(57)【要約】  本発明は、防腐剤に耐える能力を有する乳酸菌株に関する。乳酸菌株はさらに口腔病原体の増殖に拮抗する能力を有する。特に、これらの特徴を有する乳酸菌は、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属、より詳細にはＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ種に属する。したがって、本発明の菌株は、パーソナルケアの分野における組成物および製品、特に口腔ケア、ならびに医薬品に有用である。【選択図】図１
2019533655.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、以下からなる群、
ａ）トリクロサン；
ｂ）メントール、ユーカリプトール、チモールおよびサリチル酸メチルからなる群から選択される少なくとも個々の成分を含む精油；および
ｃ）メントール、ユーカリプトール、チモールおよびサリチル酸メチルからなる群から選択される個々の成分；から選択される少なくとも一つの防腐剤に耐える能力を有し、
前記防腐剤は、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの阻害を観察する濃度である、当該Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株について観察されたディスク拡散アッセイによって決定された阻害ハロが、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの阻害ハロよりも小さい場合に、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、防腐剤に耐える能力を有すると考えられ、かつ
前記Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株および前記防腐剤は、別々、逐次、同時投与用、または混合して処方される、少なくとも一つの防腐剤と組み合わせたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株の使用。
【請求項２】
前記Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓが  Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ  ＤＳＭ２０７０９である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株がＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ株である、請求項１〜２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４】
前記Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ株が、受託番号ＣＥＣＴ  ８６３３の下でスペインタイプカルチャーコレクションに寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ株である、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は以下からなる群、トリクロサン；メントール、ユーカリプトール、チモールおよびサリチル酸メチルからなる群から選択される少なくとも個々の成分を含む精油；メントール、ユーカリトール、チモールおよびサリチル酸メチルからなる群から選択される個々の成分；およびビスグアジン、からなる群から選択される少なくとも一つの防腐剤との組み合わせである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、トリクロサン；および、メントール、ユーカリプトール、チモールおよびサリチル酸メチルからなる群から選択される少なくとも個々の成分を含む精油、からなる群から選択される少なくとも一つの防腐剤との組み合わせである、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記防腐剤は、許容される賦形剤および／または担体と一緒に、パーソナルケア製品の形態で製剤化され、かつ前記Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、許容される賦形剤および／または担体と一緒に、パーソナルケア製品または医薬品の形態で製剤化される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記パーソナルケア製品は、口腔ケア製品である、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
前記口腔ケア製品が練り歯磨き、経口ゲル、経口スプレー、マウスリンスまたは経口分散錠剤である、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記防腐剤とＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株が別々（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株と防腐剤の投与の時間間隔を待機）に投与され、かつ時間間隔が１時間未満である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
治療される被験者が３０〜６０秒間防腐剤を含むマウスウォッシュで自分の口をうがいするように指示され、その後、マウスウォッシュが吐き出され、前記Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株を含有する経口錠剤が口に導入され、ゆっくりと溶かす、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
口腔内疾患の予防および／または治療のための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
前記口腔内疾患が口腔病原体によって引き起こされる、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
スペインタイプカルチャーコレクションに受託番号ＣＥＣＴ  ８６３３で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ種に属する株。
【請求項１５】
スペインタイプカルチャーコレクションに受託番号ＣＥＣＴ  ８６３３で寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉの突然変異体を得る方法であって、出発物質として寄託されたＣＥＣＴ８６３３株を使用すること、および突然変異誘発を適用することを含み、かつ、前記取得した突然変異体は、少なくとも前記寄託株の防腐剤に耐える能力を保持または増強する、方法。
【請求項１６】
以下の工程、
ｉ）乳酸菌株候補のプールから乳酸菌の個体の防腐剤に耐える能力をアッセイする工程と、
ｉｉ）Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓのよりも高い防腐剤に耐える能力を有する乳酸菌株を選択および単離する工程、を含む乳酸菌株のスクリーニングおよび単離方法。
【請求項１７】
前記乳酸菌株がＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株である請求項１６に記載のスクリーニング方法。
【請求項１８】
前記乳酸菌株がＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ株である、請求項１７に記載のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、パーソナルケア、医薬および微生物学の分野に関する。具体的には、本発明は、防腐剤、より具体的には口腔ケア用の防腐剤との組み合わせに特に有用な乳酸菌株を含む。
【背景技術】
【０００２】
健康な口はユニークで非常に貴重な資産であり、それでも一般的な健康と生活の質の統合された要素である。しかしながら、口腔の健康は、虫歯や歯周病を中心としたさまざまな形態の口腔疾患、そして時に口腔癌、ＨＩＶ／ＡＩＤＳの病変、粘膜および唾液腺疾患、口腔顔面の痛みや裂け目によって日常的に影響を受ける。これらの口腔疾患は集合的に生命に関わる口腔機能、自尊心、生活の質および全体的な健康および幸福に大きな影響を及ぼす、人類における最も一般的な慢性疾患である。口腔疾患は世界中で流行しており、公衆衛生上の大きな問題であることが現在認識されている。世界の人口の推定９０％が、人生のある時点で何らかの形の口腔疾患に罹患する。［Ｊｉｎ  ＬＪ  ｅｔ  ａｌ．“Ｇｌｏｂａｌ  ｂｕｒｄｅｎ  ｏｆ  ｏｒａｌ  ｄｉｓｅａｓｅｓ：ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｐｔｓ，ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｐｌａｙ  ｗｉｔｈ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｈｅａｌｔｈ”Ｏｒａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ２０１６］。
【０００３】
歯周病は極めて一般的であり、１つ以上の歯周組織に影響を及ぼすいくつかの状態を包含する。多くの異なる疾患が歯を支える構造に影響を及ぼすが、歯垢誘発性の炎症性病変が歯周組織の大部分を占めていて
歯肉炎または歯周炎に分類される。
【０００４】
歯肉炎は西欧の人口の約７５％が罹患する人類に影響を与える最も一般的な慢性炎症性疾患の一つである。歯肉炎は充血、すなわち歯肉の腫れと頻繁な出血で特徴付けられ、歯−歯肉環境における細菌の蓄積によって引き起こされる。この慢性炎症が歯肉に限定され得るか、または歯の歯周組織に破壊がある場合歯周炎に発展する場合がある。したがって、歯肉炎は常に歯周炎に先行するが、一部の個体では歯肉炎が歯周炎に進行しない場合もある。
【０００５】
したがって、歯周病は、歯を囲む軟組織の細菌性バイオフィルム誘発性炎症から始まる。細菌性バイオフィルムは、歯垢としても知られており、さまざまな色合いの白で表示され、歯と縁を接する歯肉縁に通常見られる食物破片と結合する。バイオフィルムは一般的に歯の間にも見られ、そこではその除去にはデンタルフロスおよび隣接歯間ブラシを使用することによる追加の努力が必要である。臨床的に明らかな場合、細菌性バイオフィルムが主な原因と考えられ、蓄積は典型的には炎症の重症度に比例する。バイオフィルム中の細菌の量は歯周病の重症度と相関する。破壊的な歯周病と相関するある種の細菌は高リスクと考えられ、特にＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ種、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｄｅｎｔｉｃｏｌａ，Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ，Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ  ｆｏｒｓｙｔｈｉａが含まれる  ［Ｈａｆｆａｊｅｅ，ＡＤ  ｅｔ  ａｌ．“Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｅｔｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｇｅｎｔｓ  ｏｆ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ”Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌｏｇｙ  ２０００．１９９４，ｖｏｌ．５，ｐｐ．７８-１１］．
【０００６】
初期の歯周治療は典型的にはバイオフィルムの物理的除去を含み、そして炎症の減少および全体的な歯周状態の改善をもたらす。歯科医および歯周病専門医は、外科的創面切除、局所化学療法剤の使用、および処方全身性抗生物質を含む追加の治療法を勧めてもよい。深刻な歯周病を疑う医師にとって、特に経験的な歯周病診断に基づいている場合は、抗菌性の口腔洗浄剤を推奨することがしばしば治療上の選択肢となる。この戦略は、歯科医が患者を評価し、診断を確立し、そしてさらなる治療を推奨することができるまで、歯周病の一時的な管理を可能にする［Ｌａｕｄｅｎｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．“Ｃｏｍｍｏｎ  Ｄｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ”Ｍｅｄ  Ｃｌｉｎ  Ｎ  Ａｍ  ２０１４，ｖｏｌ．９８，ｐｐ．１２３９-１２６０］。
【０００７】
細菌性歯周炎に対する一般的な消毒口腔洗浄剤は、クロルヘキシジングルコン酸塩０．１２％である。このすすぎを１日２回、合計２週間使用するように処方するのが一般的である。グルコン酸クロルヘキシジンは歯垢病原体に対して効果的であると確立されているが、それは唯一の治療としてめったに推奨されず、典型的には細菌性歯垢および結石デブリドマンの外科的および非外科的治療の補助として用いられる。さらに、患者は潜在的な副作用について知らされる必要がある。クロルヘキシジンは口腔粘膜を刺激し損傷する可能性があり、歯や他の口腔表面の変色および染色を引き起こし、結石の形成を増加させ、そして味覚を変化させる。口腔刺激および局所アレルギー型症状も報告されている。さらに、口内炎、歯肉炎および潰瘍を含む粘膜の副作用が報告されている。結果として、長期間のクロルヘキシジンの使用は推奨されない［Ｆｌoｔｒａ，ｌ．ｅｔ  ａｌ．“Ｓｉｄｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｃｈｌｏｒｈｅｘｉｄｉｎｅ  ｍｏｕｔｈ  ｗａｓｈｅｓ”．Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｄｅｎｔ  Ｒｅｓ  １９７１，ｖｏｌ．７３，ｐ．．１１９−１２５］。
【０００８】
マウスウォッシュに使用される他の一般的な防腐剤は、トリクロサン（［５−クロロ−２−（２，４−ジクロロフェノキシ）フェノール）である。トリクロサンは北米、ヨーロッパ、アジア全体で広く使用されている広域スペクトルの抗菌活性を有する非イオン性ハロゲン化フェノールである。トリクロサンは、多くの種類の細菌や特定の種類の真菌に対して有効であり、細菌の増殖を予防し、および／または細菌の細胞壁の透過、ＲＮＡ合成と巨大分子の生産を含む複数の細胞質や細胞膜部位を標的とすることが含まれる機構によって最終的には細胞死をもたらす。しかし、トリクロサンは、化合物が人間の健康と環境に有害であるかもしれないという懸念が現れた後、ますます精査されている。トリクロサンの使用を取り巻く潜在的な健康上の問題には、抗生物質耐性、皮膚刺激、内分泌かく乱、アレルギーの発生率の増加、および−製品による発がん性物質の形成が含まれる［Ｄａｎｎ  ＡＢ，ｅｔ  ａｌ．“Ｔｒｉｃｌｏｓａｎ：ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ，ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ”Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ２０１１，ｖｏｌ．３１，ｐｐ．２８５−３１１］。
【０００９】
合成化合物を含むマウスウォッシュに代わるものとして、いくつかの製品は精油のような「天然の」化合物で処方される。例えば、Ｌｉｓｔｅｒｉｎｅ（登録商標）は精油から抽出される化合物、すなわちメントール、ユーカリプトール、チモールおよびサリチル酸メチルの混合物である。Ｌｉｓｔｅｒｉｎｅ（登録商標）は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｕｔａｎｓ，Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ，およびＥｉｋｅｎｅｌｌａ  ｃｏｒｒｏｄｅｎ等の有害細菌、酵母Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓに有効である［Ｖｌａｃｈｏｊａｎｎｉｓ  ｃ，ｅｔ  ａｌ．“Ａ  Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｉｓｔｅｒｉｎｅ（登録商標），Ｉｔｓ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ａｎｄ  ｏｆ  Ｍｉｘｔｕｒｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ”Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１５，ｖｏｌ．２９，ｐｐ．１５９０−１５９４］。精油を用いたマウスウォッシュは、クロルヘキシジン含有マウスウォッシュよりも安全で、不快な副作用（歯の汚れや歯石の蓄積など）が少ないと見なされている。しかしながら、短期間の治療における有効性が低いことも報告されている。さらに、いくつかの精油成分は細胞傷害効果を与える可能性があることから、これらの精油成分を含有する製品は、特に曝露期間や含まれている任意の精油成分の濃度に注意を払いながら、包括的な毒性試験によって裏付けられる必要があることを示唆することは理にかなっている［Ｖｌａｃｈｏｊａｎｎｉｓ  ｃ，ｅｔ  ａｌ．“Ｌｉｓｔｅｒｉｎｅ（登録商標）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ：Ａｎ  ｕｐｄａｔｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ”Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｈｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１６，ｖｏｌ．３０，ｐｐ．３６７−３７３］．
【００１０】
防腐剤の最も関連性のある望ましくない作用の一つは、それらの非選択的な防腐作用の結果として口腔微生物叢に引き起こされる変化に関連している。選択的に毒性があり特定の部位で作用する抗生物質とは異なり、細菌の細胞内では、ほとんどの防腐剤は、特に高濃度では、防腐剤の長期使用が明確な細菌細胞標的に作用してバイオフィルムを除去および／または疾患関連−細菌を死滅させ得る標的を持っていないだけでなく、常在口腔微生物叢の天然の有益な特性を破壊する可能性がある。これは、虫歯または歯周病の定着の前触れとなり得るＡ微生物の不均衡の問題、すなわち口腔における細菌叢構成異常（細菌異常増殖症とも呼ばれる）の問題をもたらし得る。この細菌叢構成異常の仮説は、歯周の健康から疾患への移行が歯周ポケットの細菌群集における豊富度の小さい種の個体量の変化を反映しているとことを支持する。微生物群集の構成の変化は、破壊的な炎症および骨量減少を媒介するのに十分な宿主−微生物クロストークの変化をもたらす。実際には、歯周病の病因はアクティブ歯周病が発生するかどうかを決定する要因の三つのグループに基づいていると考えられる：感受性宿主、病原性種の存在、およびいわゆる「善玉菌」の不在。偏性共生体と病原性共生体の間の比例関係の結果として生じる破壊は炎症反応を促進し、その後に骨破壊をもたらす破壊的カスケードを惹き起こす［Ｃａｓｔａｌｏｎｇａ  ｍ，ｅｔ  ａｌ．“Ｔｈｅ  ｏｒａｌ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｃａｒｉｅｓ”Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２１４，ｖｏｌ．１２，ｐｐ．２２−３８］．
【００１１】
したがって、口腔洗浄剤の副作用を軽減するか、または効果を高めることができる代替品または改良された製品を探すことが望まれており、そのため、特に長期間の治療では、低用量が必要である。
【００１２】
代替予防ツールとして、プロバイオティクスの使用が提案されている。プロバイオティクスは、歯周治療における研究の有望な分野であり得る。プロバイオティクスは、「適切な量で投与されると宿主に健康上の利益を与える生きた微生物」として定義される。プロバイオティクスは有益な細菌を再生させることができ、病原菌の死滅、感染との闘いを助長し得ると考えられている。経口投与されたプロバイオティクスは、有害な微生物叢の増殖を防ぐことによって、または口腔内の粘膜免疫を調節することによって、口腔の健康に有益であり得る。プロバイオティクス種は主にＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓおよびＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍに属する。
【００１３】
市場で知られている経口プロバイオティクスはＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ  Ｐｒｏｄｅｎｔｉｓである。最近の研究では、錠剤は、プロバイオティック菌株Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ  を含有する経口治療は、慢性歯周炎をもつ患者の大部分が有意な炎症誘発性サイトカイン応答の減少、臨床パラメータの改善を誘導することを示す［Ｓｚｋａｒａｄｋｉｅｗｉｃｚ，ａ．ｋ．ｅｔ  ａｌ．“Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｏｒａｌ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ  ａ  Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  Ｓｔｒａｉｎ  ｏｆ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ  ｏｎ  Ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓ“．Ａｒｃｈ  ｌｍｍｕｎｏｌ  ｔｈｅｒ  Ｅｘｐ（Ｗａｒｓｚ）２０１４，ｖｏｌ．６２，ｐ．４９５-５００］。別の研究は、慢性歯周炎患者におけるスケーリングおよびルートプレーニング（ＳＲＰ）の補助としてのＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ含有プロバイオティックトローチ剤の効果を評価することを目的としていた。プロバイオティクスで処置したＳＲＰ群ではＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの減少が観察されたが、他の研究された病原性細菌では変化が見られなかった［Ｔｅｕｇｈｅｌｓ，Ｗ．ｅｔ  ａｌ．“Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓ：ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｓｔｕｄｙ”Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌｏｇｙ  ２０１３，ｖｏｌ．４０  ｐ．１０２５-３５］。しかし、並行研究では、Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ（ＡＴＣＣ５５７３０および  ＡＴＣＣ  ＰＴＡ５２８９）を含むプロバイオティクスロゼンジの日常摂取は、実験的歯肉炎の間に歯垢の蓄積、炎症状態またはバイオフィルムの微生物構成に有意な影響を与えていないようだったので口腔微生物叢に及ぼすＬ．ｒｅｕｔｅｒｉの効果は疑問が残る［Ｈａｌｌｓｔｒｏｅｍ，ｈ．ｅｔ  ａｌ．“Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  ｌｏｚｅｎｇｅｓ  ｏｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｏｒａｌ  ｂｉｏｆｉｌｍ  ｄｕｒｉｎｇ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｇｉｎｇｉｖｉｔｉｓ”．Ａｃｔａ  Ｏｄｏｎｔｏｌｏｇｉｃａ  Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉｃａ  ２０１３，ｖｏｌ．７１，ｐ．８２８-８３３］。
【００１４】
別の例は、健康な若年成人の歯垢量、歯肉炎、口腔微生物叢へのＬ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＧＧおよびＢ．ａｎｉｍａｌｉｓ亜種ｌａｃｔｉｓ  ＢＢ−１２を併用した経口投与ロゼンジの影響を記載した最近の研究である。プロバイオティックロゼンジはプラークと歯肉炎指数の両方を減少させたが、どちらのグループの唾液の微生物組成にもプロバイオティック誘発変化は見られなかった。結論は、プロバイオティクスロゼンジは、経口微生物叢に影響を与えずに、歯肉の炎症の点で歯の状態を改善すると言えることである［Ｔｏｉｖｉａｉｎｅｎ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ｏｒａｌｌｙ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｌｏｚｅｎｇｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＧＧ／Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｉｍａｌｉｓ  ｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓ  ＢＢ−１２  ｏｎ  ｔｈｅ  ｎｕｍｂｅｒ  ｏｆ  ｓａｌｉｖａｒｙ  ｍｕｔａｎｓ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ，ａｍｏｕｎｔ  ｏｆ  ｐｌａｑｕｅ，ｇｉｎｇｉｖａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｏｒａｌ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ａｄｕｌｔｓ”．Ｃｌｉｎ  Ｏｒａｌ  ｌｎｖｅｓｔｉｇ  ２０１５，ｖｏｌ．１９，ｐ．７７-８３］。
【００１５】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ  ＣＤ２などの他のプロバイオティクスは、口腔の健康増進および炎症性骨量減少の抑制に有用な可能性がある。しかしながら、臨床的有効性は未だ明らかにされていない［Ｍａｅｋａｗａ，ｔ．ｅｔ  ａｌ．“Ｔｏｐｉｃａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ  ＣＤ２”ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｂｏｎｅ  ｌｏｓｓ”Ｊ  Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔ  Ｒｅｓ  ２１４，ｖｏｌ．４４，ｐ．７８５-７９１］。
【００１６】
Ｎａｄｋｅｒｎｙらは、２０１５年に、０．２％クロルヘキシジンと生理食塩水を用いたプロバイオティックマウスウォッシュの歯垢除去および抗炎症の可能性を評価、および比較する臨床試験を発表した。プロバイオティックマウスウォッシュ（Ｓｐｏｒｌａｃ  Ｐｌｕｓ（登録商標））は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｂｏｕｌａｒｄｉｒを含有するプロバイオティック製剤を、薬局で市販されている１０ｍｌの蒸留水と混合することによって調製する。歯肉炎指数と口腔衛生指数に対するプロバイオティクスとクロルヘキシジンンの効果は類似していた［Ｎａｄｋｅｒｎｙ  ＰＶ，ｅｔ  ａｌ．“Ａ  ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  ａｎｄ  ｃｈｌｏｒｈｅｘｉｄｉｎｅ  ｍｏｕｔｈｒｉｎｓｅｓ  ｏｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ  ｏｆ  ｇｉｎｇｉｖｉｔｉｓ：ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｙ”Ｊ  ｌｎｄｉａｎ  ｓｏｃ  Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ  ２０１５  ｖｏｌ  １６，ｐｐ．６３３−６３９］．
【００１７】
最近の臨床試験は、慢性歯周炎および口臭を有する患者の治療にスケーリングおよびルートプレーニング（ＳＲＰ）の補助としてプロバイオティクスの局所使用を検討した［Ｐｅｎａｌａ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．“Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｌｏｃａｌ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ａｓ  ａｎ  ａｄｊｕｎｃｔ  ｔｏ  ｓｃａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｒｏｏｔ  ｐｌａｎｉｎｇ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｈａｌｉｔｏｓｉｓ：Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ”Ｊ  Ｒｅｓ  Ｐｈａｒｍ  Ｐｒａｃｔ．２０１６  Ｖｏｌ．５（２），ｐｐ．８６-９３］。被験者を試験群と対照群に無作為に割り当てた。試験群（ＳＲＰ  ＋プロバイオティクス）はプロバイオティクスとプロバイオティックマウスウォッシュの歯肉下送達を受け、対照群（ＳＲＰ  ＋プラセボ）は１５日間プラセボとプラセボマウスウォッシュの歯肉下送達を受けた。プロバイオティックは、２つのプロバイオティック生物、すなわち１カプセル当たりＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ（２Ｅ＋０９  ＣＦＵ）およびＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ（２Ｅ＋０９  ＣＦＵ）の組み合わせで構成された。患者にそれぞれ２８個のカプセルを与え、１０ｍｌの蒸留水中にカプセルを空にするように依頼し、そして１４日間、１日に２回、１分間すすぐように依頼した。すべての臨床的および微生物学的パラメータは、研究の終わりに両方の群において減少した、しかしながら、ＰＤ減少（ＰＤＲ）および臨床的アタッチメントゲイン（ＣＡＧ）の群間比較は、試験群の中程度のポケットにおけるＰＤＲを除いて統計的有意性を示さなかった。したがって、プロバイオティクス摂取の臨床効果は疑問の余地がある。
【００１８】
対照的に、この分野での概説［Ｙａｎｉｎｅ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．“Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎ  ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ  ｄｉｓｅａｓｅｓ：ａ  ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｒｅｖｉｅｗ”．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｏｒａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ  ２０１３，ｖｏｌ．１７，ｐ．１６２７−３４］は、歯周病の予防と治療に対するプロバイオティクスの有効性は疑問であると結論する。一次的な結果については、ポケットの深さの調査を調べることがプロバイオティクスの臨床上の有益な効果とはならないであろう。二次的な結果については、プロバイオティクスがプラーク指数および歯肉炎に多少有益であることが示された。同様に、より最近のメタアナリシスは、歯肉炎の指標はプロバイオティック療法によって積極的に影響を受ける可能性があるが、歯周病を管理する（すなわち予防または治療する）ためのプロバイオティクスの使用を支持する証拠は現在不十分であると結論づけている。したがって、特にビヒクルの効果またはプロバイオティック治療の用量を考慮に入れると、この方向へのさらなる研究が望ましいかもしれない。［Ｇｒｕｎｅｒ，ｄ．ｅｔ  ａｌ．“Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ｆｏｒ  ｍａｎａｇｉｎｇ  ｃａｒｉｅｓ  ａｎｄ  ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓ：  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｒｅｖｉｅｗ  ａｎｄ  Ｍｅｔａ−Ａｎａｌｙｓｉｓ”．Ｊ  Ｄｅｎｔ  ２０１６，ｖｏｌ．４８，ｐｐ．１６−１５］．要約すると、プロバイオティクスが歯周および歯肉突起の炎症の改善に寄与し得ることが従来技術において見られてきたが、プロバイオティクスが明らかな臨床効果を有し得るかどうかは依然として疑問である。
【００１９】
Ｌ．Ｄｕｎｎらの論文（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．８１，Ｎｒ．２，２０１６，ｐａｇｅｓ  Ｍ４３８−Ｍ４４４）は、一連の精油（例えば、チモールなどの個々の油成分）の種々の乳酸菌（例えば、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｃｉｔｒｏｖｏｒｕｍ）に対する抗微生物効果の試験について記載する。この論文の目的は、精油成分（例えばチモール）が関連する乳酸菌増殖を適切に抑制するために使用でき、それによって食品への保存添加物として使用できるかどうかを試験することであった。
したがって、当該論文では食品中の乳酸菌（例えば、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）の存在は望ましくないと見なされる可能性がある。
【００２０】
言い換えれば、当該論文は、例えば口腔内の障害の予防および／または治療などの任意の実用的な目的のための防腐剤（例えばチモール）と組み合わせたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株の使用を記載していない。
【００２１】
ＷＯ２０１７０１２９０５Ａ１（ＡＢ-ＢＩＯＴＩＣＳ）は、口腔内でプロバイオティクスの適切なコロニー形成を可能にする粉末形態の自己フィルム形成組成物を開示している。例えば口腔内の障害の予防および／または治療などの任意の実用的な目的のための防腐剤（例えばチモール）と組み合わせたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株の使用については記載されていない。
【発明の概要】
【００２２】
本発明によって解決されるべき１つの問題は、防腐剤を含む治療計画において投与することができる乳酸菌（ＬＡＢ）を提供することに関連していると見なすことができる。本発明者らは、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株が防腐剤に対して特に耐性があることを見出した。
【００２３】
したがって、本発明の第１の態様は、以下からなる群、
ａ）トリクロサン；
ｂ）メントール、ユーカリプトール、チモールおよびサリチル酸メチルからなる群から選択される少なくとも個々の成分を含む精油；および
ｃ）メントール、ユーカリプトール、チモールおよびサリチル酸メチルからなる群から選択される個々の成分；から選択される少なくとも一つの防腐剤に耐える能力を有し、
当該防腐剤は、阻害を観察する濃度であることを特徴とし、当該Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株について観察されたディスク拡散アッセイによって決定された阻害ハロが、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの阻害ハロよりも小さい場合にＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、防腐剤に耐える能力を有すると考えられ、かつ当該Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株および防腐剤は、別々、逐次、同時投与用、または混合して処方される、少なくとも一つの防腐剤と組み合わせて使用するためのＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株に関する。
【００２４】
あるいは、この第１の態様は、殺菌剤と組み合わせたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株の使用として製剤化することができ、ここで、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、上述のように少なくとも１つの防腐剤に耐える能力を有する。
【００２５】
第２の態様は、少なくとも１つのＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株の生細胞１０４〜１０１２ｃｆｕ／ｇを含む細菌組成物に関し、ここで、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、少なくとも第１の態様において定義される特徴を有する。
【００２６】
第３の態様は、口腔内の障害の予防および／または治療に使用するための第２の態様による組成物に関する。
【００２７】
第４の態様は、第２の態様で定義された組成物を、許容される賦形剤および／または担体と共に含むパーソナルケア製品または医薬品に関する。
【００２８】
第５の態様は、以下の工程、
ｉ）乳酸菌株候補のプールから乳酸菌の個体の防腐剤を許容する能力をアッセイすること、および
ｉｉ）Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ．よりも高い防腐剤に耐える能力を有する乳酸菌株を選択および単離することを含む、乳酸菌株のスクリーニングおよび単離方法に関する。
【００２９】
本発明の特許請求の範囲および態様において使用される用語は、この説明におけるその広く一般的な意味において理解される。但し、それらは本発明の詳細な説明において以下に定義される。
【００３０】
明細書および特許請求の範囲を通して、「含む」という用語およびその変形は、他の技術的特徴、添加剤、構成要素、または工程を排除することを意図していない。本発明のさらなる目的、利点および特徴は、本明細書を検討すると当業者には自明であろうし、または本発明の実施によって習得することができる。さらに、本発明は、本明細書に記載の特定のおよび好ましい実施形態のすべての可能な組み合わせを網羅する。以下の実施例および図面は、本発明を限定することを意図することなく、例示目的のために本明細書中に提供される。
【００３１】
発明の詳細な説明
上記で説明したように、防腐剤は広いスペクトルの抗菌活性を有することが一般に認識されている。これにより、多数の細菌や真菌種を殺すことがでるが、共生細菌やプロバイオティック細菌にも悪影響がある。実際、微量の防腐剤がそれらの投与後に見いだされる可能性があることが知られており、従って防腐剤の投与後でさえプロバイオティクスの使用を危うくする。それゆえ、特にプロバイオティック治療としての乳酸菌の使用は、防腐剤と組み合わせて可能であると示唆されたことはない。
【００３２】
驚くべきことに、本発明者らは、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株が防腐剤に耐えるより高い能力を有し、したがって防腐剤が治療目的または美容目的のために使用される場合にその株を投与することが可能であることを見出した。理論に縛られることなく、優しい細菌を好む競争的排除の原理により、それらが病原性株の前に付着する場合、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓを防腐剤と組み合わせて投与することは日和見病原体のコロニー形成に対して特に有効に保護できる。
【００３３】
したがって、本発明の一態様では、以下からなる群、
ａ）トリクロサン；
ｂ）メントール、ユーカリプトール、チモールおよびサリチル酸メチルからなる群から選択される少なくとも個々の成分を含む精油；および
ｃ）メントール、ユーカリプトール、チモールおよびサリチル酸メチルからなる群から選択される個々の成分；から選択される少なくとも一つの防腐剤に耐える能力を有し、当該防腐剤は、阻害を観察する濃度であることを特徴とし、当該Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株について観察されたディスク拡散アッセイによって決定された阻害ハロが、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの阻害ハロよりも小さい場合にＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、防腐剤に耐える能力を有すると考えられ、かつ当該Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株および防腐剤は、別々、逐次、同時投与用、または混合して処方される、防腐剤と組み合わせて使用するためのＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株を提供する。
【００３４】
あるいは、この態様は、殺菌剤と組み合わせたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株の使用として製剤化することができ、ここで、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、上記のように少なくとも１つの防腐剤に耐える能力を有する。
【００３５】
防腐剤耐性乳酸菌株
本明細書で論じるＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は単離された乳酸菌株であることが好ましい。当業者には理解されるように、「単離された」という用語は、乳酸菌株がその自然環境から単離された、すなわちそれはその自然環境中に存在しないため、他の生物および物質を含まない自然環境に存在する。
【００３６】
本明細書で使用される「耐性」という用語は、遺伝的であろうとなかろうと、防腐剤への一過性曝露に耐える微生物の能力を指し、これは必須の細菌プロセスを減速させることによって達成されることが多い。「耐性」は、最小阻害濃度（ＭＩＣ）を変化させずに生存する微生物の能力についての文献において一般的に理解されている。しかしながら、それはまた、上昇した最小阻止濃度（ＭＩＣ）、または抗菌剤がもはや微生物の増殖を妨げない状況を特徴とする、抗菌剤に対する微生物の感受性の減少として理解することもできる。
【００３７】
本明細書で使用される「防腐剤」という用語は、生体組織内または生体組織上での微生物の増殖を破壊または阻害する抗菌剤を指す。用語「抗微生物剤」は、本発明において、当該分野における通常の意味、すなわち微生物を殺すかまたはそれらの増殖を阻害する薬剤を有する。抗微生物剤は、一次的に作用する微生物、例えば細菌（抗菌剤）および真菌（抗真菌剤）に従ってさらに分類することができる。抗生物質は一般にリンパ系を通って体内の細菌を破壊するために輸送され、殺菌剤は生体以外の物体上に存在する微生物を破壊することから、防腐剤は通常抗生物質および殺菌剤と区別される。
【００３８】
実施例２〜３に記載された詳細なアッセイに基づいて、当業者は特定の株が防腐剤に耐える能力を有するかどうかを客観的に決定するために日常的にアッセイを繰り返すことができる。特に、実施例２は、菌株が防腐剤に耐えることができるかどうかを決定する方法を提供し、ここで耐性はディスク拡散アッセイによって決定された阻害ハロとして表される。例えば、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株について観察されたディスク拡散アッセイによって決定された阻害ハロがＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの阻害ハロよりも小さく、防腐剤がｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの阻害が観察される濃度にある場合、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は防腐剤に耐える能力を有すると考えられている。
【００３９】
いくつかの実施形態において、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株についてディスク拡散アッセイにより決定された阻害ハロの直径がＰ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓについて測定された直径より少なくとも１ｍｍ、２ｍｍ、３ｍｍ、若しくは４ｍｍ小さい場合、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は防腐剤耐性能力を有すると見なされるであろう。より特定の実施形態において、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓについて観察された阻害ハロの直径は、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓについて測定された阻害ハロの直径より少なくとも４ｍｍ小さい。
【００４０】
本発明によって提供されるＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、第１の態様に記載された防腐剤の少なくとも１つに耐える能力を有することを特徴とする。しかしながら、この能力の他に、実施例に示されるように、菌株は他の関連防腐剤に対しても耐性があり得ることに留意することが重要である。これは、第１の態様に記載された特徴が、本発明の目的に有用な一群のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株を定義するための重要な特徴またはマーカーとして考慮され得ることを意味する。
【００４１】
実施例を通して、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓよりも良い方法で防腐剤に耐えるこの能力に従うために異なる菌株が提供されている。上記の菌株に加えて、詳細に記載された方法によって、防腐剤に耐える同じ能力で、ＬＡＢのプール内の他の菌株を同定および単離することが妥当である。防腐剤に対する耐性の特徴が本発明の目的にとって有益であることもまた実施例によって実証される。したがって、いくつかの特定の株がこの有益な特徴を用いて試験され同定されているが、他の良好な株を得るための方法の全ての工程が本明細書に説明されているので、そのような株に本発明の範囲を制限する理由はない。したがって、本発明はまた、同じ特徴を有する実施例で使用されたもの以外の株のプールも提供する。すべてのＬＡＢ株が防腐剤に耐える能力を持つわけではないことに注意することが重要であり、したがって、本発明は当該能力を認識する方法を提供する。
【００４２】
同様に、実施例２に開示されるディスク拡散アッセイおよびアッセイの条件の使用は本発明の範囲を限定しないことに留意することは重要である。このアッセイは、菌株が防腐剤に耐える能力を試験するのに適したものである。防腐剤の濃度および量は、試験される防腐剤に応じて菌株の耐性を試験するために当業者によって選択されるであろう。特に、使用される防腐剤の濃度および量は、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの阻害を観察するのに必要なものであろう。
【００４３】
トリクロサン（ＣＡＳ登録番号３３８０−３４−５）（ＴＣＳ）は、ジフェニルエーテルであり、２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテル、５−クロロ−２−（２，４-ジクロロフェノキシ）フェノールまたはトリクロサナムと称してもよい。ＴＣＳの分子式はＣ１２Ｈ７Ｃｌ３Ｏ２で、化学物質の分子量は２８９．５５である。ＴＣＳの最も商業的に得られるグレードは、９９％以上の純粋であり、オフホワイト〜白色固体の形態で、かろうじて検出可能な芳香臭を有する白色の結晶性粉末である。トリクロサンは、多くの種類の細菌やある種の真菌に対して効果的で、細菌の繁殖や最終的には細胞死を防ぐ。トリクロサンは細菌の細胞壁を透過し、ＲＮＡ合成や異なる生体分子の産生を含む複数の細胞質および膜部位を標的にする。
【００４４】
精油は、特に口腔ケアのための代替防腐剤としても使用されている。本明細書で定義される「精油」（ＥＯ）は、植物もしくは動物の供給源から得られる油、またはそれらの合成等価物であり、モノテルペンおよびセスキテルペン炭化水素、モノテルペンおよびセスキテルペンアルコール、エステル、エーテル、アルデヒド、ケトン、酸化物などのいくつかの成分の複雑な混合物からなる。
【００４５】
「精油の個々の成分」は、オイル（天然）から単離され得るか、または全体的もしくは部分的に化学合成され得る化合物である。
【００４６】
メントールは、２-イソプロピル-５-メチルシクロヘキサノールまたは５-メチル-２-（１-メチルエチル）シクロヘキサノールとも呼ばれ、合成により製造されるか、またはコーンミント、ハッカ、または他のミント油から得られる有機化合物である。
【００４７】
ユーカリプトールは環状エーテルとモノテルペノイドで、ユーカリ属の植物の精油に特に豊富に含まれる。ユーカリプトールは、様々な同義語の１，８−シネオール（１，８−ｃｉｎｅｏｌ）、１，８−シネオール（１，８−ｃｉｎｅｏＩｅ）、カジェプトール、１，８−エポキシ−ｐ−メンタン、１，８−オキシド−ｐ−メンタン、ユーカリプトール（ｅｕｃａｌｙｐｔｏｌ）、ユーカリプトール（ｅｕｃａｌｙｐｔｏｌｅ）、１，３，３-トリメチル-２-オキサビシクロ［２，２，２］オクタン、シネオール（ｃｉｎｅｏｌ）、シネオール（ｃｉｎｅｏｌｅ）も知られている。
【００４８】
チモール（２−イソプロピル−５−メチルフェノールとしても知られる）は、タイムの油で見つかった、シメンの天然モノテルペンフェノール誘導体、カルバクロールと異性体であり、Ｔｈｙｍｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ（一般的なタイム）や他の様々な種類の植物から心地よい芳香と強い防腐性の白色の結晶質として抽出される。
【００４９】
サリチル酸メチルは、多くの種類の植物、特に冬緑植物によって天然に産生される有機エステルである。サリチル酸メチルはまた、一般に２-ヒドロキシ安息香酸メチル、ゴルテリア油、ウィンターグリーン油またはベチュラ油とも呼ばれる。
【００５０】
一実施形態では、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、ビスグアジンの群からの防腐剤に耐える能力をさらに有する。
【００５１】
「ビスグアニド」は、それらの殺菌特性について知られている化学的に関連した化合物の一種である。これらの化合物は防腐剤アレキシジンおよびクロルヘキシジンを含む。アレキシジンはまた、１-［Ｎ’−［６−［［アミノ−［［Ｎ’−（２-エチルヘキシル）カルバミミドイル］アミノ］メチリデン］アミノ］ヘキシル］カルバミミドイル］-２-（２-エチルヘキシル）グアニジンとも呼ばれる。クロルヘキシジンはカチオン性ポリビグアニドであり、（１Ｅ）-２-［６−［［アミノ−［（Ｅ）−［アミノ−（４-クロロアニリノ）メチリデン］−アミノ］メチリデン］アミノ］ヘキシル］-１−［アミノ−（４-クロロアニリノ）メチリデン］グアニジンとも呼ばれる。
【００５２】
より具体的には、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、グルコン酸クロルヘキシジンに耐える能力を有する。
【００５３】
本発明者らはまた、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株が細菌性病原体、特に口腔の病原体の増殖を阻害する（すなわち拮抗する）能力も有し得ることを見出した。この拮抗能力は、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株が病原体のコロニー形成を回避し、増殖をさえ抑制し、その結果微生物叢プロフィールを改善するのに有用であることを可能にする。
【００５４】
したがって、一実施形態では、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株はさらに、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｄｅｎｔｉｃｏｌａおよびＰｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｄｅｎｔｉｃｏｌａからなる群から選択される少なくとも１つの病原体に拮抗する能力を有する。特に、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、これらの病原体のうち少なくとも２つに拮抗する能力を有する。より具体的には、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株はＦ．ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｔ．ｄｅｎｔｉｃｏｌａおよびＰ．ｄｅｎｔｉｃｏｌａを拮抗する能力を有する。
【００５５】
１つの特定の実施形態では、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株はさらに、Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ  ｆｏｒｓｙｔｈｉａを拮抗する能力を有する。
【００５６】
１つの特定の実施形態では、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株はさらにＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓを拮抗する能力を有する。
【００５７】
本明細書に記載の詳細なアッセイ（アンタゴニスト活性アッセイについては実施例４を参照）に基づいて、当業者は、目的の株が病原体に拮抗するかどうかを客観的に決定するために日常的にこのアッセイを繰り返すことができる。拮抗活性アッセイの説明および条件は本発明の範囲を限定しない。このアッセイは、目的の株が病原体に拮抗する能力を試験するのに適したものである。
【００５８】
特定の実施形態では、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株はＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ株である。より具体的には、本発明のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、受託番号ＣＥＣＴ  ８６３３でスペインタイプカルチャーコレクションに寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉである。
【００５９】
したがって、本発明の一態様は、受託番号ＣＥＣＴ８６３３の下でスペインタイプカルチャーコレクションに寄託されたＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ種に属する菌株に関する。
【００６０】
本発明の別の態様は、少なくとも１つのＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株の生細胞１０４〜１０１２ｃｆｕ／ｇを含む組成物を提供し、ここで、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、少なくとも第一の態様で定義した特性（すなわち、防腐剤に耐える能力）を有する。
【００６１】
本発明の組成物は、単一の株を含んでもよく、または同じもしくは異なる種に属する異なるＬＡＢ株の組み合わせであってもよい。特定の実施形態では、本発明のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍの株および／またはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓの株と組み合わせて見出される。より具体的には、本発明のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株を含む組成物は、受託番号ＣＥＣＴ７４８１でスペインタイプカルチャーコレクションに寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍの株および受託番号ＣＥＣＴ  ７４８０でスペインタイプカルチャーコレクションに寄託されたＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓの株をさらに含む。
【００６２】
出発物質として寄託株を使用することにより、当業者は慣用的に、慣用の突然変異誘発または再単離技術により、本発明の組成物を形成する株の明細書に記載の関連する特徴および利点を保持または増強するそれらのさらなる変異体または突然変異体を得ることができる。したがって、本発明はまた、本明細書に開示されている株の変異体に関する。本明細書で使用されるとき、菌株の「変異体」または「突然変異体」という用語は、主に突然変異によって参照菌株Ｘから得られ、菌株よりも防腐剤に耐える同様の能力を維持する任意の天然のまたは特異的に発達した菌株を指す。
【００６３】
例えば、本明細書で企図される「変異体」株の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子は、本明細書に開示される株の１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列の配列番号１と約８５パーセント、８６パーセント、８７パーセント、８８パーセント、８９パーセント、９０パーセント、９１パーセント、９２パーセント、９３パーセント、９４パーセント、９５パーセント、９６パーセント、９７パーセント、９８パーセントまたは９９パーセントの配列同一性を共有してもよい。
【００６４】
別の実施形態では、変異株と親株との間の関連性の程度は、１つまたは複数の制限エンドヌクレアーゼを使用してパルスフィールドゲル電気泳動（ＰＦＧＥ）によって親および変異株のゲノムを分析するときに得られる類似度として決定される。ＰＦＧＥにより得られる類似度は、Ｄｉｃｅ類似度係数により測定することができる。いくつかの実施形態では、変異体と親株との間のＤｉｃｅ類似度係数は、約９５パーセント、約９６パーセント、約９７パーセント、約９８パーセント、約９９パーセント、約９９．１パーセント、約９９．５パーセント、約９９．６パーセント、約９９．７パーセント、約９９．８パーセント、約９９．９パーセント、約９９．９９パーセント、約９９．９９９パーセント、約９９．９９９９パーセント、約９９．９９９９９パーセント、約９９．９９９９９９パーセント以上１００パーセント未満である。
【００６５】
１つの特定の実施形態では、突然変異体は組換えＤＮＡ技術を使用することによって得られる。別の実施形態では、突然変異体はランダム突然変異誘発によって得られる。したがって、本発明の別の態様は、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉの突然変異体を得る方法に関し、該菌株はＣＥＣＴ  ８６３３株であり、該方法は寄託株を出発物質として使用し、突然変異誘発を適用することを含み、取得した変異体または突然変異体が少なくとも寄託株の防腐剤耐性能力を一層保持または増強する前記方法に関する。
【００６６】
特定の実施形態では、菌株は人工培地中で発酵され、発酵後に後処理に供されて細菌細胞が得られ、得られた細菌細胞は液体培地中または固体形態である。特に、後処理は、乾燥、凍結、凍結乾燥、流動床乾燥、噴霧乾燥および液体媒体中での冷蔵からなる群から選択され、より具体的には凍結乾燥である。
【００６７】
本発明の株は、適切な人工培地中で適切な条件下で細菌を培養（または発酵）させることによって産生される。微生物用の表現「人工培地」とは、天然物質、および場合により血清の機能のいくつかを再現することができるポリマーポリビニルアルコールなどの合成化学物質を含有する培地と理解されるべきである。一般的な適切な人工培地は、炭素源（例えばグルコース）、窒素源（例えばアミノ酸およびタンパク質）、水および細菌増殖に必要な塩を含む元素を含有する栄養ブロスである。増殖培地は、液体形態、または固体培地を得るために寒天または他のゲル化剤としばしば混合され得る。菌株を単独で培養して純粋な培養物を形成するか、または他の微生物との混合培養物として、あるいは異なる種類の細菌を別々に培養し、次いでそれらを所望の割合で組み合わせることによって培養することができる。培養後、そして最終製剤に応じて、菌株を精製細菌として使用してもよく、あるいは細菌培養物または細胞懸濁液をそのまままたは適切な後処理の後に使用してもよい。本明細書において、用語「バイオマス」は、培養（または培養と同義の用語として発酵）の後に得られる細菌株培養物と理解される。
【００６８】
用語「後処理」とは、本発明の文脈において、貯蔵可能な細菌細胞を得ることを目的としてバイオマスに対して行われる任意の処理のことであると理解されたい。後処理の目的は、バイオマス中の細胞の代謝活性を低下させること、そしてそれ故に細胞の有害な反応の速度を遅くすることである。後処理の結果として、細菌細胞は固体または液体形態であり得る。固体形態では、貯蔵された細菌細胞は粉末または顆粒であり得る。いずれにせよ、細菌細胞を含有する固体形態および液体形態の両方は天然には存在せず、したがってそれらは人工的な後処理プロセスの結果であるため、天然に存在しない。後処理工程は、特定の実施形態では、１つ以上のいわゆる後処理剤の使用を必要とし得る。本発明の文脈において、表現「後処理剤」は、本明細書に記載の後処理方法を実施するために使用される化合物を指す。後処理剤の中には、単独または組み合わせて使用される、脱水剤、静菌剤、凍結防止剤（抗凍結剤）、不活性充填剤（凍結乾燥保護剤としても知られる）、担体材料（コア材料としても知られる）などが含まれるが、これらに限定されない。
【００６９】
細菌細胞の代謝活性を低下させるための２つの基本的なアプローチ、従って後処理を実行するための２つのアプローチがある。１つ目は、全ての化学反応の速度を遅くすることであり、冷蔵庫、機械式冷凍庫、液体窒素冷凍庫を使用して、冷蔵または冷凍することによって温度を下げることで実行できる。あるいは、全ての化学反応の速度を低下させることは、細菌細胞の増殖を阻害する物質、すなわち静菌剤、略してＢｓｔａｔｉｃを添加することによって達成することができる。
【００７０】
後処理を行うための第二のアプローチはバイオマスから水を除去することであり、これは凍結乾燥機を用いて水を昇華させることを含むことができる。バイオマスから水を除去するための適切な技術は、乾燥、凍結乾燥、噴霧乾燥または流動床乾燥である。固体形態をもたらす後処理は、乾燥、凍結、凍結乾燥、流動床乾燥、または噴霧乾燥であり得る。
【００７１】
後処理は好ましくは凍結乾燥であり、これは減圧下での昇華による凍結細菌懸濁液からの水の除去を含む。この方法は以下の３つの工程、すなわち生産物を冷凍前処理して凍結構造を形成する、一次乾燥で大部分の水を取り除く、二次乾燥で結合水を取り除くからなる。凍結乾燥細菌培養物の製造および単離のための工業プロセスの客観的かつ予想される変動性のために、後者は凍結保護剤としても知られる一定量の不活性充填剤を一般に含有する。不活性充填剤の役割は、製品中の生きているプロバイオティクス細菌の含有量を標準化することである。市販の凍結乾燥培養物中の以下の不活性充填剤を使用する：スクロース、サッカロース、ラクトース、トレハロース、グルコース、マルトース、マルトデキストリン、コーンスターチ、イヌリン、および他の薬学的に許容される非吸湿性充填剤。場合により、アスコルビン酸のような他の安定化剤または凍結防止剤もまた、粘稠なペーストを形成するために使用され、これは凍結乾燥に供される。いずれにせよ、そのようにして得られた材料は、粉末を含む適切なサイズに粉砕することができる。
【００７２】
防腐剤と組み合わせた乳酸菌の使用
上記のように、本発明のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は防腐剤に耐えることができ、したがって防腐剤と組み合わせて使用するのに適している。
【００７３】
防腐剤の例としては、トリクロサン、植物抽出物および精油、ビスグアニドおよびセチルピリジニウムが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７４】
特定の一実施形態では、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株はトリクロサンと組み合わせて使用される。
【００７５】
別の特定の実施形態では、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は精油と組み合わせて使用される。精油の例としては、限定されないが、シナモン油、バジル油、ベルガモット油、クラリーセージ油、イランイラン油、ネロリ油、サンダルウッド油、フランキンセンス油、ジンジャー油、ハッカ油、ラベンダー油、ジャスミンアブソリュート、ゼラニウム油バーボン、スペアミント油、クローブ油、パチョリ油、ローズマリー油、ローズウッド油、サンダルウッド油、ティーツリー油、バニラ油、レモングラス油、シダーウッド油、バルサム油、タンジェリン油、ヒノキ油、ヒバ油、ギンコ油、ユーカリ油、レモン油、オレンジ油、スイートオレンジ油、ザクロ種子油、マヌカ油、シトロネラ油、ウィンターグリーン油およびカレンデュラ油が挙げられる。より特定の実施形態において、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、ハッカ油、ユーカリ油、タイム油、およびウィンターグリーン油からなる群から選択される精油と組み合わせて使用される。
【００７６】
特定の一実施形態では、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、「精油の個々の構成要素」と組み合わせて使用される。「精油の個々の成分」の例としては、限定されないが、タイム、オレガノ、クルクミン、１-シトロネロール、α-アミルシンナムアルデヒド、リラール、ゲラニオール、ファルネソール、ヒドロキシシトロネラル、イソオイゲノール、オイゲノール、カンフル、ユーカリプトール、リナロール、シトラール、チモール、リモネンおよびメントールが挙げられる。個々の成分のさらなる例は、セスキテルペノイド化合物を含み、これは精油中の活性化合物であり得る。１５個の炭素を含有するセスキテルペノイド化合物は、３つの５−炭素イソプレン単位から生合成的に形成される。セスキテルペノイド化合物としては、ファルネソール、ネロリドール、ビサボロール、アプリトン、カマズレン、サンタロール、ジンギベロール、カロトール、およびカリオフィレンが挙げられるが、これらに限定されない。より特定の実施形態では、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、メントール、ユーカリプトール、チモールおよびサリチル酸メチルからなる群から選択される精油の個々の構成要素と組み合わせて使用される。
【００７７】
特定の一実施形態では、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株はビスグアジン、より詳細にはアレキシジンまたはクロルヘキシジンと組み合わせて使用される。アレキシジンおよびクロルヘキシジンは主にその塩として使用される。本発明によるクロルヘキシジン塩には、限定されないが、パルミチン酸クロルヘキシジン、二リン酸クロルヘキシジン、クロルヘキシジンジグルコナート、二酢酸クロルヘキシジン、二塩酸クロルヘキシジン、二塩化クロルヘキシジン、二塩酸クロルヘキシジン、二塩化クロルヘキシジン、二よう化水素クロルヘキシジン、二過塩素酸クロルヘキシジン、二硝酸クロルヘキシジン、チオ硫酸クロルヘキシジン、クロルヘキシジンジアシッドホスフェート、クロルヘキシジンジフルオロホスフェート、クロルヘキシジンジホルマート、クロルヘキシジンジプロピオネート、クロルヘキシジンジヨードブチレート、クロルヘキシジンジ−ｎ−バロレート、クロルヘキシジンジカプロアート，クロルヘキシジンマロネート、クロルヘキシジンサクシネート、クロルヘキシジンマラート、酒石酸クロルヘキシジン、ジモノグリコール酸クロルヘキシジン、モノジグリコール酸クロルヘキシジン、クロルヘキシジンジラクテート、クロルヘキシジンジ-α-ヒドロキシイソブチレート、クロルヘキシジンジグルコヘプトネート、クロルヘキシジンジ−イソチオネート、クロルヘキシジンジベンゾエート、クロルヘキシジンジシンナメート、クロルヘキシジンジマンデレート、クロルヘキシジンジイソフタラート、クロルヘキシジンジ-２-ヒドロキシナフトエート、クロルヘキシジンエンボネートが挙げられる。より特定の実施形態において、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、クロルヘキシジン、より具体的にはグルコン酸クロルヘキシジンと組み合わせて使用される。
【００７８】
本発明の菌株および防腐剤は、別々の逐次的な同時投与のためにまたは混合して処方することができる。
【００７９】
投与計画および形態は、治療されるべき障害に従って当業者によって決定されるであろう。防腐剤および乳酸菌の投与は、別々に（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株と防腐剤の投与の間の時間間隔を空けて）、順次（次々に）、同時に（同時に）または混合して（一緒に）投与することができる。一実施形態では、本発明の防腐剤および菌株は、１２時間以内の時間間隔内に投与される。特に、時間間隔は６時間以内である。より具体的には、時間間隔は１時間以下である。より具体的には、時間間隔は１０分以下である。より特定の実施形態では、治療計画は防腐剤と菌株の同時投与に基づく。１つの典型的な投与計画は、防腐剤を投与し、続いて本発明のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株を投与することからなる。いくつかの実施形態では、防腐剤およびＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は同時に投与される。防腐剤および乳酸菌が患者に同時に投与されるとき、それらは別々の形態としてまたは単一組成物の一部として投与され得る。製品が別々の剤形で投与される場合、剤形は同じまたは異なる容器に入れることができる。
【００８０】
特定の投与治療において、治療されるべき被験者は、防腐剤（例えば、０．１２％（ｗ／ｖ）の濃度のクロルヘキシジン）を含有するマウスウォッシュで３０〜６０秒間彼らの口をうがいするように指示される。その後、マウスウォッシュを分割し、乳酸菌を含む経口錠剤を口の中に入れ、ゆっくり溶かす。
【００８１】
投与は、特に病状の変化または望ましくない副作用を考慮して、監督している医師により適切と考えられるように、慢性または間欠的であり得る。「慢性」投与とは、組成物を連続的に投与することをいい、「間欠」投与とは中断しながら行われる治療をいう。
【００８２】
非限定的な実施形態では、本発明のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株と組成物は歯科専門家によって急性治療に使用され、患者は本発明の粉末形態の自己膜形成性組成物または一般的な賦形剤と併せた乳酸菌を含むチューインガム、練り歯磨き、マウスウォッシュ、口内スプレー、ロゼンジ若しくは経口分散錠剤等の口腔ケア製品を用いた維持療法に従うことができる。歯科専門家による投与は、例えば本発明の組成物を注射器によって、特に鈍い先端の針を用いて塗布することによって行うことができる。専門的投与の他の非限定的な例は、本発明の組成物を含むゲルを含有する口腔スプリントの適用、またはブラシを使用することによるワニスとして処方された組成物の歯表面への塗布である。口臭、歯周炎、歯肉炎、または虫歯などの用途では、本発明の組成物を患者自身が塗布することもできる。
【００８３】
特定の一実施形態では、防腐剤は０．０５〜０．５％（ｗ／ｗ）の範囲の濃度である。より具体的には、防腐剤の濃度は、０．０５〜０．２％（ｗ／ｗ）の範囲内にある。より具体的には、濃度は、０．０５、０．１、０．１２または０．２％（ｗ／ｗ）である。
【００８４】
本発明の一態様は、ａ）防腐剤を含む第１のバイアル、ｂ）少なくともＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株を含む第２のバイアルを含む部品のキットを提供する。特定の実施形態では、キットはさらに使用説明書を含み、より具体的には投与量および／または投与計画に関する情報を含む。
【００８５】
パーソナルケア製品
一態様において、本発明は、許容される賦形剤および／または担体と共に本発明の菌株および組成物を含むパーソナルケア製品を提供する。「パーソナルケア製品」という用語は、個人衛生および／または美化のために使用される製品（化粧品）を指す。
【００８６】
当業者には理解されるように、パーソナルケア製品は、有効量の本発明の菌株を含む。Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株の有効量は当業者によって決定され、達成される特定の目的、治療されている患者の年齢および体調、基礎疾患の重症度、および最終製剤によって変わるであろう。例えば、口腔衛生製品において、１つまたは複数の株は、約１０５ｃｆｕ／ｇ〜約１０１２ｃｆｕ／ｇの量、特に約１０７ｃｆｕ／ｇ〜約１０１１ｃｆｕ／ｇの量で存在する。用語「コロニー形成単位」（「ｃｆｕ」）は、寒天プレート上の微生物学的計数により明らかにされるような細菌細胞の数として定義される。特定の実施形態において、組成物は１０７〜１０１０ｃｆｕ／ｇの間で含む。
【００８７】
「賦形剤」という用語は、医薬品、獣医製品、医薬品、栄養補助食品、医療用食品および個人用衛生製品の有効成分と一緒に配合された任意の天然または合成物質を含む、本明細書におけるその広い意味で理解される。使用されるべき最も適切な賦形剤は最終製剤に依存する。
【００８８】
本発明を利用することができるパーソナルケア製品の非限定的な例としては、固形せっけん、液状せっけん（例えば、ハンドソープ）、ハンドサニタイザー（リンスオフおよびリーブオンアルコールベース、水性ベースの手指消毒剤を含む）、綿棒およびコットンパッド、シェービングクリーム、タルカムパウダー、トイレットペーパー、術前の皮膚消毒剤、ウェットペーパー、クレンジングワイプ、消毒用ワイプ、ボディウォッシュ、にきび治療製品、抗真菌性おむつかぶれクリーム、抗真菌性スキンクリーム、シャンプー、コンディショナー、化粧品消臭ローション、制菌性クリーム、ボディローション、ハンドクリーム、局所用クリーム、アフターシェーブローション、スキントナー、口腔衛生製品、日焼け止めローション、これらに限定されないクレンジングワイプ、ベビーシャンプー、ベビーソープ、おむつクリームなどのベビー用品が挙げられる。
【００８９】
本発明はまた、これらに限定されないが、創傷治癒用軟膏、クリーム剤、およびローション剤、創傷被覆材、熱傷創傷クリーム、包帯、テープ、および滅菌ストリップなどの創傷治療用物品、ならびに医療用ガウン、帽子、フェイスマスク、靴の覆い、外科用薬液などの医療用物品に応用してもよい。
【００９０】
特定の一実施形態では、パーソナルケア製品は局所用クリームまたはゲルである。
【００９１】
本発明の様々な非限定的な実施形態において、本発明の組成物を含むパーソナルケア製品は、ステアリルアルコール、カチオン性ヒドロキシエチルセルロース（Ｕｃａｒｅ；ＪＲ３０）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース（Ｋｌｕｃｅｌ）、キトサンピロリドンカルボキシレート（Ｋｙｔａｍｅｒ）、ベヘニルアルコール、ステアリン酸亜鉛、限定されないが、Ｉｎｃｒｏｑｕａｔ／Ｐｏｌａｗａｘを含む乳化ワックス、アクリル酸の付加重合体、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）ＥＴＤ（商標）２０２０等の樹脂、グアーガム、アラビアゴム、アクリレート／ステアレス-２０メタクリレートコポリマー、寒天、アルギン、アルギン酸、アクリル酸アンモニウムコポリマー、アルギン酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、アミロペクチン、アタパルジャイト、ベントナイト、Ｃ９-１５アルコール、酢酸カルシウム、アルギン酸カルシウム、カラギーナンカルシウム、塩化カルシウム、カプリルアルコール、カルボマー９１０、カルボマー９３４、カルボマー９３４Ｐ、カルボマー９４０、カルボマー９４１、カルボキシメチルヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルハイドロキシプロピルグアー、カラギーナン、セルロース、セルロースガム、セテアリルアルコール、セチルアルコール、コーンスターチ、ダマール、デキストリン、ジベンジリデンソルビトール、エチレン二水素化獣脂アミド、エチレンジオールアミド（ｄｉｏｌａｍｉｄｅ）、エチレンジステアラミド、ゼラチン、グアーガム、塩化グアーヒドロキシプロピルトリモニウム、ヘクトライト、ヒアルロン酸、水和シリカ、ヒドロキシブチルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルステアラミド−ＭＩＰＡ、イソアセチルアルコール、イソステアリルアルコール、カラヤガム、ケルプ、ラウリルアルコール、ローカストビーンガム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ケイ酸マグネシウム、三ケイ酸マグネシウム、メトキシＰＥＧ−２２／ドデシルグリコール共重合体、メチルセルロース、微結晶セルロース、モンモリロナイト、ミリスチルアルコール、オート麦粉、オレイルアルコール、パーム核アルコール、ペクチン、ＰＥＧ-２Ｍ、ＰＥＧ-５Ｍ、ポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、アルギン酸カリウム、ポリアクリル酸アルミニウムカリウム、カラギーナンカリウム、塩化カリウム、硫酸カリウム、じゃがいも澱粉、アルギン酸プロピレングリコール、アクリル酸ナトリウム／ビニルアルコール共重合体、カルボキシメチルデキストランナトリウム、カラギーナンナトリウム、セルロース硫酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ポリメタクリル酸ナトリウム、ケイアルミン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、ステアラルコニウムベントナイト、ステアラルコニウムヘクトライト、ステアリルアルコール、獣脂アルコール、ＴＥＡ塩酸、トラガカントガム、トリデシルアルコール、トロメタミンマグネシウムアルミニウムシリケート、小麦粉、小麦デンプン、キサンタンガム、アビエチルアルコール、アクリリノール酸、ベヘン酸アルミニウム、カプリル酸アルミニウム、ジリノール酸アルミニウム、ジステアリン酸等のアルミニウム塩、��ソステアリン酸アルミニウム、ミツロウ、ベヘナミド、ブタジエン／アクリロニトリルコポリマー、Ｃ２９−７０酸、ベヘン酸カルシウム、ステアリン酸カルシウム、キャンデリラワックス、カルナバ、セレシン、コレステロール、コレステロールヒドロキシステアレート、ココナッツアルコール、コーパル、ジグリセリル／ステアリン酸／リンゴ酸、ジヒドロアビエチルアルコール、ジメチルラウラミンオレイン酸、ドデカン酸／セテアリルアルコール／グリコールコポリマー、エルカミド、エチルセルロース、グリセリルトリアセチルヒドロキシステアレート、グリセリルトリアセチルリシノレート、グリコールジベヘネート、グリコールジオクタノエート、グリコールジステアレート、ヘキサンジオールジステアレート、水素化Ｃ６-１４オレフィンポリマー、水素化ヒマシ油、水素化綿実油、水素化ラード、水素化メンヘーデン油、水素化パーム核グリセリド、水素化パーム核油、水素化パーム油、水素化ポリイソブテン、水素添加大豆油、水素添加牛脂アミド、水素添加牛脂脂肪酸グリセリド、水素添加植物グリセリド、水素添加植物油、木蝋、ホホバワックス、ラノリンアルコール、シアバター、ラウラミド、デヒドロアビエチン酸メチル、メチル水素添加ロジン酸塩、メチルロジン酸塩、メチルスチレン／ビニルトルエンコポリマー、マイクロクリスタリンワックス、モンタン酸ワックス、モンタンワックス、ミリスチルエイコサノール、ミリスチルオクタデカノール、オクタデセン／マレイン酸無水物コポリマー、オクチルドデシルステアロイルステアラート、オレアミド、オレオステアリン、Ｏｕｒｉｃｕｒｙワックス、酸化ポリエチレン、オゾケライト、パラフィン、ペンタエリスリチル、水添ロジン酸、テトラオクタン酸ペンタエリスリチル、ロジン酸ペンタエリスリチル、テトラアビエチン酸ペンタエリスリチル、テトラベヘン酸ペンタエリスリチル、テトラオレイン酸ペンタエリスリチル、ペンタエリスリチルテトラステアレート、無水オフタルミン酸／グリセリン／グリシジルデカン酸エステル共重合体、オフタルミン酸／トリメリト酸／グリコール共重合体、ポリブテン、ポリブチレンテレフタレート、ポリジペンテン、ポリエチレン、ポリイソブテン、ポリイソプレン、ポリビニルブチラール、ポリビニルラウレート、プロピレングリコールジカプリラート、ジヤシ油脂肪酸プロピレングリコール、ジイソノナン酸プロピレングリコール、プロピレングリコールジラウレート、プロピレングリコールジペラルゴナート、ジステアリン酸プロピレングリコール、ジウンデカン酸プロピレングリコール、ＰＶＰ／ｅ？ｃｏｎｓｅｎｅコポリマー、ＰＶＰ／ヘキサデセンコポリマー、米ぬか油、ステアラルコニウムベントナイト、ステアラルコニウムヘクトライト、ステアルアミド、ステアルアミドＤＥＡジステアレート、ステアルアミドＤＩＢＡステアレート、ステアルアミドＭＥＡステアレート、ステアロン、ステアリルエルクアミド、ステアリン酸ステアリル、ステアロイルステアリン酸ステアリル、合成ミツロウ、合成ワックス、トリヒドロキシステアリン，、トリイソノナノイン、トリイソステアリン、トリリノール酸トリイソステアリル、トリラウリン、トリリノール酸、トリリノレイン、ト���ミリスチン、トリオレイン、トリパルミチン、トリステアリン、ラウリン酸亜鉛、ミリスチン酸亜鉛、ネオデカン酸亜鉛、ロジン酸亜鉛、それらの混合物等の増粘剤および／またはゲル化剤を更に含むことができる。ビヒクルに使用されるゲル化剤は、天然ゴム、デンプン、ペクチン、寒天およびゼラチンなどの天然ゲル化剤であり得る。多くの場合、ゲル化剤は多糖類またはタンパク質をベースとしている。例としては、グアーガム、キサンタンガム、アルギン酸（Ｅ４００）、アルギン酸ナトリウム（Ｅ４０１）、アルギン酸カリウム（Ｅ４０２）、アルギン酸アンモニウム（Ｅ４０３）、アルギン酸カルシウム（Ｅ４０４、−褐藻由来の多糖類）、寒天（Ｅ４０６、紅藻から得られる多糖類）、カラギーナン（Ｅ４０７、紅藻から得られる多糖類）、ローカストビーンガム（Ｅ４１０、キャロブの木の種からの天然ガム））、ペクチン（ｅ４４０、リンゴまたはかんきつ類の果実から得られる多糖）、およびゼラチン（Ｅ４４１、動物のコラーゲンの部分加水分解によって製造される）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９２】
本発明の様々な非限定的な実施形態において、パーソナルケア製品に使用される菌株および組成物はさらに界面活性剤を含み得る。界面活性剤は、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤、または非イオン性界面活性剤であり得る。非イオン性界面活性剤の例には、ポリエトキシレート、脂肪アルコール（例えば、平均約２０のエチレンオキシド単位を有するセテス-２０（ポリエチレンオキシドのセチルエーテル））、その他、ＩＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａｓ  Ｉｎｃ．（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）が販売する「ＢＲＩＪ」（登録商標）非イオン性界面活性剤、コカミドプロピルベタイン、アルキルフェノール、ソルビトールの脂肪酸エステル、ソルビタン、ポリオキシエチレンソルビタンが挙げられる。適切なアニオン性界面活性剤としては、ラウリル硫酸アンモニウムおよびラウリルエーテルスルホサクシネートが挙げられる。本発明の様々な非限定的な実施形態において、パーソナルケア製品は水を含み得る。
【００９３】
本発明の様々な非限定的な実施形態において、パーソナルケア製品に使用される菌株および組成物は、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カチオン性ヒドロキシエチルセルロース（Ｕ−ケアポリマー）、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレンオキシド（ポリオックス樹脂）、およびキトサンピロリドンカルボキシレート（Ｋｙｔｏｍｅｒ  ＰＣ）などの化合物を含むヒドロゲルをさらに含み得る。
【００９４】
本発明の株および組成物はまた、口腔衛生用途における使用を意図している。したがって、１つの特定の実施形態では、パーソナルケア製品は、製薬上の賦形剤、または化粧品として許容される添加剤、または他の食用成分と共に本発明の株または組成物を含む口腔ケア製品である。本発明の組成物は有効量であろうと理解される。用語「口腔ケア製品」は、口腔および歯を清潔に保ち、歯の問題、最も一般的には、虫歯、歯肉炎、歯周（歯肉）病および口臭を防ぐために使用される製品を指す。この意味で、口腔衛生製品は、特定の治療薬の全身投与のために意図的に飲み込まれるのではなく、代わりに口腔活動のために実質的に全ての歯の表面および／または口腔組織と接触するのに十分な時間口腔内に保持される。そのような製品の非限定的な例は、練り歯磨き、歯磨き剤、歯磨き粉、局所用経口ゲル、マウスリンス、義歯製品、マウススプレー、チューインガム、デンタルフロス、デンタルテープ、ブラストパウダー、研磨ペースト、デンタルワニス、亀裂シーラント、充填材料、口腔クリームまたはジェル、キャンディー、ロゼンジ、経口分散錠剤またはストリップ、または口腔内に直接振りかけることができる粉末である。
【００９５】
特定の実施形態では、口腔ケア製品は練り歯磨き、経口ゲル、経口スプレー、マウスリンスまたは経口分散錠剤からなる群から選択される。
【００９６】
口腔ケア製品は、香味剤および矯味剤をさらに含み得る。口腔ケア製品に使用するためのこれらの薬剤の非限定的な例には、ケイ皮アルデヒド、オイゲノール、ユーカリプトール、メントール、Ｎ-エチル-ｐ-メンタン-３-カルボキサミド、アネトール、ペパーミントオイル、スペアミントオイルおよびコーンミントオイルが含まれる。
【００９７】
口腔ケア製品は、湿潤剤、ゲル化剤、研磨剤、フッ化物源、減感剤、香味剤、着色剤、甘味剤、保存剤、構造化剤、界面活性剤、抗歯石剤および抗歯垢剤を任意に含み得る。
【００９８】
口腔ケア製品はまた、過酸化物、過ホウ酸塩、過炭酸塩、過酸化物、過硫酸塩、金属亜塩素酸塩、およびそれらの組み合わせ等の漂白剤または酸化剤を含む歯白色化活性剤などの他の経口活性剤を含み得る。歯の色調整物質もまた、本発明において有用な口腔ケア活性物質の中に含まれると考えられる。
【００９９】
練り歯磨きの配合は、当業者にはよく知られている。練り歯磨き組成物では、アニオン性界面活性剤が歯肉の繊細な上皮組織に悪影響を及ぼすので、非イオン性（例えば糖と脂肪酸エステル）または両性（例えばココ由来ベタイン）界面活性剤を使用することが好ましい。練り歯磨きの場合、経口の酸性度を中和するための重炭酸ナトリウムの使用もまた特に好ましい。加えて、練り歯磨きは、練り歯磨き業界で通常使用されるものに加えて、キサンタンガム、研磨性シリカ充填剤、および他の補助剤などの増粘剤を含有することができる。好ましくは、乳酸菌は練り歯磨きに導入されるために他の形態でカプセル化または保護される。
【０１００】
当業者には公知であるように、本明細書で使用されるときに「マウスウォッシュ、「マウスリンス、「デンタルリンス」、「口腔洗浄剤、または「口浴」は、消極的に口内に保持される液体組成物、口周囲の筋肉収縮および／または頭部の動きで口の周りを洗い流す液体組成物を指し、また、うがいをしてもよく、その場合は頭部が後方に傾斜し、液体が口の奥でバブリングされる。通常、マウスウォッシュは、口腔内の微生物負荷を軽減することを目的とする消毒液であるが、他のマウスウォッシュを、鎮痛剤、抗炎症または抗真菌作用などの他の理由のために与えられるかもしれない。さらに、いくつかのリンスは、酸を中和したり、口腔乾燥（口渇）では口を湿らしておく唾液の代替として機能する。水に加えて、グリセリンまたはグリコールのようなポリヒドロキシル化合物（例えば、プロピレングリコール、非イオン性界面活性剤、等）および他の添加剤は、外観、風味を改善するため、および保存が含まれ得る。
【０１０１】
スプレーはマウスウォッシュと同等または類似の組成物であるが、その後のすすぎ洗いを必要とせずに口を湿らせそして保護するのに必要な用量の便利な適用のためにスプレーボトルに分配される。
【０１０２】
経口ゲルは、口腔への直接的で安定した適用を可能にするポリマーを含む。これらのポリマーに関して、本発明の目的のために、極端な温度条件下で非常に長期間にわたってゲル構造を安定に保つので、ポリカルボフィルおよびカルボマーとして一般に知られているポリマーの組み合わせを使用することが好ましい。ゲルは、ソルビトールなどの、ある量の天然の非齲蝕原性甘味料も含み得る。
【０１０３】
別の実施形態では、パーソナルケア製品は化粧品であり、それは本発明のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株または組成物を化粧品として許容される賦形剤と共に含む。「化粧品」または「化粧品」は洗浄、美化、魅力の上昇、あるいは身体の構造や機能に影響を与えずに外観を変えるために人体に適用されることを意図した製品である。化粧品にも治療的利点がある。
【０１０４】
「化粧品として許容される」という用語は、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、不適合性、不安定性およびアレルギー反応なしにヒトの皮膚と接触して使用するのに適している化合物、材料、組成物および／または剤形を指す。各「化粧品として許容される」担体、賦形剤などもまた、化粧品配合物の他の成分と相溶性であるという意味で「許容される」ものでなければならない。化粧品配合物に適した担体、賦形剤などは標準的な教科書に見出すことができる。
【０１０５】
化粧品の非限定的な例としては、クレンジングパッド、コロン、綿棒、コットンパッド、アイライナー、ティッシュペーパー、バリカン、リップグロス、口紅、ローション、メイクアップ、ネイルファイル、ポマード、香料、カミソリ、シェービングクリーム、保湿剤、滑石粉、トイレットペーパーおよびウェットワイプ（リキッドまたはパウダーファンデーション、リキッドまたはソリッドアイライナー、マスカラ、クリームアイシャドー、着色パウダー、乾燥または湿らせた「パンケーキ」タイプのパウダーなどを含むがこれらに限定されない）が挙げられる。
【０１０６】
医薬品および栄養補助食品
一態様では、本発明のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株および組成物は医薬品として製剤化される。「医薬品」という用語は、本明細書では、活性成分である発明の菌株と任意選択で少なくとも一つの防腐剤を、好ましくは薬剤的に許容される賦形剤と一緒に組成物の形態で含む任意の組成物を包含する広い意味で理解される。この用語は医薬品に限定されない。
【０１０７】
「薬剤的に許容される」という用語は当技術分野において認識されており、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症がなく、合理的な利益／リスク比に見合っている、被験者（例えばヒト）の組織と接触して使用するのに適した化合物、材料、組成物、担体、ビヒクルおよび／または剤形を含む。各担体、賦形剤なども、製剤の他の成分と適合性があるという意味で「許容され」なければならない。適切な担体、賦形剤などは、標準的な製薬テキストに見出すことができる。薬剤的に許容される担体として機能し得る材料のいくつかの非限定的な例としては、ラクトース、グルコース、スクロースなどの糖類；コーンスターチ、ポテトスターチなどの澱粉類；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、酢酸セルロースなどのセルロースと誘導体；トラガカント粉；麦芽；ゼラチン；タルク；カカオバター、坐剤のワックス；ピーナッツ油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、大豆油などの油；プロピレングリコールなどのグリコール類；グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコールなどのポリオール類；オレイン酸エチル、ラウリン酸エチルなどのエステル類；寒天；水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝液；医薬製剤に用いられる他の無毒性の適合性物質が挙げられる。
【０１０８】
賦形剤は、限定されないが、充填剤／希釈剤／増量剤、結合剤、付着防止剤、崩壊剤、コーティング剤、固化防止剤、酸化防止剤、潤滑剤、甘味剤、香味剤、着色剤、界面活性剤、他の製剤的に獣医学で許容される賦形剤クラスを含む群から選択される。
【０１０９】
充填剤は、限定されないが、イヌリン、オリゴフルクトース、ペクチン、変性ペクチン、微結晶セルロース、ラクトース、デンプン、マルトデキストリン、サッカロース、グルコース、フルクトース、マンニトール、キシリトール、非結晶ソルビトール、炭酸カルシウム、リン酸二カルシウム、他の不活性な無機、有機の薬剤的に許容される充填剤、これらの物質の混合物を含む群から選択される。経口懸濁液の剤形では、充填剤または希釈剤は、植物油、オレイン酸、オレイルアルコール、液体ポリエチレングリコール、他の薬理学的に許容される不活性液体、またはこれらの物質の混合物を含む群から選択される。
【０１１０】
結合剤は、例えば錠剤中の成分を一緒に保持するために、錠剤および顆粒を必要な機械的強度で確実に形成することができるように、そして低活性用量錠剤に容量を与えるために固体剤形で使用される。錠剤のような固形剤形の結合剤は、ラクトース、スクロース、コーンスターチ、トウモロコシデンプン、微結晶セルロース、変性セルロース（例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）およびヒドロキシエチルセルロース）、他の水溶性セルロースエーテル、ポビドンとしても知られるポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリエチレングリコール、ソルビトール、マルチトール、キシリトールおよび二塩基性リン酸カルシウム、他の適切な薬理学的に許容される結合剤、またはこれらの物質の混合物である。
【０１１１】
付着防止剤は、粉末（顆粒）とパンチ面との間の付着を減少させるために使用され、したがって錠剤パンチへの付着を防止する。付着防止剤はまたタブレットを固着から保護するのを助けるためにも使用される。最も一般的に使用されているのはステアリン酸マグネシウムである。
【０１１２】
錠剤およびカプセル剤のような固体剤形の崩壊剤および超崩壊剤としては、限定されないが、次の物質が使用される：架橋ポリビニルピロリドン、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、およびホルムアルデヒド−カゼイン、他の適切な薬理学的に許容される崩壊剤超崩壊剤、またはそれらの混合物。
【０１１３】
錠剤およびカプセル充填用顆粒などの固体剤形の場合のコーティングは、空気中の湿気による劣化から成分を保護し、大きくて不快な味のある錠剤を飲み込みやすくし、および／または腸溶性コーティングの場合には無傷を保証する胃液の強酸性媒体（ｐＨ１前後）を通過し、十二指腸または回腸（小腸）で放出される。ほとんどのコーティング錠では、セルロースエーテルヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）フィルムコーティングが使用されている。時折、他のコーティング材料、例えば合成ポリマーおよびポリビニルアセテートフタレート（ＰＶＡＰ）のようなコポリマー；アクリル酸メチル−メタクリル酸のコポリマー；メタクリル酸メチル−メタクリル酸の共重合体；セラック、コーンプロテインゼインまたは他の多糖類；ワックスまたは蜜ろう、ステアリン酸などのワックス様物質；セチルまたはステアリルアルコールのような高級脂肪族アルコール；固形パラフィン；モノステアリン酸グリセリン；グリセロールジステアレート、またはそれらの組み合わせが使用される。カプセルはゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースでコーティングされる。
【０１１４】
腸溶性コーティングは、薬物放出速度を制御し、そして薬物が消化管内のどこに放出されるかを決定する。腸溶性コーティングに使用される材料としては、脂肪酸、ワックス、シェラック、プラスチック、および植物繊維ならびにそれらの混合物が、他の上記のコーティングと組み合わせて含まれる。
【０１１５】
固化防止剤は、塊の形成（ケーキング）を防止し、包装、輸送、および消費を容易にするために粉末状または粒状の材料に入れられた添加剤である。錠剤、カプセル剤、または散剤のような固形剤形の固結防止剤としては、ステアリン酸マグネシウム、コロイド状二酸化ケイ素、タルク、他の薬理学的に許容される固化防止剤、またはそれらの混合物が使用される。
【０１１６】
滑沢剤は、固形剤形、特に錠剤およびカプセル剤において、成分が互いに凝集して錠剤パンチまたはカプセル充填機に固着するのを防ぐために、そしてまた硬カプセル剤中にも使用される。滑剤としては、タルクまたはシリカ、ならびに脂肪、例えば植物性ステアリン、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸、およびそれらの混合物が、錠剤または硬ゼラチンカプセル剤において最も頻繁に使用される滑剤である。
【０１１７】
甘味料は、特に固形剤形、例えばチュアブル錠、および咳止めシロップのような液体剤形において、成分をより美味しくするために加えられる。甘味料は、人工、天然または合成または半合成の甘味料から選択することができる。甘味料の非限定的な例は、アスパルテーム、アセスルファムカリウム、シクラメート、スクラロース、サッカリン、糖またはそれらの任意の混合物である。
【０１１８】
フレーバーは、任意の剤形において不快な味のある活性成分を隠すために使用することができる。香味料は、天然（例えば、果実抽出物）または人工のものであり得る。例えば、以下を改善するために：（１）苦い製品、ミント、チェリーまたはアニスを使用することができる。（２）塩味のある製品、モモ、アプリコット、またはカンゾウを使用することができる。（３）酸味のある製品、ラズベリー。（４）過度に甘い製品、バニラを使用することができる。
【０１１９】
賦形剤のクラスからの補助物質を除いて、本発明による製剤は、限定はしないが、医薬的に許容される化学形態のビタミンＤ（カルシフェロール）、塩または誘導体などの他の薬理活性または栄養物質を含み得る。製薬上および栄養上許容される化学形態のミネラル。そしてＬ−アミノ酸を含有することができる。本発明の製剤の調製に関しては、当業者の範囲内であり、そして最終投与製剤に依存するであろう。例えば、限定されないが、最終剤形が錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、経口懸濁剤などの経口固形剤である場合、製剤の固形剤形の調製方法は、以下の均質化を含む。（１）有効量の本発明の少なくとも１種以上の後処理プロバイオティクス細菌を含む活性成分。（２）例えば必要に応じて、ステアリン酸マグネシウムまたは他の滑剤で滑沢処理して最終的な剤形の粉末を生成する、均質な混合物を形成するための１種以上の賦形剤との混合物。このような均質粉末は、通常のゼラチンカプセル、あるいは胃抵抗性カプセルに充填されている。錠剤の場合、それらは直接圧縮または造粒により製造される。第一の場合には、活性成分と無水ラクトース、非結晶性ソルビトールなどのような適切な賦形剤との均質混合物を調製する。第二の場合には、錠剤を顆粒状の混合物に加工する。顆粒剤は、製剤の有効成分を適当な増量剤、結合剤、崩壊剤および少量の精製水で造粒することにより製造される。そのように調製された顆粒を篩過しそして＜１％ｗ／ｗの含水量まで乾燥する。
【０１２０】
液体剤形（例えば経口懸濁剤）の調製方法に関しては、ヒマワリ、ダイズ、オリーブ油などの種々の植物油；オレイルアルコール；ＰＥＧ  ２００、ＰＥＧ  ４００、ＰＥＧ  ６００などの液体ポリエチレングリコール；他の不活性な薬理学的に許容される液体など、不活性な液体希釈剤（フィラー）中に有効量で本発明の少なくとも１種以上の後処理プロバイオティック細菌を含む製剤の活性成分の均質化が含まれる。この方法はさらに、（１）ミツロウ、コロイド状二酸化ケイ素などの懸濁安定剤の添加および均質化による配合物の安定化、（２）甘味料の添加と均質化による製剤の甘味化、（３）香味剤の添加と均質化による製剤の香り付け、を含む群から選択される１つ以上の方法による均一混合物の処理が含まれる。そのような形態の製剤は、当技術分野で通常使用されている他の賦形剤または成分も含有することができる。
【０１２１】
医薬品は、製品の承認ルートおよび国によって異なる形式または名前を採用することができる。例えば、薬物は特定の医薬品である。医療用食品は、他の特定の医薬品である。「医療用食品」または「特別な医療目的のための食品」という用語は、通常の食事だけでは満たすことができない特有の栄養ニーズを有する疾患の食事管理を目的として特別に処方された食品を指すために使用される。それらは、米国におけるＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ‘ｓ  １９８８  Ｏｒｐｈａｎ  Ｄｒｕｇ  Ａｃｔ  Ａｍｅｎｄｍｅｎｔｓ、および欧州におけるＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎ  Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ  １９９９／２１／ＥＣなどの規制で定義されている。医療用食品は、より幅広いカテゴリーの補助食品や栄養機能表示がある伝統的食品とは異なる。したがって、特定の実施形態では、本発明の菌株は医療用食品として処方される。
【０１２２】
しばしば、本明細書に開示されているもののような、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株および組成物は、食品サプリメントと見なされる。ダイエタリーサプリメントまたは栄養補助食品としても知られる食品サプリメントは、他の特定の医薬品と見なされる。食品サプリメントは、通常食物に使用される化合物から作られた食物を補うことを目的とした調剤または製品であり、通常の食物には通常摂取されないか十分な量で消費されない栄養または有益な成分を提供する。ほとんどの場合、食品サプリメントは食品と見なされているが、時には薬、自然健康食品、または栄養補助食品として定義される。本発明の意味において、食品サプリメントは栄養補助食品も含む。食品サプリメントは通常「店頭で」、つまり処方箋なしで販売されている。食品サプリメントがピル、カプセル、錠剤または粉末の形態をとる場合、それは医薬品に使用されるものと同じ賦形剤を含む。しかしながら、食品サプリメントは、いくつかの栄養素（例えば、バーまたはヨーグルト）で強化されている食品の形をとることもできる。したがって、特定の実施形態では、本発明の株は食品サプリメントとして処方される。食品サプリメントは、それ自体で投与することができ、水、ヨーグルト、ミルクまたはフルーツジュースなどの適切な飲用液体と混合することができ、あるいは固体または液体食品と混合することができる。これに関連して、食品サプリメントは、錠剤またはトローチ剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、懸濁剤、サシェ剤、甘味剤、バー剤、シロップ剤および対応する投与形態、通常単位用量の形態であり得る。
【０１２３】
本発明の菌株は、乳製品（ヨーグルト、チーズ、発酵乳、粉乳、牛乳ベースの発酵製品、アイスクリーム、発酵シリアルベース製品、ミルクベース粉末）、パン、バー、スプレッド、ビスケット、シリアル、飲料、種々のタイプの油ま、ドレッシングなど様々な食品に含まれ得る。用語「食品」は、本明細書では、動物によって摂取され得るが、医薬品および獣医学製品を除く、あらゆる形態の製品を含む、その最も広い意味で使用される。他の食品の例は、肉製品、チョコレートスプレッド、フィリングおよびフロスティング、チョコレート、菓子類、焼き菓子、ソースおよびスープ、フルーツジュースおよびコーヒーホワイトナーである。特に興味深い食品は、食品サプリメントと乳児用調製粉乳である。食品は、オートミール粥、乳酸発酵食品、レジスタントスターチ、食物繊維、炭水化物、タンパク質およびグリコシル化タンパク質などの担体材料を含むことが好ましい。特定の実施形態では、本発明の株はカプセル化または被覆されている。
【０１２４】
本発明の別の態様は、抗凍結剤、本発明の少なくとも一つの乳酸菌を含む凍結乾燥バイオマス、薬剤的に許容される担体を含む固形組成物に関する。薬剤的に許容される担体は、好ましくは、エマルジョン、ゲル、ペースト、顆粒、粉末、ガムから選択される。本発明のさらなる態様は、前の態様で定義されたような有効量の組成物を含む口腔ケア製品、医薬組成物、および食用製品、ダイエタリーサプリメントおよび化粧品組成物を提供する。特定の実施形態では、口腔ケア製品は、チューインガム、練り歯磨き、マウススプレー、ロゼンジ、または経口分散錠剤である。特定の実施形態では、医薬組成物、食用製品またはダイエタリーサプリメントは、ロゼンジまたは経口分散錠剤である。
【０１２５】
医療用途および使用方法
本発明の一態様は、医薬として使用するための本発明のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株および組成物に関する。あるいは、この態様は、本発明の第１の態様で定義された少なくとも１つの単離された乳酸菌株を含む有効量の組成物を、それを必要とするところに投与することを含む、プロバイオティック治療方法として処方できる。本明細書で使用される「プロバイオティック」という用語は、適切な量で投与されたときに宿主に健康上の利益を与える生きた微生物を指す。
【０１２６】
具体的には、ヒト宿主においていくつかの有益な効果を発揮することにおいて、本発明の株は、細菌叢構成異常と関連する、あるいは病原菌に起因する疾患、症状の治療に有用である。本明細書で使用されるように、細菌叢構成異常（細菌異常増殖症とも呼ばれる）は、体表、身体内部の微生物の不均衡若しくは不適応に関する用語である。例えば、皮膚微生物叢、腸内細菌叢、膣内細菌叢、経口などのヒト微生物叢の一部は乱されることがあり、通常共生優勢種は過少表示され、通常は競合種または含有種が空隙を埋めるように増加する。有益な微生物の喪失、病原体の拡大、そして多様性の喪失は、細菌叢構成異常をもたらす事象である。細菌叢構成異常は、抗生物質、防腐剤の不適切な繰り返し使用による曝露に起因する可能性がある。したがって、本発明の一態様は、細菌叢構成異常、細菌叢構成異常に関連する状態の予防および／または治療に使用するための、防腐剤との併用に有用な本発明の菌株である。
【０１２７】
別の態様は、細菌叢構成異常、細菌叢構成異常に関連する状態の予防および／または治療に使用するための本発明の組成物に関する。
【０１２８】
本発明の菌株は、歯科衛生において特に有用である。したがって、一態様において、本発明は、ヒトを含む動物の口腔内の障害の予防および／または治療に使用するための、防腐剤と組み合わせて使用するための本発明の組成物および株を提供する。あるいは、本態様は、ヒトを含む動物の口腔内の障害の予防および／または治療用の医薬の製造のための本発明の株または組成物の使用として処方することができる。またあるいは、本発明はまた、それを必要とする動物に本発明で定義される株または組成物を投与することを含む、ヒトを含む動物の口腔内の障害の予防および／または治療方法を提供する。
【０１２９】
特に、口腔内の疾患は口腔病原体によって引き起こされる。「口腔病原体によって引き起こされる口腔からの障害」の例示的で非限定的な例は、歯垢関連疾患、虫歯、歯肉炎、歯周炎、カンジダ症、ヘルペスおよび潰瘍、ならびに口臭、染色歯、知覚過敏の歯、インプラント周囲疾患である。
【０１３０】
一実施形態では、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株およびその組成物は、歯肉炎、歯周炎およびインプラント周囲病を含むがこれらに限定されない歯周病の治療および／または予防に使用される。特に、歯周病は歯肉炎または歯周炎である。
【０１３１】
さらなる実施形態では、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株および組成物は、カンジダ症の治療および／または予防のために使用される。
【０１３２】
歯周治療は、典型的には最初に削り取ることによってまたは超音波によって歯肉縁下プラークを機械的に除去することである。この機械的除去により、バイオフィルム中の細菌が放出されて洗い流される。この治療の過程で、グラム陰性菌による再コロニー形成を防ぐように設計されている消毒組成物が今日使用されている。しかしながら、防腐剤を含有する組成物を定期的かつ広範に使用することの不利な点は、これらの製品の副作用および共生微生物相に対する有害な影響である。
【０１３３】
別の実施形態では、本発明の菌株および組成物は皮膚疾患を治療するのに有用である。皮膚疾患の例としては、限定されないが、爪の真菌感染症、表面的な皮膚疾患（例えば、丹毒、開放創傷感染、にきび、膿瘍、おでき、湿疹、皮膚炎、接触皮膚炎、過敏症、接触病変、床ずれ、および糖尿病性病変）が挙げられる。
【０１３４】
スクリーニング方法
本発明の一態様は、以下の工程、
ｉ）乳酸菌株候補のプールから個々の乳酸菌の防腐剤に耐える能力をアッセイすること、および
ｉｉ）Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓよりも高い防腐剤に耐える能力を有する乳酸菌株を選択および単離すること、を含む、乳酸菌株のスクリーニングおよび単離方法を提供する。
【０１３５】
一実施形態では、防腐剤に耐える能力は、ディスク拡散アッセイによって決定される阻害ハロとして表される。
【０１３６】
特定の一実施形態では、防腐剤に耐える能力は、以下の工程、
ｉ）乳酸菌の０．１Ｍリン酸緩衝生理食塩水中懸濁液を、Ｍｃ  Ｆａｒｌａｎｄ標準Ｎｏ．３に相当する光学密度でプレート内の栄養培地上に均一に拭き取り、コンフルエントな層を得ること、
ｉｉ）直径６ｍｍのセルロースディスクを栄養培地と接触させること、
ｉｉｉ）Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの増殖を抑制する濃度で防腐剤をセルロースディスクに添加すること、
ｉｖ）嫌気的または微好気的条件下、３７℃で一晩インキュベートすること、
ｖ）２４〜４８時間後にプレートを平らな台の上に置くことによって阻害ゾーンをミリメートルで測定すること、
ｖｉ）結果を抑制ハロとして表現すること、を含む。
【０１３７】
当業者は、試験されるべき乳酸菌株の栄養要求に従って工程ｉ）〜ｉｉ）の栄養培地を日常的に選択することができる。
【０１３８】
一実施形態では、乳酸菌のスクリーニングおよび単離方法は、パーソナルケア用の乳酸菌株のスクリーニングおよび単離に使用される。特定の実施形態では、当該方法は、口腔ケアのために乳酸菌をスクリーニングおよび単離するためのものである。
【０１３９】
一実施形態では、防腐剤に耐える能力をアッセイするために使用される乳酸菌株候補のプールは、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属またはＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属の乳酸菌株を含む。特に、候補株はＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株、より詳細にはＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ株である。
【図面の簡単な説明】
【０１４０】
【図１】トリクロサンに対する細菌の耐性は、ディスク拡散アッセイによって決定されたミリメートル（ｍｍ）での阻害ハロ（Ｉｎｈ）として表される。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ  ＣＤ２（Ｌ．ｂ．ＣＤ２）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＡＢ１３４（Ｐ．ａ．ＡＢ１３４）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ  ８６３３（Ｐ．ａ．ＣＥＣＴ  ８６３３）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ  ＣＥＣＴ  ８３３０（Ｐ．ｐ．ＣＥＣＴ８３３０）；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｏｒａｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓＫ１２（Ｓ．ｓＫ１２）；とＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ。
【図２】チモールに対する細菌の耐性は、ディスク拡散アッセイによって決定されたミリメートル（ｍｍ）での阻害ハロ（Ｉｎｈ）として表される。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ  ＣＤ２（Ｌ．ｂ．ＣＤ２）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＡＢ１３４（Ｐ．ａ．ＡＢ１３４）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ  ８６３３（Ｐ．ａ．ＣＥＣＴ  ８６３３）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ  ＣＥＣＴ  ８３３０（Ｐ．ｐ．ＣＥＣＴ８３３０）；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｏｒａｌｉｓ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  Ｋ１２（（Ｓ．ｓ．Ｋ１２）；とＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ。
【図３】Ｌｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｏｒｉｇｉｎａｌ（登録商標）に対する細菌の耐性は、ディスク拡散アッセイによって決定されたミリメートル（ｍｍ）での阻害ハロ（Ｉｎｈ）として表された。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ  ＣＤ２（Ｌ．ｂ．ＣＤ２）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＡＢ１３４（Ｐ．ａ．ＡＢ１３４）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ  ８６３３（Ｐ．ａ．ＣＥＣＴ  ８６３３）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ  ＣＥＣＴ  ８３３０（Ｐ．ｐ．ＣＥＣＴ８３３０）；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｏｒａｌｉｓ。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  Ｋ１２（Ｓ．ｓ．Ｋ１２）；とＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ。
【図４】Ｌｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｚｅｒｏ（登録商標）に対する細菌の耐性は、ディスク拡散アッセイによって決定されたミリメートル（ｍｍ）での阻害ハロ（Ｉｎｈ）として表される。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ  ＣＤ２（Ｌ．ｂ．ＣＤ２）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＡＢ１３４（Ｐ．ａＡＢ１３４）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ  ８６３３（Ｐ．ａＣＥＣＴ  ８６３３）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ  ＣＥＣＴ  ８３３０（Ｐ．ｐ．ＣＥＣＴ８３３０）；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｏｒａｌｉｓ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  Ｋ１２（Ｓ．ｓ．Ｋ１２）；とＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ。
【図５】クロルヘキシジンに対する細菌の耐性は、ディスク拡散アッセイにより決定されたミリメートル（ｍｍ）単位での阻害ハロ（Ｉｎｈ）として表される。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ  ＣＤ２（Ｌ．ｂ．ＣＤ２）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＡＢ１３４（Ｐ．ａＡＢ１３４）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ  ８６３３（Ｐ．ａＣＥＣＴ  ８６３３）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ  ＣＥＣＴ  ８３３０（Ｐ．ｐ．ＣＥＣＴ８３３０）；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｏｒａｌｉｓ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  Ｋ１２（Ｓ．ｓ．Ｋ１２）；とＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ。
【図６】グルコン酸クロルヘキシジンに対する細菌の耐性は、ディスク拡散アッセイにより決定されたミリメートル（ｍｍ）での阻害ハロ（Ｉｎｈ）として表される。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ  ＣＤ２（Ｌ．ｂ．ＣＤ２）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＡＢ１３４（Ｐ．ａＡＢ１３４）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ  ８６３３（Ｐ．ａＣＥＣＴ  ８６３３）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ  ＣＥＣＴ  ８３３０（Ｐ．ｐ．ＣＥＣＴ８３３０）；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｏｒａｌｉｓ；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  Ｋ１２（Ｓ．ｓ．Ｋ１２）；とＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ。
【図７】２０μｌのクロルヘキシジングルコネート０．１２％（ｖ／ｖ）を含浸させた６ｍｍセルロースディスクの周囲のＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  Ｋ１２（Ｓ．Ｓ．）およびＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ（Ｐ．ｇ．）について阻害のハロが観察された。
【図８】異なる濃度のＬｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｚｅｒｏ（登録商標）の有りまたは無し（対照）でのＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  Ｋ１２の増殖速度（Ｃ、防腐剤を含まない対照；１：１、無希釈；１：２、２倍希釈、１：４、４倍希釈；１：８、８倍希釈）。Ｘ軸＝時間（ｔ）、時間（ｈ）である。
【図９】異なる濃度のＬｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｚｅｒｏ（登録商標）の有りまたは無し（対照）でのＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｏｒａｌｉｓの増殖速度（Ｃ、防腐剤を含まない対照；１：１、無希釈；１：２、２倍希釈、１：４、４倍希釈；１：８、８倍希釈）。Ｘ軸＝時間（ｔ）、時間（ｈ）である。
【図１０】異なる濃度のＬｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｚｅｒｏ（登録商標）の有りまたは無し（対照）でのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ  ＣＤ２の増殖速度（ｃ、防腐剤を含まない対照；１：１、無希釈；１：２、２倍希釈、１：４、４倍希釈；１：８、８倍希釈）。Ｘ軸＝時間（ｔ）、時間（ｈ）である。
【図１１】異なる濃度のＬｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｚｅｒｏ（登録商標）の有りまたは無し（対照）でのＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ  ＣＥＣＴ８３３０の増殖速度（Ｃ、防腐剤を含まない対照；１：１、無希釈；１：２、２倍希釈、１：４、４倍希釈；１：８、８倍希釈）。Ｘ軸＝時間（ｔ）、時間（ｈ）である。
【図１２】異なる濃度のＬｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｚｅｒｏ（登録商標）の有りまたは無し（対照）でのＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＡＢ１３４  の増殖速度（Ｃ、防腐剤を含まない対照；１：１、無希釈；１：２、２倍希釈、１：４、４倍希釈；１：８、８倍希釈）。Ｘ軸＝時間（ｔ）、時間（ｈ）である。
【図１３】異なる濃度のＬｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｚｅｒｏ（登録商標）の有りまたは無し（対照）でのＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３  の増殖速度（Ｃ、防腐剤を含まない対照；１：１、無希釈；１：２、２倍希釈、１：４、４倍希釈；１：８、８倍希釈）。Ｘ軸＝時間（ｔ）、時間（ｈ）である。
【図１４】乳酸菌株の生存率（Ｓ．ｒ）は、液体培地アッセイによって決定されたときに百分率（ｍｍ）として表された。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ  ＣＤ２（Ｌ．ｂ．ＣＤ２）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＡＢ１３４（Ｐ．ａ．ＡＢ１３４）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ  ８６３０（Ｐ．ａＣＥＣＴ  ８６３０）；Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ  ＣＥＣＴ  ８３３０（Ｐ．ｐ．ＣＥＣＴ  ８３３０）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｏｒａｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  Ｋ１２（（Ｓ．ｓ．Ｋ１２）。
【図１５】口腔病原体Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ，Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｄｅｎｔｉｃｏｌａ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｄｅｎｔｉｃｏｌａに対する増殖阻害（ＧＩ）をミリメートル単位で表したＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  Ｋ１２、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ  ＡＴＣＣ  ５５７３０、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３の拮抗活性。
【図１６】試験開始時と比較して最悪の歯肉炎指数スコア（ＧＩ＝３）を示す歯の表面数の減少。黒いバーは標準的な口腔ケア手順（プラセボグループ）に従った被験者のグループを表す．白いバーは、標準的な口腔ケア手順とプロバイオティクス（プロバイオティクスグループ）を加えた被験者のグループを示す。Ｙ軸＝３に等しい歯肉指数を有する歯の表面の数（Ｎｔ．ｓｕｒｆ．ＧＩ＝３）。
【図１７】病原体Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ  ｆｏｒｓｙｔｈｉａおよびＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの濃度の変化（ΔＣｏｎｃ＝試験終了時の濃度−試験開始時の濃度は対数で表示）黒いバーは標準的な口腔ケア手順に従った被験者のグループ（プラセボグループ）を示し、いバーは、標準的な口腔ケア手順とプロバイオティクス（プロバイオティクスグループ）を併用した被験者のグループを示す。
【実施例】
【０１４１】
実施例１．Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３の単離および同定
乳酸菌候補は、０〜９歳の子供の新鮮な便から分離した。試料をＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解し、等分し、そして種々の抗生物質の組み合わせを補充したＭＲＳ上に播種した。菌株は３７℃または３０℃の微好気条件下（５％ＣＯ２）で培養した。インキュベーション時間は成長速度に依存したが、通常は２４時間から３日間であった。個々の株の単離は同じ選択培地を用いて進行し、次いでグラム染色を最初の同定を得るために実施した。増殖したら、単離した菌株を、１５％スキムミルク粉末を含むＰＢＳ０．１×中で凍結乾燥することによって保存した。
【０１４２】
種レベルでの同定は、１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子を配列決定することによって行った。バクテリアは５％ＣＯ２を含む雰囲気中３７℃のＭＲＳ培地（ｐＨ６．４）で一晩増殖させた。細菌をさらに回収し、洗浄し、そして溶解前緩衝液（４８０μｌのＥＤＴＡ  ５０ｍＭ  ｐＨ８．０；１２０μｌのリゾチーム１０ｍｇ／ｍｌ）中に再懸濁し、そしてさらに３７℃で６０分間インキュベートした。ＷｉｚａｒｄゲノムＤＮＡ精製キット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてＤＮＡを抽出した。上清を除去するために１４０００ｇで２分間前処理した細菌を遠心分離した後、プロメガのプロトコルに従った。手短に言えば、細菌をＮｕｃｌｅｉ  Ｌｙｓｉｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎに再懸濁し、８０℃で５分間インキュベートした後、室温まで冷却した。細胞溶解物をＲＮａｓｅ溶液中、３７℃で６０分間インキュベートし、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎを加えて高速でボルテックスすることでタンパク質を沈殿させた。試料を冷却し、１５０００ｇで３分間遠心した。ＤＮＡを含有する上清を清潔な１．５ｍｌマイクロフュージチューブに移し、反転によって６００μｌのイソプロパノールと混合した。１５０００ｇで２分間遠心分離し、そして上清を注意深く注ぎ出すことによってＤＮＡを集めた。試験管を数回穏やかに反転させることによって、ＤＮＡサンプルを６００μｌの７０％エタノールで洗浄した。１５０００ｇで２分間遠心分離した後、エタノールを吸引除去した。最後に、６５℃で１時間インキュベートすることにより、ＤＮＡペレットを１００μｌのＲｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎに再懸濁しました。サンプルは２〜８℃で保存した。
【０１４３】
真正細菌Ｅｕｂ２７ｆおよびＥｕｂ１４９２ｒ用のユニバーサルプライマーを使用して、ＰＣＲにより１６Ｓ  ｒＲＮＡを増幅した。次いで、上記のようにして得られたＤＮＡを、キットキアキック（キアゲン）を用いて洗浄した。プライマー２７Ｆ、３５７Ｆ、９０７Ｒおよび１４９２Ｒを用いて、ＢｉｇＤｙｅキットｖ．３．１を用いてＧｅｎｅｔｉｃ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  ３１３０（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）中で各試料について４回の連続した配列決定反応を行った。データ収集およびクロマトグラムは、ＤＮＡ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｖ．５．２ソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して構築し、Ｃｈｒｏｍａｓ（Ｔｅｃｈｎｅｌｙｓｉｕｍ  Ｐｔｙ  Ｌｔｄ．）およびＢｉｏＥｄｉｔ（Ｉｂｉｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いた視覚分析によって確認した。
【０１４４】
Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ  Ｄａｔａｂａｓｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔツールを用いて属の同定を行い、得られた配列と、ＢＬＡＳＴＮによるＲｅｆＳｅｑデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＲｅｆＳｅｑ／）およびリボソームデータベースプロジェクト（ｈｔｔｐ：／／ｒｄｐ．ｃｍｅ．ｍｓｕ．ｅｄｕ／）の両方から得た既知の生物の１６Ｓ配列との比較により種同定を行った。
【０１４５】
菌株ＣＥＣＴ８６３３はＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉとして同定され、２０１４年５月２６日にスペインタイプカルチャーコレクション（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔ  ｄｅＶａｌeｎｃｉａ、Ｃａｍｐｕｓ  ｄｅ  Ｂｕｒｊａｓｓｏｔ、４６１００  ｂｕｒｊａｓｓｏｔ、Ｖａｌeｎｃｉａ、スペイン）に寄託された。寄託株は増殖可能であり、寄託に関連するすべての機能を保持している。
【０１４６】
株ＣＥＣＴ８６３３について得られた１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列は、配列番号１に対応する。
【０１４７】
実施例２．乳酸菌株の防腐剤に対する耐性（ディスク拡散アッセイ）
推定されたプロバイオティック特性を有するＬＡＢ株、すなわちＬ．ｂｒｅｖｉｓ、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ、Ｐ．ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ、Ｓ．ｏｒａｌｉｓおよびＳ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓを適切な栄養培地と共に寒天プレートに播種し、単離したコロニーを得るためにインキュベートした。歯周病に関連する病原体の例として、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ  ＤＳＭ２０７０９を使用した。表１に要約されているように、各株について、使用された栄養培地および大気条件はそれらの適切な増殖に最も適していた。
【０１４８】
表１：アッセイした細菌の栄養培地および増殖条件
【表１】
2019533655.tif 000003
【０１４９】
各微生物について、単離されたコロニーを用いて、Ｍｃ  Ｆａｒｌａｎｄ標準３号と同等の光学密度を有するリン酸緩衝食塩水０．１Ｍ（ＰＢＳ）中の懸濁液を調製した。滅菌綿棒を使用して微生物に均一に播種することによって、懸濁液を対応する栄養培地上の微生物の密集層を得るために使用した（表１）。
【０１５０】
プレートに菌株を接種した直後に、６ｍｍのセルロースディスクを置いた。表２に従って、ディスクに異なる従来の防腐剤を含浸させた。
【０１５１】
表２：乳酸菌耐性の研究に使用される防腐剤
【表２】
2019533655.tif 000004
【０１５２】
使用された容量は、媒体上に広がらずにディスクによって許容された最大容量であった。溶媒は、使用量において細菌に対して阻害性がないことを確認した。微生物を表１の条件に従って増殖させ、２４時間後または４８時間後に微生物の対応する最適増殖条件に従って阻害のハロ（ミリメートル）を測定した。結果は三重に得られた。
【０１５３】
図１は、異なる濃度のトリクロサンの存在下で各微生物について観察された阻害を示す。病原体Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓおよびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．株はトリクロサンによって阻害された。しかしながら、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓもＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属に属する株も阻害されなかった。同様に、チモールは、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓおよびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種の増殖を阻害した。株および最高濃度は１．２ｍｇ／ｍＬを試験したが、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓまたはＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は試験しなかった（図２）。同じ効果が、希釈されていない２０マイクロリットルのＬｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｏｒｉｇｉｎａｌ（登録商標）を含浸させた場合にも見られた（図３）。Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓおよびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ株もまた、リステリンゼロ（登録商標）およびその対応する２倍希釈によって阻害された（図４）。Ｌｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｚｅｒｏ（登録商標）の存在に対するＬ．ｂｒｅｖｉｓの耐性はＬｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｚｅｒｏ（登録商標）の４倍と２倍希釈の存在下では阻害が観察されなかったので、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓとＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓの耐性より大きかった。しかしながら、トリクロサン、チモールおよびＬｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｏｒｉｇｉｎａｌ（登録商標）とは対照的に、希釈されていないＬｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｚｅｒｏ（登録商標）の存在はＬ．ｂｒｅｖｉｓに対して阻害効果を有した。リステリンオリジナル（登録商標）について観察されたように、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株はいずれもリステリンゼロ（登録商標）の存在によって阻害されなかった。
【０１５４】
図５および図６に示すように。クロルヘキシジンおよびグルコン酸クロルヘキシジンは、試験した最高濃度（０．１２％、ｖ／ｖ）で全ての菌株が阻害されたので、最高の抗菌効果を示すマウスウォッシュ消毒剤であった。他のマウスウォッシュ成分と同様に、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓおよびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種はすべての試験濃度においても阻害されたので、最も高いクロルヘキシジン感受性を示した株であった。Ｌ．ｂｒｅｖｉｓは０．１２％と０．０６％の濃度で阻害されたが０．０３％では阻害されなかったことから、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓとＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種より高い耐性を示した。Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ種株はクロルヘキシジンに最大の耐性を示すＬＡＢであることが示された。クロルヘキシジンを含浸させたディスクの周囲に観察された阻害ハロは、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｏｕｓ  ＣＥＣＴ８３３０、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３およびＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＡＢ１３４についてそれぞれ４、３および２ｍｍであり、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの阻害ハロは９ｍｍであった。したがって、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ株はクロルヘキシジンに対して特に耐性があった。同様に、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株はグルコン酸クロルヘキシジンに対して最も高い耐性を示す株であることが示された。図７は、グルコン酸クロルヘキシジン０．１２％の存在下でＳ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  Ｋ１２およびＰ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓと比較して、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３について観察された明らかに低い阻害ハロを示す。
【０１５５】
結論として、防腐剤の抑制効果は病原菌Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓとＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属種からのプロバイオティクスに対してより高いことが示され、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属種が続いた。特に、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属種のプロバイオティクス、詳細にはＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ種に属するプロバイオティクスが防腐剤に耐性であった。
【０１５６】
実施例３：防腐剤に対する乳酸株の耐性（液体培地アッセイ）
ＬＡＣの増殖動態がマウスウォッシュの存在によって影響を受ける可能性があるかどうかを確認するために、Ｌｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｚｅｒｏ（登録商標）の抑制効果を液体培地で調査した。プロバイオティック細菌の一晩培養物を実施例２に記載のように調製した。マクファーランド濁度標準液０．５に相当する光学密度（約１．５Ｅ＋０８  ＣＦＵ／ｍＬ）に達するように、単離したコロニーを使用して滅菌０．１Ｍ  ＰＢＳ中に細菌懸濁液を調製した。続いて、約１．５Ｅ＋０６ＣＦＵ／ｍＬの濃度を得るために１００倍希釈物を調製した。Ｌｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｚｅｒｏ（登録商標）を０．２２マイクロメートルで濾過し、４つの連続した２倍希釈物を調製した。
【０１５７】
表１（実施例２）に従って各微生物の適切な増殖に適した液体増殖培地（１４０マイクロリットル）を９６ウェルマイクロプレートにピペットで入れた。次に、４０マイクロリットルのマウスウォッシュ希釈液を添加し、続いて１Ｅ＋０６ＣＦＵ／ｍＬを含有する２０マイクロリットルの細菌懸濁液を添加した。プロバイオティクスを含まないブランクおよび成分（ＰＢＳ以外）を含まないポジティブコントロールも調製した。２４時間および４８時間でプロバイオティクスを含有するウェルの５５０ｎｍでの光学密度（Ｏ．Ｄ．）を決定し、プロバイオティックを含まない同濃度のマウスウォッシュのウェルのＯ．Ｄ．を引き算して細菌の増殖を評価した。生存率は４８時間の時点で式：
【数１】
2019533655.tif 000005
式中、ＯＤｐは、プロバイオティクスを接種したがマウスウォッシュを含まないウェルの光学密度である（陽性対照）
【０１５８】
ＯＤｂは、プロバイオティクスおよびマウスウォッシュを含まない光学密度であり、ＯＤｍは、プロバイオティクスおよびマウスウォッシュを含むウェルの光学密度であり、ＯＤｍｂは、プロバイオティクスを含まないがマウスウォッシュを含むウェルの光学密度である。
条件は三重に調べた。
【０１５９】
図８〜１３は、異なる濃度のＬｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｚｅｒｏ（登録商標）におけるプロバイオティクス株の増殖動態を示す。結果は、Ｌｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｚｅｒｏが試験した全ての濃度でＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ株の増殖を抑制したことを確認している。ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  Ｋ１２は、１：４および１：８の希釈度でしか増殖することができなかったが、その増殖は陽性対照（マウスウォッシュなしのプロバイオティクス）と比較して劇的に減少した。Ｌｉｓｔｅｒｉｎｅのマウスウォッシュ希釈が元の濃度の８倍に達したときにのみ、Ｓ．ｏｒａｌｉｓは成長することができた。しかしながら、この濃度でも２４時間で増殖は観察されず、そしてプロバイオティクスの量は４８時間で陽性対照よりも約２倍少なかった。Ｌ．ブレビスの増殖率は、培地の接種後４８時間まで増殖が観察されなかったので、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ株より低かった。しかしながら、マウスウォッシュに対するＬ．ｂｒｅｖｉｓ  ＣＤ２の耐性は、マウスウォッシュが希釈されなかった場合にのみ完全に阻害されたため、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ株より高いことが確認された。培地中に２倍、４倍および８倍希釈が存在するときのＬ．ｂｒｅｖｉｓ  ＣＤ２の濃度は約５０％減少した。
【０１６０】
Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ株は、マウスウォッシュに対して最も高い耐性を示すプロバイオティクスであった。十分に希釈されないＬｉｓｔｅｒｉｎｅ（登録商標）の存在は、２４時間でＰ．ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ  ＣＥＣＴ８３３０，Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＡＢ１３４、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３の増殖を阻害した。しかし、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＡＢ１３４およびＰ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３が、４８時間後にこのマウスウォッシュの存在下で増殖できるのは唯一のものであった。
【０１６１】
図１４は、４８時間後の異なる株の生存率を要約する。明らかに、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ株ＣＥＣＴ７７８０およびＣＥＣＴ８６３３が唯一希釈されないマウスウォッシュの存在下で増殖することができたこと、またマウスウォッシュを２倍に希釈したときＬ．ｂｒｅｖｉｓ  ＣＤ２と、特にＰ．ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ  ＣＥＣＴ８３３０がいかに増殖したかが分かる。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ株の生存率はすべての濃度で他のプロバイオティクス株よりも常に低かった。
【０１６２】
実施例４：歯周病原体に対する拮抗作用
歯肉炎、歯周炎および口臭に広く関連する病原体種、すなわちＦｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｄｅｎｔｉｃｏｌａおよびＰｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｄｅｎｔｉｃｏｌａに対して、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３の拮抗能力を試験した。病原体は、パスツール研究所コレクション（それぞれ寄託番号ＣＩＰ１０４９８８、ＣＩＰ１０３９１９およびＣＩＰ１０４４７８Ｔ）から入手した。
Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３をＭＲＳプレート上で３７℃、５％ＣＯ２でコンフルエントになるまで増殖させた。コンフルエントの直径６ミリメートルのシリンダー切片を、Ｆ．ｎｕｃｌｅａｔｕｍおよびＰ．ｄｅｎｔｉｃｏｌａを接種したＭ２０プレートまたはＴ．ｄｅｎｔｉｃｏｌａを接種したＭ７１プレート上に置いた。Ｍ２０プレートの培地は、３０ｇのトリプトン、２０ｇの酵母抽出物、０．５ｇのシステイン塩酸塩、５ｇのグルコースおよび２５ｍＬのヘミン溶液（１リットル当たり０．１ｇの塩化ヘミン、４ｍＬのトリエタノールアミンおよび９６ｍＬの蒸留水）であった。Ｍ７１プレートの培地は、１リットルあたり１５ｇのトリプトン、５ｇの酵母エキス、８ｇのリン酸水素二ナトリウム、１ｇの炭酸アンモニウム、０．５ｇのシステイン塩酸塩、０．０３ｍＬのチオグリコール酸、０．０５ｍＬのＴｗｅｅｎ８０および２５０ｍＬのウマ血清であった。プレートを嫌気性条件下、３７℃で一晩インキュベートした。増殖阻害活性（ＧＩ）は、以下のようにして阻害域直径（ＩＺＤ、ｍｍ）から円柱直径（ＣＤ、ｍｍ）を差し引いて計算した：ＧＩ＝（ＩＺＤ-ＣＤ）／２。
【０１６３】
結果は、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３と同じ条件で増殖させたＳ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ  Ｋ１２（ＢＬＩＳ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｌｔｄ．，Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ）とＬ．ｒｅｕｔｅｒｉ  ＡＴＣＣ  ５５７３０（ＧｕｍＰｅｒｉｏｂａｌａｎｃｅ（登録商標）、ＢｉｏＧａｉａ，Ｓｗｅｄｅｎ）と比較した。
【０１６４】
結果を図１５に示す。Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３は、試験した３つの病原体のうち２つを阻害したＳ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓおよびＬ．ｒｅｕｔｅｒｉの場合にはなかった、試験した３つの病原体の増殖を阻害する能力を示した。また、Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３は、市販対照よりＦ．ｎｕｃｌｅａｔｕｍおよびＴ．ｄｅｎｔｉｃｏｌａの増殖を阻害する高い能力を示しました。
【０１６５】
実施例５：臨床効果
歯肉炎に関連するパラメータを改善するプロバイオティクスとしてのＬＡＢ株の安全性およびそれらの有効性を評価するために、二重盲検無作為化プラセボ対照臨床試験が行われた。
【０１６６】
臨床試験に参加した被験者は、すべての選択基準および除外基準を満たしている。包含基準：１８〜５５歳。男性または女性（バランスの取れたグループ）。非喫煙者（まったく喫煙しないか、以前少なくとも６ヶ月間、喫煙していた者）。平均歯肉炎指数（ＧＩ）＞１．３として定義される自然発症歯肉炎を有する被験者。大部分の部位で、＞２ｍｍを超えない歯間アタッチメントロスのない者。除外基準：関心部位の歯垢除去を妨げる、上顎外側切歯、第一または第二小臼歯および第一大臼歯または隣接する歯の齲蝕性病変および／または不適切な修復のある者。現在歯科治療を受けている被験者。現在歯列矯正療法を受けている、または咬合側咬合ガードを着用している被験者。歯肉組織の応答または適切なプラーク制御を実行する能力（妊娠、糖尿病、定量的および／または定性的多形核細胞欠損症、他の免疫系障害など）に影響を及ぼし得る全身性の疾患または症状を患う被験者。歯肉反応を妨げる可能性のある薬を服用している被験者。試験前の２ヶ月以内に抗生物質または防腐剤を服用している被験者。試験前の２ヶ月以内にプロバイオティクス製品を口腔衛生のために使用している被験者。過敏症や治療薬の任意の成分に対するアレルギー歴のある者。
【０１６７】
０日目に、専門の口腔衛生（歯石除去および歯面研磨）をすべての被験者に実施した。口腔衛生習慣を標準化するために、１日に２回歯磨きをする指示と同様に、フッ化物練歯磨きが提供された。
【０１６８】
以下の２つの治療法のうちの１つに被験者を無作為に割り当てた。
【０１６９】
表３：試験治療
【表３】
2019533655.tif 000006
【０１７０】
各被験者がどの治療法に割り当てられているかは、患者も医療関係者も知らなかった。分散錠剤は同じ性状を有し、収納ケースに研究コードおよび被験者の対応識別番号が書かれた。治験責任医師は参加者に、同じ様相をもつ錠剤が入ったケースを提供した。各志願者に割り当てられた処置（Ａ〜Ｂ）は、日付登録簿に登録された。無作為化は、データが分析された後、または盲検解除を強いる何らかの関連事象があった場合にのみ、研究の終わりに明らかにされた。被験者は対応する製品を６週間摂取した。各歯磨きが終了したら（１日２回）、経口分散錠剤を口の中でゆっくり溶かした。製品を消費した後、参加者は錠剤を消費してから１時間の間、自分の歯をきれいにしたり、食べ物や飲み物（水以外のもの）を飲んだりすることは許されなかった。プロトコル遵守のための質問票に毎日記入することによって、錠剤の摂取量を報告するように被験者に依頼した。各患者の服薬遵守を調査するために、これを未使用の錠剤が入っている箱と一緒に試験官に返した。
【０１７１】
一次エンドポイントは成分プロービング時に出血のない、Ｌｏｅ＆Ｓｉｌｎｅｓｓ（１９６３）方法の変形にしたがった歯肉炎指数（ＧＩ）とした［Ｌoｅ，ｈ．ｅｔ  ａｌ．“Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  ｐｒｅｇｎａｎｃｙ”．Ａｃｔａ  Ｏｄｏｎｔｏｌｏｇｉｃａ  Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉｃａ  １９６３，ｖｏｌ．２１，ｐｐ．５３３−５５１］．各歯の全スコアの合計を検査した歯の総数で割ることによって平均ＧＩを計算した。
【０１７２】
０日目（ベースライン）に、歯肉指数（ＧＩ）を専門的口腔衛生（歯石除去と歯面研磨）の前に決定した。６週間後に同じ変数が決定された。
【０１７３】
臨床検査直前の０日目（ベースライン）および６週目（試験終了）に、各象限（上顎左右／下顎左右）に１つずつ、歯肉縁上プラークサンプルを採取し、プールした。歯肉縁上プラークは、１０秒間その場に置いた滅菌ペーパーポイントを用いて得た。サンプリングした紙の先端をプールし、２００μｌのＴＥ緩衝液（１０ｍｍトリス［ヒドロキシメチル］−メチルアミンクロリド、１ｍｍエチレンジアミン四酢酸）を含む微量遠心管に移し、分析するまで-２０℃で保存した。６つの推定歯周病原体（Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ  ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ；Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ；Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ  ｆｏｒｓｙｔｈｉａ；Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ種；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｏｒａｌｉｓ；Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｒｅｃｔｕｓ）に対する特異的プライマーを有するＴａｑｍａｎプローブに基づくリアルタイムＰＣＲを実施した。
【０１７４】
一次変数および二次変変数はＳＡＳを用いて分析した。全ての分析は、治療企図解析−（ＩＴＴ）とあたりｐｅｒ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ解析（ＰＰ）の基準で行った。データは正規性｛１｝Ｓｈａｐｉｒｏ−Ｗｉｌｋｓ検定用にチェックした。データがパラメトリックに分布している場合、グループ間の一次変数と二次変数の違いは分散分析（ＡＮＯＶＡ）によって決定される。群間の差の正確な性質を知るために、事後Ｐｏｓｔ  Ｈｏｃ（後付け）検定を判定（例えば、Ｄｕｎｃａｎ多重範囲検定）した。データがパラメトリックに分布していない場合、定量的変数の比較はノンパラメトリック検定（対データについてはＷｉｌｃｏｘｏｎ、独立データについてはＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ）によって行った。すべての仮説検定で、帰無仮説は治療群間の同等性を仮定し、Ｐ値が０．０５未満の場合は棄却した。これは、αまたはタイプＩの誤差が＜０．０５の場合に有意差が考慮されたことを意味する。
【０１７５】
５９人の患者を適格性について評価し、プロバイオティクス群（ｎ＝３０）またはプラセボ群（ｎ＝２９）に無作為に分けた。患者のベースライン特性は表４にまとめた通りであった。
【０１７６】
表４：調査母集団の人口統計学的特性
【表４】
2019533655.tif 000007
【０１７７】
患者の９４．２％が少なくとも７５％の治療を受け、プロバイオティクス群は８９．７％、対照群は１００．０％であった。グループ間の治療コンプライアンスに違いはなかった。
【０１７８】
６週目に、ＧＩスコア３を有する個々の歯の表面の数（「個々のＧＩスコア＝３の数」）は、対照群よりもプロバイオティクス群において低かった（ｎ＝０（０．０％）対ｎ＝５（０．２）。％）、ｐ値＝０．０４１８）。
【０１７９】
ベースラインとエンドポイントとの間の変化量（ベースライン−第６週）もまた、対照群（標準治療）よりもプロバイオティクスについて有意に高かった（ＩＴＴまたはＰＰ分析にかかわらず、Ｐ＜０．０１）（図１６）。
【０１８０】
プロバイオティクス含有錠剤による治療は、Ｔａｎｎｅｒｅｌｌａ  ｆｏｒｓｙｔｈｉａならびにＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓのレベルの有意な減少と相関していた（図１７）。
【０１８１】
結論として、プロバイオティクス錠剤は、歯肉炎患者において、専門的口腔衛生単独と比較して重度の炎症を示す部位の数を減らすことができた。プロバイオティクスの使用はまた、研究の個体群において測定された病原菌のうち、歯肉炎の経過に否定的に関与していると広く認識されており、また重度の炎症を示す部位の数と強い相関性を示した病原体、Ｔ．ＦｏｒｓｙｔｈｉａおよびＰ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの菌数の減少と関連する顕著な微生物学的影響力を提示した。
【０１８２】
実施例６：経口分散錠剤における製剤
経口分散錠剤は以下の組成を有する。
１２５ｍｇ  Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３
１．３μｇ  コレカルシフェロール（Ｖｉｔａｍｅｎｔ  Ｄ３）
２０ｍｇ  ミントフレーバー
８０ｍｇ  グアーガム
６８９．５３ｍｇ  ソルビトール
９．３５  シロイド
９．３５  ステアリン酸マグネシウム
【０１８３】
製剤は口腔内でゆっくり融解するのに適している。有効期間終了時のプロバイオティック濃度は、１錠剤あたり１Ｅ＋０９ＣＦＵである。
【０１８４】
あるいは、錠剤は、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３に加えて、
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＣＥＣＴ７４８１、
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ  ＣＥＣＴ７４８０を含む。
【０１８５】
実施例７：経口ゲル中の製剤
バイアルには、以下の成分を含む５００ｍｇの粉末が含まれている。
Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３（有効期間終了時のプロバイオティクスの最小濃度は６Ｅ＋０９  ＣＦＵ／バイアルである）
クロロフィリンＥ１４１ｉｉ（４％、ｗ／ｗ）
グアーガム（５．２％ｗ／ｗ）。
【０１８６】
実施例８：チューインガムにおける処方
チューインガムは以下の組成を含む。
１３４０．６８  ガムベース（ヘルスインガムＰＷＤ−０３）
１２５ｍｇのＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ  ＣＥＣＴ７４８１、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ  ＣＥＣＴ７４８０およびＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３（比率１：１：１）
３１．５２ｍｇ  カプセル化フレーバー
４７．２８ｍｇ  粉末フレーバー
１２．６１ｍｇ  液体フレーバー
２４．０ｍｇ  ステアリン酸マグネシウム
１５．７５ｍｇ  二酸化ケイ素
１．８９ｍｇ  アスパルテーム
１．２６ｍｇ  アセスルファムＫ  
【０１８７】
実施例９：練り歯磨きの配合
練り歯磨きの処方は、
１２５ｍｇのＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３
０．１２  クロルヘキシジンジグルコネート
１ｇ  キシリトール
０．５  ｇ  α−トコフェロールアセテート
１００ｇ  賦形剤
【０１８８】
あるいは、練り歯磨きの処方は：
有効期間の終わりに１Ｅ＋０９ＣＦＵの最終濃度を達成するためにＰｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ  ＣＥＣＴ８６３３
０．０４  ｇ  グリセリン酸
０．１６  ｇ  フッ化ナトリウム
８ｇＰＥＧ−１２
０．８  ｇ  ゼオライト
５．６  ｇ  シリカ
１．６  ｇ  ポリグリセリル−５ラウレート
０．８  ｇ  キシリトール
０．４８  ｇ  メントール
０．４  ｇ  サッカリンナトリウム
０．４  ｇ  安息香酸ナトリウム
０．２４  ｇ  ユーカリグロブラス
０．０８  ｇ  シクロデキストリン
０．９６  ｇ  ヒドロキシプロピルセルロース
３０．５６  ｇ  ブチレングリコール
【０１８９】
実施例１０：マウスウォッシュの製剤
マウスウォッシュは、デリバリーキャップとバイアルに入っている成分を組み合わせたものである。デリバリーキャップは、１００ｍｇの凍結乾燥プロバイオティック菌株ＣＥＣＴ８６３３（デリバリーキャップ当たり１〜２Ｅ＋０９ｃｆｕ）、ステアリン酸マグネシウム（２．２ｍｇ）（本明細書では、例えば、固化防止剤および抗付着剤と呼ばれる）および二酸化ケイ素（０．５ｍｇ）（本明細書では固化防止剤と呼ばれる）。バイアルは、０．０９２％のユーカリトリプトール、０．０４２％のメントール、０．０６％のサリチル酸メチル、０．０６４％のチモール、および２７％のエタノール（ｗ／ｖ）からなる１０ｍＬのマウスウォッシュを含む。
【０１９０】
キャップを押すことによって、プロバイオティクスはバイアルに入っている液体中に放出される。組成物を混合し、次いで１分間うがいをするために使用する。
【０１９１】
実施例１１：乳酸菌の発酵と後処理
原料として使用される後処理バイオマスは、発酵工程および凍結乾燥工程を含む製造工程によって得られた。Ｐ．ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ株を８０ｍＬのＭＲＳブロス培地に接種することによって、母培養物を調製した。接種した培地を微好気条件下、３７℃で４８時間発酵させた。得られた培養物を、ブロス培地の全体積当たり約１〜２％の接種材料の割合で６００リットルのＭＲＳブロス培地に接種するために使用した。得られた培地を３〜５℃に冷却し、そしてブロス中に存在する水の大部分を除去するために遠心分離した。凍結保護剤を濃縮培養物に添加し、得られた混合物を−４５℃で凍結乾燥した。
【０１９２】
書誌情報
Ｃａｓｔａｌｏｎｇａ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．“Ｔｈｅ  ｏｒａｌ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｃａｒｉｅｓ“Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２１４，ｖｏｌ．１２，ｐｐ．２２−３８．
Ｄａｎｎ  ＡＢ，ｅｔ  ａｌ．“Ｔｒｉｃｌｏｓａｎ：ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ，ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ”Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ２０１１，ｖｏｌ．３１，ｐｐ．２８５−３１１．
Ｆｌoｔｒａ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．“Ｓｉｄｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｃｈｌｏｒｈｅｘｉｄｉｎｅ  ｍｏｕｔｈ  ｗａｓｈｅｓ”．Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｄｅｎｔ  Ｒｅｓ  １９７１，ｖｏｌ．７３，ｐ．１１９−１２５．
Ｇｒｕｎｅｒ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．“Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ｆｏｒ  ｍａｎａｇｉｎｇ  ｃａｒｉｅｓ  ａｎｄ  ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓ：Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｒｅｖｉｅｗ  ａｎｄ  Ｍｅｔａ−Ａｎａｌｙｓｉｓ“．Ｊ  Ｄｅｎｔ  ２０１６，ｖｏｌ．４８，ｐｐ．１６−１５．
Ｈａｆｆａｊｅｅ，ＡＤ．ｅｔ  ａｌ．“Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｅｔｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｇｅｎｔｓ  ｏｆ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ
Ｄｉｓｅａｓｅｓ“Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌｏｇｙ  ２０００．１９９４，ｖｏｌ．５，ｐｐ．７８-１１．
Ｈａｌｌｓｔｒｏｅｍ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．“Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  ｌｏｚｅｎｇｅｓ  ｏｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｏｒａｌ  ｂｉｏｆｉｌｍ  ｄｕｒｉｎｇ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｇｉｎｇｉｖｉｔｉｓ”．Ａｃｔａ  Ｏｄｏｎｔｏｌｏｇｉｃａ  Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉｃａ  ２０１３，ｖｏｌ．７１，ｐ．８２８−８３３。
Ｊｉｎ  ＬＪ  ｅｔ  ａｌ．“Ｇｌｏｂａｌ  ｂｕｒｄｅｎ  ｏｆ  ｏｒａｌ  ｄｉｓｅａｓｅｓ：ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｐｔｓ，ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｐｌａｙ  ｗｉｔｈ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｈｅａｌｔｈ”Ｏｒａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ２０１６
Ｌａｕｄｅｎｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．“Ｃｏｍｍｏｎ  Ｄｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ”Ｍｅｄ  Ｃｌｉｎ  Ｎ  Ａｍ  ２０１４，ｖｏｌ．９８，ｐｐ．１２３９-１２６０
Ｍａｅｋａｗａ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．“Ｔｏｐｉｃａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ  ＣＤ２”ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｂｏｎｅ  ｌｏｓｓ“  Ｊ  Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔ  Ｒｅｓ  ２１４，ｖｏｌ．４４，ｐ．７８５−７９１
Ｎａｄｋｅｒｎｙ  ＰＶ，ｅｔ  ａｌ．“Ａ  ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  ａｎｄ  ｃｈｌｏｒｈｅｘｉｄｉｎｅ  ｍｏｕｔｈｒｉｎｓｅｓ  ｏｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ  ｏｆ  ｇｉｎｇｉｖｉｔｉｓ：Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｙ”Ｊ  ｌｎｄｉａｎ  Ｓｏｃ  Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ  ２０１５  ｖｏｌ  １６，ｐｐ．６３３−６３９
Ｐｅｎａｌａ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．“Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｌｏｃａｌ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ａｓ  ａｎ  ａｄｊｕｎｃｔ  ｔｏ  ｓｃａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｒｏｏｔ  ｐｌａｎｉｎｇ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｈａｌｉｔｏｓｉｓ：Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ”Ｊ  Ｒｅｓ  Ｐｈａｒｍ  Ｐｒａｃｔ．２０１６  Ｖｏｌ．５（２），ｐｐ．８６-９３．
Ｓｚｋａｒａｄｋｉｅｗｉｃｚ，Ａ．Ｋ．ｅｔ  ａｌ．“Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｏｒａｌ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ  ａ  Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  Ｓｔｒａｉｎ  ｏｆ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ  ｏｎ  Ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓ”．Ａｒｃｈ  ｌｍｍｕｎｏｌ  Ｔｈｅｒ  Ｅｘｐ（Ｗａｒｓｚ）２０１４，ｖｏｌ．６２，ｐ．４９５−５００
Ｔｅｕｇｈｅｌｓ，Ｗ．ｅｔ  ａｌ．“Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓ：ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｐｌａｃｅｂｏ−  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｓｔｕｄｙ”Ｊ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌｏｇｙ  ２０１３，ｖｏｌ．４０  ｐ．１０２５−３５．
Ｔｏｉｖｉａｉｎｅｎ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ｏｒａｌｌｙ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｌｏｚｅｎｇｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＧＧ  ａｎｄ  Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｉｍａｌｉｓ  ｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓ  ＢＢ−１２  ｏｎ  ｔｈｅ  ｎｕｍｂｅｒ  ｏｆ  ｓａｌｉｖａｒｙ  ｍｕｔａｎｓ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ，ａｍｏｕｎｔ  ｏｆ  ｐｌａｑｕｅ，ｇｉｎｇｉｖａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｏｒａｌ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ａｄｕｌｔｓ”．Ｃｌｉｎ  Ｏｒａｌ  ｌｎｖｅｓｔｉｇ  ２０１５，ｖｏｌ．１９，ｐ．７７-８３
Ｖｌａｃｈｏｊａｎｎｉｓ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．“Ａ  Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｉｓｔｅｒｉｎｅ（登録商標），Ｉｔｓ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ａｎｄ  ｏｆ  Ｍｉｘｔｕｒｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ”Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１５，ｖｏｌ．２９，ｐｐ．１５９０−１５９４
Ｖｌａｃｈｏｊａｎｎｉｓ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．“Ｌｉｓｔｅｒｉｎｅ（登録商標）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ：Ａｎ  ｕｐｄａｔｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ”Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｈｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１６，ｖｏｌ．３０，ｐｐ．３６７−３７３
Ｙａｎｉｎｅ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．“Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎ  ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ  ｄｉｓｅａｓｅｓ：ａ  ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｒｅｖｉｅｗ”．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｏｒａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ  ２０１３，ｖｏｌ．１７，ｐ．１６２７−３４
Ｌ．Ｄｕｎｎ  ｅｔ  ａｌ（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．８１，Ｎｒ．２，２０１６，ｐａｇｅｓ  Ｍ４３８−Ｍ４４４）
ＷＯ２０１７０１２９０５Ａ１（ＡＢ−ＢＩＯＴＩＣＳ）
【図１】
2019533655.tif 000008
【図２】
2019533655.tif 000009
【図３】
2019533655.tif 000010
【図４】
2019533655.tif 000011
【図５】
2019533655.tif 000012
【図６】
2019533655.tif 000013
【図７】
2019533655.tif 000014
【図８】
2019533655.tif 000015
【図９】
2019533655.tif 000016
【図１０】
2019533655.tif 000017
【図１１】
2019533655.tif 000018
【図１２】
2019533655.tif 000019
【図１３】
2019533655.tif 000020
【図１４】
2019533655.tif 000021
【図１５】
2019533655.tif 000022
【図１６】
2019533655.tif 000023
【図１７】
2019533655.tif 000024
【配列表】
2019533655000001.app
【国際調査報告】
2019533655.tif 000025
2019533655.tif 000026
2019533655.tif 000027