(57)【要約】  本発明は、Ｂ細胞抗原に結合するキメラ抗原受容体および腫瘍抗原に結合するキメラ抗原受容体を含む細胞の投与により、ここに記載する腫瘍抗原の発現と関係する疾患を処置するための組成物および方法を提供する。
2019513347.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
各々抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含む第一キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)および第二ＣＡＲを含む細胞であって、ここで、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインがＢ細胞抗原に結合し、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインがＢ細胞抗原以外の腫瘍抗原に結合し、場合により、Ｂ細胞抗原およびＢ細胞抗原以外の腫瘍抗原は同じ細胞に発現されないものである、細胞。
【請求項２】
第二ＣＡＲが
(ａ)固形腫瘍抗原；
(ｂ)骨髄腫瘍抗原；または
(ｃ)Ｂ細胞系譜ではない血液腫瘍の抗原
に結合する、請求項１に記載の細胞。
【請求項３】
該Ｂ細胞抗原が、ＣＤ５、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、ＣＤ１３５、ＣＤ１３８、ＣＤ１７９、ＣＤ２６９、Ｆｌｔ３、ＲＯＲ１、ＢＣＭＡ、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＣＳ−１、ＣＸＣＲ４、５、７、ＩＬ−７／３Ｒ、ＩＬ−７／４／３ＲおよびＩＬ−４Ｒからなる群から選択される、請求項１または２に記載の細胞。
【請求項４】
該Ｂ細胞抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＢＣＭＡ、ＣＳ−１およびＣＤ１３８からなる群から選択される、請求項３に記載の細胞。
【請求項５】
該Ｂ細胞抗原がＢＣＭＡである、請求項３に記載の細胞。
【請求項６】
該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインが１２または１３に挙げる重鎖結合ドメインアミノ酸配列の何れかの重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)を含む、請求項５に記載の細胞。
【請求項７】
該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインがさらに表１２または１３に挙げる軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の何れかの軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)を含む、請求項６に記載の細胞。
【請求項８】
該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインが
(ｉ)表１２または１３に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列；
(ii)表１２または１３に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０または１０を超えないアミノ酸配列；または
(iii)表１２または１３に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項５〜７の何れかに記載の細胞。
【請求項９】
該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインが
(ｉ)表１２または１３に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列；
(ii)表１２または１３に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０または１０を超えないアミノ酸配列；または
(iii)表１２または１３に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項５〜８の何れかに記載の細胞。
【請求項１０】
該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインが表１２または１３に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列および表１２または１３に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項５〜９の何れかに記載の細胞。
【請求項１１】
該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインが配列番号３４９；配列番号３３９、配列番号３４０；配列番号３４１；配列番号３４２；配列番号３４３；配列番号３４４、配列番号３４５、配列番号３４６、配列番号３４７、配列番号３４８、配列番号３５０、配列番号３５１、配列番号３５２、配列番号３５３、配列番号４２９、配列番号４３０、配列番号４３１、配列番号４３２、配列番号４３３、配列番号４３４、配列番号４３５、配列番号４３６、配列番号４３７、配列番号４３８、配列番号４３９、配列番号４４０、配列番号４４１、配列番号４４２、配列番号４４３、配列番号４４４、配列番号４４５、配列番号４４６、配列番号４４７、配列番号４４８、配列番号４４９、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５または配列番号５６６の配列を有するポリペプチドを含む、請求項１０に記載の細胞。
【請求項１２】
該Ｂ細胞抗原がＣＤ１９である、請求項３に記載の細胞。
【請求項１３】
該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインが表６、表７または表９に挙げる重鎖結合ドメインアミノ酸配列の何れかの重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)を含む、請求項１２に記載の細胞。
【請求項１４】
該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインがさらに表６、表７または表９に挙げる軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の何れかの軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)を含む、請求項１３に記載の細胞。
【請求項１５】
該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインが
(ｉ)表６または表９に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列；
(ii)表６または表９に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０または１０を超えないアミノ酸配列；または
(iii)表６または表９に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項１２〜１４の何れかに記載の細胞。
【請求項１６】
該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインが
(ｉ)表６または表９に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列；
(ii)表６または表９に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０または１０を超えないアミノ酸配列；または
(iii)表６または表９に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項１２〜１５の何れかに記載の細胞。
【請求項１７】
該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインが表６または表９に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列および表６または表９に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項１２〜１６の何れかに記載の細胞。
【請求項１８】
該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインが配列番号８３；配列番号８４、配列番号８５；配列番号８６；配列番号８７；配列番号８８；配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５または配列番号１１２の配列を有するポリペプチドを含む、請求項１７に記載の細胞。
【請求項１９】
該第二ＣＡＲが骨髄腫瘍抗原に結合し、該骨髄腫瘍抗原がＣＤ１２３、ＣＤ３３およびＣＬＬ−１からなる群から選択される、請求項１〜１８の何れかに記載の細胞。
【請求項２０】
該第二ＣＡＲがＴ細胞リンパ腫抗原に結合する、請求項１〜１８の何れかに記載の細胞。
【請求項２１】
該第二ＣＡＲが固形腫瘍抗原に結合し、該固形腫瘍抗原がＥＧＦＲｖIII、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ−Ｏ−グリコペプチド、ｓＴｎ−Ｏ−グリコペプチド、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、ｌｅｇｕｍａｎ、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ−１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＭＡＤ−ＣＴ−２、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲベータ、ＳＳＥＡ−４、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ(例えば、ＥＲＢＢ２)、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６またはＥ７、ＭＬ−ＩＡＰ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、Ｆｏｓ関連抗原、好中球エラスターゼ、ＴＲＰ−２、ＣＹＰ１Ｂ１、精子タンパク質１７、ベータヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、サイログロブリン、ＰＬＡＣ１、ｇｌｏｂｏＨ、ＲＡＧＥ１、ＭＮ−ＣＡ  IX、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸管カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、ＮＡ−１７、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＧＦＲα４およびＭＨＣにより提示されるこれらの抗原の何れかのペプチドからなる群から選択される、請求項１〜１８の何れかに記載の細胞。
【請求項２２】
該固形腫瘍抗原がＣＬＤＮ６、メソテリンおよびＥＧＦＲｖIIIからなる群から選択される、請求項２１に記載の細胞。
【請求項２３】
該固形腫瘍抗原がＥＧＦＲｖIIIである、請求項２１に記載の細胞。
【請求項２４】
該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインが表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII重鎖結合ドメインアミノ酸配列の何れかの重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)を含む、請求項２３に記載の細胞。
【請求項２５】
該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインがさらに表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の何れかの軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)を含む、請求項２４に記載の細胞。
【請求項２６】
該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインが
(ｉ)表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列；
(ii)表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０または１０を超えないアミノ酸配列；または
(iii)表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項２３〜２５の何れかに記載の細胞。
【請求項２７】
該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインが
(ｉ)表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列；
(ii)表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０または１０を超えないアミノ酸配列；または
(iii)表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項２３〜２６の何れかに記載の細胞。
【請求項２８】
該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインが表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列および表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項２３〜２７の何れかに記載の細胞。
【請求項２９】
該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインが配列番号７１〜７９の何れかの配列を有するポリペプチドを含む、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３０】
該固形腫瘍抗原がメソテリンである、請求項２１に記載の細胞。
【請求項３１】
該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインが表２または３に挙げる重鎖結合ドメインアミノ酸配列の何れかの重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)を含む、請求項３０に記載の細胞。
【請求項３２】
該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインがさらに表２または４に挙げる軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の何れかの軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)を含む、請求項３１に記載の細胞。
【請求項３３】
該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインが
(ｉ)表２に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列；
(ii)表２に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０または１０を超えないアミノ酸配列；または
(iii)表２に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項３０〜３２の何れかに記載の細胞。
【請求項３４】
該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインが
(ｉ)表２に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列；
(ii)表２に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０または１０を超えないアミノ酸配列；または
(iii)表２に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項３０〜３３の何れかに記載の細胞。
【請求項３５】
該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインが表２に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列および表２に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項３０〜３４の何れかに記載の細胞。
【請求項３６】
該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインが配列番号４６〜７０の何れかの配列を有するポリペプチドを含む、請求項３５に記載の細胞。
【請求項３７】
該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインがｓｃＦｖの形態である、請求項１〜３６の何れかに記載の細胞。
【請求項３８】
該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインがｓｃＦｖの形態である、請求項１〜３７の何れかに記載の細胞。
【請求項３９】
該第一または該第二ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインが１以上の一次シグナル伝達ドメインを含む、請求項１〜３８の何れかに記載の細胞。
【請求項４０】
該第一ＣＡＲおよび該第二ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインが一次シグナル伝達ドメインを含む、請求項３９に記載の細胞。
【請求項４１】
該第一または該第二ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインが１以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む、請求項１〜４０の何れかに記載の細胞。
【請求項４２】
該第一ＣＡＲおよび該第二ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインが１以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む、請求項４１に記載の細胞。
【請求項４３】
一次シグナル伝達ドメインがＣＤ３ゼータ刺激ドメインを含む、請求項３９〜４２の何れかに記載の細胞。
【請求項４４】
該共刺激シグナル伝達ドメインがＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ(ＣＤ１３７)、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＡＭ−１、リンパ球機能関連抗原−１(ＬＦＡ−１)、ＣＤ２、ＣＤＳ、ＣＤ７、ＣＤ２８７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３およびＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される共刺激タンパク質の細胞内ドメインである、請求項４１〜４３の何れかに記載の細胞。
【請求項４５】
該第一および該第二ＣＡＲの両方の共刺激ドメインが４−１ＢＢの細胞内ドメインを含む、請求項４４に記載の細胞。
【請求項４６】
該共刺激ドメインの１以上がＣＤ２８の細胞内ドメインを含む、請求項４１〜４５の何れかに記載の細胞。
【請求項４７】
該第一または第二ＣＡＲが２共刺激ドメイン：
(１)４−１ＢＢ共刺激ドメインおよびＣＤ２８共刺激ドメイン；
(２)４−１ＢＢ共刺激ドメインおよびＩＣＯＳ共刺激ドメイン；または
(３)ＣＤ２８共刺激ドメインおよびＩＣＯＳ共刺激ドメイン
を含む、請求項４１〜４５の何れかに記載の細胞。
【請求項４８】
該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインがＢＣＭＡに結合し、第一ＣＡＲが配列番号９４９、配列番号９５０、配列番号９５１、配列番号９５２、配列番号９５３、配列番号９５４、配列番号９５５、配列番号９５６、配列番号９５７、配列番号９５８、配列番号９５９、配列番号９６０、配列番号９６１、配列番号９６２、配列番号９６３、配列番号９７９、配列番号９８０、配列番号９８１、配列番号９８２、配列番号９８３、配列番号９８４、配列番号９８５、配列番号９８６、配列番号９８７、配列番号９８８、配列番号９８９、配列番号９９０、配列番号９９１、配列番号９９２、配列番号９９３、配列番号９９４、配列番号９９５、配列番号９９６、配列番号９９７、配列番号９９８および配列番号９９９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項１〜１１および１９〜４７の何れかに記載の細胞。
【請求項４９】
第一ＣＡＲの抗原結合ドメインがＣＤ１９に結合し、第一ＣＡＲが配列番号２６９、配列番号２７０、配列番号２７１、配列番号２７２、配列番号２７３、配列番号２７４、配列番号２７５、配列番号２７６、配列番号２７７、配列番号２７８、配列番号２７９、配列番号２８０および配列番号２８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項１〜４および１２〜４７の何れかに記載の細胞。
【請求項５０】
該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインがＥＧＦＲｖIIIに結合し、第二ＣＡＲが配列番号１０４３、配列番号１０４９、配列番号１０５５、配列番号１０６１、配列番号１０６７、配列番号１０７３、配列番号１０７９、配列番号１０８５、配列番号１０９０および配列番号１０９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項１〜１８、２１〜２９および３７〜４９の何れかに記載の細胞。
【請求項５１】
該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインがメソテリンに結合し、第二ＣＡＲが配列番号２８２、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２８５、配列番号２８６、配列番号２８７、配列番号２８８、配列番号２８９、配列番号２９０、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号２９６、配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、配列番号３００、配列番号３０１、配列番号３０２、配列番号３０３、配列番号３０４、配列番号３０５および配列番号３０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項１〜１８、２１、２２および３０〜４９の何れかに記載の細胞。
【請求項５２】
該細胞が骨髄腫瘍またはＢ細胞系譜ではない血液腫瘍を有すると診断された患者に由来する、請求項１〜２０および３７〜４９の何れかに記載の細胞。
【請求項５３】
該患者がＣＤ１２３、ＣＤ３３およびＣＬＬ−１からなる群から選択される抗原を発現する骨髄腫瘍を有すると診断されている、請求項５２に記載の細胞。
【請求項５４】
該細胞が固形腫瘍を有すると診断された患者に由来する、請求項１〜１８、２１〜５１の何れかに記載の細胞。
【請求項５５】
該患者がＥＧＦＲｖIII、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ  Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ−１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲベータ、ＳＳＥＡ−４、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６またはＥ７、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ｇｌｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰおよびＧＦＲα４からなる群から選択される抗原を発現する固形腫瘍を有すると診断されている、請求項５４に記載の細胞。
【請求項５６】
該細胞がヒト細胞であり、腫瘍を有すると診断された患者由来ではない、請求項１〜５１の何れかに記載の細胞。
【請求項５７】
該細胞がＴ細胞、ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞、細胞毒性Ｔリンパ球(ＣＴＬ)、腫瘍浸潤リンパ球(ＴＩＬ)または制御性Ｔ細胞である、請求項１〜５６の何れかに記載の細胞。
【請求項５８】
哺乳動物に請求項１〜１８、２１〜５１および５４〜５７の何れかに記載の細胞の有効量を投与することを含む、哺乳動物における、固形腫瘍細胞に対するＴ細胞介在免疫応答を刺激する方法。
【請求項５９】
哺乳動物に請求項１〜１８、２１〜５１および５４〜５７の何れかに記載の細胞の有効量を投与することを含む、哺乳動物における抗固形腫瘍免疫を提供する方法。
【請求項６０】
請求項１〜１８、２１〜５１および５４〜５７の何れかに記載の細胞の有効量を投与することを含む、固形腫瘍抗原の発現と関係する疾患を有する哺乳動物を処置する方法。
【請求項６１】
請求項１〜１９、３７〜４９、５２、５３および５６〜５７の何れかに記載の細胞の有効量を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物における骨髄腫瘍細胞に対するＴ細胞介在免疫応答を刺激する方法。
【請求項６２】
請求項１〜１９、３７〜４９、５２、５３および５６〜５７の何れかの何れかに記載の細胞の有効量を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物における抗骨髄腫瘍免疫を提供する方法。
【請求項６３】
請求項１〜１９、３７〜４９、５２、５３および５６〜５７の何れかに記載の細胞の有効量を投与することを含む、骨髄腫瘍抗原の発現と関係する疾患を有する哺乳動物を処置する方法。
【請求項６４】
該固形腫瘍がＥＧＦＲｖIII、メソテリン、ＣＳ−１、ＧＤ２、Ｔｎ  Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ−１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲベータ、ＳＳＥＡ−４、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６またはＥ７、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ｇｌｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰおよびＧＦＲα４からなる群から選択される抗原を発現する、請求項５８〜６０の何れかに記載の方法。
【請求項６５】
該哺乳動物が神経膠芽腫、卵巣癌、肺癌、前立腺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、乳癌、腺癌または中皮腫として特徴付けられる腫瘍を有する、請求項５８〜６０および６４の何れかに記載の方法。
【請求項６６】
該骨髄腫瘍がＣＤ１２３、ＣＤ３３およびＣＬＬ−１からなる群から選択される抗原を発現する、請求項６１〜６３の何れかに記載の方法。
【請求項６７】
該哺乳動物が急性骨髄白血病(ＡＭＬ)、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病(Ｂ細胞急性リンパ系白血病、ＢＡＬＬ)、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病(Ｔ細胞急性リンパ系白血病(ＴＡＬＬ))、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄白血病(ＣＭＬ)、骨髄異形成症候群、形質細胞骨髄腫またはそれらの組み合わせとして特徴付けられる腫瘍を有する、請求項６１〜６３および６６の何れかに記載の方法。
【請求項６８】
該細胞が処置哺乳動物に自己である、請求項５８〜６７の何れかに記載の方法。
【請求項６９】
該細胞が処置哺乳動物に同種である、請求項５８〜６７の何れかに記載の方法。
【請求項７０】
該哺乳動物がヒトである、請求項５８〜６９の何れかに記載の方法。
【請求項７１】
該細胞の該投与が、該腫瘍細胞の部分的または完全排除をもたらし、その後、該第一ＣＡＲを欠く以外同一細胞と比較して、高いレベルでまたは長い時間、該対象において持続する、請求項５８〜７０の何れかに記載の方法。
【請求項７２】
該哺乳動物が該細胞投与の前に、同時にまたは後に、リンパ球除去療法が適用される、請求項５８〜７１の何れかに記載の方法。
【請求項７３】
該哺乳動物が、該細胞の投与の前にまたは同時に、リンパ球除去療法が適用されない、請求項５８〜７１の何れかに記載の方法。
【請求項７４】
請求項１〜５１の何れかに記載の第一ＣＡＲおよび第二ＣＡＲをコードする、核酸。
【請求項７５】
該第一ＣＡＲおよび該第二ＣＡＲの配列が独立的リボソーム侵入部位、プロモーターエレメントまたはＴ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２ＡまたはＦ２Ａエレメントをコードする配列により離されている、請求項７４に記載の核酸。
【請求項７６】
請求項７４または７５に記載の核酸を含む、ベクター。
【請求項７７】
レンチウイルスベクターである、請求項７６に記載のベクター。
【請求項７８】
請求項１〜５１の何れかに記載の第一ＣＡＲをコードする第一核酸および第二ＣＡＲをコードする第二核酸を含む、組成物。
【請求項７９】
該第一および該第二核酸が別々のベクターに含まれる、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８０】
該ベクターがレンチウイルスベクターである、請求項７９に記載の組成物。
【請求項８１】
請求項１〜５７の何れかに記載の細胞を産生する方法であって、該細胞に請求項７４〜７５の何れかに記載の核酸、請求項７６〜７７の何れかに記載のベクターまたは請求項７８〜８０の何れかに記載の組成物を導入することを含む、方法。
【請求項８２】
請求項１〜５７の何れかに記載の細胞を産生する方法であって、該細胞に、請求項１〜５１の何れかに記載の第一ＣＡＲをコードする核酸を含む第一ベクターを導入し、該細胞に、請求項１〜５１の何れかに記載の第二ＣＡＲをコードする核酸を含む第二ベクターを導入することを含む、方法。
【請求項８３】
該第一ベクターおよび該第二ベクターの導入が同時である、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
該第一ベクターおよび該第二ベクターの導入が逐次的である、請求項８２に記載の方法。
【請求項８５】
請求項１〜５１の何れかに記載の第一ＣＡＲおよび請求項１〜５１の何れかに記載の第二ＣＡＲをコードする核酸を含む、細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１６年３月４日出願の米国特許仮出願６２／３０３,４６６号に基づく優先権を主張する。この出願の全内容を、引用により本明細書に包含させる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、一般に、Ｂ細胞を標的とするキメラ抗原受容体(ＣＡＲ)を発現するように操作された、およびＢ細胞抗原以外の腫瘍抗原を発現する細胞、例えば、固形腫瘍抗原、骨髄腫瘍抗原を発現する細胞またはＢ細胞起源ではない血液腫瘍の抗原を発現する細胞を標的とするＣＡＲを発現するように操作された、免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)の、該腫瘍抗原の発現と関係する疾患の処置のための使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
免疫療法は、腫瘍処置のための有望なアプローチである。腫瘍により発現される抗原を標的とするキメラ抗原受容体(ＣＡＲ)を発現する細胞での免疫療法は、腫瘍に対する急速かつ持続的免疫応答を誘発できる標的療法の利点を有する。ＣＡＲ療法は、Ｂ細胞悪性腫瘍などの数種の血液癌の処置において臨床で有望な結果が示されている(例えば、Sadelain et al., Cancer Discovery 3:388-398 (2013)参照)。マウス由来ＣＡＲＴ１９(すなわち、“ＣＴＬ０１９”)の臨床結果では、ＣＬＬを有する患者および小児におけるＡＬＬで完全寛解確立の見込みが示されている(例えば、Kalos et al., Sci Transl Med 3:95ra73 (2011), Porter et al., NEJM 365:725-733 (2011), Grupp et al., NEJM 368:1509-1518 (2013)参照)。しかしながら、他の癌の処置のためのＣＡＲ療法を探索する試験では、一部、インビボでのＣＡＲ発現細胞の限定的な生存および増殖により、有効性が安定しないことが示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
それ故に、患者において有効性が増強された、例えば、増殖が増強されたまたは生存が延長されたＣＡＲ細胞療法に対する要請が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
発明の概要
本発明は、少なくとも一部、第一キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)および第二ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞)を使用し、例えば、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞療法の有効性(例えば、患者における腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞の生存性および／または増殖)を増強するために、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインはＢ細胞抗原に結合し、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインがＢ細胞抗原以外の腫瘍抗原に結合して、対象における腫瘍抗原の発現と関係する疾患、例えば、癌を処置するための方法および組成物に関する。理論に拘束されることを意図しないが、Ｂ細胞抗原を標的とするＣＡＲおよび腫瘍抗原を標的とするＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞での処置は、対象における腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞の抗腫瘍有効性を、例えば、腫瘍ターゲティングＣＡＲのみを発現する(例えば、Ｂ細胞抗原を標的とするＣＡＲを発現しない)免疫エフェクター細胞と比較して、該ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞の増殖の増加および／または該ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞のインビボ生存性の延長の１以上により、増強する。ある態様において、Ｂ細胞抗原とＢ細胞抗原以外の腫瘍抗原は同じ細胞に発現されない(例えば、Ｂ細胞抗原は、腫瘍抗原を発現する細胞、例えば、腫瘍細胞に発現されない)。
【０００６】
ある態様において、本発明は、各々抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含む第一キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)および第二ＣＡＲを含み、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインがＢ細胞抗原に結合し、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインがＢ細胞抗原以外の腫瘍抗原に結合する、細胞を提供する。本発明のある態様において、第一ＣＡＲにより標的とされるＢ細胞抗原および第二ＣＡＲにより標的とされるＢ細胞抗原以外の腫瘍抗原は同じ細胞に発現されない。
【０００７】
ある実施態様において、第二ＣＡＲは、(ａ)固形腫瘍抗原、(ｂ)骨髄腫瘍抗原または(ｃ)Ｂ細胞系譜ではない血液腫瘍の抗原に結合する。
【０００８】
ある実施態様において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ５、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、ＣＤ１３５、ＣＤ１３８、ＣＤ１７９、ＣＤ２６９、Ｆｌｔ３、ＲＯＲ１、ＢＣＭＡ、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＣＳ−１、ＣＸＣＲ４、５、７、ＩＬ−７／３Ｒ、ＩＬ−７／４／３ＲおよびＩＬ−４Ｒからなる群から選択される。
【０００９】
ある実施態様において、Ｂ細胞抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＢＣＭＡ、ＣＳ−１およびＣＤ１３８からなる群から選択される。
【００１０】
ある態様において、細胞は、ＢＣＭＡであるＢ細胞抗原に結合する抗原結合ドメインを含む第一キメラ抗原受容体を含む。ある実施態様において、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインは、表１２または１３に挙げる重鎖結合ドメインアミノ酸配列の何れかの重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)を含む。ある実施態様において、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインは、表１２または１３に挙げる軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の何れかの軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)をさらに含む。ある実施態様において、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインは、(ｉ)表１２または１３に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列、(ii)表１２または１３に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０または１０を超えないアミノ酸配列または(iii)表１２または１３に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインは、(ｉ)表１２または１３に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列、(ii)表１２または１３に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０または１０を超えないアミノ酸配列または(iii)表１２または１３に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインは、表１２または１３に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列および表１２または１３に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。ある実施態様において、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインは、配列番号３４９、配列番号３３９、配列番号３４０、配列番号３４１、配列番号３４２、配列番号３４３、配列番号３４４、配列番号３４５、配列番号３４６、配列番号３４７、配列番号３４８、配列番号３５０、配列番号３５１、配列番号３５２、配列番号３５３、配列番号４２９、配列番号４３０、配列番号４３１、配列番号４３２、配列番号４３３、配列番号４３４、配列番号４３５、配列番号４３６、配列番号４３７、配列番号４３８、配列番号４３９、配列番号４４０、配列番号４４１、配列番号４４２、配列番号４４３、配列番号４４４、配列番号４４５、配列番号４４６、配列番号４４７、配列番号４４８、配列番号４４９、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５または配列番号５６６の配列を有するポリペプチドを含む。
【００１１】
他の態様において、細胞は、ＣＤ１９であるＢ細胞抗原に結合する抗原結合ドメインを含む第一キメラ抗原受容体を含む。ある実施態様において、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインは、表６、表７または表９に挙げる重鎖結合ドメインアミノ酸配列の何れかの重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)を含む。ある実施態様において、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインは、表６、表７または表９に挙げる軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の何れかの軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)をさらに含む。ある実施態様において、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインは、(ｉ)表６、表８または表９に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列、(ii)表６または表９に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０または１０を超えないアミノ酸配列または(iii)表６、表８または表９に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインは、(ｉ)表６、表７または表９に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列、(ii)表６、表７または表９に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０または１０を超えないアミノ酸配列または(iii)表６、表７または表９に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインは、表６、表８または表９に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列および表６、表７または表９に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。ある実施態様において、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインは、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５または配列番号１１２の配列を有するポリペプチドを含む。
【００１２】
他の態様(前記態様および実施態様の何れかを含む)において、細胞は、骨髄腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメインを含む第二ＣＡＲを含み、ここで、該骨髄腫瘍抗原は、ＣＤ１２３、ＣＤ３３およびＣＬＬ−１からなる群から選択される。
【００１３】
他の態様(前記態様および実施態様の何れかを含む)において、細胞は、Ｔ細胞リンパ腫抗原に結合する抗原結合ドメインを含む第二ＣＡＲを含む。
【００１４】
他の態様(前記態様および実施態様の何れかを含む)において、細胞は、固形腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメインを含む第二ＣＡＲを含み、例えば、ここで、該固形腫瘍抗原は、ＥＧＦＲｖIII、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ−Ｏ−グリコペプチド、ｓＴｎ−Ｏ−グリコペプチド、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、ｌｅｇｕｍａｎ、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ−１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＭＡＤ−ＣＴ−２、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲベータ、ＳＳＥＡ−４、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ(例えば、ＥＲＢＢ２)、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６またはＥ７、ＭＬ−ＩＡＰ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、Ｆｏｓ関連抗原、好中球エラスターゼ、ＴＲＰ−２、ＣＹＰ１Ｂ１、精子タンパク質１７、ベータヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、サイログロブリン、ＰＬＡＣ１、ｇｌｏｂｏＨ、ＲＡＧＥ１、ＭＮ−ＣＡ  IX、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸管カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、ＮＡ−１７、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＧＦＲα４およびＭＨＣにより提示されるこれらの抗原の何れかのペプチドからなる群から選択される。ある実施態様において、固形腫瘍抗原は、ＣＬＤＮ６、メソテリンおよびＥＧＦＲｖIIIからなる群から選択される。
【００１５】
ある態様において、細胞は、ＥＧＦＲｖIIIに結合する抗原結合ドメインを含む第二キメラ抗原受容体を含む。ある実施態様において、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインは、表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII重鎖結合ドメインアミノ酸配列の何れかの重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)を含む。ある実施態様において、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインは、表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の何れかの軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)をさらに含む。ある実施態様において、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインは、(ｉ)表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列、(ii)表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０または１０を超えないアミノ酸配列または(iii)表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインは、(ｉ)抗ＥＧＦＲｖIII重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列、(ii)表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０または１０を超えないアミノ酸配列または(iii)表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインは、表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列および表５に挙げる抗ＥＧＦＲｖIII重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。ある実施態様において、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインは、配列番号７１〜７９の何れかの配列を有するポリペプチドを含む。
【００１６】
ある態様において、細胞は、メソテリンに結合する抗原結合ドメインを含む第二キメラ抗原受容体を含む。ある実施態様において、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインは、表２または３に挙げる重鎖結合ドメインアミノ酸配列の何れかの重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)を含む。ある実施態様において、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインは、表２または４に挙げる軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の何れかの軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)をさらに含む。ある実施態様において、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインは、(ｉ)表２に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列、(ii)表２に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０または１０を超えないアミノ酸配列または(iii)表２に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインは、(ｉ)表２に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列、(ii)表２に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０または１０を超えないアミノ酸配列または(iii)表２に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインは、表２に挙げる軽鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列および表２に挙げる重鎖可変領域の何れかのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。ある実施態様において、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインは、配列番号４６〜７０の何れかの配列を有するポリペプチドを含む。
【００１７】
前記態様および実施態様のすべてを含む何れかの実施態様において、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖの形態である。
【００１８】
前記態様および実施態様のすべてを含む何れかの実施態様において、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖの形態である。
【００１９】
前記態様および実施態様のすべてを含む何れかの実施態様において、該第一または該第二ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ここに記載するとおり、１以上の一次シグナル伝達ドメインを含む。
【００２０】
前記態様および実施態様のすべてを含む何れかの実施態様において、該第一ＣＡＲおよび該第二ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ここに記載するとおり、一次シグナル伝達ドメインを含む。
【００２１】
前記態様および実施態様のすべてを含む何れかの実施態様において、該第一または該第二ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ここに記載するとおり、１以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。
【００２２】
前記態様および実施態様のすべてを含む何れかの実施態様において、該第一ＣＡＲおよび該第二ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、例えば、ここに記載するとおり、１以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。
【００２３】
前記態様および実施態様のすべてを含む何れかの実施態様において、一次シグナル伝達ドメインは、例えば、ここに記載するとおり、ＣＤ３ゼータ刺激ドメインを含む。
【００２４】
前記態様および実施態様のすべてを含む何れかの実施態様において、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ(ＣＤ１３７)、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＡＭ−１、リンパ球機能関連抗原−１(ＬＦＡ−１)、ＣＤ２、ＣＤＳ、ＣＤ７、ＣＤ２８７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、Ｂ７−Ｈ３およびＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される共刺激タンパク質の細胞内ドメインである。
【００２５】
ここに記載するすべての方法および組成物の実施態様において、第一ＣＡＲ分子、第二ＣＡＲ分子または第一ＣＡＲ分子と第二ＣＡＲ分子の両方の膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖またはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７およびＣＤ１５４からなる群から選択されるタンパク質からの膜貫通ドメインを含む。また、いくつかの実施態様において、第一ＣＡＲ、第二ＣＡＲまたは第一ＣＡＲと第二ＣＡＲ両方の膜貫通ドメインは、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１２のアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０、１０または５を超えないアミノ酸配列または配列番号１２のアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有する配列を含む。
【００２６】
ある実施態様において、第一ＣＡＲ分子と第二ＣＡＲ分子の膜貫通ドメインは同一である。他の実施態様において、第一ＣＡＲ分子と第二ＣＡＲ分子の膜貫通ドメインは異なる。
【００２７】
ここに記載する方法および組成物の何れかの実施態様において、第一ＣＡＲ分子の抗原結合ドメイン、第二ＣＡＲ分子の抗原結合ドメインまたは第一ＣＡＲ分子および第二ＣＡＲ分子両方の抗原結合ドメインは、ヒンジ領域を経て膜貫通ドメインに連結される。ある実施態様において、ヒンジ領域は、配列番号４またはそれと９５〜９９％同一性の配列を含む。
【００２８】
ここに記載する方法および組成物の何れかの実施態様において、第一ＣＡＲ分子、第二ＣＡＲ分子または第一ＣＡＲ分子と第二ＣＡＲ分子の両方の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ性活性化分子(ＳＬＡＭタンパク質)、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１(ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８)、４−１ＢＢ(ＣＤ１３７)、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ(ＣＤ２７８)、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ(ＬＩＧＨＴＲ)、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０(ＫＬＲＦ１)、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１(ＣＤ２２６)、ＳＬＡＭＦ４(ＣＤ２４４、２Ｂ４)、ＣＤ８４、ＣＤ９６(Ｔａｃｔｉｌｅ)、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９(ＣＤ２２９)、ＣＤ１６０(ＢＹ５５)、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００(ＳＥＭＡ４Ｄ)、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６(ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８)、ＳＬＡＭ(ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３)、ＢＬＡＭＥ(ＳＬＡＭＦ８)、ＳＥＬＰＬＧ(ＣＤ１６２)、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａおよびＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択されるタンパク質から得た機能的シグナル伝達ドメインを含む共刺激シグナル伝達ドメインを含む。ある実施態様において、共刺激ドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列または配列番号１４のアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０、１０または５を超えないアミノ酸配列または配列番号１４のアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢの機能的シグナル伝達ドメインおよび／またはＣＤ３ゼータの機能的シグナル伝達ドメインを含む。ある実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列および／または配列番号１８もしくは配列番号２０のアミノ酸配列または配列番号１４のアミノ酸配列および／または配列番号１８もしくは配列番号２０のアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾を有するが、修飾が２０、１０または５を超えないアミノ酸配列または配列番号１４のアミノ酸配列および／または配列番号１８もしくは配列番号２０のアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは配列番号１４のアミノ酸配列および配列番号１８または配列番���２０のアミノ酸配列を含み、ここで、これら細胞内シグナル伝達ドメインを含むアミノ酸配列は、同一フレームにかつ単一ポリペプチド鎖として発現される。
【００２９】
ある実施態様において、第一ＣＡＲ分子(例えば、Ｂ細胞抗原ターゲティングＣＡＲ分子)は、例えば、ここに記載する、共刺激シグナル伝達ドメインを含むが、一次シグナル伝達ドメインを含まない細胞内シグナル伝達ドメインを含む。他の実施態様において、第一ＣＡＲ分子(例えば、Ｂ細胞抗原ターゲティングＣＡＲ分子)は、例えば、ここに記載する、共刺激シグナル伝達ドメインおよび、例えば、ここに記載する、一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【００３０】
ある実施態様において、第二ＣＡＲ分子(例えば、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲ分子)は、例えば、ここに記載する、共刺激シグナル伝達ドメインを含むが、一次シグナル伝達ドメインを含まない細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある実施態様において、第二ＣＡＲ分子(例えば、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲ分子)は、例えば、ここに記載する、一次シグナル伝達ドメインを含むが、共刺激シグナル伝達ドメインを含まない、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。他の実施態様において、第二ＣＡＲ分子(例えば、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲ分子)は、例えば、ここに記載する、共刺激シグナル伝達ドメインおよび、例えば、ここに記載する、一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【００３１】
好ましい実施態様において、第一ＣＡＲ分子(例えば、Ｂ細胞抗原ターゲティングＣＡＲ分子)は、例えば、ここに記載する、共刺激シグナル伝達ドメインを含むが、一次シグナル伝達ドメインを含まない細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第二ＣＡＲ分子(例えば、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲ分子)は、例えば、ここに記載する、共刺激シグナル伝達ドメインおよび、例えば、ここに記載する、一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【００３２】
他の好ましい実施態様において、第一ＣＡＲ分子(例えば、Ｂ細胞抗原ターゲティングＣＡＲ分子)は、例えば、ここに記載する、共刺激シグナル伝達ドメインおよび、例えば、ここに記載する、一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第二ＣＡＲ分子(例えば、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲ分子)は、例えば、ここに記載する、共刺激シグナル伝達ドメインおよび、例えば、ここに記載する、一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【００３３】
ここに記載する方法および組成物の何れかの実施態様において、第一ＣＡＲ分子、第二ＣＡＲ分子または第一ＣＡＲ分子と第二ＣＡＲ分子の両方は、配列番号２のアミノ酸配列を含むリーダー配列をさらに含む。
【００３４】
前記態様および実施態様の何れかを含む実施態様において、該第一および該第二ＣＡＲの両方の共刺激ドメインは、例えば、ここに記載する、４−１ＢＢの細胞内ドメインを含む。
【００３５】
前記態様および実施態様の何れかを含む実施態様において、該共刺激ドメインの１以上は、例えば、ここに記載する、ＣＤ２８の細胞内ドメインを含む。
【００３６】
前記態様および実施態様の何れかを含む実施態様において、第一または第二ＣＡＲは、(１)例えば、ここに記載する、４−１ＢＢ共刺激ドメインおよび(２)例えば、ここに記載する、ＣＤ２８共刺激ドメインの２共刺激ドメインを含む。
【００３７】
ある態様(ＢＣＭＡ  ＣＡＲを含む前記態様および実施態様の何れかを含む)において、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインはＢＣＭＡに結合し、第一ＣＡＲは、配列番号９４９、配列番号９５０、配列番号９５１、配列番号９５２、配列番号９５３、配列番号９５４、配列番号９５５、配列番号９５６、配列番号９５７、配列番号９５８、配列番号９５９、配列番号９６０、配列番号９６１、配列番号９６２、配列番号９６３、配列番号９７９、配列番号９８０、配列番号９８１、配列番号９８２、配列番号９８３、配列番号９８４、配列番号９８５、配列番号９８６、配列番号９８７、配列番号９８８、配列番号９８９、配列番号９９０、配列番号９９１、配列番号９９２、配列番号９９３、配列番号９９４、配列番号９９５、配列番号９９６、配列番号９９７、配列番号９９８および配列番号９９９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
【００３８】
ある態様(ＣＤ１９  ＣＡＲを含む前記態様および実施態様の何れかを含む)において、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインはＣＤ１９に結合し、第一ＣＡＲは、配列番号２６９、配列番号２７０、配列番号２７１、配列番号２７２、配列番号２７３、配列番号２７４、配列番号２７５、配列番号２７６、配列番号２７７、配列番号２７８、配列番号２７９、配列番号２８０および配列番号２８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
【００３９】
ある態様(ＥＧＦＲｖIII  ＣＡＲを含む前記態様および実施態様の何れかを含む)において、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインはＥＧＦＲｖIIIに結合し、第二ＣＡＲは、配列番号１０４３、配列番号１０４９、配列番号１０５５、配列番号１０６１、配列番号１０６７、配列番号１０７３、配列番号１０７９、配列番号１０８５、配列番号１０９０および配列番号１０９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
【００４０】
ある態様(メソテリンＣＡＲを含む前記態様および実施態様の何れかを含む)において、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインはメソテリンに結合し、第二ＣＡＲは、配列番号２８２、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２８５、配列番号２８６、配列番号２８７、配列番号２８８、配列番号２８９、配列番号２９０、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号２９６、配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、配列番号３００、配列番号３０１、配列番号３０２、配列番号３０３、配列番号３０４、配列番号３０５および配列番号３０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
【００４１】
他の態様において、本発明は、例えば、ここに記載する、Ｂ細胞抗原に結合する第一抗原結合ドメイン、例えば、ここに記載する、腫瘍抗原に結合する第二抗原結合ドメイン、例えば、ここに記載する、膜貫通ドメインおよび、例えば、ここに記載する、細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲ、例えば、二重特異性ＣＡＲ(例えば、ここに記載のとおり)を含む、細胞を提供する。ある実施態様において、第一抗原結合ドメインは、ＣＤ１９に結合し、例えば、ここに記載するＣＤ１９結合ドメインを含む。ある実施態様において、第一抗原結合ドメインは、ＢＣＭＡに結合し、例えば、ここに記載するＢＣＭＡ結合ドメインを含む。ある実施態様において、第二抗原結合ドメインは、固形腫瘍抗原、骨髄腫瘍抗原またはＢ細胞系譜ではない血液腫瘍の抗原に結合する。ある実施態様において、第二抗原結合ドメインは、例えば、ここに記載する、固形腫瘍抗原に結合する。ある実施態様において、第二抗原結合ドメインは、ＥＧＦＲｖIIIに結合する(例えば、ここに記載するＥＧＦＲｖIII結合ドメインを含む)。他の実施態様において、第二抗原結合ドメインは、メソテリンに結合する(例えば、ここに記載するメソテリン結合ドメインを含む)。ある実施態様において、ＣＡＲは、例えば、ここに記載する、ＣＤ１９に対する第一抗原結合ドメインおよび、例えば、ここに記載する、ＥＧＦＲｖIIIに対する第二抗原結合ドメインを含む。ある実施態様において、ＣＡＲは、例えば、ここに記載する、ＢＣＭＡに対する第一抗原結合ドメインおよび、例えば、ここに記載する、ＥＧＦＲｖIIIに対する第二抗原結合ドメインを含む。ある実施態様において、ＣＡＲは、例えば、ここに記載する、ＣＤ１９に対する第一抗原結合ドメインおよび、例えば、ここに記載する、メソテリンに対する第二抗原結合ドメインを含む。ある実施態様において、ＣＡＲは、例えば、ここに記載する、ＢＣＭＡに対する第一抗原結合ドメインおよび、例えば、ここに記載する、メソテリンに対する第二抗原結合ドメインを含む。ある実施態様において、ＣＡＲは、例えば、ここに記載する、ＣＤ３ｚ一次シグナル伝達ドメインおよび、例えば、ここに記載する、４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある実施態様において、ＣＡＲは、例えば、ここに記載する、ＣＤ３ｚ一次シグナル伝達ドメインおよび、例えば、ここに記載する、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインを含む、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【００４２】
ある態様(前記態様および実施態様の何れかを含む)において、細胞は、骨髄腫瘍またはＢ細胞系譜ではない血液腫瘍を有すると診断された患者に由来する。
【００４３】
ある態様(前記態様および実施態様の何れかを含む)において、患者は、ＣＤ１２３、ＣＤ３３およびＣＬＬ−１からなる群から選択される抗原を発現する骨髄腫瘍を有すると診断されている。
【００４４】
ある態様(前記態様および実施態様の何れかを含む)において、細胞は、固形腫瘍を有すると診断された患者に由来する。ある実施態様において、患者は、ＥＧＦＲｖIII、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ  Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ−１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲベータ、ＳＳＥＡ−４、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６またはＥ７、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ｇｌｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰおよびＧＦＲα４からなる群から選択される抗原を発現する固形腫瘍を有すると診断されている。
【００４５】
ある態様(前記態様および実施態様の何れかを含む)において、細胞はヒト細胞であり、かつ腫瘍を有すると診断された患者由来ではない。
【００４６】
ある態様(前記態様および実施態様の何れかを含む)において、細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞、細胞毒性Ｔリンパ球(ＣＴＬ)、腫瘍浸潤リンパ球(ＴＩＬ)または制御性Ｔ細胞である。
【００４７】
他の態様において、本発明は、哺乳動物における骨髄腫瘍細胞に対するＴ細胞介在免疫応答を刺激する方法を提供し、該方法は、ここに記載する細胞、例えば、前記態様および実施態様の何れかの細胞の有効量を哺乳動物に投与することを含む。
【００４８】
他の態様において、本発明は、哺乳動物にここに、例えば、前記態様および実施態様の何れかに記載する細胞の有効量を投与することを含む、哺乳動物における抗骨髄腫瘍免疫を提供する方法を提供する。
【００４９】
他の態様において、本発明は、骨髄腫瘍抗原の発現と関係する疾患を有する哺乳動物を処置する方法を提供し、該方法は、ここに、例えば、前記態様および実施態様の何れかに記載する細胞の有効量を投与することを含む。
【００５０】
哺乳動物における骨髄腫瘍細胞に対するＴ細胞介在免疫応答を刺激する方法、哺乳動物における抗骨髄腫瘍免疫を提供する方法および／または骨髄腫瘍抗原の発現と関係する疾患を有する哺乳動物を処置する方法が関与する態様の実施態様において、骨髄腫瘍は、ＣＤ１２３、ＣＤ３３およびＣＬＬ−１からなる群から選択される抗原を発現する。ある実施態様において、哺乳動物は、急性骨髄白血病(ＡＭＬ)、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病(Ｂ細胞急性リンパ系白血病、ＢＡＬＬ)、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病(Ｔ細胞急性リンパ系白血病(ＴＡＬＬ))、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄白血病(ＣＭＬ)、骨髄異形成症候群、形質細胞骨髄腫またはそれらの組み合わせとして特徴付けられる腫瘍を有する。
【００５１】
他の態様において、本発明は、哺乳動物における、Ｂ細胞系譜ではない血液腫瘍、例えば、Ｔ細胞リンパ腫腫瘍細胞に対するＴ細胞介在免疫応答を刺激する方法を提供し、該方法は、ここに記載する細胞、例えば、前記態様および実施態様の何れかの細胞の有効量を哺乳動物に投与することを含む。
【００５２】
他の態様において、本発明は、ここに記載する細胞、例えば、前記態様および実施態様の何れかの細胞の有効量を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物における、Ｂ細胞系譜ではない血液腫瘍に対する免疫、例えば、抗Ｔ細胞リンパ腫腫瘍免疫を提供する方法を提供する。
【００５３】
他の態様において、本発明は、Ｂ細胞系譜ではない血液腫瘍の抗原、例えば、Ｔ細胞リンパ腫腫瘍抗原の発現と関係する疾患を有する哺乳動物を処置する方法を提供し、該方法は、ここに、例えば、前記態様および実施態様の何れかに記載する細胞の有効量を投与することを含む。
【００５４】
他の態様において、本発明は、哺乳動物における、固形腫瘍細胞に対するＴ細胞介在免疫応答を刺激する方法を提供し、該方法は、ここに記載する細胞、例えば、前記態様および実施態様の何れかの細胞の有効量を哺乳動物に投与することを含む。
【００５５】
他の態様において、本発明は、ここに記載する細胞、例えば、前記態様および実施態様の何れかの細胞の有効量を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物における、抗固形腫瘍免疫を提供する方法を提供する。
【００５６】
他の態様において、本発明は、固形腫瘍抗原の発現と関係する疾患を有する哺乳動物を処置する方法を提供し、該方法は、ここに、例えば、前記態様および実施態様の何れかに記載する細胞の有効量を投与することを含む。
【００５７】
哺乳動物における、固形腫瘍細胞に対するＴ細胞介在免疫応答を刺激する方法、哺乳動物における抗固形腫瘍免疫を提供する方法および／または固形腫瘍抗原の発現と関係する疾患を有する哺乳動物を処置する方法が関与する態様の実施態様において、固形腫瘍細胞は、ＥＧＦＲｖIII、メソテリン、ＣＳ−１、ＧＤ２、Ｔｎ  Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ−１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲベータ、ＳＳＥＡ−４、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６またはＥ７、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ｇｌｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰおよびＧＦＲα４、例えば、ＥＧＦＲｖIIIまたはメソテリンからなる群から選択される抗原を発現する。ある実施態様において、哺乳動物は、神経膠芽腫、卵巣癌、肺癌、前立腺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、乳癌、腺癌または中皮腫として特徴付けられる腫瘍を有する。
【００５８】
ある実施態様において、固形腫瘍抗原は、中皮腫(例えば、悪性胸膜中皮腫)、肺癌(例えば、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、扁平上皮細胞肺癌もしくは大細胞肺癌)、膵臓癌(例えば、膵管腺癌)、食道腺癌、卵巣癌、乳癌、結腸直腸癌、膀胱癌もしくはそれらの任意の組み合わせの中／上または前記癌の何れかの転移に存在する。ここに記載する方法および組成物の何れかのある実施態様において、腫瘍抗原の発現と関係する疾患は、膵臓癌、例えば、転移膵管腺癌(ＰＤＡ)である。ある実施態様において、膵臓癌は、少なくとも１つの先の標準治療で進行している対象にある。ある実施態様において、疾患は、例えば、少なくとも１つの先の標準治療で進行している対象にある、中皮腫(例えば、悪性胸膜中皮腫)である。ある実施態様において、疾患は、例えば、準治療の少なくとも１つの先のレジメン後進行している対象における、卵巣癌、例えば、漿液性上皮性卵巣癌である。ある実施態様において、疾患は、中皮腫、悪性胸膜中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、扁平上皮細胞肺癌もしくは大細胞肺癌、膵臓癌、膵管腺癌、膵臓転移、食道腺癌、乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌および膀胱癌またはそれらの任意の組み合わせである。
【００５９】
ある実施態様において、細胞は、処置哺乳動物に自己である。
【００６０】
ある実施態様において、細胞は、処置哺乳動物に同種である。
【００６１】
ある実施態様において、哺乳動物はヒトである。
【００６２】
他の態様において、本発明は、例えば、ここに記載する、本発明の細胞の投与が、該腫瘍細胞の部分的または完全排除をもたらし、その後、第一ＣＡＲを欠く以外同一の細胞より、高いレベルでまたは長い期間、該対象内に存続し続ける、前記方法の何れかを含む、方法を提供する。
【００６３】
ここに記載する方法の実施態様において、哺乳動物は、該細胞の投与の前に、同時にまたは後に、リンパ球除去療法が適用される。
【００６４】
ここに記載する方法の実施態様において、哺乳動物は、該細胞の投与の前にまたは同時に、リンパ球除去療法が適用されない。
【００６５】
ここに記載する方法および組成物の何れかの実施態様において、方法は、リンパ球除去因子適用をさらに含み得る。ある実施態様において、リンパ球除去因子は、リンパ球除去因子適用前のレベルと比較して、Ｔ細胞、例えば、制御性Ｔ細胞および／または制御性Ｂ細胞のレベルを減少させる。ある実施態様において、リンパ球除去因子は、フルダラビン、シクロホスファミド、コルチコステロイド、アレムツズマブまたは全身照射(ＴＢＩ)またはそれらの組み合わせを含む。
【００６６】
ここに記載する方法および組成物の何れも、腫瘍抗原と関係する疾患を処置するさらなる治療剤の投与を含み得る。ある実施態様において、さらなる治療剤は、抗癌治療剤である。
【００６７】
他の態様において、本発明は、例えば、ここに記載する、前記態様および実施態様の何れかの第一ＣＡＲおよび第二ＣＡＲをコードする核酸を提供する。ある実施態様において、該第一ＣＡＲの配列と該第二ＣＡＲの配列は、独立的リボソーム侵入部位、プロモーターエレメントまたはＴ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２ＡもしくはＦ２Ａエレメントをコードする配列により分離される。
【００６８】
他の態様において、本発明は、例えば、ここに記載する、前記態様および実施態様の核酸を含むベクターを提供する。ある実施態様において、ベクターは、レンチウイルスベクターである。
【００６９】
他の態様において、本発明は、前記態様および実施態様の何れかの第一ＣＡＲ(例えば、ここに記載する、例えば、Ｂ細胞抗原に対する結合ドメインを含むＣＡＲ)をコードする第一核酸および前記態様および実施態様の何れかの第二ＣＡＲ(例えば、ここに記載する、例えば、腫瘍抗原に対する結合ドメインを含むＣＡＲ)をコードする第二核酸を含む、組成物を提供する。ある実施態様において、第一および第二核酸は、別々のベクター内に含まれる。ある実施態様において、ベクターは、レンチウイルスベクターである。
【００７０】
他の態様において、本発明は、前記態様および実施態様の何れかの細胞、例えば、ここに記載する細胞を産生する方法であって、該細胞に、例えば、ここに記載する、先の核酸の態様および実施態様の何れかの核酸、例えば、ここに記載する、先のベクターの態様および実施態様の何れかのベクターまたは例えば、ここに記載する、先の組成物の態様および実施態様の何れかの組成物を導入することを含む、方法を提供する。
【００７１】
他の態様において、本発明は、先の態様および実施態様の何れかの細胞を産生する方法であって、該細胞に、例えば、ここに記載する、前記態様および実施態様の何れかの第一ＣＡＲをコードする核酸を含む第一ベクターを導入し、該細胞に、例えば、ここに記載する、前記態様および実施態様の何れかの第二ＣＡＲをコードする核酸を含む第二ベクターを導入することを含む、方法を提供する。ある実施態様において、該第一ベクターおよび該第二ベクターの導入は同時である。ある実施態様において、該第一ベクターおよび該第二ベクターの導入は逐次的である。
【００７２】
他の態様において、本発明は、例えば、ここに記載する、前記態様および実施態様の何れかの第一ＣＡＲおよび、例えば、ここに記載する、前記態様および実施態様の何れかの第二ＣＡＲをコードする、核酸を含む、細胞を提供する。
【００７３】
他の態様において、本発明は、医薬として使用するための、ここに記載する細胞、例えば、ここに記載する、Ｂ細胞抗原に結合するＣＡＲを発現するおよび、例えば、ここに記載する、Ｂ細胞抗原以外の腫瘍抗原に結合するＣＡＲを発現する、例えば、細胞を提供する。他の態様において、本発明は、Ｂ細胞抗原以外の腫瘍抗原の発現と関係する疾患の処置のための医薬として使用するための、ここに記載する細胞、例えば、ここに記載する、Ｂ細胞抗原に結合するＣＡＲを発現するおよび、例えば、ここに記載する、Ｂ細胞抗原以外の腫瘍抗原に結合するＣＡＲを発現する、例えば、細胞を提供する。他の態様において、本発明は、癌、例えば、Ｂ細胞抗原以外の腫瘍抗原を発現する癌の処置のための医薬として使用するための、ここに記載する細胞、例えば、ここに記載する、Ｂ細胞抗原に結合するＣＡＲを発現するおよび、例えば、ここに記載する、Ｂ細胞抗原以外の腫瘍抗原に結合するＣＡＲを発現する、例えば、細胞を提供する。他の態様において、本発明は、医薬の製造において使用するための、ここに記載する細胞、例えば、ここに記載する、Ｂ細胞抗原に結合するＣＡＲを発現するおよび、例えば、ここに記載する、Ｂ細胞抗原以外の腫瘍抗原に結合するＣＡＲを発現する、例えば、細胞、ここに記載する核酸またはここに記載する組成物を提供する。
【００７４】
特に定義しない限り、ここで使用する全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者により一般に理解されているのと同じ意味を有する。ここに記載するものに類似するまたは等価の方法および材料を本発明の実施または試験に使用できるが、適当な方法および材料を下に記載する。ここに記載する全ての刊行物、特許出願、特許および他の引用資料は、引用によりそれらの全体を本明細書に包含させる。さらに、材料、方法および例は単なる説明であり、限定的であることを意図しない。見出し、小見出しまたは番号もしくは文字を付したエレメント、例えば、(ａ)、(ｂ)、(ｉ)などは、単に読みやすくするために提示される。本明細書における見出しまたは番号もしくは文字を付したエレメントの使用は、工程またはエレメントをアルファベット順に実施することを要求とせずまたは、工程またはエレメントが互いに分かれていることを要求しない。本発明の他の特性、目的および利点は、明細書および図面および特許請求の範囲から明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００７５】
【図１】Ｂ細胞抗原ＣＡＲおよび固形腫瘍抗原ＣＡＲのバイシストロニック発現の核酸構築物の略図を示す。上部構築物は、Ｐ２Ａプロテアーゼ開裂部位により分離されたＣＤ１９  ＣＡＲ(Ｂ細胞抗原ＣＡＲ)およびＥＧＦＲｖIII  ＣＡＲ(固形腫瘍ＣＡＲ)をコードする。下部構築物は、Ｐ２Ａプロテアーゼ開裂部位により分離されたＣＤ１９  ＣＡＲ(Ｂ細胞抗原ＣＡＲ)およびメソテリンＣＡＲ(固形腫瘍ＣＡＲ)をコードする。
【００７６】
【図２】Ｂ細胞抗原ＣＡＲおよび固形腫瘍抗原ＣＡＲ発現のための一組の核酸構築物の略図を示す。第一構築物はＣＤ１９  ＣＡＲ(Ｂ細胞抗原ＣＡＲ)をコードし、第二構築物はＥＧＦＲｖIII  ＣＡＲ(固形腫瘍ＣＡＲ)をコードする。構築物は、別々のベクター、例えば、別々のレンチウイルスベクターに提供され得る。細胞を、Ｂ細胞抗原ＣＡＲおよび固形腫瘍抗原ＣＡＲの両方を発現させるために、一組の構築物でトランスフェクトする。
【発明を実施するための形態】
【００７７】
詳細な記載
第一キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)および第二ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞)を使用し、例えば、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞療法の有効性(例えば、患者におけるＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞の生存性および／または増殖)を増強するために、該第一ＣＡＲの抗原結合ドメインはＢ細胞抗原に結合し、該第二ＣＡＲの抗原結合ドメインＢ細胞抗原以外の腫瘍抗原に結合する、対象における腫瘍抗原の発現と関係する疾患、例えば、癌を処置するための方法および組成物。理論に拘束されることを意図しないが、Ｂ細胞抗原を標的とするＣＡＲおよび腫瘍抗原を標的とするＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞での処置は、例えば、腫瘍ターゲティングＣＡＲのみを発現する(例えば、Ｂ細胞抗原を標的とするＣＡＲを発現しない)免疫エフェクター細胞と比較して、例えば、該ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞の増殖の増加および／または該ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞のインビボ生存性の増加の１以上により、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞の抗腫瘍有効性を増強させる。
【００７８】
定義
特に定義しない限り、ここで使用する全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者により一般に理解されているのと同じ意味を有する。
【００７９】
単数表現は、その対象物の１または１超(すなわち、少なくとも１)を意味する。例として、“エレメント”は、１エレメントまたは１を超えるエレメントを意味する。
【００８０】
用語“約”は、量、期間などの測定可能な数値を記載するとき、特定した数値からの±２０％またはある場合において±１０％またはある場合において±５％またはある場合において±１％またはある場合において±０.１％の変動を、このような変動が開示する方法の実施に際して適切であるとして、包含させることを意図する。
【００８１】
用語“キメラ抗原受容体”または代替的に“ＣＡＲ”は、少なくとも１つの細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび下に定義する刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン(ここでは“細胞内シグナル伝達ドメイン”とも称する)を含む、組み換えポリペプチド構築物をいう。ある実施態様において、ＣＡＲポリペプチド構築物におけるこれらドメインは、同一ポリペプチド鎖にあり、例えば、キメラ融合タンパク質を含む。ある実施態様において、ＣＡＲポリペプチド構築物におけるこれらドメインは互いに連続的ではなく、例えば、ここに記載するＲＣＡＲにおいて提供されるとおり、例えば、異なるポリペプチド鎖にある。
【００８２】
ある態様において、刺激分子は、Ｔ細胞受容体複合体と結合するゼータ鎖である。ある態様において、細胞質シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン(例えば、ＣＤ３ゼータの一次シグナル伝達ドメイン)を含む。ある態様において、細胞質シグナル伝達ドメインは、さらに、下に定義する少なくとも１共刺激分子由来の１以上の機能的シグナル伝達ドメインを含む。ある態様において、共刺激分子は、４−１ＢＢ(すなわち、ＣＤ１３７)、ＣＤ２７、ＩＣＯＳおよび／またはＣＤ２８から選択される。ある態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ融合タンパク質を含む。ある態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインならびに共刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインおよび刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ融合タンパク質を含む。ある態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインならびに１以上の共刺激分子由来の２個の機能的シグナル伝達ドメインおよび刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ融合タンパク質を含む。ある態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインならびに少なくとも１以上の共刺激分子由来の２個の機能的シグナル伝達ドメインおよび刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ融合タンパク質を含む。ある態様において、ＣＡＲは、ＣＡＲ融合タンパク質のアミノ末端(Ｎ−ｔｅｒ)に任意的リーダー配列を含む。ある態様において、ＣＡＲは、さらに、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端にリーダー配列を含み、ここで、リーダー配列は、ＣＡＲの細胞プロセシングおよび細胞膜への局在化の間に、場合により、抗原認識ドメイン(例えば、ｓｃＦｖ)から開裂される。
【００８３】
ここに記載するもののような、特異的抗原Ｘを標的とする、例えば、結合する、抗原結合ドメイン(例えば、ｓｃＦｖまたはＴＣＲ)を含むＣＡＲは、ＸＣＡＲ、Ｘ−ＣＡＲまたはＸターゲティングＣＡＲとも称する。例えば、ＣＤ１９を標的とする抗原結合ドメインを含むＣＡＲは、ＣＤ１９ＣＡＲと称する。ここに記載するもののような、特異的腫瘍抗原(ＴＡ)を標的とする抗原結合ドメイン(例えば、ｓｃＦｖまたはＴＣＲ)を含むＣＡＲは、ＴＡ  ＣＡＲとも称する。ここに記載するもののような、特異的Ｂ細胞抗原(ＢＣＡ)を標的とする抗原結合ドメイン(例えば、ｓｃＦｖまたはＴＣＲ)を含む(例えば本発明の組成物の第一ＣＡＲ分子に関連して)ＣＡＲは、ＢＣＡ  ＣＡＲとも称する。
【００８４】
用語“シグナル伝達ドメイン”は、第二メッセンジャーを産生することによりまたはこのようなメッセンジャーに応答してエフェクターとして機能することにより、規定されたシグナル伝達経路を経て細胞活性を制御するために細胞内で情報伝達により作用する、タンパク質の機能的部分をいう。ある態様において、ここに記載するＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、ここに記載する刺激分子もしくは共刺激分子に由来するかまたは合成もしくは操作されたシグナル伝達ドメインである。
【００８５】
ここで使用する用語“抗体”は、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子由来のタンパク質またはポリペプチド配列をいう。抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナル、複数鎖または一本鎖またはインタクト免疫グロブリンであってよく、天然供給源または組み換え供給源に由来し得る。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であり得る。
【００８６】
用語“抗体フラグメント”は、インタクト抗体またはその組み換えバリアントの少なくとも一部分をいい、該抗体フラグメントの抗原などの標的の認識および特異的結合を付与するのに十分な、インタクト抗体の抗原結合ドメイン、例えば、抗原決定可変領域をいう。抗体フラグメントの例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ’)２およびＦｖフラグメント、ｓｃＦｖ抗体フラグメント、直線状抗体、単一ドメイン抗体、例えば、ｓｄＡｂ(ＶＬまたはＶＨ)、ラクダ類ＶＨＨドメインおよびヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２個のＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントなどの抗体フラグメントから形成された多特異的抗体および単離ＣＤＲまたは抗体の他のエピトープ結合フラグメントを含むが、これらに限定されない。抗原結合フラグメントはまた単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、二重特異性抗体、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲおよびビスｓｃＦｖにも取り込まれ得る(例えば、Hollinger and Hudson, Nature Biotechnology 23:1126-1136, 2005)。抗原結合フラグメントはまたフィブロネクチンIII型(Ｆｎ３)などのポリペプチドに基づく足場にも移植できる(フィブロネクチンポリペプチドミニボディを記載する米国特許６,７０３,１９９号参照)。
【００８７】
用語“ｓｃＦｖ”は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１抗体フラグメントおよび重鎖の可変領域を含む少なくとも１抗体フラグメントを含む融合タンパク質をいい、ここで、軽鎖および重鎖可変領域は、短フレキシブルポリペプチドリンカーにより連続的に結合され、一本鎖ポリペプチドとして発現されることができ、ここで、ｓｃＦｖは、それが由来するインタクト抗体の特異性を保持する。特定しない限り、ここで使用するｓｃＦｖは、例えば、ポリペプチドのＮ末端およびＣ末端に対して、何れかの順番でＶＬおよびＶＨ可変領域を有してよく、ｓｃＦｖはＶＬ−リンカー−ＶＨを含んでよくまたはＶＨ−リンカー−ＶＬを含んでよい。
【００８８】
ここで使用する用語“相補性決定領域”または“ＣＤＲ”は、抗原特異性および結合親和性を付与する、抗体可変領域内のアミノ酸の配列をいう。例えば、一般に、各重鎖可変領域に３ＣＤＲ(例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３)および各軽鎖可変領域に３ＣＤＲ(ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３)がある。あるＣＤＲの厳密なアミノ酸配列境界は、Kabat et al. (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD(“Ｋａｂａｔ”ナンバリングスキーム)、Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948(“Ｃｈｏｔｈｉａ”ナンバリングスキーム)に記載されたものまたはそれらの組み合わせを含む、多数の周知スキームの何れかを使用して決定され得る。Ｋａｂａｔナンバリングスキームでは、ある実施態様において、重鎖可変ドメイン(ＶＨ)におけるＣＤＲアミノ酸残基は３１〜３５(ＨＣＤＲ１)、５０〜６５(ＨＣＤＲ２)および９５〜１０２(ＨＣＤＲ３)と番号付けられ、軽鎖可変ドメイン(ＶＬ)におけるＣＤＲアミノ酸残基は、２４〜３４(ＬＣＤＲ１)、５０〜５６(ＬＣＤＲ２)および８９〜９７(ＬＣＤＲ３)と番号付けられる。Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキームでは、ある実施態様において、ＶＨにおけるＣＤＲアミノ酸残基は２６〜３２(ＨＣＤＲ１)、５２〜５６(ＨＣＤＲ２)および９５〜１０２(ＨＣＤＲ３)と番号付けられ、ＶＬにおけるＣＤＲアミノ酸残基は２６〜３２(ＬＣＤＲ１)、５０〜５２(ＬＣＤＲ２)および９１〜９６(ＬＣＤＲ３)と番号付けられる。統合ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームにおいて、ある実施態様において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲまたは両方の一部であるアミノ酸残基に対応する。例えば、ある実施態様において、ＣＤＲは、ＶＨ、例えば、哺乳動物ＶＨ、例えば、ヒトＶＨにおいてアミノ酸残基２６〜３５(ＨＣＤＲ１)、５０〜６５(ＨＣＤＲ２)および９５〜１０２(ＨＣＤＲ３)に対応し、ＶＬ、例えば、哺乳動物ＶＬ、例えば、ヒトＶＬにおいて、アミノ酸残基２４〜３４(ＬＣＤＲ１)、５０〜５６(ＬＣＤＲ２)および８９〜９７(ＬＣＤＲ３)に対応する。
【００８９】
本発明のＣＡＲの抗体またはその抗体フラグメントを含む部分は、例えば、ｓｃＦｖ抗体フラグメント、直線状抗体、単一ドメイン抗体、ｓｄＡｂ(ＶＬまたはＶＨ)、ラクダ類ＶＨＨドメイン、ヒト化抗体、二重特異性抗体、抗体コンジュゲートを含む、抗原結合ドメインが連続的ポリペプチド鎖の一部として発現される、多様な形態で存在し得る(Harlow et al., 1999, In: Using Antibodies:  A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY; Harlow et al., 1989, In: Antibodies:  A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York; Houston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; Bird et al., 1988, Science 242:423-426)。ある態様において、本発明のＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗体フラグメントを含む。さらなる態様において、ＣＡＲは、ｓｃＦｖを含む抗体フラグメントを含む。
【００９０】
ここで使用する用語“結合ドメイン”または“抗体分子”(ここでは“抗標的(例えば、ＣＤ１９)結合ドメイン”とも称する)は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、タンパク質、例えば、免疫グロブリン鎖またはそのフラグメントをいう。用語“結合ドメイン”または“抗体分子”は、抗体および抗体フラグメントを包含する。ある実施態様において、抗体分子は多特異的抗体分子であり、例えば、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、ここで、該複数の中の第一免疫グロブリン可変ドメイン配列が第一エピトープに結合特異性を有し、該複数の中の第二免疫グロブリン可変ドメイン配列が第二エピトープに結合特異性を有する。ある実施態様において、多特異的抗体分子は二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２以下の抗原に特異性を有する。二重特異性抗体分子は、第一エピトープに結合特異性を有する第一免疫グロブリン可変ドメイン配列および第二エピトープに結合特異性を有する第二免疫グロブリン可変ドメイン配列により特徴付けられる。
【００９１】
用語“抗体重鎖”は、天然に存在する構造の抗体分子に存在する２タイプのポリペプチド鎖の大きい方をいい、通常抗体が属するクラスを決定する。
【００９２】
用語“抗体軽鎖”は、天然に存在する構造の抗体分子に存在する２タイプのポリペプチド鎖の小さい方をいう。カッパ(κ)およびラムダ(λ)軽鎖は、２つの大きな抗体軽鎖アイソタイプをいう。
【００９３】
用語“組み換え抗体”は、例えば、バクテリオファージまたは酵母発現系により発現された抗体などの、組み換えＤＮＡテクノロジーを使用して産生された抗体をいう。本用語はまた、抗体タンパク質を発現する抗体をコードするＤＮＡ分子または抗体を特定するアミノ酸配列の合成により産生されている抗体を意味するとも解釈されるべきであり、ここで、ＤＮＡまたはアミノ酸配列は、当分野で利用可能であり、周知である組み換えＤＮＡまたはアミノ酸配列テクノロジーを使用して得られている。
【００９４】
用語“抗原”または“Ａｇ”は、免疫応答を誘発する分子をいう。この免疫応答は、抗体産生または特異的免疫適格細胞の活性化または両方に関与し得る。当業者は、実質的に全タンパク質またはペプチドを含むあらゆる高分子が抗原として働き得ることを理解する。さらに、抗原は組み換えまたはゲノムＤＮＡに由来し得る。当業者は、免疫応答を誘発するタンパク質をコードするヌクレオチド配列または部分的ヌクレオチド配列を含むあらゆるＤＮＡが、それ故に、ここで使用する用語“抗原”をコードすることを理解する。さらに、当業者は、抗原が必ずしも遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によってのみコードされないことを理解する。本発明は、１を超える遺伝子の部分的ヌクレオチド配列の使用を含み、これらのヌクレオチド配列が、所望の免疫応答を誘発するポリペプチドをコードするように種々の組み合わせで配置されることは容易に認められる。さらに、当業者は、抗原が“遺伝子”によってコードされる必要は全くないことを理解する。抗原は、生物学的サンプルから産生できまたは誘導できまたはポリペプチド以外の高分子であり得ることが容易に認められる。このような生物学的サンプルは、組織サンプル、腫瘍サンプル、細胞または他の生物学的成分を含む流体を含み得るが、これらに限定されない。
【００９５】
用語“抗腫瘍効果”または“抗腫瘍活性”は、例えば、腫瘍体積減少、腫瘍細胞数減少、転移数減少、余命延長、腫瘍細胞増殖減少、腫瘍細胞生存減少または癌状態に伴う種々の生理学的症状の改善を含むが、これらに限定されない種々の手段により顕在化され得る生物学的効果をいう。“抗腫瘍効果”はまた、そもそも腫瘍発生の予防における、本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、細胞および抗体の能力によっても顕在化され得る。
【００９６】
用語“自己”は、後に再導入される個体と同じ個体に由来するあらゆる物質をいう。
【００９７】
用語“同種”は、物質を導入する個体と同じ種の異なる動物に由来するあらゆる物質をいう。２以上の個体は、１以上の座位での遺伝子が同一ではないとき、互いに同種といえる。ある態様において、同じ種の個体からの同種物質は、抗原性に作用するのに十分遺伝的に異なり得る。
【００９８】
用語“異種”は、異なる種の動物由来の移植片をいう。
【００９９】
ここで使用する用語“アフェレーシス”は、ドナーまたは患者からの血液がドナーまたは患者から採られ、選択した特定の成分を分離する装置に通され、残りが、例えば、返血により該ドナーまたは患者に戻される、体外過程をいう。それ故に、“アフェレーシスサンプル”の記載は、アフェレーシスを使用して得たサンプルをいう。
【０１００】
用語“癌”は、異常細胞の非制御の増殖により特徴付けられる疾患をいう。癌は、病理組織学的タイプまたは侵襲性のステージとは無関係に、全タイプの癌性増殖または発癌性過程、転移組織または悪性形質転換細胞、組織または臓器を含む。癌細胞は、局所的にまたは血流およびリンパ系を介して体の他の部分に拡散し得る。種々の癌の例は、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸部癌、皮膚癌、膵臓癌、結腸直腸癌、腎臓癌、肝臓癌、脳腫瘍、リンパ腫、白血病、肺癌などを含むが、これらに限定されない。
【０１０１】
ここで使用する用語“由来する”は、第一分子と第二分子の関係を示す。これは、一般に第一分子と第二分子の構造類似性をいい、第二分子に由来する第一分子の処理または供給源の限定を暗示または包含しない。例えば、ＣＤ３ゼータ分子に由来する細胞内シグナル伝達ドメインの場合、細胞内シグナル伝達ドメインは、必要な機能、すなわち、適切な条件下シグナルを産生する能力を有するように、ＣＤ３ゼータ構造を十分に保持する。細胞内シグナル伝達ドメインの産生の特定の処理を暗示せずまたは限定を含まず、例えば、細胞内シグナル伝達ドメインを提供するために、ＣＤ３ゼータ配列から開始し、望まない配列を欠失させるかまたは変異させ、該細胞内シグナル伝達ドメインに到達しなければならないことを意味しない。
【０１０２】
用語“腫瘍抗原の発現と関係する疾患”は、例えば、癌または悪性腫瘍などの増殖性疾患または骨髄異形成、骨髄異形成症候群または前白血病などの前癌状態を含む、ここに記載する腫瘍抗原の発現と関係する疾患またはここに記載する腫瘍抗原を発現する細胞と関係する状態またはここに記載する腫瘍抗原を発現する細胞と関連関係する非癌関連徴候を含むが、これらに限定されない。ある態様において、ここに記載する腫瘍抗原の発現と関係する癌は血液癌である。ある態様において、ここに記載する腫瘍抗原の発現と関係する癌は固形癌である。さらにここに記載する腫瘍抗原の発現と関係する疾患は、例えば、ここに記載する腫瘍抗原の発現と関係する非定型および／または非古典的癌、悪性腫瘍、前癌状態または増殖性疾患を含むが、これらに限定されない。ここに記載する腫瘍抗原の発現と関係する非癌関連徴候は、例えば、自己免疫性疾患、(例えば、狼瘡)、炎症性障害(アレルギーおよび喘息)および移植を含むが、これらに限定されない。
【０１０３】
用語“保存的配列修飾”は、アミノ酸配列を含む抗体または抗体フラグメントの結合特性に顕著に影響しないまたは変えない、アミノ酸修飾をいう。このような保存的修飾は、アミノ酸置換、付加および欠失を含む。修飾を、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ介在変異誘発などの当分野で知られる標準技法により、本発明の抗体または抗体フラグメントに導入できる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が、類似側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられるものである。類似側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当分野で定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖(例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン)、酸性側鎖(例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸)、非電荷極性側鎖(例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン)、非極性側鎖(例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン)、ベータ分枝側鎖(例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン)および芳香族側鎖(例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン)を有するアミノ酸を含む。それ故に、本発明のＣＡＲ内の１以上のアミノ酸残基を、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基で置き換えることができ、該改変ＣＡＲを、ここに記載する機能的アッセイを使用して試験できる。
【０１０４】
用語“刺激”は、刺激分子(例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体またはＣＡＲ)とその同族リガンド(またはＣＡＲの場合腫瘍抗原)の結合により誘導され、それにより、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介するシグナル伝達または適切なＮＫ受容体もしくはＣＡＲのシグナル伝達ドメインを介するシグナル伝達などの、しかし、これらに限定されないシグナル伝達事象が仲介される、一次応答をいう。刺激は、ＴＧＦ−βの下方制御および／または細胞骨格構造再編成などのある分子の発現改変を仲介し得る。
【０１０５】
用語“刺激分子”は、免疫エフェクター細胞の活性化を、免疫エフェクター細胞シグナル伝達経路の少なくともある態様、例えば、Ｔ細胞シグナル伝達経路について刺激方向で、制御する細胞質シグナル伝達配列を提供する、免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞)により発現される分子をいう。ある態様において、シグナルは、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体と、ペプチドと共に充填したＭＨＣ分子の結合により開始される一次シグナルであり、これは、増殖、活性化、分化などを含むが、これらに限定されないＴ細胞応答の仲介にいたる。刺激方向で作用する一次細胞質シグナル伝達配列(“一次シグナル伝達ドメイン”とも称する)は、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。本発明において特に有用なＩＴＡＭ含有一次細胞質シグナル伝達配列の例は、ＣＤ３ゼータ、共通ＦｃＲガンマ(ＦＣＥＲ１Ｇ)、ＦｃガンマＲIIａ、ＦｃＲベータ(ＦｃイプシロンＲ１ｂ)、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８(“ＩＣＯＳ”としても既知)、ＦｃεＲＩ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２およびＣＤ６６ｄに由来するものを含むが、これらに限定されない。本発明の特定のＣＡＲにおいて、本発明の任意の１以上のＣＡＲにおける細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞内シグナル伝達配列、例えば、ＣＤ３ゼータの一次シグナル伝達配列を含む。本発明の特定のＣＡＲにおいて、ＣＤ３ゼータの一次シグナル伝達配列は、配列番号１８に提供される配列または非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、霊長類など由来の等価残基である。本発明の特定のＣＡＲにおいて、ＣＤ３ゼータの一次シグナル伝達配列は、配列番号２０に提供される配列または非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、霊長類など由来の等価残基である。
【０１０６】
用語“抗原提示細胞”または“ＡＰＣ”は、その表面で主組織適合複合体(ＭＨＣ)と複合体化した外来抗原を提示する、アクセサリー細胞(例えば、Ｂ細胞、樹状細胞など)などの免疫系細胞をいう。Ｔ細胞は、これらの複合体を、そのＴ細胞受容体(ＴＣＲ)を使用して認識する。ＡＰＣは、抗原を処理し、それをＴ細胞に提示する。
【０１０７】
本明細書で使用する用語“細胞内シグナル伝達ドメイン”は、分子の細胞内部分をいう。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ発現細胞、例えば、ＣＡＲＴ細胞またはＣＡＲ発現ＮＫ細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを産生する。例えば、ＣＡＲＴ細胞またはＣＡＲ発現ＮＫ細胞における、免疫エフェクター機能の例は、サイトカインの分泌を含む、細胞溶解活性およびヘルパー活性を含む。細胞内シグナル伝達ドメイン全体を用いることができるが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分を使用する場合には、エフェクター機能シグナルを伝達する限り、このような切断部分をインタクト鎖の代わりに使用し得る。用語細胞内シグナル伝達ドメインは、それ故に、エフェクター機能シグナルの伝達に十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意の切断部分を含むことを意味する。
【０１０８】
ある実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。一次細胞内シグナル伝達ドメインの例は、一次刺激または抗原依存的刺激を担う分子に由来するものを含む。ある実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含み得る。共刺激細胞内シグナル伝達ドメインの例は、共刺激シグナルまたは抗原非依存的刺激を担う分子に由来するものを含む。ある実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、合成または操作されている。例えば、ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞、例えば、ＣＡＲＴ細胞またはＣＡＲ発現ＮＫ細胞の場合、一次細胞内シグナル伝達ドメインはＴ細胞受容体の細胞質配列を含んでよく、そして共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは共受容体または共刺激分子からの細胞質配列を含んでよい。
【０１０９】
一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。ＩＴＡＭ含有一次細胞質シグナル伝達配列の例は、ＣＤ３ゼータ、共通ＦｃＲガンマ(ＦＣＥＲ１Ｇ)、ＦｃガンマＲIIａ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８(“ＩＣＯＳ”)、ＦｃεＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０およびＤＡＰ１２に由来するものを含むが、これらに限定されない。
【０１１０】
用語“ゼータ”または代替的に“ゼータ鎖”、“ＣＤ３ゼータ”または“ＴＣＲゼータ”は、GenBan Acc. No. BAG36664.1により提供されるタンパク質または非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、霊長類など由来の等価残基として定義され、“ゼータ刺激ドメイン”または代替的に“ＣＤ３ゼータ刺激ドメイン”または“ＴＣＲゼータ刺激ドメイン”は、Ｔ細胞活性化に必要な初期シグナルの機能的伝達に十分な、ゼータ鎖の細胞質ドメインからのアミノ酸残基として定義される。ある態様において、ゼータの細胞質ドメインは、GenBank Acc. No. BAG36664.1の残基５２〜１６４またはその機能的オルソログである非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、霊長類など由来の等価残基として定義される。ある態様において、“ゼータ刺激ドメイン”または“ＣＤ３ゼータ刺激ドメイン”は、配列番号１８として提供される配列である。ある態様において、“ゼータ刺激ドメイン”または“ＣＤ３ゼータ刺激ドメイン”は、配列番号２０として提供される配列である。またここに包含されるのは、ここに記載するアミノ酸配列、例えば、配列番号２０に１以上の変異を含むＣＤ３ゼータドメインである。
【０１１１】
用語“共刺激分子”は、共刺激リガンドと特異的に結合し、それにより、増殖のような、しかしそれに限定されない、Ｔ細胞による共刺激応答を仲介する、Ｔ細胞上の同族結合パートナーをいう。共刺激分子は、効率的免疫応答に必要な抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ性活性化分子(ＳＬＡＭタンパク質)、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１(ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８)、４−１ＢＢ(ＣＤ１３７)、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ(ＣＤ２７８)、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ(ＬＩＧＨＴＲ)、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０(ＫＬＲＦ１)、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１(ＣＤ２２６)、ＳＬＡＭＦ４(ＣＤ２４４、２Ｂ４)、ＣＤ８４、ＣＤ９６(Ｔａｃｔｉｌｅ)、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９(ＣＤ２２９)、ＣＤ１６０(ＢＹ５５)、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００(ＳＥＭＡ４Ｄ)、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６(ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８)、ＳＬＡＭ(ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３)、ＢＬＡＭＥ(ＳＬＡＭＦ８)、ＳＥＬＰＬＧ(ＣＤ１６２)、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａおよびＣＤ８３と特異的に結合するリガンドを含むが、これらに限定されない。
【０１１２】
共刺激細胞内シグナル伝達ドメインまたは共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分であり得る。細胞内シグナル伝達ドメインは、それが由来する分子の細胞内部分全体または天然細胞内シグナル伝達ドメイン全体またはその機能的フラグメントを含み得る。
【０１１３】
用語“４−１ＢＢ”は、GenBank Acc. No. AAA62478.2として提供されるアミノ酸配列を有するＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーまたは非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、霊長類など由来の等価残基をいい、“４−１ＢＢ共刺激ドメイン”は、GenBank Acc. No. AAA62478.2のアミノ酸残基２１４〜２５５または非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、霊長類など由来の等価残基をいう。ある態様において、“４−１ＢＢ共刺激ドメイン”は、配列番号１４として提供される配列または非ヒト種、例えば、マウス、齧歯類、サル、霊長類など由来の等価残基である。
【０１１４】
ここで使用する用語“免疫エフェクター細胞”は、免疫応答、例えば、免疫エフェクター応答の促進に関与する細胞をいう。免疫エフェクター細胞の例は、Ｔ細胞、例えば、アルファ／ベータＴ細胞およびガンマ／デルタＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞、ナチュラルキラーＴ(ＮＫＴ)細胞、肥満細胞および骨髄由来食細胞を含む。
【０１１５】
ここで使用する用語“免疫エフェクター機能”または“免疫エフェクター応答”は、標的細胞の免疫攻撃を増強または促進する、例えば、免疫エフェクター細胞の機能または応答をいう。例えば、免疫エフェクター機能または応答は、標的細胞の死滅または成長もしくは増殖の阻害を促進する、Ｔ細胞またはＮＫ細胞の性質をいう。Ｔ細胞の場合、一次刺激および共刺激は免疫エフェクター機能または応答の例である。
【０１１６】
用語“エフェクター機能”は、細胞の特殊化機能をいう。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性またはヘルパー活性であり得る。
【０１１７】
用語“コード”は、生物学的過程での、ヌクレオチド(例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡおよびｍＲＮＡ)の規定された配列またはアミノ酸の規定された配列およびそれに由来する生物学的性質を有する、他のポリマーおよび高分子の合成の鋳型として働く、遺伝子、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡなどのポリヌクレオチドにおけるヌクレオチドの特異的配列の固有の性質をいう。それ故に、遺伝子、ｃＤＮＡまたはＲＮＡは、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写および翻訳が細胞または他の生物系でタンパク質を産生するならば、タンパク質をコードする。ヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と一致し、通常配列表に提供されるコード鎖および遺伝子またはｃＤＮＡの転写の鋳型として使用される非コード鎖の両方が、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物をコードするということができる。
【０１１８】
特に断らない限り、“アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列”は、互いの縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードする、全ヌクレオチド配列を含む。用語タンパク質またはＲＮＡをコードするヌクレオチド配列はまた、タンパク質をコードするヌクレオチド配列が、あるバージョンにおいてイントロンを含み得る程度に、イントロンも含み得る。
【０１１９】
用語“有効量”または“治療有効量”はここでは相互交換可能に使用し、特定の生物学的結果を達成するのに有効である、ここに記載する、化合物、製剤、物質または組成物の量をいう。
【０１２０】
用語“内因性”は、生物、細胞、組織または系の内側由来のまたは内側で産生される、あらゆる物質をいう。
【０１２１】
用語“外因性”は、生物、細胞、組織または系の外側から導入されたまたは外側で産生される、あらゆる物質をいう。
【０１２２】
用語“発現”は、プロモーターにより駆動される特定のヌクレオチド配列の転写および／または翻訳をいう。
【０１２３】
用語“導入ベクター”は、単離核酸を含み、該単離核酸の細胞内部への送達に使用できる、組成物をいう。多数のベクターが当分野で知られ、直線状ポリヌクレオチド、イオン性または両親媒性化合物と結合したポリヌクレオチド、プラスミドおよびウイルスを含むが、これらに限定されない。それ故に、用語“導入ベクター”は、自己複製プラスミドまたはウイルスを含む。本用語は、例えば、ポリリシン化合物、リポソームなどの、核酸の細胞内への移送を促進する、非プラスミドおよび非ウイルス化合物をさらに含むとも解釈すべきである。ウイルス導入ベクターの例は、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクターなどを含むが、これらに限定されない。
【０１２４】
用語“発現ベクター”は、発現させるヌクレオチド配列に操作可能に結合した発現制御配列を含む組み換えポリヌクレオチドを含む、ベクターをいう。発現ベクターは、発現のための十分なシス作用性エレメントを含み、発現のための他のエレメントは宿主細胞によりまたはインビトロ発現系に供給され得る。発現ベクターは、当分野で知られる全てのこのようなものを含み、組み換えポリヌクレオチドを取り込むコスミド、プラスミド(例えば、ネイキッドまたはリポソームに包含)およびウイルス(例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス)を含む。
【０１２５】
用語“レンチウイルス”は、レトロウイルス科ファミリーの属をいう。レンチウイルスは、非分裂細胞に感染できる点で、レトロウイルスの中で独特であり、相当量の遺伝情報を宿主細胞のＤＮＡに送達でき、従って、遺伝子送達ベクターの最も効率的方法の１つである。ＨＩＶ、ＳＩＶおよびＦＩＶは、全てレンチウイルスの例である。
【０１２６】
用語“レンチウイルスベクター”は、特にMilone et al., Mol. Ther. 17(8): 1453-1464 (2009)に提供されるような自己不活性化レンチウイルスベクターを含む、レンチウイルスゲノムの少なくとも一部に由来するベクターをいう。臨床で使用し得るレンチウイルスベクターの他の例は、例えば、Oxford BioMedicaのLENTIVECTOR(登録商標)遺伝子送達テクノロジー、LentigenからのLENTIMAXTMベクター系などを含むが、これらに限定されない。非臨床タイプのレンチウイルスベクターも利用可能であり、当業者に知られる。
【０１２７】
用語“相同”または“同一性”は、２ポリマー分子間、例えば、２ＤＮＡ分子または２ＲＮＡ分子などの２核酸分子間または２ポリペプチド分子間のサブユニット配列同一性をいう。２分子の両方におけるサブユニット位置が同じモノマーサブユニットにより占拠されているとき、例えば、２ＤＮＡ分子の各々におけるある位置がアデニンで占拠されているならば、これらは、その位置で相同または同一である。２配列間の相同性は、整合または相同位置の数の直接的関数であり、例えば、２配列の位置の半分(例えば、１０サブユニット長ポリマーにおける５位置)が相同であるならば、２配列は５０％相同であり、位置の９０％(例えば、１０中９)が整合または相同であるならば、２配列は９０％相同である。
【０１２８】
非ヒト(例えば、マウス)抗体の“ヒト化”形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含む、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその抗体フラグメント(例えば抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ’)２または他の抗原結合部分配列)である。大部分について、ヒト化抗体およびその抗体フラグメントは、レシピエントの相補性決定領域(ＣＤＲ)からの残基が、所望の特異性、親和性および能力を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種(ドナー抗体)のＣＤＲからの残基で置き換えられている、ヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体または抗体フラグメント)である。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域(ＦＲ)残基が対応する非ヒト残基で置き換えられている。さらに、ヒト化抗体／抗体フラグメントは、レシピエント抗体にも、移入ＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見られない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体または抗体フラグメント性能をさらに精密化および最適化する。一般に、ヒト化抗体またはその抗体フラグメントは、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは相当部分がヒト免疫グロブリン配列のものである、少なくとも１個および一般に２個の、可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体または抗体フラグメントはまた、一般にヒト免疫グロブリンのものである、免疫グロブリン定常領域(Ｆｃ)の少なくとも一部も含み得る。さらなる詳細について、Jones et al., Nature, 321: 522-525, 1986; Reichmann et al., Nature, 332: 323-329, 1988; Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2: 593-596, 1992参照。
【０１２９】
“完全ヒト”は、分子全体がヒト起源であるかまたはヒト形態の抗体または免疫グロブリンと同一であるアミノ酸配列からなる、抗体または抗体フラグメントなどの免疫グロブリンをいう。
【０１３０】
用語“単離”は、天然状態から変えられたまたは取り出されたことを意味する。例えば、生存動物に天然に存在する核酸またはペプチドは“単離”されていないが、その天然状態で併存する物質から一部または完全に分離された同じ核酸またはペプチドは“単離”されている。単離核酸またはタンパク質は、実質的に精製された形態で存在できまたは、例えば、宿主細胞などの非天然環境で存在できる。
【０１３１】
本発明において、一般に存在する核酸塩基について次の略語を使用する。“Ａ”はアデノシンをいい、“Ｃ”はシトシンをいい、“Ｇ”はグアノシンをいい、“Ｔ”はチミジンをいい、“Ｕ”はウリジンをいう。
【０１３２】
用語“操作可能に結合”または“転写制御”は、制御配列と異種核酸配列の間の、後者の発現をもたらす機能的結合をいう。例えば、第一核酸配列が第二核酸配列と機能的な関係で配置されているとき、第一核酸配列は第二核酸配列と操作可能に結合する。例えば、プロモーターは、該プロモーターがコード配列の転写または発現に影響するならば、該コード配列と操作可能に結合する。操作可能に結合したＤＮＡ配列は互いに連続的であってよく、例えば、２タンパク質コード領域を合わせる必要がなるならば、同じリーディングフレームにある。
【０１３３】
免疫原性組成物の“非経腸”投与なる用語は、例えば、皮下(ｓ.ｃ.)、静脈内(ｉ.ｖ.)、筋肉内(ｉ.ｍ.)または胸骨内、腫瘍内注射または点滴を含む。
【０１３４】
用語“核酸”または“ポリヌクレオチド”は、一本鎖または二本鎖形態のデオキシリボ核酸(ＤＮＡ)またはリボ核酸(ＲＮＡ)およびそのポリマーをいう。特に断らない限り、本用語は、対照核酸と類似の結合性質を有し、天然に存在するヌクレオチドと類似する方法で代謝される、天然ヌクレオチドの既知アナログを含む核酸を包含する。特に断らない限り、特定の核酸配列は、その保存修飾バリアント(例えば、縮重コドン置換)、アレル、オルソログ、ＳＮＰおよび相補的配列ならびに明示的に示す配列を黙示的に包含する。具体的に、縮重コドン置換は１以上の選択(または全)コドンの第三位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換されている配列の産生により達成され得る(Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19:5081 (1991); Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985); and Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8:91-98 (1994))。
【０１３５】
用語“ペプチド”、“ポリペプチド”および“タンパク質”は相互交換可能に使用され、ペプチド結合により共有結合したアミノ酸残基を含む化合物をいう。タンパク質またはペプチドは少なくとも２アミノ酸を含まなければならず、タンパク質またはペプチド配列を構成し得るアミノ酸の最大数の制限はない。ポリペプチドは、ペプチド結合により互いに結合した２以上のアミノ酸を含む、あらゆるペプチドまたはタンパク質をいう。ここで使用する本用語は、例えば、当分野でペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーとも一般的に称される短鎖および一般に当分野でタンパク質と称され、多くのタイプが存在する長鎖の両方を含む。“ポリペプチド”は、例えば、数ある中で、生物活性フラグメント、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドのバリアント、修飾ポリペプチド、誘導体、アナログ、融合タンパク質を含む。ポリペプチドは、天然ペプチド、組み換えペプチドまたはそれらの組み合わせを含む。
【０１３６】
用語“プロモーター”は、細胞の合成機構または導入合成機構により認識され、ポリヌクレオチド配列の特異的転写の開始に必要なＤＮＡ配列をいう。
【０１３７】
用語“プロモーター／制御配列”は、プロモーター／制御配列に操作可能に結合した遺伝子産物の発現に必要な核酸配列をいう。いくつかの例では、この配列は、コアプロモーター配列であってよく、他の例において、この配列はまたエンハンサー配列および遺伝子産物の発現に必要な他の制御性エレメントを含み得る。プロモーター／制御配列は、例えば、組織特異的方法で遺伝子産物を発現するものである。
【０１３８】
用語“構成的”プロモーターは、遺伝子産物をコードするまたは特定するポリヌクレオチドと操作可能に結合したとき、細胞の大部分または全ての生理学的条件下で細胞において遺伝子産物を産生させる、ヌクレオチド配列をいう。
【０１３９】
用語“誘導可能”プロモーターは、遺伝子産物をコードするまたは特定するポリヌクレオチドと操作可能に結合したとき、実質的に該プロモーターに対応するインデューサーが細胞に存在するときのみ、細胞で遺伝子産物を産生させる、ヌクレオチド配列をいう。
【０１４０】
用語“組織特異的”プロモーターは、遺伝子によりコードされるまたは特定するポリヌクレオチドと操作可能に結合したとき、実質的に細胞が該プロモーターに対応する組織タイプの細胞であるときのみ、細胞で遺伝子産物を産生させる、ヌクレオチド配列をいう。
【０１４１】
用語“Ｂ細胞抗原”または“Ｂ−細胞抗原”は相互交換可能に使用され、優先的におよび特異的にＢ細胞表面に発現され、それに結合する薬剤により標的化され得る、分子(一般にタンパク質、炭水化物または脂質)をいう。特に興味深いＢ細胞抗原は、哺乳動物の他の非Ｂ細胞組織と比較して、Ｂ細胞で優先的に発現される。Ｂ細胞抗原は、１つの特定のＢ細胞集団、例えば、Ｂ細胞前駆体または成熟Ｂ細胞または１を超える特定のＢ細胞集団、例えば、前駆体Ｂ細胞と成熟Ｂ細胞の両方に発現される。Ｂ細胞表面マーカーの例は、ＣＤ５、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、ＣＤ１３５、ＣＤ１３８、ＣＤ１７９、ＣＤ２６９、Ｆｌｔ３、ＲＯＲ１、ＢＣＭＡ、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＣＳ−１、ＣＸＣＲ４、５、７、ＩＬ−７／３Ｒ、ＩＬ−７／４／３ＲおよびＩＬ−４Ｒを含む。特に好ましいＢ細胞抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＢＣＭＡ、ＣＳ−１およびＣＤ１３８を含む。ある実施態様において、Ｂ細胞抗原はＣＤ１９である。ある実施態様において、Ｂ細胞抗原はＣＤ２０である。ある実施態様において、Ｂ細胞抗原はＣＤ２２である。ある実施態様において、Ｂ細胞抗原はＢＣＭＡである。ある実施態様において、Ｂ細胞抗原はＦｃＲｎ５である。ある実施態様において、Ｂ細胞抗原はＦｃＲｎ２である。ある実施態様において、Ｂ細胞抗原はＣＳ−１である。ある実施態様において、Ｂ細胞抗原はＣＤ１３８である。
【０１４２】
用語“癌関連抗原”または“腫瘍抗原”は、相互交換可能に、全体的にまたはフラグメント(例えば、ＭＨＣ／ペプチド)として、癌細胞表面に発現され、癌細胞に対する薬剤の優先的ターゲティングに有用である分子(一般にタンパク質、炭水化物または脂質)をいう。ある実施態様において、腫瘍抗原は、正常細胞および癌細胞両方で発現されるマーカー、例えば、系譜マーカー、例えば、Ｂ細胞上のＣＤ１９である。ある実施態様において、腫瘍抗原は、正常細胞と比較して癌細胞で過発現している、例えば、正常細胞と比較して、１倍過発現、２倍過発現、３倍過発現またはそれ以上である、細胞表面分子をいう。ある実施態様において、腫瘍抗原は、癌細胞で不適切に合成される細胞表面分子、例えば、正常細胞で発現される分子と比較して、欠失、付加または変異を含む分子である。ある実施態様において、腫瘍抗原は、癌細胞の細胞表面に、全体的にまたはフラグメント(例えば、ＭＨＣ／ペプチド)として、排他的に発現され、正常細胞表面で合成または発現されない。ある実施態様において、本発明のＣＡＲは、ＭＨＣ提示ペプチドに結合する抗原結合ドメイン(例えば、抗体または抗体フラグメント)を含むＣＡＲを含む。通常、内因性タンパク質に由来するペプチドは主組織適合複合体(ＭＨＣ)クラスＩ分子のポケットを満たし、ＣＤ８＋  Ｔリンパ球のＴ細胞受容体(ＴＣＲ)により認識される。ＭＨＣクラスＩ複合体は、全有核細胞により構成的に発現される。癌において、ウイルス特異的および／または腫瘍特異的ペプチド／ＭＨＣ複合体は、免疫療法のための細胞表面標的の独特なクラスを表す。ヒト白血球抗原(ＨＬＡ)−Ａ１またはＨＬＡ−Ａ２の状況におけるウイルスまたは腫瘍抗原に由来するＴＣＲ様抗体ターゲティングペプチドは、記載されている(例えば、Sastry et al., J Virol. 2011 85(5):1935-1942; Sergeeva et al., Blood, 2011 117(16):4262-4272; Verma et al., J Immunol 2010 184(4):2156-2165; Willemsen et al., Gene Ther 2001 8(21) :1601-1608 ; Dao et al., Sci Transl Med 2013 5(176) :176ra33 ; Tassev et al., Cancer Gene Ther 2012 19(2):84-100参照)。例えば、ＴＣＲ様抗体は、ヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーなどのライブラリーのスクリーニングにより同定され得る。従って、本発明は、ＷＴ１、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１ａ、ＭＡＧＥ−Ａ１およびＲＡＧＥ−１の群から選択される分子のＭＨＣ提示ペプチドに結合する抗原結合ドメインを含む、ＣＡＲを提供する。
【０１４３】
用語“固形腫瘍抗原”または“固形腫瘍細胞抗原”は、それに結合する薬剤で標的化され得る、固形腫瘍細胞表面に優先的におよび特異的に発現される分子(一般にタンパク質、炭水化物または脂質)をいう。特に興味深い固形腫瘍抗原は、哺乳動物の他の非腫瘍組織と比較して、固形腫瘍細胞に優先的に発現される。固形腫瘍抗原は、１つの特定の固形腫瘍細胞集団、例えば、中皮腫腫瘍細胞または１を超える特定の固形腫瘍細胞集団、例えば、中皮腫腫瘍細胞と卵巣癌細胞の両方に発現され得る。固形腫瘍抗原の例は、ＥＧＦＲｖIII、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ  Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、ｌｅｇｕｍａｎ、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ−１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＭＡＤ−ＣＴ−２、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲベータ、ＳＳＥＡ−４、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ(例えば、ＥＲＢＢ２)、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６またはＥ７、ＭＬ−ＩＡＰ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、Ｆｏｓ関連抗原、好中球エラスターゼ、ＴＲＰ−２、ＣＹＰ１Ｂ１、精子タンパク質１７、ベータヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、サイログロブリン、ＰＬＡＣ１、ｇｌｏｂｏＨ、ＲＡＧＥ１、ＭＮ−ＣＡ  IX、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸管カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、ＮＡ−１７、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＧＦＲα４およびＭＨＣにより提示されるこれらの抗原の何れかのペプチドを含む。特に好ましい固形腫瘍抗原は、ＣＬＤＮ６、メソテリンおよびＥＧＦＲｖIIIを含む。
【０１４４】
用語“骨髄腫瘍抗原”または“骨髄腫瘍細胞抗原”は、それに結合する薬剤で標的化され得る、骨髄腫瘍細胞表面に優先的におよび特異的に発現される分子(一般にタンパク質、炭水化物または脂質)をいう。特に興味深い骨髄腫瘍抗原は、哺乳動物の他の非腫瘍組織と比較して、骨髄腫瘍細胞に優先的に発現される。骨髄腫瘍抗原は、１つの特定の骨髄腫瘍細胞集団、例えば、急性骨髄白血病(ＡＭＬ)腫瘍細胞または１を超える特定の骨髄腫瘍細胞集団に発現され得る。骨髄腫瘍抗原の例は、ＣＤ１２３、ＣＤ３３およびＣＬＬ−１を含む。
【０１４５】
用語“Ｂ細胞系譜ではない血液腫瘍の抗原”は、Ｂ細胞起源以外の造血またはリンパ系組織起源の腫瘍または癌の表面に優先的におよび特異的に発現される分子(一般にタンパク質、炭水化物または脂質)をいう。これらは、骨髄系譜起源の腫瘍、例えば、顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージおよび／または肥満細胞起源に由来する腫瘍またはその前駆体細胞集団の何れかおよびＢ細胞起源以外のリンパ系起源、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞および／または形質細胞起源またはその前駆体細胞集団の何れかの腫瘍を含む。
【０１４６】
ｓｃＦｖにおいてここで使用する用語“フレキシブルポリペプチドリンカー”または“リンカー”は、可変重鎖および可変軽鎖領域を一緒に結合させるために、単独でまたは組み合わせて使用される、グリシンおよび／またはセリン残基などのアミノ酸からなるペプチドリンカーをいう。ある実施態様において、フレキシブルポリペプチドリンカーはＧｌｙ／Ｓｅｒリンカーであり、アミノ酸配列(Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ)ｎを含み、ここで、ｎは１以上の正の整数である。例えば、ｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５およびｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９およびｎ＝１０(配列番号２８)。ある実施態様において、フレキシブルポリペプチドリンカーは、(Ｇｌｙ４Ｓｅｒ)４(配列番号２９)または(Ｇｌｙ４Ｓｅｒ)３(配列番号３０)を含むが、これらに限定されない。他の実施態様において、リンカーは、(Ｇｌｙ２Ｓｅｒ)、(ＧｌｙＳｅｒ)または(Ｇｌｙ３Ｓｅｒ)(配列番号３１)の複数の反復を含む。また本発明の範囲内に包含されるのは、引用により本明細書に包含させるＷＯ２０１２／１３８４７５号に記載のリンカーである。
【０１４７】
ここで使用する５’キャップ(ＲＮＡキャップ、ＲＮＡ  ７−メチルグアノシンキャップまたはＲＮＡ  ｍ７Ｇキャップ)は、転写開始直後に真核生物メッセンジャーＲＮＡの“前面”または５’末端に付加されている、修飾グアニンヌクレオチドである。５’キャップは、第一転写ヌクレオチドに結合した末端基からなる。その存在は、リボソームによる認識およびＲＮａｓｅからの保護に重要である。キャップ付加は転写と結び付き、互いに影響するように、共転写的に起こる。転写開始直後、合成されているｍＲＮＡの５’末端は、ＲＮＡポリメラーゼと結合したキャップ合成複合体により結合される。この酵素複合体は、ｍＲＮＡキャッピングに必要な化学反応を触媒する。合成は、多段階生化学反応として進行する。キャッピング部分は、安定性または翻訳効率などのｍＲＮＡの機能性を調節するために修飾され得る。
【０１４８】
ここで使用する“インビトロ転写ＲＮＡ”は、インビトロで合成されているＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡをいう。一般に、インビトロ転写ＲＮＡは、インビトロ転写ベクターから産生される。インビトロ転写ベクターは、インビトロ転写ＲＮＡの産生に使用される鋳型を含む。
【０１４９】
ここで使用する“ポリ(Ａ)”は、ｍＲＮＡのポリアデニル化により結合した一連のアデノシンをいう。一過性発現のための構築物の好ましい実施態様において、ポリＡは５０〜５０００(配列番号３４)、好ましくは６４超、より好ましくは１００超、最も好ましくは３００または４００を超える。ポリ(Ａ)配列は、局在化、安定性または翻訳効率などのｍＲＮＡ機能性を調節するために化学的または酵素的に修飾され得る。
【０１５０】
ここで使用する“ポリアデニル化”は、ポリアデニリル部分またはその修飾バリアントのメッセンジャーＲＮＡ分子への共有結合をいう。真核生物において、大部分のメッセンジャーＲＮＡ(ｍＲＮＡ)分子は３’末端でポリアデニル化される。３’ポリ(Ａ)テイルは、酵素、ポリアデニル酸ポリメラーゼの作用によりプレｍＲＮＡに付加されたアデニンヌクレオチドの長い配列(しばしば数百)である。高等真核生物において、ポリ(Ａ)テイルは、特異的配列、ポリアデニル化シグナルを含む転写物に付加される。ポリ(Ａ)テイルおよびそれに結合したタンパク質は、エキソヌクレアーゼによる分解からｍＲＮＡを保護するのを助ける。ポリアデニル化はまた転写終結、核からのｍＲＮＡ排出および翻訳にも重要である。ポリアデニル化は、ＤＮＡのＲＮＡへの転写直後核で生じるが、さらに後に細胞質でも生じ得る。転写が終了したら、ｍＲＮＡ鎖はＲＮＡポリメラーゼと結合したエンドヌクレアーゼ複合体の作用により開裂される。開裂部位は、通常開裂部位近くの塩基配列ＡＡＵＡＡＡの存在により特徴付けられる。ｍＲＮＡが開裂されたら、アデノシン残基は、開裂部位で遊離３’末端に付加される。
【０１５１】
ここで使用する“一過性”は、数時間、数日間または数週間の期間の非統合導入遺伝子の発現をいい、ここで、発現期間は、宿主細胞におけるゲノムに統合されるかまたは安定なプラスミドレプリコン内に含まれるときの該遺伝子の発現期間より短い。
【０１５２】
ここで使用する用語“処置”および“処置する”は、１以上の治療(例えば、本発明のＣＡＲなどの１以上の治療剤)の投与に起因する、増殖性障害の進行、重症度および／または期間の低減または改善または増殖性障害の１以上の症状(好ましくは、１以上の認識できる症状)の改善をいう。具体的実施態様において、用語“処置”および“処置する”は、患者により必ずしも認識できるものではない、腫瘍増殖などの増殖性障害の少なくとも１つの測定可能な身体的パラメータの改善をいう。他の実施態様において、用語“処置”および“処置する”は、例えば、認識できる症状の安定化により、身体的に、例えば、身体的パラメータの安定化により、生理学的にまたは両方での、増殖性障害の進行阻害をいう。他の実施態様において、用語“処置”および“処置する”は、腫瘍サイズまたは癌細胞数の減少または安定化をいう。
【０１５３】
用語“シグナル伝達経路”は、細胞のある部分から細胞の他の部分へのシグナル伝達に役割を有する多様なシグナル伝達分子間の生化学的関係をいう。用語“細胞表面受容体”は、細胞の膜を超えてシグナルを受け、シグナルを伝達できる分子および分子の複合体をいう。
【０１５４】
用語“対象”は、免疫応答が誘発され得る生存生物(例えば、哺乳動物、ヒト)を含むことを意図する。
【０１５５】
用語、“実質的に精製された”細胞は、他の細胞型が本質的にない細胞をいう。実質的に精製された細胞はまた、その天然に存在する状態で通常関係している他の細胞型から分離されている、細胞もいう。いくつかの例では、実質的に精製された細胞の集団は、細胞の同種集団をいう。他の例において、この用語は、単にその天然状態で本来関係している細胞から分離されている細胞を単にいう。ある態様において、細胞は、インビトロで培養されている。他の態様において、細胞は、インビトロで培養されていない。
【０１５６】
ここで使用する用語“治療”は処置を意味する。治療効果は、疾患状態の軽減、抑制、寛解または根絶により得られる。
【０１５７】
ここで使用する用語“耐容性”または“免疫耐容性”は、対象が通常応答する特異的抗原または抗原群に対して対象が有する免疫応答が減少または欠失している状態をいう。耐容性は、免疫反応を抑制する条件下で達成され、免疫応答の欠損のみではない。ある実施態様において、対象における耐容性は、次の１以上により特徴付けされ得る。未処置対象と比較した、特異的免疫学的応答レベル減少(例えば、が介在する抗原特異的エフェクターＴリンパ球、Ｂリンパ球または抗体)、特異的免疫学的応答の発生または進行遅延または特異的免疫学的応答発生または進行のリスク低減。
【０１５８】
ここで使用する用語“予防”は、疾患または疾患状態の防止または保護的処置をいう。
【０１５９】
用語“トランスフェクト”または“形質転換”または“形質導入”は、外因性核酸が宿主細胞に電脱または導入される過程をいう。“トランスフェクト”または“形質転換”または“形質導入”細胞は、外因性核酸でトランスフェクト、形質転換または形質導入されているものである。細胞は、初代対象細胞およびその子孫を含む。
【０１６０】
用語“特異的に結合”は、サンプルに存在する同族結合パートナー(例えば、Ｔ細胞に存在する刺激および／または共刺激分子)タンパク質を認識し、結合する抗体またはリガンドをいうが、この抗体またはリガンドは、サンプルにおける他の分子を実質的に認識または結合しない。
【０１６１】
ここで使用する“制御可能キメラ抗原受容体(ＲＣＡＲ)”は、免疫エフェクター細胞にあるとき、細胞に標的細胞、一般に癌細胞に対する特異性および制御可能細胞内シグナル産生を提供する、一組の、最も簡単な実施態様で一般に２個の、ポリペプチドをいう。ある実施態様において、ＲＣＡＲは、ＣＡＲ分子においてここに定義した、少なくとも１個の細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通および刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインおよび／または共刺激分子を含む細胞質シグナル伝達ドメイン(ここでは“細胞内シグナル伝達ドメイン”とも称する)を含む。ある実施態様において、ＲＣＡＲにおける一組のポリペプチドは互いに連続的ではなく、例えば、異なるポリペプチド鎖にある。ある実施態様において、ＲＣＡＲは、二量体化分子存在下、ポリペプチドを互いに結合できる、例えば、抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインに結合できる、二量体化スイッチを含み得る。ある実施態様において、ＲＣＡＲは、ここに記載する細胞(例えば、免疫エフェクター細胞)、例えば、ＲＣＡＲ発現細胞(ここでは“ＲＣＡＲＸ細胞”とも称する)に発現される。ある実施態様において、ＲＣＡＲＸ細胞はＴ細胞であり、ＲＣＡＲＴ細胞と称する。ある実施態様において、ＲＣＡＲＸ細胞はＮＫ細胞であり、ＲＣＡＲＮ細胞と称する。ＲＣＡＲは、ＲＣＡＲ発現細胞に標的細胞、一般に癌細胞に対する特異性および制御可能細胞内シグナル産生または増殖を提供でき、これは、ＲＣＡＲ発現細胞の免疫エフェクター性質を最適化し得る。ある実施態様において、ＲＣＡＲ細胞は、少なくとも一部、抗原結合ドメインにより結合される抗原を含む標的細胞への特異性を提供するために、抗原結合ドメインに依存する。
【０１６２】
ここで使用する用語“膜アンカー”または“膜繋留ドメイン”は、細胞外または細胞内ドメインを原形質膜に繋留するのに十分なポリペプチドまたは部分、例えば、ミリストイル基をいう。
【０１６３】
ここで使用する用語“スイッチドメイン”は、例えば、ＲＣＡＲを参照するとき、二量体化分子存在下、他のスイッチドメインと結合する、エンティティ、一般にポリペプチドベースのエンティティをいう。結合は、第一スイッチドメインに結合、例えば、融合した第一エンティティと、第二スイッチドメインに結合、例えば、融合した第二エンティティの機能的カップリングをもたらす。第一および第二スイッチドメインは、集合的に二量体化スイッチと称する。ある実施態様において、第一および第二スイッチドメインは、互いに同一であり、例えば、同じ一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、集合的にホモ二量体化スイッチと称する。ある実施態様において、第一および第二スイッチドメインは互いに異なり、例えば、異なる一次アミノ酸配列を有するポリペプチドであり、集合的にヘテロ二量体化スイッチと称する。ある実施態様において、スイッチは細胞内である。ある実施態様において、スイッチは細胞外である。ある実施態様において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースのエンティティ、例えば、ＦＫＢＰまたはＦＲＢベースであり、二量体化分子は小分子、例えば、ラパログである。ある実施態様において、スイッチドメインは、ポリペプチドベースのエンティティ、例えば、ｍｙｃペプチドに結合するｓｃＦｖであり、二量体化分子は、ポリペプチド、そのフラグメントまたはポリペプチドの多量体、例えば、ｍｙｃリガンドまたは１以上のｍｙｃ  ｓｃＦｖに結合するｍｙｃリガンドの多量体である。ある実施態様において、スイッチドメインはポリペプチドベースのエンティティ、例えば、ｍｙｃ受容体であり、二量体化分子は抗体またはそのフラグメント、例えば、ｍｙｃ抗体である。
【０１６４】
ここで使用する“二量体化分子”は、例えば、ＲＣＡＲを参照するとき、第一スイッチドメインと第二スイッチドメインの結合を促進する分子をいう。ある実施態様において、二量体化分子は対象に天然に存在しないかまたは顕著な二量体化をもたらす濃度で存在しない。ある実施態様において、二量体化分子は小分子、例えば、ラパマイシンまたはラパログ、例えば、ＲＡＤ００１である。
【０１６５】
用語“生物学的同等”は、対照化合物(例えば、ＲＡＤ００１)の対照用量または対照量により産生される効果と同等な効果を産生するのに必要な、対照化合物(例えば、ＲＡＤ００１)以外の薬剤の量をいう。ある実施態様において、効果は、例えば、Ｐ７０  Ｓ６キナーゼ阻害により測定して、例えば、インビボまたはインビトロアッセイにおいて評価して、例えば、ここに記載するアッセイ、例えば、Ｂｏｕｌａｙアッセイまたはウェスタンブロットによるリン酸化Ｓ６レベルの測定により測定して、ｍＴＯＲ阻害のレベルである。ある実施態様において、効果は、細胞選別により測定して、ＰＤ−１陽性／ＰＤ−１陰性Ｔ細胞比の改変である。ある実施態様において、ｍＴＯＲ阻害剤の生物学的同等量または用量は、対照化合物の対照用量または対照量と同じレベルのＰ７０  Ｓ６キナーゼ阻害を達成する量または用量である。ある実施態様において、ｍＴＯＲ阻害剤の生物学的同等量または用量は、対照化合物の対照用量または対照量と同じレベルのＰＤ−１陽性／ＰＤ−１陰性Ｔ細胞比改変を達成する量または用量である。
【０１６６】
ｍＴＯＲ阻害剤、例えば、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤、例えば、ＲＡＤ００１またはラパマイシンまたは触媒的ｍＴＯＲ阻害剤と組み合わせて使用するときの用語“低い、免疫増強用量”は、例えば、Ｐ７０  Ｓ６キナーゼ活性阻害により測定して、ｍＴＯＲ  活性を完全ではなく、一部阻害する、ｍＴＯＲ阻害剤の用量をいう。例えば、Ｐ７０  Ｓ６キナーゼ阻害により、ｍＴＯＲ活性を評価する方法は、ここに記載する。用量は、完全免疫抑制をもたらすには不十分であるが、免疫応答増強には十分である。ある実施態様において、低い、免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤は、ＰＤ−１陽性Ｔ細胞数減少および／またはＰＤ−１陰性Ｔ細胞数増加またはＰＤ−１陰性Ｔ細胞／ＰＤ−１陽性Ｔ細胞比増加をもたらす。ある実施態様において、低い、免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤は、ナイーブＴ細胞数増加をもたらす。ある実施態様において、低い、免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤は、次の１以上をもたらす。
例えば、記憶Ｔ細胞、例えば、記憶Ｔ細胞前駆体における、次のマーカーＣＤ６２Ｌ高、ＣＤ１２７高、ＣＤ２７＋およびＢＣＬ２の１以上の発現増加；
例えば、記憶Ｔ細胞、例えば、記憶Ｔ細胞前駆体における、ＫＬＲＧ１発現減少；および
記憶Ｔ細胞前駆体、例えば、次のＣＤ６２Ｌ高増加、ＣＤ１２７高増加、ＣＤ２７＋増加、ＫＬＲＧ１減少およびＢＣＬ２増加の任意の１個または組み合わせを有する細胞の数の増加；
ここで、上記変化は、例えば、非処置対象と比較して、例えば、少なくとも一過性に、生じる。
【０１６７】
ここで使用する“難治性”は、処置に応答しない疾患、例えば、癌をいう。ある実施態様において、難治性癌は、処置前または開始時に該処置に耐性であり得る。他の実施態様において、難治性癌は、処置中に耐性となり得る。難治性癌はまた耐性癌とも称される。
【０１６８】
ここで使用する“再発した”または“再発”は、例えば、治療、例えば、癌治療の先の処置後、改善または応答性期間後の疾患(例えば、癌)または癌などの疾患の徴候および症状の回帰または再出現をいう。最初の応答性期間は、ある閾値未満、例えば、２０％、１％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満への癌細胞レベルの低下を含み得る。再出現は、ある閾値を超える、例えば、２０％、１％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％を超える癌細胞レベルの増加を含み得る。例えば、例えば、Ｂ−ＡＬＬの場合、再出現は、例えば、完全応答後の血液、骨髄(＞５％)または髄外部位何れかへの、芽細胞の再出現を含み得る。完全応答は、この場合、＜５％ＢＭ芽細胞を含み得る。より一般に、ある実施態様において、応答(例えば、完全応答または部分的応答)は、検出可能ＭＲＤ(最小残存疾患)の非存在を含み得る。ある実施態様において、応答性の最初の期間は、少なくとも１日、２日、３日、４日、５日または６日；少なくとも１週、２週、３週または４週；少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、８ヶ月、１０ヶ月または１２ヶ月；または少なくとも１年、２年、３年、４年または５年続く。
【０１６９】
範囲：本明細書をとおして、本発明の種々の態様が範囲形式で提供され得る。範囲形式での記載は、単に簡便および簡潔を目的とし、本発明の範囲に確固たる制限を与えるものではないことは理解すべきである。従って、範囲の記載は、具体的に開示された全ての可能は部分範囲および該範囲内の個々の数値を有すると解釈すべきである。例えば、１〜６などの範囲の記載は、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６などの具体的に開示された部分範囲および、例えば、１、２、２.７、３、４、５、５.３および６などの個々の数字を有すると解釈されるべきである。他の例として、９５〜９９％同一性などの範囲は、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性のなにかを含み、９６〜９９％、９６〜９８％、９６〜９７％、９７〜９９％、９７〜９８％および９８〜９９％同一性などの下位範囲を含む。これは、範囲の広さに関係なく適用される。
【０１７０】
記載
ここに提供されるのは、Ｂ細胞抗原を標的とする第一ＣＡＲ分子(例えば、ＢＣＡ  ＣＡＲ)および腫瘍抗原を標的とする第二ＣＡＲ分子(例えば、ＴＡ  ＣＡＲ)を発現するように操作された細胞、例えば、免疫エフェクター細胞(例えば、ＮＫ細胞またはＴ細胞)のしようを含む、癌などの疾患の処置のために使用する、組成物および方法である。ある実施態様において、疾患は、固形腫瘍、骨髄腫瘍またはＢ細胞系譜ではない血液腫瘍などの癌である。ある実施態様において、腫瘍は固形腫瘍である。ある実施態様において、腫瘍は骨髄腫瘍である。ある実施態様において、腫瘍はＢ細胞系譜ではない血液腫瘍である。
【０１７１】
ある実施態様において、ここに記載する組成物および方法は、ＢＣＡ  ＣＡＲを発現しない同じ細胞と比較して、増殖が増強されたおよび／またはインビボ生存性が増加または延長された腫瘍ターゲティングＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞をもたらす。
【０１７２】
理論に拘束されることを意図しないが、細胞、例えば、腫瘍抗原を標的とするＣＡＲ(ＴＡ  ＣＡＲ)を発現する免疫エフェクター細胞またはＢ細胞抗原を標的とするＣＡＲ(ＢＣＡ  ＣＡＲ)を発現する免疫エフェクター細胞での処置は、対象におけるＴＡ  ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞の抗腫瘍有効性を、例えば、ＴＡ  ＣＡＲのみを発現する(例えば、ＢＣＡ  ＣＡＲを発現しない)免疫エフェクター細胞の投与と比較して、該ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞の増殖の増加および／または該ＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞のインビボ生存性の増加の、例えば、１以上により、増強する。理論に拘束されないが、例えば、固形腫瘍をターゲティングするＣＡＲ細胞療法は、ＣＡＲにより標的化される腫瘍抗原を発現する細胞が非寛容となるまたはＣＡＲ発現細胞の影響により数が減るため、インビボ生存性欠如となる可能性がある。対象的に、例えば、ＣＤ１９などのＢ細胞抗原をターゲティングするＣＡＲ−Ｔ細胞療法は、インビボでの迅速かつ顕著な拡大(expansion)と、続く長期生存性を示す。理論に拘束されないが、Ｂ細胞抗原をターゲティングするＣＡＲ−Ｔ細胞療法で見られるこれらの有利な効果は、Ｂ細胞の広範な(すなわち、循環)利用能により介在され得て、これが、Ｂ細胞抗原ターゲティングＣＡＲを発現する細胞を、この容易に利用可能な細胞集団に曝し、それにより刺激されることを可能とし、さらにＢ細胞／Ｔ細胞相互作用の天然免疫刺激効果により増強され得る。それ故に、理論に拘束されないが、Ｂ細胞抗原を標的とするＣＡＲの包含は、該ＣＡＲを発現するＣＡＲＴ細胞の迅速な拡大および生存性に介在し、ＣＡＲ細胞がさらに腫瘍抗原を発現するとき、このような細胞は、腫瘍抗原ターゲティングＣＡＲのみを発現するＣＡＲ  Ｔ細胞と比較して、該腫瘍抗原を発現する細胞集団が低いか、非寛容または非現存であってさえ、このような効果により利益を得る点で有利であり、それにより、ＣＡＲＴ細胞が腫瘍抗原発現細胞、例えば、癌に対する改善された細胞毒性の仲介を誘発し、細胞を再投与することなく、寛解期間の間持続し、その後、再発の期間に有効となり得ることを可能とする。それ故に、ＢＣＡ  ＣＡＲおよびＴＡ  ＣＡＲの両方を発現する細胞、例えば、免疫エフェクター細胞の投与は、疾患、例えば、癌の処置に対するＴＡ  ＣＡＲ発現細胞の有効性を増強し得る。
【０１７３】
本発明の細胞は、Ｂ細胞抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む第一ＣＡＲ分子を発現するように遺伝的操作され、かつ腫瘍抗原に特異的な抗原結合ドメインを含む第二ＣＡＲ分子を発現するように遺伝的操作される。ある実施態様において、Ｂ細胞抗原は、腫瘍抗原を発現する細胞に発現しない。抗原結合ドメインはここに記載するＢ細胞抗原またはここに記載する腫瘍抗原に結合する。Ｂ細胞抗原に結合するＣＡＲ分子は、ここでは“ＢＣＡ  ＣＡＲ”とも称する。Ｂ細胞抗原以外の腫瘍抗原、例えば、固形腫瘍抗原、骨髄腫瘍抗原またはＢ細胞起源ではない血液腫瘍の抗原に結合するＣＡＲ分子は、ここでは、“ＴＡ  ＣＡＲ”とも称する。ＣＡＲは、さらに膜貫通ドメインおよび共刺激ドメインおよび／または、例えば、ここに記載する、一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲおよび／またはＴＡ  ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＩＣＯＳおよびＣＤ２８シグナル伝達モジュールおよびそれらの組み合わせの１以上を含むが、これらに限定されない。
【０１７４】
ある態様において、本発明は、ＴＡ  ＣＡＲを発現するように操作され、かつＢＣＡ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を提供し、ここで、操作された免疫エフェクター細胞は抗腫瘍性質を示し、例えば、腫瘍体積を減少させ、腫瘍退縮を刺激し、腫瘍負荷を減少させまたは全生存を増加させ、同時に、ＢＣＡ  ＣＡＲを発現しない同じ細胞と比較して、インビボの生存性を増加させまたは増殖を増加させる。
【０１７５】
またここに記載されるのは、ＢＣＡ  ＣＡＲおよびＴＡ  ＣＡＲを発現するように操作された該細胞を使用する方法である。
【０１７６】
またここに記載されるのは、ＢＣＡ  ＣＡＲおよびＴＡ  ＣＡＲを発現するように操作された細胞を製造または選択する方法、腫瘍抗原と関係する疾患の処置のために細胞を投与する方法および本発明の細胞と共に使用するための付加的組み合わせ治療である。
【０１７７】
キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)
本発明は、腫瘍抗原に結合するＣＡＲ分子(例えば、ＴＡ  ＣＡＲ)およびＢ細胞抗原に結合するＣＡＲ分子(例えば、ＢＣＡ  ＣＡＲ)をコードする配列を含む１以上の組み換え核酸構築物を含む免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞)を包含し、ここで、ＴＡ  ＣＡＲは、ここに記載する腫瘍抗原に特異的に結合する抗原結合ドメイン(例えば、抗体または抗体フラグメント、ＴＣＲまたはＴＣＲフラグメント)を含み、ＢＣＡ  ＣＡＲは、ここに記載するＢ細胞抗原に特異的に結合する抗原結合ドメイン(例えば、抗体または抗体フラグメント、ＴＣＲまたはＴＣＲフラグメント)を含み、例えば、ここで、抗原結合ドメインの配列は、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列と連続的であり、同じリーディングフレームにある。細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインおよび／または一次シグナル伝達ドメイン、例えば、ゼータ鎖を含み得る。共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内ドメインの少なくとも一部を含む、ＣＡＲの部分をいう。
【０１７８】
ある態様において、本発明のＣＡＲは、ＣＤ１３７(４−１ＢＢ)シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳシグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータシグナルドメインおよびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある態様において、本発明のＣＡＲは、ＣＤ１３７(４−１ＢＢ)、ＣＤ２８、ＣＤ２７またはＩＣＯＳから選択される１以上の共刺激分子からの少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０１７９】
ＣＡＲ分子、例えば、ここに記載するＴＡ  ＣＡＲまたはＢＣＡ  ＣＡＲの一部であり得る種々の成分の配列の非限定的例を表１に挙げ、ここで、“ａａ”はアミノ酸を意味し、“ｎａ”は対応するペプチドをコードする核酸を意味する。
【０１８０】
【表１】
2019513347.tif 000003
【表２】
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【０１８１】
【表３】
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【表４】
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【０１８２】
【表５】
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【０１８３】
具体的態様において、本発明のＣＡＲ構築物(Ｂ細胞抗原に結合するＣＡＲまたは腫瘍抗原に結合するＣＡＲ)はｓｃＦｖドメインを含み、ここで、ｓｃＦｖは、配列番号２に提供されるような任意的リーダー配列が先頭にあり、続いて配列番号４または配列番号６または配列番号８または配列番号１０に提供されるような任意的ヒンジ配列、配列番号１２に提供されるような膜貫通領域、配列番号１４、配列番号１６、配列番号４２または配列番号４４を含む細胞内シグナル伝達ドメインおよび配列番号１８または配列番号２０を含むＣＤ３ゼータ配列があってよく、例えば、ここで、ドメインは、単一融合タンパク質を形成するように連続的であり、同じリーディングフレームにある。
【０１８４】
ある態様において、ＣＡＲ構築の例は、任意的リーダー配列(例えば、ここに記載するリーダー配列)、細胞外抗原結合ドメイン(例えば、ここに記載する抗原結合ドメイン)、ヒンジ(例えば、ここに記載するヒンジ領域)、膜貫通ドメイン(例えば、ここに記載する膜貫通ドメイン)および細胞内刺激ドメイン(例えば、ここに記載する細胞内刺激ドメイン)を含む。ある態様において、ＣＡＲ構築物の例は、任意的リーダー配列(例えば、ここに記載するリーダー配列)、細胞外抗原結合ドメイン(例えば、ここに記載する抗原結合ドメイン)、ヒンジ(例えば、ここに記載するヒンジ領域)、膜貫通ドメイン(例えば、ここに記載する膜貫通ドメイン)、細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン(例えば、ここに記載する共刺激シグナル伝達ドメイン)および／または細胞内一次シグナル伝達ドメイン(例えば、ここに記載する一次シグナル伝達ドメイン)を含む。
【０１８５】
リーダー配列の例は、配列番号２として提供される。ヒンジ／スペーサー配列の例は、配列番号４または配列番号６または配列番号８または配列番号１０として提供される。膜貫通ドメイン配列の例は、配列番号１２として提供される。４−１ＢＢタンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインの配列の例は、配列番号１４として提供される。ＣＤ２７の細胞内シグナル伝達ドメインの配列の例は、配列番号１６として提供される。ＣＤ２８の細胞内シグナル伝達ドメインの配列の例は、配列番号４２として提供される。ＣＤ２８の細胞内シグナル伝達ドメインの配列の例は、配列番号４４として提供される。ＣＤ３ゼータドメイン配列の例は、配列番号１８または配列番号２０として提供される。
【０１８６】
所望の分子をコードする核酸配列は、標準技法を使用する、例えば核酸分子を発現する細胞からのライブラリーのスクリーニング、それを含むことが知られるベクターからの核酸分子の誘導化またはそれを含む細胞および組織から直接単離などの、当分野で知られる組み換え方法を使用して得ることができる。あるいは、目的の核酸をクローン化ではなく、合成により産生できる。
【０１８７】
本発明は、細胞に直接形質導入できるＣＡＲを発現するレトロウイルスおよびレンチウイルスベクター構築物を含む。ウイルス形質導入の方法はここに記載され、当分野で周知である。
【０１８８】
本発明はまた、細胞に直接トランスフェクトできるＲＮＡ構築物も含む。トランスフェクションに使用するｍＲＮＡを産生する方法は、３’および５’非翻訳配列(“ＵＴＲ”)(例えば、ここに記載する３’および／または５’ＵＴＲ)、５’キャップ(例えば、ここに記載する５’キャップ)および／または配列内リボソーム進入部位(ＩＲＥＳ)(例えば、ここに記載するＩＲＥＳ)、発現する核酸および、一般に５０〜２０００塩基長のポリＡテイル(配列番号３２)を含む構築物を産生するために、特別に設計されたプライマーを用いる鋳型のインビトロ転写(ＩＶＴ)、続くポリＡ付加を含む。このように産生されたＲＮＡは、様々な種の細胞を効率的にトランスフェクトし得る。ある実施態様において、鋳型は、ＣＡＲのための配列を含む。ある実施態様において、ＲＮＡ  ＣＡＲベクターを、エレクトロポレーションにより、細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞にトランスフェクトする。
【０１８９】
抗原結合ドメイン
ある態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞は、抗原結合ドメインとも称する標的特異的結合エレメントを含む。部分の選択は、標的細胞表面を規定するリガンドのタイプおよび数による。例えば、抗原結合ドメインは、特定の疾患状態と関連する標的細胞上の細胞表面マーカー、例えば、特定の癌と関連する腫瘍抗原(例えば、腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメイン)として働くリガンドを認識するように選択または操作され得る。他の実施態様において、抗原結合ドメインは、正常Ｂ細胞または標的Ｂ細胞集団(例えば、Ｂ細胞抗原に結合する抗原結合ドメイン)の枯渇のために、正常Ｂ細胞またはＢ細胞の亜集団を認識するように選択または操作される。
【０１９０】
抗原結合ドメインは、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組み換え抗体、二重特異性抗体、コンジュゲート抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体および重鎖可変ドメイン(ＶＨ)、軽鎖可変ドメイン(ＶＬ)およびラクダ類由来ナノボディの可変ドメイン(ＶＨＨ)を含むが、これらに限定されないその機能的フラグメントおよび組み換えフィブロネクチンドメイン、Ｔ細胞受容体(ＴＣＲ)、親和性が増強した組み換えＴＣＲまたはそのフラグメント、例えば、一本鎖ＴＣＲなどの抗原結合ドメインとして機能することが当分野で知られる代替的足場を含むが、これらに限定されない、抗原に結合するあらゆるドメインであり得る。いくつかの例では、抗原結合ドメインがＣＡＲが最終的に使用されるのと同じ種に由来するのが有利である。例えば、ヒトにおける使用のために、ＣＡＲの抗原結合ドメインが抗体または抗体フラグメントの抗原結合ドメインのヒトまたはヒト化残基を含むのが有利であり得る。
【０１９１】
腫瘍抗原
本発明は、免疫エフェクター細胞を癌細胞に向ける１以上のＣＡＲを含むように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を提供する。これは、腫瘍抗原に特異的なＣＡＲの抗原結合ドメインにより達成される。本発明のＣＡＲにより標的化され得る、(１)癌細胞表面に発現される腫瘍抗原および(２)それ自体は細胞内であるが、このような抗原のフラグメント(ペプチド)がＭＨＣ(主組織適合複合体)により癌細胞の表面に提示される腫瘍抗原の２クラスの腫瘍抗原(腫瘍抗原)がある。
【０１９２】
ある実施態様において、腫瘍抗原は正常細胞および癌細胞の両方に発現されるが、正常細胞で低レベルで発現される。ある実施態様において、本方法は、さらに、例えば、ここに記載するアッセイにより決定して、ＴＡ  ＣＡＲを発現するように操作された細胞が、腫瘍抗原を発現する癌細胞に結合し、死滅させるが、腫瘍抗原を発現する正常細胞のせいぜい３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％またはそれ以下を死滅させることを可能とする、親和性で腫瘍抗原に結合するＴＡ  ＣＡＲを選択することを含む。例えば、Ｃｒ５１  ＣＴＬに基づくフローサイトメトリーなどの殺滅アッセイが使用され得る。ある実施態様において、選択ＴＡ  ＣＡＲは、標的抗原に対して１０−４Ｍ〜１０−８Ｍ、例えば、１０−５Ｍ〜１０−７Ｍ、例えば、１０−６Ｍまたは１０−７Ｍの結合親和性ＫＤを有する抗原結合ドメインを有する。ある実施態様において、選択抗原結合ドメインは、対照抗体、例えば、ここに記載する抗体より少なくとも５倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍または１,０００倍少ない結合親和性を有する。
【０１９３】
従って、本発明の細胞は、例示的腫瘍抗原(腫瘍抗原)ＣＤ１２３、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ−１、ＣＬＬ−１(ＣＬＥＣＬ１)、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖIII、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｔｎ  Ａｇ、ｓＴｎ  Ａｇ、Ｔｎ−Ｏ−グリコペプチド、Ｓｔｎ−Ｏ−グリコペプチド、ＰＳＭＡ、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ−１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＰＤＧＦＲベータ、ＰＲＳＳ２１、ＳＳＥＡ−４、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２(Ｈｅｒ２／ｎｅｕ)、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ−Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ−ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１ａ、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６,Ｅ７、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ  Ａ１、ＥＴＶ６−ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＭＡＤ−ＣＴ−２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビンおよびテロメラーゼ、ＰＣＴＡ−１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ−ＩＡＰ、ＥＲＧ(ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合遺伝子)、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ−２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ−１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸管カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１およびＭＨＣ上に提示されるこれらの抗原のペプチドの何れか１つを標的とする、例えば、結合できる、抗原結合ドメインを含むＴＡ  ＣＡＲを発現するように操作される、例えば、発現する。
【０１９４】
ある実施態様において、ＴＡ  ＣＡＲ、例えば、本発明の細胞により発現されるＴＡ  ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ここで固形腫瘍関連抗原と称する、固形腫瘍と関係する、例えば、固形腫瘍細胞により発現される腫瘍抗原、例えば、中皮腫(例えば、悪性胸膜中皮腫)、肺癌(例えば、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、扁平上皮細胞肺癌もしくは大細胞肺癌)、膵臓癌(例えば、膵管腺癌)、食道腺癌、卵巣癌、乳癌、結腸直腸癌および膀胱癌またはそれらの任意の組み合わせと関係する抗原を標的とする。ある実施態様において、疾患は、例えば、少なくとも１つの先の標準治療で進行している対象における、膵臓癌、例えば、転移膵管腺癌(ＰＤＡ)である。ある実施態様において、疾患は、例えば、少なくとも１つの先の標準治療で進行している対象にある、中皮腫(例えば、悪性胸膜中皮腫)である。ある実施態様において、疾患は、例えば、準治療の少なくとも１つの先のレジメン後進行している対象における、卵巣癌、例えば、漿液性上皮性卵巣癌である。
【０１９５】
固形腫瘍関連抗原(すなわち、固形腫瘍抗原)の例は、ＥＧＦＲｖIII、メソテリン、ＧＤ２、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ−Ｏ−グリコペプチド、ｓＴｎ−Ｏ−グリコペプチド、ＰＳＭＡ、ＣＤ９７、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、ＫＩＴ、ＩＬ−１３Ｒａ２、ｌｅｇｕｍａｎ、ＧＤ３、ＣＤ１７１、ＩＬ−１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＭＡＤ−ＣＴ−２、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲベータ、ＳＳＥＡ−４、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ(例えば、ＥＲＢＢ２)、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、エフリンＢ２、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｓＬｅ、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ−アセチル−ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＦＡＰ、レグマイン、ＨＰＶ  Ｅ６またはＥ７、ＭＬ−ＩＡＰ、ＣＬＤＮ６、ＴＳＨＲ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、Ｆｏｓ関連抗原、好中球エラスターゼ、ＴＲＰ−２、ＣＹＰ１Ｂ１、精子タンパク質１７、ベータヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＡＦＰ、サイログロブリン、ＰＬＡＣ１、ｇｌｏｂｏＨ、ＲＡＧＥ１、ＭＮ−ＣＡ  IX、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、腸管カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２、ＮＡ−１７、ＮＹ−ＢＲ−１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＧＰＲ２０、Ｌｙ６ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＧＦＲα４およびＭＨＣにより提示されるこれらの抗原の何れかのペプチドを含む。
【０１９６】
ある実施態様において、ＴＡ  ＣＡＲ、例えば、本発明の細胞により発現されるＴＡ  ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ヒトメソテリンに結合する。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、ヒトメソテリンに結合するマウスｓｃＦｖドメイン、例えば、ＳＳ１または配列番号４６である。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、マウスＳＳ１  ｓｃＦｖに由来するヒト化抗体または抗体フラグメント、例えば、ｓｃＦｖドメインである。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、ヒトメソテリンに結合するヒト抗体または抗体フラグメントである。メソテリンに結合するヒトｓｃＦｖドメイン(およびその配列)およびマウスＳＳ１  ｓｃＦｖの例を表２に挙げる。ＣＤＲ配列は下線を引く。表２に提供されるｓｃＦｖドメイン配列は、軽鎖可変領域(ＶＬ)および重鎖可変領域(ＶＨ)を含む。ＶＬおよびＶＨは、配列GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号３０)(例えば、ＳＳ１  ｓｃＦｖドメインに示す)またはGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(配列番号２９)(例えば、Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４、Ｍ５、Ｍ６、Ｍ７、Ｍ８、Ｍ９、Ｍ１０、Ｍ１１、Ｍ１２、Ｍ１３、Ｍ１４、Ｍ１５、Ｍ１６、Ｍ１７、Ｍ１８、Ｍ１９、Ｍ２０、Ｍ２１、Ｍ２２、Ｍ２３またはＭ２４  ｓｃＦｖドメインに示す)を含むリンカーにより結合される。表２に挙げるｓｃＦｖドメインは、次のＶＬ−リンカー−ＶＨの配向である。
【０１９７】
【表６】
2019513347.tif 000008
【表７】
2019513347.tif 000009
【表８】
2019513347.tif 000010
【０１９８】
表２に挙げるメソテリン抗原結合ドメインのｓｃＦｖドメインのＣＤＲ配列の配列を重鎖可変ドメインについて表３および軽鎖可変ドメインについて表４に示す。
【０１９９】
【表９】
2019513347.tif 000011
【０２００】
【表１０】
2019513347.tif 000012
【０２０１】
例えば、既知抗体、二重特異性分子またはＣＡＲからのあらゆる既知抗メソテリン結合ドメインが本発明のＴＡ  ＣＡＲにおける使用に適し得る。例えば、メソテリンに対する抗原結合ドメインは、例えば、ＰＣＴ公報ＷＯ２０１５／０９０２３０号に記載する、抗体、抗原結合フラグメントまたはＣＡＲの抗原結合、例えば、ＣＤＲまたはＶＨおよびＶＬであるまたはそれに由来し得る。ある実施態様において、メソテリンに対する抗原結合ドメインは、例えば、ＰＣＴ公報ＷＯ１９９７／０２５０６８号、ＷＯ１９９９／０２８４７１号、ＷＯ２００５／０１４６５２号、ＷＯ２００６／０９９１４１号、ＷＯ２００９／０４５９５７号、ＷＯ２００９／０６８２０４号、ＷＯ２０１３／１４２０３４号、ＷＯ２０１３／０４０５５７号またはＷＯ２０１３／０６３４１９号に記載する、抗体、抗原結合フラグメントまたはＣＡＲの抗原結合部分、例えば、ＣＤＲまたはＶＨおよびＶＬであるまたはそれに由来し得る。
【０２０２】
ある実施態様において、メソテリン結合ドメインは、ここに記載する、例えば、表２または４に挙げる、軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)の１以上(例えば、全３)および／またはここに記載する、例えば、表２または３に挙げる重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)の１以上(例えば、全３)を含む。ある実施態様において、メソテリン結合ドメインは、表４に挙げる何れかのアミノ酸配列のＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２およびＬＣ  ＣＤＲ３の１、２または全ておよび表３に挙げる何れかのアミノ酸配列のＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２およびＨＣ  ＣＤＲ３の１、２または全てを含む。
【０２０３】
ある実施態様において、メソテリン抗原結合ドメインは
(ｉ)(ａ)配列番号１８４のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２０９のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２３４のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１１５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３４のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１５９のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(ii)(ａ)配列番号１９０のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１５のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２４０のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１２１のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４１のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１６５のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(iii)(ａ)配列番号２０４のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２９のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２５４のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１３２のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５４のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１７９のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(iv)(ａ)配列番号１８０のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２０５のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２３０のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１１３のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３３のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１５５のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(ｖ)(ａ)配列番号１８１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２０６のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２３１のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１１３のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３４のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１５６のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(vi)(ａ)配列番号１８２のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２０７のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２３２のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１１３のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３４のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１５７のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(vii)(ａ)配列番号１８３のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２０８のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２３３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１１４のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３５のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１５８のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(viii)(ａ)配列番号１８６のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１０のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２３５のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１１６のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３６のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１６０のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(ix)(ａ)配列番号１８６のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１１のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２３６のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１１７のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３７のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１６１のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(ｘ)(ａ)配列番号１８７のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１２のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２３７のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１１８のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３８のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１６２のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(xi)(ａ)配列番号１８８のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１３のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２３８のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１１９のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１３９のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１６３のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(xii)(ａ)配列番号１８９のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１４のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２３９のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１２０のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４０のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１６４のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(xiii)(ａ)配列番号１９１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１６のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２４１のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１２１のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４２のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１６６のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(xiv)(ａ)配列番号１９２のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１７のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２４２のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１２２のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４３のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１６７のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(xv)(ａ)配列番号１９３のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１８のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２４３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１２３のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４４のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１６８のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(xvi)(ａ)配列番号１９４のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２１９のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２４４のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１２４のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４５のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１６９のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(xvii)(ａ)配列番号１９５のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２０のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２４５のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１２４のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４６のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１７０のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(xviii)(ａ)配列番号１９６のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２１のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２４６のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１２４のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４６のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１７１のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(xix)(ａ)配列番号１９７のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２２のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２４７のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１２５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４７のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１７２のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(xx)(ａ)配列番号１９８のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２３のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２４８のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１２６のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４８のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１７３のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(xxi)(ａ)配列番号１９９のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２４のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２４９のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１２７のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１４９のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１７４のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(xxii)(ａ)配列番号２００のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２５のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２５０のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１２８のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５０のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１７５のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(xxiii)(ａ)配列番号２０１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２６のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２５１のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１２９のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５１のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１７６のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(xxiv)(ａ)配列番号２０２のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２７のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２５２のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１３０のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５２のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１７７のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；または
(xxv)(ａ)配列番号２０３のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２８のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２５３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号１３１のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５３のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１７８のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
を含む。
【０２０４】
ある実施態様において、メソテリン結合ドメインは、ここに(例えば、表２に)記載する軽鎖可変領域および／またはここに(例えば、表２に)記載する重鎖可変領域を含む。ある実施態様において、メソテリン結合ドメインは、表２に挙げるアミノ酸配列の軽鎖および重鎖を含むｓｃＦｖである。ある実施態様において、メソテリン結合ドメイン(例えば、ｓｃＦｖ)は、表２に挙げる軽鎖可変領域に少なくとも１、２または３修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が３０、２０または１０を超えないアミノ酸配列または表２に挙げるアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域および／または表２に挙げる重鎖可変領域に少なくとも１、２または３修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が３０、２０または１０を超えないアミノ酸配列または表２に挙げるアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０２０５】
ある実施態様において、メソテリン結合ドメインは、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９および配列番号７０からなる群から選択されるアミノ酸配列または前記配列の何れかに少なくとも１、２または３修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が３０、２０または１０を超えないアミノ酸配列；または前記配列の何れかと９５〜９９％同一性を有する配列を含む。ある実施態様において、メソテリン結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、ここに、例えば、表２に記載するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域が、ここに、例えば、表２に記載するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域に、リンカー、例えば、ここに記載するリンカーを介して結合している。ある実施態様において、メソテリン結合ドメインは(Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ)ｎリンカーを含み、ここで、ｎは１、２、３、４、５または６、好ましくは４である(配列番号８０)。ＳｃＦｖの軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、例えば、次の軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域または重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域の配向の何れかであり得る。
【０２０６】
ある実施態様において、ＴＡ  ＣＡＲ、例えば、本発明の細胞により発現されるＴＡ  ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ヒトＥＧＦＲｖIIIに結合する。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、例えば、ｍｕ３１０Ｃなどの、ヒトＥＧＦＲｖIIIに結合するマウスｓｃＦｖドメインである。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、マウスｍｕ３１０Ｃ  ｓｃＦｖに由来するヒト化抗体または抗体フラグメント、例えば、ｓｃＦｖドメインである。ＥＧＦＲｖIIIに結合するヒト化ｓｃＦｖドメイン(およびその配列)およびマウスＳＳ１の例は、表５に提供される。
【０２０７】
ある実施態様において、ＴＡ  ＣＡＲ、例えば、本発明の細胞により発現されるＴＡ  ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ヒトクローディン６(ＣＬＤＮ６)に結合する。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、ヒトＣＬＤＮ６に結合するマウスｓｃＦｖドメインである。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体または抗体フラグメントである。ＣＬＤＮ６に結合するｓｃＦｖドメイン(およびその配列)の例は、表５に提供される。表５に提供されるｓｃＦｖドメイン配列は、軽鎖可変領域(ＶＬ)および重鎖可変領域(ＶＨ)を含む。ＶＬおよびＶＨは、例えば、次の配向ＶＬ−リンカー−ＶＨで、配列GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(配列番号２９)を含むリンカーにより結合される。
【０２０８】
【表１１】
2019513347.tif 000013
【０２０９】
ある実施態様において、ＥＧＦＲｖIII結合ドメインは、ここに記載する、例えば、表５に挙げるＥＧＦＲｖIII結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)の１以上(例えば、全３)および／またはここに記載する、例えば、表５に挙げるＥＧＦＲｖIII結合ドメインの重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)の１以上(例えば、全３)を含む。
【０２１０】
ある実施態様において、ＥＧＦＲｖIII結合ドメインは、ここに(例えば、表５)に記載の軽鎖可変領域および／またはここに(例えば、表５)に記載の重鎖可変領域を含む。ある実施態様において、ＥＧＦＲｖIII結合ドメイン表５に挙げるアミノ酸配列の軽鎖および重鎖を含むｓｃＦｖである。ある実施態様において、ＥＧＦＲｖIII結合ドメイン(例えば、ｓｃＦｖ)は、表５に挙げる軽鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が３０、２０または１０を超えないアミノ酸配列を含むまたは表５に挙げるアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域および／または表５に挙げる重鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が３０、２０または１０を超えないアミノ酸配列を含むまたは表５に挙げるアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０２１１】
ある実施態様において、ＥＧＦＲｖIII結合ドメインは、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８および配列番号７９からなる群から選択されるアミノ酸配列；または前記配列の何れかに少なくとも１、２または３修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が３０、２０または１０を超えないアミノ酸配列；または前記配列の何れかと９５〜９９％同一性を有する配列を含む。ある実施態様において、ＥＧＦＲｖIII結合ドメインはｓｃＦｖであり、ここに、例えば、表５に記載するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域が、ここに、例えば、表５に記載するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域に、リンカー、例えば、ここに記載するリンカーを介して結合している。ある実施態様において、ＥＧＦＲｖIII結合ドメインは(Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ)ｎリンカーを含み、ここで、ｎは１、２、３、４、５または６、好ましくは４である(配列番号８０)。ＳｃＦｖの軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、例えば、次の軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域または重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域の配向の何れかであり得る。
【０２１２】
ある実施態様において、クローディン−６結合ドメインは、ここに記載する、例えば、表５に挙げるＥＧＦＲｖIII結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)の１以上(例えば、全３)および／またはクローディン−６結合ドメインの重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、ここに記載する、例えば、表５に挙げる重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)の１以上(例えば、全３)を含む。
【０２１３】
ある実施態様において、クローディン−６結合ドメインは、ここに(例えば、表５)に記載の軽鎖可変領域および／またはここに(例えば、表５)に記載の重鎖可変領域を含む。ある実施態様において、クローディン−６結合ドメイン表５に挙げるアミノ酸配列の軽鎖および重鎖を含むｓｃＦｖである。ある実施態様において、クローディン−６結合ドメイン(例えば、ｓｃＦｖ)は、表５に挙げる軽鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が３０、２０または１０を超えないアミノ酸配列を含むまたは表５に挙げるアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域および／または表５に挙げる重鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が３０、２０または１０を超えないアミノ酸配列を含むまたは表５に挙げるアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０２１４】
ある実施態様において、クローディン−６結合ドメインは、配列番号９８配列番号９９および配列番号１００からなる群から選択されるアミノ酸配列；または前記配列の何れかに少なくとも１、２または３修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が３０、２０または１０を超えないアミノ酸配列；または前記配列の何れかと９５〜９９％同一性を有する配列を含む。ある実施態様において、クローディン−６結合ドメインはｓｃＦｖであり、ここに、例えば、表５に記載するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域が、ここに、例えば、表５に記載するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域に、リンカー、例えば、ここに記載するリンカーを介して結合している。ある実施態様において、クローディン−６結合ドメインは(Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ)ｎリンカーを含み、ここで、ｎは１、２、３、４、５または６、好ましくは４である(配列番号８０)。ＳｃＦｖの軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、例えば、次の軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域または重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域の配向の何れかであり得る。
【０２１５】
ある実施態様において、ＧＤ２に対する抗原結合ドメインは、例えば、Mujoo et al., Cancer Res. 47(4):1098-1104 (1987); Cheung et al., Cancer Res 45(6):2642-2649 (1985), Cheung et al., J Clin Oncol 5(9):1430-1440 (1987), Cheung et al., J Clin Oncol 16(9):3053-3060 (1998), Handgretinger et al., Cancer Immunol Immunother 35(3):199-204 (1992)に記載される、抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。ある実施態様において、ＧＤ２に対する抗原結合ドメインは、ｍＡｂ  １４.１８、１４Ｇ２ａ、ｃｈ１４.１８、ｈｕ１４.１８、３Ｆ８、ｈｕ３Ｆ８、３Ｇ６、８Ｂ６、６０Ｃ３、１０Ｂ８、ＭＥ３６.１および８Ｈ９から選択される抗体の抗原結合部分であり、例えば、ＷＯ２０１２０３３８８５号、ＷＯ２０１３０４０３７１号、ＷＯ２０１３１９２２９４号、ＷＯ２０１３０６１２７３号、ＷＯ２０１３１２３０６１号、ＷＯ２０１３０７４９１６号およびＷＯ２０１３８５５５２号を参照のこと。ある実施態様において、ＧＤ２に対する抗原結合ドメインは、米国公開番号２０１００１５０９１０またはＰＣＴ公開ＷＯ２０１１１６０１１９号に記載の抗体の抗原結合部分である。
【０２１６】
ある実施態様において、Ｔｎ抗原、ｓＴｎ抗原、Ｔｎ−Ｏ−糖ペプチド抗原またはｓＴｎ−Ｏ−糖ペプチド抗原に対する抗原結合ドメインは、例えば、ＵＳ２０１４／０１７８３６５号、ＷＯ２０１５／１２０１８０号、ＵＳ８,４４０,７９８号、ＥＰ２０８３８６８Ａ２号、Brooks et al., PNAS 107(22):10056-10061 (2010)およびStone et al., OncoImmunology 1(6):863-873(2012)に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２１７】
ある実施態様において、ＰＳＭＡに対する抗原結合ドメインは、例えば、Parker et al., Protein Expr Purif 89(2):136-145 (2013)、ＵＳ２０１１０２６８６５６号(Ｊ５９１  ＳｃＦｖ); Frigerio et al, European J Cancer 49(9):2223-2232 (2013)(scFvD2B)；ＷＯ２００６１２５４８１号(ｍＡｂｓ  ３／Ａ１２、３／Ｅ７および３／Ｆ１１)に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲおよび一本鎖抗体フラグメント(ｓｃＦｖ  Ａ５およびＤ７)である。
【０２１８】
ある実施態様において、ＣＤ９７に対する抗原結合ドメインは、例えば、ＵＳ６,８４６,９１１号；de Groot et al., J Immunol 183(6):4127-4134 (2009)に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲ；またはＲ＆Ｄからの抗体ＭＡＢ３７３４である。
【０２１９】
ある実施態様において、ＴＡＧ７２に対する抗原結合ドメインは、例えば、Hombach et al., Gastroenterology 113(4):1163-1170 (1997)に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲ；およびAbcam ab691である。
【０２２０】
ある実施態様において、ＣＤ４４ｖ６に対する抗原結合ドメインは、例えば、Casucci et al., Blood 122(20):3461-3472 (2013)に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２２１】
ある実施態様において、ＣＥＡに対する抗原結合ドメインは、例えば、Chmielewski et al., Gastoenterology 143(4):1095-1107 (2012)に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２２２】
ある実施態様において、ＥＰＣＡＭに対する抗原結合ドメインは、ＭＴ１１０、ＥｐＣＡＭ−ＣＤ３二重特異性Ａｂ(例えば、clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00635596参照)；エドレコロマブ；３６２２Ｗ９４；ＩＮＧ−１；およびアデカツムマブ(ＭＴ２０１)から選択される抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲＳである。
【０２２３】
ある実施態様において、ＫＩＴに対する抗原結合ドメインは、例えば、ＵＳ７９１５３９１号、ＵＳ２０１２０２８８５０６号およびいくつかの商品カタログ抗体に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２２４】
ある実施態様において、ＩＬ−１３Ｒａ２に対する抗原結合ドメインは、例えば、ＷＯ２００８／１４６９１１号、ＷＯ２００４０８７７５８号、いくつかの商品カタログ抗体およびＷＯ２００４０８７７５８号に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２２５】
ある実施態様において、ＣＤ１７１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Hong et al., J Immunother 37(2):93-104 (2014)に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２２６】
ある実施態様において、ＰＳＣＡに対する抗原結合ドメインは、例えば、Morgenroth et al., Prostate 67(10):1121-1131 (2007)(scFv 7F5); Nejatollahi et al., J of Oncology 2013(2013), article ID 839831 (scFv C5-II)；および米国特許公報２００９０３１１１８１号に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２２７】
ある実施態様において、ＭＡＤ−ＣＴ−２に対する抗原結合ドメインは、例えば、PMID: 2450952;ＵＳ７６３５７５３号に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２２８】
ある実施態様において、葉酸受容体アルファに対する抗原結合ドメインは、抗体ＩＭＧＮ８５３またはＵＳ２０１２０００９１８１号；ＵＳ４８５１３３２号(ＬＫ２６)：ＵＳ５９５２４８４号に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２２９】
ある実施態様において、ＥＲＢＢ２(Ｈｅｒ２／ｎｅｕ)に対する抗原結合ドメインは、抗体トラスツズマブまたはペルツズマブの抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２３０】
ある実施態様において、ＭＵＣ１に対する抗原結合ドメインは、抗体ＳＡＲ５６６６５８の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２３１】
ある実施態様において、ＥＧＦＲに対する抗原結合ドメインは、抗体セツキシマブ、パニツムマブ、ザルツムマブ、ニモツズマブまたはマツズマブの抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２３２】
ある実施態様において、ＮＣＡＭに対する抗原結合ドメインは、抗体クローン２−２Ｂ：ＭＡＢ５３２４(EMD Millipore)の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２３３】
ある実施態様において、ＣＡＩＸに対する抗原結合ドメインは、抗体クローン３０３１２３(R&D Systems)の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２３４】
ある実施態様において、Ｆｏｓ関連抗原１に対する抗原結合ドメインは、抗体１２Ｆ９(Novus Biologicals)の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２３５】
ある実施態様において、ＳＳＥＡ−４に対する抗原結合ドメインは、抗体ＭＣ８１３(Cell Signaling)または他の市販抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２３６】
ある実施態様において、ＰＤＧＦＲベータに対する抗原結合ドメインは、抗体Ａｂｃａｍ  ａｂ３２５７０の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２３７】
ある実施態様において、ＡＬＫに対する抗原結合ドメインは、例えば、Mino-Kenudson et al., Clin Cancer Res 16(5):1561-1571 (2010)に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２３８】
ある実施態様において、ポリシアル酸に対する抗原結合ドメインは、例えば、Nagae et al., J Biol Chem 288(47):33784-33796 (2013)に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２３９】
ある実施態様において、ＰＬＡＣ１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Ghods et al., Biotechnol Appl Biochem 2013 doi:10.1002/bab.1177に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２４０】
ある実施態様において、ＧｌｏｂｏＨに対する抗原結合ドメインは、抗体ＶＫ９；または例えば、Kudryashov V et al, Glycoconj J.15(3):243-9 (1998), Lou et al., Proc Natl Acad Sci USA 111(7):2482-2487 (2014) ; MBr1: Bremer E-G et al. J Biol Chem 259:14773-14777 (1984)に記載の抗体の抗原結合部分である。
【０２４１】
ある実施態様において、ＮＹ−ＢＲ−１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Jager et al., Appl Immunohistochem Mol Morphol 15(1):77-83 (2007)に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２４２】
ある実施態様において、精子タンパク質１７に対する抗原結合ドメインは、例えば、Song et al., Target Oncol 2013 Aug 14 (PMID: 23943313); Song et al., Med Oncol 29(4):2923-2931 (2012)に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２４３】
ある実施態様において、ＴＲＰ−２に対する抗原結合ドメインは、例えば、Wang et al, J Exp Med. 184(6):2207-16 (1996)に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２４４】
ある実施態様において、ＣＹＰ１Ｂ１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Maecker et al, Blood 102 (9): 3287-3294 (2003)に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２４５】
ある実施態様において、ＲＡＧＥ−１に対する抗原結合ドメインは、抗体ＭＡＢ５３２８(EMD Millipore)の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２４６】
ある実施態様において、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素に対する抗原結合ドメインは、抗体カタログ番号ＬＳ−Ｂ９５−１００(Lifespan Biosciences)の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２４７】
ある実施態様において、腸管カルボキシルエステラーゼに対する抗原結合ドメインは、抗体４Ｆ１２：カタログ番号ＬＳ−Ｂ６１９０−５０(Lifespan Biosciences)の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２４８】
ある実施態様において、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２に対する抗原結合ドメインは、抗体Lifespan Biosciences：モノクローナル：カタログ番号ＬＳ−Ｃ１３３２６１−１００(Lifespan Biosciences)の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２４９】
ある実施態様において、ＭＡＤ−ＣＴ−２に対する抗原結合ドメインは、例えば、PMID: 2450952；ＵＳ７６３５７５３号に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２５０】
ある実施態様において、抗原結合ドメインは、上記抗体からの１、２、３(例えば、全３)重鎖ＣＤＲ、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２およびＨＣ  ＣＤＲ３および／または上記抗体からの１、２、３(例えば、全３)軽鎖ＣＤＲ、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２およびＬＣ  ＣＤＲ３を含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、上記抗体の重鎖可変領域および／または可変軽鎖領域を含む。
【０２５１】
骨髄腫瘍抗原
本発明は、(１以上のＢＣＡ  ＣＡＲ分子に加えて)腫瘍抗原を標的とする１以上のＣＡＲ分子を含むように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を提供する。ある態様において、腫瘍抗原は、骨髄腫瘍に発現される抗原(表面抗原としてまたはＭＨＣとの複合体として)であり、本発明の細胞は、骨髄腫瘍抗原を認識するＣＡＲを含む。
【０２５２】
ある実施態様において、骨髄腫瘍抗原は、骨髄腫瘍細胞表面に優先的にまたは特異的に発現される抗原である。
【０２５３】
本発明は、次の骨髄腫瘍抗原ＣＤ１２３、ＣＤ３４、Ｆｌｔ３、ＣＤ３３およびＣＬＬ−１を標的化できるＣＡＲを提供する。ある実施態様において、骨髄腫瘍抗原は、ＣＤ１２３、ＣＤ３３およびＣＬＬ−１から選択される。ある実施態様において、骨髄腫瘍抗原はＣＤ１２３である。ある実施態様において、骨髄腫瘍抗原はＣＤ３３である。ある実施態様において、骨髄腫瘍抗原はＣＤ３４である。ある実施態様において、骨髄腫瘍抗原はＦｌｔ３である。ある実施態様において、骨髄腫瘍抗原はＣＬＬ−１である。ある実施態様において、抗原結合ドメインはヒト抗原を標的とする。
【０２５４】
ある実施態様において、ＴＡ  ＣＡＲ、例えば、本発明の細胞(例えば、ＢＣＡ  ＣＡＲも発現する細胞)により発現されるＴＡ  ＣＡＲの抗原結合ドメインは、骨髄腫瘍集団が標的化されるように選択され得る。あるいは、１タイプを超える骨髄腫瘍のターゲティングが望まれるとき、標的とされる１を超える、例えば、全ての、骨髄腫瘍により発現される骨髄腫瘍抗原を標的とする抗原結合ドメインが選択され得る。
【０２５５】
ある態様において、ＴＡ  ＣＡＲ、例えば、本発明の細胞により発現されるＴＡ  ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＣＤ１２３、例えば、ヒトＣＤ１２３に結合する。あらゆる既知ＣＤ１２３結合ドメインが本発明において使用され得る。ある実施態様において、ＣＤ１２３に対する抗原結合ドメインは、例えば、ＰＣＴ公報ＷＯ２０１４／１３０６３５号に記載の、抗体、抗原結合フラグメントまたはＣＡＲの抗原結合部分、例えば、ＣＤＲまたはＶＨおよびＶＬである。ある実施態様において、ＣＤ１２３に対する抗原結合ドメインは、例えば、ＰＣＴ公報ＷＯ／２０１６／０２８８９６に記載の、抗体、抗原結合フラグメントまたはＣＡＲの抗原結合部分、例えば、ＣＤＲまたはＶＨおよびＶＬである。ある実施態様において、ＣＤ１２３に対する抗原結合ドメインは、例えば、ＰＣＴ公報ＷＯ１９９７／０２４３７３号、ＷＯ２００８／１２７７３５号(例えば、２６２９２、３２７０１、３７７１６または３２７０３のＣＤ１２３結合ドメイン)、ＷＯ２０１４／１３８８０５号(例えば、ＣＳＬ３６２のＣＤ１２３結合ドメイン)、ＷＯ２０１４／１３８８１９号、ＷＯ２０１３／１７３８２０号、ＷＯ２０１４／１４４６２２号、ＷＯ２００１／６６１３９号、ＷＯ２０１０／１２６０６６号(例えば、Ｏｌｄ４、Ｏｌｄ５、Ｏｌｄ１７、Ｏｌｄ１９、Ｎｅｗ１０２またはＯｌｄ６の何れかのＣＤ１２３結合ドメイン)、ＷＯ２０１４／１４４６２２号またはＵＳ２００９／０２５２７４２号に記載の抗体、抗原結合フラグメントまたはＣＡＲの抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、マウス抗ヒトＣＤ１２３結合ドメインであるまたはそれに由来する。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体または抗体フラグメント、例えば、ｓｃＦｖドメインである。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ１２３に結合するヒト抗体または抗体フラグメントである。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、軽鎖可変領域(ＶＬ)および重鎖可変領域(ＶＨ)を含むｓｃＦｖドメインである。ＶＬおよびＶＨは、例えば、配列GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号３０)を含む、ここに記載するリンカーにより結合されてよく、任意の配向、例えば、ＶＬ−リンカー−ＶＨまたはＶＨ−リンカー−ＶＬであり得る。
【０２５６】
ある態様において、ＴＡ  ＣＡＲ、例えば、本発明の細胞により発現されるＴＡ  ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＣＤ３３、例えば、ヒトＣＤ３３に結合する。あらゆる既知ＣＤ３３結合ドメインが本発明において使用され得る。ある実施態様において、ＣＤ３３に対する抗原結合ドメインは、例えば、ＰＣＴ公報ＷＯ２０１６／０１４５７６号(その内容を引用により全体的に本明細書に包含させる)に記載の、抗体、抗原結合フラグメントまたはＣＡＲの抗原結合部分、例えば、ＣＤＲまたはＶＨおよびＶＬである。ある実施態様において、ＣＤ３３に対する抗原結合ドメインは、ゲムツズマブ  オゾガマイシンの抗原結合部分であるまたはそれに由来する(例えば、重鎖可変ドメインの１以上の、例えば、１、２または３ＣＤＲおよび／または軽鎖可変ドメインの１以上の、例えば、１、２または３ＣＤＲまたはＶＨまたはＶＬを含む抗原結合ドメインまたはゲムツズマブ  オゾガマイシンのｓｃＦｖ配列のｓｃＦｖ配列を含む)(以前はマイロターグとして市販)、例えば、Bross et al., Clin Cancer Res 7(6):1490-1496 (2001)(ゲムツズマブ  オゾガマイシン、ｈＰ６７.６)。ある実施態様において、ＣＤ３３に対する抗原結合ドメインは、GenBank reference no. AM402974.1によりコードされるｓｃＦｖ配列の抗原結合部分であるまたはそれに由来する(例えば、重鎖可変ドメインの１以上の、例えば、１、２または３ＣＤＲおよび／または軽鎖可変ドメインの１以上の、例えば、１、２または３ＣＤＲまたはＶＨまたはＶＬを含む抗原結合ドメインまたはｓｃＦｖ配列を含む)(引用によりここに包含するWang et al., Mol. Ther., vol. 23:1, pp. 184-191 (2015)参照)。ある実施態様において、ＣＤ３３に対する抗原結合ドメインは、例えば、Caron et al., Cancer Res 52(24):6761-6767 (1992)(リンツズマブ、ＨｕＭ１９５)、Lapusan et al., Invest New Drugs 30(3):1121-1131 (2012)(ＡＶＥ９６３３)、Aigner et al., Leukemia 27(5): 1107-1115 (2013)(ＡＭＧ３３０、ＣＤ３３  ＢｉＴＥ)、Dutour et al., Adv hematol 2012:683065 (2012)およびPizzitola et al., Leukemia doi:10.1038/Lue.2014.62 (2014)に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、マウス抗ヒトＣＤ３３結合ドメインであるまたはそれに由来する。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体または抗体フラグメント、例えば、ｓｃＦｖドメインである。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ３３に結合するヒト抗体または抗体フラグメントである。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、軽鎖可変領域(ＶＬ)および重鎖可変領域(ＶＨ)を含むｓｃＦｖドメインである。ＶＬおよびＶＨは、例えば、配列GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号３０)を含む、ここに記載するリンカーにより結合されてよく、任意の配向、例えば、ＶＬ−リンカー−ＶＨまたはＶＨ−リンカー−ＶＬであり得る。
【０２５７】
ある態様において、ＴＡ  ＣＡＲ、例えば、本発明の細胞により発現されるＴＡ  ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＣＬＬ−１、例えば、ヒトＣＬＬ−１に結合する。あらゆる既知ＣＬＬ−１結合ドメインが本発明において使用され得る。ある実施態様において、ＣＬＬ−１に対する抗原結合ドメインは、例えば、ＰＣＴ公報ＷＯ２０１６／０１４５３５号(その内容を引用により全体的に本明細書に包含させる)に記載の抗体、抗原結合フラグメントまたはＣＡＲの抗原結合部分、例えば、ＣＤＲまたはＶＨおよびＶＬである。ある実施態様において、ＣＬＬ−１に対する抗原結合ドメインは、Ｒ＆Ｄ、ebiosciences、Ａｂｃａｍから入手可能な抗体、例えば、PE-CLL1-hu Cat# 353604(BioLegend)；およびＰE-CLL1 (CLEC12A) Cat# 562566 (BD)の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、マウス抗ヒトＣＬＬ−１結合ドメインであるまたはそれに由来する。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体または抗体フラグメント、例えば、ｓｃＦｖドメインである。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、ヒトＣＬＬ−１に結合するヒト抗体または抗体フラグメントである。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、軽鎖可変領域(ＶＬ)および重鎖可変領域(ＶＨ)を含むｓｃＦｖドメインである。ＶＬおよびＶＨは、例えば、配列GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号３０)を含む、ここに記載するリンカーにより結合されてよく、任意の配向、例えば、ＶＬ−リンカー−ＶＨまたはＶＨ−リンカー−ＶＬであり得る。
【０２５８】
Ｂ細胞抗原
本発明は、(１以上のＴＡ  ＣＡＲ分子に加えて)Ｂ細胞抗原を標的とする１以上のＣＡＲ分子を含むように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を提供する。これは、Ｂ細胞抗原に特異的なＣＡＲの抗原結合ドメインにより達成される。このようなＣＡＲは、ここではＢＣＡ  ＣＡＲと称し得る。
【０２５９】
ある実施態様において、Ｂ細胞抗原は、Ｂ細胞表面に優先的にまたは特異的に発現される抗原である。抗原は、次のタイプのＢ細胞、前駆細胞Ｂ細胞(例えば、プレＢ細胞またはプロＢ細胞)、早期プロＢ細胞、後期プロＢ細胞、大プレＢ細胞、小プレＢ細胞、未成熟Ｂ細胞、例えば、ナイーブＢ細胞、成熟Ｂ細胞、形質Ｂ細胞、血漿芽細胞、記憶Ｂ細胞、Ｂ−１細胞、Ｂ−２細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞性Ｂ細胞、胚中心Ｂ細胞または制御性Ｂ細胞(Ｂｒｅｇ)の何れか１つの表面に発現され得る。
【０２６０】
本発明は、次のＢ細胞抗原ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＲＯＲ１、ＢＣＭＡ、ＣＤ８６およびＣＤ１７９ｂを標的化できるＣＡＲを提供する。ここに記載するＣＡＲにより標的化され得る他のＢ細胞抗原は、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ９、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１７、ＣＤ１８、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３５、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４５ＲＣ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５０、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ６０ａ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６３、ＣＤ６３、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７０、ＣＤ８５Ｅ、ＣＤ８５Ｉ、ＣＤ８５Ｊ、ＣＤ９２、ＣＤ９５、ＣＤ９７、ＣＤ９８、ＣＤ９９、ＣＤ１００、ＣＤ１０２、ＣＤ１０８、ＣＤ１１９、ＣＤ１２０ａ、ＣＤ１２０ｂ、ＣＤ１２１ｂ、ＣＤ１２２、ＣＤ１２４、ＣＤ１２５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３０、ＣＤ１３２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１３９、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５０、ＣＤ１５２、ＣＤ１６２、ＣＤ１６４、ＣＤ１６６、ＣＤ１６７ａ、ＣＤ１７０、ＣＤ１７５、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ１８０、ＣＤ１８４、ＣＤ１８５、ＣＤ１９２、ＣＤ１９６、ＣＤ１９７、ＣＤ２００、ＣＤ２０５、ＣＤ２１０ａ、ＣＤｗ２１０ｂ、ＣＤ２１２、ＣＤ２１３ａ１、ＣＤ２１３ａ２、ＣＤ２１５、ＣＤ２１７、ＣＤ２１８ａ、ＣＤ２１８ｂ、ＣＤ２２０、ＣＤ２２１、ＣＤ２２４、ＣＤ２２５、ＣＤ２２６、ＣＤ２２７、ＣＤ２２９、ＣＤ２３０、ＣＤ２３２、ＣＤ２５２、ＣＤ２５３、ＣＤ２５７、ＣＤ２５８、ＣＤ２６１、ＣＤ２６２、ＣＤ２６３、ＣＤ２６４、ＣＤ２６７、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＣＤ２７０、ＣＤ２７２、ＣＤ２７４、ＣＤ２７５、ＣＤ２７７、ＣＤ２７９、ＣＤ２８３、ＣＤ２８９、ＣＤ２９０、ＣＤ２９５、ＣＤ２９８、ＣＤ３００ａ、ＣＤ３００ｃ、ＣＤ３０５、ＣＤ３０６、ＣＤ３０７ａ、ＣＤ３０７ｂ、ＣＤ３０７ｃ、ＣＤ３０７ｄ、ＣＤ３０７ｅ、ＣＤ３１４、ＣＤ３１５、ＣＤ３１６、ＣＤ３１７、ＣＤ３１９、ＣＤ３２１、ＣＤ３２７、ＣＤ３２８、ＣＤ３２９、ＣＤ３３８、ＣＤ３５１、ＣＤ３５２、ＣＤ３５３、ＣＤ３５４、ＣＤ３５５、ＣＤ３５７、ＣＤ３５８、ＣＤ３６０、ＣＤ３６１、ＣＤ３６２およびＣＤ３６３を含む。
【０２６１】
他の実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲにより標的化されるＢ細胞抗原は、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＦｃＲｎ５、ＦｃＲｎ２、ＣＳ−１およびＣＤ１３８から選択される。ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲにより標的化されるＢ細胞抗原はＣＤ１９である。ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲにより標的化されるＢ細胞抗原はＣＤ２０である。ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲにより標的化されるＢ細胞抗原はＣＤ２２である。ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲにより標的化されるＢ細胞抗原はＢＣＭＡである。ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲにより標的化されるＢ細胞抗原はＦｃＲｎ５である。ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲにより標的化されるＢ細胞抗原はＦｃＲｎ２である。ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲにより標的化されるＢ細胞抗原はＣＳ−１である。ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲにより標的化されるＢ細胞抗原はＣＤ１３８である。
【０２６２】
ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲ、例えば、本発明の細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲも発現する細胞)により発現されるＢＣＡ  ＣＡＲの抗原結合ドメインは、好ましいＢ細胞集団が標的化されるように選択され得る。例えば、ある実施態様において、制御Ｂ細胞のターゲティングが望ましいとき、制御性Ｂ細胞に発現され、他のＢ細胞集団、例えば、形質Ｂ細胞および記憶Ｂ細胞に発現されないＢ細胞抗原を標的とする、抗原結合ドメインが選択される。制御性Ｂ細胞に発現される細胞表面マーカーはＣＤ１９、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３８またはＣＤ８６またはHe et al., 2014, J Immunology Research, Article ID 215471に記載のマーカーを含む。１タイプを超えるＢ細胞のターゲティングが望ましいとき、標的とすべき全Ｂ細胞により発現されるＢ細胞抗原を標的とする抗原結合ドメインが選択され得る。
【０２６３】
ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲ、例えば、本発明の細胞により発現されるＢＣＡ  ＣＡＲは、ＣＤ１９に結合する。ＣＤ１９は、プロ／プレＢ細胞段階から高分化形質細胞段階までの分化の系譜をとおしてＢ細胞で見られる。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ１９、例えば、ＣＴＬ０１９(例えば、配列番号９５)に結合するマウスｓｃＦｖドメインである。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、マウスＣＴＬ０１９  ｓｃＦｖに由来するヒト化抗体または抗体フラグメント、例えば、ｓｃＦｖドメインである。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ１９に結合するヒト抗体または抗体フラグメントである。ＣＤ１９に結合するｓｃＦｖドメイン(およびその配列、例えば、ＣＤＲ、ＶＬおよびＶＨ配列)の例は、表６に提供される。表６に提供されるｓｃＦｖドメイン配列は、軽鎖可変領域(ＶＬ)および重鎖可変領域(ＶＨ)を含む。ＶＬおよびＶＨは、例えば、次のＶＬ−リンカー−ＶＨの配向で、配列GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号３０)を含むリンカーにより結合される。
【０２６４】
【表１２】
2019513347.tif 000014
【表１３】
2019513347.tif 000015
【０２６５】
表６に挙げするＣＤ１９抗原結合ドメインのｓｃＦｖドメインのＣＤＲ配列の配列を、重鎖可変ドメインについて表７および軽鎖可変ドメインについて表８に示す。“ＩＤ”は、各ＣＤＲの各配列番号を示す。
【０２６６】
【表１４】
2019513347.tif 000016
【０２６７】
【表１５】
2019513347.tif 000017
【０２６８】
ある実施態様において、抗原結合ドメインは、抗ＣＤ１９抗体またはそのフラグメント、例えば、ｓｃＦｖを含む。例えば、抗原結合ドメインは、表９に挙げる可変重鎖および可変軽鎖を含む。可変重鎖と可変軽鎖を連結するリンカーは、ここに記載するリンカー配列の何れかであってよく、あるいは、GSTSGSGKPGSGEGSTKG(配列番号８１)であってよい。ＳｃＦｖの軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、例えば、次の軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域または重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域の配向の何れかであり得る。
【０２６９】
【表１６】
2019513347.tif 000018
【０２７０】
ある実施態様において、ＣＤ１９結合ドメインは、ここに記載する、例えば、表６または７に挙げるＣＤ１９結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)の１以上(例えば、全３)および／またはここに記載する、例えば、表６または８に挙げるＣＤ１９結合ドメインの重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)の１以上(例えば、全３)を含む。ある実施態様において、メソテリン結合ドメインは、引用により本明細書に包含する表８に挙げる任意のアミノ酸配列のＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２およびＬＣ  ＣＤＲ３の１、２または全ておよび表７に挙げる任意のアミノ酸配列のＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２およびＨＣ  ＣＤＲ３の１、２または全てを含む。
【０２７１】
ある実施態様において、ＣＤ１９抗原結合ドメインは、
(ｉ)(ａ)配列番号２６１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２６２のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２６３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号２５５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２５６のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２６０のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(ii)(ａ)配列番号２６１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２６２のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２６３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号２５５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２５７のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２６０のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；
(iii)(ａ)配列番号２６１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２６２のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２６３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号２５５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２５８のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２６０のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；または
(iv)(ａ)配列番号２６１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２６２のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２６３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号２５５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２５９のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２６０のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
を含む。
【０２７２】
ある実施態様において、ＣＤ１９結合ドメインは、ここに(例えば、表６または９に)記載する軽鎖可変領域および／またはここに(例えば、表６または９に)記載する重鎖可変領域を含む。ある実施態様において、メソテリン結合ドメイン表３または４に挙げるアミノ酸配列の軽鎖および重鎖を含むｓｃＦｖである。ある実施態様において、ＣＤ１９結合ドメイン(例えば、ｓｃＦｖ)は、表６または９に挙げる軽鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が３０、２０または１０を超えないアミノ酸配列を含むまたは表６または９に挙げするアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域および／または表６または９に挙げる重鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が３０、２０または１０を超えないアミノ酸配列を含むまたは表６または９に挙げるアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０２７３】
ある実施態様において、ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５および配列番号１１２からなる群から選択されるアミノ酸配列；または前記配列の何れかに少なくとも１、２または３修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が３０、２０または１０を超えないアミノ酸配列；または前記配列の何れかと９５〜９９％同一性を有する配列を含む。ある実施態様において、ＣＤ１９結合ドメインはｓｃＦｖであり、ここに、例えば、表６または９に記載するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域が、ここに、例えば、表６または９に記載するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域に、リンカー、例えば、ここに記載するリンカーを介して結合している。ある実施態様において、ＣＤ１９結合ドメインは(Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ)ｎリンカーを含み、ここで、ｎは１、２、３、４、５または６、好ましくは４である(配列番号８０)。ＳｃＦｖの軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、例えば、次の軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域または重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域の配向の何れかであり得る。
【０２７４】
当分野のあらゆる既知ＣＤ１９  ＣＡＲ、例えば、あらゆる既知ＣＤ１９  ＣＡＲのＣＤ１９抗原結合ドメインを、ＣＡＲの構築のために本発明により使用し得る。例えば、ＬＧ−７４０；米国特許８,３９９,６４５号；米国特許７,４４６,１９０号; Xu et al., Leuk Lymphoma. 2013 54(2):255-260(2012); Cruz et al., Blood 122(17):2965-2973 (2013); Brentjens et al., Blood, 118(18):4817-4828 (2011); Kochenderfer et al., Blood 116(20):4099-102 (2010); Kochenderfer et al., Blood 122 (25):4129-39(2013); and 16th Annu Meet Am Soc Gen Cell Ther (ASGCT) (May 15-18, Salt Lake City) 2013, Abst 10に記載のＣＤ１９  ＣＡＲ。ある実施態様において、ＣＤ１９に対する抗原結合ドメインは、例えば、ＰＣＴ公報ＷＯ２０１２／０７９０００号；ＰＣＴ公報ＷＯ２０１４／１５３２７０号；Kochenderfer, J.N. et al., J. Immunother. 32 (7), 689-702 (2009); Kochenderfer, J.N., et al., Blood, 116 (20), 4099-4102 (2010)；ＰＣＴ公報ＷＯ２０１４／０３１６８７号；Bejcek, Cancer Research, 55, 2346-2351, 1995；または米国特許７,４４６,１９０号に記載の、ＣＡＲ、抗体またはその抗原結合フラグメントの抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０２７５】
ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲ、例えば、本発明の細胞により発現されるＢＣＡ  ＣＡＲは、ＢＣＭＡに結合する。ＢＣＭＡは、成熟Ｂリンパ球で優先的に発現される。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、ヒトＢＣＭＡに結合するマウスｓｃＦｖドメインである。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、ヒトＢＣＭＡに結合するヒト化抗体または抗体フラグメント、例えば、ｓｃＦｖドメインである。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、ヒトＢＣＭＡに結合するヒト抗体または抗体フラグメントである。ＢＣＭＡに結合するｓｃＦｖドメイン(およびその配列、例えば、ＣＤＲ、ＶＬおよびＶＨ配列)の例は、表１２、表１３、表１４および表１５に挙げる。表１２および表１３に挙げるｓｃＦｖドメイン配列は、軽鎖可変領域(ＶＬ)および重鎖可変領域(ＶＨ)を含む。ＶＬおよびＶＨは、例えば、次のＶＨ−リンカー−ＶＬの配向で、リンカーにより結合される。
【０２７６】
【表１７】
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【表１８】
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【０２７７】
【表１９】
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【表２０】
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【０２７８】
【表２１】
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【表２２】
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【０２７９】
【表２３】
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【表２４】
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【０２８０】
【表２５】
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【表２６】
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【０２８１】
【表２７】
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【表２８】
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【０２８２】
【表２９】
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【表３０】
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【０２８３】
【表３１】
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【表３２】
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【０２８４】
【表３３】
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【表３４】
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【０２８５】
【表３５】
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【表３６】
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【０２８６】
【表３７】
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【表３８】
2019513347.tif 000040
【０２８７】
【表３９】
2019513347.tif 000041
【０２８８】
ある実施態様において、さらなるＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物の例は、ＰＣＴ公報ＷＯ２０１２／０１６３８０５号(その内容は引用によりその全体を本明細書に包含させる)からのＶＨ配列とＶＬ配列を使用して産生される。ある実施態様において、さらなるＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物の例は、ＰＣＴ公報ＷＯ２０１６／０１４５６５号(その内容は引用によりその全体を本明細書に包含させる)からのＶＨ配列とＶＬ配列を使用して産生される。ある実施態様において、さらなるＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物の例は、ＰＣＴ公報ＷＯ２０１４／１２２１４４号(その内容は引用によりその全体を本明細書に包含させる)からのＶＨ配列とＶＬ配列を使用して産生される。ある実施態様において、さらなるＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物の例は、ＰＣＴ公報ＷＯ２０１６／０１４７８９号(その内容は引用によりその全体を本明細書に包含させる)からのＣＡＲ分子および／またはＶＨ配列とＶＬ配列を使用して産生される。ある実施態様において、さらなるＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物の例は、ＰＣＴ公報ＷＯ２０１４／０８９３３５号(その内容は引用によりその全体を本明細書に包含させる)からのＣＡＲ分子および／またはＶＨ配列とＶＬ配列を使用して産生される。ある実施態様において、さらなるＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物の例は、ＰＣＴ公報ＷＯ２０１４／１４０２４８号(その内容は引用によりその全体を本明細書に包含させる)からのＣＡＲ分子および／またはＶＨ配列とＶＬ配列を使用して産生される。
【０２８９】
ある実施態様において、さらなるＢＣＭＡ  ＣＡＲ構築物の例はまた表１３に見られるＶＨ配列とＶＬ配列を使用しても産生され得る。ＶＨおよびＶＬドメインおよびリンカー配列および完全長ＣＡＲを含むｓｃＦｖドメインの例のアミノ酸配列も表１３に見られる。
【０２９０】
【表４０】
2019513347.tif 000042
【０２９１】
ｓｃＦｖドメインのＣＤＲ配列の配列を、重鎖可変ドメインについて表１４および軽鎖可変ドメインについて表１５に示す。“ＩＤ”は、各ＣＤＲの各配列番号を示す。ＣＤＲはＫａｂａｔ定義に従い示すが、他の慣習、例えば、ＣｈｏｔｈｉａまたはＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ定義組み合わせ下のＣＤＲは、上記ＶＨ配列およびＶＬ配列に基づき容易に推測され得る。
【０２９２】
【表４１】
2019513347.tif 000043
【表４２】
2019513347.tif 000044
【０２９３】
【表４３】
2019513347.tif 000045
【表４４】
2019513347.tif 000046
【０２９４】
ある実施態様において、ＢＣＭＡ結合ドメインは、ここに記載する、例えば、表１２、１３または１５に挙げるＢＣＭＡ結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１(ＬＣ  ＣＤＲ１)、軽鎖相補性決定領域２(ＬＣ  ＣＤＲ２)および軽鎖相補性決定領域３(ＬＣ  ＣＤＲ３)の１以上(例えば、全３)および／またはここに記載する、例えば、表１２、１３または１４に挙げるＢＣＭＡ結合ドメインの重鎖相補性決定領域１(ＨＣ  ＣＤＲ１)、重鎖相補性決定領域２(ＨＣ  ＣＤＲ２)および重鎖相補性決定領域３(ＨＣ  ＣＤＲ３)の１以上(例えば、全３)を含む。ある実施態様において、ＢＣＭＡ結合ドメインは、引用により本明細書に包含させる表１２に挙げる任意のアミノ酸配列のＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２およびＬＣ  ＣＤＲ３の１、２または全ておよび表１２に挙げる任意のアミノ酸配列のＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２およびＨＣ  ＣＤＲ３の１、２または全てを含む。
【０２９５】
ある実施態様において、ＢＣＭＡ抗原結合ドメインは、
(ｖ)(ａ)配列番号８１４のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５４のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８９４のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号６９４のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３４のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７７４のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(vi)(ａ)配列番号８０４のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８４４のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８８４のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号６８４のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７２４のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７６４のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(vii)(ａ)配列番号８０５のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８４５のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８８５のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号６８５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７２５のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７６５のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(viii)(ａ)配列番号８０６のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８４６のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８８６のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号６８６のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７２６のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７６６のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(ix)(ａ)配列番号８０７のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８４７のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８８７のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号６８７のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７２７のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７６７のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(ｘ)(ａ)配列番号８０８のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８４８のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８８８のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号６８８のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７２８のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７６８のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(xi)(ａ)配列番号８０９のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８４９のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８８９のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号６８９のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７２９のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７６９のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(xii)(ａ)配列番号８１０のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５０のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８９０のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号６９０のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３０のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７７０のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(xiii)(ａ)配列番号８１１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５１のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８９１のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号６９１のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３１のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７７１のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(xiv)(ａ)配列番号８１２のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５２のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８９２のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号６９２のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３２のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７７２のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(xv)(ａ)配列番号８１３のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５３のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８９３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号６９３のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３３のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７７３のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(xvi)(ａ)配列番号８１５のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５５のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８９５のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号６９５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３５のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７７５のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(xvii)(ａ)配列番号８１６のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５６のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８９６のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号６９６のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３６のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７７６のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(xviii)(ａ)配列番号８１７のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５７のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８９７のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号６９７のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３７のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７７７のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(xix)(ａ)配列番号８１８のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５８のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８９８のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号６９８のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３８のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７７８のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(xx)(ａ)配列番号８１９のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８５９のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８９９のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号６９９のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７３９のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７７９のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(xxi)(ａ)配列番号８２０のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８６０のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号９００のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号７００のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７４０のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７８０のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(xxii)(ａ)配列番号８２１のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８６１のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号９０１のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号７０１のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７４１のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７８１のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(xxiii)(ａ)配列番号８２２のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８６２のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号９０２のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号７０２のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７４２のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７８２のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(xxiv)(ａ)配列番号８２３のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８６３のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号９０３のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号７０３のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７４３のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７８３のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(xxv)(ａ)配列番号８２４のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８６４のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号９０４のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号７０４のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７４４のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７８４のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
(xxvi)(ａ)配列番号８２５のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８６５のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号９０５のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号７０５のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７４５のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７８５のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列または
(xxvii)(ａ)配列番号８２６のＬＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号８６６のＬＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号９０６のＬＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列；および
(ｂ)配列番号７０６のＨＣ  ＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号７４６のＨＣ  ＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号７８６のＨＣ  ＣＤＲ３アミノ酸配列
を含む。
【０２９６】
ある実施態様において、ＢＣＭＡ結合ドメインは、ここに(例えば、表１２または１３に)記載の軽鎖可変領域および／またはここに(例えば、表１２または１３に)記載の重鎖可変領域を含む。ある実施態様において、ＢＣＭＡ結合ドメイン表１２または１３に挙げるアミノ酸配列の軽鎖および重鎖を含むｓｃＦｖである。ある実施態様において、ＢＣＭＡ結合ドメイン(例えば、ｓｃＦｖ)は、表１２または１３に挙げる軽鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が３０、２０または１０を超えないアミノ酸配列を含むまたは表１２または１３に挙げるアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域および／または表１２または１３に挙げる重鎖可変領域のアミノ酸配列に少なくとも１、２または３修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が３０、２０または１０を超えないアミノ酸配列を含むまたは表１２または１３に挙げるアミノ酸配列と９５〜９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０２９７】
ある実施態様において、ＢＣＭＡ結合ドメインは、配列番号３４９、配列番号３３９、配列番号３４０、配列番号３４１、配列番号３４２、配列番号３４３、配列番号３４４、配列番号３４５、配列番号３４６、配列番号３４７、配列番号３４８、配列番号３５０、配列番号３５１、配列番号３５２、配列番号３５３、配列番号４２９、配列番号４３０、配列番号４３１、配列番号４３２、配列番号４３３、配列番号４３４、配列番号４３５、配列番号４３６、配列番号４３７、配列番号４３８、配列番号４３９、配列番号４４０、配列番号４４１、配列番号４４２、配列番号４４３、配列番号４４４、配列番号４４５、配列番号４４６、配列番号４４７、配列番号４４８、配列番号４４９、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５および配列番号５６６からなる群から選択されるアミノ酸配列；または前記配列の何れかに少なくとも１、２または３修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が３０、２０または１０を超えないアミノ酸配列；または前記配列の何れかと９５〜９９％同一性を有する配列を含む。ある実施態様において、ＢＣＭＡ結合ドメインはｓｃＦｖであり、ここに、例えば、表１２または１３に記載するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域が、ここに、例えば、表１２または１３に記載するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域に、リンカー、例えば、ここに記載するリンカーを介して結合している。ある実施態様において、ＢＣＭＡ結合ドメインは(Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ)ｎリンカーを含み、ここで、ｎは１、２、３、４、５または６、好ましくは４である(配列番号８０)。ＳｃＦｖの軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、例えば、次の軽鎖可変領域−リンカー−重鎖可変領域または重鎖可変領域−リンカー−軽鎖可変領域の配向の何れかであり得る。
【０２９８】
当分野におけるあらゆる既知ＢＣＭＡ  ＣＡＲ、例えば、あらゆる既知ＢＣＭＡ  ＣＡＲのＢＭＣＡ抗原結合ドメインが、ＢＣＡ  ＣＡＲを構築するために本発明に従い使用され得る。例えば、ここに記載のもの。他の例として、ＢＣＭＡ  ＣＡＲは、例えば、ＷＯ２０１６／０９４３０４号、ＷＯ２０１６／０１４７８９号またはＵＳ９,０３４,３２４号(例えば、ＵＳ９,０３４,３２４号のＣ１１Ｄ５)に記載の、ＣＡＲまたは抗原結合ドメインの抗ＢＣＭＡ結合ドメインまたはその一部、例えば、ＣＤＲを含み、これら各々の内容は、引用によりその全体を本明細書に包含させる。
【０２９９】
ある実施態様において、ＲＯＲ１に対する抗原結合ドメインは、例えば、Hudecek et al., Clin Cancer Res 19(12):3153-3164 (2013)；ＷＯ２０１１１５９８４７号；およびＵＳ２０１３０１０１６０７号に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。
【０３００】
ある実施態様において、ＣＤ２２に対する抗原結合ドメインは、例えば、Haso et al., Blood, 121(7): 1165-1174 (2013); Wayne et al., Clin Cancer Res 16(6): 1894-1903 (2010); Kato et al., Leuk Res 37(1):83-88 (2013); Creative BioMart (creativebiomart.net): MOM-18047-S(P)に記載の抗体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。ある態様において、ＣＤ２２に対する抗原結合ドメインは、例えば、ＷＯ２０１６／１６４７３１号(例えば、ＷＯ２０１６／１６４７３１号の表６Ａに記載のとおり)に記載の、抗原結合ドメインまたはＣＡＲの抗原結合部分、例えば、ＣＤＲ、ＶＬおよびＶＨまたはｓｃＦＶであり、その内容は、引用によりその全体を本明細書に包含させる。
【０３０１】
ある実施態様において、ＣＤ２０に対する抗原結合ドメインは、抗体リツキシマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ、ベルツズマブまたはＧＡ１０１またはその誘導体の抗原結合部分、例えば、ＣＤＲである。ある態様において、ＣＤ２０に対する抗原結合ドメインは、例えば、ＷＯ２０１６／１６４７３１号(例えば、ＷＯ２０１６／１６４７３１号の表１１Ａまたは１１Ｂに記載のとおり)に記載の、抗原結合ドメインまたはＣＡＲの抗原結合部分、例えば、ＣＤＲ、ＶＬおよびＶＨまたはｓｃＦＶであり、その内容は、引用によりその全体を本明細書に包含させる。
【０３０２】
ある実施態様において、抗原結合ドメインは、上記抗体からの１、２、３(例えば、全３)重鎖ＣＤＲ、ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２およびＨＣ  ＣＤＲ３および／または上に挙げる腫瘍抗原またはＢ細胞抗原に結合する抗体からの１、２、３(例えば、全３)軽鎖ＣＤＲ、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２およびＬＣ  ＣＤＲ３を含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、上に挙げる腫瘍抗原またはＢ細胞抗原に結合する抗体の重鎖可変領域および／または可変軽鎖領域を含む。
【０３０３】
ある実施態様において、ここに記載する、ＣＡＲ、例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよび／またはＢＣＡ  ＣＡＲの抗原結合ドメインはｓｃＦｖ抗体フラグメントである。ある態様において、このような抗体フラグメントは、同等な結合親和性を保持する、例えば、それが由来するＩｇＧ抗体と同じ抗原に同等な有効性で結合する点で、機能的である。他の実施態様において、抗体フラグメントは、低結合親和性を有し、例えば、それが由来する抗体より低い結合親和性で同じ抗原に結合するが、ここに記載する生物学的応答を提供する点で、機能的である。ある実施態様において、ＣＡＲ分子は、標的抗原に対して１０−４Ｍ〜１０−８Ｍ、例えば、１０−５Ｍ〜１０−７Ｍ、例えば、１０−６Ｍまたは１０−７Ｍの結合親和性ＫＤを有する抗体フラグメントを含む。ある実施態様において、抗体フラグメントは、対照抗体、例えば、ここに記載する抗体より少なくとも５倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍または１,０００倍少ない結合親和性を有する。
【０３０４】
ある実施態様において、抗原結合ドメインは、非ヒト抗体または抗体フラグメント、例えば、マウス抗体または抗体フラグメントを含む。
【０３０５】
他の実施態様において、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体または抗体フラグメントを含む。ある態様において、非ヒト抗体は、ヒト化されており、ここで、該抗体の特異的配列または領域は、ヒトまたはそのフラグメントで天然に産生される抗体との類似性を高めるために修飾されている。ある態様において、抗原結合ドメインは、それが由来するマウス配列の抗体または抗体フラグメント、例えば、ｓｃＦｖと比較して、ヒト化されている。
【０３０６】
ヒト化抗体は、ＣＤＲ移植(例えば、欧州特許ＥＰ２３９,４００号；国際公開ＷＯ９１／０９９６７号；および米国特許５,２２５,５３９、５,５３０,１０１および５,５８５,０８９参照、この各々を、引用によりその全体を本明細書に包含させる)、ベニアリングまたはリサーフェシング(例えば、欧州特許ＥＰ５９２,１０６号およびＥＰ５１９,５９６号；Padlan, 1991, Molecular Immunology, 28(4/5):489-498; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering, 7(6):805-814;およびRoguska et al., 1994, PNAS, 91:969-973参照、この各々を、引用によりその全体を本明細書に包含させる)、鎖シャッフリング(例えば、引用によりその全体を本明細書に包含させる、米国特許５,５６５,３３２号参照)および、例えば、米国特許出願公開ＵＳ２００５／００４２６６４号、米国特許出願公開ＵＳ２００５／００４８６１７号、米国特許６,４０７,２１３、米国特許５,７６６,８８６、国際公開ＷＯ９３１７１０５号、Tan et al., J. Immunol., 169:1119-25 (2002), Caldas et al., Protein Eng., 13(5):353-60 (2000), Morea et al., 方法, 20(3):267-79 (2000), Baca et al., J. Biol. Chem., 272(16):10678-84 (1997), Roguska et al., Protein Eng., 9(10):895-904 (1996), Couto et al., Cancer Res., 55 (23 Supp):5973s-5977s (1995), Couto et al., Cancer Res., 55(8):1717-22 (1995), Sandhu J S, Gene, 150(2):409-10 (1994), およびPedersen et al., J. Mol. Biol., 235(3):959-73 (1994)(この各々を、引用によりその全体を本明細書に包含させる)に開示の技法を含むが、これらに限定されない多様な技法を使用して産生され得る。しばしば、フレームワーク領域におけるフレームワーク残基は、抗原結合を改変、例えば改善するために、ＣＤＲドナー抗体からの対応する残基で置換される。これらのフレームワーク置換は、当分野で周知の方法、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するためのＣＤＲとフレームワーク残基の相互作用のモデリングおよび特定の位置での異常フレームワーク残基を同定する配列比較により、同定される(例えば、Queen et al.、米国特許５,５８５,０８９；およびRiechmann et al., 1988, Nature, 332:323参照、これらは、引用によりその全体を本明細書に包含させる)。
【０３０７】
ヒト化抗体または抗体フラグメントは、非ヒトである供給源からの残存する１以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は“移入”残基としばしば称され、これらは一般に“移入”可変ドメイン由来である。ここで提供する、ヒト化抗体または抗体フラグメントは、非ヒト免疫グロブリン分子およびフレームワーク領域からの１以上のＣＤＲを含み、ここで、フレームワークに含まれるアミノ酸残基は完全にまたは大部分ヒト生殖系列に由来する。抗体または抗体フラグメントのヒト化のための複数の技法は当分野で周知であり、本質的にWinterおよび同僚(Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988))の方法により、齧歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列に置き換える、すなわち、ＣＤＲ移植により実施され得る(ＥＰ２３９,４００号；ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０９９６７号；および米国特許４,８１６,５６７号；６,３３１,４１５号；５,２２５,５３９号；５,５３０,１０１号；５,５８５,０８９号；６,５４８,６４０号参照、これらの内容は、引用によりその全体を本明細書に包含させる)。このようなヒト化抗体および抗体フラグメントにおいて、実質的にインタクトヒト可変ドメイン未満が非ヒト種からの対応する配列で置換されている。ヒト化抗体は、しばしば、一部ＣＤＲ残基およびおそらく一部フレームワーク(ＦＲ)残基が齧歯類抗体における類似部位からの残基で置換されているヒト抗体である。抗体および抗体フラグメントのヒト化はまたベニアリングまたはリサーフェシング(ＥＰ５９２,１０６号；ＥＰ５１９,５９６号；Padlan, 1991, Molecular Immunology, 28(4/5):489-498; Studnicka et al., Protein Engineering, 7(6):805-814 (1994);およびRoguska et al., PNAS, 91:969-973 (1994))または鎖シャッフリング(米国特許５,５６５,３３２)によっても達成でき、これらの内容は、引用によりその全体を本明細書に包含させる。
【０３０８】
ヒト化抗体を製造するために使用する、軽および重両方の、選りすぐりのヒト可変ドメインは、抗原性を減少するためである。いわゆる“ベストフィット”方法により、齧歯類抗体の可変ドメインの配列を、既知ヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングする。齧歯類のものに最も近いヒト配列を、次いで、ヒト化抗体のためのヒトフレームワーク(ＦＲ)として認める(Sims et al., J. Immunol., 151:2296 (1993); Chothia et al., J. Mol. Biol., 196:901 (1987)、これらの内容は、引用によりその全体を本明細書に包含させる)。他の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全ヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークを、いくつかの異なるヒト化抗体について使用できる(例えば、Nicholson et al. Mol. Immun. 34 (16-17): 1157-1165 (1997); Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol., 151:2623 (1993)参照、これらの内容は、引用によりその全体を本明細書に包含させる)。ある実施態様において、重鎖可変領域のフレームワーク領域、例えば、全４フレームワーク領域は、ＶＨ４＿４−５９生殖系列配列に由来する。ある実施態様において、フレームワーク領域は、対応するマウス配列のアミノ酸から、１、２、３、４または５修飾、例えば、置換を含み得る。ある実施態様において、軽鎖可変領域のフレームワーク領域、例えば、全４フレームワーク領域は、ＶＫ３＿１.２５生殖系列配列に由来する。ある実施態様において、フレームワーク領域は、対応するマウス配列のアミノ酸から、１、２、３、４または５修飾、例えば、置換を含み得る。
【０３０９】
ある態様において、本発明のＣＡＲ、例えば、ここに記載するＴＡ  ＣＡＲおよび／またはＢＣ  ＣＡＲの抗体フラグメントを含む部分は、標的抗原に対する高親和性および他の都合のよい生物学的性質を保持して、ヒト化される。本発明のある態様によって、ヒト化抗体および抗体フラグメントは、親およびヒト化配列の三次元モデルを使用する親配列および種々の概念的ヒト化産物の解析の過程により製造される。三次元免疫グロブリンモデルは一般に利用可能であり、当業者にはなじみ深い。選択候補免疫グロブリン配列の可能性の高い三次元高次構造を説明および表示するコンピュータープログラムが利用可能である。これらのディスプレイの精査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性のある役割の解析、例えば、候補免疫グロブリンが標的抗原に結合する能力に影響する残基の解析を可能とする。この方法で、ＦＲ残基は、標的抗原に対する親和性増加などの所望の抗体または抗体フラグメント特性が達成されるように、レシピエントおよび移入配列から選択され、組み合わされ得る。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合への影響に直接的にかつ最も実質的に関与する。
【０３１０】
ヒト化抗体または抗体フラグメントは、元の抗体と類似の抗原特異性、例えば、本発明において、ここに記載するヒト腫瘍抗原と結合する能力を保持し得る。ある実施態様において、ヒト化抗体または抗体フラグメントは、ここに記載する腫瘍抗原またはここに記載するＢ細胞抗原の結合の親和性および／または特異性が改善し得る。ある実施態様において、ヒト化抗体または抗体フラグメントは、ここに記載する腫瘍抗原またはここに記載するＢ細胞抗原に低い親和性および／または特異性を有し得る。
【０３１１】
ある態様において、本発明の抗原結合ドメインは、抗体または抗体フラグメントの特定の機能的特性または性質により特徴付けられる。例えば、ある態様において、抗原結合ドメインを含む本発明のＣＡＲの部分は、ここに記載する腫瘍抗原またはここに記載するＢ細胞抗原に特異的に結合する。
【０３１２】
ある態様において、抗原結合ドメインは、フラグメント、例えば、一本鎖可変フラグメント(ｓｃＦｖ)である。ある態様において、ここに記載する抗腫瘍抗原結合ドメインは、Ｆｖ、Ｆａｂ、(Ｆａｂ’)２または二機能的(例えば二特異的)ハイブリッド抗体である(例えば、Lanzavecchia et al., Eur. J. Immunol. 17, 105 (1987))。ある態様において、本発明の抗体およびそのフラグメントは、野生型のまたは増強された親和性でここに記載する腫瘍抗原タンパク質に結合する。
【０３１３】
いくつかの例では、ｓｃＦｖは、当分野で知られる方法により製造され得る(例えば、Bird et al., (1988) Science 242:423-426およびHuston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883参照)。ＳｃＦｖ分子は、フレキシブルポリペプチドリンカーを使用してＶＨ領域とＶＬ領域を一緒に連結することにより製造され得る。ｓｃＦｖ分子は、最適化長および／またはアミノ酸組成のリンカー(例えば、Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカー)を含む。リンカー長は、ｓｃＦｖの可変領域がどのように折り畳まれ、相互作用するかに大きく影響し得る。事実、短ポリペプチドリンカーを用いるとき(例えば、５〜１０アミノ酸)、鎖内折りたたみは阻止される。機能的エピトープ結合部位を形成するために、２可変領域を一緒に一緒にするために鎖間折りたたみも必要である。リンカー配向およびサイズの例について、例えば、Hollinger et al. 1993 Proc Natl Acad. Sci. U.S.A. 90:6444-6448、米国特許出願公報２００５／０１００５４３号、２００５／０１７５６０６号、２００７／００１４７９４号およびＰＣＴ公報ＷＯ２００６／０２０２５８号およびＷＯ２００７／０２４７１５号参照のこと(これらは引用により本明細書に包含させる)。
【０３１４】
ｓｃＦｖは、ＶＬ領域とＶＨ領域の間に少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０またはそれ以上のアミノ酸残基のリンカーを含み得る。リンカー配列は、あらゆる天然に存在するアミノ酸を含み得る。ある実施態様において、リンカー配列は、アミノ酸グリシンおよびセリンを含む。他の実施態様において、リンカー配列は、グリシンおよびセリン反復のセット、例えば(Ｇｌｙ４Ｓｅｒ)ｎを含み、ここで、ｎは１以上の正の整数である(配列番号２２)。ある実施態様において、リンカーは(Ｇｌｙ４Ｓｅｒ)４(配列番号２９)または(Ｇｌｙ４Ｓｅｒ)３(配列番号３０)であり得る。リンカー長の変動は、活性を保持または増強し、活性試験で優れた有効性をもたらし得る。
【０３１５】
他の態様において、抗原結合ドメインは、Ｔ細胞受容体(“ＴＣＲ”)、操作されたＴＣＲまたはそのフラグメント、例えば、一本鎖ＴＣＲ(ｓｃＴＣＲ)である。このようなＴＣＲを製造する方法は当分野で知られる。例えば、Willemsen RA et al, Gene Therapy 7: 1369-1377 (2000); Zhang T et al, Cancer Gene Ther 11: 487-496 (2004); Aggen et al, Gene Ther. 19(4):365-74 (2012)参照(引用文献は、その全体を引用により本明細書に包含させる)。例えば、ｓｃＴＣＲは、リンカー(例えば、フレキシブルペプチド)により結合されたＴ細胞クローンからのＶα遺伝子およびＶβ遺伝子を含むように操作され得る。このアプローチは、それ自体細胞内であるが、このような抗原(ペプチド)のフラグメントがＭＨＣにより癌細胞の表面に提示される、癌関連標的について特に有用である。
【０３１６】
ある態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインはここに記載する抗原結合ドメインアミノ酸配列と相同であるアミノ酸配列を含み、抗原結合ドメインは、ここに記載する抗原結合ドメインの所望の機能的性質を保持する。
【０３１７】
ある具体的態様において、本発明のＣＡＲ組成物は、抗体フラグメントを含む。さらなる態様において、抗体フラグメントはｓｃＦｖを含む。さらなる態様において、抗体フラグメントは可変重鎖(ＶＨ)のみを含む。
【０３１８】
種々の態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、一方または両方の可変領域内(例えば、ＶＨおよび／またはＶＬ)、例えば１以上のＣＤＲ領域内および／または１以上のフレームワーク領域内の１以上のアミノ酸の修飾により操作されている。ある具体的態様において、本発明のＣＡＲ組成物は、抗体フラグメントを含む。さらなる態様において、抗体フラグメントはｓｃＦｖを含む。
【０３１９】
本発明の抗体または抗体フラグメントが、アミノ酸配列は異なるが(例えば、野生型から)、所望の活性は異ならないようにさらに修飾され得ることは当業者に理解される。例えば、“非必須”アミノ酸残基でのアミノ酸置換に至る付加的ヌクレオチド置換を、タンパク質になし得る。例えば、分子における非必須アミノ酸残基を、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基で置き換え得る。他の実施態様において、一連のアミノ酸を、側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成が異なる構造的に類似する一連で置換でき、例えば、アミノ酸残基が類似側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられる保存的置換をなし得る。
【０３２０】
類似側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当分野で規定されており、塩基性側鎖(例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン)、酸性側鎖(例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸)、非電荷極性側鎖(例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン)、非極性側鎖(例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン)、ベータ分枝側鎖(例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン)および芳香族側鎖(例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン)を含む。
【０３２１】
２以上の核酸またはポリペプチド配列の状況でのパーセント同一性は、同一である２以上の配列をいう。２配列は、次の配列比較アルゴリズムの１つで測定して、比較窓または指定領域にわたり最大一致のために比較し、アラインしたときまたは手動アラインメントと目視により、２配列が、同じであるアミノ酸残基またはヌクレオチドを特定のパーセンテージ有するならば(例えば、特定の領域にわたりまたは、断らないとき、配列全体にわたり、６０％同一性、場合により７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一性)、“実質的に同一”である。場合により、同一性は、少なくとも約５０ヌクレオチド(または１０アミノ酸)長である領域またはより好ましくは１００〜５００または１０００またはそれ以上のヌクレオチド(または２０、５０、２００またはそれ以上のアミノ酸)長である領域にわたり、存在する。
【０３２２】
配列比較のために、一般にある配列が対照配列として働き、それに対して、試験配列を比較する。配列比較アルゴリズムを使用するとき、試験および対照配列をコンピューターに入力し、必要であれば、部分配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。デフォルトプログラムパラメータを使用できまたは代替パラメータを指定できる。次いで、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づき、対照配列に対する試験配列のパーセント配列同一性を計算する。比較のために配列をアラインメントする方法は、当分野で周知である。比較のための配列の最適アラインメントが、例えば、Smith and Waterman, (1970) Adv. Appl. Math. 2:482cの局所相同性アルゴリズム、Needleman and Wunsch, (1970) J. Mol. Biol. 48:443の相同性アラインメントアルゴリズム、Pearson and Lipman, (1988) Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 85:2444の類似性サーチ方法、これらのアルゴリズムのコンピューターでの実行(Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WIのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ)または手動アラインメントおよび目視(例えば、Brent et al., (2003) Current Protocols in Molecular Biology)により実施され得る。
【０３２３】
パーセント配列同一性および配列類似性の決定に適するアルゴリズムの２例は、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ  ２.０アルゴリズムであり、これらはそれぞれAltschul et al., (1977) Nuc. Acids Res. 25:3389-3402;およびAltschul et al., (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410に記載される。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアは、National Center for Biotechnology Informationから公的に入手可能である。
【０３２４】
２アミノ酸配列間のパーセント同一性はまた、E. Meyers and W. Miller, (1988) Comput. Appl. Biosci. 4:11-17)のアルゴリズムを使用して実施でき、これは、ＡＬＩＧＮプログラム(version 2.0)に組み込まれ、ＰＡＭ１２０加重残基表、ギャップ長ペナルティ１２およびギャップペナルティ４を使用する。さらに、２アミノ酸配列間のパーセント同一性は、Needleman and Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:444-453)アルゴリズムを使用して決定でき、これは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ(www.gcg.comで利用可能)のＧＡＰプログラムに組み込まれており、Ｂｌｏｓｓｏｍ  ６２マトリクスまたはＰＡＭ２５０マトリクスおよびギャップ加重１６、１４、１２、１０、８、６または４および長加重１、２、３、４、５または６を使用する。
【０３２５】
ある態様において、本発明は、機能的に等価な分子を産生する、出発抗体またはフラグメント(例えば、ｓｃＦｖ)アミノ酸配列の修飾を企図する。例えば、ＣＡＲに包含されるここに記載する腫瘍抗原に対する抗原結合ドメインのＶＨまたはＶＬ、例えば、ｓｃＦｖは、ここに記載する腫瘍抗原に対する抗原結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖの出発ＶＨまたはＶＬフレームワーク領域と少なくとも約７０％、７１％。７２％。７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％,８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一性を保持するように修飾され得る。本発明は、機能的に等価な分子を産生するために、ＣＡＲ構築物全体の修飾、例えば、ＣＡＲ構築物の種々のドメインの１以上のアミノ酸配列における修飾を企図する。ＣＡＲ構築物は、出発ＣＡＲ構築物と少なくとも約７０％、７１％。７２％。７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一性を保持するように修飾され得る。
【０３２６】
二重特異性ＣＡＲ
ある実施態様において多特異的抗体分子は二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２を越えない抗原に特異性を有する。二重特異性抗体分子は、第一エピトープに結合特異性を有する第一免疫グロブリン可変ドメイン配列および第二エピトープに結合特異性を有する第二免疫グロブリン可変ドメイン配列により特徴付けられる。ある実施態様において、第一および第二エピトープは、同じ抗原、例えば、同じタンパク質(または多量体タンパク質のサブユニット)にある。ある実施態様において、第一および第二エピトープは重複する。ある実施態様において、第一および第二エピトープは重複しない。ある実施態様において、第一および第二エピトープは、異なる抗原、例えば、異なるタンパク質(または多量体タンパク質の異なるサブユニット)にある。ある実施態様において、二重特異性抗体分子は、第一エピトープに結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列および第二エピトープに結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を含む。ある実施態様において、二重特異性抗体分子は、第一エピトープに結合特異性を有する半抗体および第二エピトープに結合特異性を有する半抗体を含む。ある実施態様において、二重特異性抗体分子は、第一エピトープに結合特異性を有する半抗体またはそのフラグメントおよび第二エピトープに結合特異性を有する半抗体またはそのフラグメントを含む。ある実施態様において、二重特異性抗体分子は、第一エピトープに結合特異性を有するｓｃＦｖまたはそのフラグメンおよび第二エピトープに結合特異性を有するｓｃＦｖまたはそのフラグメンを含む。
【０３２７】
ある実施態様において、抗体分子は、多特異的(例えば、二重特異性または三特異的)抗体分子である。二重特異性またはヘテロ二量体抗体分子を産生するプロトコールは当分野で知られ、例えば、例えば、ＵＳ５７３１１６８号に記載の“ノブ・イン・ホール”アプローチ；例えば、ＷＯ０９／０８９００４号、ＷＯ０６／１０６９０５号およびＷＯ２０１０／１２９３０４号に記載の静電誘導Ｆｃ対形成；例えば、ＷＯ０７／１１０２０５号に記載の鎖交換加工ドメイン(ＳＥＥＤ)ヘテロ二量体形成；例えば、ＷＯ０８／１１９３５３号、ＷＯ２０１１／１３１７４６号およびＷＯ２０１３／０６０８６７号に記載のＦａｂアーム交換；例えば、ＵＳ４４３３０５９号に記載の、アミン反応性基とスルフヒドリル反応性基を有するヘテロ二機能性試薬を使用する二特異的構造を産生するための、例えば、抗体架橋による、二重抗体コンジュゲート；例えば、ＵＳ４４４４８７８号に記載する、２重鎖間のジスルフィド結合の還元および酸化のサイクルによる、異なる抗体からの半抗体(重−軽鎖対またはＦａｂｓ)組み換えにより産生された二重特異性抗体決定基；例えば、ＵＳ５２７３７４３号に記載のとおり、スルフヒドリル反応性基により架橋した三機能的抗体、例えば、３Ｆａｂ’フラグメント；例えば、ＵＳ５５３４２５４号に記載の、好ましくはジスルフィドまたはアミン反応性化学架橋による、生合成結合タンパク質、例えば、Ｃ末端テイルを介して架橋したｓｃＦｖの対；例えば、ＵＳ５５８２９９６号に記載の、定常ドメインが置換されている、ロイシンジッパー(例えば、ｃ−ｆｏｓおよびｃ−ｊｕｎ)により二量体化された異なる結合特異性を有する二機能性抗体、例えば、Ｆａｂフラグメント；例えば、ＵＳ５５９１８２８号に記載の、二重特異性およびオリゴ特異的モノおよびオリゴ価受容体、例えば、一方の抗体のＣＨ１領域と、一般に関連軽鎖を伴う他方の抗体のＶＨ領域のポリペプチドスペーサーを介して結合された、２抗体(２Ｆａｂフラグメント)のＶＨ−ＣＨ１領域；例えば、ＵＳ５６３５６０２号に記載の、二重特異性ＤＮＡ−抗体コンジュゲート、例えば、ＤＮＡの二本鎖切片による抗体またはＦａｂフラグメントの架橋；例えば、ＵＳ５６３７４８１号に記載の、二重特異性融合タンパク質、例えば、２ｓｃＦｖとその間に親水性螺旋ペプチドリンカーおよび完全定常領域を含む発現構築物；例えば、ＵＳ５８３７２４２号に記載の、多価および多特異的結合タンパク質、例えば、一般に二重特異性抗体と称される、Ｉｇ重鎖可変領域の結合領域を有する第一ドメインおよびＩｇ軽鎖可変領域の結合領域を有する第二ドメインを有するポリペプチドの二量体(二特異的、三特異的または四特異的分子を作るための高次構造も包含される)；例えば、ＵＳ５８３７８２１号に記載の、二重特異性／多価分子を形成するように二量体化できる、ペプチドスペーサーで抗体ヒンジ領域およびＣＨ３領域にさらに結合した結合ＶＬおよびＶＨ鎖を有するミニボディ構築物；二重特異性二重特異性抗体を形成するための二量体を形成できる、何れかの配向の、短ペプチドリンカー(例えば、５または１０アミノ酸)またはリンカー無しで結合されたＶＨおよびＶＬドメイン；例えば、ＵＳ５８４４０９４号に記���の、三量体および四量体；例えば、ＵＳ５８６４０１９号に記載の、一連のＦＶ(またはｓｃＦｖ)を形成するために、Ｃ末端でさらにＶＬドメインと結合している、架橋可能基とペプチド結合により結合している一連のＶＨドメイン(またはファミリーメンバーにおけるＶＬドメイン)；および例えば、ＵＳ５８６９６２０号に記載の、ペプチドリンカーが、例えば、ホモ二価、ヘテロ二価、三価および四価構造を形成するために、ｓｃＦＶまたは二重特異性抗体タイプ形式の両方を使用して、非共有または化学架橋により、多価構造にあわされたＶＨおよびＶＬドメインを有する一本鎖結合ポリペプチドを含むが、これらに限定されない。付加的例示的多特異的および二重特異性分子およびその製造方法は、例えば、ＵＳ５９１０５７３号、ＵＳ５９３２４４８号、ＵＳ５９５９０８３号、ＵＳ５９８９８３０号、ＵＳ６００５０７９号、ＵＳ６２３９２５９号、ＵＳ６２９４３５３号、ＵＳ６３３３３９６号、ＵＳ６４７６１９８号、ＵＳ６５１１６６３号、ＵＳ６６７０４５３号、ＵＳ６７４３８９６号、ＵＳ６８０９１８５号、ＵＳ６８３３４４１号、ＵＳ７１２９３３０号、ＵＳ７１８３０７６号、ＵＳ７５２１０５６号、ＵＳ７５２７７８７号、ＵＳ７５３４８６６号、ＵＳ７６１２１８１号、ＵＳ２００２００４５８７Ａ１号、ＵＳ２００２０７６４０６Ａ１号、ＵＳ２００２１０３３４５Ａ１号、ＵＳ２００３２０７３４６Ａ１号、ＵＳ２００３２１１０７８Ａ１号、ＵＳ２００４２１９６４３Ａ１号、ＵＳ２００４２２０３８８Ａ１号、ＵＳ２００４２４２８４７Ａ１号、ＵＳ２００５００３４０３Ａ１号、ＵＳ２００５００４３５２Ａ１号、ＵＳ２００５０６９５５２Ａ１号、ＵＳ２００５０７９１７０Ａ１号、ＵＳ２００５１００５４３Ａ１号、ＵＳ２００５１３６０４９Ａ１号、ＵＳ２００５１３６０５１Ａ１号、ＵＳ２００５１６３７８２Ａ１号、ＵＳ２００５２６６４２５Ａ１号、ＵＳ２００６０８３７４７Ａ１号、ＵＳ２００６１２０９６０Ａ１号、ＵＳ２００６２０４４９３Ａ１号、ＵＳ２００６２６３３６７Ａ１号、ＵＳ２００７００４９０９Ａ１号、ＵＳ２００７０８７３８１Ａ１号、ＵＳ２００７１２８１５０Ａ１号、ＵＳ２００７１４１０４９Ａ１号、ＵＳ２００７１５４９０１Ａ１号、ＵＳ２００７２７４９８５Ａ１号、ＵＳ２００８０５０３７０Ａ１号、ＵＳ２００８０６９８２０Ａ１号、ＵＳ２００８１５２６４５Ａ１号、ＵＳ２００８１７１８５５Ａ１号、ＵＳ２００８２４１８８４Ａ１号、ＵＳ２００８２５４５１２Ａ１号、ＵＳ２００８２６０７３８Ａ１号、ＵＳ２００９１３０１０６Ａ１号、ＵＳ２００９１４８９０５Ａ１号、ＵＳ２００９１５５２７５Ａ１号、ＵＳ２００９１６２３５９Ａ１号、ＵＳ２００９１６２３６０Ａ１号、ＵＳ２００９１７５８５１Ａ１号、ＵＳ２００９１７５８６７Ａ１号、ＵＳ２００９２３２８１１Ａ１号、ＵＳ２００９２３４１０５Ａ１号、ＵＳ２００９２６３３９２Ａ１号、ＵＳ２００９２７４６４９Ａ１号、ＥＰ３４６０８７Ａ２号、ＷＯ０００６６０５Ａ２号、ＷＯ０２０７２６３５Ａ２号、ＷＯ０４０８１０５１Ａ１号、ＷＯ０６０２０２５８Ａ２号、ＷＯ２００７０４４８８７Ａ２号、ＷＯ２００７０９５３３８Ａ２号、ＷＯ２００７１３７７６０Ａ２号、ＷＯ２００８１１９３５３Ａ１号、ＷＯ２００９０２１７５４Ａ２号、ＷＯ２００９０６８６３０Ａ１号、ＷＯ９１０３４９３Ａ１号、ＷＯ９３２３５３７Ａ１号、ＷＯ９４０９１３１Ａ１号、ＷＯ９４１２６２５Ａ２号、ＷＯ９５０９９１７Ａ１号、ＷＯ９６３７６２１Ａ２号、ＷＯ９９６４４６０Ａ１号に記載される。上記引用出願の内容を、その全体を引用により本明細書に包含させる。
【０３２８】
二重特異性抗体分子の各抗体または抗体フラグメント(例えば、ｓｃＦｖ)内で、ＶＨはＶＬの上流でも下流でもよい。ある実施態様において、上流抗体または抗体フラグメント(例えば、ｓｃＦｖ)は、そのＶＬ(ＶＬ１)の上流にそのＶＨ(ＶＨ１)と共に配置され、下流抗体または抗体フラグメント(例えば、ｓｃＦｖ)は、そのＶＨ(ＶＨ２)の上流にそのＶＬ(ＶＬ２)と共に配置され、従って、二重特異性抗体分子全体は配置ＶＨ１−ＶＬ１−ＶＬ２−ＶＨ２となる。他の実施態様において、上流抗体または抗体フラグメント(例えば、ｓｃＦｖ)は、そのＶＨ(ＶＨ１)の上流にＶＬ(ＶＬ１)と共に配置され、下流抗体または抗体フラグメント(例えば、ｓｃＦｖ)は、そのＶＬ(ＶＬ２)の上流にＶＨ(ＶＨ２)と共に配置され、従って、二重特異性抗体分子全体は、配置ＶＬ１−ＶＨ１−ＶＨ２−ＶＬ２を有する。場合により、リンカーは、２抗体または抗体フラグメント(例えば、ｓｃＦｖ)間、例えば、構築物がＶＨ１−ＶＬ１−ＶＬ２−ＶＨ２として配置されるならばＶＬ１およびＶＬ２間または構築物がＶＬ１−ＶＨ１−ＶＨ２−ＶＬ２として配置されるならばＶＨ１およびＶＨ２間に配置される。リンカーは、ここに記載するリンカー、例えば、(Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ)ｎリンカーであってよく、ここで、ｎは１、２、３、４、５または６、好ましくは４である(配列番号８０)。一般に、２ｓｃＦｖ間のリンカーは、２ｓｃＦｖのドメイン間の誤対合を避けるのに十分長くなければならない。場合により、リンカーは、第一ｓｃＦｖのＶＬとＶＨの間に配置される。場合により、リンカーは、第二ｓｃＦｖのＶＬとＶＨの間に配置される。複数のリンカーを有する構築物において、任意の２以上のリンカーは、何れも同一でも異なってもよい。従って、ある実施態様において、二重特異性ＣＡＲは、ここに記載する配置で、ＶＬ、ＶＨおよび場合により１以上のリンカーを含む。
【０３２９】
ある態様において、本発明は、二重特異性抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン(例えば、ここに記載のとおり)および細胞内シグナル伝達ドメイン(例えば、ここに記載のとおり)を含むキメラ抗原受容体を提供する。ある実施態様において、二重特異性抗原結合ドメインは、例えば、ここに記載する、Ｂ細胞抗原に結合する第一免疫グロブリン可変ドメイン配列、例えば、ｓｃＦｖ(またはここに記載するｓｃＦｖからの軽鎖ＣＤＲおよび／または重鎖ＣＤＲを含む)、例えば、(ここに、例えば、表６または表１２に記載するＣＤ１９結合ドメインまたはＢＣＭＡ結合ドメイン)およびここに記載する１以上の腫瘍抗原、例えば、固形腫瘍抗原に結合特異性を有する、例えば、メソテリン結合ドメインまたはＥＧＦＲｖIII結合ドメイン、例えば、ここに記載するｓｃＦｖを含む、第二免疫グロブリン可変ドメイン配列、例えば、ｓｃＦｖ(またはここに記載するｓｃＦｖからの軽鎖ＣＤＲおよび／または重鎖ＣＤＲを含む)(例えば、表２または表５に記載)を含む。ある実施態様において、二重特異性抗原結合ドメインは、ここに記載するＣＤ１９結合ドメインおよびここに記載するメソテリン結合ドメインを含む。ある実施態様において、二重特異性抗原結合ドメインは、ここに記載するＢＣＭＡ結合ドメインおよびここに記載するメソテリン結合ドメインを含む。ある実施態様において、二重特異性抗原結合ドメインは、ここに記載するＣＤ１９結合ドメインおよびここに記載するＥＧＦＲｖIII結合ドメインを含む。ある実施態様において、二重特異性抗原結合ドメインは、ここに記載するＢＣＭＡ結合ドメインおよびここに記載するＥＧＦＲｖIII結合ドメインを含む。他の態様において、本発明は、ここに記載する二重特異性ＣＡＲ、例えば、ここに記載するＢ細胞抗原結合ドメインおよびここに記載する腫瘍抗原(例えば、固形腫瘍抗原)を含む二重特異性ＣＡＲを発現する(例えば、含む)ように操作された、例えば、ここに記載する、細胞(例えば、細胞の集団)、例えば、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞を提供する。如何なる理論にも拘束されないが、このような二重特異性ＣＡＲ(例えば、ここに記載する、Ｂ細胞抗原結合ドメインおよび、例えば、ここに記載する、腫瘍抗原結合ドメインを、例えば、含む)を発現する細胞は、ここに記載する方法および組成物に有用であると考えられる。
【０３３０】
キメラＴＣＲ
ある態様において、ここに記載する抗原結合ドメイン、例えば、ここでの表に提供される、例えば、抗体および抗体フラグメントを、ここに記載する腫瘍抗原またはＢ細胞抗原に特異的に結合するキメラＴＣＲを作るために、Ｔ細胞受容体(“ＴＣＲ”)鎖、例えば、ＴＣＲアルファまたはＴＣＲベータ鎖の１以上の定常ドメインに移植し得る。理論に拘束されないが、キメラＴＣＲは、抗原結合により、ＴＣＲ複合体を介してシグナル伝達すると考えられる。例えば、ここに開示する、メソテリンまたはＣＤ１９  ｓｃＦｖまたはそのフラグメント、例えば、ＶＬドメインまたはＶＨドメインを、定常ドメイン、例えば、ＴＣＲ鎖、例えば、ＴＣＲアルファ鎖および／またはＴＣＲベータ鎖の細胞外定常ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインの少なくとも一部に移植し得る。他の例として、抗体または抗体フラグメントのＣＤＲ、例えば、ここに提供する表に記載の任意の抗体または抗体フラグメントのＣＤＲを、ここに記載する腫瘍抗原またはＢ細胞抗原に特異的に結合するキメラＴＣＲを作るために、ＴＣＲアルファおよび／またはベータ鎖に移植し得る。例えば、ここに開示するＬＣＤＲをＴＣＲアルファ鎖の可変ドメインに移植してよく、ここに開示するＨＣＤＲをＴＣＲベータ鎖の可変ドメインに移植してよくまたは逆も可能である。このようなキメラＴＣＲは、当分野で知られる方法により産生され得る(例えば、Willemsen RA et al, Gene Therapy 2000; 7: 1369-1377; Zhang T et al, Cancer Gene Ther 2004; 11: 487-496; Aggen et al, Gene Ther. 2012 Apr;19(4):365-74)。
【０３３１】
膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインに関して、種々の実施態様において、ＣＡＲ、例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよび／またはＢＣＡ  ＣＡＲを、ＣＡＲの細胞外ドメイン、例えば、抗原結合ドメインに結合する膜貫通ドメインを含むように設計し得る。膜貫通ドメインは、膜貫通領域に隣接した１以上の付加的アミノ酸を含んでよく、例えば、膜貫通ドメインが由来するタンパク質の細胞外領域と結合する１以上のアミノ酸(例えば、細胞外領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から最大１５アミノ酸)および／または膜貫通タンパク質が由来するタンパク質の細胞内領域に結合した１以上の付加的アミノ酸(例えば、細胞内領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０から最大１５アミノ酸)を含み得る。ある態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの他のドメインの１つと結合するものであり、例えば、膜貫通ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、共刺激ドメインと同じタンパク質由来である。いくつかの例では、膜貫通ドメインは、例えば、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するために、このようなドメインの同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインとの結合を避けるように、選択するかまたはアミノ酸置換により修飾し得る。ある態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ発現細胞の細胞表面の他のＣＡＲとホモ二量体化できる。異なる態様において、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、同じＣＡＲ発現細胞に存在する天然結合パートナーの結合ドメインとの相互作用を最小化するために、修飾または置換され得る。
【０３３２】
膜貫通ドメインは、天然または組み換え供給源に由来し得る。供給源が天然であるとき、ドメインは、あらゆる膜結合または膜貫通タンパク質に由来し得る。ある態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲが標的に結合したときは常に、細胞内ドメインのシグナル伝達ができる。本発明において特に有用な膜貫通ドメインは、例えば、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖またはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４の少なくとも膜貫通領域を含み得る。ある実施態様において、膜貫通ドメインは、例えば、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ−１(ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８)、ＩＣＯＳ(ＣＤ２７８)、４−１ＢＢ(ＣＤ１３７)、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ(ＬＩＧＨＴＲ)、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０(ＫＬＲＦ１)、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１(ＣＤ２２６)、ＳＬＡＭＦ４(ＣＤ２４４、２Ｂ４)、ＣＤ８４、ＣＤ９６(Ｔａｃｔｉｌｅ)、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９(ＣＤ２２９)、ＣＤ１６０(ＢＹ５５)、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００(ＳＥＭＡ４Ｄ)、ＳＬＡＭＦ６(ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８)、ＳＬＡＭ(ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３)、ＢＬＡＭＥ(ＳＬＡＭＦ８)、ＳＥＬＰＬＧ(ＣＤ１６２)、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃの、少なくとも膜貫通領域を含み得る。
【０３３３】
いくつかの例では、膜貫通ドメインは、ヒンジ、例えば、ヒトタンパク質からのヒンジを介して、ＣＡＲの細胞外領域、例えば、ＣＡＲの抗原結合ドメインに結合し得る。例えば、ある実施態様において、ヒンジは、ヒトＩｇ(免疫グロブリン)ヒンジ、例えば、ＩｇＧ４ヒンジまたはＣＤ８ａヒンジである。ある実施態様において、ヒンジまたはスペーサーは、配列番号４のアミノ酸配列を含む(例えば、それからなる)。ある態様において、膜貫通ドメインは、配列番号１２の膜貫通ドメインを含む(例えば、それからなる)。
【０３３４】
ある態様において、ヒンジまたはスペーサーは、ＩｇＧ４ヒンジを含む。例えば、ある実施態様において、ヒンジまたはスペーサーは、配列番号６のアミノ酸配列のヒンジを含む。ある実施態様において、ヒンジまたはスペーサーは、配列番号７のヌクレオチド配列によりコードされるヒンジを含む。ある態様において、ヒンジまたはスペーサーは、ＩｇＤヒンジを含む。例えば、ある実施態様において、ヒンジまたはスペーサーは、配列番号８のアミノ酸配列のヒンジを含む。ある実施態様において、ヒンジまたはスペーサーは、配列番号９のヌクレオチド配列によりコードされるヒンジを含む。
【０３３５】
ある態様において、膜貫通ドメインは組み換えであってよく、この場合、主にロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を含む。ある態様において、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバリンのトリプレットが組み換え膜貫通ドメインの各末端に見られ得る。
【０３３６】
場合により、２〜１０アミノ酸長の、短オリゴまたはポリペプチドリンカーが、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質領域の結合を形成する。グリシン−セリンダブレットは、特に適当なリンカーを提供する。例えば、ある態様において、リンカーは、GGGGSGGGGS(配列番号１０)のアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、リンカーは、GGTGGCGGAGGTTCTGGAGGTGGAGGTTCC(配列番号１１)のヌクレオチド配列によりコードされる。
ある態様において、ヒンジまたはスペーサーは、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジを含む。
【０３３７】
細胞質ドメイン
ＣＡＲ、例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよび／またはＢＣＡ  ＣＡＲの細胞質ドメインまたは領域は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインは、一般にＣＡＲが導入されている免疫細胞の正常エフェクター機能の少なくとも１つの活性化を担う。用語“エフェクター機能”は、細胞の特殊化機能をいう。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性またはヘルパー活性であり得る。それ故に、用語“細胞内シグナル伝達ドメイン”は、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞に特殊化機能を実施させる、タンパク質の部分をいう。通常細胞内シグナル伝達ドメイン全体を用いてよいが、多くの場合鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分を使用する場合には、このような切断部分を、エフェクター機能シグナルを伝達する限り、インタクト鎖の代わりに使用し得る。用語細胞内シグナル伝達ドメインは、それ故に、エフェクター機能シグナルの伝達に十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意の切断部分を含むことを意味する。
【０３３８】
本発明のＣＡＲにおいて使用するための細胞内シグナル伝達ドメインの例は、Ｔ細胞受容体(ＴＣＲ)の細胞質配列および抗原受容体結合後に協調して作用してシグナル伝達を開始させる共受容体、ならびにこれらの配列の任意の誘導体またはバリアントおよび同じ機能的能力を有する任意の組み換え配列を含む。
【０３３９】
ＴＣＲ単独でのシグナル産生は、Ｔ細胞の完全活性化に不十分であり、二次的および／または共刺激シグナルも必要であることが知られる。それ故に、Ｔ細胞活性化は、ＴＣＲを介して抗原依存性一次活性化を開始するもの(一次細胞内シグナル伝達ドメイン)および二次的または共刺激シグナルを提供するために抗原非依存的方式で作用するもの(二次的細胞質ドメイン、例えば、共刺激ドメイン)の２つの異なるクラスの細胞質シグナル伝達配列が介在するということができる。
【０３４０】
一次シグナル伝達ドメインは、刺激方向または阻害方向でＴＣＲ複合体の一次活性化を制御する。刺激方式で作用する一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして知られる、シグナル伝達モチーフを含み得る。
【０３４１】
本発明に特に有用なＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナル伝達ドメインの例は、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８(“ＩＣＯＳ”としても知られる)、ＦｃεＲＩ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２およびＣＤ６６ｄのものを含む。ある実施態様において、本発明のＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ３ゼータの一次シグナル伝達ドメイン、例えば、ここに記載するＣＤ３ゼータ配列を含む。
【０３４２】
ある実施態様において、一次シグナル伝達ドメインは修飾ＩＴＡＭドメイン、例えば、天然ＩＴＡＭドメインと比較して、改変した(例えば、増加または減少した)活性を有する変異ＩＴＡＭドメインを含む。ある実施態様において、一次シグナル伝達ドメインは、修飾ＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、最適化および／または切断ＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある実施態様において、一次シグナル伝達ドメインは、１、２、３、４またはそれ以上のＩＴＡＭモチーフを含む。
【０３４３】
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを単独で含んでよくまたは本発明のＣＡＲの状況において有用な任意の他の所望の細胞内シグナル伝達ドメインと組み合わせてよい。例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインはＣＤ３ゼータ鎖部分および共刺激シグナル伝達ドメインを含み得る。共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分をいう。共刺激分子は、リンパ球の抗原に対する効率的応答に必要な抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。このような分子の例は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ(ＣＤ１３７)、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１(ＬＦＡ−１)、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３およびＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む。例えば、ＣＤ２７共刺激は、インビトロでヒトＣＡＲＴ細胞の拡大、エフェクター機能および生存性を増強し、インビボでヒトＴ細胞の生存性および抗腫瘍活性を拡大することが示されている(Song et al. Blood. 2012; 119(3):696-706)。このような共刺激分子のさらなる例は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ性活性化分子(ＳＬＡＭタンパク質)、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１(ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８)、４−１ＢＢ(ＣＤ１３７)、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＯＳ(ＣＤ２７８)、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ(ＬＩＧＨＴＲ)、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０(ＫＬＲＦ１)、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１(ＣＤ２２６)、ＳＬＡＭＦ４(ＣＤ２４４、２Ｂ４)、ＣＤ８４、ＣＤ９６(Ｔａｃｔｉｌｅ)、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９(ＣＤ２２９)、ＣＤ１６０(ＢＹ５５)、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００(ＳＥＭＡ４Ｄ)、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６(ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８)、ＳＬＡＭ(ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３)、ＢＬＡＭＥ(ＳＬＡＭＦ８)、ＳＥＬＰＬＧ(ＣＤ１６２)、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａおよびＣＤ８３と特異的に結合するリガンドを含む。
【０３４４】
本発明のＣＡＲの細胞質部分内の細胞内シグナル伝達配列は、互いに無作為にまたは特定の順序で結合させ得る。場合により、短オリゴ−またはポリーペプチドリンカー、例えば、２〜１０アミノ酸(例えば、２、３、４、５、６、７、８、９または１０アミノ酸)長が、細胞内シグナル伝達配列間の結合を形成し得る。ある実施態様において、グリシン−セリンダブレットを適当なリンカーとして使用し得る。ある実施態様において、１アミノ酸、例えば、アラニン、グリシンを適当なリンカーとして使用し得る。
【０３４５】
ある態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、２以上の、例えば、２、３、４、５またはそれ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含むように設計される。ある実施態様において、２以上の、例えば、２、３、４、５またはそれ以上の共刺激シグナル伝達ドメインは、リンカー分子、例えば、ここに記載するリンカー分子により分離される。ある実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、２共刺激シグナル伝達ドメインを含む。ある実施態様において、リンカー分子はグリシン残基である。ある実施態様において、リンカーはアラニン残基である。
【０３４６】
ある態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメインおよびＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。ある態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメインおよび４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含むように設計される。ある態様において、４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインは、配列番号１４のシグナル伝達ドメインである。ある態様において、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメインは、配列番号１８のシグナル伝達ドメインである。
【０３４７】
ある態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメインおよびＣＤ２７のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。ある態様において、ＣＤ２７のシグナル伝達ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＤ２７のシグナル伝達ドメインは、配列番号１７の核酸配列によりコードされる。
【０３４８】
ある態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメインおよびＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。ある態様において、ＣＤ２８のシグナル伝達ドメインは、配列番号４４のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＣＤ２８のシグナル伝達ドメインは、配列番号４５の核酸配列によりコードされる。
【０３４９】
ある態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメインおよびＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインを含むように設計される。ある態様において、ＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインは、配列番号４２のアミノ酸配列を含む。ある態様において、ＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインは、配列番号４３の核酸配列によりコードされる。
【０３５０】
ある態様において、本発明の細胞、例えば、ここに記載する、例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を発現する細胞は、ここに記載する標的腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、一次シグナル伝達ドメインおよび共刺激シグナル伝達ドメインを含むＴＡ  ＣＡＲならびにここに記載する標的Ｂ細胞抗原に結合する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、一次シグナル伝達ドメインおよび共刺激シグナル伝達ドメインを含むＢＣＡ  ＣＡＲを含む。他の態様において、本発明の細胞、例えば、ここに記載する、例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を発現する細胞は、ここに記載する標的腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、一次シグナル伝達ドメインおよび共刺激シグナル伝達ドメインを含むＴＡ  ＣＡＲならびにここに記載する標的Ｂ細胞抗原に結合する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび共刺激シグナル伝達ドメインを含むが、一次シグナル伝達ドメインを含まないＢＣＡ  ＣＡＲを含む。理論に拘束されないが、共刺激シグナル伝達ドメインを含み、一次シグナル伝達ドメインを含まないＢＣＡ  ＣＡＲの提供は、循環Ｂ細胞に応答して本発明の細胞が持続およびまたは増殖することを可能とし、該Ｂ細胞に対する細胞毒性を最小化し得る。
【０３５１】
ある態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞、例えばＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を発現する細胞は、さらに、他のＴＡ  ＣＡＲ、例えば、同じ標的または異なる標的(例えば、ここに記載する腫瘍抗原以外またはここに記載する異なる腫瘍抗原を標的とする)に対する異なる抗原結合ドメインを含む、例えば、他のＴＡ  ＣＡＲをさらに含む。例えば、本発明の細胞が第二ＴＡ  ＣＡＲを発現するある実施態様において、第二ＴＡ  ＣＡＲは、第一ＴＡ  ＣＡＲにより標的化される腫瘍抗原と同じ癌細胞型に発現される標的に対する抗原結合ドメインを含む。ある実施態様において、ＣＡＲ発現細胞は、第一腫瘍抗原を標的とし、共刺激シグナル伝達ドメインを含むが、一次シグナル伝達ドメインを含まない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第一ＴＡ  ＣＡＲおよび第二の、異なる、腫瘍抗原を標的とし、一次シグナル伝達ドメインを有するが、共刺激シグナル伝達ドメインを有しない細胞内シグナル伝達ドメインを含む第二ＴＡ  ＣＡＲを含む。理論に拘束されることを意図しないが、共刺激シグナル伝達ドメイン、例えば、４−１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ２７またはＯＸ−４０の第一ＴＡ  ＣＡＲへのおよび一次シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ３ゼータの第二ＴＡ  ＣＡＲへの配置は、両標的が発現される細胞にＣＡＲ活性を限定できる。ある実施態様において、本発明の細胞は、ここに記載する標的抗原に結合する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび共刺激ドメインを含む第一腫瘍抗原(ＴＡ)  ＣＡＲならびに異なる標的抗原(例えば、第一標的抗原と同じ癌細胞型に発現される抗原)を標的とし、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび一次シグナル伝達ドメインを含む第二ＴＡ  ＣＡＲを含む。他の実施態様において、本発明の細胞は、ここに記載する標的抗原に結合する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび一次シグナル伝達ドメインを含む第一ＴＡ  ＣＡＲおよび第一標的抗原以外の腫瘍抗原(例えば、第一標的抗原と同じ癌細胞型に発現される抗原)を標的とし、該抗原に対する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび共刺激シグナル伝達ドメインを含む第二ＴＡ  ＣＡＲを含む(すなわち、発現するように遺伝子操作されている)。他の実施態様において、本発明の細胞は、ここに記載する標的抗原に結合する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激シグナル伝達ドメインおよび一次シグナル伝達ドメインを含む第一ＴＡ  ＣＡＲならびに第一標的抗原以外の腫瘍抗原(例えば、第一標的抗原と同じ癌細胞型に発現される抗原)を標的とし、該抗原に対する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激シグナル伝達ドメインおよび一次シグナル伝達ドメインを含む第二ＴＡ  ＣＡＲを含む(すなわち、発現するように遺伝子操作されている)。第一および第二ＴＡ  ＣＡＲ両方が共刺激シグナル伝達ドメインを含む実施態様において、第一ＴＡ  ＣＡＲおよび第二ＴＡ  ＣＡＲの共刺激シグナル伝達ドメインは、同じタンパク質、例えば、ここに記載する共刺激タンパク質、例えば、４−１ＢＢ、ＣＤ２８またはＩＣＯＳに由来し得る。他の実施態様において、第一ＴＡ  ＣＡＲおよび第二ＴＡ  ＣＡＲの共刺激シグナル伝達ドメインは異なるタンパク質に由来してよく、例えば、第一ＴＡ  ＣＡＲは、例えば、４−１ＢＢの、ここに記載する共刺激シグナル伝達ドメインを含み、第二ＴＡ  ＣＡＲは、例えば、ＣＤ２８の、ここに記載する異なる共刺激シグナル伝達ドメインを含む。
【０３５２】
ある実施態様において、ＣＡＲ発現細胞は、ここに記載するＴＡ  ＣＡＲ、ここに記載するＢＣ  ＣＡＲおよび阻害性ＣＡＲを含む。ある実施態様において、阻害性ＣＡＲは、正常細胞、例えば、ＴＡ  ＣＡＲにより標的化される腫瘍抗原も発現する正常細胞に見られるが、癌細胞に見られない抗原に結合する抗原結合ドメインを含む。ある実施態様において、阻害性ＣＡＲは、阻害性分子の抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含む。例えば、阻害性ＣＡＲの細胞内ドメインは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３(ＣＤ２７６)、Ｂ７−Ｈ４(ＶＴＣＮ１)、ＨＶＥＭ(ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０)、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスII、ＧＡＬ９、アデノシンまたはＴＧＦベータの細胞内ドメインであり得る。
【０３５３】
ある実施態様において、種々のＣＡＲ(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲ)の抗原結合ドメインは、抗原結合ドメインが互いに相互作用しないようなものである。例えば、第一および第二ＣＡＲを発現する細胞は、第二ＣＡＲの抗原結合ドメイン、例えば、ＶＨＨである第二ＣＡＲの抗原結合ドメインと結合しない、例えば、フラグメント、例えば、ｓｃＦｖとして、第一ＣＡＲの抗原結合ドメインを有し得る。
【０３５４】
ある実施態様において、抗原結合ドメインは、相補性決定領域が単一ドメインポリペプチドの一部である分子を含む単一ドメイン抗原結合(ＳＤＡＢ)分子を含む。例は、重鎖可変ドメイン、天然に軽鎖を欠く結合分子、慣用の４鎖抗体に由来する単一ドメイン、操作されたドメインおよび由来する抗体のもの以外の単一ドメイン足場を含むが、これらに限定されない。ＳＤＡＢ分子は当分野で知られる何れでもまたはあらゆる将来の単一ドメイン分子でもよい。ＳＤＡＢ分子は、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤツメウナギ、魚、サメ、ヤギ、ウサギおよびウシを含むが、これらに限定されないあらゆる種に由来し得る。この用語はまたラクダ科およびサメ以外の種からの天然に存在する単一ドメイン抗体分子も含む。
【０３５５】
ある態様において、ＳＤＡＢ分子は、例えば、サメ血清で発見された新規抗原受容体(ＮＡＲ)として知られる免疫グロブリンアイソタイプに由来するもののような、魚に見られる免疫グロブリンの可変領域に由来し得る。ＮＡＲの可変領域に由来する単一ドメイン分子(“ＩｇＮＡＲ”)を製造する方法は、ＷＯ０３／０１４１６１号およびStreltsov (2005) Protein Sci. 14:2901-2909に開示される。
【０３５６】
他の態様によって、ＳＤＡＢ分子は、軽鎖を欠く重鎖として知られる天然に存在する単一ドメイン抗原結合分子である。このような単一ドメイン分子は、例えば、ＷＯ９４０４６７８号およびHamers-Casterman, C. et al. (1993) Nature 363:446-448に開示される。明確化のために、軽鎖を天然に欠く重鎖分子由来のこの可変ドメインはＶＨＨまたはナノボディとここでは知られ、４鎖免疫グロブリンの慣用のＶＨと区別する。このようなＶＨＨ分子は、ラクダ科種、例えばラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカおよびグアナコに由来し得る。ラクダ科以外の他の種は、軽鎖を天然に欠く重鎖分子を形成でき、このようなＶＨＨは、本発明の範囲内である。
【０３５７】
ＳＤＡＢ分子は、組み換え、ＣＤＲ移植、ヒト化、ラクダ化、脱免疫化および／またはインビトロ産生(例えば、ファージディスプレイによる選択)であり得る。
【０３５８】
受容体の抗原結合ドメイン間で相互作用する抗原結合ドメインを含む複数のキメラ膜包埋受容体を有する細胞は、例えば、抗原結合ドメインの１以上がその同族抗原に結合する能力を阻害するため、望ましくないことがあり得ることも発見された。従って、ここに開示されるのは、このような相互作用が最小化された抗原結合ドメインを含む第一および第二の天然に存在しないキメラ膜包埋受容体を有する細胞である。またここに開示されるのは、このような相互作用が最小化された抗原結合ドメインを含む第一および第二天然に存在しないキメラ膜包埋受容体をコードする核酸、ならびにこのような細胞および核酸を製造および使用する方法である。ある実施態様において、該第一および該第二天然に存在しないキメラ膜包埋受容体の一方の抗原結合ドメインはｓｃＦｖを含み、他方は単一ＶＨドメイン、例えば、ラクダ類、サメまたはヤツメウナギ単一ＶＨドメインまたはヒトもしくはマウス配列に由来する単一ＶＨドメインを含む。
【０３５９】
ある実施態様において、本発明は、第一および第二ＣＡＲ(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲ)を含み、ここで、第一ＣＡＲおよび第二ＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは可変軽ドメインおよび可変重ドメインを含まない。ある実施態様において、第一ＣＡＲおよび第二ＣＡＲの一方の抗原結合ドメインはｓｃＦｖであり、他方はｓｃＦｖではない。ある実施態様において、第一ＣＡＲおよび第二ＣＡＲの一方の抗原結合ドメインは、単一ＶＨドメイン、例えば、ラクダ類、サメまたはヤツメウナギ単一ＶＨドメインまたはヒトもしくはマウス配列に由来する単一ＶＨドメインを含む。ある実施態様において、第一ＣＡＲおよび第二ＣＡＲの一方の抗原結合ドメインはナノボディを含む。ある実施態様において、第一ＣＡＲおよび第二ＣＡＲの一方の抗原結合ドメインはラクダ類ＶＨＨドメインを含む。
【０３６０】
ある実施態様において、第一ＣＡＲおよび第二ＣＡＲの一方の抗原結合ドメインはｓｃＦｖを含み、他方は単一ＶＨドメイン、例えば、ラクダ類、サメまたはヤツメウナギ単一ＶＨドメインまたはヒトもしくはマウス配列に由来する単一ＶＨドメインを含む。ある実施態様において、第一ＣＡＲおよび第二ＣＡＲの一方の抗原結合ドメインはｓｃＦｖを含み、他方はナノボディを含む。ある実施態様において、第一ＣＡＲおよび第二ＣＡＲの一方の抗原結合ドメインはｓｃＦｖを含み、他方はラクダ類ＶＨＨドメインを含む。
【０３６１】
ある実施態様において、細胞表面に存在するとき、第一ＣＡＲの抗原結合ドメインとその同族抗原の結合は、第二ＣＡＲの存在により実質的に減少しない。ある実施態様において、第二ＣＡＲの存在下の第一ＣＡＲの抗原結合ドメインとその同族抗原の結合は、第二ＣＡＲ非存在下の第一ＣＡＲの抗原結合ドメインとその同族抗原の結合の８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％である。
【０３６２】
ある実施態様において、細胞表面に存在するとき、第一ＣＡＲおよび第二ＣＡＲの抗原結合ドメインは、両者がｓｃＦｖ抗原結合ドメインであるときより低い程度で互いに結合する。ある実施態様において、第一ＣＡＲおよび第二ＣＡＲの抗原結合ドメインは、両者がｓｃＦｖ抗原結合ドメインであるときより、互いに８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％低く結合する。
【０３６３】
他の態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞は、さらに他の薬剤、例えば、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を発現する。例えば、ある実施態様において、薬剤は、阻害性分子を阻害する薬剤である。阻害性分子、例えば、ＰＤ−１は、ある実施態様において、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を低減できる。阻害性分子の例は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ(例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５)、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３(ＣＤ２７６)、Ｂ７−Ｈ４(ＶＴＣＮ１)、ＨＶＥＭ(ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０)、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスII、ＧＡＬ９、アデノシンおよびＴＧＦベータを含む。
【０３６４】
ある実施態様において、阻害性分子を阻害する薬剤は、例えば、ここに記載する分子、例えば、細胞に正のシグナルを提供する第二ポリペプチド、例えば、ここに記載する細胞内シグナル伝達ドメインと結合した第一ポリペプチド、例えば、阻害性分子を含む薬剤である。ある実施態様において、薬剤は、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ(例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５)、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３(ＣＤ２７６)、Ｂ７−Ｈ４(ＶＴＣＮ１)、ＨＶＥＭ(ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０)、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスII、ＧＡＬ９、アデノシンおよびＴＧＦベータまたはこれらの何れかのフラグメント(例えば、これらの何れかの細胞外ドメインの少なくとも一部)などの阻害性分子の第一ポリペプチドおよびここに記載する細胞内シグナル伝達ドメイン(例えば、共刺激ドメイン(例えば、ここに記載する、例えば、４−１ＢＢ、ＣＤ２７またはＣＤ２８)および／または一次シグナル伝達ドメイン(例えば、ここに記載するＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン)である第二ポリペプチドを含む。ある実施態様において、薬剤は、ＰＤ−１またはそのフラグメント(例えば、ＰＤ−１の細胞外ドメインの少なくとも一部)の第一ポリペプチドおよびここに記載する細胞内シグナル伝達ドメイン(例えば、ここに記載するＣＤ２８シグナル伝達ドメインおよび／またはここに記載するＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン)の第二ポリペプチドを含む。ＰＤ−１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳおよびＢＴＬＡも含む受容体のＣＤ２８ファミリーの阻害性メンバーである。ＰＤ−１は、活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞および骨髄細胞に発現される(Agata et al. 1996 Int. Immunol 8:765-75)。ＰＤ−１の２リガンド、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２が、ＰＤ−１への結合によりＴ細胞活性化を下方制御することが示されている(Freeman et a. 2000 J Exp Med 192:1027-34; Latchman et al. 2001 Nat Immunol 2:261-8; Carter et al. 2002 Eur J Immunol 32:634-43)。ＰＤ−Ｌ１はヒト癌で豊富である(Dong et al. 2003 J Mol Med 81:281-7; Blank et al. 2005 Cancer Immunol. Immunother 54:307-314; Konishi et al. 2004 Clin Cancer Res 10:5094)。免疫抑制は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の局所相互作用の阻害により逆転され得る。
【０３６５】
ある実施態様において、薬剤は、４−１ＢＢおよびＣＤ３ゼータなどの膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインに融合した阻害性分子、例えば、ＰＤ−１の細胞外ドメイン(ＥＣＤ)を含む(ここではＰＤ−１  ＣＡＲとも称する)。ある実施態様において、ＰＤ−１  ＣＡＲは、ここに記載するＸＣＡＲと組み合わせて使用したとき、Ｔ細胞生存性を改善する。ある実施態様において、ＣＡＲは、配列番号２６に下線で示したＰＤ−１の細胞外ドメインを含むＰＤ−１  ＣＡＲを含む。ある実施態様において、ＰＤ−１  ＣＡＲは配列番号２６のアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、ＰＤ−１  ＣＡＲは配列番号３９のアミノ酸配列を含む。
【０３６６】
ある実施態様において、薬剤は、ＰＤ−１  ＣＡＲ、例えば、ここに記載するＰＤ−１  ＣＡＲをコードする核酸配列を含む。ある実施態様において、ＰＤ−１  ＣＡＲの核酸配列は表１に配列番号２７として示し、ＰＤ−１  ＥＣＤの配列は下線を付す。
【０３６７】
他の態様において、本発明は、ＣＡＲ発現細胞の集団を提供する。ある実施態様において、ＣＡＲ発現細胞の集団は、種々のＣＡＲを発現する細胞の混合物を含む。例えば、ある実施態様において、ＣＡＲＴ細胞の集団は、ここに記載する腫瘍抗原に対する抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現する第一細胞および異なる抗原結合ドメイン、例えば、異なるここに記載する腫瘍抗原に対する抗原結合ドメイン、例えば、第一細胞により発現されるＣＡＲの抗原結合ドメインにより結合される腫瘍抗原徒異なるここに記載する腫瘍抗原に対する抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現する第二細胞を含み得る。他の例として、ＣＡＲ発現細胞の集団は、ここに記載する腫瘍抗原に対する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第一細胞およびここに記載する腫瘍抗原以外を標的とする抗原結合ドメインを含むＣＡＲを発現する第二細胞を含み得る。ある実施態様において、ＣＡＲ発現細胞の集団は、例えば、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第一細胞および二次的シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する第二細胞を含む。
【０３６８】
他の態様において、本発明は、集団における少なくとも１つの細胞がここに記載する腫瘍抗原に対する抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現し、第二細胞が他の薬剤、例えば、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を発現する、細胞の集団を提供する。例えば、ある実施態様において、薬剤は、阻害性分子を阻害する薬剤であり得る。阻害性分子、例えば、ＰＤ−１は、ある実施態様において、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を阻害し得る。阻害性分子の例は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ(例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５)、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３(ＣＤ２７６)、Ｂ７−Ｈ４(ＶＴＣＮ１)、ＨＶＥＭ(ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０)、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスII、ＧＡＬ９、アデノシンおよびＴＧＦベータを含む。ある実施態様において、阻害性分子を阻害する薬剤は、例えば、ここに記載する分子、例えば、細胞に正のシグナルを提供する第二ポリペプチド、例えば、ここに記載する細胞内シグナル伝達ドメインと結合した第一ポリペプチド、例えば、阻害性分子を含む薬剤である。ある実施態様において、薬剤は、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ(例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５)、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３(ＣＤ２７６)、Ｂ７−Ｈ４(ＶＴＣＮ１)、ＨＶＥＭ(ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０)、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスII、ＧＡＬ９、アデノシンおよびＴＧＦベータまたはこれらの何れかのフラグメントなどの阻害性分子の第一ポリペプチドおよびここに記載する細胞内シグナル伝達ドメイン(例えば、共刺激ドメイン(例えば、ここに記載する、例えば、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＯＸ４０またはＣＤ２８)および／または一次シグナル伝達ドメイン(例えば、ここに記載するＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む))である第二ポリペプチドを含む。ある実施態様において、薬剤は、ＰＤ−１またはそのフラグメントの第一ポリペプチドおよびここに記載する細胞内シグナル伝達ドメイン(例えば、ここに記載するＣＤ２８シグナル伝達ドメインおよび／またはここに記載するＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン)の第二ポリペプチドを含む。
【０３６９】
ある態様において、本発明は、ＣＡＲ発現細胞の集団、例えば、種々のＣＡＲを発現する細胞の混合物を他の薬剤、例えば、ここに記載するキナーゼ阻害剤などのキナーゼ阻害剤と組み合わせて投与することを含む、方法を提供する。他の態様において、本発明は、集団の少なくとも１つの細胞はここに記載する腫瘍抗原の抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現し、第二細胞は他の薬剤、例えば、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を発現する、細胞の集団を、他の薬剤、例えば、ここに記載するキナーゼ阻害剤などのキナーゼ阻害剤と組み合わせて、投与することを含む方法を提供する。
【０３７０】
ＣＡＲ分子の例
ある態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲは、Ｂ細胞抗原に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ分子を含む。ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲは、ＣＤ１９抗原結合ドメイン(例えば、ＣＤ１９に特異的に結合するマウス、ヒトまたはヒト化抗体または抗体フラグメント)、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン(例えば、共刺激ドメインおよび／または一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン)を含むＣＡＲ分子を含む。
【０３７１】
ここに記載するＢＣ  ＣＡＲのＣＡＲ分子の例を、表１０に挙げる。表１０におけるＣＡＲ分子は、ＣＤ１９抗原結合ドメイン、例えば、表６に挙げる任意のＣＤ１９抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含む。
【０３７２】
【表４５】
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【表４６】
2019513347.tif 000048
【表４７】
2019513347.tif 000049
【０３７３】
ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲのＣＡＲ分子は、表１０または２０１４年３月１５日出願の国際公開ＷＯ２０１４／１５３２７０号(引用により本明細書に包含される)の表３に挙げるアミノ酸配列を含む(例えば、それからなる)。ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲのＣＡＲ分子は、配列番号２６９、配列番号２７０、配列番号２７１、配列番号２７２、配列番号２７３、配列番号２７４、配列番号２７５、配列番号２７６、配列番号２７７、配列番号２７８、配列番号２７９、配列番号２８０または配列番号２８１のアミノ酸配列；または配列番号２６９、配列番号２７０、配列番号２７１、配列番号２７２、配列番号２７３、配列番号２７４、配列番号２７５、配列番号２７６、配列番号２７７、配列番号２７８、配列番号２７９、配列番号２８０または配列番号２８１のアミノ酸配列に少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０または３０修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が６０、５０または４０を超えないアミノ酸配列；または配列番号２６９、配列番号２７０、配列番号２７１、配列番号２７２、配列番号２７３、配列番号２７４、配列番号２７５、配列番号２７６、配列番号２７７、配列番号２７８、配列番号２７９、配列番号２８０または配列番号２８１のアミノ酸配列に８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む(例えば、それからなる)。
【０３７４】
ある態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲは、Ｂ細胞抗原に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ分子を含む。ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲは、ＢＣＭＡ抗原結合ドメイン(例えば、ＢＣＭＡ、例えば、ヒトＢＣＭＡに特異的に結合するマウス、ヒトまたはヒト化抗体または抗体フラグメント)、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン(例えば、共刺激ドメインおよび／または一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン)を含むＣＡＲ分子を含む。
【０３７５】
ここに記載するＢＣ  ＣＡＲのＣＡＲ分子は表１６またはＷＯ２０１６／０１４５６５号の表１または他にここに記載するとおりである。表１６におけるＣＡＲ分子は、ＢＣＭＡ抗原結合ドメイン、例えば、表１２または１３に挙げる任意のＢＣＭＡ抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含む。
【０３７６】
【表４８】
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【表４９】
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【０３７７】
【表５０】
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【表５１】
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【０３７８】
【表５２】
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【表５３】
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【０３７９】
【表５４】
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【表５５】
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【０３８０】
【表５６】
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【表５７】
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【０３８１】
【表５８】
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【表５９】
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【０３８２】
【表６０】
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【表６１】
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【０３８３】
【表６２】
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【表６３】
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【０３８４】
【表６４】
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【表６５】
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【０３８５】
【表６６】
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【表６７】
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【０３８６】
【表６８】
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【表６９】
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【０３８７】
【表７０】
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【表７１】
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【０３８８】
【表７２】
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【表７３】
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【０３８９】
【表７４】
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【表７５】
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【０３９０】
ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲのＣＡＲ分子は、表１６またはＷＯ２０１６／０１４５６５号の表１に挙げるまたはその他ここに記載するとおりのアミノ酸配列を含む(例えば、それからなる)。ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲのＣＡＲ分子は、配列番号９４９、配列番号９５０、配列番号９５１、配列番号９５２、配列番号９５３、配列番号９５４、配列番号９５５、配列番号９５６、配列番号９５７、配列番号９５８、配列番号９５９、配列番号９６０、配列番号９６１、配列番号９６２、配列番号９６３、配列番号９７９、配列番号９８０、配列番号９８１、配列番号９８２、配列番号９８３、配列番号９８４、配列番号９８５、配列番号９８６、配列番号９８７、配列番号９８８、配列番号９８９、配列番号９９０、配列番号９９１、配列番号９９２、配列番号９９３、配列番号９９４、配列番号９９５、配列番号９９６、配列番号９９７、配列番号９９８または配列番号９９９のアミノ酸配列；または配列番号９４９、配列番号９５０、配列番号９５１、配列番号９５２、配列番号９５３、配列番号９５４、配列番号９５５、配列番号９５６、配列番号９５７、配列番号９５８、配列番号９５９、配列番号９６０、配列番号９６１、配列番号９６２、配列番号９６３、配列番号９７９、配列番号９８０、配列番号９８１、配列番号９８２、配列番号９８３、配列番号９８４、配列番号９８５、配列番号９８６、配列番号９８７、配列番号９８８、配列番号９８９、配列番号９９０、配列番号９９１、配列番号９９２、配列番号９９３、配列番号９９４、配列番号９９５、配列番号９９６、配列番号９９７、配列番号９９８または配列番号９９９のアミノ酸配列に少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０または３０修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が６０、５０または４０を超えないアミノ酸配列；または配列番号９４９、配列番号９５０、配列番号９５１、配列番号９５２、配列番号９５３、配列番号９５４、配列番号９５５、配列番号９５６、配列番号９５７、配列番号９５８、配列番号９５９、配列番号９６０、配列番号９６１、配列番号９６２、配列番号９６３、配列番号９７９、配列番号９８０、配列番号９８１、配列番号９８２、配列番号９８３、配列番号９８４、配列番号９８５、配列番号９８６、配列番号９８７、配列番号９８８、配列番号９８９、配列番号９９０、配列番号９９１、配列番号９９２、配列番号９９３、配列番号９９４、配列番号９９５、配列番号９９６、配列番号９９７、配列番号９９８または配列番号９９９のアミノ酸配列に８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む(例えば、それからなる)。
【０３９１】
ある態様において、本発明の細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を含む細胞)は、腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメインを含むＴＡ  ＣＡＲ分子を含む。ある実施態様において、ＴＡ  ＣＡＲは、メソテリン抗原結合ドメイン(例えば、メソテリンに特異的に結合するマウス、ヒトまたはヒト化抗体または抗体フラグメント)、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン(例えば、共刺激ドメインおよび／または一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン)を含むＣＡＲ分子を含む。
【０３９２】
メソテリンを標的とするＴＡ  ＣＡＲ分子の例は、ここに記載され、表１１に挙げる。表１１におけるＣＡＲ分子は、メソテリン抗原結合ドメイン、例えば、表２に挙げる任意のメソテリン抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含む。リーダー配列は太字で下線を引き、ＣＤＲは下線を引き、抗原結合領域の重鎖と軽鎖間のリンカー配列は灰色の陰付である。
【０３９３】
【表７６】
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【表７７】
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【０３９４】
【表７８】
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【表７９】
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【０３９５】
ある実施態様において、本発明の細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を含む細胞)は、メソテリンに結合するＴＡ  ＣＡＲ分子を含み、表１１および２０１４年１２月１９日出願の国際公開ＷＯ２０１５／０９０２３０号(引用により本明細書に包含させる)の表２に挙げるアミノ酸配列を含む(例えば、それからなる)。ある実施態様において、ＴＡ  ＣＡＲ分子は、配列番号２８２、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２８５、配列番号２８６、配列番号２８７、配列番号２８８、配列番号２８９、配列番号２９０、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号２９６、配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、配列番号３００、配列番号３０１、配列番号３０２、配列番号３０３、配列番号３０４、配列番号３０５または配列番号３０６のアミノ酸配列；または配列番号２８２、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２８５、配列番号２８６、配列番号２８７、配列番号２８８、配列番号２８９、配列番号２９０、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号２９６、配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、配列番号３００、配列番号３０１、配列番号３０２、配列番号３０３、配列番号３０４、配列番号３０５または配列番号３０６のアミノ酸配列に少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０または３０修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が６０、５０または４０を超えないアミノ酸配列；または配列番号２８２、配列番号２８３、配列番号２８４、配列番号２８５、配列番号２８６、配列番号２８７、配列番号２８８、配列番号２８９、配列番号２９０、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号２９６、配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、配列番号３００、配列番号３０１、配列番号３０２、配列番号３０３、配列番号３０４、配列番号３０５または配列番号３０６のアミノ酸配列に８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む(例えば、それからなる)。
【０３９６】
ある態様において、本発明の細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を含む細胞)は、腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメインを含むＴＡ  ＣＡＲ分子を含む。ある実施態様において、ＴＡ  ＣＡＲは、ＥＧＦＲｖIII抗原結合ドメイン(例えば、メソテリンに特異的に結合するマウス、ヒトまたはヒト化抗体または抗体フラグメント)、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン(例えば、共刺激ドメインおよび／または一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン)を含むＣＡＲ分子を含む。
【０３９７】
ＥＧＦＲｖIIIを標的とするＴＡ  ＣＡＲ分子の例はここに記載され、表１７またはＷＯ／２０１４／１３０６５７号の表２またはＷＯ２０１６／０１４７８９号に記載のとおり提供される。
【０３９８】
【表８０】
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【表８１】
2019513347.tif 000083
【０３９９】
【表８２】
2019513347.tif 000084
【表８３】
2019513347.tif 000085
【０４００】
【表８４】
2019513347.tif 000086
【表８５】
2019513347.tif 000087
【０４０１】
【表８６】
2019513347.tif 000088
【表８７】
2019513347.tif 000089
【０４０２】
【表８８】
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【表８９】
2019513347.tif 000091
【０４０３】
ある実施態様において、本発明の細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を含む細胞)は、ＥＧＦＲｖIIIに結合するＴＡ  ＣＡＲ分子を含み、それは、表１７に挙げるアミノ酸配列を含む(例えば、それからなる)。ある実施態様において、ＥＧＦＲｖIIIに結合するＴＡ  ＣＡＲは、配列番号１０４３、配列番号１０４９、配列番号１０５５、配列番号１０６１、配列番号１０６７、配列番号１０７３、配列番号１０７９、配列番号１０８５、配列番号１０９０または配列番号１０９６のアミノ酸配列；または配列番号１０４３、配列番号１０４９、配列番号１０５５、配列番号１０６１、配列番号１０６７、配列番号１０７３、配列番号１０７９、配列番号１０８５、配列番号１０９０または配列番号１０９６のアミノ酸配列に少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０または３０修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)を有するが、修飾(例えば、置換、例えば、保存的置換)が６０、５０または４０を超えないアミノ酸配列；または配列番号１０４３、配列番号１０４９、配列番号１０５５、配列番号１０６１、配列番号１０６７、配列番号１０７３、配列番号１０７９、配列番号１０８５、配列番号１０９０または配列番号１０９６のアミノ酸配列に８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む(例えば、それからなる)。
【０４０４】
ある態様において、本発明の細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を含む細胞)は、腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメインを含むＴＡ  ＣＡＲ分子を含む。ある実施態様において、ＴＡ  ＣＡＲは、ＣＤ１２３抗原結合ドメイン(例えば、メソテリンに特異的に結合するマウス、ヒトまたはヒト化抗体または抗体フラグメント)、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン(例えば、共刺激ドメインおよび／または一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン)を含むＣＡＲ分子を含む。
【０４０５】
ＣＤ１２３を標的とするＴＡ  ＣＡＲ分子の例は、ここに記載され、ＷＯ２０１６／０２８８９６号の表２、６および９に提供される。ＣＤ１２３を標的とするＴＡ  ＣＡＲ分子の他の例は、ＷＯ／２０１４／１３０６３５号(例えば、ＷＯ／２０１４／１３０６３５号の表１)に提供される。ＣＤ１２３を標的とするＴＡ  ＣＡＲ分子の他の例は、ＷＯ／２０１４／１４４６２２号に記載されている。
【０４０６】
ある態様において、本発明の細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を含む細胞)は、腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメインを含むＴＡ  ＣＡＲ分子を含む。ある実施態様において、ＴＡ  ＣＡＲは、ＣＤ３３抗原結合ドメイン(例えば、メソテリンに特異的に結合するマウス、ヒトまたはヒト化抗体または抗体フラグメント)、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン(例えば、共刺激ドメインおよび／または一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン)を含むＣＡＲ分子を含む。ＣＤ３３を標的とするＴＡ  ＣＡＲ分子の例はここに記載され、ＷＯ２０１６／０１４５７６号、例えば、ＷＯ２０１６／０１４５７６号の表２に記載されている。
【０４０７】
ある態様において、本発明の細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を含む細胞)は、腫瘍抗原に結合する抗原結合ドメインを含むＴＡ  ＣＡＲ分子を含む。ある実施態様において、ＴＡ  ＣＡＲは、ＣＬＬ−１抗原結合ドメイン(例えば、メソテリンに特異的に結合するマウス、ヒトまたはヒト化抗体または抗体フラグメント)、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン(例えば、共刺激ドメインおよび／または一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン)を含むＣＡＲ分子を含む。ＣＬＬ−１を標的とするＴＡ  ＣＡＲ分子の例はここに記載され、ＷＯ／２０１６／０１４５３５号、例えば、ＷＯ２０１６／０１４５３５号の表２に記載されている。
【０４０８】
ナチュラルキラー細胞受容体(ＮＫＲ)ＣＡＲ
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ分子、例えば、腫瘍抗原を標的とするＣＡＲ分子(ＴＡ  ＣＡＲ)またはＢ細胞抗原を標的とするＣＡＲ分子(ＢＣＡ  ＣＡＲ)は、ナチュラルキラー細胞受容体(ＮＫＲ)の１以上の成分を含み、それによりＮＫＲ−ＣＡＲを形成する。ＮＫＲ成分は、膜貫通ドメイン、ヒンジドメインまたは次のキラー細胞免疫グロブリン様受容体(ＫＩＲ)、例えば、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／Ｌ３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＤＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＬ１／Ｓ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＰ１およびＫＩＲ３ＤＰ１；天然細胞毒性受容体(ＮＣＲ)、例えば、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６；免疫細胞受容体のシグナル伝達リンパ球活性化分子(ＳＬＡＭ)ファミリー、例えば、ＣＤ４８、ＣＤ２２９、２Ｂ４、ＣＤ８４、ＮＴＢ−Ａ、ＣＲＡＣＣ、ＢＬＡＭＥおよびＣＤ２Ｆ−１０；Ｆｃ受容体(ＦｃＲ)、例えば、ＣＤ１６およびＣＤ６４；およびＬｙ４９受容体、例えば、ＬＹ４９Ａ、ＬＹ４９Ｃのナチュラルキラー細胞受容体の何れかからの細胞質ドメインであり得る。ここに記載するＮＫＲ−ＣＡＲ分子は、アダプター分子または細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ＤＡＰ１２と相互作用し得る。ＮＫＲ成分を含むＣＡＲ分子の配置および配列の例は国際公開ＷＯ２０１４／１４５２５２号に記載され、その内容を引用により本明細書に包含させる。
【０４０９】
スプリットＣＡＲ
ある実施態様において、ここに記載する、ＣＡＲ発現細胞、例えば、ＢＣＡ  ＣＡＲおよびＴＡ  ＣＡＲを発現する細胞はスプリットＣＡＲを使用する。スプリットＣＡＲアプローチは、引用により包含させる公報ＷＯ２０１４／０５５４４２号およびＷＯ２０１４／０５５６５７号により詳細に記載される。簡潔には、スプリットＣＡＲ系は第一抗原結合ドメインおよび共刺激ドメイン(例えば、４−１ＢＢ)を有する第一ＣＡＲを発現する細胞を含み、細胞はまた第二抗原結合ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン(例えば、ＣＤ３ゼータ)を有する第二ＣＡＲも発現する。細胞が第一抗原に遭遇したとき、共刺激ドメインは活性化され、細胞は増殖する。細胞が第二抗原に遭遇したとき、細胞内シグナル伝達ドメインが活性化され、殺細胞活性が開始される。それ故に、ＣＡＲ発現細胞は、両抗原の存在下でのみ完全活性化される。ある実施態様において、第一抗原結合ドメインはここに記載する腫瘍抗原またはＢ細胞抗原を認識し、例えば、ここに記載する抗原結合ドメインを含み、第二抗原結合ドメインは第二抗原、例えば、ここに記載する第二腫瘍抗原または第二Ｂ細胞抗原を認識する。
【０４１０】
キメラ抗原受容体を制御するための戦略
ＣＡＲ活性を制御し得る多くの方法がある。ある実施態様において、ＣＡＲ活性が制御され得る制御可能ＣＡＲ(ＲＣＡＲ)が、ＣＡＲ療法の安全性および有効性の最適化のために望まれる。例えば、二量体化ドメインに融合したカスパーゼを使用する、例えば、アポトーシス誘発(例えば、Di et al., N Engl. J. Med. 2011 Nov. 3; 365(18):1673-1683参照)は、本発明のＣＡＲ療法における安全性スイッチとして使用できる。他の例として、ＣＡＲ発現細胞はまた、二量化剤(例えば、rimiducid(ＡＰ１９０３(Bellicum Pharmaceuticals)またはAP20187 (Ariad)とも称される)投与により、カスパーゼ−９の活性化と細胞のアポトーシスをもたらす、誘導可能カスパーゼ−９(ｉカスパーゼ−９)分子も発現させ得る。ｉカスパーゼ−９分子は、二量体化の化学インデューサー(ＣＩＤ)結合ドメインを含み、これは、ＣＩＤ存在下二量体化に介在する。これは、ＣＡＲ発現細胞の誘導可能および選択的枯渇をもたらす。いくつかの場合、ｉカスパーゼ−９分子は、ＣＡＲコードベクターと離れた核酸分子によりコードされる。いくつかの場合、ｉカスパーゼ−９分子は、ＣＡＲコードベクターと同じ核酸分子によりコードされる。ｉカスパーゼ−９は、ＣＡＲ発現細胞のあらゆる毒性を回避する安全性スイッチを提供し得る。例えば、Song et al. Cancer Gene Ther. 2008; 15(10):667-75; Clinical Trial Id. No. NCT02107963;およびDi Stasi et al. N. Engl. J. Med. 2011; 365:1673-83参照。
【０４１１】
本発明のＣＡＲ療法を制御する別の戦略は、例えば、抗体依存性細胞傷害(ＡＤＣＣ)による、例えば、ＣＡＲ発現細胞除去により、ＣＡＲ活性を脱活性化またはオフにする小分子または抗体の利用を含む。例えば、ここに記載するＣＡＲ発現細胞はまた細胞死、例えば、ＡＤＣＣまたは補体誘発細胞死を誘発できる分子により認識される抗原も発現し得る。例えば、ここに記載するＣＡＲ発現細胞はまた抗体または抗体フラグメントにより標的化される受容体も発現し得る。このような受容体の例は、ＥｐＣＡＭ、ＶＥＧＦＲ、インテグリン(例えば、インテグリンανβ３、α４、αΙ3/4β３、α４β７、α５β１、ανβ３、αν)、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバー(例えば、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２)、ＰＤＧＦ受容体、インターフェロン受容体、葉酸受容体、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＡＭ−１、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＥＡ、ＣＡ−１２５、ＭＵＣ１、ＴＡＧ−７２、ＩＬ−６受容体、５Ｔ４、ＧＤ２、ＧＤ３、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１１、ＣＤ１１ａ／ＬＦＡ−１、ＣＤ１５、ＣＤ１８／ＩＴＧＢ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３／ｌｇＥ受容体、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２５、ＣＤ１４７／ベイシジン、ＣＤ１５２／ＣＴＬＡ−４、ＣＤ１５４／ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１９５／ＣＣＲ５、ＣＤ３１９／ＳＬＡＭＦ７およびＥＧＦＲおよびその切断バージョン(例えば、１以上の細胞外エピトープを保持するが、細胞質ドメイン内の１以上の領域を欠くバージョン)を含む。
【０４１２】
例えば、ここに記載するＣＡＲ発現細胞はまたシグナル伝達能力を欠くが、ＡＤＣＣを誘発できる分子、例えば、セツキシマブ(アービタックス(登録商標))により認識されるエピトープを保持する切断上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦＲ)も発現でき、その結果、セツキシマブの投与がＡＤＣＣおよびその後のＣＡＲ発現細胞の枯渇を誘発する(例えば、ＷＯ２０１１／０５６８９４号およびJonnalagadda et al., Gene Ther. 2013; 20(8)853-860参照)。他の戦略は、ここに記載するＣＡＲ発現細胞におけるＣＤ３２抗原とＣＤ２０抗原の両方からの標的エピトープを合わせた高度コンパクトマーカー／自殺遺伝子の発現であり、これは、リツキシマブに結合し、例えば、ＡＤＣＣにより、選択的ＣＡＲ発現細胞の枯渇をもたらす(例えば、Philip et al., Blood. 2014; 124(8)1277-1287参照)。ここに記載するＣＡＲ発現細胞を枯渇する他の方法は、例えば、ＡＤＣＣの誘発による、破壊のために、成熟リンパ球、例えば、ＣＡＲ発現細胞に選択的に結合し、標的とするモノクローナル抗ＣＤ５２抗体であるキャンパスの投与を含む。他の実施態様において、ＣＡＲ発現細胞を、ＣＡＲリガンド、例えば、抗イディオタイプ抗体を使用して選択的に標的化できる。ある実施態様において、抗イディオタイプ抗体は、エフェクター細胞活性、例えば、ＡＤＣＣまたはＡＤＣ活性を引き起こし、それによりＣＡＲ発現細胞の数を減少できる。他の実施態様において、ＣＡＲリガンド、例えば、抗イディオタイプ抗体を殺細胞を誘発する薬剤、例えば、毒素と結合し、それによりＣＡＲ発現細胞の数を減らすことができる。あるいは、ＣＡＲ分子それ自体、下記のとおり、活性が制御され得る、例えば、オンおよびオフにされるように、設計され得る。
【０４１３】
他の実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞はまたＴ細胞枯渇剤により認識される標的タンパク質も発現し得る。ある実施態様において、標的タンパク質はＣＤ２０であり、Ｔ細胞枯渇剤は抗ＣＤ２０抗体、例えば、リツキシマブである。このような実施態様において、例えば、ＣＡＲ誘発毒性の緩和のために、ＣＡＲ発現細胞の減少または除去が望まれるならば、Ｔ細胞枯渇剤が投与される。他の実施態様において、Ｔ細胞枯渇剤は抗ＣＤ５２抗体、例えば、アレムツズマブである。
【０４１４】
他の実施態様において、ＲＣＡＲは、ここに記載する標準的ＣＡＲの成分、例えば、抗原結合ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインが別々のポリペプチドまたはメンバーに分配される、一組の、最も簡単な実施態様で一般に２個のポリペプチドを含む。ある実施態様において、一組のポリペプチドは、二量体化分子存在下、ポリペプチドを互いに結合できる、例えば、抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインに結合できる、二量体化スイッチを含む。このような制御可能ＣＡＲのさらなる記載および配置例は、ここにおよび引用によりその全体を本明細書に包含させる国際公開ＷＯ２０１５／０９０２２９号に提供される。
【０４１５】
ＣＡＲとケモカイン受容体の共発現
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を発現する細胞)は、さらにケモカイン受容体分子を含む。Ｔ細胞におけるケモカイン受容体ＣＣＲ２ｂまたはＣＸＣＲ２のトランスジェニック発現は、黒色腫および神経芽腫を含むＣＣＬ２またはＣＸＣＬ１分泌固形腫瘍への輸送を増強する(Craddock et al., J Immunother . 2010 Oct; 33(8):780-8およびKershaw et al., HumGene Ther. 2002 Nov 1; 13(16):1971-80)。それ故に、理論に拘束されることを意図しないが、腫瘍、例えば、固形腫瘍により分泌されるケモカインを認識する、ＣＡＲ発現細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を発現する細胞)により発現されるケモカイン受容体は、ＣＡＲ発現細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を発現する細胞)の腫瘍への帰巣を改善し、ＣＡＲ発現細胞の腫瘍への浸潤を促し、ＣＡＲ発現細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を発現する細胞)の抗腫瘍有効性を増強すると考えられる。ケモカイン受容体分子は、天然に存在するまたは組み換えケモカイン受容体またはそれらのケモカイン結合フラグメントを含み得る。ここに記載するＣＡＲ発現細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を発現する細胞)における発現に適するケモカイン受容体分子は、ＣＸＣケモカイン受容体(例えば、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６またはＣＸＣＲ７)、ＣＣケモカイン受容体(例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０またはＣＣＲ１１)、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体(例えば、ＣＸ３ＣＲ１)、ＸＣケモカイン受容体(例えば、ＸＣＲ１)またはそのケモカイン結合フラグメントを含む。ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲで発現されるケモカイン受容体分子は、腫瘍により分泌されるケモカインに基づき選択される。ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を発現する細胞)は、さらにＣＣＲ２ｂ受容体またはＣＸＣＲ２受容体を含む、例えば、発現する。ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を発現する細胞)およびケモカイン受容体分子は同じベクターにあるまたは２個の異なるベクターにある。ここに記載するＣＡＲおよびケモカイン受容体分子が同じベクターにある実施態様において、ＣＡＲ(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を発現する細胞)およびケモカイン受容体分子は、各々２個の異なるプロモーターの制御下にあるまたは同じプロモーターの制御下にある。
【０４１６】
ＣＡＲをコードする核酸構築物
本発明はまたここに記載する腫瘍抗原および／またはＢ細胞抗原をターゲティングするＣＡＲ構築物の１以上をコードする核酸分子も提供する。ある態様において、核酸分子はメッセンジャーＲＮＡ転写物として提供される。ある態様において、核酸分子はＤＮＡ構築物として提供される。
【０４１７】
従って、ある態様において、本発明は、キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)をコードする核酸分子に関し、ここで、ＣＡＲは、ここに記載する腫瘍抗原またはここに記載するＢ細胞抗原に結合する抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン(例えば、ここに記載する膜貫通ドメイン)および刺激ドメイン、例えば、共刺激シグナル伝達ドメイン(例えば、ここに記載する共刺激シグナル伝達ドメイン)および／または一次シグナル伝達ドメイン(例えば、ここに記載する一次シグナル伝達ドメイン、例えば、ここに記載するゼータ鎖)を含む細胞内シグナル伝達ドメイン(例えば、ここに記載する細胞内シグナル伝達ドメイン)を含む。ある実施態様において、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖またはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７およびＣＤ１５４からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインである。ある実施態様において、膜貫通ドメインは、例えば、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ−１(ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８)、ＩＣＯＳ(ＣＤ２７８)、４−１ＢＢ(ＣＤ１３７)、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ(ＬＩＧＨＴＲ)、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０(ＫＬＲＦ１)、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１(ＣＤ２２６)、ＳＬＡＭＦ４(ＣＤ２４４、２Ｂ４)、ＣＤ８４、ＣＤ９６(Ｔａｃｔｉｌｅ)、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９(ＣＤ２２９)、ＣＤ１６０(ＢＹ５５)、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００(ＳＥＭＡ４Ｄ)、ＳＬＡＭＦ６(ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８)、ＳＬＡＭ(ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３)、ＢＬＡＭＥ(ＳＬＡＭＦ８)、ＳＥＬＰＬＧ(ＣＤ１６２)、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２ＤおよびＮＫＧ２Ｃの、少なくとも膜貫通領域を含み得る。
【０４１８】
ある実施態様において、膜貫通ドメインは、配列番号１２の配列またはそれと９５〜９９％同一性の配列を含む。ある実施態様において、抗原結合ドメインは、膜貫通ドメインにヒンジ領域、例えば、ここに記載するヒンジにより結合される。ある実施態様において、ヒンジ領域は、配列番号４または配列番号６または配列番号８または配列番号１０またはそれと９５〜９９％同一性の配列を含む。ある実施態様において、単離核酸分子はさらに共刺激ドメインをコードする配列を含む。ある実施態様において、共刺激ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１(ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８)、ＩＣＯＳ(ＣＤ２７８)および４−１ＢＢ(ＣＤ１３７)からなる群から選択されるタンパク質の機能的シグナル伝達ドメインを含む。このような共刺激分子のさらなる例は、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ(ＬＩＧＨＴＲ)、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０(ＫＬＲＦ１)、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ−２Ｒベータ、ＩＬ−２Ｒガンマ、ＩＬ−７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ−６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ−１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１(ＣＤ２２６)、ＳＬＡＭＦ４(ＣＤ２４４、２Ｂ４)、ＣＤ８４、ＣＤ９６(Ｔａｃｔｉｌｅ)、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９(ＣＤ２２９)、ＣＤ１６０(ＢＹ５５)、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００(ＳＥＭＡ４Ｄ)、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６(ＮＴＢ−Ａ、Ｌｙ１０８)、ＳＬＡＭ(ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ−３)、ＢＬＡＭＥ(ＳＬＡＭＦ８)、ＳＥＬＰＬＧ(ＣＤ１６２)、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ−７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２ＤおよびＮＫＧ２Ｃを含む。ある実施態様において、共刺激ドメインは、配列番号１６の配列またはそれと９５〜９９％同一性の配列を含む。ある実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは４−１ＢＢの機能的シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ゼータの機能的シグナル伝達ドメインを含む。ある実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１４または配列番号１６、４２もしくは４４の配列またはそれと９５〜９９％同一性の配列および配列番号１８または配列番号２０の配列またはそれと９５〜９９％同一性の配列を含み、ここで、細胞内シグナル伝達ドメインを含む配列は、同一フレームでかつ単一ポリペプチド鎖として発現される。
【０４１９】
他の態様において、本発明は、配列番号２のリーダー配列、ここに記載するｓｃＦｖドメイン、配列番号４または配列番号６または配列番号８または配列番号１０(またはそれと９５〜９９％同一性の配列)のヒンジ領域、配列番号１２の配列(またはそれと９５〜９９％同一性の配列)を有する膜貫通ドメイン、配列番号１４の配列を有する４−１ＢＢ共刺激ドメイン、配列番号１６の配列(またはそれと９５〜９９％同一性の配列)を有するＣＤ２７共刺激ドメイン、配列番号４２の配列(またはそれと９５〜９９％同一性の配列)を有するＩＣＯＳ共刺激ドメインまたは配列番号４４の配列を有するＣＤ２８共刺激ドメインおよび配列番号１８の配列または配列番号２０(またはそれと９５〜９９％同一性の配列)を有するＣＤ３ゼータ刺激ドメインを含むＣＡＲ構築物をコードする、単離核酸分子を含む。
【０４２０】
所望の分子をコードする核酸配列は、標準技法を使用する、例えば、該遺伝子を発現する細胞からのライブラリーのスクリーニング、それを含むことが知られるベクターからの遺伝子の誘導化またはそれを含む細胞および組織から直接単離などの当分野で知られる組み換え方法を使用して得ることができる。あるいは、目的の遺伝子をクローン化ではなく、合成により産生できる。
【０４２１】
本発明はまた、本発明の核酸が挿入されたベクターに関する。レンチウイルスなどのレトロウイルスに由来するベクターは、導入遺伝子の長期の安定な組込みおよび娘細胞におけるその増殖を可能とするため、長期遺伝子導入を達成するのに適当なツールである。レンチウイルスベクターは、肝細胞などの非増殖細胞に伝達できるため、マウス白血病ウイルスなどのオンコレトロウイルス由来ベクターを超える付加的利点を有する。それらはまた低免疫原性のさらなる利点も有する。
【０４２２】
他の実施態様において、所望の本発明のＣＡＲをコードする核酸を含むベクターはアデノウイルスベクター(Ａ５／３５)である。他の実施態様において、ＣＡＲをコードする核酸の発現は、sleeping beauty、crisper、ＣＡＳ９および亜鉛フィンガーヌクレアーゼなどのトランスポゾンの使用により達成され得る。下記、引用により本明細書に包含させるJune et al. 2009 Nature Reviews Immunology 9.10: 704-716参照。
【０４２３】
概略として、ＣＡＲをコードする天然または合成核酸の発現は、一般にＣＡＲポリペプチドまたはその一部をコードする核酸をプロモーターと操作可能に結合させ、該構築物を発現ベクターに組み込むことにより達成される。ベクターは、真核生物での複製および組込みに適し得る。典型的クローニングベクターは、所望の核酸配列の発現制御に有用な転写および翻訳ターミネーター、開始配列およびプロモーターを含む。
【０４２４】
本発明の発現構築物はまた、標準的遺伝子送達プロトコールを使用して、核酸免疫化および遺伝子治療にも利用され得る。遺伝子送達の方法は当分野で知られる。例えば、引用によりその全体を本明細書に包含させる米国特許５,３９９,３４６号、５,５８０,８５９号、５,５８９,４６６号参照。他の実施態様において、本発明は、遺伝子治療ベクターを提供する。
【０４２５】
核酸は、多数のタイプのベクターにクローン化され得る。例えば、核酸は、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルスおよびコスミドを含むが、これらに限定されないベクターにクローン化され得る。特に興味深いベクターは、発現ベクター、複製ベクター、プローブ産生ベクターおよびシークエンシングベクターを含む。
【０４２６】
さらに、発現ベクターは、ウイルスベクターの形で細胞に提供され得る。ウイルスベクターテクノロジーは当分野で周知であり、例えば、Sambrook et al., 2012, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, volumes 1-4, Cold Spring Harbor Press, NYおよび他のウイルス学および分子生物学マニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスは、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスおよびレンチウイルスを含むが、これらに限定されない。一般に、適当なベクターは、少なくとも１生物で機能的な複製起点、プロモーター配列、簡便な制限エンドヌクレアーゼ部位および１以上の選択可能マーカーを含む(例えば、ＷＯ０１／９６５８４号；ＷＯ０１／２９０５８号；および米国特許６,３２６,１９３号)。
【０４２７】
多数のウイルスベースの系が、哺乳動物細胞への遺伝子導入のために開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系の簡便なプラットフォームを提供する。当分野で知られる技法を使用して、選択遺伝子をベクターに挿入し、レトロウイルス粒子に包含させ得る。次いで、組み換えウイルスを単離し、インビボまたはエクスビボで対象の細胞に送達できる。多数のレトロウイルス系は当分野で知られる。ある実施態様において、アデノウイルスベクターが使用される。多数のアデノウイルスベクターが当分野で知られる。ある実施態様において、レンチウイルスベクターが使用される。
【０４２８】
付加的プロモーターエレメント、例えば、エンハンサーは、転写開始の頻度を制御する。一般に、これらは、開始部位の３０〜１１０bp上流領域に位置するが、多数のプロモーターが同様に開始部位下流に機能的エレメントを含むことが示されている。プロモーターエレメント間のスペーシングはしばしばフレキシブルであり、従って、プロモーター機能が、エレメントが互いに倒置されたまたは移動したとき、保持される。チミジンキナーゼ(ｔｋ)プロモーターにおいて、プロモーターエレメント間のスペーシングは、活性が減少し始める前、５０bp離れるまで増加し得る。プロモーターによって、個々のエレメントが転写活性化に協調的にまたは独立的に機能し得ると考えられる。プロモーターの例は、ＣＭＶ  ＩＥ遺伝子、ＥＦ−１α、ユビキチンＣまたはホスホグリセロキナーゼ(ＰＧＫ)プロモーターを含む。
【０４２９】
哺乳動物Ｔ細胞でＣＡＲコード化核酸分子を発現できるプロモーターの例は、ＥＦ１ａプロモーターである。天然ＥＦ−１ａプロモーターは、アミノアシルｔＲＮＡのリボソームへの酵素的送達を担う伸長因子−１複合体のアルファサブユニットの発現を駆動する。ＥＦ１ａプロモーターは、哺乳動物発現プラスミドにおいて広く使用されており、レンチウイルスベクターにクローン化された核酸分子からのＣＡＲ発現駆動に有効であることが示されている。例えば、Milone et al., Mol. Ther. 17(8): 1453-1464 (2009)参照。ある態様において、ＥＦ−１ａプロモーターは、配列番号１として提供される配列を含む。
【０４３０】
プロモーターの他の例は、前初期サイトメガロウイルス(ＣＭＶ)プロモーター配列である。このプロモーター配列は、それに操作可能に結合したあらゆるポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動する、強力な構成的プロモーター配列である。しかしながら、他の構成的プロモーター配列も使用でき、サルウイルス４０(ＳＶ４０)初期プロモーター、マウス乳房腫瘍ウイルス(ＭＭＴＶ)、ヒト免疫不全ウイルス(ＨＩＶ)長い末端反復(ＬＴＲ)プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バーウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびにアクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、伸長因子−１αプロモーター、ヘモグロビンプロモーターおよびクレアチンキナーゼプロモーターを含むが、これらに限定されないヒト遺伝子プロモーターを含み得るが、これらに限定されない。さらに、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定されてはならない。誘導可能プロモーターもまた本発明の一部として企図される。誘導可能プロモーターの使用は、発現が所望であるとき、操作可能に結合したポリヌクレオチド配列の発現をオンにしまたは発現が望まれないとき、発現をオフにする分子スイッチを提供する。誘導可能プロモーターの例は、メタロチオネインプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーターおよびテトラサイクリンプロモーターを含むが、これらに限定されない。
【０４３１】
プロモーターの他の例は、ホスホグリセリン酸キナーゼ(ＰＧＫ)プロモーターである。ある実施態様において、切断ＰＧＫプロモーター(例えば、野生型ＰＧＫプロモーター配列と比較したとき、１以上、例えば、１、２、５、１０、１００、２００、３００または４００のヌクレオチド欠失を有するＰＧＫプロモーター)が所望であり得る。例示的ＰＧＫプロモーターのヌクレオチド配列を下に提供する。
【０４３２】
ＷＴ  ＰＧＫプロモーター
ACCCCTCTCTCCAGCCACTAAGCCAGTTGCTCCCTCGGCTGACGGCTGCACGCGAGGCCTCCGAACGTCTTACGCCTTGTGGCGCGCCCGTCCTTGTCCCGGGTGTGATGGCGGGGTGTGGGGCGGAGGGCGTGGCGGGGAAGGGCCGGCGACGAGAGCCGCGCGGGACGACTCGTCGGCGATAACCGGTGTCGGGTAGCGCCAGCCGCGCGACGGTAACGAGGGACCGCGACAGGCAGACGCTCCCATGATCACTCTGCACGCCGAAGGCAAATAGTGCAGGCCGTGCGGCGCTTGGCGTTCCTTGGAAGGGCTGAATCCCCGCCTCGTCCTTCGCAGCGGCCCCCCGGGTGTTCCCATCGCCGCTTCTAGGCCCACTGCGACGCTTGCCTGCACTTCTTACACGCTCTGGGTCCCAGCCGCGGCGACGCAAAGGGCCTTGGTGCGGGTCTCGTCGGCGCAGGGACGCGTTTGGGTCCCGACGGAACCTTTTCCGCGTTGGGGTTGGGGCACCATAAGCT(配列番号１０１)
【０４３３】
例示的切断ＰＧＫプロモーター：
ＰＧＫ１００：
ACCCCTCTCTCCAGCCACTAAGCCAGTTGCTCCCTCGGCTGACGGCTGCACGCGAGGCCTCCGAACGTCTTACGCCTTGTGGCGCGCCCGTCCTTGTCCCGGGTGTGATGGCGGGGTG(配列番号１０２)
ＰＧＫ２００：
ACCCCTCTCTCCAGCCACTAAGCCAGTTGCTCCCTCGGCTGACGGCTGCACGCGAGGCCTCCGAACGTCTTACGCCTTGTGGCGCGCCCGTCCTTGTCCCGGGTGTGATGGCGGGGTGTGGGGCGGAGGGCGTGGCGGGGAAGGGCCGGCGACGAGAGCCGCGCGGGACGACTCGTCGGCGATAACCGGTGTCGGGTAGCGCCAGCCGCGCGACGGTAACG(配列番号１０３)
ＰＧＫ３００：
ACCCCTCTCTCCAGCCACTAAGCCAGTTGCTCCCTCGGCTGACGGCTGCACGCGAGGCCTCCGAACGTCTTACGCCTTGTGGCGCGCCCGTCCTTGTCCCGGGTGTGATGGCGGGGTGTGGGGCGGAGGGCGTGGCGGGGAAGGGCCGGCGACGAGAGCCGCGCGGGACGACTCGTCGGCGATAACCGGTGTCGGGTAGCGCCAGCCGCGCGACGGTAACGAGGGACCGCGACAGGCAGACGCTCCCATGATCACTCTGCACGCCGAAGGCAAATAGTGCAGGCCGTGCGGCGCTTGGCGTTCCTTGGAAGGGCTGAATCCCCG(配列番号１０４)
ＰＧＫ４００：
ACCCCTCTCTCCAGCCACTAAGCCAGTTGCTCCCTCGGCTGACGGCTGCACGCGAGGCCTCCGAACGTCTTACGCCTTGTGGCGCGCCCGTCCTTGTCCCGGGTGTGATGGCGGGGTGTGGGGCGGAGGGCGTGGCGGGGAAGGGCCGGCGACGAGAGCCGCGCGGGACGACTCGTCGGCGATAACCGGTGTCGGGTAGCGCCAGCCGCGCGACGGTAACGAGGGACCGCGACAGGCAGACGCTCCCATGATCACTCTGCACGCCGAAGGCAAATAGTGCAGGCCGTGCGGCGCTTGGCGTTCCTTGGAAGGGCTGAATCCCCGCCTCGTCCTTCGCAGCGGCCCCCCGGGTGTTCCCATCGCCGCTTCTAGGCCCACTGCGACGCTTGCCTGCACTTCTTACACGCTCTGGGTCCCAGCCG(配列番号１０５)
【０４３４】
ベクターはまた、例えば、分泌を促すシグナル配列、ポリアデニル化シグナルおよび転写ターミネーター(例えば、ウシ成長ホルモン(ＢＧＨ)遺伝子から)、エピソーム複製および原核生物における複製を可能にするエレメント(例えばＳＶ４０起源およびＣｏｌＥ１または糖分野で知られるその他)および／または選択を可能とするエレメント(例えば、アンピシリン耐性遺伝子および／またはゼオシンマーカー)も含み得る。
【０４３５】
ＣＡＲポリペプチドまたはその一部の発現を評価するために、細胞に導入すべき発現ベクターはまたウイルスベクターによるトランスフェクトまたは感染を探索すべき細胞の集団からの発現細胞の同定および選択を促進するために、選択可能マーカー遺伝子またはレポーター遺伝子または両方も含み得る。他の態様において、選択可能マーカーは、ＤＮＡ別々の切片で運搬され、共トランスフェクション法において使用し得る。選択可能マーカーおよびレポーター遺伝子の両方は、宿主細胞での発現を可能とするために、適切な制御配列が隣接し得る。有用な選択可能マーカーは、例えば、ｎｅｏなどの抗生物質耐性遺伝子を含む。
【０４３６】
レポーター遺伝子は、トランスフェクトされた可能性のある細胞の同定および制御配列の機能性の評価に使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物または組織において存在または発現されず、その発現がある容易に検出可能な性質、例えば、酵素活性により顕在化するポリペプチドをコードする、遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、レシピエント細胞にＤＮＡ導入後、適当な時間にアッセイされる。適当なレポーター遺伝子は、ルシフェラーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼまたは緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子を含み得る(例えば、Ui-Tei et al., 2000 FEBS Letters 479: 79-82)。適当な発現系は周知であり、既知技法を使用して製造できるかまたは商業的に得られ得る。一般に、レポーター遺伝子の最高レベルの発現を示す最小５’フランキング領域を有する構築物が、プロモーターとして同定される。このようなプロモーター領域は、レポーター遺伝子に結合させ、薬剤がプロモーター駆動転写を調節する能力を評価するために使用され得る。
【０４３７】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ分子、例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよび／またはＢＣＡ  ＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクターは、さらにポリペプチド、例えば、ＣＡＲ分子の活性を増加させる薬剤をコードする第二核酸配列を含み得る。ある実施態様において、単一核酸分子または該核酸分子を含むベクターは、ここに記載するＴＡ  ＣＡＲおよびここに記載するＢＣＡ  ＣＡＲの両方をコードする。ある実施態様において、ＴＡ  ＣＡＲをコードする核酸は、ＢＣＡ  ＣＡＲをコードする核酸(例えば、ここに記載のプロモーターによる)と別の制御性制御(例えば、ここに記載のプロモーターによる)下にある。他の実施態様において、２以上の核酸配列は、同じフレームの単一核酸分子によりおよび単一ポリペプチド鎖としてコードされる。この態様において、２以上のＣＡＲ(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲ)は、例えば、１以上のペプチド開裂部位により分離され得る(例えば、細胞内プロテアーゼに対する自己開裂部位または基質)。ペプチド開裂部位の例は次のものを含み、ここで、ＧＳＧ残基は任意である。
Ｔ２Ａ：(GSG) E G R G S L L T C G D V E E N P G P(配列番号１０６)
Ｐ２Ａ：(GSG) A T N F S L L K Q A G D V E E N P G P(配列番号１０７)
Ｅ２Ａ：(GSG) Q C T N Y A L L K L A G D V E S N P G P(配列番号１０８)
Ｆ２Ａ：(GSG) V K Q T L N F D L L K L A G D V E S N P G P(配列番号１０９)
【０４３８】
細胞に遺伝子を導入し、発現する方法が当分野で知られる。発現ベクターの状況において、ベクターは、当分野における任意の方法により、宿主細胞、例えば、哺乳動物、細菌、酵母または昆虫細胞に容易に導入され得る。例えば、発現ベクターは、物理的、化学的または生物学的手段により宿主細胞に伝達され得る。
【０４３９】
宿主細胞にポリヌクレオチドを導入する物理的方法は、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、微粒子銃、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどを含む。ベクターおよび／または外因性核酸を含む細胞を産生する方法は、当分野で周知である。例えば、Sambrook et al., 2012, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, volumes 1-4, Cold Spring Harbor Press, NY参照。宿主細胞へのポリヌクレオチドの導入のための好ましい方法は、リン酸カルシウムトランスフェクションまたはエレクトロポレーションである。
【０４４０】
目的のポリヌクレオチドを宿主細胞に導入する生物学的方法は、ＤＮＡおよびＲＮＡベクターの使用を含む。ウイルスベクターおよび特にレトロウイルスベクターは、哺乳動物、例えば、ヒト細胞への遺伝子導入に最も広く使用される方法となっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルスなどに由来し得る。例えば、米国特許５,３５０,６７４号および５,５８５,３６２号参照。
【０４４１】
宿主細胞にポリヌクレオチドを導入する化学手段は、高分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフェア、ビーズなどのコロイド分散系および水中油型エマルジョン、ミセル、混合型ミセルおよびリポソームを含む脂質ベースの系を含む。インビトロおよびインビボで送達媒体として使用するコロイド系の例は、リポソーム(例えば、人工膜小胞)である。標的化ナノ粒子または他の適当なサブミクロンサイズ送達系でのポリヌクレオチドの送達など、核酸の最先端の標的化送達の他の方法が利用可能である。
【０４４２】
非ウイルス送達系が利用されるとき、送達媒体の例はリポソームである。脂質製剤の使用が、宿主細胞への核酸の導入に企図される(インビトロ、エクスビボまたはインビボ)。他の態様において、核酸は脂質と結合し得る。脂質と結合した核酸を、リポソームの水性内部に封入させ、リポソームの脂質二層内に散在させ、リポソームおよびオリゴヌクレオチドの両方と結合する結合分子によりリポソームに結合させ、リポソームに捕捉させ、リポソームと複合体化させ、脂質含有溶液に分散させ、脂質と混合し、脂質と組み合わせ、脂質に懸濁液として包含させ、ミセルに包含させまたは複合体化させまたは他に脂質と結合させ得る。脂質、脂質／ＤＮＡまたは脂質／発現ベクター関連組成物は、溶液の何らかの特定の構造に限定されない。例えば、それは二層構造、ミセルまたは“崩壊”構造で存在し得る。それらはまた単に溶液に散在し、おそらく、サイズまたは形が均一ではない凝集体を形成し得る。脂質は、天然に存在するまたは合成脂質であり得る脂肪物質である。例えば、脂質は、細胞質に天然に生じる脂肪滴ならびに長鎖脂肪族炭化水素およびその誘導体、例えば脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコールおよびアルデヒドを含む化合物群を含む。
【０４４３】
使用に適する脂質は、商業的供給源から得ることができる。例えば、ジミリスチルホスファチジルコリン(“ＤＭＰＣ”)はSigma, St. Louis, MOから得ることができ、リン酸ジセチル(“ＤＣＰ”)はK & K Laboratories(Plainview, NY)から得ることができ、コレステロール(“Ｃｈｏｉ”)はCalbiochem-Behringから得ることができ、ジミリスチルホスファチジルグリセロール(“ＤＭＰＧ”)および他の脂質はAv抗Polar Lipids, Inc.(Birmingham, AL.)から得ることができる。クロロホルムまたはクロロホルム／メタノール中の脂質の貯蔵溶液は、約−２０℃で保存され得る。クロロホルムを、メタノールより容易に蒸発するため、唯一の溶媒として使用する。“リポソーム”は、封入脂質二層または凝集体の産生により形成された多様な単層および多層状脂質媒体を包含する一般用語である。リポソームは、リン脂質二層膜および内側水性媒体を伴う小胞構造を有することにより特徴付けられ得る。多層状リポソームは、水性媒体で分離された複数の脂質層を有する。それらは、リン脂質が過剰の水溶液に懸濁されたとき、自発的に形成される。脂質成分は、閉構造形成前に自己再編成され、水を捕捉し、脂質二層間に溶質を溶解する(Ghosh et al., 1991 Glycobiology 5: 505-10)。しかしながら、溶液で正常小胞構造と異なる構造を有する組成物も包含される。例えば、脂質は、ミセル構造または単に脂質分子の不均一凝集体の形で存在すると考えられる。また企図されるのは、リポフェクタミン−核酸複合体である。
【０４４４】
外因性核酸を宿主細胞に導入するかまたは他に細胞を本発明の阻害剤に曝すのに使用した方法と無関係に、宿主細胞における組み換えＤＮＡ配列の存在を確認するために、多様なアッセイが実施され得る。このようなアッセイは、例えば、当業者に周知の“分子生物学的”アッセイ、例えばサザンおよびノーザンブロッティング、ＲＴ−ＰＣＲおよびＰＣＲ；“生化学”アッセイ、例えば、特定のペプチドの、例えば、免疫学的手段(ＥＬＩＳＡおよびウェスタンブロット)または本発明の範囲内に入る薬剤を同定するためのここに記載するアッセイによる存在または非存在の検出を含み得る。
【０４４５】
本発明は、さらにＣＡＲコード化核酸分子を含むベクターを提供する。ある実施態様において、ベクターは、例えば、ここに記載する、ＴＡ  ＣＡＲコード化核酸分子を含む。ある実施態様において、ベクターは、例えば、ここに記載する、ＢＣＡ  ＣＡＲコード化核酸分子を含む。ある実施態様において、ベクターは、ＢＣＡ  ＣＡＲコード化核酸分子およびＴＡ  ＣＡＲコード化核酸分子を含む。ある態様において、１以上のＣＡＲベクター(例えば、ＴＡ  ＣＡＲコード化核酸分子を含むベクターおよびＢＣＡ  ＣＡＲコード化核酸分子を含むベクターまたはＴＡ  ＣＡＲコード化核酸分子とＢＣＡ  ＣＡＲコード化核酸分子を含むベクター)を、細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に直接形質導入し得る。ある態様において、ベクターは、クローニングまたは発現ベクター、例えば、１以上のプラスミド(例えば、発現プラスミド、クローニングベクター、ミニサークル、ミニベクター、二重微小染色体)、レトロウイルスおよびレンチウイルスベクター構築物を含むが、これらに限定されないベクターである。ある態様において、ベクターは、哺乳動物免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)でＣＡＲ構築物の発現ができる。
【０４４６】
ある実施態様において、ＴＡ  ＣＡＲおよび／またはＢＣＡ  ＣＡＲの安定な発現が望まれるとき、ＴＡ  ＣＡＲおよび／またはＢＣＡ  ＣＡＲコード核酸分子を含むベクターを免疫エフェクター細胞に形質導入する。例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲを安定に発現する免疫エフェクター細胞を、レンチウイルスベクターを使用して産生し得る。ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの安定な発現を示す細胞は、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲを、形質導入後少なくとも１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、３ヶ月間、６ヶ月間、９ヶ月間または１２ヶ月間で発現する。
【０４４７】
ある実施態様において、ＴＡ  ＣＡＲおよび／またはＢＣＡ  ＣＡＲの一過性発現が望までるとき、ＴＡ  ＣＡＲおよび／またはＢＣＡ  ＣＡＲコード核酸分子を、免疫エフェクター細胞にトランスフェクトする。ＴＡ  ＣＡＲおよび／またはＢＣＡ  ＣＡＲコード核酸分子は、ＴＡ  ＣＡＲ−および／またはＢＣＡ−ＣＡＲコード化核酸分子を含むベクターまたはＴＡ  ＣＡＲおよび／またはＢＣＡ  ＣＡＲをコードするインビトロ転写ＲＮＡであり得る。インビトロ転写ＲＮＡ  ＣＡＲおよび免疫エフェクター細胞にトランスフェクションをする方法は、下にさらに詳述する。ＴＡ  ＣＡＲおよび／またはＢＣＡ  ＣＡＲを一過性発現する細胞は、ＴＡ  ＣＡＲおよび／またはＢＣＡ  ＣＡＲを、トランスフェクション後４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間で発現する。
【０４４８】
ＲＮＡトランスフェクション
ここに開示されるのは、インビトロ転写ＲＮＡ  ＣＡＲ、例えば、インビトロ転写ＲＮＡ  ＴＡ  ＣＡＲおよび／またはインビトロ転写ＲＮＡ  ＢＣＡ  ＣＡＲを産生する方法である。本発明はまた、細胞に直接トランスフェクトし得る、ＣＡＲコード化ＲＮＡ構築物も含む。トランスフェクションに使用するためのｍＲＮＡを産生する方法は、３’および５’非翻訳配列(“ＵＴＲ”)、５’キャップおよび／または配列内リボソーム進入部位(ＩＲＥＳ)、発現する核酸および、一般に５０〜２０００塩基長(配列番号３２)の、ポリＡテイルを含む構築物を産生するための、特別に設計されたプライマーを用いる鋳型のインビトロ転写(ＩＶＴ)、続くポリＡ付加を含む。このように産生されたＲＮＡは、様々な種の細胞を効率的にトランスフェクトし得る。ある態様において、鋳型はＣＡＲのための配列を含む。
【０４４９】
ある態様において、本発明のＣＡＲ、例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよび／またはＢＣＡ  ＣＡＲは、メッセンジャーＲＮＡ(ｍＲＮＡ)によりコードされる。ある態様において、ここに記載するＴＡ  ＣＡＲおよび／またはここに記載するＢＣ  ＣＡＲをコードするｍＲＮＡを、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を発現する細胞を産生するために、Ｔ細胞またはＮＫ細胞に導入する。
【０４５０】
ある実施態様において、インビトロ転写ＲＮＡ  ＣＡＲを、一過性トランスフェクションの形で細胞に導入し得る。ＲＮＡは、ポリメラーゼ鎖反応(ＰＣＲ)産生鋳型を使用するインビトロ転写により産生される。任意の供給源からの目的のＤＮＡを、ＰＣＲにより、適切なプライマーおよびＲＮＡポリメラーゼを使用するインビトロｍＲＮＡ合成のための鋳型に直接変換できる。ＤＮＡの供給源は、例えば、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ファージＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ配列またはＤＮＡの任意の他の適切な供給源であり得る。インビトロ転写のための所望の鋳型は、ここに記載するＣＡＲである。例えば、ＲＮＡ  ＣＡＲのための鋳型は、ここに記載する腫瘍抗原またはＢ細胞抗原に対する抗体の一本鎖可変ドメインを含む細胞外領域；ヒンジ領域(例えば、ここに記載するヒンジ領域)、膜貫通ドメイン(例えば、ＣＤ８ａの膜貫通ドメインなどのここに記載する膜貫通ドメイン)；および細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメインおよび４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含む、例えば、ここに記載する細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質領域を含む。
【０４５１】
ある実施態様において、ＰＣＲのために使用すべきＤＮＡは、オープンリーディングフレームを含む。ＤＮＡは、生物のゲノムからの天然に存在するＤＮＡ配列からであり得る。ある実施態様において、核酸は、５’および／または３’非翻訳領域(ＵＴＲ)の一部または全てを含み得る。核酸はエキソンおよびイントロンを含み得る。ある実施態様において、ＰＣＲのために使用すべきＤＮＡは、ヒト核酸配列である。他の実施態様において、ＰＣＲのために使用すべきＤＮＡは、５’および３’ＵＴＲを含むヒト核酸配列である。ＤＮＡは、あるいは天然に存在する生物に通常発現されない人工ＤＮＡ配列であってよい。人工ＤＮＡ配列の例は、融合タンパク質をコードするオープンリーディングフレームを形成するために一緒にライゲートされる、遺伝子の複数部分を含むものである。一緒にライゲートされるＤＮＡの複数部分は単一生物由来でも１を超える生物由来でもよい。
【０４５２】
ＰＣＲを、トランスフェクションに使用するｍＲＮＡのインビトロ転写用鋳型の産生に使用する。ＰＣＲを実施する方法は、当分野で周知である。ＰＣＲで使用するためのプライマーは、ＰＣＲの鋳型として使用するＤＮＡの領域に実質的に相補的である領域を有するように設計される。ここで使用する“実質的に相補的”は、プライマー配列における塩基の大部分または全てが相補的であるまたは１以上の塩基が非相補的またはミスマッチである、ヌクレオチドの配列をいう。実質的に相補的配列は、ＰＣＲで使用するアニーリング条件下、意図するＤＮＡ標的とアニールまたはハイブリダイズできる。プライマーは、ＤＮＡ鋳型の任意の部分と実質的に相補的であるように設計され得る。例えば、プライマーは、細胞で通常転写される(オープンリーディングフレーム)、５’および３’ＵＴＲを含む、核酸の部分を増幅するように設計され得る。プライマーはまた特定の目的のドメインをコードする核酸の部分を増幅するようにも設計され得る。ある実施態様において、プライマーは、５’および３’ＵＴＲの全てまたは一部を含む、ヒトｃＤＮＡのコード領域を増幅するように設計される。ＰＣＲに有用なプライマーは、当分野で周知である合成方法により産生され得る。“順方向プライマー”は、増幅すべきＤＮＡ配列の上流である、ＤＮＡ鋳型上のヌクレオチドに実質的に相補的なヌクレオチドの領域を含むプライマーをいう。“上流”は、コード鎖に対して、増幅すべきＤＮＡ配列の５'側位置をいうためにここで使用する。“逆方向プライマー”は、増幅すべきＤＮＡ配列の下流にある二本鎖ＤＮＡ鋳型と実質的に相補的であるヌクレオチドの領域を含むプライマーをいう。“下流”はコード鎖に対して、増幅すべきＤＮＡ配列の３’側位置をいうためにここで使用する。
【０４５３】
ＰＣＲに有用なあらゆるＤＮＡポリメラーゼが、ここに開示する方法で使用され得る。試薬およびポリメラーゼは、多数の業者により販売されている。
【０４５４】
安定性および／または翻訳効率を促進する能力を有する化学構造も使用し得る。ＲＮＡは、好ましくは５’および３’ＵＴＲを有する。ある実施態様において、５’ＵＴＲは、１〜３０００ヌクレオチド長である。コード領域に付加すべき５’および３’ＵＴＲ配列の長さは、ＵＴＲの種々の領域にアニールするＰＣＲのプライマーの設計を含むが、これに限定されない種々の方法により改変され得る。このアプローチを使用して、当業者は、転写ＲＮＡのトランスフェクション後の最適翻訳効率を達成するのに必要な５’および３’ＵＴＲ長を修飾できる。
【０４５５】
５’および３’ＵＴＲは、目的の核酸のための天然に存在する、内因性５’および３’ＵＴＲであり得る。あるいは、目的の核酸に内因性ではないＵＴＲ配列を、順方向および逆方向プライマーにＵＴＲ配列を包含させることによりまたは鋳型の任意の他の修飾により付加できる。目的の核酸に内因性ではないＵＴＲ配列の使用は、ＲＮＡの安定性および／または翻訳効率の修飾に有用であり得る。例えば、３’ＵＴＲ配列におけるＡＵ富エレメントは、ｍＲＮＡの安定性を減少できることが知られている。それ故に、３’ＵＴＲは、当分野で周知であるＵＴＲの性質に基づき、転写ＲＮＡの安定性を増加するように選択または設計できる。
【０４５６】
ある実施態様において、５’ＵＴＲは、内因性核酸のＫｏｚａｋ配列を含み得る。あるいは、目的の核酸に内因性ではない５’ＵＴＲを上記のとおりＰＣＲにより付加したとき、コンセンサスＫｏｚａｋ配列は、５’ＵＴＲ配列付加により再設計され得る。Ｋｏｚａｋ配列は、一部ＲＮＡ転写物の翻訳効率を増加できるが、効率的翻訳を可能とするために全ＲＮＡで必要であるようには見えない。多くのｍＲＮＡについてのＫｏｚａｋ配列の必要性は、当分野で知られる。他の実施態様において、５’ＵＴＲは、ＲＮＡゲノムが細胞で安定であるＲＮＡウイルスの５’ＵＴＲである。他の実施態様において、種々のヌクレオチドアナログを、ｍＲＮＡのエキソヌクレアーゼ分解を阻止するために、３’または５’ＵＴＲに使用できる。
【０４５７】
遺伝子クローニングの必要性なしにＤＮＡ鋳型からＲＮＡを合成することを可能とするために、転写プロモーターは、転写する配列の上流でＤＮＡ鋳型に結合すべきである。ＲＮＡポリメラーゼのプロモーターとして機能する配列が順方向プライマーの５’末端に付加されたとき、ＲＮＡポリメラーゼプロモーターは転写されるオープンリーディングフレームの上流でＰＣＲ産物に取り込まれることになる。ある好ましい実施態様において、プロモーターは、本明細書の他の箇所に記載する、Ｔ７ポリメラーゼプロモーターである。他の有用なプロモーターは、Ｔ３およびＳＰ６  ＲＮＡポリメラーゼプロモーターを含むが、これらに限定されない。Ｔ７、Ｔ３およびＳＰ６プロモーターのコンセンサスヌクレオチド配列は当分野で知られる。
【０４５８】
好ましい実施態様において、ｍＲＮＡは、５’末端および３’ポリ(Ａ)テイルの両方にキャップを有し、これは、リボソーム結合、翻訳開始および細胞におけるｍＲＮＡ安定性を決定する。環状ＤＮＡ鋳型、例えば、プラスミドＤＮＡで、ＲＮＡポリメラーゼは、真核生物細胞の発現に適しない長い鎖状体産物を産生する。３’ＵＴＲの末端で直線化されたプラスミドＤＮＡの転写は、転写後ポリアデニル化されてさえ、真核生物トランスフェクションに有効ではない正常サイズｍＲＮＡをもたらす。
【０４５９】
直線状ＤＮＡ鋳型で、ファージＴ７  ＲＮＡポリメラーゼは、鋳型の最後の塩基を超えて転写物の３’末端を伸長できる(Schenborn and Mierendorf, Nuc Acids Res., 13:6223-36 (1985); Nacheva and Berzal-Herranz, Eur. J. Biochem., 270:1485-65 (2003))。
【０４６０】
ポリＡ／ＴストレッチのＤＮＡ鋳型への組込みの慣用の方法は分子クローニングである。しかしながら、プラスミドＤＮＡに統合されたポリＡ／Ｔ配列は、プラスミドの不安定性をもたらし、これが、細菌細胞から得たプラスミドＤＮＡ鋳型がしばしば欠失および他の異常で高度に汚染されている理由である。これにより、クローニング法が、労力を要し、時間がかかるだけでなく、しばしば信頼できないものとなる。これが、クローニングなしでポリＡ／Ｔ  ３’ストレッチを有するＤＮＡ鋳型の構築を可能とする方法が高度に望まれる理由である。
【０４６１】
転写ＤＮＡ鋳型のポリＡ／Ｔセグメントは、１００Ｔテイル(配列番号３５)(サイズは５０〜５０００Ｔ(配列番号２６５)であり得る)などのポリＴテイルを含む逆方向プライマーを使用することによりＰＣＲ中または、ＤＮＡライゲーションまたはインビトロ組み換えを含むが、これらに限定されない任意の他の方法により、ＰＣＲ後に産生され得る。ポリ(Ａ)テイルもまたＲＮＡに安定性を提供し、その分解を低減する。一般に、ポリ(Ａ)テイルの長さは、転写ＲＮＡの安定性と正に相関する。ある実施態様において、ポリ(Ａ)テイルは１００〜５０００アデノシン(配列番号８２)である。
【０４６２】
ＲＮＡのポリ(Ａ)テイルは、大腸菌ポリＡポリメラーゼ(Ｅ−ＰＡＰ)などのポリ(Ａ)ポリメラーゼを使用して、インビトロ転写後さらに伸長され得る。ある実施態様において、ポリ(Ａ)テイルの長さを１００ヌクレオチドから３００〜４００ヌクレオチド(配列番号３８)に伸ばすと、ＲＮＡの翻訳効率が約２倍増加する。さらに、３’末端への種々の化学基の結合が、ｍＲＮＡ安定性を増加できる。このような結合は、修飾／人工ヌクレオチド、アプタマーおよび他の化合物を含む。例えば、ＡＴＰアナログは、ポリ(Ａ)ポリメラーゼを使用してポリ(Ａ)テイルに取り込まれ得る。ＡＴＰアナログは、ＲＮＡの安定性をさらに増加させ得る。
【０４６３】
５’キャップはまたＲＮＡ分子に安定性を提供する。好ましい実施態様において、ここに開示する方法により産生されたＲＮＡは、５’キャップを含む。５’キャップは、当分野で知られ、ここに記載する技法を使用して提供される(Cougot, et al., Trends in Biochem. Sci., 29:436-444 (2001); Stepinski, et al., RNA, 7:1468-95 (2001); Elango, et al., Biochim. Biophys. Res. Commun., 330:958-966 (2005))。
【０４６４】
ここに開示する方法により産生されたＲＮＡはまた配列内リボソーム進入部位(ＩＲＥＳ)配列も含み得る。ＩＲＥＳ配列は、ｍＲＮＡへのキャップ非依存的リボソーム結合を開始し、翻訳の開始を促進するあらゆるウイルス、染色体または人工的に設計された配列であり得る。糖、ペプチド、脂質、タンパク質、抗酸化剤および界面活性剤などの細胞透過性および生存能を促進する因子を含み得る、細胞エレクトロポレーションに適する任意の溶質が包含され得る。
【０４６５】
ＲＮＡは、多数の異なる方法の何れか、例えば、エレクトロポレーション(Amaxa Nucleofector-II (Amaxa Biosystems, Cologne, Germany)), ECM 830 (BTX) (Harvard Instruments, Boston, Mass.)またはGene Pulser II (BioRad, Denver, Colo.)、Multiporator (Eppendort, Hamburg Germany)、リポフェクションを使用するカチオン性リポソーム介在トランスフェクション、ポリマーカプセル封入、ペプチド介在トランスフェクションまたは“遺伝子銃”などの微粒子銃送達系を含むが、これらに限定されない商業的に利用可能な方法を使用して、標的細胞に導入され得る(例えば、Nishikawa, et al. Hum Gene Ther., 12(8):861-70 (2001)参照)。
【０４６６】
非ウイルス送達方法
ある態様において、非ウイルス方法を使用して、ここに記載するＣＡＲ、例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよび／またはＢＣＡ  ＣＡＲをコードする核酸を細胞または組織または対象に送達できる。ある実施態様において、非ウイルス方法はトランスポゾン(転位エレメントとも称される)の使用を含む。ある実施態様において、トランスポゾンは、それ自体ゲノムのある位置に挿入され得るＤＮＡ切片、例えば、自己複製でき、そのコピーをゲノムに挿入できるＤＮＡ切片または長い核酸からスプライシングされて除かれ、ゲノムの他の場所に挿入され得るＤＮＡ切片である。例えば、トランスポゾンは、転位のための逆反復フランキング遺伝子からなるＤＮＡ配列を含む。トランスポゾンを使用する核酸送達の方法の例は、Sleeping beautyトランスポゾン系(ＳＢＴＳ)およびpiggyBac(ＰＢ)トランスポゾン系を含む。例えば、全て引用により本明細書に包含させるAronovich et al. Hum. Mol. Genet. 20.R1(2011):R14-20; Singh et al. Cancer Res. 15(2008):2961-2971; Huang et al. Mol. Ther. 16(2008):580-589; Grabundzija et al. Mol. Ther. 18(2010):1200-1209; Kebriaei et al. Blood. 122.21(2013):166; Williams. Molecular Therapy 16.9(2008):1515-16; Bell et al. Nat. Protoc. 2.12(2007):3153-65; and Ding et al. Cell. 122.3(2005):473-83参照。
【０４６７】
ＳＢＴＳは、１)導入遺伝子を含むトランスポゾンおよび２)トランスポサーゼ酵素の供給源の２成分含む。トランスポサーゼは、トランスポゾンを担体プラスミド(または他のドナーＤＮＡ)から宿主細胞染色体／ゲノムなどの標的ＤＮＡに転位できる。例えば、トランスポサーゼは担体プラスミド／ドナーＤＮＡに結合し、トランスポゾン(導入遺伝子を含む)をプラスミドから切り出し、それを宿主細胞のゲノムに挿入する。例えば、Aronovich et al. supra.参照。
【０４６８】
トランスポゾンの例は、ｐＴ２ベースのトランスポゾンを含む。例えば、全て引用により本明細書に包含させる、Grabundzija et al. Nucleic Acids Res. 41.3(2013):1829-47; and Singh et al. Cancer Res. 68.8(2008): 2961-2971参照。トランスポサーゼの例は、Ｔｃ１／marinerタイプトランスポサーゼ、例えば、ＳＢ１０トランスポサーゼまたはＳＢ１１トランスポサーゼ(例えば、サイトメガロウイルスプロモーターから発現され得る機能亢進性トランスポサーゼ)を含む。例えば、引用により本明細書に包含させるAronovich et al.; Kebriaei et al.；およびGrabundzija et al.参照。
【０４６９】
ＳＢＴＳの使用は、導入遺伝子、例えば、ここに記載するＣＡＲをコードする核酸の効率的組込みおよび発現を可能とする。ここに提供されるのは、例えば、ＳＢＴＳなどのトランスポゾン系を使用する、ここに記載するＣＡＲを安定に発現する細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞を産生する方法である。
【０４７０】
ここに記載する方法によって、ある実施態様において、ＳＢＴＳ成分を含む１以上の核酸、例えば、プラスミドが細胞(例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞)に送達される。例えば、核酸は、核酸(例えば、プラスミドＤＮＡ)送達の標準方法、例えば、ここに記載する方法、例えば、エレクトロポレーション、トランスフェクションまたはリポフェクションにより送達される。ある実施態様において、核酸は、導入遺伝子、例えば、ここに記載するＣＡＲをコードする核酸を含むトランスポゾンを含む。ある実施態様において、核酸は、導入遺伝子(例えば、ここに記載するＣＡＲをコードする核酸)を含むトランスポゾンならびにトランスポサーゼ酵素をコードする核酸配列を含む。他の実施態様において、例えば、第一プラスミドが導入遺伝子を含むトランスポゾンを含み、第二プラスミドがトランスポサーゼ酵素をコードする核酸配列である、２核酸を有する系、例えば、デュアルプラスミド系が提供される。例えば、第一および第二核酸は、宿主細胞に共送達される。
【０４７１】
ある実施態様において、ＳＢＴＳを使用する遺伝子挿入とヌクレアーゼ(例えば、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ(ＺＦＮ)、転写アクティベーター様エフェクターヌクレアーゼ(ＴＡＬＥＮ)、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系または操作されたメガヌクレアーゼ再設計ホーミングエンドヌクレアーゼ)を使用する遺伝子編集の組み合わせを使用して、ここに記載するＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣ  ＣＡＲを発現する細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞が産生される。
【０４７２】
ある実施態様において、非ウイルス送達方法の使用は、細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞の再プログラムおよび対象への細胞の直接注入を可能とする。非ウイルスベクターの利点は、患者集団を満たすのに必要な十分量の容易で比較的安価な産生、保存中の安定性および免疫原性欠失を含むが、これらに限定されない。
【０４７３】
細胞の供給源
例えば、ここに記載するＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣ  ＣＡＲ両方を発現させるための、拡大および遺伝子修飾前に、細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞の供給源を対象から得ることができる。用語“対象”は、免疫応答が誘発できる生存生物(例えば、哺乳動物)を含むことを意図する。対象の例は、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラットおよびそれらのトランスジェニック種を含む。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織および腫瘍を含む、多数の供給源から得ることができる。本発明のある態様において、当分野で入手可能な任意の数のＴ細胞株が使用され得る。本発明のある態様において、Ｔ細胞は、FicollTM分離などの当業者に知られる任意の数の技法を使用して、対象から採取した血液から得ることができる。ある好ましい態様において、個体の循環血からの細胞を、アフェレーシスにより得る。アフェレーシス産物は、一般にＴ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球を含むリンパ球、赤血球および血小板を含む。ある態様において、アフェレーシスにより採取した細胞を、血漿フラクションを除去するために洗浄し、細胞をその後のプロセシング工程用の適切な緩衝液または媒体に入れることができる。本発明のある態様において、細胞をリン酸緩衝化食塩水(ＰＢＳ)で洗浄する。別の態様において、洗浄溶液はカルシウムを欠き、マグネシウムを欠いてよくまたは全てではないにしても、大部分の二価カチオンを欠いてよい。カルシウム非存在下での初期活性化工程は、活性化を増強させ得る。当業者には容易に認識されるとおり、洗浄工程は、製造者の指示に従う半自動化“フロースルー”遠心分離機(例えば、Cobe 2991細胞プロセッサー、Baxter CytoMateまたはHaemonetics Cell Saver 5)の使用など、当業者に知られる方法により達成され得る。洗浄後、細胞を、例えば、無Ｃａ、無ＭｇＰＢＳ、PlasmaLyte Aまたは緩衝剤添加または非添加の他の食塩水溶液などの多様な生体適合性緩衝液に再懸濁してよい。あるいは、アフェレーシスサンプルの望ましくない成分を除去し、細胞を直接培養培地に再懸濁してよい。
【０４７４】
本発明の方法は、５％以下、例えば２％の、ヒトＡＢ血清を含む培養培地条件を利用し、例えばSmith et al., “Ex vivo expansion of human T cells for adoptive immunotherapy using the novel Xeno-free CTS Immune Cell Serum Replacement” Clinical & Translational Immunology (2015) 4, e31; doi:10.1038/cti.2014.31に記載のような、既知培養培地条件および組成を用いることができることは認識される。
【０４７５】
ある態様において、Ｔ細胞は、赤血球を溶解させ、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬＴＭ勾配による遠心分離または向流遠心溶出法により、単球を枯渇させることにより、末梢血リンパ球から単離させる。ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋およびＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞などのＴ細胞の特異的亜集団を、さらに陽性または陰性選択技法により単離し得る。例えば、ある態様において、Ｔ細胞を、所望のＴ細胞の陽性選択に十分な時間、DYNABEADS(登録商標)M-450 CD3/CD28 Tなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８(例えば、３ｘ２８)コンジュゲートビーズとのインキュベーションにより単離する。ある態様において、時間は約３０分である。さらなる態様において、時間は３０分〜３６時間またはそれ以上およびその間の全整数値を含む。さらなる態様において、時間は少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間または６時間である。さらに他の好ましい態様において、時間は１０〜２４時間である。ある態様において、インキュベーション時間は２４時間である。長いインキュベーション時間は、腫瘍組織または免疫不全個体からの腫瘍浸潤リンパ球(ＴＩＬ)単離におけるように、他の細胞型と比較してＴ細胞が少ないあらゆる状況におけるＴ細胞単離に使用し得る。さらに、長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞捕捉効率を増加できる。それ故に、単にＴ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合させる時間を短くするか延ばすだけでおよび／またはビーズ対Ｔ細胞比を増加または減少させるだけで(さらにここに記載するとおり)、Ｔ細胞の亜集団を、培養開始時または本過程中の他の時点で優先的に選択し得る。さらに、ビーズまたは他の表面上の抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８抗体比を増加または減少させることにより、Ｔ細胞の亜集団を、培養開始時または他の所望の時点で優先的に選択できる。当業者は、本発明において、複数回の選択も使用できることを認識する。ある態様において、選択手順を実施し、活性化および拡大過程に“未選択”細胞を使用することが望ましいことがある。“未選択”細胞をまたさらに選択に付し得る。
【０４７６】
陰性選択によるＴ細胞集団の富化は、陰性に選択された細胞に特有の表面マーカーに対する抗体の組み合わせにより達成され得る。１つの方法は、陰性に選択された細胞に提示される細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫付着またはフローサイトメトリーによる細胞選別および／または選択である。例えば、陰性選択によりＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、一般にＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲおよびＣＤ８に対する抗体を含む。ある態様において、一般にＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋およびＦｏｘＰ３＋を発現する制御性Ｔ細胞を富化するまたは陽性選択することが望ましいことがある。あるいは、ある態様において、Ｔ制御細胞を、抗Ｃ２５コンジュゲートビーズまたは他の類似選択方法により枯渇させる。
【０４７７】
ここに記載する方法は、例えば、ここに記載する、例えば、陰性選択技法を使用する、例えば、Ｔ制御細胞−枯渇集団、ＣＤ２５＋枯渇細胞である、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞の特異的亜集団の選択を含み得る。好ましくは、Ｔ制御性枯渇細胞の集団は、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％未満のＣＤ２５＋細胞を含む。
【０４７８】
ある実施態様において、Ｔ制御細胞、例えば、ＣＤ２５＋  Ｔ細胞は、抗ＣＤ２５抗体またはそのフラグメントまたはＣＤ２５結合リガンド、ＩＬ−２を使用して集団から除去される。ある実施態様において、抗ＣＤ２５抗体またはそのフラグメントまたはＣＤ２５結合リガンドは、基質、例えば、ビーズにコンジュゲートされるかまたは基質、例えば、ビーズに他の方法で被覆される。ある実施態様において、抗ＣＤ２５抗体またはそのフラグメントを、ここに記載する基質にコンジュゲートする。
【０４７９】
ある実施態様において、Ｔ制御細胞、例えば、ＣＤ２５＋  Ｔ細胞を、MiltenyiTMからのＣＤ２５枯渇試薬を使用して集団から除去する。ある実施態様において、細胞対ＣＤ２５枯渇試薬の比は、１ｅ７細胞対２０μLまたは１ｅ７細胞対１５μLまたは１ｅ７細胞対１０μLまたは１ｅ７細胞対５μLまたは１ｅ７細胞対２.５μLまたは１ｅ７細胞対１.２５μLである。ある実施態様において、例えば、Ｔ制御細胞、例えば、ＣＤ２５＋枯渇について、５億を超える細胞／mlが使用される。さらなる態様において、６億、７億、８億または９億細胞／mlの細胞の濃度が使用される。
【０４８０】
ある実施態様において、枯渇される免疫エフェクター細胞の集団は、約６×１０９  ＣＤ２５＋  Ｔ細胞を含む。他の態様において、枯渇される免疫エフェクター細胞の集団は、約１×１０９〜１×１０１０  ＣＤ２５＋  Ｔ細胞およびその間の任意の整数値を含む。ある実施態様において、得られたＴ制御性枯渇細胞集団は、２×１０９以下のＴ制御細胞、例えば、ＣＤ２５＋細胞(例えば、１×１０９、５×１０８、１×１０８、５×１０７、１×１０７以下のＣＤ２５＋細胞)を有する。
【０４８１】
ある実施態様において、Ｔ制御細胞、例えば、ＣＤ２５＋細胞を、例えば、チューブ１６２−０１などの、枯渇チューブセットと共にCliniMAC系を使用して集団から除去する。ある実施態様において、CliniMAC系を、例えば、DEPLETION2.1などの枯渇設定で動かす。
【０４８２】
特定の理論に拘束されることを望まないが、アフェレーシス前またはＣＡＲ発現細胞産物製造中の対象における免疫細胞の負のレギュレーターのレベルの減少(例えば、望まない免疫細胞、例えば、ＴＲＥＧ細胞の数の減少)は、対象が逆戻りするリスクを減少できる。例えば、ＴＲＥＧ細胞を枯渇する方法が当分野で知られる。ＴＲＥＧ細胞を減少させる方法は、シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体(ここに記載する抗ＧＩＴＲ抗体)、ＣＤ２５−枯渇およびそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。
【０４８３】
ある実施態様において、製造方法は、ＣＡＲ発現細胞製造前のＴＲＥＧ細胞数の減少(例えば、枯渇)を含む。例えば、製造方法は、ＣＡＲ発現細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)産物製造前に、例えば、ＴＲＥＧ細胞を枯渇させるために、サンプル、例えば、アフェレーシスサンプルと抗ＧＩＴＲ抗体および／または抗ＣＤ２５抗体(またはそのフラグメントまたはＣＤ２５結合リガンド)を接触させることを含む。
【０４８４】
ある実施態様において、対象を、ＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞採取前に、ＴＲＥＧ細胞を減少させる１以上の治療で前処置し、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置に逆戻りするリスクを減少する。ある実施態様において、ＴＲＥＧ細胞を減少させる方法は、対象へのシクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５−枯渇またはそれらの組み合わせの１以上の適用を含むが、これらに限定されない。シクロホスファミド、抗ＧＩＴＲ抗体、ＣＤ２５−枯渇またはそれらの組み合わせの１以上の適用は、ＣＡＲ発現細胞産物注入前、途中または後に行い得る。
【０４８５】
ある実施態様において、対象をＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞の採取前にシクロホスファミドで前処置し、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置に逆戻りするリスクを減少する。ある実施態様において、対象をＣＡＲ発現細胞産物製造のための細胞の採取前に抗ＧＩＴＲ抗体で前処置し、それにより対象がＣＡＲ発現細胞処置に逆戻りするリスクを減少する。
【０４８６】
ある実施態様において、除去すべき細胞の集団は、制御性Ｔ細胞または腫瘍細胞ではないが、ＣＡＲＴ細胞の拡大および／または機能に他に負に影響する細胞、例えばＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ１５またはおそらく免疫抑制性である細胞により発現される他のマーカーを発現する細胞である。ある実施態様において、このような細胞は制御性Ｔ細胞および／または腫瘍細胞と同時にまたは該枯渇後または他の順番で除去されることが想起される。
【０４８７】
ここに記載する方法は、１を超える選択工程、例えば、１を超える枯渇工程を含み得る。陰性選択によるＴ細胞集団の富化は、例えば、陰性に選択された細胞に特有の表面マーカーに対する抗体の組み合わせにより達成され得る。１つの方法は、陰性に選択された細胞に提示される細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫付着またはフローサイトメトリーによる細胞選別および／または選択である。例えば、陰性選択によりＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルはＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲおよびＣＤ８に対する抗体を含み得る。
【０４８８】
ここに記載する方法は、さらに腫瘍抗原、例えば、ＣＤ２５を含まない腫瘍抗原、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ２０、ＣＤ１４またはＣＤ１１ｂを発現する細胞の集団からの除去を含み、それによりＣＡＲ、例えば、ここに記載するＣＡＲの発現に適するＴ制御性枯渇、例えば、ＣＤ２５＋枯渇および腫瘍抗原枯渇細胞の集団を提供し得る。ある実施態様において、腫瘍抗原発現細胞は、Ｔ制御、例えば、ＣＤ２５＋細胞と同時に除去される。例えば、抗ＣＤ２５抗体またはそのフラグメントおよび抗腫瘍抗原抗体またはそのフラグメントは、細胞または抗ＣＤ２５抗体またはそのフラグメントの除去に使用できるのと同じ基質、例えば、ビーズに結合させてよくまたは抗腫瘍抗原抗体またはそのフラグメントを、別々のビーズに結合してよく、その混合物を細胞の除去に使用できる。他の実施態様において、Ｔ制御細胞、例えば、ＣＤ２５＋細胞の除去および腫瘍抗原発現細胞の除去は逐次的であり、例えば、何れかの順番で行い得る。
【０４８９】
また提供されるのは、チェックポイント阻害因子、例えば、ここに記載するチェックポイント阻害因子、例えば、ＰＤ−１＋細胞、ＬＡＧ３＋細胞およびＴＩＭ−３＋細胞の１以上を発現する細胞の集団からの除去を含み、それによりＴ制御性枯渇、例えば、ＣＤ２５＋枯渇細胞およびチェックポイント阻害因子枯渇細胞、例えば、ＰＤ−１＋、ＬＡＧ３＋および／またはＴＩＭ−３＋枯渇細胞の集団を提供する方法である。チェックポイント阻害因子の例は、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−１、ＣＤ１６０、Ｐ１Ｈ、２Ｂ４、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ(例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５)、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＣＴＬＡ−４、ＢＴＬＡおよびＬＡＩＲ１を含む。ある実施態様において、チェックポイント阻害因子発現細胞を、Ｔ制御、例えば、ＣＤ２５＋細胞と同時に除去できる。例えば、抗ＣＤ２５抗体またはそのフラグメントおよび抗チェックポイント阻害因子抗体またはそのフラグメントは、細胞または抗ＣＤ２５抗体またはそのフラグメントの除去に使用できるのと同じビーズに結合させてよく、抗チェックポイント阻害因子抗体またはそのフラグメントを、別々のビーズに結合してよく、その混合物を細胞の除去に使用できる。他の実施態様において、Ｔ制御細胞、例えば、ＣＤ２５＋細胞の除去およびチェックポイント阻害因子発現細胞の除去は逐次的であり、例えば、何れかの順番で行い得る。
【０４９０】
ある実施態様において、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、グランザイムＢおよびパーフォリンまたは他の適切な分子、例えば、他のサイトカインの１以上を発現するＴ細胞集団が選択され得る。細胞発現についてスクリーニングする方法は、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１３／１２６７１２号に記載の方法により決定され得る。
【０４９１】
陽性または陰性選択による所望の細胞の集団の単離のために、細胞の濃度および表面(例えば、ビーズなどの粒子)は改変され得る。ある態様において、細胞とビーズの最大接触を確実とするために、ビーズおよび細胞が一緒に混合される体積を顕著に減少させる(例えば、細胞の濃度増加)ことが望ましいことがある。例えば、ある態様において、２０億細胞／mlの濃度が使用される。ある態様において、１０億細胞／mlの濃度が使用される。さらなる態様において、１億細胞／mlを超えて使用される。さらなる態様において、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万または５０００万細胞／mlの細胞の濃度が使用される。さらにある態様において、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万または１億細胞／mlの細胞の濃度が使用される。さらなる態様において、１億２５００万または１億５０００万細胞／mlの濃度が使用され得る。高濃度の使用は、細胞収率、細胞活性化および細胞拡大の増加をもたらし得る。さらに、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現する細胞または多くの腫瘍細胞が存在するサンプル(例えば、白血病血、腫瘍組織など)からのより効率的な捕捉を可能とする。このような細胞の集団は、治療価値を有し、取得することが望まれる。例えば、高細胞濃度の使用は、通常ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋  Ｔ細胞のより効率的な選択を可能とする。
【０４９２】
関連する態様において、低濃度の細胞を使用することが望ましいことがある。Ｔ細胞と表面(例えば、ビーズなどの粒子)の混合物を著しく希釈することにより、粒子と細胞の相互作用が最小化される。これは、粒子に結合させる所望の抗原を高量発現する細胞で選択される。例えば、ＣＤ４＋  Ｔ細胞は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞より高レベルのＣＤ２８を発現し、希釈濃度でより効率的に捕捉される。ある態様において、使用される細胞の濃度は５×１０ｅ６／mlである。他の態様において、使用される濃度は約１×１０５／ml〜１×１０６／mlおよびその間の任意の整数値であり得る。
【０４９３】
他の態様において、細胞を、２〜１０℃または室温で、種々の速度のローテーターで種々の時間インキュベートし得る。
【０４９４】
刺激のためのＴ細胞は、洗浄工程後凍結させてもよい。理論に拘束されることを望まないが、凍結およびその後の解凍工程は、細胞集団から顆粒球およびある程度単球を除去することにより、より均一の産物を提供する。血漿および血小板を除去する洗浄工程後、細胞を凍結溶液に懸濁させ得る。多くの凍結溶液およびパラメータは当分野で知られ、本工程において有用であるが、１つの方法は、２０％ＤＭＳＯおよび８％ヒト血清アルブミン含有ＰＢＳまたは１０％Ｄｅｘｔｒａｎ  ４０および５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミンおよび７.５％ＤＭＳＯまたは３１.２５％Plasmalyte-A、３１.２５％デキストロース５％、０.４５％ＮａＣｌ、１０％Ｄｅｘｔｒａｎ  ４０および５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミンおよび７.５％ＤＭＳＯを含む培養培地または例えば、ＨｅｓｐａｎおよびPlasmaLyte Aを含む他の適当な細胞凍結媒体を使用し、次いで細胞を１°／分の速度で−８０℃まで凍結させ、液体窒素貯蔵タンクの上記層で保存することを含む。制御凍結の他の方法ならびに直ぐに−２０℃または液体窒素で凍結させる未制御凍結もを使用し得る。
【０４９５】
ある態様において、凍結保存細胞を解凍し、ここに記載するとおり洗浄し、本発明の方法を使用して活性化するまでに１時間、室温に静置する。
【０４９６】
本発明においてまた企図されるのは、ここに記載する拡大細胞が必要となる時点前での対象からの血液サンプルまたはアフェレーシス産物の採取である。すなわち、拡大すべき細胞の供給源を、何らかの必要な時点で採取し、Ｔ細胞などの所望の細胞を単離し、ここに記載するもののような任意の数のＴ細胞療法により利益を受ける疾患または状態のＴ細胞療法における後の使用のために凍結させる。ある態様において、血液サンプルまたはアフェレーシスを、一般に健常な対象から取得する。ある態様において、血液サンプルまたはアフェレーシスを、疾患を発症するリスクにあるが、また疾患を発症していない一般に健常な対象から採取し、目的の細胞を単離し、後の使用のために凍結する。ある態様において、Ｔ細胞を、後の時点で拡大、凍結および使用し得る。ある態様において、サンプルを、ここに記載する特定の疾患の診断直後であるが、まだ何らかの処置前である患者から採取する。さらなる態様において、細胞を、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤、化学療法、放射線、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノレートおよびＦＫ５０６などの免疫抑制剤、抗体またはキャンパス、抗ＣＤ３抗体、シトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８および照射などの他の免疫除去剤などの薬剤での処置を含むが、これらに限定されない任意の数の適切な処置モダリティ前に、対象からの血液サンプルまたはアフェレーシスから単離する。
【０４９７】
本発明のさらなる態様において、Ｔ細胞を、対象に機能的Ｔ細胞を残す処置の後、直接患者から得る。これに関して、ある癌処置、特に免疫系を損傷させる薬物での処置後、患者が通常該処置から回復する期間である処置直後、エクスビボで拡大する能力について、得られたＴ細胞の品質が最適であるかまたは改善される可能性が観察されている。同様に、ここに記載する方法を使用するエクスビボ操作後、これらの細胞は、生着およびインビボ拡大が増強された好ましい状況であり得る。それ故に、本発明において、この回復期にＴ細胞、樹状細胞または造血系譜の他の細胞を含む血液細胞を採取することが想定される。さらに、ある態様において、特に治療後の規定された時間窓中、動員(例えば、ＧＭ−ＣＳＦでの動員)およびコンディショニングレジメンを使用して、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生および／または拡大に好都合な状態を対象において形成することができる。説明的細胞型は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞および免疫系の他の細胞を含む。
【０４９８】
ある実施態様において、Ｔ細胞集団は、ジアグリセロールキナーゼ(ＤＧＫ)欠損である。ＤＧＫ欠損細胞は、ＤＧＫ  ＲＮＡまたはタンパク質を発現しないまたはＤＧＫ活性が低減または阻害された細胞を含む。ＤＧＫ欠損細胞は、ＤＧＫ発現を低減または阻止するための遺伝的アプローチ、例えば、ＲＮＡ干渉剤、例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ投与により産生され得る。あるいは、ＤＧＫ欠損細胞を、ここに記載するＤＧＫ阻害剤での処理により産生できる。
【０４９９】
ある実施態様において、Ｔ細胞集団はIkaros欠損である。Ikaros欠損細胞は、Ikaros  ＲＮＡまたはタンパク質を発現しないまたはIkaros活性が低減または阻害された細胞を含み、Ikaros欠損細胞は、Ikaros発現を低減または阻止するための遺伝的アプローチ、例えば、ＲＮＡ干渉剤、例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ投与により産生され得る。あるいは、Ikaros欠損細胞は、Ikaros阻害剤、例えば、レナリドマイドでの処理により産生できる。
【０５００】
ある実施態様において、Ｔ細胞集団はＤＧＫ欠損およびIkaros欠損であり、例えば、ＤＧＫおよびIkarosを発現しないまたはＤＧＫおよびIkaros活性が低減または阻害されている。このようなＤＧＫおよびIkaros欠損細胞は、ここに記載する方法の何れかにより産生され得る。
【０５０１】
ある実施態様において、ＮＫ細胞は、対象から得られる。他の実施態様において、ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞株、例えば、ＮＫ−９２細胞株(Conkwest)である。
【０５０２】
同種ＣＡＲ免疫エフェクター細胞
ここに記載する実施態様において、免疫エフェクター細胞は同種免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞であり得る。例えば、細胞は同種Ｔ細胞、例えば、機能的Ｔ細胞受容体(ＴＣＲ)および／またはヒト白血球抗原(ＨＬＡ)、例えば、ＨＬＡクラスＩおよび／またはＨＬＡクラスIIの発現を欠く同種Ｔ細胞である。
【０５０３】
機能的ＴＣＲを欠くＴ細胞は、例えば、表面に何ら機能的ＴＣＲを発現しないように操作され、機能的ＴＣＲを含む１以上のサブユニットを発現しないように操作されまたは表面に極わずかな機能的ＴＣＲを産生するように操作され得る。あるいは、Ｔ細胞は、例えば、ＴＣＲのサブユニットの１以上の変異または切断形態の発現により、実質的に障害されたＴＣＲを発現し得る。用語“実質的に障害されたＴＣＲ”は、このＴＣＲが宿主で有害免疫反応を誘発しないことを意味する。
【０５０４】
ここに記載するＴ細胞は、例えば、機能的ＨＬＡをその表面に発現しないように操作され得る。例えば、ここに記載するＴ細胞は、細胞表面発現ＨＬＡ、例えば、ＨＬＡクラスＩおよび／またはＨＬＡクラスIIが下方制御されるように操作され得る。
【０５０５】
ある実施態様において、Ｔ細胞は、機能的ＴＣＲおよび機能的ＨＬＡ、例えば、ＨＬＡクラスＩおよび／またはＨＬＡクラスIIを欠き得る。
【０５０６】
機能的ＴＣＲおよび／またはＨＬＡの発現を欠く修飾Ｔ細胞は、ＴＣＲまたはＨＬＡの１以上のサブユニットのノックアウトまたはノックダウンを含む任意の適当な手段により得ることができる。例えば、Ｔ細胞は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート(ＣＲＩＳＰＲ)転写アクティベーター様エフェクターヌクレアーゼ(ＴＡＬＥＮ)または亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ(ＺＦＮ)を使用するＴＣＲおよび／またはＨＬＡのノックダウンを含み得る。
【０５０７】
ある実施態様において、同種細胞は、例えばここに記載する任意の方法により、阻害性分子を発現しないまたは低レベルで発現する細胞であり得る。例えば、細胞は、例えば、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を減少させ得る、阻害性分子を発現しないまたは低レベルで発現する細胞であり得る。阻害性分の例は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３(ＣＤ２７６)、Ｂ７−Ｈ４(ＶＴＣＮ１)、ＨＶＥＭ(ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０)、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスII、ＧＡＬ９、アデノシンおよびＴＧＦベータを含む。阻害性分子の、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質レベルでの阻害による、阻害は、ＣＡＲ発現細胞性能を最適化できる。ある実施態様において、例えば、ここに記載する、阻害性核酸、例えば、阻害性核酸、例えば、ｄｓＲＮＡ、例えば、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート(ＣＲＩＳＰＲ)、転写−アクティベーター様エフェクターヌクレアーゼ(ＴＡＬＥＮ)または亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ(ＺＦＮ)が使用され得る。
【０５０８】
ＴＣＲまたはＨＬＡを阻害するためのｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡ
ある実施態様において、ＴＣＲ発現および／またはＨＬＡ発現は、細胞、例えば、Ｔ細胞において、ＴＣＲおよび／またはＨＬＡおよび／またはここに記載する阻害性分子(例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ(例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５)、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３(ＣＤ２７６)、Ｂ７−Ｈ４(ＶＴＣＮ１)、ＨＶＥＭ(ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０)、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスII、ＧＡＬ９、アデノシンおよびＴＧＦベータ)をコードする核酸を標的とするｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡを使用して阻害され得る。
【０５０９】
ｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡのための発現系およびｓｈＲＮＡの例は、例えば、引用により本明細書に包含させる２０１５年３月１３日出願の国際公報ＷＯ２０１５／１４２６７５号のパラグラフ６４９および６５０に記載される。
【０５１０】
ＴＣＲまたはＨＬＡを阻害するためのＣＲＩＳＰＲ
ここで使用する“ＣＲＩＳＰＲ”または“ＴＣＲおよび／またはＨＬＡに対するＣＲＩＳＰＲ”または“ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するＣＲＩＳＰＲ”は、一組のクラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピートまたはこのような一組の反復を含む系をいう。ここで使用する“ＴＣＲおよび／またはＨＬＡを阻害するＣａｓ”は、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質をいう。
【０５１１】
“ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ”系は、細胞、例えば、Ｔ細胞におけるＴＣＲおよび／またはＨＬＡ遺伝子および／またはここに記載する阻害性分子(例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ(例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５)、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３(ＣＤ２７６)、Ｂ７−Ｈ４(ＶＴＣＮ１)、ＨＶＥＭ(ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０)、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスII、ＧＡＬ９、アデノシンおよびＴＧＦベータ)のサイレンスまたは変異に使用できるＣＲＩＳＰＲおよびＣａｓに由来する系をいう。
【０５１２】
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系およびその使用は、例えば、引用により本明細書に包含させる２０１５年３月１３日出願の国際公報ＷＯ２０１５／１４２６７５号のパラグラフ６５１〜６５８に記載される
【０５１３】
ＴＡＬＥＮ
“ＴＡＬＥＮ”または“ＨＬＡおよび／またはＴＣＲに対するＴＡＬＥＮ”または“ＨＬＡおよび／またはＴＣＲを阻害するＴＡＬＥＮ”は、細胞、例えば、Ｔ細胞におけるＨＬＡおよび／またはＴＣＲ遺伝子および／またはここに記載する阻害性分子(例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ(例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５)、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３(ＣＤ２７６)、Ｂ７−Ｈ４(ＶＴＣＮ１)、ＨＶＥＭ(ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０)、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスII、ＧＡＬ９、アデノシンおよびＴＧＦベータ)の編集に使用できる人工ヌクレアーゼである転写アクティベーター様エフェクターヌクレアーゼである。
【０５１４】
ＴＡＬＥＮおよびその使用は、例えば、引用により本明細書に包含させる２０１５年３月１３日出願の国際公報ＷＯ２０１５／１４２６７５号のパラグラフ６５９〜６６５に記載される
【０５１５】
ＨＬＡおよび／またはＴＣＲを阻害する亜鉛フィンガーヌクレアーゼ
“ＺＦＮ”または“亜鉛フィンガーヌクレアーゼ”または“ＨＬＡおよび／またはＴＣＲに対するＺＦＮ”または“ＨＬＡおよび／またはＴＣＲを阻害するＺＦＮ”は、細胞、例えば、Ｔ細胞におけるＨＬＡおよび／またはＴＣＲ遺伝子および／またはここに記載する阻害性分子(例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ(例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５)、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３(ＣＤ２７６)、Ｂ７−Ｈ４(ＶＴＣＮ１)、ＨＶＥＭ(ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０)、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスII、ＧＡＬ９、アデノシンおよびＴＧＦベータ)の編集に使用できる人工ヌクレアーゼである亜鉛フィンガーヌクレアーゼをいう。
【０５１６】
ＺＦＮおよびその使用は、例えば、引用により本明細書に包含させる２０１５年３月１３日出願の国際公報ＷＯ２０１５／１４２６７５号のパラグラフ６６６〜６７１に記載される
【０５１７】
テロメラーゼ発現
何らかの特定の理論に拘束されることを望まないが、ある実施態様において、治療Ｔ細胞は、Ｔ細胞における短縮されたテロメアにより、患者における短期残留性を有し、従って、テロメラーゼ遺伝子のトランスフェクションは、Ｔ細胞のテロメアを延長し、患者におけるＴ細胞の残留性を改善し得る。Carl June, “Adoptive T cell therapy for cancer in the clinic”, Journal of Clinical Investigation, 117:1466-1476 (2007)参照。それ故に、ある実施態様において、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞は、テロメラーゼサブユニット、例えば、テロメラーゼの触媒的サブユニット、例えば、ＴＥＲＴ、例えば、ｈＴＥＲＴを異所性に発現する。ある態様において、本発明は、細胞とテロメラーゼサブユニット、例えば、テロメラーゼの触媒的サブユニット、例えば、ＴＥＲＴ、例えば、ｈＴＥＲＴをコードする核酸を接触させることを含む、ＣＡＲ発現細胞を産生する方法を提供する。細胞を、ＣＡＲをコードする構築物と接触させる前、同時または後に、該核酸と接触させ得る。
【０５１８】
ある態様において、本発明は、免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)の集団を製造する方法に関する。ある実施態様において、方法は、免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞)の集団を準備し、免疫エフェクター細胞の集団とＣＡＲをコードする核酸を接触させ、そして免疫エフェクター細胞の集団とテロメラーゼサブユニット、例えば、ｈＴＥＲＴをコードする核酸を、ＣＡＲおよびテロメラーゼ発現を可能とする条件下で接触させることを含む。
【０５１９】
ある実施態様において、テロメラーゼサブユニットをコードする核酸はＤＮＡである。ある実施態様において、テロメラーゼサブユニットをコードする核酸は、テロメラーゼサブユニットの発現を駆動できるプロモーターを含む。
【０５２０】
ある実施態様において、ｈＴＥＲＴは、次のGenBank Protein ID AAC51724.1のアミノ酸配列を有する(Meyerson et al., “hEST2, the Putative Human Telomerase Catalytic Subunit Gene, Is Up-Regulated in Tumor Cells and during Immortalization” Cell Volume 90, Issue 4, 22 August 1997, Pages 785-795)。
MPRAPRCRAVRSLLRSHYREVLPLATFVRRLGPQGWRLVQRGDPAAFRALVAQCLVCVPWDARPPPAAPSFRQVSCLKELVARVLQRLCERGAKNVLAFGFALLDGARGGPPEAFTTSVRSYLPNTVTDALRGSGAWGLLLRRVGDDVLVHLLARCALFVLVAPSCAYQVCGPPLYQLGAATQARPPPHASGPRRRLGCERAWNHSVREAGVPLGLPAPGARRRGGSASRSLPLPKRPRRGAAPEPERTPVGQGSWAHPGRTRGPSDRGFCVVSPARPAEEATSLEGALSGTRHSHPSVGRQHHAGPPSTSRPPRPWDTPCPPVYAETKHFLYSSGDKEQLRPSFLLSSLRPSLTGARRLVETIFLGSRPWMPGTPRRLPRLPQRYWQMRPLFLELLGNHAQCPYGVLLKTHCPLRAAVTPAAGVCAREKPQGSVAAPEEEDTDPRRLVQLLRQHSSPWQVYGFVRACLRRLVPPGLWGSRHNERRFLRNTKKFISLGKHAKLSLQELTWKMSVRGCAWLRRSPGVGCVPAAEHRLREEILAKFLHWLMSVYVVELLRSFFYVTETTFQKNRLFFYRKSVWSKLQSIGIRQHLKRVQLRELSEAEVRQHREARPALLTSRLRFIPKPDGLRPIVNMDYVVGARTFRREKRAERLTSRVKALFSVLNYERARRPGLLGASVLGLDDIHRAWRTFVLRVRAQDPPPELYFVKVDVTGAYDTIPQDRLTEVIASIIKPQNTYCVRRYAVVQKAAHGHVRKAFKSHVSTLTDLQPYMRQFVAHLQETSPLRDAVVIEQSSSLNEASSGLFDVFLRFMCHHAVRIRGKSYVQCQGIPQGSILSTLLCSLCYGDMENKLFAGIRRDGLLLRLVDDFLLVTPHLTHAKTFLRTLVRGVPEYGCVVNLRKTVVNFPVEDEALGGTAFVQMPAHGLFPWCGLLLDTRTLEVQSDYSSYARTSIRASLTFNRGFKAGRNMRRKLFGVLRLKCHSLFLDLQVNSLQTVCTNIYKILLLQAYRFHACVLQLPFHQQVWKNPTFFLRVISDTASLCYSILKAKNAGMSLGAKGAAGPLPSEAVQWLCHQAFLLKLTRHRVTYVPLLGSLRTAQTQLSRKLPGTTLTALEAAANPALPSDFKTILD(配列番号１１０)
【０５２１】
ある実施態様において、ｈＴＥＲＴは、配列番号１１０の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である配列を有する。ある実施態様において、ｈＴＥＲＴは、配列番号１１０の配列を有する。ある実施態様において、ｈＴＥＲＴは、Ｎ末端、Ｃ末端または両方に(例えば、５、１０、１５、２０または３０を超えないアミノ酸の)欠失を有する。ある実施態様において、ｈＴＥＲＴは、Ｎ末端、Ｃ末端または両方に(例えば、５、１０、１５、２０または３０を超えないアミノ酸の)トランスジェニックアミノ酸配列を含む。
【０５２２】
ある実施態様において、ｈＴＥＲＴは、次のGenBank Accession No. AF018167の核酸配列によりコードされる(Meyerson et al., “hEST2, the Putative Human Telomerase Catalytic Subunit Gene, Is Up-Regulated in Tumor Cells and during Immortalization” Cell Volume 90, Issue 4, 22 August 1997, Pages 785-795)。
【表９０】
2019513347.tif 000092
【表９１】
2019513347.tif 000093
【０５２３】
ある実施態様において、ｈＴＥＲＴは、配列番号１１１の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６、９７％、９８％または９９％同一である配列を有する核酸によりコードされる。ある実施態様において、ｈＴＥＲＴは配列番号１１１の核酸によりコードされる。
【０５２４】
免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞)の活性化および拡大
Ｔ細胞などの免疫エフェクター細胞は、例えば、米国特許６,３５２,６９４号、６,５３４,０５５号、６,９０５,６８０号、６,６９２,９６４号、５,８５８,３５８号、６,８８７,４６６号、６,９０５,６８１号、７,１４４,５７５号、７,０６７,３１８号、７,１７２,８６９号、７,２３２,５６６号、７,１７５,８４３号、５,８８３,２２３号、６,９０５,８７４号、６,７９７,５１４号、６,８６７,０４１；および米国特許出願公開２００６０１２１００５号に記載の方法を使用して、一般に活性化および拡大され得る。
【０５２５】
一般に、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞の集団を、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤および免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞の表面の共刺激分子を刺激するリガンドが結合した表面と接触させることにより拡大させ得る。特に、Ｔ細胞集団は、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントまたは表面に固定化された抗ＣＤ２抗体との接触またはカルシウムイオノフォアと組み合わせたタンパク質キナーゼＣアクティベーター(例えば、ブリオスタチン)との接触などのここに記載する方法により刺激し得る。Ｔ細胞の表面上のアクセサリー分子の共刺激のために、アクセサリー分子に結合するリガンドが使用される。例えば、Ｔ細胞の集団を、Ｔ細胞の増殖刺激に適する条件下、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体と接触させ得る。ＣＤ４＋  Ｔ細胞またはＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体を使用できる。抗ＣＤ２８抗体の例は、９.３、Ｂ−Ｔ３、ＸＲ−ＣＤ２８(Diaclone, Besancon, France)を含み、当分野で一般に知られる他の方法と同様使用できる(Berg et al., Transplant Proc. 30(8):3975-3977, 1998; Haanen et al., J. Exp. Med. 190(9):13191328, 1999; Garland et al., J. Immunol Meth. 227(1-2):53-63, 1999)。
【０５２６】
ある態様において、Ｔ細胞のための一次刺激シグナルおよび共刺激シグナルは、異なるプロトコールにより提供され得る。例えば、各シグナルを提供する薬剤は、溶液でも表面に結合していてもよい。表面に結合するとき、薬剤は同じ表面に結合する(すなわち、“ｃｉｓ”形式)または別々の表面に結合する(すなわち、“ｔｒａｎｓ”形式)。あるいは、一方の薬剤が表面に結合し、他方の薬剤が溶液でよい。ある態様において、共刺激シグナルを提供する薬剤は細胞表面に結合し、一次活性化シグナルを提供する薬剤は溶液であるか表面に結合する。ある態様において、両剤は溶液にある。ある態様において、薬剤は可溶性形態であり、それ故に、Ｆｃ受容体または抗体または該薬剤に結合する他の結合剤を発現する細胞などの表面に架橋する。これに関して、例えば、本発明におけるＴ細胞の活性化および拡大への使用が企図される人工抗原提示細胞(ａＡＰＣｓ)について米国特許出願公報２００４０１０１５１９号および２００６００３４８１０号参照。
【０５２７】
ある態様において、２剤はビーズに、同じビーズに、すなわち、“ｃｉｓ”でまたは別々のビーズに、すなわち、“ｔｒａｎｓ”で固定化される。例として、一次活性化シグナルを提供する薬剤は抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントであり、共刺激シグナルを提供する薬剤は抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合フラグメントであり、両剤が等価な分子の量で同じビーズに固定化される。ある態様において、ＣＤ４＋  Ｔ細胞拡大およびＴ細胞増殖のためのビーズに結合した１：１比の各抗体が使用される。本発明のある態様において、１：１比を使用して観察された拡大と比較してＴ細胞拡大の増加が観察されるような比のビーズに結合した抗ＣＤ３：ＣＤ２８抗体が使用される。ある特定の態様において、１：１比を使用して観察された拡大と比較して約１〜約３倍増加が観察される。ある態様において、ビーズに結合したＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比は１００：１〜１：１００の範囲およびその間の全整数値である。本発明のある態様において、抗ＣＤ３抗体より多くの抗ＣＤ２８抗体が粒子に結合する、すなわち、ＣＤ３：ＣＤ２８の比は１未満である。本発明のある態様において、ビーズに結合した抗ＣＤ２８抗体対抗ＣＤ３抗体の比は２：１より大きい。ある特定の態様において、ビーズに結合した抗体の１：１００  ＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。ある態様において、ビーズに結合した抗体の１：７５  ＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。さらなる態様において、ビーズに結合した抗体の１：５０  ＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。ある態様において、ビーズに結合した抗体の１：３０  ＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。ある好ましい態様において、ビーズに結合した抗体の１：１０  ＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。ある態様において、ビーズに結合した抗体の１：３  ＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。さらにある態様において、ビーズに結合した抗体の３：１  ＣＤ３：ＣＤ２８比が使用される。
【０５２８】
１：５００〜５００：１およびその間の任意の整数値の粒子対細胞比をＴ細胞または他の標的細胞の刺激に使用し得る。当業者には容易に認識され得るとおり、粒子対細胞比は、標的細胞に対する粒子径に依存し得る。例えば、小型ビーズは小数の細胞しか結合できず、一方大型ビーズは多数結合できる。ある態様において、細胞対粒子比は１：１００〜１００：１の範囲およびその間の任意の整数値であり、さらなる態様において１：９〜９：１およびその間の任意の整数値を含む範囲もＴ細胞刺激に使用し得る。Ｔ細胞刺激をもたらす抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８結合粒子対Ｔ細胞の比は上記のとおり変わり得るが、しかしながら、ある好ましい値は１：１００、１：５０、１：４０、１：３０、１：２０、１：１０、１：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１および１５：１を含み、１つの好ましい比は、少なくとも１：１  粒子：Ｔ細胞である。ある態様において、１：１以下の粒子対細胞比が使用される。ある特定の態様において、好ましい粒子：細胞比は１：５である。さらなる態様において、粒子対細胞比は、刺激の日により変わり得る。例えば、ある態様において、粒子対細胞比は、第一日目１：１〜１０：１であり、付加的粒子を、その後最大１０日連日または隔日で細胞に付加し、最終比１：１〜１：１０である(付加の比の細胞数に基づく)。ある特定の態様において、粒子対細胞比は刺激の第一日目１：１であり、刺激の３日目および５日目に１：５に調節する。ある態様において、粒子を、第一日目の１：１の最終比および刺激３日目および５日目の１：５まで、連日または隔日原則で添加する。ある態様において、粒子対細胞比は刺激の第一日目２：１であり、刺激３日目および５日目１：１０に調節する。ある態様において、粒子を、第一日目の１：１の最終比および刺激３日目および５日目の１：１０まで、連日または隔日原則で添加する。当業者は、多様な他の比が本発明における使用に適し得ることを認識する。特に、比は、粒子径ならびに細胞サイズおよびタイプに依存する。ある態様において、使用のための最も典型的な比は、第一日の約１：１、２：１および３：１である。
【０５２９】
本発明のさらなる態様において、Ｔ細胞などの細胞を、薬剤被覆ビーズと組み合わせ、ビーズと細胞を続いて分離し、次いで、細胞を培養する。別の態様において、培養前に、薬剤被覆ビーズおよび細胞を分離せず、一緒に培養する。さらなる態様において、ビーズと細胞を、磁力などの力の適用により濃縮し、細胞表面マーカーのライゲーションの増加をもたらし、それにより細胞刺激を誘発する。
【０５３０】
例として、細胞表面タンパク質を、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８が結合した常磁性ビーズ(３ｘ２８ビーズ)をＴ細胞と接触させることにより、ライゲートさせ得る。ある態様において、細胞(例えば、１０４〜１０９  Ｔ細胞)およびビーズ(例えば、１：１比のDYNABEADS(登録商標)M-450 CD3/CD28 T常磁性ビーズ)を緩衝液、例えばＰＢＳ(カルシウムおよびマグネシウムなどの二価カチオン不含)中で合わせる。また、当業者はあらゆる細胞濃度が使用され得ることを容易に認識できる。例えば、標的細胞は、サンプル中に極めて稀であり、サンプルの僅か０.０１％を含むのみでもよく、またはサンプル全体(すなわち、１００％)が目的の標的細胞を含んでもよい。従って、あらゆる細胞数が本発明の範囲内である。ある態様において、細胞と粒子の最大接触を確実とするために、粒子および細胞が一緒に混合される体積を顕著に減少させる(例えば、細胞の濃度増加)ことが望ましいことがある。例えば、ある態様において、約２０億細胞／mlの濃度が使用される。ある態様において、１億細胞／mlを超えて使用される。さらなる態様において、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万または５０００万細胞／mlの細胞の濃度が使用される。さらにある態様において、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万または１億細胞／mlの細胞の濃度が使用される。さらなる態様において、１億２５００万または１億５０００万細胞／mlの濃度が使用され得る。高濃度の使用は、細胞収率、細胞活性化および細胞拡大の増進をもたらし得る。さらに、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現する細胞または多くの腫瘍細胞が存在するサンプル(例えば、白血病血、腫瘍組織など)からのより効率的な捕捉を可能とする。このような細胞の集団は、治療価値を有し、得ることが望まれる。例えば、高細胞の濃度の使用は、通常ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋  Ｔ細胞のより効率的な選択を可能とする。
【０５３１】
ある実施態様において、ＣＡＲ、例えば、ここに記載するＣＡＲをコードする核酸を形質導入した細胞を、例えば、ここに記載する方法により、拡大する。ある実施態様において、細胞は、数時間(例えば、約２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１５時間、１８時間、２１時間)〜約１４日(例えば、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日または１４日)の時間の培養において拡大させる。ある実施態様において、細胞を４〜９日の時間拡大させる。ある実施態様において、細胞を８日以下、例えば、７日、６日または５日の時間拡大させる。ある実施態様において、細胞、例えば、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を５日の培養において拡大させ、得られた細胞は、同じ培養条件下、９日の培養で拡大させた同じ細胞より強力である。効力は、例えば、種々のＴ細胞機能、例えば増殖、標的殺細胞、サイトカイン産生、活性化、遊走またはそれらの組み合わせにより定義され得る。ある実施態様において、５日拡大させた細胞、例えば、ここに記載するＣＡＲ発現細胞は、同じ培養条件下で９日の培養において拡大させた同じ細胞と比較して、抗原刺激による細胞倍加が少なくとも１倍、２倍、３倍または４倍増加する。ある実施態様において、細胞、例えば、ここに記載するＣＡＲを発現する細胞を５日の培養において拡大させ、得られた細胞は、同じ培養条件下で９日の培養において拡大させた同じ細胞と比較して高お炎症促進性サイトカイン産生、例えば、ＩＦＮ−γおよび／またはＧＭ−ＣＳＦレベルを示す。ある実施態様において、５日拡大させた細胞、例えば、ここに記載するＣＡＲ発現細胞は、同じ培養条件下で９日の培養において拡大させた同じ細胞と比較して炎症促進性サイトカイン産生、例えば、ＩＦＮ−γおよび／またはＧＭ−ＣＳＦレベルのｐｇ／mlでの少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍またはそれ以上の増加を示す。
【０５３２】
本発明のある態様において、混合物を数時間(約３時間)〜約１４日またはその間の任意の整数時間培養し得る。ある態様において、混合物を２１日培養し得る。本発明のある態様において、ビーズおよびＴ細胞を、約８日間共培養する。ある態様において、ビーズおよびＴ細胞を２〜３日間共培養する。数サイクルの刺激がまたＴ細胞の培養時間が６０日以上となり得るように、所望され得る。Ｔ細胞培養に適する条件は、適切な媒体(例えば、最小必須培地またはＲＰＭＩ培地１６４０またはX-vivo 15(Lonza))であり、これは、血清(例えば、胎児ウシまたはヒト血清)、インターロイキン−２(ＩＬ−２)、インスリン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＧＦβおよびＴＮＦ−αまたは当業者に知られる細胞増殖のための任意の他の添加剤を含む、増殖および生存能に必要な因子を含み得る。細胞増殖のための他の添加剤は、界面活性剤、プラスマネートおよびＮ−アセチル−システインおよび２−メルカプトエタノールなどの還元剤を含むが、これらに限定されない。培地はＲＰＭＩ  １６４０、ＡＩＭ−Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、α−ＭＥＭ、Ｆ−１２、X-Vivo 15およびX-Vivo 20、Optimizerを含み、アミノ酸、ピルビン酸ナトリウムおよびビタミンが添加され、無血清であるかまたは適切な量の血清(または血漿)が添加されるかまたはＴ細胞の増殖および拡大に十分な規定されたセットのホルモンおよび／または量のサイトカインが添加される。抗生物質、例えば、ペニシリンおよびストレプトマイシンは、実験用培養にのみ包含され、対象に点滴される細胞培養に添加されない。標的細胞は、増殖を支持するのに必要な条件下、例えば、適切な温度(例えば、３７℃)および雰囲気(例えば、空気＋５％ＣＯ２)に維持される。
【０５３３】
ある実施態様において、細胞は、例えば、フローサイトメトリーなどのここに記載する方法により測定して、１４日の拡大期間にわたり、細胞の少なくとも２００倍(例えば、２００倍、２５０倍、３００倍、３５０倍)増加をもたらす１以上のインターロイキンを含む、適切な培地(例えば、ここに記載する培地)で拡大される。ある実施態様において、細胞は、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−７(例えば、ＩＬ−１５およびＩＬ−７)存在下拡大される。
【０５３４】
ある実施態様において、ここに記載する方法、例えば、ＣＡＲ発現細胞製造方法は、例えば、抗ＣＤ２５抗体またはそのフラグメントまたはＣＤ２５結合リガンド、ＩＬ−２を利用して、細胞集団からＴ制御細胞、例えば、ＣＤ２５＋  Ｔ細胞を除去することを含む。細胞集団からＴ制御細胞、例えば、ＣＤ２５＋  Ｔ細胞を除去する方法は、ここに記載される。ある実施態様において、方法、例えば、製造方法は、さらに細胞集団(例えば、ＣＤ２５＋  Ｔ細胞などのＴ制御細胞が枯渇されている細胞集団；または抗ＣＤ２５抗体、そのフラグメントまたはＣＤ２５結合リガンドと先に接触させている細胞集団)とＩＬ−１５および／またはＩＬ−７を接触させることを含む。例えば、細胞集団(例えば、抗ＣＤ２５抗体、そのフラグメントまたはＣＤ２５結合リガンドと先に接触させている)を、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−７存在下拡大させる。
【０５３５】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、例えば、エクスビボで、ＣＡＲ発現細胞の製造中、インターロイキン−１５(ＩＬ−１５)ポリペプチド、インターロイキン−１５受容体アルファ(ＩＬ−１５Ｒａ)ポリペプチドまたはＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒａポリペプチド両方の組み合わせ、例えば、ｈｅｔＩＬ−１５を含む組成物と接触させる。ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、例えば、エクスビボで、ＣＡＲ発現細胞の製造中、ＩＬ−１５ポリペプチドを含む組成物と接触させる。ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、例えば、エクスビボで、ＣＡＲ発現細胞の製造中、ＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５  Ｒａポリペプチド両方の組み合わせを含む組成物と接触させる。ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞ＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５  Ｒａポリペプチド両方の組み合わせ
【０５３６】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ拡大中、ｈｅｔＩＬ−１５を含む組成物と接触させる。ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ拡大中、ＩＬ−１５ポリペプチドを含む組成物と接触させる。ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、エクスビボ拡大中、ＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両方を含む組成物と接触させる。ある実施態様において、接触は、リンパ球亜集団、例えば、ＣＤ８＋  Ｔ細胞の生存および増殖をもたらす。
【０５３７】
ある実施態様において、細胞を、血清を含む培地で培養(例えば、拡大、刺激および／または形質導入)し得る。血清は、例えば、ヒトＡＢ血清(ｈＡＢ)であり得る。ある実施態様において、ｈＡＢ血清は、約２％、約５％、約２〜３％、約３〜４％、約４〜５％または約２〜５％で存在する。２％および５％血清は、各々Ｔ細胞の大きな倍率の拡大を可能とする適当なレベルである。さらに、Smith et al., “Ex vivo expansion of human T cells for adoptive immunotherapy using the novel Xeno-free CTS Immune Cell Serum Replacement” Clinical & Translational Immunology (2015) 4, e31; doi:10.1038/cti.2014.31に示されるとおり、２％ヒトＡＢ血清を含む培地は、Ｔ細胞のエクスビボ拡大に適する。
【０５３８】
数回刺激に曝されているＴ細胞は、種々の特性を示し得る。例えば、典型的血液またはアフェレーシス末梢血単核細胞産物は、細胞毒性またはサプレッサーＴ細胞集団(ＴＣ、ＣＤ８＋)より大きいヘルパーＴ細胞集団(ＴＨ、ＣＤ４＋)を有する。ＣＤ３およびＣＤ２８受容体刺激によるＴ細胞のエクスビボ拡大は、約８〜９日目より前は主にＴＨ細胞にからなるＴ細胞の集団を産生し、約８〜９日目後、Ｔ細胞の集団は、含まれるＴＣ細胞の集団が増加する。従って、処置の目的によって、対象に主にＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を点滴するのは有利であり得る。同様に、抗原特異的ＴＣ細胞のサブセットが単離されているならば、このサブセットを大きく拡大することが有利であり得る。
【０５３９】
さらに、ＣＤ４およびＣＤ８マーカーに加えて、他の表現型マーカーは顕著に変わるが、大部分、細胞拡大過程の経過の間再現性がある。それ故に、このような再現性は、活性化Ｔ細胞産物を特定の目的のためにあつらえる能力を可能とする。
【０５４０】
ある実施態様において、ＣＡＲ、例えば、ここに記載するＣＡＲをコードする核酸を形質導入した細胞を、例えば、ＣＣＬ２０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−２１、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＴＮＦ−αおよび／またはそれらの組み合わせの１以上のタンパク質発現レベルに基づき、投与のために選択し得る。ある実施態様において、ＣＡＲ、例えば、ここに記載するＣＡＲをコードする核酸を形質導入した細胞を、例えば、ＣＣＬ２０、ＩＬ−１７ａ、ＩＬ−６およびそれらの組み合わせのタンパク質発現レベルに基づき、投与のために選択し得る。
【０５４１】
ＴＡ  ＣＡＲが構築されたら、適切なインビトロおよび動物モデルにおける、抗原刺激後Ｔ細胞を拡大させる能力、再刺激非存在下でＴ細胞拡大を持続させるおよび抗癌活性を含むが、これらに限定されない、該分子の活性評価のために種々のアッセイを使用できる。ＴＡ  ＣＡＲまたはＢＣＡ  ＣＡＲおよびＴＡ  ＣＡＲの両方を発現する細胞(例えば、本発明の細胞)の効果を評価するアッセイは、引用により本明細書に包含させる２０１５年３月１３日出願の国際公報ＷＯ２０１５／１４２６７５号のパラグラフ６９５〜７０３にさらに詳述される。
【０５４２】
ＢＣＡ  ＣＡＲが構築されたら、適切なインビトロおよび動物モデルにおけるＢ細胞(または他の好ましい集団)を枯渇する能力およびＢ細胞への暴露により持続する能力を含むが、これらに限定されない、該分子の活性評価のために種々のアッセイを使用できる。ＢＣＡ  ＣＡＲまたはＢＣＡ  ＣＡＲおよびＴＡ  ＣＡＲの両方を発現する細胞(例えば、本発明の細胞)の効果を評価するアッセイは、下にさらに詳述される。
【０５４３】
例えば、上記細胞毒性アッセイを、インビトロでＢＣＡ  ＣＡＲ発現細胞(例えば、ＢＣＡ  ＣＡＲおよびＴＡ  ＣＡＲ両方を発現する細胞)の細胞毒性活性を評価するために修飾し得る。本発明の細胞(例えば、ＢＣＡ  ＣＡＲおよびＴＡ  ＣＡＲ両方を発現する細胞)を標的細胞、例えば、ＢＣＡ  ＣＡＲにより標的化されるＢ細胞抗原を発現する細胞と、種々のエフェクター対標的(Ｅ：Ｔ)比で混合する。細胞介在細胞溶解を可能にする十分なインキュベーション後、各比のサンプルからの上清を回収し、次いで５１Ｃｒ放出について測定する。細胞介在残留性または増殖をモニターするために、本発明の細胞を、例えば、フローサイトメトリーによりモニターし得る。
【０５４４】
さらに、上記に類似した動物モデルに、本発明の細胞(例えば、ＢＣＡ  ＣＡＲおよびＴＡ  ＣＡＲ両方を発現する細胞)を投与し、ＢＣＡ  ＣＡＲを発現しない同じ細胞より大きな程度または長い時間持続および／または増殖する能力を含む、細胞の能力を評価する。
【０５４５】
治療適用
腫瘍抗原の発現と関係する疾患をＣＡＲ療法で処置するいくつかの方法は、一部、ＣＡＲ発現細胞のその後の拒絶および／またはＣＡＲ発現細胞に対する有害応答の結果であり得る、ＣＡＲ発現細胞に対する対象の免疫応答の刺激により、様々な程度で成功している。
【０５４６】
ある態様において、本発明は、本発明の細胞(例えば、ＢＣＡ  ＣＡＲおよびＴＡ  ＣＡＲ両方を発現する細胞)の投与による、ここに記載する、腫瘍抗原の発現と関係する疾患、例えば、癌の処置方法を提供する。ある実施態様において、本発明の細胞での治療は、リンパ球除去療法が前にあるまたは併用される。他の実施態様において、本発明の細胞での治療は、リンパ枯渇治療に先行され、または併用されず、例えば、対象は、本発明の細胞の投与前、１年、９ヶ月、６ヶ月、３ヶ月、２ヶ月、１ヶ月、４週、３週、２週、１週、６日、５日、４日、３日、２日、１日またはそれより短い月、週または日の間、リンパ球除去療法に先行されない。リンパ球除去剤の適当な例は、フルダラビンおよびシクロホスファミドを含むがこれらに限定されず、“組み合わせ治療”なる表題の部分でさらに説明する。
【０５４７】
他の態様において、本発明は、ここに記載された、ＴＡ  ＣＡＲ、例えば、メソテリンＣＡＲ(ここに記載)またはＥＧＦＲｖIII  ＣＡＲ(ここに記載)を含む(例えば、発現するように操作された)およびＢＣＡ  ＣＡＲ、例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ(ここに記載)またはＢＣＭＡ  ＣＡＲ(ここに記載)を含む(例えば、発現するように操作された)免疫エフェクター細胞の投与による、癌、例えば、ここに記載する固形腫瘍の処置方法を提供する。ある実施態様において、細胞療法を、ここに記載する抗癌治療剤と投与し得る。ある実施態様において、抗癌治療剤は、例えば、“組み合わせ治療”なる表題のもとに説明する化学療法剤である。他の実施態様において、抗癌治療剤は、固形腫瘍を処置する治療剤である。
【０５４８】
他の態様において、本発明は、ここに記載された、ＴＡ  ＣＡＲ、例えば、ＣＤ１２３  ＣＡＲ(ここに記載)、ＣＤ３３  ＣＡＲ(ここに記載)またはＣＬＬ−１  ＣＡＲ(ここに記載)を含む(例えば、発現するように操作された)およびＢＣＡ  ＣＡＲ、例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲ(ここに記載)またはＢＣＭＡ  ＣＡＲ(ここに記載)を含む(例えば、発現するように操作された)免疫エフェクター細胞の投与による、癌、例えば、ここに記載する骨髄腫瘍の処置法を提供する。ある実施態様において、細胞療法を、ここに記載する抗癌治療剤と投与し得る。ある実施態様において、抗癌治療剤は、例えば、“組み合わせ治療”なる表題の部分に記載する化学療法剤である。他の実施態様において、抗癌治療剤は、骨髄腫瘍を処置する治療剤である。
【０５４９】
ここで使用する“組み合わせて”投与は、２個の(またはそれ以上の)異なる処置を、対象が障害を有している間に対象に投与し、例えば、２以上の処置を、対象が該障害と診断された後、かつ障害が治癒または根絶されるかまたは他の理由で処置がで処置が中止されるまで投与することを意味する。ある実施態様において、１処置の送達を、投与期間が重複するように第二の送達開始時になお行う。これは、ここでは、“同時の”または“一緒の送達”と称することがある。他の実施態様において、１処置の送達は、他の処置の送達開始前に終わる。何れかの場合の実施態様において、処置は、組み合わせ投与により、より有効である。例えば、第二処置は、第二処置を第一処置非存在下で投与したときに見られるよりも、より有効であり、例えば、少ない第二処置で同等な効果が見られまたは第二処置は大きな程度症状を軽減しまたは第一処置で類似する状況が見られる。ある実施態様において、送達は、障害に関連する症状または他のパラメータの減少が、他方の非存在下の一方の処置で観察されるより大きい。２処置の効果は、部分的に相加、完全に相加または相加より大きい。送達は、送達された第一処置の効果が、第二の送達時なお検出可能であるようであり得る。
【０５５０】
抗癌治療
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に本発明の細胞、例えば、ここに記載するＴＡ  ＣＡＲおよびここに記載するＢＣ  ＣＡＲを含む(例えば、発現するように操作された)免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を提供することによる、疾患、例えば、癌の処置法を提供し、ここで、罹患細胞、例えば、癌細胞は、腫瘍抗原、例えば、ＴＡ  ＣＡＲにより標的化される腫瘍抗原を発現する。
【０５５１】
何らかの特定の理論に拘束されることを望まないが、本発明のＣＡＲ発現細胞により誘発された抗腫瘍免疫応答は、能動的または受動的免疫応答であってよく、あるいは直接的対間接的免疫応答によるものであり得る。ある態様において、本発明のＣＡＲ発現細胞は、ここに記載する腫瘍抗原を発現するヒト癌細胞に応答して特異的炎症促進性サイトカイン分泌および強力な細胞溶解活性を示し、ここに記載する可溶性腫瘍抗原による阻害に抵抗し、バイスタンダー殺細胞に介在し、確立されたヒト腫瘍の退縮に介在する。例えば、抗原陽性腫瘍細胞の不均一場内の低抗原腫瘍細胞は、隣接抗原陽性腫瘍細胞に対して予め反応していた本発明のＣＡＲ発現細胞による間接的破壊に感受性であり得る。
【０５５２】
ある実施態様において、本発明は、ここに記載する腫瘍抗原を発現する癌細胞の集団の増殖を阻害するまたは低減する方法を提供し、該方法は、ここに記載する腫瘍抗原発現癌細胞集団と、ここに記載する腫瘍抗原発現細胞に結合する、本発明の細胞、例えば、ここに記載するＴＡ  ＣＡＲおよびここに記載するＢＣ  ＣＡＲを含む(例えば、発現するように操作された)免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を接触させることを含む。ある実施態様において、本発明の細胞、例えば、ここに記載するＴＡ  ＣＡＲおよびここに記載するＢＣ  ＣＡＲを含む(例えば、発現するように操作された)免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)は、細胞および／または癌細胞の含量、数、量またはパーセンテージを、ここに記載する腫瘍抗原の発現と関係する癌を有する対象または動物モデルにおいて、陰性対照に対して、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％または少なくとも９９％減少させる。ある態様において、対象はヒトである。
【０５５３】
本発明はまたここに記載する腫瘍抗原と関係する疾患を予防、処置および／または管理する方法も提供する。これらの方法は、処置を必要とする対象に、腫瘍抗原発現細胞に結合する、本発明の細胞、例えば、ここに記載するＴＡ  ＣＡＲおよびここに記載するＢＣ  ＣＡＲを含む(例えば、発現するように操作された)免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することを含む。
【０５５４】
本発明は、ここに記載する腫瘍抗原と関係する癌の再発を予防する方法を提供し、該方法は、処置を必要とする対象に、腫瘍抗原発現細胞に結合する本発明の細胞、例えば、ここに記載するＴＡ  ＣＡＲおよびここに記載するＢＣ  ＣＡＲを含む(例えば、発現するように操作された)免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することを含む。理論に拘束されないが、本発明の細胞におけるＢＣＡ  ＣＡＲの発現は、ＢＣＡ  ＣＡＲを発現しない同一細胞よりも、細胞をインビボで長く持続させるかまたはインビボで大きな程度増殖し、それにより本発明の細胞の追加投与なく、再発を有効に処置し得る、ＴＡ  ＣＡＲを発現する細胞の持続集団の産生を可能とすると考えられる。
【０５５５】
ある態様において、方法は、処置を必要とする対象に、有効量の他の治療、例えば、“組み合わせ治療”なる表題の部分に記載した治療の適用と組み合わせて、有効量の腫瘍抗原発現細胞に結合するここに記載するＣＡＲ発現細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を含む(例えば、発現するように操作された)細胞)を投与することを含む。
【０５５６】
ある実施態様において、本発明の細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を含む(例えば、発現するように操作された)細胞)の投与は、該腫瘍細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲにより標的化)の部分的なまたは完全な消失をもたらし、その後、ＢＣＡ  ＣＡＲを欠く以外同一の細胞より、高いレベルでまたは長い時間、該対象において持続し続ける。
【０５５７】
本発明の細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を含む(例えば、発現するように操作された)細胞)は、腫瘍抗原を標的とするＴＡ  ＣＡＲ分子および／またはＢＣＡ  ＣＡＲ分子を安定して発現できる。あるいは、本発明の細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲの両方を含む(例えば、発現するように操作された)細胞)は、腫瘍抗原を標的とするＴＡ  ＣＡＲ分子および／またはＢＣＡ  ＣＡＲ分子を一過性に発現し得る。ＴＡ  ＣＡＲまたはＢＣＡ  ＣＡＲまたはＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲ両方が一過性に発現される実施態様において、本発明の細胞の複数の連続的注入(例えば、２、３、４、５、６、７、８、９または１０注入)が、腫瘍抗原の発現と関係する疾患の有効な処置または管理に必要であり得る。ある実施態様において、ＢＣＡ  ＣＡＲおよびＴＡ  ＣＡＲ両方の安定な発現が長期抗腫瘍活性のために好ましいものであり得る。種々の態様において、本発明の細胞またはその子孫は、細胞の投与後対象に少なくとも４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２年、３年、４年または５年生存する。ある実施態様において、このような生存は、ＢＣＡ  ＣＡＲを発現しない点以外で同一の細胞の生存性より実質的に長く、例えば、ＢＣＡ  ＣＡＲを発現しない点以外で同一の細胞の生存性より少なくとも４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２年、３年、４年または５年長い。
【０５５８】
ある態様において、本発明の細胞は、哺乳動物におけるエクスビボ免疫化および／またはインビボ治療のための、ある種のワクチンであり得る。ある態様において、哺乳動物はヒトである。
【０５５９】
エクスビボ免疫化に関して、哺乳動物に細胞を投与する前に、インビトロで、ｉ)細胞の拡大、ii)ＣＡＲをコードする核酸の細胞への導入またはiii)細胞の凍結保存の少なくとも１つを行う。
【０５６０】
エクスビボ手順は当分野で周知であり、下により詳細に説明する。簡潔には、細胞を哺乳動物(例えば、ヒト)から単離し、ここに開示するＣＡＲを発現するベクターで遺伝的修飾(すなわち、形質導入またはトランスフェクトインビトロ)する。ＣＡＲ修飾細胞を、治療効果を提供するために哺乳動物レシピエントに投与し得る。哺乳動物レシピエントはヒトであってよく、ＣＡＲ修飾細胞はレシピエントに対して自己であり得る。あるいは、細胞はレシピエントに対して同種、同系または異種であり得る。
【０５６１】
造血幹および前駆細胞のエクスビボ拡大の方法は、引用により本明細書に包含させる米国特許５,１９９,９４２号に開示され、本発明の細胞に適用され得る。他の適当な方法は当分野で知られ、それ故に本発明は細胞のエクスビボ拡大の何らかの特定の方法に限定されない。簡潔には、エクスビボ培養および免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)の拡大は、(１)哺乳動物からの末梢血採取物または骨髄外植片からＣＤ３４＋造血幹および前駆細胞を採取し、そして(２)このような細胞をエクスビボで拡大させることを含む。米国特許５,１９９,９４２号に記載の細胞増殖因子に加えて、ｆｌｔ３−Ｌ、ＩＬ−１、ＩＬ−３およびｃ−ｋｉｔリガンドなどの他の因子が、細胞の培養および拡大に使用され得る。
【０５６２】
腫瘍抗原を標的とする、例えば、固形腫瘍ＣＡＲまたは骨髄腫瘍ＣＡＲを発現する、ＣＡＲ発現細胞の例を、ここにさらに記載する。本発明の細胞の例は、ここに記載する腫瘍抗原、例えば、固形腫瘍関連抗原、骨髄腫瘍抗原またはＢ細胞起源ではない血液腫瘍に結合するＣＡＲ分子を発現し、またここに記載するＢ細胞抗原に結合するＢＣＡ  ＣＡＲ分子も発現する。
【０５６３】
ある実施態様において、本発明の細胞は、ここに記載する、メソテリンをターゲティングするＴＡ  ＣＡＲおよびここに記載する、ＣＤ１９をターゲティングするＢＣＡ  ＣＡＲを含む(例えば、発現するように操作されている)。ある実施態様において、本発明の細胞は、ここに記載する、メソテリンをターゲティングするＴＡ  ＣＡＲおよびここに記載する、ＢＣＭＡをターゲティングするＢＣＡ  ＣＡＲを含む(例えば、発現するように操作されている)。ある実施態様において、本発明の細胞は、  ここに記載する、ＥＧＦＲｖIIIをターゲティングするＴＡ  ＣＡＲおよびここに記載する、ＣＤ１９をターゲティングするＢＣＡ  ＣＡＲを含む(例えば、発現するように操作されている)。ある実施態様において、本発明の細胞は、ここに記載する、ＥＧＦＲｖIIIをターゲティングするＴＡ  ＣＡＲおよびここに記載する、ＢＣＭＡをターゲティングするＢＣＡ  ＣＡＲを含む(例えば、発現するように操作されている)。ある実施態様において、本発明の細胞は、ここに記載する、ＣＤ１２３をターゲティングするＴＡ  ＣＡＲおよびここに記載する、ＣＤ１９をターゲティングするＢＣＡ  ＣＡＲを含む(例えば、発現するように操作されている)。ある実施態様において、本発明の細胞は、ここに記載する、ＣＤ１２３をターゲティングするＴＡ  ＣＡＲおよびここに記載する、ＢＣＭＡをターゲティングするＢＣＡ  ＣＡＲを含む(例えば、発現するように操作されている)。ある実施態様において、本発明の細胞は、ここに記載する、ＣＤ３３をターゲティングするＴＡ  ＣＡＲおよびここに記載する、ＣＤ１９をターゲティングするＢＣＡ  ＣＡＲを含む(例えば、発現するように操作されている)。ある実施態様において、ここに記載する、ＣＤ３３をターゲティングするＴＡ  ＣＡＲおよびここに記載する、ＢＣＭＡをターゲティングするＢＣＡ  ＣＡＲ本発明の細胞は、を含む(例えば、発現するように操作されている)。ある実施態様において、本発明の細胞は、ここに記載する、ＣＬＬ−１をターゲティングするＴＡ  ＣＡＲおよびここに記載する、ＣＤ１９をターゲティングするＢＣＡ  ＣＡＲを含む(例えば、発現するように操作されている)。ある実施態様において、本発明の細胞は、ここに記載する、ＣＬＬ−１をターゲティングするＴＡ  ＣＡＲおよびここに記載する、ＢＣＭＡをターゲティングするＢＣＡ  ＣＡＲを含む(例えば、発現するように操作されている)。他の実施態様は、同様にここに記載される。
【０５６４】
腫瘍抗原の発現と関係する疾患
ここに記載する方法は、腫瘍抗原の発現と関係する疾患の処置に関する。腫瘍抗原の発現と関係する疾患は、腫瘍抗原の発現と関係する、癌または他の増殖性疾患、例えば非定型および／または非古典的癌、悪性腫瘍または前癌状態、例えば、過形成、骨髄異形成、骨髄異形成症候群または前白血病であり得る。ここに記載する腫瘍抗原の発現と関係する非癌関連徴候は、例えば、自己免疫疾患(例えば、狼瘡)、炎症性障害(例えば、アレルギーおよび喘息)および移植を含むが、これらに限定されない。
【０５６５】
ここに記載する方法を使用して、次の何れかの癌を処置できる：
消化管／消化器癌、例えば肛門癌；胆管癌；肝外胆管；虫垂癌；カルシノイド腫瘍、消化器癌；結腸癌；小児結腸直腸癌を含む結腸直腸癌；小児食道癌を含む食道癌；胆嚢癌；小児胃(胃部)癌を含む胃(胃部)癌；成人(原発)肝細胞(肝臓)癌および小児(原発)肝細胞(肝臓)癌を含む肝細胞(肝臓)癌；小児膵臓癌を含む膵臓癌；肉腫、横紋筋肉腫；島細胞膵臓癌；直腸癌；および小腸癌；
内分泌腺癌、例えば島細胞癌(膵内分泌部)；小児副腎皮質癌を含む副腎皮質癌；消化器カルシノイド腫瘍；副甲状腺癌；褐色細胞腫；下垂体腫瘍；小児甲状腺癌を含む甲状腺癌；小児多発性内分泌腫瘍症候群；および小児カルシノイド腫瘍；
眼癌、例えば眼内黒色腫；および網膜芽細胞腫；
筋骨格癌、例えばユーイングファミリーの腫瘍；骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫；小児横紋筋肉腫；成人および小児軟組織肉腫を含む軟組織肉腫；腱鞘の明細胞肉腫；および子宮肉腫；
乳癌、例えば小児および男性乳癌および妊娠性を含む乳癌；
神経癌、例えば小児脳幹神経膠腫；脳腫瘍；小児小脳星状細胞腫；小児脳星状細胞腫／悪性神経膠腫；小児上衣腫；小児髄芽腫；小児松果体およびテント上原始神経外胚葉性腫瘍 腫瘍；小児視覚路および視床下部神経膠腫；他の小児脳腫瘍；副腎皮質癌；中枢神経系リンパ腫；小児小脳星状細胞腫；神経芽腫；頭蓋咽頭腫；脊髄腫瘍；原発性中枢神経系非定型奇形様／ラブドイド腫瘍；中枢神経系胚性腫瘍；および小児テント上原始神経外胚葉性腫瘍 腫瘍および下垂体腫瘍；
泌尿生殖器癌、例えば小児膀胱癌を含む膀胱癌；腎臓細胞(腎臓)癌；小児卵巣癌を含む卵巣癌；卵巣上皮性癌；卵巣低悪性度腫瘍；陰茎癌；前立腺癌；小児腎臓細胞癌を含む腎臓細胞癌；腎盂および輸尿管移行細胞癌；精巣癌；尿道癌；膣癌；外陰癌；子宮頸癌；ウィルムス腫瘍および他の小児腎臓腫瘍；子宮内膜癌；および妊娠性栄養芽細胞腫瘍；
胚細胞癌、例えば小児頭蓋外胚細胞腫瘍；性腺外胚細胞腫瘍；卵巣胚細胞腫瘍；および精巣癌；
頭頸部癌、例えば口唇および口腔癌；小児口腔内癌を含む口腔内癌；下咽頭癌；小児喉頭癌を含む喉頭癌；原発不明転移扁平上皮頸部癌；口腔癌；鼻腔および副鼻腔癌；小児鼻咽頭癌を含む鼻咽頭癌；中咽頭癌；副甲状腺癌；咽頭癌；小児唾液腺癌を含む唾液腺癌；咽喉癌；および甲状腺癌；
血液癌、例えば、Ｂ細胞急性リンパ系白血病(“ＢＡＬＬ”)、Ｔ細胞急性リンパ系白血病(“ＴＡＬＬ”)、急性リンパ系白血病(ＡＬＬ)を含む、例えば、１以上の急性白血病；例えば、慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)；慢性リンパ系白血病(ＣＬＬ)を含む、１以上の慢性白血病を含むが、これらに限定されない、例えば白血病またはリンパ腫。さらなる血液癌は、例えば、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、汎発性大Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、小細胞または大細胞濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成および骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽細胞性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症および骨髄血液細胞の無効な産生(または異形成)により纏められる雑多な血液状態の集合である“前白血病”などを含むが、これらに限定されない。
肺癌、例えば非小細胞肺癌；および小細胞肺癌；
呼吸器癌、例えば、成人悪性中皮腫；小児悪性中皮腫；悪性胸腺腫；小児胸腺腫；胸腺癌；小児気管支腺腫／カルシノイドを含む気管支腺腫／カルシノイド；胸膜肺芽細胞腫；非小細胞肺癌；小細胞肺癌；
皮膚癌、例えばカポジ肉腫；メルケル細胞癌；黒色腫；および小児皮膚癌；
ＡＩＤＳ関連悪性腫瘍；
他の小児癌、小児の稀な癌および原発部位未知癌；
ならびに前記癌の転移癌もここに記載する方法により処置または予防され得る。転移癌、例えば、ＰＤ−Ｌ１を発現する転移癌(Iwai et al. (2005) Int. Immunol. 17:133-144)の処置を、ここに記載する方法を使用して実施し得る。増殖が阻害され得る癌の例は、一般に免疫療法に応答する癌を含む。さらに、難治性または再発性悪性腫瘍を、ここに記載する分子を使用して処置し得る。
【０５６６】
ある実施態様において、本発明は、本発明の細胞または組成物を固形腫瘍を処置する、例えば、固形腫瘍の増殖を阻害するために投与する、ここに記載する治療を提供する。ある実施態様において、細胞は、固形腫瘍における細胞または細胞の集団に存在する腫瘍抗原を標的とする、例えば、結合する、ＴＡ  ＣＡＲ分子を含む。ここに開示する方法により処置し得る固形腫瘍の例は、肉腫、腺癌および癌、例えば、膵臓、肝臓、肺、乳房、卵巣、リンパ系、消化器(例えば、結腸)、泌尿生殖器管(例えば、腎臓、尿路上皮細胞)、前立腺および咽頭に影響するものなどの、種々の臓器系の悪性腫瘍を含む。腺癌は、大部分の結腸癌、直腸癌、腎臓細胞癌、肝臓癌、肺非小細胞癌、小腸癌および食道癌などの悪性腫瘍を含む。ある実施態様において、固形腫瘍は中皮腫である。前記癌の転移病変も、本発明の方法および組成物を使用して処置または予防し得る。
【０５６７】
ある実施態様において、ここに記載する組み合わせ治療をＣＤ１９陰性癌の処置のために投与する。ＣＤ１９陰性癌は、ＣＤ１９喪失(例えば、抗原喪失変異)またはＣＤ１９レベルが低下する他のＣＤ１９改変(例えば、ＣＤ１９陰性クローンのクローン選択による)により特徴付けられ得る。ＣＤ１９陰性癌はＣＤ１９を１００％喪失している必要はなく、ある部分的ＣＤ１９発現を保持していてよい(例えば、ＣＤ１９を発現する癌細胞を一部保持する)。
【０５６８】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＥＧＦＲｖIIIＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＥＧＦＲｖIIIを発現する。ある実施態様において、処置する癌は、神経膠芽腫である。
【０５６９】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、メソテリンＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はメソテリンを発現する。ある実施態様において、処置する癌は、中皮腫、悪性胸膜中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、扁平上皮細胞肺癌もしくは大細胞肺癌、膵臓癌、膵管腺癌、膵臓転移、食道腺癌、乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌および膀胱癌またはそれらの何れかの組み合わせである。
【０５７０】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＧＤ２ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＧＤ２を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、神経芽腫である。
【０５７１】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＴｎＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＴｎ抗原を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、卵巣癌、結腸癌、乳癌または膵臓癌である。
【０５７２】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ｓＴｎＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はｓＴｎ抗原を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、卵巣癌、結腸癌、乳癌または膵臓癌である。
【０５７３】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＰＳＭＡＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＰＳＭＡを発現する。ある実施態様において、処置する癌は、前立腺癌である。
【０５７４】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＴＡＧ７２ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＴＡＧ７２を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、消化器癌である。
【０５７５】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＣＤ４４ｖ６ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＣＤ４４ｖ６を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、子宮頸癌、ＡＭＬまたはＭＭである。
【０５７６】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＥＰＣＡＭＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＥＰＣＡＭを発現する。ある実施態様において、処置する癌は、消化器癌である。
【０５７７】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＫＩＴＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＫＩＴを発現する。ある実施態様において、処置する癌は、消化器癌である。
【０５７８】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＩＬ−１３Ｒａ２ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＩＬ−１３Ｒａ２を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、神経膠芽腫である。
【０５７９】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＣＤ１７１ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＣＤ１７１を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、神経芽腫、卵巣癌、黒色腫、乳癌、膵臓癌、結腸癌またはＮＳＣＬＣ(非小細胞肺癌)である。
【０５８０】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＰＳＣＡＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＰＳＣＡを発現する。ある実施態様において、処置する癌は、前立腺癌である。
【０５８１】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ルイスＹＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はルイスＹを発現する。ある実施態様において、処置する癌は、卵巣癌またはＡＭＬである。
【０５８２】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＰＤＧＦＲベータＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＰＤＧＦＲベータを発現する。ある実施態様において、処置する癌は、乳癌、前立腺癌、ＧＩＳＴ(消化器間質腫瘍)、ＣＭＬ、ＤＦＳＰ(隆起性皮膚線維肉腫)または神経膠腫である。
【０５８３】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＳＳＥＡ−４ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＳＳＥＡ−４を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、神経膠芽腫、乳癌、肺癌または幹細胞癌である。
【０５８４】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、葉酸受容体アルファＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞は葉酸受容体アルファを発現する。ある実施態様において、処置する癌は、卵巣癌、ＮＳＣＬＣ、子宮内膜癌、腎臓癌または他の固形腫瘍である。
【０５８５】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＥＲＢＢ２ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＥＲＢＢ２(Ｈｅｒ２／ｎｅｕ)を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、乳癌、胃癌、結腸直腸癌、肺癌または他の固形腫瘍である。
【０５８６】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＭＵＣ１ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＭＵＣ１を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、乳癌、肺癌または他の固形腫瘍である。
【０５８７】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＥＧＦＲＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＥＧＦＲを発現する。ある実施態様において、処置する癌は、神経膠芽腫、ＳＣＬＣ(小細胞肺癌)、ＳＣＣＨＮ(頭頸部扁平上皮細胞癌)、ＮＳＣＬＣまたは他の固形腫瘍である。
【０５８８】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＮＣＡＭＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＮＣＡＭを発現する。ある実施態様において、処置する癌は、神経芽腫または他の固形腫瘍である。
【０５８９】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＣＡＩＸＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＣＡＩＸを発現する。ある実施態様において、処置する癌は、腎臓癌、ＣＲＣ、子宮頸癌または他の固形腫瘍である。
【０５９０】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＨＭＷＭＡＡＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＨＭＷＭＡＡを発現する。ある実施態様において、処置する癌は、黒色腫、神経膠芽腫または乳癌である。
【０５９１】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ｏ−アセチル−ＧＤ２ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はｏ−アセチル−ＧＤ２を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、神経芽腫または黒色腫である。
【０５９２】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＣＬＤＮ６ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＣＬＤＮ６を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、卵巣癌、肺癌または乳癌である。
【０５９３】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＴＳＨＲＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＴＳＨＲを発現する。ある実施態様において、処置する癌は、甲状腺癌または多発性骨髄腫である。
【０５９４】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＣＤ９７ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＣＤ９７を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、Ｂ細胞悪性腫瘍、胃癌、膵臓癌、食道癌、神経膠芽腫、乳癌または結腸直腸癌である。
【０５９５】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ポリシアル酸ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はポリシアル酸を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、小細胞肺癌である。
【０５９６】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＰＬＡＣ１ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＰＬＡＣ１を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、ＨＣＣ(肝細胞癌)である。
【０５９７】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＧｌｏｂｏＨＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＧｌｏｂｏＨを発現する。ある実施態様において、処置する癌は、卵巣癌、胃癌、前立腺癌、肺癌、乳癌または膵臓癌である。
【０５９８】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＮＹ−ＢＲ−１ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＮＹ−ＢＲ−１を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、乳癌である。
【０５９９】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＭＡＤ−ＣＴ−１ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＭＡＤ−ＣＴ−１を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、前立腺癌または黒色腫である。
【０６００】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＭＡＤ−ＣＴ−２ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＭＡＤ−ＣＴ−２を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、前立腺癌、黒色腫である。
【０６０１】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、Ｆｏｓ関連抗原１  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＦｏｓ関連抗原１を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、神経膠腫、扁平上皮細胞癌または膵臓癌である。
【０６０２】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＭＬ−ＩＡＰ  ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＭＬ−ＩＡＰを発現する。ある実施態様において、処置する癌は、黒色腫である。
【０６０３】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＮＡ１７ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＮＡ１７を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、黒色腫である。
【０６０４】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＴＲＰ−２ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＴＲＰ−２を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、黒色腫である。
【０６０５】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＣＹＰ１Ｂ１ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＣＹＰ１Ｂ１を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、乳癌、結腸癌、肺癌、食道癌、皮膚癌、リンパ節癌、脳腫瘍または精巣癌である。
【０６０６】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ＲＡＧＥ−１ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はＲＡＧＥ−１を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、ＲＣＣ(腎臓細胞癌)または他の固形腫瘍である。
【０６０７】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はヒトテロメラーゼ逆転写酵素を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、固形腫瘍である。
【０６０８】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、腸管カルボキシルエステラーゼＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞は腸管カルボキシルエステラーゼを発現する。ある実施態様において、処置する癌は、甲状腺癌、ＲＣＣ、ＣＲＣ(結腸直腸癌)、乳癌または他の固形腫瘍である。
【０６０９】
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２ＣＡＲを発現するように操作された免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を投与することにより癌を処置する方法を提供し、ここで、癌細胞はｍｕｔ  ｈｓｐ７０−２を発現する。ある実施態様において、処置する癌は、黒色腫である。
【０６１０】
組み合わせ治療
ここに記載するＣＡＲ発現細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲを発現するように操作された、例えば、細胞)を、他の既知薬剤および治療と組み合わせて使用し得る。
【０６１１】
例えば、本発明の細胞を含む、ここに記載する組み合わせ治療を、少なくとも１つのさらなる治療剤と組み合わせて投与し得る。ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞および少なくとも１つのさらなる治療剤は、同じまたは別々の組成物で同時にまたは逐次的に投与され得る。逐次投与について、ここに記載するＣＡＲ発現細胞をまず投与してよく、付加的薬剤を二番目に投与してよくまたは投与の順番は逆でよい。
【０６１２】
さらなる態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、手術、化学療法、放射線、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノレートおよびＦＫ５０６などの免疫抑制剤、抗体またはキャンパス、抗ＣＤ３抗体または他の抗体治療、細胞毒、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、サイトカイン、照射およびIzumoto et al. 2008 J Neurosurg 108:963-971に記載のものなどのペプチドワクチンなどの他の免疫除去剤と組み合わせた処置レジメンで使用し得る。
【０６１３】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、リンパ球除去因子と組み合わせて使用し得る。リンパ球除去因子の例は、免疫療法前に、リンパ球、例えば、Ｂ細胞リンパ球および／またはＴ細胞リンパ球を低減または減少させる。リンパ球除去因子は、フルダラビン、シクロホスファミド、コルチコステロイド、アレムツズマブまたは全身照射(ＴＢＩ)またはそれらの組み合わせを含む。例えば、フルダラビンとシクロホスファミドの組み合わせを、ここに記載する本発明の細胞の前にまたは同時に投与する。
【０６１４】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、Ｂ細胞形成不全を処置する薬剤と組み合わせて使用し得る。持続性Ｂ細胞形成不全は、低ガンマグロブリン血症をもたらし、感染のリスクを高め得る。Ｂ細胞形成不全を処置する薬剤は、静脈内免疫グロブリン(ＩＶＩＧ)、例えば、フレボガンマTM、ＧＡＭＵＮＥＸ−Ｃ(登録商標)、プリビジェン(登録商標)およびガンマガード(登録商標)を含む。
【０６１５】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、化学療法剤と組み合わせて使用し得る。化学療法剤の例は、アントラサイクリン(例えば、ドキソルビシン(例えば、リポソームドキソルビシン))、ビンカアルカロイド(例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン)、アルキル化剤(例えば、シクロホスファミド、ダカルバジン、メルファラン、イホスファミド、テモゾロミド)、免疫細胞抗体(例えば、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ)、代謝拮抗剤(例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジンアナログ、プリンアナログおよびアデノシンデアミナーゼ阻害剤(例えば、フルダラビン)を含む)、ｍＴＯＲ阻害剤、ＴＮＦＲグルココルチコイド誘発ＴＮＦＲ関連タンパク質(ＧＩＴＲ)アゴニスト、プロテアソーム阻害剤(例えば、アクラシノマイシンＡ、グリオトキシンまたはボルテゾミブ)、免疫調節剤、例えばサリドマイドまたはサリドマイド誘導体(例えば、レナリドマイド)を含む。
【０６１６】
組み合わせ治療における使用が企図される一般的化学療法剤は、アナストロゾール(アリミデックス(登録商標))、ビカルタミド(カソデックス(登録商標))、硫酸ブレオマイシン(Blenoxane(登録商標))、ブスルファン(ミレラン(登録商標))、ブスルファン注射(ブスルフェクス(登録商標))、カペシタビン(ゼローダ(登録商標))、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン(パラプラチン(登録商標))、カルムスチン(BiCNU(登録商標))、クロラムブシル(ロイケラン(登録商標))、シスプラチン(Platinol(登録商標))、クラドリビン(ロイスタチン(登録商標))、シクロホスファミド(シトキサン(登録商標)またはNeosar(登録商標))、シタラビン、シトシンアラビノシド(Cytosar-U(登録商標))、シタラビンリポソーム注射(DepoCyt(登録商標))、ダカルバジン(DTIC-Dome(登録商標))、ダクチノマイシン(アクチノマイシンＤ、Cosmegan)、塩酸ダウノルビシン(Cerubidine(登録商標))、クエン酸ダウノルビシンリポソーム注射(DaunoXome(登録商標))、デキサメサゾン、ドセタキセル(タキソテール(登録商標))、塩酸ドキソルビシン(アドリアマイシン(登録商標)、Rubex(登録商標))、エトポシド(ベプシド(登録商標))、リン酸フルダラビン(フルダラ(登録商標))、５−フルオロウラシル(Adrucil(登録商標)、Efudex(登録商標))、フルタミド(Eulexin(登録商標))、tezacitibine、ゲムシタビン(ジフルオロデオキシシチジン)、ヒドロキシ尿素(ハイドレア(登録商標))、イダルビシン(イダマイシン(登録商標))、イホスファミド(IFEX(登録商標))、イリノテカン(Camptosar(登録商標))、Ｌ−アスパラギナーゼ(ELSPAR(登録商標))、ロイコボリンカルシウム、メルファラン(アルケラン(登録商標))、６−メルカプトプリン(ピュリネソール(登録商標))、メトトレキサート(Folex(登録商標))、ミトキサントロン(Novantrone(登録商標))、マイロターグ、パクリタキセル(タキソール(登録商標))、phoenix(イットリウム９０／ＭＸ−ＤＴＰＡ)、ペントスタチン、カルムスチンインプラントを伴うポリフェプロサン２０(グリアデル(登録商標))、クエン酸タモキシフェン(ノルバデックス(登録商標))、テニポシド(Vumon(登録商標))、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン(Tirazone(登録商標))、注射用塩酸トポテカン(Hycamptin(登録商標))、ビンブラスチン(Velban(登録商標))、ビンクリスチン(オンコビン(登録商標))およびビノレルビン(ナベルビン(登録商標))を含む。
【０６１７】
アルキル化剤の例は、窒素マスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソウレア類およびトリアゼン)：ウラシルマスタード(アミノウラシルマスタード(登録商標)、Chlorethaminacil(登録商標)、Demethyldopan(登録商標)、Desmethyldopan(登録商標)、Haemanthamine(登録商標)、Nordopan(登録商標)、Uracil nitrogen mustard(登録商標)、Uracillost(登録商標)、Uracilmostaza(登録商標)、Uramustin(登録商標)、ウラムスチン(登録商標))、クロルメチン(Mustargen(登録商標))、シクロホスファミド(シトキサン(登録商標)、Neosar(登録商標)、Clafen(登録商標)、エンドキサン(登録商標)、Procytox(登録商標)、RevimmuneＴＭ)、イホスファミド(Mitoxana(登録商標))、メルファラン(アルケラン(登録商標))、クロラムブシル(ロイケラン(登録商標))、ピポブロマン(Amedel(登録商標)、Vercyte(登録商標))、トリエチレンメラミン(Hemel(登録商標)、Hexalen(登録商標)、Hexastat(登録商標))、トリエチレンチオホスホラミン、テモゾロミド(テモダール(登録商標))、チオテパ(Thioplex(登録商標))、ブスルファン(Busilvex(登録商標)、ミレラン(登録商標))、カルムスチン(BiCNU(登録商標))、ロムスチン(CeeNU(登録商標))、ストレプトゾシン(ザノサー(登録商標))およびダカルバジン(DTIC-Dome(登録商標))を含むが、これらに限定されない。アルキル化剤のさらなる例は、オキサリプラチン(Eloxatin(登録商標))；テモゾロミド(テモダール(登録商標)およびテモダール(登録商標))；ダクチノマイシン(別名アクチノマイシン−Ｄ、Cosmegen(登録商標))；メルファラン(別名Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシンおよびフェニルアラニンマスタード、アルケラン(登録商標))；アルトレタミン(別名ヘキサメチルメラミン(ＨＭＭ)、Hexalen(登録商標))；カルムスチン(BiCNU(登録商標))；ベンダムスチン(トレアンダ(登録商標))；ブスルファン(ブスルフェクス(登録商標)およびミレラン(登録商標))；カルボプラチン(パラプラチン(登録商標))；ロムスチン(別名CCNU、CeeNU(登録商標))；シスプラチン(別名CDDP、Platinol(登録商標)およびPlatinol(登録商標)−ＡＱ)；クロラムブシル(ロイケラン(登録商標))；シクロホスファミド(シトキサン(登録商標)およびNeosar(登録商標))；ダカルバジン(別名DTIC、DICおよびイミダゾールカルボキサミド、DTIC-Dome(登録商標))；アルトレタミン(別名ヘキサメチルメラミン(ＨＭＭ)、Hexalen(登録商標))；イホスファミド(IFEX(登録商標))；Prednumustine；プロカルバジン(Matulane(登録商標))；メクロレタミン(別名窒素マスタード、ムスチンおよび塩酸メクロルエタミン、Mustargen(登録商標))；ストレプトゾシン(ザノサー(登録商標))；チオテパ(別名チオホスホアミド、TESPAおよびTSPA、Thioplex(登録商標))；シクロホスファミド(エンドキサン(登録商標)、シトキサン(登録商標)、Neosar(登録商標)、Procytox(登録商標)、Revimmune(登録商標))；およびベンダムスチンＨＣｌ(トレアンダ(登録商標))を含むが、これらに限定されない。
【０６１８】
ｍＴＯＲ阻害剤の例は、例えば、テムシロリムス；リダフォロリムス(以前はデフォロリムスとして知られる、(１Ｒ,２Ｒ,４Ｓ)−４−[(２Ｒ)−２−[(１Ｒ,９Ｓ,１２Ｓ,１５Ｒ,１６Ｅ,１８Ｒ,１９Ｒ,２１Ｒ、２３Ｓ,２４Ｅ,２６Ｅ,２８Ｚ,３０Ｓ,３２Ｓ,３５Ｒ)−１,１８−ジヒドロキシ−１９,３０−ジメトキシ−１５,１７,２１,２３、２９,３５−ヘキサメチル−２,３,１０,１４,２０−ペンタオキソ−１１,３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ[３０.３.１.０４,９]ヘキサトリアコンタ−１６,２４,２６,２８−テトラエン−１２−イル]プロピル]−２−メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート、AP23573およびMK8669としても知られ、ＰＣＴ公開ＷＯ０３／０６４３８３号に記載)；エベロリムス(アフィニトール(登録商標)またはＲＡＤ００１)；ラパマイシン(AY22989、シロリムス(登録商標))；セマピモド(CAS 164301-51-3)；テムシロリムス、(５−{２,４−Ｂｉｓ[(３Ｓ)−３−メチルモルホリン−４−イル]ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−７−イル}−２−メトキシフェニル)メタノール(ＡＺＤ８０５５)；２−アミノ−８−[ｔｒａｎｓ−４−(２−ヒドロキシエトキシ)シクロヘキシル]−６−(６−メトキシ−３−ピリジニル)−４−メチル−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−７(８Ｈ)−オン(PF04691502、CAS 1013101-36-4)；およびＮ２−[１,４−ジオキソ−４−[[４−(４−オキソ−８−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−２−イル)モルホリニウム−４−イル]メトキシ]ブチル]−Ｌ−アルギニルグリシル−Ｌ−α−アスパルチルＬ−セリン−(配列番号２６４)、内側塩(SF1126、CAS 936487-67-1)およびXL765を含む。
【０６１９】
免疫調節剤の例は、例えば、アフツズマブ(Roche(登録商標)から入手可能)；ペグフィルグラスチム(Neulasta(登録商標))；レナリドマイド(CC-5013、レブラミド(登録商標))；サリドマイド(Thalomid(登録商標))、actimid(CC4047)；およびIRX-2(インターロイキン１、インターロイキン２およびインターフェロンγを含むヒトサイトカイン混合物, CAS 951209-71-5、IRX Therapeuticsから入手可能)を含む。
【０６２０】
アントラサイクリンの例は、例えば、ドキソルビシン(アドリアマイシン(登録商標)およびRubex(登録商標))；ブレオマイシン(lenoxane(登録商標))；ダウノルビシン(塩酸ダウノルビシン、ダウノマイシンおよび塩酸ルビドマイシン、Cerubidine(登録商標))；ダウノルビシンリポソーム(クエン酸ダウノルビシンリポソーム、DaunoXome(登録商標))；ミトキサントロン(ＤＨＡＤ、Novantrone(登録商標))；エピルビシン(EllenceTM)；イダルビシン(イダマイシン(登録商標)、イダマイシンＰＦＳ(登録商標))；マイトマイシンＣ(Mutamycin(登録商標))；ゲルダナマイシン；ハービマイシン；ラビドマイシン；およびデスアセチルラビドマイシンを含む。
【０６２１】
ビンカアルカロイドの例は、例えば、酒石酸ビノレルビン(ナベルビン(登録商標))、ビンクリスチン(オンコビン(登録商標))およびビンデシン(Eldisine(登録商標)))；ビンブラスチン(別名硫酸ビンブラスチン、ビンコブラスチンおよびＶＬＢ、Alkaban-AQ(登録商標)およびVelban(登録商標))；およびビノレルビン(ナベルビン(登録商標))を含む。
【０６２２】
プロテオソーム阻害剤の例は、ボルテゾミブ(ベルケイド(登録商標))；カルフィルゾミブ(PX-171-007、(Ｓ)−４−メチル−Ｎ−((Ｓ)−１−(((Ｓ)−４−メチル−１−((Ｒ)−２−メチルオキシラン−２−イル)−１−オキソペンタン−２−イル)アミノ)−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル)−２−((Ｓ)−２−(２−モルホリノアセトアミド)−４−フェニルブタンアミド)−ペンタンアミド)；マリゾミブ(ＮＰＩ−００５２)；クエン酸イキサゾミブ(MLN-9708)；デランゾミブ(ＣＥＰ−１８７７０)；およびＯ−メチル−Ｎ−[(２−メチル−５−チアゾリル)カルボニル]−Ｌ−セリル−Ｏ−メチル−Ｎ−[(１Ｓ)−２−[(２Ｒ)−２−メチル−２−オキシラニル]−２−オキソ−１−(フェニルメチル)エチル]−Ｌ−セリンアミド(ONX-0912)を含む。
【０６２３】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にブレンツキシマブと組み合わせて投与する。ブレンツキシマブは、抗ＣＤ３０抗体およびモノメチルオーリスタチンＥの抗体−薬物コンジュゲートである。ある実施態様において、対象は、ホジキンリンパ腫(ＨＬ)、例えば、再発または難治性ＨＬを有する。ある実施態様において、対象は、ＣＤ３０＋  ＨＬを含む。ある実施態様において、対象は、自己幹細胞移植(ＡＳＣＴ)を受けている。ある実施態様において、対象は、ＡＳＣＴを受けていない。ある実施態様において、ブレンツキシマブを、約１〜３mg／kg(例えば、約１〜１.５mg／kg、１.５〜２mg／kg、２〜２.５mg／kgまたは２.５〜３mg／kg)の用量で、例えば、３週毎に、例えば、静脈内投与する。
【０６２４】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にブレンツキシマブおよびダカルバジンと組み合わせてまたはブレンツキシマブおよびベンダムスチンと組み合わせて投与する。ダカルバジンは、化学名５−(３,３−ジメチル−１−トリアゼニル)イミダゾール−４−カルボキサミドのアルキル化剤である。ベンダムスチンは、化学名４−[５−[ビス(２−クロロエチル)アミノ]−１−メチルベンズイミダゾール−２−イル]ブタン酸のアルキル化剤である。ある実施態様において、対象は、ホジキンリンパ腫(ＨＬ)を有する。ある実施態様において、対象は、先に癌治療で処置されていない。ある実施態様において、対象は、少なくとも６０歳、例えば、６０歳、６５歳、７０歳、７５歳、８０歳、８５歳またはそれ以上である。ある実施態様において、ダカルバジンを、約３００〜４５０mg／ｍ２(例えば、約３００〜３２５mg／ｍ２、３２５〜３５０mg／ｍ２、３５０〜３７５mg／ｍ２、３７５〜４００mg／ｍ２、４００〜４２５mg／ｍ２または４２５〜４５０mg／ｍ２)の用量で、例えば、静脈内投与する。ある実施態様において、ベンダムスチンを、約７５〜１２５mg／ｍ２(例えば、７５〜１００mg／ｍ２または１００〜１２５mg／ｍ２、例えば、約９０mg／ｍ２)の用量で、例えば、静脈内投与する。ある実施態様において、ブレンツキシマブを、約１〜３mg／kg(例えば、約１〜１.５mg／kg、１.５〜２mg／kg、２〜２.５mg／kgまたは２.５〜３mg／kg)の用量で、例えば、３週毎に、例えば、静脈内投与する。
【０６２５】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にＣＤ２０阻害剤、例えば、抗ＣＤ２０抗体(例えば、抗ＣＤ２０単または二重特異性抗体)またはそのフラグメントと組み合わせて投与する。抗ＣＤ２０抗体の例は、リツキシマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ、ベルツズマブ、オビヌツズマブ、ＴＲＵ−０１５(Trubion Pharmaceuticals)、オカラツズマブおよびＰｒｏ１３１９２１(Genentech)を含むが、これらに限定されない。例えば、Lim et al. Haematologica. 95.1(2010):135-43参照。
【０６２６】
ある実施態様において、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブを含む。リツキシマブは、例えば、www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2010/103705s5311lbl.pdfに記載のとおり、ＣＤ２０に結合し、ＣＤ２０発現細胞の細胞溶解を起こすキメラマウス／ヒトモノクローナル抗体ＩｇＧ１カッパである。ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にリツキシマブと組み合わせて投与する。ある実施態様において、対象は、ＣＬＬまたはＳＬＬを有する。
【０６２７】
ある実施態様において、リツキシマブを、静脈内に、例えば、脈内点滴として投与する。例えば、各点滴は、約５００〜２０００mg(例えば、約５００〜５５０mg、５５０〜６００mg、６００〜６５０mg、６５０〜７００mg、７００〜７５０mg、７５０〜８００mg、８００〜８５０mg、８５０〜９００mg、９００〜９５０mg、９５０〜１０００mg、１０００〜１１００mg、１１００〜１２００mg、１２００〜１３００mg、１３００〜１４００mg、１４００〜１５００mg、１５００〜１６００mg、１６００〜１７００mg、１７００〜１８００mg、１８００〜１９００mgまたは１９００〜２０００mg)のリツキシマブを提供する。ある実施態様において、リツキシマブを１５０mg／ｍ２〜７５０mg／ｍ２、例えば、約１５０〜１７５mg／ｍ２、１７５〜２００mg／ｍ２、２００〜２２５mg／ｍ２、２２５〜２５０mg／ｍ２、２５０〜３００mg／ｍ２、３００〜３２５mg／ｍ２、３２５〜３５０mg／ｍ２、３５０〜３７５mg／ｍ２、３７５〜４００mg／ｍ２、４００〜４２５mg／ｍ２、４２５〜４５０mg／ｍ２、４５０〜４７５mg／ｍ２、４７５〜５００mg／ｍ２、５００〜５２５mg／ｍ２、５２５〜５５０mg／ｍ２、５５０〜５７５mg／ｍ２、５７５〜６００mg／ｍ２、６００〜６２５mg／ｍ２、６２５〜６５０mg／ｍ２、６５０〜６７５mg／ｍ２または６７５〜７００mg／ｍ２の用量で投与し、ここで、ｍ２は対象の体表面積を示す。ある実施態様において、リツキシマブを、少なくとも４日、例えば、４日、７日、１４日、２１日、２８日、３５日またはそれ以上の投与間隔で投与する。例えば、リツキシマブを、少なくとも０.５週、例えば、０.５週、１週、２週、３週、４週、５週、６週、７週、８週またはそれ以上の投与間隔で投与する。ある実施態様において、リツキシマブを、ここに記載する用量および投与間隔で、例えば、少なくとも２週、例えば、少なくとも２週、３週、４週、５週、６週、７週、８週、９週、１０週、１１週、１２週、１３週、１４週、１５週、１６週、１７週、１８週、１９週、２０週またはそれ以上の期間、投与する。例えば、リツキシマブを、ここに記載する用量および投与間隔で、処置サイクルあたり計少なくとも４回投与する(例えば、少なくとも処置サイクルあたり少なくとも４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回、１５回、１６回またはそれ以上)。
【０６２８】
ある実施態様において、抗ＣＤ２０抗体はオファツムマブを含む。オファツムマブは、分子量約１４９kDaの抗ＣＤ２０  ＩｇＧ１κヒトモノクローナル抗体である。例えば、オファツムマブを、トランスジェニックマウスおよびハイブリドーマテクノロジーを使用して産生し、組み換えマウス細胞株(ＮＳ０)から発現および精製させる。例えば、www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2009/125326lbl.pdf;およびClinical Trial Identifier number NCT01363128, NCT01515176, NCT01626352, およびNCT01397591参照。ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にオファツムマブと組み合わせて投与する。ある実施態様において、対象は、ＣＬＬまたはＳＬＬを有する。
【０６２９】
ある実施態様において、オファツムマブを静脈内点滴として投与する。例えば、各点滴は約１５０〜３０００mg(例えば、約１５０〜２００mg、２００〜２５０mg、２５０〜３００mg、３００〜３５０mg、３５０〜４００mg、４００〜４５０mg、４５０〜５００mg、５００〜５５０mg、５５０〜６００mg、６００〜６５０mg、６５０〜７００mg、７００〜７５０mg、７５０〜８００mg、８００〜８５０mg、８５０〜９００mg、９００〜９５０mg、９５０〜１０００mg、１０００〜１２００mg、１２００〜１４００mg、１４００〜１６００mg、１６００〜１８００mg、１８００〜２０００mg、２０００〜２２００mg、２２００〜２４００mg、２４００〜２６００mg、２６００〜２８００mgまたは２８００〜３０００mg)のオファツムマブを提供する。ある実施態様において、オファツムマブを、約３００mgの開始用量で、その後、例えば、２４週、例えば、約１１回、２０００mgで投与する。ある実施態様において、オファツムマブを、少なくとも４日、例えば、４日、７日、１４日、２１日、２８日、３５日またはそれ以上の投与間隔で投与する。例えば、オファツムマブを、少なくとも１週、例えば、１週、２週、３週、４週、５週、６週、７週、８週、９週、１０週、１１週、１２週、２４週、２６週、２８週、２０週、２２週、２４週、２６週、２８週、３０週またはそれ以上の投与間隔で投与する。ある実施態様において、オファツムマブを、ここに記載する用量および投与間隔で、例えば、少なくとも１週、例えば、１週、２週、３週、４週、５週、６週、７週、８週、９週、１０週、１１週、１２週、１３週、１４週、１５週、１６週、１７週、１８週、１９週、２０週、２２週、２４週、２６週、２８週、３０週、４０週、５０週、６０週またはそれ以上または１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月またはそれ以上または１年、２年、３年、４年、５年またはそれ以上の期間、投与する。例えば、オファツムマブを、ここに記載する用量および投与間隔で、処置サイクルあたり少なくとも２回投与する(例えば、処置サイクルあたり少なくとも２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回、１５回、１６回、１８回、２０回またはそれ以上)。
【０６３０】
いくつかの場合、抗ＣＤ２０抗体は、オクレリズマブを含む。オクレリズマブは、例えば、Clinical Trials Identifier Nos. NCT00077870, NCT01412333, NCT00779220, NCT00673920, NCT01194570, およびKappos et al. Lancet. 19.378(2011):1779-87に記載のとおり、ヒト化抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。
【０６３１】
いくつかの場合、抗ＣＤ２０抗体は、ベルツズマブを含む。ベルツズマブは、ＣＤ２０に対するヒト化モノクローナル抗体である。例えば、Clinical Trials Identifier No. NCT00547066, NCT00546793, NCT01101581, およびGoldenberg et al. Leuk Lymphoma. 51(5)(2010):747-55参照。
【０６３２】
いくつかの場合、抗ＣＤ２０抗体は、ＧＡ１０１を含む。ＧＡ１０１(別名オビヌツズマブまたはＲＯ５０７２７５９)は、ヒト化および糖改変抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。例えば、Robak. Curr. Opin. Investig. Drugs. 10.6(2009):588-96; Clinical Trials Identifier Numbers: NCT01995669, NCT01889797, NCT02229422, およびNCT01414205;およびwww.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2013/125486s000lbl.pdf参照。
【０６３３】
いくつかの場合、抗ＣＤ２０抗体は、ＡＭＥ−１３３ｖを含む。ＡＭＥ−１３３ｖ(別名ＬＹ２４６９２９８またはオカラツズマブ)は、リツキシマブと比較してＦｃγＲIIIａ受容体に対する親和性が増加し、抗体依存性細胞傷害(ＡＤＣＣ)活性が増強された、ＣＤ２０に対するヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。例えば、Robak et al. BioDrugs 25.1(2011):13-25;およびForero-Torres et al. Clin Cancer Res. 18.5(2012):1395-403参照。
【０６３４】
いくつかの場合、抗ＣＤ２０抗体は、ＰＲＯ１３１９２１を含む。ＰＲＯ１３１９２１は、リツキシマブと比較して、ＦｃγＲIIIａに良好に結合し、ＡＤＣＣが増強するよう操作されたヒト化抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。例えば、Robak et al. BioDrugs 25.1(2011):13-25;およびCasulo et al. Clin Immunol. 154.1(2014):37-46;およびClinical Trials Identifier No. NCT00452127参照。
【０６３５】
いくつかの場合、抗ＣＤ２０抗体は、ＴＲＵ−０１５を含む。ＴＲＵ−０１５は、ＣＤ２０に対する抗体のドメインに由来する抗ＣＤ２０融合タンパク質である。ＴＲＵ−０１５はモノクローナル抗体より小さいが、Ｆｃ介在エフェクター機能を保持する。例えば、Robak et al. BioDrugs 25.1(2011):13-25参照。ＴＲＵ−０１５は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインに結合した抗ＣＤ２０一本鎖可変フラグメント(ｓｃＦｖ)を含むが、ＣＨ１およびＣＬドメインを欠く。
【０６３６】
ある実施態様において、抗ＣＤ２０ここに記載する抗体は、治療剤、例えば、ここに記載する化学療法剤(例えば、シトキサン、フルダラビン、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、デメチル化剤、ペプチドワクチン、抗腫瘍抗生物質、チロシンキナーゼ阻害剤、アルキル化剤、抗微小管または有糸分裂阻害剤)、抗アレルギー剤、抗悪心剤(または制吐剤)、鎮痛剤または細胞保護剤にコンジュゲートまたは他の方法で結合する。
【０６３７】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にＢ細胞リンパ腫２(ＢＣＬ−２)阻害剤(例えば、ベネトクラクス、別名ＡＢＴ−１９９またはＧＤＣ−０１９９；)および／またはリツキシマブと組み合わせて投与する。ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にベネトクラクスおよびリツキシマブと組み合わせて投与する。ベネトクラクスは、抗アポトーシスタンパク質、ＢＣＬ−２を阻害する小分子である。ベネトクラクス(４−(４−{[２−(４−クロロフェニル)−４,４−ジメチルシクロヘキシ−１−エン−１−イル]メチル}ピペラジン−１−イル)−Ｎ−({３−ニトロ−４−[(テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル)アミノ]フェニル}スルホニル)−２−(１Ｈ−ピロロ[２,３−ｂ]ピリジン−５−イルオキシ)ベンズアミド)の構造を下に示す。
【化１】
2019513347.tif 000094
【０６３８】
ある実施態様において、対象は、ＣＬＬを有する。ある実施態様において、対象は再発性ＣＬＬを有し、例えば、対象は、先に癌治療と投与されている。ある実施態様において、ベネトクラクスを、約１５〜６００mg(例えば、１５〜２０mg、２０〜５０mg、５０〜７５mg、７５〜１００mg、１００〜２００mg、２００〜３００mg、３００〜４００mg、４００〜５００mgまたは５００〜６００mg)の用量で、例えば、連日投与する。ある実施態様において、リツキシマブを、約３５０〜５５０mg／ｍ２(例えば、３５０〜３７５mg／ｍ２、３７５〜４００mg／ｍ２、４００〜４２５mg／ｍ２、４２５〜４５０mg／ｍ２、４５０〜４７５mg／ｍ２または４７５〜５００mg／ｍ２)の用量で、例えば、静脈内に、例えば、毎月投与する。
【０６３９】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせて投与する。ある実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、癌細胞で選択的に複製し、細胞死を誘発するかまたは増殖を遅延させることができる。いくつかの場合、腫瘍溶解性ウイルスは、非癌細胞に効果がないか、効果が最小である。腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍溶解性アデノウイルス、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス、腫瘍溶解性レトロウイルス、腫瘍溶解性パルボウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性シンドビスウイルス、腫瘍溶解性インフルエンザウイルスまたは腫瘍溶解性ＲＮＡウイルス(例えば、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス(ＮＤＶ)、腫瘍溶解性麻疹ウイルスまたは腫瘍溶解性小胞口内炎ウイルス(ＶＳＶ))を含むが、これらに限定されない。
【０６４０】
ある実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、引用によりその全体を本明細書に包含させる、ＵＳ２０１０／０１７８６８４Ａ１号に記載のウイルス、例えば、組み換え腫瘍溶解性ウイルスである。ある実施態様において、組み換え腫瘍溶解性ウイルスは、例えば、引用によりその全体を本明細書に包含させる、ＵＳ２０１０／０１７８６８４Ａ１号に記載のとおり、免疫または炎症性応答の阻害因子をコードする核酸配列(例えば、異種核酸配列)を含む。ある実施態様において、組み換え腫瘍溶解性ウイルス、例えば、腫瘍溶解性ＮＤＶは、アポトーシス促進性タンパク質(例えば、apoptin)、サイトカイン(例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロン−ガンマ、インターロイキン−２(ＩＬ−２)、腫瘍壊死因子−アルファ)、免疫グロブリン(例えば、ＥＤ−Ｂフィブロネクチンに対する抗体)、腫瘍関連抗原、二重特異性アダプタータンパク質(例えば、ＮＤＶ  ＨＮタンパク質およびＣＤ３またはＣＤ２８などのＴ細胞共刺激受容体に対する二重特異性抗体または抗体フラグメント；またはヒトＩＬ−２とＮＤＶ  ＨＮタンパク質に対する一本鎖抗体の融合タンパク質)である。例えば、引用により、その全体を包含するZamarin et al. Future Microbiol. 7.3(2012):347-67参照。ある実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、各々引用によりその全体を本明細書に包含させる、ＵＳ８５９１８８１Ｂ２号、ＵＳ２０１２／０１２２１８５Ａ１号またはＵＳ２０１４／０２７１６７７Ａ１号に記載のキメラ腫瘍溶解性ＮＤＶである。
【０６４１】
ある実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、癌細胞で排他的に複製するように設計された、制限増殖型アデノウイルス(ＣＲＡｄ)である。例えば、Alemany et al. Nature Biotechnol. 18(2000):723-27参照。ある実施態様において、腫瘍溶解性アデノウイルスは、引用により本明細書に包含させる、Alemany et alの表１に記載されるものである。
【０６４２】
腫瘍溶解性ウイルスの例は、次のものを含むが、これらに限定されない。
Ｂ群腫瘍溶解性アデノウイルス(ＣｏｌｏＡｄ１)(PsiOxus Therapeutics Ltd.)(例えば、Clinical Trials Identifier: NCT02053220参照)；顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子(ＧＭ−ＣＳＦ)を含むアデノウイルスであるＯＮＣＯＳ−１０２(以前はＣＧＴＧ−１０２と称された)(Oncos Therapeutics)(例えば、Clinical Trials Identifier: NCT01598129参照)；ヒトＰＨ２０ヒアルロニダーゼをコードする遺伝的修飾腫瘍溶解性ヒトアデノウイルスであるＶＣＮ−０１(VCN Biosciences, S.L.)(例えば、Clinical Trials Identifiers: NCT02045602およびNCT02045589参照)；
網膜芽細胞腫／Ｅ２Ｆ経路が下方制御された癌細胞で選択的に複製するように修飾されている野生型ヒトアデノウイルス血清型５(Ｈａｄ５)に由来するウイルスである制限増殖型アデノウイルスＩＣＯＶＩＲ−５、(Institut Catala d'Oncologia)(例えば、Clinical Trials Identifier: NCT01864759参照)；ＩＣＯＶＩＲ５、腫瘍溶解性アデノウイルスで感染した骨髄由来自己間葉性幹細胞(ＭＳＣｓ)を含むCelyvir(Hospital Infantil Universitario Nino Jesus, Madrid, Spain/Ramon Alemany)(例えば、Clinical Trials Identifier: NCT01844661参照)；ヒトＥ２Ｆ−１プロモーターが必須Ｅ１ａウイルス遺伝子の発現を駆動し、それによりウイルス複製および細胞毒性をＲｂ経路欠損腫瘍細胞に制限する、制限増殖型腫瘍溶解性血清型５アデノウイルス(Ａｄ５)である、ＣＧ００７０(Cold Genesys, Inc.)(例えば、Clinical Trials Identifier: NCT02143804参照)；または網膜芽細胞腫(Ｒｂ)経路欠損細胞で選択的に複製し、あるＲＧＤ結合インテグリンを発現する細胞により効率的に感染するように操作されているアデノウイルスである、ＤＮＸ−２４０１(以前の名称デルタ−２４−ＲＧＤ)(Clinica Universidad de Navarra, Universidad de Navarra/DNAtrix, Inc.)(例えば、Clinical Trials Identifier: NCT01956734参照)。
【０６４３】
ある実施態様において、ここに記載する腫瘍溶解性ウイルスを、注射、例えば、皮下、動脈内、静脈内、筋肉内、髄腔内または腹腔内注射により投与する。ある実施態様において、ここに記載する腫瘍溶解性ウイルスを、腫瘍内、経皮、経粘膜、経口、鼻腔内または肺投与により投与する。
【０６４４】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲを発現する細胞を、対象にＴｒｅｇ細胞集団を減少させる分子と組み合わせて投与する。Ｔｒｅｇ細胞の数を減らす(例えば、枯渇させる)方法は当分野で知られ、例えば、ＣＤ２５枯渇、シクロホスファミド投与、ＧＩＴＲ機能調節を含む。理論に拘束されることを意図しないが、アフェレーシス前またはここに記載するＣＡＲ発現細胞投与前の対象におけるＴｒｅｇ細胞の数の減少は、腫瘍微小環境における望まない免疫細胞(例えば、Ｔｒｅｇ)の数を減らし、対象が再発するリスクを減らすと考えられる。
【０６４５】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲを発現する細胞を、制御性Ｔ細胞(Ｔｒｅｇ)を枯渇させるＧＩＴＲアゴニストおよび／またはＧＩＴＲ抗体などのＧＩＴＲをターゲティングするおよび／またはＧＩＴＲ機能を調節する分子と組み合わせて対象に投与する。ある実施態様において、ＧＩＴＲ結合分子および／またはＧＩＴＲ機能調節分子(例えば、ＧＩＴＲアゴニストおよび／またはＴｒｅｇ枯渇ＧＩＴＲ抗体)は、ＣＡＲ発現細胞の前に投与される。例えば、ある実施態様において、ＧＩＴＲアゴニストは、細胞のアフェレーシス前に投与され得る。ある実施態様において、対象は、ＣＬＬを有する。ＧＩＴＲアゴニストの例は、例えば、米国特許６,１１１,０９０号、欧州特許０９０５０５Ｂ１号、米国特許８,５８６,０２３号、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１０／００３１１８号および２０１１／０９０７５４号に記載のＧＩＴＲ融合タンパク質または例えば、米国特許７,０２５,９６２、欧州特許１９４７１８３Ｂ１、米国特許７,８１２,１３５、米国特許８,３８８,９６７、米国特許８,５９１,８８６、欧州特許ＥＰ１８６６３３９号、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１１／０２８６８３号、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１３／０３９９５４号、ＰＣＴ公開ＷＯ２００５／００７１９０号、ＰＣＴ公開ＷＯ２００７／１３３８２２号、ＰＣＴ公開ＷＯ２００５／０５５８０８号、ＰＣＴ公開ＷＯ９９／４０１９６号、ＰＣＴ公開ＷＯ２００１／０３７２０号、ＰＣＴ公開ＷＯ９９／２０７５８号、ＰＣＴ公開ＷＯ２００６／０８３２８９号、ＰＣＴ公開ＷＯ２００５／１１５４５１号、米国特許７,６１８,６３２およびＰＣＴ公開ＷＯ２０１１／０５１７２６号に記載の抗ＧＩＴＲ抗体などの、例えば、ＧＩＴＲ融合タンパク質および抗ＧＩＴＲ抗体(例えば、二価抗ＧＩＴＲ抗体)を含む。
【０６４６】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にｍＴＯＲ阻害剤、例えば、ここに記載するｍＴＯＲ阻害剤、例えば、エベロリムスなどのラパログと組み合わせて投与する。ある実施態様において、ｍＴＯＲ阻害剤は、ＣＡＲ発現細胞前に投与される。例えば、ある実施態様において、ｍＴＯＲ阻害剤は、細胞のアフェレーシス前に投与され得る。ある実施態様において、対象は、ＣＬＬを有する。
【０６４７】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にＧＩＴＲアゴニスト、例えば、ここに記載するＧＩＴＲアゴニストと組み合わせて投与する。ある実施態様において、ＧＩＴＲアゴニストは、ＣＡＲ発現細胞前に投与される。例えば、ある実施態様において、ＧＩＴＲアゴニストは、細胞のアフェレーシス前に投与され得る。ある実施態様において、対象は、ＣＬＬを有する。
【０６４８】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にａタンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤、例えば、ここに記載するタンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤と組み合わせて投与する。ある実施態様において、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤は、ＳＨＰ−１阻害剤、例えば、スチボグルコン酸ナトリウムなどの、例えば、ここに記載するＳＨＰ−１阻害剤である。ある実施態様において、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤はＳＨＰ−２阻害剤である。
【０６４９】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、キナーゼ阻害剤と組み合わせて使用し得る。ある実施態様において、キナーゼ阻害剤は、ＣＤＫ４阻害剤、例えば、ここに記載するＣＤＫ４阻害剤、例えば、６−アセチル−８−シクロペンチル−５−メチル−２−(５−ピペラジン−１−イル−ピリジン−２−イルアミノ)−８Ｈ−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−７−オン、ヒドロクロライド(パルボシクリブまたはPD0332991とも称する)などの、例えば、ＣＤＫ４／６阻害剤である。ある実施態様において、キナーゼ阻害剤は、ＢＴＫ阻害剤、例えば、イブルチニブなどの、例えば、ここに記載するＢＴＫ阻害剤である。ある実施態様において、キナーゼ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えば、ラパマイシン、ラパマイシンアナログ、ＯＳＩ−０２７などの、例えば、ここに記載するｍＴＯＲ阻害剤である。ｍＴＯＲ阻害剤は、例えば、ｍＴＯＲＣ１阻害剤および／またはｍＴＯＲＣ２阻害剤、例えば、ここに記載するｍＴＯＲＣ１阻害剤および／またはｍＴＯＲＣ２阻害剤であり得る。ある実施態様において、キナーゼ阻害剤は、ＭＮＫ阻害剤、例えば、４−アミノ−５−(４−フルオロアニリノ)−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジンなどの、例えば、ここに記載するＭＮＫ阻害剤であり得る。ＭＮＫ阻害剤は、例えば、ＭＮＫ１ａ、ＭＮＫ１ｂ、ＭＮＫ２ａおよび／またはＭＮＫ２ｂ阻害剤であり得る。ある実施態様において、キナーゼ阻害剤は、例えば、ＰＦ−０４６９５１０２、ここに記載するデュアルＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤であり得る。
【０６５０】
ある実施態様において、キナーゼ阻害剤は、アロイシンＡ；フラボピリドールまたはHMR-1275、２−(２−クロロフェニル)−５,７−ジヒドロキシ−８−[(３Ｓ,４Ｒ)−３−ヒドロキシ−１−メチル−４−ピペリジニル]−４−クロメノン；クリゾチニブ(PF-02341066；２−(２−クロロフェニル)−５,７−ジヒドロキシ−８−[(２Ｒ,３Ｓ)−２−(ヒドロキシメチル)−１−メチル−３−ピロリジニル]−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン、ヒドロクロライド(P276-00)；１−メチル−５−[[２−[５−(トリフルオロメチル)−１Ｈ−イミダゾール−２−イル]−４−ピリジニル]オキシ]−Ｎ−[４−(トリフルオロメチル)フェニル]−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−アミン(RAF265)；インジスラム(E7070)；ロスコビチン(CYC202)；パルボシクリブ(PD0332991)；ディナシクリブ(SCH727965)；Ｎ−[５−[[(５−ｔｅｒｔ−ブチルオキサゾール−２−イル)メチル]チオ]チアゾール−２−イル]ピペリジン−４−カルボキサミド(BMS 387032)；４−[[９−クロロ−７−(２,６−ジフルオロフェニル)−５Ｈ−ピリミド[５,４−ｄ][２]ベンズアゼピン−２−イル]アミノ]−安息香酸(MLN8054)；５−[３−(４,６−ジフルオロ−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル)−１Ｈ−インダゾール−５−イル]−Ｎ−エチル−４−メチル−３−ピリジンメタンアミン(AG-024322)；４−(２,６−ジクロロベンゾイルアミノ)−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸Ｎ−(ピペリジン−４−イル)アミド(AT7519)；４−[２−メチル−１−(１−メチルエチル)−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−Ｎ−[４−(メチルスルホニル)フェニル]−２−ピリミジンアミン(AZD5438)；およびXL281(BMS908662)から選択されるＣＤＫ４阻害剤である。
【０６５１】
ある実施態様において、キナーゼ阻害剤はＣＤＫ４阻害剤、例えば、パルボシクリブ(PD0332991)であり、パルボシクリブを、約５０mg、６０mg、７０mg、７５mg、８０mg、９０mg、１００mg、１０５mg、１１０mg、１１５mg、１２０mg、１２５mg、１３０mg、１３５mg(例えば、７５mg、１００mgまたは１２５mg)の用量で一定期間連日、例えば、２８日サイクルの１４〜２１日目連日または２１日サイクルの７〜１２日目連日投与する。ある実施態様において、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはそれ以上のサイクルのパルボシクリブが投与される。
【０６５２】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にサイクリン依存性キナーゼ(ＣＤＫ)４または６阻害剤、例えば、ここに記載するＣＤＫ４阻害剤またはＣＤＫ６阻害剤と組み合わせて投与する。ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にＣＤＫ４／６阻害剤(例えば、ＣＤＫ４およびＣＤＫ６両方を標的とする阻害剤)、例えば、ここに記載するＣＤＫ４／６阻害剤と組み合わせて投与する。ある実施態様において、対象は、ＭＣＬを有する。ＭＣＬは、現在利用可能な治療にほとんど応答しない、すなわち、本質的に不治の高悪性度癌である。ＭＣＬの多くの場合、サイクリンＤ１(ＣＤＫ４／６のレギュレーター)がＭＣＬ細胞で発現される(例えば、免疫グロブリンおよびサイクリンＤ１遺伝子が関与する染色体転座により)。それ故に、理論に拘束されないが、ＭＣＬ細胞は、高特異性(すなわち、正常免疫細胞に対する最小効果)でＣＤＫ４／６阻害に高度に感受性であると考えられる。ＣＤＫ４／６阻害剤単独は、ＭＣＬ処置にいくぶん有効性を有しているが、部分的寛解しか達成せず、高再発率である。ＣＤＫ４／６阻害剤の例は、ＬＥＥ０１１(別名リボシクリブ)であり、その構造を下に示す。
【化２】
2019513347.tif 000095
【０６５３】
理論に拘束されないが、ここに記載するＣＡＲ発現細胞とＣＤＫ４／６阻害剤(例えば、ＬＥＥ０１１または他のここに記載するＣＤＫ４／６阻害剤)の投与は、例えば、ＣＤＫ４／６阻害剤単独と比較して、高い応答性、例えば、高い寛解率および／または低い再発率を達成できると考えられる。
【０６５４】
ある実施態様において、キナーゼ阻害剤は、イブルチニブ(ＰＣＩ−３２７６５)；ＧＤＣ−０８３４；ＲＮ−４８６；ＣＧＩ−５６０；ＣＧＩ−１７６４；ＨＭ−７１２２４；ＣＣ−２９２；ＯＮＯ−４０５９；ＣＮＸ−７７４；およびＬＦＭ−Ａ１３から選択されるＢＴＫ阻害剤である。好ましい実施態様において、ＢＴＫ阻害剤は、インターロイキン−２−誘導可能キナーゼ(ＩＴＫ)のキナーゼ活性を低減または阻害せず、ＧＤＣ−０８３４；ＲＮ−４８６；ＣＧＩ−５６０；ＣＧＩ−１７６４；ＨＭ−７１２２４；ＣＣ−２９２；ＯＮＯ−４０５９；ＣＮＸ−７７４；およびＬＦＭ−Ａ１３から選択される。
【０６５５】
ある実施態様において、キナーゼ阻害剤は、ＢＴＫ阻害剤、例えば、イブルチニブ(ＰＣＩ−３２７６５)である。ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にＢＴＫ阻害剤(例えば、イブルチニブ)と組み合わせて投与する。ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にイブルチニブ(別名ＰＣＩ−３２７６５)と組み合わせて投与する。イブルチニブ(１−[(３Ｒ)−３−[４−アミノ−３−(４−フェノキシフェニル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン−１−イル]ピペリジン−１−イル]プロプ−２−エン−１−オン)の構造を下に示す。
【化３】
2019513347.tif 000096
【０６５６】
ある実施態様において、対象は、ＣＬＬ、マントル細胞リンパ腫(ＭＣＬ)または小リンパ性リンパ腫(ＳＬＬ)を有する。例えば、対象は、染色体１７の短アームにおける欠失(ｄｅｌ(１７ｐ)、例えば、白血病細胞における)を有する。他の例として、対象はｄｅｌ(１７ｐ)を有しない。ある実施態様において、対象は再発性ＣＬＬまたはＳＬＬを有し、例えば、対象は、先に癌治療と投与されている(例えば、１、２、３または４癌治療を先に投与されている)。ある実施態様において、対象は、難治性ＣＬＬまたはＳＬＬを有する。他の実施態様において、対象は、濾胞性リンパ腫、例えば、再発または難治性濾胞性リンパ腫を有する。ある実施態様において、イブルチニブを、約３００〜６００mg／日(例えば、約３００〜３５０mg／日、３５０〜４００mg／日、４００〜４５０mg／日、４５０〜５００mg／日、５００〜５５０mg／日または５５０〜６００mg／日mg／日、例えばmg／日、約４２０mg／日または約５６０mg／日)の用量で、例えば、経口投与する。ある実施態様において、イブルチニブを、約２５０mg、３００mg、３５０mg、４００mg、４２０mg、４４０mg、４６０mg、４８０mg、５００mg、５２０mg、５４０mg、５６０mg、５８０mg、６００mg(例えば、２５０mg、４２０mgまたは５６０mg)の用量で、連日、一定期間、例えば、２１日サイクルで連日または２８日サイクルで連日投与する。ある実施態様において、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはそれ以上のサイクルのイブルチニブが投与される。
【０６５７】
ある実施態様において、イブルチニブを、リツキシマブと組み合わせて投与する。例えば、Burger et al. (2013) Ibrutinib In Combination With Rituximab (iR) Is Well Tolerated and Induces a High Rate Of Durable Remissions In Patients With High-Risk Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL): New, Updated Results Of a Phase II Trial In 40 Patients, Abstract 675 presented at 55th ASH Annual Meeting and Exposition, New Orleans, LA 7-10 Dec参照。理論に拘束されないが、イブルチニブの付加はＴ細胞増殖性応答を増強し、Ｔ細胞をＴ−ヘルパー−２(Ｔｈ２)からＴ−ヘルパー−１(Ｔｈ１)表現型にシフトさせ得ると考えられる。Ｔｈ１およびＴｈ２はヘルパーＴ細胞の表現型であり、Ｔｈ１対Ｔｈ２が種々の免疫応答経路を指示する。Ｔｈ１表現型は、炎症促進性応答、例えば、細胞内病原体／ウイルスまたは癌細胞などの細胞殺滅または自己免疫性応答持続と関連する。Ｔｈ２表現型は、好酸球蓄積および抗炎症性応答と関連する。
【０６５８】
ここでの方法、使用および組成物のある実施態様において、ＢＴＫ阻害剤は、全体を引用により本明細書に包含させる国際出願ＷＯ／２０１５／０７９４１７号に記載のＢＴＫ阻害剤である。例えば、ある実施態様において、ＢＴＫ阻害剤は、式(Ｉ)
【化４】
2019513347.tif 000097
〔式中、
Ｒ１は水素、場合によりヒドロキシで置換されていてよいＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ２は水素またはハロゲンであり；
Ｒ３は水素またはハロゲンであり；
Ｒ４は水素であり；
Ｒ５は水素またはハロゲンであるか；
またはＲ４およびＲ５は互いに結合し、結合、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−；−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−；または−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−を意味し；
Ｒ６およびＲ７は互いに独立してＨ、場合によりヒドロキシで置換されていてよいＣ１−Ｃ６アルキルル、場合によりハロゲンもしくはヒドロキシで置換されていてよいＣ３−Ｃ６シクロアルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ８、Ｒ９、Ｒ、Ｒ’、Ｒ１０およびＲ１１は互いに独立してＨまたは場合によりＣ１−Ｃ６アルコキシで置換されていてよいＣ１−Ｃ６アルキルであるか；またはＲ８、Ｒ９、Ｒ、Ｒ’、Ｒ１０およびＲ１１の何れか２つは、それらが結合している炭素原子と共に３〜６員飽和炭素環式環を形成してよく；
Ｒ１２は水素または場合によりハロゲンもしくはＣ１−Ｃ６アルコキシで置換されていてよいＣ１−Ｃ６アルキルであるか；
またはＲ１２およびＲ８、Ｒ９、Ｒ、Ｒ’、Ｒ１０またはＲ１１の何れか１つは、それらが結合している原子と一体となって４員、５員、６員または７員アザ環式環を形成でき、これは場合によりハロゲン、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６アルコキシで置換されていてよく；
ｎは０または１であり；
Ｒ１３は場合によりＣ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシまたはＮ,Ｎ−ジ−Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノで置換されていてよいＣ２−Ｃ６アルケニル；場合によりＣ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６アルコキシで置換されていてよいＣ２−Ｃ６アルキニル；または場合によりＣ１−Ｃ６アルキルで置換されていてよいＣ２−Ｃ６アルキレニルオキシドである。〕
の化合物またはその薬学的に許容される塩である。
【０６５９】
ある実施態様において、式ＩのＢＴＫ阻害剤はＮ−(３−(５−((１−アクリロイルアゼチジン−３−イル)オキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；(Ｅ)−Ｎ−(３−(６−アミノ−５−((１−(ブト−２−エノイル)アゼチジン−３−イル)オキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−(３−(６−アミノ−５−((１−プロピオロイルアゼチジン−３−イル)オキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−(３−(６−アミノ−５−((１−(ブト−２−イノイル)アゼチジン−３−イル)オキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−(３−(５−((１−アクリロイルピペリジン−４−イル)オキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−(３−(６−アミノ−５−(２−(Ｎ−メチルアクリルアミド)エトキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；(Ｅ)−Ｎ−(３−(６−アミノ−５−(２−(Ｎ−メチルブト−２−エンアミド)エトキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−(３−(６−アミノ−５−(２−(Ｎ−メチルプロピオールアミド)エトキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；(Ｅ)−Ｎ−(３−(６−アミノ−５−(２−(４−メトキシ−Ｎ−メチルブト−２−エンアミド)エトキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−(３−(６−アミノ−５−(２−(Ｎ−メチルブト−２−インアミド)エトキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−(２−((４−アミノ−６−(３−(４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)ピリミジン−５−イル)オキシ)エチル)−Ｎ−メチルオキシラン−２−カルボキサミド；Ｎ−(２−((４−アミノ−６−(３−(６−シクロプロピル−８−フルオロ−１−オキソイソキノリン−２(１Ｈ)−イル)フェニル)ピリミジン−５−イル)オキシ)エチル)−Ｎ−メチルアクリルアミド；Ｎ−(３−(５−(２−アクリルアミドエトキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−(３−(６−アミノ−５−(２−(Ｎ−エチルアクリルアミド)エトキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−(３−(６−アミノ−５−(２−(Ｎ−(２−フルオロエチル)アクリルアミド)エトキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−(３−(５−((１−アクリルアミドシクロプロピル)メトキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；(Ｓ)−Ｎ−(３−(５−(２−アクリルアミドプロポキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；(Ｓ)−Ｎ−(３−(６−アミノ−５−(２−(ブト−２−インアミド)プロポキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；(Ｓ)−Ｎ−(３−(６−アミノ−５−(２−(Ｎ−メチルアクリルアミド)プロポキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；(Ｓ)−Ｎ−(３−(６−アミノ−５−(２−(Ｎ−メチルブト−２−インアミド)プロポキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−(３−(６−アミノ−５−(３−(Ｎ−メチルアクリルアミド)プロポキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；(Ｓ)−Ｎ−(３−(５−((１−アクリロイルピロリジン−２−イル)メトキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；(Ｓ)−Ｎ−(３−(６−アミノ−５−((１−(ブト−２−イノイル)ピロリジン−２−イル)メトキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；(Ｓ)−２−(３−(５−((１−アクリロイルピロリジン−２−イル)メトキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−(ヒドロキシメチル)フェニル)−６−シクロプロピル−３,４−ジヒドロイソキノリン−１(２Ｈ)−オン；Ｎ−(２−((４−アミノ−６−(３−(６−シクロプロピル−１−オキソ−３,４−ジヒドロイソキノリン−２(１Ｈ)−イル)−５−フルオロ−２−(ヒドロキシメチル)フェニル)ピリミジン−５−イル)オキシ)エチル)−Ｎ−メチルアクリルアミド；Ｎ−(３−(５−(((２Ｓ,４Ｒ)−１−アクリロイル−４−メトキシピロリジン−２−イル)メトキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−(３−(６−アミノ−５−(((２Ｓ,４Ｒ)−１−(ブト−２−イノイル)−４−メトキシピロリジン−２−イル)メトキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；２−(３−(５−(((２Ｓ,４Ｒ)−１−アクリロイル−４−メトキシピロリジン−２−イル)メトキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−(ヒドロキシメチル)フェニル)−６−シクロプロピル−３,４−ジヒドロイソキノリン−１(２Ｈ)−オン；Ｎ−(３−(５−(((２Ｓ,４Ｓ)−１−アクリロイル−４−メトキシピロリジン−２−イル)メトキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−(３−(６−アミノ−５−(((２Ｓ,４Ｓ)−１−(ブト−２−イノイル)−４−メトキシピロリジン−２−イル)メトキシ)ピリミジ��−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−(３−(５−(((２Ｓ,４Ｒ)−１−アクリロイル−４−フルオロピロリジン−２−イル)メトキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−(３−(６−アミノ−５−(((２Ｓ,４Ｒ)−１−(ブト−２−イノイル)−４−フルオロピロリジン−２−イル)メトキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；(Ｓ)−Ｎ−(３−(５−((１−アクリロイルアゼチジン−２−イル)メトキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；(Ｓ)−Ｎ−(３−(６−アミノ−５−((１−プロピオロイルアゼチジン−２−イル)メトキシ)ピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；(Ｓ)−２−(３−(５−((１−アクリロイルアゼチジン−２−イル)メトキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−(ヒドロキシメチル)フェニル)−６−シクロプロピル−３,４−ジヒドロイソキノリン−１(２Ｈ)−オン；(Ｒ)−Ｎ−(３−(５−((１−アクリロイルアゼチジン−２−イル)メトキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；(Ｒ)−Ｎ−(３−(５−((１−アクリロイルピペリジン−３−イル)メトキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−(３−(５−(((２Ｒ,３Ｓ)−１−アクリロイル−３−メトキシピロリジン−２−イル)メトキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；Ｎ−(３−(５−(((２Ｓ,４Ｒ)−１−アクリロイル−４−シアノピロリジン−２−イル)メトキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミド；またはＮ−(３−(５−(((２Ｓ,４Ｓ)−１−アクリロイル−４−シアノピロリジン−２−イル)メトキシ)−６−アミノピリミジン−４−イル)−５−フルオロ−２−メチルフェニル)−４−シクロプロピル−２−フルオロベンズアミドから選択される。
【０６６０】
特に断らない限り、式ＩのＢＴＫ阻害剤の記載において上に使用する化学用語は、引用によりその全体を本明細書に包含させる国際出願ＷＯ／２０１５／０７９４１７号に示す意味に従い使用される。
【０６６１】
ある実施態様において、キナーゼ阻害剤は、テムシロリムス；リダフォロリムス(１Ｒ,２Ｒ,４Ｓ)−４−[(２Ｒ)−２−[(１Ｒ,９Ｓ,１２Ｓ,１５Ｒ,１６Ｅ,１８Ｒ,１９Ｒ,２１Ｒ、２３Ｓ,２４Ｅ,２６Ｅ,２８Ｚ,３０Ｓ,３２Ｓ,３５Ｒ)−１,１８−ジヒドロキシ−１９,３０−ジメトキシ−１５,１７,２１,２３、２９,３５−ヘキサメチル−２,３,１０,１４,２０−ペンタオキソ−１１,３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ[３０.３.１.０４,９]ヘキサトリアコンタ−１６,２４,２６,２８−テトラエン−１２−イル]プロピル]−２−メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート、別名ＡＰ２３５７３およびＭＫ８６６９；エベロリムス(ＲＡＤ００１)；ラパマイシン(ＡＹ２２９８９)；セマピモド；(５−{２,４−ビス[(３Ｓ)−３−メチルモルホリン−４−イル]ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−７−イル}−２−メトキシフェニル)メタノール(ＡＺＤ８０５５)；２−アミノ−８−[ｔｒａｎｓ−４−(２−ヒドロキシエトキシ)シクロヘキシル]−６−(６−メトキシ−３−ピリジニル)−４−メチル−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−７(８Ｈ)−オン(PF04691502)；およびＮ２−[１,４−ジオキソ−４−[[４−(４−オキソ−８−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−２−イル)モルホリニウム−４−イル]メトキシ]ブチル]−Ｌ−アルギニルグリシル−Ｌ−α−アスパルチルＬ−セリン−(配列番号２６４)、分子内塩(ＳＦ１１２６)；およびＸＬ７６５から選択されるｍＴＯＲ阻害剤である。
【０６６２】
ある実施態様において、キナーゼ阻害剤はｍＴＯＲ阻害剤、例えば、ラパマイシンであり、ラパマイシンを、約３mg、４mg、５mg、６mg、７mg、８mg、９mg、１０mg(例えば、６mg)の用量で、連日、一定期間、例えば、２１日サイクルで連日または２８日サイクルで連日投与する。ある実施態様において、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはそれ以上のサイクルのラパマイシンが投与される。ある実施態様において、キナーゼ阻害剤はｍＴＯＲ阻害剤、例えば、エベロリムスであり、エベロリムスを、約２mg、２.５mg、３mg、４mg、５mg、６mg、７mg、８mg、９mg、１０mg、１１mg、１２mg、１３mg、１４mg、１５mg(例えば、１０mg)の用量で、一定期間連日、例えば、２８日サイクルで連日投与する。ある実施態様において、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはそれ以上のサイクルのエベロリムスが投与される。
【０６６３】
ある実施態様において、キナーゼ阻害剤はＣＧＰ０５２０８８；４−アミノ−３−(ｐ−フルオロフェニルアミノ)−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン(ＣＧＰ５７３８０)；セルコスポラミド；ＥＴＣ−１７８０４４５−２；および４−アミノ−５−(４−フルオロアニリノ)−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジンから選択されるＭＮＫ阻害剤である。
【０６６４】
ある実施態様において、キナーゼ阻害剤は、２−アミノ−８−[ｔｒａｎｓ−４−(２−ヒドロキシエトキシ)シクロヘキシル]−６−(６−メトキシ−３−ピリジニル)−４−メチル−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−７(８Ｈ)−オン(ＰＦ−０４６９１５０２)；Ｎ−[４−[[４−(ジメチルアミノ)−１−ピペリジニル]カルボニル]フェニル]−Ｎ’−[４−(４,６−ジ−４−モルホリニル−１,３,５−トリアジン−２−イル)フェニル]尿素(ＰＦ−０５２１２３８４、ＰＫＩ−５８７)；２−メチル−２−{４−[３−メチル−２−オキソ−８−(キノリン−３−イル)−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｃ]キノリン−１−イル]フェニル}プロパンニトリル(ＢＥＺ−２３５)；アピトリシブ(ＧＤＣ−０９８０、ＲＧ７４２２)；２,４−ジフルオロ−Ｎ−{２−(メチルオキシ)−５−[４−(４−ピリダジニル)−６−キノリニル]−３−ピリジニル}ベンゼンスルホンアミド(ＧＳＫ２１２６４５８)；８−(６−メトキシピリジン−３−イル)−３−メチル−１−(４−(ピペラジン−１−イル)−３−(トリフルオロメチル)フェニル)−１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｃ]キノリン−２(３Ｈ)−オンマレイン酸(ＮＶＰ−ＢＧＴ２２６)；３−[４−(４−モルホリニルピリド[３’,２’：４,５]フロ[３,２−ｄ]ピリミジン−２−イル]フェノール(ＰＩ−１０３)；５−(９−イソプロピル−８−メチル−２−モルホリノ−９Ｈ−プリン−６−イル)ピリミジン−２−アミン(ＶＳ−５５８４、ＳＢ２３４３)；およびＮ−[２−[(３,５−ジメトキシフェニル)アミノ]キノキサリン−３−イル]−４−[(４−メチル−３−メトキシフェニル)カルボニル]アミノフェニルスルホンアミド(ＸＬ７６５)から選択されるデュアルホスファチジルイノシトール３−キナーゼ(ＰＩ３Ｋ)およびｍＴＯＲ阻害剤である。
【０６６５】
ある実施態様において、キナーゼ阻害剤はｍＴＯＲ阻害剤、例えば、ラパマイシンであり、ラパマイシンを約３mg、４mg、５mg、６mg、７mg、８mg、９mg、１０mg(例えば、６mg)の用量で、連日、一定期間、例えば、２１日サイクルで連日または２８日サイクルで連日投与する。ある実施態様において、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはそれ以上のサイクルのラパマイシンが投与される。ある実施態様において、キナーゼ阻害剤はｍＴＯＲ阻害剤、例えば、エベロリムスであり、エベロリムスを約２mg、２.５mg、３mg、４mg、５mg、６mg、７mg、８mg、９mg、１０mg、１１mg、１２mg、１３mg、１４mg、１５mg(例えば、１０mg)の用量で、一定期間連日、例えば、２８日サイクルで連日投与する。ある実施態様において、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはそれ以上のサイクルのエベロリムスが投与される。
【０６６６】
ある実施態様において、キナーゼ阻害剤は、ＣＧＰ０５２０８８；４−アミノ−３−(ｐ−フルオロフェニルアミノ)−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジン(ＣＧＰ５７３８０)；セルコスポラミド；ＥＴＣ−１７８０４４５−２；および４−アミノ−５−(４−フルオロアニリノ)−ピラゾロ[３,４−ｄ]ピリミジンから選択されるＭＮＫ阻害剤である。
【０６６７】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にホスホイノシチド３−キナーゼ(ＰＩ３Ｋ)阻害剤(例えば、ここに記載するＰＩ３Ｋ阻害剤、例えば、イデラリシブまたはドゥベリシブ)および／またはリツキシマブと組み合わせて投与する。ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にイデラリシブおよびリツキシマブと組み合わせて投与する。ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にドゥベリシブおよびリツキシマブと組み合わせて投与する。イデラリシブ(別名ＧＳ−１１０１またはＣＡＬ−１０１; Gilead)は、ＰＩ３Ｋのデルタアイソフォームを遮断する小分子である。イデラリシブ(５−フルオロ−３−フェニル−２−[(１Ｓ)−１−(７Ｈ−プリン−６−イルアミノ)プロピル]−４(３Ｈ)−キナゾリノン)の構造を下に示す。
【化５】
2019513347.tif 000098
【０６６８】
ドゥベリシブ(別名ＩＰＩ−１４５; Infinity PharmaceuticalsおよびAbbvie)は、ＰＩ３Ｋ−δ,γを遮断する小分子である。ドゥベリシブ(８−クロロ−２−フェニル−３−[(１Ｓ)−１−(９Ｈ−プリン−６−イルアミノ)エチル]−１(２Ｈ)−イソキノリノン)の構造を下に示す。
【化６】
2019513347.tif 000099
【０６６９】
ある実施態様において、対象は、ＣＬＬを有する。ある実施態様において、対象は再発性ＣＬＬを有し、例えば、対象は、先に癌治療を投与されている(例えば、抗ＣＤ２０抗体を先に投与されているまたはイブルチニブを先に投与されている)。例えば、対象は、染色体１７の短アームにおける欠失(例えば、白血病細胞における、ｄｅｌ(１７ｐ))を有する。他の例として、対象はｄｅｌ(１７ｐ)を有しない。ある実施態様において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域(ＩｇＶＨ)遺伝子における変異を含む白血病細胞を含む。他の実施態様において、対象は、免疫グロブリン重鎖可変領域(ＩｇＶＨ)遺伝子における変異を含む白血病細胞を含まない。ある実施態様において、対象は、染色体１１の長アームにおける欠失(ｄｅｌ(１１ｑ))を有する。他の実施態様において、対象はｄｅｌ(１１ｑ)を有しない。ある実施態様において、イデラリシブを、約１００〜４００mg(例えば、１００〜１２５mg、１２５〜１５０mg、１５０〜１７５mg、１７５〜２００mg、２００〜２２５mg、２２５〜２５０mg、２５０〜２７５mg、２７５〜３００mg、３２５〜３５０mg、３５０〜３７５mgまたは３７５〜４００mg)の用量で、例えば、ＢＩＤで投与する。ある実施態様において、ドゥベリシブを、約１５〜１００mg(例えば、約１５〜２５mg、２５〜５０mg、５０〜７５mgまたは７５〜１００mg)の用量で、例えば、１日２回投与する。ある実施態様において、リツキシマブを、約３５０〜５５０mg／ｍ２(例えば、３５０〜３７５mg／ｍ２、３７５〜４００mg／ｍ２、４００〜４２５mg／ｍ２、４２５〜４５０mg／ｍ２、４５０〜４７５mg／ｍ２または４７５〜５００mg／ｍ２)の用量で、例えば、静脈内投与する。
【０６７０】
ある実施態様において、キナーゼ阻害剤は、２−アミノ−８−[ｔｒａｎｓ−４−(２−ヒドロキシエトキシ)シクロヘキシル]−６−(６−メトキシ−３−ピリジニル)−４−メチル−ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−７(８Ｈ)−オン(ＰＦ−０４６９１５０２)；Ｎ−[４−[[４−(ジメチルアミノ)−１−ピペリジニル]カルボニル]フェニル]−Ｎ’−[４−(４,６−ジ−４−モルホリニル−１,３,５−トリアジン−２−イル)フェニル]尿素(ＰＦ−０５２１２３８４、ＰＫＩ−５８７)；２−メチル−２−{４−[３−メチル−２−オキソ−８−(キノリン−３−イル)−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｃ]キノリン−１−イル]フェニル}プロパンニトリル(ＢＥＺ−２３５)；アピトリシブ(ＧＤＣ−０９８０、ＲＧ７４２２)；２,４−ジフルオロ−Ｎ−{２−(メチルオキシ)−５−[４−(４−ピリダジニル)−６−キノリニル]−３−ピリジニル}ベンゼンスルホンアミド(ＧＳＫ２１２６４５８)；８−(６−メトキシピリジン−３−イル)−３−メチル−１−(４−(ピペラジン−１−イル)−３−(トリフルオロメチル)フェニル)−１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｃ]キノリン−２(３Ｈ)−オンマレイン酸(ＮＶＰ−ＢＧＴ２２６)；３−[４−(４−モルホリニルピリド[３’,２’：４,５]フロ[３,２−ｄ]ピリミジン−２−イル]フェノール(ＰＩ−１０３)；５−(９−イソプロピル−８−メチル−２−モルホリノ−９Ｈ−プリン−６−イル)ピリミジン−２−アミン(ＶＳ−５５８４、ＳＢ２３４３)；およびＮ−[２−[(３,５−ジメトキシフェニル)アミノ]キノキサリン−３−イル]−４−[(４−メチル−３−メトキシフェニル)カルボニル]アミノフェニルスルホンアミド(ＸＬ７６５)から選択されるデュアルホスファチジルイノシトール３−キナーゼ(ＰＩ３Ｋ)およびｍＴＯＲ阻害剤である。
【０６７１】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象に未分化リンパ腫キナーゼ(ＡＬＫ)阻害剤と組み合わせて投与する。ＡＬＫキナーゼ阻害剤の例は、クリゾチニブ(Pfizer)、セリチニブ(Novartis)、アレクチニブ(中外)、ブリガチニブ(別名ＡＰ２６１１３; Ariad)、エントレクチニブ(Ignyta)、ＰＦ−０６４６３９２２(Pfizer)、ＴＳＲ−０１１(Tesaro)(例えば、Clinical Trials Identifier No. NCT02048488参照)、ＣＥＰ−３７４４０(Teva)およびＸ−３９６(Xcovery)を含むが、これらに限定されない。ある実施態様において、対象は、固形癌、例えば、ここに記載する固形癌、例えば、肺癌を有する。
【０６７２】
クリゾチニブの化学名は３−[(１Ｒ)−１−(２,６−ジクロロ−３−フルオロフェニル)エトキシ]−５−(１−ピペリジン−４−イルピラゾール−４−イル)ピリジン−２−アミンである。セリチニブの化学名は５−クロロ−Ｎ２−[２−イソプロポキシ−５−メチル−４−(４−ピペリジニル)フェニル]−Ｎ４−[２−(イソプロピルスルホニル)フェニル]−２,４−ピリミジンジアミンである。アレクチニブの化学名は９−エチル−６,６−ジメチル−８−(４−モルホリノピペリジン−１−イル)−１１−オキソ−６,１１−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ[ｂ]カルバゾールｅ−３−カルボニトリルである。ブリガチニブの化学名は５−クロロ−Ｎ２−{４−[４−(ジメチルアミノ)−１−ピペリジニル]−２−メトキシフェニル}−Ｎ４−[２−(ジメチルホスホリル)フェニル]−２,４−ピリミジンジアミンである。エントレクチニブの化学名はＮ−(５−(３,５−ジフルオロベンジル)−１Ｈ−インダゾール−３−イル)−４−(４−メチルピペラジン−１−イル)−２−((テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル)アミノ)ベンズアミドである。ＰＦ−０６４６３９２２の化学名は(１０Ｒ)−７−アミノ−１２−フルオロ−２,１０,１６−トリメチル−１５−オキソ−１０,１５,１６,１７−テトラヒドロ−２Ｈ−８,４−(メテノ)ピラゾロ[４,３−ｈ][２,５,１１]−ベンズオキサジアザシクロテトラデシン−３−カルボニトリルである。ＣＥＰ−３７４４０の化学名は(Ｓ)−２−((５−クロロ−２−((６−(４−(２−ヒドロキシエチル)ピペラジン−１−イル)−１−メトキシ−６,７,８,９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ[７]アヌレン−２−イル)アミノ)ピリミジン−４−イル)アミノ)−Ｎ−メチルベンズアミドである。Ｘ−３９６の化学名は(Ｒ)−６−アミノ−５−(１−(２,６−ジクロロ−３−フルオロフェニル)エトキシ)−Ｎ−(４−(４−メチルピペラジン−１−カルボニル)フェニル)ピリダジン−３−カルボキサミドである。
【０６７３】
カルシウム依存性ホスファターゼカルシニューリン(シクロスポリンおよびＦＫ５０６)を阻害するまたは増殖因子誘発シグナル伝達に重要なｐ７０Ｓ６キナーゼを阻害する薬物(ラパマイシン)(Liu et al., Cell 66:807-815, 1991; Henderson et al., Immun. 73:316-321, 1991; Bierer et al., Curr. Opin. Immun. 5:763-773, 1993)も使用され得る。さらなる態様において、本発明の細胞組成物を、骨髄移植、フルダラビンなどの化学療法剤を使用するＴ細胞除去療法、体外照射療法(ＸＲＴ)、シクロホスファミドおよび／またはＯＫＴ３またはキャンパスなどの抗体と組み合わせて(例えば、前に、同時にまたは後に)患者に投与し得る。ある態様において、本発明の細胞組成物を、ＣＤ２０と反応する薬剤、例えば、リツキサンなどのＢ細胞除去治療後、投与する。例えば、ある実施態様において、対象は、高用量化学療法と続く末梢血幹細胞移植の標準処置に付され得る。ある実施態様において、移植後、対象は、本発明の拡大免疫細胞の注入を受ける。さらなる実施態様において、拡大細胞を、手術前または後に投与する。
【０６７４】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にインドールアミン２,３−ジオキシゲナーゼ(ＩＤＯ)阻害剤と組み合わせて投与する。ＩＤＯは、アミノ酸、Ｌ−トリプトファンのキヌレニンへの分解を触媒する酵素である。多くの癌、例えば、前立腺、結腸直腸、膵臓、子宮頸、胃、卵巣、頭部および肺癌はＩＤＯを過発現する。ｐＤＣ、マクロファージおよび樹状細胞(ＤＣｓ)はＩＤＯを発現できる。理論に拘束されないが、Ｌ−トリプトファン減少(例えば、ＩＤＯによる触媒)は、Ｔ細胞アネルギーおよびアポトーシス誘発により免疫抑制性環境をもたらすと考えられる。それ故に、理論に拘束されないが、ＩＤＯ阻害剤は、例えば、ＣＡＲ発現免疫細胞の抑制または死滅の減少により、ここに記載するＣＡＲ発現細胞の有効性を増強すると考えられる。ある実施態様において、対象は、固形腫瘍、例えば、ここに記載する固形腫瘍、例えば、前立腺、結腸直腸、膵臓、子宮頸部、胃、卵巣、頭部または肺癌を有する。ＩＤＯ阻害剤の例は、１−メチル−トリプトファン、インドキシモド(NewLink Genetics)(例えば、Clinical Trials Identifier Nos. NCT01191216; NCT01792050参照)およびＩＮＣＢ０２４３６０(Incyte Corp.)(例えば、Clinical Trials Identifier Nos. NCT01604889; NCT01685255参照)を含むが、これらに限定されない。
【０６７５】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象に骨髄由来サプレッサー細胞(ＭＤＳＣ)のモジュレーターと組み合わせて投与する。ＭＤＳＣは、末梢および多くの固形腫瘍の腫瘍部位に蓄積する。これらの細胞はＴ細胞応答を抑制し、それによりＣＡＲ発現細胞療法の有効性を妨害する。理論に拘束されないが、ＭＤＳＣモジュレーターの投与は、ここに記載するＣＡＲ発現細胞の有効性を増強すると考えられる。ある実施態様において、対象は、固形腫瘍、例えば、ここに記載する固形腫瘍、例えば、神経膠芽腫を有する。ＭＤＳＣのモジュレーターの例は、ＭＣＳ１１０およびＢＬＺ９４５を含むが、これらに限定されない。ＭＣＳ１１０は、マクロファージコロニー刺激因子(Ｍ−ＣＳＦ)に対するモノクローナル抗体(ｍＡｂ)である。例えば、Clinical Trials Identifier No. NCT00757757参照。ＢＬＺ９４５は、コロニー刺激因子１受容体(ＣＳＦ１Ｒ)の小分子阻害剤である。例えば、Pyonteck et al. Nat. Med. 19(2013):1264-72参照。ＢＬＺ９４５の構造を下に示す。
【化７】
2019513347.tif 000100
【０６７６】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象に免疫抑制性形質細胞の活性を阻害または低減する薬剤と組み合わせて投与する。免疫抑制性形質細胞は、オキサリプラチンなどのＴ細胞依存性免疫原性化学療法を妨害することが示されている(Shalapour et al., Nature 2015, 521:94-101)。ある実施態様において、免疫抑制性形質細胞は、ＩｇＡ、インターロイキン(ＩＬ)−１０およびＰＤ−Ｌ１の１以上を発現できる。ある実施態様において、薬剤はＣＤ１９  ＣＡＲ発現細胞またはＢＣＭＡ  ＣＡＲ発現細胞である。
【０６７７】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、対象にインターロイキン−１５(ＩＬ−１５)ポリペプチド、インターロイキン−１５受容体アルファ(ＩＬ−１５Ｒａ)ポリペプチドまたはＩＬ−１５ポリペプチドとＩＬ−１５Ｒａポリペプチド両方の組み合わせ例えば、ｈｅｔＩＬ−１５(Admune Therapeutics, LLC)と組み合わせて投与する。ｈｅｔＩＬ−１５は、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒａのヘテロ二量体非共有複合体である。ｈｅｔＩＬ−１５は、例えば、引用により本明細書に包含させる、米国８,１２４,０８４号、米国２０１２／０１７７５９８号、米国２００９／００８２２９９号、米国２０１２／０１４１４１３号および米国２０１１／００８１３１１号に記載される。ある実施態様において、ｈｅｔ−ＩＬ−１５は皮下投与される。ある実施態様において、対象は、癌、例えば、固形癌、例えば、黒色腫または結腸癌を有する。ある実施態様において、対象は、転移癌を有する。
【０６７８】
ある実施態様において、ここに記載する疾患、例えば、血液学的障害、例えば、ＡＭＬまたはＭＤＳを有する対象に、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、薬剤、例えば、細胞毒性または化学療法剤、生物学的治療(例えば、抗体、例えば、モノクローナル抗体または細胞療法)または阻害剤(例えば、キナーゼ阻害剤)と組み合わせて投与する。ある実施態様において、対象に、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、細胞毒性剤、例えば、ＣＰＸ−３５１(Celator Pharmaceuticals)、シタラビン、ダウノルビシン、ボサロキシン(Sunesis Pharmaceuticals)、サパシタビン(Cyclacel Pharmaceuticals)、イダルビシンまたはミトキサントロンと組み合わせて投与する。ＣＰＸ−３５１は、５：１モル比でシタラビンおよびダウノルビシンを含むリポソーム製剤である。ある実施態様において、対象に、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、低メチル化剤、例えば、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、アザシチジンまたはデシタビンと組み合わせて投与する。ある実施態様において、対象に、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、生物学的治療、例えば、抗体または細胞療法、例えば、２２５Ａｃ−リンツズマブ(Actimab-A; Actinium Pharmaceuticals)、ＩＰＨ２１０２(Innate Pharma/Bristol Myers Squibb)、ＳＧＮ−ＣＤ３３Ａ(Seattle Genetics)またはゲムツズマブオゾガマイシン(マイロターグ；Pfizer)と組み合わせて投与する。ＳＧＮ−ＣＤ３３Ａは、抗ＣＤ３３抗体に結合したピロロベンゾジアゼピン二量体を含む抗体−薬物コンジュゲート(ＡＤＣ)である。Ａｃｔｉｍａｂ−Ａは、アクチニウムで標識された抗ＣＤ３３抗体(リンツズマブ)である。ＩＰＨ２１０２は、キラー免疫グロブリン様受容体(ＫＩＲ)を標的とするモノクローナル抗体である。ある実施態様において、対象に、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、ＦＬＴ３阻害剤、例えば、ソラフェニブ(Bayer)、ミドスタウリン(Novartis)、キザルチニブ(第一三共)、クレノラニブ(Arog Pharmaceuticals)、ＰＬＸ３３９７(第一三共)、ＡＫＮ−０２８(Akinion Pharmaceuticals)またはＡＳＰ２２１５(アステラス)と組み合わせて投与する。ある実施態様において、対象に、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、イソシトレートデヒドロゲナーゼ(ＩＤＨ)阻害剤、例えば、ＡＧ−２２１(Celgene/Agios)またはＡＧ−１２０(Agios/Celgene)と組み合わせて投与する。ある実施態様において、対象に、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、細胞周期レギュレーター、例えば、ポロ様キナーゼ１(Ｐｌｋ１)阻害剤、例えば、ボラセルチブ(Boehringer Ingelheim)；またはサイクリン依存性キナーゼ９(Ｃｄｋ９)阻害剤、例えば、アルボシジブ(Tolero Pharmaceuticals/Sanofi Aventis)と組み合わせて投与する。ある実施態様において、対象に、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、Ｂ細胞受容体シグナル伝達ネットワーク阻害剤、例えば、Ｂ細胞リンパ腫２(Ｂｃｌ−２)阻害剤、例えば、ベネトクラクス(Abbvie／Roche)；またはブルトンチロシンキナーゼ(Ｂｔｋ)阻害剤、例えば、イブルチニブ(Pharmacyclics/Johnson & Johnson Janssen Pharmaceutical)と組み合わせて投与する。ある実施態様において、対象に、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、Ｍ１アミノペプチダーゼ阻害剤、例えば、トセドスタット(CTI BioPharma/Vernalis)；ヒストンデアセチラーゼ(ＨＤＡＣ)阻害剤、例えば、プラシノスタット(MEI Pharma)；多キナーゼ��害剤、例えば、リゴセルチブ(Onconova Therapeutics/Baxter/SymBio)；またはペプチド性ＣＸＣＲ４逆アゴニスト、例えば、ＢＬ−８０４０(BioLineRx)と組み合わせて投与する。
【０６７９】
他の実施態様において、対象は、細胞の移植、例えば、同種幹細胞移植前に、本発明のＣＡＲ発現細胞または本発明の組成物の注入を受ける。好ましい実施態様において、ＣＡＲ発現細胞は、例えば、ＢＣＡ  ＣＡＲおよび／またはＴＡ  ＣＡＲをコードするｍＲＮＡのエレクトロポレーションによりＢＣＡ  ＣＡＲおよび／またはＴＡ  ＣＡＲを一過性に発現し、それにより、移植失敗を避けるために、何れかまたは両方のＣＡＲの発現がドナー幹細胞注入前に終了する。
【０６８０】
一部患者は、投与中または投与後に、本発明の化合物および／または他の抗癌剤に対するアレルギー性反応を経験するかもしれず、それ故に、アレルギー性反応のリスクを最小化するためにしばしば抗アレルギー剤が投与される。適当な抗アレルギー剤は、デキサメサゾン(例えば、デカドロン(登録商標))、ベクロメタゾン(例えば、Beclovent(登録商標))、ヒドロコルチゾン(別名コルチゾン、ヒドロコルチゾンコハク酸エステルナトリウム、ヒドロコルチゾンリン酸エステルナトリウムおよびアラ−コート(登録商標)、リン酸ヒドロコルチゾン、ソル・コーテフ(登録商標)、Hydrocort Acetate(登録商標)およびラナコート(登録商標)の商品名下販売)、プレドニゾロン(商品名Delta-Cortel(登録商標)、Orapred(登録商標)、Pediapred(登録商標)およびプレロン(登録商標)の下販売)、プレドニゾン(商品名デルタソン(登録商標)、Liquid Red(登録商標)、Meticorten(登録商標)およびオラソン(登録商標)の下販売)、メチルプレドニゾロン(別名６−メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロンコハク酸エステルナトリウム、Duralone(登録商標)、Medralone(登録商標)、メドロール(登録商標)、M-Prednisol(登録商標)およびソル・メドロール(登録商標)の商品名下販売)などのコルチコステロイド；ジフェンヒドラミン(例えば、ベナドリル(登録商標))、ヒドロキシジンおよびシプロヘプタジンなどの抗ヒスタミン剤；およびベータ−アドレナリン受容体アゴニスト、アルブテロール(例えば、Proventil(登録商標))およびテルブタリン(Brethine(登録商標))などの気管支拡張剤を含む。
【０６８１】
一部患者は、本発明の化合物および／または他の抗癌剤投与中または投与後に、悪心を経験するかもしれず、それ故に、制吐剤が悪心(胃上部)および嘔吐の予防に使用される。適当な制吐剤は、アプレピタント(Emend(登録商標))、オンダンセトロン(ゾフラン(登録商標))、グラニセトロンＨＣｌ(カイトリル(登録商標))、ロラゼパム(アチバン(登録商標)、デキサメサゾン(デカドロン(登録商標))、プロクロルペラジン(コンパジン(登録商標))、カソピタント(Rezonic(登録商標)およびZunrisa(登録商標))およびそれらの組み合わせを含む。
【０６８２】
処置期間中に経験する疼痛を軽減する医薬は、患者をより快適にするためにしばしば処方される。タイレノール(登録商標)などの一般的市販鎮痛剤がしばしば使用される。しかしながら、ヒドロコドン／パラセタモールまたはヒドロコドン／アセトアミノフェン(例えば、バイコジン(登録商標))、モルヒネ(例えば、Astramorph(登録商標)またはAvinza(登録商標))、オキシコドン(例えば、オキシコンチン(登録商標)またはパーコセット(登録商標))、塩酸オキシモルホン(Opana(登録商標))およびフェンタニル(例えば、デュラゲシク(登録商標))などのオピオイド鎮痛剤も、中程度または重度疼痛に有用である。
【０６８３】
正常細胞を処置毒性から保護し、臓器毒性を限定する努力において、細胞保護剤(例えば神経保護剤、フリーラジカルスカベンジャー、心保護剤、アントラサイクリン溢出中和剤、栄養剤など)を補助剤治療として使用し得る。適当な細胞保護剤は、アミフォスチン(Ethyol(登録商標))、グルタミン、ジメスナ(Tavocept(登録商標))、メスナ(Mesnex(登録商標))、デクスラゾキサン(Zinecard(登録商標)またはTotect(登録商標))、キサリプロデン(Xaprila(登録商標))およびロイコボリン(別名カルシウムロイコボリン、シトロボラム因子およびフォリン酸)を含む。
【０６８４】
コード番号、一般名または商品名により特定した活性化合物の構造は、“The Merck Index”の現行版またはデータベース、例えばPatents International(例えばIMS World Publications)からとり得る。
【０６８５】
本発明の化合物と組み合わせて使用され得る上記化合物は、上記文献などの文献に記載のとおりに製造および投与し得る。
【０６８６】
ある実施態様において、本発明は、少なくとも１つの本発明の化合物(例えば、本発明の化合物)またはその薬学的に許容される塩を、単独でまたは他の抗癌剤と共に、ヒトまたは動物対象への投与に適する薬学的に許容される担体と共に含む、医薬組成物を提供する。
【０６８７】
ある実施態様において、本発明は、癌などの細胞増殖性を有するヒトまたは動物対象を処置する方法を提供する。本発明は、対象に、単独でまたは他の抗癌剤と組み合わせて、本発明の化合物(例えば、本発明の化合物)またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を投与することを含む、このような処置を必要とするヒトまたは動物対象を処置する方法を提供する。
【０６８８】
特に、組成物は組み合わせ治療剤として一緒に製剤されても、別々に投与されてもよい。
【０６８９】
組み合わせ治療において、本発明の化合物および他の抗癌剤を、同時に、一緒にまたは具体的な時間制限なく逐次的に投与してよく、ここで、このような投与は、患者体内で２化合物の治療有効レベルを提供する。
【０６９０】
好ましい実施態様において、本発明の化合物および他の抗癌剤を、一般に、点滴または経口で、任意の順番で逐次的に投与する。投与レジメンは、疾患のステージ、患者の身体的適応度、個々の薬物の安全性プロファイルおよび個々の薬物の耐容性、ならびに該組み合わせを投与する処置医および医療従事者に周知の他の基準により変わり得る。本発明の化合物および他の抗癌剤を、処置に使用される特定のサイクルによって、互いに数分以内に、数時間、数日または数週離れて、投与し得る。さらに、サイクルは、一方の薬剤を処置サイクル中に他方より頻繁に、薬物の投与毎に異なる用量で、投与することを含む。
【０６９１】
本発明の他の態様において、１以上の本発明の化合物およびここに開示する組み合わせパートナーを含むキットが提供される。代表的キットは、(ａ)本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩、(ｂ)例えば、上記の、少なくとも１個の組み合わせパートナーを含み、ここで、このようなキットは、投与のための指示を含む添付文書または他のラベルを含み得る。
【０６９２】
本発明の化合物はまた既知治療法、例えば、ホルモン投与または特に放射線と組み合わせても有利に使用し得る。本発明の化合物は、特に放射線増感剤として、特に放射線療法に低感受性の腫瘍の処置に使用され得る。
【０６９３】
ある実施態様において、対象は、ＣＡＲ発現細胞の投与と関連する副作用を軽減または改善する薬剤を投与され得る。ＣＡＲ発現細胞の投与と関連する副作用は、ＣＲＳおよび血球貪食性リンパ組織球症(ＨＬＨ)、別名マクロファージ活性化症候群(ＭＡＳ)を含むが、これらに限定されない。ＣＲＳの症状は、高熱、悪心、一過性低血圧、低酸素症などを含む。ＣＲＳは、発熱、疲労、摂食障害、筋肉痛、関節痛(arthalgias)、悪心、嘔吐および頭痛などの臨床的体質性徴候および症状を含み得る。ＣＲＳは、発疹などの臨床的皮膚徴候および症状を含み得る。ＣＲＳは、悪心、嘔吐および下痢などの臨床的消化器徴候および症状を含み得る。ＣＲＳは、頻呼吸および低酸素血症などの臨床的呼吸器徴候および症状を含み得る。ＣＲＳは、頻脈、脈圧上昇、低血圧、心拍出量増加(初期)および潜在的心拍出量減少(後期)などの臨床的心血管徴候および症状を含み得る。ＣＲＳは、ｄ−二量体増加、出血を伴うまたは伴わない低フィブリノーゲン血症などの臨床的凝固徴候および症状を含み得る。ＣＲＳは、高窒素血症などの臨床的腎臓徴候および症状を含み得る。ＣＲＳは、高トランスアミナーゼ血症および高ビリルビン血症などの臨床的肝臓徴候および症状を含み得る。ＣＲＳは、頭痛、精神状態変化、混乱、譫妄、喚語困難または率直な失語症、幻覚、振戦、測定異常、歩調改変および発作などの臨床的神経徴候および症状を含み得る。
【０６９４】
従って、ここに記載する方法は、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を対象に投与し、さらに１以上のＣＡＲ発現細胞での処置に起因する可溶性因子のレベル上昇を管理する薬剤を投与することを含み得る。ある実施態様において、対象において上昇する可溶性因子は、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２およびＩＬ−６の１以上である。ある実施態様において、対象において上昇する因子は、ＩＬ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＩＬ−５およびフラクタルカインの１以上である。それ故に、この副作用を処置するために投与される薬剤は、これらの可溶性因子の１以上を中和する薬剤であり得る。ある実施態様において、これらの可溶性形態の１以上を中和する薬剤は、抗体またはその抗原結合フラグメントである。このような薬剤の例は、ステロイド(例えば、コルチコステロイド)、ＴＮＦ−α阻害剤およびＩＬ−６阻害剤を含むが、これらに限定されない。ＴＮＦ−α阻害剤の例は、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴールおよびゴリムマブなどの抗ＴＮＦ−α抗体分子である。ＴＮＦ−α阻害剤の他の例は、エタネルセプトなどの融合タンパク質である。小分子ＴＮＦ−α阻害剤は、キサンチン誘導体(例えばペントキシフィリン)およびブプロピオンを含むが、これらに限定されない。ＩＬ−６阻害剤の例は、トシリズマブ(ｔｏｃ)、サリルマブ、elsilimomab、ＣＮＴＯ  ３２８、ＡＬＤ５１８／ＢＭＳ−９４５４２９、ＣＮＴＯ  １３６、ＣＰＳＩ−２３６４、ＣＤＰ６０３８、ＶＸ３０、ＡＲＧＸ−１０９、ＦＥ３０１およびＦＭ１０１などの抗ＩＬ−６抗体分子を含むが、これらに限定されない。ある実施態様において、抗ＩＬ−６抗体分子は、トシリズマブである。ＩＬ−１Ｒベースの阻害剤の例はアナキンラである。
【０６９５】
ある実施態様において、対象は、例えば、とりわけ、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾンなどのコルチコステロイドを投与される。
【０６９６】
ある実施態様において、対象は、例えば、ノルエピネフリン、ドーパミン、フェニレフリン、エピネフリン、バソプレシンまたはそれらの組み合わせなどの昇圧剤を投与される。
【０６９７】
ある実施態様において、対象は、解熱剤が投与され得る。ある実施態様において、対象は、鎮痛剤が投与され得る。
【０６９８】
ある実施態様において、対象は、ＣＡＲ発現細胞の活性または適応度を増強する薬剤が投与され得る。例えば、ある実施態様において、薬剤は、Ｔ細胞機能を調節または制御、例えば、阻害する分子を阻害する薬剤であり得る。ある実施態様において、Ｔ細胞機能を調節または制御する分子は、阻害性分子である。阻害性分子、例えば、ＰＤ−１は、ある実施態様において、ＣＡＲ発現細胞が免疫エフェクター応答を開始する能力を低減し得る。阻害性分子の例は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ(例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５)、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ３(ＣＤ２７６)、Ｂ７−Ｈ４(ＶＴＣＮ１)、ＨＶＥＭ(ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０)、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスII、ＧＡＬ９、アデノシンおよびＴＧＦベータを含む。例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質レベルでの阻害による、Ｔ細胞機能を調節または制御、例えば、阻害する分子阻害は、ＣＡＲ発現細胞性能を最適化し得る。ある実施態様において、例えば、ここに記載の、薬剤、例えば、阻害性核酸、例えば、阻害性核酸、例えば、阻害性核酸、例えば、ｄｓＲＮＡ、例えば、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート(ＣＲＩＳＰＲ)、転写−アクティベーター様エフェクターヌクレアーゼ(ＴＡＬＥＮ)または亜鉛フィンガーエンドヌクレアーゼ(ＺＦＮ)を使用して、ＣＡＲ発現細胞における阻害性分子の発現を阻害し得る。ある実施態様において、阻害剤はｓｈＲＮＡである。
【０６９９】
ある実施態様において、Ｔ細胞機能を調節または制御、例えば、阻害する薬剤は、ＣＡＲ発現細胞内で阻害される。これらの実施態様において、Ｔ細胞機能を調節または制御、例えば、阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子を、ＣＡＲの成分、例えば、成分全てをコードする核酸に連結する。ある実施態様において、Ｔ細胞機能を調節または制御、例えば、阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、Ｔ細胞機能を調節または制御、例えば、阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子が、発現される、例えば、ＣＡＲ発現細胞内で発現されるように、プロモーター、例えば、Ｈ１−またはＵ６由来プロモーターに操作可能に結合される。例えば、Tiscornia G., “Development of Lentiviral Vectors Expressing siRNA,” Chapter 3, in Gene Transfer: Delivery and Expression of DNA and RNA (eds. Friedmann and Rossi). Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA, 2007; Brummelkamp TR, et al. (2002) Science 296: 550-553;  Miyagishi M, et al. (2002) Nat. Biotechnol. 19: 497-500参照。ある実施態様において、Ｔ細胞機能を調節または制御、例えば、阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲの成分、例えば、成分全てをコードする核酸分子を含む同じベクター、例えば、レンチウイルスベクターに存在する。このような実施態様において、Ｔ細胞機能を調節または制御、例えば、阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ベクター、例えば、レンチウイルスベクター上、ＣＡＲの成分、例えば、成分全てをコードする核酸に対して５’または３’に存在する。Ｔ細胞機能を調節または制御、例えば、阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲの成分、例えば、成分全てをコードする核酸と同じまたは異なる方向で転写される。ある実施態様において、Ｔ細胞機能を調節または制御、例えば、阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲの成分、例えば、成分全てをコードする核酸分子を含むベクター以外のベクターに存在する。ある実施態様において、Ｔ細胞機能を調節または制御、例えば、阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲ発現細胞内で一過性に発現される。ある実施態様において、Ｔ細胞機能を調節または制御、例えば、阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードする核酸分子は、ＣＡＲ発現細胞のゲノムに安定に統合される。ＣＡＲの成分、例えば、成分全てを、Ｔ細胞機能を調節または制御、例えば、阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子と発現するための例示的ベクターの配置は、例えば、引用により本明細書に包含させる、２０１４年１２月１９日出願の国際公報ＷＯ２０１５／０９０２３０号の図４７に提供される。
【０７００】
Ｔ細胞機能を調節または制御、例えば、阻害する分子がＰＤ−１である、Ｔ細胞機能を調節または制御、例えば、阻害する分子の発現阻害に有用なｄｓＲＮＡ分子ｆの例は例えば、引用によりその全体を本明細書に包含させる、２０１４年１２月１９日出願の国際公報ＷＯ２０１５／０９０２３０号のパラグラフ[００４８９]ならびに表１６および１７に記載の、ＰＤ−１を標的とするＲＮＡｉ剤を含む。
【０７０１】
ある実施態様において、Ｔ細胞機能を調節または制御、例えば、阻害する薬剤は、例えば、阻害性分子に結合する抗体または抗体フラグメントであり得る。例えば、薬剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２またはＣＴＬＡ−４に結合する抗体または抗体フラグメントであり得る(例えば、イピリムマブ(ＭＤＸ−０１０およびＭＤＸ−１０１とも称され、ヤーボイ(登録商標)として市販; Bristol-Myers Squibb；トレメリムマブ(Pfizerから入手可能なＩｇＧ２モノクローナル抗体、以前はチシリムマブ、ＣＰ−６７５,２０６として既知)。)。ある実施態様において、薬剤は、ＴＩＭ−３に結合する抗体または抗体フラグメントである。ある実施態様において、薬剤は、ＬＡＧ３に結合する抗体または抗体フラグメントである。
【０７０２】
ＰＤ−１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳおよびＢＴＬＡも含む受容体のＣＤ２８ファミリーの阻害性メンバーである。ＰＤ−１は活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞および骨髄細胞に発現される(Agata et al. 1996 Int. Immunol 8:765-75)。ＰＤ−１に対する２リガンド、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２が、ＰＤ−１への結合によりＴ細胞活性化を下方制御することが示されている(Freeman et a. 2000 J Exp Med 192:1027-34; Latchman et al. 2001 Nat Immunol 2:261-8; Carter et al. 2002 Eur J Immunol 32:634-43)。ＰＤ−Ｌ１はヒト癌で豊富である(Dong et al. 2003 J Mol Med 81:281-7; Blank et al. 2005Cancer Immunol. Immunother 54:307-314; Konishi et al. 2004 Clin Cancer Res 10:5094)。免疫抑制は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の局所相互作用の阻害により逆転され得る。ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の抗体、抗体フラグメントおよび他の阻害剤は当分野で利用可能であり、ここに記載する本発明のｃａｒｓと組み合わせて使用し得る。例えば、ニボルマブ(ＢＭＳ−９３６５５８またはＭＤＸ１１０６とも称される; Bristol-Myers Squibb)は、ＰＤ−１を特異的に遮断する完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ニボルマブ(クローン５Ｃ４)およびＰＤ−１に特異的に結合する他のヒトモノクローナル抗体は、ＵＳ８,００８,４４９号およびＷＯ２００６／１２１１６８号に開示される。ピディリズマブ(ＣＴ−０１１; Cure Tech)は、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。ピディリズマブおよび他のヒト化抗ＰＤ−１モノクローナル抗体は、ＷＯ２００９／１０１６１１号に開示される。ペンブロリズマブ(以前はランブロリズマブおよびＭＫ０３４７５とも称される; Merck)は、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗である。ペンブロリズマブおよび他のヒト化抗ＰＤ−１抗体は、ＵＳ８,３５４,５０９号およびＷＯ２００９／１１４３３５号に開示される。ＭＥＤＩ４７３６(Medimmune)は、ＰＤＬ１に結合し、該リガンドとＰＤ−１の相互作用を阻害するヒトモノクローナル抗体である。ＭＤＰＬ３２８０Ａ(Genentech／Roche)は、ＰＤ−Ｌ１に結合するヒトＦｃ最適化ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ＭＤＰＬ３２８０ＡおよびＰＤ−Ｌ１に対する他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許７,９４３,７４３および米国公開２０１２００３９９０６号に開示される。他の抗ＰＤ−Ｌ１結合剤は、ＹＷ２４３.５５.Ｓ７０(重鎖および軽鎖可変領域は、ＷＯ２０１０／０７７６３４号の配列番号２０および２１に示される)およびＭＤＸ−１１０５(ＢＭＳ−９３６５５９とも称され、例えば、ＷＯ２００７／００５８７４号に開示の抗ＰＤ−Ｌ１結合剤)を含む。ＡＭＰ−２２４(Ｂ７−ＤＣＩｇ；Amplimmune；例えば、ＷＯ２０１０／０２７８２７号およびＷＯ２０１１／０６６３４２号に開示)は、ＰＤ−１とＢ７−Ｈ１の相互作用を遮断するＰＤ−Ｌ２  Ｆｃ融合可溶性受容体である。他の抗ＰＤ−１抗体は、数ある中で、ＡＭＰ  ５１４(Amplimmune)、例えば、ＵＳ８,６０９,０８９号、ＵＳ２０１００２８３３０号および／またはＵＳ２０１２０１１４６４９号に開示の抗ＰＤ−１抗体を含む。
【０７０３】
ある実施態様において、抗ＰＤ−１抗体またはそのフラグメントは、引用によりその全体を本明細書に包含させる、“ＰＤ−１に対する抗体分子およびその使用”なる表題の、ＵＳ２０１５／０２１０７６９号に記載の抗ＰＤ−１抗体分子である。ある実施態様において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ａ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｂ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｃ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−ＤまたはＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｅの何れかから選択された抗体からの重鎖および軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、３、４、５または６ＣＤＲ(または集合的にＣＤＲ全て)；またはＵＳ２０１５／０２１０７６９号の表１に記載のとおりまたは表１におけるヌクレオチド配列によりコードされるまたは前記配列の何れかと実質的に同一(例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一)である配列；または密接に関連するＣＤＲ、例えば、同一であるかまたは少なくとも１アミノ酸改変を含むが、改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換)が２、３または４を超えないＣＤＲを含む。
【０７０４】
さらに他の実施態様において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ここに記載する抗体、例えば、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ａ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｂ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｃ、ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−ＤまたはＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｅの何れかから選択される抗体からの少なくとも１、２、３または４可変領域；またはＵＳ２０１５／０２１０７６９号の表１に記載のとおりまたは表１におけるヌクレオチド配列によりコードされる；または前記配列の何れかと実質的に同一(例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一)である配列を含む。
【０７０５】
ＴＩＭ−３(Ｔ細胞免疫グロブリン−３)はまた、特にＩＦＮ−ｇ分泌ＣＤ４＋  Ｔヘルパー１およびＣＤ８＋  Ｔ細胞毒性１細胞において、Ｔ細胞機能を負に制御し、Ｔ細胞消耗に役割を有する。ＴＩＭ−３とそのリガンド、例えば、ガレクチン−９(Ｇａｌ９)、ホスファチジルセリン(ＰＳ)およびＨＭＧＢ１の相互作用の阻害は、免疫応答を増加させ得る。ＴＩＭ−３およびそのリガンドの抗体、抗体フラグメントおよび他の阻害剤は、当分野れ利用可能であり、ここに記載するＣＤ１９  ＣＡＲと組み合わせて使用し得る。例えば、ＴＩＭ−３を標的とする抗体、抗体フラグメント、小分子またはペプチド阻害剤は、ＴＩＭ−３のＩｇＶドメインに結合し、そのリガンドとの相互作用を阻害する。ＴＩＭ−３を阻害する抗体およびペプチドは、ＷＯ２０１３／００６４９０号およびＵＳ２０１００２４７５２１号に開示される。他の抗ＴＩＭ−３抗体は、ＲＭＴ３−２３のヒト化バージョン(Ngiow et al., 2011, Cancer Res, 71:3540-3551に開示)およびクローン８Ｂ.２Ｃ１２(Monney et al., 2002, Nature, 415:536-541に開示)を含む。ＴＩＭ−３およびＰＤ−１を阻害する二特異的抗体は、ＵＳ２０１３０１５６７７４号に開示される。
【０７０６】
ある実施態様において、抗ＴＩＭ−３抗体またはそのフラグメントは、引用によりその全体を本明細書に包含させる、“ＴＩＭ−３に対する抗体分子およびその使用”なる表題の、ＵＳ２０１５／０２１８２７４号に記載の抗ＴＩＭ−３抗体分子である。ある実施態様において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、ＡＢＴＩＭ−３、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０１、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０２、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０３、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０４、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０５、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０６、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０７、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０８、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０９、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１０、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１１、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１２、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１３、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１４、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１５、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１６、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１７、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１８、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１９、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ２０、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ２１、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ２２、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ２３の何れかから選択された抗体からの重鎖および軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、３、４、５または６ＣＤＲ(または集合的にＣＤＲ全て)；またはＵＳ２０１５／０２１８２７４号の表１〜４に記載のとおり；または表１〜４におけるヌクレオチド配列によりコードされる；または前記配列の何れかと実質的に同一(例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一)である配列または密接に関連するＣＤＲ、例えば、同一であるかまたは少なくとも１アミノ酸改変を含むが、改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換)が２、３または４を超えないＣＤＲを含む。
【０７０７】
さらに他の実施態様において、抗ＴＩＭ−３抗体分子は、ここに記載する抗体、例えば、ＡＢＴＩＭ−３、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０１、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０２、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０３、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０４、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０５、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０６、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０７、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０８、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ０９、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１０、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１１、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１２、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１３、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１４、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１５、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１６、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１７、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１８、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ１９、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ２０、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ２１、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ２２、ＡＢＴＩＭ−３−ｈｕｍ２３の何れかから選択される抗体からの少なくとも１、２、３または４可変領域；またはＵＳ２０１５／０２１８２７４号の表１〜４に記載のとおり；または表１〜４におけるヌクレオチド配列によりコードされる；または前記配列の何れかと実質的に同一(例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一)である配列を含む。
【０７０８】
他の実施態様において、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤は、ＣＥＡＣＡＭ阻害剤(例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３および／またはＣＥＡＣＡＭ−５阻害剤)である。ある実施態様において、ＣＥＡＣＡＭ阻害剤は、抗ＣＥＡＣＡＭ抗体分子である。抗ＣＥＡＣＡＭ−１抗体の例は、ＷＯ２０１０／１２５５７１号、ＷＯ２０１３／０８２３６６号ＷＯ２０１４／０５９２５１号およびＷＯ２０１４／０２２３３２号に開示され、例えば、モノクローナル抗体３４Ｂ１、２６Ｈ７および５Ｆ４；または、例えば、ＵＳ２００４／００４７８５８号、ＵＳ７,１３２,２５５号およびＷＯ９９／０５２５５２号に記載のその組み換え形態、である。他の実施態様において、抗ＣＥＡＣＡＭ抗体は、例えば、Zheng et al. PLoS One. 2010 Sep 2;5(9). pii: e12529 (DOI:10:1371/journal.pone.0021146)に記載のとおり、ＣＥＡＣＡＭ−５と結合するか、例えば、ＷＯ２０１３／０５４３３１号およびＵＳ２０１４／０２７１６１８号に記載のとおり、ＣＥＡＣＡＭ−１およびＣＥＡＣＡＭ−５と交差反応する。
【０７０９】
理論に拘束されることを意図しないが、ＣＥＡＣＡＭ−１およびＣＥＡＣＡＭ−５などの癌胎児性抗原細胞接着分子(ＣＥＡＣＡＭ)は、少なくとも一部、抗腫瘍免疫応答の阻害に介在すると考えられる(例えば、Markel et al. J Immunol. 2002 Mar 15;168(6):2803-10; Markel et al. J Immunol. 2006 Nov 1;177(9):6062-71; Markel et al. Immunology. 2009 Feb;126(2):186-200; Markel et al. Cancer Immunol Immunother. 2010 Feb;59(2):215-30; Ortenberg et al. Mol Cancer Ther. 2012 Jun;11(6):1300-10; Stern et al. J Immunol. 2005 Jun 1;174(11):6692-701; Zheng et al. PLoS One. 2010 Sep 2;5(9). pii: e12529参照)。例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１は、ＴＩＭ−３に対するヘテロ親和性リガンドであり、ＴＩＭ−３介在Ｔ細胞耐容性および消耗に役割を有すると記載されている(例えば、ＷＯ２０１４／０２２３３２号；Huang, et al. (2014) Nature doi:10.1038/nature13848参照)。ある実施態様において、ＣＥＡＣＡＭ−１とＴＩＭ−３の共遮断は、異種移植結腸直腸癌モデルで抗腫瘍免疫応答を増強することが示されている(例えば、ＷＯ２０１４／０２２３３２号；Huang, et al. (2014), supra参照)。他の実施態様において、ＣＥＡＣＡＭ−１とＰＤ−１の共遮断は、例えば、ＷＯ２０１４／０５９２５１号に記載のとおり、Ｔ細胞耐容性を減少させる。それ故に、ＣＥＡＣＡＭ阻害剤は、ここに記載する他の免疫調節剤(例えば、抗ＰＤ−１および／または抗ＴＩＭ−３阻害剤)と使用して、癌、例えば、黒色腫、肺癌(例えば、ＮＳＣＬＣ)、膀胱癌、結腸癌、卵巣癌およびここに記載する他の癌に対する免疫応答を増強し得る。
【０７１０】
ＬＡＧ３(リンパ球活性化遺伝子−３またはＣＤ２２３)は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞消耗に役割を有することが示されている、活性化Ｔ細胞およびＢ細胞に発現される細胞表面分子である。ＬＡＧ３およびそのリガンドの抗体、抗体フラグメントおよび他の阻害剤は、当分野で利用可能であり、ここに記載するＣＤ１９  ＣＡＲと組み合わせて使用し得る。例えば、ＢＭＳ−９８６０１６(Bristol-Myers Squib)は、ＬＡＧ３を標的とするモノクローナル抗体である。ＩＭＰ７０１(Immutep)は、アンタゴニストＬＡＧ３抗体であり、ＩＭＰ７３１(ImmutepおよびGlaxoSmithKline)は、枯渇性ＬＡＧ３抗体である。他のＬＡＧ３阻害剤は、ＬＡＧ３の可溶性部分とＭＨＣクラスII分子に結合し、抗原提示細胞(ＡＰＣ)を活性化するＩｇの組み換え融合タンパク質である、ＩＭＰ３２１(Immutep)である。他の抗体は、例えば、ＷＯ２０１０／０１９５７０号に開示される。
【０７１１】
ある実施態様において、抗ＬＡＧ３抗体またはそのフラグメントは、引用によりその全体を本明細書に包含させる、“ＬＡＧ３に対する抗体分子およびその使用”なる表題の、ＵＳ２０１５／０２５９４２０号に記載の抗体分子である。ある実施態様において、抗ＬＡＧ３抗体分子は、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１７、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１８、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１９、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ２０、ｈｕＢＡＰ０５０(Ｓｅｒ)(例えば、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０１−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０２−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０３−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０４−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０５−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０６−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０７−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０８−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０９−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１０−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１１−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１２−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１３−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１４−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１５−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１８−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１９−ＳｅｒまたはＢＡＰ０５０−ｈｕｍ２０−Ｓｅｒ)、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｆ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｇ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｈ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−ＩまたはＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｊの何れかから選択された抗体からの重鎖および軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、３、４、５または６ＣＤＲ(または集合的にＣＤＲ全て)；またはＵＳ２０１５／０２５９４２０号の表１に記載のとおり；または表１におけるヌクレオチド配列によりコードされる；または前記配列の何れかと実質的に同一(例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一)である配列または密接に関連するＣＤＲ、例えば、同一であるかまたは少なくとも１アミノ酸改変を含むが、改変(例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換)が２、３または４を超えないＣＤＲを含む。
【０７１２】
さらに他の実施態様において、抗ＬＡＧ３抗体分子は、ここに記載する抗体、例えば、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０１、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０２、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０３、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０４、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０５、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０６、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０７、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０８、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０９、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１０、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１１、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１２、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１３、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１４、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１５、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１６、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１７、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１８、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１９、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ２０、ｈｕＢＡＰ０５０(Ｓｅｒ)(例えば、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０１−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０２−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０３−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０４−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０５−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０６−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０７−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０８−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０９−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１０−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１１−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１２−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１３−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１４−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１５−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１８−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ１９−ＳｅｒまたはＢＡＰ０５０−ｈｕｍ２０−Ｓｅｒ)、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｆ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｇ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｈ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−ＩまたはＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｊの何れかから選択される抗体からの少なくとも１、２、３または４可変領域；またはＵＳ２０１５／０２５９４２０号の表１に記載のとおり；または表１におけるヌクレオチド配列によりコードされる；または前記配列の何れかと実質的に同一(例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一)である配列を含む。ある実施態様において、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤は、例えば、第一ドメインおよび第二ドメインを含む融合タンパク質であってよく、ここで、第一ドメインは阻害性分子またはそのフラグメントであり、第二ドメインは正のシグナルと関連するポリペプチド、例えば、ここに記載する細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドである。ある実施態様において、正のシグナルと関連するポリペプチドは、例えば、ここに記載するとおり、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＩＣＯＳの共刺激ドメイン、例えば、細胞内ＣＤ２８、ＣＤ２７および／またはＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインおよび／または、例えば、ＣＤ３ゼータの一次シグナル伝達ドメインを含み得る。ある実施態様において、融合タンパク質は、ＣＡＲを発現する同じ細胞に発現される。他の実施態様において、融合タンパク質は、本発明のＣＡＲを発現しない細胞、例えば、Ｔ細胞により発現される。
【０７１３】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤はｍｉＲ−１７−９２である。
【０７１４】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤はサイトカインである。サイトカインは、Ｔ細胞拡大、分化、生存およびホメオスタシスに関連する重要な機能を有する。ここに記載するＣＡＲ発現細胞を受けている対象に投与できるサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８およびＩＬ−２１またはそれらの組み合わせを含む。好ましい実施態様において、投与されるサイトカインはＩＬ−７、ＩＬ−１５またはＩＬ−２１またはそれらの組み合わせである。サイトカインは、１日１回または１日１回を超えて、例えば、１日２回、１日３回または１日４回投与され得る。サイトカインは、１日を超えて投与でき、例えば、サイトカインは２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間または４週間投与される。例えば、サイトカインは、７日間、１日１回投与される。
【０７１５】
ある実施態様において、サイトカインは、ＣＡＲ発現Ｔ細胞と組み合わせて投与される。サイトカインは、ＣＡＲ発現Ｔ細胞と同時にまたは一緒に、例えば、同日に投与され得る。サイトカインは、ＣＡＲ発現Ｔ細胞と同じ医薬組成物に製剤しても、別々の医薬組成物に製剤してもよい。あるいは、サイトカインをＣＡＲ発現Ｔ細胞投与からしばらくして、例えば、ＣＡＲ発現Ｔ細胞投与１日、２日、３日、４日、５日、６日または７日後投与してよい。サイトカインを１日を超えて投与する投与レジメンで投与する実施態様において、サイトカイン投与レジメンの第一日はＣＡＲ発現Ｔ細胞投与と同日でよくまたはサイトカイン投与レジメンの第一日は、ＣＡＲ発現Ｔ細胞投与１日、２日、３日、４日、５日、６日または７日後であり得る。ある実施態様において、第一日目、ＣＡＲ発現Ｔ細胞を対象に投与し、第二日目、サイトカインを、翌７日間１日１回投与する。好ましい実施態様において、ＣＡＲ発現Ｔ細胞と組み合わせて投与するサイトカインは、ＩＬ−７、ＩＬ−１５またはＩＬ−２１である。
【０７１６】
他の実施態様において、サイトカインを、ＣＡＲ発現細胞投与一定期間後、例えば、ＣＡＲ発現細胞投与少なくとも２週、３週、４週、６週、８週、１０週、１２週、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月または１年またはそれ以上後に投与する。ある実施態様において、サイトカインを、対象のＣＡＲ発現細胞に対する応答の評価の後に投与する。例えば、対象に、ここに記載する用量およびレジメンに従いＣＡＲ発現細胞を投与する。ＣＡＲＴ治療に対する対象の応答を、腫瘍増殖阻害、循環腫瘍細胞減少または腫瘍退縮を含む、ここに記載する方法の何れかを使用して、ＣＡＲ発現細胞投与２週、３週、４週、６週、８週、１０週、１２週、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月または１年またはそれ以上後に評価する。ＣＡＲＴ治療に対する十分な応答を示さない対象にサイトカインを投与し得る。ＣＡＲＴ治療に対する最適以下の応答を有する対象へのサイトカインの投与は、ＣＡＲＴ有効性または抗腫瘍活性を増強し得る。好ましい実施態様において、ＣＡＲ発現細胞投与後投与されるサイトカインは、ＩＬ−７である。
【０７１７】
低用量のｍＴＯＲ阻害剤との組み合わせ
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞を、例えば、ＰＣＴ公報ＷＯ／２０１６／０１４５３０号に記載のとおり、低い、免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤と組み合わせて投与する。
【０７１８】
他の実施態様において、低い、免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤の投与は、例えば、非処理ＣＡＲ発現細胞または非処置対象と比較して、例えば、培養または対象において、ＣＡＲ発現細胞の増殖の増加または延長をもたらす。ある実施態様において、増殖増加は、ＣＡＲ発現細胞の数の増加と関連する。増殖の増加または延長を測定する方法は実施例４および５に記載する。他の実施態様において、低い、免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤の投与は、例えば、非処理ＣＡＲ発現細胞または非処置対象と比較して、例えば、培養または対象において、ＣＡＲ発現細胞による癌細胞殺滅増加をもたらす。ある実施態様において、癌細胞の殺滅増加は、腫瘍体積減少と関連する。
【０７１９】
ある実施態様において、ＣＡＲ分子、例えば、ここに記載するＣＡＲ分子を発現する細胞を、低い、免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤、例えば、アロステリックｍＴＯＲ阻害剤、例えば、ＲＡＤ００１または触媒的ｍＴＯＲ阻害剤と組み合わせて投与する。例えば、低い、免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤の投与は、ここに記載するＣＡＲ発現細胞の投与前に開始してよく、ここに記載するＣＡＲ発現細胞の投与前に完了してよく、ここに記載するＣＡＲ発現細胞の投与と同時に開始してよく、ここに記載するＣＡＲ発現細胞の投与と重複してよくまたはここに記載するＣＡＲ発現細胞の投与後続いてよい。
【０７２０】
あるいはまたはさらに、低い、免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤の投与は、ここに記載するＣＡＲ分子を発現するように操作される免疫エフェクター細胞を最適化し得る。このような実施態様において、低い、免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤、例えば、アロステリック阻害剤、例えば、ＲＡＤ００１または触媒的阻害剤の投与は、対象から、ここに記載するＣＡＲ分子を発現するように操作される免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞の採取前に開始されるまたは完了される。
【０７２１】
他の実施態様において、例えば、対象から採取後に、ここに記載するＣＡＲ分子を発現するように操作される免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞または、例えば、対象への投与前のＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞を、低い、免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤の存在下で培養し得る。
【０７２２】
ここで使用する用語“ｍＴＯＲ阻害剤”は、細胞におけるｍＴＯＲキナーゼを阻害する化合物またはリガンドまたはその薬学的に許容される塩をいう。ある実施態様において、ｍＴＯＲ阻害剤はアロステリック阻害剤である。ある実施態様において、ｍＴＯＲ阻害剤は触媒的阻害剤である。
【０７２３】
アロステリックｍＴＯＲ阻害剤は、中性三環式化合物ラパマイシン(シロリムス)、例えば、ラパマイシン誘導体、ラパマイシンアナログ(ラパログとも称する)を含む、ラパマイシンに構造的および機能的類似性を有する化合物であるラパマイシン関連化合物およびｍＴＯＲ活性を阻害する他のマクロライド化合物を含む。
【０７２４】
ラパマイシンは、式Ａで示す構造を有する、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカスにより産生される既知マクロライド抗生物質である。
【化８】
2019513347.tif 000101
【０７２５】
他の適当なラパマイシンアナログは、ＲＡＤ００１、エベロリムス(アフィニトール(登録商標))としても既知であり、化学名(１Ｒ,９Ｓ,１２Ｓ,１５Ｒ,１６Ｅ,１８Ｒ,１９Ｒ,２１Ｒ,２３Ｓ,２４Ｅ,２６Ｅ,２８Ｅ,３０Ｓ,３２Ｓ,３５Ｒ)−１,１８−ジヒドロキシ−１２−{(１Ｒ)−２−[(１Ｓ,３Ｒ,４Ｒ)−４−(２−ヒドロキシエトキシ)−３−メトキシシクロヘキシル]−１−メチルエチル}−１９,３０−ジメトキシ−１５,１７,２１,２３,２９,３５−ヘキサメチル−１１,３６−ジオキサ−４−アザ−トリシクロ[３０.３.１.０４,９]ヘキサトリアコンタ−１６,２４,２６,２８−テトラエン−２,３,１０,１４,２０−ペンタオン,シロリムス(ラパマイシン、ＡＹ−２２９８９)、４０−[３−ヒドロキシ−２−(ヒドロキシメチル)−２−メチルプロパノエート]−ラパマイシン(別名テムシロリムスまたはＣＣＩ−７７９)およびリダフォロリムス(ＡＰ−２３５７３／ＭＫ−８６６９)を含むが、これらに限定されない。ｂ  アロステリックｍＴｏｒ阻害剤の他の例は、内容を引用により本明細書に包含させる、ＵＳ２００５／０１０１６２４号に記載のゾタロリムス(ＡＢＴ５７８)およびウミロリムスを含む。他の適当なｍＴＯＲ阻害剤は、引用により本明細書に包含させる２０１５年３月１３日出願の国際公報ＷＯ２０１５／１４２６７５号のパラグラフ９４６〜９６４に記載される。低い、免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤、低用量のｍＴＯＲ阻害剤と関連するｍＴＯＲ阻害の適当なレベル、ｍＴＯＲ阻害のレベルの検出方法およびその適当な医薬組成物は、さらに引用により本明細書に包含させる２０１５年３月１３日出願の国際公報ＷＯ２０１５／１４２６７５号のパラグラフ９３６〜９４５および９６５〜１００３に記載される。
【０７２６】
医薬組成物および処置
本発明の医薬組成物は、１以上の薬学的にまたは生理学的に許容される担体、希釈剤または添加物と組み合わせて、ここに記載する、ＣＡＲ発現細胞、例えば、複数のＣＡＲ発現細胞を含み得る。このような組成物は、中性緩衝化食塩水、リン酸緩衝化食塩水などの緩衝液；グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドまたはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント(例えば、水酸化アルミニウム)；および防腐剤を含み得る。本発明の組成物は、ある態様において、静脈内投与用に製剤化される。
【０７２７】
本発明の医薬組成物は、処置(または予防)する疾患に適する方法で投与し得る。適切な投与量は臨床治験により決定され得るが、投与の量および頻度は、患者の状態ならびに患者の疾患のタイプおよび重症度などの因子により決定される。
【０７２８】
ある実施態様において、医薬組成物は、例えば、エンドトキシン、マイコプラズマ、複製可能レンチウイルス(ＲＣＬ)、ｐ２４、ＶＳＶ−Ｇ核酸、ＨＩＶ  ｇａｇ、残存抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８被覆ビーズ、マウス抗体、貯留ヒト血清、ウシ血清アルブミン、ウシ血清、培養培地成分、ベクターパッケージング細胞またはプラスミド成分、細菌および真菌からなる群から選択される、汚染物が実質的にない、例えば、検出可能なレベルでない。ある実施態様において、細菌は、アルガリゲネス・フェカリス、カンジダ・アルビカンス、エシェリキア・コリ、ヘモフィルス・インフルエンザエ、ナイセリア・メニンギティディス、シュードモナス・エルジノーサ、スタフィロコッカス・アウレウス、ストレプトコッカス・ニューモニエおよびストレプトコッカス・ピオゲネスＡ群からなる群から選択される少なくとも１つである。
【０７２９】
“免疫学的有効量”、“抗腫瘍有効量”、“腫瘍阻害有効量”または“治療量”が指示されるとき、投与すべき本発明の組成物の厳密な量は、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染または転移の程度および患者(対象)の状態の個々の差異を考慮して、処置医が決定できる。一般に、ここに記載する免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を含む医薬組成物は、１０４〜１０９細胞／kg体重、ある場合において１０５〜１０６細胞／kg体重の、これらの範囲内の全整数値を含む、用量で投与されるということができる。Ｔ細胞組成物はまたこれらの投与量で複数回投与し得る。細胞を、免疫療法において一般に知られる注入技法を使用して投与できる(例えば、Rosenberg et al., New Eng. J. of Med. 319:1676, 1988参照)。
【０７３０】
ある実施態様において、ここに記載するＣＡＲ発現細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲを発現するように操作された、例えば、細胞)の１用量は、約１×１０６細胞／kg、１.１×１０６細胞／kg、２×１０６細胞／kg、３.６×１０６細胞／kg、５×１０６細胞／kg、１×１０７細胞／kg、１.８×１０７細胞／kg、２×１０７細胞／kg、５×１０７細胞／kg、１×１０８細胞／kg、２×１０８細胞／kg、３×１０８細胞／kgまたは５×１０８細胞／kgを含む。ある実施態様において、ＣＡＲ細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲを発現するように操作された、例えば、細胞)の１用量は、少なくとも約１×１０６細胞／kg、１.１×１０６細胞／kg、２×１０６細胞／kg、３.６×１０６細胞／kg、５×１０６細胞／kg、１×１０７細胞／kg、１.８×１０７細胞／kg、２×１０７細胞／kg、５×１０７細胞／kg、１×１０８細胞／kg、２×１０８細胞／kg、３×１０８細胞／kgまたは５×１０８細胞／kgを含む。ある実施態様において、ＣＡＲ細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲを発現するように操作された、例えば、細胞)の１用量は、最大約１×１０６細胞／kg、１.１×１０６細胞／kg、２×１０６細胞／kg、３.６×１０６細胞／kg、５×１０６細胞／kg、１×１０７細胞／kg、１.８×１０７細胞／kg、２×１０７細胞／kg、５×１０７細胞／kg、１×１０８細胞／kg、２×１０８細胞／kg、３×１０８細胞／kgまたは５×１０８細胞／kgを含む。ある実施態様において、ＣＡＲ細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲを発現するように操作された、例えば、細胞)の１用量は、約１.１×１０６〜１.８×１０７細胞／kgを含む。ある実施態様において、ＣＡＲ細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲを発現するように操作された、例えば、細胞)の１用量は、約１×１０７細胞、２×１０７細胞、５×１０７細胞、１×１０８細胞、２×１０８細胞、３×１０８細胞、５×１０８細胞、１×１０９細胞、２×１０９細胞または５×１０９細胞を含む。ある実施態様において、ＣＡＲ細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲを発現するように操作された、例えば、細胞)の１用量は、少なくとも約１×１０７細胞、２×１０７細胞、５×１０７細胞、１×１０８細胞、２×１０８細胞、３×１０８細胞、５×１０８細胞、１×１０９細胞、２×１０９細胞または５×１０９細胞を含む。ある実施態様において、ＣＡＲ細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲを発現するように操作された、例えば、細胞)の１用量は、最大約１×１０７細胞、２×１０７細胞、５×１０７細胞、１×１０８細胞、２×１０８細胞、３×１０８細胞、５×１０８細胞、１×１０９細胞、２×１０９細胞または５×１０９細胞を含む。
【０７３１】
ある実施態様において、ＣＡＲ細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲを発現するように操作された、例えば、細胞)の１用量は、最大約１×１０７細胞、１.５×１０７細胞、２×１０７細胞、２.５×１０７細胞、３×１０７細胞、３.５×１０７細胞、４×１０７細胞、５×１０７細胞、１×１０８細胞、１.５×１０８細胞、２×１０８細胞、２.５×１０８細胞、３×１０８細胞、３.５×１０８細胞、４×１０８細胞、５×１０８細胞、１×１０９細胞、２×１０９細胞または５×１０９細胞を含む。ある実施態様において、ＣＡＲ細胞(例えば、ＴＡ  ＣＡＲおよびＢＣＡ  ＣＡＲを発現するように操作された、例えば、細胞)の１用量は、最大約１〜３×１０７乃至１〜３×１０８の細胞を含む。ある実施態様において、対象は、約１〜３×１０７の細胞を投与される。他の実施態様において、対象は、約１〜３×１０８の細胞を投与される。
【０７３２】
細胞を、免疫療法において一般に知られる注入技法を使用して投与できる(例えば、Rosenberg et al., New Eng. J. of Med. 319:1676, 1988参照)。
【０７３３】
ある態様において、活性化免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を対象に投与し、続いてその後血液を再採取し(またはアフェレーシスを実施し)、そこからの免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を本発明により活性化させ、患者にこの活性化および拡大免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を再注入することが望ましいことがある。この過程は、数週毎に、複数回行い得る。ある態様において、免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を、１０cc〜４００ccの血液採取物から活性化する。ある態様において、免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を、２０cc、３０cc、４０cc、５０cc、６０cc、７０cc、８０cc、９０ccまたは１００ccの血液採取物から活性化する。
【０７３４】
対象組成物の投与は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸注、移植または移植を含む、任意の簡便な方式で実施され得る。ここに記載する組成物は、患者に経動脈、皮下、皮内、腫瘍内、節内、髄内、筋肉内、静脈内(ｉ.ｖ.)または腹腔内注射により投与し得る。ある態様において、本発明のＴ細胞組成物を患者に皮内または皮下注射により投与し得る。ある態様において、本発明のＴ細胞組成物を、ｉ.ｖ.注射により投与し得る。免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)の組成物を、腫瘍、リンパ節または感染部位に直接注射し得る。
【０７３５】
特定の例示的態様において、対象は、白血球が採取され、エクスビボで富化されまたは枯渇されて、目的の細胞、例えば、Ｔ細胞を選択および／または単離する、白血球除去に付され得る。これらのＴ細胞単離物を、当分野で知られる方法により拡大させ、本発明の１以上のＣＡＲ構築物が導入され、それにより本発明のＣＡＲ  Ｔ細胞が産生されるように処理され得る。処置を必要とする対象は、続いて高用量化学療法と続く末梢血幹細胞移植での標準処置を受け得る。ある態様において、移植の後または同時に、対象は、本発明の拡大されたＣＡＲ  Ｔ細胞の注入を受ける。さらなる態様において、拡大細胞は、手術前または後に投与される。
【０７３６】
患者に投与する上記処置の投与量は、処置する状態および処置のレシピエントの厳密な性状により変わる。ヒト投与のための投与量のスケーリングは、当分野の慣例により実施され得る。例えば、キャンパスの用量は、一般に成人患者に対し１〜約１００mgの範囲であり、通常１〜３０日間、連日投与される。好ましい１日用量は、１日あたり１〜１０mgであるが、ある場合において１日４０mgまでの高用量が使用され得る(米国特許６,１２０,７６６号に記載)。
【０７３７】
ある実施態様において、ＣＡＲを、例えば、インビトロ転写を使用して、免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)に導入し、対象(例えば、ヒト)は、本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)の初期投与および本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)の１以上のその後の投与を受け、ここで、１以上のその後の投与は、先の投与後１５日以内、例えば、１４日、１３日、１２日、１１日、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日または２日に投与される。ある実施態様において、対象(例えば、ヒト)に週あたり本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)が１回を超えて投与され、例えば、本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)が週あたり２回、３回または４回投与される。ある実施態様において、対象(例えば、ヒト対象)は、週あたりＣＡＲ免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を１回を超えて投与され(例えば、週あたり２回、３回または４回)(ここではサイクルとも称する)、続いて、１週ＣＡＲ免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)投与がなく、その後、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)が対象に１回以上(例えば、週あたりＣＡＲ免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)の１回を超える投与)さらに投与される。他の実施態様において、対象(例えば、ヒト対象)は、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を１を超えるサイクル受け、各サイクルの間は、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日または３日以内である。ある実施態様において、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を、週あたり、３回、隔日で投与する。ある実施態様において、本発明のＣＡＲ免疫エフェクター細胞(例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞)を、少なくとも２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間またはそれ以上投与する。
【実施例】
【０７３８】
本発明を、次の実験例を参照して、さらに詳細に記載する。これらの実施例は、特に断らない限り、説明のみを目的として提供し、限定することは意図しない。それ故に、本発明は、決して次の実施例により限定されると解釈してはならず、むしろ、ここに提供される教示の結果として明らかとなる任意かつ全てのバリエーションを包含すると解釈すべきである。
【０７３９】
実施例１
ヒトＴリンパ球を対象から採り、エクスビボに提供し、抗ＣＤ３／ＣＤ２８を使用して刺激し、第二世代ＣＤ１９  ＣＡＲ(ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメインならびにＣＤ３ｚ一次シグナル伝達ドメインおよび４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲ)をコードするレンチウイルスベクターをＥＦ１ａプロモーター制御下および第二世代ＥＧＦＲｖIII  ＣＡＲ(ＥＧＦＲｖIII結合ドメイン、膜貫通ドメインならびにＣＤ３ｚ一次シグナル伝達ドメインおよび４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲ)をコードするレンチウイルスベクターをＥＦ１ａプロモーター制御下に形質導入する。ＣＤ１９  ＣＡＲおよびＥＧＦＲｖIII  ＣＡＲの両方を発現するように細胞を操作するための、このような系は図２に説明される。同様に、全てＥＦ１ａプロモーター制御下、第二世代ＣＤ１９  ＣＡＲおよび第二世代ＥＧＦＲｖIII  ＣＡＲと介在Ｐ２Ａ部位をコードする単一バイシストロニックレンチウイルスベクターが構築される。ＣＤ１９  ＣＡＲおよびＥＧＦＲｖIII  ＣＡＲの両方を発現するように細胞を操作するためのこのような構築物は、図１に説明される。第二世代ＣＤ１９  ＣＡＲおよび第二世代ＥＧＦＲｖIII  ＣＡＲの両方を発現する細胞は、２レンチウイルスベクターの混合物(各々ＣＤ１９  ＣＡＲまたはＥＧＦＲｖIII  ＣＡＲをコードする；図２)またはバイシストロニック構築物をコードする単一レンチウイルスベクター(図１)でＴ細胞を形質導入し、ＣＡＲ  Ｔ細胞増殖、サイトカイン放出および細胞毒性を、ここに開示する方法(例えば、ＷＯ２０１４／１３０６５７号に記載のとおり)を使用して、ＣＤ１９＋／ＥＧＦＲｖIII細胞、ＣＤ１９−／ＥＧＦＲｖIII＋細胞、ＣＤ１９＋／ＥＧＦＲＶIII＋細胞ならびにＣＤ１９＋／ＥＧＦＲｖIII細胞およびＣＤ１９−／ＥＧＦＲｖIII＋細胞を含む細胞の集団に対してアッセイし、活性を、第二世代ＥＧＦＲｖIII  ＣＡＲのみを発現する細胞と比較する。細胞を、インビボ(例えば、ＷＯ２０１４／１３０６５７号に記載の方法により、増殖、長期生存性および腫瘍毒性)で、該細胞を、確立されたＥＧＦＲｖIII  Ｕ８７ｖIII  神経膠腫腫瘍を有する異種免疫不全ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／共通ガンマ鎖−／−マウスに静脈内投与することにより、さらにアッセイする。ＣＤ１９を発現する自己Ｂ細胞または不死化Ｂ細胞を、ＣＡＲ  Ｔ細胞活性化増強のために、ＣＡＲ  Ｔ細胞と共注入する。臨床適用のために、自己Ｔ細胞をＥＧＦＲｖIII  ＣＡＲおよびＣＤ１９  ＣＡＲを発現するように形質導入し、多形神経膠芽腫(ＧＢＭ)を有する患者に投与する。ＣＡＲＴ細胞生存性、増殖／拡大および抗腫瘍有効性がモニターされる。患者において、ＣＤ１９を発現する自身の正常Ｂ細胞が、第二ＣＡＲのための刺激の供給源を提供する。
【０７４０】
実施例２
ヒトＴリンパ球を対象から採り、エクスビボに提供し、抗ＣＤ３／ＣＤ２８を使用して刺激し、第二世代ＢＣＭＡ  ＣＡＲ(ＢＣＭＡ結合ドメイン、膜貫通ドメインならびにＣＤ３ｚ一次シグナル伝達ドメインおよび４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲ)をコードするレンチウイルスベクターをＥＦ１ａプロモーター制御下および第二世代ＥＧＦＲｖIII  ＣＡＲ(ＥＧＦＲｖIII結合ドメイン、膜貫通ドメインならびにＣＤ３ｚ一次シグナル伝達ドメインおよび４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲ)をコードするレンチウイルスベクターをＥＦ１ａプロモーター制御下に形質導入する。第二世代ＢＣＭＡ  ＣＡＲおよび第二世代ＥＧＦＲｖIII  ＣＡＲの両方を発現する細胞が提供され、ＣＡＲ  Ｔ細胞増殖、サイトカイン放出および細胞毒性を、ここに開示する方法(例えば、ＷＯ２０１４／１３０６５７号に記載のとおり)を使用して、ＢＣＭＡ＋／ＥＧＦＲｖIII細胞、ＢＣＭＡ−／ＥＧＦＲｖIII＋細胞、ＢＣＭＡ＋／ＥＧＦＲＶIII＋細胞ならびにＢＣＭＡ＋／ＥＧＦＲｖIII細胞およびＢＣＭＡ−／ＥＧＦＲｖIII＋細胞を含む細胞の集団に対してアッセイし、活性を、第二世代ＥＧＦＲｖIII  ＣＡＲのみを発現する細胞と比較する。細胞を、インビボ(例えば、ＷＯ２０１４／１３０６５７号に記載の方法により、増殖、長期生存性および腫瘍毒性)で、該細胞を、確立されたＥＧＦＲｖIII  Ｕ８７ｖIII  神経膠腫腫瘍を有する異種免疫不全ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／共通ガンマ鎖−／−マウスに静脈内投与することにより、さらにアッセイする。ＢＣＭＡを発現する自己Ｂ細胞または不死化Ｂ細胞を、ＣＡＲ  Ｔ細胞活性化増強のために、ＣＡＲ  Ｔ細胞と共注入する。臨床適用のために、自己Ｔ細胞を、ＥＧＦＲｖIII  ＣＡＲおよびＢＣＭＡ  ＣＡＲを発現するように形質導入し、多形神経膠芽腫(ＧＢＭ)を有する患者に投与する。ＣＡＲＴ細胞生存性、増殖／拡大および抗腫瘍有効性がモニターされる。患者において、ＢＣＭＡを発現する自身の正常Ｂ細胞が、第二ＣＡＲのための刺激の供給源を提供する。
【０７４１】
実施例３
ヒトＴリンパ球を対象から採り、エクスビボに提供し、抗ＣＤ３／ＣＤ２８を使用して刺激し、第二世代ＣＤ１９  ＣＡＲ(ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメインならびにＣＤ３ｚ一次シグナル伝達ドメインおよび４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲ)をコードするレンチウイルスベクターをＥＦ１ａプロモーター制御下および第二世代メソテリン(“Ｍｅｓｏ”)ＣＡＲ(Ｍｅｓｏ結合ドメイン、膜貫通ドメインならびにＣＤ３ｚ一次シグナル伝達ドメインおよび４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲ)をコードするレンチウイルスベクターをＥＦ１ａプロモーター制御下で形質導入する。同様に、全てＥＦ１ａプロモーター制御下、第二世代ＣＤ１９  ＣＡＲおよび第二世代メソテリンＣＡＲと介在Ｐ２Ａ部位をコードする単一バイシストロニックベクターが構築される。第二世代ＣＤ１９  ＣＡＲおよび第二世代メソテリンＣＡＲの両方を発現する細胞が、Ｔ細胞の２レンチウイルスベクターの混合物(各々ＣＤ１９  ＣＡＲまたはＥＧＦＲｖIII  ＣＡＲをコードする)またはバイシストロニック構築物をコードする単一レンチウイルスベクターでの形質導入によりＣＡＲ  Ｔ細胞増殖、サイトカイン放出および細胞毒性を、ここに開示する方法(例えば、ＷＯ２０１５／０９０２３０号に記載のとおり)を使用して、ＣＤ１９＋／Ｍｅｓｏ細胞、ＣＤ１９−／Ｍｅｓｏ＋細胞、ＣＤ１９＋／Ｍｅｓｏ＋細胞ならびにＣＤ１９＋／Ｍｅｓｏ細胞およびＣＤ１９−／Ｍｅｓｏ＋細胞を含む細胞の集団に対してアッセイし、活性を、第二世代Ｍｅｓｏ  ＣＡＲのみ発現する細胞と比較する。細胞を、該細胞を確立されたＭｅｓｏ発現卵巣腺癌(ＯＶＣＡＲ８)異種移植を有する異種免疫不全ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／共通ガンマ鎖−／−マウスに静脈内投与することにより、インビボ(例えば、ＷＯ２０１５／０９０２３０号に記載された方法により、増殖、長期生存性および腫瘍毒性)でさらにアッセイする。ＣＤ１９を発現する自己Ｂ細胞または不死化Ｂ細胞を、ＣＡＲ  Ｔ細胞活性化増強のために、ＣＡＲ  Ｔ細胞と共注入する。臨床適用のために、自己Ｔ細胞を、Ｍｅｓｏ  ＣＡＲおよびＣＤ１９  ＣＡＲを発現するように形質導入し、中皮腫、膵臓癌または卵巣癌などのメソテリン発現癌を有する患者に投与する。ＣＡＲＴ細胞生存性、増殖／拡大および抗腫瘍有効性がモニターされる。患者において、ＣＤ１９を発現する自身の正常Ｂ細胞が、第二ＣＡＲのための刺激の供給源を提供する。
【０７４２】
実施例４
ヒトＴリンパ球を対象から採り、エクスビボに提供し、抗ＣＤ３／ＣＤ２８を使用して刺激し、第二世代ＢＣＭＡ  ＣＡＲ(ＢＣＭＡ結合ドメイン、膜貫通ドメインならびにＣＤ３ｚ一次シグナル伝達ドメインおよび４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲ)をコードするレンチウイルスベクターをＥＦ１ａプロモーター制御下および第二世代メソテリン(“Ｍｅｓｏ”)ＣＡＲ(Ｍｅｓｏ結合ドメイン、膜貫通ドメインならびにＣＤ３ｚ一次シグナル伝達ドメインおよび４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲ)をコードするレンチウイルスベクターをＥＦ１ａプロモーター制御下に形質導入する。第二世代ＢＣＭＡ  ＣＡＲおよび第二世代Ｍｅｓｏ  ＣＡＲの両方を発現する細胞が提供され、ＣＡＲ  Ｔ細胞増殖、サイトカイン放出および細胞毒性が、ここに開示する方法(例えば、ＷＯ２０１５／０９０２３０号に記載のとおり)を使用して、ＢＣＭＡ＋／Ｍｅｓｏ細胞、ＢＣＭＡ−／Ｍｅｓｏ＋細胞、ＢＣＭＡ＋／Ｍｅｓｏ＋細胞ならびにＢＣＭＡ＋／Ｍｅｓｏ細胞およびＢＣＭＡ−／Ｍｅｓｏ＋細胞を含む細胞の集団に対してアッセイし、活性を、第二世代Ｍｅｓｏ  ＣＡＲのみを発現する細胞と比較する。細胞を、該細胞を確立されたＭｅｓｏ発現卵巣腺癌(ＯＶＣＡＲ８)異種移植を有する異種免疫不全ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／共通ガンマ鎖−／−マウスに静脈内投与することにより、インビボ(例えば、ＷＯ２０１５／０９０２３０号に記載された方法により、増殖、長期生存性および腫瘍毒性)でさらにアッセイする。ＢＣＭＡを発現する自己Ｂ細胞または不死化Ｂ細胞を、ＣＡＲ  Ｔ細胞活性化増強のために、ＣＡＲ  Ｔ細胞と共注入する。臨床適用のために、自己Ｔ細胞は、Ｍｅｓｏ  ＣＡＲおよびＢＣＭＡ  ＣＡＲを発現するように形質導入され、中皮腫、膵臓癌または卵巣癌などのメソテリン発現癌を有する患者に投与される。ＣＡＲＴ細胞生存性、増殖／拡大および抗腫瘍有効性がモニターされる。患者において、ＢＣＭＡを発現する自身の正常Ｂ細胞が、第二ＣＡＲのための刺激の供給源を提供する。
【０７４３】
均等物
ここに引用する各および全特許、特許出願および刊行物の開示は、その全体を引用により本明細書に包含させる。本発明は、具体的態様を参照して記載しているが、本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく本発明の他の態様およびバリエーションが他の当業者により考案され得ることは明らかである。添付刷る特許請求の範囲は、全てのこのような態様および等価なバリエーションを含むことを意図する。
【図１】
2019513347.tif 000102
【図２】
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【配列表】
2019513347000001.app
【国際調査報告】
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