(57)【要約】  本発明は、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの新たな多形体、これらを含有する医薬組成物及び治療におけるこれらの使用を提供する。2019517460.tif 000010
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも以下の特徴的なＸ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα放射線；２θ度により表す。）を、約９．０、１４．３、１８．１、１９．６及び２４．０において呈する、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの固体形態。
【請求項２】
図１において示されたＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、請求項１に記載の固体形態。
【請求項３】
そのＤＳＣサーモグラフ内の、１４９±３℃において、吸熱ピークを呈する、請求項１又は２に記載の固体形態。
【請求項４】
図３において示されたＤＳＣサーモグラフと実質的に同じＤＳＣサーモグラフを有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の固体形態。
【請求項５】
そのＤＳＣサーモグラフ内の、１４９±３℃において、吸熱ピークを呈する、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの固体形態。
【請求項６】
図３において示されたＤＳＣサーモグラフと実質的に同じＤＳＣサーモグラフを有する、請求項５に記載の固体形態。
【請求項７】
少なくとも以下の特徴的なＸ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα放射線；２θ度により表す。）を、約８．３、１０．５、１６．６、１９．６及び２３．８において呈する、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの固体形態。
【請求項８】
図５において示されたＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、請求項７に記載の固体形態。
【請求項９】
少なくとも以下の特徴的なＸ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα放射線；２θ度により表す。）を、約７．３、１０．２、１２．４、１２．９及び１８．１において呈する、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの固体形態。
【請求項１０】
図６において示されたＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、請求項９に記載の固体形態。
【請求項１１】
少なくとも以下の特徴的なＸ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα放射線；２θ度により表す。）を、約９．０、１４．３、１５．０、１８．１及び１９．５において呈する、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの固体形態。
【請求項１２】
図７において示されたＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、請求項１１に記載の固体形態。
【請求項１３】
薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤又は担体と会合させた、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の固体形態を含む医薬組成物。
【請求項１４】
治療における使用のための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の固体形態。
【請求項１５】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態の処置における使用のための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の固体形態。
【請求項１６】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、視力障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、糖尿病、膵炎、脳内出血、腎症、心筋症、神経障害、炎症性腸疾患、関節炎、炎症、敗血症性ショック、低血圧、がん、成人呼吸窮迫症候群、播種性血管内凝固症、心肺バイパス術時の血液凝固及び術後出血から選択される、請求項１５に記載の固体形態。
【請求項１７】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病性黄斑浮腫及び遺伝性血管浮腫から選択される、請求項１５に記載の固体形態。
【請求項１８】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性及び糖尿病性黄斑浮腫から選択される、請求項１７に記載の固体形態。
【請求項１９】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、遺伝性血管浮腫である、請求項１７に記載の固体形態。
【請求項２０】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、糖尿病性黄斑浮腫である、請求項１７に記載の固体形態。
【請求項２１】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、網膜静脈閉塞症である、請求項１５に記載の固体形態。
【請求項２２】
患者の眼領域への注射に適する形態により投与され、特に、ガラス体内注射に適する形態により投与される、請求項１８に記載の固体形態。
【請求項２３】
経口投与に適する形態にある、請求項１４〜２１のいずれか一項に記載の固体形態。
【請求項２４】
経口投与される、請求項１４〜２１のいずれか一項に記載の固体形態。
【請求項２５】
固体形態を、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド及び溶媒又は溶媒の混合物の混合物から結晶化させるステップを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の固体形態を調製するためのプロセス。
【請求項２６】
溶媒又は溶媒の混合物が、ＩＰＡである、請求項２５に記載のプロセス。
【請求項２７】
混合物が、約６０〜８５℃の温度へと加熱される、請求項２６に記載のプロセス。
【請求項２８】
加熱した後で、混合物が、約０〜４０℃の温度へと冷却される、請求項２７に記載のプロセス。
【請求項２９】
固体形態を、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド及び溶媒又は溶媒の混合物の混合物から結晶化させるステップを含む、請求項７〜８のいずれか一項に記載の固体形態を調製するためのプロセス。
【請求項３０】
溶媒又は溶媒の混合物が、ＩＰＡ及びメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルである、請求項２９に記載のプロセス。
【請求項３１】
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドを、ＩＰＡへと添加した後で、組み合わされた混合物が、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルへと添加される、請求項３０に記載のプロセス。
【請求項３２】
固体形態を、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド及び溶媒又は溶媒の混合物の混合物から結晶化させるステップを含む、請求項９〜１０のいずれか一項に記載の固体形態を調製するためのプロセス。
【請求項３３】
溶媒又は溶媒の混合物が、ＩＰＡ及び水である、請求項３２に記載のプロセス。
【請求項３４】
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドを、ＩＰＡ及び水へと添加した後で、組み合わされた混合物が、約０〜−８０℃の温度へと冷却される前に、加熱される、請求項３３に記載のプロセス。
【請求項３５】
固体形態を、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド及び溶媒又は溶媒の混合物の混合物から結晶化させるステップを含む、請求項１１〜１２のいずれか一項に記載の固体形態を調製するためのプロセス。
【請求項３６】
溶媒又は溶媒の混合物が、ジクロロメタンである、請求項３５に記載のプロセス。
【請求項３７】
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドを、ジクロロメタンへと添加した後で、組み合わされた混合物が、約０〜−８０℃の温度へと冷却される前に、加熱される、請求項３６に記載のプロセス。
【請求項３８】
溶媒又は溶媒の混合物が、アニソール及びメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルである、請求項３７に記載のプロセス。
【請求項３９】
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドを、アニソールへと添加した後で、組み合わされた混合物が、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルへと添加される、請求項３８に記載のプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血漿カリクレインインヒビターの新たな多形体、これらを含有する医薬組成物及び治療におけるこれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
血漿カリクレインインヒビターは、特に、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病性黄斑浮腫及び遺伝性血管浮腫の処置において、多数の治療的適用がなされている。
【０００３】
血漿カリクレインは、キニンを、キニノーゲンから遊離させうる、トリプシン様のセリンプロテアーゼである（Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａら、「Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−Ｋｉｎｉｎ  Ｃａｓｃａｄｅ」、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、４８３〜４９３頁；Ｊ．Ｗ．Ｂｒｙａｎｔら、「Ｈｕｍａｎ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−ｋｉｎｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ」、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７、２３４〜２５０頁、２００９；Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖ．、１９９２、４４、１；及びＤ．Ｊ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ、「Ｔｏｗａｒｄｓ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−ｋｉｎｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｋｉｎｉｎ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０００、３３、６６５〜６７７を参照されたい。）。血漿カリクレインは、内因系血液凝固カスケードの不可欠なメンバーであるが、このカスケード内のその役割は、ブラジキニンの放出又は酵素的切断を伴わない。血漿プレカリクレインは、単一の遺伝子によりコードされ、肝臓において合成される。血漿カリクレインは、肝細胞により、不活性の血漿プレカリクレインとして分泌され、これが、血漿中を、高分子量のキニノーゲンに結合したヘテロ二量体の複合体として循環し、これが、活性化して、活性の血漿カリクレインをもたらす。キニンは、Ｇタンパク質共役受容体を介して作用する、炎症の強力なメディエーターであり、キニンのアンタゴニスト（ブラジキニンアンタゴニストのような）は、多数の障害を処置するための、潜在的な治療剤として、既に探索されている（Ｆ．Ｍａｒｃｅａｕ及びＤ．Ｒｅｇｏｌｉ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２００４、３、８４５〜８５２）。
【０００４】
血漿カリクレインは、多数の炎症性障害において役割を果たしていると考えられる。主要な血漿カリクレインのインヒビターは、セルピンＣ１エステラーゼインヒビターである。Ｃ１エステラーゼインヒビターにおいて遺伝子欠損を呈する患者は、顔面、手、喉、消化管及び生殖器の間欠的な腫脹を結果としてもたらす、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）を患う。急性挿間時に形成される水疱は、血管透過性の増大をもたらす、ブラジキニンを遊離させる、高分子量のキニノーゲンを切断する、高レベルの血漿カリクレインを含有する。大型のタンパク質である血漿カリクレインインヒビターによる処置は、血管透過性の増大を引き起こす、ブラジキニンの放出を防止することにより、ＨＡＥを効果的に処置することが示されている（Ａ．Ｌｅｈｍａｎｎ、「Ｅｃａｌｌａｎｔｉｄｅ（ＤＸ−８８），ａ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ  ａｎｇｉｏｅｄｅｍａ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ｏｎ−ｐｕｍｐ  ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃ  ｓｕｒｇｅｒｙ」、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．、８、１１８７〜９９頁）。
【０００５】
血漿カリクレイン−キニン系は、進行性糖尿病性黄斑浮腫を伴う患者において、異常に夥多である。近年、糖尿病性ラットにおいて、血漿カリクレインが、網膜の血管機能不全に寄与することが公表された（Ａ．Ｃｌｅｒｍｏｎｔら、「Ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇ  ｉｎ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒａｔｓ」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、２０１１、６０、１５９０〜９８頁）。さらに、血漿カリクレインインヒビターであるＡＳＰ−４４０の投与は、糖尿病性ラットにおける、網膜血管透過性及び網膜血流異常の両方を改善した。したがって、血漿カリクレインインヒビターは、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性及び糖尿病性黄斑浮腫を軽減する処置としての有用性を有するはずである。
【０００６】
血漿カリクレインはまた、血液凝固においても役割を果たす。内因系凝固カスケードは、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）により活性化しうる。ＦＸＩＩが活性化する（ＦＸＩＩａへと）と、ＦＸＩＩａは、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）の活性化を介して、フィブリンの形成を誘発し、これにより、血液凝固を結果としてもたらす。血漿カリクレインは、ＦＸＩＩを、ＦＸＩＩａへと活性化させ、これにより、内因系凝固経路の活性化を結果としてもたらすため、内因系凝固カスケードにおける、鍵となる構成要素である。さらに、ＦＸＩＩａはまた、血漿カリクレインを結果としてもたらす、血漿プレカリクレインも、さらに活性化させる。これは、血漿カリクレイン系及び内因系凝固経路の、正のフィードバック増幅を結果としてもたらす（Ｔａｎａｋａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４、１１３、３３３〜３３９）；Ｂｉｒｄら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１２、１０７、１１４１〜５０））。
【０００７】
血中のＦＸＩＩの、負に帯電した表面（心肺バイパス術時に、血液が流過する人工肺の外部配管又は膜の表面のような）との接触は、チモーゲンであるＦＸＩＩのコンフォメーション変化を誘導する結果として、少量の活性ＦＸＩＩ（ＦＸＩＩａ）をもたらす。ＦＸＩＩａの形成は、血漿カリクレインの形成を誘発する結果として、上記において記載された通り、血液凝固をもたらす。ＦＸＩＩの、ＦＸＩＩａへの活性化はまた、体内における、多様なソース（例えば、敗血症時における細菌、分解しつつある細胞に由来するＲＮＡ）上の、負に帯電した表面との接触によっても生じることがあり、これにより、播種性血管内凝固症を結果としてもたらす（Ｔａｎａｋａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４、１１３、３３３〜３３９）。
【０００８】
したがって、血漿カリクレインの阻害は、上記において記載された血液凝固カスケードを阻害するので、播種性血管内凝固症及び血液凝固が所望されない心肺バイパス術時の血液凝固の処置において有用である。例えば、Ｋａｔｓｕｕｒａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９６、８２、３６１〜３６８）は、ＬＰＳにより誘導された播種性血管内凝固症に対する、血漿カリクレインインヒビターであるＰＫＳＩ−５２７の投与が、血小板カウント及びフィブリノーゲンレベルの低下のほか、播種性血管内凝固症において通例生じる、ＦＤＰレベルの上昇も、著明に抑制したことを示した。Ｂｉｒｄら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１２、１０７、１１４１〜５０）は、血漿カリクレイン欠損マウスにおいて、凝固時間が増大し、血栓が著明に軽減されたことを示した。Ｒｅｖｅｎｋｏら（Ｂｌｏｏｄ、２０１１、１１８、５３０２〜５３１１）は、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置を使用する、マウスにおける血漿プレカリクレインレベルの低減が、抗血栓効果を結果としてもたらしたことを示した。Ｔａｎａｋａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４、１１３、３３３〜３３９）は、血液を、ＤＸ−８８（血漿カリクレインインヒビター）と接触させる結果として、活性化凝固時間（ＡＣＴ）の増大をもたらしたことを示した。Ｌｅｈｍａｎｎら（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．、２００８、１１８７〜９９）は、エカランチド（血漿カリクレインインヒビター）が、接触により活性化する誘導性凝固を遅延させることが見出されたことを示した。Ｌｅｈｍａｎｎらは、エカランチドが、「血漿カリクレインを阻害することにより、内因系凝固経路を阻害したので、インビトロにおいて、抗凝固効果を及ぼした」と結論づけている。
【０００９】
血漿カリクレインはまた、血小板の活性化の阻害においても役割を果たし、したがって、出血の停止の阻害においても役割を果たす。血小板の活性化は、止血における早期のステップであって、血管への損傷後における、血小板による止栓の形成及び出血の迅速な停止をもたらすステップのうちの１つである。血管損傷の部位において、露出されたコラーゲン及び血小板の間の相互作用は、血小板の保持及び活性化、並びにその後における出血の停止に極めて重要である。
【００１０】
活性化すると、血漿カリクレインは、コラーゲンに結合し、これにより、ＧＰＶＩ受容体により媒介される、血小板のコラーゲン媒介性活性化に干渉する（Ｌｉｕら（Ｎａｔ  Ｍｅｄ．、２０１１、１７、２０６〜２１０））。上記において論じられた通り、血漿カリクレインインヒビターは、第ＸＩＩ因子の血漿カリクレイン媒介性活性化を阻害することにより、血漿プレカリクレインの活性化を低減し、これにより、接触活性化系による、カリクレイン系の、正のフィードバック増幅を低減する。
【００１１】
したがって、血漿カリクレインの阻害は、血漿カリクレインの、コラーゲンへの結合を低減し、これにより、出血の停止に対する、血漿カリクレインの干渉を低減する。したがって、血漿カリクレインインヒビターは、脳内出血及び術後出血の処置においても有用である。例えば、Ｌｉｕら（Ｎａｔ  Ｍｅｄ．、２０１１、１７、２０６〜２１０）は、低分子ＰＫインヒビターであるＡＳＰ−４４０の全身投与が、ラットにおける血腫の拡大を低減することを裏付けた。脳血腫は、脳内出血の後に生じる場合があり、血管損傷の結果としての、脳組織の周囲の血管からの出血により引き起こされる。Ｌｉｕらにより報告された脳内出血モデルにおける出血は、血管を損傷させた脳実質の切開を伴う手術介入により誘導された。これらのデータは、血漿カリクレインの阻害が、術後出血及び術後における血腫容量を低減したことを裏付ける。Ｂｊｏｅｒｋｑｖｉｓｔら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１３、１１０、３９９−  ４０７）は、アプロチニン（血漿カリクレインを含むセリンプロテアーゼを阻害するタンパク質）を使用して、術後出血を減少させうることを裏付けた。
【００１２】
糖尿病の他の合併症であって、それらの全てが血漿カリクレインと関連する、脳内出血、腎症、心筋症及び神経障害のような合併症もまた、血漿カリクレインインヒビターの標的として考えられうる。
【００１３】
合成の低分子血漿カリクレインインヒビターは、既に、例えば、Ｇａｒｒｅｔｔら（「Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｌｄｅｈｙｄｅ・・・」、Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｒｅｓ．、５２、６２〜７１頁（１９９８））、Ｔ．Ｇｒｉｅｓｂａｃｈｅｒら（「Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｉｓｓｕｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｋｉｎｉｎｓ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１３７、６９２〜７００頁（２００２））、Ｅｖａｎｓ（「Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｄｉｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」、ＷＯ０３／０７６４５８）、Ｓｚｅｌｋｅら（「Ｋｉｎｉｎｏｇｅｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、ＷＯ９２／０４３７１）、Ｄ．Ｍ．Ｅｖａｎｓら（Ｉｍｍｕｎｏｌｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、３２、１１５〜１１６頁（１９９６））、Ｓｚｅｌｋｅら（「Ｋｉｎｉｎｏｇｅｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、ＷＯ９５／０７９２１）、Ａｎｔｏｎｓｓｏｎら（「Ｎｅｗ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」、ＷＯ９４／２９３３５）、Ｊ．Ｃｏｒｔｅら（「Ｓｉｘ  ｍｅｍｂｅｒｅｄ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ  ｕｓｅｆｕｌ  ａｓ  ｓｅｒｉｎｅ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、ＷＯ２００５／１２３６８０）、Ｊ．Ｓｔｕｅｒｚｂｅｃｈｅｒら（Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ、２７、１９２９〜３４頁（１９９４））、Ｋｅｔｔｎｅｒら（ＵＳ５，１８７，１５７）、Ｎ．Ｔｅｎｏら（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、４１、１０７９〜１０９０頁（１９９３））、Ｗ．Ｂ．Ｙｏｕｎｇら（「Ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｓ．１６、２０３４〜２０３６頁（２００６））、Ｏｋａｄａら（「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｐｌａｓｍｉｎ  ａｎｄ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ」、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４８、１９６４〜７２頁（２０００））、Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚｅｒら（「Ｔｒｙｐｓｉｎ−ｌｉｋｅ  ｓｅｒｉｎｅ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｕｓｅ」、ＷＯ０８／０４９５９５）、Ｚｈａｎｇら（「Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｈｉｇｈｌｙ  ｐｏｔｅｎｔ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２、５４５〜５５３頁（２００６））、Ｓｉｎｈａら（「Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」、ＷＯ０８／０１６８８３）、Ｓｈｉｇｅｎａｇａら（「Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、ＷＯ２０１１／１１８６７２）、及びＫｏｌｔｅら（「Ｂｉｏｃｈｅ��ｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａ  ｌｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２０１１）、１６２（７）、１６３９〜１６４９）により記載されている。また、Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚｅｒら（「Ｓｅｒｉｎｅ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、ＷＯ２０１２／００４６７８）は、ヒトプラスミン及び血漿カリクレインのインヒビターである、環化ペプチド類似体について記載している。
【００１４】
現在のところ、低分子合成血漿カリクレインインヒビターは、医療における使用について承認されていない。公知の技術分野において記載されている分子の多くは、ＫＬＫ１、トロンビン及び他のセリンプロテアーゼのような類縁の酵素に対する選択性の不良、及び経口アベイラビリティーの不良のような限界を抱えている。大型のタンパク質である血漿カリクレインインヒビターは、エカランチドについて報告されている通り、アナフィラキシー反応の危険性を提示する。したがって、血漿カリクレインを選択的に阻害する化合物であって、アナフィラキシーを誘導せず、経口アベイラビリティーがある化合物が、依然として必要とされている。さらに、公知の技術分野における分子の大多数は、高度に極性でありイオン化可能なグアニジン官能基又はアミジン官能基を特徴とする。このような官能基は、消化管の透過性に対して限定的な場合があり、したがって、経口アベイラビリティーに対して限定的な場合があることが周知である。例えば、Ｔａｍｉｅ  Ｊ．Ｃｈｉｌｃｏｔｅ及びＳｕｋａｎｔｏ  Ｓｉｎｈａ（「ＡＳＰ−６３４：Ａｎ  Ｏｒａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｆｏｒ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  ＭａｃｕｌａｒＥｄｅｍａ」、ＡＲＶＯ、２０１２年５月６日〜２０１２年５月９日、Ｆｏｒｔ  Ｌａｕｄｅｒｄａｌｅ、Ｆｌｏｒｉｄａ、Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ２２４０）により、ベンズアミジンであるＡＳＰ−４４０が、経口アベイラビリティーの不良を抱えることが報告されている。ＡＳＰ−６３４のようなプロドラッグを創出することにより、吸収が改善されうることも、さらに報告されている。しかし、プロドラッグは、いくつかの欠点、例えば、化学的安定性の不良及び不活性の担体又は予測外の代謝物に由来する潜在的な毒性を抱える場合があることが周知である。別の報告において、インドールアミドは、ＡＤＭＥ−ｔｏｘ特性及び物理化学的特性の不良又はこれらの特性の不十分を保有する薬物と関連する問題を克服しうる化合物として主張されているが、血漿カリクレインに対する阻害は、提示も主張もされていない（Ｇｒｉｆｆｉｏｅｎ  ｅｔ  ａｌ、「Ｉｎｄｏｌｅ  ａｍｉｄｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｆｏｒ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ」、ＷＯ２０１０／１４２８０１）。
【００１５】
ＢｉｏＣｒｙｓｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．は、経口アベイラビリティーがある血漿カリクレインインヒビターであるＢＣＸ４１６１の発見について報告した（「ＢＣＸ４１６１，Ａｎ  Ｏｒａｌ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：Ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  Ｏｆ  ａ  Ｐｈａｓｅ  １  Ｓｔｕｄｙ  Ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１３３巻、２号増刊、２０１４年２月、ＡＢ３９頁；及び「Ａ  Ｓｉｍｐｌｅ，Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ  Ａｓｓａｙ  ｔｏ  Ｍｏｎｉｔｏｒ  Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＢＣＸ４１６１  ｉｎ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｐｌａｓｍａ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１３３巻、２号増刊、２０１４年２月、ＡＢ４０頁）。しかし、ヒトにおける用量は、比較的大量であり、用量を４００ｍｇずつ毎日３回とする概念実証研究において現在調べられている。
【００１６】
グアニジン官能基又はアミジン官能基を特徴としない血漿カリクレインインヒビターについて存在する報告は、少数であるに過ぎない。１つの例は、アミノピリジン官能基を特徴とする化合物について記載する、Ｂｒａｎｄｌら（「Ｎ−（（６−ａｍｉｎｏ−ｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ）−ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ−ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅｓ  ａｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」、ＷＯ２０１２／０１７０２０）である。ラットモデルにおける経口有効性は、３０ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ／ｋｇの比較的高用量において裏付けられているが、薬物動態プロファイルは、報告されていない。したがって、このような化合物が、臨床へと進むのに十分な経口アベイラビリティー又は有効性を提示するのかどうかについては、未だ知られていない。他の例は、Ｂｒａｎｄｌら（「Ａｍｉｎｏｐｙｒｉｄｉｎｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、ＷＯ２０１３／１１１１０７）及びＦｌｏｈｒら（「５−ｍｅｍｂｅｒｅｄ  ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、ＷＯ２０１３／１１１１０８）である。しかし、これらの文献のいずれも、インビボデータについて報告しておらず、したがって、このような化合物が、臨床へと進むのに十分な経口アベイラビリティー又は有効性を提示するのかどうかについては、未だ知られていない。別の例は、Ａｌｌａｎら、「Ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」、ＷＯ２０１４／１０８６７９である。
【００１７】
商業的に実現可能な製造プロセスを得るために、医薬製剤の製造において、活性の化合物が、操作及び加工に簡便でありうる形態にあることが重要である。したがって、活性化合物の化学的安定性及び物理的安定性は、重要な因子である。活性化合物、及びこれを含有する製剤は、かなりの期間にわたり、活性化合物の、物理化学的特徴（例えば、化学的組成、密度、吸湿性及び可溶性）の重大な変化を呈さずに、有効な形で保存されなければならない。
【００１８】
特定の固体形態の医薬成分の製造は、その固体特性の多くの側面に影響を及ぼす可能性があり、可溶性、溶解速度、化学的安定性、力学的特性、技術的実行可能性、加工可能性、薬物動態及びバイオアベイラビリティーの側面において、利点をもたらしうることが公知である。これらの利点のうちの一部は、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ」、Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  Ｓｔａｈｌ、Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（編）（Ｖｅｒｌａｇ  Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ、Ｚｕｒｉｃｈ）において記載されている。固体形態を製造する方法はまた、「Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」、Ｎｅａｌ、Ｇ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）及び「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：Ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ」、Ｒｏｌｆ  Ｈｉｌｆｉｋｅｒ（編）（Ｗｉｌｅｙ  ＶＣＨ）においても記載されている。薬学的結晶における多形体は、Ｂｙｒｎ（Ｂｙｒｎ，Ｓ．Ｒ．、Ｐｆｅｉｆｆｅｒ，Ｒ．Ｒ．、Ｓｔｏｗｅｌｌ，Ｊ．Ｇ．、「Ｓｏｌｉｄ−Ｓｔａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ」、ＳＳＣＩ  Ｉｎｃ．、Ｗｅｓｔ  Ｌａｆａｙｅｔｔｅ、Ｉｎｄｉａｎａ、１９９９）；Ｂｒｉｔｔａｉｎ，Ｈ．Ｇ．、「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｏｌｉｄｓ」、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｂａｓｅｌ、１９９９）又はＢｅｒｎｓｔｅｉｎ（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，Ｊ．、「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｒｙｓｔａｌｓ」、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２００２）において記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１９】
【特許文献１】国際公開第２００３／０７６４５８号
【特許文献２】国際公開第９２／０４３７１号
【特許文献３】国際公開第９５／０７９２１号
【特許文献４】国際公開第９４／２９３３５号
【特許文献５】国際公開第２００５／１２３６８０号
【特許文献６】米国特許第５，１８７，１５７号明細書
【特許文献７】国際公開第２００８／０４９５９５号
【特許文献８】国際公開第２００８／０１６８８３号
【特許文献９】国際公開第２０１１／１１８６７２号
【特許文献１０】国際公開第２０１２／００４６７８号
【特許文献１１】国際公開第２０１０／１４２８０１号
【特許文献１２】国際公開第２０１２／０１７０２０号
【特許文献１３】国際公開第２０１３／１１１１０７号
【特許文献１４】国際公開第２０１３／１１１１０８号
【特許文献１５】国際公開第２０１４／１０８６７９号
【非特許文献】
【００２０】
【非特許文献１】Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａら、「Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−Ｋｉｎｉｎ  Ｃａｓｃａｄｅ」、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、４８３〜４９３頁
【非特許文献２】Ｊ．Ｗ．Ｂｒｙａｎｔら、「Ｈｕｍａｎ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−ｋｉｎｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ」、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７、２３４〜２５０頁、２００９
【非特許文献３】Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖ．、１９９２、４４、１
【非特許文献４】Ｄ．Ｊ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ、「Ｔｏｗａｒｄｓ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−ｋｉｎｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｋｉｎｉｎ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０００、３３、６６５〜６７７
【非特許文献５】Ｆ．Ｍａｒｃｅａｕ及びＤ．Ｒｅｇｏｌｉ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２００４、３、８４５〜８５２
【非特許文献６】Ａ．Ｌｅｈｍａｎｎ「Ｅｃａｌｌａｎｔｉｄｅ（ＤＸ−８８），ａ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ  ａｎｇｉｏｅｄｅｍａ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ｏｎ−ｐｕｍｐ  ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃ  ｓｕｒｇｅｒｙ」、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．、８、１１８７〜９９頁
【非特許文献７】Ａ．Ｃｌｅｒｍｏｎｔら、「Ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇ  ｉｎ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒａｔｓ」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、２０１１、６０、１５９０〜９８頁
【非特許文献８】Ｔａｎａｋａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００４、１１３、３３３〜３３９）
【非特許文献９】Ｂｉｒｄら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１２、１０７、１１４１〜５０）
【非特許文献１０】Ｋａｔｓｕｕｒａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９６、８２、３６１〜３６８）
【非特許文献１１】Ｒｅｖｅｎｋｏら（Ｂｌｏｏｄ、２０１１、１１８、５３０２〜５３１１）
【非特許文献１２】Ｌｅｈｍａｎｎら（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．、２００８、１１８７〜９９）
【非特許文献１３】Ｌｉｕら（Ｎａｔ  Ｍｅｄ．、２０１１、１７、２０６〜２１０）
【非特許文献１４】Ｂｊｏｅｒｋｑｖｉｓｔら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１３、１１０、３９９〜４０７）
【非特許文献１５】Ｇａｒｒｅｔｔら（「Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｌｄｅｈｙｄｅ…」、Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｒｅｓ．、５２、６２〜７１頁（１９９８））
【非特許文献１６】Ｔ．Ｇｒｉｅｓｂａｃｈｅｒら（「Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｉｓｓｕｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｋｉｎｉｎｓ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１３７、６９２〜７００頁（２００２））
【非特許文献１７】Ｄ．Ｍ．Ｅｖａｎｓら（Ｉｍｍｕｎｏｌｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、３２、１１５〜１１６頁（１９９６））
【非特許文献１８】Ｊ．Ｓｔｕｅｒｚｂｅｃｈｅｒら（Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ、２７、１９２９〜３４頁（１９９４））
【非特許文献１９】Ｎ．Ｔｅｎｏら（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、４１、１０７９〜１０９０頁（１９９３））
【非特許文献２０】Ｗ．Ｂ．Ｙｏｕｎｇら（「Ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｓ．１６、２０３４〜２０３６頁（２００６））
【非特許文献２１】Ｏｋａｄａら（「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｐｌａｓｍｉｎ  ａｎｄ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ」、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４８、１９６４〜７２頁（２０００））
【非特許文献２２】Ｚｈａｎｇら（「Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｈｉｇｈｌｙ  ｐｏｔｅｎｔ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２、５４５〜５５３頁（２００６））
【非特許文献２３】Ｋｏｌｔｅら（「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２０１１）、１６２（７）、１６３９〜１６４９）
【非特許文献２４】Ｔａｍｉｅ  Ｊ．Ｃｈｉｌｃｏｔｅ及びＳｕｋａｎｔｏ  Ｓｉｎｈａ（「ＡＳＰ−６３４：Ａｎ  Ｏｒａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｆｏｒ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  ＭａｃｕｌａｒＥｄｅｍａ」、ＡＲＶＯ、２０１２年５月６日〜２０１２年５月９日、Ｆｏｒｔ  Ｌａｕｄｅｒｄａｌｅ、Ｆｌｏｒｉｄａ、Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ２２４０）
【非特許文献２５】ＢｉｏＣｒｙｓｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．、「ＢＣＸ４１６１，Ａｎ  Ｏｒａｌ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：Ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  Ｏｆ  ａ  Ｐｈａｓｅ  １  Ｓｔｕｄｙ  Ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１３３巻、２号増刊、２０１４年２月、ＡＢ３９頁
【非特許文献２６】「Ａ  Ｓｉｍｐｌｅ，Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ  Ａｓｓａｙ  ｔｏ  Ｍｏｎｉｔｏｒ  Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＢＣＸ４１６１  ｉｎ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｐｌａｓｍａ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１３３巻、２号増刊、２０１４年２月、ＡＢ４０頁
【非特許文献２７】「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ」、Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  Ｓｔａｈｌ、Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（編）（Ｖｅｒｌａｇ  Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ、Ｚｕｒｉｃｈ）
【非特許文献２８】「Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」、Ｎｅａｌ、Ｇ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）
【非特許文献２９】「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：Ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ」、Ｒｏｌｆ  Ｈｉｌｆｉｋｅｒ（編）（Ｗｉｌｅｙ  ＶＣＨ）
【非特許文献３０】Ｂｙｒｎ（Ｂｙｒｎ，Ｓ．Ｒ．、Ｐｆｅｉｆｆｅｒ，Ｒ．Ｒ．、Ｓｔｏｗｅｌｌ，Ｊ．Ｇ．、「Ｓｏｌｉｄ−Ｓｔａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ」、ＳＳＣＩ  Ｉｎｃ．、Ｗｅｓｔ  Ｌａｆａｙｅｔｔｅ、Ｉｎｄｉａｎａ、１９９９）
【非特許文献３１】Ｂｒｉｔｔａｉｎ，Ｈ．Ｇ．、「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｏｌｉｄｓ」、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｂａｓｅｌ、１９９９
【非特許文献３２】Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，Ｊ．、「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｒｙｓｔａｌｓ」、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２００２）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本出願者は、血漿カリクレインのインヒビターである、新規の一連の化合物であって、ＷＯ２０１３６／０８３８２０（ＰＣＴ／ＧＢ２０１５／０５３６１５）において開示された化合物を開発した。これらの化合物は、血漿カリクレインに対する良好な選択性を裏付け、糖尿病性網膜症、黄斑浮腫及び遺伝性血管浮腫の処置において、潜在的に有用である。１つのこのような化合物は、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドである。Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドを調製しようとする初期の試みは、黄色の発泡体をもたらした。しかし、本出願者は、今や、この化合物の、新規の、安定的な結晶形態を開発しており、本明細書において、これらは、「形態１」、「形態２」、「形態３」、及び「形態４」と称される。新規の固体形態は、それらを開発に適するものとする、有利な物理化学的特性を有する。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
したがって、本発明の態様に従い、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶多形体が提供される。本出願では、これらの多形体は、「形態１」、「形態２」、「形態３」及び「形態４」と称されうる。
【００２３】
本発明の結晶多形体は、それらを開発に適するものとする、有利な物理化学的特性を有し、例えば、溶融の前における、形態１の試料の、重量喪失の非存在（ＳＴＡデータ、図２を参照されたい。）は、形態１が、水和又は溶媒和していないことを指し示す。安定的な水和物は、無水物より可溶性が小さいことが多く、又は薬物が、ヒト身体の水性環境に遭遇したら、投与された薬物の無水形態の所望されない転換を誘導しうるため、医薬の開発に適さない場合がある。結晶多形体の別の利点は、それらがより容易に加工可能であることである。すなわち、結晶化によるそれらの調製（実施例を参照されたい。）は、所望されない不純物を除去するのに、一般的かつ容易にスケーラブルな手順である。
【００２４】
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドという名称は、式Ａに描示された構造を表す。
【００２５】
【化１】
2019517460.tif 000003
【００２６】
本発明は、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態の溶媒和物（例えば、水和物）を包含する。
【００２７】
本発明のある態様において、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態は、溶媒和物又は水和物ではない。
【００２８】
現在までに、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの４つの結晶多形体が単離され、特徴付けられており、本明細書において、これらは、「形態１」、「形態２」、「形態３」、及び「形態４」と称される。好ましくは、結晶形態は、形態１である。
【００２９】
本明細書において、Ｘ線粉末回折ピーク（２θ度により表す。）は、Ｃｕ  Ｋα放射線を使用して測定される。
【００３０】
本発明は、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態１）であって、少なくとも以下の特徴的なＸ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα放射線；２θ度により表す。）を、約
（１）９．０、１４．３、１８．１、１９．６及び２４．０；又は
（２）９．０、１４．３、１８．１、１９．６、２１．３、２４．０及び２７．１；又は
（３）９．０、１４．３、１８．１、１９．６、２１．３、２３．５、２４．０、２７．１及び２８．５
において呈する結晶形態を提供する。
【００３１】
この文脈において、「約」という用語は、２θ度の測定値に、±０．３（２θ度により表す。）、好ましくは、±０．２（２θ度により表す。）の不確実性が存在することを意味する。
【００３２】
本発明はまた、特徴的ピーク（２θ度により表す。）を、約９．０、１４．３、１５．４、１８．１、１９．０、１９．６、２１．３、２３．５、２４．０、２７．１及び２８．５において含むＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態１）も提供する。
【００３３】
図１は、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１のＸ線粉末回折パターンを示す。本発明はまた、図１において示されたＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態１）も提供する。
【００３４】
本明細書において、多形体形態のＸ線粉末回折パターンは、図において描示されたＸ線粉末回折パターンと、「実質的に」同じであると記載されうる。Ｘ線粉末回折パターン内のピークは、当業者に公知の多様な因子のために、それらの位置及び相対的強度がわずかにシフトしうることが察知される。例えば、使用された装置、試料調製の方法、好ましい充填及び配向性、放射線源、並びにデータ収集の方法及び長さのために、パターンのピークのピーク位置又は相対的強度のシフトが生じうる。しかし、当業者は、本明細書の図に示されたＸ線粉末回折パターンを、未知の多形体のＸ線粉末回折パターンと比較して、多形体の識別を確認することができる。
【００３５】
本発明はまた、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態２）であって、少なくとも以下の特徴的なＸ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα放射線；２θ度により表す。）を、約
（１）８．３、１０．５、１６．６、１９．６及び２３．８；又は
（２）８．３、１０．５、１１．７、１６．６、１７．５、１９．６及び２３．８；又は
（３）８．３、１０．５、１１．７、１６．６、１７．５、１９．６、２０．９、２３．８及び２８．４
において呈する結晶形態も提供する。
【００３６】
本発明はまた、特徴的ピーク（２θ度により表す。）を、約８．３、１０．５、１１．７、１５．６、１６．６、１７．５、１９．６、２０．９、２１．８、２３．８、２７．９、２８．４及び２８．９において含むＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態２）も提供する。
【００３７】
図５は、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態２のＸ線粉末回折パターンを示す。本発明はまた、図５において示されたＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態２）も提供する。
【００３８】
本発明はまた、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態３）であって、少なくとも以下の特徴的なＸ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα放射線；２θ度により表す。）を、約
（１）７．３、１０．２、１２．４、１２．９及び１８．１；又は
（２）７．３、１０．２、１２．４、１２．９、１８．１、２２．１及び２４．０；又は
（３）７．３、１０．２、１２．４、１２．９、１３．７、１８．１、１８．８、２２．１及び２４．０
において呈する結晶形態も提供する。
【００３９】
本発明はまた、特徴的ピーク（２θ度により表す。）を、約７．３、１０．２、１２．４、１２．９、１３．７、１７．６、１８．１、１８．８、２２．１及び２４．０において含むＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態３）も提供する。
【００４０】
図６は、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態３のＸ線粉末回折パターンを示す。本発明はまた、図６において示されたＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態３）も提供する。
【００４１】
本発明はまた、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態４）であって、少なくとも以下の特徴的なＸ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα放射線；２θ度により表す。）を、約
（１）９．０、１４．３、１５．０、１８．１及び１９．５；又は
（２）９．０、１４．３、１５．０、１８．１、１８．９、１９．５、及び２７．０；又は
（３）９．０、１４．３、１５．０、１６．０、１８．１、１８．９、１９．５、２４．０及び２７．０
において呈する結晶形態も提供する。
【００４２】
本発明はまた、特徴的ピーク（２θ度により表す。）を、約９．０、１４．３、１５．０、１６．０、１８．１、１８．９、１９．５、２４．０、２５．３及び２７．０において含むＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態４）も提供する。
【００４３】
図７は、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態４のＸ線粉末回折パターンを示す。本発明はまた、図７において示されたＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態４）も提供する。
【００４４】
当業者は、ＸＲＰＤパターンを測定するための技法に精通している。特に、化合物の試料のＸ線粉末回折パターンは、以下の実験条件：
回折管陽極：Ｃｕ；
発電機電圧：４０ｋＶ；
回折管電流：４０ｍＡ；
アルファ１の波長：１．５４０６Å；
アルファ２の波長：１．５４４４Å；
試料：ＸＲＰＤ用の、バックグラウンドをゼロとする、単一の、斜めに切断された、シリカ製の試料ホルダー上で、静かに圧縮された、解析下の２ｍｇの試料
により、Ｐｈｉｌｉｐｓ  Ｘ−Ｐｅｒｔ  ＭＰＤ回折計を使用して記録されうる。
【００４５】
本発明は、そのＤＳＣサーモグラフ内の、１４９±３℃において、吸熱ピークを呈し、好ましくは１４９±２℃において、吸熱ピークを呈し、より好ましくは１４９±１℃において、吸熱ピークを呈する、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態１）を提供する。
【００４６】
本発明は、図３において示されたＤＳＣサーモグラフと実質的に同じＤＳＣサーモグラフを有する、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態１）を提供する。
【００４７】
当業者は、ＤＳＣサーモグラフを測定するための技法に精通している。特に、化合物の試料のＤＳＣサーモグラフは、
（ａ）５ｍｇの試料を、アルミニウム製のＤＳＣパンへと秤量し、アルミニウム製の蓋により、非密閉的に閉止し；
（ｂ）試料を、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｊａｄｅ  ＤＳＣへとロードし、２０ｃｍ３／分のヘリウムパージを使用しながら、安定的な熱流応答が得られるまで、試料を、３０℃に保持し；
（ｃ）走査速度を１０℃／分として、試料を、２００℃の温度へと加熱し、２０ｃｍ３／分のヘリウムパージを使用しながら、結果として得られる熱流応答をモニタリングすること
により記録されうる。
【００４８】
本発明はまた、上記において記載されたＸ線粉末回折パターン、及び上記において記載されたＤＳＣサーモグラフを有する、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態１）も提供する。
【００４９】
本発明の結晶形態は、非溶媒和形態及び溶媒和形態の両方において存在しうる。本明細書において、「溶媒和」という用語は、本発明の化合物及びある量の、１つ以上の薬学的に許容される溶媒、例えば、メタノールを含む分子複合体について記載するのに使用される。「水和させる」という用語は、溶媒が、水である場合に用いられる。
【００５０】
特定の化合物への言及はまた、全ての同位体変異体も含む。
【００５１】
本発明はまた、本発明の形態１を調製するためのプロセスであって、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの、溶媒中又は溶媒の混合物中の溶液からの結晶形態の結晶化を含むプロセスも包含する。好ましくは、溶媒は、イソプロパノールである。Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドを、溶媒又は溶媒の混合物（例えば、イソプロパノール）へと添加した後で、組み合わされた混合物（化合物＋溶媒）は、約６０〜８５℃の温度へと加熱されうる。代替的に、組み合わされた混合物は、約７０〜８５℃の温度へと加熱されうる。代替的に、組み合わされた混合物は、約８０〜８５℃の温度へと加熱されうる。代替的に、組み合わされた混合物は、約８０、８１、８２、８３、８４又は８５℃の温度へと加熱されうる。代替的に、組み合わされた混合物は、約８２℃の温度へと加熱されうる。代替的に、組み合わされた混合物は、還流するように加熱されうる。加熱の後、組み合わされた混合物は、冷却されうる。代替的に、組み合わされた混合物は、約０〜４０℃の温度へと冷却されうる。代替的に、組み合わされた混合物は、約１０〜３０℃の温度へと冷却されうる。代替的に、組み合わされた混合物は、約２０℃へと冷却されうる。
【００５２】
本発明はまた、本発明の形態２を調製するためのプロセスであって、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの、溶媒中又は溶媒の混合物中の溶液からの結晶形態の結晶化を含むプロセスも包含する。好ましくは、溶媒は、イソプロパノール及びメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルである。Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドを、溶媒又は溶媒の混合物（例えば、イソプロパノール）へと添加した後で、組み合わされた混合物（化合物＋溶媒）は、逆溶媒（例えば、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル）へと添加されうる。任意選択的に、組み合わされた混合物（化合物＋溶媒）は、加熱され、逆溶媒への添加の前に、濾過されうる。
【００５３】
本発明はまた、本発明の形態３を調製するためのプロセスであって、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの、溶媒中又は溶媒の混合物中の溶液からの結晶形態の結晶化を含むプロセスも包含する。好ましくは、溶媒は、イソプロパノール及び水である。より好ましくは、溶媒は、９０：１０のイソプロパノール／水である。Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドを、溶媒又は溶媒の混合物（例えば、イソプロパノール及び水）へと添加した後で、組み合わされた混合物（化合物＋溶媒）は、冷却される前に、加熱されうる。代替的に、組み合わされた混合物は、約０〜−８０℃の温度へと冷却される前に加熱されうる。代替的に、組み合わされた混合物は、約−６０〜−８０℃の温度へと冷却される前に加熱されうる。代替的に、組み合わされた混合物は、約−７８℃の温度へと冷却される前に加熱されうる。代替的に、組み合わされた混合物は、ドライアイス／アセトン浴へと浸漬される前に加熱されうる。次いで、冷却された混合物は、フリーザーへと移されうる。
【００５４】
本発明はまた、本発明の形態４を調製するためのプロセスであって、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの、溶媒中又は溶媒の混合物中の溶液からの結晶形態の結晶化を含むプロセスも包含する。好ましくは、溶媒は、ジクロロメタンである。Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドを、溶媒又は溶媒の混合物（例えば、ジクロロメタン）へと添加した後で、組み合わされた混合物（化合物＋溶媒）は、冷却される前に、加熱されうる。代替的に、組み合わされた混合物は、約０〜−８０℃の温度へと冷却される前に加熱されうる。代替的に、組み合わされた混合物は、約−６０〜−８０℃の温度へと冷却される前に加熱されうる。代替的に、組み合わされた混合物は、約−７８℃の温度へと冷却される前に加熱されうる。代替的に、組み合わされた混合物は、ドライアイス／アセトン浴へと浸漬される前に加熱されうる。次いで、冷却された混合物は、フリーザーへと移されうる。
【００５５】
本発明はまた、本発明の形態４を調製するためのプロセスであって、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの、溶媒中又は溶媒の混合物中の溶液からの結晶形態の結晶化を含むプロセスも包含する。好ましくは、溶媒は、アニソール及びメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルである。Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドを、溶媒又は溶媒の混合物（例えば、アニソール）へと添加した後で、組み合わされた混合物（化合物＋溶媒）は、逆溶媒（例えば、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル）へと添加されうる。任意選択的に、組み合わされた混合物（化合物＋溶媒）は、加熱され、逆溶媒への添加の前に、濾過されうる。
【００５６】
本発明のプロセスはまた、本発明の結晶形態の種結晶の添加も含みうる。
【００５７】
ある態様において、本発明は、本発明に従うプロセスにより製造された場合の、本発明の結晶形態を提供する。
【００５８】
既に言及されている通り、本発明の結晶形態は、特に、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態の処置において、多数の治療的適用がなされている。
【００５９】
したがって、本発明は、治療における使用のための、本明細書の前出において規定された、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態を提供する。好ましい実施形態において、結晶形態は、形態１である。
【００６０】
本発明はまた、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態の処置のための医薬の製造における、本明細書の前出において規定された、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態の使用も提供する。好ましい実施形態において、結晶形態は、形態１である。
【００６１】
本発明はまた、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態を処置する方法における使用のための、本明細書の前出において規定された、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態も提供する。好ましい実施形態において、結晶形態は、形態１である。
【００６２】
本発明はまた、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態を処置する方法であって、このような処置を必要とする哺乳動物へと、本明細書の前出において規定された、治療有効量の、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態を投与するステップを含む方法も提供する。好ましい実施形態において、結晶形態は、形態１である。
【００６３】
ある態様において、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、視力障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、糖尿病、膵炎、脳内出血、腎症、心筋症、神経障害、炎症性腸疾患、関節炎、炎症、敗血症性ショック、低血圧、がん、成人呼吸窮迫症候群、播種性血管内凝固症、心肺バイパス術時の血液凝固及び術後出血から選択される。好ましい実施形態において、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、糖尿病性黄斑浮腫である。別の好ましい実施形態において、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、遺伝性血管浮腫である。
【００６４】
別の態様において、血漿カリクレイン活性が関与する疾患又は状態は、網膜静脈閉塞症である。
【００６５】
代替的に、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病性黄斑浮腫及び遺伝性血管浮腫から選択されうる。代替的に、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性又は糖尿病性黄斑浮腫でありうる。代替的に、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、遺伝性血管浮腫でありうる。Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態は、患者の眼領域への注射に適する形態により投与される場合があり、特に、ガラス体内注射に適する形態により投与されうる。
【００６６】
本発明の文脈において、本明細書における「処置」に対する言及は、特に逆の指示がない限り、治癒的処置、緩和的処置及び予防的処置に対する言及を含む。「治療」、「治療的」及び「治療的に」という用語は、同様に解釈されるべきである。
【００６７】
本発明の結晶形態は、単独で、又は１つ以上の他の薬物と組み合わせて投与されうる。一般に、本発明の結晶形態は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と会合させた製剤として投与される。本明細書において、「賦形剤」という用語は、本発明の化合物以外の任意の成分であって、機能的な特徴（すなわち、薬物放出速度を制御する特徴）及び／又は非機能的な特徴（すなわち、加工補助剤又は希釈剤の特徴）を、製剤へと付与しうる成分について記載するのに使用される。賦形剤の選択は、大部分、特定の投与方式、可溶性及び安定性に対する賦形剤の効果、並びに剤形の性質のような因子に依存する。
【００６８】
別の態様において、本発明の化合物は、網膜のレーザー処置と組み合わせて投与されうる。糖尿病性黄斑浮腫を処置するための、レーザー治療の、ＶＥＧＦインヒビターのガラス体内注射との組合せは、公知である（Ｅｌｍａｎ  Ｍ、Ａｉｅｌｌｏ  Ｌ、Ｂｅｃｋ  Ｒら、「Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ  ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ  ｐｌｕｓ  ｐｒｏｍｐｔ  ｏｒ  ｄｅｆｅｒｒｅｄ  ｌａｓｅｒ  ｏｒ  ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ  ｐｌｕｓ  ｐｒｏｍｐｔ  ｌａｓｅｒ  ｆｏｒ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｍａｃｕｌａｒ  ｅｄｅｍａ」、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ、２０１０年４月２７日）。
【００６９】
当業者に、本発明の結晶形態の送達に適する医薬組成物及びそれらを調製するための方法は、たやすく明らかである。このような組成物及びそれらを調製するための方法は、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、１９版（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９５）において見出されうる。
【００７０】
ヒト患者への投与のために、本発明の結晶形態の毎日の総用量は、当然ながら、投与方式に依存して、典型的に、０．１ｍｇ〜１０，０００ｍｇ、又は１ｍｇ〜５０００ｍｇの間、又は１０ｍｇ〜１０００ｍｇの間の範囲である。ガラス体内注射により投与される場合、眼１つ当たり０．０００１ｍｇ（０．１μｇ）〜０．２ｍｇ（２００μｇ）の間又は眼１つ当たり０．０００５ｍｇ（０．５μｇ）〜０．０５ｍｇ（５０μｇ）の間の低用量が想定される。
【００７１】
毎日の総用量は、単回投与により投与される場合もあり、分割投与により投与される場合もあり、医師の熟慮により、本明細書において与えられる典型的範囲を外れる場合もある。これらの投与量は、約６０ｋｇ〜７０ｋｇの体重を有する、平均的なヒト対象に基づく。医師は、たやすく、乳児及び老人のような、その体重がこの範囲からはずれる対象のための用量を決定することができる。
【００７２】
したがって、本発明は、本明細書の前出において規定された、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶質の固体形態、及び薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。好ましい実施形態において、結晶質の固体形態は、形態１である。
【００７３】
医薬組成物は、例えば、点眼剤製剤、クリーム製剤、溶液製剤、懸濁液製剤、ヘプタフルオロアルカン（ＨＦＡ）によるエアゾール製剤及び乾燥粉末製剤の形態において、局所（例えば、眼、皮膚又は肺及び／若しくは気道）投与される場合もあり；例えば、経口投与錠剤、カプセル、シロップ、粉末又は顆粒の形態において、全身投与される場合もあり；溶液又は懸濁液の形態における、非経口投与により投与される場合もあり；皮下投与により投与される場合もあり；坐剤の形態において、直腸内投与により投与される場合もあり；経皮投与される場合もある。さらなる実施形態において、医薬組成物は、懸濁液、錠剤、カプセル、粉末、顆粒又は座剤の形態にある。
【００７４】
本発明のある実施形態において、有効成分は、経口投与される。経口投与は、化合物が、消化管に入るように、嚥下を伴う場合もあり、かつ／又は化合物が、口腔から直接、血流に入る、口腔内投与、経舌投与、若しくは舌下投与を伴う場合もある。
【００７５】
経口投与に適する製剤は、錠剤；多微粒子若しくはナノ微粒子、液体、エマルジョン又は粉末を含有する、ソフトカプセル又はハードカプセル；トローチ（液体充填型を含む。）；チューズ；ゲル；即時分散剤形；フィルム；膣座剤；スプレー；及び口腔／粘膜接着性パッチのような、固体片製剤、固体の微粒子製剤、半固体製剤及び液体（多相系又は多分散系を含む。）製剤を含む。
【００７６】
経口投与に適する製剤はまた、結晶形態を、即放的又は徐放的に送達するようにもデザインされる場合があり、ここで、放出プロファイルは、結晶形態の治療的有効性を最適化するように、遅延される場合もあり、パルス化される場合もあり、制御される場合もあり、持続する場合もあり、又は遅延されかつ持続する場合もあり、又は改変される場合もある。当技術分野において、化合物を、徐放的に送達する手段は、公知であり、それらの放出を制御するように、化合物と共に製剤化されうる、徐放ポリマーを含む。
【００７７】
液体（多相系又は多分散系を含む。）製剤は、エマルジョン、懸濁液、溶液、シロップ及びエリキシルを含む。このような製剤は、ソフトカプセル内又はハードカプセル内の充填剤として提示されうる。液体製剤はまた、例えば、サッシェからの固体の復元によっても調製されうる。
【００７８】
本発明の結晶形態はまた、Ｌｉａｎｇ及びＣｈｅｎ、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐａｔｅｎｔｓ、２００１、１１  （６）、９８１〜９８６において記載されている剤形のような即時溶解、即時崩壊剤形においても使用されうる。
【００７９】
錠剤の製剤については、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ」、１巻、Ｈ．Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ及びＬ．Ｌａｃｈｍａｎ（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８０）において論じられている。
【００８０】
ここで、以下の非限定的な例により、本発明が例示される。例において、以下の図が提示される。
【図面の簡単な説明】
【００８１】
【図１】Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１のＸ線粉末回折パターンを示す図である。
【図２】Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１のＳＴＡを示す図である。
【図３】Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１のＤＳＣサーモグラフを示す図である。
【図４（ａ）】形態１の顕微鏡画像（１００倍に拡大された。）を示す図である。
【図４（ｂ）】形態１の偏光画像を示す図である。
【図５】Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態２のＸ線粉末回折パターンを示す図である。
【図６】Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態３のＸ線粉末回折パターンを示す図である。
【図７】Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態４のＸ線粉末回折パターンを示す図である。
【実施例】
【００８２】
一般的な実験の詳細
以下の例において、以下の略号及び定義が使用される。
【００８３】
【表１】
2019517460.tif 000004
【００８４】
そうでないことが指定されない限り、全ての反応は、窒素の雰囲気下において実行した。
【００８５】
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ製（４００ＭＨｚ）の分光計において、重水素溶媒に照らして、室温において記録した。
【００８６】
分子イオンは、０．１％のＨＣＯ２Ｈ／ＭｅＣＮから、０．１％のＨＣＯ２Ｈ／Ｈ２Ｏへの、１０％〜９０％の直線勾配を伴うＣｈｒｏｍｏｌｉｔｈ  Ｓｐｅｅｄｒｏｄ  ＲＰ−１８ｅカラム、５０×４．６ｍｍを、流量を１．５ｍＬ／分として、１３分間にわたり使用して、又は酸性の、５〜９５％のＭｅＣＮ／水による、Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｘ−Ｓｅｌｅｃｔを、４分間にわたり使用して実行されるＬＣＭＳを使用して得た。データは、エレクトロスプレーを伴うＴｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ  Ｓｕｒｖｅｙｏｒ  ＭＳＱ質量分析計を、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ  Ｓｕｒｖｅｙｏｒ  ＬＣシステムと共に使用して収集した。
【００８７】
生成物を、フラッシュクロマトグラフィーにより精製した場合、「シリカ」とは、０．０３５〜０．０７０ｍｍ（２２０〜４４０のメッシュ）のクロマトグラフィーのためのシリカゲル（例えば、Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０）を指し、１０ｐ．ｓ．ｉまで加えた窒素圧により、カラム溶出を加速化させた。逆相調製用ＨＰＬＣによる精製は、Ｗａｔｅｒｓ  ２９９６光ダイオードアレイ型検出器を使用する、Ｗａｔｅｒｓ  ２５２５二元勾配ポンピングシステムを、典型的に、２０ｍＬ／分の流量において使用して実行した。
【００８８】
全ての溶媒及び市販の試薬は、受領した通りに使用した。
【００８９】
化学名は、ＭＤＬ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ製のＩＳＩＳ  Ｄｒａｗパッケージの一部として提供されているＡｕｔｏｎｏｍソフトウェア又はＭａｒｖｉｎＳｋｅｔｃｈの構成要素として、若しくはＩＤＢＳ  Ｅ−ＷｏｒｋＢｏｏｋの構成要素として提供されているＣｈｅｍａｘｏｎソフトウェアのような自動式ソフトウェアを使用して作成した。
【００９０】
Ｘ線粉末回折パターンを、Ｐｈｉｌｉｐｓ  Ｘ−Ｐｅｒｔ  ＭＰＤ回折計において収集し、以下の実験条件：
回折管陽極：Ｃｕ
発電機電圧：４０ｋＶ
回折管電流：４０ｍＡ
アルファ１の波長：１．５４０６Å
アルファ２の波長：１．５４４４Å
開始角［２θ］：４
終了角［２θ］：４０
を使用して解析した。
連続走査
解析下の約２ｍｇの試料を、ＸＲＰＤ用の、バックグラウンドをゼロとする、単一の、斜めに切断された、シリカ製の試料ホルダー上で、静かに圧縮した。次いで、試料を、解析のために、回折計へとロードした。
【００９１】
以下の方法を使用して、ＤＳＣデータを収集した：約５ｍｇずつの試料を、アルミニウム製のＤＳＣパンへと秤量し、アルミニウム製の蓋により、非密閉的に閉止した。次いで、試料を、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｊａｄｅ  ＤＳＣへとロードし、３０℃に保持した。安定的な熱流応答が得られたら、次いで、走査速度を１０℃／分として、試料を、２００〜３００℃の間の温度へと加熱し、結果として得られる熱流応答をモニタリングした。２０ｃｍ３／分のヘリウムパージを使用した。解析の前に、インジウム標準物質を使用して、計器を、温度及び熱流について検証した。
【００９２】
以下の方法を使用して、同時熱分析（ＳＴＡ）データを収集した：約５ｍｇの試料を、セラミック製のるつぼへと正確に秤量し、周囲温度のＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ＳＴＡ  ６００  ＴＧＡ／ＤＴＡ解析器のチャンバーに入れた。次いで、速度を１０℃／分として、試料を、典型的に、２５℃〜３００℃へと加熱し、この時間における重量の変化を、ＤＴＡシグナルと同様にモニタリングした。使用されたパージガスは、流量を２０ｃｍ３／分とする窒素であった。
【００９３】
合成例
６−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ安息香酸
室温において、２−フルオロ−３−メトキシ安息香酸（１０ｇ、５８．８ミリモル）の、酢酸（５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）中懸濁液へと、臭素（６．０６ｍＬ、１１８ミリモル）を、滴下により添加した。次いで、反応物を、１時間にわたり、６０℃へと加熱した。反応を、室温へと冷却し、白色の沈殿物を濾過した。固体を、水（２００ｍＬ）及びイソヘキサン（５０ｍＬ）により洗浄して、６−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ安息香酸を、８２％の収率による、１２．０９８ｇの白色の固体として得た。
［ＭＨ］＋＝２４９／２５１
【００９４】
（６−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−メタノール
６−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ安息香酸（４．１３ｇ、１６．５８ミリモル）の、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中攪拌溶液へと、４−メチルモルホリン（１．９１４ｍＬ、１７．４１ミリモル）を添加し、次いで、イソブチルクロロギ酸エステル（２．１５ｍＬ、１６．５８ミリモル）を添加した。１時間後、反応混合物を濾過して、生成した任意の塩を除去し、固体を、さらなるＴＨＦ（１０ｍＬ）で洗浄した。濾過物及び洗浄液を、組み合わせ、氷冷浴中、０℃へと冷却し、次いで、冷水（１０ｍＬ）中のＮａＢＨ４（０．６５９ｇ、１７．４１ミリモル）を、ある部分量添加し（ガスの発生）、次いで、室温へと暖め、２時間にわたり攪拌した。酸性のｐＨが得られるまで、１ＭのＨＣｌ（３０ｍＬ）を、注意深く添加することにより、反応混合物を、クエンチングした。生成物を、ジエチルエーテル（１５０ｍＬ）へと抽出した。次いで、有機層を、２ＭのＮａＯＨ（２×１００ｍＬ）により洗浄して、出発カルボン酸を除去し、次いで、１ＭのＨＣｌ（１００ｍＬ）を伴う洗浄により酸性化させるのに続き、塩水（１００ｍＬ）により洗浄し、硫酸マグネシウム上において脱水し、濾過し、真空において、溶媒を除去した。粗生成物を、０〜５０％のＥｔＯＡｃ／イソヘキサンを伴うクロマトグラフィー溶出により精製して、（６−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−メタノールを、５０％の収率による、１．３７ｇの無色の油として得た。
［ＭＨ］＋＝２１７／２１９
【００９５】
１−ブロモ−２−クロロメチル−３−フルオロ−４−メトキシ−ベンゼン
（６−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−メタノール（５００ｍｇ、２．１２７ミリモル）の、無水ＤＣＭ（４ｍＬ）中溶液を、トリエチルアミン（４１５μＬ、２．９８ミリモル）に続き、メタンスルホニルクロリド（２１４μＬ、２．７７ミリモル）により処理した。混合物を、周囲温度において、一晩にわたり攪拌した。反応混合物を、ＤＣＭ（５０ｍＬ）及び飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（４０ｍＬ）の間において分割した。有機層を回収し、水性層を、さらなるＤＣＭ（４０ｍＬ）により抽出した。組み合わされた有機物を、水（４０ｍＬ）、塩水（４０ｍＬ）により洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。粗材料を、０〜３０％のＥｔＯＡｃ／イソヘキサの勾配を伴うクロマトグラフィー溶出により精製して、１−ブロモ−２−クロロメチル−３−フルオロ−４−メトキシ−ベンゼン（４６８ｍｇ、８６％の収率）を、白色の固体として得た。
【００９６】
２−（６−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ−ベンジル）−イソインドール−１，３−ジオン
１−ブロモ−２−クロロメチル−３−フルオロ−４−メトキシ−ベンゼン（４６０ｍｇ、１．８１５ミリモル）の、無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液へと、フタルイミドカリウム（４０３ｍｇ、２．１７８ミリモル）を添加し、混合物を、９０℃において、一晩にわたり加熱した。混合物を、ＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）により希釈し、水（３×３５ｍＬ）、塩水（３５ｍＬ）により洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、黄色の固体へと濃縮した。粗材料を、フラッシュクロマトグラフィー、０〜５０％のＥｔＯＡｃ／イソヘキサンの勾配を伴う溶出により精製した。所望の生成物である、２−（６−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ−ベンジル）−イソインドール−１，３−ジオンを、５６％の収率による、３７２ｍｇの、白色の針状結晶として単離した。
［ＭＨ］＋＝３６４．０／３６６．０
【００９７】
６−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ−ベンジルアミン
２−（６−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ−ベンジル）−イソインドール−１，３−ジオン（０．３６８ｇ、１．０１１ミリモル）の、メタノール（７．５ｍＬ）中懸濁液を、ヒドラジン水和物（０．０６４ｍＬ、１．３１４ミリモル）により処理し、反応混合物を、還流において、５時間にわたり加熱した。粗混合物を、ＳＣＸカラム（８ｇ）へと、直接ロードし、ＭｅＯＨａにより洗浄し、１％のＮＨ３／ＭｅＯＨにより溶出させて、６−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ−ベンジルアミン（２０４ｍｇ、８５％の収率）を、黄色の油として得た。
［ＭＨ］＋＝２３３．９／２３５．９
【００９８】
３−メトキシメチル−１−［４−（２−オキソ−２Ｈ−ピリジン−１−イルメチル）−ベンジル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸６−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ−ベンジルアミド
２５ｍＬのフラスコを、３−（メトキシメチル）−１−（４−（（２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル）ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（１３０ｍｇ、０．３６８ミリモル）、（６−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ−ベンジルアミン（８６ｍｇ、０．３６８ミリモル）、ＨＡＴＵ（１５４ｍｇ、０．４０５ミリモル）、無水ＤＣＭ（３ｍＬ）及び無水ＤＭＦ（０．５ｍＬ）により満たした。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１６０μＬ、０．９２０ミリモル）を添加し、混合物を、周囲温度において、一晩にわたり攪拌した。反応物を、真空下において濃縮し、ＭｅＯＨ（４ｍＬ）中において再溶解させ、次いで、ＳＣＸにより精製し、ＭｅＯＨによる洗浄、１％のＮＨ３／ＭｅＯＨによる溶出を行った。残留物を、０〜１０％のＭｅＯＨ（０．３％のＮＨ３を含有する。）／ＤＣＭの勾配を伴うクロマトグラフィー溶出によりさらに精製して、３−メトキシメチル−１−［４−（２−オキソ−２Ｈ−ピリジン−１−イルメチル）−ベンジル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸６−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ−ベンジルアミド（１９１ｍｇ、８９％の収率）を、白色の発泡体として得た。
［ＭＨ］＋＝５６９．２／５７１．２
【００９９】
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド
ジシアノ亜鉛（２４．１３ｍｇ、０．２０５ミリモル）及び３−メトキシメチル−１−［４−（２−オキソ−２Ｈ−ピリジン−１−イルメチル）−ベンジル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸６−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ−ベンジルアミド（９０ｍｇ、０．１５８ミリモル）の、ジメチルアセトアミド（１．２ｍＬ）脱気溶液へと、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１８．２６ｍｇ、０．０１６ミリモル）を添加し、混合物を、一晩にわたり、１１０℃に加熱した。混合物を、０〜１０％の（０．３％のＮＨ３／ＭｅＯＨ）／ＤＣＭの勾配を伴うクロマトグラフィー溶出により精製して、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドを、２５％の収率による、２１ｍｇの、淡黄色の発泡体として得た。
［ＭＨ］＋＝５１６．３
1H  NMR  (d6-DMSO)  δ:  3.21  (3H,  s),  3.92  (3H,  s),  4.47-4.55  (4H,  m),  5.06  (2H,  s),  5.27  (2H,  s),  6.21  (1H,  td,  J  =  6.7,  1.4Hz),  6.39  (1H,  d,  J  =  9.1Hz),  7.17-7.31  (5H,  m),  7.40  (1H,  ddd,  J  =  8.9,  6.6,  2.1Hz),  7.67  (1H,  dd,  J  =  8.6,  1.5Hz),  7.75  (1H,  dd,  J  =  6.8,  2.1Hz),  8.20  (1H,  s),  8.40  (1H,  t,  J  =  5.2Hz)
【０１００】
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態１）
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（７８ｇ、粗生成物）を、ＩＰＡ（７８０ｍＬ）へと添加し、混合物を、還流において、１５分間にわたり加熱した。完全な溶解が観察されるまで、さらなるＩＰＡを、ある部分量、この温度において、１時間にわたり添加した。合計１２２５ｍＬのＩＰＡを使用した。冷水浴に入れる前に、混合物を、１時間にわたり冷却し、温度を、２０℃へと低下させた。１時間にわたり攪拌した後で、溶液を濾過し、固体を、低温ＩＰＡ（１０℃、２×２００ｍＬ）により洗浄した。固体を、吸引により、２時間にわたり乾燥させ、次いで、真空中、４５℃において、一晩にわたり乾燥させて、表題化合物（３−メトキシメチル−１−［４−（２−オキソ−２Ｈ−ピリジン−１−イルメチル）−ベンジル］−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸６−ブロモ−２−フルオロ−３−メトキシ−ベンジルアミドから、５８ｇ、７８％の収率）を得た。
【０１０１】
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態１）のＸＲＰＤディフラクトグラムを、図１に示す。
【０１０２】
ピーク位置の表：
【０１０３】
【表２】
2019517460.tif 000005
【０１０４】
同時熱分析（ＳＴＡ）
形態１のＳＴＡデータを、図２に示す。
【０１０５】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
形態１のＤＳＣデータを、図３に示す。
【０１０６】
顕微鏡法
顕微鏡研究は、ＡｘｉｏＣａｍ  ＥＲｃ  ５ｓ装置：型番１６１２を装備したＡｘｉｏＶｅｒｔ  ３５Ｍを使用して、形態１に対して実施した。顕微鏡に、４つのレンズ：Ｚｅｉｓｓ  Ａ−Ｐｌａｎ  ５倍／０．１２、Ｚｅｉｓｓ  Ａ−Ｐｌａｎ  １０倍／０．２５、ＬＤ  Ａ−Ｐｌａｎ  ２０倍／０．３０及びＡｃｈｒｏｓ  ＴＩＧＭＡＴ  ３２倍／０．４０を装備した。Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  Ｚｅｎ  ＡｘｉｏＶｉｓｉｏｎ  Ｂｌｕｅ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｌｉｔｅ  ２０１１  ｖ１．０．０．０ソフトウェアを使用して、データの収集及び査定を実施した。少量の試料を、対物レンズにロードし、薄層が得られるまで、注意深く広げた。
【０１０７】
得られた画像を、図４（ａ）及び４（ｂ）に示す。
【０１０８】
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態２）
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（３０ｍｇ）の、ＩＰＡ（３００μＬ）中混合物を、加熱した。結果として得られる過飽和溶液又は過飽和懸濁液を、周囲温度において、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ｔ−ＢＭＥ）（７５０μＬ）へと濾過した。固体を結晶化させ、過剰溶媒をデカントで除去し、窒素下の蒸発により、固体を乾燥させて、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態２）を得た。
【０１０９】
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態２）のＸＲＰＤディフラクトグラムを、図５に示す。
【０１１０】
ピーク位置の表：
【０１１１】
【表３】
2019517460.tif 000006
【０１１２】
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態３）
９０／１０のＩＰＡ／水（４００μＬ）中のＮ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（１９．８ｍｇ）を加熱して、固体を溶解させ、必要な場合、濾過した。暖められた溶液を、ドライアイス／アセトン浴へと浸漬することにより、結果として得られる溶液を冷却した。次いで、試料を、フリーザー（約−２０℃の温度）へと移した。結果として得られる固体を単離して、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態３）を得た。
【０１１３】
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態３）のＸＲＰＤディフラクトグラムを、図６に示す。
【０１１４】
ピーク位置の表：
【０１１５】
【表４】
2019517460.tif 000007
【０１１６】
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態４）
ジクロロメタン（２００μＬ）中のＮ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（２０．８ｍｇ）を加熱して、固体を溶解させ、必要な場合、濾過した。暖められた溶液を、ドライアイス／アセトン浴へと浸漬することにより、結果として得られる溶液を冷却した。試料を、フリーザー（約−２０℃の温度）へと移した。結果として得られる固体を単離して、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態４）を得た。
【０１１７】
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態４）のＸＲＰＤディフラクトグラムを、図７に示す。
【０１１８】
ピーク位置の表：
【０１１９】
【表５】
2019517460.tif 000008
【０１２０】
代替的に、形態４は、以下の方法を使用して調製することもできる：Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（２９．７ｍｇ）の、アニソール（４５０μＬ）中混合物を加熱した。結果として得られる過飽和溶液又は過飽和懸濁液を、周囲温度において、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ｔ−ＢＭＥ）（７５０μＬ）へと濾過した。固体を結晶化させ、過剰溶媒をデカントで除去し、窒素下の蒸発により、固体を乾燥させて、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態４）を得た。
【０１２１】
生物学的方法
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドが、血漿カリクレインを阻害する能力は、以下の生物学的アッセイを使用して決定することができる：
血漿カリクレインについてのＩＣ５０の決定
インビトロにおける血漿カリクレイン阻害活性は、公表されている標準的な方法（例えば、Ｊｏｈａｎｓｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅａｃ．、１９８６、８、１８５；Ｓｈｏｒｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２、４３、１２０９；Ｓｔｕｅｒｚｅｂｅｃｈｅｒら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ、１９９２、３７３、１０２５を参照されたい。）を使用して決定した。ヒト血漿カリクレイン（Ｐｒｏｔｏｇｅｎ）を、２５℃において、蛍光性基質であるＨ−ＤＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＦＣ及び多様な濃度の被験化合物と共にインキュベートした。残留酵素活性（初期反応速度）は、４１０ｎｍにおける吸光度の変化を測定することにより決定し、被験化合物についてのＩＣ５０値を決定した。
【０１２２】
このアッセイにおいて調べたところ、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドは、０．６ｎＭのＩＣ５０（ヒトＰＫａｌ）を示した。
【０１２３】
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドはまた、以下の生物学的アッセイを使用して、類縁の酵素ＫＬＫ１に対する阻害活性についてもスクリーニングした。
【０１２４】
ＫＬＫ１に対するＩＣ５０の決定
インビトロにおけるＫＬＫ１阻害活性は、公表されている標準的な方法（例えば、Ｊｏｈａｎｓｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅａｃ．、１９８６、８、１８５；Ｓｈｏｒｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２、４３、１２０９；Ｓｔｕｅｒｚｅｂｅｃｈｅｒら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ、１９９２、３７３、１０２５を参照されたい。）を使用して決定した。ヒトＫＬＫ１（Ｃａｌｌｂｉｏｃｈｅｍ）を、２５℃において、蛍光性基質であるＨ−ＤＶａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−ＡＦＣ及び多様な濃度の被験化合物と共にインキュベートした。残留酵素活性（初期反応速度）は、４１０ｎｍにおける吸光度の変化を測定することにより決定し、被験化合物についてのＩＣ５０値を決定した。
【０１２５】
このアッセイにおいて調べたところ、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドは、＞４００００ｎＭのＩＣ５０（ヒトＫＬＫ１）を示した。
【０１２６】
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドはまた、以下の生物学的アッセイを使用して、類縁の酵素ＦＸＩａに対する阻害活性についてもスクリーニングした。
ＦＸＩａに対する阻害％の決定
インビトロにおけるＦＸＩａ阻害活性は、公表されている標準的な方法（例えば、Ｊｏｈａｎｓｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅａｃ．、１９８６、８、１８５；Ｓｈｏｒｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２、４３、１２０９；Ｓｔｕｅｒｚｅｂｅｃｈｅｒら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ、１９９２、３７３、１０２５を参照されたい。）を使用して決定した。ヒトＦＸＩａ（Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、２５℃において、蛍光性基質であるＺ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＡＦＣ及び４０μＭの被験化合物と共にインキュベートした。残留酵素活性（初期反応速度）は、４１０ｎｍにおける吸光度の変化を測定することにより決定した。
【０１２７】
このアッセイにおいて調べたところ、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドは、４０μＭにおいて、２８％の阻害％（ヒトＦＸＩａ）を示した。
【０１２８】
薬物動態
Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドについての薬物動態研究を実施して、雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける単回経口投与後における薬物動態を評価した。２匹のラットに、媒体中に名目２ｍｇ／ｍＬ（１０ｍｇ／ｋｇ）の被験化合物の組成物５ｍＬ／ｋｇの単回のｐｏ投与を施した。投与後、血液試料を、２４時間にわたり回収した。試料採取時間は、５、１５及び３０分後であり、次いで、１、２、４、６、８及び１２時間後であった。回収後、血液試料を遠心分離し、血漿画分を、ＬＣＭＳにより、被験化合物の濃度について解析した。
【０１２９】
この研究から、Ｎ−［（６−シアノ−２−フルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドについて取得された経口曝露データを、下記に示す。
【０１３０】
【表６】
2019517460.tif 000009
【図１】
2019517460.tif 000011
【図２】
2019517460.tif 000012
【図３】
2019517460.tif 000013
【図４（ａ）】
2019517460.tif 000014
【図４（ｂ）】
2019517460.tif 000015
【図５】
2019517460.tif 000016
【図６】
2019517460.tif 000017
【図７】
2019517460.tif 000018
【国際調査報告】
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2019517460.tif 000020
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