(57)【要約】本発明は、胆汁うっ滞性及び線維性の疾患の処置に有用な化合物及び当該処置のためのそれらの使用に関する。
2019513762.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
胆汁うっ滞性又は線維性の疾患を処置する方法において使用するための、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩：
【化１９】
2019513762.tif 000027
［式中、
Ｒ１は、水素原子、重水素原子、ハロゲン原子、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環式基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、スルホニル基、スルホキシド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ、カルボン酸基、カルボキシラート基、ニトロ基、アミノ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基、アミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）ジアルキルアミド基を表し、
Ｒ２は、水素原子、重水素原子、ニトロ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環式基、ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールカルボニルアミノ基、カルボン酸又はカルボキシラートの基、アミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）ジアルキルアミド基、ＮＨ２基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基を表すか、
あるいはＲ１及びＲ２は、これらが結合している炭素原子と共に、置換又は非置換の５〜８員のシクロアルキル、複素環式及びアリールの基を形成し、
同一であるか又は異なるＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は、水素原子、重水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環式基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、ニトロ基、スルホニルアミノアルキル基、ＮＨ２基、アミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、カルボン酸基、カルボキシラート基、又はＲ９基を表し；
Ｒ９は、Ｏ−Ｒ８基、又はアラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンからなる群より選択されるアミノ酸、又は式（Ａ）：
【化２０】
2019513762.tif 000028
（式中、Ｒ’は、アルキル、アルケニル、アルキニルの基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、シクロアルキルアルケニル基、シクロアルケニル基、シクロアルケニルアルキル基、シクロアルケニルアルケニル基、シクロアルケニルアルキニル基を表し；
Ｒ’’及びＲ’’’は、独立して、水素原子、アルキル基、又は窒素保護基を表す）
の部分を表し；
Ｒ８は、水素原子、重水素原子、グルクロニジル基、又は
【化２１】
2019513762.tif 000029
基（式中、同一であるか又は異なるＲ８ａ、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃは、水素原子又は重水素原子を表す）であるが、
ただし、式（Ｉ）の化合物は、ＮＴＺでもＴＺでもない］。
【請求項２】
Ｒ２が、ＮＯ２基を表し；
Ｒ３が、Ｏ−Ｒ８基［式中、Ｒ８は、水素原子、重水素原子、又は
【化２２】
2019513762.tif 000030
基（式中、同一であるか又は異なるＲ８ａ、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃは、水素原子又は重水素原子を表す）を表す］を表し、そして、
同一であるか又は異なるＲ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７が、水素原子又は重水素原子を表すが、ただし、Ｒ１、Ｒ８、Ｒ８ａ、Ｒ８ｂ、Ｒ８ｃ、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は、同時に水素原子ではない、請求項１に従って使用するための化合物。
【請求項３】
２’−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−［１，１’−ビフェニル］−２−カルボン酸；
Ｎ−（５−ベンズアミド−４−（チオフェン−２−イル）−１，３−チアゾール−２−イル）−２−メトキシベンズアミド；
２，６−ジフルオロ−Ｎ−（５−メチル−４−フェニル−１，３−チアゾール−２−イル）ベンズアミド；
２−クロロ−Ｎ−［４−（２−ナフチル）−１，３−チアゾール−２−イル］−５−ニトロベンズアミド；
２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ３）エタノアート；
２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ２）エタノアート；
２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ１）エタノアート；
２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノアート；
２−（５−クロロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノアート；
２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル ２−アミノ−３−メチルペンタノアート；
２−（５−クロロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル ２−アミノ−３−メチルペンタノアート；
ＲＭ５０６１（（Ｓ）−２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノアート）；
ＲＭ５０６４（（Ｓ）−２−（５−クロロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノアート）；
ＲＭ５０６６（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル ２−アミノ−３−メチルペンタノアート）；及び
ＲＭ５０６５（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（５−クロロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル ２−アミノ−３−メチルペンタノアート）
からなる群より選択される、請求項１に従って使用するための化合物。
【請求項４】
医薬組成物に含まれる、請求項１〜３のいずれか一項に従って使用するための化合物。
【請求項５】
前記線維性障害が、肝臓、腸（gut）、腎臓、皮膚、表皮、内皮、筋肉、腱、軟骨、心臓、膵臓、肺、子宮、神経系、精巣、陰茎、卵巣、副腎、動脈、静脈、結腸、腸（intestine）（例えば、小腸）、胆管、軟組織（例えば、縦隔又は後腹膜）、骨髄、関節、眼及び胃の線維症からなる群より選択される、請求項１〜４のいずれか一項に従って使用するための化合物。
【請求項６】
前記線維性障害が、肝臓、腸（gut）、肺、心臓、腎臓、筋肉、皮膚、軟組織、骨髄、腸（intestinal）、及び関節の線維症からなる群より選択される、請求項１〜５のいずれか一項に従って使用するための化合物。
【請求項７】
前記線維性障害が、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性脂肪性肝炎（ＡＳＨ）、肺線維症、特発性肺線維症、皮膚線維症、眼線維症、心内膜心筋線維症、縦隔線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、進行性塊状線維症、増殖性線維症、新生物線維症、慢性炎症性気道疾患（ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者肺、結核）に続発する肺線維症、アルコール又は薬物誘発性の肝線維症、感染誘発性肝線維症、放射線又は化学療法誘発性の線維症、腎原性全身性線維症、クローン病、潰瘍性大腸炎、ケロイド、陳旧性心筋梗塞、強皮症／全身性硬化症、関節線維症、癒着性関節包炎の一部の形態、慢性線維化性胆管症、例えば、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、胆道閉鎖症及び家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、インプラント周囲線維症及び石綿肺からなる群より選択される、請求項１〜５のいずれか一項に従って使用するための化合物。
【請求項８】
前記胆汁うっ滞性障害が、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、妊娠時肝内胆汁うっ滞症、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症、胆道閉鎖症、胆石症、感染性胆管炎、ランゲルハンス細胞組織球増殖症に付随する胆管炎、アラジール症候群、非症候性胆管減少症、薬物誘発性胆汁うっ滞症、及び完全非経口栄養関連胆汁うっ滞症からなる群より選択される、請求項１〜４のいずれか一項に従って使用するための化合物。
【請求項９】
少なくとも１つの治療活性剤と組み合わせられた、請求項１〜４のいずれか一項記載の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１０】
前記少なくとも１つの治療活性剤が、ピルフェニドン若しくは受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫＩ）、例えば、ニンテダニブ、ソラフェニブ及び他のＲＴＫＩ、又はアンギオテンシンＩＩ（ＡＴ１）受容体ブロッカー、又はＣＴＧＦ阻害剤、又はＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＴＨＢＳ１若しくは細胞表面インテグリン等の潜在型ＴＧＦβ複合体の活性化剤を含むＴＧＦβ-及びＢＭＰ−活性化経路に干渉しやすい任意の抗線維化化合物、ＴＧＦβ受容体Ｉ型（ＴＧＦＢＲＩ）若しくはＩＩ型（ＴＧＦＢＲＩＩ）及びこれらのリガンド、例えば、ＴＧＦβ、アクチビン、インヒビン、ノーダル、抗ミュラー管ホルモン、ＧＤＦ若しくはＢＭＰ、補助共受容体（ＩＩＩ型受容体としても知られている）、又は制御性若しくは阻害性のＳＭＡＤタンパク質を含むＳＭＡＤ依存性古典的（canonical）経路の構成要素、又はＭＡＰＫシグナル伝達、ＴＡＫ１、Ｒｈｏ様ＧＴＰａｓｅシグナル伝達経路、ホスファチジルイノシトール−３ キナーゼ／ＡＫＴ経路、ＴＧＦβ誘発性ＥＭＴプロセス、若しくはＨｈリガンド若しくは標的遺伝子を含む古典的及び非古典的なヘッジホッグシグナル伝達経路の様々なブランチを含むＳＭＡＤ非依存性若しくは非古典的な経路のメンバー、又はＴＧＦβシグナル伝達に影響を与えやすいＷＮＴ若しくはノッチの経路の任意のメンバーから選択される、請求項９記載の化合物。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの治療活性剤が、スタチン、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤、他の抗炎症性及び／又は免疫抑制性の薬剤から選択される、請求項１０記載の化合物。
【請求項１２】
前記少なくとも１つの治療活性剤が、フルバスタチン、アトルバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、メバスタチン、セリバスタチン、ピタバスタチン、グルココルチコイド、ＮＳＡＩＤＳ、シクロホスファミド、ニトロソ尿素、葉酸アナログ、プリンアナログ、ピリミジンアナログ、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、シクロスポリン、ミリオシン、タクロリムス、シロリムス、ミコフェノール酸誘導体、フィンゴリモド及び他のスフィンゴシン−１−リン酸受容体調節因子；炎症促進性サイトカイン及び炎症促進性サイトカイン受容体、Ｔ細胞受容体、並びにインテグリン等の標的に対するモノクローナル及び／又はポリクローナルな抗体から選択される、請求項１１記載の化合物。
【請求項１３】
胆汁うっ滞性又は線維性の疾患を処置する方法において使用するための、請求項９〜１２のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１４】
前記組成物が、最終的にガレヌス形態又は持続放出及び／若しくは徐放を保証する装置を用いて、注射可能な懸濁液、ゲル、オイル、軟膏、丸剤、坐剤、粉剤、ゲルキャップ、カプセル、エアゾール等の形態で製剤化される、請求項９〜１２のいずれか一項記載の化合物、又は請求項１〜８のいずれか一項に従って使用するための化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医学の分野、具体的には、胆汁うっ滞性及び線維性の疾患の処置に関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞外マトリクスの異常かつ過度の沈着は、肝臓、肺、腎臓又は心臓の線維症を含む全ての線維性疾患の特徴である。罹患器官のスペクトル、線維化過程の進行性の性質、多数の罹患者、及び有効な処置の欠如は、線維性疾患を処置するときに重大な課題を引き起こす。
【０００３】
１９７５年に最初に報告された（Rossignol and Cavier 1975）ＮＴＺは、嫌気性原虫、蠕虫、並びに嫌気性及び好気性の細菌の両方を含む広範な微生物に対して非常に有効であることが示された（Rossignol and Maisonneuve 1984；Dubreuil, Houcke et al. 1996；Megraudd, Occhialini et al. 1998；Fox and Saravolatz 2005；Pankuch and Appelbaum 2006；Finegold, Molitoris et al. 2009）。ＮＴＺは、最初に腸に寄生する条虫を処置するためにヒトで研究され（Rossignol and Maisonneuve 1984）、そして、現在、寄生原虫クリプトスポリジウム・パルバム（Crystosporidium parvum）及びランブル鞭毛虫（Giardia intestinalis）によって引き起こされる下痢の処置について米国で認可されている（Alinia（登録商標）、Romark laboratories）。また、ＮＴＺは、ラテンアメリカ及びインドで広く商品化されており、そこでは広範な腸内寄生虫感染症の処置に適応がある（Hemphill, Mueller et al.2006）。提案されている、ＮＴＺがその抗寄生虫活性を発揮する作用機序は、嫌気的代謝に必須であるピルビン酸：フェレドキシンオキシドレダクターゼ（ＰＦＯＲ）酵素依存性電子伝達反応の阻害を通じたものである（Hoffman, Sisson et al.2007）。また、ＮＴＺは、ＰＦＯＲのホモログを有しない結核菌（Mycobacterium tuberculosis）に対する活性も示し、したがって、これは別の作用機序を示唆する。実際、ＮＴＺは、膜電位及び生物内ｐＨホメオスタシスを乱すアンカップラーとしても作用し得ることが示された（de Carvalho, Darby et al. 2011）。
【０００４】
ＮＴＺの薬理学的効果は、その抗寄生虫活性に限定されず、そして、近年、ＮＴＺが抗ウイルス活性を付与することもできることが幾つかの研究によって明らかになった（Di Santo and Ehrisman 2014；Rossignol 2014）。ＮＴＺは、赤血球凝集素（インフルエンザ）若しくはＶＰ７（ロタウイルス）のタンパク質の成熟における遮断、又は自然免疫応答に関与するタンパク質ＰＫＲの活性化を含む多様な方法によってウイルスの複製に干渉する（概説については、（Rossignol 2014）を参照）。また、ＮＴＺは、重要な代謝及び死促進のシグナル伝達経路に干渉することによって広い抗癌特性を有することも示された（Di Santo and Ehrisman 2014）。
【０００５】
線維性疾患を処置するための新規治療ストラテジを提案するための試みにおいて、本発明者らは、合成抗原虫剤である化合物２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル］エタノアート（ニタゾキサニド又はＮＴＺ）の誘導体が強力な抗線維化特性を示すことを見出した。更に、肝損傷モデルにおけるＮＴＺの評価によって、その血中胆汁酸濃度を低下させる能力が明らかになり、したがって、これは、線維性疾患に加えて胆汁うっ滞性疾患（例えば、ＰＢＣ及びＰＳＣ）を処置する可能性を反映している。これらの効果は、これらの分子について既に報告されている特性に鑑みて全く予想外であった。ＮＴＺ及びＴＺの誘導体は、胆汁うっ滞性疾患及び多様な種類の線維性疾患を処置するための潜在的臨床候補であると考えられる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、以下の式（Ｉ）を有する化合物を提供する：
【化１】
2019513762.tif 000003
［式中、Ｒ１は、水素原子、重水素原子、ハロゲン原子、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環式基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、スルホニル基、スルホキシド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ、カルボン酸基、カルボキシラート基、ニトロ基、アミノ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基、アミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）ジアルキルアミド基を表し、
Ｒ２は、水素原子、重水素原子、ニトロ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環式基、ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールカルボニルアミノ基、カルボン酸又はカルボキシラートの基、アミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）ジアルキルアミド基、ＮＨ２基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基を表すか、
あるいはＲ１及びＲ２は、これらが結合している炭素原子と共に、置換又は非置換の５〜８員のシクロアルキル、複素環式及びアリールの基を形成し、
同一であるか又は異なるＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は、水素原子、重水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環式基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、ニトロ基、スルホニルアミノアルキル基、ＮＨ２基、アミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、カルボン酸基、カルボキシラート基、又はＲ９基を表し；
Ｒ９は、Ｏ−Ｒ８基、又はアラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンからなる群より選択されるアミノ酸、又は式（Ａ）：
【化２】
2019513762.tif 000004
（式中、Ｒ’は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基を表し；
Ｒ’’及びＲ’’’は、独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、又は窒素保護基を表す）
の部分を表し；
Ｒ８は、水素原子、重水素原子、グルクロニジル基、又は
【化３】
2019513762.tif 000005
基（式中、同一であるか又は異なるＲ８ａ、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃは、水素原子又は重水素原子を表す）である］。
【０００７】
具体的な実施態様では、本発明の式（Ｉ）の化合物において：
アルキル基は、置換又は非置換の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、特に、置換又は非置換の（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基であってよく；
アルキニル基は、置換又は非置換の（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基であってよく；
ａ）シクロアルキル基は、置換又は非置換の（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基であってよく、
アルキルオキシ基は、置換又は非置換の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、例えば、置換又は非置換の（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルオキシ基であってよく；
アルキルチオ基は、置換又は非置換の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、例えば、置換又は非置換の（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルチオ基であってよく；
アルキルアミノ基は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基、例えば、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミノ基であってよく；
ジアルキルアミノ基は、（Ｃ１〜Ｃ６）ジアルキルアミノ基、例えば、（Ｃ１〜Ｃ４）ジアルキルアミノ基であってよく；
アリール基は、置換又は非置換の（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、例えば、置換又は非置換の（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基であってよく；
複素環式基は、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル又はヘテロアリールの基であってよい。
【０００８】
具体的な実施態様では、本発明の化合物は、上記式（Ｉ）の化合物であるが、ただし、Ｒ２がニトロ基（ＮＯ２）であり、そして、Ｒ３がアセチル基（ＣＨ３ＣＯ）であるとき、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、同時に水素原子ではなく；
Ｒ２がニトロ基（ＮＯ２）であり、そして、Ｒ３がヒドロキシル基（ＯＨ）であるとき、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、同時に水素原子ではない。
【０００９】
また、本発明は、式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物を提供する。したがって、本発明の更なる目的は、胆汁うっ滞性及び線維性の疾患を処置するために該化合物又は医薬組成物を投与することを含む処置方法を含む。
【００１０】
また、本発明は、医薬として使用するための式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００１１】
また、本発明は、胆汁うっ滞性及び線維性の疾患を処置する方法において使用するための式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００１２】
表及び文章において用いられる略語：
α-ＳＭＡ  α平滑筋アクチン
ＡＮＯＶＡ  分散分析
ＢＭＰ  骨形成タンパク質
ＣＣｌ４  四塩化炭素
ＣＯＬ１Ａ１  １型コラーゲンα１
ＤＭＳＯ  ジメチルスルホキシド
ＥＣＭ  細胞外マトリクス
ＥＬＩＳＡ  酵素結合免疫吸着測定法
ＥＭＴ  上皮間葉転換
ＦＢＳ  ウシ胎仔血清
ＦＤＡ  食品医薬品局
ＧＤＦ  増殖分化因子
Ｈｈ  ヘッジホッグ
ｈＨＳＣ  ヒト肝星細胞
ＨＳＣ  肝星細胞
ＩＣ５０  半数阻害濃度
ＭＭＰ２  マトリクスメタロペプチダーゼ２
ＭＭＰ９  マトリクスメタロペプチダーゼ９
μL  マイクロリットル
ＮＨＬＦ  正常ヒト肺線維芽細胞
ＮＴＺ  ニタゾキサニド
ＰＢＣ  原発性胆汁性胆管炎
ＰＢＳ  リン酸緩衝生理食塩水
pMol：ピコモル
ＰＳＣ  原発性硬化性胆管炎
ｒｈＦＧＦ  組み換えヒト塩基性線維芽細胞増殖因子
ＲＴ  逆転写酵素
ＳＤ  標準偏差
ＳＥＭ  平均の標準誤差
ＳｍＢＭ  平滑筋細胞基本培地
ＳｔｅＣＧＳ  星細胞増殖補給剤
ＳＴｅＣＭ  星細胞培地
ＴＢＡ  全胆汁酸
ＴＧＦβ１  腫瘍増殖因子ベータ１
ＴＧＦＢＲＩ  ＴＧＦｂ Ｉ型受容体
ＴＧＦＢＲＩＩ  ＴＧＦｂ ＩＩ型受容体
ＴＨＢＳ１  トロンボスポンジン１
ＴＭＢ  テトラメチルベンジジン
ＴＺ  チゾキサニド
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】ＲＭ−５０６１は、ヒトＨＳＣにおいてα-ＳＭＡタンパク質のＴＧＦβ１誘導性発現を阻害する。血清除去したＨＳＣをＲＭ−５０６１と共に１時間プレインキュベートした後、線維化促進性サイトカインＴＧＦβ１（１ng/mL）で活性化した。４８時間インキュベートした後、α-ＳＭＡの含量をＥＬＩＳＡによって測定した。得られた値をＴＧＦβ１対照に対する阻害率に変換した。データを平均（四重反復）±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として提示する。統計解析は、Sigma Plot 11.0ソフトウェアを使用して、一元配置分散分析、続いて、ボンフェローニ事後検定によって実施した。［＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１（１ng/mL ＴＧＦβ１群に対する比較）］。曲線当てはめ及び半数阻害濃度（ＩＣ５０）の計算は、XLFitソフトウェア5.3.1.3で実施した。
【図２】ＲＭ−５０６１は、ＮＨＬＦにおいてα-ＳＭＡタンパク質のＴＧＦβ１誘導性発現を阻害する。血清除去したＮＨＬＦをＲＭ−５０６１と共に１時間プレインキュベートした後、線維化促進性サイトカインＴＧＦβ１（１ng/mL）で活性化した。４８時間インキュベートした後、α-ＳＭＡの発現をＥＬＩＳＡによって測定した。得られた値をＴＧＦβ１対照に対する阻害率に変換した。データを平均（四重反復）±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として提示する。統計解析は、GraphPad Prism 5.02ソフトウェアを使用して、クラスカル−ウォリス検定、続いて、ダンの多重比較検定によって実施した。［＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１（１ng/mL ＴＧＦβ１群に対する比較）］。曲線当てはめ及び半数阻害濃度（ＩＣ５０）の計算は、XLFitソフトウェア5.3.1.3で実施した。
【図３】化合物５は、ヒトＨＳＣにおいてα-ＳＭＡタンパク質のＴＧＦβ１誘導性発現を阻害する。血清除去したＨＳＣを化合物５と共に１時間プレインキュベートした後、線維化促進性サイトカインＴＧＦβ１（１ng/mL）で活性化した。４８時間インキュベートした後、α-ＳＭＡの発現をＥＬＩＳＡによって測定した。得られた値をＴＧＦβ１対照に対する阻害率に変換した。データを平均（三重反復）±標準偏差（ＳＤ）として提示する。統計解析は、Sigma Plot 11.0ソフトウェアを使用して、一元配置分散分析、続いて、ボンフェローニ事後検定によって実施した。［＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１（１ng/mL ＴＧＦβ１群に対する比較）］。曲線当てはめ及び半数阻害濃度（ＩＣ５０）の計算は、XLFitソフトウェア5.3.1.3で実施した。
【図４】化合物５は、ヒト心臓線維芽細胞においてα-ＳＭＡタンパク質のＴＦＧβ１誘導性発現を阻害する。化合物５を血清除去した心臓線維芽細胞（ＮＨＣＦ）に添加し、１時間後、ＴＧＦβ１（３ng/mL）で活性化した。４８時間インキュベートした後、α-ＳＭＡの発現をＥＬＩＳＡによって測定した。得られた値をＴＧＦβ１対照に対する阻害率に変換した。データを平均（三重反復）±標準偏差（ＳＤ）として提示する。統計解析は、Sigma Plot 11.0ソフトウェアを使用して、一元配置分散分析、続いて、ボンフェローニ事後検定によって実施した。［＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１（３ng/mL ＴＧＦβ１群に対する比較）］。
【図５】化合物５は、ヒト腸線維芽細胞においてα-ＳＭＡタンパク質のＴＦＧβ１誘導性発現を阻害する。化合物５を血清除去した腸線維芽細胞（InMyoFib）に添加し、１時間後、ＴＧＦβ１（３ng/mL）で活性化した。４８時間インキュベートした後、α-ＳＭＡの発現をＥＬＩＳＡによって測定した。得られた値をＴＧＦβ１対照に対する阻害率に変換した。データを平均（三重反復）±標準偏差（ＳＤ）として提示する。統計解析は、Sigma Plot 11.0ソフトウェアを使用して、一元配置分散分析、続いて、ボンフェローニ事後検定によって実施した。［＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１（３ng/mL ＴＧＦβ１群に対する比較）］。
【図６】化合物５は、ヒト肺線維芽細胞においてα-ＳＭＡタンパク質のＴＦＧβ１誘導性発現を阻害する。化合物５を血清除去した肺線維芽細胞（ＮＨＬＦ）に添加し、１時間後、ＴＧＦβ１（１ng/mL）で活性化した。４８時間インキュベートした後、α-ＳＭＡの発現をＥＬＩＳＡによって測定した。得られた値をＴＧＦβ１対照に対する阻害率に変換した。データを平均（三重反復）±標準偏差（ＳＤ）として提示する。統計解析は、Sigma Plot 11.0ソフトウェアを使用して、一元配置分散分析、続いて、ボンフェローニ事後検定によって実施した。［＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１（１ng/mL ＴＧＦβ１群に対する比較）］。
【図７】ニタゾキサニドの長期経口投与は、血中ＴＢＡ濃度のＣＣｌ４誘導性レベルを抑制する。２５０〜２７５ｇのラットにオリーブ油（対照群）又はオリーブ油に乳化させたＣＣｌ４（ＣＣｌ４：オリーブ油 １：２v/v、最終ＣＣｌ４濃度：２mL/kg）を３週間にわたって週２回腹腔内注入した。同時に、オリーブ油注入群を対照飼料で飼育し、一方、ＣＣｌ４注入群を対照飼料又は１０mg/kg/日若しくは３０mg/kg/日 ＮＴＺを補給した飼料で飼育した。屠殺後、血中ＴＢＡ濃度を決定した。データを平均±標準偏差（ＳＤ）として提示する。統計解析は、Sigma Plot 11.0ソフトウェアを使用して、スチューデントｔ検定によって実施した：オリーブ油対ＣＣｌ４（#：ｐ＜０．０５；##：ｐ＜０．０１；###：ｐ＜０．００１）及びＣＣｌ４対ＮＴＺ（＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１）。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
発明の詳細な説明
［２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル］エタノアート（ニタゾキサニド又はＮＴＺ）の誘導体は、本願に示す通り、線維症の幾つかのモデルにおける抗線維化特性及び抗胆汁うっ滞特性を有する。したがって、本発明は、ＮＴＺの誘導体である式（Ｉ）の化合物、及びＮＴＺの誘導体の新規治療的使用に関する。特に、本発明は、胆汁うっ滞性又は線維性の障害の処置において使用するための式（Ｉ）の化合物に関する。更に、本発明は、胆汁うっ滞性又は線維性の障害の処置に有用な医薬を製造するための式（Ｉ）の化合物の使用に関する。また、本発明は、式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物に関する。本発明に係る医薬組成物は、胆汁うっ滞性又は線維性の疾患の処置に有用である。
【００１５】
線維性障害の原因物質又は起因事象はかなり多様であり、そして、その発症機序は可変であるが、罹患組織における共通の特徴は、筋線維芽細胞と呼ばれる多数の活性化線維芽細胞の存在である（Rosenbloom, Mendoza et al. 2013）。ＴＧＦβ１等の線維化刺激は、線維芽細胞の筋線維芽細胞への分化を誘導することができる（Leask and Abraham 2004；Leask 2007）。筋線維芽細胞は、代謝的に及び形態的に特徴的な線維芽細胞であり、その活性化及び増殖が線維化応答の発現中に重要な役割を果たす。更に、これらの筋線維芽細胞は、様々な形態のコラーゲン、フィブロネクチン及び他のＥＣＭタンパク質等の細胞外マトリクスの形成に関与するタンパク質の発現を含む独特の生物学的機能を示す。α−平滑筋アクチン（α-ＳＭＡ）の発現誘導は、線維化プロセスに干渉する薬物の効力を評価するために生理学的読み出し情報として使用することができる、休止状態の線維芽細胞の活性化筋線維芽細胞への分化の認識されている特徴である。腫瘍増殖β因子、そして、特に腫瘍増殖因子ベータ１（ＴＧＦβ１）は、線維芽細胞の線維化促進性筋線維芽細胞への表現型転換を誘導する認識されている生理学的シグナルであり、当該線維化促進性筋線維芽細胞は、高レベルのα-ＳＭＡ及び高レベルの細胞外マトリクスタンパク質を発現し、これらは後に分泌され、そして、線維性瘢痕組織を形成する。
【００１６】
更に、線維芽細胞の増殖及び／又は活性化は、コラーゲン線維の産生に関与し、及び／又は細胞外マトリクスの産生に関与していることが知られている（Kendall and Feghali-Bostwick 2014）。
【００１７】
予想外に、式（Ｉ）の化合物の抗線維化特性が明らかになったが、その理由は、これらの化合物が、ＴＧＦβ誘導性肝星細胞及び他の器官由来の初代線維芽細胞におけるα-ＳＭＡのレベルを用量依存的に低下させたためである。
【００１８】
先行技術は、抗線維化効果が式（Ｉ）の化合物に直接関連していることを教示していない。
【００１９】
本発明は、胆汁うっ滞又は線維症を処置するための式（Ｉ）の化合物に関し、このような化合物は、細胞外マトリクス及び線維症の形成に関与する主な細胞の種類である星細胞を含むヒトの線維芽細胞の増殖及び活性化を予想外に減少させることができる。
【００２０】
本発明は、式（Ｉ）の化合物に関する：
【化４】
2019513762.tif 000006
［式中、
Ｒ１は、水素原子、重水素原子、ハロゲン原子、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環式基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、スルホニル基、スルホキシド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ、カルボン酸基、カルボキシラート基、ニトロ基、アミノ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基、アミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）ジアルキルアミド基を表し、
Ｒ２は、水素原子、重水素原子、ニトロ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環式基、ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールカルボニルアミノ基、カルボン酸又はカルボキシラートの基、アミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）ジアルキルアミド基、ＮＨ２基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基を表すか、
あるいはＲ１及びＲ２は、これらが結合している炭素原子と共に、置換又は非置換の５〜８員のシクロアルキル、複素環式及びアリールの基を形成し、
同一であるか又は異なるＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は、水素原子、重水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環式基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、ニトロ基、スルホニルアミノアルキル基、ＮＨ２基、アミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、カルボン酸基、カルボキシラート基、又はＲ９基を表し；
Ｒ９は、Ｏ−Ｒ８基、又はアラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンからなる群より選択されるアミノ酸、又は式（Ａ）：
【化５】
2019513762.tif 000007
（式中、Ｒ’は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、シクロアルキルアルケニル基、シクロアルケニル基、シクロアルケニルアルキル基、シクロアルケニルアルケニル基、シクロアルケニルアルキニル基を表し；
Ｒ’’及びＲ’’’は、独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、又は窒素保護基を表す）
の部分を表し；
Ｒ８は、水素原子、重水素原子、グルクロニジル基、又は
【化６】
2019513762.tif 000008
基（式中、同一であるか又は異なるＲ８ａ、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃは、水素原子又は重水素原子を表す）である］。
【００２１】
具体的な実施態様では、本発明の化合物は、上記式（Ｉ）の化合物であるが、ただし、Ｒ２がニトロ基（ＮＯ２）であり、そして、Ｒ３がアセチル基（ＣＨ３ＣＯ）であるとき、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、同時に水素原子ではなく；
Ｒ２がニトロ基（ＮＯ２）であり、そして、Ｒ３がヒドロキシル基（ＯＨ）であるとき、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、同時に水素原子ではない。
【００２２】
具体的な実施態様では、本発明の式（Ｉ）の化合物において：
アルキル基は、置換又は非置換の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、特に、置換又は非置換の（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基であってよく；
アルキニル基は、置換又は非置換の（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基であってよく；
シクロアルキル基は、置換又は非置換の（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基であってよく、
アルキルオキシ基は、置換又は非置換の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、例えば、置換又は非置換の（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルオキシ基であってよく；
アルキルチオ基は、置換又は非置換の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、例えば、置換又は非置換の（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルチオ基であってよく；
アルキルアミノ基は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基、例えば、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミノ基であってよく；
ジアルキルアミノ基は、（Ｃ１〜Ｃ６）ジアルキルアミノ基、例えば、（Ｃ１〜Ｃ４）ジアルキルアミノ基であってよく；
アリール基は、置換又は非置換の（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、例えば、置換又は非置換の（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基であってよく；
複素環式基は、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル又はヘテロアリールの基であってよい。
【００２３】
具体的な実施態様では、本発明は、
Ｒ１が、水素原子、重水素原子、ハロゲン原子、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環式基、シクロアルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、スルホニル基、スルホキシド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ、カルボン酸基、カルボキシラート基、ニトロ基、アミノ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基、アミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミド基、ジアルキルアミド基を表し、
Ｒ２が、水素原子、重水素原子、ニトロ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環式基、ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、シクロアルキル基、アルキニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールカルボニルアミノ基、カルボン酸基、カルボキシラート基、アミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミド基、ジアルキルアミド基、アミノ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基を表すか、
あるいはＲ１及びＲ２が、これらが結合している炭素原子と共に、置換又は非置換の５〜８員のシクロアルキル、複素環式及びアリールの基を形成し、
同一であるか又は異なるＲ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７が、水素原子、重水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環式基、シクロアルキル基、ニトロ、スルホニルアミノアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、カルボン酸基、カルボキシラート基を表し；
Ｒ３が、水素原子、重水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環式基、シクロアルキル基、ニトロ、スルホニルアミノアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、カルボン酸基、カルボキシラート基、又はＲ９基を表し；
Ｒ９が、Ｏ−Ｒ８基、又はアラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンからなる群より選択されるアミノ酸、又は式（Ａ）：
【化７】
2019513762.tif 000009
（式中、Ｒ’は、アルキル、アルケニル、アルキニルの基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、シクロアルキルアルケニル基、シクロアルケニル基、シクロアルケニルアルキル基、シクロアルケニルアルケニル基、シクロアルケニルアルキニル基を表し；
Ｒ’’及びＲ’’’は、独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、又は窒素保護基を表す）
の部分を表し、
Ｒ８が、水素原子、重水素原子、グルクロニジル基、又は
【化８】
2019513762.tif 000010
基（式中、同一であるか又は異なるＲ８ａ、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃは、水素原子又は重水素原子を表す）である、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００２４】
具体的な実施態様では、Ｒ３は、Ｒ９基を表す。
【００２５】
具体的な実施態様では、本発明は、
Ｒ１が、水素原子、ハロゲン原子、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環式基、シクロアルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、スルホニル基、スルホキシド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ、カルボン酸基、カルボキシラート基、ニトロ基、アミノ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基、アミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミド基、ジアルキルアミド基を表し、
Ｒ２が、水素原子、ニトロ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環式基、ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、シクロアルキル基、アルキニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールカルボニルアミノ基、カルボン酸基、カルボキシラート基、アミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミド基、ジアルキルアミド基、アミノ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基を表すか、
あるいはＲ１及びＲ２が、これらが結合している炭素原子と共に、置換又は非置換の５〜８員のシクロアルキル、複素環式及びアリールの基を形成し、
同一であるか又は異なるＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７が、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環式基、シクロアルキル基、ニトロ、スルホニルアミノアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、カルボン酸基、カルボキシラート基を表すが；
ただし、Ｒ２がニトロ基（ＮＯ２）であり、そして、Ｒ３がアセチル基（ＣＨ３ＣＯ）であるとき、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７が、同時に水素原子ではなく、
Ｒ２がニトロ基（ＮＯ２）であり、そして、Ｒ３がヒドロキシル基（ＯＨ）であるとき、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７が、同時に水素原子ではない、式（Ｉ）の化合物に関する。
【００２６】
別の実施態様では：
Ｒ２は、ＮＯ２基を表し；
Ｒ３は、Ｏ−Ｒ８基［式中、Ｒ８は、水素原子、重水素原子、又は
【化９】
2019513762.tif 000011
基（式中、同一であるか又は異なるＲ８ａ、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃは、水素原子又は重水素原子を表す）を表す］を表し、そして、
同一であるか又は異なるＲ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は、水素原子又は重水素原子を表すが、ただし、Ｒ１、Ｒ８、Ｒ８ａ、Ｒ８ｂ、Ｒ８ｃ、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は、同時に水素原子ではない。
【００２７】
具体的な実施態様では、Ｒ１、Ｒ８ａ、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃ、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、並びにＲ７のうちの少なくとも１つは、重水素原子を表す。
【００２８】
具体的な実施態様では、Ｒ１、Ｒ８ａ、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃ、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、並びにＲ７は、重水素原子を表す。
【００２９】
具体的な実施態様では、Ｒ８ａ、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃ、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、並びにＲ７は、重水素原子を表す。
【００３０】
具体的な実施態様では、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は、重水素原子を表す。
【００３１】
具体的な実施態様では、Ｒ３は、Ｏ−Ｒ８基［式中、Ｒ８は、
【化１０】
2019513762.tif 000012
基（式中、Ｒ８ａ、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃは、重水素原子を表す）を表す］を表す。
【００３２】
具体的な実施態様では、Ｒ８は、
【化１１】
2019513762.tif 000013
基（式中、Ｒ８ａ及びＲ８ｂは、重水素原子を表し、Ｒ８ｃは、水素原子を表す）を表し、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は、水素原子を表す。
【００３３】
具体的な実施態様では、Ｒ８は、
【化１２】
2019513762.tif 000014
基（式中、Ｒ８ａは、重水素原子を表し、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃは、水素原子を表す）を表し、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は、水素原子を表す。
【００３４】
別の具体的な実施態様では、
Ｒ２は、ＮＯ２基を表し；
Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７は、水素原子を表し、そして、
Ｒ３は、Ｏ−Ｒ８基［式中、Ｒ８は、
【化１３】
2019513762.tif 000015
基（式中、同一であるか又は異なるＲ８ａ、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃは、水素原子又は重水素原子を表すが、ただし、Ｒ８ａ、Ｒ８ｂ、Ｒ８ｃは、同時に水素原子ではない）を表す］である。
【００３５】
具体的な実施態様では、少なくとも１つのＲ８ａ、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃは、重水素原子を表す。
【００３６】
更に具体的な実施態様では、Ｒ８ａ、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃは、重水素原子を表す。
【００３７】
別の実施態様では、Ｒ８ａ及びＲ８ｂは、重水素原子を表し、Ｒ８ｃは、水素原子を表す。
【００３８】
更に別の実施態様では、Ｒ８ａは、重水素原子を表し、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃは、水素原子を表す。
【００３９】
更に具体的な実施態様では、式（Ｉ）の化合物は：
２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ３）エタノアート；
２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ２）エタノアート；及び
２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ１）エタノアート
から選択される。
【００４０】
別の実施態様では、式（Ｉ）の化合物は：
【化１４】
2019513762.tif 000016
又はこれらの薬学的に許容し得る塩、例えば、これらの塩酸塩から選択される。
【００４１】
用語「アルキル」とは、好ましくは１〜６個、そして、更により好ましくは１〜４個の炭素原子を有する直鎖又は分枝状の置換又は非置換の飽和炭化水素基、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、tert−ブチル、又はsec−ブチルを指す。アルキル基は、１個以上のハロゲン原子によって、アリール基によって、又は複素環式基によって、又はシクロアルキル基によって場合により置換されていてもよい。また、アルキル基の更なる可能な置換基は、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、オキシム基、ヒドロキシル基、アルキルオキシ基、アリールオキシ基、カルボン酸基、カルボキシラート、アミド基、オキシム、アルケニル基及びアルキニル基から選択される１個以上の置換基を含む。
【００４２】
アルキニルという用語は、２〜６個の炭素原子を含有し、そして、少なくとも１つの三重結合を含有する直鎖又は分枝状の炭化水素基を意味する。３〜６個の炭素原子を含有するアルキニルの例は、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、３−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、４−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニル、５−ヘキシニル、及びこれらの異性体である。アルキル基は、例えば、アミノ基又はヒドロキシル基によって場合により置換されていてもよい。
【００４３】
用語「アルキルオキシ」及び「アルキルチオ」とは、それぞれ、酸素又は硫黄の原子によって化合物の残部に結合する、上に定義されたアルキル基を指す。
【００４４】
用語「アリールオキシ」とは、酸素原子によって化合物の残部に結合する、上に定義されたアリール基を指す。
【００４５】
用語「アルキルアミノ」とは、モノアルキルアミノ（−ＮＨＲ）又はジアルキルアミノ（−ＮＲＲ’）の基（式中、Ｒ及びＲ’は、独立して、上に定義されたアルキル基を表す）を指す。具体的な実施態様では、アルキルアミノ基のアルキル基は、シクロアルキル基、アリール基、複素環式基、又はアルキルオキシカルボニル基で置換されていてもよく、置換されていなくてもよい。
【００４６】
用語「シクロアルキルアミノ」とは、−ＮＨ−シクロアルキル基又は−Ｎ（アルキル）シクロアルキル基を指す。
【００４７】
用語「アミノ基」は、−ＮＨ２基を意味する。
【００４８】
用語「ニトロ基」は、−ＮＯ２基を指す。
【００４９】
用語「ヒドロキシル基」は、−ＯＨ基を指す。
【００５０】
用語「スルホニル基」は、−ＳＯ２基を指す。
【００５１】
用語「スルホキシド基」は、−ＳＯ基を指す。
【００５２】
用語「オキシム基」は、Ｃ＝Ｎ−ＯＨ基を指す。
【００５３】
用語「アルキルアミド」とは、モノアルキルアミド（−ＣＯＮＨＲ）又はジアルキルアミド（−ＣＯＮＲＲ’）の基（式中、Ｒ及びＲ’は、独立して、上に定義されたアルキル基を表す）を指す。
【００５４】
用語「アミド基」は、−ＣＯＮＨ２基を指す。
【００５５】
用語「シクロアルキル」とは、好ましくは３〜１４個の炭素原子、そして、より好ましくは３〜６個の炭素原子を有する１個の環を形成する置換又は非置換のアルキル基、例えば、シクロプロピル、シクロペンチル及びシクロへキシルを意味する。本発明のシクロアルキル基は、非置換であってもよく、又は例えばアルキル基、具体的には１個以上のハロゲン原子で置換されているアルキル基、例えばＣＦ３基で置換されていてもよい。
【００５６】
用語「カルボニル」は、−ＣＯ基を意味する。
【００５７】
用語「アリール」は、好ましくは６〜１４個の炭素原子を有する、置換されているか又は置換されていない芳香族基、例えば、フェニル、ａ−ナフチル、ｂ−ナフチル、又はビフェニルを意味する。
【００５８】
用語「複素環式」とは、ヘテロシクロアルキル基又はヘテロアリール基を指す。用語「ヘテロシクロアルキル」基とは、窒素、酸素又は硫黄から選択される１個又は数個のヘテロ原子を更に含む、置換されているか又は置換されていない、上に示したシクロアルキルを指す。これらは、一般的に、４〜１４個の炭素原子を含み、例えば、モルホリニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、ジチオラニル及びアゼパニルの基である。具体的な実施態様では、ヘテロシクロアルキル基は、５、６又は７員の環である。用語「ヘテロアリール」とは、窒素、酸素又は硫黄から選択される１個又は数個のヘテロ原子を更に含む、置換されているか又は置換されていない、上に示したアリール基を指す。これらは、一般的に、４〜１４個の炭素原子を含む。具体的な実施態様では、ヘテロアリール基は、５、６又は１０員の環である。代表的なヘテロアリール基は、ピリジニル、ピリミジニル、フラニル、チオフェニル、キノレイニル（quinoleinyl）及びイソキノレイニル（isoquinoleinyl）の基を含む。
【００５９】
アリール基又は複素環式基は、１個以上のハロゲン原子、アルキル基、又はアルキルオキシ基によって場合により置換されていてもよい。
【００６０】
ハロゲン原子とは、臭素、塩素、フッ素又はヨウ素の原子、具体的には、臭素、塩素又はフッ素の原子であると理解される。
【００６１】
本発明に係る具体的な化合物は：
化合物１：２’−（ベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イルカルバモイル）−［１，１’−ビフェニル］−２−カルボン酸；
化合物２：Ｎ−（５−ベンズアミド−４−（チオフェン−２−イル）−１，３−チアゾール−２−イル）−２−メトキシベンズアミド；
化合物３：２，６−ジフルオロ−Ｎ−（５−メチル−４−フェニル−１，３−チアゾール−２−イル）ベンズアミド；
化合物４：２−クロロ−Ｎ−［４−（２−ナフチル）−１，３−チアゾール−２−イル］−５−ニトロベンズアミド；
化合物５：２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ３）エタノアート；
化合物６：２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ２）エタノアート；
化合物７：２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ１）エタノアート；
化合物８：２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノアート；
化合物９：２−（５−クロロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノアート；
化合物１０：２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル ２−アミノ−３−メチルペンタノアート；
化合物１１：２−（５−クロロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル ２−アミノ−３−メチルペンタノアート；
化合物１２：ＲＭ５０６１（（Ｓ）−２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノアート）；
化合物１３：ＲＭ５０６４（（Ｓ）−２−（５−クロロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノアート）；
化合物１４：ＲＭ５０６６（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル） フェニル２−アミノ−３−メチルペンタノアート）；及び
化合物１５：ＲＭ５０６５（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（５−クロロチアゾール−２−イルカルバモイル） フェニル２−アミノ−３−メチルペンタノアート）
を含む。
【００６２】
具体的な実施態様では、式（Ｉ）の化合物は、化合物１２である。
【００６３】
本発明によれば、用語「線維症」、「線維性疾患」、「線維性障害」及びこれらの語形変化（declinations）は、器官又は組織における線維性結合組織の過剰の沈着の病的状態を意味する。より具体的には、線維症は、組織損傷に対する応答としての、結合組織による持続的な線維性瘢痕形成及び細胞外マトリクスの過剰産生を含む病理学的プロセスである。生理学的に、結合組織の沈着は、その下に存在する器官又は組織の構造及び機能を消し去り得る。
【００６４】
本発明によれば、線維症又は線維性障害は、任意の器官又は組織の線維症に関連し得る。具体的な器官線維症の例示的な非限定例は、肝臓、腸（gut）、腎臓、皮膚、表皮、内皮、筋肉、腱、軟骨、心臓、膵臓、肺、子宮、神経系、精巣、陰茎、卵巣、副腎、動脈、静脈、結腸、腸（intestine）（例えば、小腸）、胆管、軟組織（例えば、縦隔又は後腹膜）、骨髄、関節又は胃の線維症、特に、肝臓、腎臓、皮膚、表皮、内皮、筋肉、腱、軟骨、心臓、膵臓、肺、子宮、神経系、精巣、卵巣、副腎、動脈、静脈、結腸、腸（例えば、小腸）、胆管、軟組織（例えば、縦隔又は後腹膜）、骨髄、関節、眼又は胃の線維症を含む。
【００６５】
本発明によれば、用語「胆汁うっ滞」又は「胆汁うっ滞性疾患」又は「胆汁うっ滞性障害」及びこれらの語形変化は、肝細胞による分泌の障害又は肝内若しくは肝外の胆管を通る胆汁流の閉塞に起因する胆汁流の減少によって定義される病的状態を意味する。したがって、胆汁うっ滞の臨床的定義は、通常は胆汁に排泄される物質が保持される任意の状態である。
【００６６】
具体的な実施態様では、線維性障害は、肝臓、腸（gut）、肺、心臓、腎臓、筋肉、皮膚、軟組織（例えば、縦隔又は後腹膜）、骨髄、腸（intestinal）、及び関節（例えば、膝、肩又は他の関節）の線維症からなる群より選択される。
【００６７】
好ましい実施態様では、線維性障害は、肝臓、肺、皮膚、腎臓及び腸（intestinal）の線維症からなる群より選択される。
【００６８】
本発明のより好ましい実施態様では、処置される線維性障害は、以下の線維性障害の非網羅的なリストからなる群より選択される：非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肺線維症、特発性肺線維症、皮膚線維症、眼線維症（例えば、莢膜線維症）、心内膜心筋線維症、縦隔線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、進行性塊状線維症（炭坑夫塵肺の合併症）、増殖性線維症、新生物線維症、慢性炎症性気道疾患（ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者肺、結核）に続発する肺線維症、アルコール又は薬物誘発性の肝線維症、肝硬変、感染誘発性肝線維症、放射線又は化学療法誘発性の線維症、腎原性全身性線維症、クローン病、潰瘍性大腸炎、ケロイド、陳旧性心筋梗塞、強皮症／全身性硬化症、関節線維症、癒着性関節包炎の一部の形態、慢性線維化性胆管症、例えば、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）及び原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、胆道閉鎖症、家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、インプラント周囲線維症及び石綿肺。
【００６９】
本発明の具体的な実施態様によれば、胆汁うっ滞性疾患は、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、妊娠時肝内胆汁うっ滞症、進行性家族性肝内胆汁うっ滞症、胆道閉鎖症、胆石症、感染性胆管炎、ランゲルハンス細胞組織球増殖症に付随する胆管炎、アラジール症候群、非症候性胆管減少症、薬物誘発性胆汁うっ滞症、及び完全非経口栄養関連胆汁うっ滞症からなる群より選択される。好ましい実施態様では、胆汁うっ滞性疾患は、ＰＢＣ又はＰＳＣ、特にＰＢＣである。
【００７０】
用語「処置」又は「処置する」とは、それを必要としている被験体における胆汁うっ滞性又は線維性の障害の治癒的又は予防的な処置を指す。処置は、障害の進行を治癒、遅延、逆行又は減速させることによって、被験体の状態を改善するために、指定の障害を有する被験体、すなわち、患者に、化合物、特に医薬組成物に含まれる化合物を投与することを含む。また、処置は、障害を予防又は遅延させるために、健常な又は胆汁うっ滞性若しくは線維性の障害を発症するリスクのある被験体に投与してもよい。
【００７１】
したがって、本発明によれば、胆汁うっ滞性又は線維性の障害の処置は、該障害の進行を治癒、遅延、逆行又は減速させることによって、患者又は健常被験体、特に、胆汁うっ滞性又は線維性の障害を発症するリスクのある被験体の状態を改善するために、指定の障害を有する被験体に、式（Ｉ）の化合物又はそれを含有する医薬組成物を投与することを含む。
【００７２】
処置される被験体は、哺乳類、好ましくはヒトである。本発明に従って処置される被験体は、以前に行われた薬物処置、関連する病状、遺伝子型、リスク因子に対する曝露、ウイルス感染等の胆汁うっ滞性又は線維性の疾患に関連する幾つかの基準に基づいて、更に、画像診断方法、及び免疫学的、生化学的、酵素的、化学的又は核酸検出の方法を用いて評価することができる任意の関連するバイオマーカーの検出に基づいて選択することができる。
【００７３】
具体的な実施態様では、線維性障害の処置は、２つ以上の式（Ｉ）の化合物の組み合わせ物を投与することを含み得る。この実施態様の変形例によれば、２つ以上の式（Ｉ）の化合物は、単一の組成物中に含まれる。この実施態様の別の変形例では、２つ以上の式（Ｉ）の化合物は、療法において同時、逐次又は別々に投与するためのものであるので、異なる組成物に含まれていてもよい。
【００７４】
逐次投与の場合、式（Ｉ）の化合物を、別のものを投与する前に投与してよい。
【００７５】
式（Ｉ）の化合物は、薬学的に許容し得る塩、特に、薬学的使用に適合する酸又は塩基の塩として製剤化され得る。式（Ｉ）の化合物の塩は、薬学的に許容し得る酸付加塩、薬学的に許容し得る塩基付加塩、薬学的に許容し得る金属塩、アンモニウム及びアルキル化アンモニウムの塩を含む。これら塩は、化合物の最終精製工程中に、又は既に精製されている化合物に塩を組み込むことによって得ることができる。
【００７６】
本発明は、更に、薬学的に許容し得る担体中に式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物に関する。
【００７７】
好ましい実施態様では、本発明は、胆汁うっ滞性又は線維性の疾患を処置する方法において使用するための、上に示した化合物１〜１５から選択される化合物を含む医薬組成物に関する。
【００７８】
また、式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物は、製薬の状況において許容し得る１個又は数個の賦形剤又はビヒクル（例えば、薬学的用途に適合しかつ当業者に周知である生理食塩水、生理溶液、等張溶液等）を含んでいてもよい。
【００７９】
また、これらの組成物は、分散剤、可溶化剤、安定剤、保存剤等から選択される１個又は数個の薬剤又はビヒクルを更に含んでいてもよい。これらの製剤（液体及び／又は注射用及び／又は固体）に有用な薬剤又はビヒクルは、特に、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリソルバート８０、マンニトール、ゼラチン、ラクトース、植物油、アカシア、リポソーム等である。
【００８０】
これらの組成物は、最終的にガレヌス形態又は持続放出及び／若しくは徐放を保証する装置を用いて、注射可能な懸濁液、シロップ、ゲル、オイル、軟膏、丸剤、錠剤、坐剤、粉剤、ゲルキャップ、カプセル、エアゾール等の形態で製剤化され得る。この種の製剤については、セルロース、カーボナート又はデンプン等の薬剤を有利に使用することができる。また、本発明の組成物は、リポソーム送達系、例えば、小単層ベシクル、大単層ベシクル、及び多層ベシクルの形態で製剤化され得る。リポソームは、両親媒性脂質、例えば、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、ホスファチジルコリン、カルジオリピン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルイノシトール、ジアシルトリメチルアンモニウムプロパン、ジアシルジメチルアンモニウムプロパン、及びステアリルアミン、中性脂質、例えば、トリグリセリド、並びにこれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない様々な脂質から形成され得る。式（Ｉ）の化合物の薬学的組み合わせ物は、様々な方法及び様々な形態で投与することができる。したがって、例えば、該組み合わせ物は、当技術分野において公知の方法を使用することによって、経口、局所、経舌、鼻腔内、直腸内、経粘膜、経皮、経腸、筋肉内、静脈内、皮下、動脈内、腹腔内、肺内又は眼内の経路を使用することによって、系統的に又は非経口的に投与することができる。
【００８１】
経口投与するための製剤は、固体の錠剤及びカプセル製剤に加えて、水性の液剤及び懸濁剤の形態であってよい。水性の液剤及び懸濁剤は、滅菌された粉剤又は顆粒剤から調製され得る。化合物は、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、コーン油、綿実油、落花生油、ゴマ油、ベンジルアルコール、塩化ナトリウム、及び／又は様々な緩衝剤に溶解し得る。
【００８２】
式（Ｉ）の化合物は、様々な経路によって、そして、様々な形態で投与してよい。例えば、誘導体は、全身経路を介して、経口的に、非経口的に、吸入によって、鼻腔内噴霧によって、鼻腔内滴下によって、又は注射によって、例えば静脈内に、筋肉内経路によって、皮下経路によって、経皮経路によって、局所経路によって、動脈内経路によって投与してよい。
【００８３】
無論、投与経路は、当業者に周知の手順に従って式（Ｉ）の化合物の形態に適応するであろう。
【００８４】
式（Ｉ）の化合物は、治療有効量で投与される。本発明の状況において、用語「有効量」とは、所望の治療結果を生じさせるのに十分な化合物の量を指す。
【００８５】
投与に関連する頻度及び／又は用量は、患者、病状、投与形態等に応じて当業者が適応させることができる。典型的には、式（Ｉ）の化合物は、０．０１mg/日〜４０００mg/日、例えば５０mg/日〜２０００mg/日、そして、特に１００mg/日〜１０００mg/日を含む用量で線維性疾患を処置するために投与され得る。投与は、必要に応じて、毎日、又は更には１日数回行ってよい。一実施態様では、化合物は、少なくとも１日１回、例えば、１日１回、１日２回、又は１日３回投与される。具体的な実施態様では、化合物は、１日に１回又は２回投与される。特に、経口投与は、約１０００mgの用量、特に１０００mgの用量の化合物を含む錠剤を摂取することによって、食事中、例えば、朝食、昼食又は夕食中に１日１回実施してよい。別の実施態様では、錠剤は、例えば、ある食事中に約５００mgの用量（すなわち、４５０〜５５０mgの用量）、特に５００mgの用量の化合物を含む第１の錠剤を投与し、そして、同日の別の食事中に約５００mgの用量、特に５００mgの用量の化合物を含む第２の錠剤を投与することによって、１日２回経口投与される。好適には、式（Ｉ）の化合物による処置過程は、少なくとも１週間、特に少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０若しくは２４週間、又はそれ以上である。特に、式（Ｉ）の化合物による処置過程は、少なくとも１年間、２年間、３年間、４年間又は少なくとも５年間である。
【００８６】
具体的な実施態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物と、少なくとも１つのスタチン（ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤）、例えば、プラバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、ロスバスタチン、メバスタチン、セリバスタチン、及びピタバスタチンとの組み合わせ物に関する。スタチンは、塩、水和物、溶媒和物、多形、又は共結晶の形態であり得る。また、スタチンは、塩の水和物、溶媒和物、多形、又は共結晶の形態であってもよい。また、スタチンは、本発明に係るラクトン形態の遊離酸中に存在し得る。
【００８７】
具体的な実施態様では、本発明は、公知の抗線維化活性を有する少なくとも１つの他の治療活性剤と組み合わせた、胆汁うっ滞性又は線維性の疾患を処置するための式（Ｉ）の化合物の使用に関する。この実施態様の変形例によれば、式（Ｉ）の化合物は、ピルフェニドン若しくは受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫＩ）、例えば、ニンテダニブ、ソラフェニブ及び他のＲＴＫＩ、又はアンギオテンシンＩＩ（ＡＴ１）受容体ブロッカー、又はＣＴＧＦ阻害剤、又はＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＴＨＢＳ１若しくは細胞表面インテグリン等の潜在型ＴＧＦβ複合体の活性化剤を含むＴＧＦβ−及びＢＭＰ−活性化経路に干渉しやすい任意の抗線維化化合物、ＴＧＦβ受容体Ｉ型（ＴＧＦＢＲＩ）若しくはＩＩ型（ＴＧＦＢＲＩＩ）及びこれらのリガンド、例えば、ＴＧＦβ、アクチビン、インヒビン、ノーダル、抗ミュラー管ホルモン、ＧＤＦ若しくはＢＭＰ、補助共受容体（ＩＩＩ型受容体としても知られている）、又は制御性若しくは阻害性のＳＭＡＤタンパク質を含むＳＭＡＤ依存性古典的（canonical）経路の構成要素、又はＭＡＰＫシグナル伝達、ＴＡＫ１、Ｒｈｏ様ＧＴＰａｓｅシグナル伝達経路、ホスファチジルイノシトール−３ キナーゼ／ＡＫＴ経路、ＴＧＦβ誘発性ＥＭＴプロセス、若しくはＨｈリガンド若しくは標的遺伝子を含む古典的及び非古典的なヘッジホッグシグナル伝達経路の様々なブランチを含むＳＭＡＤ非依存性若しくは非古典的な経路のメンバー、又はＴＧＦβシグナル伝達に影響を与えやすいＷＮＴ若しくはノッチの経路の任意のメンバー等の任意の抗線維化化合物と組み合わせることができる。
【００８８】
したがって、本発明は、また、線維性障害を処置する方法において使用するための、ピルフェニドン若しくは受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫＩ）、例えば、ニンテダニブ、ソラフェニブ及び他のＲＴＫＩ、又はアンギオテンシンＩＩ（ＡＴ１）受容体ブロッカー、又はＣＴＧＦ阻害剤、又はＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＴＨＢＳ１若しくは細胞表面インテグリン等の潜在型ＴＧＦβ複合体の活性化剤を含むＴＧＦβ−及びＢＭＰ−活性化経路に干渉しやすい抗線維化化合物、ＴＧＦβ受容体Ｉ型（ＴＧＦＢＲＩ）若しくはＩＩ型（ＴＧＦＢＲＩＩ）及びこれらのリガンド、例えば、ＴＧＦβ、アクチビン、インヒビン、ノーダル、抗ミュラー管ホルモン、ＧＤＦ若しくはＢＭＰ、補助共受容体（ＩＩＩ型受容体としても知られている）、又は制御性若しくは阻害性のＳＭＡＤタンパク質を含むＳＭＡＤ依存性古典的経路の構成要素、又はＭＡＰＫシグナル伝達、ＴＡＫ１、Ｒｈｏ様ＧＴＰａｓｅシグナル伝達経路、ホスファチジルイノシトール−３ キナーゼ／ＡＫＴ経路、ＴＧＦβ誘発性ＥＭＴプロセス、若しくはＨｈリガンド若しくは標的遺伝子を含む古典的及び非古典的なヘッジホッグシグナル伝達経路の様々なブランチを含むＳＭＡＤ非依存性若しくは非古典的な経路のメンバー、又はＴＧＦβシグナル伝達に影響を与えやすいＷＮＴ若しくはノッチの経路の任意のメンバーから選択される公知の抗線維化活性を有する少なくとも１つの治療活性剤と組み合わせて、式（Ｉ）の化合物又は式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容し得る塩を含む医薬組成物に関する。
【００８９】
別の具体的な実施態様では、式（Ｉ）の化合物と組み合わせることができる分子の他の分類は、スタチン（ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤）、例えば、プラバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、ロスバスタチン、メバスタチン、セリバスタチン、及びピタバスタチン、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤、又は他の抗炎症性及び／若しくは免疫抑制性の薬剤を含む。これらの薬剤の非網羅的なリストは、グルココルチコイド、ＮＳＡＩＤＳ、シクロホスファミド、ニトロソ尿素、葉酸アナログ、プリンアナログ、ピリミジンアナログ、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、シクロスポリン、ミリオシン、タクロリムス、シロリムス、ミコフェノール酸誘導体、フィンゴリモド及び他のスフィンゴシン−１−リン酸受容体調節因子；炎症促進性サイトカイン及び炎症促進性サイトカイン受容体、Ｔ細胞受容体、インテグリン等の標的に対するモノクローナル及び／又はポリクローナルな抗体を含むが、これらに限定されない。また、式（Ｉ）の化合物と組み合わせることができる分子の他の分類は、式（Ｉ）の化合物の曝露又は効果を潜在的に強化することができる分子を含む。
【００９０】
別の実施態様では、式（Ｉ）の化合物又は式（Ｉ）の化合物の組み合わせは、唯一の活性成分として投与される。したがって、本発明は、また、胆汁うっ滞性又は線維性の障害を処置する方法において使用するための、式（Ｉ）の化合物又は式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容し得る塩から選択される化合物を含む医薬組成物であって、該化合物が、該組成物中の唯一の活性成分である医薬組成物に関する。
【００９１】
更なる実施態様では、本発明は、特に１つ以上の式（Ｉ）の化合物を含有する医薬組成物の形態で１つ以上の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、胆汁うっ滞性又は線維性の疾患を処置する方法を提供する。
【００９２】
式（Ｉ）の化合物の合成は、以下及びＷＯ２０１６／０７７４２０号に記載されているもの等、当技術分野において公知の方法に従って実施され得る。
【００９３】
既に市販されている可能性があるか又は容易に合成することができる化合物から特定の反応中間体を合成し、そして、精製することができる。
【００９４】
一般式（Ｉ）の化合物の合成の一般スキームを以下のスキームに提示する。
【００９５】
所望のＮ−（チアゾール−２−イル）ベンズアミド誘導体は、当業者に周知の方法に従って、適切な安息香酸／塩化物及び適切なアミノチアゾール中間体から得ることができる。
【化１５】
2019513762.tif 000017
【００９６】
本発明の別の態様では、Ｎ−（チアゾール−２−イル）ベンズアミドスカフォールドが形成されたら、更なる官能基を導入することができる。例えば、以下のスキームに示す通り、ヒドロキシベンズアミド誘導体をアルキル又はアルキルカルボニルの基によって更に置換してもよく、他のハロゲノベンズアミド誘導体をパラジウム触媒カップリング反応に供して、市販されている可能性があるか又は当業者によって合成され得る所望のアリール、ヘテロアリール環を導入してもよい。本発明の更に別の態様では、脱保護及びtert−ブチル ２−（ベンズアミド）チアゾール−５−イルカルバマートの更なる官能化によって、広範な５Ｎ−（５−アミノチアゾール−２−イル）ベンズアミド誘導体を調製することができる。
【化１６】
2019513762.tif 000018
【００９７】
特定のチアゾール中間体は、５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−アミン（Combi-Blocksから市販されている、カタログ＃HI-1112）又は５−ニトロ−４−置換−１，３−チアゾール−２−アミン、例えば、市販されているか又は（Tokumitsu and Hayashi 1985）若しくは（Singh, Singh et al. 2003）によってそれぞれ記載されている方法に従って合成することができる４−メチル−５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−アミン及び５−ニトロ−４−フェニル−１，３−チアゾール−２−アミンを含む。他の４−置換の５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−アミン、例えば、５−ニトロ−４−アリール−１，３−チアゾール−２−アミン、５−ニトロ−４−トリフルオロメチル−１，３−チアゾール−２−アミンは、（Kikelj and Urleb 2002）及び（Tasaganva, Tambe et al. 2011）によって記載されているのと同じ方法を使用することによって利用可能であるが、４−メチルアミノ−５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−アミン誘導体は、５−ニトロ−２−アセトアミド−４−ホルミルチアゾールから合成することができ、この合成は（Silberg, Frenkel et al. 1963）によって記載されている。
【００９８】
他の特定のチアゾールは、例えば、２−アミノ−５−フェニルチアゾール（Combi-Blocks、カタログ＃ST-4301）、２−アミノ−４−フェニルチアゾール（Combi-Blocks、カタログ＃HC-2218）、５−エチル−１，３−チアゾール−２−アミン（Combi-Blocks、カタログ＃QC-6305）、４−エチル−１，３−チアゾール−２−アミン（Combi-Blocks、カタログ＃HI-1797）、４−メチル−１，３−チアゾール−２−アミン（Combi-Blocks、カタログ＃HI-1202）、２−アミノ−４−（２−ピリジル）チアゾール（Alfa Aesar、カタログ＃H58554）、２−アミノ−４−（３−ピリジル）チアゾール（Alfa Aesar、カタログ＃H58630）、５−エチル−１，３−チアゾール−２−アミン（Ark Pharm、カタログ＃AK132917）等、一般的な供給元から購入することができる。より一般的には、特定のチアゾール中間体は、当業者に周知の方法、例えば、適切なチオ尿素と適切なα−ハロケトン又は関連化合物との反応を使用することによって合成することができる。更なる特定のチアゾールは、４又は５置換アリール、ヘテロアリールチアゾール誘導体を得るために、当業者に周知の技術を使用することによって得ることができる。同様に、５−ニトロチアゾールは、パラジウム触媒水素化（Pevarello, Amici et al. 2004）又は鉄触媒還元（Funahashi, Tsuruoka et al. 2007）等の通常の技術によってそのアミノアナログに還元することができる。
【００９９】
所望の式（Ｉ）の化合物を得るために生成される反応中間体中に場合により存在する官能基は、保護基によって永続的に又は一時的に保護されてもよく、これによって、所望の化合物の確実な合成を保証する。保護及び脱保護の反応は、当業者に周知の技術、又は書籍「Greene's Protective Groups in Organic Synthesis」（Wuts and Greene 2007）等の文献に記載されているもの等に従って実施される。
【０１００】
本発明に係る化合物は、１つ以上の不斉中心を含有し得る。本発明は、式（Ｉ）の化合物の純粋な又は混合された立体異性体（ジアステレオ異性体、鏡像異性体）に加えて、ラセミ混合物及び幾何異性体、又は互変異性体を含む。鏡像異性的に純粋な（又は濃縮された）混合物が望ましいとき、該混合物は、最終生成物若しくはキラル中間体の精製によって又は（例えば、キラル反応物質及び触媒を使用して）当業者に公知の方法に従う不斉合成によって得ることができる。本発明に係る特定の化合物は、様々な安定な互変異性体形態を有し得、そして、これらの形態及びその混合物の全てが本発明に含まれる。純粋な又は混合された立体異性体に加えてラセミ混合物及び幾何異性体又は互変異性体を得、そして、特性評価するための技術は、例えば書籍「Chirality in Drug Design and Development」（Reddy and Mehvar 2004）等の文献に記載されている。
【０１０１】
１つ以上の重水素原子を含有する式（Ｉ）の化合物のための中間体及び最終反応生成物を合成及び精製する一般的な方法の詳細を実施例に提供する。既に市販されている可能性があるか又は容易に合成することができる化合物から特定の反応中間体を合成及び精製することができる。例えば、重水素化塩化アセチルは、市販されている可能性があるか又は対応するカルボン酸から合成することができる（該カルボン酸は、（Ginsburg and Hescheles, 1958）によって記載されている方法に従って合成することができる）。
【０１０２】
式（Ｉ）の化合物の合成の一般的なスキームを以下のスキームに提示する。
【化１７】
2019513762.tif 000019
【０１０３】
エステル化工程は、当業者に周知の技術に従って実施される。
【０１０４】
式（Ｉ）の化合物は、沈殿、又は反応媒体の蒸発後の固液抽出によって精製することができる。更なる又は他の精製工程は、シリカゲルクロマトグラフィー又は結晶化によって実施することができ、該化合物が固体形態として安定であるときには、文献、又は更に一般的には化学文献（Armarego and Chai 2009）において周知の技術を適用することによって実施することができる。
【０１０５】
更に、反応混合物から式（Ｉ）の化合物を単離するのに適した必要な精製及び／又は（再）結晶化工程は、非晶質、多形、単結晶又は多結晶の形態を得るために用いることができる。このような多形は、例えば、可溶性、固有溶解速度、融点、バイオアベイラビリティ、並びに／又は医薬組成物及び／若しくは生物学的流体中における、ある多形状態から別の多形状態への転移の可能性の観点で、区別できる薬理学的及び／又は化学的特性を示し得る。
【０１０６】
（再）結晶化アッセイは、様々な溶媒のパネル（例えば、イソプロパノール、アセトン、メタノール、ジイソプロピルエーテル又は水）又はこれらの混合物において、そして、反応の体積又は温度等の様々な条件を適用することによって実施することができる。得られたサンプルは、例えば、構造、可溶性、安定性又は他の形態への変換等の特定の結晶形態の特徴を証明することができる顕微鏡観察、熱量測定、及び／又は分光法等の様々な技術によって分析することができる（Bauer 2004；Morissette, Almarsson et al. 2004；Erdemir, Lee et al. 2007；Yin and Grosso 2008）。このような多形研究によって、薬理学的及び製造上の視点の両方について薬学的に許容し得る化合物の結晶形態を特徴付けることができる。
【０１０７】
特定の式（Ｉ）の化合物は、双性イオンの形態で単離することができ、そして、これらの各形態及びこれらの混合物は、本発明に含まれる。
【０１０８】
特定の式（Ｉ）の化合物は、構造中に同位体（放射性又は非放射性）によって置き換えられる少なくとも１個の原子を含み得る。本発明に係る化合物の構造に含まれ得る同位体の例は、それぞれ２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３５Ｓ等の水素、炭素、窒素、酸素、硫黄から選択することができる。非放射性であるとき、吸収、分布、代謝、及び排泄（ＡＤＭＥ）試験を実施する手段としてだけでなく、代謝的運命を実質的に変化させるが、元の化合物の所望の生化学的効力及び選択性を保持することができる化合物を得るための手段としても、安定な同位体を水素（重水素の場合）又は炭素（１３Ｃの場合）の代わりに構造中に選択的に組み込むことができる。幾つかの好ましい場合では、この改変は、元の化合物の安全性、有効性及び／又は耐容性に対して正の影響を与える効果を有する可能性がある（Mutlib 2008）。その他の点では、放射性同位体３Ｈ及び１４Ｃが特に好ましいが、その理由は、これらの調製、そして、物質のインビボにおけるバイオアベイラビリティの試験における検出が容易であるためである。重同位体（例えば２Ｈ）が特に好ましいが、その理由は、それが、分析的試験における内部標準として、そして、薬学的関心対象となる可能な変異体として使用されるためである。
【０１０９】
語句「薬学的に許容し得る」とは、薬理学的／毒物学的視点から患者にとって、そして、組成、製剤、安定性、患者の許容性及びバイオアベイラビリティに関する物理的／化学的視点から製造する薬剤師にとって許容し得る特性及び／又は物質を指す。
【０１１０】
用語「担体」、「ビヒクル」、又は「賦形剤」とは、その取り扱い若しくは保管の特性を改善するために、又は組成物の投薬単位から別々の物品を形成することを可能にするか若しくは容易にするために、医薬組成物に添加されて被験体に治療剤を送達するための担体、ビヒクル、及び／又は希釈剤として使用される任意の物質（治療剤自体ではない）を指す。本発明の医薬組成物は、個々に又は組み合わせて、分散剤、可溶化剤、安定剤、保存剤等から選択される１個又は数個の薬剤又はビヒクルを含み得る。
【０１１１】
本発明は、以下の非限定的な実施例を参照して更に説明される。
【実施例】
【０１１２】
材料及び方法
本発明に係る重水素化化合物の合成
化学名は、ＩＵＰＡＣ命名法に従う。出発物質及び溶媒は、商業的供給元（Acros Organic、Sigma Aldrich、Combi-Blocks、Fluorochem、Fluka、Alfa Aesar又はLancaster）から購入され、そして、更に精製することなく受け取ったまま使用される。一部の出発物質は、当業者によって容易に合成され得る。空気及び水分感受性の反応は、窒素の不活性雰囲気下で実施され、そして、ガラス製品はオーブンで乾燥された。反応収率を最適化する試みは行わない。薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）は、Merckシリカゲル60 UV254（２５０μm）プレート上で行われる。可視化は、ＵＶ光を用いて行われる。カラムクロマトグラフィは、Merck製のGeduranシリカゲル60（４０〜６３μm）で行われる。融点（ｍｐ）は、Buchi Melting Point B-545で記録され、そして、補正されない。全てのマイクロ波照射実験は、Biotage Initiatorマイクロ波装置で行われる。１Ｈスペクトルは、３００MHzにおいてBruker Advance I分光計に記録された。化学シフト（δ）は、内部標準として重水素化溶媒の水素化残基を参照することによって、ppm（百万分率）で報告される：ＤＭＳＯ−ｄ６については２．５０ppm、ＣＤＣｌ３については７．２６ppm、そして、Ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ４については３．３１及び４．７８。スペクトルの分裂パターンは、以下の通り指定される：s、シングレット；d、ダブレット；dd、ダブルダブレット；ddd、ダブルダブルダブレット；t、トリプレット；dt、ダブルトリプレット；q、カルテット；m、マルチプレット；br s、ブロードシングレット。カップリング定数（Ｊ）は、０．１Hzの単位まで提示される。全ての試験した化合物は、Merck HITACHI Lachrom L-7000シリーズにおけるＨＰＬＣ及びWatersカラムSymmetry C18（３．５μm、４．６×７５mm）を備えるMerck HITACHIダイオードアレイ検出器L-7455によって、そして、ＭｅＯＨ／０．１％ ギ酸を含有するMillipore水の勾配を使用して評価して、≧９５％の化学純度を示した。質量分析測定は、qTOF Waters Micromass Ultima API及びWaters製のAcquity QDa検出器を備えるAutoPurification System 2767において実施された。全ての溶媒は、ＨＰＬＣグレードである。
【０１１３】
実施例１：
化合物５：２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ３）アセタート；
【化１８】
2019513762.tif 000020
トリエチルアミン（０．１１２mL、０．８２９mmol）及び（2Ｈ）３塩化アセチル（０．０３１mL、０．４３４mmol）を、ジクロロメタン中２−ヒドロキシ−Ｎ−（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）ベンズアミド（Interchim ref：RP253／バッチ：WZG110215-OA02）（０．１ｇ、０．３７７mmol）の混合物（０．３８M）に添加した。反応物を室温で２時間撹拌した。混合物を水で希釈し、そして、酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、そして、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル（ジクロロメタン／酢酸エチル：９／１）で精製して、黄色の固形物として２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（２Ｈ３）アセタート（０．０３８ｇ、０．１２２mmol、収率：２８％）を与えた。ＮＭＲ 1H (300MHz, DMSO-d6, δ ppm): 7.31 (dd, 1H, J=8.1Hz, J=0.9Hz, HAr), 7.41-7.47 (m, 1H, HAr), 7.65-7.71 (m, 1H, HAr), 7.84 (dd, 1H, J=7.8Hz, J=1.5Hz, HAr), 8.69 (s, 1H, HAr), 13.61 (br(s), 1H, NH); Mass (ESI+) : 311.2 (M+H)+, 333.2 (M+Na)+, 643.3 (2M+Na)+, 659.3 (2M+K)+; MP: 197-200°C。
【０１１４】
本発明に係る化合物のインビトロ評価
化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Flukaカタログ＃41640）に溶解させた。
【０１１５】
【表１】
2019513762.tif 000021
【０１１６】
出願ＷＯ２０１６／０７７４２０号に記載の方法に従ってＲＭ−５０６１を合成した。
【０１１７】
ｈＨＳＣ培養
ヒト初代肝星細胞（ｈＨＳＣ）（Innoprot）を、２％ ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ScienCell カタログ＃0010）、１％ ペニシリン／ストレプトマイシン（ScienCell カタログ＃0503）及び星細胞増殖補給剤（ＳｔｅＣＧＳ; ScienCell カタログ＃5352）を補給したＳＴｅＣＭ培地（ScienCell カタログ＃5301）中で培養した。よりよく接着させるために、細胞培養フラスコをポリ−Ｌ リジン（Sigma カタログ＃P4707）でコーティングした。
【０１１８】
ＴＧＦ−β１によるｈＨＳＣの活性化
ヒト初代肝星細胞（ｈＨＳＣ）（Innoprot）を、上記の通り標準的な条件下で培養した。続いて、該細胞を、２×１０４細胞／ウェル又は６，５×１０３細胞／ウェルの密度でそれぞれ９６ウェル又は３８４ウェルのプレートにプレーティングした。次の日、細胞培養培地を除去し、そして、細胞をＰＢＳ（Invitrogen カタログ＃14190）で洗浄した。次いで、ｈＨＳＣを無血清かつＳｔｅＣＧＳ不含培地中で２４時間飢餓状態にした。式（Ｉ）の化合物による処理については、血清除去したｈＨＳＣを該化合物と共に１時間プレインキュベートし、続いて、線維化促進性刺激ＴＧＦβ１（PeproTech カタログ＃100-21、１ng/mL）を添加し、無血清かつＳｔｅＣＧＳ不含培地中で更に４８時間インキュベートした。処理の終了時に、処理されたＨＳＣの細胞培養上清を新たなプレートに移した後、−２０℃で保管した。該細胞をＰＢＳ（Invitrogen、カタログ＃14190）で洗浄した後、溶解バッファ（CelLyticTM MT試薬；Sigma ＃C3228）を添加した。次いで、プレートシェーカーを使用して氷上で３０分間プレートをインキュベートした後、−２０℃で保存した。
【０１１９】
ＴＧＦβ１によるＮＨＣＦ−Ｖの活性化：
正常ヒト心臓線維芽細胞（心室）（ＮＨＣＦ−Ｖ）（Lonza）を正常成人心臓組織から単離した。細胞を、ＦＧＭ（商標）−３BulletKit（商標）キット（Lonza カタログ＃CC-4525）を補給した線維芽細胞基本培地（ＦＢＭ）（Lonza カタログ＃CC-3131）中で培養した。完全培地は、１０％ ウシ胎仔血清を含有する。ＴＧＦβ１による活性化実験については、ＮＨＣＦ−Ｖを６×１０３細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートにプレーティングした。次の日、細胞培養培地を除去し、そして、細胞をＰＢＳ（Invitrogen カタログ＃14190）で洗浄した。ＮＨＣＦを無血清、インスリン不含かつｒｈＦＧＦ−Ｂ不含培地中で２４時間飢餓状態にした。式（Ｉ）の重水素化化合物による処理については、血清除去したＮＨＣＦを該化合物と共に１時間プレインキュベートし、続いて、線維化促進性刺激ＴＧＦβ１（PeproTech カタログ＃100-21、３ng/mL）を添加し、無血清、インスリン不含かつｒｈＦＧＦ−Ｂ不含培地中で更に４８時間インキュベートした。
【０１２０】
ＴＧＦβ１によるInMyoFibの活性化：
ヒト腸筋線維芽細胞（InMyoFib）（Lonza）を、SmGMTM-2 BulletKit（商標）（Lonza カタログ＃CC-4149）を補給した平滑筋細胞基本培地（SmBM-2TM）（Lonza カタログ＃CC-3181）中で培養した。完全培地は、５％ ウシ胎仔血清を含有する。ＴＧＦβ１による活性化実験については、InMyoFibを１０×１０３細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートにプレーティングした。次の日、細胞培養培地を除去し、そして、細胞をＰＢＳ（Invitrogen カタログ＃14190）で洗浄した。InMyoFibを無血清、インスリン不含かつｒｈＦＧＦ−Ｂ不含培地中で２４時間飢餓状態にした。式（Ｉ）の重水素化化合物による処理については、血清除去したInMyoFibを該化合物と共に１時間プレインキュベートし、続いて、線維化促進性刺激ＴＧＦβ１（PeproTech カタログ＃100-21、３ng/mL）を添加し、無血清、インスリン不含かつｒｈＦＧＦ−Ｂ不含培地中で更に４８時間インキュベートした。
【０１２１】
ＴＧＦβ１によるＮＨＬＦの活性化
正常ヒト肺線維芽細胞（ＮＨＬＦ）（Lonza）を、ＦＧＭ−２ SingleQuots（商標）キット（Lonza カタログ＃CC-3132)を補給した線維芽細胞基本培地（ＦＢＭ）（Lonza カタログ＃CC-3131）中で培養した。完全培地は、２％ ウシ胎仔血清を含有する。ＴＧＦβ１による活性化実験については、ＮＨＬＦを５×１０３細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートにプレーティングした。次の日、細胞培養培地を除去し、そして、細胞をＰＢＳ（Invitrogen カタログ＃14190)で洗浄した。ＮＨＬＦを無血清、インスリン不含かつｒｈＦＧＦ−Ｂ不含培地中で２４時間飢餓状態にした。式（Ｉ）の化合物による処理については、血清除去したＮＨＬＦを該化合物と共に１時間プレインキュベートし、続いて、線維化促進性刺激ＴＧＦβ１（PeproTech カタログ＃100-21、1ng/mL）を添加し、無血清、インスリン不含かつｒｈＦＧＦ−Ｂ不含培地中で更に４８時間インキュベートした。処理の最後に、細胞をＰＢＳ（Invitrogen、カタログ＃14190）で洗浄した後、溶解バッファ（CelLyticTM MT試薬；Sigma ＃C3228）を添加した。次いで、プレートシェーカーを使用して氷上で３０分間プレートをインキュベートした後、−２０℃で保存した。
【０１２２】
α-ＳＭＡのＥＬＩＳＡ
サンドイッチＥＬＩＳＡを使用してα-ＳＭＡのレベルを測定した。簡潔に述べると、まず、ＥＬＩＳＡプレートのウェルを４℃で一晩捕捉抗体（マウスモノクローナル抗ＡＣＴＡ２、Abnova）でコーティングした。ＰＢＳ＋０，２％ Tween 20で３回洗浄した後、ＰＢＳ＋０．２％ ＢＳＡからなるブロッキング溶液を１時間にわたって添加し、続いて、別の洗浄サイクルに供した。室温で２時間捕捉抗体に結合させるために、細胞溶解物をウェルに移した。洗浄手順後、検出抗体（ビオチン化マウスモノクローナル抗ＡＣＴＡ２、Abnova）を室温で２時間にわたって添加し、続いて、３回洗浄した。検出については、まず、ＨＲＰコンジュゲートストレプトアビジン（R&D Systems カタログ＃DY998）を室温で３０分間適用した。洗浄後、ＨＲＰの基質であるＴＭＢ（;BD、＃555214）を添加し、そして、暗条件下、室温で７分間インキュベートした。酸化時に、ＴＭＢは水溶性青色反応生成物を形成し、これは硫酸を添加すると黄色になる（溶液停止）ので、分光光度計を用いて４５０nmにおける強度を正確に測定することができる。発色は、溶解物中に存在するα-ＳＭＡの量と正比例する。
【０１２３】
Ｃｏｌ１α１のＥＬＩＳＡ
サンドイッチＥＬＩＳＡ（R&D systems,）を使用してヒトプロコラーゲンα１（ｃｏｌ１α１）のレベルを測定した。簡潔に述べると、まず、ＥＬＩＳＡプレートのウェルを室温で一晩捕捉抗体でコーティングした。ＰＢＳ＋０，０５％ Tween 20で３回洗浄した後、ＰＢＳ＋１％ ＢＳＡからなるブロッキング溶液を１時間にわたって添加し、続いて、別の洗浄サイクルに供した。室温で２時間捕捉抗体に結合させるために、処理されたＨＳＣの細胞培養上清をウェルに移した。洗浄手順後、ビオチン化検出抗体を室温で２時間にわたって添加し、続いて、３回洗浄した。検出については、まず、ＨＲＰコンジュゲートストレプトアビジンを室温で２０分間適用した。洗浄後、ＨＲＰの基質であるＴＭＢ（BD、カタログ＃555214）を添加し、そして、暗条件下、室温で２０分間インキュベートした。酸化時に、ＴＭＢは水溶性青色反応生成物を形成し、これは硫酸を添加すると黄色になる（溶液停止）ので、分光光度計を用いて４５０nmにおける強度を正確に測定することができる。発色は、細胞培養上清中に存在するｃｏｌ１α１タンパク質の量と正比例する。
【０１２４】
本発明に係る化合物のインビボ評価
慢性ＣＣｌ４誘発性肝線維症モデルにおけるＲＭ−５０６１の評価
９週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスを対照飼料又はＲＭ−５０６１を補給した飼料で６週間飼育する。１０、３０又は１００mg/kg/日のＮＴＺの曝露にそれぞれ対応する、ＲＭ−５０６１を含有する３つのレジメンを調製する。同時に、そして、合計６週間にわたって、強制経口飼養によってマウスをオリーブ油に溶解させたＣＣｌ４又はビヒクルで週３回処理する。ＣＣｌ４の量は、０．８７５mL/kgから２．５mL/kgに次第に増加させる。処理の最後の日、６時間の絶食期間後にマウスを屠殺する。血清の生化学的分析のために血液サンプルを回収する。生化学的、組織学的、そして、発現の試験のために、迅速に肝臓を摘出する。
【０１２５】
慢性ＣＤＡＡｃ飼料誘発性肝線維症モデルにおけるＲＭ−５０６１の評価
ＣＤＡＡｃ飼料誘発性実験的肝線維症のマウスモデルにおいて、ＮＴＺの抗線維化効果を評価する。６週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに１２週間、対照（ＣＳＡＡ）飼料、ＣＤＡＡｃ飼料、又は１０、３０若しくは１００mg/kg/日のＲＭ−５０６１を補給したＣＤＡＡｃ飼料を１２週間給餌する。
【０１２６】
体重及び飼料の摂取を週２回モニタリングする。処理の最後の日、６時間の絶食期間後にマウスを屠殺する。生化学的及び組織学的試験のために、迅速に肝臓を摘出する。
【０１２７】
血漿胆汁酸濃度に対するＮＴＺの影響の評価
OFA Sprague Dawleyラット（初期体重２５０〜２７５ｇ）をその体重に従って４群に無作為化し、そして、３週間処理した。ラットにオリーブ油（対照群）又はオリーブ油に乳化させたＣＣｌ４（ＣＣｌ４：オリーブ油 １：２v/v、最終ＣＣｌ４濃度：２mL/kg）を週２回腹腔内注入した。同時に、オリーブ油注入群を対照飼料で飼育し、一方、ＣＣｌ４注入群を対照飼料又はＮＴＺを補給した飼料で飼育した。１０又は３０mg/kg/日の曝露にそれぞれ対応する、ＮＴＺを含有する２つのレジメンを調製した。処理の最後の日、６時間の絶食期間後にラットを屠殺した。生化学的分析のために、血液サンプルを回収し、そして、血清を単離した。
【０１２８】
全胆汁酸の血漿濃度の測定
Daytona自動分析機（Randox、カタログ＃BI 3863）に適切なRandoxキットを使用して、全胆汁酸（ＴＢＡ）の血漿濃度を決定した。Ｔｈｉｏ−ＮＡＤの存在下において、酵素３−αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ（３−α ＨＳＤ）は、胆汁酸を３−ケトステロイド及びＴｈｉｏ−ＮＡＤＨに変換する。この反応は可逆性であり、そして、３−α ＨＳＤは、３−ケトステロイド及びＴｈｉｏ−ＮＡＤＦＨ−を胆汁酸及びＴｈｉｏ−ＮＡＤに変換することができる。過剰のＮＡＤＨの存在下では、酵素サイクリングが効率的に生じ、そして、４０５nmにおける吸光度の特異的変化を測定することによって、Ｔｈｉｏ−ＮＡＤＨの形成速度を決定する。結果をμmol/Lで表す。
【０１２９】
結果及び結論：
分化した筋線維芽細胞の異常な存続は、多くの線維性疾患の特徴である。肝損傷後、休止状態のＨＳＣは、（α-ＳＭＡ）陽性筋線維芽細胞への分化を特徴とする活性化プロセスを受ける。新規抗線維化分子を見出す試みにおいて、線維化促進性サイトカインＴＧＦβ１で活性化されたヒトＨＳＣのモデルにおいて、式（Ｉ）の化合物及び式（Ｉ）の重水素化誘導体化合物を表現型でスクリーニングした。線維性病変の特徴であるα-ＳＭＡのレベルを使用して、線維化プロセスに干渉する該化合物の効力を評価した。幾つかの式（Ｉ）の化合物は、表２に示すように抗線維化特性が明らかになった。例えば、ＲＭ−５０６１は、α-ＳＭＡのレベルを用量依存的に減少させ（図１、表３）、ＩＣ５０は０．１〜３μMを含んでいた。これらの抗線維化特性は、ＮＨＬＦでも観察され（図２）、ＩＣ５０は同程度であった。更に、細胞外マトリクスコラーゲン１Ａ１（ＣＯＬ１Ａ１）等のＴＧＦβ刺激の別のマーカーは、ＲＭ−５０６１によって同程度減少した（表３）。
【０１３０】
式（Ｉ）の重水素化誘導体化合物は、ＴＧＦβ活性化ＨＳＣにおけるα-ＳＭＡレベルを用量依存的に減少させ、ＩＣ５０は０．１〜３μMを含んでいた（図３）。更に、式（Ｉ）の重水素化誘導体化合物の抗線維化能は、正常ヒト心臓線維芽細胞（図４）、ヒト腸筋線維芽細胞（InMyoFib）（図５）及び正常ヒト肺線維芽細胞（ＮＨＬＦ）（図６）を含む他の組織に由来する線維芽細胞にも及んだ。これらの線維症モデルの全てにおいて、式の重水素化誘導体化合物は、１μMの濃度で有意な抗線維化効果を示した。
【０１３１】
毒性アッセイによって、α-ＳＭＡ及びＣＯＬ１Ａ１のレベル低下は、細胞の毒性又はアポトーシスによるものではないことが確認された（データ不図示）。
【０１３２】
結局、これらの結果は、式（Ｉ）の化合物及び式（Ｉ）の重水素化誘導体化合物が複数の種類の線維性疾患において治療効果をもたらし得ることを示唆する。
【０１３３】
更に、ＣＣｌ４誘発性肝損傷のインビボモデルにおいて、ＮＴＺは、胆汁うっ滞に関連するマーカーである血中全胆汁酸濃度の病的な増加を防いだ（図７）。したがって、本出願は、抗寄生虫剤ＮＴＺの予想外の抗胆汁うっ滞活性を見出した。ＮＴＺ誘導体である、本明細書に開示される式（Ｉ）の化合物、特に、ＴＺのプロドラッグでもあり、ＮＴＺの活性代謝物である化合物５〜１１も、抗胆汁うっ滞特性を有すると予測される。
【０１３４】
表２：ニタゾキサニド誘導体は、ヒトＨＳＣにおいてα-ＳＭＡタンパク質のＴＧＦβ１誘導性発現を阻害する。
血清除去したＨＳＣを３μMのＮＴＺ誘導体と共に１時間プレインキュベートした後、線維化促進性サイトカインＴＧＦβ１（１ng/mL）で活性化した。４８時間インキュベートした後、α-ＳＭＡの発現をＥＬＩＳＡによって測定した。得られた値をＴＧＦβ１対照に対する阻害率に変換した。データを四重反復の平均として提示する。
【０１３５】
【表２】
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【０１３６】
表３：ＲＭ−５０６１は、ヒトＨＳＣにおいてα-ＳＭＡ及びＣＯＬ１Ａ１のタンパク質のＴＧＦβ１誘導性発現を阻害する。
血清除去したＨＳＣをＲＭ−５０６１と共に１時間プレインキュベートした後、線維化促進性サイトカインＴＧＦβ１（１ng/mL）で活性化した。４８時間インキュベートした後、細胞内α-ＳＭＡの含量及び分泌されたＣＯＬ１Ａ１をＥＬＩＳＡによって測定した。得られた値をＴＧＦβ１対照に対する阻害率に変換した。データを平均（四重反復）として提示する。曲線当てはめ及び半数阻害濃度（ＩＣ５０）の計算は、XLFitソフトウェア5.3.1.3で実施した。
【０１３７】
【表３】
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【０１３８】
参照
【表４】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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