ＥＳＩＭＳ：５１４，５１６［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｃｌ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １１．１１（ｓ，１Ｈ），９．０６（ｓ，１Ｈ），８．６９（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０−７．６８（ｍ，１Ｈ），５．８８（ｂｒ．ｓ，２Ｈ），４．１２（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７２（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），１．５１（ｓ，３Ｈ），１．４９（ｓ，３Ｈ）．
【０２０１】
実施例２：野生型マウスにおける化合物１及び比較化合物ＮＢ−３６０の慢性投与
化合物１の特に毛皮の変色に対する慢性治療効果を調べ、野生型マウスにおける有効用量を決定し、及び有効性と毛色変化との間のウィンドウを比較ＢＡＣＥ−１阻害薬化合物ＮＢ−３６０（Ｎ−（３−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−４−フルオロフェニル）−５−シアノ−３−メチルピコリンアミド）（Ｎｅｕｍａｎｎ  Ｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；及びＳｈｉｍｓｈｅｋ  ＤＲ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）のものと比較するため、本明細書に記載される試験を市販の野生型マウスで行った。
【０２０２】
動物
Ｃ５７ＢＬ／６マウスはＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、フランスに注文した。
【０２０３】
化合物製剤化及び投与
化合物１及びＮＢ−３６０は、懸濁液として製剤化した。媒体、化合物１又はＮＢ−３６０は１０ｍｌ／ｋｇの容積で１日１回（朝）、８週間にわたって経口投与した。媒体：水中０．５％メチルセルロース中０．１％Ｔｗｅｅｎ８０。
【０２０４】
体重及び毛色のスコア付け
体重を週３回（月曜日、水曜日、金曜日）測った。任意の毛髪の色の変化の主観的スコア付けを週１回（水曜日）実施した。スコア（灰色の毛皮の体に対する％）：０：変化なし；１：スポット；２：＞３０％；３：＞５０％；４：＞７５％；５：１００％。毛色の変化が観察された場合、動物を写真に撮って記録した。最後の毛色スコア付けは本試験に関与しない人が盲検で行った。
【０２０５】
エキソビボ試料及び試料採取方法
血液試料は、全血化合物レベルの分析に使用し、生存期間中に尾静脈からＥＤＴＡチューブ（ＣＢ３００、Ｓａｒｓｔｅｄｔ、ドイツ）に採るか、又は剖検日に体幹血液からＥＤＴＡエッペンドルフチューブ（Ｍｉｌｉａｎ  ＳＡ、ＣａｔＮｏＴＯＭ−１４、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗｏｈｌｅｎ、スイス）若しくは血清チューブ（ＣＢ３００Ｚ、Ｓａｒｓｔｅｄｔ、Ｎｕｅｍｂｒｅｃｈｔ、ドイツ）に採るかのいずれかとした。
【０２０６】
アミロイド−β（Ａβ）分析用の血漿をＥＤＴＡ血液の遠心（８０００ｒｐｍ／６８００×ｇ、１５分、４℃）によって収集し、低タンパク質結合性エッペンドルフチューブ（００３  ０１０８．１１６、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、Ｈａｍｂｕｒｇ、ドイツ）に収集した。
【０２０７】
室温で２０分後、遠心（８０００×ｇ、１５分、４℃）によって血清を分離し、低タンパク質結合性エッペンドルフチューブに収集して、腎毒性バイオマーカーに関して調べた。全ての血液／血漿／血清試料は、ドライアイスで凍結し、分析時まで−８０℃で保存した。
【０２０８】
断頭後、直ちに脳を摘出し、生理食塩水でリンスし、正中矢状断した。小脳の左半分を化合物レベルの分析に使用し、ガラスチューブ（Ｃｈｒｏｍａｃｏｌ、１２５×５−ＳＶ  Ｔ０５１、Ｗｅｌｗｙｎ  Ｇａｒｄｅｎ  Ｃｉｔｙ、英国）に入れ、秤量してドライアイスで凍結し、前脳の左半分（嗅球なし）をＡβ分析に使用し、金属プレート上にドライアイスで凍結して、低タンパク質結合性チューブ（００３  ０１０８．１１６、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、Ｈａｍｂｕｒｇ、ドイツ）に入れた。
【０２０９】
化合物レベルの分析ため腹側及び背側皮膚を採取し、秤量してドライアイスで凍結した。
【０２１０】
化合物レベルの分析
生体試料の化合物１及びＮＢ−３６０レベルを血液、脳及び皮膚で液体クロマトグラフィー／タンデム質量分析法（ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）によって定量化した。脳試料は２容量のＫＨ２ＰＯ４緩衝液と混合し、Ｃｏｖａｒｉｓ（登録商標）装置を使用してホモジナイズした。皮膚試料は約６倍容量のメタノール／水と混合し、Ｐｒｅｃｅｌｌｙｓチューブを使用してホモジナイズした。３０μＬの血液、脳又は皮膚ホモジネートのいずれも構造的に関連性のある内部標準でスパイクし、続いて少なくとも６倍過剰容量のアセトニトリルと混合してタンパク質を沈殿させた。上清をＬＣ／ＭＳ／ＭＳシステムに直接注入して分析にかけた。
【０２１１】
【表５】
2019524743.tif 000008
【０２１２】
【表６】
2019524743.tif 000009
【０２１３】
マウス脳内Ａβ４０の分析
脳のホモジナイゼーション
凍結マウス前脳を秤量し、９容量（ｗ／ｖ）の氷冷ＴＢＳ−Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（２０ｍＭトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．４、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、１×Ｃｏｍｐｌｅｔｅ［プロテアーゼ阻害薬カクテル錠：１  ８３６  １４５、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＧｍｂＨ、Ｐｅｎｚｂｅｒｇ、ドイツ］）中で音波処理（９０％デューティサイクル、出力制御５、４０〜５５パルス、［Ｓｏｎｉｆｉｅｒ  ４５０、Ｂｒａｎｓｏｎ］）によってホモジナイズした。ホモジナイゼーション後、分析用に数個の５０μｌアリコートを調製し、−８０℃で保存した。
【０２１４】
標準としての合成Ａβ１−４０溶液の調製
ヒトＡβペプチド（１−４０）トリフルオロ酢酸塩（Ｈ  １１９４．１０００、Ｂａｃｈｅｍ、Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ、スイス）をＡβ１−４０の検量線として使用した。これを無水ＤＭＳＯ（４１６４７、Ｆｌｕｋａ）に１ｍｇ／ｍｌの濃度で室温（ＲＴ）において約３０分間可溶化し、次に完全に可溶化されたことを目視で確認した。
【０２１５】
残りの溶液の２０×５μｌアリコート及び１００μｌアリコートを低結合性チューブ（００３０  １０８．０９４、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、Ｈａｍｂｕｒｇ、ドイツ）に調製し、窒素ガスで覆ってＡβペプチドを酸化から保護し、−８０℃で保存した。検量線のために５μｌアリコートを一度のみ使用し、次に廃棄した。
【０２１６】
マウス脳内Ａβ４０の決定
マウスの内因性Ａβ４０をＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）９６ウェルＭＵＬＴＩ−ＡＲＲＡＹヒト／げっ歯類（４Ｇ８）Ａβ４０超高感度アッセイ（＃Ｋ１１０ＦＴＥ−３、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＵＳＡ）で決定した。このアッセイは、検量線及び試料調製を除いて製造者の指示に従って実施した。各１：１０前脳ホモジネートの５０μｌアリコートを使用してＴｒｉｔｏｎＸ−１００（ＴＸ−１００）可溶性Ａβ４０を１％ＴＸ−１００で前脳から抽出し、１％ＴＸ−１００の最終濃度及び１：２０前脳希釈度に達するようにＴＢＳ  ｃｏｍｐｌｅｔｅ（２０ｍＭトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．４、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、１×Ｃｏｍｐｌｅｔｅ［プロテアーゼ阻害薬カクテル錠：１  ８３６  １４５、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＧｍｂＨ、Ｐｅｎｚｂｅｒｇ  ドイツ］）中５０μｌ  ２％ＴＸ−１００と混合した。試料を氷上で１５分間インキュベートし、５分毎にボルテックスした。試料を超遠心（１０００００×ｇ、４℃、１５分）し、５０μｌの澄明な上清を新しいチューブに移した。Ａβ４０アッセイについては、上清を更に１：１００の最終前脳希釈度となるように３％Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａ溶液（キットからのもの）中に１：５希釈し、プレートに加えた。
【０２１７】
合成Ａβ１−４０ペプチド（１．５６〜１００ｐｇ／ｍｌ）でスパイクした１％Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａ溶液の対応する希釈物で検量線を作成し、但し非トランスジェニックマウス脳試料は別とした。この場合、検量線は、合成Ａβ１−４０ペプチド（１．５６〜１００ｐｇ／ｍｌ）でスパイクした、対応して希釈したＡＰＰノックアウトマウス前脳で作成した。全ての試料及び標準について、１ウェル当たり２５μｌを加えた。決定毎にデュプリケートウェルを実施した。計算にはデュプリケートウェルからの平均値を使用した。ＭＳＤは、定量化ソフトウェアを提供していないため、試料及び標準の相対単位をＳＯＦＴｍａｘ  ＰＲＯ  ４．０にインポートして標準曲線の計算及び試料の定量化を行った。
【０２１８】
結果
ＮＢ−３６０又は化合物１で慢性治療したＣ５７ＢＬ／６マウスの体重及び毛色に対する効果
野生型ナイーブマウス（Ｃ５７ＢＬ／６）を化合物１又はＮＢ３６０で８週間慢性治療し、３日毎（月曜日、水曜日、金曜日）に体重を測定した。全体的に見て媒体と比較した治療群の有意な体重の差を観察することができなかったと共に、５６日目における試験終了時にも有意な差を観察することができなかった。それにも関わらず、治療群について有意な体重増加（０日目と５６日目との体重比較）を観察することができた。
【０２１９】
試験中、ＮＢ−３６０で治療したマウスに毛色変化が観察された。Ｃ５７ＢＬ／６の黒色の毛皮が徐々に斑点状に灰色になった。これらの灰色の斑点は、動物の腹側部に見られ、一方で背側部に影響はなかった。灰色の斑点の出現は、治療３週間後に現れ、高用量及び低用量ＮＢ−３６０群で異なる程度を呈した。主観的スコア付け方式を実施して毛皮変色を定量化した。ＮＢ−３６０群の全ての動物が毛皮変色を示した。低用量ＮＢ−３６０群（２０μｍｏｌ／ｋｇ）は、ごく僅かであるが有意な毛皮スコア変化を示した一方、高用量ＮＢ−３６０群（１００μｍｏｌ／ｋｇ）は、より重度の深刻な毛色変化を呈した、図１。注目すべきことに、毛皮変色の広がり及び増加は、５週間のＮＢ−３６０治療後にプラトーに達し、それ以上の変化はなかった。重要なことに、化合物１治療群に検出可能な明らかな毛色変化はなかった。
【０２２０】
血液及び組織における曝露
血中の化合物１曝露を１日目の初回投与後、１４日目の中間時点及び最終投与後の試験終了時に決定した。一貫して、最終日における曝露は、実験の開始時よりも低かった。曝露は、化合物１について約３５％減少した。
【０２２１】
種々の組織におけるＡＵＣ０−２４時間として表される最後２４時間にわたる化合物１の曝露を表４に要約する。血液について、ＡＵＣは、１、４、７、及び２４時間時のデータから計算し、並びに「ｍｉｎｉ」ＡＵＣは、４及び２４時間時のデータのみから計算した。これらの２つの値の比較は、大きい差を示さない。組織曝露については、４及び２４時間時のデータのみが利用可能であった。「ｍｉｎｉ」ＡＵＣは、組織曝露を十分に代表すると結論付けた。
【０２２２】
化合物１及びＮＢ−３６０の両方について、脳内及び皮膚における曝露は、血中よりはるかに高かった、表４。詳細には、皮膚曝露は、血液曝露より数倍高かった。加えて、特にＮＢ−３６０について、皮膚の背側部と比べて腹側部で曝露がより高いように見えた、表５。全ての組織で曝露の良好な用量比例性があった。
【０２２３】
【表７】
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【０２２４】
【表８】
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【０２２５】
マウス脳におけるアミロイド−βの低下
試験最終日、最終投与を受けた後４時間及び２４時間でｎ＝４マウス群を犠牲にした。前脳を分離し、β−アミロイドペプチド１−４０に関して分析した。媒体群及び治療群のＡβ４０濃度を表６にまとめ、図２に視覚化する。対応する媒体治療群に対するパーセント減少率を計算した。治療により、最終投与後４時間で有意なＡβ４０の減少が生じた。化合物１は、最終投与後２４時間もなお媒体と比べてＡβ４０の２５％の減少を示し、しかし、これは有意でなかった。高用量群では、化合物１は、最終投与後２４時間に有意に低いレベルのＡβ４０を示した。５０μｍｏｌ／ｋｇの化合物１用量群は、ほぼ平坦なプロファイルを示し、全２４時間の時間経過にわたって８０〜９０％のＡβ４０減少であった。
【０２２６】
【表９】
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【０２２７】
ＮＢ−３６０は、ＢＡＣＥ−２と比べてＢＡＣＥ−１に１．０倍の選択性を与えるＢＡＣＥ−１及びＢＡＣＥ−２酵素阻害インビトロアッセイにより示されるとおり（Ｎｅｕｍａｎｎ  Ｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５））、二重ＢＡＣＥ−１／ＢＡＣＥ−２阻害薬である。同じアッセイにおいて、化合物１は、ＢＡＣＥ−２と比べてＢＡＣＥ−１に３倍の選択性を有することが分かった。結論として、化合物１とＮＢ−３６０との間の酵素選択性及び組織分布の中程度のばらつきが、慢性マウス試験における毛髪変色の発生に効果を及ぼすものと考えられる。インビボで活性であるにも関わらず、化合物１は、マウスにおいて毛髪変色の徴候を示さなかった。
【０２２８】
実施例３：ＡＰＯＥ４−ＴＲマウスにおける化合物１の急性ＰＫ／ＰＤ用量反応試験
ヒトＡＰＯＥ４コンテクストにおけるＡＰＰ代謝に対する化合物１の効果を調べるため、ヒトＡＰＯＥ４アレルを保因するトランスジェニックマウスにおけるＰＫ／ＰＤ試験を実施した（マウスＡｐｏｅ遺伝子をヒトＡＰＯＥ４に置き換えた；ＡＰＯＥ４−ＴＲ；（Ｋｎｏｕｆｆ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９））。
【０２２９】
この試験では、３〜５ヵ月齢の雄及び雌ＡＰＯＥ４−ＴＲ動物を種々の用量（３、１０、３０ｕｍｏｌ／ｋｇ）の化合物１で急性治療し、治療後４及び２４時間で犠牲にした。
【０２３０】
動物
雄及び雌トランスジェニックホモ接合ＡＰＯＥ４−ＴＲ（Ｂ６．１２９Ｐ２−Ａｐｏｅｔｍ３（ＡＰＯＥ＊４）ＭａｅＮ８、Ｔａｃｏｎｉｃ、モデル００１５４９、３〜５ヵ月齢、ｎ＝４８）をＴａｃｏｎｉｃから入手した。
【０２３１】
用量選択
化合物１は、３、１０及び３０μｍｏｌ／ｋｇで投与した。
【０２３２】
化合物形態、製剤化及び用量設定
化合物１は、懸濁液として製剤化した。媒体又は化合物は、経口投与によって１０ｍｌ／ｋｇの容量で１回与えた。媒体：水中０．５％メチルセルロース中０．１％Ｔｗｅｅｎ８０。
【０２３３】
【表１０】
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【０２３４】
体重
体重は、投与前に１回測った。
【０２３５】
エキソビボ試料及び試料採取方法
血液試料は、全血化合物レベルの分析に使用し、剖検日に体幹血液からＥＤＴＡエッペンドルフチューブ（Ｍｉｌｉａｎ  ＳＡ、ＣａｔＮｏＴＯＭ−１４、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗｏｈｌｅｎ、スイス）、又は血清チューブ（ＣＢ３００Ｚ、Ｓａｒｓｔｅｄｔ、Ｎｕｅｍｂｒｅｃｈｔ、ドイツ）に採った。
【０２３６】
アミロイド−β（Ａβ）分析用の血漿をＥＤＴＡ血液の遠心（８０００ｒｐｍ／６８００×ｇ、１５分、４℃）によって収集し、低タンパク質結合性エッペンドルフチューブ（００３  ０１０８．１１６、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、Ｈａｍｂｕｒｇ、ドイツ）に収集した。
【０２３７】
全ての血液／血漿／血清試料は、ドライアイスで凍結し、分析時まで−８０℃で保存した。
【０２３８】
断頭後、直ちに脳を摘出し、生理食塩水でリンスし、正中矢状断した。左小脳を化合物レベルの分析に使用し、ガラスチューブ（Ｃｈｒｏｍａｃｏｌ、１２５×５−ＳＶ  Ｔ０５１、Ｗｅｌｗｙｎ  Ｇａｒｄｅｎ  Ｃｉｔｙ、英国）に入れ、秤量してドライアイスで凍結し、前脳の左半分（嗅球なし）をＡβ分析に使用し、金属プレート上にドライアイスで凍結して、低タンパク質結合性チューブ（００３  ０１０８．１１６、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、Ｈａｍｂｕｒｇ、ドイツ）に入れた。右脳は、４％パラホルムアルデヒドに固定し、ＰＢＳで洗浄し、次に可能性のある今後の組織学的分析のためにパラフィンに包埋した。
【０２３９】
試験終了時に尾を採取し、−２０℃で保存した。
【０２４０】
【表１１】
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【０２４１】
マウス脳内Ａβ４０並びにＣＳＦ中Ａβ４０及びＡβ４２の分析
脳のホモジナイゼーション
凍結マウス前脳を秤量し、９容量（ｗ／ｖ）の氷冷ＴＢＳ−Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（２０ｍＭトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．４、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、１×Ｃｏｍｐｌｅｔｅ［プロテアーゼ阻害薬カクテル錠：１  ８３６  １４５、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＧｍｂＨ、Ｐｅｎｚｂｅｒｇ、ドイツ］）中で音波処理（９０％デューティサイクル、出力制御５、４０〜５５パルス、［Ｓｏｎｉｆｉｅｒ  ４５０、Ｂｒａｎｓｏｎ］）によってホモジナイズした。ホモジナイゼーション後、分析用に数個の５０μｌアリコートを調製し、−８０℃で保存した。
【０２４２】
標準としての合成Ａβ１−４０溶液の調製
ヒトＡβ１−４０トリフルオロ酢酸塩（Ｈ  １１９４．１０００、Ｂａｃｈｅｍ、Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ、スイス）をＡβ１−４０の検量線として使用した。これを無水ＤＭＳＯ（４１６４７、Ｆｌｕｋａ）に１ｍｇ／ｍｌの濃度で室温（ＲＴ）において約３０分間可溶化し、次に完全に可溶化されたことを目視で確認した。
【０２４３】
残りの溶液の２０×５μｌアリコート及び１００μｌアリコートを低結合性チューブ（００３０  １０８．０９４、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、Ｈａｍｂｕｒｇ、ドイツ）に調製し、窒素ガスで覆ってＡβペプチドを酸化から保護し、−８０℃で保存した。検量線のために５μｌアリコートを一度のみ使用し、次に廃棄した。
【０２４４】
マウス脳内Ａβ４０の決定
マウスの内因性Ａβ４０をＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）９６ウェルＭＵＬＴＩ−ＡＲＲＡＹヒト／げっ歯類（４Ｇ８）Ａβ４０超高感度アッセイ（＃Ｋ１１０ＦＴＥ−３、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＵＳＡ）で決定した。このアッセイは、検量線及び試料調製を除いて製造者の指示に従って実施した。各１：１０前脳ホモジネートの５０μｌアリコートを使用してＴｒｉｔｏｎＸ−１００（ＴＸ−１００）可溶性Ａβ４０を１％ＴＸ−１００で前脳から抽出し、１％ＴＸ−１００の最終濃度及び１：２０前脳希釈度に達するようにＴＢＳ  ｃｏｍｐｌｅｔｅ（２０ｍＭトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．４、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、１×Ｃｏｍｐｌｅｔｅ［プロテアーゼ阻害薬カクテル錠：１  ８３６  １４５、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＧｍｂＨ、Ｐｅｎｚｂｅｒｇ  ドイツ］）中５０μｌ  ２％ＴＸ−１００と混合した。試料を氷上で１５分間インキュベートし、５分毎にボルテックスした。試料を超遠心（１０００００×ｇ、４℃、１５分）し、５０μｌの澄明な上清を新しいチューブに移した。Ａβ４０アッセイについては、上清を更に１：１００の最終前脳希釈度となるように３％Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａ溶液（キットからのもの）中に１：５希釈し、プレートに加えた。
【０２４５】
合成Ａβ１−４０ペプチド（１．５６〜１００ｐｇ／ｍｌ）でスパイクした１％Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａ溶液の対応する希釈物で検量線を作成し、但し非トランスジェニックマウス脳試料は別とした。この場合、検量線は、合成Ａβ１−４０ペプチド（１．５６〜１００ｐｇ／ｍｌ）でスパイクした、対応して希釈したＡＰＰノックアウトマウス前脳で作成した。全ての試料及び標準について、１ウェル当たり２５μｌを加えた。決定毎にデュプリケートウェルを行った。計算にはデュプリケートウェルからの平均値を使用した。ＭＳＤは、定量化ソフトウェアを提供していないため、試料及び標準の相対単位をＳＯＦＴｍａｘ  ＰＲＯ  ４．０にインポートして標準曲線の計算及び試料の定量化を行った。
【０２４６】
結果
ＡＰＯＥ４−ＴＲマウス（マウスＡＰＯＥ遺伝子をヒトＡＰＯＥ４に置き換えた）を３つの異なる用量（３、１０及び３０μｍｏｌ／ｋｇ）のＢＡＣＥ阻害薬化合物１で急性治療した。最終投与後４時間及び２４時間で動物を犠牲にし、前脳を分離した。様々な群のＡβ４０及びＡβ４２濃度を図３、図４及び図５；及び表９、表１０及び表１１にまとめる。媒体治療群に対するパーセント減少率を計算した。いずれの治療によっても、最終投与後４時間及び２４時間で有意且つ用量依存的なＡβ４０の減少が生じ、効果は、４時間で４３〜７７％及び２４時間で２０〜６６％の範囲であった。低い方の２つの用量群（３及び１０μｍｏｌ／ｋｇ）について、Ａβ４０低減効果は、４及び２４時間で有意に減少したが、最終投与後２４時間で実質的にベースラインレベルに近かった。高用量の化合物１（３０μｍｏｌ／ｋｇ）は、ほぼ平坦なプロファイルを示し、全２４時間の時間経過にわたって７７〜６６％のＡβ４０減少であった。
【０２４７】
【表１２】
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【０２４８】
【表１３】
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【０２４９】
【表１４】
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【０２５０】
血液及び脳における急性投与についての４時間及び２４時間時点のＰＫデータを図６及び表１２に示す。血液及び脳におけるＡＵＣ０−２４時間として表される２４時間にわたる化合物１の曝露を表１３にまとめる。血液及び脳における化合物１曝露は、用量比例的であり、２４時間後に予想どおりの化合物レベルの僅かな低下を呈し、これも用量比例的であった。脳内の化合物曝露は、血中よりもはるかに高かった。脳血液比は、３、１０及び３０μｍｏｌ／ｋｇ用量群について同様であり、それぞれ４時間で５、３及び４及び２４時間で９、４、及び３であった。異なる用量での化合物曝露の低下の比較を可能にする４時間／２４時間の曝露比を計算した（表１２）。化合物１は、中程度の２〜５倍の曝露減少であり、異なる用量間及び血液と脳との間で大きい差はなかった。
【０２５１】
【表１５】
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【０２５２】
【表１６】
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【０２５３】
全ての用量群について個々の動物の脳の薬物動態学的／薬力学的関係を図７に示す。化合物１について明らかなＰＫ／ＰＤ関係が見られた。低化合物レベルでは、Ａβ減少の有効性は最小限であったが、高化合物レベルでは最大限の有効性効果が認められた。
【０２５４】
図８は、異なる用量における平均値のＰＫ／ＰＤ関係を示す。ここでもやはり、Ａβ減少に対する曝露依存的効果が見られ、明らかな最小限及び最大限の有効性効果があった。
【０２５５】
結論
本実施例に提供される試験は、化合物１が、ＡＰＯＥ４−ＴＲマウスにおいてインビボで経口アベイラビリティのある、中枢作用性であり且つ強力なＢＡＣＥ阻害薬であることを実証する。マウス内因性Ａｐｏｅ遺伝子座からヒトＡＰＯＥ４を発現するＡＰＯＥ４−ＴＲマウスを使用して化合物１のＰＫ／ＰＤ関係を調べた。ＡｐｏＥ４は、アルツハイマー病の高リスク因子とされており、ＡＰＯＥ４−ＴＲマウスは、アルツハイマー脳におけるＡｐｏＥ４効果に類似している。
【０２５６】
ＡＰＯＥ４−ＴＲマウスにおける化合物１のＰＫ特性は、野生型マウスで観察されるものと違いがなかった。血液及び脳における用量依存的化合物１曝露（脳内レベルがはるかに高い）が観察された。更に、２４時間後の曝露低下は、野生型マウスで観察されるものと同様であった。３０μｍｏｌ／ｋｇの化合物１がＡＰＯＥ４−ＴＲの脳内のＡβ減少に対して最大の効果を生じ（＞７０％）、急性投与について同程度が２４時間にわたって続いた。ＰＫ／ＰＤ関係は野生型マウス及びラットと非常に類似していた。最も高い用量（３０μｍｏｌ／ｋｇ）でＡＰＯＥ４−ＴＲマウスの脳内のＡβ減少に対する最大有効性効果が僅かに低いことが見られた。これは、ＡＰＯＥ−４  ＴＲマウスで観察されるアミロイド−βのクリアランス速度が遅いことに起因し得る（Ｃａｓｔｅｌｌａｎｏ  ＪＭ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【０２５７】
実施例４：ファースト・イン・ヒューマン試験
この試験は、臨床的に完了しており、主として健康成人及び高齢対象における化合物１の安全性及び忍容性並びに薬物動態学及び薬力学を評価する無作為化、二重盲検、プラセボ対照、単一及び複数用量漸増経口投与試験であった。この試験の目的は、化合物１の単一及び複数最大耐量を決定すること、及び主要ＰＤバイオマーカーとしてＣＳＦ中Ａβを用いて薬物動態学／薬力学（ＰＫ／ＰＤ）関係を評価することであった。
【０２５８】
６０歳以上の健常高齢対象において、７５０ｍｇ単一用量及び２週間にわたる３００ｍｇ  ＱＤの最高試験用量が安全で忍容されることが決定された。薬物作用の主要バイオマーカーとしてＣＳＦ中Ａβ濃度を用いた薬力学的評価はまた、健常高齢対象にも適用された。Ａβ４０濃度の用量依存的低下が単回投与及び複数回投与後にそれぞれ最大約８０％及び９０％まで決定された（表１４及び表１５、図９）。
【０２５９】
【表１７】
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【０２６０】
【表１８】
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【０２６１】
実施例５：３ヵ月用量範囲探索安全性及び忍容性試験
第Ｉ相臨床用量範囲探索安全性及び忍容性試験において６０歳以上の健常高齢対象に化合物１を投与した。この試験は、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖにＮＣＴ０２５７６６３９識別コードで収載されている。
【０２６２】
この無作為化、二重盲検、プラセボ対照試験は、並列群設計を有し、化合物１は、１日１回、経口用量で５治療群（化合物１：２ｍｇ、１０ｍｇ、３５ｍｇ又は８５ｍｇ  ＱＤ及びプラセボ）に投与した。
【０２６３】
この試験の主要目的は、ファースト・イン・ヒューマン試験で２週間及び４週間の継続期間にわたって得られたこれまでの安全性及び忍容性データを拡大し、それによりＡＤのリスクがある対象における将来の長期有効性試験の開始を可能にすることであった。加えて、将来の有効性試験のための用量選択判断を裏付けるため、薬物動態学的／薬力学的モデル化に関連するデータを入手した。
【０２６４】
この試験では、化合物１は、３ヵ月にわたる２、１０、３５及び８５ｍｇの１日１回用量が安全で忍容されることが分かった。ＣＳＦ  Ａβレベルに対する化合物１投与の薬力学的効果を表１６及び図１０に示す。Ａβ低減の程度は、時間が経っても安定しており、約２〜３週間後にＰＤ定常状態に達した。
【０２６５】
【表１９】
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【０２６６】
２、１０、３５及び８５ｍｇで毎日投与して３ヵ月後（９１日後）の化合物１の薬物動態パラメータを表１７に示す。
【０２６７】
【表２０】
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【０２６８】
Ｃｍａｘ，ｓｓ値は、指定用量で１日１回（ｑｄ）投与して９１日後の化合物１の最高血漿定常状態濃度を表す。「ＣＶ％」は、パーセンテージ変動係数を表す。
【０２６９】
これらの結果に基づき、１５ｍｇの化合物１の１日１回用量は、７０〜１７０ｎｇ／ｍｌの血漿Ｃｍａｘ，ｓｓ値をもたらすことが予想され、及び５０ｍｇの化合物１の１日１回用量は、２００〜５００ｎｇ／ｍｌの血漿Ｃｍａｘ，ｓｓ値をもたらすことが予想される。
【０２７０】
実施例４及び５に提供されるデータに基づき、計量薬理学的モデル化から、対象の９０％で８０％のＣＳＦ  Ａβ４０低下を達成するのに５０ｍｇの１日用量、及び６０％のＣＳＦ  Ａβ４０低下を実現するのに１５ｍｇの用量が予測される。
【０２７１】
実施例６：化合物１による治療への応答性に対するＡｐｏＥ４遺伝子型の効果
実施例５及び６に記載する完了したファースト・イン・ヒューマン試験及び３ヵ月用量範囲探索安全性及び忍容性臨床試験において、初回投与前（ベースライン）並びにそれぞれ２週間及び３ヵ月間の複数回投与後に腰椎穿刺を用いてＣＳＦ中Ａβ濃度を得た。また、同意した対象のＡｐｏＥ４遺伝子型も得た。被験治療を受け、且つ薬力学的効果の判定に影響を及ぼす可能性のある大きいプロトコル逸脱がなかった対象において、Ａβ４０及びＡβ４２濃度のベースラインからのパーセント変化率を計算した。以下の表１８〜表２１は、治療群及びＡｐｏＥ遺伝子型（Ｅ４ヘテロ接合体対Ｅ４非保因者）別のベースラインからのパーセント変化率の要約統計量を提供する。ＣＳＦデータを有する１人の対象のみがＥ４ホモ接合体であった（３ヵ月用量範囲探索安全性及び忍容性試験から）。この対象は、プラセボで治療し、Ａβ４０及びＡβ４２の両方の濃度の１１％の低下を示したが、以下の表には含めない。データは、ＡｐｏＥ４保因者と非保因者との間に化合物１による治療へのＣＳＦ  Ａβ４０及びＡβ４２応答性に差がないことを示している。
【０２７２】
【表２１】
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【０２７３】
【表２２】
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【０２７４】
【表２３】
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【０２７５】
【表２４】
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【０２７６】
実施例７：プラーク担持雄ＡＰＰ２３マウスのＢＡＣＥ阻害薬化合物１による慢性治療処置
概要
プラーク担持年齢（１２ヵ月）のＡＰＰ２３トランスジェニックマウスに化合物１を２つの用量で６ヵ月間慢性投与した。媒体のみを受けた群と比較して、０．０３ｇ／ｋｇ餌の化合物１の投与により媒体群と比較してアミロイド−β４０及び４２の僅かな減少が生じ、及び０．３ｇ／ｋｇ餌の投与により強い減少が生じた。マウス脳内Ａβ量は、ベースライン時（１２ヵ月齢）のマウスと同様であった。血漿及びＣＳＦ中可溶性Ａβは、高用量群で有意に減少したのみであった。免疫組織化学によって検出したときのプラーク負荷も低用量群で僅かに（約２０％）減少し、及び高用量群で強く（約７０％）減少した。小型、中型及び大型プラークの数は、等しく治療に応答した。活性化アストロサイトの数をＧＦＡＰ染色によって決定した。全ＧＦＡＰ免疫応答性は、化合物１による治療によって用量依存的に減少した。ＧＦＡＰ陽性アストロサイトの大多数は、プラークに関連しなかったが、プラーク関連アストロサイトは、プラークから遠位にあるものと比較して化合物１治療に対してより強く応答した。ＩＢＡ１染色によって活性化ミクログリア細胞を検出した。ＩＢＡ１陽性ミクログリアの数は、化合物１治療によって用量依存的に減少した。アミロイドプラークにごく近接したミクログリアは、プラークから遠位にあるミクログリアと比較して治療によってより多く減少した。
【０２７７】
要約すれば、化合物１治療は、未治療媒体と比較して脳アミロイド−β負荷の用量依存的な減少、及びマウス脳内の２つの神経炎症マーカー、活性化アストロサイトの数及びミクログリア細胞の数の相関的減少を示した。
【０２７８】
方法
動物及び用量選択
雄トランスジェニックヘテロ接合ＡＰＰ２３（Ｂ６，Ｄ２−Ｔｇ（Ｔｈｙ１Ａｐｐ）２３Ｓｄｚ（Ｓｔｕｒｃｈｌｅｒ−Ｐｉｅｒｒａｔ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）、１２〜１４ヵ月齢、ｎ＝６４）を餌ペレット中の０．３ｇ／ｋｇ又は０．０３ｇ／ｋｇの化合物１で治療した。
【０２７９】
【表２５】
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【０２８０】
エキソビボ試料及び試料採取方法
血液試料は全血化合物レベルの分析に使用し、剖検日に体幹血液からＥＤＴＡエッペンドルフチューブ（Ｍｉｌｉａｎ  ＳＡ、ＣａｔＮｏＴＯＭ−１４、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗｏｈｌｅｎ、スイス）、又は血清チューブ（ＣＢ３００Ｚ、Ｓａｒｓｔｅｄｔ、Ｎｕｅｍｂｒｅｃｈｔ、ドイツ）に採った。
【０２８１】
アミロイド−β（Ａβ）分析用の血漿をＥＤＴＡ血液の遠心（８０００ｒｐｍ／６８００×ｇ、１５分、４℃）によって収集し、低タンパク質結合性エッペンドルフチューブ（００３  ０１０８．１１６、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、Ｈａｍｂｕｒｇ、ドイツ）に収集した。
【０２８２】
全ての血液／血漿／血清試料は、ドライアイスで凍結し、分析時まで−８０℃で保存した。
【０２８３】
断頭後、直ちに脳を摘出し、生理食塩水でリンスし、正中矢状断した。脳の左半分を化合物レベルの分析に使用し、ガラスチューブ（Ｃｈｒｏｍａｃｏｌ、１２５×５−ＳＶ  Ｔ０５１、Ｗｅｌｗｙｎ  Ｇａｒｄｅｎ  Ｃｉｔｙ、英国）に入れ、秤量してドライアイスで凍結し、前脳の左半分（嗅球なし）をＡβ分析に使用し、金属プレート上にドライアイスで凍結して、低タンパク質結合性チューブ（００３  ０１０８．１１６、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、Ｈａｍｂｕｒｇ、ドイツ）に入れた。
【０２８４】
試験終了時に尾を採取し、−２０℃で保存した。
【０２８５】
化合物レベルの分析
生体試料の化合物１レベルを血液及び脳で液体クロマトグラフィー／タンデム質量分析法（ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）によって定量化した。脳試料は、２容量のＫＨ２ＰＯ４緩衝液と混合し、Ｃｏｖａｒｉｓ（登録商標）装置を使用してホモジナイズした。３０μＬの血液又は脳ホモジネートのいずれも構造的に関連性のある内部標準でスパイクし、続いて少なくとも６倍過剰容量のアセトニトリルと混合してタンパク質を沈殿させた。上清をＬＣ／ＭＳ／ＭＳシステムに直接注入して分析にかけた。
【０２８６】
【表２６】
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【０２８７】
マウス組織内Ａβ４０及びＡβ４２の分析
脳のホモジナイゼーション
凍結マウス前脳を秤量し、９容量（ｗ／ｖ）の氷冷ＴＢＳ−Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（２０ｍＭトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．４、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、１×Ｃｏｍｐｌｅｔｅ［プロテアーゼ阻害薬カクテル錠：１  ８３６  １４５、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＧｍｂＨ、Ｐｅｎｚｂｅｒｇ、ドイツ］）中で音波処理（９０％デューティサイクル、出力制御５、４０〜５５パルス、［Ｓｏｎｉｆｉｅｒ  ４５０、Ｂｒａｎｓｏｎ］）によってホモジナイズした。ホモジナイゼーション後、分析用に数個の５０μｌアリコートを調製し、−８０℃で保存した。
【０２８８】
標準としての合成Ａβ溶液の調製
ヒトＡβペプチド（１−４０）トリフルオロ酢酸塩（Ｈ  １１９４．１０００、Ｂａｃｈｅｍ、Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ、スイス）をＡβ１−４０の検量線として使用した。これを無水ＤＭＳＯ（４１６４７、Ｆｌｕｋａ）に１ｍｇ／ｍｌの濃度で室温（ＲＴ）において約３０分間可溶化し、次に完全に可溶化されたことを目視で確認した。
【０２８９】
残りの溶液の２０×５μｌアリコート及び１００μｌアリコートを低結合性チューブ（００３０  １０８．０９４、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、Ｈａｍｂｕｒｇ、ドイツ）に調製し、窒素ガスで覆ってＡβペプチドを酸化から保護し、−８０℃で保存した。検量線のために５μｌアリコートを一度のみ使用し、次に廃棄した。
【０２９０】
ＡＰＰ２３マウス脳内Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００可溶性Ａβの決定
マウスにおけるヒトＡβ４０及び４２をＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）９６ウェルＭＵＬＴＩ−ＡＲＲＡＹヒト／げっ歯類（６Ｅ１０）Ａβ４０／４２アッセイ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ、ＵＳＡ）で決定した。このアッセイは、検量線及び試料調製を除いて製造者の指示に従って実施した。各１：１０前脳ホモジネートの５０μｌアリコートを使用してＴｒｉｔｏｎＸ−１００（ＴＸ−１００）可溶性Ａβ４０及び４２を１％ＴＸ−１００で前脳から抽出し、１％ＴＸ−１００の最終濃度及び１：２０前脳希釈度に達するようにＴＢＳ  ｃｏｍｐｌｅｔｅ（２０ｍＭトリス−ＨＣｌ  ｐＨ７．４、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、１×Ｃｏｍｐｌｅｔｅ［プロテアーゼ阻害薬カクテル錠：１  ８３６  １４５、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＧｍｂＨ、Ｐｅｎｚｂｅｒｇ  ドイツ］）中５０μｌ  ２％ＴＸ−１００と混合した。試料を氷上で１５分間インキュベートし、５分毎にボルテックスした。試料を超遠心（１０００００×ｇ、４℃、１５分）し、５０μｌの澄明な上清を新しいチューブに移した。上清を更に１：１００の最終前脳希釈度となるように３％Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａ溶液（キットからのもの）で１：５希釈し、プレートに加えた。
【０２９１】
合成Ａβ１−４０ペプチド（１．５６〜１００ｐｇ／ｍｌ）でスパイクした１％Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａ溶液の対応する希釈物で検量線を作成し、但し非トランスジェニックマウス脳試料は別とした。この場合、検量線は、合成Ａβ１−４０ペプチド（１．５６〜１００ｐｇ／ｍｌ）でスパイクした、対応して希釈したＡＰＰノックアウトマウス前脳で作成した。全ての試料及び標準について、１ウェル当たり２５μｌを加えた。決定毎にデュプリケートウェルを行った。計算にはデュプリケートウェルからの平均値を使用した。試料及び標準の相対単位をＳＯＦＴｍａｘ  ＰＲＯ  ４．０にインポートして標準曲線の計算及び試料の定量化を行った。
【０２９２】
ＡＰＰ２３マウス脳内ギ酸可溶性Ａβ４０の決定
５０マイクロリットルの前脳ホモジネートを１１６．６μｌ  １００％ギ酸と混合して、７０％の最終ギ酸濃度を得た。試料を氷上で保存し、５分毎にボルテックスした。中和のため、５０μｌの混合物を新しいチューブにピペッティングし、１×Ｃｏｍｐｌｅｔｅプロテアーゼ阻害薬を含有する９５０μｌの１Ｍトリス塩基を加えた。チューブを室温で一晩保存し、次にＥｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｍｉｃｒｏｚｅｎｔｒｉｆｕｇｅにおいて４℃で１５分間、１４０００ｒｐｍで遠心した。上層から１００μｌを取り出し、１００μｌの３％Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａ溶液（ＭｅｓｏＳｃａｌｅアッセイキットの一部）と混合した。この試料をアッセイプレートに直接加えるか（希釈１：１３３２）、又は１％Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａ溶液で更に希釈した。
【０２９３】
マウスＣＳＦ中Ａβ４０の分析
マウスＣＳＦ試料（３μｌ）を５７μＬの１％Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａ（ＭＳＤ）で希釈し、アッセイプレートに２５μｌを加えた。
【０２９４】
マウス血漿中Ａβ４０の分析
血漿試料（３０μｌ）を３０μｌの３％Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａ（ＭＳＤ）と混合し、アッセイプレートに２５μｌを加えた。
【０２９５】
二重蛍光免疫組織化学を用いたアミロイド−βプラーク及び活性化アストロサイトの組織学的分析
アミロイドペプチドのＣ末端部を認識するウサギ抗Ａβ一次抗体（この抗体は、Ｓｃｈｒａｄｅｒ−Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｇ，Ｐａｇａｎｅｔｔｉ  ＰＡ，１９９６；Ｓｃｈｒａｄｅｒ−Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７に記載されるとおり産生された）を用いてアミロイドプラークを染色した。市販のウサギ抗ＧＦＡＰ（Ｄａｋｏ  Ｓｃｈｗｅｉｚ  ＧｍｂＨ、Ｂａａｒ、スイスからのリファレンスＺ０３３４）を用いて活性化アストロサイトを検出した。
【０２９６】
全ての染色は、完全に自動化された機器Ｖｅｎｔａｎａ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）Ｕｌｔｒａ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｓｃｈｗｅｉｚ  ＡＧ、Ｒｏｔｋｒｅｕｚ、スイス）を用いて実施した。全ての化学物質は、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃにより供給された。
【０２９７】
全ての被験動物を使用し、３マイクロメートルの脳組織切片を新しく切り出し、ＳｕｐｅｒＦｒｏｓｔ＋スライド上に収集した。組織切片を脱パラフィン化し、無溶媒条件下（ＥＺｐｒｅｐ溶液）で再水和させて、続いてＥＤＴＡベースの緩衝液（ＣＣ１溶液）中での３２分間の熱回復サイクルによって抗原回復（デマスキング）を実施した。続いて、ＤＩＳＣＯＶＥＲＹ阻害薬（リファレンス０７０１７９４４００１（Ｒｏｃｈｅ））を使用してスライドを４分間ブロックした。抗体希釈剤に１／２０，０００希釈した一次抗体を手作業で組織切片に加え、室温で１時間インキュベートした。短時間の後固定（０．０５％のグルタルアルデヒド）を実施した後、多量体ＵｌｔｒａＭａｐ−抗ウサギＨＲＰ既製抗体（リファレンス０５２６９７１７００１）を１６分間適用した。
【０２９８】
製造者の推奨に従ってＤＩＳＣＯＶＥＲＹ  ＦＩＴＣ（登録商標）を用いて検出を実施した。次に、スライドを９２℃で２０分間熱変性させた後、第２の一次抗体（１／２，０００希釈した抗ＧＦＡＰ）を手作業で適用し、１時間インキュベートした。ＵｌｔｒａＭａｐ−抗ウサギＨＲＰ抗体を再び２０分間使用して、ＤＩＳＣＯＶＥＲＹローダミンキット（リファレンス０７２５９８８３００１）との組み合わせでＧＦＡＰを検出した。
【０２９９】
スライドを洗浄し、Ｐｒｏｌｏｎｇ（登録商標）Ｇｏｌｄ退色防止試薬（リファレンスＰ３６９３１、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、スイス）を使用してマウントし、Ｈａｍａｍａｔｓｕスライドスキャナ機器（ＮａｎｏＺｏｏｍｅｒ  ２．０  ＨＴ、スキャニングソフトウェアＮＤＰ−Ｓｃａｎバージョン２．５、Ｈａｍａｍａｔｓｕ  Ｐｈｏｔｏｎｉｃｓ  Ｆｒａｎｃｅ、Ｓｗｉｓｓ  Ｏｆｆｉｃｅ、Ｓｏｌｏｔｈｕｒｎ、スイス）によって４０倍対物レンズで更にスキャンした。スキャニング設定は、以下のとおりであった：ＤＡＰＩフィルタによる露光時間は、ＦＩＴＣフィルタについても５７ｍｓに設定した。ＴＲＩＴＣフィルタの露光時間（ローダミンの検出）は、１４．２ｍｓに設定した。
【０３００】
二重蛍光免疫組織化学を用いたアミロイド−βプラーク及び活性化ミクログリア細胞の分析
同じ抗体を用いてアミロイドプラークを染色し、Ｗａｋｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＧｍｂＨ（Ｎｅｕｓｓ、ドイツ）からの、抗体希釈剤で１／２００希釈したウサギ抗ＩＢＡ１抗体（リファレンス０１９−１９７４１）を用いてミクログリア細胞を検出した。染色プロトコルは、アミロイド−βプラーク及びアストロサイトのプロトコルと全く同様であった。スライドを同じ設定でスキャンした。
【０３０１】
画像解析
画像解析に基づく定量的プラーク評価のため、ＭＳ  Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｔｕｄｉｏ  ２０１０及びＭａｔｒｏｘ  ＭＩＬ  Ｖ９ライブラリ（Ｍａｔｒｏｘ  Ｉｎｃ、Ｑｕｅｂｅｃ、カナダ）からの多くの機能をベースとして有標の画像解析プラットフォーム（ＡＳＴＯＲＩＡ、自動保存画像解析）を開発した。
【０３０２】
β−アミロイドプラーク及び神経炎症分析のため、以下の一連の工程を実施した：
−  スライドをＨａｍａｍａｔｓｕ  Ｎａｎｏｚｏｏｍｅｒによって４０倍の倍率でスキャンした。各蛍光標識（ＤＡＰＩ、ＦＩＴＣ及びＴＲＩＴＣ）について別個の画像を作成した。
−  緑色ＦＩＴＣチャンネル画像でのＡβプラーク評価用に脳切片において皮質を画定するため手作業でＲＯＩ（関心領域）の輪郭を描き、次に得られた輪郭を他の２つのチャンネル画像にも使用する（得られたｘｍｌファイルをコピーする）。
−  インハウスで開発したＩｍａｇｅＳｃｏｐｅ（Ｖ１２．１．０．５０２９、Ａｐｅｒｉｏ  Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）プラグインを実行して、３つの蛍光チャンネルの各々について＊．ｔｉｆ画像タイル（１０倍の倍率）を作成及びエクスポートする。
【０３０３】
画像バッチ処理：
−  各個別の蛍光チャンネル画像へのアクセスを通じて各切片の組み合わせトゥルーカラー画像（ＤＡＰＩ、ＦＩＴＣ、ＴＲＩＴＣ）を得る。
−  黒色の未染色バックグラウンドからの有効試料（輪郭を描いたＲＯＩの範囲内にある）のセグメンテーション。
−  緑色チャンネル画像（ＦＩＴＣ標識Ａβプラーク）のオブジェクトのセグメンテーションに適応閾値処理法を適用する。
−  緑色（ＦＩＴＣ）チャンネルにおいてシグナルを示す小さ過ぎるデブリの除去後、正しい後続の個々のオブジェクト分析のための接触オブジェクトの分離。
−  形態学的トップハット変換及び閾値処理による赤色チャンネルのＴＲＩＴＣ標識オブジェクト（アストロサイト又はミクログリアを示すＧＦＡＰ又はＩｂａ１染色に特異的）のセグメンテーション。
−  特徴ベースのオブジェクト分類。
【０３０４】
４つのオブジェクトカテゴリ
−  除外すべき非特異的デブリ（ぼやけ過ぎている、小さ過ぎるオブジェクト）
−  小型プラーク（４０〜１０００ピクセル）
−  中型プラーク（１０００〜６５００ピクセル）
−  大型プラーク（＞６５００ピクセル）
【０３０５】
有効プラークに関する幾つかの形態測定上及び濃度測定上の特徴の計算
−  プラーク数
−  非線形的方法での適切な抗体の染色強度の測定及び使用に基づく「比光学濃度」（これは、タンパク質（抗原）濃度の大きさを反映することが記載されている（Ｒａｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９；Ｒｕｉｆｒｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１））
−  ＴＲＩＴＣ＋シグナル対プラーク面積比に基づく「プラーク関連ＧＦＡＰ又はＩｂａ１」、プラーク周囲の拡張円形範囲内にあるＴＲＩＴＣ＋シグナルの比に基づく「近位ＧＦＡＰ又はＩｂａ１」の評価
【０３０６】
結果
【０３０７】
【表２７】
2019524743.tif 000030
【０３０８】
２ヵ月及び４ヵ月の投与後、及び６ヵ月時の試験終了時に化合物１の血中濃度を決定した。表２４に示されるとおり、試験期間中にわたって一定の曝露があり、動物間のばらつきは、平均して１８％（８〜３６％）で許容できるものであった。平均化合物１血中濃度は、０．０３ｇ／ｋｇ餌投与群について０．２５±０．１３μＭ（平均値±ＳＤ）、及び０．３ｇ／ｋｇ投与群について２．１０±０．４７μＭであり、化合物用量の１０倍差と良好に一致した。この試験で観察された曝露は、大まかに毎日５及び４５ｍｇ／ｋｇ経口用量の化合物１に対応した。実験終了時に決定された脳／血液比は、０．０３ｇ／ｋｇ群について２．７、及び０．３ｇ／ｋｇ群について３．３であった。
【０３０９】
ＡＰＰ代謝産物の生化学的決定：マウス脳からのＴｒｉｔｏｎ  ＴＸ−１００可溶性ＡＰＰ代謝産物
脳ホモジネートを緩衝液中１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で抽出し、得られた上清を可溶性形態のＡＰＰ代謝産物に相当すると見なした。Ａβ４０及び４２に加えて、本発明者らは、Ｎ末端ＡＰＰ断片ｓＡＰＰα（α−セクレターゼの直接の切断産物）及びｓＡＰＰβ（Ｓｗｅ）（ＢＡＣＥ１切断の直接の産物）を決定した。表２５に示されるとおり、可溶性Ａβ４０及び４２は非治療群において試験期間中にわたって中程度に（２倍未満）増加する。この年齢でＡＰＰ発現及びＡβ生成の変化が起こることは知られていないため、媒体群（１８〜２０ヵ月齢）の値の増加は、Ａβ沈着からの「漏出」（これは数倍増加する、以下を参照されたい）によって起こることが想定される。また、非治療群では、可溶性ＡＰＰ代謝産物ｓＡＰＰα及びβの値にも有意な変化はなかった。
【０３１０】
低用量（０．０３ｇ化合物１／ｋｇ餌）の化合物１で治療したマウスは、可溶性Ａβ４０及び４２の弱い、但し有意差のない減少並びにｓＡＰＰαの中程度の増加を示した（表２５及び表２６、図１１、図１２及び図１３）。可溶性ＡＰＰβ（Ｓｗｅ）は、有意に２９％減少した（表２５及び表２６、図１４）。０．３ｇ／ｋｇ用量の化合物１で治療したマウスは、Ａβ及びｓＡＰＰβ（Ｓｗｅ）の両方の有意な減少並びにｓＡＰＰαの３倍の増加を示した（表２５及び表２６、図１１、図１２及び図１４）。
【０３１１】
まとめると、化合物１治療は、全ての可溶性ＢＡＣＥ１切断産物の用量依存的減少及びｓＡＰＰαの用量依存的増加を生じさせた。
【０３１２】
【表２８】
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【０３１３】
【表２９】
2019524743.tif 000032
【０３１４】
ＣＳＦ中ＡＰＰ代謝産物
剖検時に全てのマウスからＣＳＦを採取した。ベースライン群の試料は、約６ヵ月間保存し、試験終了時に残りの試料と共に分析した。表２７及び図１５のデータは、ＣＳＦ  Ａβがベースライン群（１２ヵ月齢のＡＰＰ２３マウス）で最も高いが、媒体群（１８ヵ月齢のＡＰＰ２３マウス）では下がることを示している。この媒体群と比較して、０．０３ｇ／ｋｇ餌化合物１治療群ではＣＳＦ  Ａβ４０が非有意に減少し、０．３ｇ／ｋｇ餌化合物１治療群では有意に減少する。高いベースライン値の理由は、現在のところ分かっていない。これは、オリゴマー型のＡβの解離がより高いモノマー濃度につながり得るときの長期保存の効果であると仮定される。ＣＳＦ  Ａβは、脳抽出物からのＴｒｉｔｏｎ  ＴＸ−１００可溶化Ａβよりも、Ａβ生成の変化に直接応答する可溶性アミロイド−βの定常状態濃度を代表する。低い化合物１用量（−４．６〜−２０％）での小さく有意でない治療効果、並びに高い化合物１用量（−４３．７〜−７７％）での顕著で有意な効果は、脳組織から単離された可溶性Ａβ種とＣＳＦ中Ａβ４０との間で非常に類似している。
【０３１５】
【表３０】
2019524743.tif 000033
【０３１６】
前脳内のギ酸可溶性アミロイド−βペプチド
不溶性Ａβ種をギ酸で抽出した後、ＡＰＰ２３マウス脳内の沈着形態のアミロイド−βに対する化合物１の治療効果を調べた。表２８及び表２９及び図１６〜図１９に示されるとおり、媒体群では、ベースラインと比較して沈着Ａβの大幅な増加が観察された。Ａβ４２はＡβ４０より多く増加し（Ａβ４２／４０比は、媒体群で５５％増加した）、そのより高い凝集傾向と一致した。Ａβ４０及びＡβ４２は、低用量の化合物１による治療後に媒体と比較して約１７％の減少を示したが、これは、統計的有意性には達しなかった。抽出材料のＡβ４２／４０比は変化しなかった。高い化合物１治療群では沈着Ａβ４０及びＡβ４２の強力で高度に有意な（約８０％対媒体）減少が観察され、Ａβ４２／４０比が０．０７のベースライン値に戻った。要約すれば、高用量の化合物１による治療は、ＡＰＰ２３マウスのアミロイドβの増加をほぼ完全に阻止した。
【０３１７】
【表３１】
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【０３１８】
【表３２】
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【０３１９】
アミロイド病変及び神経炎症の組織学的評価：プラーク数及びプラーク面積
アミロイドペプチドのＣ末端部を認識する抗Ａβ抗体でＡＰＰ２３脳切片上のアミロイドプラークを染色した。更に詳しいデータ分析のため、ＡＰＰ２３マウスにおける様々な形態のアミロイド−β沈着を「小型」、「中型」及び「大型」プラークに分類した。更に、総免疫染色面積を決定した。定量化結果は、表３０及び表３１及び図２０〜図２３に示す。Ａβ沈着の大多数は、「小型」プラークに分類される一方、「中型」プラークの数は、１０分の１であり、及び「大型」プラークの数は、１００分の１であった。全ての形態のプラークの数は、媒体群では試験期間中に約４〜６倍増加し、総プラーク面積についても同じことが観察された。化合物１による治療は、この増加を低用量治療群で約２５％、及び高用量治療群で約６０％減少させた。媒体群におけるＡβの増加及び０．３ｇ／ｋｇ餌化合物１治療群における効果は、組織学的分析では生化学的決定と比較して低い。二次元組織学的分析は、実際には三次元の全てで起こるプラーク容積変化を完全には再現しないこともある。
【０３２０】
【表３３】
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【０３２１】
【表３４】
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【０３２２】
活性化アストロサイトに対する効果
ＧＦＡＰ（グリア線維性酸性タンパク質）は、静止アストロサイトにも活性化アストロサイトにも見られる。ＧＦＡＰ免疫応答性は、多くの場合にアストロサイト数及び活性化のマーカーとして使用される。ＡＰＰ２３マウスでは、正規化ＧＦＡＰ陽性面積がマウスの年齢と共に約２倍増加し、この増加は、化合物１治療によって用量依存的に減少した（表３２及び表３３及び図２４〜図２８）。ＧＦＡＰ免疫応答性をアミロイドプラークとの関連性に関して更に分析した（ＩＢＡ１免疫応答性と同様に実施した）。この分析は、ＧＦＡＰ免疫応答性の大部分が非プラーク関連（遠位）であり、１０％のみがプラーク関連又は近位であることを示している。プラーク関連及び近位ＧＦＡＰ免疫応答性の割合が媒体群で増加したことから、アミロイドプラークのごく近傍におけるアストロサイト数／活性化の優勢な増加が示唆される。遠い非プラーク関連ＧＦＡＰ陽性染色について、加齢による増加は低かった。化合物１治療の効果も、プラーク関連及び非プラーク関連ＧＦＡＰ免疫応答性間で異なった。プラーク関連／近位ＧＦＡＰ免疫応答性に対する効果は、非プラーク関連／遠位染色に対するよりも強力であった。これらのデータは、化合物１がＧＦＡＰ染色に対するその効果を主にアミロイドプラークの直ちに近傍に、恐らくプラーク自体に対する効果によって及ぼすことを示唆している。
【０３２３】
【表３５】
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【０３２４】
【表３６】
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【０３２５】
ＩＢＡ１陽性ミクログリアに対する効果
ＩＢＡ１（イオン化カルシウム結合アダプター分子１）は、ミクログリア／マクロファージ特異的タンパク質である。ＩＢＡ１免疫応答性は、多くの場合にミクログリア数及び活性化のマーカーとして使用される。ＡＰＰ２３マウスでは、正規化ＩＢＡ１陽性面積がマウスの年齢と共に約５倍増加し、この増加は、化合物１治療によって用量依存的に減少した（表３４及び表３５）。ＩＢＡ１免疫応答性をアミロイドプラークとの関連性に関して更に分析した。この分析は、ＩＢＡ１免疫応答性の約７５％が非プラーク関連（遠位）であり、２５％のみがプラーク関連又は近位であることを示している。プラーク関連及び近位ＩＢＡ１免疫応答性の割合は媒体群で増加した。それより程度は低いが、遠い非プラーク関連ＩＢＡ１陽性染色もマウスの年齢と共に増加した。化合物１治療の効果もプラーク関連及び非プラーク関連ＩＢＡ１免疫応答性間で異なった。プラーク関連／近位ＩＢＡ１免疫応答性に対する効果は強力で有意であった。非プラーク関連／遠位染色に対して有意な効果は見られなかった。これは、図２９〜図３３に更に示され、プラーク面積と比べた総ＩＢＡ１染色及びプラーク関連ＩＢＡ１染色の効果が示される。これらのデータは、化合物１がＩＢＡ１染色に対するその効果を主にアミロイドプラークの直ちに近傍に、恐らくプラーク自体に影響を与えることによって及ぼすことを示唆している。プラークに対する効果は、プラークから遠いミクログリア活性化／数（これは、ＩＢＡ１＋免疫応答性の大部分である）にそれほど強く影響を及ぼさない。
【０３２６】
【表３７】
2019524743.tif 000040
【０３２７】
【表３８】
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【０３２８】
実施例８：ＡＤの臨床症状の発生リスクがある参加者における化合物１の有効性を評価する無作為化、二重盲検、プラセボ対照試験の概要
本明細書に記載する臨床試験では、認知が実質的に悪化する可能性がより高い個体を妥当なタイムフレームで選択するための予後診断強化戦略として、臨床試験セッティング内で実際的に評価することのできるＡｐｏＥ４ホモ接合体の同定を利用する。この試験は、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖにＮＣＴ０２５６５５１１識別コードで収載されている。代替として、本実施例は、認知障害のないＡｐｏＥ４保因者（ホモ接合体；又は脳アミロイドの更なる高濃度化（「アミロイド陽性」）が例えばＰＥＴ又はＣＳＦ測定により決定されたヘテロ接合体）、６０〜７５歳、１日１回経口用量の１５又は５０ｍｇ化合物１で行われてもよい。この試験は、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖにＮＣＴ０３１３１４５３識別コードで収載されている。
【０３２９】
計画された臨床試験における少なくとも５年の治療期間中、参加者の大部分がＡＤに起因する軽度認知障害（ＭＣＩ）又は認知症と診断されるであろうことが予想される。これらの診断の大多数は、ＭＣＩであると予想され、ＭＣＩは、認知症の診断に２〜４年先行すると予想される。
【０３３０】
【表３９】
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【０３３１】
【表４０】
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【０３３２】
【表４１】
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【０３３３】
【表４２】
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【０３３４】
【表４３】
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【０３３５】
【表４４】
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【０３３６】
【表４５】
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【０３３７】
実施例９：単独投与時及び強力なＣＹＰ３Ａ４阻害薬イトラコナゾール又は強力なＣＹＰ３Ａ４誘導薬リファンピシンとの併用投与時の化合物１の薬物動態のヒト試験における
健常ボランティアでの薬物間相互作用（ＤＤＩ）試験において、化合物１のＰＫに対する強力なＣＹＰ３Ａ４阻害薬（イトラコナゾール）及び強力なＣＹＰ３Ａ４誘導薬（リファンピシン）の効果を判定した。ＤＤＩ試験設計の概要は、図３４に示す。２００ｍｇ  ｑ．ｄ．の用量のイトラコナゾールは、化合物１と共に投与したとき、化合物１を単独で投与したときと比較して化合物１の平均ＡＵＣを２〜３倍増加させ、化合物１の平均Ｃｍａｘを２５％増加させた（表３７）。６００ｍｇ  ｑ．ｄ．の用量のリファンピシンは、化合物１と共に投与したとき、化合物１を単独で投与したときと比較して化合物１の平均ＡＵＣを５〜６倍低下させ、化合物１の平均Ｃｍａｘを２．５倍低下させた（表３８）。結論として、第１相研究における化合物１曝露に対する強力なＣＹＰ３Ａ４誘導薬及び強力なＣＹＰ３Ａ４阻害薬の効果は、ＣＹＰ３Ａ４／５が化合物１の排出に大きい重要性を有することを示している。
【０３３８】
【表４６】
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【０３３９】
【表４７】
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【０３４０】
実施例１０：健常高齢ＡｐｏＥ４ヘテロ接合体及びＡｐｏＥ４非保因者における化合物１による治療に応答したベースラインからのＡβ４２／Ａβ４０比の変化量の判定
脳内Ａβ沈着の増加は、確立されたＰＥＴトレーサー、例えば１１Ｃ−ピッツバーグ化合物Ｂ、１８Ｆ−フロルベタベン、又は１８Ｆ−フルテメタモルを使用した皮質ＡβのＰＥＴイメージングにより、またＣＳＦ  Ａβ１−４２の低下としても決定することができる。幾つかの試験が、脳内アミロイド−β病変の検出についてＰＥＴイメージングとＣＳＦ  Ａβ１−４２分析との間の高い一致を示している（Ｗｅｉｇａｎｄ  ＳＤ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｂａｒｔｈｅｌ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｓｃｈｉｐｋｅ  ＣＧ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７）。この相関は、ＣＳＦ  Ａβ１−４２の減少が脳内のアミロイド−β沈着が増加した結果であることを示唆している。Ａβ１−４２と対照的に、皮質アミロイド沈着物に蓄積しにくいＡβ１−４０のＣＳＦ濃度は、高い皮質アミロイド−β負荷を有する患者であっても事実上一定のままである。これと一致して、Ａβ１−４２単独の代わりにＣＳＦ  Ａβ１−４２／Ａβ１−４０比を使用したとき、よりロバストなＰＥＴ−ＣＳＦ相関が得られることが実証されている（Ｐａｎｎｅｅ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；Ｊａｎｅｌｉｄｚｅ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。脳内アミロイド−β病変の検出の診断ツールとしてＡβ１−４２／Ａβ１−４０比を使用することは十分に確立されているが、抗アミロイド剤による治療に応答したこのパラメータの変化についてはこれまで記載がない。
【０３４１】
実施例５に記載する健常高齢対象における完了した３ヵ月用量範囲探索安全性及び忍容性臨床試験において、初回投与前（ベースライン）及び３ヵ月の複数回投与後に腰椎穿刺を用いてＣＳＦ中Ａβ４０及びＡβ４２濃度を得た。多数の対象が、皮質アミロイド沈着を示すものである正常値未満（０．０９のカットオフ未満）のベースラインＣＳＦ  Ａβ４２／Ａβ４０を有することが分かった。比が０．０９未満の対象の割合は、非保因者（１５％）と比較してＡｐｏＥ４保因者（３３％）の群で高い。これは、ＡｐｏＥ４保因者のアミロイドーシス発症リスクが高いことと一致する。
【０３４２】
０．０９未満のベースラインＣＳＦ  Ａβ４２／Ａβ４０比を有する対象において、化合物１による３ヵ月の治療の終了時におけるＣＳＦ  Ａβ４２／Ａβ４０比を決定した、図３５。化合物１による治療により、同じ対象のベースライン値と比較してＡβ４２／Ａβ４０比が用量依存的に増加したことが分かった。Ａβ４２／Ａβ４０比の増加は、ＡｐｏＥ４アレルの保因者及び非保因者の両方の治療への応答に認められた。具体的には、３５ｍｇ及び８５ｍｇ１日用量により、Ａβ４２／Ａβ４０比の１．３６倍（ｐ＜０．０１対プラセボ）及び１．４６倍（ｐ＜０．０１対プラセボ）の増加が生じた。
【０３４３】
この結果は、より高用量の化合物１で治療した対象の皮質アミロイド−β負荷の減少に対応した、脳からＣＳＦへのＡβ４２の輸送の増加を示すものである。皮質アミロイド−β負荷の減少は、化合物１がＡｐｏＥ４アレルの保因者及び非保因者の両方においてＡＤに特有のアミロイド病変を修飾する能力を有し、従ってこれらの患者群のいずれにおいてもＡＤの予防に有効であると予想されることを示している。
【０３４４】
参考文献
Ａｌｂｅｒｔ  ＭＳ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｔｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ｍｉｌｄ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  ｄｕｅ  ｔｏ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｎ  Ａｇｉｎｇ−Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｏｒｋｇｒｏｕｐｓ  ｏｎ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｅｍｅｎｔ；７：２７０−９．
Ｂａｒｔｈｅｌ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｃｅｒｅｂｒａｌ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ＰＥＴ  ｗｉｔｈ  ｆｌｏｒｂｅｔａｂｅｎ（１８Ｆ）ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｈｅａｌｔｈｙ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ：ａ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ  ｐｈａｓｅ  ２  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｓｔｕｄｙ．Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ．，１０：４２４−４３５．
Ｃａｒｌｓｓｏｎ  ＡＣ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｓｅｖｅｎ  ｍｏｄｉｆｉａｂｌｅ  ｌｉｆｅｓｔｙｌｅ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｐｒｅｄｉｃｔ  ｒｅｄｕｃｅｄ  ｒｉｓｋ  ｆｏｒ  ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ａｌｌ−ｃａｕｓｅ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｒｅｇａｒｄｌｅｓｓ  ｏｆ  ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ：Ａ  ｃｏｈｏｒｔ  ｓｔｕｄｙ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ；１６８：９４６−９５２．
Ｃａｓｔｅｌｌａｎｏ  ＪＭ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｈｕｍａｎ  ａｐｏＥ  Ｉｓｏｆｏｒｍｓ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅ  Ｂｒａｉｎ  Ａｍｙｌｏｉｄ−ｂ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｃｌｅａｒａｎｃｅ．Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ；３（８９）：８９ｒａ５７）．
Ｃｏｒｄｅｒ  ＥＨ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｇｅｎｅ  ｄｏｓｅ  ｏｆ  ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅ  ｔｙｐｅ  ４  ａｌｌｅｌｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  ｌａｔｅ  ｏｎｓｅｔ  ｆａｍｉｌｉｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ；２６１（５１２３）：９２１−３．
Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  ＪＬ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｄｒｕｇ−ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｐｉｐｅｌｉｎｅ：ｆｅｗ  ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ，ｆｒｅｑｕｅｎｔ  ｆａｉｌｕｒｅｓ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｔｈｅｒａｐｙ；６：３７．
Ｆａｒｉａｓ  ＳＴ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｔｈｅ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｅｖｅｒｙｄａｙ  ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ（ＥＣｏｇ）：Ｓｃａｌｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｐｓｙｃｈｏｍｅｔｒｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｙ；２２（４）：５３１−５４４．
Ｆｏｌｓｔｅｉｎ  ＭＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７５）Ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｇｒａｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｓｔａｔｅ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃｉａｎ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔ．Ｒｅｓ．；１２：１８９−１９８．
Ｆｏｒｌｅｎｚａ  ＯＶ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｃｃｕｒａｃｙ  ａｎｄ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｅｍｅｎｔｉａ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｅｍｅｎｔ．（Ａｍｓｔ）；１（４）：４５５−４６３．
Ｆｏｓｔｅｒ  ＮＬ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）ＦＤＧ−ＰＥＴ  Ｉｍｐｒｏｖｅｓ  Ａｃｃｕｒａｃｙ  ｉｎ  Ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｉｎｇ  Ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ  ａｎｄ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｂｒａｉｎ；１３０（１０）：２６１６−２６３５．
Ｇｅｎｉｎ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）ＡｐｏＥ  ａｎｄ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ：Ａ  ｍａｊｏｒ  ｇｅｎｅ  ｗｉｔｈ  ｓｅｍｉ−ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ．Ｍｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ；１６（９）：９０３−９０７．
Ｈａｒａｄａ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１６）１８Ｆ−ＴＨＫ５３５１：Ａ  Ｎｏｖｅｌ  ＰＥＴ  Ｒａｄｉｏｔｒａｃｅｒ  ｆｏｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．；５７（２）：２０８−２１４．
Ｈｅａｄ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  Ｄｏｗｎ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒ．Ｄｉｓ．；１（３）：３５３−３６４．
Ｈｅｒｓｋｏｖｉｔｚ  ＡＺ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ａ  Ｌｕｍｉｎｅｘ  ａｓｓａｙ  ｄｅｔｅｃｔｓ  ａｍｙｌｏｉｄ  β  ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ．ＰＬｏＳ  ＯＮＥ；８（７）：ｅ６７８９８．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００６７８９８．
Ｊａｎｅｌｉｄｚｅ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１６）Ｓｗｅｄｉｓｈ  ＢｉｏＦＩＮＤＥＲ  ｓｔｕｄｙ  ｇｒｏｕｐ，Ｈａｎｓｓｏｎ  Ｏ．ＣＳＦ  Ａβ４２／Ａβ４０  ａｎｄ  Ａβ４２／Ａβ３８  ｒａｔｉｏｓ：ｂｅｔｔｅｒ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｎｎ  Ｃｌｉｎ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｎｅｕｒｏｌ．３（３）：１５４−６５．
Ｊａｎｓｅｎ  ＷＪ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ  ｏｆ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ｉｎ  ｐｅｒｓｏｎｓ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｄｅｍｅｎｔｉａ：ａ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ  ＪＡＭＡ；３１３（１９）：１９２４−３８．
Ｋａｕｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００））Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＮＰＩ−Ｑ，ａ  ｂｒｉｅｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｆｏｒｍ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  Ｃｌｉｎ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ；１２：２３３−２３９
Ｋｎｏｕｆｆ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ａｐｏ  Ｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ  ＶＬＤＬ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ａｎｄ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｒｉｓｋ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．；１０３（１１）：１５７９−１５８６）．
Ｋｒａｍｐ  ＶＰ，Ｈｅｒｒｌｉｎｇ  Ｐ，（２０１１）Ｌｉｓｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ：Ｕｐｄａｔｅ  Ｊｕｎｅ  ２０１０．Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  Ｄｉｓ．；８：４４−９４．
Ｌａｎｇｂａｕｍ  ＪＢ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ａｎ  ｅｍｐｉｒｉｃａｌｌｙ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｔｅｓｔ  ｓｃｏｒｅ  ｗｉｔｈ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｐｏｗｅｒ  ｔｏ  ｔｒａｃｋ  ａｎｄ  ｅｖａｌｕａｔｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｅｍｅｎｔ．；１０（６）：６６６−７４．
Ｌｉｕ  ＣＣ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅ  ａｎｄ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｒｉｓｋ，ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｌ．；９：１０６−１１８．
Ｌｏｇｓｄｏｎ  ＲＧ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  ｌｉｆｅ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：Ｐａｔｉｅｎｔ  ａｎｄ  ｃａｒｅｇｉｖｅｒ  ｒｅｐｏｒｔｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｈｅａｌｔｈ＆Ａｇｉｎｇ；５（１）：２１−３２．
Ｌｕｏ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）ＣＹＰ３Ａ４  Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃｓ：Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｉｍｐａｃｔ  ｏｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ；５：４８３−５０５
Ｍａｔｔｓｓｏｎ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ  Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ  Ｆｌｕｉｄ  β−Ａｍｙｌｏｉｄ  ４２  ｉｎ  Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅｌｙ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｃｏｎｔｒｏｌｓ．ＪＡＭＡ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ；７２（５）：５５４−５６０．
ＭｃＫｈａｎｎ  ＧＭ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｔｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ｄｅｍｅｎｔｉａ  ｄｕｅ  ｔｏ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ−Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｏｒｋｇｒｏｕｐｓ  ｏｎ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ａｎｄ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ；７：２６３−２６９．
Ｍｅｄｉｎａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）Ｎｅｗ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔａｕ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．；８８（４）：５４０−５４７．
Ｍｏｒｒｉｓ  ＪＣ，（１９９３）Ｔｈｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ  Ｒａｔｉｎｇ（ＣＤＲ）：Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｃｏｒｉｎｇ  ｒｕｌｅｓ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ；４３：２４１２−２４１４．
Ｎｅｕｍａｎｎ  Ｕ．ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ａ  ｎｏｖｅｌ  ＢＡＣＥ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＮＢ−３６０  ｓｈｏｗｓ  ａ  ｓｕｐｅｒｉｏｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｆｉｌｅ  ａｎｄ  ｒｏｂｕｓｔ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ−β  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ＡＰＰ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；１０：４４．
Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ＲＪ，Ｗｏｎｇ  ＰＣ，（２０１１）Ａｍｙｌｏｉｄ  Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ａｎｄ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．；３４：１８５−２０４．
Ｐａｌｍｑｖｉｓｔ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１６）Ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｄｅｔｅｃｔｓ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ａｍｙｌｏｉｄ−β  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｅａｒｌｉｅｒ  ｔｈａｎ  ｐｏｓｉｔｒｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ．Ｂｒａｉｎ；１３９：１２２６−１２３６．
Ｐａｎｎｅｅ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１６）Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ  ｆｏｒ  ＣＳＦ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ（Ａβ）１−４２  ａｎｄ  ｔｈｅ  ＣＳＦ  Ａβ１−４２  ／Ａβ１−４０  ｒａｔｉｏ−ａ  ｃｒｏｓｓ−ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ａｍｙｌｏｉｄ  ＰＥＴ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ；１３９（４）：６５１−６５８．
Ｐｏｓｎｅｒ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｔｈｅ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ−Ｓｕｉｃｉｄｅ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｒａｔｉｎｇ  Ｓｃａｌｅ：Ｉｎｉｔｉａｌ  Ｖａｌｉｄｉｔｙ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  Ｆｒｏｍ  Ｔｈｒｅｅ  Ｍｕｌｔｉｓｉｔｅ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  Ｗｉｔｈ  Ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ａｄｕｌｔｓ．Ａｍ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ；１６８：１２６６−１２７７．
Ｒａｈｉｅｒ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｉｓｓｕｅ  ｓｅｃｔｉｏｎｓ  ｂｙ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｒｙ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ；６１：３５７−３６３．
Ｒａｎｄｏｌｐｈ  Ｃ，（１９９８）Ｔｈｅ  Ｒｅｐｅａｔａｂｌｅ  Ｂａｔｔｅｒｙ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔａｔｕｓ（ＲＢＡＮＳ）．Ｐｅａｒｓｏｎ；Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ．
Ｒａｖｅｎ  ＪＣ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｓｔａｎｄａｒｄ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｍａｔｒｉｃｅｓ−１９９２  ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｒａｖｅｎ  ｍａｎｕａｌ：Ｓｅｃｔｉｏｎ  ３．Ｏｘｆｏｒｄ  Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｓｔｓ  Ｐｒｅｓｓ；Ｏｘｆｏｒｄ．
Ｒａｖｅｎ  ＪＣ，（２０００）Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  Ｍａｔｒｉｃｅｓ−１９９８  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｕｐｄａｔｅｄ  ２０００．Ｍａｎｕａｌ  ｆｏｒ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  Ｍａｔｒｉｃｅｓ（Ｓｅｃｔｉｏｎ  ３）：ＮＣＳ  Ｐｅｒｓｏｎ，Ｉｎｃ．；Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ．
Ｒｕｉｆｒｏｋ  ＡＣ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｓｔａｉｎｉｎｇ  ｂｙ  ｃｏｌｏｒ  ｄｅｃｏｎｖｏｌｕｔｉｏｎ．Ａｎａｌ  Ｑｕａｎｔ．Ｃｙｔｏｌ．Ｈｉｓｔｏｌ．；２３：２９１−２９９．
Ｓｃｈｉｐｋｅ  ＣＧ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１７）Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｌｏｒｂｅｔａｂｅｎ  ＰＥＴ  ｉｍａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｅｐｔｉｄｅ  Ａβ４２  ｉｎ  ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２６５）：９８−１０１．
Ｓｃｈｒａｄｅｒ−Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｇ，Ｐａｇａｎｅｔｔｉ  ＰＡ，（１９９６）Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｌｋａｌｉｚｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  β−ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；７１６（１−２）：９１−１００．
Ｓｃｈｒａｄｅｒ−Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｙｓｏｓｏｍａｌ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ａｍｙｌｏｉｄ  Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｄｕｃｅｓ  Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｏｆ  βＡ４．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ６８（４）：１５７１−１５８０．
Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１５）Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  Ｖｉｓｕａｌ  ａｎｄ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  Ｆｌｏｒｂｅｔａｐｉｒ  Ｆ  １８  Ｐｏｓｉｔｒｏｎ  Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ  Ｍｉｌｄ  Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  Ｏｕｔｃｏｍｅｓ．ＪＡＭＡ  Ｎｅｕｒｏｌ．；７２（１０）：１１８３−１１９０．
Ｓｅｖｒｉｏｕｋｏｖａ  ＩＦ，Ｐｏｕｌｏｓ  ＴＬ，（２０１５）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ  ａｎｄ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ  Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０  ３Ａ４−Ｌｉｇａｎｄ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．；８５１：８３−１０５．
Ｓｈｅｉｋｈ  ＪＩ，Ｙｅｓａｖａｇｅ  ＪＡ，（１９８６）Ｇｅｒｉａｔｒｉｃ  Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｃａｌｅ（ＧＤＳ）．Ｒｅｃｅｎｔ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｓｈｏｒｔｅｒ  ｖｅｒｓｉｏｎ．Ｉｎ  Ｔ．Ｌ．Ｂｒｉｎｋ（Ｅｄ．），Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ（ｐｐ．１６５−１７３）．ＮＹ：Ｔｈｅ  Ｈａｗｏｒｔｈ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．
Ｓｈｉｍｓｈｅｋ  ＤＲ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１６）Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ＢＡＣＥ１  ａｎｄ  ＢＡＣＥ２  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｓ  Ｈａｉｒ  ｄｅｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ＰＭＥＬ１７  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．；６：２１９１７；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｒｅｐ２１９１７．
Ｓｐｅｒｌｉｎｇ  ＲＡ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｔｏｗａｒｄ  ｄｅｆｉｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔａｇｅｓ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｎ  Ａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｏｒｋｇｒｏｕｐ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ；７（３）：２８０−２９２．．
Ｓｔｕｒｃｈｌｅｒ−Ｐｉｅｒｒａｔ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｔｗｏ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌｓ  ｗｉｔｈ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ−ｌｉｋｅ  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．；９４（２４）：１３２８７−１３２９２．
Ｔｈｏｒｇｒｉｍｓｅｎ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｗｈｏｓｅ  Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ  Ｉｓ  Ｉｔ  Ａｎｙｗａｙ？  Ｔｈｅ  Ｖａｌｉｄｉｔｙ  ａｎｄ  Ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ−Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ（Ｑｏｌ−ＡＤ）Ｓｃａｌｅ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｄｉｓ．Ａｓｓｏｃ．Ｄｉｓｏｒｄ．；１７：２０１−２０８．
Ｖｌａｓｓｅｎｋｏ  ＡＧ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）ＰＥＴ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｉｎ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ；１８２２（３）：３７０−３７９．
Ｗｅｉｇａｎｄ  ＳＤ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１），Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ  Ａｂｅｔａ４２  ｍｅａｓｕｒｅｓ  ｉｎｔｏ  ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｂ  ｕｎｉｔｓ  ｏｆ  ｂｒａｉｎ  Ａｂｅｔａ  ａｍｙｌｏｉｄ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｅｍｅｎｔ：Ｊ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ａｓｓｏｃ．，７：１３３−１４１．
【０３４５】
本明細書に引用される全ての参考文献、例えば科学刊行物又は特許出願公報は、各参考文献があらゆる目的から全体として参照により援用されることが具体的且つ個別的に指示されたものとみなすのと同程度に全体として及びあらゆる目的から参照により本明細書に援用される。前述の本発明は、理解を明確にするための例示及び実施例としていくらか詳細に記載されているが、当業者には、本発明の教示を踏まえれば、それに対して添付の特許請求の範囲の趣旨又は範囲から逸脱することなく特定の変更形態及び修正形態がなされ得ることは容易に明らかであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【国際調査報告】
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