(57)【要約】  抗ＬＡＧ−３抗体を開示する。こうした抗体を含む組成物、ならびにこうした抗体の使用およびこうした抗体を用いる方法もまた開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬＡＧ−３に結合可能であり、任意に単離されており、アミノ酸配列ｉ）〜ｖｉ）：
【化１】
2019517773.tif 000027
を有する抗体または抗原結合性断片、あるいは配列（ｉ）〜（ｖｉ）の１またはそれより多くにおいて、１または２または３アミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体である、
式中、Ｘ１＝ＲまたはＴ；  Ｘ２＝Ｓ、ＡまたはＴ；  Ｘ３＝ＬまたはＶ；  Ｘ４＝ＬまたはＳ；  Ｘ５＝ＨまたはＳ；  Ｘ６＝Ｓ、ＧまたはＴ；  Ｘ７＝Ｎ、Ｆ、Ｙ、ＤまたはＳ；  Ｘ８＝ＧまたはＬ；  Ｘ９＝Ｙ、ＡまたはＤ；  Ｘ１０＝存在しないまたはＮ；  Ｘ１１＝存在しないまたはＹ；  Ｘ１２＝存在しない、ＬまたはＦ；  Ｘ１３＝存在しないまたはＤ；  Ｘ１４＝Ｌ、ＧまたはＤ；  Ｘ１５＝ＧまたはＡ；  Ｘ１６＝ＮまたはＳ；  Ｘ１７＝Ｓ、ＴまたはＡ；  Ｘ１８＝ＭまたはＱ；  Ｘ１９＝Ａ、ＹまたはＧ；  Ｘ２０＝Ｌ、ＧまたはＴ；  Ｘ２１＝Ｑ、Ｐ、ＳまたはＨ；  Ｘ２２＝Ｔ、ＳまたはＷ；  Ｘ２３＝Ｐ、Ｉ、ＲまたはＬ；  Ｘ２４＝Ｙ、Ｔ、ＰまたはＬ；  Ｘ２５＝存在しない、Ｔ、ＩまたはＧ；  Ｘ２６＝存在しない、ＴまたはＬ；  Ｘ２７＝存在しないまたはＴ；  Ｘ２８＝ＳまたはＥ；  Ｘ２９＝ＹまたはＬ；  Ｘ３０＝Ｙ、Ｇ、ＡまたはＳ；  Ｘ３１＝ＭまたはＩ；  Ｘ３２＝ＨまたはＳ；  Ｘ３３＝Ｉ、ＧまたはＶ；  Ｘ３４＝ＩまたはＦ；  Ｘ３５＝Ｎ、Ｓ、ＩまたはＤ；  Ｘ３６＝ＰまたはＹ；  Ｘ３７＝Ｓ、Ｄ、ＩまたはＥ；  Ｘ３８＝Ｇ、ＦまたはＤ；  Ｘ３９＝ＧまたはＳ；  Ｘ４０＝Ｓ、Ｎ、ＴまたはＥ；  Ｘ４１＝Ｔ、ＫまたはＡ；  Ｘ４２＝Ｓ、Ｙ、ＮまたはＩ；  Ｘ４３＝ＱまたはＤ；  Ｘ４４＝ＫまたはＳ；  Ｘ４５＝ＦまたはＶ；そしてＸ４６はＱまたはＫである、
前記抗体または抗原結合性断片。
【請求項２】
ＬＣ−ＣＤＲ１が、ＲＡＳＱＳＶＳＳＧＹＬＡ（配列番号２３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列番号１２）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＦＬＡ（配列番号１５）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号１８）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＤＧＹＮＹＦＤ（配列番号２０）またはＴＴＳＱＳＶＳＳＴＳＬＤ（配列番号２６）の１つである、請求項１の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３】
ＬＣ−ＣＤＲ２が、ＤＡＳＳＲＡＴ（配列番号２４）、ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号１３）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１６）またはＬＧＳＮＲＡＡ（配列番号２１）の１つである、請求項１または請求項２の抗体または抗原結合性断片。
【請求項４】
ＬＣ−ＣＤＲ３が、ＱＱＹＧＳＳＲＰＧＬＴ（配列番号２５）、ＭＱＡＬＱＴＰＹＴ（配列番号１４）、ＱＱＹＧＰＳＩＴ（配列番号１７）、ＱＱＹＧＳＳＰＰＩＴ（配列番号１９）、ＭＱＧＴＨＷＰＰＴ（配列番号２２）またはＱＱＹＧＳＳＬＬＴ（配列番号２７）の１つである、請求項１〜３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項５】
ＨＣ−ＣＤＲ１が、ＥＬＳＭＨ（配列番号３９）、ＳＹＹＭＨ（配列番号２８）、ＳＹＧＭＨ（配列番号３１）、ＳＹＡＭＨ（配列番号３４）またはＳＹＡＩＳ（配列番号３６）の１つである、請求項１〜４のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項６】
ＨＣ−ＣＤＲ２が、ＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４０）、ＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２９）  ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３２）またはＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３７）の１つである、請求項１〜５のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項７】
以下のＣＤＲ：
【化２】
2019517773.tif 000028
式中、Ｘ１＝ＲまたはＴ；  Ｘ２＝Ｓ、ＡまたはＴ；  Ｘ３＝ＬまたはＶ；  Ｘ４＝ＬまたはＳ；  Ｘ５＝ＨまたはＳ；  Ｘ６＝Ｓ、ＧまたはＴ；  Ｘ７＝Ｎ、Ｆ、Ｙ、ＤまたはＳ；  Ｘ８＝ＧまたはＬ；  Ｘ９＝Ｙ、ＡまたはＤ；  Ｘ１０＝存在しないまたはＮ；  Ｘ１１＝存在しないまたはＹ；  Ｘ１２＝存在しない、ＬまたはＦ；  Ｘ１３＝存在しないまたはＤ；  Ｘ１４＝Ｌ、ＧまたはＤ；  Ｘ１５＝ＧまたはＡ；  Ｘ１６＝ＮまたはＳ；  Ｘ１７＝Ｓ、ＴまたはＡ；  Ｘ１８＝ＭまたはＱ；  Ｘ１９＝Ａ、ＹまたはＧ；  Ｘ２０＝Ｌ、ＧまたはＴ；  Ｘ２１＝Ｑ、Ｐ、ＳまたはＨ；  Ｘ２２＝Ｔ、ＳまたはＷ；  Ｘ２３＝Ｐ、Ｉ、ＲまたはＬ；  Ｘ２４＝Ｙ、Ｔ、ＰまたはＬ；  Ｘ２５＝存在しない、Ｔ、ＩまたはＧ；  Ｘ２６＝存在しない、ＴまたはＬ；そしてＸ２７＝存在しないまたはＴである、
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜６のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項８】
以下のＣＤＲ：
【化３】
2019517773.tif 000029
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜７のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項９】
以下のＣＤＲ：
【化４】
2019517773.tif 000030
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜７のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１０】
以下のＣＤＲ：
【化５】
2019517773.tif 000031
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜７のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１１】
以下のＣＤＲ：
【化６】
2019517773.tif 000032
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜７のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１２】
以下のＣＤＲ：
【化７】
2019517773.tif 000033
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜７のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１３】
以下のＣＤＲ：
【化８】
2019517773.tif 000034
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜７のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１４】
以下のＣＤＲ：
【化９】
2019517773.tif 000035
式中、Ｘ２８＝ＳまたはＥ；  Ｘ２９＝ＹまたはＬ；  Ｘ３０＝Ｙ、Ｇ、ＡまたはＳ；  Ｘ３１＝ＭまたはＩ；  Ｘ３２＝ＨまたはＳ；  Ｘ３３＝Ｉ、ＧまたはＶ；  Ｘ３４＝ＩまたはＦ；  Ｘ３５＝Ｎ、Ｓ、ＩまたはＤ；  Ｘ３６＝ＰまたはＹ；  Ｘ３７＝Ｓ、Ｄ、ＩまたはＥ；  Ｘ３８＝Ｇ、ＦまたはＤ；  Ｘ３９＝ＧまたはＳ；  Ｘ４０＝Ｓ、Ｎ、ＴまたはＥ；  Ｘ４１＝Ｔ、ＫまたはＡ；  Ｘ４２＝Ｓ、Ｙ、ＮまたはＩ；  Ｘ４３＝ＱまたはＤ；  Ｘ４４＝ＫまたはＳ；  Ｘ４５＝ＦまたはＶ；そしてＸ４６はＱまたはＫである、
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜１３のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１５】
以下のＣＤＲ：
【化１０】
2019517773.tif 000036
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜１４のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１６】
以下のＣＤＲ：
【化１１】
2019517773.tif 000037
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜１４のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１７】
以下のＣＤＲ：
【化１２】
2019517773.tif 000038
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜１４のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１８】
以下のＣＤＲ：
【化１３】
2019517773.tif 000039
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜１４のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項１９】
以下のＣＤＲ：
【化１４】
2019517773.tif 000040
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜１４のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２０】
ヒト、アカゲザル（ｒｈｅｓｕｓ  ｍａｃａｑｕｅ）またはネズミＬＡＧ−３に特異的に結合する、請求項１〜１９のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２１】
ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩ、任意にヒトＬＡＧ−３およびヒトＭＨＣクラスＩＩ間の相互作用を阻害する、請求項１〜２０のいずれか一項記載の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２２】
抗体が、Ｔ細胞消耗またはＴ細胞アネルギーを示すＴ細胞において、Ｔ細胞機能を回復するために有効である、請求項１〜２１のいずれか一項の抗体または抗原結合性断片。
【請求項２３】
以下のＣＤＲ：
【化１５】
2019517773.tif 000041
式中、Ｘ１＝ＲまたはＴ；  Ｘ２＝Ｓ、ＡまたはＴ；  Ｘ３＝ＬまたはＶ；  Ｘ４＝ＬまたはＳ；  Ｘ５＝ＨまたはＳ；  Ｘ６＝Ｓ、ＧまたはＴ；  Ｘ７＝Ｎ、Ｆ、Ｙ、ＤまたはＳ；  Ｘ８＝ＧまたはＬ；  Ｘ９＝Ｙ、ＡまたはＤ；  Ｘ１０＝存在しないまたはＮ；  Ｘ１１＝存在しないまたはＹ；  Ｘ１２＝存在しない、ＬまたはＦ；  Ｘ１３＝存在しないまたはＤ；  Ｘ１４＝Ｌ、ＧまたはＤ；  Ｘ１５＝ＧまたはＡ；  Ｘ１６＝ＮまたはＳ；  Ｘ１７＝Ｓ、ＴまたはＡ；  Ｘ１８＝ＭまたはＱ；  Ｘ１９＝Ａ、ＹまたはＧ；  Ｘ２０＝Ｌ、ＧまたはＴ；  Ｘ２１＝Ｑ、Ｐ、ＳまたはＨ；  Ｘ２２＝Ｔ、ＳまたはＷ；  Ｘ２３＝Ｐ、Ｉ、ＲまたはＬ；  Ｘ２４＝Ｙ、Ｔ、ＰまたはＬ；  Ｘ２５＝存在しない、Ｔ、ＩまたはＧ；  Ｘ２６＝存在しない、ＴまたはＬ；そしてＸ２７＝存在しないまたはＴである、
を含む、単離軽鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項２４】
ＬＣ−ＣＤＲ１が、ＲＡＳＱＳＶＳＳＧＹＬＡ（配列番号２３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列番号１２）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＦＬＡ（配列番号１５）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号１８）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＤＧＹＮＹＦＤ（配列番号２０）またはＴＴＳＱＳＶＳＳＴＳＬＤ（配列番号２６）の１つである、請求項２３の単離軽鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項２５】
ＬＣ−ＣＤＲ２が、ＤＡＳＳＲＡＴ（配列番号２４）、ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号１３）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１６）またはＬＧＳＮＲＡＡ（配列番号２１）の１つである、請求項２３または請求項２４の単離軽鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項２６】
ＬＣ−ＣＤＲ３が、ＱＱＹＧＳＳＲＰＧＬＴ（配列番号２５）、ＭＱＡＬＱＴＰＹＴ（配列番号１４）、ＱＱＹＧＰＳＩＴ（配列番号１７）、ＱＱＹＧＳＳＰＰＩＴ（配列番号１９）、ＭＱＧＴＨＷＰＰＴ（配列番号２２）またはＱＱＹＧＳＳＬＬＴ（配列番号２７）の１つである、請求項２３〜請求項２５のいずれか一項の単離軽鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項２７】
軽鎖配列：配列番号１、２、３、４、５または６（図１）に少なくとも８５％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離軽鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項２８】
以下のＣＤＲ：
【化１６】
2019517773.tif 000042
式中、Ｘ２８＝ＳまたはＥ；  Ｘ２９＝ＹまたはＬ；  Ｘ３０＝Ｙ、Ｇ、ＡまたはＳ；  Ｘ３１＝ＭまたはＩ；  Ｘ３２＝ＨまたはＳ；  Ｘ３３＝Ｉ、ＧまたはＶ；  Ｘ３４＝ＩまたはＦ；  Ｘ３５＝Ｎ、Ｓ、ＩまたはＤ；  Ｘ３６＝ＰまたはＹ；  Ｘ３７＝Ｓ、Ｄ、ＩまたはＥ；  Ｘ３８＝Ｇ、ＦまたはＤ；  Ｘ３９＝ＧまたはＳ；  Ｘ４０＝Ｓ、Ｎ、ＴまたはＥ；  Ｘ４１＝Ｔ、ＫまたはＡ；  Ｘ４２＝Ｓ、Ｙ、ＮまたはＩ；  Ｘ４３＝ＱまたはＤ；  Ｘ４４＝ＫまたはＳ；  Ｘ４５＝ＦまたはＶ；そしてＸ４６はＱまたはＫである、
を含む、単離重鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項２９】
ＨＣ−ＣＤＲ１が、ＥＬＳＭＨ（配列番号３９）、ＳＹＹＭＨ（配列番号２８）、ＳＹＧＭＨ（配列番号３１）、ＳＹＡＭＨ（配列番号３４）またはＳＹＡＩＳ（配列番号３６）の１つである、請求項２８の単離重鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項３０】
ＨＣ−ＣＤＲ２が、ＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４０）、ＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２９）  ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３２）またはＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３７）の１つである、請求項２８または請求項２９の単離重鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項３１】
配列番号７、８、９、１０または１１（図２）の重鎖配列に少なくとも８５％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離重鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項３２】
請求項２８〜３１のいずれか一項記載の重鎖可変領域ポリペプチドと組み合わされた、請求項２３〜２７のいずれか一項の単離軽鎖可変領域ポリペプチド。
【請求項３３】
ＬＡＧ−３に結合可能であり、重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合性断片であって：
軽鎖が、ＬＣ−ＣＤＲ１：Ｘ１Ｘ２ＳＱＳＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３（配列番号５３）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＧＹＬＡ（配列番号２３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列番号１２）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＦＬＡ（配列番号１５）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号１８）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＤＧＹＮＹＦＤ（配列番号２０）またはＴＴＳＱＳＶＳＳＴＳＬＤ（配列番号２６）の１つ、ＬＣ−ＣＤＲ２：Ｘ１４Ｘ１５ＳＸ１６ＲＡＸ１７（配列番号５４）、ＤＡＳＳＲＡＴ（配列番号２４）、ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号１３）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１６）、またはＬＧＳＮＲＡＡ（配列番号２１）の１つ、ＬＣ−ＣＤＲ３：Ｘ１８ＱＸ１９Ｘ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６Ｘ２７（配列番号５５）、ＱＱＹＧＳＳＲＰＧＬＴ（配列番号２５）、ＭＱＡＬＱＴＰＹＴ（配列番号１４）、ＱＱＹＧＰＳＩＴ（配列番号１７）、ＱＱＹＧＳＳＰＰＩＴ（配列番号１９）、ＭＱＧＴＨＷＰＰＴ（配列番号２２）、またはＱＱＹＧＳＳＬＬＴ（配列番号２７）の１つに、それぞれ、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３を含み、
式中、Ｘ１＝ＲまたはＴ；  Ｘ２＝Ｓ、ＡまたはＴ；  Ｘ３＝ＬまたはＶ；  Ｘ４＝ＬまたはＳ；  Ｘ５＝ＨまたはＳ；  Ｘ６＝Ｓ、ＧまたはＴ；  Ｘ７＝Ｎ、Ｆ、Ｙ、ＤまたはＳ；  Ｘ８＝ＧまたはＬ；  Ｘ９＝Ｙ、ＡまたはＤ；  Ｘ１０＝存在しないまたはＮ；  Ｘ１１＝存在しないまたはＹ；  Ｘ１２＝存在しない、ＬまたはＦ；  Ｘ１３＝存在しないまたはＤ；  Ｘ１４＝Ｌ、ＧまたはＤ；  Ｘ１５＝ＧまたはＡ；  Ｘ１６＝ＮまたはＳ；  Ｘ１７＝Ｓ、ＴまたはＡ；  Ｘ１８＝ＭまたはＱ；  Ｘ１９＝Ａ、ＹまたはＧ；  Ｘ２０＝Ｌ、ＧまたはＴ；  Ｘ２１＝Ｑ、Ｐ、ＳまたはＨ；  Ｘ２２＝Ｔ、ＳまたはＷ；  Ｘ２３＝Ｐ、Ｉ、ＲまたはＬ；  Ｘ２４＝Ｙ、Ｔ、ＰまたはＬ；  Ｘ２５＝存在しない、Ｔ、ＩまたはＧ；  Ｘ２６＝存在しない、ＴまたはＬ；そしてＸ２７＝存在しないまたはＴである、そして
重鎖が、ＨＣ−ＣＤＲ１：Ｘ２８Ｘ２９Ｘ３０Ｘ３１Ｘ３２（配列番号５６）、ＥＬＳＭＨ（配列番号３９）、ＳＹＹＭＨ（配列番号２８）、ＳＹＧＭＨ（配列番号３１）、ＳＹＡＭＨ（配列番号３４）、またはＳＹＡＩＳ（配列番号３６）の１つ、ＨＣ−ＣＤＲ２：Ｘ３３Ｘ３４Ｘ３５Ｘ３６Ｘ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２ＹＡＸ４３Ｘ４４Ｘ４５Ｘ４６Ｇ（配列番号５７）、ＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４０）、ＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２９）  ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３２）、またはＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３７）の１つ、ＨＣ−ＣＤＲ３：ＴＷＦＧＥＬＹＹ（配列番号４１）、ＰＦＧＤＦＤＹ（配列番号３０）、ＬＰＧＷＧＡＹＡＦＤＩ（配列番号３３）、ＤＰＤＡＡＮＷＧＦＬＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号３５）、またはＡＬＡＤＦＷＳＧＹＹＹＹＹＹＭＤＶ（配列番号３８）の１つに、それぞれ、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３を含む、
式中、Ｘ２８＝ＳまたはＥ；  Ｘ２９＝ＹまたはＬ；  Ｘ３０＝Ｙ、Ｇ、ＡまたはＳ；  Ｘ３１＝ＭまたはＩ；  Ｘ３２＝ＨまたはＳ；  Ｘ３３＝Ｉ、ＧまたはＶ；  Ｘ３４＝ＩまたはＦ；  Ｘ３５＝Ｎ、Ｓ、ＩまたはＤ；  Ｘ３６＝ＰまたはＹ；  Ｘ３７＝Ｓ、Ｄ、ＩまたはＥ；  Ｘ３８＝Ｇ、ＦまたはＤ；  Ｘ３９＝ＧまたはＳ；  Ｘ４０＝Ｓ、Ｎ、ＴまたはＥ；  Ｘ４１＝Ｔ、ＫまたはＡ；  Ｘ４２＝Ｓ、Ｙ、ＮまたはＩ；  Ｘ４３＝ＱまたはＤ；  Ｘ４４＝ＫまたはＳ；  Ｘ４５＝ＦまたはＶ；そしてＸ４６はＱまたはＫである、
前記抗体または抗原結合性断片。
【請求項３４】
ＬＡＧ−３に結合可能であり、任意に単離され、重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合性断片であって：
軽鎖配列が、軽鎖配列：配列番号１、２、３、４、５、または６（図１）に少なくとも８５％の配列同一性を有し、そして；
重鎖配列が、配列番号７、８、９、１０または１１（図２）の重鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有する
前記抗体または抗原結合性断片。
【請求項３５】
ＬＡＧ−３に結合可能であり、（ｉ）請求項１〜３４のいずれか一項記載の抗原結合性断片またはポリペプチド、および（ｉｉ）ＬＡＧ−３以外のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性断片またはポリペプチドを含む、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片である、任意に単離された、抗体または抗原結合性断片。
【請求項３６】
ＬＡＧ−３以外のターゲットタンパク質に結合可能である抗原結合性断片またはポリペプチドが、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４３、４−１ＢＢ、ＧＩＴＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、Ａ２ＡＲ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ−３、ＫＩＲ、ＨＥＲ−２、ＨＥＲ−３、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ２０、ＣＤ２４、ＣＤ９０、ＣＤ１５、ＣＤ５２、ＣＡ−１２５、ＣＤ３４、ＣＡ−１５−３、ＣＡ−１９−９、ＣＥＡ、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、ＣＤ３１、ＣＤ４４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＡＢＣＢ５およびＣＤ４５の１つである、請求項３５の抗体または抗原結合性断片。
【請求項３７】
請求項１〜３６のいずれか一項記載の抗原結合性断片を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項３８】
請求項３７記載のＣＡＲを含む細胞。
【請求項３９】
ＬＡＧ−３に結合した、請求項１〜３８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲまたは細胞を含む、任意に単離された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体。
【請求項４０】
請求項１〜３７のいずれか一項の抗体、または抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲあるいは細胞および少なくとも１つの薬学的に許容されうるキャリアーを含む、組成物。
【請求項４１】
請求項１〜３７のいずれか一項の抗体、または抗原結合性断片、ポリペプチドあるいはＣＡＲをコードする、単離核酸。
【請求項４２】
請求項４１の核酸を含むベクター。
【請求項４３】
請求項４２のベクターを含む宿主細胞。
【請求項４４】
請求項１〜３７のいずれか一項の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチドまたはＣＡＲを作製するための方法であって、抗体、または抗原結合性断片、ポリペプチドあるいはＣＡＲをコードするベクターを発現するために適切な条件下で、請求項４３の宿主細胞を培養し、そして抗体、または抗原結合性断片、ポリペプチドあるいはＣＡＲを回収する工程を含む、前記方法。
【請求項４５】
療法または医学的治療法において使用するための、請求項１〜３８または４０のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物。
【請求項４６】
Ｔ細胞機能不全障害の治療において使用するための、請求項１〜３８または４０のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物。
【請求項４７】
癌の治療において使用するための、請求項１〜３８または４０のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物。
【請求項４８】
感染性疾患の治療において使用するための、請求項１〜３８または４０のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物。
【請求項４９】
Ｔ細胞機能不全障害の治療において使用するための薬剤製造における、請求項１〜３８または４０のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物の使用。
【請求項５０】
癌の治療において使用するための薬剤製造における、請求項１〜３８または４０のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物の使用。
【請求項５１】
感染性疾患の治療において使用するための薬剤製造における、請求項１〜３８または４０のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物の使用。
【請求項５２】
請求項１〜３８または４０のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を、機能不全Ｔ細胞に投与する工程を含む、Ｔ細胞機能を増進させる、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏの方法。
【請求項５３】
Ｔ細胞機能不全障害を患う患者に、請求項１〜３８または４０のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を投与する工程を含む、Ｔ細胞機能不全障害を治療する方法。
【請求項５４】
癌を患う患者に、請求項１〜３８または４０のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を投与する工程を含む、癌を治療する方法。
【請求項５５】
感染性疾患を患う患者に、請求項１〜３８または４０のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を投与する工程を含む、感染性疾患を治療する方法。
【請求項５６】
ＬＡＧ−３を含有するかまたは含有すると推測される試料を、請求項１〜３８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞と接触させ、そして抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞およびＬＡＧ−３の複合体の形成を検出する工程を含む方法。
【請求項５７】
被験体における疾患または状態を診断する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、被験体由来の試料を、請求項１〜３８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞と接触させ、そして抗体、または抗原結合性断片、ＣＡＲあるいは細胞およびＬＡＧ−３の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法。
【請求項５８】
ＬＡＧ−３またはＭＨＣクラスＩＩにターゲティングされる剤での治療のため、被験体を選択するかまたは層別化する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、被験体由来の試料を、請求項１〜３８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞と接触させ、そして抗体、または抗原結合性断片、ＣＡＲあるいは細胞およびＬＡＧ−３の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法。
【請求項５９】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＬＡＧ−３を検出するための、請求項１〜３８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞の使用。
【請求項６０】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断剤としての、請求項１〜３８のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞の使用。
【請求項６１】
Ｔ細胞を、請求項１〜３８または４０のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物と、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで接触させる、Ｔ細胞集団を拡大するための方法。
【請求項６２】
Ｔ細胞機能不全障害を有する被験体の治療法であって、Ｔ細胞集団を拡大させるように、請求項１〜３８または４０のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物の存在下で、被験体由来の血液試料から得たＴ細胞を培養し、拡大されたＴ細胞を収集し、そして治療の必要がある被験体に、拡大されたＴ細胞を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項６３】
被験体において、癌を治療するかまたは防止する方法であって：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）少なくとも１つの細胞が、請求項１〜３７、４１または４２のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸またはベクターを発現するかまたは含むように修飾し、そして；
（ｃ）被験体に、修飾した少なくとも１つの細胞を投与する
工程を含む、前記方法。
【請求項６４】
被験体において、癌を治療するかまたは防止する方法であって：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）少なくとも１つの細胞内に、請求項４１記載の核酸または請求項４２記載のベクターを導入し、それによって、少なくとも１つの細胞を修飾し、そして；
（ｃ）被験体に、修飾した少なくとも１つの細胞を投与する
工程を含む、前記方法。
【請求項６５】
あらかじめ決定した量の請求項１〜３８、または４０〜４３のいずれか一項記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、組成物、核酸、ベクターまたは細胞を含む部分のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）に結合する抗体に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｔ細胞消耗は、多くの慢性感染および癌の間に生じるＴ細胞機能不全状態である。該状態は、劣ったＴ細胞エフェクター機能、阻害性受容体発現の持続、および機能するエフェクターまたは記憶Ｔ細胞のものとは異なる転写状態によって定義される。消耗は、感染および腫瘍の最適な制御を妨げる（Ｅ  Ｊｏｈｎ  Ｗｈｅｒｒｙ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １２，  ４９２−４９９（２０１１））。
【０００３】
Ｔ細胞消耗は、段階的および進行性のＴ細胞機能喪失によって特徴付けられる。消耗は、慢性リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）感染中によく定義され、そして一般的に、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルスおよびヒト免疫不全ウイルス感染を含む多くの慢性感染後に、ならびに腫瘍転移中に起こる、抗原持続状態下で発展する。表現型的および機能的欠陥の漸次的変化が現れる可能性があり、そしてこれらの細胞は原型エフェクター、記憶およびまたアネルギー性Ｔ細胞とは異なるため、消耗は均一に機能しなくなった状態ではない。消耗Ｔ細胞は、最も一般的には、高度慢性感染中に出現し、そして抗原刺激のレベルおよび期間は該プロセスの決定的な決定要因である（Ｙｉら，  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ａｐｒ  ２０１０；  １２９（４）：４７４−４８１）。
【０００４】
循環ヒト腫瘍特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞は、細胞傷害性である可能性があり、そしてｉｎ  ｖｉｖｏでサイトカインを産生する可能性があることから、自己および腫瘍特異的ヒトＣＤ８＋  Ｔ細胞が、ペプチド、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、およびＣｐＧでのワクチン接種などの強力な免疫療法後、または養子移入後に、機能的反応能に到達する可能性もあることが示される。末梢血と対照的に、腫瘍部位に浸潤するＴ細胞は、しばしば機能的に不全であり、異常な低サイトカイン産生および阻害性受容体ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３およびＬＡＧ−３の上方制御を示す。黒色腫組織から単離されたＴ細胞は、短期ｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養後にＩＦＮ−γ産生を回復しうるため、機能的不全は可逆性である。しかし、依然として、この機能障害が、さらなる分子経路、おそらくは動物モデルにおいて定義されるようなＴ細胞消耗またはアネルギーと似た経路を伴うかどうかを決定する必要がある（Ｂａｉｔｓｃｈら，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２０１１；１２１（６）：２３５０−２３６０）。
【０００５】
リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）はまた、ＣＤ２２３とも称され、ヒトにおいて、ＬＡＧ３遺伝子によってコードされるＩ型膜貫通タンパク質である。本明細書に記載するＬＡＧ−３の分子特性および生物学的機能は、Ｓｉｅｒｒｏら，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ（２０１１）１５（１）：  ９１−１０１に概説される。ＬＡＧ−３は、ＣＤ４様タンパク質であり、Ｔ細胞（特に活性化Ｔ細胞）、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞および形質細胞様樹状細胞表面上に発現される。ＬＡＧ−３は負の共刺激受容体、すなわち阻害性受容体であることが示されてきている。
【０００６】
ＬＡＧ−３は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、例えば樹状細胞、マクロファージおよびＢ細胞の表面で、高レベルで恒常的に発現する分子ファミリーである、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合する。ＬＡＧ−３機能は、ＭＨＣクラスＩＩへの結合およびその細胞質ドメインを通じたシグナル伝達に依存する。
【０００７】
ＬＡＧ−３は、Ｔ細胞反応の負の制御因子であり；ＬＡＧ−３の阻害は、Ｔ細胞増殖の改善を生じる一方、ＬＡＧ−３の過剰発現は、抗原駆動性Ｔ細胞増殖を損なう。
Ｔ細胞上のＬＡＧ−３の架橋は、ＣＤ４＋  Ｔ細胞のＴＣＲ仲介性活性化を損ない、増殖減少、より低いＩＬ−２産生およびＴＨ１型サイトカイン（すなわちＩＦＮγ、ＴＮＦα）の産生減少を生じる。ＬＡＧ−３発現はまた、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋制御Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）に特徴的である。ＬＡＧ−３は、抗原刺激後、ＣＤ８＋  Ｔ細胞上で高レベルで発現され、そしてＣＤ８＋  Ｔ細胞上のＬＡＧ−３発現は、同様に、制御活性増進およびより低い増殖潜在能力に関連する。
【０００８】
研究によって、慢性ウイルス感染後に消耗したＣＤ８＋  Ｔ細胞は、複数の阻害性受容体（例えばＰＤ−１、ＣＤ１６０および２Ｂ４）を発現することが示されてきている。ＬＡＧ−３は、ＬＣＭＶ感染後に高レベルで発現し、そしてＬＡＧ−３遮断と組み合わされたＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路の遮断は、慢性感染マウスにおいて、ウイルス負荷を劇的に減少させることが示されてきている（Ｂｌａｃｋｂｕｒｎら  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００９）１０：２９−３７）。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路阻害およびＬＡＧ−３遮断の組み合わせはまた、抗腫瘍有効性を提供することもまた示されてきている（Ｊｉｎｇら  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  ＩｍｍｕｎｏＴｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  （２０１５）  ３：２）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｅ  Ｊｏｈｎ  Ｗｈｅｒｒｙ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １２、４９２−４９９（２０１１）
【非特許文献２】Ｙｉら，  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ａｐｒ  ２０１０；  １２９（４）：４７４−４８１
【非特許文献３】Ｂａｉｔｓｃｈら，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２０１１；１２１（６）：２３５０−２３６０
【非特許文献４】Ｓｉｅｒｒｏら，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ（２０１１）１５（１）：  ９１−１０１
【非特許文献５】Ｂｌａｃｋｂｕｒｎら  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００９）１０：２９−３７
【非特許文献６】Ｊｉｎｇら  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  ＩｍｍｕｎｏＴｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  （２０１５）  ３：２
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、ＬＡＧ−３に結合する抗体または抗原結合性断片に関する。重鎖および軽鎖ポリペプチドもまた開示する。抗体、抗原結合性断片およびポリペプチドは、単離および／または精製型で提供されてもよく、そして研究、療法および診断において使用するために適した組成物に配合されてもよい。
【００１１】
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片またはポリペプチドは、Ｔ細胞消耗またはＴ細胞アネルギーを示しているＴ細胞、例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋  Ｔ細胞において、Ｔ細胞機能を回復するために有効である可能性もある。
【００１２】
本発明の１つの側面において、抗体または抗原結合性断片を提供し、抗体のアミノ酸配列は、アミノ酸配列ｉ）〜ｉｉｉ）、またはアミノ酸配列ｉｖ）〜ｖｉ）、または好ましくはアミノ酸配列ｉ）〜ｖｉ）：
【００１３】
【化１】
2019517773.tif 000002
【００１４】
あるいは配列（ｉ）〜（ｖｉ）の１またはそれより多くにおいて、１または２または３アミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体を含んでもよく、
式中；Ｘ１＝ＲまたはＴ；  Ｘ２＝Ｓ、ＡまたはＴ；  Ｘ３＝ＬまたはＶ；  Ｘ４＝ＬまたはＳ；  Ｘ５＝ＨまたはＳ；  Ｘ６＝Ｓ、ＧまたはＴ；  Ｘ７＝Ｎ、Ｆ、Ｙ、ＤまたはＳ；  Ｘ８＝ＧまたはＬ；  Ｘ９＝Ｙ、ＡまたはＤ；  Ｘ１０＝存在しないまたはＮ；  Ｘ１１＝存在しないまたはＹ；  Ｘ１２＝存在しない、ＬまたはＦ；  Ｘ１３＝存在しない（すなわちアミノ酸なし）またはＤ；  Ｘ１４＝Ｌ、ＧまたはＤ；  Ｘ１５＝ＧまたはＡ；  Ｘ１６＝ＮまたはＳ；  Ｘ１７＝Ｓ、ＴまたはＡ；  Ｘ１８＝ＭまたはＱ；  Ｘ１９＝Ａ、ＹまたはＧ；  Ｘ２０＝Ｌ、ＧまたはＴ；  Ｘ２１＝Ｑ、Ｐ、ＳまたはＨ；  Ｘ２２＝Ｔ、ＳまたはＷ；  Ｘ２３＝Ｐ、Ｉ、ＲまたはＬ；  Ｘ２４＝Ｙ、Ｔ、ＰまたはＬ；  Ｘ２５＝存在しない、Ｔ、ＩまたはＧ；  Ｘ２６＝存在しない、ＴまたはＬ；  Ｘ２７＝存在しないまたはＴ；  Ｘ２８＝ＳまたはＥ；  Ｘ２９＝ＹまたはＬ；  Ｘ３０＝Ｙ、Ｇ、ＡまたはＳ；  Ｘ３１＝ＭまたはＩ；  Ｘ３２＝ＨまたはＳ；  Ｘ３３＝Ｉ、ＧまたはＶ；  Ｘ３４＝ＩまたはＦ；  Ｘ３５＝Ｎ、Ｓ、ＩまたはＤ；  Ｘ３６＝ＰまたはＹ；  Ｘ３７＝Ｓ、Ｄ、ＩまたはＥ；  Ｘ３８＝Ｇ、ＦまたはＤ；  Ｘ３９＝ＧまたはＳ；  Ｘ４０＝Ｓ、Ｎ、ＴまたはＥ；  Ｘ４１＝Ｔ、ＫまたはＡ；  Ｘ４２＝Ｓ、Ｙ、ＮまたはＩ；  Ｘ４３＝ＱまたはＤ；  Ｘ４４＝ＫまたはＳ；  Ｘ４５＝ＦまたはＶ；そしてＸ４６はＱまたはＫである。
【００１５】
いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ１は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列番号１２）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＦＬＡ（配列番号１５）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号１８）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＤＧＹＮＹＦＤ（配列番号２０）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＧＹＬＡ（配列番号２３）またはＴＴＳＱＳＶＳＳＴＳＬＤ（配列番号２６）の１つである。
【００１６】
いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ２は、ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号１３）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１６）、ＬＧＳＮＲＡＡ（配列番号２１）またはＤＡＳＳＲＡＴ（配列番号２４）の１つである。
【００１７】
いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ３は、ＭＱＡＬＱＴＰＹＴ（配列番号１４）、ＱＱＹＧＰＳＩＴ（配列番号１７）、ＱＱＹＧＳＳＰＰＩＴ（配列番号１９）、ＭＱＧＴＨＷＰＰＴ（配列番号２２）、ＱＱＹＧＳＳＲＰＧＬＴ（配列番号２５）またはＱＱＹＧＳＳＬＬＴ（配列番号２７）の１つである。
【００１８】
本発明の任意の側面にしたがったいくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ１は、ＳＹＸ３０Ｘ３１Ｘ３２（配列番号５８）、Ｘ２８Ｘ２９Ｘ３０ＭＨ（配列番号５９）またはＳＹＸ３０ＭＨ（配列番号６０）であってもよく、式中、Ｘ２８＝ＳまたはＥ；  Ｘ２９＝ＹまたはＬ；  Ｘ３０＝Ｙ、Ｇ、ＡまたはＳ；  Ｘ３１＝ＭまたはＩ；そしてＸ３２＝ＨまたはＳである。
【００１９】
いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ１は、ＳＹＹＭＨ（配列番号２８）、ＳＹＧＭＨ（配列番号３１）、ＳＹＡＭＨ（配列番号３４）、ＳＹＡＩＳ（配列番号３６）またはＥＬＳＭＨ（配列番号３９）の１つである。
【００２０】
いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ２は、ＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２９）  ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３２）、ＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３７）またはＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４０）の１つである。
【００２１】
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００２２】
【化２】
2019517773.tif 000003
【００２３】
式中、Ｘ１＝ＲまたはＴ；  Ｘ２＝Ｓ、ＡまたはＴ；  Ｘ３＝ＬまたはＶ；  Ｘ４＝ＬまたはＳ；  Ｘ５＝ＨまたはＳ；  Ｘ６＝Ｓ、ＧまたはＴ；  Ｘ７＝Ｎ、Ｆ、Ｙ、ＤまたはＳ；  Ｘ８＝ＧまたはＬ；  Ｘ９＝Ｙ、ＡまたはＤ；  Ｘ１０＝存在しないまたはＮ；  Ｘ１１＝存在しないまたはＹ；  Ｘ１２＝存在しない、ＬまたはＦ；  Ｘ１３＝存在しない（すなわちアミノ酸なし）またはＤ；  Ｘ１４＝Ｌ、ＧまたはＤ；  Ｘ１５＝ＧまたはＡ；  Ｘ１６＝ＮまたはＳ；  Ｘ１７＝Ｓ、ＴまたはＡ；  Ｘ１８＝ＭまたはＱ；  Ｘ１９＝Ａ、ＹまたはＧ；  Ｘ２０＝Ｌ、ＧまたはＴ；  Ｘ２１＝Ｑ、Ｐ、ＳまたはＨ；  Ｘ２２＝Ｔ、ＳまたはＷ；  Ｘ２３＝Ｐ、Ｉ、ＲまたはＬ；  Ｘ２４＝Ｙ、Ｔ、ＰまたはＬ；  Ｘ２５＝存在しない、Ｔ、ＩまたはＧ；  Ｘ２６＝存在しない、ＴまたはＬ；そしてＸ２７＝存在しないまたはＴである、
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
【００２４】
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００２５】
【化３】
2019517773.tif 000004
【００２６】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００２７】
【化４】
2019517773.tif 000005
【００２８】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００２９】
【化５】
2019517773.tif 000006
【００３０】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００３１】
【化６】
2019517773.tif 000007
【００３２】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００３３】
【化７】
2019517773.tif 000008
【００３４】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００３５】
【化８】
2019517773.tif 000009
【００３６】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００３７】
【化９】
2019517773.tif 000010
【００３８】
式中、Ｘ２８＝ＳまたはＥ；  Ｘ２９＝ＹまたはＬ；  Ｘ３０＝Ｙ、Ｇ、ＡまたはＳ；  Ｘ３１＝ＭまたはＩ；  Ｘ３２＝ＨまたはＳ；  Ｘ３３＝Ｉ、ＧまたはＶ；  Ｘ３４＝ＩまたはＦ；  Ｘ３５＝Ｎ、Ｓ、ＩまたはＤ；  Ｘ３６＝ＰまたはＹ；  Ｘ３７＝Ｓ、Ｄ、ＩまたはＥ；  Ｘ３８＝Ｇ、ＦまたはＤ；  Ｘ３９＝ＧまたはＳ；  Ｘ４０＝Ｓ、Ｎ、ＴまたはＥ；  Ｘ４１＝Ｔ、ＫまたはＡ；  Ｘ４２＝Ｓ、Ｙ、ＮまたはＩ；  Ｘ４３＝ＱまたはＤ；  Ｘ４４＝ＫまたはＳ；  Ｘ４５＝ＦまたはＶ；そしてＸ４６はＱまたはＫである、
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
【００３９】
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００４０】
【化１０】
2019517773.tif 000011
【００４１】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００４２】
【化１１】
2019517773.tif 000012
【００４３】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００４４】
【化１２】
2019517773.tif 000013
【００４５】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００４６】
【化１３】
2019517773.tif 000014
【００４７】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、以下のＣＤＲ：
【００４８】
【化１４】
2019517773.tif 000015
【００４９】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
抗体は、図１または３に示すＣＤＲを取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含んでもよい。抗体は、図２または３に示すＣＤＲを取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
【００５０】
抗体は、配列番号１、１２、１３、１４；または２、１５、１６、１７；または３、１８、１６、１９；または４、２０、２１、２２；または５、２３、２４、２５；または６、２６、１６、２７の１つのアミノ酸配列、または図１に示すアミノ酸配列の１つ、あるいは配列番号１、１２、１３、１４；または２、１５、１６、１７；または３、１８、１６、１９；または４、２０、２１、２２；または５、２３、２４、２５；または６、２６、１６、２７の１つ、または図１に示すＶＬ鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む少なくとも１つの軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよい。
【００５１】
抗体は、配列番号７、２８、２９、３０；または８、３１、３２、３３；または９、３４、３２、３５；または１０、３６、３７、３８；または１１、３９、４０、４１の１つのアミノ酸配列、または図２に示すアミノ酸配列の１つ、あるいは配列番号７、２８、２９、３０；または８、３１、３２、３３；または９、３４、３２、３５；または１０、３６、３７、３８；または１１、３９、４０、４１の１つ、または図２に示すＶＨ鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む少なくとも１つの重鎖可変領域（ＶＨ）を含んでもよい。
【００５２】
抗体は、配列番号１、１２、１３、１４；または２、１５、１６、１７；または３、１８、１６、１９；または４、２０、２１、２２；または５、２３、２４、２５；または６、２６、１６、２７の１つのアミノ酸配列、または図１に示すアミノ酸配列の１つ（あるいは配列番号１、１２、１３、１４；または２、１５、１６、１７；または３、１８、１６、１９；または４、２０、２１、２２；または５、２３、２４、２５；または６、２６、１６、２７の１つ、または図１に示すＶＬ鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列の１つに、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む少なくとも１つの軽鎖可変領域、および配列番号７、２８、２９、３０；または８、３１、３２、３３；または９、３４、３２、３５；または１０、３６、３７、３８；または１１、３９、４０、４１の１つのアミノ酸配列、または図２に示すアミノ酸配列の１つ（あるいは配列番号７、２８、２９、３０；または８、３１、３２、３３；または９、３４、３２、３５；または１０、３６、３７、３８；または１１、３９、４０、４１の１つ、または図２に示すＶＨ鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列の１つに、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列）を含む少なくとも１つの重鎖可変領域を含んでもよい。
【００５３】
抗体は、任意に、ＬＡＧ−３、任意に、ヒトまたはネズミＬＡＧ−３に結合しうる。抗体は、任意に、上述のようなアミノ酸配列構成要素を有してもよい。抗体はＩｇＧであってもよい。１つの態様において、ＬＡＧ−３に結合した、本明細書に記載するような抗体または抗原結合性断片を含む、任意に単離された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体を提供する。
【００５４】
抗体は、任意に、ヒトＬＡＧ−３およびヒトＭＨＣクラスＩＩ、またはネズミＬＡＧ−３およびネズミＭＨＣクラスＩＩ間の相互作用または機能的関連を阻害するかまたは防止してもよい。ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩの間の相互作用または機能的関連のこうした阻害または防止は、ＬＡＧ−３のＭＨＣクラスＩＩ仲介性活性化またはＭＨＣクラスＩＩ／ＬＡＧ−３シグナル伝達を阻害するかまたは防止することも可能である。
【００５５】
本発明の１つの側面において、単離軽鎖可変領域ポリペプチドを提供し、該軽鎖可変領域は、以下のＣＤＲ：
【００５６】
【化１５】
2019517773.tif 000016
【００５７】
式中、Ｘ１＝ＲまたはＴ；  Ｘ２＝Ｓ、ＡまたはＴ；  Ｘ３＝ＬまたはＶ；  Ｘ４＝ＬまたはＳ；  Ｘ５＝ＨまたはＳ；  Ｘ６＝Ｓ、ＧまたはＴ；  Ｘ７＝Ｎ、Ｆ、Ｙ、ＤまたはＳ；  Ｘ８＝ＧまたはＬ；  Ｘ９＝Ｙ、ＡまたはＤ；  Ｘ１０＝存在しないまたはＮ；  Ｘ１１＝存在しないまたはＹ；  Ｘ１２＝存在しない、ＬまたはＦ；  Ｘ１３＝存在しない（すなわちアミノ酸なし）またはＤ；  Ｘ１４＝Ｌ、ＧまたはＤ；  Ｘ１５＝ＧまたはＡ；  Ｘ１６＝ＮまたはＳ；  Ｘ１７＝Ｓ、ＴまたはＡ；  Ｘ１８＝ＭまたはＱ；  Ｘ１９＝Ａ、ＹまたはＧ；  Ｘ２０＝Ｌ、ＧまたはＴ；  Ｘ２１＝Ｑ、Ｐ、ＳまたはＨ；  Ｘ２２＝Ｔ、ＳまたはＷ；  Ｘ２３＝Ｐ、Ｉ、ＲまたはＬ；  Ｘ２４＝Ｙ、Ｔ、ＰまたはＬ；  Ｘ２５＝存在しない、Ｔ、ＩまたはＧ；  Ｘ２６＝存在しない、ＴまたはＬ；そしてＸ２７＝存在しないまたはＴである、
を含む。
【００５８】
いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ１は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列番号１２）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＦＬＡ（配列番号１５）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号１８）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＤＧＹＮＹＦＤ（配列番号２０）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＧＹＬＡ（配列番号２３）またはＴＴＳＱＳＶＳＳＴＳＬＤ（配列番号２６）の１つである。いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ２は、ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号１３）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１６）、ＬＧＳＮＲＡＡ（配列番号２１）またはＤＡＳＳＲＡＴ（配列番号２４）の１つである。いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ３は、ＭＱＡＬＱＴＰＹＴ（配列番号１４）、ＱＱＹＧＰＳＩＴ（配列番号１７）、ＱＱＹＧＳＳＰＰＩＴ（配列番号１９）、ＭＱＧＴＨＷＰＰＴ（配列番号２２）、ＱＱＹＧＳＳＲＰＧＬＴ（配列番号２５）またはＱＱＹＧＳＳＬＬＴ（配列番号２７）の１つである。いくつかの態様において、単離軽鎖可変領域ポリペプチドは、ＬＡＧ−３に結合可能である。
【００５９】
本発明の１つの側面において、軽鎖配列：配列番号１、２、３、４、５または６（図１）に少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離軽鎖可変領域ポリペプチドを提供する。いくつかの態様において、単離軽鎖可変領域ポリペプチドは、ＬＡＧ−３に結合可能である。
【００６０】
本発明の１つの側面において、単離重鎖可変領域ポリペプチドを提供し、該重鎖可変領域は、以下のＣＤＲ：
【００６１】
【化１６】
2019517773.tif 000017
【００６２】
式中、Ｘ２８＝ＳまたはＥ；  Ｘ２９＝ＹまたはＬ；  Ｘ３０＝Ｙ、Ｇ、ＡまたはＳ；  Ｘ３１＝ＭまたはＩ；  Ｘ３２＝ＨまたはＳ；  Ｘ３３＝Ｉ、ＧまたはＶ；  Ｘ３４＝ＩまたはＦ；  Ｘ３５＝Ｎ、Ｓ、ＩまたはＤ；  Ｘ３６＝ＰまたはＹ；  Ｘ３７＝Ｓ、Ｄ、ＩまたはＥ；  Ｘ３８＝Ｇ、ＦまたはＤ；  Ｘ３９＝ＧまたはＳ；  Ｘ４０＝Ｓ、Ｎ、ＴまたはＥ；  Ｘ４１＝Ｔ、ＫまたはＡ；  Ｘ４２＝Ｓ、Ｙ、ＮまたはＩ；  Ｘ４３＝ＱまたはＤ；  Ｘ４４＝ＫまたはＳ；  Ｘ４５＝ＦまたはＶ；そしてＸ４６はＱまたはＫである、
を含む。
【００６３】
いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ１は、ＳＹＹＭＨ（配列番号２８）、ＳＹＧＭＨ（配列番号３１）、ＳＹＡＭＨ（配列番号３４）、ＳＹＡＩＳ（配列番号３６）またはＥＬＳＭＨ（配列番号３９）の１つである。いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ２は、ＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２９）  ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３２）、ＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３７）またはＥＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４０）の１つである。いくつかの態様において、単離重鎖可変領域ポリペプチドは、ＬＡＧ−３に結合可能である。
【００６４】
本発明の１つの側面において、配列番号７、８、９、１０または１１（図２）の重鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離重鎖可変領域ポリペプチドを提供する。いくつかの態様において、単離重鎖可変領域ポリペプチドは、ＬＡＧ−３に結合可能である。
【００６５】
本発明の１つの側面において、重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合性断片であって：
軽鎖が、ＬＣ−ＣＤＲ１：Ｘ１Ｘ２ＳＱＳＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３（配列番号５３）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列番号１２）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＦＬＡ（配列番号１５）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号１８）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＤＧＹＮＹＦＤ（配列番号２０）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＧＹＬＡ（配列番号２３）またはＴＴＳＱＳＶＳＳＴＳＬＤ（配列番号２６）の１つ、ＬＣ−ＣＤＲ２：Ｘ１４Ｘ１５ＳＸ１６ＲＡＸ１７（配列番号５４）、ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号１３）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１６）、ＬＧＳＮＲＡＡ（配列番号２１）またはＤＡＳＳＲＡＴ（配列番号２４）の１つ、ＬＣ−ＣＤＲ３：Ｘ１８ＱＸ１９Ｘ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３Ｘ２４Ｘ２５Ｘ２６Ｘ２７（配列番号５５）、ＭＱＡＬＱＴＰＹＴ（配列番号１４）、ＱＱＹＧＰＳＩＴ（配列番号１７）、ＱＱＹＧＳＳＰＰＩＴ（配列番号１９）、ＭＱＧＴＨＷＰＰＴ（配列番号２２）、ＱＱＹＧＳＳＲＰＧＬＴ（配列番号２５）またはＱＱＹＧＳＳＬＬＴ（配列番号２７）の１つに、それぞれ、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３を含み、
式中、Ｘ１＝ＲまたはＴ；  Ｘ２＝Ｓ、ＡまたはＴ；  Ｘ３＝ＬまたはＶ；  Ｘ４＝ＬまたはＳ；  Ｘ５＝ＨまたはＳ；  Ｘ６＝Ｓ、ＧまたはＴ；  Ｘ７＝Ｎ、Ｆ、Ｙ、ＤまたはＳ；  Ｘ８＝ＧまたはＬ；  Ｘ９＝Ｙ、ＡまたはＤ；  Ｘ１０＝存在しないまたはＮ；  Ｘ１１＝存在しないまたはＹ；  Ｘ１２＝存在しない、ＬまたはＦ；  Ｘ１３＝存在しない（すなわちアミノ酸なし）またはＤ；  Ｘ１４＝Ｌ、ＧまたはＤ；  Ｘ１５＝ＧまたはＡ；  Ｘ１６＝ＮまたはＳ；  Ｘ１７＝Ｓ、ＴまたはＡ；  Ｘ１８＝ＭまたはＱ；  Ｘ１９＝Ａ、ＹまたはＧ；  Ｘ２０＝Ｌ、ＧまたはＴ；  Ｘ２１＝Ｑ、Ｐ、ＳまたはＨ；  Ｘ２２＝Ｔ、ＳまたはＷ；  Ｘ２３＝Ｐ、Ｉ、ＲまたはＬ；  Ｘ２４＝Ｙ、Ｔ、ＰまたはＬ；  Ｘ２５＝存在しない、Ｔ、ＩまたはＧ；  Ｘ２６＝存在しない、ＴまたはＬ；そしてＸ２７＝存在しないまたはＴである、そして
重鎖が、ＨＣ−ＣＤＲ１：Ｘ２８Ｘ２９Ｘ３０Ｘ３１Ｘ３２（配列番号５６）、ＳＹＹＭＨ（配列番号２８）、ＳＹＧＭＨ（配列番号３１）、ＳＹＡＭＨ（配列番号３４）、ＳＹＡＩＳ（配列番号３６）またはＥＬＳＭＨ（配列番号３９）の１つ、ＨＣ−ＣＤＲ２：Ｘ３３Ｘ３４Ｘ３５Ｘ３６Ｘ３７Ｘ３８Ｘ３９Ｘ４０Ｘ４１Ｘ４２ＹＡＸ４３Ｘ４４Ｘ４５Ｘ４６Ｇ（配列番号５７）、ＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２９）  ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３２）、ＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３７）またはＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４０）の１つ、ＨＣ−ＣＤＲ３：ＰＦＧＤＦＤＹ（配列番号３０）、ＬＰＧＷＧＡＹＡＦＤＩ（配列番号３３）、ＤＰＤＡＡＮＷＧＦＬＬＹＹＧＭＤＶ（配列番号３５）、ＡＬＡＤＦＷＳＧＹＹＹＹＹＹＭＤＶ（配列番号３８）またはＴＷＦＧＥＬＹＹ（配列番号４１）の１つに、それぞれ、少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３を含む、
式中、Ｘ２８＝ＳまたはＥ；  Ｘ２９＝ＹまたはＬ；  Ｘ３０＝Ｙ、Ｇ、ＡまたはＳ；  Ｘ３１＝ＭまたはＩ；  Ｘ３２＝ＨまたはＳ；  Ｘ３３＝Ｉ、ＧまたはＶ；  Ｘ３４＝ＩまたはＦ；  Ｘ３５＝Ｎ、Ｓ、ＩまたはＤ；  Ｘ３６＝ＰまたはＹ；  Ｘ３７＝Ｓ、Ｄ、ＩまたはＥ；  Ｘ３８＝Ｇ、ＦまたはＤ；  Ｘ３９＝ＧまたはＳ；  Ｘ４０＝Ｓ、Ｎ、ＴまたはＥ；  Ｘ４１＝Ｔ、ＫまたはＡ；  Ｘ４２＝Ｓ、Ｙ、ＮまたはＩ；  Ｘ４３＝ＱまたはＤ；  Ｘ４４＝ＫまたはＳ；  Ｘ４５＝ＦまたはＶ；そしてＸ４６はＱまたはＫである、
前記抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００６６】
いくつかの態様において、配列同一性の度合いは、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つであってもよい。
【００６７】
本発明の別の側面において、任意に単離され、重鎖および軽鎖可変領域配列を含む抗体または抗原結合性断片であって：
軽鎖配列が、軽鎖配列：配列番号１、２、３、４、５、または６（図１）に少なくとも８５％の配列同一性を有し、そして；
重鎖配列が、配列番号７、８、９、１０または１１（図２）の重鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有する
前記抗体または抗原結合性断片を提供する。
【００６８】
いくつかの態様において、配列同一性の度合いは、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つであってもよい。
【００６９】
いくつかの態様において、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドは、配置ＬＣＦＲ１：ＬＣ−ＣＤＲ１：ＬＣＦＲ２：ＬＣ−ＣＤＲ２：ＬＣＦＲ３：ＬＣ−ＣＤＲ３：ＬＣＦＲ４にしたがって、ＣＤＲ間に可変領域軽鎖フレームワーク配列をさらに含む。フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列由来であってもよい。
【００７０】
本発明の１つの側面において、任意に、本明細書記載の重鎖可変領域ポリペプチドと組み合わされた単離軽鎖可変領域ポリペプチドを提供し、該軽鎖可変領域ポリペプチドは、以下のＣＤＲ：
【００７１】
【化１７】
2019517773.tif 000018
【００７２】
式中、Ｘ１＝ＲまたはＴ；  Ｘ２＝Ｓ、ＡまたはＴ；  Ｘ３＝ＬまたはＶ；  Ｘ４＝ＬまたはＳ；  Ｘ５＝ＨまたはＳ；  Ｘ６＝Ｓ、ＧまたはＴ；  Ｘ７＝Ｎ、Ｆ、Ｙ、ＤまたはＳ；  Ｘ８＝ＧまたはＬ；  Ｘ９＝Ｙ、ＡまたはＤ；  Ｘ１０＝存在しないまたはＮ；  Ｘ１１＝存在しないまたはＹ；  Ｘ１２＝存在しない、ＬまたはＦ；  Ｘ１３＝存在しない（すなわちアミノ酸なし）またはＤ；  Ｘ１４＝Ｌ、ＧまたはＤ；  Ｘ１５＝ＧまたはＡ；  Ｘ１６＝ＮまたはＳ；  Ｘ１７＝Ｓ、ＴまたはＡ；  Ｘ１８＝ＭまたはＱ；  Ｘ１９＝Ａ、ＹまたはＧ；  Ｘ２０＝Ｌ、ＧまたはＴ；  Ｘ２１＝Ｑ、Ｐ、ＳまたはＨ；  Ｘ２２＝Ｔ、ＳまたはＷ；  Ｘ２３＝Ｐ、Ｉ、ＲまたはＬ；  Ｘ２４＝Ｙ、Ｔ、ＰまたはＬ；  Ｘ２５＝存在しない、Ｔ、ＩまたはＧ；  Ｘ２６＝存在しない、ＴまたはＬ；そしてＸ２７＝存在しないまたはＴである、
を含む。
【００７３】
いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ１は、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤ（配列番号１２）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＦＬＡ（配列番号１５）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡ（配列番号１８）、ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＤＧＹＮＹＦＤ（配列番号２０）、ＲＡＳＱＳＶＳＳＧＹＬＡ（配列番号２３）またはＴＴＳＱＳＶＳＳＴＳＬＤ（配列番号２６）の１つである。いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ２は、ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号１３）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１６）、ＬＧＳＮＲＡＡ（配列番号２１）またはＤＡＳＳＲＡＴ（配列番号２４）の１つである。いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ３は、ＭＱＡＬＱＴＰＹＴ（配列番号１４）、ＱＱＹＧＰＳＩＴ（配列番号１７）、ＱＱＹＧＳＳＰＰＩＴ（配列番号１９）、ＭＱＧＴＨＷＰＰＴ（配列番号２２）、ＱＱＹＧＳＳＲＰＧＬＴ（配列番号２５）またはＱＱＹＧＳＳＬＬＴ（配列番号２７）の１つである。
【００７４】
いくつかの態様において、抗体、抗原結合性断片またはポリペプチドは、配置ＨＣＦＲ１：ＨＣ−ＣＤＲ１：ＨＣＦＲ２：ＨＣ−ＣＤＲ２：ＨＣＦＲ３：ＨＣ−ＣＤＲ３：ＨＣＦＲ４にしたがって、ＣＤＲ間に可変領域軽鎖フレームワーク配列をさらに含む。フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列由来であってもよい。
【００７５】
本発明の１つの側面において、任意に、本明細書記載の軽鎖可変領域ポリペプチドと組み合わされた単離重鎖可変領域ポリペプチドを提供し、該重鎖可変領域ポリペプチドは、以下のＣＤＲ：
【００７６】
【化１８】
2019517773.tif 000019
【００７７】
式中、Ｘ２８＝ＳまたはＥ；  Ｘ２９＝ＹまたはＬ；  Ｘ３０＝Ｙ、Ｇ、ＡまたはＳ；  Ｘ３１＝ＭまたはＩ；  Ｘ３２＝ＨまたはＳ；  Ｘ３３＝Ｉ、ＧまたはＶ；  Ｘ３４＝ＩまたはＦ；  Ｘ３５＝Ｎ、Ｓ、ＩまたはＤ；  Ｘ３６＝ＰまたはＹ；  Ｘ３７＝Ｓ、Ｄ、ＩまたはＥ；  Ｘ３８＝Ｇ、ＦまたはＤ；  Ｘ３９＝ＧまたはＳ；  Ｘ４０＝Ｓ、Ｎ、ＴまたはＥ；  Ｘ４１＝Ｔ、ＫまたはＡ；  Ｘ４２＝Ｓ、Ｙ、ＮまたはＩ；  Ｘ４３＝ＱまたはＤ；  Ｘ４４＝ＫまたはＳ；  Ｘ４５＝ＦまたはＶ；そしてＸ４６はＱまたはＫである、
を含む。
【００７８】
いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ１は、ＳＹＹＭＨ（配列番号２８）、ＳＹＧＭＨ（配列番号３１）、ＳＹＡＭＨ（配列番号３４）、ＳＹＡＩＳ（配列番号３６）またはＥＬＳＭＨ（配列番号３９）の１つである。
【００７９】
いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ２は、ＩＩＮＰＳＧＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２９）  ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３２）、ＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３７）またはＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４０）の１つである。
【００８０】
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、ヒト定常領域をさらに含んでもよい。例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４の１つより選択されるものである。
【００８１】
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、ネズミ定常領域をさらに含んでもよい。例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２ＢおよびＩｇＧ３の１つより選択されるものである。
【００８２】
本発明の別の側面において、ＬＡＧ−３に結合可能であり、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片である、任意に単離された、抗体または抗原結合性断片を提供する。二重特異性抗体または抗原結合性断片は、（ｉ）本明細書に記載するようなＬＡＧ−３に結合可能な抗原結合性断片またはポリペプチド、および（ｉｉ）ＬＡＧ−３以外のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性断片またはポリペプチドを含む。
【００８３】
いくつかの態様において、ＬＡＧ−３以外のターゲットタンパク質は、細胞表面受容体、例えばＴ細胞の細胞表面上に発現される受容体であってもよい。いくつかの態様において、細胞表面受容体は、免疫チェックポイント受容体、例えば共刺激受容体または阻害性受容体であってもよい。いくつかの態様において、共刺激受容体は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４３、４−１ＢＢおよびＧＩＴＲより選択されてもよい。いくつかの態様において、阻害性受容体は、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、Ａ２ＡＲ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ−３、ＰＤ−１、およびＫＩＲより選択されてもよい。
【００８４】
いくつかの態様において、ＬＡＧ−３以外のターゲットタンパク質は、その発現が癌と関連する癌マーカーであってもよい。いくつかの態様において、癌マーカーは、細胞表面で発現されてもよい。いくつかの態様において、癌マーカーは、ＨＥＲ−２、ＨＥＲ−３、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ２０、ＣＤ２４、ＣＤ９０、ＣＤ１５、ＣＤ５２、ＣＡ−１２５、ＣＤ３４、ＣＡ−１５−３、ＣＡ−１９−９、ＣＥＡ、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、ＣＤ３１、ＣＤ４４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＡＢＣＢ５およびＣＤ４５であってもよい。
【００８５】
本発明の別の側面において、本明細書に記載するような抗原結合性断片を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
別の側面において、本発明は、本明細書に記載するようなＣＡＲを含む細胞を提供する。
【００８６】
本発明の別の側面において、ＬＡＧ−３に結合した、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲまたは細胞を含む、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体を提供する。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体は、任意に単離されていてもよい。
【００８７】
本発明の別の側面において、組成物、例えば薬学的組成物または薬剤を提供する。組成物は、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲまたは細胞および少なくとも１つの薬学的に許容されうるキャリアー、賦形剤、アジュバントまたは希釈剤を含んでもよい。
【００８８】
本発明の別の側面において、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、またはＣＡＲをコードする、単離核酸を提供する。核酸は、配列番号４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、または５２（図４）の１つの配列、あるいは遺伝暗号の結果として縮重しているコード配列を有してもよく、あるいは少なくとも７０％の同一性、任意に、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの同一性を有するヌクレオチド配列を有してもよい。
【００８９】
本発明の１つの側面において、本明細書記載の核酸を含むベクターを提供する。本発明の別の側面において、ベクターを含む宿主細胞を提供する。例えば、宿主細胞は、真核、または哺乳動物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、またはヒトであってもよいし、あるいは原核細胞、例えば大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）であってもよい。本発明の１つの側面において、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチドまたはＣＡＲを作製するための方法であって、抗体、抗原結合性断片、ポリペプチドまたはＣＡＲをコードするベクターを発現するために適切な条件下で、本明細書に記載するような宿主細胞を培養し、そして抗体、抗原結合性断片、ポリペプチドまたはＣＡＲを回収する工程を含む、前記方法を提供する。
【００９０】
本発明の別の側面において、療法または医学的治療法において使用するための、抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を提供する。本発明の別の側面において、Ｔ細胞機能不全障害の治療において使用するための、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を提供する。本発明の別の側面において、Ｔ細胞機能不全障害の治療において使用するための薬剤または薬学的組成物の製造における、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物の使用を提供する。
【００９１】
本発明の別の側面において、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を、機能不全Ｔ細胞に投与する工程を含む、Ｔ細胞機能を増進させる方法を提供する。該方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで実行してもよい。
【００９２】
本発明の別の側面において、Ｔ細胞機能不全障害を患う患者に、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を投与する工程を含む、Ｔ細胞機能不全障害を治療する方法を提供する。
【００９３】
本発明の別の側面において、癌の治療において使用するための、抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を提供する。本発明の別の側面において、癌の治療において使用するための薬剤または薬学的組成物の製造における、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物の使用を提供する。
【００９４】
本発明の別の側面において、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を腫瘍細胞に投与する工程を含む、腫瘍細胞を殺す方法を提供する。該方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで実行してもよい。腫瘍細胞の殺傷は、例えば抗体依存性細胞仲介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の結果として、あるいは抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物にコンジュゲート化された薬剤の作用を通じてであってもよい。
【００９５】
本発明の別の側面において、癌を患う患者に、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を投与する工程を含む、癌を治療する方法を提供する。
【００９６】
癌は、ＬＡＧ−３を過剰発現する癌であってもよいし、またはＬＡＧ−３を過剰発現する細胞を含んでもよい。
本発明の別の側面において、被験体において、免疫反応を調節する方法であって、被験体における免疫反応が調節されるように、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を、被験体に投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【００９７】
本発明の別の側面において、腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物を投与する工程を含む、前記方法を提供する。該方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏであってもよい。いくつかの態様において、被験体において、腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、細胞または組成物の療法的有効量を、被験体に投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【００９８】
本発明の別の側面において、ＬＡＧ−３を含有するかまたは含有すると推測される試料を、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞と接触させ、そして抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞およびＬＡＧ−３の複合体の形成を検出する工程を含む、方法を提供する。
【００９９】
本発明の別の側面において、被験体における疾患または状態を診断する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、被験体由来の試料を、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞と接触させ、そして抗体、または抗原結合性断片、ＣＡＲあるいは細胞およびＬＡＧ−３の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法を提供する。
【０１００】
本発明のさらなる側面において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＬＡＧ−３の検出のための、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞の使用を提供する。本発明の別の側面において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断剤としての、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞の使用を提供する。
【０１０１】
本発明の方法において、抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲまたは細胞は、本明細書に記載するような組成物として提供されてもよい。
別の側面において、本発明は、被験体において、癌を治療するかまたは防止する方法であって：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）少なくとも１つの細胞が、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、核酸またはベクターを発現するかまたは含むように修飾し、そして；
（ｃ）被験体に、修飾した少なくとも１つの細胞を投与する
工程を含む、前記方法を提供する。
【０１０２】
別の側面において、本発明は、被験体において、癌を治療するかまたは防止する方法であって：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）少なくとも１つの細胞に、本明細書記載の核酸またはベクターを導入し、それによって、少なくとも１つの細胞を修飾し、そして；
（ｃ）被験体に、修飾した少なくとも１つの細胞を投与する
工程を含む、前記方法を提供する。
【０１０３】
別の側面において、本発明は、あらかじめ決定した量の本明細書記載の抗体、抗原結合性断片、ポリペプチド、ＣＡＲ、組成物、核酸、ベクターまたは細胞を含む部分のキットを提供する。
【０１０４】
いくつかの態様において、抗体は、本明細書に記載するようなクローンＡ６、１Ｇ１１、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５またはＧ８であってもよい。
【図面の簡単な説明】
【０１０５】
本発明の原理を例示する態様および実験は、ここで、付随する図に言及しながら論じられる。
【図１−１】抗ＬＡＧ−３抗体クローンＡ６、１Ｇ１１、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５およびＧ８の軽鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲを下線で示し、そして別個に示す。
【図１−２】抗ＬＡＧ−３抗体クローンＡ６、１Ｇ１１、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５およびＧ８の軽鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲを下線で示し、そして別個に示す。
【図２−１】抗ＬＡＧ−３抗体クローンＡ６、１Ｇ１１、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５およびＧ８の重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲを下線で示し、そして別個に示す。
【図２−２】抗ＬＡＧ−３抗体クローンＡ６、１Ｇ１１、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５およびＧ８の重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲを下線で示し、そして別個に示す。
【図３−１】抗ＬＡＧ−３抗体クローンＡ６、１Ｇ１１、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５およびＧ８の軽鎖および重鎖ＣＤＲ配列を示す表。
【図３−２】抗ＬＡＧ−３抗体クローンＡ６、１Ｇ１１、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５およびＧ８の軽鎖および重鎖ＣＤＲ配列を示す表。
【図４−１】抗ＬＡＧ−３抗体クローンＡ６、１Ｇ１１、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５およびＧ８の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。
【図４−２】抗ＬＡＧ−３抗体クローンＡ６、１Ｇ１１、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５およびＧ８の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。
【図４−３】抗ＬＡＧ−３抗体クローンＡ６、１Ｇ１１、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５およびＧ８の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。
【図４−４】抗ＬＡＧ−３抗体クローンＡ６、１Ｇ１１、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５およびＧ８の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列のヌクレオチドおよびコードされるアミノ酸配列。
【図５】ＥＬＩＳＡによって決定されるような、ＦｃカップリングヒトおよびネズミＬＡＧ−３に対する抗ＬＡＧ−３抗体の結合を示す棒グラフ。
【図６】ＥＬＩＳＡによって決定されるような、ＦｃカップリングヒトおよびネズミＬＡＧ−３に対する抗ＬＡＧ−３抗体の結合を示す棒グラフ。
【図７】ＥＬＩＳＡによって決定されるような、ヒトＬＡＧ−３への、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４形式のＡ６、Ｆ６およびＧ８抗体の結合を示すグラフ。３つ組の平均±ＳＤを示す。
【図８】ヒトＬＡＧ−３でトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞、または非トランスフェクションＰＢＳ処理対照細胞への、ＩｇＧ１形式のＡ６、Ｆ５およびＧ８抗体の結合を示す棒グラフ。幾何平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。
【図９】活性化されたＣＤ４＋  Ｔ細胞または非活性化対照ＣＤ４＋  Ｔ細胞への、ＩｇＧ１形式のＡ６、Ｆ５およびＧ８抗体の結合を示す棒グラフ。幾何ＭＦＩを示す。
【図１０】アカゲザルＬＡＧ−３でトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞、または非トランスフェクション対照細胞への、ＩｇＧ１形式のＡ６、Ｆ５およびＧ８抗体の結合を示す棒グラフ。
【図１１−１】表面プラズモン共鳴によって決定されるような、固定されたＦｃカップリングヒトまたはネズミＬＡＧ−３への、Ａ６  Ｆａｂの結合を示すセンサーグラム（ｓｅｎｓｏｒｇｒａｍ）および表。（Ａ）ヒトＬＡＧ−３へのＡ６  Ｆａｂの結合を示すセンサーグラム。（Ｂ）ネズミＬＡＧ−３へのＡ６  Ｆａｂの結合を示すセンサーグラム。（Ｃ）ヒトＬＡＧ−３に関するＡ６  Ｆａｂのアフィニティを示す表。
【図１１−２】表面プラズモン共鳴によって決定されるような、固定されたＦｃカップリングヒトまたはネズミＬＡＧ−３への、Ａ６  Ｆａｂの結合を示すセンサーグラム（ｓｅｎｓｏｒｇｒａｍ）および表。（Ａ）ヒトＬＡＧ−３へのＡ６  Ｆａｂの結合を示すセンサーグラム。（Ｂ）ネズミＬＡＧ−３へのＡ６  Ｆａｂの結合を示すセンサーグラム。（Ｃ）ヒトＬＡＧ−３に関するＡ６  Ｆａｂのアフィニティを示す表。
【図１２】Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリーによって決定されるような、ヒトＬＡＧ−３に対する抗体Ａ６、Ｆ５、Ｇ８およびＢＭＳ−９８６０１６のアフィニティを示す表。
【図１３】Ａ６および１Ｇ１１  Ｆａｂによる、Ｄａｕｄｉ細胞上のＭＨＣクラスＩＩに対するＬＡＧ−３結合の阻害を示すグラフ。
【図１４−１】Ｄａｕｄｉ細胞上のＭＨＣクラスＩＩに対するＬＡＧ−３結合の阻害を示すグラフおよび表。（Ａ）Ａ６、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５およびＧ８による、Ｄａｕｄｉ細胞上のＭＨＣクラスＩＩに対するＬＡＧ−３結合の阻害を示すグラフ。（Ｂ）Ａ６、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５およびＧ８による、ＭＨＣクラスＩＩに対するＬＡＧ−３結合の阻害に関するＩＣ５０値を示す表。
【図１４−２】Ｄａｕｄｉ細胞上のＭＨＣクラスＩＩに対するＬＡＧ−３結合の阻害を示すグラフおよび表。（Ａ）Ａ６、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５およびＧ８による、Ｄａｕｄｉ細胞上のＭＨＣクラスＩＩに対するＬＡＧ−３結合の阻害を示すグラフ。（Ｂ）Ａ６、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５およびＧ８による、ＭＨＣクラスＩＩに対するＬＡＧ−３結合の阻害に関するＩＣ５０値を示す表。
【図１５】Ａ６、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５およびＧ８による、Ｄａｕｄｉ細胞上のＭＨＣクラスＩＩに対するＬＡＧ−３結合の阻害を示すグラフ。
【図１６】ＩｇＧ１形式のＦ５またはＧ８抗体、あるいはＩｇＧ１アイソタイプ対照での処理後のＭＬＲアッセイにおける、ＩＬ−２産生を示す棒グラフ。（Ａ）および（Ｂ）は、２回の独立の実験の結果を示す。３つ組の平均±ＳＤを示す。線は、アイソタイプ対照の存在下で検出される最大平均バックグラウンドを示す。
【図１７】ＩｇＧ１形式のＦ５またはＧ８抗体、あるいはＩｇＧ１アイソタイプ対照での処理後のＭＬＲアッセイにおける、ＩＦＮ−γ産生を示す棒グラフ。（Ａ）および（Ｂ）は、２回の独立の実験の結果を示す。３つ組の平均±ＳＤを示す。線は、アイソタイプ対照の存在下で検出される最大平均バックグラウンドを示す。
【図１８−１】抗ＬＡＧ−３抗体に関するエピトープのＢｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリー分析を示すグラフ。（Ａ）ＢＭＳ−９８６０１６、（Ｂ）Ａ６、（Ｃ）Ｆ５、および（Ｄ）Ｇ８に結合したＬＡＧ−３に対する、示す抗体の結合プロファイルを示す。
【図１８−２】抗ＬＡＧ−３抗体に関するエピトープのＢｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリー分析を示すグラフ。（Ａ）ＢＭＳ−９８６０１６、（Ｂ）Ａ６、（Ｃ）Ｆ５、および（Ｄ）Ｇ８に結合したＬＡＧ−３に対する、示す抗体の結合プロファイルを示す。
【図１８−３】抗ＬＡＧ−３抗体に関するエピトープのＢｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリー分析を示すグラフ。（Ａ）ＢＭＳ−９８６０１６、（Ｂ）Ａ６、（Ｃ）Ｆ５、および（Ｄ）Ｇ８に結合したＬＡＧ−３に対する、示す抗体の結合プロファイルを示す。
【図１８−４】抗ＬＡＧ−３抗体に関するエピトープのＢｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリー分析を示すグラフ。（Ａ）ＢＭＳ−９８６０１６、（Ｂ）Ａ６、（Ｃ）Ｆ５、および（Ｄ）Ｇ８に結合したＬＡＧ−３に対する、示す抗体の結合プロファイルを示す。
【図１９】ＩＬ−２の存在下、抗ＬＡＧ−３抗体の非存在下（クローンＦ５、ＩｇＧ１）または異なる量の抗ＬＡＧ−３抗体の存在下での、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを含む培養による拡大後のＴ細胞数を示すグラフ。細胞数カウントを、「ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズのみ」の対照条件に対して標準化した。
【図２０−１】ＩＬ−２の存在下、抗ＬＡＧ−３抗体の非存在下（クローンＦ５、ＩｇＧ１）または異なる量の抗ＬＡＧ−３抗体の存在下での、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを含む培養による拡大後の（Ａ）ＣＤ８＋  Ｔ細胞および（Ｂ）ＣＤ４＋  Ｔ細胞の数を示す、ならびに（Ｃ）ＣＤ８：ＣＤ４細胞の比を示すグラフ。細胞数カウントを、「ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズのみ」の対照条件に対して標準化した。
【図２０−２】ＩＬ−２の存在下、抗ＬＡＧ−３抗体の非存在下（クローンＦ５、ＩｇＧ１）または異なる量の抗ＬＡＧ−３抗体の存在下での、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを含む培養による拡大後の（Ａ）ＣＤ８＋  Ｔ細胞および（Ｂ）ＣＤ４＋  Ｔ細胞の数を示す、ならびに（Ｃ）ＣＤ８：ＣＤ４細胞の比を示すグラフ。細胞数カウントを、「ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズのみ」の対照条件に対して標準化した。
【図２１】「ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズのみ」の対照条件に対して標準化した、ＩＬ−２の存在下、抗ＬＡＧ−３抗体の非存在下（クローンＦ５、ＩｇＧ１）または異なる量の抗ＬＡＧ−３抗体の存在下での、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを含む培養による拡大後のＣＤ４＋  Ｔ細胞集団内のＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋  Ｔｒｅｇの割合を示すグラフ。
【図２２】「ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズのみ」の対照条件に対して標準化した、ＩＬ−２の存在下、抗ＬＡＧ−３抗体の非存在下（クローンＦ５、ＩｇＧ１）または異なる量の抗ＬＡＧ−３抗体の存在下での、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを含む培養による拡大後の（Ａ）ＣＤ８＋  Ｔ細胞集団内のＣＤ８＋ＰＤ１＋細胞の割合、および（Ｂ）ＣＤ４＋  Ｔ細胞集団内のＣＤ４＋ＰＤ１＋細胞の割合を示すグラフ。
【図２３】「ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズのみ」の対照条件に対して標準化した、ＩＬ−２の存在下、抗ＬＡＧ−３抗体の非存在下（クローンＦ５、ＩｇＧ１）または異なる量の抗ＬＡＧ−３抗体の存在下での、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを含む培養による拡大後の（Ａ）ＣＤ８＋  Ｔ細胞集団および（Ｂ）ＣＤ４＋  Ｔ細胞集団内の異なるＴ細胞下位集団の割合を示す棒グラフ。
【図２４】「ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズのみ」の対照条件に対して標準化した、ＩＬ−２の存在下、抗ＬＡＧ−３抗体の非存在下（クローンＦ５、ＩｇＧ１）または異なる量の抗ＬＡＧ−３抗体の存在下での、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを含む培養による拡大後の（Ａ）ＣＤ８＋  Ｔ細胞集団内のＣＤ８＋ＣＴＬＡ４＋細胞の割合、および（Ｂ）ＣＤ４＋  Ｔ細胞集団内のＣＤ４＋ＣＴＬＡ４＋細胞の割合を示すグラフ。
【図２５】「ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズのみ」の対照条件に対して標準化した、ＩＬ−２の存在下、抗ＬＡＧ−３抗体の非存在下（クローンＦ５、ＩｇＧ１）または異なる量の抗ＬＡＧ−３抗体の存在下での、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを含む培養による拡大後の（Ａ）ＣＤ８＋  Ｔ細胞集団内のＣＤ８＋ＩＬ−１３＋細胞の割合、および（Ｂ）ＣＤ４＋  Ｔ細胞集団内のＣＤ４＋ＩＬ−１３＋細胞の割合を示すグラフ。
【図２６】「ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズのみ」の対照条件に対して標準化した、ＩＬ−２の存在下、抗ＬＡＧ−３抗体の非存在下（クローンＦ５、ＩｇＧ１）または異なる量の抗ＬＡＧ−３抗体の存在下での、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを含む培養による拡大後の（Ａ）ＣＤ８＋  Ｔ細胞集団内のＣＤ８＋ＩＦＮγ＋細胞の割合、および（Ｂ）ＣＤ４＋  Ｔ細胞集団内のＣＤ４＋ＩＦＮγ＋細胞の割合を示すグラフ。
【図２７】「ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズのみ」の対照条件に対して標準化した、ＩＬ−２の存在下、抗ＬＡＧ−３抗体の非存在下（クローンＦ５、ＩｇＧ１）または異なる量の抗ＬＡＧ−３抗体の存在下での、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを含む培養による拡大後の（Ａ）ＣＤ８＋  Ｔ細胞集団内のＣＤ８＋ＴＮＦα＋細胞の割合、および（Ｂ）ＣＤ４＋  Ｔ細胞集団内のＣＤ４＋ＴＮＦα＋細胞の割合を示すグラフ。
【図２８】「ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズのみ」の対照条件に対して標準化した、ＩＬ−２の存在下、抗ＬＡＧ−３抗体の非存在下（クローンＦ５、ＩｇＧ１）または異なる量の抗ＬＡＧ−３抗体の存在下での、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを含む培養による拡大後の拡大された細胞集団内での、（Ａ）ＣＤ５６＋細胞の割合、および（Ｂ）ＣＤ１９＋細胞の割合を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【０１０６】
抗体
本発明記載の抗体は、好ましくは、ＬＡＧ−３（抗原）、好ましくはヒトまたはネズミＬＡＧ−３に、任意に０．１〜３ｎＭの範囲のＫＤで結合する。
【０１０７】
本発明記載の抗体は、単離型で提供されてもよい。
本発明記載の抗体は、以下の特性の少なくとも１つを示しうる：
ａ）１μＭまたはそれ未満、より好ましくは、≦１０ｎＭ、≦５ｎＭ、≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１．５ｎＭ、≦１．４ｎＭ、≦１．３ｎＭ、≦１．２５ｎＭ、≦１．２４ｎＭ、≦１．２３ｎＭ、≦１．２２ｎＭ、≦１．２１ｎＭ、≦１．２ｎＭ、≦１．１５ｎＭ、≦１．１ｎＭ  ≦１．０５ｎＭ、≦１ｎＭ、≦９００ｐＭ、≦８００ｐＭ、≦７００ｐＭ、≦６００ｐＭ、≦５００ｐＭの１つのＫＤで、ヒト、マウスまたはアカゲザル（ｒｈｅｓｕｓ  ｍａｃａｑｕｅ）ＬＡＧ−３に結合する；
ｂ）ＢＭＳ−９８６０１６による、ヒト、マウスまたはアカゲザルＬＡＧ−３への結合アフィニティと類似のアフィニティ、またはそれより高いアフィニティで、ヒト、マウスまたはアカゲザルＬＡＧ−３に結合する；
ｃ）活性化ＣＤ４＋  Ｔ細胞に結合する；
ｄ）非活性化ＣＤ４＋  Ｔ細胞に実質的に結合を示さない；
ｅ）ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩ、任意にヒトＬＡＧ−３およびヒトＭＨＣクラスＩＩの間の相互作用を阻害するかまたは防止する（例えばＤａｕｄｉ細胞に対するＬＡＧ−３結合の阻害分析で決定されるように）；
ｆ）１μＭまたはそれ未満、好ましくは、≦５００ｎＭ、≦２５０ｎＭ、≦２００ｎＭ、≦１５０ｎＭ、≦１２０ｎＭ、≦１１０ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦９０ｎＭ、≦８０ｎＭ、≦７０ｎＭ、≦６０ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦４０ｎＭ、≦３０ｎＭ、≦３０ｎＭ、≦２０ｎＭ、≦１５ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦５ｎＭ、≦２．５ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭの１つのＩＣ５０で、ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩ、任意にヒトＬＡＧ−３およびヒトＭＨＣクラスＩＩの間の相互作用を阻害するかまたは防止する；
ｇ）ＢＭＳ−９８６０１６による、ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩの間の結合の阻害／防止と類似の度合いまで、またはそれより大きな度合いまで、ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩ、任意にヒトＬＡＧ−３およびヒトＭＨＣクラスＩＩの間の相互作用を阻害するかまたは防止する；
ｈ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ（例えばＢｒｏｍｅｌｏｗら  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，  ２００１  Ｊａｎ  １；２４７（１−２）：１−８を参照されたい）において、Ｔ細胞増殖、ＩＬ−２産生およびＩＦＮγ産生の１またはそれより多くを増加させる；
ｉ）ＢＭＳ−９８６０１６と類似の度合いまで、またはそれより大きな度合いまで、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいて、Ｔ細胞増殖、ＩＬ−２産生およびＩＦＮγ産生の１またはそれより多くを増加させる；
ｊ）ＢＭＳ−９８６０１６が結合するＬＡＧ−３のエピトープと異なるＬＡＧ−３、任意にヒトＬＡＧ−３のエピトープに結合する；
ｋ）感染に反応して、Ｔ細胞増殖、ＩＬ−２産生およびＩＦＮγ産生の１またはそれより多くを増加させる；
ｌ）腫瘍増殖を、任意にｉｎ  ｖｉｖｏで、阻害する。
【０１０８】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、免疫細胞、例えばＴ細胞集団の拡大のための方法において有用でありうる。本発明記載の抗体は、望ましい特性を持つ免疫細胞集団の拡大のために有用である。
【０１０９】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体の存在下で拡大された（例えばＩＬ−２の存在下で、例えばＴＣＲを通じた刺激によって、例えばＰＢＭＣ集団から拡大された）免疫細胞集団は、匹敵する方法によるが、抗体の非存在下で拡大される免疫細胞集団に比較した際に、以下の特性の１またはそれより多くを所持してもよい：
（ｉ）匹敵する総数の拡大細胞；
（ｉｉ）匹敵する数のＴ細胞；
（ｉｉｉ）より低いＣＤ８：ＣＤ４細胞比（ＣＤ８＋  Ｔ細胞を超えるＣＤ４＋  Ｔ細胞の優先的な拡大を示す）；
（ｉｖ）Ｔ細胞集団内（例えばＣＤ４＋  Ｔ細胞集団内）のＴｒｅｇ（例えばＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋  Ｔｒｅｇ）のより低い比率；
（ｖ）Ｔ細胞集団内（例えばＣＤ４＋  Ｔ細胞集団内）のＴヘルパー（Ｔｈ）細胞のより高い比率；
（ｖｉ）Ｔ細胞集団内のＰＤ１＋細胞（例えばＣＤ８＋ＰＤ１＋  Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋ＰＤ１＋  Ｔ細胞）のより低い比率；
（ｖｉｉ）Ｔ細胞集団内のＣＴＬＡ４＋細胞（例えばＣＤ８＋ＣＴＬＡ４＋  Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋ＣＴＬＡ４＋  Ｔ細胞）の匹敵する比率；
（ｖｉｉｉ）Ｔ細胞集団内のＩＬ−１３＋細胞（例えばＣＤ８＋ＩＬ−１３＋  Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋ＩＬ−１３＋  Ｔ細胞）の匹敵する比率；
（ｉｘ）Ｔ細胞集団内のＩＦＮγ＋細胞（例えばＣＤ８＋ＩＦＮγ＋  Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋ＩＦＮγ＋  Ｔ細胞）の匹敵する比率；
（ｘ）Ｔ細胞集団内のＴＮＦα＋細胞（例えばＣＤ８＋ＴＮＦα＋  Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋ＴＮＦα＋  Ｔ細胞）の匹敵する比率；
（ｘｉ）ＮＫ細胞のより低い比率；および
（ｘｉｉ）Ｂ細胞のより高い比率。
【０１１０】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体の存在下で拡大された（例えばＩＬ−２の存在下で、例えばＴＣＲを通じた刺激によって、例えばＰＢＭＣ集団から拡大された）免疫細胞集団は、匹敵する方法によるが、抗体の非存在下で拡大される免疫細胞集団に比較した際に、以下の特性の１またはそれより多くを所持してもよい：より低いＣＤ８：ＣＤ４細胞比；ＣＤ４＋  Ｔ細胞集団内でのＴｒｅｇ（例えばＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋  Ｔｒｅｇ）のより低い比率；Ｔ細胞集団内でのＴヘルパー（Ｔｈ）細胞のより高い比率；およびＴ細胞集団内でのＰＤ１＋細胞のより低い比率。
【０１１１】
「抗体」によって、本発明者らは、その断片または誘導体、あるいは合成抗体または合成抗体断片も含める。
モノクローナル抗体技術に関連した今日の技術を考慮すると、抗体は、大部分の抗原に対して調製可能である。抗原結合部分は、抗体の部分（例えばＦａｂ断片）または合成抗体断片（例えば一本鎖Ｆｖ断片［ＳｃＦｖ］）であってもよい。選択した抗原に対する適切なモノクローナル抗体は、既知の技術、例えば、“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ”，  Ｈ  Ｚｏｌａ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８８）に、そして“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，  Ｊ  Ｇ  Ｒ  Ｈｕｒｒｅｌｌ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８２）に開示されるものによって調製してもよい。キメラ抗体は、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら（１９８８，  ８ｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｐａｒｔ  ２，  ７９２−７９９）によって論じられる。
【０１１２】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、本発明の方法において有用であり、そして抗原上の単一のエピトープを特異的にターゲティングする抗体の均質な集団である。
ポリクローナル抗体は、本発明の方法において有用である。単一特異的ポリクローナル抗体が好ましい。当該技術分野に周知の方法を用いて、適切なポリクローナル抗体を調製してもよい。
【０１１３】
ＦａｂおよびＦａｂ２断片などの、抗体の抗原結合性断片もまた用いて／提供してもよく、遺伝子操作した抗体および抗体断片もまた用いて／提供してもよい。抗体の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）ドメインは、抗原認識に関与し、この事実は、初期のプロテアーゼ消化実験によって最初に認識された。さらなる確認は、齧歯類抗体の「ヒト化」によって見出された。齧歯類起源の可変ドメインを、ヒト起源の定常ドメインに融合させて、生じる抗体が、齧歯類親抗体の抗原特異性を保持するようにしてもよい（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８１，  ６８５１−６８５５）。
【０１１４】
抗原特異性は可変ドメインによって与えられ、そして定常ドメインからは独立であることは、すべて１またはそれより多くの可変ドメインを含有する抗体断片の細菌発現を伴う実験から知られる。これらの分子には、Ｆａｂ様分子（Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０，  １０４１）；  Ｆｖ分子（Ｓｋｅｒｒａら（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０，  １０３８）；  ＶＨおよびＶＬパートナードメインが柔軟なオリゴペプチドを通じて連結される、一本鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）分子（Ｂｉｒｄら（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２，  ４２３；  Ｈｕｓｔｏｎら（１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５，  ５８７９）；ならびに単離Ｖドメインを含む単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）（Ｗａｒｄら（１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，  ５４４）が含まれる。特異的結合部位を保持する抗体断片合成に関与する技術の一般的な概説は、Ｗｉｎｔｅｒ  ＆  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４９，  ２９３−２９９中に見出されるはずである。
【０１１５】
「ＳｃＦｖ分子」によって、本発明者らは、ＶＨおよびＶＬパートナードメインが、例えば柔軟なオリゴペプチドによって共有結合されている分子を意味する。
Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖおよびｄＡｂ抗体断片は、すべて大腸菌において発現可能であり、そして大腸菌から分泌可能であり、したがって、多量の前記断片の容易な産生が可能になる。
【０１１６】
全抗体、およびＦ（ａｂ’）２断片は「二価」である。「二価」によって、本発明者らは、前記抗体およびＦ（ａｂ’）２断片が２つの抗原結合部位を有することを意味する。対照的に、Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖおよびｄＡｂ断片は一価であり、１つの抗原結合部位しか持たない。また、当該技術分野に周知であるようなファージディスプレイ技術を用いて、ＬＡＧ−３に結合する合成抗体を作製してもよい。
【０１１７】
本出願はまた、ＬＡＧ−３に結合可能であり、そして二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片である、抗体または抗原結合性断片も提供する。いくつかの態様において、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片は単離されていてもよい。
【０１１８】
いくつかの態様において、二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片は、本発明記載の抗原結合性断片またはポリペプチドを含む。いくつかの態様において、二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片は、ＬＡＧ−３に結合可能な抗原結合性断片であって、ＬＡＧ−３に結合可能な抗原結合性断片が本発明記載の抗原結合性断片またはポリペプチドを含むかまたはこれらからなる、前記断片を含む。
【０１１９】
いくつかの態様において、二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片は、ＬＡＧ−３に結合可能な抗原結合性断片、および別のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性断片を含む。
【０１２０】
別のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性断片は、ＬＡＧ−３以外の別のタンパク質に結合可能である。
いくつかの態様において、ターゲットタンパク質は、細胞表面受容体であってもよい。いくつかの態様において、ターゲットタンパク質は、免疫細胞、例えばＴ細胞の細胞表面上に発現される細胞表面受容体であってもよい。いくつかの態様において、細胞表面受容体は、免疫チェックポイント受容体であってもよい。いくつかの態様において、免疫チェックポイント受容体は、共刺激受容体であってもよい。いくつかの態様において、共刺激受容体は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４３、４−１ＢＢおよびＧＩＴＲより選択されてもよい。いくつかの態様において、免疫チェックポイント受容体は阻害性受容体であってもよい。いくつかの態様において、阻害性受容体は、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、Ａ２ＡＲ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ−３、ＰＤ−１、およびＫＩＲより選択されてもよい。
【０１２１】
いくつかの態様において、ターゲットタンパク質は癌マーカーであってもよい。すなわち、ターゲットタンパク質は、その発現（例えば上方制御された発現）が癌と関連するタンパク質であってもよい。いくつかの態様において、癌マーカーは、細胞表面で発現されてもよい。いくつかの態様において、癌マーカーは受容体であってもよい。いくつかの態様において、癌マーカーは、ＨＥＲ−２、ＨＥＲ−３、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ２０、ＣＤ２４、ＣＤ９０、ＣＤ１５、ＣＤ５２、ＣＡ−１２５、ＣＤ３４、ＣＡ−１５−３、ＣＡ−１９−９、ＣＥＡ、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、ＣＤ３１、ＣＤ４４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＡＢＣＢ５およびＣＤ４５より選択されてもよい。
【０１２２】
いくつかの態様において、ＣＤ２７の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ２７抗体クローン０３２３（Ｍｉｌｌｏｐｏｒｅ）またはバルリルマブ（Ｃｅｌｌｄｅｘ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ２７結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ２８の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ２８抗体クローンＣＤ２８．６（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローンＣＤ２８．２、クローンＪＪ３１９（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、クローン２０４．１２、クローンＢ−２３、クローン１０Ｆ３（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｉｅｒｃｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローン３７４０７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローン２０４−１２（Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン１５Ｅ８（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｏｐｏｒｅ）、クローン２０４−１２、クローンＹＴＨ９１３．１２（ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ）、クローンＢ−Ｔ３（Ａｃｒｉｓ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローン９Ｈ６Ｅ２（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローンＣ２８／７７（ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ）、クローンＫＯＬＴ−２（ＡＬＰＣＯ）、クローン１５２−２Ｅ１０（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、またはクローンＸＰＨ−５６（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ２８結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＩＣＯＳの抗原結合性断片は、例えば抗ＩＣＯＳ抗体クローンＩＳＡ−３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローンＳＰ９８（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、クローン１Ｇ１、クローン３Ｇ４（Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン６６９２２２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローンＴＱ０９（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、またはクローンＣ３９８．４Ａ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＩＣＯＳ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ４０の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ４０抗体クローン８２１１１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、またはＡＳＫＰ１２４０（Ｏｋｉｍｕｒａら，  ＡＭ  Ｊ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ（２０１４）  １４（６）  １２９０−１２９９）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ４０結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ１２２の抗原結合性断片は、抗ＣＤ１２２抗体クローンｍｉｋβ２（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ１２２結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＯＸ４３の抗原結合性断片は、例えばＵＳ  ２０１３０２８０２７５、ＵＳ  ８２８３４５０またはＷＯ２０１３０３８１９１に開示される抗ＯＸ４３抗体、例えばクローン１２Ｈ３またはクローン２０Ｅ５のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＯＸ４３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、４−１ＢＢの抗原結合性断片は、例えば抗４−１ＢＢ抗体ＰＦ−０５０８２５６６（Ｆｉｓｈｅｒら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２０１２）  ６１：  １７２１−１７３３）、または��レルマブ（ＢＭＳ−６６５５１３；  Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ；  ＬｉおよびＬｉｕ，  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（２０１３）；  ５：  ４７−５３）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他の４−１ＢＢ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＧＩＴＲの抗原結合性断片は、例えば抗ＧＩＴＲ抗体ＴＲＸ−５１８（ＴｏｌｅｒｘＲ；  Ｓｃｈａｅｒら，（２０１０）  １１（１２）：  １３７８−１３８６）、またはクローンＡＩＴ  ５１８Ｄ（ＬｉｆｅＳｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＧＩＴＲ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、Ｂ７−Ｈ３の抗原結合性断片は、例えばＵＳ  ２０１３００７８２３４、ＷＯ２０１４１６０６２７またはＷＯ２０１１１０９４００に開示される抗Ｂ７−Ｈ３抗体クローンのＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＢ７−Ｈ３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、Ｂ７−Ｈ４の抗原結合性断片は、例えばＷＯ２０１３０６７４９２、ＷＯ２００９０７３５３３またはＥＰ２９３４５７５に開示される抗Ｂ７−Ｈ４抗体クローン、例えばクローン２Ｈ９のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＢ７−Ｈ４結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＢＴＬＡの抗原結合性断片は、例えば抗ＢＴＬＡ抗体クローン１Ｂ７、クローン２Ｇ８、クローン４Ｃ５（Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン４Ｂ８（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−ｏｎｌｉｎｅ）、クローンＭＩＨ２６（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｉｅｒｃｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローンＵＭＡＢ６１（ＯｒｉＧｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、クローン３３０１０４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローン１Ｂ４（ＬｉｆｅＳｐａｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）、クローン４４０２０５、クローン５Ｅ７（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＢＴＬＡ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＴＬＡ４の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＴＬＡ４抗体クローン２Ｆ１、クローン１Ｆ４（Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン９Ｈ１０（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、クローンＢＮＵ３（ＧｅｎｅＴｅｘ）、クローン１Ｅ２、クローンＡＳ３２（ＬｉｆｅＳｐａｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）  クローンＡ３．４Ｈ２．Ｈ１２（Ａｃｒｉｓ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローン０６０（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローンＢＵ５Ｇ３（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、クローンＭＩＨ８（ＭＢＬ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、クローンＡ３．６Ｂ１０．Ｇ１、またはクローンＬ３Ｄ１０（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＴＬＡ４結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、Ａ２ＡＲの抗原結合性断片は、例えば抗Ａ２ＡＲ抗体クローン７Ｆ６（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；  Ｋｏｓｈｉｂａら  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（１９９９）；  ５５：  ６１４−６２４）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＡ２ＡＲ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＶＩＳＴＡの抗原結合性断片は、例えばＷＯ２０１５０９７５３６またはＵＳ２０１４０１０５９１２に開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体、例えばクローン１３Ｆ３のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＶＩＳＴＡ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＴＩＭ−３の抗原結合性断片は、例えば抗ＴＩＭ−３抗体クローンＦ３８−２Ｅ２（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、クローン２Ｅ２（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；  Ｐｉｒｅｓ  ｄａ  Ｓｉｌｖａら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ（２０１４）  ２（５）：  ４１０−４２２）、クローン６Ｂ６Ｅ２、クローン０２４（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）  クローン３４４８０１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローンＥ−１８、クローンＨ−１９１（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、またはクローン１３Ａ２２４（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＴＩＭ−３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＰＤ−１の抗原結合性断片は、例えば抗ＰＤ−１抗体クローンＪ１１６、クローンＭＩＨ４（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローン７Ａ１１Ｂ１（Ｒｏｃｋｌａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．）、クローン１９２１０６（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローンＪ１１０、クローンＪ１０５（ＭＢＬ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、クローン１２Ａ７Ｄ７、クローン７Ａ１１Ｂ１（Ａｂｂｉｏｔｅｃ）、クローン＃９Ｘ２１（ＭｙＢｉｏＳｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ）、クローン４Ｈ４Ｄ１（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ  Ｇｒｏｕｐ）、クローンＤ３Ｗ４Ｕ、クローンＤ３Ｏ４Ｓ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、クローンＲＭＰ１−３０、クローンＲＭＰ１−１４（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、クローンＥＨ１２．２Ｈ７（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、クローン１０Ｂ１２２７（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローンＵＭＡＢ１９８、クローンＵＭＡＢ１９７（Ｏｒｉｇｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８）、ラムブロリズマブ、あるいはＷＯ  ２０１０／０７７６３４またはＷＯ  ２００６／１２１１６８に記載される他の抗ＰＤ−１抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＰＤ−１結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＫＩＲの抗原結合性断片は、例えば抗ＫＩＲ抗体クローン１−７Ｆ９（Ｒｏｍａｇｎｅら，  Ｂｌｏｏｄ（２００９）  １１４（１３）：  ２６６７−２６７７）、リリルマブ（ＢＭＳ−９８６０１５；  Ｓｏｌａら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ（２０１３）；  １：Ｐ４０）あるいはＵＳ  ２０１５／０３４４５７６またはＷＯ  ２０１４／０６６５３２に記載される抗ＫＩＲ抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＫＩＲ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＨＥＲ−２の抗原結合性断片は、例えば抗ＨＥＲ−２抗体トラスツズマブ（ハーセプチン）、あるいはＷＯ  ２００３／００６５０９またはＷＯ  ２００８／０１９２９０に記載される抗ＨＥＲ−２抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＨＥ��−２結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＨＥＲ−３の抗原結合性断片は、例えば抗ＨＥＲ−３抗体クローンＭＭ−１２１（Ｌｙｕら，  Ｉｎｔ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｐａｔｈｏｌ（２０１５）  ８（６）：  ６１４３−６１５６）、ＭＥＨＤ７９４５Ａ（Ｓｃｈａｅｆｅｒら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ（２０１１）  ２０（４）：  ４７２−４８６）、ＡＭＧ  ８８８（Ｕ３−１２８７；  Ａｕｒｉｓｉｃｃｈｉｏら，  Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ（２０１２）  ３（８）：  ７４４−７５８）あるいはＷＯ２００８／１００６２４またはＷＯ  ２０１３０４８８８３に記載される抗ＨＥＲ−３抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＨＥＲ−３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＥＧＦＲの抗原結合性断片は、例えば抗ＥＧＦＲ抗体パニツムマブ（ＡＢＸ−ＥＧＦ；ベクチビックス）、セツキシマブ（エルビタックス）、ニモツズマブ、マタズマブ（ＥＭＤ  ７２００）または抗体クローン０４８−００６（Ｓｏｇａｗａら，  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  Ｃｏｍｍ（２０１２）  ３３（７）：  ７１９−７２５）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＥＧＦＲ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＥｐＣＡＭの抗原結合性断片は、例えば抗ＥｐＣＡＭ抗体エドレコロマブ、ＩＮＧ−１、３６２２Ｗ４、またはアデカツムマブ（Ｍｕｎｚら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｉｎｔ（２０１０）  １０：４４）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＥｐＣＡＭ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ３０の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ３０抗体ブレンツキシマブ（ｃＡＣ１０）、クローンＳＧＮ−３０（Ｗａｈｌら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００２  ６２（１３）：３７３６−３７４２）、クローン５Ｆ１１（Ｂｏｒｃｈｍａｎｎら，  Ｂｌｏｏｄ（２００３）  １０２（１）：  ３７３７−３７４２）、あるいはＷＯ  １９９３０２４１３５またはＷＯ  ２００３０５９２８２に記載される抗ＣＤ３０抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ３０結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ３３の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ３３抗体リンツズマブ（ＳＧＮ−３３）、ゲムツズマブ（ミロターグ）、またはクローンｈＰ６
７．７（Ｓｉｅｖｅｒｓら，  Ｂｌｏｏｄ（１９９９）  ９３（１１）：  ３６７８−３６８４）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ３３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ３８の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ３８抗体ダラツムマブ（ダルザレックス）、ＳＡＲ６５０９８４（Ｍａｒｔｉｎら，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ（２０１４）  ３２：５ｓ，（補遺；要約  ８５３２）またはＭＯＲ２０２（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ  ＡＧ）、あるいはＷＯ  ２００６０９９８７５またはＵＳ  ２０１００２８５００４に記載される抗ＣＤ３８抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ３８結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ２０の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ、オクレリズマブ、オファツムマブ、オビヌツズマブまたはＢＭ−ｃａ（Ｋｏｂａｙａｓｈｉら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｄ（２０１３）  ２（２）：  １３０−１４３）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ２０結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ２４の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ２４抗体クローンｅＢｉｏＳＮ３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローンＭＬ５（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、またはＷＯ  ２００８０５９４９１に記載される抗ＣＤ２４抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ２４結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ９０の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ９０抗体クローン５Ｅ１０（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ９０結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ１５の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ１５抗体クローンＣ３Ｄ−１、Ｃａｒｂ−３（ＤＡＫＯ  Ａ／Ｓ）、ＭＭＡ（Ｒｏｃｈｅ）またはＢＹ８７（Ａｂｃａｍ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ１５結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ５２の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ５２抗体アレムツズマブ、クローンＨＩ１８６、またはクローンＹＴＨ３４．５（ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ５２結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＡ−１２５の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＡ−１２５抗体オレゴボマブのＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＡ−１２５結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ３４の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ３４抗体クローン５６１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、クローン５８１（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）、またはクローン５Ｆ３（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ３４結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＡ−１５−３の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＡ−１５−３抗体クローン２Ｆ１６（ＵＳＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローンＴＡ９９８（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、クローン１Ｄ１（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、またはＭａｂ  ＡＲ２０．５（Ｑｉら，  Ｈｙｂｒｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍｉｃｓ（２００１）  ２０（５−６）：  ��１３−３２４）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＡ−１５−３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＡ−１９−９の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＡ−１９−９抗体クローン１１６−ＮＳ−１９−９（ＤＡＫＯ  Ａ／Ｓ）、クローンＳＰＭ１１０、またはクローン１２１ＳＬＥ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＡ−１９−９結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＥＡの抗原結合性断片は、例えば抗ＣＥＡ抗体ラベツズマブ、Ｃ２−４５（協和発酵キリン株式会社）あるいはＩｍａｋｉｉｒｅら，  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ（２００４）  １０８：  ５６４−５７０またはＷＯ  ２０１１０３４６６０に開示される抗ＣＥＡ抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＥＡ結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ９９の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ９９抗体クローンＣ７Ａ（Ｍｏｒｉｃｏｌｉら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（２０１４）  ４０８：  ３５−４５）またはクローン１２Ｅ７（ＤＡＫＯ  Ａ／Ｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ９９結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ１１７の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ１１７抗体クローンＣＫ６（Ｌｅｂｒｏｎら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ（２０１４）  １５（９）：  １２０８−１２１８）、またはクローン１０４Ｄ２（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ１１７結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ３１の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ３１抗体クローンＪＣ７０Ａ（ＤＡＫＯ  Ａ／Ｓ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ３１結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ４４の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ４４抗体ＰＦ−０３４７５９５２（Ｒｕｎｎｅｌｓら，  Ａｄｖ  Ｔｈｅｒ（２０１０）；  ２７（３）：  １６８−１８０）、ＲＧ７３５６（Ｖｕｇｔｓら，  ＭＡｂｓ（２０１４）  ６（２）：  ５６７−５７５）、クローンＩＭ７、またはクローンＡ３Ｄ８（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ４４結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ１２３の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ１２３抗体ＣＳＬ３６２（Ｎｉｅｖｅｒｇａｌｌら，  Ｂｌｏｏｄ（２０１４）  １２３（８）：１２１８−１２２８）、ＣＳＬ３６０（Ｈｅら，  Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ（２０１５）  ５６（５）：  １４０６−１４１５）  ７３Ｇ（Ｊｉｎら，  Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ（２００９）  ５（１）：  ３１−４２）  クローン６Ｈ６（ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ）またはＷＯ  ２０１４１３０６３５に記載される抗ＣＤ１２３抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ１２３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ１３３の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ１３３抗体クローン６Ｂ３、クローン９Ｇ４、クローンＡＣ１４１（Ｗａｎｇら，  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ（Ｌａｒｃｈｍｔ）（２０１０）  ２９（３）：  ２４１−２４９���、クローン６Ｂ６（Ｃｈｅｎら，  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ（Ｌａｒｃｈｍｔ）（２０１０）  ２９（４）：  ３０５−３１０、クローンＡＣ１１３（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）、またはＷＯ  ２０１１１４９４９３に記載される抗ＣＤ１３３抗体のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ１３３結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＡＢＣＢ５の抗原結合性断片は、例えば抗ＡＢＣＢ５抗体クローン５Ｈ３Ｃ６（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＡＢＣＢ５結合性断片を含んでもよい。いくつかの態様において、ＣＤ４５の抗原結合性断片は、例えば抗ＣＤ４５抗体ＹＡＭＬ５６８（Ｇｌａｔｔｉｎｇら，  Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ（２００６）  ４７（８）：  １３３５−１３４１）またはクローンＢＲＡ−５５（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）のＣＤＲ、軽鎖および重鎖可変ドメインまたは他のＣＤ４５結合性断片を含んでもよい。
【０１２３】
本発明記載の二重特異性抗体の抗原結合性断片または二重特異性抗原結合性断片は、抗原に結合可能なポリペプチドの任意の断片であってもよい。いくつかの態様において、抗原結合性断片は、抗体または抗原結合性断片の抗原結合性領域を一緒に定義する少なくとも３つの軽鎖ＣＤＲ（すなわちＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２およびＬＣ−ＣＤＲ３）および３つの重鎖ＣＤＲ（すなわちＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２およびＨＣ−ＣＤＲ３）を含む。いくつかの態様において、抗原結合性断片は、抗体または抗原結合性断片の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含んでもよい。いくつかの態様において、抗原結合性領域は、抗体または抗原結合性断片の軽鎖ポリペプチドおよび重鎖ポリペプチドを含んでもよい。
【０１２４】
本発明記載の二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片は、任意の適切な形式、例えば本明細書にその全体が援用されるＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ＭＡｂｓ  ２０１２，  ４（２）：  １８２−１９７に記載される形式で提供されてもよい。例えば、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合性断片は、二重特異性抗体コンジュゲート（例えばＩｇＧ２、Ｆ（ａｂ’）２またはＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙ）、二重特異性ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子（例えばＩｇＧ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＩｇＧ−ｓＶＤ、ｓＶＤ−ＩｇＧ、２イン１−ＩｇＧ、ｍＡｂ２、またはＴａｎｄｅｍａｂ共通ＬＣ）、非対称二重特異性ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子（例えばｋｉｈ  ＩｇＧ、ｋｉｈ  ＩｇＧ共通ＬＣ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ｋｉｈ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、ｍＡｂ−Ｆｖ、電荷対（ｃｈａｒｇｅ  ｐａｉｒ）またはＳＥＥＤ−ｂｏｄｙ）、小分子二重特異性抗体分子（例えばＤｉａｂｏｄｙ（Ｄｂ）、ｄｓＤｂ、ＤＡＲＴ、ｓｃＤｂ、ｔａｎｄＡｂｓ、タンデムｓｃＦｖ（ｔａＦｖ）、タンデムｄＡｂ／ＶＨＨ、三重ボディ、三重ヘッド、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、またはＦ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ２）、二重特異性ＦｃおよびＣＨ３融合タンパク質（例えばｔａＦｖ−Ｆｃ、Ｄｉ−ディアボディ、ｓｃＤｂ−ＣＨ３、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ、ＨＣＡｂ−ＶＨＨ、ｓｃＦｖ−ｋｉｈ−Ｆｃ、またはｓｃＦｖ−ｋｉｈ−ＣＨ３）、または二重特異性融合タンパク質（例えばｓｃＦｖ２−アルブミン、ｓｃＤｂ−アルブミン、ｔａＦｖ−毒素、ＤＮＬ−Ｆａｂ３、ＤＮＬ−Ｆａｂ４−ＩｇＧ、ＤＮＬ−Ｆａｂ４−ＩｇＧ−サイトカイン２）であってもよい。特に、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ＭＡｂｓ  ２０１２，  ４（２）：  １８２−１９の図２を参照されたい。
【０１２５】
当業者は、本発明記載の二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片を設計し、そして調製することが可能である。
二重特異性抗体を産生するための方法には、例えば還元可能ジスルフィドまたは還元不能チオエーテル結合を用いた、例えば本明細書にその全体が援用されるＳｅｇａｌおよびＢａｓｔ，  ２００１．  二重特異性抗体の産生。  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  １４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１−２．１３．１６に記載されるような、抗体または抗体断片の化学的架橋が含まれる。例えば、Ｎ−スクシニミジル−３−（−２−ピリジルジチオ）−プロピオネート（ＳＰＤＰ）を用いて、例えばＦａｂ断片をヒンジ領域ＳＨ基を通じて化学的に架橋して、ジスルフィド連結二重特異性Ｆ（ａｂ）２ヘテロ二量体を生成してもよい。
【０１２６】
二重特異性抗体を産生するための他の方法には、例えばＤ．  Ｍ．およびＢａｓｔ，  Ｂ．  Ｊ．  ２００１．  二重特異性抗体の産生。  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  １４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１−２．１３．１６に記載されるように、抗体産生ハイブリドーマを、例えばポリエチレングリコールで融合させて、二重特異性抗体を分泌可能なクアドローマ細胞を産生することが含まれる。
【０１２７】
本発明記載の二重特異性抗体および二重特異性抗原結合性断片はまた、組換え的に、例えばどちらも本明細書にその全内容が援用される、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  第２版（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  ２０１２），  第４０章：  二重特異性抗体の産生：ディアボディおよびタンデムｓｃＦｖ（ＨｏｒｎｉｇおよびＦａｒｂｅｒ−Ｓｃｈｗａｒｚ）、または  Ｆｒｅｎｃｈ，  二重特異性抗体作製法，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．  ２０００；  ４０：３３３−３３９に記載されるような、抗原結合性分子のためのポリペプチドをコードする核酸構築物からの発現によって産生してもよい。例えば、２つの抗原結合性断片のための軽鎖および重鎖可変ドメイン（すなわちＬＡＧ−３に結合可能な抗原結合性断片のための軽鎖および重鎖可変ドメイン、ならびに別のターゲットタンパク質に結合可能な抗原結合性断片のための軽鎖および重鎖可変ドメイン）をコードし、そして抗原結合性断片間に適切なリンカーまたは二量体化ドメインをコードする配列を含むＤＮＡ構築物を、分子クローニング技術によって調製してもよい。その後、組換え二重特異性抗体を、適切な宿主細胞（例えば哺乳動物宿主細胞）において構築物を発現させる（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏで）ことによって産生してもよく、そして次いで、任意に、発現した組換え二重特異性抗体を精製してもよい。
【０１２８】
非修飾親抗体に比較して、抗原に対する抗体のアフィニティが改善されている修飾抗体を生成する、アフィニティ成熟プロセスによって抗体を産生してもよい。当該技術分野に知られる方法、例えばＭａｒｋｓら，  Ｒｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）；  Ｂａｒｂａｓら  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３（１９９４）；  Ｓｃｈｉｅｒら  Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５（１９９５）；  Ｙｅｌｔｏｎら  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５５：１９９４−２００４（１９９５）；  Ｊａｃｋｓｏｎら，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５４（７）：３３１  ０−１５  ９（１９９５）；およびＨａｗｋｉｎｓら，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２６：８８９−８９６（１９９２）によって、アフィニティ成熟抗体を産生してもよい。
【０１２９】
本発明記載の抗体は、好ましくはＬＡＧ−３に対する特異的結合を示す。ターゲット分子に特異的に結合する抗体は、好ましくは、他のターゲットに結合するよりもより高いアフィニティで、および／またはより長い期間、ターゲットに結合する。いくつかの態様において、本発明の抗体は、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＣＤ２８またはＣＴＬＡ−４の１またはそれより多くに対してよりも、ＬＡＧ−３に対して、より高いアフィニティで結合可能である。１つの態様において、非関連ターゲットに対する抗体の結合の度合いは、例えばＥＬＩＳＡ、ＳＰＲ、Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリーによってまたはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定されるような、ターゲットに対する抗体の結合の約１０％未満である。あるいは、結合特異性は、本発明の抗ＬＡＧ−３抗体が、別のターゲット分子に対する抗体のＫＤよりも少なくとも０．１桁分（すなわち０．１ｘ１０ｎ、式中、ｎは桁を示す整数である）高いＫＤで、ＬＡＧ−３に結合する結合アフィニティの観点から、反映されうる。これは、任意に、少なくとも０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、または２．０の１つであってもよい。
【０１３０】
本発明記載の抗体は、好ましくは、≦１０ｎＭ、≦５ｎＭ、≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１．５ｎＭ、≦１．４ｎＭ、≦１．３ｎＭ、≦１．２５ｎＭ、≦１．２４ｎＭ、≦１．２３ｎＭ、≦１．２２ｎＭ、≦１．２１ｎＭ、≦１．２ｎＭ、≦１．１５ｎＭ、≦１．１ｎＭ  ≦１．０５ｎＭ、≦１ｎＭ、≦９００ｐＭ、≦８００ｐＭ、≦７００ｐＭ、≦６００ｐＭ、≦５００ｐＭの１つの解離定数（ＫＤ）を有する。ＫＤは約０．１〜約３ｎＭの範囲であてもよい。抗体のそのターゲットに対する結合アフィニティは、しばしば、解離定数（ＫＤ）の観点で記載される。結合アフィニティは、当該技術分野に知られる方法によって、例えば、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；例えばＨｅａｒｔｙら，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  （２０１２）  ９０７：４１１−４４２を参照されたい）、Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリー（例えばＬａｄら，  （２０１５）  Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ  ２０（４）：  ４９８−５０７を参照されたい）、または抗体のＦａｂ型および抗原分子で行う放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって、測定してもよい。
【０１３１】
本発明記載の抗体は、好ましくは、ＢＭＳ−９８６０１６（例えばＷＯ  ２０１５０４２２４６  Ａ１に記載される−ＷＯ  ２０１５０４２２４６  Ａ１の配列番号１および２は、それぞれ、ＢＭＳ−９８６０１６の重鎖および軽鎖アミノ酸配列である）による結合のアフィニティよりも高いアフィニティまたはこれと類似のアフィニティで、ＬＡＧ−３（例えばヒトＬＡＧ−３）に対する結合を示す。
【０１３２】
本明細書において、参照抗体に比較して、所定のターゲット分子に関して、「より高いアフィニティ」を示す抗体は、ターゲット分子に対する参照抗体の結合強度に比較した際に、より強い強度で、そのターゲット分子に結合する。所定のターゲット分子に関する抗体のアフィニティは、定量的に決定してもよい。
【０１３３】
ＢＭＳ−９８６０１６に比較した、ＬＡＧ−３に対する本発明記載の抗体の結合の相対的アフィニティは、例えば、本明細書に記載するように、ＥＬＩＳＡによって決定してもよい。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＬＡＧ−３に関するＢＭＳ−９８６０１６のＫＤ未満であるかまたはこれに等しいＬＡＧ−３に関する解離定数（ＫＤ）を有してもよい。
【０１３４】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、所定のアッセイにおいて、ＬＡＧ−３に関するＢＭＳ−９８６０１６のアフィニティの１．０１倍またはそれより高い、１．０５倍またはそれより高い、１．１倍またはそれより高い、１．１５倍またはそれより高い、１．２倍またはそれより高い、１．２５倍またはそれより高い、１．３倍またはそれより高い、１．３５倍またはそれより高い、１．４倍またはそれより高い、１．４５倍またはそれより高い、１．５倍またはそれより高い、ＬＡＧ−３に関するアフィニティを有してもよい。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、所定のアッセイにおいて、ＬＡＧ−３に関するＢＭＳ−９８６０１６のＫＤ値の０．９９倍またはそれ未満、０．９５倍またはそれ未満、０．９倍またはそれ未満、０．８５倍またはそれ未満、０．８倍またはそれ未満、０．７５倍またはそれ未満、０．７倍またはそれ未満、０．６５倍またはそれ未満、０．６倍またはそれ未満、０．５５倍またはそれ未満、０．５倍またはそれ未満のＫＤ値でＬＡＧ−３に結合する。
【０１３５】
本発明記載の抗体は、好ましくは、ＢＭＳ−９８６０１６による、ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩの間の相互作用の阻害／防止よりも高い度合いまで、またはそれと類似の度合いまで、ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩ（例えばヒトＬＡＧ−３およびヒトＭＨＣクラスＩＩ）間の相互作用を阻害するかまたは防止する。ＢＭＳ−９８６０１６と比較した、ＬＡＧ−３およびＬＡＧ３間の相互作用の、ＬＡＧ−３に関する本発明記載の抗体の相対的阻害／防止は、例えば、本明細書の実施例８に記載するように決定してもよい。
【０１３６】
例えば、ＢＭＳ−９８６０１６に比較した、ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩ間の相互作用の、本発明記載の抗体の相対的阻害／防止は、例えば、本明細書に記載するように決定してもよい。簡潔には、所定の抗体による相互作用の阻害／防止は、抗体と、標識化（例えば蛍光標識化）ＬＡＧ−３をプレインキュベーションし、続いてＭＨＣクラスＩＩを発現している細胞（例えばＤａｕｄｉ細胞）に、プレミックスを適用し、プレミックスおよび細胞を、ＭＨＣクラスＩＩへのＬＡＧ−３の結合を可能にするために十分な時間、インキュベーションし、未結合ＬＡＧ−３およびＬＡＧ−３抗体複合体を除去するために洗浄し、そして最終的に、細胞を分析して標識を検出することによって、評価してもよい。
【０１３７】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＢＭＳ−９８６０１６による、ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩ間の相互作用の阻害／防止より高いかまたはそれと同等の度合いまで、ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩ間の相互作用を阻害／防止しうる。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、所定のアッセイにおいて、ＢＭＳ−９８６０１６による、ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩ間の相互作用の阻害／防止よりも、１．０１倍またはそれより高い、１．０５倍またはそれより高い、１．１倍またはそれより高い、１．１５倍またはそれより高い、１．２倍またはそれより高い、１．２５倍またはそれより高い、１．３倍またはそれより高い、１．３５倍またはそれより高い、１．４倍またはそれより高い、１．４５倍またはそれより高い、１．５倍またはそれより高い度合いまで、ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩ間の相互作用を阻害／防止しうる。
【０１３８】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＢＭＳ−９８６０１６による、ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩ間の相互作用の阻害に関するＩＣ５０よりも低い、相互作用の半最大阻害に関する値（すなわちＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩ間の相互作用の阻害に関するＩＣ５０値）で、ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩ間の相互作用を阻害／防止しうる。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、所定のアッセイにおいて、ＢＭＳ−９８６０１６による、ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩ間の相互作用の阻害に関するＩＣ５０値の０．９９倍またはそれ未満、０．９５倍またはそれ未満、０．９倍またはそれ未満、０．８５倍またはそれ未満、０．８倍またはそれ未満、０．７５倍またはそれ未満、０．７倍またはそれ未満、０．６５倍またはそれ未満、０．６倍またはそれ未満、０．５５倍またはそれ未満、０．５倍またはそれ未満のＩＣ５０値で、ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩ間の相互作用を阻害／防止しうる。
【０１３９】
本発明記載の抗体は、好ましくは、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいて、Ｔ細胞増殖、ＩＬ−２産生およびＩＦＮγ産生の１またはそれより多くを増加させる。ＭＬＲアッセイは、Ｂｒｏｍｅｌｏｗら  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，  ２００１  Ｊａｎ  １；２４７（１−２）：１−８に記載されるように実行してもよい。Ｔ細胞増殖は、当業者に周知の方法によって、例えばトリチウム化チミジンの取り込みを測定することによって、またはＣＦＳＥ色素希釈によって、例えばＡｎｔｈｏｎｙら，  ２０１２  Ｃｅｌｌｓ  １：１２７−１４０に記載されるように、評価してもよい。ＩＬ−２および／またはＩＦＮγ産生は、例えば当業者に周知の抗体に基づく方法、例えばウェスタンブロット、免疫組織化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴによって、またはレポーターに基づく方法によって、分析してもよい。
【０１４０】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＢＭＳ−９８６０１６と類似の度合いまで、またはより高い度合いまで、ＭＬＲアッセイにおいて、Ｔ細胞増殖、ＩＬ−２産生およびＩＦＮγ産生の１またはそれより多くを増加させることも可能である。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、匹敵するアッセイにおいて、ＢＭＳ−９８６０１６に反応したＭＬＲアッセイにおけるＴ細胞増殖、ＩＬ−２産生およびＩＦＮγ産生の増加の１．０１倍またはそれより高い、１．０５倍またはそれより高い、１．１倍またはそれより高い、１．１５倍またはそれより高い、１．２倍またはそれより高い、１．２５倍またはそれより高い、１．３倍またはそれより高い、１．３５倍またはそれより高い、１．４倍またはそれより高い、１．４５倍またはそれより高い、１．５倍またはそれより高い度合いまで、ＭＬＲアッセイにおけるＴ細胞増殖、ＩＬ−２産生およびＩＦＮγ産生の１またはそれより多くを増加させることも可能である。
【０１４１】
本発明記載の抗体は、ＢＭＳ−９８６０１６が結合するＬＡＧ−３のエピトープとは異なるＬＡＧ−３のエピトープに結合してもよい。いくつかの態様において、本発明記載の抗体に関するエピトープは、ＢＭＳ−９８６０１６が結合するＬＡＧ−３のエピトープとは重複しない。いくつかの態様において、本発明記載の抗体は、ＬＡＧ−３に対する結合に関して、ＢＭＳ−９８６０１６と競合しない。
【０１４２】
所定の抗体が結合するＬＡＧ−３のエピトープは、当業者に周知の方法によって決定してもよく、これには、Ｘ線結晶学、アレイに基づくオリゴペプチドスキャン、突然変異誘発に基づくマッピングおよび水素−重水素交換マッピング法が含まれる。エピトープに関する競合結合は、競合ＥＬＩＳＡによって、または例えばＳＰＲを用いた結合反応分析によって、または本明細書に記載するようなＢｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリーによって、分析してもよい。
【０１４３】
本発明記載の抗体は、該抗体が結合する抗原の生物学的活性を阻害するかまたは減少させる「アンタゴニスト」抗体であってもよい。ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩ間の相互作用のブロッキングは、ＬＡＧ−３によって仲介される免疫阻害性シグナル伝達経路を阻害することによって、Ｔ細胞機能の回復を補助する。
【０１４４】
本発明はまた、本発明記載の抗原結合性断片を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も提供する。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、抗原結合およびＴ細胞活性化機能の両方を提供する組換え受容体である。ＣＡＲ構造および操作は、例えば、本明細書にその全体が援用される、Ｄｏｔｔｉら，  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ（２０１４）２５７（１）に概説される。
【０１４５】
ＣＡＲは、細胞膜アンカー領域およびシグナル伝達領域に連結された抗原結合性領域を含む。任意のヒンジ領域は、抗原結合性領域および細胞膜アンカー領域間に分離を提供してもよく、そして柔軟性リンカーとして作用してもよい。
【０１４６】
ＣＡＲの抗原結合性領域は、ＣＡＲがターゲティングする抗原に特異的な抗体、またはターゲットに結合可能である他の剤の抗原結合性領域に基いてもよい。例えば、ＣＡＲの抗原結合性ドメインは、ターゲットタンパク質に特異的に結合する抗体の、相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列または全長軽鎖および重鎖可変領域アミノ酸配列を含んでもよい。ＣＡＲの抗原結合性ドメインは、他のタンパク質：タンパク質相互作用、例えばリガンド：受容体結合に基づいて抗原をターゲティングすることも可能であり；例えば、ＩＬ−１３に基づく抗原結合性ドメインを用いて、ＩＬ−１３Ｒα２をターゲティングするＣＡＲが開発されてきている（例えば、Ｋａｈｌｏｎら  ２００４  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６４（２４）：  ９１６０−９１６６）。
【０１４７】
本発明のＣＡＲは、ＬＡＧ−３結合性領域を含む。いくつかの態様において、本発明のＣＡＲは、本発明記載の抗体／抗原結合性断片を含むかまたはこれらからなる抗原結合性領域を含む。
【０１４８】
本発明のＣＡＲのＬＡＧ−３結合性領域は、任意の適切な形式、例えばｓｃＦｖ、Ｆａｂ等で提供されてもよい。いくつかの態様において、本発明のＣＡＲのＬＡＧ−３結合性領域は、ＬＡＧ−３結合性ｓｃＦｖを含むかまたはこれからなる。
【０１４９】
細胞膜アンカー領域を、ＣＡＲの抗原結合性領域およびシグナル伝達領域の間で提供する。細胞膜アンカー領域は、抗原結合性領域が細胞外空間にあり、そしてシグナル伝達領域が細胞内部にあるように、ＣＡＲを発現している細胞の細胞膜へのＣＡＲのアンカーリングを提供する。いくつかの態様において、本発明のＣＡＲは、ＣＤ３−ζ、ＣＤ４、ＣＤ８またはＣＤ２８の１つの膜貫通領域アミノ酸配列を含むか、該配列からなるか、または該配列に由来するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる細胞膜アンカー領域を含む。
【０１５０】
本明細書において、参照アミノ酸配列「に由来する」領域は、参照配列に、少なくとも６０％、例えば少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１５１】
ＣＡＲのシグナル伝達領域は、Ｔ細胞の活性化を可能にする。ＣＡＲシグナル伝達領域は、リン酸化およびＣＡＲ発現Ｔ細胞の活性化のための免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を提供する、ＣＤ３−ζの細胞内ドメインのアミノ酸配列を含んでもよい。他のＩＴＡＭ含有タンパク質の配列を含むシグナル伝達領域もまた、ＣＡＲにおいて使用されてきており、例えば、ＦｃγＲＩのＩＴＡＭ含有領域を含むドメイン（Ｈａｙｎｅｓら，  ２００１  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６（１）：１８２−１８７）がある。ＣＤ３−ζの細胞内ドメイン由来のシグナル伝達領域を含むＣＡＲは、しばしば、第一世代ＣＡＲと称される。
【０１５２】
ＣＡＲのシグナル伝達領域はまた、ターゲットタンパク質への結合に際して、ＣＡＲ発現Ｔ細胞の活性化を促進するため、共刺激分子のシグナル伝達領域由来の共刺激配列も含んでもよい。適切な共刺激分子には、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳおよびＣＤ２７が含まれる。さらなる共刺激配列を含むシグナル伝達領域を有するＣＡＲは、しばしば、第二世代ＣＡＲと称される。
【０１５３】
いくつかの場合、ＣＡＲは、異なる細胞内シグナル伝達経路の共刺激を提供するよう操作される。例えば、ＣＤ２８共刺激に関連するシグナル伝達は、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）経路を優先的に活性化し、一方、４−１ＢＢ仲介性シグナル伝達は、ＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦ）アダプタータンパク質を通じる。したがって、ＣＡＲのシグナル伝達領域は、ときに、１より多い共刺激分子のシグナル伝達領域に由来する共刺激配列を含有する。多数の共刺激配列を含むシグナル伝達領域を含むＣＡＲは、しばしば、第三世代ＣＡＲと称される。
【０１５４】
いくつかの態様において、本発明のＣＡＲは、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳおよびＣＤ２７の１またはそれより多くの細胞内ドメインのアミノ酸配列を含むか、該配列からなるかまたは該配列に由来する、１またはそれより多い共刺激配列を含む。
【０１５５】
任意のヒンジ領域は、抗原結合性ドメインおよび膜貫通ドメイン間の分離を提供してもよく、そして柔軟性リンカーとして作用してもよい。ヒンジ領域は、結合部分が異なる方向を向くことを可能にする、柔軟性ドメインであってもよい。ヒンジ領域は、免疫グロブリンのＩｇＧ１またはＣＨ２ＣＨ３領域に由来してもよい。いくつかの態様において、本発明のＣＡＲは、免疫グロブリンのＩｇＧ１またはＣＨ２ＣＨ３領域のヒンジ領域のアミノ酸配列を含むか、該配列からなるか、または該配列に由来するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなるヒンジ領域を含む。
【０１５６】
ＣＡＲは、Ｔ細胞強度、特異性および安全性をさらに増進させるため、共刺激性リガンド、キメラ共刺激性受容体またはサイトカインと組み合わされてもよい（本明細書に特に援用される、Ｓａｄｅｌａｉｎら，  キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）設計の基本原理。  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ２０１３  Ａｐｒｉｌ；  ３（４）：  ３８８−３９８．  ｄｏｉ：１０．１１５８／２１５９−８２９０．ＣＤ−１２−０５４８）。
【０１５７】
本発明記載のＣＡＲを含む細胞もまた提供する。本発明記載のＣＡＲを用いて、Ｔ細胞を生成してもよい。Ｔ細胞へのＣＡＲの操作は、形質導入および拡大のためのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの培養中に実行してもよく、例えば養子Ｔ細胞療法のためのＴ細胞の拡大中に起こる。
【０１５８】
いくつかの側面において、抗体は、クローンＡ６またはＡ６の変異体である。Ａ６は、以下のＣＤＲ配列を含む：
【０１５９】
【化１９】
2019517773.tif 000020
【０１６０】
ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
いくつかの側面において、抗体は、クローン１Ｇ１１または１Ｇ１１の変異体である。１Ｇ１１は、以下のＣＤＲ配列を含む：
【０１６１】
【化２０】
2019517773.tif 000021
【０１６２】
ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
いくつかの側面において、抗体は、クローンＣ２またはＣ２の変異体である。Ｃ２は、以下のＣＤＲ配列を含む：
【０１６３】
【化２１】
2019517773.tif 000022
【０１６４】
ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
いくつかの側面において、抗体は、クローンＣ１２またはＣ１２の変異体である。Ｃ１２は、以下のＣＤＲ配列を含む：
【０１６５】
【化２２】
2019517773.tif 000023
【０１６６】
ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
いくつかの側面において、抗体は、クローンＦ５またはＦ５の変異体である。Ｆ５は、以下のＣＤＲ配列を含む：
【０１６７】
【化２３】
2019517773.tif 000024
【０１６８】
ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
いくつかの側面において、抗体は、クローンＧ８またはＧ８の変異体である。Ｇ８は、以下のＣＤＲ配列を含む：
【０１６９】
【化２４】
2019517773.tif 000025
【０１７０】
ＣＤＲ配列はＫａｂａｔ定義によって決定される。
本発明記載の抗体は、Ａ６、１Ｇ１１、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５またはＧ８のＣＤＲ、あるいは配列番号１および７；２および８；３および９；４および１０；５および１１；または６および９の１つを含んでもよい。本発明記載の抗体において、６つのＣＤＲ配列のうち１または２または３または４が異なってもよい。変異体は、６つのＣＤＲ配列のうち１つまたは２つに、１つまたは２つのアミノ酸置換を有してもよい。
【０１７１】
抗ＬＡＧ−３クローンのＶＨおよびＶＬ鎖のアミノ酸配列を図１および２に示す。コードヌクレオチド配列を図４に示す。
軽鎖および重鎖ＣＤＲはまた、いくつかの異なるフレームワーク領域と組み合わせて特に有用でありうる。したがって、ＬＣ−ＣＤＲ１〜３またはＨＣ−ＣＤＲ１〜３を有する軽鎖および／または重鎖は、代替フレームワーク領域を所持してもよい。適切なフレームワーク領域は、当該技術分野に周知であり、そして例えば、本明細書に援用されるＭ．  Ｌｅｆｒａｎｃ  ＆  Ｇ．  Ｌｅ：ｆｒａｎｃ  （２００１）  ”Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ＦａｃｔｓＢｏｏｋ”，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓに記載される。
【０１７２】
本明細書において、抗体は、配列番号１および７；２および８；３および９；４および１０；５および１１；または６および９のＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列の１またはそれより多く、あるいは図１および２に示すアミノ酸配列の１つに高い割合の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨおよび／またはＶＬ鎖を有してもよい。
【０１７３】
例えば、本発明記載の抗体には、ＬＡＧ−３に結合し、そして配列番号１〜１１の１つのＶＨまたはＶＬ鎖アミノ酸配列に、あるいは図１および２に示すアミノ酸配列の１つに、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＨまたはＶＬ鎖を有する抗体が含まれる。
【０１７４】
本発明記載の抗体は、検出可能に標識されるか、または少なくとも検出可能であってもよい。例えば、抗体を、放射性原子または着色分子または蛍光分子または任意の他の方法で容易に検出可能な分子で標識してもよい。適切な検出可能分子には、蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、酵素基質、および放射標識が含まれる。結合部分を検出可能標識で直接標識してもよいし、または間接的に標識してもよい。例えば、結合部分は、それ自体標識されている別の抗体によって検出可能な、非標識抗体であってもよい。あるいは、第二の抗体が該抗体に結合したビオチンを有してもよく、そしてビオチンに対する標識ストレプトアビジンの結合を用いて、第一の抗体を間接的に標識する。
【０１７５】
核酸／ベクター
本発明は、本発明記載の抗体、抗原結合性断片またはＣＡＲをコードする核酸を提供する。いくつかの態様において、核酸は、例えば他の核酸または天然存在生物学的材料から精製されるかまたは単離されている。
【０１７６】
本発明はまた、本発明記載の抗体、抗原結合性断片またはＣＡＲをコードする核酸を含むベクターも提供する。
本発明記載の核酸および／またはベクターは、細胞、例えば初代ヒト免疫細胞内に導入するために提供されてもよい。適切なベクターには、プラスミド、バイナリーベクター、ＤＮＡベクター、ｍＲＮＡベクター、ウイルスベクター（例えばガンマレトロウイルスベクター（例えばネズミ白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来ベクター）、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクターおよびヘルペスウイルスベクター）、トランスポゾンに基づくベクター、および人工染色体（例えば酵母人工染色体）、例えばどちらも本明細書にその全体が援用される、Ｍａｕｓら，  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２０１４）  ３２：１８９−２２５またはＭｏｒｇａｎおよびＢｏｙｅｒｉｎａｓ，  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  ２０１６  ４，  ９に記載されるようなものが含まれる。いくつかの態様において、ウイルスベクターは、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、または単純ヘルペスウイルスベクターであってもよい。いくつかの態様において、レンチウイルスベクターはｐＥＬＮＳであってもよいし、またはｐＥＬＮＳに由来してもよい。いくつかの態様において、ベクターは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９をコードするベクターであってもよい。
【０１７７】
抗体／断片／ＣＡＲを含む／発現する細胞
本発明はまた、本発明記載の抗体、抗原結合性断片またはＣＡＲを含むかまたは発現する細胞も提供する。本発明記載の核酸またはベクターを含むかまたは発現する細胞もまた提供する。
【０１７８】
細胞は、真核細胞、例えば哺乳動物細胞であってもよい。哺乳動物は、ヒト、または非ヒト哺乳動物（例えばウサギ、モルモット、ラット、マウスまたは他の齧歯類（齧歯類目（ｏｒｄｅｒ  Ｒｏｄｅｎｔｉａ）の任意の動物を含む）、ネコ、イヌ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ（雌牛、例えば乳牛、またはウシ目（ｏｒｄｅｒ  Ｂｏｓ）の任意の動物を含む）、ウマ（ウマ目（ｏｒｄｅｒ  Ｅｑｕｉｄａｅ）の任意の動物を含む）、ロバ、および非ヒト霊長類）であってもよい。
【０１７９】
いくつかの態様において、細胞は、ヒト被験体由来であってもよいし、またはヒト被験体から得られていてもよい。
細胞は免疫細胞であってもよい。細胞は、造血起源の細胞、例えば好中球、好酸球、好塩基球、樹状細胞、リンパ球、または単球であってもよい。リンパ球は、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞または自然リンパ球（ＩＬＣ）、あるいはその前駆体であってもよい。細胞は、例えばＣＤ３ポリペプチド（例えばＣＤ３γ  ＣＤ３ε  ＣＤ３ζまたはＣＤ３δ）、ＴＣＲポリペプチド（ＴＣＲαまたはＴＣＲβ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４またはＣＤ８を発現してもよい。いくつかの態様において、細胞はＴ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はＣＤ３＋  Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はＣＤ３＋、ＣＤ８＋  Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞は細胞傷害性Ｔ細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ））である。
【０１８０】
細胞が本発明記載のＣＡＲを含むＴ細胞である場合、細胞は、ＣＡＲ−Ｔ細胞と称されてもよい。
いくつかの態様において、細胞は抗原特異的Ｔ細胞である。本明細書のいくつかの態様において、「抗原特異的」Ｔ細胞は、Ｔ細胞が特異的である抗原または前記抗原を発現する細胞に反応してＴ細胞の特定の機能特性を示す細胞である。いくつかの態様において、特性は、エフェクターＴ細胞、例えば細胞傷害性Ｔ細胞と関連する機能特性である。いくつかの態様において、抗原特異的Ｔ細胞は、以下の特性の１またはそれより多くを示してもよい：例えばＴ細胞が特異的である抗原を含む／発現する細胞に対する、細胞傷害性；例えばＴ細胞が特異的である抗原またはＴ細胞が特異的である抗原を含む／発現する細胞に反応した、増殖、ＩＦＮγ発現、ＣＤ１０７ａ発現、ＩＬ−２発現、ＴＮＦα発現、パーフォリン発現、グランザイム発現、グラニュリシン発現、および／またはＦＡＳリガンド（ＦＡＳＬ）発現。いくつかの態様において、Ｔ細胞が特異的である抗原は、ウイルス、例えばエプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）またはヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）のペプチドまたはポリペプチドであってもよい。
【０１８１】
本発明はまた、本発明記載の核酸またはベクターを含む細胞を産生するための方法であって、本発明記載の核酸またはベクターを細胞内に導入する工程を含む、前記方法も提供する。本発明はまた、本発明記載の抗体、抗原結合性断片またはＣＡＲを発現する細胞を産生するための方法であって、本発明記載の核酸またはベクターを細胞に導入する工程を含む、前記方法も提供する。いくつかの態様において、方法は、細胞による核酸またはベクターの発現に適した条件下で、細胞を培養する工程をさらに含む。いくつかの態様において、方法をｉｎ  ｖｉｔｒｏで行う。
【０１８２】
いくつかの態様において、本発明記載の単離核酸またはベクターの細胞内への導入は、形質導入、例えばレトロウイルス形質導入を含む。したがって、いくつかの態様において、単離核酸またはベクターは、ウイルスベクターに含まれるか、またはベクターはウイルスベクターである。いくつかの態様において、方法は、本発明記載の核酸またはベクターを、エレクトロポレーションによって、例えば本明細書にその全体が援用される、Ｋｏｈら，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  −  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  （２０１３）  ２，  ｅ１１４に記載されるように、導入する工程を含む。
【０１８３】
本発明はまた、本発明記載の細胞を産生するための方法によって得られるかまたは得られうる細胞も提供する。
検出法
本明細書記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞を、ＬＡＧ−３に対する抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞の結合を伴う方法で用いてもよい。こうした方法は、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞およびＬＡＧ−３の結合した複合体の検出を伴ってもよい。こうしたものとして、１つの態様において、ＬＡＧ−３を含有するかまたは含有すると推測される試料を、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞と接触させ、そして抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲまたは細胞およびＬＡＧ−３の複合体の形成を検出する工程を含む方法を提供する。
【０１８４】
サンドイッチアッセイ、例えばＥＬＩＳＡなどのイムノアッセイを含む適切な方法形式は、当該技術分野に周知である。該方法は、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲもしくは細胞、またはＬＡＧ−３、あるいは両方を、検出可能標識、例えば蛍光、発光または放射標識で標識することを伴ってもよい。ＬＡＧ−３発現は、例えば生検によって得られた組織試料の、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって測定してもよい。
【０１８５】
この種の方法は、ＬＡＧ−３またはＭＨＣクラスＩＩの検出およびまたは定量化を必要とする疾患または状態の診断法の基礎を提供しうる。こうした方法を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、患者試料に対して、または患者試料のプロセシング後に行ってもよい。試料をひとたび収集したら、診断のｉｎ  ｖｉｔｒｏ法が実行されるために、患者が居合わせる必要はなく、そしてしたがって、方法は、ヒトまたは動物の身体に対して行わないものであってもよい。
【０１８６】
こうした方法は、患者試料に存在するＬＡＧ−３の量を決定することを伴ってもよい。該方法は、診断に到達するプロセスの一部として、標準または参照値に対して、決定した量を比較する工程をさらに含んでもよい。他の診断試験を、本明細書に記載するものと組み合わせて用いて、診断または予後診断の正確さを増進するか、あるいは本明細書に記載する試験を用いることによって得られる結果を確認してもよい。
【０１８７】
癌細胞は、ＬＡＧ−３の発現を上方制御して、腫瘍微小環境に浸潤するいかなるＴ細胞上の阻害性ＬＡＧ−３受容体の活性化も可能にし、そしてそれによってその活性を抑制することによって、免疫抑制環境を生成するために、ＬＡＧ−３経路を利用しうる。ＬＡＧ−３発現の上方制御は、多くの異なる癌タイプにおいて立証されてきており、そして高いＬＡＧ−３発現はまた、劣った臨床転帰に関連付けられてきている。
【０１８８】
患者試料に存在するＬＡＧ−３またはＭＨＣクラスＩＩのレベルは、患者が抗ＬＡＧ−３抗体での治療に反応しうることを示しうる。試料中の高レベルのＬＡＧ−３またはＭＨＣクラスＩＩの存在を用いて、抗ＬＡＧ−３抗体での治療のために患者を選択してもよい。したがって、本発明の抗体を用いて、抗ＬＡＧ−３療法を用いた治療のための患者を選択してもよい。
【０１８９】
ＬＡＧ−３の試料における検出を、患者におけるＴ細胞機能不全障害または癌性状態の診断、癌性状態に対する素因の診断の目的のために、あるいは癌性状態の予後を提供する（予言する）ために、用いてもよい。診断または予後は、存在する（以前診断された）良性または悪性であってもよい癌性状態に関連してよく、推測される癌性状態に関連してもよく、あるいは患者における癌性状態（以前未診断であってもよい）に関してスクリーニングすることに関連してもよい。
【０１９０】
１つの態様において、Ｔ細胞消耗の度合いおよび疾患状態の重症度を示すために、ＣＤ８＋  Ｔ細胞上のＬＡＧ−３発現レベルを検出してもよい。
１つの態様において、疾患状態、例えば感染、組織炎症または癌の存在または重症度を示すために、例えば抗原提示細胞または腫瘍細胞上の、ＭＨＣクラスＩＩ発現のレベルを検出してもよい。
【０１９１】
任意の組織または体液から試料を採取してもよい。試料は：ある量の血液；フィブリン塊および血球を除去した後に得られる、血液の液体部分を含んでもよい、個体の血液由来のある量の血清；組織試料または生検；あるいは前記個体から単離された細胞を含んでもよいし、またはこれらに由来してもよい。
【０１９２】
本発明記載の方法は、好ましくはｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる。用語「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」は、培養中の細胞を用いた実験を含むよう意図され、一方、用語「ｉｎ  ｖｉｖｏ」は、損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）多細胞生物を用いた実験を含むよう意図される。
【０１９３】
療法適用
本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞およびポリペプチド、ならびにこうした剤を含む組成物を、医学的治療の方法において使用するために提供してもよい。治療を、治療を必要とする疾患または状態を有する被験体に提供してもよい。疾患または状態は、癌に関連するＴ細胞機能不全障害、または癌、または感染と関連するＴ細胞機能障害、または感染を含む、Ｔ細胞機能不全障害の１つであってもよい。
【０１９４】
Ｔ細胞機能不全障害は、正常Ｔ細胞機能が損なわれて、例えば外因性病原体、例えば微生物、細菌およびウイルスによる感染によって生じる、あるいはある型の癌におけるもの（例えば腫瘍関連抗原の型）などのある疾患状態にある宿主によって生成される、病原性抗原に対する被験体の免疫反応の下方制御を引き起こす疾患または状態であってもよい。
【０１９５】
Ｔ細胞機能不全障害は、Ｔ細胞消耗またはＴ細胞アネルギーを含んでもよい。Ｔ細胞消耗は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞が、増殖できないか、または抗原刺激に反応してＴ細胞エフェクター機能、例えば細胞傷害性およびサイトカイン（例えばＩＦＮγ）分泌を発揮できない状態を含む。消耗Ｔ細胞はまた、ＬＡＧ−３の持続発現によって特徴付けられることも可能であり、この場合、ＬＡＧ−３：ＭＨＣクラスＩＩ相互作用のブロッキングはＴ細胞消耗を逆転させ、そして抗原特異的Ｔ細胞反応を回復させることも可能である。
【０１９６】
Ｔ細胞機能不全障害は、感染として、または感染に対する有効な免疫反応を開始することが出来ない状態として現れうる。感染は、慢性、持続性、不顕性または緩慢であってもよく、そして細菌、ウイルス、真菌または寄生虫感染の結果であってもよい。こうしたものとして、細菌、ウイルスまたは真菌感染を有する患者に、治療を提供してもよい。細菌感染の例には、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）での感染が含まれる。ウイルス感染の例には、ＨＩＶ、Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎での感染が含まれる。
【０１９７】
Ｔ細胞機能不全障害は、癌、例えば腫瘍免疫エスケープと関連してもよい。多くのヒト腫瘍は、Ｔ細胞によって認識され、そして免疫反応を誘導可能な腫瘍関連抗原を発現する。Ｗｏｏら  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  （２０１２）  ７２（４）：  ９１７−９２７は、マウスにおいて、腫瘍免疫エスケープを促進するためのＬＡＧ−３およびＰＤ−１の相乗作用によるＴ細胞機能の制御を記載する。ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩの相互作用のブロッキングは、腫瘍細胞に対するこの負の免疫制御シグナルを阻害し、そして腫瘍特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞免疫を増進させることも可能である。
【０１９８】
Ｔ細胞機能不全障害、例えばＴ細胞消耗の徴候がない場合もまた、癌を治療可能であるが、本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドの使用は、被験体がＬＡＧ−３シグナル伝達を抑制し、そして限定された障害、回避または腫瘍免疫エスケープの誘導を伴って、有効な免疫反応を開始することを可能にする。こうした治療において、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドは、腫瘍免疫エスケープの発展の防止を伴う、癌の治療を提供しうる。
【０１９９】
ＬＡＧ−３を過剰発現する癌もまた、治療可能である。例えば、ＬＡＧ−３を過剰発現するこうした腫瘍細胞を、抗体依存性細胞仲介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）による、または抗ＬＡＧ−３抗体−薬剤コンジュゲートを用いる、抗ＬＡＧ−３抗体での治療によって、直接殺してもよい。
【０２００】
治療は、Ｔ細胞機能不全障害の防止、例えば感染の防止、あるいは癌の発展または進行の防止を目的としてもよい。こうしたものとして、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞およびポリペプチドを用いて、薬学的組成物または薬剤を配合して、そして被験体を疾患状態の発展に対して予防的に治療してもよい。これは、疾患状態の症状の開始前に行ってもよく、そして／または感染または癌発展のリスクがより高いと見なされる被験体に対して行ってもよい。
【０２０１】
治療は、ワクチン、例えばＴ細胞ワクチンとの併用療法を含んでもよく、これは、同時、別個または連続療法を伴ってもよいし、あるいは単一組成物中のワクチンおよび抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドの組み合わせ投与であってもよい。この背景において、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを、ワクチンに対するアジュバントとして提供してもよい。消耗Ｔ細胞の限定された増殖能は、Ｔ細胞免疫療法の失敗の主な理由とされてきており、そしてＴ細胞消耗をブロッキングするかまたは逆転させることが可能な剤の組み合わせは、Ｔ細胞免疫療法の有効性を改善するための潜在的な戦略である（Ｂａｒｂｅｒら，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｖｏｌ  ４３９，  Ｎｏ．９  ｐ６８２−６８７  Ｆｅｂ  ２００６）。
【０２０２】
抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドの投与は、好ましくは、「療法的有効量」であり、これは、個体に利益を示すために十分な量である。投与する実際の量、ならびに投与速度および時間経過は、治療する疾患の性質および重症度に応じるであろう。治療の処方、例えば投薬量の決定等は、開業医および他の医師の責任の範囲内であり、そして典型的には、治療しようとする障害、個々の患者の状態、送達部位、投与法、および医師に知られる他の要因が考慮されるであろう。上述の技術およびプロトコルの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  第２０版，  ２０００，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ刊行に見出されうる。
【０２０３】
薬学的に有用な組成物および薬剤の配合
本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞およびポリペプチドは、臨床的使用のための薬学的組成物として配合してもよく、そして薬学的に許容されうるキャリアー、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含んでもよい。
【０２０４】
本発明にしたがって、薬学的に有用な組成物の産生のためにも方法を提供し、こうした産生法は：本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを単離し；そして／または本明細書に記載するような単離抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合する工程より選択される１またはそれより多い工程を含んでもよい。
【０２０５】
例えば、本発明のさらなる側面は、Ｔ細胞機能不全障害の治療において使用するための薬剤または薬学的組成物を配合するかまたは産生する方法であって、本明細書に記載するような抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合することによって、薬学的組成物または薬剤を配合する工程を含む、前記方法に関する。
【０２０６】
感染
感染は、いかなる感染または感染性疾患、例えば細菌、ウイルス、真菌、または寄生虫感染であってもよい。いくつかの態様において、慢性／持続性感染、例えばこうした感染がＴ細胞機能不全またはＴ細胞消耗に関連する場合の感染を治療することが特に望ましい可能性もある。
【０２０７】
Ｔ細胞消耗が、多くの慢性感染（ウイルス、細菌および寄生虫感染を含む）中に、ならびに癌において（Ｗｈｅｒｒｙ    Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．  １２，  Ｎｏ．６，  ｐ４９２−４９９，  ２０１１年６月）生じるＴ細胞機能不全状態であることがよく確立されている。
【０２０８】
感染または感染性疾患は、ＬＡＧ−３が上方制御されるものであってもよい。
治療可能な細菌感染の例には、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）種、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｌｏｅｒａｅ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）種、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、エルシニア属（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、エルウィナ属（Ｅｒｗｉｎａ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、リステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）種、ヘリコバクター・ピロリ、ミコバクテリア（例えば結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））および緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）が含まれる。例えば、細菌感染は、敗血症または結核であってもよい。
【０２０９】
Ｐｈｉｌｌｉｐｓら  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  （２０１５）  １８５（３）：８２０−８３３は、肺における、および特に、結核菌に実験的に感染させたアカゲザルの肉芽腫様病変における、ＬＡＧ−３発現の上方制御を記載する。
【０２１０】
治療可能なウイルス感染の例には、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、単純ヘルペスウイルスおよびヒトパピローマウイルスが含まれる。
【０２１１】
慢性ウイルス感染、例えばＬＣＭＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、およびＨＩＶによって引き起こされるものは、一般的に、免疫クリアランスを逃れる機構を伴う。ＬＡＧ−３は、マウスにおいて、ＬＣＭＶ感染後に高発現される（Ｂｌａｃｋｂｕｒｎら  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２００９）  １０：２９−３７）。Ｃｈｅｎら，  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ  （２０１５）  ３０（１２）：１７８８−１７９５は、慢性Ｃ型肝炎患者において、ブロッキング抗ＬＡＧ−３抗体での治療によって逆転可能である、Ｃ型肝炎ウイルス特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞機能の負の制御を記載する。Ｌｉら，  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  （２０１３）  １５０  （１−２）：  １１６−１２２は、ＬＡＧ−３発現およびＨＢＶ特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞機能不全の間の正の相関を記載し、そしてＨＣＣにおけるＨＢＶ特異的細胞仲介性免疫の抑制におけるＬＡＧ−３の役割を示唆する。Ｔｉａｎら  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１５  １９４（８）：３８７３−３７８２は、ＨＩＶ感染患者における、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞上の上方制御されたＬＡＧ−３発現、ならびに疾患進行の間の関連を記載する。
【０２１２】
治療可能な真菌感染の例には、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）種、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）種およびヒストプラズマ属（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）種による感染が含まれる。真菌感染は真菌敗血症またはヒストプラズマ症であってもよい。真菌感染を仲介する際のＴ細胞消耗の重要性は、例えばＣｈａｎｇら  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  （２０１３）  １７：Ｒ８５、およびＬａｚａｒ−Ｍｏｌｎａｒら  ＰＮＡＳ  （２００８）  １０５（７）：  ２６５８−２６６３によって確立されてきている。
【０２１３】
治療可能な寄生虫感染の例には、プラスモジウム属種（例えば熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、ネズミマラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｙｏｅｌｉ）、卵形マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ）、三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、またはプラスモジウム・シャバウディ・シャバウディ（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｃｈａｂａｕｄｉ  ｃｈａｂａｕｄｉ））による感染が含まれる。寄生虫感染は、例えばマラリア、リーシュマニア症およびトキソプラズマ症などの疾患であってもよい。
【０２１４】
抗ＰＤ−Ｌ１および抗ＬＡＧ−３モノクローナル抗体を用いてｉｎ  ｖｉｖｏでＰＤ−Ｌ１およびＬＡＧ−３を遮断すると、マウスにおいて、ＣＤ４＋  Ｔ細胞機能の回復、いくつかの濾胞ヘルパーＴ細胞、胚中心Ｂ細胞および形質芽細胞の増幅、防御抗体の増進および血液段階マラリアの迅速な一掃に寄与した。これはまた、慢性感染の発展もブロッキングすることも示された（Ｂｕｔｌｅｒら，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．１３，  Ｎｏ．１２，  ｐ  １８８−１９５  ２０１２年２月）。
【０２１５】
癌
癌は、任意の望ましくない細胞増殖（または望ましくない細胞増殖によって現れる任意の疾患）、新生物または腫瘍、あるいは望ましくない細胞増殖、新生物または腫瘍に対するリスクまたは素因の増加であってもよい。癌は、良性または悪性であってもよく、そして原発性または続発性（転移性）であってもよい。新生物または腫瘍は、細胞の任意の異常な成長または増殖であってもよく、そして任意の組織に位置していてもよい。組織の例には、副腎、副腎髄質、肛門、虫垂、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、盲腸、中枢神経系（脳を含むまたは除く）、小脳、子宮頸部、結腸、十二指腸、子宮内膜、上皮細胞（例えば腎上皮）、胆嚢、食道、グリア細胞、心臓、回腸、空腸、腎臓、涙腺、喉頭、肝臓、肺、リンパ、リンパ節、リンパ芽球、上顎骨、縦隔、腸間膜、子宮筋、上咽頭、網（ｏｍｅｎｔｕｍｅ）、口腔、卵巣、膵臓、耳下腺、末梢神経系、腹膜、胸膜、前立腺、唾液腺、Ｓ状結腸、皮膚、小腸、柔組織、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、舌、扁桃腺、気管、子宮、外陰部、白血球が含まれる。
【０２１６】
治療されうる腫瘍は、神経系または非神経系腫瘍であってもよい。神経系腫瘍は、中枢または末梢神経系のいずれから生じてもよく、例えば神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫、神経線維腫、上衣腫、シュワン腫、神経線維肉腫、星状細胞腫および乏突起神経膠腫であってもよい。非神経系癌／腫瘍は、任意の他の非神経組織で生じてもよく、例には、黒色腫、中皮腫、リンパ腫、骨髄腫、白血病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、肝細胞腫、類表皮癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌、膵臓癌、胸腺癌、ＮＳＣＬＣ、血液学的癌および肉腫が含まれる。
【０２１７】
養子Ｔ細胞移入療法
本発明の態様において、治療法または予防法は、免疫細胞の養子細胞移入を含んでもよい。養子Ｔ細胞移入療法は、一般的に、典型的には血液試料を抜き取ることによって、白血球を被験体から除去し、そこから白血球を分離し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで拡大し、そして同じ被験体または異なる被験体のいずれかに戻すプロセスを指す。治療は、典型的には、被験体において必要とされるＴ細胞集団の活性型の量／濃度を増加させることを目的とする。こうした治療は、Ｔ細胞消耗を経験している被験体において有益でありうる。
【０２１８】
Ｔ細胞消耗機構をブロッキングするかまたは逆転させることが可能な抗体は、Ｔ細胞活性を増進させ、そしてＴ細胞拡大を促進する手段を提供する。
免疫チェックポイント受容体（例えばＬＡＧ−３）に対して向けられる抗体もまた、例えば特定の関心対象のＴ細胞集団の拡大のための、Ｔ細胞拡大法において有用でありうる。例えば、抗体は、（例えば望ましくない特性を有するＴ細胞サブセットよりも）望ましい特性を有するＴ細胞サブセットを優先的に拡大するための、Ｔ細胞拡大法において有用でありうる。
【０２１９】
したがって、本発明のさらなる側面において、Ｔ細胞を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで、本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドと接触させる、Ｔ細胞集団を拡大するための方法を提供する。
【０２２０】
該方法は、任意に、以下の工程：被験体から血液試料を採取する工程；血液試料からＴ細胞を単離する工程；ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ細胞培養中でＴ細胞を培養し（ここで該細胞を抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドと接触させてもよい）、Ｔ細胞の拡大集団を収集する工程；Ｔ細胞をアジュバント、希釈剤、またはキャリアーと混合する工程；拡大Ｔ細胞を被験体に投与する工程の１またはそれより多くを含んでもよい。
【０２２１】
したがって、本発明のいくつかの側面において、Ｔ細胞機能不全障害を有する被験体の治療法であって、治療が必要な被験体から血液試料を得て、Ｔ細胞集団が拡大されるように、本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドの存在下で、血液試料から得たＴ細胞を培養し、拡大されたＴ細胞を収集し、そして拡大されたＴ細胞を、治療が必要な被験体に投与する工程を含む、前記治療法を提供する。
【０２２２】
治療が必要な被験体からＴ細胞を得てもよく、そして単離し、そして／または精製してもよい。これらはＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞集団であってもよい。Ｔ細胞は、Ｔ細胞消耗を経験している集団に相当してもよく、そして任意にＬＡＧ−３の上方制御された発現を有してもよい。
【０２２３】
培養中、Ｔ細胞が望ましい細胞数に拡大することを可能にする条件下で、そしてそれに適した期間、Ｔ細胞を、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドと接触させてもよい。適切な期間の後、Ｔ細胞を採取し、任意に濃縮してもよく、そして適切なキャリアー、アジュバントまたは希釈剤と混合し、そして被験体の体内に戻してもよい。被験体は、こうした療法の１またはそれより多い周期を経てもよい。
【０２２４】
Ｔ細胞拡大法は、当該技術分野に周知であり、例えばＫａｌａｍａｓｚら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２００４  Ｓｅｐ−Ｏｃｔ；  ２７（５）：４０５−１８；  Ｍｏｎｔｅｓら，  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５  Ｎｏｖ；１４２（２）：２９２−３０２；  ＷｏｅｌｆｌおよびＧｒｅｅｎｂｕｒｇ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ９  ｐ９５０−９６６  ２７  Ｍａｒｃｈ  ２０１４；  ＴｒｉｃｋｅｔｔおよびＫｗａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｖｏｌ．  ２７５，  Ｉｓｓｕｅｓ  １−２，  １  Ａｐｒｉｌ  ２００３，  ｐ２５１−２５５；  Ｂｕｔｌｅｒら  ＰＬｏＳＯＮＥ  ７（１）  １２  Ｊａｎ  ２０１２に記載されるものがある。
【０２２５】
例えば、Ｔ細胞拡大の方法は、Ｔ細胞を刺激する工程を含んでもよい。刺激は、例えば抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８での処理による、非特異的刺激を含んでもよい。Ｔ細胞の刺激は、例えば抗原（例えばＭＨＣと複合体を形成した、例えば抗原提示細胞によって発現される）での処理による、特異的刺激を含んでもよい。Ｔ細胞拡大の方法は、Ｔ細胞増殖／拡大を促進するための１またはそれより多い因子の存在下での培養を含んでもよい。例えば、Ｔ細胞拡大の方法は、ＩＬ−２の存在下での培養を含んでもよい。
【０２２６】
本発明において、養子細胞移入（ＡＣＴ）は、被験体内に細胞または細胞集団を導入し、そして／または被験体における細胞または細胞集団の頻度を増加させることを目的として行ってもよい。
【０２２７】
Ｔ細胞の養子移入は、例えば、本明細書にその全体が援用される、ＫａｌｏｓおよびＪｕｎｅ  ２０１３，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３９（１）：  ４９−６０において記載される。ＮＫ細胞の養子移入は、例えば、本明細書にその全体が援用される、Ｄａｖｉｓら  ２０１５，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．  ２１（６）：  ４８６−４９１に記載される。
【０２２８】
細胞は、好中球、好酸球、好塩基球、樹状細胞、リンパ球、または単球であってもよい。リンパ球は、例えばＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞または自然リンパ球（ＩＬＣ）、あるいはその前駆体であってもよい。いくつかの態様において、細胞はＴ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はＣＤ３＋  Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はＣＤ３＋、ＣＤ８＋  Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞は細胞傷害性Ｔ細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ））である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はウイルス特異的Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞は、ＥＢＶ、ＨＰＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶまたはＨＩＶに特異的である。
【０２２９】
本発明は、被験体において、疾患または状態を治療するかまたは提示する方法であって、被験体から得た少なくとも１つの細胞が、本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、核酸またはベクターを発現するかまたは含むように修飾し、任意に、修飾した少なくとも１つの細胞を拡大し、そして修飾した少なくとも１つの細胞を被験体に投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【０２３０】
いくつかの態様において、方法は：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）少なくとも１つの細胞が、本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、核酸またはベクターを発現するかまたは含むように修飾し、
（ｃ）任意に、修飾した少なくとも１つの細胞を拡大し、そして；
（ｄ）修飾した少なくとも１つの細胞を被験体に投与する
工程を含む。
【０２３１】
いくつかの態様において、細胞を単離した被験体は、修飾細胞を投与する被験体である（すなわち養子移入は自己細胞のものである）。いくつかの態様において、細胞を単離した被験体は、修飾した細胞を投与する被験体とは異なる被験体である（すなわち養子移入は同種細胞のものである）。
【０２３２】
本発明記載の修飾した少なくとも１つの細胞は、当業者に周知の方法にしたがって修飾してもよい。修飾は、トランスファーされる核酸の永続的または一過性発現のための核酸トランスファーを含んでもよい。
【０２３３】
いくつかの態様において、細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、あるいはＣＡＲをコードする核酸またはベクターを含むかまたは発現するようにさらに修飾されてもよい。
任意の適切な遺伝子操作プラットホームを用いて、本発明記載の細胞を修飾してもよい。細胞を修飾するための適切な方法には、例えば、本明細書で上記に援用される、Ｍａｕｓら，  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２０１４）  ３２：１８９−２２５に記載されるような遺伝子操作プラットホーム、例えばガンマレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ＤＮＡトランスフェクション、トランスポゾンに基づく遺伝子送達およびＲＮＡトランスフェクションの使用が含まれる。
【０２３４】
いくつかの態様において、方法は、以下の工程の１またはそれより多くを含んでもよい：被験体から血液試料を採取する；血液試料から少なくとも１つの細胞を単離および／または拡大する；ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ細胞培養において、少なくとも１つの細胞を培養する；少なくとも１つの細胞内に、本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、核酸、またはベクターを導入し、それによって少なくとも１つの細胞を修飾する；修飾した少なくとも１つの細胞を拡大する；修飾した少なくとも１つの細胞を収集する；修飾細胞を、アジュバント、希釈剤、またはキャリアーと混合する；修飾細胞を被験体に投与する。
【０２３５】
いくつかの態様において、方法は、細胞を処理して、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、核酸、またはベクターの発現を誘導／増進させる工程をさらに含んでもよい。例えば、核酸／ベクターは、特定の剤での処理に反応した、核酸／ベクターからの、抗体、抗原結合性断片またはＣＡＲの発現の誘導性上方制御のための制御要素を含んでもよい。いくつかの態様において、処理は、本発明記載の修飾細胞を投与されている被験体への、剤の投与によって、ｉｎ  ｖｉｖｏであってもよい。いくつかの態様において、処理は、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏの培養中の細胞への剤の投与によって、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏであってもよい。
【０２３６】
当業者は、本発明記載の細胞の養子移入のための適切な試薬および方法を決定することが可能であり、例えば本明細書にその全体が援用される、Ｄａｉら，  ２０１６  Ｊ  Ｎａｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ  １０８（７）：  ｄｊｖ４３９を参照されたい。
【０２３７】
関連する側面において、本発明は、修飾細胞を調製する方法、細胞内に、本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、核酸またはベクターを導入し、それによって少なくとも１つの細胞を修飾する工程を含む方法を提供する。方法は、好ましくは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで行われる。
【０２３８】
１つの側面において、本発明は、被験体において、疾患または状態を治療するかまたは防止する方法であって：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）少なくとも１つの細胞内に、本発明記載の核酸またはベクターを導入し、それによって少なくとも１つの細胞を修飾し；そして
（ｃ）被験体に、修飾した少なくとも１つの細胞を投与する
工程を含む、前記方法を提供する。
【０２３９】
いくつかの態様において、細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸またはベクターを導入するようにさらに修飾されてもよい。
いくつかの態様において、方法は、例えば癌の治療または防止のため、療法的または予防的介入をさらに含む。いくつかの態様において、療法的または予防的介入は、化学療法、免疫療法、放射療法、手術、ワクチン接種および／またはホルモン療法より選択される。
【０２４０】
同時または連続投与
治療しようとする状態に応じて、組成物を単独で、あるいは他の治療と組み合わせて、同時にまたは連続してのいずれかで投与してもよい。
【０２４１】
本明細書において、本発明の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチド、および抗感染剤または化学療法剤（療法剤）を同時にまたは連続して投与してもよい。
いくつかの態様において、本発明の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドでの治療には、化学療法が付随してもよい。
【０２４２】
同時投与は、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドおよび療法剤の一緒の投与、例えば両方の剤を含有する薬学的組成物（組み合わせ調製物）、あるいは互いの直後の、そして任意に同じ投与経路を通じた、例えば同じ動脈、静脈または他の血管への投与を指す。
【０２４３】
連続投与は、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドあるいは療法剤の１つの投与に続く、所定の時間間隔後の他の剤の別個の投与を指す。２つの剤が同じ経路で投与される必要はないが、いくつかの態様ではこれに当てはまる。時間間隔は、任意の時間間隔であってもよい。
【０２４４】
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路およびＬＡＧ−３遮断の組み合わせた阻害が、抗腫瘍有効性を提供することが示されてきている（Ｊｉｎｇら  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  ＩｍｍｕｎｏＴｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  （２０１５）  ３：２；また、ＮｇｕｙｅｎおよびＯｈａｓｈｉ，  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２０１５）  １５：４５−５６）。したがって、１つの側面において、本発明は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路の阻害剤との組み合わせ療法において使用するための、本発明記載の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを提供する。
【０２４５】
いくつかの態様において、本発明は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路の阻害剤を用いた組み合わせ療法を提供する。いくつかの態様において、阻害剤は、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１の間の相互作用によって仲介されるシグナル伝達を阻害または防止することが可能な剤である。いくつかの態様において、阻害剤は、ＰＤ−１および／またはＰＤ−Ｌ１の遺伝子またはタンパク質発現を下方制御することが可能な剤である。いくつかの態様において、阻害剤は、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１の間の結合を阻害または防止することが可能な剤である。いくつかの態様において、剤は抗体である。いくつかの態様において、剤はＰＤ−１への結合が可能な抗体である。いくつかの態様において、剤は、ＰＤ−Ｌ１への結合が可能な抗体である。抗体は、アンタゴニスト抗体、またはブロッキング抗体であってもよい。ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路の阻害剤は、当業者に周知であり、そしてこれには、例えば、ニボルマブ、ピジリズマブ、ＢＭＳ９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８оＡ、ペムブロリズマブ、およびアベルマブが含まれる。本発明にしたがった使用が意図されるＰＤ−１／ＰＤＬ−１阻害剤には、本明細書にその全体が援用される、ＳｕｎｓｈｉｎｅおよびＴａｕｂｅ  「ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤」，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２０１５，  ２３：３２−３８に記載されるものが含まれる。
【０２４６】
抗感染剤
感染治療において、本発明の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを、上述のように、抗感染剤と組み合わせて投与してもよい。抗感染剤は、感染の原因となる微生物またはウイルスに対する作用を有することが知られる剤であってもよい。
【０２４７】
適切な抗感染剤には、抗生物質（例えばペニシリン、セファロスポリン、リファマイシン、リピアルマイシン、キノロン、スルホンアミド、マクロライド、リンコサミド、テトラサイクリン、環状リポペプチド、グリシルサイクリン、オキサゾリジノン、およびリピアルマイシン）、抗ウイルス剤（例えば逆転写酵素阻害剤、インテグラーゼ阻害剤、転写因子阻害剤、アンチセンスおよびｓｉＲＮＡ剤およびプロテアーゼ阻害剤）、抗真菌剤（例えばポリエン、イミジアゾール、トリアゾール、チアゾール、アリルアミン、およびエキノキャンディン）、および抗寄生虫剤（例えば抗線虫剤、抗条虫剤、抗吸虫剤、抗アメーバ剤および抗原生動物剤）が含まれる。
【０２４８】
化学療法
化学療法は、薬剤または電離放射線（例えばＸ線またはγ線を用いた放射療法）での癌の治療を指す。好ましい態様において、化学療法は、薬剤での治療を指す。薬剤は、化学実体、例えば小分子薬剤、抗生物質、ＤＮＡ挿入剤、タンパク質阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）、あるいは生物学的剤、例えば抗体、抗体断片、核酸またはペプチドアプタマー、核酸（例えばＤＮＡ、ＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質であってもよい。薬剤を、薬学的組成物または薬剤として配合してもよい。配合物は、１またはそれより多い薬剤（例えば１またはそれより多い活性剤）を、１またはそれより多い薬学的に許容されうる希釈剤、賦形剤またはキャリアーと一緒に含んでもよい。
【０２４９】
治療は、１より多い薬剤の投与を伴ってもよい。治療しようとする状態に応じて、薬剤は、単独で、あるいは他の治療と組み合わせて、同時にまたは連続してのいずれかで投与されてもよい。例えば、化学療法は、２つの薬剤の投与を伴う併用療法であってもよく、これらの１つまたはそれより多くが、癌を治療するよう意図されてもよい。
【０２５０】
化学療法は、１またはそれより多い投与経路、例えば非経口、静脈内注射、経口、皮下、皮内または腫瘍内経路によって投与されてもよい。
化学療法は治療措置にしたがって投与されてもよい。治療措置は、医者または医師によって準備されてもよく、そして治療を必要とする患者に合わせてあつらえてもよい、化学療法投与のあらかじめ決定されたタイムテーブル、計画、スキームまたはスケジュールであってもよい。
【０２５１】
治療措置は：患者に投与する化学療法のタイプ；各薬剤または放射線の用量；投与間の時間間隔；各治療の長さ；あるとすれば任意の治療休止日の数および性質等の１またはそれより多くを指してもよい。併用療法に関して、各薬剤をどのように投与するかを示す単一の治療措置を提供してもよい。
【０２５２】
化学療法薬剤および生物製剤は以下から選択してもよい：アルキル化剤、例えばシスプラチン、カルボプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、イホスファミド；プリンまたはピリミジン代謝拮抗剤、例えばアザチオプリンまたはメルカプトプリン；アルカロイドおよびテルペノイド、例えばビンカアルカロイド（例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン）、ポドフィロトキシン、エトポシド、テニポシド、タキサン、例えばパクリタキセル（タキソールＴＭ）、ドセタキセル；トポイソメラーゼ阻害剤、例えばＩ型トポイソメラーゼ阻害剤、カンプトテシン、イリノテカンおよびトポテカン、またはＩＩ型トポイソメラーゼ阻害剤、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、テニポシド；抗腫瘍抗生物質（例えばアントラサイクリン抗生物質）、例えばダクチノマイシン、ドキソルビシン（アドリアマイシンＴＭ）、エピルビシン、ブレオマイシン、ラパマイシン；抗体に基づく剤、例えば抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＣＴＬＡ−４、抗４−１ＢＢ、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ２７、抗ＢＬＴＡ、抗ＯＸ４３、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ−２、抗ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ、抗ＣＤ−５２、抗ＣＤ２０、抗ＲＳＶ、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ｅｒｂＢ２）、抗ＴＮＦ受容体、抗ＥＧＦＲ抗体、モノクローナル抗体または抗体断片、例には：セツキシマブ、パニツムマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、アブシキシマブ、ダクリズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リツキシマブ（マブテラ（登録商標））、パリビズマブ、トラスツズマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ニモツズマブが含まれる；ＥＧＦＲ阻害剤、例えばエルロチニブ、セツキシマブおよびゲフィチニブ；抗血管新生剤、例えばベバシズマブ（アバスチン（登録商標））；抗癌ワクチン、例えばシプルーセル−Ｔ（プロベンジ（登録商標））。
【０２５３】
１つの態様において、化学療法剤は、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＣＴＬＡ−４、抗４１ＢＢ、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ２７、抗ＢＬＴＡ、抗ＯＸ４３、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ２、抗ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ、抗ＣＤ−５２、抗ＣＤ２０、抗ＲＳＶ、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ｅｒｂＢ２）、抗ＴＮＦ受容体、抗ＥＧＦＲまたは他の抗体である。いくつかの態様において、化学療法剤は、免疫チェックポイント阻害剤または共刺激分子である。
【０２５４】
さらなる化学療法薬剤は:１３−シス−レチノイン酸、２−クロロデオキシアデノシン、５−アザシチジン５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アブラキサン、アキュタン（登録商標）、アクチノマイシン−Ｄ、アドリアマイシン（登録商標）、アドルシル（登録商標）、アフィニトール（登録商標）、アグリリン（登録商標）、Ａｌａ−コート（登録商標）、アルデスロイキン、アレムツズマブ、ＡＬＩＭＴＡ、アリトレチノイン、アルカバン−ＡＱ（登録商標）、アルケラン（登録商標）、オールトランスレチノイン酸、アルファインターフェロン、アルトレタミン、アメトプテリン、アミフォスチン、アミノグルテチミド、アナグレリド、アナンドロン（登録商標）、アナストロゾール、アラビノシルシトシン、アラネスプ（登録商標）、アレジア（登録商標）、アリミデックス（登録商標）、アロマシン（登録商標）、アラノン（登録商標）、亜ヒ酸、アスパラギナーゼ、ＡＴＲＡ  アバスチン（登録商標）、アザシチジン、ＢＣＧ、ＢＣＮＵ、ベンダムスチン、ベバシズマス、ベキサロテン、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ、ブレノキサン（登録商標）、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、ブスルフェックス（登録商標）、カルシウムロイコボリン、カンパス（登録商標）、カンプトサル（登録商標）、カンプトテシン−１１、カペシタビン、カラックＴＭ、カルボプラチン、カルムスチン、カソデックス（登録商標）、ＣＣ−５０１３、ＣＣＩ−７７９、ＣＣＮＵ、ＣＤＤＰ、ＣｅｅＮＵ、セルビジン（登録商標）、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、シトロボルム因子、クラドリビン、コルチゾン、コスメゲン（登録商標）、ＣＰＴ−１１、シクロホスファミド、シタドレン（登録商標）、シタラビン  シトサール−Ｕ（登録商標）、シトキサン（登録商標）、ダコゲン、ダクチノマイシン、ダルベポエチンアルファ、ダサチニブ、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ダウノルビシン塩酸、ダウノルビシン・リポソーマル、ダウノキソーム（登録商標）、デカドロン、デシタビン、デルタ−コルテフ（登録商標）、デルタゾン（登録商標）、デニロイキン、ディフチトックス、デポシトＴＭ、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、デキサゾン、デクスラゾキサン、ＤＨＡＤ、ＤＩＣ、ジオデックス、ドセタキセル、ドキシル（登録商標）、ドキソルビシン、ドキソルビシン・リポソーマル、ドロキシアＴＭ、ＤＴＩＣ、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）、デュラロン（登録商標）、エリガードＴＭ、エレンスＴＭ、エロキサチンＴＭ、エルスパー（登録商標）、エンシット（登録商標）、エピルビシン、エポエチンアルファ、エルビタックス、エルロチニブ、エルウィニアＬ−アスパラギナーゼ、エストラムスチン、エチヨルエトポフォス（登録商標）、エトポシド、リン酸エトポシド、ユーレキシン（登録商標）、エベロリムス、エビスタ（登録商標）、エキセメスタン、ファスロデックス（登録商標）、フェマラ（登録商標）、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルダラ（登録商標）、フルダラビン、フルオロプレックス（登録商標）、フルオロウラシル、フロキシメステロン、フルタミド���フォリン酸、ＦＵＤＲ（登録商標）、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツヅマブ・オゾガマイシン、グリーベックＴＭ、グリアデル（登録商標）ウェハー、ゴセレリン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ハーセプチン（登録商標）、ヘキサドロール、ヘキサレン（登録商標）、ヘキサメチルメラミン、ＨＭＭ、ヒカムチン（登録商標）、ヒドレア（登録商標）、酢酸ヒドロコルト（登録商標）、ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、リン酸ヒドロコルトン、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブ、イブリツモマブ・チウキセタン、イダマイシン（登録商標）、イダルビシン、イフェックス（登録商標）、ＩＦＮ−アルファ、イホスファミド、ＩＬ−１１、ＩＬ−２、メシル酸イマチニブ、イミダゾールカルボキサミド、インターフェロンアルファ、インターフェロンアルファ−２ｂ（ＰＥＧコンジュゲート）、インターロイキン−２、インターロイキン−１１、イントロンＡ（登録商標）（インターフェロンアルファ−２ｂ）、イレッサ（登録商標）、イリノテカン、イソトレチノイン、イキサベピロン、イキセンプラＴＭ、キドロラーゼ、ラナコート（登録商標）、ラパチニブ、Ｌ−アスパラギナーゼ、ＬＣＲ、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリン、ロイケラン、ロイカインＴＭ、リュープロリド、リューロクリスチン、リュースタチンＴＭ、リポソーマルＡｒａ−Ｃ、液体プレド（登録商標）、ロムスチン、Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン、リュプロン（登録商標）、リュプロンデポ（登録商標）、マツラン（登録商標）、マキシデックス、メクロレタミン、メクロレタミン塩酸、メドラロン（登録商標）、メドロール（登録商標）、メゲース（登録商標）、メゲストロール、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メスネックスＴＭ、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウム、メチルプレドニゾロン、メチコルテン（登録商標）、マイトマイシン、マイトマイシン−Ｃ、ミトキサントロン、Ｍ−プレドニゾール（登録商標）、ＭＴＣ、ＭＴＸ、ムスターゲン（登録商標）、ムスチン、ムタマイシン（登録商標）、ミレラン（登録商標）、ミロセルＴＭ、ミロターグ（登録商標）、ナベルビン（登録商標）、ネララビン、ネオサール（登録商標）、ニューラスタＴＭ、ニューメガ（登録商標）、ニューポゲン（登録商標）、ネキサバール（登録商標）、ニランドロン（登録商標）、ニルタミド、ナイトロジェンマスタード、ノバルデックス（登録商標）、ノバントロン（登録商標）、オクトレオチド、酢酸オクトレオチド、オンコスパー（登録商標）、オンコビン（登録商標）、オンタック（登録商標）、オンキサルＴＭ、オプレベルキン、オラプレッド（登録商標）、オラゾン（登録商標）、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルタンパク質結合型、パミドロネート、パニツムマブ、パンレチン（登録商標）、パラプラチン（登録商標）、ペディアプレド（登録商標）、ＰＥＧインターフェロン、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスティム、ＰＥＧ−イントロンＴＭ、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ＰＥＭＥＴＲＥＸＥＤ、ペントスタチン、フェニ���アラニンマスタード、プラチノール（登録商標）、プラチノール−ＡＱ（登録商標）、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレロン（登録商標）、プロカルバジン、ＰＲＯＣＲＩＴ（登録商標）、プロロイキン（登録商標）、カルムスチンインプラントプリネトール（登録商標）を含むプロリフプロスパン２０、ラロキシフェン、レブリミド（登録商標）、リューマトレックス（登録商標）、リツキサン（登録商標）、リツキシマブ、ロフェロン−Ａ（登録商標）（インターフェロンアルファ−２ａ）、リューベックス（登録商標）、ルビドマイシン塩酸、サンドスタチン（登録商標）、サンドスタチンＬＡＲ（登録商標）、サルグラモスチン、ソリュ−コルテフ（登録商標）、ソリュ−メドロール（登録商標）、ソラフェニブ、ＳＰＲＹＣＥＬＴＭ、ＳＴＩ−５７１、ストレプトゾシン、ＳＵ１１２４８、スニチニブ、スーテント（登録商標）、タモキシフェン、タルセバ（登録商標）、タルグレチン（登録商標）、タキソール（登録商標）、タキソテール（登録商標）、テモダール（登録商標）、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、ＴＥＳＰＡ、サリドマイド、タロミド（登録商標）、テラシス（登録商標）、チオグアニン、チオグアニンタブロイド（登録商標）、チオホスホアミド、チオプレックス（登録商標）、チオテパ、ＴＩＣＥ（登録商標）、トポサール（登録商標）、トポテカン、トレミフェン、トリセル（登録商標）、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレアンダ（登録商標）、トレチノイン、トレキサールＴＭ、トリセノックス（登録商標）、ＴＳＰＡ、ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＶＣＲ、ベシチビックスＴＭ、ベルバン（登録商標）、ベルケード（登録商標）、ベペシド（登録商標）、ベサノイド（登録商標）、ビアデュルＴＭ、ビダザ（登録商標）、ビンブラスチン、硫酸ビンブラスチン、ビンカサールＰｆｓ（登録商標）、ビンクリスチン、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、ＶＬＢ、ＶＭ−２６、ボリノスタット、ＶＰ−１６、ヴモン（登録商標）、キセロダ（登録商標）、ザノサール（登録商標）、ゼバリンＴＭ、ジネカード（登録商標）、ゾラデックス（登録商標）、ゾレドロン酸、ゾリンザ、ゾメタ（登録商標）より選択されてもよい。
【０２５５】
投与経路
本発明の側面にしたがった抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞、ポリペプチドおよび他の療法剤、薬剤および薬学的組成物を、限定されるわけではないが、非経口、静脈内、動脈内、筋内、皮下、皮内、腫瘍内および経口を含む、いくつかの経路による投与のために配合してもよい。抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞、ポリペプチドおよび他の療法剤は、液体または固体型で配合してもよい。ヒトまたは動物の体の選択した領域への注射による投与のため、液体配合物を配合してもよい。
【０２５６】
投薬措置
抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドの多数回の用量を提供してもよい。用量の１つまたはそれより多くまたは各々には、別の療法剤の同時または連続投与が付随していてもよい。
【０２５７】
多数回用量は、あらかじめ決定した時間間隔によって分かれていてもよく、これは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３１日、あるいは１、２、３、４、５または６ヶ月の１つであるように選択されてもよい。例えば、用量を、７、１４、２１または２８日ごとに１回投与してもよい（プラスまたはマイナス３、２、または１日）。
【０２５８】
キット
本発明のいくつかの側面において、部分のキットを提供する。いくつかの態様において、キットは、あらかじめ決定された量の抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを有する少なくとも１つの容器を有してもよい。キットは、薬剤または薬学的組成物の形で、抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを提供してもよく、そして明記する疾患または状態を治療するため、患者に投与するための使用説明書とともに提供されてもよい。抗体、抗原結合性断片、ＣＡＲ、細胞またはポリペプチドを、腫瘍へのまたは血液への注射または注入に適切であるように配合してもよい。
【０２５９】
いくつかの態様において、キットはさらに、あらかじめ決定した量の別の療法剤（例えば抗感染剤または化学療法剤）を有する少なくとも１つの容器を含んでもよい。こうした態様において、キットはまた、２つの薬剤または薬学的組成物が特定の疾患または状態に対する組み合わせ治療を提供するように、これらを同時にまたは別個に投与可能であるように、第二の薬剤または薬学的組成物も含んでもよい。療法剤はまた、腫瘍または血液への注射または注入に適切であるように配合されてもよい。
【０２６０】
被験体
治療しようとする被験体は、任意の動物またはヒトであってもよい。被験体は好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。被験体は、非ヒト哺乳動物であってもよいが、より好ましくはヒトである。被験体は男性または女性であってもよい。被験体は患者であってもよい。被験体は治療が必要な疾患または状態を有すると診断されていてもよいし、あるいはこうした疾患または状態を有すると推測されていてもよい。
【０２６１】
タンパク質発現
細胞において本発明記載のポリペプチドを産生するために適した分子生物学技術は、当該技術分野に周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ニューヨーク：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８９に示されるものがある。
【０２６２】
ポリペプチドはヌクレオチド配列から発現されてもよい。ヌクレオチド配列は、細胞中に存在するベクターに含有されてもよいし、または細胞のゲノム内に取り込まれていてもよい。
【０２６３】
「ベクター」は、本明細書において、細胞内に外因性遺伝物質をトランスファーするためのビヒクルとして用いられるオリゴヌクレオチド分子（ＤＮＡまたはＲＮＡ）である。ベクターは、細胞において、遺伝物質を発現させるための発現ベクターであってもよい。こうしたベクターには、発現しようとする遺伝子配列をコードするヌクレオチド配列に機能可能であるように連結されたプロモーター配列が含まれてもよい。ベクターにはまた、終結コドンおよび発現エンハンサーも含まれてもよい。当該技術分野に知られる任意の適切なベクター、プロモーター、エンハンサーおよび終結コドンを用いて、本発明記載のベクターからポリペプチドを発現させてもよい。適切なベクターには、プラスミド、バイナリーベクター、ウイルスベクターおよび人工染色体（例えば酵母人工染色体）が含まれる。
【０２６４】
本明細書において、用語「機能可能であるように連結される」には、選択されたヌクレオチド配列および制御ヌクレオチド配列（例えばプロモーターおよび／またはエンハンサー）が、制御配列の影響または調節下で、ヌクレオチド配列の発現を達成するような方式で、共有連結される（それによって発現カセットを形成する）状況が含まれうる。したがって、制御配列がヌクレオチド配列の転写を達成可能であるならば、制御配列は、選択されたヌクレオチド配列に、機能可能であるように連結されている。適切な場合、生じた転写物は、次いで、望ましいタンパク質またはポリペプチドに翻訳されてもよい。
【０２６５】
本発明記載のペプチドを産生するため、ポリペプチドの発現に適した任意の細胞を使用しうる。細胞は、原核細胞または真核細胞であってもよい。適切な原核細胞には大腸菌が含まれる。真核細胞の例には、酵母細胞、植物細胞、昆虫細胞または哺乳動物細胞が含まれる。いくつかの場合、ある原核細胞は、真核細胞と同じ翻訳後修飾を可能にしないため、細胞は原核細胞ではない。さらに、真核細胞では非常に高い発現レベルが可能であり、そして適切なタグを用いると、真核細胞からタンパク質を精製することがより容易でありうる。培地へのタンパク質の分泌を増進させる特定のプラスミドもまた、利用してもよい。
【０２６６】
関心対象のポリペプチドを産生する方法は、ポリペプチドを発現するように修飾された細胞の培養または発酵を伴ってもよい。培養または発酵は、栄養素、空気／酸素および／または増殖因子の適切な供給を提供され、バイオリアクター中で実行してもよい。細胞から、培地／発酵ブロスを分配し、タンパク質内容物を抽出し、そして個々のタンパク質を分離して、分泌されたポリペプチドを単離することによって、分泌されたタンパク質を収集してもよい。培養、発酵および分離技術は、当業者に周知である。
【０２６７】
バイオリアクターには、その中で細胞を培養可能である１またはそれより多い容器が含まれる。バイオリアクター中の培養は、連続して生じてもよく、リアクター内への反応物の連続流動、およびリアクターからの培養細胞の連続流動が伴う。あるいは、培養はバッチで生じてもよい。バイオリアクターは、培養中の細胞のために最適な条件が提供されるように、ｐＨ、酸素、容器内へのおよび容器外への流速、ならびに容器内の攪拌などの環境条件を監視し、そして調節する。
【０２６８】
関心対象のポリペプチドを発現する細胞の培養後、好ましくはそのポリペプチドを単離する。当該技術分野に知られる、細胞培養からポリペプチド／タンパク質を分離するための任意の適切な方法を使用してもよい。培養から関心対象のポリペプチド／タンパク質を単離するため、まず、関心対象のポリペプチド／タンパク質を含有する培地から、培養された細胞を分離する必要がある可能性もある。関心対象のポリペプチド／タンパク質が細胞から分泌される場合、分泌されたポリペプチド／タンパク質を含有する培地から、遠心分離によって細胞を分離してもよい。関心対象のポリペプチド／タンパク質が細胞内に集積する場合、遠心分離前に、例えば超音波、迅速凍結融解または浸透圧溶解を用いて、細胞を破壊する必要があるであろう。遠心分離は、培養細胞を含有するペレット、または培養細胞の細胞破片、ならびに培地および関心対象のポリペプチド／タンパク質を含有する上清を生じるであろう。
【０２６９】
次いで、他のタンパク質および非タンパク質構成要素も含有しうる上清または培地から、関心対象のポリペプチド／タンパク質を単離することが望ましい可能性もある。上清または培地からポリペプチド／タンパク質構成要素を分離するための一般的なアプローチは、沈殿による。異なる溶解度のポリペプチド／タンパク質は、硫酸アンモニウムなどの沈殿剤の異なる濃度で沈殿する。例えば、低濃度の沈殿剤では、水溶性タンパク質が抽出される。したがって、増加する濃度の沈殿剤を添加することによって、異なる溶解度のタンパク質が区別可能である。続いて、透析を用いて、分離されたタンパク質から硫酸アンモニウムを除去してもよい。
【０２７０】
異なるポリペプチド／タンパク質を区別するための他の方法が当該技術分野に知られ、例えばイオン交換クロマトグラフィおよびサイズクロマトグラフィがある。これらを沈殿の代替法として用いてもよいし、または沈殿に続いて行ってもよい。
【０２７１】
関心対象のポリペプチド／タンパク質が、ひとたび培養から単離されたら、タンパク質を濃縮する必要がある可能性もある。関心対象のタンパク質を濃縮するためのいくつかの方法が当該技術分野に知られ、例えば限外濾過または凍結乾燥がある。
【０２７２】
配列同一性
アミノ酸またはヌクレオチド配列同一性パーセントを決定する目的のための整列を、当業者に知られる多様な方式で達成してもよく、例えば公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えばＣｌｕｓｔａｌＷ  １．８２．  Ｔ−ｃｏｆｆｅｅまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを用いてもよい。こうしたソフトウェアを用いる場合、好ましくは、デフォルトパラメータ、例えばギャップペナルティおよび伸長ペナルティに関するものを用いる。ＣｌｕｓｔａｌＷ  １．８２のデフォルトパラメータは：タンパク質ギャップ・オープンペナルティ＝１０．０、タンパク質ギャップ伸長ペナルティ＝０．２、タンパク質マトリックス＝Ｇｏｎｎｅｔ、タンパク質／ＤＮＡ  ＥＮＤＧＡＰ＝−１、タンパク質／ＤＮＡ  ＧＡＰＤＩＳＴ＝４である。
【０２７３】
本発明には、記載する側面および好ましい特徴の組み合わせが含まれるが、こうした組み合わせが明らかに許容されえないかまたは明らかに回避される場合を除く。
本明細書に用いるセクション見出しは、構成上の目的のみのためであり、そして記載する主題を限定するとは意図されないものとする。
【０２７４】
本発明の側面および態様はここで、例として、付随する図を参照しながら例示されるであろう。さらなる側面および態様は、当業者には明らかであろう。本文書に言及するすべての文書が本明細書に援用される。
【０２７５】
本明細書全体にわたって、続く請求項を含めて、背景が別であることを必要としない限り、単語「含む」、ならびに変形、例えば「含む」および「含んでいる」は、言及する整数または工程、あるいは整数または工程群の包含を意味するが、いかなる他の整数または工程、あるいは整数または工程群も排除しないことが理解されるであろう。
【０２７６】
本明細書および付随する請求項において、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、背景が明らかに別であると示さない限り、複数の指示対象が含まれることに留意しなければならない。範囲は、本明細書において、「約」１つの特定の値から、そして／または「約」別の特定の値までとして表されてもよい。こうした範囲を示した場合、別の態様には、１つの特定の値から、そして／または他の特定の値までが含まれる。同様に、値を近似値で表した場合、先行する「約」を使用することによって、特定の値が別の態様を形成することが理解されるであろう。
【実施例】
【０２７７】
本発明者らは、以下の実施例において、ヒトＬＡＧ−３に特異的に結合し、そしてＭＨＣクラスＩＩへのＬＡＧ−３の結合をブロッキングし、それによってＬＡＧ−３シグナル伝達を阻害することが示された、いくつかの抗ヒトＬＡＧ−３抗体の単離および特徴付けを記載する。
【０２７８】
実施例１：抗ヒトＬＡＧ−３抗体の単離、ならびにヒトおよびネズミＬＡＧ−３への結合
抗ＬＡＧ−３抗体を、３周期バイオパニングプロセスにおいて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ選択を通じて、ヒト抗体ファージディスプレイライブラリーから単離した。
【０２７９】
ヒトＦｃにカップリングしたヒトＬＡＧ−３（ＬＡＧ−３−Ｆｃ）をビオチン化し、そしてストレプトアビジン磁気ビーズ上にコーティングした。コーティングされたビーズを用い、磁気ソーティングを用いて、抗ＬＡＧ−３特異的ファージを単離した。選択プロセスにおいて、潜在的な抗ビオチンおよび抗ヒトＦｃ抗体を排除するためのいくつかの工程を加えた。
【０２８０】
ＨＢ２１５１細胞における小規模誘導後、ヒトおよびネズミＬＡＧ−３に結合する能力に関して、Ｆａｂ抗体をＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。簡潔には、ＥＬＩＳＡプレートをヒトＬＡＧ−３−Ｆｃでコーティングし、そしてカゼイン溶液でブロッキングした。ＰＢＳ  Ｔｗｅｅｎ−２０で徹底的に洗浄した後、誘導に由来する未精製周辺質抽出物を、ＰＢＳ中、７％ミルクの存在下のＥＬＩＳＡウェルにトランスファーした。撹拌および徹底的な洗浄下、室温で９０分後、ＨＲＰにカップリングしたヤギ抗ヒトＦａｂ抗体を添加した。１時間後、プレートを洗浄し、そしてＴＭＢ基質を添加した。反応を１Ｍ  ＨＣｌで停止させ、そして６７０ｎｍの参照で、４５０ｎｍで光学密度を測定した。＞０．１の吸光度を生じる抗体を陽性として選択した。最初のクローン性スクリーニングをＤＮＡフィンガープリンティングによって行い；次いで、配列決定によって、クローン性を確認した。
【０２８１】
ＥＬＩＳＡにおいて、ヒトＬＡＧ−３への陽性結合を示す１９のユニークなクローンを選択した（図５）。これらのうち、２つのクローンが、ヒトＬＡＧ−３への高い結合、ならびにマウスＬＡＧ−３：Ａ６およびＣ１２への交差反応性の両方を示した。
【０２８２】
実施例２：抗ネズミＬＡＧ−３抗体の単離、ならびにヒトおよびネズミＬＡＧ−３への結合
ヒトＦｃにカップリングしたマウスＬＡＧ−３を用いて、実施例１に記載するものと同じ選択プロセスによって、ファージライブラリーから抗マウスＬＡＧ−３抗体を単離した。
【０２８３】
ＥＬＩＳＡにおいて、ネズミＬＡＧ−３への陽性結合を示す多様なクローンを同定し、１つを除いてすべてがマウスＬＡＧ−３に特異的であり、そしてヒトＬＡＧ−３を認識しなかった（図６）。クローン１Ｇ１１は、ヒトおよびマウスＬＡＧ−３への類似の結合を示した。
【０２８４】
実施例３：可溶性組換えヒトＬＡＧ−３タンパク質に対するＡ６、Ｆ５、およびＧ８抗体の結合
ＩｇＧ１またはＩｇＧ４形式いずれかの抗ＬＡＧ−３抗体の結合をＥＬＩＳＡによって評価した。抗体をＥＬＩＳＡプレート上にコーティングし、そしてビオチン化組換えヒトＬＡＧ−３を添加した後に、ストレプトアビジンを用いて顕色した。
【０２８５】
図７は、Ａ６、Ｆ５およびＧ８抗体クローンの結合を示す（２つ組の平均±ＳＤ）。すべての抗体は、用量依存方式でＬＡＧ−３に結合することが示された。Ａ６およびＧ８は、Ｆ５よりも、ヒトＬＡＧ−３に対してより高いアフィニティを示した。アイソタイプＩｇＧ１またはＩｇＧ４は、ヒトＬＡＧ−３へのクローンの結合を改変させないようであった。
【０２８６】
実施例４：ヒトＬＡＧ−３を発現している一過性トランスフェクション細胞に対するＡ６、Ｆ５、およびＧ８抗体の結合
Ａ６、Ｆ５、およびＧ８抗体が、細胞表面に発現したＬＡＧ−３に結合する能力を評価した。簡潔には、ＨＥＫ−２９３細胞をヒトＬＡＧ−３で一過性にトランスフェクションし、そしてフローサイトメトリーによって、第２日に抗体結合を測定した。
【０２８７】
図８は、ＬＡＧ−３トランスフェクション細胞または非トランスフェクションＰＢＳ処理対照細胞への抗体の結合を示す（幾何平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す）。抗ＬＡＧ−３抗体Ａ６、Ｆ５およびＧ８は、参照抗ＬＡＧ−３抗体ＢＭＳ−９８６０１６と類似の度合いまで、ＬＡＧ−３発現細胞の細胞表面に結合することが示された。Ｆ５は、他の抗体よりも高いＬＡＧ−３への結合アフィニティを示したが、また、非トランスフェクション細胞にも、ある程度の非特異的結合を示した。
【０２８８】
実施例５：活性化Ｔ細胞に対するＡ６、Ｆ５、およびＧ８抗体の結合
活性化Ｔ細胞に対するＡ６、Ｆ５、およびＧ８抗体の結合を評価した。簡潔には、ＰＢＭＣ試料からＣＤ４＋細胞を単離し、そして抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズで３日間刺激した。次いで、抗ＬＡＧ−３抗体を細胞上に添加し、そしてフローサイトメトリーによって結合を測定した。
【０２８９】
図９は、活性化および非活性化Ｔ細胞への抗ＬＡＧ−３抗体の結合を示す（幾何平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す）。Ｆ５およびＧ８は、活性化Ｔ細胞に対して、参照抗ＬＡＧ−３抗体ＢＭＳ−９８６０１６の結合の度合いと類似の、高い結合を示す。Ａ６は、中程度のレベルの結合を示した。試験した抗体のいずれも、非活性化Ｔ細胞への非特異的結合を示さない。
【０２９０】
実施例６：アカゲザルＬＡＧ−３に対するＡ６、Ｆ５、およびＧ８抗体の結合
一過性トランスフェクションＨＥＫ−２９３細胞を用いて、Ａ６、Ｆ５、およびＧ８抗体が、アカゲザルＬＡＧ−３に結合する能力を試験した。
【０２９１】
図１０は、アカゲザルＬＡＧ−３発現細胞および非トランスフェクション陰性対照細胞に対する抗ＬＡＧ３抗体の結合を示す。Ａ６、Ｆ５、およびＧ８抗体のすべてが、アカゲザルＬＡＧ−３に結合することを示す。アカゲザルＬＡＧ−３に対するＡ６およびＦ５の結合は高く、一方、Ｇ８による結合はより弱かった。アカゲザルＬＡＧ−３に対するＧ８の結合レベルは、参照抗ＬＡＧ−３抗体ＢＭＳ−９８６０１６の結合と類似であった。Ａ６およびＦ５は、小さい度合いの非トランスフェクション細胞への非特異的な結合を示した。
【０２９２】
実施例７：ＬＡＧ−３に対する結合のアフィニティ
表面プラズモン共鳴分析によって、抗体クローンＡ６  Ｆａｂのアフィニティを測定した。簡潔には、ヒトＦｃにカップリングしたヒトまたはマウスＬＡＧ−３をセンサーチップ上に固定し、そして抗体を異なる濃度でチップ上に適用した。ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ  ３６分析装置（Ｂｉｏｒａｄ）で会合および解離速度を測定し、そしてアフィニティ（ＫＤ）を計算した。
【０２９３】
結果を図１１に示す。Ａ６は、ヒトＬＡＧ−３から緩慢な解離を示した（図１１Ａ）；にもかかわらず、ネズミＬＡＧ−３に対する交差結合は確認されなかった（図１１Ｂ）。ヒトＬＡＧ−３に関する抗体クローンＡ６  Ｆａｂのアフィニティを図１１Ｃに示す。
【０２９４】
別個の分析において、Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリーを用いて、参照抗ＬＡＧ−３抗体ＢＭＳ−９８６０１６に比較して、ヒトＬＡＧ−３に対する抗体Ａ６、Ｆ５、およびＧ８のアフィニティを測定した。結果を図１２に示す。抗体Ａ６、Ｆ５、およびＧ８のすべてがヒトＬＡＧ−３に関する高アフィニティを有することが示され、そして特に、抗体Ｆ５およびＧ８は、ＢＭＳ−９８６０１６よりも、ヒトＬＡＧ−３に関して、より高いアフィニティを示すことが示される。
【０２９５】
実施例８：ＭＨＣクラスＩＩとＬＡＧ−３の会合の阻害
Ｄａｕｄｉ細胞表面で発現されるＭＨＣクラスＩＩへのＬＡＧ−３の結合を阻害する能力に関して、抗ＬＡＧ−３抗体を試験した。
【０２９６】
簡潔には、フィコエリトリンにカップリングしたヒトＬＡＧ−３を、ＦＡＣＳ緩衝液中、多様な濃度の抗体と、室温で３０分間プレインキュベーションした。Ｄａｕｄｉ細胞を９６ウェルプレート中にプレーティングし、そして固定／透過処理緩衝液中、抗ＣＤ１６／ＣＤ３２抗体の存在下で、固定／透過処理した。プレミックスをＤａｕｄｉ細胞上に添加し、そして４℃で３０分間インキュベーションした。次いで、細胞を透過処理／洗浄緩衝液で３回洗浄し、ＰＢＳに再懸濁し、そしてフローサイトメトリーによって分析した。
【０２９７】
フィコエリトリンで染色された細胞の割合を決定することによって、抗体がＬＡＧ−３／ＭＨＣ−ＩＩ結合をブロッキングする能力を計算した：
【０２９８】
【化２５】
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【０２９９】
Ａ６および１Ｇ１１抗体はどちらも、用量依存方式で阻害能を示し、そして高濃度で、ＭＨＣ−ＩＩへのＬＡＧ−３の結合を完全にブロッキング可能であった（図１３）。データに基づいて、ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩの会合阻害に関する半最大阻害濃度（ＩＣ５０）値を、抗体Ａ６および１Ｇ１１に関して決定した。Ａ６は６２．２ｎＭのＩＣ５０を有すると決定され、そして１Ｇ１１は３７７．７ｎＭのＩＣ５０を有すると決定された。
【０３００】
別個の分析において、上述のように、ＭＨＣクラスＩＩへのＬＡＧ−３の結合を阻害する能力に関して、抗体クローンＡ６、Ｆ５、およびＧ８を分析した。抗体クローンＡ６、Ｆ５、およびＧ８は、用量依存方式で阻害能を示し、そして高濃度で、ＭＨＣ−ＩＩへのＬＡＧ−３の結合を完全にブロッキング可能であった（図１４Ａ）。データに基づき、ＬＡＧ−３およびＭＨＣクラスＩＩの会合阻害に関するＩＣ５０値を決定し；その結果を図１４Ｂに示す。
【０３０１】
さらなる分析において、ＭＨＣクラスＩＩへのＬＡＧ−３の結合を阻害する能力に関して、抗体クローンＡ６、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５、およびＧ８を分析した。抗体がＤａｕｄｉ細胞上のリガンドに対するＬＡＧ−３の結合をブロッキングする能力を、フローサイトメトリーによって評価した。標識ＬＡＧ−３を抗ＬＡＧ−３  Ｆａｂ抗体とまたは陰性Ｆａｂ対照とプレインキュベーションした後、Ｄａｕｄｉ細胞に添加した。３０分間インキュベーションした後、細胞をＦＡＣＳによって分析した。結果を図１５に示す。抗体クローンＡ６、Ｃ２、Ｃ１２、Ｆ５、およびＧ８は、用量依存方式で、ＭＨＣクラスＩＩ発現Ｄａｕｄｉ細胞に対するＬＡＧ−３の結合をブロッキングすることが示された。
【０３０２】
実施例９：Ｔ細胞消耗後の混合リンパ球反応におけるＴ細胞活性の回復
消耗後、Ｔ細胞は刺激に対して非反応性になる。消耗を逆転させ、そして再刺激に際して、Ｔ細胞がＩＬ−２およびＩＦＮ−γを分泌する活性を回復させる能力に関して、Ｆ５およびＧ８抗体を試験した。簡潔には、混合リンパ球反応において、１人のドナー由来のＴ細胞を、ＨＬＡミスマッチドナー由来の抗原提示細胞と７日間混合して、消耗を駆動した。次いで、消耗した細胞を、多様な濃度の抗ＬＡＧ−３抗体または対照抗体の存在下で、ＨＬＡミスマッチ細胞で再刺激し、そしてＩＬ−２およびＩＦＮ−γの分泌を活性化のマーカーとして測定した。
【０３０３】
図１６および１７は、２回の独立の実験におけるＩＬ−２（図１６）およびＩＦＮ−γ（図１７）の量を示す（３つ組の平均±ＳＤを示す）。黒線は、アイソタイプ対照の存在下で検出される最大平均バックグラウンドに相当する。Ｆ５およびＧ８は、少なくとも高用量で、Ｔ細胞活性を回復可能である。
【０３０４】
抗体Ｆ５およびＧ８は、参照抗ＬＡＧ−３抗体ＢＭＳ−９８６０１６よりも、Ｔ細胞機能を回復するより優れた有効性を示す。
実施例１０：予備的エピトープマッピング
Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリーを用いて、異なる抗ＬＡＧ−３抗体クローンが異なるエピトープに結合するかどうかを調べた。これらの実験において、１つの抗体をセンサーに結合させ、そして次いでその上にＬＡＧ−３を流し、そして結合した抗体に結合することを可能にした。ある程度の緩衝液を流して、未結合抗体をリンスした。次いで、第二の抗体を適用し、そしてこの第二の抗体のＬＡＧ−３への結合を分析した。第二の抗体による結合がより強ければ、第一の抗体に関するエピトープと、第二の抗体に関するエピトープはより異なると決定された。
【０３０５】
図１８は、ＢＭＳ−９８６０１６（図１８Ａ）、Ａ６（図１８Ｂ）、Ｆ５（図１８Ｃ）またはＧ８（図１８Ｄ）に結合したＬＡＧ−３に対する、示す抗体の結合プロファイルを示す。これらのプロファイルによって、抗体クローンＡ６、Ｆ５およびＧ８が、ＢＭＳ−９８６０１６に関するエピトープとは異なるエピトープで、ＬＡＧ−３に結合することが示唆される。また、抗体クローンＦ５およびＧ８は、異なるエピトープを有することが明らかに示される。
【０３０６】
実施例１１：抗ＬＡＧ３の存在下でのＴ細胞の拡大
Ｔ細胞拡大に対する抗ＬＡＧ−３抗体の影響を分析した。以下の実験で用いられる抗ＬＡＧ−３抗体は、ＩｇＧ１形式の抗ＬＡＧ−３抗体クローンＦ５であった。
【０３０７】
簡潔には、２人の異なるドナー（ＩＤ１およびＩＤ２）由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、０．５ｘ１０６細胞／ｍｌで、２４ウェル細胞培養プレート（１ｍｌ／ウェル）のウェルに添加し、そして抗ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓをウェルに添加した。
【０３０８】
次いで、組換えヒトＩＬ−２および抗ＬＡＧ−３抗体クローンＦ５−ＩｇＧ１をウェルに添加して、以下の条件を確立した：
（ｉ）ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍｌ）
（ｉｉ）ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍｌ）＋抗ＬＡＧ−３（１０μｇ／ｍｌ）
（ｉｉｉ）ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍｌ）＋抗ＬＡＧ−３（１μｇ／ｍｌ）
（ｉｖ）ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍｌ）＋抗ＬＡＧ−３（０．１μｇ／ｍｌ）
（ｖ）ＩＬ−２（１００Ｕ／ｍｌ）＋抗ＬＡＧ−３（０．０１μｇ／ｍｌ）
（ｖｉ）なし（ビーズのみの対照）
第３日および第５日、培地０．５ｍｌを除去し、そして新鮮な細胞培地１ｍｌを添加した。
【０３０９】
第７日、細胞を採取し、異なる細胞表面マーカーに関する抗体で染色し、そして次いで、異なる細胞サブセットに関するフローサイトメトリーによって分析した。結果を、「ビーズのみの対照」群に対して標準化した。ＡＮＯＶＡによって、異なる条件間の比較を実行した。
【０３１０】
実験結果を図１９〜２８に示す。
図１９は、ＩＬ−２および抗ＬＡＧ−３抗体の存在下で抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを含む培養によるＴ細胞の拡大が、ＬＡＧ−３抗体の非存在下での培養（すなわちＩＬ−２の存在下、抗ＬＡＧ−３抗体の非存在下で抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを含む培養）と比較した際に、Ｔ細胞数を変化させなかったことを示す。
【０３１１】
図２０Ａおよび２０Ｂは、異なる条件下で拡大されたＣＤ８＋  Ｔ細胞の総数には、有意な相違が観察されなかったが、１μｇ／ｍｌおよび０．１μｇ／ｍｌの抗ＬＡＧ−３抗体の存在下で拡大された細胞に関して、ＣＤ４＋  Ｔ細胞数の有意な増加が観察されたことを示す。
【０３１２】
図２０Ｃは、抗ＬＡＧ−３抗体の存在下で拡大された細胞が、抗ＬＡＧ−３抗体の非存在下で拡大された細胞に比較した際、有意により低いＣＤ８：ＣＤ４細胞比を有したことを示す。
【０３１３】
図２１は、抗ＬＡＧ−３抗体の存在下で拡大された細胞が、ＣＤ４＋  Ｔ細胞集団内で、より低い割合のＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋  Ｔｒｅｇを有したことを示す。
図２２Ａおよび２２Ｂは、抗ＬＡＧ−３抗体の存在下で拡大された細胞が、ＣＤ８＋  Ｔ細胞集団内で、より低い割合のＣＤ８＋ＰＤ１＋細胞を、そしてＣＤ４＋  Ｔ細胞集団内で、より低い割合のＣＤ４＋ＰＤ１＋細胞を有したことを示す。
【０３１４】
図２３Ａおよび２３Ｂは、異なる条件下で拡大された細胞に関する、ＣＤ８＋およびＣＤ４＋  Ｔ細胞集団内での異なるＴ細胞下位集団の割合を示す。抗ＬＡＧ−３抗体の存在下で拡大された細胞は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋集団内で、より高い割合のＴＥＭＲＡ細胞を有した。
【０３１５】
図２４Ａおよび２４Ｂは、抗ＬＡＧ−３抗体の存在下で拡大された細胞が、ＣＤ８＋  Ｔ細胞集団内で、わずかにより低い割合のＣＤ８＋ＣＴＬＡ４＋細胞を有するが、ＣＤ４＋  Ｔ細胞集団においてはそうではないことを示す。
【０３１６】
図２５Ａおよび２５Ｂは、抗ＬＡＧ−３抗体の存在下で拡大された細胞が、ＣＤ８＋  Ｔ細胞集団内で、より低い割合のＣＤ８＋ＩＬ−１３＋細胞を、そしてＣＤ４＋  Ｔ細胞集団内で、より低い割合のＣＤ４＋ＩＬ−１３＋細胞を有したことを示す。
【０３１７】
一般的に、ＩＬ−１３＋細胞の割合は低かった（＜５％）。
図２６Ａおよび２６Ｂは、ＣＤ８＋  Ｔ細胞集団内のＣＤ８＋ＩＦＮγ＋細胞の割合またはＣＤ４＋  Ｔ細胞集団内のＣＤ４＋ＩＦＮγ＋細胞の割合に相違が観察されなかったことを示す。
【０３１８】
図２７Ａおよび２７Ｂは、ＣＤ８＋  Ｔ細胞集団内のＣＤ８＋ＴＮＦα＋細胞の割合またはＣＤ４＋  Ｔ細胞集団内のＣＤ４＋ＴＮＦα＋細胞の割合に相違が観察されなかったことを示す。
【０３１９】
図２８Ａおよび２８Ｂは、拡大された細胞の非Ｔ細胞集団内で、抗ＬＡＧ−３抗体の存在下で拡大された細胞が、より低い割合のＣＤ５６＋細胞（すなわちＮＫ細胞）およびより高い割合のＣＤ１９＋細胞（すなわちＢ細胞）を有したことを示す。
【０３２０】
一般的に、ＣＤ５６＋およびＣＤ１９＋細胞の割合は、すべての群に関して低く（＜５％）；拡大されたＴ細胞集団の純度は＞９０％であった。
全体に、結果は、抗ＬＡＧ−３抗体の存在下の拡大が：
（ａ）拡大された細胞数に影響を及ぼさない
（ｂ）拡大された集団内でのＣＤ３＋細胞数に影響を及ぼさない；
（ｃ）拡大された集団内で、より低いＣＤ８：ＣＤ４細胞比を生じる；
（ｄ）拡大された集団内で、Ｔｒｅｇのより低い割合を生じる；
（ｅ）拡大された集団内で、ＰＤ１＋細胞のより低い割合を生じる；
（ｆ）拡大された集団内で、ＣＴＬＡ４＋細胞の比率に有意に影響を及ぼさない；
（ｇ）拡大された集団内で、Ｔエフェクター細胞の比率に有意に影響を及ぼさない；
（ｈ）拡大された集団内で、Ｔｈ１サイトカインを発現する細胞の比率に有意に影響を及ぼさない；
（ｉ）拡大された集団内で、ＮＫ細胞のより低い割合を生じる；そして
（ｊ）拡大された集団内で、Ｂ細胞のより高い割合を生じる
ことを示唆した。
【図１−１】
2019517773.tif 000043
【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４−１】
2019517773.tif 000049
【図４−２】
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【図４−３】
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【図４−４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
2019517773.tif 000058
【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４−１】
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【図１４−２】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８−１】
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【図１８−２】
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【図１８−３】
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【図１８−４】
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【図１９】
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【図２０−１】
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【図２０−２】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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