(57)【要約】  本発明は、抗菌性ポリアミドポリマー及びオクテニジンを含む非水銀保存剤、及び保存剤含有マルチドーズ製剤を生成するためのそれらの使用方法に関する。保存剤含有マルチドーズ製剤は、１以上の汚染微生物に対する耐性を示し、生物学的及び低分子活性成分の長期安定性について有利な特性を有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
保存されたマルチドーズ製剤を調製する方法であって、以下のステップ：
ａ．少なくとも２効果投与量の１以上の医薬品有効成分（ＡＰＩ）を提供するステップと、
ｂ．１以上の抗菌性ポリアミドポリマー、オクテニジン、及びそれらの組合せから選択される非水銀保存剤を保存効果量提供するステップと、
ｃ．ＡＰＩ及び非水銀性保存剤を水性及び／又は成分と組み合わせて保存されたマルチドーズ液体製剤を形成するステップと、を含む、又はから実質的に成り、さらに、
ｄ．１以上の賦形剤を提供するステップと、
ｅ．液体製剤を含有するための容器を提供するステップと、
ｆ．滅菌し、液体製剤を容器に移すステップと、
ｇ．液体製剤をフリーズドライ、凍結乾燥、及び／又はガラス化し、それにより保存されたマルチドーズ製剤を生成するステップとを含んでもよい方法であって、該製剤は水銀性保存剤を含有しない、方法。
【請求項２】
保存されたマルチドーズ製剤であって、
ａ．該製剤は少なくとも２効果投与量の１以上の医薬品有効成分（ＡＰＩ）及び１以上の抗菌性ポリアミドポリマー、オクテニジン、及びそれらの組合せから選択される保存効果量の非水銀性保存剤を含む、又は
ｂ．該製剤は請求項１の方法に従って生成され、
該製剤は非水銀性保存剤を含まない、
製剤。
【請求項３】
前記ポリアミドが以下：
【化１】
2019513793.tif 000037
,
2019513793.tif 000038
,
2019513793.tif 000039
,
2019513793.tif 000040
,
及びそれらの組合せから選択される、請求項２に記載のマルチドーズ製剤。
【請求項４】
前記ポリアミドが以下の構造を有し：
【化２】
2019513793.tif 000041
;及び
サイズ排除クロマトグラフィーで測定した質量平均分子量（ＷＡＭＷ）が、約１．０ｋＤａから約１５．０ｋＤａである、請求項２又は３に記載の保存されたマルチドーズ製剤。
【請求項５】
前記ポリアミドが約２．０ｋＤａから約１０ｋＤａのＷＡＭＷを有する、請求項２から４のいずれか１項に記載の保存されたマルチドーズ製剤。
【請求項６】
前記ポリアミドが約２．５ｋＤａから約７．７６ｋＤａのＷＡＭＷ、又は約７．７６ｋＤａのＷＡＭＷを有する、請求項２、４又は５のいずれか１項に記載の保存されたマルチドーズ製剤。
【請求項７】
前記製剤が免疫原性組成物であって、効果量の少なくとも１以上の抗原、並びに製剤に対する質量体積で表される、約０．０１ｍｇ／ｍＬと０．２５ｍｇ／ｍＬの間の抗菌性ポリアミドポリマー及び／又は約０．１ｍｇ／ｍＬと約０．２５  ｍｇ／ｍＬの間のオクテニジンを含む、少なくとも２ドーズを含む、請求項２から６のいずれか１項に記載の保存されたマルチドーズ製剤。
【請求項８】
前記製剤が、抗菌性ポリアミドポリマー及び／又はオクテニジンを、製剤の約０．０５ｍｇ／ｍＬから約５ｍｇ／ｍＬの間又は約０．１ｍｇ／ｍＬから約０．２５ｍｇ／ｍＬの間の濃度で含む、請求項２から７のいずれか１項に記載の保存されたマルチドーズ製剤。
【請求項９】
前記製剤が、抗菌性ポリアミドポリマー及び／又はオクテニジンを、製剤の約０．２５ｍｇ／ｍＬの濃度で含む請求項２から８のいずれか１項に記載の保存されたマルチドーズ製剤。
【請求項１０】
前記製剤が、抗菌性ポリアミドポリマーを、約０．１ｍｇ／ｍＬと約０．２５ｍｇ／ｍＬの間含み、オクテニジンを含まない、請求項７から９のいずれか１項に記載の保存されたマルチドーズ製剤。
【請求項１１】
前記製剤が、オクテニジンを約０．１ｍｇ／ｍＬと約０．２５ｍｇ／ｍＬの間含み、ポリアミドポリマーを含まない、請求項７から９のいずれか１項に記載の保存されたマルチドーズ製剤。
【請求項１２】
前記製剤が更にアジュバントを含む、請求項１から１１のいずれか１項に記載の保存されたマルチドーズ製剤。
【請求項１３】
免疫原性製剤の抗原性が１年、１．５年、２年、又は２，５年以上安定であり、かつ、少なくとも１０回使用してもマルチドーズ製剤が安定であり続ける、請求項１から１２のいずれか１項に記載の保存されたマルチドーズ製剤。
【請求項１４】
前記製剤への１以上の微生物の接種の後、該微生物の濃度が時間の経過とともに減少し、好ましくは、前記製剤が、２４時間で最初の微生物カウントから少なくとも１．０  ｌｏｇの減少を示し、第７日に測定された先の値から少なくとも３．０  ｌｏｇの減少を示し、及び第２８日に測定された先の値から０．５  ｌｏｇ以下の増加を示す、請求項１から１１のいずれか１項に記載の保存されたマルチドーズ製剤。
【請求項１５】
１以上の微生物の接種の後、前記製剤が、接種後６時間で最初に計算されたカウントから少なくとも２．０  ｌｏｇ減少し、２４時間で測定された先の値から少なくとも３．０  ｌｏｇ減少し、第２８日においても回復しない、請求項１から１４のいずれか１項に記載の保存されたマルチドーズ製剤。
【請求項１６】
１以上の微生物が、緑膿菌、黄色ブドウ球菌、大腸菌、枯草菌及びそれらの組合せから選択される、請求項１から１５のいずれか１項に記載の保存されたマルチドーズ製剤。
【請求項１７】
前記製剤が更に１以上の緩衝液、凍結保護物質、塩、二価陽イオン、非イオン性洗剤及びフリーラジカル酸化阻害剤を含む、請求項１から１６のいずれか１項に記載の保存されたマルチドーズ製剤。
【請求項１８】
前記製剤がバイアル中に含有される、請求項１から１７のいずれか１項に記載の保存されたマルチドーズ製剤。
【請求項１９】
プレフィルドワクチン送達デバイスであって、請求項２から１８のいずれか１項に記載の保存されたマルチドーズ製剤を含み、保存剤が、ポリアミド又はオクテニジンのいずれかであるが両方ではない、デバイス。
【請求項２０】
前記デバイスがシリンジであり、保存されたマルチドーズ製剤が筋肉内又は皮下注射用に製剤される、請求項１９に記載のプレフィルドワクチン送達デバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１６年４月１４日に出願された米国仮出願第６２／３２２，２５８号の優先権の利益を請求するものであり、参照によりその全体を本明細書に援用する。
（参照による援用）
本出願はＵＳ２０１４／０２７１５２６及びＵＳ２０１４／０２７５４６９を参照し、それらの開示は、参照によりその全体を本明細書に援用する。本明細書で引用又は参照される全ての文書は、同様に、参照により本明細書に援用し、本発明の実施に用いられ得る。
（発明の分野）
本件開示は、マルチドーズ製剤のためのチメロサールフリー保存剤に関する。前記保存剤は、抗菌性ポリアミド及びオクテニジンを含む。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
ワクチンを含むマルチドーズ製剤には、最初のドーズを使用した後の続いてのドーズの組成物の汚染を最小限にするため保存剤が必要となる。保存剤は、ワクチン製剤が、米国の米国薬局方（ＵＳＰ）、英国薬局方（ＢＰ）及び欧州の欧州薬局方に従った有効性試験又は抗菌性攻撃試験（antimicrobial challenge test）を合格することができるようにしなければならない。
チメロサールはワクチン中で通常用いられる保存剤である。チメロサールは水銀性化合物であって、潜在的に刺激性であり、アレルギー反応の可能性を増加させ得る。チメロサールはまた環境にとって望ましくない。
従って、チメロサールを置き換える新規でより安全なワクチン用の保存剤を発見することは有利であろう。本件出願において、出願人は、特に抗菌性ポリアミド化合物及びオクテニジンをワクチン用保存剤として用いることを開示する。当該有効性の高い保存剤は非刺激性であり、水銀性化合物を含まない。
【発明の概要】
【０００３】
（発明の概要）
ある態様において、本発明は安全で効果的なチメロサールフリー保存剤をワクチンを含むマルチドーズ製剤のために提供する。ある実施形態では、前記保存剤は、水溶性、抗菌性アミン官能性ポリアミドであって、下記式Ｉ−ＩＶで示される一般構造を有するものを含んでよい。これらのポリマーは、ＵＳ２０１４／０２７５４６９及びＵＳ９，３２６，９９４  Ｂ２  （Genzymeの特許）に記載された方法を用いて生産してもよい。
ある実施形態において、前記ポリアミドは、式（Ｉ）の化合物である。
【化１】
2019513793.tif 000002
(I)
式中、
ｉ）ｍは０、１、２、又は３；
ｉｉ）ｎは０、１、２、又は３；
ｉｉｉ）ｏは０、１、２、又は３；
ｉｖ）ｐは０又は１；
ｖ）ｒは０又は１；
ｖｉ）ｑは１から４００までの整数；
ｖｉｉ）ＱxはＮＨ、（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアルキル、（Ｃ3−Ｃ10）シクロアルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ6−Ｃ14）アリール、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアリール；
ｖｉｉｉ）ＱyはＮＨ−Ｒw、ＮＨ−ＣＨ2−Ｒw、（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、又は（Ｃ6−Ｃ14）アリールであり、
ここでＲwは存在しないか又は（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアルキル、（Ｃ6−Ｃ14）アリール又は（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアリール；
ｉｘ）Ｒx及びＲyはそれぞれ独立して薬学的に許容される末端基である。
【０００４】
別の実施形態において、前記ポリアミドは、式（ＩＩ）の構造を有する。
【化２】
2019513793.tif 000003
(II)
式中:
ｉ）ｍは０、１、２、又は３；
ｉｉ）ｎは０、１、２、又は３；
ｉｉｉ）ｏは０、１、２、又は３；
ｉｖ）ｐは０又は１；
ｖ）ｒは０又は１；
ｖｉ）ｑは１から４００までの整数；
ｖｉｉ）ＱxはＮＨ、（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアルキル、（Ｃ3−Ｃ10）シクロアルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ6−Ｃ14）アリール、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアリール；
ｖｉｉｉ）ＱyはＮＨ−Ｒw、ＮＨ−ＣＨ2−Ｒw、（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、又は（Ｃ6−Ｃ14）アリールであり、
ここでＲwは存在しないか又は（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアルキル、（Ｃ6-Ｃ14）アリール、又は（Ｃ2-Ｃ9）ヘテロアリール；
ｉｘ）Ｒx及びＲyはそれぞれ独立して薬学的に許容される末端基であり；
ｘ）Ｘ-はそれぞれ独立してハロ又は任意の薬学的に許容されるアニオンであり；
ｘｉ）Ｙ1及びＹ2はそれぞれ独立してＨ又は（Ｃ1−Ｃ10）アルキルであり、１以上の（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアルキル、（Ｃ3−Ｃ10）シクロアルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ6−Ｃ14）アリール、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアリール、（Ｃ1−Ｃ10）アルキルアミン、−Ｓ−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、−Ｏ（Ｏ）Ｃ−（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、−（Ｃ1−Ｃ10）アルキル−ＣＯＯＨ、（Ｃ3−Ｃ10）シクロアルキル−ＣＯＯＨ、−（Ｏ）ＣＨ3、−ＯＨ、アミド、式（Ｄ）で表されるジヒドロキシ基
【化３】
2019513793.tif 000004
(D)、
（式中ｄは０から２５までの整数）、又は 
式（Ｅ）で表されるポリエチレングリコール基
【化４】
2019513793.tif 000005
(E)
（式中ｅは１から２５までの整数）、からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい。
【０００５】
別の実施形態において、前記ポリアミドは、式（ＩＩＩ）の構造を有する。
【化５】
2019513793.tif 000006
(III)
式中:
ｉ）ｍは０、１、２、又は３；
ｉｉ）ｎは０、１、２、又は３；
ｉｉｉ）ｏは０、１、２、又は３；
ｉｖ）ｐは０又は１；
ｖ）ｒは０又は１；
ｖｉ）ｑは１から４００までの整数；
ｖｉｉ）ＱxはＮＨ、（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアルキル、（Ｃ3−Ｃ10）シクロアルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ6−Ｃ14）アリール、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアリール；
ｖｉｉｉ）ＱyはＮＨ−Ｒw、ＮＨ−ＣＨ2−Ｒw、（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、又は（Ｃ6−Ｃ14）アリール、
ここでＲwは存在しない又は（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアルキル、（Ｃ6−Ｃ14）アリール、又は（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアリールであり；
ｉｘ）Ｒx及びＲyはそれぞれ独立して薬学的に許容される末端基であり；
ｘ）Ｘ-はハロ又は任意の薬学的に許容されるアニオンであり；
ｘｉ）Ｙ1はＨ又は（Ｃ1−Ｃ10）アルキルであって、１以上の、（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアルキル、（Ｃ3−Ｃ10）シクロアルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ6−Ｃ14）アリール、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアリール、（Ｃ1−Ｃ10）アルキルアミン、−Ｓ−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、−Ｏ（Ｏ）Ｃ−（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、−（Ｃ1−Ｃ10）アルキル−ＣＯＯＨ、（Ｃ3−Ｃ10）シクロアルキル−ＣＯＯＨ、−（Ｏ）ＣＨ3、−ＯＨ、アミド、式（Ｄ）で表されるジヒドロキシ基
【化６】
2019513793.tif 000007
（Ｄ）
（式中ｄは０から２５までの整数）、又は
式（Ｅ）で表されるポリエチレングリコール基
2019513793.tif 000008
（Ｅ）
（式中ｅは１から４００までの整数）、からなる群から選択される置換基で置換されていてもよい。
【０００６】
別の実施形態において、前記ポリアミドは、式（ＩＶ）の構造を有する。
2019513793.tif 000009
(IV)
式中:
ｉ）ｕは０、１、２、又は３；
ｉｉ）ｖは０、１、２、又は３；
ｉｉｉ）ｑは１から４００までの整数；
ｉｖ）ＱxはＮＨ、（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアルキル、（Ｃ3−Ｃ10）シクロアルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ6−Ｃ14）アリール、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアリール；
ｖ）ＱyはＮＨ−Ｒw、ＮＨ−ＣＨ2−Ｒw、（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、又は（Ｃ6−Ｃ14）アリールであり、
ここでＲwは存在しないか又は（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアルキル、（Ｃ6−Ｃ14）アリール、又は（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアリール；
ｖｉ）Ｒx及びＲyはそれぞれ独立して薬学的に許容される末端基である。
【０００７】
また別の実施形態において、前記ポリアミドは、式（Ｖ）の構造を有する。
【化７】
2019513793.tif 000010
(V)
式中:
ｉ）ｕは０、１、２、又は３；
ｉｉ）ｖは０、１、２、又は３；
ｉｉｉ）ｑは１から４００までの整数；
ｉｖ）ＱxはＮＨ、（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアルキル、（Ｃ3−Ｃ10）シクロアルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ6−Ｃ14）アリール、（Ｃ2-Ｃ9）ヘテロアリール；
ｖ）ＱyはＮＨ−Ｒw、ＮＨ−ＣＨ2−Ｒw、（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、又は（Ｃ6−Ｃ14）アリールであり、
ここでＲwは存在しないか又は（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアルキル、（Ｃ6−Ｃ14）アリール、又は（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアリール；
ｖｉ）Ｒx及びＲyはそれぞれ独立して薬学的に許容される末端基であり；
ｖｉｉ）Ｘ-は独立してハロ又は任意の薬学的に許容されるアニオンであり、
ｖｉｉｉ）Ｙ1及びＹ2は独立してＨ又は（Ｃ1−Ｃ10）アルキルであって、１以上の（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアルキル、（Ｃ3−Ｃ10）シクロアルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ6−Ｃ14）アリール、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアリール、（Ｃ1−Ｃ10）アルキルアミン、−Ｓ−Ｏ−（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、−Ｏ（Ｏ）Ｃ−（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、−（Ｃ1−Ｃ10）アルキル−ＣＯＯＨ、（Ｃ3−Ｃ10）シクロアルキル−ＣＯＯＨ、−（Ｏ）ＣＨ3、−ＯＨ、アミド、式（Ｄ）で表されるジヒドロキシ基
【化８】
2019513793.tif 000011
(D), 
（式中ｄは０から２５までの整数）、又は 
式（Ｅ）で表されるポリエチレングリコール基
【化９】
2019513793.tif 000012
(E)
（式中ｅは１から４００までの整数）、 から成る群から選択される置換基で置換されていてもよい。
【０００８】
前記保存剤は、オクテニジンをまた含んでもよい。オクテニジンジヒドロクロリドはカチオン性界面活性剤（中性又は生理的ｐＨ）及びビス-(ジヒドロピリジニル)-デカン誘導体であり、本件開示の前に、その主な用途は、局所用防腐剤であった。
【０００９】
【化１０】
2019513793.tif 000013
【００１０】
別の態様において、本件開示は、開示されたポリアミドポリマーとオクテニジンを用いた、ワクチンを含む保存されたマルチドーズ製剤を調製する方法を提供する。
本発明は、出願人が権利を留保し、本明細書において免責されることを開示する任意の従前より既知の製品、プロセス又は方法のような、如何なる従前より既知の製品、前記製品の製造方法、又は前記製品の使用方法をも、発明中に包含しないこととしている。更に本発明は、本発明の範囲に、米国特許商標庁（３５米国特許法セクション１１２、第1段落）又は欧州特許庁（欧州特許条約第８３条）の明細書記載要件及び実施可能要件を満たさない如何なる製品、プロセス又は前記製品の製造方法又は前記製品の使用方法をも包含することを意図しないことを、出願人が権利を留保し、本明細書において免責されることを開示する任意の従前より記載された製品、前記製品の製造方法、又は前記製品の使用方法のように、留意されたい。
これら及びその他の実施形態は、下記詳細な説明によって、開示され、又は明らかであり、及び包含される。
本件開示は図面を含まない。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
（発明の詳細な説明）
本件開示、及び特に特許請求の範囲において、「含む(comprises)」、「含まれる(comprised)」、「含んでいる(comprising)」等の用語は米国特許法の意味に起因する意味を有することができ、例えば、それらは「含む(includes)」、「含まれる(included)」、「含んでいる（including）」等を意味することができることに留意する。また、「〜から本質的に成っている（consisting essentially of）」及び「〜から本質的に成る（consists essentially of）」等の用語は、米国特許法でそれらに属するとみなされている意味を有し、例えば、それらは明示的に示されていない要素を許容するが、従来技術にみられるか、あるいは本発明の基本的又は新規の特徴に影響を及ぼす要素を除外する。
別途明記されていない限り、技術的用語は通常の用法に従って用いられる。分子生物学における通常の用語の定義は、Oxford University Pressにより出版された、Benjamin Lewin, Genes V., 1994 (ISBN 0-19-854287-9); Blackwell Science Ltd.により出版された、Kendrew 他 (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, 1994 (ISBN 0-632-02182-9)；及びVCH Publishers, Inc.により出版された、Robert A. Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, 1995 (ISBN 1-56081-569-8)において見出されてよい。
【００１２】
本明細書で用いられる場合、「約（about）」という用語は、おおよそ、その範囲で、ざっと、又はおよそという意味である。数値範囲とともに「約」という用語が用いられる場合、それは、示された数値の上又は下に境界を延ばすことにより、範囲を修正する。一般に、本明細書において「約」という用語は、述べられた値を１０％の変動によって上下に数値を修正するために用いられる。ある態様においては、「約」という用語は、それが用いられている数の数値のプラス又はマイナス２０％を意味する。従って、約５０％は、４５％−５５％の範囲にあることを意味する。本明細書に終点によって列挙される数値範囲は、範囲内に包含される全ての数値及び分数を含む（例えば、１から５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．９０、４及び５を含む）。また、全ての数及びその分数は、「約」という用語によって修正されることが推定されることについて理解されたい。
本明細書で用いられる場合、「効果量」という用語は、所望の獣医学的な効果を生むのに効果的な、本発明に従う組成物の量を意味する。
単数の用語「１つの（a）」、「１つの（an）」及び「「その（the）」は、文脈上明らかに他の意味を示していない限り、複数を含む。同様に、「又は（or）」という用語は、文脈上明らかに他の意味を示していない限り、「及び（and）」を含むことを意図している。「又は（or）」という語は、特定のリストの任意の１メンバーを意味し、またそのリストのメンバーの任意の組合せを含む。
【００１３】
本明細書で用いられる場合、「動物（animal）」という用語は、全ての哺乳類、鳥類、及び魚類を含む。本明細書で用いられる場合、動物はウマ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、鳥、霊長類、ヒト及び魚から成る群から選択されてよい。「動物」という用語はまた、任意の発達段階の動物の個体を含み、胚及び胎児の段階を含む。本明細書で用いられる場合、「ブタ」又は「コブタ」という用語は、豚起源の動物を意味し、一方で、「雌豚（sow）」は、生殖年齢及び能力のあるメスを指す。
「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書において互換的に用いられ、連続的なアミノ酸残基の重合体を指す。
「核酸」、「ヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、互換的に用いられ、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ又はｃＲＮＡ及びそれらの誘導体、例えば、修飾されたバックボーンを含むものを指す。本発明は、本明細書に記載されたものと相補的な配列を含むポリヌクレオチドを提供することが理解されるべきである。本発明において考慮される「ポリヌクレオチド」は、フォワード鎖（５’から３’）及びリバース相補鎖（３’から５’）の両方を含む。本発明に従うポリヌクレオチドは、異なる方法で調製することができ（例えば、化学合成によって、遺伝子クローニングによって等）、様々形状をとることができる（例えば、線状若しくは分岐、一本鎖若しくは二本鎖、又はそれらの混成、プライマー、プローブ等）。
本明細書で用いられる場合、「抗原」又は「免疫原」という用語は、特定の免疫反応をホスト動物中で誘発する物質を意味する。抗原は、死んだ、弱った又は生きている生物全体、生物のサブユニット又は部分、免疫原性の性質を備えたインサートを含む組換えベクター、ホスト動物に提示すると免疫反応を誘発することができるＤＮＡの部分又はフラグメント、ポリペプチド、抗原、エピトープ、ハプテン又はそれらの任意の組合せ、を含んでよい。互い違いに、免疫原又は抗原は、毒素又は抗毒素を含んでよい。
【００１４】
本明細書で用いられる場合、「免疫原性タンパク質又はペプチド」という用語は、一度ホストに投与されると、タンパク質に対して体液性の及び／又は細胞タイプの免疫反応を引き起こすことができるという意味で、免疫学的に活性なポリペプチドを含む。好ましくは、タンパク質フラグメントは、タンパク質全体と実質的に同じ免疫学的活性を有するものである。従って、本発明のタンパク質フラグメントは、少なくとも１つのエピトープ又は抗原決定因子を含む、又はから本質的に成る、又はから成る。「免疫原性」タンパク質又はポリペプチドは、本明細書で用いられる場合、タンパク質の全長配列、その類似体、又はその免疫原性フラグメントを含む。「免疫原性フラグメント」は、１以上のエピトープを含むタンパク質のフラグメントを意味し、したがって、上述の免疫学的反応を引き出す。そのようなフラグメントは、当該技術分野で既知の任意の数のエピトープマッピング技術を用いて明らかにすることが可能である。例えば、線状エピトープは、例えば、固体支持体上で、タンパク質分子の部分に対応するペプチドを大量に合成することと同時に、ペプチドが支持体にまだ接着している間にペプチドを抗体と反応させることによって決定されてもよい。同様に、立体構造のエピトープは、アミノ酸の空間配置を、例えばＸ線結晶回折及び二次元核磁気共鳴で決定することによって、容易に明らかにされる。
【００１５】
「免疫原性タンパク質又はペプチド」という用語は更に、ポリペプチドが本明細書に規定される免疫学的反応を起こすため機能する限りにおいて、配列に対する削除、付加及び置換を考慮する。「保存的変異（conservative variation）」という用語は、アミノ酸残基の別の生物学的に類似の残基による置き換え、又はコードされたアミノ酸残基が変わらない若しくは別の生物学的に類似の残基であるような核酸配列中のヌクレオチドの置き換え、を意味する。この観点から、特に好ましい置換は、一般に本質的に保存的であろう。すなわち、これらの置換は同じアミノ酸ファミリーの中で起こる。例えば、アミノ酸は一般に４つのファミリーに分けられる：（１）酸性−アスパルタート及びグルタマート；（２）塩基性−リシン、アルギニン、 ヒスチジン；（３）非極性−アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；及び（４）無電荷極性−グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン。フェニルアラニン、トリプトファン及びチロシンは、しばしば、芳香族アミノ酸に分類される。保存的変異の例としては、例えばイソロイシン、バリン、ロイシン、又はメチオニンのような親水性残基の１つが別の親水性残基に置換すること、又は、例えばアルギニンがリシンに、グルタミン酸がアスパラギン酸に、又はグルタミンがアスパラギンにといった置換のように１つの極性残基が別の極性残基に置換すること、又はアミノ酸の構造的に関連したアミノ酸との類似の保存的な置換であって、生物学的活性に主要な効果を持たないであろうものを含む。参照分子と実質的に同じアミノ酸配列を有するが、タンパク質の免疫原性に実質的に影響を与えない少量のアミノ酸置換を有するタンパク質は、したがって、ポリペプチドに参照される定義内である。これらの変性によって生成した全てのポリペプチドは本明細書に含まれる。「保存的変異」という用語はまた、置換ポリペプチドに産生された抗体がまた非置換ポリペプチドと免疫反応をする限りにおいて、置換されていない親アミノ酸の場所における置換アミノ酸の使用を含む。
【００１６】
組成物又はワクチンに対する「免疫学的反応」は、ホスト内における、関心のある組成物又はワクチンに対する細胞性及び／又は抗体−媒介免疫反応の発達である。通常、「免疫学的反応」は、１以上の以下の効果（抗体、Ｂ細胞、ヘルパーＴ細胞及び／又は細胞傷害性Ｔ細胞の産生であって、特に関心のある組成物又はワクチン中に含まれる抗原又は複数の抗原に対して向けられるもの）を含むが、それらに限定されるものではない。好ましくは、ホストは、新たな感染に対する耐性が強化される及び／又は病気の臨床的重症度が低減されるような、治療上の又は保護的な免疫学的反応のいずれかを見せるであろう。そのような保護は、感染したホストに通常現れる症状の低減又は欠如のいずれか、回復期間の短さ、及び／又は感染したホスト中の低減された病原体負荷によって証明されるであろう。
「組換え」及び「遺伝子的に改変された」という用語は互換的に用いられ、ポリヌクレオチド又はタンパク質の天然の形状若しくは構造における任意の改変、変異、若しくは操作、又はポリヌクレオチド若しくはタンパク質の天然の環境若しくは周囲における任意の改変、変異、若しくは操作を指す。ポリヌクレオチド若しくはタンパク質の改変、変異、若しくは操作は、１以上のヌクレオチド又はアミノ酸の削除、遺伝子全体の削除、遺伝子のコドン最適化、アミノ酸の保存的な置換、１以上の異種ポリヌクレオチドの挿入を含んでよいが、これらに限られるわけではない。
「多価（polyvalent）ワクチン又は組成物」、「混合又はコンボ・ワクチン又は組成物」及び「多価（multivalent）ワクチン又は組成物」という用語は、互換的に用いられ、組成物又はワクチンが１を超える組成物又はワクチンを含むことを指す。多価ワクチン又は組成物は、２、３、４又はそれ以上の組成物又はワクチンを含んでよい。多価ワクチン又は組成物は、組換えウィルスベクター、活性または弱った又は殺された野生型ウィルス、サブユニット（タンパク質／抗原）、ＤＮＡプラスミド又はそれらの混合物を含んでよい。
【００１７】
本明細書で用いられる場合、「不活化ワクチン」という用語は、ワクチン組成物であって、もはや複製又は成長をする能力のない感染性生物又は病原体を含むものを意味する。病原体は、細菌性、ウィルス性、原生動物性、又は真菌性の起源を有するものであってよい。不活化は、凍結融解、高圧、化学処置（例えば、チメロサール、ホルマリン、（ベータプロピオラクトン）、ＢＥＩ（バイナリーエチレンイミン）による処置）又はオクテニジンを含む任意のその他の化学薬剤、超音波処理、放射線、熱、又は、微生物の免疫原性を維持しつつ、複製または成長を妨げるのに十分な任意のその他の従来型の手法を含む様々な方法によって成し遂げられる。
【００１８】
保存剤は、動物用ワクチンを含むマルチドーズ製剤において、細菌又は真菌の成長を実稼働状態で防ぐために通常用いられ、繰り返し（非殺菌の）穴をバイアルにあける間、製剤の汚染を最小化するために使用される。保存剤は、米国薬局方に記載の抗菌効果試験（ＡＥＴ）に合格しなければならない。本明細書に開示されるように、出願人は、米国薬局方（ＵＳＰ）、英国薬局方（ＢＰ）及び欧州薬局方（ＥＰ）に従う抗菌性試験を行った。４つの試験用微生物を用いた：カンジダ・アルビカンス（Candida albicans）、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）及びアスペルギルス ブラシリエンシス（A. brasiliensis）である。チメロサールとホルマリンが獣医学的なワクチンにおいて引き続き重要な役割を果たす一方、欧州当局は、これらの化合物を含まないワクチンの開発を奨励している。可能性として禁止につながる潜在的な将来の恐れを克服するため、出願人は、２つの化合物を明らかし、試験し、ＷＦＩ溶液としてそれらの有効性を、薬局方に従う抗菌保存剤試験のため異なる濃度で確認した。本明細書で開示されるように、抗菌性ポリアミドポリマーとオクテニジンは安全かつ効果的なワクチン保存剤であり、細菌不活化剤である。
【００１９】
本発明のある態様において、ワクチン保存剤組成物が提供され、それは、水溶性抗菌性アミン官能性ポリアミド又はオクテニジンを含む。抗菌性ポリアミドは、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、又はＶで表される任意のポリアミドであってよい。特定の実施形態において、前記ポリアミドは表１に列挙された２５のポリマー（Ａ−Ｙ）のうちの１つから選択される。ここに提示される特に効果的な抗菌性ポリアミド種に加えて、当業者であれば、非日常的な実験の適用とともに、開示された類の追加的な活性メンバーを明らかにすることができる。
下記実施例において例示されるように、ポリアミドＢ及びＣは、黄色ブドウ球菌（S. aureus）、緑膿菌（ P. aeruginosa）、カンジダ・アルビカンス（C. albicans）及びアスペルギルスブラシリエンシス（A. brasiliensis）、乳腺炎の原因となる病原体を含む、幅広い範囲の典型的な汚染病原体に対して、ＵＳＰ及び獣医学的に許容できる水準で、特に有効である。
重要なことに、表１の「ＭＷ」の値は、「質量平均分子量」を示し、ＧＰＣの水性版であるサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって決定される。従って、本明細書で用いられる場合、例えば、「ポリマーＢ」は、約５から約１５ｋＤａ、約５から約１２ｋＤａ、約５から約１０ｋＤａ、約６から約８．５ｋＤａ、約７．５から約８ｋＤａ、又は約７．７６ｋＤａの質量平均MWを有するポリマーＢを含む組成物が包含されることを意図している。更に、「ＭＷ」は、別途明示的に述べられていない限り、「質量平均分子量」を意味することを意図している。
【００２０】
表１に示されるように、ポリマーＢ、Ｃ及びＤはそれぞれ、同じ繰返し構造（本明細書において、ポリ(4,4-トリメチレンジピペリジンビスプロパン酸-ジアミノプロパン)と定義される）を有するが、異なる質量平均ＭＷを有する。更に、ＭＩＣデータは、ポリマーＢ、Ｃ及びＤが、病原体パネルに対して同等に効果的な傾向にあることを示す。従って、出願人は、幅広い範囲のポリ(4,4-トリメチレンジピペリジンビスプロパン酸-ジアミノプロパン)ＭＷグレード（すなわち、ＭＷグレードが少なくとも約２．５ｇ／ｍｏｌから少なくとも約１０．６ｇ／ｍＬまで）が活性な抗菌剤であることを示した。
本明細書で用いられる場合、ポリマーは以下の繰り返し単位を含む：Ａ[4,4-トリメチレンジピペリジンビスプロパン酸-4,4'-ジピペリジン];Ｂ−Ｄ[4,4-トリメチレンジピペリジンビスプロパン酸-ジアミノプロパン];Ｅ[2,2'-ビピロリジンビスプロパン酸-ペンタジアミン];Ｇ[4,4-トリメチレンジピペリジンビスプロパン酸-ジアミノプロパン];Ｈ[4,4-トリメチレンジピペリジンビスプロパン酸-N(2-アミノエチル)-ジアミノエタン];Ｉ[4,4'-トリメチレンジピペリジンビスプロパン酸-N(3-アミノプロピル)1,3-プロパンジアミン];Ｊ[4,4'-トリメチレンジピペリジンビスプロパン酸-3,3'-ジアミノ-N-メチル-ジプロピルアミン;Ｋ[4,4'-ジピペリジンビスプロパン酸-2,2'-ジアミノジエチルアミン];Ｌ[4,4'-ジピペリジンビスプロパン酸-2,2'-ジアミノN-メチルジエチルアミン];Ｍ[4,4'-ジピペリジンビスプロパン酸-3,3'-ジアミノ-ジプロピルアミン];Ｎ[4,4'-ジピペリジンビスプロパン酸-3,3'-ジアミノ-N-メチル-ジプロピルアミン];Ｏ[4,4'-トリメチレンジピペリジン-1,3-ジアムニノプロパン-N,N'-ジ-3-プロピオン酸];Ｐ[4,4’-トリメチレンジピペリジンビスプロパン酸--N,N’-ジメチル-1,3-ジアミノプロパン];Ｒ[4,4-トリメチレンジピペリジンビスプロパン酸-4,4'-ジピペリジン];Ｓ[4,4-トリメチレンジピペリジンビスプロパン酸-ジアミノプロパン];及びＴ[4,4'-トリメチレンジピペリジンビスプロパン酸-N-グリシドールジエチレントリアミン]。
【００２１】
別の態様において、本発明は、低分子薬物（例えば、ファモチジンが挙げられる）及び生物学的製剤（例えば、インスリンを含むペプチド）を含む、医薬品有効成分（ＡＰＩ）を含むマルチドーズ製剤を幅広く提供する。マルチドーズワクチン製剤のように、ＡＰＩを含むマルチドーズ製剤は、繰り返し針で穴があけられるに従い、汚染又は微生物の接種にさらされやすい。そのようなことから、いくつかの実施形態では、本発明は、保存されたＡＰＩ含有マルチドーズ製剤を提供する。通常、保存剤含有マルチドーズ製剤に含まれるＡＰＩは、下記を包含するが、これらに限られるものではない。
生物学的療法：アンチベニン（サンゴヘビ（Micrurus fulvius））（ウマ起源）、アンチベニン（ガラガラヘビ（Crotalidae））（ウマ起源）、アンチベニン（クロゴケグモ（Latrodectus mactans））、サケカルシトニン（Calcitonin-salmon）注射液、酢酸デスモプレシン、エタネルセプト、エポエチンアルファ（組換え）、エポエチンアルファ（組換え）、フォリトロピンアルファ注射液、インスリンアスパルト（組換え）、７０％インスリンアスパルトプロタミン懸濁液、３０％インスリンアスパルト注射液（ｒＤＮＡ起源）、インスリングラルギン［ｒＤＮＡ起源］注射液、インスリングルリジン（ｒＤＮＡ起源）注射液、Ｒｅｇｕｌａｒ  Ｕ−５００（濃縮液）（インスリンヒト注射液ＵＳＰ［ｒＤＮＡ］起源）、インスリンリスプロ注射液（ｒＤＮＡ起源）、７５％インスリンリスプロプロタミン懸濁液及び２５％インスリンリスプロ注射液（ｒＤＮＡ起源）、インターフェロンα−ｎ３（ヒト白血球由来）、インターフェロンα−２ｂ、組換え、インターフェロンα−２ａ、組換え、酢酸ロイプロリド注射液、オクトレオチド酢酸注射液、ペグインターフェロンα−２ａ、Ｒｈ免疫グロブリン（Rho (D) Immune Globulin）（ヒト）、Ｒｈ免疫グロブリン（Rho (D) Immune Globulin）（ヒト）、サルグラモスチム（組換え）、ソマトロピン（ｒＤＮＡ起源）、トラスツズマブ及びツベルクリン精製タンパク質誘導体。
【００２２】
ワクチン：LEPTODOG(登録商標)、RECOMBITEK(登録商標)(イヌレプトスピラ症に対する不活化ワクチン)、ALURABIFFA(登録商標)及びRABISIN(登録商標)(不活化狂犬病ワクチン補強剤)を含む狂犬病ワクチン、SYNTOXAN(登録商標)株(クロストリジウムワクチン)、HYORESP(登録商標)(マイコプラズマ‐ヒオニューモニエに対するブタ用不活化ワクチン)、CIRCOVAC(登録商標)(豚サーコウィルス２（ＰＣＶ２）に対する不活化ワクチン)、PARVORUVAX(登録商標)(豚パルボウィルス、レオウィルス及び豚丹毒に対するコンボワクチン)、鳥死菌ワクチン(鶏及び七面鳥用):種鶏／採卵鶏／ブロイラーのためのBIGOPEST(登録商標)、BINEWVAX(登録商標)、COR2(登録商標)、GUMBOPEST(登録商標)、GUMBORIFFA(登録商標)、IMOPEST(登録商標)、TUR3(登録商標)、FLUVAC(登録商標)、GALLIMUNE(登録商標)範囲（range）：ニューカッスル病(ND)、(IBD)伝染性気管支炎、Flu H9N2、Flu H5N9、(EDS)産卵低下症候群、頭部腫脹症候群（Swollen head syndrome）、REOウィルス、(ART)鳥類鼻気管炎、(IB)伝染性ファブリキウス嚢病、吸着されたジフテリア破傷風トキソイド無菌体百日咳（Diphtheria and tetanus toxoids and acellular pertussis adsorbed）、ジフテリア破傷風トキソイド無菌体百日咳に対するワクチン、Ｂ型肝炎(組換え体)及び不活化ポリオウィルスワクチン混合、吸着されたジフテリア破傷風トキソイド無菌体百日咳ワクチン、Ａ型肝炎ワクチン、不活化、不活化Ａ型肝炎ワクチン及びＢ型肝炎（組換え体）ワクチン、Ｂ型肝炎ワクチン（組換え体）及び肺炎球菌の多価ワクチン。
【００２３】
低分子：アポモルヒネ塩酸塩（Apomorphine hydrochloride）注射液、エナラプリラート（Enalaprilat）、注射用エノキサパリンナトリウム（Enoxaparin sodium）静注液(結合型エストロゲン、USP)、ファモチジン（Famotidine）、フルベストラント（Fulvestrant）注射液、ハロペリドール（Haloperidol）、ヒドロコルチゾンリン酸エステルナトリウム（Hydrocortisone sodium phosphate）ハイドロコートンリン酸エステル（Hydrocortone Phosphate）注射液、ヒドロモルフォン塩酸塩（Hydromorphone hydrochloride）、酒石酸水素メタラミノール（Metaraminol bitartrate）、塩酸ナルブフィン（Nalbuphine hydrochloride）、メチルプレドニゾロン酢酸エステル（Methylprednisolone acetate）懸濁注射液、USP、オンダンセトロン塩酸塩（Ondansetron hydrochloride）、ペニシリンＧベンザチン懸濁液（Penicillin G benzanthine suspension）、フィトナジオン（Phytonadione）、スクロース注射液中のグルコン酸ナトリウム第二鉄塩複合物（Sodium ferric gluconate complex in sucrose injection）、テストステロンエナント酸エステル（Testosterone Enanthate）注射液  ＵＳＰ、複数用量バイアル（Multiple Dose Vial）、メドロキシプロゲステロン酢酸エステル（Medroxyprogesterone acetate）懸濁注射剤、USP、メドロキシプロゲステロン酢酸エステル及びエストラジオールシピオナート（Medroxyprogesterone acetate and estradiol cypionate）懸濁注射剤、フルマゼニル（Flumazenil）注射液、メシル酸ドラセトロン（Dolasetron mesylate）注射液及びシメチジン塩酸塩（Cimetidine hydrochloride）注射液、ストレプトマイシン硫酸塩（Streptomycin sulfate）、USP。
【００２４】
本発明は、したがって、新規で進歩性のある抗菌性ポリアミド組成物、及びヒト以外の動物の乳腺炎を治療及び予防するためのその使用方法を提供する。前記方法は一般に、感染動物に効果量の獣医学的組成物を、完全に又は実質的に乳腺症を引き起こす病原体を除去又は癒すために投与することを含む。以下詳細に記載するように、ポリアミド化合物はまた、幅広いその他の、重要な、ヒト及び動物の病原体に対して高い活性を有する。更に、前記ポリアミドは、マウス及びラットに十分耐用されることが示されている。例えば、4,4’-トリメチレンジピペリジンビスプロパン酸-co-1,3-ジアミノプロパンの最大耐用量は約５ｍｇ／ｋｇ（ＩＰ）及び４０ｍｇ／ｋｇ（ＩＶ）であった。
【００２５】
【表１】
2019513793.tif 000014
【表１−２】
2019513793.tif 000015
【表１−３】
2019513793.tif 000016
【００２６】
「置換された」とは、アルキル、ヘテロシクリル又はアリール基中の炭素の、１以上の非炭素の置換体による置換を意味する。非炭素の置換体は、窒素、酸素及び硫黄から選択される。
「置換されていない」は、前記基が水素と炭素のみを含むことを意味する。
「ポリマー」という用語は、繰り返し単位を含む分子を意味する。「繰り返し単位」又は「モノマー」という用語は、ポリマー中の基であって、ポリマー中で繰り返す、あるいは複数回現れるものを意味する。ポリマーは、繰り返し単位又は「コモノマー」が化学的及び構造的に互いに異なる場合、コポリマーであってよい。
「薬学的に許容されるアニオン」という用語は、薬学的用途に適するアニオンを意味する。薬学的に許容されるアニオンは、ハロゲン化物、カルボナート、ビカルボナート、スルファート、ビスルファート、ヒドロキシド、ニトラート、クロリド、ホスファート、ペルスルファート、スルフィット、アセタート、アスコルバート、ベンゾアート、シトラート、二水素シトラート、水素シトラート、オキサラート、スクシナート、タルトラート、タウロコラート、グリココラート及びコラートを含むがこれらに限られるわけではない。
【００２７】
「薬学的に許容される末端基」という用語は、薬学的用途に適する末端基を意味する。薬学的に許容される末端基の例としては、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアルキル、（Ｃ3−Ｃ10）シクロアルキル、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ6−Ｃ14）アリール、（Ｃ2−Ｃ9）ヘテロアリール、（Ｃ1−Ｃ10）アルキルアミン、−Ｏ（Ｏ）Ｃ−（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、（Ｃ1−Ｃ10）アルキル−ＣＯＯＨ、（Ｃ3−Ｃ10）シクロアルキル−ＣＯＯＨ、−（Ｏ）ＣＨ3、−ＯＨ、アミド、グアニジノ基、グアニジニウムクロリド基、グアニジノベンゼン基、ジヒドロキシ基及びポリエチレングリコール基を含むがこれらに限られるわけではない。
開示されたアミン官能性ポリアミドの「効果量」という用語は、治療される特定の状態において治療的及び／又は予防的効果を達成するために十分な量であり、例えば、乳腺炎に関係する症状の予防又は低減をもたらす量である。投与される開示されたアミン官能性ポリアミドの正確な量は、乳腺炎又は治療される感染症のタイプ及び深刻さ、並びに動物の、例えば一般的な健康状態、年齢、体重及び薬剤に対する耐性のような特徴に依存するであろう。
【００２８】
前記方法のある実施形態において、効果量の前記ポリアミド又はオクテニジンは、安定な免疫学的組成物を形成するため、１以上の抗原に添加される。
本発明の別の態様に従うと、抗菌性アミン官能性ポリアミドのワクチン製剤を保存するための使用が提供される。
【００２９】
保存されたワクチン組成物
本発明に従うと、保存されたワクチン組成物は、水溶性、抗菌性ポリアミドポリマーを含む。特に効果的なポリアミドとしては、ポリマーＢ、Ｃ、Ｄ、Ｕ及びＴが挙げられる。
本明細書において用いられる場合、「保存効果量」という用語は、多目的ワクチン製剤において汚染微生物の成長を妨げるために十分な保存剤の濃度を指す。
本発明の保存剤含有免疫原性組成物は、中でも、大腸菌（E. coli）、クレブシエラ属種（Klebsiella spp.）、 エンテロバクター属種（Enterobacter spp.）、サルモネラ属種（Salmonella spp.）、 シトロバクター属種（Citrobacter spp.）、 セラチア属種（Serratia spp.）、赤痢菌属種（Shigella spp.）、エドワージエラ属種（Edwardsiella spp.）、ハフニア属種（Hafnia spp.）、モーガネラ属種（Morganella spp.）、プロビデンシア属種（Providencia spp.）、エルシニア属種（Yersinia spp.）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、スラフィロコッカス属種（Staphylococcus spp.）、シュードモナス属種（Pseudomonas spp.）、B 群溶血性レンサ球菌（Streptococcus agalactiae）、ストレプトコッカスディスガラクティエ（Streptococcus dysgalactiae）、ストレプトコッカス属種（Streptococcus spp.）、腸球菌（Enterococci）、 コリネバクテリウム属種（Corynebacterium spp.）、 アルカノバクテリウム属種（Arcanobacterium spp.）、放線菌属種（Actinomyces spp.）、マイコバクテリウム属種（Mycobacterium spp.）、プロトテカ属種（Prototheca spp.）、 マイコプラズマ属種（Mycoplasma spp.）、エルウィニア属種（Erwinia spp.）、ラクトバシラス属種（Lactobacillus spp.）を含むいくつかの病原体に耐性を有することができる。
ある実施形態において、保存剤含有組成物は、ボレリア・ブルグドルフェリ（Borrelia burgdorferi ）細菌抽出物（例えば、米国特許第５，５２３，０８９号、米国特許第５，５８２，９９０号、米国特許第５，６８８，５１２号、米国特許第５，７７７，０９５号及び米国特許第６，０８３，７２２号のいずれかに開示された抗原。それぞれSymbicom社の特許）を含む。ある実施形態において、抗原はＯｓｐＡ（例えば、米国特許第６，１５９，４７７号又は米国特許第６，３６８，６０３号において開示されるとおり。両方ともMerial社の特許）を含む発現ベクターを含む。
【００３０】
別の実施形態において、保存剤含有マルチドーズ製剤は、大腸菌バクテリン−トキソイド（例えば、Merial社のＪ−ＶＡＣ(登録商標)）を含む。別の実施形態において、マルチドーズ製剤は、以下のワクチン組成物中の１以上の抗原を含む：LEPTODOG(登録商標)、RECOMBITEK(登録商標)(イヌレプトスピラ症に対する不活化ワクチン)、ALURABIFFA(登録商標)及びRABISIN(登録商標)(不活化狂犬病ワクチン補強剤)を含む狂犬病ワクチン、SYNTOXAN(登録商標)株(クロストリジウムワクチン)、HYORESP(登録商標)(マイコプラズマ‐ヒオニューモニエに対するブタ用不活化ワクチン)、CIRCOVAC(登録商標)(豚サーコウィルス２（ＰＣＶ２）に対する不活化ワクチン)、PARVORUVAX(登録商標)(豚パルボウィルス、レオウィルス及び豚丹毒に対するコンボワクチン)、鳥死菌ワクチン(鶏及び七面鳥用):種鶏／採卵鶏／ブロイラーのためのBIGOPEST(登録商標)、BINEWVAX(登録商標)、COR2(登録商標)、GUMBOPEST(登録商標)、GUMBORIFFA(登録商標)、IMOPEST(登録商標)、TUR3(登録商標)、FLUVAC(登録商標)、GALLIMUNE(登録商標)範囲（range）：ニューカッスル病(ND)、(IBD)伝染性気管支炎、Flu H9N2、Flu H5N9、(EDS)産卵低下症候群、頭部腫脹症候群（Swollen head syndrome）、REOウィルス、(ART)鳥類鼻気管炎、(IB)伝染性ファブリキウス嚢病に対するワクチン。
【００３１】
ある実施形態において、前記組成物はマルチドーズワクチン組成物である。いくつかの実施形態において、マルチドーズワクチン組成物は、１価の組成物である。別の実施形態において、マルチドーズワクチン組成物は多価ワクチン組成物である。
マルチドーズ組成物が１価の組成物である実施形態において、抗原は、下記ワクチンの１つに存在する抗原から選択される１つの抗原を含む、１つの抗原を含んでもよい：LEPTODOG(登録商標)、RECOMBITEK(登録商標)(イヌレプトスピラ症に対する不活化ワクチン)、ALURABIFFA(登録商標)及びRABISIN(登録商標)(不活化狂犬病ワクチン補強剤)を含む狂犬病ワクチン、SYNTOXAN(登録商標)株(クロストリジウムワクチン)、HYORESP(登録商標)(マイコプラズマ‐ヒオニューモニエに対するブタ用不活化ワクチン)、CIRCOVAC(登録商標)(豚サーコウィルス２（ＰＣＶ２）に対する不活化ワクチン)、PARVORUVAX(登録商標)(豚パルボウィルス、レオウィルス及び豚丹毒に対するコンボワクチン)。
【００３２】
マルチドーズ組成物が多価組成物である実施形態において、前記組成物は、次の中から選択される抗原を含む少なくとも２つの抗原を含んでよい：カナリアポックスベクターを用いた犬ジステンパー（canarypox-vectored canine distemper）、アデノウィルス２型、パラインフルエンザ、パルボウィルス(MLV)、イヌレプトスピラバクテリン（Leptospira Canicola bacterin）及び黄だん出血病レプトスピラバクテリン（例えば、Merial社のRECOMBITEK(登録商標)C6)。別の実施形態において、多価組成物は、脳脊髄炎−インフルエンザワクチン（Encephalomyelitis-Influenza Vaccine）、イースタンアンドウェスタン（Eastern and Western）、死滅ウィルス、破傷風トキソイド（すなわちMerial社のEQUINE EWTF）を含む。
上記から、本発明のいくつかの目的が達成され、他の有利な結果が得られたことが、見て取れるであろう。上記製剤、製品及びプロセスは、本発明の範囲から乖離することなく様々な変更を行うことが可能であり、上記記述に含まれ、添付された表に示される全ての内容は、例示であり、限定を加えるものではないことが理解されなければならないことを意図している。
【００３３】
本発明の要素又はその好ましい実施形態を紹介する場合、冠詞「１つの（ａ）」「１つの（ａｎ）」、「その（ｔｈｅ）」、及び「前記（said）」は、１以上の要素が存在することを意味することを意図している。「含む（comprising）」、「含む（including）」及び「有する（having）」との用語は、包括的で、列記された要素の他に追加的な要素が存在してもよいことを意味することを意図している。更に、「から本質的に成る（consisting essentially of）」という用語は、列記された要素の他に追加的な要素が存在してもよいが、「活性成分」と考えられるであろうものではないこと（例えば、非活性賦形剤）を意味することを意図している。最後に、「から成る（consisting of）」という用語は、列記された要素のみが含まれることを意味することを意図している。
別途注記されていない限り、技術用語は、通常の用法に従って用いられる。一般的な分子生物学における用語の定義は、Oxford University Pressより出版された、Benjamin Lewin, Genes V. , 1994 (ISBN 0-19-854287-9); Blackwell Science Ltd.により出版された、 Kendrew et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, 1994 (ISBN 0-632-02182-9); 及びVCH Publishers, Inc.により出版された、Robert A. Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, 1995 (ISBN 1-56081-569-8)において見出すことができる。
【００３４】
ある態様において、本発明は、保存されたマルチドーズ製剤を形成し、それによってマルチドーズ製剤を保存するため、マルチドーズ製剤をポリアミドポリマー及びオクテニジンから選択される非水銀性保存剤と混合することを含み、治療性生物学的物質、ワクチン及び低分子を含有するものを含む、マルチドーズ製剤を保存する方法を提供する。
いくつかの実施形態において、本発明は、保存されたマルチドーズ製剤を調製する方法を提供し、該方法は、以下のステップ、を含む、から実質的に成る、又はから成る。ａ）少なくとも２効果投与量の１以上の医薬品有効成分（ＡＰＩ）を提供するステップ、ｂ）保存効果量の、１以上の抗菌性ポリアミドポリマー、オクテニジン及びそれらの組合せから選択される非水銀性保存剤を提供するステップ、ｃ）ＡＰＩと非水銀性保存剤を水性及び／又は油性成分とともに組み合わせて保存されたマルチドーズ液体製剤を形成するステップ、ｄ）場合によっては、１以上の賦形剤を提供するステップ、ｅ）場合によっては、液体製剤を含有する容器を提供するステップ、ｆ）場合によっては、滅菌し、液体製剤を容器に移すステップ、及びｇ）場合によっては、液体製剤をフリーズドライ、凍結乾燥、及び／又はガラス化し、それによって保存されたマルチドーズ製剤を生成するステップであって、該製剤は水銀性保存剤を含有しないものであること。
【００３５】
前述のステップは任意の合理的な順番で行ってよい。例えば、非水銀性保存剤、ＡＰＩ及び任意の賦形剤は、水性及び／又は油性成分を含有する混合容器に配置してもよい。一度溶液、懸濁液、サスポエマルジョン、エマルジョン、又はミセル溶液中に徹底的に混合されれば、保存された液体製剤は、ろ過−滅菌され、無菌的に、ワクチンバイアルを含む滅菌容器に移されてよい。賦形剤は、非水銀性保存剤の溶解性を改善するものを含む任意の薬学的に又は獣医学的に許容される賦形剤を含んでよい。更に、任意の適切な保存された液体製剤を生産してよい。
特定の実施形態においては、液体製剤は水性溶液、ミセル溶液、膨張したミセル溶液、水中油型エマルジョン、油中水型エマルジョン又はサスポエマルジョンであってよい。一般に、保存された免疫学的又はその他の生物学的製剤において、抗原又はその他の生物学的物質は多相液体製剤の水相中に溶解する。エマルジョンはミクロエマルジョン又は「サブミクロ」エマルジョンであってよい。サブミクロエマルジョンは一般に本明細書において「ナノエマルジョン」として参照される。
更に、保存されたマルチドーズ製剤中に保存剤が「保存効果量」存在するとみなされるためには、該製剤は、本明細書に開示されるように、微生物の接種から保護されるべきである。例えば、保存されたマルチドーズ製剤に接種された細菌の量が時間と共に減少する場合、非水銀性保存剤が、保存効果量存在するとみなされる。別の例では、保存剤は、保存された製剤が実施例１、２及び／又は３に記載の試験に合格した場合、保存効果量存在する。
【００３６】
別の態様において、本発明は、保存されたマルチドーズ製剤を提供し、ａ）該製剤は少なくとも２効果投与量の１以上の医薬品有効成分（ＡＰＩ）、及び保存効果量の、１以上の抗菌性ポリアミドポリマー、オクテニジン、及びそれらの組合せから選択される非水銀性保存剤を含み、又はｂ）該製剤は開示された保存されたマルチドーズ製剤を調製する方法に従って生産され、該製剤は水銀性保存剤を含有しない。
【００３７】
いくつかの実施形態において、保存されたマルチドーズ製剤は、以下より選択されるポリアミドポリマーを含む：
【化１１】
2019513793.tif 000017
,
2019513793.tif 000018
,
2019513793.tif 000019
,
2019513793.tif 000020
,
及びこれらの組合せ。
【００３８】
いくつかの実施形態において、保存されたマルチドーズ製剤は、以下の構造を有するポリアミドポリマーを含む：
【化１２】
2019513793.tif 000021
; 及び
ここで、サイズ排除クロマトグラフィーで測定された質量平均分子量（ＷＡＭＷ）は約１．０ｋＤａから約１５．０ｋＤａである。別の実施形態において、該ポリアミドは、ＷＡＭＷが約２．０ｋＤａから約１０ｋＤａを有してよい。また別の実施形態において、該ポリアミドは、ＷＡＭＷが約２．５ｋＤａから約７．７６ｋＤａ、又はＷＡＭＷが約７．７６ｋＤａを有してよい。
【００３９】
別の態様において、本発明は、少なくとも１つの抗原を含み、更に少なくとも約０・０１ｍｇ／ｍＬのポリアミドポリマー、又は少なくとも約０．１ｍｇ／ｍＬのオクテニジンを含む、免疫原性組成物を提供する。該免疫原性組成物において、ポリアミドポリマー、又はオクテニジンは、約０．０５ｍｇ／ｍＬから約５ｍｇ／ｍＬの間の濃度、又は約０．１ｍｇ／ｍＬから約０．２５ｍｇ／ｍＬの間の濃度で存在してよい。いくつかの実施形態において、該ポリアミドポリマー、又はオクテニジンは、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．１２５ｍｇ／ｍＬ又は約０．２５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。本発明は開示され、当業者は、これらの安全及び効果的な非水銀性保存剤の濃度を、所望の保存効果を達成するよう日常的に調整することができるだろう。
また別の実施形態において、免疫原性組成物は、約０．１ｍｇ／ｍＬ以上のポリアミドポリマーを含む。いくつかの実施形態において、該組成物は約０．１ｍｇ／ｍＬ以上のオクテニジンを含む。
【００４０】
いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は更にアジュバントを含む。本発明の実施に用いるために適切なアジュバントは（１）アクリル又はメタクリル酸のポリマー、マレイン酸無水物及びアルケニル誘導体ポリマー、（２）免疫刺激性配列（ＩＳＳ）、例えば、１以上の非メチル化ＣｐＧユニットを有するオリゴデオキシリボヌクレオチド配列（Klinman 他, 1996; ＷＯ９８／１６２４７）、（３）水中油型エマルジョン、例えば、M. Powell, M. Newman, Plenum Pressによって出版された“Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach”（1995）の１４７頁に記載のＳＰＴエマルジョン及び同文書の１８３頁に記載のＭＦ５９エマルジョン、（４）４級アンモニウム塩を含有するカチオン性脂質、例えば、ＤＤＡ、（５）サイトカイン、（６）アルミニウムヒドロキシド又はアルミニウムホスファート、（７）サポニン（Quillaja saponariaの樹皮からのものを含む）、（８）本出願に引用及び参照により援用された任意の文書中で議論されたその他のアジュバント、又は（９）それらの組合せ又は混合物である。
水中油型エマルジョン（３）は、特にウィルスベクターに適切であり、軽液体パラフィン油（欧州薬局方タイプ）、イソプレノイドオイル、例えば、スクアラン、スクアレン、アルケンのオリゴマー化によりもたらされるオイル、例えば、イソブテン又はデセン、直鎖アルキル基を有する酸又はアルコールのエステル、例えば植物油、エチルオレアート、プロピレングリコール、ジ(カプリラート/カプラート)、グリセリントリ(カプリラート/カプラート)及びプロピレングリコールジオレアート、又は分岐脂肪族アルコール又は酸のエステル、特にイソステアリン酸 エステルに基づくことができる。オイルは、エマルジョンを形成するために乳化剤と組み合わせて用いられる。乳化剤は非イオン性界面活性剤、例えば、一方がソルビタン、マンニド（mannide）（例えば、無水マンニトールオレアート）、グリセリン、ポリグリセリン又はプロピレングリコールであって、もう一方がオレイン酸、イソステアリン酸、リシノール酸又はヒドロキシステアリン酸のエステルで、該エステルは場合によってはエトキシル化され又はポリオキシプロピレン-ポリオキシエチレンコポリマー ブロック、例えばプルロン酸、例えばＬ１２１である。
【００４１】
タイプ（１）のアジュバントポリマーのうち、好ましいのは架橋アクリル酸又はメタクリル酸ポリマーであり、特に糖のポリアルケニルエーテル又はポリアルコールによって架橋されたものである。これらの化合物は、カルボマー（Pharmeuropa, vol. 8, no. 2, June 1996)の名の下に公知である。当業者はまた、米国特許第２，９０９，４６２号を参照することが可能であり、それには、そのようなポリヒドロキシル化合物によって架橋されたアクリル酸ポリマーで、少なくとも３つのヒドロキシル基、好ましくは８を超えないそのような基を有し、少なくとも３つのヒドロキシル基の水素が、少なくとも２つの炭素原子を有する不飽和脂肪族ラジカルによって置き換えられているものが提供されている。好ましいラジカルは、２から４個の炭素原子を含み、例えば、ビニル、アリル及びその他のエチレン性不飽和基である。不飽和ラジカルはまたその他の置換基、例えば、メチルを含むことができる。Carbopol (BF Goodrich社、オハイオ、米国)の名称で市販されている製品が特に適切である。それらはアリルサッカロ−ス又はアリルペンタエリトリトールによって架橋されている。それらの中でも、Carbopol 974P、934P及び971Pを参照する。
【００４２】
いくつかの実施形態は、免疫原性組成物の抗原性が１年以上、１．５年以上、２年以上又は２．５年以上安定である。
別の実施形態において、免疫原性組成物（又はその他の保存された製剤）の１以上の微生物の接種に続いて、前記微生物の濃度は、保存剤の存在のおかげで時間と共に低減する。この低減が観察される場合、非水銀性保存剤は「保存効果量」存在するとみなされる。
いくつかの実施形態において、１以上の細菌株の接種に続いて、免疫原性組成物（又はその他の保存された製剤）は、２４時間で最初の微生物カウントから少なくとも１．０  ｌｏｇの減少、７日で測定された先の値から少なくとも３．０  ｌｏｇの減少、２８日で測定された先の値から０．５  ｌｏｇ以上の増加を示した。
また別の実施形態において、１以上の細菌株の接種の後、免疫原性組成物（又はその他の保存された製剤）は、接種後６時間で最初に計算されたカウントから少なくとも２．０  ｌｏｇの減少、２４時間で測定された先の値から少なくとも３．０  ｌｏｇの減少を示し、２８日でも回復しなかった。
【００４３】
いくつかの実施形態において、１以上の微生物は、緑膿菌（P. aeruginosa）、ブドウ球菌（ S. aureus）、大腸菌（ E. coli）及び and 枯草菌（B. subtilis）から選択される。
その他の実施形態において、免疫原性組成物（又はその他の保存された製剤）は、複数回接種される。例えば、第２の接種は最初の接種から６時間後に起こってよく、第３の接種は、最初の接種から２４時間後に起こってよく、第４の接種は最初の接種から７日後、及び第５の接種は、最初の接種から１４日後に起こってよい。
いくつかの実施形態において、免疫原性組成物（又はその他の保存された製剤）は更に１以上の緩衝液、凍結保護物質、塩、二価陽イオン、非イオン性洗剤、及びフリーラジカル酸化阻害剤を含んでもよい。
別の態様において、本発明は、本明細書に開示された免疫原性組成物（又はその他の保存された製剤）を含有するバイアルを提供する。
いくつかの実施形態において、該バイアルは２ドーズを超える免疫原性組成物（又はその他の保存された製剤）を含んでよい。
別の態様において、本件開示は、開示された方法に従って作られた、保存されたマルチドーズ製剤を提供する。
別の態様において、本件開示は、少なくとも１つの抗原、及び少なくとも約０．０１ｍｇ／ｍｌから約０．２５ｍｇ／ｍｌのポリアミドポリマー、又は少なくとも約０．１ｍｇ／ｍｌから約１．０ｍｇ／ｍｌのオクテニジンを含む、免疫原性組成物を提供する。
【００４４】
いくつかの実施形態において、免疫原性組成物（又はその他の保存された製剤）は、約０．０５ｍｇ／ｍＬと約５ｍｇ／ｍＬの間、又は約０．１ｍｇ／ｍＬと約０．２５ｍｇ／ｍＬの間のポリアミドポリマー又はオクテニジンを含む。
いくつかの実施形態において、免疫原性組成物（又はその他の保存された製剤）は、約０．１ｍｇ／ｍＬと約０．２５ｍｇ／ｍＬの間のポリアミドポリマー又はオクテニジンを含む。
その他の実施形態において、免疫原性組成物（又はその他の保存された製剤）は、約０．１ｍｇ／ｍＬ以上のポリアミドポリマーを含む。
またその他の実施形態において、免疫原性組成物（又はその他の保存された製剤）は、約０．１ｍｇ／ｍＬ以上のオクテニジンを含む。
【００４５】
いくつかの実施形態において、比較的低い量の塩、特にリン酸塩を含有する緩衝液が免疫原性組成物、又はその他の保存されたマルチドーズ製剤に、オクテニジンの溶解性を改善するために加えられる。これは、オクテニジンは通常用いられるリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に溶解性が低いという出願人の予期しない発見に基づいている。低溶解性の問題に対応するため、出願人は様々な修正を試み、最終的に、リン酸ナトリウムを重炭酸ナトリウムに置き換えると求められる溶解性が与えられると判断した。従って、いくつかの実施形態において、オクテニジンを含むマルチドーズ製剤は、標準ＰＢＳよりも少ないリン酸を含む。従って、いくつかの実施形態において、緩衝液は１００Ｌにつき、約５ｇのＮａＨ2ＰＯ4及び約２００ｇの重炭酸ナトリウムを（約２０：１の比率でＮａ2ＨＰＯ4がＫＨ2ＰＯ4に対して含まれる標準ＰＢＳの代わりに）含んでもよい。
いくつかの実施形態において、緩衝液は比較的少ないＮａＣｌを、適量のグルコースを代償的に添加することによって浸透圧モル濃度を維持しつつ、含んでもよい。該緩衝液は更に追加的な二価イオン、ＣａＣｌ2及びＭｇＣｌ2で補われてもよい。
【００４６】
いくつかの実施形態において、リン酸の量は一般に標準ＰＢＳに比較して５０倍減少され、重炭酸がリン酸の代わりに用いられる。
いくつかの実施形態において、免疫原性組成物はアジュバントを含む。
ある免疫原性組成物の実施形態において、免疫原性組成物の抗原性は、１年、１．５年、２年、又は２．５年以上安定である。
一般に、「安定」なマルチドーズ製剤は、許容できない程度の微生物の成長を示さず、生物学的活性分子又は低分子成分が、実質的に全く、又は全く崩壊、又は劣化を示さない。本明細書で用いられる場合、「安定な免疫原性組成物」とは、対象動物に投与された場合、所望の免疫学的反応を引き出すことが可能な状態のままである保存された製剤である。安定な免疫原性組成物とはしばしば、特定の時間間隔において１／２  ｌｏｇを超える活性を失わないものを含む。例えば、「少なくとも１年安定」とは、最初の力価が約Ｘ  ｌｏｇ10 ＣＣＩＤ50／ドーズの活性である免疫原性組成物が、保存された免疫原性組成物を調製してから少なくとも１年後において、少なくとも約（Ｘ−０．５）ｌｏｇ10ＣＣＩＤ50／ドーズの活性を維持することを意味する（例えば、滅菌容器に置かれた場合、又は滅菌されたバイアルの中に含有されたフリーズドライ錠剤から再懸濁された場合）。
【００４７】
ある特定の実施形態において、保存された免疫原性組成物を含む、保存されたマルチユーズ製剤は、数多くのマルチドーズ容器への接種／挿入の繰り返しを伴う特定の時間、安定のままである。そのような場合、「少なくとも１年、１０回の使用まで安定」というような用語を、マルチドーズ容器中に含有された保存された製剤を記載するために用いてよい。いくつかの好ましい実施形態において、マルチドーズ製剤は１０、１５、２０、３０、４０、５０又は１００接種／挿入を行ってさえ安定である。
ある実施形態において、免疫原性組成物への１以上の微生物の接種の後、前記微生物の濃度は時間と共に低減する。本明細書において用いられる場合、「組成物への接種」は一般に、組成物への潜在的に汚染微生物を含み得る異物（例えば、皮下注射針）の導入を指す。接種の例としては、マルチドーズワクチン製剤を含有するバイアルへの針の繰り返し挿入である。別の例は、マルチドーズワクチン製剤を含有するバイアルへの針の繰り返し挿入である。先述のそれぞれは、本明細書で用いられる「接種」の例である。
【００４８】
いくつかの実施形態において、免疫原性組成物への１以上の細胞株の接種の後、該組成物は、２４時間で最初の微生物カウントから少なくとも１．０  ｌｏｇの減少、７日で測定された先の値から少なくとも３．０  ｌｏｇの減少、及び２８日で測定された先の値から０．５  ｌｏｇ以下の増加を示す。
別の実施形態において、免疫原性組成物への接種の後、該組成物は、接種後６時間で最初に計算されたカウントから少なくとも２．０  ｌｏｇの減少、２４時間で測定された先の値から少なくともの３．０  ｌｏｇの減少を示し、２８日においても回復しなかった。いくつかの実施形態において、１以上の微生物は、緑膿菌（P. aeruginosa）、ブドウ球菌（ S. aureus）、大腸菌（ E. coli）及び枯草菌（B. subtilis）から成る群から選択される
いくつかの実施形態において、該組成物は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又はそれ以上の回数を含む複数回接種される。１を超える任意の接種回数が出願人によって想定される。
【００４９】
いくつかの実施形態において、第２の接種は最初の接種から６時間後に起こり、第３の接種は最初の接種から２４時間後に起こり、第４の接種は最初の接種から７日後に起こり、及び第５の接種は最初の接種から１４日後に起こる。
その他の実施形態において、免疫原性組成物は１以上の緩衝液、凍結保護物質、塩、二価陽イオン、非イオン性洗剤、及びフリーラジカル酸化阻害剤を含む。
ある実施形態において、本件開示は、マルチドーズ免疫原性又はその他の活性成分含有組成物を含有するバイアルを提供する。
ある実施形態において、該バイアルは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０ドーズを超える免疫原性組成物を含有する。
ある実施形態において、本件開示は、生物学的物質又は低分子活性成分を含むマルチドーズ製剤を含むプレフィルドワクチン送達デバイスを提供する。いくつかの実施形態において、該デバイスは、シリンジを含む。その他の実施形態において、該デバイスは二重又は複数チャンバーシリンジ又はバイアル又はそれらの組合せを含む。また別の実施形態において、該プレフィルドワクチン送達デバイスは、筋肉内又は皮下注射のために製剤された多価免疫原性組成物を含む。
【００５０】
ある実施形態において、該容器は、２ドーズ以上の請求項７の多価免疫原性組成物を含み、ここで各ドーズは０．１から２ｍＬの組成物を含む。いくつかの実施形態において、該組成物はポリアミドポリマーを約０．１ｍｇ／ドーズから約０．２５ｍｇ／ドーズの間、又は約０．０５ｍｇ／ドーズと約０．１２５の間の濃度で含み、ここで該ドーズは０．５ｍＬドーズである。
以下の実施例は、単に本発明を更に例示し説明することを意図している。実施例は、したがって、本発明の範囲、又は実施してよいやりかたを限定するものとみなされるべきではない。
【実施例】
【００５１】
（実施例）
下記記載のとおり、抗菌性ポリアミドポリマー及びオクテニジンの両方について試験し、有効なワクチン保存剤であることを証明した。表２は、ＵＳＰ及びＥＰのワクチン保存剤のための抗菌効果試験の要件を比較したものを示す。
【表２】
2019513793.tif 000022
【００５２】
表３及び４は、欧州薬局方（セクション５．１．３）及び獣医学的使用のためのワクチンのための欧州薬局方の判定基準を示す。
【表３】
2019513793.tif 000023
【表４】
2019513793.tif 000024
【００５３】
実施例１：ポリアミド保存剤の研究
Meyer 他(J. Pharm. Sc. 96(12):3155-67; 2007) は、チメロサールについて以下の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）データを示した：４−８μｇ／ｍＬ（大腸菌、緑膿菌）；０．２μｇ／ｍＬ（黄色ブドウ球菌）；３２μｇ／ｍＬ（カンジダ・アルビカンス）；１２８μｇ／ｍＬ（黒コウジカビ（Aspergillus niger））。更に、様々なMerial社の獣医学的ワクチン中のチメロサールの濃度は約０．００５％から約０．０１％である（＝約５０から約１００μｇ／ｍL）。先の記述に基づき、３つの異なるドーズ（０．１、１及び１０ｍｇ／ｍＬ）のポリアミドポリマーを出発点として選択した。出願人は、あらかじめこれらの濃度が効果的であるか否かを予測することはできなかった。
【００５４】
【化１３】
2019513793.tif 000025
ポリマー 「B」; MW = 7.6 kDa (表１参照)
【００５５】
【表５】
2019513793.tif 000026
満足のいく獣医学的及びＵＳＰが３つのドーズについて得られた。低用量効果は認められず、最適なドーズは、１００μｇ／ｍＬ未満であり得ることが示された。
【００５６】
方法：各濃度のポリアミドポリマーについて、希釈中和を、１０ｍＬの試験製品を１００μＬの各試験株で接種することによって行った。計数を、０日、６時間（細菌のみ）、２４時間（細菌のみ）、７日、１４日、及び２８日に行った。各計数において、１ｍＬのサンプルを９ｍＬの中和溶液中で中和し（１０分間）、黄色ブドウ球菌については同じ溶液中で２度目の１：１０希釈を行った。続いて１ｍＬの混合物をペトリ皿に移し、１５ｍＬの寒天培地（細菌用Trypcase Soy Agar並びに酵母及びカビ用Sabouraud Dextrosed Agar）で覆った。計数は、細菌は２４−４８時間、３２．５℃±２．５℃で、酵母及びカビは４８−７２時間、２２．５℃±２．５℃でインキュベートした後に行った。試験微生物には、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、カンジダ・アルビカンス、及びアスペルギルス ブラシリエンシスが含まれていた。最後に、中和溶液は、Ｔｗｅｅｎ  ８０（１０％）、レシチン  （２％）、サポニン（２％）、チオ硫酸ナトリウム（０．５％）及び緩衝溶液塩化物を含有した。サポニンはQuillaja saponariaの樹皮からのものであった。
【００５７】
【表６】
2019513793.tif 000027
【００５８】
【表７】
2019513793.tif 000028
【００５９】
【表８】
2019513793.tif 000029
【００６０】
実施例２：オクテニジン保存剤の研究
方法：各濃度のオクテニジンについて、希釈中和を実施例１に開示されているように行った。
【表９】
2019513793.tif 000030
【００６１】
【表１０】
2019513793.tif 000031
【００６２】
【表１１】
2019513793.tif 000032
【００６３】
【表１２】
2019513793.tif 000033
【００６４】
【表１３】
2019513793.tif 000034
【００６５】
【表１４】
2019513793.tif 000035
【００６６】
実施例３：水中油型エマルジョン保存剤研究
方法：各保存剤（又は保存剤の組合せ）の濃度について、希釈中和及びその他の試験を実施例１に開示された方法で行った。「ＴＳ６」製剤は水中油型エマルジョンであり、米国特許第７，３７１，３９５  Ｂ２号に記載されている（Merial社の特許；特に実施例１を参照）。各製剤（表１５参照）について、ＴＳ６抗原成分は、ブタサーコウィルス２ (PCV2) ウィルス様粒子 (VLPs)及び不活化マイコプラズマ・ハイオニューモニエ（M. hyo）（米国特許第７，３７１，３９５  Ｂ２号実施例３及び５参照）から成った。
【００６７】
【表１５】
2019513793.tif 000036
【００６８】
まとめると、実施例１から３に（及びこの開示全体を通じて）示されたデータは、ポリアミドポリマーとオクテニジンの両方が安全で効果的なワクチン保存剤であることを示している。最後に、実施例３は、ポリアミドポリマーとオクテニジンは、著しく厳しいワクチン環境（水中油型エマルジョン）にあっても効果的な保存剤であることを示している。例えば、この複雑な製剤システムは、ポリアミドポリマー及び／又はオクテニジンの保存剤の有効性を損ないかねないタンパク質及び界面活性剤との望ましくない相互作用の多くの機会を示す。実際、先の実験において、出願人は、１００μｇ／ｍＬのポリアミドポリマー又はオクテニジンのいずれかのみでは、満足のいく保存剤効果をこの油性ワクチン環境では示さないことを表した。従って、表１５にまとめたポジティブな結果を観察することは極めて予想外であった。また最後に、抗菌性ポリアミドポリマーは予期されない優れた有効性をオクテニジン及び水銀性保存剤、チメロサール（Thiomersal）に対して油性ワクチン環境において証明した。
【００６９】
このように本発明の好ましい実施形態について詳細に記述してきたが、上記実施例に規定される本発明は、多くの明らかなそれらの変化形が本発明の精神及び範囲から逸脱することなく可能であることから、上記記述において設定された特有の詳細に限定されるものではないことが、理解されるべきである。
【国際調査報告】
2019513793.tif 000042
2019513793.tif 000043
2019513793.tif 000044
2019513793.tif 000045