(57)【要約】  本発明は、複素環化合物、それを含有する医薬組成物、その製造方法、ならびに線維芽細胞増殖因子レセプタ（ＦＧＦＲ）阻害剤としてのその使用に関する。当該化合物は、式Ｉに示されるような複素環化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、溶媒和物、多形体、異性体、またはそれらの安定な同位体誘導体である。本発明はさらに、当該化合物を使用して、ＦＧＦＲ媒介性疾患、例えば、癌など、を治療または予防する方法にも関する。【化１】2019524883.tif 000046
2019524883.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式Ｉ：
【化１】
2019524883.tif 000038
［式中、Ｒ１、Ｒ２は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロゲン、および−ＣＮからなる群より選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、−ＯＲ１０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１１、−ＮＲ１０Ｒ１１からなる群より選択され；
Ｒ８、Ｒ９は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｗは、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであるか、または不在であり；
Ｙは、不在であるか、あるいはＣ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールからなる群より選択され、この場合、該シクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、任意選択により、１つまたは複数のＧ１で置換されていてもよく；
Ｚは、独立して、−ＣＮ、ＮＲ１２ＣＮ、
【化２】
2019524883.tif 000039
から選択され；
結合ａは、二重結合または三重結合であり；
結合ａが二重結合の場合、Ｒａ、Ｒｂ、およびＲｃは、それぞれ独立して、水素、−ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、または３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、この場合、該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ２で置換されていてもよく；
ＲａおよびＲｂ、あるいはＲｂおよびＲｃは、それらが結合している炭素原子と一緒に、ヘテロ原子を含む環を形成していてもよく；
結合ａが三重結合の場合、ＲａおよびＲｃは不在であり、Ｒｂは、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、または３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、この場合、該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ３で置換されていてもよく；
Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、または３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、この場合、該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ４で置換されていてもよく；
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４は、それぞれ独立して、ハロゲン、−ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−ＯＲ１３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＮＲ１４Ｒ１５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ１３、または−ＮＲ１３Ｓ（Ｏ）ｍＲ１４からなる群より選択され、この場合、該アルキル、アルケニル、アルキニル、シクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、任意選択により、ハロゲン、−ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環ヘテロシクリル、−ＯＲ１３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＮＲ１４Ｒ１５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ１３、または−ＮＲ１３Ｓ（Ｏ）ｍＲ１４からなる群より選択される１つまたは複数の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ１３、Ｒ１４、およびＲ１５は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、２〜６員環ヘテロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環の単環式ヘテロシクリル、単環式ヘテロアリール、または単環式アリールからなる群より選択され、ならびにｍは、１または２である］に示される化合物、あるいはその異性体、プロドラッグ、安定な同位体誘導体、および薬学的に許容される塩。
【請求項２】
式Ｉに示される前記化合物が、下記の式ＩＩ：
【化３】
2019524883.tif 000040
［式中、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、−ＯＲ１０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１１、−ＮＲ１０Ｒ１１からなる群より選択され；
Ｗは、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであるか、または不在であり；
Ｙは、不在であるか、あるいはＣ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールからなる群より選択され、この場合、該シクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、任意選択により、１つまたは複数のＧ１で置換されていてもよく；
Ｚは、独立して、−ＣＮ、ＮＲ１２ＣＮ、
【化４】
2019524883.tif 000041
から選択され、ここで、結合ａは、二重結合または三重結合であり；
結合ａが二重結合の場合、Ｒａ、Ｒｂ、およびＲｃは、それぞれ独立して、水素、−ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、または３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、この場合、該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ２で置換されていてもよく；
ＲａおよびＲｂあるいはＲｂおよびＲｃは、それらが結合している炭素原子と一緒に、ヘテロ原子を含む環を形成してもよく；
結合ａが三重結合の場合、ＲａおよびＲｃは不在であり、Ｒｂは、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、または３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、この場合、該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ３で置換されていてもよく；
Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、または３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、この場合、該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ４で置換されていてもよく；
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４は、それぞれ独立して、ハロゲン、−ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−ＯＲ１３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＮＲ１４Ｒ１５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ１３、または−ＮＲ１３Ｓ（Ｏ）ｍＲ１４からなる群より選択され、この場合、該アルキル、アルケニル、アルキニル、シクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、任意選択により、ハロゲン、−ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環ヘテロシクリル、−ＯＲ１３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＮＲ１４Ｒ１５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ１３、または−ＮＲ１３Ｓ（Ｏ）ｍＲ１４からなる群より選択される１つまたは複数の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ１３、Ｒ１４、およびＲ１５は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、２〜６員環ヘテロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環モノヘテロシクリル、単環式ヘテロアリール、または単環式アリールからなる群より選択され、ならびにｍは、１または２である］の化合物、あるいはその異性体、プロドラッグ、安定な同位体誘導体、または薬学的に許容される塩であることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式Ｉに示される前記化合物が、下記の式ＩＩＩ
【化５】
2019524883.tif 000042
［式中、
Ｒ４およびＲ６は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、−ＯＲ１０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１１、および−ＮＲ１０Ｒ１１からなる群より選択され；
Ｙは、３〜７員環ヘテロシクリルから選択され、該ヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ１で置換されていてもよく；
Ｚは、独立して、
【化６】
2019524883.tif 000043
から選択され；
結合ａは、二重結合または三重結合であり；
結合ａが二重結合の場合、Ｒａ、Ｒｂ、およびＲｃは、それぞれ独立して、水素、−ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、または３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ２で置換されていてもよく；
ＲａおよびＲｂあるいはＲｂおよびＲｃは、それらが結合している炭素原子と一緒に、ヘテロ原子を含む環を形成してもよく；
結合ａが三重結合の場合、ＲａおよびＲｃは不在であり、Ｒｂは、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、または３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、この場合、該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ３で置換されていてもよく；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、または３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、この場合、該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ４で置換されていてもよく；
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、およびＧ４は、それぞれ独立して、ハロゲン、−ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−ＯＲ１３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ１３、または−ＮＲ１３Ｓ（Ｏ）ｍＲ１４からなる群より選択され、この場合、該アルキル、アルケニル、アルキニル、シクリル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールは、任意選択により、ハロゲン、−ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環ヘテロシクリル、−ＯＲ１３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＮＲ１４Ｒ１５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ１３、または−ＮＲ１３Ｓ（Ｏ）ｍＲ１４からなる群より選択される１つまたは複数の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ１３、Ｒ１４、およびＲ１５は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、２〜６員環ヘテロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環の単環式ヘテロシクリル、単環式ヘテロアリール、または単環式アリールからなる群より選択され、ならびにｍは、１または２である］の化合物、あるいはその異性体、プロドラッグ、安定な同位体誘導体、または薬学的に許容される塩であることを特徴とする、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
下記：
【化７】
2019524883.tif 000044
【化８】
2019524883.tif 000045
あるいはその異性体、プロドラッグ、安定な同位体誘導体、または薬学的に許容される塩である、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物、あるいはその異性体、プロドラッグ、安定な同位体誘導体、または薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体と、希釈剤と、賦形剤と、を含む、医薬組成物。
【請求項６】
ＦＧＦＲ媒介性疾患、例えば、腫瘍など、を治療または予防するための薬物の製造における、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物、またはその異性体、プロドラッグ、安定な同位体誘導体、もしくは薬学的に許容される塩、あるいは、請求項５記載の医薬組成物の使用。
【請求項７】
ＦＧＦＲ媒介性疾患、例えば、腫瘍など、を治療または予防する方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物、またはその異性体、プロドラッグ、安定な同位体誘導体、もしくは薬学的に許容される塩、あるいは、請求項５に記載の医薬組成物を投与する工程を含む、方法。
【請求項８】
ＦＧＦＲ媒介性疾患、例えば、癌、特に、肝細胞癌および膀胱癌、の治療または予防のための、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物、またはその異性体、プロドラッグ、安定な同位体誘導体、もしくは薬学的に許容される塩、あるいは、請求項５に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、複素環化合物、それを含有する医薬組成物の調製方法、ならびに線維芽細胞増殖因子レセプタ（ＦＧＦＲ）阻害剤としてのその使用に関する。本発明による当該化合物は、ＦＧＦＲによって媒介される関連疾患、例えば、癌など、を治療または予防するために使用することができる。
【背景技術】
【０００２】
線維芽細胞増殖因子レセプタ（ＦＧＦＲ）は、レセプタチロシンキナーゼに属する。ＦＧＦＲは、主に、４つのメンバ：ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、およびＦＧＦＲ４を含む。ＦＧＦＲは、細胞増殖、遊走、アポトーシス、血管新生、および多くの他のプロセスに関与し、それらを調整する。それらの幅広い機能のために、ＦＧＦＲおよび他のＲＴＫは、正常な状態において厳密に調整される。腫瘍、例えば、肝臓癌、膀胱癌、肺癌、乳癌、および前立腺癌など、において、ＦＧＦＲ活性化変異またはリガンド／レセプタ過剰発現は、それらの継続的な構成的活性化を引き起こすであろう。それは、腫瘍の発生、発達、および予後不良に密接に関連するだけでなく、腫瘍の新生血管形成、侵襲、および転移においても重要な役割も果たす。したがって、ＦＧＦＲは、抗腫瘍治療のための重要な標的として見なされた。ＦＧＦＲの低分子阻害剤の開発は、益々注目を集めている。
【０００３】
ＦＧＦＲへの線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）の結合は、レセプタ細胞内セグメントにおけるチロシン残基または標的タンパク質のチロシン残基のリン酸化の活性化を引き起こすであろう。
次いで、関連伝達経路が、様々な細胞内シグナル伝達物質を介して活性化されるであろう。現在のところ、ＦＧＦによって誘導される下流カスケードシグナル伝達経路は、（１）．ＰＫＣ経路、（２）Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／Ｅｒｋ経路、（３）ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路、（４）ＰＩ３Ｋ経路を含むことが分かっている。興味深いことに、ＦＧＦシグナル伝達は、タンパク質キナーゼＥｒｋ１およびＥｒｋ２を活性化することができ、キナーゼ活性化の期間は、上皮増殖因子（ＥＧＦ）によって誘導されたリン酸化キナーゼよりも明らかに長く；様々な経路の活性化は、初期転写因子、例えば、ＭｙｃおよびＦｏｓなど、もリン酸化することができ、それにより、関連標的遺伝子の転写を促進し；同時に、リン酸化されたＦＧＦＲは、核への直接的形質移入に関与することができる。
ＦＧＦＲ１における変異は、３つの遺伝性疾患：カルマン症候群、パイフェル症候群、および骨空洞性骨異形成症、を引き起こし得る。ＦＧＦＲ１シグナル伝達異常は、いくつかの腫瘍においても見出された。乳癌、神経膠腫、ヒト肝細胞癌細胞において高度に発現したＦＧＦＲ１が存在することが分かった。その上、ＦＧＦＲ１によって媒介される異常シグナル伝達は、肺線維症および肝硬変などの線維症に密接に関連する。研究により、ＦＧＦＲ１の変異が、非小細胞肺癌および扁平細胞肺癌に関連していることも見出された。発見された２０を超える様々な線維芽細胞増殖因子の中でも、ＦＧＦＲ１は、１０を超える異なる線維芽細胞成長因子に結合することができるが、優先的には、ＦＧＦ１（酸性線維芽細胞増殖因子）およびＦＧＦ２（塩基性線維芽細胞増殖因子）に結合することができる。それらは、線維芽細胞、血管内皮細胞、平滑筋細胞、および神経細胞の増殖を刺激する生物学的活性を有する。ＦＧＦＲ１は、それらの高親和性レセプタである。ＦＧＦが、ＦＧＦＲ１の細胞外セグメントに結合すると、当該レセプタ細胞セグメントにおけるチロシンキナーゼ活性領域は、最初、それ自身をリン酸化し、次いで、レセプタ標的タンパク質をリン酸基転移させ、ならびにタンパク質カスケード反応により、リガンドシグナルを核に伝達し、これは、損傷修復、胚発生、骨形成、血管新生、および神経再生の促進という形で表れる。
【０００４】
ＦＧＦＲ２は、胚発生および組織修復において重要な役割を果たす。さらに、ＦＧＦＲ２は、骨および血管新生においてもより重要な役割を果たす。さらに、ＦＧＦＲ２は、腫瘍血管新生、腫瘍の病期分類、転移、予後、および化学療法効果に密接に関連していることも見出された。ＦＧＦＲ２は、多くのヒト悪性腫瘍、例えば、胃癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、および子宮内膜癌など、において、過剰発現されるか、遺伝子増幅されるか、またはミスセンス変異される。慢性炎症、喫煙、過度のカロリ摂取、および運動不足において、ＦＧＦＲ２の非制御のシグナルは、エピジェネティック修飾および遺伝子変異を引き起こし、これらは、癌の原因となる。ＦＧＦＲ２は、進行性胃癌の侵襲的特徴の条件であり、胃癌の病理タイプ、臨床病期、リンパ節、および遠隔転移に密接に関連する。ＦＧＦＲ２は、多くの異なるＦＧＦに対して高い親和性を有する。しかしながら、ＦＧＦＲ２の細胞外領域ｍＲＮＡの選択的分割は、当該領域のＣ末端を非常に変動的にし、膜横断構造に対して高親和性のＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂまたはＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃの２つのサブタイプを生じる。ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂは、主に、上皮細胞において発現し、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃは、主に、間質細胞において発現する。ストロマ細胞において発現するＦＧＦ７およびＦＧＦ１０は、特に、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂを活性化することができる。ＦＧＦ１０は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂに対して高い親和性を有し、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂの特異的リガンドである。ＦＧＦ２、ＦＧＦ４、ＦＧＦ６、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９は、特に、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃを活性化する。胃ストロマ細胞から分泌されたＦＧＦ７は、胃癌細胞の増殖を促進することができることが見出された。より悪性の細胞ほど、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂの発現は、より高かった。胃ストロマ線維症細胞においてＦＧＦＲの発現はなかった。ＦＧＦＲ２の分子に関する多くの研究により、ＦＧＦＲ２に対するモノクローナル抗体が、胃癌細胞におけるＦＧＦＲ２の高発現または活性化に対して重要な阻害作用を有することが示された。併用化学療法は、胃癌の阻害に対して相乗作用を有する。それは、ＦＧＦＲ２が、進行胃癌の治療のための良好な潜在的標的であることを示している。
【０００５】
線維芽細胞増殖因子レセプタ３（ＦＧＦＲ３）は、骨格および関節軟骨の発育ならびに関節軟骨細胞恒常性の維持において重要な役割を果たすだけでなく、骨関節炎においても重要な役割を果たす。ＦＧＦＲ３の変異活性化が、一連の遺伝性骨格発達欠乏症、例えば、致命的な小人症、軟骨発育不全、頭蓋縫合早期閉鎖症候群など、を引き起こし得ることが分かっている。最近、抗腫瘍研究により、多発性骨髄腫、子宮頚部腫瘍、および膀胱癌、特に原発性およびリンパ節転移膀胱癌においてＦＧＦＲ３遺伝子の変異が見出された。ＦＧＦＲ３の細胞外ドメインにおける異なるｍＲＮＡ分割メカニズムは、異なるＦＧＦＲ３レセプタ相同体、例えば、ＦＧＦＲ３ａ、ＦＧＦＲ３ｂ、およびＦＧＦＲ３ｃなど、を生じる。これらの相同体は、リガンド結合に対する選択性、親和性、組織発現において異なっている。例えば、ＦＧＦＲ３ｂは、ヒト上皮細胞の主要形態であり、膀胱癌において見出される主要変異でもある。見出されたＦＧＦの２３種類のうち、ＦＧＦ９およびＦＧＦ１８は、ＦＧＦＲ３ｂにおける比較的特異的なリガンドである。したがって、ＦＧＦＲ３を標的とする治療は、膀胱癌患者にかすかな光をもたらし得る。
ＦＧＦＲ４は、肝臓における主要なＦＧＦレセプタのサブタイプである。２０を超える異なる種類の線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）のうちの１０種は、ＦＧＦＲ４に結合することが分かっており、そのうちのＦＧＦＲ１９のみが、ＦＧＦＲ４に特異的に結合する。最近の研究により、ＦＧＦＲ４における変化、例えば、過剰発現、変異、転移、およびトランケーションなどが、横紋筋肉腫、腎細胞腫、骨髄腫、乳癌、胃癌、大腸癌、膀胱癌、すい臓癌、および肝細胞癌などの多くの癌の進行に関連することが示された。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、ＦＧＦＲを阻害する化合物を使用することにより、ＦＧＦＲ媒介性関連疾患、例えば、肝臓癌（特に肝細胞癌）、膀胱癌、肺癌、乳癌、前立腺癌、横紋筋肉腫、腎細胞癌、骨髄腫、胃癌、および大腸癌などの癌、を治療および予防することができることが期待できる。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の内容
本発明は、ＦＧＦＲ阻害剤として、下記の式Ｉ：
【０００８】
【化１】
2019524883.tif 000003
【０００９】
［式中、Ｒ１、Ｒ２は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロゲン、および−ＣＮからなる群より選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、−ＯＲ１０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１１、−ＮＲ１０Ｒ１１からなる群より選択され；
Ｒ８、Ｒ９は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｗは、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであるか、または不在であり；
Ｙは、不在であるか、あるいはＣ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールからなる群より選択され、この場合、当該シクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、任意選択により、１つまたは複数のＧ１で置換されていてもよく；
Ｚは、独立して、−ＣＮ、ＮＲ１２ＣＮ、
【００１０】
【化２】
2019524883.tif 000004
【００１１】
から選択され；
結合ａは、二重結合または三重結合であり；
結合ａが二重結合の場合、Ｒａ、Ｒｂ、およびＲｃは、それぞれ独立して、水素、−ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、または３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、この場合、当該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ２で置換されていてもよく；
ＲａおよびＲｂあるいはＲｂおよびＲｃは、それらが結合している炭素原子と一緒に、ヘテロ原子を含む環を形成していてもよく；
結合ａが三重結合の場合、ＲａおよびＲｃは不在であり、Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、または３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、この場合、当該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ３で置換されていてもよく；
Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、または３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、この場合、当該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ４で置換されていてもよく、
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４は、それぞれ独立して、ハロゲン、−ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−ＯＲ１３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＮＲ１４Ｒ１５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ１３、または−ＮＲ１３Ｓ（Ｏ）ｍＲ１４からなる群より選択され、この場合、当該アルキル、アルケニル、アルキニル、シクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、任意選択により、ハロゲン、−ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環ヘテロシクリル、−ＯＲ１３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＮＲ１４Ｒ１５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ１３、または−ＮＲ１３Ｓ（Ｏ）ｍＲ１４からなる群より選択される１つまたは複数の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ１３、Ｒ１４、およびＲ１５は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、２〜６員環ヘテロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環の単環式ヘテロシクリル、単環式ヘテロアリール、または単環式アリールからなる群より選択され、ならびにｍは、１または２である］に示される化合物、あるいはその異性体、プロドラッグ、安定な異性体誘導体、および薬学的に許容される塩を提供するものである。
【００１２】
本発明のある実施形態において、一般式（Ｉ）に示される化合物であって、当該化合物が、下記の式ＩＩ：
【００１３】
【化３】
2019524883.tif 000005
【００１４】
［式中、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、−ＯＲ１０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１１、−ＮＲ１０Ｒ１１からなる群より選択され；
Ｗは、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであるか、または不在であり；
Ｙは、不在であるか、あるいはＣ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールからなる群より選択され、この場合、当該シクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、任意選択により、１つまたは複数のＧ１で置換されていてもよく；
Ｚは、独立して、−ＣＮ、ＮＲ１２ＣＮ、
【００１５】
【化４】
2019524883.tif 000006
【００１６】
から選択され；
結合ａは、二重結合または三重結合であり；
結合ａが二重結合の場合、Ｒａ、Ｒｂ、およびＲｃは、それぞれ独立して、Ｈ、−ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、または３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、この場合、当該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ２で置換されていてもよく；
ＲａおよびＲｂあるいはＲｂおよびＲｃは、それらが結合している炭素原子と一緒に、ヘテロ原子を含む環を形成してもよく；
結合ａが三重結合の場合、ＲａおよびＲｃは不在であり、Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、または３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、この場合、当該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ３で置換されていてもよく；
Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、または３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、この場合、当該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ４で置換されていてもよく；
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４は、それぞれ独立して、ハロゲン、−ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−ＯＲ１３，−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４，−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３，−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４，−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３，−ＮＲ１３Ｒ１４，−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４，−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＮＲ１４Ｒ１５，−Ｓ（Ｏ）ｍＲ１３，または−ＮＲ１３Ｓ（Ｏ）ｍＲ１４からなる群より選択され、この場合、当該アルキル、アルケニル、アルキニル、シクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、任意選択により、ハロゲン、−ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環ヘテロシクリル、−ＯＲ１３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＮＲ１４Ｒ１５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ１３、または−ＮＲ１３Ｓ（Ｏ）ｍＲ１４からなる群より選択される１つまたは複数の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ１３、Ｒ１４、およびＲ１５は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、２〜６員環ヘテロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環モノヘテロシクリル、単環式ヘテロアリール、または単環式アリールからなる群より選択され、ならびにｍは、１または２である］の化合物であることを特徴とする、化合物、その異性体、プロドラッグ、安定な同位体誘導体、またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【００１７】
本発明の別の実施形態において、一般式（Ｉ）に示される化合物であって、当該化合物が、下記の式ＩＩＩ：
【００１８】
【化５】
2019524883.tif 000007
【００１９】
［式中、
Ｒ４、Ｒ６は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、−ＯＲ１０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０Ｒ１１、−ＮＲ１０Ｒ１１からなる群より選択され；
Ｙは、３〜７員環ヘテロシクリルから選択され、この場合、当該ヘテロシクリルは、１つまたは複数のＧ１で置換されていてもよく；
Ｚは、独立して、
【００２０】
【化６】
2019524883.tif 000008
【００２１】
から選択され；
結合ａは、二重結合または三重結合であり；
結合ａが二重結合の場合、Ｒａ、Ｒｂ、およびＲｃは、それぞれ独立して、Ｈ、−ＣＮ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、この場合、当該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ２で置換されていてもよく；
ＲａおよびＲｂあるいはＲｂおよびＲｃは、それらが結合している炭素原子と一緒に、ヘテロ原子を含む環を形成してもよく；
結合ａが三重結合の場合、ＲａおよびＲｃは不在であり、Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、または３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、この場合、当該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ３で置換されていてもよく；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、または３〜８員環ヘテロシクリルからなる群より選択され、この場合、当該アルキル、シクリル、およびヘテロシクリルは、任意選択により、１つまたは複数のＧ４で置換されていてもよく；
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４は、それぞれ独立して、ハロゲン、−ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、−ＯＲ１３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ１３、または−ＮＲ１３Ｓ（Ｏ）ｍＲ１４からなる群より選択され、この場合、当該アルキル、アルケニル、アルキニル、シクリル、３〜８員環ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールは、任意選択により、ハロゲン、−ＣＮ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環ヘテロシクリル、−ＯＲ１３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１３、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１３、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＮＲ１４Ｒ１５、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ１３、または−ＮＲ１３Ｓ（Ｏ）ｍＲ１４からなる群より選択される１つまたは複数の置換基で置換されていてもよく；
Ｒ１３、Ｒ１４、およびＲ１５は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、２〜６員環ヘテロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクリル、３〜８員環の単環式ヘテロシクリル、単環式ヘテロアリール、または単環式アリールからなる群より選択され；ならびにｍは、１または２である］の化合物であることを特徴とする、化合物、その異性体、プロドラッグ、安定な同位体誘導体、またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【００２２】
本発明による好ましい化合物としては、これらに限定されるわけではないが、以下：
【００２３】
【表１−１】
2019524883.tif 000009
【００２４】
【表１−２】
2019524883.tif 000010
【００２５】
【表１−３】
2019524883.tif 000011
【００２６】
【表１−４】
2019524883.tif 000012
【００２７】
【表１−５】
2019524883.tif 000013
【００２８】
【表１−６】
2019524883.tif 000014
【００２９】
【表１−７】
2019524883.tif 000015
【００３０】
あるいはそれらの互変異性体、メソマ、ラセミ体、エナンチオマ、ジアステレオ異性体、それらの混合物、およびその薬学的に許容される塩が挙げられる。
【００３１】
本発明による化合物は、ＦＧＦＲの有効な阻害剤である。したがって、本発明による当該化合物は、ＦＧＦＲ媒介疾患、例えば、これらに限定されるわけではないが、腫瘍および炎症性疾患、例えば、骨関節炎など、を治療または予防するために使用することができる。本発明による当該化合物は、ＦＧＦＲ関連癌、例えば、横紋筋肉腫、腎細胞癌、多発性骨髄腫、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、子宮頚部癌、胃癌、大腸癌、膀胱癌、すい臓癌、肺癌、乳癌、前立腺癌、および肝臓癌（例えば、肝細胞癌など）など、より詳細には、肝細胞性癌腫および膀胱癌腫、を治療または予防するために使用することができる。
【００３２】
本発明はさらに、本発明の化合物あるいはその異性体、プロドラッグ、安定な同位体異性体、または薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体と、希釈剤と、賦形剤と、を含む医薬組成物にも関する。
【００３３】
本発明の別の態様は、ＦＧＦＲによって媒介される疾患、例えば、腫瘍など、の治療または予防のための医薬品の調製における、一般式（Ｉ）に示される化合物またはそれらの異性体、プロドラッグ、安定な同位体誘導体、もしくは薬学的に許容される塩、あるいは医薬組成物、の使用に関する。
【００３４】
本発明の別の態様は、腫瘍および炎症性疾患などの疾患を治療および／または予防するための薬物の調製における、一般式（Ｉ）に示される化合物またはその互変異性体、メソマ、ラセミ体、エナンチオマ、ジアステレオ異性体、それらの混合物、およびその薬学的に許容される塩、あるいは医薬組成物、の使用に関する。
【００３５】
本発明により、当該薬物は、これらに限定されるわけではないが、錠剤、カプセル剤、液剤、凍結乾燥製剤、および注射剤を含む、任意の医薬製剤であり得る。
【００３６】
本発明による医薬製剤は、投与単位あたり所定の量の有効成分を含有する投与単位の形態において投与され得る。そのような投与単位は、治療される疾患、投薬方法、ならびに患者の年齢、体重、および状態に応じて、例えば、０．５ｍｇから１ｇ、好ましくは１ｍｇから７００ｍｇ、特に好ましくは５ｍｇから３００ｍｇの本発明による化合物を含み得、あるいは、当該医薬製剤は、投与単位あたり所定の量の有効成分を含有する投与単位において投与され得る。好ましい投与単位製剤は、上記において示されたような有効成分の１日用量または分割された用量または対応する分割量を含有する製剤である。さらに、当該医薬製剤は、製薬技術分野において周知の方法によって調製することができる。
本発明による医薬製剤は、必要に応じて、任意の好適な方法、例えば、経口（経口または舌下を含む）、経腸、経鼻、局所（経口、舌下、または経皮を含む）、および経膣、あるいは非経口（皮下、筋肉内、静脈内、または皮内を含む）による方法など、によって投与することができる。例えば、有効成分を１種または複数種の賦形剤あるいは１種または複数種の助剤と組み合わせることによってそのような製剤を調製するために、製薬技術分野において既知の全ての方法を使用することができる。
【００３７】
本発明はさらに、ＦＧＦＲ媒介性疾患（例えば、腫瘍など）を治療または予防する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の当該化合物あるいはそれらの異性体、プロドラッグ、安定な同位体誘導体、または薬学的に許容される塩、あるいは本発明の医薬組成物、を投与する工程を含む方法、にも関する。
【００３８】
本発明のさらなる態様は、ＦＧＦＲ媒介性疾患、例えば、腫瘍または炎症性疾患、の治療または予防における使用のための、一般式（Ｉ）に示される化合物あるいはその異性体、プロドラッグ、安定な同位体誘導体、または薬学的に許容される塩、ならびにそれらと、薬学的に許容される担体、希釈剤、および賦形剤を含有する医薬組成物に関する。
【００３９】
本発明の別の態様は、腫瘍などの疾患を治療および／または予防するための、一般式（Ｉ）に示される化合物あるいはその互変異性体、メソマ、ラセミ体、エナンチオマ、ジアステレオ異性体、それらの混合物、およびその薬学的に許容される塩に関する。
【００４０】
調製スキーム
本発明はさらに、当該化合物を調製する方法も提供する。
スキーム１
【００４１】
【化７】
2019524883.tif 000016
【００４２】
工程１：
Ｙは、Ｎ原子を含有する４〜５員環複素環である。ＰＧは、環Ｙの窒素原子上の保護基、例えば、ベンジルオキシアシル基など、である。ＹおよびＰＧは、当該反応の間、変化しない。Ｘがヒドロキシの場合、当該反応は、塩化メチレン中において行われ、塩基としてＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンが添加される。使用される縮合剤は、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートである。当該反応は、室温にて生じる。ＸがＣｌの場合、当該反応は、トリエチルアミンを加えたジクロロメタン中において行われ、化合物（ＩＩＩ−ＩＩ）を与える；
【００４３】
工程２：
ＹおよびＰＧは、当該反応の間、変化しない。Ｙがアゼチジニルの場合、当該反応は、縮合剤としてＰＯＣｌ３および塩基としてピリジンを添加したアセトニトリル中において、室温で行われ；Ｙがピロリジニルの場合、当該反応は、ＰＯＣｌ３および触媒量のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを添加したアセトニトリル中において、加熱下で実施され、化合物（ＩＩＩ−ＩＩＩ）を与える；
【００４４】
工程３；
ＹおよびＰＧは、当該反応の間、変化しない。臭素化反応において、臭素化剤としてＮ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）を使用し、当該反応は、室温においてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中で実施され、化合物（ＩＩＩ−ＩＶ）を与える；
【００４５】
工程４；
ＹおよびＰＧは、当該反応の間、変化しない。当該求核反応において、求核体として３０％のアンモニア水溶液が使用され、溶媒としてイソプロパノールが使用され、ならびに当該反応は、密封された菅内において加熱され、それにより化合物（ＩＩＩ−Ｖ）を与える；
【００４６】
工程５；
ＹおよびＰＧは、当該反応の間、変化しない。クロスカップリング反応において、３，５−二置換フェニルアセチレンが必要であり、トリエチルアミンなどの塩基が使用され、反応溶媒としてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドが使用され、ならびに触媒として、触媒量のヨウ化第一銅および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリドが使用され、当該反応は加熱され、それにより化合物（ＩＩＩ−ＶＩ）を与える；
【００４７】
工程６
Ｙは、当該反応の間、変化しない。脱保護基試薬として高濃塩酸が用いられ、当該反応は室温で実施され、保護基が除去され、それにより化合物（ＩＩＩ−ＶＩＩ）を与える；
【００４８】
工程７；
ＹおよびＺは、当該反応の間、変化しない。関連する塩化アシルまたは塩化物を使用する場合、トリエチルアミンなどの塩基が加えられ、当該反応は、室温において、ＴＨＦおよびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中で実施され、それにより化合物（ＩＩＩ）を与える。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
詳細な説明
特に明記されない限り、説明および請求項において使用される以下の用語は、以下の意味を有する。
【００５０】
表現「Ｃｘ〜Ｃｙ」は、本明細書において使用される場合、炭素原子の数の範囲を表し、この場合、ｘおよびｙは両方とも整数である。例えば、Ｃ３〜Ｃ８シクリルは、３個から８個の炭素原子を有するシクリルを表し、−Ｃ０〜Ｃ２アルキルは、０個から２個の炭素原子を有するアルキル基を表し、この場合、−Ｃ０アルキルは、単一の化学結合を意味する。
【００５１】
用語「アルキル」は、本明細書において使用される場合、飽和脂肪族炭化水素基を意味し、１個から２０個の炭素原子を有する直鎖状および分岐鎖状の基、例えば、１個から１８個の炭素原子、１個から１２個の炭素原子、１個から８個の炭素原子、１個から６個の炭素原子、または１個から４個の炭素原子を有する直鎖状および分岐鎖状の基を含む。非限定的な例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ｓ−ブチル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルプロピル、１，２−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、１−エチルプロピル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、ｎ−ヘキシル、１−エチル−２−メチルプロピル、１，１，２−トリメチルプロピル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２−エチルブチル、およびそれらの様々な分岐鎖異性体などが挙げられる。アルキルは、置換されていてもまたは置換されていなくてもよい。
【００５２】
本明細書において使用される用語「シクリル」または「環状基」は、３個から１２個の環状炭素原子、例えば、３個から１２個、３個から１０個、３個から８個、または３個から６個の環状炭素原子など、または３、４、５、６員環を含む、飽和または部分的不飽和の単環式または多環式炭化水素基を意味する。単環式シクリルの非限定的な例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロヘプタトリエニル、シクロオクチルなどが挙げられる。シクリルは、置換されていてもまたは置換されていなくてもよい。
【００５３】
本明細書において使用される用語「ヘテロシクリル」は、３個から２０個の環原子、例えば、３個から１６個、３個から１２個、３個から１０個、３個から８個、または３個から６個の環原子などを含む、飽和または部分的不飽和の単環式または多環式炭化水素基を意味し、この場合、１つまたは複数の環原子は、窒素、酸素、またはＳ（Ｏ）ｍ（ここで、ｍは、０から２の整数である）からなる群より選択されるヘテロ原子であるが、−Ｏ−Ｏ−、−Ｏ−Ｓ−、または−Ｓ−Ｓ−の環部分は除外され、ならびに残りの環原子は炭素である。好ましくは、３個から１２個の環原子が含まれ、そのうちの１個から４個がヘテロ原子である。より好ましくは、当該ヘテロシクリル環は、３個から１０個の環原子、より好ましくは３個から８個の環原子を含む。最も好ましいのは、５員環または６員環であり、この場合、１個から４個の環員はヘテロ原子であり、より好ましくは１個から３個がヘテロ原子であり、最も好ましくは１個から２個がヘテロ原子である。単環式ヘテロシクリルの非限定的な例としては、ピロリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ホモピペラジニルなどが挙げられる。多環式複素環基としては、スピロ環状ヘテロシクリル基、縮合された環状ヘテロシクリル基、および架橋された環状ヘテロシクリル基が挙げられる。
【００５４】
本明細書において使用される用語「スピロ複素環基」は、単環の間で１つの原子が共有される（スピロ原子と呼ばれる）５員環から２０員環の多環式複素環基を意味し、この場合、１つまたは複数の環原子は、窒素、酸素、またはＳ（Ｏ）ｍ（ここで、ｍは、０から２の整数である）からなる群より選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子は炭素である。それらは、１つまたは複数の二重結合を含んでいてもよいが、当該環のいずれも、完全に共役したπ電子系を有さない。それらは、好ましくは６員環から１４員環であり、より好ましくは７員環から１０員環である。スピロシクリル基は、環の間で共有されるスピロ原子の数により、モノ−スピロヘテロシクリル、ビ−スピロヘテロシクリル、またはポリ−スピロヘテロシクリルに分けられ、好ましくはモノ−スピロシクリルおよびビ−スピロシクリル、より好ましくは４員環／４員環、４員環／５員環、４員環／６員環、５員環／５員環、または５員環／６員環のモノ−スピロシクリルである。スピロシクリルの非限定的な例としては、以下：
【００５５】
【化８】
2019524883.tif 000017
が挙げられる。
【００５６】
本明細書において使用される用語「縮合ヘテロシクリル」は、５員環から２０員環の多環式ヘテロシクリル基を意味し、この場合、当該系におけるそれぞれの環は、隣接する原子の対を当該系の他の環と共有し、１つまたは複数の環は、１つまたは複数の二重結合を含み得るが、当該環のいずれも、完全に共役したπ電子系を有さず、１つまたは複数の環原子は、窒素、酸素、またはＳ（Ｏ）ｍ（ここで、ｍは、０から２の整数である）からなる群より選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子は炭素である。それらは、好ましくは６員環から１４員環であり、より好ましくは７員環から１０員環である。環の数により、それらは、二環式、三環式、四環式、または多環式縮合ヘテロシクリルに分けることができ、当該縮合ヘテロシクリル基は、好ましくは二環式または三環式縮合ヘテロシクリル、より好ましくは５員環／５員環または５員環／６員環の二環式縮合ヘテロシクリルである。縮合ヘテロシクリルの非限定的な例としては、以下：
【００５７】
【化９】
2019524883.tif 000018
が挙げられる。
【００５８】
当該ヘテロシクリル環は、アリール環、ヘテロアリール環、またはシクリル環に縮合していてもよく、それらにおいて親構造に結合している環は、ヘテロシクリル基であり、その非限定的な例としては、以下：
【００５９】
【化１０】
2019524883.tif 000019
など、が挙げられる。
【００６０】
当該ヘテロシクリル基は、置換されていてもまたは置換されていなくてもよい。
【００６１】
本明細書において使用される用語「アリール」は、６員環から１４員環の全てが炭素の単環式基または縮合多環式（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）基、ならびに共役したπ電子系を有する多環式（すなわち、隣接する炭素原子対を有する環）基を意味し、好ましくは６員環から１０員環、例えば、フェニルおよびナフチル、最も好ましくはフェニルである。アリール環は、ヘテロアリール環、ヘテロシクリル環、またはシクリル環に縮合していてもよく、それらにおいて親構造に結合している環は、アリール環であり、ならびに非限定的な例としては、以下：
【００６２】
【化１１】
2019524883.tif 000020
が挙げられる。
【００６３】
アリールは、置換されていてもまたは置換されていなくてもよい。
【００６４】
本明細書において、用語「ヘテロアリール」は、１個から４個のヘテロ原子と、５個から１４個の環原子と、を含むヘテロ芳香族系を意味し、この場合、当該ヘテロ原子は、酸素、硫黄、および窒素を含む。ヘテロアリールは、好ましくは５員環から１０員環、より好ましくは５員環または６員環、例えば、フリル、チエニル、ピリジル、ピロリル、Ｎ−アルキルピロリル、ピリミジニル、ピラジニル、イミダゾリル、テトラジル、オキサゾリル、およびイソオキサゾリルなど、である。当該ヘテロアリール環は、アリール環、ヘテロシクリル環、またはシクリル環に縮合していてもよく、その場合、親構造に結合している環は、ヘテロアリール環であり、ならびに非限定的な例としては、以下：
【００６５】
【化１２】
2019524883.tif 000021
が挙げられる。
【００６６】
ヘテロアリールは、置換されていてもまたは置換されていなくてもよい。
【００６７】
本明細書において、用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を意味する。
【００６８】
本明細書において、用語「シアノ」は、−ＣＮを意味する。
【００６９】
本明細書において、用語「アルケニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖状、分岐鎖状の炭化水素基、例えば、２個から２０個の炭素原子を有する直鎖状および分岐鎖状の基を意味し、例えば、２個から１８個、２個から１２個の炭素原子、２個から８個の炭素原子、２個から６個の炭素原子、または２個から４個の炭素原子を有する直鎖状および分岐鎖状の基を含む。この場合、１つから３つの炭素−炭素二重結合が存在し得、好ましくは、１つの炭素−炭素二重結合が存在し得る。用語「Ｃ２〜４アルケニル」は、２個から４個の炭素原子を有するアルケニルを意味し、例えば、ビニル、プロペニル、ブテニル、ブテン−２−イルを含む。アルケニル基は、任意選択により、置換されていてもよい。
【００７０】
本明細書において、用語「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する直鎖状または分岐鎖状の炭化水素基を意味し、例えば、２個から２０個の炭素原子を有する直鎖状および分岐鎖状の基、例えば、２個から１８個、２個から１２個の炭素原子、２個から８個の炭素原子、２個から６個の炭素原子、または２個から４個の炭素原子を有する直鎖状および分岐鎖状の基を含む。中でも、１つから３つの炭素−炭素三重結合が存在し得、好ましくは、１つの炭素−炭素三重結合が存在し得る。用語「Ｃ２〜４アルキニル」は、２個から４個の炭素原子を有するアルキニルを意味する。非限定的な例としては、アセテニル、プロピニル、ブチニル、およびブチン−２−イルが挙げられる。
【００７１】
本明細書において、用語「ヘテロアルキル」は、指定された数の炭素原子と、酸素、窒素、および硫黄から選択される少なくとも１つのヘテロ原子とからなる安定な直鎖状または分岐鎖状の炭化水素基を意味する。中でも特に、窒素および硫黄原子は、任意選択により、酸化されていてもよく、窒素原子は、任意選択により、四級化されていてもよく、ならびに、ヘテロ原子、例えば、酸素、窒素、および硫黄など、は、当該ヘテロアルキル基の任意の内部位置か、または当該アルキル基が当該分子の残りの部分と結合している位置に配置されていてもよい。２個を超えるヘテロ原子が、独立していてもよく、または連続していてもよい。
【００７２】
本明細書において、用語「アルキルオキシ」は、酸素架橋によって結合されたアルキル基を意味し、アルキルオキシ基、シクリルオキシ基、およびヘテロシクリルオキシ基を包含する。したがって、用語「アルコキシ」におけるアルキルは、上記において定義されるようなアルキル基、ヘテロシクリル基、およびシクリル基、または環状基を包含する。
【００７３】
本明細書において使用される「任意選択の」および「任意選択により」は、それに続いて説明される事象または環境が、生じ得るが、必ずしも生じるわけではないことを意味し、事象または環境が生じる場合と生じない場合を包含する。例えば、「任意選択によりアルキルで置換されていてもよいヘテロシクリル」は、アルキルが存在していてもよいが、必ずしも存在するわけではないことを意味し、ヘテロシクリルが、アルキルで置換されている場合と、アルキルで置換されていない場合を包含する。
【００７４】
本明細書において使用される用語「置換された」は、基における１つまたは複数の水素原子、好ましくは最大で５個、より好ましくは１個から３個の水素原子が、独立して、対応する数の置換基で置換されることを意味する。置換基は、それらが可能な化学的位置のみに配置されることは言うまでもなく、当業者は、それほどの努力を必要とせず、可能な置換または不可能な置換を（実験的に、または理論的に）特定することができる。例えば、自由水素を有するアミノ基またはヒドロキシ基は、不飽和結合（例えば、オレフィン結合）を有する炭素原子と組み合わされると、不安定になり得る。
【００７５】
用語「置換基」は、これらに限定されるわけではないが、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ハロゲン基、ヒドロキシ基、アミノ基、シアノ基、およびチオール基を包含する。
【００７６】
本明細書において、用語「医薬組成物」は、１種または複数種の本明細書において説明される化合物あるいは生理学的／薬学的に許容される塩またはプロドラッグと、他の化学成分と、ならびに他の成分、例えば、生理学的／薬学的に許容される担体および賦形剤など、との混合物を表す。医薬組成物の目的は、有機体への薬物の投薬を促進し、有効成分の吸収を容易にし、その結果、生物活性を発揮させることである。
【００７７】
本発明において、用語「室温」は、１５℃から３０℃を意味する。
【００７８】
本明細書において使用される用語「安定な同位体誘導体」は、同位体で置換された誘導体、例えば、式Ｉにおける任意の水素原子を１個から５個の重水素原子で置換することよって得られる誘導体、式Ｉにおける任意の炭素原子を１個から３個の炭素−１４原子で置換することよって得られる同位体で置換された誘導体、または式Ｉにおける任意の酸素原子を１個から３個の酸素−１８原子で置換することよって得られる同位体で置換された誘導体など、を包含する。
【００７９】
本発明において説明される「薬学的に許容される塩」は、Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，”Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  ｓａｌｔｓ”，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６，１−１９（１９７７）において説明されており、当該塩は、本質的に無毒であり、所望の薬物動態特性、嗜好性、吸収性、分散、代謝、または排泄などを提供し得ることは、薬剤師にとって明白である。
【００８０】
本発明による「薬学的に許容される塩」は、一般的な化学的方法により合成することができる。
【００８１】
概して、当該塩の調製は、好適な溶媒または溶媒組成物中において、遊離アルカリまたは遊離酸の形態の当該化合物を、同等の化学当量または過剰量の酸（無機酸または有機酸）またはアルカリと反応させることによって達成することができる。
【００８２】
本発明において説明される「プロドラッグ」は、生体内で代謝された後に、元の活性化合物に転化され得る化合物を意味する。代表的には、プロドラッグは、不活性物質であるか、あるいは活性な親化合物より低い活性を有するが、簡便な操作および投薬を提供することができるか、または代謝特性を向上させることができる。
【００８３】
本発明の「異性体」は、本発明による式（Ｉ）の化合物が、１つまたは複数の不斉中心を有し得、ならびにラセミ体、ラセミ体混合物、および単一のジアステレオ異性体であり得ることを意味する。エナンチオマ、ジアステレオ異性体、立体異性体、幾何異性体、および配座異性体などの異性体は全て、本発明に含まれる。幾何異性体は、ｃｉｓ−およびｔｒａｎｓ−異性体を含む。
【００８４】
本明細書において、用語「腫瘍」は、良性腫瘍および悪性腫瘍、例えば、癌を包含する。
【００８５】
本明細書において、用語「癌」は、ＦＧＦＲが関与する様々な悪性腫瘍、例えば、これらに限定されるわけではないが、肝臓癌（特に肝細胞癌）、膀胱癌、肺癌、乳癌、前立腺癌、横紋筋肉腫、腎細胞癌、骨髄腫、胃癌、膵癌、および大腸癌、を包含する。
【００８６】
本明細書において、用語「炎症性疾患」は、ＦＧＦＲが関与する任意の炎症性疾患を意味する。
【００８７】
本明細書において、用語「治療有効量／治療有効用量」は、効果的にＦＧＦＲを阻害することができるおよび／または当該疾患を治療することができる、本発明による化合物の量を意味する。
【実施例】
【００８８】
本発明は、さらに、下記の実施例によって説明されるが、説明される実施例の範囲に限定されるものでもない。以下の実施例において、特定の条件について言及されていない実験方法は、従来の方法および条件に従って、あるいは製品指示書に従って選択される。
【００８９】
本発明による全ての化合物の構造は、核磁気共鳴（１Ｈ−ＮＭＲ）および／または質量分析検出（ＭＳ）によって同定することができる。
【００９０】
１Ｈ−ＮＭＲ化学シフト（δ）は、ＰＰＭ（単位：１０−６ＰＰＭ）にて記録される。ＮＭＲは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ−４００分光計によって実施される。適切な溶媒としては、重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）、重水素化メタノール（ＣＤ３ＯＤ）、および重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ６）が挙げられ、内部標準としてテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を用いる。
【００９１】
低分解能質量分析（ＭＳ）は、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２６０ＨＰＬＣ／６１２０質量分光計により、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＺＯＲＢＡＸ  ＸＤＢ−Ｃ１８，４．６×５０ｍｍ，３．５μｍを使用し、勾配溶離条件Ｉ：０：９５％の溶媒Ａ１および５％の溶媒Ｂ１、１〜２：５％の溶媒Ａ１および９５％の溶媒Ｂ１；２．０１〜２．５０：９５％の溶媒Ａ１および５％の溶媒Ｂ１、によって特定される。百分率は、全溶媒体積に対するある特定の溶媒の体積百分率である。溶媒Ａ１：０．０１％ギ酸水溶液；溶媒Ｂ１：０．０１％ギ酸のアセトニトリル溶液；百分率は、当該溶液に対するある溶質の体積百分率である。
【００９２】
薄層シリカゲルプレートは、Ｙａｎｔａｉ  Ｙｅｌｌｏｗ  Ｓｅａ  ＨＳＧＦ２５４またはＱｉｎｇｄａｏ  ＧＦ２５４シリカゲルプレートである。Ｙａｎｔａｉ  Ｙｅｌｌｏｗ  Ｓｅａ  １００−２００または２００−３００メッシュのシリカゲルは、カラムクロマトグラフィにおける支持体として一般的に使用される。
【００９３】
本発明の既知の出発原材料は、当技術分野において既知の方法によってまたは当該方法に従って合成することができ、または、Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ａｃｃｅｌａ  ＣｈｅｍＢｉｏ  Ｉｎｃ．、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｂｉｄｅ  Ｐｈａｒｍａｔｅｃｈ、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ａｌａｄｄｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｍｅｒｙｅｒ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙなどの会社から購入することもできる。
【００９４】
実施例において、特に明記されない限り、反応において使用される溶媒は全て、無水溶媒であり、この場合、無水テトラヒドロフランは、市販のテトラヒドロフランであり、ナトリウムブロックを脱水剤として使用し、ベンゾフェノンを指示薬として使用し、当該溶液を、窒素ガスの保護下において青味がかった紫色を呈するまで還流し、蒸留し、収集し、窒素ガスの保護下において室温で貯蔵し、他の無水溶媒は、Ａｌａｄｄｉｎ  ＣｈｅｍｉｓｔｒｙおよびＡｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙから購入し、全ての無水溶媒の移し替えおよび使用は、特に明記されない限り、窒素ガスの保護下において実施するものとする。
【００９５】
実施例において、特に明記されない限り、反応は全て、アルゴン雰囲気下または窒素雰囲気下において実施される。
【００９６】
アルゴン雰囲気または窒素雰囲気は、反応フラスコが、約１Ｌの体積のアルゴン風船または窒素風船に接続されていることを意味する。
【００９７】
水素雰囲気は、反応フラスコが、約１Ｌの体積の水素風船に接続されていることを意味する。
【００９８】
水素化では、通常、当該反応物は、減圧され、水素ガスで満たされ、これを３回繰り返される。
【００９９】
反応温度は室温であり、温度範囲は、特に明記されない限り、１５℃から３０℃である。
【０１００】
実施例の反応プロセスをモニターするために、薄層クロマトグラフィ法（ＴＬＣ）を用いる。反応において使用した展開溶媒系は、Ａ：ジクロロメタンおよびメタノール系、およびＢ：石油エーテルおよび酢酸エチル系を含み、溶媒の体積比は、化合物の極性に応じて調節する。
【０１０１】
化合物の精製に用いられるカラムクロマトグラフィのための溶離液系および薄層クロマトグラフィ用の展開溶媒系は、Ａ：ジクロロメタンおよびメタノール系、およびＢ：石油エーテルおよび酢酸エチル系を含み、溶媒の体積比は、化合物の極性に応じて調節し、少量のトリエチルアミンおよび酸またはアルカリ試薬なども、調節のために添加することができる。
【０１０２】
実施例１
（Ｓ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−アクリルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン
【０１０３】
【化１３】
2019524883.tif 000022
【０１０４】
【化１４】
2019524883.tif 000023
【０１０５】
工程１
ベンジル−（Ｓ）−３−（（（３−クロロピラジン−２−イル）メチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボキシレート
ジクロロメタン（１００ｍＬ）中における（３−クロロピラジン−２−イル）メタンアミンヒドロクロリド１ａ（３．１ｇ、２１．７ｍｍｏｌ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（７．１ｇ、２２ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（９．３ｇ、７２ｍｍｏｌ）の溶液に、室温において、（Ｓ）−１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）ピロリジン−３−カルボン酸（４．５ｇ、１８ｍｍｏｌ）を、数回に分けて加えた。結果として得られた混合物を、室温で１６時間撹拌した。当該反応を水（３０ｍＬ）でクエンチし、有機相を分離した。水相をジクロロメタンで抽出し（５０ｍＬ×２）、収集した有機相を飽和塩水で洗浄し（５０ｍＬ×２）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。当該ろ液を真空下において濃縮し、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（ジクロロメタン／メタノール  ２０：１）によって精製することにより、ベンジル−（Ｓ）−３−（（（３−クロロピラジン−２−イル）メチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボキシレート１ｂ（４．８５ｇ、１３．０ｍｍｏｌ、黄色のオイル）を得た。収率：７２％。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．４３（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．３４（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．３７〜７．２６（ｍ、５Ｈ）、６．９２〜６．８５（ｂｓ、１Ｈ）、５．１４（ｓ、２Ｈ）、４．７１（ｄ、Ｊ＝４．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．８８−３．５１（ｍ、３Ｈ）、３．２２〜３．０５（ｍ、２Ｈ）、２．３１〜２．０７（ｍ、２Ｈ）。
【０１０６】
工程２
ベンジル−（Ｓ）−３−（８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート
アセトニトリル（６０ｍＬ）中におけるベンジル−（Ｓ）−３−（（（３−クロロピラジン−２−イル）メチル）カルバモイル）ピロリジン−１−カルボキシレート１ｂ（４．８５ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）の溶液に、室温において、オキシ塩化リン（９．２ｇ、６０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．１ｍＬ）を滴加した。結果として得られた混合物を、窒素下において、８０℃に加熱し、２時間撹拌した。当該混合物を室温まで冷却し、真空下において濃縮することにより、溶媒を除去した。残留物に飽和重炭酸ナトリウム溶液を加えることによって中和した。当該混合物をジクロロメタンで抽出し（８０ｍＬ×３）、収集した有機相を飽和塩水で洗浄し（５０ｍＬ×２）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。当該ろ液を真空下において濃縮し、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（２：１〜１：２のヘキサン／酢酸エチル）によって精製することにより、ベンジル−（Ｓ）−３−（８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート１ｃ（１．４１ｇ、３．９ｍｍｏｌ、黄色のオイル）を得た。収率：３３％。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．８１（ｓ、１Ｈ）、７．６２（ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２〜７．２６（ｍ、６Ｈ）、５．１６（ｓ、２Ｈ）、４．１０〜３．９５（ｍ、１Ｈ）、３．８８〜３．６５（ｍ、３Ｈ）、３．６４〜３．５５（ｍ、１Ｈ）、２．６６〜２．３２（ｍ、２Ｈ）。
【０１０７】
工程３
ベンジル−（Ｓ）−３−（１−ブロモ−８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中における、ベンジル−（Ｓ）−３−（８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート１ｃ（１．４２ｇ、４．０ｍｍｏｌ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（０．７１ｇ、４．０ｍｍｏｌ）の懸濁液を、室温で１時間撹拌した。当該反応を飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した（５０ｍＬ×３）。収集した有機相を飽和塩水で洗浄し（５０ｍＬ×２）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。当該ろ液を真空下において濃縮し、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（２：１〜１：２のヘキサン／酢酸エチル）によって精製することにより、ベンジル−（Ｓ）−３−（１−ブロモ−８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート１ｄ（１．４５ｇ、３．３ｍｍｏｌ、黄色のオイル）を得た。収率：８６％。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．６０（ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．４４〜７．２６（ｍ、６Ｈ）、５．１５（ｓ、２Ｈ）、４．０１〜３．８５（ｍ、１Ｈ）、３．８４〜３．６１（ｍ、３Ｈ）、３．６０〜３．５２（ｍ、１Ｈ）、２．６３〜２．２８（ｍ、２Ｈ）。
【０１０８】
工程４
ベンジル−（Ｓ）−３−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート
密封管（１２０ｍＬ）において、ベンジル−（Ｓ）−３−（１−ブロモ−８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート１ｄ（１．４５ｇ、３．３ｍｍｏｌ）およびイソプロパノール（３０ｍＬ）に、撹拌しながら水酸化アンモニウム（３０％水溶液、４ｍＬ）を滴加した。当該菅を密封し、当該混合物を１００℃で６時間加熱した。室温まで冷却し、当該反応混合物を水（３０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチルで抽出した（５０ｍＬ×３）。当該有機相を飽和塩水で洗浄した（５０ｍＬ×２）。収集した有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（２０：１〜１０：１のジクロロメタン／メタノール）によって精製することにより、ベンジル−（Ｓ）−３−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート１ｅ（１．１２ｇ、２．７ｍｍｏｌ、黄色のオイル）を得た。収率：８２％。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．４３〜７．２６（ｍ、５Ｈ）、７．１７（ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．１６（ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．０２〜５．５８（ｂｓ、２Ｈ）、５．１５（ｓ、２Ｈ）、４．０３〜３．８８（ｍ、１Ｈ）、３．８４〜３．５１（ｍ、４Ｈ）、２．６３〜２．２６（ｍ、２Ｈ）。
【０１０９】
工程５
ベンジル−（Ｓ）−３−（８−アミノ−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中におけるベンジル−（Ｓ）−３−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート１ｅ（１．２２ｇ、２．７ｍｍｏｌ）、１−エチニル−３，５−ジメトキシベンゼン（２．４６ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（３．０ｇ、３０ｍｍｏｌ）の溶液に、ヨウ化第一銅（６０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（１１０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を加えた。当該混合物を８０℃に加熱し、窒素下において５時間撹拌した。当該混合物を、室温まで冷却し、飽和塩化アンモニウム溶液（１０ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した（５０ｍＬ×３）。当該有機相を飽和塩水で洗浄した（２０ｍＬ×２）。収集した有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（２０：１〜１０：１のジクロロメタン／メタノール）によって精製することにより、ベンジル−（Ｓ）−３−（８−アミノ−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート１ｆ（３１０ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ、灰色固体）を得た。収率：２３％。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．４８〜７．２６（ｍ、５Ｈ）、７．２４〜７．０４（ｍ、２Ｈ）、６．７１（ｓ、２Ｈ）、６．５０（ｓ、１Ｈ）、５．９７〜５．５８（ｂｓ、２Ｈ）、５．１５（ｓ、２Ｈ）、４．０２〜３．８８（ｍ、１Ｈ）、３．８０（ｓ、６Ｈ）、３．８３〜３．５１（ｍ、４Ｈ）、２．６８〜２．２５（ｍ、２Ｈ）。
【０１１０】
工程６
（Ｓ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（ピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン塩酸塩
塩酸（３７％水溶液、２ｍＬ）中におけるベンジル−（Ｓ）−３−（８−アミノ−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート１ｆ（３１０ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ、灰色固体）の懸濁液を、室温で４８時間撹拌した。当該反応混合物を超純水（２０ｍＬ）で希釈し、ジエチルエーテル（５ｍＬ）で抽出した。結果として得られた水相を真空下で濃縮することによって、（Ｓ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（ピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン塩酸１ｇ（１９６ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ、黄色固体）を得た。収率：７３％。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３６４［Ｍ＋１］。
【０１１１】
工程７
（Ｓ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−アクリルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン
無水Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（１．０ｍＬ）および無水テトラヒドロフラン（１．０ｍＬ）中における（Ｓ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（ピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン塩酸塩１ｇ（１９６ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２００ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）の懸濁液を、窒素保護下において、０℃で１０分間撹拌した。激しく撹拌しながら、無水テトラヒドロフラン（１ｍＬ）中における塩化アクリロイル（４１ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）の溶液を滴加し、その後、当該混合物をさらに２分間撹拌した。当該混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液剤（１０ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した（３０ｍＬ×３）。収集した有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。残留物を分取ＴＬＣ（２０：１のジクロロメタン／メタノール）で精製することにより、（Ｓ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−アクリルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン１（５７．８ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ、黄色固体）を得た。収率：３１％。
ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４１８［Ｍ＋１］；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２４〜７．１２（ｍ、２Ｈ）、６．７１（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、２Ｈ）、６．５１〜６．４９（ｍ、１Ｈ）、６．４８〜６．４０（ｍ、２Ｈ）、５．９０〜５．７５（ｂｓ、２Ｈ）、５．７４〜５．６８（ｍ、１Ｈ）、４．２１〜４．０５（ｍ、２Ｈ）、４．０２〜３．９１（ｍ、１Ｈ）、３．８１（ｓ、６Ｈ）、３．８０〜３．６１（ｍ、２Ｈ）、２．５５〜２．１９（ｍ、２Ｈ）。
【０１１２】
実施例２
１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−アクリルアザシクロブタン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン
【０１１３】
【化１５】
2019524883.tif 000024
【０１１４】
【化１６】
2019524883.tif 000025
【０１１５】
工程１
ベンジル−３−（（（３−クロロピラジン−２−イル）メチル）カルバモイル）アゼチジン−１−カルボキシレート
室温において、ジクロロメタン（２０ｍＬ）中における（３−クロロピラジン−２−イル）メタンアミンヒドロクロリド１ａ（０．９ｇ、５．０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．０２ｍＬ）の溶液に、ジクロロメタン（５．０ｍＬ）中におけるベンジル３−（クロロカルボニル）アゼチジン−１−カルボキシレート（１．３ｇ、５．０ｍｍｏｌ）の溶液を、室温において滴加した。結果として得られた混合物を、室温で１０分間撹拌した。当該反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液剤（３０ｍＬ）でクエンチし、有機相を分離した。当該水層をジクロロメタンで抽出した（３０ｍｌ×２）。収集した有機相を飽和塩水で洗浄し（３０ｍＬ×２）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。当該ろ液を真空下において濃縮し、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（２０：１のジクロロメタン／メタノール）によって精製することにより、ベンジル−３−（（（３−クロロピラジン−２−イル）メチル）カルバモイル）アゼチジン−１−カルボキシレート２ａ（１．２０ｇ、３．７ｍｍｏｌ、黄色のオイル）を得た。収率：７５％。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．４３（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．３４（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．３５〜７．２７（ｍ、５Ｈ）、６．９１（ｂｓ、１Ｈ）、５．１０（ｓ、２Ｈ）、４．７１（ｄ、Ｊ＝４．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．２７〜４．１９（ｍ、４Ｈ）、３．４０（ｄｄ、Ｊ＝６．０＆６．０Ｈｚ、１Ｈ）である。
【０１１６】
工程２
ベンジル−３−（８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）アゼチジン−１−カルボキシレート
室温において、アセトニトリル（１５ｍＬ）中におけるベンジル−３−（（（３−クロロピラジン−２−イル）メチル）カルバモイル）アゼチジン−１−カルボキシレート２ｂ（０．４８ｇ、１．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（１．２０ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）を滴加した。結果として得られた混合物に、窒素保護下において、オキシ塩化リン（１．１５ｇ、７．５ｍｍｏｌ）を滴加し、室温で０．５時間撹拌した。当該混合物を真空下において濃縮することにより、溶媒を除去した。当該残留物を、飽和重炭酸ナトリウム溶液で中和し、ジクロロメタンで抽出した（５０ｍＬ×３）。収集した有機相を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。当該ろ液を真空下において濃縮し、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（３：１〜１：２のヘキサン／酢酸エチル）によって精製することにより、ベンジル−３−（８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）アゼチジン−１−カルボキシレート２ｂ（０．３７ｇ、１．１ｍｍｏｌ、黄色のオイル）を得た。収率：７２％。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３４３および３４５［Ｍ＋１］
【０１１７】
工程３
ベンジル−３−（１−ブロモ−８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）アゼチジン−１−カルボキシレート
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）中における、ベンジル−３−（８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）アゼチジン−１−カルボキシレート２ｃ（０．１１８ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（０．７１ｇ、４．０ｍｍｏｌ）の懸濁液を、室温で１時間撹拌した。当該反応を飽和チオ硫酸ナトリウム溶液でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した（３０ｍＬ×４）。収集した有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。当該ろ液を真空下において濃縮し、残留物を分取ＴＬＣ（１：１のヘキサン／酢酸エチル）によって精製することにより、表題の化合物ベンジル−３−（１−ブロモ−８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）アゼチジン−１−カルボキシレート２ｃ（０．１４３ｇ、０．３４ｍｍｏｌ、黄色のオイル）を得た。収率：９４％。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４２１および４２３［Ｍ＋１］
【０１１８】
工程４
ベンジル−３−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）アゼチジン−１−カルボキシレート
密封管（１２０ｍＬ）において、ベンジル−３−（１−ブロモ−８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）アゼチジン−１−カルボキシレート２ｆ（０．１４３ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を、イソプロパノール（１０ｍＬ）に溶解させ、撹拌しながら、水酸化アンモニウム（３０％水溶液、２ｍＬ）を滴加した。当該菅を密封し、当該混合物を１００℃に加熱し、６時間撹拌した。当該混合物を室温まで冷却し、真空下において濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（１９：１のジクロロメタン／メタノール）によって精製することにより、ベンジル−３−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）アゼチジン−１−カルボキシレート２ｅ（０．１２３ｇ、０．３１ｍｍｏｌ、黄色のオイル）を得た。収率：９０％。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４０２および４０４［Ｍ＋１］
【０１１９】
工程５
ベンジル−３−（８−アミノ−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）アゼチジン−１−カルボキシレート
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中におけるベンジル−３−（８−アミノ−１−ブロモイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）アゼチジン−１−カルボキシレート２ｅ（０．１２３ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、１−エチニル−３，５−ジメトキシベンゼン（０．７４０ｇ、３．１０ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（０．３１０ｇ、３．１０ｍｍｏｌ）の溶液に、ヨウ化第一銅（１２ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（２２ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を加えた。当該混合物を８０℃に加熱し、５時間撹拌した。当該混合物を、室温まで冷却し、飽和塩化アンモニウム溶液（１０ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した（５０ｍＬ×３）。収集した有機相を塩水で洗浄し（２０ｍＬ×２）、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。残留物を分取ＴＬＣ（１９：１のジクロロメタン／メタノール）によって精製することにより、ベンジル−３−（８−アミノ−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）アゼチジン−１−カルボキシレート２ｆ（５２．５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、灰色固体）を得た。収率：３５％。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４８４［Ｍ＋１］
【０１２０】
工程６
１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（アゼチジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン塩酸塩
塩酸（３７％水溶液、１ｍＬ）中におけるベンジル−３−（８−アミノ−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）アゼチジン−１−カルボキシレート２ｆ（１０．５ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ、灰色固体）の懸濁液を室温で３時間撹拌した。当該反応物を超純水（５ｍＬ）で希釈し、ジエチルエーテル（５ｍＬ）で洗浄した。当該水相を真空下において濃縮することにより、１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（アゼチジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン塩酸塩２ｇ（１１．３ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ、黄色固体）を得た。収率：１００％。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：３５０［Ｍ＋１］
【０１２１】
工程７
１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−アクリルアザシクロブタン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン
無水Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（１．０ｍＬ）および無水テトラヒドロフラン（１．２ｍＬ）中における１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（アゼチジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン塩酸塩２ｇ（１１．３ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の懸濁液を、０℃で１０分間撹拌した。窒素保護下において、激しく撹拌しながら、無水テトラヒドロフラン（１．０ｍＬ）中における塩化アクリロイル（２ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。当該混合物を２分間撹拌し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した（３０ｍＬ×３）。収集した有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。残留物を分取ＴＬＣ（２０：１のジクロロメタン／メタノール）で精製することにより、１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−アクリルアザシクロブタン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン２（５．５ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、白色固体）を得た。収率：７０％。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４０４［Ｍ＋１］；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．１６〜７．１２（ｍ、１Ｈ）、７．１０〜７．０７（ｍ、１Ｈ）、６．７２（ｓ、２Ｈ）、６．５１（ｓ、１Ｈ）、６．３７（ｄ、Ｊ＝１７．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．２４（ｔ、Ｊ＝１７．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．０６〜５．７８（ｂｓ、２Ｈ）、５．７２（ｄ、Ｊ＝１７．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．９０〜４．８２（ｍ、１Ｈ）、４．６６（ｔ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．５７（ｔ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．４０〜４．２９（ｍ、１Ｈ）、４．１８〜４．０６（ｍ、１Ｈ）、３．８１（ｓ、６Ｈ）。
【０１２２】
実施例３
（Ｒ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−アクリルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン
【０１２３】
【化１７】
2019524883.tif 000026
【０１２４】
（Ｒ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−アクリルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン３を、実施例１の第１の工程において（Ｓ）−１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）ピロリジン−３−カルボン酸を（Ｒ）−１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）ピロリジン−３−カルボン酸で置き換えることにより、実施例１の工程に従って調製した。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４１８［Ｍ＋１］；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２４〜７．１１（ｍ、２Ｈ）、６．７１（ｓ、２Ｈ）、６．５０〜６．３７（ｍ、３Ｈ）、６．１９〜５．８４（ｂｓ、２Ｈ）、５．７８〜５．７０（ｍ、１Ｈ）、４．１６〜４．０７（ｍ、２Ｈ）、３．９６〜３．９３（ｍ、１Ｈ）、３．８０（ｓ、６Ｈ）、３．８０〜３．６１（ｍ、２Ｈ）、２．４６〜２．２２（ｍ、２Ｈ）。
【０１２５】
実施例４
１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−アクリルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン
【０１２６】
【化１８】
2019524883.tif 000027
【０１２７】
１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−アクリルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン４を、実施例１の第１の工程において（Ｓ）−１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）ピロリジン−３−カルボン酸を１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）ピロリジン−３−カルボン酸で置き換えることにより、実施例１の工程に従って調製した。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４１８［Ｍ＋１］；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２４〜７．０４（ｍ、２Ｈ）、６．７１（ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、２Ｈ）、６．５１〜６．４８（ｍ、１Ｈ）、６．５１〜６．３２（ｍ、２Ｈ）、６．１９〜５．８４（ｂｓ、２Ｈ）、５．７５〜５．６５（ｍ、１Ｈ）、４．２４〜４．０３（ｍ、２Ｈ）、４．０２〜３．８９（ｍ、１Ｈ）、３．８１（ｓ、６Ｈ）、３．８０〜３．６１（ｍ、２Ｈ）、２．５５〜２．１６（ｍ、２Ｈ）。
【０１２８】
実施例５
（Ｒ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−ブタン−２−イノイルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン
【０１２９】
【化１９】
2019524883.tif 000028
【０１３０】
（Ｒ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−ブタン−２−イノイルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン５を、実施例３の工程に従って、ただし、実施例３の第７の工程において塩化アクリロイルを塩化ブタ−２−イノイルで置き換えることにより、実施例３の工程に従って調製した。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４３０［Ｍ＋１］；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２３〜７．１２（ｍ、２Ｈ）、６．７２（ｓ、２Ｈ）、６．５０（ｓ、１Ｈ）、６．２０〜５．８０（ｂｒ、２Ｈ）、４．２４〜３．９９（ｍ、３Ｈ）、３．８１（ｓ、６Ｈ）、３．７４〜３．６０（ｍ，２Ｈ）、２．４４〜２．３４（ｍ、２Ｈ）、２．０４〜１．９５（ｍ、３Ｈ）。
【０１３１】
実施例６
（Ｒ）−（Ｅ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−ブタン−２−エノイルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン
【０１３２】
【化２０】
2019524883.tif 000029
【０１３３】
（Ｒ）−（Ｅ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−ブタン−２−エノイルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン６を、実施例３の第７の工程において塩化アクリロイルを塩化２−ブテノイルで置き換えることにより、実施例３の工程に従って調製した。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４３２［Ｍ＋１］；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２３〜７．１４（ｍ、２Ｈ）、６．９８〜６．９６（ｍ、１Ｈ）、６．７２（ｓ、２Ｈ）、６．５０（ｓ、１Ｈ）、６．１６（ｄ、Ｊ＝１５．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．９５（ｂｓ、２Ｈ）、４．１３〜３．９４（ｍ，３Ｈ）、３．８１（ｓ、６Ｈ）、３．７３〜３．６３（ｍ、２Ｈ）、２．４５〜２．３０（ｍ、２Ｈ）、１．９１〜１．８７（ｍ、３Ｈ）。
【０１３４】
実施例７
（Ｅ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−ブタン−２−エノイルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン
【０１３５】
【化２１】
2019524883.tif 000030
【０１３６】
（Ｅ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−ブタン−２−エノイルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン７を、実施例４の第７の工程において塩化アクリロイルを塩化２−ブテノイルで置き換えることにより、実施例４の工程に従って調製した。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４３２［Ｍ＋１］；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２３〜７．１４（ｍ、２Ｈ）、６．９８〜６．９６（ｍ、１Ｈ）、６．７２（ｓ、２Ｈ）、６．５０（ｓ、１Ｈ）、６．１６（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、１Ｈ）、５．９９〜５．９１（ｂｒ、２Ｈ）、４．１３〜３．９４（ｍ、３Ｈ）、３．８１（ｓ、６Ｈ）、３．７３〜３．６３（ｍ、２Ｈ）、２．４５〜２．３０（ｍ、２Ｈ）、１．９１〜１．８７（ｍ、３Ｈ）。
【０１３７】
実施例８
１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−プロピノイルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン
【０１３８】
【化２２】
2019524883.tif 000031
【０１３９】
１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−プロピノイルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン８を、実施例４の第７の工程において塩化アクリロイルを塩化プロピオロイルで置き換えることにより、実施例４の工程に従って調製した。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４１６［Ｍ＋１］
【０１４０】
実施例９
１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−ブタン−２−イノイルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン
【０１４１】
【化２３】
2019524883.tif 000032
【０１４２】
１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−ブタン−２−イノイルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン９を、実施例４の第７の工程において塩化アクリロイルを塩化ブタ−２−イノイルで置き換えることにより、実施例４の工程に従って調製した。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４３０［Ｍ＋１］；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２３〜７．１４（ｍ、２Ｈ）、６．７２（ｓ、２Ｈ）、６．５０（ｓ、１Ｈ）、５．８８（ｂｒ、２Ｈ）、４．２４〜４．０２（ｍ、３Ｈ），３．８１（ｓ、６Ｈ）３．８８〜３．６０（ｍ、２Ｈ）、２．４４〜２．３９（ｍ、２Ｈ）、２．０５（ｓ、３Ｈ）。
【０１４３】
実施例１０
（Ｅ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−（４−ジメチルアミノ））ブタン−２−エノイルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン
【０１４４】
【化２４】
2019524883.tif 000033
【０１４５】
（Ｅ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−（４−ジメチルアミノ））ブタン−２−エノイルピロリジン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン１０を、実施例４の第７の工程において塩化アクリロイルを（Ｅ）−４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイルクロリドで置き換えることにより、実施例４の工程に従って調製した。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４７５［Ｍ＋１］；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２０〜７．１６（ｍ、２Ｈ）、６．９８〜６．９０（ｍ、１Ｈ）、６．７１（ｓ、２Ｈ）、６．５０（ｓ、１Ｈ）、６．４５（ｓ、１Ｈ）、５．８５〜５．７８（ｂｒ、２Ｈ）、４．１３〜４．１１（ｍ、２Ｈ）、３．９７〜３．９４（ｍ、３Ｈ）、３．８１（ｓ、６Ｈ）、３．７６〜３．７７（ｍ、２Ｈ）、２．３０〜２．２８（ｍ、８Ｈ）。
【０１４６】
実施例１１
（Ｅ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−ブタ−２−エノイルアザシクロブタン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン
【０１４７】
【化２５】
2019524883.tif 000034
【０１４８】
（Ｅ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−ブタ−２−エノイルアザシクロブタン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン１１を、実施例２の第７の工程において塩化アクリロイルを塩化２−ブテノイルで置き換えることにより、実施例２の工程に従って調製した。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４１８［Ｍ＋１］；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．１４〜７．１２（ｍ、１Ｈ）、７．０９〜７．０７（ｍ、１Ｈ）、７．０２〜６．８２（ｍ、１Ｈ）、６．７２（ｓ、２Ｈ）、６．５１（ｓ、１Ｈ）、６．１８〜５．８５（ｍ、２Ｈ）、５．３６〜５．３３（ｍ、１Ｈ）、４．８４〜４．８０（ｍ、１Ｈ）、４．６４〜４．６１（ｍ、１Ｈ）、４．５５〜４．５０（ｍ、１Ｈ）、４．３８〜４．２６（ｍ、１Ｈ）、４．１８〜４．０３（ｍ、１Ｈ）、３．８１（ｓ、６Ｈ）、１．８９（ｄ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、３Ｈ）。
【０１４９】
実施例１２
１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−ブタ−２−イノイルアザシクロブタン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン
【０１５０】
【化２６】
2019524883.tif 000035
【０１５１】
１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−ブタ−２−イノイルアザシクロブタン−３−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−アミン１２を、実施例２の第７の工程において塩化アクリロイルを塩化ブタ−２−イノイルで置き換えることにより、実施例２の工程に従って調製した。
ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ）：４１６［Ｍ＋１］；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．１５（ｄ、Ｊ＝２．８、１Ｈ）、７．０８（ｄ、Ｊ＝２．８、１Ｈ）、６．７２（ｓ、２Ｈ）、６．５１（ｓ、１Ｈ）、５．８６〜５．８２（ｂｒ、２Ｈ）、４．７９〜４．７１（ｍ、１Ｈ）、４．６１（ｔ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．５０（ｔ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．３８（ｔ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．１７〜４．０５（ｍ、１Ｈ）、３．８１（ｓ、６Ｈ）、１．９９（ｓ、３Ｈ）。
【０１５２】
生物学的実験
ＦＧＦＲ１活性阻害試験
線維芽細胞増殖因子レセプタ１（ＦＧＦＲ１）のチロシンキナーゼ活性に対する本発明による化合物の影響を、インビトロでのキナーゼアッセイ実験によって評価した。
【０１５３】
当該実験方法は、以下のように要約される：
【０１５４】
ＦＧＦＲ１のインビトロ活性は、ＨＴＲＦ（均一時間分解蛍光：Homogeneous  Time-Resolve  Fluorescence）キナーゼアッセイキットにより、当該キナーゼ反応における当該基質のリン酸化度をアッセイすることよって特定した。当該反応緩衝液は、以下の成分：５倍希釈された酵素緩衝液／キナーゼ５Ｘ（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＥＺＢＦＤＤ）（主要成分：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０）、５ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＤＴＴ、で構成され；ヒト遺伝子組換えＦＧＦＲ１触媒構造ドメインタンパク質（アミノ酸３０８〜７３１）は、Ｔｓｉｎｇｈｕａ大学、Ｚｈｅｎｇ  Ｙｕｔｏｎｇビルにある、Ｔｓｉｎｇｈｕａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒから購入し、反応緩衝液によって０．６ｎｇ／μＬキナーゼ溶液へと希釈し；当該基質反応溶液は、反応緩衝液で４００ｎＭに希釈されたビオチン標識化チロシンキナーゼ基質（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＴＫ０ＰＥＣ）と、４０μＭのＡＴＰと、を含んでおり、ならびに当該アッセイ溶液は、アッセイ緩衝液（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＳＤＢＲＤＦ）で０．１２５ｎｇ／μＬに希釈されたＥｕ３＋で標識化されたケージ形状の抗体（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６１Ｔ６６ＫＬＢ）と、２５ｎＭの、ストレプトアビジンで標識化されたＸＬ６６５（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６１０ＳＡＸＬＢ）と、を含んでいた。
【０１５５】
当該化合物を、１００％のＤＭＳＯに溶解させて１ｍＭに希釈し、次いで、４倍希釈系列を０．０６１μＭの最小濃度までＤＭＳＯにより希釈し、各濃度点を、当該反応緩衝液で４０倍に希釈した。当該化合物のＩＣ５０値が非常に低い場合、当該化合物の初期濃度を下げることができる。
【０１５６】
４μＬの化合物溶液と２μＬのＦＧＦＲ１キナーゼ溶液とを、３８４ウェルアッセイプレート（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈ、カタログ番号２６４７０６）に加え、均一に混合し、次いで室温で１５分間インキュベートし；続いて、４μＬの当該基質反応溶液をそこに加え、当該反応混合物を室温で６０分間インキュベートし；次いで、当該反応物に対して等体積の１０μＬのアッセイ溶液をそこに加え、均一に混合した後、室温で静置した。６０分後、ＥＤＴＡにより当該アッセイ溶液における酵素反応を停止させ、リン酸化生成物を、同時に、Ｅｕ３＋で標識されたケージ形状の抗体（ドナー）およびストレプトアビジンで標識されたＸＬ６６５抗体（レセプタ）の両方によって同定した。レーザーによる励起の後、お互いに近くにあるドナーおよびレセプタは、エネルギー共鳴移動を受け、当該ドナー（６２０ｎｍ）からレセプタ（６６５ｎｍ）へと移動されたエネルギーは、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、米国カリフォルニアのリモンシティにある企業）によって検出することができた。６６５／６２０の比は、当該基質のリン酸化度に対して正の相関にあり、したがって、ＦＧＦＲ１キナーゼ活性の検出に対して正の相関にある。この実験において、ＦＧＦＲ１タンパク質を加えなかった群を、ネガティブコントロール（１００％阻害）として使用し、ＦＧＦＲ１タンパク質を加えたが当該化合物は加えなかった群を、ポジティブコントロール（０％阻害）として使用した。ＦＧＦＲ１活性に対する当該化合物の阻害割合は、以下の式によって計算することができた：
阻害割合＝１００−１００×（シグナル化合物−シグナルネガティブコントロール）／シグナルポジティブコントロール−シグナルネガティブコントロール）
【０１５７】
当該化合物のＩＣ５０は、１０の濃度点から、ソフトウェアＸＬｆｉｔ（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ．、英国）により、以下の式によって計算した：
Ｙ＝ボトム＋（トップ−ボトム）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０−Ｘ）×スロープファクター））
ここで、Ｙは、阻害割合であり、ボトムは、Ｓ字型曲線の下部プラト値であり、トップは、当該Ｓ字型曲線の上部プラト値であり、Ｘは、測定される化合物濃度のｌｏｇ値であり、スロープファクターは、当該曲線の傾斜係数である。
【０１５８】
ＦＧＦＲ２活性阻害試験
線維芽細胞増殖因子レセプタ２（ＦＧＦＲ２）の活性に対する本発明による化合物の影響を、インビトロでのキナーゼアッセイ実験によって評価した。
【０１５９】
当該実験方法は、以下のように要約される：
【０１６０】
ＦＧＦＲ２のインビトロ活性は、ＨＴＲＦキナーゼアッセイキットにより、キナーゼ反応における基質のリン酸化度をアッセイすることによって特定した。当該反応緩衝液は、以下の成分：５倍希釈された酵素緩衝液／キナーゼ５Ｘ（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＥＺＢＦＤＤ）（主成分：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０）、５ｍＭのＭｇＣｌ２，１ｍＭのＤＴＴ、で構成され；ヒト遺伝子組換えＦＧＦＲ２触媒構造ドメインタンパク質（アミノ酸４００〜８２１）は、Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．（Ｚｈｏｎｇｈｅ  Ｓｔｒｅｅｔ  １４，  Ｂ−２０３，  Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｚｏｎｅ，  ４００８９０９９８９）から市販されており、それを反応緩衝液で０．０４５ｎｇ／μＬキナーゼ溶液へと希釈し；当該基質反応溶液は、反応緩衝液で８００ｎＭに希釈されたビオチン標識化チロシンキナーゼ基質（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＴＫ０ＰＥＣ）と、５０μＭのＡＴＰと、を含んでおり、ならびに当該アッセイ溶液は、アッセイ緩衝液（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＳＤＢＲＤＦ）で０．１２５ｎｇ／μＬに希釈された、Ｅｕ３＋で標識化されたケージ形状の抗体（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６１Ｔ６６ＫＬＢ）と、５０ｎＭの、ストレプトアビジンで標識化されたＸＬ６６５（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６１０ＳＡＸＬＢ）と、を含んでいた。
当該化合物を、１００％のＤＭＳＯに溶解させて１００μＭに希釈し、次いで、４倍希釈系列を０．００６１μＭの最小濃度までＤＭＳＯにより希釈し、各濃度点を、当該反応緩衝液で４０倍に希釈した。当該化合物のＩＣ５０値が非常に低い場合、当該化合物の初期濃度を下げることができる。
【０１６１】
４μＬの化合物溶液と２μＬのＦＧＦＲ２キナーゼ溶液とを、３８４ウェルアッセイプレート（Ｔｈｅｒｍｏ、カタログ番号２６４７０６）に加え、均一に混合し、次いで、室温で１５分間インキュベートし；続いて、４μＬの当該基質反応溶液をそこに加え、当該反応混合物を室温で６０分間インキュベートし；次いで、当該反応物に対して等体積の１０μＬのアッセイ溶液をそこに加え、均一に混合した後、室温で静置した。６０分後、ＥＤＴＡにより当該アッセイ溶液における酵素反応を停止させ、リン酸化生成物を、同時に、Ｅｕ３＋で標識されたケージ形状の抗体（ドナー）およびストレプトアビジンで標識されたＸＬ６６５抗体（レセプタ）の両方によって同定した。レーザーによる励起の後、お互いに近くにあるドナーおよびレセプタは、エネルギー共鳴移動を受け、当該ドナー（６２０ｎｍ）からレセプタ（６６５ｎｍ）へと移動されたエネルギーは、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、米国カリフォルニアのリモンシティにある企業）によって検出することができた。６６５／６２０の比は、当該基質のリン酸化度に対して正の相関にあり、したがって、ＦＧＦＲ２キナーゼ活性の検出に対して正の相関にある。この実験において、ＦＧＦＲ２タンパク質を加えなかった群を、ネガティブコントロール（１００％阻害）として使用し、ＦＧＦＲ２タンパク質を加えたが当該化合物は加えなかった群を、ポジティブコントロール（０％阻害）として使用した。ＦＧＦＲ２活性に対する当該化合物の阻害割合は、以下の式によって計算することができた：
阻害割合＝１００−１００×（シグナル化合物−シグナルネガティブコントロール）／シグナルポジティブコントロール−シグナルネガティブコントロール）
【０１６２】
当該化合物のＩＣ５０は、１０の濃度点から、ソフトウェアＸＬｆｉｔ（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ．、英国）により、以下の式によって計算した：
Ｙ＝ボトム＋（トップ−ボトム）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０−Ｘ）×スロープファクター））
ここで、Ｙは、阻害割合であり、ボトムは、Ｓ字型曲線の下部プラト値であり、トップは、当該Ｓ字型曲線の上部プラト値であり、Ｘは、測定される化合物濃度のｌｏｇ値であり、スロープファクターは、当該曲線の傾斜係数である。
【０１６３】
ＦＧＦＲ３活性阻害試験
線維芽細胞増殖因子レセプタ３（ＦＧＦＲ３）の活性に対する本発明による化合物の影響を、インビトロでのキナーゼアッセイ実験によって評価した。
【０１６４】
当該実験方法は、以下のように要約される：
【０１６５】
ＦＧＦＲ３のインビトロ活性は、ＨＴＲＦキナーゼアッセイキットにより、キナーゼ反応における基質のリン酸化度をアッセイすることによって特定した。当該反応緩衝液は、以下の成分：５倍希釈された酵素緩衝液／キナーゼ５Ｘ（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＥＺＢＦＤＤ）（主成分：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０）、５ｍＭのＭｇＣｌ２，１ｍＭのＤＴＴ、で構成され；ヒト遺伝子組換えＦＧＦＲ３触媒構造ドメインタンパク質（アミノ酸３９９〜８０６）は、Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．（Ｚｈｏｎｇｈｅ  Ｓｔｒｅｅｔ  １４，  Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｚｏｎｅ）から市販されており、それを反応緩衝液で０．３ｎｇ／μＬキナーゼ溶液へと希釈し；当該基質反応溶液は、反応緩衝液で１０００ｎＭに希釈されたビオチン標識化チロシンキナーゼ基質（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＴＫ０ＰＥＣ）と、９０μＭのＡＴＰとで構成され、ならびに当該アッセイ溶液は、アッセイ緩衝液（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＳＤＢＲＤＦ）で０．１２５ｎｇ／μＬに希釈された、Ｅｕ３＋で標識化されたケージ形状の抗体（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６１Ｔ６６ＫＬＢ）と、６２．５ｎＭの、ストレプトアビジンで標識化されたＸＬ６６５（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６１０ＳＡＸＬＢ）と、を含んでいた。
当該化合物を、１００％のＤＭＳＯに溶解させて１００μＭに希釈し、次いで、４倍希釈系列を０．００６１μＭの最小濃度までＤＭＳＯにより希釈し、各濃度点を、当該反応緩衝液で４０倍に希釈した。当該化合物のＩＣ５０値が非常に低い場合、当該化合物の初期濃度を下げることができる。
【０１６６】
４μＬの化合物溶液と２μＬのＦＧＦＲ３キナーゼ溶液とを、３８４ウェルアッセイプレート（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈ、カタログ番号２６４７０６）に加え、均一に混合し、次いで室温で１５分間インキュベートし；続いて、４μＬの当該基質反応溶液をそこに加え、当該反応混合物を室温で６０分間インキュベートし；次いで、当該反応物に対して等体積の１０μＬのアッセイ溶液をそこに加え、均一に混合した後、室温で静置した。６０分後、ＥＤＴＡにより当該アッセイ溶液における酵素反応を停止させ、リン酸化生成物を、同時に、Ｅｕ３＋で標識されたケージ形状の抗体（ドナー）およびストレプトアビジンで標識されたＸＬ６６５抗体（レセプタ）の両方によって同定した。レーザーによる励起の後、お互いに近くにあるドナーおよびレセプタは、エネルギー共鳴移動を受け、当該ドナー（６２０ｎｍ）からレセプタ（６６５ｎｍ）へと移動されたエネルギーは、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、米国カリフォルニアのリモンシティにある企業）によって検出することができた。６６５／６２０の比は、当該基質のリン酸化度に対して正の相関にあり、したがって、ＦＧＦＲ３キナーゼ活性の検出に対して正の相関にある。この実験において、ＦＧＦＲ３タンパク質を加えなかった群を、ネガティブコントロール（１００％阻害）として使用し、ＦＧＦＲ３タンパク質を加えたが当該化合物は加えなかった群を、ポジティブコントロール（０％阻害）として使用した。ＦＧＦＲ３活性に対する当該化合物の阻害割合は、以下の式によって計算することができた：
阻害割合＝１００−１００×（シグナル化合物−シグナルネガティブコントロール）／シグナルポジティブコントロール−シグナルネガティブコントロール）
【０１６７】
当該化合物のＩＣ５０は、１０の濃度点から、ソフトウェアＸＬｆｉｔ（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ．、英国）により、以下の式によって計算した：
Ｙ＝ボトム＋（トップ−ボトム）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０−Ｘ）×スロープファクター））
ここで、Ｙは、阻害割合であり、ボトムは、Ｓ字型曲線の下部プラト値であり、トップは、当該Ｓ字型曲線の上部プラト値であり、Ｘは、測定される化合物濃度のｌｏｇ値であり、スロープファクターは、当該曲線の傾斜係数である。
【０１６８】
ＦＧＦＲ４活性阻害試験
線維芽細胞増殖因子レセプタ４（ＦＧＦＲ４）の活性に対する本発明による化合物の影響を、インビトロでのキナーゼアッセイ実験によって評価した。
【０１６９】
当該実験方法は、以下のように要約される：
【０１７０】
ＦＧＦＲ４のインビトロ活性は、ＨＴＲＦキナーゼアッセイキットにより、キナーゼ反応における基質のリン酸化度をアッセイすることによって特定した。当該反応緩衝液は、以下の成分：５倍希釈された酵素緩衝液／キナーゼ５Ｘ（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＥＺＢＦＤＤ）（主成分：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０）、５ｍＭのＭｇＣｌ２，１ｍＭのＤＴＴ、で構成され；ヒト遺伝子組換えＦＧＦＲ４触媒構造ドメインタンパク質（アミノ酸４６０〜８０２）は、Ｔｓｉｎｇｈｕａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒから市販されており、それを、反応緩衝液によって０．５ｎｇ／μＬキナーゼ溶液へと希釈し；当該基質反応溶液は、反応緩衝液で５００ｎＭに希釈されたビオチン標識化チロシンキナーゼ基質（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＴＫ０ＰＥＣ）と、９０μＭのＡＴＰとで構成され、ならびに当該アッセイ溶液は、アッセイ緩衝液（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＳＤＢＲＤＦ）で０．１２５ｎｇ／μＬに希釈された、Ｅｕ３＋で標識化されたケージ形状の抗体（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６１Ｔ６６ＫＬＢ）と、３１．２５ｎＭの、ストレプトアビジンで標識化されたＸＬ６６５（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６１０ＳＡＸＬＢ）と、を含んでいた。
【０１７１】
当該化合物を、１００％のＤＭＳＯに溶解させて１００μＭに希釈し、次いで、４倍希釈系列を０．００６１μＭの最小濃度までＤＭＳＯにより希釈し、各濃度点を、当該反応緩衝液で４０倍に希釈した。当該化合物のＩＣ５０値が非常に低い場合、当該化合物の初期濃度を下げることができる。
【０１７２】
４μＬの化合物溶液と２μＬのＦＧＦＲ４キナーゼ溶液とを、３８４ウェルアッセイプレート（Ｔｈｅｒｍｏ、カタログ番号２６４７０６）に加え、均一に混合し、次いで、室温で１５分間インキュベートし；続いて、４μＬの当該基質反応溶液をそこに加え、当該反応混合物を室温で６０分間インキュベートし；次いで、当該反応物に対して等体積の１０μＬのアッセイ溶液をそこに加え、均一に混合した後、室温で静置した。６０分後、ＥＤＴＡにより当該アッセイ溶液における酵素反応を停止させ、リン酸化生成物を、同時に、Ｅｕ３＋で標識されたケージ形状の抗体（ドナー）およびストレプトアビジンで標識されたＸＬ６６５抗体（レセプタ）の両方によって同定した。レーザーによる励起の後、お互いに近くにあるドナーおよびレセプタは、エネルギー共鳴移動を受け、当該ドナー（６２０ｎｍ）からレセプタ（６６５ｎｍ）へと移動されたエネルギーは、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、米国カリフォルニアのリモンシティに存在する）によって検出することができた。６６５／６２０の比は、当該基質のリン酸化度に対して正の相関にあり、したがって、ＦＧＦＲ４キナーゼ活性の検出に対して正の相関にある。この実験において、ＦＧＦＲ４タンパク質を加えなかった群を、ネガティブコントロール（１００％阻害）として使用し、ＦＧＦＲ４タンパク質を加えたが当該化合物は加えなかった群を、ポジティブコントロール（０％阻害）として使用した。ＦＧＦＲ４活性に対する当該化合物の阻害割合は、以下の式によって計算することができた：
阻害割合＝１００−１００×（シグナル化合物−シグナルネガティブコントロール）／シグナルポジティブコントロール−シグナルネガティブコントロール）
【０１７３】
当該化合物のＩＣ５０は、１０の濃度点から、ソフトウェアＸＬｆｉｔ（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ．、英国）により、以下の式によって計算した：
Ｙ＝ボトム＋（トップ−ボトム）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０−Ｘ）×スロープファクター））
【０１７４】
ここで、Ｙは、阻害割合であり、ボトムは、Ｓ字型曲線の下部プラト値であり、トップは、当該Ｓ字型曲線の上部プラト値であり、Ｘは、測定される化合物濃度のｌｏｇ値であり、スロープファクターは、当該曲線の傾斜係数である。
【０１７５】
【表２】
2019524883.tif 000036
【０１７６】
ＲＴ４細胞増殖阻害試験
ＲＴ４膀胱癌細胞の増殖に対する本発明の化合物の効果を、発光式細胞生存試験実験（luminescent  cell  viability  test  experiment）を使用して評価した。当該実験方法は、以下のように要約される：独特で安定なルシフェラーゼによって活性な細胞代謝の指標物質ＡＴＰを検出するために、ＣｅｌｌＴｉｌｔｅｒ−Ｇｌｏ（ＣＴＧ）アッセイキットを使用したが、当該試験において発生された光シグナルは、培地における活性な細胞の数に正比例するため、結果として、ＲＴ４細胞増殖を検出するために当該キットを使用した。
【０１７７】
ＣｅｌｌＴｉｌｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ７５７２）は、ＣＴＧ凍結乾燥粉末とＣＴＧ緩衝液とで構成され、使用の際に、当該凍結乾燥粉末を当該緩衝液に溶解させた。
【０１７８】
ＲＴ４膀胱癌細胞（細胞の供給元：Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、１０％のＦＢＳ（ＧＢＩＣＯ、１００９９−１４１）および１００ユニット／ｍｌのマイシリン混合溶液（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ，  １５１４０１２２）を含有する、ＤＭＥＭ完全培地（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、１１９９５０７３）において培養した。細胞の覆う面積が培養容器の８０〜９０％に達したとき、当該細胞を、０．２５％のパンクレアチン（ＥＤＴＡを含有する）（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、２５２０００５６）によって消化し、破壊した後で、それらを、各ウェルあたり１０００個の細胞において（２７μＬのＤＭＥＭ完全培地）、白色の３８４ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ，  １６４６１０）に播種し、次いで、当該３８４ウェルプレートを、３７℃および５％ＣＯ２のインキュベータに入れ、一晩（１８〜２０時間）培養した。当該化合物を、１００％のＤＭＳＯに溶解させて５ｍＭに希釈し、次いで、４倍希釈系列を０．０６１μＭの最小濃度までＤＭＳＯにより希釈し、各濃度点を、ＦＢＳ不含ＤＭＥＭ培地で５０倍に希釈した。当該化合物のＩＣ５０値が非常に低い場合、当該化合物の初期濃度を下げることができる。一晩培養した後、ＤＭＥＭで希釈した３μＬの化合物を各ウェルに加え、穏やかに遠心分離し、均一に混合した。１０μＭのＴＡＳ−１２０（（Ｓ）−１−（（３，５−ジメトキシフェニル）エチニル）−３−（１−アクリロイルピロリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−８−アミン、ＰＣＴ国際出願第２０１５００８８４４号）を加えた群は、ネガティブコントロール（１００％阻害）としての役割を果たし、０．２％のＤＭＳＯの群は、ポジティブコントロール（０％阻害）としての役割を果たした。この３８４ウェルプレートを、さらなる培養のために３７℃および５％ＣＯ２のインキュベータに入れ、７２時間後に取り出し、室温で３０分間静置した。ＣＴＧ試薬も取り出し、室温とバランスを取った。１５μｌのＣＴＧ試薬を、各ウェルに加え、穏やかに振盪するシェーカーの上に３分間置位置して、十分な細胞溶解を確保した。発光シグナルを安定させるために１０分間静置した後、発光シグナルをＥｎＶｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、米国カルフォルニアのリモンシティにある）で読み取った。
【０１７９】
ＲＴ４細胞増殖に対する当該化合物の阻害割合は、以下の式によって計算することができた：
阻害割合＝１００−１００×（シグナル化合物−シグナルネガティブコントロール）／シグナルポジティブコントロール−シグナルネガティブコントロール）
【０１８０】
当該化合物のＩＣ５０は、８の濃度点から、ソフトウェアＸＬｆｉｔ（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ．、英国）により、以下の式によって計算した：
Ｙ＝ボトム＋（トップ−ボトム）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０−Ｘ）×スロープファクター））
ここで、Ｙは、阻害割合であり、ボトムは、Ｓ字型曲線の下部プラト値であり、トップは、当該Ｓ字型曲線の上部プラト値であり、Ｘは、測定される化合物濃度のｌｏｇ値であり、スロープファクターは、当該曲線の傾斜係数である。
【０１８１】
【表３】
2019524883.tif 000037
【０１８２】
Ｈｅｐ３Ｂ細胞増殖阻害試験
Ｈｅｐ３Ｂ細胞増殖に対する本発明による化合物の影響を、発光式細胞生存試験によって評価した。
【０１８３】
当該実験方法は、以下のように要約される：
【０１８４】
独特で安定なルシフェラーゼによって活性な細胞代謝の指標物質ＡＴＰを検出するために、ＣｅｌｌＴｉｌｔｅｒ−Ｇｌｏ（ＣＴＧ）アッセイキットを使用したが、当該試験において発生された光シグナルは、培地における活性な細胞の数に正比例するため、結果として、Ｈｅｐ３Ｂの細胞増殖を検出するために当該キットを使用した。
【０１８５】
ＣｅｌｌＴｉｌｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ７５７２）は、ＣｅｌｌＴｉｌｔｅｒ−Ｇｌｏ凍結乾燥粉末とＣｅｌｌＴｉｌｔｅｒ−Ｇｌｏ緩衝液とで構成され、使用の際に、当該凍結乾燥粉末を当該緩衝液に溶解させた。
【０１８６】
Ｈｅｐ３Ｂ細胞（ＡＴＣＣ、ＨＢ−８０６４）（細胞の供給源：Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、１０％のＦＢＳ（ＧＢＩＣＯ、１００９９−１４１）および１００ユニット／ｍｌのマイシリン混合溶液（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、１５１４０１２２）を含有する、ＤＭＥＭ完全培地（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、１１９９５０７３）において培養した。細胞の覆う面積が培養容器の８０〜９０％に達したとき、当該細胞を、０．２５％のパンクレアチン（ＥＤＴＡを含有する）（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、２５２０００５６）によって消化し、破壊した後で、それらを、各ウェルあたり１０００個の細胞において（２７μＬのＤＭＥＭ完全培地）、白色の３８４ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、１６４６１０）に播種し、次いで、当該３８４ウェルプレートを、３７℃および５％ＣＯ２のインキュベータに入れ、一晩（１８〜２０時間）培養した。当該化合物を、１００％のＤＭＳＯに溶解させて５ｍＭに希釈し、次いで、４倍希釈系列を０．００６１μＭの最小濃度までＤＭＳＯにより希釈し、各濃度点を、ＦＢＳ不含ＤＭＥＭ培地で５０倍に希釈した。当該化合物のＩＣ５０値が非常に低い場合、当該化合物の初期濃度を下げることができる。一晩培養した後、ＤＭＥＭで希釈した３μＬの化合物を各ウェルに加え、穏やかに遠心分離し、均一に混合し、この場合、ネガティブコントロール（１００％阻害）として機能するように１０μＭのＢＬＵ９９３１群を加え、ポジティブコントロール（０％阻害）として機能するように０．２％のＤＭＳＯ群を加えた。この３８４ウェルプレートを、さらなる培養のために３７℃および５％ＣＯ２のインキュベータに入れ、７２時間後に取り出し、室温で３０分間静置した。ＣＴＧ試薬も取り出し、室温とバランスを取った。１５μｌのＣＴＧ試薬を、各ウェルに加え、穏やかに振盪するシェーカーの上に３分間置位置して、十分な細胞溶解を確保した。発光シグナルを安定させるために１０分間静置した後、発光シグナルをＥｎＶｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、米国カルフォルニアのリモンシティにある企業）で読み取った。Ｈｅｐ３Ｂ細胞増殖に対する当該化合物の阻害割合は、以下の式によって計算することができた：
阻害割合＝１００−１００×（シグナル化合物−シグナルネガティブコントロール）／シグナルポジティブコントロール−シグナルネガティブコントロール）
【０１８７】
当該化合物のＩＣ５０は、８の濃度点から、ソフトウェアＸＬｆｉｔ（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ．、英国）により、以下の式によって計算した：
Ｙ＝ボトム＋（トップ−ボトム）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０−Ｘ）×スロープファクター））
ここで、Ｙは、阻害割合であり、ボトムは、Ｓ字型曲線の下部プラト値であり、トップは、当該Ｓ字型曲線の上部プラト値であり、Ｘは、測定される化合物濃度のｌｏｇ値であり、スロープファクターは、当該曲線の傾斜係数である。
【０１８８】
本発明に実施例化合物は、Ｈｅｐ３Ｂ肝臓癌細胞を効率的に阻害することができ、そのＩＣ５０は、１００〜５００ｎＭである。
【国際調査報告】
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