(57)【要約】  本発明は、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）および特にヒトＯＳＭ（ｈＯＳＭ）に特異的に結合し、ｇｐ１３０受容体へのＯＳＭの結合を阻害する抗原結合タンパク質を含んでなる医薬組成物、前記医薬組成物に対する新規の治療レジメン；ならびに炎症性または自己免疫障害の処置、特に全身性硬化症の処置における前記医薬組成物の投与方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＯＳＭに結合することが可能であり、ｇｐ１３０受容体へのＯＳＭの結合を阻害する抗原結合タンパク質を含んでなる医薬組成物であって、前記医薬組成物の有効量が、５０〜３００ｍｇの前記抗原結合タンパク質を含んでなる、医薬組成物。
【請求項２】
医薬組成物が、１００ｍｇまたは１５０ｍｇまたは２００ｍｇまたは３００ｍｇの前記抗原結合タンパク質を含んでなる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
医薬組成物が、１００ｍｇまたは１５０ｍｇまたは３００ｍｇの前記抗原結合タンパク質を含んでなる、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
抗原結合タンパク質が、配列番号３のＣＤＲＨ３、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号４のＣＤＲＬ１および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなり、任意選択で、配列番号１または配列番号４３のＣＤＲＨ１および配列番号５または配列番号４４のＣＤＲＬ２を含んでもよい、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
抗原結合タンパク質が、配列番号２０または配列番号４０の重鎖可変領域および配列番号２８の軽鎖可変領域を含んでなる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
抗原結合タンパク質が、配列番号４２に記載の重鎖および配列番号３８に記載の軽鎖を含んでなる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
抗原結合タンパク質が、配列番号４１によりコードされる重鎖および配列番号３７によりコードされる軽鎖を含んでなる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記医薬組成物内の抗原結合タンパク質の濃度が１５０ｍｇ／ｍｌである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
医薬組成物が、酢酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、アルギニン、塩化ナトリウム、ポリソルベート８０を含んでなり、ｐＨ５．５を有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
医薬組成物が、５０ｍＭ酢酸ナトリウム、０．０５ｍＭ  ＥＤＴＡ、１．０％アルギニン、５１ｍＭ塩化ナトリウム、０．０２％ポリソルベート８０を含んでなり、ｐＨ５．５を有する、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
組成物がヒト患者に投与される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
組成物が週１回または隔週に１回または毎月１回投与される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
組成物が毎週１回投与される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
組成物が皮下投与される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
炎症性または自己免疫障害または疾患の処置に使用するための、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
全身性硬化症の処置に使用するための、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
炎症性または自己免疫障害または疾患に罹患しているヒト患者を処置する方法であって、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の医薬組成物を前記患者に投与する工程を含んでなる、方法。
【請求項１８】
炎症性または自己免疫障害または疾患の処置のための薬剤の製造における、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）および特にヒトＯＳＭ（ｈＯＳＭ）に特異的に結合する抗原結合タンパク質を含んでなる医薬組成物；前記医薬組成物に対する新規の治療レジメン；ならびに炎症性または自己免疫障害の処置、特に全身性硬化症の処置における前記医薬組成物の投与方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
オンコスタチンＭは、ｇｐ１３０膜貫通シグナル伝達受容体を共有する（Taga T and Kishimoto T (1997) Annu. Rev. Immunol. 15: 797-819参照）、ＩＬ−６、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、カルジオトロフィン（cardiotropin）−１（ＣＴ−１）およびカルジオトロフィン−１様サイトカインを含む（Kishimoto T et al. (1995) Blood 86: 1243-1254参照）サイトカインのインターロイキン６（ＩＬ−６）ファミリーに属する２８ｋＤａの糖タンパク質である。ＯＳＭは、メラノーマ細胞株Ａ３７５の増殖を阻害するその能力によって、最初に発見された（Malik N (1989) et al. Mol Cell Biol 9: 2847-2853参照）。その後、多くの作用が発見され、ＩＬ−６ファミリーの他のメンバーと同じく、多機能メディエーターであることが判明した。ＯＳＭは、マクロファージ、活性化Ｔ細胞（Zarling JM (1986) PNAS (USA) 83: 9739-9743参照）、多形核好中球（Grenier A et al. (1999) Blood 93:1413-1421参照）、好酸球（Tamura S et al. (2002) Dev. Dyn. 225: 327-31参照）および樹状細胞（Suda T et al. (2002) Cytokine 17:335-340参照）を含む種々の細胞型において産生される。ＯＳＭは、膵臓、腎臓、精巣、脾臓、胃、脳（Znoyko I et al. (2005) Anat Rec A Discov Mol Cell Evol Biol 283: 182-186参照）および骨髄（Psenak O et al. (2003) Acta Haematol 109: 68-75参照）においても発現する。その主要な（principle）生物学的作用は、内皮の活性化（Brown TJ et al. (1993) Blood 82: 33-7参照）、急性期反応の活性化（Benigni F et al. (1996) Blood 87: 1851-1854参照）、細胞増殖または分化の誘導、炎症性メディエーター放出の調節、造血（haematopoesis）（Tanaka M et al. (2003) 102: 3154-3162参照）、骨のリモデリング（de Hooge ASK (2002) Am J Pathol 160: 1733-1743参照）、血管新生の促進（Vasse M et al. (1999) Arterioscler Thromb Vasc Biol 19:1835-1842参照）および創傷治癒を含む。
【０００３】
ＯＳＭに対する受容体（ＯＳＭ受容体、ＯＳＭ受容体β、「ＯＳＭＲβ」）は、上皮細胞、軟骨細胞、線維芽細胞（Langdon C et al. (2003) J Immunol 170: 548-555参照）ならびに神経平滑筋、リンパ節、骨、心臓、小腸、肺および腎臓に由来する細胞（Tamura S et al. (2002) Mech Dev 115: 127-131参照）を含む広範囲の細胞に発現する。いくつかの証拠は、内皮細胞がＯＳＭの主要な標的であることを示唆している。これらの細胞は、ＯＳＭに対する１０〜２０倍高い数の高親和性受容体および低親和性受容体の双方を発現し、ＯＳＭによる刺激後に表現型の著明かつ持続的な変化を示す（Modur V et al. (1997) J Clin Invest 100: 158-168参照）。さらに、ＯＳＭは、内皮由来と考えられるカポジ肉腫細胞に対する主要な自己分泌増殖因子である（Murakami-Mori K et al. (1995) J Clin Invest 96:1319-1327参照）。
【０００４】
その他のＩＬ−６ファミリーサイトカインと同じく、ＯＳＭは、膜貫通シグナル伝達糖タンパク質であるｇｐ１３０に結合する。ｇｐ１３０サイトカインの重要な特徴は、ｇｐ１３０およびリガンドに依存して１つ以上の共受容体を含んでなるオリゴマー受容体複合体の形成である（Heinrich PC et al. (2003) Biochem J. 374: 1-20においてレビュー）。その結果、これらのサイトカインは、形成された受容体複合体の組成に応じて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ双方での共有の独特な生物活性を媒介することができる。ヒトＯＳＭ（ｈＯＳＭ）は、ｇｐ１３０、および２つの共受容体ＬＩＦＲまたはオンコスタチン受容体（ＯＳＭＲ）のいずれか１つと複合体を形成できるという点で、その他のＩＬ−６サイトカインとは異なる。
【０００５】
ｈＯＳＭの結晶構造は解明されており、２つの潜在的な糖鎖付加部位を有する４つのαヘリックス束を含んでなることが示されている。ｈＯＳＭ分子上での部位特異的突然変異誘発によって、２つの別々のリガンド結合部位が同定されている（Deller MC et al. (2000) Structural Fold Des. 8:863-874参照）。１つ目の部位ＩＩと呼ばれる（「部位２」と呼ばれることもある）ものは、ｇｐ１３０と相互作用し、２つ目の部位、ＯＳＭ分子の逆末端に位置する部位ＩＩＩと呼ばれる（「部位３」と呼ばれることもある）ものは、ＬＩＦＲまたはＯＳＭＲのいずれかと相互作用する。突然変異誘発実験は、ＬＩＦＲおよびＯＳＭＲの結合部位はほぼ同一であるが、単一のアミノ酸変異がその２つを識別できることを示している。
【０００６】
ＯＳＭ−ｇｐ１３０相互作用の調節は、全身性硬化症、関節リウマチ、変形性関節症、特発性肺線維症、疼痛、炎症性肺疾患、心血管疾患および乾癬などの炎症性疾患および障害の処置において利点となり得るという仮説を裏付ける証拠が増えてきている。
【０００７】
したがって、本発明の目的は、例えば、全身性硬化症、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患または関節リウマチの処置に対する治療アプローチを提供することである。また、変形性関節症、特発性肺線維症、癌、喘息、疼痛、心血管疾患および乾癬などの慢性炎症性疾患および障害の処置。特に、本発明の目的は、ＯＳＭ（例えば、ｈＯＳＭ、特にその部位ＩＩ）に特異的に結合し、相互作用の調節に反応する疾患および障害の処置におけるＯＳＭとｇｐ１３０との相互作用を調節する（すなわち、阻害または遮断する）抗原結合タンパク質を提供することである。
【０００８】
全身性硬化症（ＳＳｃ）は、炎症、線維症および微小血管損傷の相互に関係のある過程が、高い死亡率および罹患率を伴う器官ベースの合併症の複雑なパターンに至る多系統自己免疫疾患である。症状は、硬化、瘢痕および水疱形成を含む。ＳＳｃの処置のための承認された薬剤はなく、そうであるから、大きなアンメット・メディカル・ニーズの領域が残っている［Denton, 2013］。
【発明の概要】
【０００９】
本発明は、抗ＯＳＭ抗体を用いた、全身性硬化症または関節リウマチなどの炎症性または自己免疫障害または疾患を処置するための新規の投与レジメンを提供する。
【００１０】
本発明は、ＯＳＭに結合することが可能であり、ｇｐ１３０受容体へのＯＳＭの結合を阻害する抗原結合タンパク質を含んでなる医薬組成物であって、前記医薬組成物の有効量が、５０〜３００ｍｇの前記抗原結合タンパク質を含んでなる、医薬組成物を開示する。
【００１１】
本開示は、前記医薬組成物を前記患者に投与することにより、炎症性または自己免疫疾患を罹患しているヒト患者を処置する方法も包含する。
【００１２】
本発明は、ＯＳＭに結合することが可能であり、例えば、ヒトＯＳＭ（ｈＯＳＭ）に特異的に結合し、ｇｐ１３０受容体へのＯＳＭの結合を阻害する抗原結合タンパク質を含んでなる医薬組成物をヒトに投与する方法をさらに提供する。
【００１３】
本発明は、ＯＳＭに結合することが可能であり、例えば、ヒトＯＳＭ（ｈＯＳＭ）に特異的に結合し、ｇｐ１３０受容体へのＯＳＭの結合を阻害する抗原結合タンパク質を含んでなる医薬組成物であって、前記医薬組成物の有効量が、５０〜３００ｍｇの前記抗原結合タンパク質を含んでなる、医薬組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、異なる用量レベルでの観測平均総ＯＳＭ対予測平均総ＯＳＭを示す。
【図２】図２は、平均（９５％ＣＩ）ターゲットエンゲージメント（％ＴＥ）を引き出すためのＴＭＤＤモデルである。
【図３】図３は、１−コンパートメントＰＫ−ＴＥモデルに基づいた、反復投与中のｍＡｂ１の模擬ターゲットエンゲージメントプロファイルを図示している。
【図４】および
【図５】図４および図５は、血漿および水疱液双方における表４に従った高濃度の単回投与を示す。
【図６】および
【図７】図６および図７は、血漿および水疱液双方におけるターゲットエンゲージメントを示す。
【図８】図８は、血小板数の用量に関連した減少の割合（％）およびベースラインからの平均変化量を示す。
【図９】図９は、前記ＦＴＩＨ  ｍａｂ１試験における３ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）の用量が３５％の減少をもたらし、６ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）の用量６０％の減少をもたらしたことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
発明の詳細な説明
本発明は、ＯＳＭに結合することが可能であり、例えば、ヒトＯＳＭ（ｈＯＳＭ）に特異的に結合し、ｇｐ１３０受容体へのＯＳＭの結合を阻害する抗原結合タンパク質を含んでなる医薬組成物であって、前記医薬組成物の有効量が、５０〜３００ｍｇの前記抗原結合タンパク質を含んでなる、医薬組成物を提供する。例えば、一実施形態では、前記医薬組成物の有効量は、１００ｍｇまたは１５０ｍｇまたは２００ｍｇまたは３００ｍｇの前記抗原結合タンパク質を含んでなる。
【００１６】
本発明は、全身性硬化症などの炎症性または自己免疫障害または疾患の処置に使用するための医薬組成物であって、医薬組成物が、ＯＳＭに結合することが可能であり、例えば、ヒトＯＳＭ（ｈＯＳＭ）に特異的に結合し、ｇｐ１３０受容体へのＯＳＭの結合を阻害する、約５０ｍｇ〜約３００ｍｇの抗原結合タンパク質を含んでなり、医薬組成物が週１回または隔週に１回投与される、医薬組成物も提供する。例えば、一実施形態では、医薬組成物は、１００ｍｇまたは１５０ｍｇまたは２００ｍｇまたは３００ｍｇの前記抗原結合タンパク質を含んでなる。
【００１７】
一実施形態では、本発明は、患者における自己免疫または炎症性疾患（例えば、全身性硬化症、潰瘍性大腸炎または炎症性腸疾患）を処置する方法であって、ｈＯＳＭに特異的に結合し、ｇｐ１３０受容体へのＯＳＭの結合を阻害するＯＳＭ結合タンパク質（例えば、抗ＯＳＭ抗体）を、５０〜３００ｍｇの前記抗原結合タンパク質の用量で、患者に投与することを含んでなる方法を提供する。例えば、一実施形態では、前記医薬組成物の有効量は、５０ｍｇ、または１００ｍｇもしくは１５０ｍｇもしくは２００ｍｇもしくは３００ｍｇの前記抗原結合タンパク質を含んでなる。例えば、一実施形態では、前記医薬組成物の有効量は、１００ｍｇの前記抗原結合タンパク質を含んでなる。例えば、一実施形態では、前記医薬組成物の有効量は、１５０ｍｇの前記抗原結合タンパク質を含んでなる。
【００１８】
別の実施形態では、本発明の医薬組成物は、毎日、隔日、毎週、隔週、４週毎または月１回、ヒトに投与され得る。さらなる実施形態では、本発明の医薬組成物は、毎週ヒトに投与され得る。
さらなる実施形態では、本発明の医薬組成物は、隔週でヒトに投与され得る。
【００１９】
別の実施形態では、本発明の医薬組成物は、１日１回、隔日に１回、７日毎に１回、１４日毎に１回、４週毎に１回または毎月１回、ヒトに投与され得る。
さらなる実施形態では、医薬組成物は、７日毎に１回投与される。
さらなる実施形態では、医薬組成物は、１４日毎に１回投与される。
【００２０】
別の実施形態では、ｈＯＳＭに特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合タンパク質をヒトに投与する方法であって、本発明の医薬組成物をヒトに投与することを含んでなる方法が提供される。一実施形態では、医薬組成物は皮下投与される。医薬組成物は、少なくとも１．０ｍＬの注射液の皮下注射として投与され得る。一実施形態では、抗原結合タンパク質は、同じ医薬組成物と同じ用量でもよい、または異なる用量でもよい２または３回の注射で投与される。医薬組成物は、同じまたは異なる注射部位で投与され得る。本発明の皮下注射は、全用量が単回投与として投与され、投与の全量が一度に投与される単回注射として投与され得る。単回投与の注射は、複数回投与され得る。単回投与は、投与が数分、数時間または数日かけて投与され得る、持続投与または漸増（titrated）投与、例えば、点滴とは異なる。
【００２１】
一実施形態では、医薬組成物は、単独療法として投与される。別の実施形態では、医薬組成物は、例えば、副腎皮質ステロイド剤、プレドニゾンまたはメトトレキサートなどの標準治療薬と同時投与される。
【００２２】
当技術分野で理解されているように、血液、血漿および／またはその他の組織における薬物動態および薬力学データを収集、測定および評価するために、種々の方法が用いられ得る。一実施形態では、測定は水疱液からなされる。
全身性硬化症の病因に関与する重要な生物学的経路の調節の証拠を示すために、線維症、炎症および血管症の機構的バイオマーカーを、血液および／または皮膚中で測定してもよい。
【００２３】
本発明の一態様では、炎症性疾患または障害に罹患しているヒト患者を処置する方法であって、治療的有効量の本発明の医薬組成物を前記患者に投与する工程を含んでなる方法が提供される。さらなる実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、全身性硬化症の処置のためのものである。さらなる実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、潰瘍性大腸炎または炎症性腸疾患の処置のためのものである。
【００２４】
一実施形態では、炎症性または自己免疫障害または疾患の処置のための薬剤の製造における本明細書に記載の抗原結合タンパク質の使用が提供される。さらなる実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、全身性硬化症の処置のためのものである。さらなる実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、潰瘍性大腸炎または炎症性腸疾患の処置のためのものである。
別の実施形態では、炎症性または自己免疫障害または疾患の処置に使用するための医薬組成物が提供される。
【００２５】
処置の用量および期間は、ヒトの循環における本発明の抗原結合タンパク質の相対期間、処置される状態および患者の全般的健康に関連する。最大の治療効果を達成するには、長期間（例えば、２〜６ヵ月）にわたる反復投与が必要とされ得ることが予想される。一実施形態では、医薬組成物は長期投与される。
【００２６】
抗原結合タンパク質、特に抗ＯＳＭ抗体の最適な用量および投与は、抗原結合タンパク質の特徴および特性に依存する。抗体の親和性は、標的の遮断または中和が成功するかどうかの判定にしばしば重要である。しかし、抗体がｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて標的に結合し遮断するにもかかわらず、臨床において抗体がｉｎ  ｖｉｖｏでの必要な評価項目を満たせないことが多い。本明細書に記載の例示された投与レジメンおよび投与プロトコルは、単に血漿分析ではなく水疱液の分析を用いて決定されており、その結果、身体の関連コンパートメントにおけるＯＳＭおよび抗原結合タンパク質のレベルの潜在的なより正確な指標が得られ、したがって、疾患の管理に対するその効果が示される。
【００２７】
本発明の別の態様では、使用説明書とともに、本明細書に記載の本発明に係る抗原結合タンパク質または医薬組成物を含んでなるパーツキットが提供される。
【００２８】
一実施形態では、疾患または障害は、全身性硬化症、潰瘍性大腸炎または炎症性腸疾患、関節リウマチ、変形性関節症、乾癬、特発性肺線維症または多発性硬化症からなる群から選択される。一実施形態では、疾患または障害は、全身性硬化症、潰瘍性大腸炎または炎症性腸疾患からなる群から選択される。
【００２９】
さらなる実施形態では、医薬組成物は、酢酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、アルギニン、塩化ナトリウムおよびポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含んでなり、ｐＨ５．５を有する。さらなる実施形態では、医薬組成物は、１００ｍｇ／ｍｌの濃度の抗原結合タンパク質、ｐＨ５．５の５０ｍＭ酢酸ナトリウム、０．０５ｍＭ  ＥＤＴＡ、１．０％アルギニン、５１ｍＭ塩化ナトリウムおよび０．０２％ＰＳ８０を含んでなる。さらなる実施形態では、医薬組成物は、１５０ｍｇ／ｍｌの濃度の抗原結合タンパク質、ｐＨ５．５の５０ｍＭ酢酸ナトリウム、０．０５ｍＭ  ＥＤＴＡ、１．０％アルギニン、５１ｍＭ塩化ナトリウムおよび０．０２％ポリソルベート８０を含んでなる。
【００３０】
本発明は、本明細書に記載の抗原結合タンパク質および薬学的に許容可能な担体を含んでなる医薬組成物をさらに提供する。
【００３１】
本明細書に記載の抗原結合タンパク質は、保存のために凍結乾燥することができ、使用前に好適な担体に溶解することができる。この技術は、従来の抗原結合タンパク質を用いると効果的であることが示されており、当技術分野で既知の凍結乾燥および溶解技術が用いられ得る。
本発明の抗原結合タンパク質は、マウスモノクローナル抗体（ｍａｂ）１０Ｇ８に関連する、またはそれに由来する。１０Ｇ８マウス重鎖可変領域は、配列番号７によりコードされ、１０Ｇ８マウス軽鎖可変領域は、配列番号９によりコードされる。
１０Ｇ８マウス重鎖可変領域は、配列番号８により提供され、１０Ｇ８マウス軽鎖可変領域は、配列番号１０により提供される。
【００３２】
本発明の一実施形態では、抗原結合タンパク質は、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体である。さらなる実施形態では、抗体はヒト化抗体である。一実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。
【００３３】
抗原結合タンパク質の重鎖可変領域（ＶＨ）は、Ｋａｂａｔにより定義される以下のＣＤＲまたはこれらのＣＤＲの変異体を含んでなり得る（Kabat et al.; Sequences of proteins of Immunological Interest NIH, 1987））。
【００３４】
配列番号１または配列番号４３のＣＤＲＨ１
配列番号２のＣＤＲＨ２
配列番号３のＣＤＲＨ３
【００３５】
本発明の軽鎖可変領域（ＶＬ）は、Ｋａｂａｔにより定義される以下のＣＤＲまたはこれらのＣＤＲの変異体を含んでなり得る（Kabat et al.; Sequences of proteins of Immunological Interest NIH, 1987））。
【００３６】
配列番号４のＣＤＲＬ１
配列番号５または配列番号４４のＣＤＲＬ２
配列番号６のＣＤＲＬ３
【００３７】
本発明のさらなる実施形態では、抗原結合タンパク質は、配列番号３のＣＤＲＨ３、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号４のＣＤＲＬ１および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなり、配列番号１または配列番号４３のＣＤＲＨ１および配列番号５または配列番号４４のＣＤＲＬ２をさらに含んでなり得る。
【００３８】
別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、配列番号３のＣＤＲＨ３、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる。
【００３９】
さらに別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、配列番号３のＣＤＲＨ３、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる。
【００４０】
さらに別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、配列番号３のＣＤＲＨ３、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号４４のＣＤＲＬ２および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる。
【００４１】
さらに別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、配列番号３のＣＤＲＨ３、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号４３のＣＤＲＨ１、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる。
【００４２】
さらに別の実施形態では、抗原結合タンパク質は、配列番号３のＣＤＲＨ３、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号４３のＣＤＲＨ１、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号４４のＣＤＲＬ２および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる。
【００４３】
一実施形態では、抗原結合タンパク質は、ＣＤＲＨ１またはＣＤＲＬ２を通じてＯＳＭと直接相互作用しない。
【００４４】
本発明のさらなる実施形態では、配列番号１９の単離重鎖可変ドメインおよび配列番号２７の単離軽鎖可変ドメインを含んでなる抗原結合タンパク質が提供される。
【００４５】
一実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号２０によりコードされる重鎖可変領域および配列番号２８によりコードされる軽鎖可変領域を含んでなる。
一実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号４１によりコードされる重鎖および配列番号３７によりコードされる軽鎖可変領域を含んでなる。
一実施形態では、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号４２の重鎖および配列番号３８の軽鎖可変領域を含んでなる。
【００４６】
定義
「抗原結合タンパク質」および「ＯＳＭ結合タンパク質」という用語は、互換的に用いられ、本明細書で使用する場合、抗体、抗体フラグメント、例えば、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、ＳｃＦｖ、ＦＡｂ、ＦＡｂ２およびその他のタンパク質構築物を意味する。例えば、抗原結合タンパク質またはＯＳＭ結合タンパク質は、ＯＳＭに結合することが可能である。例えば、具体的には、抗原結合タンパク質またはＯＳＭ結合タンパク質は、ＯＳＭに結合し、ｇｐ１３０受容体へのＯＳＭの結合を阻害する。抗原結合分子は、少なくとも１つのＩｇ可変ドメイン、例えば、抗体、ドメイン抗体（ｄＡｂｓ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ＳｃＦｖ、ダイアボディ（diabody）、ｍＡｂｄＡｂｓ、アフィボディ（affibody）、ヘテロコンジュゲート抗体または二重特異性抗体を含んでなり得る。一実施形態では、抗原結合分子は抗体である。別の実施形態では、抗原結合分子は、ｄＡｂ、すなわち、異なるＶ領域またはドメインとは独立して抗原またはエピトープに特異的に結合するＶＨ、ＶＨＨまたはＶＬなどの免疫グロブリン単一可変ドメインである。抗原結合分子は、２つの標的に結合可能であり得る、すなわち、二重標的タンパク質であり得る。抗原結合分子は、例えば、１つ以上のドメイン抗体および／またはモノクローナル抗体に結合した１つ以上のＳｃＦｖｓなど、抗体と抗原結合性フラグメントの組み合わせであり得る。抗原結合分子はまた、ＯＳＭへの結合を得るためにタンパク質工学に供されている、非Ｉｇドメイン、例えば、ＣＴＬＡ−４（エビボディ（Evibody））；リポカリン；タンパク質ＡのＺドメイン（アフィボディ（affibody）、ＳｐＡ）、Ａドメイン（アビマー（Avimer）／マキシボディ（Maxibody））などのタンパク質Ａ由来分子；ＧｒｏＥｌおよびＧｒｏＥＳなどの熱ショックタンパク質；トランスフェリン（トランスボディ（trans-body））；アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）；ペプチドアプタマー；Ｃ型レクチンドメイン（テトラネクチン）；ヒトγ−クリスタリンおよびヒトユビキチン（アフィリン（affilin））；ＰＤＺドメイン；ヒトプロテアーゼ阻害剤のスコーピオントキシンクニッツ（scorpion toxinkunitz）型ドメイン；およびフィブロネクチン（アドネクチン（adnectin））からなる群から選択される足場の誘導体であるドメインも含んでなり得る。本明細書で使用する場合、「抗原結合タンパク質」は、ヒトＯＳＭをアンタゴナイズおよび／または中和することが可能となる。さらに、抗原結合タンパク質は、ＯＳＭに結合することにより、ならびにそれをｇｐ１３０受容体への結合および／またはその活性化から防ぐことにより、ＯＳＭ活性を阻害および／または遮断し得る。
Ｆｖ、Ｆｃ、Ｆｄ、ＦａｂまたはＦ（ａｂ）２という用語は、それらの標準的な意味とともに使用される（例えば、Harlow et al., Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)参照）。
【００４７】
用語「抗体」は、本明細書において最も広い意味で使用され、具体的には、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体および多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）を網羅する。
【００４８】
本明細書で使用する「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味し、すなわち、少量存在し得る潜在的な自然発生変異を除き、集団を含んでなる個々の抗体は同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原結合部位に向かう高特異的である。さらに、異なる決定基（エピトープ）に向かう異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に向かう。
【００４９】
「キメラ抗体」とは、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定のドナー抗体のクラスまたはサブクラスに由来する抗体における対応する配列と同一または相同であり、一方、鎖の残りが、別の種に由来するまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体、および所望の生物活性を示す限り、そのような抗体のフラグメントにおける対応する配列と同一または相同である、改変抗体の一種を意味する（米国特許第４，８１６，５６７号およびMorrison et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855) (1984)）。
【００５０】
「ヒト化抗体」とは、非ヒトドナー免疫グロブリンに由来するＣＤＲを有し、分子の残りの免疫グロブリン由来部分が、１つ（以上）のヒト免疫グロブリンに由来する、改変抗体の一種を意味する。さらに、フレームワーク支持残基は、結合親和性を保存するように改変され得る（例えば、Queen et al., Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson et al., Bio/Technology, 9:421 (1991)参照）。好適なヒトアクセプター抗体は、ドナー抗体のヌクレオチドおよびアミノ酸配列との相同性によって、従来のデータベース、例えば、ＫＡＢＡＴデータベース、Ｌｏｓ  ＡｌａｍｏｓデータベースおよびＳｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔｅｉｎデータベースから選択される１つであり得る。重鎖定常領域および／またはドナーＣＤＲを挿入するための重鎖可変フレームワーク領域を提供するために、（アミノ酸ベースでの）ドナー抗体のフレームワーク領域との相同性という特徴を有するヒト抗体が、好適であり得る。軽鎖定常または可変フレームワーク領域を提供することが可能な好適なアクセプター抗体は、同様な方法で選択され得る。アクセプター抗体の重鎖および軽鎖は、同じアクセプター抗体に由来する必要はないことに注目すべきである。先行技術は、そのようなヒト化抗体を産生するいくつかの方法を説明している−例えば、ＥＰ−Ａ−０２３９４００およびＥＰ−Ａ−０５４９５１参照。
【００５１】
本明細書および添付の特許請求の範囲を通じて、用語「含んでなる（comprising）」および「含んでなる（comprises）」は、「からなる（consisting of）」および「からなる（consists of）」を包含する。すなわち、「含んでなる（comprising）」および「含んでなる（comprises）」は、文脈が許す場合、特に記載されていないその他の要素または整数を潜在的に含むことを意味することを意図している。
【００５２】
本発明の抗原結合タンパク質に関連して本明細書全体を通じて使用する「特異的に結合する」という用語は、抗原結合タンパク質が、他のヒトタンパク質への結合なしで、またはわずかな結合ありで、ヒトＯＳＭ（ｈＯＳＭ）に結合することを意味する。しかし、この用語は、本発明の抗原結合タンパク質が、他の型のＯＳＭ、例えば、霊長類のＯＳＭと交差反応もし得るということを除外しない。
【００５３】
本発明の抗原結合タンパク質に関連して本明細書全体を通じて使用する「直接相互作用する」という用語は、抗原結合タンパク質がヒトＯＳＭ（ｈＯＳＭ）に結合する場合、抗原結合タンパク質上の特異残基が、ｈＯＳＭ上の特異残基の３．５Å以内であることを意味する。
【００５４】
本発明の抗原結合タンパク質に関連して本明細書全体を通じて使用する「阻害」という用語は、ＯＳＭの生物活性は、そのような抗原結合タンパク質の非存在下でのＯＳＭの活性と比較して、本発明の抗原結合タンパク質の存在下で減少することを意味する。阻害は、ＯＳＭおよび受容体の結合の遮断、ＯＳＭが受容体を活性化することの防止、ＯＳＭのダウンレギュレーション、またはエフェクターの機能性への影響のうち１つ以上に起因し得るが、これらに限定されない。本発明の抗体は、ＯＳＭを中和し得る。
【００５５】
「ＣＤＲ」は、免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の超可変ドメインである抗体の相補性決定領域のアミノ酸配列と定義される。免疫グロブリンの可変部分には、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲが存在する。よって、本明細書で使用する「ＣＤＲ」は、３つすべての重鎖ＣＤＲもしくは３つすべての軽鎖ＣＤＲ（または、適切な場合、すべての重鎖ＣＤＲおよびすべての軽鎖ＣＤＲの双方）を意味し得る。
【００５６】
ＣＤＲは、抗体が抗原またはエピトープに結合するための接触残基の大部分を提供する。本発明における目的のＣＤＲは、ドナー抗体の可変重鎖および軽鎖配列に由来し、自然発生ＣＤＲの類似体、例えば、マウス１０Ｇ８  ＣＤＲ（配列番号１〜６）の類似体を含み、これらの類似体は、それらが由来したドナー抗体、例えば、１０Ｇ８と同じ抗原結合特異性および／または中和能も共有または保持する。
【００５７】
抗体のＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔナンバリングシステム（Kabat et al.; (Sequences of proteins of Immunological Interest NIH, 1987）により決定することができ、あるいは、抗体のＣＤＲ配列は、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングシステム（Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948）、接触定義法（MacCallum R.M., and Martin A.C.R. and Thornton J.M, (1996), Journal of Molecular Biology, 262 (5), 732-745）または、当業者に既知の抗体における残基をナンバリングするおよびＣＤＲを決定するための、その他のいずれかの確立された方法を用いて決定することができる。
【００５８】
当業者に利用可能なその他のＣＤＲ配列のナンバリング方法は、「ＡｂＭ」（バース大学）法および「接触」（ユニバーシティ・カレッジ・ロンドン）法を含む。Ｋａｂａｔ法、Ｃｈｏｔｈｉａ法、ＡｂＭ法および接触法のうち少なくとも２つを用いた最小重複領域は、「最小結合単位」を提供するために決定され得る。最小結合単位は、ＣＤＲのサブ部分であり得る。
【００５９】
以下の表１は、各ＣＤＲまたは結合単位に対する各ナンバリング方法を用いた１つの定義を示す。可変ドメインのアミノ酸配列をナンバリングするために、Ｋａｂａｔナンバリングスキームが表１において使用されている。一部のＣＤＲ定義は、用いた個々の出版物に応じて変動し得ることに注意すべきである。
【００６０】
【表１】
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【００６１】
本明細書を通じて、抗体配列におけるアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔスキームに従ってナンバリングされる。同様に、用語「ＣＤＲ」、「ＣＤＲＬ１」、「ＣＤＲＬ２」、「ＣＤＲＬ３」、「ＣＤＲＨ１」、「ＣＤＲＨ２」、「ＣＤＲＨ３」は、Kabat et al.; Sequences of proteins of Immunological Interest NIH, 1987に記載のＫａｂａｔナンバリングシステムに従う。
【００６２】
本明細書で使用する「ＶＨ」および「ＶＬ」という用語は、それぞれ抗体の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを意味する。
【００６３】
本明細書で使用する場合、用語「ドメイン」は、タンパク質の残りとは独立した三次構造を有する折り畳みタンパク質構造を意味する。一般に、ドメインは、タンパク質の別々の機能特性に対する責任を有し、多くの場合、タンパク質および／またはドメインの残りの機能を喪失することなく、付加、除去または他のタンパク質に導入され得る。「抗体単一可変ドメイン」は、抗体可変ドメインに特徴的な配列を含んでなる折り畳みポリペプチドドメインである。したがって、抗体単一可変ドメインは、完全抗体可変ドメインおよび例えば、１つ以上のループが抗体可変ドメインに特徴的ではない配列に置換されている修飾可変ドメイン、あるいは、切断されているまたはＮもしくはＣ末端伸長部を含んでなる抗体可変ドメイン、ならびに、全長ドメインの少なくとも結合活性および特異性を保持する可変ドメインの折り畳みフラグメントを含む。
【００６４】
用語「免疫グロブリン単一可変ドメイン」は、異なる可変領域またはドメインとは独立して抗原またはエピトープに特異的に結合する抗体可変ドメイン（ＶＨ、ＶＨＨ、ＶＬ）を意味する。
【００６５】
本明細書で使用する「エフェクター機能」という用語は、抗体依存性細胞傷害（antibody dependant cell mediated cytotoxic）（ＡＤＣＣ）活性、補体依存性細胞傷害（complement-dependant cytotoxic）（ＣＤＣ）活性、Ｆｃ媒介性ファゴサイトーシスおよびＦｃＲｎ受容体を介した抗体リサイクリングのうち１つ以上を指すことを意味する。
【００６６】
ここで実施例を例示としてのみ本発明を説明する。
【実施例】
【００６７】
以下の実施例により、本発明の種々の非限定的な態様を説明する。以下の実施例では、特に断りのない限り、抗原結合タンパク質は、配列番号４２に記載の重鎖および配列番号３８に記載の軽鎖を有する抗体であり、以後「ｍａｂ１」という。これらの実施例におけるｍａｂ１は、ｐＨ５．５の５０ｍＭ酢酸ナトリウム、０．０５ｍＭ  ＥＤＴＡ、１．０％アルギニン、５１ｍＭ塩化ナトリウムおよび０．０２％ポリソルベート８０を用いた１００ｍｇ／ｍＬの抽出可能量１ｍＬでの１．２ｍＬ充填量として処方した。
【００６８】
実施例１：ｍａｂ１第ＩＩ相臨床プロトコル
この仮想例では、びまん皮膚硬化型全身性強皮症を有する被験者を対象とした、ｍａｂ１の安全性、忍容性、薬物動態、薬力学を評価し、有効性を探索するプラセボ対照、反復投与、機作証明試験を実施する。
【００６９】
活動性疾患を有し、罹病期間が６０ヵ月以下のびまん皮膚硬化型全身性強皮症（ｄｃＳＳｃ）を有する被験者を組み入れる。活動性疾患は、スクリーニング時に以下の基準のうち少なくとも１つにより定義される。
・治験責任医師の見解においてＳＳｃの原因である６ｍｇ／ｌ（０．６ｍｇ／ｄＬ）以上のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）。
・最初の非レイノー現象の発現からの時間として定義される、スクリーニング時の罹病期間が１８ヵ月以下。
・６ヵ月前以内に実施された評価と比較して、３ｍＲＳＳ単位以上の増加。
・１つの新しい身体領域の関与および６ヵ月前以内に実施された評価と比較して、２ｍＲＳＳ単位以上の増加。
・６ヵ月前以内における２つの新しい身体領域の関与。
【００７０】
被験者に対して、ｍａｂ１またはプラセボのいずれかを用いて、２用量レベルのうち１つで、隔週で少なくとも１０週間皮下投与する。スクリーニングを含む試験の期間は、全被験者に対して約３２週とする。２コホートにわたり、合計で最低２４例および最大で４０例を組み入れる。コホート１またはコホート２の被験者は、ｍａｂ１またはプラセボを少なくとも４回投与され、１日目および８５日目（１２週目）の双方の評価で生検を受けた場合、試験評価項目に関して評価可能とみなされる。治験依頼者の判断で、試験全体で最大４０例まで、追加の被験者を試験にランダム化してもよい。
【００７１】
本試験は、ＳＳｃを有する被験者を対象としたｍａｂ  １の最初の試験および最初の反復投与試験であるため、主要評価項目は、ｍａｂ１の安全性および忍容性である。さらに、本試験は、ｍａｂ１の薬物動態、ターゲットエンゲージメントおよび下流薬理の評価を含む。これは、血液および皮膚水疱液中のｍａｂ１およびＯＳＭレベル、ならびに皮膚生検におけるｍａｂ１の薬理のｍＲＮＡマーカーを評価することにより、達成される。皮膚の関与は、容易に研究され、ｄｃＳＳｃ患者が経験する罹患率に実質的に寄与し、この状態に関与する３つの主要な病的過程を例証するものであるため、強調される。通常、そのような評価では、ｍａｂ１およびＯＳＭの血漿中レベルが測定される。しかし、水疱液中のレベルのモニタリングを可能とする技術が考案されている。この方法は、組織中のより正確な分析を可能にし、水疱液中のｍａｂ１の収率は、血中で測定されるものより通常２０〜３０％低いため、用量の有効性の優れた予測が可能である。
【００７２】
血液および皮膚生検における線維症、炎症および血管症のバイオマーカーの評価も実施する。この理由のため、集団は早期活動性疾患に富む。これらのパラメーターの変化、ならびに互いの関連性および臨床的有効性の予備測定値との関連性を評価する。このデータは、ｍａｂ１がＳＳｃの病因に関与する重要な経路に対する影響を有しているという証拠を提供することを意図している。
【００７３】
コホート１の目的は、高用量に増量する前の、薬理活性用量であるが準最高用量のｍａｂ１の反復投与の安全性および忍容性を評価することである。
治療相の期間は、有効な治療法は、約１０〜１２週のこの時点で機構的パラメーターの変化を生じさせるはずであるという予想に基づいている。
【００７４】
ｍａｂ１の半減期（ｔ１／２）は１９〜２５日であり、これは、可溶性サイトカインに対する典型的なモノクローナル抗体半減期が、ｍａｂ１の最終投与後約１６週であることに一致する。
【００７５】
プラセボ群は、ｍａｂ１治療とは独立した有害事象と比較した、ｍａｂ１治療に起因する有害事象の妥当な評価のために必要である。プラセボ被験者は、バイオマーカーおよび有効性評価の陰性対照としての役割も果たす。
【００７６】
被験者は、それぞれｍａｂ１およびプラセボに３：１の比でランダム化される。このアンバランスな割り付け比は、ｍａｂ１投与後におけるバイオマーカーの被験者内変化の評価に多くの被験者を利用できることを意味し、多くの被験者がｍａｂ１の投与を受けることを可能とする。
【００７７】
このまれな疾患における潜在的な被験者を除外することを避けるために、被験者は、ミコフェノール酸および低用量経口副腎皮質ステロイド剤を含む一部のバックグラウンド療法を継続することが許される。この小規模の試験における被験者間変動を最小限にするために、その他の免疫抑制治療を除外する。
【００７８】
この試験の用量レベルは、ＰＫ／ＰＤ予測、ｍａｂ１を用いたヒト初回投与試験のデータ、および前臨床データに基づき選択されている（詳細については実施例２参照）。２つの用量レベル（１００ｍｇおよび３００ｍｇ）は、血清コンパートメントおよび皮膚コンパートメントの双方における予測ターゲットエンゲージメントに基づき選択されている。１５０ｍｇを用いたさらなる計画用量試験も、毎週または隔週投与レジメンにおいて使用される。
【００７９】
約０．６ｎＭのｉｎ  ｖｉｖｏ親和性が、ヒト初回投与（ＦＴＩＨ）データから推定された。典型的なｍａｂ１の見かけの分布容積は１１．５ｌ（９５％ＣＩ：１０．２〜１３．１）であり、典型的な見かけの全身クリアランスは１４．１ｍｌ／ｈｒ（９５％ＣＩ：１２．７〜１５．６）であった。
【００８０】
【表２】
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【００８１】
実施例２：ｍａｂ１の用量選択
Ｍａｂ１の用量レベル（表２に要約）は、ＰＫ／ＰＤ予測、ならびに０．１、０．３、０．６、１．０、３．０および６．０ｍｇ／ｋｇの用量を用いたＦＴＩＨ試験の前臨床データに基づき選択した。
【００８２】
Guideline on Strategies to Identify and Mitigate Risks for First-In-Human Clinical Trials with Investigational Medicinal Products [CHMP, 2007]に従った「推定最小薬理作用量」（ＭＡＢＥＬ）は、開始用量を定義するために使用され、２０〜４０％の範囲で血漿中の最大阻害をもたらすのに予測される用量レベルと定義される。以前の抗ＯＳＭ抗体（ｍａｂ２）は、最大９０％のターゲットエンゲージメント（ＴＥ）を達成した用量で、健常人および関節リウマチ患者の双方において好ましい安全性および忍容性プロファイルを示した。
【００８３】
最良のシナリオにおけるヒトＰＫ／ＰＤ予測に従って、最大予測ＰＤ阻害が４１％であったため、ｍａｂ１に対する０．１ｍｇ／ｋｇの用量をＭＡＢＥＬ用量に指定した。
【００８４】
ｍａｂ１の６ｍｇ／ｋｇという最高計画用量は、１４〜４０日続く血漿中の完全なＴＥ（９０％超と定義）をもたらすことが予想され、皮膚を含む組織コンパートメントにおいて低いＴＥレベル（９０％未満）が達成されると予測される。
【００８５】
薬理および毒性の非臨床評価に用いられたｍａｂ１のカニクイザル試験は、この試験で用いた用量レベルにおいて、ヒトへのｍａｂ１の初回投与の不当なまたは予想外のリスクはなかったという合理的な保証を示した。最高計画曝露量（Ｃｍａｘ３３．３μｇ／ｍＬ、ＡＵＣ（０−∞）＝２３５３４μｇ＊ｈ／ｍＬ）は、毒性試験で示された安全性より約１００倍低いことが予測された−表３参照。
【００８６】
【表３】
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【００８７】
薬力学は、単回漸増投与ＦＴＩＨ試験におけるターゲットエンゲージメントを特徴づけるための遊離および総ＯＳＭレベルの測定によって評価されている。薬物および標的の結合動態とともに１−コンパートメントＰＫモデルを用いた標的介在性薬物動態（target mediated drug disposition）（ＴＭＤＤ）モデルが、血清中のＯＳＭに対するｍＡｂ１のｉｎ  ｖｉｖｏ親和性を評価するために開発された。この試験では、遊離ＯＳＭレベルは、薬物投与後に定量限界未満であり、実質的なＯＳＭ阻害が示された。
エラー！参照源が見当たりません。示す
【００８８】
推定ｉｎ  ｖｉｖｏ親和性は、０．５６８ｎＭ（９５ＣＩ：０．４５５〜０．７１０）であった。遊離ＯＳＭの推定分解（標的代謝回転）率は、２．０５ｈｒ−１（１．６２〜２．５９）であった。ｍａｂ１の６ｍｇ／ｋｇ単回皮下投与後の血清において、約９０％のターゲットエンゲージメントが推定された。
【００８９】
ｍａｂ１と血清ＯＳＭの血漿中濃度間の関係を、ターゲットエンゲージメントと同様に評価した。さらに、血漿中ｍａｂ１濃度と血小板数との間の関係を評価し、その結果は、血小板減少症および貧血に対する潜在的な影響を示した。レベルは、求められる安全域内であった。安全および有効な単回投与量を決定した後、求められるＴＥに必要な反復投与量レベルを決定することが必要であった。
【００９０】
図３は、１−コンパートメントＰＫ−ＴＥモデルに基づいた、反復投与中の模擬ｍＡｂ１  ＴＥプロファイルを示す。このモデルによると、１００ｍｇ皮下投与隔週の用量は、準最大ＴＥ（定常状態トラフレベルで約８０％）を達成すると予測され、一方、３００ｍｇ皮下投与隔週は、９０％を超えるＴＥを達成すると予測される。それゆえ、表４に従う単回高濃度投与において、１５０ｍｇの用量は、必要なターゲットエンゲージメントを達成することが期待される。図４および図５参照。
【００９１】
【表４】
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【００９２】
１５０ｍｇの用量は、毎週投与した場合、必要なＴＥに達すると予測される。しかし、２週毎に投与する１５０ｍｇの用量は、最適以下のＴＥに達し得るが、血小板減少症および貧血に関して忍容性が良好であり得る。
【００９３】
実施例３：ｍａｂ２  ＦＴＩＨ第Ｉ相試験
ｍａｂ２を用いた以前の臨床試験は、メトトレキサート（ＭＴＸ）を背景に活動性関節リウマチを有する患者を対象とした、単回（パートＡ）および３回反復（パートＢ）静脈内注入の安全性、忍容性、有効性、薬物動態および薬力学を評価するために実施された。ｍａｂ２は、配列番号４７の重鎖配列および配列番号４８の軽鎖配列を有する。
【００９４】
パートＣは、ＭＴＸを背景に活動性関節リウマチを有する患者に対して皮下投与するｍａｂ２を評価する、単回投与、ランダム化、単盲検、プラセボ対照試験であった。コホート１〜６の患者は、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ（２コホートの患者は、この用量レベルで組み入れた）、１０ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇのｍａｂ２の投与を受けた。用量は、漸増投与した。コホート２〜６は、先のコホートにおける最後の患者の投与から最低３週間後に投与を受けた。コホート７および８は同時に組み入れ、患者は１０ｍｇ／ｋｇまたは２０ｍｇ／ｋｇのｍａｂ２の投与を受けた。
【００９５】
パートＢは、パートＡにおける疾患活動性スコア２８（ＤＡＳ２８）の変化量およびＰＫに基づいた、ランダム化、二重盲検、プラセボ対照、反復投与試験であった。初回用量の投与前に、適格患者（ｎ＝５４）を２：１の比にランダム化し、ｍａｂ２（ｎ＝３７）またはプラセボ（ｎ＝１７）を投与した。各患者に対して、用量は約４週間間隔で投与した。
【００９６】
パートＡおよびＢでは、ｍａｂ２またはプラセボを緩徐静脈内注入により投与した。試験の主要評価項目は、パートＡでは２８日目、パートＢおよびＣでは５６日目におけるＤＡＳ２８の平均変化量であった。ｍａｂ２を少なくとも１回投与された全患者を、安全性解析に含めた。パートＡでは、５６、８４および９１日目における３ｍｇ／ｋｇとプラセボとの間に、ＤＡＳ２８の統計学的有意差が認められた。８４日目におけるプラセボと０．３ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇとの間にも、ＤＡＳ２８の統計学的有意差が認められた。これらの変化は小さく、遅く生じたが、ｍａｂ２の治療可能性を決定するためのパートＢおよびＣへの移行を裏付けた。パートＢでは、６ｍｇ／ｋｇとプラセボとの間には有意差は認められなかった。パートＣでは、プラセボと５００ｍｇ皮下投与群との間に、ＤＡＳ２８の統計学的有意差が４０日目、８４日目および１００日目に認められた。欧州リウマチ学会（ＥＵＬＡＲ）反応基準ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０またはＡＣＲ７０に関して、有意な所見はいずれの時点においても認められなかった。臨床、薬物動態および薬力学のデータの探索的解析は、有効性の欠如は、血清および滑液におけるＯＳＭ／抗体複合体の蓄積に起因するＯＳＭの半減期を延長させるタンパク質担体作用を引き起こす高親和性ＯＳＭ受容体と比較した、ｍａｂ２の結合親和性および速いオフレートに起因し得ることを示唆している。
【００９７】
我々のデータは、標的を完全に中和するためのｍＡｂの結合親和性およびオフレート作用の重要性、ならびにこれがその有効性にどのように影響し得るか、および疾患活動性をどのように悪化させる可能性があるかについて強調したものであった。
【００９８】
１０Ｇ８抗体の改善された親和性、および１０Ｇ８に由来するヒト化ｍａｂ１は、ｍａｂ２に関して低用量で類似した血小板作用（ｐｒｏｏｆ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）をもたらした。
【００９９】
【表５】
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【０１００】
血小板数の用量依存的な減少が認められた。割合（％）およびベースラインからの平均変化量をそれぞれ表５および図８に詳述する。
【０１０１】
この血小板数の減少は、ｍａｂ２の薬理と一致しており、用量比例的であるようであり、血小板は長期間にわたりベースラインから大きな減少を示している。
【０１０２】
表５から、３ｍｇ／ｋｇの用量は、５０％の被験者において２８〜３５％の減少を示し、これは、平均効果は５０％より明確に低く、約１０〜２０％であることを意味する。図８は、類似した変化率を示す。１０ｍｇ／ｋｇの用量は２０〜３０％の減少を示し、２０ｍｇ／ｋｇの用量は５０〜６０％の減少を示し、３０ｍｇ／ｋｇの用量は６０〜７０％の減少を示した。ｍａｂ２のすべての投与は、静脈内投与経路を用いて実施した。
【０１０３】
比較として、実施例１に概説したプロトコルに従って、最近のＦＴＩＨ試験においてｍａｂ１を血小板減少に関して評価した（非仮想データ）。図９は、前記ＦＴＩＨ  ｍａｂ１試験において３ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）の用量が３５％の減少をもたらし、６ｍｇ／ｋｇ（ＳＣ）の用量が６０％の減少をもたらしたことを示す。８０％のバイオアベイラビリティを仮定すると、ｍａｂ１とｍａｂ２との間に５〜６倍の比の効力（血小板作用に基づく）が認められる。我々のデータは、標的を完全に中和するためのｍＡｂの結合親和性およびオフレート作用の重要性、ならびに、これに基づき、投与レジメンがどのようにその有効性に影響し得るかについて強調している。
配列の要約（表Ａ）
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2019532034.tif 000008
配列表
配列番号1：10G8 CDRH1
NYAMS
配列番号2：10G8 CDRH2
TISDGGSFTYYLDNVRG
配列番号3：10G8 CDRH3
DVGHTTFWYFDV
配列番号4：10G8 CDRL1
RASKSVSAAGYNFMH
配列番号5：10G8 CDRL2
YASNLES
配列番号6：10G8 CDRL3
LHSREFPFT
配列番号7：10G8 VHヌクレオチド配列
GAAATGCAACTGGTGGAGTCTGGGGAAGGCTTAGTGGAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAACTATGCCATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCGGAAAAGAGCCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTGATGGTGGTAGTTTCACCTACTATCTAGACAATGTAAGGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACAACCTGTATTTGCAAATGAGCCATTTGAAGTCTGACGACACAGCCATGTATTACTGTGCAAGAGATGTGGGACATACTACCTTTTGGTACTTCGATGTCTGGGGCTCAGGGACCGCGGTCACCGTCTCCTCA
配列番号8：10G8 VHアミノ酸配列
EMQLVESGEGLVEPGGSLKLSCAASGFTFSNYAMSWVRQTPEKSLEWVATISDGGSFTYYLDNVRGRFTISRDNAKNNLYLQMSHLKSDDTAMYYCARDVGHTTFWYFDVWGSGTAVTVSS
配列番号9：10G8 VLヌクレオチド配列
GACATTGTGCTGACACAGTCTCCTGTTTTCTTAGTTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCCTGTAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTGCAGCTGGCTATAATTTCATGCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCGCCCAAAGTCCTCATCAAGTATGCATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGTAACATATTACTGTCTGCACAGTAGGGAGTTTCCGTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAACCTGGAAATAAAA
配列番号10：10G8 VLアミノ酸配列
DIVLTQSPVFLVVSLGQRATISCRASKSVSAAGYNFMHWYQQKPGQPPKVLIKYASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAVTYYCLHSREFPFTFGGGTNLEIK
配列番号11：10G8 VHキメラヌクレオチド配列
GAAATGCAACTGGTGGAGTCTGGGGAAGGCTTAGTGGAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAACTATGCCATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCGGAAAAGAGCCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTGATGGTGGTAGTTTCACCTACTATCTAGACAATGTAAGGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACAACCTGTATTTGCAAATGAGCCATTTGAAGTCTGACGACACAGCCATGTATTACTGTGCAAGAGATGTGGGACATACTACCTTTTGGTACTTCGATGTCTGGGGCTCAGGGACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号12：10G8 VHキメラアミノ酸配列
EMQLVESGEGLVEPGGSLKLSCAASGFTFSNYAMSWVRQTPEKSLEWVATISDGGSFTYYLDNVRGRFTISRDNAKNNLYLQMSHLKSDDTAMYYCARDVGHTTFWYFDVWGSGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号13：10G8 VLキメラヌクレオチド配列
GACATTGTGCTGACACAGTCTCCTGTTTTCTTAGTTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCCTGTAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTGCAGCTGGCTATAATTTCATGCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCGCCCAAAGTCCTCATCAAGTATGCATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGTAACATATTACTGTCTGCACAGTAGGGAGTTTCCGTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAACCTGGAAATAAAACGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
配列番号14：10G8 VLキメラアミノ酸配列
DIVLTQSPVFLVVSLGQRATISCRASKSVSAAGYNFMHWYQQKPGQPPKVLIKYASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAVTYYCLHSREFPFTFGGGTNLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号15：IGHV3_7ヒトVH生殖系列アクセプターヌクレオチド配列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTAGCTATTGGATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCCAACATAAAGCAAGATGGAAGTGAGAAATACTATGTGGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGA
配列番号16：IGHV3_7ヒトVH生殖系列アクセプターアミノ酸配列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR
配列番号17：IGKV4_1ヒトVL生殖系列アクセプターヌクレオチド配列
GACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATACAGCTCCAACAATAAGAACTACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATTATAGTACT
配列番号18：IGKV4_1ヒトVL生殖系列アクセプターアミノ酸配列
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYST
配列番号19：10G8ヒト化VH H0ヌクレオチド配列-leto最適化コドン
GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGGAGCCTGAGACTCTCTTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGCAACTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCGACGGCGGCAGCTTCACCTACTATCTGGACAACGTGAGGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGACGTCGGCCACACCACCTTCTGGTACTTCGACGTCTGGGGCAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号20：10G8ヒト化VH H0アミノ酸配列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISDGGSFTYYLDNVRGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDVGHTTFWYFDVWGRGTLVTVSS
配列番号21：10G8ヒト化VH H1ヌクレオチド配列-leto最適化コドン
GAGATGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGGAGCCTGAGACTCTCTTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGCAACTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCGACGGCGGCAGCTTCACCTACTATCTGGACAACGTGAGGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGACGTCGGCCACACCACCTTCTGGTACTTCGACGTCTGGGGCAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号22：10G8ヒト化VH H1アミノ酸配列
EMQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISDGGSFTYYLDNVRGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDVGHTTFWYFDVWGRGTLVTVSS
配列番号23：10G8ヒト化VH H2ヌクレオチド配列-leto最適化コドン
GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGGAGCCTGAGACTCTCTTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGCAACTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCGACGGCGGCAGCTTCACCTACTATCTGGACAACGTGAGGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGACGTCGGCCACACCACCTTCTGGTACTTCGACGTCTGGGGCTCCGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号24：10G8ヒト化VH H2アミノ酸配列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISDGGSFTYYLDNVRGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDVGHTTFWYFDVWGSGTLVTVSS
配列番号25：10G8ヒト化VL L0ヌクレオチド配列-leto最適化コドン
GACATCGTGATGACTCAGAGCCCCGATAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAAAGGGCCACCATCAACTGCAGGGCCAGCAAGAGCGTGAGCGCTGCCGGCTACAACTTCATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCCCCCAAGCTGCTGATCTACTACGCCTCCAACCTGGAGAGCGGCGTGCCAGACAGGTTCAGCGGATCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCAAGCCTGCAGGCCGAGGACGTCGCCGTGTACTACTGCCTGCACAGCAGGGAGTTCCCCTTCACCTTTGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
配列番号26：10G8ヒト化VL L0アミノ酸配列
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSAAGYNFMHWYQQKPGQPPKLLIYYASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLHSREFPFTFGGGTKVEIK
配列番号27：10G8ヒト化VL L1ヌクレオチド配列-leto最適化コドン
GACATCGTGATGACTCAGAGCCCCGATAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAAAGGGCCACCATCAACTGCAGGGCCAGCAAGAGCGTGAGCGCTGCCGGCTACAACTTCATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCCCCCAAGGTGCTGATCTACTACGCCTCCAACCTGGAGAGCGGCGTGCCAGACAGGTTCAGCGGATCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCAAGCCTGCAGGCCGAGGACGTCGCCGTGTACTACTGCCTGCACAGCAGGGAGTTCCCCTTCACCTTTGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
配列番号28：10G8ヒト化VL L1アミノ酸配列
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSAAGYNFMHWYQQKPGQPPKVLIYYASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLHSREFPFTFGGGTKVEIK
配列番号29：10G8ヒト化VL L2ヌクレオチド配列-leto最適化コドン
GACATCGTGATGACTCAGAGCCCCGATAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAAAGGGCCACCATCAACTGCAGGGCCAGCAAGAGCGTGAGCGCTGCCGGCTACAACTTCATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCCCCCAAGCTGCTGATCTACTACGCCTCCAACCTGGAGAGCGGCGTGCCAGACAGGTTCAGCGGATCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCAAGCCTGCAGGCCGAGGACGTCGTGGTGTACTACTGCCTGCACAGCAGGGAGTTCCCCTTCACCTTTGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
配列番号30：10G8ヒト化VL L2アミノ酸配列
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSAAGYNFMHWYQQKPGQPPKLLIYYASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVVVYYCLHSREFPFTFGGGTKVEIK
配列番号31：10G8ヒト化VL L3ヌクレオチド配列-leto最適化コドン
GACATCGTGATGACTCAGAGCCCCGATAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAAAGGGCCACCATCAACTGCAGGGCCAGCAAGAGCGTGAGCGCTGCCGGCTACAACTTCATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCCCCCAAGCTGCTGATCTACTACGCCTCCAACCTGGAGAGCGGCGTGCCAGACAGGTTCAGCGGATCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCAAGCCTGCAGGCCGAGGACGTCGCCGTGTACTACTGCCTGCACAGCAGGGAGTTCCCCTTCACCTTTGGCGGCGGCACCAACGTGGAGATCAAG
配列番号32：10G8ヒト化VL L3アミノ酸配列
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSAAGYNFMHWYQQKPGQPPKLLIYYASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLHSREFPFTFGGGTNVEIK
配列番号33：10G8ヒト化VL L4ヌクレオチド配列-leto最適化コドン
GACATCGTGATGACTCAGAGCCCCGATAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAAAGGGCCACCATCAACTGCAGGGCCAGCAAGAGCGTGAGCGCTGCCGGCTACAACTTCATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCCCCCAAGGTGCTGATCTACTACGCCTCCAACCTGGAGAGCGGCGTGCCAGACAGGTTCAGCGGATCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCAAGCCTGCAGGCCGAGGACGTCGTGGTGTACTACTGCCTGCACAGCAGGGAGTTCCCCTTCACCTTTGGCGGCGGCACCAACGTGGAGATCAAG
配列番号34：10G8ヒト化VL L4アミノ酸配列
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSAAGYNFMHWYQQKPGQPPKVLIYYASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVVVYYCLHSREFPFTFGGGTNVEIK
配列番号35：成熟H0重鎖ヌクレオチド配列-leto最適化コドン
GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGGAGCCTGAGACTCTCTTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGCAACTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCGACGGCGGCAGCTTCACCTACTATCTGGACAACGTGAGGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGACGTCGGCCACACCACCTTCTGGTACTTCGACGTCTGGGGCAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号36：成熟H0重鎖アミノ酸配列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVATISDGGSFTYYLDNVRGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDVGHTTFWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号37：成熟L1軽鎖ヌクレオチド配列-leto最適化コドン
GACATCGTGATGACTCAGAGCCCCGATAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAAAGGGCCACCATCAACTGCAGGGCCAGCAAGAGCGTGAGCGCTGCCGGCTACAACTTCATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCCCCCAAGGTGCTGATCTACTACGCCTCCAACCTGGAGAGCGGCGTGCCAGACAGGTTCAGCGGATCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCAAGCCTGCAGGCCGAGGACGTCGCCGTGTACTACTGCCTGCACAGCAGGGAGTTCCCCTTCACCTTTGGCGGCGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
配列番号38：成熟L1軽鎖アミノ酸配列
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSAAGYNFMHWYQQKPGQPPKVLIYYASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLHSREFPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号39：ヒト化VH変異体H0（IGHV3_23 CDRH1）ヌクレオチド配列-leto最適化コドン
GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGGAGCCTGAGACTCTCTTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGCAGCTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCGACGGCGGCAGCTTCACCTACTATCTGGACAACGTGAGGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGACGTCGGCCACACCACCTTCTGGTACTTCGACGTCTGGGGCAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGC
配列番号40：ヒト化VH変異体H0（IGHV3_23 CDRH1）アミノ酸配列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVATISDGGSFTYYLDNVRGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDVGHTTFWYFDVWGRGTLVTVSS
配列番号41：成熟H0（IGHV3_23 CDRH1）重鎖ヌクレオチド配列-leto最適化コドン
GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGGAGCCTGAGACTCTCTTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGCAGCTACGCCATGAGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCACCATCAGCGACGGCGGCAGCTTCACCTACTATCTGGACAACGTGAGGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGGACGTCGGCCACACCACCTTCTGGTACTTCGACGTCTGGGGCAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
配列番号42：成熟H0（IGHV3_23 CDRH1）重鎖アミノ酸配列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVATISDGGSFTYYLDNVRGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDVGHTTFWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号43：ヒト重鎖生殖系列IGHV3_23 CDRH1
SYAMS
配列番号44：ヒト軽鎖生殖系列IGKV1_5 CDRL2
KASSLES
配列番号45：ヒトOSMポリヌクレオチド配列
ATGGGGGTACTGCTCACACAGAGGACGCTGCTCAGTCTGGTCCTTGCACTC
CTGTTTCCAAGCATGGCGAGCATGGCGGCTATAGGCAGCTGCTCGAAAGAG
TACCGCGTGCTCCTTGGCCAGCTCCAGAAGCAGACAGATCTCATGCAGGAC
ACCAGCAGACTCCTGGACCCCTATATACGTATCCAAGGCCTGGATGTTCCT
AAACTGAGAGAGCACTGCAGGGAGCGCCCCGGGGCCTTCCCCAGTGAGGAG
ACCCTGAGGGGGCTGGGCAGGCGGGGCTTCCTGCAGACCCTCAATGCCACA
CTGGGCTGCGTCCTGCACAGACTGGCCGACTTAGAGCAGCGCCTCCCCAAG
GCCCAGGATTTGGAGAGGTCTGGGCTGAACATCGAGGACTTGGAGAAGCTG
CAGATGGCGAGGCCGAACATCCTCGGGCTCAGGAACAACATCTACTGCATG
GCCCAGCTGCTGGACAACTCAGACACGGCTGAGCCCACGAAGGCTGGCCGG
GGGGCCTCTCAGCCGCCCACCCCCACCCCTGCCTCGGATGCTTTTCAGCGC
AAGCTGGAGGGCTGCAGGTTCCTGCATGGCTACCATCGCTTCATGCACTCA
GTGGGGCGGGTCTTCAGCAAGTGGGGGGAGAGCCCGAACCGGAGCCGGAGA
CACAGCCCCCACCAGGCCCTGAGGAAGGGGGTGCGCAGGACCAGACCCTCC
AGGAAAGGCAAGAGACTCATGACCAGGGGACAGCTGCCCCGGTAG
配列番号46：ヒトOSMアミノ酸配列
MGVLLTQRTLLSLVLALLFPSMASMAAIGSCSKEYRVLLGQLQKQTDLMQD
TSRLLDPYIRIQGLDVPKLREHCRERPGAFPSEETLRGLGRRGFLQTLNAT
LGCVLHRLADLEQRLPKAQDLERSGLNIEDLEKLQMARPNILGLRNNIYCM
AQLLDNSDTAEPTKAGRGASQPPTPTPASDAFQRKLEGCRFLHGYHRFMHS
VGRVFSKWGESPNRSRRHSPHQALRKGVRRTRPSRKGKRLMTRGQLPR. 
配列番号47：mAb 2重鎖アミノ酸配列
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFTDYNMDWVRQAPGQKLEWIGDINPNN
GGTIDNQKFKDRATLTVDKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGIYYYGSHYFDY
WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG
ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVE
PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDP
EVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK
ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW
ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY
TQKSLSLSPGK
配列番号48：mAb 2軽鎖アミノ酸配列
EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCSATSSVSVMHWFQKKPGKAPKRWIYDTSKLAS
GVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQWSSNPLTFGGGTKVDIKRTVA
APSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ
DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【図１】
2019532034.tif 000009
【図２】
2019532034.tif 000010
【図３】
2019532034.tif 000011
【図４】
2019532034.tif 000012
【図５】
2019532034.tif 000013
【図６】
2019532034.tif 000014
【図７】
2019532034.tif 000015
【図８】
2019532034.tif 000016
【図９】
2019532034.tif 000017
【配列表】
2019532034000001.app
【国際調査報告】
2019532034.tif 000018
2019532034.tif 000019
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