【手続補正書】
【提出日】平成19年7月25日(2007.7.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
発毛を刺激するために使用される、以下を含む組成物：
（i）以下を含むポリヌクレオチド：
（a）配列番号：1もしくは3に示す核酸配列、
（b）配列番号：2もしくは4に示すアミノ酸配列をコードする核酸配列、
（c）改変されたシグナルペプチド、改変されたN末端、および／もしくは改変されたC末端を有する、配列番号：2もしくは4に示すアミノ酸配列をコードする核酸配列、もしくは
（d）ストリンジェントな条件下で（a）から（c）のいずれか一つとハイブリダイズする核酸配列；
（ii）（a）から（c）のいずれか一つに定義された核酸によってコードされるポリペプチド、または
（iii）（ii）に定義されるポリペプチドを特異的に認識する抗体に結合するか、もしくはIL-15レセプターのα鎖に特異的に結合する化合物。
【請求項２】
脱毛を治療、予防、および／または改善するために使用される、請求項1に定義されるポリヌクレオチド、ポリペプチド、または化合物を含む組成物。
【請求項３】
組成物が、第2の発毛刺激剤をさらに含む、請求項1または2記載の組成物。
【請求項４】
第2の発毛刺激剤が、カルボン酸の亜鉛塩、サポニン、トリテルペン、好ましくはオレアノール酸またはウルソール酸、クラテゴール酸（crataegolic acid）、セラストロール（celastrol）、アシアチン酸（asiatic acid）、5-α-レダクターゼのインヒビター、好ましくはプロゲステロン、1,4-メチル-4-アザステロイド（azasteroid）、好ましくは17-β-N,N-ジエチルカルバモイル-4-メチル-4-アザ-5-α-アンドロスタン-3-オン、アンドロゲンレセプターアンタゴニスト、好ましくは酢酸シプロテロン、Minoxidil（登録商標）、アゼライン酸、およびこれらの誘導体、シクロスポリン、トリヨードチロニン、ジアゾキシド、カリウムチャンネル開口薬、好ましくはクロマカリム、フェニトイン、およびそれらの混合物、ならびにエストロゲンの誘導体、好ましくはエストラジオールバレレートからなる群より選択される、請求項3記載の組成物。
【請求項５】
組成物が、薬学的または化粧品用に許容される担体をさらに含む、請求項1から4のいずれか一項記載の組成物。
【請求項６】
組成物は薬学的組成物である、請求項1から5のいずれか一項記載の組成物。
【請求項７】
組成物が化粧品用組成物である、請求項1から5のいずれか一項記載の組成物。
【請求項８】
組成物が、ヘアトニック、増毛用組成物、シャンプー、パウダー、ゼリー、ヘアリンス、軟膏、ヘアローション、ペースト、ヘアクリーム、ヘアスプレー、および／またはヘアエアロゾルとして処方される、請求項1から7のいずれか一項記載の組成物。
【請求項９】
組成物が、対象の皮膚または頭皮に対して局所的に投与される、請求項1から8のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１０】
対象が哺乳動物である、請求項9記載の組成物。
【請求項１１】
哺乳動物が、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウサギ、ヒツジ、ラクダ、マウス、ラット、アルパカ、ビクーナ、グアナコ、またはラマである、請求項10記載の組成物。
【請求項１２】
対象が、遺伝的に決定されたおよび／または後天型の脱毛を患っている、請求項9から11のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１３】
遺伝的に決定されたまたは後天型の脱毛が、円形脱毛症、部分的脱毛症（alopecia subtotalis）、完全脱毛症、抜毛癖、または薬物誘導性脱毛症である、請求項12記載の組成物。
【請求項１４】
請求項1に定義された核酸を含むトランスジェニック非ヒト動物であって、該核酸が、毛球のケラチノサイトにおいて、ランゲルハンス細胞において、メラニン細胞において、樹枝状表皮性T細胞において、肥満細胞において、皮神経線維において、または線維芽細胞において特異的に発現される、トランスジェニック非ヒト動物。
【請求項１５】
非ヒト動物において発毛を刺激する方法であって、以下の工程を含む方法：
（a）該動物を請求項1に定義された核酸で形質転換する工程；および
（b）該核酸によってコードされたポリペプチドを発現させる工程。
【請求項１６】
非ヒト動物の毛を生産する方法であって、以下の工程を含む方法：
（a）非ヒト動物を請求項1に定義された核酸で形質転換する工程； および
（b）該核酸によってコードされたポリペプチドを発現させる工程。
【請求項１７】
IL-15ポリペプチドが調節因子の制御下で発現する、請求項15または16記載の方法。
【請求項１８】
調節因子が、毛球のケラチノサイトにおいて、ランゲルハンス細胞において、メラニン細胞において、樹枝状表皮性T細胞において、肥満細胞において、皮神経線維において、または線維芽細胞において特異的な発現を可能にする、請求項17記載の方法。
【請求項１９】
非ヒト動物の皮膚および／または頭皮に、請求項1に定義される組成物を投与する工程をさらに含む、請求項16から18のいずれか一項記載の方法。
【請求項２０】
非ヒト動物の皮膚および／または頭皮に、請求項1に定義される組成物を投与する工程を含む、非ヒト動物の毛を生産する方法。
【請求項２１】
非ヒト動物の毛を入手する工程をさらに含む、請求項16から20のいずれか一項記載の方法。
【請求項２２】
動物が、イヌ、ネコ、ウマ、ウサギ、ヒツジ、ラクダ、マウス、ラット、アルパカ、ビクーナ、グアナコ、またはラマである、請求項14記載のトランスジェニック非ヒト動物、または請求項15から21のいずれか一項記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
いくつかのサイトカイン、中でもTNF-α、IL-1-β、およびIFN-γは、中間期の間、毛球ケラチノサイトにおいてアポトーシスの制御および促進に関与することが示唆されている（33）。IL-15が、毛包ケラチノサイトにおいて、シクロホスファミド誘導によるアポトーシスを妨害することが示された（34）。IL-15は、末梢の免疫機能だけでなく、免疫細胞のホメオスタシスにとっても重要な多面的サイトカインである（1-4）。多くのインビトロおよびインビボの研究によって、NK細胞系統の発生および生存におけるIL-15の重要な役割が証明されている（5,6）。マウスでの別の研究では、IL-15は、CD4+T細胞よりむしろCD8+T細胞、および上皮内リンパ球のサブセットに対する選択的増殖因子であることが示されている（7-10）。したがって、IL-15-/-およびIL-15Rα-/-マウスでは、リンパ球が減少し、具体的にはNK細胞、NKT細胞、腸管由来の上皮内リンパ球のサブセット、および活性化されたCD8+T細胞が欠乏する（5, 11）。MHCクラスIプロモーター制御下にあるIL-15の普遍的なトランスジェニック過剰発現は、NK細胞および記憶表現型CD8+T細胞を初期に増大させ、その後、致命的な白血病の発病をもたらし、その結果、これらの突然変異マウスの早期の死を招いた。このため、長期にわたるIL-15のインビボ効果を調査することは困難である（6）。その上、IL-15は、筋肉細胞の同化経路に関与し、肥満細胞の増殖因子として作用し、かつ、T細胞、B細胞、および線維芽細胞におけるアポトーシスの一般的なインヒビターとして作用する（12-15）。これらの研究は、多くの細胞型および組織におけるIL-15の広範な発現と一致する。このように、いくつかの報告は、多数の組織および細胞型においてIL-15 mRNA転写物が豊富に存在することを明らかにしている（3, 16）。しかしながら、IL-15の発現は、転写、翻訳、および細胞内輸送のレベルで厳重に制御されている（17-19）。特に、IL-15タンパク質は、例えば、翻訳を妨げる5'UTR中の12個のAUG、2つの不十分なシグナルペプチド、および前駆タンパク質のC末端にある負の調節因子など、いくつかの制御因子により転写後に調節されている。そのため、IL-15のインビボ機能に関する調査には大きな障害が生じる。皮膚の内部において、IL-15の主な細胞供給源はケラチノサイトである。ケラチノサイトはIL-15 mRNAを発現するが、紫外線または外傷のような刺激を受けた時、および乾癬病巣においてのみIL-15タンパク質を産生する（15, 20, 21）。IL-15の転写物はまた、新しく分離したばかりのヒトのランゲルハンス細胞（LC）においても検出されている。IL-15はさらに、単球からのヒトLCのインビトロ生成に関与しているとの報告もあった。IL-15は、mRNAレベルでは、活性化された単球、樹状細胞、破骨細胞、および線維芽細胞を含む、多数の組織および多様な細胞型で発現される14-15 kDaタンパク質である（1, 3）。ヘテロ三量体のIL-15レセプター（IL-15R）は、IL-2Rのβ鎖およびγ鎖、それとともにIL-15との高親和性結合を担うユニークなα鎖（IL-15Rα）から成る。IL-2Rαは、活性化T細胞上で主に発現するのに対し、IL-15RαのmRNAは、多様な組織および細胞において同定されている。IL-2のように、IL-15Rαβγ複合体は、JAK1/3およびSTAT3/5の経路を通じてシグナルを伝達する（3, 28）。IL-15は、CD8+記憶T細胞の増殖および維持に必須であるとすでに記載されており、高���量で汎T細胞および肥満細胞増殖因子として作用する（2, 26, 27）。Linder, J. Invest. Dermatol., 110:457-458 (1998) は、IL-15による、毛球におけるケラチノサイトのアポトーシス阻害を開示している。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
「ポリヌクレオチド」という用語は、インターロイキン15（IL-15）の生物活性または抗原活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに関する。多様なIL-15ポリペプチドの構造が当技術分野において記述されており、典型的なIL-15ポリペプチドが、配列番号：2（ヒトIL-15、アクセッション番号：BC018149; gi34783292）、および配列番号：4（マウスIL-15、アクセッション番号：BC023698; gi23271448）に示されている。IL-15のいくつかの生物学的機能は、当技術分野においても報告されており、本明細書において既に検討されている。IL-15の本質的な生物学的活性は、（マウスIL-15 Rαに対するアクセッション番号：BC022705、およびヒトIL-15 Rαに対するアクセッション番号：AY316538（2, Lodolce, Immunity 1998,9: 669-676））の下に寄託されているような、IL-15レセプターのα鎖に特異的に結合するその能力である。他の十分に特徴づけられた生物活性は、そのNK-/NKT細胞および記憶T細胞を刺激する能力（Flamand, J. Clin. Invest, 1996,97: 1373-81; Kv, Science 2000, 288 : 675- 678）、およびリンパ球様細胞または間葉細胞に対するその増殖作用、ならびにアポトーシス物質による誘導後のアポトーシスを阻止する能力を含む（14）。好ましくは、該生物活性は、添付の実施例で実証されているように、発毛およびケラチノサイトの刺激である。本質的な抗原性活性は、Shinozaki, J. Clin. Invest, 2002, 109: 951-960に開示されているように、特異的な、すなわち非交差反応性のIL-15抗体によって特異的に認識されるその能力である。このようなIL-15抗体は、日常的な方法によっても得ることができる。好ましくは、この抗体はモノクローナル抗体である。これらの活性は、当技術分野において周知の日常的な方法により試験することが可能であり、上記の引用文献に詳しく説明されている。最も好ましくは、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号：1（ヒトIL-15）、または配列番号：3（マウスIL-15）に示されるような核酸配列を有する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図５】
2007516987.tif 000001