(57)【要約】２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド、あるいはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、同位体分子種、薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物、水和物、共結晶、包接体、または多形体を患者に投与することを含む、白血病または骨髄異形成症候群を治療、予防、管理及び／または改善する方法が、本明細書に提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液がんを治療、予防、管理、または改善するための方法であって、それを必要とする対象に、以下の構造を有する２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド、
【化１】
2019517587.tif 000045
あるいはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、同位体分子種、薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物、水和物、共結晶、包接体、または多形体（化合物１）を投与することを含み、化合物１が、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で前記対象に投与される、前記方法。
【請求項２】
前記血液がんが、急性骨髄性白血病である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記急性骨髄性白血病が、不応性または再発性急性骨髄性白血病である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
化合物１が、２８日治療サイクルの１日目〜５日目に投与される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記治療サイクルが、２３日の休止期間を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
化合物１が、４２日治療サイクルの１日目〜５日目に投与される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
化合物１が、２８日治療サイクルの１日目〜３日目に投与される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
化合物１が、２８日治療サイクルの１日目〜５日目及び１５日目〜１９日目に投与される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記治療サイクルが、少なくとも１回繰り返される、請求項４〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記治療サイクルが、２〜４回繰り返される、請求項４〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
化合物１が、約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇの用量で投与される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
化合物１が、約０．３ｍｇ〜約８．１ｍｇの用量で投与される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
化合物１が、約０．３ｍｇ、０．６ｍｇ、１．２ｍｇ、２．４ｍｇ、３．６ｍｇ、５．４ｍｇ、または８．１ｍｇの用量で投与される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
化合物１が、約０．６ｍｇ、１．２ｍｇ、１．８ｍｇ、２．４ｍｇ、または３．６ｍｇの用量で投与される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記対象に、カルシウム、カルシトリオール、及び／またはビタミンＤの補充のうちの１つ以上が投与される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記対象に、化合物１の投与前に、カルシウム、カルシトリオール、及びビタミンＤの補充のうちの１つ以上が投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記対象に、前記サイクルの１日目の化合物１の投与の少なくとも３日前に、カルシウム、カルシトリオール、及びビタミンＤの補充が投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記対象が、正常なカルシウムホメオスタシスを妨害するか、またはカルシウムの補充を妨げる障害を有しない、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
（２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド）の多形体を投与することを含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
（２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド）の非晶質形態を投与することを含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
化合物１の凍結乾燥製剤を投与することを含み、前記凍結乾燥製剤が、化合物１、緩衝剤、及び増量剤を含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
治療上有効な量の第２の活性薬剤を投与すること、またはサポートケア療法を施すことをさらに含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記対象が、１８歳以上の患者である、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記血液がんが、骨髄異形成症候群である、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記骨髄異形成症候群が、不応性または再発性骨髄異形成症候群である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
化合物１が、２８日治療サイクルの１日目〜５日目に投与される、請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項２７】
化合物１が、４２日治療サイクルの１日目〜５日目に投与される、請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項２８】
化合物１が、２８日治療サイクルの１日目〜３日目に投与される、請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項２９】
化合物１が、２８日治療サイクルの１日目〜５日目及び１５日目〜１９日目に投与される、請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項３０】
前記治療サイクルが、少なくとも１回繰り返される、請求項２６〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記治療サイクルが、２〜４回繰り返される、請求項２６〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
化合物１が、約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇの用量で投与される、請求項２４〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
化合物１が、約０．３ｍｇ〜約８．１ｍｇの用量で投与される、請求項２４〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
化合物１が、約０．３ｍｇ、０．６ｍｇ、１．２ｍｇ、２．４ｍｇ、３．６ｍｇ、５．４ｍｇ、または８．１ｍｇの用量で投与される、請求項２４〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
化合物１が、約０．６ｍｇ、１．２ｍｇ、１．８ｍｇ、２．４ｍｇ、または３．６ｍｇの用量で投与される、請求項２４〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記対象に、カルシウム、カルシトリオール、及び／またはビタミンＤの補充のうちの１つ以上が投与される、請求項２４〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記対象に、化合物１の投与前に、カルシウム、カルシトリオール、及びビタミンＤの補充のうちの１つ以上が投与される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記対象に、前記サイクルの１日目の化合物１の投与の少なくとも３日前に、カルシウム、カルシトリオール、及びビタミンＤの補充のうちの１つ以上が投与される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記対象が、正常なカルシウムホメオスタシスを妨害するか、またはカルシウムの補充を妨げる障害を有しない、請求項２４〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
（２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド）の多形体を投与することを含む、請求項２４〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
（２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド）の非晶質形態を投与することを含む、請求項２４〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
化合物１の凍結乾燥製剤を投与することを含み、前記凍結乾燥製剤が、化合物１、緩衝剤、及び増量剤を含む、請求項２４〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
治療上有効な量の第２の活性薬剤を投与すること、またはサポートケア療法を施すことをさらに含む、請求項２４〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記対象が、１８歳以上の患者である、請求項２４〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
血液がんの治療方法の使用のための化合物であって、それを必要とする対象に前記化合物を投与することを含み、前記化合物が、以下の構造を有する２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド、
【化２】
2019517587.tif 000046
あるいはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、同位体分子種、薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物、水和物、共結晶、包接体、または多形体である、前記化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．関連出願
本出願は、２０１６年６月６日出願の米国仮出願第６２／３４６，３４４号の利益を主張し、この開示は、参照によりその全体が組み込まれる。
【０００２】
２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド、あるいはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、同位体分子種、薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物、水和物、共結晶、包接体、または多形体により、血液系悪性腫瘍を治療、予防、管理及び／または改善する方法が、本明細書に提供される。血液系悪性腫瘍を治療、予防、管理及び／または改善する方法において使用するための化合物がさらに提供され、該化合物は、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド、あるいはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、同位体分子種、薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物、水和物、共結晶、包接体、または多形体である。
【背景技術】
【０００３】
がんは、主に、所与の正常組織に由来する異常細胞の数の増加、これらの異常細胞による隣接組織への侵入、または局所リンパ節への悪性細胞のリンパ節もしくは血液由来の蔓延及び転移を特徴とする。臨床データ及び分子生物学的研究は、がんが、わずかな前新生物変化から開始される多段階のプロセスであり、ある特定の条件下で新生組織形成へと進行し得ることを示している。新生物病変は、特に、腫瘍性細胞が宿主の免疫監視を回避する条件下で、クローン的に発生し、侵入、成長、転移及び異質化の増大する能力を発達させ得る。現行のがん療法は、患者の腫瘍性細胞を根絶するための外科手術、化学療法、ホルモン療法及び／または放射線治療を含み得る。がん療法における近年の進歩は、Ｒａｊｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １１，６２８−６３０（２０１４）において論じられている。
【０００４】
現行のがん療法アプローチはすべて、患者にとって顕著な欠点を伴う。例えば、外科手術は、患者の健康によっては禁忌であり得るか、または患者にとって許容し難いものであり得る。さらに、外科手術では、腫瘍性組織を完全に除去することができない可能性もある。放射線療法は、腫瘍性組織が放射線に対して正常組織よりも高い感受性を示す場合にのみ効果的である。放射線療法は、深刻な副作用を誘発することもしばしばある。ホルモン療法が単剤として施されることはほとんどない。ホルモン療法は、効果的であり得るが、それは、他の治療によってがん細胞の大部分を除去した後に、がんの再発を予防するまたは遅延させるために使用されることが多い。
【０００５】
化学療法に関しては、がんの治療に利用可能な様々な化学療法剤が存在する。がん化学療法剤の大部分は、デオキシリボヌクレオチド三リン酸前駆体の生合成を阻害して、ＤＮＡ複製及び付随する細胞分裂を防止することにより直接的または間接的のいずれかでＤＮＡ合成を阻害することによって作用する。Ｇｉｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ′ｓ：Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｔｗｅｌｆｔｈ  Ｅｄ．（ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。
【０００６】
様々な化学療法剤が利用可能であるにもかかわらず、化学療法には多くの欠点がある。Ｓｔｏｃｋｄａｌｅ，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ．３，Ｒｕｂｅｎｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｆｅｄｅｒｍａｎ，ｅｄｓ．，ｃｈ．１２，ｓｅｃｔ．１０，１９９８。ほぼすべての化学療法剤が毒性であり、化学療法は、重度の吐き気、骨髄抑制及び免疫抑制を含む、重大かつしばしば危険な副作用を引き起こす。さらに、化学療法剤の組合せを投与しても、多くの腫瘍細胞は、化学療法剤に対して耐性であるか、または耐性を起こす。実際には、治療プロトコルに使用される特定の化学療法剤に対して耐性を示す細胞は、それらの薬剤が特定の治療に使用される薬物の機序と異なる機序により作用する場合であっても、他の薬物に耐性を示すことを証明することが多い。この現象は、多面的薬物耐性または多剤耐性と称される。薬物耐性のため、多くのがんは、標準的な化学療法治療プロトコルに不応性であることが判明しているか、または不応性となる。
【０００７】
血液系腫瘍、例えば白血病、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ならびに骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の治療のための、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド、あるいはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、同位体分子種、薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物、水和物、共結晶、包接体、または多形体を含む、抗がん剤の投与のための安全かつ有効な投与量及び投与レジメンの必要性がある。
【発明の概要】
【０００８】
一実施形態では、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド、あるいはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、同位体分子種、薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物、水和物、共結晶、包接体、または多形体（「化合物１」）を対象に投与することによって、血液系腫瘍、例えば白血病を治療、予防、管理、及び／または改善する方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、白血病は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。一実施形態では、ＡＭＬは、再発性または不応性ＡＭＬである。一実施形態では、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを対象に投与することによるＡＭＬの治療方法が、本明細書に提供される。
【０００９】
一実施形態では、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド、あるいはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、同位体分子種、薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物、水和物、共結晶、包接体、または多形体（「化合物１」）を対象に投与することによって、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を治療、予防、管理及び／または改善する方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、ＭＤＳは、再発性、耐性または不応性ＭＤＳである。一実施形態では、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを対象に投与することによるＭＤＳの治療方法が、本明細書に提供される。
【００１０】
一実施形態では、有効量の化合物１を対象にサイクルで投与することによって、血液系腫瘍を治療、予防、管理及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。一実施形態では、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを対象にサイクルで投与することによって、ＡＭＬを治療する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを投与することを含む。一実施形態では、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを対象にサイクルで投与することによって、再発性または不応性ＡＭＬを治療する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを投与することを含む。一実施形態では、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを対象にサイクルで投与することによって、ＭＤＳを治療する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを投与することを含む。
【００１１】
一実施形態では、対象は、化合物１の投与前に、カルシウム、カルシトリオール、及び／またはビタミンＤの補充が投与される。一実施形態では、対象は、治療サイクルの１日目の化合物１の投与の少なくとも３日前に、カルシウム、カルシトリオール、及びビタミンＤの補充が投与される。
【００１２】
一実施形態では、化合物１は、少なくとも２日の投与期間及び少なくとも１日の休止期間を含む治療サイクルで投与される。
【００１３】
一実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルに少なくとも５日の投与期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルに５日の投与期間を含む。
【００１４】
ある特定の実施形態では、ＡＭＬを含む白血病、より具体的には再発性または不応性ＡＭＬの治療、予防、改善及び／または管理における使用に好適な化合物１を含む薬学的組成物、単一単位剤形、及びキットが、本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、ＭＤＳの治療、予防、改善及び／または管理における使用に好適な化合物１を含む薬学的組成物、単一単位剤形、及びキットが、本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、そのような組成物は、化合物１を、任意に１つ以上の他の治療薬と組み合わせて含む。ある特定の実施形態では、ＡＭＬを含む白血病、より具体的には再発性または不応性ＡＭＬの治療に使用するための化合物１を含む薬学的組成物が、本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、ＭＤＳの治療に使用するための化合物１を含む薬学的組成物が、本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、そのような組成物は、化合物１を、任意に１つ以上の他の治療薬と組み合わせて含む。
【００１５】
本明細書に記載の主題のこれら及び他の態様は、以下の発明を実施するための形態を参照することにより明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】化合物１の形態Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及びＥのＸ線粉末ディフラクトグラムスタックプロットを示す。
【００１７】
【図２】化合物１の形態ＡのＸ線粉末ディフラクトグラム（ＸＲＰＤ）プロットを示す。
【００１８】
【図３】化合物１の形態ＡのＳＥＭ画像を示す。
【００１９】
【図４】化合物１の形態Ａの熱重量分析（ＴＧＡ）プロットを示す。
【００２０】
【図５】化合物１の形態Ａの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムプロットを示す。
【００２１】
【図６】化合物１の形態Ａの動的蒸気収着（ＤＶＳ）等温線プロットを提供する。
【００２２】
【図７】化合物１の形態Ａの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを提供する。
【００２３】
【図８】圧縮前（ａ）及び圧縮後（ｂ）の化合物１の形態ＡのＸ線粉末ディフラクトグラムプロットの比較を示す。
【００２４】
【図９】化合物１の形態ＢのＸＲＰＤプロットを示す。
【００２５】
【図１０】化合物１の形態ＢのＳＥＭ画像を示す。
【００２６】
【図１１】化合物１の形態ＢのＴＧＡサーモグラムプロットを示す。
【００２７】
【図１２】化合物１の形態ＢのＤＳＣサーモグラムプロットを示す。
【００２８】
【図１３】化合物１の形態ＢのＤＶＳ等温線プロットを提供する。
【００２９】
【図１４】化合物１の形態Ｂの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを提供する。
【００３０】
【図１５】圧縮前（ａ）及び圧縮後（ｂ）の化合物１の形態ＢのＸ線粉末ディフラクトグラムプロットの比較を示す。
【００３１】
【図１６】化合物１の形態ＣのＸＲＰＤプロットを示す。
【００３２】
【図１７】化合物１の形態ＣのＳＥＭ画像を示す。
【００３３】
【図１８】化合物１の形態ＣのＴＧＡサーモグラムプロットを示す。
【００３４】
【図１９】化合物１の形態ＣのＤＳＣサーモグラムを示す。
【００３５】
【図２０】化合物１の形態ＣのＤＶＳ等温線プロットを提供する。
【００３６】
【図２１】化合物１の形態Ｃの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを提供する。
【００３７】
【図２２】圧縮前（ａ）及び圧縮後（ｂ）の化合物１の形態ＣのＸ線粉末ディフラクトグラムプロットの比較を示す。
【００３８】
【図２３】化合物１の形態ＤのＸＲＰＤプロットを示す。
【００３９】
【図２４】化合物１の形態ＤのＴＧＡサーモグラムプロットを示す。
【００４０】
【図２５】化合物１の形態ＥのＸＲＰＤプロットを示す。
【００４１】
【図２６】化合物１の形態ＥのＴＧＡサーモグラムプロットを示す。
【００４２】
【図２７】非晶質化合物１の変調ＤＳＣサーモグラムプロットを示す。
【００４３】
【図２８】非晶質化合物１のＸＲＰＤプロットを示す。
【００４４】
【図２９】非晶質化合物１の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【００４５】
【図３０】図３０Ａ及び３０Ｂは、ＨＮＴ−３４細胞が、化合物１によるインキュベーションの８〜１６時間以内にアポトーシスに傾倒することを示す。
【００４６】
【図３１】ＡＭＬ骨髄試料中の正常なリンパ細胞に対する腫瘍からの活性領域の比較分析を提供する。図面において、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１である。図面における記号は、推定当て嵌め関数から計算された、骨髄ＡＭＬ試料の腫瘍（円）及びリンパ腫（正方形）集団の個々の活性領域値を表す。
【００４７】
【図３２】化合物１で治療された４つの異なるドナーからの顆粒球−単球及び赤血球前駆細胞の阻害を示す。
【００４８】
【図３３】図３３Ａ、３３Ｂ、及び３３Ｃは、化合物１への異なる長さの曝露後の、ドナーＨＤ４６、ＨＤ４７、ＨＤ４８及びＨＤ５０からの骨髄及び赤血球前駆細胞のコロニー数を提供する。図３３Ａ〜３３Ｃにおいて、二元配置ＡＮＯＶＡ、続いてターキーの多重比較検定を使用するＤＭＳＯ対照と比較して、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【００４９】
【図３４】３０ｎＭ濃度での化合物１への曝露時の細胞生存性研究の結果を提供する。
【００５０】
【図３５Ａ】骨髄異形成症候群を有する患者からの骨髄細胞に対する、化合物１への２４時間曝露の効果を示す。生存細胞数は、用量依存的に（Ａ）低減した。
【００５１】
【図３５Ｂ】骨髄異形成症候群を有する患者からの骨髄細胞に対する、化合物１への２４時間曝露の効果が、カスパーゼ３活性（Ｂ）により測定されるアポトーシスの誘導によって媒介されたことを示す。
【００５２】
【図３５Ｃ】コロニー形成アッセイにおけるＭＤＳ前駆細胞（Ｃ）中の化合物１のより強い効果を示す。
【００５３】
【図３６Ａ】コロニー形成アッセイにおけるストローマ共培養物中のＨＲ−ＭＤＳ及びＡＭＬ前駆細胞の維持に対する、化合物１の効果を示す。ＭＤＳ（ｎ＝３）、ｓＡＭＬ（ｎ＝４）及び正常なドナー（ＮＢＭ、ｎ＝５）からのＣＤ３４＋骨髄細胞を、ＳＬ／Ｍ２ストローマとともに１週間共培養し、次いで２週間にわたってメチルセルロース中に播種した。
【００５４】
【図３６Ｂ】コロニー再播種アッセイにおけるストローマ共培養物中のＨＲ−ＭＤＳ及びＡＭＬ前駆細胞の維持に対する、化合物１の効果を示す。同数の図３６Ａからのコロニーを、さらに２週間にわたってメチルセルロース中に再播種した。指示された濃度での化合物１を、共培養の開始時に、ビヒクル対照としてのＤＭＳＯとともに添加した。コロニーを採点して、細胞生存（図３６Ａ）及び自己再生（図３６Ｂ）に対する化合物１の効果を判定した。＊＊＊、ｐ＜０．００１、１ｎＭの化合物１で治療されたＡＭＬ対正常な骨髄対照（一元配置ＡＮＯＶＡ）。＊＊、ｐ＜０．０１、１０ｎＭの化合物１で治療されたＡＭＬ対正常な骨髄対照（一元配置ＡＮＯＶＡ）。エラーバーは、平均値±標準偏差を表す。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
６．１定義
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。すべての特許、出願、公開された出願及び他の刊行物は、参照によりそれら全体が組み込まれる。本明細書において用語に複数の定義が存在する場合、別途指示されない限り、本項における定義が優先する。
【００５６】
化合物１という用語は、以下の構造を有する「２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド」
【化１】
2019517587.tif 000003
及びその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、同位体分子種、薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物、水和物、共結晶、包接体、または多形体を指す。ある特定の実施形態では、化合物１は、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド及びその互変異性体を指す。ある特定の実施形態では、化合物１は、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドの多形体を指す。ある特定の実施形態では、化合物１は、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドの多形形態Ｃを指す。一実施形態では、立体異性体は、エナンチオマーである。
【００５７】
「対象」または「患者」という用語は、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギまたはマウスを含む哺乳類を含むが、これらに限定されない動物を指す。「対象」及び「患者」という用語は、例えば、ヒト対象などの哺乳類対象に関して、本明細書において区別なく用いられる。
【００５８】
本明細書で使用される場合、「血液がん」は、骨髄腫、リンパ腫、及び白血病を含む。「血液がん」及び「血液系悪性腫瘍」という用語は、本明細書において区別なく用いられる。一実施形態では、骨髄腫は、多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、白血病は、例えば、急性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓもしくはｍｙｅｌｏｉｄ）白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、成人Ｔ細胞白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞性白血病、骨髄異形成、骨髄増殖性障害、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、ヒトリンパ向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ−１）白血病、肥満細胞症またはＢ細胞急性リンパ芽球性白血病である。いくつかの実施形態では、リンパ腫は、例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、Ｂ細胞免疫芽球性リンパ腫、小非切断細胞リンパ腫、ヒトリンパ向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ−１）白血病／リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、Ｔ細胞／組織球リッチ大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、変形性リンパ腫、縦隔原発（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、脾性辺縁帯リンパ腫、リヒターの変換、節性辺縁帯リンパ腫またはＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。一実施形態では、血液がんまたは血液系悪性腫瘍は、例えば、ＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫または辺縁帯リンパ腫を含む緩慢性リンパ腫である。
【００５９】
「白血病」という用語は、血液形成組織の悪性腫瘍を指す。白血病としては、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病及び急性骨髄芽球性白血病が挙げられるが、これらに限定されない。白血病は、少なくとも１種の抗がん療法に対して再発性、不応性、または耐性であり得る。
【００６０】
一実施形態では、対象は、例えば、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病及び急性骨髄芽球性白血病を含む白血病を有する。一実施形態では、対象は、慢性リンパ球性白血病を有する。一実施形態では、対象は、慢性骨髄球性白血病。一実施形態では、対象は、急性リンパ芽球性白血病を有する。一実施形態では、対象は、急性骨髄性白血病を有する。一実施形態では、対象は、急性骨髄芽球性白血病。一実施形態では、白血病は、少なくとも１種の抗がん療法に対して再発性、不応性、または耐性であり得る。一実施形態では、白血病は、再発性であり得る。一実施形態では、白血病は、少なくとも１種の抗がん療法に対して不応性であり得る。一実施形態では、白血病は、少なくとも１種の抗がん療法に対して耐性であり得る。一実施形態では、対象は、再発性または不応性ＡＭＬを有する１８歳以上である。一実施形態では、対象は、不応性ＡＭＬを有する１８歳以上である。
【００６１】
一実施形態では、対象は、例えば、以下のＡＭＬの亜型を含む急性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓまたはｍｙｅｌｏｉｄ）白血病（ＡＭＬ）を有する。「急性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓまたはｍｙｅｌｏｉｄ）白血病」という用語は、骨髄中の主に未分化または最小限に分化した骨髄球系細胞の増殖及び蓄積を特徴とする血液学的状態を指し、ＦＡＢ（フランス、アメリカ、イギリス）またはＷＨＯ分類システムのいずれかによって分類された亜型を含む。本明細書に記載されるように、ＡＭＬは、ＦＡＢ分類に基づく以下の亜型を含む。Ｍ０（最小限に分化したＡＭＬ）、Ｍ１（最小成熟を伴うＡＭＬ）、Ｍ２（成熟を伴うＡＭＬ）、Ｍ３（急性前骨髄球性白血病）、Ｍ４（急性骨髄単球性白血病）、Ｍ４（好酸球増加を伴うｅｏｓ急性骨髄単球性白血病）、Ｍ５（急性単球性白血病）、Ｍ６（急性赤血球性白血病）、及びＭ７（急性巨核芽球性白血病）。本明細書に記載されるように、ＡＭＬは、ＷＨＯ分類に基づく以下の亜型を含む。再発性遺伝子異常を伴うＡＭＬ（染色体８と２１との間の転位を伴うＡＭＬ、染色体１６における転位または侵襲を伴うＡＭＬ、染色体９と１１との間の転位を伴うＡＭＬ、染色体１５と１７との間の転位を伴うＡＰＬ（Ｍ３）、染色体６と９との間の転位を伴うＡＭＬ、染色体３における転位または侵襲を伴うＡＭＬ）；染色体１と２２との間転位を伴うＡＭＬ（巨核芽球性）；脊髄形成異常関連変化を伴うＡＭＬ、以前の化学療法または放射線に関連するＡＭＬ（アルキル化剤関連ＡＭＬ、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤関連ＡＭＬ）；他の方法で分類されないＡＭＬ（上記カテゴリーに含まれないＡＭＬ、すなわち、最小限に分化したＡＭＬ（Ｍ０）、最小成熟を伴うＡＭＬ（Ｍ１）、成熟を伴うＡＭＬ（Ｍ２）、急性骨髄単球性白血病（Ｍ４）、急性単球性白血病（Ｍ５）、急性赤血球性白血病（Ｍ６）、急性巨核芽球性白血病（Ｍ７）、急性好塩基性白血病、線維症を伴う急性汎骨髄症）；骨髄性肉腫（顆粒球性肉腫、緑色腫、または髄外性骨髄芽球腫としても知られる）；ならびに未分化及び混合型急性白血病（混合表現型急性白血病としても知られる）。（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｏｒｇ／ｃａｎｃｅｒ／ａｃｕｔｅ−ｍｙｅｌｏｉｄ−ｌｅｕｋｅｍｉａ／ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ−ｄｉａｇｎｏｓｉｓ−ｓｔａｇｉｎｇ／ｈｏｗ−ｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ．ｈｔｍｌ（最終アクセス日２０１７年５月２５日）を参照されたい）。
【００６２】
一実施形態では、対象は、例えば、以下のＭＤＳの亜型を含む、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を有する。「骨髄異形成症候群」という用語は、血液の細胞成分（赤血球、白血球（リンパ球以外）、及び血小板（もしくはそれらの前駆細胞、巨核球））のうちの１つ以上の生成における異常を特徴とする血液学的状態を指し、以下の障害、不応性貧血（ＲＡ）、環状鉄芽球を伴うＲＡ（ＲＡＲＳ）、過剰な芽球を伴うＲＡ（ＲＡＥＢ）、多血球系異形成を伴う不応性血球減少症（ＲＣＭＤ）、単一血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症（ＲＣＵＤ）、未分類骨髄異形成症候群（ＭＤＳ−Ｕ）、単離されたｄｅｌ（５ｑ）の染色体異常に関連する骨髄異形成症候群、療法関連骨髄性腫瘍、及び慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）が含まれる。本明細書で使用される場合、ＭＤＳはまた、非常に低リスク、低リスク、中リスク、高リスク、または非常に高リスクのＭＤＳを含む。いくつかの実施形態では、ＭＤＳは、原発性またはデノボＭＤＳである。他の実施形態では、ＭＤＳは、二次性である。
【００６３】
本明細書で使用される場合、かつ別途指定されない限り、「治療する」、「治療すること」、及び「治療」という用語は、疾患もしくは障害、または疾患もしくは障害に関連する１つ以上の症状の根絶または緩和を指す。ある特定の実施形態では、これらの用語は、疾患または障害の蔓延または悪化（かかる疾患または障害を有する患者への１つ以上の予防薬または治療薬の投与に起因する）を最小限に抑えることを指す。いくつかの実施形態では、これらの用語は、特定の疾患の症状の発現後の、他の追加の活性薬剤を伴うまたは伴わない本明細書に提供される化合物の投与を指す。一実施形態では、疾患は、白血病であり、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、及び急性骨髄芽球性白血病が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、白血病は、少なくとも１種の抗がん療法に対して再発性、不応性、または耐性であり得る。一実施形態では、疾患は、ＡＭＬであり、上述のＡＭＬの亜型を含む。一実施形態では、疾患は、ＭＤＳであり、上述のＭＤＳの亜型を含む。
【００６４】
本明細書で使用される場合、かつ別途指定されない限り、「予防する」、「予防すること」、及び「予防」という用語は、疾患もしくは障害、またはそれらの１つ以上の症状の発現、再発、または蔓延の予防を指す。ある特定の実施形態では、これらの用語は、特に本明細書に提供される疾患または障害の危険性がある患者への症状の発現前の他の追加の活性化合物を伴うまたは伴わない本明細書に提供される化合物での治療またはその投与を指す。これらの用語は、特定の疾患の症状の抑制または軽減を包含する。特にある疾患の家族歴を有する患者は、ある特定の実施形態では、予防レジメンの候補である。加えて、症状再発の病歴を有する患者もまた、予防の有力候補である。この関連で、「予防」という用語は、「予防的治療」という用語とともに区別なく使用することができる。一実施形態では、疾患は、白血病であり、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、及び急性骨髄芽球性白血病が挙げられるが、これらに限定されない一実施形態では、白血病は、少なくとも１種の抗がん療法に対して再発性、不応性、または耐性であり得る。一実施形態では、疾患は、ＡＭＬであり、本明細書で論じられるＡＭＬの亜型を含む。一実施形態では、疾患は、ＭＤＳであり、本明細書で論じられるＭＤＳの亜型を含む。
【００６５】
本明細書で使用される場合、かつ別途指定されない限り、「管理する」、「管理すること」、及び「管理」という用語は、疾患もしくは障害、またはそれらの１つ以上の症状の進行、蔓延、または悪化の予防または遅延を指す。多くの場合、患者が予防薬及び／または治療薬から得る有益な効果は、疾患または障害の治癒をもたらさない。この関連で、「管理すること」という用語は、疾患の再発を予防もしくは最小限に抑えるための特定の疾患に罹患していた患者を治療すること、また緩解状態のままである期間を延長することを包含する。一実施形態では、疾患は、白血病であり、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、及び急性骨髄芽球性白血病が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、白血病は、少なくとも１種の抗がん療法に対して再発性、不応性、または耐性であり得る。一実施形態では、疾患は、ＡＭＬであり、本明細書で論じられるＡＭＬの亜型を含む。一実施形態では、疾患は、ＭＤＳであり、本明細書で論じられるＭＤＳの亜型を含む。
【００６６】
「有害作用」という用語は、当該分野におけるその従来かつ一般的な意味に従って使用され、本明細書で使用される場合、本明細書に記載される化合物または組成物での治療から生じる、本明細書に記載される疾患の治療、予防、管理、または改善に関連する特定の病態を指し得る。１つのそのような有害作用は、好中球減少症の発現である。好中球減少症は、骨髄への損傷から生じ得、好中球産生及び／または成熟の抑制、排除、または妨害を（直接的または間接的に）引き起こす任意の病態を指す。
【００６７】
「不応性または抵抗性」という用語は、集中的な治療の後でさえも、対象または哺乳類が、自身の身体に残存がん細胞を有する状況を指す。
【００６８】
「薬物耐性」という用語は、疾患が、ある特定の薬物（複数可）の治療に応答しない場合の病態を指す。薬物耐性は、固有であり得るか（疾患が、特定の薬物（複数可）に決して応答しないことを意味する）、または獲得され得る（疾患が以前に応答していた特定の薬物（複数可）に応答しなくなることを意味する）。ある特定の実施形態では、薬物耐性は、固有である。ある特定の実施形態では、薬物耐性は、獲得される。
【００６９】
「再発した」という用語は、療法後にがんの寛解があった対象または哺乳類において、がん細胞の復帰がある状況を指す。
【００７０】
「循環療法」は、本明細書に記載される投与期間及び本明細書に記載される休止期間を含むレジメンまたは療法を指す。
【００７１】
本明細書で使用される場合、「投与期間」という用語は、対象に、本明細書に記載される化合物または組成物が継続的または活発に投与される期間を指す。
【００７２】
本明細書で使用される場合、「休止期間」という用語は、多くの場合、投与期間に続く、対象に、本明細書に記載される化合物または組成物が投与されない期間（例えば、治療の中断）を指す。ある特定の実施形態では、「休止期間」は、単一の薬剤が対象に投与されないか、または特定の化合物を使用する治療が中断される期間を指す。そのような実施形態では、第２の治療薬（例えば、以前の投与期間に投与された化合物または組成物とは異なる薬剤）が、対象に投与され得る。
【００７３】
「ＱＤ」という用語は、１日１回用量の投与を指す。
【００７４】
「決定すること」、「測定すること」、「評価すること」、「査定すること」、及び「アッセイすること」という用語は、本明細書で使用される場合、一般に任意の形態の測定を指し、要素が存在するか否かを決定することを含む。これらの用語は、定量的決定及び／または定性的決定の両方を含む。査定することは、相対的または絶対的であり得る。「の存在を査定すること」は、存在する何かの量を決定すること、ならびにそれが存在するか不在であるかを決定することを含み得る。
【００７５】
本明細書で使用される場合、かつ別途指定されない限り、化合物の「治療上有効な量」とは、疾患もしくは障害の治療もしくは管理に治療的利点を提供するか、または疾患もしくは障害に関連する１つ以上の症状を遅延させるもしくは最小限に抑えるのに十分な量である。化合物の治療上有効な量とは、単独での、または疾患もしくは障害の治療もしくは管理に治療的利点を提供する他の療法と組み合わせた治療薬の量を意味する。「治療上有効な量」という用語は、全体的な療法を改善するか、疾患もしくは障害の症状もしくは病因を軽減もしくは回避するか、または別の治療薬の治療効力を増強する量を包含し得る。
【００７６】
本明細書で使用される場合、かつ別途指定されない限り、化合物の「予防的に有効な量」とは、疾患もしくは障害を予防するか、またはその再発を予防するのに十分な量である。化合物の予防的に有効な量とは、単独での、または疾患の予防に予防的利点を提供する他の薬剤と組み合わせた治療薬の量である。「予防的に有効な量」という用語は、全体的な予防法を改善するか、または別の予防薬の予防効力を増強する量を包含し得る。
【００７７】
本明細書で使用される場合、ＥＣＯＧステータスは、以下に示される米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータスを指す（Ｏｋｅｎ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ．Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １９８２；５（６）：６４９−６５５）。
【表１】
2019517587.tif 000004
【００７８】
本明細書で使用される場合、全生存（ＯＳ）は、臨床試験におけるランダム化から任意の原因による死亡までの時間を意味する。無増悪生存率（ＰＦＳ）は、臨床試験におけるランダム化から進行または死亡までの時間を意味する。無事象生存（ＥＦＳ）は、研究登録から、疾患の進行を含む任意の治療の失敗、任意の理由における治療の中止、または死亡までの時間を意味する。全奏功率（ＯＲＲ）は、完全及び部分的な応答を達成する患者の割合の合計を意味する。奏功期間（ＤｏＲ）は、応答の達成から再発または疾患の進行までの時間である。
【００７９】
本明細書で使用される場合、「化合物１で治療された患者集団」は、化合物１での任意の治療を受けた患者集団を指す。
【００８０】
本明細書で使用される場合、「化合物１で治療されていない患者集団」は、化合物１でのいかなる治療も受けていない患者集団を指す。そのような患者集団は、がんのいかなる治療も受けていない患者、プラセボで治療された患者、及び化合物１での治療以外の任意のがん療法で治療された患者を含む。
【００８１】
白血病患者において、特にＡＭＬ患者において、治療に対する応答は、ＡＭＬにおける国際ワーキンググループの応答基準に基づいて査定され得る（Ｃｈｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｖｉｓｅｄ  ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ  ｆｏｒ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｃｒｉｔｅｒｉａ，ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｕｔｃｏｍｅｓ，ａｎｄ  ｒｅｐｏｒｔｉｎｇ  ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔｒｉａｌｓ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００３；２１（２４）：４６４２−９）。
【表２】
2019517587.tif 000005
キー：ＡＭＬ＝急性骨髄性白血病、ＣＲ＝完全寛解、ＥＭＤ＝髄外疾患、ＩＷＧ＝国際ワーキンググループ、ＮＡ＝該当なし。
【００８２】
本明細書で使用される場合、かつ別途示されない限り、「薬学的に許容される塩」という用語は、酸性基の塩が挙げられるが、これに限定されない。ある特定の酸性条件下で、化合物は、種々の無機酸及び有機酸を用いて多種多様な塩を形成することができる。そのような塩基性化合物の薬学的に許容される塩を調製するために使用され得る酸は、薬理学的に許容されるアニオンなどの塩を形成するものであり、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重酒石酸塩、臭化物、エデト酸カルシウム、カンシラート、炭酸塩、塩酸塩、臭化物、ヨウ化物、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストル酸塩、エシル酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、ヒドロキシナフトエ酸塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩（メシル酸塩）、硫酸メチル、粘液酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トリエチオジド、及びパモ酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８３】
本明細書で使用される場合、かつ別途示されない限り、「水和物」という用語は、本明細書に提供される化合物またはその塩を意味し、非共有結合性分子間力によって結合された定比量または不定比量の水をさらに含む。水和物は、結晶性または非結晶性であり得る。
【００８４】
本明細書で使用される場合、かつ別途示されない限り、「溶媒和物」という用語は、本明細書に提供される化合物に対する１つ以上の溶媒分子の会合から形成された溶媒和物を意味する。「溶媒和物」という用語は、水和物（例えば、一水和物、二水和物、三水和物、四水和物等）を含む。溶媒和物は、結晶性または非結晶性であり得る。
【００８５】
本明細書で使用される場合、かつ別途指定されない限り、「立体異性体」という用語は、本明細書に提供されるすべての鏡像異性的に／立体異性的に純粋かつ鏡像異性的に／立体異性的に富化された化合物を包含する。
【００８６】
本明細書で使用される場合、かつ別途示されない限り、「立体異性的に純粋」または「鏡像異性的に純粋」という用語は、化合物が、１つの立体異性体を含むか、またはその対向立体異性体もしくは鏡像異性体を実質的に含まないことを意味する。例えば、化合物が、８０％、９０％、または９５％以上の１つの立体異性体及び２０％、１０％、または５％以下の対向立体異性体を含有する場合、その化合物は、立体異性的にまたは鏡像異性的に純粋である。ある特定の場合において、本明細書に提供される化合物は、その化合物が、キラル中心に関して約８０％  ｅｅ（鏡像異性体過剰率）以上、特定のキラル中心に関して９０％  ｅｅ以上、より好ましくは特定のキラル中心に関して９５％  ｅｅである場合、任意に活性または立体異性的に／鏡像異性的に純粋（すなわち、実質的にＲ形態または実質的にＳ形態）であるとみなされる。
【００８７】
本明細書で使用される場合、かつ別途示されない限り、「立体異性的に富化された」または「鏡像異性的に富化された」という用語は、ラセミ混合物ならびに本明細書に提供される化合物の立体異性体の他の混合物を包含する（例えば、Ｒ／Ｓ＝３０／７０、３５／６５、４０／６０、４５／５５、５５／４５、６０／４０、６５／３５、７０／３０）。
【００８８】
本明細書で使用される場合、任意の保護基、アミノ酸、及び他の化合物についての省略形は、別途示されない限り、それらの常例に従い、認識された省略形または生化学命名法に関するＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ委員会である（Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９７２，１１：９４２−９４４）。
【００８９】
６．２化合物
本明細書に提供される方法での使用に適した化合物は、以下の構造を有する化合物１：２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド
【化２】
2019517587.tif 000006
あるいはその立体異性体もしくは立体異性体の混合物、同位体分子種、薬学的に許容される塩、互変異性体、溶媒和物、水和物、共結晶、包接体、または多形体である。ある特定の実施形態では、化合物１は、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを指す。
【００９０】
化合物１は、本明細書に提供される実施例に記載される方法に従い、または米国特許第９，４９９，５１４号（この開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるように調製され得る。化合物はまた、本明細書における教示に基づいて当業者に明らかな他の方法に従って合成され得る。
【００９１】
ある特定の実施形態では、化合物１は、固体である。ある特定の実施形態では、化合物１は、水和される。ある特定の実施形態では、化合物１は、溶媒和される。ある特定の実施形態では、化合物１は、無水である。
【００９２】
ある特定の実施形態では、化合物１は、非晶質である。ある特定の実施形態では、化合物１は、結晶性である。ある特定の実施形態では、化合物１は、２０１７年１月６日に出願された米国仮出願第１５／４００，６３０号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載される結晶形態である。例示的な固体形態は、８６〜１０１頁に記載されている。
【００９３】
固体形態の化合物１は、２０１７年１月６日に出願された米国出願第１５／４００，６３０号に記載される方法に従って調製され得る。８６〜１０１頁を参照されたい。固体形態はまた、当業者に明らかな他の方法に従って調製することもできる。
【００９４】
一実施形態では、化合物１は、多形形態Ａ、形態Ｂ、形態Ｃ、形態Ｄ、形態Ｅ、または非晶質形態の２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドである。２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドの多形体は、本明細書において簡潔に記載されている。
【００９５】
形態Ａの２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド
ある特定の実施形態では、方法に使用するための化合物は、形態Ａの２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドである。
【００９６】
一実施形態では、形態Ａは、非晶質形態の２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドである。別の実施形態では、形態Ａの２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドは、結晶性である。
【００９７】
ある特定の実施形態では、形態Ａは、ある特定の溶媒系、例えば、以下の溶媒、室温でのアセトンならびにイソプロパノール及び水の溶媒混合物のうちの１つ以上を含む溶媒系からの結晶化によって得られる。ある特定の実施形態では、形態Ａは、高温、例えば、約５０℃でのエタノール／水（１：１）、アセトン、またはアセトニトリル中のスラリーから中間体固体形態として得られる。
【００９８】
ある特定の実施形態では、形態Ａは、例えば、Ｘ線粉末回折測定によって示されるように、実質的に結晶性である。一実施形態では、形態Ａは、実質的に図２に示されるようなＸ線粉末回折パターンを有する。
【００９９】
一実施形態では、形態Ａは、図２に示されるように、およそ１１．５、１５．６、１６．６、１７．２、１８．１、１９．０、１９．６、２１．１、２３．２、または２４．８度２θの２シータ角度で１つ以上の特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。別の実施形態では、形態Ａは、およそ１５．６、１６．６、１７．２、または２４．８度２θの２シータ角度で１つ、２つ、３つ、または４つの特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。別の実施形態では、形態Ａは、表Ａに記載されるように、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または７つの特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。別の実施形態では、形態Ａは、表Ａに記載されるように、１つ、２つ、または３つの特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。
表Ａ
【表３】
2019517587.tif 000007
【０１００】
一実施形態では、形態Ａは、図３に示されるＳＥＭ写真を有する。
【０１０１】
一実施形態では、結晶性形態Ａは、図４に示される代表的な熱重量（ＴＧＡ）サーモグラムに実質的に対応するＴＧＡサーモグラフを有する。ある特定の実施形態では、ＴＧＡ重量損失は、形態Ａでは観察されない。
【０１０２】
一実施形態では、結晶性形態Ａは、図５に示されるものに実質的に対応するＤＳＣサーモグラムを有する。ある特定の実施形態では、形態Ａは、２２９℃の開始温度及び１１８Ｊ／ｇの融解熱での溶融事象を含むＤＳＣプロットによって特徴付けられる。
【０１０３】
ある特定の実施形態では、形態Ａは、動的蒸気収着分析によって特徴付けられる。代表的な動的蒸気収着（ＤＶＳ）等温線プロットが図６に示される。ある特定の実施形態では、相対湿度（「ＲＨ」）が約０％から約９０％  ＲＨに増加すると、形態Ａは、１．５％未満、１．２％未満、または約１．２％ｗ／ｗの水取り込みを呈する。ある特定の実施形態では、形態Ａは、２２５℃に設定されたオーブン試料プロセッサを装備した電量カール・フィッシャー（ＫＦ）滴定装置で決定される、０．１％未満の水を含む。
【０１０４】
ある特定の実施形態では、形態Ａの著しい分解も残留溶媒も１Ｈ  ＮＭＲでは観察されない（図７）。
【０１０５】
ある特定の実施形態では、形態Ａは、圧縮時のその安定性プロファイルによって特徴付けられる。ある特定の実施形態では、形態Ａは、安定しており、例えば、そのＸＲＰＤパターンは、２０００−ｐｓｉの圧力を約１分間にわたって加えたときに、より広い回折ピークで実質的に不変のままである（図８）。
【０１０６】
さらに別の実施形態では、形態Ａは、実質的に純粋である。ある特定の実施形態では、実質的に純粋な形態Ａは、他の固体形態、例えば、非晶質形態を実質的に含まない。ある特定の実施形態では、実質的に純粋な形態Ａの純度は、約９５％以上純粋、約９６％以上純粋、約９７％以上純粋、約９８％以上純粋、約９８．５％以上純粋、約９９％以上純粋、約９９．５％以上純粋、または約９９．８％以上純粋である。
【０１０７】
ある特定の実施形態、形態Ａは、実質的に純粋である。本明細書におけるある特定の実施形態では、形態Ａは、例えば、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む形態Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ及び／または非晶質固体形態を含む、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む他の固体形態を実質的に含まない。ある特定の実施形態では、形態Ａは、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む固体形態の混合物であり、例えば、以下のうちの１つ以上を含む混合物が挙げられる。２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む形態Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及び非晶質固体形態。
【０１０８】
形態Ｂの２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド
ある特定の実施形態では、方法で使用するための化合物は、無水形態Ｂの２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドである。
【０１０９】
ある特定の実施形態では、形態Ｂは、ある特定の溶媒系、例えば、以下の溶媒、メタノール／水、ＤＭＳＯ／イソプロパノール、ＤＭＳＯ／トルエン、及びＤＭＳＯ／水のうちの１つ以上を含む溶媒系からの抗溶媒再結晶化によって得られる。ある特定の実施形態では、形態Ｂは、ＴＨＦ／水（１：１）からの冷却再結晶化によって得られる。
【０１１０】
ある特定の実施形態では、形態Ｂは、例えば、Ｘ線粉末回折測定によって示されるように、結晶性である。一実施形態では、形態Ｂは、実質的に図９に示されるようなＸ線粉末回折パターンを有する。
【０１１１】
一実施形態では、形態Ｂは、図９に示されるように、およそ１５．４、１６．３、１６．７、１７．７、２０．４、２５．６、または２７．５度２θの２シータ角度で１つ以上の特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。別の実施形態では、形態Ｂは、およそ１６．７、２５．６、１５．４、または１６．３度２θの２シータ角度で１つ、２つ、３つ、または４つの特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。別の実施形態では、形態Ｂは、表Ｂに記載されるように、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または７つの特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。別の実施形態では、形態Ｂは、表Ｂに記載されるように、１つ、２つ、または３つの特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。
【０１１２】
表Ｂ．化合物１の形態ＢのＸ線回折ピーク
【表４】
2019517587.tif 000008
【０１１３】
一実施形態では、形態Ｂは、図１０に示されるＳＥＭ写真を有する。一実施形態では、形態Ｂは、図１１に示される代表的な熱重量（ＴＧＡ）サーモグラムに実質的に対応するＴＧＡサーモグラフを有する。ある特定の実施形態では、形態Ｂは、１７０℃より下でＴＧＡ重量損失を示さない。ある特定の実施形態では、形態Ｂは、１７０〜２３０℃で０．４％のＴＧＡ重量損失を示す。
【０１１４】
一実施形態では、結晶性形態Ｂは、図１２に示されるものに実質的に対応するＤＳＣサーモグラムを有する。ある特定の実施形態では、形態Ｂは、２１９〜２２４℃での溶融／再結晶化事象及び２３１℃のピーク温度での主要溶融事象を含むＤＳＣプロットによって特徴付けられる。
【０１１５】
ある特定の実施形態では、形態Ｂは、動的蒸気収着分析によって特徴付けられる。代表的な動的蒸気収着（ＤＶＳ）等温線プロットが図１３に示される。ある特定の実施形態では、相対湿度（「ＲＨ」）が約０％から約９０％ＲＨに増加すると、形態Ｂは、約１．４％ｗ／ｗの水取り込みを呈する。ある特定の実施形態では、形態Ｂは、２２５℃に設定されたオーブン試料プロセッサを装備した電量カール・フィッシャー（ＫＦ）滴定装置で決定される、０．１％未満の水を含む。
【０１１６】
ある特定の実施形態では、形態Ｂは、１Ｈ  ＮＭＲによって著しい分解も残留溶媒も示さない（図１４）。
【０１１７】
ある特定の実施形態では、形態Ｂは、圧縮時のその安定性プロファイルによって特徴付けられる。ある特定の実施形態では、形態Ｂは、安定しており、例えば、そのＸＲＰＤパターンは、２０００−ｐｓｉの圧力を約１分間にわたって加えたときに、より広い回折ピークで実質的に不変のままである（図１５）。
【０１１８】
さらに別の実施形態では、形態Ｂは、実質的に純粋である。ある特定の実施形態では、実質的に純粋な形態Ｂは、他の固体形態、例えば、非晶質形態を実質的に含まない。ある特定の実施形態では、化合物１の実質的に純粋な形態Ｂの純度は、約９５％以上純粋、約９６％以上純粋、約９７％以上純粋、約９８％以上純粋、約９８．５％以上純粋、約９９％以上純粋、約９９．５％以上純粋、または約９９．８％以上純粋である。
【０１１９】
ある特定の実施形態、形態Ｂは、実質的に純粋である。ある特定の実施形態では、形態Ｂは、例えば、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む形態Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ及び／または非晶質固体形態を含む、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む他の固体形態を実質的に含まない。ある特定の実施形態では、形態Ｂは、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む固体形態の混合物であり、例えば、以下のうちの１つ以上を含む混合物が挙げられる。２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む形態Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及び非晶質固体形態。
【０１２０】
形態Ｃの２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド
ある特定の実施形態では、方法で使用するための化合物は、無水形態Ｃの２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドである。ある特定の実施形態では、形態Ｃは、結晶形態の２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドの中で最も熱力学的に安定な無水物である。
【０１２１】
ある特定の実施形態では、形態Ｃは、ある特定の溶媒系、例えば、以下の溶媒、アセトニトリル／水、アセトン、またはエタノール／水のうちの１つ以上を含む溶媒系中で、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを長期間にわたってスラリー化することによって得られる。
【０１２２】
ある特定の実施形態では、形態Ｃは、例えば、Ｘ線粉末回折測定によって示されるように、結晶性である。一実施形態では、形態Ｃは、実質的に図１６に示されるようなＸ線粉末回折パターンを有する。
【０１２３】
一実施形態では、形態Ｃは、図１６に示されるように、およそ７．４、１１．５、１５．８、１６．７、１６．９、１７．７、１８．４、１９．２、１９．５、２１．１、２３．４、２４．７、または２９．９度２θの２シータ角度で１つ以上の特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。別の実施形態では、形態Ｃは、およそ１６．７、１６．９、１７．７、または２４．７度２θの２シータ角度で１つ、２つ、３つ、または４つの特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。別の実施形態では、形態Ｃは、表Ｃに記載されるように、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または７つの特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。別の実施形態では、形態Ｃは、表Ｃに記載されるように、１つ、２つ、または３つの特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。
【０１２４】
表Ｃ．化合物１の形態ＣのＸ線回折ピーク
【表５】
2019517587.tif 000009
【０１２５】
一実施形態では、形態Ｃは、図１７に示されるＳＥＭ写真を有する。一実施形態では、形態Ｃは、図１８に示される代表的な熱重量（ＴＧＡ）サーモグラムに実質的に対応するＴＧＡサーモグラフを有する。ある特定の実施形態では、形態Ｃは、ＴＧＡ重量損失を示さない。
【０１２６】
一実施形態では、結晶性形態Ｃは、図１９に示されるものに実質的に対応するＤＳＣサーモグラムを有する。ある特定の実施形態では、形態Ｃは、２３２℃の開始温度及び１２６Ｊ／ｇの融解熱での溶融事象を含むＤＳＣプロットによって特徴付けられる。
【０１２７】
ある特定の実施形態では、形態Ｃは、動的蒸気収着分析によって特徴付けられる。代表的な動的蒸気収着（ＤＶＳ）等温線プロットが図２０に示される。ある特定の実施形態では、相対湿度（「ＲＨ」）が約０％〜約９０％ＲＨに増加すると、形態Ｃは、約０．６％ｗ／ｗの水取り込みを呈する。ある特定の実施形態では、形態Ｃは、２２５℃に設定されたオーブン試料プロセッサを装備した電量カール・フィッシャー（ＫＦ）滴定装置で決定される、０．１％未満の水を含む。
【０１２８】
ある特定の実施形態では、形態Ｃは、１Ｈ  ＮＭＲによって著しい分解も残留溶媒も示さない（図２１）。
【０１２９】
ある特定の実施形態では、形態Ｃは、圧縮時のその安定性プロファイルによって特徴付けられる。ある特定の実施形態では、形態Ｃは、安定しており、例えば、そのＸＲＰＤパターンは、２０００−ｐｓｉの圧力を約１分間にわたって加えたときに、より広い回折ピークで実質的に不変のままである（図２２）。
【０１３０】
さらに別の実施形態では、形態Ｃは、実質的に純粋である。ある特定の実施形態では、実質的に純粋な形態Ｃは、他の固体形態、例えば、非晶質形態を実質的に含まない。ある特定の実施形態では、実質的に純粋な形態Ｃの純度は、約９５％以上純粋、約９６％以上純粋、約９７％以上純粋、約９８％以上純粋、約９８．５％以上純粋、約９９％以上純粋、約９９．５％以上純粋、または約９９．８％以上純粋である。
【０１３１】
ある特定の実施形態では、形態Ｃは、実質的に純粋である。ある特定の実施形態では、形態Ｃは、例えば、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む形態Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ及び／または非晶質固体形態を含む、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む他の固体形態を実質的に含まない。ある特定の実施形態では、形態Ｃは、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む固体形態の混合物であり、例えば、以下のうちの１つ以上を含む混合物が挙げられる。２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む形態Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、及び非晶質固体形態。
【０１３２】
形態Ｄの２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド
ある特定の実施形態では、方法に使用するための化合物は、形態Ｄの２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドである。ある特定の実施形態では、形態Ｄの２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドは、ＤＭＳＯ溶媒和物である。
【０１３３】
ある特定の実施形態では、形態Ｄは、ＤＭＳＯ／メチルイソブチルケトン中で形態Ｂを加熱し、その溶液を冷却することによって得られる。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、形態Ｄは、例えば、Ｘ線粉末回折測定によって示されるように、結晶性である。一実施形態では、形態Ｄは、実質的に図２３に示されるようなＸ線粉末回折パターンを有する。
【０１３５】
一実施形態では、形態Ｄは、図２３に示されるように、およそ１４．１、１４．３、１８．８、１９．１、２３．６、または２４．０度２θの２シータ角度で１つ以上の特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。別の実施形態では、形態Ｄは、およそ１４．１、１４．３、１８．８、または１９．１度２θの２シータ角度で１つ、２つ、３つ、または４つの特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。別の実施形態では、形態Ｄは、表Ｄに記載されるように、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または７つの特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。別の実施形態では、形態Ｄは、表Ｄに記載されるように、１つ、２つ、または３つの特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。
【０１３６】
表Ｄ．化合物１の形態ＤのＸ線回折ピーク
【表６】
2019517587.tif 000010
【０１３７】
一実施形態では、図２４に示される代表的な熱重量（ＴＧＡ）サーモグラムに実質的に対応するＴＧＡサーモグラフを有する形態Ｄが、本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、形態Ｄは、最大１４０℃で約１４．１％のＴＧＡ重量損失を示す。
【０１３８】
ある特定の実施形態では、形態Ｄは、ガスクロマトグラフィーによって測定される、約１４．３重量％のＤＭＳＯを含む。
【０１３９】
さらに別の実施形態では、形態Ｄは、実質的に純粋である。ある特定の実施形態では、実質的に純粋な形態Ｄは、他の固体形態、例えば、非晶質形態を実質的に含まない。ある特定の実施形態では、実質的に純粋な形態Ｄの純度は、約９５％以上純粋、約９６％以上純粋、約９７％以上純粋、約９８％以上純粋、約９８．５％以上純粋、約９９％以上純粋、約９９．５％以上純粋、または約９９．８％以上純粋である。
【０１４０】
ある特定の実施形態では、形態Ｄは、実質的に純粋である。ある特定の実施形態では、形態Ｄは、例えば、本明細書に提供される２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む形態Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ及び／または非晶質固体形態を含む、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む他の固体形態を実質的に含まない。ある特定の実施形態では、形態Ｄは、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む固体形態の混合物であり、例えば、以下のうちの１つ以上を含む混合物が挙げられる。２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む形態Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、及び非晶質固体形態。
【０１４１】
形態Ｅの２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド
ある特定の実施形態では、方法に使用するための化合物は、形態Ｅの２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドである。ある特定の実施形態では、形態Ｅの２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドは、ＤＭＳＯ溶媒和物である。
【０１４２】
ある特定の実施形態では、形態Ｅは、室温でのＤＭＳＯ／ＭＩＢＫまたはＤＭＳＯ／ＩＰＡまたはＤＭＳＯ／アニソール中の形態Ｃから得られる。
【０１４３】
ある特定の実施形態では、形態Ｅは、例えば、Ｘ線粉末回折測定によって示されるように、結晶性である。一実施形態では、形態Ｅは、実質的に図２５に示されるようなＸ線粉末回折パターンを有する。
【０１４４】
一実施形態では、形態Ｅは、図２５に示されるように、およそ１０．５、１２．５、１６．１、１７．０、１８．５、２１．２、２１．７、２２．６、２２．９、２３．４、２３．８、２４．１、２５．１、または２６．７度２θの２シータ角度で１つ以上の特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。別の実施形態では、形態Ｅは、およそ１６．１、１７．０、２１．２、または２２．９度２θの２シータ角度で１つ、２つ、３つ、または４つの特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。別の実施形態では、形態Ｅは、表Ｅに記載されるように、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または７つの特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。別の実施形態では、形態Ｅは、表Ｅに記載されるように、１つ、２つ、または３つの特徴的なＸ線粉末回折ピークを有する。
【０１４５】
表Ｅ．化合物１の形態ＥのＸ線回折ピーク
【表７】
2019517587.tif 000011
【０１４６】
一実施形態では、図２６に示される代表的な熱重量（ＴＧＡ）サーモグラムに実質的に対応するＴＧＡサーモグラフを有する形態Ｅが、本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、形態Ｅは、最大１２０℃で約１９．４％のＴＧＡ重量損失を示す。ある特定の実施形態では、形態Ｅは、１２０〜２２０℃で２４．９％の追加の重量損失を示す。
【０１４７】
一実施形態では、形態Ｅは、実質的に純粋である。ある特定の実施形態では、実質的に純粋な形態Ｅは、他の固体形態、例えば、非晶質形態を実質的に含まない。ある特定の実施形態では、実質的に純粋な形態Ｅの純度は、約９５％以上純粋、約９６％以上純粋、約９７％以上純粋、約９８％以上純粋、約９８．５％以上純粋、約９９％以上純粋、約９９．５％以上純粋、または約９９．８％以上純粋である。
【０１４８】
ある特定の実施形態では、形態Ｅは、実質的に純粋である。本明細書におけるある特定の実施形態では、形態Ｅは、例えば、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む形態Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及び／または非晶質固体形態を含む、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む他の固体形態を実質的に含まない。ある特定の実施形態では、形態Ｅは、２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む固体形態の混合物であり、例えば、以下のうちの１つ以上を含む混合物が挙げられる。２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを含む形態Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及び非晶質固体形態。
【０１４９】
非晶質形態の２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド
ある特定の実施形態では、方法に使用するための化合物は、非晶質２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドである。
【０１５０】
ある特定の実施形態では、ＴＨＦ及び水中の２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを加熱すること、及びその溶液を冷却することによって、非晶質形態を作製するための方法が、本明細書に提供される。
【０１５１】
一実施形態では、図２７に示される変調ＤＳＣサーモグラムを有する非晶質固体形態が本明細書に提供される。
【０１５２】
一実施形態では、非晶質２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドは、実質的に図２８に示されるようなＸ線粉末回折パターンを有する。
【０１５３】
一実施形態では、非晶質２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドは、実質的に図２９に示されるような１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを有する。
【０１５４】
さらに別の実施形態では、非晶質２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドは、実質的に純粋である。ある特定の実施形態では、実質的に純粋な非晶質２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドは、任意の結晶性固体形態、例えば、形態Ａ、形態Ｂ、形態Ｃ、形態Ｄ、または形態Ｅを実質的に含まない。ある特定の実施形態では、実質的に純粋な非晶質２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドの純度は、約９５％以上純粋、約９６％以上純粋、約９７％以上純粋、約９８％以上純粋、約９８．５％以上純粋、約９９％以上純粋、約９９．５％以上純粋、または約９９．８％以上純粋である。
【０１５５】
同位体置換体の２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミド
本明細書に提供される２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドの同位体的に富化された類似体（「同位体置換体」）もまた、本明細書に提供される。薬物動態（「ＰＫ」）、薬力学（「ＰＤ」）、及び毒性プロファイルを改善するための医薬品の同位体富化（例えば、重水素化）は、いくつかのクラスの薬物によって以前に実証されている。例えば、Ｌｉｊｉｎｓｋｙ  ｅｔ．ａｌ．，Ｆｏｏｄ  Ｃｏｓｍｅｔ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，２０：３９３（１９８２）、Ｌｉｊｉｎｓｋｙ  ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，６９：１１２７（１９８２）、Ｍａｎｇｏｌｄ  ｅｔ．ａｌ．，Ｍｕｔａｔｉｏｎ  Ｒｅｓ．３０８：３３（１９９４）、Ｇｏｒｄｏｎ  ｅｔ．ａｌ．，Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．，１５：５８９（１９８７）、Ｚｅｌｌｏ  ｅｔ．ａｌ．，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，４３：４８７（１９９４）、Ｇａｔｅｌｙ  ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，２７：３８８（１９８６）、Ｗａｄｅ  Ｄ，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．Ｉｎｔｅｒａｃｔ．１１７：１９１（１９９９）を参照されたい。
【０１５６】
いずれの特定の理論によっても限定されることなく、薬物の同位体富化は、例えば、（１）望ましくない代謝産物を減少または取り除くために、（２）親薬物の半減期を増加させるために、（３）所望の効果を達成するために必要とされる投薬回数を減少させるために、（４）所望の効果を達成するために必要な用量を減少させるために、（５）いずれかが形成される場合、活性代謝産物の形成を増加させるために、かつ／または（６）特定の組織における有害な代謝産物の生成を減少させるために、かつ／または併用療法が意図的であるか否かにかかわらず、併用療法用のより有効な薬物及び／もしくはより安全な薬物を作製するために使用され得る。
【０１５７】
原子のその同位体のうちの１つへの置換により、しばしば、化学反応の反応速度に変化がもたらされる。この現象は、速度論的同位体効果（「ＫＩＥ」）として知られている。例えば、Ｃ−Ｈ結合が化学反応の律速ステップ（すなわち、最高の遷移状態エネルギーを持つステップ）中に破壊される場合、重水素のその水素への置換は、反応速度の減少を引き起こし、このプロセスは遅くなるであろう。この現象は、重水素速度論的同位体効果（「ＤＫＩＥ」）として知られている。（例えば、Ｆｏｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．，ｖｏｌ．１４，ｐｐ．１−３６（１９８５）、Ｋｕｓｈｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，ｖｏｌ．７７，ｐｐ．７９−８８（１９９９））を参照されたい。
【０１５８】
ＤＫＩＥの規模は、Ｃ−Ｈ結合が破壊される所定の反応の速度と、重水素が水素と置換される同じ反応の速度との比率として表すことができる。ＤＫＩＥは、約１（同位体効果なし）〜非常に大きい数、例えば、５０以上の範囲に及び得、この反応は、重水素が水素に置換される場合、５０倍以上遅い場合があることを意味する。特定の理論によって制限されるものではないが、高いＤＫＩＥ値は、不確定な原理の結果であるトンネリングとして知られている現象に一部よる場合がある。トンネリングは、少量の水素原子に起因しており、またトンネリングが生じるのは、プロトンを包含する遷移状態が、必要とされる活性化エネルギーの非存在下で時々形成することができるためである。重水素が水素よりも大きな質量を有しているため、この現象を受けている確率は統計的に非常に低い。
【０１５９】
三重水素（「Ｔ」）は、研究、核融合炉、中性子発生装置、及び放射性医薬品に使用される水素の放射性同位体である。三重水素は、核内に２個の中性子を有し、かつ３に近い原子量を有する水素原子である。それは、非常に低い濃度で環境において天然に生じ、最も一般には、Ｔ２Ｏとして見出される。三重水素は緩徐に壊変し（半減期＝１２．３年）、ヒトの皮膚の外層を貫通できない低エネルギーベータ粒子を放出する。内部被曝は、この同位体と関係した主要なハザードであるが、未だ、多量に摂取しなければならないことで顕著な健康リスクがもたらされる。重水素と比較して、より少ない量の三重水素が有害なレベルに到達する前に消費されなければならない。三重水素（「Ｔ」）の水素との置換は、重水素よりもそれでもより強い結合を結果的に生じ、数の上ではより大きな同位体効果を付与する。
【０１６０】
同様に、炭素に対する１３Ｃまたは１４Ｃ、硫黄に対する３３Ｓ、３４Ｓ、または３６Ｓ、窒素に対する１５Ｎ、及び酸素に対する１７Ｏまたは１８Ｏを含むが、これらに限定されない他の元素に対する同位体置換により、同様の速度論的同位体効果がもたらされるであろう。
【０１６１】
６．３使用方法
一実施形態では、化合物１を対象に投与することによって、血液がんまたは血液系悪性腫瘍を治療、予防、管理、及び／または改善する方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、血液がんまたは血液系悪性腫瘍は、骨髄腫、リンパ腫、または白血病である。ある特定の実施形態では、血液がんまたは血液系悪性腫瘍は、骨髄腫である。ある特定の実施形態では、血液がんまたは血液系腫瘍は、リンパ腫である。ある特定の実施形態では、血液がんまたは血液系悪性腫瘍は、白血病である。
【０１６２】
一実施形態では、血液がんは、多発性骨髄腫（ＭＭ）である。一実施形態では、血液がんは、再発性／不応性（Ｒ／Ｒ）多発性骨髄腫である。一実施形態では、Ｒ／Ｒ多発性骨髄腫を有する患者は、腎機能不全を有する。
【０１６３】
一実施形態では、血液がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。一実施形態では、血液がんは、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）である。一実施形態では、血液がんは、成人Ｔ細胞白血病である。一実施形態では、血液がんは、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）である。一実施形態では、血液がんは、有毛細胞性白血病である。一実施形態では、血液がんは、骨髄異形成である。一実施形態では、血液がんは、骨髄増殖性障害である。一実施形態では、血液がんは、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である。一実施形態では、血液がんは、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。一実施形態では、血液がんは、ヒトリンパ向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ−１）白血病である。一実施形態では、血液がんは、肥満細胞症である。一実施形態では、血液がんは、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病である。一実施形態では、血液がんは、ＣＬＬである。
【０１６４】
一実施形態では、血液がんは、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、Ｂ細胞免疫芽球性リンパ腫、小非切断細胞リンパ腫、ヒトリンパ向性ウイルス１型（ＨＴＬＶ−１）白血病／リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、Ｔ細胞／組織球リッチ大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、変形性リンパ腫、縦隔原発（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、脾性辺縁帯リンパ腫、リヒターの変換、節性辺縁帯リンパ腫、またはＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。一実施形態では、血液がんは、ＨＬである。一実施形態では、血液がんは、ＮＨＬである。一実施形態では、血液がんは、例えば、ＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫、または辺縁帯リンパ腫を含む緩慢性リンパ腫である。
【０１６５】
ある特定の実施形態では、血液がんは、少なくとも１種の抗がん療法に対して耐性である薬物である。ある特定の実施形態では、血液がんは、少なくとも１種の抗がん療法に対して再発性または不応性である。ある特定の実施形態では、血液がんは、転移性である。
【０１６６】
一実施形態では、治療上有効な量の化合物１を対象に投与することによって、白血病を治療、予防、管理、及び／または改善する方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、白血病は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。一実施形態では、ＡＭＬは、再発性または不応性ＡＭＬである。一実施形態では、ＡＭＬは、新たに診断されたＡＭＬである。別の実施形態では、ＡＭＬは、ＦＡＢ分類Ｍ０／１を有する。別の実施形態では、ＡＭＬは、ＦＡＢ分類Ｍ２を有する。別の実施形態では、ＡＭＬは、ＦＡＢ分類Ｍ３を有する。別の実施形態では、ＡＭＬは、ＦＡＢ分類Ｍ４を有する。別の実施形態では、ＡＭＬは、ＦＡＢ分類Ｍ５を有する。一実施形態では、ＡＭＬは、少なくとも１つの再発性遺伝子異常を伴うＡＭＬ（例えば、染色体８と２１との間の転位を伴うＡＭＬ、染色体１６における転位または侵襲を伴うＡＭＬ、染色体９と１１との間の転位を伴うＡＭＬ、染色体１５と１７との間の転位を伴うＡＰＬ（Ｍ３）、染色体６と９との間の転位を伴うＡＭＬ、染色体３における転位または侵襲を伴うＡＭＬ）；染色体１と２２との間転位を伴うＡＭＬ（巨核芽球性）；脊髄形成異常関連変化を伴うＡＭＬ、以前の化学療法または放射線に関連するＡＭＬ（例えば、アルキル化剤関連ＡＭＬ、もしくはトポイソメラーゼＩＩ阻害剤関連ＡＭＬ）；他の方法で分類されないＡＭＬ（例えば、上記カテゴリーに含まれないＡＭＬ、すなわち、最小限に分化したＡＭＬ（Ｍ０）、最小成熟を伴うＡＭＬ（Ｍ１）、成熟を伴うＡＭＬ（Ｍ２）、急性骨髄単球性白血病（Ｍ４）、急性単球性白血病（Ｍ５）、急性赤血球性白血病（Ｍ６）、急性巨核芽球性白血病（Ｍ７）、急性好塩基性白血病、もしくは線維症を伴う急性汎骨髄症）；骨髄性肉腫（顆粒球性肉腫、緑色腫、または髄外性骨髄芽球腫としても知られる）；または未分化及び混合型急性白血病（混合表現型急性白血病としても知られる）である。
【０１６７】
一実施形態では、治療上有効な量の化合物１を対象に投与することによって、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を治療、予防、管理、及び／または改善する方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、ＭＤＳを治療する方法が本明細書に提供される。一実施形態では、ＭＤＳは、再発性、耐性または不応性ＭＤＳである。一実施形態では、ＭＤＳは、不応性貧血（ＲＡ）、環状鉄芽球を伴うＲＡ（ＲＡＲＳ）、過剰な芽球を伴うＲＡ（ＲＡＥＢ）、多血球系異形成を伴う不応性血球減少症（ＲＣＭＤ）、単一血球系統の異形成を伴う不応性血球減少症（ＲＣＵＤ）、未分類骨髄異形成症候群（ＭＤＳ−Ｕ）、単離されたｄｅｌ（５ｑ）の染色体異常に関連する骨髄異形成症候群、療法関連骨髄性腫瘍、または慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）である。いくつかの実施形態では、ＭＤＳは、非常に低リスク、低リスク、中リスク、高リスク、または非常に高リスクのＭＤＳである。一実施形態では、ＭＤＳは、非常に低リスクである。別の実施形態では、ＭＤＳは、低リスクである。別の実施形態では、ＭＤＳは、中リスクである。別の実施形態では、ＭＤＳは、高リスクである。別の実施形態では、ＭＤＳは、非常に高リスクのＭＤＳである。いくつかの実施形態では、ＭＤＳは、原発性またはデノボＭＤＳである。他の実施形態では、ＭＤＳは、二次性ＭＤＳである。
【０１６８】
一実施形態では、化合物１を約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で対象に投与することによって、ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、化合物１を約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で対象に投与することによって、再発性または不応性ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、化合物１を約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で対象に投与することによって、ＡＭＬを治療する方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、化合物１を約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で対象に投与することによって、再発性または不応性ＡＭＬを治療する方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目、１日目〜１０日目、１日目〜２１日目、または１日目〜２８日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。一実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、再発性または不応性ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目、１日目〜１０日目、１日目〜２１日目、または１日目〜２８日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。一実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。一実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、再発性または不応性ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。一実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜１０日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。一実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、再発性または不応性ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜１０日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。一実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜２１日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。一実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、再発性または不応性ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜２１日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。一実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜２８日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。一実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、再発性または不応性ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜２８日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。一実施形態では、化合物１を約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で対象にサイクルで投与することによって、ＡＭＬを治療する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目、１日目〜１０日目、１日目〜２１日目、または１日目〜２８日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。一実施形態では、化合物１を約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で対象にサイクルで投与することによって、再発性不応性またはＡＭＬを治療する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目、１日目〜１０日目、１日目〜２１日目、または１日目〜２８日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。別の実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜３日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。別の実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、再発性または不応性ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜３日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。さらに別の実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目及び１５日目〜１９日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。さらに別の実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、再発性または不応性ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目及び１５日目〜１９日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。いくつかのそのような実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜３日目に、約０．６ｍｇ、１．２ｍｇ、１．８ｍｇ、２．４ｍｇ、または３．６ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。いくつかのそのような実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、再発性または不応性ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜３日目に、約０．６ｍｇ、１．２ｍｇ、１．８ｍｇ、２．４ｍｇ、または３．６ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。さらに別の実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目及び１５日目〜１９日目に、約０．６ｍｇ、１．２ｍｇ、１．８ｍｇ、２．４ｍｇ、または３．６ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。さらに別の実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、再発性または不応性ＡＭＬを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目及び１５日目〜１９日目に、約０．６ｍｇ、１．２ｍｇ、１．８ｍｇ、２．４ｍｇ、または３．６ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。
【０１６９】
一実施形態では、化合物１を約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で対象に投与することによって、ＭＤＳを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、化合物１を約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で対象に投与することによって、ＭＤＳを治療する方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、ＭＤＳを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目、１日目〜１０日目、１日目〜２１日目、または１日目〜２８日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。一実施形態では、化合物１を約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で対象にサイクルで投与することによって、ＭＤＳを治療する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目、１日目〜１０日目、１日目〜２１日目、または１日目〜２８日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。別の実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、ＭＤＳを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜３日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。さらに別の実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、ＭＤＳを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目及び１５日目〜１９日目に、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。いくつかのそのような実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、ＭＤＳを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜３日目に、約０．６ｍｇ、１．２ｍｇ、１．８ｍｇ、２．４ｍｇ、または３．６ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。さらに別の実施形態では、化合物１を対象にサイクルで投与することによって、ＭＤＳを治療、予防、管理、及び／または改善する方法が本明細書に提供され、ここで該サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目及び１５日目〜１９日目に、約０．６ｍｇ、１．２ｍｇ、１．８ｍｇ、２．４ｍｇ、または３．６ｍｇの用量で化合物１を投与することを含む。
【０１７０】
さらに、治療上有効な量の化合物１を、それを必要とする患者に投与することを含む、ＡＭＬ及び／またはＭＤＳに関連する１つ以上の臨床エンドポイントを達成するための方法が、本明細書に提供される。
【０１７１】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＡＭＬを有する患者集団における全生存（ＯＳ）、完全寛解率（ＣＲＲ）、奏功率（ＯＲＲ）、進行までの時間、無再発生存（ＲＦＳ）、無進行生存（ＰＦＳ）、無事象生存、寛解期間、及び／または寛解／応答までの時間を増加させる。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＡＭＬを有する患者集団における全生存（ＯＳ）、完全寛解率（ＣＲＲ）、奏功率（ＯＲＲ）、進行までの時間、無再発生存（ＲＦＳ）、無進行生存（ＰＦＳ）、無事象生存、寛解期間、応答期間、寛解／応答までの時間、及び／または輸血非依存性を増加させる。
【０１７２】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＡＭＬを有する患者集団における全生存（ＯＳ）を増加させる。
【０１７３】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＡＭＬを有する患者集団における完全寛解率（ＣＲＲ）を増加させる。
【０１７４】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＡＭＬを有する患者集団における奏功率（ＯＲＲ）を増加させる。
【０１７５】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＡＭＬを有する患者集団における進行までの時間を増加させる。
【０１７６】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＡＭＬを有する患者集団における無再発生存（ＲＦＳ）を増加させる。
【０１７７】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＡＭＬを有する患者集団における無進行生存（ＰＦＳ）を増加させる。
【０１７８】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＡＭＬを有する患者集団における無事象生存を増加させる。
【０１７９】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＡＭＬを有する患者集団における寛解期間を増加させる。
【０１８０】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＡＭＬを有する患者集団における応答期間を増加させる。
【０１８１】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＡＭＬを有する患者集団における寛解／応答までの時間を増加させる。
【０１８２】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＡＭＬを有する患者集団における輸血非依存性を増加させる。
【０１８３】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＭＤＳを有する患者集団における全生存（ＯＳ）、完全寛解率（ＣＲＲ）、奏功率（ＯＲＲ）、進行までの時間、無再発生存（ＲＦＳ）、無進行生存（ＰＦＳ）、無事象生存、寛解期間、及び／または寛解／応答までの時間を増加させる。
【０１８４】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＭＤＳを有する患者集団における全生存（ＯＳ）を増加させる。
【０１８５】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＭＤＳを有する患者集団における完全寛解率（ＣＲＲ）を増加させる。
【０１８６】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＭＤＳを有する患者集団における奏功率（ＯＲＲ）を増加させる。
【０１８７】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＭＤＳを有する患者集団における進行までの時間を増加させる。
【０１８８】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＭＤＳを有する患者集団における無再発生存（ＲＦＳ）を増加させる。
【０１８９】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＭＤＳを有する患者集団における無進行生存（ＰＦＳ）を増加させる。
【０１９０】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＭＤＳを有する患者集団における無事象生存を増加させる。
【０１９１】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＭＤＳを有する患者集団における寛解期間を増加させる。
【０１９２】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＭＤＳを有する患者集団における応答期間を増加させる。
【０１９３】
一実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１で治療されていない患者集団と比較した場合、有効量の化合物１で治療されたＭＤＳを有する患者集団における寛解／応答までの時間を増加させる。
【０１９４】
ある特定の実施形態では、ＯＲＲは、完全寛解（ＣＲ）（すなわち、形態学的無白血病状態、形態学的ＣＲ、細胞遺伝学的ＣＲ、分子ＣＲ、及び不完全な血液回収を伴う形態学的ＣＲ）、ならびに部分寛解のすべての応答を含む。
【０１９５】
６．４サイクリング療法／投与量
本明細書に提供される方法において、治療上有効な量の化合物１は、治療されるがんとは無関係に、それを必要とする患者に臨床的に投与され得る。サイクリング療法により、療法剤のうちの１つ以上に対する耐性の発達を減少させること、療法剤のうちの１つの副作用を回避し、もしくは減少させること、及び／または治療の有効性を改善することができる。
【０１９６】
一実施形態では、治療上有効量の化合物１は、５日までの投与期間、続いて休止期間を含む治療サイクルで投与される。一実施形態では、治療サイクルは、５日の投与期間、続いて休止期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、１０日までの投与期間、続いて休止期間を含む。一実施形態では、休止期間は、約１０日〜約４０日までである。一実施形態では、治療サイクルは、１０日までの投与期間、続いて約１０日〜約４０日までの休止期間を含む。一実施形態では、治療サイクルは、１０日までの投与期間、続いて約２３日〜約３７日までの休止期間を含む。一実施形態では、休止期間は、約２３日〜約３７日までである。一実施形態では、休止期間は、２３日である。一実施形態では、治療サイクルは、１０日までの投与期間、続いて約２３日の休止期間を含む。一実施形態では、休止期間は、３７日である。一実施形態では、治療サイクルは、１０日までの投与期間、続いて約３７日の休止期間を含む。
【０１９７】
一実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目における治療上有効な量の化合物１の投与を含む。別の実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１日目〜１０日目における化合物１の投与を含む。一実施形態では、治療サイクルは、４２日サイクルの１日目〜５日目における化合物１の投与を含む。別の実施形態では、治療サイクルは、４２日サイクルの１日目〜１０日目における化合物１の投与を含む。
【０１９８】
一実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１日目〜２１日目における治療上有効な量の化合物１の投与を含む。別の実施形態では、治療サイクルは、７日サイクルの１日目〜５日目における治療上有効な量の化合物１の投与を含む。別の実施形態では、治療サイクルは、７日サイクルの１日目〜７日目における治療上有効な量の化合物１の投与を含む。一実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目及び１５日目〜１９日目における治療上有効な量の化合物１の投与を含む。
【０１９９】
本明細書に記載される任意の治療サイクルは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上のサイクルにわたって繰り返され得る。ある特定の例において、本明細書に記載される治療サイクルは、１〜約２４サイクル、約２〜約１６サイクル、または約２〜約４サイクルを含む。ある特定の例において、本明細書に記載される治療サイクルは、１〜約４サイクルを含む。ある特定の実施形態では、サイクル１〜４は、すべて２８日サイクルである。ある特定の実施形態では、サイクル１は、４２日サイクルであり、サイクル２〜４は、２８日サイクルである。いくつかの実施形態では、治療上有効な量の化合物１は、２８日の１〜１３サイクル（例えば約１年）にわたって投与される。ある特定の例において、サイクリング療法は、サイクルの数に限定されず、この療法は疾患が進行するまで継続される。サイクルは、ある特定の例において、本明細書に記載される投与期間及び／または休止期間の持続期間を変化させることを含む。
【０２００】
一実施形態では、治療サイクルは、１日１回投与される、約０．０５ｍｇ／日〜約２０ｍｇ／日、約０．１ｍｇ／日〜約１５ｍｇ／日、約０．１ｍｇ／日〜約１０ｍｇ／日、約０．３ｍｇ／日〜約１０ｍｇ／日、約０．３ｍｇ／日〜約８．５ｍｇ／日、または約０．３ｍｇ／日〜約８．１ｍｇ／日の投与量で化合物１を投与することを含む。
【０２０１】
一実施形態では、治療サイクルは、１日１回投与される、約０．３ｍｇ／日、０．６ｍｇ／日、１．２ｍｇ／日、１．８ｍｇ／日、２．４ｍｇ／日、３．６ｍｇ／日、５．４ｍｇ／日、７．２ｍｇ、８．１ｍｇ、９．０ｍｇ／日、１０．０ｍｇ／日、１０．８ｍｇ／日、または１２．２ｍｇ／日の投与量で化合物１を投与することを含む。一実施形態では、治療サイクルは、１日１回投与される、約０．３ｍｇ／日、０．６ｍｇ／日、１．２ｍｇ／日、１．８ｍｇ／日、２．４ｍｇ／日、３．６ｍｇ／日、５．４ｍｇ／日、７．２ｍｇ、８．１ｍｇ、９．０ｍｇ／日、１０．０ｍｇ／日、１０．８ｍｇ／日、１２．２ｍｇ／日、または２０ｍｇ／日の投与量で化合物１を投与することを含む。一実施形態では、治療サイクルは、１日１回投与される、約０．６ｍｇ／日、１．２ｍｇ／日、１．８ｍｇ／日、２．４ｍｇ／日、または３．６ｍｇ／日の投与量で化合物１を投与することを含む。いくつかのそのような実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１日目〜３日目に、約０．６ｍｇ、１．２ｍｇ、１．８ｍｇ、２．４ｍｇ、または３．６ｍｇの投与量で化合物１を投与することを含む。他の実施形態では、治療サイクルは、２８日サイクルの１日目〜５日目及び１５日目〜１９日目に、約０．６ｍｇ、１．２ｍｇ、１．８ｍｇ、２．４ｍｇ、または３．６ｍｇの投与量で化合物１を投与することを含む。
【０２０２】
化合物１は、治療サイクルにおけるすべての投与期間にわたって同じ量で投与され得る。あるいは、一実施形態では、化合物は、投与期間において異なる用量で投与される。
【０２０３】
６．５例示的な製剤
固体形態（例えば、化合物１の形態Ａ、形態Ｂ、形態Ｃ、形態Ｄ、形態Ｅ、及び／または非晶質）を含む化合物１を含む例示的な製剤は、２０１７年１月６日に出願された米国特許出願第１５／４００，７９１号に記載されており、この開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。例示的な凍結乾燥製剤は、以下に記載されている。
【０２０４】
ある特定の実施形態では、凍結乾燥製剤は、化合物１、緩衝剤、及び増量剤を含む。一実施形態では、凍結乾燥製剤は、その凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約０．１〜２％の化合物１、約２〜１５％の緩衝剤、及び約７０〜９５％の増量剤を含む。
【０２０５】
一態様では、凍結乾燥製剤は、その凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約０．１〜約２％の量の化合物１を含む。ある特定の実施形態では、化合物１の量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約０．１％〜約１．５％、約０．１％〜約１％、または約０．３５％〜約０．９％である。ある特定の実施形態では、化合物１の量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約０．１％、０．２％、０．３％、０．３５％、０．３６％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、または１．０％である。一実施形態では、凍結乾燥製剤中の化合物１の量は、その凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約０．３〜約０．４％である。一実施形態では、凍結乾燥製剤中の化合物１の量は、その凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約０．３６％である。一実施形態では、凍結乾燥製剤中の化合物１の量は、その凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約０．９〜約１％である。一実施形態では、凍結乾燥製剤中の化合物１の量は、その凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約０．９３％である。
【０２０６】
別の態様では、凍結乾燥製剤は、２０ｃｃバイアル中に、約０．１ｍｇ〜約５ｍｇの量の化合物１を含む。さらに別の態様では、凍結乾燥製剤は、２０ｃｃバイアル中に、約０．１ｍｇ〜約５ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約４ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約３ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約２ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約５ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約３ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約２ｍｇ、または約０．５ｍｇ〜約１．５ｍｇの量の化合物１を含む。一態様では、化合物１は、２０ｃｃバイアル中に、約０．５、０．６、０．７、０．７５、０．７６、０．８、０．９、１．０、または１．２ｍｇの量で存在する。一態様では、化合物１は、２０ｃｃバイアル中に、約０．７６ｍｇの量で存在する。一態様では、化合物１は、２０ｃｃバイアル中に、約１ｍｇの量で存在する。
【０２０７】
一態様では、凍結乾燥製剤は、クエン酸緩衝剤を含有する。一態様では、製剤中のクエン酸緩衝剤の量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約５％〜約２５％である。一態様では、製剤中のクエン酸緩衝剤の量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約１０、１１、１２、１２．５、１２．７、１２．７８、１２．８、１３、１４、１５、１６、１７、１７．３、１７．４２、１７．５、１７．７、１８、１９、または２０％である。一態様では、製剤中のクエン酸緩衝剤の量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約１２．７８％である。一態様では、製剤中のクエン酸緩衝剤の量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約１７．４２％である。
【０２０８】
一実施形態では、クエン酸緩衝剤は、無水クエン酸及び無水クエン酸ナトリウムを含む。ある特定の実施形態では、無水クエン酸の量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約２％〜約１０％、約３％〜約９％、約５％〜約８％、または約６％〜約８％である。ある特定の実施形態では、凍結乾燥製剤中の無水クエン酸の量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約２％、４％、６％、６．２％、６．４％、６．６％、６．８％、７％、７．３％、７．４％、７．５％、８％、８．５％、または９％である。一実施形態では、凍結乾燥製剤中の無水クエン酸の量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約６％、６．２％、６．４％、６．４１％、６．６％、６．８％、または７％である。一実施形態では、凍結乾燥製剤中の無水クエン酸の量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約７％、７．３％、７．４％、７．４３％、７．５％、または８％である。一実施形態では、凍結乾燥製剤中の無水クエン酸の量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約６．４１％である。一実施形態では、凍結乾燥製剤中の無水クエン酸の量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約７．４３％である。
【０２０９】
さらに別の態様では、凍結乾燥製剤は、２０ｃｃバイアル中に、約５ｍｇ〜約２０ｍｇの量の無水クエン酸を含む。一実施形態では、無水クエン酸の量は、２０ｃｃバイアル中、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０ｍｇである。一実施形態では、無水クエン酸の量は、２０ｃｃバイアル中、約１７．７ｍｇである。一実施形態では、無水クエン酸の量は、２０ｃｃバイアル中、約６．１ｍｇである。
【０２１０】
ある特定の実施形態では、無水クエン酸ナトリウムの量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約２％〜約１５％、約４％〜約１５％、または約５％〜約１０％である。ある特定の実施形態では、凍結乾燥製剤中の無水クエン酸の量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約２％、３％、４％、５％、６％、６．２％、６．３７％、６．４％、６．６％、６．８％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％、１０％、１２％、または約１５％である。一実施形態では、凍結乾燥製剤中の無水クエン酸ナトリウムの量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約６％、６．２％、６．３７％、６．４％、６．６％、６．８％、または７％である。一実施形態では、凍結乾燥製剤中の無水クエン酸ナトリウムの量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約８％、８．５％、９％、９．５％、９．９９％、１０％、または１０．５％である。一実施形態では、凍結乾燥製剤中の無水クエン酸ナトリウムの量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約６．３７％である。一実施形態では、凍結乾燥製剤中の無水クエン酸ナトリウムの量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約９．９９％である。
【０２１１】
さらに別の態様では、凍結乾燥製剤は、２０ｃｃバイアル中に、約５ｍｇ〜約２０ｍｇの量の無水クエン酸ナトリウムを含む。一実施形態では、無水クエン酸ナトリウムの量は、２０ｃｃバイアル中、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０ｍｇである。一実施形態では、無水クエン酸ナトリウムの量は、２０ｃｃバイアル中、約１７．６ｍｇである。一実施形態では、無水クエン酸ナトリウムの量は、２０ｃｃバイアル中、約８．２ｍｇである。
【０２１２】
ある特定の実施形態では、凍結乾燥製剤中の無水クエン酸の量は、約２％、４％、６％、６．２％、６．４％、６．６％、６．８％、７％、７．３％、７．４％、７．５％、８％、８．５％、または９％であり、凍結乾燥製剤中の無水クエン酸ナトリウムの量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、２％、３％、４％、５％、６％、６．２％、６．４％、６．６％、６．８％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％、１０％、１２％、または約１５％である。一実施形態では、凍結乾燥製剤中の無水クエン酸の量は、約６％、６．２％、６．４％、６．６％、６．８％、または７％であり、凍結乾燥製剤中の無水クエン酸ナトリウムの量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約６％、６．２％、６．４％、６．６％、６．８％、または７％である。一実施形態では、凍結乾燥製剤中の無水クエン酸の量は、約７％、７．３％、７．４％、７．５％、または８％であり、凍結乾燥製剤中の無水クエン酸ナトリウムの量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約８％、８．５％、９％、９．５％、１０％、または１０．５％である。一実施形態では、無水クエン酸の量は、約６．１ｍｇであり、無水クエン酸ナトリウムの量は、２０ｃｃバイアル中、約８．２ｍｇである。一実施形態では、無水クエン酸の量は、約１７．７ｍｇであり、無水クエン酸ナトリウムの量は、２０ｃｃバイアル中、約１７．６ｍｇである。
【０２１３】
一態様では、凍結乾燥製剤中の増量剤は、Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）、マンニトール、またはＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）、例えば、β−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン、及びメチル化β−シクロデキストリンを含む。ある特定の実施形態では、凍結乾燥製剤中の増量剤は、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン（Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ）を含む。ある特定の実施形態では、凍結乾燥組成物中の増量剤の量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約７０％〜約９５％、約７５％〜約９０％、または約８０％から約９０％である。ある特定の実施形態では、凍結乾燥組成物中のヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリンの量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約７０％〜約９５％、約７５％〜約９０％、または約８０％から約９０％である。ある特定の実施形態では、凍結乾燥組成物中のヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリンの量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約７５％、８０％、８１％、８１．６１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８６．８６％、８７％、８８％、８９％、または９０％である。一実施形態では、凍結乾燥組成物中のヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリンの量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約８６．８６％である。一実施形態では、凍結乾燥組成物中のヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリンの量は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて、約８１．６１％である。
【０２１４】
別の態様では、凍結乾燥製剤は、２０ｃｃバイアル中に、約６７ｍｇの量のＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢを含む。さらに別の態様では、凍結乾燥製剤は、２０ｃｃバイアル中に、約２４０ｍｇの量のＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢを含む。
【０２１５】
ある特定の実施形態では、再構成時の凍結乾燥製剤は、約４〜５のｐＨを有する。一実施形態では、再構成時の凍結乾燥製剤は、約４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、または５を有する。
【０２１６】
ある特定の実施形態では、凍結乾燥組成物を含む容器は、本明細書に提供される。一態様では、容器は、ガラスバイアルである。一態様では、容器は、２０ｃｃのガラスバイアルである。
【０２１７】
本明細書に提供される凍結乾燥組成物は、任意の薬学的に許容される希釈剤を使用して患者に非経口投与するために構成され得る。そのような希釈剤としては、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、水中のデキストロース５％（Ｄ５Ｗ）、または共溶媒系が挙げられるが、これらに限定されない。任意の量の希釈剤を使用して、凍結乾燥製剤を構成することができ、それにより注射用の好適な溶液が調製される。したがって、希釈剤の量は、凍結乾燥製剤を溶解するのに十分でなければならない。一実施形態では、１〜５ｍＬまたは１〜３ｍＬの希釈剤を使用して、凍結乾燥製剤を構成し、約０．１〜５ｍｇ／ｍＬ、約０．１〜１ｍｇ／ｍＬ、約０．５〜１ｍｇ／ｍＬの最終濃度の化合物１をもたらす。ある特定の実施形態では、再構成された溶液中の化合物１の最終濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬである。ある特定の実施形態では、再構成された希釈剤の量は、２ｍＬ〜２０ｍＬの間で変化して、０．０５〜０．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度をもたらす。ある特定の実施形態では、必要とされる用量に応じて、複数のバイアルを再構成に使用することができる。
【０２１８】
凍結乾燥製剤の構成された溶液は、約２４時間、約１２時間、または約８時間までに貯蔵及び使用することができる。いくつかの実施形態では、溶液は、調製の８時間以内に使用される。いくつかの実施形態では、溶液は、調製の５時間以内に使用される。いくつかの実施形態では、溶液は、調製の１時間以内に使用される。
【０２１９】
一態様では、凍結乾燥製剤は、以下を含む２０ｃｃバイアル中に提供される。１ｍｇの２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを提供する量の化合物１、ならびに本明細書に記載される緩衝剤及び増量剤を含む薬学的に許容される担体または賦形剤。緩衝剤及び増量剤は、本明細書に記載される量で存在し得る。
【０２２０】
一態様では、凍結乾燥製剤は、以下を含む２０ｃｃバイアル中に提供される。１ｍｇの２−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−５−イル）メチル）−２，２−ジフルオロアセトアミドを提供する量の化合物１、１７．７ｇの無水クエン酸、１７．６ｍｇの無水クエン酸ナトリウム、及び２４０ｍｇの本明細書に記載されるＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ。一実施形態では、２０ｃｃバイアル中の凍結乾燥製剤は、２ｍＬの注射用滅菌水で再構成される。
【０２２１】
一態様では、本明細書に提供される凍結乾燥製剤を含む水性組成物が本明細書に提供される。一実施形態では、水性溶液は、０．５ｍｇ／ｍＬの化合物１を含む。
【０２２２】
６．６併用療法
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、治療上有効な量の化合物１を、治療上有効な量の他の治療薬と組み合わせて投与することを含む。
【０２２３】
一実施形態では、本明細書に提供されるサイクリング療法において、治療上有効な量の化合物１を、治療上有効な量の１つ以上の第２の活性薬剤と組み合わせて、及び任意に放射線療法、輸血、生物学的療法もしくは免疫療法、または手術と組み合わせて患者に投与することを含む、白血病を治療、予防、または管理する方法が本明細書に提供される。第２の活性薬剤の例は、本明細書に開示されている。
【０２２４】
本明細書で使用される場合、「組み合わせて」という用語は、１つより多くの療法剤（例えば、１つ以上の予防薬及び／または治療薬）の使用を含む。しかしながら、「組み合わせて」という用語の使用は、療法剤（例えば、予防薬及び／または治療薬）が疾患または障害を有する患者に投与される順序を制限しない。第１の療法剤（例えば、予防薬または治療薬、例えば、本明細書に提供される化合物の凍結乾燥製剤）は、対象に、第２の療法剤（例えば、予防薬または治療薬）の投与前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間前）、投与と同時に、または投与後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間後）に投与され得る。三重療法剤もまた、本明細書に企図される。
【０２２５】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、カルシウム、カルシトリオール、及びビタミンＤの補充のうちの１つ以上を、化合物１とともに投与することを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、カルシウム、カルシトリオール、及びビタミンＤの補充を、化合物１とともに投与することを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１での治療前に、カルシウム、カルシトリオール、及びビタミンＤの補充を投与することを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、各サイクルにおける第１用量の化合物１の投与前に、カルシウム、カルシトリオール、及びビタミンＤの補充を投与することを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、化合物１での治療の少なくとも３日前までに、カルシウム、カルシトリオール、及びビタミンＤの補充を投与することを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、各サイクルにおける第１用量の化合物１の投与前に、カルシウム、カルシトリオール、及びビタミンＤの補充を投与することを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、各サイクルにおける第１用量の化合物１の投与の少なくとも３日前までに、カルシウム、カルシトリオール、及びビタミンＤの補充を投与することを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、各サイクルにおける第１用量の化合物１の投与前に、カルシウム、カルシトリオール、及びビタミンＤの補充を投与することを含み、各サイクルにおける最終用量の化合物１の投与後も継続する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、各サイクルにおける第１用量の化合物１の投与の少なくとも３日前までに、カルシウム、カルシトリオール、及びビタミンＤの補充を投与することを含み、各サイクルにおける最終用量の化合物１の投与の少なくとも３日後まで（例えば、化合物１が１日目〜５日目に投与される場合、少なくとも８日目まで）継続する。
【０２２６】
ある特定の実施形態では、カルシウムの補充は、分割した用量で与えられた１日あたり少なくとも１２００ｍｇのカルシウム元素を送達するために投与される。ある特定の実施形態では、カルシウムの補充は、経口で（ＰＯ）１日３回投与された５００ｍｇの用量で炭酸カルシウムとして投与される。
【０２２７】
ある特定の実施形態では、カルシトリオールの補充は、０．２５μｇのカルシトリオールを送達するために１日１回（ＰＯ）投与される。
【０２２８】
ある特定の実施形態では、ビタミンＤの補充は、約５００ＩＵ〜約５０，０００ＩＵのビタミンＤを送達するために１日１回投与される。ある特定の実施形態では、ビタミンＤの補充は、約１０００ＩＵのビタミンＤを送達するために１日１回投与される。ある特定の実施形態では、ビタミンＤの補充は、約５００ＩＵのビタミンＤを送達するために１日１回投与される。ある特定の実施形態では、ビタミンＤの補充は、約５０，０００ＩＵのビタミンＤを送達するために毎週投与される。ある特定の実施形態では、ビタミンＤの補充は、約２０，０００ＩＵのビタミンＤを送達するために毎週投与される。ある特定の実施形態では、ビタミンＤの補充は、約１０００ＩＵのビタミンＤ２またはＤ３を送達するために１日１回投与される。ある特定の実施形態では、ビタミンＤの補充は、約５０，０００ＩＵのビタミンＤ２またはＤ３を送達するために毎週投与される。ある特定の実施形態では、ビタミンＤの補充は、約２０，０００ＩＵのビタミンＤ２またはＤ３を送達するために毎週投与される。
【０２２９】
ある特定の実施形態では、治療上有効な量の化合物１及び１つ以上の第２の活性薬剤の患者への投与は、同じまたは異なる投与経路により同時にまたは連続して起こり得る。特定の活性薬剤に用いられる特定の投与経路の好適性は、活性薬剤自体（例えば、それが血流に入る前に分解することなく経口投与され得るかどうか）及び治療されるがんに依存する。
【０２３０】
化合物１の投与経路は、第２の療法剤の投与経路とは無関係である。したがって、これらの実施形態に従って、化合物１は、静脈内投与され、第２の療法剤は、経口、非経口、腹腔内、静脈内、動脈内、経皮、舌下、筋肉内、直腸、経頬、鼻腔内、リポソーム、吸入により、膣内、眼内、カテーテルもしくはステントによる局所送達により、皮下、脂肪内、関節内、髄腔内、または持続放出剤形により投与され得る。一実施形態では、化合物１及び第２の療法剤は、同じ投与様式、ＩＶにより投与される。別の実施形態では、化合物１は、ある投与様式、例えば、ＩＶにより投与され、第２の薬剤（抗がん剤）は、別の投与様式、例えば、経口により投与される。
【０２３１】
一実施形態では、第２の活性薬剤は、静脈内または皮下に、約１〜約１０００ｍｇ、約５〜約５００ｍｇ、約１０〜約３５０ｍｇ、または約５０〜約２００ｍｇの量で１日１回または２回投与される。第２の活性薬剤の特定の量は、使用される特定の薬剤、治療または管理される疾患の種類、疾患の重症度及び病期、ならびに患者に同時に投与される化合物１と任意の追加の活性薬剤の量に依存する。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される併用療法の構成要素は、周期的に患者に投与される。別の実施形態では、第２の活性薬剤は、本明細書に提供される併用療法とともに、周期的投与で同時投与される。サイクリング療法には、一定期間の活性薬剤の投与と、それに続く一定期間の休止を含み、この連続的投与を繰り返す。サイクリング療法は、所定の持続期間にわたって、各活性薬剤（例えば、本明細書に記載される化合物１及び／または第２の活性薬剤）について独立して行うことができる。ある特定の実施形態では、各活性薬剤の周期的投与は、対象に投与される活性薬剤のうちの１つ以上に依存する。一実施形態では、本明細書に記載される化合物１または第２の活性薬剤の投与は、各薬剤の投与の日数（複数可）または持続期間を固定する。別の実施形態では、本明細書に記載される化合物１または第２の活性薬剤の投与は、第２の活性薬剤の投与の日数（複数可）または持続期間を固定する。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される化合物１及び第２の活性薬剤は、休止期間なしに継続的に（例えば、毎日、毎週、毎月）投与される。サイクリング療法により、療法剤のうちの１つ以上に対する耐性の発達を減少させること、療法剤のうちの１つの副作用を回避し、もしくは減少させること、及び／または治療または治療薬の有効性を改善することができる。
【０２３４】
一実施形態では、治療上有効な量の化合物１は、本明細書に記載される化学療法の構成要素として、１日１回、２８日サイクルの１日目〜５日目、１日目〜１０日目、１日目〜２１日目、または２８連続日にわたって投与される。そのような併用療法は、１日目以降（例えば、サイクル１の１日目）化合物１の投与の前に、同時に、または後に、本明細書に記載される第２の活性薬剤を投与することを含む。一実施形態では、併用療法は、２８日の１〜１３サイクル（例えば、約１２ヶ月）にわたって投与される。そのような組み合わせの、本明細書に記載される化合物１及び第２の活性薬剤は、本明細書に記載される濃度または量で存在し得る。ある特定の実施形態では、第２の活性薬剤は、サイクリング療法の間１日１回、週１回、または月１回投与され得る。別の実施形態では、第２の活性薬剤は、本明細書に記載される併用療法と組み合わせて週１回投与される。
【０２３５】
一実施形態では、治療上有効な量の化合物１は、本明細書に記載される併用療法の構成要素として、１日１回、７日サイクルの７連続日にわたって投与される。そのような併用療法は、１日目以降（例えば、サイクル１の１日目）化合物１の投与の前に、同時に、または後に、治療上有効な量の本明細書に記載される第２の活性薬剤を投与することを含む。別の実施形態では、治療上有効な量の化合物１は、１日１回、７日サイクルの５連続日にわたって投与され、２日の休止（例えば、化合物の投与なし／治療の中断）が続く。そのような併用療法は、１日目以降（例えば、サイクル１の１日目）化合物１の投与の前に、同時に、または後に、治療上有効な量の本明細書に記載される第２の活性薬剤を投与することを含む。一実施形態では、併用療法は、２８日の１〜１３サイクル（例えば、約３ヶ月）にわたって投与される。そのような組み合わせの、本明細書に記載される化合物１及び第２の活性薬剤は、本明細書に記載される濃度または量で存在し得る。一実施形態では、併用療法は、７日サイクルの５日間にわたって連続して治療上有効な量の化合物１を投与すること、及び各サイクルの少なくとも１日に投与される第２の活性薬剤と組み合わせて、各サイクルの少なくとも１日（例えば、サイクル１の１日目）に治療上有効な量の第２の活性薬剤を投与することを含む。一実施形態では、治療上有効な量の化合物１は、本明細書に記載される併用療法の構成要素として、１日１回、２８日サイクルの１日目〜５日目、１日目〜１０日目、１日目〜２１日目、または１日目〜２８日目に投与される。そのような併用療法は、１日目以降、治療上有効な量の化合物１の投与の前に、同時に、または後に、治療上有効な量の本明細書に記載される第２の活性薬剤を投与することを含む。別の実施形態では、治療上有効な量の化合物１は、１日１回、２８日サイクルの１日目〜３日目に投与される。そのような併用療法は、１日目以降、化合物１の投与の前に、同時に、または後に、治療上有効な量の本明細書に記載される第２の活性薬剤を投与することを含む。別の実施形態では、治療上有効な量の化合物１は、１日１回、２８日サイクルの１日目〜５日目及び１５日目〜１９日目に投与される。そのような併用療法は、１日目以降、化合物１の投与の前に、同時に、または後に、治療上有効な量の本明細書に記載される第２の活性薬剤を投与することを含む。
【０２３６】
ある特定の実施形態では、第２の活性薬剤は、サイクリング療法の間１日１回、週１回、または月１回投与され得る。別の実施形態では、第２の活性薬剤は、本明細書に記載される併用療法と組み合わせて週１回投与される。
【０２３７】
本明細書に記載される併用療法で使用するための化合物は、独立して、１日１回（ＱＤ）投与され得るか、または本明細書に記載される併用療法の一部として１日２回（ＢＩＤ）、１日３回（ＴＩＤ）、及び１日４回（ＱＩＤ）などの複数の日用量に分割され得る。加えて、投与は、継続的（すなわち、連続日にわたって毎日、または毎日）、間欠的、例えば、サイクル（すなわち、数日間、数週間、または数ヶ月の休薬期間を含む）であり得る。本明細書で使用される場合、「毎日」という用語は、治療薬が、例えば、ある期間にわたって、１日１回または１回より多く投与されることを意味するよう意図されている。「継続的」という用語は、治療薬が、少なくとも１０日間〜５２週間の中断なしの期間にわたって毎日投与されることを意味するよう意図されている。本明細書で使用される「間欠的」または「間欠的に」という用語は、規則的間隔または不規則な間隔のいずれかで、停止及び開始することを意味するよう意図されている。例えば、本明細書に記載される併用療法で使用するための化合物の間欠的投与は、週に１〜６日間にわたって投与され得るか、サイクルで投与されるか（例えば、２〜８週間連続の毎日投与、その後、最大１週間の投与なしの休止期間）、または隔日投与される。本明細書で使用される「サイクリング」という用語は、治療薬が、毎日または継続的に投与されるが、休止期間を伴うことを意味するよう意図されている。
【０２３８】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される併用療法で使用するための化合物は、１日１回、１日間〜６ヶ月間、１週間〜３ヶ月間、１週間〜４週間、１週間〜３週間、または１週間〜２週間にわたって投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される併用療法で使用するための化合物は、１日１回、１週間、２週間、３週間、または４週間にわたって投与される。一実施形態では、本明細書に記載される併用療法で使用するための化合物は、１日１回、１週間にわたって投与される。別の実施形態では、本明細書に記載される併用療法で使用するための化合物は、１日１回、２週間にわたって投与される。さらに別の実施形態では、本明細書に記載される併用療法で使用するための化合物は、１日１回、３週間にわたって投与される。さらに別の実施形態では、本明細書に記載される併用療法で使用するための化合物は、１日１回、４週間にわたって投与される。
【０２３９】
１つ以上の第２の活性成分または薬剤は、本明細書に提供される方法及び組成物において化合物１と一緒に使用され得る。第２の活性薬剤は、大分子（例えば、タンパク質）または小分子（例えば、合成無機、有機金属、もしくは有機分子)であり得る。
【０２４０】
大分子活性薬剤の例としては、造血成長因子、サイトカイン、ならびにモノクローナル及びポリクローナル抗体、特に、がん抗原への治療抗体が挙げられるが、これらに限定されない。典型的な大分子活性薬剤は、天然に存在する、または合成、または組換えタンパク質などの生体分子である。本明細書に提供される方法及び組成物に特に有用なタンパク質は、インビトロまたはインビボでの造血前駆細胞及び免疫学的に活性な造血細胞の生存及び／または増殖を刺激するタンパク質を含む。他の有用なタンパク質は、インビトロまたはインビボで細胞における委任赤血球系前駆体の分裂及び分化を刺激する。特定のタンパク質としては、ＩＬ−２（組換えＩＬ−ＩＩ（「ｒＩＬ２」）及びカナリア痘ＩＬ−２を含む）、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、及びＩＬ−１８；インターフェロン（インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ｂ、インターフェロンα−ｎ１、インターフェロンα−ｎ３、インターフェロンβ−Ｉａ、及びインターフェロンγ−Ｉｂ）；ＧＭ−ＣＦ及びＧＭ−ＣＳＦ；ならびにＥＰＯが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４１】
ある特定の実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＳＣＦ、またはＥＰＯは、約１〜約７５０ｍｇ／ｍ２／日、約２５〜約５００ｍｇ／ｍ２／日、約５０〜約２５０ｍｇ／ｍ２／日、または約５０〜約２００ｍｇ／ｍ２／日の範囲に及ぶ量で、４週間または６週間サイクルにおいて約５日間皮下投与される。ある特定の実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦは、約６０〜約５００ｍｃｇ／ｍ２の量で２時間にわたって静脈内投与され得るか、または約５〜約１２ｍｃｇ／ｍ２／日の量で皮下投与され得る。ある特定の実施形態では、Ｇ−ＣＳＦは、最初に約１ｍｃｇ／ｋｇ／日の量で皮下投与され得、総顆粒球数の上昇に応じて調整され得る。維持用量のＧ−ＣＳＦは、約３００ｍｃｇ（より小さい患者において）または４８０ｍｃｇの量で皮下投与され得る。ある特定の実施形態では、ＥＰＯは、１週間あたり１０，０００単位の量で３回皮下投与され得る。
【０２４２】
方法及び組成物に使用することができる特定のタンパク質には、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）（Ａｍｇｅｎ，Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）という商品名で米国で販売されているフィルグラスチム、Ｌｅｕｋｉｎｅ（登録商標）（Ｉｍｍｕｎｅｘ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）という商品名で米国で販売されているサルグラモスチム、及びＥｐｏｇｅｎ（登録商標）（Ａｍｇｅｎ，Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）という商品名で米国で販売されている組換えＥＰＯが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４３】
ＧＭ−ＣＳＦの組換え及び変異形態は、米国特許第５，３９１，４８５号、同第５，３９３，８７０号、及び同第５，２２９，４９６号に記載されているように調製することができ、これらの文献はすべて、参照により本明細書に組み込まれる。Ｇ−ＣＳＦの組換え及び変異形態は、米国特許第４，８１０，６４３号、同第４，９９９，２９１号、同第５，５２８，８２３号、及び同第５，５８０，７５５号に記載されているように調製することができ、これらの文献の全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２４４】
また、化合物１と組み合わせて使用するための、天然タンパク質、天然に存在するタンパク質、及び組換えタンパク質も提供される。天然に存在するタンパク質の変異体及び誘導体（例えば、修飾された形態）が、元となるタンパク質の薬理学的活性の少なくともいくらかをインビボで呈する該タンパク質の変異体及び誘導体をさらに包含する。変異体の例としては、タンパク質の天然に存在する形態で対応する残基とは異なる１つ以上のアミノ酸残基を有するタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。また、「変異体」という用語によって包含されるのは、それらの天然に存在する形態（例えば、非グリコシル化形態）で通常存在する炭水化物部分を欠失しているタンパク質である。誘導体の例としては、ペグ化誘導体、及びＩｇＧ１またはＩｇＧ３を、対象となるタンパク質または該タンパク質の活性部分に融合することによって形成されるタンパク質などの融合タンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｐｅｎｉｃｈｅｔ，Ｍ．Ｌ．ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８：９１−１０１（２００１）を参照されたい。
【０２４５】
化合物１と組み合わせて使用され得る抗体としては、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体が挙げられる。抗体の例としては、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（商標））、ペルツズマブ（Ｏｍｎｉｔａｒｇ（商標））、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、エドレコロマブ（Ｐａｎｏｒｅｘ（登録商標））、エロツズマブ（Ｅｍｐｌｉｃｉｔｉ（商標））、ダラツムマブ（Ｄａｒｚａｌｅｘ（商標））、イサツキシマブ（ＳＡＲ６５０９８４としても知られる）、及びＧ２５０が挙げられるが、これらに限定されない。化合物１の凍結乾燥製剤はまた、抗ＴＮＦ−α抗体及び／または抗ＥＧＦＲ抗体、例えば、Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（セツキシマブ）またはパニツムマブなどと組み合わせられ得るか、またはそれらと組み合わせて使用され得る。
【０２４６】
大分子活性薬剤は、抗がんワクチンの形態で投与され得る。例えば、ＩＬ−２、Ｇ−ＣＳＦ、及びＧＭ−ＣＳＦなどのサイトカインを分泌するか、またはその分泌を引き起こすワクチンは、提供される方法及び薬学的組成物に使用され得る。例えば、Ｅｍｅｎｓ，Ｌ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．３（１）：７７−８４（２００１）を参照されたい。
【０２４７】
小分子である第２の活性薬剤を使用して、本明細書に提供される化合物１の投与に関連する有害作用を緩和することもできる。しかしながら、いくつかの大分子と同様に、多くは、（例えば、その投与前、その投与後、またはその投与と同時に）本明細書に提供される化合物１とともに投与される場合、相乗効果を提供することができると考えられる。小分子の第２の活性薬剤の例としては、抗がん剤、抗生物質、免疫抑制剤、及びステロイドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４８】
ある特定の実施形態では、第２の薬剤は、ＨＳＰ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、またはＴＯＲキナーゼ阻害剤である。
【０２４９】
本明細書に記載される方法または組成物で使用される抗がん剤の例としては、アシビシン、アクラルビシン、アコダゾールヒドロクロリド、アクロニン、アドゼレシン、アルデスロイキン、アルトレタミン、アンボマイシン、酢酸アメタントロン、アムサクリン、アナストロゾール、アントラマイシン、アスパラギナーゼ、アスペルリン、アザシチジン、アゼテパ、アゾトマイシン、バチマスタット、ベンゾデパ、ビカルタミド、ビサントレンヒドロクロリド、ビスナフィドジメシラート、ビゼレシン、硫酸ブレオマイシン、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、ブレキナルナトリウム、ブロピリミン、ブスルファン、カクチノマイシン、カルステロン、カラセミド、カルベチマー、カルボプラチン、カルフィルゾミブ（Ｋｙｐｒｏｌｉｓ（登録商標））、カルムスチン、カルビシンヒドロクロリド、カルゼレシン、セデフィンゴール、セレコキシブ（ＣＯＸ−２阻害剤）、クロラムブシル、シロレマイシン、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、クリスナトールメシラート、シクロホスファミド、Ａｒａ−Ｃ、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシンヒドロクロリド、デシタビン、デキソルマプラチン、デザグアニン、デザグアニンメシラート、ジアジクオン、ドセタキセル、ドキソルビシン、ドキソルビシンヒドロクロリド、ドロロキシフェン、ドロロキシフェンシトラート、ドロモスタノロンプロピオナート、デュアゾマイシン、エダトレキサート、エフロルニチンヒドロクロリド、エルサミトルシン、エンロプラチン、エンプロマート、エピプロピジン、エピルビシンヒドロクロリド、エルブロゾール、エソルビシンヒドロクロリド、エストラムスチン、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エタニダゾール、エトポシド、リン酸エトポシド、エトプリン、ファドロゾールヒドロクロリド、ファザラビン、フェンレチニド、フロクスウリジン、リン酸フルダラビン、フルオロウラシル、フルオロシタビン、ホスキドン、ホストリエシンナトリウム、ゲムシタビン、ゲムシタビンヒドロクロリド、ヒドロキシ尿素、イダルビシンヒドロクロリド、イホスファミド、イルモフォシン、イプロプラチン、イリノテカン、イリノテカンヒドロクロリド、イキサゾミブ（Ｎａｎｌａｒｏ（登録商標））、酢酸ランレオチド、レナリドミド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標））、レトロゾール、酢酸ロイプロリド、リアロゾールヒドロクロリド、ロメトレキソールナトリウム、ロムスチン、ロソキサントロンヒドロクロリド、マソプロコール、マイタンシン、メクロレタミンヒドロクロリド、酢酸メゲストロール、酢酸メレンゲストロール、メルファラン、メノガリル、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム、メトプリン、メツレデパ、ミチンドミド、ミトカルシン、ミトクロミン、ミトギリン、ミトマルシン、ミトマイシン、ミトスペル、ミトタン、ミトキサントロンヒドロクロリド、ミコフェノール酸、ノコダゾール、ノガラマイシン、オマセタキシン、オルマプラチン、オキシスラン、パクリタキセル、パノビノスタット、ペグアスパルガーゼ、ペリオマイシン、ペンタムスチン、ペプロマイシンスルファート、ペルホスファミド、ピポブロマン、ピポスルファン、ピロキサントロンヒドロクロリド、プリカマイシン、プロメスタン、ポマリドマイド（Ｐｏｍａｌｙｓｔ（登録商標））、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、プロカルバジンヒドロクロリド、ピューロマイシン、ピューロマイシンヒドロクロリド、ピラゾフリン、リボプリン、サフィンゴール、サフィンゴールヒドロクロリド、セムスチン、シムトラゼン、ソラフェニブ、スパルフォサートナトリウム、スパルソマイシン、スピロゲルマニウムヒドロクロリド、スピロムスチン、スピロプラチン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、スロフェヌル、タリソマイシン、テコガランナトリウム、タキソテレ、テガフール、テロキサントロンヒドロクロリド、テモポルフィン、テニポシド、テロキシロン、テストラクトン、サリドマイド（Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標））、チアミプリン、チオグアニン、チオテパ、チアゾフリン、チラパザミン、トレミフェンシトラート、酢酸トレストロン、リン酸トリシリビン、トリメトレキサート、トリメトレキサートグルクロナート、トリプトレリン、ツブロゾールヒドロクロリド、ウラシルマスタード、ウレデパ、バプレオチド、ベルテポルフィン、ビンブラスチンスルファート、ビンクリスチンスルファート、ビンデシン、ビンデシンスルファート、ビネピジンスルファート、ビングリシナートスルファート、ビンロイロシンスルファート、ビノレルビンタートラート、ビンロシジンスルファート、ビンゾリジンスルファート、ボロゾール、ゼニプラチン、ジノスタチン、及びゾルビシンヒドロクロリドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５０】
方法または組成物に含まれる他の抗がん薬としては、２０−ｅｐｉ−１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３、５−エチニルウラシル、アビラテロン、アクラルビシン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレシン、アルデスロイキン、ＡＬＬ−ＴＫアンタゴニスト、アルトレタミン、アンバムスチン、アミドックス、アミフォスチン、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラフォリド、血管新生阻害剤、アンタゴニストＤ、アンタゴニストＧ、アンタレリックス、抗背側化形成タンパク質−1、抗アンドロゲン、前立腺癌、抗エストロゲン、抗ネオプラストン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アフィジコリングリシナート、アポトーシス遺伝子調節因子、アポトーシス調節物質、アプリン酸、ａｒａ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ、アルギニンデアミナーゼ、アスラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン１、アキシナスタチン２、アキシナスタチン３、アザセトロン、アザトキシン、アザチロシン、バッカチンＩＩＩ誘導体、バラノール、バチマスタット、ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト、ベンゾクロリン、ベンゾイルスタウロスポリン、βラクタム誘導体、β−アレチン、βクラマイシンＢ、ベツリン酸、ｂＦＧＦ阻害剤、ビカルタミド、ビサントレン、ビサジリニルスペルミン、ビスナフィド、ビストラテンＡ、ビゼレシン、ブレフラート、ブロピリミン、ブドチタン、ブチオニンスルホキシミン、カルシポトリオール、カルホスチンＣ、カンプトテシン誘導体、カペシタビン、カルボキサミド−アミノ−トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、ＣａＲｅｓｔ  Ｍ３、ＣＡＲＮ  ７００、軟骨由来阻害剤、カルゼレシン、カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）、カスタノスペルミン、セクロピンＢ、セトロレリックス、クロルン、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプロスト、ｃｉｓ−ポルフィリン、クラドリビン、クロミフェン類似体、クロトリマゾール、コリスマイシンＡ、コリスマイシンＢ、コンブレタスタチンＡ４、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン、クランベシジン８１６、クリスナトール、クリプトフィシン８、クリプトフィシンＡ誘導体、クラシンＡ、シクロペンタントラキノン、シクロプラタン、サイペマイシン、Ａｒａ−Ｃオクフォスフェート、細胞溶解因子、サイトスタチン、ダクリキシマブ、デシタビン、デヒドロジデムニンＢ、デスロレリン、デキサメタゾン、デキシホスファミド、デキシラゾキサン、デキシベラパミル、ジアジコン、ジデムニンＢ、ジドックス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ−５−アザシチジン、ジヒドロタキソール、９−ジオキサマイシン、ジフェニルスピロムスチン、ドセタキセル、ドコサノール、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドロロキシフェン、ドロナビノール、デュオカルマイシンＳＡ、エブセレン、エコムスチン、エデルフォシン、エドレコロマブ、エフロルニチン、エレメン、エミテフール、エピルビシン、エピステリド、エストラムスチン類似体、エストロゲンアゴニスト、エストロゲンアンタゴニスト、エタニダゾール、エトポシドホスフェート、エキセメスタン、ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチ���、フィナステリド、フラボピリドール、フレゼラスチン、フルアステロン、フルダラビン、フルオロダウノルニシンヒドロクロリド、フォルフェニメックス、フォルメスタン、フォストリエシン、フォテムスチン、ガドリニウムテキサフィリン、硝酸ガリウム、ガロシタビン、ガニレリックス、ゲラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム、ヘレグリン、ヘキサメチレンビスアセトアミド、ヒペリシン、イバンドロン酸、イダルビシン、イドキシフェン、イドラマントン、イルモフォシン、イロマスタット、イマチニブ（例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、イミキモド、免疫賦活性ペプチド、インスリン様成長因子−１受容体阻害剤、インターフェロンアゴニスト、インターフェロン、インターロイキン、ヨーベングアン、ヨードドキソルビシン、イポメアノール、４−イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、イソホモハリコンドリンＢ、イタセトロン、ジャスプラキノリド、カハラリドＦ、ラメラリン−Ｎトリアセテート、レナリドミド、ランレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、レンチナンスルフェート、レプトルスタチン、レトロゾール、白血病阻害因子、白血球αインターフェロン、ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン、ロイプロレリン、レバミゾール、リアロゾール、線形ポリアミン類似体、脂溶性二糖ペプチド、脂溶性白金化合物、リソクリナミド７、ロバプラチン、ロムブリシン、ロメトレキソール、ロニダミン、ロソキサントロン、ロキソリビン、ルルトテカン、ルテチウムテキサフィリン、リソフィリン、溶解性ペプチド、マイタインシン、マンノスタチンＡ、マリマスタット、マソプロコール、マスピン、マトリリシン阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、メノガリル、メルバロン、メテレリン、メチオニナーゼ、メトクロプラミド、ＭＩＦ阻害剤、ミフェプリストン、ミルテフォシン、ミリモスチム、ミトグアゾン、ミトラクトール、ミトマイシン類似体、ミトナフィド、ミトトキシン線維芽細胞成長因子−サポリン、ミトキサントロン、モファロテン、モルグラモスチム、アービタックス、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、モノホスホリル脂質Ａ＋ミオバクテリア細胞壁ｓｋ、モピダモール、マスタード抗がん剤、マイカペロキシドＢ、マイコバクテリア細胞壁抽出物、ミリアポロン、Ｎ−アセチルジナリン、Ｎ−置換ベンズアミド、ナファレリン、ナグレスチップ、ナロキソン＋ペンタゾシン、ナパビン、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン、ネリドロン酸、ニルタミド、ニサマイシン、一酸化窒素調節物質、窒素酸化物抗酸化剤、ニトルリン、オブリメルセン（Ｇｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、Ｏ６−ベンジルグアニン、オクトレオチド、オキセノン、オリゴヌクレオチド、オナプリストン、オンダンセトロン、オンダンセトロン、オラシン、経口サイトカイン誘導剤、オルマプラチン、オサテロン、オキサリプラチン、オキサウノマイシン、パクリタキセル、パクリタキセル類似体、パクリタキセル誘導体、パラウアミン、パルミトイルリゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン、パゼリプチン、ペガスパルガーゼ、ペルデシン、ペント酸ポリ硫��ナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール、ペルフルブロン、ペルホスファミド、ペリリルアルコール、フェナジノマイシン、フェニルアセテート、ホスファターゼ阻害剤、ピシバニル、ピロカルピンヒドロクロリド、ピラルビシン、ピリトレキシム、プラセチンＡ、プラセチンＢ、プラスミノゲン活性因子阻害剤、白金複合体、白金化合物、白金−トリアミン複合体、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニゾン、プロピルビス−アクリドン、プロスタグランジンＪ２、プロテアソーム阻害剤、タンパク質Ａ系免疫調節物質、タンパク質キナーゼＣ阻害剤、タンパク質キナーゼＣ阻害剤、ミクロアルガル、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、プルプリン、ピラゾロアクリジン、ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレン共役体、ｒａｆアンタゴニスト、ラルチトレキセド、ラモセトロン、ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ｒａｓ阻害剤、ｒａｓ−ＧＡＰ阻害剤、レテリプチンデメチル化、レニウムＲｅ  １８６エチドロネート、リゾキシン、リボザイム、ＲＩＩレチナミド、ロヒツキン、ロムルチド、ロキニメックス、ルビギノンＢ１、ルボキシル、サフィンゴール、サイントピン、ＳａｒＣＮＵ、サルコフィトールＡ、サルグラモスチム、Ｓｄｉ１模倣体、セムスチン、老化由来阻害剤１、センスオリゴヌクレオチド、シグナル伝達阻害剤、シゾフィラン、ソブゾキサン、ボロカプテイトナトリウム、ナトリウムフェニルアセテート、ソルベロール、ソマトメジン結合タンパク質、ソネルミン、スパルフォシン酸、スピカマイシンＤ、スピロムスチン、スプレノペンチン、スポンギスタチン１、スクアラミン、スチピアミド、ストロメリシン阻害剤、スルフィノシン、超活性血管作用性腸管ペプチドアンタゴニスト、スラジスタ、スラミン、スウェインソニン、タリムスチン、タモキシフェンメチオジド、タウロムスチン、タザロテン、テコガランナトリウム、テガフール、テルラピリリウム、テロメラーゼ阻害剤、テモポルフィン、テニポシド、テトラクロロデカオキシド、テトラゾミン、サリブラスチン、チオコラリン、トロンボポイエチン、トロンボポイエチン模倣体、サイマルファシン、サイモポイエチン受容体アゴニスト、チモトリナン、甲状腺刺激ホルモン、スズエチルエチオプルプリン、チラパザミン、チタノセンジクロリド、トプセンチン、トレミフェン、翻訳阻害剤、トレチノイン、トリアセチルウリジン、トリシリビン、トリメトレキサート、トリプトレリン、トロピセトロン、ツロステリド、チロシンキナーゼ阻害剤、チルフォスチン、ＵＢＣ阻害剤、ウベニメックス、泌尿生殖洞由来成長阻害因子、ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト、バプレオチド、バリオリンＢ、ベラレゾール、ベラミン、ベルジン、ベルテポルフィン、ビダザ、ビノレルビン、ビンキサルチン、ビタキシン、ボロゾール、ザノテロン、ゼニプラチン、ジラスコルブ、及びジノスタチンスチマラマーが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５１】
ある特定の実施形態では、化合物１は、チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与される。一実施形態では、１つのチェックポイント阻害剤が、本明細書に提供される方法に関して化合物１と組み合わせて使用される。別の実施形態では、２つのチェックポイント阻害剤が、本明細書に提供される方法に関して化合物１と組み合わせて使用される。さらに別の実施形態では、３つ以上のチェックポイント阻害剤が、本明細書に提供される方法に関して化合物１と組み合わせて使用される。
【０２５２】
本明細書で使用される場合、「免疫チェックポイント阻害剤」または「チェックポイント阻害剤」という用語は、１つ以上のチェックポイントタンパク質を完全にまたは部分的に減らす、阻害、拮抗、または調節する分子を指す。特定の理論によって制限されることなく、チェックポイントタンパク質は、Ｔ細胞活性化または機能を調節する。ＣＴＬＡ−４とそのリガンドＣＤ８０及びＣＤ８６、ならびにＰＤ−１とそのリガンドＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２などの多くのチェックポイントタンパク質が、既知である（Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ，２０１２，１２，２５２−２６４）。これらのタンパク質は、Ｔ細胞応答の共刺激または阻害性相互作用を担うと思われる。免疫チェックポイントタンパク質は、自己寛容性、ならびに生理学的免疫応答の期間及び程度を調節して維持する。免疫チェックポイント阻害剤は、抗体を含むか、または抗体から誘導される。
【０２５３】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４阻害剤である。一実施形態では、ＣＴＬＡ−４阻害剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体である。抗ＣＴＬＡ−４抗体の例としては、米国特許第５，８１１，０９７号、同第５，８１１，０９７号、同第５，８５５，８８７号、同第６，０５１，２２７号、同第６，２０７，１５７号、同第６，６８２，７３６号、同第６，９８４，７２０号、及び同第７，６０５，２３８号に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されず、これらはすべて、それらの全体が本明細書に組み込まれる。一実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、トレメリムマブ（チシリムマブまたはＣＰ−６７５，２０６としても知られる）である。別の実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０またはＭＤＸ−１０１としても知られる）である。イピリムマブは、ＣＴＬＡ−４に結合する完全ヒトモノクローナルＩｇＧ抗体である。イピリムマブは、Ｙｅｒｖｏｙ（商標）という商品名で販売されている。
【０２５４】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤である。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤の例としては、米国特許第７，４８８，８０２号、同第７，９４３，７４３号、同第８，００８，４４９号、同第８，１６８，７５７号、同第８，２１７，１４９号、ならびにＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２００３０４２４０２号、同第ＷＯ２００８１５６７１２号、同第ＷＯ２０１００８９４１１号、同第ＷＯ２０１００３６９５９号、同第ＷＯ２０１１０６６３４２号、同第ＷＯ２０１１１５９８７７号、同第ＷＯ２０１１０８２４００号、及び同第ＷＯ２０１１１６１６９９号に記載のものが挙げられるが、これらに限定されず、これらはすべて、それらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０２５５】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１阻害剤である。一実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体である。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ（ＯＮＯ−４５３８、ＢＭＳ−９３６５５８、もしくはＭＤＸ１１０６としても知られる）またはペンブロリズマブ（ＭＫ−３４７５、ＳＣＨ９００４７５、もしくはランブロリズマブとしても知られる）である。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブである。ニボルマブは、ヒトＩｇＧ４抗ＰＤ−１モノクローナル抗体であり、Ｏｐｄｉｖｏ（商標）という商品名で販売されている。別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ペンブロリズマブである。ペンブロリズマブは、ヒト化モノクローナルＩｇＧ４抗体であり、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（商標）という商品名で販売されている。さらに別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ヒト化タンパク質ＣＴ−０１１である。単独で投与されたＣＴ−０１１は、再発時に急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療への反応を示すことができない。さらに別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、融合タンパク質ＡＭＰ−２２４である。
【０２５６】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤である。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）である。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＢＭＳ−９３６５５９（ＭＤＸ−１１０５−０１としても知られる）である。さらに別の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ、及びＴｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標）としても知られる）である。
【０２５７】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ２阻害剤である。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ２阻害剤は、抗ＰＤ−Ｌ２抗体である。一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ２抗体は、ｒＨＩｇＭ１２Ｂ７Ａである。
【０２５８】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ−３）阻害剤である。一実施形態では、ＬＡＧ−３阻害剤は、可溶性Ｉｇ融合タンパク質ＩＭＰ３２１である（Ｂｒｉｇｎｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００７，１７９，４２０２−４２１１）。別の実施形態では、ＬＡＧ−３阻害剤は、ＢＭＳ−９８６０１６である。
【０２５９】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、Ｂ７阻害剤である。一実施形態では、Ｂ７阻害剤は、Ｂ７−Ｈ３阻害剤またはＢ７−Ｈ４阻害剤である。一実施形態では、Ｂ７−Ｈ３阻害剤は、抗Ｂ７−Ｈ３抗体ＭＧＡ２７１である（Ｌｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，２０１２，３８３４）。
【０２６０】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ３（Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３）阻害剤である（Ｆｏｕｒｃａｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２０１０，２０７，２１７５−８６、Ｓａｋｕｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２０１０，２０７，２１８７−９４）。
【０２６１】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）アゴニストである。一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＯＸ４０抗体である。一実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、抗ＯＸ−４０である。別の実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、ＭＥＤＩ６４６９である。
【０２６２】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＧＩＴＲアゴニストである。一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＧＩＴＲ抗体である。一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＴＲＸ５１８である。
【０２６３】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＤ１３７アゴニストである。一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＣＤ１３７抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ１３７抗体は、ウレルマブである。別の実施形態では、抗ＣＤ１３７抗体は、ＰＦ−０５０８２５６６である。
【０２６４】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＤ４０アゴニストである。一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＣＤ４０抗体である。一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＣＦ−８７０，８９３である。
【０２６５】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、組換えヒトインターロイキン−１５（ｒｈＩＬ−１５）である。
【０２６６】
一実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯ阻害剤である。一実施形態では、ＩＤＯ阻害剤は、ＩＮＣＢ０２４３６０である。別の実施形態では、ＩＤＯ阻害剤は、インドキシモドである。
【０２６７】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される併用療法は、本明細書に記載のチェックポイント阻害剤（同じまたは異なるクラスのチェックポイント阻害剤を含む）のうちの２つ以上を含む。さらに、本明細書に記載される併用療法は、本明細書に記載される疾患を治療するために適切であり、当該分野で理解される、本明細書に記載される第２の活性薬剤と組み合わせて使用することができる。
【０２６８】
ある特定の実施形態では、化合物１は、それらの表面（例えば、修飾された免疫細胞）上の１つ以上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する１つ以上の免疫細胞と組み合わせて使用することができる。通常、ＣＡＲは、第１のタンパク質、例えば、抗原結合タンパク質）由来の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある特定の実施形態では、一旦細胞外ドメインが、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）などの標的タンパク質に結合すると、シグナルは、例えば、標的タンパク質を発現する細胞を標的とし、死滅させるために、免疫細胞を活性化する細胞内シグナル伝達ドメインを介して生成される。
【０２６９】
細胞外ドメイン：ＣＡＲの細胞外ドメインは、対象となる抗原に結合する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインは、受容体、または該抗原に結合する受容体の一部分を含む。ある特定の実施形態では、細胞外ドメインは、抗体もしくはその抗原結合部分を含むか、または抗体もしくはその抗原結合部分である。特定の実施形態では、細胞外ドメインは、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）ドメインを含むか、または一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）ドメインである。一本鎖Ｆｖドメインは、例えば、可撓性リンカーによってＶＨに連結されたＶＬを含み得、該ＶＬ及びＶＨは、該抗原に結合する抗体由来である。
【０２７０】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチドの細胞外ドメインによって認識される抗原は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）である。様々な特定の実施形態では、腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原は、Ｈｅｒ２、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、α−フェトタンパク質（ＡＦＰ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、がん抗原−１２５（ＣＡ−１２５）、ＣＡ１９−９、カルレチニン、ＭＵＣ−１、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、上皮膜タンパク質（ＥＭＡ）、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）、チロシナーゼ、メラノーマ−２４関連抗原（ＭＡＧＥ）、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ７０、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮成長因子変異体ＩＩＩ）、メソテリン、ＰＡＰ（前立腺酸性ホスファターゼ）、プロステイン、ＴＡＲＰ（Ｔ細胞受容体γ代替リーディングフレームタンパク質）、Ｔｒｐ−ｐ８、ＳＴＥＡＰＩ（前立腺の６回膜貫通上皮抗原１）、クロモグラニン、サイトケラチン、デスミン、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、総嚢胞性疾患液体タンパク質（ＧＣＤＦＰ−１５）、ＨＭＢ−４５抗原、タンパク質メラン−Ａ（Ｔリンパ球によって認識されるメラノーマ抗原；ＭＡＲＴ−Ｉ）、ｍｙｏ−Ｄ１、筋特異的アクチン（ＭＳＡ）、ニューロフィラメント、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、胎盤アルカリホスファターゼ、シナプトフィシス、チログロブリン、甲状腺転写因子−１、二量体形態のピルビン酸キナーゼアイソエンザイムＭ２型(腫瘍Ｍ２−ＰＫ)、異常なｒａｓタンパク質、または異常なｐ５３タンパク質であるが、これらに限定されない。ある特定の他の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインによって認識されるＴＡＡまたはＴＳＡは、インテグリンαvβ３（ＣＤ６１）、ガラクチン、またはＲａｌ−Ｂである。
【０２７１】
ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインによって認識されるＴＡＡまたはＴＳＡは、がん／精巣（ＣＴ）抗原、例えば、ＢＡＧＥ、ＣＡＧＥ、ＣＴＡＧＥ、ＦＡＴＥ、ＧＡＧＥ、ＨＣＡ６６１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−８５、ＭＡＧＥＡ、ＭＡＧＥＢ、ＭＡＧＥＣ、ＮＡ８８、ＮＹ−ＥＳ０−１、ＮＹ−ＳＡＲ−３５、ＯＹ−ＴＥＳ−１、ＳＰＡＮＸＢＩ、ＳＰＡ１７、ＳＳＸ、ＳＹＣＰＩ、またはＴＰＴＥである。
【０２７２】
ある特定の他の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインによって認識されるＴＡＡまたはＴＳＡは、炭水化物またはガングリオシド、例えば、ｆｕｃ−ＧＭＩ、ＧＭ２（腫瘍胎児抗原−免疫原性−１、ＯＦＡ−Ｉ−１）、ＧＤ２（ＯＦＡ−Ｉ−２）、ＧＭ３、ＧＤ３等である。
【０２７３】
ある特定の他の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインによって認識されるＴＡＡまたはＴＳＡは、アルファ−アクチニン−４、Ｂａｇｅ−１、ＢＣＲ−ＡＢＬ、Ｂｃｒ−Ａｂｌ融合タンパク質、ベータ−カテニン、ＣＡ  １２５、ＣＡ  １５−３（ＣＡ  ２７．２９＼ＢＣＡＡ）、ＣＡ  １９５、ＣＡ  ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、Ｃａｓｐ−８、ｃｄｃ２７、ｃｄｋ４、ｃｄｋｎ２ａ、ＣＥＡ、ｃｏａ−１、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＥＢＮＡ、ＥＦ２、エプスタインバーウイルス抗原、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１融合タンパク質、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａｌｌ、ｈｓｐ７０−２、ＫＩＡＡ０２０５、Ｍａｒｔ２、Ｍｕｍ−１、２、及び３、ｎｅｏ−ＰＡＰ、ミオシンクラスＩ、ＯＳ−９、ｐｍｌ−ＲＡＲα融合タンパク質、ＰＴＰＲＫ、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、トリオースホスファートイソメラーゼ、Ｇａｇｅ  ３，４，５，６，７、ＧｎＴＶ、Ｈｅｒｖ−Ｋ−ｍｅｌ、Ｌａｇｅ−１、ＮＡ−８８、ＮＹ−Ｅｓｏ−１／Ｌａｇｅ−２、ＳＰ１７、ＳＳＸ−２、ＴＲＰ２−Ｉｎｔ２、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−３、ＲＡＧＥ、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ｐ１５（５８）、ＲＡＧＥ、ＳＣＰ−１、Ｈｏｍ／Ｍｅｌ−４０、ＰＲＡＭＥ、ｐ５３、ＨＲａｓ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６及びＥ７、ＴＳＰ−１８０、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｎｍ−２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２−４、ＣＡ  １９−９、ＣＡ  ７２−４、ＣＡＭ  １７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、１３−カテニン、Ｍｕｍ−１、ｐ１６、ＴＡＧＥ、ＰＳＭＡ、ＣＴ７、テロメラーゼ、４３−９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、１３ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＤ６８＼ＫＰ１、Ｃ０−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ＼７０Ｋ、ＮＹ−Ｃ０−１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、またはＴＰＳである。
【０２７４】
様々な特定の実施形態では、腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原は、Ｓ．Ａｎｇｕｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｌｅｕｋｅｍｉａ（２０１２），２６，２１８６−２１９６に記載されるような、ＡＭＬ関連腫瘍抗原である。
【０２７５】
他の腫瘍関連抗原及び腫瘍特異的抗原は、当業者に既知である。
【０２７６】
キメラ抗原受容体を構築する際に有用なＴＳＡ及びＴＡＡに結合する受容体、抗体、及びｓｃＦｖは、それらをコードするヌクレオチド配列として当該分野で既知である。
【０２７７】
ある種の特定の実施形態では、キメラ抗原受容体の細胞外ドメインによって認識される抗原は、ＴＳＡまたはＴＡＡであるが、それにもかかわらず腫瘍細胞に関連するものであるか、または腫瘍によって引き起こされる損傷であると一般にみなされない抗原である。ある特定の実施形態では、例えば、抗原は、例えば、成長因子、サイトカイン、またはインターロイキン、例えば成長因子、サイトカイン、または血管新生もしくは血管形成に関連するインターロイキンである。かかる成長因子、サイトカイン、またはインターロイキンは、例えば、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、またはインターロイキン−８（ＩＬ−８）を含み得る。腫瘍は、腫瘍に局所的な低酸素環境も作製し得る。したがって、他の特定の実施形態では、抗原は、低酸素症関連因子、例えば、ＨＩＦ−１α、ＨＩＦ−１β、ＨＩＦ−２α、ＨＩＦ−２β、ＨＩＦ−３α、またはＨＩＦ−３βである。腫瘍はまた、正常組織に局所的な損傷をもたらす可能性があり、損傷関連分子パターン分子（ＤＡＭＰ、別名アラルミン）としても知られる分子の放出を引き起こす。したがって、ある種の他の特定の実施形態では、抗原は、ＤＡＭＰ、例えば、熱ショックタンパク質、クロマチン関連タンパク質高移動度群ボックス１（ＨＭＧＢ１）、Ｓ１００Ａ８（ＭＲＰ８、カルグラニュリンＡ）、Ｓ１００Ａ９（ＭＲＰ１４、カルグラニュリンＢ）、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）であるか、またはデオキシリボ核酸、アデノシン三リン酸、尿酸、もしくはヘパリン硫酸であり得る。
【０２７８】
膜貫通ドメイン：ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインは、リンカー、スペーサ、またはヒンジポリペプチド配列、例えば、ＣＤ２８由来の配列もしくはＣＴＬＡ４由来の配列によってポリペプチドの膜貫通ドメインに結合される。膜貫通ドメインは、任意の膜貫通タンパク質の膜貫通ドメインから得られ得るか、またはそれに由来し得、かかる膜貫通ドメインのすべてまたはその一部分を含み得る。特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、ＣＤ８、ＣＤ１６、サイトカイン受容体、及びインターロイキン受容体、または成長因子受容体等から得られ得るか、またはそれに由来し得る。
【０２７９】
細胞内シグナル伝達ドメイン：ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内ドメインは、Ｔ細胞の表面上で発現されるタンパク質の細胞内ドメインまたはモチーフであるか、またはそれらを含み、該Ｔ細胞の活性化及び／または増殖をもたらす。かかるドメインまたはモチーフは、ＣＡＲの細胞外部分への抗原の結合に応答してＴリンパ球の活性化に必要な一次抗原結合シグナルを伝送することができる。典型的には、このドメインまたはモチーフは、ＩＴＡＭ（免疫受容体チロシン系活性化モチーフ）を含むか、またはＩＴＡＭである。ＣＡＲに好適なＩＴＡＭ含有ポリペプチドには、例えば、ゼータＣＤ３鎖（ＣＤ３ζ）またはそのＩＴＡＭ含有部分が含まれる。特定の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達ドメインである。他の特定の実施形態では、細胞内ドメインは、リンパ球受容体鎖、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体タンパク質、Ｆｅ受容体サブユニット、またはＩＬ−２受容体サブユニット由来である。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、さらに、例えば、ポリペプチドの細胞内ドメインの一部として１つ以上の共刺激ドメインまたはモチーフを含む。１つ以上の共刺激ドメインまたはモチーフは、共刺激ＣＤ２７ポリペプチド配列、共刺激ＣＤ２８ポリペプチド配列、共刺激ＯＸ４０（ＣＤ１３４）ポリペプチド配列、共刺激４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）ポリペプチド配列、または共刺激誘導性Ｔ細胞共刺激性（ＩＣＯＳ）ポリペプチド配列、または他の共刺激ドメインもしくはモチーフ、またはそれらの任意の組み合わせのうちの１つ以上であり得るか、またはそれらを含み得る。
【０２８０】
ＣＡＲは、Ｔ細胞生存モチーフも含み得る。Ｔ細胞生存モチーフは、抗原による刺激後のＴリンパ球の生存を促進する任意のポリペプチド配列またはモチーフであり得る。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞生存モチーフは、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＩＬ−７受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン（ＩＬ−７Ｒ）、ＩＬ−１２受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＬ−１５受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＬ−２１受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、または形質転換成長因子β（ＴＧＦβ）受容体の細胞内シグナル伝達ドメインであるか、またはそれらに由来する。
【０２８１】
ＣＡＲを発現する修飾免疫細胞は、例えば、Ｔリンパ球（Ｔ細胞、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞）、細胞傷害性リンパ球（ＣＴＬ）、または天然キラー（ＮＫ）細胞であり得る。本明細書に提供される組成物及び方法で使用されるＴリンパ球は、ナイーブＴリンパ球またはＭＨＣの制限されたＴリンパ球であり得る。ある特定の実施形態では、Ｔリンパ球は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である。ある特定の実施形態では、Ｔリンパ球は、腫瘍生検から単離されているか、または腫瘍生検から単離されたＴリンパ球から拡大されたものである。ある特定の他の実施形態では、Ｔ細胞は、末梢血、臍帯血、またはリンパ液から単離されたものであるか、または末梢血、臍帯血、もしくはリンパ液から単離されたＴリンパ球から拡大されるものである。ＣＡＲを発現する修飾免疫細胞を生成するために使用される免疫細胞は、当該分野で認められた常法、例えば、血液収集後、アフェレーシス及び任意に抗体媒介性の細胞単離または選別を使用して単離され得る。
【０２８２】
修飾免疫細胞は、好ましくは修飾免疫細胞が投与される個体に自己移植される。ある特定の他の実施形態では、修飾免疫細胞は、修飾免疫細胞が投与される個体に同種である。同種Ｔリンパ球またはＮＫ細胞は、修飾されたＴリンパ球を調製するために使用される場合、個体における移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）の可能性を低めるであろうＴリンパ球またはＮＫ細胞を選択することが好ましい。例えば、ある特定の実施形態では、ウイルス特異的Ｔリンパ球は、修飾Ｔリンパ球の調製のために選択され、かかるリンパ球は、任意のレシピエント抗原に結合する著しく低減された天然能力を有することが予想され、それ故に、それらによって活性化されるであろう。ある特定の実施形態では、同種Ｔリンパ球のレシピエント媒介性拒絶は、１つ以上の免疫抑制剤、例えば、シクロスポリン、タクロリムス、シロリムス、シクロホスファミド等の宿主への共投与により減少され得る。
【０２８３】
Ｔリンパ球、例えば、未修飾Ｔリンパ球、またはＣＤ３及びＣＤ２８を発現するＴリンパ球、またはＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８共刺激ドメインを含むポリペプチドを含むＴリンパ球は、ＣＤ３及びＣＤ２８への抗体、例えば、ビーズに結合した抗体を使用して拡張され得、例えば、米国特許第５，９４８，８９３号、同第６，５３４，０５５号、同第６，３５２，６９４号、同第６，６９２，９６４号、同第６，８８７，４６６号、及び同第６，９０５，６８１号を参照されたい。
【０２８４】
修飾免疫細胞、例えば、修飾Ｔリンパ球は、所望される場合、修飾免疫細胞の実質的にすべての死滅を可能にする「自殺遺伝子」または「安全スイッチ」を任意に含むことができる。例えば、修飾Ｔリンパ球は、ある特定の実施形態では、ガンシクロビルと接触した時に、修飾Ｔリンパ球の死をもたらす、ＨＳＶチミジンキナーゼ遺伝子（ＨＳＶ−ＴＫ）を含むことができる。別の実施形態では、修飾Ｔリンパ球は、誘導性カスパーゼ、例えば、誘導性カスパーゼ９（ｉｃａｓｐａｓｅ９）、例えば、カスパーゼ９と特定の低分子医薬を使用した二量体化を可能にするヒトＦＫ５０６結合タンパク質との融合タンパク質を含む。Ｓｔｒａａｔｈｏｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １  ０５（１１）：４２４７−４２５４（２００５）を参照されたい。
【０２８５】
方法または組成物に特に有用な特定の第２の活性薬剤としては、リツキシマブ、オブリマーセン（Ｇｅｎａｓｅｎｓｅ （登録商標））、レミケード、ドセタキセル、セレコキシブ、メルファラン、デキサメタゾン（デカドロン （登録商標））、ステロイド、ゲムシタビン、シスプラチナム、テモゾロミド、エトポシド、シクロホスファミド、テモダール、カルボプラチン、プロカルバジン、グリアデル、タモキシフェン、トポテカン、メトトレキサート、Ａｒｉｓａ （登録商標）、タキソール、タキソテレ、フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン、キセロダ、インターフェロンα、ペグ化インターフェロンα（例えば、ＰＥＧ  ＩＮＴＲＯＮ−Ａ）、カペシタビン、シスプラチン、チオテパ、フルダラビン、カルボプラチン、リポソームダウノノルビシン、Ａｒａ−Ｃ、ドキセタキソール、パシリタキセル、ビンブラスチン、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、ダカルバジン、ビノレルビン、ゾレドロン酸、パルミトロナート、バイアキシン、ブスルファン、プレドニゾン、ビスホスホネート、三酸化ヒ素、ビンクリスチン、ドキソルビシン（Ｄｏｘｉｌ （登録商標））、パクリタキセル、ガンシクロビル、アドリアマイシン、エストラムスチンリン酸ナトリウム（Ｅｍｃｙｔ （登録商標））、スリンダク、及びエトポシドが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載される方法または組成物のいくつかの実施形態では、第２の活性薬剤は、エナシデニブ、アザシチジン、ＣＣ−４８６、デシタビン、シタラビン（ａｒａ−Ｃ）、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、イダルビシン、クラドリビン、ミドスタウリン、フルダラビン、トポテカン、三酸化ヒ素、またはミトキサントロンのうちの１つ以上である。
【０２８６】
本明細書に提供される方法のある特定の実施形態では、化合物１と組み合わせた第２の活性薬剤の使用は、当業者によって適切であるとみなされるように、本明細書に提供される化合物１の投与中または投与直後に修飾または遅延され得る。ある特定の実施形態では、化合物１を単独でまたは他の療法剤と組み合わせて投与される対象は、適切な場合、制吐薬、骨髄成長因子、及び血小板の注入を含む支持療法を受け得る。いくつかの実施形態では、化合物１を投与される対象は、当業者の判断に従って、第２の活性薬剤として成長因子を投与され得る。いくつかの実施形態では、エリスロポエチンまたはダルベポエチン（Ａｒａｎｅｓｐ）と組み合わせた化合物１の投与が提供される。
【０２８７】
ある特定の実施形態では、化合物１は、三酸化ヒ素、フルダラビン、カルボプラチン、ダウノルビシン、シクロホスファミド、シタラビン、ドキソルビシン、イダルビシン、塩酸ミトキサントロン、チオグアニン、ビンクリチン、及び／またはトポテカンと組み合わせて、不応性または再発性急性骨髄性白血病を含む急性骨髄性白血病を有する患者に投与される。ある特定の実施形態では、化合物１は、三酸化ヒ素、フルダラビン、カルボプラチン、ダウノルビシン、シクロホスファミド、シタラビン、ドキソルビシン、イダルビシン、塩酸ミトキサントロン、チオグアニン、ビンクリチン、トポテカン、及び／またはエナシデニブと組み合わせて、不応性または再発性急性骨髄性白血病を含む急性骨髄性白血病を有する患者に投与される。
【０２８８】
ある特定の実施形態では、化合物１は、アザシチジン、シタラビン、ダウノルビシン、デシタビン、イダルビシン、またはレナリドミドと組み合わせて、ＭＤＳを有する患者に投与される。ある特定の実施形態では、化合物１は、アザシチジン、ＣＣ−４８６、シタラビン、ダウノルビシン、デシタビン、イダルビシン、またはレナリドミドと組み合わせて、ＭＤＳを有する患者に投与される。
【０２８９】
本明細書に提供される化合物と前述の化合物のうちの１つ以上及び任意に１つ以上のさらなる薬理学的に活性な物質とのすべての好適な組み合わせが、本明細書に企図されることが認識されよう。
【０２９０】
６．７患者集団
本明細書に提供される方法のある特定の実施形態では、対象は、動物、例えば哺乳動物、または非ヒト霊長類である。特定の実施形態では、対象は、ヒトである。対象は、男性または女性対象であり得る。
【０２９１】
本明細書に提供される方法に対して特に有用な対象は、ヒト白血病患者、例えば、再発性または不応性急性骨髄性白血病を含む急性骨髄性白血病であると診断されている患者を含む。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、対象は、１８歳以上である。いくつかの実施形態では、対象は、１８、２５、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、または７０歳超である。他の実施形態では、対象は、６５歳未満である。
【０２９３】
いくつかの実施形態では、対象は、白血病に対する対象の米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータススコアに基づいて治療される。いくつかの実施形態では、対象は、０〜２のＥＣＯＧパフォーマンスステータススコアを有する。いくつかの実施形態では、対象は、０のＥＣＯＧパフォーマンスステータススコアを有する。いくつかの実施形態では、対象は、１のＥＣＯＧパフォーマンスステータススコアを有する。他の実施形態では、対象は、２のＥＣＯＧパフォーマンスステータススコアを有する。
【０２９４】
いくつかの実施形態では、対象は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に対する対象の米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータススコアに基づいて治療される。いくつかの実施形態では、対象は、０〜１のＥＣＯＧパフォーマンスステータススコアを有する。いくつかの実施形態では、対象は、０のＥＣＯＧパフォーマンスステータススコアを有する。いくつかの実施形態では、対象は、１のＥＣＯＧパフォーマンスステータススコアを有する。
【０２９５】
いくつかの実施形態では、対象は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）に対する対象の米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータススコアに基づいて治療される。いくつかの実施形態では、対象は、０〜２のＥＣＯＧパフォーマンスステータススコアを有する。いくつかの実施形態では、対象は、０のＥＣＯＧパフォーマンスステータススコアを有する。いくつかの実施形態では、対象は、１のＥＣＯＧパフォーマンスステータススコアを有する。他の実施形態では、対象は、２のＥＣＯＧパフォーマンスステータススコアを有する。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、対象は、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）に対する対象の米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータススコアに基づいて治療される。いくつかの実施形態では、対象は、０〜２のＥＣＯＧパフォーマンスステータススコアを有する。いくつかの実施形態では、対象は、０のＥＣＯＧパフォーマンスステータススコアを有する。いくつかの実施形態では、対象は、１のＥＣＯＧパフォーマンスステータススコアを有する。他の実施形態では、対象は、２のＥＣＯＧパフォーマンスステータススコアを有する。
【０２９７】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、前処置なしにドナーリンパ球輸注（ＤＬＩ）から少なくとも４週間（化合物１の初回投与から）が経過した対象の治療を包含する。
【０２９８】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、以下のスクリーニング臨床検査値を有する対象の治療を包含する。
正常範囲内（ＷＮＬ）の補正された血清Ｃａまたは遊離（イオン化）血清Ｃａ
補正されたＣａ（ｍｇ／ｄＬ）＝総Ｃａ（ｍｇ／ｄＬ）−０．８（アルブミン［ｇ／ｄＬ］−４）
最初の輸注前の総白血球数（ＷＢＣ）＜２５×１０９／Ｌこのレベルを達成するために、先の白血球除去及び／またはヒドロキシウレアでの前治療もしくは同時治療が許される。
正常範囲内または補充物で訂正可能なカリウム及びマグネシウム
アスパルテートアミノトランスフェラーゼ／血清グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ／ＳＧＯＴ）またはアラニンアミノトランスフェラーゼ／血清グルタメートピルビン酸トランスアミナーゼ（ＡＬＴ／ＳＧＰＴ）≦２．５×正常範囲の上限（ＵＬＮ）。
尿酸≦７．５ｍｇ／ｄＬ（４４６μｍｏｌ／Ｌ）尿酸低下剤での前治療及び／または同時治療（例えば、アロプリノール、ラスブリカーゼ）が許される。
血清ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ
コッククロフト・ゴールト式を使用する≧６０ｍＬ／分の推定された血清クレアチニンクリアランス
ＩＮＲ＜１．５×ＵＬＮ及びＰＴＴ＜１．５×ＵＬＮ
【０２９９】
他の実施形態では、本方法は、白血病について以前に治療された対象、または現在治療されている対象を治療することを包含する。例えば、対象は、白血病についての標準的な治療レジメンで以前に治療されていてよく、または現在治療されている。対象は、当業者により処方された任意の白血病治療レジメンで治療されていてもよい。ある特定の実施形態では、対象は、少なくとも１つの導入／再導入または強化ＡＭＬレジメンで以前に治療された。いくつかの実施形態では、対象は、強化レジメンの一部として、自己骨髄移植または幹細胞移植を受けている。
【０３００】
ある特定の実施形態では、対象は、活性中枢神経系（ＣＮＳ）白血病または既知のＣＮＳ白血病を示唆する臨床症状を有しない。
【０３０１】
ある特定の実施形態では、対象は、白血病のすぐに致命的な重度の合併症、例えば播種性／制御不能の感染、制御不能の出血、及び／または制御不能の播種性血管内凝固を有しない。
【０３０２】
ある特定の実施形態では、対象は、心機能不全または臨床的に有意な心疾患を有しない。
【０３０３】
いくつかの実施形態では、対象は、本明細書に提供される方法に従って化合物１の治療の３ヶ月前または３ヶ月未満前に、先の自家造血幹細胞移植を受けていない。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、対象は、本明細書に提供される方法に従って化合物１での治療を開始する６ヶ月未満前に、標準または強度軽減前処置のいずれかを伴う先の自家造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けていない。
【０３０５】
いくつかの実施形態では、対象は、ＨＳＣＴ後の全身性免疫抑制療法を受けていないか、または臨床的に有意な移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を有していない。
【０３０６】
いくつかの実施形態では、対象は、５半減期または化合物１の治療を開始する４週間前のいずれか短い方で、先の全身性がん配向性治療を受けていない。いくつかの実施形態では、対象は、ヒドロキシウレア治療を受けた。
【０３０７】
いくつかの実施形態では、対象は、化合物１の治療を開始する２週間未満前に大手術を受けていない。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、対象は、既知のＨＩＶ感染を有していない。いくつかの実施形態では、対象は、既知の慢性、活性Ｂ型またはＣ型肝炎（ＨＢＶ／ＨＣＶ）感染を有していない。
【０３０９】
いくつかの実施形態では、対象は、抗凝固剤（例えば、ワルファリン、低分子重量ヘパリン、第Ｘａ因子阻害剤）の慢性治療的投与を伴う治療を受けていない。いくつかの実施形態では、対象は、活発な進行中の全身性治療を必要とする同時第２のがんの病歴を有していない。
【０３１０】
ある特定の実施形態では、対象は、正常なカルシウムホメオスタシスを妨害するか、またはカルシウムの補充を妨げる障害または病態を有していない。
【０３１１】
がんを有する対象は、異種の臨床症状及び様々な臨床転帰を有するため、患者に与えられる治療は、予後に応じて変更し得る。臨床医であれば、過度の実験の具体的な二次薬剤、ある種の手術、及びがんを有する個体対象を治療するために効果的に使用され得るある種の非薬物系標準的治療なしに容易に決定することができるであろう。
【０３１２】
６．８活性の評価
標準的な生理学的、薬理学的、及び生化学的手順は、化合物を試験して、所望の抗増殖活性を有するものを特定するのに利用可能である。
【０３１３】
そのようなアッセイとしては、生化学的アッセイ、例えば、結合アッセイ、放射能組込みアッセイ、ならびに様々な細胞系アッセイが挙げられる。
【０３１４】
本明細書に提供される実施形態は、以下の実施例を参照することによってより完全に理解され得る。これらの実施例は、本明細書に提供される薬学的組成物及び投薬形態の例示であることを意味する。
【実施例】
【０３１５】
以下の実施例は、例示として提示されており、限定するものではない。以下の略語を説明及び実施例で使用する。
ＡＢＣ＝活性化Ｂ細胞、
ＡＬＬ＝急性リンパ芽球性白血病、
ＡＭＬ＝急性骨髄性白血病、
ＡＴＣＣ＝アメリカ培養組織系統保存機関、
ＡＵＣ＝曲線下面積＝活性領域、
ＡＶ＝アネキシンＶ、
ＢＣＬ＝Ｂ細胞リンパ腫、
ＢＦＵ−Ｅ＝赤血球のバースト形成単位、
ＢＭＥ＝β−メルカプトエタノール
ＣＦＵ−Ｅ＝赤血球のコロニー形成単位、
ＣＦＵ−ＧＥＭＭ＝顆粒球／赤血球／単球／巨核球のコロニー形成単位、
ＣＦＵ−ＧＭ＝顆粒球／単球のコロニー形成単位、
ＣＬＬ＝慢性リンパ性白血病、
ｃ−Ｍａｆ＝ｖ−ｍａｆ鳥類筋腱膜線維肉腫腫瘍遺伝子相同体、
ＤＬＢＣＬ＝びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、
ＤＭＥＭ＝ダルベッコ改変イーグル培地、
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド、
ＤＳＭＺ＝Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ、
ＦＡＢ＝フランス・アメリカ・イギリス、
ＦＢＳ＝胎仔血清、
ＦＧＦＲ３＝線維芽細胞成長因子受容体３、
ＧＣＢ＝胚中心Ｂ
ｇ／Ｌ＝グラム／リットル、
ＧＭ  ＣＳＦ＝顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、
ｈｒ＝時間（複数可）、
ＨＥＰＥＳ＝２−［４−（２ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］エタンスルホン酸、
ＨＰ＝ハプトグロビン、
ＨＰＣ＝造血前駆細胞
ＩＭＤＭ＝イスコフ改変ダルベッコ培地、
ＴＢＡ＝Ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、
ＭＣＬ＝マントル細胞リンパ腫、
Ｎ＝実験の数、
ＮＡ＝該当なし、
ＮＦ＝「良好な曲線」の当嵌なし、
ｎＭ＝ナノモル、
ＮＲ＝ランク付けなし、
ＰＢＭＣ＝末梢血単核細胞、
ＭａｆＢ＝Ｖ−ｍａｆ筋腱膜線維肉腫腫瘍遺伝子相同体Ｂ、
ＭＥＭ＝最小必須培地、
ＭＭＳＥＴ＝多発性骨髄腫ＳＥＴドメイン、
ＲＰＭＩ＝ロズウェルパーク祈念研究所組織培養培地、
ＳＤ＝標準偏差、
μＭ＝マイクロモル、及び
ｙ＝年齢。
【０３１６】
実施例１：凍結乾燥製剤
表Ａ及びＢに記載される組成物を有する化合物１の凍結乾燥製剤は、米国出願第１５／４００，７９１号に記載される手順を使用して調製した。
表Ａ
【表８】
2019517587.tif 000012
表Ｂ
【表９】
2019517587.tif 000013
【０３１７】
実施例２：インビトロでのＡＭＬ細胞株における化合物１の抗増殖及びアポトーシス促進効果の評価、ならびにＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）（ＣＴＧ）発光細胞生存性アッセイを介した非腫瘍原性正常細胞の３日間の比較
細胞培養材料：ヒトＡＭＬ、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、バーキットリンパ腫、及び骨髄腫細胞株は、表１に示されるベンダーから購入した。
【０３１８】
表２及び表３ヒト正常ドナーＰＢＭＣ及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）患者の芽球は、ＡｌｌＣｅｌｌｓ，ＬＬＣ（Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）から入手した。造血性及び原発性細胞試料を、表１に示される培地中、５％  ＣＯ２とともに３７℃で培養した。
【０３１９】
表２及び表３すべての細胞株を、ログ相に保持し、細胞密度及び生存性を、Ｖｉ−ｃｅｌｌ  ＸＲ細胞生存性分析装置（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｂｒｅａ，ＣＡ）を使用してトリパンブルー排除によって監視した。ヒトＰＢＭＣを、Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）ＢｉｏＣｏａｔ（商標）Ｔ細胞活性化抗ヒトＣＤ３  ９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）上で培養した。
表１：試験した急性骨髄性白血病細胞株
【表１０】
2019517587.tif 000014
表２：試験したリンパ腫細胞株
【表１１】
2019517587.tif 000015
2019517587.tif 000016
表３：試験した多発性骨髄腫細胞株
【表１２】
2019517587.tif 000017
【０３２０】
試験品の調製：化合物を、最大体積５０μＬを想定して０．１％の最終ＤＭＳＯ体積まで、ブラック３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．）に播種した。１：３の希釈で１０μＭから開始する１０点用量応答を、ＥＤＣ  ＡＴＳ−１００プラットフォームを使用して、音響分注により重複してプリントした。
【０３２１】
細胞増殖アッセイ：血液学的細胞株の増殖／生存性に対する化合物１の効果（表１
【０３２２】
表２、及び表３）、ＴＨＬＥ−２またはＰＢＭＣを、製造者の指示に従い、ＣＴＧ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して７２時間のインキュベーション後に査定した。血液学的細胞株を、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ（商標）Ｃｏｍｂｉ試薬分注器（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）によって、５０μＬ総体積中０．１〜０．３×１０６細胞／ｍＬの濃度で化合物プレートに分注した。ＴＨＬＥ−２細胞を、５０μＬ体積中１０００細胞／ウェルで播種し、７２時間インキュベートした。７２時間目に、２５μＬ／ウェルのＣＴＧを、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ（商標）Ｃｏｍｂｉ試薬分注器により分注し、生存細胞による三リン酸アデノシン（ＡＴＰ）の放出を、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプラットフォームを使用して３０分後に相対発光単位として測定した。
【０３２３】
凍結ＰＢＭＣの場合、細胞を、１０％  ＦＢＳを有するＲＰＭＩ中、３７℃で２分間解凍し、細胞数及び生存性を、前述の通りＶｉＣｅｌｌ上で測定した。末梢血単核細胞を洗浄し、１×１０６細胞／ｍＬまで希釈し、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ（商標）Ｃｏｍｂｉ試薬分注器によって、２５μＬ／ウェルの体積で化合物プレートに分注し、２時間インキュベートした。２時間後、２５μＬの抗体ＣＤ３抗体結合ビーズ（１細胞：２抗ヒトＣＤ３抗体でコーティングされたＭ−４５０ビーズ）を、ウェル毎に分注し、さらに７２時間インキュベートした。７２時間後、製造者の指示に従いヒトＩＬ−２  ３８４ウェル組織培養キット（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用して、インターロイキン（ＩＬ）−２放出を分析するために、１５μＬの上澄みを収集し、残りの細胞上澄みをＣＴＧで処理した。
【０３２４】
細胞アポトーシスアッセイ：化合物１がアポトーシスを誘導する能力を、選択されたＡＭＬ細胞株及び健康なＰＢＭＣにおいて、示された時点及び化合物濃度で査定した。フローサイトメトリーによるＡｎｎｅｘｉｎ  Ｖ／７−ＡＡＤ読取りの場合、ＡＭＬ細胞株を、平底９６ウェルプレート（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ）に、２００μＬ完全培地中０．１〜０．３×１０６細胞／ｍＬの播種密度で播種した。化合物１をプレート上に分注し、細胞を示された時間にわたってインキュベートした。凍結したＰＢＭＣの場合、細胞を前述の通り解凍し、２００μＬ中１×１０６細胞／ｍＬの播種密度で、Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）ＢｉｏＣｏａｔ（商標）Ｔ細胞活性化抗ヒトＣＤ３  ９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）上に播種した。化合物１をプレート上に分注し、細胞を示された時間にわたってインキュベートした。インキュベーション期間の最後に、１００μＬの細胞を９６ウェルＵ底プレート（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ）に移し、１２００ｒｐｍで５分間遠心分離し、培地を除去した。次いで、２．５μＬのＡｎｎｅｘｉｎ  Ｖ−ＡＦ６４７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及び５μＬの７−ＡＡＤ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を、１００μＬの１Ｘ  Ａｎｎｅｘｉｎ結合緩衝剤（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に添加した。１００マイクロリットルのＡｎｎｅｘｉｎ  Ｖ／７−ＡＡＤ緩衝剤をウェル毎に添加し、細胞を１５分間インキュベートした後、Ａｔｔｕｎｅフローサイトメーター（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して分析した。カスパーゼ３／７活性の場合、残りの１００μＬを、ＣｅｌｌＥｖｅｎｔ（商標）カスパーゼ−３／７  Ｇｒｅｅｎ  ＲｅａｄｙＰｒｏｂｅｓ（登録商標）試薬（１：１０００希釈、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）で１５分間インキュベートした後、Ａｔｔｕｎｅフローサイトメーターを使用して分析した。細胞の健康を査定するためのオルトゴナル法としてミトコンドリア電位を測定する場合、ＪＣ−１ミトコンドリア膜電位アッセイキット（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，Ｍｉｃｈｉｇａｎ）を製造者の指示に従って用い、ＴＥＣＡＮ  Ｓａｆｉｒｅ  ＩＩマルチモードプレートリーダーを使用して読み取った。
【０３２５】
化合物１ウォッシュアウトアッセイ：ウォッシュアウト実験の場合、ＡＭＬ細胞株を、Ｕ底９６ウェルプレートに６０，０００細胞／ウェルの密度で播種した。すべての細胞を、ゼロ時間（ｔ＝０）に化合物１で処理し、次いで各時点で、細胞を化合物作用濃度を１００倍超えるグルタルイミド（例えば、１００ｎＭの化合物処理のウォッシュアウトの場合、１００μＭのグルタルイミド）を含有するウォッシュアウト培地中に再懸濁した。インキュベーション期間の最後に、プレートを２００ｇで３分間遠心分離し、上澄みを除去し、Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ（２．５μＬ／ウェル）及び７−ＡＡＤ（５μＬ／ウェル）を含有する１００μＬ／ウェル１Ｘ  Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ結合緩衝剤中に細胞を再懸濁した。フローサイトメトリーを、ＢＤ  ＦＡＣＳａｒｒａｙ器具を使用して行い、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して結果を定量化した。同時に、ＣＴＧを９６（ブラック）ウェルプレートに添加し、細胞増殖アッセイにおいて上記のように処理した。
【０３２６】
結果．化合物１は、急性骨髄性白血病細胞株のパネルにわたって抗増殖活性を明示する。化合物１のインビトロ抗増殖活性を、１１個のＡＭＬ細胞株のパネルにおいて試験した。この研究に対して選択された細胞株は、ＡＭＬ患者において見られる広範囲の表現型を表す（表１）。化合物１は、７２時間後に培地中に存在するＡＴＰレベルの定量的査定によって決定して、査定された１１個のＡＭＬ細胞株のうち１０個において細胞増殖を阻害した。化合物１の抗増殖ＩＣ５０値は、試験された１１個のＡＭＬ細胞株のうち１０個において３〜７５ｎＭの範囲であった（表４）。１つのＡＭＬ細胞株（ＯＣＩ−ＡＭＬ３）は、化合物１の成長阻害効果に対して比較的感受性が低かった（ＩＣ５０＝３μＭ）。化合物１の抗増殖効果はまた、多発性骨髄腫及びリンパ腫細胞株のパネル、ならびにＣＬＬ患者試料において試験した（表２、表３、及び表４）。
表４：液体培養物中の急性骨髄性白血病細胞株のパネルにおける化合物１による細胞増殖の阻害
【表１３】
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【０３２７】
増殖は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを使用して査定した。化合物１でインキュベートした培養物についての結果を、各細胞株の対照培養物についての結果に対して正規化した。化合物１による細胞増殖の阻害に対するＩＣ５０を、ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅソフトウェアを使用して、各細胞株について決定した。
【０３２８】
ソース：Ｑｕｅｎｔｍｅｉｅｒ，２００５；Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎウェブサイト（ａｔｃｃｏｒｇ／Ｐｒｏｄｕｃｔｓ／Ｃｅｌｌｓ＿ａｎｄ＿Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ／Ｂｙ＿Ｄｉｓｅａｓｅ＿Ｍｏｄｅｌ／Ｃａｎｃｅｒ／Ｓｏｕｒｃｅ＿Ｔｉｓｓｕｅ／Ｌｅｕｋｅｍｉａ．ａｓｐｘ）、Ｌｅｉｂｎｉｚ−Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  ＤＳＭＺ−Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨウェブサイト（ｄｓｍｚ．ｄｅ／ｃａｔａｌｏｇｕｅｓ／ｃａｔａｌｏｇｕｅ−ｈｕｍａｎ−ａｎｄ−ａｎｉｍａｌ−ｃｅｌｌ−ｌｉｎｅｓ．ｈｔｍｌ）。
表５：多発性骨髄腫及びリンパ腫細胞株のパネルにおける化合物１の抗増殖効果（続き）
【表１４】
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【０３２９】
化合物１の治療濃度域を計算するために、化合物を、不死化（但し、非腫瘍原性）ヒト肝細胞由来細胞株ＴＨＬＥ−２（Ｐｆｅｉｆｅｒ，ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １９９３  ９０（１１）：５１２３−５１２７）に対して、及び一次ヒトＰＢＭＣに対してカウンタースクリーニングした。化合物１は、ＡＭＬ細胞株と比較して、ＴＨＬＥ−２（ＩＣ５０  約１０μＭ）における抗増殖活性の低減を明示したが、一次ヒトＰＢＭＣに対していくらかの活性を有していた（ＩＣ５０＝０．１２μＭ）。ＴＨＬＥ−２細胞と比較した１０個の感受性ＡＭＬ細胞株に対する化合物１治療濃度域は、４．１（ＫＧ−１ａ）〜５７（ＨＮＴ−３４）（方法１）または５．７（ＫＧ−１ａ）〜７９．５（ＨＮＴ−３４）（方法２）の範囲であった。ＰＢＭＣと比較した化合物１治療濃度域は、２．６（ＫＧ−１ａ）〜３６（ＨＮＴ−３４）または１．５（ＫＧ−１ａ）〜２１（ＨＮＴ−３４）の範囲であった（表６）。
表６：ＴＨＬＥ−２細胞及び末梢血単核細胞と比較した、液体培養物中の急性骨髄性白血病細胞株のパネルにおける化合物１の治療濃度域
【表１５】
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【０３３０】
１１個の異なるＡＭＬ細胞株の培養物を、０．５ｎＭ〜１０μＭの濃度の化合物１で７２時間インキュベートした。増殖は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを使用して査定した。化合物１でインキュベートした培養物についての結果を、各細胞株の対照培養物についての結果に対して正規化した。細胞増殖の阻害はまた、ＴＨＬＥ−２細胞中０．１ｎＭ〜１００μＭの化合物１濃度で、及びＰＢＭＣ中０．５ｎＭ〜１０μＭの化合物１濃度で決定した。化合物１治療濃度域は、細胞増殖に対する濃度のプロットについてＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用し、不死化（但し、非腫瘍原性）ヒトＴＨＬＥ−２肝細胞由来細胞株またはＰＢＭＣのＡＵＣを、ＡＭＬ細胞株のＡＵＣで除算することによって決定される、曲線下面積を使用して計算した（ＡＵＣ、活性領域［Ｂａｒｒｅｔｉｎａ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ（２０１２）４８３６０３−６０７］測定値（任意単位）。
【０３３１】
化合物１は、急性骨髄性白血病細胞株においてアポトーシスを誘導する。ＡＭＬ細胞株におけるアポトーシスに対する化合物１の効果を調査した。ＨＮＴ−３４細胞を、０．００１μＭの濃度の化合物１でインキュベートした。０．０１μＭ及び０．１μＭでのアポトーシスを、経時的に査定した。結果は、ＨＮＴ−３４細胞の場合、１００ｎＭの化合物１が、インキュベーションの８〜１６時間以内に最大アポトーシスを誘導したことを示した。次に、選択されたＡＭＬ細胞株のパネルにおける化合物１によるアポトーシスの誘導を調べた。アポトーシスの顕著な誘導は、調べた５個の細胞株のうち４個において２４〜４８時間後に観察された。予想通り、化合物１は、化合物１非感受性ＡＭＬ株、ＯＣＩ−ＡＭＬ３においてアポトーシスを誘導しなかった。
【０３３２】
化合物１がＡＭＬ細胞株をアポトーシスに傾倒させる時点を決定するために、ウォッシュアウト実験を異なる時点で行い、７２時間後に細胞生存性を査定した（図３０Ａにおける概略を参照されたい）。化合物１（１００ｎＭ）は、治療の８〜１６時間以内に細胞をアポトーシスに不可逆的に傾倒させた（図３０Ｂ）。１００ｎＭの化合物１を１〜４時間ウォッシュアウトすることにより、ポテンシーを約１０倍低減した（ＥＣ５０曲線における右シフト）。８〜１６時間でのウォッシュアウトは、ポテンシーを約４倍低減し、２４時間までに化合物は、ウォッシュアウトなしの試料と同様のポテンシーを有していた（図３０Ｂ）。
【０３３３】
化合物１は、急性骨髄性白血病細胞株と比較して、正常ドナーからの末梢血単核細胞に対する抗増殖効果の差異を明示する。健康なＰＢＭＣにおける化合物１の効果もまた査定した。化合物１を、時間０において１人のドナーからのＰＢＭＣに添加し、７２時間目に査定した。これを、予め活性化し、抗ＣＤ３抗体でコーティングしたプレート上で７２時間増殖させた後、化合物１を添加し、細胞をさらに７２時間インキュベートしたＰＢＭＣと比較した。ＨＮＴ−３４細胞を、感受性の陽性対照細胞株として使用した。予め活性化した末梢血単核細胞は、ＣＴＧ及び生存細胞数により決定される、化合物１の抗増殖効果（ＩＣ５０＞１０μＭ）に耐性があった。しかしながら、化合物１は、２つの方法ＣＴＧ及びフローサイトメトリー細胞計数を使用して測定して、予め活性化しなかったＰＢＭＣ中の細胞増殖を低減した（ＣＴＧ  ＩＣ５０＝０．１μＭ、細胞数ＩＣ５０＝０．５μＭ）。予め活性化していないＰＢＭＣ中の抗増殖活性を、ＨＮＴ−３４細胞におけるものと比較した場合（ＣＴＧ  ＩＣ５０＝０．００２μＭ、細胞数ＩＣ５０＝０．００４μＭ）、５０〜１２５の治療濃度域を計算することができた。アポトーシスの誘導について、０．１μＭの化合物１において、予め活性化していないＰＢＭＣよりも約３倍のカスパーゼ３／７活性の上昇の差異、及び約７倍の膜脱分極の増加の差異が、７２時間後にＨＮＴ−３４細胞において見られた。カスパーゼ３／７及び膜脱分極の化合物１誘導性上昇の同様のまたはより大きい差異が、予め活性化したＰＢＭＣとＨＮＴ−３４細胞との間で見られた。
【０３３４】
結論．化合物１は、試験した１１個の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞株のうち１０個において強力な抗増殖活性を明示する。抗増殖効果は、アポトーシスの急速な誘導に起因すると思われる。最も感受性のＡＭＬ細胞株、ＨＮＴ−３４において、フローサイトメトリーＡｎｎｅｘｉｎ  Ｖ／７−アミノアクチノマイシンＤ（７−ＡＡＤ）アッセイにより測定して、１００ｎＭの化合物１でのインキュベーションの８〜１６時間以内に最大アポトーシスが誘導された。抗増殖効果についてのＩＣ５０値は、１０個の感受性ＡＭＬ細胞株において３〜７５ｎＭの範囲であり、非感受性株（ＯＣＩ−ＡＭＬ３）の場合、ＩＣ５０は３μＭであった。化合物１のＲ−及びＳ−鏡像異性体の抗増殖効果もまた、１１個のＡＭＬ細胞株のパネルにおいて評価した。両方の鏡像異性体は、７２時間における化合物１のものと同様の細胞増殖の阻害を示した（データ図示せず）。
【０３３５】
急性骨髄性白血病細胞株は、異なる起源からの非腫瘍原性細胞よりも化合物１による殺傷の作用を受け易い。化合物１は、非腫瘍原性ヒト肝細胞由来細胞株ＴＨＬＥ−２において低減した抗増殖効果を示した（ＩＣ５０＝約１０μＭ）。さらに、化合物１の抗増殖効果は、健康な一次ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）において低減した。予め活性化した末梢血単核細胞は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標） （ＣＴＧ）及び生存細胞数により決定して、細胞増殖に対する化合物１の効果に耐性があったが（ＩＣ５０＞１０μＭ）、化合物１は、２つの方法、ＣＴＧ及びフローサイトメトリー細胞計数を使用して測定して、予め活性化しなかったＰＢＭＣにおける細胞増殖を低減した（ＣＴＧ  ＩＣ５０＝０．１μＭ、細胞数ＩＣ５０＝０．５μＭ）。さらに、化合物１は、健康なドナーＰＢＭＣよりも腫瘍細胞において、アポトーシスの誘導に対する示差的効果を有していた。ＨＮＴ−３４細胞株及びＰＢＭＣにおいて、フローサイトメトリーカスパーゼ３／７アッセイ及びミトコンドリア膜電位アッセイを使用して、アポトーシスを評価した。１００ｎＭにおいて、化合物１は、ＰＢＭＣよりもＨＮＴ−３４細胞において、約３倍優れたカスパーゼ３／７活性化及び約７倍優れた膜脱分極を誘導した。
【０３３６】
実施例３：ＩｎｃｕＣｙｔｅ（商標）動的カスパーゼ３／７アポトーシス活性を使用する、インビトロでの化合物１でインキュベートした急性骨髄性白血病細胞株におけるアポトーシス及び生存性の評価
方法．急性骨髄性白血病細胞株パネル：ヒトＡＭＬ細胞株、ＡＭＬ−１９３、Ｆ３６−Ｐ、ＧＤＭ−１、ＨＬ−６０、ＨＮＴ−３４、Ｋａｓｕｍｉ−１、Ｋａｓｕｍｉ−３、ＫＧ−１、ＫＧ−１ａ、ＭＬ−２、ＭＯＬＭ−１３、ＭＵＴＺ−８、ＭＶ−４−１１、ＮＯＭＯ−１、ＯＣＩ−ＡＭＬ２、ＯＣＩ−ＡＭＬ３、ＳＩＧ−Ｍ５、ＴＦ−１、ＴＨＰ−１、及びＵＴ−７は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）及びＤｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ）（Ｇｅｒｍａｎｙ）細胞バンクから入手した。ＡＭＬパネルは、各ＦＡＢ分類（Ｍ０〜Ｍ７）からの細胞株（複数可）を含む（表７）。
表７：急性骨髄性白血病細胞株の特徴
【表１６】
2019517587.tif 000021
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2019517587.tif 000023
【０３３７】
細胞培養条件：２０％胎仔血清（ＦＢＳ）（Ｈｙｃｌｏｎｅカタログ番号ＳＨ３０９１０．０３、ロット番号ＡＺＦ１８８８６４、Ｃｏｒｎｉｎｇ参照番号３５−０１０−ＣＶ、ロット番号３５０１０１２４）を含有する、１０ｎｇ／ｍＬのヒト組換え顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号ＳＲＰ３０５０）で補充された、または補充されていない成長培地中で細胞株を維持した（表８）。培地は、ＡＴＣＣ（カタログ番号３０−２００１、３０−２００２、３０−２００３、３０−２００５）及びＧｉｂｃｏ（参照番号１２５６１−０５６）から購入した。ヒト組換え顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉにおいて発現した。各細胞株の細胞倍加時間は、ＡＴＣＣ及びＤＳＭＺによって提供された。細胞を、湿潤したインキュベーター内で５％二酸化炭素（ＣＯ２）で維持した。すべての細胞株を、ＩｎｃｕＣｙｔｅ  Ｚｏｏｍ（Ｅｓｓｅｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用する生細胞撮像の前に、２〜４週間にわたってＧＭ−ＣＳＦを含むか、または含まないイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）＋２０％  ＦＢＳに順応させた。ＥＭＥＭの使用は、大部分の培地においてリボフラビンによって引き起こされる背景蛍光を排除するために必須であった。
表８：成長条件
【表１７】
2019517587.tif 000024
【０３３８】
赤色標識された急性骨髄性白血病細胞株の誘導：ＡＭＬ−１９３、ＨＬ−６０、ＫＧ−１、ＭＬ−２、ＭＯＬＭ−１３、ＭＶ−４−１１、ＮＯＭＯ−１、ＯＣＩ−ＡＭＬ２、ＯＣＩ−ＡＭＬ３、ＳＩＧ−Ｍ５、ＴＦ−１、及びＴＨＰ−１を含む１２個の細胞株は、赤色レンチウイルスで安定して形質導入された。細胞を、６ウェルプレートの成長培地中に播種し、８μｇ／ｍＬのポリブレン（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカタログ番号ＴＲ−１００３−Ｇ）でインキュベートした後、０．５〜２．５の感染多重度（ＭＯＩ）で２４時間、ＣｅｌｌＰｌａｙｅｒ（商標）ＮｕｃＬｉｇｈｔ（商標）赤色レンチウイルス粒子（Ｅｓｓｅｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号４４７８）に感染させた。ＭＯＩは、細胞に対するウイルス粒子の比を指す。ウイルス含有培地を、新鮮な成長培地と置き換え、さらに２４〜４８時間インキュベートした後、Ｚｅｏｃｉｎ（５００〜２０００μｇ／ｍＬ）、ブレオマイシンの誘導体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号Ｒ２５０−０１）で選択した。細胞を、新鮮なＺｅｏｃｉｎで３〜４日毎に３〜８週間にわたって選択した。細胞を、核制限された赤色蛍光について、蛍光顕微鏡を使用して周期的に見た。一旦、集団が安定して赤色に蛍光すると、Ｚｅｏｃｉｎ選択を終了した。すべての赤色標識された細胞株を、ＧＭ−ＣＳＦ補充を伴うか、または伴わない２０％  ＦＢＳを含有するＥＭＥＭに順応させ、最適な生細胞撮像を可能にした。
【０３３９】
化合物１での細胞培養物のインキュベーション：化合物１は、凍結された２０μＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中３０ｍＭのストック濃度でＣｅｌｇｅｎｅ化学グループによる研究のために提供された。Ｃｏｓｔａｒ９６ウェル細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ番号３５９５）を、１００μＬの１０μｇ／ｍＬフィブロネクチン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号Ｆ１１４１）で４時間、３７℃でコーティングして直ちに使用するか、または後の使用のために一晩冷蔵した。細胞（３０００〜６０００細胞）を、フィブロネクチンでコーティングした９６ウェルプレートの成長培地中に播種し、最小数時間から一晩にわたってインキュベートした。細胞を、ＤＭＳＯを含む化合物１（０〜１０μＭ）及び培地対照を用いて、１２点濃度応答で三重にインキュベートした。０．６％  ＤＭＳＯ（培地中で希釈された）中２００μＭの濃度から始まる化合物１の３倍連続希釈を行った。最も感受性のある細胞株の場合、０．６％  ＤＭＳＯ（培地中で希釈された）中２００μＭの濃度から始まる化合物１の３倍連続希釈を行った。各希釈について、５μＬまたは１０μＬの量を、１００μＬまたは２００μＬの細胞にそれぞれ添加し（最終０．３％  ＤＭＳＯ）、生細胞撮像のためにインキュベートした。
【０３４０】
ＩｎｃｕＣｙｔｅ  Ｚｏｏｍ上の生細胞撮像：化合物１での細胞のインキュベーションに続いて、希釈したカスパーゼ３／７試薬（Ｅｓｓｅｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号４４４０）を各ウェルに添加した。カスパーゼ３／７試薬は、活性化したカスパーゼ３／７認識モチーフ（ＤＥＶＤ）を、ＤＮＡ層間色素であるＮｕｃＶｉｅｗ  ＴＭ４８８にカップリングする。活性化したカスパーゼ３／７による基質の切断は、ＤＮＡ色素の放出及び核ＤＮＡの緑色蛍光染色をもたらす。これは、カスパーゼ３／７媒介性アポトーシスを受ける細胞の経時的な撮像を可能にする。カスパーゼ３／７の活性化は、ＩｎｃｕＣｙｔｅ（商標）ＺＯＯＭ基本分析装置を使用して定量化した。赤色標識された細胞株もまた、細胞倍加時間及び細胞生存性に対する化合物１の効果の両方を決定するために、ＩｎｃｕＣｙｔｅ（商標）ＺＯＯＭ基本分析装置を使用して、経時的に撮像した。実験は、各細胞株において少なくとも２回行った。
【０３４１】
用量応答データ分析：１２、２４、４８、７２、及び９６時間の時点において化合物１（０〜１０μＭ）の濃度範囲でインキュベートした各細胞株について、細胞成長（総赤色積分強度（ＲＣＵ×μｍ２／ウェル）または赤色オブジェクト数（１／ウェル）、及び細胞死（緑色オブジェクト数（１／ウェル））の曲線下面積（木）ＡＵＣ）を、各濃度及び複製について、Ｒ「ｐｒａｃｍａ」パッケージ（Ｂｏｒｃｈｅｒｓ  ＨＷ．Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｍａｔｈ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｒ  Ｐａｃｋａｇｅ  ｖｅｒｓｉｏｎ  １．８．６．ｈｔｔｐｓ：／／ｃｒａｎ．ｒ  ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／ｗｅｂ／ｐａｃｋａｇｅｓ／ｐｒａｃｍａ／ｐｒａｃｍａ．ｐｄｆ．ｐ３４０−３４１．Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２７，２０１５．２０１６年２月１日にアクセス）における「ｔｒａｐｚ」関数によって計算した。次に、４パラメータ対数ロジスティクスモデルを使用して、Ｒ「ｄｒｃ」パッケージ（Ｒｉｔｚ  Ｃ．Ｓｔｒｅｉｂｉｇ  ＪＣ．Ｂｉｏａｓｓａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｕｓｉｎｇ  Ｒ．Ｊ．Ｓｔａｔｉｓｔ．Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ２００５；１２（５）：１−２２）からの「ｄｒｍ」関数によって、各時点における相対ＥＣ５０を決定した。≧８０％の二乗されたＲｎｉｙｏｔｔｅ適合度を測定し（決定係数またはモデル適合によって説明される変化量）ＥＣ５０パラメータを、≦４０％のパラメータに対する標準誤差の比、及び報告されたＥＣ５０より上及び下の少なくとも１つの濃度点の存在を有することによって査定した。
【０３４２】
ＲＦＰ標識された細胞についての緑色オブジェクト（１／ウェル）対時間及び総赤色積分強度（ＲＣＵ×μｍ２／ウェル）または赤色オブジェクト数（１／ウェル）対時間を、Ｅｓｓｅｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＩｎｃからのＩｎｃｙＣｙｔｅ  ＺＯＯＭデバイスソフトウェアにおけるグラフ化能力を使用してプロットした。
【０３４３】
結果
化合物１でインキュベートされた急性骨髄性白血病細胞株のパネルにおけるアポトーシス応答の定量化。カスパーゼ３／７活性化によって測定される、アポトーシスのリアルタイム撮像を、化合物１の濃度範囲でインキュベートされたＡＭＬ細胞株において行った。表９は、２４、４８、７２、及び９６時間の時点でのＡＭＬ細胞株における化合物１媒介性カスパーゼ３／７活性化の平均ＥＣ５０値を示す。
【０３４４】
化合物１によるアポトーシス誘導に対する異なる感受性が、２０個のＡＭＬ細胞株にわたって観察された。ＴＨＰ−１を除くすべての細胞株は、４８時間において少なくとも１つの良好な曲線適合を有していたため、この時間を使用して、細胞株の相対感受性を定義した。
●８個の細胞株（ＨＮＴ−３４、Ｋａｓｕｍｉ−３、ＨＬ−６０、ＭＬ−２、ＭＶ４−１１、ＫＧ−１、ＭＵＴＺ−８、ＧＤＭ−１）は、０．０５μＭより下のＥＣ５０４８時間（０．００４〜０．０４９μＭの範囲）を有し、これらの株は、０．０２７μＭの平均ＥＣ５０４８時間を有する、高度に感受性として分類された。ＨＮＴ−３４は、０．００４μＭのＥＣ５０４８時間を有する最も感受性のある細胞株であった。
●７個の細胞株（ＯＣＩ−ＡＭＬ−２、ＡＭＬ−１９３、ＳＩＧ−Ｍ５、Ｋａｓｕｍｉ−１、ＴＦ−１、Ｎｏｍｏ−１、ＫＧ−１ａ）は、０．０５μＭ〜０．２μＭのＥＣ５０４８時間（０．０８１〜０．１４５μＭの範囲）を有し、これらの株は、０．１１４μＭの平均ＥＣ５０４８時間を有する、中度に感受性として分類された。
●４個の細胞株（ＵＴ−７、Ｆ３６−Ｐ、ＭＯＬＭ−１３、ＯＣＩ−ＡＭＬ３）は、０．２μＭ〜１μＭのＥＣ５０４８時間（０．２３１〜０．８９６μＭの範囲）を有し、０．４５８μＭの平均ＥＣ５０４８時間を有していた。１つの細胞株（ＴＨＰ−１）は、１０μＭより大きいＥＣ５０４８時間を有していた。これらの細胞株は、最も低い感受性として分類された。
【０３４５】
化合物１によるカスパーゼ３／７活性化（アポトーシス誘導）の異なる時点の動態を、ＡＭＬ細胞パネルにわたって観察した。
●アポトーシス応答は、８個の最も感受性の高い細胞株において早くて１２時間で観察された（ＥＣ５０１２時間は、０．０５３〜０．２２７μＭの範囲である）。ＥＣ５０１２時間は、「良好な曲線適合」の欠失に起因してＨＮＴ−３４、ＨＬ−６０、及びＭＵＴＺ−８細胞株において観察されなかったが、カスパーゼ３／７活性化が観察された。
●２４時間までに、２０個の細胞株のうち１４は、良好な曲線適合を有していた（ＥＣ５０２４時間は、０．００７〜０．９１６μＭの範囲である）。２個の細胞株（ＨＮＴ−３４及びＫａｓｕｍｉ−３）は、０．０５μより下のＥＣ５０２４時間を有し、７個の細胞株（ＨＬ−６０、ＭＬ−２、ＭＶ−４−１１、ＫＧ−１、ＭＵＴＺ−８、ＳＩＧ−Ｍ５、及びＮＯＭＯ−１）は、０．０５μＭ〜０．２μＭのＥＣ５０２４時間を有し、５個の細胞株（ＫＧ−１ａ、ＡＭＬ−１９３、ＧＤＭ−１、ＯＣＩ−ＡＭＬ２、及びＭＯＬＭ−１３）は、０．２μＭより大きいＥＣ５０２４時間を有していた。
●化合物１の増加したポテンシーは、一般に、後の時点でＡＭＬ細胞パネルにわたって観察された。ＥＣ５０７２時間及びＥＣ５０９６時間は、それぞれ０．００３〜０．９７１μＭ及び０．００１〜０．４１８μＭの範囲であった。７２時間までに、２０個の細胞株のうち１１個（ＨＮＴ−３４を含む）は、≦０．０５μＭのＥＣ５０７２時間を有し、２０個の細胞株のうち４個は、０．０５〜０．２０μＭのＥＣ５０７２時間を有し、２０個の細胞株のうち４個は、０．２〜１μＭのＥＣ５０７２時間を有していた。同様の結果は、９６時間の時点で観察された。
表９：急性骨髄性白血病細胞株における化合物１誘導性アポトーシスの平均ＥＣ５０値
【表１８】
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【０３４６】
２０個のヒトＡＭＬ細胞株を、化合物１用量範囲（０〜１０μＭ）でインキュベートし、緑色オブジェクト（アポトーシスを受けている細胞）を、上記のように経時的に撮像した。平均ＥＣ５０値は、上記のように、１２、２４、４８、７２、及び９６時間の時点での計算されたＡＵＣ（曲線下面積）から決定された。ＥＣ５０値に基づく細胞株のランク付けを、２４時間及び４８時間の時点で示す。
【０３４７】
化合物１でインキュベートされた赤色標識された急性骨髄性白血病細胞株のパネルにおける細胞生存性の定量化：１２個の赤色標識細胞株のサブパネルを、ＩｎｃｕＣｙｔｅ  Ｚｏｏｍ生細胞撮像を使用して、細胞生存性に対する経時的な化合物１の効果について評価した。表１０は、２４、４８、７２、及び９６時間の時点でのＡＭＬ細胞株における化合物１媒介性細胞生存性の低減に対する平均ＥＣ５０値を示す。
【０３４８】
化合物１による細胞生存性の低減に対する異なる感受性が、ＡＭＬ細胞株にわたって観察された。ＴＨＰ−１を除くすべての細胞株は、９６時間において少なくとも１つの良好な曲線適合を有していたため、この時間を使用して、細胞株の相対感受性を定義した。
○７個の細胞株（ＡＭＬ−１９３、ＭＬ−２、ＨＬ−６０、ＫＧ−１、ＮＯＭＯ−１、ＭＶ−４−１１、ＯＣＩ−ＡＭＬ２）は、０．０５μＭより下のＥＣ５０９６時間（０．００２〜０．０４０μＭの範囲）を有し、これらの株は、０．０１５μＭの平均ＥＣ５０９６時間を有する、高度に感受性として分類された。ＡＭＬ−１９３は、０．００２μＭのＥＣ５０９６時間を有する最も感受性のある細胞株であった。
○４個の細胞株（ＴＦ−１、ＴＨＰ−１、ＳＩＧ−Ｍ５、ＯＣＩ−ＡＭＬ３）は、０．０５μＭ〜０．２０μＭのＥＣ５０９６時間（０．０５８〜０．１８６μＭの範囲）を有し、これらの株は、０．１２１μＭの平均ＥＣ５０９６時間を有する、中度に感受性として分類された。
○１個の細胞株（ＭＯＬＭ−１３）のみが、０．２μＭより大きいＥＣ５０９６時間を有していた（０．２４８μＭのＥＣ５０９６時間）。この細胞株は、最も低い感受性として分類された。
表１０：赤色標識された急性骨髄性白血病細胞株における細胞生存性に対する化合物１の効果の平均ＥＣ５０値
【表１９】
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【０３４９】
上記のように確立された１２個の赤色標識されたヒトＡＭＬ細胞株を、化合物１用量範囲（０〜１０μＭ）でインキュベートし、赤色蛍光またはオブジェクト数を、上記のように経時的に撮像した。細胞生存性のＥＣ５０は、２４、４８、７２、及び９６時間の時点で上記のように決定した。細胞株のランク付けを、４８、７２、及び９６時間の時点で示す。
【０３５０】
結論．ＩｎｃｕＣｙｔｅ（商標）動的カスパーゼ３／７アポトーシスアッセイを使用して、２０個の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞株のパネルにおけるアポトーシスに対する化合物１の効果を評価するために、研究を行った。さらに、１３個の赤色標識されたＡＭＬ細胞株を確立して、ＩｎｃｙＣｙｔｅ（商標）システムを使用して、細胞生存性に対する化合物１の効果を評価し、総生存細胞を定量化した。研究からの結論は、以下を含む。
●化合物１によるアポトーシス誘導に対する異なる感受性が、２０個のＡＭＬ細胞株にわたって観察された。
○８個の細胞株（ＨＮＴ−３４、Ｋａｓｕｍｉ−３、ＨＬ−６０、ＭＬ−２、ＭＶ４−１１、ＫＧ−１、ＭＵＴＺ−８、ＧＤＭ−１）は、４８時間において０．０２７μＭの平均ＥＣ５０（０．００４〜０．０４９μＭの範囲）を有し、高度に感受性として定義された。
○７個の細胞株（ＯＣＩ−ＡＭＬ−２、ＡＭＬ−１９３、ＳＩＧ−Ｍ５、Ｋａｓｕｍｉ−１、ＴＦ−１、Ｎｏｍｏ−１、ＫＧ−１ａ）は、４８時間において０．１１４μＭの平均ＥＣ５０（０．０８１〜０．１４５μＭの範囲）を有し、中度に感受性として定義された。
○５個の細胞株（ＵＴ−７、Ｆ３６−Ｐ、ＭＯＬＭ−１３、ＯＣＩ−ＡＭＬ３、ＴＨＰ−１）は、ＵＴ−７、Ｆ３６−Ｐ、ＭＯＬＭ−１３、及びＯＣＩ−ＡＭＬ３については０．２３１〜０．８９６μＭの範囲のＥＣ５０値（ＴＨＰ−１については１０μＭより大きいＥＣ５０）を有し、最も感受性が低いと定義された。
●化合物１によるアポトーシス誘導に対する異なる動態が、ＡＭＬ細胞パネルにわたって観察された。
○アポトーシス応答は、８個の最も感受性の高い細胞株において早くて１２時間で観察された（曲線適合を有する５個の株について、ＥＣ５０１２時間は、０．０５３〜０．２２７μＭの範囲である）。
○７２時間までに、２０個の細胞株のうち１９個は、化合物１に応答し、ＥＣ５０７２時間及びＥＣ５０９６時間は、それぞれ０．００３〜０．９７１μＭ及び０．００１〜０．４１８μＭの範囲であった。
○ＴＨＰ−１細胞株のみが、すべての時点で１０μＭより大きいＥＣ５０を有していた。
●細胞生存性により測定される化合物１に対する異なる感受性もまた、１２個の赤色標識されたＡＭＬ細胞株にわたって観察された。
○７個の細胞株（ＡＭＬ−１９３、ＭＬ−２、ＨＬ−６０、ＫＧ−１、ＮＯＭＯ−１、ＭＶ−４−１１、ＯＣＩ−ＡＭＬ２）は、０．０５μＭより下のＥＣ５０９６時間（０．００２〜０．０４０μＭの範囲）を有し、これらの株は、０．０１５μＭの平均ＥＣ５０９６時間を有する、高度に感受性として分類された。
○４個の細胞株（ＴＦ−１、ＴＨＰ−１、ＳＩＧ−Ｍ５、ＯＣＩ−ＡＭＬ３）は、０．０５μＭ〜０．２０μＭのＥＣ５０９６時間（０．０５８〜０．１８６μＭの範囲）を有し、これらの株は、０．１２１μＭの平均ＥＣ５０９６時間を有する、中度に感受性として分類された。
○１個の細胞株（ＭＯＬＭ−１３）のみが、０．２μＭより大きいＥＣ５０９６時間を有していた（０．２４８μＭのＥＣ５０９６時間）。この細胞株は、最も低い感受性として分類された。
【０３５１】
実施例４：急性骨髄性白血病を有するドナーからの骨髄試料における抗腫瘍活性
患者試料：研究は、ＡＭＬであると診断された１８歳以上の成人患者からの骨髄（ＢＭ）試料を含んでいた。試料は、２つの異なるバッチで分析され、第１のバッチは、１０人の患者（ＣＧ１を含む識別コードが割り当てられたドナー）を含み、第２のバッチは、残りの２０人のドナー（ＣＧ３を含む識別コードが割り当てられた）を含む。第１のバッチのドナーについての臨床データを表１１に提示する。対応する臨床データは、書込み時に２０個の患者試料の第２のバッチについて入手可能でなかった。
表１１：ドナー臨床データ（ＣＧ１ドナー）
【表２０】
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【０３５２】
実験研究デザイン：フローサイトメトリーベースのプラットフォーム（ＥｘｖｉＴｅｃｈ）を使用して、急性骨髄性白血病を有する３０人のドナーから得た骨髄試料の悪性細胞及び正常なリンパ細胞における化合物１のエクスビボ薬理学を評価し、特徴づける（Ｂｅｎｎｅｔｔ，ｅｔ  ａｌ  Ｃｌｉｎ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｌｅｕｋ  ２０１４  Ａｕｇ；１４（４）：３０５−３１８）。
【０３５３】
１日目に、ドナー試料を受領した。少量を検証用に分離し、大半を培養培地で希釈し（Ｒｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＲＰＭＩ）１６４０）、化合物１濃度の範囲で以前に調製された９６ウェルプレートに播種した。各ウェルに播種される生白血病細胞の数は、各試料の白血病細胞のパーセンテージに依存して、８０００〜３２，０００で固定した。プレートを２４、４８、または９６時間インキュベートした。抗体抗Ｄ３４、抗ＣＤ１１７、抗ＨＬＡ−ＤＲ、抗ＣＤ４５、抗ＣＤ１４、抗ＣＤ６４、抗ＣＤ１３、抗ＣＤ１１ｂ）またはＡｎｎｅｘｉｎ  Ｖを添加して、前方散乱（ＦＳＣ）または側方散乱（ＳＳＣ）及び異なる表面マーカーの発現のまたは発現の欠失に基づくゲート戦略を使用して白血病細胞を特定した。モノクローナル抗体の選択を行い、各試料における白血病細胞の特定を最適化した。この分析の目的は、表現型の特徴付けだけでなく、これらの細胞の特定でもあった。したがって、Ｅｕｒｏｆｌｏｗ（ｖａｎ  Ｄｏｎｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２０１２  Ｓｅｐ；２６（９）：１９０８−１９７５）がＡＭＬ（ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ１１７）及びヒト白血球抗原ＤＲ（ＨＬＡ−ＤＲ）の「骨格マーカー」として指定されたマーカーが、組合せに含まれた。それらは、ＡＭＬ患者のほぼ９０％における白血病細胞の特定を可能にした。追加のパネル、ＣＤ３４／ＣＤ１４／ＣＤ６４／ＣＤ４５及びＣＤ３４／ＣＤ１１ｂ／Ｃ１３／ＣＤ４５も使用して、骨髄性白血病集団の特定を完了した。これは、各特定の試料における病理学的細胞集団の明白な特定のための、２つの最良な抗体の選択を可能にした。
【０３５４】
生白血病細胞を、Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）染色の非存在下で、高、中、または低（例えば、ＦＳＣ中／高／ＳＳＣ中）として分類されたそれらの光散乱特性によって特定した。前方散乱／側方散乱の選択を行い、デブリを除外した。試料の受領時の細胞生存性の平均パーセンテージは、５０％超であった（生存性が５０％超であった場合のみに、試料を処理した）。いくつかのＡＭＬドナー試料において、十分な正常、非腫瘍性リンパ球細胞を数えることができ、この細胞集団において化合物１の効果を測定した。非腫瘍性リンパ球を、ＣＤ４５の著明発現、ＦＳＣ低／ＳＳＣ低、及び骨髄マーカー（ＣＤ１１７、ＣＤ１１ｂ、及びＣＤ１３）の非存在によって特定した。
【０３５５】
使用される方法の詳細な説明は、以前に公開されている（Ｂｅｎｎｅｔｔ，ｅｔ  ａｌ  Ｃｌｉｎ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｌｅｕｋ  ２０１４  Ａｕｇ；１４（４）：３０５−３１８）。簡潔には、ＢＭ試料を、元の病院において滅菌条件下で抽出し、抽出の２４時間以内に受領した。初期分析は、病理学的細胞の数及びそれらの生存性を評価した。異なる量の試料（１μＬ、３μＬ、５μＬ、及び７μＬ）を、９６ウェルプレートに重複で移した。赤血球を溶解するために、１８０μＬの塩化アンモニウム溶解液（２ｇ  ＫＨＣＯ３、１６．５８ｇ  ＮＨ４Ｃｌ、０．０７４ｇ  エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム・２Ｈ２Ｏ、及び１Ｌに調整されたＨ２Ｏ）を、各ウェルに添加した。４℃で１０分間のインキュベーションに続いて、各プレートを５分間１２００ｒｐｍで遠心分離し、上澄みを除去した。溶解ステップを２回行った。分析するために、２０μＬのＡｎｎｅｘｉｎ  Ｖ−ＦＩＴＣ（Ｉｍｍｕｎｏｓｔｅｐ，Ｓａｌａｍａｎｃａ，Ｓｐａｉｎ）、結合緩衝剤（ＢＢ、２．４ｇの４−［２−ヒドロキシエチル］−１−ピペラジンエタンスルホンさん［ＨＥＰＥＳ］、８．１９ｇのＮａＣｌ、０．３７ｇのＣａＣｌ２、及び１Ｌに調整されたＨ２Ｏ）、及び以下のモノクローナル抗体（ＭｏＡｂ）を各ウェルに添加した。ＣＤ１１７（クローン１０４Ｄ２）−ＰＥ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）、ＣＤ３４（クローン５８１）−ＰｅｒＣＰ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＨＬＡ−ＤＲ（クローンＬ２４３）−ＰＢ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、及びＣＤ４５（ＨＩ３０）−ＰＯ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）（ｖａｎ  Ｄｏｎｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２０１２ｂ  Ｓｅｐ；２６（９）：１８９９−１９０７）。暗所における室温で１５分間のインキュベーション後に、ＢＢ溶液を使用して洗浄ステップを行った。ＥｘｖｉＴｅｃｈプラットフォームにおける分析のために、ペレットを３０μＬのＢＢ中に再懸濁した。次いで、細胞数及び生存性を計算し、ウェル毎に使用する試料の最適な量を決定した。
【０３５６】
アッセイ調製：試料全体を、２０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）ウシ胎児血清（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）、２％  ＨＥＰＥＳ、１％抗生物質（Ｚｅｌｌ  Ｓｈｉｅｌｄ，Ｌａｂｃｌｉｎｉｃｓ，Ｂａｒｃｅｌｏｎａ，Ｓｐａｉｎ）、及び２μＭのＬ−グルタミン（Ｌｏｎｚａ，Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ，ＭＡ）で補充されたＲＰＭＩ  １６４０培地で、ウェルあたり６０μＬの最終量に希釈した。混合物を、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  Ｃｏｍｂｉスマート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用して、化合物１を含有する９６ウェルプレートに分注した。化合物１を含有するプレートを、Ｅｃｈｏ  ５５０液体ハンドラー（ＬａｂＣｙｔｅ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を使用して事前に調製した。化合物１の場合、ドナーにわたって活性の範囲を網羅するように調整された１２の濃度（０．００１６〜４０μＭ）を使用した。化合物１を、３０人のドナー試料において分析した。プレートを、５％  ＣＯ２を含有する湿潤した空気中、３７℃で２４、４８、及び９６時間インキュベートした。
【０３５７】
白血球集団を単離する：インキュベーションの最後に分析のための試料を調製するために、赤血球細胞集団を、上記のように同じ手順に従って溶解した。次に、２０μＬの、試料の白血病細胞集団を特定するための２つの最良のＭｏＡｂ（以前に決定された）及びＡｎｎｅｘｉｎ  Ｖ−ＦＩＴＣの組合せを各ウェルに添加し、プレートを暗所において室温で１５分間インキュベートした。ＢＢを使用して、洗浄ステップを行い、ＥｘｖｉＴｅｃｈプラットフォームにおける分析のために、ペレットを２０μＬのＢＢに再懸濁した。
【０３５８】
ＥｘｖｉＴｅｃｈプラットフォーム：この新規のフローサイトメトリーベースのシステムは、ＣｙＡｎ高度デジタル処理サイトメーター（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｂｒｅａ，ＣＡ）及びエンドポイントサンプラー（ＥＰＳ）プレートハンドラー（Ｓａｒｙｎａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を組み込む。ＥＰＳは、アッセイプレートの各ウェルの内容物を吸引し、その内容物をサイトメーターのフローセルに送達した。各９６ウェルアッセイプレートを、ＣｙＡｎサイトメーターから単一フローサイトメトリー標準（．ｆｃｓ）ファイルとして収集した。ＥＰＳを、サイトメーターとして同じコンピューターから実行し、各プレートの第２のファイルを記録する。このタイミングファイルを、専用のソフトウェアプログラム、ＦＣＳ分析装置（Ｓａｒｙｎａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によるデータ分析のための．ｆｃｓファイルと統合した。このプログラムは、取得したデータをサイトメーターから特定のグループに分離し、各グループにウェル番号を割り当てるようにデザインした。次いで、各９６ウェルプレートを単一ファイルとして分析し、必要に応じて各ウェルプレートを個々に調べることができた。
【０３５９】
フローサイトメトリーデータ分析：Ｓｕｍｍｉｔソフトウェア（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）を、初期分析に使用した。ＦＳＣ／ＳＳＣに基づくゲート戦略及び異なるＭｏＡｂマーカーの発現または発現の欠失に基づくゲート戦略を使用して病理学的細胞の特定を行った。減少は、化合物を有するウェル内に対するビヒクル単独を有する対照ウェル内の生細胞の数の差異として測定した。したがって、一旦病理学的細胞のサブセットが特定されると、Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ及び適切なＦＳＣ／ＳＳＣを使用して、死細胞を除外し、対照ウェルと比較して薬物ウェルにおける生細胞の数のみを測定した（Ｋｏｏｐｍａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ  １９９４  Ｓｅｐ  １；８４（５）：１４１５−１４２０）。さらに、ＦＳＣ及びＳＳＣの変化は、壊死細胞を特定し、廃棄するのを助けたため、ヨウ化プロピジウムの使用は不要と思われた。一旦上記のパラメータが得られると、ＦＣＳ分析装置を使用して、試料に対する各個々の濃度の効果を定量化した。
【０３６０】
データ分析：個々のデータ点を得て、それらを使用してＥＣ５０及びＥｍａｘを計算した。４パラメータロジスティクモデル（Ｓ状用量応答モデル、ＩＤＢＳ  ＸＬＦｉｔ）を使用して、適合されたパラメータを決定した。
ｙ＝（Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（ｘ／Ｃ）＾Ｄ））））
Ａ＝ＹＭｉｎ
Ｂ＝ＹＭａｘ
Ｃ＝ＥＣ５０
Ｄ＝勾配係数
Ｙ＝陽性対照に対する細胞数のパーセンテージ
【０３６１】
すべての阻害曲線を、Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｂａｓｅ  ＸＥ（ＩＤＢＳ）を使用して処理し、評価した。プラトーを実験的に決定できなかった場合、Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｂａｓｅ  ＸＥによって戻された外挿ＥＣ５０値をＮＣ（計算されていない）に変更した。原データが過剰なノイズで予想のＳ状形状に一致しなかった場合、Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｂａｓｅ  ＸＥによって戻された適合パラメータをＮＣに変更した。
【０３６２】
活性領域は、曲線下面積（ＡＵＣ、ＸＬＦｉｔ  ｆｏｒｍｕｌａ：ｘｆ４＿ＡｒｅａＸＳｔａｒｔＸＥｎｄ（＜ｆｉｔ  ｃｅｌｌ＞、＜ｍｉｎ  ｃｏｎｃ＞、＜ｍａｘ＿ｃｏｎｃ＞）から計算される）を、総理論的領域によって除算されたパーセンテージとして計算される（濃度範囲及び最大理論的阻害によって囲まれた矩形：最大阻害＊（最大濃度−最小濃度））。結果として、活性領域は、不活性化合物については高く（すべての点が１００付近である）、活性化合物については低い。
【０３６３】
Ｅｍａｘは、適合パラメータＹＭｉｎを１００％から差し引くことによって計算し、これにより最大有効性（白血病細胞の完全減少）は１００％である（例えば、ＹＭｉｎ＝ゼロ）。
【０３６４】
ＡＵＣデータの階層的クラスタリング及びヒートマップを、Ｒ統計的プログラムを用いて生成した（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．Ｒ−ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ）。カラム側デンドログラムは、平均結合方法、及び各時点の標準化ＡＵＣデータに基づいて計算された試料間のユークリッド距離を使用して生成した。ヒートマップは、原寸のＡＵＣデータで示され、赤色／緑色スキームで着色した。すなわち、赤色はより高いＡＵＣを意味し、緑色はより低いＡＵＣを意味する。
【０３６５】
対応のある両側スチューデントｔ検定を使用して、リンパ球と比較した腫瘍のＡＵＣ間の差異の統計的有意性を決定した。
【０３６６】
結果
２４、４８、及び９６時間における化合物１の効果を、３０個の新鮮な（骨髄抽出から２４時間未満の培養時間）ＡＭＬ骨髄試料において評価した（表１２）。これらのアッセイの場合、骨髄試料は、単離した白血球としてではなく骨髄微小環境（間質、赤血球、免疫細胞、血清タンパク質等）を維持するために、エクスビボで分離なしに培養した。白血球は、化合物１誘導性抗増殖効果が既に起こっていた場合、インキュベーション後のみに単離した。この時点で、白血病細胞及び正常細胞集団を、ＡＭＬの「骨格」抗体マーカーを使用して、フローサイトメトリーによって特定し（ｖａｎ  Ｄｏｎｇｅｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２０１２  Ｓｅｐ；２６（９）：１９０８−１９７５）、これらの集団の生存性のパーセンテージは、これらの細胞の光散乱特性及びＡｎｎｅｘｉｎ  Ｖ染色を使用して確立した。興味深いことに、３０個の患者試料のうち２６個は、化合物１に対して感受性であり、該化合物は、４人のドナーのみにおいて低減した有効性を示した。ここで白血病細胞の大きなパーセンテージが、２４時間後も４８時間後も生存性のままであった。感受性患者試料の群における化合物１の平均ＥＣ５０は、３つの時点すべてにわたって２１ｎＭ（２〜１６０ｎＭの範囲）であった（表１２）。化合物１のエクスビボ有効性は、時間依存性及び濃度依存性であった（表１２）。非感受性として分類された４個の患者試料のうち３個が、感受性試料よりも高いＥＣ５０値を示し、４個すべてが、一貫して、２４時間及び４８時間で６８％より多く白血病芽球を減少させることができないことにより測定して、より弱い有効性を示した。感受性患者試料において、白血病細胞の殺滅は急速かつ非常に効率的であった。化合物１は、２４時間までに平均８２％超、４８時間までに９２％超、及び９６時間までに９８％超の白血病細胞を減少させることができた。顕著に、すべての時点において、正常リンパ球に対する化合物１の抗増殖効果は、腫瘍細胞において観察された効果と比較して著しく減少し（２〜５倍）、化合物１の腫瘍特異的活性を示唆する（図３１）。十分な正常リンパ球がカウントされ得た患者試料において、Ｅｍａｘは、２４〜９６時間で平均４６％〜７６％であった。
表１２
【表２１】
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2019517587.tif 000031
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【０３６７】
急性骨髄性白血病骨髄試料中の正常なリンパ細胞に対する腫瘍からの活性領域の比較分析を図３１に提供する。この図において、活性領域値は、ポテンシー（ＥＣ５０）及び有効性（Ｅｍａｘ）を統合する。活性領域が小さいほど、ポテンシーが大きく、治療が有効である。対応のある両側スチューデントｔ検定を使用して、リンパ球と比較した腫瘍のＡＵＣ間の差異の統計的有意性を決定した。エラーバーは、標準偏差を表す。
【０３６８】
結論．化合物１を、３０人のＡＭＬ患者から入手した試料のパネルにおいて試験した。患者の診断中に得られた骨髄（ＢＭ）吸引物を、構成成分の分離なしに播種し、公開された手順に従って２４、４８、及び９６時間目に感受性について試験した（Ｂｅｎｎｅｔｔ，ｅｔ  ａｌ  Ｃｌｉｎ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｌｅｕｋ  ２０１４  Ａｕｇ；１４（４）：３０５−３１８）。標準治療薬の場合、この試験は、臨床感受性と非常に良好に相関することが示された。化合物１のエクスビボ有効性は、時間及び濃度依存性であり、試験した３０個の患者試料のうち２６個が、３つの時点すべてにわたって２１ｎＭ（範囲は２〜１６０ｎＭであった）の最大応答（ＥＣ５０）の５０％を誘導するために必要な平均濃度を有することを示す。非感受性として分類された４個の患者試料のうち３個が、感受性試料よりも高いＥＣ５０値を示し、４個すべてが、一貫して、２４時間及び４８時間で６８％より多く白血病芽球を減少させることができないことにより測定して、より不良な有効性を示した。感受性患者試料において、白血病細胞の殺滅は、急速かつ非常に効率的であった。そこで２４時間までに、平均８２％超の白血病細胞が枯渇し、４８時間までに、９２％超が枯渇し、９６時間までに９８％超が減少した。十分な正常リンパ球がカウントされ得た患者試料において、化合物１は、著しく活性が低く、正常細胞に対する中度の有効性を有するにすぎず（Ｅｍａｘ［最大可能硬化］は２４〜９６時間で平均４６％〜７６％であった）、白血病細胞と正常細胞との間で２〜５倍の示差的ポテンシーを示した。
【０３６９】
実施例５：造血前駆細胞に対する化合物１の効果のインビトロ評価
実験デザイン：ヒト骨髄（ＢＭ）ＣＤ３４＋細胞を使用して、化合物１により誘導されたＢＭ毒性に対する潜在力を評価した。造血前駆細胞の機能性に対する化合物１の効果を試験するために、コロニー形成アッセイを、ＭｅｔｈｏＣｕｌｔ培地上にＢＭ  ＣＤ３４＋細胞を播種することによって行った。細胞を、化合物１とともにＭｅｔｈｏＣｕｌｔに直接播種するか、または化合物１とともに液体培地に２、４、または８時間にわたって培養し、化合物を含まないＭｅｔｈｏＣｕｌｔに播種して、異なる曝露時間の効果を評価した。ＨＳＣ上で化合物１により誘導された早期アポトーシスを、フローサイトメトリーによって分析した。
【０３７０】
結果．化合物１またはＤＭＳＯに曝露された培地における、一般的な顆粒球／赤血球／単球／巨核球のコロニー形成単位（ＣＦＵ）（ＣＦＵ−ＧＥＭＭ）、顆粒球／単球のＣＦＵ（ＣＦＵ−ＧＭ）、赤血球のバースト形成単位（ＢＦＵ−Ｅ）、及び赤血球のＣＦＵ（ＣＦＵ−Ｅ）を、ＳＴＥＭｖｉｓｉｏｎ上で採点した。４人の正常ＢＭドナーの各々について、各条件からの絶対数を表１３〜１６に示す。
表１３：ドナーＨＤ１０からのコロニー形成アッセイにおける顆粒球、単球、及び／または赤血球前駆細胞に対する化合物１の効果
【表２２】
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表１４：ドナーＨＤ１４からのコロニー形成アッセイにおける顆粒球、単球、及び／または赤血球前駆細胞に対する化合物１の効果
【表２３】
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表１５：ドナーＨＤ１８からのコロニー形成アッセイにおける顆粒球、単球、及び／または赤血球前駆細胞に対する化合物１の効果
【表２４】
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表１６：ドナーＨＤ１９からのコロニー形成アッセイにおける顆粒球、単球、及び／または赤血球前駆細胞に対する化合物１の効果
【表２５】
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【０３７１】
予想通り、ＣＦＵ−ＧＥＭＭ及びＣＦＵ−Ｅコロニー数は非常に低く、ＣＦＵ−ＧＭ及びＢＦＵ−Ｅのパーセンテージのみを、ＩＣ５０の計算に使用した（図３２）。ＣＦＵ−ＧＭの阻害についてのＩＣ５０値は、ドナー間で大きさが同等であった。ＢＦＵ−Ｅの阻害についてのＩＣ５０値は、他の３人のドナーよりも大幅に低い値であったドナーＤ１９からのＢＦＵ−ＥについてのＩＣ５０を除いて、ドナー間で大きさが同等であった。
【０３７２】
正常なドナーからの骨髄ＣＤ３４＋細胞を、ＭｅｔｈｏＣｕｌｔ培地において化合物１でインキュベートした。ＣＦＵ−ＧＭ及びＢＦＵ−Ｅのコロニー数を、ＳＴＥＭＶｉｓｉｏｎ自動コロニー数計数器及びソフトウェアを使用して計数し、ＤＭＳＯ対照のコロニー数に対して正規化した。ＤＭＳＯ対照対化合物１の濃度のパーセンテージとしてプロットされた結果を使用して、ＩＣ５０値を決定した。データは、ｎ＝３技術的複製の平均の平均±標準誤差として示す。ドナーは、ＨＤ１０、ＨＤ１４、ＨＤ１８、及びＨＤ１９であった。
【０３７３】
化合物１の曝露の２、４、及び８時間後の早期アポトーシスを、フローサイトメトリーによって測定した。Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ陰性細胞のパーセンテージによって測定される、これらの早期時点における化合物１誘導性アポトーシスの徴候は、６００ｎＭまでの化合物１の濃度において明らかではなかった。同様の傾向は、ＨＳＣ（ＣＤ３４＋／ＣＤ３８−）及びＨＰＣ（ＣＤ３４＋／ＣＤ３８＋）において観察された（表１７〜２０）。ＨＳＣ及びＨＰＣ集団に対するより長期の曝露の潜在的効果は、この研究において評価されなかった。
表１７：ドナーＨＤ８からの生存性ＣＤ３４陽性／ＣＤ３８陰性細胞のパーセンテージ
【表２６】
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表１８：ドナーＨＤ８からの生存性ＣＤ３４陽性／ＣＤ３８陽性細胞のパーセンテージ
【表２７】
2019517587.tif 000042
表１９：ドナーＨＤ９からの生存性ＣＤ３４陽性／ＣＤ３８陰性細胞のパーセンテージ
【表２８】
2019517587.tif 000043
表２０：ドナーＨＤ９からの生存性ＣＤ３４陽性／ＣＤ３８陽性細胞のパーセンテージ
【表２９】
2019517587.tif 000044
【０３７４】
早期アポトーシスが、２、４、または８時間の時点で検出されなかったとしても、同じ細胞のコロニー形成アッセイは、化合物１に対する曝露の８時間後に、ＢＦＵ−Ｅ及びＣＦＵ−ＧＭの不全を示した。８０ｎＭより高い濃度で、コロニーの数は、５０％超低減した。それにもかかわらず、効果は、化合物１がＭｅｔｈｏＣｕｌｔ培地において、１４日間のインキュベーション期間を通して、化合物ウォッシュアウトなしに維持された（連続条件）場合に観察されたものより低かった。
【０３７５】
造血前駆細胞に対する化合物１の効果を、ドナーＨＤ４６、ＨＤ４７、ＨＤ４８、及びＨＤ５０からの試料を使用してさらに調査した。ＢＦＵ−Ｅコロニーの数は、８時間の曝露で１１１ｎＭ以上の化合物１の濃度で５０％超低減し（ｐ＜０．０１及び０．００１）、個々のＩＣ５０値は、３０〜１５０ｎＭの範囲であった。１０００ｎＭの化合物１への８時間曝露で形成されたＣＦＵ  ＧＭコロニーの数の低減は、４人のドナーについて３１％〜４６％の範囲であり（ｐ＜０．０１）、３３３ｎＭの化合物１において２２％〜４６％の範囲であった（ｐ＜０．０５）（図３３Ａ〜Ｃ）。示される結果は、４人のドナーの平均値であり、エラーバーは、（ＳＥＭ）の標準誤差を表す。
【０３７６】
図３３Ａ及び３３Ｂは、それぞれ、イスコフ培地における４時間または８時間にわたる化合物１による骨髄ＣＤ３４＋細胞のプレインキュベーション、続いてＭｅｔｈｏＣｕｌｔ培地における１４日間の化合物１なしのインキュベーション後のコロニー数を提供する。図３３Ｃは、１４日間にわたる、化合物１の連続存在下でのＭｅｔｈｏＣｕｌｔ培地における骨髄ＣＤ３４＋細胞のインキュベーション後のコロニー数を提供する。骨髄及び赤血球コロニーの数は、１４日間のインキュベーション期間全体で、化合物１に曝露された試料中、１１１ｎＭ以上の濃度で良好に減少した。
【０３７７】
結論．ＡＭＬにおける導入療法の目標は、完全寛解（ＣＲ）を達成することである。ＣＲは、末梢血中１×１０９細胞／Ｌより多い好中球、５％未満の骨髄芽球、及び髄外疾患の証拠なしとして定義される。化学療法は、すべての造血細胞（良性及び悪性の両方）の骨髄を「空にする」ため、及び生存造血幹細胞（ＨＳＣ）に正常細胞を有する髄を再配置させ、それにより寛解をもたらすために与えられる。
【０３７８】
造血前駆細胞における化合物１毒性の評価は、４人の健康なドナーからのＣＤ３４＋細胞における標準化コロニー形成アッセイを使用して行った。顆粒球−単球及び赤血球前駆細胞の阻害は、それぞれ８２ｎＭ〜１３５ｎＭ及び３２ｎＭ〜１３１ｎＭのＩＣ５０値で観察された。
【０３７９】
４人の異なるドナーからの細胞を使用して、化合物１に対する異なる曝露時間の応答も分析した。化合物１の毒性は、この化合物に対する曝露時間の長さが低減したときに減衰した。８時間において、効果は強度において低減したが、４時間において、効果は存在しなかった。毒性は、連続単一用量曝露後に最大であった。Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖフローサイトメトリーによって測定されるアポトーシスの徴候は、ＣＤ３４＋／ＣＤ３８−造血幹細胞（ＨＳＣ）またはＣＤ３４＋／ＣＤ３８＋造血前駆細胞（ＨＰＣ）のいずれかにおいて、試験された化合物１の濃度（６００ｎＭまで）において２、４、または８時間で明らかでなかった。
これらのデータは、用量及び曝露時間が低減されると、造血前駆細胞に対する化合物１の毒性が、効果的に管理され得ることを示唆する。
【０３８０】
実施例６：好中球成熟に対する化合物１の効果−エクスビボでの健康な骨髄前駆細胞
ＣＦＵ−ＧＭ前駆細胞の増殖に対する化合物１の効果は、薬物誘導性好中球減少症におけるこれらの前駆細胞の役割に起因して、特別な関連性がある。好中球は、別個のステージを通して発生するＣＦＵ−ＧＭ前駆細胞、骨髄芽球（ステージＩ）、前骨髄球（ステージＩＩ）及び骨髄球（ステージＩＩＩ）を通して発生する前駆細胞に由来し、これらは最終的に縞状核または分葉核を有する好中球に向けて成熟する。好中球成熟に対する化合物１の効果は、前駆細胞の２次元培養、続いてフローサイトメトリーを使用することによって決定した。健康なボランティアから入手した骨髄ＣＤ３４＋細胞を、組織培養培地に移し、幹細胞因子（ＳＣＦ）、Ｆｍｓ関連チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ−３リガンド）、及び顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）を添加することによって、エクスビボで骨髄性分化を誘導した。このシステムにおける化合物１の効果を評価するために、３０ｎＭまでの化合物１の濃度及び０日目に開始して８、２４、及び７２時間の曝露時間を選択した。化合物１に対する曝露後に、細胞を洗浄し、次いで１４日目まで化合物１の非存在下、培養培地中でインキュベートした。細胞分化及びアポトーシスを、培養の３、７、１０、及び１４日目に、フローサイトメトリーに基づく方法で測定し、アポトーシス細胞及び死細胞を、Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ陽性及び７−アミノアクチノマイシンＤ陽性として特定した。結果は、細胞が２４時間及び７２時間にわたって化合物に曝露されたとき、試験した最高の化合物１濃度（３０ｎＭ）においてのみ生存性が減少したことを示した（図３４）。
【０３８１】
図３４において、健康なドナーからの骨髄ＣＤ３４＋細胞を、３０ｎＭの化合物１またはＤＭＳＯでインキュベートした。化合物１を、８、２４、または７２時間後にウォッシュアウトし、培地を置き換え、培養物を化合物１またはＤＭＳＯの非存在下で１４日目までインキュベートした。細胞を、それらのＣＤ３４、ＣＤ３３、及びＣＤ１１ｂの発現に従い、最も未成熟から最も成熟まで、ＨＰＣ、ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、及びステージＩＶとして分類した。次いで、各ステージからのアポトーシス細胞を、Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖについて陽性として特定し、ＡＶ＋ＨＰＣ、ＡＶ＋ステージＩ、ＡＶ＋ステージＩＩ、ＡＶ＋ステージＩＩ、及びＡＶ＋ステージＩＶとして標識した。各化合物１曝露期間（８時間、２４時間、及び７２時間）について、Ｎ＝１である。評価した２人の健康なドナーのうちの１人から得た骨髄前駆細胞について、代表的な結果を示す。２４時間及び７２時間の曝露群において、３ｎＭ以下の化合物１の濃度で、または８時間の曝露時間での０．０３〜３０ｎＭの任意の化合物１の濃度で、生存性の低減はなかった。化合物１の除去後に、培養物中の細胞生存性は増加し、２４時間にわたって化合物１に曝露された培養物中で１０日目に対照値に到達した。細胞生存性は、７２時間にわたって化合物１に曝露された培養物中で、９．６％から３０％（ドナー１）及び１３％から４４％（ドナー２）まで増加した。２４時間または７２時間の曝露後の３０ｎＭの化合物１におけるアポトーシスは、骨髄性分化のすべてのステージに影響を及ぼしたが、生存細胞は、増殖し、正常な好中球に完全に成熟することができた（図３４）。
【０３８２】
造血研究の要約：要約すると、これらのデータは、健康なドナーの骨髄のエクスビボ培養物に化合物１を添加することは、細胞成長の遅延または停止を誘導することにより顆粒球−単球及び赤血球コロニーの形成の減少／遅延をもたらしたことを示す。前駆細胞による阻害性成長は、化合物１が８時間までの治療後にウォッシュアウトされたときに大幅に低減し、化合物１治療のための用量スケジュール戦略が、造血幹細胞及び前駆細胞の生存を可能にするはずであり、インビボでの血液毒性の潜在性を低減することを示唆する。前駆細胞分化に対する化合物１の効果を、好中球の発達中に前駆細胞集団を分析することによってさらに調査した。化合物１でのより長い治療（７２時間まで）は、細胞の一部にアポトーシスを誘導することによって好中球分化のすべてのステージに影響を及ぼしたが、生存細胞は、増殖し、正常な好中球に完全に成熟することができた。これらの発見は、投薬戦略が、ＡＭＬ細胞株及びＡＭＬ患者の芽球において強力なアポトーシスを誘導し、腫瘍細胞を排除するが、正常な造血幹／前駆細胞の一部を利用し、好中球減少症の逆転を可能にすることができる化合物である、化合物１について考案され得る可能性を示唆する。
【０３８３】
実施例７：ＭＤＳ試料のインビトロ生存性に対する化合物１の効果
方法．高リスクＭＤＳ試料に対する化合物１の効果は、幹細胞／前駆細胞に対するその効果をより良く定義するために、インビトロ液体培養において、ならびにコロニーアッセイによって測定した。高リスクＭＤＳ患者からの骨髄単核細胞（ＢＭＭＣ）を、ｈＬＤＬ（４０μｇ／ｍＬ）、ＳＣＦ（５０ｎｇ／ｍＬ）、ＦＬＴ３Ｌ（５０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−３（１０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−６（２５ｎｇ／ｍＬ）、及びＴＰＯ（１００ｎｇ／ｍＬ）（すべてＰｅｐｒｏｔｅｃｈから）で補充されたＣｅｌｌＧｒｏ培地（ＧｅｌｌＧｅｎｉｘ）中、インビトロで培養した。培養中に、細胞を異なる濃度の化合物１（３７、１１１、３３３、及び１０００ｎＭ）またはＤＭＳＯ対照に曝露した。２４時間後、細胞を２回洗浄して化合物を除去し、１週間まで培養物中に維持し、１日目、３日目、及び７日目に生存細胞計数を行う。化合物ウォッシュアウトの直後に、条件あたり１０５個の細胞をコロニー形成アッセイのために収集し、別の１０５個の細胞を細胞内フローサイトメトリーのために染色した。
【０３８４】
コロニー形成アッセイの場合、細胞をＭｅｔｈｏＣｕｌｔ培地（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に播種し、３７℃で１４日間インキュベートし、ＳｔｅｍＶｉｓｉｏｎ（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して自動計数によって採点した。
【０３８５】
アポトーシス細胞の細胞内フローサイトメトリー測定の場合、細胞を、１．６％パラホルムアルデヒド中に固定し、氷冷メタノール中で透過処理し、ＦＩＴＣ複合化抗活性カスパーゼ３抗体（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して染色した。ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を、フローサイトメトリーデータ取得に使用した。フローサイトメトリー標準（ＦＣＳ）ファイルを、Ｉｎｆｉｎｉｃｙｔソフトウェア（Ｃｙｔｏｇｎｏｓ）を使用して分析した。
【０３８６】
結果．図３５Ａに示されるように、生存細胞の数は、２４時間の曝露後に、化合物１の濃度まで用量依存的に著しく低減し、この効果は、少なくとも１週間の間維持された。カスパーゼ３活性化によって確認されるように、ＭＤＳ細胞に対するこの効果は、アポトーシスの誘導によって媒介された（図３５Ｂ）。化合物１の効果は、コロニー形成アッセイにより測定して、ＭＤＳ前駆細胞においてより急性であった（図３５Ｃ）。
【０３８７】
結論．化合物１は、ＭＤＳ試料中の細胞数の減少を誘導した。この効果は、カスパーゼ３の活性化によって媒介された。化合物１はまた、ＭＤＳ前駆細胞を効果的に減少させた。このデータは、ＭＤＳ試料に対する化合物１の抗増殖効果及びアポトーシス効果を示す。
【０３８８】
実施例８：ＭＤＳ患者試料の細胞生存及び自己再生に対する化合物１の効果
方法．ヒトインターロイキン−３（ＩＬ−３）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、及び幹細胞因子（ＳＣＦ）を発現するマウス間質細胞ＳＬ／Ｍ２を、培養密度、続いてγ線照射に対して培養した。次いで、３人の高リスクＭＤＳ患者（ＨＲ−ＭＤＳ）、３人のＭＤＳから生じる二次ＡＭＬ患者（ｓＡＭＬ）、及び５人の同年齢の健康なドナーから単離されたヒトＣＤ３４＋骨髄細胞を、不活性化ＳＬ／Ｍ２細胞で１週間培養した。次に、ヒト前駆細胞をＦＡＣＳによって定量化し、細胞を、コロニー形成アッセイ（細胞生存アッセイ）のためにメチルセルロース中に播種した。２週間後、２０〜２５個のコロニーを各条件から選び、再懸濁し、２回目のコロニー形成アッセイ（細胞自己再生アッセイ）のために新鮮なメチルセルロース中に再播種した。
【０３８９】
結果．コロニー形成アッセイ（図３６Ａ）において、化合物１は、ＨＲ−ＭＤＳ、ｓＡＭＬ、及び正常な骨髄前駆細胞において著しい細胞毒性を誘導した。１０ｎＭ及び１００ｎＭでの化合物１は、正常な骨髄前駆細胞と比較して、ＨＲ−ＭＤＳ及びＡＭＬ前駆細胞の細胞生存をより特異的に阻害する傾向があった。コロニー再播種アッセイ（図３６Ｂ）において、１ｎＭ及び１０ｎＭでの化合物１は、正常な骨髄前駆細胞よりも、ｓＡＭＬ及びＨＲ−ＭＤＳ前駆細胞の自己再生を著しく低減した。
結論．化合物１は、ｓＡＭＬ及びＨＲ−ＭＤＳ細胞の成長を阻害した。治療濃度域は、正常な骨髄前駆細胞に対する低減した効果とともに示された。
【０３９０】
実施例９：急性骨髄性白血病異種移植マウスモデルにおける化合物１の抗腫瘍活性
この研究において、ＨＬ−６０  ＩＶ  ＡＭＬ異種移植モデルにおける化合物１の抗腫瘍活性を研究した。このモデルにおいて、ＨＬ−６０ヒトＡＭＬ細胞を、ホストＢＭ及び内臓（例えば、脾臓、肝臓）に移植し、動物は、進行性末梢白血球増多症を発症する。雌の重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスに、ＨＬ−６０細胞を尾静脈注射によって接種した。異種移植ＨＬ−６０細胞に対する化合物１の効果を理解するために、動物に、ビヒクルもしくは化合物１（０．５、１、２．５、及び５ｍｇ／ｋｇ）を１日１回（ＱＤ）５日間、移植後３週間〜４週間の間に腹腔内（ＩＰ）投与するか（ＡＰ６５１６、生存研究）、または動物に、ビヒクルもしくは化合物１を、１日２回（ＢＩＤ）、連続で５日間もしくは１０日間にわたって（５ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ×５もしくは２．５ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ×１０）、移植後６週間〜８週間の間にＩＰ投与した（研究ＡＰ６９８２、ＢＭ中の％ヒトＣＤ３３＋［ｈＣＤ３３＋］細胞）。
【０３９１】
生存研究
ＨＬ−６０を担持する動物の末梢血からの腫瘍負荷を、腫瘍細胞接種後７週間目に蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）によって査定した。ビヒクル対照群と比較して、化合物１治療群のうちのいずれにおいても腫瘍負荷に対する効果は観察されなかった。ビヒクル対照及び化合物１治療群からのマウスは、ビヒクル対照群の場合は５４日目、及び化合物１治療群の場合は５１日目〜５７日目の間に疾患負荷に屈した。全生存効果は、化合物１治療群に対して観察されなかった。２．５ｍｇ／ｋｇ化合物１治療群からの１匹のマウス（１／８）が、１６２日目の研究終了まで生存した。陽性対照フルダラビンは、著しく延命した（生存中央値７６日に対してビヒクル対照群は６７．５日、ｐ＜０．０５）。
【０３９２】
骨髄におけるＨＬ−６０腫瘍細胞
３週間目の５連続日治療に続くＨＬ−６０生存研究において、化合物１治療による活性が観察されなかったため、治療時間に近いエンドポイントを見るように実験をデザインした。この研究では、投与される薬物の総量を一定に維持しながら、異なる化合物１投薬スケジュール（５ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＤ×５連続日に対する２．５ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＤ×１０連続日）を研究した。ビヒクル対照動物は、５％  Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）／４５％  ＰＥＧ  ４００／５０％生理食塩水で治療した。治療は、接種後６週間目に開始した。ビヒクル及び化合物１治療群は、治療開始後７日目（５連続日の５ｍｇ／ｋｇを１日２回［ＢＩＤ］化合物１の後）または１１日目（１０連続日の２．５ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤ化合物１の後）のいずれかに終了した。研究の主要エンドポイントは、ＦＡＣＳ分析によるＢＭ中のｈＣＤ３３＋／ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージであった。追加のエンドポイントには、細胞生存性、体重、及びＢＭ組織学が含まれた。
【０３９３】
ＨＬ−６０細胞は、ヒト特異的抗体を有するＣＤ３３＋／ＣＤ４５として、ＦＡＣＳ分析により大腿骨髄試料から特定した。ＢＩＤ×５群及びＢＩＤ×１０群からのビヒクル治療した動物のＢＭにおけるヒトＣＤ３３＋／ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージは、それぞれ４７．５±６％及び５５．２±６％であった。５ｍｇ／ｋｇの化合物１  ＢＩＤ×５での治療は、ビヒクル対照群と比較して、ＢＭ中のヒトＣＤ３３＋／ＣＤ４５＋腫瘍細胞のパーセンテージの著しい５４．０％低減（ｐ＝０．００１３）をもたらした（ビヒクル対照群及び化合物１治療群について、それぞれ４７．５％対２１．９％ヒトＣＤ３３＋／ＣＤ４５＋細胞）。２．５ｍｇ／ｋｇの化合物１  ＢＩＤ×１０での治療は、ビヒクル対照群と比較して、ＢＭ中のヒトＣＤ３３＋／ＣＤ４５＋腫瘍細胞のパーセンテージの著しい７１．５％低減（ｐ＜０．０００１）をもたらした（ビヒクル対照群及び化合物１治療群について、それぞれ５５．２％対１５．７％ヒトＣＤ３３＋／ＣＤ４５＋細胞）。ＦＡＣＳ分析により決定される、骨髄細胞生存性に対する著しい効果は、化合物１治療群において観察されなかったが、この測定が、マウス骨髄細胞とヒト骨髄細胞とを区別しないことに留意すべきである。疾患進行と一致する体重喪失は、ビヒクル群及び化合物１治療群の両方において観察された。化合物１治療により示される差異はなかった。
【０３９４】
ビヒクル及び化合物１で治療された動物の代替大腿骨をホルマリンに固定し、パラフィンに埋め込み、ヘマトキシリン及びエオシン染色のために処理した。単一の組織切片／動物を組織学的分析に使用し、生存骨髄中の腫瘍のパーセントを、腫瘍細胞により占められる面積に基づいて推定した。化合物１（５ｍｇ／ｋｇ）ＢＩＤ×５治療による骨髄中の生存腫瘍のパーセンテージにおいて、著しい３５％低減（ビヒクル対照に対してｐ＜０．００６）があった。２．５ｍｇ／ｋｇ化合物１  ＢＩＤ×１０での治療は、骨髄中の生存腫瘍のパーセンテージの減少に向かう傾向を明示したが（ビヒクル対照に対して２３．５％）、この減少は統計的に有意でなかった。これらのデータは、化合物１治療後のＦＡＣＳデータにおいて観察された低減と一致するが、変化の程度は、組織学的分析においてより小さい。これは、ＦＡＣＳによる骨髄細胞集団全体の分析と比較して、組織学的査定における小さい試料面積（１切片／マウス）に起因し得る。
【０３９５】
実施例１０：再発性または不応性急性骨髄性白血病を有する対象における化合物１（新規のＣｅｒｅｂｌｏｎ  Ｅ３リガーゼ調節薬）の第１相非盲検用量検出研究
適応症：再発性または不応性急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療
【０３９６】
目的
【０３９７】
主目的：
化合物１の安全性及び耐容性を決定すること。
【０３９８】
化合物１の非耐量（ＮＴＤ）、最大耐量（ＭＴＤ）、及び／または推奨される第２相用量（ＲＰ２Ｄ）を定義すること。
【０３９９】
二次目的：
化合物１の予備的な有効性に関する情報を提供すること。
【０４００】
化合物１の薬物動態（ＰＫ）を特徴付けること。
【０４０１】
研究デザイン
これは、ヒトにおいて初の、再発性または不応性ＡＭＬを有する対象における化合物１の非盲検第１相用量漸増及び拡張臨床試験である。研究の用量漸増部（パートＡ）は、静脈内投与された漸増用量の化合物１の安全性及び耐容性を評価し、化合物１のＭＴＤを決定する。拡張部（パートＢ）は、ＲＰ２Ｄを決定するために、各々およそ２０人までの評価可能な対象の選択された拡張コホートにおける、ＭＴＤ以下で投与された化合物１の安全性及び有効性をさらに評価する。１つ以上の投薬レジメン及び／または疾患サブセットは、コホート拡張のために選択され得る。パートＡ及びＢは、３つの期間、スクリーニング、治療、及びフォローアップからなる。白血病応答は、調査者によって決定される。疾患の査定は、ＡＭＬにおける国際ワーキンググループの応答基準に基づく（Ｃｈｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｖｉｓｅｄ  ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ  ｆｏｒ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｃｒｉｔｅｒｉａ，ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｕｔｃｏｍｅｓ，ａｎｄ  ｒｅｐｏｒｔｉｎｇ  ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔｒｉａｌｓ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００３；２１（２４）：４６４２−９）。
【０４０２】
スクリーニング期間
スクリーニング期間は、化合物１の初回投与の２８日前に開始する。任意の他の研究手順を開始する前に、対象及び実施スタッフは、インフォームドコンセント文書に署名し、日付を記入しなければならない。すべてのスクリーニング試験及び手順は、化合物１の初回投与前２８日以内に完了しなければならない。
【０４０３】
治療期間
治療期間において、化合物１は、疾患進行、再発、許容されない毒性、または対象／医師による撤退決定が存在しない場合、各２８日サイクルの１〜５日目に４サイクルまで静脈内投与される。パートＡの間、対象が臨床利益（安定した疾患またはＰＲ）を明示し、許容されない毒性がなく研究薬物に耐容する場合、サイクル４に加えて２つの追加のサイクルが許容され得る。修正された投薬スケジュール（例えば、投薬を５日から１０日まで増加させる）が、必要に応じて、毒性、ＰＫプロファイル、及びＰＤ所見に基づいて、追加のコホートにおいて評価されてもよい。
【０４０４】
すべての対象は、各サイクルの１日目の少なくとも３日前にカルシウム、カルシトリオール、及びビタミンＤの補充を開始し、各サイクルにおける化合物１の最終投与から３日以降（例えば、化合物１が１日目〜５日目に投与される場合、８日目以降）まで継続する必要がある。
【０４０５】
サイクル１において、２８日目（±３日）に骨髄評価を行う。２８日目の骨髄評価に基づいて、造血低形成骨髄を有し、持続性白血病の証拠がなく、グレード３以上の好中球減少症を有する対象は、サイクル１における安全性モニタリングのために、さらに２週間フォローする（合計４２日の期間、図１を参照）。追加の骨髄査定は、血液学的回復の時点または４２日目（±３日）に行う。したがって、パートＡにおいて、サイクル１中の用量制限毒性（ＤＬＴ）の評価のための期間は、最大４２日（２８日または４２日）となる。
【０４０６】
サイクル２〜４は、２８日の長さである。
【０４０７】
フォローアップ期間
フォローアップ期間において、すべての対象は、安全性について、化合物１の最終投与後２８日間（±３日）にわたってフォローされる。
【０４０８】
記録された疾患の進行（または再発）のない対象は、１年目はその後８週間（±１週間）毎、及び２年目は１２週間（±２週間）毎、または疾患の進行（もしくは再発）、新規抗がん療法の開始、研究からの撤退の同意、死亡、または治験の終了のうち最初に到来するものまでに行われた全血球数及び末梢血塗抹の有効性評価を有する。骨髄評価は、１年目の最後に、フォローアップ期間中に臨床的に示されるように完了する。
【０４０９】
すべての対象は、最長２年、または死亡、フォローアップの喪失、もしくは治験の終了のうち最初に起こるものまで、有効性長期フォローアップのスケジュールに従って生存フォローアップのためにフォローされる。生存フォローアップは、記録のレビュー（公的記録）及び／または対象、家族、または対象の治療医師との電話コンタクトによって行われ得る。
【０４１０】
パートＡ−用量漸増
漸増相（パートＡ）の間、修正された加速滴定デザイン（Ｓｉｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ  １９９７；８９（１５）：１１３８−４７）を使用して、初期毒性を確立する。各々１人以上の対象のコホートに、２人以上の対象がＤＬＴ期間内にグレード２以上の化合物１関連有害事象を経験するまで（異なるコホートであってもよい）、または１人以上の対象がＤＬＴ期間内にＤＬＴを経験するまで、コホートあたり１００％増分で増加する用量で化合物１を投与する。その時点で、現行のコホート及びすべての後続のコホートは、３〜６人の対象を登録して拡張される。５０％を超えない用量増分での用量漸増スケジュールは、ＮＴＤ及びＭＴＤを確立するために同時に開始される。初期用量は、０．３ｍｇである。試料用量漸増スキームを図２に示す。化合物１製剤中のＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）残留溶媒は、２．４ｍｇの化合物１の日用量を超える用量漸増コホートで進めるために、ＩＣＨ  Ｑ３Ｃ不純物：残留溶媒において設定された１日許容曝露量（ＰＤＥ）を超えてはならない。
【０４１１】
用量漸増決定は、調査者（及び／または指定された代表者）、スポンサーの研究担当医師、安全性担当医師、及び研究管理者を含む安全性検討委員会（ＳＲＣ）の自由裁量で行われる。特別出席者には、研究薬物動態学者、研究統計学者、及び追加の研究臨床科学者を挙げることができる。必要に応じて、ＳＲＣは、他の内部及び外部専門家に助言を求めることができる。
【０４１２】
ＳＲＣは、より高い用量コホート、用量コホート内の追加の対象、中間用量コホート、より少量の用量増分、代替投薬スケジュール（例えば、化合物１投与の５日から１０日まで増加させる）を評価することを決定してもよく、及び／または入手可能な臨床及び検査安全性データ、ＰＫプロファイル、及びＰＤ所見のレビューに基づいて、ＭＴＤを宣言してもよい。代替投薬スケジュールが評価される事象において、開始用量及びスケジュールは、用量漸増のための基準を以前に満たしていた用量コホートの用量強度を超えない。
【０４１３】
第１の用量が、用量漸増中に任意のコホートに投与された後、各コホートにおける対象は、次のより高い用量コホートが始まる前に、少なくとも２８日間及び最大４２日間（サイクル１、ＤＬＴ期間）にわたって観察される。所与の用量漸増コホートにおいて、１日あたり複数の対象は登録されない。ＤＬＴについて評価可能な対象は、以下であるとして定義される。
【０４１４】
ＤＬＴを経験することなく、サイクル１の間に、予定されたサイクル１全用量（例えば、５日投与スケジュールの場合、４つの完全化合物１用量、投与を飛ばした場合は７日目以前に４つ以上の用量が完了される）の化合物１の少なくとも８０％を受けた、または
【０４１５】
化合物１の少なくとも１つの用量（もしくはその留分）を受けた後にＤＬＴを経験した。
【０４１６】
代替投与スケジュール（例えば、投薬を５日間から１０日間まで増加させる）がパートＡにおいて評価される事象において、ＤＬＴ評価可能な対象を決定するために同じ基準が適用される。ＤＬＴについて評価可能でない対象を置き換える。
【０４１７】
用量コホートにおける評価可能な対象のうちの３３％超がサイクル１の間にＤＬＴを経験する場合、用量は非耐容性であると見なされる。ＭＴＤは、評価可能な対象のうちの３３％以下がサイクル１の間にＤＬＴを経験する、ＮＴＤより下の最終用量として定義される。６人の評価可能な対象のうちの２人以上が、第１の用量コホートにおいてＤＬＴを経験する場合、より低い用量コホートが、ＳＲＣの自由裁量において調査される（すなわち、０．１ｍｇの化合物１）。中間用量の化合物１（ＮＴＤとＮＴＤ前の最終用量レベルとの間の用量）を評価して、ＭＴＤを正確に決定することができる。
【０４１８】
対象内用量漸増は、ＤＬＴ査定期間の間は許容されないが、サイクル２以降では、疾患進行の証拠のない、割り当てられた用量の化合物１に耐容する対象は（調査者の自由裁量において）、この研究における対象の少なくとも１つのコホートによって適切に耐容されることが示される最高用量レベルまで漸増させることができる（すなわち、評価可能な対象のうちの３３％以下が、その用量レベルでＤＬＴを経験した）。
【０４１９】
パートＢ−コホート拡張
用量漸増（パートＡ）の完了後に、追加の対象を拡張相（パートＢ）に登録することができ、各コホートはおよそ２０人までの評価可能な対象を含む。拡張は、パートＡからの安全性、ＰＫ、及びＰＤデータに基づいて、用量漸増相において確立されたＭＴＤ及びスケジュールで、及び／または代替耐量及びスケジュールで起こり得る。ＳＲＣは、コホート拡張のために対象となる用量及びスケジュールを選択する。１つ以上の投薬レジメンが、コホート拡張のために選択され得る。ＳＲＣは、安全性データのレビューを、研究を通して定期的に継続し、必要に応じて、研究の継続性及び用量修正を勧める。
【０４２０】
研究対象集団
他の確立された療法に好適でない世界保健機関の基準（Ｌｏｗｅｎｂｅｒｇ，Ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ：ｔｈｅ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  ｏｆ  ｃａｐｔｕｒｉｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｖａｒｉｅｔｙ．Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ＡＳＨ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｇｒａｍ  ２００８；２００８（１）：１−１１）によって定義される、再発性または不応性ＡＭＬを有する１８歳以上の男性及び女性が、研究に登録される。
【０４２１】
研究の長さ
登録は、完了までにおよそ１８〜２４ヶ月かかることが予想される（用量漸増に１２〜１５ヶ月、及び拡張に６〜９ヶ月）。活発な治療及び治療後フォローアップの完了には、さらに６〜２４ヶ月を要すると予想される。研究全体は、およそ３〜４年まで継続することが予想される。
【０４２２】
治験の終了は、最後の対象が治療後フォローアップを完了するための最終訪問日、またはプロトコルにおいて事前に特定される、一次、二次、及び／または探索的分析に必要とされる最後の対象からの最後のデータ点の受領日のうち後に到来する日として定義される。
【０４２３】
研究治療
治験使用のために適切に標識されたＩＶ注入用の化合物１は、関連する国の保健局の規制に従って供給される。研究薬は、上記の治療期間の部分で概説されるように投与される。
【０４２４】
臨床的に有意な疾患進行（もしくは再発）、許容されない毒性、または対象／医師による撤退決定の証拠がある場合、研究治療を中止することができる。対象は、調査者の自由裁量で疾患進行を超えて研究薬を受け続けることができる。
【０４２５】
重要な有効性査定の概要
一次有効性変数は、白血病奏功率である。
【０４２６】
すべての治療された対象が、有効性分析に含まれる。白血病応答は、調査者によって決定される。査定は、ＡＭＬにおける国際ワーキンググループの応答基準に基づく（Ｃｈｅｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２００３；２１（２４）：４６４２−９）。
【０４２７】
抗白血病活性の証拠の記述的分析は、調査者による臨床的、検査、分子、及び細胞遺伝学的査定に基づいて提供され、骨髄芽球のパーセンテージの査定、骨髄遺伝学、分子遺伝子研究を含み、分子応答、骨髄フローサイトメトリー、血小板数、及び絶対好中球数を評価する。
【０４２８】
応答基準は、最良の総合応答率カテゴリーである、完全寛解率（ＣＲＲ）及び奏効率（ＯＲＲ）によって要約される。ＯＲＲは、完全寛解（ＣＲ）（すなわち、形態学的無白血病状態、形態学的ＣＲ、細胞遺伝学的ＣＲ、分子ＣＲ、及び不完全な血液回収を伴う形態学的ＣＲ）、ならびに部分寛解のすべての応答を含む。
【０４２９】
注目する有効性変数は、ＯＲＲ及びＣＲＲである。全生存（ＯＳ）、無再発生存（ＲＦＳ）、無進行生存（ＰＦＳ）、無事象生存、寛解期間、応答期間、及び寛解／応答までの時間を含む臨床活性の他の測定値が要約される。
【０４３０】
重要な安全性査定の概要
この研究の安全性変数は、有害事象、安全性臨床検査変数、１２−誘導心電図、東海岸がん臨床試験グループパフォーマンスステータス、左室駆出率査定、身体検査、バイタルサイン、研究治療への曝露、併用医薬の査定、及び妊娠の可能性のある女性の妊娠検査を含む。
【０４３１】
重要な薬物動態査定の概要
化合物１について決定された血漿ＰＫパラメータは、観察された最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）、投与後０時間〜２４時間の血漿濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ２４）、終末相排出半減期（ｔ１／２）、総血漿クリアランス（ＣＬ）、ピーク（最大）血漿濃度までの時間（ｔｍａｘ）、安定した状態での分布容積（Ｖｓｓ）である。選択されたＰＫパラメータ（例えば、Ｃｍａｘ、ＡＵＣ２４、ｔ１／２）は、必要に応じて、化合物１のＲ鏡像異性体及びＳ鏡像異性体について推定される。
【０４３２】
統計方法
統計分析は、必要に応じて、または該当する場合、用量レベル（パートＡ）及びコホート（パートＢ）別に行う。すべての分析は、本質的に記述的である。
【０４３３】
安全性データのすべての要約は、任意の化合物１を受ける対象を使用して行われる（治療対象集団）。
【０４３４】
主対象となる有効性変数は、ＯＲＲ及びＣＲＲである。ＯＳ、ＲＦＳ、ＰＦＳ、無事象生存、寛解期間、応答期間、及び寛解／応答までの時間を含む他の予備的な有効性変数が要約される。有効性分析は、治療集団及び有効性評価可能集団（ベースライン白血病査定評価、少なくとも１サイクルの研究治療またはサイクル１における予定用量の少なくとも８０％、及び研究白血病査定評価に関するものを受けた）に対して繰り返し、治療集団を使用した結果を一次と見なした。
【０４３５】
すべてのバイオマーカー関連データの提示は、別途特定されない限り、少なくとも１つのバイオマーカー査定を受けた治療対象に基づく。記述的統計は、投薬レジメン及び／または疾患サブセット別、ならびに全体の連続バイオマーカーエンドポイントのベースライン及びベースラインからの変化について提示される。
【０４３６】
ＰＫ、ＰＤ、安全性、及び活性関係の調査を査定する。
【０４３７】
Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｈａｒｍｏｎｉｓａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｕｓｅ／優良臨床試験実施基準、及び該当する規制要件に準拠して、研究を行う。
【０４３８】
包含基準
対象は、この研究の用量漸増（パートＡ）または用量拡張（パートＢ）に登録されるために、下記の基準を満たさなければならない。
１．ＩＣＤに署名する時点で１８歳以上の男性及び女性。
２．対象は、任意の研究関連査定／手順が行われる前にＩＣＤを理解し、自発的に署名しなければならない。
３．対象は、研究訪問スケジュール及び他のプロトコル要件に従う意志があり、それが可能である。
４．他の確立された療法に好適でない、世界保健機関の基準（Ｌｏｗｅｎｂｅｒｇ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ＡＳＨ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｇｒａｍ  ２００８；（１）：１−１１）によって定義される再発性または不応性ＡＭＬ。
５．０〜２の東海岸がん臨床試験グループのパフォーマンスステータス（ＥＣＯＧ  ＰＳ）
６．前処置なしにドナーリンパ球輸注（ＤＬＩ）から少なくとも４週間（初回投与から）が経過している。
７．対象は、以下のスクリーニング検査値を有していなければならない。
正常範囲内（ＷＮＬ）の補正された血清Ｃａまたは遊離（イオン化）血清Ｃａ
補正されたＣａ（ｍｇ／ｄＬ）＝総Ｃａ（ｍｇ／ｄＬ）−０．８（アルブミン［ｇ／ｄＬ］−４）
最初の輸注前の総白血球数（ＷＢＣ）＜２５×１０９／Ｌこのレベルを達成するために、ヒドロキシウレアでの前治療もしくは同時治療が許される。
正常範囲内または補充物で訂正可能なカリウム及びマグネシウム
アスパルテートアミノトランスフェラーゼ／血清グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ／ＳＧＯＴ）またはアラニンアミノトランスフェラーゼ／血清グルタメートピルビン酸トランスアミナーゼ（ＡＬＴ／ＳＧＰＴ）≦２．５×正常範囲の上限（ＵＬＮ）。
尿酸≦７．５ｍｇ／ｄＬ（４４６μｍｏｌ／Ｌ）尿酸低下剤での前治療及び／または同時治療（例えば、アロプリノール、ラスブリカーゼ）が許される。
血清ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ
コッククロフト・ゴールト式を使用する≧６０ｍＬ／分の推定された血清クレアチニンクリアランス
ＩＮＲ＜１．５×ＵＬＮ及びＰＴＴ＜１．５×ＵＬＮ
８．化合物１についての妊娠防止計画（ＰＰＰ）：
ａ）．妊娠の可能性のある女性（ＦＣＢＰ）は、ＰＰＰに概説されている頻度に基づいて妊娠検査を受けなければならず、妊娠結果が陰性でなければならない。
ｂ）．異性間性交の完全な節制を実践しない限り、性的に活発なＦＣＢＰは、ＰＰＰにおいて特定される適切な避妊法を使用することに同意しなければならない。
ＦＣＢＰは、中断なしに、化合物１の開始前２８日間にわたって、化合物１治療の期間全体にわたって、投与中断の間、及び化合物１の最終投与後少なくとも２８日間にわたって、２つの信頼できる避妊形態を同時に使用すること（または完全な節制を実践すること）に同意しなければならない。
完全な節制は、これが対象の好ましく通常のライフスタイルである場合にのみ許容される。
断続的な節制（カレンダー排卵法、排卵徴候体温法、排卵後法）及び撤退は許容されない。
ｃ）．異性間性交の完全な節制を実践しない限り、性的に活発な男性（精管切除を受けていた男性を含む）は、ＦＣＢＰと性交渉を行うときに、ＰＰＰにおいて特定されるバリア避妊法を使用しなければならない。
完全な節制は、これが対象の好ましく通常のライフスタイルである場合にのみ許容される。
ｄ）．女性は、ＰＰＰにおいて特定される期間の間、授乳または母乳提供を行わないことに同意しなければならない。
ｅ）．男性は、ＰＰＰにおいて特定される期間の間、精液または精子を提供しないことに同意しなければならない。
ｆ）．すべての対象は、
化合物１が潜在的な催奇の危険性を有し得ることを理解しなければならない。
ＰＰＰにおいて特定される期間の間、献血しないことに同意しなければならない。
妊娠の予防及び胎児被曝の危険性について助言を受けなければならない。
【０４３９】
除外基準
以下のうちのいずれかの存在により、対象が登録から除外される。
１．急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）を有する対象
２．活性中枢神経系（ＣＮＳ）白血病または既知のＣＮＳ白血病を示唆する臨床症状を有する対象。脳脊髄液の評価は、スクリーニング中に白血病によるＣＮＳ関与の臨床的疑いがある場合にのみ必要とされる。
３．白血病のすぐに致命的な重度の合併症、例えば播種性／制御不能の感染、制御不能の出血、及び／または制御不能の播種性血管内凝固を有する対象。
４．以下を含む正常なカルシウムホメオスタシスを妨害するか、またはカルシウムの補充を妨げる障害または病態。
カルシウムの吸収を妨害する任意の既知の病態。
副甲状腺機能低下または副甲状腺機能亢進の臨床証拠。
化合物１の開始前の最後の４週間以内のビスホスホネートまたはデノスマブ。
活発なまたは最近の腎臓結石（化合物１の開始前１年以内）。
１２ｎｇ／ｍＬ未満の血清２５−ヒドロキシビタミンＤレベル（３０ｎｍｏｌ／Ｌ）。
５．以下のうちのいずれかを含む、心機能不全または臨床的に有意な心疾患。
複数ゲート取得（ＭＵＧＡ）走査または心エコー図（ＥＣＨＯ）により決定される、４５％未満の左室駆出率（ＬＶＥＦ）。
完全な左脚ブロックまたは二束ブロック。
先天性ＱＴ延長症候群。
持続的または臨床的に有意な心室性不整脈。
スクリーニング心電図（ＥＣＧ）上で４７０ｍｓｅｃ以上のＱＴｃＦ（１日目の前に７２時間以上行われた三重記録の平均）。
化合物１の開始前３ヶ月以内の不安定な狭心症または心不全。
６．先に自家造血幹細胞移植を受け、調査者の判断において、最後の移植の作用（例えば、移植関連副作用）から完全に回復していない患者。
７．化合物１の開始前６ヶ月以内に標準または強度軽減前処置のいずれかを伴う先の自家造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）
８．スクリーニングの時点でＨＳＣＴ後の全身性免疫抑制療法を受けているか、または臨床的に有意な移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）を有している対象。進行中の皮膚または眼性ＧＶＨＤに対する局所ステロイドの使用が許されている。
９．５半減期以下または化合物１の開始前４週間のいずれか短い方での、先の全身性がん配向性治療または治験モダリティ。末梢白血病芽球を制御するために、ヒドロキシウレアが許容される。
１０．化合物１の開始前２週間以内の白血球除去。
１１．化合物１の開始前２週間以内の大手術。対象は、最近の手術のいかなる臨床的に有意な作用からも回復していなければならない。
１２．妊娠または授乳中の女性。
１３．既知のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症。
１４．既知の慢性、活性Ｂ型またはＣ型肝炎（ＨＢＶ／ＨＣＶ）感染症。
１５．抗凝固剤（例えば、ワルファリン、低分子重量ヘパリン、第Ｘａ因子阻害剤）の慢性治療的投与を伴う進行中の治療。
１６．活発な進行中の全身性治療を必要とする同時第２のがんの病歴。
１７．対象は、カルシウム、カルシトリオール、及び／もしくはビタミンＤの補充、またはそれらの成分のうちのいずれかに対して既知のアレルギー／過敏症を有する。
１８．対象は、該対象が研究に参加するのを妨げる任意の有意な健康状態、検査異常、または精神病を有する。
１９．対象は、対象が研究に参加することになっていた場合に、対象を許容されない危険性に曝す検査異常の存在を含む任意の病態を有する。
２０．対象は、研究からのデータを解釈する能力を混乱させる任意の病態を有する。
【０４４０】
上記の例は、当業者に、請求される実施形態を作製及び使用する方法の完全な開示及び説明を付与するために提供されるものであり、本明細書に開示されるものの範囲を限定することを意図しない。当業者に明らかな修正は、以下の特許請求の範囲内であるよう意図されている。本明細書に引用されるすべての刊行物、特許、及び特許出願は、そのような各刊行物、特許、または特許出願が、明確かつ個別に参照により本明細書に組み込まれることが示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
2019517587.tif 000047
【図２】
2019517587.tif 000048
【図３】
2019517587.tif 000049
【図４】
2019517587.tif 000050
【図５】
2019517587.tif 000051
【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【国際調査報告】
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