(57)【要約】  本発明は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択された化合物に関し、特に、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンのリン酸塩に関し、両方とも、（Ｒ）型の鏡像体過剰率が９７％以上であるのが好ましい。さらに、本発明は、上記化合物を含む医薬組成物、薬物として、およびアルドステロンの過剰暴露が疾患または障害の有害作用の一因となる妊娠可能な女性および小児患者を含むヒトの前記疾患および障害の治療方法、ならびに前記本発明の化合物の調製方法におけるそれらの使用にも関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩、から選択される化合物であって、（Ｒ）型の鏡像体過剰率が９７％以上である、化合物。
【請求項２】
無細胞ヒト組換えアロマターゼ酵素アッセイで、７００ｎＭ以上、好ましくは１０００ｎＭ以上、およびより好ましくは１５００ｎＭ以上のＩＣ５０でアロマターゼ活性を阻害する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞アッセイで、１００ｎＭ以下、好ましくは５０ｎＭ以下、より好ましくは１０ｎＭ以下のＩＣ５０で、アルドステロンシンターゼを阻害する、請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
前記化合物は、アロマターゼに比べてアルドステロンシンターゼに対し５０以上、好ましくは１００以上、最も好ましくは７００以上の選択性を有し、前記選択性が、アロマターゼ阻害に対するＩＣ５０値およびアルドステロンシンターゼ阻害に対するＩＣ５０値の比率により決定され、アロマターゼの阻害に対するＩＣ５０値およびアルドステロンシンターゼの阻害に対するＩＣ５０値は、両方とも、前記ＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞アッセイで測定される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
前記化合物が、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
前記薬学的に許容可能な塩が結晶質である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
前記薬学的に許容可能な塩が無水である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
前記薬学的に許容可能な塩が非吸湿性である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が、熱重量分析／示差走査熱量測定（ＴＧＡ／ＤＳＣ）により測定して、１８４℃〜１９３℃に等しいまたは１８４℃〜１９３℃の間の融点を有し、好ましくは前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が、１８８℃〜１９０℃に等しいまたは１８８℃〜１９０℃の間の融点を有する、請求項５〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が、結晶形Ｉの（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩であり、前記結晶形Ｉが、ＣｕＫα照射を用いて測定した２θ値で、１９．５０４、２１．９１９および２４．１５９を含むＸ線粉末回折パターンを有し、各ピークが、±０．５、または好ましくは±０．２度変動し得る、請求項５〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩。
【請求項１３】
少なくとも１種の薬学的に許容可能な賦形剤と混合した、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物または請求項１２に記載の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を含む医薬組成物であって、好ましくは、錠剤、丸薬、分散性顆粒、カシェ剤、カプセル剤、粉剤、トローチ剤、坐剤または停留かん腸剤の形態である、医薬組成物。
【請求項１４】
アルドステロンへの過剰暴露が疾患または障害の有害作用の一因である前記疾患または障害の閉経前女性および小児患者を含む好ましくはヒトの治療方法で使用するための、好ましくは前記疾患または障害が、原発性および続発性高アルドステロン症、心不全、慢性腎不全、高血圧、再狭窄、肥満症、腎症、心筋梗塞後症候群、腎線維症、および冠状動脈性心疾患から選択され、さらに好ましくは、前記疾患または障害が、原発性および続発性高アルドステロン症から選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物；請求項１２に記載の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩または請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択される化合物の調製方法であって、
ｉ．ラセミ５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンと、（−）−Ｏ，Ｏ’−ジベンゾイル−Ｌ−酒石酸とを反応させて、ジアステレオマー（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンジベンゾイル−酒石酸塩を形成するステップ；および
ｉｉ．ステップｉで得られた前記酒石酸塩を少なくとも１回再結晶化するステップ；および
ｉｉｉ．ステップｉｉで得られた前記酒石酸塩の溶液に、塩基を加えることにより、遊離塩基（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンを開放するステップ；および必要に応じ、
ｉｖ．前記遊離塩基と酸を反応させることにより薬学的に許容可能な塩を形成し、好ましくは前記酸がリン酸（Ｈ３ＰＯ４）であるステップ、
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択される化合物に関し、特に、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンのリン酸塩に関し、両方とも、（Ｒ）型の鏡像体過剰率が９７％以上であるのが好ましい。さらに、本発明は、上記化合物を含む医薬組成物、薬物として、およびアルドステロンの過剰暴露が閉経前女性および小児患者における場合を含む疾患または障害の有害作用の一因となる前記疾患および障害の治療方法、ならびに前記発明の化合物の調製方法におけるそれらの使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
アルドステロンシンターゼ（ＣＹＰ１１Ｂ２）の阻害は、ミネラルコルチコイド受容体（ＭＲ）遮断に加えて、高血圧、心不全および腎障害の治療のための新しい選択肢として登場した。この目的は、血漿および組織の両方中のアルドステロン濃度を低減し、それにより、心臓、血管および腎臓標的器官におけるＭＲ依存性およびＭＲ非依存性効果を減らすことである。アルドステロンは、アルドステロンシンターゼ（ＣＹＰ１１Ｂ２）のデオキシコルチコステロンに対する酵素作用により、副腎の球状層で産生される（Ｍ．Ａｚｉｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｐｈｒｏｌ  Ｄｉａｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ（２０１３）２８：３６−４３）。
【０００３】
アルドステロン合成を阻害する初期の試みには、種々の非選択的ステロイド産生阻害剤の使用が含まれたが、この物質は大きな安全上の懸念があった。アルドステロン合成の特異的阻害に対する標的化薬理学的手法の概念は、進行性乳癌治療に効果的な非ステロイド性アロマターゼ阻害剤として既知のファドロゾール塩酸塩（ＣＧＳ１６９４９Ａ，ＩＮＮ：ファドロゾール；米国特許第４，６１７，３０７号；米国特許第４，７２８，６４５号；米国特許第５，０９８，９１１号）がアルドステロンレベルに影響を及ぼすという発見により始まった。その後の前臨床研究により、Ｒ−エナンチオマー（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジンクロリドがＣＹＰ１１Ｂ２の効力の大きい阻害剤であり、一方で、Ｓ−エナンチオマーがＣＧＳ１６９４９Ａの強力で効力の大きいアロマターゼ（ＣＹＰ１９）阻害活性の原因であることが示された（Ｊ．Ｍｅｎａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ（２００６）２４：９９３；Ｆｉｅｂｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ（２００５）１１１：３０７８−９４；Ｆｕｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ（１９９３）３６：１３９３−１４００；ＵＳ  ５，０５７，５２１）。
【０００４】
他方では、およびその早期発見にもかかわらず、ヒトを対象として（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジンクロリドの臨床開発に関する報告はなく、また、商業的に利用可能な合成も、十分なキラル純度も開示されていない（米国特許第４，８８９，８６１号）。加えて、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジンクロリドは、吸湿性が高いことが判明した（Ｂｒｏｗｎｅ  ＬＪ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ（１９９１）３４：７２５−３６；Ｆｕｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ（１９９３）３６：１３９３−１４００；米国特許第４，８８９，８６１号）。
【０００５】
臨床試験での広範なアロマターゼ阻害剤の評価によりアロマターゼ阻害の多数の有害な結果が明らかになったことから、対応する（Ｓ）エナンチオマーの強力で効力の高いアロマターゼ阻害活性を考慮すると、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジンクロリドのキラル純度は特に重要である。したがって、乳癌で、アロマターゼ阻害剤の治療を受けた３０，０２３人の閉経後の女性を対象にした７つの試験からなる系統的再調査およびメタアナリシスは、骨折および心臓血管疾患の発生の顕著な増加を示した（Ａｍｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ（２０１１）１０３：１２９９−１３０９）。さらに、アロマターゼ阻害の持続期間が長くなるほど、心臓血管疾患および骨折に対する関与が強くなる。加えて、閉経前女性、すなわち、妊娠可能な女性では、アロマターゼ阻害への曝露は、生殖障害に繋がる可能性があり、授乳中の女性では、新生児が母乳への分泌介してアロマターゼ阻害化合物に曝露される可能性がある。さらに、小児患者では、アロマターゼ阻害は発達障害をもたらす可能性がある。したがって、極めて高い純度およびこのような薬物の混入物および不純物回避の必要性は明らかである。このような薬物は通常、長期間にわたり、あるいは生涯にわたり適用される。
【０００６】
さらに、および必要とされる極めて高いキラル純度および有害作用としてのアロマターゼ阻害の回避に加えて、アロマターゼ阻害成分へのどのような変換をも排除するために、水中の溶解度およびエナンチオマー安定性を含む長期間にわたる安定性、ならびにこのような薬物の、特に、錠剤などの経口投与に好適する投与形態への処理のしやすさが、追加分を全部含めた、このような薬物の製剤のための、前提条件である。
【発明の概要】
【０００７】
驚いたことに、今や本発明者らは、従来にない程度のキラル純度、すなわち、鏡像体過剰率（ｅｅ）を有し、通常好ましくは、９７％以上の（Ｒ）型のｅｅを有し、さらに好ましくは、９９％以上あるいは９９．５％以上の（Ｒ）型のｅｅを有する、式（Ｉ）の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンの提供に至った。さらに、驚くべきことに、本発明者らは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンのリン酸塩、特に（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が、長期間にわたり非吸湿性および特に、純度、含水量ならびにエナンチオマー純度に関して、安定であることを見出した。さらにおよび重要なことに、本発明者らは、意外にも、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンのリン酸塩、特に（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が、１つの安定型の結晶質であることを見出した。加えて、本発明の化合物は、さらに、低減された、極めて低いアロマターゼ活性を有し、その結果として、増大した、極めて高いアルドステロンシンターゼ活性を有し、これが、本発明の化合物を、ヒトにおける、特に閉経前女性および小児患者のための臨床開発に極めて好適する候補として適性の高い化合物にしている。非常に低いアロマターゼ活性は、臨床開発および特に、閉経前女性、従って妊娠可能な女性および小児患者のための、アルドステロン過剰暴露に関連する疾患および障害を治療する薬物としての公認された使用のための前提条件でさえあると考えられる。アロマターゼの量およびアンドロゲンからエストロゲンへの変換のパーセンテージは、性腺外組織では定量的に小さく、多くの場合、任意の組織中の１％未満であるが、ホルモン作用の観点からは、その影響は、それでもまだ大きい（Ｂｌａｋｅｍｏｒｅ  ａｎｄ  Ｎａｆｔｏｌｉｎ，Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（２０１６）３１：２５８−２６９）ので、後者は特に有効である。したがって、本発明の化合物は、混入および効力の高いアロマターゼ阻害性（Ｓ）エナンチオマーに起因する悪影響および望ましくない影響を最小化することにより、アルドステロン産生により悪影響がある障害の生涯治療の可能性を提供する。
【０００８】
したがって、第１の態様では、本発明は、式（Ｉ）の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択される化合物を提供し、前記化合物は、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する。
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【０００９】
特に、および第２の態様では、本発明は、通常好ましくは、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供し、これは、驚くべきことに、非吸湿性であり、これにより、特に、純度、含水量およびキラル純度に関して、長期間にわたり安定である。吸湿性は、医薬品有効成分の安定性に悪影響を与えるので、これは特に重要である。さらにおよび重要なことは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンのリン酸塩、特に（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が、１つの安定型の結晶質であることである。不安定な多形は通常、医薬品効力特性に悪影響を与える。
【００１０】
さらなる態様において、本発明は、妊娠可能な女性および小児患者を含むヒトの疾患または障害の治療の薬物としての使用およびその疾患または障害の治療の方法での使用のための、通常好ましくは、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンならびにそのリン酸塩、好ましくは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供し、アルドステロンへの過剰暴露が前記疾患または障害の有害作用の一因であり、前記疾患または障害は、通常好ましくは、原発性および続発性高アルドステロン症、心不全、慢性腎不全、高血圧、再狭窄、肥満症、腎症、心筋梗塞後症候群、腎線維症、および冠状動脈性心疾患から選択され、さらに好ましくは、前記疾患または障害は、原発性および続発性高アルドステロン症から選択される。さらに好ましくは、前記方法は、特に、妊娠可能な女性および小児患者を含むヒトでの使用に好適する。
【００１１】
（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩の、このような高キラル純度で達成された本発明のキラル分割および合成は、今や、通常好ましくは、アルドステロン合成の律速酵素を阻害する、すなわちアルドステロンシンターゼ（ＣＹＰ１１Ｂ２）を阻害することにより、望ましくない混入アロマターゼ活性を可能な限り少なくして、アルドステロンの抑制のための医薬組成物の調製を可能とする。前記疾患および障害の生涯治療の典型的な必要性により、有益なアルドステロンシンターゼ阻害性（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンまたは薬学的に許容可能なその塩、およびこれにより特に、そのリン酸塩、およびさらに好ましくは（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩の、効力の高いアロマターゼ阻害性（Ｓ）−（−）−エナンチオマーからの混入を最小化するという観点から本発明の利点が高められる。実施例８の表１０および１１で示されるように、本発明の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンのリン酸塩、好ましくは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、アルドステロン産生（アルドステロンシンターゼ活性）およびエストラジオール産生（アロマターゼ活性）を、ＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞によりそれぞれ、８．１ｎＭおよび５７６０ｎＭのＩＣ５０で阻害し、したがって、アロマターゼ活性に比べて、アルドステロンシンターゼ活性の７００を超える大きい阻害を示し、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジン、およびさらに（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩の、本発明のリン酸塩に対する極めて有益な安全性プロファイルを立証している。したがって、本発明は、特にヒト、特に閉経前女性および小児患者における適用に好適する。非常に低いアロマターゼ活性は、臨床開発および特に、閉経前女性、従って妊娠可能な女性および小児患者のための、アルドステロン関連疾患および障害のための薬物としての使用のための前提条件でさえあると考えられる。
【００１２】
本発明者らは、本発明の方法により調製した（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジン、ならびにそのリン酸塩、特に、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が、従来にない低いアロマターゼ阻害活性を示すことを見出した。したがって、さらなる態様では、本発明は、実施例８に記載の無細胞ヒト組換えアロマターゼ酵素アッセイにより測定して、アロマターゼに対し、７００ｎＭ以上のＩＣ５０値を有する、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンまたは薬学的に許容可能なその塩、特に、そのリン酸塩、より好ましくは（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供する。実施例８では、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンのリン酸塩、好ましくは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、１６４０ｎＭのＩＣ５０でアロマターゼ活性を阻害することが明らかになった。
【００１３】
さらに、本発明者らは、本発明の方法により調製した（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジン、ならびにそのリン酸塩、好ましくは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が、従来にない高いアルドステロンシンターゼ阻害活性を示すことを見出した。したがって、さらなる態様では、本発明は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩、特に、そのリン酸塩から選択される化合物、より好ましくは（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供し、前記化合物は、実施例８に記載のＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞アッセイにおいて、１００ｎＭ以下のＩＣ５０で、アルドステロンシンターゼを阻害する。
【００１４】
さらなる態様では、本発明は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンの（−）−Ｏ，Ｏ’−ジベンゾイル−Ｌ−酒石酸塩のエナンチオ選択的結晶化を特徴とする、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択される化合物の調製方法を提供し、極めて好ましくは前記薬学的に許容可能な塩は、その二水素リン酸塩である。
【００１５】
さらなる態様では、本発明は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択される化合物を提供し、前記化合物は、少なくとも＋９５°の、好ましくは少なくとも＋９６°の、より好ましくは少なくとも＋９７°の、さらにより好ましくは少なくとも＋９８°の比旋光度［α］Ｄ２０（ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  １：１（体積／体積））、［α］Ｄ２０（エタノール）または［α］Ｄ２５（エタノール）、好ましくは［α］Ｄ２０（ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  １：１（体積／体積））を有し、好ましくは前記化合物は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩であり、さらに好ましくは、前記化合物は、実施例８に記載の無細胞ヒト組換えアロマターゼ酵素アッセイで、７００ｎＭ以上、好ましくは１０００ｎＭ以上、およびより好ましくは１５００ｎＭ以上のＩＣ５０でアロマターゼ活性を阻害し、またさらに好ましくは、前記化合物は、実施例８に記載のＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞アッセイで、１００ｎＭ以下、好ましくは５０ｎＭ以下、およびより好ましくは１０ｎＭ以下のＩＣ５０でアルドステロンシンターゼを阻害する。極めて好ましい実施形態では、前記化合物は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩であり、少なくとも＋９５°の、好ましくは少なくとも＋９６°の、より好ましくは少なくとも＋９７°の、さらにより好ましくは少なくとも＋９８°の比旋光度［α］Ｄ２０（ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  １：１（体積／体積））を有し、好ましくは前記化合物は、実施例８に記載の無細胞ヒト組換えアロマターゼ酵素アッセイで、７００ｎＭ以上、好ましくは１０００ｎＭ以上、およびより好ましくは１５００ｎＭ以上のＩＣ５０でアロマターゼ活性を阻害し、またさらに好ましくは、前記化合物は、実施例８に記載のＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞アッセイで、１００ｎＭ以下、好ましくは５０ｎＭ以下、およびより好ましくは１０ｎＭ以下のＩＣ５０でアルドステロンシンターゼを阻害する。
【００１６】
さらなる態様では、本発明は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択される化合物を提供し、前記化合物は、少なくとも＋９５°の、好ましくは少なくとも＋９６°の、より好ましくは少なくとも＋９７°の、さらにより好ましくは少なくとも＋９８°の比旋光度［α］Ｄ２０（ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  １：１（体積／体積））、［α］Ｄ２０（エタノール）または［α］Ｄ２５（エタノール）、好ましくは［α］Ｄ２０（ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  １：１（体積／体積））を有し、好ましくは前記化合物は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩であり、さらに好ましくは、前記化合物は、アロマターゼに比べてアルドステロンシンターゼに対し５０以上、好ましくは１００以上、最も好ましくは７００以上の選択性を有し、前記選択性は、アロマターゼ阻害に対するＩＣ５０値およびアルドステロンシンターゼ阻害に対するＩＣ５０値の比率により決定され、アロマターゼの阻害に対するＩＣ５０値およびアルドステロンシンターゼの阻害に対するＩＣ５０値は、両方とも、好ましくは同時に、実施例８に記載のＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞アッセイで測定される。極めて好ましい実施形態では、前記化合物は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩であり、少なくとも＋９５°の、好ましくは少なくとも＋９６°の、より好ましくは少なくとも＋９７°の、さらにより好ましくは少なくとも＋９８°の比旋光度［α］Ｄ２０（ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  １：１（体積／体積））を有し、好ましくは前記化合物は、アロマターゼに比べてアルドステロンシンターゼに対し５０以上、好ましくは１００以上、最も好ましくは７００以上の選択性を有し、前記選択性は、アロマターゼ阻害に対するＩＣ５０値およびアルドステロンシンターゼ阻害に対するＩＣ５０値の比率により決定され、アルドステロンシンターゼの阻害に対するＩＣ５０値およびアロマターゼの阻害に対するＩＣ５０値は、両方とも、好ましくは同時に、実施例８に記載のＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞アッセイで測定される。
【００１７】
さらなる態様では、本発明は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択される化合物を提供し、前記化合物は、実施例８に記載の無細胞ヒト組換えアロマターゼ酵素アッセイで、７００ｎＭ以上、好ましくは１０００ｎＭ以上、およびより好ましくは１５００ｎＭ以上のＩＣ５０でアロマターゼ活性を阻害し、好ましくは、前記化合物は、９７％以上の（Ｒ）型の鏡像体過剰率を有し、さらに好ましくは前記化合物は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩である。
【００１８】
さらなる態様では、本発明は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択される化合物を提供し、前記化合物は、実施例８に記載のＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞アッセイにおいて、１００ｎＭ以下、好ましくは５０ｎＭ以下、およびより好ましくは１０ｎＭ以下のＩＣ５０でアルドステロンシンターゼを阻害し、好ましくは、前記化合物は、９７％以上の（Ｒ）型の鏡像体過剰率を有し、さらに好ましくは前記化合物は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩である。
【００１９】
さらなる態様では、本発明は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択される化合物を提供し、前記化合物は、アロマターゼに比べてアルドステロンシンターゼに対し５０以上、好ましくは１００以上、最も好ましくは７００以上の選択性を有し、前記選択性は、アロマターゼ阻害に対するＩＣ５０値およびアルドステロンシンターゼ阻害に対するＩＣ５０値の比率により決定され、アロマターゼの阻害に対するＩＣ５０値およびアルドステロンシンターゼの阻害に対するＩＣ５０値は、両方とも、好ましくは同時に、実施例８に記載のＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞アッセイで測定され、好ましくは、前記化合物は、９７％以上の（Ｒ）型の鏡像体過剰率を有し、さらに好ましくは前記化合物は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩である。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）ディフラクトグラムである。ディフラクトグラムのＹ軸は１秒当たりのカウント数で表した強度の記録であり、Ｘ軸は２θ（度）である。
【図２】（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩の熱重量分析（ＴＧＡ）／示差走査熱量測定（ＤＳＣ）結果を示す。上段パネルは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩のＴＧＡサーモグラムを示す。下段パネルは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩のＤＳＣサーモグラムを示す。サーモグラムは、１８９℃の融点（下段パネル）を超える２２５℃の温度までに１．４％の質量損失（上段パネル）を示す。サーモグラムは、１８８℃で始まり、ピークが１８９℃である融点を示す。
【図３】高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩のキラル純度を示す。クロマトグラムは、９９．９％ｅｅを超えるＲ−（＋）−エナンチオマー（保持時間：１４．４５９分）の鏡像体過剰率を示す（Ｓ−（−）−エナンチオマーの保持時間：９．８１４分）。
【図４】（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩の動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）等温線プロットである（２回の吸着／脱着サイクルの重ね合わせ）。動的等温線プロットは、それぞれ、１％の吸湿量まで質量増加を示す。
【図５】（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩の動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）質量プロット変化を示す（点線：質量の相対変化；破線：目標相対湿度（ＲＨ））。質量プロットは、１％までの可逆的水吸収を示す。
【図６】ＤＶＳサイクル前（上段のパターン）およびサイクル後（下段のパターン）の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）ディフラクトグラムを示す。重ね合わせたディフラクトグラムは、ＤＶＳ処理によりそれぞれの結晶形の反射パターンが影響を受けないことを示す。
【図７】単結晶Ｘ線分析により決定された（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩の結晶構造および絶対配置を示す。単一Ｘ線測定により、炭素５のＲ−（＋）−立体配置が確認される。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
特に断らなければ、本明細書で使用されるすべての技術的および科学的用語は、本発明が属する当業者により一般に理解されているものと同じ意味を有する。
【００２２】
用語の「約」が使われる場合、特に記載がない場合、特に±１０％、±５％または±３％を意味する（それぞれの所与の数値を基準にして）。それぞれの本発明の実施形態では、「約」は削除できる。
【００２３】
本明細書で使用される場合、用語の「キラル純度」は、キラルＨＰＬＣ（詳細は実施例を参照されたい）により測定した鏡像体過剰率（ｅｅ）により定義され、下記式により計算される：
ｅｅ＝（ＡＲ−ＡＳ）／（ＡＲ＋ＡＳ）ｘ１００％、
式中、ＡＲは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンの試料溶液のＨＰＬＣクロマトグラムのピークの面積であり、ＡＳは、（Ｓ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンの試料溶液のＨＰＬＣクロマトグラムのピークの面積である。
【００２４】
本明細書で使用される場合、用語の「薬学的に許容可能な塩」は、薬学的に許容可能な、親化合物の目的の薬理活性を有する塩を意味する。このような塩には、当業者に既知の無機酸または有機酸との間で形成された酸付加塩が挙げられる（Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  Ｓｔａｈｌ（Ｅｄｉｔｏｒ），Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｉｔｏｒ）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ，２ｎｄ  Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｒｃｈ  ２０１１，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，ＩＳＢＮ：９７８−３−９０６３９−０５１−２）。本発明において特に好ましい薬学的に許容可能な塩は、リン酸との間で形成された酸付加塩、すなわち、二水素リン酸塩である。
【００２５】
本出願で使用される場合、用語の「リン酸塩」は、プロトン化型の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンを含む化合物、すなわち、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジンカチオンを含み、リン酸由来の陰イオンをさらに含み、前記陰イオンは、通常好ましくは、二水素リン酸塩［Ｈ２ＰＯ４］−および一水素リン酸塩［ＨＰＯ４］２−から選択される。本出願で使用される場合、好ましくは、用語の「リン酸塩」は、式（Ｉ）の化合物の二水素リン酸塩を意味し、すなわち、式（Ｉ）の化合物が一旦プロトン化され、対イオンが［Ｈ２ＰＯ４］−であり（単結晶Ｘ線構造は図７を参照されたい）、その結果、モノプロトン化（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンの二水素リン酸に対する化学量論は１：１である。本明細書では、後者の化合物は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩と呼ばれる。
【００２６】
用語の「アロマターゼ」は、チトクロムＰ４５０スーパーファミリーのメンバーであるＣＹＰ１９を意味し、これは、エストロゲンシンターゼとしても知られる。
【００２７】
用語の「アルドステロンシンターゼ」は、ステロイドヒドロキシラーゼチトクロムＰ４５０酵素ＣＹＰ１１Ｂ２を意味する。
【００２８】
本明細書で使用される場合、用語の「非晶質」は、過冷却液体または粘稠液体を意味し、これは、固体のように見えるが、長い範囲にわたり維持される規則的に反復される分子配置を有さず、また、融点を有さず、むしろそのガラス転移温度を超えると軟化または流動する。
【００２９】
本明細書では同義に使われ、本発明の化合物に関連する用語の「結晶質」および「結晶質純度」は、規則的に反復される分子配置または外表面配置を有する固体を意味する。（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を含む、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩に言及する場合、用語の「結晶質」および「結晶質純度」は、結晶形Ｉを意味し、総重量の少なくとも６０％、好ましくは総重量の少なくとも７０％、さらに好ましくは総重量の８０％、またさらに好ましくは総重量の９０％、およびまたさらに好ましくは総重量９５％の前記結晶形Ｉが存在するのが好ましい。他の成分は、例えば、非晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩であり得る。結晶質純度は、本明細書に記載のＸＲＰＤにより決定し得る。したがって、好ましい実施形態では、前記ＸＲＰＤは、次の装置、パラメーターおよび測定条件を用いて測定できる：
測定器：Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｄ２  ＰＨＡＳＥＲ；照射：ＣｕＫα（３０ｋＶ、１０ｍＡ）；走査範囲：５〜４５°（２θ値）、試料回転  ５ｒｐｍ、０．５秒／ステップ、０．０１０°／ステップ、３．０ｍｍ検出器スリット。
【００３０】
本明細書で使用される場合、用語の「結晶形Ｉ」は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を意味し、前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、ＣｕＫα照射を用いて測定した２θ値で、１９．５０４、２１．９１９および２４．１５９を含むＸ線粉末回折パターンを有し、各ピークは、±１度または好ましくは±０．５度、またはさらに好ましくは±０．２度変動し得る。好ましい実施形態では、本明細書で使用される場合、「結晶形Ｉ」は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を意味し、前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、ＣｕＫα照射を用いて測定した２θ値で、１９．５０４、２１．９１９および２４．１５９を含むＸ線粉末回折パターンを有し、各ピークは、±１度または好ましくは±０．５度、またはさらに好ましくは±０．２度変動し得る。さらに好ましい実施形態では、本明細書で使用される場合、「結晶形Ｉ」は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を意味し、前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、ＣｕＫα照射を用いて測定した２θ値で、１９．５０４、２１．９１９および２４．１５９を含むＸ線粉末回折パターンを有し、各ピークは、±０．５度、または好ましくは±０．２度変動し得る。またさらに好ましい実施形態では、本明細書で使用される場合、用語の「結晶形Ｉ」は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を意味し、前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、ＣｕＫα照射を用いて測定した２θ値で、１９．５０４、２１．９１９および２４．１５９を含むＸ線粉末回折パターンを有し、各ピークは、±０．２度変動し得る。別の好ましい実施形態では、本明細書で使用される場合、「結晶形Ｉ」は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を意味し、前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、ＣｕＫα照射を用いて測定した２θ値で、１９．５０４；２１．９１９；２４．１５９；１６．００３；２６．１０１；２７．１６８；２７．５４２および２９．０２９を含むＸ線粉末回折パターンを有し、各ピークは、±１度、または好ましくは±０．５度、またはさらに好ましくは±０．２度変動し得る。別の好ましい実施形態では、本明細書で使用される場合、「結晶形Ｉ」は、（Ｒ）−（＋）−５���（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を意味し、前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、ＣｕＫα照射を用いて測定した２θ値で、１９．５０４；２１．９１９；２４．１５９；１６．００３；２６．１０１；２７．１６８；２７．５４２および２９．０２９を含むＸ線粉末回折パターンを有し、各ピークは、±０．５度、または好ましくは±０．２度変動し得る。
【００３１】
本明細書で使用される場合、用語の「無水」は、３％未満、好ましくは２．５％未満、より好ましくは２％未満、より好ましくは１．５％未満、最も好ましくは１％未満の水和水を含む結晶形を意味する。
【００３２】
用語の「非吸湿性」は、本発明の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンの薬学的に許容可能な塩、特に、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンのリン酸塩、より好ましくは（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が、粉末または顆粒として存在する場合、商業上の使用を前提として、それらによる周囲大気の水蒸気に対する２４時間、数週間、数か月、または数年にわたる曝露に対し、会合、凝集、水吸収、または潮解といった有害な現象を生ずることなしに耐える能力を意味する。通常好ましくは、本明細書で使用し、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンのリン酸塩に言及する場合、および好ましくは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩に言及する場合、用語の「非吸湿性」は、通常の周囲条件下、通常好ましくは、２０〜２５℃および２０％〜８０％、好ましくは３０〜６０％の相対湿度の開放下で貯蔵時に、少なくとも１日にわたり、好ましくは１週間、さらに好ましくは１ヶ月間、またさらに好ましくは少なくとも３ヶ月間にわたり、およびまたさらに好ましくは少なくとも６ヶ月間、およびまたさらに好ましくはまたは少なくとも１年以上の期間にわたり、特に、規制ＩＣＨ基準を満たすように、（好ましくは易流動性の）粉末または顆粒としてその粘度を保持することを意味する。さらに好ましくは、本明細書で使用し、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンのリン酸塩に言及する場合、および好ましくは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩に言及する場合、用語の「非吸湿性」は、通常の周囲条件下、通常好ましくは、２０〜２５℃および２０％〜８０％、好ましくは３０％〜６０％の相対湿度の開放下で貯蔵時に、２４時間にわたり、通常好ましくは、実施例５で測定されるようにして、５％未満、好ましくは３％未満、さらに好ましくは２％未満、またさらに好ましくは１％未満の重量増加を示すことを意味する。またさらに好ましくは、本明細書で使用され、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンのリン酸塩に言及する場合、および好ましくは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩に言及する場合、用語の「非吸湿性」は、通常の周囲条件下、通常好ましくは、２０〜２５℃および２０％〜８０％、好ましくは３０％〜６０％の相対湿度の開放下で貯蔵時に、２４時間にわたり、通常好ましくは、実施例５で測定されるようにして、前記リン酸塩、好ましくは前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が、５％（重量／重量）未満、好ましくは３％（重量／重量）未満、さらに好ましくは２％（重量／重量）未満、またさらに好ましくは１％（重量／重量）未満の水吸収を示すことを意味する。あるいは好ましくは、本明細書で使用し、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンのリン酸塩に言及する場合、および好ましくは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩に言及する場合、用語の「非吸湿性」は、通常の周囲条件下、通常好ましくは、２５℃および約６０％の相対湿度の開放下で貯蔵時に、２４時間にわたり、好ましくは１ヶ月間、またさらに好ましくは少なくとも３ヶ月間にわたり、およびまたさらに好ましくは少なくとも６ヶ月間、およびまたさらに好ましくはまたは少なくとも１年の期間にわたり、通常好ましくは、実施例９で測定されるようにして、含水量が０．５重量／重量％未満、好ましくは０．４重量／重量％未満、およびさらに好ましくは０．３重量／重量％以下であることを意味する。
【００３３】
本明細書で使用される場合、用語の「薬学的に許容可能な賦形剤」は、医薬剤形に定常的に使用される任意の生理学的に不活性の添加剤を含む。薬学的に許容可能な賦形剤は、結合剤、希釈剤、担体、潤滑剤、流動促進剤、コーティング添加剤またはこれらの組み合わせを含む群から選択される。
【００３４】
本明細書で使用される場合、用語の「溶解度」は、Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，Ｃｈａｐｔｅｒ  “Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｎｏｔｉｃｅｓ”，§  ５．３０  ”Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ”に従って（および以降で定義するように）、簡略化した記述溶解度（例えば、水中）を意味する。
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【００３５】
本明細書で使用される場合、用語の「妊娠可能な女性」は、妊婦になることができる閉経前の女性を意味する。
【００３６】
本明細書で使用される場合、用語の「小児患者」は、分類０〜１８歳、好ましくは０〜１６歳の患者を意味し、早産および臨月新生児（０〜２７日）、乳幼児および幼児（２８日〜２３ヶ月）、小児（２〜１１年）および若者（２〜１６／１８年）を含む。
【００３７】
したがって、一実施形態では、５０％体積／体積超の水中溶解度を有する、式（Ｉ）の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択される化合物、特に（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が提供される。
【００３８】
表現「ＩＣ５０」は、当該技術分野において一般に既知の最大半量阻害濃度を意味する。アロマターゼに対するＩＣ５０は、実施例８で記載の無細胞ヒト組換えアロマターゼアッセイにより決定される。アルドステロンシンターゼに対するＩＣ５０は、実施例８で記載のヒトＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ細胞アッセイにより決定される。「アロマターゼに比べたアルドステロンシンターゼに対する選択性」に言及する場合、次の比率が意図されている：
選択性＝（アロマターゼに対するＩＣ５０）／（アルドステロンシンターゼに対するＩＣ５０）
式中、アルドステロンシンターゼに対するＩＣ５０およびアロマターゼに対するＩＣ５０は、両方とも、好ましくは同時に、実施例８で記載のヒトＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ細胞アッセイにより決定される。
【００３９】
前述で概略を述べたように、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンのリン酸塩、好ましくは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、アルドステロン産生（アルドステロンシンターゼ活性）およびエストラジオール産生（アロマターゼ活性）を、ＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞によりそれぞれ、８．１ｎＭおよび５７６０ｎＭのＩＣ５０で阻害し（実施例８、表１０および１１）、したがって、アロマターゼに比べて、アルドステロンシンターゼに対し約７００の選択性を示す。
【００４０】
本明細書で使用される場合、「障害」または「疾患」という用語は、なんらかの機能の障害または異常；病的な身体的または精神状態を意味する。Ｄｏｒｌａｎｄ’ｓ  Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ（ＶＳＩＢ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏ．２７ｔｈ  ｅｄ．１９８８）を参照されたい。
【００４１】
本明細書で使用される場合、表現の「アルドステロンへの過剰暴露が疾患または障害の有害作用の一因となる疾患または障害」は、好ましくは、アルドステロンシンターゼの異常なまたは不適切な活性／発現に起因する、およびアルドステロンシンターゼの異常なまたは不適切な発現と関連する生物活性またはプロセスに起因する疾患および障害を意味する。アルドステロンシンターゼの異常なまたは不適切な活性／発現に起因する疾患または障害の典型例は、原発性および続発性高アルドステロン症、心不全、慢性腎不全、高血圧、再狭窄、肥満症、腎症、心筋梗塞後症候群、腎線維症、および冠状動脈性心疾患である。
【００４２】
本明細書で使用される場合、「アルドステロンシンターゼの異常な活性」という用語は、野性型または在来遺伝子または天然タンパク質の活性とは異なる、または健康な対象の遺伝子またはタンパク質の活性とは異なるアルドステロンシンターゼの活性を意味する。異常な活性は、正常な活性より強力であるか、またはより弱い場合がある。
【００４３】
本明細書で使用される場合、「アルドステロンシンターゼの不適切な活性」という用語は、野性型または在来遺伝子または天然タンパク質の活性、または健康な対象の遺伝子またはタンパク質のアルドステロンシンターゼの活性を意味し、この活性は、健康な対象では適切であると見なされるが、同じ前記活性が病気の対象では不適切と見なされる、すなわち、前記活性は、病気の対象に対しては強力過ぎるまたは弱すぎると見なされる。
【００４４】
本明細書で使用される場合、任意の疾患または障害の「治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、疾患または障害を回復させることを意味する（すなわち、疾患の発症、またはその少なくとも１つの臨床症状を止めるまたは減らすことを意味する）。
【００４５】
本明細書で使用される場合、「比旋光度」という用語は、それぞれの化合物の溶媒中の溶液の比旋光度を意味し、前記溶媒は、通常好ましくは、エタノールまたはＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  １：１（体積／体積）、さらに好ましくはＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  １：１（体積／体積）であり、前記比旋光度は、式：１００ｘα／（ｌｘｃ）により計算され、式中、α＝観察した回転（度）；ｌ＝セル光路長（デシメートル）；ｃ＝濃度（ｇ／１００ｍｌ）であり；測定は、室温、通常好ましくは、２０℃または２５℃で、ナトリウムＤ線（すなわち、５８９．３ｎｍ）で実施される。用語の「比旋光度」は、［α］Ｄ２０または［α］Ｄ２５として略記される。通常、［α］Ｄ２０もしくは［α］Ｄ２５に対して、回転の符合（＋または−）およびその実際の値がそこに示されるか、または［α］Ｄ２０もしくは［α］Ｄ２５は、回転の符合（＋または−）およびその実際の値が度（°）で与えられる。上記で測定された完全な単位（度・ｄｍ−１・ｃｍ３・ｇ−１）は、わかりやすくするために通常、省略される。
【００４６】
第１の態様では、本発明は、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型の鏡像体過剰率（ｅｅ）を有する、式（Ｉ）の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択される化合物を提供する。
【００４７】
特に、および第２の態様では、本発明は、通常好ましくは、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供し、これは、驚くべきことに、非吸湿性であり、特に、純度、含水量およびキラル純度に関して、長期間にわたり安定である。さらにおよび重要なことは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンのリン酸塩、特に（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が、１つの安定型の、通常好ましくは、前記結晶形Ｉの結晶質であることである。
【００４８】
動的水蒸気吸着調査により測定して、本発明の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩の水吸収は、９０％を超える湿度で１％未満であり（図４）、加えて、水吸収は可逆的である（図５）。さらに、２２５℃まで加熱時の質量減少は、１．４％にすぎなかった（図２）。結論として、本発明のリン酸塩、好ましくは（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、吸湿性ではない。結果として、本発明の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、周囲条件で、従来通りの医薬品収納容器に大量に保存可能である。さらに、本発明の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、高度結晶質であり、高レベルの結晶質純度を有することが明らかになった。さらに、驚くべきことに、記載した極めて優れたキラル純度を有する、本発明の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、１つの単結晶形で存在し、一定のＸ線構造およびそのキラル中心である炭素５の位置で、Ｒ−（＋）−絶対配置を有する（図１および表１；図７）。
【００４９】
複数の結晶形−多形と呼ばれる−は、このような型が相互変換でき、このような相互転換を防ぐために追加の措置を必要とするために、製剤の製造を複雑化する。異なる多形は、医薬品の製剤で異なる挙動をし、微粒子化、錠剤形成、溶解度およびさらにはバイオアベイラビリティに影響を与える場合がある。最も小さい化合物でさえ、固体結晶中で数十万個の可能なその分子の配置を有し得るために、結晶構造およびそれらの性質の予測は、科学的な難題であり、多形性が実際に所与の分子で起こるかどうかを演繹的に知ることはできない。したがって、安全で効果的な形態の薬物を得ようとする場合、多形性は深刻な懸念である。これにもかかわらず、本発明者らは、結晶形Ｉの（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が物理的に安定であること、すなわち、多形性は観察されず（実施例６、表８；実施例７、表９および図６、実施例９）、予測通り確実に得ることができる（実施例３、ステップ４）ことを発見した。さらに、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩のＸＲＰＤ分析（図１および表１）は、この物質が非晶質物質を基本的に不含である（すなわち、非晶質物質は検出できない）ことを示した。別の方法の記載がない場合には、ＸＲＰＤは、実施例に記載のように実施した。
【００５０】
したがって、一実施形態では、本発明は、結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩、好ましくは、無水結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩、より好ましくは、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、無水結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供する。
【００５１】
（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩の結晶（結晶形Ｉ）は、それらのＸ線粉末パターンの次の角度、格子面間隔（ｄ値）および相対的線強度（強度）（表１）を有するＸＲＰＤ（図１）を特徴とする。
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【００５２】
一実施形態では、実施例セクションで記載のように測定した次の２θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする、結晶形Ｉの（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が提供される：１９．５０４；２１．９１９および２４．１５９。一実施形態では、実施例セクションで記載のように測定した次の２θ値を含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする、結晶形Ｉの（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が提供される：１９．５０４；２１．９１９および２４．１５９。各ピークは、±１または好ましくは±０．５、またはさらに好ましくは±０．２度変動し得る。好ましい実施形態では、前記Ｘ線粉末回折パターンは、次の２θ値をさらに含む：１６．００３；２６．１０１；２７．１６８；２７．５４２および２９．０２９。好ましい実施形態では、前記Ｘ線粉末回折パターンは、次の２θ値をさらに含む：１６．００３；２６．１０１；２７．１６８；２７．５４２および２９．０２９。各ピークは、±１または好ましくは±０．５、またはさらに好ましくは±０．２度変動し得る。特定の好ましい実施形態では、次の２θ値の内の少なくとも１個、より好ましくは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６個または全てを含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする、結晶形Ｉの（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が提供される：６．０２３１２９；９．９６９０３４；１１．２６２２４；１１．２２８４８；１１．９６５６６；１２．７７７６１；１３．７９３４７；１４．３９３１４；１５．３３９４；１６．００３１７；１６．２７３３７；１７．０７５０２；１７．２７５９３；１７．９９０４；１８．３８２３８；１８．６５４７１；１８．９６０９６；１９．１４２８１；１９．５０４；２０．０１２６５；２０．５８８０８；２０．４３３０２；２０．７２１１２；２１．１２６８３；２１．９１９０６；２２．５９２０２；２４．４４７８８；２４．１５９１７；２４．４８１１９；２５．７００７１；２６．１００９４；２６．５８１２７；２７．１６７６７；２７．５４１６５；２７．７１４０８；２８．２７６０３；２８．０９７２５；２８．５４９０９；２９．０２９３９；２９．７１３１４；３０．０７５７８；３０．６８８０８；３０．９２８６７；３１．６３７９；３２．２７００５；３２．７９８０６；３３．２０６３８；３３．２３３０４；３３．６５８０８；３４．４１７９３；３４．３５５１２；３５．０２１４２；３５．０６６７１；３５．６８９７８；３５．９３６２２；３６．５０３０５；３６．５６５９１；３６．９２０２３；３７．１４０２１；３９．６０８１５；３７．８９６２４および４０．２２４６４。別の特定の好ましい実施形態では、次の２θ値の内の少なくとも１個、より好ましくは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６個または全てを含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする、結晶形Ｉの（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が提供される：６．０２３１２９；９．９６９０３４；１１．２６２２４；１１．２２８４８；１１．９６５６６；１２．７７７６１；１３．７９３４７；１４．３９３１４；１５．３３９４；１６．００３１７；１６．２７３３７；１７．０７５０２；１７．２７５９３；１７．９９０４；１８．３８２３８；１８．６５４７１；１８．９６０９６；１９．１４２８１；１９．５０４；２０．０１２６５；２０．５８８０８；２０．４３３０２；２０．７２１１２；２１．１２６８３；２１．９１９０６；２２．５９２０２；２４．４４７８８；２４．１５９１７；２４．４８１１９；２５．７００７１；２６．１００９４；２６．５８１２７；２７．１６７６７；２７．５４１６５；２７．７１４０８；２８．２７６０３；２８．０９７２５；２８．５４９０９；２９．０２９３９；２９．７１３１４；３０．０７５７８；３０．６８８０８；３０．９２８６７；３１．６３７９；３２．２７００５；３２．７９８０６；３３．２０６３８；３３．２３３０４；３３．６５８０８；３４．４１７９３；３４．３５５１２；３５．０２１４２；３５．０６６７１；３５．６８９７８；３５．９３６２２；３６．５０３０５；３６．５６５９１；３６．９２０２３；３７．１４０２１；３９．６０８１５；３７．８９６２４および４０．２２４６４。各ピークは、±１または好ましくは±０．５、またはさらに好ましくは±０．２度変動し得る。別の特定の好ましい実施形態では、次の２θ値の内の少なくとも１個、より好ましくは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６個または全てを含むＸ線粉末回折パターンを特徴とする、結晶形Ｉの（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が提供される：６．０２３１２９；９．９６９０３４；１１．２６２２４；１１．２２８４８；１１．９６５６６；１２．７７７６１；１３．７９３４７；１４．３９３１４；１５．３３９４；１６．００３１７；１６．２７３３７；１７．０７５０２；１７．２７５９３；１７．９９０４；１８．３８２３８；１８．６５４７１；１８．９６０９６；１９．１４２８１；１９．５０４；２０．０１２６５；２０．５８８０８；２０．４３３０２；２０．７２１１２；２１．１２６８３；２１．９１９０６；２２．５９２０２；２４．４４７８８；２４．１５９１７；２４．４８１１９；２５．７００７１；２６．１００９４；２６．５８１２７；２７．１６７６７；２７．５４１６５；２７．７１４０８；２８．２７６０３；２８．０９７２５；２８．５４９０９；２９．０２９３９；２９．７１３１４；３０．０７５７８；３０．６８８０８；３０．９２８６７；３１．６３７９；３２．２７００５；３２．７９８０６；３３．２０６３８；３３．２３３０４；３３．６５８０８；３４．４１７９３；３４．３５５１２；３５．０２１４２；３５．０６６７１；３５．６８９７８；３５．９３６２２；３６．５０３０５；３６．５６５９１；３６．９２０２３；３７．１４０２１；３９．���０８１５；３７．８９６２４および４０．２２４６４。各ピークは、±０．５、または好ましくは±０．２度変動し得る。一実施形態では、ＸＲＰＤディフラクトグラム中の結晶形Ｉの３つの最大ピークは、１：０．８５：０．５５、特に、１：０．９：０．６、さらに特に、１：０．９５：０．６５、例えば、１：０．９７：０．６８の相対強度を有する（ＸＲＰＤダイアグラムのそれぞれのピークの積分により得られる）。特定の実施形態では、それぞれ、最大ピークは、約２１．９１９の２シータ（θ）値であり、２番目に大きなピークは、約１９．５０４の２シータ（θ）値であり、３番目に大きなピークは、約２４．１５９の２シータ（θ）値である。さらなる特定の実施形態では、それぞれ、最大ピークは、約２１．９１９±０．５、または好ましくは±０．２度の２シータ（θ）値であり、２番目に大きなピークは、約１９．５０４±０．５、または好ましくは±０．２度の２シータ（θ）値であり、３番目に大きなピークは、約２４．１５９±０．５、または好ましくは±０．２度の２シータ（θ）値である。（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が図１に示すＸＲＰＤディフラクトグラムを示すのが好ましい。
【００５３】
驚くべきことに、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩（結晶形Ｉ）は、ＤＳＣ（図２）で測定して、１８９℃の単一の鋭く、高い融点を有し、この場合にも、高い物理的安定性を示し、これは、薬物製造、貯蔵および医薬製剤への処理においてさらに有益性が高いことがさらに見出された。したがって、一実施形態では、通常好ましくは、熱重量分析／示差走査熱量測定（ＴＧＡ／ＤＳＣ）を用いて、１８４℃〜１９３℃に等しいまたは１８４℃〜１９３℃の間の融点を有する（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が提供され、好ましくは前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、１８８℃〜１９０℃に等しいまたは１８８℃〜１９０℃の間の融点を有する。さらなる実施形態では、１８４℃、１８５℃、１８６℃、１８７℃、１８８℃、１８９℃、１９０℃、１９１℃、１９２℃、１９３℃または１９４℃、最も好ましくは１８９℃の融点を有する（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が提供される。さらなる実施形態では、１８９±５℃、１８９±２℃、１８９±１℃または１８９±０．５℃の融点を有する（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が提供される。別の方法の記載がない場合には、本明細書の融解温度は、実施例セクションで記載のようにＴＧＡ／ＤＳＣにより取得した。
【００５４】
さらに、本発明者らは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩（結晶形Ｉ）の溶解度は、いくつかの非水性溶媒中で低く（実施例６、表７）、この溶媒は、したがって、この塩に対し非溶媒であり、良好な沈殿を得ることを可能とし、さらに、良好な収率および良好な純度を得ることを可能とすることを見出した。他方では、結晶形Ｉは、水中に極めて可溶性であり（実施例６、表８）、これは、経口または非経口製剤を得るのに好都合である。
【００５５】
本明細書に記載の鏡像異性的に純粋で、従って、９９．９％を超えるｅｅを有する、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジン遊離塩基から調製した（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、＋９８．１°（ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  １：１（体積／体積）；実施例３）の比旋光度（［α］Ｄ２０）を有することが明らかになった。
【００５６】
したがって、本発明の１つの極めて好ましい実施形態および態様では、少なくとも＋９４°、好ましくは少なくとも＋９５°、さらに好ましくは少なくとも＋９６°、より好ましくは少なくとも＋９７°、さらにより好ましくは少なくとも＋９８°の比旋光度［α］Ｄ２０（ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  １：１（体積／体積））を有する、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が提供される。
【００５７】
さらなる実施形態では、本発明は、少なくとも＋１２０°、好ましくは少なくとも＋１２１°、さらに好ましくは少なくとも＋１２２°、またさらに好ましくは少なくとも＋１２３°、またさらに好ましくは少なくとも＋１２４°、またさらに好ましくは少なくとも＋１２５°、またさらに好ましくは少なくとも＋１２６°、またさらに好ましくは少なくとも＋１２７°の比旋光度［α］Ｄ２５（エタノール）を有する、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンを提供する。別の実施形態では、本発明は、少なくとも＋９５°、好ましくは少なくとも＋９６°、さらに好ましくは少なくとも＋９７°、より好ましくは少なくとも＋９８°、さらにより好ましくは少なくとも＋９９°、さらに好ましくは少なくとも＋１００°、さらにより好ましくは少なくとも＋１０１°、さらにより好ましくは少なくとも＋１０２°、およびまたより好ましくは少なくとも＋１０３°、さらにより好ましくは少なくとも＋１０４°の比旋光度［α］Ｄ２０（エタノール）を有する、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジンクロリドを提供する。
【００５８】
極めて好ましい態様では、本発明は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩、好ましくは結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩、より好ましくは無水結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供する。
【００５９】
また極めて好ましい実施形態および態様では、本発明は、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩、好ましくは、結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩、より好ましくは、無水結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供する。
【００６０】
また極めて好ましい実施形態および態様では、本発明は、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩、好ましくは、無水結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供し、好ましくは前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、結晶形Ｉの（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩であり、前記結晶形Ｉは、ＣｕＫα照射を用いて測定した次の２θ値を含むＸ線粉末回折パターンを有する：１９．５０４；２１．９１９および２４．１５９。各ピークは、±０．５、または好ましくは±０．２度変動し得る。
【００６１】
また極めて好ましい実施形態および態様では、本発明は、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩、好ましくは、無水結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供し、前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、結晶形Ｉの（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩であり、前記結晶形Ｉは、ＣｕＫα照射を用いて測定した次の２θ値を含むＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを有する：１９．５０４；２１．９１９および２４．１５９。各ピークは、±０．５、または好ましくは±０．２度変動し得る。好ましくは、前記ＸＲＰＤは、次の装置、パラメーターおよび測定条件を用いて測定できる：測定器：Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｄ２  ＰＨＡＳＥＲ；照射：ＣｕＫα（３０ｋＶ、１０ｍＡ）；走査範囲：５〜４５°（２θ値）、試料回転  ５ｒｐｍ、０．５秒／ステップ、０．０１０°／ステップ、３．０ｍｍ検出器スリット。
【００６２】
また極めて好ましい実施形態および態様では、本発明は、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩、好ましくは、無水結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供し、前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、結晶形Ｉの（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩であり、前記結晶形Ｉは、ＣｕＫα照射を用いて測定した次の２θ値を含むＸ線粉末回折パターンを有する：１９．５０４；２１．９１９および２４．１５９。各ピークは、±０．５、または好ましくは±０．２度変動し得る。前記ＸＲＰＤは、次の装置、パラメーターおよび測定条件を用いて測定できる：測定器：Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｄ２  ＰＨＡＳＥＲ；照射：ＣｕＫα（３０ｋＶ、１０ｍＡ）；走査範囲：５〜４５°（２θ値）、試料回転  ５ｒｐｍ、０．５秒／ステップ、０．０１０°／ステップ、３．０ｍｍ検出器スリット。
【００６３】
（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、無水であることがさらに明らかになった（実施例３および５）。したがって、一実施形態では、本発明は、無水（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供する。特定の好ましい実施形態では、本発明は、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、無水（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供する。
【００６４】
さらに特定の好ましい実施形態では、本発明は、無水（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩  結晶形Ｉを提供する。
【００６５】
またさらに特定の好ましい実施形態では、本発明は、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、本明細書で定義の結晶形Ｉの無水（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供する。
【００６６】
前述で概略を述べたように、本発明者らは、驚くべきことに、本発明の方法（実施例３）により調製した（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジン、ならびにそのリン酸塩、好ましくは（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が、従来にない低いアロマターゼ阻害活性を示すことを見出し（実施例８）、これは、本発明の化合物を、高まったアルドステロンシンターゼ活性および／またはアルドステロンの高まったレベルに関連する疾患または障害の治療方法に使用する場合に、特に、妊娠可能な女性および小児患者に使用する場合に、アロマターゼの阻害に関連する副作用を回避するのに極めて重要である。したがって、さらなる態様では、本発明は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択される化合物、特に、そのリン酸塩、さらに好ましくは（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供し、前記化合物は、実施例８に記載の無細胞ヒト組換えアロマターゼ酵素アッセイで、７００ｎＭ以上、好ましくは７５０ｎＭ以上、より好ましくは８００ｎＭ以上、より好ましくは８５０ｎＭ以上、より好ましくは９００ｎＭ以上、より好ましくは９５０ｎＭ以上、より好ましくは１０００ｎＭ以上、より好ましくは１０５０ｎＭ以上、より好ましくは１１００ｎＭ以上、より好ましくは１１５０ｎＭ以上、より好ましくは１２００ｎＭ以上、より好ましくは１２５０ｎＭ以上、より好ましくは１３００ｎＭ以上、より好ましくは１３５０ｎＭ以上、より好ましくは１４００ｎＭ以上、より好ましくは１４５０ｎＭ以上、より好ましくは１５００ｎＭ以上、より好ましくは１５５０ｎＭ以上、最も好ましくは少なくとも１６００ｎＭ、例えば、１６１０ｎＭまたは１６２０ｎＭまたは１６３０ｎＭまたは１６４０ｎＭまたは少なくとも１６５０ｎＭのＩＣ５０で、アロマターゼ活性を阻害する。
【００６７】
またさらなる態様では、本発明は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択される化合物、特に、そのリン酸塩、さらに好ましくは（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供し、前記化合物は、実施例８に記載のＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞アッセイにおいて、１００ｎＭ以下のＩＣ５０で、アルドステロンシンターゼを阻害する。一実施形態では、本発明の化合物は、実施例８に記載のＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞アッセイで、９０ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、７０ｎＭ以下、６０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、３５ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、２５ｎＭ以下または２０ｎＭ以下；特に１５ｎＭ以下、例えば、１５ｎＭ、１４ｎＭ、１３ｎＭ、１２ｎＭ、１１ｎＭ、１０ｎＭ、９ｎＭ、８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭまたは１ｎＭ以下のＩＣ５０でアルドステロンシンターゼを阻害する。好ましい実施形態では、本発明の化合物は、実施例８に記載のＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞アッセイで、１０ｎＭ以下のＩＣ５０で、アルドステロンシンターゼを阻害する。
【００６８】
またさらなる態様では、本発明は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択される化合物を提供し、前記化合物は、アロマターゼに比べてアルドステロンシンターゼに対し３０以上、好ましくは５０以上、より好ましくは１００以上、より好ましくは１５０以上、より好ましくは２００以上、より好ましくは２５０以上、より好ましくは３００以上、より好ましくは３５０以上、より好ましくは４００以上、より好ましくは４５０以上、より好ましくは５００以上、より好ましくは５５０以上、より好ましくは６００以上、より好ましくは６５０以上、最も好ましくは７００以上の選択性を有し、前記選択性は、アロマターゼ阻害に対するＩＣ５０値およびアルドステロンシンターゼ阻害に対するＩＣ５０値の比率により決定され、アロマターゼの阻害に対するＩＣ５０値およびアルドステロンシンターゼの阻害に対するＩＣ５０値は、両方とも、好ましくは同時に、実施例８に記載のＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞アッセイで測定される。
【００６９】
したがって、また極めて好ましい実施形態および態様では、本発明は、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩、好ましくは、無水結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供し、は前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、結晶形Ｉの（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩であり、前記結晶形Ｉは、ＣｕＫα照射を用いて測定した次の２θ値を含むＸ線粉末回折パターンを有する：１９．５０４；２１．９１９および２４．１５９。各ピークは、±０．５、または好ましくは±０．２度変動し得る。前記ＸＲＰＤは、通常好ましくは、次の装置、パラメーターおよび測定条件を用いて測定できる：測定器：Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｄ２  ＰＨＡＳＥＲ；照射：ＣｕＫα（３０ｋＶ、１０ｍＡ）；走査範囲：５〜４５°（２θ値）、試料回転  ５ｒｐｍ、０．５秒／ステップ、０．０１０°／ステップ、３．０ｍｍ検出器スリット。また、前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、実施例８に記載の無細胞ヒト組換えアロマターゼ酵素アッセイで、７００ｎＭ以上、好ましくは７５０ｎＭ以上、より好ましくは８００ｎＭ以上、より好ましくは８５０ｎＭ以上、より好ましくは９００ｎＭ以上、より好ましくは９５０ｎＭ以上、より好ましくは１０００ｎＭ以上、より好ましくは１０５０ｎＭ以上、より好ましくは１１００ｎＭ以上、より好ましくは１１５０ｎＭ以上、より好ましくは１２００ｎＭ以上、より好ましくは１２５０ｎＭ以上、より好ましくは１３００ｎＭ以上、より好ましくは１３５０ｎＭ以上、より好ましくは１４００ｎＭ以上、より好ましくは１４５０ｎＭ以上、より好ましくは１５００ｎＭ以上、より好ましくは１５５０ｎＭ以上、最も好ましくは少なくとも１６００ｎＭ、例えば、１６１０ｎＭまたは１６２０ｎＭまたは１６３０ｎＭまたは１６４０ｎＭまたは少なくとも１６５０ｎＭのＩＣ５０で、アロマターゼ活性を阻害する。
【００７０】
また極めて好ましい実施形態および態様では、本発明は、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩、好ましくは、無水結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供し、前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、結晶形Ｉの（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩であり、前記結晶形Ｉは、ＣｕＫα照射を用いて測定した次の２θ値を含むＸ線粉末回折パターンを有する：１９．５０４；２１．９１９および２４．１５９。各ピークは、±０．５、または好ましくは±０．２度変動し得る。前記ＸＲＰＤは、通常好ましくは、次の装置、パラメーターおよび測定条件を用いて測定できる：測定器：Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｄ２  ＰＨＡＳＥＲ；照射：ＣｕＫα（３０ｋＶ、１０ｍＡ）；走査範囲：５〜４５°（２θ値）、試料回転  ５ｒｐｍ、０．５秒／ステップ、０．０１０°／ステップ、３．０ｍｍ検出器スリット。また、前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、実施例８に記載のＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞アッセイで、９０ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、７０ｎＭ以下、６０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、３５ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、２５ｎＭ以下または２０ｎＭ以下；特に１５ｎＭ以下、例えば、１５ｎＭ、１４ｎＭ、１３ｎＭ、１２ｎＭ、１１ｎＭ、１０ｎＭ、９ｎＭ、８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭまたは１ｎＭ以下のＩＣ５０でアルドステロンシンターゼを阻害する。好ましい実施形態では、本発明の化合物は、実施例８に記載のＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞アッセイで、１０ｎＭ以下のＩＣ５０で、アルドステロンシンターゼを阻害する。
【００７１】
また極めて好ましい実施形態および態様では、本発明は、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩、好ましくは、無水結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供し、前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、結晶形Ｉの（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩であり、前記結晶形Ｉは、ＣｕＫα照射を用いて測定した次の２θ値を含むＸ線粉末回折パターンを有する：１９．５０４；２１．９１９および２４．１５９。各ピークは、±０．５、または好ましくは±０．２度変動し得る。前記ＸＲＰＤは、通常好ましくは、次の装置、パラメーターおよび測定条件を用いて測定できる：測定器：Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｄ２  ＰＨＡＳＥＲ；照射：ＣｕＫα（３０ｋＶ、１０ｍＡ）；走査範囲：５〜４５°（２θ値）、試料回転  ５ｒｐｍ、０．５秒／ステップ、０．０１０°／ステップ、３．０ｍｍ検出器スリット。また、前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、アロマターゼに比べてアルドステロンシンターゼに対し３０以上、好ましくは５０以上、より好ましくは１００以上、より好ましくは１５０以上、より好ましくは２００以上、より好ましくは２５０以上、より好ましくは３００以上、より好ましくは３５０以上、より好ましくは４００以上、より好ましくは４５０以上、より好ましくは５００以上、より好ましくは５５０以上、より好ましくは６００以上、より好ましくは６５０以上、最も好ましくは７００以上の選択性を有し、前記選択性は、アロマターゼ阻害に対するＩＣ５０値およびアルドステロンシンターゼ阻害に対するＩＣ５０値の比率により決定され、アロマターゼの阻害に対するＩＣ５０値およびアルドステロンシンターゼの阻害に対するＩＣ５０値は、両方とも、好ましくは同時に、実施例８に記載のＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ副腎細胞アッセイで測定される。
【００７２】
一態様では、本発明は、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、薬物として使用するための（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンを提供する。
【００７３】
さらなる態様では、本発明は、薬物として使用するための（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供し、好ましくは前記二水素リン酸塩は、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する。
【００７４】
本発明は、妊娠可能な女性および小児患者を含むヒトの疾患または障害の治療方法で使用するための、通常好ましくは、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンならびにそのリン酸塩、好ましくは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩をさらに提供し、アルドステロンへの過剰暴露が前記疾患または障害の有害作用の一因であり、通常好ましくは、前記疾患または障害は、原発性および続発性高アルドステロン症、心不全、慢性腎不全、高血圧、再狭窄、肥満症、腎症、心筋梗塞後症候群、腎線維症、および冠状動脈性心疾患から選択される。
【００７５】
さらに、本発明は、疾患または障害の治療方法で使用するための、通常好ましくは、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンならびにそのリン酸塩、好ましくは、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供し、前記疾患または障害は、原発性および続発性高アルドステロン症、心不全、慢性腎不全、高血圧、再狭窄、肥満症、腎症、心筋梗塞後症候群、腎線維症、および冠状動脈性心疾患から選択される。さらに好ましくは、前記方法は、特に、妊娠可能な女性および小児患者を含むヒトでの使用に好適する。
【００７６】
さらなる極めて好ましい実施形態および態様では、本発明は、ヒトの疾患または障害の治療方法で使用するための、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩、好ましくは、無水結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供し、前記疾患または障害は、原発性および続発性高アルドステロン症、心不全、慢性腎不全、高血圧、再狭窄、肥満症、腎症、心筋梗塞後症候群、腎線維症、および冠状動脈性心疾患から選択され、好ましくは前記ヒトは、妊娠可能な女性または小児患者である。
【００７７】
さらなる極めて好ましい実施形態および態様では、本発明は、ヒトの疾患または障害の治療方法で使用するための、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩、好ましくは、無水結晶質（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を提供し、前記疾患または障害は、原発性および続発性高アルドステロン症、心不全、慢性腎不全、高血圧、再狭窄、肥満症、腎症、心筋梗塞後症候群、腎線維症、および冠状動脈性心疾患から選択され、好ましくは前記ヒトは、妊娠可能な女性または小児患者であり、前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、実施例８に記載の無細胞ヒト組換えアロマターゼ酵素アッセイで、７００ｎＭ以上、好ましくは７５０ｎＭ以上、より好ましくは８００ｎＭ以上、より好ましくは８５０ｎＭ以上、より好ましくは９００ｎＭ以上、より好ましくは９５０ｎＭ以上、より好ましくは１０００ｎＭ以上、より好ましくは１０５０ｎＭ以上、より好ましくは１１００ｎＭ以上、より好ましくは１１５０ｎＭ以上、より好ましくは１２００ｎＭ以上、より好ましくは１２５０ｎＭ以上、より好ましくは１３００ｎＭ以上、より好ましくは１３５０ｎＭ以上、より好ましくは１４００ｎＭ以上、より好ましくは１４５０ｎＭ以上、より好ましくは１５００ｎＭ以上、より好ましくは１５５０ｎＭ以上、最も好ましくは少なくとも１６００ｎＭ、例えば、１６１０ｎＭまたは１６２０ｎＭまたは１６３０ｎＭまたは１６４０ｎＭまたは少なくとも１６５０ｎＭのＩＣ５０で、アロマターゼ活性を阻害する。
【００７８】
さらなる態様では、本発明は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択される化合物を調製する方法を提供し、極めて好ましい前記薬学的に許容可能な塩は、そのリン酸塩であり、さらに好ましくは（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩である。本発明の方法は、（ｉ）ラセミ５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンと、（−）−Ｏ，Ｏ’−アシル化Ｌ−酒石酸、特に、（−）−Ｏ，Ｏ’−ジベンゾイル−Ｌ−酒石酸とを反応させて、ジアステレオマー（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンジベンゾイル−Ｌ−酒石酸塩を形成するステップ；および（ｉｉ）ステップｉで得た酒石酸塩を少なくとも１回再結晶化するステップ、および（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）で得た前記酒石酸塩の溶液に塩基を加えることにより、遊離塩基（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンを開放させるステップ、および必要に応じ（ｉｖ）前記遊離塩基と、酸、好ましくはリン酸（Ｈ３ＰＯ４）とを反応させることにより、薬学的に許容可能な塩を形成するステップを含む。一実施形態では、前記（ｉ）のラセミ５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンと、（−）−Ｏ，Ｏ’−ジベンゾイル−Ｌ−酒石酸、特に、（−）−Ｏ，Ｏ’−ジベンゾイル−Ｌ−酒石酸とを反応させて、ジアステレオマー（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジン−Ｌ−酒石酸塩を形成するステップは、アルコール溶液、好ましくはエタノールの溶液中で、約５０℃未満の温度、好ましくは約４５℃未満の温度、およびさらに好ましくは、４０℃未満の温度で実施される。一実施形態では、前記（ｉｉ）のステップ（ｉ）で得られた酒石酸塩を少なくとも１回再結晶化するステップは、水−アルコール溶液中で、好ましくは、水性のエタノール溶液中で実施され、好ましくは、水：エタノールの比は、約２．４：約１０である。
【００７９】
一実施形態では、本発明の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択される化合物を調製する得方法は、キラル分取ＨＰＬＣによる５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジン（ファドロゾール）のキラル分割のステップを含まず、好ましくは、本発明の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩から選択される化合物を調製する前記方法は、５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジン（ファドロゾール）のキラルＨＰＬＣによるキラル分割のステップを含まない。このようなキラルＨＰＬＣによるキラル分割ステップは通常、（ｉ）低容量カラムによる反復キラルＨＰＬＣまたは（ｉｉ）高容量カラムによる分取ＨＰＬＣ、を含む。
【００８０】
好ましい実施形態では、本発明の方法は、９７％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上、およびまたより好ましくは９９．５％以上、またより好ましくは９９．８％以上、例えば、９９．９％の（Ｒ）型のｅｅを有する、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩、特にそのリン酸塩、さらに好ましくは（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を生ずる。
【００８１】
さらに好ましい実施形態では、本発明の方法は、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩、特にそのリン酸塩、さらに好ましくは（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を生じ、前記（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩は、実施例８に記載の無細胞ヒト組換えアロマターゼ酵素アッセイで、７００ｎＭ以上、好ましくは７５０ｎＭ以上、より好ましくは８００ｎＭ以上、より好ましくは８５０ｎＭ以上、より好ましくは９００ｎＭ以上、より好ましくは９５０ｎＭ以上、より好ましくは１０００ｎＭ以上、より好ましくは１０５０ｎＭ以上、より好ましくは１１００ｎＭ以上、より好ましくは１１５０ｎＭ以上、より好ましくは１２００ｎＭ以上、より好ましくは１２５０ｎＭ以上、より好ましくは１３００ｎＭ以上、より好ましくは１３５０ｎＭ以上、より好ましくは１４００ｎＭ以上、より好ましくは１４５０ｎＭ以上、より好ましくは１５００ｎＭ以上、より好ましくは１５５０ｎＭ以上、最も好ましくは少なくとも１６００ｎＭ、例えば、１６１０ｎＭまたは１６２０ｎＭまたは１６３０ｎＭまたは１６４０ｎＭまたは１６５０ｎＭ以上のＩＣ５０で、アロマターゼ活性を阻害する。
【００８２】
したがって、本発明の方法は、結晶化を利用して、商業的医薬用途のための極めて優れた高キラル純度の（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンおよび薬学的に許容可能なその塩、および極めて好ましくはそのリン酸塩、およびまたさらに、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩が得られる。商業規模では、結晶化は、より大きなバッチ調製、より安価な装置および施設を可能にし、特殊な専門知識を要しないことにより、クロマトグラフ分割よりも遙かに大きな経済的利点がある。
【００８３】
一態様では、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンまたは薬学的に許容可能なその塩、特にリン酸塩、より好ましくは（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を、本明細書に記載のように少なくとも１種の薬学的に許容可能な賦形剤と混合して含む医薬組成物が提供される。
【００８４】
一実施形態では、前記医薬組成物は、錠剤、丸薬、分散性顆粒、カシェ剤、カプセル剤、粉剤、トローチ剤、坐剤または停留かん腸剤の形態で提供される。
【００８５】
実施例
装置、材料および方法
比旋光度［α］Ｄ
比旋光度［α］Ｄ測定は、標準的なＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ偏光計３４３の５８９．３ｎｍのナトリウムＤ線を用いて、溶液中で実施した。その測定のために、１ｇの（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩を１００ｍｌのそれぞれの溶媒に溶解し、この溶液を１デシメートル長さの光学キュベットに移した。測定は、それぞれ、２０℃または２５℃の温度で実施した。比旋光度［α］Ｄは、式：１００ｘα／（ｌｘｃ）により計算され、式中、α＝観察した回転（度）；ｌ＝セル光路長（デシメートル）；ｃ＝濃度（ｇ／１００ｍｌ）である。
【００８６】
元素分析
元素分析は、標準的な装置（例えば、ｖａｒｉｏ  ＥＬ  ｃｕｂｅ元素分析装置）で実施し、炭素、水素および窒素の値を決定した。
【００８７】
キラルＨＰＬＣ
Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズＬＣ２２測定器を用い、次のカラム規格値および条件でキラルＨＰＬＣを実施した。
カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｃｋ  ＡＤ−Ｈ、粒度分布：５μｍ、２５０ｘ４．６ｍｍ；ｎ°  ＡＤＨ０ＣＥ−ＴＦ０８７
移動相：エタノール＋０．１％ジエチルアミン（ＤＥＡ）
検出器波長：２３０ｎｍ
オーブン温度：２５℃
流量：０．５ｍＬ／分
注入量：５μｌ；
試料調製：エタノール＋０．１％ＤＥＡ中の０．５ｍｇ／ｍＬ
【００８８】
ＸＲＰＤ
ブラッグ−ブレンターノ構成のＢｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｄ２  ＰＨＡＳＥＲを用いて、Ｘ線粉末回折調査を実施した。３０ｋＶ、１０ｍＡのＣｕ陰極を使用；試料ステージ標準回転；Ｋβフィルター（０．５％Ｎｉ）による単色化。スリット：固定発散スリット１．０ｍｍ（＝０．６１°）、一次軸ソーラースリット２．５°、二次軸ソーラースリット２．５°。検出器：受光スリット５°の検出器開口部を備えた線形検出器ＬＹＮＸＥＹＥ。標準的サンプルホルダー（（５１０）シリコンウエハ中の０．１ｍｍキャビティ）はバックグラウンド信号に対し最小限の寄与であった。測定条件：走査範囲：５〜４５°（２θ値）、試料回転  ５ｒｐｍ、０．５秒／ステップ、０．０１０°／ステップ、３．０ｍｍ検出器スリット；全ての測定条件は測定器制御ファイルにログ記録した。システム適合性として、コランダム試料Ａ２６−８２６−Ｓ（ＮＩＳＴ標準）を毎日測定した。
【００８９】
データ収集用に使用したソフトウェアは、Ｄｉｆｆｒａｃ．Ｃｏｍｍａｎｄｅｒ  ｖ２．０．２６とした。Ｄｉｆｆｒａｃ．Ｅｖａ  ｖ１．４を用いてデータ解析を実施した。バックグラウンド補正またはスムージングのパターンへの適用は行わなかった。
【００９０】
単結晶Ｘ線解析
（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩単結晶を、ｎ−プロパノール／水混合物を溶媒として用いて成長させた。好適な単結晶を母液から取り出し、直ちに高粘度油でコートし、必要な大きさに切り出して、Ｍｉｔｅｇｅｎ  Ｍｉｃｒｏｌｏｏｐに取り付け、１５０Ｋにショック凍結した。ＭｏＫα照射を備えたＢｒｕｋｅｒ  Ｄ８  Ｑｕｅｓｔ測定器で、φ−スキャンおよびω−スキャンを使って、測定を実施した。その後、分子構造を直接法（ＳＨＥＬＸＴソフトウェア）で解釈した。全ての非水素原子を非等方性温度因子で精密化した。完成モデルに対し、Ｂｉｊｖｏｅｔ解析を実施して絶対配置を決定した。
【００９１】
ＴＧＡ／ＤＳＣ
３４位置自動サンプラーを備えたＭｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＴＧＡ／ＤＳＣ１  ＳＴＡＲｅ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて、熱重量分析および示差走査熱量測定（ＴＧＡ／ＤＳＣ）調査を実施した。Ａ１るつぼ（４０μＬ；穴付き）を用いて試料を作製した。通常、５〜１０ｍｇの試料を秤量済みのＡ１るつぼに加え、３０℃で５分間保持した後、１０℃／分で３０℃から３５０℃まで加熱した。試料上への４０ｍｌ／分の窒素パージを維持した。データ収集および評価に使用したソフトウェアは、ＳＴＡＲｅ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖ１２．１０  ｂｕｉｌｄ  ５９３７とした。サーモグラムに対し補正は適用しなかった。
【００９２】
ＤＳＣ
Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  ＤＳＣ１  ＳＴＡＲｅ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて、ＤＳＣ調査を実施した。Ａ１るつぼ（４０μＬ；穴付き）を用いて試料を作製した。通常、１〜８ｍｇの試料を秤量済みのＡ１るつぼに加え、３０℃で５分間保持した後、１０℃／分で３０℃から３５０℃まで加熱し、３５０℃で１分間保持した。試料上への４０ｍｌ／分の窒素パージを維持した。システム適合性チェックとして、インジウムおよび亜鉛を基準として使用した。データ収集および評価に使用したソフトウェアは、ＳＴＡＲｅ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖ１２．１０  ｂｕｉｌｄ  ５９３７とした。サーモグラムに対し補正は適用しなかった。
【００９３】
ＤＶＳ
Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｌｔｄ．ＤＶＳ−１  Ｎｏ  Ｖｉｄｅｏを用いて、動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）調査を実施した。通常２０〜３０ｍｇの試料を天秤皿に装填し、０％ＲＨで平衡化した。材料を乾燥後、ＲＨを１０％／ステップ、１時間／増分で増やし、９５％ＲＨで終了した。吸着サイクルの完了後、試料を同じ方法を使用して乾燥させた。データ収集用に使用したソフトウェアは、ＤＶＳＷｉｎ  ｖ３．０１  Ｎｏ  Ｖｉｄｅｏとした。ＤＶＳ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｕｉｔｅ  ｖ６．３．０（Ｓｔａｎｄａｒｄ）を用いて、データ解析を実施した。
【００９４】
溶解度
振とうフラスコ法を用いて溶解度を測定した；溶解度は、２０℃で目視で測定した。１０ｍｇの化合物に対し、完全な溶解が得られるまで、または０．０５ｍｇ／ｍｌの溶解度に達するまで、リストに挙げた溶媒を１５分の間隔をあけて段階的に添加した。
【００９５】
ハイスループット実験
冷却結晶化実験の温度制御用のＪｕｌａｂｏ  ＦＰＳＯを備えた、結晶化構成のＦｒｅｅｓｌａｔｅ  Ｃｏｒｅ  Ｍｏｄｕｌｅ  ２を用いて、ハイスループット実験をウェルプレート形式で実施した。
【００９６】
固体ディスペンスシステム
ザルトリウス天秤を備えた古典的なＳＶ−ホッパー構成のＦｒｅｅｓｌａｔｅ  Ｃｏｒｅ  Ｍｏｄｕｌｅ  Ｐｒｏｔｅｇｅ固体ディスペンスシステムを用いて固体を投与した。使用したホッパーは、８ｍｍの弁サイズと４：３ｍｍ漏斗サイズを有する２５ｍｌの従来型ホッパー、８ｍｍの弁サイズと４：３ｍｍ漏斗サイズを有する１０ｍｌの従来型ホッパー、および標準的４ｍｌのガラスバイアルを有するＳＶホッパーとした。
【００９７】
ラセミ５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジン
標記化合物（ファドロゾール）を、例えば、Ｌ．Ｊ．Ｂｒｏｗｎｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９１，３４，７２５）により記載の手順に従って調製し得、またはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈなどの市販の業者から取得し得る。
【００９８】
実施例１
ラセミ５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンを用いたジアステレオマー塩スクリーニング
１００ｍｇ（１．０当量）の標記化合物をイソプロパノールに溶解し、続けて、イソプロパノール（０．５ｍＬ）中のキラル酸（０．５当量）の溶液を添加した。スクリーニングの結果を表２にまとめている。
2019532975.tif 000006
【００９９】
実施例２
（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンを用いた塩スクリーニング
一般的手順：標記化合物（遊離塩基）を３５℃でエタノール（１００ｇ／Ｌ）に溶解し、続けて、同じ温度で酸を添加した。得られた混合物を−２０℃／ｈの冷却速度で１０℃に冷却し、沈殿物（存在する場合）を濾別し、エタノールで洗浄して、減圧下、５０℃で乾燥した。
塩スクリーニングの結果を表３〜５にまとめている。
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固体として得られたリン酸塩、酒石酸塩およびフマル酸塩については、表５による固体状態特性評価を実施した。
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【０１００】
実施例３
（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩（結晶形Ｉ）の調製
ステップ１：（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジンジベンゾイル−Ｌ−酒石酸塩の調製
１０Ｌの反応器中に、２０℃でラセミ５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジン（３２８ｇ、＝１．０当量）およびエタノール（２．３Ｌ）を装填した。混合物を４０℃に加熱後、（−）−Ｏ，Ｏ’−ジベンゾイル−Ｌ−酒石酸（２７６．４ｇ、０．５当量）のエタノール（１Ｌ）中溶液を加えた。混合物を４０℃で１時間保持後、２時間をかけて２０℃に冷却し、この温度で１時間保持した後、０．５時間かけて１０℃まで冷却し、最後に１０℃で一晩保持した。その後、沈殿物を濾別し、濾過ケーキを低温（０℃）のエタノール（１Ｌ）で洗浄し、標記化合物を白色の湿った粉末として得た（４８５ｇ、＝４１３．７ｇの乾燥時減量による推定乾燥物、４８．４％；ｅｅ＝８７％）。
【０１０１】
ステップ２：（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジンジベンゾイル−Ｌ−酒石酸塩の再結晶化
１０Ｌの反応器に、２０℃で、ステップ１で得られた（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジンジベンゾイル−Ｌ−酒石酸塩（４８５ｇ、ｅｅ＝８７％、＝４１３．７ｇ推定乾燥物、乾燥減量による、＝１．０当量）、エタノール（１０Ｌ、２４Ｖ）および水（２．４Ｌ、６Ｖ）を装填した。得られた混合物を加熱還流し、溶液が形成された。次に、溶液を５０℃まで冷却し、この温度で１時間保持した。その後、混合物を２時間かけて１０℃に冷却した後、この温度で一晩保持した。沈殿物を濾別し、濾過ケーキを低温（０℃）のエタノール（１．２Ｌ）で洗浄した。生成物を減圧下、４０℃で乾燥させて、標記化合物を白色粉末として得た（２９４．８ｇ、７１％、単一エナンチオマー）。
鏡像体過剰率：ＨＰＬＣで測定して、９９．９％超。
【０１０２】
ステップ３：（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジン（遊離塩基）の調製
２Ｌの反応器に、ステップ２から得られた（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジンジベンゾイル−Ｌ−酒石酸塩（１７７ｇ、単一エナンチオマー）およびジクロロメタン（１．７７Ｌ、１０Ｖ）を装填した。その後、Ｎａ２ＣＯ３（７１ｇ、２．２当量）の水（８７５ｍＬ）中溶液を加えた。室温で０．２５時間撹拌後、混合物をデカントした。こうして得られた液相は透明であり、水相は８〜９のｐＨであった。有機相を水（２ｘ８７５ｍＬ）で洗浄後、真空下で濃縮した。残留物をエタノールに溶解し、再度、真空下で濃縮して、標記化合物（７０ｇ、定量収率）を油として得て、これは、静置時に固化した。
【０１０３】
ステップ４．（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩
１Ｌの反応器に、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジン（９４ｇ、１．０当量）およびエタノール（５６４ｍＬ）を加え、混合物を３５℃に加熱した。この溶液を濾過し、反応器をエタノール（９４ｍＬ）で濯いだ。Ｈ３ＰＯ４（９７ｇ、Ｈ２Ｏ中８５重量／重量％）のエタノール（２３５ｍＬ）中溶液を同じ温度で加え、エタノール（４７ｍＬ）で濯いだ。３５℃で１時間撹拌後、混合物を１０℃に冷却し（−２０℃／時間の速度で）、この温度で１０時間保持した。得られた固体を濾別し、濾過ケーキを低温（１０℃）のエタノール（３ｘ９４ｍＬ）で洗浄した。減圧下、５０℃で乾燥後、標記化合物を白色結晶質易流動性の粉末（１００ｇ、７４％）を得た。
ＸＲＰＤ：図１および表１を参照されたい。
融点：ＴＧＡ／ＤＳＣで測定して、１８９℃（図２）。
鏡像体過剰率：９９．９％超（図３）。調製物の鏡像体過剰率の測定のためのキラルＨＰＬＣは、Ｒ−（＋）エナンチオマーに対する１４．４５９分の、およびＲ−（−）エナンチオマーに対する９．８１４分の保持時間（ｔｒ）を特徴とした。
絶対配置：炭素５上のＲ−（＋）−を単結晶Ｘ線で決定。
比旋光度（ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  １：１（体積／体積））：［α］Ｄ２０＝＋９８．１。
吸湿性：ＤＶＳで測定して、９０％以上の相対湿度（ＲＨ）で、１．０％。水吸収は、可逆的で、結晶形はＤＶＳ処理で変化しない（図４〜６）。２２５℃までの加熱時の質量損失は、ＴＧＡ／ＤＳＣで測定して、１．４％（図２）。（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩の結晶は、その元素分析によりさらに特徴付けられ、分子式Ｃ１４Ｈ１６Ｎ３Ｏ４Ｐ（分子量：３２１．２７）から計算される値：Ｃ５２．４％；Ｈ５．１％；Ｎ１３．０３％と一致する。
【０１０４】
実施例４
（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロ−イミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩から、遊離塩基を介して、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジンクロリドの調製
実施例３で調製した（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロ−イミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩（１０００ｍｇ、３．１１ｍｍｏｌ）をＥｔ２Ｏ（３０ｍｌ）に懸濁させ、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液（３０ｍｌ）で抽出した。水層をジエチルエーテル（２ｘ２０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（１０ｍｌ）および蒸留水（１０ｍｌ）で洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥後、濾過、留去して、遊離塩基（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジンを白色固体としてとして得て、これを、真空中、５０℃で一晩乾燥させた（５３０ｍｇ）。
融点：１０１〜１０２℃；比旋光度（エタノール）：［α］Ｄ２５＝＋１２７．３；
このように得られた（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピリジン（１００ｍｇ、０．４４７ｍｍｏｌ、１当量）を塩化メチレン（２．２ｍｌ）に溶解し、ＨＣｌ（ジエチルエーテル中の２Ｍ、０．３４ｍｌ、０．７６ｍｍｏｌ、１．５当量）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した後、留去し、真空下、８０℃で乾燥した。（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロ−イミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジンクロリドを結晶質固体として単離した。
【０１０５】
融点：２４０〜２４３℃；比旋光度（エタノール）：［α］Ｄ２０＝＋１０４．８；比旋光度（ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ  １：１（体積／体積））：［α］Ｄ２０＝＋１２４．４。
【０１０６】
実施例５
（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロ−イミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジンクロリドと比較した、（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロ−イミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩の吸湿性
２種の結晶質塩の１００ｍｇの試料を開放フラスコに入れて、条件付けされていない周囲空気中、室温下で並べて２４時間貯蔵し、時間０および２４時間後に重量測定を行った（表６）。（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロ−イミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、０．５７％の重量増加を示し、１３．１％の重量増加により明示される、対応する（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジンクロリドと比較して、非吸湿性であると見なされる。
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【０１０７】
実施例６
（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩の振とうフラスコ溶解度調査
物質の振とうフラスコ溶解度調査を、米国薬局方（ＵＳＰ）の仕様書に従って実施した。一組の異なる官能基を有する薬学的に認められているプロセス溶媒を用いて、振とうフラスコ溶解度を測定した。溶媒を一晩室温下、０〜１００ミリバールで蒸発させた。その後、全ての固形物をＸＲＰＤを用いて分析した。この調査の結果を下表７で見出すことができる。
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【０１０８】
この物質は、水に極めて可溶性で、メタノールおよび酢酸に溶けやすく、エタノールに溶けにくく、その他の試験した溶媒に事実上溶けない。表８には、蒸発後の、スラリーの固形物または溶液の固形物に対し実施した測定のＸＲＰＤ結果を示す。
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酢酸の場合（非晶質）を除いて、溶媒の蒸発後、新規の多形型は得られず、結晶形Ｉの極めて優れた安定性が確認された。
【０１０９】
実施例７
（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩に対する多形調査
溶媒および共溶媒を異なる比率で加えた。次に、異なる比率を、１００％溶媒と０％共溶媒、８０％溶媒と２０％共溶媒、６０％溶媒と４０％共溶媒、４０％溶媒と６０％共溶媒、２０％溶媒と８０％共溶媒および５％溶媒と９５％共溶媒とした。表９は、調査条件の配置およびそれぞれの多形型に関するＸＲＰＤ結果を示す。
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【０１１０】
Ｆｒｅｅｓｌａｔｅ  ＣＭ  Ｐｒｏｔｅｇｅ固体ディスペンスシステムを用いて、出発材料を９６ウェルプレート（「マスタープレート」）に分注した（３０ｍｇ）。固体の分注後、ウェルプレートを、液体（溶媒＋共溶媒合計＝８００μＬ）分注のために、Ｆｒｅｅｓｌａｔｅ  Ｃｏｒｅ  Ｍｏｄｕｌｅ２に移した。マスタープレートを５０℃で２時間撹拌した。マスタープレートの試料の一定分量を熱濾過プレートを介して、冷却結晶化プレートに移した。その後、冷却プレート中の試料を、３次冷却速度を用いて５時間かけて、５０℃から１０℃に冷却した。どのウエルも固体を含んでいなかったので、蒸発結晶化をシミュレートするために、溶媒を室温下、０〜１００ミリバールで蒸発させた。形成された全ての固体をＸＲＰＤで分析した。それぞれのディフラクトグラムを重ね合わせることにより、全てのディフラクトグラムを図１で概説した基準ディフラクトグラムと比較した（図６）。この調査では、記載した極めて有益で意外な特性を有する、標記化合物の１つの多形、結晶形Ｉのみが特定され得た。この知見は、結晶化は塩選択の関数であるのみでなく、本発明の結晶形Ｉの（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩をもたらす結晶化処理条件の関数でもあることを確証すると思われる（Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  Ｓｔａｈｌ（Ｅｄｉｔｏｒ），Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｉｔｏｒ）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ，２ｎｄ  Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｒｃｈ  ２０１１，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，ＩＳＢＮ：９７８−３−９０６３９−０５１−２）。
【０１１１】
実施例８
（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩によるアロマターゼおよびアルドステロンシンターゼ阻害の評価
アルドステロンシンターゼ（ＣＹＰ１１Ｂ２）およびアロマターゼ（ＣＹＰ１９）活性のためのヒトＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ細胞アッセイ
侵襲的原発性副腎皮質癌由来の連続継代性細胞株であるＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ細胞を、ＣＬＳ細胞株サービスＧｍｂＨ（カタログ番号３００４８３）から得た。ＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ細胞は、アルドステロンおよびエストラジオールの両方を産生するので、この細胞は、アルドステロンシンターゼ活性およびアロマターゼ活性を同じ条件下で測定することを可能とする。アッセイで使用する前に、細胞を１５ｍＭのヘペスおよび１．２ｇのＮａＨＣＯ３を含み、５％ステロイド不含血清置換物、Ｐａｎｅｘｉｎ  ＢＭＭ（ＰＡＮ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ａｌｄｅｎｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ；カタログ番号ＰＯ４−９５１５Ａ２）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、１．２５％のＬ−グルタミン、および６．２５μｇ／ｍｌのインスリン、６．２５ｎｇ／ｍｌのセレン、５．３５μｇ／ｍｌのリノール酸ならびに１．２５ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミンを補充したＤＭＥＭ／ハム培地中で維持した。細胞を９５％空気／５％ＣＯ２の雰囲気下、３７℃で維持した。アッセイのために、細胞を、２４ウェルプレート中で５ｘ１０５細胞／ウエルの密度で継代培養し、５０〜６０％集密度まで（４８時間）増殖させた。その後、増殖培地を、アッセイの最終濃度が０．５％のエタノールからなるように、エタノール／水１：１（体積／体積）に溶解した試験化合物を含む５００μｌ無血清ＤＭＥＭ：ハムＦ１２で置換した。６種の濃度を評価し、化合物不含の対照試料を０．５％のエタノールで補充した。化合物を含む細胞を９５％空気／５％ＣＯ２下、３７℃で６時間インキュベートした。その後、上清を取り出し、−２０℃で分析まで貯蔵した。上清を取り出した後、細胞を位相差顕微鏡で形態学的変化を、検査を利用して光学的評価により、およびレサズリンの蛍光を発する最終生成物レゾルフィンへの変換を測定するレサズリン法により評価して、生存率を保障した。生育不能な細胞は、変換を行う代謝能力に欠けている。Ｗａｌｌａｃ  １４２０  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｃｏｕｎｔｅｒ  Ｖｉｃｔｏｒ  Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ／Ｌｕｍｉｎａｔｏｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｗｌａｔｈａｍ，ＭＡ）を用いて、それぞれ、５４４ｎｍ／５９０ｎｍ（消光／発光）での蛍光を測定することにより変換を定量した。
【０１１２】
アルドステロンシンターゼ活性の尺度としての、アルドステロン濃度の定量は、ＬＣ−ＭＳにより以下のように実施した。分析の前に、アセトニトリルを用いて試料タンパク質を沈殿させ、遠心分離後に粒子不含上清をＬＣ−ＭＳに供した。ＨＰＬＣシステムは、Ａｃｃｅｌａ  Ｕ−ＨＰＬＣポンプおよびＡｃｃｅｌａ  Ｏｐｅｎオートサンプラー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）から構成した。質量分析は、標準的Ｘｃａｌｉｂｕｒソフトウェア２．２（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を実行しているＰＣに接続された熱エレクトロスプレー（Ｈ−ＥＳＩ）インターフェースを備えたＱ−Ｅｘａｃｔｉｖｅ  ＭＳ（Ｏｒｂｉｔｒａｐ）を用いて実施した。ＬＣは、０．１％ギ酸含有アセトニトリル（溶媒Ａ）および水性の０．１％ギ酸溶媒Ｂを用いて、勾配方式で実施した。ポンプ流量を６００μｌ／分に設定し、Ｃ６−Ｐｈｅｎｙｌ、４ｘ２．０ｍｍＩＤの定量用のプレカラムを備えたＫｉｎｅｔｅｘ  Ｐｈｅｎｙｌ−Ｈｅｘｙｌ  ２．６μｍ、５０ｘ２．１ｍｍ分析カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で分離を実施した。ＭＳチューニングファイルとして、汎用チューニングファイルを用い、内部較正用のロックマスとして、溶媒系に存在するフタル酸ジイソオクチル（ｍ／ｚ  ３９１．２８４９２）の［Ｍ＋Ｈ］＋イオンを用いた。全ＭＳ−ＳＩＭ分析（ｍ／ｚ：２５０〜４００）を適用し、Ｏｒｂｉｔｒａｐ（商標）の質量分解能を３５，０００に設定した。全ての試料で、試料注入体積は２０μｌであった。結果をｎｇ／ｍｌとして表示し、アルドステロン産生の阻害を未処理対照に対する、すなわち、どの阻害剤も存在しない場合に対するパーセント阻害として表した（表１０）。ＩＣ５０値は、試験化合物の濃度と、以下に示すように５０％の直上および直下の対応するパーセンテージ阻害を使って、線形補間を用いて計算した。
ＩＣ５０＝（５０％−低ｉｎｈ％）／（高ｉｎｈ％−低ｉｎｈ％）ｘ（高ｃｏｎｃ−低ｃｏｎｃ）＋低ｃｏｎｃ
式中、「ｉｎｈ」は阻害、「ｃｏｎｃ」は濃度である。
2019532975.tif 000014
ａ高ｃｏｎｃ＝少なくとも５０％を阻害する供試品の最低濃度（１０ｎＭ）
ｂ低ｃｏｎｃ＝５０％未満を阻害する供試品の最高濃度（１ｎＭ）
ｃ高ｉｎｈ＝高ｃｏｎｃの供試品で達成されたパーセント阻害（６０．８％）
ｄ低ｉｎｈ＝低ｃｏｎｃの供試品で達成されたパーセント阻害（８．７％）
ＩＣ５０＝（５０％−８．７％）／（６０．８％−８．７％）ｘ（１０ｎＭ−１ｎＭ）＋１ｎＭ＝８．１ｎＭ
ＩＣ５０＝アルドステロン産生（アルドステロンシンターゼ活性）の阻害に対し、８．１ｎＭ
【０１１３】
以降で示すように遙かに高い濃度の阻害剤を用いてＩＣ５０を得たことを除いて、アルドステロンシンターゼ活性の測定について前述したのと同様にして、ＮＣＩ−Ｈ２９５Ｒ細胞のインキュベーション由来の上清中のエストラジオール濃度の定量化によりアロマターゼ活性を測定した。エストラジオール濃度の定量化は、ＩＢＬ−Ｈａｍｂｕｒｇ（Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の１７−ベータエストラジオールＥＬＩＳＡキットを用いて、製造業者説明書に従って行った。対応するログ記録した濃度（ｘ軸）に対して、それぞれの参照基準（ｙ軸）の吸光度をプロットすることにより、検量線を生成した。それぞれの試料の吸光度を用いて、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ５．０４（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使って、検量線からの補間により対応する値を決定した。表１１に開示のアルドステロンシンターゼデータに対して前述の式を用いて、ＩＣ５０を計算した。
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ａ高ｃｏｎｃ＝少なくとも５０％を阻害する供試品の最低濃度（１０μＭ）
ｂ低ｃｏｎｃ＝５０％未満を阻害する供試品の最高濃度（１μＭ）
ｃ高ｉｎｈ＝高ｃｏｎｃの供試品で達成されたパーセント阻害（６８．６％）
ｄ低ｉｎｈ＝低ｃｏｎｃの供試品で達成されたパーセント阻害（２９．１％）
ＩＣ５０＝（５０％−２９．１％）／（６８．６％−２９．１％）ｘ（１０μＭ−１μＭ）＋１μＭ＝５．７６μＭまたは５７６０ｎＭ
ＩＣ５０＝エストラジオール産生（アロマターゼ活性）の阻害に対し、５７６０ｎＭ
【０１１４】
無細胞ヒト組換えアロマターゼアッセイ
アロマターゼ（ＣＹＰ１９）活性を、製造業者の説明書に従って、ヒトＣＹＰ１９アッセイキット（Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）、Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ；製品＃４５６２６０）を用いて測定した。アッセイシステムは、組換えヒト酵素、蛍光定量的基質ＭＦＣ（７−メチル−４−トリフルオロ−メチル−クマリン）、ならびにグルコース−６−ホスフェート脱水素酵素、ＮＡＤＰ＋およびグルコース−６−ホスフェートから構成されるＮＡＤＰＨリジェネレーションシステムを利用した。酵素活性を５０％阻害（ＩＣ５０）した試験化合物の濃度の測定のために、８種の試験濃度を試験した。アッセイにおける最終エタノール濃度が１％になるように、試験化合物をエタノール／水１：１（体積／体積）に溶解した。ＮＡＤＰＨリジェネレーションシステムと共に、種々の濃度の試験化合物を９６ウェルプレートに加えた。１０分のプレインキュベーション後、あらかじめ温めた酵素基質混合物の添加により反応を開始し、３７℃でさらに３０分間継続させた。次に、８０％のアセトニトリルおよび２０％、０．５Ｍのトリス塩基の溶液（停止液）の添加により反応を停止させた。バックグラウンド蛍光を制御するために、ブランクウエル（試験試料不含）を同様にアッセイしたが、これらのウエルは、酵素基質混合物の添加の前に、停止液を添加した。蛍光生成物が形成され、Ｗａｌｌａｃ  １４２０  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｃｏｕｎｔｅｒ  Ｖｉｃｔｏｒ  Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｅｒ／Ｌｕｍｉｎａｔｏｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｗｌａｔｈａｍ，ＭＡ）を用いて、７−ヒドロキシ−４−トリフルオロ−メチル−クマリン（ＨＦＣ）を検出した。励起および発光用の波長は、それぞれ、４０５および５３５ｎｍであった。標準的ソフトウェアＷａｌｌａｃ  １４２０  Ｍａｎａｇｅｒ３．０を用いて、データを集計した。上記で示したようなブランクウエル試料の減算に加えて、それぞれの試験物質を、自己蛍光に関して予備テストした。このために、ＮＡＤＰＨジェネレーションシステム（補助因子混合物）および酵素／基質混合物を、対照タンパク質、アッセイバッファー、および試験化合物溶媒の比較混合物により置換した。その後、これらの対照試料をプレインキュベートし、上述のようにアッセイした。ＩＣ５０の３回の独立した測定を、％阻害の阻害剤濃度に対する最良当てはめプロット直線から行った（表１２）。
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【０１１５】
実施例９
（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩の安定性データの評価
法的考察のために該当する重要な長期安定性データを測定した。これに関して、下表１３〜１５に示す種々の試験を、２５℃および６０％ＲＨ（表１３）、３０℃および６５％ＲＨ（表１４）、および４０℃および７５％ＲＨ（表１５）で、また、それぞれの試験を種々の時点で（初期、１、３および６ヶ月後、またはさらに長期に）行った。
【０１１６】
（Ｒ）−（＋）−５−（ｐ−シアノフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾリウム［１，５−ａ］ピリジン二水素リン酸塩は、長期間にわたり極めて安定であり、評価した安定性条件および期間で、特に、純度、含水量に関して、従って、吸湿性ならびにキラル純度に関して、長期安定性が示されたことが明らかになった。さらに、および重要なのは、評価した条件および期間のいずれにおいても、多形性の変化が観察されなかったことである。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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