(57)【要約】  本発明は、金属塩と、金属表面に結合することができる官能基を有する少なくとも１種の配位子とを含む第１の液体を提供する工程と、還元剤を含む第２の液体を提供する工程と、液滴を生成するように動作可能な少なくとも１つの液滴発生器を提供する工程と、少なくとも１つの液滴発生器に第１の液体の液滴を生成させる工程と、液滴を気体に通し、第２の液体と接触させ、金属塩および少なくとも１種の配位子を還元剤と接触させ、それによりナノ粒子の自己形成を引き起こす工程とを含み、該ナノ粒子は該金属のコアとコアに共有結合した複数の該配位子を含むコロナとを有する、ナノ粒子を製造するための方法を提供する。また、本発明の方法によって製造されたナノ粒子、およびそのようなナノ粒子の医薬における使用も提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナノ粒子を製造するための方法であって、
金属塩および金属表面に結合可能な官能基を有する少なくとも１種の配位子を含む第１の液体を提供する工程、
還元剤を含む第２の液体を提供する工程、
液滴を生成するように動作可能な少なくとも１つの液滴発生器を提供する工程、
前記少なくとも１つの液滴発生器に前記第１の液体の液滴を生成させる工程、
前記液滴を気体に通し、前記第２の液体と接触させ、前記金属塩および前記少なくとも１種の配位子を前記還元剤と接触させ、それにより、前記金属のコアおよび前記コアに共有結合した複数の前記配位子を含むコロナを有する前記ナノ粒子を自己形成させる工程
を含む、方法。
【請求項２】
前記金属塩が、Ａｕ、Ａｇ、Ｃｕ、Ｐｔ、Ｐｄ、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｇｄ、ＥｕまたはＺｎの塩を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記金属塩が、ＨＡｕＣｌ４を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも１種の配位子が、硫化物、チオールを含むか、またはジスルフィド架橋によって連結された配位子二量体として提供される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも１種の配位子が、炭水化物部分、アルキル鎖および／またはグリコール鎖またはグルタチオンを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記炭水化物部分が、単糖類、二糖類またはオリゴ糖である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記炭水化物部分が、グルコース、ガラクトース、グルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、フコースおよび／またはラクトース、またはそれらのグリコシドを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも１種の配位子が、オリゴエチレングリコールまたはポリエチレングリコールを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記少なくとも１種の配位子が、１−アミノ−１７−メルカプト−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサ−ヘプタデカノールまたはＨＳ−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＨを含み、式中、ｍは２〜３０の間、所望により６〜１０の間である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記少なくとも１種の配位子が、治療剤または生体影響剤、所望により細胞傷害性化合物を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記少なくとも１種の配位子が、ドキソルビシン、イリノテカン、白金（ＩＩ）、白金（ＩＶ）、テモゾロミド、クロロトキシン、カルムスチン、カンプトテシン、ドセタキセル、ソラフェニブ、メイタンシン、メイタンシノイド（例えば、メイタンシノイドＤＭ１またはメイタンシノイドＤＭ４）、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）およびヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤からなる群から選択される化合物を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記少なくとも１種の配位子が、
【化１】
2019513184.tif 000004
2019513184.tif 000005
から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記治療剤または生体影響剤が、ペプチド、ポリペプチド、または核酸を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記ペプチドまたはポリペプチドが、抗原、所望により自己抗原である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記少なくとも１種の配位子が、検出可能なラベルを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記検出可能なラベルが、蛍光ラベルまたは光音響染料を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記少なくとも１種の配位子が、標的化部分を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記標的化部分が、特定の受容体、細胞型、組織、腫瘍または器官を選択的に標的とする、それらに結合する、またはそれらに取り込まれる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記標的化部分が、葉酸、ラクトース、アルブミン、グルタミン、ペプチド、ポリペプチド、細胞表面受容体に結合する配位子、抗体、抗体フラグメント、およびアプタマーからなる群から選択される、請求項１７または請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記少なくとも１種の配位子が、少なくとも２、３、４または少なくとも異なる５種の配位子を含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記少なくとも２種の配位子が、
（ｉ）２’−チオエチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド、および
（ｉｉ）１−アミノ−１７−メルカプト−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサ−ヘプタデカノールまたはＨＳ−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＨを含み、
式中、ｍは２〜３０、所望により６〜１０の間である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記第１の液体が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を更に含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記還元剤が、ＮａＢＨ４、ヒドラジン水和物、ＮａＢＨ３ＣＮ（シアノ水素化ホウ素）およびＤＩＢＡＬ（水素化ジイソブチルアルミニウム）からなる群から選択される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記少なくとも１つの液滴発生器が、圧電部品を含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記液滴発生器が、ドロップオンデマンドモードで動作する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
信号発生器が前記圧電部品に電場を供給する、請求項２４または請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記少なくとも１つの液滴発生器は、複数の液滴発生器出口を備え、前記液滴発生器出口は、ラインまたはアレイにある、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記少なくとも１つの液滴発生器が、インクジェットプリントヘッドの形態である、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記第２の液体が、開放式容器、薄膜、または回転ディスク反応器中に提供され、所望により前記第２の液体が撹拌される、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記第２の液体が、流路内の流れとして提供される、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記第２の液体が、気体を通過するジェットとして提供される、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記第１の液体の複数の液滴が、それぞれの液滴発生器出口から実質的に同時に射出され、前記液滴が、前記第２の液体のジェットに接触する前に、並列に気体を通過する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
液滴発生器出口の数が、５〜２５００の範囲であり、所望により２５６、５１２または１０２４である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
液滴発生器出口当たりの液滴発生器の周波数が、０．１〜１００ｋＨｚ、所望により１〜１０ｋＨｚの範囲内である、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記液滴が、１〜１００ｐＬ、所望により２０〜６０ｐＬの範囲内の個々の液滴体積を有する、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記方法が、準安定ナノ粒子を形成するためのものである、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記ナノ粒子コアの前記表面露出原子の少なくとも１０％が、いずれの配位子によってもキャップされていない、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記ナノ粒子を含む溶液に更なる配位子を添加する工程を更に含む、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記更なる配位子が、前記第１の液体中の前記少なくとも１種の配位子と同じである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記更なる配位子が、前記第１の液体中の前記少なくとも１種の配位子とは異なる、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記更なる配位子が、前記還元剤に感受性であり、および／または前記第１の液体中で不安定である化合物または化学基を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記更なる配位子が、メイタンシノイド、所望によりメイタンシノイドＤＭ１またはメイタンシノイドＤＭ４を含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記更なる配位子が、前記第１の液体中の前記少なくとも１種の配位子の量に対して過剰量、所望により化学量論的に過剰量で添加される、請求項３８〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記更なる配位子の少なくとも一部が前記ナノ粒子と反応し、それにより前記ナノ粒子の前記コアに共有結合するようになる、請求項３８〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記ナノ粒子を前記第２の液体から分離することによって、前記ナノ粒子を回収することを更に含む、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記ナノ粒子を透析、洗浄、乾燥、遠心分離および滅菌からなる群から選択される１つまたは複数の製造後処理工程に晒すことを更に含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記ナノ粒子を少なくとも１種のペプチドまたはポリペプチドと接触させることを更に含み、それにより前記少なくとも１種のペプチドまたはポリペプチドは、ナノ粒子のコロナに非共有結合してペプチド結合またはポリペプチド結合ナノ粒子を形成する、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記ナノ粒子を医薬組成物または送達形態に処方またはパッケージすることを更に含む、請求項４５〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
請求項１〜４８のいずれか一項に記載の方法によって得られた、または得ることができるナノ粒子。
【請求項５０】
医薬に使用するための、請求項４９に記載のナノ粒子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ナノ粒子、特に金属または半導体コアを有するナノ粒子の製造方法に関し、このコアは複数の配位子によって共有結合されている。このナノ粒子は、これに共有結合または非共有結合した１つまたは複数のペイロードを含んでよく、例えば製薬キャリアとして機能する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、ナノ粒子の製造方法に関する。医療および診断用途に使用するためのナノ粒子、ならびにそれらの製造方法が知られている。国際公開第０２／３２４０４号は、チオール誘導体化炭水化物配位子（グリコナノ粒子）で官能化された金ナノ粒子の合成および特徴付けを記載している。メタノール中の（ジスルフィド形態の）配位子の溶液を、水中のテトラクロロ金酸に添加した。水中の水素化ホウ素ナトリウムを、配位子および金塩を含有する容器に素早く攪拌しながら少量ずつ添加した。ナノ粒子の自己形成の結果として、黒い懸濁液が形成された。
【０００３】
国際公開第２０１６／０７５２１１Ａ１号は、持続放出性カプセル化ナノ粒子およびそれらの製造方法を記載している。
【０００４】
国際公開第２０１４／１２２４４４Ａ１号は、医薬に使用するための浸透促進活性担持ナノ粒子およびそのようなナノ粒子の製造方法を記載している。
【０００５】
国際公開第２０１１／１５６７１１Ａ１号は、ナノ粒子に結合、または関連する活性物質を有するナノ粒子、ならびにナノ粒子およびナノ粒子を含むフィルムを形成するための方法を含む、治療用フィルム送達システムを記載している。
【０００６】
国際公開第２０１０／０５２５０３Ａ１号は、電気インピーダンストモグラフィーを使用して哺乳動物の腫瘍を画像化するための金属コアナノ粒子の使用を記載しており、また、ナノ粒子を形成するための方法も記載している。
【０００７】
国際公開第２０１２／１７０８２８Ａ１号は、コアおよびコアに共有結合した配位子のコロナを有するナノ粒子を記載しており、異なる種類のペプチドがナノ粒子に結合し、フィルムを含む様々な剤形に組み込まれる。また、ナノ粒子を生成し、それにペプチドを結合させ、ナノ粒子をフィルムに組み込むための方法も記載している。
【０００８】
糖化金ナノ粒子の更なる開発は、例えば医療および診断用途において、従来の実験室合成技術の量を上回る単分散ナノ粒子の制御された製造を提供する、スケールアップ合成方法の必要性を生み出している。前述の合成方法（例えば、国際公開第０２／３２４０４号に記載されている）に関する特定の問題は、得られたナノ粒子の均一性特性（大きさを含む）が、添加された水素化ホウ素ナトリウムと金塩およびチオール誘導体化配位子とのほぼ瞬時混合を達成することに大部分依存することである。更に、水素化ホウ素ナトリウムは潜在的に可燃性水素ガスの供給源であり、したがって、特に大規模反応法の場合に、慎重に制御された条件を必要とすることである。反応器内の水素ガス生成によって起こる発泡の制御が問題である。より大きなスケールでは、ＮａＢＨ４の添加時に顕著な発泡が見られ、これは時には消泡剤の添加を必要とする。ナノ粒子合成の間は、消泡剤の添加の必要性を最小限にするか、または避けることが望ましい。
【０００９】
制御された様式で、かつ望ましくない発泡を伴わずに、大きな規模で均一な特性を有する金属含有ナノ粒子を製造する方法に対する満たされていないニーズが依然として存在する。本発明は、このニーズおよび他のニーズを提起する。
【発明の概要】
【００１０】
概して、本発明は、還元剤（例えば、水素化ホウ素ナトリウム）を含有する溶液に、ナノ粒子反応物（例えば、金属塩および誘導体化配位子）を含む溶液を滴下で添加する、ナノ粒子の製造方法に関する。ナノ粒子反応物を含有する比較的小さなサイズの液滴が、迅速な混合をもたらし、結果として、生成されるナノ粒子のより均一な特性（例えば、より狭いサイズ分布）を確実にする傾向がある。ナノ粒子反応物を含有する溶液は、液滴発生器から液滴として、気体を通過し、還元剤を含有する溶液中に都合よく射出され得る。還元剤を含有する溶液は、容器内で液体が連続的に攪拌されたプールの形態で、または液体流の形態で（例えば、流路を通って、または気体を通過する液体のジェットとして）提供され得る。本発明者らは、驚くべきことに、このようにして製造されたナノ粒子が良好な均一性を示すことを見出した。更に、とりわけ従来知られている製造方法によって課される制約（例えば、還元剤の混合速度および還元剤濃度の経時変化）は、本発明の製造方法によってほとんど回避されるため、このナノ粒子の製造方法では、よりスケールアップを行いやすい。
【００１１】
したがって、第一の態様において、本発明は、
コア形成材料（典型的には金属塩）、および金属表面に結合することができる官能基（例えば、チオール含有極性有機化合物）を有する少なくとも１種の配位子を含む第１の液体を提供する工程と、
還元剤（例えば、水素化ホウ素ナトリウムを含む溶液）を含む第２の液体を提供する工程と、
液滴を生成するように動作可能な少なくとも１つの液滴発生器を設ける工程と、
少なくとも１つの液滴発生器に第１の液体の液滴を生成させる工程と、
液滴を気体に通し、第２の液体と接触させ、コア形成材料（例えば金属塩）および少なくとも１種の配位子を還元剤と接触させ、それにより、コア（例えば、該金属塩から還元された金属）およびコアに共有結合した複数の該配位子を含むコロナを有する該ナノ粒子を自己形成させる工程と
を含む、ナノ粒子を製造するための方法を提供する。
【００１２】
ある場合において、金属塩は、Ａｕ、Ａｇ、Ｃｕ、Ｐｔ、Ｐｄ、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｇｄ、Ｅｕおよび／またはＺｎの塩を含む。特に、金属塩はＨＡｕＣＩ４であってよい。第１の液体中の金属塩（例えば、ＨＡｕＣＩ４）の濃度は、例えば、０．１〜１００ｍｇ／ｍＬ、例えば１〜３０ｍｇ／ｍＬの範囲であってもよい。
【００１３】
ＺｎＳ、ＣｄＳおよびＣｄＳｅのような半導体（量子ドット）コアを有するナノ粒子が既に記載されている（デ・ラ・フエンテおよびペネデス、テトラヘドロンアシンメトリー、２００５年、第１６巻、３８７〜３９１項）。本明細書では、第１の液体が例えば硝酸カドミウムおよびジスルフィド誘導体化炭水化物を含んでよく、第２の液体が硫化ナトリウムを含んでよく、それによりＣｄＳのコアを有する糖化量子ドットを形成することが企図される。
【００１４】
本発明の第一の態様によれば、少なくとも１種の配位子は、硫化物、チオールを含んでよく、またはジスルフィド架橋によって連結された配位子二量体として提供することができる。
【００１５】
第１の液体中の配位子の濃度は、例えば、金属塩の濃度に対してモル過剰であってもよい。ある場合には、配位子は、金属塩に対する比で１．１：１〜５：１、例えば１．５：１、２：１、２．５：１、３：１、３．５：１、４：１、４．５：１または５：１の間で第１の液体中に存在する。特定の場合には、配位子は、金属塩の３当量で第１の液体中に存在する（例えば、モル比３：１のグルコース−Ｃ２ジスルフィド：Ａｕ３＋）。
【００１６】
ある場合において、少なくとも１種の配位子は、炭水化物部分、アルキル鎖、グリコール鎖およびグルタチオンの１つまたは複数を含む。グルタチオンは天然にはシステインアミノ酸の形態のチオールを有し、これは金属（例えば金）コア表面への共有結合を促進する。配位子は、例えば、チオール−Ｃ２〜１２アルキルサッカライドのようなコンジュゲートの形態を取ってよい。
【００１７】
いくつかの場合において、炭水化物部分は、単糖類（例えば、リボースなどの５炭素単糖類、またはグルコースなどの６炭素単糖類）、二糖類（例えば、ラクトースまたはマルトース）、オリゴ糖類または多糖類である。特定の場合において、炭水化物部分は、グルコース、ガラクトース、グルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、フコースおよび／またはラクトース、またはそのグリコシドを含む。
【００１８】
いくつかの場合において、少なくとも１種の配位子は、オリゴエチレングリコールまたはポリエチレングリコールを含む。特定の場合には、少なくとも１種の配位子はヘキサエチレングリコールを含んでよい。ある場合において、少なくとも１種の配位子は、１−アミノ−１７−メルカプト−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサ−ヘプタデカノールを含む。ある場合において、配位子は、負に帯電した末端基または生理的ｐＨで負電荷を有することができる末端基を含んでよい。希釈配位子は、カルボン酸末端基を有してよい。特に、希釈配位子は、ＳＨ−ＰＥＧ−ＣＯＯＨを含んでよい。ある場合において、少なくとも１つの希釈配位子は、ＨＳ−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＨを含み、式中、ｍは２〜３０、任意に６〜１０の間である。ある場合において、ｍは２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０であってもよい。
【００１９】
いくつかの場合において、少なくとも１種の配位子は、治療用および／または生体影響剤を含む。例示的なクラスの治療剤は、細胞傷害性化合物、抗増殖剤または血管新生阻害薬などの抗癌剤である。特に、少なくとも１種の配位子は、ドキソルビシン、イリノテカン、白金（ＩＩ）、白金（ＩＶ）、テモゾロミド、クロロトキシン、カルムスチン、カンプトテシン、ドセタキセル、ソラフェニブ、メイタンシン、メイタンシノイド（例えばメイタンシノイドＤＭ１またはメイタンシノイドＤＭ４）、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）およびヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤（例えばパノビノスタット）からなる群から選択される化合物を含んでよい。
【００２０】
ある場合において、少なくとも１種の配位子は、
【化１】
2019513184.tif 000002
2019513184.tif 000003
から選択される。
【００２１】
いくつかの場合において、治療剤または生体影響性剤は、ペプチド、ポリペプチドおよび／または核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡのようなＤＮＡまたはＲＮＡ）を含む。ペプチドまたはポリペプチドは、場合によっては、１つまたは複数の翻訳後修飾を有していてもよく、例えば、グリコシル化されていてもよい。治療剤または生体影響剤（例えば、ペプチドまたはポリペプチド）は、１つまたは複数のエピトープを含み得るか、または提示し得る。特に、薬剤、例えばペプチドまたはポリペプチドは、抗原であってもよい。特定の場合において、抗原は、ヒト自己免疫疾患に関与する自己抗原、例えば自己抗原ペプチドであり得る。自己抗原ペプチドの多くの例が知られている。特定の場合において、自己抗原ペプチドは、１型真性糖尿病に関与する自己抗原（例えば、プロインスリン、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）、ＩＡ２、膵島細胞抗原、クロモグラニンＡ、または上記のいずれかの断片）であってよい。あるいは、ペプチドまたはポリペプチドは、１つまたは複数の天然に存在するペプチド配列に由来する合成または複合配列であってもよい。
【００２２】
いくつかの場合において、少なくとも１種の配位子は、蛍光ラベルまたは光音響染料のような検出可能なラベルを含む。
【００２３】
いくつかの場合において、少なくとも１種の配位子は、標的化部分を含む。標的化部分は、特定の受容体、細胞型、組織、腫瘍または器官を選択的に標的とし、それらに結合し、またはそれらに取り込まれる。標的化部分は、特定の対象部位、例えば、腫瘍または罹患組織部位、器官型または特定の細胞型への得られたナノ粒子の標的化を促進することができる。
【００２４】
ある場合において、標的化部分は、葉酸、ラクトース、アルブミン、グルタミン、ペプチド、ポリペプチド、細胞表面受容体に結合する配位子（例えば、ゲフィチニブなどのＥＧＦＲ配位子）、抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖなど）、およびアプタマーからなる群から選択されてよい。いくつかの場合においては、抗体またはその断片は、腫瘍関連抗原に選択的に結合する。
【００２５】
いくつかの場合において、少なくとも１種の配位子は、少なくとも２、３、４または少なくとも５種類の異なる配位子を含む。特に、異なる種類の配位子は、本明細書で論じられる異なる配位子の２、３、４、５またはそれ以上を含んでよい。異なる種類の配位子は、特定の比率（例えば、１：４０〜４０：１）で第１の液体中に提供されてもよい。第１の液体中の配位子種の比率は、得られるナノ粒子のコロナを構成する共有結合配位子の比率に大きく反映されると考えられている。共有結合した配位子の比率は、種々の周知の技術を用いて合成後に決定することができる。例えば、配位子の存在および配位子の相対的な割合は、ＮＭＲを用いて決定することができる。
【００２６】
特定の場合において、少なくとも２種の配位子は：
（ｉ）２’−チオエチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド、および
（ｉｉ）１−アミノ−１７−メルカプト−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサ−ヘプタデカノールを含む。配位子（ｉ）および（ｉｉ）の２つの種は、１０：９０〜９０：１０の範囲の比、例えば４０：６０〜６０：４０で第１の液体中に提供されてもよい。
【００２７】
いくつかの場合において、本発明の方法によって形成されたナノ粒子のコアの平均直径は、１ｎｍ〜５ｎｍの範囲にある。それの配位子を含むナノ粒子の直径は、場合によっては、２ｎｍ〜５０ｎｍ、または３ｎｍ〜３０ｎｍ、または４ｎｍ〜２０ｎｍ、または５ｎｍ〜１５ｎｍの範囲内にあり得る。
【００２８】
いくつかの場合において、該第１の液体は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を更に含む。ＤＭＳＯは溶解補助剤としてよく知られており、例えば圧電性液滴発生器から液滴生成を助けることが判明している。いくつかの場合において、該第１の液体はアルコール、例えばメタノールおよび／または水を更に含む。
【００２９】
いくつかの場合において、本発明の第一の態様によれば、該還元剤は、ＮａＢＨ４、ヒドラジン水和物、ＮａＢＨ３ＣＮ（シアノ水素化ホウ素）およびＤＩＢＡＬ（水素化ジイソブチルアルミニウム）からなる群から選択されてよい。場合によっては、還元剤はＮａＢＨ４であってもよい。第２の液体中の還元剤（例えば、ＮａＢＨ４）の濃度は、例えば０．０１〜０．１Ｍ、例えば０．０５Ｍであってよい。
【００３０】
いくつかの場合において、本発明の第一の態様によれば、少なくとも１つの液滴発生器は圧電部品を含む。この方法の特定の実施形態では、液滴射出方法は、圧電効果を利用し、これにより、電気パルスが印加されたときにピエゾ結晶が歪む。この歪みは圧力パルスを生じさせ、ノズルから液滴を射出させ、液滴が射出された後、より多くの流体を引き込むための負圧を生成する。特に印刷業界において、多くの既製の装置は、液滴を生成するためにこの原理を利用している。
【００３１】
いくつかの場合において、液滴発生器または複数の発生器がドロップオンデマンドモードで動作する。いくつかの場合において、信号発生器が圧電部品に電場を供給する。
【００３２】
いくつかの場合において、少なくとも１つの液滴発生器は複数の液滴発生器出口を含み、液滴発生器出口はラインまたはアレイにある。いくつかの場合において、少なくとも１つの液滴発生器は、インクジェットプリントヘッドの形態である。
【００３３】
第２の液体は、液滴発生器から射出され、気体を通過した後の第１の液体の液滴が、第２の液体の表面に入り込むかまたは接触することを可能にする任意の構成で提供され得る。ある場合において、第２の液体は、開放式容器、薄膜、または回転ディスク反応器中に提供されてもよい。ある場合において、容器は撹拌フラスコまたは浴であってもよい。攪拌は、還元剤の分配を容易にし、第２の液体中の還元剤の均一濃度を維持するのに役立つ。これは、第１の液体の液滴の侵入部位における低減された還元剤濃度の局所領域を防止するのに役立つ。
【００３４】
他の場合には、第２の液体は、１つまたは複数の流路に少なくとも１つの流れとして供給されてもよい。
【００３５】
更に別の場合には、第２の液体は気体（例えば空気）を通過するジェットとして提供されてもよい。特に、第２の液体のジェットは、該第２の液体の連続的な無パルス性の流れを提供し、該第２の液体の流れを流れに使用可能な断面積の減少を引き起こすことで第２の液体の流速を増加させるノズルであって、第２の液体のジェットを噴出するオリフィスで終端する該ノズルを通過させることによって生成される。いくつかの場合において、第２の液体のジェットは、その長さの少なくとも一部に対していずれの壁または流路とも接触していない。特定の実施形態では、いずれの壁または流路とも接触していないジェットの長さ部分は接触領域を含み、該接触領域は、該液滴が該ジェットと接触するジェットの領域である。
【００３６】
第２の液体を流路中の流れまたはジェットとして提供することの特別な利点は、還元剤の濃度を一定のレベルに容易に維持できることである。ナノ粒子反応物（金属塩および配位子）を特定の濃度で還元剤を含む容器に添加する場合、還元剤濃度は、第１の液体の液滴が時間によりますます多くなるにつれて激減する。これは、第１の液体の液滴の初期接触部位における第２の液体中の還元剤の濃度が経時的に一定であるために、第２の液体が流れまたはジェットとして提供される場合はその限りではない。これは、生産バッチ内の特性（例えば、サイズ）の一貫性を保証するのに役立つ。いくつかの場合において、ジェットアプローチは、第１または第２の液体のいずれにおいても意味のある濃度減少がなく、一定の反応条件を保証する。
【００３７】
いくつかの場合において、該第１の液体の液滴は、該第２の液体と接触する前に、１〜１００ｍｍの距離、所望により２〜１０ｍｍの距離で気体（例えば、空気）を通過する。
【００３８】
いくつかの場合おいて、第２の液体の流れまたはジェットは、液滴射出の方向に対して実質的に垂直に、および複数の液滴発生器出口の長手方向軸に実質的に平行に流れる。
【００３９】
いくつかの場合おいて、少なくとも１つの液滴発生器は、第２の液体の上に配置され、該液滴は、初期速度で、および／または重力の助けにより、第２の液体に向かって下方に射出される。
【００４０】
いくつかの場合おいて、該第１の液体の複数の液滴が、それぞれの液滴発生器出口から実質的に同時に分配され、液滴は、該第２の液体と接触する前に、気体（例えば空気）を並列に通過する。
【００４１】
いくつかの場合おいて、液滴発生器出口の数は５〜２５００の範囲内にあり、所望により２５６、５１２または１０２４である。
【００４２】
いくつかの場合おいて、液滴生成の周波数は０．１〜１００ｋＨｚ、所望により１〜１０ｋＨｚの範囲内であり、記載された周波数は、液滴発生器出口当たり（例えば、ノズル当たり）のものである。すべてのノズルにわたる総計の総周波数は、例えばＭＨｚ範囲でかなり高くなり得る（例えば、本明細書の例１では２．０５ＭＨｚの総計周波数を説明する）。
【００４３】
いくつかの場合おいて、液滴は、１〜１００ｐＬ、所望により２０〜６０ｐＬの範囲の個々の液滴体積を有する。
【００４４】
いくつかの場合おいて、本発明の第一の態様によると、この方法は、準安定なナノ粒子を製造するためのものである。この文脈において、「準安定」または「メタ安定」ナノ粒子は、配位子でキャップされていない、ナノ粒子コアの１つまたは複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくはそれ以上）の、表面露出原子（例えば、金原子）を有するナノ粒子である。配位子に共有結合していない（すなわち、キャップされていない）ナノ粒子コアの表面露出原子の割合は、ある場合には少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％または５０％であってよい。特定の実施形態では、形成されたナノ粒子が配位子で完全にキャップされないまたは不動態化されないよう、コア形成材料（例えば金属塩）に対する配位子の比を選択することができる。
【００４５】
いくつかの場合おいて、本発明の第一の態様によれば、この方法は、ナノ粒子を含む溶液に更なる配位子を添加するステップを更に含む。ナノ粒子は、必要に応じて、最初に準安定状態で形成され得ることが判明している。あるいは、完全に安定したナノ粒子を生成するために、合成中または合成後に、より多くの過剰量の配位子を添加することができる。いかなる特定の理論にも束縛されることを望まないが、本発明者らは、準安定状態で最初に形成されたナノ粒子は、配位子で完全に不動態化（すなわちキャップ）されていないコアを有すると考えている。準安定ナノ粒子は、経時的に、ナノ粒子のサイズなどの特性を変える配位子置換反応および／またはコア合体を起こす可能性がある。特に、金原子は、露出している場合は置換されていてもよく、すなわち、金原子は他の露出した金表面と結合することができ、これらは再構成されてより大きなナノ粒子を形成する。実施例に示されているように、液滴発生器からの第１の液体の第２の液体への射出が完了してから２０分後に、過剰の未反応配位子（例えば、３ｘモル過剰のグルコースＣ２ジスルフィド）を添加し、続いて混合物を撹拌すると、得られた十分安定なナノ粒子はサイズ分布が狭く、プラズモン共鳴バンドがほぼ完全に存在しない。
【００４６】
いくつかの場合おいて、更なる添加された配位子は、第１の液体中の少なくとも１種の配位子と同じである。このようにして、続く配位子のキャップされていないコア表面原子への結合または既存の配位子の競合的置換は、追加の「同様の」または類似の配位子置換をもたらし、それによりナノ粒子の構成を安定（準安定から完全安定へシフト）させる傾向がある。
【００４７】
いくつかの場合おいて、更なる添加された配位子は、第１の液体中の少なくとも１種の配位子とは異なる。このようにして、続く配位子のキャップされていないコア表面原子への結合または既存の配位子の競合的置換は、異なる配位子の添加をもたらし、それにより混合コロナを有するナノ粒子を生成する傾向がある。第１の液体中の配位子の少なくとも１種とは異なる配位子の添加について想定される特別な利点は、配位子を還元剤と接触させて安定ではないナノ粒子に結合させる能力である。この方法は例えば、第１の液体中に第１の配位子「Ａ」を用いて、最初に配位子「Ａ」のコロナを有する準安定ナノ粒子を形成してもよい。これらのナノ粒子を含有する溶液に、例えば過剰量の第２の配位子「Ｂ」を添加してもよい。次に、第２の配位子は、ナノ粒子のコアの表面上のキャップされていない部位に定着し、および／または配位子「Ａ」の一部を置換し得る。その結果は、配位子「Ａ」および「Ｂ」の混合コロナを有するナノ粒子である。この例において、「Ｂ」は還元剤の存在下で安定である必要はなく、および／または第１の液体中に提供する必要はない。したがって、このアプローチは、初期合成条件（例えば、還元剤への曝露）に適合しない配位子を含むために、「Ｂ」の自由な選択を可能にする。このアプローチの１つの特定の例は、少なくとも１つのメイタンシノイド配位子（例えば、メイタンシノイドＤＭ１またはＤＭ４）を有するナノ粒子の合成である。メイタンシノイドは還元環境に敏感であることが判明している。例えば、メイタンシノイドＤＭ１は、水素化ホウ素ナトリウムで処理した場合にいくつかの反応生成物を形成する。したがって、有利には、準安定ナノ粒子は、本発明の方法および還元環境（例えば、グルコース−Ｃ２−チオール）において安定な第１の配位子種を用いて形成され得る。準安定ナノ粒子が形成されたら、過剰の還元剤感受性配位子（例えば、メイタンシノイドＤＭ１またはメイタンシノイドＤＭ４）を準安定なナノ粒子を含む溶液に添加する。次いで、還元剤感受性配位子（例えば、メイタンシノイドＤＭ１またはメイタンシノイドＤＭ４）は、ナノ粒子のコアの表面のキャップされていない部位に定着し、混合コロナ（この例では、グルコース−Ｃ２配位子とメイタンシノイドＤＭ１またはメイタンシノイドＤＭ４配位子との混合物）を有する安定なナノ粒子を形成する。
【００４８】
いくつかの場合おいて、更なる配位子は、該第１の液体中の該少なくとも１種の配位子の量に対して過剰量、所望により化学量論的に過剰量で添加される。
【００４９】
ある場合において、更なる配位子の少なくとも一部がナノ粒子と反応し、それによりナノ粒子のコアに共有結合するようになる。
【００５０】
いくつかの場合おいて、本発明の第一の態様によれば、本方法は第２の液体からナノ粒子を分離することによって、ナノ粒子を回収することを含む。ナノ粒子を、透析、洗浄、乾燥、遠心分離（例えば、超遠心分離）および滅菌からなる群から選択される１つまたは複数の製造後処理工程に晒してもよい。
【００５１】
いくつかの場合おいて、本発明の第一の態様の方法は、ナノ粒子を少なくとも１種のペプチドと接触させることを更に含み、それにより少なくとも１種のペプチドは、ナノ粒子のコロナに非共有結合してペプチド結合ナノ粒子を形成する。これは例えば、ナノ粒子を含む溶液（例えば、水溶液）を少なくとも１種のペプチドを含む溶液（例えば、水溶液）と、ペプチド分子がナノ粒子のコロナに非共有的に（例えば、静電的に）結合することを許容する時間および温度で混合することによって達成されてよい。適切なペプチドとしては、インスリン、ＧＬＰ−１、エクセナチド、アミリン、オクトレオチド、テリパラチド、サイトカインおよび抗体などの治療用活性剤が挙げられる（例えば、国際公開第２０１１／１５４７１１号もまた参照）。
【００５２】
いくつかの場合おいて、本発明の第一の態様の方法は、ナノ粒子を医薬組成物または送達形態に処方またはパッケージすることを更に含む。特に、本発明の方法によって形成されたナノ粒子は、１つまたは複数の薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤と組み合わせてもよい。
【００５３】
ある場合には、医薬組成物は、注射可能な経路を介した送達のために処方され得る。いくつかの場合おいて、ナノ粒子は、例えばトランスバッカル送達のためにポリマーフィルムに組み込まれてもよい。
【００５４】
本発明は、そのような組み合わせが明らかに許されないか、または明示的に回避されると述べられている場合を除いて、記載された態様および好ましい特徴の組み合わせを含む。本発明のこれらのならびに更なる態様および実施形態は、以下に、および添付の実施例および図面を参照して、より詳細に記載される。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】本発明の一実施形態の概略図を示す。金塩（Ａｕ３＋）および配位子を含有する溶液を、過剰の還元剤（ＢＨ４−）を含む容器に滴下する。滴下されたＡｕ３＋は過剰のＢＨ４−に当たるため、液滴中の全ての金原子は（混合の必要なしに）完全に還元されるべきである。配位子が適切な濃度で提供されると、ナノ粒子が生成される。
【図２】圧電液滴発生器を使用する本発明の実施形態の概略図を示す。インサートパネルは、圧電液滴発生器のオリフィスから射出された液滴の高速写真を示す。ＤＭＳＯ中のＡｕ３＋およびグルコース−Ｃ２二量体（ジスルフィド二量体として提供される２’−チオエチル−β−Ｄ−グルコピラノシド）の溶液を、液滴の安定な流れとして、圧電液滴発生器から（射出条件：４４Ｖ、１３μｓパルス、５０℃、ν＝４０００Ｈｚ）、ＮａＢＨ４を含む溶液に射出する。
【図３】本発明の方法によって製造されたグルコース−Ｃ２配位子のコロナを有する金ナノ粒子の吸光度スペクトルを示す。光学密度（ｙ軸）は波長ｎｍ（ｘ軸）に対してプロットされている。吸光度スペクトルは、表面プラズモン共鳴バンドの証明をほとんどまたは全く示さない。
【図４】動的光散乱（ＤＬＳ）によって決定される４つのサイズ分布トレースを示しており、集団中のナノ粒子の体積パーセント（ｙ軸）は、ナノ粒子直径ｎｍ（ｘ軸）に対してプロットされている。平均直径は２．７ｎｍであることを見出した。４つのトレースのそれぞれのナノ粒子は、液滴射出が完了した後（２０分）、ナノ粒子を含有する溶液に過剰量（３ｘモル当量）のグルコース−Ｃ２ジスルフィドを添加し、得られた混合物を１時間攪拌する、本発明の実施例の方法によって製造された。
【図５】本発明の方法の連続的な還元剤流の実施形態の概略図を示す。水素化ホウ素ナトリウムを含有する溶液の水平ジェットが左から右に示されている。金塩（Ａｕ３＋）と配位子の溶液を圧電液滴発生器から射出し、水素化ホウ素ナトリウムを含むジェットと接触させる前に空気を通過する液滴の下方流を形成する。金塩の還元および配位子のコロナを有する金ナノ粒子の形成が急速に起こり、形成されたナノ粒子を含む液体のジェット流が配管の肘関節部（ジェットの右端に示される）に入り、収集容器に下向きに導かれる。
【図６】本発明の方法に従って製造されたナノ粒子の透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）画像を示す。５０ｎｍのスケールバーが示されている。暗い点は、概して球状の金コアナノ粒子を示す。ＤＭＳＯ中のＡｕ３＋およびグルコース−Ｃ２二量体の溶液の液滴を、ＮａＢＨ４を含む溶液に射出する、圧電液滴発生器を介してナノ粒子のバッチを製造した。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
本発明の説明において、以下の用語が使用され、以下に示すように定義されることが意図される。
【００５７】
ナノ粒子
本明細書で使用される場合、「ナノ粒子」は、ナノメータースケールを有する粒子を指し、あらゆる特定の形状の限定を伝えることを意図するものではない。特に、「ナノ粒子」は、ナノスフェア、ナノチューブ、ナノボックス、ナノクラスター、ナノロッドなどを包含する。特定の実施形態において、本明細書で企図されるナノ粒子および／またはナノ粒子コアは、概して多面体または球形の幾何学的形状を有する。
【００５８】
複数の炭水化物含有配位子を含むナノ粒子は、例えば、国際公開第２００２／０３２４０４号、国際公開第２００４／１０８１６５号、国際公開第２００５／１１６２２６号、国際公開第２００６／０３７９７９号、国際公開第２００７／０１５１０５号、国際公開第２００７／１２２３８８号、国際公開第２００５／０９１７０４号（これらのそれぞれの内容全体が参照により本明細書に明示的に援用される）に記載されており、このようなナノ粒子は、本発明に従って使用することができる。
【００５９】
本明細書中で使用される場合、「コロナ」とは、層またはコーティングを指し、この層またはコーティングは一部または完全にナノ粒子コアの露出した表面を覆う。コロナは、一般に少なくとも１つの炭水化物部分、１つの界面活性剤部分および／または１つのグルタチオン部分を含む複数の配位子を含む。したがって、コロナは、金属コアを取り囲むかまたは部分的に取り囲む有機層であると考えられてよい。特定の実施形態では、コロナは、ナノ粒子のコアの不動態化を提供および／またはそれに関与する。したがって、場合によっては、コロナは、半導体または金属含有コアを実質的に安定化させるのに十分な完全なコーティング層を含んでよい。しかしながら、例えば貴金属で被覆された金属酸化物含有内部コアを含むコアを有する特定のナノ粒子が、コア表面を部分的にしか被覆しないコロナを含んでもよいことが、本明細書中では具体的に意図されている。場合によっては、コロナは、本発明のナノ粒子の水溶性などの溶解性を促進する。
【００６０】
ナノ粒子は、小さな粒子であり、例えば固定化配位子用基材として使用可能な金属または半導体原子のクラスターである。
【００６１】
好ましくは、ナノ粒子は、０．５〜５０ｎｍ、より好ましくは０．５〜１０ｎｍ、より好ましくは０．５〜５ｎｍ、より好ましくは０．５〜３ｎｍ、更により好ましくは０．５〜２．５ｎｍの平均直径を有するコアを有する。配位子がコアに加えて考慮される場合、好ましくは、粒子の全体の平均直径は２．０〜２０ｎｍ、より好ましくは３〜１０ｎｍ、最も好ましくは４〜５ｎｍである。平均直径は、透過型電子顕微鏡法のような当技術分野で周知の技術を用いて測定することができる。
【００６２】
コア材料は、金属または半導体とすることができる（任意に金属原子を含む半導体であるか、または有機半導体）であり、２つ以上のタイプの原子から形成されてもよい。好ましくは、コア材料は、Ａｕ、ＦｅまたはＣｕから選択される金属である。ナノ粒子コアはまた、Ａｕ／Ｆｅ、Ａｕ／Ｃｕ、Ａｕ／Ｇｄ、Ａｕ／Ｆｅ／Ｃｕ、Ａｕ／Ｆｅ／ＧｄおよびＡｕ／Ｆｅ／Ｃｕ／Ｇｄを含有する合金から形成されてもよく、本発明で使用されてよい。好ましいコア材料はＡｕおよびＦｅであり、最も好ましい材料はＡｕである。ナノ粒子のコアは、ナノメートル範囲のコア直径を提供するために、好ましくは約１００〜５００原子（例えば、金原子）を含む。他の特に有用なコア材料は、ＮＭＲ活性である１つまたは複数の原子でドープされ、インビトロおよびインビボの両方でＮＭＲを用いてナノ粒子を検出することを可能にする。ＮＭＲ活性原子の例として、Ｍｎ＋２、Ｇｄ＋３、Ｅｕ＋２、Ｃｕ＋２、Ｖ＋２、Ｃｏ＋２、Ｎｉ＋２、Ｆｅ＋２、Ｆｅ＋３、およびランタノイド＋３、または量子ドットが挙げられる。
【００６３】
半導体化合物を含むナノ粒子コアは、量子ドットとして作用することができるナノメートルスケールの半導体結晶として検出可能であり、すなわち、光を吸収して材料中の電子をより高いエネルギーレベルに励起し、続いて材料の周波数特性の光子を放出する。半導体コア材料の例は、セレン化カドミウム、硫化カドミウム、カドミウムテルルである。また、硫化亜鉛のような亜鉛化合物も含まれる。
【００６４】
いくつかの実施形態において、ナノ粒子またはその配位子は、検出可能なラベルを含む。ラベルは、ナノ粒子のコアのまたは配位子の要素であってもよい。ラベルは、ナノ粒子のその要素の固有の性質のために検出可能であり得るか、または検出可能な更なる部分に結合、共役化または複合することによって検出可能であり得る。好ましいラベルの例としては、蛍光基であるラベル、放射性核種、磁気ラベルまたは染料が挙げられる。蛍光基は、フルオレセイン、ローダミンまたはテトラメチルローダミン、テキサスレッド、Ｃｙ３、Ｃｙ５などを含み、ラマン散乱分光法を用いて蛍光ラベルの励起および放出光の検出によって検出することができる（Ｙ．Ｃ．カオ、Ｒ．ジン、Ｃ．Ａ．マーキン、サイエンス２００２、２９７：１５３６−１５３９）。いくつかの場合において、検出可能なラベルは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を含んでよい。ある場合において、検出可能なラベル（例えば、ＦＩＴＣ）は、例えば、リンカーを介してナノ粒子のコアに共有結合していてもよい。
【００６５】
いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、放射性核種によって放出される放射能を用いてナノ粒子を検出する際に使用するための放射性核種、例えば、ＰＥＴ、ＳＰＥＣＴまたは治療のために、すなわち標的細胞を死滅させるために使用され得る放射性核種を含んでよい。本発明での使用に容易に適合させることができる当技術分野で一般的に使用される放射性核種の例として、最も安定なものがＴｃＯ４−；３２Ｐまたは３３Ｐ；５７Ｃｏ；５９Ｆｅ；Ｃｕ２＋塩としてよく使用される６７Ｃｕ；一般にＧａ３＋塩、例えばガリウムクエン酸塩として使用される６７Ｇａ；６８Ｇｅ；８２Ｓｒ；９９Ｍｏ；１０３Ｐｄ；一般にＩｎ３＋塩として使用される１１１Ｉｎ；一般にヨウ化ナトリウムとして使用される１２５Ｉまたは１３１Ｉ；１３７Ｃｓ；１５３Ｇｄ；１５３Ｓｍ；１５８Ａｕ；１８６Ｒｅ；一般に塩化タリウムのようなＴｌ＋塩として使用される２０１Ｔｌ；３９Ｙ３＋；７１Ｌｕ３＋；および２４Ｃｒ２＋であっても、様々な酸化状態で存在する９９ｍＴｃが含まれる。ラベルおよびトレーサーとしての放射性核種の一般的使用は当該分野で公知であり、本発明の態様における使用のために当業者によって容易に適合され得る。放射性核種は、ナノ粒子のコアをドーピングすることによって、またはナノ粒子に固定化された配位子の一部として存在するラベルとしてそれらを含むことによって、最も容易に使用することができる。
【００６６】
活性剤
本明細書中で使用される場合、用語「生体影響剤」は、生物学系への効果、好ましくは治療効果に影響を及ぼす薬剤およびプロドラッグを包含することを意図する。本明細書で企図される活性剤のクラスとして、低分子有機化合物、ペプチド、ポリペプチドおよび核酸が挙げられる。具体的な例として、化学療法剤（例えば、テモゾロミド、イリノテカン、クロロトキシン、カルムスチン、白金（ＩＶ）、白金（ＩＩ）、カンプトテシン、ドキソルビシン、ドセタキセルメイタンシン、メイタンシノイド（例えば、ＤＭ１およびＤＭ４）、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）および／または、パノビノスタット、ボリノスタット、ロミデプシンおよびチダミドなどのヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤）；ペプチドまたはポリペプチド（例えば、インスリン、ＧＬＰ−１、アミリン、エクセナチド、オクトレオチド、テリパラチド、グルカゴン、サイトカイン、および／または抗体）；ＤＮＡまたはＲＮＡ（例えば、ｓｉＲＮＡを含む）が挙げられる。
【００６７】
以下は例として提示され、特許請求の範囲の限定として解釈されるべきではない。
【００６８】
実施例
実施例１−圧電射出に基づく金ナノ粒子の合成
ＤＭＳＯ中のＨＡｕＣｌ４（［Ａｕ３＋］１ｍｇ／ｍｌ）、グルコース−Ｃ２−ジスルフィド（Ａｕ３＋グルコース：Ｃ２−ジスルフィドのモル比が１：３）を含む溶液を、単一の圧電液滴発生器から、以下の射出条件（４４Ｖ、１３μｓパルス、５０℃、ｎ＝４０００Ｈｚ）を用いて射出した。液滴は、濃度０．０５ＭのＮａＢＨ４水溶液８ｍＬを含む１２ｍＬバイアルに射出された。
【００６９】
液滴射出が完了した後、得られたナノ粒子をアミコン超遠心分離機で単離した。適切な大きさの準安定性のナノ粒子が生成された（非常に小さいプラズモンバンドによって示された）。これらのナノ粒子は、直径＞８ｎｍへのサイズの増加に伴って一晩で「熟成」した（赤色が観察された）ことが見出された。本発明者らは、これは、ナノ粒子が単離された（すなわち、ナノ粒子が最初に準安定であった）時点で、金ナノ粒子コアが配位子で完全にキャップされなかったことを示すと考えている。
【００７０】
次いで、上述した反応物濃度および液滴射出条件を用いて、更なる金ナノ粒子バッチを製造した。射出が完了した後（２０分）、更に３ｘモル当量のグルコースＣ２ジスルフィドを、ナノ粒子を含有する溶液に添加した。混合物を１時間撹拌した。
【００７１】
適切なサイズ（動的光散乱（ＤＬＳ）による平均直径２．７ｎｍ）の安定なナノ粒子が生成された（図３および図４参照）。これらを透過型電子顕微鏡で視覚化した（図６を参照）。
【００７２】
方法のスケーラビリティを調査するために、更に実験を行った。特に、第１の液体中のＡｕ３＋および配位子濃度を増加させることにより、単位時間当たりのＡｕ（ｓ）の収率が増加する。５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬおよび３０ｍｇ／ｍＬのＡｕ３＋濃度（およびそれに対応して１：３のＡｕ：配位子比を維持する配位子の増加した濃度）は、本質的にプラズモン共鳴バンドが観察されない安定な金ナノ粒子を生成することを見出した。以下の計算は、４ｋＨｚ液滴生成周波数で５１２ノズルプリントヘッドアレイを使用して達成可能な推定歩留まりを提供する。
【００７３】
４０００Ｈｚ×５１２ノズル＝２．０５ＭＨｚ
液滴容量＝４２ｐＬ
＝０．０８６ｍＬ／ｓ
＝５．１６ｍＬ／ｍｉｎ
＝３０９ｍＬ／ｈｒ
【００７４】
［Ａｕ３＋］＝３０ｍｇ／ｍＬ（および収率〜９０％と仮定）では、これは８．３４ｇＡｕ（ｓ）／ｈｒとなる。
【００７５】
しかしながら、上記計算は代表的な数値を提供するものであり、本発明の方法の最大収率とはみなされないことに留意すべきである。
【００７６】
本明細書中に引用された全ての参考文献は、個々の刊行物または特許もしくは特許出願が、具体的かつ個別にその全体を参照により組み込まれていると示されているのと同じ程度、その全体が全ての目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【００７７】
本明細書に記載の特定の実施形態は、限定ではなく例として提供される。本明細書中のいずれのサブタイトルも、便宜のためにのみ含まれており、決して開示を限定するものとして解釈されるべきではない。
【図１】
2019513184.tif 000006
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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2019513184.tif 000013
2019513184.tif 000014