【手続補正書】
【提出日】平成19年5月9日(2007.5.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項７】  前記細菌ＤＮＡがチモテ菌ＤＮＡ（Ｍ−ＤＮＡ）であり、前記細菌ＤＮＡ−細菌細胞壁複合体がチモテ菌ＤＮＡ（Ｍ−ＤＮＡ）−チモテ菌細胞壁複合体（ＭＣＣ）である、請求項６記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
正常細胞に及ぼす低分子量ＨＡ（５×１０5Ｄａ以下）および高分子量ＨＡ（５×１０5Ｄａ以上）の両方の作用は、広範に研究されてきた（McKee et al. J. Biol. Chem. 272:8013, 1997; Hodge-Dufour et al. J. Immunol. 159:2492, 1997; Rooney et al. Int. J. Cancer 60: 632, 1995）。しかしながら、悪性細胞に及ぼすＨＡの作用についてはほとんど分かっていない。ｉｎ ｖｉｔｒｏでは、ＨＡ（＞０．３２０ｍｇ／ｍｌ）は、Ｂ１６Ｆ１０ネズミ黒色腫細胞の増殖を５０％〜９０％抑制した。ｉｎ ｖｉｖｏでは、Ｂ１６Ｆ１０ネズミ黒色腫の近傍にアルゼット（Ａｌｚｅｔ）浸透圧ポンプにより７日間に亘って投与されたＨＡ（１ｍｇ／ｍｌ）は、腫瘍体積を８５％以上低減した。ｉｎ ｖｉｖｏで、種々のその他の治療薬とともに種々の期間に亘って投与されたＨＡ（＞７５０ｍｇ／ｋｇ）は、直腸癌、胃癌、乳癌、前立腺癌および子宮内膜癌を低減または排除した（ＰＣＴ／ＣＡ／００２８３）。ｉｎ ｖｉｖｏで、２．５ｍｇ／ｋｇの親油性チューブリン安定化化学療法薬パクリタキセル（paclitaxel, ＴＡＸＯＬ（登録商標））とともに投与されたヒアルロナン（ＨＡ）（７．５ｍｇ／ｋｇ）は、ＢＡＬＢ／ｃマウス中に播種された結腸２６細胞の腫瘍塊を低減した。水不溶性パクリタキセルはＨＡ上で疎水性パッチと結合し、そしてＨＡは悪性細胞の表面でＨＡ受容体と結合し、それによりパクリタキセルを悪性細胞に直接送達する、ということが提示された（ＰＣＴ／ＣＡ９８／００６６０）。即ち、ＨＡはパクリタキセルの送達剤として機能し、この送達の効率はＣＤ４４のようなＨＡ細胞表面受容体の発現に依存する。しかしながら、結腸−２６癌細胞は高レベルのＨＡ受容体を発現するので、ＨＡは単独でこれらの癌細胞の成長を有意に抑制する（Freemantle et al. Int. J. Tissue React. 17: 157, 1995）。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
癌は、過剰な細胞増殖、不十分な細胞死または２つの組合せに起因する異型細胞の異常網状蓄積である。細胞増殖は、全細胞ＤＮＡの複製および１つの細胞の２つの細胞への分裂により特徴付けられる（Hochhauser D. Anti-Cancer Chemotherapy Agents 8: 903, 1997）。細胞死は、細胞溶解過程を開始し、アポトーシスを促進するＩＬ−６およびＩＬ−１２を含むがこれらに限定されない免疫媒介物質により、及び細胞死に至る経路を直接開始するアポトーシス誘導物質により、影響を及ぼされる（Muzio et al. Cell 85:817, 1996; Levine, A. Cell 88:323, 1997）。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
ＨＡは、癌細胞中で増殖を抑制し、アポトーシスを誘導する化学療法薬を含むがこれに限定されない他の抗腫瘍剤と、相乗的に作用する非毒性抗腫瘍性薬である。ＨＡおよび化学療法薬は癌細胞に及ぼす互いの作用を増強するので、化学療法薬の標準用量は、癌治療の療法的有効性を危うくすることなく低減され得る。さらにＨＡは安価であるので、そしてほとんどの化学療法薬が高価であるので、ＨＡと化学療法薬の併用は、癌治療の経費を有意に低減し得る。用量有効性の増大、毒性の低減および経費の低減は、医療業界で長年切実に感じられてきた実現されていない必要性に対処し、ヒトを含めた哺乳類に重要な利益を提供する。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
実施例４
細胞増殖の測定
ジメチルチアゾールジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）還元を用いて、細胞増殖を測定した（Mosman et al. J. Immunol. Methods 65:55, 1983）。別記しない限り、１ｍｌのＰＢＳ中に溶解した５ｍｇのＭＴＴ（Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA）１００μｌを各ウエルに添加した。４時間後、各ウエルから培地を取り出して、１．０ｍｌの酸−イソプロパノール（イソプロパノール中の０．０４ＮのＨＣｌ）を添加し、混合により還元ＭＴＴを溶解させた。マルチプレート分光光度計読取器（Ｅｌｘ８００モデル、Bio-TEK Instruments Inc., Winooski, Vermont, USA）を用いて５７０ｎｍで、反応産物の吸光度を測定した。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７１】
実施例８
化学療法薬の抗腫瘍効果のＨＡ増強
ＲＴ−４ヒト膀胱癌細胞およびＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞を、０．０、０．００８または０．０８μｇ／ｍｌの５．０〜７．５×１０5ＤａのＨＡ＋０．１μｇ／ｍｌのＣＩＳ、＋１．０μｇ／ｍｌの５−ＦＵまたは＋１０μｇ／ｍｌの５−ＦＵを用いて、実施例６と同様にインキュベートした（表７）。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７２】
【表７】
2003518510.tif 000001
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７９】
実施例１０
サイトカイン産生の誘導
全血のＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（Amersham Pharmacia Biotech, Baie d'Urfee, Quebec, Canada）密度勾配遠心分離により、５名の健常人の血液から、末梢血単核球（以後、「ＰＢＭＣ」）を単離した。適切な市販ＥＬＩＳＡ（BioSource, Camarillo, CA, USA）を用いて、免疫系細胞によるＩＬ−６およびＩＬ−１２産生の刺激が測定された。結果は、対照細胞と比較した処置細胞によるサイトカイン産生の「倍（×）」増として表す。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９３】
【表１３】
2003518510.tif 000002
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９６】
【表１４】
2003518510.tif 000003
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９９】
【表１５】
2003518510.tif 000004