(57)【要約】本開示は、例えば、同種造血幹細胞移植（ＨＣＴ）の後に血液悪性腫瘍の再発を防止または管理するために、マイナー組織適合性（Ｈ）抗原（ＨＡ−１Ｈ？）を標的化するする組成物及び方法を提供する。操作された結合タンパク質、例えば、Ｔ細胞受容体またはキメラ抗原受容体をコードし、場合により、さらなる成分、例えば、共受容体及び／または安全スイッチをコードする導入遺伝子コンストラクトも提供される。そのような導入遺伝子コンストラクトは、免疫細胞、例えばＴ細胞に形質導入することができ、血液悪性腫瘍を有するまたは血液悪性腫瘍（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫）の再燃の危険性がある対象において、免疫療法として使用することができる。【選択図】図３０
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ＴＲＡＶ１７遺伝子、ＴＲＡＶ２１遺伝子もしくはＴＲＡＶ１０遺伝子にコードされるアミノ酸配列を有するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン、ならびに配列番号１３〜１７及び８６のうちのいずれか１つのＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメイン、
（ｂ）配列番号８７〜９２のうちのいずれか１つのＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＴＣＲ  Ｖαドメイン、及びＴＲＢＶ７−９遺伝子にコードされるアミノ酸配列を有するＴＣＲ  Ｖβドメイン、または
（ｃ）配列番号８７〜９２のうちのいずれか１つのＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＴＣＲ  Ｖαドメイン、ならびに配列番号１３〜１７及び８６のうちのいずれか１つのＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＴＣＲ  Ｖβドメイン
を含む結合タンパク質をコードする異種性ポリヌクレオチドを含む、操作された免疫細胞であって、
前記コードされる結合タンパク質が、ＨＡ−１Ｈ抗原を含むペプチドに特異的に結合することができ、ＨＡ−１Ｈ抗原を含まないペプチドに結合しない、前記操作された免疫細胞。
【請求項２】
（ａ）前記コードされるＶβＣＤＲ３が配列番号１４のアミノ酸配列を含み、前記コードされるＶαＣＤＲ３が配列番号８８のアミノ酸配列を含む、
（ｂ）前記コードされるＶβＣＤＲ３が配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記コードされるＶαＣＤＲ３が、配列番号８７のアミノ酸配列を含む、
（ｃ）前記コードされるＶβＣＤＲ３が配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記コードされるＶαＣＤＲ３が配列番号８９のアミノ酸配列を含む、
（ｄ）前記コードされるＶβＣＤＲ３が配列番号１６のアミノ酸配列を含み、前記コードされるＶαＣＤＲ３が配列番号９０のアミノ酸配列を含む、
（ｅ）前記コードされるＶβＣＤＲ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記コードされるＶαＣＤＲ３が配列番号９１のアミノ酸配列を含む、または
（ｆ）前記コードされるＶβＣＤＲ３が配列番号８６のアミノ酸配列を含み、前記コードされるＶαＣＤＲ３が配列番号９２のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の操作された免疫細胞。
【請求項３】
前記コードされるＶαドメインが配列番号２、４、６、８、１０及び１２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の操作された免疫細胞。
【請求項４】
前記コードされるＶβドメインが配列番号１、３、５、７、９及び１１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項５】
前記コードされるＶαドメインがＣＤＲ１のアミノ酸配列に変化を含まない、前記コードされるＶβドメインがＣＤＲ１のアミノ酸配列に変化を含まない、または前記コードされるＶαドメインの前記ＣＤＲ１及び前記コードされるＶβドメインの前記ＣＤＲ１がアミノ酸配列に変化を含まない、請求項３または４に記載の操作された免疫細胞。
【請求項６】
前記コードされるＶαドメインがＣＤＲ２のアミノ酸配列に変化を含まない、前記コードされるＶβドメインがＣＤＲ２のアミノ酸配列に変化を含まない、または前記コードされるＶαドメインの前記ＣＤＲ２及び前記コードされるＶβドメインの前記ＣＤＲ２がアミノ酸配列に変化を含まない、請求項３〜５のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項７】
（ａ）前記コードされるＶβドメインが配列番号３のアミノ酸配列を含むか、それからなり、前記コードされるＶαドメインが配列番号４のアミノ酸配列を含むか、それからなる、
（ｂ）前記コードされるＶβドメインが配列番号１のアミノ酸配列を含むか、それからなり、前記コードされるＶαドメインが配列番号２のアミノ酸配列を含むか、それからなる、
（ｃ）前記コードされるＶβドメインが配列番号５のアミノ酸配列を含むか、それからなり、前記コードされるＶαドメインが配列番号６のアミノ酸配列を含むか、それからなる、
（ｄ）前記コードされるＶβドメインが配列番号７のアミノ酸配列を含むか、それからなり、前記コードされるＶαドメインが配列番号８のアミノ酸配列を含むか、それからなる、
（ｅ）前記コードされるＶβドメインが配列番号９のアミノ酸配列を含むか、それからなり、前記コードされるＶαドメインが配列番号１０のアミノ酸配列を含むか、それからなる、または
（ｆ）前記コードされるＶβドメインが配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、それからなり、前記コードされるＶαドメインが配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、それからなる、
請求項１〜６のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項８】
前記コードされる結合タンパク質が配列番号１９〜２２、２４及び２６のうちのいずれか１つのアミノ酸配に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するＴＣＲα鎖定常ドメインを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項９】
前記コードされる結合タンパク質が配列番号１８、２３及び２５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％の配列同一性を有するＴＣＲβ鎖定常ドメインを含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項１０】
前記コードされる結合タンパク質が配列番号２８、３０、３２、３４、３６及び３８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有するＴＣＲα鎖を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項１１】
前記コードされる結合タンパク質が配列番号２８、３０、３２、３４、３６及び３８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲα鎖を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項１２】
前記コードされる結合タンパク質が配列番号２７、２９、３１、３３、３５及び３７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有するＴＣＲβ鎖を含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項１３】
前記コードされる結合タンパク質が配列番号２７、２９、３１、３３、３５及び３７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項１４】
前記コードされる結合タンパク質が、
（ａ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲα鎖、
（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲα鎖、
（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲα鎖、
（ｄ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲα鎖、
（ｅ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲ−α鎖、または
（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲ−α鎖
含む、請求項８〜１３のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項１５】
（ｉ）前記ＴＣＲα鎖をコードする異種ポリヌクレオチド及び（ｉｉ）前記ＴＣＲβ鎖をコードする異種ポリヌクレオチドが単一オープンリーディングフレーム中に含まれ、前記単一オープンリーディングフレームが、（ｉ）及び（ｉｉ）の間に配置される自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１０〜１４のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項１６】
前記自己切断ペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが配列番号７６〜８４のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含むか、それからなる、請求項１５に記載の操作された免疫細胞。
【請求項１７】
前記単一オープンリーディングフレームが配列番号５９〜６３のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列に少なくとも約８０％同一であるヌクレオチド配列を含む、請求項１５または１６に記載の操作された免疫細胞。
【請求項１８】
前記単一オープンリーディングフレームが配列番号５９〜６３のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含むか、それからなる、請求項１７に記載の操作された免疫細胞。
【請求項１９】
前記コードされる単一オープンリーディングフレームが配列番号５３〜５７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなる、請求項１５〜１８のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項２０】
前記コードされる結合タンパク質がＨＡ−１Ｈペプチド：ＨＬＡ複合体に特異的に結合することができる、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項２１】
前記ＨＬＡがＨＬＡ−Ａ＊０２０１を含む、請求項２０に記載の操作された免疫細胞。
【請求項２２】
前記ＨＡ−１Ｈペプチドがアミノ酸配列ＶＬＨＤＤＬＬＥＡ（配列番号６６）を含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項２３】
前記コードされる結合タンパク質がＴＣＲ、ＴＣＲの抗原結合性断片またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項２４】
前記ＴＣＲの前記抗原結合性断片が単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）を含む、請求項２３に記載の操作された免疫細胞。
【請求項２５】
前記コードされる結合タンパク質がＣＡＲを含む、請求項２３に記載の操作された免疫細胞。
【請求項２６】
前記コードされる結合タンパク質がＴＣＲを含む、請求項２３に記載の操作された免疫細胞。
【請求項２７】
（ａ）安全スイッチタンパク質、
（ｂ）選択マーカー、
（ｃ）ＣＤ８共受容体β鎖
（ｄ）ＣＤ８共受容体α鎖、または
（ｅ）これらの任意の組み合わせ
をコードする異種性ポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項２８】
前記コードされる安全スイッチタンパク質が、
（ｉ）トランケートされたＥＧＦ受容体（ｔＥＧＦＲ）、
（ｉｉ）ｉＣａｓｐ９、
（ｉｉｉ）ＲＱＲポリペプチド、
（ｉｖ）ｍｙｃエピトープ、または
（ｖ）これらの任意の組み合わせ
を含む、請求項２７に記載の操作された免疫細胞。
【請求項２９】
前記コードされる選択マーカーが、
（ｉ）ＲＱＲポリペプチド、
（ｉｉ）トランケートされた低親和性神経成長因子（ｔＮＧＦＲ）、
（ｉｉｉ）トランケートされたＣＤ１９（ｔＣＤ１９）、
（ｉｖ）トランケートされたＣＤ３４（ｔＣＤ３４）、または
（ｖ）これらの任意の組み合わせ
を含む、請求項２７または２８に記載の操作された免疫細胞。
【請求項３０】
前記コードされるＣＤ８共受容体が配列番号７１〜７５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むβ鎖を含む、請求項２７〜２９のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項３１】
前記コードされるＣＤ８共受容体が、配列番号６９のアミノ酸配列を有するＲＱＲポリペプチドを含む組換えＣＤ８共受容体である、請求項２７〜３０のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項３２】
前記コードされるＲＱＲポリペプチドが、前記コードされるＣＤ８共受容体のβ鎖中に含まれる、請求項３１に記載の操作された免疫細胞。
【請求項３３】
前記コードされるＲＱＲポリペプチドが、前記コードされるＣＤ８共受容体のα鎖中に含まれる、請求項３１または３２に記載の操作された免疫細胞。
【請求項３４】
ｉＣａｓｐ９をコードする異種性ポリヌクレオチド及びＲＱＲポリペプチドを含むβ鎖を含む組換えＣＤ８共受容体タンパク質をコードする異種性ポリヌクレオチドを含む、請求項３２に記載の操作された免疫細胞。
【請求項３５】
５’から３’に、（［ｉＣａｓｐ９ポリペプチド］−［ブタテッショウウイルス２Ａ（Ｐ２Ａ）ペプチド］−［ＴＣＲβ鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＴＣＲα鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＲＱＲポリペプチドを含むＣＤ８β鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＣＤ８α鎖］）をコードする異種性ポリヌクレオチドを含む、請求項３２または３４に記載の操作された免疫細胞。
【請求項３６】
前記ＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチドが配列番号４１のヌクレオチド配列を含むか、それからなり、前記ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチドが配列番号４２のヌクレオチド配列を含むか、それからなる、請求項２７〜３５のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項３７】
配列番号８５のヌクレオチド配列を含むか、それからなる異種性導入遺伝子ポリヌクレオチドを含む、操作された免疫細胞。
【請求項３８】
前記免疫細胞がＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫ−Ｔ細胞である、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞。
【請求項３９】
前記免疫細胞がＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項３８に記載の操作された免疫細胞。
【請求項４０】
前記免疫細胞がＰＤ−１遺伝子、ＬＡＧ３遺伝子、ＴＩＭ３遺伝子、ＣＴＬＡ４遺伝子、ＨＬＡ成分遺伝子、ＴＣＲ成分遺伝子またはこれらの任意の組み合わせの染色体遺伝子ノックアウトを含む、請求項３９に記載の操作された免疫細胞。
【請求項４１】
前記染色体遺伝子ノックアウトが、α１マクログロブリン遺伝子、α２マクログロブリン遺伝子、α３マクログロブリン遺伝子、β１ミクログロブリン遺伝子またはβ２ミクログロブリン遺伝子から選択されるＨＬＡ成分遺伝子のノックアウトを含む、請求項４０に記載の操作された免疫細胞。
【請求項４２】
前記染色体遺伝子ノックアウトが、ＴＣＲα可変領域遺伝子、ＴＣＲβ可変領域遺伝子、ＴＣＲ定常領域遺伝子またはこれらの組み合わせから選択されるＴＣＲ成分遺伝子のノックアウトを含む、請求項４１に記載の操作された免疫細胞。
【請求項４３】
請求項１〜４２のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞及び医薬的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含む、組成物。
【請求項４４】
有効量の（ｉ）請求項１〜４２のいずれか１項に記載の操作された免疫細胞または（ｉｉ）請求項４３に記載の組成物を含む、単位用量。
【請求項４５】
約１：１の比率で、（ｉ）少なくとも約３０％の操作されたＣＤ４＋Ｔ細胞を含む組成物を（ｉｉ）少なくとも約３０％の操作されたＣＤ８＋Ｔ細胞を含む組成物と組み合わせて含み、実質的にナイーブＴ細胞を含まない、請求項４４に記載の単位用量。
【請求項４６】
対象において、ＨＡ−１Ｈ抗原の発現を特徴とする過剰増殖性障害を治療するための、またはそうした過剰増殖性障害の再発を防止するための方法であって、請求項４４または４５に記載の単位用量を前記対象に投与し、それによって、前記過剰増殖性障害を治療することを含む、前記方法。
【請求項４７】
前記ＨＡ−１Ｈ抗原が、前記対象の過剰増殖細胞が発現するＨＬＡ複合体中に存在する、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記過剰増殖性障害が血液悪性腫瘍を含む、請求項４６または４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記血液悪性腫瘍が、白血病、リンパ腫、骨髄異形成障害、または骨髄腫を含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記血液悪性腫瘍が白血病を含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記白血病が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、混合表現型急性白血病（ＭＰＡＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、ヘアリーセル白血病、または慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）から選択される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記血液障害がリンパ腫を含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記リンパ腫が、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、中枢神経系リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、ＣＤ３７＋樹状細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、粘膜関連（ＭＡＬＴ）リンパ組織の節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性体液性リンパ腫、またはバーキットリンパ腫から選択される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記血液悪性腫瘍が骨髄異形成障害を含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５５】
前記骨髄異形成障害が、単一血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症（不応性貧血、不応性好中球減少症及び不応性血小板減少症）、環状鉄芽球を伴う不応性貧血（ＲＡＲＳ）、環状鉄芽球を伴う不応性貧血−血小板増加症（ＲＡＲＳ−ｔ）、多血球系異形成を伴う不応性血球減少症（ＲＣＭＤ）、多血球系異形成と環状鉄芽球を伴う不応性血球減少症（ＲＣＭＤ−ＲＳ）、芽球増加を伴う不応性貧血（ＲＡＥＢ）、分類不可能な脊髄形成異常、または小児期の不応性血球減少症から選択される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記対象が造血細胞移植（ＨＣＴ）を受けているか、以前に受けていた、請求項４６〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
前記ＨＣＴが、ＨＬＡ成分をコードする遺伝子の染色体ノックアウト、ＴＣＲ成分をコードする遺伝子の染色体ノックアウト、または両方を含むドナー造血細胞を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記対象がリンパ球枯渇化学療法を以前に受けたことがあった、請求項４６〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
前記リンパ球枯渇化学療法が、シクロホスファミド、フルダラビン、抗胸腺細胞グロブリン、またはこれらの組み合わせを含んでいた、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記単位用量に含まれる前記操作された細胞の１つまたは複数が前記対象に対して同種異系である、請求項４６〜５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６１】
請求項２７〜４２のいずれか１項に記載され、安全スイッチタンパク質をコードする異種性ポリヌクレオチドを含む操作された免疫細胞を以前に与えられたことがある対象に、前記対象において、以前に投与された操作された免疫細胞を除去するのに有効な量で、前記安全スイッチタンパク質の同族化合物を含む投与することを含む、養子免疫療法のモジュレート方法。
【請求項６２】
（ａ）前記安全スイッチタンパク質がｔＥＧＦＲを含み、前記同族化合物がセツキシマブである、
（ｂ）前記安全スイッチタンパク質がｉＣａｓｐ９を含み、前記同族化合物がＡＰ１９０３である、
（ｃ）前記安全スイッチタンパク質がＲＱＲポリペプチドを含み、前記同族化合物がリツキシマブである、
（ｄ）前記安全スイッチタンパク質がｍｙｃ結合ドメインを含み、前記同族化合物が前記ｍｙｃ結合ドメインに特異的な抗体である、または
（ｅ）（ａ）〜（ｄ）の任意の組み合わせである、
請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記安全スイッチがｉＣａｓｐ９及び前記ｉＣａｓｐ９に結合した前記ＡＰ１９０３を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
結合タンパク質をコードする単離ポリヌクレオチドであって、前記コードされる結合タンパク質が、
（ａ）ＴＲＡＶ１７遺伝子、ＴＲＡＶ２１遺伝子もしくはＴＲＡＶ１０遺伝子にコードされるアミノ酸配列を有するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン、ならびに配列番号１３〜１７及び８６のうちのいずれか１つのＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメイン、
（ｂ）配列番号８７〜９２のうちのいずれか１つのＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＴＣＲ  Ｖαドメイン、及びＴＲＢＶ７−９遺伝子にコードされるアミノ酸配列を有するＴＣＲ  Ｖβドメイン、または
（ｃ）配列番号８７〜９２のうちのいずれか１つのＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＴＣＲ  Ｖαドメイン、ならびに配列番号１３〜１７及び８６のうちのいずれか１つのＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＴＣＲ  Ｖβドメイン
を含み、
前記コードされる結合タンパク質が、ＨＡ−１Ｈ抗原を含むペプチドに特異的に結合することができ、ＨＡ−１Ｈ抗原を含まないペプチドに結合せず、前記ポリヌクレオチドが宿主細胞での発現のためにコドン最適化される、前記単離ポリヌクレオチド。
【請求項６５】
（ａ）前記コードされるＶβＣＤＲ３が配列番号１４のアミノ酸配列を含み、前記コードされるＶαＣＤＲ３が配列番号８８のアミノ酸配列を含む、
（ｂ）前記コードされるＶβＣＤＲ３が配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記コードされるＶαＣＤＲ３が配列番号８７のアミノ酸配列を含む、
（ｃ）前記コードされるＶβＣＤＲ３が配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記コードされるＶαＣＤＲ３が配列番号８９のアミノ酸配列を含む、
（ｄ）前記コードされるＶβＣＤＲ３が配列番号１６のアミノ酸配列を含み、前記コードされるＶαＣＤＲ３が配列番号９０のアミノ酸配列を含む、または
（ｅ）前記コードされるＶβＣＤＲ３が配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記コードされるＶαＣＤＲ３が配列番号９１のアミノ酸配列を含む、
請求項６４に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項６６】
前記コードされるＶαドメインが配列番号２、４、６、８、１０及び１２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項６４または６５に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項６７】
前記コードされるＶβドメインが配列番号１、３、５、７、９及び１１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項６４〜６６のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項６８】
前記コードされるＶαドメインがＣＤＲ１のアミノ酸配列に変化を含まない、前記コードされるＶβドメインがＣＤＲ１のアミノ酸配列に変化を含まない、または前記コードされるＶαドメインの前記ＣＤＲ１及び前記コードされるＶβドメインの前記ＣＤＲ２がアミノ酸配列に変化を含まない、請求項６６または６７に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項６９】
前記コードされるＶαドメインがＣＤＲ２のアミノ酸配列に変化を含まない、前記コードされるＶβドメインがＣＤＲ２のアミノ酸配列に変化を含まない、または前記コードされるＶαドメインの前記ＣＤＲ２及び前記コードされるＶβドメインの前記ＣＤＲ２がアミノ酸配列に変化を含まない、請求項６６〜６８のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項７０】
（ａ）前記コードされるＶβドメインが配列番号３のアミノ酸配列を含むか、それからなり、前記コードされるＶαドメインが配列番号４のアミノ酸配列を含むか、それからなる、
（ｂ）前記コードされるＶβドメインが配列番号１のアミノ酸配列を含むか、それからなり、前記コードされるＶαドメインが配列番号２のアミノ酸配列を含むか、それからなる、
（ｃ）前記コードされるＶβドメインが配列番号５のアミノ酸配列を含むか、それからなり、前記コードされるＶαドメインが配列番号６のアミノ酸配列を含むか、それからなる、
（ｄ）前記コードされるＶβドメインが配列番号７のアミノ酸配列を含むか、それからなり、前記コードされるＶαドメインが配列番号８のアミノ酸配列を含むか、それからなる、
（ｅ）前記コードされるＶβドメインが配列番号９のアミノ酸配列を含むか、それからなり、前記コードされるＶαドメインが配列番号１０のアミノ酸配列を含むか、それからなる、
（ｆ）前記コードされるＶβドメインが配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、それからなり、前記コードされるＶαドメインが配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、それからなる
請求項６４〜６９のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項７１】
前記コードされる結合タンパク質が配列番号１９〜２２、２４及び２６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％の配列同一性を有するＴＣＲα鎖定常ドメインを含む、請求項６４〜７０のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項７２】
前記コードされる結合タンパク質が配列番号１８、２３及び２５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％の配列同一性を有するＴＣＲβ鎖定常ドメインを含む、請求項６４〜７１のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項７３】
前記コードされる結合タンパク質が配列番号２８、３０、３２、３４、３６及び３８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有するＴＣＲα鎖を含む、請求項６４〜７２のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項７４】
前記コードされる結合タンパク質が配列番号２８、３０、３２、３４、３６及び３８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲα鎖を含む、請求項６４〜７３のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項７５】
前記ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチドが配列番号４０、４２、４６、４８、５０または５２のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含むか、それからなる、請求項７４に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項７６】
前記コードされる結合タンパク質が配列番号２７、２９、３１、３３、３５及び３７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有するＴＣＲβ鎖を含む、請求項６４〜７５のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項７７】
前記コードされる結合タンパク質が配列番号２７、２９、３１、３３、３５及び３７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖を含む、請求項６４〜７６のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項７８】
前記ＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチドが配列番号３９、４１、４３、４５、４７、４９または５１のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含むか、それからなる、請求項７７に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項７９】
前記コードされる結合タンパク質が、
（ａ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲα鎖、
（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲα鎖、
（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲα鎖、
（ｄ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲα鎖、
（ｅ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲ−α鎖、または
（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲ−α鎖
を含む、請求項６４〜７８のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８０】
前記ＴＣＲβ鎖をコードする前記ポリヌクレオチドと前記ＴＣＲα鎖をコードする前記ポリヌクレオチドの間に配置される自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、請求項６４〜７９のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８１】
前記コードされる自己切断ペプチドが配列番号７６〜８４のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含むか、それからなる、請求項８０に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８２】
前記単一オープンリーディングフレームが配列番号５９〜６３のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列に少なくとも約８０％同一であるヌクレオチド配列を含む、請求項８０または８１に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８３】
前記単一オープンリーディングフレームが配列番号５９〜６３のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含むか、それからなる、請求項８２に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８４】
前記コードされる（［ＴＣＲβ鎖、自己切断ペプチド、ＴＣＲα鎖］）が配列番号５３〜５７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなる、請求項８０〜８３のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８５】
前記コードされる結合タンパク質がＨＡ−１Ｈペプチド：ＨＬＡ複合体に特異的に結合することができる、請求項６４〜８４のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８６】
前記ＨＬＡがＨＬＡ−Ａ＊０２０１を含む、請求項８５に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８７】
前記ＨＡ−１Ｈペプチドがアミノ酸配列ＶＬＨＤＤＬＬＥＡ（配列番号６６）を含む、請求項６４〜８６のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８８】
前記コードされる結合タンパク質がＴＣＲ、ＴＣＲの抗原結合性断片またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、請求項６４〜８７のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８９】
前記ＴＣＲの前記抗原結合性断片が単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）を含む、請求項８８に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項９０】
前記コードされる結合タンパク質がＣＡＲを含む、請求項８８に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項９１】
前記コードされる結合タンパク質がＴＣＲを含む、請求項８８に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項９２】
（ａ）安全スイッチタンパク質、
（ｂ）選択マーカー、
（ｃ）ＣＤ８共受容体β鎖、
（ｄ）ＣＤ８共受容体α鎖、または
（ｅ）これらの任意の組み合わせ
をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項６４〜９１のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項９３】
前記コードされる安全スイッチタンパク質が、
（ｉ）トランケートされたＥＧＦ受容体（ｔＥＧＦＲ）、
（ｉｉ）ｉＣａｓｐ９、
（ｉｉｉ）ＲＱＲポリペプチド、
（ｉｖ）ｍｙｃエピトープ、または
（ｖ）これらの任意の組み合わせ
を含む、請求項９２に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項９４】
前記コードされる選択マーカーが、
（ｉ）ＲＱＲポリペプチド、
（ｉｉ）トランケートされた低親和性神経成長因子（ｔＮＧＦＲ）、
（ｉｉｉ）トランケートされたＣＤ１９（ｔＣＤ１９）、
（ｉｖ）トランケートされたＣＤ３４（ｔＣＤ３４）、または
（ｖ）これらの任意の組み合わせ
を含む、請求項９２または９３に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項９５】
前記コードされるＣＤ８共受容体が配列番号７１〜７５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むβ鎖を含む、請求項９２〜９４のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項９６】
前記コードされるＣＤ８共受容体が、配列番号６９のアミノ酸配列を有するＲＱＲポリペプチドを含む組換えＣＤ８共受容体である、請求項９２〜９５のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項９７】
前記ＲＱＲポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが前記コードされるＣＤ８共受容体のβ鎖をコードするポリヌクレオチド中に含まれる、請求項９６に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項９８】
前記ＲＱＲポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが前記コードされるＣＤ８−共受容体のα鎖をコードするポリヌクレオチド中に含まれる、請求項９６または９７に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項９９】
ｉＣａｓｐ９をコードするポリヌクレオチド、及びＲＱＲポリペプチドを含むβ鎖を含む組換えＣＤ８共受容体タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、請求項９８に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項１００】
５’から３’に、（［安全スイッチタンパク質をコードするポリヌクレオチド］−［自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチド］−［ＴＣＲβ鎖をコードする前記ポリヌクレオチド］−［自己切断ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド］−［ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチド］−［自己切断ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド］−［ＲＱＲポリペプチドを含むＣＤ８β鎖をコードするポリヌクレオチド］−［自己切断ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド］−［ＣＤ８α鎖をコードするポリヌクレオチド］）を含む単一オープンリーディングフレームを含む、請求項９９に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項１０１】
前記単一オープンリーディングフレームが、５’から３’に、（［ｉＣａｓｐ９ポリペプチド］−［ブタテッショウウイルス２Ａ（Ｐ２Ａ）ペプチド］−［ＴＣＲβ鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＴＣＲα鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＲＱＲポリペプチドを含むＣＤ８β鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＣＤ８α鎖］）をコードする、請求項１００に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項１０２】
前記ＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチドが配列番号４１のヌクレオチド配列を含むか、それからなり、前記ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチドが配列番号４２のヌクレオチド配列を含むか、それからなる、請求項９２〜１０１のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項１０３】
前記ポリヌクレオチドが配列番号８５のヌクレオチド配列を含むか、それからなる、単離ポリヌクレオチド。
【請求項１０４】
前記単離ポリヌクレオチドがＴ細胞における発現のためにコドン最適化される、請求項６４〜１０３のいずれか１項に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項１０５】
請求項６４〜１０４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドに作動的に連結した発現制御配列を含む、導入遺伝子コンストラクト。
【請求項１０６】
（ａ）安全スイッチタンパク質をコードするポリヌクレオチド、
（ｂ）ＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチド、
（ｃ）ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチド、
（ｂ）選択マーカーをコードするポリヌクレオチド、
（ｃ）ＣＤ８共受容体β鎖をコードするポリヌクレオチド、及び
（ｄ）ＣＤ８共受容体α鎖をコードするポリヌクレオチド
を含む単一オープンリーディングフレームに作動的に連結した発現制御配列を含む、導入遺伝子コンストラクト。
【請求項１０７】
前記コードされる安全スイッチタンパク質が、
（ｉ）トランケートされたＥＧＦ受容体（ｔＥＧＦＲ）、
（ｉｉ）ｉＣａｓｐ９、
（ｉｉｉ）ＲＱＲポリペプチド、
（ｉｖ）ｍｙｃエピトープ、または
（ｖ）これらの任意の組み合わせ
を含む、請求項１０６に記載の導入遺伝子コンストラクト。
【請求項１０８】
前記コードされる選択マーカーが、
（ｉ）ＲＱＲポリペプチド；
（ｉｉ）トランケートされた低親和性神経成長因子（ｔＮＧＦＲ）、
（ｉｉｉ）トランケートされたＣＤ１９（ｔＣＤ１９）、
（ｉｖ）トランケートされたＣＤ３４（ｔＣＤ３４）、または
（ｖ）これらの任意の組み合わせ
を含む、請求項１０６または１０７に記載の導入遺伝子コンストラクト。
【請求項１０９】
前記コードされるＣＤ８共受容体が、配列番号６９のアミノ酸配列を有するＲＱＲポリペプチドを含む組換えＣＤ８共受容体である、請求項１０６〜１０８のいずれか１項に記載の導入遺伝子コンストラクト。
【請求項１１０】
前記コードされるＲＱＲポリペプチドが、前記コードされるＣＤ８β鎖中または前記コードされるＣＤ８α鎖中に含まれる、請求項１０９に記載の導入遺伝子コンストラクト。
【請求項１１１】
前記単一オープンリーディングフレームが、
（ａ）安全スイッチタンパク質をコードするポリヌクレオチド、
（ｂ）ＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチド、
（ｃ）ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチド、
（ｄ）ＲＱＲポリペプチドを含むＣＤ８β鎖をコードするポリヌクレオチド、及び
（ｅ）ＣＤα鎖をコードするポリヌクレオチド
を含む、請求項１１０に記載の導入遺伝子コンストラクト。
【請求項１１２】
前記単一オープンリーディングフレームが、５’から３’に、（［安全スイッチタンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド］−［自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチド］−［ＴＣＲβ鎖をコードする前記ポリヌクレオチド］−［自己切断ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチド］−［ＴＣＲα鎖をコードする前記ポリヌクレオチド］−［自己切断ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド］−［ＲＱＲポリペプチドを含むＣＤ８β鎖をコードする前記ポリヌクレオチド］−［自己切断ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド］−［ＣＤ８α鎖をコードする前記ポリヌクレオチド］）をコードする、請求項１１１に記載の導入遺伝子コンストラクト。
【請求項１１３】
前記単一オープンリーディングフレームが５’から３’に、（［ｉＣａｓｐ９ポリペプチド］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＴＣＲβ鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＴＣＲα鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＲＱＲポリペプチドを含むＣＤ８β鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＣＤ８α鎖］）をコードする、請求項１１２に記載の導入遺伝子コンストラクト。
【請求項１１４】
請求項１０６〜１１３のいずれか１項に記載の導入遺伝子コンストラクトを含む、ベクター。
【請求項１１５】
前記導入遺伝子コンストラクトを宿主細胞に送達することができる、請求項１１４に記載のベクター。
【請求項１１６】
前記宿主細胞が造血前駆細胞またはヒト免疫系細胞である、請求項１１５に記載のベクター。
【請求項１１７】
前記ヒト免疫系細胞がＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４−ＣＤ８−二重陰性Ｔ細胞、γδＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、またはこれらの任意の組み合わせである、請求項１１６に記載のベクター。
【請求項１１８】
前記免疫系細胞がＣＤ４＋細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項１１７に記載のベクター。
【請求項１１９】
前記Ｔ細胞がナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、またはこれらの任意の組み合わせである、請求項１１７に記載のベクター。
【請求項１２０】
ウイルスベクターである、請求項１１４〜１１９のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１２１】
前記ウイルスベクターがレンチウイルスベクターまたはγ−レトロウイルスベクターである、請求項１２０に記載の発現ベクター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表に関する記載
本出願と関連する配列表は紙コピーの代わりにテキスト形式で提供され、参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名称は３６００５６＿４５５ＷＯ＿ＳＥＱＵＥＮＣＥ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ＴＸＴである。このテキストファイルは２００ＫＢであり、２０１７年９月２２日に作成され、ＥＦＳ−ＷＥＢを通して電子的に提出される。
【０００２】
政府の権利の記載
本発明は、米国国立衛生研究所によって与えられたＣＡ１５４５３２の下で政府の支援により実施された。政府は本発明に関して一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
血液悪性腫瘍の患者を同種造血幹細胞移植（ＨＣＴ）で治療することができる。米国では、例えば、同種ＨＣＴ移植は、２０１３以来年間およそ８，０００の移植で、過去３５年間にわたって着実に増加している（ＣＩＢＭＴＲ  ２０１６  ＳＵＭＭＡＲＹを参照されたい）。しかし、血液悪性腫瘍の再発がその後起こり得る。現在、急性白血病の治療のためにＨＣＴを受ける著しい数の患者が再発する（米国単独で毎年およそ２，０００人の患者がＨＣＴ後に再発する（または約２５〜５０％）；ＳＵＣＨＥＳＴＯＮ−ＣＡＭＰＢＥＬＬ  ＥＴ  ＡＬ．，Ｃｕｒｒ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｍａｌｉｇ．ｒｅｐ．１０：４５−５８，２０１５を参照されたい）。根本的な完全な寛解を達成することができない、及び／またはＨＣＴより前の強力な前処置レジメンに耐えることができない患者で再発率は特に高い。ＨＣＴ後に再発した患者の予後は非常に悪く、ＨＣＴから＜１００日、１００〜２００日及び＞２００日で再発する患者の２年生存率はそれぞれ３％、９％及び１９％である。第２のＨＣＴを受ける患者はよりよい転帰を有し得るが、第２のＨＣＴの対象になるためには、患者は最初に寛解を達成しなければならず、これは、典型的には、患者の約３０％でしか起こらない。
【０００４】
ある場合には、急性白血病の再発は、元の幹細胞ドナーからのドナーリンパ球輸注で治療することができる。しかし、ドナーリンパ球輸注のこの移植片対白血病（ＧＶＬ）効果は、深刻な死亡率及び罹患率をもたらす移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を伴うことが多く、必ずしも有効とは限らない。正常な組織に対する免疫応答（移植片対宿主病、ＧＶＨＤ）を高めることなくＧＶＬを選択的に増大させることができれば、ＨＣＴ後の再発を防止することができる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】ＳＵＣＨＥＳＴＯＮ−ＣＡＭＰＢＥＬＬ  ＥＴ  ＡＬ．，Ｃｕｒｒ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｍａｌｉｇ．ｒｅｐ．１０：４５−５８，２０１５
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
ある特定のマイナーＨ抗原は白血病幹細胞及び芽細胞で発現しており（例えば、Ｂｌｅａｋｌｅｙ  ａｎｄ  Ｒｉｄｄｅｌｌ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ４：３７１−３８０，２００４、Ｂｌｅａｋｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１５：４９２３−４９３３，２０１０、Ｂｌｅａｋｌｅｙ  ａｎｄ  Ｒｉｄｄｅｌｌ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８９：３９６−４０７，２０１１、ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｈａｒｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ８３：１０６０−１０６６，１９９４、Ｂｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６：８６３９−８６４４，１９９９、Ｈａｍｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２０：３７１−３７４，２００６を参照されたい）、がん特異的Ｔ細胞を使用して標的にされている。ＨＣＴ後の再発患者におけるマイナーＨ抗原標的化Ｔ細胞免疫療法の小規模の臨床試験では、いくらかの患者において臨床応答が観察された（Ｗａｒｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１５：３８６９−３８７８，２０１０）。Ｔ細胞の遺伝子改変の技術的進歩及びＴ細胞生物学の知識の増大は、治療用量の抗原特異的Ｔ細胞が、現在、効率的に調製すること、患者に与えること、インビボで抗力のある抗腫瘍化効果を持続及び発揮することができることを意味する。（Ｈｅｅｍｓｋｅｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９：８８５−８９４，２００４、Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１４：１２６−１２９，２００６、Ｇｒｉｆｆｉｏｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ９３：１５３５−１３１５４３，２００８、Ｏｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１０：５２１２２４８，２０１０、Ｓｃｈｍｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２０：１２４０−１２４８，２００９、Ｓｔｒｏｍｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．２５７：１４５−１６４，２０１４）。しかし、白血病関連抗原を標的にする細胞ベースの療法が必要である。本明細書中に開示される実施形態はこれらの必要性に対処し、他の関連した利点を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】本開示のＨＡ−１Ｈ特異的Ｔ細胞クローンを単離及び特性評価する方法を示す図である。（図１の左上）ＨＡ−１Ｈ特異的Ｔ細胞を単離するために、ＣＤ８＋細胞をＨＡ１Ｈペプチド（
【化１】
2019531074.tif 000003
；配列番号１）でパルスした樹状細胞（ＤＣ）でプライムし、微量培養で増殖させた。（左中央）ＩＬ−１２及びＩＬ−１５を含むＣＴＬ培地中で１２日間インキュベートした後、スプリットウェル微量細胞傷害アッセイで一定分量のＴ細胞を評価し、ここでは、Ｔ２細胞をＶＬＨＤＤＬＬＥＡペプチドでパルスしたか、しなかった。（左下）Ｔ２＋ＶＬＨＤＤＬＬＥＡに特異的に反応した細胞を限界希釈によってクローニングし、細胞傷害性について再評価し、さらなる評価のために迅速に増殖させた（８クローン）。（右上）示された７つ（７）クローンのＨＡ−１Ｈ特異性を示すフローサイトメトリーデータ。ＨＬＡ−Ａ２−ＨＡ−１Ｈデキストラマー染色（Ｙ軸）及びＣＤ８（Ｘ軸）についての染色。（右下）示されるタイトレーションの同族ペプチドでパルスした５１ＣＲ標識されたＴ２細胞の特異的溶解について示されるＣＴＬクローンを試験したクロム放出アッセイ（ＣＲＡ）実験のデータ。
【図２Ａ】図１に示す方法によって得られた単離した細胞障害性Ｔ細胞クローンの特性評価を示す図である。図２Ａは、７つ（７）の代表的なＨＡ−１Ｈ特異的クローン（１、２、１０、１３、４、１６及び５）及び別の腫瘍抗原に特異的な対照クローンのＨＬＡ−Ａ２／ＨＡ−１Ｈマルチマー及びＣＤ８＋モノクローナル抗体染色である。
【図２Ｂ】図１に示す方法によって得られた単離した細胞障害性Ｔ細胞クローンの特性評価を示す図である。図２Ｂは、７つのＨＡ−１Ｈ特異的クローンを、ＨＡ−１ペプチドでパルスした標的細胞を死滅させることについて試験したクロム放出アッセイのデータである。
【図２Ｃ】図１に示す方法によって得られた単離した細胞障害性Ｔ細胞クローンの特性評価を示す図である。図２Ｃは、ＨＡ−１Ｈ特異的ＣＴＬクローンを、ペプチドでパルスしたＴ２細胞、ＨＡ−１Ｈ＋ＡＭＬ細胞系統ＴＨＰ−１、ＨＡ−１Ｈ＋一次ＡＭＬまたはＨＡ−１−ＡＭＬとともにインキュベートした細胞傷害アッセイのデータである。
【図３】本開示の代表的なＨＡ−１ＨＴＣＲをコードするレンチウイルスコンストラクトを示す図である。
【図４】ＨＡ−１  ＴＣＲを発現するように形質導入されたＴ細胞を評価するための手順を示す図である。
【図５Ａ】ＨＡ−１Ｈ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞の発現及び活性を示す図である。図５Ａは、ＴＣＲ２またはＴＣＲ１６で形質導入されたＴ細胞のＨＡ−１Ｈデキストラマー結合及びＣＤ８発現を示すフローサイトメトリーデータである。
【図５Ｂ】ＨＡ−１Ｈ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞の発現及び活性を示す図である。図５Ｂは、ＴＣＲ２またはＴＣＲ１６で形質導入されたＣＤ８＋Ｔ細胞ならびに対応する「親クローン」、すなわち、ＴＣＲ２及びＴＣＲ１６が単離されたＴ細胞クローンならびに対照の異なる抗原（ＳＭＣＹ）に特異的な対照クローンの死滅活性を示す。左：ＨＡ−１ＨでパルスしたＴ２細胞の溶解。右：不適切なＳＭＣＹペプチドでパルスしたＴ２細胞。
【図５Ｃ】ＨＡ−１Ｈ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞の発現及び活性を示す図である。図５Ｃは、ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２（破線、丸）、ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ１６（破線、正方形）、親ＴＣＲ２クローン（丸の実線）、親ＴＣＲ１６クローン（正方形の実線）及びＳＭＣＹペプチドに特異的な異種性または親クローン（グラフの下部の２つの線）による、示される量のＨＡ−１Ｈペプチド（Ｘ軸）でパルスしたＴ２細胞の特異的溶解を示す。
【図６−１】レンチウイルスベクターを使用した、ＣＤ８＋Ｔ細胞へのＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲの形質導入及び活性を示す図である。図６Ａは、レンチウイルスベクター（ＬＶ）または異なるマイナーＨ抗原（対照）に特異的なＴＣＲとともに送達された、ＨＡ−１Ｈ  特異的ＴＣＲ（特に、ＴＣＲクローン１、２、１０、１６及び５）をコードするポリヌクレオチドを含むように形質導入されたＣＤ８＋Ｔ細胞のＨＬＡ−Ａ２／ＨＡ−１Ｈマルチマー染色を示すフローサイトメトリーである。図６Ｂ〜図６Ｅでは、クロム放出アッセイ（ＣＲＡ）を使用して、特異的溶解活性を評価した。図６Ｂは、ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞（実線及び記号−ＴＣＲ２丸、ＴＣＲ１６正方形）、ＨＡ−１Ｈ特異的Ｔ細胞クローン（破線、白色の記号−クローン２＝丸、クローン１６＝正方形）またはＴ細胞クローン対照（菱形）による、様々な濃度のＨＡ−１ペプチド抗原でパルスされたＴ２標的細胞の溶解を示す。図６Ｃは、示されるエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比率での、ＨＡ−１Ｈ特異的ＴＣＲ２（丸）またはＨＡ−１Ｈ特異的ＴＣＲ１６（正方形）で形質導入されたＣＤ８＋Ｔ細胞によるＨＬＡ−Ａ２＋ＨＡ−１Ｈ＋ＬＣＬの溶解を示す。図６Ｄは、ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞による、ＨＬＡ−Ａ２＋／ＨＡ−１＋ホモ接合型（Ｈ／Ｈ）（丸、Ｎ＝７）、ＨＬＡ−Ａ２＋／ＨＡ１Ｈ＋ヘテロ接合型（Ｈ／Ｒ）（正方形、Ｎ＝２２）、ＨＬＡ−Ａ２＋／ＨＡ−１Ｈ−（Ｒ／Ｒ）（三角形、Ｎ＝１７）またはＨＬＡ−Ａ２陰性（逆三角形、Ｎ＝４１）造血細胞（ＬＣＬ）標的の溶解を示す。図６Ｅは、ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞による、共通のＨＬＡアレルを有するＬＣＬの溶解を示す。別段の指定がない限り、２０：１のＥ：Ｔ比率を使用した。ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ１６を用いて、図６Ｄ及び図６Ｅに示すものと匹敵するデータも得られた（非表示）。
【図６−２】レンチウイルスベクターを使用した、ＣＤ８＋Ｔ細胞へのＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲの形質導入及び活性を示す図である。図６Ａは、レンチウイルスベクター（ＬＶ）または異なるマイナーＨ抗原（対照）に特異的なＴＣＲとともに送達された、ＨＡ−１Ｈ  特異的ＴＣＲ（特に、ＴＣＲクローン１、２、１０、１６及び５）をコードするポリヌクレオチドを含むように形質導入されたＣＤ８＋Ｔ細胞のＨＬＡ−Ａ２／ＨＡ−１Ｈマルチマー染色を示すフローサイトメトリーである。図６Ｂ〜図６Ｅでは、クロム放出アッセイ（ＣＲＡ）を使用して、特異的溶解活性を評価した。図６Ｂは、ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞（実線及び記号−ＴＣＲ２丸、ＴＣＲ１６正方形）、ＨＡ−１Ｈ特異的Ｔ細胞クローン（破線、白色の記号−クローン２＝丸、クローン１６＝正方形）またはＴ細胞クローン対照（菱形）による、様々な濃度のＨＡ−１ペプチド抗原でパルスされたＴ２標的細胞の溶解を示す。図６Ｃは、示されるエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比率での、ＨＡ−１Ｈ特異的ＴＣＲ２（丸）またはＨＡ−１Ｈ特異的ＴＣＲ１６（正方形）で形質導入されたＣＤ８＋Ｔ細胞によるＨＬＡ−Ａ２＋ＨＡ−１Ｈ＋ＬＣＬの溶解を示す。図６Ｄは、ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞による、ＨＬＡ−Ａ２＋／ＨＡ−１＋ホモ接合型（Ｈ／Ｈ）（丸、Ｎ＝７）、ＨＬＡ−Ａ２＋／ＨＡ１Ｈ＋ヘテロ接合型（Ｈ／Ｒ）（正方形、Ｎ＝２２）、ＨＬＡ−Ａ２＋／ＨＡ−１Ｈ−（Ｒ／Ｒ）（三角形、Ｎ＝１７）またはＨＬＡ−Ａ２陰性（逆三角形、Ｎ＝４１）造血細胞（ＬＣＬ）標的の溶解を示す。図６Ｅは、ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞による、共通のＨＬＡアレルを有するＬＣＬの溶解を示す。別段の指定がない限り、２０：１のＥ：Ｔ比率を使用した。ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ１６を用いて、図６Ｄ及び図６Ｅに示すものと匹敵するデータも得られた（非表示）。
【図７】ＴＣＲ２形質導入細胞とともに、または「親」クローン２細胞とともに、ＨＡ−１（ＨＡ−１Ｈ＋ＬＣＬ（Ｈ／ＨまたはＨ／Ｒ）及びＨＡ−１Ｈ−ＬＣＬ（Ｒ／Ｒ）を内因的に発現する標的細胞をインキュベートした細胞傷害性実験のデータを示す図である。Ｙ染色体関連マイナーＨ抗原（ＦＩＤＳＹＩＣＱＶ）に特異的な対照クローンも示す。
【図８−１】ＨＡ−１Ｈ−ＴＣＲ２形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞による、ＨＡ−１＋白血病細胞の特異的な死滅を示す図である。図８Ａは、一次ＡＭＬ試料のパネルとの５時間の共培養（１：１）後に脱顆粒を示すＨＡ−１Ｈ−ＴＣＲ２形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＣＤ１０７ａのＨＡ−１Ｈ特異的発現を示す。図８Ｂ〜図８Ｅは、ＨＡ−１  ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞による白血病及びリンパ腫標的の溶解を示すＣＲＡである。図８Ｂは、ＨＡ−１ＨＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞（ダークグレーのバー）及びＨＡ−１Ｈ特異的Ｔ細胞クローン２（ライトグレーのバー）による一次ＨＡ−１Ｈ＋ＡＭＬまたはＨＡ−１−ＡＭＬの溶解を示す。図８Ｃは、様々なＥ：Ｔ比率でのＨＬＡ−Ａ２＋／ＨＡ−１Ｈ＋一次ＡＭＬ（ＡＭＬ１）を示す。図８Ｄは、Ｂ−ＡＬＬ系統（１）ＢＡＬＬ−１、（２）ＲＳ４；１１、Ｔ−ＡＬＬ系統（１）ＭＯＬＴ４、（２）ＣＥＭ（３）ＲＰＭＩ−８４０２（４）ＨＳＢ−２及びＡＭＬ系統ＮＢ−４を示す。図８Ｅは、Ｔ細胞リンパ腫（ＳＵＰ−Ｍ２  ＨＬＡ−Ａ２＋、ＨＡ−１＋；ＳＵ−ＤＨＬ−１  ＨＬＡ−Ａ２＋ＨＡ−１−）細胞系統を示す。図８Ｄでは、ＷＴがＨＬＡ−Ａ２−であったか、ＨＡ−１Ｈ−遺伝子型を有していた場合、＊ＨＬＡ−Ａ２または＊＊ＨＬＡ−Ａ２及びＨＡ−１Ｈミニ遺伝子をコードするＬＶでＨＬＡ−Ａ２−及び／またはＨＡ−１Ｈ−（ＷＴ）細胞系統を形質導入（ＴＤ）した。別段の指定がない限り、２０：１のＥ：Ｔ比率を使用した。
【図８−２】ＨＡ−１Ｈ−ＴＣＲ２形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞による、ＨＡ−１＋白血病細胞の特異的な死滅を示す図である。図８Ａは、一次ＡＭＬ試料のパネルとの５時間の共培養（１：１）後に脱顆粒を示すＨＡ−１Ｈ−ＴＣＲ２形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＣＤ１０７ａのＨＡ−１Ｈ特異的発現を示す。図８Ｂ〜図８Ｅは、ＨＡ−１  ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞による白血病及びリンパ腫標的の溶解を示すＣＲＡである。図８Ｂは、ＨＡ−１ＨＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞（ダークグレーのバー）及びＨＡ−１Ｈ特異的Ｔ細胞クローン２（ライトグレーのバー）による一次ＨＡ−１Ｈ＋ＡＭＬまたはＨＡ−１−ＡＭＬの溶解を示す。図８Ｃは、様々なＥ：Ｔ比率でのＨＬＡ−Ａ２＋／ＨＡ−１Ｈ＋一次ＡＭＬ（ＡＭＬ１）を示す。図８Ｄは、Ｂ−ＡＬＬ系統（１）ＢＡＬＬ−１、（２）ＲＳ４；１１、Ｔ−ＡＬＬ系統（１）ＭＯＬＴ４、（２）ＣＥＭ（３）ＲＰＭＩ−８４０２（４）ＨＳＢ−２及びＡＭＬ系統ＮＢ−４を示す。図８Ｅは、Ｔ細胞リンパ腫（ＳＵＰ−Ｍ２  ＨＬＡ−Ａ２＋、ＨＡ−１＋；ＳＵ−ＤＨＬ−１  ＨＬＡ−Ａ２＋ＨＡ−１−）細胞系統を示す。図８Ｄでは、ＷＴがＨＬＡ−Ａ２−であったか、ＨＡ−１Ｈ−遺伝子型を有していた場合、＊ＨＬＡ−Ａ２または＊＊ＨＬＡ−Ａ２及びＨＡ−１Ｈミニ遺伝子をコードするＬＶでＨＬＡ−Ａ２−及び／またはＨＡ−１Ｈ−（ＷＴ）細胞系統を形質導入（ＴＤ）した。別段の指定がない限り、２０：１のＥ：Ｔ比率を使用した。
【図９Ａ】ＨＡ−１Ｈ＋またはＨＡ−１Ｈ−一次白血病細胞に対する、ＴＣＲ２またはＴＣＲ１６で形質導入されたＴ細胞（及び対応する親クローン）の細胞傷害性を示す図である。図９Ａは、示される細胞系統の特異的溶解（４時間、ＣＲＡ）を示す。
【図９Ｂ】ＨＡ−１Ｈ＋またはＨＡ−１Ｈ−一次白血病細胞に対する、ＴＣＲ２またはＴＣＲ１６で形質導入されたＴ細胞（及び対応する親クローン）の細胞傷害性を示す図である。図９Ｂは、示されるエフェクター：標的比率での標的細胞の特異的溶解。
【図１０】ＴＣＲ２−及びＴＣＲ１６−形質導入細胞（ならびに親クローン）を、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）へ線維芽細胞を曝露して、または曝露せずに、ＨＡ−１Ｈ遺伝子型陽性真皮線維芽細胞とともにインキュベートした、細胞傷害アッセイのデータを示す。
【図１１Ａ】ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２及びＣＤ８共受容体変異体で形質導入されたＣＤ４＋Ｔ細胞の特性評価を示す図である。図１１Ａは、（ｉ、ｉｉ）に示すようにＣＤ８α及び／またはβＭ１〜Ｍ５鎖で形質導入されたＣＤ４＋Ｔ細胞のＨＡ−１Ｈ／ＨＬＡ−Ａ２マルチマー染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）である。（ｉｉｉ）は、様々なＣＤ８共受容体コンストラクトのＭＦＩをグラフにまとめたものである。
【図１１Ｂ】ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２及びＣＤ８共受容体変異体で形質導入されたＣＤ４＋Ｔ細胞の特性評価を示す図である。図１１Ｂは、ＨＡ−１Ｈ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（黒丸）、ＣＤ８α及びβ鎖（正方形、菱形、下向きの三角形）、ＣＤ８α鎖単独（上向きの三角形）またはＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲのみ（白丸）で形質導入されたＣＤ４＋Ｔ細胞による、様々な濃度のＨＡ−１ＨペプチドでパルスされたＴ２の溶解を示すＣＲＡである。
【図１１Ｃ】ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２及びＣＤ８共受容体変異体で形質導入されたＣＤ４＋Ｔ細胞の特性評価を示す図である。図１１Ｃは、ＨＬＡ−Ａ２＋ＨＡ−１Ｈ＋ＬＣＬ、ＨＡ−１Ｈ−ＬＣＬまたは培地のみによる刺激に応じた、（上から下に）ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ単独、ＣＤ８α鎖を有するＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ、ＣＤ８α及びβＭ１鎖を有するＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ、またはＣＤ８α及びβＭ４鎖を有するＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲで形質導入されたＣＤ４＋Ｔ細胞における細胞分裂を伴う、カルボキシフルオレセイン（ＣＦＳＥ）色素の希釈を示す増殖アッセイ。
【図１２Ａ】ＨＡ−１Ｈ−ＴＣＲ２及びＣＤ８共受容体で形質導入されたＣＤ４＋Ｔ細胞のさらなる機能的特性評価を示す図である。図１２Ａは、ＨＬＡ−Ａ２＋／ＨＡ−１Ｈ＋ＡＭＬまたはＨＬＡ−Ａ２＋／ＨＡ−１Ｈ−ＡＭＬに応じた、ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２  ＬＶ（上部パネル）またはＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２−ＣＤ８共受容体ＬＶ（下部パネル）で形質導入されたＣＤ８＋Ｔ細胞（左）及びＣＤ４＋Ｔ細胞（右）によるＩＬ−２及びＩＦＮ−γ産生を示す細胞内サイトカインアッセイである。
【図１２Ｂ】ＨＡ−１Ｈ−ＴＣＲ２及びＣＤ８共受容体で形質導入されたＣＤ４＋Ｔ細胞のさらなる機能的特性評価を示す図である。図１２Ｂは、ＨＬＡ−Ａ２＋／ＨＡ−１Ｈ＋一次ＡＭＬ、ＨＬＡ−Ａ２＋／ＨＡ−１Ｈ−ＡＭＬまたは培地対照に応じた、ＨＡ−１Ｈ特異的ＴＣＲ２  ＬＶ（上部パネル）またはＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２−ＣＤ８共受容体ＬＶ（下部パネル）で形質導入されたＣＤ８＋Ｔ細胞（左）及びＣＤ４＋Ｔ細胞（右）の増殖を示すＣＦＳＥアッセイ。
【図１３】本開示の安全スイッチ遺伝子コンストラクト（下部）及びＴ細胞を死滅させるための安全スイッチ遺伝子コンストラクトを使用するスキーマ（上部）の代表的な図である。
【図１４】一次Ｔ細胞を安全スイッチ遺伝子及びＨＡ−１Ｈ特異的ＴＣＲ２を発現する導入遺伝子コンストラクトで形質導入し（またはＴＣＲ２単独で形質導入し）、この一次Ｔ細胞をＨＡ−１ＨペプチドでパルスしたＴ２細胞とともにインキュベートした細胞傷害アッセイのデータを示す。
【図１５】コードされる安全スイッチを活性化する「自殺薬物」の存在または非存在下での、形質導入されたＴＣＲの生存パーセントを示す。
【図１６】示された濃度の同族安全性スイッチ活性化薬への暴露後の、ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２＋安全遺伝子で形質導入されたＣＤ８＋Ｔ細胞の生存を示す図である。ｉＣａｓｐ９−ＴＣＲ２、ｔＥＧＦｒ−ＴＣＲ２、ＲＱＲ８−ＴＣＲ２及びＭｙｃ−ＴＣＲ２  ＣＤ８＋形質導入Ｔ細胞の生存を、示された濃度のそれぞれの安全スイッチ活性化薬：ＡＰ１９０３、抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂ（セツキシマブ）＋補体；抗ＣＤ２０ｍＡｂ（リツキシマブ）＋補体；抗ｍｙｃ  ｍＡｂ＋補体とともに２４時間インキュベートした後に測定した。残りのＨＡ−１  ＴＣＲ２形質導入Ｔ細胞は、フローサイトメトリーによって定量化した。矢印はインビボでヒトにおいて達成され得る及び許容され得る薬物濃度を示す。
【図１７】ｉＣａｓｐ９−ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ−ＣＤ８＋発現コンストラクトを評価するための以下の５つ（５）の異なるタイプのコンストラクトを示す。（ｉ）ｉＣａｓｐ  ９及びＴＣＲ２、（ｉｉ）ＴＣＲ２及びＣＤ８共受容体、（ｉｉｉ）ｉＣａｓｐ  ９、ＴＣＲ２及びＣＤ８共受容体、（ｉｖ）ｉＣａｓｐ９、ＴＣＲ２及びＣＤ８共受容体にＲＱＲタグを有するＣＤ８共受容体、ならびに（ｖ）ｉＣａｓｐ９、ＴＣＲ２及びＴＣＲのアルファ鎖にＱ（ＣＤ３４）タグを有するＣＤ８共受容体。
【図１８】本開示のＴＣＲ形質導入細胞を評価するためのフロチャートを示す図である。
【図１９】ＨＡ−１デキストラマーによる富化の前（上部の行）及び後（下部の行）の、示される導入遺伝子コンストラクトのそれぞれにおける操作されたＴＣＲの発現を示すフローサイトメトリーデータを示す図である。
【図２０Ａ】導入遺伝子コンストラクト：ｉＣａｓｐ−９−ＴＣＲ（−  −；第１のバー）、ＴＣＲ及びＣＤ８共受容体（−▲−；第２のバー）、ｉＣａｓｐ−９−ＴＣＲ−ＣＤ８共受容体（−◆−；第３のバー）、ｉＣａｓｐ９−ＴＣＲ−ＲＱＲ−ＣＤ８共受容体（−■−；第４のバー）、及びｉＣａｓ９−ＣＤ３４タグ−ＴＣＲ−ＣＤ８共受容体（−●−；第５のバー）で形質導入されたＴ細胞による、ペプチドでパルスした標的細胞（図２０Ａ）及びＬＣＬ系統（図２０Ｂ）の特異的溶解を示す。
【図２０Ｂ】導入遺伝子コンストラクト：ｉＣａｓｐ−９−ＴＣＲ（−  −；第１のバー）、ＴＣＲ及びＣＤ８共受容体（−▲−；第２のバー）、ｉＣａｓｐ−９−ＴＣＲ−ＣＤ８共受容体（−◆−；第３のバー）、ｉＣａｓｐ９−ＴＣＲ−ＲＱＲ−ＣＤ８共受容体（−■−；第４のバー）、及びｉＣａｓ９−ＣＤ３４タグ−ＴＣＲ−ＣＤ８共受容体（−●−；第５のバー）で形質導入されたＴ細胞による、ペプチドでパルスした標的細胞（図２０Ａ）及びＬＣＬ系統（図２０Ｂ）の特異的溶解を示す。
【図２１】ＨＡ−１Ｈ＋（上部）またはＨＡ−１Ｈ−（下部）細胞系統による刺激後の、示される導入遺伝子コンストラクトで形質導入されたＴ細胞によるサイトカイン生成を示す図である。
【図２２】示される標的細胞系統に対する、導入遺伝子コンストラクト（上部）で形質導入されたＴ細胞の細胞溶解活性（下部）を示す図である。
【図２３】インターフェロンガンマの存在または非存在下で、示される非造血細胞に対して、示される導入遺伝子コンストラクトで形質導入されたＴ細胞の細胞溶解活性がないことを示す。ＨＡ−１Ｈ＋造血対照細胞はＴ細胞によって死滅させられた。
【図２４】一次白血病細胞に暴露された場合の、示される導入遺伝子コンストラクトで形質導入された細胞によるサイトカイン生成を示す図である。
【図２５】ＨＡ−１Ｈ＋一次白血病細胞で刺激した場合の形質導入されたＴ細胞の増殖を示す、フローサイトメトリーのヒストグラムを示す図である。上部：ＣＦＳＥでＦ１細胞を染色することによって増殖を測定するためのスキーム（左）、及び本開示の導入遺伝子コンストラクトで形質導入されたＴ細胞の代表的な増殖データ。下部：示される導入遺伝子コンストラクトで形質導入されたＴ細胞の増殖。
【図２６】示された濃度の同族自殺薬物を導入した後の、示される（上部）導入遺伝子コンストラクトで形質導入されたＴ細胞の生存（下部）を示す。
【図２７】本開示の操作されたＴ細胞の富化スキームを示す。Ｔ細胞を示される導入遺伝子コンストラクト（上部）で形質導入し、発現（中央）を調べる。選択可能な形質導入マーカー（ＣＤ３４エピトープ；２つの右端の散布図）を発現する細胞を、抗ＣＤ３４抗体を有する磁気ビーズで選択する。
【図２８Ａ】磁気選択の前（上部の行）及び後（下部の行）の形質導入されたＴ細胞の頻度を示すフローサイトメトリーデータ（図２８Ａ）を示す。
【図２８Ｂ】左側の４つの散布図：ＣＤ３４選択マーカー及びＣＤ８に対する染色。右側の４つの散布図：ＨＡ−１Ｈデキストラマー及びＣＤ８に対する染色。選択の前または後にＣＤ３４選択マーカー（左）を発現するまたはＨＡ−１Ｈに特異的な（右）細胞の細胞数も示す（図２８Ｂ）。
【図２９】本開示のＴＣＲ安全性遺伝子コンストラクトの様々な機能性を示す概略図である。
【図３０】本開示の例示的ｉＣ９−ＨＡ−１Ｈ−ＴＣＲ−ＲＱＲ−ＣＤ８コンストラクトをコードするレンチウイルス送達ベクターの図である。
【図３１】本開示のＴＣＲ２−ＣＤ８導入遺伝子コンストラクトで形質導入されたＣＤ８＋及びＣＤ４＋細胞の機能的特性評価を示す。左パネル：ＨＡ−１Ｈペプチド抗原に応じたサイトカイン放出（ＩＬ−２；ＩＦＮ−γ）を示すフローサイトメトリーデータ。中央パネル：フローサイトメトリーデータの定量化。右パネル：ＨＡ−１Ｈに応じた、形質導入細胞の増殖。
【図３２Ａ】（ＨＡ−１Ｈ特異的ＴＣＲ）−（ＲＱＲ）−（ＣＤ８）で形質導入され、臨床スケールまで増殖されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の特性評価を示す。図３２Ａは、形質導入されたＴ細胞の増殖である。
【図３２Ｂ】（ＨＡ−１Ｈ特異的ＴＣＲ）−（ＲＱＲ）−（ＣＤ８）で形質導入され、臨床スケールまで増殖されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の特性評価を示す。図３２Ｂは、ＨＡ−１／ＨＬＡ−Ａ２マルチマー染色を用いるフローサイトメトリーによる、形質導入されたＴ細胞におけるＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲマルチマーの結合及びＣＤ３４の発現を示す。
【図３２Ｃ】（ＨＡ−１Ｈ特異的ＴＣＲ）−（ＲＱＲ）−（ＣＤ８）で形質導入され、臨床スケールまで増殖されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の特性評価を示す。図３２Ｃは、ＣＤ４５ＲＡ枯渇の後、ならびに形質導入及び増殖に続いた、アフェレーシス時のＴ細胞における共刺激性分子及びホーミング分子の発現（Ｎ＝５）を示す。
【図３２Ｄ】（ＨＡ−１Ｈ特異的ＴＣＲ）−（ＲＱＲ）−（ＣＤ８）で形質導入され、臨床スケールまで増殖されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の特性評価を示す。図３２Ｄ、図３２Ｅは、最終的な細胞生成物中のＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  ＣＤ８＋及びＣＤ４＋における「枯渇」マーカーの発現（Ｎ＝３）（図３２Ｄ）及び代表的な実施例（図３２Ｅ）。
【図３２Ｅ】（ＨＡ−１Ｈ特異的ＴＣＲ）−（ＲＱＲ）−（ＣＤ８）で形質導入され、臨床スケールまで増殖されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の特性評価を示す。図３２Ｄ、図３２Ｅは、最終的な細胞生成物中のＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  ＣＤ８＋及びＣＤ４＋における「枯渇」マーカーの発現（Ｎ＝３）（図３２Ｄ）及び代表的な実施例（図３２Ｅ）。
【図３３−１】臨床規模のＨＡ−１Ｈ−ＴＣＲ２−ＲＱＲ−ＣＤ８形質導入Ｔ細胞を標的細胞とともにインキュベートした機能的認識アッセイのデータを示す図である。図３３Ａは、ＥＴ比率２０：１でのＣＲＡにおける、ＣＤ８＋（実線）及びＣＤ４＋Ｔ細胞（破線）による、様々なＶＬＨ（実線、ダークグレー）及びＶＬＲ（実線、ライトグレー）ペプチド濃度でパルスした標的Ｔ２細胞の溶解を示す。図３３Ｂは、ＣＲＡにおけるＣＤ８＋（実線）によるＨＡ−１Ｈ＋Ａ２＋ＬＣＬ、ＨＡ−１Ｈ−−Ａ２＋ＬＣＬ、及びＡＭＬ  ＨＡ−１Ｈ＋Ａ２＋細胞系統（ＴＨＰ−１）の溶解を示す。図３３Ｃは、１０ｎｇ／ｍｌのＨＡ−１ペプチドでパルスしたＴ２細胞による刺激に応じた、Ｔ細胞によるＩＬ−２、ＩＦＮ−γ及びＴＮＦαの産生を示す。図３３Ｄは、Ｔ細胞によって分泌されるサイトカイン種の数を示す円グラフである。図３３Ｅは、多重イムノアッセイによって測定した場合の、ＶＬＨまたはＶＬＲペプチドでパルスしたＴ２細胞によるＴ細胞の刺激から２４時間後の培地中のサイトカイン及びグランザイムＢ濃度。
【図３３−２】臨床規模のＨＡ−１Ｈ−ＴＣＲ２−ＲＱＲ−ＣＤ８形質導入Ｔ細胞を標的細胞とともにインキュベートした機能的認識アッセイのデータを示す図である。図３３Ａは、ＥＴ比率２０：１でのＣＲＡにおける、ＣＤ８＋（実線）及びＣＤ４＋Ｔ細胞（破線）による、様々なＶＬＨ（実線、ダークグレー）及びＶＬＲ（実線、ライトグレー）ペプチド濃度でパルスした標的Ｔ２細胞の溶解を示す。図３３Ｂは、ＣＲＡにおけるＣＤ８＋（実線）によるＨＡ−１Ｈ＋Ａ２＋ＬＣＬ、ＨＡ−１Ｈ−−Ａ２＋ＬＣＬ、及びＡＭＬ  ＨＡ−１Ｈ＋Ａ２＋細胞系統（ＴＨＰ−１）の溶解を示す。図３３Ｃは、１０ｎｇ／ｍｌのＨＡ−１ペプチドでパルスしたＴ２細胞による刺激に応じた、Ｔ細胞によるＩＬ−２、ＩＦＮ−γ及びＴＮＦαの産生を示す。図３３Ｄは、Ｔ細胞によって分泌されるサイトカイン種の数を示す円グラフである。図３３Ｅは、多重イムノアッセイによって測定した場合の、ＶＬＨまたはＶＬＲペプチドでパルスしたＴ２細胞によるＴ細胞の刺激から２４時間後の培地中のサイトカイン及びグランザイムＢ濃度。
【図３４Ａ】図３４Ａは、ＣＤ３４免疫磁気ビーズによる富化の前または後の最終生成物中のＴ細胞におけるＣＤ３４（左のグラフ）及びＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ（右のグラフ）の発現（Ｎ＝３）を示す。
【図３４Ｂ】図３４Ｂは、５ＮＧ／ＭＬ  ＡＰ１９０３または培地対照のみとともに２４時間インキュベートした後の細胞生成物中のＴ細胞の生存を示す図である。
【図３５】示された濃度のＨＡ−１Ｈ抗原でパルスしたＴ２細胞に対する、本開示の別のＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲで形質導入されたＴ細胞（丸）及び対照細胞（三角形）の細胞溶解活性を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
いくつかの態様では、本開示は、マイナー組織適合性抗原ＨＡ−１Ｈの発現を特徴とする過剰増殖性疾患を治療するための組成物及び方法を提供する。背景として、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）試験は、典型的には、器官、細胞及び組織被移植者を適合性ドナーと適合させるために使用される。ＨＬＡ試験は、ヒトが遺伝によって受け継いだメジャーＨＬＡ遺伝子、及び細胞の表面に存在する対応する抗原またはタンパク質を特定する。これらの抗原は、体の免疫系がどの細胞が「自己」であるか、どれが「外来性」または「非自己」であるかを区別するのを助ける。「非自己」と認識される任意の細胞は、免疫応答、例えば、Ｔ細胞媒介性細胞傷害または抗体の産生を誘発することができる。注目すべきことに、メジャーＨＬＡ遺伝子に対する試験は、さらなる抗原を生じさせるマイナーＨＬＡ遺伝子を特定しない。したがって、「ＨＬＡ適合された」ドナー細胞でさえ、認識される「外来性」のマイナーなＨＬＡタンパク質またはペプチドを発現する健常な受容細胞を攻撃する可能性がある。上皮組織で発現しているマイナーＨ抗原は、移植片対宿主病につながるアロ反応性Ｔ細胞の標的である。しかし、いくつかのマイナーＨ抗原は、血液悪性腫瘍に影響を及ぼされ得る造血細胞を含む造血系で優勢にまたは排他的発現している遺伝子と関係がある。したがって、発現が制限されたマイナーＨ抗原は、移植片対白血病効果を増強しようとし、それによって、再発を防止する療法の重要な潜在的な標的である。
【０００９】
マイナー組織適合性抗原ＨＡ−１Ｈは、同義ＨＭＨＡ１遺伝子（Ｒｈｏ  ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質４５とも呼ばれる）にコードされ、白血病細胞及び正常造血細胞で高発現している（例えば、Ｇｒｉｆｆｉｏｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：１００，２０１６、Ｓｐｉｅｒｉｎｇｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｌ．Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌ．１９：１２４４−１２５３，２０１３（これらのＨＡ−１発現の開示は参照によって本明細書に組み込まれる）を参照されたい）が、正常非造血細胞ではそうではない。５２％の個体に存在するＨＭＨＡ１変異体（ｒｓ１８０１２８４  Ａ／ＡまたはＡ／Ｇ）は、アルギニンの代わりにヒスチジン残基を含む免疫原性ペプチド（
【化２】
2019531074.tif 000004
；配列番号６６）（Ｒ１３９Ｈ多型）を生じさせ、共通のＨＬＡ−Ａ＊０２０１（Ａ２）アレルを有する個体において、このペプチドのＨＬＡ提示が起こる（ｄｅｎ  Ｈａａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７９：１０５４−１０５７，１９９８）。したがって、ＨＡ−１Ｈを標的にするＴ細胞療法は、血液悪性腫瘍のために移植を受け、ＨＬＡ−Ａ２陰性またはＨＡ−１Ｈ陰性（「ＨＡ−１Ｒ」；ｒｓ１８０１２８４  Ｇ／Ｇ−
【化３】
2019531074.tif 000005
；配列番号６５）のいずれかであるＴ細胞ドナーを必要とする対象のおよそ２５％に適用可能である。
【００１０】
いくつかの態様では、本開示は、ＨＡ−１Ｈに特異的な結合タンパク質、例えば、ＴＣＲ及びＣＡＲを発現する操作された免疫細胞を提供する。そのような操作された免疫細胞は、血液悪性腫瘍を治療するための、またはその再発もしくは再燃を防止するための単独型の療法として使用することができ、あるいはそのような細胞は、（例えば、同種ＨＣＴに続いて、または同種ＨＣＴと組み合わせて）、さらなる療法または薬剤を含む治療レジメンの一部として使用することができる。
【００１１】
より詳細に本開示を記載する前に、本明細書で使用される特定の用語の定義を提供することは、それらの理解に役立ち得る。さらなる定義が本開示の全体を通して記載される。
【００１２】
本明細書では、別段指示がない限り、いかなる濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲または整数範囲も、記載される範囲内の任意の整数、及び適切な時には、それらの分数（例えば、ある整数の１０分の１及び１００分の１）の値を含むことを理解されたい。さらに、ポリマーのサブユニット、サイズまたは厚さなどの任意の物理的特徴に関して本明細書に記載されるいかなる数の範囲も、別段指示がない限り、記載される範囲内の任意の整数を含むことを理解されたい。本明細書で使用する場合、用語「約」は、別段指示がない限り、示される範囲、値または構造の±２０％を意味する。本明細書で使用する場合、用語「ａ」及び「ａｎ」は、列挙される成分の「１つまたは複数」を指すことを理解されたい。選択肢（例えば、「または」）の使用は、選択肢の１つ、両方またはこれらの任意の組み合わせのいずれかを意味することを理解されたい。本明細書で使用する場合、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「有する」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」は、同義的に使用され、こうした用語及びこれらの変形形態は、非限定として解釈されることが意図される。
【００１３】
さらに、本明細書に記載の構造物及び置換基の様々な組み合わせから生じる個々の化合物または化合物の群は、各化合物または化合物の群が個々に記載される場合と同じ程度に本出願によって開示されることを理解されたい。したがって、特定の構造物または特定の置換基の選択は本開示の範囲内である。
【００１４】
用語「から本質的になる」は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と等しくなく、請求の特定の材料もしくはステップ、または請求される主題の基本的な特性に実質的に影響を及ぼさないものを指す。例えば、タンパク質のドメイン、領域もしくはモジュール（例えば、結合ドメイン、ヒンジ領域、リンカーモジュール）またはタンパク質（これは、１つもしくは複数のドメイン、領域もしくはモジュールを有し得る）は、ドメイン、領域、モジュールまたはタンパク質のアミノ酸配列が、組み合わせて、最大で２０％（例えば、最大で１５％、１０％、８％、６％、５％、４％、３％、２％または１％）のドメイン、領域、モジュールまたはタンパク質の長さに寄与し、ドメイン（複数可）、領域（複数可）、モジュール（複数可）またはタンパク質の活性（例えば、結合タンパク質の標的結合親和性）に実質的に影響を及ぼさない（すなわち、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、または１％以下など、５０％を超えて活性を低下させない）、伸長、欠失、変異またはこれらの組み合わせ（例えば、アミノ末端もしくはカルボキシ末端またはドメイン間のアミノ酸）を含む場合、特定のアミノ酸配列「から本質的になる」。
【００１５】
本明細書で使用する場合、「免疫系細胞」は、２つの主要な系列、すなわち、骨髄系前駆細胞（これは、単球、マクロファージ、樹状細胞、巨核球及び顆粒球などの骨髄系細胞を生じさせる）ならびにリンパ球前駆細胞（これは、Ｔ細胞、Ｂ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ球細胞を生じさせる）を生じさせる骨髄の造血幹細胞が起源である、免疫系の任意の細胞を意味する。例示的免疫系細胞としては、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４−ＣＤ８−二重陰性Ｔ細胞、γδＴ細胞、調節性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞及び樹状細胞が挙げられる。マクロファージ及び樹状細胞は、ペプチドと複合体化されたＡＰＣの表面にある主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）受容体がＴ細胞の表面にあるＴＣＲと相互作用する場合にＴ細胞を活性化することができる特殊化した細胞である、「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」と称され得る。
【００１６】
「Ｔ細胞」または「Ｔリンパ球」は、胸腺で成熟し、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を産生する免疫系細胞である。Ｔ細胞は、ナイーブ（「ＴＮ」；抗原に暴露されていない。ＴＣＭ（本明細書に記載）と比較して、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ１２７及びＣＤ４５ＲＡの発現が増大しており、ＣＤ４５ＲＯの発現が低下しているか、発現していない）、メモリーＴ細胞（ＴＭ）（抗原経験及び長寿命）及びエフェクター細胞（抗原経験、細胞傷害性）であり得る。ＴＭは、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＯを発現する）ならびにエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ、ＣＤ４５ＲＯを発現し、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７及びＣＤ２８の発現は低下している）のサブセットにさらに分けることができる。エフェクターＴ細胞（ＴＥ）は、ＣＤ４５ＲＡを発現する抗原経験ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球を指し、ＴＣＭと比較してＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７及びＣＤ２８の発現が低下しており、グランザイム及びパーフォリンに陽性である。ヘルパーＴ細胞（ＴＨ）は、サイトカインを放出することによって他の免疫細胞の活性に影響を及ぼすＣＤ４＋細胞である。ＣＤ４＋Ｔ細胞は適応免疫応答を活性化及び抑制することができ、これら２つの機能のどちらが誘導されるかは、他の細胞及びシグナルの存在に依存するであろう。Ｔ細胞を既知の技法を使用して収集することができ、それらの様々な亜集団または組み合わせを抗体への親和性結合、フローサイトメトリーまたは免疫磁気選択などの既知の技法によって富化または枯渇させることができる。他の例示的Ｔ細胞としては、調節性Ｔ細胞、例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋（Ｆｏｘｐ３＋）調節性Ｔ細胞及びＴＲＥＧ１７細胞ならびにＴｒ１、Ｔｈ３、ＣＤ８＋ＣＤ２８−及びＱａ−１拘束性Ｔ細胞が挙げられる。
【００１７】
「Ｔ細胞受容体」（ＴＣＲ）は、ＭＨＣ受容体に結合している抗原ペプチドに特異的に結合することができる、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバー（これは、可変結合ドメイン、定常ドメイン、膜貫通領域及び短い細胞質尾部を有する；例えば、Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ，３ｒｄ  Ｅｄ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐ．４３３，１９９７を参照されたい）を指す。ＴＣＲは、細胞表面上に、または可溶性形態で見出すことができ、一般に、α鎖及びβ鎖（それぞれＴＣＲα及びＴＣＲβとしても知られる）またはγ鎖及びδ鎖（それぞれＴＣＲγ及びＴＣＲδとしても知られる）を有するヘテロダイマーから構成される。
【００１８】
他の免疫グロブリン（例えば抗体）のように、ＴＣＲ鎖（例えば、α鎖、β鎖）の細胞外部分は、Ｎ末端に２つの免疫グロブリンドメイン、可変ドメイン（例えば、α鎖可変ドメインもしくはＶα鎖可変ドメインまたはＶβ；典型的には、Ｋａｂａｔの番号付け（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，１９９１，５ＴＨ  ｅｄ．に基づいて、アミノ酸１〜１１６）を、及び細胞膜に隣接する１つの定常ドメイン（例えば、α鎖定常ドメインまたはＣα、典型的には、Ｋａｂａｔに基づいて５アミノ酸１１７〜２５９、β鎖定常ドメインまたはＣβ、典型的には、Ｋａｂａｔに基づいてアミノ酸１１７〜２９５）を含む。さらに、免疫グロブリンのように、可変ドメインは、フレームワーク領域（ＦＲ）によって分離した相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む（例えば、Ｊｏｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：９１３８，１９９０、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．７：３７４５，１９８８を参照されたい。Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５，２００３も参照されたい）。
【００１９】
本明細書で使用する場合、「抗原」または「Ａｇ」は、免疫応答を誘発する免疫原性分子を指す。この免疫応答は、抗体産生、特定の免疫担当細胞（例えばＴ細胞）の活性化または両方を含み得る。抗原（免疫原性分子）は、例えば、ペプチド、糖ペプチド、ポリペプチド、糖ポリペプチド、ポリヌクレオチド、多糖、脂質などでもよい。抗原は、合成されても、組換えで生成されても、または生物試料に由来してもよいことは、容易に明らかである。１つまたは複数の抗原を含むことができる例示的生物試料としては、組織試料、腫瘍試料、細胞、生体液またはこれらの組み合わせが挙げられる。抗原は、抗原を発現するように改変もしくは遺伝子操作された細胞、または内因的に（例えば、ヒトの介入による改変もしくは遺伝子操作なしで）免疫原性の変異または多型を発現する細胞によって生成することができる。
【００２０】
「主要組織適合抗原複合体」（ＭＨＣ）は、すべての有核細胞の細胞表面にペプチド抗原を送達する糖タンパク質を指す。ＭＨＣクラスＩ分子は、膜貫通α鎖（３つのαドメインを有する）及び非共有結合的に会合したβ２ミクログロブリンを有するヘテロダイマーである。ＭＨＣクラスＩＩ分子は２つの膜貫通糖タンパク質、α及びβからなり、これらの両方とも膜を貫通する。各鎖は２つのドメインを有する。ＭＨＣクラスＩ分子はサイトゾルに由来するペプチドを細胞表面に送達し、ここで、ペプチド：ＭＨＣ複合体がＣＤ８＋Ｔ細胞によって認識される。ＭＨＣクラスＩＩ分子は小胞系に由来するペプチドを細胞表面に送達し、ここで、このペプチドがＣＤ４＋Ｔ細胞によって認識される。ヒトＭＨＣはヒト白血球抗原（ＨＬＡ）と称される。
【００２１】
用語「エピトープ」または「抗原性エピトープ」は、同族結合分子、例えば、免疫グロブリン、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体または他の結合分子、ドメインもしくはタンパク質が認識し、特異的に結合する、任意の分子、構造物、アミノ酸配列またはタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は、一般に、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基を含み、特異的三次元構造的特性及び特異的荷電特性を有し得る。
【００２２】
本明細書で使用する場合、「特異的に結合する」または「に特異的」は、試料中の任意の他の分子または成分と有意に会合または合体しないが、１０５Ｍ−１（これは、この会合反応に対するオン速度［Ｋｏｎ］対オフ速度［Ｋｏｆｆ］の比率に等しい）以上の親和性またはＫＡ（すなわち、１／Ｍの単位での特定の結合相互作用の平衡結合定数）を有する、標的分子への結合タンパク質（例えばＴＣＲ受容体）または結合ドメイン（もしくはそれらの融合タンパク質）の会合または合体を指す。結合タンパク質または結合ドメイン（もしくはそれらの融合タンパク質）は、「高親和性」結合タンパク質もしくは結合ドメイン（もしくはそれらの融合タンパク質）に、または「低親和性」結合タンパク質または結合ドメイン（もしくはそれらの融合タンパク質）に分類することができる。「高親和性」結合タンパク質または結合ドメインは、少なくとも１０７Ｍ−１、少なくとも１０８Ｍ−１、少なくとも１０９Ｍ−１、少なくとも１０１０Ｍ−１、少なくとも１０１１Ｍ−１、少なくとも１０１２Ｍ−１または少なくとも１０１３Ｍ−１のＫＡを有する結合タンパク質または結合ドメインを指す。「低親和性」結合タンパク質または結合ドメインは、１０７Ｍ−１、１０６Ｍ−１まで、１０５Ｍ−１までのＫＡを有する結合タンパク質または結合ドメインを指す。あるいは、親和性は、Ｍの単位（例えば、１０−５Ｍ〜１０−１３Ｍ）での特定の結合相互作用の平衡解離定数（Ｋｄ）であると定義することができる。
【００２３】
ある特定の実施形態では、受容体または結合ドメインは「増強された親和性」を有し得、これは、野生型（または親）結合ドメインに比べて標的抗原へのより強い結合を有する、選択されたまたは操作された受容体または結合ドメインを指す。例えば、増強された親和性は、野生型結合ドメインよりも高い標的抗原に対するＫＡ（平衡結合定数）の結果、野生型結合ドメインのものより低い標的抗原に対するＫｄ（解離定数）の結果、野生型結合ドメインのものより低い標的抗原に対するオフ速度（ＫＯＦＦ）の結果、またはこれらの組み合わせであり得る。ある特定の実施形態では、増強された親和性のＴＣＲは、特定の宿主細胞、例えば、免疫系の細胞、造血幹細胞、Ｔ細胞、一次Ｔ細胞、Ｔ細胞系統、ＮＫ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞で発現を増強するように、コドン最適化され得る（Ｓｃｈｏｌｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１９：１３５，２００６）。Ｔ細胞は、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞でもよい。
【００２４】
特定の標的に特異的に結合する本開示の結合ドメインを特定するための、及び結合ドメインまたは融合タンパク質の親和性を決定するための様々なアッセイが知られており、例えば、マルチマー／テトラマー染色、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、分析的超遠心分離法、分光法及び表面プラスモン共鳴法（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））分析である（例えば、Ｄｏｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４６：１１−２２，２０１５、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０，１９４９、Ｗｉｌｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０２９５：２１０３，２００２、Ｗｏｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：２５６０，１９９３及び米国特許第５，２８３，１７３号、第５，４６８，６１４号、または同等物を参照されたい。すべて参照により本明細書に組み込まれる）。
【００２５】
本開示で使用されるＴＣＲの供給源は、様々な動物種、例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギまたは他の哺乳動物由来であり得る。
【００２６】
本明細書で使用する場合、用語「ＣＤ８共受容体」または「ＣＤ８」は、アルファ−アルファホモダイマーまたはアルファ−ベータヘテロダイマーのいずれかとしての細胞表面糖タンパク質ＣＤ８を意味する。ＣＤ８共受容体は、細胞障害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）の機能及びその細胞質内チロシンリン酸化経路を介するシグナリングを通じた機能を補助する（Ｇａｏ  ａｎｄ  Ｊａｋｏｂｓｅｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：６３０−６３６，２０００、Ｃｏｌｅ  ａｎｄ  Ｇａｏ，Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：８１−８８，２００４）。５つ（５）の異なるＣＤ８β鎖（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｐ１０９６６を参照されたい）及び単一のＣＤ８α鎖（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｐ０１７３２を参照されたい）が存在する。
【００２７】
「ＣＤ４」は、ＴＣＲが抗原提示細胞とコミュニケートするのを補助する免疫グロブリン共受容体糖タンパク質である（Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ＆  Ｒｅｅｃｅ，Ｂｉｏｌｏｇｙ  ９０９（Ｂｅｎｊａｍｉｎ  Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，Ｓｉｘｔｈ  Ｅｄ．，２００２）を参照されたい）。ＣＤ４は、免疫細胞、例えば、ヘルパーＴ細胞、単球、マクロファージ及び樹状細胞の表面に見出され、細胞表面で発現している４つの免疫グロブリンドメイン（Ｄ１〜Ｄ４）を含む。抗原提示の間、ＣＤ４は、ＴＣＲ複合体とともに動員されて、ＭＨＣＩＩ分子の異なる領域に結合する（ＣＤ４はＭＨＣＩＩβ２に結合するが、ＴＣＲ複合体はＭＨＣＩＩα１／β１に結合する）。理論に拘束されることを望むものではないが、ＴＣＲ複合体への近接によって、ＣＤ４結合キナーゼ分子がＣＤ３の細胞質ドメインに存在する免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）をリン酸化することが可能になると信じられている。この活性は、様々なタイプのヘルパーＴ細胞を生成するために、活性化されたＴＣＲが発生するシグナルを増幅すると考えられる。
【００２８】
ある特定の実施形態では、ＴＣＲはＴ細胞（またはＴリンパ球）の表面に見出され、ＣＤ３複合体と会合している。「ＣＤ３」は、Ｔ細胞における抗原シグナリングと関係がある、６つの鎖の多タンパク質複合体（Ａｂｂａｓ  ａｎｄ  Ｌｉｃｈｔｍａｎ，２００３、Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，ｐ．１７２  ａｎｄ  １７８，１９９９を参照されたい）である。哺乳動物では、この複合体は、１つのＣＤ３γ鎖、１つのＣＤ３δ鎖、２つのＣＤ３ε鎖及びＣＤ３ζ鎖のホモダイマー１つを含む。ＣＤ３γ、ＣＤ３β及びＣＤ３ε鎖は、単一の免疫グロブリンドメインを含む免疫グロブリンスーパーファミリーの非常に関連した細胞表面タンパク質である。ＣＤ３γ、ＣＤ３β及びＣＤ３ε鎖の膜貫通領域は負に荷電しており、これは、これらの鎖が正に荷電したＴ細胞受容体鎖と会合することを可能にするという特徴である。ＣＤ３γ、ＣＤ３β及びＣＤ３ε鎖の細胞内尾部は、それぞれ、免疫受容体チロシン活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして知られる単一の保存されたモチーフを含み、一方で、各ＣＤ３ζ鎖は３つを有する。理論に拘束されることを望むものではないが、ＩＴＡＭはＴＣＲ複合体のシグナリング能力に重要であると信じられている。本開示で使用するＣＤ３は、ヒト、マウス、ラットまたは他の哺乳動物を含めた様々な動物種に由来し得る。
【００２９】
本明細書で使用する場合、「ＴＣＲ複合体」は、ＣＤ３とＴＣＲの会合によって形成される複合体を指す。例えば、ＴＣＲ複合体は、１つのＣＤ３γ鎖、１つのＣＤ３β鎖、２つのＣＤ３ε鎖、ＣＤ３ζ鎖のホモダイマー１つ、１つのＴＣＲα鎖及び１つのＴＣＲβ鎖からなり得る。あるいは、ＴＣＲ複合体は、１つのＣＤ３γ鎖、１つのＣＤ３β鎖、２つのＣＤ３ε鎖、ＣＤ３ζ鎖のホモダイマー１つ、１つのＴＣＲγ鎖及び１つのＴＣＲβ鎖からなり得る。
【００３０】
本明細書で使用する場合、「ＴＣＲ複合体の成分」は、ＴＣＲ鎖（すなわち、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγもしくはＴＣＲδ）、ＣＤ３鎖（すなわち、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３εもしくはＣＤ３ζ）または２つ以上のＴＣＲ鎖もしくはＣＤ３鎖によって形成される複合体（例えば、ＴＣＲα及びＴＣＲβの複合体、ＴＣＲγ及びＴＣＲδの複合体、ＣＤ３ε及びＣＤ３δの複合体、ＣＤ３γ及びＣＤ３εの複合体もしくはＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ及び２つのＣＤ３ε鎖のサブ−ＴＣＲ複合体）を指す。
【００３１】
本明細書で使用する場合、用語「ＨＡ−１Ｈ抗原」もしくは「ＨＡ−１Ｈペプチド抗原」もしくは「ＨＡ−１Ｈ含有ペプチド抗原」（または「マイナーＨＡ−１Ｈ抗原」もしくは「マイナーＨＡ−１Ｈペプチド抗原」もしくは「マイナーＨＡ−１Ｈ含有ペプチド抗原」もしくは「マイナー組織適合性ＨＡ−１Ｈ抗原ペプチド」）は、ＭＨＣ（例えば、ＨＬＡ）分子と複合体を形成することができ、ＨＡ−１Ｈペプチド：ＭＨＣ（例えば、ＨＬＡ）複合体に特異的な本開示の結合タンパク質が複合体などに特異的に結合することができる、約７アミノ酸、約８アミノ酸、約９アミノ酸、約１０アミノ酸から、最大で約２０アミノ酸までの長さにわたり、Ｒ１３９Ｈ置換多型を含む、ＨＭＨＡ１タンパク質の天然にまたは合成的に生成されたペプチド部分を指す。例示的ＨＡ−１ＨＨＡ−１ペプチド抗原は、アミノ酸
【化４】
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（配列番号６６）を有するペプチドを含み、配列中の太字のヒスチジンはＲ１３９Ｈ多型を示す。
【００３２】
本明細書で使用する場合、用語「ＨＡ−１Ｈ特異的結合タンパク質」は、ＨＡ−１Ｈペプチド抗原に（または、例えば細胞表面上のＨＡ−１Ｈペプチド抗原：ＨＬＡ複合体に）特異的に結合し、ＨＡ−１Ｈ多型を含まないＨＭＨＡペプチド（例えば、配列番号６５に示すアミノ酸配列を含むペプチド）に結合せず、そのようなＨＭＨＡペプチドを含むＨＬＡ複合体に結合しない、タンパク質またはポリペプチド、例えば、ＴＣＲまたはＣＡＲを指す。
【００３３】
ある特定の実施形態では、ＨＡ−１Ｈ特異的結合タンパク質は、約１０−８Ｍ未満、約１０−９Ｍ未満、約１０−１０Ｍ未満、約１０−１１Ｍ未満、約１０−１２Ｍ未満もしくは約１０−１３Ｍ未満のＫｄで、または、例えば、同じアッセイで測定した場合に、本明細書で提供される例示的ＨＡ−１Ｈ特異的結合タンパク質、例えば、本明細書で提供されるＨＡ−１Ｈ特異的ＴＣＲのうちのいずれかによって示される親和性とほぼ同じ親和性で、その親和性と少なくともほぼ同じ親和性で、もしくはその親和性を超える親和性かほぼその親和性で、ＨＡ−１含有ペプチド（またはＨＡ−１Ｈペプチド：ＨＬＡ複合体）に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、ＨＡ−１特異的結合タンパク質は、ＨＡ−１特異的免疫グロブリンスーパーファミリー結合タンパク質またはその結合部分を含む。
【００３４】
抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞、マクロファージ、リンパ球または他の細胞型）による抗原プロセシングの原理及び免疫適合性（例えば、抗原提示に関連するＭＨＣ遺伝子の少なくとも１つのアレル形態を共有する）ＡＰＣとＴ細胞の間の主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）拘束提示を含めた、ＡＰＣによるＴ細胞への抗原提示の原理は、十分に確立されている（例えば、Ｍｕｒｐｈｙ，Ｊａｎｅｗａｙ’ｓ  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（８ｔｈ  Ｅｄ．）２０１１  Ｇａｒｌａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，ＮＹ；ｃｈａｐｔｅｒｓ  ６，９ａｎｄ１６を参照されたい）。例えば、サイトゾルに由来する、プロセッシングを受けた抗原ペプチド（例えば、腫瘍抗原、細胞内病原体）は、一般に、約７アミノ酸〜約１１アミノ酸の長さであり、クラスＩ  ＭＨＣ（ＨＬＡ）分子と会合するが、小胞系でプロセッシングを受けたペプチド（例えば、細菌性、ウイルス性）は約１０アミノ酸〜約２５アミノ酸まで長さがさまざまであり、クラスＩＩ  ＭＨＣ（ＨＬＡ）分子と会合する。
【００３５】
「変化したドメイン」または「変化したタンパク質」は、野生型のモチーフ、領域、ドメイン、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質（例えば、野生型のＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＴＣＲα定常ドメイン、ＴＣＲβ定常ドメイン）に対して、少なくとも８５％（例えば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％，９９．１％、９９．２％、９９．３％、９９．４％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％）の同一でない配列同一性を有するモチーフ、領域、ドメイン、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質を指す。
【００３６】
変化したドメインまたは変化したタンパク質または誘導体は、同じアミノ酸に対するすべての可能なコドン選択及び保存的アミノ酸置換に基づくコドン選択に基づくものを含むことができる。例えば、以下の６群のそれぞれは、互いに保存的置換である以下のアミノ酸を含む：１）アラニン（ａｌａ；Ａ）、セリン（ｓｅｒ；Ｓ）、スレオニン（ｔｈｒ；Ｔ）、２）アスパラギン酸（ａｓｐ；Ｄ）、グルタミン酸（ｇｌｕ；Ｅ）、３）アスパラギン（ａｓｎ；Ｎ）、グルタミン（ｇｌｎ；Ｑ）；４）アルギニン（ａｒｇ；Ｒ）、リジン（ｌｙｓ；Ｋ）、５）イソロイシン（ｉｌｅ；Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（ｍｅｔ；Ｍ）、バリン（ｖａｌ；Ｖ）及び６）フェニルアラニン（ｐｈｅ；Ｆ）、チロシン（ｔｙｒ；Ｙ）、トリプトファン（ｔｒｐ；Ｗ）。（ＷＯ９７／０９４３３  、１０ページ、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｏｒｔｈ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．７１−７７，１９７５、Ｌｅｗｉｎ  Ｇｅｎｅｓ  ＩＶ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，ｐ．８，１９９０、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ  １９８４も参照されたい）。さらに、コードされる配列中の単一アミノ酸またはわずかな割合のアミノ酸を変化させる、付加するまたは欠失させる個々の置換、欠失または付加も「保存的置換」である。
【００３７】
本明細書で使用する場合、「核酸」または「核酸分子」は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって、またはインビトロ翻訳によって生成されるこれらの断片のうちのいずれかを指し、ライゲーション、切断、エンドヌクレアーゼ作用またはエキソヌクレアーゼ作用のうちのいずれかによって生成される断片も指す。ある特定の実施形態では、本開示の核酸はＰＣＲによって生成される。核酸は、天然に存在するヌクレオチド（例えば、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチド）、天然に存在するヌクレオチドの類似体（例えば、天然に存在するヌクレオチドのα−鏡像異性型）または両方の組み合わせであるモノマーからなり得る。修飾ヌクレオチドは、糖部分またはピリミジンもしくはプリン塩基部分における修飾またはこれらの置換を有し得る。核酸モノマーは、ホスホジエステル結合またはそのような結合の類似型によって連結され得る。ホスホジエステル結合の類似型としては、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホルアニリデート、ホスホルアミデートなどが挙げられる。核酸分子は、一本鎖または二本鎖のいずれかであり得る。
【００３８】
用語「単離される」は、その本来の環境（例えば、それが天然に存在する場合は天然環境）から物質が取り出されることを意味する。例えば、生きている動物中に存在する天然に存在する核酸またはポリペプチドは単離されていないが、天然のシステムで共存する物質のいくつかまたはすべてから分離された同じ核酸またはポリペプチドは単離されている。そのような核酸はベクターの一部でもよく、及び／またはそのような核酸もしくはポリペプチドは組成物（例えば、細胞可溶化物）の一部でもよく、それにもかかわらず、そのようなベクターまたは組成物が核酸またはポリペプチドの天然環境の一部ではないという点において、分離されている。用語「遺伝子」は、ポリペプチド鎖の生成に関与するＤＮＡのセグメントを意味し、これは、コード領域に先行する及び続く領域（「リーダー及びトレーラー」）ならびに個々のコーディングセグメント（エクソン）間の介在配列（イントロン）を含む。
【００３９】
本明細書で使用する場合、用語「組換え」及び「操作された」は、外来性核酸分子の導入によって改変された細胞、微生物、核酸分子、ポリペプチド、タンパク質、プラスミド、もしくはベクターを指し、またはヒトの介入によって遺伝子操作された、すなわち、異種核酸分子の導入によって改変された細胞もしくは微生物を指し、または内在性の核酸分子もしくは遺伝子の発現が制御される、調節解除される、もしくは構成的であるように変えられ、そのような変化または改変が遺伝子操作によって導入され得る細胞もしくは微生物を指す。ヒトが作り出した遺伝子の変化は、例えば、１種または複数のタンパク質もしくは酵素をコードする核酸分子（これは、例えばプロモーターなどの発現制御エレメントを含んでもよい）を導入する改変、または他の核酸分子の付加、欠失、置換、または細胞の遺伝物質の他の機能的破壊もしくは細胞の遺伝物質への機能的付加を含むことができる。例示的改変としては、参照または親分子由来の非相同または相同なポリペプチドのコード領域またはその機能的断片の中のものが挙げられる。
【００４０】
本明細書で使用する場合、「変異」は、それぞれ参照または野生型の核酸分子またはポリペプチド分子と比較した場合の、核酸分子またはポリペプチド分子の配列の変化を指す。変異は、ヌクレオチド（複数可）またはアミノ酸（複数可）の置換、挿入または欠失を含めた、いくつかの異なるタイプの配列変化をもたらし得る。ある特定の実施形態では、変異は、１つもしくは３つのコドンもしくはアミノ酸の置換、１つ〜約５つのコドンもしくはアミノ酸の欠失、またはこれらの組み合わせである。
【００４１】
「保存的置換」は、あるアミノ酸の、同様の性質を有する別のアミノ酸に対する置換として当技術分野で認識される。例示的な保存的置換は当技術分野で周知である（例えば、ＷＯ９７／０９４３３、１０ページ、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｗｏｒｔｈ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．７１−７７，１９７５、Ｌｅｗｉｎ，Ｇｅｎｅｓ  ＩＶ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，ｐ．８，１９９０を参照されたい）。
【００４２】
用語「コンストラクト」は、組換え核酸分子を含む任意のポリヌクレオチドを指す。「導入遺伝子」または「導入遺伝子コンストラクト」は、天然に見られない配置で作動可能に連結した２つ以上の遺伝子を含むコンストラクトを指す。用語「作動可能に連結した（ｏｐｅｒａｂｌｙ−ｌｉｎｋｅｄ）」（または、本明細書において、「作動可能に連結した（ｏｐｅｒａｂｌｙ  ｌｉｎｋｅｄ）」は一方の機能が他方の影響を受けるような、単一核酸断片における２つ以上の核酸分子の結合を指す。例えば、プロモーターは、それがコード配列の発現に影響を及ぼすことができる（すなわち、コード配列がプロモーターの転写制御下にある）場合、コード配列と作動可能に連結している。
【００４３】
「連結されていない」は、関連する遺伝要素が互いに密接に関連しておらず、一方の機能が他方に影響を及ぼさないことを意味する。いくつかの実施形態では、導入遺伝子中に存在する遺伝子は、発現制御配列（例えば、プロモーター）に作動可能に連結している。
【００４４】
コンストラクト（例えば導入遺伝子）は、ベクター（例えば、細菌ベクター、ウイルスベクター）中に存在していてもよく、またはゲノム中に組み込まれていてもよい。「ベクター」は、別の核酸分子を輸送することができる核酸分子である。ベクターは、染色体の、非染色体の、半合成のまたは合成の核酸分子を含むことができる、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス、ＲＮＡベクター、または直鎖状もしくは環状のＤＮＡもしくはＲＮＡ分子でもよい。例示的ベクターは、自律複製ができるもの（エピソームベクター）またはそれに結合している核酸分子の発現ができるもの（発現ベクター）である。本開示の組成物及び方法に有用なベクターは、さらに本明細書に記載されている。
【００４５】
本明細書で使用する場合、用語「発現」は、遺伝子などの核酸分子のコード配列に基づいてポリペプチドが生成されるプロセスを指す。このプロセスは、転写、転写後制御、転写後修飾、翻訳、翻訳後制御、翻訳後修飾、またはこれらの任意の組み合わせを含むことができる。
【００４６】
細胞への核酸分子の挿入の文脈では、用語「導入される」は、「トランスフェクション」または「形質転換」または「形質導入」を意味し、真核細胞または原核細胞への核酸分子の組み込みへの言及を含み、ここで、核酸分子は、細胞のゲノム（例えば、染色体、プラスミド、プラスチドまたはミトコンドリアのＤＮＡ）に組み込まれても、自律性レプリコンに変換されても、一過的に発現されてもよい（例えば、トランスフェクトされたｍＲＮＡ）。
【００４７】
本明細書で使用する場合、「異種性」または「外来性」の核酸分子、コンストラクトまたは配列は、宿主細胞にとってネイティブではないが、宿主細胞由来の核酸分子または核酸分子の一部に相同であり得る、核酸分子または核酸分子の一部を指す。異種性または外来性の核酸分子、コンストラクトまたは配列の供給源は、異なる属または種由来であり得る。ある特定の実施形態では、例えば、コンジュゲーション、形質転換、トランスフェクション、形質導入、エレクトロポレーションなどによって、宿主細胞または宿主ゲノムに異種性または外来性の核酸分子が加えられ（すなわち、内在性またはネイティブでない）、ここで、加えられた分子は、宿主ゲノムに組み込まれてもよいし、または染色体外遺伝物質として（例えば、プラスミドもしくは他の形態の自己複製ベクターとして）存在してもよく、且つ多コピーで存在してもよい。さらに、「異種性」は、たとえ宿主細胞が相同なタンパク質または活性をコードするとしても、宿主細胞に導入される、外来性核酸分子にコードされる非ネイティブの酵素、タンパク質または他の活性を指す。
【００４８】
本明細書に記載のように、１つより多い異種性または外来性の核酸分子を、別々の核酸分子として、個々に制御される複数の遺伝子として、ポリシストロニック性核酸分子として、融合タンパク質をコードする単一核酸分子として、またはこれらの任意の組み合わせで、宿主細胞に導入することができる。例えば、本明細書で開示されるように、マイナー組織適合性（Ｈ）抗原ＨＡ−１Ｈペプチドに特異的な所望のＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及びＴＣＲβ）をコードする２つ以上の異種性または外来性の核酸分子を発現するように宿主細胞を改変することができる。２つ以上の外来性核酸分子を宿主細胞に導入する場合は、２つ以上の外来性核酸分子は、（例えば、単一ベクター上にある）単一核酸分子として導入されてもよく、別々のベクター上にあってもよく、単一部位もしくは複数部位で宿主染色体に組み込まれてもよく、またはこれらの任意の組み合わせでもよいことが理解される。言及される異種核酸分子またはタンパク質活性の数は、コード核酸分子の数またはタンパク質活性の数を指し、宿主細胞に導入される別々の核酸分子の数ではない。
【００４９】
本明細書で使用する場合、用語「内在性の」または「ネイティブの」は、通常は宿主細胞中に存在する遺伝子、タンパク質または活性を指す。さらに、親の遺伝子、タンパク質または活性と比較して、変異している、過剰発現している、シャッフルされた、重複している、または変化している、遺伝子、タンパク質または活性は、依然として、その特定の宿主細胞にとって内在性またはネイティブであると考えられる。例えば、第１の遺伝子由来の内在性制御配列（例えば、プロモーター、翻訳減衰配列）は、第２のネイティブの遺伝子または核酸分子の発現を変化させるまたは調節するのに使用することができ、第２のネイティブの遺伝子または核酸分子の発現または調節は、親細胞における通常の発現または制御と異なる。
【００５０】
用語「相同な」または「相同体」は、宿主の細胞、種または系統に見られる、またはこれらに由来する分子または活性を指す。例えば、異種性または外来性の核酸分子は、ネイティブの宿主細胞遺伝子に相同であり得、場合により、変化した発現レベル、異なる配列、変化した活性またはこれらの任意の組み合わせを有し得る。
【００５１】
本明細書で使用する場合、「配列同一性」は、配列を整列させ、必要であれば、最大のパーセント配列同一性を得るようにギャップを導入した後の、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮しない、別の参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、ある配列中のアミノ酸残基のパーセンテージを指す。パーセンテージ配列同一性の値は、デフォルト値に設定されたパラメーターを用いて、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７），Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２によって規定されるようにＮＣＢＩ  ＢＬＡＳＴ２．０ソフトウェアを使用して得ることができる。
【００５２】
ＨＡ−１Ｈ特異的結合タンパク質、アクセサリータンパク質及び操作された宿主細胞
ある特定の態様では、本開示は、ＨＡ−１Ｈ抗原に特異的に結合する結合タンパク質をコードする異種性ポリヌクレオチドを含む操作された免疫細胞を提供する。ある特定の実施形態では、コードされる結合タンパク質は、ＨＡ−１Ｈ抗原特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはＨＡ−１Ｈ抗原特異的キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。さらなる実施形態では、結合タンパク質は、さらなるアクセサリータンパク質、例えば、安全スイッチタンパク質、タグ、選択マーカー、ＣＤ８共受容体β鎖、α鎖もしくは両方、またはこれらの任意の組み合わせをコードする導入遺伝子コンストラクトの一部として発現する。
【００５３】
本明細書に記載の実施形態のうちのいずれかでは、本開示のコードされるポリペプチド（例えば、ｉＣａｓｐ９、ＴＣＲβ鎖、ＴＣＲα鎖、ＣＤ８β鎖、ＣＤ８α鎖）は、「シグナルペプチド」（リーダー配列、リーダーペプチド、または移行ペプチドとしても知られる）を含むことができる。シグナルペプチドは、新たに合成されたポリペプチドを細胞の内部または外部の適切な位置にターゲティングする。シグナルペプチドは、局在化もしくは分泌の間に、または一旦局在化もしくは分泌が完了すると、ポリペプチドから除去され得る。シグナルペプチドを有するポリペプチドを「プレタンパク質」と本明細書で言及し、そのシグナルペプチドが除去されたポリペプチドを「成熟」タンパク質またはポリペプチドと本明細書で言及する。代表的なシグナルペプチドは、配列番号１〜３、５〜９及び７０〜７５ののうちのいずれかの１つ位置１〜位置２１からのアミノ酸、または配列番号４、１０及び１２のうちのいずれか１つの位置１〜位置１９からのアミノ酸を含む。
【００５４】
ＴＣＲ及びＣＡＲなどの本開示の結合タンパク質は、標的（この場合、ＨＡ−１Ｈ）に特異的な結合ドメインを含む。本明細書で使用する場合、「結合ドメイン」（「結合領域」または「結合部分」とも称される）は、標的（例えば、ＨＡ−１ＨペプチドまたはＨＡ−１Ｈペプチド：ＭＨＣ複合体）と特異的に及び非共有結合的に会合、合体または結合する能力を有する分子またはその一部（例えば、ペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド、タンパク質）を指す。結合ドメインとしては、生物学的分子、分子複合体（すなわち、２つ以上の生物学的分子を含む複合体）または目的の他の標的に対する、任意の天然に存在する、合成の、半合成の、または組換え生成された結合パートナーが挙げられる。例示的結合ドメインとしては、生物学的分子、分子複合体または目的の他の標的に結合するその特異性能力によって選択される、単鎖免疫グロブリン可変領域（例えば、単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）、単鎖ＦＶ（ｓｃＦＶ））、受容体外部ドメイン、リガンド（例えば、サイトカイン、ケモカイン）、または合成ポリペプチドが挙げられる。
【００５５】
ある特定の実施形態では、ＨＡ−１Ｈ特異的結合ドメイン単独で（すなわち、ＨＡ−１特異的結合タンパク質のいかなる他の部分もなしで）可溶性であり得、約１０−８Ｍ未満、約１０−９Ｍ未満、約１０−１０Ｍ未満、約１０−１１Ｍ未満、約１０−１２Ｍ未満または約１０−１３Ｍ未満のＫｄでＨＡ−１Ｈに結合することができる。特定の実施形態では、ＨＡ−１Ｈ特異的結合ドメインは、ＨＡ−１Ｈ特異的ｓｃＴＣＲ（例えば、単鎖αβＴＣＲタンパク質、例えば、Ｖα−Ｌ−Ｖβ、Ｖβ−Ｌ−Ｖα、Ｖα−Ｃα−Ｌ−ＶαまたはＶα−Ｌ−Ｖβ−Ｃβ（ここで、Ｖα及びＶβはそれぞれＴＣＲα及びβ可変ドメインであり、Ｃα及びＣβはそれぞれＴＣＲα及びβ定常ドメインであり、Ｌはリンカである））を含む。
【００５６】
用語「可変領域」または「可変ドメイン」は、免疫グロブリンスーパーファミリー結合タンパク質（例えば、ＴＣＲ）の抗原への結合に関与する免疫グロブリンスーパーファミリー結合タンパク質のドメイン（例えば、ＴＣＲα鎖もしくはＴＣＲβ鎖（またはγδＴＣＲについてはγ鎖及びδ鎖））を指す。ネイティブＴＣＲのα鎖及びβ鎖の可変ドメイン（それぞれ、Ｖα及びＶβ）は、一般に、各ドメインが４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つのＣＤＲを含む、類似した構造を有する。Ｖαドメインは、２つの別々のＤＮＡセグメント、すなわち、可変遺伝子セグメント及び結合遺伝子セグメント（Ｖ−Ｊ）にコードされ、Ｖβドメインは３つの別々のＤＮＡセグメント、すなわち、可変遺伝子セグメント、多様性遺伝子セグメント及び結合遺伝子セグメント（Ｖ−Ｄ−Ｊ）にコードされる。単一のＶαまたはＶβドメインは、抗原結合特異性を与えるのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合するＴＣＲは、抗原に結合するＴＣＲ由来のＶαまたはＶβドメインを使用して、それぞれ相補的ＶαまたはＶβドメインのライブラリーをスクリーニングして、単離することができる。
【００５７】
用語「相補性決定領域」及び「ＣＤＲ」は「超可変領域」または「ＨＶＲ」と同義であり、抗原特異性及び／または結合親和性を与える、ＴＣＲ可変領域内の非連続的アミノ酸配列を指すことが当技術分野で既知である。一般に、各α鎖可変領域中に３つのＣＤＲ（αＣＤＲ１、αＣＤＲ２、αＣＤＲ３）が存在し、各β鎖可変領域中に３つのＣＤＲ（βＣＤＲ１、βＣＤＲ２、βＣＤＲ３）が存在する。ＣＤＲ３は、プロセッシングを受けた抗原の認識に関与する主要なＣＤＲと考えられる。ＣＤＲ１及びＣＤＲ２主にＭＨＣと相互作用する。
【００５８】
ある特定の実施形態では、コードされる結合タンパク質は、（ａ）ＴＲＡＶ１７遺伝子、ＴＲＡＶ２１遺伝子またはＴＲＡＶ１０遺伝子にコードされるアミノ酸配列を有するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン、ならびに配列番号１３〜１７及び８６のうちのいずれか１つに示すＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメイン、（ｂ）配列番号８７〜９２のうちのいずれか１つに示すＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＴＣＲ  Ｖαドメイン、及びＴＲＢＶ７−９遺伝子にコードされるアミノ酸配列を有するＴＣＲ  Ｖβドメイン、または（ｃ）配列番号８７〜９２のうちのいずれか１つのＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＴＣＲ  Ｖαドメイン、ならびに配列番号１３〜１７及び８６のうちのいずれか１つのＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＴＣＲ  Ｖβドメインを含み、ここで、コードされる結合タンパク質はＨＡ−１Ｈマイナー抗原を含むペプチドに特異的に結合することができ、ＨＡ−１Ｈマイナー抗原を含まないペプチドに結合しない。
【００５９】
さらなる実施形態では、コードされる結合タンパク質はＴＣＲ  Ｖαドメイン及びＴＣＲ  Ｖβドメインを含み、ここで、（ａ）コードされるＶβＣＤＲ３は配列番号１３のアミノ酸配列を含み、コードされるＶαＣＤＲ３は、配列番号８７のアミノ酸配列を含み、（ｂ）コードされるＶβＣＤＲ３は配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含み、コードされるＶαＣＤＲ３は、配列番号８８のアミノ酸配列を含み、（ｃ）コードされるＶβＣＤＲ３は、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含み、コードされるＶαＣＤＲ３は、配列番号８９のアミノ酸配列を含み、（ｄ）コードされるＶβＣＤＲ３は、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含み、コードされるＶαＣＤＲ３は、配列番号９０のアミノ酸配列を含み、（ｅ）コードされるＶβＣＤＲ３は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含み、コードされるＶαＣＤＲ３は、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、または（ｆ）コードされるＶβＣＤＲ３は、配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含み、コードされるＶαＣＤＲ３は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む。
【００６０】
さらなる実施形態では、コードされる結合タンパク質はＶαドメインを含み、コードされるＶαドメインは、配列番号２、４、６、８、１０及び１２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。追加的な実施形態では、コードされる結合タンパク質は、Ｖβドメインを含み、コードされるＶβドメインは、配列番号１、３、５、７、９及び１１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００６１】
いくつかの実施形態では、コードされるＶαドメインはＣＤＲ１のアミノ酸配列に変化を含まない、コードされるＶβドメインはＣＤＲ１のアミノ酸配列に変化を含まない、またはコードされるＶαドメインのＣＤＲ１及びコードされるＶβドメインのＣＤＲ１はアミノ酸配列に変化を含まない。さらなる実施形態では、コードされるＶαドメインはＣＤＲ２のアミノ酸配列に変化を含まない、コードされるＶβドメインはＣＤＲ２のアミノ酸配列に変化を含まない、またはコードされるＶαドメインのＣＤＲ２及びコードされるＶβドメインのＣＤＲ２はアミノ酸配列に変化を含まない。
【００６２】
特定の実施形態では、コードされる結合タンパク質はＴＣＲ  Ｖαドメイン及びＴＣＲ  Ｖβドメインを含み、ここで、（ａ）コードされるＶβドメインは配列番号１のアミノ酸配列を含むか、それからなり、コードされるＶαドメイン配列番号２のアミノ酸配列を含むか、それからなり、（ｂ）コードされるＶβドメインは配列番号３のアミノ酸配列を含むか、それからなり、コードされるＶαドメインは配列番号４のアミノ酸配列を含むか、それからなり、（ｃ）コードされるＶβドメインは配列番号５のアミノ酸配列を含むか、それからなり、コードされるＶαドメインは配列番号６のアミノ酸配列を含むか、それからなり、（ｄ）コードされるＶβドメインは配列番号７のアミノ酸配列を含むか、それからなり、コードされるＶαドメインは配列番号８のアミノ酸配列を含むか、それからなり、（ｅ）コードされるＶβドメインは配列番号９のアミノ酸配列を含むか、それからなり、コードされるＶαドメインは配列番号１０のアミノ酸配列を含むか、それからなり、または（ｆ）コードされるＶβドメインは配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、それからなり、コードされるＶαドメインは配列番号１２のアミノ酸配列を含むか、それからなる。
【００６３】
細胞によって発現される本開示の例示的結合タンパク質はシグナルペプチドを含むことができ（例えば、結合プレタンパク質）、細胞は、シグナルペプチドを除去して、成熟結合タンパク質を生成することができる。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、２つの成分、例えば、α鎖及びβ鎖を含み、これらは、細胞表面で会合して機能的結合タンパク質を形成することができる。２つの会合した成分は成熟タンパク質を含むことができる。ある特定の実施形態では、本開示の結合タンパク質は成熟Ｖβドメインを含み、成熟Ｖβドメインは、配列番号９６、９８、１００、１０２、１０４または１０６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなる。さらなる実施形態では、本開示の結合タンパク質は成熟Ｖαドメインを含み、成熟Ｖαドメインは配列番号９７、９９、１０１、１０３、１０５または１０７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなる。さらに別の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、成熟Ｖβドメイン及び成熟Ｖαドメインを含み、成熟Ｖβドメインは、配列番号９６、９８、１００、１０２、１０４または１０６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなり、成熟Ｖαドメインは配列番号９７、９９、１０１、１０３、１０５または１０７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなる。ある特定の実施形態では、本開示の結合タンパク質は成熟ＴＣＲβ鎖を含み、成熟ＴＣＲβ鎖は、配列番号１０８、１１０、１１２、１１４、１１６または１１８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなる。さらなる実施形態では、本開示の結合タンパク質は成熟ＴＣＲα鎖を含み、成熟ＴＣＲα鎖は、配列番号１０９、１１１、１１３、１１５、１１７または１１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなる。さらに別の実施態様では、本開示の結合タンパク質は成熟ＴＣＲβ鎖及び成熟ＴＣＲα鎖を含み、成熟ＴＣＲβ鎖は、配列番号１０８、１１０、１１２、１１４、１１６または１１８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなり、成熟ＴＣＲα鎖は、配列番号１０９、１１１、１１３、１１５、１１７または１１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなる。ある特定の実施形態では、本開示の結合タンパク質はＣＤ８β鎖とともに発現し、ＣＤ８β鎖は成熟ＣＤ８β鎖を含み、成熟ＣＤ８β鎖は、配列番号１２１〜１２５のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むか、それからなる。さらなる実施形態では、本開示の結合タンパク質はＣＤ８α鎖とともに発現し、ＣＤ８α鎖は成熟ＣＤ８α鎖を含み、成熟ＣＤ８α鎖は配列番号１２０のアミノ酸配列を含むか、それからなる。より多くの実施形態では、本開示の結合タンパク質はＣＤ８β鎖及びＣＤ８α鎖とともに発現し、ＣＤ８β鎖及びＣＤ８α鎖は成熟ＣＤ８β鎖及びＣＤ８α鎖を含み、成熟ＣＤ８β鎖は、配列番号１２１〜１２５のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むか、それからなり、成熟ＣＤ８α鎖は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むか、それからなる。
【００６４】
さらなる実施形態では、コードされる結合タンパク質は、成熟ＴＣＲ  Ｖαドメイン及び成熟ＴＣＲ  Ｖβドメインを含み、ここで、（ａ）Ｖβドメインは配列番号９６のアミノ酸配列を含むか、それからなり、Ｖαドメインは配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、それからなり、（ｂ）Ｖβドメインは配列番号９８のアミノ酸配列を含むか、それからなり、Ｖαドメインは配列番号９９のアミノ酸配列を含むか、それからなり、（ｃ）Ｖβドメインは配列番号１００のアミノ酸配列を含むか、それからなり、Ｖαドメインは配列番号１０１のアミノ酸配列を含むか、それからなり、（ｄ）Ｖβドメインは配列番号１０２のアミノ酸配列を含むか、それからなり、Ｖαドメインは配列番号１０３のアミノ酸配列を含むか、それからなり、（ｅ）Ｖβドメインは配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか、それからなり、Ｖαドメインは配列番号１０５のアミノ酸配列を含むか、それからなり、または（ｆ）Ｖβドメインは配列番号１０６のアミノ酸配列を含むか、それからなり、Ｖαドメインは配列番号１０７のアミノ酸配列を含むか、それからなる。
【００６５】
本開示の操作された免疫細胞に含まれるコードされる結合タンパク質は、いくつかの実施形態では、ＴＣＲ定常ドメインを含むことができる。ある特定の実施形態では、ＴＣＲ定常ドメインは所望のＴＣＲ鎖の対形成を増強するように改変される。例えば、改変によって異種性ＴＣＲα鎖と異種性ＴＣＲβ鎖の間の増強された対形成は、異種性ＴＣＲ鎖と内在性ＴＣＲ鎖の望まれない誤対合に関して２つの異種性鎖を含むＴＣＲの優先的なアセンブリーをもたらす（例えば、そのＴＣＲ改変が参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｏｖｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．１６（２）：７７（２０１０）を参照されたい）。異種性ＴＣＲ鎖の対形成を増強する例示的改変としては、異種性ＴＣＲα鎖及びβ鎖のそれぞれへの相補的システイン残基の導入が挙げられる。いくつかの実施形態では、異種性ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチドはアミノ酸位置４８（完全長成熟ヒトＴＣＲα鎖配列に対応する）にシステインをコードし、異種性ＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチドはアミノ酸位置５７（完全長成熟ヒトＴＣＲβ鎖配列に対応する）にシステインをコードする。
【００６６】
ある特定の実施形態では、コードされる結合タンパク質は、配列番号１９、２２、２４及び２６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％の配列同一性を有するＴＣＲα鎖定常（Ｃα）ドメインを含む。さらなる実施形態では、コードされる結合タンパク質は、配列番号１９、２２、２４及び２６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％の配列同一性を有するＴＣＲ  Ｃαをドメイン含み、但し、ＴＣＲ  Ｃαドメインが位置４８に導入されたシステイン残基を保持するという条件である。さらに別の実施形態では、コードされる結合タンパク質は、配列番号１９、２２、２４及び２６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲ  Ｃαドメインを含む。
【００６７】
ある特定の実施形態では、コードされる結合タンパク質は、配列番号１８、２３及び２５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％の配列同一性を有するＴＣＲβ鎖定常（Ｃβ）ドメインを含む。さらなる実施形態では、コードされる結合タンパク質は、配列番号１８、２３及び２５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％の配列同一性を有するＴＣＲ  Ｃβドメインを含み、但し、ＴＣＲ  Ｃβドメインが位置５７に導入されたシステイン残基を保持するという条件である。さらに別の実施形態では、コードされる結合タンパク質は、配列番号１８、２３及び２５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲ  Ｃβドメインを含む。
【００６８】
ある特定の実施形態では、コードされる結合タンパク質は、配列番号２８、３０、３２、３４、３６及び３８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有するＴＣＲα鎖（例えば、ＴＣＲ  Ｃαドメインと作動的に結合したＴＣＲ  Ｖαドメイン）を含み、場合により、ＴＣＲ  Ｃαドメインは、位置４７（Ｃαドメインの先頭から数える）にシステインを保持する。さらなる実施形態では、コードされる結合タンパク質は、配列番号２８、３０、３２、３４、３６及び３８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲα鎖を含む。他の実施形態では、コードされる結合タンパク質は、配列番号２７、２９、３１、３３、３５及び３７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を有するＴＣＲβ鎖（例えば、ＴＣＲ  Ｃβドメインと作動的に結合したＴＣＲ  Ｖβドメイン）を含み、場合により、ＴＣＲ  Ｃβドメインは、位置５７（Ｃβドメインの先頭から数える）にシステインを保持する。さらに別の実施形態では、コードされる結合タンパク質は、配列番号２７、２９、３１、３３、３５及び３７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖を含む。
【００６９】
本開示の操作された免疫細胞にコードされる結合タンパク質は、開示されるＴＣＲβ鎖と会合した、本明細書中に開示されたＴＣＲα鎖のうちのいずれかを含むことができる。例えば、ある特定の実施形態では、コードされる結合タンパク質は、（ａ）配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲα鎖、（ｂ）配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号３０に示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲα鎖、（ｃ）配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲα鎖、（ｄ）配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲα鎖、（ｅ）配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲ−α鎖、または（ｆ）配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるＴＣＲβ鎖、及び配列番号３８に示されるアミノ酸配を含むか、それからなるＴＣＲ−α鎖を含む。
【００７０】
本開示の操作された免疫細胞は、本明細書に記載の結合タンパク質をコードする単一ポリヌクレオチドを含むことができ、または結合タンパク質は１つより多いポリヌクレオチドにコードされてもよい。換言すれば、結合タンパク質の成分または部分は２つ以上のポリヌクレオチドにコードされてもよく、これらのポリヌクレオチドは、単一核酸分子に含まれてもよく、または２つ以上の核酸分子に含まれてもよい。
【００７１】
ある特定の実施形態では、本開示の結合タンパク質の２つ以上の成分または部分をコードする１つのポリヌクレオチドは、単一オープンリーディングフレーム中で作動的に結合した２つ以上のコード配列を含む。そのような配置は、好都合なことに、例えば、ＴＣＲのアルファ鎖及びベータ鎖の同時発現（その結果、これらは約１：１の比率で生成される）などの、所望の遺伝子産物の協調的発現を可能にし得る。ある特定の実施形態では、本開示の結合タンパク質の２つ以上の置換可能な遺伝子産物、例えば、ＴＣＲ（例えば、アルファ鎖及びベータ鎖）またはＣＡＲは別々の分子で発現し、翻訳後に会合する。さらなる実施形態では、本開示の結合タンパク質の２つ以上の置換可能な遺伝子産物は、切断可能なまたは除去可能なセグメントによって分離された部分を有する単一ペプチドとして発現する。例えば、単一のポリヌクレオチドまたはベクターにコードされる分離可能なポリペプチドの発現に有用な自己切断ペプチドが当技術分野で既知であり、これには、例えば、ブタテッショウウイルス−１  ２Ａ（Ｐ２Ａ）ペプチド、例えば、配列番号７６〜８１のうちのいずれか１つに示されるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドにコードされるペプチド、トセアアシグナウイルス（Ｔｈｏｓｅａａｓｉｇｎａ  ｖｉｒｕｓ）２Ａ（Ｔ２Ａ）ペプチド、例えば、配列番号８２に示されるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドにコードされるペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）２Ａ（Ｅ２Ａ）ペプチド、例えば、配列番号８３に示されるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドにコードされるペプチド、及び口蹄疫ウイルス２Ａ（Ｆ２Ａ）ペプチド、例えば、配列番号８４に示されるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドにコードされるペプチドが含まれる。
【００７２】
ある特定の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、１つまたは複数のジャンクションアミノ酸を含む。「ジャンクションアミノ酸」または「ジャンクションアミノ酸残基」は、ポリペプチドの２つの隣接するモチーフ、領域またはドメインの間の、例えば、結合ドメインと隣接する定常ドメインの間の、またはＴＣＲ鎖と隣接する自己切断ペプチドの間の１つまたは複数の（例えば、２〜約１０）のアミノ酸残基を指す。ジャンクションアミノ酸は、融合タンパク質をコードするコンストラクトの設計から（例えば、融合タンパク質をコードする核酸分子の構築の間に制限酵素部位の使用によって生じるアミノ酸残基）、または例えば、本開示のコードされる結合タンパク質の１つまたは複数のドメインに隣接する自己切断ペプチドの切断から（例えば、ＴＣＲα鎖とＴＣＲβ鎖の間に配置されるＰ２Ａペプチド。その自己切断は、α鎖、ＴＣＲβ鎖または両方に１つまたは複数のジャンクションアミノ酸を残し得る）生じ得る。
【００７３】
本開示の操作された免疫細胞に含まれる結合タンパク質は、ある特定の実施形態では、ＨＡ−１Ｈペプチド：ＨＬＡ複合体に特異的に結合することができる。例えば、具体的な実施形態では、本開示の結合タンパク質はＨＡ−１Ｈペプチド：ＨＬＡ複合体に特異的に結合することができ、ここで、ＨＬＡはＨＬＡ−Ａ＊０２０１を含むことができる。特定の実施形態では、ＨＡ−１Ｈペプチドはアミノ酸配列ＶＬＨＤＤＬＬＥＡ（配列番号６６）を含む。
【００７４】
前述の実施形態のうちのいずれかでは、操作された免疫細胞に含まれるコードされる結合タンパク質は、ＴＣＲ、ＴＣＲの抗原結合性断片（例えば、単鎖ＴＣＲ（「ｓｃＴＣＲ」））またはキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）を含むことができる。
【００７５】
ある特定の実施形態では、ＴＣＲの抗原結合性断片は単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）を含み、これは、ＴＣＲ  ＶαとＴＣＲ  Ｖβドメインの両方を含むが、単一のＴＣＲ定常ドメイン（ＣαまたはＣβ）しか含まない。さらなる実施形態では、ＴＣＲの抗原結合断片またはキメラ抗原受容体は、キメラである（例えば、１つより多いドナーもしくは種由来のアミノ酸残基もしくはモチーフを含む）、ヒト化されている（例えば、ヒトにおいて免疫原性の危険性を低減するように変えられた、もしくは置換された非ヒト生物由来の残基を含む）、またはヒトである。
【００７６】
「キメラ抗原受容体」（ＣＡＲ）は、天然に存在しないまたは宿主細胞中に天然に存在しない様式で互いに連結している２つ以上の天然に存在するアミノ酸配列を含むように操作された融合タンパク質であって、細胞表面上に存在する場合に受容体として機能することができる融合タンパク質を指す。本開示のＣＡＲは、膜貫通ドメイン及び１つまたは複数の細胞内シグナリングドメイン（場合により、共刺激性ドメイン（複数可）を含む）に連結した抗原結合ドメインを含む細胞外部分（すなわち、免疫グロブリンまたは免疫グロブリン様分子から得られるまたは生じ、例えば、がん抗原に特異的な抗体もしくはＴＣＲから生じるｓｃＦＶ、またはＮＫ細胞由来の免疫受容体から生じるもしくは得られる抗原結合ドメイン）を含む（例えば、Ｓａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．，３（４）：３８８（２０１３）を参照されたい。Ｈａｒｒｉｓ  ａｎｄ  Ｋｒａｎｚ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．，３７（３）：２２０（２０１６）、及びＳｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，６３（１１）：１１６３（２０１４）も参照されたい）。
【００７７】
操作されたＴＣＲを生成する方法は、例えば、Ｂｏｗｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４６（１５）：３０００（２００９）に記載されており、その技法は参照により本明細書に組み込まれる。ＣＡＲの作製方法は当技術分野で周知であり、例えば、米国特許第６，４１０，３１９号、米国特許第７，４４６，１９１号、米国特許公開第２０１０／０６５８１８号、米国特許第８，８２２，６４７号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／０３１６８７号、米国特許第７，５１４，５３７号、及びＢｒｅｎｔｊｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１３：５４２６に記載されており、それらの技法は参照により本明細書に組み込まれる。
【００７８】
本開示の操作された免疫細胞は、例えばがんに対する療法として、投与することができる。状況によっては、細胞免疫療法と関係がある活性を低減または停止することが望ましい場合もある。したがって、ある特定の実施形態では、本開示の操作された免疫細胞は、結合タンパク質及びアクセサリータンパク質、例えば、安全スイッチタンパク質（これは、望ましい場合に、そのような細胞の活性を選択的にモジュレートする（例えば、減らすまたは除去する）ために、同族薬物または他の化合物を使用して標的にされ得る）をコードする異種性ポリヌクレオチドを含む。この関連で使用される安全スイッチタンパク質としては、例えば、医薬品グレードの抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、セツキシマブ（アービタックス）ｔＥＧＦ受容体のための、細胞外Ｎ末端リガンド結合ドメイン及び細胞内受容体型チロシンキナーゼ活性がないが、ネイティブアミノ酸配列、Ｉ型膜貫通細胞表面局在及び立体構造的にインタクトな結合エピトープを保持するトランケートされたＥＧＦ受容体ポリペプチド（ｈｕＥＧＦＲｔ）、（ｔＥＧＦｒ；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１８：１２５５−１２６３，２０１１）、カスパーゼポリペプチド（例えば、ｉＣａｓｐ９；Ｓｔｒａａｔｈｏｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０５：４２４７−４２５４，２００５、Ｄｉ  Ｓｔａｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６５：１６７３−１６８３，２０１１、Ｚｈｏｕ  ａｎｄ  Ｂｒｅｎｎｅｒ，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．ｐｉｉ：Ｓ０３０１−４７２Ｘ（１６）３０５１３−６．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｅｘｐｈｅｍ．２０１６．０７．０１１）、ＲＱＲ８（Ｐｈｉｌｉｐ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ  １２４：１２７７−１２８７，２０１４）、本明細書で論じる、ヒトｃ−ｍｙｃタンパク質の１０アミノ酸タグ（Ｍｙｃ）（Ｋｉｅｂａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０５：６２３−６２８，２００８）、ならびにマーカー／安全スイッチポリペプチド、例えば、ＲＱＲ（ＣＤ２０＋ＣＤ３４；Ｐｈｉｌｉｐ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）が挙げられる。
【００７９】
治療的細胞に有用な他のアクセサリー成分は、細胞が特定される、選別される、単離される、富化されるまたは追跡されるのを可能にするタグまたは選択マーカーを含む。例えば、所望の特性を有する印がつけられた免疫細胞（例えば、抗原特異的ＴＣＲ及び安全スイッチタンパク質）を、所望の純度の治療用製品へ含めるために、試料中の印がつけられていない細胞から選別することができ、より効率的に活性化させることができ、増殖させることができる。
【００８０】
本明細書で使用する場合、用語「選択マーカー」は、選択マーカーを含むポリヌクレオチドで形質導入された免疫細胞の検出及びポジティブ選択を可能にする特定可能な変化を細胞に与える核酸コンストラクトを含む。ＲＱＲは、ＣＤ２０の主要細胞外ループ及び２つの最小ＣＤ３４結合部位を含む選択マーカーである。いくつかの実施形態では、ＲＱＲをコードするポリヌクレオチドは、１６アミノ酸のＣＤ３４最小エピトープをコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態、例えば、本明細書の実施例で提供されるある特定の実施形態では、ＣＤ３４最小エピトープはＣＤ８ストークドメインのアミノ末端位置に組み込まれる（Ｑ８）。さらなる実施形態では、ＣＤ３４最小結合部位配列をＣＤ２０に対する標的エピトープと結合させて、Ｔ細胞に対するコンパクトなマーカー／自殺遺伝子（ＲＱＲ８）を形成することができる（Ｐｈｉｌｉｐ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４、参照により本明細書に組み込まれる）。このコンストラクトは、例えば、導入遺伝子を発現する操作されたＴ細胞の選択的除去を可能にする臨床的に認められた医薬的抗体リツキシマブを利用する、磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）に結合したＣＤ３４特異的抗体を用いて、そのコンストラクトを発現する免疫細胞の選択を可能にする（Ｐｈｉｌｉｐ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【００８１】
さらなる例示的選択マーカーとしては、通常はＴ細胞で発現していない、いくつかのトランケートされたＩ型膜貫通タンパク質：トランケートされた低親和性神経成長因子、トランケートされたＣＤ１９及びトランケートされたＣＤ３４も挙げられる（例えば、それぞれその全体が本明細書に組み込まれる、Ｄｉ  Ｓｔａｓｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６５：１６７３−１６８３，２０１１、Ｍａｖｉｌｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ８３：１９８８−１９９７，１９９４、Ｆｅｈｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１：４４８−４５６，２０００を参照されたい）。ＣＤ１９及びＣＤ３４の特に魅力的な特色は、臨床グレードの選別のためにこれらのマーカーを標的にすることができる、既製のＭｉｌｔｅｎｙｉ  ＣｌｉｎｉＭＡＣｓ（商標）選択システムが利用できることである。しかし、ＣＤ１９及びＣＤ３４は、組み込むベクターのベクターパッケージング能力及び転写効率に重い負担をかける可能性がある、比較的大きな表面タンパク質である。細胞外の非シグナリングドメインまたは様々なタンパク質（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ３４、ＬＮＧＦＲ）を含む表面マーカーも用いることができる。任意の選択マーカーを用いることができ、これは、医薬品及び医薬部外品の製造管理及び品質管理の基準（Ｇｏｏｄ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ）にふさわしいものであるべきである。ある特定の実施形態では、選択マーカーは、目的の遺伝子産物（例えば、ＴＣＲまたはＣＡＲなどの本開示の結合タンパク質）をコードするポリヌクレオチドとともに発現される。選択マーカーのさらなる例としては、例えば、レポーター、例えば、ＧＦＰ、ＥＧＦＰ、β−ｇａｌまたはクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）が挙げられる。ある特定の実施形態では、例えばＣＤ３４などの選択マーカーは細胞によって発現され、ＣＤ３４は、本明細書に記載の方法で使用するための形質導入された目的の細胞を選択する、富化する、または単離する（例えば、免疫磁気選択による）するのに使用することができる。本明細書で使用する場合、ＣＤ３４マーカーは、抗ＣＤ３４抗体、または例えば、ｓｃＦＶ、ＴＣＲもしくはＣＤ３４に結合する他の抗原認識成分と区別される。
【００８２】
ある特定の実施形態では、選択マーカーは、ＲＱＲポリペプチド、トランケートされた低親和性神経成長因子（ｔＮＧＦＲ）、トランケートされたＣＤ１９（ｔＣＤ１９）、トランケートされたＣＤ３４（ｔＣＤ３４）またはこれらの任意の組み合わせを含む。
【００８３】
背景として、免疫療法細胞生成物へのＣＤ４＋Ｔ細胞の包含は、抗原誘導性ＩＬ−２分泌をもたらすことができ、移行させた細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞の持続性及び機能を増強することができる（例えば、Ｋｅｎｎｅｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２２２：１２９（２００８）、Ｎａｋａｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４６２（７２７２）：５１０（２００９）を参照されたい）。ある状況では、ＣＤ４＋Ｔ細胞中のクラスＩ拘束性ＴＣＲは、クラスＩ  ＨＬＡペプチド複合体に対するＴＣＲの感度を増強するために、ＣＤ８共受容体の移行を必要とし得る。ＣＤ４共受容体はＣＤ８と構造が異なり、効果的にＣＤ８共受容体の代わりになり得ない（例えば、Ｓｔｏｎｅ  ＆  Ｋｒａｎｚ，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：２４４（２０１３）を参照されたい。Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３７（２）：１３９（２０１２）も参照されたい）。したがって、本開示の組成物及び方法で使用するための別のアクセサリータンパク質は、ＣＤ８共受容体またはその成分を含む。
【００８４】
ある特定の実施形態では、本開示の結合タンパク質をコードする異種性ポリヌクレオチドを含む操作された免疫細胞は、さらに、ＣＤ８共受容体タンパク質またはそのベータ鎖もしくはアルファ鎖成分をコードする異種性ポリヌクレオチドを含むことができる。いくつかの実施形態では、コードされるＣＤ８共受容体は、配列番号７１〜７５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むβ鎖を含む。さらなる実施形態では、コードされるＣＤ８共受容体は、配列番号６９のアミノ酸配列を有するＲＱＲポリペプチドをさらに含む組換えＣＤ８共受容体である。理論に拘束されることを望むものではないが、ＲＱＲポリペプチドが選択マーカー／安全スイッチとして機能するためには、宿主細胞表面からの距離が重要であると信じられている（Ｐｈｉｌｉｐ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０（上記））。いくつかの実施形態では、コードされるＲＱＲポリペプチドは、コードされるＣＤ８共受容体のβ鎖、α鎖または両方に含まれる。具体的な実施形態では、操作された免疫細胞は、ｉＣａｓｐ９をコードする異種性ポリヌクレオチド、及びＲＱＲポリペプチドを含むβ鎖を含み、ＣＤ８α鎖をさらに含む組換えＣＤ８共受容体タンパク質をコードする異種性ポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、コードされるＣＤ８α鎖は配列番号７０に示されるアミノ酸配列を含む。
【００８５】
さらなる実施形態では、操作された免疫細胞は、ｉＣａｓｐ９をコードする異種性ポリヌクレオチド、及びＲＱＲポリペプチドを含むα鎖を含み、さらにＣＤ８β鎖を含む組換えＣＤ８共受容体タンパク質をコードする異種性ポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、コードされるＣＤ８α鎖とコードされるＣＤ８β鎖の両方はＲＱＲポリペプチドを含む。
【００８６】
操作された免疫細胞は、結合タンパク質、安全スイッチタンパク質、選択マーカー及びＣＤ８共受容体タンパク質をコードする単一ポリヌクレオチドを含むように効率的に形質導入され得、この単一ポリヌクレオチドを効率的に発現することができる。例えば、いくつかの実施形態では、本開示の操作された免疫細胞は、５’から３’に、（［ｉＣａｓｐ９ポリペプチド］−［ブタテッショウウイルス２Ａ（Ｐ２Ａ）ペプチド］−［ＴＣＲβ鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＴＣＲα鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＲＱＲポリペプチドを含むＣＤ８β鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＣＤ８α鎖］）をコードする異種性ポリヌクレオチドを含む。具体的な実施形態では、ＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号４１のヌクレオチド配列を含むか、それからなり、ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチドは配列番号４２のヌクレオチド配列を含むか、それからなる。
【００８７】
特定の実施形態では、操作された免疫細胞は、配列番号８５のヌクレオチド配列を含むか、それからなる異種性ポリヌクレオチドを含む。
【００８８】
例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫ−Ｔ細胞を含めて、任意の適切な免疫細胞を、本開示の結合タンパク質をコードする異種性ポリヌクレオチドを含むように操作することができる。いくつかの実施形態では、操作された免疫細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、または両方を含む。所望の核酸でＴ細胞をトランスフェクトする／形質導入する方法は、所望の標的特異性のＴ細胞を使用する養子移植手順（例えば、Ｓｃｈｍｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎ．２０：１２４０，２００９、Ｄｏｓｓｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７：７４２，２００９、Ｔｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１２：２２６１，２００８、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１８：７１２，２００７、Ｋｕｂａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ１  １０９：２３３１，２００７、ＵＳ２０１１／０２４３９７２、ＵＳ２０１１／０１８９１４１、Ｌｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：２４３，２００７）を有するとして記載されており（例えば、米国特許出願公開第ＵＳ２００４／００８７０２５号）、したがって、本明細書における教示に基づいて、本明細書中に開示される実施形態へこれらの方法体系を適合させることが意図される。
【００８９】
任意の適切な方法を使用して、細胞、例えばＴ細胞をトランスフェクトするもしくは形質導入する、または本方法のポリヌクレオチドもしくは組成物を投与することができる。ポリヌクレオチドを宿主細胞に送達するための既知の方法としては、例えば、陽イオンポリマー、脂質様分子及びある特定の市販品、例えば、ＩＮ−ＶＩＶＯ−ＪＥＴ  ＰＥＩなどの使用が挙げられる。他の方法としては、エキソビボの形質導入、注射、エレクトロポレーション、ＤＥＡＥ−デキストラン、超音波処理の負荷、リポソーム媒介性トランスフェクション、受容体媒介性形質導入、微粒子銃、トランスポゾン媒介性移行などが挙げられる。宿主細胞をトランスフェクトするまたは形質導入するさらに別の方法は、本明細書でさらに詳細に記載されるベクターを使用する。
【００９０】
前述の実施形態のうちのいずれかでは、操作された免疫細胞は、免疫シグナリングまたは他の関連した活性に関与するポリペプチドをコードする１種または複数の内在性遺伝子の発現を低減させるまたは排除するように改変された「万能ドナー」細胞でもよい。例示的遺伝子ノックアウトとしては、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＨＬＡ分子、ＴＣＲ分子などをコードするものが挙げられる。理論に拘束されることを望むものではないが、ある特定の内因的に発現した免疫細胞タンパク質は、操作された免疫細胞を受け取った同種異系宿主によって外来性として認識され得、これは、操作された免疫細胞を排除させる可能性があり（例えば、ＨＬＡアレル）、または操作された免疫細胞の免疫活性をダウンレギュレートする可能性があり（例えば、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ４）、または異種発現した本開示の結合タンパク質の結合活性を妨げる可能性がある（例えば、非ＨＡ−１Ｈ抗原に結合し、それによって、ＨＡ−１Ｈ抗原を発現する細胞に結合する操作された免疫細胞を妨げる、内在性ＴＣＲ）。したがって、そのような内在性遺伝子またはタンパク質の発現または活性を低下させるまたは排除することは、同種異系宿主内における操作された免疫細胞の活性、寛容性及び持続性を向上させることができ、（例えば、ＨＬＡ型を問わず任意の受容者に）投与するための万能の「既製の」細胞が可能になる。
【００９１】
ある特定の実施形態では、本開示の操作された免疫細胞は、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＨＬＡ成分（例えば、α１マクログロブリン、α２マクログロブリン、α３マクログロブリン、β１ミクログロブリン、もしくはβ２ミクログロブリンをコードする遺伝子）、またはＴＣＲ成分（例えば、ＴＣＲ可変領域またはＴＣＲ定常領域をコードする遺伝子）をコードする遺伝子の１つまたは複数の染色体遺伝子ノックアウトを含む（Ｔｏｒｉｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．６：２１７５７（２０１６）、Ｔｏｒｉｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１９（２４）：５６９７（２０１２）、及びＴｏｒｉｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２２（８）：１３４１（２０１３）を参照されたい。これらの遺伝子編集技法及び組成物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。本明細書で使用する場合、用語「染色体遺伝子ノックアウト」は、操作された免疫細胞による機能的に活性な内在性ポリペプチド産物の産生を防止する、操作された免疫細胞における遺伝子の変化を指す。染色体遺伝子ノックアウトをもたらす変化としては、例えば、導入されたナンセンス変異（未成熟終止コドンの形成を含める）、ミスセンス変異、遺伝子欠失及び鎖破壊、ならびに操作された免疫細胞において内在性遺伝子発現を阻害する阻害性核酸分子の異種性発現を挙げることができる。
【００９２】
染色体遺伝子ノックアウトは、免疫細胞の染色体編集によって導入することができる。ある特定の実施形態では、染色体遺伝子ノックアウトは免疫細胞の染色体編集によって行われる。染色体編集は、例えば、エンドヌクレアーゼを使用して実施することができる。本明細書で使用する場合、「エンドヌクレアーゼ」は、ポリヌクレオチド鎖内のホスホジエステル結合の切断を触媒することができる酵素を指す。ある特定の実施形態では、エンドヌクレアーゼは、標的遺伝子を切断し、それによって、標的遺伝子を不活性化する、または「ノックアウトする」ことができる。エンドヌクレアーゼは、天然に存在していてもよく、組換えでもよく、遺伝子改変されていてもよく、または融合エンドヌクレアーゼでもよい。エンドヌクレアーゼによって引き起こされる核酸の鎖破壊は、一般に、相同組換えまたは非相同末端結合（ＮＨＥＪ）の異なる機構を介して修復される。相同組換えの間、ドナー核酸分子は、標的遺伝子を不活性化するための遺伝子「ノックイン」に使用され得る。ＮＨＥＪは、切断部位でＤＮＡ配列に変化、例えば、少なくとも１つのヌクレオチドの置換、欠失または付加をもたらすことが多い、エラーを起こしやすい修復プロセスである。ＮＨＥＪは、標的遺伝子を「ノックアウトする」のに使用することができる。エンドヌクレアーゼを使用して免疫細胞中の遺伝子または遺伝子発現を破壊するまたはノックアウトする方法は当技術分野で既知であり、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０６６２６２号、第ＷＯ２０１３／０７４９１６号、及び第ＷＯ２０１４／０５９１７３号に記載されており、これらのそれぞれからの方法は、参照により組み込まれる。エンドヌクレアーゼの例としては、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥ−ヌクレアーゼ、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓヌクレアーゼ及びメガヌクレアーゼが挙げられる。
【００９３】
本明細書で使用する場合、「ジンクフィンガーヌクレアーゼ」（ＺＦＮ）は、非特異的ＤＮＡ切断ドメイン、例えば、ＦｏｋＩエンドヌクレアーゼに融合したジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメインを含む融合タンパク質を指す。約３０アミノ酸の各ジンクフィンガーモチーフはＤＮＡの約３塩基対に結合し、ある特定の残基のアミノ酸をトリプレット配列の特異性を変化させるように変えることができる（例えば、Ｄｅｓｊａｒｌａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：２２５６−２２６０，１９９３、Ｗｏｌｆｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８５：１９１７−１９３４，１９９９を参照されたい）。所望のＤＮＡ配列、例えば、約９〜約１８塩基対の範囲の長さを有する領域に対する結合特異性をもたらすために、複数のジンクフィンガーモチーフを直列に連結することができる。背景として、ＺＦＮは、ゲノム中の部位特異的なＤＮＡ二本鎖破壊（ＤＳＢ）の形成を触媒することによってゲノム編集を媒介し、ＤＳＢ部位におけるゲノムに相同な隣接配列を含む導入遺伝子の標的化組み込みは、相同組み換え修復によって促進される。あるいは、ＺＦＮによって生成されたＤＳＢは、切断部位でヌクレオチドの挿入または欠失をもたらすエラーを起こしやすい細胞性修復経路である非相同末端結合による（ＮＨＥＪ）修復を介して、標的遺伝子のノックアウトをもたらし得る。ある特定の実施形態では、遺伝子ノックアウトは、ＺＦＮ分子を使用して作製された、挿入、欠失、変異またはこれらの組み合わせを含む。
【００９４】
本明細書で使用する場合、「転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ」（ＴＡＬＥＮ）は、ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメイン及びＤＮＡ切断ドメイン、例えばＦｏｋＩエンドヌクレアーゼを含む融合タンパク質を指す。「ＴＡＬＥ  ＤＮＡ結合ドメイン」または「ＴＡＬＥ」は、それぞれ、一般に、１２番目及び１３番目のアミノ酸が異なる高度に保存された３３〜３５アミノ酸配列を有する、１つまたは複数のＴＡＬＥ反復ドメイン／単位からなる。ＴＡＬＥ反復ドメインは、標的ＤＮＡ配列へのＴＡＬＥの結合に関与する。反復可変二残基（ＲＶＤ）と称される異なるアミノ酸残基は、特異的なヌクレオチド認識と関連がある。これらのＴＡＬＥのＤＮＡ認識のための天然の（標準的な）コードは、位置１２及び１３のＨＤ配列はシトシン（ｃ）への結合をもたし、ＮＧはＴに結合し、ＮＩはＡに結合し、ＮＮはＧまたはＡに結合し、及びＮＧはＴに結合するように決定されており、非標準の（非定型の）ＲＶＤも知られている（例えば、その非定型のＲＶＤが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許公開第ＵＳ２０１１／０３０１０７３号を参照されたい）。ＴＡＬＥＮは、Ｔ細胞のゲノム中で部位特異的な二本鎖破壊（ＤＳＢ）を導くのに使用することができる。非相同末端結合（ＮＨＥＪ）は、アニーリングのための配列重複がほとんどないまたはまったくない、二本鎖破壊の両側からのＤＮＡを連結し、それによって、ノックアウト遺伝子が発現するエラーを導入する。あるいは、相同組み換え修復は、導入遺伝子中に相同な隣接配列が存在することを条件として、ＤＳＢ部位に導入遺伝子を導入することができる。ある特定の実施形態では、遺伝子ノックアウトは、挿入、欠失、変異またはこれらの組み合わせを含み、ＴＡＬＥＮ分子を使用して作製される。
【００９５】
本明細書で使用する場合、「クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート／Ｃａｓ」（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ）ヌクレアーゼシステムは、塩基対形成の相補性を介してゲノム内の標的部位（プロトスペーサーとして知られている）を認識し、次いで、短い、保存されたプロトスペーサー関連モチーフ（ＰＡＭ）が相補的標的配列の３’に直接続く場合にＤＮＡを切断するためにＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）ガイドＣａｓヌクレアーゼを用いるシステムを指す。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、Ｃａｓヌクレアーゼの配列及び構造に基づいて、３つの型（すなわち、Ｉ型、ＩＩ型及びＩＩＩ型）に分類される。Ｉ型及びＩＩＩ型のｃｒＲＮＡガイドサーベイランス複合体は、複数のＣａｓサブユニットを必要とする。最も研究されているＩＩ型システムは、少なくとも３つの成分：ＲＮＡガイドＣａｓ９ヌクレアーゼ、ｃｒＲＮＡ及びトランスアクティングｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）を含む。ｔｒａｃｒＲＮＡは二本鎖形成領域を含む。ｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡは、Ｃａｓ９ヌクレアーゼと相互作用することができ、ｃｒＲＮＡのスペーサーとＰＡＭから上流の標的ＤＮＡのプロトスペーサーの間のワトソン−クリック塩基対形成を介して、標的ＤＮＡの特定の部位にＣａｓ９／ｃｒＲＮＡ：ｔｒａｃｒＲＮＡ複合体をガイドすることができる二本鎖を形成する。Ｃａｓ９ヌクレアーゼは、ｃｒＲＮＡスペーサーによって規定された領域内の二本鎖破壊を切断する。ＮＨＥＪによる修復は、標的遺伝子座の発現を破壊する挿入及び／または欠失をもたらす。あるいは、相同組み換え修復を介して、相同な隣接配列を有する導入遺伝子をＤＳＢ部位に導入することができる。ｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡは、単一のガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡまたはｇＲＮＡ）に操作することができる（例えば、Ｊｉｎｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３７：８１６−２１，２０１２を参照されたい）。さらに、標的部位に相補的なガイドＲＮＡの領域を所望の配列を標的にするように変えるまたはプログラムすることができる（Ｘｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ  ９：ｅ１００４４８，２０１４、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／００６８７９７号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０１８６８４３号、米国特許第８，６９７，３５９号及びＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０７１４７４号。これらのそれぞれの技法及び組成物は参照により組み込まれる）。ある特定の実施形態では、遺伝子ノックアウトは、挿入、欠失、変異またはこれらの組み合わせを含み、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼシステムを使用して作製される。
【００９６】
本明細書で使用する場合、「ホーミングエンドヌクレアーゼ」とも称される「メガヌクレアーゼ」は、大きな認識部位（約１２〜約４０塩基対の二本鎖ＤＮＡ配列）を特徴とするエンドデオキシリボヌクレアーゼを指す。メガヌクレアーゼは、配列及び構造モチーフに基づいて、以下の５つのファミリーに分けることができる：ＬＡＧＬＩＤＡＤＧ、ＧＩＹ−ＹＩＧ、ＨＮＨ、Ｈｉｓ−Ｃｙｓボックス及びＰＤ−（Ｄ／Ｅ）ＸＫ。例示的メガヌクレアーゼとしては、Ｉ−ＳｃｅＩ、Ｉ−ＣｅｕＩ、ＰＩ−ＰｓｐＩ、ＰI−Ｓｃｅ、Ｉ−ＳｃｅＩＶ、Ｉ−ＣｓｍＩ、Ｉ−ＰａｎＩ、Ｉ−ＳｃｅＩＩ、Ｉ−ＰｐｏＩ、Ｉ−ＳｃｅＩＩＩ、Ｉ−ＣｒｅＩ、Ｉ−ＴｅｖＩ、Ｉ−ＴｅｖＩＩ及びＩ−ＴｅｖＩＩＩが挙げられ、これらの認識配列は既知である（例えば、米国特許第５，４２０，０３２号及び第６，８３３，２５２号、Ｂｅｌｆｏｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３７９−３３８８，１９９７、Ｄｕｊｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ８２：１１５−１１８，１９８９、Ｐｅｒｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２２：１１２５−１１２７，１９９４、Ｊａｓｉｎ，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．１２：２２４−２２８，１９９６、Ｇｉｍｂｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：１６３−１８０，１９９６、Ａｒｇａｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８０：３４５−３５３，１９９８を参照されたい）。
【００９７】
ある特定の実施形態では、ＰＤ−１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ４、ＨＬＡをコードする遺伝子、またはＴＣＲ成分をコードする遺伝子から選択される標的の部位特異的なゲノム改変を促進するために、天然に存在するメガヌクレアーゼを使用することができる。他の実施形態では、標的遺伝子に対して新規な結合特異性を有する操作されたメガヌクレアーゼが、部位特異的なゲノム改変に使用される（例えば、Ｐｏｒｔｅｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：９６７−７３，２００５、Ｓｕｓｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ＭＯＬ．ＢＩＯＬ．３４２：３１−４１，２００４、Ｅｐｉｎａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３１：２９５２−６２，２００３、Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ  １０：８９５−９０５，２００２、Ａｓｈｗｏｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４４１：６５６−６５９，２００６、Ｐａｑｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．７：４９−６６，２００７、米国特許公開第ＵＳ２００７／０１１７１２８号、第ＵＳ２００６／０２０６９４９号、第ＵＳ２００６／０１５３８２６号、第ＵＳ２００６／００７８５５２号及び第ＵＳ２００４／０００２０９２号を参照されたい）。
【００９８】
ある特定の実施形態では、染色体遺伝子ノックアウトは、腫瘍関連抗原に特異的に結合する抗原特異的受容体をコードする異種性ポリヌクレオチドを含む操作された免疫細胞に導入されている阻害性核酸分子を含み、阻害性核酸分子は標的特異的阻害剤をコードし、コードされる標的特異的阻害剤は、操作された免疫細胞において、内在性遺伝子発現（すなわち、ＰＤ−１、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ４、ＨＬＡ成分、ＴＣＲ成分またはこれらの任意の組み合わせのもの）を阻害する。
【００９９】
染色体遺伝子ノックアウトは、ノックアウト手順または薬剤の使用の後に、操作された免疫細胞のＤＮＡをシーケンスすることによって、直接的に確認することができる。染色体遺伝子ノックアウトは、ノックアウトの後に遺伝子発現を欠くこと（例えば、遺伝子にコードされるｍＲＮＡまたはポリペプチド産物を欠くこと）によって、推測することができる。
【０１００】
別の態様では、本開示の操作された免疫細胞及び医薬的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含む組成物が本明細書で提供される。有効量の操作された免疫細胞または操作された免疫細胞を含む組成物を含む単位用量も本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、単位用量は、約１：１の比率で、（ｉ）少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の操作されたＣＤ４＋Ｔ細胞を含む組成物を、（ｉｉ）少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の操作されたＣＤ８＋Ｔ細胞を含む組成物と組み合わせて含み、ここで、単位用量は、低減量のナイーブＴ細胞を含むか、実質的に含まない（すなわち、匹敵する数のＰＢＭＣを有する患者試料と比較して、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満、約５％未満、約１％未満の、単位用量中に存在するナイーブＴ細胞の集団を有する）。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、単位用量は、約１：１の比率で、（ｉ）少なくとも約５０％の操作されたＣＤ４＋Ｔ細胞を含む組成物を、（ｉｉ）少なくとも約５０％の操作されたＣＤ８＋Ｔ細胞を含む組成物と組み合わせて含み、ここで、単位用量は、低減量のナイーブＴ細胞を含むか、実質的に含まない。さらなる実施形態では、単位用量は、約１：１の比率で、（ｉ）少なくとも約６０％の操作されたＣＤ４＋Ｔ細胞を含む組成物を、（ｉｉ）少なくとも約６０％の操作されたＣＤ８＋Ｔ細胞を含む組成物と組み合わせて含み、ここで、単位用量は、低減量のナイーブＴ細胞を含むか、実質的に含まない。さらに別の実施形態では、単位用量は、約１：１の比率で、（ｉ）少なくとも約７０％の操作されたＣＤ４＋Ｔ細胞を含む組成物を、（ｉｉ）少なくとも約７０％の操作されたＣＤ８＋Ｔ細胞を含む組成物と組み合わせて含み、ここで、単位用量は、低減量のナイーブＴ細胞を含むか、実質的に含まない。いくつかの実施形態では、単位用量は、約１：１の比率で、（ｉ）少なくとも約８０％の操作されたＣＤ４＋Ｔ細胞を含む組成物を、（ｉｉ）少なくとも約８０％の操作されたＣＤ８＋Ｔ細胞を含む組成物と組み合わせて含み、ここで、単位用量は、低減量のナイーブＴ細胞を含むか、実質的に含まない。いくつかの実施形態では、単位用量は、約１：１の比率で、（ｉ）少なくとも約８５％の操作されたＣＤ４＋Ｔ細胞を含む組成物を、（ｉｉ）少なくとも約８５％の操作されたＣＤ８＋Ｔ細胞を含む組成物と組み合わせて含み、ここで、単位用量は、低減量のナイーブＴ細胞を含むか、実質的に含まない。いくつかの実施形態では、単位用量は、約１：１の比率で、（ｉ）少なくとも約９０％の操作されたＣＤ４＋Ｔ細胞を含む組成物を、（ｉｉ）少なくとも約９０％の操作されたＣＤ８＋Ｔ細胞を含む組成物と組み合わせて含み、ここで、単位用量は、低減量のナイーブＴ細胞を含むか、実質的に含まない。
【０１０２】
本明細書に記載の実施形態のうちのいずれかでは、単位用量は、等しいまたはほぼ等しい数の操作されたＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ３＋ＣＤ８＋及び操作されたＣＤ４５ＲＡ−ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＴＭ細胞を含む。
【０１０３】
ポリヌクレオチド、導入遺伝子及びベクター
さらなる態様では、本開示は、単離ポリヌクレオチドの少なくとも一部が宿主細胞（例えば、本明細書で開示されるような操作された免疫細胞）における発現のためにコドン最適化されるという条件で、本明細書に記載の結合タンパク質（例えば、ＨＡ−１Ｈ特異的ＴＣＲ、ｓｃＴＣＲまたは本明細書に記載のＴＣＲ  Ｖα及びＶβドメインを含む（及び場合により、本明細書に記載の定常ドメインもしくは他の成分をさらに含む）ＣＡＲ）をコードし、さらに、安全スイッチタンパク質、選択マーカー、ＣＤ８共受容体β鎖またはＣＤ８共受容体α鎖またはこれらの任意の組み合わせをコードしていてもよい単離ポリヌクレオチドを提供する。
【０１０４】
特に、（例えば、本開示の結合タンパク質のうちのいずれかをコードする）、操作された免疫細胞に含まれる前述の異種性ポリヌクレオチドのうちのいずれも、さらに、または代わりに単離形態で提供され得、ここで、ポリヌクレオチドは宿主細胞における発現のためにコドン最適化される。例えば、ある特定の実施形態では、単離ポリヌクレオチドはＨＡ−１Ｈ特異的結合タンパク質のＴＣＲβ鎖をコードし、配列番号３９、４１、４３、４５、４７、４９または５１のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含むか、それからなる。さらなる実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、ＨＡ−１Ｈ特異的結合タンパク質のＴＣＲα鎖をコードし、配列番号４０、４２、４６、４８、５０または５２のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含むか、それからなる。
【０１０５】
ある特定の実施形態では、ＴＣＲα鎖をコードする異種性ポリヌクレオチド及びＴＣＲβ鎖をコードする異種性ポリヌクレオチドは、操作された免疫細胞に含まれる単一オープンリーディングフレーム中に含まれ、単一オープンリーディングフレームは、α鎖をコードするポリヌクレオチド及びβ鎖をコードするポリヌクレオチドの間に配置される自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号７６〜８４のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含むか、それからなる。
【０１０６】
さらなる実施形態では、単一オープンリーディングフレームは、配列番号５９〜６３のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列に対して少なくとも約８０％同一のヌクレオチド配列を含む。具体的な実施形態では、単一オープンリーディングフレームは、配列番号５９〜６３のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含むか、それからなる。さらに別の実施形態では、コードされる（［ＴＣＲβ鎖］−［自己切断ペプチド］−［ＴＣＲα−鎖］）は、配列番号５３〜５７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、それからなり、これは、細胞がシグナルペプチドを除去する前、及び自己切断ペプチドによってβ鎖とα鎖が分離される前に存在する。
【０１０７】
本開示の単離ポリヌクレオチドは、本明細書で開示されるように、安全スイッチタンパク質、選択マーカー、ＣＤ８共受容体β鎖（例えば、配列番号７１〜７５）、またはＣＤ８共受容体アルファ鎖（例えば、配列番号７０）をコードするポリヌクレオチドをさらに含むことができ、または任意のそれらの組み合わせをコードするポリヌクレオチドを含むことができる。具体的な実施形態では、単離物は、ｉＣａｓｐ９をコードする異種性ポリヌクレオチド及びＲＱＲポリペプチドを含むβ鎖またはα鎖を含む組換えＣＤ８共受容体タンパク質をコードする異種性ポリヌクレオチドを含む。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、５’から３’に、（［安全スイッチタンパク質をコードするポリヌクレオチド］−［自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチド］−［ＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチド］−［自己切断ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド］−［ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチド］−［自己切断ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド］−［ＲＱＲポリペプチドを含むＣＤ８β鎖をコードするポリヌクレオチド］−［自己切断ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド］−［ＣＤ８α鎖をコードするポリヌクレオチド］）を含む単一オープンリーディングフレームを含む。
【０１０９】
さらなる実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、５’から３’に、（［ｉＣａｓｐ９ポリペプチド］−［ブタテッショウウイルス２Ａ（Ｐ２Ａ）ペプチド］−［ＴＣＲβ鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＴＣＲα鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＲＱＲポリペプチドを含むＣＤ８β鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＣＤ８α鎖］）をコードする単一オープンリーディングフレームを含む。ある特定の実施形態では、ＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号４１のヌクレオチド配列を含むか、それからなり、ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチドは配列番号４２のヌクレオチド配列を含むか、それからなる。
【０１１０】
具体的な実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、配列番号８５のヌクレオチド配列を含むか、それからなる。
【０１１１】
本明細書に記載の実施形態のうちのいずれかでは、単離ポリヌクレオチドは免疫細胞、例えばＴ細胞における発現のためにコドン最適化される。
【０１１２】
別の態様では、導入遺伝子コンストラクトが本明細書で提供され、ここで、導入遺伝子コンストラクトは、（ａ）安全スイッチタンパク質をコードするポリヌクレオチド、（ｂ）ＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチド、（ｃ）ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチド、（ｂ）選択マーカーをコードするポリヌクレオチド、（ｃ）ＣＤ８共受容体β鎖をコードするポリヌクレオチド、及び（ｄ）ＣＤ８共受容体α鎖をコードするポリヌクレオチドを含む単一オープンリーディングフレームに作動的に連結している発現制御配列（例えば、プロモーター配列）を含む。
【０１１３】
目的のポリペプチドを遺伝子操作する及び生成するための導入遺伝子コンストラクトの構築は、当技術分野で既知の任意の適切な分子生物学操作技法を使用して達成することができる。効率的な転写及び翻訳を得るために、ある特定の実施形態では、本開示の各導入遺伝子コンストラクト中のポリヌクレオチドは、目的のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に作動可能に（すなわち、作動的に）連結した少なくとも１つの適切な発現制御配列（調節配列とも呼ばれる）、例えば、リーダー配列、特にプロモーターを含む。ある特定の実施形態では、導入遺伝子コンストラクトは、安全スイッチタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含み、コードされる安全スイッチタンパク質は、（ｉ）トランケートされたＥＧＦ受容体（ｔＥＧＦｒ）、（ｉｉ）ｉＣａｓｐ９、（ｉｉｉ）ＲＱＲポリペプチド、（ｉｖ）ｍｙｃエピトープ、または（ｖ）これらの任意の組み合わせを含む。
【０１１４】
さらなる実施形態では、コードされる選択マーカーは、（ｉ）ＲＱＲポリペプチド、（ｉｉ）トランケートされた低親和性神経成長因子（ｔＮＧＦＲ）、（ｉｉｉ）トランケートされたＣＤ１９（ｔＣＤ１９）、（ｉｖ）トランケートされたＣＤ３４（ｔＣＤ３４）、または（ｖ）これらの任意の組み合わせを含む。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、コードされるＣＤ８共受容体は、配列番号６９に示されるアミノ酸配列を有するＲＱＲポリペプチドを含む組換えＣＤ８共受容体である。特定の実施形態では、導入遺伝子コンストラクトは、コードされるＣＤ８β鎖中に含まれるＲＱＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。さらなる実施形態では、導入遺伝子コンストラクトは、コードされるＣＤ８α鎖中に含まれるＲＱＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
【０１１６】
例えば、ある特定の実施形態では、本開示の導入遺伝子コンストラクトは、（ａ）安全スイッチタンパク質をコードするポリヌクレオチド、（ｂ）ＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチド、（ｃ）ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチド、（ｄ）ＲＱＲポリペプチドを含むＣＤ８β鎖をコードするポリヌクレオチド、及び（ｅ）ＣＤ８α鎖をコードするポリヌクレオチドを含むオープンリーディングフレームを含む。５’から３’に、（［安全スイッチタンパク質をコードするポリヌクレオチド］−［自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチド］−［ＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチド］−［自己切断ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド］−［ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチド］−［自己切断ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド］−［ＲＱＲポリペプチドを含むＣＤ８β鎖をコードするポリヌクレオチド］−［自己切断ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド］−［ＣＤ８α鎖をコードするポリヌクレオチド］）を含む単一オープンリーディングフレームを含めて、ポリヌクレオチド成分のいかなる配置も本明細書で意図される。
【０１１７】
具体的な実施形態では、本開示の導入遺伝子コンストラクトは、５から３’に、（［ｉＣａｓｐ９ポリペプチド］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＴＣＲβ鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＴＣＲα鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＲＱＲポリペプチドを含むＣＤ８β鎖］−［Ｐ２Ａペプチド］−［ＣＤ８α鎖］）をコードする単一オープンリーディングフレームを含む。
【０１１８】
さらなる実施形態では、導入遺伝子コンストラクトは、本明細書に記載のポリヌクレオチドに作動的に連結した発現制御配列を含むことができる。例えば、導入遺伝子コンストラクトは、本開示の結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドに作動的に連結した発現制御配列を含むことができ、ここで、結合タンパク質は、（ａ）ＴＲＡＶ１７遺伝子、ＴＲＡＶ２１遺伝子もしくはＴＲＡＶ１０遺伝子にコードされるアミノ酸配列を有するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン、ならびに配列番号１３〜１７及び８６のうちのいずれか１つに示されるＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメイン、（ｂ）配列番号８７〜９２のうちのいずれか１つに示すＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＴＣＲ  Ｖαドメイン、及びＴＲＢＶ７−９遺伝子にコードされるアミノ酸配列を有するＴＣＲ  Ｖβドメイン、または（ｃ）配列番号８７〜９２のうちのいずれか１つのＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＴＣＲ  Ｖαドメイン、ならびに配列番号１３〜１７及び８６のうちのいずれか１つのＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＴＣＲ  Ｖβドメインを含み、ここで、コードされる結合タンパク質はＨＡ−１Ｈ抗原を含むペプチドに特異的に結合することができ、ＨＡ−１Ｈ抗原を含まないペプチドに結合しない。
【０１１９】
本開示の導入遺伝子コンストラクトを含むベクターも本明細書で提供される。ベクターのいくつかの例としては、プラスミド、ウイルスベクター、コスミドなどが挙げられる。いくつかのベクターは、導入される宿主細胞（例えば、細菌性複製開始点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳類ベクター）中で自律複製ができ得るが、他のベクターは、宿主細胞のゲノムに組み込まれ得るか、宿主細胞への導入時にポリヌクレオチドインサートの組み込みを促進し、それによって、宿主ゲノムとともに複製することができる（例えば、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター）。さらに、いくつかのベクターは、作動的に連結した遺伝子の発現を指示することができる（これらのベクターは、「発現ベクター」と称することができる）。関連実施形態によれば、１種または複数の薬剤（例えば、本明細書に記載の結合タンパク質をコードするポリヌクレオチド）が対象に同時投与される場合、各薬剤は、別々のベクター中に、または同じベクター中に存在していてもよく、複数のベクター（それぞれ異なる薬剤または同じ薬剤を含む）を細胞もしくは細胞集団に導入することができ、または対象に投与することができることがさらに理解される。
【０１２０】
ある特定の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドを、ベクターのある特定の要素に作動的に連結することができる。例えば、連結しているコード配列の発現及びプロセシングをもたらすのに必要とされるポリヌクレオチド配列を作動的に連結することができる。発現制御配列としては、適切な転写開始配列、終了配列、プロモーター配列及びエンハンサー配列；効率的なＲＮＡプロセシングシグナル、例えば、スプライシング及びポリアデニル化シグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を増強する配列（すなわち、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列）；タンパク質の安定性を増強する配列；及び場合によっては、タンパク質分泌を増強する配列を挙げることができる。発現制御配列は、それらが、目的の遺伝子及び目的の遺伝子を制御するようにトランスで、または離れて作用する発現制御配列と隣接している場合、作動的に連結され得る。
【０１２１】
ある特定の実施形態では、ベクターは、プラスミドベクターまたはウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクターもしくはγ−レトロウイルスベクターから選択されるベクター）を含む。ウイルスベクターとしては、レトロウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス（例えば、アデノ随伴ウイルス）、コロナウイルス、マイナス鎖ＲＮＡウイルス、例えば、オルソミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、ラブドウイルス（例えば、狂犬病ウイルス及び水疱性口内炎ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、麻疹及びセンダイ）、プラス鎖ＲＮＡウイルス、例えば、ピコルナウイルス及びアルファウイルス、ならびに二本鎖ＤＮＡウイルス、例えば、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス１型及び２型、エプスタイン−バーウイルス、サイトメガロウイルス）、ならびにポックスウイルス（例えば、ワクシニア、鶏痘及びカナリア痘）が挙げられる。他のウイルスとしては、例えばノーウォークウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、パポーバウイルス、ヘパドナウイルス及び肝炎ウイルスが挙げられる。レトロウイルスの例としては、トリ白血病肉腫、哺乳類Ｃ型、Ｂ型ウイルス、Ｄ型ウイルス、ＨＴＬＶ−ＢＬＶ群、レンチウイルス及びスプマウイルスが挙げられる（Ｃｏｆｆｉｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ：Ｔｈｅ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｉｎ  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂ．Ｎ．Ｆｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９６）。
【０１２２】
「レトロウイルス」は、ＲＮＡゲノムを有するウイルスであり、このＲＮＡゲノムは逆転写酵素を使用してＤＮＡに逆転写され、次いで、逆転写されたＤＮＡは宿主細胞ゲノムに組み込まれる。「ガンマレトロウイルス」は、レトロウイルス科の１つの属を指す。ガンマレトロウイルスの例としては、マウス幹細胞ウイルス、マウス白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ肉腫ウイルス及びトリ細網内皮症が挙げられる。本明細書で使用する場合、「レンチウイルスベクター」は、遺伝子送達のためのＨＩＶベースのレンチウイルスベクターを意味し、これは、組み込み型でもよく、または非組み込み型でもよく、比較的大きなパッケージング能力を有し、様々な異なる細胞型を形質導入することができる。レンチウイルスベクターは、通常、プロデューサー細胞への３つ（パッケージング、エンベロープ及び移行）またはそれ以上のプラスミドの一過的トランスフェクションの後に生成される。ＨＩＶのように、レンチウイルスベクターは、ウイルス表面の糖タンパク質と細胞表面の受容体の相互作用を介して標的細胞に侵入する。侵入時に、ウイルスＲＮＡは逆転写を受け、これは、ウイルスの逆転写酵素複合体によって媒介される。逆転写産物は二本鎖の直鎖状ウイルスＤＮＡであり、これは、感染細胞のＤＮＡへのウイルスの組み込みの基質である。
【０１２３】
ある特定の実施形態では、ウイルスベクターは、ガンマレトロウイルス、例えば、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来のベクターでもよい。他の実施形態では、ウイルスベクターは、より複雑なレトロウイルス由来のベクター、例えば、レンチウイルス由来のベクターでもよい。ＨＩＶ−１由来のベクターはこの範疇に属する。他の例としては、ＨＩＶ−２、ＦＩＶ、ウマ伝染性貧血ウイルス、ＳＩＶ及びマエディビスナウイルス（ヒツジレンチウイルス）に由来するレンチウイルスベクターが挙げられる。ＴＣＲまたはＣＡＲ導入遺伝子を含むウイルス粒子で哺乳類宿主細胞を形質導入するための、レトロウイルス及びレンチウイルスのウイルスベクター及びパッケージング細胞の使用方法は当技術分野で既知であり、例えば、米国特許第８，１１９，７７２号、Ｗａｌｃｈｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ６：３２７９３０，２０１１、Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：４４１５，２００５、Ｅｎｇｅｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１４：１１５５，２００３、Ｆｒｅｃｈａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１８：１７４８，２０１０、及びＶｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５０６．９７，２００９において以前に記載されている。レトロウイルス及びレンチウイルスのベクターコンストラクト及び発現システムは市販されてもいる。他のウイルスベクターもポリヌクレオチド送達に使用することができ、例えば、ＤＮＡウイルスベクター、例えば、アデノウイルスベースのベクター及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベースのベクター；単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に由来するベクター、例えば、アンプリコンベクター、複製欠陥ＨＳＶ及び弱毒化ＨＳＶである（Ｋｒｉｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．５：１５１７，１９９８）。
【０１２４】
遺伝子療法用途のために最近開発された他のベクターを本開示の組成物及び方法とともに使用することもできる。そのようなベクターとしては、バキュロウイルス及びα−ウイルスに由来するもの（Ｊｏｌｌｙ，ＤＪ．１９９９．Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ，ｐｐ  ２０９−４０  ｉｎ  Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ  Ｔ．ｅｄ．Ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ＯＦ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂ）、またはプラスミドベクター（例えば、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙもしくは他のトランスポゾンベクター）が挙げられる。
【０１２５】
ウイルスベクターゲノムが、別々の転写産物として宿主細胞で発現させる複数のポリヌクレオチドを含む場合は、ウイルスベクターは、２つの（またはそれ以上の）転写産物の間に、バイシストロニックまたはマルチストロニックな発現を可能にするさらなる配列を含むこともできる。ウイルスベクターで使用されるそのような配列の例としては、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、フューリン切断部位、ウイルス２Ａペプチド、またはこれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【０１２６】
ある特定の実施形態では、ベクターは、宿主細胞（例えば、造血前駆細胞またはヒト免疫系細胞）に導入遺伝子コンストラクトを送達することができる。具体的な実施形態では、ベクターは、ヒト免疫系細胞、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４−ＣＤ８−二重陰性Ｔ細胞、γδＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、またはこれらの任意の組み合わせなどに導入遺伝子コンストラクトを送達することができる。さらなる実施形態では、ベクターは、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、またはこれらの任意の組み合わせに導入遺伝子コンストラクトを送達することができる。いくつかの実施形態では、本開示のポリヌクレオチドまたは導入遺伝子コンストラクトをコードするベクターは、宿主細胞で染色体ノックアウトを行うのに使用することができる（例えば、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓエンドヌクレアーゼまたは本明細書で開示されるような別のエンドヌクレアーゼ）、または遺伝子療法の置換（ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）もしくは遺伝子修復療法において、治療的導入遺伝子もしくはその一部を宿主細胞に送達するのに使用することができるヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドをさらに含むことができる。あるいは、染色体ノックアウトまたは遺伝子置換または遺伝子修復療法のために使用されるヌクレアーゼを、本開示のポリヌクレオチドまたは導入遺伝子コンストラクトをコードするベクターから独立して宿主細胞に送達することができる。
【０１２７】
使用
さらに他の態様では、本開示は、対象において、ＨＡ−１抗原の発現を特徴とする過剰増殖性障害を治療するための、または該障害の再発を防止するための方法を提供し、この方法は、本開示の操作された免疫細胞を含む単位用量（または、操作された免疫細胞を含む組成物）を対象に投与し、それによって、過剰増殖性障害を治療することを含む。
【０１２８】
「治療する」または「治療」または「改善する」は、対象（例えばヒトまたはヒト以外の哺乳動物、例えば、霊長類、ウマ、ネコ、イヌ、ヤギ、マウスもしくはラット）の疾患、障害または状態の医療管理を指す。一般に、本開示の操作された免疫細胞及び場合により補助剤を含む、適切な用量または治療レジメンは、治療的または予防的利益を引き出すのに十分である量で投与される。治療的または予防的／防止的利益としては、臨床転帰の向上、疾患に付随する症状の軽減もしくは緩和、症状の発生の減少、生活の質の向上、より長い無疾患状況、疾患の程度の縮小、病態の安定化、疾患進行の遅延、寛解、生存、長期の生存、またはこれらの任意の組み合わせがあげられる。
【０１２９】
本明細書で使用する場合、「治療有効量」または「有効量」は、統計学的に有意な方法での、臨床転帰の向上、疾患に付随する症状の軽減もしくは緩和、症状の発生の減少、生活の質の向上、より長い無疾患状況、疾患の程度の縮小、病態の安定化、疾患の進行の遅延、寛解、生存、または長期の生存を含めた治療効果をもたらすのに十分である、操作された免疫細胞の量を指す。単独で投与される、個々の活性成分または単一活性成分を発現する細胞に言及する場合は、治療有効量は、その成分またはその成分を単独で発現する細胞の効果を指す。組み合わせに言及する場合は、治療有効量は、連続的に投与されるか同時に投与されるかに関わらず、活性成分の組み合わせた量または治療効果をもたらす活性成分を発現する細胞と組み合わせた補助活性成分の組み合わせた量を指す。組み合わせはまた、１種より多い活性成分を発現する細胞でもよい。
【０１３０】
用語「医薬的に許容可能な賦形剤もしくは担体」または「生理学的に許容可能な賦形剤または担体」は、ヒトまたは他のヒト以外の哺乳動物対象への投与に適しており、安全である、または重大な有害事象を引き起こさないと一般に認識されている、生物学的に適合性のビヒクル、例えば生理食塩水（本明細書でより詳細に記載されている）を指す。
【０１３１】
本明細書で使用する場合、「統計学的に有意な」は、スチューデントのＴ検定を使用して計算した場合の０．０５０以下のｐ値を指し、測定された特定の事象または結果が偶然生じたことはありそうもないことを示す。
【０１３２】
本明細書中に開示された方法は、例えば、対象において、ＨＡ−１抗原の発現を特徴とする過剰増殖性障害を治療するまたは該障害の再発を防止するのに有用であり得、ここでは、ＨＡ−１Ｈ抗原は、対象の過剰増殖細胞が発現するＨＬＡ複合体中に存在する。
【０１３３】
ＨＡ−１Ｈ：ＨＬＡ複合体を特徴とする過剰増殖性障害の例としては、血液悪性腫瘍が挙げられる。ある特定の実施形態では、血液悪性腫瘍は、白血病（例えば、急性白血病または慢性白血病）を含む。具体的な実施形態では、白血病は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、混合表現型急性白血病（ＭＰＡＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、ヘアリーセル白血病、または慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を含む。ある特定の実施形態では、血液悪性腫瘍はリンパ腫を含む。ある特定の実施形態では、リンパ腫は、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、中枢神経系リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、ＣＤ３７＋樹状細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、骨外形質細胞腫、粘膜関連（ＭＡＬＴ）リンパ組織の節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性体液性リンパ腫、バーキットリンパ腫／白血病、不確定悪性度のＢ細胞増殖、リンパ腫様肉芽腫症及び移植後リンパ増殖性障害を含む。ある特定の実施形態では、血液悪性腫瘍は、骨髄異形成障害、例えば、単一血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症（不応性貧血、不応性好中球減少症及び不応性血小板減少症）、環状鉄芽球を伴う不応性貧血（ＲＡＲＳ）、環状鉄芽球を伴う不応性貧血−血小板増加症（ＲＡＲＳ−ｔ）、多血球系異形成を伴う不応性血球減少症（ＲＣＭＤ）、多血球系異形成と環状鉄芽球を伴う不応性血球減少症（ＲＣＭＤ−ＲＳ）、芽球増加を伴う不応性貧血（ＲＡＥＢ）、分類不可能な脊髄形成異常、及び小児期の不応性血球減少症を含む。さらなる実施形態では、血液悪性腫瘍は骨髄腫を含む。本発明によって治療することができる対象は、一般に、ヒトならびに獣医学目的の他の霊長類対象、例えば、サル及び類人猿である。前述の実施形態のうちのいずれかでは、対象はヒト対象でもよい。対象は雄でも、雌でもよく、乳児、児童、青年、成人及び老人対象を含めたいかなる適切な年齢でもよい。本開示による細胞は、医学分野の当業者によって決定されるような、治療される疾患、状態または障害に適した方法で投与することができる。上記実施形態のうちのいずれかでは、本明細書に記載の操作された免疫細胞または単位用量は、標的細胞（例えば、白血病細胞）に遭遇するように、静脈内に、腹腔内に、腫瘍内に、骨髄に、リンパ節に、または脳脊髄液に投与される。組成物の投与の適切な用量、適切な継続期間及び頻度は、患者の状態；疾患、状態または障害のサイズ、タイプ及び重症度；活性成分の特定の形態；ならびに投与方法などの因子によって決定される。
【０１３４】
組成物または単位用量中の細胞の量は、少なくとも１つの細胞（例えば、１つの操作されたＣＤ８＋Ｔ細胞亜集団、１つの操作されたＣＤ４＋Ｔ細胞亜集団）であり、またはより典型的には、１０２細胞を越え、例えば、１０６まで、１０７まで、１０８細胞まで、１０９細胞まで、または１０１０細胞を超える。ある特定の実施形態では、細胞は、約１０６〜約１０１０細胞／ｍ２の範囲で、好ましくは、約１０５〜約１０９細胞／ｍ２の範囲で投与される。細胞の数は、組成物が意図される最終的な使用及びその中に含まれる細胞のタイプに依存する。例えば、特定の抗原に特異的な融合タンパク質を含むように改変された細胞は、少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上のそのような細胞を含む細胞集団を含むであろう。本明細書で提供される使用については、細胞は一般に、１リットル以下、５００ｍｌ以下、２５０ｍｌ以下または１００ｍｌ以下の体積である。実施形態では、所望の細胞の密度は、典型的には、１０４細胞／ｍｌを越え、一般に、１０７細胞／ｍｌを越え、一般に、１０８細胞／ｍｌ以上である。細胞は、単回注入として、またはある期間にわたって複数回注入で投与することができる。臨床的に適切な数の免疫細胞を、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０または１０１１細胞に累積的に等しいかそれを超える複数回の注入に分配することができる。ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞の単位用量を、同種異系ドナー（例えば、ＨＡ１Ｈ−陰性、ＨＬＡ−Ａ２−陰性または両方であるドナー）由来の造血幹細胞とともに（例えば、同時にまたは同時期に）同時投与することができる。
【０１３５】
本明細書で開示される操作された免疫細胞及び医薬的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物（すなわち、組成物）も意図される。適切な賦形剤としては、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロールなど及びこれらの組み合わせが挙げられる。実施形態では、本明細書で開示される融合タンパク質または宿主細胞を含む組成物は、適切な注入媒体をさらに含む。適切な注入媒体は、任意の等張媒体製剤でもよく、典型的には、通常の生理食塩水、Ｎｏｒｍｏｓｏｌ  Ｒ（Ａｂｂｏｔｔ）またはＰｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ  Ａ（Ｂａｘｔｅｒ）、５％デキストロース水、乳酸リンゲル液が利用可能である。ヒト血清アルブミンまたは他のヒト血清成分で注入媒体を補充することができる。
【０１３６】
医薬組成物は、医学分野の当業者によって決定されるような、治療される（または防止される）疾患または状態に適した方法で投与することができる。組成物の投与の適切な用量及び適切な継続期間及び頻度は、患者の健康状態、患者のサイズ（すなわち、体重、大きさ（ｍａｓｓ）または体面積）、患者の状態のタイプ及び重症度、活性成分の特定の形態及び投与方法などの因子によって決定される。一般に、適切な用量及び治療レジメンは、治療的及び／または予防的利益（臨床転帰の向上、例えば、より頻繁な完全なもしくは部分的な寛解、またはより長い無疾患及び／または全生存期間、または症状の重症度の軽減を含めた、本明細書に記載されるようなもの）を提供するのに十分である量で、組成物（複数可）提供する。
【０１３７】
医薬組成物の有効量は、投薬量で、及び必要とされる期間にわたって、本明細書に記載の所望の臨床結果または有利な治療を達成するのに十分な量を指す。有効量は、１または複数回の投与で送達することができる。投与が疾患または疾患状況を有することが既に知られているか確認されている対象に対するものである場合、用語「治療量」は、治療に関連して使用され得るが、「予防有効量」は、防止クールとして、疾患または疾患状況（例えば、再燃）を発生する余地があるまたは危険性がある対象へ有効量を投与することを説明するのに使用され得る。
【０１３８】
本明細書に記載の医薬組成物は、単位用量容器または多回用量容器、例えば、密閉のアンプルまたはバイアル中に提供することができる。そのような容器は、患者へ注入するまで製剤の安定性を保持するために、凍結されてもよい。ある特定の実施形態では、単位用量は、約１０７細胞／ｍ２〜約１０１１細胞／ｍ２の用量で、本明細書に記載の操作された免疫細胞を含む。様々な治療レジメンにおいて本明細書に記載の特定の組成物を使用するのに適した投薬及び治療レジメンの開発は、例えば、非経口または静脈内の投与または製剤を含む。
【０１３９】
対象組成物が非経口的に投与される場合、組成物は無菌の水性または油性の溶液または懸濁液を含むこともできる。適切な無毒の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒としては、水、リンゲル溶液、等張塩溶液、１，３−ブタンジオール、エタノール、水との混合液状態のプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールが挙げられる。水性の溶液または懸濁液は、１種または複数の緩衝剤、例えば、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウムまたは酒石酸ナトリウムをさらに含むことができる。当然ながら、任意の投薬単位製剤の調製に使用されるいかなる材料も、用いられる量において、医薬的に純粋であり、実質的に無毒であるべきである。さらに、活性化合物を徐放性の調製物及び製剤に組み込むことができる。本明細書で使用する場合、投薬単位剤形は、治療対象に対する単位投薬量として適する、物理的に別々の単位を指し、各単位は、適切な医薬担体とともに所望の効果をもたらすように計算された所定量の操作された免疫細胞または活性化合物を含むことができる。
【０１４０】
一般に、適切な投薬及び治療レジメンは、利益をもたらすのに十分である量で、活性な分子または細胞を提供する。そのような応答は、非治療対象と比較して、治療対象において臨床転帰の向上（例えば、より頻繁な寛解、完全なまたは部分的なまたはより長い無疾患生存）を確立することによって、モニターすることができる。腫瘍タンパク質に対する既存の免疫応答の増大は、一般に、臨床転帰の向上と関連がある。そのような免疫応答は、一般に、標準的な増殖、細胞傷害性またはサイトカインアッセイを使用して評価することができ、これらは決まりきった作業である。
【０１４１】
予防的使用については、用量は、疾患または障害と関係がある疾患を防止する、その発生を遅らせる、またはその重症度を減らすのに十分であるべきである。本明細書に記載の方法に従って投与される免疫原性組成物の予防的利益は、（インビトロ及びインビボの動物研究を含めた）前臨床研究及び臨床研究を行うことによって、及びそれらから得られたデータを適切な統計学的、生物学的及び臨床的な方法及び技法によって解析することによって決定することができ、当業者はそれらすべてを容易に実施することができる。
【０１４２】
本明細書で使用する場合、組成物の投与は、送達の経路または様式に関わらず、対象へのその送達を指す。投与は、連続的または断続的及び非経口的に行われ得る。投与は、認識される状態、疾患もしくは病態を有すると既に確認された対象を治療するためでもよく、またはそのような状態、疾患もしくは病態に罹りやすい、またはそのような状態、疾患もしくは病態を発生する危険性がある対象を治療するためでもよい。補助的な療法との同時投与は、任意の順序及び任意の投薬スケジュールでの複数の薬剤の同時及び／または連続的送達（例えば、１種または複数のサイトカイン；免疫抑制療法、例えば、カルシニューリン阻害剤、コルチコステロイド、微小管阻害剤、低用量のミコフェノール酸プロドラッグまたはこれらの任意の組み合わせを伴う操作された免疫細胞）を含むことができる。
【０１４３】
ある特定の実施形態では、複数用量の本明細書に記載の操作された免疫細胞が対象に投与され、これは約２〜約４週の投与間隔で投与することができる。
【０１４４】
本開示の治療または防止方法は、治療クールまたはレジメンの一部として対象に施すことができ、これは、本明細書で開示される単位用量、細胞、または組成物の投与の前または後にさらなる治療を含むことができる。例えば、ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞の単位用量が与えられている対象は、造血細胞移植（ＨＣＴ；骨髄破壊的及び非骨髄破壊的ＨＣＴを含める）を受けているか、以前に受けたことがあった。具体的な実施形態では、ＨＣＴはＨＡ−１−、ＨＬＡ−Ａ２−または両方であるドナー細胞を含み、ＨＣＴドナー細胞を受けている対象はＨＡ−１＋／ＨＬＡ−Ａ２＋である。前述の実施形態のうちのいずれかでは、ＨＣＴで使用される造血細胞は、（例えば、本明細書に記載の方法に従う染色体遺伝子ノックアウトによって）ＨＬＡ分子またはＴＣＲ分子から選択されるポリペプチド生成物をコードする１種または複数の内在性遺伝子の発現を低減させるまたは排除するように改変されている「万能ドナー」細胞でもよい。ＨＣＴを行うための技法及びレジメンは当技術分野で既知であり、任意の適切なドナー細胞、例えば、臍帯血、骨髄もしくは末梢血に由来する細胞、造血幹細胞、動員された幹細胞、または羊水由来の細胞の移植を含むことができる。したがって、ある特定の実施形態では、本開示の操作された免疫細胞は、改変ＨＣＴ療法において、造血幹細胞とともに、またはその直後に投与することができる。
【０１４５】
さらなる実施形態では、対象は、操作された免疫細胞またはＨＣＴを受ける前に、リンパ球枯渇化学療法を以前に受けたことがあった。ある特定の実施形態では、リンパ球枯渇化学療法は、シクロホスファミド、フルダラビン、抗胸腺細胞グロブリン、またはこれらの組み合わせを含む前処置レジメンを含む。
【０１４６】
本開示による方法は、併用療法で疾患または障害を治療するために１種または複数のさらなる薬剤を投与することをさらに含むことができる。例えば、ある特定の実施形態では、併用療法は、免疫チェックポイント阻害剤とともに（同時発生的に、同時に、または連続して）操作された免疫細胞を投与することを含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、刺激性免疫チェックポイント剤のアゴニストとともに操作された免疫細胞を投与することを含む。さらなる実施形態では、併用療法は、第２の療法、例えば、化学療法剤、放射線療法、手術、抗体またはこれらの任意の組み合わせとともに操作された免疫細胞を投与することを含む。
【０１４７】
本明細書で使用する場合、用語「免疫抑制剤（ｉｍｍｕｎｅ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｇｅｎｔ）」または「免疫抑制剤（ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｇｅｎｔ）」は、免疫応答を制御または抑制するのを支援するために阻害シグナルを与える、１種または複数の細胞、タンパク質、分子、化合物または複合体を指す。例えば、免疫抑制剤としては、免疫刺激を部分的にもしくは完全に遮断する、免疫活性化を低下させる、防止する、もしくは遅延させる、または免疫抑制を増大させる、活性化する、もしくはアップレギュレートする分子が挙げられる。（例えば、免疫チェックポイント阻害剤ともに）標的にする例示的免疫抑制剤としては、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ４、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ２４４／２Ｂ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＫＩＲ、ＰＶＲ１Ｇ（ＣＤ１１２Ｒ）、ＰＶＲＬ２、アデノシン、Ａ２ａＲ、免疫抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−１ＲＡ、ＩＬ−３５）、ＩＤＯ、アルギナーゼ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ−５、ＴＲＥＧ細胞、またはこれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【０１４８】
免疫抑制剤阻害剤（免疫チェックポイント阻害剤とも称される）は、化合物、抗体、抗体断片もしくは融合ポリペプチド（例えば、ＦＣ融合体、例えば、ＣＴＬＡ４−ＦｃもしくはＬＡＧ３−Ｆｃ）、アンチセンス分子、リボザイムもしくはＲＮＡＩ分子、または低分子量有機分子でもよい。本明細書に開示される実施形態のうちのいずれかでは、方法は、単独でまたは任意の組み合わせで、以下の免疫抑制成分のうちのいずれか１つの１種または複数の阻害剤とともに、操作された免疫細胞を、含むことができる。
【０１４９】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞は、ＰＤ−１阻害剤、例えば、ＰＤ−１特異的抗体またはその結合断片、例えば、ピディリズマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０（以前はＡＭＰ−５１４）、ＡＭＰ−２２４、ＢＭＳ−９３６５５８またはこれらの任意の組み合わせと組み合わせて使用される。さらなる実施形態では、本開示の操作された免疫細胞（または、これを発現する操作された宿主細胞）は、ＰＤ−Ｌ１特異的抗体またはその結合断片、例えば、ＢＭＳ−９３６５５９、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、アテゾリズマブ（ＲＧ７４４６）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａまたはこれらの任意の組み合わせと組み合わせて使用される。
【０１５０】
ある特定の実施形態では、本開示の操作された免疫細胞は、ＬＡＧ３阻害剤、例えば、ＬＡＧ５２５、ＩＭＰ３２１、ＩＭＰ７０１、９Ｈ１２、ＢＭＳ−９８６０１６またはこれらの任意の組み合わせと組み合わせて使用される。
【０１５１】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞はＣＴＬＡ４の阻害剤と組み合わせて使用される。特定の実施形態では、操作された免疫細胞はＣＴＬＡ４特異的抗体またはその結合断片、例えば、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ融合タンパク質（例えば、アバタセプト、ベラタセプト）またはこれらの任意の組み合わせと組み合わせて使用される。
【０１５２】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞は、Ｂ７−Ｈ３特異的抗体またはその結合断片、例えば、エノビリツズマブ（ＭＧＡ２７１）、３７６．９６または両方と組み合わせて使用される。Ｂ７−Ｈ４抗体結合断片は、例えば、Ｄａｎｇａｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７３：４８２０，２０１３に記載されているようなｓｃＦｖまたはその融合タンパク質、ならびに米国特許第９，５７４，０００号及びＰＣＴ特許公開第ＷＯ／２０１６４０７２４Ａ１号及び第ＷＯ２０１３／０２５７７９Ａ１号に記載されているものでもよい。
【０１５３】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞はＣＤ２４４の阻害剤と組み合わせて使用される。
【０１５４】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞はＢＬＴＡ、ＨＶＥＭ、ＣＤ１６０の阻害剤またはこれらの任意の組み合わせと組み合わせて使用される。抗ＣＤ−１６０抗体は、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１０／０８４１５８号に記載されている。
【０１５５】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞はＴＩＭ３の阻害剤と組み合わせて使用される。
【０１５６】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞はＧａｌ９の阻害剤と組み合わせて使用される。
【０１５７】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞はアデノシンシグナリングの阻害剤、例えば、デコイアデノシン受容体と組み合わせて使用される。
【０１５８】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞はＡ２ａＲの阻害剤と組み合わせて使用される。
【０１５９】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞はＫＩＲの阻害剤、例えば、リリルマブ（ＢＭＳ−９８６０１５）と組み合わせて使用される。
【０１６０】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞は阻害性サイトカイン（典型的には、ＴＧＦβ以外のサイトカイン）またはＴＲＥＧの発生または活性の阻害剤と組み合わせて使用される。
【０１６１】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞は、ＩＤＯ阻害剤、例えば、レボ−１−メチルトリプトファン、エパカドスタット（ＩＮＣＢ０２４３６０；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１５：３５２０−３０，２０１０）、エブセレン（Ｔｅｒｅｎｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．４９：５９１−６００，２０１０）、インドキシモド、ＮＬＧ９１９（Ｍａｕｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １０４ｔｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ２０１３；Ａｐｒ  ６−１０，２０１３）、１−メチル−トリプトファン（１−ＭＴ）−チラ−パザミンまたはこれらの任意の組み合わせと組み合わせて使用される。
【０１６２】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞はアルギナーゼ阻害剤、例えば、Ｎ（オメガ）−ニトロ−Ｌ−アルギニンメチルエステル（Ｌ−ＮＡＭＥ）、Ｎ−オメガ−ヒドロキシ−ノル−１−アルギニン（ノル−ＮＯＨＡ）、Ｌ−ＮＯＨＡ、２（Ｓ）−アミノ−６−ボロノヘキサン酸（ＡＢＨ）、Ｓ−（２−ボロノエチル）−Ｌ−システイン（ＢＥＣ）またはこれらの任意の組み合わせと組み合わせて使用される。
【０１６３】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞はＶＩＳＴＡの阻害剤、例えば、ＣＡ−１７０（Ｃｕｒｉｓ，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，Ｍａｓｓ．）と組み合わせて使用される。
【０１６４】
ある得定の実施形態では、操作された免疫細胞はＴＩＧＩＴの阻害剤、例えばＣＯＭ９０２（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ，Ｔｏｒｏｎｔｏ，Ｏｎｔａｒｉｏ  Ｃａｎａｄａ）など、ＣＤ１５５の阻害剤、例えばＣＯＭ７０１（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ）など、または両方と組み合わせて使用される。
【０１６５】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞はＰＶＲＩＧの阻害剤、ＰＶＲＬ２の阻害剤または両方と組み合わせて使用される。抗ＰＶＲＩＧ抗体は、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／１３４３３３号に記載されている。抗ＰＶＲＬ２抗体は、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１７／０２１５２６号に記載されている。
【０１６６】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞はＬＡＩＲ１阻害剤と組み合わせて使用される。
【０１６７】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞はＣＥＡＣＡＭ−１、ＣＥＡＣＡＭ−３、ＣＥＡＣＡＭ−５の阻害剤またはこれらの任意の組み合わせと組み合わせて使用される。
【０１６８】
ある特定の実施形態では、操作された免疫細胞は刺激性免疫チェックポイント分子の活性を増大させる（すなわち、アゴニストである）薬剤と組み合わせて使用される。例えば、操作された免疫細胞は、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）アゴニスト（例えば、ウレルマブなど）、ＣＤ１３４（ＯＸ−４０）アゴニスト（例えば、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ６３８３またはＭＥＤＩ０５６２など）、レナリドマイド、ポマリドミド、ＣＤ２７アゴニスト（例えば、ＣＤＸ−１１２７など）、ＣＤ２８アゴニスト（例えば、ＴＧＮ１４１２、ＣＤ８０またはＣＤ８６など）、ＣＤ４０アゴニスト（例えば、ＣＰ−８７０、８９３、ｒｈｕＣＤ４０ＬまたはＳＧＮ−４０など）、ＣＤ１２２アゴニスト（例えば、ＩＬ−２など）、ＧＩＴＲのアゴニスト（例えば、ＰＣＴ特許公開第ＷＯ２０１６／０５４６３８号に記載されているヒト化モノクローナル抗体など）、ＩＣＯＳのアゴニスト（ＣＤ２７８）（例えば、ＧＳＫ３３５９６０９、ｍＡｂ８８．２、ＪＴＸ−２０１１、Ｉｃｏｓ１４５−１、Ｉｃｏｓ３１４−８またはこれらの任意の組み合わせなど）と組み合わせて使用することができる。本明細書に開示される実施形態のうちのいずれかでは、方法は、単独でまたは任意の組み合わせで、前述のうちのいずれかを含めた刺激性免疫チェックポイント分子の１種または複数のアゴニストとともに、操作された免疫細胞を投与することを含むことができる。
【０１６９】
ある特定の実施形態では、併用療法は、操作された免疫細胞及び非炎症性固形腫瘍が発現するがん抗原に特異的な抗体もしくはその抗原結合断片、放射線治療、手術、化学療法剤、サイトカイン、ＲＮＡｉまたはこれらの任意の組み合わせの１つまたは複数を含む第２の療法を含む。
【０１７０】
ある特定の実施形態では、併用療法の方法は、融合タンパク質を投与すること、及び放射線治療または手術をさらに施すことを含む。放射線療法は当技術分野で周知であり、Ｘ線療法、例えば、ガンマ照射及び放射性医薬品療法を含む。対象において所与のがんを治療するのに適した手術及び手術技法は当業者に周知である。
【０１７１】
ある特定の実施形態では、併用療法の方法は、操作された免疫細胞を投与すること、及び化学療法剤をさらに投与することを含む。化学療法剤としては、これらに限定はされないが、クロマチン機能の阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管阻害薬、ＤＮＡ損傷剤、代謝拮抗剤（例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類似体、プリン類似体及び糖修飾類似体）、ＤＮＡ合成阻害剤、ＤＮＡ相互作用剤（例えば、挿入剤）及びＤＮＡ修復阻害剤が挙げられる。例示的化学療法剤としては、限定はされないが、以下の群が挙げられる：代謝拮抗／抗がん剤、例えば、ピリミジン類似体（５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、カペシタビン、ゲムシタビン及びシタラビン）ならびにプリン類似体、葉酸アンタゴニストならびに関連した阻害剤（メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン及び２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン））；抗増殖性／抗有糸分裂剤、例えば、天然物、例えば、ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン及びビノレルビン）、微小管破壊剤、例えば、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロン及びナベルビン、エピジポドフィロトキシン（エトポシド、テニポシド）、ＤＮＡ損傷剤（アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、シトキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ヘキサメチルメラミンオキサリプラチン、イホスファミド、メルファラン、メクロレタミン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソ尿素、プリカマイシン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テモゾロミド、テニポシド、トリエチレンチオホスホルアミド及びエトポシド（ＶＰ１６））；抗生物、例えば、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）及びマイトマイシン；酵素（全身的にＬ−アスパラギンを代謝し、それ自体のアスパラギンを合成する能力を有さない細胞を欠乏させるＬ−アスパラギナーゼ）；抗血小板剤；抗増殖性／抗有糸分裂アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード（メクロレタミン、シクロホスファミド及び類似体、メルファラン、クロラムブシル）、エチレンイミンならびにメチルメラミン（ヘキサメチルメラミン及びチオテパ）、スルホン酸アルキル−ブスルファン、ニトロソ尿素（カルムスチン（ＢＣＮＵ）及び類似体、ストレプトゾシン）、トラゼン−ダカルバジニン（ＤＴＩＣ）；抗増殖性／抗有糸分裂代謝拮抗剤、例えば、葉酸類似体（メトトレキサート）；白金配位錯体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、ミトタン、アミノグルテチミド；ホルモン、ホルモン類似体（エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）及びアロマターゼ阻害剤（レトロゾール、アナストロゾール）；抗凝血剤（ヘパリン、合成ヘパリン塩及びトロンビンの他の阻害剤）；線維素溶解剤（例えば、組織プラスミノーゲンアクチベーター、ストレプトキナーゼ及びウロキナーゼ）、アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレル、アブシキシマブ；抗遊走剤；抗分泌剤（ブレベルジン）；免疫抑制剤（シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）、シロリムス（ラパマイシン）、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル）；抗血管新生化合物（ＴＮＰ４７０、ゲニステイン）及び増殖因子阻害剤（血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）阻害剤、維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）阻害剤）；アンギオテンシン受容体遮断薬；一酸化窒素ドナー；抗センスオリゴヌクレオチド；抗体（トラスツズマブ、リツキシマブ）；キメラ抗原受容体；細胞周期阻害剤及び分化誘導剤（トレチノイン）；ｍＴＯＲ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（ドキソルビシン（アドリアマイシン）、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エニポシド、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）及びミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン）、コルチコステロイド（コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン及びプレニゾロン）；増殖因子シグナル伝達キナーゼ阻害剤；ミトコンドリア機能障害誘導剤、毒素、例えば、コレラ毒素、リシン、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓアデニル酸シクラーゼ毒素またはジフテリア毒素及びカスパーゼ活性化剤；ならびにクロマチン破壊剤。
【０１７２】
サイトカインは、抗がん活性に対する宿主免疫応答を操るために使用されることが増えている。例えば、Ｆｌｏｒｏｓ  ＆  Ｔａｒｈｉｎｉ，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．４２（４）：５３９−５４８，２０１５を参照されたい。免疫性の抗がん性または抗腫瘍性応答を促進するのに有用なサイトカインとしては、単独のまたは本開示の操作された免疫細胞との任意の組み合わせの、例えば、ＩＦＮ−α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２４及びＧＭ−ＣＳＦ挙げられる。
【０１７３】
養子免疫療法のモジュレート方法も本明細書で提供され、この方法は、安全スイッチタンパク質をコードする異種性ポリヌクレオチドを含む本開示の操作された免疫細胞を以前に与えられたことがある対象に、対象において、以前に投与された操作された免疫細胞を除去するのに有効な量で、安全スイッチタンパク質の同族化合物を投与することを含む。
【０１７４】
本明細書で使用する場合、用語「養子免疫療法（ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ）」または「養子免疫療法（ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ）」は、天然に存在するまたは遺伝子操作された疾患または抗原特異的免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の投与を指す。養子細胞免疫療法は、自己（免疫細胞は受容者由来である）、同種異系（免疫細胞は同じ種のドナー由来である）または同系（免疫細胞は受容者と遺伝的に同一のドナー由来である）でもよい。
【０１７５】
ある特定の実施形態では、安全スイッチタンパク質はｔＥＧＦＲを含み、同族化合物はセツキシマブであり、または安全スイッチタンパク質はｉＣａｓｐ９を含み、同族化合物はＡＰ１９０３（例えば、ダイマー化ＡＰ１９０３）であり、または安全スイッチタンパク質はＲＱＲポリペプチドを含み、同族化合物はリツキシマブであり、または安全スイッチタンパク質はｍｙｃ結合ドメインを含み、同族化合物はｍｙｃ結合ドメインに特異的な抗体である。
【０１７６】
さらに別の態様では、本開示の組成物または単位用量の製造のための方法が提供される。ある特定の実施形態では、方法は、（ｉ）本開示のベクターで形質導入された一定分量の宿主細胞と（ｉｉ）医薬的に許容可能な担体を組み合わせることを含む。ある特定の実施形態では、本開示のベクターは、養子移植療法（例えば、がん抗原のターゲティング）で使用するための宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）をトランスフェクトする／形質導入するために使用される。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、この方法は、一定分量をとる前に、形質導入された宿主細胞を培養し、ベクターが組み込まれている（すなわち、発現している）として形質導入細胞を選択することをさらに含む。さらなる実施形態では、方法は、培養及び選択の後に、及び一定分量をとる前に、形質導入された宿主細胞を増殖させることを含む。本方法の実施形態のうちのいずれかでは、後の使用のために、製造した組成物または単位用量を凍結することができる。本方法に従って組成物または単位用量を製造するために任意の適切な宿主細胞を使用することができ、例えば、造血幹細胞、Ｔ細胞、一次Ｔ細胞、Ｔ細胞系統、ＮＫ細胞、またはＮＫ−Ｔ細胞が挙げられる。具体的な実施形態では、方法は、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞である宿主細胞を含む。
【実施例】
【０１７８】
実施例１
ＨＡ−１Ｈ特異的ＴＣＲの単離及びクローニング
以前に記載されたインビトロ方法（Ｂｌｅａｋｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１５：４９２３−４９３３，２０１０（図１）を使用して、ＨＡ−１Ｈ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞クローンを単離した。特に、ＣＤ８＋Ｔ細胞単離キット及び抗ＣＤ４５ＲＯ免疫磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、ＨＬＡ−Ａ２＋ドナー（２ドナー）の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）からＣＤ８＋Ｔ細胞を単離した。自己樹状細胞（ＤＣ）を１μｇ／ｍＬ  ＨＡ−１Ｈペプチド
【化５】
2019531074.tif 000007
で３〜６時間、３７℃でパルスした。精製したＣＤ８＋ＴＮを、完全Ｔリンパ球（ＣＴＬ）培地中で、３０：１のＴＮ対ＤＣの比率で、ペプチドでパルスしたＤＣと混合し、６×１０４Ｔ細胞／ウェルで、９６ウェルプレート中で共培養し、開始から１０ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−１２を補充し、７日目から１０ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−１５を補充した。１１〜１３日目に、スプリットウェルマイクロクロム放出アッセイ（ＣＲＡ；μＣＲＡ）において、ＨＡ−１Ｈ特異的細胞傷害性について細胞を評価した。続いて、１ｕｇ／ｍＬ  ＨＡ−１ＨペプチドでパルスしたＴ２細胞を溶解したＴ細胞系統（＞２０％溶解及びペプチドでパルスしていない標的に対してパルスした標的の＞５倍以上の溶解）を、抗ＣＤ３モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）及びフィーダー細胞を使用して、限界希釈によりクローニングした。
【０１７９】
１１〜１３日目に、μＣＲＡによってクローンをスクリーニングした。上記の判断基準を使用した際に特異的な細胞傷害性を示すウェルからのＴ細胞クローンを、急速増殖プロトコール（ＲＥＰ）によって、抗ＣＤ３ｍＡｂ、ＩＬ−２及びフィーダー細胞を使用して増殖させた。増殖させたクローンの特異性をＣＲＡ、ＨＡ−１／ＨＬＡ−Ａ２マルチマー染色及び細胞内サイトカイン染色（ＩＣＣ）によって評価した。ＨＡ−１Ｈ／ＨＬＡ  Ａ２マルチマーを用いて、ＣＴＬクローンのＨＡ−１Ｈ特異性を検証した。特に、ＨＬＡ−Ａ２／ＨＡ−１Ｈマルチマー及びＣＤ８＋モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を使用して、ＨＡ−１特異的クローン（クローン１、２、１０、１３、１４、１６及び５）及び別の腫瘍抗原に特異的な対照クローンを染色した（図２Ａ）。
【０１８０】
さらに、クロム放出アッセイ（ＣＲＡ）を使用して、７つのＨＡ−１特異的ＣＴＬクローン（１、２、１０、１３、１４、１６及び５）をＨＡ−１Ｈペプチドでパルスした標的の死滅について試験した。Ｔ細胞クローンは、ＨＡ−１Ｈペプチド
【化６】
2019531074.tif 000008
でパルスした標的細胞を非常に低いペプチド濃度で認識し、最大半量の溶解が１０ｐＭのペプチド濃度で見られた（図２Ｂ）（ＩＣＣデータ非表示）。内在性のＨＡ−１Ｈ発現がある、またはない細胞に対する単離クローンの細胞傷害性も調べた。このアッセイは、ＨＡ−１Ｈ＋急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞系統（ＴＨＰ−１）及びＨＡ−１Ｈ＋一次ＡＭＬを溶解するがＨＡ−１Ｈ−ＡＭＬを溶解しない７つのＨＡ−１Ｈ特異的ＣＴＬクローン（ＴＣＲ１、ＴＣＲ２、ＴＣＲ１０、ＴＣＲ１３、ＴＣＲ１４、ＴＣＲ１６及びＴＣＲ５）を示す（図２Ｃ）。
【０１８１】
次に、単離したＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲをクローニングした。８つのＣＴＬのＴＣＲ  Ｖβ及びＶα遺伝子をシーケンスし、６つの異なるＴＣＲを特定した（ＴＣＲ１とＴＣＲ１３は同一であることが分かり、ＴＣＲ２とＴＣＲ１４も同様であった）。６つのＴＣＲをコードする遺伝子（及び特定のアレル）及びＴＣＲのＶβ  ＣＤＲ３アミノ酸配列を表１に示す。
【表１−１】
2019531074.tif 000009
【表１−２】
2019531074.tif 000010
【０１８２】
７番目のＴＣＲ、「ＴＣＲ２９」も特定し、シーケンスした。シーケンス後に、ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ（形質導入されたＣＤ８＋Ｔ細胞で機能が不十分であるＴＣＲ２４を除く）をコードする遺伝子をコドン最適化して、発現を最大にし、以下に記載のように、システイン修飾を導入して、内在性ＴＣＲ鎖との誤対合の危険性を低減させた。コドン最適化及びシステイン修飾後のＣＴＬクローンＴＣＲβ及びＴＣＲα遺伝子のヌクレオチド配列を配列番号３９〜４８及び５１〜５２に示す。
【０１８３】
各ＨＡ−１Ｈ特異的Ｔ細胞クローンからＲＮＡを抽出した。５’−第１鎖ｃＤＮＡ増幅及びｃＤＮＡ末端の迅速増幅（ＲＡＣＥ）ＰＣＲを行って、ＳＭＡＲＴｅｒ  ＲＡＣＥ  ｃＤＮＡ増幅キット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用して、完全長ＴＣＲ領域を特定した。５’ＣＤＳプライマーＡ、ＳＭＡＲＴｅｒ  ＩＩＡオリゴ及びＳＭＡＲＴＳｃｒｉｂｅ逆転写酵素を使用して、ＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。続いて、このｃＤＮＡを使用して、Ｐｈｕｓｉｏｎ（登録商標）ハイフィデリティーＤＮＡポリメラーゼ及びＴＣＲアルファ（α）−（５’−ＧＧＴＧＡＡＴＡＧＧＣＡＧＡＣＡＧＡＣＴＴ−３’）（配列番号９３）またはＴＣＲベータ（β）−鎖（ＧＴＧＧＣＣＡＧＧＣＡＣＡＣＣＡＧＴＧＴ）（配列番号９４）に対する遺伝子特異的プライマーを使用して、ＲＡＣＥ  ＰＣＲ反応を行った。ＲＡＣＥ  ＰＣＲ産物を精製し、シーケンスして、ＴＣＲα−及びβ鎖を特定した。ＩＭＧＴ／Ｖ−ＱＵＥＳＴを使用して、ＴＣＲ可変（Ｖ）、多様性（Ｄ）及び結合（Ｊ）領域を規定した。
【０１８４】
位置４８（ＴｈｒからＣｙｓ）及び５７（ＳｅｒからＣｙｓ）で相補的システイン残基をＴＣＲα及びβ遺伝子の定常ドメインに組み込んで、外来性ＴＣＲの対形成を増加させ、内在性ＴＣＲとの誤対合を減少させた。協調的遺伝子発現を確実にするために、ブタテッショウウイルス（Ｐ２Ａ）由来の２Ａ要素によってＴＣＲ鎖を分離させた。導入遺伝子を、発現を増強するためにコドン最適化し、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって合成し、制限消化及びライゲーションによって、ｐＲＲＬＳＩＮ．ｃＰＰＴ．ＭＳＣＶ．ＷＰＲＥ  ＬＶベクターにクローニングした。コードされるＴＣＲコンストラクトのアミノ酸配列を配列番号５３〜５７に示す。
【０１８５】
実施例２
ＨＡ−１Ｈ特異的ＴＣＲの異種性発現及び活性
次に、コドン最適化し、システイン修飾したＴＣＲを発現及び活性について試験した。
【０１８６】
レンチウイルス（ＬＶ）ベクターを使用して一次Ｔ細胞を形質導入して、操作されたＨＡ−１Ｈ特異的ＴＣＲコンストラクトをコードするポリヌクレオチドを送達した。形質導入されたＴ細胞を選別し、増殖させ、ＨＡ−１Ｈ特異性について試験した（図４）。６つのＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  ＬＶのうちの５つが一次ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞を効率的に形質導入し（図５Ａ及び６Ａ）、少量のＨＡ−１ＨペプチドでパルスしたＨＬＡ−Ａ２＋細胞の特異的認識を与えた。ＴＣＲ２及びＴＣＲ１６が最も強い細胞障害活性を示し、これらをさらなる実験のために選択した。これらのＴＣＲで形質導入されたＴ細胞は、ＨＡ−１Ｈでパルスした細胞（図５Ｂ、５Ｃ、６Ｂ及び３５）、内在性のＨＡ−１Ｈ発現を有する細胞系統（図６Ｃ〜６Ｅ及び図７）ならびに内在性ＨＡ−１Ｈを有する一次白血病細胞（図８Ａ〜８Ｅ、図９）を死滅させたが、これらの操作された細胞はＨＡ−１Ｈ−陰性細胞（図７）、一次白血病細胞（図８Ａ、８Ｂ及び９）または線維芽細胞（図１０）によって活性化されず、これらを死滅させなかった。さらに、ＣＤ８＋及びＣＤ４＋ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  Ｔ細胞は、ＨＡ−１Ｈペプチドの刺激に応じて、ＩＦＮγ及びＩＬ−２を分泌した（データ非表示）。ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  ＣＤ４＋細胞は高ペプチド濃度でパルスした標的細胞を死滅させたが、ＨＡ−１ＨＴＣＲ単独でのＬＶ形質導入は、ネイティブレベルの抗原を有する一次白血病細胞に対してＣＤ４＋Ｔ細胞を応答性にしなかった（データ非表示）。
【０１８７】
要約すれば、これらのデータは、Ｔ細胞が、形質導入されたＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲを効果的に発現し、リンパ球細胞に対して抗原特異的死滅活性を有することを示す。
【０１８８】
実施例３
ＣＤ４＋ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ細胞におけるＣＤ８共受容体の機能
免疫療法細胞生成物へのＣＤ４＋Ｔ細胞の包含は、抗原誘導性ＩＬ−２分泌をもたらすこと、ならびに移行させた細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞の持続性及び機能を増強することができる（例えば、Ｋｅｎｎｅｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２２２．１２９（２００８）、Ｎａｋａｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４６２（７２７２）：５１０（２００９）を参照されたい）。しかし、ＣＤ４＋Ｔ細胞中の多くのクラスＩ拘束性ＴＣＲの最適な機能は、クラスＩ  ＨＬＡペプチド複合体に対するＴＣＲの感度を増強するために、ＣＤ８共受容体の移行を必要とする。ＣＤ４共受容体はＣＤ８と構造が異なり、効果的にＣＤ８共受容体の代わりになることができない（例えば、Ｓｔｏｎｅ  ＆  Ｋｒａｎｚ，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：２４４（２０１３）を参照されたい。Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３７（２）：１３９（２０１２）も参照されたい。ＨＡ−１ＨＴＣＲ単独で形質導入されたＣＤ４＋Ｔ細胞中で細胞溶解活性を誘導するためには、比較的高いＨＡ−１Ｈペプチド濃度が必要とされ、ＨＡ−１  ＴＣＲ  ＣＤ４＋Ｔ細胞は細胞系統または白血病を認識せず、これは、ＴＣＲのＣＤ８共受容体依存性を意味する（データ非表示）。
【０１８９】
導入遺伝子コンストラクト中にＣＤ８共受容体を含める様々なオプションを探索した。ＣＤ８共受容体は、典型的にはＣＤ８α鎖とβ鎖のダイマーとして、ヒトの通常のαβＴＣＲ  Ｔ細胞の表面に存在し、異なる細胞質内尾部配列を有する５つのβ鎖変異体（βＭ１〜５）が存在する（例えば、Ｔｈａｋｒａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８０（１１）：７４３１（２００８）を参照されたい。Ｔｈａｋｒａｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ８（３）：ｅ５９３７４（２０１３）も参照されたい）。ＣＤ８共受容体鎖のアミノ酸配列を配列番号４８〜５３に示す。
【０１９０】
完全長またはトランケートされた変異体としてＣＤ８α鎖及びＣＤ８β鎖の一方または両方を含む、ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２コンストラクトを生成した。一次ＣＤ４＋Ｔ細胞を形質導入するのに使用した場合、α鎖及びβは細胞表面で発現され、αβダイマー及びαモノマーは、βモノマーが行うよりもより大きな程度まで、ＴＣＲで形質導入されたＴ細胞によって、ＨＡ−１Ｈ／ＨＬＡ−Ａ２マルチマー結合を増加させた（図１１Ａ（ｉ−ｉｉ））。細胞内の鎖成分のトランケーションを有するＣＤ８α鎖及びβ鎖は、ＴＣＲ単独を上回ってマルチマー結合を増加させなかった（図１１Ａ（ｉｉｉ））。ＣＤ８α及びβＭ１またはβＭ４変異体での形質導入は、ＣＤ８α及びβＭ２またはβＭ５鎖が行うよりも、ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲの機能を向上させた（図１１Ｂ）。機能アッセイでは、βＭ１またはβＭ４鎖の組み込みは、ＣＤ８αモノマーより大きい程度までＣＤ４＋Ｔ細胞の機能を向上させた（図１１Ｂ及び１１Ｃ）。βＭ１は、βＭ４が行うよりも大きな応答特異性をもたらした。したがって、βＭ１変異体を選択し、ＣＤ８α及びβＭ１配列ならびにＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲを含むマルチシストロンＬＶ中で使用した。ベクターで形質導入されたＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＩＬ−２及びインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）を分泌し（図１２Ａ）、ＨＡ−１Ｈ＋ＡＭＬ細胞と共培養した場合に増殖した（図１２Ｂ）。
【０１９１】
実施例４
ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲコンストラクトへの安全スイッチの導入
任意の予期しない毒性の場合に、ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞が迅速に枯渇され得るということを確実にするために、４つのコドン最適化「安全スイッチ」ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲコンストラクトを生成した：（１）誘導性カスパーゼ９（ｉＣａｓｐ９）は、改変ヒトＦＫ−結合タンパク質へのヒトカスパーゼ９の融合に基づき、条件付きダイマー化を可能にする。合成ダイマー化薬に暴露されると、ｉＣａｓｐ９は活性化され、このコンストラクトを発現する細胞の迅速な死を引き起こす（例えば、Ｓｔｒａａｔｈｏｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０５（１１）：４２４７（２００５）を参照されたい）、（２）トランケートされたヒトＥＧＦＲ（「ｔＥＧＦＲ」）は、細胞外Ｎ末端リガンド結合ドメイン及び細胞内受容体型チロシンキナーゼ活性がないが、Ｉ型膜貫通細胞表面局在及び医薬品グレードの抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂ、セツキシマブに対する結合エピトープを保持するポリペプチドである（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１８（５）４２５５（２０１１）を参照されたい）、（３）ＲＱＲ８はＴ細胞に対するコンパクトな組み合わされたマーカー及び安全スイッチであり、トランケートされたＣＤ８共受容体ストーク上に提示されたＣＤ３４（抗体ＱＢＥｎｄ１０によって認識されるマーカー）及びＣＤ２０抗原（細胞外ループミモトープ）の両方由来の標的エピトープを組み合わせる。ＲＱＲ８は医薬品グレードの抗ＣＤ２０ｍＡｂ、リツキシマブが結合する（Ｐｈｉｌｉｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １２４（８）：１２５５（２０１１）を参照されたい）、（４）Ｍｙｃタグを付けたＴＣＲは、タグ特異的ｍＡｂが結合する、ヒトｃ−Ｍｙｃタンパク質の１０アミノ酸タグを組み込む（Ｋｉｅｂａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  １０５（２）：６２３（２００８）を参照されたい）。
【０１９２】
ｔＥＧＦＲ、ＲＱＲ８またはｍｙｃ−タグへのそれぞれのｍＡｂの結合は、補体依存性または抗体依存性細胞傷害に対する標的及び形質導入細胞の排除をもたらす。安全スイッチ分子を、ＴＣＲβ及びＴＣＲαコード配列の上流に、且つこれらのコード配列と作動的に結合させて、ＴＣＲ２  ＬＶコンストラクトにクローニングした。協調的遺伝子発現を確実にするように、ＴＣＲβとＴＣＲα配列をブタテッショウウイルス由来のＰ２Ａ要素によって分離させた。ｉＣａｓｐ９−ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ、ｔＥＧＦＲ−ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ、ＲＱＲ８−ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲまたはＭｙｃタグを付けたＨＡ−１Ｈ−ＴＣＲで形質導入されたＴ細胞は、すべて、ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ発現及びＨＡ−１ＨＴＣＲ単独で形質導入されたＴ細胞による認識と類似したＨＡ−１Ｈ＋標的細胞認識を示した（図１４）。
【０１９３】
安全スイッチがＴ細胞を排除する能力を試験するために、最適濃度（図１６）のそれぞれの同族薬物（ｉＣａｓｐ９／ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲに対してダイマー化剤ＡＰ１９０３；補体＋適切なｍＡｂ（ｔＥＧＦＲ−ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲに対して抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂ；ＲＱＲ８−ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲに対して抗ＣＤ２０  ｍＡｂプラス；及びすべての他のコンストラクト中のＭｙｃタグを付けたＨＡ−１Ｈ−ＴＣＲに対して抗ＭｙｃタグｍＡｂ）とともに、形質導入されたＴ細胞を２４時間インキュベートした。安全スイッチが形質導入されたＴ細胞のすべては、それらのそれぞれの誘発剤に感受性が高かった（図１６。図１５も参照されたい）。しかし、ＡＰ１９０３を伴うｉＣａｓｐ９は、形質導入されたＴ細胞の最も迅速且つ完全な排除を一貫してもたらし、これをさらなる評価のために選択した。
【０１９４】
実施例５
導入遺伝子コンストラクトの設計及び選択
次に、ｉＣａｓｐ９及びＣＤ８αβＭ１共受容体の両方を組み込んでいるＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ導入遺伝子を機能性について解析した。形質導入されたＴ細胞の選択及び追跡を支援するために、２つのマーカー構成を設計した。１つでは、ＲＱＲポリペプチドの最小ＣＤ３４エピトープ（「Ｑ」）をＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲのα鎖に入れ子式に入れた。もう１つでは、ＲＱＲポリペプチドを完全長の機能的ＣＤ８αβＭ１共受容体のβ鎖に組み込んだ。次いで、５つのＬＶ導入遺伝子コンストラクトを作出して、ＣＤ８＋Ｔ細胞を形質導入し、（１）ｉＣａｓｐ９−ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２、（２）ＨＡ−１Ｈ−ＴＣＲ２−ＣＤ８共受容体、（３）ｉＣａｓｐ９−ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２−ＣＤ８、（４）ｉＣａｓｐ９−ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２−ＲＱＲ−ＣＤ８、及び（５）ｉＣａｓｐ９−ＣＤ３４−ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２−ＣＤ８を比較した（図１７及び１８を参照されたい）。
【０１９５】
すべてのコンストラクトは、特異的に、サイトカインを分泌し、ＨＡ−１Ｈ＋を死滅させるが、ＨＡ−１Ｈ−ＡＭＬ細胞または線維芽細胞は死滅させず、十分に動作しなかったｉＣａｓｐ９−ＣＤ３４−ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２−ＣＤ８コンストラクト（ＴＣＲα鎖にはめ込まれたＣＤ３４エピトープを有する）を除いては、類似した機能を有する（図１９〜２６を参照されたい）、Ｔ細胞を生成した。すべての所望の要素（免疫磁気選択の能力を含む；図２７〜２９を参照されたい）を含み、あまり複雑でないコンストラクトと同様に機能したｉＣａｓｐ９−ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ２−ＲＱＲ−ＣＤ８導入遺伝子をさらなる研究のために選択した。このコンストラクトの模式図を図３０に示し、コンストラクトのヌクレオチド配列を配列番号８５に示す。
【０１９６】
実施例６
ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  Ｔ細胞の臨床規模の生成及び試験
Ｔ細胞免疫療法生成物の細胞組成物は、養子Ｔ細胞移入後に、抗原特異的Ｔ細胞の持続性及び機能に対して重要な下流効果を有し得る（例えば、Ｓｏｍｍｅｒｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ３０（２）：４９２（２０１６）を参照されたい。Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １１７（６）：１８８８（２０１１）及びＨｉｎｒｉｃｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  １０６＊４１）：１７４６９（２００９））も参照されたい。一般に、ＴＮ、Ｔメモリー幹細胞（ＴＳＣＭ）及びセントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）を含めた「より若い」Ｔ細胞サブセットに由来する抗原特異的Ｔ細胞の注入は、有利であると思われる。ＨＣＴ後のＴ細胞免疫療法においては、ドナーＴ細胞のネイティブＴＣＲによって媒介されるＧＶＨＤの可能性を考慮することも重要である。ＴＮはマウスモデルにおいて重度のＧＶＨＤを引き起こし、ＰＢＳＣ移植片由来のＣＤ４５ＲＡ＋ＴＮの枯渇は、ヒトにおいて、重度及び／または慢性のＧＶＨＤの危険性を低下させる（例えば、Ｂｌｅａｋｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２５（７）２６７７（２０１５）を参照されたい）。ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞が腫瘍部位においてクローン性増殖を増強すること、及び活性化誘導細胞死を防止することによって、抗腫瘍ＣＴＬ応答を増強することができるので、同じ抗原に特異的なＣＤ４＋細胞とＣＤ８＋細胞の両方を含むことも望ましい（例えば、Ｇｉｕｎｔｏｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．８（３）：９２２（２００２）を参照されたい。Ｋｅｎｎｅｄｙ  ａｎｄ  Ｃｅｌｉｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７７（５）２８６２（２００６）も参照されたい）。したがって、Ｔ細胞生成物（１〜２×１０９ＰＢＳＣ／ＰＢＭＣ）から最初にＣＤ４５ＲＡ＋ＴＮ細胞を枯渇させて重篤なＧＶＨＤの危険性を最小限にし、ＣＤ１４＋単球を枯渇させてＬＶ形質導入効率を最適化してから、ＣＤ８＋及びＣＤ４＋富化画分を分離して、一定のＣＤ４：ＣＤ８組成物を確実にし（約３×１０６細胞の各細胞型）、刺激し（ＣＤ３／ＣＤ２８ミクロビーズのビーズ）、ｉＣａｓｐ９−ＨＡ１  ＴＣＲ２−ＲＱＲ−ＣＤ８  ＬＶでＴ細胞を形質導入した。
【０１９７】
形質導入細胞を４〜５日後にＨＡ−１Ｈ／ＨＬＡ−Ａ２マルチマー及びＣＤ３４  ｍＡｂを使用してフローソートし、ＯＫＴ３細胞、ＰＢＭＣ、ＨＡ−１＋ＬＣＬ及びＩＬ−２を含む、ＲＥＰ（急速増殖プロトコール）を使用するＧ−Ｒｅｘフラスコ中で培養した。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲメモリーＴ細胞は効率的に増幅し、平均して２０００倍増殖した（図３２Ａ；図３１の一番左のパネルも参照されたい）。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋形質導入Ｔ細胞を収集し、混合し（１６〜２０日目で、合計３〜６×１０９細胞）、次いで、ＣＤ３４についての選択を介して富化して、≧１．５×１０９細胞の富化集団を生成した。次いで、放出アッセイを行って、純度（＞７５％）、生存率、機能、特異性、ウイルスの有無及び無菌性について試験した。ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲの発現を保持していた最終的なＴ細胞生成物（図３２Ｂ）は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７及びＣＤ２７の可変的発現を伴う、ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＤ２８＋表現型を主として有しており（図３２Ｃ）、ＰＤ−１などの枯渇マーカーを発現しない細胞を含んでいた（図３２Ｄ、３２Ｅ）。
【０１９８】
増殖したＣＤ８＋及びＣＤ４＋ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  Ｔ細胞は、ＨＡ−１Ｈでパルスした細胞（図３３Ａ）またはＨＡ−１Ｈ＋白血病細胞系統（図３３Ｂ）の刺激に応じて、特異的に死滅させる、及びサイトカインを分泌する能力を保持しており、多くのＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  ＣＤ８＋及びＣＤ４＋細胞は複数のサイトカインを分泌した（図３３Ｃ；図３１の中央及び右側のパネルも参照されたい）。さらに、抗ＣＤ３４免疫磁気ビーズを使用して細胞を富化することができ（図３４Ａ）、ＡＰ１９０３ダイマー化薬への暴露によって細胞は効率的に排除された（図３４Ｂ）。最後に、ＴＣＲイムノシーケシング（Ａｄａｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、細胞生成物におけるＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞中のネイティブＴＣＲを評価し、多様なポリクローナル集団が観察された（データ非表示）。さらに、生成物は、最近養子Ｔ細胞移入後の持続性及び増殖の可能性と関連付けられた発見（Ｃｈａｐｕｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２（８）（２０１７）である、多数の非常に低頻度のＴＣＲを含んでいた。
【０１９９】
実施例７
ＨＡ−１ＨＴ細胞療法生成物を使用する臨床研究
実施例５に記載されているＨＡ−１Ｈ細胞療法生成物（ｐＲＲＬＳＩＮ  ｉＣ９−ＨＡ−１Ｈ−ＴＣＲ２−ＲＱＲ−ＣＤ８（今後は「ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  ＬＶ」と省略する）で形質導入されたＣＤ８＋及びＣＤ４＋メモリーＴ細胞）を使用して、実行可能性及び安全性研究を行う。患者試料は、再発性白血病（ＡＭＬ、ＡＬＬ、別の急性白血病またはＣＭＬ）を有する小児、青年及び成人を含む。特に、０〜７０歳の患者をそれぞれおよそ１２人の対象の２つの年齢群に登録し、１つの群は≧１６歳の年齢であり、１つの群は＜１６歳の年齢の群である。すべての患者はＨＬＡ−Ａ＊０２０１を発現し、ＨＡ−１（Ｈ）遺伝子型（ＲＳ＿１８０１２８４：Ａ／Ｇ、Ａ／Ａ）を有する。患者は、既定の基準によって適切にＨＬＡ適合された、ＨＣＴに対する成人ドナーも有し、ＡＭＬ、ＡＬＬ、別のタイプの急性白血病または慢性骨髄性白血病について同種ＨＣＴを現在受けているか、以前に受けていた。
【０２００】
再発の疑いの後に骨髄試料を得る。次いで、患者は、一般に、Ｔ細胞生成物を注入する前にリンパ球枯渇化学療（フルダラビン）を受ける。その後、以下の３つの判断基準を満たす場合に、単回用量のＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  ＬＶ−Ｔ細胞（約１：１のＣＤ４＋：ＣＤ８＋ＴＭ）を患者に投与する：（１）ＨＣＴ後に再発性または難治性疾患のエビデンスがある、（２）ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  Ｔ細胞が生成されている、及び（３）リンパ球枯渇化学療法が施されている（示される場合）。表２に示す投与計画に従って、ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  ＬＶ−Ｔ細胞を（重力またはシリンジポンプを介して中心静脈カテーテルを通して許容される程度に迅速に）注入によって投与する。
【表２】
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【０２０１】
若いコホートの対象の治療より前に、少なくとも１〜２人の対象≧１６歳を治療する。各年齢群（≧１６及び＜１６歳）で、用量レベル１（３×１０６ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  Ｔ細胞／ｋｇ）から始まるＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  Ｔ細胞の５用量レベルのうちの１つで、３人以上の患者のコホートにおいて患者を治療する。各年齢群内の連続した対象への治験薬の投与の間の２８日間を観察する。Ｔ細胞生成物の注入後４、１８及び３２日目に骨髄試料を得る。本研究の他の態様は、以下をモニターすることを含む：末梢血中での移行したＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  Ｔ細胞のインビボ持続性、ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  Ｔ細胞が骨髄に遊走する能力、養子Ｔ細胞移入の前及び可能であれば後のＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  Ｔ細胞の機能、ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  Ｔ細胞の注入に続いて白血病の負荷の低減があるかどうか、ＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  Ｔ細胞の注入に続いて受容者の造血キメラ現象の低減があるかどうか、及びＨＡ−１Ｈ  ＴＣＲ  Ｔ細胞の注入に続いて移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の徴候または症状の出現または再燃があるかどうか。
【０２０２】
本出願が優先権を主張する、２０１６年９月２３日に出願された米国特許仮出願第６２／３９９，２９１号は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２０３】
上記の様々な実施形態を組み合わせて、さらなる実施形態を提供することができる。本明細書で言及される及び／または出願データシートに収載される米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、海外特許、海外特許出願及び非特許文献のすべては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。実施形態の態様は、必要であれば、様々な特許、出願及び刊行物の概念を採用するように修正して、さらに別の実施形態を提供することができる。
【０２０４】
上記の詳細な説明を考慮して、これら及び他の変更を実施形態に行うことができる。一般に、以下の特許請求の範囲では、使用される用語は、本明細書及び特許請求の範囲に開示される特定の実施形態に特許請求の範囲を制限すると解釈されるべきではなく、すべてのあり得る実施形態を、そのような特許請求の範囲が権利を与えられる全範囲の均等物とともに含むと解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は本開示によって制限されない。
【図１】
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【図２Ａ】
2019531074.tif 000013
【図２Ｂ】
2019531074.tif 000014
【図２Ｃ】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
2019531074.tif 000018
【図５Ｂ】
2019531074.tif 000019
【図５Ｃ】
2019531074.tif 000020
【図６−１】
2019531074.tif 000021
【図６−２】
2019531074.tif 000022
【図７】
2019531074.tif 000023
【図８−１】
2019531074.tif 000024
【図８−２】
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【図９Ａ】
2019531074.tif 000026
【図９Ｂ】
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【図１０】
2019531074.tif 000028
【図１１Ａ】
2019531074.tif 000029
【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２Ａ】
2019531074.tif 000032
【図１２Ｂ】
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【図１３】
2019531074.tif 000034
【図１４】
2019531074.tif 000035
【図１５】
2019531074.tif 000036
【図１６】
2019531074.tif 000037
【図１７】
2019531074.tif 000038
【図１８】
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【図１９】
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【図２０Ａ】
2019531074.tif 000041
【図２０Ｂ】
2019531074.tif 000042
【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
2019531074.tif 000051
【図２９】
2019531074.tif 000052
【図３０】
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【図３１】
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【図３２Ａ】
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【図３２Ｂ】
2019531074.tif 000056
【図３２Ｃ】
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【図３２Ｄ】
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【図３２Ｅ】
2019531074.tif 000059
【図３３−１】
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【図３３−２】
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【図３４Ａ】
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【図３４Ｂ】
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【図３５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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