(57)【要約】  本発明は、（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸（１：１）クエン酸塩である化合物、そのような化合物を含む医薬組成物、αｖβ６インテグリンアンタゴニストを要する疾患または病態、特に、特発性肺線維症の治療を含む療法におけるそのような化合物の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸（１：１）クエン酸塩である化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物および薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項３】
経口投与に適した形態である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
カプセルである請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
療法で使用するための、請求項１に記載の化合物または請求項２〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
αｖβ６受容体アンタゴニストを要する疾患または病態の治療に使用するための、請求項１に記載の化合物または請求項２〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記疾患または病態が線維症である、請求項６に記載の使用のための化合物または請求項６に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項８】
前記線維症が特発性肺線維症である、請求項７に記載の使用のための化合物または請求項７に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項９】
αｖβ６インテグリンアンタゴニストを要するヒトにおける疾患または病態を治療する方法であって、それを必要とするヒトに治療上有効な量の請求項１に記載の化合物を投与することを含んでなる、方法。
【請求項１０】
前記疾患または病態が線維症である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記線維症が特発性肺線維症である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
αｖβ６受容体アンタゴニストを要する疾患または病態の治療のための薬剤の製造における、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１３】
前記疾患または病態が線維症である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記線維症が特発性肺線維症である、請求項１３に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、αｖβ６インテグリンアンタゴニストであるピロリジン化合物、そのような化合物を含んでなる医薬組成物および療法、特に、αｖβ６インテグリンアンタゴニストを要する（indicated）病態の治療におけるその使用、αｖβ６インテグリンのアンタゴニストを要する病態の治療のための医薬の製造における化合物の使用、およびヒトにおけるαｖβ６インテグリンの拮抗作用を要する障害の治療のための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
インテグリンスーパーファミリータンパク質は、アルファおよびベータサブユニットからなるヘテロ二量体の細胞表面受容体である。少なくとも１８種のアルファサブユニットと８種のベータサブユニットが報告されており、それらは、２４種の異なるアルファ／ベータヘテロ二量体を形成することが実証されている。各鎖は、鎖１本当たり２０前後のアミノ酸の膜貫通領域を備えた大きな細胞外ドメイン（ベータサブユニットでは６４０を越えるアミノ酸、アルファサブユニットでは９４０を越えるアミノ酸）と、一般に、鎖１本当たり３０〜５０種のアミノ酸の短い細胞質テールを含んでなる。種々のインテグリンが、細胞外マトリックスとの細胞接着、細胞−細胞相互作用、ならびに細胞の遊走、増殖、分化および生存に対する作用を含む多くの細胞生物学に関与していることが示されている (Barczyk et al, Cell and Tissue Research, 2010, 339, 269)。
【０００３】
インテグリン受容体は、短いタンパク質−タンパク質結合界面を介して結合タンパク質と相互作用する。インテグリンファミリーは、そのようなリガンドにおける類似の結合認識モチーフを共有するサブファミリーに分類することができる。主なサブファミリーは、ＲＧＤ−インテグリンであり、これはそれらのタンパク質配列内にＲＧＤ（アルギニン−グリシン−アスパラギン酸）モチーフを含有するリガンドを認識する。このサブファミリーには、８種のインテグリン、すなわち、αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、αｖβ８、αＩＩｂβ３、α５β１、α８β１が存在し、命名は、αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、およびαｖβ８が、βサブユニットは異なるが、共通のαｖサブユニットを有し、αｖβ１、α５β１およびα８β１が、αサブユニットは異なるが、共通のβ１サブユニットを有することを示している。β１サブユニットは、１１種の異なるαサブユニットと対を成し、そのうち、上記に列挙した３種のみが、ＲＧＤペプチドモチーフを共通に認識することが示されている(Humphries et al, Journal of Cell Science, 2006, 119, 3901)。 
【０００４】
８種のＲＧＤ結合インテグリンは、異なるＲＧＤ含有リガンドに対して、異なる結合親和性および特異性を有する。リガンドには、フィブロネクチン、ビトロネクチン、オステオポンチン、ならびにトランスフォーミング増殖因子β１およびβ３（ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３）の潜伏関連ペプチド（ＬＡＰ）などのタンパク質が含まれる。ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３のＬＡＰと結合するインテグリンは、いくつかのシステムで、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３生物活性の活性化、およびその後のＴＧＦβ駆動性の生物学を可能にすることが示されている(Worthington et al, Trends in Biochemical Sciences, 2011, 36, 47)。このようなリガンドの多様性は、ＲＧＤ結合インテグリンの発現パターンと相まって、疾患介入のための多くの機会を作り出す。このような疾患には、線維性疾患(Margadant et al, EMBO reports, 2010, 11, 97)、炎症性障害、癌(Desgrosellier et al, Nature Reviews Cancer, 2010, 10, 9)、再狭窄、および血管形成要素を有する他の疾患(Weis et al, Cold Spring. Harb. Perspect. Med. 2011, 1, a 006478)が含まれる。
【０００５】
阻害性の抗体、ペプチドおよび小分子を含め相当な数のαｖインテグリンアンタゴニスト(Goodman et al, Trends in Pharmacological Sciences, 2012, 33, 405)が文献に開示されている。抗体では、これらには、ｐａｎ−αｖアンタゴニストのインテツムマブおよびアビツズマブ(Gras, Drugs of the Future, 2015, 40, 97)、選択的αｖβ３アンタゴニストのエタラシズマブ、および選択的αｖβ６アンタゴニストのＳＴＸ−１００が含まれる。シレンジタイドは、αｖβ３およびαｖβ５の両方を阻害する環状ペプチドアンタゴニストであり、ＳＢ−２６７２６８は、αｖβ３およびαｖβ５の両方を阻害する化合物の例である(Wilkinson-Berka et al, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2006, 47, 1600)。種々の組合せのαｖインテグリンのアンタゴニストとして作用する化合物を発明することで、新規薬剤を、特定の疾患兆候のために作出、適合させることが可能となる。
【０００６】
肺線維症は、特発性間質性肺炎を含むいくつかの間質性肺疾患の最終段階であり、肺間質内での細胞外マトリックスの過剰な沈積を特徴とする。特発性間質性肺炎のうち、特発性肺線維症（ＩＰＦ）は、診断後３〜５年の典型的生存期間を有する最も一般的かつ最も致命的な病態である。ＩＰＦにおける線維症は、一般に、進行性で、現行の薬理学的介入に不応であり、無情にも機能性肺胞単位の閉塞のために呼吸不全につながる。ＩＰＦは米国および欧州の約５００，０００人を侵している。
【０００７】
ＴＧＦβ１の活性化における上皮限定インテグリンαｖβ６の重要な役割を裏付けるｉｎ  ｖｉｔｒｏの実験的動物およびＩＰＦ患者の免疫組織化学データが存在する。このインテグリンの発現は、正常な上皮組織では低く、ＩＰＦにおける活性化上皮を含む、損傷および炎症上皮において有意にアップレギュレートされる。従って、このインテグリンを標的とすることで、より広いＴＧＦβ恒常性の役割に干渉する理論的可能性が低くなる。抗体遮断によるαｖβ６インテグリンの部分的阻害は、炎症を悪化させることなく、肺線維症を予防することが示されている(Horan GS et al Partial inhibition of integrin αvβ6 prevents pulmonary fibrosis without exacerbating inflammation. Am J Respir Crit Care Med 2008 177: 56-65)。αｖβ６はまた、肺線維症の他肝臓および腎臓を含む他の器官の線維性疾患の重要な促進因子と考えられ(Reviewed in Henderson NC et al Integrin-mediated regulation of TGFβ in Fibrosis, Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Basis of Disease 2013 1832:891-896)、このことは、αｖβ６アンタゴニストが複数の器官の線維性疾患を治療する上で有効であり得ることを示唆している。
【０００８】
いくつかのＲＧＤ結合インテグリンがＴＧＦβと結合してこれを活性化することができるという所見と一致して、種々のαｖインテグリンが最近、線維性疾患に関連付けられている(Henderson NC et al Targeting of αv integrin identifies a core molecular pathway that regulates fibrosis in several organs Nature Medicine 2013 Vol 19, Number 12: 1617-1627; Sarrazy V et al Integrins αvβ5 and αvβ3 promote latent TGF-β1 activation by human cardiac fibroblast contraction Cardiovasc Res 2014 102:407-417; Minagawa S et al Selective targeting of TGF-β activation to treat fibroinflammatory airway disease Sci Transl Med  2014 Vol 6, Issue 241: 1-14; Reed NI et al .The αvβ1 integrin plays a critical in vivo  role in tissue fibrosis Sci Transl Med  2015 Vol 7, Issue 288: 1-8)。従って、ＲＧＤ結合インテグリンファミリーの特定のメンバーに対する、またはＲＧＤ結合インテグリンファミリー内の特定の選択的フィンガープリントを有する阻害剤は、複数の器官の線維性疾患を治療する上で有効であり得る。
【０００９】
αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６およびαｖβ８に対する一連のインテグリンアンタゴニストのＳＡＲ関係が記載されている(Macdonald, SJF et al. Structure activity relationships of αv integrin antagonists for pulmonary fibrosis by variation in aryl substituents. ACS MedChemLett 2014, 5, 1207-1212. 19 Sept 2014)。
【００１０】
ＷＯ２０１６／０４６２２５Ａ１（２０１６年３月３１日公開）には、特定のジアステレオ異性体である（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸ならびにそのマレイン酸塩およびクエン酸塩を含む、αｖβ６アンタゴニストとしての、式：
【化１】
2019508475.tif 000002
の化合物およびそれらの塩が開示されている。
【００１１】
αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５またはαｖβ８などの他のαvインテグリンに対しても活性を持ち得るαvβ6アンタゴニスト、特に（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸の代替的な塩を提供することが本発明の目的である。
【発明の概要】
【００１２】
本発明の第一の面では、（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸１：１クエン酸塩が提供される。
【００１３】
（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸１：１クエン酸塩は、αｖβ６インテグリンアンタゴニスト活性を有し、特定の障害の治療に使用される可能性があると考えられる。用語αｖβ６アンタゴニスト活性には、本明細書でのαｖβ６阻害剤活性が含まれる。
【００１４】
本発明の第二の面では、（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸１：１クエン酸塩と、薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含んでなる医薬組成物が提供される。
【００１５】
本発明の第三の面では、療法において、特に、αｖβ６インテグリン受容体アンタゴニストを要する疾患または病態の治療において使用するための（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸１：１クエン酸塩が提供される。
【００１６】
本発明の第四の面では、治療を必要とするヒトにおけるαｖβ６インテグリン受容体アンタゴニストを要する疾患または病態の治療方法が提供され、その方法は、それを必要とするヒトに治療上有効な量の（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸１：１クエン酸塩を投与することを含んでなる。
【００１７】
本発明の第五の面では、αｖβ６インテグリン受容体アンタゴニストを要する疾患または病態の治療のための薬剤の製造における（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸１：１クエン酸塩の使用が提供される。
【発明の具体的な説明】
【００１８】
本発明の第一の面では、（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸１：１クエン酸塩（以下、「本発明の化合物」とも称する）が提供される。
【００１９】
多くの有機化合物は、それらが反応される、またはそれらが沈澱もしくは結晶化される溶媒と複合体を形成することができることが認識されるであろう。これらの複合体は、「溶媒和物」として知られる。例えば、水との複合体は、「水和物」として知られる。水、キシレン、Ｎ−メチルピロリジノン、メタノールおよびエタノールなどの、高沸点を有しかつ／または水素結合を形成することができる溶媒を、溶媒和物を形成するために使用することができる。溶媒和物を同定するための方法には、限定されるものではないが、ＮＭＲおよび微量分析が含まれる。本発明の化合物は、溶媒和物形態または非溶媒和物形態で存在し得る。
【００２０】
本発明の化合物は、結晶形または非晶質形であり得る。さらに、本発明の化合物の結晶形の一部は異なる多形で存在し得る。本発明の化合物の多形形態は、限定することなく、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターン、赤外（ＩＲ）スペクトル、ラマンスペクトル、示差走査熱分析（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、および固相核磁気共鳴（ＳＳＮＭＲ）を含むいくつかの従来の分析技術を使用して、特徴化および識別を行い得る。
【００２１】
本発明の化合物はまた、薬剤物質の安定性および溶解度を高めるために噴霧乾燥分散（ＳＤＤ）法を用い、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのポリマーマトリックス中の非晶質分子分散物として調製してもよい。
【００２２】
本発明の化合物はまた、液体または半固形充填硬カプセルまたは軟質ゼラチンカプセルの形態で、バイオアベイラビリティおよび安定性などの特性を改善するために液体封入技術を用いて送達させてもよい。
【００２３】
本発明の化合物は、いくつかの互変異性形の１つで存在し得る。本発明は、個々の互変異性体としてであれ、またはそれらの混合物としてであれ、１：１クエン酸塩の形態での（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸の総ての互変異性体を包含すると理解される。  
【００２４】
定義
用語はそれらの通義の範囲内で使用される。以下の定義は、明確にするのが目的であって、定義された用語を制限することは目的とされない。
【００２５】
本明細書で使用する場合、「治療（treatment）」という用語は、特定の病態の緩和、病態の１つ以上の症状の除去または軽減、病態の進行の遅延または除去、および以前に罹患したか診断された患者または対象の病態の再発の遅延を指す。
【００２６】
本明細書で使用する場合、「有効な量（effective amount）」という用語は、組織、系、動物、または例えば、研究者もしくは臨床医が研究を行っているヒトの生物学的または医学的な応答を引き出すであろう薬品または医薬品の量を意味する。
【００２７】
本明細書で使用する場合、「治療上有効な量（therapeutically effective amount）」という用語は、任意の量であって、そのような量を受けていない対応する対象と比較して、疾患、障害、または副作用の改善された治療、治癒、または緩和、あるいは疾患または障害の進行の速度の低下がもたらされる任意の量を意味する。正常な生理学的機能を向上させるのに効果的な量もこの用語の範囲内に含まれる。
【００２８】
化合物調製
本発明の化合物は、標準的な化学を含む様々な方法によって製造することができる。
【００２９】
当業者であれば、２つの幾何異性体で存在し得る中間化合物のいくつかの（E）または（Z）の記載は、主要ではない成分として他方の幾何異性体を含有し得ることを理解されよう。
【００３０】
本発明の化合物は、当業者によく知られた方法により、式（Ｉ）：
【化２】
2019508475.tif 000003
の化合物と、クエン酸との反応によって調製してもよい。
【００３１】
式（Ｉ）の化合物は、構造式（ＩＩ）（即ち、エステル基の開裂）：
【化３】
2019508475.tif 000004
［式中、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、例えば、ｔｅｒｔ−ブチル、イソプロピル、エチルまたはメチル基である。あるいは、Ｒ２はキラルアルキル、例えば［（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキサノールからの］（−）−メンチルである］
の化合物の脱保護を含む方法により、ＷＯ２０１６／０４６２２５に開示されたとおりに調製してもよい。
【００３２】
Ｒ２がメチル、メンチル、またはｔｅｒｔ−ブチルである場合の構造式（II）の脱保護は、例えば、ジクロロメタン、２−メチル−テトラヒドロフラン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、シクロペンチルメチルエーテルまたは水などの好適な溶媒中で塩酸、臭化水素酸、硫酸、またはリフルオロ酢酸を使用して、酸加水分解によって達成してもよい。あるいは、酵素的加水分解を用いてもよい。
【００３３】
あるいは、Ｒ２がメチル、エチル、イソプロピル、またはメンチルである場合の構造式（II）の脱保護は、好適な溶媒（例えば、水性メタノールなどの水性溶媒）中で、例えば、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムを使用する、塩基加水分解によって達成してもよい。
【００３４】
式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ）：
【化４】
2019508475.tif 000005
［式中、Ｒ２は前に定義されたとおりである］
の化合物から、構造式（ＩＶ）：
【化５】
2019508475.tif 000006
のボロン酸の化合物との反応によって得てもよい。
【００３５】
あるいは、ピナコールエステルなどのボロン酸エステルを用いてもよく、これによりｉｎ  ｓｉｔｕで親ボロン酸(oarent boiric acid)を提供する。構造式（ＩＶ）の化合物は、例えば、Enamine LLC, Princeton Corporate Plaza, 7 Deer Park Drive Ste. 17-3, Monmouth Jct. NJ (USA) 08852, Manchestetr OrganicsまたはFluorochemから市販されている。構造式（ＩＩＩ）と（ＩＶ）の化合物間の反応は、１，４−ジオキサンなどの水混和性溶媒中、５０〜９５℃などの高温下、ロジウム触媒、例えば、ロジウム（１，５−シクロオクタジエン）クロリドの二量体である［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２などの好適な触媒、およびホスフィンリガンドなどの添加剤、例えば、ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）の存在下、好ましくは、水酸化カリウムなどの塩基の存在下で行うことができる。この反応は、好ましくは、反応混合物が窒素などの不活性ガスでパージされ、減圧下で排気され、この排気および窒素でのパージが３回繰り返された厳密な嫌気性条件で行われる。（Ｒ）−ＢＩＮＡＰの存在下でのカップリング反応により、例えばおよそ８０：２０以上の主要異性体でのジアステレオ異性体混合物がもたらされた。（Ｒ）−ＢＩＮＡＰを使用している場合の主要ジアステレオ異性体は、（Ｓ）構造を有する（ＷＯ２０１４／１５４７２５で構造的に関連する化合物の調製に関して同様に示されるとおり）。ジアステレオ異性体比は、エステル段階（式（ＩＩ）の化合物）または対応する酸（式（Ｉ）の化合物）への変換後でのキラルＨＰＬＣ、キラルＳＦＣ、または結晶化によって、例えば９９：１超にさらに増加させ得る。式（ＩＩ）の化合物の、式（Ｉ）への化合物の変換のための酵素的加水分解の使用は、ジアステレオ異性体の比を増加させるために使用してもよく、キラルＨＰＬＣなどの方法を使用する必要性を回避するかもしれない。
【００３６】
式（ＩＩＩ）の化合物は、ジクロロメタンなどの溶媒中、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（「ＤＩＰＥＡ」）などの有機塩基および例えば、ジクロロメタンとの、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２付加物［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）］錯体などの好適なパラジウムベース触媒の存在下で、式（Ｖ）：
【化６】
2019508475.tif 000007
の化合物から、式（VI）：
【化７】
2019508475.tif 000008
［式中、Ｒ２は上で定義されたとおりである］の化合物との反応によって得てもよい。Ｒ２がｔｅｒｔ−ブチルを表す式（ＶＩ）の化合物はＷＯ２０１４／１５４７２５の３２ページに開示されている。Ｒ２がメチルを表す式（ＶＩ）の化合物はＷＯ２０１４／１５４７５の５０ページに開示されている。式（Ｖ）の化合物は、親化合物として使用することもでき、または三級アミン塩基の存在下で、二塩酸塩などの塩からｉｎ  ｓｉｔｕで生成させることもできる。
【００３７】
式（ＶＩ）の化合物は本明細書に記載された方法によって調製してもよい。例示を目的として、Ｒ２がメチルであり、かつ二重結合が（Ｅ）形状を有する構造式（ＶＩ）の化合物は、高温（例えば５０℃）でアセトニトリル中、市販の４−ブロモクロトン酸メチルおよび酢酸ナトリウムまたは酢酸カリウムから出発する、下記に示す方法によって調製してもよい：
【化８】
2019508475.tif 000009
【００３８】
式（V）の化合物は、触媒水素化分解によって、例えば、エタノールまたは酢酸エチルなどの不活性溶媒中で、炭素上に堆積させたパラジウム触媒を用いて、構造式（VII）の化合物：
【化９】
2019508475.tif 000010
から調製してもよい。
【００３９】
式（ＶＩＩ）の化合物は、式（ＶＩＩＩ）の化合物：
【化１０】
2019508475.tif 000011
から、例えば、ＤＭＦなどの好適な溶媒中および１３０℃などの高温で、炭酸カリウムなどの塩基の存在下でベンゼンスルホニルヒドラジドから生じるジイミド還元によって得てもよい。
【００４０】
式（ＶＩＩＩ）の化合物は、幾何異性体（例えば（Ｅ）または（Ｚ）の形態）として存在し、かつ純粋な異性体としてまたは混合物として使用され得る。式（ＶＩＩＩ）の化合物は、公知の市販（例えば、Wuxi App Tec, 288 Fute Zhong Road, Waigaoquiao Free Trade, Shanghai 200131、中国より）の式（ＩＸ）の化合物：
【化１１】
2019508475.tif 000012
から出発して得てもよく、これは、ピリジン中三酸化硫黄で式（Ｘ）：
【化１２】
2019508475.tif 000013
の化合物の対応するアルデヒドへ酸化させてもよい。
【００４１】
この式（Ｘ）の化合物は、次いで式（ＸＩ）のイリド：
【化１３】
2019508475.tif 000014
と、式（Ｘ）の化合物を単離させることなく反応させ、それにより幾何異性体（Ｅ）および（Ｚ）の混合物として存在している式（ＶＩＩＩ）の化合物が形成される。当業者であれば、アルデヒド（Ｘ）から式（ＶＩＩＩ）の化合物を生成する他の方法が存在することも理解されよう。幾何異性体は、クロマトグラフィーによって分離しても、または混合物として次の工程で使用することができる。式（Ｉ）の化合物の調製の全体的なスキームはスキーム（Ｉ）として下記に要約される：
スキーム（Ｉ）
【化１４】
2019508475.tif 000015
【００４２】
式（ＸＩ）のイリドは、式（ＸＩＩ）の化合物（Fluorochemより入手可能）：
【化１５】
2019508475.tif 000016
から出発して作製してもよく、これは第一の塩酸との反応、続けて重炭酸ナトリウムでの中和により、次に式（ＸＩＩＩ）のアルデヒド：
【化１６】
2019508475.tif 000017
に変換させてもよく、これは例えばホウ化水素ナトリウムを使用して、対応する式（ＸＩＶ）のアルコール：
【化１７】
2019508475.tif 000018
に還元させてもよく（式（ＸＩＶ）のアルコールの調製については、ＵＳ−Ａ−２００４００９２５３８に開示された経路も参照のこと）、これを次いで例えば三臭化リンを用いて臭素化させて対応する式（ＸＶ）のブロモ化合物：
【化１８】
2019508475.tif 000019
を生成してもよく、これをアセトニトリルなどの溶媒中でトリフェニルホスフィンと反応させることによってトリフェニルホスホニウムブロミド（ＸＶＩ）に変換させてもよい。
【化１９】
2019508475.tif 000020
【００４３】
式（ＸＩ）の上記イリド化合物は、構造式（ＸＶＩ）の化合物の、ＴＨＦなどの不活性溶媒中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドの溶液などの塩基との反応によって得てもよい。式（ＸＩ）のイリドは、単離させても、または好ましくはｉｎ  ｓｉｔｕで形成させ、予め単離することなく、式（Ｘ）のアルデヒドと同一の容器中で反応させてもよい。
【００４４】
式（ＸＩ）のイリドの全体的なスキームは、スキーム（ＩＩ）として下記のとおり要約される：
スキーム（ＩＩ）
【化２０】
2019508475.tif 000021
【００４５】
上記の経路のいずれにおいても、１つ以上の官能基を保護することが有利であり得ることが認識されるであろう。保護基およびそれらの除去のための手段の例は、T. W. Greene ‘Protective Groups in Organic Synthesis’（第３版， J. Wiley and Sons, 1999）に見出すことができる。好適なアミン保護基としては、アシル（例えば、アセチル）
、カルバメート（例えば、２’，２’，２’−トリクロロエトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニルまたはｔ−ブトキシカルボニル）およびアリールアルキル（例えば、ベンジル）が含まれ、これらは、適切に、加水分解（例えば、ジオキサン中の塩酸、もしくはジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸などの酸を使用）によって、または還元的に（例えば、ベンジルもしくはベンジルオキシカルボニル基の水素化分解、または酢酸中で亜鉛を使用する２’，２’，２’−トリクロロエトキシカルボニル基の還元的除去）によって除去することができる。他の好適なアミン保護基としては、トリフルオロアセチル（−ＣＯＣＦ３）が含まれ、これは塩基触媒による加水分解によって除去することができる。
【００４６】
上記いずれの経路でも、様々な基および部分が分子に導入される合成段階の正確な順序は可変であることが認識されるであろう。工程の一つの段階で導入される基または部分(moieties)が、その後の変換および反応によって影響を受けないように守られ、それに応じて合成段階の順序を選択することは当業者の技術の範囲内である。
【００４７】
式（Ｉ）の化合物の絶対立体配置は、既知の絶対立体配置の中間体からの独立したエナンチオ選択的合成に従って得ることができる。あるいは、鏡像異性体的に純粋な式（Ｉ）の化合物は、絶対立体配置が既知の化合物に変換され得る。いずれの場合にも、分光分析データ、旋光度および分析的ＨＰＬＣカラムでの保持時間の比較を絶対立体配置の確認に使用することができる。実現可能であれば、第３の選択肢として、Ｘ線結晶構造からの絶対立体配置の決定がある。
【００４８】
使用方法
本発明の化合物はαｖインテグリンアンタゴニスト活性、特に、αｖβ６受容体活性を有し、従って、αｖβ６アンタゴニストを要する疾患または病態の治療において潜在的有用性を有する。
【００４９】
したがって、本発明は、療法において使用するための（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸１：１クエン酸塩を提供する。本発明の化合物は、αｖβ６インテグリンアンタゴニストを要する疾患または病態の治療において使用することができる。
【００５０】
したがって、本発明は、αｖβ６インテグリンアンタゴニストを要する疾患または病態の治療において使用するための（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸１：１クエン酸塩を提供する。
【００５１】
また、αｖβ６インテグリンアンタゴニストを要する疾患または病態の治療のための薬剤の製造における（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸１：１クエン酸塩の使用も提供される。
【００５２】
また、治療を必要とする対象においてαｖβ６インテグリンアンタゴニストを要する疾患または病態を治療する方法であって、治療上有効な量の（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸１：１クエン酸塩を投与することを含んでなる方法が提供される。
【００５３】
好適には、それを必要とする対象は哺乳動物、特に、ヒトである。
【００５４】
線維性疾患は、修復過程または反応過程にある器官または組織において過剰な線維性結合組織の形成を伴う。αｖβ６アンタゴニストは、αｖβ６インテグリン機能およびアルファｖインテグリンを介してのトランスフォーミング増殖因子ベータの活性化に依存するものを含む、様々なそのような疾患または病態の治療において有用であると考えられる。このため、一実施態様では、αｖβ６アンタゴニストを要する疾患または病態は線維性疾患である。疾患には、限定されるものではないが、肺線維症（例えば、特発性肺線維症、非特異的間質性肺炎（ＮＳＩＰ）、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、Ｈｅｒｍａｎｓｋｙ−Ｐｕｄｌａｋ症候群、進行性塊状線維症（炭坑夫塵肺症の合併症）、結合組織疾患関連肺線維症、喘息およびＣＯＰＤでの気道線維症、ＡＲＤＳ関連線維症、急性肺損傷、放射線誘発線維症、家族性肺線維症、肺高血圧）；腎線維症（糖尿病性腎障害、ＩｇＡ腎障害、狼瘡性腎炎、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、移植腎障害、自己免疫腎障害、薬物誘発性腎障害、高血圧関連腎障害、腎性全身性線維症）；肝線維症（ウイルス誘発性線維症（例えば、Ｃ型またはＢ型肝炎）、自己免疫肝炎、原発性胆汁性肝硬変、アルコール性肝臓疾患、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含む非アルコール性脂肪肝疾患、先天性(congential)肝線維症、原発性硬化性胆管炎、薬物誘発性肝炎、肝硬変）；皮膚線維症（肥厚性瘢痕、強皮症、ケロイド、皮膚筋炎、好酸球性筋膜炎、Ｄｕｐｙｔｒｅｎｓ拘縮、Ｅｈｌｅｒｓ−Ｄａｎｌｏｓ症候群、Ｐｅｙｒｏｎｉｅ病、栄養障害型表皮水疱症、口腔粘膜下線維症）；眼線維症（加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ、緑内障）角膜瘢痕化、角膜損傷および角膜創傷治癒、線維柱帯切除術後の濾過胞瘢痕化(filter bleb scarring)の予防；心臓線維症（鬱血性心不全、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、心内膜心筋線維症、肥大性心筋症（ＨＣＭ））、ならびに他の多種の線維性病態（縦隔線維症、骨髄線維症、腹膜後線維症、クローン病、神経線維腫症、子宮平滑筋腫（線維性）、慢性臓器移植拒絶）が含まれ得る。αｖβ１、αｖβ５またはαｖβ８インテグリンのさらなる阻害に関するさらなる利点も存在し得る。
【００５５】
加えて、αｖβ６インテグリンに関連する前癌病変または癌も治療することができる（これらには、限定されるものではないが、子宮内膜癌、基底細胞癌、肝臓癌、結腸癌、子宮頸癌、口腔癌、膵臓癌、乳癌および卵巣癌、カポジ肉腫、巨細胞腫瘍、ならびに癌関連間質が含まれ得る)。血管新生に対する作用から利点を得ることができる病態も、利益を受け得る(例えば、固形腫瘍)。
【００５６】
用語「αｖβ６アンタゴニストを要する疾患または病態」は、上記病的状態のいずれかまたは総てを含むことが意図される。
【００５７】
一実施態様において、αｖβ６アンタゴニストを要する疾患または病態は、特発性肺線維症である。
【００５８】
別の実施態様において、αｖβ６アンタゴニストを要する疾患または病態は、角膜瘢痕化、角膜損傷および角膜創傷治癒から選択される。
【００５９】
組成物
（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸１：１クエン酸塩は、療法において使用するためにそのままの化学物質として投与することも可能であるが、有効成分を医薬組成物として提供することが一般的である。
【００６０】
したがって、本発明は、さらなる面で、（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸１：１クエン酸塩と薬学的に許容可能な担体、希釈剤および／または賦形剤とを含んでなる医薬組成物を提供する。担体、希釈剤または賦形剤は、組成物の他の成分と適合し、そのレシピエントに有害でないという意味で許容されなければならない。
【００６１】
本発明の別の面によれば、本発明の化合物を薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤と混合することを含む、医薬組成物の調製方法も提供される。医薬組成物は、本明細書に記載のいずれかの病態の治療において使用することができる。
【００６２】
さらに、（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸１：１クエン酸塩を含んでなる、αｖβ６インテグリンアンタゴニストを要する疾患または病態を治療するための医薬組成物も提供される。
【００６３】
さらに、０．０５〜１０００ｍｇの（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸１：１クエン酸塩と０．１〜２ｇの薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含んでなる医薬組成物が提供される。
【００６４】
本発明の化合物は医薬組成物における使用を意図されているので、それらは好ましくは実質的に純粋な形態で、例えば、少なくとも純度６０％、より好適には少なくとも純度７５％、好ましくは少なくとも純度８５％、特には少なくとも純度９８％（重量に対する重量の％）で提供されることが容易に理解されるであろう。
【００６５】
医薬組成物は、単位用量当たり所定量の有効成分を含有する単位投与形で提供され得る。好ましい単位投与組成物は、有効成分の１日用量もしくは部分用量、またはその適切な分数を含有するものである。したがって、そのような単位用量は、１日１回以上投与することができる。好ましい単位投与組成物は、本明細書の上記で挙げたような１日用量もしくは部分用量（１日１回以上投与するため）、または適切なその分数の有効成分を含有するものである。
【００６６】
医薬組成物は、任意の適切な経路、例えば、経口（頬側または舌下を含む）、直腸、吸入、鼻腔内、局所（頬側、舌下または経皮を含む）、膣、目または非経口（皮下、筋肉内、静脈内または皮内を含む）経路による投与に適合させることができる。そのような組成物は、薬学分野で知られている任意の方法によって、例えば、有効成分を担体または賦形剤と会合させることによって製造することができる。
【００６７】
一実施態様において、医薬組成物は経口投与に適している。
【００６８】
経口投与に適した医薬組成物は、カプセル剤もしくは錠剤などの分離した単位；散剤もしくは顆粒；水性液もしくは非水性液中の溶液もしくは懸濁液；可食フォームまたはホイップ；または水中油型液体エマルションもしくは油中水型液体エマルションとして提供され得る。
【００６９】
例えば、錠剤またはカプセル剤の形態での経口投与では、有効薬物成分を、エタノール、グリセロール、水などの経口用の非毒性で薬学的に許容可能な不活性担体と合わせることができる。錠剤またはカプセル剤に組み込むために適した散剤は、化合物を好適な微細な粒径（例えば、微粉化によって）に縮小し、例えば、デンプンまたはマンニトールなどの可食炭水化物などの同様に調製された医薬担体と混合することによって調製され得る。香味剤、保存剤、分散剤および着色剤も存在することができる。  
【００７０】
カプセル剤は、上記のように粉末混合物を調製し、成形ゼラチンシース（gelatin sheaths）に充填することによって製造することができる。コロイドシリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムまたは固体ポリエチレングリコールなどの、流動促進剤および滑沢剤を、充填操作の前に、粉末混合物に添加することができる。カプセル剤が摂取される際に、医薬のアベイラビリティを改善するために、寒天、炭酸カルシウムまたは炭酸ナトリウムなどの崩壊剤または可溶化剤を添加することもできる。
【００７１】
さらに、所望の場合または必要な場合には、好適な結合剤、流動促進剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤、崩壊剤および着色剤も、混合物に組み込むことができる。好適な結合剤には、デンプン、ゼラチン、グルコースまたはベータ−ラクトースなどの天然の糖、トウモロコシ甘味剤、アラビアガム、トラガカントガムまたはアルギン酸ナトリウムなどの天然および合成ゴム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックスなどが含まれる。
【００７２】
これらの投与形で使用される滑沢剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれる。
【００７３】
崩壊剤には、限定されるものではないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが含まれる。錠剤は、例えば、粉末混合物を調製し、造粒またはスラグとし、滑沢剤および崩壊剤を添加し、打錠することによって製剤化する。粉末混合物は、適切に微粉化された化合物を、上記のように希釈剤または基剤、ならびに場合によりカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、もしくはポリビニルピロリドンなどの結合剤、パラフィンなどの溶解遅延剤、第四級塩などの吸収促進剤、および／またはベントナイト、カオリンもしくリン酸二カルシウムなどの吸収剤と混合することによって調製される。粉末混合物は、シロップ、デンプンペースト、アカディア粘液（acadia mucilage）またはセルロースもしくはポリマー材料の溶液などの結合剤で湿らせ、篩に通すことによって顆粒化することができる。造粒の代わりに、粉末混合物を、打錠機に掛けることができ、結果として不完全に形成されたスラグが破砕されて顆粒となる。顆粒剤は、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルクまたは鉱油を添加することによって、錠剤成形金型に粘着することを防止するために滑沢化することができる。次いで、滑沢化された混合物を打錠する。本発明の化合物は、流動性不活性担体と混合して、造粒またはスラグ化工程を行うことなく直接、打錠することもできる。セラックのシールコート、糖またはポリマー材料のコーティング、およびワックスの艶出コーティングからなる透明または不透明の保護コーティングを施すことができる。異なる単位用量を識別するために、これらのコーティングに染料を添加することができる。
【００７４】
溶液、シロップ、およびエリキシルなどの経口用液体は、所定量が、予め決定された量の化合物を含有するように、単位投与形で調製することができる。シロップは、化合物を好適に矯味した水溶液に溶解させることによって調製することができ、エリキシルは、非毒性アルコールビヒクルの使用によって調製する。懸濁剤は、化合物を非毒性ビヒクルに分散させることによって製剤化することができる。エトキシ化イソステアリルアルコールおよびポリオキシエチレンソルビトールエーテルなどの可溶化剤および乳化剤、保存剤、ペパーミントオイルなどの香味添加剤、または天然甘味剤もしくはサッカリンもしくは他の人口甘味剤なども添加することができる。
【００７５】
適切であれば、経口投与用の用量単位組成物を、マイクロカプセル化することができる。処方物は、例えば、粒子材料をポリマー、ワックスなどでコーティングまたはそれに包埋することによって、放出を延長また持続させるように調製することもできる。
【００７６】
本発明の化合物は、小単ラメラ小胞、大単ラメラ小胞および多重ラメラ小胞などのリポソーム送達系の形態で投与することもできる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンなどの様々なリン脂質から形成することができる。
【００７７】
本発明の化合物はまた、原薬(drug substance)の安定性および溶解度を高めるために噴霧乾燥分散（ＳＤＤ）法を用い、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのポリマーマトリックス中の非晶質分子分散物として調製してもよい。
【００７８】
本発明の化合物はまた、液体または半固形充填硬カプセルまたは軟質ゼラチンカプセルの形態で、バイオアベイラビリティおよび安定性などの特性を改善するために液体封入技術を用いて送達させてもよい。
【００７９】
経皮投与に適した医薬組成物は、長期間にわたってレシピエントの表皮と密着して接触して留まるように意図された別個のパッチ剤として提供することができる。
【００８０】
局所投与に適した医薬組成物は、軟膏、クリーム、懸濁剤、ローション、散剤、液剤、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾルまたはオイルとして製剤化することができる。
【００８１】
眼または他の外部組織、例えば、口および皮膚の治療では、組成物は、好ましくは、局所用軟膏またはクリームとして塗布される。軟膏に製剤化する場合、有効成分を、パラフィン系または水混和性軟膏剤基剤のいずれかとともに使用することができる。あるいは、有効成分を、水中油型クリームまたは油中水型基剤を用いてクリーム剤に製剤化することができる。本発明の化合物は、局所用点眼剤として投与することができる。本発明の化合物は、１日より長い投与間隔を要する結膜下、房内または硝子体内経路を介して投与することができる。
【００８２】
眼への局所投与に適した医薬組成物には、有効成分が好適な担体、特に、水性溶媒に溶解または懸濁している点眼剤が含まれる。眼に投与される処方物は、眼科的に適したｐＨおよびモル浸透圧濃度を有する。酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸および塩酸などの酸；水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、および乳酸ナトリウムなどの塩基；ならびにクエン酸塩／デキストロース、重炭酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムなどのバッファーを含め、１種以上の眼科的に許容可能なｐＨ調整剤および／または緩衝剤を本発明の組成物に含めることができる。このような酸、塩基、およびバッファーは、組成物のｐＨを眼科的に許容可能な範囲に維持するのに必要な量で含まれ得る。１つ以上の眼科的に許容可能な塩は、組成物のモル浸透圧濃度を眼科的に許容可能な範囲とするのに十分な量で組成物を含み得る。このような塩としては、ナトリウム、カリウムまたはアンモニウム陽イオンおよび塩化物、クエン酸、アスコルビン酸、ホウ酸、リン酸、重炭酸、硫酸、チオ硫酸または重亜硫酸陰イオンを有するものが含まれる。
【００８３】
眼送達デバイスは、複数の定義された放出速度ならびに持続的用量動態および透過性を持った１つ以上の治療薬の放出制御のために設計することができる。放出制御は、生分解性／生体浸食性ポリマー（例えば、ポリ（エチレンビニル）アセテート（ＥＶＡ）、超加水分解ＰＶＡ）、ヒドロキシアルキルセルロース（ＨＰＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ポリカプロラクトン、ポリ（グリコール）酸、ポリ（乳）酸、ポリ無水物の、薬物の拡散、腐食、溶解および浸透を増強するポリマー分子量、ポリマー結晶度、共重合体比、加工条件、表面仕上げ、幾何学、賦形剤添加およびポリマーコーティングの、種々の選択および特性を組み込んだポリマーマトリックスの設計を通して得ることができる。
【００８４】
眼用デバイスを用いた薬物送達のための処方物は、１つ以上の有効成分と指示される投与経路に適当なアジュバントを組み合わせることができる。例えば、有効成分を、任意の薬学的に許容可能な賦形剤、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、アルカン酸のセルロースエステル、ステアリン酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウムおよびカルシウム塩、アカシア、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリジン、および／またはポリビニルアルコールと混合し、従来の投与向けに錠剤化またはカプセル化することができる。あるいは、本化合物をポリエチレングリコール、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロースコロイド溶液、エタノール、トウモロコシ油、落花生油、綿実油、ゴマ油、トラガカントガム、および／または種々のバッファーに溶解させてもよい。本化合物はまた、生分解性および非生分解性ポリマーの両方の組成物および時間遅延特性を有する担体または希釈剤と混合してもよい。生分解性組成物の代表例としては、アルブミン、ゼラチン、デンプン、セルロース、デキストラン、多糖類、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ヒドロキシブチレート）、ポリ（アルキルカーボネート）およびポリ（オルトエステル）およびそれらの混合物が挙げられる。非生分解性ポリマーの代表例としては、ＥＶＡコポリマー、シリコーンゴムおよびポリ（メチルアクリレート）、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００８５】
眼送達用の医薬組成物はまた、ｉｎ  ｓｉｔｕゲル化可能水性組成物も含む。このような組成物は、眼または涙液と接触した際にゲル化を促進するのに効果的な濃度でゲル化剤を含んでなる。好適なゲル化剤としては、限定されるものではないが、熱硬化性ポリマーが含まれる。「ｉｎ  ｓｉｔｕゲル化可能（in situ gellable）」という用語は、本明細書で使用する場合、眼または涙液と接触した際にゲルを形成する低粘度の液体を含むだけでなく、眼に投与した際に実質的に高い粘度またはゲル強度を示す半液体およびチキソトロピックゲルなどのより粘稠な液体も含む。例えば、眼への薬物送達に使用するためのポリマーの例の教示の目的で引用することにより本明細書の一部とされるLudwig (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 3; 57:1595-639を参照のこと。
【００８６】
口腔中への局所投与に適した医薬組成物には、ロゼンジ剤、香錠および洗口液が含まれる。
【００８７】
直腸投与に適した医薬組成物は、坐剤または浣腸として提供することができる。
【００８８】
鼻腔または吸入投与用の投与形は、好都合には、エアロゾル、溶液、懸濁液、ゲルまたはドライパウダーとして処方され得る。
【００８９】
膣投与に適した医薬組成物は、膣坐剤、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたは噴霧処方物として提供され得る。
【００９０】
非経口投与に適した医薬組成物には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および組成物を、意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質を含有してよい、水性および非水性無菌注射液、ならびに懸沈殿防止剤および増粘剤を含み得る水性および非水性無菌懸濁剤が含まれる。組成物を、単位用量または多回用量容器、例えば、密封アンプルおよびバイアル中で提供してもよく、使用直前に、無菌液体担体、例えば注射水を添加するだけのフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存してもよい。即時注射溶液および懸濁液は、無菌粉末、顆粒および錠剤から調製してもよい。
【００９１】
本発明の化合物は、長時間作用型非経口（ＬＡＰ）薬物送達システムで投与してもよい。そのような薬剤送達システムは、一度注射された薬剤の徐放を提供することを目的とする処方物を含む。ＬＡＰ処方物は、一度注射されると回収することはできないであろう、粒子ベースの、例えばナノまたはミクロンサイズのポリマー球状粒子；または必要に応じて回収してもよい小型のロッド状挿入装置でもよい。長時間作用型粒子状注射可能処方物は、薬物の溶解性が低いために溶解速度が遅い場合の結晶薬物粒子の水性懸濁液からなってもよい。ポリマーベースのＬＡＰ処方物は、典型的にはマトリックス内に均一に分散させた薬物（親水性または疎水性のもの）を含有しているポリマーマトリックスからなる。ＬＡＰ処方物がポリマーベースの場合、幅広く使用されるポリマーはポリ−ｄ、ｌ−乳酸−コ−グリコール酸（ＰＬＧＡ）またはそれらのバージョンである。
【００９２】
本発明の化合物の治療上有効な量は、例えば、対象の齢および体重、治療を必要とする詳細な病態およびその重篤度、処方物の性質、ならびに投与経路を含む複数の因子によって決まり、最終的には担当の医師または獣医の裁量にある。
【００９３】
本医薬組成物では、経口または非経口投与の各用量単位は、０．０１〜３０００ｍｇ、０．１〜２０００ｍｇ、もしくはより典型的には０．５〜１０００ｍｇの両イオン性親化合物として計算される本発明の化合物を含有してもよい。
【００９４】
鼻腔もしくは吸入投与のための各用量単位は、好ましくは０．００１〜５０ｍｇ、より好ましくは０．０１〜５ｍｇ、一層より好ましくは１〜５０ｍｇの両イオン性親化合物として計算される本発明の化合物を含有している。
【００９５】
噴霧化した溶液または懸濁液の投与のために、投与単位は、１日当たり１回、１日当たり２回、または１日当たり２回より多く、好適に送達させてもよく、１〜１５ｍｇを典型的には含有している。本発明の化合物は、薬局においてまたは患者によって、再構築のために乾燥または凍結乾燥粉末で提供されても、あるいは、例えば食塩水溶液中で提供されてもよい。
【００９６】
本発明の化合物は、例えば、両イオン性親化合物として計算される本発明の化合物を、１日当たり０．０１ｍｇ〜３０００ｍｇまたは１日当たり０．５〜１０００ｍｇの経口または非経口用量、あるいは１日当たり０．００１ｍｇ〜５０ｍｇまたは１日当たり０．０１〜５０ｍｇの鼻腔または吸入用量の１日当たりの用量（成人患者）で投与することができる。この量は１日当たりの単回用量、または１日当たりの合計用量が同一となるように、通常１日当たりの部分用量の数（２、３、４、５、または６など）での単回用量以上で付与されてもよい。効果的な量の（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸１：１クエン酸塩は、効果的な量の両イオン性親化合物の割合として決定してもよい。
【００９７】
本発明の化合物は、単独で、または他の治療薬と組合せて使用することができる。従って、本発明による併用療法は、本発明の化合物の投与、および少なくとも１種の他の薬学的に活性な薬剤の使用を含んでなる。好ましくは、本発明による併用療法は、本発明の化合物および少なくとも１種の他の薬学的に活性な薬剤の投与を含んでなる。本発明の化合物および他の薬学的に活性な薬剤は、一緒に単一の医薬組成物で、または別個に投与することができ、別個に投与される場合には、これを同時にまたは任意の順序で逐次に行うことができる。本発明の化合物および他の薬学的に活性な薬剤の量、ならびに投与の相対的なタイミングは、所望の併用治療効果が達成されるように選択されるであろう。
【００９８】
よって、さらなる面では、本発明の化合物と少なくとも１種の他の薬学的に活性な薬剤を含んでなる組合せが提供される。
【００９９】
よって、一面において、本発明による化合物および医薬組成物は、アレルギー性疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患の療法、抗線維性療法および閉塞性気道疾患の療法、糖尿病性眼疾患の療法、ならびに角膜瘢痕化、角膜損傷の療法および角膜創傷治癒を含む、１つ以上の他の治療薬と組合せて使用し得るか、それを含み得る。
【０１００】
抗アレルギー療法としては、抗原免疫療法（例えば、ハチ毒液、花粉、牛乳、落花生、ＣｐＧモチーフ、コラーゲンの成分および断片、口腔または舌下抗原として投与され得る細胞外マトリックスの他の成分）、抗ヒスタミン薬（例えば、セチリジン、ロラチジン、アクリバスチン、フェキソフェナジン、クロルフェナミン）、およびコルチコステロイド（例えば、プロピオン酸フルチカゾン、フロ酸フルチカゾン、二プロピオン酸ベクロメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、フロ酸モメタゾン、トリアムシノロン、フルニソリド、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン）が含まれる。
【０１０１】
抗炎症療法としては、ＮＳＡＩＤ（例えば、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン）、ロイコトリエンモジュレーター（例えば、モンテルカスト、ザフィルルカスト、プランルカスト）、および他の抗炎症療法（例えば、ｉＮＯＳ阻害剤、トリプターゼ阻害剤、ＩＫＫ２阻害剤、ｐ３８阻害剤（ロスマピモド、ジルマピモド）、エラスターゼ阻害剤、ベータ２アゴニスト、ＤＰ１アンタゴニスト、ＤＰ２アンタゴニスト、ｐＩ３Ｋデルタ阻害剤、ＩＴＫ阻害剤、ＬＰ（リゾホスファチジン酸）阻害剤またはＦＬＡＰ（５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質）阻害剤（例えば、ナトリウム３−（３−（ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−１−（４−（６−エトキシピリジン−３−イル）ベンジル）−５−（（５−メチルピリジン−２−イル）メトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イル）−２，２−ジメチルプロパノエート）；アデノシンａ２ａアゴニスト（例えば、アデノシンおよびリガデノソン）、ケモカインアンタゴニスト（例えば、ＣＣＲ３アンタゴニストまたはＣＣＲ４アンタゴニスト）、メディエーター放出阻害剤が含まれる。
【０１０２】
自己免疫疾患の療法としては、ＤＭＡＲＤＳ（例えば、メトトレキサート、レフルノミド、アザチオプリン）、生物薬剤療法（例えば、抗ＩｇＥ、抗ＴＮＦ、抗インターロイキン（例えば、抗ＩＬ−１、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−１２、抗ＩＬ−１７、抗ＩＬ−１８）、受容体療法（例えば、エタネルセプトおよび類似の薬剤）；抗原非特異的免疫療法（例えば、インターフェロンまたは他のサイトカイン／ケモカイン、サイトカイン／ケモカイン受容体モジュレーター、サイトカインアゴニストまたはアンタゴニスト、ＴＬＲアゴニストおよび類似の薬剤）が含まれる。
【０１０３】
他の抗線維性療法としては、ＴＧＦβ合成の阻害剤（例えば、ピルフェニドン）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）および線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）受容体キナーゼを標的とするチロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ニンテダニブ（ＢＩＢＦ−１１２０）およびメシル酸イマチニブ（グリベック））、エンドセリン受容体アンタゴニスト（例えば、アンブリセンタンまたはマシテンタン）、酸化防止剤（例えば、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）；広域抗生物質（例えば、コトリモキサゾール、テトラサイクリン（塩酸ミノサイクリン））、ホスホジエステラーゼ５（ＰＤＥ５）阻害剤（例えば、シルデナフィル）、抗αｖβｘ抗体および薬物（例えば、抗αｖβ６モノクローナル抗体（例えば、ＷＯ２００３１０００３３Ａ２に記載されているもの）；インテツムマブ、シレンジチド）が併用可能である。
【０１０４】
閉塞性気道疾患の療法としては、短期作用型β２−アゴニスト（例えば、サルブタモール）、長期作用型β２−アゴニスト（例えば、サルメテロール、フォルモテロールおよびビランテロール）、短期作用型ムスカリン性アンタゴニスト（例えば、臭化イプラトロピウム）、長期作用型ムスカリン性アンタゴニスト（例えば、チオトロピウム、ウメクリジニウム）などの気管支拡張薬が含まれる。
【０１０５】
いくつかの実施態様において、治療はまた、本発明の化合物と他の既存の治療様式、例えば、糖尿病性眼疾患の治療のための既存の薬剤、例えば、抗ＶＥＧＦ療法、例えば、ルセンティス（商標）、アバスチン（商標）、およびアフリバーセプト、ならびにステロイド、例えば、トリアムシノロン、およびフルオシノロンアセトニド含有ステロイドインプラントの組合せも含めることができる。
【０１０６】
いくつかの実施態様において、治療はまた、本発明の化合物と他の既存の治療様式、例えば、角膜瘢痕化、角膜損傷の治療または角膜創傷治癒のための既存の薬剤、例えば、ゲンテル（Ｇｅｎｔｅｌ）（商標）、ウシ血液抽出物、レボフロキサシン（商標）、およびオフロキサシン（商標）の組合せも含めることができる。
【０１０７】
本発明の化合物および組成物は、癌を治療するために単独で、または化学療法、放射線療法、標的薬剤、免疫療法および細胞もしくは遺伝子療法を含む癌療法と組合せて使用され得る。
【０１０８】
上記で言及した組合せは、好都合には、医薬組成物の形態で使用するために提供することができ、従って、上記で定義されたような組合せを薬学的に許容可能な希釈剤または担体とともに含んでなる医薬組成物は本発明のさらなる面を表す。そのような組合せの個々の化合物を順次、または個別もしくは組合せた医薬組成物として同時に投与することができる。好ましくは、個々の化合物が、組み合わせた医薬組成物として同時に投与されるであろう。公知の治療薬の適切な用量は、当業者には容易に理解されるであろう。
【０１０９】
本発明の化合物が、通常、吸入、静脈内、経口、鼻腔内、眼内局所、または他の経路よって投与される１つ以上の他の治療上有効な薬剤と組み合わせて投与される場合には、結果としての医薬組成物も同じ経路によって投与され得ることが認識されるであろう。あるいは、本組成物の個々の成分は異なる経路によって投与されてもよい。
【０１１０】
以下、本発明を単に例により示す。
【０１１１】
略語
以下のリストは、本明細書で使用される特定の略語の定義を示す。このリストは排他的ではなく、本明細書の下記で定義されていない略語の意味は当業者には容易に分かることが認識されるであろう。
【０１１２】
Ａｃ（アセチル）
ＢＣＥＣＦ−ＡＭ（２’，７’−ビス−（２−カルボキシエチル）−５−（および−６）−カルボキシフルオレセインアセトキシメチルエステル）
ＢＥＨ（エチレン架橋ハイブリッド技術）
Ｂｕ（ブチル）
ＣＢＺ（カルボキシベンジル）
ＣＨＡＰＳ（３−［（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホネート）
Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ−Ｈ（５μｍシリカゲル上にコーティングされたセルローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート））
Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ（５μｍシリカゲル上にコーティングされたアミローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート））
Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＤ（５μｍシリカゲル上に固定されたアミローストリス（３−クロロフェニルカルバメート））
Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＳ（５μｍシリカゲル上にコーティングされたアミローストリス（（Ｓ）−アルファ−メチルベンジルカルバメート））
ＣＤＩ（カルボニルジイミダゾール）
ＣＳＨ（表面チャージハイブリッド技術）
ＣＶ（カラム体積）
ＤＣＭ（ジクロロメタン）
ＤＩＰＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）
ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）
ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）
ＤＳＣ（示差操作比色法）
Ｅｔ（エチル）
ＥｔＯＨ（エタノール）
ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）
ｈ（時間）
ＨＣｌ（塩酸）
ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）
ＬＣＭＳ（液体クロマトグラフィー質量分析）
ＭＤＡＰ（質量分析自動分取ＨＰＬＣ）
ＭＤＣＫ（Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙイヌ腎臓）
Ｍｅ（メチル）
ＭｅＣＮ（アセトニトリル）
ＭｅＯＨ（メタノール）
ＭＳ（質量スペクトル）
ｍｉｎ（分）
ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２  ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ），ジクロロメタンとの錯体
Ｐｈ（フェニル）
ｉＰｒ（イソプロピル）
（Ｒ）−ＢＩＮＡＰ  （Ｒ）−（＋）−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフタレン
［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２（クロロ（１，５−シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）二量体）
ＲＴ（保持時間）
ＳＰＥ（固相抽出）
ＴＢＭＥ（ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル）
ＴＥＡ（トリエチルアミン）
ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）
ＴＧＡ（熱重量分析）
ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）
ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）
ＵＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）
【０１１３】
ブラインという場合には総て、塩化ナトリウムの飽和水溶液を指す。
【０１１４】
実験の詳細
分析的ＬＣＭＳ
分析的ＬＣＭＳを、次のシステムＡ、Ｂ、Ｃ、またはＤの１つで行った。
【０１１５】
総てのシステムに対するＵＶ検出は、２２０ｎｍ〜３５０ｎｍの波長の平均シグナルであり、質量スペクトルは、交互スキャンポジティブおよびネガティブモードエレクトロスプレーイオン化を使用する質量分析計で記録した。
【０１１６】
本明細書において言及するＬＣＭＳシステムＡ〜Ｄの実験の詳細は以下の通りである。
システムＡ
カラム：５０ｍｍ×２．１ｍｍ  ＩＤ、１．７μｍ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８カラム
流速：１ｍＬ／分
温度：４０℃
溶媒：Ａ：アンモニア溶液でｐＨ１０に調整した水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム
Ｂ：アセトニトリル
勾配：      時間（分） Ａ％ Ｂ％
０            ９９            １
１．５          ３          ９７
１．９          ３          ９７
２．０        ９９            １
【０１１７】
システムＢ
カラム：５０ｍｍ×２．１ｍｍ  ＩＤ、１．７μｍ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８カラム
流速：１ｍＬ／分
温度：４０℃
溶媒：Ａ：水中０．１％ｖ／ｖギ酸溶液
Ｂ：アセトニトリル中０．１％ｖ／ｖギ酸溶液
勾配：      時間（分） Ａ％ Ｂ％
０            ９７            ３
１．５          ０        １００
１．９          ０        １００
２．０        ９７            ３
【０１１８】
システムＣ
カラム：５０ｍｍ×２．１ｍｍ  ＩＤ、１．７μｍ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＣＳＨ  Ｃ１８カラム
流速：１ｍＬ／分
温度：４０℃
溶媒：Ａ：アンモニア溶液でｐＨ１０に調整した水中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム
Ｂ：アセトニトリル
勾配：      時間（分） Ａ％ Ｂ％ 
０            ９７            ３
１．５          ５          ９５
１．９          ５          ９５
２．０        ９７            ３
【０１１９】
システムＤ
カラム：５０ｍｍ×２．１ｍｍ  ＩＤ、１．７μｍ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８カラム
流速：１．０ｍＬ／分
温度：４０℃
溶媒：Ａ：水中０．１％ｖ／ｖトリフルオロ酢酸溶液
Ｂ：アセトニトリル中０．１％ｖ／ｖトリフルオロ酢酸溶液
勾配：      時間（分） Ａ％ Ｂ％
０            ９５            ５
１．５          ５          ９５
１．９          ５          ９５
２．０        ９５            ５
【０１２０】
中間体１：７−（ブロモメチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（化合物（ＸＶ））
【化２１】
2019508475.tif 000022
三臭化リン（０．５６５ｍＬ，５．９９ｍｍｏｌ）を無水アセトニトリル（５０ｍＬ）中（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）メタノール（化合物（ＸＩＶ））：ＵＳ２００４００９２５３８，８０ページ，［０８４４］を参照のこと）（８２０ｍｇ，４．９９ｍｍｏｌ）の懸濁液に、窒素下で０℃にて滴状添加した。添加すると、濃橙色沈殿物が形成され、これは淡橙色に変化した。反応混合物を１時間０℃で撹拌し、これまでに反応が完了した。混合物を真空濃縮し、残留物を酢酸エチル（２５０ｍＬ）とＮａＨＣＯ３の飽和水溶液（２５０ｍＬ）に分けた。水相をさらに酢酸エチル（２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機溶液を疎水性フリットに通し、次に真空濃縮させて標題化合物（１．０５ｇ，９３％）を泡状（fluffy）のクリーム状の固体として得た：ＬＣＭＳ（システムＣ) RT=0.95分, ES+ve m/z 227, 229 (M+H)+。
【０１２１】
中間体２：トリフェニル（（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）メチル）ホスホニウムブロミド（化合物（ＸＶＩ））
【化２２】
2019508475.tif 000023
アセトニトリル（９８ｍＬ）中、７−（ブロモメチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（化合物（ＸＶ），中間体１）（１．００ｇ，４．４０ｍｍｏｌ）の溶液を、トリフェニルホスフィン（１．２７０ｇ，４．８４ｍｍｏｌ）で処理し、溶液を窒素下で一晩室温にて撹拌した。混合物を真空濃縮して濃クリーム固体（dark cream solid）を得、次にこれをジエチルエーテルで粉末化して標題化合物（２．１３９ｇ，９９％）を淡クリーム固体（pale cream solid）として得た：ＬＣＭＳ（システムＣ）RT= 1.23分, ES+ve m/z 409 (M+H)+。
【０１２２】
中間体３：３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）ビニル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｅ，Ｚ）ベンジル（化合物（ＶＩＩＩ））
【化２３】
2019508475.tif 000024
ＤＣＭ（３ｍＬ）およびＤＭＳＯ（０．３ｍＬ）中、３−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボン酸（＋）−ベンジル（化合物（ＩＸ）：Wuxi App Tecより入手可能；Tetrahedron Asymmetry, 27 (2016),1222-1230ページを参照のこと）（２６０ｍｇ，１．０３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を、窒素下でＤＩＰＥＡ（０．８９６ｍＬ，５．１３ｍｍｏｌ）で処理した。０〜５℃（氷浴）に冷却した後、ピリジン三酸化硫黄（３２７ｍｇ，２．０５ｍｍｏｌ）を約５分間にわたって分割して添加してアルコール化合物（ＩＸ）を対応するアルデヒド化合物（Ｘ）に酸化させ、これは単離しなかった。冷却浴を取り除き、撹拌を０．５時間継続させた。その間に無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）中、トリフェニル（（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）メチル）ホスホニウムブロミド（化合物（ＸＶＩ），調製については中間体２を参照のこと）（５５３ｍｇ，１．１３ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素下で約５分間にわたってカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（ＴＨＦ中１Ｍ）（１．２３２ｍＬ，１．２３２  ｍｍｏｌ）で滴状処理し、結果として橙色の溶液を得た。撹拌を１０分間継続し、次いでアルデヒド（式（Ｘ））溶液をイリド溶液に１回で添加し、混合物を２２時間大気温度で撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、飽和水性重炭酸ナトリウム（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、次に真空蒸発させた。濃褐色残留物を３０分間、０−１００％酢酸エチル−シクロヘキサンの勾配で溶出する２０ｇのシリカＳＰＥカートリッジ上でのクロマトグラフィーによって精製して標題化合物を幾何異性体として得た：
異性体１:藁色ガム状物(123.4 mg, 31%), LCMS (システムＡ) RT=1.28分, 95%, ES+ve m/z 382 (M+H)+および
異性体２:藁色ガム状物(121.5 mg, 31%), LCMS (システムＡ) RT=1.22分, 91%, ES+ve m/z 382 (M+H)+
全体的な収率＝244.9 mg, 62.5%。
【０１２３】
中間体３の配置は、後に（Ｒ）であることが示され、２つの幾何異性体は：（Ｒ，Ｅ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）ビニル）ピロリジン−１−カルボン酸ベンジルおよび３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）ビニル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｒ，Ｚ）−ベンジルであった。
【０１２４】
中間体４：３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−カルボン酸ベンジル（化合物（ＶＩＩ））  
【化２４】
2019508475.tif 000025
ＤＭＦ（２ｍＬ）中、３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）ビニル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｅ，Ｚ）−ベンジル（化合物（ＶＩＩＩ），中間体３）（２４４ｍｇ，０．６４０ｍｍｏｌ）（１：１，Ｅ：Ｚ）の溶液を、ベンゼンスルホニルヒドラジド（Alfa Aesarより入手可能）  （２７５ｍｇ，１．６０ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３５４ｍｇ，２．５６ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を１時間１３０℃に加熱し、次いで冷却し、ＤＣＭと水とに分けた。有機相を水で洗浄し、疎水性フリットに通して乾燥させた。有機溶液を真空蒸発させ、残留橙色油状物を２０分間０−５０％［（３：１ＥｔＯＡｃ−ＥｔＯＨ）−ＥｔＯＡｃ］の勾配で溶出するシリカカートリッジ（２０ｇ）上でクロマトグラフィーによって精製した。適切な画分を合わせ、真空蒸発させて標題化合物（１５０ｍｇ，６１％）を淡黄色ガム状物として得た：ＬＣＭＳ（システムＡ）RT=1.24分, 90%, ES+ve m/z 384 (M+H)+。中間体４の絶対的構造は、後に（Ｓ）であることが示されたために、化合物は３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−カルボン酸（Ｓ）−ベンジルであった。
【０１２５】
中間体５：７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（化合物（Ｖ））
【化２５】
2019508475.tif 000026
１０％パラジウム炭素（０．５０ｇ）含有エタノール（７０ｍＬ）中、３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−カルボン酸ベンジル（化合物（ＶＩＩ），中間体４）（４．６７  ｇ，１２．２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を７時間水素雰囲気下で撹拌した。ＬＣＭＳは不完全な脱保護を示し、追加の１０％パラジウム炭素（０．２５ｇ）を加え、混合物を一晩水素雰因気下で撹拌した。反応混合物は濃灰色懸濁液として存在したためにＤＣＭを加えて混合物が黒色になるまで材料を溶解させた。触媒をセライトのパッドを通して濾過により除去し、濾液および洗浄物を真空蒸発させた。残留物をＤＣＭから蒸発させて標題化合物を橙色油状物（３．２８ｇ）として得た：ＬＣＭＳ（システムＡ） RT=0.79分,90%, ES+ve m/z 250 (M+H)+。中間体５の配置は後に（Ｓ）として確立され、化合物の名称は（Ｓ）−７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジンである。
【０１２６】
中間体６：４−アセトキシブト−２−エン酸（Ｅ）−メチル（化合物（ＶＩ））
【化２６】
2019508475.tif 000027
ＭｅＣＮ（３０ｍＬ）中、酢酸ナトリウムの懸濁液（３．５ｇ，４２ｍｍｏｌ）を４−ブロモクロトン酸メチル（Aldrich) （３．３３ｍＬ，５ｇ，２８ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を３日間５０℃に加熱した。混合物をエーテルで希釈し、次いで濾過した。固体をエーテルで洗浄し、合わせた濾液および洗浄物を減圧下で蒸発させた。蒸発後、残留物をエーテルと水に分けた。有機相を水性重炭酸ナトリウムで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させて淡橙色油状物を得た。ＮＭＲは生成物と出発材料との混合物を示したために、残留油状物に酢酸ナトリウム（３．４４ｇ，４２ｍｍｏｌ）、続けてＭｅＣＮ（１０ｍＬ）を添加し、混合物を週末にわたって７０℃に加熱した。混合物を減圧下で濃縮させ、残留物をエーテルと水とに分けた。有機溶液を水、ブラインで洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過した。残留物を減圧下で蒸発させて標題化合物（３．５５ｇ，８０％）を橙色油状物として得た：NMR δ (CDCl3) 6.92 (dt, J 16, 5 Hz,1H), 6.01 (dt, J 16, 2 Hz, 1H), 4.72 (dd, J 5, 2 Hz, 2H), 3.73 (s, 3H), 2.10 (s, 3H)。
【０１２７】
中間体７：４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）ブト−２−エン酸（Ｅ）−メチル（化合物（ＩＩＩ））
【化２７】
2019508475.tif 000028
ＤＣＭ（２ｍＬ）中、４−アセトキシブト−２−エン酸（Ｅ）−メチル（化合物（ＶＩ），調製については中間体６を参照のこと）（１２７ｍｇ，０．８０２ｍｍｏｌ）と、７−（２−（３−フルオロピロリジン−３−イル）エチル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン（化合物（Ｖ），  調製については中間体５を参照のこと）（２００ｍｇ，０．８０２ｍｍｏｌ）と、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２付加物（６５．７ｍｇ，０．０８０ｍｍｏｌ）との混合物を２時間大気温度で撹拌した。ＬＣＭＳは約５０％の変換を示し、ＤＩＰＥＡ（０．２７９ｍＬ，１．６０ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を室温で２時間撹拌した。ＬＣＭＳは生成物へのほぼ完全な変換を示した。材料をカラムに直接搭載し、２０分にわたりシクロヘキサン中０−１００％ＥｔＯＡｃで溶出するクロマトグラフィー（２０ｇアミノプロピルカートリッジ）によって精製した。適切な画分を合わせ、蒸発させて標題化合物（１０１．４ｍｇ，３６％）を得た：ＬＣＭＳ（システムＡ） RT=1.08 min, 95%, ES+ve m/z 348 (M+H)+。中間体８の配置は（Ｓ）として確立され、かつ名称は４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）ブト−３−エン酸（Ｓ，Ｅ）−メチルとして確立された。
【０１２８】
中間体８：（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸および
中間体９：（Ｒ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸
【化２８】
2019508475.tif 000029
４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）ブト−２−エン酸（Ｓ，Ｅ）−メチル（化合物（ＩＩＩ），中間体８）（１０１．４ｍｇ，０．２９２ｍｍｏｌ）、３．８Ｍ  ＫＯＨ（ａｑ）（０．２３０ｍＬ，０．８７６  ｍｍｏｌ）および（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ボロン酸（Enamine LLCからの化合物（ＩＶ））（１７２ｍｇ，０．８７６ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２ｍＬ）中に溶解させて溶液を脱気した。［Ｒｈ（ＣＯＤ）Ｃｌ］２（７．２０ｍｇ，０．０１５ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−ＢＩＮＡＰ（２１．８１ｍｇ，０．０３５ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２ｍＬ）中に懸濁させて脱気した。次に反応物の前者の溶液を窒素下で後者の触媒溶液に添加した。反応混合物を加熱し撹拌した（５０℃、２時間）。次いで混合物をＳＣＸカートリッジ（１０ｇ）（１ＣＶＭｅＯＨ、１ＣＶＭｅＣＮで予め調整した）上に搭載し、１０ＣＶ  ＤＭＳＯ、４ＣＶ  ＭｅＣＮで洗浄し、ＭｅＯＨ（４ＣＶ）中、２Ｍ  ＮＨ３で溶出した。塩基性画分を減圧下で蒸発させた。残留物を１２時間高真空下で乾燥させて４−（３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸（Ｓ）−メチル（１３１．３ｍｇ，９３％）を得た。 
【０１２９】
次いでこのメチルエステルをＴＨＦ（２ｍＬ）中に溶解させ、水性１Ｍ  ＬｉＯＨ  （１．４５９ｍＬ，１．４５９ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を１８時間室温で撹拌した。ＬＣＭＳはカルボン酸への完全な加水分解を示し、２Ｍ  ＨＣｌ（０．８７６ｍＬ，  １．７５１ｍｍｏｌ）を加え、溶液をＳＣＸ  カートリッジ（１０ｇ）（１ＣＶ  ＭｅＯＨ，１ＣＶ  ＭｅＣＮで予め調整した）上に搭載し、４ＣＶ  ＭｅＣＮで洗浄し、ＭｅＯＨ（４ＣＶ）中２Ｍ  ＮＨ３で溶出した。塩基性画分を減圧下で蒸発させて粗生成物をガム状物（１２７ｍｇ，９０％）として得た。分析的ｃｈｉｒａｌ  ＨＰＬＣ  ＲＴ＝９．０分、８８％およびＲＴ＝１３．８分、６０％ＥｔＯＨ（０．２％イソプロピルアミン含有）−ヘプタン、流速＝１．０ｍＬ／分で溶出し、２１５ｎｍで検出する、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＪ−Ｈカラム（４．６ｍｍ  ｉｄ×２５ｃｍ）上で１２％。ジアステレオ異性体混合物を６０％ＥｔＯＨ−ヘプタン、流速＝３０ｍＬ／分で溶出し、２１５ｎｍで検出するＣｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＪ−Ｈカラム（３ｃｍ×２５ｃｍ）上の分取ｃｈｉｒａｌ  ＨＰＬＣによって分離して、標題化合物の２つの個別のジアステレオ異性体を得た。
【０１３０】
中間体８（７８ｍｇ，５５％）：分析的ｃｈｉｒａｌ  ＨＰＬＣ  ＲＴ＝９．０分、６０％ＥｔＯＨ（０．２％イソプロピルアミン含有）−ヘプタン，流速＝１．０ｍＬ／ｍｉｎで溶出し、２１５ｎｍで検出するＣｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＪ−Ｈ  カラム（４．６  ｍｍ  ｉｄ×２５ｃｍ）で９８．７％；ＬＣＭＳ（システムＤ）RT=0.52分,100%, ES+ve m/z 486 (M+H)+および（システムＣ） RT=0.81分, 92%, ES+ve m/z 486 (M+H)+ 1H NMR (CDCl3, 600MHz): δ 8.45 (br s, 1H), 7.21 (t, J=7.7 Hz, 1H), 7.16 (d, J=7.2 Hz, 1H), 6.86-6.73 (m, 3H), 6.31 (d, J=7.2 Hz, 1H), 4.12 (t, J=4.4 Hz, 2H), 4.08 (br s, 1H), 3.75 (td, J=4.7, 0.8 Hz, 2H), 3.73-3.68 (m, 1H), 3.47 (br s, 2H), 3.46 (d, J=1.1 Hz, 2H), 3.42 (br t, J=5.1 Hz, 2H), 3.00-2.85 (m, 2H), 2.82-2.75 (m, 1H), 2.70-2.66 (m, 1H), 2.63-2.57 (m, 1H), 2.73-2.55 (m, 3H), 2.49 (q, J=9.1 Hz, 1H), 2.45 (dd, J=11.9, 3.7 Hz, 1H), 2.23-1.97 (m, 4H), 1.95-1.80 (m, 3H); [α]D 20 + 51（エタノール中ｃ＝０．７２）。
【０１３１】
中間体８の不斉中心の絶対配置が決定され、化合物は（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸であることが分かった。
【化２９】
2019508475.tif 000030
【０１３２】
中間体９（１０ｍｇ，７％）：分析的ｃｈｉｒａｌ  ＨＰＬＣ  ＲＴ＝１２．５分、６０％ＥｔＯＨ（０．２％イソプロピルアミン含有）−ヘプタン，流速＝１．０ｍＬ／分で溶出し、２１５ｎｍで検出するＣｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＪ−Ｈカラム（４．６ｍｍ  ｉｄ×２５ｃｍ）上で＞９９．５％；ＬＣＭＳ（システムＣ）RT=0.82分、84%、ES+ve m/z 486 (M+H)+. [α]D 20 - 28（エタノール中ｃ＝０．５０）。
【０１３３】
中間体９の不斉中心の絶対配置が決定され、化合物は構造式（Ｒ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸であることが分かった。
【化３０】
2019508475.tif 000031
【０１３４】
実施例１：（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸１：１クエン酸塩
クエン酸（４０．８ｍｇ，０．２１２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（０．１ｍＬ）中に懸濁させ、溶解するまで５０℃に加熱し、室温に冷ました。別のバイアル中に、（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸（中間体８）（１０２ｍｇ，０．２１０ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（０．１００ｍＬ）中に溶解させ、クエン酸溶液に添加した。およそ１０秒後に、沈殿が観察された。ジイソプロピルエーテル（５ｍＬ）を加え、さらに沈殿が発生し、懸濁液を３時間撹拌した。固体を濾過によって回収し、ジイソプロピルエーテル（５ｍＬ）で洗浄して（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸クエン酸塩（１：１塩）（１３８ｍｇ，０．２０４ｍｍｏｌ，９７％）を白色固体として得た：ＬＣＭＳ（システムＣ）  RT=0.82分, 100%, ES+ve m/z 486 (M+H)+; 1H NMR (600MHz, 重水) δ 7.54 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.39 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.03 (d, J=8.0 Hz, 1H), 6.99 - 6.97 (m, 1H), 6.98 - 6.97 (m, 1H), 6.58 (d, J=7.5 Hz, 1H), 4.22 - 4.20 (m, 2H), 3.83 - 3.81 (m, 2H), 3.79 - 3.70 (m, 1H), 3.70 - 3.65 (m, 1H), 3.67 - 3.61 (m, 2H), 3.64 - 3.60 (m, 1H), 3.55 - 3.47 (m, 1H), 3.49 - 3.45 (m, 1H), 3.47 - 3.43 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 2.86 - 2.83 (m, 2H), 2.86 - 2.81 (m, 2H), 2.80 - 2.75 (m, 2H), 2.74 (d, J=15.0 Hz, 2H), 2.70 (dd, J=8.0, 15.5 Hz, 1H), 2.60 (dd, J=8.0, 15.5 Hz, 1H), 2.44 - 2.38 (m, 1H), 2.30 - 2.18 (m, 1H), 2.31 - 2.18 (m, 2H), 1.94 - 1.87 (m, 2H)。
【０１３５】
生物学的アッセイ
細胞間接着アッセイ
使用した試薬および方法は記載の通りであり[Ludbrook et al, Biochem. J. 2003, 369, 311およびにαｖβ８関してはMacdonald et al. ACS MedChemLett 2014, 5, 1207-1212)、以下に明瞭化の点を示す。以下の細胞株を使用し、括弧内にリガンドを示す：、Ｋ５６２−αｖβ３（ＬＡＰ−ｂ１）、Ｋ５６２−αｖβ５（ビトロネクチン）、Ｋ５６２−αｖβ６（ＬＡＰ−ｂ１）、Ｋ５６２−αｖβ８（ＬＡＰ−ｂ１）、Ａ５４９−αｖβ１（ＬＡＰ−ｂ１）。接着を促進するために使用した二価陽イオンは２ｍＭ  ＭｇＣｌ２であった。接着を、蛍光色素ＢＣＥＣＦ−ＡＭ（Ｌｉｆｅ  ＴｅｃＨｎｏｌｏｇｉｅｓ）での細胞標識によって定量化し、その際、３×１０６細胞／ｍＬの細胞懸濁液を、０．３３μＬ／ｍＬの３０ｍＭ  ＢＣＥＣＦ−ＡＭとともに３７℃で１０分間インキュベートし、その後、５０μＬ／ウェルを９６ウェルアッセイプレートに分注した。アッセイの終了時に、接着した細胞を、Ｈ２Ｏ中０．５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を５０μＬ／ウェルで使用して溶解し、蛍光を放出させた。蛍光強度を、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（商標）プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して検出した。このアッセイにおいて活性なアンタゴニストについて、ＩＣ５０決定のために、データを４パラメーターロジスティック方程式にフィットさせた。
【０１３６】
実施例１の化合物は、上記のアッセイに従い試験し、αvβ6インテグリンアンタゴニストであることが見出された。当業者であれば、機能的活性のためのin vitro結合アッセイおよびセルに基づくアッセイが、実験的な変異性の影響を受けることを認識するであろう。このように、下記に示す値がただの例示であり、アッセイの運転を繰り返すと、多少異なるｐＩＣ５０値がもたらされるかもしれないことを理解されよう。
【０１３７】
細胞間接着アッセイにおける実施例１の効力（ｐＩＣ５０）は、αｖβ６  ｐＩＣ５０＝７．９；αｖβ３  ｐＩＣ５０＝７．２；αｖβ５  ｐＩＣ５０＝ＮＤ（決定されず）；αｖβ８  ｐＩＣ５０＝ＮＤ；αｖβ１  ｐＩＣ５０＝６．４であった。
【０１３８】
化学的および物理的安定性
（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸（１：１）クエン酸塩は、５０℃を除く、様々な試験された条件で好適な科学的安定性プロファイル (表１および表２を参照のこと)を有することが示され、（１：１）クエン酸塩が水分から保護された場合に、好適な物理的安定性プロファイル(表２を参照のこと)を有することが示された。
【０１３９】
本発明の化合物の安定性は、２つのバッチのサンプル（第一のバッチ−表１を参照のこと；第二のバッチ−表２を参照のこと）を様々な温度および湿度の条件に曝すことによって決定した。（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸および不純物の含有量は、第一のバッチ（表１）については標準として５℃／ａｍｂサンプルを用い、第二のバッチ（表２）については標準として冷蔵したサンプルを用いて高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析法を使用して測定した。不純物は、クロマトグラムの（Ｓ）−４−（（Ｓ）−３−フルオロ−３−（２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−２−イル）エチル）ピロリジン−１−イル）−３−（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）ブタン酸ピークに対するパーセント面積として決定された。
【０１４０】
表１および表２については、実験はそれぞれ二連で行った。アッセイ値は２つの二連の平均として与えられた。不純物の値は各二連実験の結果を表す。
【０１４１】
【表１】
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【０１４２】
【表２】
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【国際調査報告】
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2019508475.tif 000035