【手続補正書】
【提出日】平成18年11月15日(2006.11.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  配列番号：４に示すアミノ酸配列を有する親バスルス・リケニホルミス（Bacillus licheniformis）α−アミラーゼ又は当該配列に対して少なくとも60％の配列同一性を有するα−アミラーゼの変異体であって、S356及びY358からなる群から選択される１又は複数の位置の変化、あるいはE376K、S417S及びA420Q,Rからなる群から選択される１又は複数の置換を含み、ここで
（ａ）前記変化が独立に、
（ｉ）前記位置を占めるアミノ酸の下流へのアミノ酸の挿入、
（ii）前記位置を占めるアミノ酸の欠失、又は
（iii ）前記位置を占めるアミノ酸の他のアミノ酸による置換、
であり；
（ｂ）前記変異体はα−アミラーゼ活性を有し；そして
（ｃ）各位置は配列番号：４のアミノ酸配列を有する親α−アミラーゼのアミノ酸配列の位置に対応する；
ことを特徴とする変異体。
【請求項２】  前記親α−アミラーゼが、バチルス・リケニホルミス（B. licheniformis）、特にバチルス・リケニホルミス（B. licheniformis）の株ATCC 27811、バチルス・アミロリクエファシエンス（B. amyloliquefaciens）、バチルス・ステアロサーモフィルス（B. stearothermophilus）、又はバチルス・スペーシス（Bacillus sp.） NCIB 12289、NCIB 12512、NCIB 12513もしくはDSM 9375 の菌株に由来する請求項１に記載の変異体。
【請求項３】  前記親α−アミラーゼが、配列番号： 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 及び8 に記載の群から選択されたα−アミラーゼのいずれかである請求項１又は２に記載の変異体。
【請求項４】  前記親α−アミラーゼが、配列番号： 4 と、少なくとも65%、好ましくは70%,さらに好ましくは少なくとも80%, さらにもっと好ましくは少なくとも約90%、さらにもっと好ましくは少なくとも95%、さらにもっと好ましくは少なくとも97%、そしてさらにもっと好ましくは少なくとも97%、という同一性を有するアミノ酸配列を有する請求項１〜３のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項５】  前記親α−アミラーゼが、配列番号： 12 の核酸配列と、中程度の、好ましくは高いストリンジェンシー条件の下でハイブリダイズする核酸配列によってコードされる請求項１〜４のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項６】  前記親α−アミラーゼが、配列番号： 4 に示されているバチルス・リケニホルミス（B. licheniformis）α−アミラーゼと配列番号： 5 に示されているバチルス・アミロリクエファシエンス（B. amylioliquefaciens）α−アミラーゼのハイブリッド、特に配列番号：５に示すバスルス・アミロリクエファシエンスα−アミラーゼのＮ−末端の33アミノ酸によりＮ−末端の35アミノ酸が置換されている点を除き配列番号：４のバシルス・リケニホルメスα−アミラーゼと同一であるハイブリドバスルスα−アミラーゼ、特にH156Y＋181T＋190F＋209V＋264S（配列番号：４のナンバリングを用いる）の変異を更に有するハイブリドバスルスα−アミラーゼである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項７】  前記親α−アミラーゼが、さらに、次の位置：K176, I201, 及びH205（配列番号： 4 の番号付けによる）の１又は複数に突然変異を有し、特に次の置換：K176R, I201F, 又はH205N（配列番号： 4 の番号付けによる）の１又は複数を有し、あるいは親α−アミラーゼが、次の置換：K176R+ 201F+H205N（配列番号： 4 の番号付けによる）、を有する請求項１〜６のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項８】  前記変異体が S356A又はY358F の１又は複数置換を有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項９】  請求項１〜８のいずれか１項に記載のα−アミラーゼ変異体をコードするDNA配列を含むDNA構築物。
【請求項１０】  請求項９に記載のDNA構築物を有する組換え発現ベクター。
【請求項１１】  請求項９に記載のDNA構築物又は請求項10に記載のベクターによって形質転換された細胞。
【請求項１２】  微生物、特に細菌又は菌類である、請求項11に記載の細胞。
【請求項１３】  細胞がバチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis）, バチルス・リケニホルミス（Bacillus licheniformis）, バチルス・レンタス（Bacillus lentus）, バチルス・ブレビス（Bacillus brevis）, バチルス・ステアロサーモフィルス（Bacillus stearothermophilus）, バチルス・アルカロフィルス（Bacillus alkalophilus）, バチルス・アミロリクエファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）, バチルス・コアグランス（Bacillus coagulans）, バチルス・サーキュランス（Bacillus circulans）, バチルス・ラウトス（Bacillus lautus）, 又は バチルス・ツリンギエンシス（Bacillus thuringiensis）などのグラム陽性細菌である請求項12に記載の細胞。
【請求項１４】  請求項１〜８のいずれか１項に記載のα−アミラーゼ変異体を、例えばほこりがたたない顆粒、安定化された液体、又は保護された酵素という形態で、含む洗剤添加物。
【請求項１５】  0.02-200 mg の酵素タンパク質／g 添加物を含む請求項14に記載の洗剤添加物。
【請求項１６】  さらに、プロテアーゼ、リパーゼ、ペルオキシダーゼ、他の澱粉分解酵素及び／又はセルラーゼ、など別の酵素を含む請求項14又は15に記載の洗剤添加物。
【請求項１７】  請求項１〜８のいずれか１項に記載のα−アミラーゼ変異体を含む洗剤組成物。
【請求項１８】  さらに、プロテアーゼ、リパーゼ、ペルオキシダーゼ、他の澱粉分解酵素及び／又はセルラーゼ、など別の酵素を含む請求項17に記載の洗剤組成物。
【請求項１９】  請求項１〜８のいずれかに記載のα−アミラーゼ変異体を含む手動又は自動食器洗浄洗剤組成物。
【請求項２０】  さらに、プロテアーゼ、リパーゼ、ペルオキシダーゼ、別の澱粉分解酵素及び／又はセルラーゼ、など別の酵素を含む請求項19に記載の食器洗浄洗剤組成物。
【請求項２１】  請求項１〜８のいずれか１項に記載のα−アミラーゼ変異体を含む手動又は自動洗濯洗浄組成物。
【請求項２２】  さらに、プロテアーゼ、リパーゼ、ペルオキシダーゼ、別の澱粉分解酵素、及び／又は、セルラーゼ、など別の酵素を含む請求項21に記載の洗濯洗浄組成物。
【請求項２３】  （ｉ）配列番号： 4 に示される配列を有するバチルス・リケニホルミス（B. licheniformis）からのα−アミラーゼと、配列番号： 3 に示される配列を有するバチルス・ステアロサーモフィルス（B. stearothermophilus） α−アミラーゼ（ターマミル（Termamyl）様の親α−アミラーゼとしての）から得られる請求項１〜８のいずれか１項に記載の１又は複数の変異体との混合物；又は
（ii）配列番号： 3 に示される配列を有するバチルス・ステアロサーモフィルス（B. stearothermophilus）からのα−アミラーゼと、１又は複数の他のターマミル（Termamyl）様の親α−アミラーゼから得られる請求項１〜８のいずれかに記載の１又は複数の変異体との混合物；又は
（iii）配列番号： 3 に示される配列を有するバチルス・ステアロサーモフィルス（B. stearothermophilus）α−アミラーゼ（ターマミル（Termamyl）様の親α−アミラーゼとして）から得られる請求項１〜８のいずれかに記載の１又は複数の変異体と、１又は複数の他のターマミル（Termamyl）様の親α−アミラーゼから得られる本発明による１又は複数の変異体との混合物；
を含む組成物。
【請求項２４】  請求項１〜８のいずれか１項に記載のα−アミラーゼ変異体又は請求項23に記載の組成物の、洗濯及び／又は食器洗浄のため、織物のサイズ剤除去のため、又は澱粉液化のための使用。
【請求項２５】  配列番号：４に示すアミノ酸配列を有する親バスルス・リケニホルミス（Bacillus licheniformis）α−アミラーゼ又は当該配列に対して少なくとも60％の配列同一性を有する親α−アミラーゼの変異体を製造する方法であって、該変異体は高い温度で親に比べて大きな安定性を示し、
（ａ）親α−アミラーゼをコード化しているDNA配列にランダム突然変異を誘発させるステップ；
（ｂ）ステップ（ａ）で得られた突然変異したDNA配列を宿主細胞で発現させるステップ；及び
（ｃ）高い温度で親α−アミラーゼに比べて大きな安定性を示す突然変異したα−アミラーゼを発現する宿主細胞をスクリーニングするステップ；
を含む方法。