(57)【要約】  本発明は、成長ホルモン欠乏を治療するための、ヒト成長ホルモン融合タンパク質であるＧＸ‐Ｈ９の投与方法に関する。具体的に、本発明は、ｈＧＨ融合タンパク質であるＧＸ‐Ｈ９および薬学的に許容可能な担体を含み、前記融合タンパク質（ＧＸ‐Ｈ９）が、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．３ｍｇの投与量で週１回投与されるか、または患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与される、成長ホルモン欠乏を治療するための薬学組成物に関する。また、本発明は、成長ホルモン欠乏の患者に、ｈＧＨ融合タンパク質であるＧＸ‐Ｈ９を患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．３ｍｇの投与量で週１回投与するか、または患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与するステップを含む、成長ホルモン欠乏を治療する方法に関する。【選択図】図１０
2019508421.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組換えｈＧＨ  ＧＸ‐Ｈ９および薬学的に許容可能な担体を含む成長ホルモン欠乏を治療するための薬学組成物であって、前記組換えｈＧＨが、患者の体重ｋｇ当たり少なくとも０．１ｍｇの投与量で、少なくとも１週間の間隔を伴って少なくとも１回投与される、成長ホルモン欠乏を治療するための薬学組成物。
【請求項２】
前記組換えｈＧＨは、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．３ｍｇの投与量で週１回投与されることを特徴とする請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項３】
前記組換えｈＧＨは、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．２ｍｇの投与量で週１回投与されることを特徴とする請求項２に記載の薬学組成物。
【請求項４】
前記組換えｈＧＨタンパク質は、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与されることを特徴とする請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項５】
前記組換えｈＧＨタンパク質は、患者の体重ｋｇ当たり０．１５〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与されることを特徴とする請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項６】
前記組換えｈＧＨタンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列を含むことを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の薬学組成物。
【請求項７】
皮下に投与されることを特徴とする請求項１〜５のいずれか一項に記載の薬学組成物。
【請求項８】
成長ホルモン欠乏の患者に組換えｈＧＨ、ＧＸ‐Ｈ９を患者の体重ｋｇ当たり少なくとも０．１ｍｇの投与量で、少なくとも１週間の間隔を伴って１回投与するステップを含む、成長ホルモン欠乏を治療する方法。
【請求項９】
成長ホルモン欠乏の患者に組換えｈＧＨ、ＧＸ‐Ｈ９を患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．３ｍｇの投与量で週１回投与するステップを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
成長ホルモン欠乏の患者に組換えｈＧＨ、ＧＸ‐Ｈ９を患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与するステップを含む、請求項８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）にハイブリッドＦｃを融合させて製造した組換えヒト成長ホルモンであるｈＧＨ‐ｈｙＦｃ（ＧＸ‐Ｈ９）を含む、成長ホルモン欠乏を治療するための薬学組成物に関する。 具体的に、本発明は、成長ホルモン欠乏の治療に効果的な組換えｈＧＨ、ＧＸ‐Ｈ９の投与方法に関し、組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）および薬学的に許容可能な担体を含み、前記組換えｈＧＨが、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．３ｍｇの投与量で週１回投与されるかまたは患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与される、成長ホルモン欠乏を治療するための薬学組成物に関する。また、本発明は、 成長ホルモン欠乏の患者に組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）を患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．３ｍｇの投与量で週１回投与するかまたは患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与するステップを含む、成長ホルモン欠乏を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
成長ホルモンは、１９１個のアミノ酸で構成された単一分子のポリペプチドであって、脳下垂体前葉から分泌されるホルモンである。成長ホルモン受容体と結合してＩＧＦ‐１（Ｉｎｓｕｌｉｎ  ｌｉｋｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ‐１）を発現させることで、細胞の成長および再生に関与する。成長ホルモンは、健常者の体では脳下垂体で生産され、思春期まで生産量が増加し、年をとる  につれて生産量が次第に減少すると知られている。
【０００３】
代表的な成長ホルモンの欠乏症状としては、成人成長ホルモン欠乏症（ａｄｕｌｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ、ＡＧＨＤ）と小児成長ホルモン欠乏症（ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ、ＰＧＨＤ）が挙げられる。成人成長ホルモン欠乏症は、脳腫瘍、脳出血などの治療過程で、放射線や手術によって患者の脳下垂体が損傷する場合に発生するか、または特発性で発生する。成長ホルモンが円滑に分泌されないと、体重の減少、骨の無機質密度の減少、脂肪の増加、ＨＤＬの減少、ＬＤＬの増加、筋肉強度の減少などの症状が現れ、生活の質が低下する。成人成長ホルモン欠乏症の患者は、血清中のＩＧＦ‐１の濃度が、同じ年齢帯の健常者に対して標準偏差スコア（ｓｔａｎｄａｒｄ  ｄｅｖｉａｔｉｏｎ  ｓｃｏｒｅ、ＳＤＳ）が−２以下（＜−２ＳＤＳ）または百分位数２．５以内（＜２．５ｐｅｒｃｅｎｔｉｌｅ）に属する。血中成長ホルモンの反応値は、インスリン耐性検査（ＩＴＴ）、アルギニン負荷（ＧＨＲＨ＋ＡＲＧ）検査、グルカゴン（Ｇｌｕｃａｇｏｎ）検査、Ｌ‐ＤＯＰＡ検査、クロニジン（Ｃｌｏｎｉｄｉｎｅ）検査などの刺激試験（ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｔｅｓｔ）により測定することができる。成長ホルモンの最大数値（ｐｅａｋ  ＧＨ）が、肥満度指数（ＢＭＩ）２５ｋｇ／ｍ２未満の患者で１１．０μｇ／Ｌ以下、肥満度指数２５〜３０ｋｇ／ｍ２の患者で８．０μｇ／Ｌ以下、または肥満度指数が３０ｋｇ／ｍ２を超える患者で４．０μｇ／Ｌ以下である場合に、欠乏症と判定する(Guidelines for Use of Growth Hormone in Clinical Practice, Endocr. Pract. 2009;15 (Suppl 2))。 
【０００４】
小児成長ホルモン欠乏症は、脳下垂体の損傷または発達障害がある場合に発生する。成長ホルモンの分泌に障害があると低身長症が発生するが、身長が同じ年齢の成長曲線で下位３％であるか、または年間５ｃｍ以下の成長を示し、低血糖、体力低下、うつ病、および精神的未成熟などの症状が現れることもある。同じ年齢帯で、身長が平均より３ＳＤ以上低い場合、親の身長の平均より１．５ＳＤ以上低い場合、平均身長より２ＳＤ以上低く、同じ年齢の成長に比べて１年以上１ＳＤ以上低い場合、年齢は２歳以上であるがＳＤ値が０．５以上低い場合、または低身長症が発生しなかったが、１年以上２ＳＤ未満であるか２年以上１．５ＳＤを維持する場合に、小児成長ホルモン欠乏症と判定し得る(Consensus guideline for the diagnosis and treatment of GH deficiency in childhood and adolescence: summary statement of the GH Research Society. GH Research Society, J. Clin. Endocrinol. Metab., 2000 Nov; 85(11): 3990-3)。
【０００５】
成人成長ホルモン欠乏症の場合、従来は患者の体重に基づいて薬物の投与量を決定していたが、最近は、患者毎に個別化された用量で治療を行っている。すなわち、予想される治療適正用量より低い用量で治療を始めた後、臨床反応、異常反応（空腹血糖）、またはＩＧＦ‐１数値に応じて、０．１‐０．２ｍｇ／ｄａｙを増加または減少させる方式により調節している。成長ホルモンは、その治療用量を決定する時に、患者の性別、エストロゲン状態、年齢などを考慮すべきである。成人成長ホルモン欠乏症患者の治療の目標は、新陳代謝の正常化および生活の質の改善にある。そのためには、血中のＩＧＦ‐１数値が、年齢と性別による正常範囲（−２ＳＤＳ〜２ＳＤＳ）内での中間（５０ｔｈ  ｐｅｒｃｅｎｔｉｌｅ  ｏｒ  ０  ＳＤＳ）〜１ＳＤＳの範囲に投与用量を適正化すべきである。
【０００６】
小児成長ホルモン欠乏症の場合、患者と診断された後に、できる限り早く治療を始めることを進めている。一般には、成長ホルモンを毎晩皮下投与する用法が用いられており、勧奨用量は２５‐５０μｇ／ｋｇ／ｄａｙである。通常、３ヶ月または６ヶ月毎に周期的に成長速度を確認し、身長の成長、成長速度の変化、患者個別順応度、安全性の確認のための異常反応の確認、および血清中のＩＧＦ‐１またはＩＧＦＢＰ‐３数値などの確認を勧奨している。小児成長ホルモン欠乏症患者の治療の目標は、正常に身長を成長させることにあり、血中のＩＧＦ‐１数値が同じ年齢の平均（５０ｔｈ  ｐｅｒｃｅｎｔｉｌｅ  ｏｒ  ０  ＳＤＳ）に近く維持するように成長ホルモンを投与しなければならない。
【０００７】
１９５０年代に最初に成長ホルモンの治療が始まった時には、成長ホルモンをヒトの死体の脳下垂体から抽出した。１名のヒトから抽出された成長ホルモンの量が極めて少なかったため、供給が非常に制限的であり、高価であった。遺伝子の組換え技術が発達するに伴い、大膓菌で合成した成長ホルモンが発売された（Ｓｏｍａｔｒｏｐｉｎ、１９８１、米国Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社）。現在米国で市販されている組換え成長ホルモン（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｈｏｒｍｏｎｅ）治療剤は、ファイザー（Ｐｆｉｚｅｒ）のジェノトロピン（Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎ）、イーライリリー（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）のヒューマトロープ（Ｈｕｍａｔｒｏｐｅ）、ジェネンテック（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）のニュートロピン（Ｎｕｔｒｏｐｉｎ）、ノボノルディスク（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）のノルディトロピン（Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎ）などがある。
【０００８】
しかしながら、上記のような組換え成長ホルモン製剤は、何れも週６回または週７回の投与を要する１日型剤型である。成人成長ホルモン欠乏症の場合、ヒューマトロープは０．２ｍｇ／ｄａｙ（０．１５‐０．３０ｍｇ／ｄａｙ範囲）の用量で用いられている。ニュートロピンは、体重に基づかずに投与量を決定する場合、開始用量は０．２ｍｇ／ｄａｙ（０．１５‐０．３ｍｇ／ｄａｙ範囲）であり、１‐２ヶ月周期で０．１‐０．２ｍｇ／ｄａｙの用量変更が可能である。体重に基づいてニュートロピンの投与量を決定する場合には、開始用量が０．００５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ以上を超えないように用いられている。用量を増やす必要がある場合には、投薬４週後に、０．０１ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ以上を超えないように増量するようにしている。ノルディトロピンは、体重に基づかずに投与量を決定する場合、開始用量は０．２ｍｇ／ｄａｙ（０．１５‐０．３ｍｇ／ｄａｙ範囲）であり、１‐２ヶ月周期で０．１‐０．２ｍｇ／ｄａｙの用量変更が可能である。体重に基づいてノルディトロピンの投与量を決定する場合には、開始用量が０．００４ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ以上を超えないように用いられている。用量を増やす必要がある場合には、投薬６週後に、０．０１６ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ以上を超えないように増量するようにしている。小児成長ホルモン欠乏症の場合、ジェノトロピンは０．１６‐０．２４ ｍｇ／ｋｇ／ｗｅｅｋの用量で、ヒューマトロープは０．０２６‐０．０４３ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの用量で用いられている。ニュートロピンは０．３ ｍｇ／ｋｇ／ｗｅｅｋの用量で 用いられ、ノルディトロピンは０．０２４‐０．０３４ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの用量で用いられている。
【０００９】
現在の成長ホルモン製剤は１日剤型であって、特に、小児患者の場合には、３‐４年の長い治療期間に毎日薬を注射しなければならないという不便さがあるだけでなく、注射による精神的ストレスが患者の生活の質を低下させると知られている。また、患者が不意に注射を打つことができない問題が頻繁に発生し、治療効果を阻害する最も大きい要因となっている。また、治療年数が増加するにつれて、投与不履行回数が著しく増加すると知られている(Endocrine practice, 2008 Mar; 14(2): 143-54)。約２／３程度の患者が、不履行によって順応度が低くなり、実際にこれによって身長成長速度が減少すると知られている(PloS one, 2011 Jan; 6(1): e16223)。
【００１０】
このような問題のため、様々な技術を用いて持続型成長ホルモンを開発しようとする試みが行われつつあるが、現在まで、開発に成功して市場に発売された製品はただ１つの徐放性製剤が唯一である。米国のジェネンテック社によって開発されたニュートロピンデポ剤は１ヵ月剤型で開発されたが、生産が困難となって市場から撤収した。ＬＧライフサイエンスのユトロピンプラス／デクラゼ（Ｅｕｔｒｏｐｉｎ  Ｐｌｕｓ／Ｄｅｃｌａｇｅ）は、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ：ＨＡ）を用いて週１回剤型で開発されたが、１世代製品に比べて注射針が太い注射器を用いなければならないという不便さがある。
【００１１】
したがって、毎日の投薬による不便さおよび患者の順応度の低下を考慮して、患者の利便性を満たしながらも、安全で且つ効果的な持続型成長ホルモンの開発が求められている。ＧＸ‐Ｈ９（ｈＧＨ‐ｈｙｂｒｉｄ  Ｆｃ）は、臨床開発中の持続型成長ホルモン製剤である。米国特許第７，８６７，４９１号では、免疫グロブリンＩｇＤおよび免疫グロブリンＩｇＧ４を組み合わせることで、既存のＦｃ融合技術の問題点である補体依存細胞毒性（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）および抗体依存性細胞毒性（Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｃｅｌｌｕａｒ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）を克服できるハイブリッド形態のＦｃを製造している。次に、米国特許第８，５２９，８９９号では、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）にハイブリッドＦｃを融合させることで、既存の１日型成長ホルモン製剤に代替可能な物質である組換えｈＧＨ（ｈＧＨ‐ｈｙＦｃ、ＧＸ‐Ｈ９）を製造している。しかしながら、Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃに結合される薬理活性成分の種類によって実際の体内半減期が大きく変わり、これは、治療投与量にも影響を与える。ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）にｈｙＦｃが融合されたタンパク質であるＧＸ‐Ｈ９を用いて成長ホルモン欠乏を治療するにおいて効果的で且つ安全な投与量、周期などはまだ明らかになっていない。
【００１２】
そこで、本発明では、組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９が最適の効果を奏することができる投与用量および投与頻度を開発するために、健常な成人３２名（２０１３‐００２７７１‐１８）および成人成長ホルモン欠乏症患者４８名（２０１４‐００２６９８‐１３、ＥｕｄｒａＣＴ）を対象として臨床試験を行った。その結果、成長ホルモンによって誘発され得る副作用を最小化しながらも、ＩＧＦ‐１のＳＤＳ値を長期間にわたって正常範囲に維持できるＧＸ‐Ｈ９の投与用量、投与頻度、安全性などを確認し、本発明を完成した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的は、成長ホルモン欠乏の治療に効果的な組換えｈＧＨ、ＧＸ‐Ｈ９の投与容量およびその投与頻度を解明することによってｈＧＨ融合タンパク質ＧＸ‐Ｈ９を 用い、成長ホルモン欠乏を治療する方法を提供するところにある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
前記目的を達成するために、本発明は、組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９および薬学的に許容可能な担体を含み、前記組換えｈＧＨが、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．３ｍｇの投与量で週１回投与される、成長ホルモン欠乏を治療するための薬学組成物を提供する。
【００１５】
本発明はまた、組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９および薬学的に許容可能な担体を含み、前記組換えｈＧＨが、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与される、成長ホルモン欠乏を治療するための薬学組成物を提供する。
【００１６】
本発明はまた、成長ホルモン欠乏の患者に組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９を患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．３ｍｇの投与量で週１回投与するステップを含む、成長ホルモン欠乏を治療する方法を提供する。 
【００１７】
本発明はまた、成長ホルモン欠乏の患者に組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９を患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与するステップを含む、成長ホルモン欠乏を治療する方法を提供する。 
【発明の効果】
【００１８】
本発明によると、成長ホルモン欠乏の成人患者に、組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９を患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．３ｍｇの投与量で週１回投与するかまたは患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与する場合、体内に成長ホルモンが長期間維持され、ＩＧＦ‐１のＳＤＳ値を長期間にわたって正常範囲に維持できるため、成長ホルモン製剤を毎日投薬する必要がなく、ただ週１回または２週１回ずつ投与することで成長ホルモン欠乏を治療することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）に対するＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）Ｉの結合力を測定した結果を示した図である。
【図２】組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）に対するＣ１ｑの結合力を測定した結果を示した図である。
【図３】脳下垂体摘出ラットの体重増加を測定した結果である。
【図４】組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）をラットに単回皮下投与した時の薬動学的特性を示した図である。
【図５】組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）をサルに単回皮下投与した時の薬動学的特性を示した図である。
【図６】組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）をサルに繰り返して皮下投与した時の薬動学的特性を示した図である。
【図７】第1相臨床試験で組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）の薬動学的特性を示した図である。
【図８】第1相臨床試験で組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）の薬力学（ＩＧＦ‐１  ＳＤＳ）的特性を示した図である。
【図９】第２相臨床試験で組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）を 繰り返して投与した場合の薬動学的特性を示した図である。
【図１０】第２相臨床試験で組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）を 繰り返して投与した場合の薬力学的特性を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）融合タンパク質であるＧＸ‐Ｈ９が、ヒトにおいて実際に成長を促進させるのに有効な投与量および投与頻度はまだ明らかになっていない。
【００２１】
本発明者らは、ＧＸ‐Ｈ９が最適の効果を奏することができる投与用量および投与頻度を開発するために、健常な成人３２名（２０１３‐００２７７１‐１８）および成人成長ホルモン欠乏症患者４８名（２０１４‐００２６９８‐１３、ＥｕｄｒａＣＴ）を対象として臨床試験を行って、その結果組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９を患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．３ｍｇの投与量で週１回投与するかまたは患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与した場合、体内に成長ホルモンが長期間維持され、ＩＧＦ‐１のＳＤＳ値を長期間にわたって正常範囲に維持できることを確認した。 
【００２２】
したがって、一観点において、本発明は、組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９および薬学的に許容可能な担体を含み、前記組換えｈＧＨが、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．３ｍｇの投与量で週１回投与される、成長ホルモン欠乏を治療するための薬学組成物に関する。特に、本発明は、前記組換えｈＧＨが、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．２ｍｇの投与量で週１回投与される薬学組成物に関する。
【００２３】
また、他の観点において、本発明は、ＧＨ融合タンパク質であるＧＸ‐Ｈ９および薬学的に許容可能な担体を含み、前記組換えｈＧＨが、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．４ｍｇの投与量で２週回投与される、成長ホルモン欠乏を治療するための薬学組成物に関する。特に、本発明は、前記組換えｈＧＨが、患者の体重ｋｇ当たり０．１５〜０．４ ｍｇの投与量で週１回投与される薬学組成物に関する。 
【００２４】
本発明の薬学組成物で、ＧＨ融合タンパク質であるＧＸ‐Ｈ９は、配列番号１のアミノ酸配列を含んでもよい。 本発明の薬学組成物は、皮下に投与されてもよい。 
【００２５】
また、他の観点において、本発明は、成長ホルモン欠乏の患者に組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９を患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．３ｍｇの投与量で週１回投与するステップを含む、成長ホルモン欠乏を治療する方法に関する。
【００２６】
また、さらに他の観点において、本発明は、成長ホルモン欠乏の患者に組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９を患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与するステップを含む、成長ホルモン欠乏を治療する方法に関する。
【００２７】
本発明で使用された組換えｈＧＨ「ＧＸ‐Ｈ９」とは、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）にハイブリッドＦｃを融合させて製造したヒト成長ホルモン融合タンパク質であるｈＧＨ‐ｈｙＦｃを指称し、添付された配列番号１のアミノ酸配列を含んでもよい。組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９は、米国特許第８，５２９，８９９号に開示された方法によって製造されることができる。
【００２８】
本発明によると、組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９を含む薬学組成物は、成長ホルモン欠乏の患者に投与されることができる。
【００２９】
成人成長ホルモン欠乏症は、成人において、同じ年齢帯の健常者に対して標準偏差スコア（ＳＤＳ）が−２以下（＜−２ＳＤＳ）または百分位数２．５以内（＜２．５ｐｅｒｃｅｎｔｉｌｅ）に属する場合を意味する。脳下垂体疾患と脳下垂体機能低下症を有する成人では、通常、成長ホルモン欠乏症が伴われ、体構成と代謝異常だけでなく、肉体的能力や精神機能の障害をもたらし得る。成人成長ホルモン欠乏症は、三つの範疇に分類され得る。第一は、小児期から成長ホルモン欠乏症があった場合、第二は、視床下部‐脳下垂体の器質的疾患によって成長ホルモン欠乏が発生した場合、第三に、特発性（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ）成長ホルモン欠乏症の場合に分けられる。
【００３０】
本発明の薬学組成物は、薬学的に許容可能な担体を含むことができ、このような薬学的に許容可能な担体は、患者への組換えｈＧＨ伝達に適した非毒性物質であればいずれの担体でも使用可能である。 蒸留水、アルコール、脂肪、ワックスおよび非活性固体が担体として含有できる。緩衝剤、分散剤、希釈剤などのような薬学的に許容可能なアジュバント、例えば、注射用静菌水 （BWFI）、リン酸緩衝食塩水、リンガー溶液、ブドウ糖溶液、ポロクサマー溶液なども本発明の薬学組成物に含まれてもよい。
【００３１】
本発明で、組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９は、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．３ｍｇの投与量で週１回投与されることができ、例えば、年齢、性別、エストロゲン状態に合うように患者の体重ｋｇ当たり０．１、０．１５、０．２、０．２５、または０．３ｍｇの投与量で週１回投与されることができる。好ましくは、組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９は、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．２ｍｇの投与量で週１回投与されてもよい。また、組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９は、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与されることができ、例えば、年齢、性別、エストロゲン状態に合うように患者の体重ｋｇ当たり０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、０．３５、または０．４ｍｇの投与量で２週１回投与されることができる。 好ましくは、組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９は、患者の体重ｋｇ当たり０．１５〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与されてもよい。 特に、好適な組換えｈＧＨの投与量は、０．１ｍｇ／ｋｇを週１回投与するか、０．２ｍｇ／ｋｇを２週１回投与するか、０．３ｍｇ／ｋｇを２週１回投与する。また、場合によっては、組換えｈＧＨは、年齢、性別、エストロゲン状態に応じて、０．３〜０．６ｍｇ／ｋｇを２週、３週または４週に１回投与してもよい。
【００３２】
組換えｈＧＨの投与用量は患者の年齢、性別、エストロゲン状態に基づいて調節可能であり、投与経過を見ながら増量若しくは減量することができる。後続的に投与される組換えｈＧＨの用量は、ＩＧＦ‐ＩのＳＤＳの変化に応じて初期用量より高いかより低くてもよく、または初期用量と同量であってもよい。初期には、安全に少量の組換えｈＧＨで投与を始め、異常反応などが発生しないことを確認して漸次的に増量することができる。また、患者から得た血漿または血清サンプル中におけるＩＧＦ‐ＩのＳＤＳ変化をモニタリングしながら組換えｈＧＨの投与用量を調節することができる。個々の患者毎に適した組換えｈＧＨの投与用量は、患者の年齢、性別、体質、体重などによって異なり得る。
【００３３】
組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９を含む本発明の薬学組成物は、様々な方法で 対象に投与されることができる。例えば、薬学組成物は、非経口的に投与でき、その例としては、皮下, 筋肉内または静脈内が挙げられる。このような組成物は、通常、広く知られた滅菌技術により滅菌されることができる。組成物は、ｐＨ調節などのような生理的条件を調節するために求められる薬学的に許容可能な補助物質および補助剤、毒性調節 製剤およびこれの類似体を含んでもよく、例えば、酢酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ ）、塩化ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、塩化カリウム（ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、 塩化カルシウム（ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、乳酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｌａｃｔａｔｅ ）などを含んでもよい。 このような剤型において組換えｈＧＨの濃度は非常に多様であり、選択された特定投与方法によって、好ましくは、体液の体積、粘性度（ｖｉｓｃｏｓｉｔｉｅｓ）などに基づいて選択され得る。
［実施例］
以下、本発明を実施例を挙げて詳述する。これらの実施例は単に本発明をより具体的に説明するためのものであり、本発明の範囲がこれらの実施例に制限されないことは当業者において通常の知識を有する者にとって自明である。
【００３４】
実施例１．組換えｈＧＨＧＸ‐Ｈ９の製造
組換えｈＧＨＧＸ‐Ｈ９は、米国特許第８，５２９，８９９号に開示の方法により製造可能である。
【００３５】
先ず、配列番号１のアミノ酸配列をコードする、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）にｈｙＦｃが融合されたｈＧＨ‐ｈｙＦｃの核酸配列を発現ベクターｐＡＤ１５に挿入し、ｈＧＨ‐ｈｙＦｃを発現する生産細胞株を製造した。ｈＧＨ‐ｈｙＦｃ構造遺伝子を含むベクターを製造するために、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）遺伝子はＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＡ９８６１８．１配列を用い、ｈｙＦｃの遺伝子はＧｅｎＢａｎｋ  Ｐ０１８８０（ＩｇＤ）とＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＨ２５９８５（ＩｇＧ４）配列を融合して製造した。遺伝子の製造業社から得た遺伝子を、生産細胞株の製造のための発現ベクターに特異的制限酵素を用いて注入した。
【００３６】
上記の方法により確保した発現ベクターを、ＣＨＯ  ＤＧ４４(Columbia University, USA)細胞にリン酸カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）法によりトランスフェクションした。トランスフェクション６時間後に、トランスフェクションされた細胞をリン酸塩緩衝液で洗浄した後、１０％のｄＦＢＳ(Gibco, USA, 30067-334)、ＭＥＭ  ａｌｐｈａ (Gibco, 12561, USA, Cat No. 12561-049)、ＨＴ＋(Gibco, USA, 11067-030))培地に培地交換を行った。トランスフェクション４８時間後、ＨＴを含まない１０％のｄＦＢＳ＋ＭＥＭ  ａｌｐｈａ培地を用いて、１００ｍｍプレートで連続的に希釈してＨＴセレクション（ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）を行った。培地を週２回交換しながら、単一コロニーが形成されるまで待った。その後、ＤＨＦＲ‐システムを用いて生産性を増幅させるために、ＨＴセレクションが完了したクローンに対してＭＴＸ増幅を行った。ＭＴＸ増幅の完了後、生産性の評価のための細胞安定化のために、４〜５回程度継代培養した後、単位生産性の評価を行い、目的のタンパク質の生産に適したクローンを確保した。
【００３７】
生産性が最も高いクローンについて単一クローンを確保するために限界希釈クローニング（Ｌｉｍｉｔｉｎｇ  ｄｉｌｕｔｉｏｎ  ｃｌｏｎｉｎｇ、ＬＤＣ）を行った。ＬＤＣは、９６ウェルプレートに１ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌの濃度となるように細胞を培養培地で希釈して接種した。接種１０〜１４日後に、顕微鏡により単一クローンがあるウェルの細胞のみを確保し、生産性評価を行うことができる程度に細胞をＴ２５フラスコで培養した後、生産性が高い細胞株を確保した。
【００３８】
確保した細胞株から培養液を得た後、培養液から目的のタンパク質を精製した。タンパク質培養液試料を、プロセップウルトラプラス（Ｐｒｏｓｅｐ（登録商標）Ｕｌｔｒａ  Ｐｌｕｓ、Ｍｅｒｃｋ）を用いてタンパク質培養液を吸着（Ｓａｍｐｌｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ）させた後、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、１５０ｍＭの塩化ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ  Ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、およびｐＨ７．０の緩衝液を用いて平衡化（Ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ）した。ＸＫ１６／２０カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用し、１００ｍＭのクエン酸ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ  ｃｉｔｒａｔｅ）、２００ｍＭのＬ‐アルギニン、およびｐＨ３．１の緩衝液を用いてタンパク質を溶出させた。
【００３９】
実施例２．組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）の抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）および補体依存細胞毒性（ＣＤＣ）の試験
ＧＸ‐Ｈ９のハイブリッドＦｃ領域が、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ；ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｙｔｙ）および補体依存細胞毒性（ＣＤＣ；ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）を誘発しないことを確認するために、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）を行った。
【００４０】
陽性対照群として、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩに対して結合力が非常に高いと知られたリツキサン（Ｒｉｔｕｘａｎ：スイスのＲｏｃｈｅ社）とエンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ：米国のＡｍｇｅｎ社）を使用した。ＧＸ‐Ｈ９、リツキサン、およびエンブレルを各９６ウェルプレートに付着（ｃｏａｔｉｎｇ）させた後、順に希釈（ｓｅｒｉａｌ  ｄｉｌｕｔｉｏｎ）したＦｃγ受容体Ｉと反応させた。反応時間が経過した後、反応液を緩衝溶液で洗浄することで、試験物質と結合していないＦｃγ受容体Ｉを除去した。その後、ビオチンが結合されている抗Ｆｃγ受容体Ｉ抗体（ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ  ａｎｔｉ‐ＦｃγＲＩ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）とストレプトアビジンコンジュゲート化したＨＲＰ抗体（ＨＲＰ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ）を用いて、Ｆｃγ受容体Ｉと試験物質との結合力を測定した。
【００４１】
細胞媒介性細胞毒性を誘発するＣ１ｑとＧＸ‐Ｈ９との結合力も、上記のようなＥＬＩＳＡ方法により測定した。陽性対照群として、リツキサン（Ｒｉｔｕｘａｎ：スイスのＲｏｃｈｅ社）とエンブレル（Ｅｎｂｒｅｌ：米国のＡｍｇｅｎ社）を使用して、ＨＲＰコンジュゲート化した抗Ｃ１ｑ抗体（ＨＲＰ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ａｎｔｉ‐Ｃ１ｑ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）を用いて試験物質との結合力を測定した。
【００４２】
その結果、ＧＸ‐Ｈ９は、図１に示したように、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性を誘発するＦｃγ受容体Ｉに対して低い結合力を示し、図２から分かるように、補体依存細胞毒性を誘発するＣ１ｑに対しても結合力が低いことが確認された。
【００４３】
実施例３．組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）の前臨床試験の結果
３‐１：脳下垂体摘出ラットを用いた、ＧＸ‐Ｈ９の繰り返し皮下投与の効能試験
動物疾患モデルである脳下垂体摘出ラット（Ｈｙｐｏｐｈｙｓｅｃｔｏｍｉｚｅｄ  Ｒａｔｓ）を用いてＧＸ‐Ｈ９の効能を試験した。対照群として、１日１回投与製剤であるジェノトロピン（米国のＰｆｉｚｅｒ社）を使用し、ＧＸ‐Ｈ９を週１回投与して効能を比較した。
【００４４】
脳下垂体摘出後に約１週間、体重増加量が１０％以下である個体を対象として試験を行った。グループ１は陰性対照群であって、２週間製剤緩衝液のみを皮下投与した。グループ２は、ジェノトロピンを毎日０．２ｍｇ／ｋｇずつ皮下投与した。グループ３は、ジェノトロピンの一週間の用量である１．４ｍｇ／ｋｇを週１回皮下投与した。グループ４は、ＧＸ‐Ｈ９を１．４ｍｇ／ｋｇ（ジェノトロピンの一週間の用量に相当する）週１回皮下投与した。グループ５は、ＧＸ‐Ｈ９を３．５ｍｇ／ｋｇ（ジェノトロピンの一週間の用量のモル数の１／２に相当する）週１回皮下投与した。グループ６は、ＧＸ‐Ｈ９を７．０ｍｇ／ｋｇ（ジェノトロピンの一週間の用量のモル数と同モル数に相当する）週１回皮下投与した。薬物投与後に、毎日症状を観察し、体重を測定した。
【００４５】
その結果、図３に示したように、ジェノトロピンを１日１回投与した場合には、毎日０．２ｍｇ／ｋｇ投与した時に平均約２０ｇの体重が増加したが、一週間の投与量（１．４ｍｇ／ｋｇ）を一度に週１回で投与した場合には、体重が増加しなかった。ＧＸ‐Ｈ９を週１回で７ｍｇ／ｋｇ投与した場合（グループ６）には、同モル数のジェノトロピンを投与した場合（グループ３）に比べてより多くの体重増加を示した。また、ＧＸ‐Ｈ９を３．５ｍｇ／ｋｇ投与した場合（グループ５）には、ジェノトロピンを毎日０．２ｍｇ／ｋｇずつ投与した場合（グループ２）と類似の効能を示した。
【００４６】
３‐２：ラットを用いた、組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）の単回皮下投与後の薬動学的試験
ＧＸ‐Ｈ９の薬物動態を試験するために、ラットにＧＸ‐Ｈ９を単回皮下投与した。対照群として、ユトロピン（Ｅｕｔｒｏｐｉｎ；韓国の（株）ＬＧライフサイエンス）を単回皮下投与し、その効果を比較した。グループ１は、ユトロピン２００μｇ／ｋｇを単回皮下投与し、グループ２は、２００μｇ／ｋｇのＧＸ‐Ｈ９を単回皮下投与した。グループ３は、１，０００μｇ／ｋｇのＧＸ‐Ｈ９を単回皮下投与した。
【００４７】
皮下投与前および投与１、４、８、１２、１８、２４、３６、４８、７２、９６、１２０、１４４、１６８、２１６、２６４、および３３６時間後に血液を採取した。各物質の血中濃度は、それぞれの特異的な酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）により測定した。
【００４８】
試験結果を図４に示した。ＧＸ‐Ｈ９を２００または１，０００μｇ／ｋｇの用量で単回皮下投与した後の薬物動態は、１７または２４時間（Ｔｍａｘ）で最高血中濃度に達し、それぞれ９日および１１日まで血中からＧＸ‐Ｈ９が検出された。投与用量が増加するにつれて全身曝露（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ）も増加した。
【００４９】
対照物質であるユトロピン２００μｇ／ｋｇの投与群と比較すると、２００μｇ／ｋｇのＧＸ‐Ｈ９を皮下投与した場合に、より長期間（ユトロピン：２４時間ｖｓＧＸ‐Ｈ９：９日）血中から試験物質が検出された。２００μｇ／ｋｇのＧＸ‐Ｈ９を皮下投与した場合、最高血中濃度に達する時間（Ｔｍａｘ）の差は約２０時間であった（ユトロピン：４時間ｖｓＧＸ‐Ｈ９：２４時間）。上記の結果から、対照薬物であるユトロピンと比較すると、ＧＸ‐Ｈ９は、ラットで対照薬物、ユトロピンに比べて長期間持続的に全身曝露されることが確認された。また、ＧＸ‐Ｈ９の用量が増加するにつれて、皮下投与後の全身曝露が用量増加率に比例して増加した。
【００５０】
３‐３：サルを用いた、組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）の皮下投与後の薬物動態試験
サル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ）において、ＧＸ‐Ｈ９および対照物質であるユトロピンの薬物動態を解析した。雄サル（３匹／群）に、ＧＸ‐Ｈ９を５００μｇ／ｋｇおよび１０００μｇ／ｋｇの用量で週４回繰り返して皮下投与し、対照物質であるユトロピンを、１０００μｇ／ｋｇの用量で単回皮下投与した。
【００５１】
ＧＸ‐Ｈ９を投与したグループは、１回および４回目の投与（０日および２１日投与）を行う前に採血し、投与１、４、８、１２、１８、２４、３０、３６、４８、６０、７２、９６、１２０、１４４、および１６８時間後に血液を採取した。
【００５２】
ユトロピンを投与したグループでは、単回投与前、並びに、投与の１、４、８、１２、１８、２４、３０、３６、４８、６０、７２、９６、１２０、１４４、および１６８時間後に採血した。
【００５３】
血中濃度は、ＧＸ‐Ｈ９とユトロピンのそれぞれに対する特異的な酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）により測定し、その結果を図５および図６に示した。ＧＸ‐Ｈ９を５００または１，０００μｇ／ｋｇの用量で皮下投与した場合には、単回投与（０日）した後と、繰り返して投与（４週）した後の両方において、用量増加につれて全身曝露が増加することが確認された。
【００５４】
対照薬物であるユトロピン（１０００μｇ／ｋｇ、単回皮下投与）と比較すると、ＧＸ‐Ｈ９（５００または１，０００μｇ／ｋｇ）を投与した場合には、より長期間血中から試験物質が検出（ユトロピン投与後１２‐１８時間ｖｓＧＸ‐Ｈ９投与後１６８時間）された。すなわち、ＧＸ‐Ｈ９を皮下投与する場合、対照薬物であるユトロピンに比べてより持続的に全身曝露されることが確認された。また、ＧＸ‐Ｈ９の用量が５００から１０００μｇ／ｋｇに増加するにつれて、皮下投与後に全身曝露が用量増加率に比例して増加することが確認された。
【００５５】
実施例４．組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）の第Ｉ相臨床試験の結果
４‐１：健常な成人における組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）の薬動学的特性
健常な志願者を対象として、無作為割付、二重盲検、プラセボ対照、単回投与、段階的増量の第Ｉ相臨床試験を行った。第Ｉ相臨床試験の目的は、ＧＸ‐Ｈ９を単回皮下投与した時の安全性、耐薬性、および薬動／薬力学的特性を評価することであった。健常な志願者を無作為に試験群またはプラセボ群に割付け、ＧＸ‐Ｈ９を４つの用量群（０．２、０．４、０．８、および１．６ｍｇ／ｋｇ）として単回皮下投与した後、合計５６日間評価を行った。
【００５６】
ＧＸ‐Ｈ９を投与したグループは、単回投与前、並びに、投与０．２５、１、２、４、６、８、１２、１６、２４、２８、３２、３６、４０、４８、５４、６０、７２、８０、９６、１４４、３１２、４８０、６４８、および１３２０時間後に採血した。
【００５７】
血中濃度は、ＧＸ‐Ｈ９に特異的な酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）により測定し、その結果を下記表１および図７に示した。
【００５８】
【表１】
2019508421.tif 000003
【００５９】
ＧＸ‐Ｈ９の単回皮下投与１２時間後頃（８‐１６時間）に幾何平均濃度のピークが観察され、投与３２時間後頃（２８‐３２時間）に、それより低い二番目のピークが観察された。最高用量では、二番目のピークはＣｍａｘに相当した（図７参照）。ＣｍａｘとＡＵＣは、全ての用量で、用量を超えて増加した。半減期（ｔ１／２）は６９．２時間から１３８時間であり、個人差があった。
【００６０】
４‐２：健常な成人における組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）の薬力学的特性
ＧＸ‐Ｈ９を投与したグループは、単回投与前、並びに、投与１２、２４、３６、４８、６０、７２、９６、１４４、３１２、４８０、６４８、１３２０時間後に採血した。投与前に採血して測定した血中のＩＧＦ‐１濃度を基底値（ベースライン）として変化量を図８に示した。
【００６１】
図８は、プラセボ群と、ＧＸ‐Ｈ９を０．２、０．４、０．８、および１．６ｍｇ／ｋｇ投与した群の、ベースラインに対する血中ＩＧＦ‐１濃度（ｎｇ／ｍＬ）の変化量を示したものである。ＧＸ‐Ｈ９を０．２、０．４、０．８、および１．６ｍｇ／ｋｇで単回皮下投与した後、血中ＩＧＦ‐１の濃度は、用量に比例して増加した。平均最大増加量（ベースラインに対する％変化）は、用量が０．２、０．４、０．８、および１．６ｍｇ／ｋｇである際にそれぞれ８１％、１５７％、３０１％、および３４９％であった。ＩＧＦ‐１が血中最高濃度に達する時間は４８‐９６時間であって、用量に比例して増加した。ＩＧＦ‐１の平均濃度は、０．２ｍｇ／ｋｇの用量で投薬７日目に、他の用量では１４日目にベースラインに回復することが確認された。
【００６２】
４‐３：健常な成人における組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）の安全性の結果
試験対象者で観察された治療副作用（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｅｍｅｒｇｅｎｔ  ａｄｖｅｒｓｅ  ｅｖｅｎｔｓ）を、投与した薬物、薬物と異常反応の関連性、および治療副作用応の強度によって分析した結果を下記表２にまとめた。
【００６３】
【表２】
2019508421.tif 000004
【００６４】
前記表２に示されたように、試験対象者のうち２１名から総５４件の副作用が報告された。死亡または重大な副作用は報告されなかった。重症度が重症である副作用が１名の試験対象者から報告されたが、薬物による副作用ではないと判断された。上記の副作用を除いた全ての副作用の重症度は軽症であった。最も頻繁に報告された副作用は、筋骨格系および結合組織の障害（１９件）、全身障害および投与部位異常（１１件）、神経障害（１０件）であった。３件以上報告された副作用は、筋肉痛（７件）、カテーテル挿入部位反応（６件）、頭痛（５件）、鼻咽頭炎（５件）、関節痛（４件）、および肢痛（３件）であった。
【００６５】
一方、ＧＸ‐Ｈ９を単回投与した試験対象者でＧＸ‐Ｈ９の抗体形成を調べた。投与前と２８日目、５６日目に血中抗体形成（Ａｎｔｉ‐ｄｒｕｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ、ＡＤＡ）を観察した結果、ＧＸ‐Ｈ９によって抗体が形成された患者は現れなかった。
【００６６】
実施例５．組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）の第ＩＩ相臨床試験の結果
５‐１：成人成長ホルモン欠乏症患者におけるＧＸ‐Ｈ９の薬動学的特性
無作為割付、陽性対照薬の対照、公開臨床試験で、成人成長ホルモン欠乏症患者にＧＸ‐Ｈ９を週１回または２週１回投薬した時の安全性、耐薬性、有効性、および薬動／薬力学的特性を評価するための第ＩＩ相臨床試験を行った。投与用量は、０．１ｍｇ／ｋｇずつ週１回（グループ１）、０．３ｍｇ／ｋｇずつ２週１回（グループ２）、または０．２ｍｇ／ｋｇずつ２週１回（グループ３）として、総１２週間繰り返して投与した。また、陽性対照薬として、ジェノトロピンを６μｇ／ｋｇずつ毎日投薬（グループ４）した。
【００６７】
【表３】
2019508421.tif 000005
【００６８】
ＧＸ‐Ｈ９を週１回投与したグループは、最初投与（１週）および最後投与（１２週）の前、並びに、投与１、２、４、８、１２、１８、２４、４８、７２、９６、および１６８時間後に採血した。
【００６９】
ＧＸ‐Ｈ９を２週１回投与したグループは、最初投与（１週）および最後投与（１１週）の前、並びに、投与１、２、４、８、１２、１８、２４、４８、７２、１６８、２４０、および３３６時間後に採血した。
【００７０】
収得された血液から血中ＧＸ‐Ｈ９の濃度を測定して、その結果を下記の表４〜表６および図９に示した。 
【００７１】
【表４】
2019508421.tif 000006
【表５】
2019508421.tif 000007
【表６】
2019508421.tif 000008
【００７２】
ＧＨ‐Ｈ９を０．１ｍｇ／ｋｇずつ１２週まで繰り返して投与した後、最初投与（1週）および最後投与（１２週）の時点で、投与前、投与１、２、４、８、１２、１８、２４、４８、７２、および１６８時間後に薬動学的変化を確認した結果、投与前の定量限界以下（ＢＬＱ）で、最初投与（１週）および最後投与（１２週）１６８時間（７日）後までのＧＸ‐Ｈ９の濃度が、それぞれ平均（標準偏差）７．４１（２．７１）、１２．７５（４．９２）と示された。また、ＧＨ‐Ｈ９を０．３ｍｇ／ｋｇおよび０．２ｍｇ／ｋｇずつ１２週まで繰り返して投与した後、最初投与（１週）および最後投与（１２週）の時点で、投与前、投与１、２、４、８、１２、１８、２４、４８、７２、１６８、２４０、および３３６時間後に薬動学的変化を確認した結果、投与前の定量限界以下（ＢＬＱ）で、最初投与（１週）および最後投与（１２週）３３６時間（１４日）後までのＧＸ‐Ｈ９の濃度が、０．３ｍｇ／ｋｇずつ２週間隔で投与したグループではそれぞれ平均（標準偏差）１９．２０（３１．６６）、１１．５８（４．７０）と示され、０．２ｍｇ／ｋｇずつ２週間隔で投与したグループではそれぞれ平均（標準偏差）４．５７（１．０７）、３．７０（０．９７）と示された。
【００７３】
したがって、ＧＸ‐Ｈ９を、０．１ｍｇ／ｋｇ〜０．３ｍｇ／ｋｇの濃度範囲で１週間隔または２週間隔で投与する際に、ＧＸ‐Ｈ９が体内に蓄積されることなく、且つ適切な水準に維持されることが分かった。
【００７４】
５‐２：成人成長ホルモン欠乏症患者における組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）の薬力学的特性
ＧＸ‐Ｈ９を週１回投与したグループは、最初投与（１週）および最後投与（１２週）の前、並びに、投与１２、２４、４８、７２、および１６８時間後に採血した。時間および用量によるＩＧＦ‐１の健常者に対する標準偏差スコア（ｓｔａｎｄａｒｄ  ｄｅｖｉａｔｉｏｎ  ｓｃｏｒｅ、ＳＤＳ）の変化を評価するために、第３、５、７、９、および１１週の投与後４日間のＩＧＦ‐１のＳＤＳを確認した。ＧＸ‐Ｈ９を２週１回投与したグループは、最初投与（１週）および最後投与（１１週）の前、並びに、投与１２、２４、４８、７２、１６８、２４０、および３３６時間後に採血した。時間および用量によるＩＧＦ‐１のＳＤＳの変化を評価するために、第３、５、７、および９週の投与後４日間のＩＧＦ‐１のＳＤＳを確認した。
【００７５】
ＧＸ‐Ｈ９の薬力学的特性を測定した結果を下記の表７〜表１０および図１０に示した。
【００７６】
【表７】
2019508421.tif 000009
【表８】
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【表９】
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【表１０】
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【００７７】
ＧＨ‐Ｈ９を０．１ｍｇ／ｋｇずつ１２週まで繰り返して投与した後、最初投与（1週）および最後投与（１２週）の時点で、投与前、投与１２、２４、４８、７２、および１６８時間後に薬力学的変化を確認した結果、投与前のＩＧＦ‐１のＳＤＳが平均（標準偏差）−２．４８（０．３９）である成長ホルモン欠乏症患者で最後投与（１２週）後７日以内に最小平均（標準偏差）変化量−０．４１（０．９７）、最大平均（標準偏差）変化量 １．０１（０．８７）と示された。また、ＧＨ‐Ｈ９を０．３ｍｇ／ｋｇおよび０．２ｍｇ／ｋｇずつ１１週まで繰り返して投与した後、最初投与（１週）および最後投与（１１週）の時点で、投与前、投与１２、２４、４８、７２、１６８、２４０、および３３６時間後に薬力学的変化を確認した結果、ＩＧＦ‐１のＳＤＳが平均（標準偏差）−２．６４（１．２５）および −２．４０（０．８２）である成長ホルモン欠乏症患者で最後投与（１１週）１４日以内に最小平均（標準偏差）変化量 −１．３６（１．５９）および −２．０１（０．８８）、最大平均（標準偏差）変化量 ２．１２（１．８２）および１．３３（１．８３） と示された。陽性対照薬として、ジェノトロピンを６μｇ／ｋｇずつ毎日投薬後、最初投与（1週）および最後投与（１２週）の時点で、投与前、投与１２、２４、４８、７２、および１６８時間後に薬力学的変化を確認した結果、投与前のＩＧＦ‐１のＳＤＳが平均（標準偏差）−２．７０（０．８８）である成長ホルモン欠乏症患者で最後投与（１２週）後３日以内に最小平均（標準偏差）変化量−０．０４（０．９１）、最大平均（標準偏差）変化量 ０．４２（０．８２）と示された。
【００７８】
ＧＸ‐Ｈ９のＩＧＦ‐１のＳＤＳの最大平均変化量は、０．１ｍｇ／ｋｇずつ１週間隔、または０．３ｍｇ／ｋｇずつ２週間隔で投与してから４８時間〜７２時間の間で現れ、最小平均変化量は、投与１６８時間〜３３６時間後に現れた。これに対し、毎日投与する陽性対照薬であるジェノトロピンは、投与後１２時間以内に最大平均変化量が現れ、２４時間以内に最小平均変化量に達した。
【００７９】
成人成長ホルモン欠乏症患者の治療の目標は、新陳代謝の正常化および生活の質の改善にあり、年齢と性別によって異なるが、ＧＸ‐Ｈ９投与後に血中ＩＧＦ‐１の数値が正常範囲（−２ＳＤＳ〜２ＳＤＳ）内での中間（５０ｔｈ  ｐｅｒｃｅｎｔｉｌｅ  ｏｒ  ０  ＳＤＳ）〜１ＳＤＳの範囲に投与用量を適正化すべきである。したがって、ＧＸ‐Ｈ９を週１回投与する場合、ＩＧＦ‐１数値に応じて、０．１ｍｇ／ｋｇ〜０．２ｍｇ／ｋｇの濃度範囲で治療用量を調節することにより、患者のＩＧＦ‐１のＳＤＳの範囲を正常水準に維持させることができることを確認した。また、ＧＨ‐Ｈ９を週２回投与する場合、ＩＧＦ‐１数値に応じて、０．２ｍｇ／ｋｇ〜０．４ｍｇ／ｋｇの濃度範囲で治療用量を調節することにより、患者のＩＧＦ‐１のＳＤＳの範囲を正常水準に維持させることができることを確認した。
【００８０】
５‐３：成長ホルモン欠乏症患者における組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）の安全性の結果
試験対象者で観察された副作用を、投与した薬物、および薬物と副作用の関連性によって分析した結果を下記表５にまとめた。
【００８１】
【表１１】
2019508421.tif 000013
【００８２】
ＧＸ‐Ｈ９を週１回投与した５名の患者から、総１１件の副作用が報告された。死亡または重大な副作用は報告されなかった。全ての副作用の重症度は軽症であった。最も頻繁に報告された副作用は、筋骨格系および結合組織の障害（２件）と血液およびリンパ系臓器障害（３件）であった。そのうち３件が、臨床試験時に投与した薬と因果関係があると報告された。報告された全ての副作用は、既存の成長ホルモン治療時に観察されると知られた反応であった。
【００８３】
５‐４：成長ホルモン欠乏症患者における組換えｈＧＨ（ＧＸ‐Ｈ９）の抗体反応（ＡＤＡ）の結果
持続的な投与による薬理効果を確認するために、ＧＸ‐Ｈ９によって抗体形成が誘導されるかを検査した。１名の患者（サンプル１５０２‐００１）の場合、臨床試験の開始前から抗体を有していたため、検査結果が陽性であった。また、投薬してから１日、３２日、および１０６日目にもＧＸ‐Ｈ９による数値増加は現れなかった。また、この患者の薬力学を検討した結果、ＩＧＦ‐１数値が大きく増加することが確認された。これは、既存に存在する抗‐ｈＧＨ抗体がＧＸ‐Ｈ９の治療に関係ないことを示唆する。結論的に、ＧＸ‐Ｈ９の投与は全体患者で抗体反応を誘導しなかった。
【００８４】
【表１２】
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【００８５】
１）スクリーニング：サンプルが反応性でなかった場合、＜２０と報告される；反応性の場合、特異性が評価される。
２）特異性：阻害％は１００ｘ（１−（ＧＸ−Ｈ９添加サンプルの平均ＯＤ／非添加サンプルの平均ＯＤ））で定義される；＞＝１７％の場合、サンプルのタイターが評価される。
３）タイター値：タイター値は、プレートのカットポイントＯＤよりも大きいまたはこれと等しい平均ＯＤを生じる繰り返し希釈回数であって、当該系列における更なる希釈は、カットポイントＯＤよりも低い平均ＯＤを生じる希釈回数によって定義される。
ＮＡ：反応性でないサンプル。更なる分析は不要である。
【００８６】
既存の成人成長ホルモン欠乏症患者の治療のために勧奨される１世代（毎日投与）ｈＧＨの１日使用量は、６〜１２μｇ／ｋｇと知られている。１世代ｈＧＨの７日間の分量と同モル数に換算すると、ＧＸ‐Ｈ９剤型の週１回の用量は０．２１〜０．４２ｍｇ／ｋｇであり、２週１回の用量は０．４２〜０．８４ｍｇ／ｋｇである。しかし、臨床で確認された効果的な用量は、単純計算による予測とは異なった。実際の臨床実験の薬動学と薬力学的結果、およびそれに基づいて実施したシミュレーションモデリングの結果、成人成長ホルモン欠乏症患者を対象とした適正用量は、週１回投与時に０．１ｍｇ／ｋｇ〜０．２ｍｇ／ｋｇであり、２週１回投与時に０．２ｍｇ／ｋｇ〜０．４ｍｇ／ｋｇであると予測された。すなわち、既存のｈＧＨの１日使用量から予測された用量よりも低い用量であることが確認された。
【００８７】
また、成人患者を対象として０．１ｍｇ／ｋｇの投与量を週１回ずつ１２週間投薬した時に、重大な副作用は現れず、薬物投与による抗体反応もないことが確認された。０．３ｍｇ／ｋｇの投与量を２週１回ずつ投与した結果も、副作用または抗体反応がないことが確認された。したがって、ＧＸ‐Ｈ９は、体内に存在する成長ホルモンや１世代成長ホルモン製品と同等な効能を有しながらも、増進された半減期を有しているため、服薬の利便性が非常に改善され、また安全であることが確認された。
【００８８】
以上、本発明の内容の特定の部分を詳述したが、当業界における通常の知識を持った者にとって、このような具体的な記述は単なる好適な実施態様に過ぎず、これにより本発明の範囲が制限されることはないという点は明らかである。よって、本発明の実質的な範囲は特許請求の範囲とこれらの等価物により定義されると言える。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成31年2月6日(2019.2.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組換えｈＧＨ  ＧＸ‐Ｈ９および薬学的に許容可能な担体を含む成長ホルモン欠乏を治療するための薬学組成物であって、前記組換えｈＧＨが、患者の体重ｋｇ当たり少なくとも０．１ｍｇの投与量で、少なくとも１週間の間隔を伴って少なくとも１回投与される、成長ホルモン欠乏を治療するための薬学組成物。
【請求項２】
前記組換えｈＧＨは、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．３ｍｇの投与量で週１回投与されることを特徴とする請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項３】
前記組換えｈＧＨは、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．２ｍｇの投与量で週１回投与されることを特徴とする請求項２に記載の薬学組成物。
【請求項４】
前記組換えｈＧＨタンパク質は、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与されることを特徴とする請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項５】
前記組換えｈＧＨタンパク質は、患者の体重ｋｇ当たり０．１５〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与されることを特徴とする請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項６】
前記組換えｈＧＨタンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列を含むことを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の薬学組成物。
【請求項７】
皮下に投与されることを特徴とする請求項１〜５のいずれか一項に記載の薬学組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】
組換えｈＧＨであるＧＸ‐Ｈ９を含む本発明の薬学組成物は、様々な方法で 対象に投与されることができる。例えば、薬学組成物は、非経口的に投与でき、その例としては、皮下, 筋肉内または静脈内が挙げられる。このような組成物は、通常、広く知られた滅菌技術により滅菌されることができる。組成物は、ｐＨ調節などのような生理的条件を調節するために求められる薬学的に許容可能な補助物質および補助剤、毒性調節 製剤およびこれの類似体を含んでもよく、例えば、酢酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ ）、塩化ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、塩化カリウム（ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、 塩化カルシウム（ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、乳酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｌａｃｔａｔｅ ）などを含んでもよい。 このような剤型において組換えｈＧＨの濃度は非常に多様であり、選択された特定投与方法によって、好ましくは、体液の体積、粘性度（ｖｉｓｃｏｓｉｔｉｅｓ）などに基づいて選択され得る。
一態様において、本発明は以下を提供する。
[項目１]
組換えｈＧＨ  ＧＸ‐Ｈ９および薬学的に許容可能な担体を含む成長ホルモン欠乏を治療するための薬学組成物であって、前記組換えｈＧＨが、患者の体重ｋｇ当たり少なくとも０．１ｍｇの投与量で、少なくとも１週間の間隔を伴って少なくとも１回投与される、成長ホルモン欠乏を治療するための薬学組成物。
[項目２]
前記組換えｈＧＨは、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．３ｍｇの投与量で週１回投与されることを特徴とする項目１に記載の薬学組成物。
[項目３]
前記組換えｈＧＨは、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．２ｍｇの投与量で週１回投与されることを特徴とする項目２に記載の薬学組成物。
[項目４]
前記組換えｈＧＨタンパク質は、患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与されることを特徴とする項目１に記載の薬学組成物。
[項目５]
前記組換えｈＧＨタンパク質は、患者の体重ｋｇ当たり０．１５〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与されることを特徴とする項目１に記載の薬学組成物。
[項目６]
前記組換えｈＧＨタンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列を含むことを特徴とする項目１〜５のいずれかに記載の薬学組成物。
[項目７]
皮下に投与されることを特徴とする項目１〜５のいずれか一項に記載の薬学組成物。
[項目８]
成長ホルモン欠乏の患者に組換えｈＧＨ、ＧＸ‐Ｈ９を患者の体重ｋｇ当たり少なくとも０．１ｍｇの投与量で、少なくとも１週間の間隔を伴って１回投与するステップを含む、成長ホルモン欠乏を治療する方法。
[項目９]
成長ホルモン欠乏の患者に組換えｈＧＨ、ＧＸ‐Ｈ９を患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．３ｍｇの投与量で週１回投与するステップを含む、項目８に記載の方法。
[項目１０]
成長ホルモン欠乏の患者に組換えｈＧＨ、ＧＸ‐Ｈ９を患者の体重ｋｇ当たり０．１〜０．４ｍｇの投与量で２週１回投与するステップを含む、項目８に記載の方法。
【国際調査報告】
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