(57)【要約】  本発明は、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの新たな多形体、これらを含有する医薬組成物及び治療におけるこれらの使用を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも以下の特徴的なＸ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα放射線；２θ度により表す。）を、約５．５、９．５、１２．７、１４．７及び１６．７において呈する、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの固体形態。
【請求項２】
図１において示されたＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、請求項１に記載の固体形態。
【請求項３】
ＤＳＣサーモグラフにおいて、１５７±３℃に吸熱ピークを呈する、請求項１又は２に記載の固体形態。
【請求項４】
図３において示されたＤＳＣサーモグラフと実質的に同じＤＳＣサーモグラフを有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の固体形態。
【請求項５】
ＤＳＣサーモグラフにおいて、１５７±３℃に吸熱ピークを呈する、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの固体形態。
【請求項６】
図３において示されたＤＳＣサーモグラフと実質的に同じＤＳＣサーモグラフを有する、請求項５に記載の固体形態。
【請求項７】
少なくとも以下の特徴的なＸ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα放射線；２θ度により表す。）を、約９．５、１０．３、１３．２、１５．６及び１６．９において呈する、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの固体形態。
【請求項８】
図１２において示されたＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、請求項７に記載の固体形態。
【請求項９】
少なくとも以下の特徴的なＸ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα放射線；２θ度により表す。）を、約１２．３、１３．７、２０．７、２６．２及び２７．８において呈する、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの固体形態。
【請求項１０】
図１３において示されたＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、請求項９に記載の固体形態。
【請求項１１】
薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤又は担体と共に、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の固体形態を含む、医薬組成物。
【請求項１２】
治療における使用のための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の固体形態。
【請求項１３】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態の処置における使用のための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の固体形態。
【請求項１４】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、視力障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、糖尿病、膵炎、脳内出血、腎症、心筋症、神経障害、炎症性腸疾患、関節炎、炎症、敗血症性ショック、低血圧、がん、成人呼吸窮迫症候群、播種性血管内凝固症、心肺バイパス術時の血液凝固及び術後出血から選択される、請求項１３に記載の固体形態。
【請求項１５】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病性黄斑浮腫及び遺伝性血管浮腫から選択される、請求項１３に記載の固体形態。
【請求項１６】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性及び糖尿病性黄斑浮腫から選択される、請求項１５に記載の固体形態。
【請求項１７】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、遺伝性血管浮腫である、請求項１５に記載の固体形態。
【請求項１８】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、糖尿病性黄斑浮腫である、請求項１５に記載の固体形態。
【請求項１９】
血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態が、網膜静脈閉塞症である、請求項１３に記載の固体形態。
【請求項２０】
患者の眼領域への注射に適した形態で投与される、特に、硝子体内注射に適した形態で投与される、請求項１６に記載の固体形態。
【請求項２１】
固体形態を、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドと溶媒又は溶媒の混合物との混合物から結晶化させるステップを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の固体形態を調製するための方法。
【請求項２２】
溶媒又は溶媒の混合物が、イソプロパノールである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
混合物が、約６０〜８５℃の温度に加熱される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
加熱した後で、混合物が、約０〜４０℃の温度に冷却される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
固体形態を、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドと溶媒又は溶媒の混合物との混合物から結晶化させるステップを含む、請求項７〜８のいずれか一項に記載の固体形態を調製するための方法。
【請求項２６】
溶媒又は溶媒の混合物が、メタノール及び水である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
メタノール及び水が、蒸発させられる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
固体形態を、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドと溶媒又は溶媒の混合物との混合物から結晶化させるステップを含む、請求項９〜１０のいずれか一項に記載の固体形態を調製するための方法。
【請求項２９】
溶媒又は溶媒の混合物が、メタノール及びペンタンである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
混合物が、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドのメタノール溶液を、ペンタンに添加することにより調製される、請求項２９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血漿カリクレインインヒビターの新たな多形体、これらを含有する医薬組成物及び治療におけるこれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
血漿カリクレインインヒビターは、特に、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病性黄斑浮腫及び遺伝性血管浮腫の処置において、多数の治療的適用がなされている。
【０００３】
血漿カリクレインは、キニンを、キニノーゲンから遊離させうる、トリプシン様のセリンプロテアーゼである（Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａら、「Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−Ｋｉｎｉｎ  Ｃａｓｃａｄｅ」、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、４８３〜４９３頁；Ｊ．Ｗ．Ｂｒｙａｎｔら、「Ｈｕｍａｎ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−ｋｉｎｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ」、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７、２３４〜２５０頁、２００９；Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖ．、１９９２、４４、１；及びＤ．Ｊ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ、「Ｔｏｗａｒｄｓ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−ｋｉｎｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｋｉｎｉｎ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０００、３３、６６５〜６７７を参照されたい。）。血漿カリクレインは、内因系血液凝固カスケードの不可欠なメンバーであるが、このカスケードにおけるその役割は、ブラジキニンの放出又は酵素的切断を伴わない。血漿プレカリクレインは、単一の遺伝子によりコードされ、肝臓において合成される。血漿カリクレインは、肝細胞により、不活性の血漿プレカリクレインとして分泌され、これが、血漿中を、高分子量のキニノーゲンに結合したヘテロ二量体の複合体として循環し、これが、活性化して、活性の血漿カリクレインをもたらす。キニンは、Ｇタンパク質共役受容体を介して作用する、炎症の強力なメディエーターであり、キニンのアンタゴニスト（ブラジキニンアンタゴニストのような）は、多数の障害を処置するための、潜在的な治療剤として、既に探索されている（Ｆ．Ｍａｒｃｅａｕ及びＤ．Ｒｅｇｏｌｉ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２００４、３、８４５〜８５２）。
【０００４】
血漿カリクレインは、多数の炎症性障害において役割を果たしていると考えられる。主要な血漿カリクレインのインヒビターは、セルピンＣ１エステラーゼインヒビターである。Ｃ１エステラーゼインヒビターにおいて遺伝子欠損を呈する患者は、顔面、手、喉、消化管及び生殖器の間欠的な腫脹を結果としてもたらす、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）を患う。急性挿間時に形成される水疱は、血管透過性の増大をもたらす、ブラジキニンを遊離させる、高分子量のキニノーゲンを切断する、高レベルの血漿カリクレインを含有する。大型のタンパク質である血漿カリクレインインヒビターによる処置は、血管透過性の増大を引き起こす、ブラジキニンの放出を防止することにより、ＨＡＥを効果的に処置することが示されている（Ａ．Ｌｅｈｍａｎｎ、「Ｅｃａｌｌａｎｔｉｄｅ（ＤＸ−８８），ａ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ  ａｎｇｉｏｅｄｅｍａ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ｏｎ−ｐｕｍｐ  ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃ  ｓｕｒｇｅｒｙ」、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．、８、１１８７〜９９頁）。
【０００５】
血漿カリクレイン−キニン系は、進行性糖尿病性黄斑浮腫を伴う患者において、異常に夥多である。近年、糖尿病性ラットにおいて、血漿カリクレインが、網膜の血管機能不全に寄与することが公表された（Ａ．Ｃｌｅｒｍｏｎｔら、「Ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇ  ｉｎ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒａｔｓ」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、２０１１、６０、１５９０〜９８頁）。さらに、血漿カリクレインインヒビターであるＡＳＰ−４４０の投与は、糖尿病性ラットにおける、網膜血管透過性及び網膜血流異常の両方を改善した。したがって、血漿カリクレインインヒビターは、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性及び糖尿病性黄斑浮腫を軽減する処置としての有用性を有するはずである。
【０００６】
血漿カリクレインはまた、血液凝固においても役割を果たす。内因系凝固カスケードは、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）により活性化しうる。ＦＸＩＩが活性化する（ＦＸＩＩａに）と、ＦＸＩＩａは、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）の活性化を介して、フィブリンの形成を誘発し、これにより、血液凝固が生じる。血漿カリクレインは、ＦＸＩＩを、ＦＸＩＩａに活性化させ、これにより、内因系凝固経路の活性化を結果としてもたらすため、内因系凝固カスケードにおける、鍵となる構成要素である。さらに、ＦＸＩＩａはまた、血漿カリクレインを結果としてもたらす、血漿プレカリクレインも、さらに活性化させる。これは、血漿カリクレイン系及び内因系凝固経路の、正のフィードバック増幅を結果としてもたらす（Ｔａｎａｋａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４、１１３、３３３〜３３９）；Ｂｉｒｄら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１２、１０７、１１４１〜５０））。
【０００７】
血中のＦＸＩＩの、負に帯電した表面（心肺バイパス術時に、血液が流過する人工肺の外部配管又は膜の表面のような）との接触は、チモーゲンであるＦＸＩＩのコンフォメーション変化を誘導する結果として、少量の活性ＦＸＩＩ（ＦＸＩＩａ）をもたらす。ＦＸＩＩａの形成は、血漿カリクレインの形成を誘発する結果として、上記において記載された通り、血液凝固をもたらす。ＦＸＩＩの、ＦＸＩＩａへの活性化はまた、体内における、多様なソース（例えば、敗血症時における細菌、分解しつつある細胞に由来するＲＮＡ）上の、負に帯電した表面との接触によっても生じることがあり、これにより、播種性血管内凝固症を結果としてもたらす（Ｔａｎａｋａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４、１１３、３３３〜３３９）。
【０００８】
したがって、血漿カリクレインの阻害は、上記において記載された血液凝固カスケードを阻害するので、播種性血管内凝固症及び血液凝固が所望されない心肺バイパス術時の血液凝固の処置において有用である。例えば、Ｋａｔｓｕｕｒａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９６、８２、３６１〜３６８）は、ＬＰＳにより誘導された播種性血管内凝固症に対する、血漿カリクレインインヒビターであるＰＫＳＩ−５２７の投与が、血小板カウント及びフィブリノーゲンレベルの低下のほか、播種性血管内凝固症において通例生じる、ＦＤＰレベルの上昇も、有意に抑制したことを示した。Ｂｉｒｄら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１２、１０７、１１４１〜５０）は、血漿カリクレイン欠損マウスにおいて、凝固時間が増大し、血栓が有意に軽減されたことを示した。Ｒｅｖｅｎｋｏら（Ｂｌｏｏｄ、２０１１、１１８、５３０２〜５３１１）は、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置を使用する、マウスにおける血漿プレカリクレインレベルの低減が、抗血栓効果を結果としてもたらしたことを示した。Ｔａｎａｋａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４、１１３、３３３〜３３９）は、血液を、ＤＸ−８８（血漿カリクレインインヒビター）と接触させる結果として、活性化凝固時間（ＡＣＴ）の増大をもたらしたことを示した。Ｌｅｈｍａｎｎら（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．、２００８、１１８７〜９９）は、エカランチド（血漿カリクレインインヒビター）が、接触により活性化する誘導性凝固を遅延させることが見出されたことを示した。Ｌｅｈｍａｎｎらは、エカランチドが、「血漿カリクレインを阻害することにより、内因系凝固経路を阻害したので、インビトロにおいて、抗凝固効果を及ぼした」と結論づけている。
【０００９】
血漿カリクレインはまた、血小板の活性化の阻害においても役割を果たし、したがって、出血の停止の阻害においても役割を果たす。血小板の活性化は、止血における早期のステップであって、血管への損傷後における、血小板による止栓の形成及び出血の迅速な停止をもたらすステップのうちの１つである。血管損傷の部位において、露出されたコラーゲン及び血小板の間の相互作用は、血小板の保持及び活性化、並びにその後における出血の停止に極めて重要である。
【００１０】
活性化すると、血漿カリクレインは、コラーゲンに結合し、これにより、ＧＰＶＩ受容体により媒介される、血小板のコラーゲン媒介性活性化に干渉する（Ｌｉｕら（Ｎａｔ  Ｍｅｄ．、２０１１、１７、２０６〜２１０））。上記において論じられた通り、血漿カリクレインインヒビターは、第ＸＩＩ因子の血漿カリクレイン媒介性活性化を阻害することにより、血漿プレカリクレインの活性化を低減し、これにより、接触活性化系による、カリクレイン系の、正のフィードバック増幅を低減する。
【００１１】
したがって、血漿カリクレインの阻害は、血漿カリクレインの、コラーゲンへの結合を低減し、これにより、出血の停止に対する、血漿カリクレインの干渉を低減する。したがって、血漿カリクレインインヒビターは、脳内出血及び術後出血の処置においても有用である。例えば、Ｌｉｕら（Ｎａｔ  Ｍｅｄ．、２０１１、１７、２０６〜２１０）は、低分子ＰＫインヒビターであるＡＳＰ−４４０の全身投与が、ラットにおける血腫の拡大を低減することを裏付けた。脳血腫は、脳内出血の後に生じる場合があり、血管損傷の結果としての、血管から脳組織の周囲への出血により引き起こされる。Ｌｉｕらにより報告された脳内出血モデルにおける出血は、血管を損傷させた脳実質の切開を伴う手術介入により誘導された。これらのデータは、血漿カリクレインの阻害が、術後出血及び術後における血腫容量を低減したことを裏付ける。Ｂｊｏｅｒｋｑｖｉｓｔら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１３、１１０、３９９−  ４０７）は、アプロチニン（血漿カリクレインを含むセリンプロテアーゼを阻害するタンパク質）を使用して、術後出血を減少させうることを裏付けた。
【００１２】
糖尿病の他の合併症であって、それらの全てが血漿カリクレインと関連する、脳内出血、腎症、心筋症及び神経障害のような合併症もまた、血漿カリクレインインヒビターの標的として考えられうる。
【００１３】
合成の低分子血漿カリクレインインヒビターは、既に、例えば、Ｇａｒｒｅｔｔら（「Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｌｄｅｈｙｄｅ・・・」、Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｒｅｓ．、５２、６２〜７１頁（１９９８））、Ｔ．Ｇｒｉｅｓｂａｃｈｅｒら（「Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｉｓｓｕｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｋｉｎｉｎｓ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１３７、６９２〜７００頁（２００２））、Ｅｖａｎｓ（「Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｄｉｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」、ＷＯ０３／０７６４５８）、Ｓｚｅｌｋｅら（「Ｋｉｎｉｎｏｇｅｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、ＷＯ９２／０４３７１）、Ｄ．Ｍ．Ｅｖａｎｓら（Ｉｍｍｕｎｏｌｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、３２、１１５〜１１６頁（１９９６））、Ｓｚｅｌｋｅら（「Ｋｉｎｉｎｏｇｅｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、ＷＯ９５／０７９２１）、Ａｎｔｏｎｓｓｏｎら（「Ｎｅｗ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」、ＷＯ９４／２９３３５）、Ｊ．Ｃｏｒｔｅら（「Ｓｉｘ  ｍｅｍｂｅｒｅｄ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ  ｕｓｅｆｕｌ  ａｓ  ｓｅｒｉｎｅ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、ＷＯ２００５／１２３６８０）、Ｊ．Ｓｔｕｅｒｚｂｅｃｈｅｒら（Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ、２７、１９２９〜３４頁（１９９４））、Ｋｅｔｔｎｅｒら（ＵＳ５，１８７，１５７）、Ｎ．Ｔｅｎｏら（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、４１、１０７９〜１０９０頁（１９９３））、Ｗ．Ｂ．Ｙｏｕｎｇら（「Ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｓ．１６、２０３４〜２０３６頁（２００６））、Ｏｋａｄａら（「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｐｌａｓｍｉｎ  ａｎｄ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ」、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４８、１９６４〜７２頁（２０００））、Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚｅｒら（「Ｔｒｙｐｓｉｎ−ｌｉｋｅ  ｓｅｒｉｎｅ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｕｓｅ」、ＷＯ０８／０４９５９５）、Ｚｈａｎｇら（「Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｈｉｇｈｌｙ  ｐｏｔｅｎｔ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２、５４５〜５５３頁（２００６））、Ｓｉｎｈａら（「Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」、ＷＯ０８／０１６８８３）、Ｓｈｉｇｅｎａｇａら（「Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、ＷＯ２０１１／１１８６７２）、及びＫｏｌｔｅら（「Ｂｉｏｃｈｅ��ｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａ  ｌｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２０１１）、１６２（７）、１６３９〜１６４９）により記載されている。また、Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚｅｒら（「Ｓｅｒｉｎｅ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、ＷＯ２０１２／００４６７８）は、ヒトプラスミン及び血漿カリクレインのインヒビターである、環化ペプチド類似体について記載している。
【００１４】
現在のところ、低分子合成血漿カリクレインインヒビターは、医療における使用について承認されていない。公知の技術分野において記載されている分子の多くは、ＫＬＫ１、トロンビン及び他のセリンプロテアーゼのような類縁の酵素に対する選択性の不良、及び経口アベイラビリティーの不良のような限界を抱えている。大型のタンパク質である血漿カリクレインインヒビターは、エカランチドについて報告されている通り、アナフィラキシー反応の危険性を提示する。したがって、血漿カリクレインを選択的に阻害する化合物であって、アナフィラキシーを誘導せず、経口アベイラビリティーがある化合物が、依然として必要とされている。さらに、公知の技術分野における分子の大多数は、高度に極性でありイオン化可能なグアニジン官能基又はアミジン官能基を特徴とする。このような官能基は、消化管の透過性に対して限定的な場合があり、したがって、経口アベイラビリティーに対して限定的な場合があることが周知である。例えば、Ｔａｍｉｅ  Ｊ．Ｃｈｉｌｃｏｔｅ及びＳｕｋａｎｔｏ  Ｓｉｎｈａ（「ＡＳＰ−６３４：Ａｎ  Ｏｒａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｆｏｒ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  ＭａｃｕｌａｒＥｄｅｍａ」、ＡＲＶＯ、２０１２年５月６日〜２０１２年５月９日、Ｆｏｒｔ  Ｌａｕｄｅｒｄａｌｅ、Ｆｌｏｒｉｄａ、Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ２２４０）により、ベンズアミジンであるＡＳＰ−４４０が、経口アベイラビリティーの不良を抱えることが報告されている。ＡＳＰ−６３４のようなプロドラッグを創出することにより、吸収が改善されうることも、さらに報告されている。しかし、プロドラッグは、いくつかの欠点、例えば、化学的安定性の不良及び不活性の担体又は予測外の代謝物に由来する潜在的な毒性を抱える場合があることが周知である。別の報告において、インドールアミドは、ＡＤＭＥ−ｔｏｘ特性及び物理化学的特性の不良又はこれらの特性の不十分を保有する薬物と関連する問題を克服しうる化合物として主張されているが、血漿カリクレインに対する阻害は、提示も主張もされていない（Ｇｒｉｆｆｉｏｅｎ  ｅｔ  ａｌ、「Ｉｎｄｏｌｅ  ａｍｉｄｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｆｏｒ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ」、ＷＯ２０１０／１４２８０１）。
【００１５】
ＢｉｏＣｒｙｓｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．は、経口アベイラビリティーがある血漿カリクレインインヒビターであるＢＣＸ４１６１の発見について報告した（「ＢＣＸ４１６１，Ａｎ  Ｏｒａｌ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：Ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  Ｏｆ  ａ  Ｐｈａｓｅ  １  Ｓｔｕｄｙ  Ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１３３巻、２号増刊、２０１４年２月、ＡＢ３９頁；及び「Ａ  Ｓｉｍｐｌｅ，Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ  Ａｓｓａｙ  ｔｏ  Ｍｏｎｉｔｏｒ  Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＢＣＸ４１６１  ｉｎ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｐｌａｓｍａ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１３３巻、２号増刊、２０１４年２月、ＡＢ４０頁）。しかし、ヒトにおける用量は、比較的大量であり、用量を４００ｍｇずつ毎日３回とする概念実証研究において現在調べられている。
【００１６】
グアニジン官能基又はアミジン官能基を特徴としない血漿カリクレインインヒビターについて存在する報告は、少数であるに過ぎない。１つの例は、アミノピリジン官能基を特徴とする化合物について記載する、Ｂｒａｎｄｌら（「Ｎ−（（６−ａｍｉｎｏ−ｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ）−ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ−ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅｓ  ａｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」、ＷＯ２０１２／０１７０２０）である。ラットモデルにおける経口有効性は、３０ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ／ｋｇの比較的高用量において裏付けられているが、薬物動態プロファイルは、報告されていない。したがって、このような化合物が、臨床に進むのに十分な経口アベイラビリティー又は有効性を提示するのかどうかについては、未だ知られていない。他の例は、Ｂｒａｎｄｌら（「Ａｍｉｎｏｐｙｒｉｄｉｎｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、ＷＯ２０１３／１１１１０７）及びＦｌｏｈｒら（「５−ｍｅｍｂｅｒｅｄ  ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、ＷＯ２０１３／１１１１０８）である。しかし、これらの文献のいずれも、インビボデータについて報告しておらず、したがって、このような化合物が、臨床に進むのに十分な経口アベイラビリティー又は有効性を提示するのかどうかについては、未だ知られていない。別の例は、Ａｌｌａｎら、「Ｂｅｎｚｙｌａｍｉｎｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」、ＷＯ２０１４／１０８６７９である。
【００１７】
商業的に実現可能な製造方法を得るために、医薬製剤の製造において、活性の化合物が、操作及び加工に簡便でありうる形態にあることが重要である。したがって、活性化合物の化学的安定性及び物理的安定性は、重要な因子である。活性化合物、及びこれを含有する製剤は、かなりの期間にわたり、活性化合物の、物理化学的特徴（例えば、化学的組成、密度、吸湿性及び可溶性）の重大な変化を呈さずに、有効な形で保存されなければならない。
【００１８】
特定の固体形態の医薬成分の製造は、その固体特性の多くの側面に影響を及ぼす可能性があり、可溶性、溶解速度、化学的安定性、力学的特性、技術的実行可能性、加工可能性、薬物動態及びバイオアベイラビリティーの側面において、利点をもたらしうることが公知である。これらの利点のうちの一部は、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ」、Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  Ｓｔａｈｌ、Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（編）（Ｖｅｒｌａｇ  Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ、Ｚｕｒｉｃｈ）において記載されている。固体形態を製造する方法はまた、「Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」、Ｎｅａｌ、Ｇ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）及び「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：Ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ」、Ｒｏｌｆ  Ｈｉｌｆｉｋｅｒ（編）（Ｗｉｌｅｙ  ＶＣＨ）においても記載されている。薬学的結晶における多形体は、Ｂｙｒｎ（Ｂｙｒｎ，Ｓ．Ｒ．、Ｐｆｅｉｆｆｅｒ，Ｒ．Ｒ．、Ｓｔｏｗｅｌｌ，Ｊ．Ｇ．、「Ｓｏｌｉｄ−Ｓｔａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ」、ＳＳＣＩ  Ｉｎｃ．、Ｗｅｓｔ  Ｌａｆａｙｅｔｔｅ、Ｉｎｄｉａｎａ、１９９９）；Ｂｒｉｔｔａｉｎ，Ｈ．Ｇ．、「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｏｌｉｄｓ」、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｂａｓｅｌ、１９９９）又はＢｅｒｎｓｔｅｉｎ（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，Ｊ．、「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｒｙｓｔａｌｓ」、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２００２）において記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１９】
【特許文献１】国際公開第２００３／０７６４５８号
【特許文献２】国際公開第９２／０４３７１号
【特許文献３】国際公開第９５／０７９２１号
【特許文献４】国際公開第９４／２９３３５号
【特許文献５】国際公開第２００５／１２３６８０号
【特許文献６】米国特許第５，１８７，１５７号明細書
【特許文献７】国際公開第２００８／０４９５９５号
【特許文献８】国際公開第２００８／０１６８８３号
【特許文献９】国際公開第２０１１／１１８６７２号
【特許文献１０】国際公開第２０１２／００４６７８号
【特許文献１１】国際公開第２０１０／１４２８０１号
【特許文献１２】国際公開第２０１２／０１７０２０号
【特許文献１３】国際公開第２０１３／１１１１０７号
【特許文献１４】国際公開第２０１３／１１１１０８号
【特許文献１５】国際公開第２０１４／１０８６７９号
【非特許文献】
【００２０】
【非特許文献１】Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａら、「Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−Ｋｉｎｉｎ  Ｃａｓｃａｄｅ」、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、４８３〜４９３頁
【非特許文献２】Ｊ．Ｗ．Ｂｒｙａｎｔら、「Ｈｕｍａｎ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−ｋｉｎｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ」、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、７、２３４〜２５０頁、２００９
【非特許文献３】Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖ．、１９９２、４４、１
【非特許文献４】Ｄ．Ｊ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ、「Ｔｏｗａｒｄｓ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−ｋｉｎｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｋｉｎｉｎ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０００、３３、６６５〜６７７
【非特許文献５】Ｆ．Ｍａｒｃｅａｕ及びＤ．Ｒｅｇｏｌｉ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２００４、３、８４５〜８５２
【非特許文献６】Ａ．Ｌｅｈｍａｎｎ「Ｅｃａｌｌａｎｔｉｄｅ（ＤＸ−８８），ａ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ  ａｎｇｉｏｅｄｅｍａ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ｏｎ−ｐｕｍｐ  ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃ  ｓｕｒｇｅｒｙ」、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．、８、１１８７〜９９頁
【非特許文献７】Ａ．Ｃｌｅｒｍｏｎｔら、「Ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇ  ｉｎ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｒａｔｓ」、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、２０１１、６０、１５９０〜９８頁
【非特許文献８】Ｔａｎａｋａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００４、１１３、３３３〜３３９）
【非特許文献９】Ｂｉｒｄら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１２、１０７、１１４１〜５０）
【非特許文献１０】Ｋａｔｓｕｕｒａら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９６、８２、３６１〜３６８）
【非特許文献１１】Ｒｅｖｅｎｋｏら（Ｂｌｏｏｄ、２０１１、１１８、５３０２〜５３１１）
【非特許文献１２】Ｌｅｈｍａｎｎら（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．、２００８、１１８７〜９９）
【非特許文献１３】Ｌｉｕら（Ｎａｔ  Ｍｅｄ．、２０１１、１７、２０６〜２１０）
【非特許文献１４】Ｂｊｏｅｒｋｑｖｉｓｔら（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ、２０１３、１１０、３９９〜４０７）
【非特許文献１５】Ｇａｒｒｅｔｔら（「Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｌｄｅｈｙｄｅ…」、Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｒｅｓ．、５２、６２〜７１頁（１９９８））
【非特許文献１６】Ｔ．Ｇｒｉｅｓｂａｃｈｅｒら（「Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｉｓｓｕｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｋｉｎｉｎｓ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１３７、６９２〜７００頁（２００２））
【非特許文献１７】Ｄ．Ｍ．Ｅｖａｎｓら（Ｉｍｍｕｎｏｌｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、３２、１１５〜１１６頁（１９９６））
【非特許文献１８】Ｊ．Ｓｔｕｅｒｚｂｅｃｈｅｒら（Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ、２７、１９２９〜３４頁（１９９４））
【非特許文献１９】Ｎ．Ｔｅｎｏら（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、４１、１０７９〜１０９０頁（１９９３））
【非特許文献２０】Ｗ．Ｂ．Ｙｏｕｎｇら（「Ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ」、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｓ．１６、２０３４〜２０３６頁（２００６））
【非特許文献２１】Ｏｋａｄａら（「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｐｌａｓｍｉｎ  ａｎｄ  ｐｌａｓｍａ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ」、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４８、１９６４〜７２頁（２０００））
【非特許文献２２】Ｚｈａｎｇら（「Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｈｉｇｈｌｙ  ｐｏｔｅｎｔ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２、５４５〜５５３頁（２００６））
【非特許文献２３】Ｋｏｌｔｅら（「Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２０１１）、１６２（７）、１６３９〜１６４９）
【非特許文献２４】Ｔａｍｉｅ  Ｊ．Ｃｈｉｌｃｏｔｅ及びＳｕｋａｎｔｏ  Ｓｉｎｈａ（「ＡＳＰ−６３４：Ａｎ  Ｏｒａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｆｏｒ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  ＭａｃｕｌａｒＥｄｅｍａ」、ＡＲＶＯ、２０１２年５月６日〜２０１２年５月９日、Ｆｏｒｔ  Ｌａｕｄｅｒｄａｌｅ、Ｆｌｏｒｉｄａ、Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ２２４０）
【非特許文献２５】ＢｉｏＣｒｙｓｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．、「ＢＣＸ４１６１，Ａｎ  Ｏｒａｌ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：Ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｕｌｔｓ  Ｏｆ  ａ  Ｐｈａｓｅ  １  Ｓｔｕｄｙ  Ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１３３巻、２号増刊、２０１４年２月、ＡＢ３９頁
【非特許文献２６】「Ａ  Ｓｉｍｐｌｅ，Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ  Ａｓｓａｙ  ｔｏ  Ｍｏｎｉｔｏｒ  Ｐｌａｓｍａ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＢＣＸ４１６１  ｉｎ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｐｌａｓｍａ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１３３巻、２号増刊、２０１４年２月、ＡＢ４０頁
【非特許文献２７】「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ」、Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  Ｓｔａｈｌ、Ｃａｍｉｌｌｅ  Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（編）（Ｖｅｒｌａｇ  Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ、Ｚｕｒｉｃｈ）
【非特許文献２８】「Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」、Ｎｅａｌ、Ｇ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）
【非特許文献２９】「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：Ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ」、Ｒｏｌｆ  Ｈｉｌｆｉｋｅｒ（編）（Ｗｉｌｅｙ  ＶＣＨ）
【非特許文献３０】Ｂｙｒｎ（Ｂｙｒｎ，Ｓ．Ｒ．、Ｐｆｅｉｆｆｅｒ，Ｒ．Ｒ．、Ｓｔｏｗｅｌｌ，Ｊ．Ｇ．、「Ｓｏｌｉｄ−Ｓｔａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ」、ＳＳＣＩ  Ｉｎｃ．、Ｗｅｓｔ  Ｌａｆａｙｅｔｔｅ、Ｉｎｄｉａｎａ、１９９９）
【非特許文献３１】Ｂｒｉｔｔａｉｎ，Ｈ．Ｇ．、「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｏｌｉｄｓ」、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｂａｓｅｌ、１９９９
【非特許文献３２】Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，Ｊ．、「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｒｙｓｔａｌｓ」、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２００２）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本出願者は、血漿カリクレインのインヒビターである、新規な一連の化合物であって、ＷＯ２０１３６／０８３８２０（ＰＣＴ／ＧＢ２０１５／０５３６１５）において開示された化合物を開発した。これらの化合物は、血漿カリクレインに対する良好な選択性を裏付け、糖尿病性網膜症、黄斑浮腫及び遺伝性血管浮腫の処置において、潜在的に有用である。１つのこのような化合物は、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドである。Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドを調製しようとする初期の試みは、非晶質固体（形態Ａ）をもたらした。しかし、本出願者は、今般、この化合物の、新規で、安定的な結晶形態を開発しており、本明細書において、これらは、「形態１」、「形態２」、及び「形態３」と称される。新規の固体形態は、それらを開発に適するものとする、有利な物理化学的特性を有する。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
したがって、本発明の態様に従い、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶多形体が提供される。本出願では、これらの多形体は、「形態１」、「形態２」、及び「形態３」と称されうる。
【００２３】
本発明の結晶多形体は、それらを開発に適するものとする、有利な物理化学的特性を有する。例えば、図４における、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの「形態１」についての重量水蒸気吸脱着法（ＧＶＳ）データは、水和が可逆的である（すなわち、有意なヒステリシスが見られない。）ことを示す。さらに、これらのデータは、通常条件（７０％以下の相対湿度）下において、水分含量の、比較的漸進的な増大が見られるに過ぎないことを示す。これは、有意な吸湿性が存在しないことと一致する。
【００２４】
結晶形態の、医薬開発のための適性についての、さらなる証拠は、本明細書で開示された安定性データにより提示される。Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１は、ティッシュにより覆われた硝子製のオープンバイアル内、４０℃／７５％ＲＨで保存した。初期時点において、ＸＲＰＤは、試料が結晶であり、形態１の多形体と符合することを示した（図１）。ＤＳＣは、１５４．９℃の開始温度を示した（図３）。ＸＲＰＤは、７日後及び２８日後では、変化を示さなかった（図６）。同様に、ＤＳＣも、７日後（開始：１５５．２℃）及び２８日後（１５５．０℃）では、有意な変化を示さなかった（図９及び図１０）。
【００２５】
結晶形態の、医薬開発のための適性についての、なおさらなる証拠は、本明細書で開示された、さらなる安定性データにより提示される。Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１を、ネジ式キャップの止栓により閉止されたＨＤＰＥボトルにおいて、二重のポリエチレンバッグにパッキングして、６カ月４０℃／７５％ＲＨ及び１２カ月２５℃／６０％ＲＨの２つの条件で、個別に保存した。初期時点において、ＸＲＰＤは、試料が結晶であり、形態１の多形体と符合することを示した。ＸＲＰＤは、４０℃／７５％ＲＨの６カ月後では、又は２５℃／６０％ＲＨの１２カ月後では、変化を示さなかった（図１６）。アッセイ、水分含量、ＸＲＰＤ、ＤＳＣ、純度、及び不純物プロファイルを含む、全ての測定パラメータは、本研究の過程において変わらなかった。
【００２６】
Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドという名称は、図Ａに示された構造を表す。
【００２７】
【化１】
2019517461.tif 000002
【００２８】
現在までに、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの３つの結晶多形体が単離され、特徴付けられており、本明細書において、これらは、「形態１」、「形態２」、及び「形態３」と称される。好ましくは、結晶形態は、形態１である。
【００２９】
本明細書において、Ｘ線粉末回折ピーク（２θ度により表す。）は、Ｃｕ  Ｋα放射線を使用して測定される。
【００３０】
本発明は、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態１）であって、少なくとも以下の特徴的なＸ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα放射線；２θ度により表す。）を、約
（１）５．５、９．５、１２．７、１４．７及び１６．７；又は
（２）５．５、９．５、１２．７、１４．７、１６．７、１８．３及び２０．２；又は
（３）５．５、９．５、１２．７、１４．７、１５．５、１６．７、１８．３、１９．３及び２０．２
において呈する結晶形態を提供する。
【００３１】
この文脈において、「約」という用語は、２θ度の測定値に、±０．３（２θ度により表す。）、好ましくは、±０．２（２θ度により表す。）の不確実性が存在することを意味する。
【００３２】
本発明はまた、特徴的ピーク（２θ度により表す。）を、約５．５、９．５、１２．７、１４．７、１５．５、１６．７、１８．３、１９．３、２０．２及び２２．９において含むＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態１）も提供する。
【００３３】
図１は、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１のＸ線粉末回折パターンを示す。本発明はまた、図１において示されたＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態１）も提供する。
【００３４】
本明細書において、多形体形態のＸ線粉末回折パターンは、図において示されたＸ線粉末回折パターンと、「実質的に」同じであると記載されうる。Ｘ線粉末回折パターンにおけるピークは、当業者に公知の多様な因子のために、わずかに、ピークの位置のシフト及び相対的強度が変化しうることが認識される。例えば、使用された装置、試料調製の方法、好ましい充填及び配向性、放射線源、並びにデータ収集の方法及び長さのために、パターンのピークのピーク位置のシフト又は相対的強度の変化が生じうる。しかし、当業者は、本明細書の図に示されたＸ線粉末回折パターンを、未知の多形体のＸ線粉末回折パターンと比較して、多形体の識別を確認することができる。
【００３５】
本発明はまた、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態２）であって、少なくとも以下の特徴的なＸ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα放射線；２θ度により表す。）を、約
（１）９．５、１０．３、１３．２、１５．６及び１６．９；又は
（２）６．５、９．５、１０．３、１３．２、１４．１、１５．６及び１６．９；又は
（３）６．５、８．３、９．５、１０．３、１３．２、１４．１、１５．６、１６．９及び２５．３
において呈する結晶形態も提供する。
【００３６】
本発明はまた、特徴的ピーク（２θ度により表す。）を、約６．５、８．３、９．５、１０．３、１３．２、１４．１、１５．０、１５．６、１６．９、１９．０、１９．２、２１．０、２１．８、２３．５及び２５．３において含むＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態２）も提供する。
【００３７】
図１２は、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態２のＸ線粉末回折パターンを示す。本発明はまた、図１２において示されたＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態２）も提供する。
【００３８】
本発明はまた、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態３）であって、少なくとも以下の特徴的なＸ線粉末回折ピーク（Ｃｕ  Ｋα放射線；２θ度により表す。）を、約
（１）１２．３、１３．７、２０．７、２６．２及び２７．８；又は
（２）９．７、１２．３、１３．７、１９．０、２０．７、２６．２及び２７．８；又は
（３）９．７、１２．３、１３．７、１７．７、１９．０、２０．７、２３．２、２６．２及び２７．８
において呈する結晶形態も提供する。
【００３９】
本発明はまた、特徴的ピーク（２θ度により表す。）を、約９．７、１２．３、１３．７、１７．７、１９．０、２０．７、２３．２、２６．２及び２７．８において含むＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態３）も提供する。
【００４０】
図１３は、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態３のＸ線粉末回折パターンを示す。本発明はまた、図１３において示されたＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態３）も提供する。
【００４１】
当業者は、ＸＲＰＤパターンを測定するための技法に精通している。特に、化合物の試料のＸ線粉末回折パターンは、以下の実験条件：
回折管陽極：Ｃｕ；
発電機電圧：４０ｋＶ；
回折管電流：４０ｍＡ；
アルファ１の波長：１．５４０６Å；
アルファ２の波長：１．５４４４Å；
試料：ＸＲＰＤ用の、バックグラウンドをゼロとする、単一の、斜めに切断された、シリカ製の試料ホルダー上で、静かに圧縮された、解析下の２ｍｇの試料
により、Ｐｈｉｌｉｐｓ  Ｘ−Ｐｅｒｔ  ＭＰＤ回折計を使用して記録されうる。
【００４２】
本発明は、ＤＳＣサーモグラフにおいて、１５７±３℃に、吸熱ピークを呈し、好ましくは１５７±２℃に、吸熱ピークを呈し、より好ましくは１５７±１℃に、吸熱ピークを呈する、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態１）を提供する。
【００４３】
本発明は、図３において示されたＤＳＣサーモグラフと実質的に同じＤＳＣサーモグラフを有する、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態１）を提供する。
【００４４】
当業者は、ＤＳＣサーモグラフを測定するための技法に精通している。特に、化合物の試料のＤＳＣサーモグラフは、
（ａ）５ｍｇの試料を、アルミニウム製のＤＳＣパンに秤量し、アルミニウム製の蓋により、非密閉的に閉止し；
（ｂ）試料を、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｊａｄｅ  ＤＳＣにロードし、２０ｃｍ３／分のヘリウムパージを使用しながら、安定的な熱流応答が得られるまで、試料を、３０℃に保持し；
（ｃ）走査速度を１０℃／分として、試料を、２００〜３００℃の間の温度に加熱し、２０ｃｍ３／分のヘリウムパージを使用しながら、結果として得られる熱流応答をモニタリングすること
により記録することができる。
【００４５】
本発明は、上記において記載されたＸ線粉末回折パターン、及び上記に記載されたＤＳＣサーモグラフを有する、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態（形態１）を提供する。
【００４６】
特定の化合物への言及はまた、全ての同位体変異体も含む。
【００４７】
本発明の結晶形態は、非溶媒和形態及び溶媒和形態の両方で存在しうる。本明細書において、「溶媒和」という用語は、本発明の化合物及びある量の、１つ以上の薬学的に許容される溶媒、例えば、メタノールを含む分子複合体について記載するのに使用される。「水和させる」という用語は、溶媒が、水である場合に用いられる。
【００４８】
本発明のある態様において、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態１は、溶媒和物又は水和物ではない。
【００４９】
本発明はまた、本発明の形態１を調製するための方法であって、該方法は、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの、溶媒中又は溶媒の混合物中の溶液からの結晶形態の結晶化を含む。好ましくは、溶媒は、イソプロパノールである。Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドを、溶媒又は溶媒の混合物（例えば、イソプロパノール）に添加した後で、組み合わされた混合物（化合物＋溶媒）は、約６０〜８５℃の温度に加熱してもよい。代替的に、組み合わされた混合物は、約７０〜８５℃の温度に加熱してもよい。代替的に、組み合わされた混合物は、約８０〜８５℃の温度に加熱してもよい。代替的に、組み合わされた混合物は、約８０、８１、８２、８３、８４又は８５℃の温度に加熱してもよい。代替的に、組み合わされた混合物は、約８２℃の温度に加熱してもよい。代替的に、組み合わされた混合物は、加熱して還流してもよい。加熱の後、組み合わされた混合物は、冷却してもよい。代替的に、組み合わされた混合物は、約０〜４０℃の温度に冷却してもよい。代替的に、組み合わされた混合物は、約１０〜３０℃の温度に冷却してもよい。代替的に、組み合わされた混合物は、室温に冷却してもよい。
【００５０】
本発明はまた、本発明の形態２を調製するための方法であって、該方法はＮ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの、溶媒中又は溶媒の混合物中の溶液からの結晶形態の結晶化を含む。好ましくは、溶媒は、メタノール及び水である。より好ましくは、溶媒は、約５０：５０のメタノール／水である。Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドを、溶媒又は溶媒の混合物（例えば、メタノール及び水）に添加した後で、組み合わされた混合物（化合物＋溶媒）の溶媒は、蒸発することができる。
【００５１】
本発明はまた、本発明の形態３を調製するための方法であって、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの、溶媒中又は溶媒の混合物中の溶液からの結晶形態の結晶化を含む方法も包含する。好ましくは、溶媒は、メタノール及びペンタンである。メタノール及びペンタンからの結晶化は、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの、メタノール中溶液を、ペンタンに添加することにより実施することができる。
【００５２】
本発明の方法はまた、本発明の結晶形態の種結晶の添加も含みうる。
【００５３】
ある態様において、本発明は、本発明に従う方法により製造された場合の、本発明の結晶形態を提供する。
【００５４】
既に言及されている通り、本発明の結晶形態は、特に、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態の処置において、多数の治療的適用がなされている。
【００５５】
したがって、本発明は、治療における使用のための、本明細書の前出において規定された、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態を提供する。好ましい実施形態において、結晶形態は、形態１である。
【００５６】
本発明はまた、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態の処置のための医薬の製造における、本明細書の前出において規定された、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態の使用も提供する。好ましい実施形態において、結晶形態は、形態１である。
【００５７】
本発明はまた、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態を処置する方法における使用のための、本明細書の前出において規定された、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態も提供する。好ましい実施形態において、結晶形態は、形態１である。
【００５８】
本発明はまた、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態を処置する方法であって、このような処置を必要とする哺乳動物に、本明細書の前出において規定された、治療有効量の、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態を投与するステップを含む方法も提供する。好ましい実施形態において、結晶形態は、形態１である。
【００５９】
ある態様において、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、視力障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、糖尿病、膵炎、脳内出血、腎症、心筋症、神経障害、炎症性腸疾患、関節炎、炎症、敗血症性ショック、低血圧、がん、成人呼吸窮迫症候群、播種性血管内凝固症、心肺バイパス術時の血液凝固及び術後出血から選択される。好ましい実施形態において、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、糖尿病性黄斑浮腫である。別の好ましい実施形態において、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、遺伝性血管浮腫である。
【００６０】
別の態様において、血漿カリクレイン活性が関与する疾患又は状態は、網膜静脈閉塞症である。
【００６１】
代替的に、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性、糖尿病性黄斑浮腫及び遺伝性血管浮腫から選択されうる。代替的に、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、糖尿病性網膜症に伴う網膜血管透過性又は糖尿病性黄斑浮腫でありうる。代替的に、血漿カリクレインにより媒介される疾患又は状態は、遺伝性血管浮腫でありうる。Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶形態は、患者の眼領域への注射に適した形態で投与される場合があり、特に、硝子体内注射に適した形態で投与してもよい。
【００６２】
本発明の文脈において、本明細書における「処置」に対する言及は、特に逆の指示がない限り、治癒的処置、緩和的処置及び予防的処置に対する言及を含む。「治療」、「治療的」及び「治療的に」という用語は、同様に解釈されるべきである。
【００６３】
本発明の結晶形態は、単独で、又は１つ以上の他の薬物と組み合わせて投与されうる。一般に、本発明の結晶形態は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と共に製剤として投与される。本明細書において、「賦形剤」という用語は、本発明の化合物以外の任意の成分であって、機能的な特徴（すなわち、薬物放出速度を制御する特徴）及び／又は非機能的な特徴（すなわち、加工補助剤又は希釈剤の特徴）を、製剤に付与しうる成分について記載するのに使用される。賦形剤の選択は、大部分、特定の投与方式、可溶性及び安定性に対する賦形剤の効果、並びに剤形の性質のような因子に依存する。
【００６４】
別の態様において、本発明の化合物は、網膜のレーザー処置と組み合わせて投与されうる。糖尿病性黄斑浮腫を処置するための、レーザー治療の、ＶＥＧＦインヒビターの硝子体内注射との組合せは、公知である（Ｅｌｍａｎ  Ｍ、Ａｉｅｌｌｏ  Ｌ、Ｂｅｃｋ  Ｒら、「Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ  ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ  ｐｌｕｓ  ｐｒｏｍｐｔ  ｏｒ  ｄｅｆｅｒｒｅｄ  ｌａｓｅｒ  ｏｒ  ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ  ｐｌｕｓ  ｐｒｏｍｐｔ  ｌａｓｅｒ  ｆｏｒ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｍａｃｕｌａｒ  ｅｄｅｍａ」、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ、２０１０年４月２７日）。
【００６５】
当業者に、本発明の結晶形態の送達に適する医薬組成物及びそれらを調製するための方法は、たやすく明らかである。このような組成物及びそれらを調製するための方法は、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、１９版（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９５）において見出されうる。
【００６６】
ヒト患者への投与のために、本発明の結晶形態の毎日の総用量は、当然ながら、投与方式に依存して、典型的に、０．１ｍｇ〜１００００ｍｇ、又は１ｍｇ〜５０００ｍｇの間、又は１０ｍｇ〜１０００ｍｇの間の範囲である。硝子体内注射により投与される場合、眼１つ当たり０．０００１ｍｇ（０．１μｇ）〜０．２ｍｇ（２００μｇ）の間又は眼１つ当たり０．０００５ｍｇ（０．５μｇ）〜０．０５ｍｇ（５０μｇ）の間の低用量が想定される。
【００６７】
毎日の総用量は、単回投与により投与される場合もあり、分割投与により投与される場合もあり、医師の裁量により、本明細書において与えられる典型的範囲を外れる場合もある。これらの投与量は、約６０ｋｇ〜７０ｋｇの体重を有する、平均的なヒト対象に基づく。医師は、たやすく、乳児及び老人のような、その体重がこの範囲からはずれる対象のための用量を決定することができる。
【００６８】
したがって、本発明は、本明細書の前出において規定された、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの結晶質の固体形態、及び薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。好ましい実施形態において、結晶質の固体形態は、形態１である。
【００６９】
医薬組成物は、例えば、点眼剤製剤、クリーム製剤、溶液製剤、懸濁液製剤、ヘプタフルオロアルカン（ＨＦＡ）によるエアゾール製剤及び乾燥粉末製剤の形態において、局所（例えば、眼、皮膚又は肺及び／若しくは気道）投与される場合もあり；例えば、経口投与錠剤、カプセル、シロップ、粉末又は顆粒の形態において、全身投与される場合もあり；溶液又は懸濁液の形態で、非経口投与により投与される場合もあり；皮下投与により投与される場合もあり；坐剤の形態で、直腸内投与により投与される場合もあり；経皮投与される場合もある。さらなる実施形態において、医薬組成物は、懸濁液、錠剤、カプセル、粉末、顆粒又は坐剤の形態である。
【００７０】
本発明のある実施形態において、有効成分は、経口投与される。経口投与は、化合物が、消化管に入るように、嚥下を伴う場合もあり、かつ／又は化合物が、口腔から直接、血流に入る、口腔内投与、経舌投与、若しくは舌下投与を伴う場合もある。
【００７１】
経口投与に適する製剤は、錠剤；多微粒子若しくはナノ微粒子、液体、エマルジョン又は粉末を含有する、ソフトカプセル又はハードカプセル；トローチ（液体充填型を含む。）；チューズ；ゲル；即時分散剤形；フィルム；膣坐剤；スプレー；及び口腔／粘膜接着性パッチのような、固体片製剤、固体の微粒子製剤、半固体製剤及び液体（多相系又は多分散系を含む。）製剤を含む。
【００７２】
経口投与に適する製剤はまた、結晶形態を、即放的又は徐放的に送達するようにもデザインされる場合があり、ここで、放出プロファイルは、該結晶形態の治療的有効性を最適化するように、遅延される場合もあり、パルス化される場合もあり、制御される場合もあり、持続する場合もあり、又は遅延されかつ持続する場合もあり、又は改変される場合もある。当技術分野において、化合物を、徐放的に送達する手段は、公知であり、それらの放出を制御するように、該化合物と共に製剤化されうる、徐放ポリマーを含む。
【００７３】
液体（多相系又は多分散系を含む。）製剤は、エマルジョン、懸濁液、溶液、シロップ及びエリキシルを含む。このような製剤は、ソフトカプセル内又はハードカプセルにおける充填剤として提示することができる。液体製剤はまた、例えば、サッシェからの固体の復元によっても調製することができる。
【００７４】
本発明の結晶形態はまた、Ｌｉａｎｇ及びＣｈｅｎ、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐａｔｅｎｔｓ、２００１、１１  （６）、９８１〜９８６において記載されている剤形のような即時溶解、即時崩壊剤形においても使用されうる。
【００７５】
錠剤の製剤については、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ」、１巻、Ｈ．Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ及びＬ．Ｌａｃｈｍａｎ（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８０）において論じられている。
【００７６】
ここで、以下の非限定的な例により、本発明が例示される。例において、以下の図が提示される。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１のＸ線粉末回折パターンを示す図である。
【図２】Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１のＳＴＡを示す図である。
【図３】Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１のＤＳＣサーモグラフを示す図である。
【図４】Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１についての重量水蒸気吸脱着等温線（吸着及び脱着）を示す図である。
【図５】図４に示された重量水蒸気吸脱着法の前（上）及び後（下）における、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１についてのＸ線粉末回折パターンを示す図である。
【図６】安定性研究中の０日後（上）、７日後（中）及び２８日後（下）における、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１についてのＸ線粉末回折パターンを示す図である。
【図７】安定性研究中の７日後における、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１についてのＳＴＡを示す図である。
【図８】安定性研究中の２８日後における、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１についてのＳＴＡを示す図である。
【図９】安定性研究中の７日後における、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１についてのＤＳＣサーモグラフを示す図である。
【図１０】安定性研究中の２８日後における、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１についてのＤＳＣサーモグラフを示す図である。
【図１１】Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（イソプロパノールから再結晶化した。）の形態１についてのＸ線粉末回折パターンを示す図である。
【図１２】Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態２のＸ線粉末回折パターンを示す図である。
【図１３】Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態３のＸ線粉末回折パターンを示す図である。
【図１４】Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態ＡのＸ線粉末回折パターンを示す図である。
【図１５】Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態Ａについての重量水蒸気吸脱着等温線（吸着及び脱着）を示す図である。
【図１６】安定性研究中の０カ月後（上）、４０℃／７５％ＲＨの６カ月後（中）及び２５℃／６０％ＲＨの１２カ月後（下）における、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドの形態１についてのＸ線粉末回折パターンを示す図である。
【実施例】
【００７８】
一般的な実験の詳細
以下の例において、以下の略号及び定義が使用される。
【００７９】
【表１】
2019517461.tif 000003
【００８０】
そうでないことが指定されない限り、全ての反応は、窒素の雰囲気下で実行した。
【００８１】
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ製（４００ＭＨｚ）の分光計で、重水素溶媒に照らして、室温で記録した。
【００８２】
分子イオンは、０．１％のＨＣＯ２Ｈ／ＭｅＣＮから、０．１％のＨＣＯ２Ｈ／Ｈ２Ｏへの、１０％〜９０％の直線勾配を伴うＣｈｒｏｍｏｌｉｔｈ  Ｓｐｅｅｄｒｏｄ  ＲＰ−１８ｅカラム、５０×４．６ｍｍを、流量を１．５ｍＬ／分として、１３分間にわたり使用して、又は酸性の、５〜９５％のＭｅＣＮ／水による、Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｘ−Ｓｅｌｅｃｔを、４分間にわたり使用して実行されるＬＣＭＳを使用して得た。データは、エレクトロスプレーを伴うＴｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ  Ｓｕｒｖｅｙｏｒ  ＭＳＱ質量分析計を、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ  Ｓｕｒｖｅｙｏｒ  ＬＣシステムと共に使用して収集した。
【００８３】
生成物を、フラッシュクロマトグラフィーにより精製した場合、「シリカ」とは、０．０３５〜０．０７０ｍｍ（２２０〜４４０のメッシュ）のクロマトグラフィーのためのシリカゲル（例えば、Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０）を指し、１０ｐ．ｓ．ｉまで加えた窒素圧により、カラム溶出を加速化させた。逆相分取用ＨＰＬＣによる精製は、Ｗａｔｅｒｓ  ２９９６光ダイオードアレイ型検出器を使用する、Ｗａｔｅｒｓ  ２５２５二元勾配ポンピングシステムを、典型的に、２０ｍＬ／分の流量で使用して実行した。
【００８４】
全ての溶媒及び市販の試薬は、そのまま使用した。
【００８５】
化学名は、ＭＤＬ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ製のＩＳＩＳ  Ｄｒａｗパッケージの一部として提供されているＡｕｔｏｎｏｍソフトウェア又はＭａｒｖｉｎＳｋｅｔｃｈの構成要素として、若しくはＩＤＢＳ  Ｅ−ＷｏｒｋＢｏｏｋの構成要素として提供されているＣｈｅｍａｘｏｎソフトウェアのような自動式ソフトウェアを使用して作成した。
【００８６】
そうでないことが記載されない限り、Ｘ線粉末回折パターンは、Ｐｈｉｌｉｐｓ  Ｘ−Ｐｅｒｔ  ＭＰＤ回折計で回収され、以下の実験条件を使用して解析された：
回折管陽極：Ｃｕ
発電機電圧：４０ｋＶ
回折管電流：４０ｍＡ
アルファ１の波長：１．５４０６Å
アルファ２の波長：１．５４４４Å
開始角［２θ］：４
終了角［２θ］：４０
を使用して解析した。
【００８７】
解析下の約２ｍｇの試料を、ＸＲＰＤ用の、バックグラウンドをゼロとする、単一の、斜めに切断された、シリカ製の試料ホルダー上で、静かに圧縮した。次いで、試料を、解析のために、回折計にロードした。
【００８８】
以下の方法を使用して、ＤＳＣデータを収集した：約５ｍｇずつの試料を、アルミニウム製のＤＳＣパンに秤量し、アルミニウム製の蓋により、非密閉的に閉止した。次いで、試料を、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｊａｄｅ  ＤＳＣへとロードし、３０℃に保持した。安定的な熱流応答が得られたら、次いで、走査速度を１０℃／分として、試料を、２００〜３００℃の間の温度に加熱し、結果として得られる熱流応答をモニタリングした。２０ｃｍ３／分のヘリウムパージを使用した。解析の前に、インジウム標準物質を使用して、計器を、温度及び熱流について検証した。
【００８９】
重量水蒸気吸脱着法（ＧＶＳ）データは、以下の方法を使用して収集された：約１０ｍｇの試料を、ワイヤーメッシュ型の水蒸気吸脱着天秤皿に入れ、「ＩｇａＳｏｒｐ」水蒸気吸脱着天秤（Ｈｉｄｅｎ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）にロードした。次いで、０％の湿度環境を維持することにより、さらなる重量の変化が記録されなくなるまで、試料を乾燥させた。次いで、その後、試料を、ＲＨの増分を１０％とする、０〜９０％ＲＨランピングプロファイル下に置き、平衡に達する（９９％のステップ完了）まで、試料を、各ステップに維持した。平衡に到達したら、装置内のＲＨ％を、次のステップにランピングさせ、平衡手順を繰り返した。次いで、吸脱着サイクルの完了後、同じ手順を使用して、試料を乾燥させた。次いで、吸／脱着サイクル時の重量変化をモニタリングし、試料の吸湿性を決定した。
【００９０】
以下の方法を使用して、同時熱分析（ＳＴＡ）データを収集した：約５ｍｇの試料を、セラミック製のるつぼに正確に秤量し、周囲温度のＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ＳＴＡ  ６００  ＴＧＡ／ＤＴＡ解析器のチャンバーに入れた。次いで、速度を１０℃／分として、試料を、典型的に、２５℃〜３００℃に加熱し、この時間における重量の変化を、ＤＴＡシグナルと同様にモニタリングした。使用されたパージガスは、流量を２０ｃｍ３／分とする窒素であった。
【００９１】
合成例
Ａ．１−（４−ヒドロキシメチル−ベンジル）−１Ｈ−ピリジン−２−オン
４−（クロロメチル）ベンジルアルコール（５．０ｇ、３１．９３ミリモル）を、アセトン（１５０ｍＬ）中に溶解させた。２−ヒドロキシピリジン（３．６４ｇ、３８．３ミリモル）及び炭酸カリウム（１３．２４ｇ、９５．７８ミリモル）を添加し、反応混合物を、５０℃で、３時間攪拌し、この時間の後、溶媒を、真空で除去し、残留物を、クロロホルム（１００ｍＬ）中に採取した。この溶液を、水（３０ｍＬ）、塩水（３０ｍＬ）により洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、真空で蒸発させた。残留物を、３％のＭｅＯＨ／９７％のＣＨＣｌ３を溶離液とするフラッシュクロマトグラフィー（シリカ）により精製して、１−（４−ヒドロキシメチル−ベンジル）−１Ｈ−ピリジン−２−オンとして同定される白色の固体を得た（５．３０ｇ、２４．６２ミリモル、７７％の収率）。
［Ｍ＋Ｎａ］＋＝２３８
【００９２】
Ｂ．１−（４−クロロメチル−ベンジル）−１Ｈ−ピリジン−２−オン
１−（４−ヒドロキシメチル−ベンジル）−１Ｈ−ピリジン−２−オン（８．４５ｇ、３９．３ミリモル）、乾燥ＤＣＭ（８０ｍＬ）及びトリエチルアミン（７．６６ｍｌ、５５．０ミリモル）を、氷冷浴中で冷却した。メタンスルホニルクロリド（３．９５ｍｌ、５１．０ミリモル）を添加し、氷冷浴中、１５分間にわたり攪拌した。氷冷浴を除去し、攪拌を、室温で、一晩持続させた。反応混合物を、ＤＣＭ（１００ｍＬ）及び飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１００ｍＬ）の間で分割した。水性層を、さらなるＤＣＭ（２×５０ｍＬ）により抽出し、組み合わされた有機物を、塩水（５０ｍＬ）により洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過及び濃縮して、１−（４−クロロメチル−ベンジル）−１Ｈ−ピリジン−２−オンを、淡黄色の固体として得た（８．６５ｇ、３６．６ミリモル、９３％の収率）。
［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３４．１
【００９３】
Ｃ．メチル３−（メトキシメチル）−１−（４−（（２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル）ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート
炭酸カリウム（５１９ｍｇ、３．７６ミリモル）を、メチル３−（メトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（３２０ｍｇ、１．８８ミリモル；ＣＡＳ番号：３１８４９６−６６−１（ＷＯ２０１２／００９００９に記載された方法に従い合成された。））及び１−（４−（クロロメチル）ベンジル）ピリジン−２（１Ｈ）−オン（５２７ｍｇ、２．２６ミリモル）の、ＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に添加し、６０℃で、一晩加熱した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）により希釈し、塩水（２×１００ｍＬ）により洗浄し、硫酸マグネシウムにより脱水し、濾過し、真空で濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（４０ｇのカラム、イソヘキサン中に０〜１００％のＥｔＯＡｃ）により精製して、２つの位置異性体を得た。カラムからの第２の異性体を回収して、メチル３−（メトキシメチル）−１−（４−（（２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル）ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレートを、無色のガムとして得た（３７８ｍｇ、１．０１ミリモル、５３．７％の収率）。
［Ｍ＋Ｈ］＋＝３６８．２
【００９４】
Ｄ．３−（メトキシメチル）−１−（４−（（２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル）ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸
ＴＨＦ（５ｍＬ）及びＭｅＯＨ（５ｍＬ）中のメチル３−（メトキシメチル）−１−（４−（（２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル）ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボキシレート（３．７７ｇ、１０．２６ミリモル）に、２ＭのＮａＯＨ溶液（１５．３９ｍｌ、３０．８ミリモル）を添加し、室温で、一晩攪拌した。１ＭのＨＣｌ（５０ｍＬ）を添加し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）により抽出した。有機層を、塩水（５０ｍＬ）により洗浄し、硫酸マグネシウムにより脱水し、濾過し、真空で濃縮して、３−（メトキシメチル）−１−（４−（（２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル）ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸を、白色の粉末として得た（１．２２ｇ、３．４５ミリモル、３３．６％の収率）。
［Ｍ＋Ｈ］＋＝３５４．２
【００９５】
Ｅ．Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態Ａ）
３−（メトキシメチル）−１−（４−（（２−オキソピリジン−１（２Ｈ）−イル）メチル）ベンジル）−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸（６２１ｍｇ、１．７６ミリモル）及び２，６−ジフルオロ−３−メトキシベンジルアミン（３０４ｍｇ、１．７６ミリモル）を、ＤＣＭ中、０℃で溶解させた。ＨＯＢｔ（２８５ｍｇ、２．１１ミリモル）、トリエチルアミン（１．２３ｍＬ、８．７９ミリモル）及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（４７１．６ｍｇ、２．４６ミリモル）を添加し、混合物を、室温まで暖めた。２日間にわたり攪拌した後、ＤＣＭ（５０ｍＬ）を添加し、混合物を、塩水により洗浄した。有機層を、硫酸マグネシウムにより脱水し、真空で、濾過及び濃縮した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、５％のＭｅＯＨ、９５％のＤＣＭ）により精製し、溶媒を、真空で除去し、残留物を、アセトニトリル及び水中に採取し、凍結乾燥させて、表題化合物として同定された白色の固体を得た。
［Ｍ＋Ｈ］＋＝５０９．０
１Ｈ  ＮＭＲ，  （ｄ６−ＤＭＳＯ）：  ３．２０  （３Ｈ，  ｓ），  ３．８１  （３Ｈ，  ｓ），  ４．４３  （２Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ５．３Ｈｚ），  ４．４９  （２Ｈ，  ｓ），  ５．０６  （２Ｈ，  ｓ），  ５．２６  （２Ｈ，  ｓ），  ６．２１  （１Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ  ＝  １．４，    ６．７Ｈｚ），  ６．３９  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  ０．７，    １．４，    ９．１Ｈｚ），  ７．０２  （１Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ  ＝  １．９，    ９．２Ｈｚ），  ７．１２  （１Ｈ，  ｄｔ，  Ｊ  ＝  ５．３，    ９．３Ｈｚ），  ７．１８−７．２７  （４Ｈ，  ｍ），  ７．４０  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  ２．１，    ６．６，    ９．２Ｈｚ），  ７．７５  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  ０．７，    ２．１，    ６．８Ｈｚ），  ８．２１  （１Ｈ，  ｓ），  ８．２４  （１Ｈ，  ｔ，  Ｊ  ＝  ５．３Ｈｚ）．
【００９６】
Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態Ａ）のＸＲＰＤディフラクトグラムを、図１４に示す。
【００９７】
重量水蒸気吸脱着法（ＧＶＳ）
形態ＡについてのＧＶＳデータを、下記の表に列挙し、図１５に示す。
【００９８】
【表２】
2019517461.tif 000004
【００９９】
Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態１）
Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（２００ｍｇ）、アセトニトリル（２．０ｍＬ）中懸濁液を、４０℃〜周囲温度の間で、一晩、約１８〜２４時間、温度サイクルに供した。結果として得られた生成物を、まず、窒素下で、過剰溶媒の蒸発により乾燥させ、次いで、真空オーブン内、５０℃で、約６時間、恒量になるまで乾燥させて、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態１）を得た。
【０１００】
Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態１）のＸＲＰＤディフラクトグラムを、図１に示す。
【０１０１】
ピーク位置の表：
【０１０２】
【表３】
2019517461.tif 000005
【０１０３】
同時熱分析（ＳＴＡ）
形態１のＳＴＡデータを、図２に示す。
【０１０４】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
形態１のＤＳＣデータを、図３に示す。
【０１０５】
重量水蒸気吸脱着法（ＧＶＳ）
形態１についてのＧＶＳデータを、下記の表に列挙し、図４に示す。
【０１０６】
【表４】
2019517461.tif 000006
【０１０７】
安定性データ
形態１の試料を、乾燥機内、４０℃／７５％ＲＨの加速化安定性条件下において、ティッシュにより覆われたオープンバイアルに入れた。上記において記載された方法と同じ方法を使用して、試料を、７日後及び２８日後に、ＸＲＰＤ、ＳＴＡ及びＤＳＣにより再解析した。データを、図６〜図１０に示す。
【０１０８】
形態１のさらなる試料を、ネジ式キャップの止栓により閉止されたＨＤＰＥボトルにおける、二重のポリエチレンバッグにパッキングして、６カ月にわたる４０℃／７５％ＲＨ及び１２カ月にわたる２５℃／６０％ＲＨの２つの条件で、個別に保存した。この安定性研究において、ＣｕＫα放射線（４５ｋＶ、４０ｍＡ）、θ−θゴニオメーター、集光鏡（Ｃｕ  Ｗ／Ｓｉ）、発散スリット（１／２°）、入射ビーム及び回折ビームの両方におけるソーラースリット（０．０４  ＲＡＤ）、固定マスク（４ｍｍ）及びＰＩＸｃｅｌ検出器を使用して、Ｘ線粉末回折パターンを、ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ  Ｘ’Ｐｅｒｔ  ＰＲＯ回折計上に収集した。データ収集に使用されたソフトウェアは、Ｘ’Ｐｅｒｔ  Ｄａｔａ  Ｃｏｌｌｅｃｔｏｒ、ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．２ｆであった。計器は、認定されたＳｔａｎｄａｒｄ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｍａｔｅｒｉａｌ（登録商標）６４０ｄ、Ｓｉｌｉｃｏｎ  Ｐｏｗｄｅｒ（ＮＩＳＴ）を使用して、性能を点検した。ＸＲＰＤパターンを、透過フォイルによる試料ステージ（ポリイミド：Ｋａｐｔｏｎ（登録商標）、ＴＦ−４７５、７．５μｍの厚さのフィルム）を介して、周囲条件下で取得した。検体は、試料ステージに分配された、約５ｍｇの被験試料により検討した。データ収集の範囲は、ステップサイズを、０．０２６３°とし、連続走査速度を０．２０２００４°秒−１として、２．９９４〜３５．００５６°２θであった。４０℃／７５％ＲＨの６カ月後では、又は２５℃／６０％ＲＨの１２カ月後では、ＸＲＰＤディフラクトグラムの変化は、観察されなかった（図１６）。
【０１０９】
２５℃／６０％ＲＨ及び４０℃／７５％ＲＨで保存された形態１の試料に対するさらなる試験を、下記の表に記載された通りに実行した。アッセイ、水分含量、ＸＲＰＤ、ＤＳＣ、純度、及び不純物プロファイルを含む、全ての測定パラメータは、本研究の経過にわたり変化しなかった。
【０１１０】
【表５】
2019517461.tif 000007
【０１１１】
Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態１）
窒素下、５Ｌのフランジフラスコに、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（１５９．６ｇ）及びＩＰＡ（３．２Ｌ）を添加した。混合物を、加熱し還流して、透明な溶液を得た。水で冷却する前に、混合物を、ゆっくりと、５０℃まで冷却した。溶液を、３０分間にわたり、５０℃〜室温に冷却し、任意選択的に、氷／水浴中で、さらに冷却した。混合物を、室温で、３０分間攪拌し、濾過した。固体を、ＩＰＡ（４８０ｍＬ）により洗浄し、任意選択的に、ジエチルエーテルにより、さらに洗浄した。次いで、固体を、５０℃で、真空で、週末に乾燥させ、合計１５３．９ｇのＮ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態１）を得た（１５３．９ｇ、９６％）。１Ｈ  ＮＭＲは、＞９５％の純度を示した。ＬＣは、９９．８％の純度を示した。
【０１１２】
イソプロパノールからの再結晶化により単離されたＮ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドのＸＲＰＤディフラクトグラムを、図１１に示し、形態１としての固体の識別を確認する。
【０１１３】
Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態２）
Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドを、５０／５０のメタノール／水混合物中に溶解させた。溶媒を蒸発させ、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態２）を単離した。
【０１１４】
Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態２）のＸＲＰＤディフラクトグラムを、図１２に示す。
【０１１５】
ピーク位置の表：
【０１１６】
【表６】
2019517461.tif 000008
【０１１７】
Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態３）
Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドを、メタノール中に溶解させた。その溶液を、ペンタンに添加した。Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態３）を、結果として得られた混合物から単離した。
【０１１８】
Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミド（形態３）のＸＲＰＤディフラクトグラムを、図１３に示す。
【０１１９】
ピーク位置の表：
【０１２０】
【表７】
2019517461.tif 000009
【０１２１】
生物学的方法
Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドが、血漿カリクレインを阻害する能力は、以下の生物学的アッセイを使用して決定することができる。
【０１２２】
血漿カリクレインについてのＩＣ５０の決定
インビトロにおける血漿カリクレイン阻害活性は、公表されている標準的な方法（例えば、Ｊｏｈａｎｓｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅａｃ．、１９８６、８、１８５；Ｓｈｏｒｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２、４３、１２０９；Ｓｔｕｅｒｚｅｂｅｃｈｅｒら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ、１９９２、３７３、１０２５を参照されたい。）を使用して決定した。ヒト血漿カリクレイン（Ｐｒｏｔｏｇｅｎ）を、２５℃で、蛍光性基質であるＨ−ＤＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＦＣ及び多様な濃度の被験化合物と共にインキュベートした。残留酵素活性（初期反応速度）は、４１０ｎｍにおける吸光度の変化を測定することにより決定し、被験化合物についてのＩＣ５０値を決定した。
【０１２３】
このアッセイにおいて調べたところ、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドは、４．５ｎＭのＩＣ５０（ヒトＰＫａｌ）を示した。
【０１２４】
Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドはまた、以下の生物学的アッセイを使用して、類縁の酵素ＫＬＫ１に対する阻害活性についてもスクリーニングした。
【０１２５】
ＫＬＫ１に対するＩＣ５０の決定
インビトロにおけるＫＬＫ１阻害活性は、公表されている標準的な方法（例えば、Ｊｏｈａｎｓｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅａｃ．、１９８６、８、１８５；Ｓｈｏｒｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２、４３、１２０９；Ｓｔｕｅｒｚｅｂｅｃｈｅｒら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ、１９９２、３７３、１０２５を参照されたい。）を使用して決定した。ヒトＫＬＫ１（Ｃａｌｌｂｉｏｃｈｅｍ）を、２５℃において、蛍光性基質であるＨ−ＤＶａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−ＡＦＣ及び多様な濃度の被験化合物と共にインキュベートした。残留酵素活性（初期反応速度）は、４１０ｎｍにおける吸光度の変化を測定することにより決定し、被験化合物についてのＩＣ５０値を決定した。
【０１２６】
このアッセイにおいて調べたところ、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドは、＞１００００ｎＭのＩＣ５０（ヒトＫＬＫ１）を示した。
【０１２７】
Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドはまた、以下の生物学的アッセイを使用して、類縁の酵素ＦＸＩａに対する阻害活性についてもスクリーニングした。
【０１２８】
ＦＸＩａに対する阻害％の決定
インビトロにおけるＦＸＩａ阻害活性は、公表されている標準的な方法（例えば、Ｊｏｈａｎｓｅｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅａｃ．、１９８６、８、１８５；Ｓｈｏｒｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２、４３、１２０９；Ｓｔｕｅｒｚｅｂｅｃｈｅｒら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ、１９９２、３７３、１０２５を参照されたい。）を使用して決定した。ヒトＦＸＩａ（Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、２５℃において、蛍光性基質であるＺ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＡＦＣ及び４０μＭの被験化合物と共にインキュベートした。残留酵素活性（初期反応速度）は、４１０ｎｍにおける吸光度の変化を測定することにより決定した。
【０１２９】
このアッセイにおいて調べたところ、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドは、４０μＭにおいて、４％の阻害％（ヒトＦＸＩａ）を示した。
【０１３０】
薬物動態
Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドについての薬物動態研究を実施して、雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける単回経口投与後における薬物動態を評価した。２匹のラットに、媒体中に名目２ｍｇ／ｍＬ（１０ｍｇ／ｋｇ）の被験化合物の組成物５ｍＬ／ｋｇの単回のｐｏ投与を施した。投与後、血液試料を、２４時間にわたり回収した。試料採取時間は、５、１５及び３０分後であり、次いで、１、２、４、６、８及び１２時間後であった。回収後、血液試料を遠心分離し、血漿画分を、ＬＣＭＳにより、被験化合物の濃度について解析した。
【０１３１】
この研究から、Ｎ−［（２，６−ジフルオロ−３−メトキシフェニル）メチル］−３−（メトキシメチル）−１−（｛４−［（２−オキソピリジン−１−イル）メチル］フェニル｝メチル）ピラゾール−４−カルボキサミドについて取得された経口曝露データを、下記に示す。
【０１３２】
【表８】
2019517461.tif 000010
【図１】
2019517461.tif 000011
【図２】
2019517461.tif 000012
【図３】
2019517461.tif 000013
【図４】
2019517461.tif 000014
【図５】
2019517461.tif 000015
【図６】
2019517461.tif 000016
【図７】
2019517461.tif 000017
【図８】
2019517461.tif 000018
【図９】
2019517461.tif 000019
【図１０】
2019517461.tif 000020
【図１１】
2019517461.tif 000021
【図１２】
2019517461.tif 000022
【図１３】
2019517461.tif 000023
【図１４】
2019517461.tif 000024
【図１５】
2019517461.tif 000025
【図１６】
2019517461.tif 000026
【国際調査報告】
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2019517461.tif 000028
2019517461.tif 000029