(57)【要約】  カチオン性のペプチドまたはポリマーおよびリピドイド化合物を含む、核酸化合物の送達のための組成物を提供する。核酸化合物は、任意の化学修飾型および非修飾型のＤＮＡまたはＲＮＡであり得る。組成物中のリピドイドの量は好ましくは、カチオン性のペプチドまたはポリマーと比べて少ない。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）カチオン性のペプチドまたはポリマー；  
（ｂ）カチオン性のリピドイド化合物；および
（ｃ）核酸化合物
を含む組成物。
【請求項２】
前記リピドイド化合物が２個以上のカチオン性窒素原子および少なくとも２つの親油性尾部を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記リピドイド化合物が（ａ）エステル、アミドもしくはカルバメート基などの加水分解性連結基；または（ｂ）加水分解性連結基がないものである、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記リピドイド化合物のカチオン性窒素原子のうちの少なくとも１個が永久的にカチオン性である、請求項２または３に記載の組成物。
【請求項５】
前記リピドイド化合物が、式Ｉ
(化)
2019517553.tif 000060
（式Ｉ）
（式中
−ＲＡは、各存在について独立して選択され、非置換の環式もしくは非環式の分枝もしくは非分枝状のＣ１〜２０脂肪族基；置換もしくは非置換の環式もしくは非環式の分枝もしくは非分枝状のＣ１〜２０ヘテロ脂肪族基；置換もしくは非置換のアリール；置換もしくは非置換のヘテロアリール；
(化)
2019517553.tif 000061
であり；
ここで、ＲＡのうちの少なくとも１つが
(化)
2019517553.tif 000062
であり；
−Ｒ５は、各存在について、非置換の環式もしくは非環式の分枝もしくは非分枝状のＣ８〜１６脂肪族；置換もしくは非置換非置換のアリール；または置換もしくは非置換のヘテロアリールから独立して選択され；
−ｘは１〜１０の整数であり；
−ｙは１〜１０の整数である）による化合物またはその薬学的に許容され得る塩である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記リピドイド化合物が、式ＩＩａおよび／または式ＩＩｂ：
−Ｎ（Ｒ１）−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒ５）−Ｒ２  （式ＩＩａ）    
−Ｎ＋（Ｒ3）（Ｒ4）−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒ５）−Ｒ２  （式ＩＩｂ）
の２つまたは３つの部分を含み、
ここで、式ＩＩａまたは式ＩＩｂの個々の各部分について独立して、  
−Ｒ1は、水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルから選択され、  
−Ｒ２は、線状または分枝状の飽和または不飽和のＣ６〜Ｃ１６ヒドロカルビル鎖から選択され、  
−Ｒ3およびＲ4はＣ１〜Ｃ４−アルキルから選択され、  
−Ｒ５は水素またはヒドロキシルである、
請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
リピドイド化合物が、式ＩＩａおよび／または式ＩＩｂの３つの同一の部分を含む化合物であり、式中
−Ｒ1が水素であり、  
−Ｒ２が線状または分枝状のＣ６〜Ｃ１６アルキル鎖であり、
−Ｒ3およびＲ4がメチルである、
請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記リピドイド化合物が、式ＩＩＩ
(化)
2019517553.tif 000063
（式ＩＩＩ）
（式中  
−Ｒ1およびＲ２は各々、水素、任意選択で置換されている飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ２０ヒドロカルビルおよび任意選択で置換されている飽和または不飽和のＣ6〜Ｃ２０アシルからなる群より独立して選択され；  
−Ｌ１およびＬ2は各々、任意選択で置換されている飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ３０ヒドロカルビルから独立して選択され；  
−ｍおよびｏは各々、ゼロおよび任意の正の整数からなる群より独立して選択され；
−ｎは任意の正の整数である）
で表される化合物である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記カチオン性のペプチドまたはポリマーが、ジスルフィド結合を形成し得る少なくとも１個の−ＳＨ基を有する少なくとも１つのカチオン性部分Ｐまたはそのジスルフィド結合型多量体を含む化合物であり、ここで、部分Ｐは、
−約０．５ｋＤａ〜約３０ｋＤａの分子量を有するポリマー部分または
−３〜１００個のアミノ酸で構成されたペプチド部分（ここで、前記ペプチド部分のアミノ酸の総数の少なくとも１０％は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓおよび／またはＯｒｎから選択される塩基性アミノ酸である）、
から選択される、１〜８請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
部分Ｐが
−７〜３０個のアミノ酸で構成されており、前記少なくとも１個の−ＳＨ基がＣｙｓ残基によりもたらされたものであるペプチド部分；あるいは
−任意選択で修飾されているポリアクリレート、キトサン、ポリエチレンイミン、ポリアミン、ポリアミノエステルもしくはポリアミドアミンまたはその任意のコポリマーから選択されるポリマー部分
である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ペプチド部分が２つの末端部を有し、ここで、
−前記Ｃｙｓ残基が、前記末端部のうちの１つもしくはその付近に位置するか；または
−前記ペプチド部分が少なくとも２個のＣｙｓ残基を含み、前記Ｃｙｓ残基のうちの少なくとも１つが前記末端部の各々もしくはその付近に位置する、
請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記カチオン性のペプチドまたはポリマーが、式    
Ｌ１−Ｐ１−［Ｐ−］ｎ−Ｐ３−Ｌ2（式ＩＶ）
（式中
Ｐは上記に規定のものであり；
Ｐ３は任意選択であり；  
Ｐ１およびＰ３は独立して選択され、各々は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ−Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ−２−（メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリン、ポリ（ヒドロキシアルキルＬ−アスパラギン）、ポリ（２−（メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリン）、ヒドロキシエチルデンプンまたはポリ（ヒドロキシアルキルＬ−グルタミン）から選択される線状または分枝状の親水性ポリマー鎖を表し、ここで、前記ポリマー鎖は約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａの分子量を示すものであり、Ｐ１およびＰ３の各々は部分Ｐとジスルフィド結合によって連結されており；  
Ｌ１およびＬ2は任意選択のリガンドであり、ＲＧＤ、ＲＧＤペプチド、トランスフェリン、葉酸根、シグナルペプチドもしくはシグナル配列、局在化シグナルもしくは配列、核局在化シグナルもしくは配列（ＮＬＳ）、抗体、細胞膜透過ペプチド、例えばＷＥＡＫＬＡＫＡＬＡＫＡＬＡＫＨＬＡＫＡＬＡＫＡＬＫＡＣＥＡ、ＴＡＴ、受容体のリガンド、サイトカイン、ホルモン、増殖因子、小分子、糖類、マンノース、ガラクトース、ｎ−アセチルガラクトサミン、合成リガンド、受容体の小分子作動薬、阻害薬もしくは拮抗薬またはＲＧＤペプチド模倣アナログから独立して選択され；  
ｎは、１〜約５０から選択される整数、好ましくは２、３、４もしくは５〜約１０または２、３もしくは４〜約９の範囲の整数、例えば６または７であり；  ｎが１より大きい場合、各部分Ｐは別の部分Ｐとジスルフィド結合によって連結されている）
による化合物である、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記核酸化合物に対する前記カチオン性のペプチドまたはポリマーの重量比が少なくとも約１であり、前記核酸化合物に対する前記リピドイド化合物の割合が約１５ｎｍｏｌ以下／μｇである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記カチオン性のペプチドまたはポリマーに対する前記リピドイド化合物の重量比が約１：５０より大きくない、および／または前記カチオン性のペプチドまたはポリマーに対する前記リピドイド化合物の割合が約２ｎｍｏｌ以下／μｇである、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
約０．１〜約２０または約０．２〜約１５または約２〜約１５または約２〜約１２のＮ／Ｐ比を有しており、ここで、前記Ｎ／Ｐ比は、前記核酸化合物のリン酸基に対する前記カチオン性のペプチドまたはポリマーの塩基性基の窒素原子のモル比と定義される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
請求項２〜８のいずれか１項に記載のリピドイド化合物以外の脂質が実質的にない、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
２種類以上の異なる種のカチオン性のペプチドおよび／またはポリマーを含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記核酸化合物が、
−任意選択でプラスミド、オリゴデゾキシヌクレオチド、ゲノムＤＮＡ、ＤＮＡプライマー、ＤＮＡプローブ、免疫賦活性ＤＮＡ、アプタマーまたはその任意の組合せから選択される化学修飾型および非修飾型のＤＮＡ、一本鎖もしくは二本鎖のＤＮＡ、コードもしくは非コードＤＮＡ、および／または
−任意選択でメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、オリゴリボヌクレオチド、ウイルスＲＮＡ、レプリコンＲＮＡ、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）もしくはリボスイッチ、ＲＮＡアプタマー、ＲＮＡデコイ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイムまたはその任意の組合せから選択される化学修飾型および非修飾型のＲＮＡ、一本鎖もしくは二本鎖のＲＮＡ、コードもしくは非コードＲＮＡ
から選択される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
標的化剤、細胞膜透過剤およびステルス性薬剤から独立して選択される１種類以上の化合物をさらに含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記カチオン性のペプチドまたはポリマー、前記リピドイド化合物および前記核酸化合物がナノ粒子中に含まれている、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
請求項１〜２０に記載の組成物を含むナノ粒子。
【請求項２２】
前記核酸化合物ならびに前記カチオン性のペプチドまたはポリマーおよび／または前記リピドイド化合物によって形成された複合体を含む、請求項２１に記載のナノ粒子。
【請求項２３】
動的レーザー散乱による測定時、それぞれ、約３０ｎｍ〜約８００ｎｍ、好ましくは約５０ｎｍ〜約３００ｎｍまたは約６０ｎｍ〜約２５０ｎｍまたは約６０ｎｍ〜約１５０ｎｍまたは約６０ｎｍ〜約１２０ｎｍの流体力学的直径を有する、請求項２１または２２に記載のナノ粒子。
【請求項２４】
約０ｍＶ〜約−５０ｍＶまたは約０ｍＶ〜約−１０ｍＶの範囲のゼータ電位を有する、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項２５】
本質的に
（ａ）１種類以上のカチオン性のペプチドおよび／またはポリマー；
（ｂ）１種類以上のリピドイド化合物；
（ｃ）１種類以上の核酸化合物；
ならびに任意選択で
（ｄ）標的化剤、細胞膜透過剤およびステルス性薬剤から独立して選択される１種類以上の化合物
からなる、請求項２１〜２４のいずれか１項に記載のナノ粒子。
【請求項２６】
（ｉ）１種類以上のカチオン性のペプチドおよび／またはポリマー；
（ｉｉ）１種類以上の請求項２〜８のいずれか１項に記載のリピドイド化合物；ならびに
（ｉｉｉ）１種類以上の核酸化合物を、例えばナノ粒子の形成を可能にするための水性液の存在下で合わせる工程
を含む方法によって得られ得るナノ粒子。
【請求項２７】
請求項２１〜２６のいずれか１項の複数のナノ粒子を含む組成物。
【請求項２８】
前記ナノ粒子が、動的レーザー散乱による測定時、それぞれ、約３０ｎｍ〜約８００ｎｍ、好ましくは約５０ｎｍ〜約３００ｎｍまたは約６０ｎｍ〜約２５０ｎｍまたは約６０ｎｍ〜約１５０ｎｍまたは約６０ｎｍ〜約１２０ｎｍの平均流体力学的直径を有する、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
滅菌された液状剤として製剤化される、請求項２７または２８に記載の組成物。
【請求項３０】
滅菌された固形組成物、例えば、水性液状担体を用いて再構成するための粉末剤または凍結乾燥形態として製剤化される、請求項２７または２８に記載の組成物。
【請求項３１】
（ａ）前記カチオン性のペプチドまたはポリマーおよび／または前記リピドイド化合物を含む第１のキット構成要素；ならびに
（ｂ）前記核酸化合物を含む第２のキット構成要素
を備えた、請求項２７〜３０のいずれか１項に記載の組成物を調製するためのキット。
【請求項３２】
医薬としての使用のための請求項２１〜２６のいずれか１項に記載のナノ粒子または請求項２７〜３０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３３】
請求項３２に記載のナノ粒子または組成物であって、前記使用が、がんまたは腫瘍疾患、感染性疾患、好ましくは（ウイルスによる、細菌による、または原生動物学的）感染性疾患、自己免疫疾患、アレルギーまたはアレルギー性疾患、単因子遺伝性疾患、すなわち、（遺伝性）疾患、または遺伝病一般、遺伝的に継承された背景を有し、典型的には明確な遺伝子欠陥によって引き起こされてメンデルの法則に従って継承される疾患、心血管疾患、ニューロン病、呼吸器系の疾患、消化器系の疾患、皮膚の疾患、筋骨格系障害、結合組織の障害、新生物、免疫不全症、内分泌疾患、栄養上の疾患および代謝病、目の疾患、耳の疾患ならびにペプチドまたはタンパク質の欠損と関連している疾患から選択される疾患の予防、処置および／または寛解を含む、ナノ粒子または組成物。
【請求項３４】
式ＩＸ：
(化)
2019517553.tif 000064
（式ＩＸ）
に示すカチオンを含み、任意選択で、薬学的に許容され得るアニオンをさらに含むリピドイド化合物。
【請求項３５】
式Ｘ、ＸａまたはＸｂ：
(化)
2019517553.tif 000065
（式Ｘ）
または
(化)
2019517553.tif 000066
（式Ｘａ）
または
(化)
2019517553.tif 000067
（式Ｘｂ）
を含むリピドイド化合物。
【請求項３６】
式ＸＩ：
(化)
2019517553.tif 000068
（式ＸＩ）
に示す構造を含むリピドイド化合物。
【請求項３７】
式ＸＩＩ：
(化)
2019517553.tif 000069
（式ＸＩＩ）
に示す構造を含むリピドイド化合物。
【請求項３８】
ＰＥＧ化されている、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩによるリピドイド。
【請求項３９】
前記ナノ粒子または前記組成物が接眼送達によって投与される、請求項３２または３３のいずれか１項に記載された使用のための、請求項２１〜２６もしくは３２〜３３のいずれか１項に記載のナノ粒子、請求項１〜２０もしくは２７〜３０のいずれか１項に記載の組成物もしくはワクチン、または請求項３４〜３７のいずれか１項に記載のリピドイド化合物。
【請求項４０】
前記接眼送達が、硝子体内、房内、結膜下、網膜下、テノン嚢下、球後、経表面および／または後強膜近傍投与を含む、請求項３２〜３４のいずれか１項に記載された使用のための、請求項２１〜２６のいずれか１項に記載のナノ粒子、請求項１〜２０もしくは２７〜３０のいずれか１項に記載の組成物もしくはワクチン、または請求項３４〜３７のいずれか１項に記載のリピドイド化合物。
【請求項４１】
前記接眼送達が毛様筋内への投与を含む、請求項３２〜３４のいずれか１項に記載された使用のための、請求項２１〜２６のいずれか１項に記載のナノ粒子、請求項１〜２０もしくは２７〜３０のいずれか１項に記載の組成物もしくはワクチン、または請求項３４〜３７のいずれか１項に記載のリピドイド化合物。
【請求項４２】
ｍＲＮＡの接眼送達方法であって、送達を必要とする被験体の目に、タンパク質をコードしているｍＲＮＡを含む請求項２１〜２６もしくは３２〜３３のいずれか１項に記載のナノ粒子、請求項１〜２０もしくは２７〜３０のいずれか１項に記載の組成物もしくはワクチン、または請求項３４〜３７のいずれか１項に記載のリピドイド化合物を、前記ｍＲＮＡにコードされた前記タンパク質の発現および／または活性が前記目においてもたらされるように投与することを含む方法。
【請求項４３】
前記ｍＲＮＡが前記被験体の目に、硝子体内、房内、結膜下、網膜下、テノン嚢下、球後、経表面および／または後強膜近傍投与によって投与されるか、あるいは前記ｍＲＮＡが毛様筋内に投与される、請求項４０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
本発明は、薬物療法、疾患の抑制および薬物送達の分野におけるものである。本発明は、特に、特定の型の活性成分を、それを必要とする被験体に送達するのに有用な担体に関する。より詳しくは、本発明は、生存生物内の標的に、例えば標的器官、組織または細胞に生物学的バリアを超えて送達することが難しい生物活性化合物であるかかる活性成分の送達に関する。治療上、大きな価値があると同時に生物学的標的に送達することが困難なかかる生物活性化合物の例としては、核酸ベースのワクチンおよび治療薬が挙げられる。
【背景技術】
【０００２】
種々の疾患は、今日では、ペプチド−、タンパク質−および核酸−ベースの薬物の投与を伴う処置、特に核酸での細胞または組織のトランスフェクションを必要とする。ペプチド−、タンパク質−および核酸−ベースの薬物の最大の治療的潜在性は、そのサイズおよび電荷により哺乳動物細胞の原形質膜を超える能力が限定的であることによって大きく障害され、細胞への到達が不良となり、治療有効性が不充分となっている。今日、このハードルは、バイオ医薬品の開発および多くの生物製剤商業的成功のための主要課題である（例えば、Ｆｏｅｒｇ  ａｎｄ  Ｍｅｒｋｌｅ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ｗｗｗ．ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ．ｗｉｌｅｙ．ｃｏｍでオンライン公開），２００８，９７（１）：１４４−６２参照）。
【０００３】
一部の疾患または障害では、遺伝子療法アプローチが例えば、欠陥性の変異型アレルを機能性のもので置き換える遺伝性疾患の場合において、遺伝子での細胞または組織のトランスフェクションおよび該細胞のＤＮＡ内への該遺伝子の挿入を必要とするかかる処置の具体的な一形態として開発されている。しかしながら、個体の細胞内への核酸または遺伝子の導入または挿入は、遺伝子療法の有意な治療効果を得るために絶対に必要ではあるが依然として今日の大きな課題である。
【０００４】
個体の細胞内への核酸または遺伝子の成功裡の導入を達成するため、いくつかの異なるハードルを越えなければならない。核酸の輸送は典型的には、核酸と細胞膜との会合、続くエンドソームによる取込みによって行われる。エンドソーム内では、導入された核酸がサイトゾルから隔離されている。発現がサイトゾル内で起こると、この核酸はエンドソームから離脱しなければならない。この核酸は、エンドソームがリソソームと融合する前にエンドソームを離れていないと、通常、エンドソームの内容物となり、分解される運命となる。あるいはまた、エンドソームが細胞膜と融合し、その内容物が細胞外培地中に戻ることになる場合もあり得る。したがって、核酸の効率的な導入のためには、トランスフェクション自体の効率に加えてエンドソーム脱出が最も重要な工程の１つであると思われる。これまでに、このような問題に対処するいろいろなアプローチがある。しかしながら、今日まですべての面において完全に成功裡のアプローチはこれまで存在しない。
【０００５】
当該技術分野で今日使用されているトランスフェクション剤としては典型的には、ナノ粒子またはマイクロ粒子に合成され得る種々の型のペプチド、ポリマー、脂質、ならびに他の担体化合物が挙げられる（例えば、Ｇａｏ，Ｘ．，Ｋ．Ｓ．Ｋｉｍ，ｅｔ  ａｌ．（２００７），ＡＡＰＳ  Ｊ  ９（１）：Ｅ９２−１０４参照）。このようなトランスフェクション剤おほとんどは、インビトロ反応でのみ成功裡に使用されている。生体動物の細胞を核酸でトランスフェクトする場合、さらなる要件を満たす必要がある。一例として、核酸と担体の複合体は生理学的塩溶液中で凝集に対して安定でなければならない。さらに、宿主の補体系の一部のものと相互作用するものであってはならない。さらに、複合体は、遍在するヌクレアーゼによる早期細胞外分解から核酸を保護するものでなければならない。遺伝子療法用途には、さらに、担体が適応免疫系によって認識されないこと（免疫原性）および非特異的サイトカインストームを刺激しないこと（急性免疫応答）が非常に重要である（Ｇａｏ，Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７，上掲）；Ｍａｒｔｉｎ，Ｍ．Ｅ．ａｎｄ  Ｋ．Ｇ．Ｒｉｃｅ（２００７），ＡＡＰＳ  Ｊ  ９（１）：Ｅ１８−２９；およびＦｏｅｒｇ  ａｎｄ  Ｍｅｒｋｌｅ，（２００８，上掲）参照）。
【０００６】
Ｆｏｅｒｇ  ａｎｄ  Ｍｅｒｋｌｅ（２００８，上掲）には、ペプチド−、タンパク質および核酸−ベースの薬物の治療的潜在性が論考されている。彼らの解析によれば、このような薬物の最大の治療的潜在性は、哺乳動物細胞の原形質膜を超える能力が限定的であることによって高頻度に障害され、細胞への到達が不良となり、治療有効性が不充分となっている。今日、このハードルは、バイオ医薬品の開発および多くの生物製剤商業的成功のための主要課題である。
【０００７】
これとの関連において、Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．（Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ＡＡＰＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２００７；９（１）Ａｒｔｉｃｌｅ  ９）から、治療用遺伝子を、適正な遺伝子発現が行われ得る選択された細胞に送達する方法の開発における遺伝子療法のための主な課題がわかる。しかしながら、細胞または組織内への遺伝子送達、特に核酸の成功裡の導入は簡単ではなく、典型的には多くの要素に依存する。成功裡の送達、例えば、細胞または組織内への核酸または遺伝子の送達のためには、多くの障壁を解決しなければならない。Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）によれば、理想的な遺伝子送達方法は、３つの主要な基準：（１）細胞間マトリックス中のヌクレアーゼによる分解に対して導入遺伝子を保護すべきであること、（２）導入遺伝子は原形質膜を超えて運ばれるべきであること、および（３）有害な効果を有していてはならないことを満たす必要がある。
【０００８】
典型的には、核酸での細胞のトランスフェクションは、ウイルスベクターもしくは非ウイルスベクターまたは担体を用いて行われる。成功裡の送達のためには、このようなウイルスベクターまたは非ウイルスベクターは、上記の障壁を解決できるものでなければならない。今日利用可能なほとんどの成功裡の遺伝子療法ストラテジーは、ウイルスベクター、例えばアデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスおよびヘルペスウイルスの使用に依存している。ウイルスベクターは、高効率での遺伝子導入および長期間の遺伝子発現の可能性を媒介することができ、３つの基準の２つを満足している。しかしながら、遺伝子療法の臨床試験でカバーされていない急性免疫応答、免疫原性および挿入変異誘発により、一般に使用されている一部のウイルスベクターに関して深刻な安全性の懸念が生じている。
【０００９】
この問題の解決は非ウイルスベクターの使用に見られ得る。非ウイルスベクターはウイルスベクターほど効率的ではないが、遺伝子療法においてより安全な代替法を提供するために多くの非ウイルスベクターが開発されている。非ウイルスの遺伝子送達の方法では、物理的（担体なしの遺伝子送達）および化学的アプローチ（合成ベクターに基づいた遺伝子送達）の使用が検討されている。物理的アプローチとしては、通常、注射針を使用する単純な注射、エレクトロポレーション、遺伝子銃、超音波および流体力学的送達が挙げられる。これらのアプローチの一部のものでは、細胞膜を透過して細胞内遺伝子導入を助長する物理的な力が使用される。化学的アプローチでは典型的には、合成化合物または天然に存在する化合物、例えばカチオン性脂質またはカチオン性のポリマーが、細胞内に導入遺伝子を送達するための担体として使用される。種々の非ウイルスの遺伝子送達系の基礎科学および応用においてかなりの進歩がみられるが、大部分の非ウイルスアプローチは依然として、特にインビボ遺伝子送達のためにはウイルスベクターよりも効率性が低い（例えば、Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ＡＡＰＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２００７；９（１）Ａｒｔｉｃｌｅ  ９参照）。
【００１０】
ここ１０年で、物理的合成または化学的ライゲーションからいわゆる細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）（また、タンパク質−形質導入ドメイン（ＰＴＤ）とも表記される）への結果と思われる核酸の細胞送達における実質的な改善のための魅力的な展望が発表されている（Ｆｏｅｒｇ  ａｎｄ  Ｍｅｒｋｌｅ（２００８，上掲）参照）。ＣＰＰは、哺乳動物細胞の原形質膜を超えることができ、したがって細胞への薬物送達のための前例のない機会をもたらし得る１０〜約３０個のアミノ酸の短鎖ペプチド配列である。このようなペプチドはほぼすべてが一連のカチオン性アミノ酸を、低ｐＨでα−ヘリックスを形成する配列との組合せで含むものである。インビボでｐＨがプロトンポンプによって連続的に低下すると、通常、該ペプチドのコンホメーションの変化が急速に開始される。このヘリックスモチーフがエンドソームの膜内への挿入を媒介し、その内容物の細胞質内への放出をもたらす（Ｆｏｅｒｇ  ａｎｄ  Ｍｅｒｋｌｅ，（２００８，上掲）；およびＶｉｖｅｓ，Ｅ．，Ｐ．Ｂｒｏｄｉｎ，ｅｔ  ａｌ．（１９９７）；Ａ  ｔｒｕｎｃａｔｅｄ  ＨＩＶ−１  Ｔａｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂａｓｉｃ  ｄｏｍａｉｎ  ｒａｐｉｄｌｙ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｐｌａｓｍａ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｎｄ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｅｌｌ  ｎｕｃｌｅｕｓ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２（２５）：１６０１０−７参照）。このような利点にもかかわらず、ＣＰＰ媒介性薬物送達に対する大きな障害は、上皮および内皮の酵素的バリアとの接触またはその通過時における多くの場合で急速な該ペプチドの代謝クリアランスにあると考えられる。その結果、ＣＰＰの代謝安定性は、細胞内バイオアベイラビリティのための重要な生物薬剤学的要素である。しかしながら、一方においてそのカーゴを標的に、代謝的に切断される前に運ぶのに充分に安定であるが、他方において蓄積されて毒性レベルに達し得る前に組織から一掃され得るＣＰＰは当該技術分野において入手可能ではない。
【００１１】
例えば遺伝子療法のために細胞内にカーゴ分子を送達するための当該技術分野におけるさらなるアプローチの一例は、他の型のペプチドリガンドの使用を含むものである（ＭａｒｔｉｎおよびＲｉｃｅ参照（ＭａｒｔｉｎおよびＲｉｃｅ，Ｔｈｅ  ＡＡＰＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２００７；９（１）Ａｒｔｉｃｌｅ  ３）参照）。かかるペプチドリガンドは、より大きなタンパク質から採用された短鎖配列であって受容体認識のために必要とされる必須アミノ酸群であるもの、例えば、がん細胞を標的化するために使用されるＥＧＦペプチドであり得る。他のペプチドリガンドも同定されており、レシチン様酸化型ＬＤＬ受容体（ＬＯＸ−１）を標的化するために使用されるリガンドが挙げられる。内皮細胞内でのＬＯＸ−１の上方調節は、機能不全状態、例えば高血圧およびアテローム性動脈硬化と関連している。しかしながら、かかるペプチドリガンドは、そのカーゴ分子に複合体化または接着では連結され得ず、典型的には細胞内で細胞毒性効果を示す共有結合、例えば架橋剤を必要とするため、多くの遺伝子療法アプローチで適したものではない。
【００１２】
また、合成ベクターも、例えば遺伝子療法の目的のために細胞内にカーゴ分子を送達するために使用され得る。しかしながら、多くの合成ベクターの主な不都合点の１つはウイルスベクターと比べてトランスフェクション効率が不良であることであり、さらなる臨床開発を可能にするために有意な改善が必要とされる。インビトロおよびインビボの両方において核酸導入を制限するいくつかの障壁が特定されており、生理学的条件におけるベクターの細胞内送達不良、毒性および不安定性が挙げられる（例えば、Ｒｅａｄ，Ｍ．Ｌ．，Ｋ．Ｈ．Ｂｒｅｍｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）：Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｒｅｄｕｃｉｂｌｅ  ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎｓ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ．Ｊ  Ｇｅｎｅ  Ｍｅｄ  ５（３）：２３２−４５参照）。
【００１３】
遺伝子療法における具体的なアプローチの一例では、カチオン性またはカチオン化可能な脂質が使用される。しかしながら、多くのカチオン性またはカチオン化可能な脂質は細胞培養において優れたトランスフェクション活性を示すが、ほとんどは血清の存在下では性能が良好ではなく、インビボで活性なものは少数のみである。血液、上皮内層の粘液または組織マトリックス中に存在し、負電荷を有し、多くの場合両親媒性である圧倒的な量のタンパク質および多糖にリポフレックスが曝露されると、サイズ、表面電荷および脂質組成の劇的な変化が起こる。インビボで投与されると、リポフレックスは、負電荷を有する血液成分と相互作用して大きな凝集体を形成する傾向にあり、この凝集体は、循環赤血球の表面上に吸収され得、厚い粘液層内にトラップされるか、または微小血管系内で閉鎖され、これらが遠位の位置の意図された標的細胞に到達することが妨げられる。さらに、リポフレックスに関する毒性が観察されている。症状としては、とりわけ炎症性サイトカインの誘導が挙げられる。ヒトでは、種々の度合の有害な炎症反応、例えば流感様症状が、リポフレックスを投与された被験体にみとめられた。したがって、リポフレックスがヒトにおいて、特に、反復投与が必要とされる場合に安全に使用され得るかどうかに関しては疑わしいようである。
【００１４】
遺伝子療法におけるさらなるアプローチの一例では、カチオン性またはカチオン化可能なポリマーが使用される。かかるポリマーは、負電荷を有する核酸をしっかり複合体化して凝縮させ得るため、核酸の送達に効率的であることがわかった。したがって、いくつかのカチオン性またはカチオン化可能なポリマーが、インビトロおよびインビボでの遺伝子送達のための担体として検討されている。このようなものとしては、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ポリアミドアミンおよびポリプロピルアミンデンドリマー、ポリアリルアミン、カチオン性のデキストラン、キトサン、種々のタンパク質およびペプチドが挙げられる。ほとんどのカチオン性またはカチオン化可能なポリマーは、ＤＮＡを小粒子に凝縮させ、細胞表面上のアニオン性部位との電荷−電荷相互作用によりエンドサイトーシスによる細胞内取込みを助長する機能を共通して有するが、そのトランスフェクション活性および毒性は劇的に異なる。興味深いことに、カチオン性またはカチオン化可能なポリマーは、分子量の増大に伴い、負電荷を有する核酸カーゴの複合体化がより強力になるため、より良好なトランスフェクション効率を示す。しかしながら、分子量の増大はまた、そのポリマーの毒性の上昇ももたらす。ＰＥＩは、おそらく最も活性で最も研究されている遺伝子送達用ポリマーであるが、トランスフェクション試薬としてのその主な欠点はその非生分解性の性質および毒性に関することである。さらに、高分子量ポリマーによって形成されたポリプレックスが生理学的条件下で改善された安定性を示す場合であっても、データでは、かかるポリマーがベクターの荷卸し（ｕｎｐａｃｋｉｎｇ）を妨害する場合があり得ることが示されている。例えば、１９および３６個のアミノ酸残基のポリ（Ｌ−リシン）（ＰＬＬ）は、１８０個の残基のＰＬＬよりも速やかにＤＮＡから解離し、短期遺伝子発現の有意な向上をもたらすことが示された。ＤＮＡを受容体媒介性遺伝子送達において活性な構造にコンパクト化するためには最低６〜８個のカチオン性アミノ酸長が必要とされる。しかしながら、短鎖ポリカチオンで形成されたポリプレックスは生理学的条件下で不安定であり、典型的には生理学的塩溶液中に急速に凝集する。このマイナスの影響を解決するため、Ｒｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．（Ｒｅａｄ，Ｍ．Ｌ．，Ｋ．Ｈ．Ｂｒｅｍｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）：Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｒｅｄｕｃｉｂｌｅ  ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎｓ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ．Ｊ  Ｇｅｎｅ  Ｍｅｄ  ５（３）：２３２−４５；およびＲｅａｄ，Ｍ．Ｌ．，Ｓ．Ｓｉｎｇｈ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）：Ａ  ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  ｒｅｄｕｃｉｂｌｅ  ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ｂｒｏａｄ  ｒａｎｇｅ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３３（９）：ｅ８６参照）により、細胞内環境によって切断されて核酸の放出を助長し得るペプチドＣｙｓ−Ｌｙｓ１０−Ｃｙｓの酸化的重縮合によって調製される線状の還元性ポリカチオン（ＲＰＣ）を主体とする���しい型の合成ベクターが開発された。彼らは、ＲＰＣによって形成されたポリプレックスが還元条件によって不安定化され、ＤＮＡおよびｍＲＮＡの効率的な放出が可能になることを示すことができた。また、ＲＰＣの切断によってポリカチオン毒性も低分子量ペプチドと同等のレベルまで低減された。Ｒｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００３，上掲）のこのアプローチの不都合点は、トランスフェクション効率を充分なレベルまで向上させるために、エンドソーム溶解剤クロロキンまたはカチオン性脂質ＤＯＴＡＰがさらに必要であることであった。結果として、Ｒｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００５，上掲）は、エンドソーム緩衝能を有することが知られているヒスチジン残基をＲＰＣ内に含めた。彼らは、ヒスチジンリッチＲＰＣが細胞内還元性環境によって切断され、エンドソーム溶解剤クロロキンを必要とすることなく、広範な核酸、例えばプラスミドＤＮＡ、ｍＲＮＡおよびｓｉＲＮＡ分子の効率的な細胞質送達が可能であることを示すことができた。
【００１５】
Ｒｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００５，上掲）では、ヒスチジンリッチＲＰＣがそのままインビボ用途に使用できかどうかは評価されなかった。彼らの研究では、細胞取込みを制限するポリプレックスに対する血清タンパク質の結合によって生じ得るヒスチジン残基が遺伝子導入を向上させる能力がマスキングされることを回避するためにトランスフェクションが血清の非存在下で行われた。予備実験では、ヒスチジンリッチＲＰＣポリプレックスのトランスフェクション特性が血清タンパク質の存在に影響され得ることが示されており、ＧＦＰ陽性細胞では１０％ＦＣＳ（ウシ胎仔血清）中において５０％の低下が観察されている。インビボ用途のために、彼らは、親水性ポリマーであるポリ−［Ｎ−（２ヒドロキシ−プロピル）メタクリルアミド］での修飾を提案している。したがって、Ｒｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００５，上掲）では、ポリプレックスの凝集および血清タンパク質に対するポリカチオン性タンパク質の結合の抑制が達成されなかった。さらに、大過剰のポリマー（これは高いＮ／Ｐ比を特徴とする）のため、核酸と複合体形成する場合に強力な複合体が形成され、これは、塩誘導性凝集および血清内容物との相互作用（オプソニン化）の傾向が強いためインビボでの有用性は限定的にすぎない。さらに、このような複合体は、遺伝子療法の目的で使用した場合、急性免疫応答を刺激する場合があり得る。Ｎｅｉｔｈｅｒ  ｄｉｄ  Ｒｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００３，上掲）は、この刊行物に示したＲＰＣベースの複合体のインビボデータを示している。このような強力なＲＰＣベースの複合体は、真皮内への局所投与後、完全に不活性になることがわかっている。さらに、Ｒｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００５，上掲）では、核酸カーゴの完全な複合体化を確実にするためにできるだけ長い鎖長を有する高分子量ポリマーの生成（「段階成長重合」）を誘導するため、ストリンジェントな酸化条件（３０％  ＤＭＳＯ）が使用された。
【００１６】
Ｒｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．と同様のアプローチにおいて、ＭｃＫｅｎｚｉｅ  ｅｔ  ａｌ．（ＭｃＫｅｎｚｉｅ，Ｄ．Ｌ．，Ｋ．Ｙ．Ｋｗｏｋ，ｅｔ  ａｌ．（２０００），Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７５（１４）：９９７０−７、ＭｃＫｅｎｚｉｅ，Ｄ．Ｌ．，Ｅ．Ｓｍｉｌｅｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０００），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  １１（６）：９０１−９およびＵＳ６，７７０，７４０Ｂ１）により、高分子量ポリカチオンで観察される毒性を低下させる目的で複数のシステインを短鎖合成ペプチド内に挿入することによって、遺伝子送達剤としての自己架橋性ペプチドが開発された。ＤＮＡの複合体化のため、自己架橋性ペプチドをＤＮＡと混合し、ペプチド間ジスルフィド結合の誘導と並行してＤＮＡカーゴの複合体化を行った。インビボ遺伝子送達アプローチのため、彼らは、自己架橋性ペプチドを、各末端から遠位の部位で該ペプチドに作動可能に結合させるステルス性の（ｓｔｅａｌｔｈｉｎｇ）薬剤（例えば、ポリエチレングリコール）または標的化剤で誘導体化することを提案している。さらなるアプローチの一例では、同じ著者により、ＤＮＡペプチド縮合物のマスキング、およびそれによる血液成分との相互作用の低減の目的のために、還元性または非還元性の結合によるポリエチレングリコールでの非架橋性ペプチドＣＷＫ１８の誘導体化が開発された（Ｋｗｏｋ，Ｋ．Ｙ．，Ｄ．Ｌ．ＭｃＫｅｎｚｉｅ，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）．“Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈｌｙ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）−ｐｅｐｔｉｄｅ  ＤＮＡ  ｃｏｎｄｅｎｓａｔｅｓ．”Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８８（１０）：９９６−１００３．）。
【００１７】
上記のことを要約すると、上記に例示した現在の先行技術は種々の不都合点をもっている。Ｒｅａｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００３，上掲）またはＭｃＫｅｎｚｉｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０００  ＩおよびＩＩ，上掲ならびにＵＳ６，７７０，７４０  Ｂ１）に報告された自己架橋性ペプチドの具体的な不都合点の１つは、形成される粒子の表面上の高い正電荷に関するものである。この電荷のため、該粒子は、このような粒子がインビボで高い塩濃度に供されると凝集に対して高い不安定性を示す。しかしながら、かかる塩濃度は、インビボで細胞内または細胞外の培地中に典型的に存在する。さらに、高い正電荷を有する複合体は強いオプソニン化傾向を示す。これにより、マクロファージによる取込みの向上、および分解による複合体の高速不活化がもたらされる。特に、このような複合体が免疫系の細胞によって取り込まれると、一般的には、下流でいろいろなサイトカインの刺激がもたらされる。しかしながら、自然免疫系のこの非特異的活性化は、このような系の大変な不都合点であり、特に、急性免疫応答（サイトカインストーム）が厳格に回避されるべきであるいくつかの態様の遺伝子療法の目的のためには回避されるべきである。さらに、生物学的系では、正電荷を有する複合体は、細胞外マトリックスまたは血清の負電荷を有する成分に容易に結合し得る、または固定化され得る。また、複合体内の核酸の放出が早すぎる場合があり、導入効率および複合体のインビボ半減期の低下がもたらされる場合があり得る。さらに、インビボ遺伝子送達に好都合であるステルス性薬剤、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）での担体の可逆的誘導体化は、ペプチドモノマーでのみ可能であったが、自己架橋性ペプチド、もっと言うと規定のポリマー鎖長を有する高分子担体で可能ではなかった。特に、かかる可逆的誘導体化は、架橋型のカチオン性ペプチド担体の末端部では可能ではなかった。さらに、先行技術では、長いポリマー鎖を有するか、または自己架橋性ペプチドからなる不明確なポリマー鎖長を有する高分子量ポリマーのみが報告されており、これは、残念ながら、そのカーゴのコンパクト化が細胞内でのカーゴの放出が限定的であるような程度である。極端に不明確なポリマー鎖長は、ＲＰＣを主体とする医薬の規制機関による承認に関してさらに問題となる。かかる承認のための必須条件は、医薬のどの調製物も同じ組成、同じ構造および同じ特性を有することである。これは、先行技術のＲＰＣを主体とする複合体では確保され得ない。さらに、先行技術において提供されるＲＰＣベースのポリマーまたは複合体は、その不明確な構造またはポリマー鎖長のため特性評価することが困難である。
【００１８】
結果として、遺伝子療法および他の治療用途の目的のための核酸のコンパクト化と安定化の両方を可能にし、良好なトランスフェクション活性を核酸カーゴの良好な放出（特にインビボで）との組合せで示し、例えば自己架橋性ポリマーによる可逆的ステルス性および核酸の可逆的複合体化の組合せによる毒性が低いか、またはさらには無い一般的に適用可能な方法または担体は今日まで提示されていない。したがって、当該技術分野において、遺伝子導入の目的のための改善された担体であって、そのカーゴが代謝的に切断される前に標的に運ばれるのに充分に安定であるとともに、それでもなお、蓄積されて毒性レベルに達し得る前に組織から一掃される担体が提供される必要性が依然として存在している。
【００１９】
したがって、本発明の基礎をなす目的は、特に治療用途または予防用途のための核酸の送達のための担体であって、核酸をコンパクト化することができ、そのインビトロでのいろいろな細胞株内への効率的な導入が可能であるが、インビボのトランスフェクションもまた可能にする担体を提供することである。細胞による取込みはエンドソーム経路によって行われるため、かかる担体または複合体化剤はまた、エンドソームからの核酸の効率的な放出を可能にするか、またはもたらすものであるのがよい。さらなる目的は、核酸と複合体化したら凝集に対する抵抗性を示す担体を提供することである。またさらなる目的は、核酸カーゴに対して血清含有培地に対する向上した安定性をもたらすことである。別の目的は、強力な急性免疫反応がない効率的なインビボ活性を可能にすることである。さらなる目的は、例えば本明細書において上記のような、核酸送達のための既知の担体の任意の不都合点または制限を解決することである。本発明が対処するさらなる目的は、以下の説明、実施例および本特許の特許請求の範囲に基づいて明らかとなろう。
これらの目的は、本特許の特許請求の範囲に示される本発明の主題によって解決される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２０】
【特許文献１】米国特許第６，７７０，７４０Ｂ１号明細書
【非特許文献】
【００２１】
(非特許文献１)Ｆｏｅｒｇ  ａｎｄ  Ｍｅｒｋｌｅ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ｗｗｗ．ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ．ｗｉｌｅｙ．ｃｏｍでオンライン公開），２００８，９７（１）：１４４−６２
(非特許文献２)Ｇａｏ，Ｘ．，Ｋ．Ｓ．Ｋｉｍ，ｅｔ  ａｌ．（２００７），ＡＡＰＳ  Ｊ  ９（１）：Ｅ９２−１０４
(非特許文献３)Ｍａｒｔｉｎ，Ｍ．Ｅ．ａｎｄ  Ｋ．Ｇ．Ｒｉｃｅ（２００７），ＡＡＰＳ  Ｊ  ９（１）：Ｅ１８−２９
(非特許文献４)Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ＡＡＰＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２００７；９（１）Ａｒｔｉｃｌｅ  ９
(非特許文献５)Ｖｉｖｅｓ，Ｅ．，Ｐ．Ｂｒｏｄｉｎ，ｅｔ  ａｌ．（１９９７）；Ａ  ｔｒｕｎｃａｔｅｄ  ＨＩＶ−１  Ｔａｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂａｓｉｃ  ｄｏｍａｉｎ  ｒａｐｉｄｌｙ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｐｌａｓｍａ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｎｄ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｅｌｌ  ｎｕｃｌｅｕｓ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２（２５）：１６０１０−７
(非特許文献６)ＭａｒｔｉｎおよびＲｉｃｅ，Ｔｈｅ  ＡＡＰＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２００７；９（１）Ａｒｔｉｃｌｅ  ３）
(非特許文献７)Ｒｅａｄ，Ｍ．Ｌ．，Ｋ．Ｈ．Ｂｒｅｍｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）：Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｒｅｄｕｃｉｂｌｅ  ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎｓ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ．Ｊ  Ｇｅｎｅ  Ｍｅｄ  ５（３）：２３２−４５
(非特許文献８)Ｒｅａｄ，Ｍ．Ｌ．，Ｓ．Ｓｉｎｇｈ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）：Ａ  ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  ｒｅｄｕｃｉｂｌｅ  ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ｂｒｏａｄ  ｒａｎｇｅ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３３（９）：ｅ８６
(非特許文献９)ＭｃＫｅｎｚｉｅ，Ｄ．Ｌ．，Ｋ．Ｙ．Ｋｗｏｋ，ｅｔ  ａｌ．（２０００），Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７５（１４）：９９７０−７
(非特許文献１０)ＭｃＫｅｎｚｉｅ，Ｄ．Ｌ．，Ｅ．Ｓｍｉｌｅｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０００），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  １１（６）：９０１−９
(非特許文献１２)Ｋｗｏｋ，Ｋ．Ｙ．，Ｄ．Ｌ．ＭｃＫｅｎｚｉｅ，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）．“Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈｌｙ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）−ｐｅｐｔｉｄｅ  ＤＮＡ  ｃｏｎｄｅｎｓａｔｅｓ．”Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８８（１０）：９９６−１００３
【発明の概要】
【００２２】
第１の態様において、本発明により、カチオン性のペプチドまたはポリマー、カチオン性のリピドイド（ｌｉｐｉｄｏｉｄ）化合物および核酸化合物を含む組成物を提供する。該リピドイド化合物は好ましくは、２個以上のカチオン性窒素原子および少なくとも２つの親油性尾部を含む化合物である。多くの慣用的なカチオン性脂質とは対照的に、該リピドイド化合物は、加水分解性連結基、特に、加水分解性のエステル、アミドまたはカルバメート基を含む連結基がないものであり得る。該リピドイドのカチオン性窒素原子はカチオン化可能もしくは永久的にカチオン性であり得るか、または両方の型のカチオン性窒素が該化合物中に存在し得る。
【００２３】
一実施形態では、該リピドイド化合物が、式Ｉ
(化)
2019517553.tif 000002
（式Ｉ）
による化合物であり、
式中、各存在のＲＡは、独立して、非置換の環式もしくは非環式の分枝もしくは非分枝状のＣ１〜２０脂肪族；置換もしくは非置換の環式もしくは非環式の分枝もしくは非分枝状のＣ１〜２０ヘテロ脂肪族；置換もしくは非置換のアリール；置換もしくは非置換のヘテロアリール；    (化)
2019517553.tif 000003
であり、
ここで、ＲＡのうちの少なくとも１つが
(化)
2019517553.tif 000004
である。
【００２４】
さらに、各存在のＲ５は、独立して、非置換の環式もしくは非環式の分枝もしくは非分枝状のＣ８〜１６脂肪族；置換もしくは非置換のアリール；または置換もしくは非置換のヘテロアリールである。各存在のｘは１〜１０（両端を含む）の整数であり；各存在のｙは１〜１０（両端を含む）の整数である。また、式Ｉの化合物の任意の薬学的に許容され得る塩が該リピドイド化合物の範囲に含まれる。一部の実施形態では、式Ｉによるリピドイド化合物がＰＥＧ部分を含む。
【００２５】
別の実施形態では、該リピドイドが、式ＩＩａおよび／または式ＩＩｂ：
−Ｎ（Ｒ１）−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒ５）−Ｒ２（式ＩＩａ）
−Ｎ＋（Ｒ3）（Ｒ4）−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒ５）−Ｒ２（式ＩＩｂ）
の２つまたは３つの部分を含む化合物であり、ここで、式ＩＩａまたは式ＩＩｂの個々の各部分について独立して、Ｒ1は、水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルから選択され；Ｒ２は、線状または分枝状の飽和または不飽和のＣ６〜Ｃ１６ヒドロカルビル鎖から選択され、Ｒ3およびＲ4は各存在においてＣ１〜Ｃ４−アルキルから独立して選択され、Ｒ５は水素またはヒドロキシル、好ましくはヒドロキシルである。一部の実施形態では、式ＩＩａおよび／またはＩＩｂによる該リピドイド化合物がＰＥＧ部分を含む。
【００２６】
さらなる一実施形態では、該リピドイドが、式ＩＩＩ
(化)
2019517553.tif 000005
（式ＩＩＩ）
による化合物であり、
式中、Ｒ1およびＲ２は各々、水素、任意選択で置換されている飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ２０ヒドロカルビルおよび任意選択で置換されている飽和または不飽和のＣ6〜Ｃ２０アシルからなる群より独立して選択され；Ｌ１およびＬ2は各々、任意選択で置換されている飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ３０ヒドロカルビルから独立して選択され；ｍおよびｏは各々、ゼロおよび任意の正の整数からなる群より独立して選択され；ｎは任意の正の整数である。本発明の一部の実施形態では、Ｒ1、Ｒ２、Ｌ１および／またはＬ2は各々、独立してＰＥＧ部分であるか、またはＰＥＧ部分で置換されている。
【００２７】
該カチオン性のペプチドまたはポリマーは、例えば、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓおよび／またはＯｒｎから選択される塩基性アミノ酸を含むか、または該アミノ酸を主体とするオリゴ−またはポリペプチドであり得る。あるいはまた、これは、アミノ酸ではないモノマー単位、例えばカチオン性の多糖、ポリイミンまたはポリアクリレートを主体とするポリマーであってもよい。
【００２８】
該核酸化合物は、例えば、化学修飾型および非修飾型のＤＮＡ、一本鎖もしくは二本鎖のＤＮＡ、コードもしくは非コードＤＮＡから選択され得、任意選択で、プラスミド、（短鎖）オリゴデゾキシヌクレオチド（すなわち、（短鎖）ＤＮＡオリゴヌクレオチド）、ゲノムＤＮＡ、ＤＮＡプライマー、ＤＮＡプローブ、免疫賦活性ＤＮＡ、アプタマーまたはその任意の組合せから選択され得る。択一的または付加的に、かかる核酸分子は、例えば任意のＰＮＡ（ペプチド核酸）から選択され得る。さらに択一的または付加的に、また、特に好ましい一実施形態によれば、該核酸は、化学修飾型および非修飾型のＲＮＡ、一本鎖もしくは二本鎖のＲＮＡ、コードもしくは非コードＲＮＡから選択され、任意選択で、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、（短鎖）オリゴリボヌクレオチド（すなわち、（短鎖）ＲＮＡオリゴヌクレオチド）、ウイルスＲＮＡ、レプリコンＲＮＡ、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、もしくはリボスイッチ、ＲＮＡアプタマー、ＲＮＡデコイ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイムまたはその任意の組合せから選択される。好ましくは、該複合体の核酸分子はＲＮＡである。より好ましくは、該複合体の核酸分子は（線状の）一本鎖ＲＮＡ、さらにより好ましくはｍＲＮＡまたは免疫賦活性ＲＮＡである。
【００２９】
該組成物は、さらに、リピドイドの含有量がカチオン性のペプチドもしくはポリマーの量または核酸の量と比べて相対的に少ないことを特徴とするものであり得る。一実施形態では、核酸化合物に対するカチオン性のペプチドまたはポリマーの重量比が少なくとも約１であり、核酸化合物に対するリピドイドの割合が約１５ｎｍｏｌ以下／μｇである。別の実施形態では、カチオン性のペプチドまたはポリマーに対するリピドイドの重量比が約１：５０より大きくない、および／またはカチオン性のペプチドまたはポリマーに対するリピドイドの割合が約２ｎｍｏｌ以下／μｇである。
【００３０】
さらなる一態様では、本発明により、該カチオン性のペプチドまたはポリマー、該リピドイドおよび該核酸化合物を含む、例えば複合体の形態のナノ粒子を提供する。
【００３１】
さらなる一態様では、本発明により、かかるナノ粒子または複数のかかるナノ粒子を含む組成物を提供する。該組成物は、例えば、滅菌された液状分散体または滅菌された固形組成物として、例えば、水性液状担体を用いて再構成するための粉末剤または凍結乾燥形態として製剤化され得る。
【００３２】
またさらなる一態様では、本発明により、上記に規定した組成物を調製するためのキットを提供する。例えば、キットは、該カチオン性のペプチドまたはポリマーおよび／または該リピドイドを含む第１のキット構成要素；または該核酸化合物を含む第２のキット構成要素を備えたものであり得る。
【００３３】
またさらなる一態様では、本発明は、上記の任意の態様による組成物、ナノ粒子またはキットの医学的使用に関するものである。医学的使用には、例えば、がんまたは腫瘍疾患、感染性疾患、好ましくは（ウイルスによる、細菌による、または原生動物学的）感染性疾患、自己免疫疾患、アレルギーまたはアレルギー性疾患、単因子遺伝性（ｍｏｎｏｇｅｎｅｔｉｃ）疾患、すなわち、（遺伝性）疾患、または遺伝病一般、遺伝的に継承された背景を有し、典型的には明確な遺伝子欠陥によって引き起こされてメンデルの法則に従って継承される疾患、心血管疾患、ニューロン病、呼吸器系の疾患、消化器系の疾患、皮膚の疾患、筋骨格系障害、結合組織の障害、新生物、免疫不全症、内分泌疾患、栄養上の疾患および代謝病、目の疾患、耳の疾患ならびにペプチドまたはタンパク質の欠損と関連している疾患から選択される疾患の予防、処置および／または寛解が含まれ得る。
【００３４】
本発明は、生物学的に活性なカーゴ物質、例えば核酸の特定の組織または標的細胞への送達が、カチオン性のペプチドまたはポリマーとリピドイドを合わせたビヒクルを使用することで、該カーゴ物質が細胞によって有効に取り込まれるとともに、通常リピドイドに伴う毒性が実質的に低減されることにより実質的に改善され得るという知見に基づいたものである。
【００３５】
本発明のさらなる目的、態様、有用な実施形態、用途、有益な効果および利点は、以下の詳細説明、実施例および特許請求の範囲に基づいて明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１Ａ】図１Ａは、インビトロでのＳｏｌ８筋肉細胞における本発明のポリマー−脂質またはポリマー−リピドイド製剤のトランスフェクション効率に対する効果を示す。トランスフェクション実験はすべて三連で、ＧｐＬｕｃ  ｍＲＮＡ（配列番号：１２）をカーゴとして用いて行った。さらに、陰性対照（バッファー，パッシブパルシング）も含めている。本発明のポリマー−脂質またはポリマー−リピドイドトランスフェクション試薬に加えて、ポリマーのみを比較のために、トランスフェクション試薬の使用なしの純粋なＧｐＬｕｃ  ｍＲＮＡ（本明細書においてＲ２８５１とも表示）とともに使用した。
【図１Ｂ】図１Ｂは、インビトロでのＳｏｌ８筋肉細胞における本発明のポリマー−脂質またはポリマー−リピドイド製剤のトランスフェクション効率に対する効果を示す。トランスフェクション実験はすべて三連で、ＧｐＬｕｃ  ｍＲＮＡ（配列番号：１２）をカーゴとして用いて行った。さらに、陰性対照（バッファー，パッシブパルシング）も含めている。本発明のポリマー−脂質またはポリマー−リピドイドトランスフェクション試薬に加えて、ポリマーのみを比較のために、トランスフェクション試薬の使用なしの純粋なＧｐＬｕｃ  ｍＲＮＡ（本明細書においてＲ２８５１とも表示）とともに使用した。
【図１Ｃ】図１Ｃは、インビトロでのＳｏｌ８筋肉細胞における本発明のポリマー−脂質またはポリマー−リピドイド製剤のトランスフェクション効率に対する効果を示す。トランスフェクション実験はすべて三連で、ＧｐＬｕｃ  ｍＲＮＡ（配列番号：１２）をカーゴとして用いて行った。さらに、陰性対照（バッファー，パッシブパルシング）も含めている。本発明のポリマー−脂質またはポリマー−リピドイドトランスフェクション試薬に加えて、ポリマーのみを比較のために、トランスフェクション試薬の使用なしの純粋なＧｐＬｕｃ  ｍＲＮＡ（本明細書においてＲ２８５１とも表示）とともに使用した。
【図２Ａ】同様に、図２Ａは、インビトロでのＨｅｐＧ２細胞におけるｍＲＮＡの本発明のポリマー−リピドイド製剤のトランスフェクション効率に対する効果を示す。特に、カチオン化可能な３−Ｃ１２および３−Ｃ１２−ＯＨならびに永久的にカチオン性の３−Ｃ１２−ＯＨ−ｃａｔを比較した。さらなる詳細については実施例３を参照されたい。
【図２Ｂ】同様に、図２Ｂは、インビトロでのＨｅｐＧ２細胞におけるｍＲＮＡの本発明のポリマー−リピドイド製剤のトランスフェクション効率に対する効果を示す。特に、カチオン化可能な３−Ｃ１２および３−Ｃ１２−ＯＨならびに永久的にカチオン性の３−Ｃ１２−ＯＨ−ｃａｔを比較した。さらなる詳細については実施例３を参照されたい。
【図３】図３は、いろいろなポリマー−脂質またはリピドイド複合体化ＧｐＬｕｃ  ｍＲＮＡでの処理後のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるサイトカインインターフェロンα（ＩＮＦａ）のインビトロ放出を示す。さらなる詳細については実施例４を参照されたい。
【図４】図４は、本発明のポリマー−脂質またはポリマー−リピドイド製剤の網膜下注射後２４時間目の、ラットの目へのＰｐＬｕｃ  ｍＲＮＡ（配列番号：１９）の網膜下注射の走査レーザー検眼鏡（ＳＬＯ）解析の結果を示し、相対発光量（ＲＬＵ）で表示している。注射レジメンおよびさらなる詳細については実施例５を参照されたい。
【図５】図５は、ＨＡ−ｍＲＮＡの本発明のポリマー−リピドイド製剤を用いたＨＡ−ｍＲＮＡ（Ｒ２５６４，配列番号：１７）または「裸の」ＨＡ−ｍＲＮＡ単独でのＢａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝８）の筋肉内ワクチン接種後に誘導されたＨＡタンパク質（ヘマグルチニン）に対する抗体の力価を示す。各点は個々の動物を表し、横線は中央値を表す。さらなる詳細については実施例６を参照されたい。
【図６】図６は、非ＣＶＣＭ／ＰＢ８３ポリマーを用いたｍＲＮＡ構築物Ｒ２８５１でトランスフェクトしたＡ５４９細胞におけるＧｐＬｕｃタンパク質発現を示す。
【図７Ａ】図７Ａは、非ＣＶＣＭ／ＰＢ８３ポリマーを用いたｍＲＮＡ構築物Ｒ２８５１でトランスフェクトしたＢＨＫ細胞および分化Ｓｏｌ８細胞におけるＧｐＬｕｃタンパク質発現を示す。
【図７Ｂ】図７Ｂは、非ＣＶＣＭ／ＰＢ８３ポリマーを用いたｍＲＮＡ構築物Ｒ２８５１でトランスフェクトしたＢＨＫ細胞および分化Ｓｏｌ８細胞におけるＧｐＬｕｃタンパク質発現を示す。
【図７Ｃ】図７Ｃは、非ＣＶＣＭ／ＰＢ８３ポリマーを用いたｍＲＮＡ構築物Ｒ２２４４でトランスフェクトしたＨｅＬａ細胞におけるＰｐＬｕｃタンパク質発現を示す。
【図８】図８は、ｍＲＮＡ構築物Ｒ２８５１でトランスフェクトしたＨｅｐ  Ｇ２細胞におけるＧｐＬｕｃタンパク質発現を示す。
【図９】図９は、硝子体内注射の際のＰｐＬｕｃタンパク質発現を示す。
【図１０】図１０は、いろいろなポリマー／脂質組成物を用いて製剤化したｍＲＮＡ構築物Ｒ２８５１でトランスフェクトしたＡ５４９細胞におけるＧｐＬｕｃタンパク質発現を示す。
【図１１Ａ】図１１Ａは、ペグ化脂質を用いて製剤化したｍＲＮＡ構築物Ｒ２８５１でトランスフェクトしたＡ５４９細胞におけるＧｐＬｕｃタンパク質発現を示す。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、ペグ化脂質を用いて製剤化したｍＲＮＡ構築物Ｒ２８５１でトランスフェクトしたＡ５４９細胞におけるＧｐＬｕｃタンパク質発現を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
発明の詳細な説明
特に定義していない限り、または具体的な状況においてそうでないことが必要とされない限り、本明細書で用いる技術用語はすべて、該当する技術分野の当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。
【００３８】
本文中においてそうでないことが示されていない、または必要とされない限り、“ｃｏｍｐｒｉｓｅ（〜を含む）」、“ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ”および“ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ”という語ならびに類似表現は、本説明および特許請求の範囲において包含的および包括的な意味で、“ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ、ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ（限定されないが、〜を含む）”と解釈されたい。
【００３９】
表現「一実施形態（“ｏｎｅ  ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ」、“ａｎ  ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ”）、「具体的な一実施形態」などは、特定の特色、特性もしくは特徴、または特色、特性もしくは特徴の特定の群もしくは組合せ（それぞれの表現の組合せで言及されている場合）が本発明の実施形態の少なくとも１つに存在していることを意味する。本説明全体の種々の箇所におけるこのような表現の存在は必ずしも同じ実施形態に言及しているのではない。さらに、該特定の特色、特性または特徴は、１つ以上の実施形態において任意の適当な様式で合わされていてもよい。
【００４０】
単数形“ａ”、“ａｎ”および“ｔｈｅ”は、本文中にそうでないことを明示していない限り、複数に対する言及を包含していると理解されたい。
【００４１】
数に関するパーセンテージは、それぞれの対象物の総数に対するものであると理解されたい。他の場合では、本文中に特に記載のない限り、パーセンテージは重量基準のパーセンテージ（ｗｔ．−％）であると理解されたい。
【００４２】
第１の態様において、本発明により、カチオン性のペプチドまたはポリマー、カチオン性のリピドイド化合物および核酸化合物を含む組成物を提供する。
【００４３】
本発明との関連において、「組成物」は、明記された成分が、任意選択で任意のさらなる構成成分とともに組み込まれたものであり得る任意の型の組成物をいう。したがって、組成物は、乾燥組成物、例えば粉末もしくは顆粒、または固形単位、例えば凍結乾燥形態もしくは錠剤であり得る。あるいはまた、組成物は液状形態であってもよく、各構成成分が、溶解または分散された（例えば、懸濁もしくは乳化された）形態で独立して組み込まれたものであり得る。好ましい実施形態の一例では、組成物は、滅菌された固形組成物、例えば、水性液状担体を用いて再構成するための粉末剤または凍結乾燥形態として製剤化される。また、かかる製剤は、以下にさらに詳細に説明する核酸カーゴを含むバージョンの組成物にも好ましい。
【００４４】
本明細書で用いる場合、「化合物」は、本質的に同じ化学構造および特性を有する分子からなる物質である化学物質を意味する。より小さい分子化合物では、該分子は典型的には、原子組成および構造的配置に関して同一である。高分子化合物またはポリマー化合物では、化合物の分子は非常に類似しているが、必ずしもそのすべてが同一というわけではない。例えば、５０個のモノマー単位からなると表記されているポリマーセグメントは、例えば４８個または５３個のモノマー単位を有する個々の分子もまた含むものであり得る。
【００４５】
本明細書で用いる場合、ペプチドは、ペプチド結合またはアミド結合によって連結された複数のアミノ酸モノマーを含む化合物である。また、ペプチドのサイズに応じて、これはオリゴペプチドまたはポリペプチドと称される場合もあり得る。原則的に、タンパク質はポリペプチドでもある。
【００４６】
ポリマーは、本発明との関連において、分子が複数の反復サブユニットで構成された化合物である。ポリマーは、異なるサブユニットを主体とするもの、例えばコポリマーであってもよい。
【００４７】
リピドイド化合物（単にリピドイドとも称する）は脂質様化合物、すなわち脂質様の物性を有する両親媒性化合物である。リピドイド化合物は好ましくは、２個以上のカチオン性窒素原子および少なくとも２つの親油性尾部を含む化合物である。多くの慣用的なカチオン性脂質とは対照的に、該リピドイド化合物は、加水分解性連結基、特に、加水分解性のエステル、アミドまたはカルバメート基を含む連結基がないものであり得る。該リピドイドのカチオン性窒素原子はカチオン化可能もしくは永久的にカチオン性であり得るか、または両方の型のカチオン性窒素が該化合物中に存在し得る。
【００４８】
具体的な状況から異なる意味が明白でない限り、用語「カチオン性の」は、それぞれの構造が、永久的であるか、または永久的ではないが特定の条件、例えばｐＨに応答するかのいずれかの正電荷を有することを意味する。したがって、用語「カチオン性の」は「永久的にカチオン性の」および「カチオン化可能な」の両方を包含している。
【００４９】
本明細書で用いる場合、「永久的にカチオン性の」は、それぞれの化合物または基もしくは原子が、その環境の任意のｐＨ値または水素イオン活性において正電荷を有することを意味する。典型的には、正電荷は第４級窒素原子の存在の結果によるものである。化合物が複数のかかる正電荷を担持している場合、これを永久的にポリカチオン性（これは永久的にカチオン性のサブカテゴリーである）と称する場合があり得る。
【００５０】
これとの関連において、接頭語「ポリ−」は、化合物内のそれぞれの特性を有する複数の原子または基をいう。丸括弧内に記載の場合、複数の存在は任意選択である。例えば、（ポリ）カチオン性はカチオン性および／またはポリカチオン性を意味する。しかしながら、接頭語がないことは、例えば複数を排除していると解釈されるべきでない。例えば、ポリカチオン性化合物とはカチオン性化合物でもあり、これに言及している場合があり得る。
【００５１】
「カチオン化可能な」とは、化合物または基もしくは原子が、その環境の低ｐＨにおいては正電荷を有し、高ｐＨにおいては電荷を有しないことを意味する。また、ｐＨ値が測定できない非水性環境では、カチオン化可能な化合物、基または原子は、高水素イオン濃度において正電荷を有し、水素イオンが低濃度または低活性では電荷を有しない。これは、カチオン化可能またはポリカチオン化可能な化合物の個々の特性、特に、それぞれのカチオン化可能な基または原子のｐＫａ（このときのｐＨまたは水素イオン濃度において、該基または原子は荷電または非荷電である）に依存する。希薄水性環境では、正電荷を有するカチオン化可能な化合物、基または原子の割合が、当業者によく知られたいわゆるヘンダーソン・ハッセルバルヒの式を用いて推定され得る。
【００５２】
例えば、化合物または部分がカチオン化可能である場合、これは、約１〜９、好ましくは４〜９、５〜８またはさらには６〜８のｐＨ値、より好ましくは９未満、８未満、７未満のｐＨ値、最も好ましくは生理学的ｐＨ値、例えば約７．３〜７．４、すなわち生理学的条件下、特にインビボ細胞の生理学的塩条件下において正電荷を有することが好ましい。
【００５３】
具体的な状況から異なる意味が明白でない限り、「カチオン化されている」とは、典型的には、カチオン化可能な構造が、例えば中性の生理学的環境における塩基性アミノ酸、例えばアルギニンの場合のように、実際に正電荷を有しているという状態であることを意味する。
【００５４】
少なくとも１つのカチオン性部分Ｐを含むカチオン性化合物のジスルフィド結合型多量体の場合のような、化合物の「多量体」は、第１の化合物の少なくとも２つの単位を含み、その多量体である化合物であると理解されたい。これは、第１の化合物がすでに複数の反復単位を含むものであるか否かに無関係である。
【００５５】
−ＳＨ基はスルフヒドリル基を意味する。
【００５６】
本発明は、リピドイドとカチオン性のペプチドまたはポリマーの組合せが複合体形成および細胞内への核酸の送達において、予想外の度合の耐容性で非常に有効であるという知見に基づいたものである。より詳しくは、本発明者らは、かかる組合せが、細胞内にカーゴを送達するための有効性に関して担体成分（すなわち、リピドイドおよびポリマーまたはペプチド）の相加効果を示すが、毒性に関しては相加効果が全くないか、驚くほどほんの少しであることを見出した。
【００５７】
好都合には、該カチオン性のペプチドまたはポリマーは、そのペプチドまたはポリマー含有量をかなり多様にすることが可能であり、したがって、その生物理学的／生化学的特性をかなり容易にモジュレートする可能であり、例えば、種々の型のカチオン性の、またはカチオン化可能なペプチド、タンパク質またはポリマーを組み込むことが可能であり、任意選択で他の成分、例えば他のアミノ酸成分が付加される。
【００５８】
また、さらに少ない量の該リピドイド（該カチオン性のペプチドもしくはポリマーの量に対して、および／または該核酸化合物に対して）で、該組成物の望ましくない効果または毒性を実質的に増大させることなく核酸カーゴの細胞送達を向上させることが可能であるという観察結果は非常に驚くべきことである。本発明は、例えばＲＮＡの送達および細胞のトランスフェクションに提案されている、リポフレックスまたは脂質ナノ粒子に使用される脂質の典型的な量の約０．１〜約１０％という少ない量で実施され得る。理論に拘束されることを望まないが、本発明者らは、リピドイドがこのような少量であることが本発明の組成物の高い耐容性を得るのに極めて重要であったと思っている。
【００５９】
該カチオン性のペプチドまたはポリマーは、アミノ酸であってもそうでなくてもよいモノマー単位を主体とする任意の永久的にカチオン性の、またはカチオン化可能な化合物であり得る。該カチオン性のペプチドまたはポリマーは、例えば、核酸化合物と複合体を形成する能力を有することが一般に知られているカチオン性のペプチドまたはポリマーから選択され得る。
【００６０】
一実施形態では、該カチオン性のペプチドまたはポリマーは、プロタミン、ヌクレオリン、オリゴ−またはポリリシン、オリゴ−またはポリアルギニン、細胞膜透過ペプチド、キメラＣＰＰ、トランスポータン、ＭＰＧペプチド、ＨＩＶ結合ペプチド、Ｔａｔ、ＨＩＶ−１  Ｔａｔ、Ｔａｔ由来ペプチド、ペネトラチンファミリーの構成員、ペネトラチン、Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａ由来ペプチド、ｐＡｎｔｐ、ｐＩｓｌ、抗菌薬由来ＣＰＰ、ブフォリン−２、Ｂａｃ７１５−２４、ＳｙｎＢ、ＳｙｎＢ（１）、ｐＶＥＣ、ｈＣＴ由来ペプチド、ＳＡＰ、ＭＡＰ、ＫＡＬＡ、ＰｐＴＧ２０、ＦＧＦ、ラクトフェリン、ヒストン、ＶＰ２２、ＶＰ２２由来ペプチド、ＨＳＶ、タンパク質形質導入ドメイン、ＰｐＴ６２０、プロリンリッチペプチド、アルギニンリッチペプチド、リシンリッチペプチド、Ｐｅｐ−１、カルシトニンペプチド、β−アミノ酸、逆（ｒｅｖｅｒｓｅｄ）ポリアミド、ポリ（Ｎ−エチル−４−ビニルピリジニウムブロミド）、ポリ（ジメチルアミノエチルメチルアクリレート）、ポリ（アミドアミン）、ポリβアミノエステル、ジアミン修飾型１，４−ブタンジオールジアクリレート−コ−５−アミノ−１−ペンタノールポリマー、ポリプロピルアミンデンドリマー、ｐＡＭＡＭベースのデンドリマー、ポリイミン、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（プロピレンイミン）、ポリアリルアミン、１，５−ジメチル−１，５−ジアザウンデカメチレンポリメトブロミド、臭化ヘキサジメトリン、カチオン性多糖、カチオン性のシクロデキストリンベースのポリマー、カチオン性のデキストランベースのポリマー、キトサン、シラン主鎖ベースのポリマー、ＰＭＯＸＡ−ＰＤＭＳコポリマー、１つ以上のカチオン性ブロックと１つ以上の中性ブロックのブロックコポリマーから選択される。
【００６１】
一実施形態では、該カチオン性のペプチドまたはポリマーは天然ペプチドから選択される。天然とは、ペプチドが自然によって、すなわち生存生物によって産生されるものであることを意味する。また、もちろん、天然ペプチドは化学合成されたものであってもよいものの、それは、天然に存在しているペプチドである。任意選択で、天然ペプチドは化学修飾されていてもよい。
【００６２】
本発明の組成物に選択される天然のカチオン性ペプチドは、例えば細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）群の構成員であり得る。多くのＣＰＰは、塩基性アミノ酸リッチ、例えばリシンまたはアルギニンリッチのアミノ酸組成を有する。
【００６３】
一実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、ＴＡＴ由来ペプチド（ＴＡＴは「転写のトランス活性化因子」を意味する）のシステイン無含有バージョンの群のもの、例えばＴＡＴまたはＨＩＶ１−ＴＡＴ、Ｔａｔ−ＡＩＥドット（ｄｏｔ）、ＴＡＴ（４７〜５７）、ＴＡＴ（４９〜５７）、ＴＡＴ（４８〜６０）、Ｒ９−ＴＡＴ、Ｔａｔ−ＧＦＰ−Ｔａｔ、Ｔａｔ−ＧＦＰ、６Ｈｉｓ−ＴＡＴ−Ａｉｎｐ１、６Ｈｉｓ−ＴＡＴ−ＧＦＰ、６ｘＨｉｓ−ＴＡＴ−ＳＯＤ、ＴＡＴ−ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ｐＴａｔ、ＥＧＦＰ−ＴＡＴ、Ｔａｔ−Ｄｅｘ、Ｔａｔ−ＰＣＰ、Ｐ４２−ＴＡＴである。
【００６４】
別の実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａ由来ペプチド群のもの（ペネトラチンファミリーまたはｐＡｎｔｐとしても知られている）、例えばｐＡｎｔｐ４３〜５８である。
【００６５】
さらなる一実施形態では、細胞膜透過ペプチドは、ｈＣＴ由来ペプチド、例えばｈＣＴ９−３２、ｈＣＴ１２−３２、ｈＣＴ１５−３２、ｈＣＴ１８−３２、ｈＣＴ２１−３２から選択される。潜在的に対象のさらなる細胞膜透過ペプチド群は、ヒストン群、例えばＨ２ＡまたはＨ４である。
【００６６】
さらなる一実施形態によれば、細胞膜透過ペプチドは抗菌薬由来カチオン性ＣＰＰ、例えばブフォリン−２、マガイニンＩＩ、セクロピン、アンドロピン、モリシン、セラトトキシン、メリチン、ボンビニン、ブレビニン−１、エスクレチン、ＣＡＰ１８、ＬＬ３７、Ｂａｃ７１５−２４／ＢＡＣ７１５−２４、Ｂａｃ１−７、Ｂａｃ１−１５、Ｂａｃ１−１７、Ｂａｃ１−２４、Ｂａｃ５−２４、Ｂａｃ７−２４、Ｂａｃ９−２４、Ｂａｃ１１−２４、Ｂａｃ１３−２４、Ｂａｃ１５−２４、ＳｙｎＢ１、ＳｙｎＢ３、ＳｙｎＢ５、デルマセプチンＳ４、アバエシン、アピダエシン、プロフェニンまたはインドリシジンである。
【００６７】
任意選択で、ＣＰＰは、トランスポータンファミリーのシステイン無含有構成員である。
【００６８】
任意選択で、ＣＰＰはキメラペプチドまたは合成修飾ペプチド、例えばＭＰＧペプチドファミリーの構成員、例えばＭＰＧ−ＮＬＳ、ＥＧＦＰ−ＭＰＧ、ＭＰＧα、ＭＰＧβ；またはビオチニル−ペネトラチン、ＰＡＦ２６、ＰＡＦ９５、ＰＡＦ９６、ＣＲＧＤＫ、Ｐ２８、ＲＡＬＡペプチド、ＲＴＡＴ−ＥＬＰＢＣ、ＧＳＴ−（ＨＥ）１２ＥＦＧ５−ＴＡＴ、ＦａｂＲｅｖ１−Ｔａｔ、Ｇ３Ｒ６ＴＡＴ、ＭＡＰ、Ｐｅｐ−１、ｐｐＴＧ、ｐｐＴＧ１、ｐｐＴＧ２０、ＥＧＦＰ−ｐｐＴＧ２０；またはＭＰＧ、ＫＬＡ−ＴＡＴ（４７〜５７）もしくはＴａｔＬＫ１５である。
【００６９】
別の実施形態によれば、該カチオン性のペプチドまたはポリマーは、天然に存在していることが知られていない合成ペプチドまたはオリゴ−もしくはポリ（アミノ酸）からなる群のものである。好ましい合成ペプチドは、２〜約５０個のアミノ酸残基またはより好ましくは約５〜約３０個のアミノ酸残基で構成されており、塩基性アミノ酸リッチ、例えばアルギニン、リシン、ヒスチジン、および／またはオルニチンリッチである化合物である。好ましくは、該カチオン性のペプチドのアミノ酸残基の少なくとも約５０％が該塩基性アミノ酸である。
【００７０】
任意選択で、該カチオン性のペプチドは完全に、または大部分が特定の１種類の塩基性アミノ酸で構成されたもの、例えば約５〜約３０個のＡｒｇ、Ｌｙｓ、ＨｉｓまたはＯｒｎのセグメント、例えば
2019517553.tif 000006
である。
【００７１】
他の有用なペプチドは、以下の例の場合のような、２種類以上の異なる塩基性アミノ酸で構成されたものであり、この例は、配列組成を示すことを意図しており、アミノ酸残基が存在する特定の順序を指定するものではない：
2019517553.tif 000007
2019517553.tif 000008
2019517553.tif 000009
【００７２】
さらに、該カチオン性のペプチド内に、１個以上の親水性アミノ酸残基を該塩基性アミノ酸とともに組み込むことが有用であり得る。この目的に有用な親水性アミノ酸の中でも、電荷を有しない極性側鎖を有するもの、特にＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｓｎおよび／またはＧｌｎが好ましい。かかるアミノ酸またはこのようなアミノ酸リッチの配列の組込みにより、核酸カーゴに対するより柔軟な結合が可能になる。これにより、核酸カーゴのより有効なコンパクト化がもたらされ得、したがって、ヌクレアーゼおよび不要な脱コンパクト化に対するより良好な保護がもたらされ得る。また、担体全体において低カチオン性電荷を示す担体を提供することが可能になり、この状況では、所望の場合または必要に応じて、より良好に調整された結合特性が可能になる。
【００７３】
該カチオン性部に組み込まれる有用な部分配列の例としては、以下のもの：Ｓｅｒ−Ｔｈｒ、Ｔｈｒ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ、Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、Ｇｌｎ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ、Ｇｌｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ、Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ｓｅｒ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ、Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、またはＡｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎなどが挙げられる。かかる配列は、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５回またはさらにはそれ以上の回数反復されていてもよく、互いに適切に結合されていてもよい。
【００７４】
任意選択で、親水性アミノ酸リッチの配列に、Ｓｅｒ、ＴｈｒおよびＡｓｎの長鎖配列の構造切断体としての機能を果たし得る少なくとも１個のプロリンを含めてもよい。また、２個、３個またはそれ以上のプロリンを、特に長鎖配列に組み込んでもよい。
【００７５】
さらに、該カチオン性のペプチド内に、１個以上の親油性アミノ酸、特に、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、および／またはＭｅｔを組み込むことが有用であり得る。かかる親油性アミノ酸は、該カチオン性のペプチドと核酸カーゴが結合したら形成される複合体に関与できるものであり得る。
【００７６】
親油性アミノ酸の使用により、該核酸のより強いコンパクト化が可能になる。これは、該親油性アミノ酸と該核酸カーゴの特定の相互作用によって該担体（１種類または複数種）と該カーゴ間で形成される複合体のさらなる安定性がもたらされることによるものであり得る。この安定化は、ポリマー鎖同士の非共有結合性会合または架橋と同様であり得る。特に、水性環境では、この型の相互作用は典型的には強力であり、有意な効果をもたらす。
【００７７】
有用な部分配列の例としては、Ｌｅｕ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｉｌｅ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｉｌｅ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅ、Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｍｅｔ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｍｅｔ、Ｍｅｔ−Ｍｅｔ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｍｅｔ、Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｌａ、Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｍｅｔ、またはＭｅｔ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔなどが挙げられる。かかる配列は、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５回またはそれ以上の回数反復されていてもよく、互いに結合されていてもよい。任意選択で、親油性アミノ酸リッチの配列に、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａおよび／またはＭｅｔの長鎖配列の構造切断体としての機能を果たし得る少なくとも１個のプロリンを含めてもよい。また、２個、３個またはそれ以上のプロリンを、特に長鎖配列に組み込んでもよい。
【００７８】
該カチオン性のペプチドの特性は、その配列内に非天然アミノ酸を含めることにより、または該ペプチドの化学修飾によってさらにモジュレートされ得る。例えば、特定の化学基が導入され得る。かかる基は例えば、例えば、アミド形成（例えば、カルボン酸、スルホン酸、アミンなどとの反応による）によって、マイケル付加（例えば、マレインイミド（ｍａｌｅｉｎｉｍｉｄｅ）部分、α，β不飽和（ｕｎｓａｔｕｒｅｄ）カルボニルなどを使用）によって、クリックケミストリー（例えば、アジドもしくはアルキンを使用）によって、アルケン／アルキンのメタセシス（ｍｅｔｈａｔｅｓｉｓ）（例えば、アルケンもしくはアルキンを使用）、イミンもしくはヒドロゾン（ｈｙｄｒｏｚｏｎｅ）の形成（アルデヒドもしくはケトン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、アミンを使用）、複合体化反応（アビジン、ビオチン、プロテインＧなどを使用）あるいはＳｎ−型置換反応（例えば、ハロゲンアルカン、チオール、アルコール、アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、スルホン酸エステル、オキシホスホニウム塩との）を可能にする成分またはさらなる成分の結合に使用され得る他の化学部分によって、さらなる成分またはリガンドの結合が可能となるように選択され得る。
【００７９】
別の実施形態では、該カチオン性のペプチドまたはポリマーは、天然、合成または半合成のポリマーから選択される。好ましくは、該ポリマーは、約０．５ｋＤａ〜約２０ｋＤａ、例えば、それぞれ約０．５ｋＤａ〜約１１．５ｋＤａ、または約１ｋＤａ〜約１０ｋＤａ、または約０．１ｋＤａ〜約８ｋＤａ、または約０．１ｋＤａ〜約６ｋＤａ、または約０．１ｋＤａ〜約５ｋＤａ、または約０．５ｋＤａ〜約５ｋＤａ、または約０．３ｋＤａ〜約２０ｋＤａ、または約０．３ｋＤａ〜約１０ｋＤａ、または約０．４ｋＤａ〜約１０ｋＤａ、または約０．５ｋＤａ〜約１０ｋＤａ、または約０．５ｋＤａ〜約７．５ｋＤａ、または約０．５ｋＤａ〜約４ｋＤａ、または約０．５ｋＤａ〜約３ｋＤａ、または約０．６７ｋＤａ〜約２．７ｋＤａの分子量を示すものである。
【００８０】
一実施形態では、該カチオン性のポリマーは任意選択で修飾されているポリアクリレート、キトサン、ポリエチレンイミン、ポリアミン、ポリアミノエステルもしくはポリアミドアミンまたはその任意のコポリマーである。
【００８１】
具体的な好ましいカチオン性のポリマーとしては、例えば、修飾ポリアミノ酸、例えばβ−アミノ酸−ポリマーもしくは逆ポリアミド；修飾ポリエチレン、例えば（ポリ（Ｎ−エチル−４−ビニルピリジニウムブロミド））（ＰＥＶＰ）など；修飾アクリレート、例えば（ポリ（ジメチルアミノエチルメチルアクリレート））（ｐＤＭＡＥＭＡ）など；修飾アミドアミン、例えば（ポリ（アミドアミン））（ｐＡＭＡＭ）など；修飾ポリβアミノエステル（ＰＢＡＥ）、例えばジアミン末端修飾１，４ブタンジオールジアクリレート−コ−５−アミノ−１−ペンタノールポリマーなど；デンドリマー、例えばポリプロピルアミンデンドリマーもしくはｐＡＭＡＭベースのデンドリマーなど；ポリイミン（１種類もしくは複数種）、例えばポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩあるいはｐＥＩ）、ポリ（プロピレンイミン）など；ポリアリルアミン、（１，５−ジメチル−１，５−ジアザウンデカメチレンポリメトブロミド、または臭化ヘキサジメトリンが挙げられる。
【００８２】
また、カチオン性多糖、すなわち、糖主鎖ベースのポリマー、例えばシクロデキストリンベースのポリマー、デキストランベースのポリマー、キトサンなど；シラン主鎖ベースのポリマー、例えばＰＭＯＸＡ−ＰＤＭＳコポリマーなど；ならびに１個以上のカチオン性ブロック（例えば、上記のカチオン性のポリマーから選択されるもの）と１個以上の親水性または疎水性のブロック（例えば、ポリエチレングリコール）の組合せからなるブロックポリマーも好ましい。
【００８３】
好ましい実施形態の一例では、該カチオン性のペプチドまたはポリマーは、ジスルフィド結合を形成し得る少なくとも１個の−ＳＨ基を有する少なくとも１つのカチオン性部分Ｐまたはそのジスルフィド結合型多量体を含むカチオン性化合物であり、ここで、部分Ｐは、約０．５ｋＤａ〜約３０ｋＤａの分子量を有するポリマー部分または約３〜約１００個のアミノ酸で構成されたペプチド部分（ここで、該ペプチド部分のアミノ酸の総数の少なくとも１０％はアルギニン（Ａｒｇ）、リシン（Ｌｙｓ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）および／またはオルニチン（Ｏｒｎ）から選択される塩基性アミノ酸である）のいずれかである。
【００８４】
一実施形態では、該カチオン性化合物のカチオン性部分Ｐは３〜１００個のアミノ酸で構成されたペプチド部分であり、ここで、該ペプチド部分のアミノ酸の総数の少なくとも１０％は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓおよび／またはＯｒｎから選択される塩基性アミノ酸である。かかるペプチドの例は例えばＷＯ２０１２／０１３３２６に開示されており、その開示内容はその全体が本明細書に組み込まれる。
【００８５】
これとの関連において、「塩基性アミノ酸」は生理学的環境においてカチオン化されるアミノ酸、あるいは、より厳密には、その分子の大部分が、比較的中性ｐＨ、例えば細胞外体液の生理学的ｐＨで正味の正電荷を有するアミノ酸である。これはＡｒｇ、Ｌｙｓ、ＨｉｓおよびＯｒｎの場合である。
【００８６】
Ｐがペプチド部分である場合、Ｐの「ジスルフィド結合型多量体」は、少なくとも２分子のペプチドＰ間の少なくとも１つのジスルフィド結合の形成の結果、生じるペプチドまたはタンパク質を意味する。例えば、２分子のペプチドＰは、例えば長鎖のペプチド鎖を形成するために１つのジスルフィド結合によって連結させてもよく；または例えば、ジスルフィド結合の形成に関与する−ＳＨ基の位置に応じて環式ペプチド、長鎖ペプチド鎖またはさらに別の構造を形成するために２つのジスルフィド結合によって連結させてもよい。また、２つより多くのペプチドＰによるジスルフィド結合型多量体は、Ｐの性質および形成されたジスルフィド結合に応じて種々の異なる形状を有し得る。組成物が２種類以上の異なるペプチドＰを含む場合、該多量体は、同一の分子間または異なる分子間のジスルフィド結合の結果、生じるものとなり得る。
【００８７】
好ましくは、部分Ｐとして選択されるペプチド部分は、約３〜約５０個のアミノ酸、より好ましくは約７〜約３０個のアミノ酸または約３〜約２５個のアミノ酸の長さを有するものである。また、約３〜約２０個のアミノ酸、または約５〜約２０個のアミノ酸、または約７〜約３０個のアミノ酸、または約６〜約１８個のアミノ酸、または約７〜約１７個のアミノ酸、例えば約５〜約１５個のアミノ酸の範囲の長さも好ましい。
【００８８】
典型的には、部分Ｐとして選択されるペプチド部分は、約０．３ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、特に、約０．５ｋＤａ〜約３０ｋＤａ、または約０．６ｋＤａ〜約１０ｋＤａ、または約０．８ｋＤａ〜約５ｋＤａ、例えば約１ｋＤａ〜約３ｋＤａの範囲の分子量を有するものである。
【００８９】
かかるペプチド部分の−ＳＨ基（１個または複数）は、Ｐであるペプチド配列内の任意のアミノ酸残基の化学修飾によって、アミノ酸ではないがスルフヒドリル基を含む構造単位の組込みによって、および／またはかかる−ＳＨ基を含む１個以上のアミノ酸、例えばシステイン（Ｃｙｓ）によってもたらされ得る。好ましい実施形態の一例では、Ｐであるペプチド部分の−ＳＨ基のうちの少なくとも１個がＣｙｓによってもたらされる。別の実施形態では、Ｐの実質的にすべての−ＳＨ基がＣｙｓ残基によってもたらされる。例えば、Ｐは、Ｃｙｓによってもたらされた１個の−ＳＨ基を含むものであってもよく、ともにＣｙｓによってもたらされた２個の−ＳＨ基を備えているものであってもよい。
【００９０】
好ましいさらなる一実施形態では、部分Ｐは、７〜３０個のアミノ酸で構成されており、該少なくとも１個の−ＳＨ基がＣｙｓ残基によりもたらされたものであるペプチド部分である。また、この実施形態において、１個または２個の−ＳＨ基を含み、その−ＳＨ基の各々がＣｙｓによってもたらされたものであるペプチド部分も好ましい。さらに、かかるペプチド部分は、例えば線状ペプチド配列の場合のように２つの末端部を有するものであってもよく、Ｃｙｓ残基が該末端部のうちの１つまたはその付近に位置し得る。また、２つの末端部および少なくとも２個のＣｙｓ残基を有し、該Ｃｙｓ残基のうちの少なくとも１つが該末端部の各々もしくはその付近に位置するかかるペプチド部分も好ましい。
【００９１】
Ｐとして選択されるペプチド部分内の塩基性アミノ酸の含有量は該ペプチド配列のアミノ酸の総数の少なくとも１０％、好ましくはそれより多い、例えば、それぞれ少なくとも約２０％、または少なくとも約３０％、または少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％、または少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％である。また、塩基性アミノ酸の含有量は、ペプチドの長さに鑑みて、該ペプチドは典型的には、ジスルフィド結合を形成し得る−ＳＨ基を有する少なくとも１個、より好ましくは少なくとも２個の残基、例えばシステイン残基または例えば−ＳＨ基を有するように修飾された他のアミノ酸の組込みも必要とするということを考慮して選択され得る。好ましい実施形態の一例では、該ペプチド内の塩基性アミノ酸の数は、該ペプチドのアミノ酸の総数より２〜５個少ない、特に、該アミノ酸総数より２〜４個少ない、例えばＰのアミノ酸総数より２個または３個少ない。特定の一実施形態では、該ペプチドは、２個のＣｙｓと、それ以外は塩基性アミノ酸のみで構成されている。
【００９２】
Ｐとして選択されるペプチド部分は、塩基性アミノ酸リッチである既知のペプチドまたはタンパク質に由来するコア配列を含むものであってもよい。これとの関連において、「由来する」とは、Ｐが、由来する該既知のペプチドには存在しないさらなるアミノ酸、例えば、ジスルフィド結合の形成能に必要とされるもの、例えばＣｙｓを含んでいてもよいことを意味する。塩基性アミノ酸リッチのかかる既知のペプチドの例としては、プロタミン、ヌクレオリン、スペルミンまたはスペルミジン、オリゴ−またはポリ−Ｌ−リシン（ＰＬＬ）、塩基性ポリペプチド、オリゴ−またはポリアルギニン、細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）、キメラＣＰＰ、例えばトランスポータン、またはＭＰＧペプチド、ＨＩＶ結合ペプチド、Ｔａｔ、ＨＩＶ−１  Ｔａｔ（ＨＩＶ）、Ｔａｔ由来ペプチド、ペネトラチンファミリーの構成員、例えば、ペネトラチン、Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａ由来ペプチド（特に、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａのもの）、ｐＡｎｔｐ、ｐＩｓｌなど、抗菌薬由来ＣＰＰ、例えば、ブフォリン−２、Ｂａｃ７１５−２４、ＳｙｎＢ、ＳｙｎＢ（１）、ｐＶＥＣ、ｈＣＴ由来ペプチド、ＳＡＰ、ＰｐＴＧ２０、ＦＧＦ、ラクトフェリン、ヒストン、ＶＰ２２由来またはアナログペプチド、ＨＳＶ、ＶＰ２２（単純ヘルペス）、ＭＡＰ、ＫＡＬＡまたはタンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ、ＰｐＴ６２０、プロリンリッチペプチド、アルギニンリッチペプチド、リシンリッチペプチド、Ｐｅｐ−１、Ｌ−オリゴマー、カルシトニンペプチド（１種類もしくは複数種）が挙げられる。
【００９３】
好ましい実施形態の一部のものでは、Ｐとして選択されるペプチド部分が、完全に、または大部分が特定の１種類の塩基性アミノ酸で構成されたコア配列、例えば約５〜約３０個のＡｒｇ、Ｌｙｓ、ＨｉｓまたはＯｒｎのセグメント、例えば
2019517553.tif 000010
を含むものである。
【００９４】
表現「コア配列」は、１個以上のさらなるアミノ酸、特に−ＳＨ基を示すアミノ酸、例えばシステインがそれぞれのコア配列外のペプチド内に存在していてもよいことを意味する。他の有用なコア配列は、以下の例の場合のような、２種類以上の異なる塩基性アミノ酸で構成されたものであり、この例は、配列組成を示すことを意図しており、アミノ酸が存在する特定の順序を指定するものではない：
2019517553.tif 000011
2019517553.tif 000012
2019517553.tif 000013
【００９５】
記載のように、これらはコア配列であり、かかるペプチド性部分Ｐの完全ペプチド配列に、さらに、ジスルフィド結合を形成し得る少なくとも１個の−ＳＨ基を含めてもよい。Ｃｙｓは、かかる−ＳＨ基を担持しているペプチド内の好ましい部分の一例である。したがって、上記に示したコア配列は好ましくは少なくとも１個のＣｙｓ、例えば１個または２個のＣｙｓをさらに含むペプチド部分の一部分であり、ここで、該１個または２個のＣｙｓ残基は、該末端部のうちの１つまたはそれぞれ該ペプチドの各末端部に位置している。部分Ｐとして選択されるかかる特に好ましい配列としては、以下のもの：
2019517553.tif 000014
【００９６】
もちろん、Ｐとして選択される異なるペプチド部分を有する上記のような２種類以上の異なるカチオン性化合物を組成物に含めること、またはペプチド部分Ｐを後述する式Ｉの化合物と結合させることも本発明の範囲に含まれる。
【００９７】
さらに、組成物にカチオン性のペプチド部分Ｐを、Ｐの規定に含まれないが、担体系の、または本発明の組成物をカーゴ物質、例えば核酸と結合させると形成される複合体の物理的、化学的または生物学的特性をモジュレートするのに有用であり得る１種類以上の他のペプチドとの組合せで含めてもよい。Ｐの規定に従わないかかる他のペプチド配列は、部分Ｐを含むカチオン性化合物の一部分もしくはそのジスルフィド結合型多量体の一部分であり得るか、または別個の化合物として本発明の組成物に組み込まれ得る。かかる別個の化合物もまた、例えば、カチオン性部分Ｐを含むカチオン性化合物とジスルフィド結合を形成し得る１個以上の−ＳＨ基を含むものであることが好ましい。
【００９８】
例えば、１個以上の芳香族アミノ酸、例えばＴｒｐ、ＴｙｒまたはＰｈｅを含むペプチドを組み込むことが有用であり得る。もちろん、芳香族アミノ酸を部分Ｐ自体に組み込んでもよい。あるいはまた、かかる芳香族アミノ酸を組成物中に、他のペプチドであるが例えば別の成分と、例えばカチオン性部分Ｐを含む該カチオン性化合物とジスルフィド結合を形成し得る１個以上の−ＳＨ基を含むペプチドの形態で組み込んでもよい。この様式では、芳香族アミノ酸もまた、該担体組成物を核酸カーゴと結合させると形成される複合体に関与する。
【００９９】
芳香族アミノ酸の組込みにより、該アミノ酸（１個または複数）の芳香族構造と該核酸の塩基との相互作用による該担体と核酸カーゴとのさらなる結合が可能になり、これはより安定な複合体に寄与し得る。この結合は、カチオン性基またはカチオン化基と該核酸のリン酸主鎖との相互作用とは異なる。芳香族アミノ酸と核酸の塩基間の相互作用は、例えば、インターカレーションによって、または副溝もしくは主溝への結合によって起こり得る。これは、インビボの細胞外マトリックス中に主にみられるアニオン性複合体形成パートナー（例えば、ヘパリン、ヒアルロン酸）による脱コンパクト化の傾向はなく、また、塩効果に対する感受性も低い。
【０１００】
一部の具体的な実施形態では、組成物は、芳香族アミノ酸リッチであるか、または実質的に芳香族アミノ酸で構成されたコア配列を含む１種類以上のペプチドを含むものである。かかるペプチド内の芳香族アミノ酸は、同一であっても互いに異なっていてもよい。コア配列は好ましくは、ジスルフィド結合の形成能を付与する−ＳＨ基を含む１つまたは、より好ましくは２つの部分、例えばＣｙｓにフランキングされている
【０１０１】
有用なコア配列の例としては、Ｔｒｐ−Ｔｙｒ、Ｔｙｒ−Ｔｒｐ、Ｔｒｐ−Ｔｒｐ、Ｔｙｒ−Ｔｙｒ、Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ、Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ、Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ、Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ、Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ、Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ、Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ、Ｐｈｅ−Ｔｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｔｒｐ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ、Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ、およびＴｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒなどが挙げられる。かかる配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５回またはさらにはそれ以上の回数反復されていてもよい。また、該配列が互いに適切に結合されていてもよい．
【０１０２】
同じく末端Ｃｙｓ残基を含む完全ペプチド配列の例は、例えば：
Ｃｙｓ−Ｔｙｒ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、またはＣｙｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ；
Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、またはＣｙｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓなどである。また、各Ｃｙｓは、遊離−ＳＨ−部分を担持している修飾アミノ酸または化学物質化合物で置き換えられていてもよい。また、該配列、特に２個の末端Ｃｙｓ残基を有するものの組合せ、または例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５回もしくはさらにはそれ以上の回数の反復体であるペプチドを使用してもよい。
【０１０３】
さらに、芳香族アミノ酸リッチのかかるペプチドに、Ｔｒｐ、ＴｙｒおよびＰｈｅの長鎖配列の構造切断体としての機能を果たし得る少なくとも１個のプロリンを含有させてもよい。芳香族アミノ酸配列の長さに応じて、２個、３個またはそれ以上のプロリンを組み込むことが好ましかろう。
【０１０４】
さらに、本発明の組成物中に、１個以上の親水性アミノ酸を含むペプチドを、ペプチド部分Ｐを含む該カチオン性化合物とともに組み込むことが有用であり得る。もちろん、親水性アミノ酸をペプチド部分Ｐ自体に組み込んでもよい。あるいはまた、かかるアミノ酸を組成物中に、この場合も同じく１個以上の−ＳＨ基またはジスルフィド結合を含み、該担体組成物を核酸カーゴと結合させると形成される複合体（例えば、該複合体の特性を修飾するため）に関与できるものであり得る他のペプチドの形態で組み込んでもよい。
【０１０５】
この目的に有用な親水性アミノ酸の中でも、電荷を有しない極性側鎖を有するもの、特にＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｓｎおよび／またはＧｌｎが好ましい。かかるアミノ酸またはこのようなアミノ酸リッチの配列の組込みにより、核酸カーゴに対するより柔軟な結合が可能になる。これにより、核酸カーゴのより有効なコンパクト化がもたらされ得、したがって、ヌクレアーゼおよび不要な脱コンパクト化に対するより良好な保護がもたらされ得る。また、担体全体において低カチオン性電荷を示す担体を提供することが可能になり、この状況では、所望の場合または必要に応じて、より良好に調整された結合特性が可能になる。
【０１０６】
有用なコア配列の例としては、同一かまたは異なる親水性アミノ酸を主体とする配列、例えば以下のもの：Ｓｅｒ−Ｔｈｒ、Ｔｈｒ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ、Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ、Ｇｌｎ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ、Ｇｌｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ、Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ、Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ｓｅｒ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ、Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ、Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ、Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ、Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ、またはＡｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎなどが挙げられる。この場合も、かかる配列は、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５回またはさらにはそれ以上の回数反復されていてもよく、互いに適切に結合されていてもよい。さらに、コア配列は好ましくは、−ＳＨ基を含むかまたはジスルフィド結合を形成するジスルフィド結合の形成能を付与する１個または２個の残基、例えばＣｙｓにフランキングされている。
【０１０７】
同じくかかる末端Ｃｙｓ残基を含む完全ペプチド配列の例はＣｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ、またはＣｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｃｙｓなどである。また、各Ｃｙｓは、ジスルフィド結合に関与する遊離−ＳＨ−部分またはイオウ原子を担持している修飾アミノ酸または化学物質化合物で置き換えられていてもよい。該配列は、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５回またはさらにはそれ以上の回数反復されていてもよく、互いに結合されていてもよい。
【０１０８】
任意選択で、親水性アミノ酸リッチの配列に、Ｓｅｒ、ＴｈｒおよびＡｓｎの長鎖配列の構造切断体としての機能を果たし得る少なくとも１個のプロリンを含めてもよい。また、２個、３個またはそれ以上のプロリンを、特に長鎖配列に組み込んでもよい。
【０１０９】
さらに、本発明の組成物中に、１個以上の親油性アミノ酸、特に、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、および／またはＭｅｔを含むペプチドを、ペプチド部分Ｐを含む該カチオン性化合物とともに組み込むことが有用であり得る。かかる親油性アミノ酸をペプチド部分Ｐ自体に組み込んでもよい。あるいはまた、該アミノ酸を組成物中に、この場合も同じく１個以上の−ＳＨ基またはジスルフィド結合を含み、該担体組成物を核酸カーゴと結合させると形成される複合体に関与できるものであり得る他のペプチドの形態で組み込んでもよい。
【０１１０】
親油性アミノ酸の使用により、該核酸のより強いコンパクト化が可能になる。これは、該親油性アミノ酸と該核酸カーゴの特定の相互作用によって該担体（１種類または複数種）と該カーゴ間で形成される複合体のさらなる安定性がもたらされることによるものであり得る。この安定化は、ポリマー鎖同士の非共有結合性会合または架橋と同様であり得る。特に、水性環境では、この型の相互作用は典型的には強力であり、有意な効果をもたらす。
【０１１１】
有用なコア配列の例としては、同一かまたは異なる親油性アミノ酸を主体とする配列、例えばＬｅｕ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ、Ｉｌｅ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｉｌｅ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅ、Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅ、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｍｅｔ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｍｅｔ、Ｍｅｔ−Ｍｅｔ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｍｅｔ、Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｌａ、Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｍｅｔ、またはＭｅｔ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔなどが挙げられる。かかる配列は、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５回またはそれ以上の回数反復されていてもよく、互いに結合されていてもよい。さらに、コア配列は好ましくは、ジスルフィド結合に関与する−ＳＨ基またはイオウ原子を含む１個または２個の残基、例えばＣｙｓにフランキングされている。
【０１１２】
同じくかかる末端Ｃｙｓ残基を含む完全ペプチド配列の例はＣｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ、またはＣｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ｃｙｓ、Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｃｙｓ、またはＣｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｃｙｓなどである。また、各Ｃｙｓは、遊離−ＳＨ−基を担持しているかまたはかかる−ＳＨ基に由来するジスルフィド結合に関与する修飾アミノ酸または化学物質化合物で置き換えられていてもよい。かかる配列は、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５回またはそれ以上の回数反復されていてもよく、互いに結合されていてもよい。
【０１１３】
任意選択で、親油性アミノ酸リッチの配列に、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａおよび／またはＭｅｔの長鎖配列の構造切断体としての機能を果たし得る少なくとも１個のプロリンを含めてもよい。また、２個、３個またはそれ以上のプロリンを、特に長鎖配列に組み込んでもよい。
【０１１４】
任意選択で、ペプチド部分Ｐに機能性ペプチド配列を含めてもよい。択一的または付加的に、機能性ペプチドを本発明の組成物中に、ペプチド部分Ｐを含む該カチオン性化合物とともに、任意選択で、例えばジスルフィド結合に関与する１個以上の−ＳＨ基またはイオウ原子を示すように修飾した後に組み込んでもよい。あるいはまた、かかる機能性ペプチド配列を別の担体成分、例えばペプチドＰに、該機能性ペプチド配列が低ｐＨ値、例えば生理学的ｐＨ値で離脱または放出することを可能にする酸不安定性結合によって、好ましくは担体成分の側鎖によって結合させてもよい。
【０１１５】
該機能性ペプチドまたはペプチド配列はシグナルペプチドもしくはシグナル配列、局在化シグナルもしくは配列、核局在化シグナルもしくは配列（ＮＬＳ）、抗体、細胞膜透過ペプチド、（例えば、ＴＡＴ）などであり得るか、またはこれらに由来するものであり得る。
【０１１６】
これとの関連において、シグナルペプチド、局在化シグナルもしくは配列または核局在化シグナルもしくは配列（ＮＬＳ）は、担体−カーゴ複合体を特定の標的細胞（例えば、肝細胞もしくは抗原提示細胞）または亜細胞構造に指向するために使用され得、特定の標的、例えば細胞内、核内、エンドソーム区画内、ミトコンドリアマトリックス、原形質膜、ゴルジ装置、核、細胞質および細胞骨格、小胞体などへのトランスローカリゼーション（ｔｒａｎｓｌｏｃａｌｉｓａｔｉｏｎ）を可能にするものであり得る。シグナル配列または核局在化シグナルは、本明細書に定義した任意の核酸、特にＲＮＡまたはＤＮＡ、より好ましくはｓｈＲＮＡまたはｐＤＮＡの例えば核内への輸送のために使用され得る。核局在化配列としては、例えば、ＫＤＥＬ、ＤＤＥＬ、ＤＥＥＬ、ＱＥＤＬ、ＲＤＥＬ、ＧＱＮＬＳＴＳＮ、ＰＫＫＫＲＫＶ、ＰＱＫＫＩＫＳ、ＱＰＫＫＰ、ＲＫＫＲ、ＲＫＫＲＲＱＲＲＲＡＨＱ、ＲＱＡＲＲＮＲＲＲＲＷＲＥＲＱＲ、ＭＰＬＴＲＲＲＰＡＡＳＱＡＬＡＰＰＴＰ、ＧＡＡＬＴＩＬＶ、またはＧＡＡＬＴＬＬＧが挙げられ得る。エンドソーム区画用の局在化配列の一例はＭＤＤＱＲＤＬＩＳＮＮＥＱＬＰである。ミトコンドリアマトリックス用の例示的な局在化配列はＭＬＦＮＬＲＸＸＬＮＮＡＡＦＲＨＧＨＮＦＭＶＲＮＦＲＣＧＱＰＬＸである。原形質膜用の局在化配列としては、例えば、ＧＣＶＣＳＳＮＰ、ＧＱＴＶＴＴＰＬ、ＧＱＥＬＳＱＨＥ、ＧＮＳＰＳＹＮＰ、ＧＶＳＧＳＫＧＱ、ＧＱＴＩＴＴＰＬ、ＧＱＴＬＴＴＰＬ、ＧＱＩＦＳＲＳＡ、ＧＱＩＨＧＬＳＰ、ＧＡＲＡＳＶＬＳ、およびＧＣＴＬＳＡＥＥが挙げられる。小胞体および核用の局在化配列としては、ＧＡＱＶＳＳＱＫおよびＧＡＱＬＳＲＮＴが挙げられる。ゴルジ装置、核、細胞質および細胞骨格用の局在化配列としてはＧＮＡＡＡＡＫＫが挙げられる。細胞質および細胞骨格用の局在化配列としてはＧＮＥＡＳＹＰＬが挙げられる。原形質膜および細胞骨格用の局在化配列としてはＧＳＳＫＳＫＰＫが挙げられる。分泌シグナルペプチド配列の例としては、古典的または非古典的ＭＨＣ−配列（例えば、ＭＨＣ  ＩおよびＩＩ分子のシグナル配列、例えば、ＭＨＣクラスＩ分子ＨＬＡ−Ａ＊０２０１のシグナル配列）が挙げられる。また、有用なペプチドに、サイトカインまたは免疫グロブリンのシグナル配列、例えば免疫グロブリンまたは抗体のインバリアント鎖のシグナル配列；Ｌａｍｐ１、タパシン、Ｅｒｐ５７、カルレティキュリン、カルネキシン、他の膜結合タンパク質、または小胞体（ＥＲ）もしくはエンドソーム−リソソーム区画と結合しているタンパク質のシグナル配列を組み込んでもよい。特に好ましいはＭＨＣクラスＩ分子ＨＬＡ−Ａ＊０２０１のシグナル配列である。
【０１１７】
ペプチド部分Ｐの特性は、その配列内に非天然アミノ酸を含めることにより、または該ペプチドの化学修飾によってさらにモジュレートされ得る。例えば、特定の化学基が導入され得る。かかる基は例えば、例えば、アミド形成（例えば、カルボン酸、スルホン酸、アミンなどとの反応による）によって、マイケル付加（例えば、マレインイミド部分、α，β不飽和カルボニルなどを使用）によって、クリックケミストリー（例えば、アジドもしくはアルキンを使用）によって、アルケン／アルキンのメタセシス（例えば、アルケンもしくはアルキンを使用）、イミンもしくはヒドロゾンの形成（アルデヒドもしくはケトン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、アミンを使用）、複合体化反応（アビジン、ビオチン、プロテインＧなどを使用）あるいはＳｎ−型置換反応（例えば、ハロゲンアルカン、チオール、アルコール、アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、スルホン酸エステル、オキシホスホニウム塩との）を可能にする成分またはさらなる成分の結合に使用され得る他の化学部分によってさらなる成分またはリガンドの結合が可能となるように選択され得る。
【０１１８】
ペプチド部分Ｐを有するカチオン性化合物を含む本発明の組成物の具体的な利点のうちの１つは、かかるペプチド部分が容易に設計され得、特定の治療目的または用途と関連する具体的なニーズに適合させ得るということである。例えば、特定のカーゴ、例えば核酸構築物との複合体を形成するために必要とされる正電荷の量は、該ペプチド配列内の塩基性アミノ酸の含有量を変更することにより最適化され得る。同時に、生分解性および耐容性を最適化するために該ペプチドの長さが変更され得る。
【０１１９】
発明者らは、該ペプチド分子が、核酸カーゴとの複合体の形成も可能にする条件下で互いに容易にジスルフィド結合を形成することを見出した。特定のインビボ条件下、例えば、例えばサイトゾルＧＳＨが存在する典型的なサイトゾル環境では、このジスルフィド結合が還元されてより小さいペプチド単位がもたらされ、これはほとんどの細胞により、まず小さいオリゴペプチドに、最終的にアミノ酸に容易に代謝される。上記のような大きなオリゴペプチドの場合であっても有意な毒性はみられていない。
【０１２０】
別の好ましい実施形態では、部分Ｐを含むカチオン性化合物が、式ＩＶ
Ｌ１−Ｐ１−［Ｐ−］ｎ−Ｐ３−Ｌ2（式ＩＶ）
による化合物であり、
式中、Ｐは上記に規定したとおりである、すなわち、Ｐは、約０．５ｋＤａ〜約３０ｋＤａの分子量を有するポリマー部分または３〜１００個のアミノ酸で構成されたペプチド部分のいずれかであり、ここで、該ペプチド部分のアミノ酸の総数の少なくとも１０％は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓおよび／またはＯｒｎから選択される塩基性アミノ酸である。Ｐ３は任意選択である。Ｐ１およびＰ３（存在する場合）は独立して選択され、各々は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ−Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ−２−（メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリン、ポリ（ヒドロキシアルキルＬ−アスパラギン）、ポリ（２−（メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリン）、ヒドロキシエチルデンプンまたはポリ（ヒドロキシアルキルＬ−グルタミン）から選択される線状または分枝状の親水性ポリマー鎖を表し、ここで、該ポリマー鎖は約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａの分子量を示すものであり、Ｐ１およびＰ３の各々は部分Ｐとジスルフィド結合によって連結されている。Ｌ１およびＬ2は任意選択のリガンドであり、ＲＧＤ、ＲＧＤペプチド、トランスフェリン、葉酸根、シグナルペプチドもしくはシグナル配列、局在化シグナルもしくは配列、核局在化シグナルもしくは配列（ＮＬＳ）、抗体、細胞膜透過ペプチド、例えばＷＥＡＫＬＡＫＡＬＡＫＡＬＡＫＨＬＡＫＡＬＡＫＡＬＫＡＣＥＡ、ＴＡＴ、受容体のリガンド、サイトカイン、ホルモン、増殖因子、小分子、糖類、マンノース、ガラクトース、ｎ−アセチルガラクトサミン、合成リガンド、受容体の小分子作動薬、阻害薬もしくは拮抗薬またはＲＧＤペプチド模倣アナログから独立して選択される。
【０１２１】
さらに、式ＩＶのｎは、１〜約５０から選択される整数、好ましくは２、３、４もしくは５〜約１０または２、３もしくは４〜約９の範囲の整数、例えば６または７である；ただし、ｎが１より大きい場合、各部分Ｐは別の部分Ｐとジスルフィド結合によって連結されているものとする。また、２〜約２０の範囲から、または約４〜約１０、例えば約４、５、６、７、８、９もしくは１０からのｎの選択も好ましい。
【０１２２】
任意選択のセグメントＬ１、Ｌ2またはＰ３に対する言及はいずれも、それぞれのセグメントが存在する任意選択の実施形態に適用可能であると解釈されたい。
【０１２３】
式ＩＶから明白なように、それぞれのカチオン性化合物は、それぞれ少なくとも成分または部分Ｐ、Ｐ１およびＰ３間にジスルフィド結合ならびに任意選択で、部分Ｐ内および／またはＰ１およびＬ１および／またはＰ３およびＬ３間にさらなるジスルフィド結合を含む。このジスルフィド結合は、残基、例えばＣｙｓ、または化学修飾アミノ酸または還元型形態において−ＳＨ基を担持する他の残基に由来するものであり得る−ＳＨ基に由来する。
【０１２４】
また、任意選択で、さらなる成分、例えばアミノ酸成分、例えば抗原のエピトープ、抗原、抗体、細胞膜透過ペプチド（例えば、ＴＡＴ）、リガンドなどに結合させるために１個以上のさらなる−ＳＨ基またはジスルフィド結合を該化合物中に存在させてもよい。
【０１２５】
式ＩＩによる化合物およびその調製方法のさらなる例は、例えばＷＯ２０１１／０２６６４１に開示されており、その開示内容はその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１２６】
本発明を実施するための式ＩＶによる化合物の使用は高い多用途性という利点と関連している。さらに、式ＩＩを主体とする実施形態は、例えば、遺伝子療法または他の治療用途の目的のための核酸の効率的なトランスフェクションの目的のために核酸を活性損なうことなく、特に、いろいろな細胞株の核酸でのインビトロでの効率的なトランスフェクションの目的のために、また、インビボでのトランスフェクションの目的のためにも効率的にコンパクト化するために、ポリマー鎖の長さを規定すること、および所望の特性の異なる短鎖ポリマーを１つのポリマーに結合することが可能である。該担体分子はさらに、細胞に対して毒性ではなく、その核酸カーゴの効率的な放出をもたらすものである。最後に、これは、特に分子の末端部に対する親水性ポリマー鎖（例えば、ＰＥＧ）の可逆的付加による凝集に対して改善された抵抗性を示すものであり、これによってさらに、血清含有培地に対する核酸カーゴの安定性の向上が付与され、免疫系による高分子担体とカーゴの複合体の認識または血清内容物との他の望まない相互作用が抑制される。サイトゾル内では、セグメントＰ１およびＰ３によって得られる「コーティング」が細胞の還元条件下で容易に除去される。また、この効果も、サイトゾル内での核酸カーゴの放出を促進させる。
【０１２７】
上記に規定したように、リガンドＬ１およびＬ2が式ＩＶによる化合物中に任意選択で含まれ得る。これらは、例えば、カーゴ、例えば複合体化核酸を特定の細胞内に指向するために使用され得る。これらは互いに独立して選択され得る。潜在的に好適なリガンドの例としては、ＲＧＤ、トランスフェリン、葉酸根、シグナルペプチドまたはシグナル配列、局在化シグナルまたは配列、核局在化シグナルまたは配列（ＮＬＳ）、抗体、細胞膜透過ペプチド、（例えば、ＴＡＴ）、受容体のリガンド（例えば、サイトカイン、ホルモン、増殖因子など）、小分子（例えば、マンノースもしくはガラクトースなどの糖類または合成リガンド）、受容体の小分子作動薬、阻害薬または拮抗薬（例えば、ＲＧＤペプチド模倣アナログ）などが挙げられる。
【０１２８】
好ましいリガンドの一例としては、ＷＥＡＫＬＡＫＡＬＡＫＡＬＡＫＨＬＡＫＡＬＡＫＡＬＫＡＣＥＡ（ＫＡＬＡとも称される）およびＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮａｃ）が挙げられる。また、この状況において、細胞膜上にマンノース受容体を担持している抗原提示細胞を標的化するためのリガンドとしてのマンノースも好ましい。好ましいさらなる一実施形態では、任意選択のリガンドとしてのガラクトースが肝細胞を標的化するために使用され得る。
【０１２９】
かかるリガンドＬ１およびＬ2は成分Ｐ１および／またはＰ３に、可逆的ジスルフィド結合または任意の他の可能な化学結合によって、例えば、３−チオプロピオン酸もしくは２−イミノチオラン（トラウト試薬）の結合によって、アミド形成（例えば、カルボン酸、スルホン酸、アミンなど）によって、マイケル付加（例えば、マレインイミド部分、不飽和カルボニルなど）によって、クリックケミストリー（例えば、アジドもしくはアルキン）によって、アルケン／アルキンのメタセシス（例えば、アルケンもしくはアルキン）、イミンもしくはヒドロゾンの形成（アルデヒドもしくはケトン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、アミン）、複合体化反応（アビジン、ビオチン、プロテインＧ）あるいはＳｎ−型置換反応（例えば、ハロゲンアルカン、チオール、アルコール、アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、スルホン酸エステル、オキシホスホニウム塩）を可能にする成分またはさらなる成分の結合に使用され得る他の化学部分によって結合され得る。
【０１３０】
上記に規定したように、成分Ｐ１およびＰ３は独立して選択され、各々は、成分Ｐとのジスルフィド結合に関与する少なくとも１個のイオウ原子を含有している線状または分枝状の親水性ポリマー鎖を表す。Ｐ１およびＰ３の各々のポリマー鎖は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ−Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ−２−（メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリン、ポリ（ヒドロキシアルキルＬ−アスパラギン）、ポリ（２−（メタクリロイルオキシ）エチルホスホリルコリン）、ヒドロキシエチルデンプンまたはポリ（ヒドロキシアルキルＬ−グルタミン）から独立して選択される。Ｐ１およびＰ３の各々は約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａの分子量を示すものである。
【０１３１】
Ｐ１および／またはＰ３のポリマー鎖の分子量は、好ましくは約１ｋＤａ〜約７５ｋＤａまたは約５ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、さらにより好ましくは約５ｋＤａ〜約２５ｋＤａである。別の好ましいものによれば、Ｐ１および／またはＰ３は、約５ｋＤａ〜約２５ｋＤａの任意選択で修飾されているポリエチレングリコール鎖である。
【０１３２】
ジスルフィド結合を可能にするイオウ原子は、親水性ポリマー鎖Ｐ１およびＰ３の各々に、内部システインまたはその還元型形態および式ＩＶの化合物内への組込み前において−ＳＨ部分を担持している任意のさらなる（修飾型）アミノ酸もしくは部分によって供給され得る。
【０１３３】
あるいはまた、親水性ポリマー鎖Ｐ１および／またはＰ３は、−ＳＨ部分で、好ましくは−ＳＨ部分を担持している化合物との化学反応によって、親水性ポリマーＰ１およびＰ３の各々が式ＩＶの化合物への組み込み前に少なくとも１個のかかる−ＳＨ部分を担持するように修飾されたポリマーに由来するものであり得る。−ＳＨ部分を担持しているかかる化合物は、例えば、（さらなる）システインまたは−ＳＨ部分を担持している任意のさらなる（修飾型）アミノ酸であり得る。
【０１３４】
また、かかる化合物は、−ＳＨ部分を含むか、または親水性ポリマー鎖Ｐ１およびＰ３への−ＳＨ部分の導入を可能にする任意の非アミノ化合物または部分であり得る。かかる非アミノ化合物はＰ１および／またはＰ３に、化学反応または化合物の結合によって、例えば、３−チオプロピオン酸もしくはチオイモラン（ｔｈｉｏｉｍｏｌａｎｅ）（トラウト試薬）の結合によって、アミド形成（例えば、カルボン酸、スルホン酸、アミンなど）によって、マイケル付加（例えば、マレインイミド部分、不飽和カルボニルなど）によって、クリックケミストリー（例えば、アジドもしくはアルキン）によって、アルケン／アルキンのメタセシス（例えば、アルケンもしくはアルキン）、イミンもしくはヒドロゾンの形成（アルデヒドもしくはケトン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、アミン）、複合体化反応（アビジン、ビオチン、プロテインＧ）あるいはＳｎ−型置換反応（例えば、ハロゲンアルカン、チオール、アルコール、アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、スルホン酸エステル、オキシホスホニウム塩）を可能にする成分またはさらなる成分の結合に使用され得る他の化学部分によって結合され得る。この状況における特に好ましいＰＥＧ誘導体はα−メトキシ−ω−メルカプトポリ（エチレングリコール）である。各場合で、例えばシステインまたは任意のさらなる（修飾型）アミノ酸もしくは化合物の、ジスルフィド結合に関与するイオウ原子は、Ｐ１およびＰ３の末端部に存在していてもよく、任意の内部位置に存在していてもよい。一実施形態では、Ｐ１およびＰ３の各々は、一方の末端部に少なくとも１つのジスルフィド結合と、本明細書に規定したさらなる成分、例えばリガンド、アミノ酸成分（ＡＡ）ｘ、抗体、細胞膜透過ペプチド（例えば、ＴＡＴ）などをさらに結合させるために使用され得る少なくとも１個のさらなる−ＳＨ基またはジスルフィド結合とを示すものである。
【０１３５】
好ましいさらなる一実施形態によれば、親水性ポリマー鎖Ｐ１およびＰ３の各々はまた、本明細書に規定したさらなる成分、例えばリガンド、アミノ酸成分（ＡＡ）ｘなどの結合を、例えば、アミド形成（例えば、カルボン酸、スルホン酸、アミンなど）によって、マイケル付加（例えば、マレインイミド部分、不飽和カルボニルなど）によって、クリックケミストリー（例えば、アジドもしくはアルキン）によって、アルケン／アルキンのメタセシス（例えば、アルケンもしくはアルキン）、イミンもしくはヒドロゾンの形成（アルデヒドもしくはケトン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、アミン）、複合体化反応（アビジン、ビオチン、プロテインＧ）あるいはＳｎ−型置換反応（例えば、ハロゲンアルカン、チオール、アルコール、アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、スルホン酸エステル、オキシホスホニウム塩）を可能にする成分によって、またはさらなる成分の結合のために使用され得る他の化学基によって結合することを可能にする少なくとも１個のさらなる官能基も含むものであり得る。
【０１３６】
上記に規定したように、式ＩＶの化合物におけるＰは、約０．５ｋＤａ〜約３０ｋＤａの分子量を有するポリマー部分または３〜１００個のアミノ酸で構成されたペプチド部分であり、ここで、該ペプチド部分のアミノ酸の総数の少なくとも１０％は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓおよび／またはＯｒｎから選択される塩基性アミノ酸である。Ｐがペプチド部分である場合、Ｐ一般との関連において上記のものと同じ好ましいものが同様に適用される；また、−ＳＨ基に関する好ましいものを式ＩＩの化合物のかかる−ＳＨ基に由来するジスルフィド結合に適用するのがよい。
【０１３７】
例えば、式ＩＶの化合物におけるＰとして選択されるペプチド部分は好ましくは約３〜約５０個のアミノ酸、より好ましくは約７〜約３０個のアミノ酸または約３〜約２５個のアミノ酸の長さを有するものである。また、約３〜約２０個のアミノ酸、または約５〜約２０個のアミノ酸、または約７〜約３０個のアミノ酸、または約６〜約１８個のアミノ酸、または約７〜約１７個のアミノ酸、例えば約５〜約１５個のアミノ酸の範囲の長さも好ましい。式ＩＩのペプチド部分Ｐは、約０．３ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、特に、約０．５ｋＤａ〜約３０ｋＤａ、または約０．６ｋＤａ〜約１０ｋＤａ、または約０．８ｋＤａ〜約５ｋＤａ、例えば約１ｋＤａ〜約３ｋＤａの範囲の分子量を有するものであることがさらに好ましい。
【０１３８】
さらに、式ＩＶにおけるＰとして選択されるペプチド部分内の塩基性アミノ酸の含有量は該ペプチド配列のアミノ酸の総数の少なくとも１０％、好ましくはそれより多い、例えば、それぞれ少なくとも約２０％、または少なくとも約３０％、または少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％、または少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％である。
【０１３９】
好ましい実施形態の一部のものでは、式ＩＶの化合物におけるＰとして選択されるペプチド部分は、完全に、または大部分が特定の１種類の塩基性アミノ酸で構成されたもの、例えば約５〜約３０個のＡｒｇ、Ｌｙｓ、ＨｉｓまたはＯｒｎのセグメントであり、１個または２個の末端Ｃｙｓ残基にフランキングされていてもよいコア配列を含む。式ＩＶのかかる好ましいバージョンのペプチド部分Ｐの例としては：
2019517553.tif 000015
2019517553.tif 000016
【０１４０】
あるいはまた、式ＩＶにおける部分Ｐに有用なペプチド配列は、以下の例の場合のような、２種類以上の異なる塩基性アミノ酸で構成されたものであり、この例は、配列組成を示すことを意図しており、塩基性アミノ酸が存在する特定の順序を指定するものではないが、Ｃｙｓ残基は末端位置に存在する：
2019517553.tif 000017
2019517553.tif 000018
2019517553.tif 000019
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2019517553.tif 000021
【０１４１】
さらに、式ＩＶにおけるペプチド部分Ｐに、さらに詳細に上記の１個以上の芳香族アミノ酸、特に、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＰｈｅを含めてもよい。任意選択で、芳香族アミノ酸リッチのペプチド配列に、Ｔｒｐ、ＴｙｒおよびＰｈｅの長鎖配列の構造切断体としての機能を果たし得る少なくとも１個のプロリンをさらに含有させてもよい。芳香族アミノ酸配列の長さに応じて、２個、３個またはそれ以上のプロリンを組み込むことが好ましかろう。
【０１４２】
任意選択で、式ＩＶにおける部分Ｐで、ペプチド配列が選択される場合、かかる配列に、特に電荷を有しない極性側鎖を有するもの、例えばＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｓｎおよび／またはＧｌｎから選択される１個以上の親水性アミノ酸をさらに含有させてもよい。Ｐ一般へのかかるアミノ酸の組込みに関する上記のより詳細な説明を参照されたい。同じことが、部分Ｐ内への親油性アミノ酸、特に、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、および／またはＭｅｔの組込み、ならびにＰの他の修飾（あれば）に適用される。
【０１４３】
あるいはまた、式ＩＶによるカチオン性化合物は、約０．５ｋＤａ〜約３０ｋＤａの分子量を有するポリマー部分である部分Ｐを含むものであってもよい。また、この場合、上記のポリマー部分Ｐについて一般的に記載した選択肢および好ましいものを、Ｐが式ＩＶの化合物の一部であるこの具体的な場合に提供するのがよい。
【０１４４】
この場合も、この場合のＰが、いくつかの単位のＰを含む、および／またはＰ１およびＰ３と連結され、−ＳＨ基に由来するジスルフィド結合によって連結された多量体形態で存在するため、この場合のＰには−ＳＨ基そのものは含まれ得ず、式ＩＶに示されたような酸化型形態である。
【０１４５】
記載のように、Ｐは、任意選択で修飾されているポリアクリレート、キトサン、ポリエチレンイミン、ポリアミン、ポリアミノエステルもしくはポリアミドアミンまたはその任意のコポリマーであり得る。
【０１４６】
好ましくは、Ｐに選択されるポリマー部分は、約０．５ｋＤａ〜約２０ｋＤａ、例えば、それぞれ約０．５ｋＤａ〜約１１．５ｋＤａ、または約１ｋＤａ〜約１０ｋＤａ、または約０．１ｋＤａ〜約８ｋＤａ、または約０．１ｋＤａ〜約６ｋＤａ、または約０．１ｋＤａ〜約５ｋＤａ、または約０．５ｋＤａ〜約５ｋＤａ、または約０．３ｋＤａ〜約２０ｋＤａ、または約０．３ｋＤａ〜約１０ｋＤａ、または約０．４ｋＤａ〜約１０ｋＤａ、または約０．５ｋＤａ〜約１０ｋＤａ、または約０．５ｋＤａ〜約７．５ｋＤａ、または約０．５ｋＤａ〜約４ｋＤａ、または約０．５ｋＤａ〜約３ｋＤａ、または約０．６７ｋＤａ〜約２．７ｋＤａの分子量を示すものである。
【０１４７】
Ｐに選択される好ましいポリマー部分としては、例えば、修飾ポリアミノ酸、例えばβ−アミノ酸−ポリマーもしくは逆ポリアミド；修飾ポリエチレン、例えば（ポリ（Ｎ−エチル−４−ビニルピリジニウムブロミド））（ＰＥＶＰ）など；修飾アクリレート、例えば（ポリ（ジメチルアミノエチルメチルアクリレート））（ｐＤＭＡＥＭＡ）など；修飾アミドアミン、例えば（ポリ（アミドアミン））（ｐＡＭＡＭ）など；修飾ポリβアミノエステル（ＰＢＡＥ）、例えばジアミン末端修飾１，４ブタンジオールジアクリレート−コ−５−アミノ−１−ペンタノールポリマーなど；デンドリマー、例えばポリプロピルアミンデンドリマーもしくはｐＡＭＡＭベースのデンドリマーなど；ポリイミン（１種類もしくは複数種）、例えばポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩあるいはｐＥＩ）、ポリ（プロピレンイミン）など；ポリアリルアミン、（１，５−ジメチル−１，５−ジアザウンデカメチレンポリメトブロミド、または臭化ヘキサジメトリン（Ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ（登録商標））が挙げられる。
【０１４８】
また、カチオン性多糖、すなわち、糖主鎖ベースのポリマー、例えばシクロデキストリンベースのポリマー、デキストランベースのポリマー、キトサンなど；シラン主鎖ベースのポリマー、例えばＰＭＯＸＡ−ＰＤＭＳコポリマーなど；ならびに１個以上のカチオン性ブロック（例えば、上記のカチオン性のポリマーから選択されるもの）と１個以上の親水性または疎水性のブロック（例えば、ポリエチレングリコール）の組合せからなるブロックポリマーも好ましい。
【０１４９】
一実施形態では、少なくとも１つのカチオン性部分Ｐを含むカチオン性化合物が、式ＩＶａ
Ｌ１−Ｐ１−｛［Ｐ−］ａ［（ＡＡ）ｘ−］ｂ｝Ｐ３−Ｌ2（式ＩＶａ）
による化合物であり、
式中
Ｐ、Ｐ１、Ｐ３、Ｌ１およびＬ2は上記に規定のものであり；
（ＡＡ）ｘはアミノ酸（ＡＡ）成分であり、ここで、ｘは１〜約１００から選択される整数であり；
ａおよびｂは、ａ＋ｂの和が２〜約５０の範囲となるように１〜約４９から独立して選択される整数であり；
部分［Ｐ−］および［（ＡＡ）ｘ−］は、部分式｛［Ｐ−］ａ［（ＡＡ）ｘ−］ｂ｝内において任意の順に配列され得；
Ｐ、Ｐ１、Ｐ３および（ＡＡ）ｘの各々は隣の各Ｐ、Ｐ１、Ｐ３および（ＡＡ）ｘにジスルフィド結合によって連結されている。
【０１５０】
この場合も、式ＩＶとの関連においてＰ、Ｐ１、Ｐ３、Ｌ１およびＬ2について先に記載の選択肢および好ましいものが、この実施形態に同様に適用可能である。式ＩＶａは式ＩＶと、化合物のコア領域内の該１つ以上の部分Ｐとの組合せで１つ以上のペプチド配列（ＡＡ）ｘをさらに含んでいるという点で異なっている。
【０１５１】
個々の各（ＡＡ）ｘ単位は独立して選択され得るとともに、単位内の各アミノ酸であり得る。特定の非塩基性アミノ酸、例えば１個以上の芳香族アミノ酸、特に、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、および／またはＰｈｅ；あるいは１個以上の親水性アミノ酸、特に、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｓｎおよび／またはＧｌｎ；あるいは親油性アミノ酸、特に、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌａ、および／またはＭｅｔを導入するために１つ以上の（ＡＡ）ｘ単位を使用してもよい。そのため、上記のように、（ＡＡ）ｘ単位による組込みは、ペプチド配列Ｐ自体へのそれぞれのアミノ酸の導入の択一法である。式ＩＶａによる（ＡＡ）ｘ単位として別個に組み込む場合、このような（ＡＡ）ｘ単位の各々は隣の各Ｐ、Ｐ１、Ｐ３および（ＡＡ）ｘ部分にジスルフィド結合によって連結され、このジスルフィド結合は、好ましい実施形態の一例では、上記のような末端Ｃｙｓ残基を伴うものである。
【０１５２】
好ましくは、（ＡＡ）ｘ部分１つあたりのアミノ酸の数は約２〜約５０または約３〜約５０、より好ましくは約７〜約３０または約３〜約２５である。また、約３〜約２０個のアミノ酸、または約５〜約２０個のアミノ酸、または約７〜約３０個のアミノ酸、または約６〜約１８個のアミノ酸、または約７〜約１７個のアミノ酸、例えば約５〜約１５個のアミノ酸の範囲の長さも好ましい。
【０１５３】
式ＩＶａにおけるＰがペプチド部分である場合、成分｛［Ｐ−］ａ［（ＡＡ）ｘ−］ｂ｝中のカチオン性のアミノ酸の含有量は少なくとも１０％、２０％または３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％または６０％であることが好ましい。任意選択で、これは約５０±１０％、６０±１０％、７０±１０％、または８０±１０％である。これとの関連において、成分｛［Ｐ−］ａ［（ＡＡ）ｘ−］ｂ｝全体の全アミノ酸の含有量（すなわち、数）を１００％と規定する。
【０１５４】
式ＩＶａにおける部分Ｐがポリマー鎖である場合、本明細書において定義した（生理学的）ｐＨでの成分｛［Ｐ−］ａ［（ＡＡ）ｘ−］ｂ｝中におけるカチオン性電荷の含有量は、好ましくは５０％より多い、例えば少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％またはさらには９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％であり、あるいは約５０％超〜１００％の範囲、または約６０％〜約１００％、または前述の値の任意の２つで形成される範囲であってもよい、ただし、成分｛［Ｐ−］ａ［（ＡＡ）ｘ−］ｂ｝全体における本明細書において定義した（生理学的）ｐＨでの全電荷、例えば正電荷と負電荷の含有量は１００％であるものとする。
【０１５５】
さらなる一実施形態では、少なくとも１つのカチオン性部分Ｐを含むカチオン性化合物が、以下の式ＩＶｂまたはＩＶｃ：
Ｌ１−［（ＡＡ１）ｘ１−］ｚ１Ｐ１−［Ｐ−］ｎ−Ｐ３−［（ＡＡ２）ｘ２］ｚ２−Ｌ2（式ＩＶｂ）または
Ｌ１−［（ＡＡ１）ｘ１−］ｚ１Ｐ１−｛［Ｐ−］ａ［（ＡＡ）ｘ−］ｂ｝−Ｐ３−［（ＡＡ２）ｘ２］ｚ２−Ｌ2（式ＩＶｃ）
のうちの１つによる化合物であり、
式中、Ｐ、Ｐ１、Ｐ３、（ＡＡ）ｘ、Ｌ１およびＬ2は上記に規定のものであり；
（ＡＡ１）ｘ１および（ＡＡ２）ｘ２はアミノ酸（ＡＡ）成分であり、ここで、アミノ酸ＡＡ１およびＡＡ２はＡＡと、および／または互いに同じであっても異なっていてもよく、ｘ１およびｘ２は、１〜約１００から独立して選択される整数であり；  ｚ１およびｚ２は、１〜約３０から独立して選択される整数であり；
部分［Ｐ−］および［（ＡＡ）ｘ−］は、部分式｛［Ｐ−］ａ［（ＡＡ）ｘ−］ｂ｝内において任意の順に配列され得；
Ｐ、Ｐ１、Ｐ３、（ＡＡ）ｘ、（ＡＡ１）ｘ１または（ＡＡ２）ｘ２  はいずれも、隣のＰ、Ｐ１、Ｐ３、（ＡＡ）ｘ、（ＡＡ１）ｘ１、（ＡＡ２）ｘ２、Ｌ１および／またはＬ2にジスルフィド結合によって連結され得る。
【０１５６】
この場合も、式ＩＶおよび式ＩＶａとの関連においてＰ、Ｐ１、Ｐ３、Ｌ１、Ｌ2および（ＡＡ）ｘならびにａおよびｂについて先に記載の選択肢および好ましいものが、式ＩＶｂおよびＩＶｃによるカチオン性化合物でのこのような実施形態に同様に適用可能である。また、ｘについて先に記載の好ましいものがｘ１およびｘ２に適用される。式ＩＶｂは式ＶＩａと、アミノ酸成分（ＡＡ）ｘが、アミノ酸成分（ＡＡ１）ｘ１および（ＡＡ２）ｘ２（これらも同じく、単位１つあたり１〜約１００個のアミノ酸および分子１つあたり１〜約３０単位の独立して選択される反復アミノ酸単位と規定される）で置き換えられており；分子のコア部分またはその付近に位置するのではなく、（ＡＡ１）ｘ１および（ＡＡ２）ｘ２が、コア外であって、それぞれＰ１と任意選択の成分Ｌ１の間およびＰ３と任意選択の成分Ｌ2の間に位置するという点で異なっており、該分子構築物の物理的および生物学的特性のモジュレーションがもたらされる。式ＩＶｃによる化合物では、アミノ酸成分が、式ＩＶａの場合のように分子のコア領域内および式ＩＶｂの場合のように２つの末端部の方にもの両方に存在する。
【０１５７】
整数ｚ１およびｚ２は、１〜約３０、より好ましくはそれぞれ約１〜約２０、または１〜約１５、または１〜約１０の範囲から選択される。
【０１５８】
一実施形態では、組成物は２種類以上の異なる種のカチオン性のペプチドおよび／またはポリマーを含むものである。この実施形態では、カチオン性のペプチドおよび／またはポリマーの各々は個々に選択され得、ここで、上記のすべての選択肢および好ましいものが各選択に適用される。
【０１５９】
記載のように、カチオン性のリピドイド化合物（単にリピドイドとも称する）は脂質様化合物、すなわち脂質様の物性を有する両親媒性化合物である。
【０１６０】
一実施形態では、該リピドイドが、少なくとも２個のカチオン性窒素原子および少なくとも２つの親油性尾部を含む化合物である。本明細書で用いる場合、「尾部」は、少なくとも４個、より好ましくは少なくとも６個の炭素原子の鎖または鎖様構造、例えば任意選択で置換されているヒドロカルビル、アシルまたはアシルオキシルアルキル鎖である、分子の一部分の構造である。親油性尾部である任意選択で置換されているヒドロカルビル、アシルまたはアシルオキシアルキル鎖は、カチオン性窒素原子と直接連結されていてもよい。
【０１６１】
具体的な一実施形態では、該リピドイドが、各々がカチオン性窒素原子と直接連結されている２つの同一の親油性尾部を含む化合物である。別の具体的な実施形態では、該リピドイドが、各尾部がカチオン性窒素原子と直接連結されている３つの同一の親油性尾部を含む化合物である。さらなる具体的な一実施形態では、該リピドイドが、各尾部がカチオン性窒素原子と直接連結されている４つ以上の同一の親油性尾部を含む化合物である。このような実施形態の各々において、該リピドイドは任意選択で、親油性尾部に連結されていないさらなる窒素原子を含むものであってもよい。かかるリピドイドもまた、オリゴアミンのカチオン性の窒素に結合されているかまたは該窒素のうちのいくつかに結合されている親油性尾部を有する該オリゴアミンに由来するカチオン性の主鎖を有する化合物であると理解され得る。
【０１６２】
親油性尾部が置換されているヒドロカルビル（例えば、アルキル）鎖である場合、置換基は、例えばメチルまたはヒドロキシルであり得る。
【０１６３】
任意選択で置換されているヒドロカルビル鎖は、例えばアルキルに似た飽和型であってもよく、不飽和、すなわちアルケニルまたはアルキニル（各々は、任意選択で１つ、２つ、３つまたはそれ以上の炭素−炭素二重結合および／または三重結合を有する）であってもよい。尾部構造がアシルまたはアシルオキシアルキル基であるか、または該基を含むものである場合、このようなものもまた、尾部の炭化水素セグメント内に１つ、２つまたはそれ以上の炭素−炭素二重結合および／または三重結合を含むものであってもよい。
【０１６４】
一実施形態では、該リピドイド化合物は加水分解性連結基、例えばエステル、アミドまたはカルバメート基がないものである。本明細書で用いる場合、連結基は、該リピドイド分子の親油性尾部をカチオン性窒素原子を含む該親水性領域に連結する基である。核酸を細胞に送達し、トランスフェクションを向上させるための担体または薬剤として提案されている慣用的なカチオン性脂質は多くの場合、典型的ではないにしても、かかるリンカーまたは連結基を示すものであり、これらは、ほとんどの場合、加水分解性および／または酵素的切断性である。特に、エステル基を有するリンカー、また、アミド基またはカルバメート基を有するリンカーも提案されており、これらはすべて、インビボで加水分解性切断および／または酵素的切断を受け易い。
【０１６５】
本明細書で用いる場合、加水分解性とは、生体液（例えば、間質液）中、インビボ条件下で数秒以内、数分以内、数時間以内または数日以内に認識可能な度合の加水分解が起こること；好ましくは、それぞれの化合物または基が７日後以内またはさらには２日後以内に少なくとも５０％まで加水分解されることを意味する。
【０１６６】
本発明の一部の実施形態では、該リピドイド化合物がＰＥＧ部分を含む。
【０１６７】
前記のように、該リピドイド化合物はカチオン性であり、これは、カチオン化可能であるか、または永久的にカチオン性であることを意味する。一実施形態では、該リピドイドがカチオン化可能である、すなわち、１個以上のカチオン化可能な窒素原子を含むが、永久的にカチオン性の窒素原子は含んでいない。別の実施形態では、該リピドイドのカチオン性窒素原子のうちの少なくとも１個が永久的にカチオン性である。任意選択で、該リピドイドは、２個の永久的にカチオン性の窒素原子、３個の永久的にカチオン性の窒素原子、またはさらには４個以上の永久的にカチオン性の窒素原子を含むものである。
【０１６８】
さらなる一実施形態では、該リピドイド化合物が、式Ｉ    
(化)
2019517553.tif 000022
（式Ｉ）
による化合物またはその薬学的に許容され得る塩である。
【０１６９】
式Ｉにおいて、各存在のＲＡは、独立して、非置換の環式もしくは非環式の分枝もしくは非分枝状のＣ１〜２０脂肪族；置換もしくは非置換の環式もしくは非環式の分枝もしくは非分枝状のＣ１〜２０ヘテロ脂肪族；置換もしくは非置換のアリール；置換もしくは非置換のヘテロアリール；
(化)
2019517553.tif 000023
であり、
ここで、ＲＡのうちの少なくとも１つが
(化)
2019517553.tif 000024
である。
【０１７０】
さらに、各存在のＲ５は、独立して、非置換の環式もしくは非環式の分枝もしくは非分枝状のＣ８〜１６脂肪族；置換もしくは非置換のアリール；または置換もしくは非置換のヘテロアリールである。さらに、各存在のｘは１〜１０の整数であり、各存在のｙは１〜１０の整数である。本発明の一部の実施形態では、ＲＡまたはＲ５がＰＥＧ−部分であるか、またはＰＥＧ−部分で置換されている。
【０１７１】
任意選択で、Ｒ５は、少なくとも１つの存在が、またはさらには各存在がＣ８〜Ｃ１６アルキルである。好ましい実施形態の一例によれば、少なくとも１つのｘは、１または２から選択され、任意選択ですべての存在のｘが１または２である。さらに、少なくとも１つのｙは、１または２から選択され、任意選択ですべての存在のｙが１または２である。さらなる一実施形態では、すべての存在のＲ５がＣ８〜Ｃ１６アルキルであり、すべての存在のｘが１または２であり、すべての存在のｙが１または２である。
【０１７２】
一部の実施形態では、かかるリピドイドは、オリゴアミンとエポキシド末端脂肪族化合物を高温で、例えば８０〜９５℃にて溶媒の非存在下で反応させることにより調製され得る。かかるリピドイド化合物は、該アミンと疎水性の脂肪族尾部によるエポキシドの開環によって生じる親水性部分を含む。好ましくは、該オリゴアミンは２〜５個の窒素原子を含むものである。中でも、好ましいオリゴアミンは、限定されないが：
2019517553.tif 000025
である。
【０１７３】
本発明の一部の実施形態では、オリゴアミンベースのリピドイドは任意選択で、ＰＥＧ部分で置換されている。
【０１７４】
中でも、好ましいエポキシド末端脂肪族化合物は、限定されないが２−アルキルオキシランであり、該アルキルはブチル、ヘキシル、オクチル、デシル、ドデシル、テトラデシルまたはオクタデシルである。任意選択で、該アルキル基は、アルキル側鎖、例えばメチル、エチル、プロピルまたはイソプロピル側鎖をさらに示すものであってもよい。さらに、２−アルキルオキシランのアルキル基はまた、１個以上のヘテロ原子、例えば酸素も含むものであってもよい。さらに、エポキシド末端脂肪族化合物は１つ以上の炭素−炭素二重または三重結合を含むものであってもよい。
【０１７５】
かかるリピドイド化合物の調製に関するさらなる手引きについてはＵＳ８９６９３５３を参照されたく、その開示内容はその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１７６】
さらなる一実施形態によれば、この場合、該リピドイド化合物が、式ＩＩａおよび／または式ＩＩｂ：
−Ｎ（Ｒ１）−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒ５）−Ｒ２（式ＩＩａ）
−Ｎ＋（Ｒ3）（Ｒ4）−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒ５）−Ｒ２（式ＩＩｂ）
の２つまたは３つの部分を含み、
ここで、式ＩＩａまたは式ＩＩｂの個々の各部分について独立して、Ｒ1は、水素またはＣ１〜Ｃ４−アルキルから選択され；Ｒ２は、線状または分枝状の飽和または不飽和のＣ６〜Ｃ１６ヒドロカルビル鎖から選択され；Ｒ3およびＲ4は、Ｃ１〜Ｃ４−アルキルから選択され、Ｒ５は水素またはヒドロキシルである。任意選択で、一部の実施形態では、式ＩＩａおよび／またはＩＩｂの各部分は個々に、ＰＥＧ部分で置換されていてもよく、そうでなくてもよい。
【０１７７】
Ｒ1は、各存在について同じであっても異なっていてもよい。一実施形態では、特にＲ1が水素またはメチルである場合、これは各存在について同じである。また、Ｒ3およびＲ4も各存在について同じであってもよく；例えば、すべての場合のＲ3およびＲ4がメチルであり得る。
【０１７８】
またさらなる一実施形態では、該リピドイド化合物が、式中のＲ1が水素であり、Ｒ２が線状または分枝状のＣ６〜Ｃ１６アルキル鎖であり、Ｒ3およびＲ4がメチルであり、Ｒ５がヒドロキシルである式ＩＩａおよび／または式ＩＩｂの３つの同一の部分を含む化合物である。例えば、式ＩＩａによる化合物は、オリゴアミン主鎖
Ｈ２Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２
を主体とするものであり得、
ここで、３つの第１級アミノ基の各々について、水素原子のうちの１個は
−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ２、
−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２、
ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ２、
ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（Ｎ（Ｒ６）２）−Ｒ２
および／または
−ＣＯ−ＣＨ（Ｎ（Ｒ６）２）−Ｒ２
で置換されており、
Ｒ２は線状または分枝状のＣ６〜Ｃ１６アルキル、特に、線状のＣ６、Ｃ８、Ｃ１０またはＣ１２アルキルであり、各Ｒ６は独立してＨまたはＣＨ３であり得る。式ＩＩｂによる化合物は、同じオリゴアミン主鎖と同じ置換基−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ２を主体とするものであり得るが、加えて２つのメチル基を有し、その窒素原子の各々にも置換基−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ２が結合している。この場合も、Ｒ２は線状または分枝状のＣ６〜Ｃ１６アルキル、特に、線状のＣ６、Ｃ８、Ｃ１０またはＣ１２アルキルである。
【０１７９】
任意選択で、この場合、３つの第１級アミノ基の各々について、水素原子のうちの１個がＰＥＧ部分で置換されているか、またはＰＥＧ化されている。
【０１８０】
具体的な一実施形態では、永久的にカチオン性のリピドイドが、式ＩＸ：
(化)
2019517553.tif 000026
に示すカチオンと、さらに任意選択でアニオン、好ましくは上記のアニオンとを含む化合物である。該化合物は、まず、式：
Ｈ２Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２
のオリゴアミンを、非分枝飽和型の末端Ｃ１２アルキルエポキシドと反応させた後、活性型メチル、例えばヨウ化メチルで４級化することにより調製され得る。本発明の一態様は、この化合物自体（その任意の塩を含む）に関するものである。
【０１８１】
本発明のさらなる具体的な一実施形態では、該リピドイドが、式Ｘ：
(化)
2019517553.tif 000027
による化合物である。
【０１８２】
任意選択で、該リピドイド化合物は、式中の第１級アミンが各々、独立して、メチルで１回または２回置換されている式Ｘによるリピドイド化合物である。特定の好ましい一実施形態では、該リピドイド化合物が、式Ｘａ：
(化)
2019517553.tif 000028
による化合物である。
【０１８３】
本発明の特定の好ましいさらなる一実施形態では、該リピドイド化合物が、式Ｘｂ：
(化)
2019517553.tif 000029
による化合物である。
【０１８４】
特定の好ましい一実施形態では、該リピドイド化合物が、構造：
(化)
2019517553.tif 000030
を含む化合物である。
【０１８５】
本発明の好ましいさらなる一実施形態では、該リピドイド化合物が、構造：
(化)
2019517553.tif 000031
を含む化合物である。
【０１８６】
さらなる一実施形態では、該リピドイド化合物が、式ＩＩＩ    
(化)
2019517553.tif 000032
（式ＩＩＩ）
による化合物であり、
式中、Ｒ1およびＲ２は各々、水素、任意選択で置換されている飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ２０ヒドロカルビルおよび任意選択で置換されている飽和または不飽和のＣ6〜Ｃ２０アシルからなる群より独立して選択される。さらに、Ｌ１およびＬ2は各々、任意選択で置換されている飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ３０ヒドロカルビルから独立して選択され；ｍおよびｏは各々、ゼロおよび任意の正の整数からなる群より独立して選択され；ｎは任意の正の整数である。一部の実施形態では、式ＩまたはＩＩによるリピドイドがＰＥＧ化されている。他の実施形態では、式ＩＩＩによるリピドイドがＰＥＧ化されている。他の実施形態では、一般的なカチオン性またはイオン化性の脂質がＰＥＧ化されている。一部の実施形態では、ＰＥＧ中のエチレングリコール部分の数が５〜９、１０〜２０、２１〜３０、３１〜４０、４１〜５０もしくはそれ以上であるか、またはＰＥＧ部分がＰＥＧ２００〜ＰＥＧ１００００から選択される。好ましくはＰＥＧ部分がＰＥＧ５００〜ＰＥＧ２０００から選択される。他の実施形態では、分枝状のＹ字形または櫛形であるＰＥＧポリマーが使用される。
【０１８７】
好ましい実施形態の一例では、式ＩＩＩのリピドイドのＲ1およびＲ２がともにＣ１〜Ｃ２０アルキル、より好ましくはＣ１〜Ｃ６アルキル、特にメチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルである。例えば、Ｒ1とＲ２の両方がメチルであり得る。さらに、ｎは、好ましくは約５以下、特に約２以下、例えば１である。さらに、ｏは好ましくは０または１から選択され、ｍは好ましくは１〜６の範囲、例えば１、２、３、４、５または６から選択される。
【０１８８】
さらなる一実施形態では、Ｌ１およびＬ2は各々、不飽和のＣ６〜Ｃ２２ヒドロカルビルから、特にＣ１０〜Ｃ２２ヒドロカルビルから独立して選択される。中でも、好ましいヒドロカルビルは、１４、１６、１８、２０または２２個の炭素原子を有する線状のω−６およびω−９不飽和炭化水素鎖である。
【０１８９】
また、式中のＲ1およびＲ２がともにメチルであり、ｍが３または４であり、ｎが１であり、ｏが０または１であり、Ｌ１およびＬ2が、１６または１８個の炭素原子を有する同一の線状のω−６およびω−９不飽和炭化水素鎖である式ＩＩＩのリピドイドも好ましい。一部の実施形態では、Ｒ1、Ｒ２、Ｌ１またはＬ2のうちの少なくとも１つがＰＥＧ部分であり得るか、またはＰＥＧ部分で置換されたものであり得る。
【０１９０】
さらなる一実施形態では、該リピドイドが、ｎが０である場合を除く上記に規定した式ＩＩＩによる化合物である。
【０１９１】
任意選択で、該組成物は、各々が上記のように独立して選択される２種類以上のリピドイドを含むものであるか；またはリピドイドと別のカチオン性脂質の組合せを含むものであってもよい。
【０１９２】
一実施形態では、該組成物は、上記に規定したリピドイド以外の脂質が実質的にないものであるか；または請求項のうちの１つに規定したもの以外の脂質が実質的にないものである。実際、これは、核酸の有効な送達に関して該リピドイドの特性および好都合な効果の恩恵があるが、上記に規定したようなカチオン性ではなく、かつリポフレックスまたは脂質ナノ粒子、例えば両性イオンのホスホ脂質またはステロイド、例えばコレステロールを調製するために多くの場合で使用される他の脂質（これは、場合によってはヘルパー脂質と称される）の存在を必要としないことは本発明の具体的な利点の１つである。したがって、該組成物には中性もしくは両性イオンの脂質がないこと；またはステロイド、例えばコレステロールがないことは本発明の好ましい実施形態の一例である。
【０１９３】
これらに限定されないが、以下のリピドイド構造を本発明において使用した：
2019517553.tif 000033
2019517553.tif 000034
2019517553.tif 000035
2019517553.tif 000036
2019517553.tif 000037
【０１９４】
本発明の組成物中または後述する本発明のナノ粒子（１個または複数）中に含められる生物学的に活性なカーゴ物質は好ましくは核酸化合物または核酸複合体である。該組成物中に含められる核酸化合物は任意の型の核酸または核酸誘導体であり得る。好ましい実施形態の一部のものでは、核酸化合物が、化学修飾型および非修飾型のＤＮＡ、一本鎖もしくは二本鎖のＤＮＡ、コードもしくは非コードＤＮＡから選択され、任意選択で、プラスミド、（短鎖）オリゴデゾキシヌクレオチド（すなわち、（短鎖）ＤＮＡオリゴヌクレオチド）、ゲノムＤＮＡ、ＤＮＡプライマー、ＤＮＡプローブ、免疫賦活性ＤＮＡ、アプタマーまたはその任意の組合せから選択される。択一的または付加的に、かかる核酸分子は、例えば任意のＰＮＡ（ペプチド核酸）から選択され得る。さらに択一的または付加的に、また、特に好ましい一実施形態によれば、該核酸は、化学修飾型および非修飾型のＲＮＡ、一本鎖もしくは二本鎖のＲＮＡ、コードもしくは非コードＲＮＡから選択され、任意選択で、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、（短鎖）オリゴリボヌクレオチド（すなわち、（短鎖）ＲＮＡオリゴヌクレオチド）、ウイルスＲＮＡ、レプリコンＲＮＡ、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）もしくはリボスイッチ、ＲＮＡアプタマー、ＲＮＡデコイ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイムまたはその任意の組合せから選択される。好ましくは、該複合体の核酸分子はＲＮＡである。より好ましくは、該複合体の核酸分子は（線状の）一本鎖ＲＮＡ、さらにより好ましくはｍＲＮＡまたは免疫賦活性ＲＮＡである。
【０１９５】
任意選択で、生物学的に活性なカーゴ物質は１種類より多くの核酸化合物の組合せである。
【０１９６】
異なる角度から説明すると、該核酸は一本鎖または二本鎖の核酸化合物または核酸複合体であり得る。厳密に言えば、二本鎖の核酸はまた、非共有結合によるこれらの会合によって核酸複合体を形成する２つの核酸化合物（すなわち、２つの逆平行の鎖）が合わさったものとみなすこともできよう。しかしながら、一般的な技術的専門用語と同様に、二本鎖の核酸はまた、１つの化合物または分子として記載している場合もあり得る。また、該核酸は、少なくとも部分的に自己相補的な２つの鎖を含む部分的に二本鎖または部分的に一本鎖の核酸であってもよい。かかる部分的に二本鎖または部分的に一本鎖の核酸分子は典型的には、長い一本鎖の核酸分子と短い一本鎖の核酸分子によって形成されるか、または長さがほぼ等しい２本の一本鎖の核酸分子によって形成され、この場合では、一方の一本鎖の核酸分子が一部において他方の一本鎖の核酸分子に相補的であり、したがって、両者がこの領域で二本鎖の核酸分子を形成する、すなわち、部分的に二本鎖または部分的に一本鎖の核酸（分子）となる。好ましくは、核酸化合物は一本鎖の核酸である。さらに、核酸化合物は環状の核酸であっても線状の核酸であってもよく、好ましくは線状の核酸であり得る。
【０１９７】
任意選択で、該核酸は人工核酸であってもよい。「人工核酸分子」または「人工核酸」は典型的には、天然に存在しない核酸分子、例えばＤＮＡまたはＲＮＡであると理解され得る。換言すると、人工核酸分子は非天然核酸分子と理解され得る。かかる核酸分子は、その個々の配列（これは天然に存在しない）のため、および／またはヌクレオチドの天然に存在しない他の修飾、例えば構造の修飾のため非天然であり得る。人工核酸分子は、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子またはＤＮＡ部分とＲＮＡ部分を含むハイブリッド分子であり得る。典型的には、人工核酸分子は、遺伝子工学的方法によって所望の人工ヌクレオチド配列（異種配列）に対応するように設計および／または作製され得る。これとの関連において、人工配列は通常、天然に存在しないものであり得る配列である、すなわち、野生型配列と少なくとも１個のヌクレオチドが異なるものである。用語「野生型」は、天然に存在する配列と理解され得る。さらに、用語「人工核酸分子」は、「１個の分子」を意味することに限定されず、典型的には、同一の分子の集合体を包含していると理解されたい。したがって、これは、アリコートに含まれた複数の同一の分子に関するものであり得る。
【０１９８】
さらなる一実施形態では、本明細書において規定した配列（タンパク質、またはそれぞれ核酸）は、前記配列（タンパク質、またはそれぞれ核酸）と少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する配列（タンパク質、またはそれぞれ核酸）を含むもの、または該配列からなるものである。
【０１９９】
２種類以上の異なる核酸の組合せは、例えば、抗体の重鎖をコードしている核酸（例えば、ＲＮＡ）ならびに同じ抗体の軽鎖をコードしている核酸を含む組成物の場合に有用であり得る。別の例は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系（ＣＲＩＳＰＲ：クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート；Ｃａｓ：ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質）と称される生物体の免疫系の部分に影響を及ぼすための２種類以上の核酸の組合せである。
【０２００】
またさらなる一例は、本発明の組成物またはナノ粒子中におけるガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）とコード核酸の組合せである。
【０２０１】
コード核酸
該核酸は、限定されないが、例えば、治療活性なタンパク質またはペプチドから選択され得る、例えば、抗原、例えば、腫瘍抗原、病原性抗原（例えば、動物抗原、ウイルス抗原、原生動物抗原、細菌抗原から選択される）、アレルギー性抗原、自己免疫抗原もしくはさらなる抗原、アレルゲン、抗体、免疫賦活性のタンパク質またはペプチド、抗原特異的Ｔ細胞受容体、あるいは特定の（治療）用途に適した任意の他のタンパク質またはペプチドから選択され得るタンパク質またはペプチドをコードしているものであり得、ここで、コード核酸は細胞、組織または生物体に輸送され得、その後、そのタンパク質がこの細胞、組織または生物体内で発現され得る。
【０２０２】
バイシストロニックな核酸またはＲＮＡおよびマルチシストロニックな（ｍｕｌｔｉｃｉｓｔｒｏｎｉｃ）核酸またはＲＮＡ：バイシストロニックまたはマルチシストロニックな核酸またはＲＮＡは典型的には、典型的には２つ（バイシストロニック）またはそれ以上（マルチシストロニックな）のコード領域を有するものであり得る核酸またはＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡである。この状況におけるコード領域は、ペプチドまたはタンパク質に翻訳可能なコドンの配列である。
【０２０３】
本発明の一部の特定の実施形態によれば、該核酸はモノ−、バイ−またはマルチシストロニックなもの、好ましくは本明細書に規定したものである。バイ−またはマルチシストロニックな核酸分子内のコード配列は好ましくは、相違する本明細書に規定したタンパク質もしくはペプチドまたはその断片もしくはバリアントをコードするものである。好ましくは、２種類以上のタンパク質またはペプチドをコードしているコード配列は、バイ−またはマルチシストロニックな核酸内において、少なくとも１つのＩＲＥＳ（内部リボソーム進入部位）配列（以下に規定する）によって隔離されているのがよい。したがって、用語「２種類以上のタンパク質またはペプチドをコードしている」とは、限定されないが、バイ−またはさらにはマルチシストロニックな核酸が、例えば、少なくとも２、３、４、５、６種類もしくはそれ以上の（好ましくは、異なる）タンパク質もしくはペプチドおよび／または本明細書に示した定義の範囲内のタンパク質もしくはペプチドあるいはその断片もしくはバリアントをコードしているものであり得ることを意味し得る。より好ましくは、限定されないが、バイ−またはさらにはマルチシストロニックな核酸は、例えば、少なくとも２、３、４、５、６種類もしくはそれ以上の（好ましくは、異なる）本明細書に規定したタンパク質もしくはペプチドあるいは本明細書に規定したその断片もしくはバリアントをコードしているものであり得る。これとの関連において、上記に規定したいわゆるＩＲＥＳ（内部リボソーム進入部位）配列は、単独のリボソーム結合部位として機能を果たすものであってもよいが、また、リボソームによって互いに独立して翻訳されるいくつかのタンパク質またはペプチドをコードしている上記に規定したバイ−またはさらにはマルチシストロニックな核酸をもたらすのに有用なものであってもよい。本明細書に従って使用され得るＩＲＥＳ配列の例は、ピコルナウイルス（例えば、ＦＭＤＶ）、ペスチウイルス（ＣＦＦＶ）、ポリオウイルス（ＰＶ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＣＭＶ）、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、豚コレラウイルス（ＣＳＦＶ）、マウス白斑ウイルス（ＭＬＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）またはコオロギ麻痺ウイルス（ＣｒＰＶ）に由来のものである。
【０２０４】
さらなる一実施形態によれば、本発明による核酸配列の該少なくとも１つのコード配列は、アミノ酸リンカー配列で連結された、またはアミノ酸リンカー配列なしの本明細書に規定した少なくとも２、３、４、５、６、７、８種類およびそれ以上のタンパク質もしくはペプチド（またはその断片および誘導体）をコードしているものであり得、ここで、前記リンカー配列には、剛直なリンカー、柔軟なリンカー、切断性のリンカー（例えば、自己切断性ペプチド）またはその組合せが包含され得る。この場合、該タンパク質またはペプチドは同一かまたは異なるかまたはその組合せであり得る。特定のタンパク質またはペプチドの組合せが、本明細書において説明した少なくとも２種類のタンパク質またはペプチドをコードしている前記核酸（本明細書において「多抗原−構築物／核酸」とも称する）にコードされ得る。
【０２０５】
本発明との関連において、多価（“ｐｏｌｙｖａｌｅｎｔ”またはさらには“ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ”）核酸混合物を得るために、コード配列のある特定の組合せ（例えば、少なくとも２種類の異なるタンパク質を含む）は、モノ−、バイ−およびマルチシストロニックな核酸および／または多抗原−構築物／核酸の任意の組合せによって作製され得ることに注意されたい。
【０２０６】
特定の好ましい態様では、コードされたペプチドまたはタンパク質は、ヒト、ウイルス、細菌、原生動物のタンパク質またはペプチドから選択される。
【０２０７】
ａ）治療活性なタンパク質
本発明との関連において、治療活性なタンパク質またはペプチドは、本発明のナノ粒子中に含められる核酸にコードされ得る。治療活性なタンパク質は本明細書において、治癒に対して効果を有するか、疾患、好ましくは本明細書に規定したものを予防的に抑制もしくは治療的に処置するか、または個体が必要とするタンパク質、例えば、個体の生体で生成されない、もしくは不充分な量でしか生成されない天然タンパク質もしくは修飾された天然タンパク質であるタンパク質と定義する。該タンパク質は、当業者に知られた任意の天然に存在する、または合成的に設計された組換えもしくは単離タンパク質から選択され得る。これらに限定されないが、治療活性なタンパク質には、細胞内でのシグナル伝達を刺激または阻害し得るタンパク質、例えば、サイトカイン、リンホカイン、モノカイン、増殖因子、受容体、シグナル伝達分子、転写因子など；抗凝固因子；アンチトロンビン；抗アレルギー性タンパク質；アポトーシス因子またはアポトーシス関連タンパク質、治療用の活性酵素および任意の後天性疾患または任意の遺伝性疾患と関連している任意のタンパク質が包含され得る。
【０２０８】
ｂ）抗原
該核酸は択一的に、抗原をコードしているものであってもよい。本発明によれば、用語「抗原」は、免疫系によって認識され、例えば適応免疫応答の一部として抗体または抗原特異的Ｔ細胞の形成によって抗原特異的免疫応答を誘発し得る物質をいう。これとの関連において、抗原のエピトープ、抗原性断片または抗原性ペプチドであるタンパク質は、特に、それぞれＢ細胞、抗体またはＴ細胞によって認識され得るＢ細胞およびＴ細胞のエピトープを意味する。
【０２０９】
本発明との関連において、該核酸にコードされた抗原は典型的には、上記の定義に含まれる任意の抗原、抗原のエピトープまたは抗原性ペプチドであり、好ましくは、タンパク質抗原およびペプチド抗原、例えば、腫瘍抗原、アレルギー性抗原、自己免疫の自己抗原、病原性抗原などである。特に、抗原は、宿主生物体（例えば、ヒト被験体）自体とは別の生物体に由来するもの、例えばウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、原生動物抗原、動物抗原、アレルギー性抗原などであり得る。アレルギー性抗原は、アレルギー抗原またはアレルゲンとも称され、典型的には、ヒト被験体においてアレルギーを引き起こし得る抗原である。
【０２１０】
あるいはまた、該核酸にコードされた抗原は、宿主自体に由来するものであり得る。かかる抗原の例としては、腫瘍抗原、自己抗原（“ｓｅｌｆ−ａｎｔｉｇｅｎ”またはａｕｔｏ−ａｎｔｉｇｅｎ”）、例えば自己免疫の自己抗原が挙げられるが、元々は宿主生物体以外の細胞に由来するが、宿主生物体、組織または細胞内部で、例えばプロテアーゼによる分解または他の型の代謝によって断片化または分解された本明細書に規定した（非自己）抗原も包含される。
【０２１１】
本発明との関連において同じく好ましい抗原クラスの１つは腫瘍抗原のものである。中でも、好ましい腫瘍抗原は、腫瘍細胞の表面上に位置するものである。また、腫瘍抗原は、正常細胞と比べて腫瘍細胞において過剰発現されているタンパク質であってもよい。さらに、腫瘍抗原にはまた、それ自体は腫瘍細胞でないか、または元々は腫瘍細胞でなかった細胞内で発現され、腫瘍に付随する抗原も包含される。例えば、腫瘍に供給される血管の形成または再形成と関連している抗原、特に、血管新生に付随するもの、例えばＶＥＧＦまたはｂＦＧＦなどの増殖因子もまた対象である。また、腫瘍に付随する抗原としては、典型的には腫瘍が埋め込まれた細胞または組織に由来する抗原が挙げられる。さらに、一部の特定の他のタンパク質またはペプチドは、腫瘍が発生した患者の体液中に（過剰）発現され、高濃度で存在している場合があり得る。このような物質は、免疫応答を誘導しないという点で、厳密に言えば抗原ではないけれども、腫瘍抗原または腫瘍関連抗原とも称される。
【０２１２】
腫瘍抗原は、さらに腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）と腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に分けられ得る。ＴＳＡは、腫瘍細胞によってのみ提示され、健常細胞には提示されないものであり得る。これは、典型的には腫瘍特異的変異により生じる。ＴＡＡは、より一般的にみられ、通常、腫瘍細胞と健常細胞の両方によって産生される。これらの抗原は免疫系によって認識され、抗原提示細胞が細胞傷害性Ｔ細胞によって破壊され得る。さらに、腫瘍抗原は腫瘍の表面上に、例えば変異した受容体の形態で存在している場合もあり得る。この場合、これは、抗体によっても認識され得る。
【０２１３】
コードされた抗原がアレルゲンである場合、かかる抗原は、例えば動物、植物、カビ、真菌、細菌などの任意の供給源の抗原から選択され得る。植物由来アレルゲンは、例えば花粉由来のアレルゲンであり得る。この場合も、該ナノ粒子中に組み込まれる核酸は、天然抗原またはその断片もしくはエピトープをコードしているものであり得る。
【０２１４】
ｃ）抗体
さらなる一実施形態によれば、核酸化合物は抗体または抗体断片をコードしているものである。該抗体またはその断片は、（ｉ）一本鎖抗体、（ｉｉ）一本鎖抗体の断片、（ｉｉｉ）多鎖抗体および（ｉｖ）多鎖抗体の断片からなる群より選択される。
【０２１５】
一般に、抗体は、ともに可変ドメインと定常ドメインを有する軽鎖および重鎖からなる。軽鎖は、Ｎ末端側の可変ドメインＶＬとＣ末端側の定常ドメインＣＬからなる。対照的に、例えばＩｇＧ抗体の重鎖は、Ｎ末端側の可変ドメインＶＨと３つの定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３で構成されている。
【０２１６】
好ましい実施形態の一例では、抗体は完全長抗体から選択される。かかる抗体は、任意の組換え産生された抗体または天然に存在する抗体、特に、治療目的、診断目的もしくは科学目的に適した抗体、または疾患、例えば免疫疾患もしくはがんと関連している抗体であり得る。用語「抗体」は、その最も広い意味で用いており、具体的にはモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体（例えば、アゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、およびブロック抗体または中和抗体）ならびにポリエピトープ特異性を有する抗体種を包含している。抗体は、任意のクラスの抗体、例えばＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥ抗体に属するものであり得る。さらに、抗体は、宿主生物体の免疫処置によって生じる抗体、またはその組換え操作されたバージョン、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、イントラボディに似ているものであってもよい。
【０２１７】
さらに、核酸化合物はまた、抗体断片、抗体のバリアント、付加体または誘導体、例えば単鎖可変断片、ダイアボディまたはトリアボディをコードしているものであってもよい。抗体断片は好ましくは、上記の型の抗体のＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆａｃｂ、ｐＦｃ’、ＦｄおよびＦｖ断片から選択される。一般に、抗体断片は当該技術分野で知られているものである。例えば、Ｆａｂ（“ｆｒａｇｍｅｎｔ，ａｎｔｉｇｅｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ”）断片は、重鎖および軽鎖の各々の１つの定常ドメインと１つの可変ドメインで構成されている。この２つの可変ドメインが、特異的抗原上のエピトープに結合する。この２つの鎖はジスルフィド結合によって連結されている。例えばｓｃＦｖ（“ｓｉｎｇｌｅ  ｃｈａｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｆｒａｇｍｅｎｔ”）断片は典型的には、軽鎖および重鎖の可変ドメインからなるものである。これらのドメインは人工の結合、一般的にはポリペプチド結合、例えば１５〜２５個のグリシン、プロリンおよび／またはセリン残基で構成されたペプチドによって連結されている。
【０２１８】
一実施形態では、生物学的に活性なカーゴ物質が少なくとも２種類の相違するＲＮＡの組合せを含むものであって、ＲＮＡのうちの１種類が抗体またはその断片の重鎖をコードしており、別のＲＮＡが該抗体またはその断片の対応する軽鎖をコードしているものである。
【０２１９】
さらなる一実施形態では、生物学的に活性なカーゴ物質が少なくとも２種類の相違するＲＮＡの組合せを含むものであって、ＲＮＡのうちの１種類が抗体またはその断片の重鎖可変領域をコードしており、別のＲＮＡが該抗体またはその断片の対応する軽鎖可変領域をコードしているものである。
【０２２０】
さらに、該抗体または抗体断片のいろいろな鎖がマルチシストロニック核酸（ポリシストロニック核酸とも称される）にコードされていることが好ましい。あるいはまた、いろいろな系統の抗体または抗体断片がいくつかのモノシストロニック核酸にコードされている。
【０２２１】
さらなる一実施形態によれば、本発明は、生物学的に活性なカーゴ物質の調製のための少なくとも１つの核酸分子の使用を含む。１つより多くの核酸分子が使用される場合、複合体化核酸分子は異なるものであり得る、すなわち、それにより少なくとも２つ相違する（複合体化）核酸分子の混合物が形成されている。
【０２２２】
一実施形態では、生物学的に活性なカーゴ物質は
（ｉ）ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質をコードしている核酸分子；および／または
（ｉｉ）１種類以上のガイドＲＮＡ配列（１つもしくは複数）
を含むものである。
【０２２３】
用語「ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質」には、限定されないが、ＣＡＳ９（ＣＲＩＳＰＲ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ９）、ＣＳＹ４、ｄＣＡＳ９、およびｄＣＡＳ９−エフェクタードメイン（アクチベーターおよび／またはインヒビタードメイン）融合タンパク質が包含される。ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質は、任意の数の種、例えば限定されないが、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｉｎｎｏｃｕａ、およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓに由来するものであり得る。
【０２２４】
用語「ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）」は、「人工ガイドＲＮＡ」、「短鎖ガイドＲＮＡ」、「低分子ガイドＲＮＡ」または「ｓｇＲＮＡ」とも称され、転写開始部位の上流の目的遺伝子の５’ＵＴＲの一方の鎖に相補的な典型的には２０〜２５ヌクレオチド長の配列を含むＲＮＡを示す。ｓｇＲＮＡの設計の説明は、例えばＭａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３９：８２３−８２６をみるとよい。人工ｓｇＲＮＡは目的遺伝子を標的化し、人工ポリヌクレオチドにコードされたＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質が目的遺伝子、例えば、転写のモジュレーションが所望される遺伝子と相互作用するように指向する。目的遺伝子は用途に応じて選択される。
【０２２５】
一実施形態では、本発明の組成物中またはナノ粒子（１個もしくは複数）中に含まれた１つの本発明の核酸分子が、前記ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質と同時に前記ガイドＲＮＡ（１つまたは複数）をコードしている１つの核酸分子を含む。
【０２２６】
さらなる一実施形態では、生物学的に活性なカーゴ物質は、１つより多くの核酸分子の組合せを含むものである。別の実施形態では、１つより多くの本発明の核酸分子が、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質および前記ガイドＲＮＡ（１つまたは複数）をコードしている前記核酸分子を含む。この場合、生物学的に活性なカーゴ物質は、Ｃａｓ９タンパク質と標的の特異的ｇＲＮＡの両方を発現する２つの相違するＲＮＡを含むものである。
【０２２７】
ｓｉＲＮＡ
好ましいさらなる一実施形態では、本発明のナノ粒子中に組み込まれる核酸化合物が、ｄｓＲＮＡ、好ましくはｓｉＲＮＡの形態である。ｄｓＲＮＡまたはｓｉＲＮＡは、特にＲＮＡ干渉の現象との関連において重要である。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）のインビトロ手法は、遺伝子発現の配列特異的抑制を誘発する二本鎖ＲＮＡ分子（ｄｓＲＮＡ）に基づいたものである（Ｚａｍｏｒｅ（２００１）Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．９：７４６−７５０；Ｓｈａｒｐ（２００１）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．５：４８５−４９０：Ｈａｎｎｏｎ（２００２）Ｎａｔｕｒｅ  ４１：２４４−２５１）。長鎖ｄｓＲＮＡでの哺乳動物細胞のトランスフェクションでは、プロテインキナーゼＲおよびＲｎａｓｅＬの活性化によって非特異的効果、例えばインターフェロン応答などがもたらされる（Ｓｔａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６７：２２７−２６４；Ｈｅ  ａｎｄ  Ｋａｔｚｅ（２００２）Ｖｉｒａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：９５−１１９）。このような非特異的効果は、３０ｂｐより短いｓｉＲＮＡでは誘発されないため、この非特異的効果は、短鎖の、例えば２１〜２３量体のいわゆるｓｉＲＮＡ（低分子干渉ＲＮＡ）を使用すると回避される（Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ  ４１１：４９４−４９８）。
【０２２８】
該核酸は、例えば、約１７〜約２９塩基対、好ましくは約１９〜約２５塩基対の長さを有する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）であり得る。ｄｓＲＮＡは、本明細書において前述した治療的に意義のあるタンパク質または抗原の核酸配列セクション（コードセクションまたは非コードセクションのどちらか、好ましくはコードセクション）と好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、例えば１００％（ｄｓＲＮＡのヌクレオチドに関して）相補的なものである。９０％相補的とは、ある長さ、例えば２０個のヌクレオチドのｄｓＲＮＡで、これには、それぞれのタンパク質をコードしているｍＲＮＡの対応するセクションとの相補性を有しないヌクレオチドが２個より多く含まれていないことを意味する。また、その配列が本明細書において前述した治療的に意義のあるタンパク質または抗原の核酸セクションと完全に相補的な二本鎖ＲＮＡも好ましい。
【０２２９】
一実施形態では、ｄｓＲＮＡは、一般構造５’−（Ｎ１７〜２９）−３’、好ましくは一般構造５’−（Ｎ１９〜２５）−３’、または５’−（Ｎ１９〜２４）−３’、または５’−（Ｎ２１〜２３）−３’を有するものであり、ここで、それぞれ、各Ｎはヌクレオチドであり、該ヌクレオチド配列は、本明細書において前述した治療的に意義のあるタンパク質または抗原に対応するｍＲＮＡセクションに相補的である。原則的に、該ｍＲＮＡのコード領域内に存在する１７〜２９、好ましくは１９〜２５塩基対の長さを有するあらゆるセクションが本明細書におけるｄｓＲＮＡの標的配列として有用であり得る。同様に、核酸として使用されるｄｓＲＮＡはまた、コード領域内内に存在するものではない、特に、例えば該ｍＲＮＡの５’非コード領域内の、本明細書において先に（活性成分として）記載した（治療的に意義のある）タンパク質または抗原のヌクレオチド配列に対して指向されるもの、したがって、調節機能を有するｍＲＮＡの非コード領域対して指向されるものであってもよい。したがって、核酸として使用されるｄｓＲＮＡの標的配列は、該ｍＲＮＡの翻訳領域および非翻訳領域内および／または本明細書において前述したタンパク質または抗原の制御エレメント領域内に存在するものであり得る。また、核酸として使用されるｄｓＲＮＡの標的配列は、非翻訳配列と翻訳配列の重複領域に存在するものであってもよく；特に、標的配列は、該ｍＲＮＡのコード領域の開始トリプレットの上流の少なくとも１個のヌクレオチドを含むものであり得る。
【０２３０】
免疫賦活性核酸
ａ）免疫賦活性ＣｐＧ核酸
別の実施形態によれば、本発明のナノ粒子中に組み込まれる核酸は免疫賦活性ＣｐＧ核酸、特に、好ましくは自然免疫応答を誘導するＣｐＧ−ＲＮＡまたはＣｐＧ−ＤＮＡである。潜在的に好適な免疫賦活性ＣｐＧ核酸の例としては、限定されないが、一本鎖ＣｐＧ−ＤＮＡ（ｓｓ  ＣｐＧ−ＤＮＡ）、二本鎖ＣｐＧ−ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）、一本鎖ＣｐＧ−ＲＮＡ（ｓｓ  ＣｐＧ−ＲＮＡ）および二本鎖ＣｐＧ−ＲＮＡ（ｄｓ  ＣｐＧ−ＲＮＡ）が挙げられる。好ましくは、ＣｐＧ核酸はＣｐＧ−ＲＮＡ、特に一本鎖ＣｐＧ−ＲＮＡ（ｓｓ  ＣｐＧ−ＲＮＡ）である。ヌクレオチドまたは塩基対に関するＣｐＧ核酸の好ましい長さは、ｓｉＲＮＡについて上記のような好ましいものと同様である。好ましくは、ＣｐＧモチーフは非メチル化型である。
【０２３１】
ｂ）免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）
さらなる択一例によれば、生物学的に活性なカーゴ物質として本発明のナノ粒子中に組み込まれる核酸は免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）の形態であり得、これは好ましくは自然免疫応答を惹起するものである。
【０２３２】
かかるｉｓＲＮＡは二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、または部分的に二本鎖のＲＮＡ、または短鎖ＲＮＡオリゴヌクレオチドであり得る。好ましい実施形態の一例では、これは一本鎖ＲＮＡである。
【０２３３】
さらに、ｉｓＲＮＡは環状であっても線状であってもよい。好ましい実施形態の一例では、線状ｉｓＲＮＡ、例えば線状一本鎖ＲＮＡまたは長鎖一本鎖ＲＮＡが使用される。
【０２３４】
さらに、ｉｓＲＮＡはコードＲＮＡであっても非コードＲＮＡであってもよい。好ましい実施形態の一例によれば、非コードＲＮＡ、例えば非コード一本鎖ＲＮＡ、非コード線状ＲＮＡ、非コード線状一本鎖ＲＮＡ、または非コード長鎖線状一本鎖ＲＮＡがｉｓＲＮＡとして使用される。
【０２３５】
好ましいさらなる一実施形態によれば、ｉｓＲＮＡは、インビトロ転写されたＲＮＡの場合のように、その５’末端に三リン酸部を担持しているものである。この好ましいものは、前述の型のすべての線状ｉｓＲＮＡに適用される。
【０２３６】
この場合も、本発明による生物学的に活性なカーゴ物質として使用されるｉｓＲＮＡは、天然に存在するものであれ合成であれ、自然免疫応答を誘導し得る、および／または抗原によって誘導された適応免疫応答を増強もしくは補助し得る任意の型またはクラスのＲＮＡから選択され得る。
【０２３７】
これとの関連において、免疫応答は種々の様式で起こり得る。好適な適応免疫応答のための実質的な要素は一部の特定のＴ細胞亜集団の刺激である。Ｔリンパ球は、典型的には２つの亜集団Ｔ−ヘルパー１（Ｔｈ１）細胞とＴ−ヘルパー２（Ｔｈ２）細胞に分けられ、これらによって免疫系が細胞内（Ｔｈ１）および細胞外（Ｔｈ２）病原体、例えば抗原を破壊し得る。この２つのＴｈ細胞集団は、これらが産生するエフェクタータンパク質（サイトカイン）のパターンが異なっている。したがって、Ｔｈ１細胞は、マクロファージおよび細胞傷害性Ｔ細胞の活性化によって細胞性免疫応答を補助する。他方、Ｔｈ２細胞は、形質細胞への変換のためのＢ細胞の刺激によって、および抗体（例えば、抗原に対する）の形成によって体液性免疫応答を促進させる。したがって、Ｔｈ１／Ｔｈ２比は適応免疫応答の誘導および維持において非常に重要である。
【０２３８】
本発明との関連において、適応免疫応答のＴｈ１／Ｔｈ２比は細胞性応答（Ｔｈ１応答）の方にシフトさせる、すなわち、細胞性免疫応答を誘導または向上させることが好ましい。例えば、適応免疫応答を補助し得る自然免疫系は、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のリガンドによって賦活され得る。ＴＬＲは、哺乳動物において病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を認識し、自然免疫において極めて重要な役割を果たす高度に保存されたパターン認識受容体（ＰＲＲ）ポリペプチドファミリーである。現在、少なくとも１３個のファミリー構成員が同定されており、ｔｏｌｌ様受容体  ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２およびＴＬＲ１３と表記される。さらに、いくつかの特異的ＴＬＲリガンドも同定されている。非メチル化型細菌ＤＮＡおよびその合成アナログ（ＣｐＧ  ＤＮＡ）がＴＬＲ９のリガンドであることがわかった（Ｈｅｍｍｉ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｎａｔｕｒｅ  ４０８：７４０−５；Ｂａｕｅｒ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ  ＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉ  ＵＳＡ  ９８、９２３７−４２）。さらに、ある特定のＴＬＲのリガンドはある特定の核酸分子を含んでいること、およびある特定の型のＲＮＡは配列非依存的様式または配列依存的様式で免疫賦活性であり、このような種々の免疫賦活性ＲＮＡはＴＬＲ3、ＴＬＲ７もしくはＴＬＲ８または細胞内受容体、例えばＲＩＧ−Ｉ、ＭＤＡ−５などを刺激するものであり得ることが報告されている。Ｌｉｐｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．により、ある特定のＧ，Ｕ含有オリゴリボヌクレオチドがＴＬＲ７およびＴＬＲ８を介して作用することにより免疫賦活性となることが調べられた（ＷＯ０３／０８６２８０参照）。Ｌｉｐｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．によって報告されたこの免疫賦活性Ｇ，Ｕ含有オリゴリボヌクレオチドは、ＲＮＡ供給源、例えばリボソームＲＮＡ、トランスファーＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡおよびウイルスＲＮＡから誘導可能であると考えられた。
【０２３９】
したがって、本発明との関連において使用されるｉｓＲＮＡは、免疫賦活性であることが知られた任意のＲＮＡ配列、例えば限定されないが、ＴＬＲ、例えばマウスファミリー構成員のＴＬＲ1〜ＴＬＲ1３、もしくはより好ましくはヒトファミリー構成員のＴＬＲ1〜ＴＬＲ1０から選択されるＴＬＲ、特に、ＴＬＲ７もしくはＴＬＲ８のリガンド；またはＲＮＡの細胞内受容体、例えばＲＩＧ−ＩもしくはＭＤＡ−５（例えば、Ｍｅｙｌａｎ，Ｅ．，Ｔｓｃｈｏｐｐ，Ｊ．（２００６）：Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ＲＮＡ  ｈｅｌｉｃａｓｅｓ：Ｔｗｏ  ｐａｒａｌｌｅｌ  ｗａｙｓ  ｔｏ  ｔｒｉｇｇｅｒ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  ２２，５６１−５６９参照）のリガンドであるＲＮＡ配列および／または該リガンドをコードしているＲＮＡ配列を含むものであり得る。
【０２４０】
限定されないが、ｉｓＲＮＡとしては、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）およびウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）が挙げられ得る。これは、約５０００個までのヌクレオチド、例えば、それぞれ約５〜約５０００個のヌクレオチド、または約５〜約１０００個、または約５００〜約５０００個、または約５〜約５００個、または約５〜約２５０個、または約５〜約１００個、または約５〜約５０またはまたは約５〜約３０個のヌクレオチドを含むものであり得る。
【０２４１】
この実施形態のさらに好ましい一態様によれば、ｉｓＲＮＡは、式ＶまたはＶＩの核酸を含むもの、または該核酸からなるものであり：
（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａ（式Ｖ）
式中：
Ｇはグアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）またはグアノシン（グアニン）もしくはウリジン（ウラシル）のアナログ、好ましくは、グアノシン（グアニン）またはそのアナログであり；
Ｘはグアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）またはこれらのヌクレオチド（ヌクレオシド）のアナログ、好ましくは、ウリジン（ウラシル）またはそのアナログであり；
Ｎは、約４〜５０個、好ましくは約４〜４０個、より好ましくは約４〜３０個または４〜２０個の核酸の長さを有する核酸配列であり、各Ｎは独立して、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）またはこれらのヌクレオチド（ヌクレオシド）のアナログから選択され；
ａは、１〜２０、好ましくは１〜１５、最も好ましくは１〜１０の整数であり；
ｌは、１〜４０の整数であり、
ここで、ｌ＝１である場合、Ｇはグアノシン（グアニン）またはそのアナログであり、ｌ＞１である場合、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％がグアノシン（グアニン）またはそのアナログであり；
ｍは整数であり、少なくとも３であり；ここで、ｍ＝３である場合、Ｘはウリジン（ウラシル）またはそのアナログであり、ｍ＞３である場合、少なくとも３個連続のウリジン（ウラシル）またはウリジン（ウラシル）のアナログが存在し；
ｎは、１〜４０の整数であり、ここで、ｎ＝１である場合、Ｇはグアノシン（グアニン）またはそのアナログであり、ｎ＞１である場合、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％がグアノシン（グアニン）またはそのアナログであり；
ｕ、ｖは互いに独立して０〜５０の整数であり、ここで、好ましくは、ｕ＝０である場合、ｖ≧１であるか、またはｖ＝０である場合、ｕ≧１であり；
ここで、式Ｖの核酸分子は、少なくとも５０個のヌクレオチド、好ましくは少なくとも１００個のヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１５０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは少なくとも２００個のヌクレオチド、最も好ましくは少なくとも２５０個のヌクレオチドの長さを有するものである；
（ＮｕＣｌＸｍＣｎＮｖ）ａ（式ＶＩ）
式中：
Ｃはシチジン（シトシン）、ウリジン（ウラシル）またはシチジン（シトシン）もしくはウリジン（ウラシル）のアナログ、好ましくは、シチジン（シトシン）またはそのアナログであり；
Ｘはグアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）または上記のヌクレオチド（ヌクレオシド）のアナログ、好ましくは、ウリジン（ウラシル）またはそのアナログであり；
Ｎは各々、約４〜５０個、好ましくは約４〜４０個、より好ましくは約４〜３０個または４〜２０個の核酸の長さを有する核酸配列であり、各Ｎは、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）またはこれらのヌクレオチド（ヌクレオシド）のアナログから独立して選択され；
ａは、１〜２０、好ましくは１〜１５、最も好ましくは１〜１０の整数であり；
ｌは、１〜４０の整数であり、ここで、ｌ＝１である場合、Ｃはシチジン（シトシン）またはそのアナログであり、ｌ＞１である場合、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％がシチジン（シトシン）またはそのアナログであり；
ｍは整数であり、少なくとも３であり；ここで、ｍ＝３である場合、Ｘはウリジン（ウラシル）またはそのアナログであり、ｍ＞３である場合、少なくとも３個連続のウリジン（ウラシル）またはウリジン（ウラシル）のアナログが存在し；
ｎは、１〜４０の整数であり、ここで、ｎ＝１である場合、Ｃはシチジン（シトシン）またはそのアナログであり、ｎ＞１である場合、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％がシチジン（シトシン）またはそのアナログであり；
ｕ、ｖは互いに独立して０〜５０の整数であり、ここで、好ましくは、ｕ＝０である場合、ｖ≧１であるか、またはｖ＝０である場合、ｕ≧１であり；
ここで、式ＶＩの核酸分子は、少なくとも５０個のヌクレオチド、好ましくは少なくとも１００個のヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１５０個のヌクレオチド、さらにより好ましくは少なくとも２００個のヌクレオチド、最も好ましくは少なくとも２５０個のヌクレオチドの長さを有するものである。
【０２４２】
式ＶＩに関して、エレメントＮ（すなわち、ＮｕとＮｖ）およびＸ（Ｘｍ）、特に、上記に規定したコア構造、ならびに整数ａ、ｌ、ｍ、ｎ、ｕおよびｖについて上記に示した定義はいずれも、式Ｖのエレメントに相応して同様に適用され、ここで、式ＶＩにおいてコア構造はＣｌＸｍＣｎと規定される。隣接するエレメントＮｕとＮｖの定義は、ＮｕとＮｖについて上記に示した定義と同一である。
【０２４３】
この実施形態の非常に特に好ましい一態様によれば、式Ｖによる核酸分子は、例えば、以下のいずれかの配列から選択され得る：
UAGCGAAGCUCUUGGACCUAGGUUUUUUUUUUUUUUUGGGUGCGUUCCUAGAAGUACACG（配列番号：1）
UAGCGAAGCUCUUGGACCUAGGUUUUUUUUUUUUUUUGGGUGCGUUCCUAGAAGUACACGAUCGCUUCGAGAACCUGGAUCCAAAAAAAAAAAAAAACCCACGCAAGGAUCUUCAUGUGC（配列番号：２）
GGGAGAAAGCUCAAGCUUGGAGCAAUGCCCGCACAUUGAGGAAACCGAGUUGCAUAUCUCAGAGUAUUGGCCCCCGUGUAGGUUAUUCUUGACAGACAGUGGAGCUUAUUCACUCCCAGGAUCCGAGUCGCAUACUACGGUACUGGUGACAGACCUAGGUCGUCAGUUGACCAGUCCGCCACUAGACGUGAGUCCGUCAAAGCAGUUAGAUGUUACACUCUAUUAGAUC（配列番号：３）
GGGAGAAAGCUCAAGCUUGGAGCAAUGCCCGCACAUUGAGGAAACCGAGUUGCAUAUCUCAGAGUAUUGGCCCCCGUGUAGGUUAUUCUUGACAGACAGUGGAGCUUAUUCACUCCCAGGAUCCGAGUCGCAUACUACGGUACUGGUGACAGACCUAGGUCGUCAGUUGACCAGUCCGCCACUAGACGUGAGUCCGUCAAAGCAGUUAGAUGUUACACUCUAUUAGAUCUCGGAUUACAGCUGGAAGGAGCAGGAGUAGUGUUCUUGCUCUAAGUACCGAGUGUGCCCAAUACCCGAUCAGCUUAUUAACGAACGGCUCCUCCUCUUAGACUGCAGCGUAAGUGCGGAAUCUGGGGAUCAAAUUACUGACUGCCUGGAUUACCCUCGGACAUAUAACCUUGUAGCACGCUGUUGCUGUAUAGGUGACCAACGCCCACUCGAGUAGACCAGCUCUCUUAGUCCGGACAAUGAUAGGAGGCGCGGUCAAUCUACUUCUGGCUAGUUAAGAAUAGGCUGCACCGACCUCUAUAAGUAGCGUGUCCUCUAG（配列番号：４）
GGGAGAAAGCUCAAGCUUGGAGCAAUGCCCGCACAUUGAGGAAACCGAGUUGCAUAUCUCAGAGUAUUGGCCCCCGUGUAGGUUAUUCUUGACAGACAGUGGAGCUUAUUCACUCCCAGGAUCCGAGUCGCAUACUACGGUACUGGUGACAGACCUAGGUCGUCAGUUGACCAGUCCGCCACUAGACGUGAGUCCGUCAAAGCAGUUAGAUGUUACACUCUAUUAGAUCUCGGAUUACAGCUGGAAGGAGCAGGAGUAGUGUUCUUGCUCUAAGUACCGAGUGUGCCCAAUACCCGAUCAGCUUAUUAACGAACGGCUCCUCCUCUUAGACUGCAGCGUAAGUGCGGAAUCUGGGGAUCAAAUUACUGACUGCCUGGAUUACCCUCGGACAUAUAACCUUGUAGCACGCUGUUGCUGUAUAGGUGACCAACGCCCACUCGAGUAGACCAGCUCUCUUAGUCCGGACAAUGAUAGGAGGCGCGGUCAAUCUACUUCUGGCUAGUUAAGAAUAGGCUGCACCGACCUCUAUAAGUAGCGUGUCCUCUAGAGCUACGCAGGUUCGCAAUAAAAGCGUUGAUUAGUGUGCAUAGAACAGACCUCUUAUUCGGUGAAACGCCAGAAUGCUAAAUUCCAAUAACUCUUCCCAAAACGCGUACGGCCGAAGACGCGCGCUUAUCUUGUGUACGUUCUCGCACAUGGAAGAAUCAGCGGGCAUGGUGGUAGGGCAAUAGGGGAGCUGGGUAGCAGCGAAAAAGGGCCCCUGCGCACGUAGCUUCGCUGUUCGUCUGAAACAACCCGGCAUCCGUUGUAGCGAUCCCGUUAUCAGUGUUAUUCUUGUGCGCACUAAGAUUCAUGGUGUAGUCGACAAUAACAGCGUCUUGGCAGAUUCUGGUCACGUGCCCUAUGCCCGGGCUUGUGCCUCUCAGGUGCACAGCGAUACUUAAAGCCUUCAAGGUACUCGACGUGGGUACCGAUUCGUGACACUUCCUAAGAUUAUUCCACUGUGUUAGCCCCGCACCGCCGACCUAAACUGGUCCAAUGUAUACGCAUUCGCUGAGCGGAUCGAUAAUAAAAGCUUGAAUU（配列番号：５）
GGGAGAAAGCUCAAGCUUAUCCAAGUAGGCUGGUCACCUGUACAACGUAGCCGGUAUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGACCGUCUCAAGGUCCAAGUUAGUCUGCCUAUAAAGGUGCGGAUCCACAGCUGAUGAAAGACUUGUGCGGUACGGUUAAUCUCCCCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUAGUAAAUGCGUCUACUGAAUCCAGCGAUGAUGCUGGCCCAGAUC（配列番号：６）
GGGAGAAAGCUCAAGCUUAUCCAAGUAGGCUGGUCACCUGUACAACGUAGCCGGUAUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGACCGUCUCAAGGUCCAAGUUAGUCUGCCUAUAAAGGUGCGGAUCCACAGCUGAUGAAAGACUUGUGCGGUACGGUUAAUCUCCCCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUAGUAAAUGCGUCUACUGAAUCCAGCGAUGAUGCUGGCCCAGAUCUUCGACCACAAGUGCAUAUAGUAGUCAUCGAGGGUCGCCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGGCCCAGUUCUGAGACUUCGCUAGAGACUACAGUUACAGCUGCAGUAGUAACCACUGCGGCUAUUGCAGGAAAUCCCGUUCAGGUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUCCGCUCACUAUGAUUAAGAACCAGGUGGAGUGUCACUGCUCUCGAGGUCUCACGAGAGCGCUCGAUACAGUCCUUGGAAGAAUCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGUGCGACGAUCACAGAGAACUUCUAUUCAUGCAGGUCUGCUCUAG（配列番号：７）
GGGAGAAAGCUCAAGCUUAUCCAAGUAGGCUGGUCACCUGUACAACGUAGCCGGUAUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGACCGUCUCAAGGUCCAAGUUAGUCUGCCUAUAAAGGUGCGGAUCCACAGCUGAUGAAAGACUUGUGCGGUACGGUUAAUCUCCCCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUAGUAAAUGCGUCUACUGAAUCCAGCGAUGAUGCUGGCCCAGAUCUUCGACCACAAGUGCAUAUAGUAGUCAUCGAGGGUCGCCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGGCCCAGUUCUGAGACUUCGCUAGAGACUACAGUUACAGCUGCAGUAGUAACCACUGCGGCUAUUGCAGGAAAUCCCGUUCAGGUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUCCGCUCACUAUGAUUAAGAACCAGGUGGAGUGUCACUGCUCUCGAGGUCUCACGAGAGCGCUCGAUACAGUCCUUGGAAGAAUCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGUGCGACGAUCACAGAGAACUUCUAUUCAUGCAGGUCUGCUCUAGAACGAACUGACCUGACGCCUGAACUUAUGAGCGUGCGUAUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUCCUCCCAACAAAUGUCGAUCAAUAGCUGGGCUGUUGGAGACGCGUCAGCAAAUGCCGUGGCUCCAUAGGACGUGUAGACUUCUAUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUCCCGGGACCACAAAUAAUAUUCUUGCUUGGUUGGGCGCAAGGGCCCCGUAUCAGGUCAUAAACGGGUACAUGUUGCACAGGCUCCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUCGCUGAGUUAUUCCGGUCUCAAAAGACGGCAGACGUCAGUCGACAACACGGUCUAAAGCAGUGCUACAAUCUGCCGUGUUCGUGUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGUGAACCUACACGGCGUGCACUGUAGUUCGCAAUUCAUAGGGUACCGGCUCAGAGUUAUGCCUUGGUUGAAAACUGCCCAGCAUACUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUCAUAUUCCCAUGCUAAGCAAGGGAUGCCGCGAGUCAUGUUAAGCUUGAAUU（配列番号：８）
【０２４４】
別の非常に特に好ましい実施形態によれば、式ＶＩによる核酸分子は、例えば、以下のいずれかの配列から選択され得る：
UAGCGAAGCUCUUGGACCUACCUUUUUUUUUUUUUUCCCUGCGUUCCUAGAAGUACACG （配列番号：９）
または
UAGCGAAGCUCUUGGACCUACCUUUUUUUUUUUUUUUCCCUGCGUUCCUAGAAGUACACGAUCGCUUCGAGAACCUGGAUGGAAAAAAAAAAAAAAAGGGACGCAAGGAUCUUCAUGUGC （配列番号：１０）
【０２４５】
さらなる一実施形態では、本発明による生物学的に活性なカーゴ物質として使用される核酸化合物は化学修飾された核酸の形態であるか、または安定化された核酸、好ましくは安定化されたＲＮＡもしくはＤＮＡ、例えば、エキソ−またはエンドヌクレアーゼによるインビボ分解本質的に抵抗性であるＲＮＡである。
【０２４６】
化学修飾：
核酸に関する用語「修飾（１つまたは複数）」、「化学修飾（１つまたは複数）」、「修飾された」などは、本明細書で用いる場合、主鎖修飾ならびに糖鎖修飾または塩基修飾を含む化学修飾を示し得る。それぞれの修飾産物は、例えば「修飾核酸」または「化学修飾核酸」と称され得る。
【０２４７】
本発明との関連における主鎖修飾は、核酸化合物、好ましくはｍＲＮＡに含まれているヌクレオチドの主鎖のリン酸基が化学修飾される修飾である。糖鎖修飾は、核酸のヌクレオチドの糖鎖の化学修飾である。さらに、本発明との関連における塩基修飾は、人工核酸、好ましくはｍＲＮＡのヌクレオチドの塩基部分の化学修飾である。これとの関連において、ヌクレオチドアナログまたは修飾体は好ましくは、転写および／または翻訳に適用可能なヌクレオチドアナログから選択される。
【０２４８】
糖鎖修飾：
前記のように、ヌクレオシドおよびヌクレオチドは糖鎖部分において修飾され得る。例えば、２’−ヒドロキシル基（ＯＨ）は、いくつかのいろいろな「オキシ」または「デオキシ」置換基で修飾され得るか、または置き換えられ得る。「オキシ」−２’−ヒドロキシル基修飾の例としては、限定されないが、アルコキシまたはアリールオキシ（−ＯＲ、例えば、Ｒ＝Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールもしくは糖鎖）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＲ；「ロックド」核酸（ＬＮＡ）、これは、２’−ヒドロキシルが、例えばメチレン架橋によって同じリボース糖鎖の４’−炭素に連結されている；およびアミノ基（−Ｏ−アミノ、ここで、アミノ基、例えばＮＲＲは、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノもしくはジヘテロアリールアミノ、エチレンジアミン、ポリアミノであり得る）またはアミノアルコキシが挙げられる。
【０２４９】
「デオキシ」修飾は、水素、アミノ（例えば、ＮＨ２；アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジヘテロアリールアミノもしくはアミノ酸）を含むものであるか；またはアミノ基が糖鎖にリンカーを介して結合され得るものであり、ここで、該リンカーは１個以上の原子Ｃ、ＮおよびＯを含むものである。
【０２５０】
また、糖鎖基は、リボースの対応する炭素のものと反対の立体化学配置を有する１個以上の炭素を含有しているものであってもよい。したがって、人工核酸、好ましくはｍＲＮＡは、例えば糖鎖としてアラビノースを含有しているヌクレオチドを含むものであり得る。
【０２５１】
主鎖修飾
核酸化合物の主鎖のリン酸基は、１個以上の酸素原子を異なる置換基で置き換えることにより修飾され得る。さらに、修飾されたヌクレオシドおよびヌクレオチドは、本明細書に記載の修飾リン酸基での非修飾リン酸基部分の全置換を含むものであってもよい。修飾リン酸基の例としては、限定されないが、ホスホロチオエート、ホスホロセレネート、ボラノホスフェート、ボラノホスフェートエステル、ハイドロジェンホスホネート、ホスホロアミデート、アルキルまたはアリールホスホネートおよびホスホトリエステルが挙げられる。ホスホロジチオエートは、両方にイオウで置き換えられた非連結性酸素を有する。また、リン酸基リンカーが、窒素（架橋型ホスホロアミデート）、イオウ（架橋型ホスホロチオエート）および炭素（架橋型メチレン−ホスホネート）での連結性酸素の置き換えによって修飾されていてもよい。
【０２５２】
塩基修飾：
任意選択で、修飾は核酸化合物の核酸塩基部分に関するものであってもよい。核酸、例えばＲＮＡにみられる核酸塩基の例としては、限定されないが、アデニン、グアニン、シトシンおよびウラシルが挙げられる。例えば、本明細書に記載のヌクレオシドおよびヌクレオチドは主溝表面上が化学修飾されたものであり得る。一部の実施形態では、主溝の化学修飾は、アミノ基、チオール基、アルキル基またはハロ基を含むものであり得る。
【０２５３】
本発明の特に好ましい実施形態では、塩基修飾は、２−アミノ−６−クロロプリンリボシド−５’−三リン酸、２−アミノプリン−リボシド−５’−三リン酸；２−アミノアデノシン−５’−三リン酸、２’−アミノ−２’−デオキシシチジン−三リン酸、２−チオシチジン−５’−三リン酸、２−チオウリジン−５’−三リン酸、２’−フルオロチミジン−５’−三リン酸、２’−Ｏ−メチルイノシン−５’−三リン酸  ４−チオウリジン−５’−三リン酸、５−アミノアリルシチジン−５’−三リン酸、５−アミノアリルウリジン−５’−三リン酸、５−ブロモシチジン−５’−三リン酸、５−ブロモウリジン−５’−三リン酸、５−ブロモ−２’−デオキシシチジン−５’−三リン酸、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン−５’−三リン酸、５−ヨードシチジン−５’−三リン酸、５−ヨード−２’−デオキシシチジン−５’−三リン酸、５−ヨードウリジン−５’−三リン酸、５−ヨード−２’−デオキシウリジン−５’−三リン酸、５−メチルシチジン−５’−三リン酸、５−メチルウリジン−５’−三リン酸、５−プロピニル−２’−デオキシシチジン−５’−三リン酸、５−プロピニル−２’−デオキシウリジン−５’−三リン酸、６−アザシチジン−５’−三リン酸、６−アザウリジン−５’−三リン酸、６−クロロプリンリボシド−５’−三リン酸、７−デアザアデノシン−５’−三リン酸、７−デアザグアノシン−５’−三リン酸、８−アザアデノシン−５’−三リン酸、８−アジドアデノシン−５’−三リン酸、ベンゾイミダゾール−リボシド−５’−三リン酸、Ｎ１−メチルアデノシン−５’−三リン酸、Ｎ１−メチルグアノシン−５’−三リン酸、Ｎ６−メチルアデノシン−５’−三リン酸、Ｏ６−メチルグアノシン−５’−三リン酸、プソイドウリジン−５’−三リン酸、またはピューロマイシン−５’−三リン酸、キサントシン−５’−三リン酸から選択される。ヌクレオチドに対して特に好ましいものは、５−メチルシチジン−５’−三リン酸、７−デアザグアノシン−５’−三リン酸、５−ブロモシチジン−５’−三リン酸、およびプソイドウリジン−５’−三リン酸からなる塩基修飾型ヌクレオチドの群から選択される塩基修飾が示される。
【０２５４】
一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドとしては、ピリジン−４−オンリボヌクレオシド、５−アザ−ウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオウリジン、４−チオ−プソイドウリジン、２−チオ−プソイドウリジン、５−ヒドロキシウリジン、３−メチルウリジン、５−カルボキシメチル−ウリジン、１−カルボキシメチル−プソイドウリジン、５−プロピニル−ウリジン、１−プロピニル−プソイドウリジン、５−タウリノメチルウリジン、１−タウリノメチル−プソイドウリジン、５−タウリノメチル−２−チオ−ウリジン、ｌ−タウリノメチル−４−チオ−ウリジン、５−メチル−ウリジン、１−メチル−プソイドウリジン、４−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、２−チオ−ｌ−メチル−プソイドウリジン、１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、ジヒドロウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−ジヒドロプソイドウリジン、２−メトキシウリジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−プソイドウリジン、および４−メトキシ−２−チオ−プソイドウリジンが挙げられる。
【０２５５】
一部の実施形態では、修飾ヌクレオシドとしては、５−アザ−シチジン、プソイドイソシチジン、３−メチル−シチジン、Ｎ４−アセチルシチジン、５−ホルミルシチジン、Ｎ４−メチルシチジン、５−ヒドロキシメチルシチジン、１−メチル−プソイドイソシチジン、ピロロ−シチジン、ピロロ−プソイドイソシチジン、２−チオ−シチジン、２−チオ−５−メチル−シチジン、４−チオ−プソイドイソシチジン、４−チオ−１−メチル−プソイドイソシチジン、４−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドイソシチジン、１−メチル−１−デアザ−プソイドイソシチジン、ゼブラリン、５−アザ−ゼブラリン、５−メチル−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ−ゼブラリン、２−チオ−ゼブラリン、２−メトキシ−シチジン、２−メトキシ−５−メチル−シチジン、４−メトキシ−プソイドイソシチジン、および４−メトキシ−ｌ−メチル−プソイドイソシチジンが挙げられる。
【０２５６】
他の実施形態では、修飾ヌクレオシドとしては、２−アミノプリン、２、６−ジアミノプリン、７−デアザ−アデニン、７−デアザ−８−アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２−アミノプリン、７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミノプリン、１−メチルアデノシン、Ｎ６−メチルアデノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、Ｎ６−グリシニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−トレオニル  カルバモイルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデノシン、７−メチルアデニン、２−メチルチオ−アデニン、および２−メトキシ−アデニンが挙げられる。
【０２５７】
他の実施形態では、修飾ヌクレオシドとしては、イノシン、１−メチル−イノシン、ワイオシン、ワイブトシン、７−デアザ−グアノシン、７−デアザ−８−アザ−グアノシン、６−チオ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−グアノシン、６−チオ−７−メチル−グアノシン、７−メチルイノシン、６−メトキシ−グアノシン、１−メチルグアノシン、Ｎ２−メチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２−メチル−６−チオ−グアノシン、およびＮ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシンが挙げられる。
【０２５８】
一部の実施形態では、ヌクレオチドは、主溝表面が修飾され得、ウラシルのＣ−５の水素をメチル基またはハロ基で置き換えることを含むものであり得る。
【０２５９】
具体的な実施形態では、修飾ヌクレオシドは５’−Ｏ−（１−チオリン酸）−アデノシン、５’−Ｏ−（１−チオリン酸）−シチジン、５’−Ｏ−（１−チオリン酸）−グアノシン、５’−Ｏ−（１−チオリン酸）−ウリジンまたは５’−Ｏ−（１−チオリン酸）−プソイドウリジンである。
【０２６０】
さらなる具体的な実施形態では、修飾された核酸化合物、好ましくはｍＲＮＡは、６−アザ−シチジン、２−チオ−シチジン、α−チオ−シチジン、プソイド−イソ−シチジン、５−アミノアリル−ウリジン、５−ヨード−ウリジン、Ｎ１−メチル−プソイドウリジン、５，６−ジヒドロウリジン、α−チオ−ウリジン、４−チオ−ウリジン、６−アザ−ウリジン、５−ヒドロキシ−ウリジン、デオキシ−チミジン、５−メチル−ウリジン、ピロロ−シチジン、イノシン、α−チオ−グアノシン、６−メチル−グアノシン、５−メチル−シチジン（ｃｙｔｄｉｎｅ）、８−オキソ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、Ｎ１−メチル−アデノシン、２−アミノ−６−クロロ−プリン、Ｎ６−メチル−２−アミノ−プリン、プソイド−イソ−シチジン、６−クロロ−プリン、Ｎ６−メチル−アデノシン、α−チオ−アデノシン、８−アジド−アデノシン、７−デアザ−アデノシンから選択されるヌクレオシド修飾を含むものであり得る。
【０２６１】
一実施形態では、該核酸は脂質修飾を示すものである。本明細書に規定したかかる脂質修飾型の核酸またはＲＮＡは典型的には、該核酸またはＲＮＡと共有結合により連結された少なくとも１つのリンカーと、それぞれのリンカーと共有結合により連結された少なくとも１つの脂質とをさらに含むものである。あるいはまた、脂質修飾型核酸は、本明細書に規定した少なくとも１個の核酸と、該核酸と共有結合により連結された（リンカーなしで）少なくとも１つの（二官能性の）脂質とを含むものである。第３の択一例によれば、脂質修飾型核酸は、本明細書に規定した核酸分子と、該ＲＮＡと共有結合により連結された少なくとも１つのリンカーと、それぞれのリンカーと共有結合により連結された少なくとも１つの脂質を含み、該核酸と共有結合により連結された（リンカーなしで）少なくとも１つの（二官能性の）脂質もまた含むものである。これとの関連において、脂質修飾は線状の核酸配列の末端部に存在することが特に好ましい。
【０２６２】
本発明の別の好ましい実施形態によれば、本明細書に規定した修飾核酸配列、特に、本明細書に規定した修飾ＲＮＡは、いわゆる「５’キャップ」構造の付加によって修飾され得、該構造は好ましくは、本明細書に記載の核酸を安定化させるものである。５’−キャップは、一般的には成熟ＲＮＡの５’末端を「キャップする」実体、典型的には、修飾ヌクレオチド実体である。５’−キャップは典型的には修飾ヌクレオチドによって、特にグアニンヌクレオチドの誘導体によって形成され得る。好ましくは、５’−キャップは５’末端に５’−５’−三リン酸結合によって連結される。５’−キャップはメチル化型、例えばｍ７ＧｐｐｐＮであり得、ここで、Ｎは、５’−キャップを担持している核酸の５’末端ヌクレオチド、典型的にはＲＮＡの５’末端である。ｍ７ＧｐｐｐＮは５’−キャップ構造であり、これは、ポリメラーゼＩＩによって転写されるＲＮＡに天然に存在し、したがって、好ましくは、これとの関連における修飾ＲＮＡ中に含められる修飾とはみなされない。したがって、本発明の修飾ＲＮＡ配列は、５’−キャップとしてｍ７ＧｐｐｐＮを含んでいてもよいが、さらに該修飾ＲＮＡ配列は、典型的には、本明細書に規定した少なくとも１つのさらなる修飾を含むものである。
【０２６３】
５’キャップ構造のさらなる例としては、グリセリル、逆位（ｉｎｖｅｒｔｅｄ）デオキシ脱塩基残基（部分）、４’，５’メチレンヌクレオチド、１−（β−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’−チオヌクレオチド、炭素環式のヌクレオチド、１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド、Ｌ−ヌクレオチド、α−ヌクレオチド、修飾塩基ヌクレオチド、トレオ−ペントフラノシルヌクレオチド、非環式の３’，４’−セコヌクレオチド、非環式の３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド、非環式の３，５ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、３’−３’−逆位ヌクレオチド部分、３’−３’−逆位脱塩基部分、３’−２’−逆位ヌクレオチド部分、３’−２’−逆位脱塩基部分、１，４−ブタンジオールホスフェート、３’−ホスホルアミデート、ヘキシルホスフェート、アミノヘキシルホスフェート、３’−ホスフェート、３’ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、または架橋性もしくは非架橋性のメチルホスホネート部分が挙げられる。このような修飾型５’−キャップ構造は、これとの関連における少なくとも１つの修飾とみなされる。
【０２６４】
特に好ましい修飾型５’−キャップ構造は、キャップ１（ｍ７Ｇの隣接するヌクレオチドのリボースのメチル化）、キャップ２（ｍ７Ｇの下流の２つ目のヌクレオチドのリボースのさらなるメチル化）、キャップ３（ｍ７Ｇの下流の３つ目のヌクレオチドのリボースのさらなるメチル化）、キャップ４（ｍ７Ｇの下流の４つ目のヌクレオチドのリボースのメチル化）、ＡＲＣＡ（抗逆キャップアナログ、修飾ＡＲＣＡ（例えば、ホスホチオエート修飾ＡＲＣＡ）、イノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’−フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、および２−アジド−グアノシンである。したがって、本発明によるＲＮＡは、好ましくは５’−キャップ構造を含むものである。
【０２６５】
好ましい一実施形態では、５’−キャップ構造は共転写により、本明細書に規定したキャップ−アナログを本明細書に規定したＲＮＡインビトロ転写反応において用いて付加される。別の実施形態では、５’−キャップ構造は酵素的キャッピングによって、キャッピング酵素（例えば、ワクシニアウイルスキャッピング酵素）を用いて付加される。
【０２６６】
任意選択で、エキソ−またはエンドヌクレアーゼによるインビボ分解に本質的に抵抗性であるｍＲＮＡである核酸が選択され得る。かかる安定化は、例えば、主鎖のリン酸基を化学修飾することによって行われ得る。糖鎖または塩基の修飾をさらに使用してもよい。また、ｍＲＮＡを、いわゆる「５’キャップ」構造を付加することによって、ＲＮａｓｅによる分解に対して安定化させてもよい。これとの関連において特に好ましいものは、５’キャップ構造としてのＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇまたはｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｎ（ＮはＡ、Ｇ、ＣまたはＵである）が示される。別の例によれば、該ｍＲＮＡは３’末端に、典型的には約１０〜約２００個のアデノシンヌクレオチド、好ましくは約１０〜約１００個のアデノシンヌクレオチド、もしくは約２０〜約１００個のアデノシンヌクレオチドまたはさらには約４０〜約８０個のアデノシンヌクレオチドのポリ−Ａ尾部を示すものであり得る。さらなる一例によれば、該ｍＲＮＡは３’末端に、典型的には約１０〜約２００個のシトシンヌクレオチド、好ましくは約１０〜約１００個のシトシンヌクレオチド、もしくは約２０〜約７０個のシトシンヌクレオチド、もしくは約２０〜約６０個またはさらには約１０〜約４０個のシトシンヌクレオチドのポリ−Ｃ尾部を有するものであり得る。
【０２６７】
別の実施形態によれば、本発明の核酸配列は、該核酸配列のグアノシン／シトシン（Ｇ／Ｃ）含有量を修正することにより修正され、したがって安定化され得る。
【０２６８】
本発明の特に好ましい一実施形態では、本発明の核酸配列のコード配列のＧ／Ｃ含有量が、それぞれの野生型核酸配列、すなわち非修正核酸のコード配列のＧ／Ｃ含有量と比べて修正される、特に増大される。該核酸にコードされたアミノ酸配列は好ましくは、それぞれの野生型核酸にコードされたアミノ酸配列と比べて修正されていない。本発明の核酸配列のこの修正は、任意の核酸領域の該配列、特に、任意のＲＮＡ領域の該配列が翻訳されることが、該核酸、特に該ＲＮＡの効率的な翻訳に重要であるという事実に基づいたものである。したがって、核酸の組成および種々のヌクレオチドの配列が重要である。特に、ＲＮＡの場合、高いＧ（グアノシン）／Ｃ（シトシン）含有量を有する配列の方が、高いＡ（アデノシン）／Ｕ（ウラシル）含有量を有する配列より安定である。したがって、本発明によれば、該核酸のコドンは、高いＧ／Ｃヌクレオチド量を含むように、それぞれの野生型核酸と比べてさまざまであるが翻訳されるアミノ酸配列は保持されている。いくつかのコドンが１つの同じアミノ酸をコードしているという事実（いわゆる遺伝コードの縮重）との関連において、この安定性のための最も好都合なコドンが決定され得る（いわゆる択一的（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ）コドン使用頻度）。該核酸にコードされたアミノ酸に応じて、該核酸配列には、その野生型配列に対する種々の修正の可能性が存在する。
【０２６９】
以下の修正がＲＮＡ分子に適用され得るが、ＤＮＡ分子にも振り替え可能であり得る：排他的にＧまたはＣヌクレオチドを含むコドンにコードされているアミノ酸の場合、該コドンの修正は必要ない。したがって、Ｐｒｏのコドン（ＣＣＣまたはＣＣＧ）、Ａｒｇのコドン（ＣＧＣまたはＣＧＧ）、Ａｌａのコドン（ＧＣＣまたはＧＣＧ）およびＧｌｙのコドン（ＧＧＣまたはＧＧＧ）は、ＡまたはＵが存在しないため修正を必要としない。対照的に、Ａおよび／またはＵヌクレオチドを含むコドンは、同じアミノ酸をコードしているがＡおよび／またはＵを含んでいない他のコドンでの置換によって修正され得る。このようなものの例は：ＰｒｏのコドンがＣＣＵまたはＣＣＡからＣＣＣまたはＣＣＧに修正され得る；ＡｒｇのコドンがＣＧＵまたはＣＧＡまたはＡＧＡまたはＡＧＧからＣＧＣまたはＣＧＧに修正され得る；ＡｌａのコドンがＧＣＵまたはＧＣＡからＧＣＣまたはＧＣＧに修正され得る；ＧｌｙのコドンがＧＧＵまたはＧＧＡからＧＧＣまたはＧＧＧに修正され得ることである。他の場合では、ＡまたはＵヌクレオチドをそのコドンから消失させることはできないが、しかしながら、ＡおよびＵの含有量を、少ない含有量でＡおよび／またはＵヌクレオチドを含むコドンを使用することによって減らすことが可能である。このようなものの例は：ＰｈｅのコドンがＵＵＵからＵＵＣに修正され得る；ＬｅｕのコドンがＵＵＡ、ＵＵＧ、ＣＵＵまたはＣＵＡからＣＵＣまたはＣＵＧに修正され得る；ＳｅｒのコドンがＵＣＵまたはＵＣＡまたはＡＧＵからＵＣＣ、ＵＣＧまたはＡＧＣに修正され得る；ＴｙｒのコドンがＵＡＵからＵＡＣに修正され得る；ＣｙｓのコドンがＵＧＵからＵＧＣに修正され得る；ＨｉｓのコドンがＣＡＵからＣＡＣに修正され得る；ＧｌｎのコドンがＣＡＡからＣＡＧに修正され得る；ＩｌｅのコドンがＡＵＵまたはＡＵＡからＡＵＣに修正され得る；ＴｈｒのコドンがＡＣＵまたはＡＣＡからＡＣＣまたはＡＣＧに修正され得る；ＡｓｎのコドンがＡＡＵからＡＡＣに修正され得る；ＬｙｓのコドンがＡＡＡからＡＡＧに修正され得る；ＶａｌのコドンがＧＵＵまたはＧＵＡからＧＵＣまたはＧＵＧに修正され得る；ＡｓｐのコドンがＧＡＵからＧＡＣに修正され得る；ＧｌｕのコドンがＧＡＡからＧＡＧに修正され得る；終止コドンＵＡＡがＵＡＧまたはＵＧＡに修正され得ることである。他方において、Ｍｅｔ（ＡＵＧ）およびＴｒｐ（ＵＧＧ）のコドンの場合は、配列修正の可能性はない。上記に羅列した置換は、個々に、または考えられ得るあらゆる組合せのいずれかで、本発明のＲＮＡ配列のＧ／Ｃ含有量を、その具体的な野生型ＲＮＡ（すなわち、元の配列）と比べて増大させるために使用され得る。したがって、例えば、野生型配列に存在しているＴｈｒのすべてのコドンがＡＣＣ（またはＡＣＧ）に修正され得る。しかしながら、好ましくは、例えば、上記の置換の可能性の組合せ：
−元の配列（野生型ＲＮＡ）のＴｈｒをコードしているすべてのコドンをＡＣＣ（またはＡＣＧ）に置換および
−Ｓｅｒをコードしている元々のすべてのコドンをＵＣＣ（またはＵＣＧまたはＡＧＣ）に置換；元の配列のＩｌｅをコードしているすべてのコドンをＡＵＣに置換および
−Ｌｙｓをコードしている元々のすべてのコドンをＡＡＧに置換および
−Ｔｙｒをコードしている元々のすべてのコドンをＵＡＣに置換；元の配列のＶａｌをコードしているすべてのコドンをＧＵＣ（またはＧＵＧ）に置換および
−Ｇｌｕをコードしている元々のすべてのコドンをＧＡＧに置換および
−Ａｌａをコードしている元々のすべてのコドンをＧＣＣ（またはＧＣＧ）に置換および
−Ａｒｇをコードしている元々のすべてのコドンをＣＧＣ（またはＣＧＧ）に置換；元の配列のＶａｌをコードしているすべてのコドンをＧＵＣ（またはＧＵＧ）に置換および
−Ｇｌｕをコードしている元々のすべてのコドンをＧＡＧに置換および
−Ａｌａをコードしている元々のすべてのコドンをＧＣＣ（またはＧＣＧ）に置換および
−Ｇｌｙをコードしている元々のすべてのコドンをＧＧＣ（またはＧＧＧ）に置換および
−Ａｓｎをコードしている元々のすべてのコドンをＡＡＣに置換；元の配列のＶａｌをコードしているすべてのコドンをＧＵＣ（またはＧＵＧ）に置換および
−Ｐｈｅをコードしている元々のすべてのコドンをＵＵＣに置換および
−Ｃｙｓをコードしている元々のすべてのコドンをＵＧＣに置換および
−Ｌｅｕをコードしている元々のすべてのコドンをＣＵＧ（またはＣＵＣ）に置換および
−Ｇｌｎをコードしている元々のすべてのコドンをＣＡＧに置換および
−Ｐｒｏをコードしている元々のすべてのコドンをＣＣＣ（またはＣＣＧ）に置換；など
が使用される。
【０２７０】
具体的な一実施形態によれば、本明細書に規定したペプチドまたはタンパク質またはその断片もしくはバリアントをコードしている領域内あるいは野生型ＲＮＡ配列の配列全体の置換可能なコドンの少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、より好ましくは少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％、９５％またはさらには１００％が置換され、それにより前記配列のＧ／Ｃ含有量を増大させる。これとの関連において、本発明のＲＮＡ配列のＧ／Ｃ含有量、好ましくは、本発明によるＲＮＡ配列の該少なくとも１つのコード配列のＧ／Ｃ含有量を、野生型配列と比べて最大限（すなわち、置換可能なコドンの１００％）まで増大させることが特に好ましい。本発明によれば、本発明のＲＮＡ配列の好ましい修正のさらなる一例は、翻訳効率もまた、細胞内におけるｔＲＮＡの存在頻度の差によって決定されるという所見に基づくものである。したがって、いわゆる「レアコドン」が高い程度で本発明のＲＮＡ配列内に存在する場合、対応する修正ＲＮＡ配列は、比較的「高頻度の」ｔＲＮＡをコードしているコドンが存在している場合よりも有意に不充分な度合で翻訳される。本発明によれば、本発明の修正ＲＮＡ配列では、本明細書に規定したペプチドまたはタンパク質またはその断片もしくはバリアントをコードしている領域が、野生型ＲＮＡ配列の対応する領域と比べて、細胞内において比較的レアなｔＲＮＡをコードしている野生型配列の少なくとも１つのコドンが、細胞において比較的高頻度であるｔＲＮＡをコードしており、比較的レアな該ｔＲＮＡと同じアミノ酸を担持しているコドンで交換されているように修正されている。この修正により、本発明のＲＮＡの配列は、高頻度に存在するｔＲＮＡを利用可能にするコドンが挿入されるように修正される。換言すると、本発明によれば、この修正により、細胞内において比較的レアなｔＲＮＡをコードしている野生型配列のすべてのコドンを、各場合で細胞において比較的高頻度であるｔＲＮＡをコードしており、各場合で比較的レアな該ｔＲＮＡと同じアミノ酸を担持しているコドンで交換することができる。細胞において比較的高頻度に存在しているｔＲＮＡおよび対照的に、比較的レアな存在であるｔＲＮＡは当業者に知られている；例えば、Ａｋａｓｈｉ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．２００１，１１（６）：６６０−６６６を参照のこと。具体的なアミノ酸に使用され、ｔＲＮＡが最も高頻度に存在するコドン、例えば、ｔＲＮＡに使用され、（ヒト）細胞において最も高頻度に存在しているＧｌｙコドンが特に好ましい。本発明によれば、本発明の修正ＲＮＡ配列において増大させた、特に最大限にした逐次Ｇ／Ｃ含有量を、該ＲＮＡ配列のコード配列にコードされたタンパク質のアミノ酸配列を修飾しない「高頻度の」コドンと関連づけることが特に好ましい。この好ましい実施形態により、特に効率的に翻訳および安定化された（修正された）本発明のＲＮＡ配列を提供することが可能になる。上記の本発明の修正ＲＮＡ配列（高Ｇ／Ｃ含有量；ｔＲＮＡの交換）の判定は、ＷＯ０２／０９８４４３（その開示内容は、その全範囲が本発明に含まれる）に説明されたコンピュータプログラムを用いて行われ得る。このコンピュータプログラムを使用し、任意の所望のＲＮＡ配列のヌクレオチド配列が、最大Ｇ／Ｃ含有量がもたらされるような遺伝コードまたはその縮重の性質の補助を伴って、細胞において可能な限り高頻度に存在するｔＲＮＡをコードしており、修正ＲＮＡ配列にコードされているアミノ酸配列が好ましくは非修正配列と比べて修正されていないコドンの使用との組合せで修正され得る。あるいはまた、Ｇ／Ｃ含有量のみまたはコドン使用頻度のみを元の配列と比べて修正することも可能である。また、Ｖｉｓｕａｌ  Ｂａｓｉｃ  ６．０（使用される開発環境：Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｔｕｄｉｏ  Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅ  ６．０  ｗｉｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅｐａｃｋ  ３）のソースコードもＷＯ０２／０９８４４３に記載されている。本発明の好ましいさらなる一実施形態では、本発明のＲＮＡ配列のリボソーム結合部位の環境内におけるＡ／Ｕ含有量が、そのそれぞれの野生型ＲＮＡのリボソーム結合部位の環境内のＡ／Ｕ含有量と比べて高い。この修正（リボソーム結合部位周囲の高Ａ／Ｕ含有量）により、該ＲＮＡに対するリボソーム結合の効率が増大する。リボソーム結合部位（例えば、Ｋｏｚａｋ配列）に対するリボソームの有効な結合はさらに、該ＲＮＡの効率的な翻訳という効果を有する。本発明のさらなる一実施形態によれば、本発明のＲＮＡ配列は、潜在的に不安定性の配列エレメントに関して修正され得る。特に、このＲＮＡ配列のコード配列および／または５’および／または３’非翻訳領域が、それぞれの野生型ＲＮＡと比べて不安定性の配列エレメントを含まず、修正ＲＮＡ配列のコードされたアミノ酸配列が好ましくはそのそれぞれの野生型ＲＮＡと比べて修飾されないように修正され得る。例えば、真核生物のＲＮＡの配列には不安定性の配列エレメント（ＤＳＥ）が存在し、これにシグナルタンパク質が結合してＲＮＡのインビボでの酵素的分解を調節することが知られている。したがって、修正ＲＮＡ配列の、任意選択で、本明細書に規定した少なくとも１種類のペプチドもしくはタンパク質またはその断片もしくはバリアントをコードしている領域内の該配列のさらなる安定化のため、野生型ＲＮＡの対応する領域と比べて１つ以上のかかる修正が行われ得、その結果、不安定性の配列エレメントが含まれなくなる、または実質的に含まれなくなる。本発明によれば、非翻訳領域（３’−および／または５’−ＵＴＲ）内に存在するＤＳＥもまた、かかる修正によって本発明のＲＮＡ配列から消失させることができる。かかる不安定性の配列は、例えば、数多くの不安定なＲＮＡの３’−ＵＴＲセクションに存在するＡＵリッチ配列（ＡＵＲＥＳ）である（Ｃａｐｕｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １９８６，８３：１６７０−１６７４）。したがって、本発明のＲＮＡ配列は好ましくは、それぞれの野生型ＲＮＡと比べて、本発明のＲＮＡ配列がかかる不安定性の配列を含まないように修正される。これは、可能なエンドヌクレアーゼによって認識される配列モチーフ、例えば、トランスフェリン受容体をコードしている遺伝子の３’−ＵＴＲセグメント内に含まれた配列ＧＡＡＣＡＡＧ（Ｂｉｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１９９４，１３：１９６９〜１９８０）にもまた適用される。このような配列モチーフもまた、好ましくは本発明のＲＮＡ配列から除去される。
【０２７１】
別の好ましい実施形態によれば、本発明との関連において使用されるｍＲＮＡは、好ましくはそのコード領域内においてＧ／Ｃ含有量の修正を有し、これは、該Ｇ／Ｃ含有量が、その対応する野生型ｍＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含有量と比べて、好ましくは、コードされたアミノ酸配列が変更されることなく修正されている、特に増大されていることを意味する。例えば、コード領域のＧ／Ｃ含有量は、本明細書に記載の抗原、抗原性タンパク質もしくは抗原性ペプチドまたはその断片もしくはバリアントをコードしている野生型ｍＲＮＡのものと比べて少なくとも７％または少なくとも１５％または少なくとも２０％増大され得る。具体的な一実施形態によれば、コード領域内または配列全体の置換可能なコドンの少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％または８０％、例えば９０％以上、９５％以上、またはさらには１００％が、Ｇ／Ｃ含有量を増大させるために置換される。これとの関連において、１００％の置換とは、コード領域の本質的にすべての置換可能なコドンが置換されていることを意味し、これは本発明の好ましい実施形態の一例である。別の好ましい実施形態では、コード領域が、細胞内において比較的レアなｔＲＮＡをコードしている野生型配列の少なくとも１つのコドンが、細胞において比較的高頻度であるｔＲＮＡをコードしているが比較的レアな該ｔＲＮＡと同じアミノ酸をコードしているコドンで交換されているように修正されたｍＲＮＡが使用される。細胞において比較的レアな存在であるｔＲＮＡまたは高頻度に存在しているｔＲＮＡは当業者に知られている；例えば、Ａｋａｓｈｉ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．２００１，１１（６）：６６０−６６６を参照のこと。具体的なアミノ酸について最も高頻度に存在しているｔＲＮＡが特に好ましい。
【０２７２】
別の実施形態によれば、本発明の核酸配列は、該配列をヒトコドン使用頻度に適合させることにより修正され、したがって安定化され得る。
【０２７３】
本発明によれば、本発明の核酸配列の好ましい修正のさらなる一例は、同じアミノ酸をコードしているコドンは、典型的には異なる頻度で存在しているという所見に基づくものである。本発明によれば、本発明の修正核酸配列では、本明細書に規定したコード配列が好ましくは、それぞれの野生型核酸の対応するコード配列と比べて、同じアミノ酸をコードしているコドンの頻度が、例えば表Ｂに示すようなヒトコドン使用頻度に従う該コドンの天然に存在する頻度に相当するように修正されている。
【０２７４】
例えば、本発明による核酸配列の該少なくとも１つのコード配列にコードされたアミノ酸配列内に存在するアミノ酸アラニン（Ａｌａ）の場合、野生型コード配列を、好ましくは、コドン「ＧＣＣ」を０．４０の頻度で使用し、コドン「ＧＣＴ」を０．２８の頻度で使用し、コドン「ＧＣＡ」を０．２２の頻度で使用し、コドン「ＧＣＧ」を０．１０の頻度で使用するという様式で適合させるなどである（表Ｂ参照）。
【０２７５】
表：ヒトコドン使用頻度の表
2019517553.tif 000038
2019517553.tif 000039
＊：最も高頻度のコドン
【０２７６】
上記のように、本発明によれば、細胞内において比較的レアなｔＲＮＡをコードしている野生型配列のすべてのコドンが、細胞内において比較的高頻度のｔＲＮＡをコードしており、各場合で比較的レアな該ｔＲＮＡと同じアミノ酸を担持しているコドンで交換されていることが好ましい。したがって、コードされた各アミノ酸について最も高頻度のコドンが使用されることが特に好ましい（表Ｂ参照，最も高頻度のコドンにアスタリスクを表示している）。かかる最適化手順によってコドン適合度指数（ＣＡＩ）が上がり、最終的にＣＡＩが最大限となる。本発明との関連において、高いかまたは最大限のＣＡＩを有する配列を、典型的には「コドン最適化」配列および／またはＣＡＩ増大および／または最大化配列と称する。好ましい一実施形態によれば、本発明の核酸配列は少なくとも１つのコード配列を含み、該コード配列／配列が本明細書に記載のようにコドン最適化されている。より好ましくは、該少なくとも１つのコード配列のコドン適合度指数（ＣＡＩ）は少なくとも０．５、少なくとも０．８、少なくとも０．９または少なくとも０．９５である。最も好ましくは、該少なくとも１つのコード配列のコドン適合度指数（ＣＡＩ）は１である。
【０２７７】
例えば、本発明による核酸配列の該少なくとも１つのコード配列にコードされたアミノ酸配列内に存在するアミノ酸アラニン（Ａｌａ）の場合、野生型コード配列を、前記アミノ酸またはアミノ酸  システイン（Ｃｙｓ）について最も高頻度のヒトコドン「ＧＣＣ」を常に使用するという様式で適合させる、野生型配列を、前記アミノ酸について最も高頻度のヒトコドン「ＴＧＣ」を常に使用するという様式で適合させるなどである。
【０２７８】
別の実施形態によれば、本発明の核酸配列は、該核酸配列の、好ましくは該核酸配列のコード配列の、より好ましくはＲＮＡ配列のコード配列のシトシン（Ｃ）含有量を修正すること、好ましくは増大させることにより修正され得る。
【０２７９】
本発明の特に好ましい一実施形態では、本発明の核酸配列のコード配列のＣ含有量は、それぞれの野生型核酸、すなわち非修正核酸のコード配列のＣ含有量と比べて修正される、好ましくは増大される。本発明の核酸配列の該少なくとも１つのコード配列にコードされたアミノ酸配列は好ましくは、それぞれの野生型核酸にコードされたアミノ酸配列と比べて修飾されていない。
【０２８０】
本発明の好ましい一実施形態では、修正核酸、特に、修正ＲＮＡ配列は、理論的に可能な最大シトシン含有量の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％もしくは８０％、または少なくとも９０％またはさらには最大シトシン含有量が達成されるように修正される。
【０２８１】
好ましいさらなる実施形態では、「シトシン含有量最適化可能」である標的核酸、特に修正ＲＮＡの野生型配列のコドンの少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはさらには１００％が、野生型配列に存在するものより高いシトシン含有量を有するコドンで置き換えられている。
【０２８２】
好ましいさらなる一実施形態では、野生型コード配列のコドンのいくつかをさらに、細胞において比較的レアなｔＲＮＡのコドンが、細胞において比較的高頻度のｔＲＮＡのコドンで交換されるように修飾してもよいが、置換される比較的高頻度のｔＲＮＡのコドンは、元の野生型コドンの比較的レアな該ｔＲＮＡと同じアミノ酸を担持しているものとする。好ましくは、比較的レアなｔＲＮＡのコドンのすべてが、細胞において比較的高頻度のｔＲＮＡのコドンで置き換えられるが、シトシンを全く含まないコドンに排他的にコードされたアミノ酸をコードしているコドン、または各々、同じ数のシトシンを含む２つのコドンにコードされたグルタミン（Ｇｌｎ）のコドンは除く。
【０２８３】
本発明の好ましいさらなる一実施形態では、修正標的核酸、好ましくは該ＲＮＡは、理論的に可能な最大シトシン含有量の少なくとも８０％、または少なくとも９０％またはさらには最大シトシン含有量が、細胞において比較的高頻度のｔＲＮＡをコードしているコドンによって達成されるように修正され、この場合、そのアミノ酸配列は変化なしである。
【０２８４】
遺伝コードに天然に存在する縮重のため、具体的なアミノ酸は１つより多くのコドンにコードされ得る。したがって、天然に存在する２０種類のアミノ酸のうち１８種類が、１つより多くのコドン（ＴｒｙｐとＭｅｔは例外である）、例えば、２つのコドン（例えば、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ）、３つのコドン（例えば、Ｉｌｅ）、４つのコドン（例えば、Ａｌ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ）または６つのコドン（例えば、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ）にコードされている。しかしながら、同じアミノ酸をコードしているすべてのコドンがインビボ条件下において同じ頻度で使用されるわけではない。個々の各生物体に応じて、典型的なコドン使用頻度プロフィールが確立されている。
【０２８５】
用語「シトシン含有量最適化可能コドン」は、本発明との関連において用いる場合、同じアミノ酸をコードしている他のコドンより少ないシトシン含有量を示すコドンをいう。したがって、同じアミノ酸をコードしているコドンであって、コドン内においてより多いシトシン数を示す別のコドンで置き換えられ得る野生型コドンはいずれも、シトシン最適化可能（Ｃ最適化可能）とみなされる。野生型コード配列内の特定のＣ最適化コドンによるＣ最適化可能な野生型コドンのかかる置換はいずれも、その全Ｃ含有量を増大させ、Ｃ富化修正核酸配列に反映される。好ましい一実施形態によれば、本発明の核酸配列、特にＲＮＡ配列、好ましくは本発明の核酸配列の該少なくとも１つのコード配列は、潜在的にＣ最適化可能すべてのコドンについてＣ最適化コドンを含むＣ最大限化ＲＮＡ配列を含むもの、または該配列からなるものである。したがって、理論的に置き換え可能なＣ最適化可能コドンの１００％またはすべてが、好ましくはコード配列の全長にわたってＣ最適化コドンで置き換えられている。
【０２８６】
これとの関連において、シトシン含有量最適化可能コドンは、同じアミノ酸をコードしている他のコドンより少ないシトシン数を含むコドンである。
【０２８７】
コドンＧＣＧ、ＧＣＡ、ＧＣＵはいずれもアミノ酸Ａｌａをコードしており、これらは、同じアミノ酸をコードしているコドンＧＣＣで交換され得る、および／または
ＣｙｓをコードしているコドンＵＧＵは、同じアミノ酸をコードしているコドンＵＧＣで交換され得る、および／または
ＡｓｐをコードしているコドンＧＡＵは、同じアミノ酸をコードしているコドンＧＡＣで交換され得る、および／または
ＰｈｅをコードしているコドンＵＵＵは、同じアミノ酸をコードしているコドンＵＵＣで交換され得る、および／または
ＧｌｙをコードしているコドンＧＧＧ、ＧＧＡ、ＧＧＵはいずれも、同じアミノ酸をコードしているコドンＧＧＣで交換され得る、および／または
ＨｉｓをコードしているコドンＣＡＵは、同じアミノ酸をコードしているコドンＣＡＣで交換され得る、および／または
ＩｌｅをコードしているコドンＡＵＡ、ＡＵＵはいずれも、コドンＡＵＣで交換され得る、および／または
ＬｅｕをコードしているコドンＵＵＧ、ＵＵＡ、ＣＵＧ、ＣＵＡ、ＣＵＵはいずれも、同じアミノ酸をコードしているコドンＣＵＣで交換され得る、および／または
ＡｓｎをコードしているコドンＡＡＵは、同じアミノ酸をコードしているコドンＡＡＣで交換され得る、および／または
ＰｒｏをコードしているコドンＣＣＧ、ＣＣＡ、ＣＣＵはいずれも、同じアミノ酸をコードしているコドンＣＣＣで交換され得る、および／または
ＡｒｇをコードしているコドンＡＧＧ、ＡＧＡ、ＣＧＧ、ＣＧＡ、ＣＧＵはいずれも、同じアミノ酸をコードしているコドンＣＧＣで交換され得る、および／または
ＳｅｒをコードしているコドンＡＧＵ、ＡＧＣ、ＵＣＧ、ＵＣＡ、ＵＣＵはいずれも、同じアミノ酸をコードしているコドンＵＣＣで交換され得る、および／または
ＴｈｒをコードしているコドンＡＣＧ、ＡＣＡ、ＡＣＵはいずれも、同じアミノ酸をコードしているコドンＡＣＣで交換され得る、および／または
ＶａｌをコードしているコドンＧＵＧ、ＧＵＡ、ＧＵＵはいずれも、同じアミノ酸をコードしているコドンＧＵＣで交換され得る、および／または
ＴｙｒをコードしているコドンＵＡＵは、同じアミノ酸をコードしているコドンＵＡＣで交換され得る。
【０２８８】
上記の場合のいずれにおいても、シトシン数は、交換されたコドン１つあたり１個増加する。コード配列のすべての非Ｃ最適化コドン（Ｃ最適化可能コドンに相当）の交換によりＣ最大限化コード配列がもたらされる。本発明との関連において、本発明によるＲＮＡ配列の該少なくとも１つのコード配列内の非Ｃ最適化コドンの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％がＣ最適化コドンで置き換えられる。
【０２８９】
一部のアミノ酸ではＣ最適化コドンで置き換えられるＣ最適化可能コドンのパーセンテージが７０％未満であるが他のアミノ酸では置き換えられるコドンのパーセンテージが７０％より高く、Ｃ最適化の全体としてのパーセンテージが、コード配列のすべてのＣ最適化可能な野生型コドンの少なくとも７０％を満たしているということが好ましい場合があり得る。
【０２９０】
好ましくは、本発明のＣ最適化ＲＮＡ配列では、任意の所与のアミノ酸のＣ最適化可能な野生型コドンの少なくとも５０％がＣ最適化コドンで置き換えられる、例えば、任意の修正Ｃ富化ＲＮＡ配列は好ましくは、上記のアミノ酸Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＶａｌおよびＴｙｒのいずれか１つをコードしているＣ最適化可能な野生型コドン位置に少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％のＣ最適化コドンを含む。
【０２９１】
これとの関連において、シトシン含有量最適化可能ではないが少なくとも２つのコドンにコードされているアミノ酸をコードしているコドンは、なんらさらなる選択プロセスを伴わずに使用され得る。しかしながら、細胞、例えばヒト細胞において比較的レアなｔＲＮＡをコードしている野生型配列のコドンは、細胞において比較的高頻度のｔＲＮＡをコードしているコドンで交換され得、この場合、どちらも同じアミノ酸をコードしている。したがって、Ｇｌｕをコードしている比較的レアなコドンＧＡＡは、同じアミノ酸をコードしている比較的高頻度のコドンＧＡＧで交換され得る、および／または
Ｌｙｓをコードしている比較的レアなコドンＡＡＡは、同じアミノ酸をコードしている比較的高頻度のコドンＡＡＧで交換され得る、および／または
Ｇｌｎをコードしている比較的レアなコドンＣＡＡは、同じアミノ酸をコードしている比較的高頻度のコドンＣＡＧで交換され得る。
【０２９２】
これとの関連において、各々、唯一のコドンにコードされているアミノ酸Ｍｅｔ（ＡＵＧ）およびＴｒｐ（ＵＧＧ）は変化なしである。終止コドンはシトシン含有量最適化されないが、比較的レアな終止コドンアンバー、オーカー（ＵＡＡ、ＵＡＧ）は、比較的高頻度の終止コドンオパール（ＵＧＡ）で交換され得る。
【０２９３】
上記に羅列した１つの置換は、修正核酸配列のシトシン含有量を野生型核酸配列と比べて最適化するために個々に、ならびに考えられ得るあらゆる組合せで使用され得る。
【０２９４】
したがって、本明細書に規定した該少なくとも１つのコード配列は、それぞれの野生型核酸のコード配列と比べて、アミノ酸が少なくとも２つまたはそれ以上のコドンにコードされており、該コドンのうちの１つはさらに１個のシトシンを含み、かかるコドンは、さらに１個のシトシンを含むＣ最適化コドンで交換されてもよく、ここで、該アミノ酸は好ましくは野生型配列と比べて改変されないというような様式で変更され得る。
【０２９５】
好ましいさらなる一実施形態によれば、本発明の核酸配列、特にＲＮＡ配列は３’末端に、典型的には約１０〜２００個のアデノシンヌクレオチド、好ましくは約１０〜１００個のアデノシンヌクレオチド、より好ましくは約４０〜８０個のアデノシンヌクレオチドまたはさらにより好ましくは約５０〜７０個のアデノシンヌクレオチドのポリ−Ａ尾部を含むものであり得る。
【０２９６】
好ましくは、本発明のＲＮＡ配列内のポリ（Ａ）配列は、ＲＮＡのインビトロ転写によるＤＮＡ鋳型に由来するものである。あるいはまた、ポリ（Ａ）配列は、必ずしもＤＮＡ前駆体からの転写を伴わない一般的な化学合成法によってインビトロで得られるものであってもよい。さらに、ポリ（Ａ）配列またはポリ（Ａ）尾部を、当該技術分野で知られた市販のポリアデニル化キットおよび対応するプロトコルを用いた本発明によるＲＮＡの酵素的ポリアデニル化によって作製してもよい。
【０２９７】
あるいはまた、本明細書に記載のＲＮＡは、任意選択でポリアデニル化シグナルを含むものであってもよく、ポリアデニル化シグナルは本明細書において、特定のタンパク質因子（例えば、切断ポリアデニル化特異性因子（ＣＰＳＦ）、切断刺激因子（ＣｓｔＦ）、切断因子ＩおよびＩＩ（ＣＦ  ＩおよびＣＦ  ＩＩ）、ポリ（Ａ）ポリメラーゼ（ＰＡＰ））によってポリアデニル化が（転写された）ＲＮＡに伝達されるシグナルと定義する。これとの関連において、ＮＮ（Ｕ／Ｔ）ＡＮＡコンセンサス配列を含むコンセンサスポリアデニル化シグナルが好ましい。特に好ましい一態様では、ポリアデニル化シグナルは、以下の配列：ＡＡ（Ｕ／Ｔ）ＡＡＡまたはＡ（Ｕ／Ｔ）（Ｕ／Ｔ）ＡＡＡのうちの１つを含むものである（ここで、ウリジンは通常、ＲＮＡに存在し、チミジンは通常、ＤＮＡに存在する）。
【０２９８】
好ましいさらなる一実施形態によれば、本発明の核酸配列、特にＲＮＡ配列は３’末端に、典型的には約１０〜２００個のシトシンヌクレオチド、好ましくは約１０〜１００個のシトシンヌクレオチド、より好ましくは約２０〜７０個のシトシンヌクレオチドまたはさらにより好ましくは約２０〜６０個またはさらには１０〜４０個のシトシンヌクレオチドのポリ（Ｃ）尾部を含むものであり得る。好ましくは、本発明のＲＮＡ配列内のポリ（Ｃ）配列は、ＲＮＡのインビトロ転写によるＤＮＡ鋳型に由来するものである。
【０２９９】
好ましい一実施形態では、本発明による核酸配列、特にＲＮＡ配列は少なくとも１つの５’−または３’−ＵＴＲエレメントを含む。これとの関連において、ＵＴＲエレメントは、天然に存在する任意の遺伝子の５’−もしくは３’−ＵＴＲに由来する核酸配列または遺伝子の５’−もしくは３’−ＵＴＲの断片、ホモログもしくはバリアントに由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものである。好ましくは、本明細書に従って使用される５’−または３’−ＵＴＲエレメントは、本発明のＲＮＡ配列の該少なくとも１つのコード配列に対して異種である。天然に存在する遺伝子に由来する５’−または３’−ＵＴＲエレメントが好ましいとはいえ、合成的に操作されたＵＴＲエレメントもまた、本発明との関連において使用され得る。
【０３００】
用語「３’ＵＴＲエレメント」は典型的には、３’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲのバリアントに由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものである核酸配列をいう。本発明の意味における３’ＵＴＲエレメントは、核酸分子、特にＲＮＡまたはＤＮＡ、好ましくはｍＲＮＡの３’ＵＴＲを表すものであり得る。したがって、本発明の意味において、好ましくは、３’ＵＴＲエレメントは、ＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡの３’ＵＴＲであり得るか、またはＲＮＡの３’ＵＴＲの転写鋳型であり得る。したがって、３’ＵＴＲエレメントは、好ましくは、ＲＮＡの３’ＵＴＲ、好ましくは、ｍＲＮＡ、例えば遺伝子操作されたベクター構築物の転写によって得られるｍＲＮＡの３’ＵＴＲに対応する核酸配列である。好ましくは、３’ＵＴＲエレメントは、３’ＵＴＲの機能を果たすもの、または３’ＵＴＲの機能を果たす配列をコードしているものである。
【０３０１】
好ましくは、該少なくとも１つの３’ＵＴＲエレメントは、脊索動物遺伝子、好ましくは脊椎動物遺伝子、より好ましくは哺乳動物遺伝子、最も好ましくはヒト遺伝子の３’ＵＴＲに由来する核酸配列、または脊索動物遺伝子、好ましくは脊椎動物遺伝子、より好ましくは哺乳動物遺伝子、最も好ましくはヒト遺伝子の３’ＵＴＲのバリアントに由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものである。
【０３０２】
好ましくは、本発明の核酸配列、特にＲＮＡ配列は、半減期の向上を伴うＲＮＡ（これにより安定なＲＮＡをもたらす）に関する遺伝子から誘導可能であり得る３’ＵＴＲエレメント、例えば、以下に規定し、説明する３’ＵＴＲエレメントを含むものである。好ましくは、３’ＵＴＲエレメントは、好ましくは安定なＲＮＡをコードしている遺伝子の３’ＵＴＲに由来する核酸配列、または前記遺伝子のホモログ、断片もしくはバリアントに由来する核酸配列である。
【０３０３】
特に好ましい一実施形態では、３’ＵＴＲエレメントは、アルブミン遺伝子、α−グロビン遺伝子、β−グロビン遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ遺伝子、リポキシゲナーゼ遺伝子、およびコラーゲンα遺伝子、例えばコラーゲンα１（Ｉ）遺伝子からなる群より選択される遺伝子の３’ＵＴＲに由来する核酸配列、またはアルブミン遺伝子、α−グロビン遺伝子、β−グロビン遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ遺伝子、リポキシゲナーゼ遺伝子、およびコラーゲンα遺伝子、例えばコラーゲンα１（Ｉ）遺伝子（特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００（その開示は引用により本明細書に組み込まれる）の配列番号：１３６９〜１３９０によるもの）からなる群より選択される遺伝子の３’ＵＴＲのバリアントに由来する核酸配列、またはそのホモログ、断片もしくはバリアントに由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものである。特に好ましい一実施形態では、３’ＵＴＲエレメントは、アルブミン遺伝子、好ましくは脊椎動物のアルブミン遺伝子、より好ましくは哺乳動物のアルブミン遺伝子、最も好ましくはヒトアルブミン遺伝子の３’ＵＴＲに由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものである。
【０３０４】
これとの関連において、本発明によるＲＮＡ配列は、特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号：１３６９〜１３９０による核酸に由来する対応ＲＮＡ配列を含む３’−ＵＴＲエレメントまたはその断片、ホモログもしくはバリアントを含むことが特に好ましい。
【０３０５】
別の特に好ましい実施形態では、３’ＵＴＲエレメントは、α−またはβ−グロビン遺伝子、好ましくは脊椎動物のα−またはβ−グロビン遺伝子、より好ましくは哺乳動物のα−またはβ−グロビン遺伝子、最も好ましくはヒトのα−またはβ−グロビン遺伝子の３’ＵＴＲに由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものである。
【０３０６】
用語「［…］遺伝子の３’ＵＴＲに由来する核酸配列」は、好ましくは、［…］遺伝子の３’ＵＴＲ配列またはその一部分を主体とする核酸配列、例えばアルブミン遺伝子、α−グロビン遺伝子、β−グロビン遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ遺伝子、リポキシゲナーゼ遺伝子、もしくはコラーゲンα遺伝子、例えばコラーゲンα１（Ｉ）遺伝子の３’ＵＴＲ、好ましくはアルブミン遺伝子の３’ＵＴＲまたはその一部分を主体とする核酸配列を示す。この用語は、遺伝子の３’ＵＴＲ配列全体、すなわち完全長の３’ＵＴＲ配列に相当する配列、および遺伝子、例えばアルブミン遺伝子、α−グロビン遺伝子、β−グロビン遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ遺伝子、リポキシゲナーゼ遺伝子、またはコラーゲンα遺伝子、例えばコラーゲンα１（Ｉ）遺伝子のの３’ＵＴＲ配列の断片、好ましくはアルブミン遺伝子の３’ＵＴＲ配列の断片に相当する配列を包含している。
【０３０７】
用語「［…］遺伝子の３’ＵＴＲのバリアントに由来する核酸配列」は、好ましくは、遺伝子の３’ＵＴＲ配列のバリアントを主体とする核酸配列、例えばアルブミン遺伝子、α−グロビン遺伝子、β−グロビン遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ遺伝子、リポキシゲナーゼ遺伝子、もしくはコラーゲンα遺伝子、例えばコラーゲンα１（Ｉ）遺伝子の３’ＵＴＲのバリアントを主体とする核酸配列、または上記のその一部分を主体とする核酸配列を示す。この用語は、遺伝子の３’ＵＴＲのバリアントの配列全体、すなわち、遺伝子の完全長のバリアント３’ＵＴＲ配列に相当する配列、および遺伝子のバリアント３’ＵＴＲ配列の断片に相当する配列を包含している。この状況における断片は、好ましくは、完全長バリアント３’ＵＴＲ内の連続ヌクレオチド鎖であって完全長バリアント３’ＵＴＲの少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、さらにより好ましくは少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％である連続ヌクレオチド鎖に相当する連続ヌクレオチド鎖からなるものである。バリアントのかかる断片は、本発明の意味において、好ましくは本明細書に記載のバリアントの機能性断片である。
【０３０８】
好ましい一実施形態によれば、本発明による核酸配列、特にＲＮＡ配列は、５’−キャップ構造および／または少なくとも１つの３’−非翻訳領域エレメント（３’−ＵＴＲエレメント）（好ましくは、本明細書に規定したもの）を含む。より好ましくは、該ＲＮＡは、本明細書に規定した５’−ＵＴＲエレメントをさらに含む。
【０３０９】
特に好ましい一実施形態では、該ＲＮＡ配列は好ましくは、５’−から３’−の方向に：
ａ．）５’−ＣＡＰ構造、好ましくはｍ７ＧｐｐｐＮ；
ｂ．）目的のタンパク質もしくは目的のペプチドまたはその断片もしくはバリアントに由来する少なくとも１種類の抗原性ペプチドもしくはタンパク質、またはその断片もしくはバリアントをコードしている少なくとも１つのコード配列、
ｃ．）αグロビン遺伝子、そのホモログ、断片またはバリアントに由来する核酸配列を含む、または該核酸配列からなる３’−ＵＴＲエレメント；
ｄ．）任意選択で、ポリ（Ａ）配列、好ましくは６４個のアデノシンを含むもの；
ｅ．）任意選択で、ポリ（Ｃ）配列、好ましくは３０個のシトシンを含むもの
を含む。
【０３１０】
特に好ましい一実施形態では、該少なくとも１種類の核酸配列、特にＲＮＡ配列は、少なくとも１つの５’−非翻訳領域エレメント（５’−ＵＴＲエレメント）を含む。好ましくは、該少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントは、ＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲに由来する核酸配列またはＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲの断片、ホモログもしくはバリアントに由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものである。
【０３１１】
５’−ＵＴＲエレメントは、上記に規定したＴＯＰ−モチーフまたは５’−ＴＯＰを含まないものであることが特に好ましい。
【０３１２】
一部の実施形態では、ＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲに由来する５’−ＵＴＲエレメントの核酸配列が、その３’末端において、由来する遺伝子またはＲＮＡの開始コドン（例えば、Ａ（Ｕ／Ｔ）Ｇ）の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０位上流に位置するヌクレオチドで終結している。したがって、５’−ＵＴＲエレメントは、いずれのタンパク質コード配列部分も含まないものである。したがって、好ましくは、該少なくとも１種類の核酸配列、特にＲＮＡ配列の１つだけのタンパク質コード部分が該コード配列によってもたらされる。
【０３１３】
ＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲに由来する核酸配列は好ましくは、真核生物のＴＯＰ遺伝子、好ましくは植物または動物のＴＯＰ遺伝子、より好ましくは脊索動物のＴＯＰ遺伝子、さらにより好ましくは脊椎動物のＴＯＰ遺伝子、最も好ましくは哺乳動物ののＴＯＰ遺伝子、例えばヒトＴＯＰ遺伝子に由来するものである。
【０３１４】
例えば、５’−ＵＴＲエレメントは好ましくは、特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００（その開示は引用により本明細書に組み込まれる）の配列番号：１〜１３６３、配列番号：１３９５、配列番号：１４２１および配列番号：１４２２からなる群、特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号：１〜１３６３、配列番号：１３９５、配列番号：１４２１および配列番号：１４２２のホモログ、そのバリアント、または好ましくは対応するＲＮＡ配列より選択される核酸配列に由来する核酸配列を含む、または該核酸配列からなる５’−ＵＴＲエレメントから選択される。用語「特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号：１〜１３６３、配列番号：１３９５、配列番号：１４２１および配列番号：１４２２のホモログ」は、人間以外の種の配列であって、特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号：１〜１３６３、配列番号：１３９５、配列番号１４２１および配列番号：１４２２による配列に相同なものをいう。
【０３１５】
好ましい一実施形態では、本発明による核酸配列、特にＲＮＡ配列の５’−ＵＴＲエレメントは、特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号：１〜１３６３、配列番号：１３９５、配列番号：１４２１および配列番号：１４２２、特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号：１〜１３６３、配列番号：１３９５、配列番号：１４２１および配列番号：１４２２のホモログ  そのバリアント、または対応するＲＮＡ配列から選択される核酸配列の５位のヌクレオチド（すなわち、配列内の５位に位置するヌクレオチド）から開始コドン（該配列の３’末端に位置する）のすぐ５’側のヌクレオチド位置、例えば、ＡＴＧ配列のすぐ５’側のヌクレオチド位置までに存在している核酸配列に由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものである。５’ＵＴＲエレメントが、特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号：１〜１３６３、配列番号：１３９５、配列番号：１４２１および配列番号：１４２２、特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号：１〜１３６３、配列番号：１３９５、配列番号：１４２１および配列番号：１４２２のホモログ、そのバリアント、または対応するＲＮＡ配列から選択される核酸配列の５’−ＴＯＰのすぐ３’側のヌクレオチド位置から開始コドン（該配列の３’末端に位置する）のすぐ５’側のヌクレオチド位置、例えば、ＡＴＧ配列のすぐ５’側のヌクレオチド位置までに存在している核酸配列に由来するものであることが特に好ましい。
【０３１６】
特に好ましい一実施形態では、５’−ＵＴＲエレメントは、リボソームタンパク質をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲに由来する核酸配列、またはリボソームタンパク質をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲのバリアントに由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものである。例えば、５’−ＵＴＲエレメントは、特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号：６７、１７０、１９３、２４４、２５９、５５４、６５０、６７５、７００、７２１、９１３、１０１６、１０６３、１１２０、１１３８および１２８４〜１３６０のいずれかによる核酸配列の５’−ＵＴＲ、対応するＲＮＡ配列、そのホモログ、または本明細書に記載のそのバリアント、好ましくは５’−ＴＯＰモチーフがないものに由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものである。上記のように、５位からＡＴＧ（これは配列の３’末端に位置する）のすぐ５’側のヌクレオチドまでに存在している配列が前記配列の５’−ＵＴＲに相当する。
【０３１７】
好ましくは、５’−ＵＴＲエレメントは、リボソーム大サブユニット（Ｌａｒｇｅ）タンパク質（ＲＰＬ）をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲに由来する核酸配列またはリボソーム大サブユニットタンパク質（ＲＰＬ）をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲのホモログもしくはバリアントに由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものである。例えば、５’−ＵＴＲエレメントは、特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号：６７、２５９、１２８４〜１３１８、１３４４、１３４６、１３４８〜１３５４、１３５７、１３５８、１４２１および１４２２のいずれかによる核酸配列の５’−ＵＴＲ、対応するＲＮＡ配列、そのホモログ、または本明細書に記載のそのバリアント、好ましくは５’−ＴＯＰモチーフがないものに由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものである。
【０３１８】
特に好ましい一実施形態では、５’−ＵＴＲエレメントは、リボソームタンパク質大サブユニット３２遺伝子の５’−ＵＴＲ、好ましくは脊椎動物のリボソームタンパク質大サブユニット３２（Ｌ３２）遺伝子、より好ましくは哺乳動物のリボソームタンパク質大サブユニット３２（Ｌ３２）遺伝子、最も好ましくはヒトリボソームタンパク質大サブユニット３２（Ｌ３２）遺伝子に由来する核酸配列、またはリボソームタンパク質大サブユニット３２遺伝子の５’ＵＴＲのバリアント、好ましくは脊椎動物のリボソームタンパク質大サブユニット３２（Ｌ３２）遺伝子、より好ましくは哺乳動物のリボソームタンパク質大サブユニット３２（Ｌ３２）遺伝子、最も好ましくはヒトリボソームタンパク質大サブユニット３２（Ｌ３２）遺伝子に由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものであり、ここで、好ましくは、５’−ＵＴＲエレメントは前記遺伝子５’−ＴＯＰを含まないものである。
【０３１９】
したがって、特に好ましい一実施形態では、５’−ＵＴＲエレメントは、配列番号：１３（５’末端のオリゴピリミジントラクトがないヒトリボソームタンパク質大サブユニット３２の５’−ＵＴＲ：ＧＧＣＧＣＴＧＣＣＴＡＣＧＧＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＣＡＴＣＴＣＣＴＴＣＴＣＧＧＣＡＴＣ；特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号１３６８に対応）による核酸配列と、または好ましくは対応するＲＮＡ配列と少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、さらにより好ましくは少なくとも約９５％、さらにより好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものであるか、あるいはここで、該少なくとも１つの５’ＵＴＲエレメントは、上記の配列の核酸配列と少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、さらにより好ましくは少なくとも約９５％、さらにより好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列の断片を含むもの、または該断片からなるものであり、好ましくは、該断片は上記のようなもの、すなわち、完全長５’ＵＴＲの少なくとも２０％などである連続ヌクレオチド鎖である。好ましくは、該断片は、少なくとも約２０個以上のヌクレオチド、好ましくは少なくとも約３０個以上のヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約４０個以上のヌクレオチドの長さを示すものである。好ましくは、該断片は本明細書に記載の機能性断片である。
【０３２０】
一部の実施形態では、本発明によるＲＮＡ配列は、ＲＰＳＡ、ＲＰＳ２、ＲＰＳ３、ＲＰＳ３Ａ、ＲＰＳ４、ＲＰＳ５、ＲＰＳ６、ＲＰＳ７、ＲＰＳ８、ＲＰＳ９、ＲＰＳ１０、ＲＰＳ１１、ＲＰＳ１２、ＲＰＳ１３、ＲＰＳ１４、ＲＰＳ１５、ＲＰＳ１５Ａ、ＲＰＳ１６、ＲＰＳ１７、ＲＰＳ１８、ＲＰＳ１９、ＲＰＳ２０、ＲＰＳ２１、ＲＰＳ２３、ＲＰＳ２４、ＲＰＳ２５、ＲＰＳ２６、ＲＰＳ２７、ＲＰＳ２７Ａ、ＲＰＳ２８、ＲＰＳ２９、ＲＰＳ３０、ＲＰＬ３、ＲＰＬ４、ＲＰＬ５、ＲＰＬ６、ＲＰＬ７、ＲＰＬ７Ａ、ＲＰＬ８、ＲＰＬ９、ＲＰＬ１０、ＲＰＬ１０Ａ、ＲＰＬ１１、ＲＰＬ１２、ＲＰＬ１３、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＰＬ１４、ＲＰＬ１５、ＲＰＬ１７、ＲＰＬ１８、ＲＰＬ１８Ａ、ＲＰＬ１９、ＲＰＬ２１、ＲＰＬ２２、ＲＰＬ２３、ＲＰＬ２３Ａ、ＲＰＬ２４、ＲＰＬ２６、ＲＰＬ２７、ＲＰＬ２７Ａ、ＲＰＬ２８、ＲＰＬ２９、ＲＰＬ３０、ＲＰＬ３１、ＲＰＬ３２、ＲＰＬ３４、ＲＰＬ３５、ＲＰＬ３５Ａ、ＲＰＬ３６、ＲＰＬ３６Ａ、ＲＰＬ３７、ＲＰＬ３７Ａ、ＲＰＬ３８、ＲＰＬ３９、ＲＰＬ４０、ＲＰＬ４１、ＲＰＬＰ０、ＲＰＬＰ１、ＲＰＬＰ２、ＲＰＬＰ３、ＲＰＬＰ０、ＲＰＬＰ１、ＲＰＬＰ２、ＥＥＦ１Ａ１、ＥＥＦ１Ｂ２、ＥＥＦ１Ｄ、ＥＥＦ１Ｇ、ＥＥＦ２、ＥＩＦ３Ｅ、ＥＩＦ３Ｆ、ＥＩＦ３Ｈ、ＥＩＦ２Ｓ３、ＥＩＦ３Ｃ、ＥＩＦ３Ｋ、ＥＩＦ３ＥＩＰ、ＥＩＦ４Ａ２、ＰＡＢＰＣ１、ＨＮＲＮＰＡ１、ＴＰＴ１、ＴＵＢＢ１、ＵＢＡ５２、ＮＰＭ１、ＡＴＰ５Ｇ２、ＧＮＢ２Ｌ１、ＮＭＥ２、ＵＱＣＲＢ、またはそのホモログもしくはバリアントから選択される脊椎動物のＴＯＰ遺伝子、例えば哺乳動物、例えばヒトのＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲに由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものである５’−ＵＴＲエレメントを含み、ここで好ましくは、５’−ＵＴＲエレメントはＴＯＰ−モチーフまたは前記遺伝子の５’−ＴＯＰを含まないものであり、任意選択で、５’−ＵＴＲエレメントは、その５’末端において、５’末端のオリゴピリミジントラクト（ＴＯＰ）の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０位下流に位置するヌクレオチドで始まり、さらに、任意選択で、ＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲに由来する５’ＵＴＲエレメントは、その３’末端において、由来する遺伝子の開始コドン（Ａ（Ｕ／Ｔ）Ｇ）の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０位上流に位置するヌクレオチドで終結している。
【０３２１】
特に好ましいさらなる実施形態では、５’−ＵＴＲエレメントは、リボソームタンパク質大サブユニット３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、リボソームタンパク質大サブユニット３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、リボソームタンパク質大サブユニット２１遺伝子（ＲＰＬ2１）、ＡＴＰ合成酵素、Ｈ＋輸送ミトコンドリアＦ１複合体、αサブユニット１、心筋（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、ヒドロキシステロイド（１７−β）デヒドロゲナーゼ遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、アンドロゲン誘導性１遺伝子（ＡＩＧ１）、シトクロムｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）、もしくはＮ−アシルスフィンゴシンアミドヒドロラーゼ（酸性セラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）またはそのバリアント、好ましくは脊椎動物のリボソームタンパク質大サブユニット３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、脊椎動物のリボソームタンパク質大サブユニット３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、脊椎動物のリボソームタンパク質大サブユニット２１遺伝子（ＲＰＬ2１）、脊椎動物のＡＴＰ合成酵素、Ｈ＋輸送ミトコンドリアＦ１複合体、αサブユニット１、心筋（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、脊椎動物のヒドロキシステロイド（１７−β）デヒドロゲナーゼ遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、脊椎動物のアンドロゲン誘導性１遺伝子（ＡＩＧ１）、脊椎動物のシトクロムｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）、もしくは脊椎動物のＮ−アシルスフィンゴシンアミドヒドロラーゼ（酸性セラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）またはそのバリアント、より好ましくは哺乳動物のリボソームタンパク質大サブユニット３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、リボソームタンパク質大サブユニット３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、リボソームタンパク質大サブユニット２１遺伝子（ＲＰＬ2１）、哺乳動物のＡＴＰ合成酵素、Ｈ＋輸送ミトコンドリアＦ１複合体、αサブユニット１、心筋（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、哺乳動物のヒドロキシステロイド（１７−β）デヒドロゲナーゼ遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、哺乳動物のアンドロゲン誘導性１遺伝子（ＡＩＧ１）、哺乳動物のシトクロムｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）、もしくは哺乳動物のＮ−アシルスフィンゴシンアミドヒドロラーゼ（酸性セラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）またはそのバリアント、最も好ましくはヒトリボソームタンパク質大サブユニット３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、ヒトリボソームタンパク質大サブユニット３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、ヒトリボソームタンパク質大サブユニット２１遺伝子（ＲＰＬ2１）、ヒトＡＴＰ合成酵素、Ｈ＋輸送ミトコンドリアＦ１複合体、αサブユニット１、心筋（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、ヒトヒドロキシステロイド（１７−β）デヒドロゲナーゼ遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、ヒトアンドロゲン誘導性１遺伝子（ＡＩＧ１）、ヒトシトクロムｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）、もしくはヒトＮ−アシルスフィンゴシンアミドヒドロラーゼ（酸性セラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）またはそのバリアントの５’−ＵＴＲに由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものであり、ここで、好ましくは、５’ＵＴＲエレメントは前記遺伝子の５’ＴＯＰを含まないものである。
【０３２２】
したがって、特に好ましい一実施形態では、５’−ＵＴＲエレメントは、特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号：１４１２〜１４２０による核酸配列または対応するＲＮＡ配列と少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、さらにより好ましくは少なくとも約９５％、さらにより好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものであるか、あるいはここで、該少なくとも１つの５’ＵＴＲエレメントは、特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号：１４１２〜１４２０による核酸配列と少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、さらにより好ましくは少なくとも約９５％、さらにより好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列の断片を含むもの、または該断片からなるものであり、ここで、好ましくは、該断片は上記のようなもの、すなわち、完全長５’ＵＴＲの少なくとも２０％などである連続ヌクレオチド鎖である。好ましくは、該断片は、少なくとも約２０個以上のヌクレオチド、好ましくは少なくとも約３０個以上のヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約４０個以上のヌクレオチドの長さを示すものである。好ましくは、該断片は本明細書に記載の機能性断片である。
【０３２３】
したがって、特に好ましい一実施形態では、５’−ＵＴＲエレメントは、配列番号：１４（５’末端のオリゴピリミジントラクトがないＡＴＰ５Ａ１の５’−ＵＴＲ：ＧＣＧＧＣＴＣＧＧＣＣＡＴＴＴＴＧＴＣＣＣＡＧＴＣＡＧＴＣＣＧＧＡＧＧＣＴＧＣＧＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＴＡＣＣＧＣＣＴＧＣＧＧＡＧＴＡＡＣＴＧＣＡＡＡＧ；特許出願ＷＯ２０１３／１４３７００の配列番号：１４１４に対応）による核酸配列と、または好ましくは対応するＲＮＡ配列と少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、さらにより好ましくは少なくとも約９５％、さらにより好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものであるか、あるいはここで、該少なくとも１つの５’ＵＴＲエレメントは、上記の核酸配列と少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、さらにより好ましくは少なくとも約９５％、さらにより好ましくは少なくとも約９９％の同一性を有する核酸配列の断片を含むもの、または該断片からなるものであり、好ましくは、該断片は上記のようなもの、すなわち、完全長５’ＵＴＲの少なくとも２０％などである連続ヌクレオチド鎖である。好ましくは、該断片は、少なくとも約２０個以上のヌクレオチド、好ましくは少なくとも約３０個以上のヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約４０個以上のヌクレオチドの長さを示すものである。好ましくは、該断片は本明細書に記載の機能性断片である。
【０３２４】
好ましくは、該少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントと該少なくとも１つの３’ＵＴＲエレメントが、上記の該少なくとも１つのＲＮＡ配列からのタンパク質生成を増大させるために相乗的に作用する。
【０３２５】
特に好ましい一実施形態によれば、本発明によるＲＮＡ配列は、好ましくは、５’−から３’−の方向に：
ａ．）５’−キャップ構造、好ましくはｍ７ＧｐｐｐＮ；
ｂ．）ＴＯＰ遺伝子、そのホモログ、断片またはバリアントの５’−ＵＴＲに由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものである５’−ＵＴＲエレメント；
ｃ．）目的のタンパク質もしくは目的のペプチドまたはその断片もしくはバリアントに由来する少なくとも１種類の抗原性ペプチドまたはタンパク質をコードしている少なくとも１つのコード配列、
ｄ．）安定なＲＮＡ、そのホモログ、断片またはバリアントをもたらす遺伝子に由来する核酸配列を含む、または該核酸配列からなる３’−ＵＴＲエレメント；
ｅ．）任意選択で、ポリ（Ａ）配列  好ましくは、６４個のアデノシンを含むもの；および
ｆ．）任意選択で、ポリ（Ｃ）配列、好ましくは３０個のシトシンを含むもの
を含む。
【０３２６】
特に好ましい一実施形態では、本発明に従って使用される核酸配列、特にＲＮＡ配列はヒストンステム−ループ配列／構造を含むものである。かかるヒストンステム−ループ配列は好ましくは、ＷＯ２０１２／０１９７８０（その開示内容は引用により本明細書に組み込まれる）に開示されたヒストンステム−ループ配列から選択される。
【０３２７】
本発明での使用に適するヒストンステム−ループ配列は好ましくは、以下の式ＶＩＩまたはＶＩＩＩの少なくとも１種類から選択される：
式ＶＩＩ（ステムボーダーエレメント（ｂｏｒｄｅｒｉｎｇ  ｅｌｅｍｅｎｔ）がないステム−ループ配列）：
2019517553.tif 000040
式中：
ステム１またはステム２のボーダーエレメントＮ１〜６は、１〜６個、好ましくは２〜６個、より好ましくは２〜５個、さらにより好ましくは３〜５個、最も好ましくは４〜５個または５個のＮの連続した配列であり、ここで、各Ｎは、他のものと独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され；
ステム１［Ｎ０〜２ＧＮ３〜５］はエレメントステム２に逆相補的または部分的に逆相補的であり、５〜７個のヌクレオチドの連続した配列であり；
Ｎ０〜２は、０〜２個、好ましくは０〜１個、より好ましくは１個のＮの連続した配列であり、各Ｎは、他のものと独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され；
Ｎ３〜５は、３〜５個、好ましくは４〜５個、より好ましくは４個のＮの連続した配列であり、各Ｎは、他のものと独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、
Ｇはグアノシンまたはそのアナログであり、任意選択でシチジンまたはそのアナログで置き換えられていてもよい、ただし、ステム２内のその相補ヌクレオチドのシチジンはグアノシンで置き換えられるものとし；
ループ配列［Ｎ０〜４（Ｕ／Ｔ）Ｎ０〜４］は、エレメントステム１とステム２の間に位置し、３〜５個のヌクレオチド、より好ましくは４個のヌクレオチドの連続した配列であり；
各Ｎ０〜４  は他のものと独立して、０〜４個、好ましくは１〜３個、より好ましくは１〜２個のＮの連続した配列であり、各Ｎは、他のものと独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され；
Ｕ／Ｔは、ウリジンまたは任意選択でチミジンを表し；
ステム２［Ｎ３〜５ＣＮ０〜２］はエレメントステム１に逆相補的または部分的に逆相補的であり、５〜７個のヌクレオチドの連続した配列であり；
Ｎ３〜５は、３〜５個、好ましくは４〜５個、より好ましくは４個のＮの連続した配列であり、各Ｎは、他のものと独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され；
Ｎ０〜２は、０〜２個、好ましくは０〜１個、より好ましくは１個のＮの連続した配列であり、各Ｎは、他のものと独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧもしくはＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され；
Ｃはシチジンまたはそのアナログであり、任意選択でグアノシンまたはそのアナログで置き換えられていてもよい、ただし、ステム１内のその相補ヌクレオシドのグアノシンはシチジンで置き換えられるものとし；
ステム１およびステム２は、互いに塩基対合して逆相補配列を形成し得るものであり、この場合、塩基対合はステム１とステム２間で、例えば、ヌクレオチドＡとＵ／ＴまたはＧとＣのワトソン−クリック型塩基対合または非ワトソン−クリック型塩基対合、例えば、ゆらぎ塩基対合、逆ワトソン−クリック型塩基対合、フーグスティーン型塩基対合、逆フーグスティーン型塩基対合によって起こり得、あるいは互いに塩基対合して部分的に逆相補配列を形成し得るものであり、この場合、不完全な塩基対合はステム１とステム２間で、一方のステム内の１個以上の塩基は他方のステムの逆相補配列内に相補塩基を有していないことに基づいて起こり得る。
【０３２８】
好ましいさらなる一実施形態によれば、該核酸配列、特にＲＮＡ配列は、以下の特定の式ＶＩＩａまたはＶＩＩＩａの少なくとも１種類による少なくとも１つのヒストンステム−ループ配列を含むものであり得る：
式ＶＩＩａ（ステムボーダーエレメントがないステム−ループ配列）：
2019517553.tif 000041
式中、Ｎ、Ｃ、Ｇ、ＴおよびＵは上記に規定したとおりである。
【０３２９】
さらなるより特に好ましい一実施形態によれば、該少なくとも１つの核酸、好ましくは該少なくとも１つのＲＮＡは、以下の特定の式ＶＩＩｂまたはＶＩＩＩｂの少なくとも１種類による少なくとも１つのヒストンステム−ループ配列を含むものであり得る：
式ＶＩＩｂ（ステムボーダーエレメントがないステム−ループ配列）：
2019517553.tif 000042
式中、Ｎ、Ｃ、Ｇ、ＴおよびＵは上記に規定したとおりである。
【０３３０】
特に好ましいヒストンステム−ループ配列の一例は配列ＣＡＡＡＧＧＣＴＣＴＴＴＴＣＡＧＡＧＣＣＡＣＣＡ（配列番号：１５によるもの）またはより好ましくは、対応するＲＮＡ配列ＣＡＡＡＧＧＣＵＣＵＵＵＵＣＡＧＡＧＣＣＡＣＣＡ（配列番号：１６によるもの）である。
【０３３１】
上記の任意の修飾は、本発明の核酸配列、特にＤＮＡおよび／またはＲＮＡ配列に、さらに、本発明との関連において使用される任意のＤＮＡまたはＲＮＡに適用され得、適切な場合または必要な場合は、互いに任意の組合せで組み合わされ得るが、このような修飾の組合せはそれぞれの核酸配列において互いに干渉しないものであるものとする。当業者は、しかるべく選択を行うことができよう。
【０３３２】
本明細書に規定した少なくとも１つのコード配列を含む本発明による核酸配列、特に本発明によるＲＮＡ配列は、好ましくは５’ＵＴＲおよび／または３’ＵＴＲを含むものであり得、好ましくは少なくとも１つのヒストンステム−ループを含む。本発明によるＲＮＡ配列の３’ＵＴＲは、好ましくは、本明細書に規定したポリ（Ａ）および／またはポリ（Ｃ）配列もまた含む。３’ＵＴＲのこのシングルエレメントはその内部に、本発明のＲＮＡ配列の配列全長に沿って５’から３’まで任意の順序で存在し得る。また、本明細書に記載のさらなるエレメント、例えば本明細書に規定した安定化配列（例えば、グロビン遺伝子のＵＴＲに由来）、ＩＲＥＳ配列などを含めてもよい。また、該エレメントの各々を、本発明によるＲＮＡ配列内において少なくとも１回（特に、ジ−またはマルチシストロニックな構築物にて）、好ましくは２回以上反復させてもよい。一例として、該シングルエレメントは本発明による核酸配列内、特にＲＮＡ配列内に以下の順序で存在させ得る：
５’−コード配列−ヒストンステム−ループ−ポリ（Ａ）／（Ｃ）配列−３’；または
５’−コード配列−ポリ（Ａ）／（Ｃ）配列−ヒストンステム−ループ−３’；または
５’−コード配列−ヒストンステム−ループ−ポリアデニル化シグナル−３’；または
５’−コード配列−ポリアデニル化シグナル−ヒストンステム−ループ−３’；または
５’−コード配列−ヒストンステム−ループ−ヒストンステム−ループ−ポリ（Ａ）／（Ｃ）配列−３’；または
５’−コード配列−ヒストンステム−ループ−ヒストンステム−ループ−ポリアデニル化シグナル−３’；または
５’−コード配列−安定化配列−ポリ（Ａ）／（Ｃ）配列−ヒストンステム−ループ−３’；または
５’−コード配列−安定化配列−ポリ（Ａ）／（Ｃ）配列−ポリ（Ａ）／（Ｃ）配列−ヒストンステム−ループ−３’；など。
【０３３３】
さらなる一実施形態によれば、本発明において使用される核酸配列、特にＲＮＡ配列は、好ましくは、以下の構造エレメント：５’−および／または３’−非翻訳領域エレメント（ＵＴＲエレメント）、特に、５’−ＵＴＲエレメント（これは好ましくは、ＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲまたはその断片、ホモログもしくはそのバリアントに由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものである）、あるいは５’−および／または３’−ＵＴＲエレメント（これは好ましくは、安定なＲＮＡをもたらす遺伝子またはそのホモログ、断片もしくはバリアントから誘導可能なものであり得る）；ヒストン−ステム−ループ構造、好ましくはその３’非翻訳領域内にヒストン−ステム−ループ；５’−キャップ構造；ポリ−Ａ尾部；またはポリ（Ｃ）配列のうちの少なくとも１つを含むものである。
【０３３４】
特に好ましい一実施形態では、該核酸配列、特にＲＮＡ配列は、好ましくは、５’−から３’−の方向に：
ａ．）５’−ＣＡＰ構造、好ましくはｍ７ＧｐｐｐＮ；
ｂ．）少なくとも１種類の目的の抗原性ペプチドもしくは目的のタンパク質またはその断片もしくはバリアントをコードしている少なくとも１つのコード配列、
ｃ．）αグロビン遺伝子、そのホモログ、断片またはバリアントに由来する核酸配列を含む、または該核酸配列からなる３’−ＵＴＲエレメント；
ｄ．）任意選択で、ポリ（Ａ）配列、好ましくは６４個のアデノシンを含むもの；
ｅ．）任意選択で、ポリ（Ｃ）配列、好ましくは３０個のシトシンを含むもの；および
ｆ．）任意選択で、ヒストンステム−ループ、好ましくは、配列番号：１６によるＲＮＡ配列を含むもの
を含む。
【０３３５】
別の特に好ましい実施形態によれば、本発明に従って使用される核酸配列、特にＲＮＡ配列は、好ましくは、５’−から３’−の方向に：
ａ．）５’−ＣＡＰ構造、好ましくはｍ７ＧｐｐｐＮ；
ｂ．）ＴＯＰ遺伝子、そのホモログ、断片またはバリアントの５’−ＵＴＲに由来する核酸配列を含むもの、または該核酸配列からなるものである５’−ＵＴＲエレメント；
ｃ．）少なくとも１種類の目的の抗原性ペプチドもしくは目的のタンパク質またはその断片もしくはバリアントをコードしている少なくとも１つのコード配列、
ｄ．）安定なＲＮＡをもたらす遺伝子に由来する核酸配列を含む、または該核酸配列からなる３’−ＵＴＲエレメント；
ｅ．）任意選択で、ポリ（Ａ）配列  好ましくは、６４個のアデノシンを含むもの；
ｆ．）任意選択で、ポリ（Ｃ）配列、好ましくは３０個のシトシンを含むもの；および
任意選択で、ヒストンステム−ループ、好ましくは、配列番号：１６によるＲＮＡ配列を含むもの
を含む。
【０３３６】
本明細書に従って使用される核酸は、当該技術分野で知られた任意の方法によって、例えば、例えば固相合成などの合成方法、ならびにインビトロ法、例えばインビトロ転写反応またはインビボ反応、例えば細菌内でのＤＮＡプラスミドのインビボ増殖によって調製され得る。
【０３３７】
別の好ましい実施形態によれば、該核酸は、コード核酸、好ましくはｍＲＮＡの形態であり、これは付加的または択一的に分泌シグナルペプチドをコードしている。かかるシグナルペプチドは、典型的には約１５〜３０個のアミノ酸の長さを示すものであり、好ましくは、コードされたペプチドのＮ末端に位置するが、これに限定されない。本明細書に規定したシグナルペプチドは、好ましくは、コードされたタンパク質またはペプチドの特定の細胞領域または特定の細胞区画内への、例えば細胞表面、小胞体（ＥＲ）またはエンドソーム−リソソーム区画への輸送を可能にするものである。
【０３３８】
該核酸にコードされたタンパク質またはペプチドは、天然に存在するタンパク質の断片またはバリアントであってもよい。かかる断片またはバリアントは典型的には、上記のタンパク質もしくはペプチドまたはそのコード核酸配列の配列のうちの１つに関して野生型配列全体と、核酸レベルまたはアミノ酸レベルのいずれかで少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、等しくより好ましくは少なくとも８５％、さらにより好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％またはさらには９７％の配列同一性を有する配列を含むものであり得る。
【０３３９】
タンパク質またはペプチドの「断片」は、本発明との関連において、アミノ酸配列またはそのコード核酸配列に関して、天然タンパク質またはそのコード核酸配列のアミノ酸配列と比べてＮ末端部、Ｃ末端部および／または配列内部において切断型の本明細書に規定したタンパク質またはペプチドの配列を含むものであり得る。かかる切断は、アミノ酸レベルまたは核酸レベルのいずれかで起こるものであり得る。したがって、かかる断片に関する配列同一性は、タンパク質もしくはペプチド全体に言及している場合またはコード核酸配列全体に言及している場合があり得る。同じことが核酸にも相応に適用される。
【０３４０】
タンパク質またはペプチドのかかる断片は約６〜約２０個またはそれ以上のアミノ酸の配列を含むものであり得、このようなものとしては、プロセッシングされてＭＨＣクラスＩ分子によって提示される、好ましくは約８〜約１０個のアミノ酸、例えば８、９もしくは１０個（またはさらには６、７、１１もしくは１２個のアミノ酸）の長さを有する断片、ならびにプロセッシングされて、ＭＨＣクラスＩＩ分子によって提示される、好ましくは約１３個以上のアミノ酸、例えば、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはさらにはそれ以上のアミノ酸の長さを有する断片が挙げられ、ここで、このような断片はアミノ酸配列の任意の部分から選択され得る。このような断片は、典型的にはＴ細胞によって該ペプチド断片とＭＨＣ分子からなる複合体の形態で認識される、すなわち、該断片は典型的にはその天然形態では認識されない。
【０３４１】
また、タンパク質またはペプチドの該断片は、該タンパク質またはペプチドのエピトープを含むものであってもよい。エピトープ（「抗原決定基」とも称される）は、本発明との関連において、典型的には、天然のタンパク質またはペプチドの外部表面上に位置し、好ましくは５〜１５個のアミノ酸を有し、より好ましくは５〜１２個のアミノ酸、６〜９個のアミノ酸を有し、その天然形態で抗体またはＢ細胞受容体によって認識され得る断片である。かかるエピトープはさらに、かかるタンパク質またはペプチドの本明細書に記載の任意のバリアントから選択され得る。これとの関連において、抗原決定基は立体構造型エピトープであっても不連続（ｄｉｓｃｏｎｔｉｎｏｕｓ）エピトープであってもよく、エピトープはタンパク質またはペプチドのセグメントで構成されており、このようなセグメントは、該タンパク質またはペプチドのアミノ酸配列内では不連続であるが一体となって３次元構造になるかまたは連続もしくは線状のエピトープ（これは、１本のポリペプチド鎖で構成される）になる。
【０３４２】
本明細書に規定したタンパク質またはペプチドの「バリアント」は、コードアミノ酸配列が変更されるように該タンパク質またはペプチドをコードしているヌクレオチドが置き換えられた核酸にコードされ得る。それにより、１つ以上の変異、例えば１個以上の置換、挿入および／または欠失されたアミノ酸を有するタンパク質またはペプチドが作製される。好ましくは、このような断片および／またはバリアントは、完全長の天然タンパク質と比べて同じ生物学的機能または特異的活性、例えば特異的抗原性特性を有するものである。
【０３４３】
一実施形態では、核酸化合物に対するカチオン性のペプチドまたはポリマーの重量比は少なくとも約１である。例えば、これは約１〜約２０、または約１〜約１５、例えば約２±１、３±１、４±１、５±１、６±１、７±１、８±１、９±１、１０±１、１１±１、１２±１、１３±１、１４±１の範囲であり得る。
【０３４４】
核酸化合物１μｇあたりのカチオン性のリピドイドのｎｍｏｌで表示すると、この量は好ましくは約４０ｎｍｏｌ以下／μｇである。別の実施形態では、この比は約１５ｎｍｏｌ以下／μｇ、特に１０ｎｍｏｌ以下／μｇである。一部の具体的な実施形態では、該量はさらにもっと少なく、例えば約２ｎｍｏｌ以下／μｇ、または約１．５ｎｍｏｌ以下／μｇ、またはさらには約１ｎｍｏｌ以下／μｇ、例えば、それぞれ約０．０５〜約２ｎｍｏｌ／μｇ、または約０．１〜約１．５ｎｍｏｌ／μｇ、または約０．２５〜約１．０ｎｍｏｌ／μｇ、または約０．３〜約０．８ｎｍｏｌ／μｇ、例えば約０．４ｎｍｏｌ／μｇの範囲である。
【０３４５】
一実施形態では、核酸化合物に対するカチオン性のペプチドまたはポリマーの重量比が少なくとも約１である、および／または核酸化合物に対するリピドイドの割合が約１５ｎｍｏｌ以下／μｇである
【０３４６】
リピドイドの量は、核酸カーゴに比べて相対的に少ないだけでなく、カチオン性のペプチドまたはポリマーに対しても相対的に少ない。カチオン性のペプチドまたはポリマーに対するリピドイドの重量比は約１：１０より大きくないか、またはそれぞれ約１：２０、もしくは１：３０、もしくは１：４０より大きくないことが一般的に好ましい。別の好ましい実施形態では、それぞれの比が約１：５０より大きくない、および／または該核酸に対するリピドイドの割合が約２ｎｍｏｌ以下／μｇである。
【０３４７】
また、該組成物はＮ／Ｐ比によって特性評価され得、Ｎ／Ｐ比は、本発明によれば、カーゴとして使用される核酸化合物のリン酸基（「Ｐ」）に対するカチオン性のペプチドまたはポリマーの塩基性基の窒素原子（「Ｎ」）のモル比と定義される；文脈から異なるＮ／Ｐ比が意図されていることが明白でない限り。一実施形態では、約０．１〜約２０または約０．２〜約１５または約２〜約１５または約２〜約１２のＮ／Ｐ比。
【０３４８】
Ｎ／Ｐ比は、例えば、１μｇのＲＮＡには典型的には約３ｎｍｏｌのリン酸残基が含まれていることに基づいて計算され得るが、ＲＮＡは塩基の統計的分布を示すものであるものとする。ペプチドまたはポリマーの「Ｎ」値は、その分子量、または該ペプチドまたはポリマーが分子量分布を有する場合はその平均分子量と、カチオン性基もしくはカチオン化可能基の相対的含有量に基づいて計算され得る。好ましいさらなる一実施形態では、Ｎ／Ｐ比は約０．２〜約１５の範囲、またはそれぞれ約０．２〜約１３、もしくは約０．３〜約１２、もしくは約０．５〜約１０、もしくは約０．６〜約８の範囲である。
【０３４９】
一実施形態では、約２〜約１５または約２〜約１２の範囲のＮ／Ｐ比が選択される。かかるＮ／Ｐ比を示す本発明による組成物が、該組成物の静脈内投与を含む使用に特に好適である。
【０３５０】
上記のように、本発明の組成物中ならびにナノ粒子（1個または複数）中のリピドイドの量は典型的には、カーゴとしての核酸用の慣用的な脂質ベースの担体中よりもずっと少ない。
【０３５１】
理論的には、リピドイドの量はまた、Ｎ／Ｐ比でも表示され得る。この場合、「Ｎ」はリピドイドの塩基性基のモル数を表し、一方、「Ｐ」は、カーゴとして使用される核酸のリン酸基を示す。本発明の組成物において、したがって本発明のナノ粒子においてもまた、このリピドイド関連Ｎ／Ｐ−比は好ましくは約３以下、特に約２以下である。また、１以下、例えばそれぞれ約０．０１〜約１、または約０．０２〜約０．８、または約０．０５〜約０．６、または約０．１〜約０．５の範囲のリピドイド関連Ｎ／Ｐ比も好ましい。
【０３５２】
本発明の組成物に、さらなる構成成分、例えば１種類以上の不活性成分、補助剤または賦形剤を含めてもよい。一実施形態では、該組成物は、標的化剤、細胞膜透過剤およびステルス性（ｓｔｅａｌｔｈ）薬剤から独立して選択される１種類以上の化合物を含むものである。
【０３５３】
本明細書で用いる場合、標的化剤は、標的、例えば標的細胞の表面もしくは該表面上に位置する標的または細胞内標的に対して親和性を有する化合物である。例えば、標的化剤は、抗体、抗体断片、または目的の標的に対して親和性を有する小分子薬剤であり得る。任意選択で、かかる薬剤を該カチオン性のペプチドまたはポリマー内に組み込んでもよい。他の場合では、かかる薬剤が該組成物中に、なんらの担体化合物との共有結合なしのさらなる構成成分として組み込まれ得る。
【０３５４】
同じことが、任意選択の細胞膜透過薬剤および/またはステルス性薬剤にも適用される。本明細書で用いる場合、細胞膜透過剤には、細胞膜透過ペプチド（CPP）、ならびに同様の生物学的または生体模倣的機能を有する、すなわち細胞内へのカーゴの取込みを助長するための任意の他の化合物が包含される。ステルス性薬剤は、本発明との関連において、カーゴ分子または粒子に結合すると、例えば静脈内注射または輸注によって注射された被験体の血流中で長時間の循環時間をもたらす化合物または物質を意味する。ステルス性薬剤の一例はペグ化脂質であり、その脂質ドメインは、例えばリピドイドの疎水性基と相互作用することによってナノ粒子に対するアンカーとしての機能を果たし得、一方、そのポリエチレングリコール（PEG）ドメインは「ステルス」特性を付与し得る。この特性は、カーゴ物質が血流中で循環中において被験体の免疫系との相互作用の低減を示すことを意味し、これは、典型的には、血液からの消失半減期の延長ならびに免疫原性および抗原性の低減と関連する。
【０３５５】
有用なペグ化脂質の例としては、１−（モノメトキシ−ポリエチレングリコール）−２，３−ジミリスチルグリセロール（ＰＥＧ−ＤＭＧ）、Ｎ−［（メトキシポリ（エチレングリコール）２０００）カルバモイル］−１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−アミン（ＰＥＧ−Ｃ−ＤＭＡ）、または１，２−ジアシアル（ｄｉａｃｙａｌ）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）］が挙げられ；後者の場合、アシルは、例えばミリストイル、パルミトイル、ステアロイルまたはオレオイルは意味し得、ポリエチレングリコールは典型的には、ポリエチレングリコール−３５０〜ポリエチレングリコール−５０００、特に、ポリエチレングリコール−７５０、ポリエチレングリコール−１０００、ポリエチレングリコール−２０００、およびポリエチレングリコール−３０００である。
【０３５６】
本発明の組成物において、構成成分、すなわち、カチオン性のペプチドまたはポリマー、リピドイドおよび核酸化合物を１個以上のナノ粒子中に組み込んでもよい。換言すると、該組成物は、該カチオン性のペプチドまたはポリマー、該リピドイドおよび該核酸化合物を含む１個以上のナノ粒子を含むものであり得る。あるいはまた、該組成物は、少なくとも該カチオン性のペプチドまたはポリマーと該核酸化合物を含む１個以上のナノ粒子を含むものであり得る。このような実施形態では、各構成成分は、上記のように選択され得、これらの特色に関してあらゆる選択肢および好ましいものが包含される。
【０３５７】
典型的には、かかるナノ粒子は、該カチオン性のペプチドまたはポリマーおよび任意選択でまた該リピドイドを核酸化合物と合わせると、これらが一体となって担体-カーゴ複合体（以下にさらに詳細に説明する）を形成し得ることで形成される。しかしながら、２つの成分、すなわち、該ポリマーまたはペプチドと核酸化合物が相互作用して、例えばナノ粒子に似たコロイド状構造を形成するが、該リピドイドはかかる複合体またはナノ粒子中に組み込まれないか、または充分に組み込まれないこともまた考えられ得る。
【０３５８】
「ナノ粒子」は、本明細書で用いる場合、任意の構造または形態構造を有するサブミクロン粒子である。サブミクロン粒子はまた、コロイドまたはコロイド状と称される場合もあり得る。ナノ粒子のベースとなる材料に関して、およびその構造または形態構造に関して、ナノ粒子は、ナノ粒子の具体的な型の考えられ得る表記を数例挙げると、例えば、ナノカプセル、小胞、リポソーム、脂質ナノ粒子、ミセル、架橋ミセル、リポフレックス、ポリプレックス、混合型またはハイブリッド型の複合体と分類され得る。
【０３５９】
この態様によれば、本発明はまた、上記に規定したナノ粒子自体、ならびに複数のかかるナノ粒子、特に、複数の該好ましいナノ粒子（以下に、より詳細に説明する）に関するものである。
【０３６０】
好ましい実施形態の一例では、ナノ粒子は、該核酸化合物ならびに該カチオン性のペプチドまたはポリマーおよび／または該リピドイドによって形成された複合体を含むものである。さらなる具体的な一実施形態では、ナノ粒子は本質的にこれらの構成成分（ａ）、（ｂ）および（ｃ）からなるものである。また別の具体的な実施形態では、ナノ粒子は、本質的に（ａ）１種類以上のカチオン性のペプチドおよび／またはポリマー；（ｂ）１種類以上のリピドイド；（ｃ）１種類以上の核酸化合物；ならびに任意選択で、（ｄ）標的化剤、細胞膜透過剤およびステルス性薬剤から独立して選択される１種類以上の化合物からなるものである。この場合も同様に、このような実施形態では、個々の構成成分に関して上記に記載した選択肢および好ましいものが充分に適用可能である。
【０３６１】
好ましい実施形態の一例では、本発明のナノ粒子（１個または複数）は、該カチオン性のペプチドまたはポリマーと該カチオン性のリピドイドの複合体；または該カチオン性のペプチドまたはポリマーおよび／または該カチオン性のリピドイドと該核酸化合物の複合体を含むものである。換言すると、ナノ粒子は複合体を含むものであってもよく、またはさらには実質的に複合体であってもよく、該複合体は
（ａ）該カチオン性のペプチドまたはポリマー；
（ｂ）該カチオン性のリピドイド；および／または
（ｃ）該核酸化合物
のうちの任意の２つの構成員、または３つのすべての構成員で構成されたものであり得る。
【０３６２】
「複合体」は、本明細書で用いる場合、分子がより大きな単位に会合し、共有結合性の化学結合より弱い力で一体に保持されたものである。かかる複合体はまた、会合複合体とも称され得る。複合体を一体に保持する力は、多くの場合、水素結合（“ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｂｏｎｄ”）（“ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｂｒｉｄｇｅ”としても知られている）、ロンドン力および／または双極子誘引である。脂質またはリピドイドと核酸を含む複合体は多くの場合、リポフレックスと称され、ポリマーと核酸の複合体はポリプレックスとして知られている。
【０３６３】
本発明により提供されるカチオン性のペプチドまたはポリマーとリピドイドの両方の存在下では、該核酸は、リポフレックスの特徴とポリプレックスの特徴を同時に有するハイブリッド型複合体を形成し得る。理論に拘束されることを望まないが、本発明者らは、かかるハイブリッドの複合体は、本発明の組成物またはナノ粒子において形成された場合、カーゴといろいろな型の担体間（カーゴ分子のいろいろなドメインまたは領域を含む）の種々の型の相互作用を兼ね備えるという点で特に安定となり得ると思っている。他方において、また、核酸化合物の複合体化は、本発明を実施した場合、主にカチオン性のペプチドまたはタンパク質によってなされること（特に、比較的少量のリピドイドしか使用しない場合）、およびリピドイドの存在は、複合体が生体細胞に取り込まれたらその運命に大きく影響することもあり得ると考える。いずれの場合も、本発明はなんら理論に限定されず、本明細書に規定した２つ以上の構成成分で形成される複合体はいずれも、本発明による複合体であると理解されたい。
【０３６４】
好ましい実施形態の一例では、本発明のナノ粒子は実質的に、上記に規定したカーゴ-担体複合体からなるものである。この具体的な状況において、表現「実質的に〜からなる」とは、例えば、ナノ粒子中の微量の補助物質、例えば溶媒、共溶媒、界面活性剤、等張化剤などの存在を排除すると理解されるべきでない。
【０３６５】
あるいはまた、本発明の組成物中のナノ粒子の少なくとも約５０ｗｔ．−％、またはそれぞれ、その少なくとも６０ｗｔ．−％、その少なくとも７０ｗｔ．−％、その少なくとも８０ｗｔ．−％、その少なくとも８５ｗｔ．−％、その少なくとも９０ｗｔ．−％、もしくはその少なくとも９５ｗｔ．−％が、該カチオン性のペプチドまたはポリマー、該リピドイド、および該生物学的に活性なカーゴ物質からなるものである。
【０３６６】
本発明との関連において、「生物学的に活性なカーゴ物質」は一般的に、所望の生物学的効果、例えば薬理学的効果、例えば、任意の型の予防効果、治療効果、診断効果または寛解効果を得るために被験体または被験体の器官、組織もしくは細胞に、製剤、担体、ベクターまたは媒体によって送達されることが意図された化合物または化合物の混合物もしくは組合せをいう。生物学的に活性なカーゴ物質の送達は、かかる物質を含む製剤品を投与することが目的であるが、製剤、または担体、ベクターもしくは媒体（これも、場合によっては生物学的に活性とみなされる場合もあり得る）は主に、該カーゴ物質を送達するための手段である。異なる意味が文脈から明白でない限り、表現「生物学的に活性なカーゴ物質」、「生物学的に活性な化合物」、「カーゴ物質」、「カーゴ」などは同義的に用いている。本発明の組成物ならびに本発明のナノ粒子は、生物学的に活性なカーゴ物質として少なくとも１種類の核酸化合物または核酸ベースの物質を含むものである。任意選択で、核酸化合物であってもそうでなくてもよい１種類以上の他の活性成分がカーゴ中に存在していてその一部を構成していてもよい。
【０３６７】
「担体」または「ビヒクル」は、本明細書で用いる場合、一般的に、製剤の一部であって、生物学的に活性な化合物または物質の送達を補助するか、可能にするか、または改善する任意の化合物、構築物または物質を意味し得る。これは、生物学的に実質的に不活性であってもよく、被験体の組織、細胞または亜細胞成分と実質的に相互作用するという点で生物学的に活性であってもよく、例えば生物学的に活性なカーゴ物質の取込みを向上させるものであってもよい。本発明との関連において、これらの用語は、該リピドイド、該カチオン性のペプチドまたはポリマー、または両者の組合せもしくは混合物にもまた適用される。
【０３６８】
「製剤」は、これに組み込まれて製剤によって投与される生物学的に活性な化合物に関して、少なくとも１種類の生物学的に活性な化合物および１種類の賦形剤、担体、ビヒクルまたは他の補助物質を含むその組成および製造方法の点で薬学的に許容され得る任意の製剤品である。
【０３６９】
記載のように、本発明の組成物に、上記のようなさらなる構成成分、例えば標的化剤、細胞膜透過剤およびステルス性薬剤から独立して選択される１種類以上の化合物を含めてもよい。このようなさらなる構成成分はいずれも、任意選択でナノ粒子（1個または複数）中に組み込まれ得る。
【０３７０】
本明細書で用いる場合、標的化剤は、標的、例えば標的細胞の表面もしくは該表面上に位置する標的または細胞内標的に対して親和性を有する化合物である。例えば、標的化剤は、抗体、抗体断片、または目的の標的に対して親和性を有する小分子薬剤であり得る。部分Ｐまたはそのジスルフィド結合型多量体を有する化合物との関連において論考したように、かかる薬剤は任意選択でかかる化合物内に組み込まれ得る。他の場合では、かかる薬剤はナノ粒子中に、なんらの担体化合物との共有結合なしのさらなる構成成分として組み込まれ得る。
【０３７１】
同じことが、任意選択の細胞膜透過薬剤および／またはステルス性薬剤にも適用される。本明細書で用いる場合、細胞膜透過剤には、上記に規定した細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）、ならびに同様の生物学的または生体模倣的機能を有する、すなわち細胞内へのカーゴの取込みを助長するための任意の他の化合物が包含される。ステルス性薬剤は、本発明との関連において、カチオン性のリピドイド、部分Ｐまたはそのジスルフィド結合型多量体を含む化合物および該核酸カーゴを含むナノ粒子中に組み込まれると、該ナノ粒子が例えば静脈内注射または輸注注射された被験体の血流中で該ナノ粒子の長時間の循環時間をもたらす化合物または物質を意味する。ステルス性薬剤の一例はペグ化脂質であり、その脂質ドメインは、例えばリピドイドの疎水性基と相互作用することによってナノ粒子に対するアンカーとしての機能を果たし得、一方、そのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ドメインは該ナノ粒子に「ステルス」特性を付与し得る。この特性は、該ナノ粒子が血流中で循環中において被験体の免疫系との相互作用の低減を示すことを意味し、これは、典型的には、血液からの該ナノ粒子の消失半減期の延長ならびに免疫原性および抗原性の低減と関連する。
【０３７２】
有用なペグ化脂質の例としては、１−（モノメトキシ−ポリエチレングリコール）−２，３−ジミリスチルグリセロール（ＰＥＧ−ＤＭＧ）、Ｎ−［（メトキシポリ（エチレングリコール）２０００）カルバモイル］−１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−アミン（ＰＥＧ−Ｃ−ＤＭＡ）、または１，２−ジアシアル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）］が挙げられ；後者の場合、アシルは、例えばミリストイル、パルミトイル、ステアロイルまたはオレオイルは意味し得、ポリエチレングリコールは典型的には、ポリエチレングリコール−３５０〜ポリエチレングリコール−５０００、特に、ポリエチレングリコール−７５０、ポリエチレングリコール−１０００、ポリエチレングリコール−２０００、およびポリエチレングリコール−３０００である。
【０３７３】
他の中性脂質は、通常、本発明の組成物中またはナノ粒子（１個もしくは複数）中に組み込まなくてよい。これは本発明のさらなる利点の１つであり、（典型的には、かなりの量でさえある）いわゆるヘルパー脂質の組込みを必要とする、核酸（ｎｕｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）カーゴの複合体化および送達に適した既知のほとんどの脂質担体系とは対照的である。本明細書で用いる場合、ヘルパー脂質は、核酸との組合せでの脂質ナノ粒子の安定性に寄与し得る非カチオン性またはカチオン化可能な（両性イオン性でない限り）ホスホ脂質またはステロイドである。したがって、本発明のナノ粒子ならびに組成物にかかるヘルパー脂質が含まれていないことは本発明の好ましい実施形態の一例である。
【０３７４】
該ナノ粒子は、動的レーザー散乱による測定時、約１，０００ｎｍ以下の流体力学的直径を有するものである。より好ましくは、その流体力学的直径は約８００ｎｍ以下、例えば約３０ｎｍ〜約８００ｎｍの範囲である。他の好ましい実施形態では、流体力学的直径が、それぞれ約５０ｎｍ〜約３００ｎｍまたは約６０ｎｍ〜約２５０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約１５０ｎｍまたは約６０ｎｍ〜約１２０ｎｍの範囲である。これらは個々のナノ粒子の好ましい直径であるが、これは、本発明の組成物中における他の直径のナノ粒子の存在を排除するものではない。しかしながら、本発明は好ましくは、多くの（またはさらにはほとんどの）ナノ粒子がかかる直径を示す組成物を用いて実施される。
【０３７５】
さらに、複数のかかるナノ粒子を含む本発明による組成物はまた、動的レーザー散乱によって測定される平均流体力学的直径によっても特性評価され得、これもまた、好ましくは８００ｎｍ以下、例えば約３０ｎｍ〜約８００ｎｍの範囲である。流体力学的直径との関連において、「平均」は、キュムラント平均としても知られるＺ平均であると理解されたい。明らかに、動的レーザー散乱による測定もまた、適切な分散剤を用いて適切な希釈度で、使用される分析機器について製造業者の推奨に従って実施されなければならない。特に好ましいのは、それぞれ約５０ｎｍ〜約３００ｎｍまたは約６０ｎｍ〜約２５０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約１５０ｎｍまたは約６０ｎｍ〜約１２０ｎｍの範囲の平均流体力学的直径である。
【０３７６】
該ナノ粒子はさらに界面動電位によっても特性評価され得、これはゼータ電位によって表示され得る。好ましい実施形態において、ゼータ電位は、それぞれ約０ｍＶ〜約５０ｍＶまたは約０ｍＶ〜約１０ｍＶの範囲である。他の好ましい実施形態では、ゼータ電位がプラス、すなわち０ｍＶより高いがそれぞれ５０ｍＶ以下、または４０ｍＶ、または３０ｍＶ、または２０ｍＶ、または１０ｍＶである。
【０３７７】
さらなる実施形態では、ゼータ電位が、それぞれ約０ｍＶ〜約−５０ｍＶまたは約０ｍＶ〜約−１０ｍＶの範囲である。別の実施形態では、ゼータ電位がマイナス、すなわち０ｍＶより低いが、それぞれ−５０ｍＶ以上、または−４０ｍＶ、または−３０ｍＶ、または−２０ｍＶ、または−１０ｍＶである。
【０３７８】
別の実施形態では、ゼータ電位が、１未満のＮ／Ｐ比を有する粒子（局所投与に特に好適）について０ｍＶ〜−５０ｍＶの範囲である。さらなる一実施形態では、ゼータ電位が、１より大きいＮ／Ｐ比を有する粒子（静脈内または他の血管内適用に特に好適）について０ｍＶ〜＋５０ｍＶの範囲である。
【０３７９】
カチオン性部分Ｐまたはそのジスルフィド結合型多量体を含むカチオン性化合物の量は、核酸カーゴの量を考慮して選択するのがよい。好ましい実施形態の一例では、この量は、例えば約０．１〜約２０の範囲のＮ／Ｐ比が得られるように選択される。これとの関連において、Ｎ／Ｐ比は、カーゴとして使用される核酸のリン酸基（「Ｐ」）に対する部分Ｐまたはそのジスルフィド結合型多量体を含む化合物の塩基性窒素含有基の窒素原子（「Ｎ」）のモル比と定義される。Ｎ／Ｐ比は、例えば、１μｇのＲＮＡには典型的には約３ｎｍｏｌのリン酸残基が含まれていることに基づいて計算され得るが、ＲＮＡは、塩基の統計的分布を示すものであるものとする。ペプチドまたはポリマーの「Ｎ」値は、その分子量、または該ペプチドまたはポリマーが分子量分布を有する場合はその平均分子量と、カチオン性基もしくはカチオン化可能基の相対的含有量に基づいて計算され得る。好ましいさらなる一実施形態では、Ｎ／Ｐ比は約０．２〜約１５の範囲、またはそれぞれ約０．２〜約１３、もしくは約０．３〜約１２、もしくは約０．５〜約１０、もしくは約０．６〜約８の範囲である。
【０３８０】
一実施形態では、約２〜約１５または約２〜約１２の範囲のＮ／Ｐ比が選択される。かかるＮ／Ｐ比を示す本発明による組成物が、該組成物の静脈内投与を含む使用に特に好適である。
【０３８１】
上記のように、本発明の組成物中ならびにナノ粒子（１個または複数）中のカチオン性のリピドイドの量は典型的には、カーゴとしての核酸用の慣用的なリピドイドベースの担体中よりもずっと少ない。本発明は、例えばＲＮＡの送達および細胞のトランスフェクションに提案されている、リポフレックスまたはリピドイドナノ粒子に使用されるリピドイドの典型的な量の約０．１〜約１０％という少ない量で実施され得る。理論に拘束されることを望まないが、本発明者らは、リピドイドがこのような少量であることが本発明の組成物の高い耐容性を得るのに極めて重要であったと思っている。
【０３８２】
リピドイドの量はまた、Ｎ／Ｐ比でも表示され得る。この場合、「Ｎ」はカチオン性のリピドイドの塩基性基のモル数を表し、一方、「Ｐ」は、カーゴとして使用される核酸のリン酸基を示す。本発明の組成物において、したがって本発明のナノ粒子においてもまた、このリピドイド関連Ｎ／Ｐ−比は好ましくは約３以下、特に約２以下である。また、それぞれ約０．０１６〜約０．６５０、または約０．０３２〜約０．４８４、または約０．０８０〜約０．３２３、または約０．９６８〜約０．２５８、例えば約０．１２９の範囲のリピドイド関連Ｎ／Ｐ比も好ましい。
【０３８３】
カチオン性のリピドイドの量は、カーゴに対して相対的に少ないだけでなく、ペプチドまたはポリマー担体、すなわち部分Ｐまたはその該多量体を含む化合物の量に対しても相対的に少ない。部分Ｐまたはそのジスルフィド結合型多量体を含む化合物に対するカチオン性のリピドイドの重量比は約１：１０より大きくない、またはそれぞれ約１：２０、もしくは１：３０、もしくは１：４０より大きくないことが一般的に好ましい。別の好ましい実施形態では、それぞれの比が約１：５０より大きくない。
【０３８４】
該ナノ粒子は、（ｉ）１種類以上のカチオン性のペプチドおよび／またはポリマー；（ｉｉ）上記に規定した１種類以上のリピドイド、任意選択で適切な溶媒（例えば、エタノール、ＤＭＳＯ）に溶解させる；ならびに（ｉｉｉ）１種類以上の核酸化合物を合わせる工程を含み、合わせることが、例えばナノ粒子または複数のナノ粒子の形成を可能にするための水性液の存在下で行われる方法によって調製され得る。これらの異なる薬剤の良好な混合を可能にするため、リピドイドを、核酸との混合前に、該カチオン性の複合体化パートナーと混合してもよい。混合は適当な混合デバイス（例えば、Ｔ型もしくはＹ型を用いる層流の組合せ；マイクロ流路デバイスまたは単に撹拌溶液に添加すること）によって行われ得る。
【０３８５】
該カチオン性のペプチドまたはポリマー、該リピドイド、カーゴとしての核酸化合物および／または１種類以上の不活性成分を含む本発明の組成物、ナノ粒子またはナノ粒子を含む組成物、特に、上記のナノ粒子を含む組成物は、好ましくは、例えば、被験体、特に動物またはヒト被験体への投与に適するように製剤化および加工処理される。好ましくは、組成物は滅菌されている。
【０３８６】
これに関して、該組成物は医薬組成物とも称され得る。これは、該組成物または該ナノ粒子の構成成分および他の特色に関して本明細書に記載の任意の選択肢および好ましいものに適用され得る一般的な好ましいものである。換言すると、本発明はまた、例えば、核酸化合物が少なくとも１種類のペプチドまたはタンパク質をコードしているコード核酸である本明細書に規定した医薬組成物に関するものである。例えば、コード核酸は、治療活性なタンパク質または抗原をコードしているものであり得る。本発明はさらに、コード核酸が少なくとも１種類の抗原をコードしているかかる医薬組成物を含むワクチンに関するものである。これとの関連において、ワクチンは医薬組成物からなるものであってもよく、医薬組成物を他の構成成分とともに含むものであってもよい。
【０３８７】
本発明の医薬組成物、ナノ粒子またはナノ粒子を含む組成物は、経口、非経口、吸入スプレーによって、経表面、経直腸、経鼻、口腔内、経膣で、または埋込み型リザーバによって投与され得る。非経口という用語は、本明細書で用いる場合、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、肝内、病巣内、頭蓋内、経皮、皮内、肺内、腹腔内、心臓内、動脈内および舌下への注射または輸注手法を包含している。一部の実施形態では、本発明の医薬組成物、ナノ粒子またはナノ粒子を含む組成物は接眼送達によって投与され得る。具体的な一実施形態では、本発明の医薬組成物、ナノ粒子またはナノ粒子を含む組成物は網膜下または硝子体内注射によって投与される。好ましい一実施形態では、本発明の医薬組成物、ナノ粒子またはナノ粒子を含む組成物は硝子体内注射によって投与される。別の好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物  ナノ粒子またはナノ粒子を含む組成物は網膜下注射によって投与される。
【０３８８】
また、本発明は、眼の疾患、障害または病的状態に苦しんでいるか、またはこれらに易罹患性の被験体を処置するために使用され得る。本明細書で用いる場合、「眼の疾患、障害または病的状態」は、目および／または視力が悪くなる疾患、障害または病的状態をいう。一部の実施形態では、眼の疾患、障害または病的状態は、目または視力と関連している解剖学的部分におけるタンパク質欠損症または機能障害によって引き起こされ得るものである。例示的な眼の疾患、障害または病的状態としては、限定されないが、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、色素性ブドウ膜炎（ＰＵ）、網膜静脈分枝閉塞症（ＢＲＶＯ）、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、嚢胞様黄斑浮腫（ＣＭＥ）、ブドウ膜炎（ｕｖｅｉｔｉｃ）黄斑浮腫（ＵＭＥ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）網膜炎、眼内炎、炎症、緑内障、黄斑変性、強膜炎、網脈絡膜炎（ｃｈｏｒｉｏｔｅｔｉｎｉｔｉｓ）およびブドウ膜炎が挙げられる。
【０３８９】
種々の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の任意の眼の疾患、障害または病的状態において欠損しているタンパク質をコードしているｍＲＮＡを送達するために使用され得る。
【０３９０】
好ましくは、本発明の医薬組成物、ナノ粒子またはナノ粒子を含む組成物は非経口注射によって、より好ましくは皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、肝内、病巣内、頭蓋内、経皮、皮内、肺内、腹腔内、心臓内、動脈内、硝子体内、網膜下、房内、結膜下、テノン嚢下、球後、経表面および／または後強膜近傍（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｊｕｘｔａｓｃｌｅｒａｌ）投与、毛様筋内への投与または舌下注射によって、あるいは輸注手法によって投与され得る。特に好ましいは皮内注射および筋肉内注射である。本発明の医薬組成物の滅菌された注射用形態は水性または油性の懸濁剤であり得る。このような懸濁剤は、当該技術分野で知られた手法に従って、適当な分散化剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて製剤化され得る。
【０３９１】
また、本発明の医薬組成物、本明細書に規定したナノ粒子またはナノ粒子を含む組成物を、任意の経口に許容され得る投薬形態、例えば限定されないが、カプセル剤、錠剤、水性懸濁剤または液剤で経口投与してもよい。
【０３９２】
また、本発明の医薬組成物、ナノ粒子またはナノ粒子を含む組成物を特に、処置標的が経表面適用によって容易に到達可能な領域または器官を含む場合、例えば、皮膚の疾患または任意の他の到達可能な上皮組織の疾患などの場合、経表面投与してもよい。好適な経表面製剤は、このような領域または器官の各々に対して容易に調製される。経表面適用のためには、本発明の医薬組成物は、１種類以上の担体中に懸濁または溶解させた本明細書に規定した核酸を含む適当な軟膏に製剤化され得る。
【０３９３】
本発明の医薬組成物、ナノ粒子またはナノ粒子を含む組成物は典型的には、本発明の医薬組成物の成分、特に、本明細書に規定した核酸配列（１つまたは複数）を「安全で有効な量」で含むものである。本明細書で用いる場合、「安全で有効な量」は、本明細書に規定した疾患または障害のプラスの改良を有意に誘導するのに充分な本明細書に規定した核酸配列（１つまたは複数）自体の量を意味する。しかしながら、同時に、「安全で有効な量」は、深刻な副作用が回避されるのに、および利点とリスクの理にかなった関係が可能であるのに充分に少ない量である。このような限界値の決定は典型的には、理にかなった医学的判断の範囲内である。
【０３９４】
したがって、本発明によるワクチンは、本明細書に記載の（医薬）組成物と同じ成分を主体とするものである。その範囲において、本明細書において提供する（医薬）組成物の説明が参照され得る。好ましくは、本発明によるワクチンは、本明細書に規定した少なくとも１種類の核酸配列を含む少なくとも１種類の核酸および薬学的に許容され得る担体を含むものである。諸実施形態において、ワクチンが１種類より多くの核酸、特に１種類より多くのｍＲＮＡ配列（例えば、複数の本発明によるＲＮＡ配列、ここで、各々は、好ましくは相違する抗原性ペプチドまたはタンパク質をコードしている）を含むものである場合、ワクチンは、物理的に分離された形態で提供され得、個別の投与工程によって投与され得る。本発明によるワクチンは、特に、ｍＲＮＡ配列が１つの組成物によって提供される場合、本明細書に記載の（医薬）組成物に相当し得る。しかしながら、本発明のワクチンはまた、物理的に分離された状態で提供してもよい。例えば、諸実施形態において、ワクチンが１種類より多くのｍＲＮＡ配列／種を含むものである場合、このようなＲＮＡ種を、各々が相違する抗原性ペプチドまたはタンパク質をコードしている少なくとも１種類のｍＲＮＡ種／配列（例えば、３種類の相違するｍＲＮＡ種／配列）が各々に含まれ得る例えば２、３、４、５または６種類の個別の組成物が提供されるように提供してもよく、これらは合わせてもよく合わせなくてもよい。また、本発明のワクチンは、各組成物が少なくとも１種類の本明細書に規定した抗原性ペプチドまたはタンパク質をコードしている少なくとも１種類のｍＲＮＡを含むものである少なくとも２種類の相違する組成物の組合せであってもよい。あるいはまた、ワクチンは、各々が本明細書に規定した抗原性ペプチドまたはタンパク質のうちの１種類をコードしている少なくとも１種類のｍＲＮＡ、好ましくは少なくとも２、３、４、５、６種類またはそれ以上のｍＲＮＡの組合せとして提供され得る。このようなワクチンは、使用前に合わせて１つの組成物を提供してもよく、本明細書に規定した任意の抗原性ペプチドまたはタンパク質をコードしている相違するｍＲＮＡ配列／種を投与するために１回より多くの投与が必要とされるように使用してもよい。ワクチンが、本明細書に規定した抗原の組合せをコードしている少なくとも１種類のｍＲＮＡ配列、典型的には少なくとも２種類のｍＲＮＡ配列を含むものである場合、これは、例えば、１回の投与（すべてのｍＲＮＡ種／配列を合わせる）によって、少なくとも２回の個別の投与によって投与され得る。したがって；個別の実体（１種類のｍＲＮＡ種を含むもの）または合わせた実体（１種類より多くのｍＲＮＡ種を含むもの）として提供される、本明細書に規定した少なくとも１種類の抗原性ペプチドもしくはタンパク質または抗原の任意の組合せ（および任意選択で、さらなる抗原）をコードしているモノ−、バイ−またはマルチシストロニックなｍＲＮＡの任意の組合せが本発明によるワクチンであると理解されたい。
【０３９５】
本発明による（医薬）組成物と同様、ワクチンの実体は、液状およびまたは乾燥（例えば、凍結乾燥）形態で提供され得る。これは、さらなる成分、特に、その医薬品としての使用を可能にするさらなる成分を含むものであってもよい。ワクチンまたは（医薬）組成物は、例えば、薬学的に許容され得る担体および／またはさらなる補助物質および添加剤をさらに含むものであり得る。
【０３９６】
ワクチンまたは（医薬）組成物は典型的には、本明細書に規定した抗原性ペプチドもしくはタンパク質またはその断片もしくはバリアントあるいは抗原（好ましくは、本明細書に規定したもの）の組合せをコードしている本明細書に規定した本発明による核酸、特にｍＲＮＡを安全で有効な量で含むものである。本明細書で用いる場合、「安全で有効な量」は、がんまたはがんに関連する疾患もしくは障害のプラスの改良を有意に誘導するのに充分なｍＲＮＡの量を意味する。しかしながら、同時に、「安全で有効な量」は、深刻な副作用が回避されるのに、すなわち利点とリスクの理にかなった関係が可能であるのに充分に少ない量である。このような限界値の決定は典型的には、理にかなった医学的判断の範囲内である。本発明のワクチンまたは（医薬）組成物に関して、表現「安全で有効な量」は好ましくは、適応免疫系を、過度または有害な免疫反応がもたらされないが、また好ましくはかかる免疫反応が測定可能レベル未満にならないような様式で賦活するのに適したｍＲＮＡ（したがって、コードされた抗原）の量を意味する。本明細書に規定した（医薬）組成物またはワクチンのｍＲＮＡのかかる「安全で有効な量」はさらに、ｍＲＮＡ、例えば、モノシストロニック、バイ−またはさらにはマルチシストロニックなｍＲＮＡの型に依存して選択され得、それは、バイ−またはさらにはマルチシストロニックなｍＲＮＡでは等量モノシストロニックなｍＲＮＡの使用より有意に高いコードされた抗原（１種類または複数種）の発現がもたらされ得るからである。上記に規定した（医薬）組成物またはワクチンのｍＲＮＡの「安全で有効な量」はさらに、処置対象の具体的な病的状態、また、処置対象の患者の年齢および体調、病的状態の重症度、処置の持続期間、付随する治療の性質、使用される具体的な薬学的に許容され得る担体の性質、ならびに同様の要素（担当医の知識と経験の範囲内）と関連してさまざまである。本発明によるワクチンまたは組成物は、ヒトに対して、また獣医学目的のために、医薬組成物またはワクチンとして本発明に従って使用され得る。
【０３９７】
好ましい一実施形態では、本発明による（医薬）組成物、ワクチンまたはパーツキットの核酸、特にｍＲＮＡは凍結乾燥形態で提供される。好ましくは、凍結乾燥されたｍＲＮＡは、投与前に適当なバッファー（好都合には水性担体を主体とするもの）中で、例えば、乳酸加リンゲル液（これが好ましい）、リンゲル液、リン酸バッファー溶液中で再構成される。好ましい一実施形態では、本発明による（医薬）組成物、ワクチンまたはパーツキットは少なくとも１、２、３、４、５、６種類またはそれ以上のｍＲＮＡ、好ましくは、凍結乾燥形態で個別に提供され（任意選択で少なくとも１種類のさらなる添加剤と一緒に）、（モノシストロニックな）ｍＲＮＡの各々の個々の投与が可能となるように使用前に適当なバッファー（例えば、Ｒｉｎｇｅｒ−Ｌａｃｔａｔｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）中で好ましくは個別に再構成されるｍＲＮＡを含むものである。
【０３９８】
本発明によるワクチンまたは（医薬）組成物には典型的には薬学的に許容され得る担体が含められ得る。表現「薬学的に許容され得る担体」は、本明細書で用いる場合、好ましくは本発明のワクチンの液状または非液状の基剤を包含している。本発明のワクチンが液状形態で提供される場合、担体は水、典型的にはパイロジェンフリー水；等張性生理食塩水または緩衝（水性）溶液、例えば、リン酸塩、クエン酸塩などの緩衝溶液である。特に、本発明のワクチンの注射のためには、水または、ナトリウム塩、好ましくは少なくとも５０ｍＭのナトリウム塩、カルシウム塩、好ましくは少なくとも０，０１ｍＭのカルシウム塩、および任意選択でカリウム塩、好ましくは少なくとも３ｍＭのカリウム塩を含有している好ましくはバッファー、より好ましくは水性バッファーが使用され得る。好ましい一実施形態によれば、ナトリウム塩、カルシウム塩および任意選択でカリウム塩はそのハロゲン化物、例えば塩化物、ヨウ化物または臭化物の形態、その水酸化物、炭酸塩、炭酸水素塩または硫酸塩の形態などで存在させ得る。限定されないが、ナトリウム塩の例としては、例えばＮａＣｌ、ＮａＩ、ＮａＢｒ、Ｎａ２ＣＯ３、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＳＯ４が挙げられ、任意選択のカリウム塩の例としては、例えばＫＣｌ、ＫＩ、ＫＢｒ、Ｋ２ＣＯ３、ＫＨＣＯ３、Ｋ２ＳＯ４が挙げられ、カルシウム塩の例としては、例えばＣａＣＬ2、ＣａＩ２、ＣａＢＲ２、ＣａＣＯ３、ＣａＳＯ４、Ｃａ（ＯＨ）２が挙げられる。さらに、上記のカチオンの有機アニオンをバッファー中に含めてもよい。より好ましい一実施形態によれば、上記に規定した注射目的に適したバッファーは、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カルシウム（ＣａＣＬ2）および任意選択で塩化カリウム（ＫＣｌ）から選択される塩を含むものであり得、ここで、該塩化物に加えてさらなるアニオンを存在させてもよい。また、ＣａＣＬ2をＫＣｌなどの別の塩で置き換えてもよい。典型的には、注射用バッファー中の塩は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）では少なくとも５０ｍＭ、塩化カリウム（ＫＣｌ）では少なくとも３ｍＭおよび塩化カルシウム（ＣａＣＬ2）では少なくとも０，０１ｍＭの濃度で存在させる。注射用バッファーは、具体的な関連媒体（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｍｅｄｉｕｍ）に対して高張性であっても等張性であっても低張性であってもよい、すなわち、該バッファーは、具体的な関連媒体と比べて高い塩含有量を有するものであっても、同一の塩含有量を有するものであっても、低い塩含有量を有するものであってもよく、この場合、好ましくは、浸透作用または他の濃度効果による細胞の損傷をもたらさないかかる濃度の前述の塩が使用され得る。関連媒体は、例えば、「インビボ」法では、存在する液体、例えば血液、リンパ液、サイトゾル液または他の体液、あるいは例えば、「インビトロ」法において関連媒体として使用され得る液体、例えば一般的なバッファーまたは液体である。かかる一般的なバッファーまたは液体は当業者に知られている。乳酸加リンゲル液が液状基剤として特に好ましい。
【０３９９】
しかしながら、人に対する投与に適した１種類以上の適合性の固形または液状の充填剤もしくは希釈剤またはカプセル封入用化合物も同様に使用され得る。用語「適合性の」とは、本明細書で用いる場合、本発明のワクチンの構成成分が本明細書に規定した本発明による核酸、特にｍＲＮＡと、相互作用が起こらないような、典型的な使用条件下で本発明のワクチンの医薬としての有効性が実質的に低減され得ないであろう様式で混合され得ることを意味する。薬学的に許容され得る担体、充填剤および希釈剤はもちろん、処置対象の人に対する投与に適したものとなるのに充分に高い純度および充分に低い毒性を有するものでなければならない。薬学的に許容され得る担体、充填剤またはその構成成分として使用され得る化合物の一例は糖類、例えばラクトース、グルコース、トレハロースおよびスクロースなど；デンプン、例えばコーンスターチまたはイモデンプンなど；デキストロース；セルロースおよびその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、酢酸セルロースなど；粉末化トラガカント；モルト；ゼラチン；獣脂；固形流動促進剤、例えばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウムなど；硫酸カルシウム；植物油、例えばラッカセイ油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油およびカカオ油など；ポリオール、例えばポリプロピレングリコール、グリセロール、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなど；アルギン酸である。
【０４００】
薬学的に許容され得る担体の選択は、原則的には、本発明による医薬組成物またはワクチンが投与される様式によって決定される。組成物またはワクチンは、例えば全身投与または局所投与され得る。全身投与のための経路としては一般的には、例えば経皮、経口、非経口経路、例えば皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、皮内および腹腔内注射、眼内、硝子体内、網膜下、房内、結膜下、テノン嚢下、球後、経表面および／または後強膜近傍投与、毛様筋内への投与および／または鼻腔内投与経路が挙げられる。局所投与のための経路としては一般的には例えば経表面投与経路が挙げられるが、皮内、経皮、皮下もしくは筋肉内注射または病巣内、頭蓋内、肺内、心臓内および舌下注射もまた挙げられる。より好ましくは、本発明による組成物またはワクチンは皮内、皮下または筋肉内経路、好ましくは注射（これは無針注射および／または針注射であり得る）によって投与され得る。したがって、組成物／ワクチンは、好ましくは、液状形態または固形形態に製剤化される。投与すべき本発明によるワクチンまたは組成物の適当な量は、常套的な実験によって、例えば動物モデルを使用することによって決定され得る。かかるモデルとしては、なんら限定を示唆するものではないが、ウサギ、ヒツジ、マウス、ラット、イヌおよび非ヒト霊長類モデルが挙げられる。注射用の好ましい単位用量形態としては、水、生理食塩水またはその混合物の滅菌溶液が挙げられる。かかる溶液のｐＨは約７．４に調整するのがよい。注射用の好適な担体としては、ハイドロゲル、制御放出または遅延放出のためのデバイス、ポリ乳酸およびコラーゲンマトリックスが挙げられる。経表面適用のための好適な薬学的に許容され得る担体としては、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤などにおける使用に適したものが挙げられる。本発明の組成物またはワクチンを経口投与する場合、錠剤、カプセル剤などが好ましい単位用量形態である。経口投与に使用され得る単位用量形態の調製のための薬学的に許容され得る担体は先行技術においてよく知られている。その選択は、二次的考慮事項、例えば味、コストおよび貯蔵性（これらは本発明の目的に重要ではない）に依存し、当業者は難なく行うことができる。
【０４０１】
本発明のワクチンまたは組成物は、免疫原性をさらに高めるために１種類以上の補助物質をさらに含むものであってもよい。好ましくはこれにより、本発明の組成物中に含める核酸と補助物質（これは、任意選択で上記の本発明のワクチンまたは組成物と共製剤化され得る（または個別に製剤化され得る））の相乗作用が得られる。補助物質の種々の型に応じて、種々の機構がこの点において役割を果たし得る。
【０４０２】
本発明のワクチンまたは組成物中に含められ得るさらなる添加剤は乳化剤、例えばTweenなど；湿潤剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムなど；着色剤；味覚付与剤、医薬用担体；錠剤形成剤；安定剤；抗酸化剤；保存料である。
【０４０３】
また、本発明のワクチンまたは組成物にさらに、ヒトＴｏｌｌ様受容体ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０に対する結合親和性（リガンドとして）のため、またはマウスＴｏｌｌ様受容体ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２もしくはＴＬＲ１３に対する結合親和性（リガンドとして）のため免疫賦活性であることが知られている任意のさらなる化合物を含めてもよい。
【０４０４】
これとの関連において本発明のワクチンまたは組成物に添加され得る別の類型の化合物は、ＣｐＧ核酸、特にＣｐＧ−ＲＮＡまたはＣｐＧ−ＤＮＡであり得る。ＣｐＧ−ＲＮＡまたはＣｐＧ−ＤＮＡは一本鎖ＣｐＧ−ＤＮＡ（ｓｓ  ＣｐＧ−ＤＮＡ）、二本鎖ＣｐＧ−ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）、一本鎖ＣｐＧ−ＲＮＡ（ｓｓ  ＣｐＧ−ＲＮＡ）または二本鎖ＣｐＧ−ＲＮＡ（ｄｓ  ＣｐＧ−ＲＮＡ）であり得る。ＣｐＧ核酸は好ましくは、ＣｐＧ−ＲＮＡの形態、より好ましくは一本鎖ＣｐＧ−ＲＮＡ（ｓｓ  ＣｐＧ−ＲＮＡ）の形態である。ＣｐＧ核酸は好ましくは、少なくとも１つまたはそれ以上の（細胞分裂促進性の）シトシン／グアニンジヌクレオチド配列（ＣｐＧモチーフ）を含むものである。第１の好ましい択一例によれば、このような配列に含められる少なくとも１つのＣｐＧモチーフ、すなわち、ＣｐＧモチーフのＣ（シトシン）およびＧ（グアニン）は非メチル化型である。このような配列に任意選択で含められるさらなるシトシンまたはグアニンはすべて、メチル化型または非メチル化型のいずれかであり得る。しかしながら、好ましいさらなる択一例によれば、ＣｐＧモチーフのＣ（シトシン）およびＧ（グアニン）はまた、メチル化形態で存在していてもよい。
【０４０５】
本明細書で用いる場合、用語「本発明の組成物」は、少なくとも１種類の人工核酸を含む本発明の組成物を示し得る。同様に、用語「本発明のワクチン」は、これとの関連において用いる場合、人工核酸を主体とする、すなわち、少なくとも１種類の人工核酸を含むものであるか、または前記人工核酸を含む本発明の組成物を含むものである本発明のワクチンを示し得る。
【０４０６】
該組成物を既製の注射用製剤として設計してもよい。例えば、該組成物は、注射に適した滅菌された液状剤として製剤化され得る。この場合、該組成物は、好ましくは、約４〜約９、またはより好ましくは約４．５〜約８．５の範囲のｐＨを有する滅菌された水性液剤またはナノ粒子の滅菌された水性懸濁剤として提供され得る。かかる液状組成物の重量オスモル濃度は好ましくは約１５０〜約５００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、より好ましくは約２００〜約４００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇである。また、該組成物が静脈内注射される場合、ｐＨは約４．５〜約８、または約５〜約７．５の範囲であり得；重量オスモル濃度は、この場合では好ましくは、それぞれ約２２０〜約３５０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、または約２５０〜約３３０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇの範囲で選択され得る。
【０４０７】
あるいはまた、該組成物を、使用前に希釈またはさらには再構成を必要とする濃縮形態として製剤化してもよい。例えば、該組成物は液状濃縮物の形態であり得、これは、水性溶媒または希釈剤での希釈を必要とする水性および/または有機系の液状製剤であり得る。液状濃縮物が有機溶媒を含むものである場合、かかる溶媒は好ましくは、比較的毒性が低い水混和性の有機溶媒、例えばエタノールまたはプロピレングリコールから選択される。
【０４０８】
好ましい実施形態の一例では、本発明の組成物は、例えば注射に適した液状製剤を得るために液状担体で再構成するための乾燥製剤として提供される。特に、乾燥製剤は、水性液状担体を用いて再構成するための滅菌された粉末剤または凍結乾燥形態であり得る。
【０４０９】
性能、安定性または耐容性を最適化するため、該組成物に任意選択で、必要とされる、または有用な医薬用賦形剤を含めてもよい。潜在的に有用な賦形剤としては、酸、塩基、浸透物質、抗酸化剤、安定剤、界面活性剤、共力剤、着色剤、増粘剤、増量剤、および（必要な場合は）保存料が挙げられる。
【０４１０】
また、本発明は、本明細書に規定した本発明の組成物の構成成分を備えたキット、特にパーツキットに関するものである。換言すると、本発明により、任意のかかる組成物を調製するためのキットを提供する。本発明の医薬組成物は、例えばキットの１つまたは異なるパーツに存在させ得、該キットが、該カチオン性のペプチドまたはポリマーおよび/または該リピドイド化合物を含む第１のキット構成要素と、該核酸化合物を含む第２のキット構成要素を備えたものである。
【０４１１】
例えば、第１のキット構成要素は、滅菌された固形組成物、例えば凍結乾燥形態もしくは粉末剤として、または滅菌された液状組成物として提供され得る。該カチオン性のペプチドまたはポリマーおよび／または該リピドイドに加えて、第１のキット構成要素は、上記の１種類以上の不活性成分を備えていてもよい。同様に、第２のキット構成要素も、例えば、滅菌された固形または液状の組成物として製剤化され得、また、該核酸化合物に加えて１種類以上のさらなる不活性成分も含んでいてもよい。本発明の組成物は、この２つの構成要素の内容物を合わせ、任意選択で混合することにより得られる。任意選択で、該リピドイドを、第１のキット構成要素内に該カチオン性のペプチドまたはポリマーと一緒にではなく、第３のキット構成要素内に収容してもよい。
【０４１２】
あるいはまた、同じく本発明の範囲に含まれるが、少なくとも１種類のカチオン性のペプチドまたはポリマー、少なくとも１種類のリピドイド、および少なくとも１種類の核酸化合物もしくは少なくとも１種類の核酸配列または該核酸配列を含むワクチン（例えば、滅菌された固形もしくは液状の製剤として製剤化されたもの）を備えた第１のキット構成要素であって、任意選択で、本明細書に規定した少なくとも１種類の他の成分、例えば医薬用担体またはビヒクルを備えた第１のキット構成要素；ならびに例えば上記の本発明の組成物を得るために第１のキット構成要素の内容物を溶解または分散させるための液状担体を備えた第２のキット構成要素を備えたキットを提供する。この場合も、該キット構成要素は好ましくは、固形であれ液状であれ、滅菌された形態で提供され、その各々は、１種類以上のさらなる賦形剤または不活性成分を備えていてもよい。
【０４１３】
キットまたはパーツキットが複数の核酸配列を備えたものである場合、キットの１つの構成要素は、該キットに含められる核酸配列のうちの１種類だけを含むものであっても、いくつかを含むものであっても、すべてを含むものであってもよい。択一的な一実施形態では、各構成要素がキットのパーツを構成するように１種類ごとの／各核酸配列がキットの異なる／個別の構成要素に含められ得る。また、１種類より多くの核酸を第１の構成要素にキットのパーツとして含め、一方、１つ以上の他の（第２、第３などの）構成要素（該キットの１つ以上の他のパーツを提供する）のいずれかに、１種類または１種類より多くの核酸（これは、第１の構成要素と同一であっても部分的に同一であっても異なっていてもよい）を含めてもよい。
【０４１４】
任意選択で、上記の任意のキット構成要素は、固形形態であれ液状形態であれ濃縮物であるように製剤化され、生体適合性または生理学的に耐容性の液状担体（これは、任意選択でキットのパーツではない場合があり得る）、例えば滅菌された生理食塩水溶液、滅菌されたバッファー、または注射用薬物の液状希釈剤として高頻度に使用される他の溶液で希釈されるように設計され得る。
【０４１５】
この注射用製剤との関連において、表現「液状担体」は典型的には、生理学的に許容され得る組成、ｐＨおよび重量オスモル濃度を有する耐容性が良好な水性注射用液状組成物を意味する。
【０４１６】
キットまたはパーツキットにさらに、核酸配列、本発明の医薬組成物または任意のその構成要素もしくはパーツ（例えば、キットがパーツキットとして準備される場合）の投与および投薬量に関する情報を有する技術的使用説明書を含めてもよい。
【０４１７】
上記のナノ粒子、キットおよび組成物は、核酸カーゴを生体細胞に送達するため、例えば該核酸で該細胞をトランスフェクトするために特に有用である。これは、科学研究目的、診断用途または治療に有用であり得る。好ましい実施形態の一例では、該ナノ粒子（1個もしくは複数）該組成物は医薬として使用される。
【０４１８】
本明細書で用いる場合、「医薬」は、疾患もしくは病的状態の予防、抑制、処置、治癒、待期療法、寛解、マネージメント、改善、遅延、安定化または再発もしくは拡延の抑制もしくは遅延、例えば、疾患もしくは病的状態の任意の症状の抑制、処置もしくは寛解に有用な任意の化合物、物質、組成物または製剤を意味する。
【０４１９】
診断薬または医薬としてのインビボでの使用に適するようにするため、本発明の組成物は液状形態で提供され得、ここで、各構成成分は、溶解形態または分散形態（例えば、懸濁形態もしくは乳化）で独立して組み込まれ得る。例えば、該組成物は、被験体に対して注射による投与に適した滅菌された水性液剤の形態であり得る。別の好ましい実施形態では、該組成物は、水性液状担体を用いて再構成するための滅菌された固形組成物、例えば滅菌された粉末剤または凍結乾燥形態として製剤化される。
【０４２０】
好ましいさらなる一実施形態では、本明細書に記載のナノ粒子（１個もしくは複数）および／または組成物は、ペプチドまたはタンパク質の欠損症と関連している疾患の予防、処置および／または寛解において使用される。したがって、本発明はまた、ペプチドまたはタンパク質の欠損症と関連している疾患の予防、処置および／または寛解のための医薬の製造のための該ナノ粒子（１個もしくは複数）および／または該組成物の使用に関するものである。さらに、本発明により、ペプチドまたはタンパク質の欠損症と関連している疾患または病的状態のリスクがあるか、またはこれに罹患している被験体の処置方法であって、該ナノ粒子（１個もしくは複数）および／または該組成物を該被験体に投与することを含む方法を提供する。
【０４２１】
本発明によりさらに、本明細書に記載の人工核酸、少なくとも１種類の人工核酸を含む本発明の組成物、本発明のポリペプチド、少なくとも１種類の本発明のポリペプチドを含む本発明の組成物もしくは本発明のワクチンまたはこれらを備えたキットのいくつかの用途および使用を提供する。特に、本発明の（医薬）組成物（１種類もしくは複数種）または本発明のワクチンは、ヒトに対して、また獣医学目的のために、好ましくはヒトの医療目的のために、一般的には医薬組成物として、またはワクチンとして使用され得る。
【０４２２】
さらなる一態様では、本発明により、例えばウイルス感染の予防的処置（曝露前の予防もしくは曝露後の予防）および／または治療的処置の方法における使用のための本明細書に記載の人工核酸、少なくとも１種類の人工核酸を含む本発明の組成物、本発明のポリペプチド、少なくとも１種類の本発明のポリペプチドを含む本発明の組成物、本発明のワクチンまたは本発明のキットもしくはパーツキットを提供する。その結果、さらなる一態様では、本発明は、本明細書に開示の人工核酸、少なくとも１種類の人工核酸を含む本発明の組成物、本明細書に記載の本発明のポリペプチド、少なくとも１種類の本発明のポリペプチドを含む本発明の組成物、本明細書に規定した本発明のワクチンまたは本発明のキットもしくはパーツキットの医薬としての最初の医学的使用に関するものである。特に、本発明により、医薬の調製のための、本明細書に規定した少なくとも１種類の、例えばウイルスのタンパク質もしくはペプチドまたは本明細書に記載のその断片もしくはバリアントを含む少なくとも１種類のポリペプチドをコードしている少なくとも１つのコード領域を含む人工核酸の使用を提供する。
【０４２３】
別の態様によれば、本発明は、例えばウイルスによる感染または感染に関連する疾患もしくは障害の処置のための、本明細書に開示の人工核酸、少なくとも１種類の本明細書に開示の人工核酸を含む本発明の組成物、本明細書に記載の本発明のポリペプチド、少なくとも１種類の本発明のポリペプチドを含む本発明の組成物、本発明のワクチンまたは本発明のキットもしくはパーツキットの2回目の医学的使用に関するものである。
【０４２４】
本発明の組成物または本発明のワクチン、特に、少なくとも１種類の本明細書に開示の人工核酸を含む本発明の組成物、本明細書に記載の本発明のポリペプチドまたは少なくとも１種類の本発明のポリペプチドを含む本発明の組成物は、例えば、全身投与または局所投与され得る。全身投与のための経路としては一般的には、例えば経皮、経口、非経口経路、例えば皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、皮内および腹腔内注射、房内、結膜下、テノン嚢下、球後、経表面および／または後強膜近傍投与、毛様筋内への投与および／または鼻腔内投与経路が挙げられる。局所投与のための経路としては一般的には例えば経表面投与経路が挙げられるが、皮内、経皮、皮下もしくは筋肉内注射または病巣内、頭蓋内、肺内、心臓内および舌下注射もまた挙げられる。より好ましくは、ワクチンは皮内、皮下または筋肉内経路によって投与され得る。したがって、本発明のワクチンは、好ましくは液状（または場合によっては固形）形態に製剤化される。好ましくは、本発明のワクチンは慣用的な針注射または無針ジェット式注射によって投与され得る。好ましい一実施形態では、本発明のワクチンまたは組成物は、本明細書に規定したジェット式注射によって好ましくは筋肉内または皮内に、より好ましくは皮内に投与され得る。
【０４２５】
好ましい一実施形態では、単回用量の該人工核酸、組成物またはワクチンには特定の量の本明細書に開示の人工核酸が含まれる。好ましくは、該人工核酸は、少なくとも４０μｇ／用量の量で、好ましくは４０〜７００μｇ／用量の量で、より好ましくは８０〜４００μｇ／用量の量で提供される。より詳しくは、慣用的な針を使用することにより好ましく行われる皮内注射の場合、単回用量に含められる本発明の人工核酸の量は典型的には、少なくとも２００μｇ、好ましくは２００μｇ〜１．０００μｇ、より好ましくは３００μｇ〜８５０μｇ、さらにより好ましくは３００μｇ〜７００μｇである。ジェット式注射（例えば、Ｔｒｏｐｉｓデバイスを使用）によって好ましくは行われる皮内注射の場合では、単回用量に含められる該人工核酸の量は典型的には、少なくとも８０μｇ、好ましくは８０μｇ〜７００μｇ、より好ましくは８０μｇ〜４００μｇである。さらに、慣用的な針使用することにより、またはジェット式注射によって好ましく行われる筋肉内注射の場合、単回用量に含められる該人工核酸の量は典型的には、少なくとも８０μｇ、好ましくは８０μｇ〜１．０００μｇ、より好ましくは８０μｇ〜８５０μｇ、さらにより好ましくは８０μｇ〜７００μｇである。
【０４２６】
例えばウイルス感染の処置または予防のための免疫処置プロトコル、すなわち、例えばウイルスに対する被験体の免疫処置は、典型的には一連の単回用量または単回投薬量の本発明の組成物または本発明のワクチンを含む。単回投薬量は、本明細書で用いる場合、それぞれ初回／最初の用量、２回目の用量または以降の任意の用量（これは、好ましくは免疫反応を「追加刺激」するために投与される）をいう。
【０４２７】
好ましい一実施形態によれば、本明細書に開示の人工核酸、少なくとも１種類の本明細書に開示の人工核酸を含む本発明の組成物、本明細書に記載の本発明のポリペプチド、少なくとも１種類の本発明のポリペプチドを含む本発明の組成物、本発明のワクチンまたは本発明のキットもしくはパーツキットは、処置または予防における使用のため、好ましくは、例えばウイルス感染または関連する障害もしくは疾患の処置または予防における使用のために提供され、ここで、該処置または予防は、活性なさらなる医薬成分の投与を含む。より好ましくは、本発明の人工核酸を主体とする本発明のワクチンまたは組成物の場合、ポリペプチドが活性なさらなる医薬成分として共投与され得る。例えば、本明細書に記載の少なくとも１種類の、例えばウイルスのタンパク質もしくはペプチドまたはその断片もしくはバリアントが、免疫応答を誘導または向上させるために共投与され得る。同様に、本明細書に記載の本発明のポリペプチドを主体とする本発明のワクチンまたは組成物の場合、本明細書に記載の人工核酸が活性なさらなる医薬成分として共投与され得る。例えば、本明細書に記載の少なくとも１種類のポリペプチドをコードしている本明細書に記載の人工核酸が、免疫応答を誘導または向上させるために共投与され得る。
【０４２８】
本発明のワクチンまたは組成物のさらなる成分は、免疫グロブリン、好ましくはＩｇＧ、モノクローナルまたはポリクローナル抗体、ポリクローナル血清（１種類または複数種）など、最も好ましくは、例えばウイルスに指向される免疫グロブリンから選択され得る免疫療法剤であり得る。好ましくは、かかるさらなる免疫療法剤は、ペプチド／タンパク質として提供され得るか、または、核酸に、好ましくはＤＮＡまたはＲＮＡ、より好ましくはｍＲＮＡにコードされ得る。かかる免疫療法剤により、本発明の人工核酸または本発明のポリペプチドによって誘発される能動ワクチン接種に加えて受動ワクチン接種をもたらすことが可能になる。
【０４２９】
さらなる一態様では、本発明により、障害を処置または予防する方法であって、該障害が好ましくは、例えばウイルスによる感染または例えばウイルスによる感染に関連する障害であり、該処置または予防を必要とする被験体に、本明細書に開示の人工核酸、少なくとも１種類の本明細書に開示の人工核酸を含む本発明の組成物、本明細書に記載の本発明のポリペプチド、少なくとも１種類の本発明のポリペプチドを含む本発明の組成物、本発明のワクチンまたは本発明のキットもしくはパーツキットを投与することを含む方法を提供する。
【０４３０】
特に、かかる方法は好ましくは：
ａ）本明細書に開示の人工核酸、少なくとも１種類の本明細書に開示の人工核酸を含む本発明の組成物、本明細書に記載の本発明のポリペプチド、少なくとも１種類の本発明のポリペプチドを含む本発明の組成物、本発明のワクチンまたは本発明のキットもしくはパーツキットを準備する工程；
ｂ）本明細書に開示の人工核酸、少なくとも１種類の本明細書に開示の人工核酸を含む本発明の組成物、本明細書に記載の本発明のポリペプチド、少なくとも１種類の本発明のポリペプチドを含む本発明の組成物、本発明のワクチンまたは本発明のキットもしくはパーツキットを組織または生物体に適用または投与する工程；
ｃ）任意選択で、例えばウイルスに対する免疫グロブリン（ＩｇＧ）を投与する工程
を含むものであり得る。
【０４３１】
また、さらなる一態様によれば、本発明により、例えば少なくとも１種類のウイルスを含む少なくとも１種類のポリペプチドまたはその断片もしくはバリアントの発現のための方法であって、好ましくは以下の工程：
ａ）例えば少なくとも１種類のウイルスを含む少なくとも１種類のポリペプチドまたはその断片もしくはバリアント（好ましくは、本明細書に規定したもの）をコードしている少なくとも１つのコード領域を含む本発明の人工核酸、あるいは前記人工核酸を含む組成物を準備する工程；および
ｂ）本発明の人工核酸または前記人工核酸を含む本発明の組成物を発現系に、例えば無細胞発現系、細胞（例えば、発現宿主細胞もしくは体細胞）、組織または生物体に適用または投与する工程
を含む方法を提供する。
【０４３２】
該方法は、検査、研究、診断、ペプチドもしくはタンパク質の商業的生産および／または治療目的のために適用され得る。これとの関連において、典型的には、本明細書に規定した本発明の人工核酸または本明細書に規定した本発明の組成物もしくはワクチンの調製後、これは典型的には、無細胞発現系、細胞（例えば、発現宿主細胞もしくは体細胞）、組織または生物体に、例えば、裸の形態もしくは複合体の形態で、または本明細書に記載の（医薬）組成物もしくはワクチンとして、好ましくは、トランスフェクションによって、または本明細書に記載の任意の投与様式を使用することにより適用または投与される。該方法は、インビトロ、インビボまたはエキソビボで行われ得る。さらに、該方法は特定の疾患の処置の状況において、特に感染性疾患または関連障害の処置において行われ得る。
【０４３３】
これとの関連において、インビトロは、本明細書において、本明細書に規定した本発明の人工核酸または本明細書に規定した本発明の組成物もしくはワクチンでの生物体の外部での培養細胞のトランスフェクションまたは形質導入と定義し；インビボは、本明細書において、本発明のｍＲＮＡまたは本発明の組成物を生物体または個体の全身に適用することによる、本発明の人工核酸または本発明の組成物もしくはワクチンでの細胞のトランスフェクションまたは形質導入と定義し、エキソビボは、本明細書において、本発明の人工核酸または本発明の組成物もしくはワクチンでの生物体または個体の外部での細胞のトランスフェクションまたは形質導入、およびその後の、トランスフェクトされた該細胞の該生物体または個体への適用と定義する。
【０４３４】
同様に、別の態様によれば、本発明によりまた、好ましくは診断目的もしくは治療目的のため、例えば、コードされたウイルスの抗原性ペプチドまたはタンパク質の発現のための、例えば、本明細書に規定した本発明の人工核酸または本明細書に規定した本発明の組成物もしくはワクチンを、例えば無細胞発現系、細胞（例えば、発現宿主細胞もしくは体細胞）、組織または生物体に適用または投与することによる、本明細書に規定した本発明の人工核酸または本明細書に規定した本発明の組成物もしくはワクチンの使用を提供する。該使用は、（診断）検査、研究、診断、ペプチドもしくはタンパク質の商業的生産および／または治療目的のために適用され得る。これとの関連において、典型的には、本明細書に規定した本発明の人工核酸または本明細書に規定した本発明の組成物もしくはワクチンの調製後、これは典型的には、無細胞発現系、細胞（例えば、発現宿主細胞もしくは体細胞）、組織または生物体に、好ましくは、裸の形態もしくは複合体の形態で、または本明細書に記載の（医薬）組成物もしくはワクチンとして、好ましくは、トランスフェクションによって、または本明細書に記載の任意の投与様式を使用することにより適用または投与される。該使用は、インビトロ、インビボまたはエキソビボで行われ得る。さらに、該使用は特定の疾患の処置の状況において、特に、例えばウイルス感染または関連障害の処置において行われ得る。
【０４３５】
特に好ましい一実施形態では、本発明により、本明細書に規定した使用のための、好ましくは医薬としての使用のための、処置もしくは予防、好ましくは例えばウイルス感染もしくは関連障害の処置もしくは予防における使用のための、またはワクチンとしての使用のための人工核酸、本発明の組成物または本発明のワクチンを提供する。
【０４３６】
該組成物またはワクチンは慣用的な針注射または無針ジェット式注射によって、例えば、腫瘍組織に隣接および／または近接して投与され得る。好ましい一実施形態では、本発明の組成物または本発明の医薬組成物はジェット式注射によって投与される。ジェット式注射は、本発明の組成物および任意選択で適当なさらなる賦形剤を含む液をオリフィスに通し、かくして哺乳動物の皮膚に浸透し得る高圧の超微細な液流を生じさせる無針注射方法をいう。原理的には、この液流が皮膚に穴を形成し、この穴から液流が標的組織、例えば腫瘍組織内に押し込まれる。したがって、ジェット式注射は、例えば本発明の組成物の腫瘍内適用に使用され得る。
【０４３７】
他の実施形態では、本発明の組成物または本発明の医薬組成物は、経口、非経口、吸入スプレーによって、経表面、経直腸、経鼻、口腔内、経膣で、または埋込み型リザーバによって投与され得る。非経口という用語は、本明細書で用いる場合、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、リンパ節内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、肝内、病巣内、頭蓋内、経皮、皮内、肺内、腹腔内、心臓内、動脈内、房内、結膜下、テノン嚢下、球後、経表面および／または後強膜近傍投与、毛様筋内への投与および舌下への注射または輸注手法を包含している。
【０４３８】
特に好ましいさらなる投与経路は皮内注射および筋肉内注射である。
【０４３９】
にもかかわらず、本発明の医薬組成物に、該医薬組成物の投与およびその成分の取込みを助長するためのさらなる成分を含めてもよい。かかるさらなる成分は、適切な担体またはビヒクル、抗菌剤および／または抗ウイルス剤であり得る。
【０４４０】
本発明の医薬組成物のさらなる成分は、免疫グロブリン、好ましくはＩｇＧ、モノクローナルまたはポリクローナル抗体、ポリクローナル血清（１種類または複数種）などから選択され得る免疫療法剤であり得る。好ましくは、かかるさらなる免疫療法剤は、ペプチド／タンパク質として提供され得るか、または、核酸に、好ましくはＤＮＡまたはＲＮＡ、より好ましくはｍＲＮＡにコードされ得る。
【０４４１】
本発明の医薬組成物は典型的には、本発明の医薬組成物の成分、特に、本明細書に規定したＲＮＡ分子（１種類または複数種）を「安全で有効な量」で含むものである。本明細書で用いる場合、「安全で有効な量」は、例えば腫瘍またはがん疾患のプラスの改良を有意に誘導するのに充分な本明細書に規定したＲＮＡ分子（１種類または複数種）自体の量を意味する。しかしながら、同時に、「安全で有効な量」は、深刻な副作用が回避されるのに、および利点とリスクの理にかなった関係が可能であるのに充分に少ない量である。このような限界値の決定は典型的には、理にかなった医学的判断の範囲内である。
【０４４２】
本発明の医薬組成物は、ヒトに対して、また獣医学目的のために、好ましくはヒトの医療目的のために、一般的には医薬組成物として使用され得る。
【０４４３】
本発明によりさらに、本明細書に規定した核酸配列、複数の本明細書に規定した核酸配列を含む本発明の組成物、本明細書に規定した核酸配列を含む本発明の医薬組成物またはこれらを備えたキットのいくつかの用途および使用を提供する。
【０４４４】
具体的な一態様によれば、本発明は、本明細書に規定した核酸配列または複数の本明細書に規定した核酸配列を含む本発明の組成物の医薬としての、特に遺伝子療法における、好ましくは本明細書に規定した疾患の処置のための最初の医学的使用に関するものである。
【０４４５】
別の態様によれば、本発明は、本明細書に規定した核酸配列または複数の本明細書に規定した核酸配列を含む本発明の組成物の本明細書に規定した疾患の処置のための２回目の医学的使用に関するもの、好ましくは、本明細書に規定した核酸配列、複数の本明細書に規定した核酸配列を含む本発明の組成物、該核酸配列を含む医薬組成物またはこれらを備えたキットの本明細書に規定した疾患の予防、処置および／または寛解のための医薬の調製のための使用に関するものである。好ましくは、医薬組成物は、それを必要とする患者にこの目的ために使用されるか、または投与される。
【０４４６】
好ましくは、本明細書に記載の疾患は好ましくは、感染性疾患、新生物（例えば、がんまたは腫瘍疾患）、血液および血液形成器官の疾患、内分泌疾患、栄養上の疾患および代謝病、神経系の疾患、循環系の疾患、呼吸器系の疾患、消化器系の疾患、皮膚および皮下組織の疾患、筋骨格系および結合組織の疾患、ならびに泌尿生殖器系の疾患から選択される。
【０４４７】
これとの関連において、特に好ましいのは：１ｐ３６欠失症候群；１８ｐ欠失症候群；２１−水酸化酵素欠損症；４５，Ｘ（ターナー症候群）；４７，ＸＸ，＋２１（ダウン症候群）；４７，ＸＸＸ（トリプルＸ症候群）；４７，ＸＸＹ（クラインフェルター症候群）；４７，ＸＹ，＋２１（ダウン症候群）；４７，ＸＹＹ症候群；５−ＡＬＡ脱水素酵素欠損性ポルフィリン症（ＡＬＡ脱水素酵素欠損症）；５−アミノレブリン酸脱水素酵素欠損ポルフィリン症（ＡＬＡ脱水素酵素欠損症）；５ｐ欠失症候群（ネコなき）５ｐ−症候群（ネコなき）；Ａ−Ｔ（毛細血管拡張性運動失調症）；ＡＡＴ（α−１アンチトリプシン欠乏症）；先天性両側精管欠損症（Ａｂｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ｖａｓ  ｄｅｆｅｒｅｎｓ（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｂｉｌａｔｅｒａｌ  ａｂｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ｖａｓ  ｄｅｆｅｒｅｎｓ））；無精管（Ａｂｓｅｎｔ  ｖａｓａ）（先天性両側精管欠損症）；無セルロプラスミン血症；ＡＣＧ２（軟骨無形成症ＩＩ型）；ＡＣＨ（軟骨形成不全症）；軟骨無形成ＩＩ型；軟骨形成不全症；酸性β−グルコシダーゼ欠損症（ゴーシェ病１型）；尖頭合指症（アペール）（アペール症候群）；尖頭合指症，Ｖ型（ファイファー症候群）；尖頭症（アペール症候群）；急性脳性ゴーシェ病（ゴーシェ病２型）；急性間欠性ポルフィリン症；ＡＣＹ２欠損症（カナバン病）；ＡＤ（アルツハイマー病）；アデレード型頭蓋骨縫合早期癒合症（Ｍｕｅｎｋｅ症候群）；腺腫様多発結腸ポリープ（家族性大腸腺腫症）；結腸の大腸腺腫症（家族性大腸腺腫症）；ＡＤＰ（ＡＬＡ脱水素酵素欠損症）；アデニロコハク酸リアーゼ欠損症；副腎障害（２１−水酸化酵素欠損症）；副腎性器症候群（２１−水酸化酵素欠損症）；副腎脳白質ジストロフィー；ＡＩＰ（急性間欠性ポルフィリン症）；ＡＩＳ（アンドロゲン不応症）；ＡＫＵ（アルカプトン尿症）；ＡＬＡ脱水素酵素ポルフィリン症（ＡＬＡ脱水素酵素欠損症）；ＡＬＡ−Ｄポルフィリン症（ＡＬＡ脱水素酵素欠損症）；ＡＬＡ脱水素酵素欠損症；アルカプトン尿症（Ａｌｃａｐｔｏｎｕｒｉａ）（アルカプトン尿症（ａｌｋａｐｔｏｎｕｒｉａ））；アレキサンダー病；アルカプトン尿症；アルカプトン尿症性組織黒変症（アルカプトン尿症）；α−１アンチトリプシン欠乏症；α−１プロテイナーゼ阻害薬（α−１アンチトリプシン欠乏症）；α−１関連気腫（α−１アンチトリプシン欠乏症）；α−ガラクトシダーゼＡ欠損症（ファブリー病）；ＡＬＳ（筋萎縮性側索硬化症）；アルストレム症候群；ＡＬＸ（アレキサンダー病）；アルツハイマー病；エナメル質形成不全症；アミノレブリン酸脱水素酵素欠損症（ＡＬＡ脱水素酵素欠損症）；アミノアシラーゼ２欠損症（カナバン病）；筋萎縮性側索硬化症；アンダーソン−ファブリー病（ファブリー病）；アンドロゲン不応症；貧血；貧血，遺伝性鉄芽球性（Ｘ連鎖性鉄芽球性貧血）；貧血，伴性低色素性鉄芽球性（Ｘ連鎖性鉄芽球性貧血）；貧血，脾性，家族性（ゴーシェ病）；アンジェルマン症候群；びまん性体部被角血管腫（ファブリー病）；角化血管腫，びまん性（ファブリー病）；網膜血管腫（フォン・ヒッペル・リンドウ病）；ＡＮＨ１（Ｘ連鎖性鉄芽球性貧血）；ＡＰＣレジスタンス、ライデン型（第Ｖ因��ライデン血栓性素因）；アペール症候群；ＡＲ欠損症（アンドロゲン不応症）；ＡＲ−ＣＭＴ２  ｅｅ（シャルコー・マリー・トゥース病，２型）；クモ指症（マルファン症候群）；ＡＲＮＳＨＬ（非症候性難聴，常染色体劣性）；関節眼症，遺伝性進行性（スティックラー症候群ＣＯＬ2Ａ１）；先天性多発関節弛緩症（エーラス・ダンロス症候群，関節弛緩型）；ＡＳ（アンジェルマン症候群）；Ａｓｐ欠損症（カナバン病）；Ａｓｐａ欠損症（カナバン病）；アスパルトアシラーゼ欠損症（カナバン病）；毛細血管拡張性運動失調症；自閉症−認知症−運動失調−手の合目的使用の喪失（Ａｕｔｉｓｍ−Ｄｅｍｅｎｔｉａ−Ａｔａｘｉａ−Ｌｏｓｓ  ｏｆ  Ｐｕｒｐｏｓｅｆｕｌ  Ｈａｎｄ  Ｕｓｅ）症候群（レット症候群）；常染色体優性若年性ＡＬＳ（筋萎縮性側索硬化症，４型）；常染色体優性オピッツＧ／ＢＢＢ症候群（２２ｑ１１．２欠失症候群）；常染色体劣性形態の若年性ＡＬＳ３型（筋萎縮性側索硬化症（２型）；常染色体劣性非症候性聴力損失（非症候性難聴，常染色体劣性）；常染色体劣性感音聴覚障害および甲状腺腫（ペンドレッド症候群）；ＡｘＤ（アレキサンダー病）；Ａｙｅｒｚａ症候群（原発性肺高血圧症）；ヘキソサミニダーゼＧＭ２ガングリオシドーシスのＢ異型（サンドホッフ病）；ＢＡＮＦ（神経線維腫症２）；Ｂｅａｒｅ−Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ｃｕｔｉｓ  ｇｙｒａｔａ症候群；良性発作性頭位眩暈症（地中海熱，家族性）；ベンジャミン症候群；βサラセミア；ＢＨ４欠損症（テトラヒドロビオプテリン欠損症）；両側性の聴神経梢腫神経線維腫症（神経線維腫症２）；ビオチニダーゼ欠損症；膀胱がん；出血性障害（第Ｖ因子ライデン血栓性素因）；ブロッホ・サルツバーガー症候群（色素失調症）；ブルーム症候群；骨疾患；骨髄疾患（Ｘ連鎖性鉄芽球性貧血）；ボンネビー・ウルリッヒ症候群（ターナー症候群）；ボンネビル病（結節硬化症）；ボンネビル母斑症（結節硬化症）；脳の疾患（プリオン病）；乳がん；バート・ホッグ・デュベ症候群；骨粗鬆症（Ｂｒｉｔｔｌｅ  ｂｏｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）（骨形成不全症）；幅広母指（Ｂｒｏａｄ  Ｔｈｕｍｂ−Ｈａｌｌｕｘ）症候群（ルビンシュタイン・テイビ症候群）；青銅色糖尿病（ヘモクロマトーシス）；青銅色肝硬変（ヘモクロマトーシス）；球脊髄型筋萎縮症、Ｘ連鎖性（ケネディ病）；ビュルガー・グリュッツ症候群（リポタンパク質リパーゼ欠損症，家族性）；ＣＡＤＡＳＩＬ；ＣＧＤ  慢性肉芽腫症；屈曲肢異形成症；カナバン病；がん；がん家系症候群（遺伝性非ポリポーシス結腸直腸がん）；乳房のがん（乳がん）；膀胱のがん（膀胱がん）；カルボキシラーゼ欠損症、多発性，遅発型（ビオチニダーゼ欠損症）；心筋症（ヌーナン症候群）；ネコ鳴き（Ｃａｔ  ｃｒｙ）症候群（ネコなき（Ｃｒｉ  ｄｕ  ｃｈａｔ））；ＣＡＶＤ（先天性両側精管欠損症）；Ｃａｙｌｏｒ  ｃａｒｄｉｏｆａｃｉａｌ症候群（２２ｑ１１．２欠失症候群）；ＣＢＡＶＤ（先天性両側精管欠損症）；セリアック病；ＣＥＰ（先天性骨髄性ポルフィリン症）；セラミダーゼトリエキソシダーゼ欠損症（ファブリー病）；小脳網膜（Ｃｅｒｅｂｅｌｌｏ  ｒｅｔｉｎａｌ）血管腫症，家族性（フォン・ヒッペル・リンドウ病）；皮質下梗塞および白質脳症を伴う脳動脈症（ＣＡＤＡＳＩＬ）；皮質下梗塞および白質脳症を伴う脳の常染色体優性動脈症（ＣＡＤＡＳＩＬ）；脳の硬化症（結節硬化症）；脳萎縮症性高アンモニア血症（レット症候群）；セレブロシドリポイド症候群（ゴーシェ病）；ＣＦ（嚢胞性線維症）；ＣＨ（先天性甲状腺機能低下症）；シャルコー病（筋萎縮性側索硬化症）；シャルコー・マリー・トゥース病；軟骨発育不全症（軟骨形成不全症）；軟骨形成異常症候群（軟骨形成不全症）；感音難聴を伴う軟骨形成異常症（耳脊椎巨大骨端異形成症）；軟骨形成不全（軟骨無形成症，ＩＩ型）；コレオアテトーシス自傷−高尿酸血（Ｃｈｏｒｅｏａｔｈｅｔｏｓｉｓ  ｓｅｌｆ−ｍｕｔｉｌａｔｉｏｎ  ｈｙｐｅｒｕｒｉｃｅｍｉａ）症候群（レッシュ・ナイハン症候群）；古典的ガラクトース血症（ガラクトース血症）；古典的エーラス・ダンロス症候群（エーラス・ダンロス症候群  古典的型）；古典的フェニルケトン尿症（フェニルケトン尿症）；軟口蓋裂（Ｃｌｅｆｔ  ｌｉｐ  ａｎｄ  ｐａｌａｔｅ）（スティックラー症候群）；致死性骨異形成症を伴うクローバ形頭蓋（致死性骨異形成症２型）；ＣＬＳ（コフィン・ローリー症候群）；ＣＭＴ（シャルコー・マリー・トゥース病）；コケイン症候群；コフィン・ローリー症候群；コラーゲン異常症，ＩＩ型およびＸＩ型；結腸がん，家族性非ポリポーシス（遺伝性非ポリポーシス結腸直腸がん）；結腸がん，家族性（家族性大腸腺腫症）；結腸直腸がん；ＨＰＲＴ完全欠損症（レッシュ・ナイハン症候群）；ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ完全欠損症（レッシュ・ナイハン症候群）；圧迫性神経障害（圧迫性麻痺になりやすい遺伝性神経障害）；先天性副腎皮質過形成（２１−水酸化酵素欠損症）；先天性両側精管欠損症（輸精管の先天的欠損）；先天性骨髄性ポルフィリン症；先天性心臓疾患；先天性髄鞘形成不全（シャルコー・マリー・トゥース病１型／シャルコー・マリー・トゥース病４型）；先天性甲状腺機能低下症；先天性メトヘモグロビン血症（ｍｅｔｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｅｍｉａ）（メトヘモグロビン血症，（Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｍｅｔｈａｅｍｏｇｌｏｂｉｎａｅｍｉａ））；先天性骨硬化症（軟骨形成不全症）；先天性鉄芽球性貧血（Ｘ連鎖性鉄芽球性貧血）；結合組織病；円錐動脈幹異常顔貌症候群（２２ｑ１１．２欠失症候群）；クーリー貧血（βサラセミア）；銅蓄積症（ウィルソン病）；銅輸送異常症（メンケス病）；コプロポルフィリン症，遺伝性（遺伝性コプロポルフィリン症）；コプロポルフィリノーゲンオキシダーゼ欠損症（遺伝性コプロポルフィリン症）；カウデン症候群；ＣＰＯ欠損症（遺伝性コプロポルフィリン症）；ＣＰＲＯ欠損症（遺伝性コプロポルフィリン症）；ＣＰＸ欠損症（遺伝性コプロポルフィリン症）；頭蓋顔面関節異常（クルゾン症候群）；頭蓋顔面異骨症（クルゾン症候群）；クレチン症（先天性甲状腺機能低下症）；クロイツフェルト・ヤコブ病（プリオン病）；ネコなき（クローン病，線維性狭窄性）；クルゾン症候群；黒色表皮症を伴うクルゾン症候群（クルゾン外骨格（Ｃｒｏｕｚｏｎｏｄｅｒｍｏｓｋｅｌｅｔａｌ）症候群）；クルゾン外骨格症候群；ＣＳ（コケイ��症候群）（カウデン症候群）；クルシュマン・バッテン・スタイナート症候群（筋強直性ジストロフィー）；Ｂｅａｒｅ−Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎのｃｕｔｉｓ  ｇｙｒａｔａ症候群（Ｂｅａｒｅ−Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ｃｕｔｉｓ  ｇｙｒａｔａ症候群）；染色体変異障害（Ｄｉｓｏｒｄｅｒ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ）；Ｄ−グリセリン酸デヒドロゲナーゼ欠損症（高シュウ酸尿症，原発性）；まだらの骨幹端症候群（脊椎骨端骨幹端異形成症，Ｓｔｒｕｄｗｉｃｋ型）；ＤＡＴ−アルツハイマー型認知症（アルツハイマー病）；遺伝性高カルシウム尿症（デント病）；ＤＢＭＤ（筋ジストロフィー，デュシェンヌ型およびベッカー型）；甲状腺腫を伴う難聴（ペンドレッド症候群）；難聴−網膜炎色素変性症候群（アッシャー症候群）；欠損系疾患、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ（フェニルケトン尿症）；変性性神経疾患；ド・グルーシー症候群１（ド・グルーシー症候群）；デジュリーヌ・ソッタス症候群（シャルコー・マリー・トゥース病）；δ−アミノレブリン酸脱水素酵素欠損ポルフィリン症（ＡＬＡ脱水素酵素欠損症）；認知症（ＣＡＤＡＳＩＬ）；ミエリン形成不全性（ｄｅｍｙｅｌｉｎｏｇｅｎｉｃ）白質ジストロフィー（アレキサンダー病）；エーラス・ダンロス症候群皮膚脆弱型（エーラス・ダンロス症候群皮膚脆弱型）；皮膚脆弱型（エーラス・ダンロス症候群皮膚脆弱型型）；発育障害；ｄＨＭＮ（筋萎縮性側索硬化（４型）；ＤＨＭＮ−Ｖ（遠位型脊髄筋萎縮症，Ｖ型）；ＤＨＴＲ欠損症（アンドロゲン不応症）；びまん性グロボイド体（Ｇｌｏｂｏｉｄ  Ｂｏｄｙ）硬化症（クラッベ病）；ディ・ジョージ症候群；ジヒドロテストステロン受容体欠損症（アンドロゲン不応症）；遠位型脊髄筋萎縮症，Ｖ型；ＤＭ１（筋強直性ジストロフィー１型）；ＤＭ２（筋強直性ジストロフィー２型）；ダウン症候群；ＤＳＭＡＶ（遠位型脊髄筋萎縮症，Ｖ型）；ＤＳＮ（シャルコー・マリー・トゥース病４型）；ＤＳＳ（シャルコー・マリー・トゥース病，４型）；デュシェンヌ型／ベッカー型筋ジストロフィー（筋ジストロフィー，デュシェンヌ型およびベッカー型）；小人，軟骨無形成症性（軟骨形成不全症）；小人，致死性骨（致死性骨異形成症）；小人症；小人症−網膜委縮症−難聴症候群（コケイン症候群）；ミエリン形成不全性白質ジストロフィー（アレキサンダー病）；筋
緊張性異栄養症（筋強直性ジストロフィー）；網膜色素変性症異栄養症−異骨症症候群（アッシャー症候群）；若年性家族性アルツハイマー病（ＥＯＦＡＤ）（アルツハイマー病）；ＥＤＳ（エーラス・ダンロス症候群）；エーラス・ダンロス症候群；エクマン−ロブスタイン病（骨形成不全症）；絞扼性末梢神経障害（圧迫性麻痺になりやすい遺伝性神経障害）；エピロイア（結節硬化症）；ＥＰＰ（骨髄性プロトポルフィリン症）；赤芽球性貧血（βサラセミア）；エリスロヘパティック（Ｅｒｙｔｈｒｏｈｅｐａｔｉｃ）プロトポルフィリン症（骨髄性プロトポルフィリン症）；赤血球５−アミノレブリン酸合成酵素欠損症（Ｘ連鎖性鉄芽球性貧血）；骨髄性ポルフィリン症（先天性骨髄性ポルフィリン症）；骨髄性プロトポルフィリン症；骨髄性ウロポルフィリン症（先天性骨髄性ポルフィリン症）；目のがん（網膜芽腫ＦＡ−フリードライヒ失調症）；ファブリー病；顔面の損傷および障害；第Ｖ因子ライデン血栓性素因；ＦＡＬＳ（筋萎縮性側索硬化症）；家族性聴神経腫（神経線維腫症ＩＩ型）；家族性大腸腺腫症；家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）（アルツハイマー病）；家族性筋萎縮性側索硬化症（筋萎縮性側索硬化症）；家族性自律神経障害；家族性脂肪誘導性高トリグリセリド血症（リポタンパク質リパーゼ欠損症，家族性）；家族性ヘモクロマトーシス（ヘモクロマトーシス）；家族性ＬＰＬ欠損症（リポタンパク質リパーゼ欠損症，家族性）；家族性非ポリポーシス結腸がん（遺伝性非ポリポーシス結腸直腸がん）；家族性発作性多発性漿膜炎（地中海熱，家族性）；家族性ＰＣＴ（晩発性皮膚ポルフィリン症）；家族性圧脆弱性神経障害（圧迫性麻痺になりやすい遺伝性神経障害）；家族性原発性肺高血圧症（ＦＰＰＨ）（原発性肺高血圧症）；家族性ターナー症候群（ヌーナン症候群）；家族性血管性白質脳症（ＣＡＤＡＳＩＬ）；ＦＡＰ（家族性大腸腺腫症）；ＦＤ（家族性自律神経障害）；女性の仮性ターナー症候群（ヌーナン症候群）；鉄付加酵素欠損症（骨髄性プロトポルフィリン症）；フェロポルチン病（ヘモクロマトーシス４型）；発熱（地中海熱，家族性）；ＦＧ症候群；ＦＧＦＲ3関連頭蓋骨癒合症（Ｍｕｅｎｋｅ症候群）；星状細胞のフィブリノイド変性（アレキサンダー病）；膵臓線維嚢胞性の疾患（嚢胞性線維症）；ＦＭＦ（地中海熱，家族性）；Ｆｏｌｌｉｎｇ病（フェニルケトン尿症）；ｆｒａ（Ｘ）症候群（脆弱Ｘ症候群）；脆弱Ｘ症候群；骨脆弱症（骨形成不全症）；ＦＲＡＸＡ症候群（脆弱Ｘ症候群）；ＦＲＤＡ（フリードライヒ失調症）；フリードライヒ失調症（フリードライヒ失調症）；フリードライヒ失調症；ＦＸＳ（脆弱Ｘ症候群）；Ｇ６ＰＤ欠損症；ガラクトキナーゼ欠損疾患（ガラクトース血症）；ガラクトース−１−リン酸ウリジル−トランスフェラーゼ欠損疾患（ガラクトース血症）；ガラクトース血症；ガラクトシルセラミダーゼ欠損疾患（クラッベ病）；ガラクトシルセラミドリピドーシス（クラッベ病）；ガラクトシルセレブロシダーゼ欠損症（クラッベ病）；ガラクトシルスフィンゴシンリピドーシス（クラッベ病）；ＧＡＬＣ欠損症（クラッベ病）；ＧＡＬＴ欠損症（ガラクトース血症）；ゴーシェ病；ゴーシェ様疾患（仮性ゴーシェ病）；ＧＢＡ欠損症（ゴーシェ病１型）；ＧＤ（ゴーシェ病）；遺伝性脳  障害；遺伝性気腫（α−１アンチトリプシン欠乏症）；遺伝性ヘモクロマトーシス（ヘモクロマトーシス）；巨細胞性肝炎，新生児（新生児ヘモクロマトーシス）；ＧＬＡ欠損症（ファブリー病）；膠芽細胞腫，網膜（網膜芽腫）；神経膠腫，網膜（網膜芽腫）；グロボイド細胞白質ジストロフィー（ＧＣＬ、ＧＬＤ）（クラッベ病）；グロボイド細胞白質脳症（クラッベ病）；グルコセレブロシダーゼ欠損症（ゴーシェ病）；グルコセレブロシドーシス（ゴーシェ病）；グルコシルセレブロシドリピドーシス（ゴーシェ病）；グルコシルセラミダーゼ欠損症（ゴーシェ病）；グルコシルセラミドβ−グルコシダーゼ欠損症（ゴーシェ病）；グルコシルセラミドリピドーシス（ゴーシェ病）；グリセリン酸性尿症（高シュウ酸尿症，原発性）；グリシン脳症（非ケトーシス型高グリシン血症）；グリコール酸尿症（高シュウ酸尿症，原発性）；ＧＭ２ガングリオシドーシス，１型（テイ・サックス病）；甲状腺腫−難聴症候群（ペンドレッド症候群）；グレーフェ−アッシャー症候群（アッシャー症候群）；Ｇｒｏｎｂｌａｄ−Ｓｔｒａｎｄｂｅｒｇ症候群（弾性線維性仮性黄色腫）；ガンサー型ポルフィリン症（先天性骨髄性ポルフィリン症）；ガンサー病（先天性骨髄性ポルフィリン症）；ヘモクロマトーシス（ヘモクロマトーシス）；ハルグレン症候群（アッシャー症候群）；道化師様魚鱗癬；Ｈｂ  Ｓ  疾患（鎌状赤血球貧血）；ＨＣＨ（軟骨低形成症）；ＨＣＰ（遺伝性コプロポルフィリン症）；頭部および脳の奇形；聴覚障害および難聴；小児の聴力問題；ＨＥＦ２Ａ（ヘモクロマトーシス２型）；ＨＥＦ２Ｂ（ヘモクロマトーシス２型）；ヘマトポルフィリン症（ポルフィリン症）；ヘム合成酵素欠損症（骨髄性プロトポルフィリン症）；ヘモクロマトーシス（ヘモクロマトーシス）；ヘモクロマトーシス；ヘモグロビンＭ疾患（メトヘモグロビン血症β−グロビン型）；ヘモグロビンＳ疾患（鎌状赤血球貧血）；血友病；ＨＥＰ（肝造血性ポルフィリン症）；肝ＡＧＴ欠損症（高シュウ酸尿症，原発性）；肝造血性ポルフィリン症；肝レンズ核変性症候群（ウィルソン病）；遺伝性関節眼症（スティックラー症候群）；遺伝性コプロポルフィリン症；遺伝性ジストピア性（ｄｙｓｔｏｐｉｃ）リピドーシス（ファブリー病）；遺伝性ヘモクロマトーシス（ＨＨＣ）（ヘモクロマトーシス）；遺伝性封入体ミオパチー（骨格筋再生）；遺伝性鉄負荷性（−ｌｏａｄｉｎｇ）貧血（Ｘ連鎖性鉄芽球性貧血）；遺伝性運動感覚神経障害（シャルコー・マリー・トゥース病）；遺伝性運動神経障害（ｎｅｕｒｏｎｏｐａｔｈｙ）（脊髄筋萎縮症）；遺伝性運動神経障害、Ｖ型（遠位型脊髄筋萎縮症，Ｖ型）；遺伝性多発性外骨腫（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｅｘｏｓｔｏｓｅｓ）；遺伝性非ポリポーシス結腸直腸がん；遺伝性間欠熱症候群（地中海熱，家族性）；遺伝性結腸ポリポーシス（家族性大腸腺腫症）；遺伝性肺気腫（α−１アンチトリプシン欠乏症）；活性化プロテインＣに対する遺伝性耐性（第Ｖ因子ライデン血栓性素因）；遺伝性感覚性自律神経性神経障害ＩＩＩ型（家族性自律神経障害）；遺伝性痙性対麻痺（乳児発症性上行性（ｉｎｆａｎｔｉ��ｅ−ｏｎｓｅｔ  ａｓｃｅｎｄｉｎｇ）遺伝性痙攣性麻痺）；遺伝性脊髄性運動失調症（フリードライヒ失調症）；遺伝性脊髄性硬化症（フリードライヒ失調症）；Ｈｅｒｒｉｃｋ貧血（鎌状赤血球貧血）；ヘテロ接合性ＯＳＭＥＤ（ワイゼンバッハー・ツヴェイミューラー症候群）；ヘテロ接合性耳脊椎巨大骨端異形成症（ワイゼンバッハー・ツヴェイミューラー症候群）；ＨｅｘＡ欠損症（テイ・サックス病）；ヘキソサミニダーゼＡ欠損症（テイ・サックス病）；ヘキソサミニダーゼα−サブユニット欠損症（バリアント  Ｂ）（テイ・サックス病）；ＨＦＥ関連ヘモクロマトーシス（ヘモクロマトーシス）；ＨＧＰＳ（早老症）；ヒッペル・リンドウ病（フォン・ヒッペル・リンドウ病）；ＨＬＡＨ（ヘモクロマトーシス）；ＨＭＮ  Ｖ（遠位型脊髄筋萎縮症，Ｖ型）；ＨＭＳＮ（シャルコー・マリー・トゥース病）；ＨＮＰＣＣ（遺伝性非ポリポーシス結腸直腸がん）；ＨＮＰＰ（圧迫性麻痺になりやすい遺伝性神経障害）；ホモシスチン尿症；ホモシスチン尿症オキシダーゼ欠損症（アルカプトン尿症）；ホモシスチン尿症尿症（アルカプトン尿症）；ホモ接合性晩発性皮膚ポルフィリン症（肝造血性ポルフィリン症）；ＨＰ１（高シュウ酸尿症，原発性）；ＨＰ２（高シュウ酸尿症，原発性）；ＨＰＡ（高フェニルアラニン血症）；ＨＰＲＴ−ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ欠損症（レッシュ・ナイハン症候群）；ＨＳＡＮＩＩＩ型（家族性自律神経障害）；ＨＳＡＮ３（家族性自律神経障害）；ＨＳＮ−ＩＩＩ（家族性自律神経障害）；ヒト皮膚脆弱型（エーラス・ダンロス症候群皮膚脆弱型型）；ハンチントン病；ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群（早老症）；アンドロゲン過多症，非古典型、２１−水酸化酵素欠損症（２１−水酸化酵素欠損症）によるもの；高乳糜血症，家族性（リポタンパク質リパーゼ欠損症，家族性）；ケトアシドーシスおよび白血球減少を伴う高グリシン血症（プロピオン酸血症）；高脂血症Ｉ型（リポタンパク質リパーゼ欠損症，家族性）；高シュウ酸尿症，原発性；高フェニルアラニン血症（高フェニルアラニン血症）；高フェニルアラニン血症；軟骨低異形成症（軟骨低形成症）；軟骨低発生症；軟骨低形成症；低色素性貧血（Ｘ連鎖性鉄芽球性貧血）；低銅血症，先天性；メンケス症候群）；ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ｔｒａｎｓｆｅｒｓｅ）（ＨＰＲＴ）欠損症（レッシュ・ナイハン症候群）；ＩＡＨＳＰ（乳児発症性上行性遺伝性痙攣性麻痺）；特発性ヘモクロマトーシス（ヘモクロマトーシス，３型）；特発性新生児ヘモクロマトーシス（ヘモクロマトーシス，新生児）；特発性肺高血圧症（原発性肺高血圧症）；免疫系障害（Ｘ連鎖性重症複合型免疫不全）；色素失調症；乳児期脳性ゴーシェ病（ゴーシェ病２型）；乳児期ゴーシェ病（ゴーシェ病２型）；乳児発症性上行性遺伝性痙攣性麻痺；不妊症；遺伝性気腫（α−１アンチトリプシン欠乏症）；遺伝性ヒト感染性海綿状脳症（プリオン病）；圧迫性麻痺に対する遺伝性傾向（圧迫性麻痺になりやすい遺伝性神経障害）；Ｉｎｓｌｅｙ−Ａｓｔｌｅｙ症候群（耳脊椎巨大骨端異形成症）；間欠性急性ポルフィリン症症候群（急性間欠性ポルフ���リン症）；腸ポリープ症−皮膚色素沈着症候群（ポイツ・ジェガース症候群）；ＩＰ（色素失調症）；鉄貯蔵障害（ヘモクロマトーシス）；二動原体同腕１５（ｉｄｉｃ１５）；孤立性（Ｉｓｏｌａｔｅｄ）難聴（非症候性難聴）；ジャクソン・ワイス症候群；ＪＨ（ヘモクロマトーシス２型）；ジュベール症候群；ＪＰＬＳ（若年性原発性側索硬化症）；若年性筋萎縮性側索硬化症（筋萎縮性側索硬化症（２型）；若年性痛風、舞踏病アテトーゼ、精神遅滞症候群（レッシュ・ナイハン症候群）；若年性高尿酸血症症候群（レッシュ・ナイハン症候群）；ＪＷＳ（ジャクソン・ワイス症候群）；ＫＤ（Ｘ連鎖性球脊髄性筋萎縮）；ケネディ疾患（Ｘ連鎖性球脊髄性筋萎縮）；ケネディ球脊髄性筋委縮症（Ｘ連鎖性球脊髄性筋萎縮）；ケラシン（Ｋｅｒａｓｉｎ）組織球増殖症（ゴーシェ病）；ケラシンリポイドーシス（ゴーシェ病）；ケラシン蓄積症（ゴーシェ病）；ケトーシス型グリシン血症（プロピオン酸血症）；ケトーシス型高グリシン血症（プロピオン酸血症）；腎臓疾患（高シュウ酸尿症，原発性）；クラインフェルター症候群；クラインフェルター症候群；クニースト異形成症；クラッベ病；ラクナ型認知症（ＣＡＤＡＳＩＬ）；ランガー・サルディーノ軟骨無形成症（軟骨無形成症，ＩＩ型）；ランガー・サルディーノ異形成症（軟骨無形成症，ＩＩ型）；遅発型アルツハイマー病（アルツハイマー病２型）；遅発型家族性アルツハイマー病（ＡＤ２）（アルツハイマー病２型）；遅発型クラッベ病（ＬＯＫＤ）（クラッベ病）；学習障害（学習能力障害）；黒子症，口囲（ポイツ・ジェガース症候群）；レッシュ・ナイハン症候群；白質ジストロフィ；ローゼンタール線維を伴う白質ジストロフィー（アレキサンダー病）；白質ジストロフィ，海綿状（カナバン病）；ＬＦＳ（リ・フラウメニ症候群）；リ・フラウメニ症候群；リパーゼＤ欠損症（リポタンパク質リパーゼ欠損症，家族性）；ＬＩＰＤ欠損症（リポタンパク質リパーゼ欠損症，家族性）；リピドーシス，セレブロシド（ゴーシェ病）；リピドーシス，ガングリオシド，乳児期（テイ・サックス病）；リポイド組織球増殖症（ケラシン型）（ゴーシェ病）；リポタンパク質リパーゼ欠損症，家族性；肝臓疾患（ガラクトース血症）；ルー・ゲーリッグ病（筋萎縮性側索硬化症）；ルイ・バー症候群（毛細血管拡張性運動失調症）；リンチ症候群（遺伝性非ポリポーシス結腸
直腸がん）；リシル−ヒドロキシラーゼ欠損症（エーラス・ダンロス症候群，脊椎後弯側弯症型）；マシャド・ジョセフ病（脊髄小脳失調３型）；男性の乳がん（乳がん）；男性の性機能障害；男性のターナー症候群（ヌーナン症候群）；乳房の悪性新生物（乳がん）；乳房の悪性腫瘍（乳がん）；膀胱の悪性腫瘍（膀胱がん）；乳（ｍａｍｍａｒｙ）癌がん（乳（ｂｒｅａｓｔ）がん）；マルファン症候群１５；マーカーＸ症候群（脆弱Ｘ症候群）；マーティン・ベル症候群（脆弱Ｘ症候群）；マッキューン・オルブライト症候群；ＭｃＬｅｏｄ症候群；ＭＥＤＮＩＫ；地中海貧血（βサラセミア）；地中海熱，家族性；巨大骨端小人症（耳脊椎巨大骨端異形成症）；Ｍｅｎｋｅａ症候群（メンケス症候群）；メンケス症候群；骨軟骨異常を伴う精神遅滞（コフィン・ローリー症候群）；代謝障害；遡及性小人症，ＩＩ型（クニースト異形成症）；変容性骨異形成症ＩＩ型クニースト異形成症）；メトヘモグロビン血症，β−グロビン型；メチルメチルマロン酸血症；ＭＦＳ（マルファン症候群）；ＭＨＡＭ（カウデン症候群）；ＭＫ（メンケス症候群）；ミクロ症候群；小頭症；ＭＭＡ（メチルメチルマロン酸血症）；ＭＮＫ（メンケス症候群）；モノソミー１ｐ３６症候群（１ｐ３６欠失症候群）；モノソミーＸ（ターナー症候群）；運動ニューロン疾患、筋萎縮性側索硬化症（筋萎縮性側索硬化症）；運動障害；モワット・ウィルソン症候群；ムコ多糖症（ＭＰＳ  Ｉ）；ムコビシドーシス（嚢胞性線維症）；Ｍｕｅｎｋｅ症候群；多発脳梗塞性認知症（ＣＡＤＡＳＩＬ）；複合カルボキシラーゼ欠損症、遅発型（ビオチニダーゼ欠損症）；多発性過誤腫症候群（カウデン症候群）；多発性神経線維腫症（神経線維腫症）；筋ジストロフィー；筋ジストロフィー，デュシェンヌ型およびベッカー型；筋緊張症委縮（Ｍｙｏｔｏｎｉａ  ａｔｒｏｐｈｉｃａ）（筋強直性ジストロフィー）；筋緊張症ジストロフィー（Ｍｙｏｔｏｎｉａ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｃａ）（筋強直性ジストロフィー）；筋強直性ジストロフィー；粘液水腫，先天性（先天性甲状腺機能低下症）；Ｎａｎｃｅ−Ｉｎｓｌｅｙ症候群（耳脊椎巨大骨端異形成症）；Ｎａｎｃｅ−Ｓｗｅｅｎｅｙ軟骨異形成症（耳脊椎巨大骨端異形成症）；ＮＢＩＡ１（パントテン酸キナーゼ関連神経変性）；ニール・ディングウォール症候群（コケイン症候群）；神経芽細胞腫，網膜（網膜芽腫）；脳の鉄蓄積を伴う神経変性１型（パントテン酸キナーゼ関連神経変性）；神経線維腫症Ｉ型；神経線維腫症ＩＩ型；神経系の疾患；神経筋障害；神経障害，遠位型遺伝性運動、Ｖ型（遠位型脊髄筋萎縮症Ｖ型）；神経障害，遠位型遺伝性運動，錘体路に特色を有する（筋萎縮性側索硬化症（４型）；ＮＦ（神経線維腫症）；ニーマン・ピック（ニーマン・ピック  病）；ノアク症候群（ファイファー症候群）；非ケトーシス型高グリシン血症（グリシン脳症）；非神経障害性（ｎｅｕｒｏｎｏｐａｔｈｉｃ）ゴーシェ病（ゴーシェ病１型）；非フェニルケトン尿症性高フェニルアラニン血症（テトラヒドロビオプテリン欠損症）；非症候性難聴；ヌーナン症候群；ノルボットニアンゴーシェ病（ゴーシェ病３型）；組織褐変症（アルカプトン尿症）；アルカプトン尿性関節炎（アルカプトン尿症）；ＯＩ（骨形成不全症）；ＯＳＭＥＤ（耳脊椎巨大骨端異形成症）；骨形成不全症；骨脆症（Ｏｓｔｅｏｐｓａｔｈｙｒｏｓｉｓ）（骨形成不全症）；骨硬化症，先天性（軟骨形成不全症）；耳・脊椎・巨大骨端異形成症（耳脊椎巨大骨端異形成症）；耳脊椎巨大骨端異形成症；シュウ酸症（高シュウ酸尿症，原発性）；シュウ酸尿症，原発性（高シュウ酸尿症，原発性）；パントテン酸キナーゼ関連神経変性；パトウ症候群（トリソミー１３）；ＰＢＧＤ欠損症（急性間欠性ポルフィリン症）；ＰＣＣ欠損症（プロピオン酸血症）；ＰＣＴ（晩発性皮膚ポルフィリン症）；ＰＤＭ（筋強直性ジストロフィー２型）；ペンドレッド症候群；周期性疾患（地中海熱，家族性）；周期性腹膜炎（地中海熱，家族性）；ペリオロフィシャル（Ｐｅｒｉｏｒｉｆｉｃｉａｌ）黒子症症候群（ポイツ・ジェガース症候群）；末梢神経障害（家族性自律神経障害）；末梢神経線維腫症（神経線維腫症１）；腓骨筋委縮症（シャルコー・マリー・トゥース病）；ペルオキシソームアラニン：グリオキシル酸アミノトランスフェラーゼ欠損症（高シュウ酸尿症，原発性）；ポイツ・ジェガース症候群；ファイファー症候群；フェニルアラニンヒドロキシラーゼ欠損疾患（フェニルケトン尿症）；フェニルケトン尿症；褐色細胞腫（フォン・ヒッペル・リンドウ病）；胎児性軟骨異形成症を伴うピエール・ロバン症候群（ワイゼンバッハー・ツヴェイミューラー症候群）；色素沈着性肝硬変（ヘモクロマトーシス）；ＰＪＳ（ポイツ・ジェガース症候群）；ＰＫＡＮ（パントテン酸キナーゼ関連神経変性）；ＰＫＵ（フェニルケトン尿症）；鉛性（Ｐｌｕｍｂｏ）ポルフィリン症（ＡＬＡ欠損ポルフィリン症）；ＰＭＡ（シャルコー・マリー・トゥース病）；多発性線維性骨形成異常（マッキューン・オルブライト症候群）；結腸ポリポーシス（家族性大腸腺腫症）；ポリポーシス，過誤腫性，腸（ポイツ・ジェガース症候群）；ポリポーシス，腸，ＩＩ（ポイツ・ジェガース症候群）；ポリープ／スポット（ｐｏｌｙｐｓ−ａｎｄ−ｓｐｏｔｓ）症候群（ポイツ・ジェガース症候群）；ポルホビリノゲン合成酵素欠損症（ＡＬＡ欠損ポルフィリン症）；ポルフィリン症；ポルフィリン障害（ポルフィリン症）；ＰＰＨ（原発性肺高血圧症）；ＰＰＯＸ欠損症（異型ポルフィリン症）；プラダー・ラープハルト・ウィリ症候群（プラダー・ウィリ症候群）；プラダー・ウィリ症候群；初老期および老人性認知症（アルツハイマー病）；原発性ヘモクロマトーシス（ヘモクロマトーシス）；原発性高尿酸血症症候群（レッシュ・ナイハン症候群）；原発性肺高血圧症；原発性老人性変性性認知症（アルツハイマー病）；プリオン疾患；プロコラーゲン型ＥＤＳ  ＶＩＩ、変異型（エーラス・ダンロス症候群，関節弛緩型）；早老症（ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群）；早老症様症候群（コケイン症候群）；早老症性小体症（ｐｒｏｇｅｒｏｉｄ  ｎａｎｉｓｍ）（コケイン症候群）；進行性舞踏病、慢性遺伝性（ハンチントン）（ハンチントン病）；進行性筋委縮症（脊髄筋萎縮症）；正常強膜を有する進行性変形性骨形成不全症（骨形成不全症ＩＩＩ型）；ＰＲＯＭＭ（筋強直性ジストロフィー２型）；プロピオン酸血��（ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ  ａｃａｄｅｍｉａ）；プロピオニル−ＣｏＡカルボキシラーゼ欠損症（プロピオン酸血症）；プロテインＣ欠損症；プロテインＳ欠損症；プロトポルフィリン症（骨髄性プロトポルフィリン症）；プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ欠損症（異型ポルフィリン症）；近位型筋強直性ジストロフィー（筋強直性ジストロフィー２型）；近位型筋強直性ミオパチー（筋強直性ジストロフィー２型）；仮性ゴーシェ病；仮性ウルリッヒ・ターナー症候群（ヌーナン症候群）；弾性線維性仮性黄色腫；プシコシンリピドーシス（クラッベ病）；肺動脈性高血圧症（原発性肺高血圧症）；肺高血圧症（原発性肺高血圧症）；ＰＷＳ（プラダー・ウィリ症候群）；ＰＸＥ−弾性線維性仮性黄色腫（弾性線維性仮性黄色腫）；Ｒｂ（網膜芽腫）；レックリングハウゼン病、神経（神経線維腫症１）；再発性多発性漿膜炎（地中海熱，家族性）；網膜障害；網膜色素変性症−難聴症候群（アッシャー症候群）；網膜芽腫；レット症候群；ＲＦＡＬＳ３型（筋萎縮性側索硬化症（２型）；リッカー症候群（筋強直性ジストロフィー２型）；リレイ・デイ症候群（家族性自律神経障害）；ルーシー・レヴィー症候群（シャルコー・マリー・トゥース病）；ＲＳＴＳ（ルビンシュタイン・テイビ症候群）；ＲＴＳ（レット症候群）（ルビンシュタイン・テイビ症候群）；ＲＴＴ（レット症候群）；ルビンシュタイン・テイビ症候群；Ｓａｃｋ−Ｂａｒａｂａｓ症候群（エーラス・ダンロス症候群，血管型）；ＳＡＤＤＡＮ；リ・フラウメニの肉腫ファミリー症候群（リ・フラウメニ症候群）；肉腫、乳房、白血病および副腎（ＳＢＬＡ）症候群（リ・フラウメニ症候群）；ＳＢＬＡ症候群（リ・フラウメニ症候群）；ＳＢＭＡ（Ｘ連鎖性球脊髄性筋萎縮）；ＳＣＤ（鎌状赤血球貧血）；シュワン細胞腫，聴覚，両側性（神経線維腫症２）；ＳＣＩＤＸ１（Ｘ連鎖性重症複合型免疫不全）；結節性硬化症（結節硬化症）；ＳＤＡＴ（アルツハイマー病）；ＳＥＤ，先天性（脊椎骨端異形成症，先天性）；ＳＥＤ  Ｓｔｒｕｄｗｉｃｋ（脊椎骨端骨幹端異形成症，Ｓｔｒｕｄｗｉｃｋ型）；ＳＥＤｃ（脊椎骨端異形成症，先天性）；ＳＥＭＤ，Ｓｔｒｕｄｗｉｃｋ型（脊椎骨端骨幹端異形成症，Ｓｔｒｕｄｗｉｃｋ型）；老人性認知症（アルツハイマー病２型）；発達の遅れおよび黒色表皮症を伴う重度軟骨形成不全症（ＳＡＤＤＡＮ）；シュプリンツェン症候群（２２ｑ１１．２欠失症候群）；鎌状赤血球貧血；骨格／皮膚／脳症候群（ＳＡＤＤＡＮ）；皮膚色素沈着障害；ＳＭＡ（脊髄筋萎縮症）；ＳＭＥＤ，Ｓｔｒｕｄｗｉｃｋ型（脊椎骨端骨幹端異形成症，Ｓｔｒｕｄｗｉｃｋ型）；ＳＭＥＤ，Ｉ型（脊椎骨端骨幹端異形成症，Ｓｔｒｕｄｗｉｃｋ型）；スミス・レムリ・オピッツ症候群；南アフリカ遺伝性ポルフィリン症（異型ポルフィリン症）；痙攣性麻痺、乳児発症性上行性（乳児発症性上行性遺伝性痙攣性麻痺）；言語およびコミュニケーション障害；スフィンゴリピドーシス、テイ・サックス（テイ・サックス病）；球脊髄性筋委縮症；脊髄筋萎縮症；脊髄筋萎縮症，遠位型Ｖ型（遠位型脊髄筋萎縮症Ｖ型）；脊髄筋萎縮症，遠位型，主に上肢（遠位型脊髄筋萎縮症Ｖ型）；脊髄小脳失調；脊椎骨端骨幹端異形成症���Ｓｔｒｕｄｗｉｃｋ型；脊椎骨端異形成症，先天性；脊椎骨端異形成症（コラーゲン異常症，ＩＩ型およびＸＩ型）；脊椎骨端骨幹端（ｓｐｏｎｄｙｌｏｍｅｔａｐｉｐｈｙｓｅａｌ）異形成症，先天性，Ｓｔｒｕｄｗｉｃｋ型（脊椎骨端骨幹端異形成症，Ｓｔｒｕｄｗｉｃｋ型）；脊椎骨端骨幹（ｓｐｏｎｄｙｌｏｍｅｔａｐｈｙｓｅａｌ）端異形成症（ＳＭＤ）（脊椎骨端骨幹端異形成症，Ｓｔｒｕｄｗｉｃｋ型）；脊椎骨端骨幹端異形成症，Ｓｔｒｕｄｗｉｃｋ型（脊椎骨端骨幹端異形成症，Ｓｔｒｕｄｗｉｃｋ型）；中枢神経系の海綿状変性（カナバン病）；脳の海綿状変性（カナバン病）；幼年期の白質の海綿状変性（カナバン病）；散発性原発性肺高血圧症（原発性肺高血圧症）；ＳＳＢ症候群（ＳＡＤＤＡＮ）；針金様毛髪症候群（メンケス症候群）；スタイナート病（筋強直性ジストロフィー）；スタイナート筋強直性ジストロフィー症候群（筋強直性ジストロフィー）；スティックラー症候群；卒中（ＣＡＤＡＳＩＬ）；Ｓｔｒｕｄｗｉｃｋ症候群（脊椎骨端骨幹端異形成症，Ｓｔｒｕｄｗｉｃｋ型）；亜急性神経障害性ゴーシェ病（ゴーシェ病３型）；スウェーデンの遺伝性ポルフィリン症（急性間欠性ポルフィリン症）；スウェーデンのポルフィリン症（急性間欠性ポルフィリン症）；スイスチーズ様軟骨異形成症（クニースト異形成症）；テイ・サックス  疾患；ＴＤ−致死性骨異形成症（致死性骨異形成症）；まっすぐ大腿骨およびクローバー葉様頭蓋骨を伴うＴＤ（致死性骨異形成症２型）；毛細血管拡張症，小脳−眼皮膚（毛細血管拡張性運動失調症）；睾丸性女性化症症候群（アンドロゲン不応症）；テトラヒドロビオプテリン欠損症；ＴＦＭ−睾丸性女性化症症候群（アンドロゲン不応症）；中等症サラセミア（βサラセミア）；サラセミアメジャー（βサラセミア）；致死性骨異形成症；真性糖尿病および感音難聴を伴うチアミン応答性巨赤芽球性貧血；活性化プロテインＣの補因子の欠損による栓友病，ライデン型（第Ｖ因子ライデン血栓性素因）；甲状腺疾患；ソーセージ様ニューロパチー（圧迫性麻痺になりやすい遺伝性神経障害）；ＨＰＲＴ完全欠損症（レッシュ・ナイハン症候群）；ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ完全欠損症（レッシュ・ナイハン症候群）；トゥレット症候群；伝染性認知症（プリオン病）；伝染性海綿状脳症（プリオン病）；トリーチャー・コリンズ症候群；トリアス（
Ｔｒｉａｓ）骨脆弱症（骨形成不全症Ｉ型）；トリプルＸ症候群；トリプロ（Ｔｒｉｐｌｏ）Ｘ症候群（トリプルＸ症候群）；トリソミー２１（ダウン症候群）；トリソミーＸ（トリプルＸ症候群）；Ｔｒｏｉｓｉｅｒ−Ｈａｎｏｔ−Ｃｈａｕｆｆａｒｄ症候群（ヘモクロマトーシス）；ＴＳ（ターナー症候群）；ＴＳＤ（テイ・サックス病）；ＴＳＥ（プリオン病）；結節（ｔｕｂｅｒｏｓｅ）硬化症（結節（ｔｕｂｅｒｏｕｓ）硬化症）；結節硬化症；ターナー症候群；Ｘ染色体を有する女性のターナー症候群（ヌーナン症候群）；ターナー表現型，正常核型（ヌーナン症候群）；ターナー症候群（ターナー症候群）；ターナー様症候群（ヌーナン症候群）；２型ゴーシェ病（ゴーシェ病２型）；３型ゴーシェ病（ゴーシェ病３型）；ＵＤＰ−ガラクトース−４−エピメラーゼ欠損疾患（ガラクトース血症）；ＵＤＰグルコース４−エピメラーゼ欠損疾患（ガラクトース血症）；ＵＤＰグルコースヘキソース−１−リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ欠損症（ガラクトース血症）；ウルリッヒ・ヌーナン症候群（ヌーナン症候群）；ウルリッヒ・ターナー症候群（ターナー症候群）；未分化（Ｕｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ）難聴（非症候性難聴）；ＵＰＳ欠損症（急性間欠性ポルフィリン症）；膀胱（Ｕｒｉｎａｒｙ  ｂｌａｄｄｅｒ）がん（膀胱（ｂｌａｄｄｅｒ）がん）；ＵＲＯＤ欠損症（晩発性皮膚ポルフィリン症）；ウロポルフィリノーゲンデカルボキシラーゼ欠損症（晩発性皮膚ポルフィリン症）；ウロポルフィリノーゲン合成酵素欠損症（急性間欠性ポルフィリン症）；ＵＲＯＳ欠損症（先天性骨髄性ポルフィリン症）；アッシャー症候群；ＵＴＰヘキソース−１−リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ欠損症（ガラクトース血症）；フォンボゲル・ベルトラン症候群（カナバン病）；バンデルヘーベ症候群（骨形成不全症Ｉ型）；異型ポルフィリン症；Ｖｅｌｏｃａｒｄｉｏｆａｃｉａｌ症候群（２２ｑ１１．２欠失症候群）；ＶＨＬ症候群（フォン・ヒッペル・リンドウ病）；視力障害および盲目症（アルストレム症候群）；フォンボゲル・ベルトラン病（カナバン病）；フォン・ヒッペル・リンドウ病；Ｖｏｎ  Ｒｅｃｋｌｅｎｈａｕｓｅｎ−Ａｐｐｌｅｂａｕｍ病（ヘモクロマトーシス）；フォンレックリングハウゼン病（神経線維腫症１）；ＶＰ（異型ポルフィリン症）；Ｖｒｏｌｉｋ病（骨形成不全症）；ワールデンブルグ症候群；Ｗａｒｂｕｒｇ  Ｓｊｏ  Ｆｌｅｄｅｌｉｕｓ症候群（ミクロ症候群）；ＷＤ（ウィルソン病）；ワイゼンバッハー・ツヴェイミューラー症候群；ウィルソン病；ウィルソン病（ウィルソン病）；ウォルフ・ヒルシュホーン症候群；ウォルフ周期性疾患（地中海熱，家族性）；ＷＺＳ（ワイゼンバッハー・ツヴェイミューラー症候群）；色素性乾皮症；Ｘ連鎖性精神遅滞および巨精巣症（脆弱Ｘ症候群）；Ｘ連鎖性原発性高尿酸血症（レッシュ・ナイハン症候群）；Ｘ連鎖性重症複合型免疫不全；Ｘ連鎖性鉄芽球性貧血；Ｘ連鎖性球脊髄性筋萎縮（ケネディ病）；Ｘ連鎖性の尿の酸性尿症の酵素の欠損（レッシュ・ナイハン症候群）；Ｘ−ＳＣＩＤ（Ｘ連鎖性重症複合型免疫不全）；ＸＬＳＡ（Ｘ連鎖性鉄芽球性貧血）；ＸＳＣＩＤ（Ｘ連鎖性重症複合型免疫不全）���ＸＸＸ症候群（トリプルＸ症候群）；ＸＸＸＸ症候群（４８，ＸＸＸＸ）；ＸＸＸＸＸ症候群（４９，ＸＸＸＸＸ）；ＸＸＹ症候群（クラインフェルター症候群）；ＸＸＹトリソミー（クラインフェルター症候群）；ＸＹＹ，核型（４７，ＸＹＹ症候群）；ＸＹＹ症候群（４７，ＸＹＹ症候群）；ならびにＹＹ症候群（４７，ＸＹＹ症候群）から選択される遺伝性疾患である。
【０４４８】
さらに好ましい一態様では、本明細書に規定した核酸配列または複数の本明細書に規定した核酸配列を含む本発明の組成物は、医薬組成物の調製のため、特に本明細書に規定した目的のための、好ましくは本明細書に規定した疾患の処置での遺伝子療法における使用のための医薬組成物の調製のために使用され得る。
【０４４９】
本発明の医薬組成物はさらに、遺伝子療法において、特に、疾患または障害（好ましくは本明細書に規定したもの）の処置における遺伝子療法において使用され得る。
【０４５０】
本発明によりさらに、本明細書に規定した本発明のＲＮＡを含む組成物または医薬組成物またはワクチンまたはキットまたはパーツキットのいくつかの用途および使用を提供する。一実施形態では、該組成物または医薬組成物またはキットまたはパーツキットは、医薬として、すなわち腫瘍またはがん疾患の処置のために使用され得る。これとの関連において、処置は好ましくは腫瘍内適用によって、特に腫瘍組織内への注射によって行われる。別の態様によれば、本発明は、上記のような該ＲＮＡを含む組成物または医薬組成物またはワクチンまたはキットまたはパーツキットの２回目の医学的使用に関するものであり、この場合、この主題は、医薬の調製のため、特に腫瘍またはがん疾患の処置の処置のための腫瘍内適用（投与）のための医薬の調製のために使用される。
【０４５１】
好ましくは、本明細書に記載の疾患は腫瘍またはがん疾患から選択され、腫瘍またはがん疾患としては好ましくは、例えば、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）白血病、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連がん、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞癌、胆管がん、膀胱がん、骨のがん、骨肉腫／悪性線維性組織球腫、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、上衣細胞腫、髄芽細胞腫、テント上原始神経外胚葉腫瘍、視覚伝導路および視床下部の神経膠腫、乳がん、気管支腺腫／カルチノイド、バーキットリンパ腫、小児カルチノイド腫瘍、消化管カルチノイド腫瘍、原発不明癌、原発性中枢神経系リンパ腫、小児小脳星状細胞腫、小児脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、子宮頚がん、小児がん、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）白血病、慢性脊髄増殖性障害、結腸がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、線維形成性小円形細胞性腫瘍、子宮内膜がん、上衣細胞腫、食道がん、ユーイング腫瘍ファミリーのユーイング肉腫、小児頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、眼内黒色腫、網膜芽腫、胆嚢がん、胃（Ｇａｓｔｒｉｃ（Ｓｔｏｍａｃｈ））がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、頭蓋外、性腺外または卵巣胚細胞腫瘍、妊娠性トロホブラスト腫瘍、脳幹の神経膠腫、小児脳星状細胞腫、小児視覚伝導路および視床下部の神経膠腫、胃カルチノイド、ヘアリー細胞白血病、頭頸部癌がん、心臓のがん、肝細胞（肝臓）がん、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、小児視床下部および視覚伝導路の神経膠腫、眼内黒色腫、島細胞癌（エンドクリン，膵臓）、カポジ肉腫、腎臓がん（腎細胞がん）、喉頭がん、白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、ヘアリー細胞白血病、口唇および口腔がん、脂肪肉腫、肝臓がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、バーキットリンパ腫、皮膚Ｔ−Ｃｅｌｌリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、原発性の中枢神経系のリンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、骨の悪性線維性組織球腫／骨肉腫、小児髄芽細胞腫、黒色腫、眼内（目の）黒色腫、メルケル細胞癌、成人の悪性中皮腫、小児中皮腫、原発不明の口内がんを伴う首の転移性扁平上皮がん、小児多発性内分泌腺腫症候群、多発性骨髄腫／形質細胞腫、菌状息肉症、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、慢性骨髄性白血病、成人の急性骨髄性白血病、小児急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫（骨髄のがん）、慢性骨髄増殖性障害、鼻腔および副鼻腔のがん、鼻咽腔癌、神経芽細胞腫、口腔がん、口腔咽頭がん、骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫、卵巣がん、卵巣上皮がん（表面の上皮−間質腫瘍）、卵巣の生殖細胞腫瘍、卵巣の低悪性度腫瘍、膵がん、島細胞膵がん、副鼻腔および鼻腔のがん、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、松果体星状細胞腫、松果体胚細胞腫、小児松果体芽細胞腫およびテント上原始神経外胚葉腫瘍、下垂体腺腫、形質細胞腫／多発性骨髄腫、胸膜肺芽細胞腫、原発性の中枢神経系のリンパ腫、前立腺がん、直腸がん、腎細胞癌（腎臓がん）、腎盂および尿管のがん、網膜芽腫、小児横紋筋肉腫、唾液腺がん、ユーイング腫瘍ファミリーの肉腫、カポジ肉腫、軟部組織肉腫、子宮肉腫、セザリー症候群、皮膚がん（非黒色腫）、皮膚がん（黒色腫）、メルケル細胞皮膚癌、小腸のがん、扁平上皮癌、原発不明の首の転移性扁平上皮、小児テント上原始神経外胚葉腫瘍、精巣がん、喉のがん、小児胸腺腫、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺がん、小児甲状腺がん、腎盂および尿管の移行細胞がん、妊娠性絨毛腫瘍、尿道がん、子宮内膜の子宮がん、子宮肉腫、膣がん、小児視覚伝導路および視床下部の神経膠腫、外陰がん、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ならびに小児ウィルムス腫瘍（腎臓がん）が挙げられる。
【０４５２】
腫瘍内投与に適した腫瘍またはがんの特に好ましい例は前立腺がん、肺がん、乳がん、脳のがん、頭頸部がん、甲状腺がん、結腸がん、胃がん、肝臓がん、膵臓がん、卵巣がん、皮膚がん、膀胱、子宮および頸部である。
【０４５３】
具体的な一実施形態によれば、医薬は患者に、単回用量または数回の用量として投与され得る。一部の特定の実施形態では、医薬は患者に単回用量として投与した後、２回目の用量、後に任意選択でさらには３回目、４回目（またはそれ以上）の後続用量などで投与され得る。
【０４５４】
好ましくは、本発明の組成物は、少なくとも４０μｇのＲＮＡ／用量の量で提供される。より詳しくは、単回用量に含められるｍＲＮＡの量は典型的には、少なくとも２００μｇ、好ましくは２００μｇ〜１．０００μｇ、より好ましくは３００μｇ〜８５０μｇ、さらにより好ましくは３００μｇ〜７００μｇである。
【０４５５】
別の実施形態では、本発明の組成物のヌクレオチド酸分子、好ましくはｍＲＮＡ分子は、少なくとも１種類の抗原の少なくとも１つのエピトープをコードしているものである。本発明の好ましい実施形態では、該少なくとも１種類の抗原は、感染性疾患と関連している病原体に由来する抗原、アレルギーと関連している抗原、自己免疫疾患と関連している抗原、およびがんまたは腫瘍疾患と関連している抗原、あるいは前記抗原の断片、バリアントおよび／または誘導体からなる群より選択される。
【０４５６】
好ましくは、該少なくとも１種類の抗原は、病原体に由来するもの、好ましくはウイルス系、細菌系、真菌系または原生動物系の病原体、好ましくは：狂犬病ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス（ｈＰＶ）、炭疽菌、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、デングウイルス、ロタウイルス、インフルエンザウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、黄熱病ウイルス、ヒト型結核菌、プラスモジウム、黄色ブドウ球菌、クラミジア・トラコマチス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）およびＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）からなるリストから選択される病原体に由来するものである。
【０４５７】
これとの関連において、本発明の組成物のｍＲＮＡは、病原性抗原またはその断片、バリアントもしくは誘導体の少なくとも１つのエピトープを含むタンパク質またはペプチドをコードしているものであり得る。かかる病原性抗原は、被験体、特に哺乳動物の被験体、より特別にはヒトによる免疫学的反応を誘発させる病原性生物体に由来するもの、特に細菌系、ウイルス系または原生動物系（ｍｕｌｔｉｃｅｌｌｕｌａｒ）の病原性生物体に由来するものである。より詳しくは、病原性抗原は好ましくは、ウイルスまたは細菌または原生動物生物体の表面に存在する表面抗原、例えば、タンパク質（またはタンパク質断片、例えば表面抗原の外側部分）である。
【０４５８】
病原性抗原は、ペプチドまたはタンパク質抗原は、好ましくは感染性疾患と関連している病原体に由来するものであり、これは好ましくは、病原体Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ、アナプラズマ属、Ａｎａｐｌａｓｍａ  ｐｈａｇｏｃｙｔｏｐｈｉｌｕｍ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｅ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ、Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ、Ａｓｃａｒｉｓ  ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、アスペルギルス属、アストロウイルス科、バベシア属、炭疽菌、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ  ｈｅｎｓｅｌａｅ、ＢＫウイルス、Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｓ  ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、ボレリア属，ボレリア属の種、ブルセラ属、Ｂｒｕｇｉａ  ｍａｌａｙｉ、ブニヤウイルス科、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａおよび他のバークホルデリア種、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍａｌｌｅｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ、カルシウイルス科、カンピロバクター属、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、カンジダ属の種、クラミジア・トラコマチス、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ、ＣＪＤプリオン、Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、クロストリジウム属の種、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、コクシジオイデス属の種、コロナウイルス、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ  ｂｕｒｎｅｔｉｉ、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、クリプトスポリジウム属、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、デングウイルス（ＤＥＮ−１、ＤＥＮ−２、ＤＥＮ−３およびＤＥＮ−４）、Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、エボラウイルス（ＥＢＯＶ）、エキノコックス属、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｃｈａｆｆｅｅｎｓｉｓ、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｅｗｉｎｇｉｉ、エールリヒア属、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、エンテロコッカス属、エンテロウイルス属、エンテロウイルス、主にコクサッキーＡ群ウイルスおよびエンテロウイルス７１（ＥＶ７１）、エピデルモフィトン属の種、エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７、Ｏ１１１およびＯ１０４：Ｈ４、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｈｅｐａｔｉｃａおよびＦａｓｃｉｏｌａ  ｇｉｇａｎｔｉｃａ、ＦＦＩプリオン、フィラリア上科、フラビウイルス、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、フゾバクテリウム属、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｃａｎｄｉｄｕｍ、Ｇｉａｒｄｉａ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｉｓ、顎口虫属の種、ＧＳＳプリオン、グアナリトウイルス、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、ヘニパウイルス（ヘンドラウイルス  ニパウイルス）、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス１および２（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、Ｈｏｒｔａｅａ  ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ、ヒトボカウイルス（ＨＢｏＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）およびヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ−７）、ヒトメタニューモウイルス（ｈＭＰＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、日本脳炎ウイルス、ＪＣウイルス、フニンウイルス、Ｋｉｎｇｅｌｌａ  ｋｉｎｇａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ、Ｋｕｒｕ  ｐｒｉｏｎ、ラッサウイルス、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、リーシュマニア属、レプトスピラ属、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、マチュポウイルス、マラセジア属の種、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、Ｍｅｔａｇｏｎｉｍｕｓ  ｙｏｋａｇａｗａｉ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａ  ｐｈｙｌｕｍ、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、ムンプスウイルス、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅおよびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ、ヒト型結核菌、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ  ｆｏｗｌｅｒｉ、Ｎｅｃａｔｏｒ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、ノカルジア属の種、Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ  ｖｏｌｖｕｌｕｓ、Ｏｒｉｅｎｔｉａ  ｔｓｕｔｓｕｇａｍｕｓｈｉ、オルトミクソウイルス科（インフルエンザ）、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、肺吸虫属の種、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ  ｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ、パルボウイルスＢ１９、パスツレラ属、プラスモジウム属、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルス属、ライノウイルス、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ａｋａｒｉ、リケッチア属、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｔｙｐｈｉ、リフトバレー熱ウイルス、ロタウイルス、風疹ウイルス、サビアウイルス、サルモネラ属、Ｓａｒｃｏｐｔｅｓ  ｓｃａｂｉｅｉ、ＳＡＲＳコロナウイルス、住血吸虫属、シゲラ属、シンノンブルウイルス、ハンタウイルス、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、ブドウ球菌属、ブドウ球菌属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ、テニア属、Ｔａｅｎｉａ  ｓｏｌｉｕｍ、ダニ媒介脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）、Ｔｏｘｏｃａｒａ  ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃ���ｒａ  ｃａｔｉ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐｉｒａｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｉｓ、白癬菌属の種、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ、Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ、水痘・帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、水痘・帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、Ｖａｒｉｏｌａ  ｍａｊｏｒまたはＶａｒｉｏｌａ  ｍｉｎｏｒ、ｖＣＪＤプリオン、ベネズエラ馬脳炎ウイルス、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、西ナイルウイルス、西部馬脳炎ウイルス、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ  ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、黄熱病ウイルス、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓおよびＹｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに由来する抗原から選択される。
【０４５９】
さらに、病原性抗原（感染性疾患と関連している病原体に由来する抗原）は好ましくは、以下の抗原：外膜タンパク質Ａ  ＯｍｐＡ、バイオフィルム結合タンパク質Ｂａｐ、輸送タンパク質ＭｕｃＫ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ、アシネトバクター感染症））；いろいろな表面糖タンパク質ＶＳＧ、微小管結合タンパク質ＭＡＰＰ１５、トランス−シアリダーゼＴＳＡ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ、アフリカ睡眠病（Ａｆｒｉｃａｎ  ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍｉａｓｉｓ））；ＨＩＶ  ｐ２４抗原、ＨＩＶエンベロープタンパク質（Ｇｐ１２０、Ｇｐ４１、Ｇｐ１６０）、ポリプロテインＧＡＧ、ネガティブ因子タンパク質Ｎｅｆ、転写のトランス活性化因子Ｔａｔ（ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、ＡＩＤＳ（後天性免疫不全症候群））；ガラクトース阻害性接着タンパク質ＧＩＡＰ、２９ｋＤａ抗原Ｅｈ２９、Ｇａｌ／ＧａｌＮＡｃレクチン、タンパク質ＣＲＴ、１２５ｋＤａの免疫優性抗原、タンパク質Ｍ１７、アドヘシンＡＤＨ１１２、タンパク質ＳＴＩＲＰ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、アメーバ症）；主要表面タンパク質１〜５（ＭＳＰ１ａ、ＭＳＰ１ｂ、ＭＳＰ２、ＭＳＰ３、ＭＳＰ４、ＭＳＰ５）、ＩＶ型セクレオション（ｓｅｃｒｅｏｔｉｏｎ）系タンパク質（ＶｉｒＢ２、ＶｉｒＢ７、ＶｉｒＢ１１、ＶｉｒＤ４）（アナプラズマ属、アナプラズマ病）；防御抗原ＰＡ、浮腫因子ＥＦ、致死性因子（ｆａｃｏｔｏｒ）ＬＦ、Ｓ層相同タンパク質ＳＬＨ（炭疽菌、炭疽）；アクラノリシン（ａｃｒａｎｏｌｙｓｉｎ）、ホスホリパーゼＤ、コラーゲン結合タンパク質ＣｂｐＡ（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ、Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ感染症）；ヌクレオカプシドタンパク質ＮＰ、糖タンパク質前駆体ＧＰＣ、糖タンパク質ＧＰ１、糖タンパク質ＧＰ２（フニンウイルス、アルゼンチン出血熱）；キチン−タンパク質層タンパク質、１４ｋＤａの表面抗原Ａ１４、主要精子タンパク質ＭＳＰ、ＭＳＰ重合組織化タンパク質ＭＰＯＰ、ＭＳＰ線維タンパク質２  ＭＦＰ２、ＭＳＰ重合活性化キナーゼＭＰＡＫ、ＡＢＡ−１様タンパク質ＡＬＢ、タンパク質ＡＢＡ−１、クチクリン（ｃｕｔｉｃｕｌｉｎ）ＣＵＴ−１（Ａｓｃａｒｉｓ  ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、回虫症）；４１ｋＤａのアレルゲンＡｓｐ  ｖ１３、アレルゲンＡｓｐ  ｆ３、主要分生子表面タンパク質ｒｏｄｌｅｔ  Ａ、プロテアーゼＰｅｐ１ｐ、ＧＰＩ−アンカー型タンパク質Ｇｅｌ１ｐ、ＧＰＩ−アンカー型タンパク質Ｃｒｆ１ｐ（アスペルギルス属、アスペルギルス症）；ファミリーＶＰ２６タンパク質、ＶＰ２９タンパク質（アストロウイルス科、アストロウイルス感染症）；桿小体結合タンパク質１  ＲＡＰ−１、メロゾイト表面抗原ＭＳＡ−１、ＭＳＡ−２（ａ１、ａ２、ｂ、ｃ）、１２Ｄ３、１１Ｃ５、２１Ｂ４、Ｐ２９、バリアント赤血球表面抗原ＶＥＳＡ１、頂端側膜抗原１  ＡＭＡ−１（バベシア属、バベシア症）；ヘモシアニン、エンテロトキシンＣ、ＰＸＯ１−５１、グリコール酸オキシダーゼ、ＡＢＣ−トランスポーター、ペニシリン結合（−ｂｉｎｇｄｎ）タンパク質、亜鉛輸送体ファミリータンパク質、プソイドウリジン合成酵素Ｒｓｕ、プラスミド複製タンパク質ＲｅｐＸ、オリゴエンドペプチダーゼＦ、プロファージ膜タンパク質、タンパク質ＨｅｍＫ、鞭毛抗原Ｈ、２８．５ｋＤａの細胞表面抗原（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ感染症）；後期Ｔ抗原ＬＴ、小分子Ｔ抗原、カプシドタンパク質ＶＰ１、カプシドタンパク質ＶＰ２（ＢＫウイルス、ＢＫウイルス感染症）；２９ｋＤａ−タンパク質、カスパーゼ−３様抗原、糖タンパク質（Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｓ  ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｓ  ｈｏｍｉｎｉｓ感染症）；酵母表面アドヘシンＷＩ−１（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、ブラストミセス症）；核タンパク質Ｎ、ポリメラーゼＬ、マトリックスタンパク質Ｚ、糖タンパク質ＧＰ（マチュポウイルス、ボリビア出血熱）；外部表面タンパク質Ａ  ＯｓｐＡ、外部表面タンパク質ＯｓｐＢ、外部表面タンパク質ＯｓｐＣ、デコリン結合タンパク質Ａ  ＤｂｐＡ、デコリン結合タンパク質Ｂ  ＤｂｐＢ、鞭毛フィラメント４１ｋＤａのコアタンパク質Ｆｌａ、塩基性膜タンパク質Ａ前駆体ＢｍｐＡ（免疫優性抗原Ｐ３９）、外部表面２２ｋＤａのリポタンパク質前駆体（抗原ＩＰＬＡ７）、いろいろな表面リポタンパク質ｖｌｓＥ（ボレリア属，ボレリア感染症）；ボツリヌス神経毒ＢｏＮＴ／Ａ１、ＢｏＮＴ／Ａ２、ＢｏＮＴ／Ａ３、ＢｏＮＴ／Ｂ、ＢｏＮＴ／Ｃ、ＢｏＮＴ／Ｄ、ＢｏＮＴ／Ｅ、ＢｏＮＴ／Ｆ、ＢｏＮＴ／Ｇ、組換えの  ボツリヌス毒素ＦのＨｃドメインＦＨｃ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、ボツリヌス症（および乳児ボツリヌス症））；ヌクレオカプシド、糖タンパク質前駆体（サビアウイルス、ブラジル出血熱）；銅／亜鉛スーパーオキシド・ジスムターゼＳｏｄＣ、バクテリオフェリチンＢｆｒ、５０Ｓリボソームタンパク質ＲｐｌＬ、ＯｍｐＡ様膜貫通ドメイン含有タンパク質Ｏｍｐ３１、免疫原性の３９ｋＤａのタンパク質Ｍ５  Ｐ３９、亜鉛ＡＢＣトランスポーターペリプラスム亜鉛結合タンパク質ｚｎｕＡ、ペリプラスム免疫原性タンパク質Ｂｐ２６、３０Ｓリボソームタンパク質Ｓ１２  ＲｐｓＬ、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼＧａｐ、２５ｋＤａの外膜免疫原性タンパク質前駆体Ｏｍｐ２５、浸潤タンパク質Ｂ  ｌａｌＢ、誘発因子Ｔｉｇ、分子シャペロンＤｎａＫ、推定ペプチジル−プロリルシス−トランスイソメラーゼＳｕｒＡ、リポタンパク質Ｏｍｐ１９、外膜タンパク質ＭｏｔＹ  Ｏｍｐ１６、保存された外膜タンパク質Ｄ１５、リンゴ酸デヒドロゲナーゼＭｄｈ、ＩＶ型分泌系（Ｔ４ＳＳ）の成分ＶｉｒＪ、機能不明のリポタンパク質ＢＡＢ１＿０１８７（ブルセラ属、ブルセラ症）；ＡＢＣトランスポーターファミリーの構成員（ＬｏｌＣ、ＯｐｐＡおよびＰｏｔＦ）、推定リポタンパク質放出系膜貫通タンパク質ＬｏｌＣ／Ｅ、フラジェリンＦｌｉＣ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ細胞内運動性Ａ  ＢｉｍＡ、細菌の伸長因子−Ｔｕ  ＥＦ−Ｔｕ、１７ｋＤａのＯｍｐＡ様タンパク質、ｂｏａＡコードタンパク質、ｂｏａＢコードタンパク質（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａおよび他のバークホルデリア種、バークホルデリア感染症）；ミコ��ル−トランスフェラーゼＡｇ８５Ａ、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ６５、タンパク質ＴＢ１０．４、１９ｋＤａ抗原、タンパク質ＰｓｔＳ３、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ７０（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ、ブルーリ潰瘍）；ノロウイルスメジャーおよびマイナーウイルスカプシドタンパク質ＶＰ１およびＶＰ２、ゲノムポリプロテイン、サポウイルスカプシドタンパク質ＶＰ１、タンパク質Ｖｐ３、ゲノム（ｇｅｏｍｅ）ポリプロテイン（カルシウイルス科、カリシウイルス感染（ノロウイルスおよびサポウイルス））；主要外膜タンパク質ＰｏｒＡ、フラジェリンＦｌａＡ、表面抗原ＣｊａＡ、フィブロネクチン結合タンパク質ＣａｄＦ、アスパラギン酸／グルタミン酸結合ＡＢＣトランスポータータンパク質Ｐｅｂ１Ａ、タンパク質ＦｓｐＡ１、タンパク質ＦｓｐＡ２（カンピロバクター属、カンピロバクター症）；解糖酵素エノラーゼ、分泌型アスパルチルプロテイナーゼＳＡＰ１−１０、グリコホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）結合細胞壁タンパク質、タンパク質ＨｙＲ1、補体受容体３関連タンパク質ＣＲ3−ＲＰ、アドヘシンＡｌｓ３ｐ、熱ショックタンパク質９０ｋＤａのｈｓｐ９０、細胞表面疎水性タンパク質ＣＳＨ（通常、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓおよび他のカンジダ種、カンジダ症）；１７−ｋＤａ抗原、タンパク質Ｐ２６、三量体の自己輸送体アドヘシンＴＡＡ、バルトネラ属のアドヘシンＡ  ＢａｄＡ、多様に発現される外膜タンパク質Ｖｏｍｐｓ、タンパク質Ｐａｐ３、タンパク質ＨｂｐＡ、エンベロープ結合プロテアーゼＨｔｒＡ、タンパク質ＯＭＰ８９、タンパク質ＧｒｏＥＬ、タンパク質ＬａｌＢ、タンパク質ＯＭＰ４３、ジヒドロリポアミドスクシニルトランスフェラーゼＳｕｃＢ（Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ  ｈｅｎｓｅｌａｅ、猫ひっかき病）；無べん毛型表面タンパク質−２、無べん毛型特異的表面タンパク質ＳＳＰ４、クルジパイン、トランス−シアリダーゼＴＳ、トリポマスチゴート表面糖タンパク質ＴＳＡ−１、補体調節タンパク質ＣＲＰ−１０、タンパク質Ｇ４、タンパク質Ｇ２、パラキソネマルロッド（ｐａｒａｘｏｎｅｍａｌ  ｒｏｄ）タンパク質ＰＡＲ２、パラフラジェラー（ｐａｒａｆｌａｇｅｌｌａｒ）ロッド成分ＰａＲ1、ムチン結合表面タンパク質ＭＰＳＰ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ、シャーガス病（Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍｉａｓｉｓ））；エンベロープ糖タンパク質（ｇＢ、ｇＣ、ｇＥ、ｇＨ、ｇＩ、ｇＫ、ｇＬ）（水痘・帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、水痘）；主要外膜タンパク質ＭＯＭＰ、おそらく外膜タンパク質ＰＭＰＣ、外膜複合体タンパク質Ｂ  ＯｍｃＢ、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ６０  ＨＳＰ１０、タンパク質ＩｎｃＡ、ＩＩＩ型分泌系由来タンパク質、リボヌクレオチドレダクターゼ短鎖タンパク質ＮｒｄＢ、プラスミドタンパク質Ｐｇｐ３、クラミジア外部タンパク質Ｎ  ＣｏｐＮ、抗原ＣＴ５２１、抗原ＣＴ４２５、抗原ＣＴ０４３、抗原ＴＣ００５２、抗原ＴＣ０１８９、抗原ＴＣ０５８２、抗原ＴＣ０６６０、抗原ＴＣ０７２６、抗原ＴＣ０８１６、抗原ＴＣ０８２８（クラミジア・トラコマチス、クラミジア感染症）；低カルシウム応答タンパク質Ｅ  ＬＣｒＥ、クラミジ���外部タンパク質Ｎ  ＣｏｐＮ、セリン／トレオニン−プロテインキナーゼＰｋｎＤ、アシル−担体−タンパク質Ｓ−マロニルトランスフェラーゼＦａｂＤ、一本鎖ＤＮＡ結合タンパク質Ｓｓｂ、主要外膜タンパク質ＭＯＭＰ、外膜タンパク質２  Ｏｍｐ２、多形膜タンパク質ファミリー（Ｐｍｐ１、Ｐｍｐ２、Ｐｍｐ３、Ｐｍｐ４、Ｐｍｐ５、Ｐｍｐ６、Ｐｍｐ７、Ｐｍｐ８、Ｐｍｐ９、Ｐｍｐ１０、Ｐｍｐ１１、Ｐｍｐ１２、Ｐｍｐ１３、Ｐｍｐ１４、Ｐｍｐ１５、Ｐｍｐ１６、Ｐｍｐ１７、Ｐｍｐ１８、Ｐｍｐ１９、Ｐｍｐ２０、Ｐｍｐ２１）（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染症）；コレラ毒素Ｂ  ＣＴＢ、毒素共調節ピリンＡ  ＴｃｐＡ、毒素共調節ピリンＴｃｐＦ、毒素  共調節線毛生合成タンパク質Ｆ  ＴｃｐＦ、コレラエンテロトキシンサブユニットＡ、コレラエンテロトキシンサブユニットＢ、熱安定性エンテロトキシンＳＴ、マンノース感受性ヘマグルチニンＭＳＨＡ、外膜タンパク質Ｕ  Ｐｏｒｉｎ  ｏｍｐＵ、Ｐｏｒｉｎｇ  Ｂタンパク質、多形膜タンパク質−Ｄ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、コレラ）；プロピオニル−ＣｏＡカルボキシラーゼＰＣＣ、１４−３−３タンパク質、プロヒビチン、システインプロテアーゼ、グルタチオントランスフェラーゼ、ゲルゾリン、カテプシンＬプロテイナーゼＣａｔＬ、テグメントタンパク質２０．８ｋＤａのＴＰ２０．８、テグメントタンパク質３１．８ｋＤａのＴＰ３１．８、リゾホスファチジン酸ホスファターゼＬＰＡＰ、（Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ、肝吸虫症）；表面層タンパク質ＳＬＰ、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ抗原ＧＤＨ、毒素Ａ、毒素Ｂ、システインプロテアーゼＣｗｐ８４、システインプロテアーゼＣｗｐ１３、システインプロテアーゼＣｗｐ１９、細胞壁タンパク質ＣｗｐＶ、鞭毛タンパク質ＦｌｉＣ、鞭毛タンパク質ＦｌｉＤ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染症）；ライノウイルス：カプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４；コロナウイルス：スパイクタンパク質Ｓ、エンベロープタンパク質Ｅ、膜タンパク質Ｍ、ヌクレオカプシドタンパク質Ｎ（通常、ライノウイルスおよびコロナウイルス、一般的な風邪（急
性ウイルス性鼻咽頭炎；急性鼻感冒））；プリオンタンパク質Ｐｒｐ（ＣＪＤプリオン、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ））；エンベロープタンパク質Ｇｃ、エンベロープタンパク質Ｇｎ、ヌクレオカプシドタンパク質（クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、クリミア・コンゴ出血熱（ＣＣＨＦ））；ビルレンス関連ＤＥＡＤ−ｂｏｘ  ＲＮＡヘリカーゼＶＡＤ１、ガラクトキシロマンナン−タンパク質ＧａｌＸＭ、グルクロンオキシロマンナンＧＸＭ、マンノタンパク質ＭＰ（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、クリプトコッカス症）；酸性リボソームタンパク質Ｐ２  ＣｐＰ２、ムチン抗原Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ２、Ｍｕｃ３  Ｍｕｃ４、Ｍｕｃ５、Ｍｕｃ６、Ｍｕｃ７、表面接着タンパク質ＣＰ２０、表面接着タンパク質ＣＰ２３、表面タンパク質ＣＰ１２、表面タンパク質ＣＰ２１、表面タンパク質ＣＰ４０、表面タンパク質ＣＰ６０、表面タンパク質ＣＰ１５、表面結合糖ペプチドｇｐ４０、表面結合糖ペプチドｇｐ１５、オーシスト壁タンパク質ＡＢ、プロフィリンＰＲＦ、アピラーゼ（クリプトスポリジウム属、クリプトスポリジウム症）；脂肪酸およびレチノール結合タンパク質−１  ＦＡＲ−１、組織阻害薬のメタロプロテイナーゼＴＩＭＰ（ＴＭＰ）、システインプロテイナーゼＡＣＥＹ−１、システインプロテイナーゼＡＣＣＰ−１、表面抗原Ａｃ−１６、分泌型タンパク質２  ＡＳＰ−２、メタロプロテアーゼ１  ＭＴＰ−１、アスパルチルプロテアーゼ阻害薬ＡＰＩ−１、表面結合抗原ＳＡＡ−１、成人特異的分泌型第Ｘａ因子セリンプロテアーゼ阻害薬  抗凝固因子ＡＰ、カテプシンＤ様アスパラギン酸プロテアーゼＡＲＲ−１（通常、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｅ；他の多くの寄生虫、Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｌａｒｖａ  ｍｉｇｒａｎｓ（ＣＬＭ））；カテプシンＬ様プロテアーゼ、５３／２５−ｋＤａ抗原、８ｋＤａファミリー構成員、わずかなトリプシン様活性を有する嚢尾虫タンパク質ＴｓＡｇ５、六鉤幼虫タンパク質ＴＳＯＬ１８、六鉤幼虫タンパク質ＴＳＯＬ４５−１Ａ、乳酸デヒドロゲナーゼＡ  ＬＤＨＡ、乳酸デヒドロゲナーゼＢ  ＬＤＨＢ（Ｔａｅｎｉａ  ｓｏｌｉｕｍ、嚢尾虫症）；ｐｐ６５抗原、膜タンパク質ｐｐ１５、カプシド−近位型テグメントタンパク質ｐｐ１５０、タンパク質Ｍ４５、ＤＮＡ  ポリメラーゼＵＬ５４、ヘリカーゼＵＬ１０５、糖タンパク質ｇＭ、糖タンパク質ｇＮ、糖（ｇｌｃｏ）タンパク質Ｈ、糖タンパク質Ｂ  ｇＢ、タンパク質ＵＬ８３、タンパク質ＵＬ９４、タンパク質ＵＬ９９（サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、サイトメガロウイルス感染症）；カプシドタンパク質Ｃ、プレ膜タンパク質ｐｒＭ、膜タンパク質Ｍ、エンベロープタンパク質Ｅ（ドメインＩ、ドメインＩＩ、ドメインＩＩ）、タンパク質ＮＳ１、タンパク質ＮＳ２Ａ、タンパク質ＮＳ２Ｂ、タンパク質ＮＳ３、タンパク質ＮＳ４Ａ、タンパク質２Ｋ、タンパク質ＮＳ４Ｂ、タンパク質ＮＳ５（デングウイルス（ＤＥＮ−１、ＤＥＮ−２、ＤＥＮ−３およびＤＥＮ−４）−フラビウイルス、デング熱）；３９ｋＤａのタンパク質（Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、二核アメーバ症）；ジフテリア毒素前駆体Ｔｏｘ、ジフテリア毒素ＤＴ、��リン特異的ソルターゼＳｒｔＡ、シャフトピリンタンパク質ＳｐａＡ、チップピリンタンパク質ＳｐａＣ、マイナーピリンタンパク質ＳｐａＢ、表面結合タンパク質ＤＩＰ１２８１（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｅｒｉａｅ、ジフテリア）；糖タンパク質ＧＰ、核タンパク質ＮＰ、マイナーマトリックスタンパク質ＶＰ２４、メジャーマトリックスタンパク質ＶＰ４０、転写アクチベーター  ＶＰ３０、ポリメラーゼ補因子ＶＰ３５、ＲＮＡポリメラーゼＬ（エボラウイルス（ＥＢＯＶ）、エボラ出血熱）；プリオンタンパク質（ｖＣＪＤプリオン、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ、ｎｖＣＪＤ））；ＵｖｒＡＢＣ系タンパク質Ｂ、タンパク質Ｆｌｐ１、タンパク質Ｆｌｐ２、タンパク質Ｆｌｐ３、タンパク質ＴａｄＡ、ヘモグロビン受容体ＨｇｂＡ、外膜タンパク質ＴｄｈＡ、タンパク質ＣｐｓＲＡ、調節因子ＣｐｘＲ、タンパク質ＳａｐＡ、１８ｋＤａ抗原、外膜タンパク質ＮｃａＡ、タンパク質ＬｓｐＡ、タンパク質ＬｓｐＡ１、タンパク質ＬｓｐＡ２、タンパク質ＬｓｐＢ、外膜成分ＤｓｒＡ、ｌｅｃｔｉｎ  ＤｌｔＡ、リポタンパク質Ｈｌｐ、主要外膜タンパク質ＯＭＰ、外膜タンパク質ＯｍｐＡ２（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ、軟性下疳）；アスパルチルプロテアーゼ１  Ｐｅｐ１、ホスホリパーゼＢ  ＰＬＢ、α−マンノシダーゼ１  ＡＭＮ１、グルカノシルトランスフェラーゼＧＥＬ１、ウレアーゼＵＲＥ、ペルオキシソームマトリックスタンパク質Ｐｍｐ１、プロリンリッチ抗原Ｐｒａ、ヒト（ｈｕｍａｌ）Ｔ細胞反応性（ｒｅａｔｉｖｅ）タンパク質ＴｃｒＰ（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓおよびＣｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｐｏｓａｄａｓｉｉ、コクシジオイデス症）；アレルゲンＴｒｉ  ｒ  ２、熱ショックタンパク質６０  Ｈｓｐ６０、真菌アクチンＡｃｔ、抗原Ｔｒｉ  ｒ２、抗原Ｔｒｉ  ｒ4、抗原Ｔｒｉ  ｔ１、タンパク質ＩＶ、グリセロール−３−リン酸デヒドロゲナーゼＧｐｄ１、オスモセンサー（ｏｓｍｏｓｅｎｓｏｒ）ＨｗＳｈｏ１Ａ、オスモセンサーＨｗＳｈｏ１Ｂ、ヒスチジンキナーゼＨｗＨｈｋ７Ｂ、アレルゲンＭａｌａ  ｓ  １、アレルゲンＭａｌａ  ｓ  １１、チオレドキシンＴｒｘ  Ｍａｌａ  ｓ  １３、アレルゲンＭａｌａ  ｆ、アレルゲンＭａｌａ  ｓ（通常、白癬菌属の種、エピデルモフィトン属の種，マラセジア属の種，Ｈｏｒｔａｅａ  ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ、Ｄｅｒｍａｔｏｐｈｙｔｏｓｉｓ）；タンパク質ＥＧ９５、タンパク質ＥＧ１０、タンパク質ＥＧ１８、タンパク質ＥｇＡ３１、タンパク質ＥＭ１８、抗原ＥＰＣ１、抗原Ｂ、抗原５、タンパク質Ｐ２９、タンパク質１４−３−３、８ｋＤａのタンパク質、ミオフィリン（ｍｙｏｐｈｉｌｉｎ）、熱ショックタンパク質２０  ＨＳＰ２０、糖タンパク質ＧＰ−８９、脂肪酸結合タンパク質ＦＡＰＢ（エキノコックス属、エキノコックス症）；主要表面タンパク質２  ＭＳＰ２、主要表面タンパク質４  ＭＳＰ４、ＭＳＰ  バリアントＳＧＶ１、ＭＳＰ  バリアントＳＧＶ２、外膜タンパク質ＯＭＰ、外膜（ｍｅｍｂｒａｎｄｅ）タンパク質１９  ＯＭＰ−１９、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１−２、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１Ｂ、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１〜３、Ｅｒｕｍ２５１０コードタンパク質、タンパク質ＧｒｏＥＬ、タンパク質ＧｒｏＥＳ、３０−ｋＤＡの主要外膜タンパク質、ＧＥ  １００ｋＤａのタンパク質、ＧＥ  １３０ｋＤａのタンパク質、ＧＥ  １６０ｋＤａのタンパク質（エールリヒア属、エールリヒア症）；分泌型抗原ＳａｇＡ、ｓａｇＡ様タンパク質ＳａｌＡおよびＳａｌＢ、コラーゲンアドヘシンＳｃｍ、表面タンパク質Ｆｍｓ１（ＥｂｐＡ（ｆｍ）、Ｆｍｓ５（ＥｂｐＢ（ｆｍ）、Ｆｍｓ９（ＥｐｂＣ（ｆｍ）およびＦｍｓ１０、タンパク質ＥｂｐＣ（ｆｍ）、９６ｋＤａの免疫防御糖タンパク質Ｇ１（エンテロコッカス属、エンテロコッカス感染症）；ゲノムポリプロテイン、ポリメラーゼ３Ｄ、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ１、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ２、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ３、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ４、プロテアーゼ２Ａ、プロテアーゼ３Ｃ（エンテロウイルス属、エンテロウイルス感染症）；外膜タンパク質ＯＭ、６０ｋＤａの外膜タンパク質、細胞表面抗原ＯｍｐＡ、細胞表面抗原ＯｍｐＢ（ｓｃａ５）、１３４ｋＤａの外膜タンパク質、３１ｋＤａの外膜タンパク質、２９．５ｋＤａの外膜タンパク質、細胞表面タンパク質ＳＣＡ４、細胞表面タンパク質Ａｄｒ1（ＲＰ８２７）、細胞表面タンパク質Ａｄｒ２（ＲＰ８２８）、細胞表面タンパク質ＳＣＡ１、浸潤タンパク質ｉｎｖＡ、細胞分裂タンパク質ｆｔｓ、分泌タンパク質ｓｅｃ  ０ファミリー、ビルレンスタンパク質ｖｉｒＢ、ｔｌｙＡ、ｔｌｙＣ、パーブリン様タンパク質Ｐｌｐ、プレタンパク質トランスロカーゼＳｅｃＡ、１２０ｋＤａの表面タンパク質抗原ＳＰＡ、１３８ｋＤの複合体抗原、主要１００−ｋＤタンパク質（タンパク質Ｉ）、細胞質内タンパク質Ｄ、防御表面タンパク質抗原ＳＰＡ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ、発疹チフス）；エプスタイン・バール核抗原（ＥＢＮＡ−１、ＥＢＮＡ−２、ＥＢＮＡ−３Ａ、ＥＢＮＡ−３Ｂ、ＥＢＮＡ−３Ｃ、ＥＢＮＡ−リーダータンパク質（ＥＢＮＡ−ＬＰ））、潜在膜タンパク質（ＬＭＰ−１、ＬＭＰ−２Ａ、ＬＭＰ−２Ｂ）、初期抗原ＥＢＶ−ＥＡ、膜抗原ＥＢＶ−ＭＡ、ウイルスカプシド抗原ＥＢＶ−ＶＣＡ、アルカリヌクレアーゼＥＢＶ−ＡＮ、糖タンパク質Ｈ、糖タンパク質ｇｐ３５０、糖タンパク質ｇｐ１１０、糖タンパク質ｇｐ４２、糖タンパク質ｇＨｇＬ、糖タンパク質ｇＢ（エプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）、エプスタイン・バールウイルス感染性単核球症）；カプシドタンパク質ＶＰ２、カプシドタンパク質ＶＰ１、主要タンパク質ＮＳ１（パルボウイルスＢ１９、伝染性紅斑（第５病））；ｐｐ６５抗原、糖タンパク質１０５、主要カプシドタンパク質、エンベロープ糖タンパク質Ｈ、タンパク質Ｕ５１（ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）およびヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ−７）、突発性発疹）；チオレドキシン−グルタチオンレダクターゼＴＧＲ、カテプシンＬ１およびＬ2、Ｋｕｎｉｔｚ型タンパク質ＫＴＭ、ロイシンアミノペプチダーゼＬＡＰ、システインプロテイナーゼＦａｓ２、サポニン様タンパク質−２  ＳＡＰ−２、チオレドキシンペルオキシダーゼＴＰｘ、Ｐｒｘ−１、Ｐｒｘ−���、カテプシンｌ  システインプロテイナーゼＣＬ３、プロテアーゼカテプシンＬ  ＣＬ１、ホスホグリセリン酸キナーゼＰＧＫ、２７ｋＤａの分泌タンパク質、６０ｋＤａのタンパク質ＨＳＰ３５α、グルタチオントランスフェラーゼＧＳＴ、２８．５ｋＤａのテグメントａｌ抗原２８．５ｋＤａのＴＡ、カテプシンＢ３プロテアーゼＣａｔＢ３、Ｉ型シスタチンステフィン（ｓｔｅｆｉｎ）−１、カテプシンＬ５、カテプシンＬ１ｇおよびカテプシンＢ、脂肪酸結合タンパク質ＦＡＢＰ、ロイシンアミノペプチダーゼＬＡＰ（Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｈｅｐａｔｉｃａおよびＦａｓｃｉｏｌａ  ｇｉｇａｎｔｉｃａ、肝蛭症）；プリオンタンパク質（ＦＦＩプリオン、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ））；毒液アレルゲンホモログ様タンパク質ＶＡＬ−１、豊富な幼虫の（ａｂｕｎｄａｎｔ  ｌａｒｖａｌ）転写物ＡＬＴ−１、豊富な幼虫の転写物ＡＬＴ−２、チオレドキシンペルオキシダーゼＴＰＸ、スズメバチアレルゲンホモログＶＡＨ、チオレドキシン（ｔｈｉｏｒｄｏｘｉｎ）ペルオキシダーゼ２  ＴＰＸ−２、抗原性タンパク質ＳＸＰ（ペプチドＮ、Ｎ１、Ｎ２およびＮ３）、活性化結合タンパク質−１  ＡＳＰ−１、チオレドキシンＴＲＸ、トランスグルタミナーゼＢｍＴＧＡ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼＧＳＴ、ミオシン、スズメバチアレルゲンホモログＶＡＨ、１７５ｋＤａのコラーゲナーゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼＧＡＰＤＨ、クチクラコラーゲンＣｏｌ−４、分泌型幼虫酸性タンパク質ＳＬＡＰｓ、キチナーゼＣＨＩ−１、マルトース結合タンパク質ＭＢＰ、解糖酵素フルクトース−１，６−ビスリン酸アルドラーゼＦｂａ、トロポミオシンＴＭＹ−１、線虫特異的遺伝子産物ＯｖＢ２０、オンコシスタチンＣＰＩ−２、Ｃｏｘ−２（フィラリア上科、フィラリア症）；ホスホリパーゼＣ  ＰＬＣ、熱不安定性エンテロトキシンＢ、ι毒素成分Ｉｂ、タンパク質ＣＰＥ１２８１  、ピルビン酸フェレドキシンオキシドレダクターゼ、伸長因子Ｇ  ＥＦ−Ｇ、パーフリンゴリジンＯ  Ｐｆｏ、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼＧａｐＣ、フルクトース−ビスリン酸アルドラーゼＡｌｆ２、ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓエンテロトキシンＣＰＥ、α毒素ＡＴ、αトキソイドＡＴｄ、ε−トキソイドＥＴｄ、タンパク質ＨＰ、大細胞毒素Ｔｐｅ
Ｌ、エンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＮａｇｌｕ、ホスホグリセロムターゼＰｇｍ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓによる食中毒）；ロイコトキシンｌｋｔＡ、接着ＦａｄＡ、外膜タンパク質ＲａｄＤ、高分子量アルギニン結合タンパク質（フゾバクテリウム属、フゾバクテリウム感染症）；ホスホリパーゼＣ  ＰＬＣ、熱不安定性エンテロトキシンＢ、ι毒素成分Ｉｂ、タンパク質ＣＰＥ１２８１、ピルビン酸フェレドキシンオキシドレダクターゼ、伸長因子Ｇ  ＥＦ−Ｇ、パーフリンゴリジンＯ  Ｐｆｏ、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼＧａｐＣ、フルクトース−ビスリン酸アルドラーゼＡｌｆ２、ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓエンテロトキシンＣＰＥ、α毒素ＡＴ、αトキソイドＡＴｄ、ε−トキソイドＥＴｄ、タンパク質ＨＰ、大細胞毒素ＴｐｅＬ、エンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＮａｇｌｕ、ホスホグリセロムターゼＰｇｍ（通常、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ；他のクロストリジウム種、ガス壊疽（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ  ｍｙｏｎｅｃｒｏｓｉｓ））；リパーゼＡ、リパーゼＢ、ペルオキシダーゼＤｅｃ１（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｃａｎｄｉｄｕｍ、ゲオトリクム症）；プリオンタンパク質（ＧＳＳプリオン、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー症候群（ＧＳＳ））；嚢胞壁タンパク質ＣＷＰ１、ＣＷＰ２、ＣＷＰ３、バリアント表面タンパク質ＶＳＰ、ＶＳＰ１、ＶＳＰ２、ＶＳＰ３、ＶＳＰ４、ＶＳＰ５、ＶＳＰ６、５６ｋＤａ抗原、ピルビン酸フェレドキシンオキシドレダクターゼＰＦＯＲ、アルコールデヒドロゲナーゼＥ  ＡＤＨＥ、α−ジアルジン（ｇｉａｒｄｉｎ）、α８−ジアルジン、α１−ギアルジン（ｇｕｉａｒｄｉｎ）、β−ジアルジン、システインプロテアーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼＧＳＴ、アルギニンデイミナーゼＡＤＩ、フルクトース−１，６−ビスホスファトアルドラーゼＦＢＡ、Ｇｉａｒｄｉａ  ｔｒｏｐｈｏｚｏｉｔｅ抗原ＧＴＡ（ＧＴＡ１、ＧＴＡ２）、オルニチンカルボキシｌトランスフェラーゼＯＣＴ、筋線維（ｓｔｒｉａｔｅｄ  ｆｉｂｅｒ）−アセンブリン（ａｓｓｅｂｌｉｎ）様タンパク質ＳＡＬＰ、ウリジンホスホリル様タンパク質ＵＰＬ、α−チューブリン、β−チューブリン（Ｇｉａｒｄｉａ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｉｓ、ランブル鞭毛虫症）；ＡＢＣトランスポーターファミリーの構成員（ＬｏｌＣ、ＯｐｐＡおよびＰｏｔＦ）、推定リポタンパク質放出系膜貫通タンパク質ＬｏｌＣ／Ｅ、フラジェリンＦｌｉＣ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ細胞内運動性Ａ  ＢｉｍＡ、細菌の伸長因子−Ｔｕ  ＥＦ−Ｔｕ、１７ｋＤａのＯｍｐＡ様タンパク質、ｂｏａＡコードタンパク質（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍａｌｌｅｉ、鼻疽）；シクロフィリンＣｙＰ、２４ｋＤａの第３期幼虫タンパク質（ｐｒｏｔｉｅｎ）ＧＳ２４、排出−分泌産物ＥＳＰ（４０、８０、１２０および２０８ｋＤａ）（Ｇｎａｔｈｏｓｔｏｍａ  ｓｐｉｎｉｇｅｒｕｍおよびＧｎａｔｈｏｓｔｏｍａ  ｈｉｓｐｉｄｕｍ、顎口虫症）；ピリンタンパク質、マイナーピリン結合サブユニットｐｉｌＣ、主要ピリンサブユニットおよびバリアントｐｉｌＥ、ｐｉｌＳ、相変異タンパク質ｐｏｒＡ、Ｐｏｒｉｎ  Ｂ  ＰｏｒＢ、タンパク質ＴｒａＤ、ナイセリア菌外膜抗原Ｈ．８、７０ｋＤａ抗原、主要外膜タンパク質ＰＩ、外膜タンパク質ＰｌＡおよびＰｌＢ、Ｗ抗原、表面タンパク質Ａ  ＮｓｐＡ、トランスフェリン結合タンパク質ＴｂｐＡ、トランスフェリン結合タンパク質ＴｂｐＢ  、ＰＢＰ２、ｍｔｒＲコードタンパク質、ｐｏｎＡコードタンパク質、膜パーミアーゼＦｂｐＢＣ、ＦｂｐＡＢＣタンパク質系、ＬｂｐＡＢタンパク質、外膜タンパク質Ｏｐａ、外膜輸送体ＦｅｔＡ、鉄抑制調節因子ＭｐｅＲ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、淋病）；外膜タンパク質Ａ  ＯｍｐＡ、外膜タンパク質Ｃ  ＯｍｐＣ、外膜タンパク質Ｋ１７  ＯｍｐＫ１７（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ、鼡径部肉芽腫（ドノヴァン症））；フィブロネクチン結合タンパク質Ｓｆｂ、フィブロネクチン／フィブリノゲン結合タンパク質ＦＢＰ５４、フィブロネクチン結合タンパク質ＦｂａＡ、Ｍタンパク質１型Ｅｍｍ１、Ｍタンパク質型６  Ｅｍｍ６、免疫グロブリン結合タンパク質３５  Ｓｉｂ３５、表面タンパク質Ｒ２８  ＳｐＲ２８、スーパーオキシド・ジスムターゼＳＯＤ、Ｃ５ａ  ペプチダーゼＳｃｐＡ、抗原Ｉ／ＩＩ  ＡｇＩ／ＩＩ、アドヘシンＡｓｐＡ、Ｇ関連α２−マクログロブリン結合タンパク質ＧＲＡＢ、表面細繊維タンパク質Ｍ５（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ａ群連鎖球菌感染症）；Ｃタンパク質β抗原、アルギニンデイミナーゼタンパク質、アドヘシンＢｉｂＡ、１０５ｋＤＡのタンパク質ＢＰＳ、表面抗原ｃ、表面抗原Ｒ、表面抗原Ｘ、トリプシン抵抗性タンパク質Ｒ1、トリプシン抵抗性タンパク質Ｒ3、トリプシン抵抗性タンパク質Ｒ4、表面免疫原性タンパク質Ｓｉｐ、表面タンパク質Ｒｉｂ、ロイシンリッチリピートタンパク質ＬｒｒＧ、セリンリッチリピートタンパク質Ｓｒｒ−２、Ｃタンパク質α−抗原Ｂｃａ、β抗原Ｂａｇ、表面抗原ε、α様タンパク質ＡＬＰ１、α様タンパク質ＡＬＰ５  表面抗原δ、α様タンパク質ＡＬＰ２、α様タンパク質ＡＬＰ３、α様タンパク質ＡＬＰ４、Ｃβタンパク質Ｂａｃ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｂ群連鎖球菌感染症）；トランスフェリン結合タンパク質２  Ｔｂｐ２、ホスファターゼＰ４、外膜タンパク質Ｐ６、ペプチドグリカン関連リポタンパク質Ｐａｌ、タンパク質Ｄ、タンパク質Ｅ、接着および浸透タンパク質Ｈａｐ、外膜タンパク質２６  Ｏｍｐ２６、外膜タンパク質Ｐ５（フィンブリン）、外膜タンパク質Ｄ１５、外膜タンパク質ＯｍｐＰ２、５’−ヌクレオチダーゼＮｕｃＡ、外膜タンパク質Ｐ１、外膜タンパク質Ｐ２、外膜リポタンパク質Ｐｃｐ、リポタンパク質Ｅ、外膜タンパク質Ｐ４、フクロ（ｆｕｃｕｌｏ）キナーゼＦｕｃＫ、［Ｃｕ，Ｚｎ］−スーパーオキシド・ジスムターゼＳｏｄＣ、プロテアーゼＨｔｒＡ、タンパク質Ｏ１４５、α−ガラクトシルセラミド（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、インフルエンザ菌感染症）；ポリメラーゼ３Ｄ、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ１、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ２、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ３、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ４、プロテアーゼ２Ａ、プロテアーゼ３Ｃ（エンテロウイルス、主にコクサッキーＡ群ウイルスおよびエンテロウイルス７１（ＥＶ７１）、手、口蹄疫（ＨＦＭＤ））；ＲＮＡポリメラーゼＬ、タンパク質Ｌ、糖タンパク質Ｇｎ、糖タンパク質Ｇｃ、ヌクレオカプシドタンパク質Ｓ、エンベロープ糖タンパク質Ｇ１、核タンパク質ＮＰ、タンパク質Ｎ、ポリプロテインＭ（シンノンブルウイルス、ハンタウイルス、ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ））；熱ショックタンパク質ＨｓｐＡ、熱ショックタンパク質ＨｓｐＢ、クエン酸合成酵素ＧｌｔＡ、タンパク質ＵｒｅＢ、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ６０、好中球活性化タンパク質ＮＡＰ、カタラーゼＫａｔＡ、液胞化細胞毒素ＶａｃＡ、ウレアーゼα  ＵｒｅＡ、ウレアーゼβＵｒｅｂ、タンパク質Ｃｐｎ１０、タンパク質ｇｒｏＥＳ、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ１０、タンパク質ＭｏｐＢ、細胞毒性関連１０ｋＤａのタンパク質ＣＡＧ、３６ｋＤａ抗原、β−ラクタマーゼＨｃｐＡ、Ｂｅｔａ−ラクタマーゼＨｃｐＢ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、ピロリ菌感染症）；膜内在性タンパク質、凝集傾向タンパク質、Ｏ−抗原、毒素抗原Ｓｔｘ２Ｂ、毒素抗原Ｓｔｘ１Ｂ、接着抗原断片Ｉｎｔ２８、タンパク質ＥｓｐＡ、タンパク質ＥｓｐＢ、インチミン、タンパク質Ｔｉｒ、タンパク質ＩｎｔＣ３００、タンパク質Ｅａｅ（大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７、Ｏ１１１およびＯ１０４：Ｈ４、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ））；ＲＮＡポリメラーゼＬ、タンパク質Ｌ、糖タンパク質Ｇｎ、糖タンパク質Ｇｃ、ヌクレオカプシドタンパク質Ｓ、エンベロープ糖タンパク質Ｇ１、核タンパク質ＮＰ、タンパク質Ｎ、ポリプロテインＭ（ブニヤウイルス科、腎症候性出血熱（ＨＦＲＳ））；糖タンパク質Ｇ、マトリックスタンパク質Ｍ、核タンパク質Ｎ、融合タンパク質Ｆ、ポリメラーゼＬ、タンパク質Ｗ、タンパク質Ｃ、ホスホタンパク質ｐ、非構造タンパク質Ｖ（ヘニパウイルス（ヘンドラウイルスニパウイルス）、ヘニパウイルス感染症）；ポリプロテイン、糖タンパク質（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｎ）Ｇｐ２、Ａ型肝炎表面抗原ＨＢＡｇ、タンパク質２Ａ、ウイルスタンパク質ＶＰ１、ウイルスタンパク質ＶＰ２、ウイルスタンパク質ＶＰ３、ウイルスタンパク質ＶＰ４、タンパク質Ｐ１Ｂ、タンパク質Ｐ２Ａ、タンパク質Ｐ３ＡＢ、タンパク質Ｐ３Ｄ（Ａ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎）；Ｂ型肝炎表面抗原ＨＢｓＡｇ、Ｂ型肝炎コア抗原ＨｂｃＡｇ、ポリメラーゼ、タンパク質Ｈｂｘ、ｐｒｅＳ２ミドル（ｍｉｄｄｌｅ）表面タンパク質、表面タンパク質Ｌ、ラージ（ｌａｒｇｅ）Ｓタンパク質、ウイルスタンパク質ＶＰ１、ウイルスタンパク質ＶＰ２、ウイルスタンパク質ＶＰ３、ウイルスタンパク質ＶＰ４（Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｂ型肝炎）；エンベロープ糖タンパク質Ｅ１  ｇｐ３２  ｇｐ３５  、エンベロープ糖タンパク質Ｅ２  ＮＳ１  ｇｐ６８  ｇｐ７０、カプシドタンパク質Ｃ  、コアタンパク質Ｃｏｒｅ、ポリプロテイン、ウイルスタンパク質ＶＰ１、ウイルスタンパク質ＶＰ２、ウイルスタンパク質ＶＰ３、ウイルスタンパク質ＶＰ４、抗原Ｇ、タンパク質ＮＳ３、タンパク質ＮＳ５Ａ、（Ｃ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎）；ウイルスタンパク質ＶＰ１、ウイルスタンパク質ＶＰ２、ウイルスタンパク質ＶＰ３、ウイルスタンパク質ＶＰ４、ラージ肝炎δ抗原、スモール（ｓｍａｌｌ）肝炎δ抗原（Ｄ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎）；ウイルスタンパク質ＶＰ１、ウイルスタンパク質ＶＰ２、ウイルスタンパク質ＶＰ３、ウイルスタンパク質ＶＰ４、カプシドタンパク質Ｅ２（Ｅ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎）；糖タンパク質Ｌ  ＵＬ１、ウラシル−ＤＮＡグリコシラーゼＵＬ2、タンパク質ＵＬ３、タンパク質ＵＬ４、ＤＮＡ  複製タンパク質ＵＬ５、門脈タンパク質ＵＬ６、ビリオン成熟タンパク質ＵＬ７、ＤＮＡヘリカーゼＵＬ８、複製起点結合タンパク質ＵＬ９、糖タンパク質Ｍ  ＵＬ１０、タンパク質ＵＬ１１、アルカリｅｘｏヌクレアーゼＵＬ１２、セリン−トレオニンプロテインキナーゼＵＬ１３、テグメントタンパク質ＵＬ１４、ターミナーゼＵＬ１５、テグメントタンパク質ＵＬ１６、タンパク質ＵＬ１７、カプシドタンパク質ＶＰ２３  ＵＬ１８、主要カプシドタンパク質ＶＰ５  ＵＬ１９、膜タンパク質ＵＬ2０、テグメントタンパク質ＵＬ2１、Ｇｌｙｃｏタンパク質Ｈ（ＵＬ２２）、チミジンキナーゼＵＬ２３、タンパク質ＵＬ２４、タンパク質ＵＬ２５、カプシドタンパク質Ｐ４０（ＵＬ２６、ＶＰ２４、ＶＰ２２Ａ）、糖タンパク質Ｂ（ＵＬ２７）、ＩＣＰ１８．５タンパク質（ＵＬ２８）、主要ＤＮＡ結合タンパク質ＩＣＰ８（ＵＬ２９）、ＤＮＡポリメラーゼＵＬ３０、核マトリックスタンパク質ＵＬ３１、エンベロープ糖タンパク質ＵＬ３２、タンパク質ＵＬ３３、ｉｎｎｅｒ  核膜タンパク質ＵＬ３４、カプシドタンパク質ＶＰ２６（ＵＬ３５）、ラージテグメントタンパク質ＵＬ３６、カプシドアセンブリタンパク質ＵＬ３７、ＶＰ１９Ｃタンパク質（ＵＬ３８）、リボヌクレオチドレダクターゼ（大サブユニットサブユニット）ＵＬ３９、リボヌクレオチドレダクターゼ（小サブユニット）ＵＬ４０、テグメントタンパク質／ビリオン宿主シャットオフＶＨＳタンパク質（ＵＬ４１）、ＤＮＡポリメラーゼプロセッシビリティ（ｐｒｏｃｅｓｓｉｖｉｔｙ）因子ＵＬ４２、膜タンパク質ＵＬ４３、糖タンパク質Ｃ（ＵＬ４４）、膜タンパク質ＵＬ４５、テグメントタンパク質ＶＰ１１／１２（ＵＬ４６）、テグメントタンパク質ＶＰ１３／１４（ＵＬ４７）、ビリオン成熟タンパク質ＶＰ１６（ＵＬ４８、α−ＴＩＦ）、エ
ンベロープタンパク質ＵＬ４９、ｄＵＴＰジホスファターゼＵＬ５０、テグメントタンパク質ＵＬ５１、ＤＮＡヘリカーゼ／プライマーゼ複合体タンパク質ＵＬ５２、糖タンパク質Ｋ（ＵＬ５３）、転写調節タンパク質ＩＥ６３（ＩＣＰ２７、ＵＬ５４）、タンパク質ＵＬ５５、タンパク質ＵＬ５６、ウイルスの複製タンパク質ＩＣＰ２２（ＩＥ６８、ＵＳ１）、タンパク質ＵＳ２、セリン／トレオニン−プロテインキナーゼＵＳ３、糖タンパク質Ｇ（ＵＳ４）、糖タンパク質Ｊ（ＵＳ５）、糖タンパク質Ｄ（ＵＳ６）、糖タンパク質Ｉ（ＵＳ７）、糖タンパク質Ｅ（ＵＳ８）、テグメントタンパク質ＵＳ９、カプシド／テグメントタンパク質ＵＳ１０、Ｖｍｗ２１タンパク質（ＵＳ１１）、ＩＣＰ４７タンパク質（ＩＥ１２、ＵＳ１２）、主要転写アクチベーター  ＩＣＰ４（ＩＥ１７５、ＲＳ１）、Ｅ３ユビキチンリガーゼＩＣＰ０（ＩＥ１１０）、潜伏期間関連タンパク質１  ＬＲＰ１、潜伏期間関連タンパク質２  ＬＲＰ２、ニューロビルレンス因子ＲＬ１（ＩＣＰ３４．５）、潜伏期間結合転写物ＬＡＴ（単純ヘルペスウイルス１および２（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、単純ヘルペス）；熱ショックタンパク質Ｈｓｐ６０、細胞表面タンパク質Ｈ１Ｃ、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ型ＤｐｐＩＶ、Ｍ抗原、７０ｋＤａのタンパク質、１７ｋＤａのヒストン様タンパク質（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、ヒストプラスマ症）；脂肪酸およびレチノール結合タンパク質−１  ＦＡＲ−１、組織阻害薬のメタロプロテイナーゼＴＩＭＰ（ＴＭＰ）、システインプロテイナーゼＡＣＥＹ−１、システインプロテイナーゼＡＣＣＰ−１、表面抗原Ａｃ−１６、分泌型タンパク質２  ＡＳＰ−２、メタロプロテアーゼ１  ＭＴＰ−１、アスパルチルプロテアーゼ阻害薬  ＡＰＩ−１、表面結合抗原ＳＡＡ−１、表面結合抗原ＳＡＡ−２、成人特異的分泌型第Ｘａ因子、セリンプロテアーゼ阻害薬抗凝固因子ＡＰ、カテプシンＤ様アスパラギン酸プロテアーゼＡＲＲ−１、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼＧＳＴ、アスパラギン酸プロテアーゼＡＰＲ−１、アセチルコリンエステラーゼＡＣｈＥ（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅおよびＮｅｃａｔｏｒ  ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、鉤虫感染症）；タンパク質ＮＳ１、タンパク質ＮＰ１、タンパク質ＶＰ１、タンパク質ＶＰ２、タンパク質ＶＰ３（ヒトボカウイルス（ＨＢｏＶ）、ヒトボカウイルス感染症）；主要表面タンパク質２  ＭＳＰ２、主要表面タンパク質４  ＭＳＰ４、ＭＳＰ  バリアントＳＧＶ１、ＭＳＰ  バリアントＳＧＶ２、外膜タンパク質ＯＭＰ、外膜（ｍｅｍｂｒａｎｄｅ）タンパク質１９  ＯＭＰ−１９、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１−２、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１Ｂ、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１〜３、Ｅｒｕｍ２５１０コードタンパク質、タンパク質ＧｒｏＥＬ、タンパク質ＧｒｏＥＳ、３０−ｋＤＡの主要外膜タンパク質、ＧＥ  １００ｋＤａのタンパク質、ＧＥ  １３０ｋＤａのタンパク質、ＧＥ  １６０ｋＤａのタンパク質（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｅｗｉｎｇｉｉ、ヒトのエールリッヒ症）；主要表面タンパク質１〜５（ＭＳＰ１ａ、ＭＳＰ１ｂ、ＭＳＰ２、ＭＳＰ３、ＭＳＰ４、���ＳＰ５）、ＩＶ型分泌（ｓｅｃｒｅｏｔｉｏｎ）系タンパク質ＶｉｒＢ２、ＶｉｒＢ７、ＶｉｒＢ１１、ＶｉｒＤ４（Ａｎａｐｌａｓｍａ  ｐｈａｇｏｃｙｔｏｐｈｉｌｕｍ、ヒト顆粒球アナプラズマ症（ＨＧＡ））；タンパク質ＮＳ１、スモール疎水性タンパク質ＮＳ２、ＳＨタンパク質、融合タンパク質Ｆ、糖タンパク質Ｇ、マトリックスタンパク質Ｍ、マトリックスタンパク質Ｍ２−１、マトリックスタンパク質Ｍ２−２、ホスホタンパク質Ｐ、核タンパク質Ｎ、ポリメラーゼＬ（ヒトメタニューモウイルス（ｈＭＰＶ）、ヒトメタニューモウイルス感染症）；主要表面タンパク質２  ＭＳＰ２、主要表面タンパク質４  ＭＳＰ４、ＭＳＰ  バリアントＳＧＶ１、ＭＳＰ  バリアントＳＧＶ２、外膜タンパク質ＯＭＰ、外膜（ｍｅｍｂｒａｎｄｅ）タンパク質１９  ＯＭＰ−１９、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１−２、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１Ｂ、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１〜３、Ｅｒｕｍ２５１０コードタンパク質、タンパク質ＧｒｏＥＬ、タンパク質ＧｒｏＥＳ、３０−ｋＤＡの主要外膜タンパク質、ＧＥ  １００ｋＤａのタンパク質、ＧＥ  １３０ｋＤａのタンパク質、ＧＥ  １６０ｋＤａのタンパク質（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｃｈａｆｆｅｅｎｓｉｓ、ヒト単球性エーリキア症）；複製タンパク質Ｅ１、調節タンパク質Ｅ２、タンパク質Ｅ３、タンパク質Ｅ４、タンパク質Ｅ５、タンパク質Ｅ６、タンパク質Ｅ７、タンパク質Ｅ８、主要カプシドタンパク質Ｌ１、マイナーカプシドタンパク質Ｌ2（ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染症）；融合タンパク質Ｆ、ヘマグルチニン−ノイラミニダーゼＨＮ、糖タンパク質Ｇ、マトリックスタンパク質Ｍ、ホスホタンパク質Ｐ、核タンパク質Ｎ、ポリメラーゼＬ（ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス感染症）；血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、Ｎｕｃｌｅｏタンパク質（ＮＰ）、Ｍ１タンパク質、Ｍ２タンパク質、ＮＳ１タンパク質、ＮＳ２タンパク質（ＮＥＰタンパク質：核輸送タンパク質）、ＰＡタンパク質、ＰＢ１タンパク質（ポリメラーゼ塩基性１タンパク質）、ＰＢ１−Ｆ２タンパク質およびＰＢ２タンパク質（オルトミクソウイルス科、インフルエンザウイルス（流感））；ゲノムポリプロテイン、タンパク質Ｅ、タンパク質Ｍ、カプシドタンパク質Ｃ（日本脳炎ウイルス、日本脳炎）；ＲＴＸ毒素、ＩＶ型線毛、主要線毛サブユニットＰｉｌＡ、調節転写因子ＰｉｌＳおよびＰｉｌＲ、タンパク質σ５４、外膜タンパク質（Ｋｉｎｇｅｌｌａ  ｋｉｎｇａｅ、Ｋｉｎｇｅｌｌａ  ｋｉｎｇａｅ感染症）；プリオンタンパク質（Ｋｕｒｕ  ｐｒｉｏｎ、クールー病）；核タンパク質Ｎ、ポリメラーゼＬ、マトリックスタンパク質Ｚ、糖タンパク質ＧＰ（ラッサウイルス、ラッサ熱）；ペプチドグリカン関連リポタンパク質ＰＡＬ、６０ｋＤａのシャペロニンＣｐｎ６０（ｇｒｏＥＬ、ＨｓｐＢ）、ＩＶ型ピリンＰｉｌＥ、外膜タンパク質ＭＩＰ、主要外膜タンパク質ＭｏｍｐＳ、亜鉛メタロプロテイナーゼＭＳＰ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、レジオネラ症（在郷軍人病、ポンティアック熱））；Ｐ４  ヌクレアーゼ、タンパク質ＷＤ、リボヌクレオチドレダクターゼＭ２、表面膜  糖タンパク質Ｐｇ４６、システインプロテイナーゼＣＰ、グルコース調節型タンパク質７８  ＧＲＰ−７８、病期（ｓｔａｇｅ）特異的Ｓ抗原様タンパク質Ａ２、ＡＴＰａｓｅ  Ｆ１、β−チューブリン、熱ショックタンパク質７０  Ｈｓｐ７０、ＫＭＰ−１１、糖タンパク質ＧＰ６３、タンパク質ＢＴ１、ヌクレオシドヒドラーゼＮＨ、細胞表面タンパク質Ｂ１、リボソームタンパク質Ｐ１様タンパク質Ｐ１、ステロール２４−ｃ−メチルトランスフェラーゼＳＭＴ、ＬＡＣＫタンパク質、ヒストンＨ１、ＳＰＢ１タンパク質、チオール特異的抗酸化因子ＴＳＡ、タンパク質抗原ＳＴｌ１、シグナルペプチダーゼＳＰ、ヒストンＨ２Ｂ、表面抗原ＰＳＡ−２、システインプロテイナーゼｂ  Ｃｐｂ（リーシュマニア属、リーシュマニア症）；主要膜タンパク質Ｉ、セリンリッチ抗原−  ４５ｋＤａ、１０ｋＤａのカペロニン（ｃａｐｅｒｏｎｉｎ）ＧｒｏＥＳ、ＨＳＰｋＤａ抗原、アミノ−オキソノナン酸合成酵素ＡＯＮＳ、タンパク質レコンビナーゼＡ  ＲｅｃＡ、アセチル−／プロピオニル−補酵素Ａカルボキシラーゼα、アラニンラセマーゼ、６０ｋＤａのシャペロニン２、ＥＳＡＴ−６様タンパク質ＥｃｘＢ（Ｌ−ＥＳＡＴ−６）、タンパク質Ｌｓｒ２、タンパク質ＭＬ０２７６、ヘパリン結合ヘマグルチニンＨＢＨＡ、熱ショックタンパク質６５  Ｈｓｐ６５、ｍｙｃＰ１またはＭＬ００４１コードタンパク質、ｈｔｒＡ２またはＭＬ０１７６コードタンパク質、ｈｔｒＡ４またはＭＬ２６５９コードタンパク質、ｇｃｐまたはＭＬ０３７９コードタンパク質、ｃｌｐＣまたはＭＬ０２３５コードタンパク質（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅおよびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ、らい病）；外膜タンパク質ＬｉｐＬ３２、膜タンパク質ＬＩＣ１０２５８、膜タンパク質ＬＰ３０、膜タンパク質ＬＩＣ１２２３８、Ｏｍｐａ様タンパク質Ｌｓａ６６、表面タンパク質ＬｉｇＡ、表面タンパク質ＬｉｇＢ、主要外膜タンパク質ＯｍｐＬ１、外膜タンパク質ＬｉｐＬ４１、タンパク質ＬｉｇＡｎｉ、表面タンパク質ＬｃｐＡ、接着タンパク質ＬｉｐＬ５３、外膜タンパク質ＵｐＬ３２、表面タンパク質Ｌｓａ６３、フラジェリンＦｌａＢ１、膜（ｍｅｍｂｒａｎ）リポタンパク質ＬｉｐＬ２１、膜タンパク質ｐＬ４０、レプトスピラ表面アドヘシンＬｓａ２７、外膜タンパク質ＯｍｐＬ３６、外膜タンパク質ＯｍｐＬ３７、外膜タンパク質ＯｍｐＬ４７、外膜タンパク質ＯｍｐＬ５４、アシルトランスフェラーゼＬｐｘＡ（レプトスピラ属、レプトスピラ症）；リステリオリシンＯ前駆体Ｈｌｙ（ＬＬＯ）、浸潤結合タンパク質Ｉａｐ（Ｐ６０）、リステリオリシン調節タンパク質ＰｒｆＡ、亜鉛メタロプロテイナーゼＭｐｌ、ホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼＣ  ＰＬＣ（ＰｌｃＡ、ＰｌｃＢ）、Ｏ−アセチルトランスフェラーゼＯａｔ、ＡＢＣ−トランスポーターパーミアーゼＩｍ．Ｇ＿１７７１、接着タンパク質ＬＡＰ、ＬＡＰ受容体Ｈｓｐ６０、アドヘシンＬａｐＢ、溶血素リステリオリシンＯ  ＬＬＯ、タンパク質ＡｃｔＡ、インターナリンＡ  ＩｎｌＡ、タンパク質ｌｎｌＢ（Ｌｉ���ｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、リステリア症）；外部表面タンパク質Ａ  ＯｓｐＡ、外部表面タンパク質ＯｓｐＢ、外部表面タンパク質ＯｓｐＣ、デコリン結合タンパク質Ａ  ＤｂｐＡ、デコリン結合タンパク質Ｂ  ＤｂｐＢ、鞭毛フィラメント４１ｋＤａのコアタンパク質Ｆｌａ、塩基性膜タンパク質Ａ  ＢｍｐＡ（免疫優性抗原Ｐ３９）、外部表面２２ｋＤａのリポタンパク質前駆体（抗原ＩＰＬＡ７）、いろいろな表面リポタンパク質ｖｌｓＥ（通常、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉおよび他のボレリア種、ライム疾患（ライムボレリア症））；毒液アレルゲンホモログ様タンパク質ＶＡＬ−１、豊富な幼虫の転写物ＡＬＴ−１、豊富な幼虫の転写物ＡＬＴ−２、チオレドキシンペルオキシダーゼＴＰＸ、スズメバチアレルゲンホモログＶＡＨ、チオレドキシン（ｔｈｉｏｒｄｏｘｉｎ）ペルオキシダーゼ２  ＴＰＸ−２、抗原性タンパク質ＳＸＰ（ペプチドＮ、Ｎ１、Ｎ２およびＮ３）、活性化結合タンパク質−１  ＡＳＰ−１、チオレドキシンＴＲＸ、トランスグルタミナーゼＢｍＴＧＡ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼＧＳＴ、ミオシン、スズメバチアレルゲンホモログＶＡＨ、１７５ｋＤａのコラーゲナーゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼＧＡＰＤＨ、クチクラコラーゲンＣｏｌ−４、分泌型幼虫酸性タンパク質ＳＬＡＰ、キチナーゼＣＨＩ−１、マルトース結合タンパク質ＭＢＰ、解糖酵素フルクトース−１，６−ビスリン酸アルドラーゼＦｂａ、トロポミオシンＴＭＹ−１、線虫特異的遺伝子産物ＯｖＢ２０、オンコシスタチンＣＰＩ−２、タンパク質Ｃｏｘ−２（Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ  ｂａｎｃｒｏｆｔｉおよびＢｒｕｇｉａ  ｍａｌａｙｉ、リンパ系フィラリア症（象皮病））；糖タンパク質ＧＰ、マトリックスタンパク質Ｚ、ポリメラーゼＬ、核タンパク質Ｎ（リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎）；トロンボスポンジン関連無名タンパク質ＴＲＡＰ、ＳＳＰ２  スポロゾイト表面タンパク質２、頂端側膜抗原１  ＡＭＡ１、桿小体膜抗原ＲＭＡ１、酸性塩基性リピート抗原ＡＢＲＡ、細胞通過タンパク質ＰＦ、タンパク質Ｐｖｓ２５、メロゾイト表面タンパク質１  ＭＳＰ−１、メロゾイト表面タンパク質２  ＭＳＰ−２、リング感染（ｒｉｎｇ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ）赤血球表面抗原ＲＥＳＡＬｉｖｅｒ病期
（ｓｔａｇｅ）抗原３  ＬＳＡ−３、タンパク質Ｅｂａ−１７５、セリンリピート抗原５  ＳＥＲＡ−５、スポロゾイト周囲タンパク質ＣＳ、メロゾイト表面タンパク質３  ＭＳＰ３、メロゾイト表面タンパク質８  ＭＳＰ８、エノラーゼＰＦ１０、肝細胞赤血球タンパク質１７ｋＤａのＨＥＰ１７、赤血球膜タンパク質１  ＥＭＰ１、タンパク質Ｋβメロゾイト表面タンパク質４／５  ＭＳＰ  ４／５、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ９０、グルタミン酸リッチタンパク質ＧＬＵＲＰ、メロゾイト表面タンパク質４  ＭＳＰ−４、タンパク質ＳＴＡＲＰ、スポロゾイト周囲タンパク質関連抗原前駆体ＣＲＡ（プラスモジウム属、マラリア）；核タンパク質Ｎ、膜結合タンパク質ＶＰ２４、マイナー核タンパク質ＶＰ３０、ポリメラーゼ補因子ＶＰ３５、ポリメラーゼＬ、マトリックスタンパク質ＶＰ４０、エンベロープ糖タンパク質ＧＰ（マールブルグウイルス、マールブルグ出血熱（ＭＨＦ））；タンパク質Ｃ、マトリックスタンパク質Ｍ、ホスホタンパク質Ｐ、非構造タンパク質Ｖ、ヘマグルチニン糖タンパク質Ｈ、ポリメラーゼＬ、核タンパク質Ｎ、融合タンパク質Ｆ（麻疹ウイルス、麻疹）；ＡＢＣトランスポーターファミリーの構成員（ＬｏｌＣ、ＯｐｐＡおよびＰｏｔＦ）、推定リポタンパク質放出系膜貫通タンパク質ＬｏｌＣ／Ｅ、フラジェリンＦｌｉＣ、バークホルデリア細胞内運動性Ａ  ＢｉｍＡ、細菌の伸長因子−Ｔｕ  ＥＦ−Ｔｕ、１７ｋＤａのＯｍｐＡ様タンパク質、ｂｏａＡコードタンパク質、ｂｏａＢコードタンパク質（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ、類鼻疽（Ｗｈｉｔｍｏｒｅ’ｓ  病））；ピリンタンパク質、マイナーピリン結合サブユニットｐｉｌＣ、主要ピリンサブユニットおよびバリアントｐｉｌＥ、ｐｉｌＳ、相変異タンパク質ｐｏｒＡ、Ｐｏｒｉｎ  Ｂ  ＰｏｒＢ、タンパク質ＴｒａＤ、ナイセリア菌外膜抗原Ｈ．８、７０ｋＤａ抗原、主要外膜タンパク質ＰＩ、外膜タンパク質ＰｌＡおよびＰｌＢ、Ｗ抗原、表面タンパク質Ａ  ＮｓｐＡ、トランスフェリン結合タンパク質ＴｂｐＡ、トランスフェリン結合タンパク質ＴｂｐＢ  、ＰＢＰ２、ｍｔｒＲコードタンパク質、ｐｏｎＡコードタンパク質、膜パーミアーゼＦｂｐＢＣ、ＦｂｐＡＢＣタンパク質系、ＬｂｐＡＢタンパク質、外膜タンパク質Ｏｐａ、外膜輸送体ＦｅｔＡ、鉄抑制調節因子ＭｐｅＲ、因子Ｈ結合タンパク質ｆＨｂｐ、アドヘシンＮａｄＡ、タンパク質ＮｈｂＡ、リプレッサＦａｒＲ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、髄膜炎疾患）；６６ｋＤａのタンパク質、２２ｋＤａのタンパク質（通常、Ｍｅｔａｇｏｎｉｍｕｓ  ｙｏｋａｇａｗａｉ、メタゴニムス症）；極管タンパク質（Ｇｌｕｇｅａの３４、７５および１７０ｋＤａ、エンセファリトゾーン属の３５、５５および１５０ｋＤａ）、キネシン関連タンパク質、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ最大サブユニット、同様のｏｔ膜内在性タンパク質ＹＩＰＡ、抗サイレンシングタンパク質１、熱ショック転写因子ＨＳＦ、タンパク質キナーゼ、チミジンキナーゼ、ＮＯＰ−２様核小体タンパク質（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａ  ｐｈｙｌｕｍ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉｏｓｉｓ）；ＣＡＳＰ８およびＦＡＤＤ様アポトーシス調製因子、グ��タチオンペルオキシダーゼＧＰＸ１、ＲＮＡヘリカーゼＮＰＨ−ＩＩ  ＮＰＨ２、Ｐｏｌｙ（Ａ）ポリメラーゼ触媒サブユニットＰＡＰＬ、主要エンベロープタンパク質Ｐ４３Ｋ、初期転写因子７０ｋＤａのサブユニットＶＥＴＦＳ、初期転写因子８２ｋＤａのサブユニットＶＥＴＦＬ、メタロエンドペプチダーゼＧ１−型、ヌクレオシド  ｔｒｉホスファターゼＩ  ＮＰＨ１、複製タンパク質Ａ２８様ＭＣ１３４Ｌ、ＲＮＡポリメラーゼ（ｐｏｌｙｍｅａｓｅ）７ｋＤａのサブユニットＲＰＯ７（伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、伝染性軟属腫（ＭＣ））；マトリックスタンパク質Ｍ、ホスホタンパク質Ｐ／Ｖ、スモール疎水性タンパク質ＳＨ、核タンパク質Ｎ、タンパク質Ｖ、融合糖タンパク質Ｆ、ヘマグルチニン−ノイラミニダーゼＨＮ、ＲＮＡポリメラーゼＬ（ムンプスウイルス、流行性耳下腺炎）；外膜タンパク質ＯＭ、細胞表面抗原ＯｍｐＡ、細胞表面抗原ＯｍｐＢ（ｓｃａ５）、細胞表面タンパク質ＳＣＡ４、細胞表面タンパク質ＳＣＡ１、細胞質内タンパク質Ｄ、結晶性表面層タンパク質ＳＬＰ、防御表面タンパク質抗原ＳＰＡ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｔｙｐｈｉ、発疹熱（Ｍｕｒｉｎｅ  ｔｙｐｈｕｓ（Ｅｎｄｅｍｉｃ  ｔｙｐｈｕｓ）））；アドヘシンＰ１、接着Ｐ３０、タンパク質ｐ１１６、タンパク質Ｐ４０、細胞骨格タンパク質ＨＭＷ１、細胞骨格タンパク質ＨＭＷ２、細胞骨格タンパク質ＨＭＷ３、ＭＰＮ１５２コードタンパク質、ＭＰＮ４２６コードタンパク質、ＭＰＮ４５６コードタンパク質、ＭＰＮ−５００コードタンパク質（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）；ＮｏｃＡ、鉄依存性調節タンパク質、ＶａｐＡ、ＶａｐＤ、ＶａｐＦ、ＶａｐＧ、カゼイン溶解性（ｃａｓｅｉｎｏｌｙｔｉｃ）プロテアーゼ、フィラメント先端（ｆｉｌａｍｅｎｔ  ｔｉｐ）関連４３ｋＤａのタンパク質、タンパク質Ｐ２４、タンパク質Ｐ６１、１５ｋＤａのタンパク質、５６ｋＤａのタンパク質（通常、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓおよび他のノカルジア種、ノカルジア症）；毒液アレルゲンホモログ様タンパク質ＶＡＬ−１、豊富な幼虫の転写物ＡＬＴ−１、豊富な幼虫の転写物ＡＬＴ−２、チオレドキシンペルオキシダーゼＴＰＸ、スズメバチアレルゲンホモログＶＡＨ、チオレドキシンペルオキシダーゼ２  ＴＰＸ−２、抗原性タンパク質ＳＸＰ（ペプチドＮ、Ｎ１、Ｎ２およびＮ３）、活性化結合タンパク質−１  ＡＳＰ−１、チオレドキシンＴＲＸ、トランスグルタミナーゼＢｍＴＧＡ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼＧＳＴ、ミオシン、スズメバチアレルゲンホモログＶＡＨ、１７５ｋＤａのコラーゲナーゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼＧＡＰＤＨ、クチクラコラーゲンＣｏｌ−４、分泌型幼虫酸性タンパク質ＳＬＡＰ、キチナーゼＣＨＩ−１、マルトース結合タンパク質ＭＢＰ、解糖酵素フルクトース−１，６−ビスリン酸アルドラーゼＦｂａ、トロポミオシンＴＭＹ−１、線虫特異的遺伝子産物ＯｖＢ２０、オンコシスタチンＣＰＩ−２、Ｃｏｘ−２（Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ  ｖｏｌｖｕｌｕｓ、回旋糸状虫症（河川盲目症））；４３ｋＤａの分泌型糖タンパク質、糖タンパク質ｇｐ０、糖タンパク質ｇｐ７５、抗原Ｐｂ２７、抗原Ｐｂ４０、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ６５、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ７０、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ９０、タンパク質Ｐ１０、トリオースリン酸イソメラーゼＴＰＩ、Ｎ−アセチル−グルコサミン結合レクチンＰａｒａｃｏｃｃｉｎ、２８ｋＤａのタンパク質Ｐｂ２８（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、パラコクシジオイデス症（南アメリカブラストミセス症））；２８ｋＤａのクルジパイン様システインプロテアーゼＰｗ２８ＣＣＰ（通常、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ  ｗｅｓｔｅｒｍａｎｉおよび他の肺吸虫属の種、肺吸虫症）；外膜タンパク質ＯｍｐＨ、外膜タンパク質Ｏｍｐ２８、タンパク質ＰＭ１５３９、タンパク質ＰＭ０３５５、タンパク質ＰＭ１４１７、修復タンパク質ＭｕｔＬ、タンパク質ＢｃｂＣ、タンパク質（ｐｒｔｅｉｎ）ＰＭ０３０５、ギ酸デヒドロゲナーゼ−Ｎ、タンパク質ＰＭ０６９８、タンパク質ＰＭ１４２２、ＤＮＡジャイレース、リポタンパク質ＰｌｐＥ、接着性タンパク質Ｃｐ３９、ヘム獲得系受容体ＨａｓＲ、３９ｋＤａの莢膜タンパク質、鉄調節型ＯＭＰ  ＩＲＯＭＰ、外膜タンパク質ＯｍｐＡ８７、線毛タンパク質Ｐｔｆ、線毛サブユニットタンパク質ＰｔｆＡ、トランスフェリン結合タンパク質Ｔｂｐｌ、エステラーゼ酵素ＭｅｓＡ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ毒素ＰＭＴ、接着性タンパク質Ｃｐ３９（パスツレラ属、パスツレラ症）；“糸状ヘマグルチニンＦｈａＢ、アデニル酸シクラーゼＣｙａＡ、百日咳毒素サブユニット４前駆体ＰｔｘＤ、パータクチン前駆体Ｐｒｎ、毒素サブユニット１  ＰｔｘＡ、タンパク質Ｃｐｎ６０、タンパク質ｂｒｋＡ、百日咳毒素サブユニット２前駆体ＰｔｘＢ、百日咳毒素サブユニット３前駆体ＰｔｘＣ、百日咳毒素サブユニット５前駆体ＰｔｘＥ、パータクチンＰｒｎ、タンパク質Ｆｉｍ２、タンパク質Ｆｉｍ３；”（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、百日咳（ゼーゼーいう咳））；“Ｆ１カプセル抗原、ビルレンス関連Ｖ抗原、分泌型エフェクタータンパク質ＬｃｒＶ、Ｖ抗原、外膜プロテアーゼＰｌａ，分泌型エフェクタータンパク質ＹｏｐＤ、推定分泌型タンパク質−チロシンホスファターゼＹｏｐＨ、針複合体大サブユニットＹｓｃＦ、タンパク質キナーゼＹｏｐＯ、推定自己輸送体タンパク質ＹａｐＦ、内膜ＡＢＣ−トランスポーターＹｂｔＱ（Ｉｒｐ７）、推定糖結合タンパク質ＹＰＯ０６１２、熱ショックタンパク質９０  ＨｔｐＧ、推定スルファターゼタンパク質ＹｄｅＮ、外膜リポタンパク質担体タンパク質ＬｏｌＡ、分泌  シャペロンＹｅｒＡ、推定リポタンパク質ＹＰＯ０４２０、ヘモシアニンアクチベータータンパク質ＨｐｍＢ、ペスチシン（ｐｅｓｔｉｃｉｎ）／エルシニアバクチン外膜受容体  Ｐｓｎ、分泌型エフェクタータンパク質ＹｏｐＥ、分泌型エフェクタータンパク質ＹｏｐＦ、分泌型エフェクタータンパク質ＹｏｐＫ、外膜タンパク質ＹｏｐＮ、外膜タンパク質ＹｏｐＭ、コアギュラーゼ／フィブリノリジン前駆体Ｐｌａ；”（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ、疫病）；タンパク質ＰｈｐＡ、表面アドヘシンＰｓａＡ、ニューモリシンＰｌｙ、ＡＴＰ依存的プロテアーゼＣｌｐ、リポ酸−���ンパク質リガーゼＬｐｌＡ、細胞壁表面アンカー型タンパク質ｐｓｒＰ、ソルターゼＳｒｔＡ、グルタミル−ｔＲＮＡ合成酵素ＧｌｔＸ、コリン結合タンパク質Ａ  ＣｂｐＡ、肺炎球菌表面タンパク質Ａ  ＰｓｐＡ、肺炎球菌表面タンパク質Ｃ  ＰｓｐＣ、６−ホスホグルコン酸デヒドロゲナーゼＧｎｄ、鉄結合タンパク質ＰｉａＡ、ムレインヒドラーゼＬｙｔＢ、プロテオン（ｐｒｏｔｅｏｎ）ＬｙｔＣ、プロテアーゼＡ１（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、肺炎球菌感染症）；主要表面タンパク質Ｂ、ケキシン様プロテアーゼＫＥＸ１、タンパク質Ａ１２、５５ｋＤａ抗原Ｐ５５、主要表面糖タンパク質Ｍｓｇ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ（ＰＣＰ））；ゲノムポリプロテイン、ポリメラーゼ３Ｄ、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ１、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ２、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ３、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ４、プロテアーゼ２Ａ、プロテアーゼ３Ｃ（ポリオウイルス、灰白髄炎）；タンパク質Ｎｆａ１、エキセンジン−３、分泌リパーゼ、カテプシンＢ様プロテアーゼ、システインプロテアーゼ、カテプシン、ペルオキシレドキシン、タンパク質Ｃｒｙ１Ａｃ（通常、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ  ｆｏｗｌｅｒｉ、原発性アメーバ髄膜脳炎（ＰＡＭ））；アグノ（ａｇｎｏ）タンパク質、ラージＴ抗原、スモールＴ抗原、主要カプシドタンパク質ＶＰ１、マイナーカプシドタンパク質Ｖｐ２（ＪＣウイルス、進行性多病巣性白質脳症）；低カルシウム応答タンパク質Ｅ  ＬＣｒＥ、クラミジア外部タンパク質Ｎ  ＣｏｐＮ、セリン／トレオニン−プロテインキナーゼＰｋｎＤ、アシル−担体−タンパク質Ｓ−マロニルトランスフェラーゼＦａｂＤ、一本鎖ＤＮＡ結合タンパク質Ｓｓｂ、主要外膜タンパク質ＭＯＭＰ、外膜タンパク質２  Ｏｍｐ２、多形膜タンパク質ファミリー（Ｐｍｐ１、Ｐｍｐ２、Ｐｍｐ３、Ｐｍｐ４、Ｐｍｐ５、Ｐｍｐ６、Ｐｍｐ７、Ｐｍｐ８、Ｐｍｐ９、Ｐｍｐ１０、Ｐｍｐ１１、Ｐｍｐ１２、Ｐｍｐ１３、Ｐｍｐ１４、Ｐｍｐ１５、Ｐｍｐ１６、Ｐｍｐ１７、Ｐｍｐ１８、Ｐｍｐ１９、Ｐｍｐ２０、Ｐｍｐ２１）（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｓｉｔｔａｃｉ、オウム病）；外膜タンパク質Ｐ１、熱ショックタンパク質Ｂ  ＨｓｐＢ、ペプチドＡＢＣトランスポーター、ＧＴＰ結合タ
ンパク質、タンパク質ＩｃｍＢ、リボヌクレアーゼＲ、ホスファタス（ｐｈｏｓｐｈａｔａｓ）ＳｉｘＡ、タンパク質ＤｓｂＤ、外膜タンパク質ＴｏｌＣ、ＤＮＡ結合タンパク質ＰｈｏＢ、ＡＴＰａｓｅ  ＤｏｔＢ、熱ショックタンパク質Ｂ  ＨｓｐＢ、膜タンパク質Ｃｏｍ１、２８ｋＤａのタンパク質、ＤＮＡ−３−メチルアデニングリコシダーゼＩ、外膜（ｐｏｕｔｅｒ）タンパク質ＯｍｐＨ、外膜タンパク質ＡｄａＡ、グリシン切断型Ｔ−タンパク質（Ｃｏｘｉｅｌｌａ  ｂｕｒｎｅｔｉｉ、Ｑ熱）；核タンパク質Ｎ、ラージ構造タンパク質Ｌ、ホスホ（ｐｈｏｐｈｏ）タンパク質Ｐ、マトリックスタンパク質Ｍ、糖タンパク質Ｇ（狂犬病ウイルス、狂犬病）；融合タンパク質Ｆ、核タンパク質Ｎ、マトリックスタンパク質Ｍ、マトリックスタンパク質Ｍ２−１、マトリックスタンパク質Ｍ２−２、ホスホタンパク質Ｐ、スモール疎水性タンパク質ＳＨ、主要表面糖タンパク質Ｇ、ポリメラーゼＬ、非構造タンパク質１  ＮＳ１、非構造タンパク質２  ＮＳ２（呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、呼吸器合胞体ウイルス感染症）；ゲノムポリプロテイン、ポリメラーゼ３Ｄ、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ１、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ２、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ３、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ４、プロテアーゼ２Ａ、プロテアーゼ３Ｃ（ライノウイルス、ライノウイルス感染症）；外膜タンパク質ＯＭ、細胞表面抗原ＯｍｐＡ、細胞表面抗原ＯｍｐＢ（ｓｃａ５）、細胞表面タンパク質ＳＣＡ４、細胞表面タンパク質ＳＣＡ１、タンパク質ＰＳ１２０、細胞質内タンパク質Ｄ、防御表面タンパク質抗原ＳＰＡ（リケッチア属、リケッチア感染症）；外膜タンパク質ＯＭ、細胞表面抗原ＯｍｐＡ、細胞表面抗原ＯｍｐＢ（ｓｃａ５）、細胞表面タンパク質ＳＣＡ４、細胞表面タンパク質ＳＣＡ１、細胞質内タンパク質Ｄ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ａｋａｒｉ、小水疱性リケッチア症）；エンベロープ糖タンパク質ＧＰ、ポリメラーゼＬ、核タンパク質Ｎ、非構造タンパク質ＮＳＳ（リフトバレー熱ウイルス、リフトバレー熱（ＲＶＦ））；外膜タンパク質ＯＭ、細胞表面抗原ＯｍｐＡ、細胞表面抗原ＯｍｐＢ（ｓｃａ５）、細胞表面タンパク質ＳＣＡ４、細胞表面タンパク質ＳＣＡ１、細胞質内タンパク質Ｄ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ、ロッキー山紅斑熱（ＲＭＳＦ））；“非構造タンパク質６  ＮＳ６、非構造タンパク質２  ＮＳ２、中間カプシドタンパク質ＶＰ６、内部カプシドタンパク質ＶＰ２、非構造タンパク質３  ＮＳ３、ＲＮＡ指向ＲＮＡポリメラーゼＬ、タンパク質ＶＰ３、非構造タンパク質１  ＮＳ１、非構造タンパク質５  ＮＳ５、外側カプシド糖タンパク質ＶＰ７、非構造糖タンパク質４  ＮＳ４、外側カプシドタンパク質ＶＰ４”（ロタウイルス、ロタウイルス感染症）；ポリプロテインＰ２００、糖タンパク質Ｅ１、糖タンパク質Ｅ２、タンパク質ＮＳ２、カプシドタンパク質Ｃ（風疹ウイルス、風疹）；シャペロニンＧｒｏＥＬ（ＭｏｐＡ）、イノシトールリン酸ホスファターゼＳｏｐＢ、熱ショックタンパク質ＨｓｌＵ、シャペロンタンパク質ＤｎａＪ、タンパク質ＴｖｉＢ、タンパク質ＩｒｏＮ、フラジェリンＦｌｉＣ、浸潤タンパク質ＳｉｐＣ、糖タン���ク質ｇｐ４３、外膜タンパク質ＬａｍＢ、外膜タンパク質ＰａｇＣ、外膜タンパク質ＴｏｌＣ、外膜タンパク質ＮｍｐＣ、外膜タンパク質ＦａｄＬ、輸送タンパク質ＳａｄＡ、トランスフェラーゼＷｇａＰ、エフェクタータンパク質ＳｉｆＡ、ＳｔｅＣ、ＳｓｅＬ、ＳｓｅＪおよびＳｓｅＦ（サルモネラ属、サルモネラ症）、タンパク質１４、非構造タンパク質ＮＳ７ｂ、非構造タンパク質ＮＳ８ａ、タンパク質９ｂ、タンパク質３ａ、核タンパク質Ｎ、非構造タンパク質ＮＳ３ｂ、非構造タンパク質ＮＳ６、タンパク質７ａ、非構造タンパク質ＮＳ８ｂ、膜タンパク質Ｍ、エンベロープスモール膜タンパク質ＥｓＭ、レプリカーゼポリプロテイン１ａ、スパイク糖タンパク質Ｓ、レプリカーゼポリプロテイン１ａｂ；（ＳＡＲＳコロナウイルス、ＳＡＲＳ（重度急性呼吸器症候群））；セリンプロテアーゼ、Ａ典型的なヒゼンダニ（Ｓａｒｃｏｐｔｅｓ）抗原１  ＡＳＡ１、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼＧＳＴ、システインプロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、ａｐｏリポタンパク質（Ｓａｒｃｏｐｔｅｓ  ｓｃａｂｉｅｉ、Ｓｃａｂｉｅｓ）；グルタチオンＳ−トランスフェラーゼＧＳＴ、パラミオシン、ヘモグルビナーゼ（ｈｅｍｏｇｌｂｉｎａｓｅ）ＳＭ３２、主要卵抗原、１４ｋＤａの脂肪酸結合タンパク質Ｓｍ１４、主要幼虫表面抗原Ｐ３７、２２，６ｋＤａのテグメントａｌ抗原、カルパインＣＡＮＰ、三リン酸イソメラーゼＴｉｍ、表面タンパク質９Ｂ、外側カプシドタンパク質ＶＰ２、２３ｋＤａの膜内在性タンパク質Ｓｍ２３、Ｃｕ／Ｚｎ−スーパーオキシド・ジスムターゼ、糖タンパク質Ｇｐ、ミオシン（住血吸虫属、住血吸虫症（ビルハルツ住血吸虫症））；６０ｋＤａのシャペロニン、５６ｋＤａの型特異的抗原、ピルビン酸リン酸ジキナーゼ、４−ヒドロキシ安息香酸オクタプレニルトランスフェラーゼ（Ｏｒｉｅｎｔｉａ  ｔｓｕｔｓｕｇａｍｕｓｈｉ、草原熱）；デヒドロゲナーゼＧｕａＢ、浸潤タンパク質Ｓｐａ３２、インバシンＩｐａＡ、インバシンＩｐａＢ、インバシンＩｐａＣ、インバシンＩｐａＤ、インバシンＩｐａＨ、インバシンＩｐａＪ（シゲラ属、細菌性赤痢（Ｓｈｉｇｅｌｌｏｓｉｓ（Ｂａｃｉｌｌａｒｙ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｙ）））；タンパク質Ｐ５３、ビリオンタンパク質ＵＳ１０ホモログ、転写調節因子ＩＥ６３、転写トランスアクチベーターＩＥ６２、プロテアーゼＰ３３、αトランス誘導性因子７４ｋＤａのタンパク質、デオキシウリジン５’−三リン酸ヌクレオチドヒドロラーゼ、転写トランスアクチベーターＩＥ４、膜タンパク質ＵＬ４３ホモログ、核ホスホタンパク質ＵＬ３ホモログ、核タンパク質ＵＬ４ホモログ、複製起点結合タンパク質、膜タンパク質２、ホスホタンパク質３２、タンパク質５７，ＤＮＡポリメラーゼプロセッシビリティ因子、門脈タンパク質５４、ＤＮＡプライマーゼ、テグメントタンパク質ＵＬ１４ホモログ、テグメントタンパク質ＵＬ２１ホモログ、テグメントタンパク質ＵＬ５５ホモログ、トリパータイル（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ）ターミナーゼサブユニットＵＬ３３ホモログ、トリパータイルターミナーゼサブユニットＵＬ１５ホモログ、カプシド結合タンパク質４４、ビリオンパッケージタンパク質４３（水痘・帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、Ｓｈｉｎｇｌｅｓ（Ｈｅｒｐｅｓ  ｚｏｓｔｅｒ））；切断型３−βヒドロキシ−５−エンステロイドデヒドロゲナーゼホモログ、ビリオン膜タンパク質Ａ１３、タンパク質Ａ１９、タンパク質Ａ３１、切断型タンパク質Ａ３５ホモログ、タンパク質Ａ３７．５ホモログ、タンパク質Ａ４７、タンパク質Ａ４９、タンパク質Ａ５１、セマフォリン様タンパク質Ａ４３、セリンプロテイナーゼ阻害薬１、セリンプロテイナーゼ阻害薬２、セリンプロテイナーゼ阻害薬３、タンパク質Ａ６、タンパク質Ｂ１５、タンパク質Ｃ１、タンパク質Ｃ５、タンパク質Ｃ６、タンパク質Ｆ７、タンパク質Ｆ８、タンパク質Ｆ９、タンパク質Ｆ１１、タンパク質Ｆ１４、タンパク質Ｆ１５、タンパク質Ｆ１６（Ｖａｒｉｏｌａ  ｍａｊｏｒまたはＶａｒｉｏｌａ  ｍｉｎｏｒ、天然痘（痘瘡））；アドヘシン／糖タンパク質ｇｐ７０、プロテアーゼ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、スポロトリクム症）；ヘム鉄結合タンパク質ＩｓｄＢ、コラーゲンアドヘシンＣｎａ、クランプリング因子Ａ  ＣｌｆＡ、タンパク質ＭｅｃＡ、フィブロネクチン結合タンパク質Ａ  ＦｎｂＡ、エンテロトキシン型Ａ  ＥｎｔＡ、エンテロトキシン型Ｂ  ＥｎｔＢ、エンテロトキシン型Ｃ  ＥｎｔＣ１、エンテロトキシン型Ｃ  ＥｎｔＣ２、エンテロトキシン型Ｄ  ＥｎｔＤ、エンテロトキシン型Ｅ  ＥｎｔＥ、毒素性ショック症候群毒素−１  ＴＳＳＴ−１、スタフィロキナーゼ、ペニシリン結合タンパク質２ａ  ＰＢＰ２ａ（ＭｅｃＡ）、分泌抗原ＳｓｓＡ（ブドウ球菌属、ブドウ球菌食中毒）；ヘム鉄結合タンパク質ＩｓｄＢ、コラーゲンアドヘシンＣｎａ、クランプリング因子Ａ  ＣｌｆＡ、タンパク質ＭｅｃＡ、フィブロネクチン結合タンパク質Ａ  ＦｎｂＡ、エンテロトキシン型Ａ  ＥｎｔＡ、エンテロトキシン型Ｂ  ＥｎｔＢ、エンテロトキシン型Ｃ  ＥｎｔＣ１、エンテロトキシン型Ｃ  ＥｎｔＣ２、エンテロトキシン型Ｄ  ＥｎｔＤ、エンテロトキシン型Ｅ  ＥｎｔＥ、毒素性ショック症候群毒素−１  ＴＳＳＴ−１、スタフィロキナーゼ、ペニシリン結合タンパク質２ａ  ＰＢＰ２ａ（ＭｅｃＡ）、分泌抗原ＳｓｓＡ（ブドウ球菌属  例えば、ａｕｒｅｕｓ、ブドウ球菌感染症）；抗原Ｓｓ−ＩＲ、抗原ＮＩＥ、ストロンギラスタチン（ｓｔｒｏｎｇｙｌａｓｔａｃｉｎ）、Ｎａ＋−Ｋ＋  ＡＴＰａｓｅ  Ｓｓｅａｔ−６、トロポミシン（ｔｒｏｐｏｍｙｓｉｎ）ＳｓＴｍｙ−１、タンパク質ＬＥＣ−５、４１ｋＤａのａ抗原Ｐ５、４１ｋＤａの幼虫タンパク質、３１ｋＤａの幼虫タンパク質、２８ｋＤａの幼虫タンパク質（Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｉａｓｉｓ）；グリセロホスホジエステルホスホジエステラーゼＧｌｐＱ（Ｇｐｄ）、外膜タンパク質ＴｍｐＢ、タンパク質Ｔｐ９２、抗原ＴｐＦ１、リピートタンパク質Ｔｐｒ、リピートタンパク質Ｆ  ＴｐｒＦ、リピート  タンパク質Ｇ  ＴｐｒＧ、リピートタンパク質Ｉ  ＴｐｒＩ、リピートタンパク質Ｊ  ＴｐｒＪ、リピートタンパク質Ｋ  ＴｐｒＫ、トレポネーマ膜タンパク質Ａ  ＴｍｐＡ、リポタンパク質、１５ｋＤａのＴｐｐ１５、４７ｋＤａの膜抗原、ミニフェリチンＴｐＦ１、アドヘシンＴｐ０７５１、リポタンパク質ＴＰ０１３６、タンパク質ＴｐＮ１７、タンパク質ＴｐＮ４７、外膜タンパク質ＴＰ０１３６、外膜タンパク質ＴＰ０１５５、外膜タンパク質ＴＰ０３２６、外膜タンパク質ＴＰ０４８３、外膜タンパク質ＴＰ０９５６（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ、梅毒）；Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ  Ｌ様プロテアーゼ、５３／２５−ｋＤａ抗原、８ｋＤａファミリー構成員、わずかなトリプシン様活性を有する嚢尾虫タンパク質ＴｓＡｇ５、六鉤幼虫タンパク質ＴＳＯＬ１８、六鉤幼虫タンパク質ＴＳＯＬ４５−１Ａ、乳酸デヒドロゲナーゼＡ  ＬＤＨＡ、乳酸デヒドロゲナーゼＢ  ＬＤＨＢ（テニア属、テニア症）；破傷風毒素ＴｅｔＸ、破傷風毒素Ｃ  ＴＴＣ、１４０ｋＤａのＳ  層タンパク質、フラボタンパク質β−サブユニット  ＣＴ３、ホスホリパーゼ（レシチナーゼ）、ホスホ担体タンパク質ＨＰｒ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、破傷風（Ｌｏｃｋｊａｗ））；ゲノムポリプロテイン、タンパク質Ｅ、タンパク質Ｍ、カプシドタンパク質Ｃ（ダニ媒介脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）、ダニ媒介脳炎）；５８−ｋＤａ抗原、６８−ｋＤａ抗原、トキソカラ属幼虫排出−分泌抗原ＴＥＳ、３２ｋＤａの糖タンパク質、糖タンパク質ＴＥＳ−７０、糖タンパク質ＧＰ３１、排出−分泌抗原ＴｃＥＳ−５７、腸周囲抗原Ｐｅ、可溶性抽出物抗原Ｅｘ、排出／分泌幼虫抗原ＥＳ、抗原ＴＥＳ−１２０、ポリプロテインアレルゲンＴＢＡ−１、カテプシンＬ様システインプロテアーゼｃ−ｃｐｌ−１、２６ｋＤａのタンパク質（Ｔｏｘｏｃａｒａ  ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ  ｃａｔｉ、トクソカリアシス（Ｏｃｕｌａｒ  Ｌａｒｖａ  Ｍｉｇｒａｎｓ（ＯＬＭ）およびＶｉｓｃｅｒａｌ  Ｌａｒｖａ  Ｍｉｇｒａｎｓ（ＶＬＭ）））；短系タンパク質（  ＭＩＣ１、ＭＩＣ２、ＭＩＣ３、ＭＩＣ４、ＭＩＣ５、ＭＩＣ６、ＭＩＣ７、ＭＩＣ８）、桿小体タンパク質Ｒｏｐ２、桿小体タンパク質（Ｒｏｐ１、Ｒｏｐ２、Ｒｏｐ３、Ｒｏｐ４、Ｒｏｐ５、Ｒｏｐ６、Ｒｏｐ７、Ｒｏｐ１６、Ｒｊｏｐ１７）、タンパク質ＳＲ1，表面抗原Ｐ２２、主要抗原ｐ２４、主要表面抗原ｐ３０、高密度顆粒タンパク質（ＧＲＡ１、ＧＲＡ２、ＧＲＡ３、ＧＲＡ４、ＧＲＡ５、ＧＲＡ６、ＧＲＡ７、ＧＲＡ８、ＧＲＡ９、ＧＲＡ１０）、２８ｋＤａ抗原、表面抗原ＳＡＧ１、ＳＡＧ２関連抗原、ヌクレオシド−トリホスファターゼ１
、ヌクレオシド−トリホスファターゼ２、タンパク質Ｓｔｔ３、ＨｅｓＢ様ドメイン含有タンパク質、ロンボイド（ｒｈｏｍｂｏｉｄ）様プロテアーゼ５、トキソメプシン（ｔｏｘｏｍｅｐｓｉｎ）１（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、トキソプラズマ症）；４３ｋＤａの分泌型糖タンパク質、５３ｋＤａの分泌型糖タンパク質、パラミオシン、抗原Ｔｓ２１、抗原Ｔｓ８７、抗原ｐ４６０００、ＴＳＬ−１抗原、カベオリン−１  ＣＡＶ−１、４９ｋＤａの生まれたばかりの幼虫の抗原、プロサポニンホモログ、セリンプロテアーゼ、セリンプロテイナーゼ阻害薬、４５ｋＤａの糖タンパク質Ｇｐ４５（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐｉｒａｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌｏｓｉｓ）；Ｍｙｂ様転写因子（Ｍｙｂ１、Ｍｙｂ２、Ｍｙｂ３）、接着タンパク質ＡＰ２３、接着タンパク質ＡＰ３３、アドヘシンタンパク質ＡＰ３３−３、アドヘシンＡＰ５１、アドヘシンＡＰ６５、接着タンパク質ＡＰ６５−１、α−アクチニン、キネシン結合タンパク質、テネウリン（ｔｅｎｅｕｒｉｎ）、６２ｋＤａプロテイナーゼ、スブチリシン様セリンプロテアーゼＳＵＢ１、システインプロテイナーゼ遺伝子３  ＣＰ３、α−エノラーゼＥｎｏ１、システインプロテイナーゼＣＰ３０、熱ショックタンパク質（Ｈｓｐ７０、Ｈｓｐ６０）、免疫原性タンパク質Ｐ２７０、（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｉｓ、トリコモナス症）；β−チューブリン、４７ｋＤａのタンパク質、分泌白血球様プロテイナーゼ−１  ＳＬＰ−１、５０ｋＤａのタンパク質ＴＴ５０、１７ｋＤａ抗原、４３／４７ｋＤａのタンパク質（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、鞭虫症（鞭虫感染症））；タンパク質ＥＳＡＴ−６（ＥｓｘＡ）、１０ｋＤａの濾液（ｆｉｌｔｒａｔｅ）抗原ＥｓｘＢ、分泌型抗原８５−Ｂ  ＦＢＰＢ、フィブロネクチン結合タンパク質Ａ  ＦｂｐＡ（Ａｇ８５Ａ）、セリンプロテアーゼＰｅｐＡ、ＰＰＥファミリータンパク質ＰＰＥ１８、フィブロネクチン結合タンパク質Ｄ  ＦｂｐＤ、免疫原性タンパク質ＭＰＴ６４、分泌型タンパク質ＭＰＴ５１、カタラーゼ−ペルオキシダーゼ−ペルオキシニトリターゼ（ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｔａｓｅ）Ｔ  ＫＡＴＧ、ペリプラスムリン酸結合リポタンパク質ＰＳＴＳ３（ＰＢＰ−３、Ｐｈｏｓ−１）、鉄調節型ヘパリン結合ヘマグルチニンＨｂｈａ、ＰＰＥファミリータンパク質ＰＰＥ１４、ＰＰＥファミリータンパク質ＰＰＥ６８、タンパク質Ｍｔｂ７２Ｆ、タンパク質Ａｐａ、免疫原性タンパク質ＭＰＴ６３、ペリプラスムリン酸結合リポタンパク質ＰＳＴＳ１（ＰＢＰ−１）、分子シャペロンＤｎａＫ、細胞表面リポタンパク質Ｍｐｔ８３、リポタンパク質Ｐ２３、リン酸輸送系パーミアーゼタンパク質ｐｓｔＡ、１４ｋＤａ抗原、フィブロネクチン結合タンパク質Ｃ  ＦｂｐＣ１、アラニンデヒドロゲナーゼＴＢ４３、グルタミン合成酵素１、ＥＳＸ−１タンパク質、タンパク質ＣＦＰ１０、ＴＢ１０．４タンパク質、タンパク質ＭＰＴ８３、タンパク質ＭＴＢ１２、タンパク質ＭＴＢ８、Ｒｐｆ様タンパク質、タンパク質ＭＴＢ３２、タンパク質ＭＴＢ３９、クリスタリン、熱ショックタンパク質ＨＳＰ６５、タンパク質ＰＳＴ−Ｓ（通常、ヒト型結核菌、結核）；外膜タンパク質ＦｏｂＡ、外膜タンパク質ＦｏｂＢ、細胞内成長座（ｇｒｏｗｔｈ  ｌｏｃｕｓ）ｌｇｌＣ１、細胞内成長座ＩｇｌＣ２、アミノトランスフェラーゼＷｂｔｌ、シャペロニンＧｒｏＥＬ、１７ｋＤａの主要膜タンパク質ＴＵＬ４、リポタンパク質ＬｐｎＡ、キチナーゼファミリー１８タンパク質、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ、Ｎｉｆ３ファミリータンパク質、ＩＶ型線毛グリコシル化タンパク質、外膜タンパク質ｔｏｌＣ、ＦＡＤ結合ファミリータンパク質、ＩＶ型ピリン多量体外膜タンパク質、２成分センサータンパク質ＫｄｐＤ、シャペロンタンパク質ＤｎａＫ、タンパク質ＴｏｌＱ（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、野兎病）；“ＭＢ抗原、ウレアーゼ、タンパク質ＧｙｒＡ、タンパク質ＧｙｒＢ、タンパク質ＰａｒＣ、タンパク質ＰａｒＥ、脂質関連膜タンパク質ＬＡＭＰ、チミジンキナーゼＴＫ、ホスホリパーゼＰＬ−Ａ１、ホスホリパーゼＰＬ−Ａ２、ホスホリパーゼＰＬ−Ｃ、表面−発現させ、９６ｋＤａの抗原；”（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ、Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ感染症）；非構造ポリプロテイン、構造ポリプロテイン、カプシドタンパク質ＣＰ、タンパク質Ｅ１、タンパク質Ｅ２、タンパク質Ｅ３、プロテアーゼＰ１、プロテアーゼＰ２、プロテアーゼＰ３（ベネズエラ馬脳炎ウイルス、ベネズエラ馬脳炎）；糖タンパク質ＧＰ、マトリックスタンパク質Ｚ、ポリメラーゼＬ、核タンパク質Ｎ（グアナリトウイルス、ベネズエラ出血熱）；ポリプロテイン、タンパク質Ｅ、タンパク質Ｍ、カプシドタンパク質Ｃ、プロテアーゼＮＳ３、タンパク質ＮＳ１、タンパク質ＮＳ２Ａ、タンパク質ＡＳ２Ｂ、ブロテイン（ｂｒｏｔｅｉｎ）ＮＳ４Ａ、タンパク質ＮＳ４Ｂ、タンパク質ＮＳ５（西ナイルウイルス、西ナイル熱）；カプシドタンパク質ＣＰ、タンパク質Ｅ１、タンパク質Ｅ２、タンパク質Ｅ３、プロテアーゼＰ２（西部馬脳炎ウイルス、西部馬脳炎）；ゲノムポリプロテイン、タンパク質Ｅ、タンパク質Ｍ、カプシドタンパク質Ｃ、プロテアーゼＮＳ３、タンパク質ＮＳ１、タンパク質ＮＳ２Ａ、タンパク質ＡＳ２Ｂ、タンパク質ＮＳ４Ａ、タンパク質ＮＳ４Ｂ、タンパク質ＮＳ５（黄熱病ウイルス、黄熱病）；推定Ｙｏｐ標的化タンパク質ＹｏｂＢ、エフェクタータンパク質ＹｏｐＤ、エフェクタータンパク質ＹｏｐＥ、タンパク質ＹｏｐＨ、エフェクタータンパク質ＹｏｐＪ、タンパク質トランスロケーションタンパク質ＹｏｐＫ、エフェクタータンパク質ＹｏｐＴ、タンパク質ＹｐｋＡ、鞭毛生合成タンパク質ＦｌｈＡ、ペプチダーゼＭ４８、カリウム流出系ＫｅｆＡ、転写調節因子（ｒｅｇｕｌａｔｏｅｒ）ＲｏｖＡ、アドヘシンＩｆｐ、トランスロケータタンパク質（ｐｏｒｔｅｉｎ）ＬｃｒＶ、タンパク質ＰｃｒＶ、インバシンＩｎｖ、外膜タンパク質ＯｍｐＦ様ポリン、アドヘシンＹａｄＡ、タンパク質キナーゼＣ、ホスホリパーゼＣ１、タンパク質ＰｓａＡ、マンノシルトランスフェラーゼ様タンパク質ＷｂｙＫ、タンパク質ＹｓｃＵ、抗原ＹＰＭａ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、仮性結核菌感染症）；エフェクタータンパク質ＹｏｐＢ、６０ｋＤａのシャペロニン、タンパ��質ＷｂｃＰ、チロシン−タンパク質ホスファターゼＹｏｐＨ、タンパク質ＹｏｐＱ、エンテロトキシン、ガラクトシドパーミアーゼ、レダクターゼ（ｒｅｄｕｃｔａａｓｅ）ＮｒｄＥ、タンパク質ＹａｓＮ、インバシンＩｎｖ、アドヘシンＹａｄＡ、外膜ポリンＦ  ＯｍｐＦ、タンパク質ＵｓｐＡ１、タンパク質ＥｉｂＡ、タンパク質Ｈｉａ、細胞表面タンパク質Ａｉｌ、シャペロンＳｙｃＤ、タンパク質ＬｃｒＤ、タンパク質ＬｃｒＧ、タンパク質ＬｃｒＶ、タンパク質ＳｙｃＥ、タンパク質ＹｏｐＥ、調節因子タンパク質ＴｙｅＡ、タンパク質ＹｏｐＭ、タンパク質ＹｏｐＮ、タンパク質ＹｏｐＯ、タンパク質ＹｏｐＴ、タンパク質ＹｏｐＤ、プロテアーゼＣｌｐＰ、タンパク質ＭｙｆＡ、タンパク質ＦｉｌＡ、およびタンパク質ＰｓａＡ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、エルシニア症）（括弧内は、抗原（１種類または複数種）が由来する具体的な病原体または病原体の科および該病原体が関連している感染性疾患である）から選択され得る。
【０４６０】
特に好ましい実施形態では、病原性抗原は
ａ）ＨＩＶ  ｐ２４抗原、ＨＩＶエンベロープタンパク質（Ｇｐ１２０、Ｇｐ４１、Ｇｐ１６０）、ポリタンパク質ＧＡＧ、ネガティブ因子タンパク質Ｎｅｆ、転写のトランス活性化因子Ｔａｔ（感染性疾患がＨＩＶ、好ましくはヒト免疫不全ウイルスによる感染である場合）、
ｂ）主要外膜タンパク質ＭＯＭＰ、おそらく外膜タンパク質ＰＭＰＣ、外膜複合体タンパク質Ｂ  ＯｍｃＢ、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ６０  ＨＳＰ１０、タンパク質ＩｎｃＡ、ＩＩＩ型分泌系由来のタンパク質、リボヌクレオチドレダクターゼ短鎖タンパク質ＮｒｄＢ、プラスミドタンパク質Ｐｇｐ３、クラミジア外部タンパク質Ｎ  ＣｏｐＮ、抗原ＣＴ５２１、抗原ＣＴ４２５、抗原ＣＴ０４３、抗原ＴＣ００５２、抗原ＴＣ０１８９、抗原ＴＣ０５８２、抗原ＴＣ０６６０、抗原ＴＣ０７２６、抗原ＴＣ０８１６、抗原ＴＣ０８２８（感染性疾患がクラミジア・トラコマチスによる感染である場合）、
ｃ）ｐｐ６５抗原、膜タンパク質ｐｐ１５、カプシド−近位型テグメントタンパク質ｐｐ１５０、タンパク質Ｍ４５、ＤＮＡポリメラーゼＵＬ５４、ヘリカーゼＵＬ１０５、糖タンパク質ｇＭ、糖タンパク質ｇＮ、糖（ｇｌｃｏ）タンパク質Ｈ、糖タンパク質Ｂ  ｇＢ、タンパク質ＵＬ８３、タンパク質ＵＬ９４、タンパク質ＵＬ９９（感染性疾患がサイトメガロウイルス感染、好ましくはサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）による感染である場合）；
ｄ）カプシドタンパク質Ｃ、プレ膜タンパク質ｐｒＭ、膜タンパク質Ｍ、エンベロープタンパク質Ｅ（ドメインＩ、ドメインＩＩ、ドメインＩＩ）、タンパク質ＮＳ１、タンパク質ＮＳ２Ａ、タンパク質ＮＳ２Ｂ、タンパク質ＮＳ３、タンパク質ＮＳ４Ａ、タンパク質２Ｋ、タンパク質ＮＳ４Ｂ、タンパク質ＮＳ５（感染性疾患がデング熱、好ましくはデングウイルス（ＤＥＮ−１、ＤＥＮ−２、ＤＥＮ−３およびＤＥＮ−４）−フラビウイルスによる感染である場合）；
ｅ）Ｂ型肝炎表面抗原ＨＢｓＡｇ、Ｂ型肝炎コア抗原ＨｂｃＡｇ、ポリメラーゼ、タンパク質Ｈｂｘ、ｐｒｅＳ２ミドル表面タンパク質、表面タンパク質Ｌ、ラージＳタンパク質、ウイルスタンパク質ＶＰ１、ウイルスタンパク質ＶＰ２、ウイルスタンパク質ＶＰ３、ウイルスタンパク質ＶＰ４（感染性疾患がＢ型肝炎、好ましくはＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）による感染である場合）；
ｆ）複製タンパク質Ｅ１、調節タンパク質Ｅ２、タンパク質Ｅ３、タンパク質Ｅ４、タンパク質Ｅ５、タンパク質Ｅ６、タンパク質Ｅ７、タンパク質Ｅ８、主要カプシドタンパク質Ｌ１、マイナーカプシドタンパク質Ｌ2（感染性疾患が、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染、好ましくはヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）による感染である場合）；
ｇ）融合タンパク質Ｆ、ヘマグルチニン−ノイラミニダーゼＨＮ、糖タンパク質Ｇ、マトリックスタンパク質Ｍ、ホスホタンパク質Ｐ、核タンパク質Ｎ、ポリメラーゼＬ（感染性疾患が、ヒトパラインフルエンザウイルス感染、好ましくはヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）による感染である場合）；
ｈ）血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、Ｎｕｃｌｅｏタンパク質（ＮＰ）、Ｍ１タンパク質、Ｍ２タンパク質、ＮＳ１タンパク質、ＮＳ２タンパク質（ＮＥＰタンパク質：核輸送タンパク質）、ＰＡタンパク質、ＰＢ１タンパク質（ポリメラーゼ塩基性１タンパク質）、ＰＢ１−Ｆ２タンパク質およびＰＢ２タンパク質（オルトミクソウイルス科、インフルエンザウイルス（流感））；
ｉ）核タンパク質Ｎ、ラージ構造タンパク質Ｌ、ホスホタンパク質Ｐ、マトリックスタンパク質Ｍ、糖タンパク質Ｇ（感染性疾患が狂犬病、好ましくは狂犬病ウイルスによる感染である場合）；
ｊ）融合タンパク質Ｆ、核タンパク質Ｎ、マトリックスタンパク質Ｍ、マトリックスタンパク質Ｍ２−１、マトリックスタンパク質Ｍ２−２、ホスホタンパク質Ｐ、スモール疎水性タンパク質ＳＨ、主要表面糖タンパク質Ｇ、ポリメラーゼＬ、非構造タンパク質１  ＮＳ１、非構造タンパク質２  ＮＳ２（感染性疾患が呼吸器合胞体ウイルス感染、好ましくは呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）による感染である場合）；
ｋ）分泌抗原ＳｓｓＡ（ブドウ球菌属、ブドウ球菌食中毒）；分泌抗原ＳｓｓＡ（ブドウ球菌属  例えば、ａｕｒｅｕｓ、ブドウ球菌感染症）；分子シャペロンＤｎａＫ、細胞表面リポタンパク質Ｍｐｔ８３、リポタンパク質Ｐ２３、リン酸輸送系パーミアーゼタンパク質ｐｓｔＡ、１４ｋＤａ抗原、フィブロネクチン結合タンパク質Ｃ  ＦｂｐＣ１、アラニンデヒドロゲナーゼＴＢ４３、グルタミン合成酵素１、ＥＳＸ−１タンパク質、タンパク質ＣＦＰ１０、ＴＢ１０．４タンパク質、タンパク質ＭＰＴ８３、タンパク質ＭＴＢ１２、タンパク質ＭＴＢ８、Ｒｐｆ様タンパク質、タンパク質ＭＴＢ３２、タンパク質ＭＴＢ３９、クリスタリン、熱ショックタンパク質ＨＳＰ６５、タンパク質ＰＳＴ−Ｓ（感染性疾患が結核、好ましくはヒト型結核菌による感染である場合）；
またはゲノムポリプロテイン、タンパク質Ｅ、タンパク質Ｍ、カプシドタンパク質Ｃ、プロテアーゼＮＳ３、タンパク質ＮＳ１、タンパク質ＮＳ２Ａ、タンパク質ＡＳ２Ｂ、タンパク質ＮＳ４Ａ、タンパク質ＮＳ４Ｂ、タンパク質ＮＳ５（感染性疾患が黄熱病、好ましくは（ｐｅｒｆｅｒａｂｌｙ）黄熱病ウイルスによる感染である場合）から選択される。
【０４６１】
実施例
以下の実施例は、本発明のさらなる実例を示すことを意図したものである。この実施例は例示にすぎず、本発明の主題の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例１】
【０４６２】
実施例１：本発明による組成物の調製
以下の実施例のため、Ｇａｕｓｓｉａ  ｐｒｉｎｃｅｐｓルシフェラーゼ（ＧｐＬｕｃ）をコードしているＤＮＡ配列を調製し、後続のＲＮＡのインビトロ転写反応に使用した。得られたｍＲＮＡ構築物を、さらなるインビトロ実験およびインビボ実験に使用した。ＧｐＬｕｃおよびＰｐＬｕｃのそれぞれのアミノ酸配列およびｍＲＮＡ配列ならびに調製工程の詳細を以下に示す。
ＧｐＬｕｃ，アミノ酸配列（配列番号：１１）：
MGVKVLFALICIAVAEAKPTENNEDFNIVAVASNFATTDLDADRGKLPGKKLPLEVLKEMEANARKAGCTRGCLICLSHIKCTPKMKKFIPGRCHTYEGDKESAQGGIGEAIVDIPEIPGFKDLEPMEQFIAQVDLCVDCTTGCLKGLANVQCSDLLKKWLPQRCATFASKIQGQVDKIKGAGGD 
ＧｐＬｕｃ，ｍＲＮＡ配列（配列番号：１２）、また、本明細書においてＲ２８５１と表示する：
GGGGCGCUGCCUACGGAGGUGGCAGCCAUCUCCUUCUCGGCAUCAAGCUUACCAUGGGCGUGAAGGUCCUGUUCGCCCUCAUCUGCAUCGCCGUGGCGGAGGCCAAGCCCACCGAGAACAACGAGGACUUCAACAUCGUGGCCGUCGCCAGCAACUUCGCCACCACGGACCUGGACGCGGACCGGGGGAAGCUGCCGGGCAAGAAGCUCCCCCUGGAGGUGCUGAAGGAGAUGGAGGCCAACGCCCGCAAGGCCGGGUGCACCCGGGGCUGCCUCAUCUGCCUGUCCCACAUCAAGUGCACCCCCAAGAUGAAGAAGUUCAUCCCCGGGCGCUGCCACACCUACGAGGGCGACAAGGAGAGCGCGCAGGGCGGGAUCGGCGAGGCCAUCGUGGACAUCCCGGAGAUCCCCGGGUUCAAGGACCUGGAGCCCAUGGAGCAGUUCAUCGCCCAGGUCGACCUCUGCGUGGACUGCACGACCGGCUGCCUGAAGGGGCUGGCCAACGUGCAGUGCUCCGACCUCCUGAAGAAGUGGCUGCCCCAGCGGUGCGCCACCUUCGCGAGCAAGAUCCAGGGCCAGGUCGACAAGAUCAAGGGCGCCGGGGGCGACUGAGGACUAGUGCAUCACAUUUAAAAGCAUCUCAGCCUACCAUGAGAAUAAGAGAAAGAAAAUGAAGAUCAAUAGCUUAUUCAUCUCUUUUUCUUUUUCGUUGGUGUAAAGCCAACACCCUGUCUAAAAAACAUAAAUUUCUUUAAUCAUUUUGCCUCUUUUCUCUGUGCUUCAAUUAAUAAAAAAUGGAAAGAACCUAGAUCUAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUGCAUCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCAAAGGCUCUUUUCAGAGCCACCAGAAUU
ＰｐＬｕｃ，アミノ酸配列（配列番号：１８）：
MEDAKNIKKGPAPFYPLEDGTAGEQLHKAMKRYALVPGTIAFTDAHIEVDITYAEYFEMSVRLAEAMKRYGLNTNHRIVVCSENSLQFFMPVLGALFIGVAVAPANDIYNERELLNSMGISQPTVVFVSKKGLQKILNVQKKLPIIQKIIIMDSKTDYQGFQSMYTFVTSHLPPGFNEYDFVPESFDRDKTIALIMNSSGSTGLPKGVALPHRTACVRFSHARDPIFGNQIIPDTAILSVVPFHHGFGMFTTLGYLICGFRVVLMYRFEEELFLRSLQDYKIQSALLVPTLFSFFAKSTLIDKYDLSNLHEIASGGAPLSKEVGEAVAKRFHLPGIRQGYGLTETTSAILITPEGDDKPGAVGKVVPFFEAKVVDLDTGKTLGVNQRGELCVRGPMIMSGYVNNPEATNALIDKDGWLHSGDIAYWDEDEHFFIVDRLKSLIKYKGYQVAPAELESILLQHPNIFDAGVAGLPDDDAGELPAAVVVLEHGKTMTEKEIVDYVASQVTTAKKLRGGVVFVDEVPKGLTGKLDARKIREILIKAKKGGKIAV 
ＰｐＬｕｃ，ｍＲＮＡ配列（配列番号：１９）：
GGGGCGCUGCCUACGGAGGUGGCAGCCAUCUCCUUCUCGGCAUCAAGCUUGAGGAUGGAGGACGCCAAGAACAUCAAGAAGGGCCCGGCGCCCUUCUACCCGCUGGAGGACGGGACCGCCGGCGAGCAGCUCCACAAGGCCAUGAAGCGGUACGCCCUGGUGCCGGGCACGAUCGCCUUCACCGACGCCCACAUCGAGGUCGACAUCACCUACGCGGAGUACUUCGAGAUGAGCGUGCGCCUGGCCGAGGCCAUGAAGCGGUACGGCCUGAACACCAACCACCGGAUCGUGGUGUGCUCGGAGAACAGCCUGCAGUUCUUCAUGCCGGUGCUGGGCGCCCUCUUCAUCGGCGUGGCCGUCGCCCCGGCGAACGACAUCUACAACGAGCGGGAGCUGCUGAACAGCAUGGGGAUCAGCCAGCCGACCGUGGUGUUCGUGAGCAAGAAGGGCCUGCAGAAGAUCCUGAACGUGCAGAAGAAGCUGCCCAUCAUCCAGAAGAUCAUCAUCAUGGACAGCAAGACCGACUACCAGGGCUUCCAGUCGAUGUACACGUUCGUGACCAGCCACCUCCCGCCGGGCUUCAACGAGUACGACUUCGUCCCGGAGAGCUUCGACCGGGACAAGACCAUCGCCCUGAUCAUGAACAGCAGCGGCAGCACCGGCCUGCCGAAGGGGGUGGCCCUGCCGCACCGGACCGCCUGCGUGCGCUUCUCGCACGCCCGGGACCCCAUCUUCGGCAACCAGAUCAUCCCGGACACCGCCAUCCUGAGCGUGGUGCCGUUCCACCACGGCUUCGGCAUGUUCACGACCCUGGGCUACCUCAUCUGCGGCUUCCGGGUGGUCCUGAUGUACCGGUUCGAGGAGGAGCUGUUCCUGCGGAGCCUGCAGGACUACAAGAUCCAGAGCGCGCUGCUCGUGCCGACCCUGUUCAGCUUCUUCGCCAAGAGCACCCUGAUCGACAAGUACGACCUGUCGAACCUGCACGAGAUCGCCAGCGGGGGCGCCCCGCUGAGCAAGGAGGUGGGCGAGGCCGUGGCCAAGCGGUUCCACCUCCCGGGCAUCCGCCAGGGCUACGGCCUGACCGAGACCACGAGCGCGAUCCUGAUCACCCCCGAGGGGGACGACAAGCCGGGCGCCGUGGGCAAGGUGGUCCCGUUCUUCGAGGCCAAGGUGGUGGACCUGGACACCGGCAAGACCCUGGGCGUGAACCAGCGGGGCGAGCUGUGCGUGCGGGGGCCGAUGAUCAUGAGCGGCUACGUGAACAACCCGGAGGCCACCAACGCCCUCAUCGACAAGGACGGCUGGCUGCACAGCGGCGACAUCGCCUACUGGGACGAGGACGAGCACUUCUUCAUCGUCGACCGGCUGAAGUCGCUGAUCAAGUACAAGGGCUACCAGGUGGCGCCGGCCGAGCUGGAGAGCAUCCUGCUCCAGCACCCCAACAUCUUCGACGCCGGCGUGGCCGGGCUGCCGGACGACGACGCCGGCGAGCUGCCGGCCGCGGUGGUGGUGCUGGAGCACGGCAAGACCAUGACGGAGAAGGAGAUCGUCGACUACGUGGCCAGCCAGGUGACCACCGCCAAGAAGCUGCGGGGCGGCGUGGUGUUCGUGGACGAGGUCCCGAAGGGCCUGACCGGGAAGCUCGACGCCCGGAAGAUCCGCGAGAUCCUGAUCAAGGCCAAGAAGGGCGGCAAGAUCGCCGUGUAAGACUAGUGCAUCACAUUUAAAAGCAUCUCAGCCUACCAUGAGAAUAAGAGAAAGAAAAUGAAGAUCAAUAGCUUAUUCAUCUCUUUUUCUUUUUCGUUGGUGUAAAGCCAACACCCUGUCUAAAAAACAUAAAUUUCUUUAAUCAUUUUGCCUCUUUUCUCUGUGCUUCAAUUAAUAAAAAAUGGAAAGAACCUAGAUCUAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUGCAUCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCAAAGGCUCUUUUCAGAGCCACCAGAAUU 
【０４６３】
ＤＮＡおよびｍＲＮＡ構築物の調製：
Ｇａｕｓｓｉａ  ｐｒｉｎｃｅｐｓルシフェラーゼをコードしているＤＮＡ配列を、安定化のためにＧＣ最適化配列を導入することによってＤＮＡ配列をコードしている野生型を修飾することにより調製した。配列を誘導型ｐＵＣ１９ベクター内に導入し、リボソームの５’ＴＯＰ  ＵＴＲである３２Ｌ４−５’−ＵＴＲ（３２Ｌ４）に由来する安定化ＵＴＲ配列およびアルブミン７に由来する３’ＵＴＲを含むように修飾し、ヒストンステム−ループ配列、３’−末端部の６４個のアデノシン鎖（ポリ−Ａ−尾部）および３’−末端部の３０個のシトシン鎖（ポリ−Ｃ−尾部）をコード配列の３’側に導入した。この配列は以下の配列エレメント：ガウシアルシフェラーゼをコードしているコード配列；リボソームの５’ＴＯＰ  ＵＴＲである３２Ｌ４−５’−ＵＴＲ（３２Ｌ４）に由来する安定化配列；３’−末端部の６４個のアデノシン（ポリ−Ａ−尾部）；５個のヌクレオチド、３’−末端部の３０個のシトシン（ポリ−Ｃ−尾部）および５個のさらなるヌクレオチドを含む。
【０４６４】
Ｒ２８５１は、この状況において言及している場合、６４個のアデニレートを有するポリ（Ａ）−配列、続いて５個のヌクレオチド、続いて３０個のシチジレート（ｃｙｔｉｄｙｌａｔｅ）を有するポリ（Ｃ）−配列およびヒストンステム−ループ配列、続いてさらに５個のヌクレオチドを有する、Ｇａｕｓｓｉａ  ｐｒｉｎｃｅｐｓルシフェラーゼをコードしているＧＣ富化ｍＲＮＡ配列に似たものである。
【０４６５】
ＲＮＡのインビトロ転写：
それぞれのＤＮＡプラスミドを酵素的に線状化し、ＤＮＡ依存性Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼを用いて、ヌクレオチド混合物の存在下、それぞれのバッファー条件下でインビトロ転写した。キャップアナログ（ｍ７ＧｐｐｐＧ）をヌクレオチド混合物に添加することにより、ＧｐＬｕｃ  ｍＲＮＡを共転写によってキャッピングした。
【０４６６】
ｍＲＮＡ構築物の精製：
得られたｍＲＮＡ構築物を、ＰｕｒｅＭｅｓｓｅｎｇｅｒ（登録商標）（ＣｕｒｅＶａｃ，Ｔｕｂｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ；ＷＯ２００８／０７７５９２Ａ１）を用いて精製し、さらなる実験に使用した。
【０４６７】
カチオン性のペプチド／ポリマーの調製
ジスルフィド結合型ポリエチレングリコール／ペプチドコンジュゲートであるＰＢ８３を以下のようにして調製した。２０ｍｇの量のペプチド（ＣＨＨＨＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＨＨＨＣ−ＮＨ２）ＴＦＡ塩を２ｍＬのホウ酸バッファー（ｐＨ８．５）に溶解させ、室温でおよそ１８時間撹拌した。次いで、Ｎ−メチルピロリドンに溶解させた１２．６ｍｇのＰＥＧ−ＳＨ  ５０００（Ｓｕｎｂｒｉｇｈｔ）をペプチド溶液に添加し、ホウ酸バッファー（ｐＨ８．５）を用いて３ｍＬまでフィルアップした。室温で１８時間のインキュベーション後、反応混合物を精製し、セントリコン手段（ＭＷＣＯ  １０ｋＤａ）によって濃縮し、水で洗浄し、凍結乾燥させた。凍結乾燥後、凍結乾燥物をＥＬＧＡ  水に溶解させ、濃度を１０ｍｇ／ｍＬに調整した。得られたポリエチレングリコール／ペプチドポリマー（ＨＯ−ＰＥＧ  ５０００−Ｓ−（Ｓ−ＣＨＨＨＨＨＨＲＲＲＲＨＨＨＨＨＨＣ−Ｓ−）７−Ｓ−ＰＥＧ  ５０００−ＯＨをさらなる製剤化実験に使用し、以下、本明細書においてＰＢ８３と称する。
【０４６８】
リピドイドの調製
リピドイド 
(化)
2019517553.tif 000043
３−Ｃ１２
および
(化)
2019517553.tif 000044
３−Ｃ１２−ＯＨ
を調製した。リピドイド３−Ｃ１２は、トリス（２−アミノエチル）アミンの活性型ラウリン（Ｃ１２）酸誘導体でのアシル化後、アミドの還元によって得られ得る。あるいはまた、これは、対応するアルデヒドでの還元的アミノ化により調製され得る。リピドイド３−Ｃ１２−ＯＨは、Ｌｏｖｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｐｐ．１８６４−１８６９，ＰＮＡＳ，ｖｏｌ．１０７（２０１０），ｎｏ．５（化合物Ｃ１２−１１０参照）による同じオリゴアミンでの末端Ｃ１２アルキルエポキシドの付加によって調製される。
【０４６９】
式ＩＸ：
(化)
2019517553.tif 000045
（式ＩＸ）
によるカチオンを含むリピドイド３−Ｃ１２−ＯＨ−ｃａｔを３−Ｃ１２−ＯＨから、活性型メチル基、例えばヨウ化メチルとの反応によって調製した。
【０４７０】
ポリマー−リピドイド複合体化ｍＲＮＡのナノ粒子を有する組成物の調製：
まず、乳酸加リンゲルバッファー（ＲｉＬａ；択一的に、例えば生理食塩水（ＮａＣｌ）またはＰＢＳバッファーを使用してもよい）、それぞれの量のリピドイド、およびそれぞれの量のポリマー（ＰＢ８３）を混合し、リピドイドとペプチドまたはポリマーを含む組成物を調製した。次いで、この担体組成物を使用し、ｍＲＮＡをそれぞれの量のポリマー−リピドイド担体と混合して例えばリピドイド、ポリマーおよびｍＲＮＡ間での複合体の形成を可能にするために室温で１０分間のインキュベーション期間を設けることにより、該ｍＲＮＡを有するナノ粒子を合成した。次いで、このナノ粒子を、さらなるインビトロ実験およびインビボ実験に使用した。これとの関連における関連パラメータはリピドイドの量と種類、ポリマーの量と種類、およびＮ／Ｐ比である。
【０４７１】
得られたポリマー−リピドイド複合体化ｍＲＮＡ粒子の完全性を特性評価するため、ＲＮＡアガロースゲルシフトアッセイを行った。また、サイズ測定を行ない、得られたナノ粒子が一様なサイズプロフィールを有するかどうかを評価した。
【０４７２】
ＲＮＡゲルシフトアッセイのため、慣用的なＲＮＡアガロースゲルを調製し、それぞれのポリマー−リピドイド複合体化ｍＲＮＡ粒子をロードした。ゲルバンドを、バイオイメージングシステム．を用いて可視化した。試験したすべてのポリマー−リピドイド複合体化ｍＲＮＡを解析し、それぞれの条件下で安定であることが測定された（データ示さず）。
【０４７３】
粒径の測定のため、ポリマー−リピドイド複合体化ｍＲＮＡを含む試料を乳酸加リンゲル液（択一的に、生理食塩水）中で最終容量５０μＬまで希釈した。サイズ測定は、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（登録商標）デバイスを用いて行った。
【０４７４】
ゲルシフトアッセイおよび粒径解析の結果により、得られたポリマー−リピドイド−ｍＲＮＡ複合体は、広範なポリマー−対−リピドイド比にわたって安定で一様であることが示された。
【実施例２】
【０４７５】
実施例２：インビトロでのＳｏｌ８筋肉細胞のトランスフェクション効率に対するいろいろなポリマー−リピドイド製剤の効果
この実施例は、分化Ｓｏｌ８細胞において陽性対照および陰性対照と比較した、ＧｐＬｕｃ  ｍＲＮＡ（配列番号：１２）を含む種々の本発明による組成物のトランスフェクション効率を示す。図１Ａ〜１Ｃからわかるように、少量であってもリピドイド（すなわち、３−Ｃ１２および３−Ｃ１２−ＯＨ）をカチオン性のポリマー−ペプチドコンジュゲート（ＰＢ８３）に添加すると、トランスフェクション効率の顕著な増大がもたらされることがわかった。
【０４７６】
Ｓｏｌ８細胞のトランスフェクション：
Ｓｏｌ８は、Ｄａｕｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．によって、正常Ｃ３Ｈマウスの脚から採取したヒラメ筋の一次培養物から単離された筋原性細胞株である。０．２ｍＬの容量のＳｏｌ８細胞（２００００細胞）を９６ウェルガラス底プレート（コラーゲンでコートしたＳｏｆｔｗｅｌｌ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌ，弾性Ｅ＝１２ｋＰａ）内に１日目に播種した。各ウェルから培地を除去した後、１００μＬ  ＤＭＥＭ培地（２％のウマ血清を含む）を各ウェルに添加した。その後、２日目に、Ｓｏｌ８細胞を、実施例１）に従って調製したポリマー−リピドイド複合体の１００μＬのトランスフェクションミックス（三連）およびそれぞれの対照（三連）でトランスフェクトし、細胞を３７℃および５％ＣＯ２で１２０分間インキュベートした。インキュベーション後、１５０μＬの培地を、１０％のウシ胎仔血清を補給した１５０μＬの新鮮ＤＭＥＭ培地と交換した。トランスフェクション後２４時間目、すなわち３日目、各ウェルの１０μＬの上清みを抽出し、さらなる発光解析に使用した。解析は後述するようにして行った。カーゴでの成功裡のトランスフェクションにより、ルシフェラーゼタンパク質の翻訳およびＧｐルシフェラーゼタンパク質の細胞培養上清み中への分泌がもたらされる。
【０４７７】
発光解析のため、１０μＬの容量の上清みを、ＧｐＬｕｃ測定のために９６ウェルプレートに移した。次いで、セレンテラジン標準溶液（１００μＭ）を、５ｍＭのＮａＣｌ（ｐＨ７．２）を補給した４９ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水中で調製した（１ｍＬのセレンテラジン標準原液（ＥｔＯＨ中４．７２ｍＭ）。１００μＬの容量のセレンテラジン標準溶液をＧｐＬｕｃの基質として使用し、５秒後に市販のマイクロプレートリーダーで測定した。
【実施例３】
【０４７８】
実施例３：インビトロでのＨｅｐＧ２細胞のトランスフェクション効率に対するいろいろなポリマー−リピドイド製剤の効果
この実施例は、ＨｅｐＧ２細胞において陽性対照および陰性対照と比較した、ＧｐＬｕｃ  ｍＲＮＡを含む種々の本発明による組成物のトランスフェクション効率を示す。図２Ａおよび２Ｂからわかるように、少量であってもリピドイド（３−Ｃ１２；３−Ｃ１２−ＯＨ、または３−Ｃ１２−ＯＨ−ｃａｔ）をカチオン性のポリマー−ペプチドコンジュゲート（ＰＢ８３）に添加すると、トランスフェクション効率の顕著な増大がもたらされることがわかった。
【０４７９】
実験は、Ｓｏｌ８細胞ではなくＨｅｐＧ２細胞をトランスフェクトしたこと以外は、先の実施例に記載のようにして行った。０．２ｍＬの容量のＨｅｐＧ２細胞（１００００細胞）を９６ウェル組織培養プレート内に播種した。各ウェルから培地を除去した後、１００μＬのＲＰＭＩ  １６４０培地（１％のペニシリンと１％のストレプトマイシン、１％のＬ−グルタミンを含む）を各ウェルに添加した。その後、ＨｅｐＧ２細胞を、ポリマー−リピドイドｍＲＮＡ複合体の１００μＬのトランスフェクションミックス（三連）およびそれぞれの対照（三連）でトランスフェクトし、細胞を３７℃および５％ＣＯ２で９０分間インキュベートした。インキュベーション後、１５０μＬの培地を、１０％のウシ胎仔血清を補給した１５０μＬの新鮮ＲＰＭＩ  １６４０培地と交換した。トランスフェクション後２４時間目、各ウェルの１０μＬの上清みを抽出し、さらなる発光解析に使用した。
【実施例４】
【０４８０】
実施例４：ヒトＰＢＭＣでのインビトロサイトカイン刺激
この実施例では、本発明のナノ粒子によって誘発される免疫系の内因性賦活を評価した。免疫賦活に対する本発明の製剤の影響を評価するため、サイトカインのインターフェロンα（ＩＮＦａ）および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦａ）の放出を、いろいろなポリマー−脂質複合体化ＧｐＬｕｃ  ｍＲＮＡで処理後のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）において測定した。
【０４８１】
健常ドナーの末梢血由来のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ勾配を用いて単離し、続いて１×ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で洗浄した。単離した細胞を９６ウェルマイクロタイタープレート上に播種した（２×１０５細胞／ウェル）。ＰＢＭＣを２４時間、１０μＬのそれぞれのポリマー−リピドイド複合体化ｍＲＮＡ粒子（実施例１に従って調製）または特定の対照（例えば、裸のＲＮＡ、乳酸加リンゲルバッファー、ＣｐＧ２２１６、ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ（登録商標））とともにＸ−ＶＩＶＯ  １５培地（Ｌｏｎｚａ）中で三連にてインキュベートした。ＰＢＭＣ刺激に対する免疫賦活効果を、ヒトＩＮＦａを検出する特異的抗体を用いてサイトカイン産生を検出することによって測定した。
【０４８２】
ＥＬＩＳＡマイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｂ）を一晩（ｏ／ｎ）、特異的サイトカイン抗体をさらに含めた結合バッファー（０．０２％ＮａＮ３，１５ｍＭ  Ｎａ２ＣＯ３，１５ｍＭ  ＮａＨＣＯ３，ｐＨ９．７）とともにインキュベートした。次いで細胞を、１％のＢＳＡ（ウシ血清  アルブミン）を含む１×ＰＢＳでブロックした。細胞上清みを添加し、３７℃で４時間インキュベートした。続いて、マイクロタイタープレートを、０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含む１×ＰＢＳで洗浄し、次いで、ビオチン標識二次抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）とともにインキュベートした。ストレプトアビジンカップリングホースラディッシュペルオキシダーゼをプレートに添加した。次いでプレートを、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を含む１×ＰＢＳで再度洗浄し、ＡＢＴＳ（２，２’−アジノ−ビス（３−エチル−ベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）を基質として添加した。４０５ｎｍにおける吸光度（ＯＤ  ４０５）を、組換えサイトカイン（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）での標準曲線を用いて、Ｔｅｃａｎ（Ｃｒａｉｌｓｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）製のＳｕｎｒｉｓｅ  ＥＬＩＳＡ−Ｒｅａｄｅｒで測定することによりサイトカイン量を調べた。並行して、細胞培養上清み中のＧｐＬｕｃ濃度も調べた。
【０４８３】
その結果、、図３からわかるように、試験した組成物はヒトＰＢＭＣにおけるサイトカインの分泌を刺激せず、本発明のナノ粒子は、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドなどの強力な陽性対照の非存在下において免疫系を内因的に賦活させる可能性が非常にごくわずかであることが示された。
【実施例５】
【０４８４】
実施例５：ルシフェラーゼ−ｍＲＮＡの網膜下注射後２４時間目のラットの目の走査レーザー検眼鏡（ＳＬＯ）解析
ｍＲＮＡ複合体を、ＰｐＬｕｃ  ｍＲＮＡ（配列番号：１９）とカチオン性のポリマー−脂質またはリピドイド溶液（例えば、ＭＣ３−ｃａｔまたは３−Ｃ１２−ＯＨ）をいろいろな仕込み比率で混合することにより調製した。リンゲルバッファーで処置した動物を対照として使用した。凍結乾燥製剤をリンゲルバッファーで再水和させた。最終ｍＲＮＡ濃度を２．５μｇ／μｌにした。２回用量の２μｌを各目に注射した。１群あたり４つの目（２匹のラット）を処置した。処置後２４時間目、非侵襲的走査レーザー検眼鏡（ＳＬＯ）を用いて網膜を画像撮影した（データ示さず）。ルシフェリン溶液をラットの尾静脈内に注射し、２分間のインキュベーション時間後、目を少なくとも１０分間解析した。この時間中、ラットにさらにルシフェリン溶液を、鼻で吸わせて投与した。詳細な解析のため、次いで動物を致死させ、その目を取り出して凍結させた。続いて、目の試料をトランスフェクションレベルについて解析した。この目的のため、これらの目をＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒで機械的に破壊し、溶解させた。各試料のルシフェラーゼ活性をルミノメーターでアッセイした。
【０４８５】
ルシフェラーゼ−ｍＲＮＡ（ＰｐＬｕｃ  ｍＲＮＡ）の網膜下注射の結果を図４に示し、相対発光量（ＲＬＵ）で表示する。
【実施例６】
【０４８６】
実施例６：マウスの筋肉内ワクチン接種後の体液性および細胞性免疫応答の誘導
ＤＮＡおよびｍＲＮＡ構築物の調製
この実施例のため、Ａ型インフルエンザウイルス（Ａ／Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ／６０２／２００９（Ｈ１Ｎ１））のヘマグルチニン（ＨＡ）タンパク質をコードしているＤＮＡ配列を調製し、後続のインビトロ転写反応に使用した。それぞれのｍＲＮＡ配列ならびにワクチン接種レジメンに関するさらなる詳細を以下に示す。
Ａ型インフルエンザウイルス（Ａ／Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ／６０２／２００９（Ｈ１Ｎ１））のヘマグルチニン（ＨＡ）タンパク質をコードしているＧ／Ｃ富化ｍＲＮＡ配列Ｒ２５６４（配列番号１７）：
GGGGCGCUGCCUACGGAGGUGGCAGCCAUCUCCUUCUCGGCAUCAAGCUUACCAUGAAGGCCAUCCUGGUGGUCCUCCUGUACACCUUCGCCACCGCGAACGCCGACACGCUGUGCAUCGGCUACCACGCCAACAACAGCACCGACACCGUGGACACCGUGCUCGAGAAGAACGUCACGGUGACCCACUCCGUGAACCUGCUGGAGGACAAGCACAACGGGAAGCUCUGCAAGCUGCGGGGCGUCGCCCCGCUGCACCUCGGGAAGUGCAACAUCGCCGGCUGGAUCCUGGGGAACCCGGAGUGCGAGAGCCUGUCCACCGCGAGCUCCUGGAGCUACAUCGUGGAGACCUCCAGCUCCGACAACGGCACGUGCUACCCCGGCGACUUCAUCGACUACGAGGAGCUCCGCGAGCAGCUGAGCUCCGUGAGCUCCUUCGAGCGGUUCGAGAUCUUCCCCAAGACCAGCUCCUGGCCCAACCACGACAGCAACAAGGGGGUCACCGCCGCCUGCCCGCACGCCGGCGCGAAGUCCUUCUACAAGAACCUGAUCUGGCUCGUGAAGAAGGGGAACAGCUACCCCAAGCUGUCCAAGAGCUACAUCAACGACAAGGGCAAGGAGGUGCUGGUCCUCUGGGGGAUCCACCACCCCAGCACCUCCGCCGACCAGCAGAGCCUGUACCAGAACGCCGACGCCUACGUGUUCGUGGGCUCCAGCCGCUACUCCAAGAAGUUCAAGCCCGAGAUCGCCAUCCGGCCGAAGGUCCGCGACCAGGAGGGCCGGAUGAACUACUACUGGACGCUGGUGGAGCCCGGGGACAAGAUCACCUUCGAGGCGACCGGCAACCUCGUGGUCCCCCGCUACGCCUUCGCCAUGGAGCGGAACGCCGGGAGCGGCAUCAUCAUCUCCGACACCCCCGUGCACGACUGCAACACGACCUGCCAGACCCCGAAGGGCGCCAUCAACACCAGCCUGCCCUUCCAGAACAUCCACCCCAUCACGAUCGGGAAGUGCCCCAAGUACGUGAAGUCCACCAAGCUGCGCCUCGCGACCGGCCUGCGGAACGUCCCGAGCAUCCAGUCCCGCGGGCUGUUCGGCGCCAUCGCCGGGUUCAUCGAGGGCGGCUGGACCGGGAUGGUGGACGGCUGGUACGGGUACCACCACCAGAACGAGCAGGGCAGCGGGUACGCCGCCGACCUCAAGUCCACGCAGAACGCGAUCGACGAGAUCACCAACAAGGUGAACAGCGUCAUCGAGAAGAUGAACACCCAGUUCACCGCCGUGGGCAAGGAGUUCAACCACCUGGAGAAGCGGAUCGAGAACCUGAACAAGAAGGUCGACGACGGCUUCCUCGACAUCUGGACGUACAACGCCGAGCUGCUGGUGCUCCUGGAGAACGAGCGCACCCUGGACUACCACGACUCCAACGUGAAGAACCUCUACGAGAAGGUCCGGAGCCAGCUGAAGAACAACGCCAAGGAGAUCGGGAACGGCUGCUUCGAGUUCUACCACAAGUGCGACAACACCUGCAUGGAGUCCGUGAAGAACGGGACCUACGACUACCCCAAGUACAGCGAGGAGGCCAAGCUGAACCGCGAGGAGAUCGACGGCGUGAAGCUCGAGUCCACGCGGAUCUACCAGAUCCUGGCGAUCUACAGCACCGUCGCCAGCUCCCUGGUGCUCGUGGUCAGCCUGGGGGCCAUCUCCUUCUGGAUGUGCAGCAACGGCUCCCUGCAGUGCCGCAUCUGCAUCUGACCACUAGUGCAUCACAUUUAAAAGCAUCUCAGCCUACCAUGAGAAUAAGAGAAAGAAAAUGAAGAUCAAUAGCUUAUUCAUCUCUUUUUCUUUUUCGUUGGUGUAAAGCCAACACCCUGUCUAAAAAACAUAAAUUUCUUUAAUCAUUUUGCCUCUUUUCUCUGUGCUUCAAUUAAUAAAAAAUGGAAAGAACCUAGAUCUAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUGCAUCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCAAAGGCUCUUUUCAGAGCCACCAGAAUU
【０４８７】
第１の調製法に従い、上記のｍＲＮＡをコードしているＤＮＡ配列を調製した。構築物Ｒ２５６４（配列番号：１７）を、リボソームタンパク質３２Ｌに由来する５’−ＴＯＰ−ＵＴＲを導入し、安定化のためにＧＣ最適化配列を導入した後、アルブミン−３’−ＵＴＲに由来する安定化配列、６４個のアデノシン鎖（ポリ（Ａ）−配列）、３０個のシトシン鎖（ポリ（Ｃ）−配列）およびヒストンステムループを導入することによって野生型コード配列を修飾することにより調製した。
【０４８８】
ワクチンの調製
「裸の」ｍＲＮＡ  Ｒ２５６４を、乳酸加リンゲル液（ＲｉＬａ）中にて投与した。裸のｍＲＮＡ  Ｒ２５６４とＰＢ８３および３−Ｃ１２−ＯＨとの共製剤を、すべての成分を投与前に直接混合することにより作製した。
【０４８９】
免疫処置
Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝８／群）に、１０μｇのＨＡ−ｍＲＮＡ（Ｒ２５６４，配列番号：１７，「裸の」ＨＡ−ｍＲＮＡ）単独またはＰＢ８３  Ｎ／Ｐ  ０．７，０．４  ３−Ｃ１２−ＯＨと共製剤化した１０μｇのＨＡ−ｍＲＮＡのいずれかで、０日目に筋肉内（左脛骨筋）ワクチン接種し、２５日目に追加刺激した；以下の表１参照。表中、表示した量（単位：μｇ）は、該核酸分子そのものの質量を示す。
【０４９０】
【表１】
2019517553.tif 000046
表1：実験設定
【０４９１】
２５日目、すべての動物に追加刺激の注射を行った。機能性の体液性応答の誘導を４０日目に、血液試料を採取し、血清の赤血球凝集抑制（ＨＩ）抗体価（以下の表２参照）（これは一般的に、インフルエンザウイルス感染に対する免疫防御のサロゲートマーカーとして使用される）を調べることにより解析した。１：４０以上のＨＩ価が典型的には防御の賦与とみなされる。乳酸加リンゲルバッファー（ＲｉＬａ）処置マウスを陰性対照として使用した。
【０４９２】
【表２】
2019517553.tif 000047
表２：ワクチン接種スケジュール
【０４９３】
赤血球凝集抑制アッセイ
赤血球凝集抑制（ＨＩ）アッセイのため、マウス血清を熱不活化し（５６℃，３０分間）、カオリンとともにインキュベートし、ニワトリ赤血球（ＣＲＢＣ）（ともに、Ｌａｂｏｒ  Ｄｒ．Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｋｏｌｌｅｇｅｎ，Ｏｃｈｓｅｎｈａｕｓｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に予備吸着させた。ＨＩアッセイのため、前処理した血清の５０μＬの２倍希釈液を４赤血球凝集価（ＨＡＵ）の不活化Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／５  ７／２００９（ＮＩＢＳＣ，Ｐｏｔｔｅｒｓ  Ｂａｒ，ＵＫ）とともに４５分間インキュベートし、５０μＬの０．５％ＣＲＢＣを添加した。
【０４９４】
結果：
図５においてわかるように、ＰＢ８３  Ｎ／Ｐ  ０．７、０．４  ３−Ｃ１２−ＯＨ−製剤でワクチン接種したマウスはすべて、≧１：４０のＨＩ価を示した。図５はさらに、ＨＡ−ｍＲＮＡ（Ｒ２５６４）とＰＢ８３および３−Ｃ１２−ＯＨを主体とするポリマー−リピドイド担体とを含む製剤での筋肉内ワクチン接種では、ＨＡタンパク質に対してＨＡ−ｍＲＮＡ（Ｒ２５６４）単独でのワクチン接種と比べて高い抗体価が誘導されることを示す。
【実施例７】
【０４９５】
実施例７：
Ａ５４９細胞におけるいろいろな脂質との組合せでの他のポリマーのトランスフェクション効率
この実施例では、Ａ５４９細胞（ヒト肺癌細胞株）における、いろいろな脂質との組合せでのＰＢ８３以外のポリマーのトランスフェクション効率に対する効果の評価を記載する。このため、ポリカチオン性ブロックポリマーＳｕｎｂｒｉｇｈｔ  ＡＳ５０−ＤＴ−Ａ（日油株式会社，東京）をｍＲＮＡの効率的な送達のために使用した。トランスフェクション効率の読み出し情報として、Ｇａｕｓｓｉａ  ｐｒｉｎｃｅｐｓルシフェラーゼＧｐＬｕｃ  ｍＲＮＡをカーゴとして使用した。カーゴでの成功裡のトランスフェクションにより、ルシフェラーゼタンパク質の翻訳およびルシフェラーゼタンパク質の細胞培養上清み中への分泌がもたらされる。
【０４９６】
したがって、Ａ５４９細胞を２４ウェルプレート内に、７５０００細胞／ウェルの密度で細胞培養培地（Ｇｉｂｃｏ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２Ｋ（Ｋａｉｇｈｎ’ｓ）培地，１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ），１％のＬ−グルタミン，１％のペニシリン／ストレプトマイシン）中に播種した。Ａ５４９細胞を二連で、後述するようにしていろいろな担体−脂質製剤およびＧｐＬｕｃコードｍＲＮＡ（配列番号：１２；Ｒ２８５１）でトランスフェクトした。陰性対照として、ＰＢ８３担体なしのＧｐＬｕｃコードｍＲＮＡを使用した。ルシフェラーゼ発現を２４時間後に定量した。＃
【０４９７】
【表３】
2019517553.tif 000048
表３：トランスフェクション条件
【０４９８】
結果：
図６は、ＧｐＬｕｃタンパク質が、非ＰＢ８３ポリマーを用いてｍＲＮＡ構築物Ｒ２８５１でトランスフェクトしたＡ５４９細胞において発現したこと、および試験した脂質の添加ありの製剤は、脂質の添加なしのＳｕｎｂｒｉｇｈｔポリマー対照と比べた場合、より効率的であったことを示す。これは、カチオン性のポリマー系を使用した場合に、ｍＲＮＡと非常に少量の脂質の組合せによりトランスフェクション効率を高めることができたことを示す。
【０４９９】
実施例７：ＢＨＫ細胞におけるいろいろな脂質との組合せでの他のポリマーのトランスフェクション効率
この実施例では、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞およびＳｏｌ８（ハツカネズミの骨格筋）細胞における、いろいろな脂質との組合せでのＰＢ８３以外のポリマーのトランスフェクション効率に対する効果の評価を記載する。このため、分子
−ＧＨ５Ｒ４Ｈ５ＧＣ−Ｓ−Ｓ−ＣＧＨ５Ｒ４Ｈ５Ｇ（「Ｉｎｌａｙ−ダイマー」；Ｓ−Ｓは、この単位がシステインＳ−Ｓ結合によって共有結合されていることを示す；Ｉｎｔａｖｉｓ  Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＡＧ，Ｇｅｒｍａｎｙ／Ｃｏｌｏｇｎｅ）；
−Ｋ（ＥＥＥＫＫ）３ＳＧＧＧＧＨ５Ｒ４Ｈ５ＧＣ−Ｓ−Ｓ−ＣＧＨ５Ｒ４Ｈ５ＧＧＧＧＳ（ＫＫＥＥＥ）３Ｋ（「（ＫＫＥＥＥ）３Ｋ−ダイマー」；Ｓ−Ｓは、この単位がシステインＳ−Ｓ結合によって共有結合されていることを示す；Ｉｎｔａｖｉｓ  Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＡＧ，Ｇｅｒｍａｎｙ／Ｃｏｌｏｇｎｅ）；
−ポリカチオン性の線状多糖キトサン９５／５０（「キトサン」，ＣＡＳ  ９０１２−７６−４；Ｉｎｔａｖｉｓ  Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＡＧ，Ｇｅｒｍａｎｙ／Ｃｏｌｏｇｎｅ）；
−（Ｒ１２Ｃ）−（ＣＲ１２Ｃ）−（Ｒ１２Ｃ）（「トリマー」；Ｒ１２Ｃ単位とＣＲ１２Ｃ単位はシステインＳ−Ｓ結合によって共有結合されている；Ｉｎｔａｖｉｓ  Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＡＧ，Ｇｅｒｍａｎｙ／Ｃｏｌｏｇｎｅ）；
−Ｒ１２Ｃ−ＰＥＧ５０００（「Ｒ１２Ｃ−ＰＥＧ」）；および
−（Ｒ１２ＣＷ）２（この２つのＲ１２ＣＷ−単位はシステインＳ−Ｓ結合によって共有結合されている）
をｍＲＮＡの送達のために使用した。トランスフェクション効率の読み出し情報として、Ｇａｕｓｓｉａ  ｐｒｉｎｃｅｐｓルシフェラーゼＧｐＬｕｃ  ｍＲＮＡをカーゴとして使用した。カーゴでの成功裡のトランスフェクションにより、ルシフェラーゼタンパク質の翻訳およびルシフェラーゼタンパク質の細胞培養上清み中への分泌がもたらされる。
【０５００】
したがって、ＢＨＫ細胞では、細胞を９６ウェルプレート内に、１００００細胞／ウェルの密度で細胞培養培地（ＲＰＭＩ，１０％のＦＣＳ，１％のＬ−グルタミン，１％のペニシリン／ストレプトマイシン）中に播種した。ＢＨＫ細胞を二連で、後述するようにしていろいろな担体−脂質製剤およびＧｐＬｕｃコードｍＲＮＡ（配列番号：１２；Ｒ２８５１）でトランスフェクトした。陰性対照として、ＰＢ８３担体なしのＧｐＬｕｃコードｍＲＮＡを使用した。ルシフェラーゼ発現をトランスフェクション後２４時間目に定量した。
【０５０１】
したがって、Ｓｏｌ８（分化）細胞では、細胞をトランスフェクションの７日前に、９６ウェルプレート内に、１００００細胞／ウェルの密度で細胞培養培地（ＤＭＥＭ，１％のペニシリン／ストレプトマイシン，１％のＬ−グルタミン，１％のＦＣＳ）中に播種した。播種の１日後に培地を除去し、１％のＦＣＳを含有しているＤＭＥＭを細胞に添加した。播種後３日目、細胞の培地を交換した（ＤＭＥＭ，１％のＦＣＳ）。８日目、Ｓｏｌ８細胞を三連で、後述するようにしていろいろな担体−脂質製剤およびＧｐＬｕｃコードｍＲＮＡ（配列番号：１２；Ｒ２８５１）でトランスフェクトした。陰性対照として、ＣＶＣＭ／ＰＢ８３担体なしのＧｐＬｕｃコードｍＲＮＡを使用した。ルシフェラーゼ発現をトランスフェクション後２４時間目に定量した。
【０５０２】
したがって、ＨｅＬａ細胞では、細胞を９６ウェルプレート内に、１００００細胞／ウェルの密度で細胞培養培地（ＲＰＭＩ，１０％ＦＣＳ，１％のＬ−グルタミン，１％のペニシリン／ストレプトマイシン）中に播種した。ＨｅＬａ細胞を二連で、後述するようにしていろいろな担体−脂質製剤および２μｇのＰｐＬｕｃコードｍＲＮＡ（配列番号：１９；Ｒ２２４４；以下の表参照）でトランスフェクトした。陰性対照として、ＰＢ８３担体なしのＰｐＬｕｃコードｍＲＮＡを使用した。ルシフェラーゼ発現をトランスフェクション後２４時間目に定量した。
【０５０３】
【表４】
2019517553.tif 000049
表４：トランスフェクション条件
【０５０４】
結果：
図７Ａおよび７Ｂは、ＧｐＬｕｃタンパク質が、非ＰＢ８３ポリマーを用いてｍＲＮＡ構築物Ｒ２８５１でトランスフェクトしたＢＨＫ細胞および分化Ｓｏｌ８細胞において発現したこと、および試験した脂質の添加ありの製剤は、それぞれの脂質の添加なしのポリマー対照と比べた場合、より効率的であったことを示す。図７Ｃは、ＰｐＬｕｃタンパク質がＨｅＬａ細胞において発現したことを示す。これは、カチオン性のポリマー系を使用した場合に、ｍＲＮＡと非常に少量の脂質の組合せによりトランスフェクション効率を高めることができたことを示す。
【実施例８】
【０５０５】
実施例８：３−Ｃ１２−アミド脂質との組合せでの他のポリマーのトランスフェクション効率
この実施例では、ＦＣＳなしでのＨｅｐＧ２細胞における、いろいろなポリマー−脂質製剤のトランスフェクション効率に対する効果の評価を記載する。トランスフェクション効率の読み出し情報として、Ｇａｕｓｓｉａ  ｐｒｉｎｃｅｐｓルシフェラーゼＧｐＬｕｃ  ｍＲＮＡをカーゴとして使用した。カーゴでの成功裡のトランスフェクションにより、ルシフェラーゼタンパク質の翻訳およびルシフェラーゼタンパク質の細胞培養上清み中への分泌がもたらされる。
【０５０６】
したがって、ＨｅｐＧ２細胞を２４ウェルプレート内に、１００００細胞／ウェルの密度で細胞培養培地（２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ５００ｍｌ，１０％ＦＣＳ，１％のＬ−グルタミン，１％のペニシリン／ストレプトマイシン；Ｌｏｎｚａ  Ｇｒｏｕｐ  ＡＧ  ＢＥ１２−１１５Ｆ／６ＭＢ２０５；Ｂａｓｅｌ／Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄを含むＲＰＭＩ  １６４０）中に播種した。ＨｅｐＧ２細胞を二連で、後述するようにしていろいろな担体−脂質製剤および０．７のＮ／Ｐ比を有するＧｐＬｕｃコードｍＲＮＡ（配列番号：１２；Ｒ２８５１）でトランスフェクトした。陰性対照として、ＣＶＣＭ／ＰＢ８３担体なしのＧｐＬｕｃコードｍＲＮＡを使用した。ルシフェラーゼ発現を２４時間後に定量した。
【０５０７】
３−Ｃ１２−アミド（式Ｘ）
(化)
2019517553.tif 000050
３−Ｃ１２−アミドモノメチル誘導体（式Ｘａ）
(化)
2019517553.tif 000051
３−Ｃ１２−アミドジ−メチル誘導体（式Ｘｂ）
(化)
2019517553.tif 000052
【０５０８】
【表５】
2019517553.tif 000053
表５：トランスフェクション条件：
【０５０９】
結果：
図８は、ＧｐＬｕｃタンパク質が、ｍＲＮＡ構築物Ｒ２８５１でトランスフェクトしたＨｅｐ  Ｇ２細胞において発現したこと、および試験した脂質の添加ありの製剤は、脂質の添加なしの対照と比べた場合、非常に効率的であったことを示す。これは、ｍＲＮＡと非常に少量の脂質の組合せによりトランスフェクション効率を高めることができたことを示す。
【実施例９】
【０５１０】
実施例９：硝子体内送達の際のいろいろな脂質との組合せでの他のポリマーのトランスフェクション効率
この実施例では、接眼送達を行った場合の、いろいろなポリマー−脂質製剤のトランスフェクション効率に対する効果の評価を記載する。トランスフェクション効率の読み出し情報として、Ｐｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓルシフェラーゼＰｐｌｕｃ  ｍＲＮＡをカーゴとして使用した。カーゴでの成功裡のトランスフェクションにより、ルシフェラーゼタンパク質の翻訳およびルシフェラーゼタンパク質の細胞培養上清み中への分泌がもたらされる。
【０５１１】
ｍＲＮＡ複合体を、ＰｐＬｕｃ  ｍＲＮＡ（配列番号：１９  Ｒ２２４４）とカチオン性のポリマー−脂質溶液を同じ仕込み比率で混合することにより調製した。製剤をリンゲルバッファー中で、以下のスキームに従って最終ｍＲＮＡ濃度を２μｇ／μｌにして調製した。
【０５１２】
製剤１（ＰｐＬｕｃ  ｍＲＮＡ  Ｒ２２４４）
２０ｍｌのｍＲＮＡ（５ｇ／ｌ）＋２５ｍｌの水＋５ｍｌの１０×ＲｉＬａ
５０ｍｌ中１００ｍｇのｍＲＮＡにする（２ｍｇ／ｍｌに相当）
【０５１３】
製剤２（ＰｐＬｕｃ  ｍＲＮＡ  Ｒ２２４４，ＰＢ８３  Ｎ／Ｐ  ０．７，０．４  ３−Ｃ１２−ＯＨ中）
２０ｍｌのＣＶＣＭ（ＰＢ８３，１０ｇ／ｌ）＋０．４ｍｌの３−Ｃ１２−ＯＨ（１００μｍｏｌ／ｍｌ）＋４．５ｍｌの水＋５ｍｌの１０×ＲｉＬａ
２０ｍｌのｍＲＮＡ（Ｒ２２４４−ルシフェラーゼ；５ｇ／ｌ）に添加
５０ｍｌ中１００ｍｇのｍＲＮＡにする（２ｍｇ／ｍｌに相当）
【０５１４】
５μｌを各目に（硝子体内）注射した。群あたり４つの目を処置した。リンゲルバッファー中で調製した非製剤化ｍＲＮＡで処置した動物を対照として使用した。処置後２４時間目、動物を致死させ、その目を取り出して凍結させた。続いて、目の試料をトランスフェクションレベルについて解析した。この目的のため、これらの目をＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒで機械的に破壊し、溶解させた。各試料のルシフェラーゼ活性をルミノメーターでアッセイした。ルシフェラーゼ活性の結果を相対発光量（ＲＬＵ）で表示する。
【０５１５】
結果：
図９は、硝子体内注射の際にＰｐＬｕｃタンパク質が発現したこと、および試験した脂質の添加ありの製剤は、脂質の添加なしの対照と比べた場合、非常に効率的であったことを示す。これは、ｍＲＮＡと非常に少量の脂質の組合せにより硝子体内でトランスフェクション効率を高めることができたことを示す。
【実施例１０】
【０５１６】
実施例１０：Ａ５４９細胞におけるいろいろなポリマー−脂質の組合せのトランスフェクション効率
この実施例では、Ａ５４９細胞（ヒト肺癌細胞株）における、いろいろなポリマー−脂質製剤のトランスフェクション効率に対する効果の評価を記載する。トランスフェクション効率の読み出し情報として、Ｇａｕｓｓｉａ  ｐｒｉｎｃｅｐｓルシフェラーゼＧｐＬｕｃ  ｍＲＮＡをカーゴとして使用した。カーゴでの成功裡のトランスフェクションにより、ルシフェラーゼタンパク質の翻訳およびルシフェラーゼタンパク質の細胞培養上清み中への分泌がもたらされる。
【０５１７】
したがって、Ａ５４９細胞を２４ウェルプレート内に、７５０００細胞／ウェルの密度で細胞培養培地（Ｇｉｂｃｏ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２Ｋ（Ｋａｉｇｈｎ’ｓ）培地，１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ），１％のＬ−グルタミン，１％のペニシリン／ストレプトマイシン）中に播種した。Ａ５４９細胞を二連で、後述するようにしていろいろな担体−脂質製剤およびＧｐＬｕｃコードｍＲＮＡ（配列番号：１２；Ｒ２８５１）でトランスフェクトした。陰性対照として、ＣＶＣＭ／ＰＢ８３担体なしのＧｐＬｕｃコードｍＲＮＡを使用した。ルシフェラーゼ発現を２４時間後に定量した。
【０５１８】
この実際の実施例では、カチオン性脂質ＤＤＡＢ（ジメチルジオクタデシルアンモニウム；ＣＡＳ番号３７００−６７−２；Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＵＳＡ）を使用した：
(化)
2019517553.tif 000054
【０５１９】
【表６】
2019517553.tif 000055
表６：トランスフェクション条件：
【０５２０】
結果：
図１０は、ＧｐＬｕｃタンパク質が、ｍＲＮＡ構築物Ｒ２８５１でトランスフェクトしたＡ５４９細胞において発現したこと、および試験した脂質の添加ありの製剤は、脂質の添加なしの対照と比べた場合、非常に効率的であったことを示す。これは、ｍＲＮＡと非常に少量の脂質の組合せによりトランスフェクション効率を高めることができたことを示す。
【実施例１１】
【０５２１】
実施例１１：Ａ５４９細胞におけるいろいろなポリマー−ＰＥＧ−脂質の組合せのトランスフェクション効率
この実施例では、Ａ５４９細胞（ヒト肺癌細胞株）における、いろいろなポリマー−脂質製剤のトランスフェクション効率に対する効果の評価を記載する。トランスフェクション効率の読み出し情報として、Ｇａｕｓｓｉａ  ｐｒｉｎｃｅｐｓルシフェラーゼＧｐＬｕｃ  ｍＲＮＡをカーゴとして使用した。カーゴでの成功裡のトランスフェクションにより、ルシフェラーゼタンパク質の翻訳およびルシフェラーゼタンパク質の細胞培養上清み中への分泌がもたらされる。
【０５２２】
したがって、Ａ５４９細胞を２４ウェルプレート内に、７５０００細胞／ウェルの密度で細胞培養培地（Ｇｉｂｃｏ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２Ｋ（Ｋａｉｇｈｎ’ｓ）培地，１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ），１％のＬ−グルタミン，１％のペニシリン／ストレプトマイシン）中に播種した。Ａ５４９細胞を二連で、後述するようにしていろいろな担体−脂質製剤およびＧｐＬｕｃコードｍＲＮＡ（配列番号：１２；Ｒ２８５１）でトランスフェクトした。陰性対照として、ＣＶＣＭ／ＰＢ８３担体なしのＧｐＬｕｃコードｍＲＮＡを使用した。ルシフェラーゼ発現を２４時間後に定量した。
【０５２３】
この実際の実施例では、（Ｒ１２ＣＷ）２を担体ポリマーとして使用し（２つのＲ1２ＣＷ−単位はシステインＳ−Ｓ結合によって共有結合）、ペグ化３−Ｃ１２−ＯＨ脂質（ＣｈｉｒｏＢｌｏｃｋ，Ｂｉｔｔｅｒｆｅｌｄ−Ｗｏｌｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用した：
(化)
2019517553.tif 000056
【０５２４】
【表７】
2019517553.tif 000057
表７：トランスフェクション条件
【０５２５】
第２部では、（Ｒ１２ＣＷ）２を担体ポリマーとして使用し（２つのＲ1２ＣＷ−単位はシステインＳ−Ｓ結合によって共有結合）、
(化)
2019517553.tif 000058
（ＣｈｉｒｏＢｌｏｃｋ，Ｂｉｔｔｅｒｆｅｌｄ−Ｗｏｌｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用した：
【０５２６】
【表８】
2019517553.tif 000059
表８：トランスフェクション条件：
【０５２７】
結果：
図１１Ａおよび１１Ｂは、ＧｐＬｕｃタンパク質が、ｍＲＮＡ構築物Ｒ２８５１でトランスフェクトしたＡ５４９細胞において発現したこと、および試験したペグ化脂質の添加ありの製剤は、脂質の添加なしの対照と比べた場合、非常に効率的であったことを示す。これは、ｍＲＮＡと非常に少量のペグ化脂質の組合せによりトランスフェクション効率を高めることができたことを示す。
【図１Ａ】
2019517553.tif 000070
【図１Ｂ】
2019517553.tif 000071
【図１Ｃ】
2019517553.tif 000072
【図２Ａ】
2019517553.tif 000073
【図２Ｂ】
2019517553.tif 000074
【図３】
2019517553.tif 000075
【図４】
2019517553.tif 000076
【図５】
2019517553.tif 000077
【図６】
2019517553.tif 000078
【図７Ａ】
2019517553.tif 000079
【図７Ｂ】
2019517553.tif 000080
【図７Ｃ】
2019517553.tif 000081
【図８】
2019517553.tif 000082
【図９】
2019517553.tif 000083
【図１０】
2019517553.tif 000084
【図１１Ａ】
2019517553.tif 000085
【図１１Ｂ】
2019517553.tif 000086
【国際調査報告】
2019517553.tif 000087
2019517553.tif 000088
2019517553.tif 000089