(57)【要約】  本開示は、成長ホルモン欠乏症を治療するために、ヒト成長ホルモン融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）を投与するための方法に関する。具体的には、本開示は、成長ホルモン欠乏症を治療するための医薬組成物であって、ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）および薬学的に許容される担体を含み、融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）が、小児患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇの用量で１週間に１回投与される、または小児患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に１回投与される、医薬組成物に関する。加えて、本開示は、成長ホルモン欠乏症を治療するための方法であって、ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）を、成長ホルモン欠乏症を有する患者に、患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇの用量で１週間に１回、または患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に１回投与する工程を含む、方法に関する。【選択図】  図９
2019533004.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
成長ホルモン欠乏症を治療するための医薬組成物であって、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）とハイブリッドＦｃの融合タンパク質であるｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９、および薬学的に許容される担体を含み、前記ｈＧＨ融合タンパク質が、患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇの用量で１週間に１回投与される、医薬組成物。
【請求項２】
前記ｈＧＨ融合タンパク質が、前記患者の体重１ｋｇあたり０．５〜１．５ｍｇの用量で１週間に１回投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
成長ホルモン欠乏症を治療するための医薬組成物であって、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）とハイブリッドＦｃの融合タンパク質であるｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９、および薬学的に許容される担体を含み、前記ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）が、患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に１回投与される、医薬組成物。
【請求項４】
前記ｈＧＨ融合タンパク質が、前記患者の体重１ｋｇあたり１．０〜３．０ｍｇの用量で１週間に１回投与される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記ｈＧＨ融合タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１〜４の何れか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記医薬組成物が皮下投与される、請求項１〜４の何れか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
成長ホルモン欠乏症を治療するための方法であって、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９を、成長ホルモン欠乏症を有する患者に、前記患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇの用量で１週間に１回投与する工程を含む方法。
【請求項８】
成長ホルモン欠乏症を治療するための方法であって、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９を、成長ホルモン欠乏症を有する患者に、前記患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に１回投与する工程を含む、方法。
【請求項９】
ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）とハイブリッドＦｃの融合タンパク質であるｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９および薬学的に許容される担体を含む容器、ならびに前記ｈＧＨ融合タンパク質が、成長ホルモン欠乏症を治療するために、患者に、前記患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回投与されることを示す添付文書を含むキット。
【請求項１０】
ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）とハイブリッドＦｃの融合タンパク質であるｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９および薬学的に許容される担体を含む容器、ならびに前記ｈＧＨ融合タンパク質が、成長ホルモン欠乏症を治療するために、患者に、前記患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇ／ｋｇの用量で２週間に１回投与されることを示す添付文書を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[1]本開示は、成長ホルモン欠乏症を治療するための医薬組成物であって、ハイブリッドＦｃをヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）に融合させることによって生成されるヒト成長ホルモン融合タンパク質ｈＧＨ−ｈｙＦｃ（ＧＸ−Ｈ９）を含む医薬組成物に関する。具体的には、本開示は、成長ホルモン欠乏症を治療するのに効果的なｈＧＨ融合タンパク質を投与するための方法、ならびに成長ホルモン欠乏症を治療するための医薬組成物であって、ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）および薬学的に許容される担体を含み、ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）が、患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇの用量で１週間に１回投与される、または患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に１回投与される、医薬組成物に関する。
【０００２】
[2]加えて、本開示は、成長ホルモン欠乏症を治療するための方法であって、ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）を、成長ホルモン欠乏症を有する小児患者に、患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇの用量で１週間に１回、または患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に１回投与する工程を含む方法に関する。
【０００３】
[3]さらに、本開示は、ｈＧＨ融合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む容器、ならびにｈＧＨ融合タンパク質が、成長ホルモン欠乏症を治療するために、患者に、患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回または患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に１回投与されることを示す添付文書を含むキットに関する。
【背景技術】
【０００４】
[5]１９１のアミノ酸からなる単一分子ポリペプチドである成長ホルモンは、下垂体前葉から分泌されるホルモンである。成長ホルモンは、成長ホルモン受容体に結合して、細胞の増殖および再生に関与するＩＧＦ−１（インスリン様増殖因子１）を発現する。成長ホルモンは、正常な人の身体の下垂体において合成され、その生成は、思春期まで増加し、年齢とともに徐々に減少することが知られている。
【０００５】
[6]典型的な成長ホルモン欠乏障害としては、成人成長ホルモン欠乏症（ＡＧＨＤ）および小児成長ホルモン欠乏症（ＰＧＨＤ）が挙げられる。成人成長ホルモン欠乏症は、患者の下垂体が、脳腫瘍、脳溢血などの治療の間に放射線もしくは手術によって損傷を受けた場合に生じるか、または突発的に生じる。成長ホルモンの分泌が正常でない場合、体重減少、骨塩量の減少、脂肪の増加、ＨＤＬの減少、ＬＤＬの増加、筋力の低下などを含む症状が生じて生活の質が低下する。成人成長ホルモン欠乏症を有する患者は、−２のＩＧＦ−１標準偏差値（ＳＤＳ）もしくはそれ未満（＜−２ＳＤＳ）、または年齢に対して正常の第２．５パーセンタイル値未満を有する。血中成長ホルモンレベルは、インスリン負荷試験（ＩＴＴ）、ＧＨＲＨ＋アルギニン刺激試験（ＧＨＲＨ＋ＡＲＧ）、グルカゴン試験、Ｌ−ＤＯＰＡ試験、クロニジン試験などを含む刺激試験によって測定することができる。ピーク成長ホルモン（ＧＨ）レベルが、肥満度指数（ＢＭＩ）が２５ｋｇ／ｍ２未満の患者において１１．０μｇ／Ｌ以下、肥満度指数が２５〜３０ｋｇ／ｍ２の患者において８．０μｇ／Ｌ以下、または肥満度指数が３０ｋｇ／ｍ２を超える患者において４．０μｇ／Ｌ以下である場合、これらの患者は、成長ホルモン欠乏症を有すると決定される（Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｈｏｒｍｏｎｅ  ｉｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、Ｅｎｄｏｃｒ．Ｐｒａｃｔ．２００９；１５（補遺２））。
【０００６】
[7]小児成長ホルモン欠乏症は、下垂体への損傷または発達障害がある場合に生じる。成長ホルモン分泌が損なわれると、同じ年齢群の成長曲線における下位３％、または１年あたり５ｃｍ以下に対応する成長が現れる低身長が現れ、低グルコースレベル、基礎体力の低下、憂うつおよび精神の未成熟を含む症状も現れる。以下の小児は、小児成長ホルモン欠乏症を有すると決定されてもよい：その身長が同じ年齢群における平均値よりも少なくとも３ＳＤ低い小児；その身長が両親の平均身長よりも少なくとも１．５ＳＤ低い小児；１年以上の期間にわたって、同じ年齢群の平均値を少なくとも２ＳＤ下回り、同じ年齢群の成長を少なくとも１ＳＤ下回る小児；２歳以上であるが、ＳＤ値が少なくとも０．５下回る小児；または低身長症状を示さないが、１年以上にわたりＳＤが２未満であるかもしくは２年以上にわたりＳＤ１．５を維持している小児（Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ＧＨ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｉｎ  ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ  ａｎｄ  ａｄｏｌｅｓｃｅｎｃｅ：  ｓｕｍｍａｒｙ  ｓｔａｔｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＧＨ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｏｃｉｅｔｙ．  ＧＨ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  Ｍｅｔａｂ．、２０００年１１月；８５（１１）：３９９０〜３）。
【０００７】
[8]成人成長ホルモン欠乏症については、従来技術では、薬物の用量は患者の体重に基づいて決定されたが、近年は、各患者に対して個別化された用量が、治療のために使用されている。具体的には、推定される適切な用量よりも低い用量での治療の開始後、臨床反応、有害事象事例、またはＩＧＦ−１レベルに応じて、用量を０．１〜０．２ｍｇ／日の範囲で増加または減少させる。成長ホルモンの治療用量は、患者の性別、エストロゲンレベル、年齢などを考慮して決定されるべきである。成人成長ホルモン欠乏症の治療は、代謝を正常にし、生活の質を改善することを目的とする。このために、成長ホルモンの用量は、血中ＩＧＦ−１レベルが、患者の年齢および性別に応じて正常範囲内（−２ＳＤＳ〜２ＳＤＳ）になるように好適に決定されるべきである。
【０００８】
[9]小児成長ホルモン欠乏症については、小児成長ホルモン欠乏症を有すると診断された後、可能な限り早く治療を開始することが推奨される。一般に、毎日夜に成長ホルモンを皮下投与するレジメンが使用され、成長ホルモンの推奨用量は、２５〜５０μｇ／ｋｇ／日である。一般に、３ヶ月または６ヶ月の間隔で成長速度を確認し、身長の伸び、伸び率の変化、個々の患者の服薬遵守をモニタリングし、安全性の確認のために有害事象を確認し、血清ＩＧＦ−１またはＩＧＦＢＰ−３レベルを測定することが推奨される。小児成長ホルモン欠乏症患者の治療は、正常に身長が伸びることを目的とし、成長ホルモンの用量は、血中ＩＧＦ−１レベルを、患者の年齢および性別に応じて正常範囲内（−２ＳＤＳ〜２ＳＤＳ）に維持することができるように好適に決定されるべきである。
【０００９】
[10]成長ホルモン治療が１９５０年代に最初に導入されたとき、成長ホルモンはヒトの遺体から抽出され、１人から得ることができる成長ホルモンの量は非常に限られていたため、成長ホルモンは、安定的に供給するのが困難であり、また高価でもあった。その後、遺伝子組換え技術が発展し、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中で合成された成長ホルモンが市場に流通するようになった（Ｓｏｍａｔｒｏｐｉｎ、１９８１、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、ＵＳＡ）。米国市場に現在出されている組換え成長ホルモン治療剤の例としては、Ｐｆｉｚｅｒ製Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎ、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ製Ｈｕｍａｔｒｏｐｅ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ製Ｎｕｔｒｏｐｉｎ、Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ製Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎなどが含まれる。
【００１０】
[11]しかしながら、組換え成長ホルモン調剤は、すべて、１週間に６回または７回投与する必要のある、毎日１回用量形態である。成人成長ホルモン欠乏症については、Ｈｕｍａｔｒｏｐｅが、０．２ｍｇ／日（０．１５〜０．３０ｍｇ／日の範囲内）の用量で使用される。Ｎｕｔｒｏｐｉｎの用量の決定が体重に基づかない場合、Ｎｕｔｒｏｐｉｎの開始用量は、０．２ｍｇ／日（０．１５〜０．３ｍｇ／日の範囲内）であり、用量は、１〜２ヶ月の間隔で０．１〜０．２ｍｇ／日の範囲内で変更されてもよい。Ｎｕｔｒｏｐｉｎの用量が体重に基づいて決定される場合、その開始用量は、０．００５ｍｇ／ｋｇ／日を超えないで使用される。Ｎｕｔｒｏｐｉｎの用量を増加させる必要がある事例の場合、用量は、投与後４週間で０．０１ｍｇ／ｋｇ／日を超えないように増加される。Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎの用量の決定が体重に基づかない場合、その開始用量は、０．２ｍｇ／日（０．１５〜０．３ｍｇ／日の範囲内）であり、Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎの用量は、１〜２ヶ月の間隔で０．１〜０．２ｍｇ／日の範囲内で変更されてもよい。Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎの用量が体重に基づいて決定される場合、Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎは、その開始用量が０．００４ｍｇ／ｋｇ／日を超えないように使用される。Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎの用量を増加させる必要がある場合、６週後に０．０１６ｍｇ／ｋｇ／日を超えないように増加される。小児成長ホルモン欠乏症については、Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎは、０．１６〜０．２４ｍｇ／ｋｇ／週の用量で使用され、Ｈｕｍａｔｒｏｐｅは、０．０２６〜０．０４３ｍｇ／ｋｇ／日の用量で使用される。さらに、Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎは、０．３ｍｇ／ｋｇ／週の用量で使用され、Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎは、０．０２４〜０．０３４ｍｇ／ｋｇ／日の用量で使用される。
【００１１】
[12]現在の成長ホルモン調剤は、毎日１回用量形態であり、特に、小児患者に対して３〜４年の長い治療期間にわたって毎日それらを注射する必要があることは不都合である。さらに、これらの成長ホルモン調剤の注射から生じる精神的ストレスが、生活の質を低下させることが知られている。さらに、患者が意図せず注射を受けない服薬遵守の問題がしばしば発生し、この問題は、治療効果を損なう最大の要因である。加えて、治療の年数が増加するにつれて、非服薬遵守数が大幅に増加することが知られている（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｐｒａｃｔｉｃｅ、２００８年３月、１４（２）：１４３〜５４）。患者の約２／３の身長の伸び率は、実際の非服薬遵守（低服薬遵守）のために低下することが知られている（ＰｌｏＳ  ｏｎｅ、２０１１年１月；６（１）：ｅ１６２２３）。
【００１２】
[13]そのような問題に起因して、様々な技術を使用して、長期持続型の成長ホルモンを開発する試みが間断なく行われている。しかしながら、成功裡に開発され市場に流通している製品の中でも、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって開発されたＮｕｔｒｏｐｉｎ  Ｄｅｐｏｔは、毎月１回用量形態であったが、これは、その製造が困難であるために市場から撤退した。さらに、Ｅｕｔｒｏｐｉｎ  Ｐｌｕｓ／Ｄｅｃｌａｇｅ（ＬＧ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｔｄ．）が、ヒアルロン酸（ＨＡ）を使用して、毎週１回用量形態として開発されたが、これは、第１世代製品において大きな針の注射器を使用する必要があるという欠点がある。
【００１３】
[14]したがって、毎日用量から生じる不都合および他の様々な理由のために低下する患者の服薬遵守の観点から、安全で効果的である一方患者の服薬遵守を満たす長期持続型の成長ホルモンを開発する必要性がある。ＧＸ−Ｈ９（ｈＧＨ−ハイブリッドＦｃ）は、長期持続型の成長ホルモン調剤である。米国特許第７，８６７，４９１号では、従来のＦｃ融合技術の問題である、補体依存性細胞傷害および抗体依存性細胞障害を克服することが可能なハイブリッドＦｃが、イムノグロブリンＩｇＤおよびイムノグロブリンＩｇＧ４を組み合わせることによって生成された。次いで、米国特許第８，５２９，８９９号では、従来の毎日１回用量型の成長ホルモン調剤を置きかえることが可能なｈＧＨ融合タンパク質（ｈＧＨ−ｈｙＦｃ、ＧＸ−Ｈ９）が、ハイブリッドＦｃをヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）に融合させることによって生成された。しかしながら、実際のＦｃ融合タンパク質のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期は、Ｆｃに結合する生理活性構成成分の種類に応じて大きく変化し、これは、融合タンパク質の用量にも影響を与える。成長ホルモン欠乏症の治療において効果的かつ安全な、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）およびｈｙＦｃの融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９の用量、投薬頻度などは、いまだ明らかになっていない。
【００１４】
[15]したがって、最適な効果を示すことができるｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９の用量および投薬頻度を決定するために、本発明者らは、３２名の健康な成人（２０１３−００２７７１−１８）、成人成長ホルモン欠乏症を有する４５名の患者（２０１４−００２６９８−１３、ＥｕｄｒａＣＴ／ＮＣＴ０２９４６６０６、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ）および小児成長ホルモン欠乏症を有する５６名の患者（２０１５−００１９３９−２１、ＥｕｄｒａＣＴ）に対して臨床研究を実施している。結果として、本発明者らは、ＩＧＦ−１  ＳＤＳ値を長期間にわたって正常範囲内に維持する一方、成長ホルモンによって生じ得る副作用を最小にすることができる、ＧＸ−Ｈ９の用量、投薬頻度、安全性などを決定し、それによって本発明を完成した。
【発明の概要】
【００１５】
[18]技術的な問題
[20]本開示の目的は、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９の用量および投薬頻度を明らかにすることによって、成長ホルモン欠乏症を治療するのに効果的なｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９を使用して成長ホルモン欠乏症を治療するための方法を提供することである。
【００１６】
[21]上記の目的を達成するために、本開示は、成長ホルモン欠乏症を治療するための医薬組成物であって、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９および薬学的に許容される担体を含み、ｈＧＨ融合タンパク質が、小児患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇの用量で１週間に１回投与される、医薬組成物を提供する。
【００１７】
[22]本開示はまた、成長ホルモン欠乏症を治療するための医薬組成物であって、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９および薬学的に許容される担体を含み、ｈＧＨ融合タンパク質が、小児患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に１回投与される、医薬組成物も提供する。
【００１８】
[23]本開示はまた、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９および薬学的に許容される担体を含有する容器、ならびにｈＧＨ融合タンパク質が、成長ホルモン欠乏症を治療するために、小児患者に、患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇの用量で１週間に１回投与されることを示す添付文書を含むキットも提供する。
【００１９】
[24]本開示はまた、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９および薬学的に許容される担体を含有する容器、ならびにｈＧＨ融合タンパク質が、成長ホルモン欠乏症を治療するために、小児患者に、患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に１回投与されることを示す添付文書を含むキットも提供する。
【００２０】
[25]本開示はまた、成長ホルモン欠乏症を治療するための方法であって、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９を、成長ホルモン欠乏症を有する小児患者に、患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇの用量で１週間に１回投与する工程を含む方法も提供する。本開示は、成長ホルモン欠乏症を有する小児患者に、患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇの用量で１週間に１回投与することによって成長ホルモン欠乏症を治療するための医薬の製造における、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９の使用を提供する。本開示は、成長ホルモン欠乏症を有する小児患者に、患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇの用量で１週間に１回投与することによる成長ホルモン欠乏症の治療における使用のための、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９を含む組成物を提供する。
【００２１】
[26]本開示はまた、成長ホルモン欠乏症を治療するための方法であって、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９を、成長ホルモン欠乏症を有する小児患者に、患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に１回投与する工程を含む方法にも関する。本開示は、成長ホルモン欠乏症を有する小児患者に、患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に１回投与することによって成長ホルモン欠乏症を治療するための医薬の製造における、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９の使用を提供する。本開示は、成長ホルモン欠乏症を有する小児患者に、患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に１回投与することによる成長ホルモン欠乏症の治療における使用のための、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９を含む組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】[28]図１は、ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）についてのＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）Ｉの結合親和性の測定の結果を示す。
【図２】[29]図２は、ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）についてのＣ１ｑの結合親和性の測定の結果を示す。
【図３】[30]図３は、Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎ（Ｐｆｉｚｅｒ）またはＧＸ−Ｈ９の投与後の、下垂体切除ラットにおける体重増加の測定の結果を示す。
【図４】[31]図４は、ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）またはＥｕｔｒｏｐｉｎ（ＬＧ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）の、それぞれの薬物のラットへの単回用量皮下投与後に示された、薬物動態特性を示す。
【図５】[32]図５は、それぞれの薬物のサルへの単回用量皮下投与後に示された、ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）またはＥｕｔｒｏｐｉｎの薬物動態特性を示す。
【図６】[33]図６は、ＧＸ−Ｈ９を４週間にわたってサルに反復投与した後に示された、ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）の薬物動態を示す。
【図７】[34]図７は、健康な成人ボランティアに対する第１相臨床研究における、ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）の用量に応じた薬物動態特性を示す。
【図８】[35]図８は、健康な成人ボランティアに対する第１相臨床研究における、ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）の用量に応じた薬力学特性（ＩＧＦ−１  ＳＤＳ）（ベースラインからの変化）を示す。
【図９】[36]図９は、小児成長ホルモン欠乏症を有する患者に対する第２相臨床研究における、ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）の単回用量（ＳＤ）期間および複数回用量（ＭＤ）期間中の用量に応じた用量依存薬物動態特性を示す。
【図１０】[37]図１０は、小児成長ホルモン欠乏症を有する患者に対する第２相臨床研究における、ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）の単回用量（ＳＤ）期間および複数回用量（ＭＤ）期間中の用量に応じた薬力学（平均ＩＧＦ−１  ＳＤＳ）特性を示す。
【発明の詳細な説明】
【００２３】
[40]ヒトにおいて、実際の成長を促進するのに効果的である、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９の用量および投薬頻度は、いまだ明らかになっていない。
【００２４】
[41]本発明者らは、最適な効果を示すことができるＧＸ−Ｈ９の用量および投薬頻度を決定するために、小児ホルモン欠乏症を有する５６名の患者に対する臨床研究（２０１５−００１９３９−２１）を実施している。結果として、本発明者らは、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９が、小児患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇの用量で１週間に１回投与された場合、または小児患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に１回投与された場合、成長ホルモンが、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて長期持続し得、その結果、そのＩＧＦ−１  ＳＤＳ値を、長期間にわたって正常範囲内に維持することができることを見出した。
【００２５】
[42]したがって、一側面では、本開示は、成長ホルモン欠乏症を治療するための医薬組成物であって、ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）および薬学的に許容される担体を含み、ｈＧＨ融合タンパク質が小児患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇの用量で１週間に１回投与される、医薬組成物を対象とする。特に、本開示は、ｈＧＨ融合タンパク質が、小児患者の体重１ｋｇあたり０．５〜１．５ｍｇ、０．７〜１．３ｍｇ、または０．８〜１．２ｍｇの用量で１週間に１回投与される、医薬組成物を対象とする。
【００２６】
[43]加えて、別の側面では、本開示は、成長ホルモン欠乏症を治療するための医薬組成物であって、ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）および薬学的に許容される担体を含み、ｈＧＨ融合タンパク質が小児患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に１回投与される、医薬組成物を対象とする。特に、本開示は、ｈＧＨ融合タンパク質が、小児患者の体重１ｋｇあたり１．０〜３．０ｍｇ、１．４〜２．６ｍｇ、または１．６〜２．４ｍｇの用量で２週間に１回投与される、医薬組成物を対象とする。
【００２７】
[44]本開示の医薬組成物において、ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）は、配列番号１のアミノ酸配列を含んでいてもよい。本開示の医薬組成物は、皮下注射されてもよい。
【００２８】
[45]別の側面では、本開示は、成長ホルモン欠乏症を治療するための方法であって、成長ホルモン欠乏症を有する小児患者に、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９を、患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇの用量で１週間に１回投与する工程を含む方法を対象とする。
【００２９】
[46]なお別の側面では、本開示は、成長ホルモン欠乏症を治療するための方法であって、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９を、成長ホルモン欠乏症を有する小児患者に、患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に１回投与する工程を含む方法を対象とする。
【００３０】
[47]ここで使用される場合、「ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９」という用語は、ハイブリッドＦｃをヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）に融合させることによって生成されるヒト成長ホルモン融合タンパク質ｈＧＨ−ｈｙＦｃを指す。ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９は、本明細書に添付された配列番号１のアミノ酸配列を含んでいてもよい。ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９は、米国特許第８，５２９，８９９号に開示されている方法に従って生成することができる。
【００３１】
[48]本開示によるｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９を含む医薬組成物は、成長ホルモン欠乏症を有する小児患者に投与することができる。
【００３２】
[49]「低身長」は、身長が、正常の２標準偏差（ＳＤ）もしくは第３パーセンタイル値（３％）未満である場合、または身長の伸びが１年あたり５ｃｍ以下である場合を意味する。成長ホルモン欠乏症は、先天性または後天性欠乏症を含んでもよい。先天性欠乏症に関して、下垂体が発達せず、その結果成長ホルモン分泌障害が生じる場合、成長ホルモン欠乏症が生じ得る。後天性成長ホルモン欠乏症は、難産に起因する酸素欠乏を原因とする脳組織への損傷によって生じ得る。成長ホルモン欠乏症の他の原因としては、脳腫瘍の治療のための放射線または出生後の結核性髄膜炎による下垂体への損傷を含む。成長ホルモン欠乏症は、症状、たとえば、成長遅滞および低身長を示し、先天性成長ホルモン欠乏症は、新生児で開始する低グルコース症状を示す。加えて、小児は、症状、たとえば、不安の増加および活力の減少を示す。
【００３３】
[50]本開示の医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含む。薬学的に許容される担体は、それが、ｈＧＨ融合タンパク質を患者に送達するのに好適な非毒性物質である限り、任意の担体であってもよい。本開示において使用することができる担体の例としては、滅菌水、アルコール、脂肪、ワックスおよび不活性固体が挙げられる。薬学的に許容されるアジュバント、たとえば、緩衝剤、分散剤、希釈剤など、すなわち、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液、スクロース溶液、ポロキサマー溶液なども、本開示の医薬組成物中に組み込まれてもよい。
【００３４】
[51]本開示において、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９は、小児患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇの用量で１週間に１回、たとえば、患者の体重１ｋｇあたり０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１または１．２ｍｇの用量で１週間に１回投与されてもよい。好ましくは、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９は、患者の体重１ｋｇあたり０．５〜１．５ｍｇ、０．７〜１．３ｍｇ、または０．８〜１．２ｍｇの用量で１週間に１回投与されてもよい。加えて、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９は、小児患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に１回、たとえば、患者の体重１ｋｇあたり１．０、１．２、１．４、１．６、１．８、２．０、２．２、２．４、２．６または２．８ｍｇの用量で２週間に１回投与されてもよい。好ましくは、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９は、患者の体重１ｋｇあたり１．０〜３．０ｍｇ、１．４〜２．６ｍｇ、または１．６〜２．４ｍｇの用量で２週間に１回投与されてもよい。より好ましくは、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９は、患者の体重１ｋｇあたり０．８〜１．２ｍｇの用量で１週間に１回、または患者の体重１ｋｇあたり１．６〜２．４ｍｇの用量で２週間に１回投与される。
【００３５】
[52]ｈＧＨ融合タンパク質の用量は、患者の体重に基づいて調節することができ、投与後の進行に応じて増加または減少させることができる。後続して投与されるｈＧＨ融合タンパク質の用量は、初期用量よりも高くても低くてもよく、または初期用量と等しくてもよい。初期段階において、ｈＧＨ融合タンパク質は、安全性を確実にするために低用量で投与されてもよく、有害事象などが現れないことが確認された場合、用量を徐々に増加させてもよい。加えて、ｈＧＨ融合タンパク質の用量は、患者から得られた血漿または血清試料中のＩＧＦ−Ｉ  ＳＤＳ値をモニタリングしながら調節してもよい。個々の患者に好適なｈＧＨ融合タンパク質の用量は、患者の年齢、性別、体質、体重などに応じて変動してもよい。
【００３６】
[53]ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９を含有する医薬組成物は、様々な方法で対象に投与されてもよい。たとえば、医薬組成物は、非経口的に、たとえば皮下または静脈内に投与されてもよい。この組成物は、当技術分野で周知の従来の滅菌技術を使用して滅菌されてもよい。組成物は、生理的条件に近づけるために必要とされる通りの薬学的に許容される補助剤、たとえば、ｐＨ調節および緩衝剤、毒性調節剤など、たとえば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどを含有していてもよい。これらの調合物中のｈＧＨ融合タンパク質の濃度は、幅広く変動し得、選択される特定の投与様式に従って、液量、粘度などに主に基づいて選択されてもよい。
【００３７】
[54]なお別の側面では、本開示は、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９および薬学的に許容される担体を含有する容器、ならびにｈＧＨ融合タンパク質が、成長ホルモン欠乏症を治療するために、小児患者に、患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇの用量で１週間に１回投与されることを示す添付文書を含むキットを対象とする。特に、本開示は、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９および薬学的に許容される担体を含有する容器、ならびにｈＧＨ融合タンパク質が、成長ホルモン欠乏症を治療するために、小児患者に、患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に１回投与されることを示す添付文書を含むキットを対象とする。
【００３８】
[55]添付文書は、ｈＧＨ融合タンパク質が、成長ホルモン欠乏症を治療するために小児患者に投与されることを示す手引きのタイプであってもよい。
【００３９】
[56]ｈＧＨ融合タンパク質および薬学的に許容される担体は、同じ容器または個別の容器中に存在していてもよい。一態様では、好適な容器としては、ボトル、バイアル、バッグ、注射器（たとえば、用量調節可能なペン型、障壁の除去後、溶媒および凍結乾燥剤を混合することによって即時投与が可能な注射器など）などが挙げられてもよい。容器は、様々な材料、たとえば、ガラス、プラスチック材料または金属で形成されていてもよい。容器に含まれるラベルは、使用説明を示していてもよい。加えて、商業的観点および使用者の観点から、キットは、他の好ましい材料、たとえば、緩衝液、希釈剤、フィルター、針、注射器などを含んでいてもよい。
【００４０】
［実施例］
[59]以下、本開示を、例を参照してさらに詳細に記載する。これらの例は、例示のみを目的とし、本開示の範囲を限定すると解釈されるべきではないことが、当業者には明らかである。
【００４１】
[61]例１：ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９の生成
[62]ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９は、米国特許第８，５２９，８９９号に開示されている方法に従って生成することができる。
【００４２】
[63]最初に、ｈｙＦｃが配列番号１のアミノ酸配列をコードするヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）に融合したｈＧＨ−ｈｙＦｃの核酸配列を、発現ベクターｐＡＤ１５に挿入し、これによって、ｈＧＨ−ｈｙＦｃを発現および生成する細胞株を構築した。ｈＧＨ−ｈｙＦｃ構造遺伝子を含むベクターを構築するために、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）遺伝子として、ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＡ９８６１８．１の配列を使用し、ｈｙＦｃ遺伝子として、ＧｅｎＢａｎｋ  Ｐ０１８８０（ＩｇＤ）およびＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＨ２５９８５（ＩｇＧ４）の配列を融合のために使用した。遺伝子プロデューサーから得られた遺伝子を、特定の制限酵素の使用によって、融合タンパク質生成細胞株の生成のために発現ベクターに挿入した。
【００４３】
[64]上記の方法によって得られた発現ベクターを、リン酸カルシウム法によってＣＨＯ  ＤＧ４４（Ｃｏｌｕｍｂｉａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＵＳＡ）細胞にトランスフェクトした。トランスフェクションの６時間後、トランスフェクト細胞をリン酸緩衝液で洗浄し、次いで、培地を、１０％  ｄＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ、３００６７−３３４）、ＭＥＭアルファ（Ｇｉｂｃｏ、１２５６１、ＵＳＡ、カタログ番号１２５６１−０４９）、ＨＴ＋（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ、１１０６７−０３０））培地で置きかえた。トランスフェクションの４８時間後、細胞を、１００ｍｍプレート上、ＨＴ不含１０％  ｄＦＢＳ＋ＭＥＭアルファ培地で系列希釈し、ＨＴ選別を実施した。細胞を、単一のコロニーが形成されるまで静置した一方、培地を週に２回置きかえた。次に、ＤＨＦＲシステムを使用して生産性を増加させるために、ＨＴ選別クローンのＭＴＸ増幅を実施した。ＭＴＸ増幅の完了後、細胞を安定化のために４〜５回副次培養し、次いで、単位生産性の評価を実施し、これによって所望のタンパク質の生成のために好適なクローンを得た。
【００４４】
[65]最も高い生産性を示すクローンについて単一のクローンを得るために、限界希釈クローニング（ＬＤＣ）を実施した。ＬＤＣのために、細胞を培地で希釈し、９６ウェルプレートに１個の細胞／ウェルの濃度で播種した。播種後１０〜１４日で、細胞を、顕微鏡観察下で単一のクローンを含有するウェルから収集し、収集した細胞をＴ２５フラスコ中で培養して、細胞の生産性評価を実施できるようにした。次いで、生産性の高い細胞株を選択した。
【００４５】
[66]選択した細胞株から培養培地を収集し、次いで、所望のタンパク質を培養培地から精製した。このために、タンパク質含有培養培地試料を、Ｐｒｏｓｅｐ  Ｕｌｔｒａ  Ｐｌｕｓ（Ｐｒｏｓｅｐ（登録商標）Ｕｌｔｒａ  Ｐｌｕｓ、Ｍｅｒｃｋ）を使用して吸着し（試料結合）、次いで、５０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウムおよびｐＨ７．０緩衝液を使用して平衡化した。ＸＫ１６／２０カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を溶出のために使用し、所望のタンパク質を、１００ｍＭクエン酸ナトリウム、２００ｍＭ  Ｌ−アルギニンおよびｐＨ３．１緩衝液を使用して溶出した。
【００４６】
[68]例２：ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に関する試験
[69]ＧＸ−Ｈ９のハイブリッドＦｃ領域が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導しないことを確認するために、酵素連結免疫測定法アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を実施した。
【００４７】
[70]陽性対照として、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩへの非常に高い結合親和性を有することが公知の、Ｒｉｔｕｘａｎ（Ｒｏｃｈｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）およびＥｎｂｒｅｌ（Ａｍｇｅｎ、ＵＳＡ）を使用した。ＧＸ−Ｈ９、ＲｉｔｕｘａｎおよびＥｎｂｒｅｌのそれぞれを９６ウェルプレートにコーティングし、次いで、系列希釈したＦｃγ受容体Ｉと反応させた。反応の完了後、反応溶液のそれぞれを緩衝液で洗浄して、試験物質に結合していないＦｃγ受容体Ｉを除去した。次に、Ｆｃγ受容体Ｉと試験物質のそれぞれとの間の結合親和性を、ビオチン化抗ＦｃγＲＩ抗体およびＨＲＰコンジュゲートストレプトアビジンを使用して測定した。
【００４８】
[71]ＧＸ−Ｈ９と補体依存性細胞傷害を誘導するＣ１ｑとの間の結合親和性も、上記の通りのＥＬＩＳＡ法を使用して測定した。陽性対照として、Ｒｉｔｕｘａｎ（Ｒｏｃｈｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）およびＥｎｂｒｅｌ（Ａｍｇｅｎ、ＵＳＡ）を使用し、Ｃ１ｑと試験物質のそれぞれとの間の結合親和性を、ＨＲＰコンジュゲート抗Ｃ１ｑｌ抗体を使用して測定した。
【００４９】
[72]結果として、図１に示されるように、ＧＸ−Ｈ９は、抗体依存性細胞傷害を誘導するＦｃγ受容体Ｉに対する低い結合親和性を示し、図２から分かるように、ＧＸ−Ｈ９はまた、補体依存性細胞傷害を誘導するＣ１ｑに対する低い親和性を有した。
【００５０】
[74]例３：ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）の前臨床研究の結果
[75]３−１：下垂体切除ラットを使用したＧＸ−Ｈ９の反復皮下投与の効果に関する試験
[76]ＧＸ−Ｈ９の効果を、動物疾患モデルである下垂体切除ラットを使用して試験した。対照として、毎日１回用量形態のＧｅｎｏｔｒｏｐｉｎ（Ｐｆｉｚｅｒ、ＵＳＡ）を使用した。ＧＸ−Ｈ９を１週間に１回投与し、その効果を、対照の効果と比較した。
【００５１】
[77]試験を、下垂体切除後約１週間で約１０％以下の体重増加を示す個体に対して実施した。陰性対照として群１には、２週間にわたってビヒクル単独を皮下投与した。群２には、Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎを、０．２ｍｇ／ｋｇの用量で毎日投与した。群３には、Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎを、Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎの週用量である１．４ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回皮下投与した。群４には、ＧＸ−Ｈ９を１．４ｍｇ／ｋｇの用量（Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎの週用量に対応する）で１週間に１回皮下投与した。群５には、ＧＸ−Ｈ９を、３．５ｍｇ／ｋｇの用量（Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎの週用量のモル数の１／２に対応する）で１週間に１回皮下投与した。群６には、ＧＸ−Ｈ９を、７．０ｍｇ／ｋｇの用量（Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎの週用量のモル数と同一のモル数に対応する）で１週間に１回皮下投与した。それぞれの薬物投与の翌日、各ラットにおける症状を観察し、各ラットの体重を測定した。
【００５２】
[78]結果として、図３に示されるように、Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎを、０．２ｍｇ／ｋｇの用量で１日に１回投与した場合、平均で約２０ｇの体重増加があったが、Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎを１．４ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回投与した場合、体重増加はなかった。ＧＸ−Ｈ９を７ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回投与した場合（群６）、群６では、Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎを同一モル数で投与した群３と比較して、より大きな体重増加が示された。加えて、３．５ｍｇ／ｋｇのＧＸ−Ｈ９の投与（群５）では、０．２ｍｇ／ｋｇのＧｅｎｏｔｒｏｐｉｎの毎日投与（群２）の効果と同様の効果が示された。
【００５３】
[80]３−２：ラットを使用したｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）の単回用量皮下投与の薬物動態研究
[81]ＧＸ−Ｈ９の薬物動態を試験するために、ラットに、単回用量のＧＸ−Ｈ９を皮下投与した。対照として、効果の比較のために単回用量のＥｕｔｒｏｐｉｎ（ＬＧ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｔｄ．、Ｋｏｒｅａ）をラットに投与した。群１には、単回用量の２００μｇ／ｋｇのＥｕｔｒｏｐｉｎを皮下投与し、群２には、単回用量の２００μｇ／ｋｇのＧＸ−Ｈ９を皮下投与した。群３には、単回用量の１，０００μｇ／ｋｇのＧＸ−Ｈ９を皮下投与した。
【００５４】
[82]皮下投与前、ならびに皮下投与後１、４、８、１２、１８、２４、３６、４８、７２、９６、１２０、１４４、１６８、２１６、２６４および３３６時間の時点で、ラットから血液をサンプリングした。各試験物質の血中濃度を、各試験物質に特異的な生体試料分析法（ＥＬＩＳＡ）を使用して測定した。
【００５５】
[83]試験結果を図４および以下の表１に示す。これらから分かるように、単回用量のＧＸ−Ｈ９を２００または１，０００μｇ／ｋｇの用量で皮下投与した後の薬物動態においては、１７時間または２４時間でピーク血中濃度に達し（Ｔｍａｘ）、ＧＸ−Ｈ９は、それぞれ９日および１１日まで血液中で検出された。投与用量が増加すると、全身曝露も増加した。
【００５６】
【表１】
2019533004.tif 000003
【００５７】
[87]対照物質である２００μｇ／ｋｇのＥｕｔｒｏｐｉｎを投与した群と比較した場合、２００μｇ／ｋｇのＧＸ−Ｈ９を皮下投与した群の場合では、試験物質は、より長い期間血中で検出され（Ｅｕｔｒｏｐｉｎについて２４時間対ＧＸ−Ｈ９について９日間）、ＧＸ−Ｈ９は、血中で維持された一方、最大血中濃度に達するのに要した時間（Ｔｍａｘ）は、約２０時間の差異（Ｅｕｔｒｏｐｉｎについて４時間対ＧＸ−Ｈ９について２４時間）を示した。そのような結果は、ラットが、対照薬物Ｅｕｔｒｏｐｉｎと比較してより長い期間、ＧＸ−Ｈ９に全身曝露されたことを示している。加えて、ＧＸ−Ｈ９の用量が増加すると、皮下投与後の全身曝露も、用量の増加率に比例して増加する。
【００５８】
[89]３−３：サルを使用したｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）の皮下投与後の薬物動態研究
[90]カニクイザルにおけるＧＸ−Ｈ９および対照物質Ｅｕｔｒｏｐｉｎの薬物動態を分析した。雄性のサル（群あたり３匹のサル）に、ＧＸ−Ｈ９を、５００μｇ／ｋｇおよび１，０００μｇ／ｋｇの用量で１週間に１回、合計４回反復して皮下投与し、対照物質Ｅｕｔｒｏｐｉｎを、１，０００μg／ｋｇの単回用量で皮下投与した。
【００５９】
[91]ＧＸ−Ｈ９を投与した群では、血液を１回目および５回目の投与前（０日目および２１日目）、ならびに投与後１、４、８、１２、１８、２４、３０、３６、４８、６０、７２、９６、１２０、１４４および１６８時間の時点でサンプリングした。
【００６０】
[92]Ｅｕｔｒｏｐｉｎを投与した群では、血液を、単回用量投与前、ならびに単回用量投与後１、４、８、１２、１８、２４、３０、３６、４８、６０、７２、９６、１２０、１４４および１６８時間の時点でサンプリングした。
【００６１】
[93]試験物質の血中濃度を、ＧＸ−Ｈ９およびＥｕｔｒｏｐｉｎのそれぞれに特異的な生体試料分析法（ＥＬＩＳＡ）を使用して測定し、結果を図５および以下の表２（単回用量投与）、ならびに図６および以下の表３（反復投与）に示す。図５、６、表２および３から分かるように、ＧＸ−Ｈ９を、５００または１，０００μg／ｋｇの用量で投与した場合、全身曝露は、単回投与および反復投与（４週間）の両方の後で、用量の増加に従って増加した。
【００６２】
【表２】
2019533004.tif 000004
【００６３】
【表３】
2019533004.tif 000005
【００６４】
[99]対照薬物Ｅｕｔｒｏｐｉｎ（１，０００μｇ／ｋｇ、単回用量で皮下投与）と比較した場合、ＧＸ−Ｈ９（５００または１，０００μｇ／ｋｇ）の投与の場合では、試験物質は、より長い期間血液中で検出された（Ｅｕｔｒｏｐｉｎの投与後１２〜１８時間対ＧＸ−Ｈ９の投与後１６８時間）。つまり、ＧＸ−Ｈ９を皮下投与した場合、サルは、対照薬物Ｅｕｔｒｏｐｉｎと比較してより長い期間、ＧＸ−Ｈ９に全身曝露された。加えて、ＧＸ−Ｈ９の用量が５００から１，０００μｇ／ｋｇに増加すると、ＧＸ−Ｈ９の皮下投与後の全身曝露も、用量の増加率に比例して増加することが示された。
【００６５】
[101]例４：ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）の第１相臨床研究の結果
[102]４−１：健康な成人におけるｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）の薬物動態特性
[103]健康なボランティアに対し、無作為割当て、二重盲検、プラセボ対照、単回用量投与および用量の段階的増加を使用して、第１相臨床研究を実施した。第１相臨床研究は、ＧＸ−Ｈ９の単回用量投与に対する、安全性、薬物耐性および薬物動態／薬力学特性を評価することが目的であった。健康なボランティアを、無作為に試験群またはプラセボ群に割り当て、次いで、４種の用量（０．２、０．４、０．８および１．６ｍｇ／ｋｇ）のＧＸ−Ｈ９を単回容量で皮下投与し、次いで、合計で５６日間にわたって評価した。
【００６６】
[104]ＧＸ−Ｈ９を投与した群では、血液を、単回用量投与前、ならびに単回用量投与後０．２５、１、２、４、６、８、１２、１６、２４、２８、３２、３６、４０、４８、５４、６０、７２、８０、９６、１４４、３１２、４８０、６４８および１３２０時間の時点でサンプリングした。
【００６７】
[105]ＧＸ−Ｈ９の血中濃度を、ＧＸ−Ｈ９に特異的な生体試料分析法（ＥＬＩＳＡ）を使用して分析し、結果を、以下の表４および図７［平均（範囲）］に示す。
【００６８】
【表４】
2019533004.tif 000006
【００６９】
[108]１）ｔｍａｘは、中央値（範囲）として表す。
【００７０】
[109]２）ｎ＝５（１名についてのｔ１／２値およびパラメータは、正確に決定できなかった）。
【００７１】
[111]ＧＸ−Ｈ９の単回用量皮下投与後、幾何平均濃度のピークが約１２時間（８〜１６時間）で観察され、約１２時間において観察されたピークよりも低い２つめのピークが、投与後約３２時間（２８〜３２時間）で観察された。最大血液濃度に達するのに要した時間は、０．２〜０．８ｍｇ／ｋｇ用量群において１２〜１６時間、１．６ｍｇ／ｋｇ用量群において３４時間であった。最高用量群における２つめのピークは、Ｃｍａｘに対応した（図７を参照されたい）。ＣｍａｘおよびＡＵＣは、すべての用量について、用量に対して増加した。半減期（ｔ１／２）は、６９．２時間〜１３８時間であり、個体間で異なった。
【００７２】
[113]４−２：健康な成人におけるｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）の薬物動態特性
ＧＸ−Ｈ９を投与した群では、血液を、単回用量投与前、ならびに単回用量投与後１２、２４、３６、４８、６０、７２、９６、１４４、３１２、４８０、６４８および１３２０時間の時点でサンプリングした。投与前に測定したサンプリングした血液におけるＩＧＦ−１濃度に対するベースラインからのパーセント変化の結果を、図８に示す。
【００７３】
[115]図８は、プラセボ群、ならびに０．２、０．４、０．８および１．６ｍｇ／ｋｇのＧＸ−Ｈ９を投与した群におけるベースラインからの血中ＩＧＦ−１濃度（ｎｇ／ｍＬ）のパーセント変化（％）を示している。ここから分かるように、ＧＸ−Ｈ９を０．２、０．４、０．８および１．６ｍｇ／ｋｇの用量の単回用量で皮下投与した場合、血中ＩＧＦ−１濃度は、用量依存的様式で増加した。平均最大増加（ベースラインからのパーセント変化）は、０．２、０．４、０．８および１．６ｍｇ／ｋｇの用量で、それぞれ８１％、１５７％、３０１％および３４９％であった。ＩＧＦ−１が最大血液濃度に達するのに要した時間は、０．２〜０．８ｍｇ／ｋｇ用量群において４８〜６０時間、１．６ｍｇ／ｋｇ用量群において４８〜９６時間であり、それが用量依存的様式で増加したことを示した。ＩＧＦ−１の平均濃度は、０．２ｍｇ／ｋｇの用量において投与後７日目および他の用量において１４日目にベースラインに戻った。
【００７４】
[117]４−３：健康な成人におけるｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）の安全性調査
試験対象において観察された、治療により出現した有害事象を、投与薬物、有害事象と薬物との関係および有害事象の強度に従って分析した。結果を以下の表５にまとめる。
【００７５】
【表５】
2019533004.tif 000007
【００７６】
[121]Ｎ＝薬物に曝露された人数；
[122]ｎ＝有害事象を示した人数；
[123]Ｅ＝出現した有害事象数；
[124]（％）＝治療から生じた有害事象を経験した患者のパーセンテージ、（ｎ／Ｎ）×１００；
[125]深刻な有害事象または軽度の有害事象は記録されなかった。
【００７７】
[126]図５に示されるように、試験対象のうち２１名で、合計５４件の有害事象が報告された。死亡または深刻な有害事象は報告されなかった。重度の有害事象が１名の試験対象において報告されたが、この重度の有害事象は、薬物に起因しないと考えられると決定した。上記の有害事象を除くすべての有害事象は軽度であった。最も頻繁に報告された有害事象は、筋骨格および結合組織障害（１９件）、全身性疾患および投与部位異常（１１件）、ならびに神経性異常（１０件）であった。３件以上報告された有害事象は、筋痛（７件）、カテーテル処置部位反応（６件）、頭痛（５件）、上咽頭炎（５件）、関節痛（４件）および四肢痛（３件）であった。
【００７８】
[127]一方、ＧＸ−Ｈ９を１回投与された試験対象においては、投与前、ならびに投与後２８日目および５６日目に、抗薬物抗体（ＡＤＡ）の存在または非存在を観察した。結果として、ＧＸ−Ｈ９によって抗体が形成された患者は現れなかった。
【００７９】
[129]例５：ｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）の第２相研究の結果
[130]５−１：小児成長ホルモン欠乏症を有する患者におけるｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）の薬物動態特性
[131]無作為化、非盲検、実薬対照、用量設定試験において、１週間に１回または２週間に１回投与した場合のＧＸ−Ｈ９の安全性、薬物耐性、有効性および薬物動態／薬力学特性を評価するために、小児成長ホルモン欠乏症を有する患者に対する第２相臨床研究が進行中である。ＧＸ−Ｈ９を、０．８ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回、１．２ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に１回、および２．４ｍｇ／ｋｇの用量で２週間に１回、合計６ヶ月にわたって投与し、次いで、ＧＸ−Ｈ９の有効性および安全性を、投与の１８ヶ月の延長を含む合計２４ヶ月にわたって評価した。対照薬として、Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎを０．０３ｍｇ／ｋｇの用量で毎日、１２ヶ月にわたって投与した。
【００８０】
[132]小児患者に対する臨床研究の期間は、スクリーニング期間、単回投与期間（４週）、複数回用量投与−用量範囲決定期間（６ヶ月）、延長投与期間（６ヶ月）、追加の延長投与期間（１２ヶ月）、および安全性追跡観察期間（１ヶ月）からなった。単回投与期間の間、ＰＫ／ＰＤ分析のための血液サンプリングを以下の方法で実施した。
【００８１】
[133]ＧＸ−Ｈ９コホート（コホート１；０．８ｍｇ／ｋｇ、１週間に１回、コホート２；１．２ｍｇ／ｋｇ、１週間に１回、およびコホート３；２．４ｍｇ／ｋｇ、１ヶ月に２回）、サンプリングタイミング：０（−１時間）、１６（±２時間）、４０（±２時間）、６４（±４時間）、８８（±４時間）、１１２（±６時間）、１６０（±１２時間）、３３６（±４８時間）、および６７２（±４８時間）。
【００８２】
[134]Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎ（登録商標）コホート（コホート４）：サンプリングタイミング：０（−１時間）、１６（±２時間）、８８（±４時間）、１６０（±１２時間）、３３６（±４８時間）、および６７２（±４８時間）。
【００８３】
[135]複数回投与−用量決定期間（６ヶ月）の間、決定した用量を継続して投与した。３ヶ月後、ＰＫ／ＰＤ分析を定常状態において実施した。血液サンプリングを、以下の方法で実施した。
【００８４】
[136]ＧＸ−Ｈ９の１週間に１回の投与に割り当てられた試験対象について、血液サンプリングを８５日目に実施した（ＰＫおよびＰＤの両方を含む）：０（−１時間）、１６（±２時間）、４０（±２時間）、６４（±４時間）、８８（±４時間）、１１２（±６時間）、および１６０（±１２時間）。
【００８５】
[137]ＧＸ−Ｈ９の１ヶ月に２回の投与に割り当てられた試験対象について、血液サンプリングを８５日目に実施した（ＰＫおよびＰＤの両方を含む）：０（−１時間）、１６（±２時間）、４０（±２時間）、６４（±４時間）、８８（±４時間）、１１２（±６時間）、１６０（±１２時間）、および３３６（±４８時間）。
【００８６】
[138]Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎ（登録商標）コホートの１日１回投与に割り当てられた試験対象について、血液サンプリングを８５日目、離脱前であるが薬物投与後に実施した（ＰＫおよびＰＤを含む）：０（−１時間）、６（±２時間）、１２（±２時間）、１８（±２時間）、２４（±２時間）。
【００８７】
[139]結果として、図９から分かるように、０．８、１．２および２．４ｍｇ／ｋｇの用量はすべて、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて蓄積することなくｉｎ  ｖｉｖｏにおいて好適なレベルを維持した。
【００８８】
[141]５−２：小児成長ホルモン欠乏症を有する患者におけるｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）の薬力学特性
[142]融合タンパク質の薬力学特性の分析を、例５−１で上記した通りの薬力学分析のための血液サンプリングタイミングと同じタイミングで実施した。
【００８９】
[143]単回用量投与期間の間、ＰＫ／ＰＤ分析のための血液サンプリングを以下の方法で実施した。
【００９０】
[144]ＧＸ−Ｈ９コホート（コホート１、コホート２およびコホート３）：サンプリングタイミング：０（−１時間）、１６（±２時間）、４０（±２時間）、６４（±４時間）、８８（±４時間）、１１２（±６時間）、１６０（±１２時間）、３３６（±４８時間）、および６７２（±４８時間）。
【００９１】
[145]Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎ（登録商標）コホート（コホート４）：サンプリングタイミング：０（−１時間）、１６（±２時間）、８８（±４時間）、１６０（±１２時間）、３３６（±４８時間）、および６７２（±４８時間）。
【００９２】
[146]複数回用量投与−用量範囲決定期間の間、血液サンプリングを以下の方法で実施した。
【００９３】
[147]ＧＸ−Ｈ９の１週間に１回投与に割り当てられた試験対象のＰＫ／ＰＤ：サンプリングタイミング：０（−１時間）、１６（±２時間）、４０（±２時間）、６４（±４時間）、８８（±４時間）、１１２（±６時間）および１６０（±１２時間）。
【００９４】
[148]ＧＸ−Ｈ９の１ヶ月に２回投与に割り当てられた試験対象のＰＫ／ＰＤ：サンプリングタイミング：０（−１時間）、１６（±２時間）、４０（±２時間）、６４（±４時間）、８８（±４時間）、１１２（±６時間）、１６０（±１２時間）、３３６（±４８時間）。
【００９５】
[149]Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎ（登録商標）コホートの１日に１回投与に割り当てられた試験対象のＰＫ／ＰＤ：サンプリングタイミング：０（−１時間）、６（±２時間）、１２（±２時間）、１８（±２時間）、および２４（±２時間）。
【００９６】
[150]結果として、図１０から分かるように、０．８、１．２および２．４ｍｇ／ｋｇのすべての用量は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて蓄積することなくｉｎ  ｖｉｖｏにおいて好適なレベルを維持した。さらに、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける平均ＩＧＦ−１  ＳＤＳ値が正常範囲内（−２ＳＤＳ〜２ＳＤＳ）であったことを確認した。
【００９７】
[152]５−３：小児成長ホルモン欠乏症を有する患者におけるｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）の安全性の調査
[153]試験対象において観察された有害事象を。投与薬物および薬物と有害事象との関係に従って分析した。結果として、小児患者に対する臨床研究において現在までに報告されたすべての有害事象は、既存の成長ホルモン治療において観察されるものと同じレベルであり、ＧＸ−Ｈ９が安全であることを示した。
【００９８】
[155]５−４：小児成長ホルモン欠乏症を有する患者におけるｈＧＨ融合タンパク質に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）の調査
[156]免疫原性を、ＧＸ−Ｈ９の反復投与によって抗体が形成されるかを決定することによって評価した。現在まで、ＧＸ−Ｈ９の投与によって形成された抗体は、何れの患者においても観察されなかった。
【００９９】
[157]小児成長ホルモン欠乏症を有する患者の治療のために推奨される従来の第１世代（毎日用量）ｈＧＨの用量は、１週間あたり０．１６ｍｇ／ｋｇ〜０．２４ｍｇ／ｋｇであることが知られている。本開示によると、小児成長ホルモン欠乏症を有する患者のためのｈＧＨ融合タンパク質の好適な用量は、１週間に１回投与する場合０．４ｍｇ／ｋｇ〜１．６ｍｇ／ｋｇ、および２週間に１回投与する場合０．８ｍｇ／ｋｇ〜３．２ｍｇ／ｋｇであることが見出だされた。加えて、小児患者へのｈＧＨ融合タンパク質（ＧＸ−Ｈ９）の単回または複数回投与は、深刻な有害事象を示さなかった。
【０１００】
[158]したがって、ＧＸ−Ｈ９は、ｉｎ  ｖｉｖｏ成長ホルモンまたは第１世代成長ホルモン製品と同等の効果を有し、同時に、半減期が増加し、したがって、患者服薬遵守の大幅な改善を示し、それはまた安全でもあることが見出だされた。
【産業上の利用可能性】
【０１０１】
[160]本開示によると、ｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ−Ｈ９が、小児成長ホルモン欠乏症を有する小児患者の体重１ｋｇあたり０．４〜１．６ｍｇの用量で１週間に１回投与された場合、または小児患者の体重１ｋｇあたり０．８〜３．２ｍｇの用量で２週間に２回投与された場合、成長ホルモンは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて長期持続し得、その結果、そのＩＧＦ−１  ＳＤＳ値を、長期間にわたって正常範囲に維持することができ、したがって、成長ホルモン調合物を、毎日投与する必要性なしに１週間に１回または２週間に１回投与し、これによって成長ホルモン欠乏症を治療することができる。
【０１０２】
[161]本開示を、具体的な特徴に関して詳細に記載しているが、この記載は、好ましい態様についてのみであり、本開示の範囲を限定しないことは当業者には明らかである。したがって、本開示の実質的な範囲は、添付の特許請求の範囲およびその等価物によって定義される。
【０１０３】
[162]配列表フリーテキスト
[163]電子ファイル添付。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年5月17日(2019.5.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
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