(57)【要約】  キラーＩｇＧ受容体（ＫＩＲ）の細胞外部分に結合する、天然のヒトレパートリー由来のモノクローナル抗体、ならびにその医薬用組成物および動物用組成物は、ヒトおよび他の対象者における癌を治療するのに有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抑制性キラーＩｇＧ様４０受容体（ＫＩＲ）の細胞外部分に結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）であって、
（ａ）  ＴＲＬ８５０４の重鎖可変領域（配列番号１）のＣＤＲｓ；
（ｂ）  ＴＲＬ８５０７の重鎖可変領域（配列番号３）のＣＤＲｓ；
（ｃ）  ＴＲＬ８６０５の重鎖可変領域（配列番号５）のＣＤＲｓ；または
（ｄ）  ＴＲＬ８６０８の重鎖可変領域（配列番号７）のＣＤＲｓ
を含むｍＡｂ。
【請求項２】
請求項１に記載のｍＡｂであって、
ＴＲＬ８５０４の軽鎖可変領域（配列番号２）のＣＤＲをさらに含む（ａ）のｍＡｂ；
ＴＲＬ８５０７の軽鎖可変領域（配列番号４）のＣＤＲをさらに含む（ｂ）のｍＡｂ；
ＴＲＬ８６０５の軽鎖可変領域（配列番号６）のＣＤＲをさらに含む（ｃ）のｍＡｂ；または
ＴＲＬ８６０８の軽鎖可変領域（配列番号８）のＣＤＲをさらに含む（ｄ）のｍＡｂ。
【請求項３】
請求項１に記載のｍＡｂであって、
（ａ）  ＴＲＬ８５０４の重鎖可変領域（配列番号１）；
（ｂ）  ＴＲＬ８５０７の重鎖可変領域（配列番号３）；
（ｃ）  ＴＲＬ８６０５の重鎖可変領域（配列番号５）；または
（ｄ）  ＴＲＬ８６０８の重鎖可変領域（配列番号７）
を含むｍＡｂ。
【請求項４】
請求項３に記載のｍＡｂであって、
ＴＲＬ  ８５０４の軽鎖可変領域（配列番号２）をさらに含む（ａ）のｍＡｂ；
ＴＲＬ  ８５０７の軽鎖可変領域（配列番号４）をさらに含む（ｂ）のｍＡｂ；
ＴＲＬ  ８６０５の軽鎖可変領域（配列番号６）をさらに含む（ｃ）のｍＡｂ；または
ＴＲＬ  ８６０８の軽鎖可変領域（配列番号８）をさらに含む（ｄ）のｍＡｂ。
【請求項５】
Ｆｖ抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、種化（ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｚｅｄ）抗体、または前記可変領域に対して異種の一般的な定常領域を含む完全抗体である、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載のｍＡｂ。
【請求項６】
請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載のｍＡｂを別々にまたは組み合わせてコードする、１つまたは複数の単離された核酸。
【請求項７】
請求項６に記載の１つまたは複数の核酸を含む、１つまたは複数の組換えベクター。
【請求項８】
請求項７に記載の１つまたは複数のベクターを含む細胞。
【請求項９】
請求項８に記載の細胞を培養し、産生されたｍＡｂを回収することを含んでなる、ＫＩＲの細胞外部分に結合するｍＡｂの製造方法。
【請求項１０】
対象者における癌を治療する方法で使用するための、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載のｍＡｂ。
【請求項１１】
請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載のｍＡｂを、少なくとも１つの賦形剤と共に含有する、医薬用組成物または動物薬用組成物。
【請求項１２】
追加の抗腫瘍剤をさらに含む、請求項１１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年６月３０日に出願された米国仮特許出願第６２／３５６，８１５号からの優先権を主張する。上記出願の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、免疫チェックポイントモジュレーター（ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ：ＩＣＭ）として作用する物質および方法に関する。より具体的には、本発明は、抑制性のキラー免疫グロブリン様受容体（Ｋｉｌｌｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＫＩＲ）ファミリーのシグナル伝達を低下させることによって、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）による腫瘍細胞の殺傷を増強する抗体に関する。本発明はまた、そのような作用物質の製薬学的用途、ならびにトランスフェクトした細胞株を用いてそのような作用物質を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
過去２０年間にわたり、癌に対する抗体治療薬の発見は、腫瘍細胞に関連するタンパク質（腫瘍関連抗原としても知られる）に焦点が当てられてきた。ＶＥＧＦ、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、およびＣＤ２０を標的とするものを含む、いくつかのそのような抗腫瘍抗体医薬が商品化されている。腫瘍関連抗原に対する自然免疫応答が非常に変化しやすいことにより、外因性のこれらの抗体の供給が必要となっている。この変化のしやすさは、一部には、腫瘍が免疫抑制因子を分泌することに起因している。
【０００４】
過去５年間で、免疫系を刺激することにより作用し、それによって癌と闘う身体の自然な能力を向上させる、新しいクラスの癌治療薬が臨床的に開発されている。このクラスの治療薬は、免疫チェックポイントモジュレーター（ＩＣＭ）として知られている。これまでのところ、このクラスの薬物全ては、それ自体が抗体であり、例えば、承認薬であるヤーボイ（Ｙｅｒｖｏｙ（商標））（イピリムマブ）、オプジーボ（Ｏｐｄｉｖｏ（商標））（ニボルマブ）、およびキイトルーダ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（商標））（ペンブロリズマブ）が含まれており、それぞれの標的はＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１である。これらのＩＣＭ抗体は、免疫系に対するブレーキを一時的に解除することによって、腫瘍により誘発される免疫抑制に対抗している。ＩＣＭ薬は、免疫抑制因子を分泌することが多いメラノーマの治療に特に有効であることが判明している。
【０００５】
これらの第一世代ＩＣＭ抗体の組み合わせにより効果が増強されることが臨床的に観察されているが、これと同時に自己免疫疾患に似た毒性が増加する。したがって、さらなる改善は、免疫系刺激の悪影響を最小限に抑えながら、抗腫瘍免疫を強化する薬剤の組み合わせを同定することにかかっている。ＩＣＭ活性を有する天然のヒト抗体に基づくモノクローナル抗体は、良好な寛容性を示すように既に自然に選択されているため、特に興味深い。そのような抗体は、特定のＩＣＭ標的に、またはそれらの標的上の特定のエピトープに、優先的に結合することができる。学術論文には、２０種を超える潜在的なＩＣＭ標的が記載されている。
【発明の概要】
【０００６】
本発明のＩＣＭ標的は、１７種類の遺伝子（２種類の偽遺伝子を含む）を含む、キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）ファミリーのメンバーである。
【０００７】
米国特許第９，０１８，３６６号は、マウスハイブリドーマに由来するＫＩＲファミリーに対するいくつかのモノクローナル抗体を開示している。本明細書に開示される、天然のヒト免疫レパートリーに由来する抗体は、‘３６６特許に記載された抗体とは異なっている。
【０００８】
発明の開示
本発明は、ヒト免疫系のメモリーＢ細胞コンパートメント内の希少抗体（特異性と親和性によって定義される）に基づいたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を提供する。驚くべきことに、天然の抗体が、癌がない健康な血液ドナーにおいて同定され、該ドナーからクローニングされた。すなわち、ＩＣＭ抗体の投与によって代表されるこの薬理学的アプローチに対応する作用が天然にも存在し、このことは、健康な個体では初期の腫瘍が免疫系によって排除されるという長期にわたる免疫監視機構（ｉｍｍｕｎｅ  ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ）の概念と一致している。ＩＣＭ標的に対する高親和性抗体を産生するメモリーＢ細胞が低頻度であることもまた、天然のＩＣＭ機構が一過性であり、長期の自己免疫疾患をもたらすことなくメモリーＢ細胞レパートリーにフットプリントを残していくことを示唆している。
【０００９】
したがって、本発明のｍＡｂは、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）上に発現したＫＩＲファミリーに対する天然のヒト抗体に基づいている。多くの腫瘍は、細胞傷害性Ｔ細胞からの攻撃を逃れるために、主要組織適合遺伝子複合体（Ｍａｊｏｒ  Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｃｏｍｐｌｅｘ：ＭＨＣ）クラスＩ分子の発現をダウンレギュレートしている。しかし、これにより、「自己性の喪失」（ｍｉｓｓｉｎｇ  ｓｅｌｆ）の認識として知られるプロセスを介したＮＫ細胞による細胞溶解への感受性が増大する。いくつかのＫＩＲファミリーのメンバーによるヒトＭＨＣ（ＨＬＡ抗原）の会合は、健康な細胞にとっては有用な、ＮＫ細胞媒介細胞傷害性を妨げる抑制性のシグナル伝達をもたらす。抑制性ＫＩＲのそれらのＨＬＡリガンドへの結合を遮断する抗体は、腫瘍細胞のＮＫ媒介殺傷を増強するのに有用である。
【００１０】
一態様では、本発明は、ＫＩＲファミリーのメンバーを標的とする、単離された天然ヒト抗体に由来しかつ組換え的に産生されたモノクローナル抗体に関する。本発明の抗体は、単離された該抗体の可変領域を含み得るが、一般的に、完全抗体の形態で産生された場合には、単離された形態に生来でない一般的（ｇｅｎｅｒｉｃ）な定常領域を含むことができる。さらに、ｍＡｂは、Ｆｖ抗体を含む抗原結合フラグメントのみの形態であってもよい。それらはまた、いずれかの特定の種の抗体に類似するように改変することもでき、すなわち、イヌ、ネコ、例えばウシ、ヒツジ及びブタなどの家畜、ならびにウマ種など獣医学的に関心のある種を含む種に、「種化」（ｓｐｅｃｉｅ−ｉｚｅｄ）することができる。
【００１１】
本発明はまた、これらの抗体を産生するための組換え材料、それらの産生方法、および癌を治療するための使用方法に関する。したがって、医薬用組成物および動物用（ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ）組成物も含まれる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本明細書に開示される抗体などのヒト関連抗体は、有効性の観点（健康なドナーからクローン化されたものに基づいている）と安全性の観点（毒性を生じさせるオフターゲット反応性の可能性の減少）の両方から特に好ましいものである。天然のヒトレパートリーにおける、特定の標的に対するヒト抗体の頻度は、典型的には、免疫化マウスのレパートリーおけるそれよりも数桁低い。したがって、何百万もの個々の抗体産生ヒトＢリンパ球を詳しく調べることができるハイスループット技術が必要とされる。ヒトＢ細胞は生体外で非常に限られた寿命（１０日未満）を有するので、この技術もその時間内で行われなければならない。
【００１３】
本発明の抗体のベースとなる抗体は、以前に記載されたＣｅｌｌＳｐｏｔ（商標）技術（米国特許第７，４１３，８６８号および第７，９３９，３４４号；参照により本明細書に組み込まれる）を用いて同定された。このアッセイ方法は、ＥＬＩＳＡと同等のアッセイを、単一細胞から該細胞の近くにフットプリントとして分泌されたＩｇＧを捕捉することによってほぼ単一細胞の寸法の仮想ウェルにまで効果的に縮小するものである。この方法では、５００万個のＢ細胞を容易に分析することができる。さらに、微視的な多重化試薬（コンビナトリアルに着色された蛍光ラテックスミクロスフェア；米国特許第６，６４２，０６２号参照；参照により本明細書に組み込まれる）の使用により、各細胞が分泌する抗体のフットプリントは、多数の生化学的プローブを用いて特異性および／または親和性について詳細に特徴づけられる。この定量的アッセイの忠実度は、調査集団から極めて稀な好ましい細胞を抽出するのに十分である。クローン化された抗体をコードする遺伝子は、外因性細胞において発現されても典型的には、元の同定アッセイと一致する表現型を示す。
【００１４】
本発明の完全ヒトの完全抗体は、天然に実際に見出されるものとは区別される。なぜならば、それらは、重鎖および／または軽鎖の定常領域の一般的な形態をコードし、かつヒト抗体に代表的な関連する異種可変領域をさらにコードする核酸を構築することによって、組換えにより調製されるからである。さらに、Ｂ細胞はアッセイ前に培養されるので、このエクスビボ同定期間中に突然変異が生じる可能性がある。
【００１５】
本明細書で使用する用語「抗体」または「ｍＡｂ」は、免疫特異性または抗原結合性を依然として保持している、従来の抗体またはｍＡｂの免疫反応性フラグメント、例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ならびに重鎖および軽鎖の可変領域が定常領域の一部または全部を含まずに直接結合している一本鎖抗体を含む。また、１つの抗体源に由来する重鎖と軽鎖の対および異なる抗体源に由来する重鎖と軽鎖の対を含む二重特異性抗体も含まれる。同様に、軽鎖はしばしば特異性を喪失させることなく交換可能であるので、抗体の特異性を決定する重鎖可変領域を異種の軽鎖可変領域と組み合わせた抗体は、本発明の範囲内に含まれる。例えば、異なる種に由来する定常領域と可変領域を有するキメラ抗体、及び種化（ｓｐｅｃｉｅｓ−ｉｚｅｄ）形態も含まれる。
【００１６】
特異性を決定する可変領域の重要なアミノ酸配列は、フレームワーク上に配置されたＣＤＲ配列であり、そのフレームワークは、必ずしも特異性に影響を与えたりまたは許容できないレベルにまで親和性を低下させたりすることなく、変えることができる。こうしたＣＤＲ領域を特定することは、当技術分野で公知の方法により達成される。具体的には、関連するＣＤＲ領域を同定するための最も一般的に使用される方法は、Ｋａｂａｔの方法であり、例えば、Ｗｕ，  Ｔ．  Ｔ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  （１９７０）  １３２：２１１  ２５０およびＫａｂａｔ，  Ｅ．  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８３）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  ３２３ページに開示されている。別の同様の一般的に使用される方法は、Ｃｈｏｔｈｉａの方法であり、例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ，  Ｃ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  （１９８７）  １９６：９０１  ９１７およびＣｈｏｔｈｉａ，  Ｃ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  （１９８９）  ３４２：８７７  ８８３に発表されている。さらなる改良が、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ，  Ｋ．  Ｒ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  （２００８）  ４５：３８３２  ３８３９により提案されている。本発明は、これらのシステムまたは当技術分野で公知の他の認識されたシステムのいずれかによって特定されたＣＤＲ領域を含む。
【００１７】
本発明のｍＡｂの結合特異性は、述べたように、ＣＤＲ領域、主に重鎖のＣＤＲ領域によって決まるが、軽鎖のＣＤＲ領域によっても補完される（軽鎖はある程度交換することができる）。したがって、本発明のｍＡｂは、重鎖の３つのＣＤＲ領域と、任意で、それに適合する軽鎖の３つのＣＤＲ、を含むことができる。結合親和性は、ＣＤＲがフレームワーク上に配置される様式によっても決定されるため、本発明のｍＡｂは、３つの関連するＣＤＲを含む重鎖の完全な可変領域だけでなく、任意で、問題の重鎖を補完する軽鎖に関連した３つのＣＤＲを含む完全な軽鎖可変領域を含み得る。これは、単一のエピトープに免疫特異的であるｍＡｂ、ならびに２つの別々のエピトープに結合することができる二重特異性の抗体または結合部分（ｂｉｎｄｉｎｇ  ｍｏｉｅｔｙ）について当てはまる。
【００１８】
二重特異性結合部分は、異なる特異性を有する２つの異なる結合部分を共有結合で連結させることによって形成され得る。現在、２つの別々の抗体由来の抗原特異性ドメインを組み込んだ単一抗体様分子（二重特異性抗体）を作製するための多くの技術が存在している。適切な技術は、ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ社（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，  ＭＤ）、Ｍｉｃｒｏｍｅｔ社（Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤ）およびＭｅｒｒｉｍａｃ社（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  ＭＡ）により記載されている。（例えば、Ｏｒｃｕｔｔ，  Ｋ．  Ｄ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  Ｄｅｓ．  Ｓｅｌ．  （２０１０）  ２３：２２１  ２２８；  Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  ＭＡｂｓ．  （２０１１）  １：３；  Ｂａｅｕｅｒｌｅ，  Ｐ．  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  （２００９）  ６９：４９４１  ４９４４参照。）例えば、１つの単一特異性ｍＡｂ由来の重鎖と任意で軽鎖のＣＤＲ領域を、適切な連結手段を介して、別のｍＡｂの重鎖配列と任意で軽鎖のＣＤＲ領域を含むペプチドに結合させることができる。その連結がアミノ酸配列を介する場合には、二重特異性エンティティ（ｅｎｔｉｔｙ）の全体をコードする核酸を組換えにより発現させて、二重特異性結合部分を組換え的に産生させることができる。単一特異性を有する結合部分の場合と同様に、本発明はまた、実際にＣＤＲ領域を含む二重特異性の抗体または結合エンティティ／結合部分と同じエピトープの一方または両方に結合する結合部分も含む。本発明はさらに、完全な重鎖配列と軽鎖配列、または完全な重鎖配列と軽鎖の少なくともＣＤＲ、または重鎖のＣＤＲと完全な軽鎖配列、を含む二重特異性構築物を包含する。
【００１９】
上述したように、本発明のｍＡｂは、ＫＩＲファミリー受容体のメンバーに対するものである。
【００２０】
ＫＩＲファミリー受容体の名称は構造に基づいており、細胞外免疫グロブリン様ドメイン（Ｄ）の数および細胞質内尾部の長さ（ＬｏｎｇまたはＳｈｏｒｔ）を含む。特定の遺伝子を示すために最後の数字が追加される。ＫＩＲファミリーメンバーの大部分は抑制性であるが、刺激性のものもある。これらの遺伝子の異なる組み合わせが様々な程度で発現している。抑制性シグナル伝達と刺激性シグナル伝達のさらなるバランスは、ＫＩＲ遺伝子内の多形と、ＫＩＲファミリーメンバーの一部のみを発現する個々の細胞で決められる。ヒトの約５０％はハプロタイプＡと呼ばれる特定の組み合わせを発現し、これは主に抑制性受容体：ＫＩＲ２ＤＬ１−３およびＫＩＲ３ＤＬ１−３をコードする。ハプロタイプＡは活性化受容体ＫＩＲ２ＤＳ４およびＫＩＲ２ＤＬ４をも含む；しかしながら、ＫＩＲ２ＤＳ４は大多数の事例では機能を欠いており、多くのＫＩＲ２ＤＬ４対立遺伝子産物は細胞表面上に提示されない。
【００２１】
本発明のｍＡｂは、公知の技術を用いて組換え的に産生させることができる。したがって、本明細書に記載される新規抗体に関して、本発明はまた、それらをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子、ならびにこれらのヌクレオチド配列を含むベクターまたは発現系、これらのヌクレオチド配列の発現のための発現系またはベクターを含む細胞、およびこれらの細胞を培養して、産生された結合部分を回収することによる該結合部分の産生方法に関する。組換え法で一般的に使用される細胞は、原核細胞、酵母、哺乳動物細胞、昆虫細胞および植物細胞を含めて、どのようなタイプの細胞でも使用することができる。また、新規抗体をコードする組換え分子で形質転換されたヒト細胞（例えば、筋細胞またはリンパ球）も含まれる。
【００２２】
典型的には、本発明のｍＡｂのための発現系は、発現の制御配列に結合されたタンパク質をコードする核酸を含む。多くの実施形態において、制御配列は該タンパク質をコードする核酸に対して異種である。したがって、本発明は、上記のように、二重特異性ｍＡｂを含む本発明のｍＡｂのいずれかをコードする核酸、およびそれらを産生させるための組換え方法に関する。
【００２３】
本発明はまた、活性成分として本発明のｍＡｂを含む医薬用組成物および動物用組成物に関する。これらの組成物は、緩衝剤および他の単純な賦形剤などの適切な生理学的に適合しうる賦形剤を含有するか、またはリポソーム製剤もしくは遅延放出製剤などのより複雑な製剤であり得る。該組成物は、追加の活性成分、特に抗腫瘍化学療法剤を含んでもよい。本発明のｍＡｂは診断にも使用することができる。
【００２４】
本発明のｍＡｂおよびその組成物は、ヒトおよび他の対象者、例えば動物対象者、における固形腫瘍および血液の腫瘍ならびにメラノーマを含めて、腫瘍の治療に有用であるだけでなく、研究室内実験、例えばラットまたはマウスでの実験を行う際にも有用である。必要とされる投与量は可変的であり、主治医の判断に任される。当業者であれば、治療される対象者の状態ならびに身体的特徴に応じて用量が適切に調整されることを理解するであろう。
【００２５】
賦形剤を含む従来の製剤、投与方法および治療の適応症は、米国特許第９，０１８，３６６号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されており、本発明に含まれる。
【実施例】
【００２６】
実施例１
インフォームドコンセントのもとに得られた、Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒの匿名ドナーからのヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、米国特許第７，４１３，８６８号および第７，９３９，３４４号に記載されるＣｅｌｌＳｐｏｔ（商標）アッセイを用いて、ＫＩＲ２ＤＬ３を含むＩＣＭ標的についてスクリーニングした。全血から分離したＢ細胞を、短期間の増殖、分化および抗体分泌（約５日間継続）を開始させるためにサイトカインおよびマイトジェンで刺激し、アッセイに供するためにプレーティングした。陽性抗体の可変領域をコードする核酸を抽出し、該核酸を使用して抗体を次のように組換え的に産生させた：シグナルペプチドを含む発現ベクターに該ＤＮＡをクローニングし、可変領域をコードする該ＤＮＡと、抗体の定常領域をコードする独立してクローニングされたＤＮＡとを融合する。
【００２７】
ＫＩＲ２ＤＬ３を含めて、異なるＩＣＭ抗原への結合についての２２人の血液ドナーの調査は、２２人のうち１９人のドナーにおいて抗ＫＩＲ抗体の検出をもたらした。多反応性抗体を排除するためにカウンタースクリーン（ｃｏｕｎｔｅｒｓｃｒｅｅｎ）としてＢＳＡを使用した。こうして、以下に記載した４種のｍＡｂが得られた。
【００２８】
【表１】
2019524086.tif 000002
【００２９】
上記の配列を、米国特許第９，０１８，３６６号にマウス抗体について記載されたものと比較した。２つの例は、１−７Ｆ９および１−４Ｆ１と命名されている。１−７Ｆ９と比較すると、ＴＲＬ８６０５  ＶＨ遺伝子は配列において５１％同一であり（６１％保存）、ＶＬは６２％同一である（７５％保存）。１−４Ｆ１と比較すると、ＴＲＬ８６０５  ＶＨ遺伝子は配列において５１％同一であり（６１％保存）、ＶＬは５９％同一である（６８％保存）。
【００３０】
実施例２
実施例１で調製したｍＡｂを、購入したまたは社内で生産した異なるＫＩＲ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を用いて吸着ＥＬＩＳＡで試験した。連続希釈により、結合親和性（以下の表２にｎＭで記載）を算出することができた；ＮＤ：不検出。ＴＲＬ８６０５は、いくつかのＫＩＲファミリーメンバーに対してサブｎＭ（ｓｕｂ−ｎＭ）の親和性を示す。
【００３１】
【表２】
2019524086.tif 000003
【配列表】
2019524086000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成31年3月19日(2019.3.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抑制性キラーＩｇＧ様４０受容体（ＫＩＲ）の細胞外部分に結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）であって、
（ａ）  ＴＲＬ８５０４の重鎖可変領域（配列番号１）の３つのＣＤＲｓ；
（ｂ）  ＴＲＬ８５０７の重鎖可変領域（配列番号３）の３つのＣＤＲｓ；
（ｃ）  ＴＲＬ８６０５の重鎖可変領域（配列番号５）の３つのＣＤＲｓ；または
（ｄ）  ＴＲＬ８６０８の重鎖可変領域（配列番号７）の３つのＣＤＲｓ
を含むｍＡｂ。
【請求項２】
請求項１に記載のｍＡｂであって、
ＴＲＬ８５０４の軽鎖可変領域（配列番号２）の３つのＣＤＲをさらに含む（ａ）のｍＡｂ；
ＴＲＬ８５０７の軽鎖可変領域（配列番号４）の３つのＣＤＲをさらに含む（ｂ）のｍＡｂ；
ＴＲＬ８６０５の軽鎖可変領域（配列番号６）の３つのＣＤＲをさらに含む（ｃ）のｍＡｂ；または
ＴＲＬ８６０８の軽鎖可変領域（配列番号８）の３つのＣＤＲをさらに含む（ｄ）のｍＡｂ。
【請求項３】
請求項１に記載のｍＡｂであって、
（ａ）  ＴＲＬ８５０４の重鎖可変領域（配列番号１）；
（ｂ）  ＴＲＬ８５０７の重鎖可変領域（配列番号３）；
（ｃ）  ＴＲＬ８６０５の重鎖可変領域（配列番号５）；または
（ｄ）  ＴＲＬ８６０８の重鎖可変領域（配列番号７）
を含むｍＡｂ。
【請求項４】
請求項３に記載のｍＡｂであって、
ＴＲＬ８５０４の軽鎖可変領域（配列番号２）をさらに含む（ａ）のｍＡｂ；
ＴＲＬ８５０７の軽鎖可変領域（配列番号４）をさらに含む（ｂ）のｍＡｂ；
ＴＲＬ８６０５の軽鎖可変領域（配列番号６）をさらに含む（ｃ）のｍＡｂ；または
ＴＲＬ８６０８の軽鎖可変領域（配列番号８）をさらに含む（ｄ）のｍＡｂ。
【請求項５】
Ｆｖ抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、種化（ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｚｅｄ）抗体、または前記可変領域に対して異種の一般的な定常領域を含む完全抗体である、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載のｍＡｂ。
【請求項６】
請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載のｍＡｂを別々にまたは組み合わせてコードする、１つまたは複数の単離された核酸。
【請求項７】
請求項６に記載の１つまたは複数の核酸を含む、１つまたは複数の組換えベクター。
【請求項８】
請求項７に記載の１つまたは複数のベクターを含む細胞。
【請求項９】
請求項８に記載の細胞を培養し、産生されたｍＡｂを回収することを含んでなる、ＫＩＲの細胞外部分に結合するｍＡｂの製造方法。
【請求項１０】
対象者における癌を治療する方法で使用するための、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載のｍＡｂ。
【請求項１１】
請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載のｍＡｂを、少なくとも１つの賦形剤と共に含有する、医薬用組成物または動物薬用組成物。
【請求項１２】
追加の抗腫瘍剤をさらに含む、請求項１１に記載の組成物。
【国際調査報告】
2019524086.tif 000004
2019524086.tif 000005