(57)【要約】対象に早期細胞療法選択肢を提供し、リスクがより高い治療モダリティを回避する潜在的利益を提供するための方法および組成物が提供される。がんまたは他の増殖性障害などの疾患または状態を有するまたは有する疑いのある対象を治療するための方法および組成物が提供される。一部の実施形態では、がんは、Ｂ細胞増殖性障害などのリンパ腫もしくは白血病またはＣＤ１９＋Ｂ細胞悪性疾患などの悪性疾患である。一部の実施形態では、本方法は、組換え抗原受容体を発現する細胞（本明細書では「ＲＡＲ細胞」と代替的に呼ばれる）の用量を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、細胞は、組換え抗原受容体を発現するＴ細胞である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）疾患または状態を有する対象に、組換え抗原受容体を発現する細胞の用量を投与するステップであって、前記受容体が任意選択でキメラ抗原受容体である、ステップ；ならびに
（ｂ）前記抗原受容体発現細胞の投与後に、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を前記対象に投与しない、および／または
（ａ）における投与の開始後の約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、もしくは約１年以内に、ＨＳＣＴを前記対象に投与しない、および／またはここで前記細胞の投与後に、または（ａ）における投与の開始後の約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、もしくは約１年以内に、ＨＳＣＴを前記対象に投与しない、および／または
前記対象の再発がない場合、任意選択で臨床的寛解後にＨＳＣＴをそのように投与しないステップ
を含む、治療方法。
【請求項２】
疾患または状態を有し、ＨＳＣＴ未経験である対象に、組換え抗原受容体を発現する細胞の用量を投与するステップを含む治療方法であって、前記抗原受容体が、任意選択でキメラ抗原受容体であり、前記対象が、前記投与後、前記細胞の用量の投与の開始後の少なくとも約１、２、３、４、５、６、９、または１２カ月間、ＨＳＣＴ未経験として維持される、治療方法。
【請求項３】
前記対象には、前記抗原受容体発現細胞の投与の開始前にＨＳＣＴが投与されていない、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記対象には、（ａ）における投与前におよび／または前記疾患もしくは前記状態の診断以降に、前記疾患または前記状態のための療法が施されていない、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記対象が、（ａ）における投与前におよび／または前記疾患もしくは前記状態の診断以降に、導入補助化学療法または前記細胞の以前の用量以外の、前記疾患または前記状態のための療法を受けていない、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記対象が、（ａ）における投与前におよび／または前記疾患もしくは前記状態の診断以降に、導入補助化学療法および／または地固め化学療法以外の、前記疾患または前記状態のための療法を受けていない、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記対象が、（ａ）における投与前におよび／または前記疾患もしくは前記状態の診断以降に、導入補助化学療法または前記細胞の以前の用量以外の、前記疾患または前記状態のための療法を受けておらず、対象の平均全生存が、前記抗原受容体発現細胞の投与後に、または投与の１カ月、２カ月、３カ月、もしくは６カ月以内に前記対象がＨＳＣＴを受けること除いて前記方法と同一である方法による治療を受けた対象で観察されるものと比較して増強される、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
疾患または状態を有する対象に、組換え抗原受容体を発現する細胞の用量を投与するステップを含む治療方法であって、前記対象が、前記抗原受容体発現細胞の投与の開始後に、および／または前記抗原受容体発現細胞の投与の開始前に、および／または前記抗原受容体発現細胞の投与の開始と同時に、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けない、および／または受けていない、治療方法。
【請求項９】
前記対象が、前記抗原受容体発現細胞の投与前にまたは投与と同時に、ＨＳＣＴを受けておらず、前記対象が、前記抗原受容体発現細胞の投与後に、または前記投与の開始から、任意選択で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、もしくは１２カ月以内または約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、もしくは１２カ月以内の期間内にＨＳＣＴを受けない、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記疾患または前記状態が、腫瘍またはがんである、請求項１から９のいずれか一項に記載の治療方法。
【請求項１１】
前記疾患または前記状態が、白血病、リンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、難治性濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、緩徐進行性Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞悪性疾患、結腸、肺、肝臓、乳房、前立腺、卵巣、皮膚のがん、黒色腫、骨および脳がん、卵巣がん、上皮がん、腎細胞癌、膵臓腺癌、ホジキンリンパ腫、子宮頚癌、結腸直腸がん、膠芽腫、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、髄芽細胞腫、骨肉腫、滑膜肉腫、中皮腫、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の治療方法。
【請求項１２】
前記疾患または前記状態が、白血病またはリンパ腫および／または血液がんであり、ならびに／またはＢ細胞白血病もしくはリンパ腫であり、ならびに／または任意選択で急性白血病、慢性白血病、および／もしくは非ホジキンリンパ腫としてである、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記対象が、前記抗原受容体発現細胞の投与の開始時にまたは開始直前に形態学的疾患を示すか、あるいは前記対象が、前記抗原受容体発現細胞の投与の開始時にもしくは開始直前に微小病変を示すかまたは再発している、請求項１０から１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
形態学的疾患を示すがんを有する対象に、組換え抗原受容体を発現する細胞の用量を投与するステップを含む治療方法であって、前記対象が、前記抗原受容体発現細胞の投与後に、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けない、治療方法。
【請求項１５】
前記対象が、（ａ）ＨＳＣＴ未経験ステータスを有し、前記疾患または前記状態のための別の治療または療法について未経験ステータスであるとして、および／または抗原受容体発現細胞の投与の開始時にもしくは開始前に、導入期の化学療法を受けており、任意選択で地固め化学療法を受けていないとして；あるいは（ｂ）約１８、２０、３０、４０、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、もしくは８５歳であるか、または少なくとも約１８、２０、３０、４０、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、もしくは８５歳であるとして選択される、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記対象が、形態学的疾患を有するとして、または前記抗原受容体発現細胞の投与の開始時に微小病変を有するとして選択される、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記対象が、前記微小病変を示し、および／または微小病変を有するとして選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記方法により治療された、投与直前に微小病変を有する前記疾患または前記状態を有する対象の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９９％が、完全寛解および／またはＭＲＤ陰性完全寛解を示す、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記方法により治療された、投与直前に形態学的疾患を有する前記疾患または前記状態を有する対象の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９９％が、完全寛解および／またはＭＲＤ陰性完全寛解を示す、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
（ａ）疾患または状態を有する対象を選択するステップであって、前記対象が、以下：
（ｉ）（Ａ）造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けていない、（Ｂ）前記疾患または前記状態の診断以降にＨＳＣＴを受けていない、（Ｃ）前記疾患または前記状態のための療法を施されていない、（Ｄ）導入補助化学療法以外の、前記疾患または前記状態のための療法を施されていない、（Ｅ）地固め療法および／または前記細胞の以前の用量以外の、前記疾患または前記状態のための療法を施されていないか、および／または
（ｉｉ）成体であるか；および／または
（ｉｉｉ）形態学的疾患もしくはある閾値よりも高い疾患負荷を示すか；および／または
（ｉｖ）ＨＳＣＴの候補ではないか；および／または
（ｖ）ＨＳＣＴ療法を受けることが意図されていないかもしくは予定されていない、
ステップ；ならびに
（ｂ）前記対象に、組換え抗原受容体を発現する細胞の用量を投与するステップであって、前記抗原受容体が任意選択でキメラ抗原受容体である、ステップ
を含む、治療方法。
【請求項２１】
前記方法によって、前記対象が、任意選択でＨＳＣＴを受けずに、または前記細胞の投与後の少なくとも約１、約２、約３、約４、約５、約６、約１２、約２４、約３６、もしくは約４８カ月間に、臨床的寛解、分子的寛解、完全寛解、または無再発生存を示す、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記疾患または前記状態が、腫瘍またはがんである、請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記対象が、前記抗原受容体発現細胞の投与の開始時に形態学的疾患を示す、請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
（ａ）形態学的疾患を示すがんを有する対象を選択するステップ、または微小病変を有する対象を選択するステップ；
（ｂ）前記対象に、組換え抗原受容体を発現する細胞の用量を投与するステップ；および
（ｃ）前記抗原受容体発現細胞の投与後に、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を前記対象に投与しないステップ
を含む、治療方法。
【請求項２５】
前記疾患または前記状態が、白血病またはリンパ腫である、請求項１７から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記疾患または前記状態が、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、および急性骨髄性白血病から選択され、ならびに／または任意選択でＢ細胞由来である、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記疾患または前記状態が、任意選択でＢ細胞由来の、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である、請求項１から２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記疾患または前記状態が、任意選択でＢ細胞由来の、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である、請求項１から２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記疾患または前記状態が、任意選択でＢ細胞由来の、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）である、請求項１から２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗原受容体発現細胞の投与前に、前記対象にＨＳＣＴが投与されるかまたは既に投与されている、請求項２４から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗原受容体発現細胞の投与前に、前記対象にＨＳＣＴが投与されない、請求項２４から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
形態学的疾患が、骨髄に５％よりも多くのまたは約５％よりも多くの芽細胞を含み、および／または前記微小病変が、骨髄に約５％未満の芽球を含む、請求項１８から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記対象が、前記微小病変を示し、および／または微小病変を有するとして選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記方法により治療された、投与直前に微小病変を有する前記疾患または前記状態を有する対象の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９９％が、完全寛解および／またはＭＲＤ陰性完全寛解を示す、請求項１から３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記方法により治療された、投与直前に形態学的疾患を有する前記疾患または前記状態を有する対象の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９９％が、完全寛解および／またはＭＲＤ陰性完全寛解を示す、請求項１から３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
形態学的疾患が、骨髄に２０％よりも多くのまたは約２０％よりも多くの芽細胞を含む、請求項２０から３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記形態学的疾患が、骨髄に５０％よりも多くのまたは約５０％よりも多くの芽細胞を含む、請求項２０から３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記対象が、前記抗原受容体発現細胞の投与の開始時に分子的に検出可能な疾患を含むがんを示す、請求項１から１５、２２および２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗原受容体発現細胞の投与前、投与と同時に、および／または投与後にＨＳＣＴを受けた対象と比較して、前記対象の全生存の増強をもたらす、請求項６から３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記抗原受容体発現細胞の投与後にＨＳＣＴを受けた対象と比較して、前記対象の全生存の増強をもたらす、請求項６から３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記方法を使用して治療した後の対象中の平均全生存中央値が、前記抗原受容体発現細胞の投与後および／または投与前にＨＳＣＴを投与することをさらに含むことを除いて前記方法と同一である方法により治療した対象中の平均全生存中央値と比較して、前記抗原受容体発現細胞の投与後の２カ月よりも長い期間もしくは約２カ月よりも長い期間、６カ月よりも長い期間もしくは約６カ月よりも長い期間、１年よりも長い期間もしくは約１年よりも長い期間、または２年よりも長い期間または約２年よりも長い期間、増強される、請求項１から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記方法で治療した対象の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％が、前記抗原受容体発現細胞の投与の開始後、６カ月、１年、２年よりも長い期間もしくは約６カ月、約１年、約２年よりも長い期間、３年よりも長い期間もしくは約３年よりも長い期間、４年よりも長い期間もしくは約４年よりも長い期間、またはそれよりも長い期間の生存期間、無症候生存期間、または無再発生存期間を示す、請求項１から４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＨＳＣＴが、前記対象に対して同種異系である、請求項１から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記抗原受容体発現細胞の開始時に、前記対象が、前記疾患もしくは前記状態を治療するための療法または療法剤を以前に投与されておらず、および／または前記腫瘍もしくは前記がんを標的とする療法剤を受容しておらず、および／または前記細胞の別の用量もしくはキメラ受容体を発現する細胞の別の用量以外の任意のそのような薬剤を受容していない、請求項１から４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記抗原受容体発現細胞の投与の開始時に、前記対象が、前記疾患または前記状態を治療するための以前の療法または療法剤の投与後に再発したか；あるいは
前記対象が、前記抗原受容体発現細胞の投与前に、前記疾患または前記状態を治療するための療法または療法剤で、任意選択で前記腫瘍または前記がんを標的とする療法剤で治療されており、前記抗原受容体発現細胞の投与の開始時に、難治性であるかまたは前記療法もしくは前記療法剤に対して非応答性である、請求項１から４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
疾患負荷を示す１つまたは複数の因子の低減により示されるような、前記対象の前記疾患または前記状態の負荷の低減をもたらす、請求項１から４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記細胞により発現される前記抗原受容体が、前記疾患もしくは前記状態の細胞もしくは組織により発現されるかまたは前記疾患もしくは前記状態に関連する抗原と特異的に結合する、請求項１から４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記組換え抗原受容体が、Ｔ細胞受容体または機能的非Ｔ細胞受容体である、および／あるいは
前記組換え抗原受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項１から４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記組換え抗原受容体がＣＡＲである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記抗原受容体が、前記抗原と特異的に結合する細胞外抗原認識ドメイン、およびＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項４８または４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記抗原がＣＤ１９を含む、請求項４７から５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３−ゼータ（ＣＤ３ζ）鎖の細胞内ドメインを含む、請求項５０または５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記ＣＡＲが、共刺激シグナル伝達領域をさらに含む、請求項４９から５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８のシグナル伝達ドメインならびに任意選択でＣＤ２８の膜貫通および／または細胞外部分を含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記共刺激シグナル伝達ドメインが、４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
前記細胞が、Ｔ細胞を含むかまたはＴ細胞であり、前記Ｔ細胞は、ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋であり得る、請求項１から５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記Ｔ細胞が、前記対象に対して自己由来である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
ＣＤ４＋細胞  対  ＣＤ８＋細胞の比が、約１：５〜約５：１である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＣＤ４＋細胞  対  ＣＤ８＋細胞の比が、約１：２〜約２：１である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記細胞の用量が、前記対象の疾患または状態の負荷の低減に十分な量の細胞を含む、請求項１から５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記細胞の用量が、それぞれ両端の値を含む、前記対象の体重１ｋｇ当たり細胞約０．２×１０６個〜細胞約６×１０６個、前記対象の体重１ｋｇ当たり細胞約０．５×１０６個〜細胞約３×１０６個、前記対象の体重１ｋｇ当たり細胞約０．７５×１０６個〜細胞約２．５×１０６個、または前記対象の体重１ｋｇ当たり細胞約１×１０６個〜細胞約２×１０６個を含む、請求項１から６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記用量の細胞が、前記細胞を含む単一の医薬組成物で投与される、請求項１から６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記用量の細胞が、前記用量の細胞を集合的に含む複数の組成物で、３日間以下の期間にわたって投与される、請求項１から６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記対象に、抗原受容体発現細胞の第１の用量を投与した後、組換え抗原受容体を発現する細胞の連続用量を投与するステップを含む、請求項１から６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記抗原受容体発現細胞の連続用量が、前記細胞の第１の用量の投与の開始から、それぞれ両端の値を含む約９日〜約３５日の間、約１４日〜約２８日の間、約１５日〜約２７日の間、または約１７日〜約２１日の間の後の時点で投与される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記連続用量中の細胞により発現される前記抗原受容体が、前記第１の用量中の細胞により発現される前記抗原受容体と同一であるか、または前記第１の用量中の細胞により発現される前記抗原受容体と実質的に同一である、請求項６４または６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記連続用量中の細胞により発現される前記抗原受容体が、前記第１の用量の細胞により発現される前記抗原受容体と特異的に結合する抗原と同じ抗原と特異的に結合する、請求項６４または６５に記載の方法。
【請求項６８】
前記細胞の連続用量が、前記対象の疾患または状態の負荷の低減に十分な量の細胞を含む、請求項６４から６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記細胞の連続用量が、前記第１の用量中の抗原受容体発現細胞の数未満であるかまたはおよそ同じ数の抗原受容体発現細胞を含む、請求項６４から６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記対象が、前記細胞の第１の用量の投与の開始後に、および前記細胞の連続用量の投与の開始前に、形態学的疾患を示す、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記連続用量が、前記第１の用量と比較して、増加した数の抗原受容体発現細胞を含む、請求項６４から６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記増加した数が、前記第１の用量中の数よりも少なくとも約２倍、約５倍、または約１０倍である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記対象が、前記細胞の第１の用量の投与の開始後に、および前記細胞の連続用量の投与の開始前に、微小病変を示す、請求項７１または７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記対象が、前記微小病変を示し、および／または微小病変を有するとして選択される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記方法により治療された、投与直前に微小病変を有する前記疾患または前記状態を有する対象の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９９％が、完全寛解および／またはＭＲＤ陰性完全寛解を示す、請求項１から７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
前記方法により治療された、投与直前に形態学的疾患を有する前記疾患または前記状態を有する対象の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９９％が、完全寛解および／またはＭＲＤ陰性完全寛解を示す、請求項１から７５のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、２０１６年６月３日に出願された米国仮出願第６２／３４５，６８２号（この内容は、その全体が援用され、またそれへの優先権が主張される）への優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、リスクがより高い治療モダリティを回避する可能性を治療対象に提供する、がんなどの疾患の管理における早期養子細胞療法の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
種々の免疫療法および／または細胞療法が、疾患および状態の治療に利用可能である。例えば、養子細胞療法（キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および／または他の組換え抗原受容体などの、目的の疾患または障害に特異的なキメラ受容体を発現する細胞を投与することを含むもの、ならびに他の養子免疫細胞および養子Ｔ細胞療法を含む）は、がんならびに他の疾患および障害の治療に有効であり得る。例えば、ある患者集団における有効性の増加、および／またはある疾患もしくは状態を治療するための有効性の増加をもたらすための代替的な方法が必要とされている。提供されている実施形態の中には、そのような必要性に取り組む方法および使用がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
がんまたは他の増殖性障害などの疾患または状態を有するまたは有する疑いのある対象を治療するための方法および組成物が提供される。一部の実施形態では、がんは、Ｂ細胞増殖性障害などのリンパ腫もしくは白血病またはＣＤ１９＋Ｂ細胞悪性疾患などの悪性疾患である。一部の実施形態では、本方法は、組換え抗原受容体を発現する細胞（本明細書では「ＲＡＲ細胞」と代替的に呼ばれる）の用量を対象に投与することを含む。一部の実施形態では、細胞は、組換え抗原受容体を発現するＴ細胞である。一部の実施形態では、組換え抗原受容体は、Ｔ細胞受容体またはキメラ抗原受容体などの免疫受容体であってもよい。一部の実施形態では、受容体はキメラ受容体である。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、ＣＤ１９に結合する。
【０００５】
一部の実施形態では、ＲＡＲ細胞の投与は、第１選択療法として使用され、ならびに／あるいは対象は、疾患もしくは状態の以前の治療を受けていないか、または導入補助化学療法および／もしくは地固め化学療法（ｃｏｎｓｏｌｉｄａｔｉｎｇ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）以外にそのような治療を受けていないか、および／または疾患もしくは状態の診断以降にそのような療法を受けていない。一部の実施形態では、患者が、一部の場合では、投与後に寛解を経験しているか、および／または他の点では造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）の候補である場合でさえ、患者には、別の療法、例えば、ＨＳＣＴなどの別の細胞媒介性療法がさらに施されない。
【０００６】
一部の実施形態では、本方法は、１つまたは複数の他の療法での以前の、併用の、同時の、またはその後の治療を受けておらず、かつ／またはそのような１つまたは複数の他の療法の候補ではない患者の治療に好適である。一部の態様では、対象は、それに続くまたは同時の造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けないか、または細胞用量の投与もしくはその開始後の１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、９カ月間、もしくは１年間などのある特定の期間内にそのような移植を受けることにならない。一部の態様では、対象は、ＲＡＲ細胞用量投与後に、および／またはＲＡＲ細胞の投与もしくはＲＡＲ細胞治療の開始の１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、９カ月、もしくは１年以内などのある特定の期間内にＨＳＣＴを受けていないか、あるいは受けることが意図されていないか、または受けることが想定されていない。一部の実施形態では、本方法は、ＨＳＣＴ、ならびに／またはアブレーション照射もしくは化学療法、ならびに／あるいはＲＡＲ細胞の用量以外のおよび／または任意選択で導入補助化学療法および／もしくは地固め化学療法以外の他の療法を施すことを含まない。
【０００７】
一部の態様では、対象は、以前にＨＳＣＴで治療されておらず、および／または疾患もしくは状態の診断以降、および／または過去１年もしくは２年もしくは６カ月以内にＨＳＣＴで治療されていない。
【０００８】
一部の実施形態では、対象は、ＨＳＣＴに関して未経験であり（つまり、ＨＳＣＴ未経験）、および／または現在治療対象となっている疾患もしくは状態のための１つまたは複数の他の治療に関して未経験であり、および／またはがん療法もしくは化学療法もしくは細胞減少療法に関して未経験である。一部の実施形態では、ＨＳＣＴ未経験対象（または他の療法に関して未経験である対象）は、造血幹細胞移植（または他の療法）をかつて受けたことがなく、および／または現在治療対象となっている疾患もしくは状態の診断以降もしくは獲得以降に、造血幹細胞移植（または他の療法）を受けていない対象である。一部の実施形態では、対象は、ＲＡＲ細胞用量の投与後、またはＲＡＲ細胞療法の開始後のある特定の期間、例えば、ＲＡＲ細胞の最初の用量の投与の開始後の少なくとも１、２、３、４、５、６、９、または１２カ月間、そのような未経験の状態に維持される。一部の実施形態では、対象には、抗原受容体発現細胞の投与の開始前にＨＳＣＴが投与されていない。一部の態様では、対象には、細胞の投与前におよび／または疾患もしくは状態の診断以降に、疾患または状態のための療法が施されていない；対象は、投与前におよび／または疾患もしくは状態の診断以降に、導入補助化学療法または細胞の以前の用量以外の、疾患または状態のための療法を受けていない；かつ／または対象は、ＲＡＲ細胞用量の投与前にまたは疾患もしくは状態の診断以降に、導入補助化学療法および／または地固め化学療法以外の、疾患または状態のための療法を受けていない。
【０００９】
一部の態様では、ＲＡＲ細胞療法による治療後または治療開始後のＨＳＣＴの投与は禁忌である場合がある。一部の実施形態では、細胞療法の開始後または終了後の特定の期間内、例えば、そのような療法の投与後または開始後の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月以内に、その後のＨＳＣＴが考慮され得る。特定の実施形態では、１つまたは複数の指定の特性または属性を有するがんを有し、本方法による１回または複数の細胞用量を受けている患者は、その後のＨＳＣＴを受けるべきではなく、他の治療選択肢が使い尽くされていない限り、その後のＨＳＣＴを受けるべきではなく、および／またはその後のＨＳＣＴを受けると、合併症誘導性死亡のリスク増加を示す場合がある。
【００１０】
一部の実施形態では、本方法は、それにより、例えば、完全寛解、臨床的寛解、無再発生存、全生存、ＭＲＤ陰性奏効率、または他の好ましい転帰などの、治療を示す結果をもたらす。一部の実施形態では、治療を示す結果または因子は、抗原受容体発現細胞の投与後に、または投与の１カ月、２カ月、３カ月、もしくは６カ月以内に対象がＨＳＣＴを受けること除いて方法と同一である方法による治療を受けた対象で観察されるものと比較して増強される。
【００１１】
一部の実施形態では、対象の生存は、抗原受容体発現細胞の投与後にＨＳＣＴを受けた対象と比較して、増強、増加、または延長される。
【００１２】
疾患または状態を有する対象に、組換え抗原受容体を発現する細胞の用量を投与するステップを伴う治療方法であって、対象が、抗原受容体発現細胞の投与の開始後に、および／または抗原受容体発現細胞の投与の開始前に、および／または抗原受容体発現細胞の投与の開始と同時に、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を同時に受けない、および／または受けていない、治療方法がさらに提供される。一部の実施形態では、対象は、抗原受容体発現細胞の投与前にまたは投与と同時に、ＨＳＣＴを受けておらず、対象は、抗原受容体発現細胞の投与後にＨＳＣＴを受けない。
【００１３】
さらに、疾患または状態を有する対象に、組換え受容体を発現する細胞の用量を投与する方法であって、対象が、抗原受容体発現細胞の投与後に造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けない方法が提供される。
【００１４】
さらに、疾患または状態を有する対象に、組換え受容体を発現する細胞の用量を投与する方法であって、対象が、細胞の投与前にまたは投与と同時に造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けていない方法が提供される。一部の実施形態では、疾患または状態は、腫瘍またはがんである。一部の実施形態では、疾患または状態は、白血病、リンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、難治性濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、緩徐進行性Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞悪性疾患、結腸、肺、肝臓、乳房、前立腺、卵巣、皮膚のがん、黒色腫、骨および脳がん、卵巣がん、上皮がん、腎細胞癌、膵臓腺癌、ホジキンリンパ腫、子宮頚癌、結腸直腸がん、膠芽腫、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、髄芽細胞腫、骨肉腫、滑膜肉腫、中皮腫、ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される。一部の特定の実施形態では、疾患または状態は、白血病またはリンパ腫であり、任意選択でＢ細胞白血病またはリンパ腫である。一部の実施形態では、対象は、抗原受容体発現細胞の投与の開始時に形態学的疾患（ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ）を示す。
【００１５】
形態学的疾患を示すがんを有する対象に、組換え抗原受容体を発現する細胞の用量を投与するステップを伴う治療方法であって、対象が、抗原受容体発現細胞の投与後に、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けない、治療方法がさらに提供される。一部の実施形態では、対象は、抗原受容体発現細胞の投与の開始時にＨＳＣＴ未経験ステータスを有するとして選択される。一部の実施形態では、対象は、抗原受容体発現細胞の投与の開始時に形態学的疾患を示すがんを有するとして選択される。
【００１６】
（ａ）疾患または状態を有する対象を選択するステップであって、対象が、以下：（ｉ）（Ａ）造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けていない、（Ｂ）疾患または状態の診断以降にＨＳＣＴを受けていない、（Ｃ）疾患または状態のための療法を施されていない、（Ｄ）導入補助化学療法以外の、疾患または状態のための療法を施されていない、（Ｅ）地固め療法および／または細胞の以前の用量以外の、疾患または状態のための療法を施されていないか、および／または（ｉｉ）成体であるか；および／または（ｉｉｉ）形態学的疾患もしくはある閾値よりも高い疾患負荷を示すか；および／または（ｉｖ）ＨＳＣＴの候補ではないか；および／または（ｖ）ＨＳＣＴ療法を受けることが意図されていないかもしくは予定されていない、ステップ；ならびに
（ｂ）対象に、組換え抗原受容体を発現する細胞の用量を投与するステップであって、抗原受容体が任意選択でキメラ抗原受容体である、ステップを含む、治療方法もまた本明細書に提供される。
【００１７】
一部の実施形態では、それによって、対象は、任意選択でＨＳＣＴを受けずに、またはＲＡＲ細胞の投与後の少なくとも約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、約１２カ月、約２４カ月、約３６カ月、もしくは約４８カ月間に、臨床的寛解、分子的寛解、完全寛解、または無再発生存を示し、実施形態の非限定的なサブセットにおいて、前記対象は、前記期間内にＨＳＣＴを受けていない。一部の実施形態では、疾患または状態は、腫瘍またはがんである。一部の実施形態では、対象は、抗原受容体発現細胞の投与の開始時に形態学的疾患を示す。
【００１８】
一部の実施形態では、提供される処置の方法は、
（ａ）形態学的疾患を示すがんを有する対象を選択するステップ；
（ｂ）対象に、組換え抗原受容体を発現する細胞の用量を投与するステップ；および
（ｃ）抗原受容体発現細胞の投与後に、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を対象に投与しないステップ
を伴う。
【００１９】
一部の実施形態では、提供される処置の方法は、
（ａ）微小または分子疾患を示すがんを有する対象を選択するステップ；
（ｂ）対象に、組換え抗原受容体を発現する細胞の用量を投与するステップ；および
（ｃ）抗原受容体発現細胞の投与後に、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を対象に投与しないステップ
を伴う。
【００２０】
一部の実施形態では、疾患または状態は、白血病またはリンパ腫である。一部の特定の実施形態では、疾患または状態は、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、および急性骨髄性白血病から選択され、ならびに任意選択でＢ細胞由来である。一部のさらなる実施形態では、疾患または状態は、任意選択でＢ細胞由来の、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。他のさらなる実施形態では、疾患または状態は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である。他のさらなる実施形態では、疾患は、Ｂ細胞由来の急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である。
【００２１】
本明細書で開示されている他の実施形態および／または方法と組み合わせることができる一部の実施形態では、対象には、抗原受容体発現細胞を投与する前にＨＳＣＴが投与される。他の実施形態では、対象には、抗原受容体発現細胞の投与前にＨＳＣＴが投与されず、および／または細胞用量の投与前のある特定の期間内に、例えば、疾患または状態の診断以降に、および／または過去約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、約７カ月、約８カ月、約９カ月、約１０カ月、約１１カ月、約１２カ月、または過去約１年、約２年、約３年、もしくは約４年、またはそれよりも長い期間内に、そのような療法が施されていない。
【００２２】
本明細書に開示されている他の実施形態および／または方法と組み合わせることができる一部の実施形態では、形態学的疾患は、５％よりも多くのまたは約５％よりも多くの芽細胞を骨髄に含む。ある特定の実施形態では、形態学的疾患は、２０％よりも多くのまたは約２０％よりも多くの芽細胞を骨髄に含む。一部の実施形態では、形態学的疾患は、５０％よりも多くのまたは約５０％よりも多くの芽細胞を骨髄に含む。一部の実施形態では、微小病変（ｍｉｎｉｍａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ）または分子病は、約５％より少ない（未満）または約５％の芽球を骨髄に含み、および／または芽球は、フローサイトメトリーアッセイなどのあるアッセイでは血中または骨髄中に本質的には検出されないが、ＰＣＲなどの分子的方法では検出可能である。
【００２３】
ある特定の実施形態では、対象は、微小病変を示し、および／または微小病変を有するとして選択される。一部の実施形態では、方法により治療された、投与直前に微小病変を有する疾患または状態を有する対象の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９９％は、完全寛解および／またはＭＲＤ陰性完全寛解を示す。
【００２４】
一部の実施形態では、方法により治療された、投与直前に形態学的疾患を有する疾患または状態を有する対象の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９９％は、完全寛解および／またはＭＲＤ陰性完全寛解を示す。
【００２５】
本明細書に開示される他の実施形態および／または方法と組み合わせられ得る一部の実施形態では、対象は、抗原受容体発現細胞の投与の開始時に分子的に検出可能な疾患を含むがんを示す。
【００２６】
一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、抗原受容体発現細胞の投与前、投与と同時に、および／または投与後にＨＳＣＴを受けた対象と比較して、対象の全生存の増強をもたらす。一部の実施形態では、方法は、抗原受容体発現細胞の投与後にＨＳＣＴを受けた対象と比較して、前記対象の全生存の増強をもたらす。
【００２７】
本明細書に開示される一部の実施形態および／または方法では、方法を使用して治療した後の対象中の平均全生存中央値が、抗原受容体発現細胞の投与後および／または投与前にＨＳＣＴを投与することをさらに含むことを除いて方法と同一である方法により治療した対象中の平均全生存中央値と比較して、抗原受容体発現細胞の投与後の２カ月よりも長い期間もしくは約２カ月よりも長い期間、６カ月よりも長い期間もしくは約６カ月よりも長い期間、１年よりも長い期間もしくは約１年よりも長い期間、または２年よりも長い期間または約２年よりも長い期間、増強される。
【００２８】
本明細書に開示される一部の実施形態および／または方法では、方法で治療した対象の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％または少なくとも約９９％が、抗原受容体発現細胞の投与の開始後、６カ月、１年、２年よりも長い期間もしくは約６カ月、１年、２年よりも長い期間、３年よりも長い期間もしくは約３年よりも長い期間、４年よりも長い期間もしくは約４年よりも長い期間、またはそれよりも長い期間の生存期間、無症候生存期間、および／または無再発生存期間を示す。一部の実施形態では、ＨＳＣＴは、対象に対して同種異系である。一部の実施形態では、抗原受容体発現細胞の開始時に、対象は、疾患もしくは状態を治療するための療法または療法剤を以前に投与されておらず、および／または腫瘍もしくはがんを標的とする療法剤を受容しておらず、および／または細胞の別の用量もしくはキメラ受容体を発現する細胞の別の用量以外の任意のそのような薬剤を受容していない。
【００２９】
一部の実施形態では、抗原受容体発現細胞の投与の開始時に、対象は、疾患または状態を治療するための以前の療法または療法剤の投与後に再発したか；あるいは対象は、抗原受容体発現細胞の投与前に、疾患または状態を治療するための療法または療法剤で、任意選択で腫瘍またはがんを標的とする療法剤で治療されており、抗原受容体発現細胞の投与の開始時に、難治性であるかまたは療法もしくは療法剤に対して非応答性である。一部の実施形態では、疾患負荷を示す１つまたは複数の因子の低減により示されるような、対象の疾患または状態の負荷の低減をもたらす。一部の実施形態では、細胞により発現される抗原受容体は、疾患もしくは状態の細胞もしくは組織により発現されるかまたは疾患もしくは状態に関連する抗原と特異的に結合する。
【００３０】
本明細書に開示される一部の実施形態および／または方法では、組換え抗原受容体は、Ｔ細胞受容体または機能的非Ｔ細胞受容体である、および／あるいは組換え抗原受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一部の実施形態では、組換え抗原受容体はＣＡＲである。一部の実施形態では、抗原受容体は、抗原と特異的に結合する細胞外抗原認識ドメイン、およびＩＴＡＭを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、抗原はＣＤ１９を含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３−ゼータ（ＣＤ３ζ）鎖の細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、共刺激シグナル伝達領域をさらに含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８のシグナル伝達ドメインならびに任意選択でＣＤ２８の膜貫通および／または細胞外部分を含む。他の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含む。
【００３１】
一部の実施形態では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１４１３４１６５、ＷＯ２００８１２１４２０、および米国特許第７，４４６，１９０号に記載されているような、ＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含むＣＤ１９指向性ＣＡＲである。
【００３２】
一部の実施形態では、組換え抗原受容体が導入されている細胞は、Ｔ細胞を含むかまたはＴ細胞である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、前記対象に対して自己由来である。一部の実施形態では、細胞の用量は、対象の疾患または状態の負荷の低減に十分な量の細胞を含む。一部の実施形態では、ＣＤ４＋細胞  対  ＣＤ８＋細胞の比は、約１：５〜約５：１である。一部の実施形態では、ＣＤ４＋細胞  対  ＣＤ８＋細胞の比は、約１：２〜約２：１である。
【００３３】
本明細書に開示される他の実施形態および／または方法と組み合わせられ得る一部の実施形態では、細胞の用量は、それぞれ両端の値を含む、対象の体重１ｋｇ当たり細胞約０．２×１０６個〜細胞約６×１０６個、対象の体重１ｋｇ当たり細胞約０．５×１０６個〜細胞約３×１０６個、対象の体重１ｋｇ当たり細胞約０．７５×１０６個〜細胞約２．５×１０６個、または対象の体重１ｋｇ当たり細胞約１×１０６個〜細胞約２×１０６個を含む。一部の実施形態では、用量の細胞は、細胞を含む単一の医薬組成物で投与される。一部の実施形態では、用量の細胞は、用量の細胞を集合的に含む複数の組成物で、３日間以下の期間にわたって投与される。
【００３４】
一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、対象に、抗原受容体発現細胞の第１の用量を投与した後、組換え抗原受容体を発現する細胞の連続用量を投与するステップをさらに含む。
【００３５】
一部の実施形態では、最初の用量および連続用量は、ＰＣＴ出願ＷＯ２０１６／０６４９２９に記載されるような様式で投与される。一部の実施形態では、抗原受容体発現細胞の連続用量は、細胞の第１の用量の投与の開始から、それぞれ両端の値を含む約９日〜約３５日の間、約１４日〜約２８日の間、約１５日〜約２７日の間、または約１７日〜約２１日の間の後の時点で投与される。
【００３６】
一部の実施形態では、連続用量中の細胞により発現される抗原受容体は、第１の用量中の細胞により発現される抗原受容体と同一であるか、または第１の用量中の細胞により発現される抗原受容体と実質的に同一である。一部の実施形態では、連続用量中の細胞により発現される抗原受容体は、第１の用量の細胞により発現される抗原受容体と特異的に結合する抗原と同じ抗原と特異的に結合する。
【００３７】
一部の実施形態では、細胞の連続用量は、対象の疾患または状態の負荷の低減に十分な量の細胞を含む。一部の実施形態では、細胞の連続用量は、第１の用量中の抗原受容体発現細胞の数未満であるかまたはおよそ同じ数の抗原受容体発現細胞を含む。一部の実施形態では、対象は、細胞の第１の用量の投与の開始後に、および細胞の連続用量の投与の開始前に、形態学的疾患を示す。
【００３８】
一部の実施形態では、連続用量は、第１の用量と比較して、増加した数の抗原受容体発現細胞を含む。一部の実施形態では、増加した数は、第１の用量中の数よりも少なくとも２倍、５倍、または１０倍である。一部の実施形態では、対象は、細胞の第１の用量の投与の開始後に、および細胞の連続用量の投与の開始前に、微小病変を示す。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】図１、部分群による完全寛解（ＣＲ）率。Ｐｈ＋：フィラデルフィア染色体陽性；ＣＩ：信頼区間。
【００４０】
【図２】図２、ベースライン疾患負荷による全患者の全生存。
【００４１】
【図３】図３、ベースライン疾患負荷によるＭＲＤ−ＣＲ患者の全生存。
【００４２】
【図４】図４、ベースライン疾患負荷によるおよびＣＡＲ−Ｔ  ＨＳＣＴ後のＭＲＤ−ＣＲ患者の全生存。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
表１．ベースライン患者特徴。
【００４４】
表２．完全寛解（ＣＲ）率。
【００４５】
表３．サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）段階分けシステム。
【００４６】
表３Ａ．ＣＲＳの例示的な段階分け基準。
【００４７】
表４．ベースライン疾患負荷によるＣＲＳおよび神経学的毒性。
【００４８】
詳細な説明
本明細書では、操作された細胞を、疾患または状態を有する対象に投与することを含む治療方法が提供される。細胞は、一般的に、１つまたは複数の組換え抗原受容体、例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作されている。
【００４９】
遺伝子操作された細胞による細胞療法の方法および使用
細胞療法に使用するための、種々のがんおよび腫瘍を含む疾患または状態を治療するための方法および組成物が提供される。本方法は、治療される疾患または状態に関連する分子を認識および／または特異的に結合し、そのような分子に結合するとそのような分子に対する免疫応答などの応答をもたらすように設計されている組換え受容体を発現する操作された細胞（本明細書では「ＲＡＲ細胞」と代替的に呼ばれる）を投与することを含む。受容体としては、キメラ受容体、例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などのキメラ受容体、およびトランスジェニックＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む他のトランスジェニック抗原受容体を挙げることができる。
【００５０】
一部の実施形態では、本方法は、がん（例えば、Ｂ細胞白血病またはリンパ腫）などのある疾患もしくは状態を有する対象を、疾患もしくは状態の診断後、および／または対象が、疾患または状態の１つまたは複数の療法または治療を受ける前に、より早期に治療することができることにおいて有利である。例えば、一部の実施形態では、本方法は、ＲＡＲ細胞の１つまたは複数の用量を、診断の約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２カ月、またはそれよりも長い月数以内に、ならびに／あるいは対象が、疾患もしくは状態の療法を受けていないか、および／または造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）、高用量の化学療法もしくは放射線、および／または細胞（および／または他の操作された細胞）の別の用量および／または導入補助化学療法もしくは地固め化学療法以外の療法などの特定のタイプの治療もしくは療法を受けていない時点で、対象に投与することを含む。一部の実施形態では、本方法および使用は、ある疾患および状態の第１選択療法を提供する。一部の実施形態では、本方法によると、疾患または状態（例えば、がん）を治療するために、ＨＳＣＴおよび／または他の療法などの、副作用リスクのあり得る（一部の場合では、特にある対象集団において）他の療法など、ＲＡＲ細胞以外の追加療法を施す必要性が回避される。一部の実施形態では、本方法は、患者が、１つまたは複数の所与の療法により以前に治療されていないこと、および／またはそのような１つまたは複数の他の療法のその後の投与に関するリスクを増加させる可能性のある特性などの１つまたは複数の特性を有することに基づいて、治療するための対象を選択することを含む。一部の実施形態では、対象は、年齢（例えば、成人対象、または少なくとも１８、２０、３０、４０、５０、５５、６０、６５  ７０、７５、もしくは８０歳である対象が選択される）、疾患負荷（例えば、高度な形態学的疾患または微小病変もしくは分子病を有する対象が選択される；対象が骨髄に約５％未満の芽球を示す場合、対象は、微小病変を示すものとして選択され、ある特定の実施形態では、対象は、分子的に検出可能ながんを示す）に基づいて選択される。一部の実施形態では、対象は、微小病変を示す、および／または微小病変を有するとして選択される。一部の実施形態では、方法により治療された、投与直前に微小病変を有する疾患または状態を有する対象の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９９％は、完全寛解および／またはＭＲＤ陰性完全寛解を示す。一部の実施形態では、方法により治療された、投与直前に形態学的疾患を有する疾患または状態を有する対象の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９９％は、完全寛解および／またはＭＲＤ陰性完全寛解を示す。
【００５１】
一部の実施形態では、対象は、Ｂ細胞白血病もしくはリンパ腫および／または急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）などの白血病あるいはリンパ腫などの疾患または状態に基づいて選択される。一部の実施形態では、疾患または状態は、Ｂ細胞に由来するものなどの、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）および／または慢性リンパ球性白血病である。
【００５２】
一部の実施形態では、本方法は、ＲＡＲ細胞の用量で対象を治療することであって、そのような細胞が、疾患または状態に関連する抗原もしくは分子を認識または結合する組換え抗原受容体を発現すること；および対象に、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）、例えば同種異系ＨＳＣＴをさらに投与せず、および／または対象が、そのようなさらなる投与を受けないか、または細胞用量の投与後もしくはその開始後のある特定の期間内に、例えば、第１のもしくはその後の（例えば、連続した）細胞用量であってもよいそのような細胞用量の投与後もしくは開始後の約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、もしくは約１２カ月以内に、そのようなさらなる投与を受けないことを含む。
【００５３】
一部の態様では、ＲＡＲ細胞療法による治療後または治療開始後のＨＳＣＴの投与は禁忌である場合がある。一部の実施形態では、細胞療法の開始後または終了後の特定の期間内、例えば、そのような療法の投与後または開始後の約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、または約１２カ月以内に、その後のＨＳＣＴが考慮され得る。特定の実施形態では、１つまたは複数の指定の特性または属性を有するがんを有し、本方法による１回または複数の細胞用量を受けている患者は、その後のＨＳＣＴを受けるべきではなく、他の治療選択肢が使い尽くされていない限り、その後のＨＳＣＴを受けるべきではなく、および／またはその後のＨＳＣＴを受けると、合併症誘導性死亡のリスク増加を示す場合がある。そのような実施形態の態様では、対象または疾患の１つまたは複数の指定の特性または属性は、以下のものであるか、または以下のものを含む：形態学的疾患、約５％、約２０％、または約５０％よりも多くの芽球、微小病変、分子病；成人、少なくとも１８、２０、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、もしくは９０歳などのある指定の年齢よりも年長であること；治療されている疾患または状態に加えて、幹細胞移植後の合併症のリスク増加を示すことが公知であるものなどの、１つまたは複数の合併性疾患または状態が個体に存在すること。例えば、一部の実施形態では、対象が、属性の１つまたは複数を各々個々にまたは任意の組み合わせで有するかあるいは有する疑いがある場合、その後のＨＳＣＴは、禁忌であるかまたは推奨されない。一部の実施形態では、合併症誘導性死亡は、細胞療法、疾患負荷、および／またはがんに直接起因するもの以外の要因（例えば、ＨＳＣＴの結果としての敗血症）により誘導される死亡を示す。一部の実施形態では、これらの患者は、細胞療法に応答してがんの完全寛解を達成する場合があるが、細胞療法後にＨＳＣＴが投与された場合は、非がん起因性の合併症および／または死亡のリスクが増加する場合がある。一部の態様では、本方法は、形態学的疾患を示すがんを有する患者を選択することまたは微小病変を有する対象を選択することを含み、組換え抗原受容体を発現する細胞の用量を患者に投与すること、および抗原受容体発現細胞の投与後に造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を対象に投与しないことを含む。一部の実施形態では、対象は、微小病変を示す、および／または微小病変を有するとして選択される。一部の実施形態では、方法により治療された、投与直前に形態学的疾患を有する疾患または状態を有する対象の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９９％は、完全寛解および／またはＭＲＤ陰性完全寛解を示す。一部の実施形態では、方法により治療された、投与直前に微小疾患を有する疾患または状態を有する対象の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９９％は、完全寛解および／またはＭＲＤ陰性完全寛解を示す。
【００５４】
一部の実施形態では、本方法は、ＲＡＲ細胞または細胞を含む組成物を、疾患、状態、もしくは障害を有するか、有するリスクがあるか、または有する疑いのあるものなどの対象、組織、もしくは細胞に投与することを含む。一部の実施形態では、ＲＡＲ細胞、集団、および／または組成物は、治療される特定の疾患または状態を有する対象に、例えば養子Ｔ細胞療法などの養子細胞療法により投与される。一部の実施形態では、ＲＡＲ細胞または組成物は、疾患または状態を有するかまたは有するリスクのある対象などの対象に投与され、疾患または状態の１つまたは複数の症状を改善する。
【００５５】
一部の実施形態では、対象は、ＨＳＣＴに関して未経験である（すなわち、ＨＳＣＴ未経験）、および／または現在治療対象となっている疾患もしくは状態のための１つまたは複数の他の治療に関して未経験である、および／またはがん療法もしくは化学療法もしくは細胞減少療法に関して未経験である。一部の実施形態では、ＨＳＣＴ未経験対象（または他の療法に関して未経験である対象）は、造血幹細胞移植（または他の療法）をかつて受けたことがなく、および／または現在治療対象となっているこの疾患もしくは状態の診断以降にまたは獲得以降に、造血幹細胞移植（または他の療法）を受けていない対象である。一部の実施形態では、対象は、ＲＡＲ細胞の第１の用量の投与開始後の少なくとも約１、約２、約３、約４、約５、約６、または約１２カ月間などの、ＲＡＲ細胞用量の投与後またはＲＡＲ細胞療法の開始後のある特定の期間にわたって、そのような未経験ステータスを維持する。一部の実施形態では、対象には、抗原受容体発現細胞の投与開始前にＨＳＣＴが投与されていない。
【００５６】
一部の実施形態では、対象は、組換え抗原受容体を発現する細胞の用量の投与を開始する前に、ＨＳＣＴで以前に治療されていない、および／または特定の期間内にもしくは診断以降に、そのように治療されていない対象である。一部の態様では、対象は、治療後にもしくは治療後の特定の期間内にＨＳＣＴをさらに受けず、および／または特定の生存または他の効果を達成するためにそのような治療を必要としない。
【００５７】
一部の実施形態では、対象は、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）、例えば同種異系ＨＳＣＴで以前に治療されているが、その後のＨＳＣＴを受けない。一部の実施形態では、対象は、ＨＳＣＴ後に、疾患の持続または再発を示す。
【００５８】
一部の実施形態では、対象は、組換え受容体を発現する細胞の投与前に、疾患または状態、例えば腫瘍を標的とする療法剤、例えば、疾患を軽減または縮小させるが完全に疾患または状態を根絶しない、導入補助化学療法および／または地固め化学療法などの療法剤で治療されている。一部の態様では、対象は、難治性であるかまたは他の療法剤に非応答性である。一部の実施形態では、対象は、例えば、化学療法または放射線を含む別の療法介入による治療後に、疾患の持続または再発を示す。
【００５９】
一部の実施形態では、ＲＡＲ細胞は、併用治療の一部として、抗体、または操作された細胞もしくは受容体、または細胞毒性剤もしくは療法剤などの薬剤などの別の療法介入と同時にまたは任意の順序で順次投与される。一部の実施形態では、ＲＡＲ細胞は、１つまたは複数の追加の療法剤と共投与または同時投与されるか、または別の療法介入に関連して、同時にまたは任意の順序で順次に、のいずれかで併用される。一部の状況では、ＲＡＲ細胞は、ＲＡＲ細胞集団が１つまたは複数の追加の療法剤の効果を増強するか、またはその逆となるように、別の療法と時間を十分に接近させて共投与される。一部の実施形態では、ＲＡＲ細胞は、１つまたは複数の追加の療法剤の前に投与される。一部の実施形態では、ＲＡＲ細胞は、１つまたは複数の追加の療法剤の後で投与される。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の薬剤は、例えば、持続性を増強するために、ＩＬ−２などのサイトカインを含む。
【００６０】
一部の実施形態では、本方法は、例えば、第１の用量投与または連続用量投与の前に、腫瘍量を低減するために化学療法剤、例えば前処置化学療法剤を投与することを含む。
【００６１】
一部の実施形態では、投与は、別の療法に対して耐性となっている対象であっても、および／または別の療法を受けていないか、あるいは別のＲＡＲ細胞用量または１回もしくは２回のラウンドの化学療法以外の別の療法を受けていない対象であっても、対象を有効に治療する。一部の実施形態では、本方法で治療された対象は、他の方法で治療された対象と比較して、平均生存の増加を有する。
【００６２】
治療される疾患または状態は、一般的に、標的抗原の発現がその病因に関連および／または関与するもの、例えば、抗原が、そのような疾患、状態、もしくは障害を引き起こすか、悪化させるか、またはそうでなければ関与するか、あるいは疾患もしくは障害の単なるマーカーであるか、または疾患もしくは障害の細胞で過剰発現されるかもしくは固有に発現されるものである。例示的な疾患および状態としては、悪性疾患または細胞の形質転換（例えば、がん）に関連する疾患または状態を挙げることができる。例示的な抗原としては、治療することができる種々の疾患および状態と関連する抗原が挙げられ、それらは上記に記載されている。特定の実施形態では、キメラ抗原受容体またはトランスジェニックＴＣＲは、疾患または状態に関連する抗原と特異的に結合する。
【００６３】
疾患、状態、および障害の中には、固形腫瘍、血液悪性疾患、および黒色腫を含み、局在性および転移性腫瘍を含む腫瘍がある。一部の実施形態では、対象は、ウイルスまたは他の病原体、例えば、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、ＣＭＶ、および寄生生物疾患による感染症などの感染性疾患を有する。
【００６４】
一部の実施形態では、疾患または状態は、腫瘍、がん、悪性疾患、新生物、または他の増殖性疾患もしくは障害である。そのような疾患として、これらに限定されないが、白血病、リンパ腫、例えば、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、難治性濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、緩徐進行性Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞悪性疾患、結腸、肺、肝臓、乳房、前立腺、卵巣、皮膚のがん、黒色腫、骨および脳がん、卵巣がん、上皮がん、腎細胞癌、膵臓腺癌、ホジキンリンパ腫、子宮頚癌、結腸直腸がん、膠芽腫、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、髄芽細胞腫、骨肉腫、滑膜肉腫、および／または中皮腫が挙げられる。一部の実施形態では、対象は、白血病またはリンパ腫であり、任意選択でＢ細胞白血病またはリンパ腫である。一部の実施形態では、対象は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を有する。一部の実施形態では、対象は、非ホジキンリンパ腫を有する。
【００６５】
一部の実施形態では、疾患または状態は、これらに限定されないが、ウイルス、レトロウイルス、細菌、および原虫感染症、免疫不全、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、アデノウイルス、ＢＫポリオーマウイルスなどの感染性疾患または状態である。一部の実施形態では、疾患または状態は、関節炎、例えば関節リウマチ（ＲＡ）、Ｉ型糖尿病、全身性エリトマトーデス（ＳＬＥ）、炎症性腸疾患、乾癬、硬皮症、自己免疫性甲状腺疾患、グレーブス病、クローン病、多発性硬化症、喘息などの自己免疫性または炎症性疾患もしくは状態、および／または移植に関連する疾患または状態である。
【００６６】
一部の実施形態では、疾患または障害に関連する抗原は、オーファンチロシンキナーゼ受容体ＲＯＲｌ、ｔＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、Ｌｌ−ＣＡＭ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、メソテリン、ＣＥＡ、およびＢ型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４、０ＥＰＨａ２、ＥｒｂＢ２、３、もしくは４、ＦＢＰ、胎児アセチルコリン（ａｃｅｔｈｙｃｈｏｌｉｎｅ）ｅ受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＩＬ−２２Ｒ−アルファ、ＩＬ−１３Ｒ−アルファ２、ｋｄｒ、カッパ軽鎖、Ｌｅｗｉｓ  Ｙ、Ｌ１細胞接着分子、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＰＳＣＡ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００、腫瘍胎児性抗原、ＲＯＲ１、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦ−Ｒ２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンＢ２、ＣＤ１２３、ＣＳ−１、ｃ−Ｍｅｔ、ＧＤ−２、およびＭＡＧＥ  Ａ３、ＣＥ７、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ−１）、サイクリンＡ１（ＣＣＮＡ１）などのサイクリン、ならびに／またはビオチン化分子、ならびに／またはＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、もしくは他の病原体により発現される分子からなる群より選択される。
【００６７】
一部の実施形態では、提供される方法は、形態学的疾患または微小病変など、治療時に特定のレベルの疾患負荷を示す対象の全生存を増強することができる。
【００６８】
養子細胞療法用の細胞を投与するための方法は公知であり、提供される方法および組成物と共に使用することができる。例えば、養子Ｔ細胞療法は、例えば、Ｇｒｕｅｎｂｅｒｇらによる米国特許出願公開第２００３／０１７０２３８号；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇによる米国特許第４，６９０，９１５号；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（２０１１）  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．  ８（１０）：５７７−８５）に記載されている。例えば、Ｔｈｅｍｅｌｉら、（２０１３）  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ３１（１０）：  ９２８−９３３；Ｔｓｕｋａｈａｒａら、（２０１３）  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ４３８（１）：  ８４−９；Ｄａｖｉｌａら、（２０１３）  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ８（４）：  ｅ６１３３８を参照のこと。
【００６９】
一部の実施形態では、細胞療法、例えば養子細胞療法、例えば養子Ｔ細胞療法は、細胞が、細胞療法を受けようとしている対象から、もしくはそのような対象に由来する試料から、単離および／または他の方法で調製される自己移入により実施される。したがって、一部の態様では、細胞は、治療を必要とする対象、例えば患者に由来し、細胞は、単離および処理した後、同じ対象に投与される。
【００７０】
一部の実施形態では、細胞療法、例えば養子細胞療法、例えば養子Ｔ細胞療法は、細胞が、細胞療法を受けようとしている対象もしくは最終的に細胞療法を受ける対象、例えば第１の対象以外の対象から、単離および／または他の方法で調製される同種異系移入により実施される。そのような実施形態では、次いで、細胞は、同じ種の異なる対象、例えば第２の対象に投与される。一部の実施形態では、第１および第２の対象は遺伝子的に同一である。一部の実施形態では、第１および第２の対象は遺伝子的に類似している。一部の実施形態では、第２の対象は、第１の対象と同じＨＬＡクラスまたはスーパータイプを発現する。
【００７１】
細胞は、任意の好適な手段により、例えば、ボーラス注入により、注射により、例えば、静脈内もしくは皮下注射、眼内注射、眼周囲注射、網膜下注射、硝子体内注射、経中隔注射、強膜下注射、脈絡膜内注射、前房内注射、結膜下（ｓｕｂｃｏｎｊｅｃｔｖａｌ）注射、結膜下（ｓｕｂｃｏｎｊｕｎｔｉｖａｌ）注射、テノン下注射、眼球後注射、眼球周囲注射、または後側強膜近傍送達（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｊｕｘｔａｓｃｌｅｒａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ）により投与することができる。一部の実施形態では、それらは、非経口、肺内、および鼻腔内に、局所治療が所望の場合は、病巣内投与で投与される。非経口注入としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が挙げられる。一部の実施形態では、所与の用量が、細胞の単回ボーラス投与により投与される。一部の実施形態では、所与の用量が、例えば３日間以下の期間にわたる細胞の複数ボーラス投与により、または細胞の連続注入投与により投与される。
【００７２】
疾患を予防または治療する場合、適切な投与量は、治療される疾患のタイプ、細胞または組換え受容体のタイプ、疾患の重症度および経過、細胞が予防目的で投与されるかまたは療法目的で投与されるか、以前の療法、対象の臨床履歴および細胞への応答、ならびに主治医の判断に依存する場合がある。一部の実施形態では、組成物および細胞は、一回でまたは一連の治療にわたって、適切に対象に投与される。
【００７３】
一部の態様では、細胞を対象（例えばヒト）に投与したら、操作された細胞集団の生物学的活性を、幾つかの公知の方法のいずれかにより測定する。評価するパラメーターとしては、ｉｎ  ｖｉｖｏの場合は、例えばイメージングによる、またはｅｘ  ｖｉｖｏの場合は、例えばＥＬＩＳＡもしくはフローサイトメトリーによる、操作されたもしくは天然Ｔ細胞または他の免疫細胞の抗原に対する特異的結合が挙げられる。ある特定の実施形態では、操作された細胞が標的細胞を破壊する能力は、例えば、Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ、３２巻（７号）：６８９〜７０２頁（２００９）およびＨｅｒｍａｎら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２８５巻（１号）：２５〜４０頁（２００４）に記載の細胞傷害性アッセイなどの、当技術分野で公知の任意の好適な方法を使用して測定することができる。また、ある特定の実施形態では、細胞の生物学的活性は、ＣＤ１０７ａ、ＩＦＮγ、ＩＬ−２、およびＴＮＦなどの、あるサイトカインの発現ならびに／または分泌をアッセイすることにより測定することができる。一部の態様では、生物学的活性は、腫瘍量または負荷の低減などの臨床転帰を評価することにより測定される。一部の態様では、細胞の毒性転帰、持続性、および／もしくは拡大増殖、ならびに／または宿主免疫応答の存在もしくは非存在が評価される。
【００７４】
ある特定の実施形態では、操作された細胞は、それらの治療有効性または予防有効性が増加されるように、任意の数の様式で修飾される。例えば、集団により発現される操作されたＣＡＲまたはＴＣＲは、直接的またはリンカーを介して間接的のいずれかで標的化部分とコンジュゲートされていてもよい。化合物、例えばＣＡＲまたはＴＣＲを標的化部分にコンジュゲートさせる実施は、当技術分野で公知である。例えば、Ｗａｄｗａら、Ｊ．  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ、３巻：１１１頁（１９９５）および米国特許第５，０８７，６１６号を参照されたい。
【００７５】
細胞により発現される組換え抗原受容体
一部の実施形態では、提供される方法で使用するための、または関連して投与される細胞は、操作された受容体、例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）もしくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）などの操作された抗原受容体を含有するかまたは含むように操作されている。また、そのような細胞の集団、そのような細胞を含有する、および／またはそのような細胞が濃縮されている組成物、Ｔ細胞またはＣＤ８＋もしくはＣＤ４＋細胞などのあるタイプの細胞が濃縮されているかまたは選択されているものなどが提供される。組成物としては、養子細胞療法用など投与用の医薬組成物および製剤がある。また、提供される方法に従って、細胞および組成物を対象、例えば患者に投与するための治療方法が提供される。
【００７６】
一部の実施形態では、細胞は、遺伝子操作により導入された１つまたは複数の核酸を含み、それにより、そのような核酸の組換えまたは遺伝子操作産物を発現する。一部の実施形態では、遺伝子移入は、まず細胞を、例えば、サイトカインもしくは活性化マーカーの発現により測定される、増殖、生存、および／または活性化などの応答を誘導する刺激と組み合わせることなどにより刺激し、その後、活性化された細胞に形質導入し、臨床適用に十分な数まで培養中で拡大増殖させることにより達成される。
【００７７】
細胞は、一般的に、機能的非ＴＣＲ抗原受容体、例えばキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびトランスジェニックＴ細胞受容体（ＴＣＲ）などの他の抗原結合受容体を含む抗原受容体などの組換え受容体を発現する。受容体としては、他のキメラ受容体もある。
【００７８】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
提供される方法および使用の一部の実施形態では、キメラ抗原受容体などのキメラ受容体は、所望の抗原（例えば、腫瘍抗原）に対する特異性を提供するリガンド結合ドメイン（例えば、抗体または抗体断片）が細胞内シグナル伝達ドメインと組み合わされている１つまたは複数のドメインを含有する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞活性化ドメインなどの、一次活性化シグナルを提供する活性化細胞内ドメイン部分である。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、エフェクター機能を促進するための共刺激シグナル伝達ドメインを含有するかまたはさらに含有する。一部の実施形態では、キメラ受容体は、免疫細胞内に遺伝子操作されると、Ｔ細胞活性を調節することができ、一部の場合では、Ｔ細胞分化または恒常性を調節し、それにより養子細胞療法で使用されるものなど、ｉｎ  ｖｉｖｏでの寿命、生存、および／または持続性が向上された遺伝子操作された細胞をもたらすことができる。
【００７９】
ＣＡＲを含む例示的な抗原受容体、およびそのような受容体を操作し、細胞に導入するための方法として、例えば、国際特許出願公開ＷＯ２０００１４２５７、ＷＯ２０１３１２６７２６、ＷＯ２０１２／１２９５１４、ＷＯ２０１４０３１６８７、ＷＯ２０１３／１６６３２１、ＷＯ２０１３／０７１１５４、ＷＯ２０１３／１２３０６１、米国特許出願公開第ＵＳ２００２１３１９６０号、同第ＵＳ２０１３２８７７４８号、同第ＵＳ２０１３０１４９３３７号、米国特許第号６，４５１，９９５号、同第７，４４６，１９０号、同第８，２５２，５９２号、同第８，３３９，６４５号、同第８，３９８，２８２号、同第７，４４６，１７９号、同第６，４１０，３１９号、同第７，０７０，９９５号、同第７，２６５，２０９号、同第７，３５４，７６２号、同第７，４４６，１９１号、同第８，３２４，３５３号および同第８，４７９，１１８号、および欧州特許出願第ＥＰ２５３７４１６号に記載されるもの、および／またはＳａｄｅｌａｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ２０１３  Ａｐｒｉｌ；  ３（４）：  ３８８−３９８；Ｄａｖｉｌａら、（２０１３）  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ８（４）：  ｅ６１３３８；Ｔｕｒｔｌｅら、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ２０１２  Ｏｃｔｏｂｅｒ；  ２４（５）：  ６３３−３９；  Ｗｕら、Ｃａｎｃｅｒ，  ２０１２  Ｍａｒｃｈ  １８（２）：  １６０−７５に記載されるものが挙げられる。一部の態様では、抗原受容体は、米国特許第７，４４６，１９０号に記載されるようなＣＡＲ、および国際特許出願公開ＷＯ／２０１４０５５６６８  Ａ１に記載されるものを含む。ＣＡＲの例は、ＷＯ２０１４０３１６８７、ＵＳ  ８，３３９，６４５、ＵＳ  ７，４４６，１７９、ＵＳ  ２０１３／０１４９３３７、米国特許第７，４４６，１９０号、米国特許第８，３８９，２８２号、Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒら、２０１３，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，  １０，  ２６７−２７６  （２０１３）；  Ｗａｎｇら、（２０１２）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ３５（９）：  ６８９−７０１；およびＢｒｅｎｔｊｅｎｓら、Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．  ２０１３  ５（１７７）など前述の公開物のいずれかに開示されるようなＣＡＲを含む。ＷＯ２０１４０３１６８７、ＵＳ  ８，３３９，６４５、ＵＳ  ７，４４６，１７９、ＵＳ  ２０１３／０１４９３３７、米国特許第７，４４６，１９０号、および米国特許第８，３８９，２８２号も参照のこと。
【００８０】
ＣＡＲなどのキメラ受容体は、一般的には、抗体分子の部分、一般的には抗体の可変重鎖（ＶＨ）領域および／または可変軽鎖（ＶＬ）領域、例えば、ｓｃＦｖ抗体断片などの、細胞外抗原結合ドメインを含む。
【００８１】
一部の実施形態では、受容体により標的とされる抗原は、ポリペプチドである。一部の実施形態では、それは、炭水化物または他の分子である。一部の実施形態では、抗原は、正常または標的とされない細胞または組織と比較して、疾患または状態の細胞上、例えば腫瘍または病原性細胞で選択的に発現または過剰発現される。他の実施形態では、抗原は、正常細胞で発現される、および／または操作された細胞で発現される。
【００８２】
一部の実施形態において、受容体により標的とされる抗原として、オーファンチロシンキナーゼ受容体ＲＯＲｌ、ｔＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、Ｌｌ−ＣＡＭ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、メソテリン、ＣＥＡ、およびＢ型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４、０ＥＰＨａ２、ＥｒｂＢ２、３、もしくは４、ＦＢＰ、胎児アセチルコリン（ａｃｅｔｈｙｃｈｏｌｉｎｅ）ｅ受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＩＬ−２２Ｒ−アルファ、ＩＬ−１３Ｒ−アルファ２、ｋｄｒ、カッパ軽鎖、Ｌｅｗｉｓ  Ｙ、Ｌ１細胞接着分子、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＰＳＣＡ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００、腫瘍胎児性抗原、ＲＯＲ１、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦ−Ｒ２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンＢ２、ＣＤ１２３、ｃ−Ｍｅｔ、ＧＤ−２、およびＭＡＧＥ  Ａ３、ＣＥ７、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ−１）、サイクリンＡ１（ＣＣＮＡ１）などのサイクリン、ならびに／またはビオチン化分子、ならびに／またはＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、もしくは他の病原体により発現される分子が挙げられる。
【００８３】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、病原体特異的抗原に結合する。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ウイルス抗原（ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ等など）、細菌抗原、および／または寄生生物抗原に特異的である。
【００８４】
一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、抗体または抗体断片を含有する細胞外部分を含む。一部の態様では、キメラ抗原受容体は、抗体または断片を含有する細胞外部分、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、抗体または断片は、ｓｃＦｖを含む。
【００８５】
一部の実施形態では、組換え受容体、例えばＣＡＲの抗体部分は、少なくとも、ヒンジ領域、例えばＩｇＧ４ヒンジ領域ならびに／またはＣＨ１／ＣＬおよび／もしくはＦｃ領域などの免疫グロブリン定常領域の部分をさらに含む。一部の実施形態では、定常領域または部分は、ＩｇＧ４またはＩｇＧ１などのヒトＩｇＧのものである。一部の態様では、定常領域の部分は、抗原認識要素、例えばｓｃＦｖと膜貫通ドメインとの間のスペーサー領域としての役目を果たす。スペーサーは、スペーサーがない場合と比較して、抗原結合後の細胞の応答性の増加をもたらす長さのものであってもよい。例示的なスペーサーとしては、これらに限定されないが、Ｈｕｄｅｃｅｋら（２０１３）Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、１９巻：３１５３頁；国際特許出願公開番号ＷＯ２０１４０３１６８７；米国特許第８，８２２，６４７号；または米国特許出願公開第２０１４／０２７１６３５号に記載されているものが挙げられる。
【００８６】
一部の実施形態では、抗原受容体は、細胞外ドメインと直接または間接に連結されている細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、細胞外ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを連結する膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭを含む。例えば、一部の態様では、抗原認識ドメイン（例えば、細胞外ドメイン）は、一般的に、ＣＡＲの場合はＴＣＲ複合体などの抗原受容体複合体による活性化および／または別の細胞表面受容体によるシグナルを模倣するシグナル伝達要素などの、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達要素に連結されている。一部の実施形態では、キメラ受容体は、細胞外ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）と細胞内シグナル伝達ドメインとの間に連結または融合されている膜貫通ドメインを含む。したがって、一部の実施形態では、抗原結合要素（例えば、抗体）は、１つまたは複数の膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインに連結されている。
【００８７】
一実施形態では、受容体、例えばＣＡＲのドメインの１つと天然で付随する膜貫通ドメインが使用される。一部の例では、膜貫通ドメインは、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限にするために、そのようなドメインと、同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインとの結合が回避されるように選択されているか、またはアミノ酸置換により修飾されている。
【００８８】
一部の実施形態における膜貫通ドメインは、天然供給源または合成供給源のいずれかに由来する。供給源が天然である場合、一部の態様におけるドメインは、任意の膜結合型または膜貫通型タンパク質に由来する。膜貫通領域としては、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ、またはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤＳ、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４に由来する（すなわち、少なくともそれらの膜貫通領域を含む）ものが挙げられる。あるいは、一部の実施形態における膜貫通ドメインは、合成である。一部の態様では、合成膜貫通ドメインは、ロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を主に含む。一部の態様では、合成膜貫通ドメインの各末端には、フェニルアラニン、トリプトファン、およびバリンのトリプレットが見出されるだろう。一部の実施形態では、連結は、リンカー、スペーサー、および／または膜貫通ドメインによる。一部の態様では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８の膜貫通部分を含有する。一部の実施形態では、受容体は、米国特許第７，４４６，１９０号に記載のキメラ受容体にあるものなど、ＣＤ２８の細胞外領域の部分をさらに含む。一部の実施形態では、例えば、抗原がＣＤ１９である場合、キメラ受容体は、米国特許第７，４４６，１９０号に記載されているもの、例えば、その中に記載されているＣＤ２８由来配列および抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖを有し、一部の態様では、ヒトＣＤ３ゼータの細胞内部分をさらに有するものなどである。一部の実施形態では、キメラ受容体は、１９２８ｚである。１９２８ｚの例示的な構造および配列は、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１４１３４１６５、ＷＯ２００８１２１４２０、および米国特許第７，４４６，１９０号に見出すことができる。
【００８９】
一部の実施形態では、細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインは、直接的または間接的に連結されていてもよい。一部の実施形態では、細胞外ドメインおよび膜貫通型は、本明細書に記載の任意のものなどの、スペーサーにより連結されている。一部の実施形態では、受容体は、ＣＤ２８細胞外部分などの、膜貫通ドメインが由来する分子の細胞外部分を含む。
【００９０】
細胞内シグナル伝達ドメインとしては、天然抗原受容体によるシグナル、そのような受容体と共刺激受容体との組み合わせによるシグナル、および／または共刺激受容体単独によるシグナルを模倣または近似するものがある。一部の実施形態では、グリシンおよびセリンを含有するもの、例えばグリシン−セリンダブレットなどの、短いオリゴ−またはポリペプチドリンカー、例えば、長さが２〜１０個アミノ酸のリンカーが、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質シグナル伝達ドメインとの間に存在し、連結を形成する。
【００９１】
一部の態様では、Ｔ細胞活性化は、２つのクラスの細胞質シグナル伝達配列：ＴＣＲによる抗原依存性一次活性化を開始させる配列（一次細胞質シグナル伝達配列）および抗原非依存的様式で作用して、二次または共刺激シグナルを提供する配列（二次細胞質シグナル伝達配列）により媒介されると説明される。一部の態様では、ＣＡＲは、そのようなシグナル伝達要素の１つまたは両方を含む。
【００９２】
受容体、例えばＣＡＲは、一般的には、少なくとも１つの細胞内シグナル伝達要素または複数の細胞内シグナル伝達要素を含む。一部の態様では、ＣＡＲは、ＴＣＲ複合体の一次活性化を制御する一次細胞質シグナル伝達配列を含む。刺激様式で作用する一次細胞質シグナル伝達配列は、免疫受容活性化チロシンベースのモチーフまたはＩＴＡＭとして公知のシグナル伝達モチーフを含有していてもよい。一次細胞質シグナル伝達配列を含有するＩＴＡＭの例としては、ＣＤ３ゼータ鎖、ＦｃＲガンマ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、およびＣＤ３イプシロンに由来するものが挙げられる。一部の実施形態では、ＣＡＲの細胞質シグナル伝達分子は、細胞質シグナル伝達ドメイン、その部分、またはＣＤ３ゼータに由来する配列を含有する。
【００９３】
一部の実施形態では、受容体は、Ｔ細胞活性化および細胞傷害性を媒介するＴＣＲ  ＣＤ３鎖、例えばＣＤ３ゼータ鎖などの、ＴＣＲ複合体の細胞内要素を含む。したがって、一部の態様では、抗原結合部分は、１つまたは複数の細胞シグナル伝達モジュールに連結されている。一部の実施形態では、細胞シグナル伝達モジュールは、ＣＤ３膜貫通ドメイン、ＣＤ３細胞内シグナル伝達ドメイン、および／または他のＣＤ膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、受容体、例えばＣＡＲは、Ｆｃ受容体γ、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２５、またはＣＤ１６などの１つまたは複数の追加分子の部分をさらに含む。例えば、一部の態様では、ＣＡＲまたは他のキメラ受容体は、ＣＤ３ゼータ（ＣＤ３−ζ）またはＦｃ受容体γとＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２５、またはＣＤ１６との間のキメラ分子を含む。
【００９４】
一部の実施形態では、ＣＡＲまたは他のキメラ受容体がライゲーションすると、受容体の細胞質ドメインまたは細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞、例えばＣＡＲを発現するように操作されたＴ細胞の正常なエフェクター機能または応答の少なくとも１つを活性化する。例えば、一部の状況では、ＣＡＲは、サイトカインまたは他の因子の分泌など、細胞溶解活性またはＴヘルパー活性などのＴ細胞の機能を誘導する。一部の実施形態では、例えば、エフェクター機能シグナルが形質導入される場合、抗原受容体要素または共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインの切断型部分が、完全な免疫刺激鎖の代わりに使用される。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の細胞質配列、および一部の態様では、天然の状況においてそのような受容体と協同して作用し、抗原受容体係合後にシグナル伝達を開始させる共受容体の配列も含む。
【００９５】
天然ＴＣＲの状況では、十分な活性化には、一般的に、ＴＣＲによるシグナル伝達だけでなく共刺激シグナルも必要とされる。したがって、一部の実施形態では、十分な活性化を促進するために、二次または共刺激シグナルを生成するための要素もＣＡＲに含まれている。他の実施形態では、ＣＡＲは、共刺激シグナルを生成するための要素を含んでいない。一部の態様では、追加のＣＡＲが同じ細胞内で発現され、二次または共刺激シグナルを生成するための要素が提供される。
【００９６】
一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞共刺激分子の細胞内ドメインを含有する。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、およびＩＣＯＳなどの共刺激受容体のシグナル伝達ドメインならびに／または膜貫通部分を含む。一部の態様では、同じＣＡＲが、活性化要素および共刺激要素の両方を含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間などに、Ｔ細胞共刺激分子またはその機能的改変体に由来する細胞内ドメインを含む。一部の態様では、Ｔ細胞共刺激分子は、ＣＤ２８または４１ＢＢである。
【００９７】
一部の実施形態では、活性化ドメインは、１つのＣＡＲ内に含まれるが、共刺激要素は、別の抗原を認識する別のＣＡＲにより提供される。一部の実施形態では、ＣＡＲとしては、活性化または刺激性ＣＡＲ、共刺激性ＣＡＲが挙げられ、それらは両方とも同じ細胞で発現される（ＷＯ２０１４／０５５６６８を参照）。一部の態様では、細胞は、１つまたは複数の刺激性もしくは活性化ＣＡＲおよび／または共刺激性ＣＡＲを含む。一部の実施形態では、細胞は、疾患もしくは状態に関連するものおよび／または特異的なもの以外の抗原を認識するＣＡＲなどの、阻害性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ、Ｆｅｄｏｒｏｖら、Ｓｃｉ．  Ｔｒａｎｓｌ．  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、５巻（２１５号）（２０１３年１２月））をさらに含み、疾患標的化ＣＡＲにより送達される活性化シグナルは、阻害性ＣＡＲがそのリガンドに結合することにより減少または阻害され、例えば、オフターゲット効果が低減される。
【００９８】
ある特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３−ゼータ）細胞内ドメインに連結されているＣＤ２８膜貫通およびシグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ細胞内ドメインに連結されているキメラＣＤ２８およびＣＤ１３７（４−１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）共刺激ドメインを含む。
【００９９】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、１つまたは複数の、例えば２つまたはそれよりも多くの共刺激ドメイン、および活性化ドメイン、例えば一次活性化ドメインを、細胞質部分に包含する。例示的なＣＡＲとしては、ＣＤ３−ゼータ、ＣＤ２８、および４−１ＢＢの細胞内要素が挙げられる。
【０１００】
一部の実施形態では、抗原受容体は、マーカーおよび／もしくはＣＡＲを発現する細胞をさらに含むか、または他の抗原受容体は、受容体を発現する細胞の形質導入または操作を確認するために使用することができる、細胞表面マーカーなどの代用マーカーをさらに含む。一部の態様では、マーカーは、そのような細胞表面受容体（例えば、ｔＥＧＦＲ）の切断バージョンなどの、ＣＤ３４、ＮＧＦＲ、または上皮増殖因子受容体のすべてまたは一部（例えば切断型形態）を含む。一部の実施形態では、マーカーをコードする核酸は、切断可能なリンカー配列、例えばＴ２Ａなどのリンカー配列をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されている。例えば、マーカーおよび任意選択でリンカー配列は、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１４０３１６８７に開示されているいずれのものであってもよい。例えば、マーカーは、任意選択でＴ２Ａ切断可能リンカー配列などのリンカー配列に連結されている切断型ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔ）であってもよい。
【０１０１】
一部の実施形態では、マーカーは、天然ではＴ細胞に見出されないかもしくは天然ではＴ細胞の表面上に見出されない分子、例えば細胞表面タンパク質、またはその部分である。一部の実施形態では、分子は、非自己分子、例えば非自己タンパク質、すなわち細胞が養子的に移入されることになる宿主の免疫系により「自己」であると認識されないものである。
【０１０２】
一部の実施形態では、マーカーは、療法的機能がなく、および／または遺伝子操作用のマーカーとして、例えば操作が成功した細胞を選択するために使用されること以外に効果をもたらさない。他の実施形態では、マーカーは、養子移入時およびリガンドとの遭遇時に細胞の応答を増強ならびに／または弱める共刺激もしくは免疫チェックポイント分子などの、ｉｎ  ｖｉｖｏで遭遇することになる細胞に対するリガンドなど、療法用分子または他の点である所望の効果を発揮する分子であってもよい。
【０１０３】
一部の場合では、ＣＡＲは、第１、第２、および／または第３世代ＣＡＲと呼ばれる。一部の態様では、第１世代ＣＡＲは、抗原結合時にＣＤ３鎖誘導性シグナルのみをもたらすものであり、一部の態様では、第２世代ＣＡＲは、ＣＤ２８またはＣＤ１３７などの共刺激受容体に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含むものなど、そのようなシグナルおよび共刺激シグナルをもたらすものであり、一部の態様では、第３世代ＣＡＲは、異なる共刺激受容体の複数の共刺激ドメインを含むものである。
【０１０４】
例えば、一部の実施形態では、ＣＡＲは、抗体、例えば抗体断片、ＣＤ２８の膜貫通部分もしくはその機能的改変体であるかまたはそれを含有する膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ２８のシグナル伝達部分またはその機能的改変体およびＣＤ３ゼータのシグナル伝達部分またはその機能的改変体を含有する細胞内シグナル伝達ドメインを含有する。一部の実施形態では、ＣＡＲは、抗体、例えば抗体断片、ＣＤ２８の膜貫通部分もしくはその機能的改変体であるかまたはそれを含有する膜貫通ドメイン、ならびに４−１ＢＢのシグナル伝達部分またはその機能的改変体およびＣＤ３ゼータのシグナル伝達部分またはその機能的改変体を含有する細胞内シグナル伝達ドメインを含有する。一部のそのような実施形態では、受容体は、Ｉｇヒンジ、例えばＩｇＧ４ヒンジなど、ヒトＩｇ分子などのＩｇ分子の部分を含有する、ヒンジのみのスペーサーなどのスペーサーをさらに含む。
【０１０５】
例えば、一部の実施形態では、ＣＡＲは、ｓｃＦｖを含む抗体断片などの抗体、ヒンジ領域および／または重鎖分子の１つまたは複数の定常領域などの免疫グロブリン分子の部分を含有するスペーサー、例えばＩｇヒンジ含有スペーサーなどのスペーサー、ＣＤ２８由来膜貫通ドメイン、ＣＤ２８由来細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインのすべてまたは部分を含む膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、抗体またはｓｃＦｖなどの断片、Ｉｇヒンジ含有スペーサーのいずれかなどのスペーサー、ＣＤ２８由来膜貫通ドメイン、４−１ＢＢ由来細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ゼータ由来シグナル伝達ドメインを含む。
【０１０６】
一部の実施形態では、そのようなＣＡＲ構築物をコードする核酸分子は、例えば、ＣＡＲをコードする配列の下流に、Ｔ２Ａリボソームスキップエレメントをコードする配列および／またはｔＥＧＦＲ配列をさらに含む。また、一部の実施形態では、抗原受容体（例えば、ＣＡＲ）を発現するＴ細胞は、切断型ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔ）を非免疫原性選択エピトープとして発現するように生成することもでき（例えば、同じ構築物から２つのタンパク質が発現されるように、Ｔ２Ａリボソームスイッチにより隔てられているＣＡＲおよびＥＧＦＲｔをコードする構築物を導入することにより）、その後、それをマーカーとして使用して、そのような細胞を検出することができる（例えば、米国特許第８，８０２，３７４号を参照）。
【０１０７】
対象に投与された細胞により発現されるＣＡＲなどの組換え受容体は、一般的には、治療されている疾患もしくは状態またはそれらの細胞で発現されるか、関連するか、および／または特異的である分子を認識するかまたは特異的に結合する。分子、例えば抗原と特異的に結合すると、受容体は、一般的には、ＩＴＡＭ形質導入シグナルなどの免疫刺激シグナルを細胞内に送達し、それにより疾患または状態を標的とする免疫応答を促進する。例えば、一部の実施形態では、細胞は、疾患もしくは状態の細胞もしくは組織により発現されるか、または疾患もしくは状態に関連する抗原と特異的に結合するＣＡＲを発現する。
【０１０８】
ＴＣＲ
一部の実施形態では、遺伝子操作された抗原受容体としては、組換えＴ細胞受容体（ＴＣＲ）および／または天然に存在するＴ細胞からクローニングされたＴＣＲが挙げられる。一部の実施形態では、標的抗原（例えば、がん抗原）に対する高親和性Ｔ細胞クローンが同定され、患者から単離され、細胞に導入される。一部の実施形態では、標的抗原に対するＴＣＲクローンは、ヒト免疫系遺伝子（例えば、ヒト白血球抗原系またはＨＬＡ）で操作されたトランスジェニックマウスで生成されている。例えば、腫瘍抗原（例えば、Ｐａｒｋｈｕｒｓｔら、（２００９）  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １５：１６９−１８０およびＣｏｈｅｎら、（２００５）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７５：５７９９−５８０８を参照のこと）を参照のこと。一部の実施形態では、ファージディスプレイは、標的抗原に対するＴＣＲを単離するために使用される（例えば、Ｖａｒｅｌａ−Ｒｏｈｅｎａら、（２００８）  Ｎａｔ  Ｍｅｄ．  １４：１３９０−１３９５およびＬｉ（２００５）    Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２３：３４９−３５４を参照のこと。）。
【０１０９】
一部の実施形態では、Ｔ細胞クローンを得た後、ＴＣＲアルファおよびベータ鎖を単離し、遺伝子発現ベクターにクローニングする。一部の実施形態では、ＴＣＲアルファおよびベータ遺伝子は、両鎖が共発現されるように、ピコルナウイルス２Ａリボソームスキップペプチドを介して連結されている。一部の実施形態では、ＴＣＲの遺伝学的移入は、レトロウイルスもしくはレンチウイルスベクター、またはトランスポゾンにより達成される（例えば、Ｂａｕｍら、（２００６）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ．  １３：１０５０−１０６３；Ｆｒｅｃｈａら、（２０１０）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ．  １８：１７４８−１７５７；およびＨａｃｋｅｔｔら、（２０１０）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ．  １８：６７４−６８３を参照のこと。）。
【０１１０】
投薬
一部の実施形態では、用量のサイズまたはタイミングは、対象における特定の疾患または状態の関数として決定される。特定の疾患の用量のサイズまたはタイミングを、提供されている説明に照らして経験的に決定することは、当業者のレベル内にある。
【０１１１】
養子細胞療法の状況では、所与の「用量」の投与は、所与の量または数の細胞を、単一の組成物および／または単一の非断続的投与として、例えば単回注射または連続注入として投与することを包含し、また、所与の量または数の細胞を、複数の個々の組成物または注入物として提供されている分割用量として、３日間以下の指定の期間にわたって投与することを包含する。したがって、一部の状況では、第１の用量または連続用量は、単一の時点で投与または開始される、指定数の細胞の単回または連続投与である。しかしながら、一部の状況では、第１の用量または連続用量は、３日間もしくは２日間にわたって１日１回または１日の期間にわたる複数の注入など、３日間以下の期間にわたって、複数の注射または注入で投与される。
【０１１２】
したがって、一部の態様では、第１の用量の細胞は、単一の医薬組成物で投与される。一部の実施形態では、連続用量の細胞は、単一の医薬組成物で投与される。
【０１１３】
一部の実施形態では、第１の用量の細胞は、第１の用量の細胞を集合的に含有する複数の組成物で投与される。一部の実施形態では、連続用量の細胞は、連続用量の細胞を集合的に含有する複数の組成物で投与される。一部の態様では、追加の連続用量を、３日間以下の期間にわたって複数の組成物で投与してもよい。
【０１１４】
用語「分割用量」は、１日よりも長い期間にわたって投与されるように分割されている用量を指す。このタイプの投薬は、本方法により包含されており、単回用量であるとみなされる。
【０１１５】
このように、細胞の用量は、分割用量として投与することができる。例えば、一部の実施形態では、用量は、２日間にわたってまたは３日間にわたって対象に投与される場合がある。分割投薬の例示的な方法は、初日に用量の約２５％を投与し、２日目に用量の残り約７５％を投与することを含む。他の実施形態では、第１の用量の約３３％を初日に投与し、残り約６７％を２日目に投与してもよい。一部の態様では、用量の約１０％を初日に投与し、用量の約３０％を２日目に投与し、用量の約６０％を３日目に投与する。一部の実施形態では、分割用量は、３日間よりも長い期間には分割されない。
【０１１６】
一部の実施形態では、細胞の用量は、一般的には、疾患負荷の低減に有効であるために十分に大きい。
【０１１７】
一部の実施形態では、細胞は、一部の態様では所望の用量もしくは数の細胞または細胞タイプおよび／または所望の比の細胞タイプを含む所望の投与量で投与される。したがって、一部の実施形態では、細胞の投与量は、細胞の総数（または体重１ｋｇ当たりの数）、およびＣＤ４＋対ＣＤ８＋比などの個々の集団またはサブタイプの所望の比に基づく。一部の実施形態では、細胞の投与量は、個々の集団中の細胞のまたは個々の細胞タイプの所望の総数（または体重１ｋｇ当たりの数）に基づく。一部の実施形態では、投与量は、総細胞の所望の数、所望の比、および個々の集団内の所望の細胞の総数などの、そのような特徴の組み合わせに基づく。
【０１１８】
一部の実施形態では、ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞などの細胞の集団またはサブタイプは、Ｔ細胞の所望の用量などの総細胞の所望の用量の許容される差でまたは許容される差内で投与される。一部の態様では、所望の用量は、所望の数の細胞、または細胞が投与される対象の体重の単位当たりの、例えば細胞の個数／ｋｇでの所望の数の細胞である。一部の態様では、所望の用量は、最小数の細胞、もしくは体重の単位当たり最小数の細胞であるか、またはそれよりも多い。一部の態様では、所望の用量で投与される総細胞の中には、個々の集団またはサブタイプが、所望の出力比（ＣＤ４＋対ＣＤ８＋比など）にてまたはその付近にて、例えばそのような比のある許容される差または誤差以内に存在する。
【０１１９】
一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４＋細胞の所望の用量および／またはＣＤ８＋細胞の所望の用量などの、細胞の個々の集団またはサブタイプの１つまたは複数の所望の用量の許容される差でまたは許容される差内で投与される。一部の態様では、所望の用量は、所望の数の細胞のサブタイプもしくは集団、または細胞が投与される対象の体重の単位当たりの、例えば細胞の個数／ｋｇでの所望の数のそのような細胞である。一部の態様では、所望の用量は、最小数の細胞の集団もしくはサブタイプ、または体重の単位当たりの最小数の細胞の集団もしくはサブタイプであるか、またはそれよりも多い。
【０１２０】
したがって、一部の実施形態では、投与量は、総細胞の所望の固定用量および所望の比に基づき、ならびに／または個々のサブタイプもしくは亜集団の１つまたは複数、例えば各々の所望の固定用量に基づく。したがって、一部の実施形態では、投与量は、Ｔ細胞の所望の固定または最小用量およびＣＤ４＋細胞  対  ＣＤ８＋細胞の所望の比に基づき、ならびに／またはＣＤ４＋および／もしくはＣＤ８＋細胞の所望の固定または最小用量に基づく。
【０１２１】
ある特定の実施形態では、細胞、または細胞のサブタイプの個々の集団は、細胞約１００万〜約１０００億個の範囲、例えば、細胞約１００万〜約５００億個（例えば、細胞約５００万個、細胞約２５００万個、細胞約５億個、細胞約１０億個、細胞約５０億個、細胞約２００億個、細胞約３００億個、細胞約４００億個、または前記値の任意の２つによって規定される範囲）、例えば、細胞約１０００万〜約１０００億個（例えば、細胞約２０００万個、細胞約３０００万個、細胞約４０００万個、細胞約６０００万個、細胞約７０００万個、細胞約８０００万個、細胞約９０００万個、細胞約１００億個、細胞約２５０億個、細胞約５００億個、細胞約７５０億個、細胞約９００億個、または前記値の任意の２つによって規定される範囲）、および一部の場合には、細胞約１００００万個〜細胞約５００億個（例えば、細胞約１．２億個、細胞約２．５億個、細胞約３．５億個、細胞約４．５億個、細胞約６．５億個、細胞約８億個、細胞約９億個、細胞約３０億個、細胞約３００億個、細胞約４５０億個）またはこれらの範囲の間の任意の値で対象に投与される。
【０１２２】
一部の実施形態では、全細胞の用量および／または細胞の個々の亜集団の用量は、体重１キログラム（ｋｇ）当たり細胞約１０４〜約１０９個の範囲内、例えば、体重１ｋｇ当たり細胞約１０５〜約１０６個、例えば、体重１ｋｇ当たり細胞約１ｘ１０５個、体重１ｋｇ当たり細胞約１．５ｘ１０５個、体重１ｋｇ当たり細胞約２ｘ１０５個、または体重１ｋｇ当たり細胞約１ｘ１０６個である。例えば、一部の実施形態では、細胞は、体重１キログラム（ｋｇ）当たりＴ細胞約１０４〜約１０９個、例えば、体重１ｋｇ当たりＴ細胞約１０５〜約１０６個、例えば、体重１ｋｇ当たりＴ細胞約１ｘ１０５個、体重１ｋｇ当たりＴ細胞約１．５ｘ１０５個、体重１ｋｇ当たりＴ細胞約２ｘ１０５個、または体重１ｋｇ当たりＴ細胞約１ｘ１０６個で、またはある特定の誤差の範囲内で、投与される。
【０１２３】
一部の実施形態では、細胞は、体重１キログラム（ｋｇ）当たりＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋細胞約１０４〜約１０９個、例えば、体重１ｋｇ当たりＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋細胞約１０５〜約１０６個、例えば、体重１ｋｇ当たりＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋細胞約１ｘ１０５個、体重１ｋｇ当たりＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋細胞約１．５ｘ１０５個、体重１ｋｇ当たりＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋細胞約２ｘ１０５個、または体重１ｋｇ当たりＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋細胞約１ｘ１０６個で、またはある特定の誤差の範囲内で、投与される。
【０１２４】
一部の実施形態では、細胞は、以下の値より大きい、および／または少なくともＣＤ４＋細胞約１ｘ１０６個、約２．５ｘ１０６個、約５ｘ１０６個、約７．５ｘ１０６個、または約９ｘ１０６個、および／または少なくともＣＤ８＋細胞約１ｘ１０６個、約２．５ｘ１０６個、約５ｘ１０６個、約７．５ｘ１０６個、または約９ｘ１０６個、および／または少なくともＴ細胞約１ｘ１０６個、約２．５ｘ１０６個、約５ｘ１０６個、約７．５ｘ１０６個、または約９ｘ１０６個で、またはある特定の誤差の範囲内で、投与される。一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞約１０８〜約１０１２個または約１０１０〜１０１１個、ＣＤ４＋細胞約１０８〜約１０１２個または約１０１０〜約１０１１個、および／またはＣＤ８＋細胞約１０８〜１０１２個または約１０１０〜約１０１１個で、またはある特定の誤差の範囲内で、投与される。
【０１２５】
一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞またはサブタイプなどの、複数の細胞集団またはサブタイプの所望の出力比の許容される範囲でまたは許容される範囲内で投与される。一部の態様では、所望の比は、特定の比であってもよく、または比の範囲であってもよい。例えば、一部の実施形態では、所望の比（例えば、ＣＤ４＋  対  ＣＤ８＋細胞の比）は、約１：５〜約５：１（または約１：５より大きくかつ約５：１未満）、または約１：３〜約３：１（または約１：３より大きくかつ約３：１未満）、例えば、約２：１〜約１：５（または約１：５より大きくかつ約２：１未満、例えば、約５：１、約４．５：１、約４：１、約３．５：１、約３：１、約２．５：１、約２：１、約１．９：１、約１．８：１、約１．７：１、約１．６：１、約１．５：１、約１．４：１、約１．３：１、約１．２：１、約１．１：１、約１：１、約１：１．１、約１：１．２、約１：１．３、約１：１．４、約１：１．５、約１：１．６、約１：１．７、約１：１．８、約１：１．９、約１：２、約１：２．５、約１：３、約１：３．５、約１：４、約１：４．５、または約１：５である。一部の態様では、許容される差は、所望の比の約１％、約２％、約３％、約４％約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％以内（これらの範囲の間の任意の値を含む）である。
【０１２６】
一部の実施形態では、例えば、対象がヒトである場合、用量は、約１×１０８個より少ないかもしくはそれと等しい総組換え受容体（例えば、ＣＡＲ）発現細胞、Ｔ細胞、または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、例えば、約２×１０６、約５×１０６、約１×１０７、約５×１０７、もしくは約１×１０８個以下のそのような総細胞、または先述の値の任意の２つの間の範囲などの、約１×１０６〜約１×１０８個（両端を含む）の範囲である。一部の実施形態では、用量は、対象の１ｍ２当たり約１×１０８個より少ないかもしくはそれと等しい総組換え受容体（例えば、ＣＡＲ）発現細胞、Ｔ細胞、または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）細胞を含み、例えば、対象の１ｍ２当たり約２×１０６、約５×１０６、約１×１０７、約５×１０７、もしくは約１×１０８個以下のそのような細胞、または先述の値の任意の２つの間の範囲などの、対象の１ｍ２当たり約１×１０６〜約１×１０８個（両端を含む）の範囲である。
【０１２７】
一部の実施形態では、用量中の細胞の数は、対象の体重１ｋｇ当たり細胞約０．５×１０６個〜細胞約３×１０６個、対象の体重１ｋｇ当たり細胞約０．７５×１０６個〜細胞約２．５×１０６個、または対象の体重１ｋｇ当たり細胞約１×１０６個〜細胞約２×１０６個（それぞれ、両端を含む）である。
【０１２８】
特定の実施形態では、用量は、対象の体重１キログラム当たり約１０５個〜約１０６個（両端を含む）の範囲の細胞の数、組換え受容体（例えば、ＣＡＲ）発現細胞の数、Ｔ細胞の数、もしくは末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の数、および／または対象の体重１キログラム当たり約１０５個もしくは１０６個以下（両端を含む）であるそのような細胞の数を含有する。例えば、一部の実施形態では、用量は、対象の体重１キログラム当たり約１×１０５、約２×１０５、約５×１０５、または約１×１０６個のまたはそれよりも少ないまたはそれ以下のそのような細胞を含む。一部の実施形態では、用量は、対象の体重１キログラム当たり約１×１０５、約２×１０５、約５×１０５、もしくは約１×１０６個の、または先述の値の任意の２つの間の範囲内の値のそのような細胞を含む。
【０１２９】
特定の実施形態では、細胞の数および／または濃度は、組換え受容体（例えば、ＣＡＲ）発現細胞の数を指す。他の実施形態では、細胞の数および／または濃度は、投与されたすべての細胞、Ｔ細胞、または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の数または濃度を指す。
【０１３０】
一部の態様では、用量のサイズは、以前の治療、例えば化学療法に対する対象の応答、腫瘍負荷、バルク、サイズ、もしくは度合いなどの対象の疾患負荷、転移の程度もしくはタイプ、病期、ならびに／または対象が毒性転帰、例えば、ＣＲＳ、マクロファージ活性化症候群、腫瘍崩壊症候群、神経毒性、ならびに／または投与されている細胞および／もしくは組換え受容体に対する宿主免疫応答を発症する可能性もしくは発症率などの、１つまたは複数の基準に基づいて決定される。
【０１３１】
一部の態様では、用量のサイズは、対象の疾患または状態の負荷により決定される。例えば、一部の態様では、投与される細胞の数は、細胞の用量を投与する直前の対象中に存在する腫瘍量に基づいて決定される。一部の実施形態では、用量のサイズは、疾患負荷と逆相関する。疾患負荷が大きい状況のような、一部の態様では、対象は、少ない数の細胞、例えば、対象の体重１キログラム当たり約１×１０６個のもしくはそれよりも少ないもしくはそれと等しい細胞、または約０．５×１０６個／ｋｇのもしくはそれよりも少ないもしくはそれと等しい細胞が投与される。疾患負荷がより低い状況のような、他の実施形態では、対象は、対象の体重１キログラム当たり細胞約１×１０６個よりも多くの細胞など、例えば、細胞約２×１０６個、約２．５×１０６個、または約３×１０６個／ｋｇよりも多くの、より多数の細胞が投与される。一部の実施形態では、用量中の細胞、組換え受容体（例えば、ＣＡＲ）発現細胞、Ｔ細胞、または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の数は、対象の体重１キログラム当たり約１×１０６個よりも多くのそのような細胞であり、例えば、体重１キログラム当たり約２×１０６、約３×１０６、約５×１０６、約１×１０７、約５×１０７、約１×１０８、約１×１０９、もしくは約１×１０１０個のそのような細胞、および／または対象もしくは全体の１ｍ２当たり約１×１０８、約１×１０９、約１×１０１０個のそのような細胞、または先述の値のいずれか２つの間の範囲である。
【０１３２】
一部の実施形態では、対象は、治療前に疾患負荷が評価され、対象が５％未満の骨髄芽細胞を示す場合、対象には、細胞約１×１０６個／ｋｇ、細胞約２×１０６個／ｋｇ、細胞約５×１０６個／ｋｇ、または細胞約１×１０７個／ｋｇよりも多くの組換え受容体発現（例えば、ＣＡＲ発現Ｔ細胞などの、ＣＡＲ発現）の用量を投与することができる、または対象が約５％より多いかもしくはそれと等しい骨髄芽細胞を示す場合、対象には、細胞約１×１０６個／ｋｇまたは細胞約０．５×１０６個／ｋｇであるかまたはそれと等しいかまたはそれよりも少ない組換え受容体発現（例えば、ＣＡＲ発現Ｔ細胞などの、ＣＡＲ発現）の用量を投与することができる。一部の実施形態では、対象は、治療前に疾患負荷が評価され、対象が、約１０％未満（例えば、約９％未満、約８％未満、約７％未満、約６％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、約１％未満、約０．５％未満）の骨髄芽細胞を示す場合、対象には、細胞約１×１０６個／ｋｇ、細胞約２×１０６個／ｋｇ、細胞約５×１０６個／ｋｇ、または細胞約１×１０７個／ｋｇよりも多くの組換え受容体発現（例えば、ＣＡＲ発現Ｔ細胞などの、ＣＡＲ発現）の用量を投与することができる、または対象が、約１０％より多いかもしくはそれと等しい骨髄芽細胞を示す場合、対象には、細胞約１×１０６個／ｋｇまたは細胞約０．５×１０６個／ｋｇであるかまたはそれよりも少ないかまたはそれと等しい組換え受容体発現（例えば、ＣＡＲ発現Ｔ細胞などの、ＣＡＲ発現）の用量を投与することができる。一部の実施形態では、対象は、治療前に疾患負荷が評価され、対象が約２０％未満の骨髄芽細胞を示す場合、対象には、細胞約１×１０６個／ｋｇ、細胞約２×１０６個／ｋｇ、細胞約５×１０６個／ｋｇ、または細胞約１×１０７個／ｋｇよりも多くの組換え受容体発現（例えば、ＣＡＲ発現Ｔ細胞などの、ＣＡＲ発現）の用量を投与することができる、または対象が約２０％より多いかもしくはそれと等しい骨髄芽細胞を示す場合、対象には、細胞約１×１０６個／ｋｇもしくは細胞約０．５×１０６個／ｋｇであるかまたはそれと等しいかまたはそれよりも少ない組換え受容体発現（例えば、ＣＡＲ発現Ｔ細胞などの、ＣＡＲ発現）の用量を投与することができる。一部の実施形態では、組換え受容体発現（例えば、ＣＡＲ発現Ｔ細胞などの、ＣＡＲ発現）の第１の用量の前に、疾患負荷が評価され、リスク適応用量が選択される。一部の実施形態では、組換え受容体発現（例えば、ＣＡＲ発現Ｔ細胞などの、ＣＡＲ発現）の１つまたは複数の連続用量の前に、疾患負荷が評価され、リスク適応用量が選択される。
【０１３３】
細胞数に関して、一部の実施形態では、そのような値は、組換え受容体発現（例えば、ＣＡＲ発現）細胞の数を指し、他の実施形態では、それらは、投与されるＴ細胞もしくはＰＢＭＣまたは総細胞の数を指す。
【０１３４】
一部の実施形態では、１つまたは複数のさらなる連続用量を投与してもよい。一部の実施形態では、連続用量で投与される細胞の数は、本明細書の実施形態のいずれかにおいて第１の用量で投与される細胞の数と同じであるかまたは同様である。一部の実施形態では、具体的な投薬レジメンは、ＰＣＴ特許出願公開番号ＷＯ２０１６／０６４９２９に記載されているものなど、組換え抗原受容体を発現する細胞の投与時の対象における毒性を低減または最小限にするように選択される。
【０１３５】
一部の場合では、提供される方法は、所望の場合または特定の疾患もしくは状況で必要とされる場合、細胞の第１の用量よりも多くの回数、従ってより高い用量で投与される細胞の連続用量を含む。一部の実施形態では、まず低用量の組換え受容体発現（例えば、ＣＡＲ発現）細胞を投与する方法は、対象におけるその後のより高用量の組換え受容体発現（例えば、ＣＡＲ発現）細胞の投与が、治療した対象の大多数で毒性転帰を引き起こす可能性がより少なくなるように、形態学的疾患ステータスから微小病変へなど、対象の疾患負荷を低減することができる。
【０１３６】
一部の実施形態では、対象は、連続用量の投与前に、分子的に検出可能な疾患および／または微小病変などの非形態学的疾患を示すものである。対象は、骨髄に約５％未満の芽球を示す場合、微小病変を示すと言われる。ある特定の実施形態では、微小病変を有する対象は、分子的に検出可能ながんを示す。一部の実施形態では、対象は、Ｂ細胞白血病もしくはリンパ腫および／または急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）などの白血病またはリンパ腫などの疾患または状態に基づいて選択されている。一部の実施形態では、対象は、微小病変を示し、および／または微小病変を有するとして選択される。一部の実施形態では、方法により治療された、投与直前に微小病変を有する疾患または状態を有する対象の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９９％は、完全寛解および／またはＭＲＤ陰性完全寛解を示す。一部の実施形態では、方法により治療された、投与直前に形態学的疾患を有する疾患または状態を有する対象の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９９％は、完全寛解および／またはＭＲＤ陰性完全寛解を示す。
【０１３７】
一部の実施形態では、第１の用量の投与後および連続用量の投与前に、対象の腫瘍量を評価して、腫瘍量が、第１の投与による治療前に存在した腫瘍量と比較して低減されていることを確認することができる。一部の実施形態では、対象の評価が、腫瘍量の低減を示し、および／または対象が、非形態学的疾患、例えば分子的に検出可能な疾患および／または微小病変を示す場合、提供される方法は、第１のまたは初回の用量よりも高い連続用量の組換え受容体発現（例えば、ＣＡＲ発現）細胞を投与することを含む。一部の実施形態では、対象の評価が、腫瘍量が低減されていないことを示し、および／または対象が、形態学的疾患を示す場合、提供される方法は、第１のまたは初回の用量と同じかまたはそれよりも少ない連続用量の組換え受容体発現（例えば、ＣＡＲ発現）細胞を投与することを含む。
【０１３８】
一部の実施形態では、連続用量の組換え受容体発現（例えば、ＣＡＲ発現）細胞は、対象の腫瘍量が第１の用量により低減されている可能性が高い、第１のまたは初回の細胞用量の投与後の時点で対象に投与される。一部の実施形態では、腫瘍量は、連続用量の投与前に、実際にすべての対象で低減されている必要はなく、臨床データに基づくものなど、治療した対象において平均で腫瘍量が低減されており、そのような第１の用量で治療された対象の大多数が腫瘍量の低減を示し、例えば、第１のまたは初回の用量で治療された対象の少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、もしくはそれよりも多くが、腫瘍量の低減を示す。一般的に、疾患負荷が、第１の用量により低減されたか、または第１の用量により低減された可能性が高くなった後の時点で、連続用量を対象に投与し、それのより疾患またはその症状もしくは転帰をさらに低減および／または除去するか、またはその拡大もしくは進行を予防する。一部の態様における連続投与時の疾患負荷低減の状況は、移入された細胞の消耗の可能性を低減させ、それにより有効性を向上させる。連続用量は、第１の用量と比較して、同じ、より低い、またはより高い用量であってもよい。一部の実施形態では、複数の連続用量が、第１の用量後に投与される。
【０１３９】
一部の実施形態では、連続用量の組換え受容体発現（例えば、ＣＡＲ発現）細胞は、増加した数の組換え受容体発現（例えば、ＣＡＲ発現）細胞が、連続用量により対象に投与されるように、第１の用量よりも高い用量で投与される。一部の実施形態では、組換え受容体発現（例えば、ＣＡＲ発現）細胞のより高用量とは、より低用量またはより少ない数の細胞の投与により達成されるものと比較して、腫瘍量の改善もしくはより大幅な低減および／または対象の全生存期間の改善もしくは延長などの、応答または有効性の増加を促進することができるものである。一部の実施形態では、細胞の第１の用量の投与が対象における腫瘍量を低減することができるため、より多くの数の細胞の連続用量の投与は、そうでなければ形態学的疾患を有する対象に生じる場合がある、連続用量の投与後の対象におけるＣＲＳおよび／または神経毒性を回避もしくは最小限にすることができる。
【０１４０】
一部の態様では、連続用量は、第１の用量よりも大きい。例えば、一部の実施形態では、連続用量は、対象の体重１キログラム当たり約または少なくとも約２×１０６、約３×１０６、約５×１０６、約１×１０７、約１×１０８、もしくは約１×１０９個のそのような細胞など、対象の体重１キログラム当たり約１×１０６細胞よりも多くの組換え受容体（例えば、ＣＡＲ）発現細胞、Ｔ細胞、および／またはＰＢＭＣを含有する。一部の実施形態では、連続用量中の細胞の数は、対象の体重１ｋｇ当たり細胞約２×１０６個〜細胞約６×１０６個、対象の体重１ｋｇ当たり細胞約２．５×１０６個〜細胞約５．０×１０６個、または対象の体重１ｋｇ当たり細胞約３．０×１０６個〜細胞約４．０×１０６個（それぞれ、両端を含む）である。一部の実施形態では、連続用量の量またはサイズは、疾患負荷もしくはその指標、および／または疾患もしくは状態の１つまたは複数の症状を低減するのに十分である。一部の実施形態では、用量は、対象の生存を向上させるのに、例えば、少なくとも６カ月間、または少なくとも約１年、約２年、約３年、約４年、もしくは約５年間の対象の生存、無再発生存、または無症候生存（ｅｖｅｎｔ−ｆｒｅｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）を誘導するのに有効なサイズである。一部の実施形態では、連続用量中の投与される細胞、組換え受容体（例えば、ＣＡＲ）発現細胞、Ｔ細胞、および／もしくはＰＢＭＣの数、ならびに／または対象の体重当たりの投与されるそのような細胞の数は、第１の用量中の投与された数の少なくとも２倍、５倍、１０倍、５０倍、または１００倍であるか、またはそれよりも多い。一部の実施形態では、疾患負荷、腫瘍サイズ、腫瘍容積、腫瘍質量、および／または腫瘍負荷もしくはバルクは、第１の用量の投与直前または連続用量の投与直前のものと比較して、連続用量後に、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、もしくは約９０％、またはそれよりも高いパーセントで低減される。
【０１４１】
他の実施形態では、連続用量で投与される細胞の数は、第１の用量で投与される細胞の数よりも少ない。
【０１４２】
一部の実施形態では、複数の連続用量は、第１の用量後に投与され、１つまたは複数の追加の用量が、連続用量の投与後に投与される。一部の態様では、１つまたは複数の追加の用量（すなわち、第３、第４、第５など）で対象に投与される細胞の数は、第１の用量および／または連続用量と同じであるかもしくは同様である。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の用量は、以前の用量よりも大きい。
【０１４３】
一部の実施形態では、第１のものに対するおよび／または互いに対する連続用量のタイミングは、望ましくない毒性転帰のリスクを低減し、最大の有効性を促進するように設計されている。一部の実施形態では、同じか、より低いか、またはより高い連続用量などの連続用量は、対象における疾患負荷が依然として低減されたままであるか、または臨床データなどに基づいて複数の対象において平均して低減されたままであるが、ＣＲＳおよび／または神経毒性のリスクが依然として低いままである時点で投与される。一部の実施形態では、連続用量は、一般的には、例えば、ＣＲＳもしくは神経毒性、マクロファージ活性化症候群、または腫瘍溶解症候群などの、毒性転帰もしくは症状のリスクまたはそれらの生化学的指標が、許容可能なレベルであるかまたはそれを下回る、第１のまたは以前の用量に対しての時点で投与される。例えば、連続用量は、毒性転帰がピークに達し、初回用量後に許容可能なレベル未満に低下しつつあるかまたは低下した後で投与することができる。したがって、一部の実施形態では、連続用量は、第１のまたは以前の用量の開始の少なくとも約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、約２３、約２４、約２５、約２６、もしくは約２７日後に投与されるか、あるいは第１のまたは以前の用量の開始の約１４日もしくは約１５日または約２１日目よりも後に投与される。一部の実施形態では、適切なタイミングは、毒性事象に関連する１つまたは複数の症状または転帰の存在をモニターおよび／または評価し、症状または転帰が許容可能なレベルであるかまたはそれを下回ることを決定した後で連続用量を送達することにより決定される。
【０１４４】
疾患負荷の低減、有効性、および生存
提供される方法による投与は、一般的には、対象における疾患または状態の拡大もしくは負荷を低減または予防する。例えば、疾患または状態が腫瘍である場合、本方法は、一般的には、腫瘍サイズ、バルク、転移、骨髄中の芽球のパーセント、または分子的に検出可能ながんを低減し、および／または予後もしくは生存または腫瘍量と関連する他の症状を改善する。
【０１４５】
疾患負荷は、腫瘍の器官もしくは組織または例えば転移を示すことになる他の位置など、対象中の、または対象の器官、組織、もしくは体液中の疾患の細胞の総数を包含し得る。例えば、腫瘍細胞は、ある血液学的悪性疾患の状況では、血液もしくは骨髄で検出および／または定量化されてもよい。疾患負荷は、一部の実施形態では、腫瘍の質量、転移の数もしくは程度、および／または骨髄に存在する芽細胞の百分率を含んでいてもよい。
【０１４６】
一部の実施形態では、対象は白血病を有する。疾患負荷の程度は、血液または骨髄中の残存白血病を評価することにより決定することができる。一部の実施形態では、対象は、例えば光学顕微鏡検査により検出して、骨髄に約１０％より多いかもしくはそれと等しい芽球、骨髄に約２０％より多いかもしくはそれと等しい芽球、骨髄に約３０％より多いかもしくはそれと等しい芽球、骨髄に約４０％より多いかもしくはそれと等しい芽球、または骨髄に約５０％より多いかもしくはそれと等しい芽球が存在するなど、５％より多いかもしくはそれと等しい芽球が骨髄に存在する場合、形態学的疾患を示す。一部の実施形態では、骨髄に存在する芽球が約５％未満である場合、対象は、完全寛解または臨床的寛解を示す。
【０１４７】
一部の実施形態では、対象は、完全寛解を示すことができるが、少ない割合の形態学的に検出不能な（光学顕微鏡検査技法により）残存白血病細胞が存在する。対象は、骨髄に５％未満の芽球を示し、分子的に検出可能ながんを示す場合、微小残存病変（ＭＲＤ）を示すと言われる。一部の実施形態では、分子的に検出可能ながんは、少数の細胞の高感度検出を可能にする様々な分子技法のいずれかを使用して評価することができる。一部の態様では、そのような技法としては、固有のＩｇ／Ｔ細胞受容体遺伝子再配列、または染色体転座により産生される融合転写物を決定することができるＰＣＲアッセイが挙げられる。一部の実施形態では、フローサイトメトリーを使用して、白血病特異的免疫表現型に基づいて、がん細胞を同定することができる。一部の実施形態では、がんの分子的検出は、１００，０００個の正常細胞中わずか１個の白血病細胞を検出することができる。一部の実施形態では、対象は、１００，０００個の細胞中少なくとも１個または１個よりも多くの白血病細胞が、ＰＣＲまたはフローサイトメトリーなどにより検出される場合、分子的に検出可能なＭＲＤを示す。一部の実施形態では、対象の疾患負荷は、分子的に検出不能であるかまたはＭＲＤであり、一部の場合では、ＰＣＲまたはフローサイトメトリー技法を使用しても、対象における白血病細胞を検出することができない。
【０１４８】
一部の態様では、疾患または状態は、第１の用量の投与後も持続し、および／または第１の用量の投与は、対象における疾患または状態を根絶するには十分ではない。
【０１４９】
一部の態様では、連続用量の投与は、第１の用量の直前の時点でのまたは連続用量の直前の時点での疾患負荷と比較して、疾患負荷を低減する。一部の態様では、例えば、再発の状況では、連続用量の投与は、第１の用量の投与後の疾患負荷のピークレベルと比較して、疾患負荷の低減をもたらす。
【０１５０】
一部の実施形態では、本方法は、対象が、以前のおよび／もしくはその後のＨＳＣＴならびに／または例えばある患者集団では一般に有害副作用のリスクを有する他の療法を受けるものなど、代替投薬レジメンを使用する同等な方法で観察されることになる低減と比較して、疾患または状態の負荷、例えば腫瘍細胞の数、腫瘍のサイズ、患者の生存または無症候生存の持続期間を、より高い度合いでおよび／またはより長期間にわたって低減する。
【０１５１】
一部の実施形態では、対象の疾患または状態の負荷が、検出、評価、または測定される。一部の態様では、疾患負荷は、対象中の、または対象の器官、組織、もしくは体液中の、例えば血液または血清中の疾患または疾患関連細胞、例えば腫瘍細胞の総数を検出することにより検出することができる。一部の実施形態では、疾患負荷、例えば腫瘍量は、固形腫瘍の質量および／または転移の数もしくは程度を測定することにより評価される。一部の態様では、対象の生存、ある特定の期間内の生存、生存の程度、無症候もしくは無症状生存または無再発生存の存在または持続期間が評価される。一部の実施形態では、疾患または状態のあらゆる症状が評価される。一部の実施形態では、疾患または状態の負荷の尺度は、指定されている。
【０１５２】
一部の実施形態では、本方法により、対象の無症候生存率または全生存率が、他の方法と比較して改善される。例えば、一部の実施形態では、無症候生存率または、対象が最初の用量の６カ月後における方法によって処置される可能性は、約４０％より大きい、約５０％より大きい、約６０％より大きい、約７０％より大きい、約８０％より大きい、約９０％より大きい、または約９５％より大きい。一部の態様では、全生存率は、約４０％より大きい、約５０％より大きい、約６０％より大きい、約７０％より大きい、約８０％より大きい、約９０％より大きい、または約９５％より大きい。一部の実施形態では、方法で処置された対象は、無症候生存、無再発生存、または少なくとも約６月、少なくとも約１年、約２年、約３年、約４年、約５年、約６年、約７年、約８年、約９年、または約１０年までの生存を示す。一部の実施形態では、進行までの時間は、約６カ月、少なくとも約１年、約２年、約３年、約４年、約５年、約６年、約７年、約８年、約９年、または約１０年より長い進行までの時間など、改善される。
【０１５３】
一部の実施形態では、本方法による治療後、再発の可能性が、他の方法と比較して低減される。例えば、一部の実施形態では、最初の用量の６カ月後における再発の可能性は、約８０％未満、約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、または約１０％未満である。
【０１５４】
遺伝子操作された細胞、および細胞を産生するための方法
一部の実施形態では、提供される方法は、疾患または状態を有する対象に、組換え抗原受容体を発現する細胞を投与することを含む。遺伝子操作された要素、例えば組換え受容体、例えばＣＡＲまたはＴＣＲを導入するための種々の方法は周知であり、提供される方法および組成物と共に使用することができる。例示的な方法としては、ウイルス、例えばレトロウイルスまたはレンチウイルス、形質導入、トランスポゾン、およびエレクトロポレーションによることを含む、受容体をコードする核酸を移入するための方法が挙げられる。
【０１５５】
受容体を発現し、提供される方法により投与される細胞としては、操作された細胞がある。遺伝子操作は、一般的に、レトロウイルス形質導入、トランスフェクション、または形質転換などにより、組換え要素または操作された要素をコードする核酸を、細胞を含有する組成物に導入することを含む。
【０１５６】
遺伝子操作のためのベクターおよび方法
一部の実施形態では、組換え核酸は、例えばシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に由来するベクターなどの、組換え感染性ウイルス粒子を使用して細胞に移入される。一部の実施形態では、組換え核酸は、組換えレンチウイルスベクター、またはガンマ−レトロウイルスベクターなどのレトロウイルスベクターを使用して、Ｔ細胞に移入される（例えば、Ｋｏｓｔｅら、（２０１４）  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２０１４  Ａｐｒ  ３．  ｄｏｉ：  １０．１０３８／ｇｔ．２０１４．２５；Ｃａｒｌｅｎｓら、（２０００）  Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ２８（１０）：  １１３７−４６；Ａｌｏｎｓｏ−Ｃａｍｉｎｏら、（２０１３）  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ  ２，  ｅ９３；Ｐａｒｋら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２０１１  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２９（１１）：  ５５０−５５７を参照のこと）。
【０１５７】
一部の実施形態では、レトロウイルスベクター、例えば、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）、脊髄増殖性肉腫ウイルス（ＭＰＳＶ）、マウス胚幹細胞ウイルス（ＭＥＳＶ）、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）、脾臓フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に由来するレトロウイルスベクターは、長い末端反復配列（ＬＴＲ）を有する。ほとんどのレトロウイルスベクターは、マウスレトロウイルスに由来する。一部の実施形態では、レトロウイルスとしては、任意のトリまたは哺乳動物細胞供給源に由来するものが挙げられる。レトロウイルスは、典型的には、両栄養性であり、レトロウイルスが、ヒトを含む幾つかの種の宿主細胞に感染可能であることを意味する。一実施形態では、発現しようとする遺伝子は、レトロウイルスのｇａｇ、ｐｏｌ、および／またはｅｎｖ配列を置き換える。幾つかの例示的なレトロウイルス系が記載されている（例えば、米国特許第５，２１９，７４０号；同第６，２０７，４５３号；同第５，２１９，７４０号；ＭｉｌｌｅｒおよびＲｏｓｍａｎ（１９８９）  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ７：９８０−９９０；Ｍｉｌｌｅｒ，Ａ．Ｄ．（１９９０）  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １：５−１４；Ｓｃａｒｐａら、（１９９１）  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １８０：８４９−８５２；Ｂｕｒｎｓら、（１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：８０３３−８０３７；およびＢｏｒｉｓ−ＬａｗｒｉｅおよびＴｅｍｉｎ  （１９９３）  Ｃｕｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｇｅｎｅｔ．  Ｄｅｖｅｌｏｐ．  ３：１０２−１０９）。
【０１５８】
レンチウイルス形質導入の方法は、公知である。例示的な方法は、例えば、Ｗａｎｇら、（２０１２）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ３５（９）：  ６８９−７０１；Ｃｏｏｐｅｒら、（２００３）  Ｂｌｏｏｄ．  １０１：１６３７−１６４４；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、（２００９）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ５０６：  ９７−１１４；およびＣａｖａｌｉｅｒｉら、（２００３）  Ｂｌｏｏｄ．    １０２（２）：  ４９７−５０５に記載されている。
【０１５９】
一部の実施形態では、組換え核酸は、エレクトロポレーションによりＴ細胞に移入される（例えば、Ｃｈｉｃａｙｂａｍら（２０１３）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ８巻（３号）：ｅ６０２９８頁およびＶａｎ  Ｔｅｄｅｌｏｏら（２０００）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ７巻（１６号）：１４３１〜１４３７頁を参照）。一部の実施形態では、組換え核酸は、転位によりＴ細胞に移入される（例えば、Ｍａｎｕｒｉら（２０１０）Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２１巻（４号）：４２７〜４３７頁；Ｓｈａｒｍａら（２０１３）Ｍｏｌｅｃ  Ｔｈｅｒ  Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ  ２巻、ｅ７４頁；およびＨｕａｎｇら（２００９）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ５０６巻：１１５〜１２６頁を参照）。免疫細胞に遺伝物質を導入し発現させる他の方法としては、リン酸カルシウムトランスフェクション（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．）、プロトプラスト融合、カチオン性リポソーム媒介性トランスフェクション；タングステン粒子促進性微粒子銃（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３４６巻：７７６〜７７７頁（１９９０））；およびリン酸ストロンチウムＤＮＡ共沈（Ｂｒａｓｈら、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、７巻：２０３１〜２０３４頁（１９８７））が挙げられる。
【０１６０】
組換え産物をコードする核酸を移入するための他の手法およびベクターは、例えば、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１４０５５６６８および米国特許第７，４４６，１９０号に記載されているものである。
【０１６１】
一部の実施形態では、細胞、例えばＴ細胞には、拡大増幅中または拡大増幅後のいずれでも、例えば、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をトランスフェクトすることができる。所望の受容体の遺伝子を導入するためのこのトランスフェクションは、例えば、任意の好適なレトロウイルスベクターを用いて実施することができる。次いで、遺伝子修飾細胞集団を、初回刺激（例えば、ＣＤ３／ＣＤ２８刺激）から解放した後、第２のタイプの刺激で、例えばｄｅ  ｎｏｖｏで導入された受容体により刺激することができる。この第２のタイプの刺激としては、ペプチド／ＭＨＣ分子の形態の抗原性刺激、遺伝子導入受容体の同種（架橋）リガンド（例えば、ＣＡＲの天然リガンド）、または新しい受容体のフレームワーク内に直接結合する（例えば、受容体内の定常領域を認識することにより）任意のリガンド（抗体など）を挙げることができる。例えば、Ｃｈｅａｄｌｅら、「Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｂａｓｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ」Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ２０１２；９０７巻：６４５〜６６頁またはＢａｒｒｅｔｔら、Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ６５巻：３３３〜３４７頁（２０１４）を参照されたい。
【０１６２】
一部の場合では、細胞、例えばＴ細胞が活性化されることを必要としないベクターを使用してもよい。一部のそのような例では、細胞は、活性化の前に選択および／または形質導入される場合がある。したがって、細胞は、細胞を培養する前にまたは後で、一部の場合では、培養の少なくとも部分と同時にまたはその間に操作される場合がある。
【０１６３】
追加の核酸の中でも、例えば、導入用遺伝子は、以下がある：移入された細胞の生存能および／または機能を促進することなどにより療法の有効性を向上させるもの；ｉｎ  ｖｉｖｏ生存または局在化を評価するためのものなど、細胞を選択および／または評価するための遺伝子マーカーを提供する遺伝子；Ｌｕｐｔｏｎ  Ｓ．  Ｄ．ら、Ｍｏｌ．  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、１１巻：６号（１９９１）；およびＲｉｄｄｅｌｌら、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ３巻：３１９〜３３８頁（１９９２）に記載されているような、例えば、細胞をｉｎ  ｖｉｖｏでのネガティブ選択に感受性することにより安全性を向上させる遺伝子；ドミナントポジティブ選択可能マーカーをネガティブ選択可能マーカーと融合することに由来する二機能性選択可能融合遺伝子の使用が記載されているＬｕｐｔｏｎらのＰＣＴ／ＵＳ９１／０８４４２およびＰＣＴ／ＵＳ９４／０５６０１の公報も参照されたい。例えば、Ｒｉｄｄｅｌｌら、米国特許第６，０４０，１７７号の第１４欄〜第１７欄を参照されたい。
【０１６４】
遺伝子操作用の細胞および細胞の調製
一部の実施形態では、核酸は、異種性であり、すなわち細胞または細胞から得られる試料には通常は存在せず、別の生物または細胞から得られるものなどであり、例えば、操作されている細胞および／またはそのような細胞が由来する生物には普通は見出されない。一部の実施形態では、そうした核酸は、天然には存在せず、自然界では見出されない核酸などであり、複数の異なる細胞タイプに由来する種々のドメインをコードする核酸のキメラ組み合わせを含むものが挙げられる
【０１６５】
細胞は、一般的には、哺乳動物細胞などの真核細胞であり、典型的には、ヒト細胞である。一部の実施形態では、細胞は、血液、骨髄、リンパ、またはリンパ器官に由来し、リンパ球、典型的にはＴ細胞および／またはＮＫ細胞を含む、自然免疫または適応免疫の細胞、例えば骨髄性細胞またはリンパ系細胞などの免疫系の細胞である。他の例示的な細胞としては、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を含む、多分化能および多能性幹細胞などの幹細胞が挙げられる。細胞は、典型的には、対象から直接単離されたものおよび／または対象から単離され凍結されたものなど、初代細胞である。一部の実施形態では、細胞としては、機能、活性化状態、成熟、分化の能力、拡大増殖、再循環、局在化、および／または持続能力、抗原特異性、抗原受容体のタイプ、特定の器官もしくは区画中での存在、マーカーもしくはサイトカイン分泌プロファイル、および／または分化の度合いにより規定されるものなど、全Ｔ細胞集団、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、およびそれらの亜集団などの、Ｔ細胞または他の細胞タイプの１つまたは複数のサブセットが挙げられる。細胞は、治療される対象に関して、同種異系および／または自己由来であってもよい。方法としては、既成の方法が挙げられる。既成技術の場合などの一部の態様では、細胞は、多能性および／または多分化能であり、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）などの幹細胞などである。一部の実施形態では、本方法は、対象から細胞を単離し、調製し、処理し、培養し、および／またはそれらを操作すること、ならびに凍結保存の前または後にそれらを同じ対象に再度導入することを含む。
【０１６６】
Ｔ細胞のおよび／またはＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞のサブタイプおよび亜集団としては、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、エフェクターＴ細胞（ＴＥＦＦ）、メモリーＴ細胞、およびそれらのサブタイプ、例えば、幹細胞メモリーＴ（ＴＳＣＭ）、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）、エフェクターメモリーＴ（ＴＥＭ）、または最終分化型エフェクターメモリーＴ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、未熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、天然に存在する適応性抑制性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ヘルパーＴ細胞、例えば、ＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、濾胞性ヘルパーＴ細胞、アルファ／ベータＴ細胞、およびデルタ／ガンマＴ細胞がある。
【０１６７】
一部の実施形態では、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。一部の実施形態では、細胞は、単球または顆粒球、例えば、骨髄性細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、肥満細胞、好酸球、および／または好塩基球である。
【０１６８】
一部の実施形態では、細胞は、遺伝子操作により導入された１つまたは複数の核酸を含み、それによりそのような核酸の組換えまたは遺伝子操作産物を発現する。一部の実施形態では、核酸は、異種性であり、すなわち細胞または細胞から得られる試料には通常は存在せず、別の生物または細胞から得られるものなどであり、例えば、操作されている細胞および／またはそのような細胞が由来する生物には普通は見出されない。一部の実施形態では、そのような核酸は、天然には存在せず、自然界では見出されない核酸などであり、複数の異なる細胞タイプに由来する種々のドメインをコードする核酸のキメラ組み合わせを含むものが挙げられる。
【０１６９】
一部の実施形態では、操作された細胞の調製は、１つまたは複数の培養および／または調製ステップを含む。ＣＡＲなどのトランスジェニック受容体をコードする核酸を導入するための細胞は、生物学的試料、例えば対象から得られるかまたは由来するものなどの試料から単離することができる。一部の実施形態では、細胞が単離される対象は、疾患もしくは状態を有するか、または細胞療法を必要としているか、もしくは細胞療法が施されることになる対象である。対象は、一部の実施形態では、細胞が単離、処理、および／または操作される養子細胞療法などの特定の治療的介入を必要とするヒトである。
【０１７０】
したがって、細胞は、一部の実施形態では、初代細胞、例えば初代ヒト細胞である。試料としては、対象から直接採取される組織、流体、および他の試料、ならびに分離、遠心分離、遺伝子操作（例えば、ウイルスベクターによる形質導入）、洗浄、および／またはインキュベーションなどの１つまたは複数の処理ステップから生じる試料が挙げられる。生物学的試料は、生物学的な供給源から直接得られた試料または処理された試料であってもよい。生物学的試料としては、これらに限定されないが、それらに由来する処理試料を含む、血液、血漿、血清、脳脊髄液、関節液、尿、および汗などの体液、組織、ならびに器官試料が挙げられる。
【０１７１】
一部の態様では、細胞がそれに由来するかもしくはそれから単離される試料は、血液または血液由来試料であるか、あるいはアフェレーシスもしくは白血球アフェレーシス産物であるかまたはそれに由来する。例示的な試料としては、全血、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、白血球、骨髄、胸腺、組織生検、腫瘍、白血病、リンパ腫、リンパ節、腸管関連リンパ組織、粘膜関連リンパ組織、脾臓、他のリンパ系組織、肝臓、肺、胃、腸、結腸、腎臓、膵臓、乳房、骨、前立腺、頚部、精巣、卵巣、扁桃腺、もしくは他の器官、および／またはそれらに由来する細胞が挙げられる。試料としては、細胞療法、例えば養子細胞療法の状況では、自己由来および同種異系供給源に由来する試料が挙げられる。
【０１７２】
一部の実施形態では、細胞は、細胞株、例えばＴ細胞株に由来する。細胞は、一部の実施形態では、例えばマウス、ラット、非ヒト霊長類、およびブタに由来する異種供給源から得られる。
【０１７３】
一部の実施形態では、細胞の単離は、１つまたは複数の調製および／または非親和性系細胞分離ステップを含む。一部の例では、細胞を、洗浄し、遠心分離し、および／または１つまたは複数の試薬の存在下でインキュベートして、例えば不要な要素を除去し、所望の要素を濃縮し、溶解し、または特定の試薬に感受性である細胞を除去する。一部の例では、細胞は、密度、接着特性、サイズ、特定の要素に対する感受性および／または耐性などの１つまたは複数の特性に基づいて分離される。
【０１７４】
一部の例では、対象の循環血液に由来する細胞は、例えば、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスにより得られる。試料は、一部の態様では、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞を含むリンパ球、他の有核白血球細胞、赤血球細胞、および／または血小板を含有し、一部の態様では、赤血球細胞および血小板以外の細胞を含有する。
【０１７５】
一部の実施形態では、対象から収集された血液細胞を、洗浄して、例えば、血漿画分を除去し、細胞を、その後の処理ステップのために適切な緩衝液または培地に入れる。一部の実施形態では、細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。一部の実施形態では、洗浄溶液は、カルシウムおよび／またはマグネシウムおよび／または多くのもしくはすべての２価カチオンを欠いている。一部の態様では、洗浄ステップは、製造業者の指示に従って、半自動「フロースルー」遠心機（例えば、Ｃｏｂｅ２９９１セルプロセッサー、Ｂａｘｔｅｒ）により達成される。一部の態様では、洗浄ステップは、製造業者の指示に従って、接線流濾過（ＴＦＦ）により達成される。一部の実施形態では、細胞は、洗浄後、例えばＣａ＋＋／Ｍｇ＋＋非含有ＰＢＳなどの、様々な生体適合性緩衝液に再懸濁される。ある特定の実施形態では、血液細胞試料の要素を除去し、細胞を培養培地に直接再懸濁する。
【０１７６】
一部の実施形態では、本方法は、赤血球細胞を溶解し、パーコールまたはフィコール勾配で遠心分離することにより、末梢血から白血球を調製することなど、密度に基づく細胞分離法を含む。
【０１７７】
一部の実施形態では、単離方法は、表面マーカー、例えば表面タンパク質、細胞内マーカー、または核酸などの、１つまたは複数の特異的な分子の細胞での発現または存在に基づいて異なる細胞タイプを分離することを含む。一部の実施形態では、そのようなマーカーに基づいて分離するための任意の公知の方法を使用することができる。一部の実施形態では、分離は、親和性に基づく分離または免疫親和性に基づく分離である。例えば、一部の態様では、単離は、１つまたは複数のマーカー、典型的には細胞表面マーカーの細胞での発現または発現レベルに基づき、例えば、そのようなマーカーと特異的に結合する抗体または結合パートナーと共にインキュベーションし、その後一般的には洗浄ステップを行い、抗体または結合パートナーに結合した細胞を、抗体または結合パートナーに結合しなかった細胞から分離することにより、細胞および細胞集団を分離することを含む。
【０１７８】
そのような分離ステップは、試薬に結合した細胞がさらなる使用のために保持されるポジティブ選択に基づいていてもよく、および／または抗体もしくは結合パートナーに結合しなかった細胞が保持されるネガティブ選択に基づいていてもよい。一部の例では、両画分が、さらなる使用のために保持される。一部の態様では、不均質集団中の細胞タイプを特異的に識別する抗体が利用可能ではなく、分離が、所望の集団以外の細胞により発現されるマーカーに基づいて実施することが最善である場合、ネガティブ選択が特に有用であり得る。
【０１７９】
分離は、特定のマーカーを発現する特定の細胞集団または細胞の１００％濃縮または除去をもたらす必要はない。例えば、マーカーを発現するものなどの、特定のタイプの細胞のポジティブ選択または濃縮は、そのような細胞の数または割合を増加させることを指すが、マーカーを発現しない細胞の完全な非存在をもたらす必要はない。同様に、マーカーを発現するものなどの特定のタイプの細胞のネガティブ選択、除去、または枯渇は、そのような細胞の数または割合を減少させることを指すが、すべてのそのような細胞の完全な除去をもたらす必要はない。
【０１８０】
一部の例では、複数ラウンドの分離ステップが実施され、１つのステップでのポジティブまたはネガティブ選択画分が、その後のポジティブまたはネガティブ選択などの別の分離ステップに供される。一部の例では、各々がネガティブ選択のために標的とされるマーカーに特異的である複数の抗体または結合パートナーと共に細胞をインキュベートすることなどにより、複数のマーカーを発現する細胞を単一の分離ステップで同時に枯渇させることができる。同様に、種々の細胞タイプで発現される複数の抗体または結合パートナーと共に細胞をインキュベートすることにより、複数の細胞タイプを、ポジティブ選択で同時に選択することができる。
【０１８１】
例えば、一部の態様では、陽性であるかまたは１つもしくは複数の表面マーカーを高レベルで発現する細胞、例えば、ＣＤ２８＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ１２７＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、および／またはＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞などの、Ｔ細胞の特定の亜集団が、ポジティブまたはネガティブ選択技法により単離される。
【０１８２】
例えば、ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋Ｔ細胞は、ＣＤ３／ＣＤ２８がコンジュゲートされている磁気ビーズ（例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｅｘｐａｎｄｅｒ）を使用して、ポジティブ選択することができる。
【０１８３】
一部の実施形態では、単離は、ポジティブ選択により特定の細胞集団を濃縮することにより、またはネガティブ選択により特定の細胞集団を枯渇させることにより実施される。一部の実施形態では、ポジティブまたはネガティブ選択は、それぞれポジティブ選択またはネガティブ選択された細胞で発現される（ｍａｒｋｅｒ＋）か、または比較的より高いレベルで発現される（ｍａｒｋｅｒｈｉｇｈ）１つまたは複数の表面マーカーと特異的に結合する１つまたは複数の抗体または他の結合剤と共に細胞をインキュベートすることにより達成される。
【０１８４】
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、Ｂ細胞、単球、または他の白血球細胞などの非Ｔ細胞で発現される、ＣＤ１４などのマーカーのネガティブ選択により、ＰＢＭＣ試料から分離される。一部の態様では、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋選択ステップを使用して、ＣＤ４＋ヘルパーおよびＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞を分離する。そのようなＣＤ４＋およびＣＤ８＋集団は、１つまたは複数のナイーブ、メモリー、および／もしくはエフェクターＴ細胞亜集団で発現されるかまたは比較的より高い度合いで発現されるマーカーのポジティブもしくはネガティブ選択により、亜集団へとさらに選別することができる。
【０１８５】
一部の実施形態では、ＣＤ８＋細胞は、それぞれの亜集団と関連する表面抗原に基づくポジティブまたはネガティブ選択などにより、ナイーブ、セントラルメモリー、エフェクターメモリー、および／またはセントラルメモリー幹細胞がさらに濃縮または枯渇される。一部の実施形態では、投与後の長期生存、拡大増殖、および／または生着の向上など、有効性を増加させるために、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞の濃縮が実施される。これは、一部の態様では、そのような亜集団において特に堅固である。Ｔｅｒａｋｕｒａら（２０１２）Ｂｌｏｏｄ．１巻：７２〜８２頁；Ｗａｎｇら（２０１２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ３５巻（９号）：６８９〜７０１頁を参照されたい。一部の実施形態では、ＴＣＭ濃縮ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞を組み合わせることは、有効性をさらに増強する。
【０１８６】
実施形態では、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８＋末梢血リンパ球のＣＤ６２Ｌ＋およびＣＤ６２Ｌ−サブセットの両方に存在する。ＰＢＭＣは、抗ＣＤ８および抗ＣＤ６２Ｌ抗体などを使用して、ＣＤ６２Ｌ−ＣＤ８＋および／またはＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ８＋画分を濃縮または枯渇させることができる。
【０１８７】
一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞の濃縮は、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、および／またはＣＤ１２７の陽性または高度な表面発現に基づき、一部の態様では、ＣＤ４５ＲＡおよび／またはグランザイムＢを発現するかもしくは高度に発現する細胞のネガティブ選択に基づく。一部の態様では、ＴＣＭ細胞が濃縮されたＣＤ８＋集団の単離は、ＣＤ４、ＣＤ１４、ＣＤ４５ＲＡを発現する細胞の枯渇、およびＣＤ６２Ｌを発現する細胞のポジティブ選択または濃縮により実施される。１つの態様では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞の濃縮は、ＣＤ４発現に基づいて選択される細胞の陰性画分から開始し、それを、ＣＤ１４およびＣＤ４５ＲＡの発現に基づくネガティブ選択、およびＣＤ６２Ｌに基づくポジティブ選択に供することで実施される。そのような選択は、一部の態様では、同時に実施され、他の態様では、いずれかの順序で順次実施される。また、一部の態様では、ＣＤ８＋細胞集団または亜集団の調製に使用されたものと同じ、ＣＤ４の発現に基づく選択ステップを使用して、ＣＤ４＋細胞集団または亜集団を生成し、ここで、ＣＤ４に基づく分離に由来する陽性および陰性画分が両方とも保持され、任意選択で１つまたは複数のさらなるポジティブまたはネガティブ選択ステップ後に、本方法のその後のステップで使用される。
【０１８８】
特定の例では、ＰＢＭＣの試料または他の白血球細胞試料を、ＣＤ４＋細胞の選択に供し、ここで、陰性および陽性画分が両方とも保持される。その後、陰性画分を、ＣＤ１４およびＣＤ４５ＲＡまたはＣＤ１９の発現に基づくネガティブ選択、ならびにＣＤ６２ＬまたはＣＣＲ７などのセントラルメモリーＴ細胞に特徴的なマーカーに基づくポジティブ選択に供し、ここで、ポジティブおよびネガティブ選択はいずれかの順序で実施される。
【０１８９】
ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞は、細胞表面抗原を有する細胞集団を識別することにより、ナイーブ、セントラルメモリー、およびエフェクター細胞に選別される。ＣＤ４＋リンパ球は、標準的方法により得ることができる。一部の実施形態では、ナイーブＣＤ４＋Ｔリンパ球は、ＣＤ４５ＲＯ−、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。一部の実施形態では、セントラルメモリーＣＤ４＋細胞は、ＣＤ６２Ｌ＋およびＣＤ４５ＲＯ＋である。一部の実施形態では、エフェクターＣＤ４＋細胞は、ＣＤ６２Ｌ−およびＣＤ４５ＲＯ−である。
【０１９０】
一例では、ネガティブ選択によりＣＤ４＋細胞を濃縮するため、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体を含む。一部の実施形態では、抗体または結合パートナーは、ポジティブおよび／またはネガティブ選択での細胞分離を可能にするために、磁気ビーズまたは常磁性ビーズなどの固体支持体またはマトリクスに結合されている。例えば、一部の実施形態では、細胞および細胞集団は、免疫磁気（または親和性磁気）分離技法を使用して、分離または単離される（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、５８巻：Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、２巻：Ｃｅｌｌ  Ｂｅｈａｖｉｏｒ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ、１７〜２５頁、Ｓ．  Ａ．  ＢｒｏｏｋｓおよびＵ．  Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ編、（Ｃ）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪに概説されている）。
【０１９１】
一部の態様では、分離しようとする細胞の試料または組成物を、小さな磁化可能なまたは磁気応答性の材料、例えば磁気応答性粒子またはマイクロ粒子、例えば常磁性ビーズ（例えば、ＤｙｎａｌビーズまたはＭＡＣＳビーズなど）と共にインキュベートする。磁気応答性材料、例えば粒子は、一般的には、分離することが望ましい、例えば、ネガティブ選択またはポジティブ選択することが望ましい１つまたは複数の細胞または細胞の集団に存在する分子、例えば表面マーカーと特異的に結合する結合パートナー、例えば抗体に直接的にまたは間接的に付着されている。
【０１９２】
一部の実施形態では、磁気粒子またはビーズは、抗体または他の結合パートナーなどの特異的結合メンバーに結合されている磁気応答性材料を含む。磁気分離法で使用される多数の磁気応答性材料が周知である。好適な磁気粒子としては、Ｍｏｌｄａｙ、米国特許第４，４５２，７７３号および欧州特許明細書ＥＰ４５２３４２Ｂに記載されているものが挙げられる。これら文献は、参照により本明細書に組み込まれる。他の例は、Ｏｗｅｎの米国特許第４，７９５，６９８号およびＬｉｂｅｒｔｉらの米国特許第５，２００，０８４号に記載されているものなどのコロイドサイズの粒子である。
【０１９３】
インキュベーションは、一般的には、磁気粒子またはビーズに付着させた抗体もしくは結合パートナー、またはそのような抗体もしくは結合パートナーと特異的に結合する二次抗体もしくは他の試薬などの分子が、細胞表面分子が試料内の細胞上に存在する場合それと特異的に結合する条件下で実施される。
【０１９４】
一部の態様では、試料は、磁場に配置され、それに磁気応答性または磁化可能な粒子が付着した細胞が、磁石に引き付けられ、未標識細胞と分離されることになる。ポジティブ選択の場合、磁石に引き付けられた細胞を保持し、ネガティブ選択の場合は、引き付けられない細胞（未標識細胞）が保持される。一部の態様では、ポジティブおよびネガティブ選択の組み合わせが、同じ選択ステップ中に実施され、陽性および陰性画分が保持され、さらに処理されるか、またはさらなる分離ステップに供される。
【０１９５】
ある特定の実施形態では、磁気応答性粒子は、一次抗体もしくは他の結合パートナー、二次抗体、レクチン、酵素、またはストレプトアビジンでコーティングされている。ある特定の実施形態では、磁気粒子は、１つまたは複数のマーカーに特異的な一次抗体のコーティングを介して細胞に付着する。ある特定の実施形態では、細胞は、ビーズではなく、一次抗体または結合パートナーで標識され、その後、細胞タイプ特異的な二次抗体−または他の結合パートナー（例えばストレプトアビジン）でコーティングされた磁性粒子が添加される。ある特定の実施形態では、ストレプトアビジンでコーティングされた磁気粒子が、ビオチン化一次または二次抗体と共に使用される。
【０１９６】
一部の実施形態では、磁気応答性粒子は、その後インキュベートされ、培養され、および／または操作されることになる細胞に付着したままであり、一部の態様では、粒子は、患者に投与される細胞に付着したままである。一部の実施形態では、磁化可能または磁気応答性粒子は、細胞から取り除かれる。細胞から磁化可能粒子を取り除くための方法は公知であり、例えば、競合性非標識抗体、および切断可能なリンカーにコンジュゲートされている磁化可能粒子または抗体の使用が挙げられる。一部の実施形態では、磁化可能粒子は、生分解性である。
【０１９７】
一部の実施形態では、親和性に基づく選択は、磁気活性化細胞選別法（ＭＡＣＳ）による（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）。磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）システムは、それに付着されている磁化粒子を有する細胞の高純度選択が可能である。ある特定の実施形態では、ＭＡＣＳは、外部磁場を印加した後、非標的および標的種が逐次的に溶出されるモードで動作される。すなわち、磁化粒子に付着されている細胞が適所に保持され、未付着種が溶出される。次いで、この第１の溶出ステップが完了した後、磁場に捕捉され、溶出が妨げられた種が、それらを溶出および回収することができる幾つかの様式で遊離される。ある特定の実施形態では、非標的細胞が標識され、不均質な細胞集団から枯渇される。
【０１９８】
ある特定の実施形態では、単離または分離は、本方法の単離、細胞調製、分離、処理、インキュベーション、培養、および／または製剤化ステップの１つまたは複数を実施するシステム、デバイス、または装置を使用して実施される。一部の態様では、システムは、例えば、エラー、ユーザ取り扱い、および／または汚染を最小限にするために、閉鎖または無菌環境下で使用され、これらステップの各々が実施される。一例では、システムは、国際特許出願公開番号ＷＯ２００９／０７２００３またはＵＳ２０１１０００３３８０Ａ１に記載のようなシステムである。
【０１９９】
一部の実施形態では、システムまたは装置は、単離、処理、操作、および製剤化ステップの１つまたは複数、例えばすべてを、統合型もしくは自己完結型システムで、および／または自動化もしくはプログラム可能な様式で実施する。一部の態様では、システムまたは装置は、システムまたは装置と通信し、ユーザが、処理、単離、操作、および製剤化ステップの結果をプログラム、制御、評価すること、ならびに／またはそれらステップの種々の局面を調整することを可能にする、コンピューターおよび／またはコンピュータプログラムを含む。
【０２００】
一部の態様では、分離および／または他のステップは、例えば、閉鎖および無菌システム内にて臨床規模レベルで細胞を自動分離するための、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳシステム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｉｃ）を使用して実施される。構成要素としては、一体型マイクロコンピュータ、磁気分離ユニット、蠕動ポンプ、および種々のピンチバルブを挙げることができる。一部の態様では、一体型コンピューターは、機器のすべての構成要素を制御し、システムに指図して、反復手順を標準化された順序で実行させる。一部の態様では、磁気分離ユニットは、移動可能な永久磁石および選択カラムの保持具を含む。蠕動ポンプは、管状材料セットの全体にわたりピンチバルブと一緒に流量を制御することによって、システムを通しての緩衝液の制御された流れおよび細胞の連続的な懸濁を確実にする。
【０２０１】
一部の態様では、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳシステムには、無菌、非発熱性溶液中で供給される抗体カップリング磁化可能粒子が使用される。一部の実施形態では、細胞を磁気粒子で標識した後、細胞を洗浄して過剰な粒子を除去する。その後、細胞調製バッグを管状材料セットに接続し、管状材料セットは、次いで緩衝液を含有するバッグおよび細胞収集バッグに接続される。管状材料セットは、プレカラムおよび分離カラムを含む組立済み無菌管状材料で構成されており、一回のみ使用される。分離プログラムの開始後、システムは、自動的に細胞試料を分離カラムに適用する。標識細胞はカラム内に保持されるが、未標識細胞は、一連の洗浄ステップにより除去される。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法で使用される細胞集団は、未標識であり、カラムに保持されない。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法で使用される細胞集団は、標識されており、カラムに保持される。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法で使用される細胞集団は、磁場の除去後にカラムから溶出され、細胞収集バッグ内に収集される。
【０２０２】
ある特定の実施形態では、分離および／または他のステップは、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  Ｐｒｏｄｉｇｙシステム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して実施される。一部の態様では、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  Ｐｒｏｄｉｇｙシステムには、遠心分離による細胞の自動洗浄および分画を可能にする細胞処理ユニットが装備されている。また、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  Ｐｒｏｄｉｇｙシステムには、供給源細胞産物の肉眼で見える層を見分けることにより最適な細胞分画エンドポイントを決定するためのボード上のカメラおよび画像認識ソフトウェアが含まれていてもよい。例えば、末梢血は、赤血球、白血球細胞、および血漿層（ｐｌａｓｍａ  ｌａｙｅｒ）へと自動的に分離される。また、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  Ｐｒｏｄｉｇｙシステムは、例えば、細胞分化および拡大増殖、抗原負荷、ならびに長期細胞培養などの細胞培養プロトコールが達成される一体型細胞培養チャンバーを含んでいてもよい。入力ポートを介して培地の無菌除去および補給を可能にすることができ、一体型顕微鏡を使用して細胞をモニターすることができる。例えば、Ｋｌｅｂａｎｏｆｆら（２０１２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ３５巻（９号）：６５１〜６６０頁、Ｔｅｒａｋｕｒａら（２０１２）Ｂｌｏｏｄ．  １巻：７２〜８２頁、およびＷａｎｇら（２０１２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ３５巻（９号）：６８９〜７０１頁を参照されたい。
【０２０３】
一部の実施形態では、本明細書に記載の細胞集団は、複数の細胞表面マーカーについて染色されている細胞が流体の流れで運搬されるフローサイトメトリーにより、収集および濃縮（または枯渇）される。一部の実施形態では、本明細書に記載の細胞集団は、調製規模の（ＦＡＣＳ）選別法により、収集および濃縮（または枯渇）される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の細胞集団は、ＦＡＣＳに基づく検出システムと組み合わせて微小電気機械システム（ＭＥＭＳ）チップを使用することにより、収集および濃縮（または枯渇）される（例えば、ＷＯ２０１０／０３３１４０号、Ｃｈｏら（２０１０）Ｌａｂ  Ｃｈｉｐ  １０巻、１５６７〜１５７３頁；およびＧｏｄｉｎら（２００８）Ｊ  Ｂｉｏｐｈｏｔｏｎ．  １巻（５号）：３５５〜３７６頁を参照）。いずれの場合でも、細胞を、複数のマーカーで標識して、良好に画定された高純度のＴ細胞サブセットの単離を可能にすることができる。
【０２０４】
一部の実施形態では、抗体または結合パートナーを、１つまたは複数の検出可能なマーカーで標識して、ポジティブおよび／またはネガティブ選択のための分離を容易にする。例えば、分離は、蛍光標識抗体への結合に基づいていてもよい。一部の例では、１つまたは複数の細胞表面マーカーに特異的な抗体または他の結合パートナーの結合に基づく細胞の分離は、調製規模（ＦＡＣＳ）を含む蛍光活性化細胞選別法（ＦＡＣＳ）および／または例えばフローサイトメトリー検出システムと組み合わせた微小電気機械システム（ＭＥＭＳ）チップなどにより、流体の流れ中で実施される。そのような方法により、複数のマーカーに基づくポジティブおよびネガティブ選択が同時に可能になる。
【０２０５】
一部の実施形態では、調製方法は、単離、インキュベーション、および／または操作の前もしくは後のいずれかで細胞を凍結、例えば凍結保存するステップを含む。一部の実施形態では、凍結およびその後の解凍ステップにより、細胞集団中の顆粒球およびある程度までは単球が除去される。一部の実施形態では、例えば、血漿および血小板を除去するための洗浄ステップ後に、細胞を凍結用溶液に懸濁する。一部の態様では、様々な公知の凍結用溶液およびパラメーターのいずれかを使用することができる。一例は、２０％ＤＭＳＯおよび８％ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含有するＰＢＳ、または他の好適な細胞凍結用培地を使用することを含む。その後、これを、ＤＭＳＯおよびＨＳＡの終濃度がそれぞれ１０％および４％になるように培地で１：１希釈する。その後、細胞を、一般的には、毎分１℃の速度で−８０℃に凍結し、液体窒素貯蔵タンクの気相に保管する。
【０２０６】
一部の実施形態では、細胞は、遺伝子操作の前にまたは遺伝子操作と関連してインキュベートおよび／または培養される。インキュベーションステップは、培養（ｃｕｌｔｕｒｅ）、培養（ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ）、刺激、活性化、および／または増殖を含んでいてもよい。インキュベーションおよび／または操作は、ユニット、チャンバー、ウェル、カラム、チューブ、管状材料セット、バルブ、バイアル、培養皿、バッグ、または培養もしくは細胞培養用の他の容器などの培養容器中で実施してもよい。一部の実施形態では、組成物または細胞は、刺激条件または刺激剤の存在下でインキュベートされる。そのような条件としては、集団中の細胞の増殖、拡大増殖、活性化、および／または生存を誘導するように、抗原曝露を模倣するように、および／または組換え抗原受容体の導入などの遺伝子操作のために細胞を抗原刺激するように設計されているものが挙げられる。
【０２０７】
条件としては、特定の培地、温度、酸素含有量、二酸化炭素含量、時間、作用物質、例えば、栄養素、アミノ酸、抗生物質、イオン、ならびに／またはサイトカイン、ケモカイン、抗原、結合パートナー、融合タンパク質、組換え可溶性受容体、および細胞を活性化するように設計された任意の他の作用物質などの刺激因子の１つまたは複数を挙げることができる。
【０２０８】
一部の実施形態では、刺激条件または刺激剤としては、ＴＣＲ複合体の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することが可能な１つまたは複数の作用物質、例えばリガンドが挙げられる。一部の態様では、作用物質は、Ｔ細胞のＴＣＲ／ＣＤ３細胞内シグナル伝達カスケードをオンにするかまたは開始させる。そのような作用物質としては、例えばビーズなどの固体支持体に結合されている、ＴＣＲ要素および／もしくは共刺激受容体に特異的なもの、例えば抗ＣＤ３、抗ＣＤ２８などの抗体、ならびに／または１つまたは複数のサイトカインを挙げることができる。任意選択で、拡大増殖方法は、抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８抗体を、培養培地に添加するステップをさらに含んでいてもよい（例えば、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍｌの濃度で）。一部の実施形態では、刺激剤としては、ＩＬ−２および／またはＩＬ−１５、例えば、少なくとも約１０単位／ｍＬの濃度のＩＬ−２が挙げられる。
【０２０９】
一部の態様では、インキュベーションは、Ｒｉｄｄｅｌｌらによる米国特許第６，０４０，１  ７７号、Ｋｌｅｂａｎｏｆｆら、（２０１２）    Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ３５（９）：  ６５１−６６０、Ｔｅｒａｋｕｒａら、（２０１２）  Ｂｌｏｏｄ．１：７２−８２、および／またはＷａｎｇら、（２０１２）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ３５（９）：６８９−７０１に記載されるものなどの技法に従って実施することができる。
【０２１０】
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、非分裂性末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）などの培養開始組成物フィーダー細胞に添加し（例えば、得られた細胞集団が、拡大増殖させようとする開始集団中の各Ｔリンパ球毎に少なくとも約５、１０、２０、もしくは４０個、またはそれよりも多くのＰＢＭＣフィーダー細胞を含むように）、培養物をインキュベートすること（例えば、Ｔ細胞の数を拡大増殖させるのに十分な時間にわたって）により拡大増殖される。一部の態様では、非分裂性フィーダー細胞は、ガンマ線照射ＰＢＭＣフィーダー細胞を含んでいてもよい。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、細胞分裂を防止するために、約３０００〜３６００ラドの範囲のガンマ線で照射されている。一部の態様では、フィーダー細胞は、Ｔ細胞の集団を添加する前に、培養培地に添加される。
【０２１１】
一部の実施形態では、刺激条件としては、ヒトＴリンパ球の成長に好適な温度、例えば、少なくとも摂氏約２５度、一般的には少なくとも約３０度、および一般的には摂氏約３７度が挙げられる。任意選択で、インキュベーションは、非分裂性ＥＢＶ形質転換リンパ芽球様細胞（ＬＣＬ）をフィーダー細胞として添加することをさらに含んでいてもよい。ＬＣＬは、約６０００〜１０，０００ラドの範囲のガンマ線で照射されていてもよい。一部の態様では、ＬＣＬフィーダー細胞は、ＬＣＬフィーダー細胞の初期Ｔリンパ球に対する比が少なくとも約１０：１であるなど、任意の好適な量で提供される。
【０２１２】
実施形態では、抗原特異的ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞などの抗原特異的Ｔ細胞は、ナイーブまたは抗原特異的Ｔリンパ球を抗原で刺激することにより得られる。例えば、サイトメガロウイルス抗原に対する抗原特異的Ｔ細胞株またはクローンは、感染対象からＴ細胞を単離し、細胞を同じ抗原でｉｎ  ｖｉｔｒｏで刺激することにより生成することができる。
【０２１３】
組成物および製剤
一部の実施形態では、組換え抗原受容体、例えばＣＡＲまたはＴＣＲで操作された細胞を含む細胞の用量は、医薬組成物または製剤などの組成物または製剤として提供される。そのような組成物は、疾患、状態、および障害の予防もしくは治療などに、または検出、診断、および予後の方法などに、提供される方法に従って使用することができる。
【０２１４】
用語「医薬製剤」は、そこに含有されている活性成分の生物学的活性が有効であることを可能にするような形態であり、製剤を投与することになる対象に対して許容できないほど毒性である追加要素を含有さない調製物を指す。
【０２１５】
「薬学的に許容される担体」は、対象に対して非毒性である、活性成分以外の医薬製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体としては、これらに限定されないが、緩衝液、賦形剤、安定化剤、または保存剤が挙げられる。
【０２１６】
一部の態様では、担体の選択は、部分的には、特定の細胞もしくは薬剤により、および／または投与方法より決定される。したがって、様々な好適な製剤が存在する。例えば、医薬組成物は、保存剤を含有していてもよい。好適な保存剤としては、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸ナトリウム、および塩化ベンザルコニウムを挙げることができる。一部の態様では、２つまたはそれよりも多くの保存剤の混合物が使用される。保存剤またはその混合物は、典型的には、組成物全体の約０．０００１重量％〜約２重量％の量で存在する。担体は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｏｓｏｌ，  Ａ．編（１９８０）に記載されている。薬学的に許容される担体は、一般的に、用いられる投与量および濃度ではレシピエントに非毒性であり、これらに限定されないが、以下のものが挙げられる：リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；および／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤。
【０２１７】
一部の態様では、組成物には緩衝化剤が含まれている。好適な緩衝化剤としては、例えば、クエン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸、リン酸カリウム、および種々の他の酸および塩が挙げられる。一部の態様では、２つまたはそれよりも多くの緩衝化剤の混合物が使用される。緩衝化剤またはその混合物は、典型的には、組成物全体の約０．００１重量％〜約４重量％の量で存在する。投与可能な医薬組成物を調製するための方法は公知である。例示的な方法は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、第２１版（２００５年５月１日）に、より詳細に記載されている。
【０２１８】
また、製剤または組成物は、細胞または薬剤で予防または治療される特定の適応症、疾患、または状態に有用であり、それぞれの活性が互いに悪影響を及ぼさない１つよりも多くの活性成分を含有することができる。そのような活性成分は、意図されている目的に有効な量の組み合わせで存在することが好適である。したがって、一部の実施形態では、医薬組成物は、化学療法剤などの他の薬学的に活性な薬剤または薬物、例えば、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メトトレキセート、パクリタキセル、リツキシマブ、ビンブラスチン、ビンクリスチンなどをさらに含む。一部の実施形態では、薬剤または細胞は、塩、例えば薬学的に許容される塩の形態で投与される。好適な薬学的に許容される酸付加塩としては、塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸、および硫酸などの鉱酸に由来するもの、ならびに酒石酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、およびアリールスルホン酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸などの有機酸に由来するものが挙げられる。
【０２１９】
活性成分は、マイクロカプセル中、コロイド薬物送達系中（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）、またはマクロエマルジョン中に捕捉されていてもよい。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、シクロデキストリン包接化合物などの包接化合物またはリポソームとして製剤化される。リポソームは、薬剤または宿主細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）を特定の組織へと標的化する役目を果たすことができる。リポソームの調製には、例えば、Ｓｚｏｋａら、Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｂｉｏｅｎｇ．、９巻：４６７頁（１９８０）および米国特許第４，２３５，８７１号、第４，５０１，７２８号、第４，８３７，０２８号、および第５，０１９，３６９号に記載のものなど、多数の方法が利用可能である。
【０２２０】
一部の態様では、医薬組成物は、組成物の送達が、治療される部位の感作前に、および感作を引き起こすのに十分な時間で生じるように、時限放出（ｔｉｍｅ−ｒｅｌｅａｓｅｄ）、遅延放出、および持続放出送達系を用いることができる。多数のタイプの放出送達系が利用可能であり、公知である。そのような系では、組成物の反復投与を回避することができ、それにより対象および医師の利便性が増加する。
【０２２１】
一部の実施形態では、医薬組成物は、治療有効量または予防有効量などの、疾患もしくは状態の治療あるいは予防に有効な量の薬剤または細胞を含有する。一部の実施形態では、治療有効性または予防有効性は、治療される対象を定期的に評価することによりモニターされる。数日間またはそれよりも長期間にわたって反復投与する場合、治療は、状態に応じて、疾患症状の所望の抑制が生じるまで反復される。しかしながら、他の投薬レジメンが有用である場合があり、決定することができる。所望の投与量は、組成物の単回ボーラス投与により、組成物の複数ボーラス投与により、または組成物の連続注入投与により送達することができる。
【０２２２】
薬剤または細胞は、任意の好適な手段により、例えば、ボーラス注入により、注射により、例えば、静脈内もしくは皮下注射、眼内注射、眼周囲注射、網膜下注射、硝子体内注射、経中隔注射、強膜下注射、脈絡膜内注射、前房内注射、結膜下注射、結膜下注射、テノン下注射、眼球後注射、眼球周囲注射、または後側強膜近傍送達により投与することができる。一部の実施形態では、それらは、非経口、肺内、および鼻腔内に、局所治療が所望の場合は、病巣内投与により投与される。非経口注入としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が挙げられる。一部の実施形態では、所与の用量が、細胞または薬剤の単回ボーラス投与により投与される。一部の実施形態では、所与の用量が、例えば３日間以下の期間にわたる細胞または薬剤の複数ボーラス投与により、または細胞または薬剤の連続注入投与により投与される。
【０２２３】
疾患を予防または治療する場合、適切な投与量は、治療される疾患のタイプ、１つまたは複数の薬剤のタイプ、細胞または組換え受容体のタイプ、疾患の重症度および経過、薬剤または細胞が予防目的で投与されるかまたは治療目的で投与されるか、以前の療法、対象の臨床履歴および薬剤または細胞への応答、ならびに主治医の判断に依存する場合がある。一部の実施形態では、組成物は、一回でまたは一連の治療にわたって、対象に適切に投与される。
【０２２４】
細胞または薬剤は、標準的な投与技法、製剤、および／またはデバイスを使用して投与することができる。組成物の保管および投与には、シリンジおよびバイアルなどの製剤およびデバイスが提供される。細胞に関して、投与は、自己由来であってもよく、または異種性であってもよい。例えば、免疫応答細胞または前駆細胞を、１つの対象から得、同じ対象または異なる適合する対象に投与してもよい。末梢血に由来する免疫応答細胞またはそれらの後代（例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ由来）は、カテーテル投与を含む局所注射、全身注射、局所注射、静脈内注射、または非経口投与により投与することができる。療法組成物（例えば、神経毒性の症状を治療または改善する遺伝子修飾免疫応答細胞または薬剤を含有する医薬組成物）を投与する場合、療法組成物は、一般的には、単位投与量の注射可能な形態（溶液、懸濁物、エマルジョン）に製剤化されることになる。
【０２２５】
製剤としては、経口、静脈内、腹腔内、皮下、肺、経皮、筋肉内、鼻腔内、頬内、舌下、または坐剤投与用のものが挙げられる。一部の実施形態では、薬剤または細胞集団は、非経口投与される。用語「非経口」は、本明細書で使用される場合、静脈内、筋肉内、皮下、直腸、膣、および腹腔内投与を含む。一部の実施形態では、薬剤または細胞集団は、静脈内、腹腔内、または皮下注射による末梢性全身送達を使用して、対象に投与される。
【０２２６】
一部の実施形態における組成物は、無菌液体調製物、例えば等張水溶液、懸濁液、乳濁液、分散液、または粘性組成物として提供され、これらは、一部の態様では、選択されたｐＨに緩衝され得る。液体調製物は、普通は、ゲル、他の粘性組成物、および固体組成物よりも容易に調製される。さらに、液体組成物は、特に注射によって投与するのに、いくらかより好都合である。他方では、粘性組成物は、特定の組織とより長期間接触させるのに適した粘度範囲内で製剤化され得る。液体または粘性組成物は、担体を含むことができ、この担体は、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）および適切なそれらの混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。
【０２２７】
注射可能な滅菌溶液は、例えば滅菌水、生理食塩水、グルコース、デキストロースなどの、適切な担体、賦形剤、または添加剤との混合で、溶媒に薬剤または細胞を組み込むことによって調製され得る。また組成物は、凍結乾燥させることができる。組成物は、所望の投与経路および調製物に応じて、湿潤剤、分散化剤、または乳化剤（例えば、メチルセルロース）、ｐＨ緩衝剤、ゲル化添加物質または増粘添加物質、保存剤、香味剤、着色剤などの補助物質を含有し得る。適切な調製物を調製するために、標準書を一部の態様では参考にすることができる。
【０２２８】
抗菌性保存剤、抗酸化剤、キレート剤、および緩衝液を含めた、組成物の安定性および無菌性を増強する様々な添加物質を添加することができる。微生物作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等によって確保され得る。注射可能な医薬形態の持続的吸収は、吸収遅延剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム（ａｌｕｍｉｎｕｒｎ）およびゼラチンを使用することによってもたらされ得る。
【０２２９】
持続放出調製物を調製することができる。持続放出調製物の好適な例としては、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが挙げられる。こうしたマトリクスは、有形物品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形態である。
【０２３０】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、一般的に無菌性である。無菌性は、例えば、滅菌濾過膜による濾過により、容易に達成することができる。
【０２３１】
キット
また、記載されている製剤または組成物（個々の用量またはその部分の投与に十分な数もしくは濃度の細胞を有する、バッグまたはバイアルなどの１つまたは複数の容器中に存在していてもよい）のいずれかなど、提供されている実施形態のいずれかによる１つまたは複数の細胞用量、ならびに本明細書で提供される方法に従って投与するための指示および／または指示が含まれている包装材料もしくは文献を含有する、キットなどの製造品が提供される。一部の態様では、指示には、記載されている実施形態のいずれかに関する警告または禁忌が示されている。
【０２３２】
定義
用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、交換可能に使用され、アミノ酸残基のポリマーを指し、最短の長さに限定されない。提供されている受容体および他のポリペプチド、例えばリンカーまたはペプチドを含むポリペプチドは、天然および／または非天然アミノ酸残基を含むアミノ酸残基を含んでいてもよい。また、この用語は、ポリペプチドの発現後修飾、例えばグリコシル化、シアリル化、アセチル化、およびリン酸化を含む。一部の態様では、ポリペプチドは、タンパク質が所望の活性を維持する限り、ネイティブまたは天然配列に対する修飾を含有していてもよい。こうした修飾は、部位特異的変異誘発によるなど意図的であってもよく、またはタンパク質を産生する宿主の変異もしくはＰＣＲ増幅によるエラーなどによる偶発的なものであってもよい。
【０２３３】
本明細書で使用される場合、「対象」は、ヒトまたは他の動物などの哺乳動物であり、典型的にはヒトである。一部の実施形態では、１つまたは複数の薬剤、細胞、細胞集団、または組成物が投与される対象、例えば患者は、哺乳動物、典型的にはヒトなどの霊長類である。一部の実施形態では、霊長類は、サルまたは類人猿である。対象は、雄であってもよくまた雌であってもよく、幼仔（ｉｎｆａｎｔ）、若年、青年、成体、および老年の対象を含む任意の好適な年齢であってもよい。一部の実施形態では、対象は、げっ歯動物などの非霊長類哺乳動物である。
【０２３４】
本明細書で使用される場合、「治療」（および「治療する」または「治療すること」などのその文法的バリエーション）は、疾患もしくは状態もしくは障害、あるいはそれらに伴う症状、有害作用、もしくは転帰または表現型の、完全なまたは部分的な改善または低減を指す。望ましい治療効果としては、これらに限定されないが、疾患の発病または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的帰結の減少、転移の予防、疾患進行速度の低下、疾患状態の改善または軽減、および寛解または予後の改善が挙げられる。こうした用語は、疾患の完全な治癒、またはすべての症状もしくは転帰に対するあらゆる症状もしくは効果の完全な除去を示唆するものではない。
【０２３５】
本明細書で使用される場合、「疾患の発症を遅延させる」は、疾患（例えば、がん）の発症を、延期させる（ｄｅｆｅｒ）、妨害する、緩徐化する、停滞させる、安定化させる、抑制する、および／または延期させる（ｐｏｓｔｐｏｎｅ）ことを意味する。この遅延は、治療されている疾患および／または個体の履歴に応じて、様々な期間であってもよい。当業者であれば明らかなように、十分なまたは顕著な遅延は、個体が疾患を発症しないという点で、事実上、予防を包含する場合がある。例えば、転移の発症などの後期がんを遅延させることができる。
【０２３６】
「予防すること」は、本明細書で使用される場合、疾患に対する素因を有し得るが、疾患を有するとまだ診断されていない対象における疾患の発症または再発に関して予防を提供することを含む。一部の実施形態では、提供されている細胞および組成物は、疾患の発症を遅延させるか、または疾患の進行を緩徐化させるために使用される。
【０２３７】
本明細書で使用される場合、機能または活性を「抑制する」とは、目的の条件またはパラメーターを除いてそれ以外は同じである条件と比較して、またはその代わりに別の条件と比較して、機能または活性を低減させることである。例えば、腫瘍成長を抑制する細胞は、その細胞の非存在下での腫瘍成長速度と比較して、腫瘍成長速度を低減させる。
【０２３８】
薬剤、例えば医薬製剤、細胞、または組成物の「有効量」は、投与の状況では、治療または予防結果など、所望の結果を達成するために必要な投与量／量でおよび期間にわたって有効な量を指す。
【０２３９】
薬剤、例えば医薬製剤または細胞の「治療有効量」は、例えば、疾患、状態、もしくは障害の治療について所望の治療結果および／または治療の薬物動態学的もしくは薬力学的効果を達成するために、必要な投与量で、かつ期間にわたって有効な量を指す。治療有効量は、対象の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに投与される細胞集団などの要因に応じて様々であってもよい。一部の実施形態では、提供される方法は、有効量、例えば治療有効量の細胞および／または組成物を投与することを含む。
【０２４０】
「予防有効量」は、所望の予防結果を達成するために必要な投与量で、かつ期間にわたって有効な量を指す。必ずという訳ではないが典型的には、対象には予防用量が疾患の初期段階でまたはその前に使用されるため、予防有効量は、治療有効量未満であろう。腫瘍量がより低い状況では、一部の態様における予防有効量は、治療有効量よりも高いだろう。
【０２４１】
用語「約」は、本明細書で使用される場合、当技術分野の当業者には直ちに公知である、それぞれの値の通常の誤差範囲を指す。「約」に関して、本明細書中の値またはパラメーターは、その値またはパラメーターそれ自体に関する実施形態を含む（および記載する）。例えば、「約」は、当技術分野での実施によると、３標準偏差以内または３標準偏差超を意味する場合がある。加えて、「約」は、所与の値の最大２０％、好ましくは最大１０％、より好ましくは最大５％、およびさらにより好ましくは最大１％の範囲を意味する場合がある。あるいは、特に生物学的な系またはプロセスに関する場合、この用語は、値の１桁以内、好ましくは５倍以内、およびより好ましくは２倍以内を意味する場合がある。
【０２４２】
本明細書で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、状況が明白にそうではないと示さない限り、複数の参照対象を含む。例えば、「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」は、「少なくとも１つ」または「１つまたは複数」を意味する。
【０２４３】
本開示の全体にわたって、特許請求された主題の種々の態様は、範囲形式で示されている。範囲形式での記載は、便宜上および簡潔さのために過ぎず、特許請求された主題の範囲に対する硬直的な限定として解釈されるべきでないことが理解されるべきである。したがって、範囲の記載は、考え得るすべての部分範囲およびその範囲内の個々の数値を具体的に開示しているとみなされるべきである。例えば、値の範囲が提供されている場合、その範囲の上限と下限との間の各介在値、および任意の他の表示値またはその表示範囲内の介在値は、特許請求された主題内に包含されることが理解される。そうしたより小さな範囲の上限および下限は、そうしたより小さな範囲に独立して含まれていてもよく、それらも特許請求された主題内に包含されるが、但し表示範囲の任意の限界値が特に除外される場合がある。表示範囲が限界値の一方または両方を含む場合、それら含まれる限界値のいずれかまたは両方を除く範囲も、特許請求された主題に含まれる。これは、範囲の幅にかわらず該当する。
【０２４４】
本明細書で使用される場合、組成物は、細胞を含む、２つまたはそれよりも多くの産物、物質、または化合物の任意の混合物を指す。組成物は、溶液、懸濁物、液体、粉末、ペースト、水性、非水性、またはそれらの任意の組み合わせであってもよい。
【０２４５】
本明細書で使用される場合、１つまたは複数の特定の細胞タイプまたは細胞集団に関する「濃縮すること」は、細胞タイプまたは集団の数または百分率を、例えば、組成物中のもしくは組成物の容積中の細胞の総数と比較して、または他の細胞タイプと比べて、集団または細胞により発現されるマーカーに基づくポジティブ選択、または枯渇させようとする細胞集団または細胞に存在しないマーカーに基づくネガティブ選択などにより、増加させることを指す。この用語は、他の細胞、細胞タイプ、または集団が組成物から完全に除去されていることを必要とせず、そのようにして濃縮された細胞が、濃縮された組成物中に１００％にさらに近い値で存在することを必要としない。
【０２４６】
本明細書で使用される場合、細胞または細胞の集団が、特定のマーカーに「陽性」であるという記述は、細胞上にまたは細胞に、特定のマーカー、典型的には表面マーカーが検出可能に存在することを指す。表面マーカーが参照される場合、この用語は、例えばマーカーと特異的に結合する抗体で染色して、前記抗体を検出することによりフローサイトメトリーで検出されるような表面発現の存在を指し、ここで、染色は、フローサイトメトリーにより、他の点では同一の条件下でのアイソタイプ一致対照または蛍光マイナス１（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｍｉｎｕｓ  ｏｎｅ）（ＦＭＯ）ゲーティング対照を用いた同じ手順で実施して検出される染色よりも実質的に高いレベルで、および／もしくはマーカーに対して陽性であることがわかっている細胞のレベルと実質的に同様のレベルで、ならびに／またはマーカーに対して陰性であることがわかっている細胞のレベルよりも実質的に高いレベルで検出可能である。
【０２４７】
本明細書で使用される場合、細胞または細胞の集団が、特定のマーカーに「陰性」であるという記述は、細胞上にまたは細胞に、特定のマーカー、典型的には表面マーカーの実質的に検出可能な存在が存在しないことを指す。表面マーカーが参照される場合、この用語は、例えばマーカーと特異的に結合する抗体で染色して、前記抗体を検出することによりフローサイトメトリーで検出されるような表面発現の非存在を指し、染色は、フローサイトメトリーにより、他の点では同一の条件下でのアイソタイプ一致対照または蛍光マイナス１（ＦＭＯ）ゲーティング対照を用いた同じ手順で実施して検出される染色よりも実質的に高いレベルで、および／もしくはマーカーに対して陽性であることがわかっている細胞のレベルよりも実質的に低いレベルで、ならびに／またはマーカーに対して陰性であることがわかっている細胞のレベルと比較して実質的に同様のレベルでは検出されない。
【０２４８】
用語「ベクター」は、本明細書で使用される場合、それに連結されている別の核酸を増幅することが可能な核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、ならびに導入されている宿主細胞のゲノムに組み込まれるベクターを含む。あるベクターは、ベクターに作動可能に連結した核酸の発現を指図することが可能である。そのようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と呼ばれる。
【０２４９】
別様に定義されていない限り、本明細書で使用される技術用語、表記法、ならびに他の技術的および科学的な用語または専門用語はすべて、特許請求された主題が関する当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有することが意図されている。一部の場合では、一般的に了解されている意味を有する用語が、明瞭性のためにおよび／または参照を容易にするために本明細書で定義されている。そのような定義が本明細書に含まれていることは、当技術分野で一般的に了解されているものに対して実質的な違いを表わすためのものであるとは必ずしも解釈されないものとする。
【０２５０】
本出願で参照されている、特許文献、科学論文、およびデータベースを含む刊行物はすべて、各々個々の刊行物が参照によりあたかも個々に組み込まれているのと同程度に、それらの全体が参照によりあらゆる目的のために組み込まれる。本明細書中で示されている定義が、参照により本明細書に組み込まれている特許、出願、出願公開、および他の刊行物に示されている定義に反するかまたはそうでなければ矛盾する場合、本明細書で示されている定義が、参照により本明細書に組み込まれている定義に優先する。
【０２５１】
本明細書で使用されているセクションの題名は、文章構成のためのものに過ぎず、記載されている主題を限定するものと解釈されるべきではない。
【実施例】
【０２５２】
以下の実施例は、説明のために含まれているに過ぎず、本発明の範囲を限定することは意図されていない。
【０２５３】
本発明は、例えば本発明の種々の態様を例証するために提供されている特定の開示されている実施形態の範囲に限定されることは意図されていない。記載されている組成物および方法に対する種々の操作が、本明細書の記載および教示から明白になるだろう。そのような変異は、本開示の真の範囲および趣旨から逸脱せずに実践することができ、本開示の範囲以内に入ることが意図されている。
【０２５４】
（実施例１：再発難治性Ｂ細胞ＡＬＬを有する成人患者におけるＣＤ１９標的化ＣＡＲ修飾Ｔ細胞の投与）
再発難治性ＣＤ１９＋Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）を有する成人患者を、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）発現Ｔ細胞で治療した。手短かに言えば、白血球アフェレーシスを実行し、患者に由来する末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）試料からＴ細胞を濃縮した。これらの細胞を、ＣＤ１９  ＣＡＲ発現カセット（１９−２８ｚ；抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ２８の細胞外、膜貫通、および細胞質部分、ならびにＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む）をコードするレトロウイルスベクターで形質導入した。治療に選択した患者は、少なくとも１８歳であり、再発難治性ＣＤ１９＋Ｂ−ＡＬＬを罹患していた（同種異系造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）後の再発、および／または孤立性髄外疾患が許容された）。個体は、任意の活性中枢神経系（ＣＮＳ）疾患を罹患し、免疫抑制剤を必要とする移植片対宿主病または重大な心臓疾患（例えば、６カ月以内に心筋梗塞を罹患し、または４０％よりも高い駆出率を有する患者）を示した場合、除外した。ＣＡＲ−Ｔ細胞を注入する（概して、１ｋｇ当たり１×１０６または３×１０６個のＣＡＲ発現細胞の少なくとも１用量が投与された）２日前に、前処置化学療法を施した。疾患を、注入後２８〜３５日目に評価した。一部の場合では、対象は、注入後のおよそ１４日目に第２の用量を受けた。
【０２５５】
治療した５１人の患者のうち５０人が、１カ月よりも長期の追跡調査での応答評価について評価可能だった（毒性については、５１人すべてが評価可能だった）。各患者の疾患負荷は、Ｔ細胞注入前に評価した。３１人の患者は、形態学的疾患（骨髄に少なくとも５％の芽球）であり、一方で２０人の患者は、微小病変（骨髄に５％未満の芽球）である。１カ月よりも長期の追跡調査での応答評価が評価可能だった５０人の患者中、２９人（５８％）が、６カ月間またはそれよりも長期の追跡評価を受け、１７人（３４％）が、１年間またはそれよりも長期の追跡評価を受けた。これら対象のベースライン患者特徴は、表１に示されている。
【表１】
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【０２５６】
形態学的疾患コホートのほとんど５０パーセント（４８％）は、４つまたはそれよりも多くの以前の療法を受けており、３６％は、ブリナツモマブ（ＣＤ１９標的化療法）による以前の治療を受けていた。
【０２５７】
評価可能な患者の完全寛解（ＣＲ）率、微小残存病変（ＭＲＤ）陰性（ＭＲＤ−）率、およびＣＲまでの平均時間は、表２に示されている（ベースライン疾患負荷による個々のコホート（形態学的疾患（３０例）および微小病変（２０例））を含む）。種々の他の部分群によるＣＲ率は、図１に示されている。
【表２】
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【０２５８】
１９−２８ｚ  ＣＡＲ  Ｔ細胞注入治療の後、ＣＲを達成した４１人の患者のうち１６人（３９％）が、ＣＲ達成後に同種異系ＨＳＣＴに進んだ。これら１６人の患者のうち９人（３９％）は、ベースラインにて形態学的疾患を有し、７人は、ベースラインにて微小病変を有していた。同種異系ＨＳＣＴに進んだ１６人の患者のうち、１４人は、以前にＨＳＣＴを受けておらず、２人は、以前にＨＳＣＴを受けていた。
【０２５９】
３３人のＭＲＤ陰性ＣＲ患者のうち、１５人（４５％）は再発したが、９人（２１％）は、１年よりも長い期間にわたって無疾患を維持した。再発した患者の４人（２７％）の疾患は、ＣＤ１９陰性またはＣＤ１９検出不能であると決定された。
【０２６０】
ベースライン疾患負荷により群分けしたすべての患者の全生存は、図２に反映されている。ベースライン疾患負荷により群分けしたＭＲＤ−ＣＲ患者の全生存は、図３に反映されている。ベースライン疾患負荷およびＣＡＲ−Ｔ  ＨＳＣＴ後により群分けした患者の全生存は、図４に示されている。
【０２６１】
末梢血（ＰＢ）および骨髄（ＢＭ）中のＣＡＲ操作Ｔ細胞を、ｑＰＣＲおよびフローサイトメトリーで測定した。最大のＴ細胞拡大増殖は、注入の７〜１４日後に検出され、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の発症と相関していた。Ｔ細胞は、ｑＰＣＲで測定したところ、Ｔ細胞注入の１〜６カ月後まで存続した。
【０２６２】
観察された有害事象には、ＣＲＳ（例えば、発熱、低血圧、および呼吸機能不全）、神経学的変化（例えば、せん妄、全脳症、失語症、発作および発作様活動）が含まれていた。大多数の患者では、神経学的症状は可逆的だった。神経毒性は、ＣＲＳと無関係に生じる場合がある。この実施例にてＣＲＳに使用された段階分けシステムは、表３に要約されている。Ｌｅｅら、Ｂｌｏｏｄ．  ２０１４；１２４巻（２号）：１８８〜９５頁に記載のシステムおよび／または表３Ａに要約されるようなシステムなどの、他の段階分けシステムが公知であり、それらを使用することができる。ベースライン疾患負荷により群分けした患者に観察されたＣＲＳおよび神経学的毒性は、表４に示されている。この研究で毒性を治療するためのトシリズマブおよび／またはステロイドの使用は、無再発生存（ＲＦＳ）に影響を及ぼさなかった。
【表３】
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【表３Ａ】
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【表４】
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【０２６３】
この研究では、評価した患者の間で７７〜９０％のＣＲ率、および６８〜７０％のＭＲＤ陰性ＣＲ率が観察された。形態学的疾患および微小病変の両コホートの、その後の同種異系ＨＳＣＴを受けなかった患者のサブセットにおいて、持続的な応答および生存率が観察された。ベースラインで微小病変を有する患者は、重度のＣＲＳを示さず、形態学的ベースライン疾患負荷コホートと比較して、神経学的毒性の割合がより低いことが観察された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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