(57)【要約】  本発明は、Ｐ２Ｘ７受容体に結合するアミノ酸配列およびポリペプチドに関する。特に本発明は、Ｐ２Ｘ７受容体に結合する改良された重鎖免疫グロブリン単一可変ドメイン（本明細書では「ＩＳＶ」または「ＩＳＶＤ」とも呼ぶ）、および、かかるＩＳＶＤを含むタンパク質、ポリペプチドおよび他の構築物、化合物、分子、または化学物質に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｐ２Ｘ７受容体に結合する免疫グロブリン単一可変ドメインであって、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＨＹＡＭＧ（配列番号２）であるＣＤＲ１（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＳＳＹＧＳＴＤＹＧＤＳＶＫＧ（配列番号３）であるＣＤＲ２（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＤＥＴＬＧＡＶＰＮＦＲＬＨＥＫＹＥＹＥＹ（配列番号４）であるＣＤＲ３（Kabatによる）；
および、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
および／または、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号１と比較してＥ１Ｄ突然変異を有する）、
ここで：
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１位のアミノ酸残基は、好ましくは、ＬまたはＶから選択され；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の８９位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＶまたはＬから適切に選択され；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択され；
ただしここで、（ｉ）８９位はＴであり；または（ｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、または（ｉｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｉｖ）８９位はＬであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱである、
前記免疫グロブリン単一可変ドメイン。
【請求項２】
Ｐ２Ｘ７受容体に結合する免疫グロブリン単一可変ドメインであって、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＦＳＴＳＴＭＧ（配列番号９）であるＣＤＲ１（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＤＷＳＤＦＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）であるＣＤＲ２（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＨＳＥＴＲＧＧＴＲＹＦＤＲＰＳＬＹＮＹ（配列番号１１）であるＣＤＲ３（Kabatによる）；
および、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
および／または、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号８と比較してＥ１Ｄ突然変異を有する）、ここで：
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１位のアミノ酸残基は、好ましくは、ＬまたはＶから選択され；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の８９位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＶまたはＬから適切に選択され；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択され；
ただしここで、（ｉ）８９位はＴであり；または（ｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、または（ｉｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｉｖ）８９位はＬであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱである、
前記免疫グロブリン単一可変ドメイン。
【請求項３】
請求項１に記載の少なくとも１つの免疫グロブリン単一可変ドメイン、および／または請求項２に記載の少なくとも１つの免疫グロブリン単一可変ドメインを含む、ポリペプチド。
【請求項４】
請求項１に記載の少なくとも１つの免疫グロブリン単一可変ドメイン、および請求項２に記載の少なくとも１つの免疫グロブリン単一可変ドメインを含む、請求項３に記載のポリペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｐ２Ｘ７受容体に結合するアミノ酸配列およびポリペプチドに関する。
特に、本発明は、Ｐ２Ｘ７受容体に結合する改良された重鎖免疫グロブリン単一可変ドメイン（本明細書では「ＩＳＶ」または「ＩＳＶＤ」とも呼ぶ）、および、かかるＩＳＶＤを含む、タンパク質、ポリペプチドおよび他の構築物、化合物、分子、または化学物質に関する。
本発明により提供される抗Ｐ２Ｘ７受容体ＩＳＶＤは、本明細書では「本発明のＰ２Ｘ７結合剤」または「Ｐ２Ｘ７結合剤」とも呼ばれる。本明細書に記載の抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチド、構築物、化合物、分子または化学物質は、本明細書では「本発明のポリペプチド」または「本発明の化合物」とも呼ばれる。
【０００２】
以下のさらなる説明から明らかになるように、本発明は、Ｐ２Ｘ７結合剤の２つの異なるグループを提供し、これらは一般に、本明細書においてそれぞれ「３ｃ２３ベースのＰ２Ｘ７結合剤」、「３ｃ２３ベースの結合剤」または「３ｃ２３ベースのビルディングブロック」、および「１ｃ８１ベースのＰ２Ｘ７結合剤」、「１ｃ８１ベースの結合剤」または「１ｃ８１ベースのビルディングブロック」と呼ばれる。この点において、本発明は、これらのＰ２Ｘ７結合剤およびそれを含む化合物およびポリペプチドだけでなく、少なくとも１種（例えば１または２種）のかかる３ｃ２３ベース結合剤、および少なくとも１種（例えば１または２種）のかかる１ｃ８１ベースの結合剤を含む、二重パラトピックな（biparatopic）（本明細書において定義）ポリペプチドも提供する。
本発明により提供されるポリペプチドおよび化合物は、好ましくは融合タンパク質である。また、本明細書にさらに記載されるように、本発明のポリペプチドは延長された半減期（本明細書において定義）を備えていてもよく、この目的のために、例えば、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質に結合する少なくとも１種のＩＳＶＤも含んでもよい。本発明のポリペプチドは、好ましくは、Ｃ末端伸長Ｘ（ｎ）（本明細書にさらに記載）も含む。
本発明の他の側面、態様、特徴、使用および利点は、本明細書の開示に基づいて当業者には明らかであろう。
【背景技術】
【０００３】
プリンヌクレオチドは、細胞外シグナル伝達分子として十分に確立されている。Ｐ２Ｘ受容体は、例えば脳および脊髄の様々な領域において、速い興奮性伝達を媒介するＡＴＰ応答性のカチオンチャネルである。Ｐ２Ｘ７サブタイプは、ＡＴＰへの長期間の曝露の間にそのイオン選択性を変化させる珍しい特性を有し、その結果、チャネル孔の漸進的な拡張および９００Ｄａもの大きな分子の透過性の発現がもたらされる。Ｐ２Ｘ７受容体は元々、マクロファージ、ミクログリアおよび特定のリンパ球を含む造血起源の細胞において説明されており、Ｃａ２＋およびＮａ＋イオンの流入ならびに炎症促進性サイトカインの放出を媒介する。Ｐ２Ｘ７受容体は、神経変性、慢性炎症および慢性疼痛の重要なメディエーターであるインターロイキン１βのプロセシングおよび放出を調節する能力を介して、ニューロン細胞死に影響を及ぼし得る。Ｐ２Ｘ７受容体の活性化は炎症性刺激を提供し、Ｐ２Ｘ７受容体欠損マウスでは炎症応答が実質的に弱められ、これには神経因性および慢性炎症性疼痛のモデルが含まれる。さらに、Ｐ２Ｘ７受容体活性は、炎症促進性サイトカインの放出を制御することによって、うつ病の病態生理に関与している可能性がある。したがってＰ２Ｘ７受容体は、神経系と免疫系との間の重要な通信リンクを表す可能性がある（Skaper et al., 2010 FASEB J. 24:337-345）。Ｐ２Ｘ７受容体の免疫系重要細胞への局在化は、これらの細胞から重要な炎症性メディエーターを放出するその能力と相まって、治療的利用の標的を提供しつつ、疼痛および神経変性疾患を含む広範囲の疾患の処置におけるＰ２Ｘ７受容体アンタゴニストの潜在的役割を示唆している。
【０００４】
アポトーシス細胞死が疾患の重要なメカニズムであるがんにおいて、アポトーシスに直接作用するＰ２Ｘ７は、正常組織と比較して皮膚がんおよび子宮上皮がんにおいて示されたように、重要な役割を果たす。げっ歯類モデルにおける糖尿病の網膜の早期のアポトーシス細胞死は、眼のその部分におけるＰ２Ｘ７活性化と関連されており、糖尿病性微小血管損傷への関連の可能性を示唆する。Ｐ２Ｘ７受容体多型は、家族ベースの定量的遺伝学研究において高血圧に関連し、Ｐ２Ｘ７の最初のイントロン中の一塩基多型ｒｓ５９１８７４と夜間の拡張期血圧に強い関連性があることが報告されている。Ｐ２Ｘ７受容体は心臓血管系の細胞内で発現され、このシグナル伝達系に影響を及ぼす薬物は、高血圧および血栓性事象の予防における新たな治療法を提供し得る。健康な腎臓でのＰ２Ｘ７受容体の発現は、あったとしてもごくわずかである。対照的に、罹患した腎組織においてはＰ２Ｘ７の発現が増加し、腎疾患の２つのげっ歯類モデルの糸球体の免疫組織化学は、優勢な発現が、有足細胞、内皮および糸球体間質細胞にあることを示している。Ｐ２Ｘ７受容体の潜在的役割が、多嚢胞性腎疾患および腎線維症について記載されている。
【０００５】
ＡＴＰは神経伝達および神経調節において重要な役割を果たすため、Ｐ２Ｘ７を含むプリン受容体サブファミリーは、様々な病的状態に関与する。中枢神経系（ＣＮＳ）障害のこの病態生理には、脳外傷、虚血、神経変性疾患および神経精神病が含まれる。損傷が生じると、大量のＡＴＰが細胞外環境に放出され、これは外傷に対する細胞応答を誘発するために重要である。この状況において、Ｐ２Ｘ４とＰ２Ｘ７の発現レベルが変化し、障害部位への休止ミクログリアの遊走および走化性を刺激し得る。Ｐ２Ｘ７は、ミクログリアの増殖および死を制御する上で重要な役割を果たす。脳虚血は、脳卒中を含むＣＮＳの問題を引き起こし、悪化させ得て、ミクログリアに発現されるＰ２Ｘ７受容体（Ｐ２Ｘ７Ｒ）は、グルコース／酸素欠乏の結果として皮質損傷に関与する可能性がある。神経炎症は、アルツハイマー病およびパーキンソン病などいくつかの神経変性疾患の病因において、主要な役割を果たす。正確なメカニズムは不明であるが、ミクログリアにおけるシグナル伝達経路の調節不全は炎症を増強し得て、シナプス機能障害および最終的には神経細胞死に至る。Ｐ２Ｘ７受容体の発現および機能は、アルツハイマー病患者および種々の神経変性疾患動物モデルの死後の脳において、顕著に上方制御される。これは、神経変性の進行におけるＰ２Ｘ７Ｒ経路の役割を支持する。Ｐ２Ｘ７Ｒのブロッキングは、種々の動物モデルにおける神経病理学の改善をもたらすことが示されている。
【０００６】
まとめると、これらの結果は、Ｐ２Ｘ７Ｒシグナル伝達経路が、アルツハイマー病およびハンチントン病を含む様々な神経変性疾患を処置するための、治療標的を構成することを示している。
Ｐ２Ｘ７受容体に結合することができるＩＳＶＤ（および特にナノボディ）およびそれらの使用は、当分野において、特にWO 2010/070145およびWO 2013/178783から知られている。
WO 2013/178783は、配列番号１２として、３ｃ２３と呼ばれる抗Ｐ２Ｘ７受容体ナノボディを開示する（本明細書中の配列番号８７参照）。本出願では、３ｃ２３と同じ配列を有するが、３ｃ２３と比較してヒト化Ａ１４ＰおよびＱ１０８Ｌ置換を有する標準ナノボディ（本明細書では「標準Ａ」と呼ぶ）が使用される。３ｃ２３のアミノ酸配列および標準Ａのアミノ酸配列（KabatおよびＡｂｍ慣習によるそのＣＤＲと共に；配列番号４と７が同一であることに留意されたい）は、以下の表Ａに、配列番号１および配列番号２〜７として示されている。
【０００７】
WO 2013/178783はまた、配列番号６として、１ｃ８１と呼ばれる抗Ｐ２Ｘ７受容体ナノボディ（本明細書の配列番号８８を参照）を開示する。本出願では、１ｃ８１と同じ配列を有するが、１ｃ８１と比較してヒト化Ａ１４ＰおよびＱ１０８Ｌ置換を有する標準ナノボディ（本明細書では「標準Ｂ」と呼ぶ）が使用される。１ｃ８１および標準Ｂのアミノ酸配列（KabatおよびＡｂｍ慣習によるそのＣＤＲも共に；配列番号１１と１４が同一であることに留意されたい）は、以下の表Ｂに、配列番号８および配列番号９〜１４として示されている。
【０００８】
表Ａ：３ｃ２３、標準ＡおよびそのＣＤＲ
【表１】
2019503987.tif 000002
【０００９】
表Ｂ：１ｃ８１、標準ＢおよびそのＣＤＲ
【表２】
2019503987.tif 000003
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、改良されたＰ２Ｘ７受容体結合剤、特に、改良された抗Ｐ２Ｘ７受容体ＩＳＶＤ、より特に、改良された抗Ｐ２Ｘ７受容体ナノボディを提供することを目的とする。
本発明はまた、少なくとも１種のかかる抗Ｐ２Ｘ７受容体ＩＳＶＤを含む、ポリペプチド、タンパク質および他の化合物および構築物を提供することも目的とする。かかるポリペプチド、タンパク質および他の化合物および構築物は好ましくは、本明細書にさらに記載されている通りである。
より具体的には、本発明は、３ｃ２３および標準Ａのバリアントであり、かついくつかの健康なヒト対象および患者から得た血清中に存在し得る干渉因子（一般に「既存の抗体」と呼ばれる）による結合が減少した、改良されたＰ２Ｘ７受容体結合剤を提供することを目的とする。以下を参照されたい：WO 12／175741、WO 2013/024059、および例えばHolland et al. (J. Clin. Immunol. 2013, 33(7):1192-203）、ならびに、２０１５年５月１３日に出願され「改良された免疫グロブリン可変ドメイン」と題された代理人による同時係属中の未公開のＰＣＴ出願PCT/EP2015/060643。
【００１１】
本発明はまた、少なくとも１種のかかる３ｃ２３ベースの結合剤を含む、ポリペプチド、タンパク質および他の化合物および構築物を提供することを目的とする。かかるポリペプチド、タンパク質および他の化合物および構築物は、好ましくは本明細書にさらに記載される。
本発明はまた、１ｃ８１および標準Ｂのバリアントであり、かつ既存の抗体による結合が減少した、改良されたＰ２Ｘ７受容体結合剤を提供することを目的とする。本発明はさらに、少なくとも１種のかかる１ｃ８１ベースの結合剤を含む、ポリペプチド、タンパク質および他の化合物および構築物を提供することを目的とする。かかるポリペプチド、タンパク質および他の化合物および構築物は、好ましくは本明細書にさらに記載される。
上記のように、好ましい１側面において、本発明は、本発明のこれらの３ｃ２３および／または１ｃ８１ベースのビルディングブロックを含む、二重パラトピック抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドを提供する。
【００１２】
本発明のいくつかの好ましいが非限定的な３ｃ２３ベースのビルディングブロックは、図２に配列番号１５〜４２として列挙され、図３Ａは、標準Ａ、３ｃ２３および配列番号１５〜４２のアラインメントを示す。
本発明のいくつかの好ましいが非限定的な１ｃ８１ベースのビルディングブロックは、図２に配列番号４３〜７０として列挙され、図３Ｂは、標準Ｂ、１ｃ８１および配列番号４３〜７０のアラインメントを示す。
【００１３】
図３および図４に示されるＰ２Ｘ７結合剤のうち、配列番号２９〜４２および５７〜７０の配列は、Ｃ末端アラニン伸長を、すなわち、通常のＣ末端配列ＶＴＶＳＳ（配列番号８４、標準Ａに存在）と比較して、ＩＳＶＤ配列のＣ末端（「１１４位」と呼ばれることもある）のアラニン残基を有する、本発明のＰ２Ｘ７受容体結合剤の例である。WO 12/175741に記載されているように（また例えばWO 2013/024059およびPCT/EP2015/060643 WOにも）、このＣ末端アラニン伸長は、いわゆる「既存の抗体」（ＩｇＧと仮定）の、ＩＳＶのＣ末端領域に位置する推定上のエピトープへの結合を防ぐことができる。このエピトープは、他の残基のなかでも、Ｃ末端配列ＶＴＶＳＳの表面に露出したアミノ酸残基ならびに１４位のアミノ酸残基（およびアミノ酸配列中のこれの隣の／近くのアミノ酸残基、例えば１１位、１３位および１５位など）を含むと推定され、また８３位のアミノ酸残基（およびアミノ酸配列中のこれの隣の／近くのアミノ酸残基、例えば８２位、８２ａ位、８２ｂ位、および８４位）、および／または１０８位のアミノ酸残基（およびアミノ酸配列中のこれの隣の／近くのアミノ酸残基、例えば１０７位）も含み得る。
【００１４】
しかし、かかるＣ末端アラニン（または一般にＣ末端伸長）の存在は、ある範囲の対象（健康な対象と患者の両方）からの血清に見出され得る「既存の抗体」の結合を大きく減少させる（そして多くの場合、本質的に完全に防止する）ことができるにもかかわらず、いくつかの対象からの血清（例えば、ＳＬＥなどのいくつかの免疫疾患を有する患者からの血清）は、ＩＳＶがかかるＣ末端アラニン（またはより一般的に、かかるＣ末端伸長）を含む場合であっても、ＩＳＶのＣ末端領域（かかる領域が露出されている場合）に結合可能な既存の抗体を含むことができることが見出されている。再度、２０１５年５月１３日に出願され「改良された免疫グロブリン可変ドメイン」と題された代理人による同時係属中の未公開のＰＣＴ出願PCT/EP2015/060643を参照されたい。
【００１５】
したがって、本発明の１つの特定の目的は、Ｐ２Ｘ７受容体結合剤（および特に、標準Ａまたは標準Ｂのいずれかの改良されたバリアントであるＰ２Ｘ７受容体結合剤）であって、いわゆる「既存の抗体」による、および特に、PCT/EP2015/060643に記載されている種類のもの（すなわち、Ｃ末端伸長の存在下でさえも、ＩＳＶの露出したＣ末端領域に結合することができるこれらの既存の抗体）による減少した結合を有する、前記Ｐ２Ｘ７受容体結合剤を提供することである。前述のように、本発明により提供されるＰ２Ｘ７結合剤はまた、ビルディングブロックとして適切に使用して、既存の抗体による結合が低いかまたは減少した、本発明のポリペプチドを提供することができる。再度、かかるポリペプチドは、好ましくは本明細書にさらに記載される。
【００１６】
一般に、本発明により提供されるＰ２Ｘ７結合剤は、本明細書にさらに記載されているように、１１位、８９位、１１０位および／または１１２位に突然変異（の適切な組み合わせ）を含むであろう。
表Ｃは、本発明のＰ２Ｘ７結合剤の１１位、８９位、１１０位および１１２位に存在し得るアミノ酸残基の、いくつかの好ましいが非限定的な、可能性ある組み合わせを列挙する。特に好ましい組み合わせを太字で示し、最も好ましい組み合わせを太字／下線で示す。
【００１７】
表Ｃ：１１位、８９位、１１０位および１１２位のアミノ酸の可能な組み合わせ。
【表３】
2019503987.tif 000004
【００１８】
本発明のＰ２Ｘ７結合剤が一価の形態（format）で使用される場合、またはそれらが本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合、Ｐ２Ｘ７結合剤（およびそれによって得られる本発明のポリペプチド）は、好ましくは、アスパラギン酸残基（Ｄ）を１位に有する（例えば、それぞれ配列番号１５〜４２または４３〜７０の配列と比較して、Ｅ１Ｄ突然変異を有する）。
また、本発明のＰ２Ｘ７結合剤が一価の形態で使用される場合、またはそれらが本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合、Ｐ２Ｘ７結合剤（およびそれによって得られる本発明のポリペプチド）は、好ましくは、Ｃ末端伸長Ｘ（ｎ）を有する。Ｃ末端伸長等は、本明細書およびWO 2012/175741およびPCT/EP2015/06043にさらに記載されており、好ましくは式（Ｘ）ｎで表されるものであり、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは天然に存在するアミノ酸残基から独立して選択され（ただし好ましい１側面によれば、システイン残基を含まない）、および好ましくは独立して、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される。
【００１９】
かかるＣ末端伸長Ｘ（ｎ）の、いくつかの好ましいが非限定的な例によれば、Ｘおよびｎは、以下であることができる：
（ａ）ｎ＝１およびＸ＝Ａｌａ；
（ｂ）ｎ＝２および各Ｘ＝Ａｌａ；
（ｃ）ｎ＝３および各Ｘ＝Ａｌａ；
（ｄ）ｎ＝２および少なくとも１つのＸ＝Ａｌａ（残りのアミノ酸残基Ｘ（単数または複数）は、任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕおよび／またはＩｌｅから独立して選択される）；
（ｅ）ｎ＝３および少なくとも１つのＸ＝Ａｌａ（残りのアミノ酸残基Ｘ（単数または複数）は、任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕおよび／またはＩｌｅから独立して選択される）；
（ｆ）ｎ＝３および少なくとも２つのＸ＝Ａｌａ（残りのアミノ酸残基Ｘ（単数または複数）は、任意の天然アミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕおよび／またはＩｌｅから独立して選択される）；
【００２０】
（ｇ）ｎ＝１およびＸ＝Ｇｌｙ；
（ｈ）ｎ＝２および各Ｘ＝Ｇｌｙ；
（ｉ）ｎ＝３および各Ｘ＝Ｇｌｙ；
（ｊ）ｎ＝２および少なくとも１つのＸ＝Ｇｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘ（単数または複数）は、任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕおよび／またはＩｌｅから独立して選択される）；
（ｋ）ｎ＝３および少なくとも１つのＸ＝Ｇｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘ（単数または複数）は、任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕおよび／またはＩｌｅから独立して選択される）；
（ｌ）ｎ＝３および少なくとも２つのＸ＝Ｇｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘ（単数または複数）は、任意の天然アミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕおよび／またはＩｌｅから独立して選択される）；
（ｍ）ｎ＝２および各Ｘ＝ＡｌａまたはＧｌｙ；
（ｎ）ｎ＝３および各Ｘ＝ＡｌａまたはＧｌｙ；
【００２１】
（ｏ）ｎ＝３および少なくとも１つのＸ＝ＡｌａまたはＧｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘ（単数または複数）は、任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕおよび／またはＩｌｅから独立して選択される）；または
（ｐ）ｎ＝３および少なくとも２つのＸ＝ＡｌａまたはＧｌｙ（残りのアミノ酸残基Ｘ（単数または複数）は、任意の天然アミノ酸から独立して選択されるが、好ましくはＶａｌ、Ｌｅｕおよび／またはＩｌｅから独立して選択される）；
ここで（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｍ）および（ｎ）の側面が特に好ましく、ここでｎ＝１または２の側面が好ましく、およびｎ＝１の側面が特に好ましい。
【００２２】
好ましくは、本発明のポリペプチド中に存在する任意のＣ末端伸長は、（遊離の）システイン残基を含まないことにも留意すべきである（ただし、前記システイン残基が、例えばペグ化などの、さらなる官能化のために使用されるかまたは意図されない限り）。
有用なＣ末端伸長のいくつかの具体的だが非限定的な例は、次のアミノ酸配列である：Ａ、ＡＡ、ＡＡＡ、Ｇ、ＧＧ、ＧＧＧ、ＡＧ、ＧＡ、ＡＡＧ、ＡＧＧ、ＡＧＡ、ＧＧＡ、ＧＡＡまたはＧＡＧ。
本発明はまた、配列最適化３ｃ２３および１ｃ８１バリアントを含む多数の配列最適化免疫グロブリン単一可変ドメインも提供する。
【００２３】
特に、配列最適化免疫グロブリン単一可変ドメインは、本明細書の免疫グロブリン単一可変ドメインについて一般的に定義されているが、ただし少なくとも１つのアミノ酸残基が存在している（特に、フレームワーク残基の少なくとも１つにおいて）アミノ酸配列であって、ヒト化置換（本明細書に定義される）であるか、および／またはこれに対応するものである。いくつかの好ましいが非限定的なヒト化置換（およびそれらの適切な組み合わせ）は、本明細書の開示に基づいて当業者に明らかになるであろう。さらに、または代替的に、他の潜在的に有用なヒト化置換を、天然に存在するＶＨＨ配列のフレームワーク領域の配列を１つ以上の密接に関連するヒトＶＨ配列の対応するフレームワーク配列と比較することによって、確かめることができ、その後、こうして決定された１つ以上の潜在的に有用なヒト化置換（またはそれらの組み合わせ）を、前記ＶＨＨ配列に導入することができ（本明細書にさらに記載された、それ自体知られた任意の方法で）、得られたヒト化ＶＨＨ配列は、標的に対する親和性、安定性、発現の容易さおよびレベル、および／または他の所望の特性について、試験することができる。このようにして、限定された試行錯誤によって、他の適切なヒト化置換（またはその適切な組み合わせ）を、当業者は本明細書の開示に基づいて決定することができる。また、前述に基づいて、免疫グロブリン単一可変ドメイン（のフレームワーク領域）は、部分的にヒト化されていても、完全にヒト化されていてもよい。また、前述のように、本発明により提供されるポリペプチドは、好ましくは、延長された半減期（本明細書で定義される）を有する。好ましくは、この目的のために、本発明のポリペプチドはまた、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質に結合する少なくとも１つ（例えば１つ）のＩＳＶＤも含む。この目的のために本発明のポリペプチドに含まれ得る血清アルブミン結合性ＩＳＶＤの好ましい例は、本明細書の開示に基づいて当業者には明らかであろう。
【００２４】
本発明はまた、以下に関する：本明細書に記載された本発明のＰ２Ｘ７受容体結合剤（すなわち、１種以上、例えば１または２種の３ｃ２３ベースのビルディングブロックおよび／または１種以上、例えば１または２種の１ｃ８１ベースのビルディングブロックなど）を含むかまたは本質的にそれからなる、タンパク質、ポリペプチドおよび他の構築物、分子または化学物質；本発明のＰ２Ｘ７受容体結合剤を発現／生成するための、および／またはこれを含むタンパク質、ポリペプチドおよび他の構築物、分子または化学物質を発現／生成するための、方法；本発明のＰ２Ｘ７受容体結合剤を、および／またはこれを含むタンパク質、ポリペプチドおよび他の構築物、分子または化学物質を含む、組成物および製品（例えば医薬組成物および製品など）；本発明のＰ２Ｘ７受容体結合剤をコードする、および／またはこれを含むタンパク質またはポリペプチドをコードする、ヌクレオチド配列および核酸；および、本発明のＰ２Ｘ７受容体結合剤の、およびこれを含むタンパク質、ポリペプチドおよび他の構築物、分子または化学物質の、使用（および特に、治療的、予防的および診断的な使用）。
【００２５】
本発明のこれらおよび他の側面、態様、利点、用途および使用は、本明細書のさらなる説明から明らかになるであろう。
本明細書において、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン中のアミノ酸残基／位置は、Kabatによる番号付けを用いて示される。便宜上、図１は、本明細書において具体的に言及されるいくつかのアミノ酸位置および、いくつかの代替的番号付けシステム（例えば、ＡｈｏおよびＩＭＧＴ）によるそれらの番号付けを列挙した表を提供する。Kabatの番号付けは決定的であり、他の番号付けシステムは参考としてのみ与えられている）。
【００２６】
ＣＤＲに関しては、当技術分野で知られているように、ＶＨまたはＶＨＨ断片のＣＤＲを定義および記載するための複数の慣習があり、例えば、Kabatによる定義（配列の可変性に基づいており、最も一般的に使用される）、およびChothiaによる定義（構造ループ領域の位置に基づく）である。例えば、ウェブサイトhttp://www.bioinf.org.uk/abs/を参照されたい。本明細書および特許請求の範囲の目的に対しては、KabatによるＣＤＲも言及され得るが、ＣＤＲは最も好ましくはＡｂｍ定義（Oxford MolecularのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアに基づく）に基づいて定義され、これはKabatとChothiaの定義の間の最適な妥協案であると考えられている。再度、ウェブサイトhttp://www.bioinf.org.uk/abs/を参照されたい。
【００２７】
また、本明細書においては：
−  用語「免疫グロブリン単一可変ドメイン」（「ＩＳＶ」または「ＩＳＶＤ」とも呼ばれる）は一般に、別の可変ドメインと相互作用することなく（例えば、従来の４鎖モノクローナル抗体のＶＨドメインとＶＬドメインとの間に必要とされる、ＶＨ／ＶＬ相互作用なしで）、機能的抗原結合部位を形成することができる、免疫グロブリン可変ドメイン（これは重鎖または軽鎖ドメインであってよく、ＶＨ、ＶＨＨまたはＶＬドメインを含む）を指すために使用される。ＩＳＶＤの例は当業者には明らかであり、例えば、ナノボディ（ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨおよび／またはラクダ化ＶＨ、例えばラクダ化ヒトＶＨなどを含む）、ＩｇＮＡＲ、ドメイン、ＶＨドメインであるか、またはＶＨドメインに由来する（単一ドメイン）抗体（例えば、ｄＡｂ（商標）など）、およびＶＬドメインであるか、またはＶＬドメインに由来する（単一ドメイン）抗体（例えば、ｄＡｂ（商標）など）である。本明細書で特に他を明記しない限り、重鎖可変ドメイン（ＶＨドメインまたはＶＨＨドメインなど）に基づくか、および／またはこれに由来するＩＳＶＤが、一般に好ましい。最も好ましくは、本明細書で特に他を明記しない限り、ＩＳＶＤはナノボディである。
【００２８】
−  用語「ナノボディ」は一般に、WO2008/010079またはWO2009/138519に定義されているように、したがって特定の側面においては一般に、ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨまたはラクダ化ＶＨ（例えばラクダ化ヒトＶＨなど）を、または一般に、配列最適化ＶＨＨ（例えば、化学的安定性および／または溶解性、既知のヒトフレームワーク領域との最大重複および最大発現のために最適化されたものなど）を意味する。ナノボディ（Nanobody）またはナノボディ（Nanobodies）という用語はAblynx N.V.の登録商標であり、したがって、Nanobody（登録商標）および／またはNanobodies（登録商標）とも呼ばれ得ることに留意されたい。
【００２９】
−  一般に、本明細書で別段の指示がない限り、本明細書で言及されるＩＳＶＤ、ナノボディ、ポリペプチド、タンパク質および他の化合物および構築物は、ヒトにおける（および／または任意に温血動物、および特に哺乳動物における）疾患または障害の、予防または処置での使用が意図される。したがって一般に、本明細書に記載のＩＳＶＤ、ナノボディ、ポリペプチド、タンパク質および他の化合物および構築物は、好ましくは、（生物学的）薬物または他の薬学的もしくは治療的に活性な化合物、および／または医薬品または組成物として使用することができ、および／またはその一部であることができる。かかる薬物、化合物または生成物は、好ましくはヒトに対する投与のために、例えばかかる予防または処置を必要とする対象の予防または処置のため、または例えば臨床試験の一部として、適している。本明細書にさらに記載されるように、この目的のために、かかる薬物または化合物は、本発明により提供されるＩＳＶＤ以外の、他の部分、実体または結合単位を含むことができる（これは、本明細書に記載されているように、ＩＳＶＤベースまたはナノボディベースの生物学的製剤の薬物動態特性または薬力学特性、例えばその半減期などに影響を与える、１つ以上の他のさらなる治療部分または１つ以上の他の部分であってもよい）。かかるさらなる治療部分または他の部分の適切な例は、当業者には明らかであり、例えば、一般に、任意の治療的に活性なタンパク質、ポリペプチドまたは他の結合ドメインもしくは結合単位を含むことができる。また、本明細書にさらに記載するように、本明細書に記載のＩＳＶＤまたはナノボディは、（ヒト）血清アルブミンなどの（ヒト）血清タンパク質に対して指向されることができ、かかるＩＳＶＤまたはナノボディは、特に、治療部分および化合物において、またはその半減期を延長するために、治療的使用を見出すことができる（例えば、本明細書に記載のＩＳＶベースの生物学的製剤における、またはそのためのもの）。例えば、WO 2004/041865、WO 2006/122787およびWO 2012/175400を参照；これらには一般的に、半減期延長のための血清−アルブミン結合性ナノボディの使用が記載されている。また、本明細書において、特に他を明記しない限り、本明細書に記載のすべての用語は、WO 2009/138519（もしくはWO 2009/138519に引用されている先行技術）またはWO 2008/020079（もしくはWO 2008/020079に引用されている先行技術）に与えられた意味を有する。また、方法または技術が本明細書に具体的に記載されていない場合、それは、WO 2009/138519（もしくはWO 2009/138519に記載されている従来技術）またはWO 2008/020079（もしくはWO 2008/020079に記載されている従来技術）に記載のようにして、実施することができる。また、本明細書に記載のように、本発明の任意のＩＳＶＤまたは化合物を含む任意の医薬品または組成物は、医薬品または組成物における使用のための（すなわち、意図される医薬品形態に応じた）それ自体が知られている１つ以上のさらなる成分、および／または例えば、治療的使用のために意図された（すなわち、組み合わせ製品を提供するための）、１つ以上の他の化合物または活性成分も、含むことができる。
【００３０】
また、本明細書または特許請求の範囲で使用される場合、以下の用語は、WO 2009/138519号の６２〜７５頁に与えられているものと同じ意味を、および／または適用可能な場合はこれに記載された方法で決定されたものと同じ意味を有する：「アゴニスト」、「アンタゴニスト」、「インバースアゴニスト」「非極性、非荷電アミノ酸残基」、「極性非荷電アミノ酸残基」、「極性荷電アミノ酸残基」、「配列同一性」、「まったく同じ」および「アミノ酸相違（２つのアミノ酸配列の配列比較を指す場合）」、「本質的に単離された（形態）（における）」、「ドメイン」、「結合ドメイン」、「抗原決定基」、「エピトープ」、（抗原に）「対する」、「指向される」、「特異性」および「半減期」。さらに、用語「調節する」および「調節すること」、「相互作用部位」、「特異的」、「クロスブロック」、「クロスブロックされた」および「クロスブロッキング」および「本質的にｐＨとは無関係」は、Ablynx N.V.のWO 2010/130832の７４〜７９頁に定義されている（および／またはこれに記載のようにして決定される）。また、本発明の構築物、化合物、タンパク質またはポリペプチドに言及する場合、「一価」、「二価」（または「多価」）、「二重特異性」（または「多特異性」）、および「二重パラトピック」（または「多重パラトピック（multiparatopic）」）などの用語は、WO 2009/138519、WO 2010/130832またはWO 2008/020079で与えられている意味を有する。
【００３１】
本明細書で言及されるＩＳＤＮ、ナノボディ、ＩＳＶＤベースの生物学的製剤、ナノボディベースの生物学的製剤または他のアミノ酸配列、化合物またはポリペプチドに関連して本明細書で使用される「半減期」という用語は、一般に、WO 2008/020079の５７頁、段落ｏ）に記載されるように定義することができ、その中で言及されているように、アミノ酸配列、化合物またはポリペプチドの血清濃度が、in vivoで例えば配列または化合物の分解によって、および／または自然のメカニズムによる配列または化合物のクリアランスまたは隔離（sequestration）によって、５０％減少するのにかかる時間を指す。本発明のアミノ酸配列、化合物またはポリペプチドのin vivo半減期は、それ自体知られている任意の方法、例えば薬物動態分析により、決定することができる。適切な技術は当業者には明らかであり、例えば、WO 2008/020079の５７頁、段落ｏ）に記載されるようなものであってよい。また、WO 2008/020079の５７頁、段落ｏ）でも述べられているように、半減期は、ｔ１／２−α、ｔ１／２−βおよび曲線下面積（ＡＵＣ）などのパラメータを用いて表すことができる。この点において、本明細書で使用される「半減期」という用語は、特に、ｔ１／２−βまたは終末半減期を指す（ここではｔ１／２−α、および／またはＡＵＣ、またはその両方は、考慮しないでよい）。例えば、以下の実験パート、ならびに次のような標準的なハンドブックを参照されたい：Kenneth, A et al: Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for PharmacistおよびPeters et al, Pharmacokinete analysis: A Practical Approach (1996)。さらに、"Pharmacokinetics", M Gibaldi & D Perron, published by Marcel Dekker, 2nd Rev. edition (1982)も参照されたい。同様に、用語「半減期の延長」または「延長された半減期」もまた、WO 2008/020079の５７頁、段落ｏ）に定義されており、特にｔ１／２−βの増加を指し、ここでｔ１／２−αおよび／またはＡＵＣまたはその両方の増加は、伴う場合も伴わない場合もある。
【００３２】
用語が本明細書で具体的に定義されていない場合、当業者には明らかであろう当技術分野における通常の意味を有する。参考文献は、例えば、次のような標準的なハンドブック：Sambrook et al, "Molecular Cloning: A Laboratory Manual" (2nd.Ed.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)；F. Ausubel et al, eds., "Current protocols in molecular biology", Green Publishing and Wiley Interscience, New York (1987)；Lewin, “Genes II”, John Wiley & Sons, New York, N.Y., (1985)；Old et al., “Principles of Gene Manipulation: An Introduction to Genetic Engineering”, 2nd edition, University of California Press, Berkeley, CA (1981)；Roitt et al., “Immunology” (6th. Ed.), Mosby/Elsevier, Edinburgh (2001)；Roitt et al., Roitt’s Essential Immunology, 10th Ed. Blackwell Publishing, UK (2001)；およびJaneway et al., “Immunobiology” (6th Ed.), Garland Science Publishing/Churchill Livingstone, New York (2005)、ならびに、本明細書に引用される一般的背景技術である。
【００３３】
また、本明細書にすでに示されているように、ナノボディのアミノ酸残基は、Riechmann and Muyldermans, J. Immunol. Methods 2000 Jun 23; 240 (1-2): 185-195の論文においてラクダ科動物からのＶＨＨドメインに適用された番号付け、または本明細書で言及されているように、Kabat et al. (Sequence of proteins of immunological interest”, US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publication No. 91)により与えられたＶＨの一般的な番号付けに従って番号付けされている。この番号付けによれば、ナノボディのＦＲ１は、１〜３０位のアミノ酸残基を含み、ナノボディのＣＤＲ１は、３１〜３５位のアミノ酸残基を含み、ナノボディのＦＲ２は、３６〜４９位のアミノ酸を含み、ナノボディのＣＤＲ２は、５０〜６５位のアミノ酸残基を含み、ナノボディのＦＲ３は、６６〜９４位のアミノ酸残基を含み、ナノボディのＣＤＲ３は、９５〜１０２位のアミノ酸残基を含み、ナノボディのＦＲ４は、１０３〜１１３位のアミノ酸残基を含む。［この点について、ＶＨドメインおよびＶＨＨドメインに関して当技術分野でよく知られているように、各ＣＤＲのアミノ酸残基の総数は変化してもよく、Kabatの番号付けによって示されるアミノ酸残基の総数に一致しない場合もある（すなわち、Kabatの番号付けによる１つ以上の位置は、実際の配列において占有されないかもしれないし、または実際の配列はKabatの番号付けによって許容される数より多くのアミノ酸残基を含み得る）。これは、一般的に、Kabatによる番号付けが、実際の配列中のアミノ酸残基の実際の番号付けに一致することも、一致しないこともあることを意味する。しかしながら一般的に、Kabatの番号付けによれば、ＣＤＲのアミノ酸残基の数にかかわらず、以下のことが言える：Kabatの番号付けによる１位は、ＦＲ１の開始に対応し、逆もまた同様であり、Kabatの番号付けによる３６位は、ＦＲ２の開始に対応し、逆もまた同様であり、Kabatの番号付けによる６６位は、ＦＲ３の開始に対応し、逆もまた同様であり、Kabatの番号付けによる１０３位は、ＦＲ４の開始に対応し、逆もまた同様である。］
【００３４】
ＶＨドメインのアミノ酸残基を番号付けするための代替方法であって、ラクダ科動物由来のＶＨＨドメインおよびナノボディに類似の様式で適用することができるものは、Chothia et al. (Nature 342, 877-883 (1989))に記載された方法、いわゆる「ＡｂＭの定義」およびいわゆる「接触の定義（contact definition）」である。しかしながら、本説明、側面および図においては、別段の指示がない限り、RiechmannおよびMuyldermansによってＶＨＨドメインに適用されたKabatの番号付けに従う。
図、任意の配列表および実験パート／実施例は、本発明をさらに説明するためだけに与えられ、本明細書に明示的に別段の指示がない限り、本発明の範囲および／または添付の特許請求の範囲を決して限定するものとして翻訳または解釈されるべきではないことにも、留意すべきである。
【００３５】
本発明の３ｃ２３ベースの結合剤の説明．
一般に、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号１または８７の配列と比較した突然変異）を含む、配列番号１（標準Ａ）と３ｃ２３（配列番号８７）のバリアントである：
−  ８９Ｔ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ。
【００３６】
特に、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤において：
−  １１位のアミノ酸残基は、好ましくはＬまたはＶから選択され；および
−  ８９位のアミノ酸残基は、好ましくはＴ、ＶまたはＬから適切に選択され；および
−  １１０位のアミノ酸残基は、好ましくはＴ、ＫまたはＱから適切に選択され；および
−  １１２位のアミノ酸残基は、好ましくはＳ、ＫまたはＱから適切に選択され；
ただしここで、（ｉ）８９位はＴであり；または（ｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、または（ｉｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｉｖ）８９位はＬであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱである。
【００３７】
８９位がＴであるか、または、１１位がＶでありかつ８９位がＬである（任意に、１１０Ｋもしくは１１０Ｑ突然変異および／または１１２Ｋもしくは１１２Ｑ突然変異との適切な組み合わせ、および特に１１０Ｋもしくは１１０Ｑ突然変異との組み合わせでの）３ｃ２３ベースの結合剤が、特に好ましい。さらにより好ましいのは、１１位がＶであり、かつ８９位がＬであり、任意に１１０Ｋまたは１１０Ｑ突然変異を有する、３ｃ２３ベースの結合剤である。
本明細書にさらに記載するように、本発明の３ｃ２３ベースのビルディングブロックである本発明のＰ２Ｘ７受容体結合剤は、好ましくは、３ｃ２３および標準Ａに存在するＣＤＲ（すなわちＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）と同じ組み合わせを有する。
【００３８】
したがって、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、好ましくは以下のＣＤＲ（Kabat慣習による）を含む:
−  アミノ酸配列ＨＹＡＭＧ（配列番号２）であるＣＤＲ１（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＳＳＹＧＳＴＤＹＧＤＳＶＫＧ（配列番号３）であるＣＤＲ２（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＤＥＴＬＧＡＶＰＮＦＲＬＨＥＫＹＥＹＥＹ（配列番号４）であるＣＤＲ３（Kabatによる）。
代替的に、ＣＤＲがＡｂｍ慣習に従って与えられる場合、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、好ましくは、以下のＣＤＲを含む：
−  アミノ酸配列ＧＲＴＦＲＨＹＡＭＧ（配列番号５）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＳＳＹＧＳＴＤ（配列番号６）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＤＥＴＬＧＡＶＰＮＦＲＬＨＥＫＹＥＹＥＹ（配列番号７、これは配列番号４と同じ）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）。
【００３９】
３ｃ２３ベースの結合剤は、好ましくは以下もまた有する：
−  配列番号１の標準アミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；および／または、
−  配列番号１の標準アミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）。
【００４０】
本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤の様々な側面および好ましい側面において、配列番号１に対する配列同一性の程度および／または本発明のかかる結合剤に存在し得る「アミノ酸相違」の数および種類（すなわち、配列番号１の配列と比較した）については、（ｉ）３ｃ２３ベースの結合剤が、配列番号１の配列と、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性の程度を有する（ここで、ＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、ならびに関与する特定の側面によって必要とされる１１位、８９位、１１０位、および／または１１２位での突然変異は、配列同一性の程度の決定には考慮しない）と言われる場合；および／または（ｉｉ）３ｃ２３ベースの結合剤が、配列番号１の配列と、７個以下、好ましくは５個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」を有する（再度、存在し得る任意のＣ末端伸長を考慮せず、関与する特定の側面によって必要とされる１１位、８９位、１１０位、および／または１１２位での突然変異は考慮しない）と言われる場合には、これはまた、配列番号１の配列と比べて、関与する特定の側面によって必要とされる１１位、８９位、１１０位、および／または１１２位での突然変異以外のアミノ酸相違を有しない配列、および存在し得る任意のＣ末端伸長もまた含む。
【００４１】
したがって、本発明の１つの特定の側面において、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、配列番号１と１００％の同一性（ＣＤＲを含むが、本明細書に開示の１１位、８９位、１１０位、および／または１１２位での突然変異または突然変異の組み合わせ、および／または存在し得る任意のＣ末端伸長は考慮しない）を有してもよく、および／または、配列番号１とのアミノ酸相違（すなわち、本明細書に開示の１１位、８９位、１１０位、および／または１１２位での突然変異または突然変異の組み合わせおよび存在し得る任意のＣ末端伸長以外）を有しなくてもよい。
任意のアミノ酸相違が存在する場合（すなわち、任意のＣ末端伸長、および関与する特定の側面によって必要とされる１１位、８９位、１１０位、および／または１１２位での突然変異に加えて）、これらのアミノ酸相違は、ＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域に存在するが、それらは好ましくは、フレームワーク領域（Ａｂｍ慣習によって定義されるもの、すなわちＡｂｍ慣習に従って定義されるＣＤＲ内にはない）のみに存在する、すなわち、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、配列番号１に存在するのと同じＣＤＲ（Ａｂｍ慣習に従って定義される）を有することになる。
【００４２】
また、３ｃ２３ベースの結合剤が、配列番号１の配列と１つ以上のアミノ酸相違を有する場合（関与する特定の側面によって必要とされる１１位、８９位、１１０位、および／または１１２位での突然変異に加えて）、存在し得るかかる突然変異／アミノ酸相違（すなわち、配列番号１の配列と比較した）のいくつかの具体的だが非限定的な例は、例えばＡ１４Ｐ、Ｇ６０Ａ、Ｄ７３Ｎ、Ａ７４Ｓ、Ｐ７９Ｙおよび／またはＫ８３Ｒであるか、または、これらの突然変異の２つ以上（および最大ですべてを含む）の任意の適切な組み合わせであり、例えば、特に好ましい配列番号１３６〜１４３、１５４〜１６１および１６９〜１７６によって表されるものなどである。突然変異の他の例は、１つ以上の適切な「ヒト化」置換（の適切な組み合わせ）であり；例えばWO 2009/138519（またはWO 2009/138519に引用されている先行技術）およびWO 2008/020079（またはWO 2008/020079に引用されている先行技術）、ならびにWO 2008/020079の表Ａ−３〜Ａ−８（可能性のあるヒト化置換を示すリストである）を参照されたい。
【００４３】
また、３ｃ２３ベースの結合剤が一価の形態であるか、または本発明のポリペプチドのＮ末端部分に存在し、および／またはＮ末端部分を形成する場合、これは好ましくは１位にＤを（すなわち、標準Ａと比較してＥ１Ｄ突然変異を）含む。したがって、さらなる側面において、本発明は、そのＮ末端に３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書にさらに記載）を有する本発明のポリペプチド（本明細書にさらに記載）に関し、ここで前記３ｃ２３ベースの結合剤は、例えば１位にＤを有し、例えば、配列番号１５４〜１６１および１６９〜１７６である。
さらに、３ｃ２３ベースの結合剤が一価の形態であるか、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在し、および／またはＣ末端を形成する場合、それは好ましくは、式（Ｘ）ｎのＣ末端伸長を有し、式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは天然に存在するアミノ酸残基から独立して選択され（ただし好ましい１側面によれば、いかなるシステイン残基も含まない）、および好ましくは独立して、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択され、例えば、配列番号１６９〜１７６である。
【００４４】
かかるＣ末端伸長Ｘ（ｎ）のいくつかの好ましいが非限定的な例によれば、Ｘおよびｎは、本発明のポリペプチドについて本明細書にさらに記載されるようなものであることができる。
本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤が、１１０位または１１２位に突然変異を（任意に、本明細書に記載の１１位および／または８９位の突然変異と組み合わせて）含む場合、フレームワーク４のＣ末端アミノ酸残基（１０９位から開始）は、以下であり得る：（ｉ）Ｃ末端伸長が存在しない場合：ＶＴＶＫＳ（配列番号７２）、ＶＴＶＱＳ（配列番号７３）、ＶＫＶＳＳ（配列番号７４）またはＶＱＶＳＳ（配列番号７５）；または（ｉｉ）Ｃ末端伸長が存在する場合：ＶＴＶＫＳＸ（ｎ）（配列番号７６）、ＶＴＶＱＳＸ（ｎ）（配列番号７７）、ＶＫＶＳＳＸ（ｎ）（配列番号７８）またはＶＱＶＳＳＸ（ｎ）（配列番号７９）、例えばＶＴＶＫＳＡ（配列番号：８０）、ＶＴＶＱＳＡ（配列番号８１）、ＶＫＶＳＳＡ（配列番号：８２）またはＶＱＶＳＳＡ（配列番号８３）。本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤が、１１０位または１１２位に突然変異を含まない場合（しかし本明細書に記載の１１位および／または８９位の突然変異のみを含む）、フレームワーク４のＣ末端アミノ酸残基（１０９位から開始）は、通常、以下のいずれかである：（ｉ）Ｃ末端伸長が存在しない場合：ＶＴＶＳＳ（配列番号８４）（配列番号１の配列におけるように）；または（ｉｉ）Ｃ末端伸長が存在する場合：ＶＴＶＳＳＸ（ｎ）（配列番号８５）、例えばＶＴＶＳＳＡ（配列番号８６）など。これらのＣ末端配列において、Ｘおよびｎは、Ｃ末端伸長について本明細書で定義されている通りである。
【００４５】
したがって、第１の側面において、３ｃ２３ベースの結合剤は、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＨＹＡＭＧ（配列番号２）であるＣＤＲ１（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＳＳＹＧＳＴＤＹＧＤＳＶＫＧ（配列番号３）であるＣＤＲ２（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＤＥＴＬＧＡＶＰＮＦＲＬＨＥＫＹＥＹＥＹ（配列番号４）であるＣＤＲ３（Kabatによる）；
および、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
【００４６】
および／または、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；
【００４７】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号１と比較してＥ１Ｄ突然変異を有する）、
ここで：
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１位のアミノ酸残基は、好ましくは、ＬまたはＶから選択され；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の８９位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＶまたはＬから適切に選択され；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択され；
ただしここで、（ｉ）８９位はＴであり；または（ｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、または（ｉｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｉｖ）８９位はＬであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱである。
【００４８】
さらなる態様において、３ｃ２３ベースの結合剤は、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＨＹＡＭＧ（配列番号２）であるＣＤＲ１（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＳＳＹＧＳＴＤＹＧＤＳＶＫＧ（配列番号３）であるＣＤＲ２（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＤＥＴＬＧＡＶＰＮＦＲＬＨＥＫＹＥＹＥＹ（配列番号４）であるＣＤＲ３（Kabatによる）；
および、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
【００４９】
および／または、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
【００５０】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号１と比較してＥ１Ｄ変異を有する）、
ただしここで、前記３ｃ２３ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号１のアミノ酸配列と比較した突然変異）を次の位置に含むようにする（Kabatによる番号付け）：
−  ８９Ｔ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ。
【００５１】
前述のように、３ｃ２３ベースの結合剤が本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合（本明細書で定義するように）、３ｃ２３ベースの結合剤（およびその結果得られる本発明のポリペプチド）は、好ましくは、本発明のポリペプチドについて本明細書で記載されている、および／またはWO 2012/175741もしくはPCT/EP2015/060643に記載されているような、Ｃ末端伸長Ｘ（ｎ）を有する。
前述のように、本発明において、８９位がＴであるか、または、１１位がＶでありかつ８９位がＬである（任意に、１１０Ｋもしくは１１０Ｑ突然変異および／または１１２Ｋもしくは１１２Ｑ突然変異との適切な組み合わせ、および特に１１０Ｋもしくは１１０Ｑ突然変異との組み合わせでの）３ｃ２３ベースの結合剤が、特に好ましい。さらにより好ましいのは、１１位がＶであり、かつ８９位がＬであり、任意に１１０Ｋまたは１１０Ｑ突然変異を有する、３ｃ２３ベースの結合剤である。
【００５２】
したがって、１つの好ましい側面において、３ｃ２３ベースの結合剤は、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＨＹＡＭＧ（配列番号２）であるＣＤＲ１（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＳＳＹＧＳＴＤＹＧＤＳＶＫＧ（配列番号３）であるＣＤＲ２（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＤＥＴＬＧＡＶＰＮＦＲＬＨＥＫＹＥＹＥＹ（配列番号４）であるＣＤＲ３（Kabatによる）；
および、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
【００５３】
および／または、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
【００５４】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号１と比較してＥ１Ｄ突然変異を有する）、
【００５５】
ここで：
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１位のアミノ酸残基は、好ましくは、ＬまたはＶから選択され；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の８９位のアミノ酸残基は、Ｔであり；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され（および好ましくはＴであり）；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択され（および好ましくはＳである）。
別の好ましい側面において、３ｃ２３ベースの結合剤は、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＨＹＡＭＧ（配列番号２）であるＣＤＲ１（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＳＳＹＧＳＴＤＹＧＤＳＶＫＧ（配列番号３）であるＣＤＲ２（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＤＥＴＬＧＡＶＰＮＦＲＬＨＥＫＹＥＹＥＹ（配列番号４）であるＣＤＲ３（Kabatによる）；
【００５６】
および、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
および／または、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
【００５７】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号１と比較してＥ１Ｄ突然変異を有する）、ここで：
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１位のアミノ酸残基は、Ｖであり；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の８９位のアミノ酸残基は、Ｌであり；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択される。
【００５８】
特定のしかし非限定的な１側面において、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号１の配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含み：
−  １１Ｖと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
および、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号１のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
【００５９】
他の特定のしかし非限定的な側面において、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号１の配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含み：
−  ８９Ｌと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
および、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号１のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
【００６０】
他の特定のしかし非限定的な側面において、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号１の配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含み：
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ；
および、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号１のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
【００６１】
他の特定のしかし非限定的な側面において、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号１の配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含み：
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ；
および、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号１のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
別の側面において、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、８９位にＴを含み、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号１のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
【００６２】
別の側面において、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、１１位にＶを、８９位にＬを含み、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号１のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
前述のように、本明細書に記載の側面による本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、好ましくはさらに、Ａ１４Ｐ突然変異、Ａ７４Ｓ突然変異および／またはＫ８３Ｒ突然変異の適切な組み合わせを含み、および好ましくは、これらの突然変異の任意の２つの適切な組み合わせ、例えばこれらの突然変異の３つすべての組み合わせを（そして再度、３ｃ２３ベースの結合剤が本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合は、好ましくはＥ１Ｄ突然変異も）含む。
【００６３】
別の側面において、３ｃ２３ベースの結合剤は、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＧＲＴＦＲＨＹＡＭＧ（配列番号５）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＳＳＹＧＳＴＤ（配列番号６）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＤＥＴＬＧＡＶＰＮＦＲＬＨＥＫＹＥＹＥＹ（配列番号４）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）；
および、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
【００６４】
および／または、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
【００６５】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；
【００６６】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号１と比較してＥ１Ｄ突然変異を有する）、
ここで：
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１位のアミノ酸残基は、好ましくは、ＬまたはＶから選択され；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の８９位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＶまたはＬから適切に選択され；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択され；
ただしここで、（ｉ）８９位はＴであり；または（ｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、または（ｉｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｉｖ）８９位はＬであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱである。
【００６７】
さらなる側面において、３ｃ２３ベースの結合剤は、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＧＲＴＦＲＨＹＡＭＧ（配列番号５）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＳＳＹＧＳＴＤ（配列番号６）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＤＥＴＬＧＡＶＰＮＦＲＬＨＥＫＹＥＹＥＹ（配列番号４）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）；
および、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
【００６８】
および／または、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；
【００６９】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号１と比較してＥ１Ｄ突然変異を有する）、
ここで、前記３ｃ２３ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号１のアミノ酸配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含む：
−  ８９Ｔ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ。
【００７０】
前述のように、３ｃ２３ベースの結合剤が１価の形態で使用される場合、および／または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合（本明細書で定義のように）、３ｃ２３ベースの結合剤（およびその結果得られる本発明のポリペプチド）は好ましくは、Ｃ末端伸長Ｘ（ｎ）を有し、このＣ末端伸長は、本発明のポリペプチドについて本明細書に記載されたもの、および／またはWO 2012/175741もしくはPCT/EP2015/060643に記載のものであってよい。
前述のように、本発明において、８９位がＴであるか、または、１１位がＶでありかつ８９位がＬである（任意に、１１０Ｋもしくは１１０Ｑ突然変異および／または１１２Ｋもしくは１１２Ｑ突然変異との適切な組み合わせ、および特に１１０Ｋもしくは１１０Ｑ突然変異との組み合わせでの）３ｃ２３ベースの結合剤が、特に好ましい。さらにより好ましいのは、１１位がＶであり、かつ８９位がＬであり、任意に１１０Ｋまたは１１０Ｑ突然変異を有する、３ｃ２３ベースの結合剤である。
【００７１】
したがって、１側面において、３ｃ２３ベースの結合剤は、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＧＲＴＦＲＨＹＡＭＧ（配列番号５）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＳＳＹＧＳＴＤ（配列番号６）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＤＥＴＬＧＡＶＰＮＦＲＬＨＥＫＹＥＹＥＹ（配列番号４）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）；
および、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
【００７２】
および／または、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；
【００７３】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号１と比較してＥ１Ｄ突然変異を有する）、
ここで：
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１位のアミノ酸残基は、好ましくは、ＬまたはＶから選択され；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の８９位のアミノ酸残基は、Ｔであり；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され（および好ましくはＴであり）；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択され（および好ましくはＳである）。
別の好ましい側面において、３ｃ２３ベースの結合剤は、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＧＲＴＦＲＨＹＡＭＧ（配列番号５）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＳＳＹＧＳＴＤ（配列番号６）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＤＥＴＬＧＡＶＰＮＦＲＬＨＥＫＹＥＹＥＹ（配列番号４）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）；
【００７４】
および、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
および／または、以下を有し：
−  配列番号１のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
【００７５】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；
【００７６】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号１と比較してＥ１Ｄ突然変異を有する）、
ここで：
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１位のアミノ酸残基は、Ｖであり；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の８９位のアミノ酸残基は、Ｌであり；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され；および
−  ３ｃ２３ベースの結合剤の１１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択される。
【００７７】
特定のしかし非限定的な１側面において、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号１の配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含み：
−  １１Ｖと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
および、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号１のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
【００７８】
他の特定のしかし非限定的な側面において、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号１の配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含み：
−  ８９Ｌと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
および、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号１のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
【００７９】
他の特定のしかし非限定的な側面において、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号１の配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含み：
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ；
および、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号１のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
他の特定のしかし非限定的な側面において、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号１の配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含み：
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ；
および、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号１のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
【００８０】
別の側面において、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、８９位にＴを含み、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号１のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
別の側面において、本発明により提供される３ｃ２３ベースの結合剤は、１１位にＶを、８９位にＬを含み、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号１のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
【００８１】
本発明のポリペプチドに存在し得る３ｃ２３ベースの結合剤の、いくつかの好ましいが非限定的な例は、配列番号１５〜４２に与えられ、これらの配列の１つ以上を適切に含む本発明のポリペプチドは、本発明のさらなる側面を形成する（それぞれの場合において、好ましくは、ポリペプチドのＮ末端にある場合は１位にＤを有し、ポリペプチドのＣ末端にある場合はＣ末端アラニンを有する）。本発明のポリペプチドに存在することができるいくつかの特に好ましい３ｃ２３ベースの結合剤は、配列番号２４、２５、３８および３９の配列であるか、または、そのバリアントであって、Ａ１４Ｐ、Ｇ６０Ａ、Ｄ７３Ｎ、Ａ７４Ｓ、Ｐ７９Ｙおよび／もしくはＫ８３Ｒから選択される１もしくは２以上の突然変異（の適切な組み合わせ）、もしくはこれらの突然変異の２もしくは３以上（および最大ですべてを含む）の任意の適切な組み合わせを有するものであり、例えば、特に好ましい配列番号１３６〜１４３により表されるものである（再度、それぞれの場合において、好ましくは、ポリペプチドのＮ末端にある場合は１位のＤを有し、例えば配列番号１５４〜１６１であり、およびポリペプチドのＣ末端にある場合は、Ｃ末端アラニンを有し、例えば配列番号１６９〜１７６である）。
【００８２】
本発明の１ｃ８１ベースの結合剤の説明．
一般に、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号８配列と比較した突然変異）を含む、配列番号８（標準Ｂ）と１ｃ８１（配列番号８８）のバリアントである：
−  ８９Ｔ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ。
【００８３】
特に、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤において：
−  １１位のアミノ酸残基は、好ましくはＬまたはＶから選択され；および
−  ８９位のアミノ酸残基は、好ましくはＴ、ＶまたはＬから適切に選択され；および
−  １１０位のアミノ酸残基は、好ましくはＴ、ＫまたはＱから適切に選択され；および
−  １１２位のアミノ酸残基は、好ましくはＳ、ＫまたはＱから適切に選択され；
ただしここで、（ｉ）８９位はＴであり；または（ｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、または（ｉｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｉｖ）８９位はＬであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱである。
【００８４】
８９位がＴであるか、または、１１位がＶでありかつ８９位がＬである（任意に、１１０Ｋもしくは１１０Ｑ突然変異および／または１１２Ｋもしくは１１２Ｑ突然変異との適切な組み合わせ、および特に１１０Ｋもしくは１１０Ｑ突然変異との組み合わせでの）１ｃ８１ベースの結合剤が、特に好ましい。さらにより好ましいのは、１１位がＶであり、かつ８９位がＬであり、任意に１１０Ｋまたは１１０Ｑ突然変異を有する、１ｃ８１ベースの結合剤である。
本明細書にさらにまた記載するように、本発明の１ｃ８１ベースのビルディングブロックである本発明のＰ２Ｘ７受容体結合剤は、好ましくは、１ｃ８１および標準Ｂに存在するＣＤＲ（すなわちＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）と同じ組み合わせを有する。
【００８５】
したがって、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、好ましくは以下のＣＤＲ（Kabat慣習による）を含む:
−  アミノ酸配列ＦＳＴＳＴＭＧ（配列番号９）であるＣＤＲ１（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＤＷＳＤＦＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）であるＣＤＲ２（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＨＳＥＴＲＧＧＴＲＹＦＤＲＰＳＬＹＮＹ（配列番号１１）であるＣＤＲ３（Kabatによる）。
【００８６】
代替的に、ＣＤＲがＡｂｍ慣習に従って与えられる場合、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、好ましくは、以下のＣＤＲを含む：
−  アミノ酸配列ＧＲＴＦＳＦＳＴＳＴＭＧ（配列番号１２）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＤＷＳＤＦＮＴＹ（配列番号１３）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＨＳＥＴＲＧＧＴＲＹＦＤＲＰＳＬＹＮＹ（配列番号１４、これは配列番号１１と同じ）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）。
上の好ましいＣＤＲは、１ｃ８１（配列番号８８）および標準Ｂ（配列番号８）に存在するものと同じである。
【００８７】
本発明のポリペプチドに存在する１ｃ８１ベースの結合剤は、好ましくは以下もまた有する：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；および／または、
−  配列番号８のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）。
【００８８】
本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤の様々な側面および好ましい側面において、配列番号８に対する配列同一性の程度および／または本発明のかかる結合剤に存在し得る「アミノ酸相違」の数および種類（すなわち、配列番号８の配列と比較した）については、（ｉ）１ｃ８１ベースの結合剤が、配列番号８の配列と、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の配列同一性の程度を有する（ここで、ＣＤＲ、存在し得る任意のＣ末端伸長、ならびに関与する特定の側面によって必要とされる１１位、８９位、１１０位、および／または１１２位での突然変異は、配列同一性の程度の決定には考慮しない）と言われる場合；および／または（ｉｉ）１ｃ８１ベースの結合剤が、配列番号８の配列と、７個以下、好ましくは５個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」を有する（再度、存在し得る任意のＣ末端伸長を考慮せず、関与する特定の側面によって必要とされる１１位、８９位、１１０位、および／または１１２位での突然変異は考慮しない）と言われる場合には、これはまた、配列番号８の配列と比べて、関与する特定の側面によって必要とされる１１位、８９位、１１０位、および／または１１２位での突然変異以外のアミノ酸相違を有しない配列、および存在し得る任意のＣ末端伸長もまた含む。
【００８９】
したがって、本発明の１つの特定の側面において、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、配列番号８と１００％の同一性（ＣＤＲを含むが、本明細書に開示の１１位、８９位、１１０位、および／または１１２位での突然変異または突然変異の組み合わせ、および／または存在し得る任意のＣ末端伸長は考慮しない）を有してもよく、および／または、配列番号８とのアミノ酸相違（すなわち、本明細書に開示の１１位、８９位、１１０位、および／または１１２位での突然変異または突然変異の組み合わせおよび存在し得る任意のＣ末端伸長以外）を有しなくてもよい。
任意のアミノ酸相違が存在する場合（すなわち、任意のＣ末端伸長、および関与する特定の側面によって必要とされる１１位、８９位、１１０位、および／または１１２位での突然変異に加えて）、これらのアミノ酸相違は、ＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域に存在するが、それらは好ましくは、フレームワーク領域（Ａｂｍ慣習によって定義されるもの、すなわちＡｂｍ慣習に従って定義されるＣＤＲ内にはない）のみに存在する、すなわち、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、配列番号８に存在するのと同じＣＤＲ（Ａｂｍ慣習に従って定義される）を有することになる。
【００９０】
また、本発明の任意の側面による本発明のポリペプチドに存在する１ｃ８１ベースの結合剤が、配列番号８の配列と１つ以上のアミノ酸相違を有する場合（関与する特定の側面によって必要とされる１１位、８９位、１１０位、および／または１１２位での突然変異に加えて）、存在し得るかかる突然変異／アミノ酸相違（すなわち、配列番号８の配列と比較した）のいくつかの具体的だが非限定的な例は、例えばＫ１０Ｇ、Ａ１４Ｐ、Ｌ８２Ｍ、Ｋ８３Ｒ、Ｌ４５Ｒ、Ｈ７２Ｄ、Ｐ７４Ｓ、Ｒ７５Ｋおよび／もしくはＳ７７Ｔであるか、または、これらの突然変異の２つ以上（および最大ですべてを含む）の任意の適切な組み合わせであり、例えば、配列番号１２９〜１３５、１４７〜１５３および１６２〜１６８で表されるものであり、このうち配列番号１３４、１５２および１６７が特に好ましい。突然変異の他の例は、１つ以上の適切な「ヒト化」置換（の適切な組み合わせ）であり；例えばWO 2009/138519（またはWO 2009/138519に引用されている先行技術）およびWO 2008/020079（またはWO 2008/020079に引用されている先行技術）、ならびにWO 2008/020079の表Ａ−３〜Ａ−８（可能性のあるヒト化置換を示すリストである）を参照されたい。
【００９１】
また、１ｃ８１ベースの結合剤が一価の形態であるか、または本発明のポリペプチドのＮ末端部分に存在し、および／またはＮ末端部分を形成する場合、これは好ましくは１位にＤを（すなわち、配列番号８と比較してＥ１Ｄ突然変異を）含む。したがって、さらなる側面において、本発明は、そのＮ末端に１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書にさらに記載）を有する本発明のポリペプチド（本明細書にさらに記載）に関し、ここで前記１ｃ８１ベースの結合剤は、例えば１位にＤを有し、例えば、配列番号１４７〜１５３および１６２〜１６８で表されるものであり、このうち配列番号１５２および１６７が特に好ましい。
【００９２】
１ｃ８１ベースの結合剤が一価の形態であるか、または、それらが存在するタンパク質、ポリペプチドもしくは他の化合物もしくは構築物のＣ末端に存在し、および／またはＣ末端を形成する場合（またはそうでなければ、かかるタンパク質、ポリペプチドまたは他の化合物または構築物において「露出した」Ｃ末端を有する場合；これはＩＳＶのＣ末端が、定常ドメイン（ＣＨ１ドメインなど）と会合していないかまたは連結していないことを一般に意味する；再度、WO 2012/175741およびPCT/EP2015/06043を参照）、それは好ましくは、式（Ｘ）ｎのＣ末端伸長をも有し、式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１など）であり；各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは天然に存在するアミノ酸残基から独立して選択され（ただし好ましい１側面によれば、いかなるシステイン残基も含まない）、および好ましくは独立して、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択され、例えば、配列番号１６２〜１６８で表されるものであり、このうち配列番号１６７が特に好ましい。
かかるＣ末端伸長Ｘ（ｎ）のいくつかの好ましいが非限定的な例によれば、Ｘおよびｎは、本発明のポリペプチドについて本明細書にさらに記載されるようなものであることができる。
【００９３】
本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤が、１１０位または１１２位に突然変異を（任意に、本明細書に記載の１１位および／または８９位の突然変異と組み合わせて）含む場合、フレームワーク４のＣ末端アミノ酸残基（１０９位から開始）は、以下であり得る：（ｉ）Ｃ末端伸長が存在しない場合：ＶＴＶＫＳ（配列番号７２）、ＶＴＶＱＳ（配列番号７３）、ＶＫＶＳＳ（配列番号７４）またはＶＱＶＳＳ（配列番号７５）；または（ｉｉ）Ｃ末端伸長が存在する場合：ＶＴＶＫＳＸ（ｎ）（配列番号７６）、ＶＴＶＱＳＸ（ｎ）（配列番号７７）、ＶＫＶＳＳＸ（ｎ）（配列番号７８）またはＶＱＶＳＳＸ（ｎ）（配列番号７９）、例えばＶＴＶＫＳＡ（配列番号：８０）、ＶＴＶＱＳＡ（配列番号８１）、ＶＫＶＳＳＡ（配列番号：８２）またはＶＱＶＳＳＡ（配列番号８３）。本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤が、１１０位または１１２位に突然変異を含まない場合（しかし本明細書に記載の１１位および／または８９位の突然変異のみを含む）、フレームワーク４のＣ末端アミノ酸残基（１０９位から開始）は、通常、以下のいずれかである：（ｉ）Ｃ末端伸長が存在しない場合：ＶＴＶＳＳ（配列番号８４）（配列番号１の配列におけるように）；または（ｉｉ）Ｃ末端伸長が存在する場合：ＶＴＶＳＳＸ（ｎ）（配列番号８５）、例えばＶＴＶＳＳＡ（配列番号８６）など。これらのＣ末端配列において、Ｘおよびｎは、Ｃ末端伸長について本明細書で定義されている通りである。
【００９４】
したがって、第１の側面において、１ｃ８１ベースの結合剤は、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＦＳＴＳＴＭＧ（配列番号９）であるＣＤＲ１（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＤＷＳＤＦＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）であるＣＤＲ２（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＨＳＥＴＲＧＧＴＲＹＦＤＲＰＳＬＹＮＹ（配列番号１１）であるＣＤＲ３（Kabatによる）；
および、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
【００９５】
および／または、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
【００９６】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；
【００９７】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号８と比較してＥ１Ｄ突然変異を有する）、
ここで：
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１位のアミノ酸残基は、好ましくは、ＬまたはＶから選択され；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の８９位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＶまたはＬから適切に選択され；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択され；
ただしここで、（ｉ）８９位はＴであり；または（ｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、または（ｉｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｉｖ）８９位はＬであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱである。
【００９８】
さらなる態様において、本発明のポリペプチドに存在する１ｃ８１ベースの結合剤は、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＦＳＴＳＴＭＧ（配列番号９）であるＣＤＲ１（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＤＷＳＤＦＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）であるＣＤＲ２（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＨＳＥＴＲＧＧＴＲＹＦＤＲＰＳＬＹＮＹ（配列番号１１）であるＣＤＲ３（Kabatによる）；
および、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
【００９９】
および／または、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；
【０１００】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号８と比較してＥ１Ｄ突然変異を有する）、
ただしここで、前記１ｃ８１ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号８のアミノ酸配列と比較した突然変異）を次の位置に含むようにする（Kabatによる番号付け）：
−  ８９Ｔ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ。
【０１０１】
前述のように、本発明のポリペプチドに存在する１ｃ８１ベースの結合剤が、一価の形態で使用されるか、および／または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合（本明細書で定義するように）、１ｃ８１ベースの結合剤（およびその結果得られる本発明のポリペプチド）は、好ましくは、本発明のポリペプチドについて本明細書で記載されている、および／またはWO 2012/175741もしくはPCT/EP2015/060643に記載されているような、Ｃ末端伸長Ｘ（ｎ）を有する。
前述のように、本発明において、８９位がＴであるか、または、１１位がＶでありかつ８９位がＬである（任意に、１１０Ｋもしくは１１０Ｑ突然変異および／または１１２Ｋもしくは１１２Ｑ突然変異との適切な組み合わせ、および特に１１０Ｋもしくは１１０Ｑ突然変異との組み合わせでの）１ｃ８１ベースの結合剤が、特に好ましい。さらにより好ましいのは、１１位がＶであり、かつ８９位がＬであり、任意に１１０Ｋまたは１１０Ｑ突然変異を有する、１ｃ８１ベースの結合剤である。
【０１０２】
したがって、１つの好ましい側面において、本発明のポリペプチドに存在する１ｃ８１ベースの結合剤は、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＦＳＴＳＴＭＧ（配列番号９）であるＣＤＲ１（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＤＷＳＤＦＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）であるＣＤＲ２（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＨＳＥＴＲＧＧＴＲＹＦＤＲＰＳＬＹＮＹ（配列番号１１）であるＣＤＲ３（Kabatによる）；
および、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
【０１０３】
および／または、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；
【０１０４】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号８と比較してＥ１Ｄ突然変異を有する）、
ここで：
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１位のアミノ酸残基は、好ましくは、ＬまたはＶから選択され；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の８９位のアミノ酸残基は、Ｔであり；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され（および好ましくはＴであり）；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択され（および好ましくはＳである）。
【０１０５】
別の好ましい側面において、本発明のポリペプチドに存在する１ｃ８１ベースの結合剤は、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＦＳＴＳＴＭＧ（配列番号９）であるＣＤＲ１（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＤＷＳＤＦＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）であるＣＤＲ２（Kabatによる）；および
−  アミノ酸配列ＨＳＥＴＲＧＧＴＲＹＦＤＲＰＳＬＹＮＹ（配列番号１１）であるＣＤＲ３（Kabatによる）；
および、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
【０１０６】
および／または、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
【０１０７】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号８と比較してＥ１Ｄ突然変異を有する）、ここで：
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１位のアミノ酸残基は、Ｖであり；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の８９位のアミノ酸残基は、Ｌであり；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択される。
【０１０８】
特定のしかし非限定的な１側面において、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号８の配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含み：
−  １１Ｖと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
および、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号８のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
【０１０９】
他の特定のしかし非限定的な側面において、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号８の配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含み：
−  ８９Ｌと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
および、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号８のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
【０１１０】
他の特定のしかし非限定的な側面において、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号８の配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含み：
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ；
および、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号８のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
他の特定のしかし非限定的な側面において、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号８の配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含み：
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ；
および、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号８のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
【０１１１】
別の側面において、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、８９位にＴを含み、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号８のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
別の側面において、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、１１位にＶを、８９位にＬを含み、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号８のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
前述のように、本明細書に記載の側面による本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、好ましくはさらに、Ｋ１０Ｇ、Ａ１４Ｐ、Ｌ８２Ｍ、Ｋ８３Ｒ、Ｌ４５Ｒ、Ｈ７２Ｄ、Ｐ７４Ｓ、Ｒ７５Ｋおよび／またはＳ７７Ｔ突然変異の適切な組み合わせ、または、これらの突然変異の２つ以上（および最大ですべてを含む）の任意の適切な組み合わせを（そして再度、１ｃ８１ベースの結合剤が一価であるか、または本発明の化合物またはポリペプチドのＮ末端に存在する場合は、好ましくはＥ１Ｄ突然変異も）、含んでよい。
【０１１２】
別の側面において、１ｃ８１ベースの結合剤は、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＧＲＴＦＳＦＳＴＳＴＭＧ（配列番号１２）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＤＷＳＤＦＮＴＹ（配列番号１３）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＨＳＥＴＲＧＧＴＲＹＦＤＲＰＳＬＹＮＹ（配列番号１１）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）；
および、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
【０１１３】
および／または、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
【０１１４】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号８と比較してＥ１Ｄ突然変異を有する）、
【０１１５】
ここで：
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１位のアミノ酸残基は、好ましくは、ＬまたはＶから選択され；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の８９位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＶまたはＬから適切に選択され；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択され；
ただしここで、（ｉ）８９位はＴであり；または（ｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、または（ｉｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｉｖ）８９位はＬであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱである。
【０１１６】
さらなる側面において、本発明のポリペプチドに存在する１ｃ８１ベースの結合剤は、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＧＲＴＦＳＦＳＴＳＴＭＧ（配列番号１２）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＤＷＳＤＦＮＴＹ（配列番号１３）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＨＳＥＴＲＧＧＴＲＹＦＤＲＰＳＬＹＮＹ（配列番号１１）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）；
および、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
【０１１７】
および／または、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
【０１１８】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号８と比較してＥ１Ｄ突然変異を有する）、
ここで、前記１ｃ８１ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号８のアミノ酸配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含む：
−  ８９Ｔ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ。
【０１１９】
前述のように、本発明のポリペプチドに存在する１ｃ８１ベースの結合剤が１価の形態で使用される場合、および／または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合（本明細書で定義のように）、１ｃ８１ベースの結合剤（およびその結果得られる本発明のポリペプチド）は好ましくは、Ｃ末端伸長Ｘ（ｎ）を有し、このＣ末端伸長は、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤について本明細書に記載されたもの、および／またはWO 2012/175741もしくはPCT/EP2015/060643に記載のものであってよい。
前述のように、本発明において、１ｃ８１ベースの結合剤であって、８９位がＴであるか、または、１１位がＶでありかつ８９位がＬである（任意に、１１０Ｋもしくは１１０Ｑ突然変異および／または１１２Ｋもしくは１１２Ｑ突然変異との適切な組み合わせ、および特に１１０Ｋもしくは１１０Ｑ突然変異との組み合わせでの）、前記１ｃ８１ベースの結合剤が特に好ましい。さらにより好ましいのは、１１位がＶであり、かつ８９位がＬであり、任意に１１０Ｋまたは１１０Ｑ突然変異を有する、１ｃ８１ベースの結合剤である。
【０１２０】
したがって、１側面において、本発明のポリペプチドに存在する１ｃ８１ベースの結合剤は、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＧＲＴＦＳＦＳＴＳＴＭＧ（配列番号１２）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＤＷＳＤＦＮＴＹ（配列番号１３）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＨＳＥＴＲＧＧＴＲＹＦＤＲＰＳＬＹＮＹ（配列番号１１）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）；
および、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
【０１２１】
および／または、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
【０１２２】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；
【０１２３】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号８と比較してＥ１Ｄ突然変異を有する）、
ここで：
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１位のアミノ酸残基は、好ましくは、ＬまたはＶから選択され；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の８９位のアミノ酸残基は、Ｔであり；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され（および好ましくはＴであり）；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択され（および好ましくはＳである）。
【０１２４】
別の好ましい側面において、本発明のポリペプチドに存在する１ｃ８１ベースの結合剤は、以下を有し：
−  アミノ酸配列ＧＲＴＦＳＦＳＴＳＴＭＧ（配列番号１２）であるＣＤＲ１（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＡＩＤＷＳＤＦＮＴＹ（配列番号１３）であるＣＤＲ２（Ａｂｍによる）；および
−  アミノ酸配列ＨＳＥＴＲＧＧＴＲＹＦＤＲＰＳＬＹＮＹ（配列番号１１）であるＣＤＲ３（Ａｂｍによる）；
および、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の、ある程度の配列同一性（ここで、存在し得る任意のＣ末端伸長ならびにＣＤＲは、配列同一性の程度の決定には考慮されない）；
【０１２５】
および／または、以下を有し：
−  配列番号８のアミノ酸配列との、７個以下、例えば５個以下、好ましくは３個以下、例えば３個、２個または１個のみの「アミノ酸相違」（「アミノ酸相違」は本明細書で定義されており、存在し得る１１位、８９位、１１０位、または１１２位での上記の突然変異のいずれも考慮せず、および存在し得る任意のＣ末端伸長も考慮しない）（ここで、前記アミノ酸相違が存在する場合、これはフレームワークおよび／またはＣＤＲに存在し得るが、しかし好ましくはフレームワークにのみ存在し、ＣＤＲには存在しない）；
【０１２６】
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＣ末端に存在する場合）、以下を有し：
−  Ｃ末端伸長（Ｘ）ｎ、この式中、ｎは１〜１０、好ましくは１〜５、例えば１、２、３、４または５（および好ましくは１または２、例えば１）であり；および各Ｘは、（好ましくは天然に存在する）アミノ酸残基であり、これは独立して選択され、および好ましくは独立してアラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）からなる群から選択される；
および任意に（すなわち、一価の形態である場合、または本発明のポリペプチドのＮ末端に存在する場合）、１位にＤを有する（すなわち、配列番号８と比較してＥ１Ｄ突然変異を有する）、
ここで：
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１位のアミノ酸残基は、Ｖであり；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の８９位のアミノ酸残基は、Ｌであり；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され；および
−  １ｃ８１ベースの結合剤の１１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択される。
【０１２７】
特定のしかし非限定的な１側面において、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号８の配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含み：
−  １１Ｖと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
および、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号８のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
【０１２８】
他の特定のしかし非限定的な側面において、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号８の配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含み：
−  ８９Ｌと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
および、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号８のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
【０１２９】
他の特定のしかし非限定的な側面において、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号８の配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含み：
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ；
および、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号８のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
【０１３０】
他の特定のしかし非限定的な側面において、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、以下のアミノ酸残基（すなわち、配列番号８の配列と比較した突然変異）を記された位置（Kabatによる番号付け）に含み：
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ；
および、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号８のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
別の側面において、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、８９位にＴを含み、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号８のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
【０１３１】
別の側面において、本発明により提供される１ｃ８１ベースの結合剤は、１１位にＶを、８９位にＬを含み、ＣＤＲ（Kabatによる）を有し、本明細書に記載の配列番号８のアミノ酸配列と全体的な配列同一性を有する。
本発明のポリペプチドに存在し得る１ｃ８１ベースの結合剤の、いくつかの好ましいが非限定的な例は、配列番号４３〜７０に与えられ、これらの配列の１つ以上を適切に含む本発明のポリペプチドは、本発明のさらなる側面を形成する（それぞれの場合において、好ましくは、ポリペプチドのＮ末端にある場合は１位にＤを有し、ポリペプチドのＣ末端にある場合はＣ末端アラニンを有する）。本発明のポリペプチドに存在することができるいくつかの特に好ましい１ｃ８１ベースの結合剤は、配列番号５２、５３、６６および６７の配列、またはＫ１０Ｇ、Ａ１４Ｐ、Ｌ８２Ｍ、Ｋ８３Ｒ、Ｌ４５Ｒ、Ｈ７２Ｄ、Ｐ７４Ｓ、Ｒ７５Ｋおよび／もしくはＳ７７Ｔから選択される１もしくは２以上の突然変異（の適切な組み合わせ）を有するそれらのバリアントであり、例えば、配列番号１２９〜１３５により表されるものであり、このうち配列番号１３４が特に好ましく（再度、それぞれの場合において、好ましくは、ポリペプチドのＮ末端にある場合は１位のＤを有し、例えば配列番号１４７〜１５３であり、このうち配列番号１５２が特に好ましく、およびポリペプチドのＣ末端にある場合は、Ｃ末端アラニンを有し、例えば配列番号１６２〜１６８であり、このうち配列番号１６７が特に好ましい）。
【０１３２】
本発明のポリペプチド
前述のように、さらなる側面において、本発明は、本発明の少なくとも１種（例えば、１、２または３種）のＰ２Ｘ７受容体結合剤を含むか、または本質的にそれらからなる、タンパク質、ポリペプチド、構築物、化合物または他の化学物質（本明細書ではまとめて「本発明のポリペプチド」または「本発明の化合物」とも呼ぶ）に関する。
これらの抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドは、例えば、１種以上の（例えば、１または２種の）３ｃ２３ベースのビルディングブロック、および／または１種以上の（例えば、１または２種の）１ｃ８１ベースのビルディングブロックを含むことができ、特に、１、２、もしくは３種（特に２種）の３ｃ２３ベースのビルディングブロックを含んでよく（かつ１ｃ８１ベースのビルディングブロックはなし）、または、１、２、もしくは３種（特に２種）の１ｃ８１ベースのビルディングブロックを含んでよく（かつ３ｃ２３ベースのビルディングブロックはなし）、または、二重パラトピックであることができ、すなわち、１もしくは２種（および特に１種）の３ｃ２３ベースのビルディングブロックと１もしくは２種（および特に１種）の１ｃ８１ベースのビルディングブロックとを含むことができる。
【０１３３】
前述のように、本発明のポリペプチドは、好ましくは、延長された半減期（本明細書で定義）を有し、これは一般に、ポリペプチドが、本発明のポリペプチド中に存在する一価の３ｃ２３ベースの結合剤の半減期よりも、少なくとも２倍、好ましくは少なくとも５倍、例えば少なくとも１０倍または２０倍以上の半減期（本明細書で定義）を有し、ならびに、本発明のポリペプチド中に存在する一価の１ｃ８１ベースの結合剤の半減期よりも、少なくとも２倍、好ましくは少なくとも５倍、例えば少なくとも１０倍または２０倍以上の半減期（本明細書で定義）を有することを意味する（ヒトおよび／または適切な動物モデル、例えばマウスもしくはカニクイザルなどのいずれかで測定）。
特に、本発明のポリペプチドは好ましくは、ヒト対象において、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば少なくとも１０日の半減期（本明細書で定義）を有する。
【０１３４】
かかる（延長された）半減期を有する本発明のポリペプチドを提供するために、本発明のポリペプチドは、好ましくは、血清アルブミン結合性ＩＳＤＮ、特に血清アルブミン結合性ナノボディを含む。
特に、かかる血清アルブミン結合性ＩＳＶＤまたはナノボディは、ヒト血清アルブミンに対する（単一）ドメイン抗体またはｄＡｂ、例えばEP 2 139 918、WO 2011/006915、WO 2012/175400、WO 2014/111550に記載されているようなものであってもよく、特にWO2004/041865、WO2006/122787、WO2001/175400またはPCT/EP2015/060643に記載された血清アルブミン結合性ナノボディであってよい。特に好ましい血清アルブミン結合性ＩＳＶＤは、ナノボディＡｌｂ−１（WO 2006/122787参照）またはそのヒト化バリアント、例えばＡｌｂ−８（WO 2006/122787、配列番号６２）、Ａｌｂ−２３（WO 2012/175400、配列番号１）、およびＡｌｂ−１の他のヒト化（および好ましくは配列最適化された）バリアント、および／またはＡｌｂ−８またはＡｌｂ−２３のバリアントである（または、より一般的には、Ａｌｂ−１、Ａｌｂ−８およびＡｌｂ−２３と本質的に同じＣＤＲを有するＩＳＶＤ）。本発明のポリペプチドに存在し得るいくつかの特に好ましいが非限定的な血清アルブミン結合剤のアミノ酸配列は、配列番号８９〜９２として図中に与えられており、この中で配列番号９０〜９２が特に好ましい。
【０１３５】
再度、前述のように、かかる血清アルブミン結合性ＩＳＶＤは、存在する場合その配列内に、既存の抗体による結合を減少させる１つ以上のフレームワーク突然変異を含み得る。特に、かかる血清アルブミン結合性ＩＳＶＤが、ナノボディまたは（単一）ドメイン抗体であって、ＶＨドメインから本質的になるか、および／またはこれに由来するものである場合、該血清アルブミン結合性ＩＳＶＤは、PCT/EP2015/060643に記載されているか、および／または、本質的に、本発明によって提供されるＰ２Ｘ７結合剤について本明細書に記載されているところの、１１位、８９位、１１０位、および／または１１２位でのアミノ酸残基／突然変異（の適切な組み合わせ）を含み得る。例えば、PCT/EP2015/060643には、１１位、８９位、１１０位および／または１１２位にアミノ酸残基／突然変異を含み、かつ本発明の化合物において使用することができる既存の抗体による結合を低減する、Ａｌｂ−１、Ａｌｂ−８およびＡｌｂ−２３のいくつかのバリアントが記載されている。
【０１３６】
再度、かかる血清アルブミン結合性ＩＳＶＤが本発明の化合物のＣ末端に存在する場合、血清アルブミン結合性ＩＳＶＤ（および結果として本発明の化合物）は、好ましくはＣ末端伸長Ｘ（ｎ）を有する（このＣ末端伸長は、本発明により提供されるＰ２Ｘ７結合剤について本明細書で記載されているもの、および／またはWO 2012/175741もしくはPCT/EP2015/060643に記載されているようなものであってよい。また、好ましくは、少なくとも前記Ｃ末端ＩＳＶＤは、既存の抗体の結合を低減する突然変異を有し、これは例えば、PCT/EP2015/060643に記載の１１位、８９位、１１０位および／または１１２位にアミノ酸残基／突然変異（の適切な組み合わせ）などである。
血清アルブミン結合性ＩＳＶＤの存在／使用は、本発明のポリペプチドに半減期の延長をもたらす好ましい方法であるが、本発明の化合物の半減期を延長させる他の手段（例えば、血清アルブミンに結合する他の結合ドメインの使用、トランスフェリンまたはＩｇＧなどの他の血清タンパク質に結合するＩＳＶＤの使用、ＰＥＧ化、ヒトアルブミンまたはその適切な断片への融合、または適切な血清アルブミン結合性ペプチドの使用）も、あまり好ましくはないが、本発明の範囲に含まれる。
【０１３７】
前述のように、本発明のポリペプチドは、好ましくはＣ末端伸長Ｘ（ｎ）を有し（本明細書にさらに記載）、好ましくは１位（すなわちポリペプチドのＮ末端）のアミノ酸残基はＤである。
本発明のポリペプチドにおいて、Ｐ２Ｘ７結合剤（および存在する場合は、血清アルブミン結合性ＩＳＶ）は、互いに、または１もしくは２以上の適切なリンカーを介して、直接的に連結され得る。いくつかの好ましいが非限定的なリンカーは、９ＧＳ、１５ＧＳまたは３５ＧＳリンカーである。
【０１３８】
あまり好ましくはないが、本発明のポリペプチドが、１種以上のＰ２Ｘ７結合剤および血清アルブミン結合性ＩＳＶＤ（存在する場合）に加えて、１つ以上の他のアミノ酸配列、化学物質または部分を含むことも、排除されない。これらの他のアミノ酸配列、化学物質または部分は、本発明の（結果として生じる）化合物に、１つ以上の所望の特性を付与することができ、および／または本発明の（結果として生じる）化合物の特性を所望の様式で変えることができて、例えば、本発明の（結果として生じる）化合物に所望の生物学的活性および／または治療活性を提供し、薬物動態学的および／または薬力学的特性を改変または改善し、本発明の化合物を特定の細胞、組織または器官（がん細胞およびがん組織を含む）に標的化し、細胞毒性効果を提供し、および／または検出可能なタグまたは標識として機能させることができる。かかる他のアミノ酸配列、化学物質または部分のいくつかの非限定的な例は、以下である：
【０１３９】
−  Ｐ２Ｘ７以外の治療的に関連する標的に対して指向された、１つ以上の結合ドメインまたは結合単位（すなわち、（Ｐ２Ｘ７に対して二重パラトピックであることに加えて）Ｐ２Ｘ７および前記他の標的に対して二重特異性である本発明の化合物を提供するため）；および／または
−  Ｐ２Ｘ７受容体に対して増加した特異性を提供する、１つ以上の結合ドメインまたは結合単位（通常、これらはＰ２Ｘ７受容体に結合することができるが、一般にそれ自体は本質的に、Ｐ２Ｘ７受容体に対して機能的ではない）；および／または
−  本発明の化合物を所望の細胞、組織または器官（がん細胞など）に標的化する、１つ以上の結合ドメインまたは結合単位；および／または
−  ペイロード、例えば細胞傷害性ペイロードなど；および／または
−  検出可能な標識またはタグ、例えば放射性標識または蛍光標識など；および／または
−  本発明の化合物の固定化、検出および／または精製を助けることができるタグ、例えばＨＩＳまたはＦＬＡＧ３タグなど；および／または
−  官能化され得るタグ、例えば、Ｃ末端のＧＧＣタグまたはＧＧＧＣタグなど。
【０１４０】
本発明の化合物が、（好ましくはヒト）慣用抗体（例えば、Ｆｃ部分またはその機能的断片、または１もしくは２以上の定数ドメインなど）、および／またはラクダ科の重鎖のみの抗体（例えば１つ以上の定常ドメインなど）からの、１つ以上の部分または断片を含み得ることも、本発明の範囲から除外されない。
本発明のポリペプチドが、１つ以上のさらなる結合ドメインまたは結合単位（例えば、前の段落に記載されるような）を含む場合、これらの他の結合ドメインまたは結合単位は、好ましくは１つ以上のＩＳＶＤを含み、より好ましくはすべてＩＳＶＤである。例えば、限定はされないが、これらの１つ以上のさらなる結合ドメインまたは結合単位は、以下であることができる：１つ以上のナノボディ（ＶＨＨ、ヒト化ＶＨＨおよび／またはラクダ化ＶＨ、例えばラクダ化ヒトＶＨなど）、ＶＨドメインであるかまたはＶＨドメインに由来する（単一ドメイン）抗体、ＶＨドメインであるかまたは本質的にＶＨドメインからなるか、またはＶＨドメインに由来するｄＡｂ、またはさらには、ＶＬドメインであるかまたは本質的にＶＬドメインからなる（単一）ドメイン抗体。特に、これらの１つ以上の結合ドメインまたは結合単位は、存在する場合、１つ以上のナノボディを含み得、より特にはすべてナノボディであってよい。
【０１４１】
本発明のポリペプチドがそのＣ末端にＩＳＶＤを有する場合（このＣ末端ＩＳＶＤは、Ｐ２Ｘ７結合剤、血清アルブミン結合性ＩＳＶＤまたは前の段落で言及した別のＩＳＶＤであってよい）、本発明のポリペプチド（すなわち前記Ｃ末端ＩＳＶＤ）は、好ましくは、本明細書に記載のようにＣ末端伸長Ｘ（ｎ）を有する。
本発明のポリペプチドが、１種以上のＰ２Ｘ７結合剤および血清アルブミン結合性ＩＳＶＤ（存在する場合）に加えて、任意のさらなるＩＳＶＤ（前の段落で言及されている）を含む場合、およびかかるさらなるＩＳＶＤがナノボディであるか、または、ＶＨ配列であるかこれから本質的になるか、および／またはこれに由来するＩＳＶＤである場合、本発明の好ましい側面によれば、本発明のポリペプチド中に存在するかかるＩＳＶＤの１つ以上（好ましくはすべて）は、それらの配列内に、既存の抗体による結合を減少させる１つ以上のフレームワーク突然変異を含むであろう。特に、本発明のこの側面によれば、かかるさらなるＩＳＶＤは、PCT/EP2015/060643に記載されているような、および／または、本質的にＰ２Ｘ７について本明細書に記載されているような、１１位、８９位、１１０位および／または１１２位のアミノ酸残基／突然変異（の適切な組み合わせ）を含んでよい。１つの特定の態様において、本発明のポリペプチドが、そのＣ末端にＩＳＶＤを有する場合（このＣ末端ＩＳＶＤは、Ｐ２Ｘ７、血清アルブミン結合性ＩＳＶＤまたは前の段落で言及された別のＩＳＶＤであってよい）、少なくとも、Ｃ末端に存在しかつ／またはＣ末端を形成する前記ＩＳＶＤは、既存の抗体による結合を減少させるようなかかるフレームワーク突然変異を有する（および前記Ｃ末端ＩＳＶＤは、好ましくは、本明細書に記載のＣ末端伸長Ｘ（ｎ）も有するであろう）。
【０１４２】
一側面において、本発明は、少なくとも１種のＰ２Ｘ７結合剤（本明細書に記載）および任意に１種以上の他のＩＳＶＤ（例えば、血清アルブミン結合性ＩＳＶＤ）を含む抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し、ここで、前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、次のアミノ酸残基を含む：
−  １１位のアミノ酸残基は、好ましくは、ＬまたはＶから選択され；および
−  ８９位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＶまたはＬから適切に選択され；および
−  １１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され；および
−  １１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択され；
ただしここで、（ｉ）８９位はＴであり；または（ｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、または（ｉｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｉｖ）８９位はＬであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱである。
【０１４３】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種のＰ２Ｘ７結合剤（本明細書に記載）および任意に１種以上の他のＩＳＶＤ（例えば、血清アルブミン結合性ＩＳＶＤ）を含む抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し、ここで、前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、次のアミノ酸残基を含む：
−  ８９Ｔ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ。
【０１４４】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種のＰ２Ｘ７結合剤（本明細書に記載）および任意に１種以上の他のＩＳＶＤ（例えば、血清アルブミン結合性ＩＳＶＤ）を含む抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し、ここで、前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、次のアミノ酸残基を含む：
−  １１位のアミノ酸残基は、好ましくは、ＬまたはＶから選択され；および
−  ８９位のアミノ酸残基は、Ｔであり；および
−  １１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され（および好ましくはＴであり）；および
−  １１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択される（および好ましくはＳである）。
【０１４５】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種のＰ２Ｘ７結合剤（本明細書に記載）および任意に１種以上の他のＩＳＶＤ（例えば、血清アルブミン結合性ＩＳＶＤ）を含む抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し、ここで、前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、次のアミノ酸残基を含む：
−  １１位のアミノ酸残基は、Ｖであり；および
−  ８９位のアミノ酸残基は、Ｌであり；および
−  １１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され；および
−  １１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択される。
【０１４６】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種のＰ２Ｘ７結合剤（本明細書に記載）および任意に１種以上の他のＩＳＶＤ（例えば、血清アルブミン結合性ＩＳＶＤ）を含む抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し、ここで、前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、次のアミノ酸残基を含む：
−  １１Ｖと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ。
【０１４７】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種のＰ２Ｘ７結合剤（本明細書に記載）および任意に１種以上の他のＩＳＶＤ（例えば、血清アルブミン結合性ＩＳＶＤ）を含む抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し、ここで、前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、次のアミノ酸残基を含む：
−  ８９Ｌと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ。
【０１４８】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種のＰ２Ｘ７結合剤（本明細書に記載）および任意に１種以上の他のＩＳＶＤ（例えば、血清アルブミン結合性ＩＳＶＤ）を含む抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し、ここで、前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、次のアミノ酸残基を含む：
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ。
【０１４９】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種のＰ２Ｘ７結合剤（本明細書に記載）および任意に１種以上の他のＩＳＶＤ（例えば、血清アルブミン結合性ＩＳＶＤ）を含む抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し、ここで、前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、次のアミノ酸残基を含む：
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ。
別の側面において、本発明は、少なくとも１種のＰ２Ｘ７結合剤（本明細書に記載）および任意に１種以上の他のＩＳＶＤ（例えば、血清アルブミン結合性ＩＳＶＤ）を含む抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し、ここで、前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、８９位にＴを含む。
【０１５０】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種のＰ２Ｘ７結合剤（本明細書に記載）および任意に１種以上の他のＩＳＶＤ（例えば、血清アルブミン結合性ＩＳＶＤ）を含む抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し、ここで、前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、１１位にＶ、かつ８９位にＬを含む。
再び、これらの二重パラトピック抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドはすべて、好ましくはＣ末端伸長Ｘ（ｎ）（本明細書に記載）および１位にＤを含み、さらに本明細書に記載されるように、血清アルブミン結合性ＩＳＶＤを含み得る。
【０１５１】
本明細書の開示から明らかであるように、本発明により提供される抗Ｐ２Ｘ７ポリペプチドは、異なる「形態」を有し、すなわち、本質的に一価、二価または三価であり、単一特異性、二重特異性、三重特異性などであることができ、および二重パラトピックであることができる（例えば本明細書およびWO 08/020079で定義されているように）。例えば、本発明の化合物は、以下であることができる：
−  （本質的に）１価である、すなわち、（本質的に）本発明の単一Ｐ２Ｘ７受容体結合剤を含む。前述のように、一価の形態で使用する場合、本発明のＰ２Ｘ７受容体結合剤は、好ましくは、本明細書にさらに記載するようにＣ末端伸長Ｘ（ｎ）を有する。本発明のかかる化合物はまた、半減期が延長されていてもよい；
【０１５２】
−  （本質的に）二価または三価かつ単一特異性であり得る。本発明のかかる化合物は、Ｐ２Ｘ７受容体に対する２種以上のＩＳＶＤを含み、これらは同一でも異なっていてもよく、異なる場合は、同一のエピトープまたはＰ２Ｘ７受容体に対してまたはＰ２Ｘ７受容体上の異なるエピトープに対して、指向されていてもよい（後者の場合、本発明の二重パラトピックまたは多重パラトピック化合物を提供するために）。かかる本発明の化合物はまた、半減期が延長されていてもよい；
−  （本質的に）二価、三価（または多価）かつ二重特異性または三重特異性（または多重特異性）であり得る。かかる本発明の化合物は、Ｐ２Ｘ７受容体および少なくとも１つの他の標的に指向される。本明細書に記載されるように、前記他の標的は、例えば、Ｐ２Ｘ７受容体および前記他の治療標的に関して二重特異性である本発明の化合物を提供するために、別の治療的に関連する標的（すなわち、Ｐ２Ｘ７受容体以外）であり得る。前記他の標的はまた、延長された半減期を有する本発明の化合物を提供するために、延長された半減期を提供する標的（例えば、ヒト血清アルブミン）であり得る。本明細書で前述されたように、かかる他の標的はまた、本発明の化合物が特定の細胞、組織または器官を標的とすることを可能にし得る。これらのアプローチ／ＩＳＶＤを組み合わせて、例えば、Ｐ２Ｘ７受容体および少なくとも１つの他の治療的に関連する標的に対して二重特異性であり、かつ半減期が延長された、本発明の化合物を提供することも可能である。
【０１５３】
再度、これらのポリペプチドはすべて、好ましくは本明細書にさらに記載されている。
当業者には明らかであるように、本発明の化合物の局所使用（すなわち、皮膚または眼に）が意図される場合、または、例えばＧＩ管（胃腸管；すなわち経口投与後または坐剤による投与後）のどこかまたは肺内（すなわち吸入による投与後）のどこかで（局所的な）治療作用を有することが意図される場合、または、作用が意図される場所に直接適用したい（例えば、直接注射によって）場合、本発明の化合物は、通常、半減期延長を必要としない。また、特定の急性症状または適応症の処置のためには、延長された半減期を有しないことが好ましいかもしれない。これらの場合、半減期延長のない、本発明の一価化合物または本発明の別の化合物の使用（例えば、Ｐ２Ｘ７受容体に関して二価または二重パラトピックである本発明の化合物の使用）が好ましい場合がある。
【０１５４】
本発明のかかる化合物の、いくつかの好ましいが非限定的な例は、以下の表Ｄ−１に概略的に示されており、これらの各々は、本発明のさらなる側面を形成する（２種以上の３ｃ２３ベースの結合剤が本発明のポリペプチドに存在する場合、それらが同一であっても異なっていてもよく、それらが異なる場合、それらのすべては、好ましくは、本明細書に記載の１１位、８９位、１１０位および／または１１２位の突然変異（の適切な組み合わせ）を含み、かつ好ましくは、本明細書に記載の同じＣＤＲも有する。２種以上の１Ｃ８１ベースの結合剤が本発明のポリペプチドに存在する場合も、同様である）。半減期延長を伴わない本発明の適切な化合物の他の例は、本明細書の開示に基づいて当業者には明らかであろう。本発明の二重パラトピックポリペプチドのいくつかの好ましい例を、下の表Ｅ−１およびＥ−２に示す。
【０１５５】
表Ｄ−１：半減期延長ＩＳＶＤなしの本発明のいくつかのポリペプチドの概略図
【表４】
2019503987.tif 000005
【０１５６】
当業者に明らかなように、本発明の化合物の全身投与が、および／または慢性疾患もしくは障害の予防および／または処置用の使用が意図される場合、本発明の前記化合物が、延長された半減期（本明細書中で定義される）を有すること、すなわち、本発明のかかる化合物に存在するＰ２Ｘ７受容体結合剤（単数または複数）と比較して延長された半減期を有することが好ましい。より好ましくは、本発明のかかる化合物は、半減期延長ＩＳＶＤを、例えば好ましくは、ＩＳＶＤ特にナノボディなどであってヒト血清アルブミンに結合するもの（本明細書に記載）を含む。
本発明のかかる化合物の、いくつかの好ましいが非限定的な例は、以下の表Ｄ−２に概略的に示されており、これらの各々は、本発明のさらなる側面を形成する。半減期延長を有する本発明の適切な化合物の他の例は、本明細書の開示に基づいて当業者には明らかであろう。一般に、半減期延長を有する本発明の化合物では、Ｃ末端伸長の存在がより好ましい。
【０１５７】
表Ｄ−２：半減期延長ＩＳＶＤを有する本発明のいくつかのポリペプチドの概略図
【表５】
2019503987.tif 000006
【０１５８】
図４Ａは、配列番号９３〜９８として、一般式［３ｃ２３］−［３ｃ２３］−［ＨＬＥ］の本発明の化合物のいくつかの非限定的な例を示す。使用された３ｃ２３ビルディングブロックは、Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ突然変異またはＶ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｋ突然変異のいずれかを保有する。血清アルブミン結合剤は、配列番号８９または、Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ突然変異もしくはＬ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｋ突然変異を有する配列番号８９のアルブミン結合剤、のいずれかであり、これらの突然変異は既存の抗体による結合を低減し、好ましい。リンカーは、それぞれ３５ＧＳおよび９ＧＳリンカーである。ポリペプチドは、１位にＤを有し、Ｃ末端アラニンを保有する。図４Ａはまた、配列番号１４４として、ヒト化された一般式［３ｃ２３］−［３ｃ２３］−［ＨＬＥ］の本発明の化合物の非限定的な例を示す。
【０１５９】
図４Ｂは、配列番号９９〜１０４として、一般式［１ｃ８１］−［１ｃ８１］−［ＨＬＥ］の本発明の化合物のいくつかの非限定的な例を示す。使用された１ｃ８１ビルディングブロックは、Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ突然変異またはＶ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｋ突然変異のいずれかを保有する。血清アルブミン結合剤は、配列番号８９または、Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ突然変異もしくはＬ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｋ突然変異を有する配列番号８９のアルブミン結合剤の、いずれかであり、これらの突然変異は既存の抗体による結合を低減し、好ましい。リンカーは、それぞれ３５ＧＳおよび９ＧＳリンカーである。ポリペプチドは、１位にＤを有し、Ｃ末端アラニンを保有する。図４Ｂはまた、配列番号１４５として、ヒト化された一般式［１ｃ８１］−［１ｃ８１］−［ＨＬＥ］の本発明の化合物の非限定的な例を示す。
【０１６０】
本発明により提供される二重パラトピックポリペプチド
前述したように、１つの特に好ましい態様において、本発明は、二重パラトピック抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドを提供する。特に、本発明により提供される二重パラトピック抗Ｐ２Ｘ７ポリペプチドは、本明細書に記載の少なくとも１種（例えば１または２種）の３ｃ２３ベースの結合剤、および本明細書に記載の少なくとも１種（例えば１または２種）の１ｃ８１ベースの結合剤を含む。
したがって、さらなる側面において、本発明は、本明細書に記載の少なくとも１種（例えば、１または２種）の３ｃ２３ベースの結合剤および本明細書に記載の少なくとも１種（例えば、１または２種）の１ｃ８１ベースの結合剤を含む、ポリペプチド（これは好ましくは融合タンパク質である）に関する。
【０１６１】
本発明によって提供される二重パラトピックポリペプチドは、延長された半減期（本発明のポリペプチドに関して本明細書に一般的に記載されている）を有することができ、この目的のために、血清アルブミン結合性ＩＳＶＤを含んでよい。
したがって、さらなる側面において、本発明は、本明細書に記載の少なくとも１種（例えば、１または２種）の３ｃ２３ベースの結合剤、および本明細書に記載の少なくとも１種（例えば、１または２種）の１ｃ８１ベースの結合剤を含むポリペプチド（これは好ましくは融合タンパク質である）であって、前記ポリペプチドが、ヒト対象において、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば少なくとも１０日の半減期（本明細書に定義）を有する、前記ポリペプチドに関する。
【０１６２】
さらなる側面において、本発明は、本明細書に記載の少なくとも１種（例えば、１または２種）の３ｃ２３ベースの結合剤、および本明細書に記載の少なくとも１種（例えば、１または２種）の１ｃ８１ベースの結合剤、および少なくとも１種（および好ましくは１種）の血清アルブミン結合性ＩＳＶＤ（および特に血清アルブミン結合性ナノボディ）を含む、ポリペプチド（これは好ましくは融合タンパク質である）に関する。再度、前記ポリペプチドは好ましくは、ヒト対象において、少なくとも１日、好ましくは少なくとも３日、より好ましくは少なくとも７日、例えば少なくとも１０日の半減期（本明細書に定義）を有する。
前述したように、本発明の二重パラトピックポリペプチドは好ましくはまた、Ｃ末端伸長Ｘ（ｎ）（本明細書にさらに記載）を有し、および好ましくは、１位のアミノ酸残基（すなわちポリペプチドのＮ末端）は、Ｄである。
本発明の二重パラトピックポリペプチドにおいて、３ｃ２３ベースの結合剤（単数または複数）および１ｃ８１ベースの結合剤（単数または複数）（および存在する場合、血清アルブミン結合性ＩＳＶ）は再度、互いに直接的に、または１つ以上の適切なリンカーを介して、結合することができる。いくつかの好ましいが非限定的なリンカーは、９ＧＳ、１５ＧＳまたは３５ＧＳリンカーである。
【０１６３】
それほど好ましくはないが、本発明のポリペプチドが、１種以上の３ｃ２３ベースの結合剤、１種以上の１ｃ８１ベースの結合剤および血清アルブミン結合性ＩＳＶＤ（存在する場合）に加えて、本発明の化合物について本明細書に一般的に記載されているような１つ以上の他のアミノ酸配列、化学物質または部分を含むこともまた、除外されない。再度、これらの他の結合ドメインまたは結合単位は、好ましくは１種以上のＩＳＶＤを含み、より好ましくはすべてＩＳＶＤであり、そして再度、二重パラトピックポリペプチドがそのＣ末端にＩＳＶＤを有する場合、本発明のポリペプチド（すなわち、前記Ｃ末端ＩＳＶＤ）は、好ましくは、本明細書に記載のＣ末端伸長Ｘ（ｎ）を有する。再度、存在するすべてのＩＳＶＤは、好ましくは、それらの配列内に、既存の抗体による結合を減少させる１つ以上のフレームワーク突然変異を、特に、PCT/EP2015/060643に記載されているか、および／または本質的にＰ２Ｘ７結合剤について本明細書に記載されているような、１１位、８９位、１１０位および／または１１２位のアミノ酸残基／突然変異を有する。また、本発明の二重パラトピックポリペプチドは、好ましくは、１位にＤを有する。
【０１６４】
一側面において、本発明は、少なくとも１種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）および少なくとも１種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）を含む、二重パラトピック抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し（この二重特異性ポリペプチドは本明細書にさらに記載される）、ここで前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、次のアミノ酸残基を含む：
−  １１位のアミノ酸残基は、好ましくは、ＬまたはＶから選択され；および
−  ８９位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＶまたはＬから適切に選択され；および
−  １１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され；および
−  １１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択され；
ただしここで、（ｉ）８９位はＴであり；または（ｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、または（ｉｉｉ）８９位はＬであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｉｖ）８９位はＬであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉ）８９位はＬであり、かつ１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１０位はＫもしくはＱであり；または（ｖｉｉ）１１位はＶであり、かつ１１２位はＫもしくはＱである。
【０１６５】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）および少なくとも１種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）を含む、二重パラトピック抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し（この二重パラトピックポリペプチドは本明細書にさらに記載される）、ここで前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、次のアミノ酸残基を含む：
−  ８９Ｔ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ。
【０１６６】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）および少なくとも１種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）を含む、二重パラトピック抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し（この二重特異性ポリペプチドは本明細書にさらに記載される）、ここで前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、次のアミノ酸残基を含む：
−  １１位のアミノ酸残基は、好ましくは、ＬまたはＶから選択され；および
−  ８９位のアミノ酸残基は、Ｔであり；および
−  １１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され（および好ましくはＴであり）；および
−  １１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択される（および好ましくはＳである）。
【０１６７】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）および少なくとも１種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）を含む、二重パラトピック抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し（この二重パラトピックポリペプチドは本明細書にさらに記載される）、ここで前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、次のアミノ酸残基を含む：
−  １１位のアミノ酸残基は、Ｖであり；および
−  ８９位のアミノ酸残基は、Ｌであり；および
−  １１０位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｔ、ＫまたはＱから適切に選択され；および
−  １１２位のアミノ酸残基は、好ましくは、Ｓ、ＫまたはＱから適切に選択される。
【０１６８】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）および少なくとも１種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）を含む、二重パラトピック抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し（この二重パラトピックポリペプチドは本明細書にさらに記載される）、ここで前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、次のアミノ酸残基を含む：
−  １１Ｖと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  １１Ｖと、８９Ｌおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ。
【０１６９】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）および少なくとも１種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）を含む、二重パラトピック抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し（この二重パラトピックポリペプチドは本明細書にさらに記載される）、ここで前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、次のアミノ酸残基を含む：
−  ８９Ｌと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１０Ｋもしくは１１０Ｑとの組み合わせ；または
−  ８９Ｌと、１１Ｖおよび１１２Ｋもしくは１１２Ｑとの組み合わせ。
【０１７０】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）および少なくとも１種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）を含む、二重パラトピック抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し（この二重パラトピックポリペプチドは本明細書にさらに記載される）、ここで前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、次のアミノ酸残基を含む：
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１０Ｋもしくは１１０Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ。
【０１７１】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）および少なくとも１種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）を含む、二重パラトピック抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し（この二重パラトピックポリペプチドは本明細書にさらに記載される）、ここで前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、次のアミノ酸残基を含む：
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖとの組み合わせ；または
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、８９Ｌとの組み合わせ；または
−  １１２Ｋもしくは１１２Ｑと、１１Ｖおよび８９Ｌとの組み合わせ。
【０１７２】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）および少なくとも１種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）を含む、二重パラトピック抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し（この二重パラトピックポリペプチドは本明細書にさらに記載される）、ここで前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、８９位にＴを含む。
別の側面において、本発明は、少なくとも１種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）および少なくとも１種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）を含む、二重パラトピック抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し（この二重パラトピックポリペプチドは本明細書にさらに記載される）、ここで前記ポリペプチド中に存在するすべてのＩＳＶＤは、１１位にＶを含み、かつ８９位にＬを含む。
【０１７３】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）および少なくとも１種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）を含む、二重パラトピック抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し（この二重パラトピックポリペプチドは本明細書にさらに記載される）、ここで、３ｃ２３結合剤は、配列番号１５〜４２および１３６〜１４３および１６９〜１７６から、またはＡ１４Ｐ、Ｇ６０Ａ、Ｄ７３Ｎ、Ａ７４Ｓ、Ｐ７９Ｙおよび／またはＫ８３Ｒから選択される１つ以上の突然変異（の適切な組み合わせ）、もしくはこれらの突然変異の２つ以上（および最大ですべてを含む）の任意の適切な組み合わせを有するそれらのバリアントから、適切に選択され（再度、それぞれの場合好ましくは、ポリペプチドのＮ末端にある場合には１位のＤを有し、例えば配列番号１５４〜１６１であり、およびポリペプチドのＣ末端にある場合にはＣ末端アラニン有し、例えば配列番号１６９〜１７６であり）、およびここで、１ｃ８１結合剤は、配列番号４３〜７０および１２９〜１３５から、または、Ｋ１０Ｇ、Ａ１４Ｐ、Ｌ８２Ｍ、Ｋ８３Ｒ、Ｌ４５Ｒ、Ｈ７２Ｄ、Ｐ７４Ｓ、Ｒ７５Ｋおよび／またはＳ７７Ｔから選択される１つ以上の突然変異（の適切な組み合わせ）を有するそれらのバリアントから、適切に選択される（再度、それぞれの場合好ましくは、ポリペプチドのＮ末端にある場合には１位のＤを有し、例えば配列番号１４７〜１５３であり、このうち配列番号１５２が特に好ましく、およびポリペプチドのＣ末端にある場合にはＣ末端アラニンを有し、例えば配列番号１６２〜１６８であり、このうち配列番号１６７が特に好ましい）。
【０１７４】
別の側面において、本発明は、少なくとも１種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）および少なくとも１種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）を含む、二重パラトピック抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドに関し（この二重パラトピックポリペプチドは本明細書にさらに記載される）、ここで、３ｃ２３結合剤は、配列番号２４、２５、３８、３９、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２および１４３から、またはＡ１４Ｐ、Ｇ６０Ａ、Ｄ７３Ｎ、Ａ７４Ｓ、Ｐ７９Ｙおよび／もしくはＫ８３Ｒから選択される１つ以上の突然変異（の適切な組み合わせ）、もしくはこれらの突然変異の２つ以上（および最大ですべてを含む）の任意の適切な組み合わせを有するそれらのバリアントから、適切に選択され（再度、それぞれの場合好ましくは、ポリペプチドのＮ末端にある場合には１位のＤを有し、例えば配列番号１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０および１６１であり、およびポリペプチドのＣ末端にある場合にはＣ末端アラニンを有し、例えば配列番号１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７６および１７６であり）、ここで、１ｃ８１結合剤は、配列番号５２、５３、６６、６７、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４および１３５から、またはＫ１０Ｇ、Ａ１４Ｐ、Ｌ８２Ｍ、Ｋ８３Ｒ、Ｌ４５Ｒ、Ｈ７２Ｄ、Ｐ７４Ｓ、Ｒ７５Ｋおよび／もしくはＳ７７Ｔから選択される１つ以上の突然変異（の適切な組み合わせ）を有するそれらのバリアントから、適切に選択される（再度、それぞれの場合好ましくは、ポリペプチドのＮ末端にある場合には１位のＤを有し、例えば配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２および１５３であり、この中で配列番号１５２が特に好ましく、およびポリペプチドのＣ末端にある場合にはＣ末端アラニンを有し、例えば配列番号１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７および１６８であり、この中で配列番号１６７が特に好ましい）。
【０１７５】
再び、これらの二重パラトピック抗Ｐ２Ｘ７受容体ポリペプチドはすべて、好ましくはＣ末端伸長Ｘ（ｎ）（本明細書に記載）および１位にＤを含み、さらに本明細書に記載されるように、血清アルブミン結合性ＩＳＶＤを含んでよい。
本明細書の開示から、本発明の二重パラトピックポリペプチドが異なる「形態」を有し得ることは明らかであろう。例えば、限定するものではないが、本発明の二重パラトピックポリペプチドは：
−  本質的に、１種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）および１種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）からなる；
−  本質的に、２種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）および１種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）からなる；
−  本質的に、１種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）および２種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）からなる；
−  本質的に、２種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）および２種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）からなる；
−  本質的に、１種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）、１種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）、およびヒト血清アルブミンに対する１種のＩＳＶＤ（本明細書に記載）からなる；
−  本質的に、２種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）、１種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）、およびヒト血清アルブミンに対する１種のＩＳＶＤ（本明細書に記載）からなる；
−  本質的に、１種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）、２種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）、およびヒト血清アルブミンに対する１種のＩＳＶＤ（本明細書に記載）からなる；または、
−  本質的に、２種の３ｃ２３ベースの結合剤（本明細書に記載）、２種の１ｃ８１ベースの結合剤（本明細書に記載）、およびヒト血清アルブミンに対する１種のＩＳＶＤ（本明細書に記載）からなる。
【０１７６】
発明の二重パラトピックポリペプチドのための他の適切な形態は、本明細書の開示に基づいて当業者には明らかであろう。
当業者には明らかであるように、本発明の二重パラトピックポリペプチドの局所使用（すなわち、皮膚または眼に）が意図される場合、または、例えばＧＩ管（すなわち経口投与後または坐剤による投与後）のどこかまたは肺内（すなわち吸入による投与後）のどこかで（局所的な）治療作用を有することが意図される場合、または、作用が意図される場所に直接適用したい（例えば、直接注射によって）場合、本発明のポリペプチドは、通常、半減期延長を必要としない。これらの場合、半減期延長のない、本発明の二重パラトピック二重特異的ポリペプチドまたは本発明の別のポリペプチドの使用が好ましい場合がある。
【０１７７】
本発明の二重パラトピックポリペプチドの、いくつかの好ましいが非限定的な例は、以下の表Ｅ−１に概略的に示されており、これらの各々は、本発明のさらなる側面を形成する（再度、２種以上の３ｃ２３ベースの結合剤が本発明の二重パラトピックポリペプチドに存在する場合、それらは同一であっても異なっていてもよく、それらが異なる場合、それらのすべては、好ましくは、本明細書に記載の１１位、８９位、１１０位および／または１１２位の突然変異（の適切な組み合わせ）を含み、かつ好ましくは、本明細書に記載の同じＣＤＲも有する。２種以上の１Ｃ８１ベースの結合剤が本発明の二重パラトピックポリペプチドに存在する場合も、同様である）。半減期延長を伴わない本発明の適切な二重パラトピックポリペプチドの他の例は、本明細書の開示に基づいて当業者には明らかであろう。再度、これらのポリペプチドは、好ましくは、１位にＤを有する。
【０１７８】
表Ｅ−１：半減期延長ＩＳＶＤを有しない本発明のいくつかの二重パラトピックポリペプチドの概略図。
【表６】
2019503987.tif 000007
【０１７９】
当業者に明らかなように、本発明の二重パラトピックポリペプチドの全身投与が、および／または慢性疾患もしくは障害の予防および／または処置用の使用が意図される場合、本発明の前記二重パラトピックポリペプチドが延長された半減期（本明細書中で定義される）を有すること、すなわち、本発明のかかるポリペプチドに存在する１ｃ８１ベースの結合剤（単数または複数）と比較して延長された半減期を有することが好ましい。より好ましくは、本発明のかかる二重パラトピックポリペプチドは、半減期延長ＩＳＶＤを、例えば好ましくは、ＩＳＶＤ特にナノボディなどであってヒト血清アルブミンに結合するもの（本明細書に記載）を含む。
本発明のかかる二重パラトピックポリペプチドのいくつかの好ましいが非限定的な例は、以下の表Ｅ−２に概略的に示されており、これらの各々は、本発明のさらなる側面を形成する。半減期延長を有する本発明の適切な二重パラトピックポリペプチドの他の例は、本明細書の開示に基づいて当業者には明らかであろう。一般に、半減期延長を有する本発明の二重パラトピックポリペプチドでは、Ｃ末端伸長の存在がより好ましい。再度、これらのポリペプチドは、好ましくは１位にＤを有する。
【０１８０】
表Ｅ−２：半減期延長ＩＳＶＤを有する本発明のいくつかの二重パラトピックポリペプチドの概略図。
【表７】
2019503987.tif 000008
【０１８１】
図４Ｃは、配列番号１０５〜１２８として、一般式［３ｃ２３］−［１ｃ８１］−［ＨＬＥ］（配列番号１０５〜１１６）または［１ｃ８１］−［３ｃ２３］−［ＨＬＥ］（配列番号１１７〜１２８）の本発明の二重パラトピック化合物のいくつかの非限定的な例を示す。使用される３ｃ２３および１ｃ８１ビルディングブロックは、Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ突然変異またはＶ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｋ突然変異のいずれかを保有する。血清アルブミン結合剤は、配列番号８９または、Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ突然変異もしくはＬ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｋ突然変異を有する配列番号８９のアルブミン結合剤の、いずれかであり、これらの突然変異は既存の抗体による結合を低減し、好ましい。リンカーは、それぞれ３５ＧＳおよび９ＧＳリンカーである。ポリペプチドは、１位にＤを有し、Ｃ末端アラニンを保有する。図４Ｃは、配列番号１４６として、ヒト化された一般式［３ｃ２３］−［１ｃ８１］−［ＨＬＥ］の本発明の二重パラトピック化合物の非限定的な例を示す。
【０１８２】
本発明のさらなる側面
本発明はまた、本明細書に記載の本発明のポリペプチドをコードする、ヌクレオチド配列または核酸に関する。本発明はさらに、上記ヌクレオチド配列または核酸およびそれ自体知られている遺伝子構築物のための１つ以上の要素を含む、遺伝子構築物を含む。遺伝子構築物は、プラスミドまたはベクターの形態であってよい。再度、かかる構築物は一般的に、Ablynx N.V.の公開特許出願、例えばWO 2004/041862、WO 2006/122786、WO 2008/020079、WO 2008/142164またはWO 2009/068627に記載されている通りであることができる。
本発明はまた、かかるヌクレオチド配列または核酸を含み、かつ／または本発明のポリペプチドを発現する（または発現することができる）宿主または宿主細胞にも関する。再度、かかる宿主細胞は一般的に、Ablynx N.V.の公開特許出願、例えばWO 2004/041862、WO 2006/122786、WO 2008/020079、WO 2008/142164またはWO 2009/068627に記載されている通りであることができる。
【０１８３】
本発明はまた、本発明のポリペプチドを調製する方法であって、方法が、本明細書に記載の宿主細胞を、該宿主細胞が本明細書に記載のアミノ酸配列、融合タンパク質または構築物を産生または発現するような条件下で、培養または維持することを含み、および任意に、こうして産生された本発明のポリペプチドを単離することをさらに含む、前記方法に関する。再度、かかる方法は、Ablynx N.V.の公開特許出願、例えばWO 2004/041862、WO 2006/122786、WO 2008/020079、WO 2008/142164またはWO 2009/068627に一般的に記載されているように実施することができる。
本発明はまた、本発明の少なくとも１つのポリペプチド、および任意に少なくとも１つの薬学的に許容し得る担体、希釈剤または賦形剤を含む、医薬組成物に関する。かかる調製物、担体、賦形剤および希釈剤は一般的に、Ablynx N.V.の公開特許出願、例えばWO 2004/041862、WO 2006/122786、WO 2008/020079、WO 2008/142164またはWO 2009/068627に記載されている通りであることができる。
【０１８４】
しかしながら、本発明の好ましいポリペプチドは延長した半減期を有するので、それらは好ましくは循環系に投与される。したがってそれらは、本発明のポリペプチドが循環系に入ることを可能にする任意の適切な方法で、例えば静脈内に、注射または注入により、または本発明のポリペプチドが循環系に入ることを可能にする任意の他の適切な方法で（経口投与、皮下投与、筋肉内投与、皮膚を介する投与、鼻腔内投与、肺を介する投与などを含む）、投与することができる。適切な投与方法および投与経路は、再度、例えばAblynx N.V.の公開特許出願、例えばWO 2004/041862、WO 2006/122786、WO 2008/020079、WO 2008/142164またはWO 2009/068627の教示から、当業者には明らかである。
したがって、別の側面において、本発明は、本発明のポリペプチドの使用によって予防または処置することができる少なくとも１つの疾患または障害の予防および／または処置の方法であって、方法が、それを必要とする対象に、薬学的に活性な量の、本発明のポリペプチドおよび／またはそれを含む医薬組成物を投与することを含む、前記方法に関する。
【０１８５】
本発明の文脈において、用語「予防および／または処置」とは、疾患を予防することおよび／または処置することを含むばかりでなく、一般的には、以下を含む：疾患の発症を予防すること、疾患の進行を遅くすることまたは逆行させること、疾患に関連する１つ以上の症状の発症を予防することまたは遅延させること、疾患に関連する１つ以上の症状を軽減することおよび／または緩和すること、疾患および／またはそれに関連する任意の症状の重篤度および／または持続時間を低減すること、および／または疾患および／またはそれに関連する任意の症状の重篤度のさらなる増加を予防すること、疾患によって引き起こされる任意の生理学的損傷を予防、軽減または逆転させること、および一般的に、処置される患者にとって有益な任意の薬理学的作用。
処置される対象は、任意の温血動物であり得るが、特に哺乳動物、より具体的にはヒトである。当業者に明らかであるように、処置される対象は特に、本明細書に記載の疾患および障害に罹患しているか、またはそのリスクのある人である。
【０１８６】
別の態様において、本発明は免疫療法のための方法に関し、この方法は、本明細書に記載の疾患および障害に罹患しているかまたはそのリスクのある対象に、薬学的に活性な量の本発明のポリペプチドおよび／またはこれを含む医薬組成物を投与することを含む。
本発明のポリペプチドおよび／またはこれを含む組成物は、予防または処置される疾患または障害を予防および／または処置するのに適した処置レジメンに従って、投与される。臨床医は、一般に適切な処置レジメンを、予防または処置される疾患または障害、処置される疾患の重篤度および／またはその症状の重篤度、使用される特定のポリペプチド、投与の特定の経路、および使用される医薬製剤または組成物、患者の年齢、性別、体重、食事、全身状態などの因子、および臨床医に知られている同様の因子に依存して、決定することができる。
【０１８７】
一般に、処置レジメンは、本発明の１種以上のポリペプチドまたはこれを含む１種以上の組成物を、１つ以上の薬学的に有効な量または用量で、投与することを含む。投与されるべき特定の量または用量は、臨床医によって、再度、上記で引用した因子に基づいて決定することができる。
【０１８８】
一般に、本明細書に記載の疾患および障害の予防および／または処置のために、処置される特定の疾患または障害、使用される本発明のポリペプチドの効力および／または半減期、特定の投与経路および、使用される特定の医薬製剤または組成物に依存して、本発明のポリペプチドは一般に、１日当たり体重１ｋｇあたり１ｇから０．０１μｇの間、好ましくは１日当たり体重１ｋｇあたり０．１ｇから０．１μｇの間の量で、例えば約１、１０、１００、または１０００μｇ／体重ｋｇ／日で、連続的に（例えば輸液により）、または１日１回の用量として、または１日当たり複数回の分割用量として、投与されるであろう。臨床医は一般に、本明細書に記載の因子に応じて、適切な１日用量を決定することができるであろう。特定の場合には、臨床医は、例えば上記の因子および自身の専門的判断に基づいて、これらの量から逸脱することを選択可能であることは明らかであろう。一般に、投与される量に関するいくつかの指針は、同じ標的に対して本質的に同じ経路を介して投与される比較可能な従来の抗体または抗体断片に対して通常投与される量から、ただし親和性／結合活性、有効性、生体内分布、半減期および当業者に知られている類似の因子における相違を考慮に入れて、得ることができる。
【０１８９】
通常、上記の方法において、本発明の単一のポリペプチドが使用される。しかし、本発明の２種以上のポリペプチドを組み合わせて使用することは、本発明の範囲内である。
本発明のポリペプチドはまた、１種以上のさらなる薬学的に活性な化合物または成分と組み合わせて、すなわち、相乗効果をもたらし得るかまたは相乗効果をもたらさない併用処置レジメンとして、使用され得る。再度、臨床医は、かかるさらなる化合物または成分、ならびに適切な併用処置レジメンを、上記の因子および自身の専門的判断に基づいて選択することができる。
【０１９０】
特に、本発明のポリペプチドは、本発明の融合タンパク質または構築物で予防または処置することができる疾患および障害の予防および／または処置のために使用されるかまたは使用可能である、他の薬学的に活性な化合物または成分と組み合わせて、使用することができ、その結果、相乗効果が得られてもよいし、得られなくてもよい。
臨床医には明らかであるように、本発明に従って使用される処置レジメンの有効性は、関連する疾患または障害についてそれ自体が既知の任意の方法により、決定および／または追跡することができる。臨床医はまた、適切な場合およびまたは場合に応じて、特定の処置レジメンを変更または改変して、所望の治療効果を達成し、望ましくない副作用を回避し、制限しまたは低減し、および／または一方で所望の治療効果を達成することと、他方で望ましくない副作用を回避する、制限する、または低減することとの間の適切なバランスを達成することができる。
【０１９１】
一般に、処置レジメンは、所望の治療効果が達成されるまで、および／または所望の治療効果が維持される限り、続けられる。再度、これは臨床医が決定することができる。
処置される対象は、任意の温血動物、特に哺乳動物、より具体的にはヒトであり得る。当業者に明らかであるように、処置される対象は、特に、本明細書に記載の疾患および障害に罹患しているか、またはそのリスクのある人である。
【０１９２】
本発明のＰ２Ｘ７受容体結合剤および化合物は、Ｐ２Ｘ７受容体に結合することができるので、これらは特に、Ｐ２Ｘ７、Ｐ２Ｘ７受容体またはＰ２Ｘ７シグナル伝達経路に関連するか、および／またはＰ２Ｘ７シグナル伝達経路を調節することによって予防、処置または緩和することができる疾患または障害の予防または処置のために、使用することができる。これらには、以下の疾患が含まれるがそれに限定はされない：炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節リウマチ、変形性関節症、がん、糖尿病、腎炎、神経因性疼痛、てんかん、神経変性疾患例えばアルツハイマー病およびハンチントン病など、多発性硬化症および脳卒中および高血圧、虚血を含む心血管疾患、ならびに本明細書に記載の他の障害および疾患。特に、本発明のポリペプチドおよび組成物は、Ｐ２Ｘ７介在性障害を伴う疾患の診断、予防および処置に使用することができる。
本発明の他の側面、態様、利点および用途は、本明細書のさらなる説明から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１９３】
本発明は、以下の非限定的な好ましい側面、実施例および図面を用いてさらに説明される。
【図１】図１は、本明細書で具体的に言及されるいくつかのアミノ酸位置、およびいくつかの代替的な番号付けシステム（ＡｈｏおよびＩＭＧＴなど）によるそれらの番号付けを列挙した表である。
【図２−１】図２は、本明細書で言及されるアミノ酸配列を列挙する。
【図２−２】図２は、本明細書で言及されるアミノ酸配列を列挙する。
【図２−３】図２は、本明細書で言及されるアミノ酸配列を列挙する。
【図２−４】図２は、本明細書で言及されるアミノ酸配列を列挙する。
【図２−５】図２は、本明細書で言及されるアミノ酸配列を列挙する。
【図２−６】図２は、本明細書で言及されるアミノ酸配列を列挙する。
【図２−７】図２は、本明細書で言及されるアミノ酸配列を列挙する。
【図２−８】図２は、本明細書で言及されるアミノ酸配列を列挙する。
【図２−９】図２は、本明細書で言及されるアミノ酸配列を列挙する。
【図３Ａ−１】図３Ａは、標準Ａ（配列番号１）と、３ｃ２３（配列番号８７）および配列番号１５〜４２の３ｃ２３ベースのビルディングブロックの配列の、アライメントを示す。
【図３Ａ−２】図３Ａは、標準Ａ（配列番号１）と、３ｃ２３（配列番号８７）および配列番号１５〜４２の３ｃ２３ベースのビルディングブロックの配列の、アライメントを示す。
【図３Ｂ−１】図３Ｂは、標準Ｂ（配列番号８）と、１ｃ８１（（配列番号８８）および配列番号４３〜７０の１ｃ８１ベースのビルディングブロックの配列の、アラインメントを示す。
【図３Ｂ−２】図３Ｂは、標準Ｂ（配列番号８）と、１ｃ８１（（配列番号８８）および配列番号４３〜７０の１ｃ８１ベースのビルディングブロックの配列の、アラインメントを示す。
【図４Ａ】図４は、本発明のいくつかの例示的なポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
【図４Ｂ】図４は、本発明のいくつかの例示的なポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
【図４Ｃ−１】図４は、本発明のいくつかの例示的なポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
【図４Ｃ−２】図４は、本発明のいくつかの例示的なポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
【図４Ｃ−３】図４は、本発明のいくつかの例示的なポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
【図４Ｃ−４】図４は、本発明のいくつかの例示的なポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
【０１９４】
【図５】図５は、ヒト健常対象からの９６の血清試料を、標準Ａおよび標準Ａの本発明による２つの代表的なバリアント（すなわち、それぞれ［標準Ａ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｃ末端アラニン］および［標準Ａ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｋ＋Ｃ末端アラニン］）への結合について試験した場合の、例１で得られたデータ点の２つの対応するプロットを示す。各ドットは、試験した９６の試料のうちの１つの結合レベルを表す。右側のパネルと左側のパネルに表示されるデータ点は同じである；右側のパネルにおいて、試験した３つの化合物の各々について各個々の試料で測定したデータ点（すなわち、標準Ａ；標準Ａ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋１１４Ａ；および標準Ａ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｋ＋１１４Ａ）を、線で結んだ（結果として、線の傾きから、本発明の突然変異およびＣ末端アラニンが導入された場合に、既存の抗体による結合が減少する程度についての指標が得られる）。
【図６−１】図６は、図４にコンパイルされたデータ点の結合データをリストした表である（３つのカラムは、標準化されたＰｒｅＡｂ結合レベル（１２５秒でのＲＵ）を示し、２つのカラムは、使用された標準化合物と比較した、ＰｒｅＡｂ結合の減少パーセントを示す）。
【図６−２】図６は、図４にコンパイルされたデータ点の結合データをリストした表である（３つのカラムは、標準化されたＰｒｅＡｂ結合レベル（１２５秒でのＲＵ）を示し、２つのカラムは、使用された標準化合物と比較した、ＰｒｅＡｂ結合の減少パーセントを示す）。
【図６−３】図６は、図４にコンパイルされたデータ点の結合データをリストした表である（３つのカラムは、標準化されたＰｒｅＡｂ結合レベル（１２５秒でのＲＵ）を示し、２つのカラムは、使用された標準化合物と比較した、ＰｒｅＡｂ結合の減少パーセントを示す）。
【０１９５】
【図７】図７は、ヒト健常対象からの９６の血清試料を、標準Ｂおよび標準Ｂの本発明による２つの代表的なバリアント（すなわち、それぞれ［標準Ｂ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｃ末端アラニン］および［標準Ｂ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｋ＋Ｃ末端アラニン］）への結合について試験した場合の、例２で得られたデータ点の２つの対応するプロットを示す。各ドットは、試験した９６の試料のうちの１つの結合レベルを表す。右側のパネルと左側のパネルに表示されるデータ点は同じである；右側のパネルにおいて、試験した３つの化合物の各々について各個々の試料で測定したデータ点（すなわち、標準Ｂ；標準Ｂ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋１１４Ａ；および標準Ｂ＋Ｌ１１Ｖ＋Ｖ８９Ｌ＋Ｔ１１０Ｋ＋１１４Ａ）を、線で結んだ（結果として、線の傾きから、本発明の突然変異およびＣ末端アラニンが導入された場合に、既存の抗体によって結合が減少する程度についての指標が得られる）。
【０１９６】
【図８−１】図８は、図７にコンパイルされたデータ点の結合データをリストした表である（３つのカラムは、標準化されたＰｒｅＡｂ結合レベル（１２５秒でのＲＵ）を示し、２つのカラムは、使用された標準化合物と比較した、ＰｒｅＡｂ結合の減少パーセントを示す）。
【図８−２】図８は、図７にコンパイルされたデータ点の結合データをリストした表である（３つのカラムは、標準化されたＰｒｅＡｂ結合レベル（１２５秒でのＲＵ）を示し、２つのカラムは、使用された標準化合物と比較した、ＰｒｅＡｂ結合の減少パーセントを示す）。
【図８−３】図８は、図７にコンパイルされたデータ点の結合データをリストした表である（３つのカラムは、標準化されたＰｒｅＡｂ結合レベル（１２５秒でのＲＵ）を示し、２つのカラムは、使用された標準化合物と比較した、ＰｒｅＡｂ結合の減少パーセントを示す）。
【図９】図９は、Hek-mP2X7細胞における抗Ｐ２Ｘ７ １ｃ８１ ＳＯバリアントの、ＡＴＰ介在性カルシウム取り込みの阻害を示す。パネルＡ：１００ｎＭおよび１０ｎＭ濃度でのＡＴＰ添加直後に測定した、バリアントのカルシウム取り込み。パネルＢ：１００ｎＭ濃度で試験したバリアントの経時的に記録されたカルシウム取り込み。
【図１０】図１０は、F024500016対照および強制酸化試料の、インタクトマスＬＣ−ＭＳ分析のＵＶ ２８０ｎｍクロマトグラムのオーバーレイを示す。
【図１１】図１１は、F024500016対照および温度ストレス試料の、インタクトマスＬＣ−ＭＳ分析のＵＶ ２８０ｎｍクロマトグラムのオーバーレイを示す。
【実施例】
【０１９７】
実験パート
以下の実験パートで使用したヒト試料は、商業的供給源またはヒトボランティアから（必要な同意および承認がすべて得られた後に）得られたものであり、適用される法律および規制上の要件（医学上の秘密および患者のプライバシーを含むがこれらに限定されない）に従って使用された。
以下の実施例では、明示的に別段の指示がない限り、試験したナノボディに使用された試料中に存在する既存の抗体の結合を、以下のようにProteOnを用いて決定した：
ナノボディは、血清アルブミン上でまたは、ＦＬＡＧ３タグを介しモノクローナル抗ＦＬＡＧ Ｍ２を用いて捕捉した。
【０１９８】
既存の抗体の、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上に捕捉されたナノボディへの結合の場合、ProteOn XPR36（Bio-Rad Laboratories, Inc.）を用いて評価した。ＰＢＳ／Tween（リン酸緩衝化生理食塩水、ｐＨ７．４、０．００５％Tween20）をランニングバッファーとして使用し、実験を２５℃で行った。ProteOn GLCセンサーチップのリガンドレーンを、ＥＤＣ／ＮＨＳ（流速３０μｌ／分）で活性化し、ＨＳＡを１０μｇ／ｍｌでProteOn酢酸緩衝液ｐＨ４．５（流速１００μｌ／分）に注入して、約３２００ＲＵの固定化レベルにした。固定化後、表面をエタノールアミンＨＣｌ（流速３０μｌ／分）で失活させた。ナノボディをＨＳＡ表面上に４５μｌ／分で２分間注入して、約２００ＲＵのナノボディ捕捉レベルを得た。既存の抗体を含有する試料を１４，０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清をＰＢＳ−Tween20（０．００５％）で１：１０に希釈した後、４５μｌ／分で２分間注入し、続いて４００秒の解離ステップを行った。各サイクルの後（すなわち、新しいナノボディ捕捉および血液試料注入ステップの前）、ＨＳＡ表面を、ＨＣｌ（１００ｍＭ）を４５μｌ／分で２分間注入して再生した。センサーグラム処理およびデータ分析は、ProteOn Manager 3.1.0（Bio-Rad Laboratories, Inc.）を用いて行った。既存抗体の結合を示すセンサーグラムは、二重参照後に、１）ナノボディ−ＨＳＡ解離および２）参照リガンドレーンへの非特異的結合を差し引くことによって得た。既存の抗体の結合レベルは、報告点を１２５秒（会合の終了の５秒後）に設定することにより決定した。既存抗体の結合のパーセンテージの低下を、標準ナノボディの１２５秒での結合レベルと比較して計算した。
【０１９９】
既存の抗体の、モノクローナル抗ＦＬＡＧ Ｍ２（Sigma）上に捕捉されたＦＬＡＧ標識ナノボディへの結合の場合、ProteOn XPR36（Bio-Rad Laboratories, Inc.）を用いて評価した。ＰＢＳ／Tween（リン酸緩衝化生理食塩水、ｐＨ７．４、０．００５％Tween20）をランニングバッファーとして使用し、実験を２５℃で行った。ProteOn GLCセンサーチップのリガンドレーンを、ＥＤＣ／ＮＨＳ（流速３０μｌ／分）で活性化し、抗ＦＬＡＧ Ｍ２ ｍＡｂを１０μｇ／ｍｌでProteOn酢酸緩衝液ｐＨ４．５（流速１００μｌ／分）に注入して、約４０００ＲＵの固定化レベルにした。固定化後、表面を、エタノールアミンＨＣｌ（流速３０μｌ／分）で失活させた。ナノボディを、抗ＦＬＡＧ Ｍ２表面上に４５μｌ／分で２分間注入して、約１００ＲＵのナノボディ捕捉レベルを得た。血液試料の抗ＦＬＡＧ Ｍ２表面への非特異的結合を減少させるために、１００ｎＭの３ｘＦＬＡＧペプチド（Sigma）を血液試料に添加した。既存の抗体を含有する試料を１４，０００ｒｐｍで２分間遠心分離し、上清をＰＢＳ−Tween20（０．００５％）で１：１０に希釈した後、４５μｌ／分で２分間注入し、続いて６００秒の解離ステップを行った。各サイクルの後（すなわち、新しいナノボディ捕捉および血液試料注入ステップの前）、抗ＦＬＡＧ Ｍ２表面を、グリシンｐＨ１．５（１０ｍＭ）を１５０μｌ／分で１０秒間注入して再生した。センサーグラム処理およびデータ分析は、ProteOn Manager 3.1.0（Bio-Rad Laboratories, Inc.）を用いて行った。既存抗体の結合を示すセンサーグラムは、二重参照後に、１）ナノボディ−抗ＦＬＡＧ Ｍ２解離および、２）参照リガンドレーンへの非特異的結合を差し引くことによって得た。既存の抗体の結合レベルは、報告点を１２５秒（会合の終了の５秒後）に設定することにより決定した。既存抗体の結合のパーセンテージの低下を、標準ナノボディの１２５秒での結合レベルと比較して計算した。
【０２００】
例１：本発明の突然変異を標準Ａ（配列番号１）に導入すると、既存の抗体による結合が減少する。
標準Ａ（配列番号１）および、本発明によるＣ末端アラニン伸長と代表的な突然変異とを保有する標準Ａの改良されたバリアントの２つの代表的な例（［標準Ａ（Ｌ１１Ｖ、Ｖ８９Ｌ）−Ａ］および［標準Ａ（Ｌ１１Ｖ、Ｖ８９Ｌ、Ｔ１１０Ｋ）−Ａ］、両者ともＮ末端ＨＩＳ６−ＦＬＡＧ３タグで試験した；配列番号７１参照）を、健康なヒトボランティアからの９６の血清試料からの試料中に存在する既存抗体による結合について、試験した。化合物をＦＬＡＧタグを用いて捕捉し、ProteOnを用いて、この実験パートのプリアンブルで与えられたプロトコルに従って結合を測定した。
【０２０１】
結果を図５に示す。図６は、図５のデータ点の１つを形成する試料の各々の結果を示す。
以下のことがわかる：試験した９６の試料の大部分について、本発明による突然変異を導入すると、既存抗体の結合が減少し、減少の程度は一般に、各試料中の既存の抗体が標準Ａに結合することができるレベルに依存する。
【０２０２】
例２：本発明の突然変異を標準Ｂ（配列番号８）に導入すると、既存の抗体による結合が減少する。
標準Ｂ（配列番号８）および、本発明によるＣ末端アラニン伸長と代表的突然変異を有する標準Ａの改良されたバリアントの２つの代表例（［標準Ｂ（Ｌ１１Ｖ、Ｖ８９Ｌ）−Ａ］および［標準Ｂ（Ｌ１１Ｖ、Ｖ８９Ｌ、Ｔ１１０Ｋ）−Ａ］、両者ともＮ末端ＨＩＳ６−ＦＬＡＧ３タグで試験した；配列番号７１参照）を、健康なヒトボランティアからの９６の血清試料からの試料中に存在する既存抗体による結合について、試験した。化合物をＦＬＡＧタグを用いて捕捉し、ProteOnを用いて、この実験パートのプリアンブルで与えられたプロトコルに従って結合を測定した。
【０２０３】
結果を図７に示す。図８は、図７のデータ点の１つを形成する試料の各々の結果を示す。
以下のことがわかる：試験した９６の試料の大部分について、本発明による突然変異を導入すると、既存抗体の結合が減少し、減少の程度は一般に、各試料中の既存の抗体が標準Ａに結合することができるレベルに依存する。
【０２０４】
例３：１ｃ８１のさらなる配列最適化。
配列最適化のプロセスにおいて、以下を試みた：（１）翻訳後修飾（ＰＴＭ）のための部位をノックアウトする；（２）親ナノボディをヒト化する；ならびに（３）潜在的な既存抗体のエピトープをノックアウトする。同時に、ナノボディの機能的および生物物理学的特性は、好ましくは保存されるか、または改善されるはずである。
潜在的な既存の抗体のエピトープが同定され、例２において排除された。この例では、ヒト化および潜在的なＰＴＭのための部位が同定され、合成された。
【０２０５】
特に、ヒト化のためには、ＩＳＶＤ配列はヒトＩＧＨＶ３−ＩＧＨＪ生殖系列コンセンサス配列に対してより相同性が高くされる。ＶＨＨ「品質証明（hallmark）」残基を除いて、ＩＳＶＤとヒトＩＧＨＶ３−ＩＧＨＪ生殖系列コンセンサス配列との間で異なっているフレームワーク領域の特定のアミノ酸を、タンパク質の構造、活性および安定性が無傷のままであるように、ヒトの対応物に変化させた。このために、１ｃ８１のすべての可能な順列（permutation）を、ヒトＩＧＨＶ３−ＩＧＨＪ生殖系列コンセンサス配列を考慮して作成した。
さらなる配列最適化のプロセスにおいて、特に考慮されるアミノ酸残基は、１０Ｇ、１４Ｐ、４５Ｒ、７２Ｄ、７４Ｓ、７５Ｋ、７７Ｔ、８２Ｍ、８３Ｒおよび１０８Ｌであった。
【０２０６】
３．１  安定性
第１の評価として、大腸菌におけるタグなしタンパク質として生成されたＳＯバリアントの溶解度を評価し、特に、精製プロセスの様々なステップにおける安定性を、（例えば、濃縮、凍結／解凍後に）、目視検査および標準分光光度法によるＯＤ３４０ｎｍでの凝集の測定により詳述した。値が＞０．１であるＯＤ３４０ｎｍは、可能な凝集を示す。
ナノボディを、アフィニティークロマトグラフィーにより精製し、DulbeccoのＰＢＳに再構成した。５ｍｇ／ｍＬ未満の濃度を有する試料を、VivaSpinカラム（MWCO 5000, PES）を用いて濃縮した。ナノボディF024500044（ＷＴ）は、タンパク質の損失および沈殿を示した。試料を、低結合Durapore０．２２μｍＰＶＤＦ膜（MilliPore）を用いてろ過した。ろ過した試料の濃度をTrinean Dropsenseを用いて測定した。試料を−２０℃で保存し、解凍した後、遠心分離ステップおよびタンパク質濃度の再測定を行って、凍結／解凍感度を評価した。
【０２０７】
結果を表３．１に示す。
表３．１
【表８】
2019503987.tif 000009
すべてのバリアントが、野生型１ｃ８１と比較して改良された溶解性を示したと結論付けた。しかし、２つのバリアントについては、いくらかの凝集が観察され、わずかなタンパク質の損失を生じた。
【０２０８】
３．２  機能性
次にＳＯバリアントの機能性を、野生型１ｃ８１と比較して評価した。特に、ＡＴＰ介在性Ｃａ２＋流入の阻害を、mP2X7-HEK細胞において、基本的にWO2013/178783に記載の方法に従って評価した。
簡単に述べると、Ｐ２Ｘ７のゲーティングは、一定の試料温度３７℃を維持するために、赤外線ランプを備えたFACS-CantoII（BD）でのリアルタイムフローサイトメトリーによってモニターした。HEK293-hP2X7細胞に、２μＭのＦｌｕｏ−４カルシウム指示薬（Invitrogen）を３７℃で２０分間負荷し、２回洗浄した。ペレット化した細胞を、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋および０．１％ＢＳＡを補充したＰＢＳに一価精製ナノボディ（１０ｎＭまたは１００ｎＭ）の存在下または不在下で再懸濁させた。細胞を氷上に保ち、分析の前に水浴中で１分間、３７℃に調整した。ＡＴＰ（Sigma-Aldrich）を最終濃度が５ｍＭになるように加え、細胞におけるＦｌｕｏ−４取り込みの平均蛍光強度を、３０分間記録した。
【０２０９】
結果を図９に示す；これは、Hek-mP2X7細胞における、抗Ｐ２Ｘ７ １ｃ８１ ＳＯバリアントのＡＴＰ介在性カルシウム取り込みの阻害を示す。パネルＡ：１００ｎＭおよび１０ｎＭ濃度でのバリアントのＡＴＰ添加直後に測定した、カルシウム取り込み。パネルＢ：１００ｎＭ濃度で試験したバリアントの、経時的に記録されたカルシウム取り込み。
結果から、２つのＳＯバリアント（＃４５および＃５０）が、野生型１ｃ８１（＃４４）と同様に、Ｐ２Ｘ７のブロッキングにおいて完全な親和性および機能性を維持し、一方他のバリアントの結合親和性は変化する（何故ならば、それらがこのアッセイにおいて、３０分間の時間枠にわたりＡＴＰ介在性のカルシウム流入を完全には遮断しないように見えるため）、と結論付けることができる。
【０２１０】
３．３  安定性試験
バリアントF024500050（＃５０）を、さらなる安定性試験に供した。特に、＃５０は強制酸化および温度ストレスを受けた。
【０２１１】
温度ストレスを試験するために、試料を高温で、すなわち２５℃および４０℃で４週間保存し、その後試料を、インタクトマスＬＣ−ＭＳおよび／またはペプチドマップＬＣ−ＭＳで分析した（Agilent 1290 Infinity UHPLCシステムおよびAgilent Q-TOF質量分析計）。結果を、−２０℃で保存した標準物質と比較した。
化学的安定性を試験するために、試料を暗所で３時間、Ｈ２Ｏ２（１０ｍＭの最終濃度）による強制酸化に付した。その後反応を、室温で１時間のメチオニン（最終濃度１１２ｍＭ）により停止させた。試料は、温度試料を試験するための上記のように設定して分析した。
強制酸化設定では、試料はいかなるメチオニン酸化も示さなかった（データは示されず）。
４週間保存した対照および４０℃の温度ストレス試料の、インタクトマスＬＣ−ＭＳ分析の結果を、表３．３に要約する。
【０２１２】
表３．３．F02450050対照および４０℃温度ストレス試料（４週間の保存）の、インタクトマスＬＣ−ＭＳ分析で観察されたピークの概要
【表９】
2019503987.tif 000010
【０２１３】
結論として、強制酸化条件下では、Ｍ酸化は観察されなかった。適用された温度ストレス条件下で、主としてピログルタマートの形成がインタクトマス分析によって観察された。また、トリプシンペプチドマップ分析によって、主にピログルタマートの形成が観察された。さらに、ごくわずかで無視できる量の異性化および脱アミド化が観察された。
＃５０におけるＥ１Ｄの突然変異は、実質的にピログルタマートの形成を無効にした（データ示さず）。したがって、好ましい突然変異はＥ１Ｄであろう（配列番号１４７〜１５３および１６２〜１６８参照）。
【０２１４】
３．４  結論
機能性を保持しつつ、より高いタンパク質濃度で改良された安定性を示すので、バリアントF024500050が特に好ましいことが分かる。このバリアントF024500050は、既存の抗体による結合の減少をもたらす本発明の突然変異と組み合わせることができる（例２参照）。好ましい突然変異は、Ｌ１１Ｖ、Ｖ８９Ｌ、Ｔ１１０Ｋ、Ｑ１０８Ｌおよび／または１１４Ａ、ならびにＥ１Ｄおよび／またはＮ末端アラニン、好ましくはこれらの突然変異のすべてである。
【０２１５】
例４：３ｃ２３のさらなる配列最適化。
例３と同様に、３ｃ２３の配列を配列最適化について分析した。例２では、潜在的な既存の抗体のエピトープが同定され排除された。
この例において、ヒト化および潜在的なＰＴＭのための部位が同定され、さらに合成された。
【０２１６】
４．１  安定性試験
例３．３と同様に、バリアントF024500016（＃１６；配列番号８７）をさらなる安定性試験に供した。特に、＃１６は強制酸化および温度ストレスを受けた。
温度ストレスを試験するために、試料を高温で、すなわち２５℃および４０℃の高温で４週間保存し、その後試料を、インタクトマスＬＣ−ＭＳおよび／またはペプチドマップＬＣ−ＭＳで分析した（Agilent 1290 Infinity UHPLCシステムおよびAgilent Q-TOF質量分析計）。結果を、−２０℃で保存した標準物質と比較した。
【０２１７】
化学的安定性を試験するために、試料を暗所で３時間、Ｈ２Ｏ２（１０ｍＭの最終濃度）による強制酸化に付した。その後反応を、室温で１時間のメチオニン（最終濃度１１２ｍＭ）により停止させた。試料は、温度試料を試験するための上記のように設定して分析した。
F024500016対照および強制酸化試料のインタクトなマスクロマトグラムを、図１０に示す。プレピーク領域のごくわずかな増加のみが観察され、酸化に感受性のメチオニンが、このナノボディに存在しないことが示された。
F024500016対照および温度ストレスを受けた試料のインタクトマスクロマトグラムを、図１１に示す。
温度ストレスにより、主にピログルタマートの形成が観察された。非常に少量の酸化、脱アミノ化およびインタクトな＋１２Ｄａのみが見られた。
これらの結果に基づき、Ｅ１Ｄは好ましい突然変異である（例えば、配列番号１５４〜１６１および１６９〜１７６を参照）。
【０２１８】
４．２  ヒト化
ヒト化のために、ＩＳＶＤ配列を、ヒトＩＧＨＶ３−ＩＧＨＪ生殖系列コンセンサス配列にさらに相同であるようにする。ＶＨＨ「品質証明」残基を除いて、ＩＳＶＤとヒトＩＧＨＶ３−ＩＧＨＪ生殖系列コンセンサス配列との間で異なっているフレームワーク領域の特定のアミノ酸を、タンパク質の構造、活性および安定性が無傷のままであるように、ヒトの対応物に変化させた。このために、３ｃ２３のすべての可能な順列を、ヒトＩＧＨＶ３−ＩＧＨＪ生殖系列コンセンサス配列を考慮して合成した。
【０２１９】
さらなる配列最適化のプロセスにおいて、特に考慮されるアミノ酸残基は、１４Ｐ、６０Ａ、７３Ｎ、７４Ｓ、７９Ｙおよび８３Ｒであった。種々の順列は、配列番号１３６〜１４３により（およびＥ１Ｄを含む例４．１の配列番号１５４〜１６１および１６９〜１７６の結果に基づいて）表される。
例３．１および３．２と同様に、これらのバリアントの安定性および機能性を試験することができる。
安定性および機能性を示す特に好ましい配列バリアントを選択した後、このバリアントを、既存の抗体による結合の減少をもたらす本発明の突然変異と組み合わせることができる（例１参照）。好ましい突然変異は、Ｌ１１Ｖ、Ｖ８９Ｌ、Ｔ１１０Ｋ、Ｑ１０８Ｌおよび／または１１４Ａ、ならびにＥ１Ｄおよび／またはＮ末端アラニン、および好ましくはこれらの突然変異のすべてである。
本出願を通して引用されたすべての参考文献（文献、発行された特許、公開特許出願、および同時係属中の特許出願を含む）の全内容は、特に本明細書の上で参照された教示について、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【図１】
2019503987.tif 000011
【図２−１】
2019503987.tif 000012
【図２−２】
2019503987.tif 000013
【図２−３】
2019503987.tif 000014
【図２−４】
2019503987.tif 000015
【図２−５】
2019503987.tif 000016
【図２−６】
2019503987.tif 000017
【図２−７】
2019503987.tif 000018
【図２−８】
2019503987.tif 000019
【図２−９】
2019503987.tif 000020
【図３Ａ−１】
2019503987.tif 000021
【図３Ａ−２】
2019503987.tif 000022
【図３Ｂ−１】
2019503987.tif 000023
【図３Ｂ−２】
2019503987.tif 000024
【図４Ａ】
2019503987.tif 000025
【図４Ｂ】
2019503987.tif 000026
【図４Ｃ−１】
2019503987.tif 000027
【図４Ｃ−２】
2019503987.tif 000028
【図４Ｃ−３】
2019503987.tif 000029
【図４Ｃ−４】
2019503987.tif 000030
【図５】
2019503987.tif 000031
【図６−１】
2019503987.tif 000032
【図６−２】
2019503987.tif 000033
【図６−３】
2019503987.tif 000034
【図７】
2019503987.tif 000035
【図８−１】
2019503987.tif 000036
【図８−２】
2019503987.tif 000037
【図８−３】
2019503987.tif 000038
【図９】
2019503987.tif 000039
【図１０】
2019503987.tif 000040
【図１１】
2019503987.tif 000041
【配列表】
2019503987000001.app
【国際調査報告】
2019503987.tif 000042
2019503987.tif 000043
2019503987.tif 000044
2019503987.tif 000045
2019503987.tif 000046
2019503987.tif 000047