(57)【要約】  本発明の例示的側面において、ヘリコバクター・ピロリ感染、萎縮性胃炎と関連リスク、および／または胃機能障害の無症候性および症候性対象を、全血サンプル、サンプル採取時刻およびサンプル貯蔵温度、ならびに関連バイオマーカー含量の分析に基づいてスクリーニングするための改善された方法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘリコバクター・ピロリ感染、萎縮性胃炎と関連リスク、および／または胃機能障害の無症候性および症候性対象をスクリーニングするための、下記ステップを含む方法：
ａ）対象から全血サンプルを得るステップ、
ｂ）該全血サンプルの採取時刻を記録するステップ、
ｃ）該全血サンプルから分離した血漿または血清サンプルにおけるガストリン−１７の濃度を定量するステップ、
ｄ）ステップｂ）およびｃ）から得られた値を参照値と比較することにより、初期ガストリン−１７濃度を決定するステップ、および
ｅ）前記比較に基づいて、胃粘膜の構造および／または機能を判断するステップ。
【請求項２】
ヘリコバクター・ピロリ感染、萎縮性胃炎と関連リスク、および／または胃機能障害の無症候性および症候性対象をスクリーニングするための、下記ステップを含む方法：
ａ）対象から全血サンプルを得るステップ、
ｂ）該全血サンプル採取の貯蔵温度を記録するステップ、
ｃ）該全血サンプルから分離した血漿または血清サンプルにおけるガストリン−１７の濃度を定量するステップ、
ｄ）ステップｂ）およびｃ）から得られた値を参照値と比較することにより、初期ガストリン−１７濃度を決定するステップ、および
ｅ）前記比較に基づいて、胃粘膜の構造および／または機能を判断するステップ。
【請求項３】
ヘリコバクター・ピロリ感染、萎縮性胃炎と関連リスク、および／または胃機能障害の無症候性および症候性対象をスクリーニングするための、下記ステップを含む方法：
ａ）対象から全血サンプルを得るステップ、
ｂ）該全血サンプルの採取時刻を記録するステップ、
ｃ）該全血サンプル採取の貯蔵温度を記録するステップ、
ｄ）該全血サンプルから分離した血漿または血清サンプルにおけるガストリン−１７の濃度を定量するステップ、
ｅ）ステップｂ）、ｃ）およびｄ）から得られた値を参照値と比較することにより、初期ガストリン−１７濃度を決定するステップ、および
ｆ）前記比較に基づいて、胃粘膜の構造および／または機能を判断するステップ。
【請求項４】
血漿または血清サンプルにおいて、ガストリン−１７濃度に加えて、ペプシノゲンＩ、ペプシノゲンＩＩおよびヘリコバクター・ピロリＩｇＧ抗体の濃度をも測定する、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
全血サンプルを安定剤を用いずに採取および貯蔵する、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
全血サンプルを、血漿および／または血清の分離ならびにバイオマーカー濃度の解析まで、０〜３０℃の範囲の温度で採取および貯蔵する、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
・血漿または血清バイオマーカー濃度の測定、
・全血サンプル採取から血漿または血清サンプル解析までの時間、および
・全血サンプルの貯蔵温度
に基づいて初期バイオマーカー濃度を決定する、デバイスまたはプログラム。
【請求項８】
・血漿または血清バイオマーカー濃度が定量下限を上回り、
・全血サンプル採取から血漿および／または血清サンプル解析までの時間が０〜４８時間であり、かつ
・全血サンプルの貯蔵温度が０〜３０℃である、
請求項７に記載のデバイスまたはプログラム。
【請求項９】
ヘリコバクター・ピロリ感染、萎縮性胃炎と関連リスク、および／または胃機能障害の無症候性および症候性対象をスクリーニングする非侵襲的な試験において使用するためのものである、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）感染および／または萎縮性胃炎と関連リスクを示すバイオマーカーを有する人を検査する方法に関する。より具体的には、本発明は、前記疾患および胃粘膜機能のスクリーニングおよび検出に関する解析ステップを改善する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ユニークなヘリコバクター・ピロリ試験であるGastroPanel（登録商標）は、下記の状態を検出することができる：
１）胃癌および消化性潰瘍疾患（胃および十二指腸潰瘍）の両方についての独立したリスク因子である、ヘリコバクター・ピロリ（ＨＰ）感染。
２）多くの場合に無症候性である、ＨＰ感染により誘発される萎縮性胃炎（ＡＧ）、ならびに胃体部または胃前庭部のトポグラフィックなＡＧ部位（topographic site of AG）。胃体部ＡＧとあらゆるその臨床的結果は、ＨＰ感染のほか、胃粘膜の自己免疫疾患によっても起こりうる。
２．１）胃体部粘膜のＡＧは、胃酸分泌低下、または最終的に胃酸欠如（無胃酸症）をもたらす。それにより、胃または食道癌、ならびにビタミンＢ１２、カルシウム、マグネシウムおよび亜鉛の吸収不良のリスクが高まる。さらに、胃酸欠如により、ある種の薬物、例えばジピリダモール、ある種の鉄剤および抗真菌薬（フルコナゾール、イトラコナゾール）、チロキシンおよびアタザナビルの吸収が阻害される。カルシウムの欠乏は骨粗鬆症の原因となり得、ビタミンＢ１２の欠乏は、アルツハイマー病、痴呆症、抑鬱または末梢神経障害の発症の原因となりうる。胃酸分泌低下は、ジアルジア症、マラリア、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）、腸管出血性大腸菌（E. coli EHEC）および肺炎を包含する、消化管および気道における重大な感染症のリスクも高めうる。
２．２）胃前庭部ＡＧは、胃癌のリスクを高める。胃体部および胃前庭部の両方にＡＧがある場合（汎発性胃炎（pangastritis））、これは、胃癌についての最も重要な単独のリスク条件である。
【０００３】
３）さらに、ＡＧ、ＭＡＬＴリンパ腫または出血性消化性潰瘍を有する対象、およびＰＰＩ薬物または抗生物質を使用している対象におけるＨＰ感染。これらの症例において、１３Ｃ尿素呼気試験（ＵＢＴ）または便中ＨＰ抗原試験ではしばしば偽陰性の結果が示され、ＨＰ感染（そして、それが招く可能性のある結果）が見逃されてしまう。ＵＢＴは、無胃酸症の対象において、偽陽性の結果を示しうる。さらに、ＵＢＴおよびＨＰ抗原または抗体試験は、ＨＰ感染または自己免疫疾患によるＡＧを検出しない（http://www.biohithealthcare.com/limitations-of-helicobacter-pylori-diagnostics）。
４）食道逆流疾患と、起こりうる合併症の素因である、胃粘膜による過剰な胃酸分泌。合併症は、潰瘍性食道炎、バレット食道または下部食道癌である。
【０００４】
症候性のヘリコバクター・ピロリ（ＨＰ）感染、萎縮性胃炎（ＡＧ）および胃酸過剰分泌は、胃内視鏡検査の適用である。
【０００５】
このGastroPanel（登録商標）というイノベーションは、フィンランドおよびエストニアの研究グループにより実施された胃炎患者についての追跡研究、ならびに胃炎および消化性潰瘍疾患の病因におけるヘリコバクター・ピロリの役割の発見（これには２００５年にノーベル賞が与えられた）に基づき、また、ビオヒット（Biohit）の研究開発、および垂直光ビーム測定原理の発明に基づくマイクロプレート免疫アッセイアナライザーに基づいている。
【０００６】
より詳しく述べると、ビオヒットのGastroPanel（登録商標）は、胃粘膜構造および機能についての４つの生物学的マーカーであるペプシノゲンＩ（ＰＧＩ）、ペプシノゲンＩＩ（ＰＧＩＩ）、ガストリン−１７（Ｇ−１７）およびヘリコバクター・ピロリＩｇＧ抗体の血漿中濃度を測定する、定量的ＥＬＩＳＡ試験パネルである。GastroPanel（登録商標）の主な適用は、１）ヘリコバクター・ピロリ感染、２）萎縮性胃炎（ＡＧ）、３）胃機能障害の、無症候性および症候性対象の診断およびスクリーニングを補助することである。
【０００７】
GastroPanel（登録商標）は、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｐ）感染（世界人口の５〜８０％）の診断のため、あらゆる消化不良患者（西洋人口の２０〜４０％）の検査のため、および萎縮性胃炎（ＡＧ）と関連リスク（例えば胃および食道癌）のスクリーニングのための、最重要試験である（１〜３）。萎縮性胃炎は、ビタミンＢ１２、鉄、マグネシウム、亜鉛、カルシウムおよびある種の医薬の吸収不良のリスクも高める。Ｈｐ感染を調べる１３Ｃ尿素呼気試験（ＵＢＴ）、便中抗原試験および抗体試験では、Ｈｐ感染または自己免疫疾患によって起こされる萎縮性胃炎も、胃酸分泌レベルも、検出できない。さらに、１３Ｃ尿素呼気試験および便中抗原試験は、患者がａ）萎縮性胃炎を有するか、ｂ）ＭＡＬＴリンパ腫を有するか、ｃ）出血性消化性潰瘍疾患を有するか、またはｄ）抗生物質またはＰＰＩを使用中である場合には、偽陰性の結果を示しうる。
【０００８】
GastroPanel（登録商標）は、胃の正常な生理機能の主要な調節因子を表す、主要な胃特異的バイオマーカーからなる。それら４つのバイオマーカーは、胃粘膜の構造および機能の両方に関する情報を与えるよう設計され、ペプシノゲンＩ（ＰＧＩ）、ペプシノゲンＩＩ（ＰＧＩＩ）、アミド化ガストリン−１７（Ｇ−１７）、およびＨｐ抗体を含む（１〜６）。このパネルは、最も重要なことには、胃酸およびＧ−１７をそれぞれ分泌する胃体部および胃前庭部粘膜の能力について、ならびに重要な胃病状、例えば炎症、萎縮性胃炎（これは、胃癌およびその臨床的結果の上昇したリスクを表しうる（１））のグレードおよびトポグラフィーについて、精密な推定を与える（７〜９）。
【０００９】
４つすべてのバイオマーカーの血漿中レベルが正常であることは、胃粘膜が正常な構造および機能を有することを示し、異常なレベルは、胃体部の胃酸分泌、ＰＧおよびＧ−１７の間のフィードバック機構における障害を反映して、胃が健常でないことを示す。Ｇ−１７の評価には、Ｇ−１７基底（G-17 basal; G-17b）値とＧ−１７刺激（G-17 stimulated; G-17s）値の２つのオプションがあり、後者は、胃前庭部の機能障害（Ｇ−１７ｓ正常）と胃前庭部のＡＧ（ＡＧにおいてＧ−１７ｓは増加しない）との識別において特に重要である。
【００１０】
GastroPanel（登録商標）は、胃粘膜健康状態についての初めての非侵襲的診断試験として、結果の判定が、その目的のために特に設計されたソフトウェアアプリケーション（GastroSoft）(http://www.gastropanel.com)によってなされるという点においてもユニークである。GastroPanel（登録商標）の結果は、次の５つの診断カテゴリーの１つとして判定される：１）正常な粘膜、２）表層性の（Ｈｐ）胃炎、３）胃前庭部におけるＡＧ、４）胃体部におけるＡＧ、および５）胃前庭部および胃体部の両方におけるＡＧ（汎発性胃炎）（１１、１２）。したがって、GastroPanel（登録商標）は、同じ５診断カテゴリーに基づく、胃炎分類のためのUpdated Sydney System（ＵＳＳ）と共に用いるのに適している（１３）。
【００１１】
GastroPanel（登録商標）は、その有効性が、生検で確認される胃内視鏡検査に基づく複数の大規模試験（すべて、そのテーマについての最近のメタアナリシスに含められた（１４））において確認されている（１４、１５）。それら試験は、５つの組織学的カテゴリーをエンドポイントとして、パネルの各バイオマーカーについての有効な参照（カットオフ）値を確立するために活用されている。それら試験により、GastroPanelが、最も重要な試験エンドポイントである中程度ないし重度のＡＧの検出において、高度に正確であることが確認されている（１４〜１６）。すなわち、ＰＧＩ、ＰＧＩＩおよびそれらの比（ＰＧＩ／ＰＧＩＩ）が正常値であれば、胃体部ＡＧは９５％を超えるＮＰＶで否定される。一方、十分な検出力を有しＵＳＳで有効性が確認されたシリーズにおいて、ＰＧＩおよびＰＧＩＩならびにそれらの比の値が確立されたカットオフレベルを下回る場合は、中程度ないし重度のＡＧが０．９５０を超えるＲＯＣ曲線下（ＡＵＣ）値で推定されている（１、２、３、１６、１７）。
【００１２】
手短に説明すると、ＰＧＩのレベルは、胃体部ＡＧ（および汎発性胃炎）において低下するが、他のすべての状態で正常範囲内にとどまる。ＰＧＩＩレベルの上昇は粘膜の炎症を反映し、Ｈｐ関連非ＡＧにおいて最も高値となる。Ｇ−１７値は胃体部ＡＧにおいて最も高いが、これは、胃体部の委縮により胃体部からの胃酸分泌による負のフィードバックが損なわれ、その結果、正常な胃前庭部粘膜によるＧ−１７ｂ分泌が抑制されなくなるためである。ＰＰＩ医薬の長期使用により胃酸分泌が阻害される状況にも、同じことが当てはまる。胃前庭部粘膜が萎縮し、Ｇ細胞が減少すると、Ｇ−１７分泌は当然ながら、タンパク質刺激後でさえ（Ｇ−１７ｓ）非常に低いレベルにとどまる（１７）。
【００１３】
３つのバイオマーカーに加えてＨｐ  ＩｇＧ抗体を用いることによって、診断の有効性は有意に高められる。Ｈｐに対するＩｇＧ血清学は、潜在的に次の２つの異なる状態を評価する：１）現時点のＨｐ感染、または２）Ｈｐに対する過去の暴露。GastroPanel（登録商標）はこれら２つを識別し得ないものの、このＨｐ関与についての証拠は、診断有効性を有意に高める。Ｈｐは、単独の異常マーカーとしては、Ｈｐ関連の表層性胃炎（ＡＧなし）に関連し、上昇したＨｐ抗体力価は、それ以外の３つのマーカーにおける異常との組み合わせで、Ｈｐ関連ＡＧ（胃前庭部または胃体部）の診断を確認する（１、３、１８、１９）。
【００１４】
GastroPanel（登録商標）の結果の判定について、詳細はhttp://www.gastropanel.comを参照されたい。
【００１５】
また、ＷＯ２００９／０５３５３７に、GastroPanelイノベーションに関する方法原理および概念が記載されている。
【００１６】
さらに、Syrjaenen（２０１６）は、萎縮性胃炎の診断について、GastroPanel（登録商標）を用いたすべての関連する研究についての系統的なレビューおよびメタアナリシスを提供し、GastroPanel（登録商標）によるＡＧの診断およびスクリーニングを支持する国際的な専門家の見解を裏付けている。胃前庭部ＡＧおよび胃体部ＡＧの両方に対する高い特異性の故に、GastroPanel（登録商標）は恰好の胃の健康状態の試験である。
【００１７】
GastroPanel（登録商標）試験において、４つのバイオマーカーの濃度が血液サンプルから測定される。胃粘膜細胞から分泌されるそれらマーカーであるペプシノゲンＩ（ＰＧＩ）、ペプシノゲンＩＩ（ＰＧＩＩ）およびガストリン−１７（Ｇ１７）が測定され、さらにヘリコバクター・ピロリ抗体が測定される。４つすべてのバイオマーカーの結果を総合的に判断することにより、バイオマーカーを個別に用いる場合よりも信頼性が高く総合的な胃粘膜構造および機能の理解が可能となる。ただし、それらバイオマーカーの濃度測定をできるだけ速やかに行うか、またはサンプルを解析まで適正に保管し取り扱うよう注意を払うべきである。血液サンプルは、採取後３０分以内に遠心分離することが推奨される。被験物質の分解を防止するために、分離された血漿の入った管に特別な安定剤物質を添加すべきである。そのような安定剤物質の使用により、サンプルを室温（２０〜２５℃）で３日間、または冷蔵庫内（２〜８℃）で７日間まで、保存することが可能となる。そのようなサンプルは、解析まで、より長期間置く場合、−２０℃で２週間までの貯蔵に耐える。さらに長期間貯蔵する場合は、サンプルを−７０℃に保つべきである。しかしながら、サンプルを遠心分離することが可能でない場合には、安定剤は、赤血球細胞の溶血を起こすので、使用することができない。したがって、全血サンプルの貯蔵および輸送中の温度および時間の影響には、高い関心が持たれる。
【発明の概要】
【００１８】
本発明は、特許請求の範囲の独立請求項に記載される特徴によって限定される。いくつかの特定の態様が、従属請求項において限定される。
【００１９】
本発明の第１の側面において、ヘリコバクター・ピロリ感染、萎縮性胃炎と関連リスク、および／または胃機能障害の無症候性および症候性対象を、全血サンプルを得ること、サンプル採取時刻もしくはサンプル貯蔵温度またはそれら両方の組み合わせを記録すること、関係するバイオマーカーの濃度を測定すること、およびそのような情報に基づき初期バイオマーカー濃度および胃粘膜状態を決定すること、に基づいてスクリーニングする方法が提供される。
【００２０】
本発明の第２の側面において、血漿または血清バイオマーカー濃度の測定、全血サンプル採取から血漿または血清サンプル解析までの時間、全血サンプルの貯蔵温度、に基づいて初期バイオマーカー濃度を決定するデバイスまたはプログラムが提供される。
【００２１】
本発明の第３の側面において、前記のような手段によって決定されるバイオマーカー、例えばガストリン−１７の初期濃度は、ヘリコバクター・ピロリ感染、萎縮性胃炎と関連リスク、および／または胃機能障害の無症候性および症候性対象をスクリーニングするための非侵襲的試験において用いられる。
【００２２】
本発明は、例えばガストリン−１７バイオマーカーの濃度が、時間および温度に対して単調に低下するという知見に基づく。濃度が定量限界よりも高く、サンプルの貯蔵温度およびサンプル採取の時刻の情報がわかっていれば、初期ガストリン−１７濃度を信頼性を以て推定し、胃粘膜健康状態の結果の判定のために用いることができる。
【００２３】
前記の、および他の側面と、既知の解決方法に勝るその利点は、以下説明され、特許請求の範囲に記載されるように、本発明によって達成される。
【００２４】
より明確には、本発明の方法は、請求項１、２および３に記載されるものによって特徴付けられる。
【００２５】
本発明のデバイスまたはプログラムは、請求項７に記載されるものによって特徴付けられ、本発明の使用は、請求項９に記載されるものによって特徴付けられる。
【００２６】
本発明によって多大な利益がもたらされる。例えば、血液サンプルは、後の解析のために血漿または血清を分離する遠心分離に直ちに付す必要がない。サンプルは、後の解析のために、初めに加工処理する必要なく全血サンプルとして、採取、貯蔵および輸送することができる。後にバイオマーカーを測定する解析ステップにおいて、変化、例えばタンパク質分解の影響による変化を受けている可能性のある得られた結果を判断および補正するために、サンプル採取時刻および貯蔵温度が用いられる。これにより、実際の臨床的作業の時間依存が緩和され、所要時間が短縮され、費用も抑えられる。例えば、各サンプルの解析を、該血液サンプルを採取した現場で行う必要はなく、後での加工処理および解析用に、サンプルを単に採取しさえすればよい。したがって、検査施設内のロジスティクスもまた、改善される。さらに、血液サンプルは、貯蔵のための安定剤を必要とせず、後で解析のために使用するまで、例えば室温で、全血サンプルとして貯蔵することができる。
【００２７】
本発明の技術を、以下、特定の態様を参照してより詳細に説明する。
【００２８】
態様
本発明の技術は、ヘリコバクター・ピロリ感染および／または萎縮性胃炎と関連リスクを示すＧＰバイオマーカーを有するか、または有すると推測される人を検査する場合の、全血サンプルの貯蔵および輸送中の温度および時間の影響に関する。
【００２９】
図１に示すように、ペプシノゲンＩ、ペプシノゲンＩＩおよびヘリコバクター・ピロリは、通常の室温で数日間の貯蔵に十分に耐え、実質的な分解を起こさないが、ガストリン−１７はそうでないことがわかった。ここで、酸化、光分解、ジスルフィドスクランブリング、脱アミド化、凝集、沈降、解離、断片化等のさまざまなタンパク質分解イベントは関心の対象ではなく、単に貯蔵時間および温度の影響が関心の対象である。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】図１は、サンプルを全血として、解析までさまざまな時間、２１℃で貯蔵した場合の、ペプシノゲンおよびガストリン−１７の相対濃度変化を示す図である。
【図２−４】図２〜４は、サンプルを、４℃、２１℃の室温、および３０℃で１２、２４、３６および４８時間貯蔵した後のガストリン−１７の濃度を示す。２４時間後の相対的な濃度低下は、４℃、２１℃および３０℃でそれぞれ、約２０％、４０％および８０％である。より詳細には、図２ａは、全血として解析までさまざまな時間、４℃で貯蔵したサンプルにおける、ガストリン−１７の濃度を示す図である。図２ｂは、全血として解析までさまざまな時間、４℃で貯蔵したサンプルにおける、ガストリン−１７の相対濃度変化を示す図である。図３ａは、全血として解析までさまざまな時間、２１℃で貯蔵したサンプルにおける、ガストリン−１７の濃度を示す図である。図３ｂは、全血として解析までさまざまな時間、２１℃で貯蔵したサンプルにおける、ガストリン−１７の相対濃度変化を示す図である。図４ａは、全血として解析までさまざまな時間、３０℃で貯蔵したサンプルにおける、ガストリン−１７の濃度を示す図である。図４ｂは、全血として解析までさまざまな時間、３０℃で貯蔵したサンプルにおける、ガストリン−１７の相対濃度変化を示す図である。
【図５】図５に示されるように、貯蔵／輸送温度は、ガストリン−１７の分解速度に顕著に影響する。すなわち、図５は、２つの異なるサンプルの全血を、さまざまな温度で１日間（２４時間）貯蔵した結果を示す図である。
【図６】図６は、全血として解析までさまざまな時間、３０℃で貯蔵したサンプルにおける、ガストリン−１７の濃度を示す図である。破線は、ガストリン−１７高参照値７ｐｍｏｌ／ｌ（高参照値の例；より高い濃度は胃酸低下を示す）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
本発明の一態様は、ヘリコバクター・ピロリ感染、萎縮性胃炎と関連リスク、および／または胃機能障害の無症候性および症候性対象をスクリーニングするための、下記ステップを含む方法である：
ａ）対象から全血サンプルを得るステップ、
ｂ）該全血サンプルの採取時刻を記録するステップ、
ｃ）該全血サンプルから分離した血漿または血清サンプルにおけるガストリン−１７の濃度を定量するステップ、
ｄ）ステップｂ）およびｃ）から得られた値を参照値と比較することにより、初期ガストリン−１７濃度を決定するステップ、および
ｅ）前記比較に基づいて、胃粘膜の構造および／または機能を判断するステップ。
【００３２】
本発明の他の一態様は、ヘリコバクター・ピロリ感染、萎縮性胃炎と関連リスク、および／または胃機能障害の無症候性および症候性対象をスクリーニングするための、下記ステップを含む方法である：
ａ）対象から全血サンプルを得るステップ、
ｂ）該全血サンプル採取の貯蔵温度を記録するステップ、
ｃ）該全血サンプルから分離した血漿または血清サンプルにおけるガストリン−１７の濃度を定量するステップ、
ｄ）ステップｂ）およびｃ）から得られた値を参照値と比較することにより、初期ガストリン−１７濃度を決定するステップ、および
ｅ）前記比較に基づいて、胃粘膜の構造および／または機能を判断するステップ。
【００３３】
本発明のさらなる一態様は、ヘリコバクター・ピロリ感染、萎縮性胃炎と関連リスク、および／または胃機能障害の無症候性および症候性対象をスクリーニングするための、下記ステップを含む方法である：
ａ）対象から全血サンプルを得るステップ、
ｂ）該全血サンプルの採取時刻を記録するステップ、
ｃ）該全血サンプル採取の貯蔵温度を記録するステップ、
ｄ）該全血サンプルから分離した血漿または血清サンプルにおけるガストリン−１７の濃度を定量するステップ、
ｅ）ステップｂ）、ｃ）およびｄ）から得られた値を参照値と比較することにより、初期ガストリン−１７濃度を決定するステップ、および
ｆ）前記比較に基づいて、胃粘膜の構造および／または機能を判断するステップ。
【００３４】
血漿または血清サンプルにおいて、ガストリン−１７濃度に加えて、ペプシノゲンＩ、ペプシノゲンＩＩおよびヘリコバクター・ピロリＩｇＧ抗体の濃度をも測定する方法も、本発明の範囲に含まれる。
【００３５】
サンプルの初期濃度を推定するための適当な解析関数の一例を下記に示すが、これに限定されるものではない。濃度低下が分子の数に比例すると仮定される場合、
【数１】
2019536029.tif 000002
ここで、Ｎは分子の数であり、ｋは低下が起こるであろう速度を示し、ｔは時間である。
【００３６】
該１階微分方程式の解は、下記のように表すことができる：
【数２】
2019536029.tif 000003
ここで、Ｎ０は初期の分子数、すなわち被験物質の初期濃度であり、
2019536029.tif 000004
【００３７】
測定される濃度は貯蔵温度の影響を受けているので、関数を下記の一般形で表すことができる：
【数３】
2019536029.tif 000005
ここで、Ｔはサンプルの貯蔵温度である。
【００３８】
濃度半減時間ｔ１／２を下記式から解くことができる：
【数４】
2019536029.tif 000006
半減時間ｔ１／２およびｋ（Ｔ）を、測定データから推定することができる。
【００３９】
濃度は時間および温度に対して単調に低下するので、濃度が定量下限（ＬｏＱ）を上回っており、貯蔵温度およびサンプル採取時刻の情報が得られているならば、初期濃度を推定し、その情報を結果の判断に利用することができる。
【００４０】
本発明の一態様において、（参照範囲に対して）高いガストリン−１７濃度は、胃酸欠如を示す。測定まである時間にわたり貯蔵されたサンプルが、依然高い濃度値を示す場合、初期濃度も高かったに違いない。そのような状況を、測定をサンプル採取から１日（２４時間）後に行ったものとして、サンプルＢＮ１９９９について図５に示す。貯蔵サンプルの結果に基づく判断は、そのサンプルが採取直後に解析されかのように有効である。
【００４１】
さらに、温度がある温度を超えたことがなかったことが確かであれば、それにより、参照範囲と対比される濃度を推定することができ、それを結果の判断に利用することが可能である。例えば、図５におけるサンプルＢＮ１９９８が測定まで室温（２１℃）で貯蔵され、測定値が５ｐｍｏｌ／ｌである場合、半減時間は２４時間よりも短いと推定することができ、したがって、初期値が高参照値の例である７ｐｍｏｌ／ｌよりも高かったことが確実でありうる。したがって、この場合も胃酸欠如が示され、例えば低いペプシノゲンレベルとの組み合わせで、萎縮性胃炎の診断の特異度が高められうる。
【００４２】
さらに、該サンプルが測定まで２４時間貯蔵されたとして、値が約２ｐｍｏｌ／ｌであれば、それは、胃酸量が参照範囲の上限を下回り正常であることを示す。
【００４３】
ただし、測定濃度がＬｏＱを下回る場合には、初期濃度を推定することは不可能である。その場合は、ガストリン−１７の結果を判定に使用することができない。したがって、GastroPanel（登録商標）判定は、それ以外のバイオマーカー値に基づいてなされなければならない。
【００４４】
一態様において、全血サンプルは安定剤を用いずに採取および貯蔵される。
【００４５】
一態様において、全血サンプル採取から、血漿または血清サンプルのさらなる解析までの時間は、０〜１２０時間、より好ましくは０〜７２時間、最も好ましくは０〜４８時間である。
【００４６】
一態様において、全血サンプルは、血漿および／または血清の分離ならびにバイオマーカー濃度の解析まで、０〜３０℃の範囲の温度、例えば４℃、２１℃または３０℃で採取および貯蔵される。
【００４７】
血漿または血清バイオマーカー濃度の測定、全血サンプル採取から血漿および／または血清サンプル解析までの時間、ならびに全血サンプルの貯蔵温度、に基づき初期バイオマーカー濃度を決定するデバイスまたはプログラムは、本発明の範囲に含まれる。
【００４８】
好ましくは、血漿または血清バイオマーカー濃度は定量下限を上回り、全血サンプル採取から血漿および／またはサンプル解析までの時間は０〜４８時間であり、全血サンプルの貯蔵温度は０〜３０℃である。
【００４９】
したがって、前記のようなデバイスまたはプログラムは、例えば、本発明の前記必須パラメータを考慮に入れるよう改変されている、GastroPanelの結果の判断のために設計されたGastroSoftプログラムでありうる。
【００５０】
本発明のさらなる一態様は、本開示の方法を、ヘリコバクター・ピロリ感染、萎縮性胃炎と関連リスク、および／または胃機能障害の無症候性および症候性対象をスクリーニングする非侵襲的な試験において使用することである。
【００５１】
当業者に理解されるように、開示される本発明の態様は、本書に開示される特定の構造、方法ステップまたは材料に限定されず、その等価物まで拡大されると理解すべきである。また、本書で使用される用語は、特定の態様を説明する目的で使用されるに過ぎず、限定を意図したものではないことを理解すべきである。
【００５２】
本明細書中で一態様またはある態様について言うとき、該態様に関連して記載される特定の特徴、構造または性質は、本発明の少なくとも１つの態様に含まれることを意味する。したがって、本明細書中の異なる箇所で「一態様において」または「ある態様において」という表現を用いるのは、必ずしもすべて同一の態様を指すわけではない。例えば「約」または「実質的に」のような用語を用いて数値が記載される場合、当該正確な数値も開示されるものとする。
【００５３】
本書において、複数の、事項、構造要素、構成要素および／または材料が、簡便のために共同のリスト中に記載されうる。しかしながら、そのようなリストは、リストの各メンバーが別個の独特のメンバーとして個別に特定されるかのように解釈すべきである。したがって、そのようなリストの個々のメンバーのいずれも、そうでないことを指摘していない限り、単に同じ群において挙げられるということに基づいて、同じリストの他のメンバーの事実上の(de facto）等価物であると解釈すべきではない。さらに、本書において、本発明のさまざまな態様および例が、そのさまざまな構成要素についての選択肢を伴って記載されうる。そのような複数の態様、例、および選択肢は、互いに事実上の等価物であると解釈すべきではなく、本発明を個々に独立して表現するものであると解釈すべきである。
【００５４】
さらに、記載される特徴、構造または性質は、１つまたはそれ以上の態様において、任意の適当な様式で組み合わせられうる。続く記載において、本発明の態様の十分な理解を提供するために、多数の特定の詳細事項が提供される。しかしながら、当業者は、本発明は、そのような特定の詳細事項の１つまたはそれ以上によらなくても実施されうること、または他の方法、成分、材料等によって実施されうることを理解しうる。他の例において、よく知られた構造、材料または操作は、示していないか、詳細には記載していないが、これは、本発明の側面がわかり難くならないようにするためである。
【００５５】
前記の例は、本発明の原理を１つまたはそれ以上の特定の適用において説明するものであるが、形態、使用法、および実施の詳細事項における数多くの変更を、発明力を行使することなく、また、本発明の原理および概念から外れることなくなしうることは、当業者に明らかであろう。したがって、本発明は、特許請求の範囲によるような限定を除き、限定されることは意図されない。
【００５６】
本書において、「含む」および「包含する」という動詞は、挙げられていない特徴の存在を除外するものでも、それをも必要とするものでもない、非限定的に限定するもの（open limitation）として用いられる。従属請求項に記載される複数の特徴は、そうでないことが明記されない限り、互いに任意に組み合わせることが可能である。さらに、本書を通して、「１つの」という用語、すなわち単数形の使用は、複数形を排除するものではないと理解される。
【産業上の利用可能性】
【００５７】
本発明の少なくともいくつかの態様には、例えば消化不良患者のスクリーニングおよび検査において、また、萎縮性胃炎（ＡＧ）と関連リスク（例えば胃および食道癌）のスクリーニングおよび検出のための、産業上の用途が見出される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００５８】
１．ＷＯ  ２００９／０５３５３７
【非特許文献】
【００５９】
2019536029.tif 000007
【００６０】
2019536029.tif 000008
【図１】
2019536029.tif 000009
【図２ａ】
2019536029.tif 000010
【図２ｂ】
2019536029.tif 000011
【図３ａ】
2019536029.tif 000012
【図３ｂ】
2019536029.tif 000013
【図４ａ】
2019536029.tif 000014
【図４ｂ】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
2019536029.tif 000018
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