(57)【要約】  本発明は、少なくとも部分的に一体化している、凝集したＯＲＣ繊維、フィブリノゲン、及びトロンビンを含む止血組成物、並びに、非水性低沸点溶媒中フィブリノゲンの粒子、トロンビン、ＯＲＣ繊維を含む混合物の懸濁液を形成する工程と、ノズルを通して懸濁液を基材上に噴霧する工程と、非水性溶媒を蒸発させる工程と、基材から組成物を分離し、篩分けする工程とを含む、粉末状止血組成物を形成する方法を目的とする。
2019524348.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
粉末状止血組成物を形成する方法であって、
ａ）非水性低沸点溶媒中フィブリノゲンの粒子、トロンビン、ＯＲＣ繊維を含む混合物の懸濁液を形成する工程と、
ｂ）ノズルを通して前記懸濁液を基材上に噴霧する工程と、
ｃ）前記非水性溶媒を蒸発させる工程と、
ｄ）前記基材から前記組成物を分離し、前記組成物を篩分けし、
このようにして、前記粉末状止血組成物を形成する工程と、
を含む方法。
【請求項２】
前記非水性低沸点溶媒が、ヒドロフルオロエーテルＣ４Ｆ９ＯＣＨ３を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記非水性低沸点溶媒が、ＨＦＥ７１００を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記懸濁液がトリスを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記懸濁液が塩化カルシウムを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記懸濁液が、約９０重量％のフィブリノゲン、約８重量％のトロンビン、及び約２．５重量％の塩化カルシウムを含むフィブリンシーラント粉末を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記粉末状止血組成物の、フィブリンシーラント粉末のＯＲＣに対する重量比が約１：１〜約１０：１である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記粉末状止血組成物が、主に約２５０〜約８５０マイクロメートルの範囲の粒径を有する粉末を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記粉末状止血組成物が、主に約３５５〜約８５０マイクロメートルの範囲の粒径を有する粉末を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記粉末状止血組成物が、少なくとも部分的に一体化している、凝集したＯＲＣ繊維、フィブリノゲン、及びトロンビンを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも部分的に一体化している、凝集したＯＲＣ繊維、フィブリノゲン、及びトロンビンを含む止血組成物。
【請求項１２】
トリスを更に含む、請求項１１に記載の止血組成物。
【請求項１３】
塩化カルシウムを更に含む、請求項１１に記載の止血組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、約９０重量％のフィブリノゲン、約８重量％のトロンビン、及び約２．５重量％の塩化カルシウムを含むフィブリンシーラント粉末を含む、請求項１１に記載の止血組成物。
【請求項１５】
フィブリンシーラント粉末のＯＲＣに対する重量比が約１：１〜約１０：１である、請求項１４に記載の止血組成物。
【請求項１６】
主に約２５０〜約８５０マイクロメートルの範囲の粒径を有する粉末を含む、請求項１１に記載の止血組成物。
【請求項１７】
主に約３５５〜約８５０マイクロメートルの範囲の粒径を有する粉末を含む、請求項１６に記載の止血組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に、止血及び組織封止を促進するための剤及び材料、より具体的には、改善された効力を有する再吸収性止血粒子、特に、フィブリノゲン、トロンビン、及び酸化再生セルロースで作製された粒子凝集体、並びにこのような組成物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
多種多様な状況において、ヒトを含む動物は、創傷が原因で、あるいは外科的処置の間に、出血に見舞われることがある。状況によっては、出血は比較的軽いものであり、通常の血液凝固作用が、簡単な応急処置の実施に加われば、それだけで十分である。他の状況では、相当な出血が起こることがある。これらの局面では通常、専門的な設備及び物資、並びに適切な救助を施すように訓練された人員が必要となる。
【０００３】
外科的処置中の出血は、多くの形態で顕在化し得る。それは、広い表面積から離散又は拡散し得る。それは、高容量若しくは低容量の大小の血管、動脈（高圧）又は静脈（低圧）からのものであり得る。それは容易にアクセス可能であり得るか、又はアクセスが難しい部位に由来する場合もある。出血の制御は、失血を最小限に抑え、術後合併症を低減させ、かつ手術室での手術の時間を短くするために、外科的処置において必須かつ重要である。出血を制御するための適切な方法又は製品の選択は、出血の重症度、出血源の解剖学的場所並びに隣接する重要な構造の近接性、出血が離散した出血源からのものであるか、若しくはより広い表面積からのものであるか、出血源の視認性並びに正確な識別、及び供給源へのアクセスが挙げられるが、これらに限定されない多くの因子に依存する。
【０００４】
止血を達成するための従来の方法には、外科的技術、縫合糸、結紮糸又はクリップ、及びエネルギーに基づく凝固若しくは焼灼の使用が挙げられる。これらの従来の対策が非効果的又は非実用的なとき、補助的止血技術及び製品が典型的には利用される。
【０００５】
上記の問題に対処する取り組みにおいて、過剰な出血を制御するための又は止血に対する補助材としての材料が開発されてきた。局所用吸収性止血材（ＴＡＨ）は、外科用途で広く使用されている。ＴＡＨは、織布又は不織布又はスポンジに基づく形態などの様々な形態の製品を包含し、典型的には、ポリグラクチン９１０、酸化セルロース、酸化再生セルロース（ＯＲＣ）、ゼラチン、コラーゲン、キチン、キトサン、デンプンなどのラクチド−グリコリドベースのコポリマーを含む、天然ポリマーから合成ポリマーに及ぶ少なくとも部分的に再吸収可能な材料及びこれらの組み合わせから作られる。ゼラチンは、局所トロンビン溶液を用いて又は用いずに様々な形態で使用される。生物学的に活性のある局所止血製品（局所トロンビン溶液、フィブリンシーラントなど）及び様々な合成局所シーラントも広く使用されている。
【０００６】
止血性能を改善するために、上記ＴＡＨ材料をベースとするスカフォールドをトロンビン及びフィブリノゲンなどの生物由来の凝固因子と組み合わせることができる。
【０００７】
その生分解性及びその殺菌性、並びに止血特性により、酸化セルロース並びに酸化再生セルロースは、神経外科、腹部手術、心臓血管手術、胸部外科、頭部及び頸部手術、骨盤手術、並びに皮膚及び皮下組織処置などの様々な外科処置において局所性止血用創傷包帯として長い間使用されてきた。粉体、織布、不織布、編物、及び他の形態で作られるか否かにかかわらず、酸化セルロース材料に基づいた様々な種類の止血剤を形成するための多数の方法が知られている。現在利用される止血用創傷包帯には、セルロース繊維の均一性を増加した酸化セルロースである酸化再生セルロース（ＯＲＣ）を含む編み布地又は不織布が含まれる。
【０００８】
多くの外科手技のための安全かつ有効な止血を提供するＯＲＣが、１９６０年代に導入された。ＯＲＣ止血材の作用機序は、材料が水を吸収することで始まり、次いで、わずかに膨潤して出血部位においてタンポン充填をもたらすと考えられる。ＯＲＣ繊維は、最初に、流体、血液タンパク質、血小板、及び細胞を捕捉して、ゲル様の「疑似血餅」を形成し、これが血流に対する障壁として作用し、続いて、固体フィブリン塊を形成するためのマトリクスとして作用する。ＯＲＣ布地は、そのマトリクス構造に緩い編地を有し、その隣接する周囲に迅速にぴったりと一致し、他の吸収剤よりも管理が容易であるが、その理由は、手術器具に粘着せず、切り取って容易にサイズを整えることができるためである。これによって、外科医が、全ての出血が止まるまで、セルロースを適所にしっかりと保持することができる。
【０００９】
最も一般的に使用される局所止血剤のうちの１つは、酸化再生セルロース（Oxidized Regenerated Cellulose、ＯＲＣ）から作製されたＳＵＲＧＩＣＥＬ（登録商標）オリジナル吸収性止血材である。ＳＵＲＧＩＣＥＬ（登録商標）吸収性止血材は、結紮又は他の従来の制御方法が非実用的又は非効果的であるとき、毛細血管、静脈、及び小動脈の出血の制御を支援するために、外科手技において補助的に使用される。吸収性止血材のＳＵＲＧＩＣＥＬ（登録商標）ファミリーは、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｗｏｕｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ、Ｅｔｈｉｃｏｎ，Ｉｎｃ．（Ｓｏｍｅｒｖｉｌｌｅ，Ｎ．Ｊ．）の一部門、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｃｏｍｐａｎｙから市販されている全ての止血用創傷包帯を含む、４つの主な製品グループからなる。
【００１０】
ＳＵＲＧＩＣＥＬ（登録商標）オリジナル止血材は、薄黄色の鋳造物を備える白色の布地であり、かすかにキャラメルのような香りを有する。当該止血材は、強固であり、ほつれることなく縫合又は切断することができる。
【００１１】
ＳＵＲＧＩＣＥＬ（登録商標）ＮＵ−ＫＮＩＴ（登録商標）吸収性止血材は、類似しているが、より密度の高い編地を有するので、引張強度がより高い。当該止血材は、出血を制御するために所定の場所に巻いたり縫合したりすることができるので、外傷及び移植手術における使用が特に推奨される。
【００１２】
ＳＵＲＧＩＣＥＬ（登録商標）ＦＩＢＲＩＬＬＡＲ（商標）吸収性止血材形態の製品は、層状構造を有し、これによって、特定の出血部位において止血を行うのに必要な任意の量のＳＵＲＧＩＣＥＬ（登録商標）ＦＩＢＲＩＬＬＡＲ（商標）止血材を外科医が鉗子で剥がし、把持することができるようになる。ＳＵＲＧＩＣＥＬ（登録商標）ＦＩＢＲＩＬＬＡＲ（商標）止血材形態は、到達しづらいか又は不規則な形状の出血部位では、編地形態よりも便利であることがある。当該止血材は、整形外科／脊椎及び神経外科的手術における使用が特に推奨される。
【００１３】
ＳＵＲＧＩＣＥＬ（登録商標）ＳＮｏＷ（商標）吸収性止血材形態の製品は、構造化された不織布である。ＳＵＲＧＩＣＥＬ（登録商標）ＳＮｏＷ（商標）止血材は、構造化された不織布であることから、内視鏡用途のためのＳＵＲＧＩＣＥＬ（登録商標）の他の形態よりも便利であることがある。当該止血材は、高度に適応可能であるので、開腹及び最小侵襲性手術の両方において推奨される。
【００１４】
酸化セルロースを含有する市販の吸収性止血剤の他の例には、Ｇｅｌｉｔａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＢＶ（Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によるＧｅｌｉｔａＣｅｌ（登録商標）吸収性セルロース包帯が挙げられる。商業的に入手可能な上記の酸化セルロース止血剤は、止血をもたらすための多孔質構造を有する編物又は不織布である。
【００１５】
フィブリノゲン及びトロンビンは、血管損傷後に止血の達成に関与する重要なタンパク質であり、血餅形成に必須である。フィブリノゲン及びトロンビンは、典型的な凝固反応を開始することなく粉末形態で又は非水性懸濁液中で合わせることができるので、タンパク質が可溶である水性媒体又は他の液体環境中で当該タンパク質が水和するまでフィブリン塊の形成が阻止される。粉末形態のこれらのタンパク質の混合物は、局所止血、組織修復、薬物送達などを含む様々な潜在的な生物医学的用途を有する。更に、これらタンパク質の混合物を粉末形態で担体若しくは基材、又は他の医療用具に充填して、例えば止血用具として使用することができる製品を形成することもできる。
【００１６】
フィブリン糊として知られているフィブリンシーラントは、数十年間にわたって病院で使用されている。しばしば、フィブリンシーラントは、２つの液体成分、すなわち、フィブリノゲンを含む成分、及びトロンビンを含む成分からなり、それらの固有の不安定性に起因して冷凍保管される。時としてフィブリンシーラント製品は、２つのフリーズドライ成分からなり、これらは結合注射器又は他の二連式送達デバイスによって使用及び送達の直前に再構成を必要とする。フリーズドライ製剤は、典型的に安定しているが、フィブリノゲン成分は、再構成することが困難である。現在市場で入手可能な、又は開発中の多くの止血製剤は、しばしば凍結乾燥されたトロンビンと組み合わせて、凍結乾燥されたフィブリノゲンを利用し、止血製剤は、乾燥粉末、半液体ペースト、液体製剤の形態で塗布されるか、又は任意に吸収性布地スカフォールド等の支持スカフォールド上に配置される。
【００１７】
止血及び組織封止及び接着の特性が強化された包帯を提供するために、トロンビン、フィブリン及びフィブリノゲンを含むがこれらに限定されない治療剤が、ゼラチンベースの担体、多糖ベースの担体、グリコール酸又は乳酸ベースの担体、及びコラーゲンマトリックスを含む包帯の担体又は基材と組み合わせられている。このような包帯の例は、米国特許第６，７６２，３３６号「Ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ  ｓａｎｄｗｉｃｈ  ｂａｎｄａｇｅ」、米国特許第６，７３３，７７４号「Ｃａｒｒｉｅｒ  ｗｉｔｈ  ｓｏｌｉｄ  ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ  ａｎｄ  ｓｏｌｉｄ  ｔｈｒｏｍｂｉｎ」、国際公開第２００４／０６４８７８号「Ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ」、及び欧州特許第１８０９３４３（Ｂ１）号「Ａ  ｒｅｉｎｆｏｒｃｅｄ  ａｂｓｏｒｂａｂｌｅ  ｍｕｌｔｉｌａｙｅｒｅｄ  ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ  ｗｏｕｎｄ  ｄｒｅｓｓｉｎｇ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  ｍａｋｉｎｇ」に開示されている。
【００１８】
欧州特許第１４９３４５１（Ｂ１）号「Ｈａｅｍｏｓｔａｔｉｃ  ｄｅｖｉｃｅｓ  ａｎｄ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ  ｏｘｉｄｉｚｅｄ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ａｎｄ  ａ  ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ｂｉｎｄｅｒ」には、トロンビン及びフィブリノゲンなどの酸感受性種、並びに他の酸感受性の生物製剤及び医薬品のための担体としてカルボン酸酸化セルロースを使用するのは問題があると開示されている。当該特許には、０．０３５〜４．３５ｍｍの指定の平均公称粒径を有する生体適合性の酸化セルロース粒子と、キトサン以外の生体適合性、多孔質、水溶性の多糖バインダー成分と、任意追加的に、トロンビン、フィブリノゲン、又はフィブリンから選択される止血剤とからなる止血組成物であって、当該水溶性の多糖の当該酸化セルロース粒子に対する重量比が、３．９７〜１５．８５であり、当該組成物が、好適な溶媒に溶解している当該多糖バインダー成分を有するポリマー溶液を提供する工程と、当該生体適合性の酸化セルロース粒子を提供する工程と、当該ポリマー溶液全体にわたって実質的に均質に当該酸化セルロース粒子を分散させて実質的に均質な分散液を形成するのに有効な条件下で当該ポリマー溶液を当該酸化セルロース粒子と接触させる工程と、全体にわたって分散した当該粒子を有する当該ポリマー溶液を、当該実質的に均質な分散液を固化させるのに有効な条件に供する工程と、固化した分散液から当該溶媒を除去して、当該止血組成物を形成する工程と、を含むプロセスによって得ることができる多孔質フォームスポンジである、止血組成物も更に開示されている。
【００１９】
露国特許出願公開第２２３５５３９（Ｃ１）号「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｐｒｅｐａｒｉｎｇ  ｐｏｗｄｅｒ−ｌｉｋｅ  ｍａｔｅｒｉａｌ  ｆｏｒ  ｃｅｓｓａｔｉｏｎ  ｂｌｅｅｄｉｎｇ」には、トロンビン及びフィブリノゲンを含む水性媒体に基剤として部分酸化セルロースを混合することを含む、止血効果を惹起する粉末様材料を調製する方法が開示されている。ゼラチン、イプシロン−アミノカプロン酸、及びリゾチームを指定の物質に添加し、更に、布地としてのジアルデヒドセルロースを部分酸化セルロースとして使用する、すなわち、アルデヒド基の含量は以下の成分比で４〜６％である：ジアルデヒドセルロース、１ｇ；フィブリノゲン、１８〜２２ｍｇ；ゼラチン、２７〜３３ｍｇ；イプシロン−アミノカプロン酸、４５〜５５ｍｇ；リゾチーム、９．５〜１０．５ｍｇ；トロンビン、３５０Ｕ；水、６．５ｍＬ。方法は、総含量の半分量のゼラチン及び総含量の半分量の水中にフィブリノゲン、イプシロン−アミノカプロン酸を含有する溶液を調製することと、残りの量の水中、トロンビン、リゾチーム、及び残りの量のゼラチンの溶液を別個に調製することとを含む。調製した溶液中、半分量のジアルデヒドセルロースを３〜４時間維持し、半完成製品を絞り、空気中で乾燥させ、複合粉砕に供する。
【００２０】
米国特許出願公開第２００６０１５９７３３（Ａ１）号「Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ  ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ  ｔｏ  ａ  ｗｏｕｎｄ」には、カルボン酸酸化セルロース基材の酸性の性質によって、トロンビン又はフィブリノゲンを含む酸感受性タンパク質を、接触した際に急速に変性及び不活化できることが開示されている。トロンビン及び第ＸＩＩＩ因子の酵素活性の多くは、反応中に失われることがある。これによって、カルボン酸酸化セルロースを、トロンビン、フィブリノゲン、フィブリン、又は他の酸感受性生物製剤及び医薬品の担体として使用することが困難になる。その特許出願には、中和されたカルボン酸酸化セルロース及びタンパク質ベースの止血剤、例えば、トロンビン、フィブリノゲン、及びフィブリンを含む止血創傷包帯が公知であることが更に開示されている。中和されたカルボン酸酸化セルロース系材料は、当該材料をトロンビン適合性にするために、トロンビンを添加する前にセルロースにおける酸基を中和することによって、弱有機酸の塩基性塩の水又はアルコール溶液で酸性カルボン酸酸化セルロースを処理して当該セルロース系材料のｐＨを５〜８に上昇させることによって調製される。酸中和剤、イプシロンアミノカプロン酸（epsilon aminocaproic acid、ＥＡＣＡ）の存在下で酸性カルボン酸酸化再生セルロース又は他の材料にトロンビンを添加して、トロンビンが止血剤として機能することができる領域に当該材料のｐＨを上昇させたトロンビン止血パッチが開示された。このような中和されたカルボン酸酸化セルロースはトロンビン適合性であり得るが、もはや殺菌性ではなく、その理由は、酸化セルロースの抗菌活性がその酸性の性質に起因するものであるためである。
【００２１】
米国特許第７０９４４２８（Ｂ２）号「Ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ，ｄｅｖｉｃｅｓ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ」には、少なくとも１つの凝固促進性金属イオン、例えば、銀（Ｉ）又は水銀（ＩＩ）と、少なくとも１つの凝固促進性バイオポリマー、例えば、コラーゲン、トロンビン、プロトロンビン、フィブリン、フィブリノゲン、ヘパリナーゼ、第ＶＩＩａ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸａ因子、第Ｘａ因子、第ＸＩＩ因子、フォンビルブラント因子、セレクチン、凝固促進性毒、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤、糖タンパク質ＩＩｂ〜ＩＩＩａ、プロテアーゼ、又は血漿とを含む止血組成物が開示されている。創傷に塗布するためのペースト、ドウ、糊、液体、凍結乾燥粉末、又は発泡体の形態の組成物を提供することができる。止血組成物は、凝固促進性金属イオンと組み合わせて少なくとも１つの凝固促進性バイオポリマーを含み、当該凝固促進性金属イオンは、当該凝固促進性バイオポリマーの非存在下におけるその有効止血濃度を下回る濃度で当該組成物中に存在し、当該止血組成物は、銀（Ｉ）及びコラーゲン、銀（Ｉ）及びトロンビン、銀（Ｉ）及びプロトロンビン、銀（Ｉ）及びフィブリン、銀（Ｉ）及びフィブリノゲン、銀（Ｉ）及びヘパリナーゼ、銀（Ｉ）及び第ＶＩＩａ因子、銀（Ｉ）及び第ＶＩＩＩ因子、銀（Ｉ）及び第ＩＸａ因子、銀（Ｉ）及び第Ｘａ因子、銀（Ｉ）及び第ＸＩＩ因子、銀（Ｉ）及びフォンビルブラント因子、銀（Ｉ）及びセレクチン、銀（Ｉ）及び凝固促進性毒、銀（Ｉ）及びプラスミノーゲン活性化因子阻害剤、銀（Ｉ）及び糖タンパク質ＩＩｂ〜ＩＩＩａ、銀（Ｉ）及びプロテアーゼ、銀（Ｉ）及び血漿、水銀（ＩＩ）及びコラーゲン、水銀（ＩＩ）及びトロンビン、水銀（ＩＩ）及びプロトロンビン、水銀（ＩＩ）及びフィブリン、水銀（ＩＩ）及びフィブリノゲン、水銀（ＩＩ）及びヘパリナーゼ、水銀（ＩＩ）及び第ＶＩＩａ因子、水銀（ＩＩ）及び第ＶＩＩＩ因子、水銀（ＩＩ）及び第ＩＸａ因子、水銀（ＩＩ）及び第Ｘａ因子、水銀（ＩＩ）及び第ＸＩＩ因子、水銀（ＩＩ）及びフォンビルブラント因子、水銀（ＩＩ）及びセレクチン、水銀（ＩＩ）及び凝固促進性毒、水銀（ＩＩ）及びプラスミノーゲン活性化因子阻害剤、水銀（ＩＩ）及び糖タンパク質ＩＩｂ〜ＩＩＩａ、水銀（ＩＩ）及びプロテアーゼ、並びに水銀（ＩＩ）及び血漿からなる群から選択される。また、本発明の止血組成物は、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸、セルロース、酸化セルロース、メチルセルロース、又はアルブミンなどであるが、これらに限定されない担体を含んでいてもよい。これらを使用して、マトリクス、好適な粘度、送達性、接着性、又は創傷への塗布を容易にするために本明細書における組成物に付与されることが望ましい他の特性を提供することができる。これら特徴を付与する多数の他の担体が本明細書に包含される。
【００２２】
米国特許第６１６２２４１（Ａ）号「Ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ  ｔｉｓｓｕｅ  ｓｅａｌａｎｔｓ」には、医学的に許容できる期間組織からの血流を停止させるのに有効な量の止血剤が組み込まれている、架橋性基を含む生体適合性、生分解性のヒドロゲル組織シーラントを含む止血組織シーラントが開示されている。
【００２３】
米国特許第６１７７１２６（Ｂ１）号「Ｐｒｏｃｅｓｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｍａｔｅｒｉａｌ  ｆｏｒ  ｓｅａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｈｅａｌｉｎｇ  ｗｏｕｎｄｓ」には、創傷を封止及び／又は治癒するための材料を生産するプロセスであって、ｉ）２枚以上の板を有する容器に液体組成物を充填することであって、当該板の少なくとも２枚に１つ以上の流通穴が穿孔されており、当該穿孔板のうちの少なくとも１枚が別の当該穿孔板に対して移動可能である、ことと、ｉｉ）当該容器の下を搬送方向に担体を搬送することと、ｉｉｉ）当該液体組成物が当該容器の下を搬送されている当該担体上に滴り落ちるように当該穿孔板を互いに対して連続的に移動させ、それによって当該液体組成物を当該担体に実質的に均等に塗布することと、を含むプロセスが開示されている。
【００２４】
国際公開第２０１４１３５６８９（Ａ２）号「Ｐｏｗｄｅｒ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ」には、トロンビン及びフィブリノゲンを含む医療用途に好適な無菌粉末組成物であって、トロンビン粉末が液体原料から生成され、当該原料がトロンビンの溶液又は懸濁液、好ましくは溶液を含み、当該粉末が、無菌噴霧乾燥又は無菌流動床乾燥から選択されるプロセスによって液体を除去することによって生成され、当該原料から液体を除去して得られた粉末が、当該液体原料のトロンビンの効力又は活性の少なくとも８０％を示し、フィブリノゲン粉末が、無菌噴霧乾燥又は無菌流動床乾燥によって原料から液体を除去することによって生成され、当該原料がフィブリノゲンの溶液又は懸濁液、好ましくは溶液を含み、当該組成物が、医療用途のための無菌最終医薬製品としてパッケージ化される、組成物が開示されている。
【００２５】
米国特許出願公開第２０１００１１９，５６３号「ＳＯＬＩＤ  ＦＩＢＲＩＮＯＧＥＮ  ＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮ」には、フィブリノゲンを含み、更に、（ａ）アルブミン、（ｂ）非イオン界面活性剤、（ｃ）塩基性アミノ酸又はその塩、及び（ｄ）酸性アミノ酸、その塩、中性アミノ酸、及びその塩からなる群から選択される少なくとも２つのアミノ酸又はその塩、を含む、固体フィブリノゲン製剤が開示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２６】
塗布のし易さ及び止血の迅速な開始を容易にする、改善された止血形態及び材料が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００２７】
本発明は、フィブリノゲン、トロンビン、及び酸化再生セルロース繊維を含む凝集体を含む止血材を目的とする。いくつかの態様では、止血材は、塩化カルシウム、トリスなどの添加剤を更に含む。別の態様では、本発明は、フィブリノゲン、トロンビン、及びＯＲＣの粉末の混合物を非水性溶媒に懸濁させ、ノズルを通して懸濁液を基材上に噴霧し、当該基材から止血材を除去し、篩分けすることによって、上記止血材を作製する方法を目的とする。
【００２８】
更に別の実施形態では、本発明は、上記止血材を患者の創傷の上及び／又は中に塗布することによって創傷を治療する方法を目的とする。
【００２９】
一実施形態では、本発明は、粉末状止血組成物を形成する方法であって、非水性低沸点溶媒中フィブリノゲンの粒子、トロンビン、ＯＲＣ繊維を含む混合物の懸濁液を形成し、ノズルを通して当該懸濁液を基材上に噴霧し、当該非水性溶媒を蒸発させ、当該基材から当該組成物を分離し、当該組成物を篩分けし、このようにして、粉末状止血組成物を形成する、方法に関する。非水性低沸点溶媒は、ＨＦＥ７１００などであるがこれに限定されないヒドロフルオロエーテルＣ４Ｆ９ＯＣＨ３であってよい。懸濁液は、トリス及び／又は塩化カルシウムを更に含み得る。液体懸濁液は、約９０重量％のフィブリノゲン、約８重量％のトロンビン、及び約２．５重量％の塩化カルシウムを含むフィブリンシーラント粉末を含有し得る。懸濁している粉末状止血組成物の、フィブリンシーラント粉末のＯＲＣに対する重量比は、約１：１〜約１０：１であり得る。懸濁している粉末状止血組成物は、主に約２５０〜約８５０マイクロメートル、より好ましくは約３５５〜約８５０マイクロメートルの範囲の粒径測定値を有する粉末の形態であり得る。得られた粉末状止血組成物は、少なくとも部分的に一体化している、凝集したＯＲＣ繊維、フィブリノゲン、及びトロンビンを含み、トリス及び／又は塩化カルシウムを更に含み得る。
【００３０】
本発明は、更に、得られた上記止血組成物を創傷の上及び／又は中に塗布することによって創傷を治療する方法を目的とする。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】製造プロセスの概略図である。
【図２】水中における本発明の組成物及び比較組成物のゲル化を評価する試験バイアルを示す写真である。
【図３】本発明の組成物及び比較組成物と接触した血液の凝固を評価する試験バイアルを示す写真である。
【図４】本発明の組成物及び比較組成物と接触した血液の凝固を評価する試験バイアルを示す写真である。
【図５】比較組成物の可溶化試験の結果を示す複合写真である。
【図６】本発明の組成物の可溶化試験の結果を示す複合写真である。
【図７】比較組成物の可溶化試験の結果を示す複合写真である。
【図８】様々な粒径の本発明の組成物の可溶化試験の結果を示す複合写真である。
【図９】本発明の組成物のうちの１つのＳＥＭ写真を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本発明者らは、止血にとって非常に有益な驚くべき特性を有する止血材、及びそれを作製するプロセスを見出した。
【００３３】
本発明に係る止血材は、酸化セルロースベースの繊維材料、より好ましくは、酸化再生セルロース粉末、フィブリノゲン粉末、及びトロンビン粉末から作製される。本発明に係る止血材は、粉末の形態の少なくとも部分的に一体化しているＯＲＣ繊維、フィブリノゲン、及びトロンビンを表す。
【００３４】
図１を参照すると、本発明に係る止血材を作製するプロセスの概略ブロック図が示され、当該プロセスは、以下の工程を含む：
・フィブリノゲン、トロンビン、及びＯＲＣの乾燥粉末を調製する工程、
・フィブリノゲン、トロンビン、及びＯＲＣの粉末の混合物を、周囲条件下で急速蒸発することができる非水性溶媒に懸濁させる工程、
・ノズルを通して懸濁液を基材上に噴霧する工程、
・当該非水性溶媒を蒸発させ、得られた止血材料を乾燥させる工程、
・当該基材から当該止血材料を除去／分離し、篩分けし、このようにして、粉末の形態の少なくとも部分的に一体化しているＯＲＣ繊維、フィブリノゲン、及びトロンビンを形成する工程。
【００３５】
一実施形態では、ｐＨ調整のために、粉末形態のトリス又はトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンバッファを、フィブリノゲン、トロンビン、及びＯＲＣの混合物に添加する。次いで、混合組成物をＨＦＥに添加して懸濁液を形成した。一実施形態では、ＨＦＥの蒸発による噴霧中の材料流の冷却／冷し効果によって、得られた止血材の上又は中に一部の周囲水分が吸収されるようになる。このようにして吸収された任意の過剰な水分は、真空オーブン乾燥における最終乾燥工程において除去される。
【００３６】
本発明の一態様によれば、本発明の止血材におけるフィブリノゲン／トロンビン混合物のＯＲＣ粉末に対する重量比は、約１：１〜約１０：１である。
【００３７】
本発明の一態様によれば、本発明の止血材は、２５０〜８５０マイクロメートルのサイズを有する粒子を含む。
【００３８】
本発明の一態様によれば、本発明の止血材は、粉末形態の、実質的に均一に分布している、少なくとも部分的に一体化しているＯＲＣ繊維、フィブリノゲン、及びトロンビンを含む。
【００３９】
本発明の一態様によれば、本発明の止血材は、高い均一性、一体性、迅速なゲル化／凝固、及び強い接着力を有する。
【００４０】
本発明の一態様によれば、懸濁液が噴霧される回収表面又は基材は、不活性不織布フェルト若しくはメッシュ又は鋼板を含む。
【実施例】
【００４１】
実施例１．止血組成物の調製
本発明の止血組成物の個々の成分を下記のとおり調製した。
【００４２】
フィブリノゲン。凍結乾燥、フリーズドライなどを含むフィブリノゲン粉末を調製する任意の方法を利用することができる。本実施例では、噴霧乾燥法（噴霧乾燥機製造業者：ＰｒｏＣｅｐＴ、型番４Ｍ８−ＴｒｉＸ）によってフィブリノゲン粉末を調製した。フィブリノゲン溶液は、Ｂｉｏｓｅａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＣＯ．ＬＴＤ（所在地：中国、広州）から市販されており、ＷＦＩ中にフィブリノゲン、アルブミン、及び他の必要な試薬を含む製剤である。まず、フィブリノゲン溶液を熱風中でスプレーノズルを通して霧化させ、次いで、直ちに乾燥させた。噴霧乾燥パラメータは、表１に示すとおりであった。
【００４３】
【表１】
2019524348.tif 000003
【００４４】
トロンビン。凍結乾燥、フリーズドライなどを含むトロンビン粉末を調製する任意の方法を利用することができる。本実施例では、トロンビン製剤溶液を用いて噴霧乾燥法によってトロンビン粉末を調製した。トロンビン溶液は、Ｂｉｏｓｅａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＣＯ．ＬＴＤ（所在地：中国、広州）から市販されており、ＷＦＩ中にトロンビン、アルブミン、及び他の必要な試薬を含む製剤であった。噴霧乾燥パラメータは、表２に示すとおりであった。
【００４５】
【表２】
2019524348.tif 000004
【００４６】
次いで、８９．７重量％のフィブリノゲン及び７．８重量％のトロンビン及び２．５重量％の塩化カルシウムの比で複合体を調製するために、トロンビン及びフィブリノゲンの粉末を一緒に混合して、フィブリンシーラント粉末を形成した。
【００４７】
フィブリノゲン及びトロンビンの供給源は、フィブリノゲン及びトロンビンを得るために分画された、Ｂｉｏｓｅａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＣＯ．ＬＴＤ（所在地：中国、広州）によって供給されているブタ血漿であった。
【００４８】
ＯＲＣ粉末は、Ｓｕｒｇｉｃｅｌオリジナル布地を加工することによって得ることができる。全ての目的のために参照により本明細書に援用される、Ｙｉ−Ｌａｎ  Ｗａｎｇによる、２０１５年１１月６日に出願された、「Ｃｏｍｐａｃｔｅｄ  Ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｉｃ  Ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ」と題された米国仮特許出願第６２／２５１７７３号を参照する。
【００４９】
簡潔に述べると、以下のプロセスにおいてＳｕｒｇｉｃｅｌオリジナル布地を加工することによってＯＲＣ粉末を得た：
１）当該布地を約５ｃｍ×２０ｃｍ（約２”×８”）片に分割及び切断し、
２）公知の粉砕方法を用いて、当該布地を粉末粒径（Ｄ５０が９４マイクロメートル未満）に粉砕する。調製において使用される方法のうちの１つは次のボールミル法である。約１００グラムの布地を５００ｍＬのジルコニア製ジャーに入れ、次いで、１２又は１３個の２０ｍｍのジルコニア製ボール（ビー玉）を同じジャーに入れ、ジャーにふたをし、Ｒｅｔｓｃｈ遊星ボールミル（型番ＰＭ１００）にジャーを固定し、当該布地を４５０ｒｐｍで２０分間粉砕し、粉砕された粉末を直径２０ｃｍ（８”）及び目開き３００−マイクロメートルの篩上に移し、少し振盪することによってビー玉と粉末とを分け、粉末を回収する。
【００５０】
同時噴霧方法を用いることによって、本発明の止血組成物を以下のとおり調製した。１重量部のＯＲＣ繊維を、１重量部、又は２重量部、又は５重量部、又は１０重量部のフィブリンシーラント粉末と合わせた。したがって、一例として、１０ｇのＯＲＣ粉末を１０ｇ、２０ｇ、５０ｇ、又は１００ｇのフィブリンシーラント混合粉末と合わせて、２０ｇ、３０ｇ、５０ｇ、又は１００ｇの混合物を生成した。
【００５１】
それぞれのＯＲＣ：フィブリンシーラント比について、ｐＨを７．０に調整するために少量のトリスを添加した。粉末を湿潤表面上に置き、生じたｐＨを測定し、７の中性ｐＨを得るために必要なトリスの量を評価することによって、ｐＨを調整した。次いで、サンプルを廃棄した。次いで、対応する比例量のトリスの乾燥粉末を粉末混合物に添加した後、同時噴霧した。
【００５２】
トリスを乾燥形態で添加したので、ＯＲＣ自体は中和されていない。塗布中に粉末製剤全体を濡らし、トリスを溶解させたとき、ＯＲＣが中和される。ＦＳ及びＯＲＣ粉末の懸濁液を作製するために低沸点非水性溶媒を利用した。例えば、６１℃の沸点を有するＮｏｖｅｃ  ７１００  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｆｌｕｉｄとして３Ｍによって供給されているＨＦＥ  ７１００として入手した、ヒドロフルオロエーテルＣ４Ｆ９ＯＣＨ３を使用した。ＨＦＥ７１００溶媒を粉末組成物に添加し、１５０μｍの篩で濾過した。２０±５℃の温度のリザーバにおいて９０ｒｐｍ／分で一定に撹拌することによって、均等に分布している懸濁液を作製した。直径０．７ｍｍのノズルを通して、懸濁している成分を噴霧した。使用したノズルの種類は、Ｓｐｒａｙｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃｏ．によって製造されているＢ１／８ＶＡＵ−３１６ＳＳ＋ＳＵＶ６７−３１６ＳＳであった。２０±５℃の温度の不織布又はステンレス鋼の基材上への、ノズルを通る流れは、１３０ｍＬ／分の流速であった。
【００５３】
懸濁液を噴霧したとき、ＨＦＥ  ７１００溶媒の大部分が蒸発していた。もし存在する場合、ＨＦＥ  ７１００溶媒残渣及び粉末中の吸収された周囲水分を、２０±５℃で２４時間±５時間、真空乾燥オーブンにおいて蒸発させた。
【００５４】
得られた止血組成物をすくい取るか剥がし取るか又は他の方法で基材から分離し、続いて、８５０μｍ、３５５μｍ、２５０μｍの目開きを有する篩に通した。
【００５５】
表３は、組成物を同時噴霧するために使用したパラメータを示す。
【００５６】
【表３】
2019524348.tif 000005
【００５７】
比較例として、同じ噴霧方法ＨＦＥ７１００によって、ＯＲＣもトリスも含まない純粋なフィブリンシーラント混合組成物も調製した。
【００５８】
実施例２．機械的混合止血組成物対噴霧混合止血組成物のゲル化の比較
急速なゲル化及び強力なゲルの形成は、止血材にとって重要である。
【００５９】
同時噴霧方法によって、上記のとおり本発明の止血組成物を調製した。
【００６０】
乾燥粉末、すなわち、上記のとおり得られたＦＳ又はＯＲＣ粉末を手で振盪することによって、同時噴霧を実施せずに容器内において手で振盪して均等に混合された組成物にすることによって、比較のための機械混合組成物を調製した。組成物は、トリスを含む同じ成分を全て含んでおり、違いは混合方法であった。
【００６１】
試験したフィブリンシーラント粉末のＯＲＣに対する比は、フィブリンシーラント（ＦＳ）：ＯＲＣ比−１：１、２：１、５：１、１０：１（重量による）であった。したがって、１：１のＦＳ／ＯＲＣ比では、１部のフィブリンシーラント粉末（フィブリノゲン、トロンビン、塩化カルシウムを含む）を１部のＯＲＣ粉末と合わせる（重量による）。
【００６２】
次いで、機械混合組成物及び本発明の噴霧混合組成物を、水表面上に２００ｍｇの量で５０ｍＬのバイアル内の２０ｍＬの水に添加した。２分間ゲル化させた後、バイアルを上下逆さまにし、組成物のゲル化層が形成されたかどうかを観察し、形成された場合、ゲル化層によって封止され、形成されたゲル層によってバイアルの底部に保持された水が観察された。
【００６３】
次に、試験の終了時に上下逆さまにした試験バイアルの画像を示す図２を参照すると、
・試験バイアル１は、１：１ＦＳ／ＯＲＣ比の機械混合組成物を示し、
・試験バイアル２は、２：１ＦＳ／ＯＲＣ比の機械混合組成物を示し、
・試験バイアル３は、５：１ＦＳ／ＯＲＣ比の機械混合組成物を示し、
・試験バイアル４は、１０：１ＦＳ／ＯＲＣ比の機械混合組成物を示し、
・試験バイアル５は、ＯＲＣ粉末を含まない（フィブリンシーラント粉末のみ）機械混合組成物を示し、
・試験バイアル６は、１：１ＦＳ／ＯＲＣ比の本発明の止血組成物を示す。
【００６４】
図２に示される結果の解析は、試験バイアル１〜５ではゲル化が流体を保持するには不十分であり、バイアルの下部に流体が視認できることを示す。試験バイアル６では、流体はバイアルの上部に視認できる、すなわち、水はゲル化層によって保持され、重力下でバイアルの下部に移動するのが阻止されている。このように、全ての比の機械混合組成物及びＯＲＣを含まないフィブリンシーラント組成物ではゲル化が不十分であったが、１：１比で調製された本発明の止血組成物は、驚くべきことに、強力なゲル化を示した。
【００６５】
実施例３．インビトロにおける血液凝固試験
インビトロにおけるいくつかの本発明の組成物、また、比較組成物による血液凝固を以下のとおり試験した。
【００６６】
２０ｍＬのクエン酸添加された全血（ブタ）を５０ｍＬのバイアルに添加した。２００ｍｇの試験した止血組成物を血液表面上に添加した。２分間凝固させた後、バイアルを上下逆さまにし、血液凝固を観察した。完全に凝固した場合、凝固した血液は、上下逆さまになったバイアルの上部に留まる。凝固が不完全な場合、血液は流体のままであり、重力によってバイアルの下部に流れる。
【００６７】
ＯＲＣの代わりにフィブリンシーラント粉末に添加した比較のための賦形剤は、トレハロース、ＰＥＧ  ４０００、マンニトール、及びアルファ−セルロース（α−セルロース）であった。全ての賦形剤は、Ａｌａｄｄｉｎ  ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入した。１０：１比、すなわち、１０部のフィブリンシーラント（ＦＳ）粉末を１部のそれぞれの賦形剤と合わせて、上記のとおり噴霧方法によって、トレハロース、ＰＥＧ４０００、マンニトール、又はアルファ−セルロースを含むフィブリンシーラント粉末混合物を調製した。２０ｍＬの血液に添加した本発明の組成物、また、比較組成物の総量は２００ｍｇであった。
【００６８】
次に、試験の終了時に上下逆さまにした試験バイアルの画像を示す図３を参照すると、
・試験バイアル８は、２：１ＦＳ／ＯＲＣ比を有する本発明の止血組成物を示し、
・試験バイアル９は、５：１ＦＳ／ＯＲＣ比を有する本発明の止血組成物を示し、
・試験バイアル１０は、１：１ＦＳ／ＯＲＣ比を有する本発明の止血組成物を示し、
・試験バイアル１１は、同時噴霧によって作製された、ＯＲＣを含まず、フィブリンシーラント粉末のみを含む比較組成物を示し、
・試験バイアル１２は、１０：１ＦＳ／α−セルロース重量比でα−セルロースを添加した、フィブリンシーラント粉末を含む比較組成物を示し、
・試験バイアル１３は、１０：１ＦＳ／トレハロース重量比でトレハロースを添加した、フィブリンシーラント粉末を含む比較組成物を示し、
・試験バイアル１４は、１０：１ＦＳ／ＰＥＧ４０００重量比でＰＥＧ４０００を添加した、フィブリンシーラント粉末を含む比較組成物を示し、
・試験バイアル１５は、１０：１ＦＳ／マンニトール重量比でマンニトールを添加した、フィブリンシーラント粉末を含む比較組成物を示す。
【００６９】
図３に提示した結果の解析は、本発明の止血組成物を含む試験バイアル８〜１０では、血液が凝固しており、上下逆さまになったバイアルの上部に血餅が視認でき、凝固した血液が重力下でバイアルの下部に移動するのが阻止されている。このように、２：１、５：１、１：１ＦＳ／ＯＲＣ比で調製された本発明の止血組成物は、驚くべきことに、強力な血液の凝固を示した。また、バイアル１２内のα−セルロースを含む比較サンプルも、血液の凝固を示す。バイアル１１（ＯＲＣを含まず、フィブリンシーラント粉末のみ）、バイアル１３（トレハロースを添加したフィブリンシーラント粉末）、バイアル１４（ＰＥＧ４０００を添加したフィブリンシーラント粉末）、バイアル１５（マンニトールを添加したフィブリンシーラント粉末）内の比較例は、凝固を全く示さないか、不十分な凝固しか示さず、したがって、流体を保持するには凝固が不十分であり、流体はバイアルの下部に視認でき、すなわち、血液は流体のままであり、重力によってバイアルの下部に流れる。本発明の止血組成物は、驚くべきことに、強力な血液凝固を示した。
【００７０】
同一の試験方法を用いて、本発明の止血組成物及び容器内で乾燥粉末を手で振盪することによって調製された比較のための機械混合組成物、並びにＯＲＣを含まないフィブリンシーラント粉末のみについて、更なるインビトロにおける血液凝固試験を実施した。
【００７１】
次に、試験の終了時に上下逆さまにした試験バイアルの画像を示す図４を参照すると、
・試験バイアル１は、１：１ＦＳ／ＯＲＣ比の機械混合組成物を示し、
・試験バイアル２は、２：１ＦＳ／ＯＲＣ比の機械混合組成物を示し、
・試験バイアル３は、５：１ＦＳ／ＯＲＣ比の機械混合組成物を示し、
・試験バイアル４は、１０：１ＦＳ／ＯＲＣ比の機械混合組成物を示し、
・試験バイアル５は、Ｙｉ−Ｌａｎ  Ｗａｎｇによる、２０１５年１１月６日に出願された、「Ｃｏｍｐａｃｔｅｄ  Ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ  Ｃｅｌｌｕｌｏｓｉｃ  Ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ」と題された米国仮特許出願第６２／２５１７７３号に記載のとおり調製された圧縮されたＯＲＣ粉末凝集体を含む比較組成物（２００ｍｇ）を示し、
・試験バイアル６は、同時噴霧方法によって調製された、ＯＲＣを含まず、フィブリンシーラント粉末のみを含む比較組成物を示し、
・試験バイアル７は、１：１ＦＳ／ＯＲＣ比を有する本発明の止血組成物を示し、
・試験バイアル８は、２：１ＦＳ／ＯＲＣ比を有する本発明の止血組成物を示し、
・試験バイアル９は、５：１ＦＳ／ＯＲＣ比を有する本発明の止血組成物を示し、
・試験バイアル１０は、１０：１ＦＳ／ＯＲＣ比を有する本発明の止血組成物を示す。
【００７２】
図４に提示した結果の解析は、全ての比の機械混合組成物、ＯＲＣ粉末のみ、及びＯＲＣを含まないフィブリンシーラント粉末を含む試験バイアル１〜６における比較例は、凝固を全く示さないか、不十分な凝固しか示さず、したがって、流体を保持するには凝固が不十分であり、流体はバイアルの下部に視認でき、すなわち、血液は流体のままであり、重力によってバイアルの下部に流れることを示す。対照的に、図３に提示した結果と同様に、本発明の止血組成物を含む試験バイアル７〜１０では、血液が凝固しており、上下逆さまになったバイアルの上部に血餅が視認でき、凝固した血液が重力下でバイアルの下部に移動するのが阻止されている。このように、１：１〜１０：１ＦＳ／ＯＲＣ比で調製された本発明の止血組成物は、驚くべきことに、強力な血液の凝固を示した。
【００７３】
実施例４．組成物の可溶化
体液と接触したときの粉末状止血組成物の迅速な可溶化又は溶解性は、迅速に止血させるのに役立ち得、流体との迅速な相互作用を示す。可溶化のバイアル試験を以下のとおり実施した：１グラムの試験した止血粉末状組成物を、純水の入ったトレイ内に置かれたスポンジ材上に配置された不織布を含む湿潤基材のある領域に均等に塗布した。試験した粉末状止血組成物を湿潤基材の表面に塗布した後、組成物の溶解性の目視観測を実施し、０時間（組成物の塗布直後、試験した組成物の塗布の１分後及び２分後に結果を記録した。
【００７４】
次に、図５を参照すると、容器内で乾燥粉末を手で振盪することによって調製された比較のための機械混合組成物の試験結果を示す複合画像を示す。ＦＳ／ＯＲＣ比−１：１、２：１、５：１、１０：１、及びＯＲＣを含まないＦＳ粉末について、０分、１分、及び２分の写真を撮影した。結果は、比較例では２分時点でさえも不十分な可溶化を示す。
【００７５】
次に、図６を参照すると、噴霧方法によって調製された本発明の止血組成物の試験結果を示す複合画像を示す。ＦＳ／ＯＲＣ比−１：１、２：１、５：１、１０：１、及びＯＲＣを含まないＦＳ粉末について、０分、１分、及び２分の写真を撮影した。結果は、１分時点でさえも良好な可溶化を示し、そして、２分時点で非常に良好な可溶化を示し、１：１及び２：１比では１分で既に迅速な完全可溶化が観察され、全ての比について２分で良好な可溶化が観察された。純ＦＳは、比較例では２分時点でさえも不十分な可溶化を示す。
【００７６】
次に、図７を参照すると、ＯＲＣの代わりにフィブリンシーラント粉末に賦形剤を添加した、ＦＳを含む比較組成物、並びにＯＲＣを含まないＦＳ粉末の試験結果を表す複合画像を示す。賦形剤は、トレハロース、ＰＥＧ  ４０００、マンニトールであった。１０：１ＦＳ／賦形剤比で上記のとおり噴霧方法によって、トレハロース、ＰＥＧ  ４０００、マンニトールを含むフィブリンシーラント粉末混合物を調製した。０分、１分、及び２分に撮影された写真を示す。結果は、比較例では２分時点でさえも不十分な可溶化を示す。
【００７７】
噴霧方法によって調製された本発明の止血組成物の溶解性は、ＯＲＣ成分の濃度に影響を受けていた。低濃度のＯＲＣでさえも、組成物の溶解性が改善された。
【００７８】
実施例５．粒径の効果
本発明の止血組成物の性能に対する粒径の効果を評価した。８５０μｍ、３５５μｍ、及び２５０μｍの開口部を有する篩に組成物を逐次通すことによって粒径を制御した。本発明の組成物の粉末を、主に８５０μｍ超、主に３５５〜８５０μｍ、主に２５０〜３５５μｍ、及び主に２５０μｍ未満のサイズ群に分けた。５：１ＦＳ／ＯＲＣ比で作製された本発明の止血組成物を、溶解性について試験した。
【００７９】
次に、図８を参照すると、噴霧方法によって調製された本発明の止血組成物の試験結果を示す複合画像を示す。異なる粉末サイズ範囲について、０分、１分、及び２分に写真を撮影する。結果は、主に３５５〜８５０μｍの組成物では２分時点で特に優れた可溶化を示し、主に２５０〜３５５μｍの組成物では良好な可溶化を示し、主に８５０μｍ超及び主に２５０μｍ未満の組成物ではそれほど有効な可溶化を示さない。このように、主に２５０〜８５０μｍの範囲が良好な可溶化を示し、好ましい粒径範囲であり、主に３５５〜８５０μｍの範囲の粒子が特に好ましい。得られた粉末は、フィブリノゲン、トロンビン、及びＯＲＣの凝塊であり、出発物質の粒径よりも大きいサイズの粒子を多く有する。
【００８０】
実施例６．トリス添加の効果
トリスを添加した及びトリスを添加していない本発明の組成物の剥離試験を実施した。ｐＨ＝７を達成するためのトリス添加の量を決定した。トリス粉末を粉砕し、１５０μｍの篩に通した。１５０μｍ未満の粉末を回収し、所定の量を乾燥混合物に添加して、組成物のｐＨを調整した後、同時噴霧した。
【００８１】
剥離試験を以下のとおり実施した。０．５ｇの本発明の組成物を真皮組織に塗布し、複合二層マトリクスで覆い、これを３分間粉末に押し付け、組織からサンプルへの分離力をＩｎｓｔｒｏｎ引張試験機によって測定し、力／単位幅（Ｎ／ｍ）として記録した。複合二層マトリクスは、参照により本明細書に援用される、Ｄ．Ｓｈｅｔｔｙらによる「Ｒｅｉｎｆｏｒｃｅｄ  ａｂｓｏｒｂａｂｌｅ  ｍｕｌｔｉｌａｙｅｒｅｄ  ｆａｂｒｉｃ  ｆｏｒ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｄｅｖｉｃｅｓ」と題された米国特許第７，６６６，８０３号に記載されているとおり、カルボン酸酸化再生セルロース編地（ＯＲＣ）にニードルパンチされた合成吸収性ポリ（グリコリド−コ−ラクチド）（ＰＧＬ、９０／１０モル／モル）不織布の層を含んでいた。
【００８２】
次に、表ＮＮを参照すると、本発明の製剤の接着力をＯＲＣ添加の関数として示す。ＯＲＣ含量が高いほど接着性は低いが、１：１ＦＳ粉末：ＯＲＣ繊維製剤でさえも、認識できる剥離力を有する。
【００８３】
次に、表４を参照すると、様々なＦＳ／ＯＲＣ比について、トリスを含む及び含まない本発明の製剤の接着力を、対応するｐＨ値と共に示す。ｐＨを７．０に調整するために、列挙した重量パーセントでトリスを添加した。全ての組成物が高い剥離力を示したが、同じＦＳ／ＯＲＣ比ではトリスの存在によって明らかにより高い剥離力が得られ、一部は２〜４倍高い剥離力を示した。
【００８４】
【表４】
2019524348.tif 000006
【００８５】
データの解析は、トリスの添加によって達成された中性ｐＨを有する本発明の組成物について、接着力又は剥離力の驚くべき改善を示す。しかし、力は幾分低い。
【００８６】
実施例７．粒子の特性評価
次に、５：１ＦＳ／ＯＲＣの本発明の組成物の拡大ＳＥＭ画像を示す図９を参照すると、組成物の成分が少なくとも部分的に一体化しており、すなわち、互いに付着しているか又は互いにコーティングされており、単なる機械混合では一体化していないことが明らかである。
【００８７】
粉末形態の本発明の組成物の試験は、成分が十分に混合されており、生物製剤がＯＲＣ繊維に密着していたことを示す。
【００８８】
実施例８．止血試験
本発明の止血組成物を用いた肝擦過傷モデルにおけるインビトロにおける止血効果の試験を、以下のとおり実施した。ブタ肝臓の表面上に３ｃｍ×３ｃｍの滲出領域を作製することによって肝擦過傷モデルを作製した。０．５ｇの５：１のＦＳ／ＯＲＣ比を有する本発明の止血組成物を塗布して、全くタンポン充填を適用することなく滲出領域を覆った。２分以内に止血された。
【００８９】
本発明の止血組成物を用いた肝切除モデルにおけるインビトロにおける止血効果の試験を、以下のとおり実施した。一部の腹部手術で使用される外科的操作であるプリングル操作を使用して、大きな非侵襲的止血材をクランプとして適用することによって肝切除モデルを作製した。まず出血を制御するためにプリングル操作を適用し、次いで、肝縁部に沿って長さ５ｃｍ及び幅５ｃｍの肝組織切片を作製して、胆管を露出させた。その直後、本発明の止血組成物粉末を塗布して切断面を覆い、出血が止まるまで生理食塩水を同時に噴霧した。次いで、プリングルクランプを解放して結果を調べた。止血が達成され、プリングルクランプを解放した後に胆管漏出が阻止されたことが観察された。２分で止血が行われた。
【００９０】
〔実施の態様〕
（１）  粉末状止血組成物を形成する方法であって、
ａ）非水性低沸点溶媒中フィブリノゲンの粒子、トロンビン、ＯＲＣ繊維を含む混合物の懸濁液を形成する工程と、
ｂ）ノズルを通して前記懸濁液を基材上に噴霧する工程と、
ｃ）前記非水性溶媒を蒸発させる工程と、
ｄ）前記基材から前記組成物を分離し、前記組成物を篩分けし、
このようにして、前記粉末状止血組成物を形成する工程と、
を含む方法。
（２）  前記非水性低沸点溶媒が、ヒドロフルオロエーテルＣ４Ｆ９ＯＣＨ３を含む、実施態様１に記載の方法。
（３）  前記非水性低沸点溶媒が、ＨＦＥ７１００を含む、実施態様１に記載の方法。
（４）  前記懸濁液がトリスを更に含む、実施態様１に記載の方法。
（５）  前記懸濁液が塩化カルシウムを更に含む、実施態様１に記載の方法。
【００９１】
（６）  前記懸濁液が、約９０重量％のフィブリノゲン、約８重量％のトロンビン、及び約２．５重量％の塩化カルシウムを含むフィブリンシーラント粉末を含む、実施態様１に記載の方法。
（７）  前記粉末状止血組成物の、フィブリンシーラント粉末のＯＲＣに対する重量比が約１：１〜約１０：１である、実施態様６に記載の方法。
（８）  前記粉末状止血組成物が、主に約２５０〜約８５０マイクロメートルの範囲の粒径を有する粉末を含む、実施態様１に記載の方法。
（９）  前記粉末状止血組成物が、主に約３５５〜約８５０マイクロメートルの範囲の粒径を有する粉末を含む、実施態様８に記載の方法。
（１０）  前記粉末状止血組成物が、少なくとも部分的に一体化している、凝集したＯＲＣ繊維、フィブリノゲン、及びトロンビンを含む、実施態様１に記載の方法。
【００９２】
（１１）  少なくとも部分的に一体化している、凝集したＯＲＣ繊維、フィブリノゲン、及びトロンビンを含む止血組成物。
（１２）  トリスを更に含む、実施態様１１に記載の止血組成物。
（１３）  塩化カルシウムを更に含む、実施態様１１に記載の止血組成物。
（１４）  前記組成物が、約９０重量％のフィブリノゲン、約８重量％のトロンビン、及び約２．５重量％の塩化カルシウムを含むフィブリンシーラント粉末を含む、実施態様１１に記載の止血組成物。
（１５）  フィブリンシーラント粉末のＯＲＣに対する重量比が約１：１〜約１０：１である、実施態様１４に記載の止血組成物。
【００９３】
（１６）  主に約２５０〜約８５０マイクロメートルの範囲の粒径を有する粉末を含む、実施態様１１に記載の止血組成物。
（１７）  主に約３５５〜約８５０マイクロメートルの範囲の粒径を有する粉末を含む、実施態様１６に記載の止血組成物。
（１８）  創傷の上及び／又は中に実施態様１１に記載の止血組成物を塗布することによって創傷を治療する方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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