(57)【要約】  本開示は、脱炭酸大麻樹脂並びにマイクロ波及び溶媒を使用して大麻種からカンナビノイドを抽出及び脱炭酸することによって、脱炭酸大麻樹脂を製造する方法に関する。本開示はまた、それらを含む医薬製品を製造するための脱炭酸大麻樹脂の使用に関する。【選択図】  図２Ｃ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
大麻種植物に由来する脱炭酸カンナビノイドを含み、その結果、植物中のΔ９−テトラヒドロカンナビジオール酸（Δ９−ＴＨＣＡ）及びカンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）カンナビノイドがそれぞれ独立に、９０％〜１００％脱炭酸されて、樹脂中にそれぞれΔ９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）及びカンナビジオール（ＣＢＤ）が生じており、セスキカンナビゲロール及び／又はカンナビゲロールを含む脱炭酸大麻樹脂。
【請求項２】
Δ９−ＴＨＣＡ及びＣＢＤＡカンナビノイドが９２％〜１００％脱炭酸されている、請求項１に記載の脱炭酸大麻樹脂。
【請求項３】
Δ９−ＴＨＣＡ及びＣＢＤＡカンナビノイドが９４％〜１００％脱炭酸されている、請求項１に記載の脱炭酸大麻樹脂。
【請求項４】
Δ９−ＴＨＣＡ及びＣＢＤＡカンナビノイドが９６％〜１００％脱炭酸されている、請求項１に記載の脱炭酸大麻樹脂。
【請求項５】
Δ９−ＴＨＣＡ及びＣＢＤＡカンナビノイドが９８％〜１００％脱炭酸されている、請求項１に記載の脱炭酸大麻樹脂。
【請求項６】
Δ９−ＴＨＣＡ及びＣＢＤＡカンナビノイドが９９％〜１００％脱炭酸されている、請求項１に記載の脱炭酸大麻樹脂。
【請求項７】
前記Δ９−ＴＨＣＡ及びＣＢＤＡカンナビノイドが１００％脱炭酸されている、請求項１に記載の脱炭酸大麻樹脂。
【請求項８】
カンナビノール（ＣＢＮ）をさらに含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の脱炭酸大麻樹脂。
【請求項９】
前記樹脂中に重量又は体積で５％未満の溶媒が存在する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の脱炭酸大麻樹脂。
【請求項１０】
溶媒を実質的に含有しない、請求項１〜９のいずれか一項に記載の脱炭酸大麻樹脂。
【請求項１１】
（ｉ）請求項１〜１０のいずれか一項に記載の脱炭酸大麻樹脂及び（ｉｉ）適切な薬学的に許容される担体又は添加剤を含む医薬製品。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の脱炭酸大麻樹脂を含む天然健康製品。
【請求項１３】
大麻植物原料からカンナビノイドを抽出及び脱炭酸する方法であって、
（ｉ）前記大麻植物原料からカンナビノイドを抽出するために前記大麻植物原料を溶媒と接触させることによって、前記大麻植物原料からカンナビノイドを抽出するステップであり、大麻の抽出物が溶媒及びカンナビノイドを含む、ステップと；
（ｉｉ）約１００〜２００℃の温度で、密閉コンテナ又は密閉容器内で、かつ対応する脱炭酸カンナビノイドを形成するために十分な期間にわたって、前記植物原料及び抽出物にマイクロ波を施すことによって、（ａ）前記植物原料、及び（ｂ）カンナビノイドを含む前記抽出物中のカンナビノイドを脱炭酸するステップと
を含み、前記マイクロ波を施した後に、セスキカンナビゲロール及び／又はカンナビゲロールをさらに生成する方法。
【請求項１４】
前記抽出ステップの前に、前記植物原料を破砕して、抽出に適したサイズ及び形態の大麻植物原料を形成する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記抽出及び脱炭酸を同時に行う、請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記大麻植物原料を、撹拌又は攪乱によって前記溶媒に懸濁させる、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記溶媒が、８０〜１００％エタノール、エチレングリコール、イソプロパノール、及びこれらの任意の組合せからなる溶媒の群から選択される、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
溶媒と大麻植物原料との比が、前記大麻植物原料が前記密閉容器内で前記溶媒中に沈むような比である、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記期間が、前記反応の規模に応じて約１５〜７５分である、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記温度が約１３０℃〜約１８０℃である、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記温度が、約１５０℃〜約１７０℃である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記マイクロ波が、約２．４５ＧＨｚの周波数及び約１．２２×１０８ｎｍの波長を有する、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記密閉コンテナ又は密閉容器内で前記植物原料及び抽出物にマイクロ波を施すことを、約２〜２２バールの圧力下で行う、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記抽出及び脱炭酸カンナビノイドを大麻樹脂の形態で回収する、請求項１３〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記大麻樹脂が前記セスキカンナビゲロール及び／又は前記カンナビゲロールを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記抽出及び脱炭酸カンナビノイドを単離化合物の形態で回収する、請求項１３〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記樹脂から（ｉ）単一のカンナビノイド、（ｉｉ）カンナビノイドの混合物、（ｉｉｉ）単一の化合物又は（ｉｖ）化合物の混合物を分離することによって、脱炭酸カンナビノイドを前記大麻樹脂から回収する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
脱炭酸カンナビノイドを、セライト及び／又は活性炭炭素フィルターを使用して回収する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
前記樹脂中の前記脱炭酸カンナビノイドに脱ろうを施してろうを除去する、請求項２４に記載の方法。
【請求項３０】
前記植物原料を破砕するステップの前に、前記大麻植物原料を乾燥する、請求項１４に記載の方法。
【請求項３１】
前記大麻植物原料が乾燥大麻である、請求項１３〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
実質的に溶媒非含有の脱炭酸大麻樹脂を得るために、前記樹脂から前記溶媒を除去するステップをさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項３３】
前記大麻植物原料が、トリコーム、大麻の雌花序、苞葉、大麻の柄、大麻の葉、又はそれらの複数若しくはそれらの組合せである、請求項１３〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記溶媒を樹脂から除去する、請求項１３〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［先行出願の相互参照］
[0001]本出願は、パリ条約に基づき、その全体が記載されている場合と同様に参照によって本明細書に組み込まれる２０１６年６月２９日に出願の米国特許出願第６２／３５６，２６２号の優先権を主張する。
【０００２】
［開示の分野］
[0002]本開示は、脱炭酸大麻樹脂、並びにそのままで医薬品若しくは天然健康製品（natural health products）としての、又は医薬品、医薬製剤及び天然健康製品を含む大麻由来産物を製造するための原料としての脱炭酸樹脂の使用に関する。本開示はまた、脱炭酸大麻樹脂を含む製品及び組成物に関する。マイクロ波抽出及び脱炭酸を使用して脱炭酸大麻樹脂を製造する方法も開示する。
【０００３】
［開示の背景］
[0003]大麻は、麻科の顕花植物属である。３つの種を認めることができる（カンナビス・サティバ（cannabis sativa）、カンナビス・インディカ（cannabis indica）及びカンナビス・ルデラリス（cannabis ruderalis））。大麻種は、化合物の高度に複雑な混合を含み、今日までに５６８種に及ぶ特有の分子が同定されている（Pertwee, R. G. e., Handbook of cannabis. Oxford University Press: Oxford,2014）。カンナビノイドは、大麻種に存在する最も注目すべき化合物である。これらの化合物のうち、Δ９−テトラヒドロカンナビノール（Δ９−ＴＨＣ）、カンナビノール（ＣＢＮ）、及びカンナビノジオール（ＣＢＤＬ）は精神活性を有することが公知である（Pertwee, R. G. e., Handbook of cannabis. Oxford University Press: Oxford,2014）。非精神活性化合物であるカンナビジオール（ＣＢＤ）などの他のカンナビノイドは、アドレナリン及びカンナビノイド受容体を含む様々な受容体を介して、それらの生理学的作用を発揮する（Pertwee, R. G. e., Handbook of cannabis. Oxford University Press: Oxford,2014）。カンナビノイド受容体（ＣＢ１及びＣＢ２）は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）に属する（Cottone,E.; Pomatto, V.; Cerri, F.; Campantico, E.; Mackie, K.; Delpero, M.; Guastalla,A.; Dati, C.; Bovolin, P.; Franzoni, M. F. Cannabinoid receptors are widelyexpressed in goldfish: molecular cloning of a CB2-like receptor and evaluationof CB1 and CB2 mRNA expression profiles in different organs. Fish Physiologyand Biochemistry 2013, 39(5), 1287-1296）。大麻種の植物によって産生されるフィトカンナビノイド、さらには我々の身体において産生されるエンドカンナビノイドは、これらの受容体に結合する。疼痛、不安、てんかん発作、悪心、及び食欲刺激を含む様々な臨床状態の処置、又はその軽減のために、患者は医療用大麻を摂取する（Galal, A. M.; Slade, D.; Gul, W.; El-Alfy, A. T.; Ferreira, D.; Elsohly,M. A. Naturally occurring and related synthetic cannabinoids and theirpotential therapeutic applications. Recent patents on CNS drug discovery 2009, 4(2),112及びDowner, E. J.; Campbell, V. A. Phytocannabinoids, CNScells and development: A dead issue？ Phytocannabinoidshave neurotoxic properties. Drug and Alcohol Review 2010, 29(1), 91-98）。カンナビノイド及びエンドカンナビノイドが、若齢期において神経細胞の発生及び成熟に影響を及ぼすことも公知である（Downer, E. J.; Campbell, V.A. Phytocannabinoids, CNS cells anddevelopment: A dead issue？ Phytocannabinoids haveneurotoxic properties. Drug and Alcohol Review 2010, 29(1), 91-98）。亜麻から単離されるカンナビノイド様化合物も、抗炎症特性を示している（Styrczewska, M.; Kulma, A.; Ratajczak, K.; Amarowicz, R.; Szopa, J. Cannabinoid-likeanti-inflammatory compounds from flax fiber. Cellular & Molecular BiologyLetters 2012, 17(3), 479-499）。
【０００４】
[0004]多くのカンナビノイドは、腺状突起として公知の大麻植物の構造部で産生される粘稠性樹脂に濃縮される。少なくとも１１３種の異なるカンナビノイドが、大麻植物から単離されていて、最も共通しているのはΔ９−テトラヒドロカンナビノール酸（Δ９−ＴＨＣ−Ａ）であり、これは、精神活性Δ９−テトラヒドロカンナビノール（Δ９−ＴＨＣ）の非活性前駆体である。
【０００５】
[0005]Δ９−ＴＨＣ−Ａは、乾燥させていない新鮮な大麻中に様々な量で見い出されるが、乾燥と共に、特に、大麻が燻煙されるか、又は食用大麻（ｃａｎｎａｂｉｓ  ｅｄｉｂｌｅｓ）に調理される場合のような強い加熱の下では、Δ９−ＴＨＣに次第に脱炭酸される。
【０００６】
[0006]Δ９−ＴＨＣは、ヒトに対して治療効果を有する、大麻から得られる唯一の物質ではない。例えば、研究によって、大麻の一部の株の別の主要な成分であるカンナビジオール（ＣＢＤ）が、抗不安性を有し、かつ抗精神病特性を有することが見出されており、ヒトにおいて神経保護性を有し得ることが示されている。
【０００７】
[0007]図１Ａは、大麻に存在するか、又はそこから得ることができる６種の主要なカンナビノイドの化学構造を示している：Δ９−ＴＨＣ、Δ９−ＴＨＣ−Ａ、Δ８−ＴＨＣ、カンナビノール（ＣＢＮ）、Δ２−ＣＢＤ及びカンナビジオール酸（Δ２−ＣＢＤ−Ａ）。図１Ｂは、カンナビゲロール酸（ＣＢＧＡ）から、カンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）、テトラヒドロカンナビノール酸（ＴＨＣＡ）及びカンナビクロメン酸（ＣＢＣＡ）へのカンナビノール酸シンターゼ経路を示しており、これらはすべて、脱炭酸されて、活性なカンナビノイド形態になり得る。場合によっては、非脱炭酸カンナビノイドも治療特性を有し得る。
【０００８】
[0008]脱炭酸は、二酸化炭素を放出し、中性カンナビノイドを生成する化学反応である。大麻の一例では、非精神活性Δ９−ＴＨＣ−Ａは、脱炭酸によって精神活性Δ９−ＴＨＣに変換され得る。
【０００９】
[0009]脱炭酸されているカンナビノイドを含む大麻樹脂を生成する必要がある。当技術分野で公知の大麻樹脂又は抽出物は、ばらつきなく完全に脱炭酸されていなくてもよく、かなりの割合のＴＨＣＡ及びＣＢＤＡを含んでもよい。例えば、ＷＯ２０１４／１５９６８８を参照されたい。当分野の大麻抽出物又は樹脂は、例えば、気化、食用マトリックスへの注入、及び電子吸入デバイスによる吸入において使用するためのものである。したがって、当分野の抽出物及び樹脂は、それらの脱炭酸カウンターパート（それぞれＴＨＣ及びＣＢＤ）とは逆に、主にＴＨＣＡ及び／又はＣＢＤＡを含み、脱炭酸は、気化又は食用マトリックスでの調理によって抽出物及び樹脂を加熱した後に初めて生じる（すなわち、抽出物及び樹脂が加熱された後に初めて、カンナビノイドがそれらの活性形態へと脱炭酸される）。本開示の大麻樹脂は、脱炭酸された治療活性カンナビノイドを含むので、それらはそのまま使用することができる。例えば、本開示の大麻樹脂は、治療においてそのまま使用することができるか、又はさらに加熱して（すなわち、脱炭酸して）治療活性形態にする必要のない医薬製品のための様々な大麻製剤を開発するために使用することができる。
【００１０】
[0010]「燻煙（smoked）」又は加熱（すなわち「ベーピング（vaping）」）しなければならない場合、多くの人々が、大麻を（医薬品又は天然健康製品のいずれかとして）使用することに抵抗をもつことがある。このことは、燻煙及びベーピングに対するネガティブな認識が、特に高齢世代において存在するためであり得る。大麻が、より通常の形態（すなわち、錠剤形態、又は医薬品の他の通常の形態）であれば、多くの人々が大麻をより受容し得る。医薬品又は天然健康製品として使用するための通常の形態の大麻を生成するために、製品中のカンナビノイドは脱炭酸されていなければならない。
【００１１】
[0011]大麻からカンナビノイドを抽出及び脱炭酸する効率的な方法を開発する必要もある。
【００１２】
[0012]今日まで、カンナビノイド酸の脱炭酸を行う最も単純な機構は、加熱による機構である。脱炭酸の他のプロセスは、毒性溶媒を必要とする。これらの系では、脱炭酸後に、大麻抽出物から有機溶媒を分離するために、分留などの蒸留プロセスを使用することがある。
【００１３】
[0013]脱炭酸に加えて、植物原料からのカンナビノイドの抽出が必要である。抽出は、脱炭酸前に行われることが最も多い。公知である、大麻からΔ９−ＴＨＣＡ及びＣＢＤＡなどのカンナビノイドを抽出する機構には、音波処理、還流（ソックスレー）抽出及び超臨界流体抽出（ＳＦＥ）が含まれる。例えば、米国特許第９，０４４，３９０号は、約７５０ｐｓｉ〜２５，０００ｐｓｉの間の圧力で、及び約−１５℃〜２００℃の間の温度で大麻植物原料を超臨界流体溶媒系と接触させる分別ＳＦＥプロセスを記載している。
【００１４】
[0014]医療、治療及びレクリエーションの目的での大麻の使用許可が増えるにつれて、公知の有効性を有するばらつきのない活性カンナビノイド含有樹脂を得るための、及び活性な脱炭酸カンナビノイドの生成及び回収を最適化するための再現可能な方法に対する必要が増している。需要及び潜在的な使用が増えるにつれて、商業用医薬製剤、天然健康製品製剤又はレクリエーション用製剤を製造するために容易に規模拡大することができる方法も必要とされている。
【００１５】
［開示の概要］
[0015]本開示は、脱炭酸大麻樹脂を提供する。脱炭酸大麻樹脂は、樹脂がそこから抽出される植物のカンナビノイドプロファイルを含むが、それらのカンナビノイドは脱炭酸されている。カンナビノイドは、少なくとも９０％〜１００％脱炭酸されている（すなわち、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％、又はそれらの任意の端数、例えば、９３．３％脱炭酸されている）。従来技術の大麻樹脂の一部とは異なり、本開示の脱炭酸大麻樹脂は、例えば、治療においてそのまま使用することができるか、又は脱炭酸して治療活性形態にするために加熱されることを必要としない様々な医薬製剤を開発するための原料として使用することができる。
【００１６】
[0016]上記の脱炭酸カンナビノイドに加えて、大麻種において見い出され、かつ使用される溶媒中で可溶性である他の化学物質が、樹脂において見い出される。そのような化合物には、例えば、テルペン、脂肪酸、クロロフィル、フラボノイド、及び他の化合物が含まれ得る。化合物の一部は、抽出及び脱炭酸のために使用されるプロセスによって、化学的変換を受けることがある。一部の実施形態では、ＴＨＣ及び／又はＣＢＤは、脱炭酸大麻樹脂の主要な成分である。
【００１７】
[0017]本開示はまた、大麻植物原料からカンナビノイドを抽出及び脱炭酸する改善方法であって、抽出前、その間、又はその後にマイクロ波技術を使用して大麻植物原料を脱炭酸することを含む方法を提供する。
【００１８】
[0018]一部の実施形態では、方法は、大麻植物原料をより小さな断片に細断又は細砕して、抽出に適したサイズ及び形態の大麻植物原料を形成するステップと；大麻植物原料からカンナビノイドを抽出するために、混合物中で、破砕された大麻植物原料を溶媒と接触させることによって、破砕された大麻植物原料からカンナビノイドを抽出するステップと、混合物にマイクロ波を施すことによって、混合物中でカンナビノイドを脱炭酸して、脱炭酸カンナビノイドを形成するステップとを含む。
【００１９】
[0019]一部の実施形態では、抽出及び脱炭酸ステップを１ステップで、植物原料を適切な溶媒、（例えば、薬学的に許容される溶媒、例えば、８０〜１００％エタノール（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、１００％、及び任意の整数又はその整数の端数）、エチレングリコール、イソプロパノール又は同様の溶媒の組合せからなる溶媒の群から選択される溶媒に曝露し、溶媒中の植物原料に、所望の脱炭酸カンナビノイド含有樹脂を得るために十分なマイクロ波を施すことによって行う。１００％脱炭酸が必要なければ、マイクロ波ステップの期間を、樹脂中に所望の程度の脱炭酸カンナビノイドが得られるように調節することができる。一部の実施形態では、溶媒中の植物原料をマイクロ波の下に置く。一部の実施形態では、溶媒中の植物原料に、所望の脱炭酸（生物学的に活性な）カンナビノイド含有樹脂を生成するために十分な時間にわたって、及び／又は圧力で、及び／又は温度でマイクロ波を施す。一部の実施形態では、細断、抽出及び脱炭酸を１ステップで行う。
【００２０】
[0020]一部の実施形態では、抽出及び脱炭酸ステップを１ステップで行う場合、破砕された大麻植物原料を（例えば、撹拌、振盪又は攪乱によって）溶媒に懸濁させ、マイクロ波を施して、抽出及び脱炭酸大麻樹脂を生じさせる。
【００２１】
[0021]本開示の一実施形態は、大麻種植物からの脱炭酸カンナビノイドを含み、その結果、植物中のΔ９−テトラヒドロカンナビジオール酸（Δ９−ＴＨＣＡ）及びカンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）カンナビノイドがそれぞれ独立に、９０％〜１００％脱炭酸されて、樹脂中でそれぞれΔ９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）及びカンナビジオール（ＣＢＤ）が生じている、脱炭酸大麻樹脂である。９０％〜１００％脱炭酸の範囲は、任意の整数又はこの範囲の整数の端数、例えば、９０％、８８．４％、及び１００％を含む。脱炭酸大麻樹脂はさらに、カンナビノール（ＣＢＮ）、他の脱炭酸カンナビノイド、又は例えば、表３２に見い出される化合物を含む任意の化合物（例えば、テルペン、クロロフィル）を含んでよい。
【００２２】
[0022]脱炭酸大麻樹脂は、重量で、又は体積で５％未満の溶媒を含んでよいか、又は溶媒を実質的に非含有であってよい。
【００２３】
[0023]本開示の一実施形態は、（ｉ）本開示の脱炭酸大麻樹脂及び（ｉｉ）適切な薬学的に許容される担体又は添加剤を含む医薬組成物である。
【００２４】
[0024]本開示の別の実施形態は、本開示の脱炭酸大麻樹脂を含む天然健康製品である。
【００２５】
[0025]本開示の別の実施形態は、植物原料からカンナビノイドを抽出及び脱炭酸する方法であって、（ｉ）大麻植物原料からカンナビノイドを抽出するために大麻植物原料を溶媒と接触させることによって、大麻植物原料からカンナビノイドを抽出するステップであり、大麻の抽出物が溶媒及びカンナビノイドを含む、ステップと；（ｉｉ）約１００〜２００℃の温度で、密閉容器内で、かつ抽出物中の対応する脱炭酸カンナビノイドを形成するために十分な期間にわたって、植物原料及び抽出物にマイクロ波を施すことによって、（ａ）植物原料、及び（ｂ）カンナビノイドを含む抽出物中のカンナビノイドを脱炭酸するステップとを含む方法である。温度は、１００〜２００℃の範囲内の任意の整数又は整数の端数、例えば、１０３℃、１７５．５℃、及び２００℃であってよい。
【００２６】
[0026]一部の実施形態では、抽出ステップ前に、植物原料を破砕して、抽出に適したサイズ及び形態の大麻植物原料を形成する。
【００２７】
[0027]一部の実施形態では、抽出及び脱炭酸を同時に行う。
【００２８】
[0028]一部の実施形態では、大麻植物原料を、撹拌又は攪乱によって溶媒に懸濁させる。
【００２９】
[0029]一部の実施形態では、溶媒は、８０〜１００％エタノール、エチレングリコール、イソプロパノール、及び上記の任意の組合せからなる溶媒の群から選択される。溶媒と大麻植物原料との比は、大麻植物原料が密閉容器内で溶媒中に沈むような比であってよい。
【００３０】
[0030]一部の実施形態では、期間は、反応の規模に応じて約１５〜７５分である。
【００３１】
[0031]一部の実施形態では、温度は、約１３０℃〜約１８０℃、又は約１５０℃〜約１７０℃である。
【００３２】
[0032]一部の実施形態では、マイクロ波は、約２．４５ＧＨｚの周波数及び約１．２２×１０８ｎｍの波長を有する。
【００３３】
[0033]一部の実施形態では、密閉容器内で植物原料及び抽出物にマイクロ波を施すことを約１〜２２バールの圧力下で行う。圧力は、１〜２２バールの範囲内の任意の整数又は整数の端数、例えば、１バール、１５．５バール及び１８バールであってよい。
【００３４】
[0034]一部の実施形態では、抽出及び脱炭酸カンナビノイドを大麻樹脂の形態で、又は単離化合物の形態で回収する。例えば、樹脂から（ｉ）単一のカンナビノイド、（ｉｉ）カンナビノイドの混合物、（ｉｉｉ）単一の化合物又は（ｉｖ）化合物の混合物を分離することによって、脱炭酸カンナビノイドを大麻樹脂から回収することができる。脱炭酸カンナビノイドをセライト（Celite）（登録商標）及び／又は活性炭炭素フィルターを使用して回収してもよい。
【００３５】
[0035]一部の実施形態では、樹脂中の脱炭酸カンナビノイドに脱ろうを施してろうを除去してもよい。
【００３６】
[0036]一部の実施形態では、破砕ステップ前に、大麻植物原料を乾燥させる。一部の実施形態では、大麻植物原料は、乾燥大麻である。
【００３７】
[0037]一部の実施形態では、実質的に溶媒非含有の脱炭酸大麻樹脂を得るために、樹脂から溶媒を除去するさらなるステップを使用する。
【００３８】
[0038]一部の実施形態では、大麻植物原料は、トリコーム、大麻の雌花序、苞葉、大麻の柄、大麻の葉、又はそれらの組合せである。
【００３９】
[0039]一部の実施形態では、溶媒を樹脂から除去する。
【００４０】
[0040]本開示の一実施形態は、商業的規模で行われる本開示の方法である。
【００４１】
[0041]本発明の一実施形態は、天然健康製品又は医薬製品における本開示の大麻樹脂の使用である。
【００４２】
[0042]本出願の追加の態様は、後続の記載を考慮すれば明らかになるであろう。しかしながら、本開示の意図及び範囲内での様々な変化及び変更が、この詳細な説明から当業者には明らかになるので、詳細な説明及び具体的な例は、本開示の実施形態を示してはいるが、単なる実例として示されていることは理解されるべきである。
【００４３】
[0043]略語：
【００４４】
[0044]Δ９−ＴＨＣ＝Δ９−テトラヒドロカンナビノール、ＣＢＤ＝カンナビジオール、ＣＢＮ＝カンナビノール、ＣＢＤＬ＝カンナビノジオール、ＣＢＣ＝カンナビクロメン、ＣＢＬ＝カンナビシクロール、ＣＢＥ＝カンナビエルソイン、ＣＢＧ＝カンナビゲロール、ＴＨＶ＝テトラヒドロカンナビバリン、ＣＢＤＶ＝カンナビジバリン、ＣＢＣＶ＝カンナビクロムバリン、ＴＨＣＡ＝テトラヒドロカンナビジオール酸、ＣＢＤＡ＝カンナビジオール酸、ＣＢＮＡ＝カンナビノール酸、ＣＢＣＡ＝カンナビクロメン酸、ＣＢＬＡ＝カンナビシクロール酸、ＣＢＥＡ＝カンナビエルソン酸、ＣＢＧＡ＝カンナビゲロール酸、ＴＨＣＶＡ＝テトラヒドロカンナビバリン酸、Ｃ１−ＴＨＣＲＡ＝テトラヒドロカンナビオルコール酸（Tetrahydrocannabiorcolic acid）、Ｃ４−ＴＨＣＡ＝Ｃ４−テトラヒドロカンナビノール酸、ＣＢＮＤ＝カンナビノジオール。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
[0045]発明の主題を容易に理解し得るように、実施形態を、添付の図面で例示する。
【００４６】
【図１Ａ】大麻中に存在する６種の主要なカンナビノイドの化学構造が示されている：Δ９−ＴＨＣ、Δ９−ＴＨＣ−Ａ、Δ８−ＴＨＣ、ＣＢＮ、Δ２−ＣＢＤ及びΔ２−ＣＢＤ−Ａ。
【図１Ｂ】カンナビゲロール酸（ＣＢＧＡ）からカンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）、テトラヒドロカンナビノール酸（ＴＨＣＡ）及びカンナビクロメン酸（ＣＢＣＡ）へのカンナビノール酸シンターゼ経路が示されている。
【図２Ａ】医療用大麻及び脱炭酸大麻樹脂が示されている。
【図２Ｂ】医療用大麻の脱炭酸前の株１の質量スペクトルである。
【図２Ｃ】医療用大麻の脱炭酸後の株１の質量スペクトルである。
【図３】本出願の一実施形態に従って大麻植物原料からカンナビノイドを抽出及び脱炭酸するためのプロセスを図示するブロックダイヤグラムである。
【図４】Δ８−ＴＨＣでの標準曲線が示されている（選択イオン記録（ＳＩＲ）クロマトグラムが積分されており、ＡＵＣが濃度（ｕｇ／ｍＬ）に対してプロットされている）。
【図５】Δ９−ＴＨＣでの標準曲線が示されている（選択イオン記録（ＳＩＲ）クロマトグラムが積分されており、ＡＵＣが濃度（ｕｇ／ｍＬ）に対してプロットされている。
【図６】ＴＨＣＡでの標準曲線が示されている（選択イオン記録（ＳＩＲ）クロマトグラムが積分されており、ＡＵＣが濃度（ｕｇ／ｍＬ）に対してプロットされている。
【図７】ＣＢＤでの標準曲線が示されている（選択イオン記録（ＳＩＲ）クロマトグラムが積分されており、ＡＵＣが濃度（ｕｇ／ｍＬ）に対してプロットされている。
【図８】ＣＢＤＡでの標準曲線が示されている（選択イオン記録（ＳＩＲ）クロマトグラムが積分されており、ＡＵＣが濃度（ｕｇ／ｍＬ）に対してプロットされている。
【図９】ＣＢＮでの標準曲線が示されている（選択イオン記録（ＳＩＲ）クロマトグラムが積分されており、ＡＵＣが濃度（ｕｇ／ｍＬ）に対してプロットされている。
【図１０】様々な温度でマイクロ波照射を使用して抽出された大麻植物原料サンプル中に存在するΔ９−ＴＨＣ及びＴＨＣ−Ａの相対量が示されている。
【図１１】エタノール、ソックスレー及びＳＦＥを使用し、大麻にマイクロ波条件を施さなかった場合の、大麻抽出物中の様々なカンナビノイドの濃度が示されている。
【図１２】エタノール、ソックスレー及びＳＦＥを使用し、続いてマイクロ波加熱を行った場合の、大麻抽出物中の様々なカンナビノイドの濃度が示されている。
【図１３】様々な温度でのマイクロ波加熱のみの後の大麻からの様々なカンナビノイド濃度が示されている。
【図１４】様々な温度でのマイクロ波加熱及びその後のＳＦＥ抽出後の大麻からの様々なカンナビノイド濃度が示されている。
【図１５】様々な温度でのマイクロ波加熱及びその後のＳＦＥ抽出後の大麻からの様々なカンナビノイド濃度が示されており、この場合、各方法によって抽出されるＴＨＣ合計を表すために、ＴＨＣの酸性及び中性形態が一緒に加えられている。
【図１６】１７０℃、１５分間のマイクロ波抽出から得られた大麻抽出物のポジティブモード（１５０〜５００ｍ／ｚ）でのマススキャンのクロマトグラムが示されている。
【図１７】１７０℃、１５分間のマイクロ波抽出から得られた大麻抽出物でのｍ／ｚ＝３１５の単一イオン記録（ＳＩＲ）（＋ｖｅ）検出が示されている。
【図１８】１７０℃、１５分間のマイクロ波抽出から得られた大麻抽出物でのｍ／ｚ＝３５９のＳＩＲ（＋ｖｅ）検出が示されている。
【図１９】１７０℃、１５分間のマイクロ波抽出から得られた大麻抽出物のネガティブモード（１５０〜５００ｍ／ｚ）でのマススキャンのクロマトグラムが示されている。
【図２０】１７０℃、１５分間のマイクロ波抽出から得られた大麻抽出物でのｍ／ｚ＝３１３のＳＩＲ（−ｖｅ）検出が示されている。
【図２１】１７０℃、１５分間のマイクロ波抽出から得られた大麻抽出物でのｍ／ｚ＝３５７のＳＩＲ（−ｖｅ）検出が示されている。
【図２２】１３０℃、１０分間のマイクロ波抽出から得られた大麻抽出物のポジティブモード（１５０〜５００ｍ／ｚ）でのマススキャンのクロマトグラムが示されている。
【図２３】１３０℃、１０分間のマイクロ波抽出から得られた大麻抽出物でのｍ／ｚ＝３１５のＳＩＲ（＋ｖｅ）検出が示されている。
【図２４】１３０℃、１０分間のマイクロ波抽出から得られた大麻抽出物でのｍ／ｚ＝３５９のＳＩＲ（＋ｖｅ）検出が示されている。
【図２５】１３０℃、１０分間のマイクロ波抽出から得られた大麻抽出物のネガティブモード（１５０〜５００ｍ／ｚ）でのマススキャンのクロマトグラムが示されている。
【図２６】１３０℃、１０分間のマイクロ波抽出から得られた大麻抽出物でのｍ／ｚ＝３１３のＳＩＲ（−ｖｅ）検出が示されている。
【図２７】１３０℃、１０分間のマイクロ波抽出から得られた大麻抽出物でのｍ／ｚ＝３５７のＳＩＲ（−ｖｅ）検出が示されている。
【図２８Ａ】大麻抽出物の脱炭酸前に質量スペクトルにおいて示された選択シグナルの概観が示されている。
【図２８Ｂ】大麻抽出物の脱炭酸後に質量スペクトルにおいて示された選択シグナルの概観が示されている。
【００４７】
［詳細な説明］
[0047]前記のとおり、テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）、又はより正確には、その主要な異性体Δ９−ＴＨＣは、大麻の主要な精神活性成分（又はカンナビノイド）である。ＴＨＣとは異なり、その対応する酸ＴＨＣ−Ａ（又はその主要な異性体ではΔ９−ＴＨＣ−Ａ）は、未加工及び生の大麻において見い出される非精神活性カンナビノイドである。
【００４８】
[0048]Δ９−ＴＨＣは、カンナビノイドとして公知の化合物のファミリーのうちの１種にすぎない。例えば、Δ８−ＴＨＣは、Δ９−ＴＨＣの二重結合異性体であり、大麻の多くの種類の微量成分である。これら２種の化合物の間の主要な化学的相違は、Δ９−ＴＨＣがカンナビノール（ＣＢＮ）に容易に酸化されるのに対して、Δ８−ＴＨＣは、非常に安定であるので、カンナビノールに酸化しないことである。Δ８−ＴＨＣはほとんどの場合、Δ９−ＴＨＣがもたらすのと同様の精神測定的作用をもたらすが、一般に、Δ９−ＴＨＣよりも５０％低い効力を有すると考えられている。他方で、ＣＢＤは、ヒトに投与された場合、それ自体は精神測定活性を有さないか、限られた精神測定的活性を有するが、下記で論述するとおり、ＣＢＤは、他の治療特性を含む。大麻植物では、ＣＢＧＡは前駆体であり、カンナビノール（ＣＢＮ）はＴＨＣの代謝産物である。大麻が成熟するにつれて、ＴＨＣはＣＢＮに徐々に分解されて、これも精神活性特性を有する。
【００４９】
[0049]図１は、大麻中に存在する６種の主要なカンナビノイドの化学構造を示している：Δ９−ＴＨＣ、Δ９−ＴＨＣ−Ａ、Δ８−ＴＨＣ、ＣＢＮ、Δ２−カンナビジオール（Δ２−ＣＢＤ又はＣＢＤ）及びΔ２−カンナビジオール酸（Δ２−ＣＢＤ−Ａ又はＣＢＤ−Ａ）。
【００５０】
[0050]図２ａ、２ｂ及び２ｃは、脱炭酸（decarbosylated）大麻樹脂並びに医療用大麻の脱炭酸前（ｂ）及び脱炭酸後（ｃ）の株１の質量スペクトルを示しており、それぞれＣＢＤ及びＴＨＣへのＣＢＤＡ及びＴＨＣＡの１００％変換率を示している。
【００５１】
[0051]図３では、大麻植物原料からカンナビノイドを抽出及び脱炭酸するための方法１００を示している。概して、方法１００は、ステップ１０２で未加工の大麻植物原料を乾燥させるステップと、ステップ１０４で大麻植物原料を破砕して、抽出に適したサイズ及び形態の大麻植物原料を形成するステップと、大麻植物原料からカンナビノイドを抽出するために、破砕された大麻植物原料を溶媒と接触させることによって、破砕された大麻植物原料からカンナビノイドを抽出するステップと、抽出物にマイクロ波を施すことによってカンナビノイドを脱炭酸して脱炭酸カンナビノイドを形成するステップとを含む。カンナビノイドが植物中にあるとき、カンナビノイドが抽出物中にあるとき、又はその両方のときに、カンナビノイドの脱炭酸は起こり得る。一部の実施形態では、閉鎖反応容器内で抽出物に、脱炭酸カンナビノイドを形成するために十分な温度及び十分な時間で、マイクロ波を施す。
【００５２】
[0052]抽出及び脱炭酸カンナビノイドを回収してもよい。回収には、大麻植物原料の抽出物から溶媒を濾過して、脱炭酸カンナビノイドを単離することが含まれ得る。
【００５３】
[0053]一部の実施形態では、プロセスは、脱炭酸の前に、その間に、又はその後に抽出ステップを含む。一部の実施形態では、本開示のプロセスは、１つより多い抽出ステップを含む。
【００５４】
[0054]一部の実施形態では、脱炭酸ステップを、抽出の前に、その間に、又はその後に行うことができる。
【００５５】
[0055]本開示の一実施形態では、抽出及び脱炭酸を行うための１ステップ法であって、大麻植物原料（適切に調製されている、例えば、本明細書に記載のとおりに乾燥及び破砕されていてもよい）を適切な抽出溶媒（例えば、エタノール、グリセロール、及びイソプロパノール、及び当業者に知られているような他の溶媒などの薬学的に許容される溶媒）に入れ、（例えば、撹拌、攪乱、振盪又は当業者に知られている他の手段によって）懸濁液又は溶液で維持し、適切に抽出及び脱炭酸されたカンナビノイドを得るための温度、圧力及び時間で撹拌しながらマイクロ波照射を施し、その適切に抽出及び脱炭酸されたカンナビノイドを、混合物又は個々の化学成分のいずれかとして使用するために（例えば、治療用又は医薬製品として使用するために）回収することができる１ステップ法を使用する。さらに、一部の実施形態では、溶媒は、食品グレードのオイル及び／又は中鎖トリグリセリド、例えば、ヤシ油であってよい。
【００５６】
[0056]このような方法は、カンナビノイド酸をその脱炭酸形態に変換する際には、抽出及び脱炭酸の他の公知の方法（単純加熱など）よりも効率的である。
【００５７】
[0057]特に、図１１及び１２は、エタノール、ソックスレー及びＳＦＥを使用し、それぞれ大麻にマイクロ波条件を施さない場合、及び続いてマイクロ波加熱を行った場合の大麻植物原料抽出物中の種々のカンナビノイドの様々な濃度を示している。図１１に示されている、溶媒抽出のみ、ソックスレー抽出のみ（例えば、溶媒及び加熱）及びＳＦＥのみ（例えば、溶媒及び加熱）を使用することによって測定された濃度を、図１２に示されている、溶媒抽出及びその後のマイクロ波、ソックスレー抽出及びその後のマイクロ波並びにＳＦＥ及びその後のマイクロ波を使用することによって測定された濃度と比較してみると、マイクロ波加熱を溶媒抽出、ソックスレー抽出及びＳＦＥのそれぞれに加えることで、抽出物中のＴＨＣ、ＣＢＤ及びＣＢＮ濃度を大きく上昇させ、ＴＨＣＡ濃度を低下させることができる。
【００５８】
[0058]図１３及び１４はさらに、抽出物が約１７０℃で約２０分間にわたってマイクロ波照射を施された場合に、抽出物中で高濃度のＴＨＣ、ＣＢＤ、ＣＢＮ及びＴＨＣＡが達成されることを示している。実際の作業変数についてのさらなる詳細を以下に示す。
【００５９】
乾燥１０２
[0059]ステップ１０２で、大麻植物原料を乾燥させて、水分／含水量を減少させることができる。ここでは、大麻植物原料には、任意の大麻植物が包含され、これに限定されないが、カンナビス・サティバ、カンナビス・インディカ及びカンナビス・ルデラリス、並びにそのすべての亜種（例えば、変異株インディカ（indica）品種及びカフィリスタニカ（kafiristanica）品種を含むカンナビス・サティバ亜種インディカ）が含まれ、種々の量の個別のカンナビノイドを天然に含有する大麻化学変種（化学組成物によって特徴づけられる品種）を含む野生型又は栽培用大麻植物及びまたその変異株、及びその遺伝的交雑、自己交雑又はハイブリッドの結果である植物も含まれる。したがって「大麻植物原料」という用語は、１種又は複数の大麻植物に由来する植物原料を包含すると解釈されるべきである。「大麻植物原料」には、生若しくは新鮮な大麻及び乾燥大麻が含まれる。加えて、これに限定されないが、トリコーム、花芽、花苞葉、葉、柄及びカンナビノイドを含有し得る任意の他の植物部分を含む大麻植物の任意の部分を使用することができる。また、雌株は、雄株よりも高濃度のカンナビノイドを生成し得るが、雌株（「雌株化植物（feminized plants）」を含む）及び雄株の両方を使用することができる。
【００６０】
[0060]任意選択の乾燥ステップ１０２を使用して、大麻植物原料に抽出及び脱炭酸を施す前に大麻植物原料から過剰の水分を除去することができる。大麻植物原料から水含分を除去することは、抽出及び／又は脱炭酸プロセスの後続の段階でさらに加熱するために役立ち得る。別法では、新鮮な大麻植物原料（例えば、植物に直接由来）をその後の破砕、抽出及び脱炭酸ステップのために使用することができる。この場合、ステップ１０２での大麻植物原料の乾燥を任意の手段によって、例えば、６０〜７５℃の範囲の温度又は同様の条件の炉内で、又は真空炉又は同様の条件を使用して、水分の量に応じて数時間、例えば、４時間、又は６時間又は８時間かけて行うことができる。乾燥プロセスの間に、加熱が、他にもプロセスはあるが特に、炉内の加熱素子又は赤外加熱を使用して行われる場合、カンナビノイドカルボン酸形態の一部が、それらの脱炭酸カンナビノイド形態に変換され得る。
【００６１】
破砕１０４
[0061]破砕ステップ１０４で、大麻植物原料を破砕して、マイクロ波加熱を施すことによって抽出及び脱炭酸するために適したサイズ及び形態の大麻植物原料を生成することができる。
【００６２】
[0062]大麻植物原料のトリコーム（すなわち、樹脂腺）は、花芽、扇葉、及び柄の表面からの、ほぼ微視的キノコ様突出部である。比較的複雑であるが、トリコームは、柄及び頭部から主に構成される。ＴＨＣなどのカンナビノイドの産生は主に、トリコームの頭部で生じる。カンナビノイドは、植物のトリコームに濃縮されている。トリコームは、大麻植物原料表面から容易に落ちるように作られている。
【００６３】
[0063]「抽出及び脱炭酸に適したサイズ及び形態」という用語は、大麻植物原料断片の粒径の低下を指す。
【００６４】
[0064]この場合、ステップ１０４での大麻植物原料の破砕を、大麻植物原料を抽出及び／又は脱炭酸のためにサイズ及び形態において適した小片へと小さくする圧潰、粉砕、細砕、微粉砕、細断、砕解又は当業者に知られている同等のプロセスによる手段を含む任意の機械的手段によって行うことができる。
【００６５】
[0065]実施形態の一例では、エタノールなどの適切な溶媒と接触させて、及び／又は細胞膜を破砕して、それを抽出及び／又は脱炭酸に適したものとすることによって大麻植物原料を緩めるために、音波処理を使用することもできる。実施形態の別の例では、乳鉢及び乳棒で細断を行って、抽出及び／又は脱炭酸に適したサイズ及び形態の大麻植物原料を生成することができる。
【００６６】
[0066]特定の実施形態では、大麻植物原料をサイズにおいて、その粒径が１ｍｍ〜１０ｍｍの範囲内であるように小さくする。
【００６７】
抽出１０６
[0067]破砕ステップ１０４が完了したら、抽出ステップ１０６を行うことができる。抽出ステップ１０６を脱炭酸ステップ１０８の前又はその後のいずれかで脱炭酸ステップ１０８とは別のステップとして行うことができる、又は下記のとおり、抽出ステップ１０６及び脱炭酸ステップ１０８を同時に行うことができることに留意すべきである。疑念を回避するために、これに限定されないが、溶媒の存在下での音波処理、還流（ソックスレー）抽出及び超臨界流体抽出（ＳＦＥ）を含むいずれかの抽出を脱炭酸ステップ１０８の前又はその後に行うことができることは理解されるべきである。加えて、破砕（１０４）、抽出（１０６）及び脱炭酸（１０８）を１ステップで行うこともできることも理解されるべきである。
【００６８】
[0068]一実施形態では、抽出ステップ１０６は、破砕ステップ１０４の産物である破砕大麻原料からのカンナビノイドを、溶媒と接触させることを含むことができる。
【００６９】
[0069]一部の実施形態では、抽出ステップ１０６における溶媒処理は、非カンナビノイド不純物を除去して、カンナビノイドの実質的に純粋な調製物を残す。非極性液体溶媒が、この作用のために有用であり得ることが判明している。したがって、カンナビノイドよりも極性である不純物が溶媒での処理によって除去されるように、適切な非極性溶媒には、カンナビノイドよりもかなり極性が低い本質的に任意の非極性溶媒が含まれる。濾過及び当業者に知られているとおりの他の方法も、不純物を除去するために使用することができる。
【００７０】
[0070]有用な非極性溶媒には、これに限定されないが、Ｃ５〜Ｃ１２直鎖又は分枝鎖アルカン、又はＣ１〜Ｃ１２アルコールの炭酸エステルが含まれる。より揮発性の物質Ｃ５〜Ｃ１２アルカンは、それらが抽出物からより容易に除去されるので特に有用であり得る。さらに、エタノール（例えば、９５％エタノール）などの、医薬組成物において使用するために承認されている溶媒が特に有用であり得る。
【００７１】
[0071]特に有用な溶媒には、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、イソオクタン及びエタノール、及び／又はその混合物又は当業者に知られているとおりの同様のものが含まれる。
【００７２】
[0072]抽出ステップ１０６の一実施形態では、破砕された大麻植物原料を、溶媒に添加し、同時に音波処理することができる。
【００７３】
[0073]この場合、音波処理は、乾燥又は非乾燥大麻植物原料の断片細胞、高分子及び膜への超音波振動（例えば、＞２０ｋＨｚ）の適用を指す。超音波振動は、当技術分野で公知の任意の手段によって得ることができる。
【００７４】
[0074]例示的な一実施形態では、大麻植物原料及び溶媒の混合物の音波処理を、５〜２５分にわたって２５℃で行うことができ、大麻植物原料と溶媒との比は、すべての大麻植物原料が反応容器内で完全に溶媒に沈むような比である。
【００７５】
[0075]大麻植物原料及び溶媒の混合物の音波処理が完了したら、溶媒を混合物から除去する。溶媒の除去を、これに限定されないが、濾過及び／又は蒸発を含む当技術分野で公知の任意の手段によって行うことができる。音波処理後に濾過するための一実施形態は、得られた抽出物を濾液及び植物原料に分離する、ガラス焼結漏斗を通しての真空濾過である。次いで、得られた濾液に、ソックスレー又は当業者に知られているとおりの他の溶媒抽出、例えば、ＳＦＥなどのさらなる抽出を施すことができる。
【００７６】
[0076]抽出ステップ１０６のまた別の実施形態では、カンナビノイドを還流（ソックスレー）抽出によって、ステップ１０４において破砕された大麻植物原料から抽出することができる。
【００７７】
[0077]還流（ソックスレー）抽出の間、ステップ１０４において破砕された大麻植物原料は一般に、受け器内で、加熱溶媒の上部に吊るされている。溶媒蒸気が蒸留アームに上がり、未加工大麻原料を収容している受け器に流れるように、溶媒を蒸留フラスコ内で加熱して還流する。未加工大麻原料の上部に吊るされている冷却器が、未加工大麻原料よりも上部に上昇した溶媒蒸気が冷却され、続いて、未加工大麻原料を収容している受け器に滴下することを確実にする。カンナビノイドが温かい溶媒に溶解し始めるように、受け器は温かい溶媒でゆっくり満たされる。受け器がいっぱいになったら、溶媒が蒸留フラスコに戻るように、受け器はサイホンによって空にされる。このサイクルを、数時間又は数日にわたって多数回繰り返してもよい。
【００７８】
[0078]還流（ソックスレー）抽出を、抽出のために使用される対応する溶媒の沸点よりも高い溶媒温度で行い、約３〜５時間かけて行うことが好ましい。
【００７９】
[0079]抽出が完了したら、溶媒の除去を、これに限定されないが、上述のとおりの濾過及び／又は蒸発を含む当技術分野で公知の任意の手段によって行うことができる。
【００８０】
[0080]上述のとおりの音波処理又は還流（ソックスレー）抽出のいずれかの代わりに、本出願に包含される抽出ステップ１０６の別の実施形態は、ＳＦＥによる大麻植物原料からのカンナビノイドの抽出である。
【００８１】
[0081]ＳＦＥは、抽出溶媒として超臨界流体を使用して、別の（マトリックス）から１種又は複数の成分（エクストラクタント（extractant））を分離するプロセスを指す。抽出は通常、固体マトリックス（例えば、大麻植物原料）からであるが、液体又は樹脂原料（例えば、ハッシュオイル）からであってもよい。
【００８２】
[0082]多くの超臨界流体を使用することができるが、二酸化炭素（ＣＯ２）が、ＳＦＥのために最も一般に使用される超臨界流体である。他の例示的な実施形態では、ＣＯ２を、当業者に知られているとおりのエタノール又はメタノールなどの補助溶媒によって改質してもよい。
【００８３】
[0083]超臨界流体のための抽出条件は、臨界温度（例えば、ＣＯ２では３１℃）及び臨界圧力（例えば、ＣＯ２では７４バール）を超える。これに限定されないが、エタノールなどの調整剤の添加によって、これらの抽出条件の変更が必要となり得る。
【００８４】
[0084]例示的なＳＦＥ系は、ＣＯ２（さらには任意の他の溶媒）のためのポンプ、大麻原料を収めるための圧力セル、系内の圧力を維持するための手段及び収集容器を含む。液体を加熱帯域にポンプ導入し、そこで、超臨界状態に加熱する。次いで、抽出容器に送り、そこで、固体マトリックスに急速に拡散させ、抽出されるべき大麻物質を溶解する。溶解された物質（例えば、カンナビノイド）を、より低い圧力で抽出セルから分離器に集めると、抽出された原料が沈降する。次いで、ＣＯ２を冷却し、再圧縮及び再循環させるか、また大気に放出することができる。
【００８５】
[0085]この場合、抽出ステップ１０６で行われるＳＦＥ抽出の温度は、一部の実施形態では、３５〜５５℃の範囲であってよい。
【００８６】
[0086]さらに、抽出ステップ１０６で行われるＳＦＥ抽出の圧力は、一部の実施形態では、６５〜８５バールの範囲であってよい。
【００８７】
[0087]本開示におけるＳＦＥを、１２ＭＰａの背圧調節圧力で約４０℃で行い、抽出された化合物を、２００〜６００ｎｍのフォトダイオードアレイ（２５４ｎｍでモニター）を使用してモニターする。この系の捕集時間（acquisition time）及び方法時間（method time）はそれぞれ、抽出のために変えられる超臨界流体と共溶媒の比に応じて、数分〜６０分まで、理想的には１５〜３０分の間で変動し得る。
【００８８】
[0088]特定の実施形態では、ＳＦＥを多数回、連続して実施することができる。このような実施形態では、ＳＦＥは、フラクショナルＳＦＥである。
【００８９】
[0089]溶媒及び還流（ソックスレー）抽出を伴う音波処理のために上述したとおり、ＳＦＥが完了したら、溶媒の除去を、濾過及び／又は蒸発を含む当技術分野で公知の任意の手段によって行うことができるが、これに限定されるものではない。
【００９０】
マイクロ波支援抽出及び脱炭酸１０８
[0090]Δ９−ＴＨＣ−Ａなどのフィトカンナビノイド酸の脱炭酸は、反応の時間及び温度に応じて決まる。例えば、溶液中の濃Δ９−ＴＨＣ−ＡのΔ９−ＴＨＣへの脱炭酸及びΔ９−ＴＨＣの分解は、温度によって変動する。したがって、温度制御が、所望の比の脱炭酸生成物を制御するために重要である。大麻の加工における従来の家庭用マイクロ波の使用が文献において論述されているが、しかしながら、多様なばらついた結果を伴い、必ずしも、特に溶媒中での抽出及び脱炭酸のためのものではない。さらに、１００％脱炭酸を得るためには、大麻原料の燃焼又は溶媒の沸騰／蒸発を伴うことなく、温度を一定時間にわたって持続させなければならない。温度が、用いられる溶媒の沸点よりも高いと、溶媒が沸騰してこぼれる、及び／又は蒸発する。カンナビノイドを完全に脱炭酸するが、大麻植物原料を燃焼させない、又は大麻と共に溶媒を沸騰／蒸発させない必要とされる時間にわたって温度を維持するために、マイクロ波容器（すなわち、密閉容器）は、圧力下になければならない。容器又はコンテナの密閉によって、容器又はコンテナ内の圧力が保証される。
【００９１】
[0091]図３に示されているとおり、マイクロ波支援抽出は、上記のとおり、機械的破砕ステップ１０４の直後、又は先行の抽出ステップ１０６の後のいずれかで行うことができる。
【００９２】
[0092]マイクロ波支援抽出及び脱炭酸１０８は、溶媒中に大麻植物原料を懸濁させること、及び密閉容器内で、脱炭酸カンナビノイドを形成するために十分な温度、圧力及び時間で、混合物にマイクロ波を施すことを含み得る。
【００９３】
[0093]この場合、「マイクロ波」という用語は、１メートル〜１ミリメートルの範囲の波長を有する電磁放射線の形態を指す；３００ＭＨｚ（１００ｃｍ）〜３００ＧＨｚ（０．１ｃｍ）の間の周波数を有する。
【００９４】
[0094]さらに、マイクロ波支援抽出及び脱炭酸ステップ１０８での溶媒処理は再び、非カンナビノイド不純物を除去して、カンナビノイドの実質的に純粋な調製物を残すためのものである。したがって、非極性液体溶媒が、この作用のために有用である。一実施形態では、エタノールを、マイクロ波支援抽出及び脱炭酸ステップ１０８における液体溶媒として使用する。別の実施形態では、９５％エタノールを、マイクロ波支援抽出及び脱炭酸ステップ１０８における液体溶媒として使用する。
【００９５】
[0095]エタノールは７８℃の沸点を有し、大麻の脱炭酸プロセスは圧力依存的であるので（上記のとおり）、温度制御は、マイクロ波支援抽出ステップ１０８において重要である。
【００９６】
[0096]例示的な一実施形態では、それぞれＣＢＤ及びＴＨＣへのＣＢＤＡ及びＴＨＣＡの脱炭酸を促進する適切な条件は、大麻植物原料を溶媒（エタノールなど）に懸濁し、次いで、この混合物に、１０６〜１０９ｎｍ及び３００ＭＨｚ〜３００ＧＨｚの周波数の範囲の波長の電磁放射線（例えば、マイクロ波）を施すことである。一実施形態では、条件はさらに、例えば、４０〜２５０℃の温度範囲、２〜５℃／秒の温度上昇、０〜２０バールの圧力範囲（２ＭＰａ、２９０ｐｓｉ）、２．４５ＧＨｚで０〜４００Ｗのマイクロ波出力範囲又は特定の溶媒及び／又は反応条件に合わせて、必要とされる温度に達し、脱炭酸を達成するための軽微な変化及び調節を含む。撹拌が必要であれば、可変式マグネチックスターラー（３００〜９００ＲＰＭ）を使用してもよい。
【００９７】
[0097]別の例示的な実施形態では、マイクロ波支援抽出及び脱炭酸を、１００〜２００℃（この範囲のすべての可能な整数及び整数の端数を含む、例えば、１６３．５℃）、１３０〜１７０℃、１５０〜１７０℃又は１３０〜１５０℃の範囲の温度で行うことができる。
【００９８】
[0098]別の例示的な実施形態では、マイクロ波支援抽出及び脱炭酸を、２〜２２バール（この範囲のすべての可能な整数及び整数の端数を含む）の範囲の圧力、例えば、１０．７バール又は１７バール又は１８バール又は１９バール又は２０バール又は２１バールで行うことができる。
【００９９】
[0099]大麻植物原料に、溶媒に懸濁し、それぞれ２．４５ＧＨｚ及び１．２２×１０８ｎｍの周波数及び波長、並びに１３０〜１９０℃の範囲の温度でマイクロ波を施すことができる。
【０１００】
[00100]未加工の大麻原料を溶媒に懸濁し、それぞれ２．４５ＧＨｚ及び１．２２×１０８ｎｍの周波数及び波長、並びに１５０〜１９０℃の範囲の温度でマイクロ波を施すことができ、溶媒はエタノールである。
【０１０１】
[00101]別の実施形態では、大麻植物原料を溶媒に懸濁し、混合物を規定の時間（例えば、０〜３０秒又は原料を懸濁するために合理的な長さの時間）にわたって撹拌し、その後、マイクロ波を施すことができる。一実施形態では、規定の期間は、３０秒である。
【０１０２】
[00102]別の実施形態では、大麻原料を溶媒に懸濁することができ、混合物に、マイクロ波を施している間、撹拌することができる。一実施形態では、規定の期間は１０分であり、別の実施形態では、規定の期間は２０分である。作業マイクロ波の変数の表を参照のために以下に示す。
【０１０３】
[00103]
【表１】
2019524655.tif 000003
【０１０４】
[00104]用いるマイクロ波装置の種類及びユーザー設定のために利用可能なオプションに応じて、下記のパラメーターを使用者は設定することができる：
出力（ＯＦＦ）＝反応混合物を加熱するときに印加される定電力また最大電力。
初期電力（ＯＦＦ）＝反応混合物を加熱するときに最初に印加される電力。
固定保持時間（ＯＮ）＝ＯＮならば、目的温度又は目的圧力に達したときに、時間のカウントダウンが開始され、すなわち、設定温度又は圧力に達するまでにかかった初期時間は、加熱時間に含まれない。
圧力（ＯＦＦ）＝反応のための目的圧力。
冷却（ＯＦＦ）＝ＯＦＦならば、加熱プロセス中に冷却は適用されない。
吸収（ＮＯＲＭＡＬ）＝ＮＯＲＭＡＬならば、印加される電力は初期には、目的温度に応じて、２００〜４００Ｗの間である。
温度＝目的温度。（注：実時間でガラスバイアルの表面温度を測定する外部赤外センサーによって、温度をモニターする）。
合計時間＝すべてのステップについての合計時間。
事前撹拌＝加熱プロセス前の撹拌時間。
撹拌速度＝磁気撹拌棒の回転速度。
【０１０５】
[00105]下記のパラメーターを観察し、外挿した。
供給電力＝目的温度を達成するために使用される電力。
保持電力＝目的温度を維持するために使用される電力。
反応圧力＝反応中の最大圧力。
【０１０６】
[00106]一部の実施形態では、脱炭酸カンナビノイド生成物をそのまま使用することができるか、又はさらに、使用前に加工、精製又は回収することができる。
【０１０７】
回収１１０
[00107]任意選択で、マイクロ波を施した後に、回収ステップ１１０で、脱炭酸カンナビノイドの調製物を得られた懸濁液から回収することができる。
【０１０８】
[00108]一実施形態では、抽出及び脱炭酸カンナビノイドを、大麻植物原料の抽出物から溶媒を濾過して脱炭酸カンナビノイド又は脱炭酸カンナビノイド含有画分を単離することによって回収する。
【０１０９】
[00109]別の実施形態では、抽出及び脱炭酸カンナビノイドを、適切なセライト（登録商標）パッド及び／又は活性炭（例えば、木炭）を介して濾過することによって回収して、その後の加工又は使用のための清澄溶液を得る。この実施形態では、セライト（登録商標）をガラス焼結漏斗に入れ、次いで、活性炭と層状にすることができる。濾過剤を、真空濾過を介してエタノールで洗浄することができ、抽出物を適切な体積のエタノールなどの適切な溶媒に溶解し、漏斗に移すことができる。次いで、真空を適用することができ、カンナビノイドが完全に溶離されるまで、濾過剤を溶媒で洗浄することができる。次いで、得られた濾液を濃縮乾固することができる（例えば、２５℃で）。当業者であれば、上記の回収タスクを達成するために、セライト（登録商標）及び活性炭パッドの代わりに、機能性膜、セルロースフィルターなどを使用することを想像することもできる。
【０１１０】
[00110]別法では、ステップ１０８から得られた脱炭酸カンナビノイドの調製物を収集し、続いて、これに限定されないが、音波処理、還流（ソックスレー）抽出及び／又はＳＦＥを含むステップ１０６に記載の抽出方法のいずれかに従って加工することができる。
【０１１１】
使用及び製品
[00111]脱炭酸大麻樹脂を、（ｉ）医薬品、天然健康製品として、若しくはレクリエーション用にそのまま、又は（ｉｉ）既知の治療上又は精神活性上の使用などの脱炭酸カンナビノイド（複数可）の既知の用途のための医薬品、天然健康製品、又はレクリエーション用製品などの製品の調製において原料として使用することができる。
【０１１２】
[00112]一実施形態では、本開示の脱炭酸樹脂を、そのまま、例えば、医薬品として、又は天然健康製品として使用することができる。
【０１１３】
[00113]一実施形態では、開示の方法によって生成して得られた脱炭酸カンナビノイドを含み、さらに、適切な薬学的に許容される担体又は添加剤を含むことができる医薬組成物を形成することができる。
【０１１４】
[00114]本開示の医薬組成物は追加的に、脱炭酸カンナビノイドに加えて、１種又は複数のさらなる医薬活性成分を含むことができる。
【０１１５】
[00115]医薬組成物を、所望の使用及び投与形態、経口（例えば、錠剤又は液体形態）、ミスト又は他の形態（エアロゾル、吸入器又は静脈内に適した製剤）であるかどうかに応じて、所望の場合には、当技術分野で周知の技法を使用して、様々な剤形で調製することができる。
【０１１６】
[00116]様々な異なる剤形のための薬学的に許容される担体又は添加剤が当技術分野で周知であり、それらには、担体、希釈剤、フィラー、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、流動促進剤、着色剤、顔料、味覚マスキング剤、甘味剤、香味剤、可塑剤、並びに吸収促進剤、透過促進剤、界面活性剤、補助界面活性剤、及び特殊油などの任意の許容される補助物質が含まれる。適正な添加剤（複数可）を一部では、剤形、所望の投与形態、所望の放出速度、及び製造信頼性に基づき選択する。添加剤の普通の種類の例には、様々なポリマー、ろう、リン酸カルシウム、及び糖が含まれる。
【０１１７】
[00117]当業者は、Remington:The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, Allen, Loyd V., Jr, 2012に記載されている方法などの医薬製剤の公知の方法を参照するであろう。
【０１１８】
[00118]本開示を次の実施例において記載するが、これは、本開示の理解を助けるために記載するものであり、この後に続く特許請求の範囲において定義されるとおりの本開示の範囲を何ら制限するものとは解釈されるべきではない。
【０１１９】
[00119]
【実施例】
【０１２０】
[00120]実験１：脱炭酸大麻樹脂
【０１２１】
[00121]医療用大麻に抽出及びＵＰＬＣ−ＭＳによる化学分析を施した。
【０１２２】
[00122]抽出方法
【０１２３】
[00123]図２Ａは、医療用大麻及び脱炭酸大麻樹脂を示している。４種の抽出方法を、スキーム１の対応するフローチャートに示されているとおりに行った。下記の実験５〜９に記載のとおりの（Ａ）超音波処理（Ｂ）ソックスレー抽出（Ｃ）超臨界流体抽出（参照によって本明細書に組み込まれるOmar, J. Olivares, M. et al., J. Sep. Sci. 2013, 36, 1397-1404）。（Ｄ）閉鎖系マイクロ波抽出（エタノール、ヘキサン又はイソプロパノール又は液体ＣＯ２中）。
【０１２４】
[00124]スキーム１  様々な抽出方法のフローチャート
【化１】
2019524655.tif 000004
【０１２５】
[00125]ＵＰＬＣ−ＭＳ方法。ドナーサンプル中のカンナビノイド標準、大麻抽出物及びカンナビノイドを、Quaternary Solvent Manager及びSample ManagerFTNを備えたWaters（登録商標） ACQUITYUPLC H-Class Systemを使用して分析した。サンプルをモニターするために使用した検出器は、Waters（登録商標）ＭＳ３１００質量分析計であった。ベンゾフェノン、カフェイン又はΔ９−ＴＨＣ−ｄ３を内標準として使用した。条件を表２に列記する。
【０１２６】
[00126]
【表２】
2019524655.tif 000005
【０１２７】
[00127]抽出結果
【０１２８】
[00128]
【表３】
2019524655.tif 000006
【０１２９】
[00129]
【表４】
2019524655.tif 000007
【０１３０】
ＵＰＬＣ−ＭＳによる化学分析
[00130]医療用大麻の脱炭酸前（図２ｂ）及びその後（図２ｃ）の株１の質量スペクトルは、それぞれＣＢＤ及びＴＨＣへのＣＢＤＡ及びＴＨＣＡの１００％変換を示している。
【０１３１】
[00131]閉鎖系マイクロ波抽出は、ＵＰＬＣ−ＭＳによる化学分析中に観察されるとおり、カンナビノイドの同時の抽出及び脱炭酸をもたらす。
【０１３２】
[00132]実験２：様々な抽出方法のさらなる比較、カンナビノイドの脱炭酸及び標準曲線の生成
【０１３３】
[00133]方法１Ａ：超音波抽出（音波処理）。
【０１３４】
[00134]一般手順：
１．乾燥植物原料を秤量し、乳鉢及び乳棒を使用して細断した。
２．溶媒を添加し（２５〜１３０ｍＬ）、混合物を５分間にわたって２５℃で音波処理した。
３．溶媒をデカンテーションし、真空濾過を使用してガラス焼結漏斗で濾過した。
４．ステップ２及び３を残りの線維原料で２回繰り返した。
５．濾液を濃縮乾固し（２５℃で）、次いで、秤量した（緑色の樹脂）。
【０１３５】
[00135]下の表５は、大麻の３つの共通の株の音波処理の結果を示している。
【０１３６】
[00136]
【表５】
2019524655.tif 000008
【０１３７】
[00137]方法１Ｂ：セライト（登録商標）／活性炭での濾過。
【０１３８】
[00138]方法１Ａ（上記）後に、抽出物の緑色を除去するために、抽出物にセライト（登録商標）及び活性炭での濾過を施した。結果を表６に示す。
【０１３９】
[00139]一般手順：
１．セライト（登録商標）をガラス焼結漏斗に入れ、次いで、活性炭と層状にした。
２．抽出物をエタノール１ｍＬに溶解し、漏斗に移した。
３．抽出物を含有したバイアルをエタノール１．５ｍＬで２回洗浄し、漏斗に移した。
４．次いで、真空を適用し、濾液がもはやＵＶ活性ではなくなるまで、濾過剤をエタノールで洗浄した（６０〜７０ｍＬ）。
５．濾液を濃縮乾固し（２５℃で）、次いで、秤量した（オレンジ色の樹脂）。
【０１４０】
[00140]
【表６】
2019524655.tif 000009
【０１４１】
[00141]方法２：ソックスレー抽出
【０１４２】
[00142]一般手順：
１．乾燥植物原料を秤量し、乳鉢及び乳棒を使用して細断した。
２．次いで、圧潰された原料をセルロース抽出円筒濾紙（４３×１２３ｍｍ；２ｍｍ厚）に移した。
３．次いで、円筒濾紙を大きな抽出機（サイズ：５５／５０）に挿入した。
４．溶媒（４００ｍＬ）及び撹拌棒を丸底フラスコに加え、次いでこれを、適切なＤｒｙＳｙｎ加熱ブロックに入れ、抽出機に接続した。
５．次いで、抽出機を大きな凝縮器（サイズ：５５／５０）に接続し、還流を１２０℃で３．５時間にわたって行った。
６．還流が完了したら、溶媒を濃縮乾固し（２５℃で）、次いで、秤量した（緑色の樹脂）。
【０１４３】
[00143]下の表７は、上記の手順に従った大麻のソックスレー抽出の結果を示している。
【０１４４】
[00144]
【表７】
2019524655.tif 000010
【０１４５】
[00145]方法３：超臨界流体抽出（ＳＦＥ）
【０１４６】
[00146]一般手順：
１．乾燥植物原料を秤量し、乳鉢及び乳棒を使用して細断した。
２．圧潰された植物原料を１０ｍＬ抽出容器に移し、以下の条件のいずれかを施した。
３．すべての画分を合わせ、濃縮乾固し（２５℃で）、次いで、秤量した（緑色の樹脂）
【０１４７】
[00147]方法３Ａ：ＳＦＥ条件
溶媒Ａ＝ＣＯ２
溶媒Ｂ＝エタノール
温度＝４０℃
ＢＰＲ＝１２ＭＰａ
ＰＤＡ＝２００〜６００ｎｍ（２５４ｎｍでモニター）
捕集時間＝３０分
方法時間＝３０．２分
ｉ．１：１  Ａ／Ｂで静的に５分。
ｉｉ．１：１  Ａ／Ｂ（流速＝１０ｍＬ／分；補給ポンプ＝０．２ｍＬ／分）で動的に２５分。
ｉｉｉ．画分を５分ごとに収集した。
【０１４８】
[00148]方法３Ｂ：ＳＦＥ条件
溶媒Ａ＝ＣＯ２
溶媒Ｂ＝エタノール
温度＝４０℃
ＢＰＲ＝１２  ＭＰａ
ＰＤＡ＝２００〜６００ｎｍ（２５４ｎｍでモニター）
ｉ．１００％Ａ（流速＝１０ｍＬ／ｍｉｎ）で動的に１５分。
画分を７．５分ごとに収集した。
捕集時間＝１５分
方法時間＝１５．２分
ｉｉ．８０：２０Ａ／Ｂ（流速＝１０ｍＬ／分；補給ポンプ＝１ｍＬ／分）で動的に３０分。
画分を５分ごとに収集した。
捕集時間＝３０分
方法時間＝３０．２分
【０１４９】
[00149]下の表８は、大麻での方法３Ａ及び３Ｂで概説した条件に従ったＳＦＥの結果を示している。
【０１５０】
[00150]
【表８】
2019524655.tif 000011
【０１５１】
[00151]方法４：エタノール（ＭＡＥ）でのマイクロ波支援抽出、その後のＳＦＥ。
【０１５２】
[00152]それぞれＣＢＤ及びＴＨＣへのＣＢＤＡ及びＴＨＣＡの脱炭酸を促進する適切な条件をＭＡＥで決定した。
【０１５３】
[00153]この抽出で使用した溶媒はエタノールであった。しかしながら、エタノールは７８℃の沸点を有するので、マイクロ波条件下で密閉容器内でエタノールのみを加熱した場合に達成することができる最高温度を決定しなければならなかった。
【０１５４】
[00154]一般手順：
１．エタノール（１１ｍＬ）及び撹拌棒を２０ｍＬマイクロ波バイアルに入れ、次いでこれを密閉した。
２．一般マイクロ波条件：
ａ．事前撹拌＝３０秒
ｂ．ラン時間＝１５分
ｃ．吸収＝通常
【０１５５】
[00155]結果を、下の表９に示す。
【０１５６】
[00156]
【表９】
2019524655.tif 000012
【０１５７】
[00157]エタノールを加熱することができる最大温度が決定したら、大麻で、次の条件を行った：
【０１５８】
[00158]一般手順：
１．乾燥植物原料を秤量し、乳鉢及び乳棒を使用して細断した。
２．圧潰された植物原料を撹拌棒と共に２０ｍＬ又は５ｍＬマイクロ波バイアルに移した。
３．植物原料が完全に沈むように、エタノール（１１ｍＬ又は３ｍＬ）をバイアルに添加した。次いで、バイアルを密閉し、下記のマイクロ波条件を施した：
ａ．事前撹拌＝３０秒
ｂ．ラン時間＝１０分
ｃ．吸収＝正常
４．懸濁液を濾過し、濾液及び植物繊維を別々に収集した。
５．濾液を濃縮し、植物繊維に下記のＳＦＥ条件を施した：
溶媒Ａ＝ＣＯ２
溶媒Ｂ＝エタノール
温度＝２５℃
ＢＰＲ＝１２ＭＰａ
ＰＤＡ＝２００〜６００ｎｍ（２５４ｎｍでモニター）
捕集時間＝２０分
方法時間＝２０．２分
６．１００％Ａ〜５０％の勾配；０．１分〜１５分（流速＝１０ｍＬ／分；補給ポンプ＝１ｍＬ／分）
７．画分を７．５分ごとに収集した。
【０１５９】
[00159]結果を下の表１０に示す。
【０１６０】
[00160]
【表１０】
2019524655.tif 000013
【０１６１】
[00161]表１４（以下に示す）は、カンナビノイドの分析及び定量化を示している。
【０１６２】
[00162]方法５：ＳＦＥ／ソックスレー／音波処理抽出、続く、樹脂のマイクロ波（脱炭酸のため）。
【０１６３】
[00163]一般手順：
１．方法１Ａ（エタノール抽出）、２及び３Ａから単離された樹脂をエタノール３〜３．５ｍＬに溶解し、５ｍＬマイクロ波バイアルに移した。
２．撹拌棒を加え、バイアルを密閉し、下記のマイクロ波条件を施した：
ａ．温度＝１５０℃
ｂ．事前撹拌＝３０秒
ｃ．ラン時間＝１０分
ｄ．吸収＝正常。
３．次いで、反応混合物を濃縮した。
【０１６４】
[00164]結果を下の表１１に示す。
【０１６５】
[00165]
【表１１】
2019524655.tif 000014
【０１６６】
[00166]クロマトグラフィー分析（ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＰＤＡ）
【０１６７】
[00167]大麻抽出物のクロマトグラフィープロファイルを、Waters（登録商標）２５４５バイナリーグラジエントモジュールＬＣ、Waters（登録商標）ＰＤＡ２９９８フォトダイオードアレイ検出器（１９０〜８００ｎｍ）及びWaters（登録商標）３１００質量分析計（６０〜２０００Ｄａ）を備えたＬＣ−ＰＤＡ−ＭＳによって決定した。
【０１６８】
[00168]ＬＣをＸ−Ｂｒｉｄｇｅ分析用Ｃ１８カラム（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、内径５ｕｍ）で、流速１．５ｍＬ／分で行った。質量スペクトルを、ＥＳＩ（＋ｖｅ）モードを使用して記録した。注入サンプルを、Millex-GV（登録商標）シリンジフィルター（０．２２μｍ、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｏｐｏｒｅ）を使用して濾過した。
【０１６９】
[00169]クロマトグラフィーの条件は次のとおりであった：
移動相：
Ａ：水／０．１％ギ酸
Ｂ：メタノール／０．１％ギ酸
勾配：
０〜２５分：３０％Ａ／７０％Ｂ→１００％Ｂ
２５〜２８分：１００％Ｂ
２８〜３０分：１００％Ｂ→３０％Ａ／７０％Ｂ
３０〜３５分：３０％Ａ／７０％Ｂ
注入体積：１０μＬ
流速：１．５ｍＬ／分
合計ラン時間：３５分
【０１７０】
[00170]ＵＰＬＣ／ＭＳ。大麻抽出物及びカンナビノイド標準を、Quaternary Solvent Manager、Sample ManagerFTN、アクイティＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨカラム（２．１×５０ｍｍ、Ｃ１８、１．７μｍ）を備えたWaters（登録商標）ACQUITY UPLC H-Class Systemを使用して分析した。サンプル注入プレート及びカラムをそれぞれ１５℃及び４０℃に維持した。サンプルをモニターするために使用した検出器はWaters（登録商標）ＭＳ  ３１００質量分析計であった。
【０１７１】
[00171]クロマトグラフィーの条件は次のとおりであった：
【０１７２】
[00172]移動相：
Ａ：水／０．１％ギ酸
Ｂ：メタノール／０．１％ギ酸
勾配：
０〜４．５分：３０％Ａ／７０％Ｂ→１００％Ｂ
４．５〜５．０分：１００％Ｂ
５．０〜５．２分：１００％Ｂ→３０％Ａ／７０％Ｂ
５．２〜６．０分：３０％Ａ／７０％Ｂ
注入体積：２μＬ
流速：０．６ｍＬ／分
合計ラン時間：６分
【０１７３】
[00173]カンナビノイドでの標準曲線：
【０１７４】
[00174]標準的なカンナビノイドサンプルをCerilliant-Certified Reference Standardsからメタノール中１．０ｍｇ／ｍＬ溶液の形で購入した。
１．Δ８−テトラヒドロカンナビノール（Δ８−ＴＨＣ、Ｃａｔ＃．Ｔ−０３２、Ｌｏｔ  ＦＥ１００１１５０１）
２．Δ９−テトラヒドロカンナビノール（Δ９−ＴＨＣ、Ｃａｔ＃．Ｔ−００５、Ｌｏｔ  ＦＥ０５２７１５０２）
３．Δ９−テトラヒドロカンナビノール酸Ａ（ＴＨＣＡ−Ａ、Ｃａｔ＃．Ｔ−０９３、Ｌｏｔ  ＥＲ０２１０１５０６）
４．Δ２−カンナビドイル（ＣＢＤ、Ｃａｔ＃．Ｃ−０４５、Ｌｏｔ  ＦＥ０１２８８１５０２）
５．カンナビジオール酸（ＣＢＤＡ、Ｃａｔ＃．Ｃ−１４４．Ｌｏｔ  ＦＥ０１８１６０２）
６．カンナビノール（ＣＢＮ、Ｃａｔ＃．Ｃ−０４６、Ｌｏｔ  ＦＥ０６０８１５０２）
【０１７５】
[00175]カンナビノイド１〜６の化学構造を図１に示す。
【０１７６】
[00176]各標準サンプルの作業用ストック溶液を、水／０．１％ギ酸及びメタノール／０．１％ギ酸を使用して調製した。各ストックサンプルの最終濃度は３０％水／０．１％ギ酸及び７０％メタノール／０．１％ギ酸中５０μｇ／ｍＬであった。
【０１７７】
[00177]ストックサンプル（５０μｇ／ｍＬ）を移動相（３０％水／０．１％ギ酸及び７０％メタノール／０．１％ギ酸）で希釈して、次の濃度を得た：
０、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、７．５、及び１０．０μｇ／ｍＬ
【０１７８】
[00178]すべての濃度が標準曲線の構築に含まれたことに留意されたい。飽和レベルの非常に低いシグナルによって、カンナビノイドの一部（例えば、０．１又は１０．０μｇ／ｍＬ）を除外した。
【０１７９】
[00179]各濃度を３連でランさせた。注入液２μＬを作製し、シグナルを最高６分間にわたって記録した。ポジティブモードでのＳＩＲ＋ｖｅ（３１１、３１５、及び３５９ｍ／ｚ）又はＳＩＲ−ｖｅ（３１３及び３５７）及びマススキャン（１５０〜５００ｍ／ｚ）をモニターし、記録した。ＳＩＲクロマトグラムを積分し、ＡＵＣを濃度（μｇ／ｍＬ）に対してプロットした。
【０１８０】
[00180]
【表１２】
2019524655.tif 000015
【０１８１】
[00181]上記のとおりのカンナビノイド１〜６のそれぞれについての標準曲線を図４〜９に示す。
【０１８２】
[00182]図４は、Δ８−ＴＨＣでの標準曲線を示している。線型回帰：ｙ＝１０９４８１４９ｘ＋２１５３３６５、Ｒ＝０．９９８４
【０１８３】
[00183]図５は、Δ９−ＴＨＣでの標準曲線を示している。線型回帰：ｙ＝１１６０９８６９ｘ＋２１８７２１５、Ｒ＝０．９９８０。
【０１８４】
[00184]図６は、ＴＨＣＡでの標準曲線を示している。線型回帰：ｙ＝１４５５０９６７ｘ＋１１９８８６、Ｒ＝０．９９９２
【０１８５】
[00185]図７は、ＣＢＤでの標準曲線を示している。線型回帰：ｙ＝９６０１９０１ｘ＋１４４８９３２、Ｒ＝０．９９７８。
【０１８６】
[00186]図８は、ＣＢＤＡでの標準曲線を示している。線型回帰：ｙ＝９０９６８８０ｘ＋１１１４０９、Ｒ＝０．９９９３。
【０１８７】
[00187]図９は、ＣＢＮでの標準曲線を示している。線型回帰：ｙ＝２５９５３２８ｘ−３９７５９４、Ｒ＝０．９９６７。
【０１８８】
[00188]表１３は、種々の温度でマイクロ波抽出方法を使用して得られた抽出物中のカンナビノイドの濃度（μｇ／ｍＬ）を示している。マイクロ波反応後の固体物質（植物線維）残分をＳＦＥ抽出（方法３Ａ）に曝露した。各マイクロ波反応物の合計体積は３ｍＬであった。
【０１８９】
[00189]
【表１３】
2019524655.tif 000016
【０１９０】
[00190]図１０は、種々の温度でマイクロ波方法を使用して抽出されたサンプル中に存在するΔ９−ＴＨＣ及びＴＨＣ−Ａの量を示している。ＴＨＣの各形態の量は、ＴＨＣの合計量（中性及び酸性形態）に対するパーセンテージとして示されている。
【０１９１】
[00191]表１４は、方法５を施した後の大麻抽出物中のカンナビノイドの量を示している。表１１も参照されたい。注：ＣＢＮは、マイクロ波中に、ＴＨＣＡの脱炭酸に基づき形成されると考えられる。ＣＢＤＡは定量化しなかった。
【０１９２】
[00192]
【表１４】
2019524655.tif 000017
【０１９３】
[00193]上記データのプロットが図１１及び１２に示されており、図１１は、ＥｔＯＨ、ソックスレー及びＳＦＥを使用し、大麻にマイクロ波条件を施さなかった場合の抽出物での濃度を示しており、図１２は、初めにＥｔＯＨ又はソックスレー又はＳＦＥを使用して大麻を抽出し、続いてマイクロ波加熱を行った場合のカンナビノイドの濃度を示している。
【０１９４】
[00194]表１５は、種々の温度でマイクロ波抽出方法を使用して得られた抽出物でのカンナビノイドの収量（ｍｇ／植物原料ｇ）を示している。マイクロ波反応後の固体物質（植物線維）残分をＳＦＥ抽出（方法３Ａ）に曝露した。各マイクロ波反応物の合計体積は３ｍＬであった。ＣＢＤＡは定量化しなかった。
【０１９５】
[00195]
【表１５】
2019524655.tif 000018
【０１９６】
[00196]図１３は、マイクロ波加熱のみの後に大麻から得られたカンナビノイドを示している。
【０１９７】
[00197]図１４は、マイクロ波、続くＳＦＥ抽出を示している。マイクロ波溶媒及びＳＦＥ抽出からのカンナビノイドが一緒に加えられている。
【０１９８】
[00198]図１５は、マイクロ波加熱、続くＳＦＥ抽出後の大麻からの様々なカンナビノイド濃度を示している。図１５では、両方の抽出からのカンナビノイドを一緒に加えられている。各方法によって抽出された合計ＴＨＣを示すために、ＴＨＣの酸性及び中性形態を一緒に加えた。
【０１９９】
[00199]図１６は、Waters（登録商標）ＭＳ３１００質量検出器を使用してＥＳＩのポジティブモードで記録されたマススキャン（１５０〜５００ｍ／ｚ）のクロマトグラムを示している。サンプルを１７０℃、１５分間でマイクロ波抽出から得た。矢印はＣＢＤ、ＣＢＤＡ、Δ９−ＴＨＣ、及びＴＨＣＡの保持時間を指している。低いサンプル濃度によって、ピークは、このクロマトグラムでは見ることができない。このサンプルで得られた単一イオン記録（ＳＩＲ＋ｖｅ）は、ＣＢＤ及びΔ９−ＴＨＣ（図１７）、ＣＢＤＡ及びＴＨＣＡ（図１８）を表す個々のピークを示している。分析物が存在しないか、又はこのモードでは検出されなければ、予測保持時間が示されている。
【０２００】
[00200]図１７は、１７０℃、１５分間のマイクロ波抽出から得られたサンプルでカンナビジオール（ＣＢＤ）及びΔ９−テトラヒドロカンナビノール（Δ９−ＴＨＣ）を検出するための単一イオン記録（ＳＩＲ＋ｖｅ、ｍ／ｚ＝３１５）を示している（マススキャンは図１６に示されている）。
【０２０１】
[00201]図１８は、１７０℃、１５分間のマイクロ波抽出から得られたサンプルでカンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）及びテトラヒドロカンナビノール酸（ＴＨＣＡ）を検出するための単一イオン記録（ＳＩＲ＋ｖｅ、ｍ／ｚ＝３５９）を示している（マススキャンは図１６に示されている）。ポジティブモード（ＥＳＩ＋ｖｅ）は、カンナビノイドの酸性形態を検出するための好ましいものではない。
【０２０２】
[00202]図１９は、Waters（登録商標）ＭＳ３１００質量検出器を使用してＥＳＩのネガティブモードで記録されたマススキャン（１５０〜５００ｍ／ｚ）のクロマトグラムを示している。サンプルを、１７０℃、１５分間のマイクロ波抽出から得た。矢印は、ＣＢＤ、ＣＢＤＡ、Δ９−ＴＨＣ、及びＴＨＣＡの保持時間を指している。低いサンプル濃度によって、ピークは、このクロマトグラムでは見ることができなかった。このサンプルで得られた単一イオン記録（ＳＩＲ−ｖｅ）は、ＣＢＤ及びΔ９−ＴＨＣ（図２０）、ＣＢＤＡ及びＴＨＣＡ（図２１）を表す個々のピークを示している。分析物が存在しないか、又はこのモードでは検出されなければ、予測保持時間が示されている。
【０２０３】
[00203]図２０は、１７０℃、１５分間のマイクロ波抽出から得られたサンプルでカンナビジオール（ＣＢＤ）及びΔ９−テトラヒドロカンナビノール（Δ９−ＴＨＣ）を検出するための単一イオン記録（ＳＩＲ−ｖｅ、ｍ／ｚ＝３１３）を示している（マススキャンは図１９に示されている）。カンナビノイドの中性形態は、ネガティブモードでは容易に検出することができず、したがって、ポジティブモードと比較して、ピークは観察されない（図１７を参照されたい）。
【０２０４】
[00204]図２１は、１７０℃、１５分間のマイクロ波抽出から得られたサンプルでカンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）及びテトラヒドロカンナビノール酸（ＴＨＣＡ）を検出するための単一イオン記録（ＳＩＲ−ｖｅ、ｍ／ｚ＝３５７）を示している（マススキャンは図１９に示されている）。ＥＳＩ−ｖｅモードは、カンナビノイドの酸性形態を検出するために有用である。
【０２０５】
[00205]図２２は、Waters（登録商標）ＭＳ３１００質量検出器を使用してＥＳＩのポジティブモードで記録されたマススキャン（１５０〜５００ｍ／ｚ）のクロマトグラムを示している。サンプルを、１３０℃、１０分間のマイクロ波抽出から得た。ＣＢＤ、ＣＢＤＡ、Δ９−ＴＨＣ、及びＴＨＣＡの保持時間が示されている。このサンプルで得られた単一イオン記録（ＳＩＲ＋ｖｅ）は、ＣＢＤ及びΔ９−ＴＨＣ（図２３）並びにＣＢＤＡ及びＴＨＣＡ（図２４）を表す個々のピークを示している。分析物が存在しないか、又はこのモードでは検出されなければ、予測保持時間が示されている。
【０２０６】
[00206]図２３は、１３０℃、１０分間のマイクロ波抽出から得られたサンプルでカンナビジオール（ＣＢＤ）及びΔ９−テトラヒドロカンナビノール（Δ９−ＴＨＣ）を検出するための単一イオン記録（ＳＩＲ＋ｖｅ、ｍ／ｚ＝３１５）を示している（マススキャンは図２２に示されている）。
【０２０７】
[00207]図２４は、１３０℃、１０分間のマイクロ波抽出から得られたサンプルでカンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）及びテトラヒドロカンナビノール酸（ＴＨＣＡ）を検出するための単一イオン記録（ＳＩＲ＋ｖｅ、ｍ／ｚ＝３５９）を示している（マススキャンは図２２に示されている）。分析されたサンプルの比較的高い濃度によって、ＣＢＤ及びＴＨＣの酸性形態はネガティブモードによって検出される。
【０２０８】
[00208]図２５は、Waters（登録商標）ＭＳ３１００質量検出器を使用してＥＳＩのネガティブモードで記録されたマススキャン（１５０〜５００ｍ／ｚ）のクロマトグラムを示している。サンプルを１３０℃、１０分間のマイクロ波抽出から得た。ＣＢＤ、ＣＢＤＡ、Δ９−ＴＨＣ、及びＴＨＣＡの保持時間が示されている。このサンプルで得られた単一イオン記録（ＳＩＲ−ｖｅ）は、ＣＢＤ及びΔ９−ＴＨＣ（図２６）並びにＣＢＤＡ及びＴＨＣＡ（図２７）を表す個々のピークを示している。分析物が存在しないか、又はこのモードでは検出されなければ、予測保持時間が示されている。
【０２０９】
[00209]図２６は、１３０℃、１０分間のマイクロ波抽出から得られたサンプルでカンナビジオール（ＣＢＤ）及びΔ９−テトラヒドロカンナビノール（Δ９−ＴＨＣ）を検出するための単一イオン記録（ＳＩＲ−ｖｅ、ｍ／ｚ＝３１３）を示している（マススキャンは図２５に示されている）。中性カンナビノイド（ポジティブモード（図２３）と比較して、ＣＢＤ及びΔ９−ＴＨＣは、ネガティブモード検出では見ることができない）。
【０２１０】
[00210]図２７は、１３０℃、１０分間のマイクロ波抽出から得られたサンプルでカンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）及びテトラヒドロカンナビノール酸（ＴＨＣＡ）を検出するための単一イオン記録（ＳＩＲ−ｖｅ、ｍ／ｚ＝３５７）を示している（マススキャンは図２５に示されている）。部分的な脱炭酸を示す多少のＣＢＤＡ及びＴＨＣＡがなお存在する。
【０２１１】
[00211]実験２での結果のまとめ
【０２１２】
[00212]図４〜９は、それぞれΔ８−ＴＨＣ、Δ９−ＴＨＣ、ＴＨＣ−Ａ、ＣＢＤ、ＣＢＤＡ及びＣＢＮでの標準的なクロマトグラフィー曲線を示している。これらの標準曲線を、０〜１０μｇ／ｍＬの間の濃度で生成し、続いて、本明細書に記載の実施形態を使用して形成された様々な産物での各化合物の濃度を決定するために使用した。
【０２１３】
[00213]表５は、超音波抽出中の様々な溶媒の使用を示している。回収濾過プロセス中に失われた大麻植物原料も最少量であった（表６を参照されたい）。これは、異なる抽出方法（溶媒、ソックスレー、ＳＦＥ抽出）にわたって、同様の回収率であるとも考えられる（表７及び８を参照されたい）。
【０２１４】
[00214]マイクロ波を使用してエタノール中でカンナビノイド抽出／脱炭酸を行う場合、エタノールの沸点によって、マイクロ波を使用してのカンナビノイドの抽出／脱炭酸は１８０℃未満の温度で、例えば、１６０℃±１０℃（例えば、＋／−許容される標準誤差）で最も良好に行われることが示された。使用された条件下で、ＴＨＣ（所望の脱炭酸生成物）へのＴＨＣＡの変換が１００℃よりも１３０℃で良好であったこと、及びマイクロ波及びＳＦＥに対してマイクロ波のみを使用して行った場合、１３０℃超、例えば、１５０℃〜１７０℃の温度がより効率的な変換を示したことも示された（表１３及び１５さらには図１０を参照されたい）。しかしながら、続いてＳＦＥを行うと、原料のかなりの損失が存在するようである（表９及び１０、並びに１５を参照されたい）。したがって、所望の結果を得るための最小数のステップ及びプロセスは、１ステップ抽出／脱炭酸方法である。
【０２１５】
[00215]図１１及び１２並びに表１４は、抽出が僅かに脱炭酸されているか、又は脱炭酸されていないＴＨＣ生成物をもたらした一方で、マイクロ波ステップの追加が脱炭酸ＴＨＣのかなりの増加をもたらしたことを示している。
【０２１６】
[00216]図１３は、１００℃〜１７０℃の間の範囲の温度でのマイクロ波照射のみの後の大麻からのΔ９−ＴＨＣ、ＴＨＣ−Ａ、ＣＢＤ及びＣＢＮの濃度を示している。図１３は、エタノールを溶媒として使用した場合、１３０℃〜１７０℃の間の温度でのマイクロ波照射が最適であることを示している。
【０２１７】
[00217]図１４は、１００℃〜１７０℃の間の範囲の温度でのマイクロ波照射及びその後のＳＦＥ抽出後の大麻植物原料からのΔ９−ＴＨＣ、ＴＨＣ−Ａ、ＣＢＤ及びＣＢＮの濃度を示している。ＳＦＥ抽出の使用は、脱炭酸カンナビノイドの収量を有意に増加させないと考えられる。
【０２１８】
[00218]図１５は、１００℃〜１７０℃の範囲の温度でのマイクロ波照射及びその後のＳＦＥ抽出後の大麻からの合計ＴＨＣ、ＣＢＤ及びＣＢＮの濃度を示しており、各方法によって抽出されるＴＨＣ全量を示すためにＴＨＣの酸性及び中性形態を一緒に加えている。この場合も、ＳＦＥ抽出の使用は、脱炭酸カンナビノイドの収量を有意に増加させないようである。
【０２１９】
[00219]上記の結果から、かなりの脱炭酸生成物ＴＨＣがマイクロ波抽出から生じていると考えられ、かつＳＦＥなどの第２の抽出ステップの追加は、カンナビノイドプロファイルを変化させないと考えられる。これはさらに、ＣＢＤ、さらにはＴＨＣ成分が、マイクロ波抽出だけの後に、又はマイクロ波及びＳＦＥ抽出を組み合わせた後に、抽出物中に存在することを示している。
【０２２０】
[00220]まとめると、本開示は、大麻植物原料の抽出及び脱炭酸を同時に、エタノールなどの抽出溶媒の沸点未満の温度に設定されたマイクロ波を使用して、別の抽出ステップを必要とせずに行うことができることを示している。これは、脱炭酸カンナビノイドの形成及び回収を最適化し、ばらつきのない再現可能な有効性及び治療結果を有する、よりばらつきのない再現可能な生成物を生成することができる。
【０２２１】
[00221]抽出ステップを、マイクロ波の使用前に含めることもできる。マイクロ波ステップ後の抽出ステップは可能であるが、必要ではない。
【０２２２】
[00222]実験３：超臨界流体抽出（ＳＦＥ）
【０２２３】
[00223]一般手順：
１．乾燥植物原料を秤量し、乳鉢及び乳棒を使用して細断した。
２．圧潰された植物原料を１０ｍＬ抽出容器に移し、次の条件のいずれかを施した。
３．各ランからの画分を５分ごとに収集し、合わせ、濃縮乾固し（２５℃で）、次いで、秤量した（緑色の樹脂）。
４．抽出を同じ植物繊維で３回行った。
Ａ）ＳＦＥ条件
溶媒Ａ＝ＣＯ２
溶媒Ｂ＝エタノール
温度＝２５℃
ＢＰＲ＝１２ＭＰａ
ＰＤＡ＝２００〜６００ｎｍ（２５４ｎｍでモニター）
流速＝１０ｍＬ／分
補給ポンプ＝１ｍＬ／分
捕集時間＝３０分
方法時間＝３０．２分
ｉ．０．１分〜２５分；Ａ中０〜５０％Ｂの勾配
２６分；１００％Ａ
３０分；１００％Ａ
【０２２４】
[00224]下の表１６に、対応する結果を示す。
【０２２５】
[00225]
【表１６】
2019524655.tif 000019
【０２２６】
[00226]実験４：エタノールでの抽出物のマイクロ波支援脱炭酸（ＭＡＥ）
【０２２７】
[00227]一般手順：
１．上記ＳＦＥ方法から単離された抽出物をエタノール５〜１０ｍＬに溶解し、適切な体積を５ｍＬマイクロ波バイアルに移した。
２．追加の体積のエタノール及び撹拌棒を５ｍＬマイクロ波バイアルに加えた。
３．バイアルを密閉し、下記の２つのマイクロ波条件の一方を施した：
（ａ）温度＝１５０℃；ラン時間＝１０分；撹拌速度＝６００ｒｐｍ；吸収＝正常
（ｂ）温度＝１００℃；ラン時間＝３０分；撹拌速度＝６００ｒｐｍ；吸収＝正常
４．次いで、２０ｍＬバイアルに移した後に、溶液を３５℃で濃縮した。
【０２２８】
[00228]結果を下の表１７に示す。
【０２２９】
[00229]
【表１７】
2019524655.tif 000020
【０２３０】
[00230]実験５：エタノールを用いる追加のマイクロ波支援抽出（ＭＡＥ）、脱炭酸のための条件の最適化
【０２３１】
[00231]一般手順：
１．乾燥植物原料を秤量し、ラボラトリーブレンダーを２２，０００ｒｐｍで６０秒間にわたって使用して細断した。
２．圧潰された植物原料を再秤量し、撹拌棒と共に２０ｍＬマイクロ波バイアルに移した。
３．エタノール（１０ｍＬ）をバイアルに添加し、次いで、バイアルを密閉し、下記のマイクロ波条件を施した：
（ａ）温度＝１７０℃；ラン時間＝１５分；事前撹拌＝３０秒；撹拌速度＝９００ｒｐｍ；吸収＝正常
（ｂ）温度＝１５０℃；ラン時間＝２０分；事前撹拌＝３０秒；撹拌速度＝９００ｒｐｍ；吸収＝正常
４．懸濁液を濾過し、濾液及び植物繊維を別々に収集した。
５．次いで、濾液を３５℃で濃縮し、次いで、エタノールを使用して２０ｍＬバイアルに移し、再び３５℃で濃縮し、次いで、冷蔵庫に貯蔵した。
【０２３２】
[00232]結果を下の表１８に示す。
【０２３３】
[00233]
【表１８】
2019524655.tif 000021
【０２３４】
[00234]上記ステップ３の条件（ｂ）がこの規模で成功することが判明したので、その後の脱炭酸を、そのマイクロ波条件を使用して行い、３連で行った。しかしながら、次の変更を行った：
【０２３５】
[00235]ステップ１：１８，０００ｒｐｍで４秒間にわたってブレンド。
【０２３６】
[00236]ステップ４：濾過をセライト／活性炭で行った（前の報告において既に記載したとおり）
【０２３７】
[00237]ステップ５：次いで、濾液を３５℃で濃縮し、秤量し、エタノールを使用して２０ｍＬバイアルに移し、次いで、冷蔵庫で貯蔵した。
【０２３８】
[00238]結果を下の表１９に示す。
【０２３９】
[00239]
【表１９】
2019524655.tif 000022
【０２４０】
[00240]この実験は抽出方法の一貫性を示している。
【０２４１】
[00241]実験６：大麻抽出（１グラム規模）
【０２４２】
[00242]一般手順（約１．０ｇバッチ；細断前）：
１．乾燥植物原料を秤量し、ラボラトリーブレンダーを１８，０００ｒｐｍで４秒間にわたって使用して細断した。
２．圧潰された植物原料を再秤量し（約０．８７５ｇ）、撹拌棒と共に２０ｍＬマイクロ波バイアルに移動した。
３．エタノール（１０ｍＬ）をバイアルに添加し、次いで、バイアルを密閉し、下記のマイクロ波条件を施した：
温度＝１５０℃；ラン時間＝２０分；事前撹拌＝３０秒；撹拌速度＝９００ｒｐｍ；吸収＝正常
４．懸濁液をセライト／活性炭で濾過し、濾液及び植物繊維を別々に収集した。
５．次いで、濾液を３５℃で濃縮し、次いで、エタノールを使用して２０ｍＬバイアルに移し、再び３５℃で濃縮し、次いで、冷蔵庫に貯蔵した。
６．脱炭酸を３連で行った。
【０２４３】
[00243]脱ろう手順：
１．樹脂をエタノール（１０ｍＬ／ｇ）に溶解し、水浴中で５分間にわたって４０℃で加熱した。
２．抽出物溶液を含有するバイアルを、ドライアイス／アセトン浴を使用して３〜４時間にわたって−７５℃に冷却した。
３．溶液を事前秤量したシリンジフィルターで２０ｍＬバイアル内で濾過した
フィルターの仕様：Millex（登録商標）−ＧＶ（滅菌）、Low Protein Binding Durapore（登録商標）（ＰＶＤＦ）メンブレン；空孔サイズ０．２２μｍ；直径３３ｍｍ。
４．フィルターを、ドライアイス／アセトン浴を使用して５分間にわたって−７５℃で冷却しておいたエタノールで洗浄した。
５．濾液を３５℃で濃縮し、抽出物を秤量した。
６．換気フード内で２〜３日間にわたって乾燥した後に、シリンジフィルターを秤量した。
【０２４４】
[00244]
【表２０】
2019524655.tif 000023
【０２４５】
[00245]
【表２１】
2019524655.tif 000024
結果のまとめ：大麻の１グラム規模のバッチを抽出及び脱炭酸することに成功した。
【０２４６】
[00246]実験７：変更条件を使用しての大規模ＭＡＥ（約３．７５ｇバッチ；細断前）
１．乾燥植物原料を秤量し（バッチ当たり約３．７５ｇ）、ラボラトリーブレンダーを１８，０００ｒｐｍで４秒間にわたって使用して細断した。
２．圧潰された植物原料を再秤量し、撹拌棒と共に３×２０ｍＬマイクロ波バイアルに移した（バイアル当たり植物線維約１．２ｇ）。
３．９５％〜１００％エタノール（１２ｍＬ）をバイアルに添加し、次いで、バイアルを密閉し、下記のマイクロ波条件を施した：
温度＝１５０℃；ラン時間＝３０分；事前撹拌＝３０秒；撹拌速度＝９００ｒｐｍ；吸収＝正常
注：分析によって、脱炭酸がこの規模では完了しないことが明らかとなったので、脱炭酸のための時間を３０分に増やした。
４．脱炭酸後に３×２０ｍＬバイアルを合わせ、懸濁液を濾過し、濾液及び植物繊維を別々に収集した。
５．次いで、濾液を３５℃で濃縮し、次いで、エタノールを使用して２０ｍＬバイアルに移し、再び３５℃で濃縮し、秤量し、冷蔵庫に貯蔵した。
６．脱炭酸を２連で行った。
【０２４７】
[00247]結果を下の表２２に示す。
【０２４８】
[00248]
【表２２】
2019524655.tif 000025
【０２４９】
[00249]結果のまとめ：上記の結果から、より大規模なマイクロ波支援抽出が３〜４グラム規模で成功したと結論付けることができる。条件を適切に調節して、この方法を数グラム以上の規模に規模拡大することができる。
【０２５０】
[00250]実験８：エタノールでの大規模マイクロ波支援抽出（ＭＡＥ）
（Ａ）一般手順（約３．７５ｇバッチ；細断前）：
１．乾燥植物原料を秤量し、ラボラトリーブレンダーを１８，０００ｒｐｍで４秒間にわたって使用して細断した。
２．圧潰された植物原料を再秤量し、撹拌棒と共に３×２０ｍＬマイクロ波バイアルに移した（バイアル当たり植物線維約１．２ｇ）。
３．９５％〜１００％エタノール（１２ｍＬ）をバイアルに添加し、次いで、バイアルを密閉し、下記のマイクロ波条件を施した：
温度＝１５０℃；ラン時間＝３０分；事前撹拌＝３０秒；撹拌速度＝９００ｒｐｍ；吸収＝正常
注：分析によって、この規模では脱炭酸が完了しなかいことが明らかとなったので、脱炭酸のための時間を３０分に増やした。
４．脱炭酸後にすべての２０ｍＬバイアルを合わせ、懸濁液を濾過し、濾液及び植物繊維を別々に収集した（第１のバッチ）。
５．次いで、濾液を３５℃で濃縮し、次いで、エタノールを使用して２０ｍＬバイアルに移し、再び３５℃で濃縮し、秤量し、冷蔵庫に貯蔵した。
６．脱炭酸を２連で行った。
【０２５１】
[00251]脱ろう手順：
１．前記と同じ
【０２５２】
[00252]
【表２３】
2019524655.tif 000026
【０２５３】
[00253]
【表２４】
2019524655.tif 000027
（Ｂ）一般手順（約７．５ｇバッチ；細断前）：
１．乾燥植物原料を秤量し、ラボラトリーブレンダーを１８，０００ｒｐｍで１０秒間にわたって使用して細断した。
２．圧潰された植物原料を再秤量し、撹拌棒と共に６×２０ｍＬマイクロ波バイアルに移した（バイアル当たり植物線維約１．２ｇ）。
３．上記（Ａ）のステップ３〜６を参照されたい。
【０２５４】
[00254]脱ろう手順：
１．前記と同じ
【０２５５】
[00255]
【表２５】
2019524655.tif 000028
【０２５６】
[00256]
【表２６】
2019524655.tif 000029
（Ｃ）一般手順（約４．０及び７．０ｇバッチ；細断前）：
１．乾燥植物原料を秤量し、ラボラトリーブレンダーを１８，０００ｒｐｍで１０秒間にわたって使用して細断した。
２．圧潰された植物原料を再秤量し、撹拌棒と共に２０ｍＬマイクロ波バイアルに移した（バイアル当たり植物線維約１．２ｇ）。
３．約４．０ｇバッチについては、上記（Ａ）のステップ３〜５を参照されたい。
４．約７．０ｇバッチについては、上記（Ａ）のステップ３〜５を参照されたい。
【０２５７】
[00257]脱ろう手順：
１．前記と同じ
【０２５８】
[00258]
【表２７】
2019524655.tif 000030
【０２５９】
[00259]
【表２８】
2019524655.tif 000031
【０２６０】
[00260]結果のまとめ：大麻の３．７５グラム規模のバッチでの抽出及び脱炭酸は成功した。
【０２６１】
[00261]実験９：エタノールを用いてのより大規模なマイクロ波支援抽出（ＭＡＥ）及び脱ろう
１．乾燥植物原料を秤量し（バッチ当たり約７．５ｇ）、ラボラトリーブレンダーを１８，０００ｒｐｍで１０秒間にわたって使用して細断した。
２．圧潰された植物原料を再秤量し、撹拌棒と共に６×２０ｍＬマイクロ波バイアルに移した（バイアル当たり植物線維約１．２ｇ）。
３．９５％〜１００％エタノール（１２ｍＬ）をバイアルに添加し、次いで、バイアルを密閉し、下記のマイクロ波条件を施した：
温度＝１５０℃；ラン時間＝３０分；事前撹拌＝３０秒；撹拌速度＝９００ｒｐｍ；吸収＝正常
４．脱炭酸後に３×２０ｍＬバイアルを合わせ、懸濁液を濾過し、濾液及び植物繊維を別々に収集した。
５．次いで、濾液を３５℃で濃縮し、次いで、エタノールを使用して２０ｍＬバイアルに移し、再び３５℃で濃縮し、秤量し、冷蔵庫に貯蔵した。
６．樹脂をエタノール（１０ｍＬ／ｇ）に溶解した。
７．抽出物溶液を含有するバイアルを、ドライアイス／アセトン浴を使用して４時間にわたって−７５℃に冷却した。
８．溶液を事前秤量したシリンジフィルターで２０ｍＬバイアル内で濾過した。
フィルターの仕様：Millex（登録商標）−ＧＶ（滅菌）、
Low Protein Binding Durapore（登録商標）（ＰＶＤＦ）メンブレン；
空孔サイズ０．２２μｍ；
直径３３ｍｍ。
９．フィルターを、ドライアイス／アセトン浴を使用して５分間にわたって−７５℃で冷却しておいたエタノールで洗浄した。
１０．濾液を３５℃で濃縮し、２日間にわたって４０℃（水浴によって）で真空乾燥し、次いで、抽出物を秤量した。
１１．換気フード内で２〜３日間にわたって乾燥した後に、シリンジフィルターを秤量した。
【０２６２】
[00262]結果を下の表２９に示す。
【０２６３】
[00263]
【表２９】
2019524655.tif 000032
【０２６４】
[00264]結果のまとめ：大麻抽出及び脱炭酸の７．５ｇ大規模バッチは成功した。これらの実験は、本開示の方法がばらつきなくカンナビノイドを抽出及び脱炭酸し、商業的規模で使用され得ることを実証している。
【０２６５】
[00265]実験１０：脱ろう
【０２６６】
[00266]脱ろうは、ろう及び他の部分的に可溶性の物質を０±１０℃の温度範囲で除去するために典型的に使用される手順である。抽出物中にろうが存在しない、又はそのような疎水性分子が分解されている、及び氷浴又は零下の温度で固化する場合には、このプロセスを適用することはできない。
【０２６７】
[00267]実験１０Ａ
ろうを除去するために、１〜３週間にわたって冷蔵庫（−５℃）内に貯蔵しておいた抽出物の溶液を次のとおりに処理した：
１．溶液を、シリンジフィルターを使用して２０ｍＬバイアル内で濾過した。
フィルターの仕様：Millex（登録商標）−ＧＶ（滅菌）
Low Protein Binding Durapore（登録商標）（ＰＶＤＦ）メンブレン
空孔サイズ０．２２μｍ
直径１３ｍｍ。
２．濾液を３５℃で濃縮し、３日間にわたって４０℃で（水浴によって）真空乾燥した。
３．次いで、抽出物を再秤量した。
【０２６８】
[00268]実験１０Ｂ
１．樹脂を９５％〜１００％エタノール（１０ｍＬ／ｇ）に溶解し、４０℃で５分間にわたって水浴内で加熱した
２．抽出物溶液を含有するバイアルを、ドライアイス／アセトン浴を使用して３〜３．７５時間にわたって−７５℃に冷却した。
３．溶液を、事前秤量したシリンジフィルターで２０ｍＬバイアル内で濾過した（フィルター仕様については上記を参照されたい）；フィルターをドライアイス／アセトン浴を使用して５分間にわたって−７５℃で冷却しておいたエタノールで洗浄した。
４．濾液を３５℃で濃縮し、抽出物を秤量した。
５．換気フード内で２〜３日間にわたって乾燥した後に、シリンジフィルターを秤量した。
【０２６９】
[00269]結果を下の表３０ａ及びｂに示す。
【０２７０】
[00270]
【表３０】
2019524655.tif 000033
【０２７１】
[00271]
【表３１】
2019524655.tif 000034
【０２７２】
[00272]下の表３１ａ及びｂは、脱ろう方法前及びその後に単離された植物原料１グラム当たりの抽出物中のカンナビノイドの量（ミリグラム）を示している。
【０２７３】
[00273]
【表３２】
2019524655.tif 000035
【０２７４】
[00274]
【表３３】
2019524655.tif 000036
【０２７５】
[00275]結果のまとめ：抽出物の脱ろうは、抽出物からのろうの除去に成功した。
【０２７６】
[00276]実験１１：脱炭酸前及びその後の医療用大麻の化学作用
【０２７７】
[00277]方法１
【０２７８】
[00278]抽出：乾燥植物原料（１ｇ）を秤量し、乳鉢に移し、乳棒を使用して細断した。次いで、圧潰された植物原料を１０ｍＬ容器に移し、超臨界ＣＯ２を溶媒Ａとして、及びエタノールを溶媒Ｂとして用いる超臨界流体抽出（ＳＦＥ）を施した。フォトダイオードアレイ検出器を、２００〜６００ｎｍの範囲の波長をモニターするように設定し、逆圧調節器を１２ＭＰａに設定した。使用したＳＦＥ条件は：流速＝１０ｍＬ／分（ＣＯ２及びスレイブポンプ（slave pump））及び１ｍＬ／分（補給ポンプ）；温度＝２５℃；勾配：１００％Ａ〜５０％Ａ（０．１〜２５分）、１００％Ｂ（２５〜２６分）及び１００％Ａ（２６〜３０分）であった。方法が完了したら、すべての画分を合わせ、減圧下で濃縮乾固して（２５℃で）、緑色の粘着性の樹脂０．２８ｇを得た。これを、さらなる後処理のために使用し、分析した。
【０２７９】
[00279]活性化：大麻抽出物に、マイクロ波を使用しての加熱を施すことによって、フィトカンナビノイドの活性化を行った。５ｍＬサイズのマイクロ波バイアルに、エタノール（２ｍＬ）に溶解した大麻抽出物（２７．７２ｍｇ）を装入した。バイアルを密閉し、圧力容器内での１０分間にわたる１５０℃での加熱を施して、緑色の粘着性の抽出物を得た。これを３５℃で濃縮乾固して、活性化大麻抽出物を樹脂（２１．２ｍｇ）として得た。
【０２８０】
[00280]図２８Ａ及び２８Ｂは、大麻抽出物の脱炭酸前（Ａ）及びその後（Ｂ）の、さらにはそれらの対応する化合物群の質量スペクトルで見られる選択シグナルの概観を示している。太字のシグナルは、カンナビノイド生合成経路で同定されている化合物である。
【０２８１】
[00281]表３２。株Ｉの大麻抽出物の脱炭酸後の化学組成の潜在的変化。左側のカラムは、超臨界流体抽出（ＳＦＥ）によって得られる大麻抽出物中に存在するが、脱炭酸樹脂中には存在しない潜在的な化合物を示している。次いで、この抽出物に、マイクロ波技術を使用する加熱条件を施し、右側のカラムは、本開示に記載のマイクロ波技術を使用する前には大麻抽出物中に存在しなかった、同定された新たな化学物質を示している。
【０２８２】
[00282]
【表３４】
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【０２８３】
[00283]閉鎖系マイクロ波抽出は、カンナビノイドの同時の抽出及び脱炭酸をもたらした。天然大麻抽出物では、６３種の化合物が観察され得（図２８Ａ）、脱炭酸大麻抽出物では、最高２２種の新たな化合物が存在し得た（表３２）。樹脂から最高２６種の化合物が脱炭酸大麻樹脂中には存在しないが、脱炭酸ステップ前の大麻樹脂中には存在した。
【０２８４】
[00284]実験１２：溶媒非含有脱炭酸大麻樹脂
【０２８５】
[00285]一般手順
【０２８６】
[00286]脱炭酸樹脂から溶媒を除去するために、次の手順を使用する：
蒸留器又は回転蒸発器を使用して、抽出及び脱炭酸プロセスで使用された溶媒を蒸発させ、濃縮し、溶媒非含有脱炭酸樹脂を得る。溶媒の蒸発中に、周囲温度よりも高い温度を使用して、溶媒の急速な蒸発を促進する。加えて、真空を使用して、大気圧よりも低い圧力で溶媒の除去を促進してもよい。一般に、そのようなプロセスは、十分に確立されており、当業者に知られている．
【０２８７】
[00287]得られた脱炭酸大麻樹脂は、溶媒５％未満を含んでよいか、又は樹脂は、溶媒を非含有であってよい。
【０２８８】
[00288]本発明の態様又は実施形態がマーカッシュグループ又は他の選択肢グループに関して記載されている場合、本発明は、全体として列挙されているすべてのグループだけではなく、個別にそのグループの各メンバー及び主要なグループのすべての可能な亜群、また、グループのメンバーの１つ又は複数が欠けている主要なグループも包含する。本発明はまた、特許請求の範囲に記載の発明におけるグループメンバーのいずれか１つ又は複数の明白な除外も想定している。
【０２８９】
[00289]数値データが、本明細書において、範囲の形式で示されていることがある。そのような範囲の形式は単に便宜及び簡潔のために使用されており、範囲の限界として明確に列挙されている数値を含むだけでなく、各数値及び亜範囲が明確に列挙されている場合と同様に、その範囲に包含されるすべての個々の数値又は亜範囲を含むと、柔軟に解釈されるべきであることは理解されるべきである。例えば、約１〜約４．５の数値範囲は、１〜約４．５の明確に列挙された限界だけを含むのではなく、２、３、４などの個々の数値、及び１〜３、２〜４などの亜範囲も含むと解釈されるべきである。同じ原理が、「約４．５未満」などの１つのみの数値が挙げられている範囲にも当てはまり、これは、上記で挙げられた値及び範囲のすべてを含むと解釈されるべきである。さらに、そのような解釈は、範囲の幅又は記載されている特徴にかかわらず、当てはめられるべきである。
【０２９０】
[00290]上述の開示を、明確さ及び理解のためにやや詳細に記載してきたが、本開示を読むことで、添付の請求項における本開示の真の範囲から逸脱することなく、形態及び詳細を様々に変更することができることは、当業者には分かるであろう。
【０２９１】
[00291]それぞれの個別の刊行物、特許又は特許出願が具体的に、かつ個別に、その全体で参照によって本明細書に組み込まれていると示されている場合と同程度まで、すべての刊行物、特許、及び特許出願は、その全体で参照によって本明細書に組み込まれる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【国際調査報告】
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