(57)【要約】  本発明は、病変標識用注射剤組成物および前記注射剤組成物を利用して病変の位置に関する情報を提供する方法に関する。より具体的に、本発明による病変標識用注射剤組成物は、活性成分を含有する複合体を含む第１組成に生体適合性粘性物質を含む第２組成を含むことにより、複合体が早く沈む問題を解決することができる。また、特に、本発明による病変標識用注射剤組成物は、注射の準備中に複合体が早く沈む問題を解決して、一定の量の複合体が注射され得るようにする効果を有し、過量の複合体が注射される問題および複合体が周辺に非常に早く広がる問題を解決することにより、臨床的に便利で且つ安定的に使用できる効果を有することができる。
2019513783.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性成分を含有し、平均密度が１．１〜１．４ｇ／ｍｌである複合体を含む第１組成と；
平均分子量が０．５〜３．０ＭＤａである第２組成と；を含み、
前記第２組成は、常温で２４〜１５００ｃｐｓの粘度を有することを特徴とする病変標識用注射剤組成物。
【請求項２】
前記注射剤組成物は、
常温で測定時に、下記数式１を満たすことを特徴とする請求項１に記載の病変標識用注射剤組成物：
［数式１］
｜Ｔ２−Ｔ１｜＜１５％
Ｔ１は、製造された注射剤組成物を１×１×３ｃｍ３サイズの透明容器に担持された状態で、前記容器高さの１／４の地点で測定した５５０ｎｍに対する透過度（％）であり、
Ｔ２は、製造された注射剤組成物を１×１×３ｃｍ３サイズの透明容器に担持された状態で１２０分間放置した後、前記容器高さの１／４の地点で測定した５５０ｎｍに対する透過度（％）である。
【請求項３】
前記注射剤組成物は、
常温で測定時に、下記数式２を満たすことを特徴とする請求項１に記載の病変標識用注射剤組成物：
［数式２］
｜Ｆ２−Ｆ１｜＜２０ｇｆ
Ｆ１は、製造された注射剤組成物を２６Ｇ針が結合された注射器に担持された状態で注射開始時に測定した滑走力であり、
Ｆ２は、製造された注射剤組成物を２６Ｇ針を含む注射器に担持された状態で１２０分間放置した後、注射するときの注射開始時に測定した滑走力である。
【請求項４】
前記数式２によって測定された滑走力は、１５ｇｆ以下であることを特徴とする請求項３に記載の病変標識用注射剤組成物。
【請求項５】
前記Ｆ２は、１２０〜１６５ｇｆの滑走力を有することを特徴とする請求項３に記載の病変標識用注射剤組成物。
【請求項６】
前記第１組成は、
大凝集アルブミン（ｍａｃｒｏａｇｇｒｅｇａｔｅｄ  ａｌｂｕｍｉｎ、ＭＡＡ）に生体組織染色用色素、放射性同位元素またはこれらの組合せが結合された複合体を含むことを特徴とする請求項１に記載の病変標識用注射剤組成物。
【請求項７】
前記生体組織染色用色素は、目視で確認可能な色素または蛍光色素であり、
前記放射性同位元素は、Ｈ−３、Ｃ−１４、Ｐ−３２、Ｓ−３５、Ｃｌ−３６、Ｃｒ−５１、Ｃｏ−５７、Ｃｏ−５８、Ｃｕ−６４、Ｆｅ−５９、Ｙ−９０、Ｉ−１２４、Ｉ−１２５、Ｒｅ−１８６、Ｉ−１３１、Ｔｃ−９９ｍ、Ｍｏ−９９、Ｐ−３２、ＣＲ−５１、Ｃａ−４５、Ｃａ−６８およびこれらの組合せよりなる群から選択されることを特徴とする請求項６に記載の注射剤組成物。
【請求項８】
前記第２組成は、ヒアルロン酸（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ；ＨＡ）またはコラーゲンであることを特徴とする請求項１に記載の注射剤組成物。
【請求項９】
第２組成は、全体注射剤組成物に対して０．２〜１％（ｗ／ｖ）含まれることを特徴とする請求項１に記載の病変標識用注射剤組成物。
【請求項１０】
（ａ）請求項１〜９のいずれか一項に記載の注射剤組成物を個体で発生した病変に投与する段階と；
（ｂ）前記個体から活性成分の信号が発生して病変の位置を確認する段階と；を含む病変の位置に関する情報を提供する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、病変標識用注射剤組成物および前記注射剤組成物を利用して病変の位置に関する情報を提供する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般的に、抗癌治療の場合、多様な抗癌剤を利用する方法が開発されているが、未だに外科手術的な方法を用いて癌細胞を除去する方法が最も多く行われている。
【０００３】
しかしながら、外科手術的な方法を使用する場合、手術後における患者の健康および福祉のために、手術中に手術範囲を最小化する技術が必須である。特に乳癌の場合、乳房が小さい韓国女性の手術時に、切除する病変が他の国に比べて少なくしなければ、乳房保存的治療法の目標を達成することができなくなる。
【０００４】
一方、手術範囲は、病変と病変周囲のエッジ余分部位に決定される。執刀医が病変部位と範囲を正確に知らなければ、病変周囲のエッジ余分を大きくして置く必要がある。なぜなら、むやみに手術範囲を縮めていてば、腫瘍が切除面に残ってしまうことがあるからである。
【０００５】
ところが、実際臨床手術では、手術執刀医が手術中に病変を正確にリアルタイムで確認するための方法が多くない。非常に精密な診断方法が開発されたにもかかわらず、このような診断方法は、手術中には使用できなく、実際手術中には、主に執刀医の触感や視覚に依存することになり、この場合、病変が明確に区別される場合はまれである。
【０００６】
特に、病変が小さい場合は、さらに区別できなくなる。微細浸湿手術および保存的手術の目的を達成するために、執刀医に、病変を手術中にリアルタイムで知らせる技術が必要とされる。
【０００７】
従来の腫瘍除去手術、特に乳癌手術時には、患者の微細病変の位置を手術前に超音波、マンモグラフィー、または磁気共鳴映像で確認し、確認された病変の位置を標識した後、標識された部位の組織を除去しており、確認された病変の位置を標識する方法としては、皮膚の表面に絵を描く方法、ワイヤーを利用する方法、チャコール（ｃｈａｒｃｏａｌ）のような黒い色素を注射する方法などが使用されている。
【０００８】
しかし、病変の位置を標識するために皮膚上にペンを利用して絵を描く方法は、非常に柔軟な乳房組織の特性上、診断するときとは異なって、手術室で乳房の形状が大きく変化するという点、乳房深部の病変である場合には、皮膚の表面に標識したことだけでは不充分であるという点のため、最も容易に使用できるが正確度が最も低いという短所がある。
【０００９】
次に、ワイヤーを利用して乳房の病変に刺す方法は、本来ワイヤーを皮膚の表面に垂直に挿入させなければならないが、超音波プローブに影響を与えることがあるので、仕方なく斜線に挿入させなければならないという点、ワイヤーの位置が乳房の動きに応じて移動してしまうという点などのため、予想より低い正確度を示し、挿入されたワイヤーは、手術に邪魔となり、ワイヤーの挿入部位を切除する施術がさらに行われなければならないという短所がある。最後に、チャコールのような色素を注射する方法は、注射された色素が病変に結合して、病変の位置を正確に標識することができるという長所があるのに対し、乳房深部の病変である場合、外部では黒色の色素を確認することができなく、色素により手術部位が汚染されることがあるという短所がある。前記列挙した短所は、乳癌以外の癌組織を除去するための外科的手術の際にも共通して適用され得る。
【００１０】
このように現在までに開発された技術では、外科的に病変、特に癌病変を除去するための手術範囲を精密に決定することは難しいため、今のところは、外科的に癌病変を除去する場合、切除範囲が必要以上に拡大されるしかなく、手術後にも病変が正常に除去されたかを確認するための検査が伴わなければならない。
【００１１】
このような問題を解決するために、韓国特許登録第１０−１５５２１３８号によれば、大凝集アルブミンに生体組織染色用色素、放射性同位元素またはこれらの組合せが結合された複合体を含む癌病変標識用組成物を開示することにより、標識子が癌病変に効果的に吸着して病変の位置を正確に標識することができ、前記色素をリアルタイムで追跡して除去しようとする病変の範囲を正確に確認することができるようにした。
【００１２】
なお、韓国特許登録第１０−１５５２１３８号に開示された複合体の水溶液形態は、単数色素形態に比べて組織においての拡散が少ないため、手術用標識子として有利であるが、実際適用時に、注射の準備中にすでに沈んでいて一定の量が注射されない問題が発生した。
【００１３】
また、韓国特許登録第１０−１５５２１３８号に開示された複合体の水溶液形態は、粘度が低いため、注射時に過量あるいは少量で注射される傾向にあった。したがって、注射経験が少ない場合や注射が難しい臨床状況で一定の大凝集アルブミン量が注射されなかった。注射の準備中に注射器内で沈む場合、固まったまま、注射されて、標識部位が一定でない場合が観察された。また、注射量が多かったり、注射される組織が堅い場合（瘢痕組織、筋肉組織）、注射された溶液が緩い組織に組織と組織間の膜や筋肉部位などに沿って広く広がる場合もあった。
【００１４】
すなわち、筋肉の場合、筋膜に沿って広く広がることができ、瘢痕組織の場合、瘢痕組織の繊維組織のきめに沿って長く広がることができる。これを防止するために、比較的太い針を利用し、少量をゆっくり注射しなければならないが、このような方式は、臨床的に使用するに際して、非常に不便な側面がある。
【００１５】
したがって、注射剤内に含まれる複合体が固まって注射針を塞いだり、一定の量で注射されない問題や周辺の組織に非常に早く広がる問題を解決できる注射剤組成物などが必要な実情である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】韓国特許登録第１０−１５５２１３８号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明は、前述した問題点を解決するためのものであって、注射剤組成物内に粘度を調節できる組成を追加して、複合体が早く沈む問題を解決できる病変標識用注射剤組成物を提供しようとする。
【００１８】
特に、複合体が早く沈む問題を解決して、一定の量の複合体が注射され得、周辺組織に非常に早く広がる問題点を解決できる病変標識用注射剤組成物を提供しようとする。
【００１９】
なお、前述した病変標識用注射剤組成物を利用して、病変の位置に関する情報を提供する方法を提供しようとする。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
上記の目的を達成するために、
本発明は、一実施例において、
活性成分を含有し、平均密度が１．１〜１．４ｇ／ｍｌである複合体を含む第１組成と；
平均分子量が０．５〜３．０ＭＤａである第２組成と；を含み、
前記第２組成は、常温で２４〜１５００ｃｐｓの粘度を有することを特徴とする病変標識用注射剤組成物を提供する。
【００２１】
また、本発明は、一実施例において、
下記段階を含む、病変の位置に関する情報を提供する方法を提供する：
（ａ）前記注射剤組成物を個体で発生した病変に投与する段階；および
（ｂ）前記個体から活性成分の信号が発生して病変の位置を確認する段階。
【発明の効果】
【００２２】
本発明による病変標識用注射剤組成物は、活性成分を含有する複合体を含む第１組成に生体適合性粘性物質を含む第２組成を含むことにより、複合体が早く沈む問題を解決することができる。
【００２３】
特に、本発明による病変標識用注射剤組成物は、注射の準備中に複合体が早く沈む問題を解決して、一定の量の複合体が注射され得るようにする効果を有し、過量の複合体が注射される問題および複合体が周辺に非常に早く広がる問題を解決することにより、臨床的に便利で且つ安定的に使用され得る効果を有することができる。
【００２４】
また、本発明の注射剤組成物にヒアルロン酸またはコラーゲンなどのような生体適合性粘性物質が一定量添加されることにより、筋肉組織、乳房組織、皮下組織、皮膚組織などのような様々な組織に同じ量を注射する場合、前記粘性物質が含まれていない場合に比べて、極めて一定に注射される効果を示すことができ、注射を早くする場合にも、前記粘性物質が含まれていない場合に比べて極めて少なく広がる効果を示すことができる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は、ＩＣＧ−ＭＡＡの密度を推定するための線形回帰式を示すグラフである。
【図２】図２は、ＩＣＧとＭＡＡの濃度変化によるＩＣＧ−ＭＡＡ複合体の近赤外線蛍光の信号強度の変化を示すグラフである。
【図３】図３は、ＨＡ濃度が互いに異なる二つのＭＡＡを比較した写真である（（ａ）０．１％のＨＡ、（ｂ）０．５％のＨＡ）。
【図４】図４は、ＨＡが存在する／存在しないＭＡＡ水溶液の明視野イメージ（ｂｒｉｇｈｔ  ｆｉｅｌｄ  ｉｍａｇｅ）を示す。
【図５】図５は、多様なＭＡＡの濃度で、５μＭのＩＣＧからの蛍光信号を測定したものを示す。
【図６】図６は、鶏ささみと鶏砂嚢に注射した後、切開前あるいは切開後に撮影したＮＩＲＦ（Ｎｅａｒ−Ｉｎｆｒａｒｅｄ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ）イメージを示す。
【図７】図７は、注射針経路に沿って注射された鶏ささみを切開した後の可視化した切断面の明視野およびＮＩＲＦイメージを示す。
【図８】図８は、内視鏡用注射器（ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ  ｃａｔｈｅｔｅｒ）を利用して胃癌手術におけるＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡ混合物の適用性を実験したものを示す。
【図９】図９は、ヒアルロン酸の有無によって蛍光信号を測定した結果を示す図である（（ａ）ヒアルロン酸が添加されていない、（ｂ）０．１％のヒアルロン酸が添加される）。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明は、多様な変更を加えることができ、様々な実施例を有することができるところ、特定の実施例を図面に例示し、詳細な説明に詳細に説明しようとする。
しかしながら、これは、本発明を特定の実施形態に対して限定しようとするものではなく、本発明の思想および技術範囲に含まれるすべての変更、均等物ないし代替物を含むことが理解されなければならない。
【００２７】
本発明において、「含む」または「有する」などの用語は、明細書上に記載された特徴、数字、段階、動作、構成要素、部品またはこれらを組み合わせたものが存在することを指定しようとするものであって、一つまたはそれ以上の他の特徴や数字、段階、動作、構成要素、部品またはこれらを組み合わせたものなどの存在または付加可能性をあらかじめ排除しないものと理解されなければならない。
【００２８】
本発明は、病変標識用注射剤組成物に関し、より詳細には、注射剤組成物内に粘度を調節できる組成を追加して、複合体が早く沈む問題を解決できる病変標識用注射剤組成物に関する。
【００２９】
特に、本発明による病変標識用注射剤組成物は、前記粘度を調節できる組成を追加して、複合体が早く沈む問題を解決することができ、これに伴い、一定の量の複合体が注射され得る効果がある。
【００３０】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明は、一実施例において、
活性成分を含有し、平均密度が１．１〜１．４ｇ／ｍｌである複合体を含む第１組成と；
分子量が０．５〜３．０ＭＤａである第２組成と；を含み、
前記第２組成は、常温で２４〜１５００ｃｐｓの粘度を有することを特徴とする病変標識用注射剤組成物を提供する。
【００３１】
より具体的に、大凝集アルブミンに活性成分が結合された複合体は、平均密度が１．１〜１．４ｇ／ｍＬと比較的高い密度を有していて、前記複合体は、注射の準備中に注射器内で沈む問題が発生した。
【００３２】
したがって、本発明は、注射の準備中に複合体が早く沈む問題点を解決するためのものであって、前述した第１組成に平均分子量が０．５〜３．０ＭＤａである第２組成を追加して粘度を調節したことを特徴とする。
【００３３】
まず、以下では、本発明の第１組成について詳細に説明することとする。
本発明の一実施例において、第１組成は、大凝集アルブミン（ ｍａｃｒｏａｇｇｒｅｇａｔｅｄ  ａｌｂｕｍｉｎ、ＭＡＡ）に活性成分が結合された組成を含むことができる。
【００３４】
本発明において、「大凝集アルブミン（ＭＡＡ）」とは、ヒトの血清アルブミンを加熱して凝固させて製造された直径１０〜５０μｍのタンパク質性粒子を意味する。
【００３５】
一方、直径が１０ｎｍ未満のヒト血清アルブミンと比較して、その構造および物理的特性が異なり得、前記ＭＡＡは、静脈注射する場合、約８μｍの肺毛細管に滞留し、微小塞栓を引き起こす特性を示すので、前記特性を利用して、放射性同位元素で標識されたＭＡＡは、肺シンチグラフィー（肺塞栓、肺血栓、高安病、肺炎、肺癌などの肺血類異常あるいは左右シャントや肺靜脈圧亢進の診断）または静脈スキャン（当該部位で中枢の静脈血診断）や静脈スキャン（バージャー病など末梢動脈血流異常の診断）等に使用されてきた。本発明のＭＡＡは、癌病変組織に注入して、癌病変組織に標識物質を結合させるための媒介体として使用され得る。
【００３６】
なお、本発明のＭＡＡ、組換えＨＳＡを利用して合成することができ、自己由来でないＨＳＡを利用して合成することもできる。また、商業的に利用可能なものを購入して使用することもできる。本発明のＭＡＡは、癌病変組織に注入して、癌病変組織に標識物質を結合させるための媒介体として使用され、前記媒介体は、標識物質を吸着させて前記標識物質が癌病変組織に広がることを防止する役割を行うことができる。
【００３７】
なお、本発明の一実施例において、「活性成分」は、輻射エネルギーの吸収、放電、粒子の衝撃などにより分子、原子イオンなどのエネルギーを高めて化学反応を起こしやすい状態になる成分を意味するものであって、活性成分は、生体組織染色用色素、放射性同位元素またはこれらの組合せを意味し得る。
【００３８】
本発明の一実施例において、前記生体組織染色用色素は、目視で確認可能な色素または蛍光色素であってもよい。
【００３９】
前記目視で確認可能な色素は、中性赤、ナイル青、ビスマルクブラウン、リチウムカルミン、トリパンブルー、ヤヌスグリーン、メチルバイオレット、オーラミン、マラガライトグリーン、サプラニン、エオシン、コンゴレッド、エリスロシン、ニグロシン、アルシアンブルー、ヘマトキシリン、アニリンブルー、ライトグリーンよびこれらの組合せよりなる群から選択され得る。
【００４０】
本発明の一実施例において、前記蛍光色素は、近赤外線蛍光色素であってもよく、前記近赤外線蛍光色素は、インドシアニングリーン（ｉｎｄｏｃｙａｎｉｎｅ  ｇｒｅｅｎ、ＩＣＧ）であってもよいが、これに制限されるものではない。
【００４１】
本発明の用語「生体組織染色用色素」とは、生体組織に結合して、結合された位置を標識することにより、標識された位置を目視でまたは検出用ツールを使用して確認できるようにする物質を意味する。本発明の目的上、前記生体組織染色用色素は、癌組織に結合されて、癌の発生部位を標識する用途に使用され得る標識物質となり得る。好ましくは、目視で確認可能な色素、結合部位で蛍光を発生させて蛍光カメラなどの装備を使用して検出できる蛍光色素などを単独でまたは組み合わせて使用することができるが、特にこれに制限されるものではない。
【００４２】
本発明の用語「目視で確認可能な色素」とは、生体組織に結合した標識物質が可視光線領域の色を示し、標識された部位を目視で確認できるようにする色素の一種を意味する。本発明の目的上、前記目視で確認可能な色素は、癌が発生した部位に注射して、外科手術的な方法で癌を除去する場合、切除する癌病変を明確に確認できるようにして、癌手術の成功率を向上させる役割を行うことができる。前記目視で確認可能な標識物質は、好ましくは、中性赤、ナイル青、ビスマルクブラウン、リチウムカルミン、トリパンブルー、ヤヌスグリーン、メチルバイオレット、オーラミン、マラガライトグリーン、サプラニン、エオシン、コンゴレッド、エリスロシン、ニグロシン、アルシアンブルー、ヘマトキシリン、アニリンブルー、ライトグリーンなどを単独でまたは混合して使用することができるが、癌病変組織を確認できるようにする目的を達成できる限り、特にこれに制限されるものではない。
【００４３】
本発明の用語「蛍光色素」とは、一定波長の光を吸収して励起状態を形成した後、光の浸透距離が最大となり、水分によるエラー信号を最小化できる蛍光を発生する有機化合物を意味する。好ましくは７００ｎｍ〜３０００ｎｍ、より好ましくは７５０ｎｍ〜９００ｎｍの近赤外線波長の蛍光を発生する有機化合物である近赤外線蛍光色素であってもよい。前記近赤外線蛍光色素から発生する近赤外線波長の蛍光は、蛍光カメラ、蛍光センシングプローブ（ＰＣＴ／ＫＲ２０１１／００９２７１）等の装備を利用して写真の形態で撮影したり、リアルタイムでモニタリングすることができる。本発明の近赤外線波長の蛍光は、生体内における吸収が他の波長帯に比べて相対的に少ないため、比較的生体内の深い部位で発生する近赤外線も生体の外部で検出が可能である。本発明の目的上、前記近赤外線領域蛍光色素は、癌が発生した部位に注射して外科手術的な方法で癌を除去する場合、切開する前に癌病変部位を正確に確認できるようにして、癌手術の成功率を向上させる役割を行うことができる。特に、前記目視で確認可能な色素とは異なって、切開して直接的な病変を確認する前に、体外でも病変の位置を検出することができるので、迅速で且つ正確な癌手術の実行を図ることができるようにする。前記近赤外線蛍光色素としては、好ましくは、インドシアニングリーンなどが使用でき、人体に使用可能な近赤外線蛍光色素である限り、本発明の範囲に含まれていてもよい。
【００４４】
前記近赤外線蛍光色素がＭＡＡに結合された複合体は、腫瘍に蓄積されるものとして知られている他の物質に近赤外線蛍光色素が結合された複合体に比べて、検出される蛍光信号の安定性および正確性に優れているという長所を示すので、微細病変を見出すことができる割合が高く、病変切除の正確度を向上させることができる。
【００４５】
本発明の用語「インドシアニングリーン（ｉｎｄｏｃｙａｎｉｎｅ  ｇｒｅｅｎ、ＩＣＧ）」とは、生物学または医学分野において広く使用される近赤外線領域の蛍光映像用染料を意味する。人体に注入された後、一時間程度経過すると、分解されてなくなったり、大小便として排出される特性があって、人体に使用可能な蛍光染料として臨床的適用に有利である。実際に、インドシアニングリーンを利用して人体に適用した事例は、様々な論文に報告されたことがあり、一例として乳癌患者１８名において安全に臨床的に使用したことが報告された（Ｔ．Ｋｉｔａｉ、ｅｔ  ａｌ．、Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ、１２：２１１−２１５、２００５）。なお、前記近赤外線蛍光色素を吸着結合させることは、本発明のＭＡＡに近赤外線蛍光色素を混合させる段階を通じて達成することができる。
【００４６】
本発明の一実施例によれば、ＭＡＡにＩＣＧが結合された複合体（ＩＣＧ−ＭＡＡ）の製造時に、高い水準の近赤外線蛍光信号を示す複合体を製造するのに適した混合比率は、０．２３ｍｇ／ｍｌのＭＡＡに対しては、３．９μＭのＩＣＧ、２．３ｍｇ／ｍｌのＭＡＡに対しては６．５μＭのＩＣＧおよび１１．５ｍｇ／ｍｌのＭＡＡに対しては６．５μＭのＩＣＧであることを確認した。生体内に注射する場合は、生体内における拡散などにより濃度が変化するので、注射時点に正確な濃度を定めることができないが、実験的に注射注入が容易な２〜４ｍｇ／ｍｌのＭＡＡに対して６．５μＭのＩＣＧで最も蛍光が高い値を示すことを確認したので、好ましくは２ｍｇ／ｍｌのＭＡＡに対して６．５μＭのＩＣＧが使用できる。
【００４７】
本発明の用語「放射性同位元素」とは、原子番号が同一であるが、原子量が異なり、放射能を発散できる元素を意味する。ガンマ線や他の亜原子粒子を放出して放射性減衰をする特性を利用して一般的に疾病を診断するのに重要な標識子として使用されることもある。本発明の目的上、前記放射性同位元素は、近赤外線蛍光色素で発生する蛍光が検出されない程度の深部組織に癌が発生した部位に注射して、外科手術的な方法で癌を除去する場合、切開する前に癌病変部位を正確に確認できるようにして、癌手術の成功率を向上させる役割を行うことができる。前記放射性同位元素は、癌病変に結合し得るＭＡＡに標識できる特性を示すものであれば、特に制限されない。好ましくは、Ｈ−３、Ｃ−１４、Ｐ−３２、Ｓ−３５、Ｃｌ−３６、Ｃｒ−５１、Ｃｏ−５７、Ｃｏ−５８、Ｃｕ−６４、Ｆｅ−５９、Ｙ−９０、Ｉ−１２４、Ｉ−１２５、Ｒｅ−１８６、Ｉ−１３１、Ｔｃ−９９ｍ、Ｍｏ−９９、Ｐ−３２、ＣＲ−５１、Ｃａ−４５、Ｃａ−６８等が挙げられ、より好ましくは、医学的に使用されるＩ−１２４、Ｉ−１２５、Ｉ−１３１、Ｃｕ−６４、Ｔｃ−９９ｍ、Ｍｏ−９９、ＣＲ−５１、Ｃａ−４５、Ｃａ−６８等が挙げられ、最も好ましくは、Ｔｃ−９９ｍが使用できる。
【００４８】
本発明の用語「Ｔｃ−９９ｍ」とは、テクネチウム（ｔｅｃｈｎｅｔｉｕｍ、Ｔｃ）の放射性同位元素であって、６時間の短い半減期を有し、ガンマ線を発生させて映像用に使用され、被爆量が非常に少なく、組織透過度に優れ、一部の色素に現れるアレルギー反応も起こらないため、医学研究に広く使用される。
【００４９】
本発明の用語「個体」とは 、癌が発病して病変を示すことができ、本発明の癌病変標識用複合体または組成物が投与され得る生きている有機体を意味する。
【００５０】
本発明において提供する病変標識用注射剤組成物を生体内の癌病変組織に投与する場合、投与された癌病変に結合されて、病変の位置を色、近赤外線蛍光、放射能またはこれらの組合せを通じて標識することができ、前記標識を検出することにより、癌病変の位置、大きさなどを手術中にリアルタイムで検出することができるので、外科的な癌病変の除去時に正確性を向上させることができ、正常組織の過多な損失を防止することができる。
【００５１】
なお、本発明の注射剤組成物に含まれた複合体は、他の物質に生体組織染色用色素を結合させた複合体に比べて、生体内の癌病変で長期間残留することができるので、癌病変の外科的な切開時だけでなく、外科的な施術による癌病変切除の正確度を容易に確認することができる。例えば、超音波等を用いて手術前に微細病変の位置を確認した後、本発明の複合体を病変部の上に注入し、数時間後に手術中にも安定で且つ正確に病変部位を確認することができる。
【００５２】
本発明の一実施例において、前記ＭＡＡは、緩衝液に対して１〜８ｍｇ／ｍｌの濃度で使用されることが好ましいが、これに制限されるものではない。
【００５３】
本発明の一実施例において、１〜８ｍｇ／ｍｌのＭＡＡに対して前記ＩＣＧは４〜２５０μＭが使用されることが好ましい。ＭＡＡの溶解度を考慮するとき、より好ましくは、２〜４ｍｇ／ｍｌのＭＡＡに対して６．５μＭのＩＣＧが使用できる。しかし、体内の注射後に条件に応じて最大の蛍光強度を示すように、実施例では、記述した範囲内で適切なＭＡＡとＩＣＧの濃度は調整が可能である。
【００５４】
本発明の一実施例において、前記放射線同位元素は、Ｈ−３、Ｃ−１４、Ｐ−３２、Ｓ−３５、Ｃｌ−３６、Ｃｒ−５１、Ｃｏ−５７、Ｃｏ−５８、Ｃｕ−６４、Ｆｅ−５９、Ｙ−９０、Ｉ−１２４、Ｉ−１２５、Ｒｅ−１８６、Ｉ−１３１、Ｔｃ−９９ｍ、Ｍｏ−９９、Ｐ−３２、ＣＲ−５１、Ｃａ−４５、Ｃａ−６８およびこれらの組合せよりなる群から選択され得る。
【００５５】
次に、以下では、本発明の一実施例による第２組成について詳細に説明することとする。
本発明の一実施例による第２組成は、分子量が０．５〜３．０ＭＤａであり、生体適合性粘性物質を含むことを特徴とする。
【００５６】
特に、第２組成は、所定の粘度を有していて、病変標識用注射剤組成物に追加することにより、第１組成に含まれる複合体が早く沈む問題を解決することができ、これに伴い、一定の量の複合体が注射され得る効果がある。
【００５７】
前記第２組成の分子量は、０．５〜３．０ＭＤａであってもよく、または１．０〜２．０ＭＤａであってもよい。第２組成は、比較的小さい分子量と所定の粘度を有していて、第１組成に含まれる複合体が早く沈む問題を解決することができる。
【００５８】
ここで、分子量の単位「Ｄａ」は、質量を表示する単位であって、酸素原子の質量の１／１６を１ｄａｌｔｏｎといえる。
【００５９】
なお、第２組成は、常温で５〜１５００ｃｐｓの粘度を有することができ、１００〜９００ｃｐｓを有することができ、好ましく１００〜３５０ｃｐｓの粘度を有することができる。
【００６０】
より具体的に、常温で第２組成の粘度が５ｃｐｓ未満である場合には、粘度が小さいため、第１組成に含まれる複合体が早く沈む問題を解決することができず、１５００ｃｐｓを超過する場合には、粘度が非常に高くて、組織に注射時に高い圧力により注射が難しくなる困難を経験することができる。
【００６１】
本発明の一実施例において、第２組成は、生体適合性粘性物質を含むことができ、前記生体適合性粘性物質は、ヒアルロン酸（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、ＨＡ）またはコラーゲンであってもよいが、これに制限されるものではない。
【００６２】
好ましくは、前記生体適合性粘性物質は、ヒアルロン酸であってもよい。
【００６３】
本発明の一実施例において、第２組成は、全体注射剤組成物に対して０．２％（ｗ／ｖ）〜１％（ｗ／ｖ）で添加され得る。
【００６４】
より具体的に、第２組成が全体注射剤組成物に対して、０．２％（ｗ／ｖ）未満で含まれる場合、注射剤組成物の懸濁性維持時間が短いため、複合体が早く沈んで、組織に一定の量で注射させることが難しいことがあり、特に、組織内注射時に一度に過量が注射されたり、周辺に非常に早く広がる問題が発生し得る。
【００６５】
また、全体注射剤組成物に対して、前記第２組成が１％（ｗ／ｖ）を超過すると、第２組成の濃度により粘度が高くなって、注射時に高い圧力が加えられて、手ぶらでは注射しにくいことがある。
【００６６】
一様態として、注射剤組成物を１８〜２６Ｇ針を含む注射器に担持された状態で０．２％（ｗ／ｖ）〜１％（ｗ／ｖ）で添加され得、他の様態として、内視鏡用注射器を利用する場合、０．２〜０．５％（ｗ／ｖ）を含むことができる。
【００６７】
一方、本発明の一実施例による注射剤組成物は、常温で測定時に、下記数式１を満たす病変標識用注射剤組成物を提供することを特徴とする。
【００６８】
［数式１］
｜Ｔ２−Ｔ１｜＜１５％
【００６９】
Ｔ１は、製造された注射剤組成物を１×１×３ｃｍ３サイズの透明容器に担持された状態で、前記容器高さの１／４の地点で測定した５５０ｎｍに対する透過度（％）であり、
Ｔ２は、製造された注射剤組成物を１×１×３ｃｍ３サイズの透明容器に担持された状態で１２０分間放置した後、前記容器高さの１／４の地点で測定した５５０ｎｍに対する透過度（％）である。
【００７０】
ここで、透過度というのは、物質層を光が通過する程度、物質層に対する入射光の強さをＩ１、これを通過して出た光の強さをＩ２というとき、Ｔ＝Ｉ２Ｉ１を透過度と言える。
【００７１】
なお、透明容器は、横×縦×高さが１×１×３ｃｍ３であってもよいが、これに限定されるものではない。
【００７２】
また、容器高さの１／４の地点というのは、前記容器の底面から１／４に該当する地点を意味することができる。
【００７３】
一例において、０．４％（ｗ／ｖ）のヒアルロン酸を添加して製造された注射剤組成物を１×１×３ｃｍ３サイズの透明容器に担持された状態で、前記容器の１／４の地点で測定した５５０ｎｍに対する透過度（Ｔ１）が０．４％であってもよく、製造された注射剤組成物を１×１×３ｃｍ３サイズの透明容器に担持された状態で１２０分間放置した後、前記容器の１／４の地点で測定した５５０ｎｍに対する透過度（Ｔ２）は、７８．７１％であってもよい。
【００７４】
すなわち、注射剤組成物内に粘度を調節できる第２成分を添加することにより、懸濁性維持時間が長くなることになって、｜Ｔ２−Ｔ１｜＜１５％であってもよい。
【００７５】
これに加えて、本発明の一実施例による注射剤組成物は、常温で測定時に、下記数式２を満たす病変標識用注射剤組成物を提供することができる。
【００７６】
［数式２］
｜Ｆ２−Ｆ１｜＜２０ｇｆ
【００７７】
Ｆ１は、製造された注射剤組成物を２６Ｇ針が結合された注射器に担持された状態で注射開始時に測定した滑走力であり、
Ｆ２は、製造された注射剤組成物を２６Ｇ針を含む注射器に担持された状態で１２０分間放置した後、注射するときの注射開始時に測定した滑走力である。
【００７８】
ここで、滑走力の単位である「ｇｆ」は、力の大きさを意味するものであり、ｇ重（ｇｒａｖｉｔａｉｏｎａｌ  ｆｏｒｃｅ）を意味することができ、１ｇ重は、０．００９８Ｎを示す。
【００７９】
なお、「滑走力」というのは、組成物を注射器内に担持させた状態で注射器で注射するときに指にかかる力（ｇｌｉｄｉｎｇ  ｆｏｒｃｅ）を意味することができる。
【００８０】
一方、２６Ｇ（Ｇｕａｇｅ）は、針の内径が０．２４１ｍｍである注射器を意味することができる。
【００８１】
特定の様態として、前記数式２によって測定された滑走力は、５ｇｆ以下であってもよい。すなわち、｜Ｆ２−Ｆ１｜は、５ｇｆ以下であってもよい。
【００８２】
特に、｜Ｆ２−Ｆ１｜に対する数値が少なく出るというのは、注射剤組成物を所定時間放置した後、注射開始と注射するときの中間基点の圧力が差異が小さいことを意味し、これは、１２０分間放置しても、注射剤組成物の懸濁性が維持されたことを意味し、特に、注射剤組成物内で複合体の沈降速度が遅くなったことを意味する。
【００８３】
なお、Ｆ２は、１２０〜１６５ｇｆの滑走力を有することを特徴とし、より具体的に、第２組成が全体注射剤組成物に対して０．２％（ｗ／ｖ）〜１％（ｗ／ｖ）含まれるとき、Ｆ２は、１２０〜１６５ｇｆであってもよい。
【００８４】
すなわち、本発明の注射剤組成物にヒアルロン酸またはコラーゲンなどのような生体適合性粘性物質を一定量添加することにより、注射の準備中に複合体が早く沈む問題を解決して、一定の量の複合体が注射され得るようにする効果を有し、過量の複合体が注射される問題および複合体が周辺に非常に早く広がる問題を解決することができる。また、本発明の注射剤組成物にヒアルロン酸またはコラーゲンなどのような生体適合性粘性物質が一定量添加されることにより、筋肉組織、乳房組織、皮下組織、皮膚組織などのような様々な組織に同じ量を注射する場合、前記粘性物質が含まれていない場合に比べて、極めて少なく広がる効果を示すことができ、注射を早くする場合にも、前記粘性物質が含まれていない場合に比べて、極めて少なく広がる効果を示すことができる。
【００８５】
本発明の一実施例において、前記病変は、癌病変であってもよいが、これに制限されるものではない。
【００８６】
本発明の一実施例において、前記癌は、前立腺癌、乳癌、子宮癌、皮膚癌、子宮頸癌、肺癌、脳腫瘍、胃腸管腫瘍、肝癌、軟組織肉腫、リンパ腫およびこれらの組合せよりなる群から選択される固形癌であってもよい。
【００８７】
本発明の一実施例において、本発明による注射剤組成物は、癌除去手術中にリアルタイムで前記癌病変組織の大きさおよび位置を確認するのに使用できる。
【００８８】
また、本発明は、下記段階を含む、病変の位置に関する情報を提供する方法に関する：
（ａ）本発明による注射剤組成物を個体で発生した病変に投与する段階；および
（ｂ）前記個体から活性成分の信号が発生して病変の位置を確認する段階を含む。
【００８９】
以下、実施例を通じて本発明をより一層詳細に説明しようとする。これらの実施例は、ただ本発明を例示するためのものであって、本発明の範囲がこれらの実施例により制限されるものと解釈されないことは、当業界における通常の知識を有する者にとって自明だろう。
【００９０】
＜製造例＞
製造例１：大凝集アルブミン（ＭＡＡ）の製造
大凝集アルブミン（ＭＡＡ）を製造するために、０．１Ｍのアセテート緩衝液（ｐＨ５．４、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｋｏｒｅａ）に希釈された２％ヒト血清アルブミン１０ｍｌ（ＳＫプラズマ）を塩化スズ５０ｍｇ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｋｏｒｅａ）と混合し、１０分間室温で強く撹拌した後、７０℃で２０分間さらに撹拌して反応させた。
そして、反応が終了した後、更なる凝集を防止するために、前記反応物を氷に入れて急速冷却させた。
【００９１】
次に、冷却させた反応物に２０％ヒト血清アルブミン０．３５ｍｌを追加した後（ヒト血清として７０ｍｇ）、室温で１０分間撹拌し、前記反応物をＭＡＡ基準１、２、４、８ｍｇずつガラスバイアルに分注し、凍結乾燥して、凍結乾燥したＭＡＡキットを製造した。
【００９２】
最終的に、ＭＡＡキットには、凍結乾燥したＭＡＡがそれぞれ１、２、４、８ｍｇが含まれた。
【００９３】
前述したように、記述したように、ＭＡＡを製造するとき、アセテート緩衝液が製造過程中に使用され、凍結乾燥したＭＡＡキットには、注射用水あるいはＨＡが含まれた注射用水で溶かして使用される。
【００９４】
製造例２：インドシアニングリーン（ＩＣＧ）が結合されたＭＡＡ基盤標識子の製造
製造例２−１：ＩＣＧとＭＡＡの混合比率の決定
近赤外線蛍光を示すＭＡＡ基盤の標識子を製造するために、実施例１で製造したＭＡＡに近赤外線蛍光を示すインドシアニングリーン（Ｉｎｄｏｃｙａｎｉｎｅ  ｇｒｅｅｎ、ＩＣＧ、第一薬品、ジアグノグリーン注射）を結合して、複合体（ＩＣＧ−ＭＡＡ）を製造した。
【００９５】
この際、最も強い近赤外線蛍光を示すことができるＩＣＧとＭＡＡの混合比を決定するために、１．３〜１０３２μＭのＩＣＧと０〜１１．５ｍｇ／ｍｌのＭＡＡを多様な割合で反応させて、それぞれのＩＣＧ−ＭＡＡ複合体を製作した。
そして、製作されたそれぞれのＩＣＧ−ＭＡＡ複合体に示される近赤外線蛍光の信号強度を測定した（表１および図２）。
【００９６】
図２は、ＩＣＧとＭＡＡの濃度変化によるＩＣＧ−ＭＡＡ複合体の近赤外線蛍光の信号強度の変化を示すグラフである。
【００９７】
【表１】
2019513783.tif 000003
【００９８】
表１と図２を参照すると、ＭＡＡを処理しない場合には、２５．８μＭのＩＣＧが、最も高い値の近赤外線蛍光の信号強度を示し、０．２３ｍｇ／ｍｌのＭＡＡを処理した場合には、３．９μＭのＩＣＧが、最も高い値の近赤外線蛍光の信号強度を示した。
【００９９】
なお、２．３ｍｇ／ｍｌのＭＡＡを処理した場合には、６．５μＭのＩＣＧが、最も高い値の近赤外線蛍光の信号強度を示し、１１．５ｍｇ／ｍｌのＭＡＡを処理した場合にも、７．５μＭのＩＣＧが、最も高い値の近赤外線蛍光の信号強度を示すことを確認することができた。
【０１００】
一方、生体に注射する場合は、生体内における拡散などによりＭＡＡとＩＣＧの濃度が変わることができ、注射時点に正確な濃度を定めることができないが、実験的に２ｍｇ／ｍｌのＭＡＡに対して６．５μＭのＩＣＧで最も蛍光が高い値を示すことを確認した。
【０１０１】
製造例２−２：ＩＣＧが結合されたＩＣＧ−ＭＡＡ複合体の製造
ＭＡＡ濃度が１、２、４、８ｍｇ／ｍｌであるＩＣＧ−ＭＡＡ複合体を製造した。ＩＣＧ−ＭＡＡ複合体製造反応は、常温で進めた。
【０１０２】
より具体的に、１、２、４、８ｍｇのＭＡＡ凍結乾燥キットにそれぞれ１３μＭのＩＣＧを０．５ｍｌずつ加え、約１分間軽く振って反応させた。次に、それぞれ蒸留水０．５ｍｌを加えて約５分間軽く振って、ＭＡＡ濃度が異なる６．５μＭのＩＣＧ−ＭＡＡ複合体を製造した。
【０１０３】
＜実施例＞
実施例１：ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡの製造
ＭＭＡ濃度が１、２、４、８ｍｇ／ｍｌであり、ＩＣＧが６．５μＭであり、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ、ＨＡ、Ｓｈａｎｄｏｎ  Ｆｏｃｕｓｃｈｅｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｃｏ．）の濃度が０．５％であるＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡ注射剤組成物を製造した。
【０１０４】
より具体的に、１、２、４、８ｍｇのＭＡＡ凍結乾燥キットにそれぞれ１３μＭのＩＣＧを０．５ｍｌずつ加え、約１分間軽く振って反応させる。次に、きあらかじめ溶解した０．２、０．４、０．６、０．８、１、２、４、８％（ｗ／ｖ）のＨＡ（１、４４８  ｋＤａ）をそれぞれ０．５ｍｌ添加した後、約５分間強く撹拌して、均一に混合されるようにした。
【０１０５】
結果的に、最終組成比率で０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、４％（ｗ／ｖ）のＨＡがそれぞれ含有され、ＩＣＧの濃度が６．５μＭであり、ＭＡＡが１、２、４、８ｍｇ／ｍｌであるＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡ注射剤組成物の合計３２種類を製造した。
参考として、ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡの製造工程は、常温で進めた。
【０１０６】
＜実験例＞
実験例１．ＩＣＧ−ＭＡＡ複合体の密度測定
ＩＣＧ−ＭＡＡ複合体の密度を測定した。
ＩＣＧ−ＭＡＡ複合体は、生体物質などの形態を損傷せず、水溶液の状態で実際使用形態で密度を直接測定することは難しいため、間接的に濃度による密度の変化を参考にしてＩＣＧ−ＭＡＡ複合体の密度を測定した。
【０１０７】
前記で製造したＭＭＡの濃度が２ｍｇ／ｍｌであり、ＩＣＧが６．５μＭであるＩＣＧ−ＭＡＡ複合体を利用して密度を測定し、２０ｍｇ／ｍｌ〜２００ｍｇ／ｍｌ（２〜２０％（ｗ／ｖ）の濃度のＩＣＧ−ＭＡＡ複合体を利用して、下記のようにＩＣＧ−ＭＡＡの密度を測定した。
【０１０８】
より具体的に、常温で、透明容器に２０ｍＬの蒸留水を満たした後、前述したＩＣＧ−ＭＡＡ複合体を投与して、前記ＩＣＧ−ＭＡＡ複合体を含む蒸留水の変化する密度を測定し、特に、ＩＣＧ−ＭＡＡ複合体の濃度によって変化する密度を測定した。
【０１０９】
参考として、ＩＣＧ−ＭＡＡ複合体を蒸留水に投与して溶解した場合、蒸留水が白色の懸濁性を呈することを確認することができた。
【０１１０】
表２は、ＩＣＧ−ＭＡＡ複合体を含む蒸留水に対する密度を示した表であり、ＩＣＧ−ＭＡＡ複合体が含まれる濃度別に記述した。
【０１１１】
【表２】
2019513783.tif 000004
【０１１２】
表２を参照して線形回帰分析で線形回帰式を求め、外挿で１００％であるときの密度を測定した（０．２７５７＊１００＋１．００６４＝１．２８２１）。
【０１１３】
その結果、回帰式によって、ＩＣＧ−ＭＡＡ複合体の密度は、１．２８２１ｇ／ｍＬと推定された（図１）。
なお、２０分後、蒸留水にＩＣＧ−ＭＡＡ複合体を溶解した蒸留水を確認したところ、容器の下方の部分に白色の懸濁液が沈んでいることを確認することができた。
【０１１４】
結果的に、ＩＣＧ−ＭＡＡ複合体の密度は、１．２８２１ｇ／ｍＬであり、常温における蒸留水の密度（０．９９８２１ｇ／ｍＬ）より高いものと判断した。
【０１１５】
実験例２．注射剤組成物の有用性評価
実験例２−１：注射剤組成物としてのＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡの有用性−１
注射剤組成物としてのＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡの有用性を判断するために、ＨＡの濃度によるＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡの懸濁性維持時間を測定した。参考として、ＭＡＡは、２ｍｇ／ｍｌの濃度を利用し、ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡ最終注射物は、ＭＡＡとＩＣＧが完全に溶解すると、淡緑色の懸濁液の性状を示す。
【０１１６】
より具体的に、ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡ注射物が製造された後に、懸濁性を維持する時間を測定し、追加されるＨＡの濃度による懸濁性を維持する時間を測定した。ここで、懸濁性は、５００ｎｍ光の透過度２０％を基準として沈む部位と浮遊部位が区分される基準が見える時点で懸濁性維持時間を定義した。
そして、その結果を表２に記述した。
【０１１７】
表３は、ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡ注射物が製造された後に懸濁性が維持される時間をＨＡ溶剤の濃度別に示した表である。
【０１１８】
【表３】
2019513783.tif 000005
【０１１９】
表３を参照すると、ＨＡが添加されていない注射剤組成物は、ＨＡを添加した組成物より懸濁性維持時間が比較的短く、ＨＡが添加される比率が増加するほど懸濁性維持時間が長くなることを確認することができた。
【０１２０】
一方、０．１％のＨＡが注射剤組成物に添加されたとき、懸濁性維持時間が３０分以内に増加したが、ＨＡの濃度が０．２％（ｗ／ｖ）から懸濁性が２時間を超え、ＨＡの濃度が０．３％（ｗ／ｖ）からは懸濁性が８時間を超えることを確認した。
すなわち、０．２％（ｗ／ｖ）から実際の注射用製剤として効果的であると判断された。
【０１２１】
図３は、ＨＡ濃度が互いに異なる二つのＭＡＡを比較した写真を示す。
より具体的に、前記で製造したＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡ注射剤を３０分が経過した後に撮影した写真であり、図３（ａ）は、０．１％のＨＡが添加されたＭＡＡの写真であり、図３（ｂ）は、０．５％のＨＡが添加されたＭＡＡの写真である。
【０１２２】
図３を参照すると、０．１％のＨＡが添加された注射剤組成物は、早く沈むのに対し、０．５％のＨＡが添加された注射剤組成物は、長時間沈まないことが分かった。すなわち、図３から、ＩＣＧ−ＭＡＡに０．５％のＨＡが添加されたＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡは、注射の準備中に早く沈まないことであるから、注射剤組成物として非常に有用であることが分かる。
【０１２３】
実験例２−２：注射剤組成物としてのＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡの有用性−２
実験例２−２では、ヒアルロン酸（ＨＡ）の濃度によって注射時に指にかかる力（ｇｌｉｄｉｎｇ  ｆｏｒｃｅ）を様々な条件で測定し、注射剤組成物としてＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡの有用性を判断した。
【０１２４】
より具体的に、最終製造された注射物を注射剤として使用する場合、注射の容易性を１８Ｇ、２１Ｇ、２２Ｇ、２３Ｇ、２６Ｇ針をそれぞれ装着した１ｃｃの使い捨て注射器を利用して評価した。
【０１２５】
一方、組成物の特性として注射器で注射するときにかかる負荷は、１８Ｇａｕｇｅ（針の内径：０．８３８ｍｍ）、２１Ｇ（針の内径：０．４９５ｍｍ）、２２Ｇ（針の内径：０．３９４ｍｍ）、２３Ｇ（針の内径：０．３１８ｍｍ）、２６Ｇ（針の内径：０．２４１ｍｍ）別に調査した。
【０１２６】
なお、１．８ｍの連結導管を有する内視鏡注射器（７Ｆｒ、長さ１８０ｃｍ、ＭＴＷ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて抵抗性（注射時に指にかかる力）を測定した。
そして、その結果を下記の表４に記述した。
【０１２７】
【表４】
2019513783.tif 000006
【０１２８】
一般的に、臨床で使用する注射針を利用する場合、６０〜１４０ｇｆの力が注射時に加えられた。ヒアルロン酸（ＨＡ）１％濃度までは、注射時に抵抗が大きくないため、使用に困難がなかった。
【０１２９】
他方で、導管の長さが長くて、抵抗が多くかかる内視鏡用注射器針（７Ｆｒ、１８０ｃｍ）を利用する場合、水は、１４０ｇｆの力がかかり、ＨＡの濃度が０．６％（ｗ／ｖ）である場合は、７８０ｇｆの力がかかって、顕著に高い圧力が加えられる場合にのみ、注射が可能であった。
【０１３０】
個人差があるが、７００ｇｆの滑走力（ｇｌｉｄｉｎｇ  ｆｏｒｃｅ）がかかる場合、組織に注射することに困難を感じて精密に注射することが難しい。一方、内視鏡用注射器針（７Ｆｒ、１８０ｃｍ）を利用したとき、ＨＡ０．６０％は、７８０ｇｆの力がかかって、顕著に高い圧力が加えられる場合のみに注射が可能であり、ＨＡ０．７０％からは抵抗が大きくなって、手ぶらでは注射することができなかった。
【０１３１】
すなわち、ヒアルロン酸は、一般的な注射条件では１％（ｗ／ｖ）まで可能であり、針が長く、注射器から針まで微細な導管で連結された特殊注射器（内視鏡注射器）の場合には、０．５％（ｗ／ｖ）まで手で注射することができた。
【０１３２】
一方、組織と直接当接する一般的な注射器（２６Ｇ〜１８Ｇ）を利用する場合には、組織に柔らかに注射することが好ましく、２００ｇｆ未満の力がかかることが理想的であり、ヒアルロン酸の場合、１％（ｗ／ｖ）までは２００ｇｆ未満の力で注射が可能になることを確認することができた。
【０１３３】
実験例３．ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡの沈降による注射器圧力の変化
実験例３−３：ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡの沈降による注射器圧力の変化−１
実施例３−３では、ヒアルロン酸が添加される注射剤組成物をすぐに注射する場合の圧力（Ａ）と前記注射剤組成物を１２０分間放置した後、組成物が沈降した後に注射器にかかる圧力（Ｂ）を測定して、下記の表に記述した。
【０１３４】
この際、注射器は、２６Ｇを使用して注射器の滑走力（ｇｌｉｄｉｎｇ  ｆｏｒｃｅ）を測定した。
なお、滑走力の単位は、ｇｆであり、ｇ重（１ｇ重＝０．００９８Ｎ）を示す。
【０１３５】
【表５】
2019513783.tif 000007
【０１３６】
表５を参照すると、ヒアルロン酸が添加される注射剤組成物をすぐに注射する場合の圧力（Ａ）と前記注射剤組成物を１２０分間放置した後、組成物が沈降した後に注射器にかかる圧力（Ｂ）は、ヒアルロン酸の濃度が高くなるほど、圧力（Ａ、Ｂ）が高くなることを確認することができた。
【０１３７】
なお、ヒアルロン酸の濃度が高くなるほど注射剤組成物を１２０分間放置した後に注射器にかかる圧力（Ｂ）と注射剤組成物をすぐに注射する場合の圧力（Ａ）とが差異が大きく出なかった。特に、ヒアルロン酸の濃度が０．２％（ｗ／ｖ）であるときから１．０％（ｗ／ｖ）であるときまで平均Ｂ−Ａ値は、１３．２７７７８ｇｆであり、これによる標準偏差は、２．９６９７５５であった。
【０１３８】
実験例３−３：ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡの沈降による注射器圧力（ｇｌｉｄｉｎｇ  ｆｏｒｃｅ）の変化−２
一般的に、ヒアルロン酸の濃度によって２６Ｇの注射器にかかる圧力は、約２０ｇｆ（０．１％  ＨＡ）から７０ｇｆ（１．０％  ＨＡ）増加する。注射剤内にヒアルロン酸の他に注射剤組成物によって注射器にかかる圧力は増加し、一例として８ｍｇ／ｍｌの場合、約１５ｇｆの力がさらに加えられる。
【０１３９】
したがって、実験例３−３において、ヒアルロン酸が添加される注射剤組成物をすぐに注射する場合と前記注射剤組成物を１２０分間放置した後、組成物が沈降した後に注射器にかかる圧力を測定して、下記の表に記述した。
【０１４０】
参考として、表６の（Ａ）は、注射剤組成物をすぐに注射する場合を示し、（Ｂ）は、注射剤組成物を１２０分間放置した後、注射開始時の圧力を示す。なお、（Ｃ）は、注射剤組成物を１２０分間放置した後、注射するときの中間基点の圧力（指にかかる力、ｇｌｉｄｉｎｇ  ｆｏｒｃｅ）を示す。
【０１４１】
【表６】
2019513783.tif 000008
【０１４２】
表６を参照すると、ヒアルロン酸が入っていない場合、２時間放置後に注射開始時に、圧力が４００ｇｆが超えることを確認することができる。これは、注射剤内の組成物により注射針が詰まることを意味する。
そして、組成物により詰まった針があけられながら１２０ｇｆに圧力が減少した。
【０１４３】
ヒアルロン酸が０．２％（ｗ／ｖ）以上の場合は、１２０分間放置した後にも、注射剤内の組成物により注射針が詰まらないため、すぐに注射する場合のように、小さい力（２００ｇｆ）でも注入が可能であった。
【０１４４】
すなわち、ヒアルロン酸を適正量（０．２％以上）添加することにより、沈降速度を遅延させることができ、沈降した組成物により注射針が詰まって、過度な力を加える場合に注射が始まる短所を解決することができた。
【０１４５】
一方、ヒアルロン酸の濃度が１％（ｗ／ｖ）を超過する場合には、ヒアルロン酸の粘度に起因して注射時に抵抗感が激しかった。
【０１４６】
実験例３．ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡの沈降による透過度の変化
実施例１で製造された注射剤組成物を利用して、時間による吸光度の変化を測定した。参考として、ＭＡＡは、２ｍｇ／ｍｌを含む注射剤組成物を利用して吸光度の変化を測定した。
【０１４７】
なお、透過度は、ＵＶ分光計（ＴＥＣＡＮ．ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｍ２００ＰＲＯ）を利用して可視光線透過度を測定した。
【０１４８】
より具体的に、注射剤組成物を１×１×３ｃｍ３サイズの透明容器に担持された状態で前記容器高さの１／４の地点でＵＶ分光計で透過度を測定するとき、５５０ｎｍに対して透過度を測定した。
【０１４９】
この際、Ｔ１は、製造された注射剤組成物を１×１×３ｃｍ３サイズの透明容器に担持された状態で、前記容器高さの１／４の地点で測定した５５０ｎｍに対する透過度（％）であり、Ｔ２は、製造された注射剤組成物を１×１×３ｃｍ３サイズの透明容器に担持された状態で１２０分放置した後、前記容器高さの１／４の地点で測定した５５０ｎｍに対する透過度（％）である。
【０１５０】
【表７】
2019513783.tif 000009
【０１５１】
表７を参照して、ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡの沈降による透過度の変化を調べると、ヒアルロン酸が添加されていないときに最初に測定した透過度が７７．７６％であり、１２０分が経過した後には、８７．８８％と透過度が増加した。
【０１５２】
これは、最初に注射剤組成物内にＩＣＧ−ＭＡＡが溶解して注射剤組成物が懸濁されてから、１２０分が経過した後に、ＩＣＧ−ＭＡＡの粒子が高い密度に起因して、下側に沈むことにより、容器の底からの１／４の地点における透過度は高くなることである。
【０１５３】
なお、ヒアルロン酸（ＨＡ）が０．４％（ｗ／ｖ）以上からは、最初に測定した透過度（Ｔ１）と１２０分間放置した後に測定した透過度（Ｔ２）の差は、１％未満とその差異が大きくなかった。
【０１５４】
これは、ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡを注射剤組成物に含まれることにより、時間が経過しても懸濁性が維持されることを意味する。
【０１５５】
結果的に、注射剤組成物にヒアルロン酸（ＨＡ）を添加しつつ、ＩＣＧ−ＭＡＡ複合体の粘度を制御することにより、注射剤組成物において、前記複合体を早く沈むことを防止できることが分かった。
【０１５６】
一方、ヒアルロン酸０．２％（ｗ／ｖ）であるとき、Ｔ１とＴ２の差が９．１９％と差異があって、前記複合体が２時間以内に沈んだことを確認することができる。通常、注射剤組成物として使用するとき、製造後に３０分以内に投与するので、ＩＣＧ−ＭＡＡの複合体に０．２％のヒアルロン酸（ＨＡ）を添加した場合にも、実際注射用組成物として使用可能なものと判断した。
【０１５７】
実験例４．ＨＡの適用の有無によるＩＣＧ−ＭＡＡの明視野イメージ
図４は、０．５％（ｗ／ｖ）のＨＡ、６．５μＭのＩＣＧ、２、４、８ｍｇ／ｍｌのＭＡＡが含まれたＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡと６．５μＭのＩＣＧ、２、４、８ｍｇ／ｍｌのＭＡＡが含まれたＩＣＧ−ＭＡＡ注射物の明視野イメージ（ｂｒｉｇｈｔ  ｆｉｅｌｄ  ｉｍａｇｅ）を示す。ＭＡＡ粒子分布は、血球計がある光学顕微鏡を使用して可視化した。各正四角形は０．０５ｍｍ２を示す。上部の行（図４の１、２、３）は、ＨＡが含有されていないＩＣＧ−ＭＡＡを示し、下部の行（図４の４、５、６）は、０．５％ＨＡ（ｗ／ｖ）が含有されたＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡを示す。ＭＡＡ濃度は、それぞれ下記の通りである：図４の１＆４：２ｍｇ／ｍｌ；図４の２＆５：４ｍｇ／ｍｌ；図４の３＆６：８ｍｇ／ｍｌ。上部の行でＭＡＡ粒子は、全部沈んでいて、明視野で全部焦点が合って鮮明な映像を得たが、下部行では、ＭＡＡ粒子が沈んでおり、注射物内で浮遊していて、一部の粒子は焦点が合って鮮明な映像を得、一部の粒子は、焦点が合わない様相を示した。
【０１５８】
実験例５．ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡにおける蛍光維持特性
図５は、多様なＭＡＡの濃度で、５μＭのＩＣＧと０．５％ＨＡが添加されたＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡからの蛍光信号を測定したものを示す。図５のＡは、明視野イメージを示し、図５のＢは、ＮＩＲＦイメージを示す。図５のＡおよび図５のＢの左側から、ＭＡＡ濃度は、０ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌおよび８ｍｇ／ｍｌである。ＮＩＲＦイメージは、７４０ｎｍのピーク波長を有する１７個の２ｍＡのＮＩＲ  ＬＥＤを発光させることにより収得された。前記イメージは、下記カメラの設定によってＡＶＴ  ＵｎｉＣａｍ  ｖｉｅｗｅｒ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ａｌｌｉｅｄ  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）により撮影され、可視化した：露出時間：２００ｍｓ；ゲイン：２００；ターゲット階調値：１２５；明るさ：１６．
【０１５９】
図５のＡおよび図５のＢの間で、水に存在するＭＡＡは、エペンドルプチューブ（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ｔｕｂｅｓ）の壁に非常に早く沈むので、本発明者らが明視野イメージを撮影した後、各チューブを混合し、さらに位置させることにより、チューブ位置の小さい変化が発生した。
【０１６０】
図５のＣは、多様な濃度のＭＡＡに存在する５μＭのＩＣＧの蛍光発光スペクトルを示す。相対蛍光強度（ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）（ａ．ｕ：ａｒｂｉｔｒａｒｙ  ｕｎｉｔ）がコンピュータで調節された蛍光マイクロプレートリーダー（ｃｏｍｐｕｔｅｒ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  ｒｅａｄｅｒ）（Ｓａｆｉｒｅ  ＩＩ；Ｔｅｃａｎ、Ｄｕｒｈａｍ、ＮＣ）を利用して収得された。ＩＣＧに対する励起（ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ）波長は、７６０ｎｍであり、発光波長は、７９０〜８５０ｎｍであった。
【０１６１】
すなわち、図５のＡ〜図５のＣから、ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡにおいても蛍光が維持されることが分かった。
【０１６２】
実験例６．鶏ささみにＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡを注射した結果
図６は、ＨＡ０．５％（ｗ／ｖ）の添加による差異を示す実験結果である。また、一般的な組織強度を示す鶏ささみおよび緻密な組織強度を示す鶏砂嚢を利用して組織強度による差異を確認した。ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡとＩＣＧ−ＭＡＡ  ５０μｌを鶏ささみおよび鶏砂嚢に５ｍｍの深さでそれぞれ５回ずつゆっくり注射した。ＮＩＲＦイメージは、７４０ｎｍのピーク波長を有する１７個の２ｍＡのＮＩＲ  ＬＥＤを発光させることにより収得された。前記イメージは、下記カメラの設定によってＡＶＴ  ＵｎｉＣａｍ  ｖｉｅｗｅｒ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ａｌｌｉｅｄ  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）により撮影され、可視化した：露出時間：１９５ｍｓ；ゲイン：１７０；ターゲット階調値：１２５；明るさ：１６。注射を準備し注射するまで約２〜３分の時間が必要とされた。ＩＣＧ−ＭＡＡは、鶏ささみ５回のうち２回、鶏砂嚢５回のうち３回でＩＣＧ−ＭＡＡ粒子が沈んでいて、注射針が詰まって、注射が困難であった。注射が困難な場合、さらに注射器を振った後、短い時間にさらに注射した。これに対し、ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡは、１０回の試みのうち注射が良好に行われない場合はなかった。
【０１６３】
図６の１と図６の２は、鶏ささみに０．５％ＨＡが含まれたＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡを注射し撮影した切開前および切開後のＮＩＲＦイメージである。標識が適切に良好に分布していることを見ることができる。図６の３と図６の４は、鶏砂嚢に０．５％ＨＡが含まれたＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡを注射し撮影した切開前および切開後のＮＩＲＦイメージである。やはり標識が適切に分布していることを見ることができる。図６の５と図６の６は、鶏ささみに０．５％ＨＡが含まれていないＩＣＧ−ＭＡＡを注射し撮影した二回のＮＩＲＦイメージである。図６の５は、適切に標識になったが、図６の６は、全体注射量は同一にもかかわらず、注射中にＩＣＧ−ＭＡＡ粒子が沈んでいて、少ない量が注射されたものと判断される。図６の７と図６の８は、鶏砂嚢に０．５％ＨＡが含まれていないＩＣＧ−ＭＡＡを注射し撮影した切開前および切開後のＮＩＲＦイメージである。ＩＣＧ−ＭＡＡが注射トラックに沿って逆流するなど標識が正確に行われなかった。
【０１６４】
図７は、注射針経路に沿って注射された鶏ささみを切開した後の可視化した切断面の明視野およびＮＩＲＦイメージを示す。ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡが注射された部位が明視野イメージにおいて白色円で表示されている。ＮＩＲＦイメージは、７４０ｎｍのピーク波長を有する１７個の２ｍＡのＮＩＲ  ＬＥＤを発光させることにより収得された。前記イメージは、下記カメラの設定によってＡＶＴ  ＵｎｉＣａｍ  ｖｉｅｗｅｒ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ａｌｌｉｅｄ  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）により撮影され、可視化した：露出時間：１９５ｍｓ；ゲイン：１７０；ターゲット階調値：１２５；明るさ：１６。
【０１６５】
これから、ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡが組織（鶏ささみ）に注射された場合、蛍光特性を良好に維持するだけでなく、広がり性が非常に少ないことが分かる。すなわち、ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡを使用することにより、ＩＣＧ−ＭＡＡ複合体が周辺に非常に早くおよび非常に多く広がる問題が解決されたことを確認することができる。
【０１６６】
実験例７．内視鏡用注射器を利用して鶏ささみにＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡを注射した結果
図８は、内視鏡用注射器（ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ  ｃａｔｈｅｔｅｒ）を利用して胃癌手術におけるＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡ混合物の適用性を実験したものを示す。図８の１〜図８の３および図８の５は、明視野イメージを示し、図８の４および図８の６は、ＮＩＲＦイメージを示す；
【０１６７】
図８の１：廃棄可能な内視鏡用注射器を利用して鶏ささみの片方にＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡ混合物［６．５μＭのＩＣＧ、２ｍｇ／ｍｌのＭＡＡ、および０．５％ＨＡ（ｗ／ｖ）］を注射する；
図８の２：鶏ささみの第２部位に前記混合物を注射する；
図８の３：二つの矢印は、注射部位を示す；
図８の４：胃壁の内側にあるような注射部位のＮＩＲＦイメージを示す；
図８の５：注射された鶏ささみをひっくり返したイメージを示す；
図８の６：ひっくり返った鶏ささみ上の注射部位のＮＩＲＦイメージを示し、前記注射部位は、外部ＮＩＲ供給源（ｓｏｕｒｃｅｓ）を利用して示すことができる。
【０１６８】
前記ＮＩＲＦイメージは、７４０ｎｍのピーク波長を有する１７個の２ｍＡのＮＩＲ  ＬＥＤを発光させることにより収得された。前記イメージは、下記カメラの設定によってＡＶＴ  ＵｎｉＣａｍ  ｖｉｅｗｅｒ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ａｌｌｉｅｄ  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）により撮影され、可視化した：露出時間：１９５ｍｓ；ゲイン：１７０；ターゲット階調値：１２５；明るさ：１６。
【０１６９】
これから、ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡが内視鏡用注射器を利用して組織（鶏ささみ）に注射された場合、蛍光特性を良好に維持するだけでなく、広がり性が非常に少ないことが分かる。すなわち、鶏ささみと同様に、胃癌などの手術をする場合においても、ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡを使用することにより、蛍光特性を良好に維持しながらも、ＩＣＧ−ＭＡＡ複合体が周辺に非常に早くおよび非常に多く広がらないようにできることが分かる。
【０１７０】
実験例８．ＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡの一定の濃度効果
沈降速度の増加によって注射時に一定量が注射される効果を調べるために、ヒアルロン酸が添加されていないＩＣＧ−ＭＡＡと０．１％（ｗ／ｖ）のＨＡが添加されたＩＣＧ−ＭＡＡ−ＨＡ注射剤組成物の注射量を１００μｌずつ連続的にチューブに注射して、蛍光信号を測定した。
一方、蛍光信号は、チューブに注射し、５分間沈降させた後に測定した。
【０１７１】
参考として、ＩＣＧ−ＭＡＡ注射剤組成物は、２ｍｇ／ｍｌのＭＡＡの濃度で、１．５μＭ（約０．００１ｍｇ）のＩＣＧが添加され、前記ＩＣＧ−ＭＡＡに０．１％（ｗ／ｖ）のＨＡが添加された。
【０１７２】
図９は、ヒアルロン酸の有無によって蛍光信号を測定した結果を示す図である（左側から最初１００μｌ、（ａ）ヒアルロン酸が添加されていない、（ｂ）０．１％のヒアルロン酸が添加される）。
【０１７３】
図９のＮＩＲＦ（近赤外線蛍光）イメージは、７４０ｎｍのピーク波長を有する１７個の２ｍＡのＮＩＲ  ＬＥＤを発光させることにより収得された。前記イメージは、下記カメラの設定によってＡＶＴ  ＵｎｉＣａｍ  ｖｉｅｗｅｒ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ａｌｌｉｅｄ  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）により撮影され、可視化した：露出時間：２００ｍｓ；ゲイン：２００；ターゲット階調値：１２５；明るさ：１６。
【０１７４】
図９を参照すると、ヒアルロン酸が添加されていない注射剤組成物の場合、注射組成物の用量のＣＶ（標準偏差／平均）が２８％であった。
【０１７５】
特に、図９（ａ）を参照して蛍光強度を比較してみれば、左側と右側の蛍光強度の差が大きく出ることから見て、ＩＣＧ−ＭＡＡが初期には多く注入され、後半に行くほど少なく注入されて、一定に注射されないと判断された。
【０１７６】
他方で、図９（ｂ）を参照すると、注射剤組成物にヒアルロン酸を添加した場合、ＩＣＧ−ＭＡＡが沈降する速度が遅くなって、結果的に、一定の量のＩＣＧ−ＭＡＡが注射が可能であることを知ることになった。
【０１７７】
以上、本発明についてその好ましい実施例を中心に記述した。本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者は、本発明が本発明の本質的な特性を逸脱しない範囲で変形された形態で具現され得ることを理解することができる。したがって、開示された実施例は、限定的な観点でなく、説明的な観点で考慮されなければならない。本発明の範囲は、前述した説明でなく、特許請求範囲に示されており、それと同等な範囲内にあるすべての差異点は、本発明に含まれたものと解釈されなければならない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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