【手続補正書】
【提出日】平成19年7月19日(2007.7.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  ＡｃｒＡＢ様流出ポンプを有する微生物を試験化合物および指示薬化合物と接触させ、指示薬化合物の流出に対する試験化合物の効果を測定し、ＡｃｒＡＢ流出ポンプの活性を阻害することで薬物耐性を減少させる化合物を同定することを特徴とする薬物耐性を軽減する化合物のスクリーニング方法。
【請求項２】  微生物が薬物に高い耐性を有することを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】  微生物細胞がフルオロキノロンに高い耐性を有することを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項４】  微生物細胞が薬物標的遺伝子に少なくとも１つの染色体突然変異を含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項５】  ジャイラーゼ、トポイソメラーゼおよびｆａｂＩよりなる群から選択される遺伝子に突然変異が存在することを特徴とする請求項４記載の方法。
【請求項６】  微生物中におけるフルオロキノロン耐性を減少させる化合物の能力を検出することを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項７】  ｉ）ＡｃｒＡＢ様流出ポンプを有する微生物を試験化合物および指示薬化合物と接触させ；
ｉｉ）その化合物がＡｃｒＡＢ様流出ポンプの活性を阻害する能力を試験し；
ｉｉｉ）その化合物が非ＡｃｒＡＢ流出ポンプの活性を阻害する能力を試験し；
ｉｖ）ＡｃｒＡＢ様流出ポンプおよび非ＡｃｒＡＢ様流出ポンプの活性を阻害する化合物を同定し、それにより、ＡｃｒＡＢ様流出ポンプを特異的に妨害する化合物を同定する
ことを特徴とするＡｃｒＡＢ様流出ポンプの活性を特異的に阻害する化合物のスクリーニング方法。
【請求項８】  １種以上の薬物に対し耐性である微生物を、その微生物が耐性である薬物およびＡｃｒＡＢ様流出ポンプの阻害剤と接触させ、それにより、薬物の抗微生物活性を増強することを特徴とする薬物の抗微生物活性の増強方法。
【請求項９】  微生物をシクロヘキサジン、第四級アンモニウム化合物、パイン油、トリクロサンおよび一般に安全であると考えられる化合物よりなる群から選択される化合物と接触させることを特徴とする請求項８記載の方法。
【請求項１０】  接触工程が半ビボで生じることを特徴とする請求項８記載の方法。
【請求項１１】  微生物を非抗生物質薬剤およびＡｃｒＡＢ様流出ポンプの阻害剤と接触させることを特徴とする請求項８記載の方法。
【請求項１２】  非抗生物質薬剤がクロロヘキサジン、第四級アンモニウム化合物、パイン油、トリクロサンおよび一般的に安全であると考えられる化合物（ＧＲＡＳ）よりなる群から選択されることを特徴とする請求項１１記載の方法。
【請求項１３】  ＡｃｒＡＢ様流出ポンプ阻害剤および抗生物質を含む医薬組成物。
【請求項１４】  医薬上許容される担体をさらに含む請求項１２記載の組成物。
【請求項１５】  抗生物質がフルオロキノロンである請求項１３記載の組成物。
【請求項１６】  医薬上許容される担体がポンプの阻害剤である請求項１４記載の組成物。
【請求項１７】  高抗生物質耐性の微生物で生じる微生物感染の治療用医薬の製造のためのＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様の流出ポンプの阻害剤の使用であって、その微生物が、ＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプ、ならびに少なくとも２つの以下の形質：
ｉ) 微生物を１以上の抗生物質に耐性にさせる抗生物質標的をコードする遺伝子における少なくとも１つの突然変異；
ｉｉ）抗生物質耐性を増加させる、ｉ）と同じ遺伝子または異なる遺伝子に対する第２の突然変異；および
ｉｉｉ）少なくとも１つの流出ポンプの増加した発現
を含むことを特徴とする該使用。
【請求項１８】  高抗生物質耐性の微生物で生じる微生物感染の治療用医薬の製造のためのＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様の流出ポンプの阻害剤および抗生物質の使用であって、その微生物が、ＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプ、ならびに少なくとも２つの以下の形質：
ｉ) 微生物を１以上の抗生物質に耐性にさせる抗生物質標的をコードする遺伝子における少なくとも１つの突然変異；
ｉｉ）抗生物質耐性を増加させる、ｉ）と同じ遺伝子または異なる遺伝子に対する第２の突然変異；および
ｉｉｉ）少なくとも１つの流出ポンプの増加した発現
を含むことを特徴とする該使用。
【請求項１９】  高フルオロキノロン耐性の微生物で生じる微生物感染の治療用医薬の製造のためのＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様の流出ポンプの阻害剤およびフルオロキノロンの使用であって、該微生物が、ＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプ、ならびに少なくとも２つの以下の形質：
ｉ) 微生物を１以上の抗生物質に耐性にさせる抗生物質標的をコードする遺伝子における少なくとも１つの突然変異；
ｉｉ）抗生物質耐性を増加させる、ｉ）と同じ遺伝子または異なる遺伝子に対する第２の突然変異；および
ｉｉｉ）少なくとも１つの流出ポンプの増加した発現
を含むことを特徴とする該使用。
【請求項２０】  微生物が、３つの形質のすべてを含むことを特徴とする請求項１７〜１９のいずれか１記載の使用。
【請求項２１】  阻害剤が、通常放出し得る化合物を放出するＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプの能力に干渉する化合物であることを特徴とする請求項１７〜１９のいずれか１記載の使用。
【請求項２２】  阻害剤が、流出ポンプをコードする１または複数の遺伝子に対するアンチセンス核酸またはリボザイムであることを特徴とする請求項１７〜１９のいずれか１記載の使用。
【請求項２３】  阻害剤が、流出ポンプに対する抗体であることを特徴とする請求項１７〜１９のいずれか１記載の使用。
【請求項２４】  阻害剤が、流出ポンプの発現を調節する蛋白質に対する抗体であることを特徴とする請求項１７〜１９のいずれか１記載の使用。
【請求項２５】  阻害剤が、流出ポンプの発現を抑制する遺伝子または調節遺伝子座であることを特徴とする請求項１７〜１９のいずれか１記載の使用。
【請求項２６】  阻害剤が、予防的に投与されることを特徴とする請求項１７〜１９のいずれか１記載の使用。
【請求項２７】  阻害剤が、治療的に投与されることを特徴とする請求項１７〜１９のいずれか１記載の使用。
【請求項２８】  微生物が、フルオロキノロンに高い耐性を有することを特徴とする請求項１７〜１９のいずれか１記載の使用。
【請求項２９】  少なくとも１つの突然変異が、ジャイラーゼおよびトポイソメラーゼをコードする遺伝子に存在することを特徴とする請求項１７〜１９のいずれか１記載の使用。
【請求項３０】  微生物が、グラム陰性菌であることを特徴とする請求項１７〜１９のいずれか１記載の使用。
【請求項３１】  微生物感染の治療用医薬の製造のための薬物およびＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様の流出ポンプの阻害剤の使用であって、その微生物感染が、微生物の増殖を減少させる薬物に対する耐性を有し、微生物が、ＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプ、ならびに少なくとも２つの以下の形質：
ｉ) 微生物を１以上の抗生物質に耐性にさせる抗生物質標的をコードする遺伝子における少なくとも１つの突然変異；
ｉｉ）抗生物質耐性を増加させる、ｉ）と同じ遺伝子または異なる遺伝子に対する第２の突然変異；および
ｉｉｉ）少なくとも１つの流出ポンプの増加した発現
を含むことを特徴とする該使用。
【請求項３２】  微生物が、クロロヘキサジン、第四級アンモニウム化合物、パイン油、トリクロサンよりなる群から選択される薬物と接触させることを特徴とする請求項３１記載の使用。
【請求項３３】  接触工程が、半ビボで生じることを特徴とする請求項３１記載の使用。
【請求項３４】  微生物感染が耐性を有する薬物が、非抗生物質であることを特徴とする請求項３１記載の使用。
【請求項３５】  非抗生物質薬剤が、クロロヘキサジン、第四級アンモニウム化合物、パイン油およびトリクロサンよりなる群から選択されることを特徴とする請求項３４記載の使用。
【請求項３６】  ＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプを有する微生物を試験化合物および指示薬化合物と接触させ、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）に対する試験化合物の効果を測定することを含み、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）における減少が、試験化合物がＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプの活性を阻害することにより薬物耐性を軽減させる指標であることを特徴とする薬物耐性を軽減する化合物のスクリーニング方法。
【請求項３７】  微生物が薬物に高い耐性を有することを特徴とする請求項３６記載の方法。
【請求項３８】  微生物細胞がフルオロキノロンに高い耐性を有することを特徴とする請求項３６記載の方法。
【請求項３９】  微生物細胞が薬物標的遺伝子に少なくとも１つの染色体突然変異を含むことを特徴とする請求項３６記載の方法。
【請求項４０】  ジャイラーゼ、トポイソメラーゼおよびｆａｂＩよりなる群から選択される遺伝子に突然変異が存在することを特徴とする請求項３９記載の方法。
【請求項４１】  微生物における化合物がフルオロキノロン耐性を減少させる能力を検出することを特徴とする請求項３８記載の方法。
【請求項４２】  ＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプを有する微生物を試験化合物および抗生物質と接触させ、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）に対する試験化合物の効果を測定することを含み、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）における減少が、試験化合物がＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプの活性を阻害することにより薬物耐性を軽減させる指標であることを特徴とする薬物耐性を軽減する化合物のスクリーニング方法。
【請求項４３】  ＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプおよびジャイラーゼ遺伝子中の染色体突然変異を有する微生物を、試験化合物および指示薬化合物と接触させ、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）に対する試験化合物の効果を測定することを含み、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）における減少が、試験化合物がＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプの活性を阻害することにより薬物耐性を軽減させる指標であることを特徴とする薬物耐性を軽減する化合物のスクリーニング方法。
【請求項４４】  ＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプおよびトポイソメラーゼ遺伝子中の染色体突然変異を有する微生物を、試験化合物および指示薬化合物と接触させ、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）に対する試験化合物の効果を測定することを含み、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）における減少が、試験化合物がＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプの活性を阻害することにより薬物耐性を軽減させる指標であることを特徴とする薬物耐性を軽減する化合物のスクリーニング方法。
【請求項４５】  ＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプおよびｆａｂＩ遺伝子中の染色体突然変異を有する微生物を、試験化合物および指示薬化合物と接触させ、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）に対する試験化合物の効果を測定することを含み、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）における減少が、試験化合物がＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプの活性を阻害することにより薬物耐性を軽減させる指標であることを特徴とする薬物耐性を軽減する化合物のスクリーニング方法。
【請求項４６】  ＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプ、ジャイラーゼ遺伝子中の染色体突然変異、および薬物耐性を増加させる第２の突然変異を有する微生物を、試験化合物および指示薬化合物と接触させ、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）に対する試験化合物の効果を測定することを含み、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）における減少が、試験化合物がＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプの活性を阻害することにより薬物耐性を軽減させる指標であることを特徴とする薬物耐性を軽減する化合物のスクリーニング方法。
【請求項４７】  ＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプ、ジャイラーゼ遺伝子中の染色体突然変異を含み、かつ少なくとも１つの流出ポンプの発現を増加させた微生物を、試験化合物および指示薬化合物と接触させ、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）に対する試験化合物の効果を測定することを含み、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）における減少が、試験化合物がＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプの活性を阻害することにより薬物耐性を軽減させる指標であることを特徴とする薬物耐性を軽減する化合物のスクリーニング方法。
【請求項４８】  ＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプを含む微生物を、試験化合物のライブラリーおよび指示薬化合物と接触させ、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）に対する試験化合物の効果を測定することを含み、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）における減少が、試験化合物がＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプの活性を阻害することにより薬物耐性を軽減させる指標であることを特徴とする薬物耐性を軽減する化合物のスクリーニング方法。
【請求項４９】  ＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプを含む高抗生物質耐性の微生物における抗生物質耐性を軽減する化合物のスクリーニング方法であって、その微生物が、少なくとも２つの以下の形質：
ｉ）その微生物を１以上の抗生物質に対して耐性とさせる抗生物質標的をコードする遺伝子中の少なくとも１つの染色体突然変異；
ｉｉ）抗生物質耐性をさらに増加させる（ ｉ）と同じ遺伝子もしくは異なる遺伝子に対する）第２の突然変異；および
ｉｉｉ）少なくとも１つの流出ポンプの増加した発現
を含み、その微生物を試験化合物と接触させ、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）に対する試験化合物の効果を測定することを含み、指示薬化合物の最小阻止濃度（ＭＩＣ）における減少が、試験化合物が微生物における抗生物質耐性を軽減させる指標であることを特徴とする該方法。
【請求項５０】  微生物が、３つの形質のすべてを含む請求項４９記載の方法。
【請求項５１】  微生物が、フルオロキノロンに高い耐性を有することを特徴とする請求項４９記載の方法。
【請求項５２】  少なくとも１つの染色体突然変異が、ジャイラーゼおよびトポイソメラーゼよりなる群から選択される遺伝子に存在することを特徴とする請求項４９記載の方法。
【請求項５３】  微生物が、グラム陰性菌であることを特徴とする請求項４９記載の方法。
【請求項５４】  微生物が、機能性のポリンチャネルを含むことを特徴とする請求項４９記載の方法。
【請求項５５】  微生物が、試験化合物のライブラリーから選択された試験化合物と接触することを特徴とする請求項４９記載の方法。
【請求項５６】  ＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプの活性が、流出ポンプの基質である指示薬化合物の流出を測定することにより決定されることを特徴とする請求項４９記載の方法。
【請求項５７】  ＡｃｒＡＢまたはＡｃｒＡＢ様流出ポンプの活性が、抗生物質における微生物の増殖を測定することにより決定されることを特徴とする請求項４９記載の方法。
【請求項５８】  流出ポンプがＡｃｒＡＢであることを特徴とする請求項４９記載の方法。