(57)【要約】  本明細書では、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、ＰＤ−１またはＯＸ４０などの免疫調節薬と結合する抗原結合タンパク質との組合せ、それらの医薬組成物、および癌における使用を含む、前記組合せを投与することを含んでなる処置の方法が開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療上有効な量のＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、治療上有効な量の免疫調節標的に結合する少なくとも１種類の抗原結合タンパク質とを含んでなる、組合せ。
【請求項２】
前記免疫調節標的がＰＤ１またはＯＸ４０である、請求項１に記載の組合せ。
【請求項３】
前記ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質が免疫複合体として細胞傷害性薬剤とコンジュゲートされ、かつ、該細胞傷害性薬剤がＭＭＡＥまたはＭＭＡＦである、請求項１または２のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項４】
前記細胞傷害性薬剤がリンカーを介して前記ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質とコンジュゲートされ、かつ、該リンカーがシトルリン−バリンまたはマレイミドカプロイルである、請求項３に記載の組合せ。
【請求項５】
前記ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質が配列番号２００のＣＤＲＨ３変異体Ｎ９９Ｄを含んでなる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項６】
前記ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質が配列番号３のＣＤＲＨ３またはその変異体を含んでなる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項７】
前記ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質が配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる、請求項１に記載の組合せ。
【請求項８】
前記ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質が配列番号２３の重鎖可変領域と配列番号３１の軽鎖可変領域とを含んでなる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項９】
ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質がペンブロリズマブまたはニボルマブである、請求項２に記載の組合せ。
【請求項１０】
ＯＸ４０に結合する抗原結合タンパク質が配列番号２１９のＣＤＲＨ１、配列番号２２０のＣＤＲＨ２、配列番号２２１のＣＤＲＨ３、配列番号２２２のＣＤＲＬ１、配列番号２２３のＣＤＲＬ２、配列番号２２４のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、請求項２に記載の組合せ。
【請求項１１】
ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質が配列番号２２９の重鎖可変領域と配列番号２３０の軽鎖可変領域とを含んでなる、請求項２に記載の組合せ。
【請求項１２】
ｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなり、ＭＭＡＦとコンジュゲートされた免疫複合体である、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）ペンブロリズマブまたはニボルマブ
とを含んでなる、組合せ。
【請求項１３】
ｉ）配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなり、ＭＭＡＦとコンジュゲートされた免疫複合体である、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）配列番号２１９のＣＤＲＨ１、配列番号２２０のＣＤＲＨ２、配列番号２２１のＣＤＲＨ３、配列番号２２２のＣＤＲＬ１、配列番号２２３のＣＤＲＬ２、配列番号２２４のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなるＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質
とを含んでなる、組合せ。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組合せを含んでなる、医薬組成物。
【請求項１５】
必要とする哺乳動物において癌を処置する方法であって、
治療上有効な量のＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
治療上有効な量の免疫調節標的と結合する少なくとも１種類の抗原結合タンパク質
とを含む、治療上有効な量の組合せを投与することを含んでなる、方法。
【請求項１６】
前記免疫調節標的がＰＤ１またはＯＸ４０である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記癌が多発性骨髄腫または非ホジキンリンパ腫である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
必要とするヒトにおいて癌を処置する方法であって、
ｉ）治療上有効な量の、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなり、ＭＭＡＦとコンジュゲートされた免疫複合体である、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）治療上有効な量のペンブロリズマブまたはニボルマブ
とを含む、治療上有効な量の組合せを投与することを含んでなる、方法。
【請求項２０】
必要とするヒトにおいて癌を処置する方法であって、
ｉ）治療上有効な量の、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなり、ＭＭＡＦとコンジュゲートされた免疫複合体である、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）治療上有効な量の、配列番号２１９のＣＤＲＨ１、配列番号２２０のＣＤＲＨ２、配列番号２２１のＣＤＲＨ３、配列番号２２２のＣＤＲＬ１、配列番号２２３のＣＤＲＬ２、配列番号２２４のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質
とを含む、治療上有効な量の組合せを投与することを含んでなる、方法。
【請求項２１】
癌の処置において使用するための、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項２２】
癌の処置のための薬剤の製造における、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組合せの使用。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の参照】
【０００１】
本出願は、２０１５年１２月１日出願の米国出願第６２／２６１，４８１号に対する優先権を主張するものであり、その開示は引用することにより本明細書の一部とされる。
【０００２】
配列表
本出願はＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、これは引用することによりその全内容が本明細書の一部とされる。２０１６年１１月３０日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、ＰＢ６５９８７ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔの名称で、２９３，８８２バイトのサイズである。
【技術分野】
【０００３】
本発明は、ヒトＢＣＭＡに対するモノクローナル抗体を含む抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質を、抗ＰＤ−１抗原結組合せおよび／または抗ＯＸ４０抗原結合タンパク質などの免疫調節薬と組み合わせて含んでなる組合せに関する。さらに本発明は、ヒトなどの哺乳動物の癌の処置における前記組合せの使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
癌を含む過剰増殖性障害の有効な処置は、腫瘍学の分野で継続的な目標である。一般に、癌は、細胞分裂、分化およびアポトーシス細胞死を制御する正常なプロセスの脱調節から生じ、無限成長、局部的拡大および全身転移の能力を有する悪性細胞の増殖を特徴とする。正常なプロセスの脱調節は、シグナル伝達経路の異常および正常細胞で視られるものとは異なる因子に対する応答を含む。
【０００５】
免疫療法は過剰増殖性障害を処置するための１つのアプローチである。科学者および臨床医が様々なタイプの癌免疫療法の開発で遭遇した主要なハードルは、腫瘍退縮をもたらすロバストな抗腫瘍応答を惹起するために自己抗原（癌）に対する免疫寛容を破ることであった。腫瘍を標的とする低分子および高分子薬剤の従来の開発とは異なり、癌免疫療法は、より持続的な効果を誘導し、かつ、再発を最小にするために、エフェクター細胞の記憶プールを生成する能力を有する免疫系の細胞を標的とする。
【０００６】
ＢＣＭＡ（ＣＤ２６９またはＴＮＦＲＳＦ１７）は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである。ＢＣＭＡは、リガンドＢＡＦＦおよびＡＰＲＩＬに対する非グリコシル化内在性膜受容体である。ＢＣＭＡのリガンドはまた、さらなる受容体、すなわち、ＡＰＲＩＬおよびＢＡＦＦに結合するＴＡＣＩ（膜貫通アクチベーターおよびカルシウムモジュレーターおよびシクロフィリンリガンドインターアクター(Transmembrane Activator and Calcium modulator and cyclophilin ligand Interactor)）、ならびにＢＡＦＦに対して限定されているが高い親和性を示すＢＡＦＦ−Ｒ（ＢＡＦＦ受容体またはＢＲ３）にも結合する。考え合わせると、これらの受容体およびそれらの対応するリガンドは、体液性免疫、Ｂ細胞発達およびホメオスタシスの異なる側面を調節する。
【０００７】
ＢＣＭＡの発現は一般にＢ細胞系譜に限定され、最終的なＢ細胞分化を増大することが報告されている。ＢＣＭＡは、ヒト血漿芽細胞、扁桃、脾臓および骨髄由来の形質細胞により発現されるが、扁桃記憶Ｂ細胞によっても、また、ＴＡＣＩ−ＢＡＦＦＲ低表現型を有する胚中心Ｂ細胞でも発現される(Darce et al,2007)。ＢＣＭＡはナイーブＢ細胞および記憶Ｂ細胞には実質的に存在しない(Novak et al., 2004aおよびb)。ＢＣＭＡ抗原は細胞表面に発現されるので抗体に接近可能であるが、ゴルジ体でも発現される。その発現プロフィールによって示唆されるように、ＢＣＭＡシグナル伝達は一般にＢ細胞の生存および増殖に関連し、Ｂ細胞分化の後期段階、ならびに長期生存型骨髄形質細胞(O’Connor et al.,2004)および血漿芽細胞(Avery et al.,2003)の生存に重要である。さらに、ＢＣＭＡはＡＰＲＩＬに高い親和性で結合するので、ＢＣＭＡ−ＡＰＲＩＬシグナル伝達軸は、おそらく生理学上最も関連のある相互作用であるＢ細胞分化のより後期の段階で優勢となることが示唆される。
【０００８】
ＢＣＭＡに結合しシグナル伝達を調節する抗原結合タンパク質および抗体は当技術分野で公知であり、例えば癌のための免疫療法として開示されている。
【０００９】
ＰＤ−１リガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２が、Ｔ細胞上に見られるＰＤ−１受容体に結合すると、Ｔ細胞の増殖およびサイトカイン産生が阻害される。ＰＤ−１リガンドのアップレギュレーションがいくつかの腫瘍に見られ、この経路を介するシグナル伝達は、腫瘍の活発なＴ細胞免疫監視の阻害に寄与し得る。ＰＤ−１受容体と結合しＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２とのその相互作用を遮断する抗原結合タンパク質および抗体は、抗腫瘍免疫応答を含む免疫応答のＰＤ−１経路により媒介される阻害を解除する可能性がある。
【００１０】
抗腫瘍Ｔ細胞機能の増進とＴ細胞増殖の誘導は、癌治療の有力かつ新規なアプローチである。３つの免疫腫瘍学的抗体（例えば、免疫調節薬）が現在上市している。抗ＣＴＬＡ−４（ヤーボイ（登録商標）／イピリムマブ）は、Ｔ細胞プライミングの点で免疫応答を増強すると思われ、抗ＰＤ−１抗体（オプジーボ（登録商標）／ニボルマブおよびキートルーダ（登録商標）／ペンブロリズマブ）は、すでにプライムされ活性化されている腫瘍特異的Ｔ細胞において阻害チェックポイントを解除することによって局部の腫瘍微小環境で働くと思われる。
【００１１】
ＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０（ｈＯＸ４０）またはｈＯＸ４０Ｒ）は、他の細胞の中でも、活性化されたＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞で発現される腫瘍壊死因子受容体ファミリーメンバーである。その機能の１つは、これらの細胞の分化および長期生存である。ＯＸ４０に対するリガンド（ＯＸ４０Ｌ）は、活性化された抗原提示細胞により発現される。
【００１２】
癌治療には近年の多くの進展があるが、依然として癌の影響を被る個人のより有効かつ／または増強された処置の必要がある。抗腫瘍免疫を増強するための治療アプローチを組み合わせるに関する本明細書の組合せおよび方法はこの必要に取り組むものである。
【発明の概要】
【００１３】
本発明は、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、治療上有効な量の、免疫調節標的に結合する免疫調節標的とを含んでなる組合せを提供する。抗原結合タンパク質の例としては、ＰＤ−１およびＯＸ４０が挙げられる。
【００１４】
別の実施態様では、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質は、免疫複合体（例えば、抗体−薬物複合体(antibody-drug conjugate)（ＡＤＣ））として細胞傷害性薬剤とコンジュゲートされる。細胞傷害性薬剤はＭＭＡＥまたはＭＭＡＦを含み得、細胞傷害性薬剤は、シトルリン−バリンまたはマレイミドカプロイルなどのリンカーを介してＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質とコンジュゲートされ得る。
【００１５】
一つの実施態様では、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質は、アンタゴニストである。別の実施態様では、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質は、ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。
【００１６】
一つの実施態様では、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質は、配列番号３のＣＤＲＨ３、配列番号２００のＣＤＲＨ３変異体Ｎ９９Ｄ、またはそれらの変異体を含んでなる抗体である。別の実施態様では、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号３のＣＤＲＨ３または配列番号２００のＣＤＲＨ３変異体Ｎ９９Ｄ、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３およびそれらの変異体を含んでなる抗体である。さらに別の実施態様では、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質は、配列番号２３の重鎖可変領域と配列番号３１の軽鎖可変領域とを含んでなる抗体である。
【００１７】
本発明は、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と治療上有効な量の、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質とを含んでなる組合せを提供する。
【００１８】
一つの実施態様では、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質はアンタゴニストである。別の実施態様では、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質は、ＩｇＧ４モノクローナル抗体である。
【００１９】
一つの実施態様では、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質は、配列番号２０１のＣＤＲＨ１、配列番号２０２のＣＤＲＨ２、配列番号２０３のＣＤＲＨ３、配列番号２０４のＣＤＲＬ１、配列番号２０５のＣＤＲＬ２、配列番号２０６のＣＤＲＬ３、およびそれらの変異体を含んでなる。さらに別の実施態様では、ＰＤ−１と結合する抗原結合タンパク質は、配列番号２０７の重鎖可変領域と配列番号２０８の軽鎖可変領域とを含んでなる。
【００２０】
さらに別の実施態様では、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、またはペンブロリズマブまたはニボルマブのいずれかと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の配列相同性を含んでなる抗体である。
【００２１】
本発明は、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と治療上有効な量の、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質とを含んでなる組合せを提供する。
【００２２】
一つの実施態様では、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質は、アゴニストである。別の実施態様では、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質は、ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。
【００２３】
一つの実施態様では、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質は、配列番号２１９のＣＤＲＨ１、配列番号２２０のＣＤＲＨ２、配列番号２２１のＣＤＲＨ３、配列番号２２２のＣＤＲＬ１、配列番号２２３のＣＤＲＬ２、配列番号２２４のＣＤＲＬ３、およびそれらの変異体を含んでなる。さらに別の実施態様では、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質は、配列番号２２９の重鎖可変領域と配列番号２３０の軽鎖可変領域とを含んでなる。
【００２４】
また、本発明の組合せを含んでなる医薬組成物も提供される。
【００２５】
また、必要とする哺乳動物（例えば、ヒト）において癌を処置する方法であって、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と治療上有効な量の、免疫調節標的に結合する少なくとも１種類の抗原結合タンパク質とを含んでなる、治療上有効な量の組合せを投与することを含んでなる方法も提供される。一つの実施態様では、免疫調節標的は、ＰＤ１またはＯＸ４０である。一つの実施態様では、癌は、多発性骨髄腫（ＭＭ）または非ホジキンリンパ腫Ｂ細胞白血病（ＮＨＬ）である。一つの実施態様では、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質およびＰＤ−１またはＯＸ４０に結合する抗原結合タンパク質(the antigen binding)は同時または逐次に投与される。方法は組合せの全身（例えば、静脈内）投与または腫瘍内投与を提供する。
【００２６】
本明細書では、癌の処置における本明細書に記載の組合せが提供される。
【００２７】
癌の処置のための薬剤の製造における本明細書に記載の組合せの使用が企図される。
【００２８】
適切には、本発明の医薬組成物を１種類以上の薬学上許容可能な担体とともに含んでなるキットが提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】図１．ＢＣＭＡ  ＡＤＣはＢＣＭＡ発現癌細胞株において免疫原性細胞死を誘導する  図１Ａ）ＢＣＭＡ発現癌細胞株における免疫原性細胞死(Immunogenic cell death)（ＩＣＤ）を示す模式図。ＩＣＤは、ＡＴＰおよびＨＭＧＢ１の細胞内放出、および細胞膜でのＣＲＴの露出としばしば関連付けられる特殊なタイプのアポトーシスである。ＩＣＤは、樹状細胞(dendritic cells)（ＤＣ）による抗原提示プロセスの関与を介して免疫応答を誘導する。
【００３０】
図１Ｂ）ＢＣＭＡ−ＭＭＡＦはＢＣＭＡ＋  ＭＭ細胞株においてＡＴＰ、ＣＲＴおよびＨＭＧＢ１を誘導する
供試細胞株を、抗ＢＣＭＡ−ＭＭＡＦ抗体薬物複合体またはミトキサントロンで４８時間処理した後、１）自動フローサイトメトリーにより細胞数の損失を評価し、２）カルレティキュリン(calreticulin)（ＣＲＴ）露出をポリクローナル抗ＣＲＴ抗体でマークし、フローサイトメトリーにより評価し、３）細胞上清中のＨＭＧＢ１含量をＥＬＩＳＡにより評価し、続いて吸光度評価を行い、４）細胞上清中のＡＴＰを続いての発光評価により評価した。抗ＢＣＭＡ−ＭＭＡＦは、ＢＣＭＡ陽性ＭＭ細胞株であるＮＣＩ−Ｈ９２９でのみ、ＡＴＰ放出、ＨＭＧＢ１放出およびＣＲＴ露出を誘導する。
【図２】図２：免疫原性細胞死の誘導を介した樹状細胞成熟活性化の誘導  図２Ａ）ＢＣＭＡ  ＡＤＣで処理したＮＣＩ−Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞との２４時間の共培養後、３名の健常ドナーからのＨＬＡ−ＤＲ＋樹状細胞においてＣＤ８３細胞表面発現が増大した。
【００３１】
図２Ｂ）ＢＣＭＡ  ＡＤＣで処理したＮＣＩ−Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞との２４時間の共培養後の３名の健常ドナーからのＣＤ１１ｃ＋樹状細胞においてＣＤ４０細胞表面発現を増大した。マーカー発現を、（ａ）非処理（ＢＣＭＡ  ＡＤＣ無し）樹状細胞単独および（ｂ〜ｆ）（ｂ）非処理（ＢＣＭＡ  ＡＤＣ無し）、（ｃ）ＩｇＧ対照（１０μｇ／ｍＬ）、（ｄ）０．１、（ｅ）１および（ｆ）１０μｇ／ｍＬ  ＢＣＭＡ  ＡＤＣ処理（４８時間）ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞と共培養した樹状細胞で測定した。（ｇ）樹状細胞の３μｇ／ｍＬリポ多糖（ＬＰＳ）処理を陽性対照として含めた。Ｘ軸：対数平均蛍光強度（ＭＦＩ）。水平な線は、ＩｇＧ対照のＭＦＩを表す。
【図３】図３．ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞およびＢＣＭＡ  ＡＤＣ処理ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞と未熟樹状細胞の共培養系の両方からのＩＬ−１０産生の抑制  図３Ａおよび３Ｂ．ＩＬ−１０は、２名の健常ヒトドナー由来樹状細胞とＢＣＭＡ  ＡＤＣ処理ＮＣＩ−Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞の共培養からの上清で減少した。ＩＬ−１０を、（ａ）非処理（ＢＣＭＡ  ＡＤＣ無し）樹状細胞単独および（ｂ〜ｆ）（ｂ）非処理（ＢＣＭＡ  ＡＤＣ無し）、（ｃ）ＩｇＧ対照（１０μｇ／ｍＬ）、（ｄ）０．１、（ｅ）１および（ｆ）１０μｇ／ｍＬ  ＢＣＭＡ  ＡＤＣ処理（４８時間）ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞と共培養した樹状細胞で測定した。（ｇ）樹状細胞の３μｇ／ｍＬリポ多糖（ＬＰＳ）処理を陽性対照として含めた。
【００３２】
図３Ｃ．ＩＬ−１０は、単独で培養したＮＣＩ−Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞からの上清においてＢＣＭＡ  ＡＤＣ処置で減少した。ＩＬ−１０を、非処理（ａ）、ＩｇＧ対照（ｂ）、０．１（ｃ）、１（ｄ）、および１０μｇ／ｍＬ  ＢＣＭＡ  ＡＤＣ（ｅ）処理（４８時間）ＮＣＩ−Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞で測定した。
【図４】図４：ヒトＴ細胞に対するＢＣＭＡ  ＡＤＣの効果  図４Ａ）ＢＣＭＡ  ＡＤＣの存在下での２４および７２時間の抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激後のＰＢＭＣ中のＣＤ４細胞における平均変化率％（Ａｖｇ）とそのパーセンテージ（％）の変動係数（ＣＶ）およびマーカーのＭＦＩ；  図４Ｂ）ＢＣＭＡ  ＡＤＣの存在下での２４および７２時間の抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激後のＰＢＭＣ中のＣＤ８細胞における平均変化率％（Ａｖｇ）とそのパーセンテージ（％）の変動係数（ＣＶ）およびマーカーのＭＦＩ；  図４Ｃ）ＢＣＭＡ  ＡＤＣの存在下での４８および７２時間の抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激を用いた場合の、ＩＦＮγおよびＩＬ−４を発現するＣＤ４およびＣＤ８細胞の平均変化率％（Ａｖｇ）とそのパーセンテージ（％）の変動係数（ＣＶ）；  ４Ｄ）ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖に対するＢＣＭＡ  ＡＤＣの効果。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞を種々の濃度のＢＣＭＡ  ＡＤＣの存在下または不在下で抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体で刺激した。９６時間後、細胞増殖をフローサイトメトリーによって分析した。データは３名の異なるドナーからの平均±ＳＤを表す。
【００３３】
ＢＣＭＡ−ＡＤＣは、ヒトＴ細胞に対して直接的効果を持つとは思われない。
【図５】図５：ＥＬ４−Ｌｕｃ２−ｈＢＣＭＡマウスにおける、腫瘍体積に対する抗ＢＣＭＡ抗体と抗ＯＸ４０抗体の組合せの効果（図５Ａ）および生存率（図５Ｂ）を示すグラフ。
【図６】図６：ＥＬ４−Ｌｕｃ２−ｈＢＣＭＡマウスにおける腫瘍体積に対するＭＭＡＦとコンジュゲートされた抗ＢＣＭＡ抗体と抗ＰＤ−１抗体の組合せの効果を示すグラフ。
【図７】図７：ＥＬ４−Ｌｕｃ２−ｈＢＣＭＡマウスにおける腫瘍体積に対するＭＭＡＦとコンジュゲートされた抗ＢＣＭＡ抗体と抗ＰＤ−１抗体の組合せの効果を示すグラフ。
【発明の具体的説明】
【００３４】
組合せ
本発明の一つの実施態様では、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質またはそのフラグメントと治療上有効な量の、免疫調節標的に結合する抗原結合タンパク質またはそのフラグメントとを含んでなる組合せが提供される。
【００３５】
本発明の一つの実施態様では、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質またはそのフラグメントと治療上有効な量の、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質またはそのフラグメント(an antigen binding protein of fragment thereof)を含んでなる組合せが提供される。
【００３６】
本発明の一つの実施態様では、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質またはそのフラグメントと治療上有効な量の、ＯＸ４０に結合する抗原結合タンパク質またはそのフラグメントとを含んでなる組合せが提供される。
【００３７】
一つの実施態様では、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質またはそのフラグメント、治療上有効な量の、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質またはそのフラグメント(an antigen binding protein of fragment thereof)、および治療上有効な量の、ＯＸ４０に結合する抗原結合タンパク質またはそのフラグメントを含んでなる組合せが提供される。
【００３８】
ＢＣＭＡと結合する抗原結合タンパク質
一つの実施態様では、ＢＣＭＡと特異的に結合する、例えば、ヒトＢＣＭＡ（ｈＢＣＭＡ）と特異的に結合する抗原結合タンパク質（例えば、抗体）またはフラグメントが提供される。別の実施態様では、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質は、ＢＡＦＦおよび／またはＡＰＲＩＬの、ＢＣＭＡ受容体への結合を阻害する。
【００３９】
さらなる実施態様では、抗原結合タンパク質またはそれらのフラグメントは、ＦｃγＲＩＩＩＡと結合し、ＦｃｇＲＩＩＩＡにより媒介されるエフェクター機能を媒介する能力を有するか、またはＦｃγＲＩＩＩＡにより媒介されるエフェクター機能が増強されている。本明細書に提供される本発明の一つの実施態様では、抗原結合タンパク質は内部移行能がある。本明細書で提供される本発明の一つの特定の実施態様では、本明細書に記載される抗原結合タンパク質は迅速な内部移行能がある。例えば、抗原結合タンパク質は、１２時間未満、または６時間未満、または１２０分未満で内部移行する。一つの実施態様では、抗原結合タンパク質は、３０分未満、例えば、１５分で内部移行する。抗原結合タンパク質の内部移行は、当技術分野で公知の技術を用いて、例えば、受容体に結合し細胞内小胞（エンドソームおよびリソソーム）と共局在したもしくは細胞質中に存在するＢＣＭＡを可視化するための共焦点顕微鏡によって、あるいはまた、内部移行を示すＢＣＭの消失を伴った、細胞表面のＢＣＭＡの存在の経時的変動を検出するためのフローサイトメトリーによって測定することができる。
【００４０】
さらなる実施態様では、本発明の抗原結合タンパク質は、エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有し、例えば、抗原結合タンパク質はＡＤＣＣエフェクター機能が増強されている。
【００４１】
さらなる実施態様では、抗原結合タンパク質は、細胞傷害性薬剤である薬物とコンジュゲートされて免疫複合体（例えば、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ））を形成する。一つのこのような実施態様では、細胞傷害性薬剤はオーリスタチンである。なおさらなる実施態様では、細胞傷害性薬剤は、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはモノメチルオーリスタチチンＦ（ＭＭＡＦ）である。一つの実施態様では、免疫複合体はＡＤＣＣも増強されている。
【００４２】
一つの実施態様では、細胞傷害性薬剤は、バリン−シトルリン（ＶＣ）またはマレイミドカプロイル（ｍｃ）などのリンカーを介して、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質  とコンジュゲートされる。
【００４３】
一つのこのような実施態様では、免疫複合体は、免疫原性細胞死を引き起こすことができる。本発明の一つの実施態様では、非膜結合型ＢＣＭＡ、例えば、血清ＢＣＭＡと結合する本明細書に記載される本発明による抗原結合タンパク質が提供される。
【００４４】
別の例では、ＢＣＭＡと結合する抗原結合タンパク質は、ＢＣＭＡとＢＡＦＦまたはＡＰＲＩＬなどのＢＣＭＡリガンドとの結合を遮断するアンタゴニストである。
【００４５】
一つの実施態様では、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質は、免疫グロブリン様ドメインまたはそのフラグメントを含む。別の実施態様では、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質は、モノクローナル抗体、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ、それらのサブクラス、またはそれらの修飾変異体である。さらに別の実施態様では、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質はＩｇＧ抗体である。
【００４６】
本発明の一つの実施態様では、配列番号３のＣＤＲＨ３、配列番号２００のＣＤＲＨ３変異体Ｎ９９Ｄ、またはそれらの変異体を含んでなる。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号３または配列番号２００で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＨ３領域を含んでなる、本明細書に記載される抗原結合タンパク質が提供される。
【００４７】
本発明のさらなる実施態様では、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２および／または配列番号６のＣＤＲＬ３およびまたはそれらの変異体のうち１以上をさらに含んでなる、本明細書に記載される抗原結合タンパク質が提供される。
【００４８】
本発明の一つの実施態様では、配列番号１８４のＣＤＲＨ３または配列番号１８４の変異体を含んでなる、本明細書に記載される抗原結合タンパク質が提供される。
【００４９】
本発明のさらなる実施態様では、配列番号１８２のＣＤＲＨ１、配列番号１８３のＣＤＲＨ２、配列番号１８５のＣＤＲＬ１、配列番号１８６のＣＤＲＬ２および／または配列番号１８７のＣＤＲＬ３およびまたはそれらの変異体のうち１以上をさらに含んでなる、本明細書に記載される抗原結合タンパク質が提供される。
【００５０】
なおさらなる実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３変異体Ｎ９９Ｄ、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号１、配列番号２、配列番号２００、配列番号４、配列番号５および配列番号６で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ領域を含んでなる。
【００５１】
さらなる実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号３のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５および配列番号６で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ領域を含んでなる。
【００５２】
なおさらなる実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号１８４のＣＤＲＨ３、配列番号１８３のＣＤＲＨ２、配列番号１８２のＣＤＲＨ１、配列番号１８５のＣＤＲＬ１、配列番号１８６のＣＤＲＬ２および配列番号１８７のＣＤＲＬ３を含んでなる。
【００５３】
本発明の抗原結合タンパク質は、列番号７および配列番号９に記載される可変領域を有するマウス抗体、またはその非マウス等価物、例えば、そのラット、ヒト、キメラまたはヒト化変異体に由来し、例えば、それらは配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７および配列番号２９に記載される重鎖可変配列ならびに／または配列番号３１、配列番号３３および／もしくは配列番号３５に記載される軽鎖可変配列を有する抗体に由来する。
【００５４】
別の実施態様では、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号１１６もしくは配列番号１１８の重鎖可変領域および／または配列番号１２０もしくは配列番号１２２に記載される軽鎖可変配列を有する抗体に由来する。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号１１６もしくは配列番号１１８で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域および／または配列番号１２０もしくは配列番号１２２で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域を含んでなる。
【００５５】
別の実施態様では、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号１４０の重鎖可変領域配列および／または配列番号１４４の軽鎖可変領域配列を有する抗体に由来する。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号１４０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域および／または配列番号１４４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域を含んでなる。
【００５６】
本発明の一つの実施態様では、以下：配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号１１６または配列番号１１８のうちのいずれか一つから選択される単離された重鎖可変領域を含んでなる抗原結合タンパク質が提供される。
【００５７】
本発明の別の実施態様では、以下：配列番号３１、配列番号３３または配列番号３５、配列番号１２０または配列番号１２２のうちのいずれか一つから選択される単離された軽鎖可変領域を含んでなる抗原結合タンパク質が提供される。
【００５８】
本発明のさらなる実施態様では、以下：配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７および配列番号２９のうちのいずれか一つから選択される単離された重鎖可変領域と、以下：配列番号３１、配列番号３３および／または  配列番号３５のうちのいずれか一つから選択される単離された軽鎖可変領域とを含んでなる抗原結合タンパク質が提供される。
【００５９】
一つの実施態様では、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号２３の重鎖可変領域と配列番号３１の軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域と、配列番号３１で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域とを含んでなる。
【００６０】
一つの実施態様では、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号２７の重鎖可変領域と配列番号３１の軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域と、配列番号３１で示されるアミノ酸配列と．少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有すアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域とを含んでなる。
【００６１】
一つの実施態様では、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号２９の重鎖可変領域と配列番号３１の軽鎖可変領域を含んでなる。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２９で示されるアミノ酸配列少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域と、配列番号３１で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有すアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域とを含んでなる。
【００６２】
一つの実施態様では、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号１１６の重鎖可変領域と配列番号１２０の軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号１１６で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域と、配列番号１２０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域とを含んでなる。
【００６３】
一つの実施態様では、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号１１８の重鎖可変領域と配列番号１２２の軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号１１８で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域と、配列番号１２２で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域とを含んでなる。
【００６４】
一つの実施態様では、免疫複合体は、ＧＳＫ２８５７９１６である。Tai, Blood, 123(2):3128-38 (2014)。ＧＳＫ２８５７９１６は、マレイミドカプロイル（ｍｃ）リンカーを介してモノメチルオーリスタチチンＦ（ＭＭＡＦ）とコンジュゲートされた抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる。ＧＳＫ２８５７９１６は、クローンＪ６Ｍ０に由来し、配列番号５５、配列番号６３、配列番号２３、配列番号３１、配列番号１、配列番号２、配列番号２００、配列番号４、配列番号５、および配列番号６のアミノ酸配列を含んでなる。
【００６５】
一つの実施態様では、配列番号１２、または配列番号１４、または配列番号１６、または配列番号１８、または配列番号２０、または配列番号２２、または配列番号２４、または配列番号２６、または配列番号２８、または配列番号３０または配列番号１１７または配列番号１１９または配列番号１４１の単離された重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドが提供される。
【００６６】
一つの実施態様では、配列番号３２、または配列番号３４、または配列番号３６または配列番号１２１または配列番号１２３または配列番号１４５の単離された軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドが提供される。
【００６７】
さらなる実施態様では、配列番号２４、または配列番号２８または配列番号３０の単離された重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドおよび配列番号３２、または配列番号３４の単離された軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドが提供される。
【００６８】
なおさらなる実施態様では、配列番号２４の単離された重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドおよび配列番号３２の単離された軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドが提供される。
【００６９】
なおさらなる実施態様では、配列番号１１７の単離された重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドおよび配列番号１２１の単離された軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドが提供される。
【００７０】
なおさらなる実施態様では、配列番号１１９の単離された重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドおよび配列番号１２３の単離された軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドが提供される。
【００７１】
なおさらなる実施態様では、配列番号１４１の単離された重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドおよび配列番号１４５の単離された軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドが提供される。
【００７２】
さらなる実施態様では、抗原結合タンパク質は、本明細書で記載される重鎖可変領域のいずれか一つを本明細書で記載される軽鎖可変領域のいずれか一つと組み合わせて含んでなり得る。いくつかの実施態様では、抗原結合タンパク質は、ＢＣＭＡ、例えば、ヒトＢＣＭＡに結合する（例えば、かつ拮抗する）ことができる。
【００７３】
一つの実施態様では、抗原結合タンパク質は、本明細書に記載される本発明による１以上のＣＤＲ、または本明細書に記載される本発明による重鎖可変領域または軽鎖可変領域の一方もしくは両方を含んでなる抗体またはその抗原結合フラグメントである。一つの実施態様では、抗原結合タンパク質は霊長類ＢＣＭＡに結合する。一つのこのような実施態様では、抗原結合タンパク質は加えて、非ヒト霊長類ＢＣＭＡ、例えば、カニクイザル  マカクザルＢＣＭＡにも結合する。
【００７４】
別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、ｄＡｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニ抗体、およびミニボディからなる群から選択される。
【００７５】
本発明の一つの実施態様では、抗原結合タンパク質は、ヒト化またはキメラ抗体であり、さらなる実施態様では、抗体はヒト化されている。
【００７６】
一つの実施態様では、抗体はモノクローナル抗体である。
【００７７】
本発明の一つの実施態様では、配列番号５５または配列番号５９または配列番号６１で示される重鎖配列を有する抗体が提供される。
【００７８】
本発明の一つの実施態様では、配列番号６３または配列番号６５で示される軽鎖配列を有する抗体が提供される。
【００７９】
本発明のさらなる実施態様では、配列番号５５の重鎖配列および配列番号６３で示される軽鎖配列を有する抗体が提供される。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号５５で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖領域と、配列番号６３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖領域とを含んでなる。
【００８０】
一つの実施態様では、本明細書に記載される本発明の抗原結合タンパク質と競合する抗原結合タンパク質またはそのフラグメントが提供される。よって、一つのこのような実施態様では、配列番号２３の重鎖可変配列と配列番号３１の軽鎖可変領域とを含んでなる抗原結合タンパク質と競合する抗原結合タンパク質が提供する。
【００８１】
よって、さらなる実施態様では、配列番号２７、配列番号２９、配列番号１１６、配列番号１１８および配列番号１４０のうち一つから選択される重鎖可変配列と、配列番号３１、配列番号１２０、配列番号１２２および配列番号１４４のうち一つから選択される軽鎖可変領域とを含んでなる抗原結合タンパク質と競合する抗原結合タンパク質が提供される。
【００８２】
本発明の一つの実施態様では、抗原結合タンパク質は、キメラ抗原受容体(chimeric antigen receptor)（ＣＡＲ）である。さらなる実施態様では、ＣＡＲは、結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内エフェクタードメインを含んでなる。
【００８３】
一つの実施態様では、膜貫通ドメインは、天然源または合成源のいずれかに由来し得る。一つの実施態様では、膜貫通ドメインは、いずれの膜結合または膜貫通タンパク質に由来してもよい。あるいは、膜貫通ドメインは合成することもでき、ロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を主要に含んでなることができる。例えば、膜貫通ドメインは、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ３もしくはＣＤ２８などのＣＤタンパク質の膜貫通ドメイン、α、β、γもしくはδなどのＴ細胞受容体のサブユニット、ＩＬ−２受容体のサブユニット（α鎖）、低親和性神経成長因子受容体（ＬＮＧＦＲもしくはｐ７５）のサブユニット(submit)（β鎖もしくはγ鎖）、またはＦｃ受容体のサブユニット鎖であり得る。一つの実施態様では、膜貫通ドメインは、ＣＤ４、ＣＤ８またはＣＤ２８の膜貫通ドメインを含んでなる。さらなる実施態様では、膜貫通ドメインは、ＣＤ４またはＣＤ８の膜貫通ドメイン（例えば、引用することにより本明細書の一部とされるＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１１３９３４５．１に記載されるＣＤ８α鎖）を含んでなる。なおさらなる実施態様では、膜貫通ドメインは、ＣＤ４の膜貫通ドメインを含んでなる。
【００８４】
細胞内エフェクタードメインまたは「シグナル伝達ドメイン」は、標的結合ドメインが標的に結合した後に細胞内シグナル伝達を担う。細胞内エフェクタードメインは、ＣＡＲが発現される免疫細胞の通常のエフェクター機能のうち少なくとも１つの活性化を担う。例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能は、細胞溶解活性またはサイトカインの分泌を含むヘルパー活性であり得る。ＣＡＲ足場における使用のためのエフェクタードメインの好ましい例は、天然Ｔ細胞受容体および補助受容体の細胞質配列、ならびに抗原結合後のシグナル伝達の開始と強調して働くこれらの配列の任意の誘導体または変異体および同じ機能的能力を有する任意の合成配列であり得る。エフェクタードメインは、抗原依存的一次活性化を誘導するものと抗原非依存的に二次シグナルまたは補助刺激シグナルを提供する働きをするものの２つのクラスに分けることができる。一次活性化エフェクタードメインは、ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｍｏｔｉｆｓ（ＩＴＡＭ）として知られるシグナル伝達モチーフを含んでなり得る。ＩＴＡＭは、多様な受容体の細胞質内テールに共通に見られる、よく定義されたシグナル伝達  モチーフであり、ｓｙｋ／ｚａｐ７０クラスチロシンキナーゼの結合部位として機能する。本明細書で使用されるＩＴＡＭは、限定されない例として、ＣＤ３ζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＦｃＲε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ６６ｄに由来するものを含み得る。一つの実施態様では、細胞内エフェクタードメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン（ＣＤ２４７としても知られる）を含んでなる。天然ＴＣＲはＣＤ３ζシグナル伝達分子を含み、従って、このエフェクタードメインの使用が、自然界に存在するＴＣＲ構築物に最も近い。
【００８５】
本発明の一つの実施態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζエフェクタードメインである。
【００８６】
エフェクタードメインはまた、二次シグナルまたは補助刺激シグナルも提供し得る。Ｔ細胞は、例えば増殖の活性化、分化などを増強することによってＴ細胞応答を増強するために抗原提示細胞上の同族補助刺激リガンドと結合する補助刺激分子をさらに含んでなる。よって、一つの実施態様では、細胞内エフェクタードメインは、補助刺激ドメインさらに含んでなる。さらなる実施態様では、補助刺激ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ２７、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１（ＣＤ２７９）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＮＫＧ２Ｃ（ＣＤ９４）、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６）またはそれらの任意の組合せから選択される補助刺激分子の細胞内ドメインを含んでなる。なおさらなる実施態様では、補助刺激ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ２７、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳまたはそれらの任意の組合せから選択される補助刺激分子の細胞内ドメインを含んでなる。
【００８７】
本発明の抗原結合タンパク質と参照抗体の間の競合は競合ＥＬＩＳＡ、ＦＭＡＴまたはＢｉａｃｏｒｅによって決定され得る。一つの実施態様では、競合アッセイは、Ｂｉａｃｏｒｅによって実施される。この競合にはいくつかの可能性のある理由が存在し、すなわち、２つのタンパク質が同じまたは重複するエピトープと結合する可能性があり、結合の立体阻害が存在する可能性もあり、または第１のタンパク質の結合が抗原に、第２のタンパク質の結合を妨げるもしくは低下させる立体配座変化を誘導する可能性もある。
【００８８】
別の実施態様では、抗原結合タンパク質はヒトＢＣＭＡと高い親和性で結合し、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅにより測定した場合、抗原結合タンパク質はヒトＢＣＭＡと２０ｎＭ以下の親和性または１５ｎＭ以下の親和性または５ｎＭ以下の親和性または１０００ｐＭ以下の親和性または５００ｐＭ以下の親和性または４００ｐＭ以下、または３００ｐＭ以下または例えば、約１２０ｐＭの親和性で結合する。さらなる実施態様では、抗原結合タンパク質はヒトＢＣＭＡと、Ｂｉａｃｏｒｅにより測定した場合に、約１００ｐＭ〜約５００ｐＭの間または約１００ｐＭ〜約４００ｐＭの間、または約１００ｐＭ〜約３００ｐＭの間で結合する。本発明の一つの実施態様では、抗原結合タンパク質はＢＣＭＡと１５０ｐｍ未満の親和性で結合する。
【００８９】
一つのこのような実施態様では、これは、例えば、引用することにより本明細書の一部とされるＷＯ２０１２１６３８０５の実施例４に示されるようにＢｉａｃｏｒｅにより測定される。
【００９０】
別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、細胞中和アッセイにおいてヒトＢＣＭＡと結合し、リガンドＢＡＦＦおよび／またはＡＰＲＩＬとＢＣＭＡ受容体の結合を中和し、ここで、抗原結合タンパク質は、約１ｎＭ〜約５００ｎＭの間、または約１ｎＭ〜約１００ｎＭの間、または約１ｎＭ〜約５０ｎＭの間、または約１ｎＭ〜約２５ｎＭの間、または約５ｎＭ〜約１５ｎＭの間のＩＣ５０を有する。本発明のさらなる実施態様では、抗原結合タンパク質は、細胞中和アッセイにおいてＢＣＭＡに結合し、ＢＣＭＡを中和し、ここで、抗原結合タンパク質は、約１０ｎＭのＩＣ５０を有する。
【００９１】
一つのこのような実施態様では、これは、例えば、引用することにより本明細書の一部とされるＷＯ２０１２１６３８０５の実施例４．６に示されるように細胞中和アッセイにより測定される。
【００９２】
ＰＤ−１と結合する抗原結合タンパク質
本明細書に記載される本発明の一つの実施態様では、組合せは、ＢＣＭＡと特異的に結合する抗原結合タンパク質（例えば、抗体）とＰＤ−１と特異的に結合する抗原結合タンパク質（例えば、抗体）またはそのフラグメントとを含んでなる。一例では、ＰＤ−１と特異的に結合する抗原結合タンパク質は、ヒトＰＤ−１（ｈＰＤ−１）に結合する。別の例では、ＰＤ−１と特異的に結合する抗抗原結合タンパク質は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２などのＰＤ−１リガンドとの結合を遮断するアンタゴニストである。
【００９３】
一つの実施態様では、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質は、免疫グロブリン様ドメインまたはそのフラグメントを含む。別の実施態様では、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質は、モノクローナル抗体、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤもしくはＩｇＥ、それらのサブクラス、またはそれらの修飾変異体である。さらに別の実施態様では、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質は、ＩｇＧ抗体である。別の実施態様では、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質は、ＩｇＧ４抗体である。
【００９４】
本発明の一つの実施態様では、配列番号２０３のＣＤＲＨ３またはその変異体を含んでなる、本明細書に記載される抗原結合タンパク質が提供される。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２０３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＨ３領域を含んでなる。
【００９５】
本発明のさらなる実施態様では、配列番号２０１のＣＤＲＨ１、配列番号２０２のＣＤＲＨ２、配列番号２０３のＣＤＲＨ３、配列番号２０４のＣＤＲＬ１、配列番号２０５のＣＤＲＬ２、配列番号２０６のＣＤＲＬ３、およびまたはそれらの変異体を含んでなる、本明細書に記載される抗原結合タンパク質が提供される。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５および配列番号２０６で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ領域を含んでなる。
【００９６】
本発明の一つの実施態様では、配列番号２１３ＣＤＲＨ３のまたはその変異体を含んでなる、本明細書に記載される抗原結合タンパク質が提供される。
【００９７】
本発明のさらなる実施態様では、配列番号２１１のＣＤＲＨ１、配列番号２１２のＣＤＲＨ２、配列番号２１４のＣＤＲＬ１、配列番号２１５のＣＤＲＬ２および／または配列番号２１６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体のうち１以上をさらに含んでなる、本明細書に記載される抗原結合タンパク質が提供される。
【００９８】
なおさらなる実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２０３のＣＤＲＨ３、配列番号２０２のＣＤＲＨ２、配列番号２０１のＣＤＲＨ１、配列番号２０４のＣＤＲＬ１、配列番号２０５のＣＤＲＬ２および配列番号２０６のＣＤＲＬ３を含んでなる。
【００９９】
なおさらなる実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２１３のＣＤＲＨ３、配列番号２１１のＣＤＲＨ２、配列番号２１２のＣＤＲＨ１、配列番号２１４のＣＤＲＬ１、配列番号２１５のＣＤＲＬ２および配列番号２１６のＣＤＲＬ３を含んでなる。
【０１００】
本発明の一つの実施態様では、配列番号２０７または配列番号２１７から選択される単離された重鎖可変ドメインを含んでなる抗原結合タンパク質が提供される。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２０７または配列番号２１７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域を含んでなる。
【０１０１】
本発明の別の実施態様では、配列番号２０８または配列番号２１８から選択される単離された軽鎖可変領を域含んでなる抗原結合タンパク質が提供される。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２０８または配列番号２１８で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域を含んでなる。
【０１０２】
本発明のさらなる実施態様では、配列番号２０７または配列番号２１７から選択される単離された重鎖可変領域と、配列番号２０８または配列番号２１８から選択される単離された軽鎖可変ドメインとを含んでなる抗原結合タンパク質が提供される。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２０７または配列番号２１７で示されるアミノ酸配列少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域と、配列番号２０８または配列番号２１８で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域とを含んでなる。
【０１０３】
一つの実施態様では、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号２０７によりコードされる重鎖可変領域と配列番号２０８によりコードされる軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２０７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域と、配列番号２０８で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域とを含んでなる。
【０１０４】
一つの実施態様では、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号２１７によりコードされる重鎖可変領域と配列番号２１８によりコードされる軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２１７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域と、配列番号２１８で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域とを含んでなる。
【０１０５】
企図される一つの組合せにおいて、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質は、ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体であり、かつ、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質は、配列番号２０１のＣＤＲＨ１、配列番号２０２のＣＤＲＨ２、配列番号２０３のＣＤＲＨ３、配列番号２０４のＣＤＲＬ１、配列番号２０５のＣＤＲＬ２、配列番号２０６のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる。
【０１０６】
一つの実施態様では、単離された配列番号２０７の重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドが提供される。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２０７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域を含んでなる。
【０１０７】
一つの実施態様では、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５および配列番号２０６のＣＤＲ領域をコードするポリヌクレオチドが提供される。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５および配列番号２０６で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ領域を含んでなる。
【０１０８】
一つの実施態様では、抗原結合タンパク質は、本明細書に記載される本発明による１以上のＣＤＲ、または本明細書に記載される本発明による重鎖可変領域もしくは軽鎖可変領域の一方もしくは両方を含んでなる抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０１０９】
別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、ｄＡｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニ抗体、およびミニボディからなる群から選択される。
【０１１０】
一つの実施態様では、本発明の抗原結合タンパク質は、ヒト化またはキメラ抗体であり、さらなる実施態様では、抗体はヒト化されている。
【０１１１】
一つの実施態様では、抗体はモノクローナル抗体である。
【０１１２】
本発明の一つの実施態様では、配列番号２０９で示される重鎖配列を有する抗体が提供される。
【０１１３】
本発明の一つの実施態様では、配列番号２１０で示される軽鎖配列を有する抗体が提供される。
【０１１４】
本発明のさらなる実施態様では、配列番号２０９の重鎖配列と配列番号２１０で示され軽鎖配列を有する抗体が提供される。
【０１１５】
一つの実施態様では、本明細書に記載される本発明の抗原結合タンパク質と競合する抗原結合タンパク質またはそのフラグメントが提供される。よって、一つのこのような実施態様では、配列番号２０７の重鎖可変配列と配列番号２０８の軽鎖可変領域を含んでなる抗原結合タンパク質と競合する抗原結合タンパク質が提供される。
【０１１６】
本明細書で記載される単離された抗体は、ヒトＰＤ−１と結合し、  遺伝子Ｐｄｃｄ１、またはそれと９０パーセントの相同性もしくは９０パーセントの同一性を有する遺伝子もしくはｃＤＮＡ配列によりコードされるヒトＰＤ−１と結合し得る。完全なｈＰＤ−１  ｍＲＮＡ配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｕ６４８６３として見出すことができる。ヒトＰＤ−１のタンパク質配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＣ５１７７３で見出すことができる。
【０１１７】
別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅにより測定した場合に、ヒトＰＤ−１と高い親和性で結合し、抗原結合タンパク質は１ｎＭ以下の親和性でヒトＰＤ−１と結合する。本発明の一つの実施態様では、抗原結合タンパク質は、１００ｐｍ未満の親和性でＰＤ−１に結合する。
【０１１８】
カニクイザルＰＤ−１に対するペンブロリズマブの結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、細胞ＥＬＩＳＡおよび生体光干渉計により評価した。これらの試験では、カニクイザルおよびヒトＰＤ−１に対するペンブロリズマブの結合親和性は、カニクイザルＰＤ−１に対してはやや低いものの、同じ範囲にあることが判明した。動態分析により、ＫＤは、ヒトＰＤ−１に対しては２９ｐＭ、カニクイザルＰＤ−１に対しては１１８ｐＭであった。機能的には、ペンブロリズマブは、ヒトまたはカニクイザルＰＤ−１を発現する細胞へのヒトＰＤ−１リガンドの結合を同等の効力で遮断した。当業者は、ＫＤ数値が小さいほど結合が強いことを認識するであろう。ＫＤの逆数（すなわち、１／ＫＤ）は、Ｍ−１を単位とする平衡会合定数（ＫＡ）である。当業者は、ＫＡ数値が大きいほど結合が強いことを認識するであろう。
【０１１９】
解離速度定数（ｋｄ）または「解離速度」は、複合体の安定性、すなわち、毎秒に減衰する複合体画分を表す。例えば、０．０１ｓ−１のｋｄは、毎秒複合体の１％が減衰することに等しい。ある実施態様では、解離速度定数（ｋｄ）は、１×１０−３ｓ−１以下、１×１０−４ｓ−１以下、１×１０−５ｓ−１以下、または１×１０−６ｓ−１以下である。ｋｄは１×１０−５ｓ−１〜１×１０−４ｓ−１の間、または１×１０−４ｓ−１〜１×１０−３ｓ−１の間であり得る。
【０１２０】
例えば、本発明の抗原結合タンパク質と参照抗体の間の競合は、競合ＥＬＩＳＡ、ＦＭＡＴまたはＢＩＡｃｏｒｅにより決定することができる。一つの実施態様では、競合アッセイはＢｉａｃｏｒｅにより行われる。この競合にはいくつかの可能性のある理由が存在し、すなわち、２つのタンパク質が同じまたは重複するエピトープと結合する可能性があり、結合の立体阻害が存在する可能性もあり、または第１のタンパク質の結合が抗原に、第２のタンパク質の結合を妨げるもしくは低下させる立体配座変化を誘導する可能性もある。
【０１２１】
本発明の一つの実施態様では、ＰＤ−１抗原結合タンパク質は、キートルーダ（登録商標）またはＭＫ３４７５およびラムブロリズマブとしても知られるペンブロリズマブである。ペンブロリズマブは、ＰＤ−１受容体と結合し、そのＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２との相互作用を遮断して腫瘍免疫応答を含む免疫応答のＰＤ−１経路により媒介される阻害を解除するモノクローナル抗体である。
【０１２２】
同系マウス腫瘍モデルにおいて、ＰＤ−１活性の遮断は腫瘍成長の低下をもたらした。ペンブロリズマブは、およその分子量１４９ｋＤａのＩｇＧ４κ免疫グロブリンである。
【０１２３】
ペンブロリズマブ（キートルーダ（登録商標））は、切除不能または転移性黒色腫を有し、かつ、イピリムマブ後に疾患進行を示す患者の処置に指示されるヒトプログラム細胞死受容体−１(programmed death receptor-1)（ＰＤ−１）遮断抗体であり、ＢＲＡＦ  Ｖ６００突然変異陽性の場合には、ＢＲＡＦ阻害剤である。ペンブロリズマブの推奨用量は２ｍｇ／ｋｇであり、疾患進行または許容不能の毒性まで、３週間ごとに３０分の静注として投与される。
【０１２４】
ペンブロリズマブは、単回使用バイアル中の無菌、保存剤不含の白色〜灰白色の凍結乾燥粉末である。各バイアルは静注用に再構成され、希釈される。各２ｍＬの再構成溶液は５０ｍｇのペンブロリズマブを含有し、Ｌ−ヒスチジン（３．１  ｍｇ）、ポリソルベート−８０（０．４ｍｇ）、スクロース（１４０ｍｇ）中に調剤される。ｐＨを５．５に調整するために塩酸／水酸化ナトリウムを含有してもよい。
【０１２５】
ペンブロリズマブは、例えば、米国特許第８，３５４，５０９号および同第８，９００，５８７号に記載されている。
【０１２６】
ペンブロリズマブは、切除不能または転移性黒色腫を有し、かつ、イピリムマブ後に疾患進行を示す患者の処置のために承認されており、ＢＲＡＦ  Ｖ６００突然変異陽性の場合には、ＢＲＡＦ阻害剤である。
【０１２７】
一つの実施態様では、組合せは、ペンブロリズマブとＧＳＫ２８５７９１６を含んでなる。
【０１２８】
別の例として、抗ＢＣＭＡ抗体は、ニボルマブ（オプジーボ（登録商標））と併用可能である。ニボルマブは、ＰＤ−１受容体と結合し、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２とのその相互作用を遮断して腫瘍免疫応答を含む免疫応答のＰＤ−１経路により媒介される阻害を解除するヒト免疫グロブリンＧ４（ＩｇＧ４）モノクローナル抗体である。同系マウス腫瘍モデルでは、ＰＤ−１活性の遮断は、腫瘍成長の低下をもたらした。
【０１２９】
ニボルマブ（オプジーボ（登録商標））は、切除不能または転移性黒色腫を有し、かつ、イピリムマブ後に疾患進行を示す患者の処置に指示されるプログラム細胞死受容体−１（ＰＤ−１）遮断抗体であり、ＢＲＡＦ  Ｖ６００突然変異陽性の場合には、ＢＲＡＦ阻害剤である。この適応は、腫瘍応答率および応答持続性に基づき迅速承認下で承認される。この適応に対する継続的承認は、検証的治験および白金に基づく化学療法中または療法後に進行を示す転移性扁平上皮非小細胞肺癌における臨床利益の立証および記述を条件とし得る。
【０１３０】
ニボルマブ（オプジーボ（登録商標））の推奨は３ｍｇ／ｋｇであり、疾患進行または許容不能の毒性まで、２週間ごとに６０分の静注として投与される。
【０１３１】
米国特許第８，００８，４４９号では、７種の抗ＰＤ−１  ＨｕＭＡｂ：１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、５Ｃ４（本明細書ではニボルマブまたはＢＭＳ−９３６５５８とも呼ばれる）、４Ａ１  １、７Ｄ３および５Ｆ４が例示されている。米国特許第８，７７９，１０５号も参照。これらの抗体、またはそれらのＣＤＲ（またはこれらのアミノ酸配列のいずれかと少なくとも９０％（例えば９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）の同一性を有するアミノ酸配列）のうちいずれか１つを本明細書に記載の組成物および方法で使用することができる。
【０１３２】
ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質
本明細書に記載される本発明の一つの実施態様では、組合せは、ＢＣＭＡと特異的に結合する抗原結合タンパク質（例えば、抗体）とＯＸ４０と特異的に結合する抗原結合タンパク質（例えば、抗体）またはそのフラグメントとを含んでなる。一例では、ＯＸ４０と特異的に結合する抗原結合タンパク質は、ヒトＯＸ４０（ｈＯＸ４０）に結合する。別の例では、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質はアゴニストである。
【０１３３】
一つの実施態様では、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質は、免疫グロブリン様ドメインまたはそのフラグメントを含む。別の実施態様では、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質は、モノクローナル抗体、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤもしくはＩｇＥ、それらのサブクラス、またはそれらの修飾変異体である。さらに別の実施態様では、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質はＩｇＧ１抗体である。
【０１３４】
本発明の一つの実施態様では、配列番号２２１のＣＤＲＨ３またはその変異体を含んでなる、本明細書に記載される抗原結合タンパク質が提供される。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２２１で示されるアミノ酸配列となくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＨ３領域を含んでなる。
【０１３５】
本発明のさらなる実施態様では、配列番号２１９のＣＤＲＨ１、配列番号２２０のＣＤＲＨ２、配列番号２２１のＣＤＲＨ３、配列番号２２２のＣＤＲＬ１、配列番号２２３のＣＤＲＬ２および配列番号２２４のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる、本明細書に記載される抗原結合タンパク質が提供される。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２１９、配列番号２２０、配列番号２２１、配列番号２２２、配列番号２２３および配列番号２２４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ領域を含んでなる。
【０１３６】
本発明の一つの実施態様では、配列番号２３３のＣＤＲＨ３またはその変異体を含んでなる、本明細書に記載される抗原結合タンパク質が提供される。
【０１３７】
本発明のさらなる実施態様では、配列番号２３１のＣＤＲＨ１、配列番号２３２のＣＤＲＨ２、配列番号２３４のＣＤＲＬ１、配列番号２３５のＣＤＲＬ２および／または配列番号２３６のＣＤＲＬ３およびまたはそれらの変異体のうち１以上をさらに含んでなる、本明細書に記載される抗原結合タンパク質が提供される。
【０１３８】
本発明の一つの実施態様では、配列番号２２９、配列番号２２５、または配列番号２３７から選択される単離された重鎖可変領域を含んでなる抗原結合タンパク質が提供される。
【０１３９】
本発明の別の実施態様では、配列番号２３０、配列番号２２７、または配列番号２３９から選択される単離された軽鎖可変領域を含んでなる抗原結合タンパク質が提供される。
【０１４０】
本発明のさらなる実施態様では、配列番号２２５または配列番号２３７から選択される単離された重鎖可変領域と配列番号２２７または配列番号２３９から選択される単離された軽鎖可変領域とを含んでなる抗原結合タンパク質が提供される。
【０１４１】
一つの実施態様では、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号２２５の重鎖可変領域と配列番号２２７の軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２２５で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域と、配列番号２２７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域とを含んでなる。
【０１４２】
一つの実施態様では、本発明の抗原結合タンパク質は、配列番号２３７の重鎖可変領域と配列番号２３９の軽鎖可変領域とを含んでなる。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２３７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域と、配列番号２３９で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域とを含んでなる。
【０１４３】
本発明のさらなる実施態様では、単離された配列番号２２９の重鎖可変領域と単離された配列番号２３０の軽鎖可変領域とを含んでなる抗原結合タンパク質が提供される。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２２９で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域と、配列番号２３０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域とを含んでなる。
【０１４４】
本発明の一つの実施態様では、単離された配列番号２４３の重鎖領域と単離された配列番号２４４の軽鎖領域とを含んでなる抗原結合タンパク質が提供される。別の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列番号２４３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖領域と、配列番号２４４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖領域とを含んでなる。
【０１４５】
企図される一つの組合せにおいて、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質は、ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体とを含んでなる免疫複合体であり、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質は、配列番号２１９のＣＤＲＨ１、配列番号２２０のＣＤＲＨ２、配列番号２２１のＣＤＲＨ３、配列番号２２２のＣＤＲＬ１、配列番号２２３のＣＤＲＬ２および配列番号２２４のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる。
【０１４６】
一つの実施態様では、単離された配列番号２２９、配列番号２２６、または配列番号２３８の重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドが提供される。
【０１４７】
一つの実施態様では、配列番号２３０、配列番号２２８、または配列番号２４０を含んでなる単離された軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドが提供される。
【０１４８】
さらなる実施態様では、単離された配列番号２２９、配列番号２２６、または配列番号２３８の重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドおよび単離された配列番号２３０、配列番号２２８、または配列番号２４０の軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドが提供される。
【０１４９】
一つの実施態様では、本発明の抗原結合タンパク質は、その標的（例えば、ＯＸ４０）に高い親和性で結合する。例えば、Ｂｉａｃｏｒｅにより測定した場合、本抗体は、ＯＸ４０、好ましくは、ヒトＯＸ４０と、１〜１０００ｎＭまたは５００ｎＭ以下の親和性または２００ｎＭ以下の親和性または１００ｎＭ以下の親和性または５０ｎＭ以下の親和性または５００ｐＭ以下の親和性または４００ｐＭ以下または３００ｐＭ以下の親和性で結合する。さらなる実施態様では、本抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅにより測定した場合、ＯＸ４０、好ましくは、ヒトＯＸ４０と約５０ｎＭ〜約２００ｎＭの間または約５０ｎＭ〜約１５０ｎＭの間で結合する。本発明の一つの実施態様では、本抗体は、ＯＸ４０、好ましくは、ヒトＯＸ４０に、１００ｎＭ未満の親和性で結合する。
【０１５０】
例えば、本発明の抗原結合タンパク質と参照抗体の間の競合は、競合ＥＬＩＳＡ、ＦＭＡＴまたはＢＩＡｃｏｒｅにより決定することができる。一つの実施態様では、競合アッセイはＢｉａｃｏｒｅにより行われる。この競合にはいくつかの可能性のある理由が存在し、すなわち、２つのタンパク質が同じまたは重複するエピトープと結合する可能性があり、結合の立体阻害が存在する可能性もあり、または第１のタンパク質の結合が抗原に、第２のタンパク質の結合を妨げるもしくは低下させる立体配座変化を誘導する可能性もある。
【０１５１】
ある実施態様では、本発明の組合せまたはその方法または使用の抗原結合タンパク質とＯＸ４０、好ましくは、ヒトＯＸ４０の相互作用の平衡解離定数（ＫＤ）は、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、２ｎＭ以下または１ｎＭ以下である。あるいは、ＫＤは５〜１０ｎＭの間、または１〜２ｎＭの間であり得る。ＫＤは、１ｐＭ〜５００ｐＭの間、または５００ｐＭ〜１ｎＭの間であり得る。当業者は、ＫＤ数値が小さくなるほど結合が強くなることを認識するであろう。
【０１５２】
さらなる実施態様では、抗原結合タンパク質は、本明細書で記載される重鎖可変鎖のいずれか１つを本明細書の表Ａに記載される軽鎖のいずれか１つと組み合わせて含んでなり得る。
【０１５３】
一つの実施態様では、抗原結合タンパク質は、ＯＸ４０と結合するモノクローナル抗体であり、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【０１５４】
一つの実施態様では、抗原結合タンパク質は、ＯＸ４０と結合するモノクローナル抗体であり、約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、および約１０ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される用量で投与される。
【０１５５】
別の実施態様では、ＯＸ４０と結合するモノクローナル抗体は、１日１回、週１回、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）、および３週間に１回（Ｑ３Ｗ）からなる群から選択される頻度で投与される。
【０１５６】
さらに別の実施態様では、ヒトＰＤ−１と結合するモノクローナル抗体は、約２００ｍｇの用量で投与される。
【０１５７】
一つの実施態様では、ＯＸ４０と結合するモノクローナル抗体は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの用量に投与される。ＯＸ４０と結合するモノクローナル抗体は、１日１回、週１回、２週間に１回（Ｑ２Ｗ）、および３週間に１回（Ｑ３Ｗ）からなる群から選択される頻度で投与することができる。好適には、ＯＸ４０と結合する抗体は、３週間に１回投与される。一つの態様において、ペンブロリズマブは、２００ｍｇ  Ｑ３Ｗの用量で投与される。
【０１５８】
医薬組成物および処置方法
本発明はさらに、本明細書に記載の組合せ、および１以上の薬学上許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。本発明の組合せは２つの医薬組成物を含んでなり得、一方は抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質またはフラグメントを含んでなり、他方は抗ＰＤ−１またはＯＸ４０抗原結合タンパク質またはそのフラグメントを含んでなり、そのそれぞれは同じまたは異なる担体、希釈剤または賦形剤を含み得る。担体、希釈剤または賦形剤は、その処方物の他の成分と適合し、医薬調剤能を有し、かつ、そのレシピエントに有害でないという意味で許容可能でなければならない。
【０１５９】
本発明の組合せの成分は、およびそのような成分を含んでなる医薬組成物は、いずれの順序で、異なる投与経路で逐次に投与されてもよく、前記成分およびそれらを含んでなる医薬組成物は同時に投与されてもよい。
【０１６０】
本明細書に記載の組合せの成分のそれぞれは、同じバイアル／容器中または異なるバイアル／容器中に製造してもよい。例えば、一つの実施態様では、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質は、ＰＤ−１と結合する抗原結合タンパク質またはＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質と同じバイアル／容器中に製造され、この組合せの総ての成分が同時に投与される。別の例示的実施態様では、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質は、ＰＤ−１と結合する抗原結合タンパク質またはＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質と異なるバイアル／容器中に製造され、この組合せの成分のそれぞれは同時に、逐次に、また、同じまたは異なる投与経路で投与することができる。
【０１６１】
また、本発明の別の実施態様によれば、本発明の組合せの成分と１種類以上の薬学上許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を混合することを含む、医薬組成物の調製のための方法も提供される。
【０１６２】
本発明の成分は、いずれの適当な経路によって投与してもよい。いくつかの成分については、好適な経路は経口、直腸、鼻腔、局所（口内および舌下を含む）、膣、および非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、くも膜下腔内、および硬膜外を含む）を含む。好ましい経路は例えば組合せのレシピエントの状態および処置される癌によって異なり得ることが認識されるであろう。また、投与される薬剤のそれぞれは同じまたは異なる経路によって投与されてよいこと、およびこれらの成分は一緒に混合されていてもまたは別個の医薬組成物であってもよいことも認識されるであろう。
【０１６３】
一つの実施態様では、本発明の組合せの１以上の成分は静脈投与される。別の実施態様では、本発明の組合せの１以上の成分は腫瘍内投与される。別の実施態様では、本発明の組合せの１以上の成分は例えば脈内に全身投与され、本発明の組合せの１以上の他の成分は腫瘍内投与される。別の実施態様では、本発明の組合せの総ての成分は、例えば静脈内に全身投与される。別の実施態様では、本発明の組合せの総ての成分は腫瘍内投与される。例えば本段落におけるこれらの実施態様のいずれにおいても、本発明の成分は、１以上の医薬組成物として投与される。
【０１６４】
本発明の組合せの治療上有効な量（または組合せの成分のそれぞれの治療上有効な量）の投与には、それらの組合せが治療上有効な量の成分化合物の個々の投与に比べた場合に以下の改善特性のうち１以上を提供するという点で個々の成分化合物よりも有利である：ｉ）最も活性の高い単剤よりも大きな抗癌作用、ｉｉ）相乗的または極めて相乗的な抗癌活性、ｉｉｉ）低減された副作用プロフィールで増強された抗癌活性を示す投与プロトコール、ｉｖ）毒性作用プロフィールの低減、ｖ）治療域の増大、またはｖｉ）成分化合物の一方または両方のバイオアベイラビリティの増大。
【０１６５】
一つの実施態様では、本発明は、必要とする哺乳動物（例えば、ヒト）においてＢ細胞障害の処置など、癌を処置する方法であって、治療上有効な量の本明細書に記載される組合せを投与することを含んでなる方法を提供する。一つの実施態様では、癌は多発性骨髄腫である。別の実施態様では、癌は非ホジキンリンパ腫である。
【０１６６】
一つの実施態様では、本発明のＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質のいずれか１つまたはその抗体薬物複合体；およびペンブロリズマブ、またはそれと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の配列相同性を含んでなる抗体を投与することを含んでなる、癌を処置するための方法が提供される。
【０１６７】
一つの実施態様では、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質またはそれらの免疫複合体のうちのいずれか１つ；およびニボルマブ、またはそれと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の配列相同性を含んでなる抗体を投与することを含んでなる、癌を処置するための方法が提供される。
【０１６８】
一つの実施態様では、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量のＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）配列番号２０１のＣＤＲＨ１、配列番号２０２のＣＤＲＨ２、配列番号２０３のＣＤＲＨ３、配列番号２０４のＣＤＲＬ１、配列番号２０５のＣＤＲＬ２、配列番号２０６のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、治療上有効な量の、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質と
を含んでなる治療上有効な量の組合せを投与することを含んでなる、必要とするヒトにおいて癌を処置するための方法が提供される。
【０１６９】
一つの実施態様では、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）治療上有効な量のペンブロリズマブまたはニボルマブと
を含んでなる治療上有効な量の組合せを投与することを含んでなる、必要とするヒトにおいて癌を処置するための方法が提供される。
【０１７０】
一つの実施態様では、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と
ｉｉ）配列番号２１９のＣＤＲＨ１、配列番号２２０のＣＤＲＨ２、配列番号２２１のＣＤＲＨ３、配列番号２２２のＣＤＲＬ１、配列番号２２３のＣＤＲＬ２、配列番号２２４のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、治療上有効な量の、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質と
を含んでなる治療上有効な量の組合せを投与することを含んでなる、必要とするヒトにおいて癌を処置するための方法が提供される。
【０１７１】
一つの実施態様では、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）配列番号２０１のＣＤＲＨ１、配列番号２０２のＣＤＲＨ２、配列番号２０３のＣＤＲＨ３、配列番号２０４のＣＤＲＬ１、配列番号２０５のＣＤＲＬ２、配列番号２０６のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、治療上有効な量の、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質と、
を含んでなる治療上有効な量の組合せを投与することを含んでなる、必要とするヒトにおいて多発性骨髄腫を処置するための方法が提供される。
【０１７２】
一つの実施態様では、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）配列番号２０１のＣＤＲＨ１、配列番号２０２のＣＤＲＨ２、配列番号２０３のＣＤＲＨ３、配列番号２０４のＣＤＲＬ１、配列番号２０５のＣＤＲＬ２、配列番号２０６のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、治療上有効な量の、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質と
を含んでなる治療上有効な量の組合せを投与することを含んでなる、必要とするヒトにおいて非ホジキンリンパ腫を処置するための方法が提供される。
【０１７３】
一つの実施態様では、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）配列番号２１９のＣＤＲＨ１、配列番号２２０のＣＤＲＨ２、配列番号２２１のＣＤＲＨ３、配列番号２２２のＣＤＲＬ１、配列番号２２３のＣＤＲＬ２、配列番号２２４のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、治療上有効な量の、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質と
を含んでなる治療上有効な量の組合せを投与することを含んでなる、必要とするヒトにおいて多発性骨髄腫を処置するための方法が提供される。
【０１７４】
一つの実施態様では、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）配列番号２１９のＣＤＲＨ１、配列番号２２０のＣＤＲＨ２、配列番号２２１のＣＤＲＨ３、配列番号２２２のＣＤＲＬ１、配列番号２２３のＣＤＲＬ２、配列番号２２４のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、治療上有効な量の、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質と
を含んでなる治療上有効な量の組合せを投与することを含んでなる、必要とするヒトにおいて非ホジキンリンパ腫を処置するための方法が提供される。
【０１７５】
前記哺乳動物における癌の腫瘍サイズが、単剤療法として使用されるＢＣＭＡに対する抗原結合タンパク質およびＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質またはＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質のよる処置に比べて相加量よりも縮小される方法が提供される。好適には、組合せは相乗作用性であり得る。
【０１７６】
一つの実施態様では、哺乳動物は、ＢＣＭＡに対する抗原結合タンパク質またはＰＤ−１もしくはＯＸ４０に対する抗原結合タンパク質を単剤療法として受容した哺乳動物に比べて、本明細書に記載される組合せで処理された場合に高い生存を示す。一つの実施態様では、これらの方法は、必要とする哺乳動物に少なくとも１種類の抗新生物薬を投与することをさらに含んでなる。
【０１７７】
必要とする哺乳動物（例えば、ヒト）の癌の処置、特に、Ｂ細胞障害の処置における使用が企図される。一つの実施態様では、癌は多発性骨髄腫である。別の実施態様では、癌は非ホジキンリンパ腫である。
【０１７８】
一つの実施態様では、癌を処置するための本明細書に記載の組合せの使用が提供され、前記組合せは、本発明のＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質またはそれらの抗体薬物複合体のうちのいずれか１つ；およびペンブロリズマブ、またはそれと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の配列相同性を含んでなる抗体を含んでなる。
【０１７９】
一つの実施態様では、癌を処置するための本明細書に記載の組合せの使用が提供され、前記組合せは、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質またはそれらの免疫複合体のうちのいずれか１つ；およびニボルマブ、またはそれと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の配列相同性を含んでなる抗体を含んでなる。
【０１８０】
一つの実施態様では、必要とするヒトにおいて癌を処置するための組合せの使用が提供され、前記組合せは、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量のＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）配列番号２０１のＣＤＲＨ１、配列番号２０２のＣＤＲＨ２、配列番号２０３のＣＤＲＨ３、配列番号２０４のＣＤＲＬ１、配列番号２０５のＣＤＲＬ２、配列番号２０６のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、治療上有効な量の、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質と
を含んでなる。
【０１８１】
一つの実施態様では、必要とするヒトにおいて癌を処置するための組合せの使用が提供され、前記組合せは、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）配列番号２１９のＣＤＲＨ１、配列番号２２０のＣＤＲＨ２、配列番号２２１のＣＤＲＨ３、配列番号２２２のＣＤＲＬ１、配列番号２２３のＣＤＲＬ２、配列番号２２４のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる治療上有効な量の、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質と
を含んでなる。
【０１８２】
一つの実施態様では、必要とするヒトにおいて多発性骨髄腫を処置するための組合せの使用が提供され、前記組合せは、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量のＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）配列番号２０１のＣＤＲＨ１、配列番号２０２のＣＤＲＨ２、配列番号２０３のＣＤＲＨ３、配列番号２０４のＣＤＲＬ１、配列番号２０５のＣＤＲＬ２、配列番号２０６のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、治療上有効な量の、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質と
を含んでなる。
【０１８３】
一つの実施態様では、必要とするヒトにおいて非ホジキンリンパ腫を処置するための組合せの使用が提供され、前記組合せは、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパクと
ｉｉ）配列番号２０１のＣＤＲＨ１、配列番号２０２のＣＤＲＨ２、配列番号２０３のＣＤＲＨ３、配列番号２０４のＣＤＲＬ１、配列番号２０５のＣＤＲＬ２、配列番号２０６のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、治療上有効な量の、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質と
を含んでなる。
【０１８４】
一つの実施態様では、必要とするヒトにおいて多発性骨髄腫を処置するための組合せの使用が提供され、前記組合せは、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と
ｉｉ）配列番号２１９のＣＤＲＨ１、配列番号２２０のＣＤＲＨ２、配列番号２２１のＣＤＲＨ３、配列番号２２２のＣＤＲＬ１、配列番号２２３のＣＤＲＬ２、配列番号２２４のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、治療上有効な量の、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質と
を含んでなる。
【０１８５】
一つの実施態様では、必要とするヒトにおいて非ホジキンリンパ腫を処置するための組合せの使用が提供され、前記組合せは、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）配列番号２１９のＣＤＲＨ１、配列番号２２０のＣＤＲＨ２、配列番号２２１のＣＤＲＨ３、配列番号２２２のＣＤＲＬ１、配列番号２２３のＣＤＲＬ２、配列番号２２４のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる治療上有効な量の、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質と
を含んでなる。
【０１８６】
また、本発明では、特にＢ細胞障害の処置などの癌の処置のための薬剤の製造における本発明の組合せまたは医薬組成物の使用も提供される。一つの実施態様では、癌は多発性骨髄腫である。別の実施態様では、癌は非ホジキンリンパ腫である。
【０１８７】
一つの実施態様では、癌の処置のための薬剤の製造における本発明の組合せまたは医薬組成物の使用は、本発明のＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質またはそれらの抗体薬物複合体のうちのいずれか１つ；およびペンブロリズマブ、またはそれと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の配列相同性を含んでなる抗体を含んでなる組合せを含む。
【０１８８】
一つの実施態様では、癌の処置のための薬剤の製造における本発明の組合せまたは医薬組成物の使用は、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質またはそれらの免疫複合体のうちのいずれか１つ；およびニボルマブ、またはそれと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の配列相同性を含んでなる抗体を含んでなる組合せを含む。
【０１８９】
一つの実施態様では、癌の処置のための薬剤の製造における組合せの使用が企図され、前記組合せは、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）配列番号２０１のＣＤＲＨ１、配列番号２０２のＣＤＲＨ２、配列番号２０３のＣＤＲＨ３、配列番号２０４のＣＤＲＬ１、配列番号２０５のＣＤＲＬ２、配列番号２０６のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、治療上有効な量の、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質と
を含んでなる。
【０１９０】
一つの実施態様では、癌の処置のための薬剤の製造における組合せの使用が企図され、前記組合せは、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）配列番号２１９のＣＤＲＨ１、配列番号２２０のＣＤＲＨ２、配列番号２２１のＣＤＲＨ３、配列番号２２２のＣＤＲＬ１、配列番号２２３のＣＤＲＬ２、配列番号２２４のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、治療上有効な量の、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質と
を含んでなる。
【０１９１】
一つの実施態様では、多発性骨髄腫の処置のための薬剤の製造における組合せの使用が企図され、前記組合せは、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）配列番号２０１のＣＤＲＨ１、配列番号２０２のＣＤＲＨ２、配列番号２０３のＣＤＲＨ３、配列番号２０４のＣＤＲＬ１、配列番号２０５のＣＤＲＬ２、配列番号２０６のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、治療上有効な量の、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質と
を含んでなる。
【０１９２】
一つの実施態様では、非ホジキンリンパ腫の処置のための薬剤の製造における組合せの使用が企図され、前記組合せは、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）配列番号２０１のＣＤＲＨ１、配列番号２０２のＣＤＲＨ２、配列番号２０３のＣＤＲＨ３、配列番号２０４のＣＤＲＬ１、配列番号２０５のＣＤＲＬ２、配列番号２０６のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、治療上有効な量の、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質と
を含んでなる。
【０１９３】
一つの実施態様では、多発性骨髄腫の処置のための薬剤の製造における組合せの使用が企図され、前記組合せは、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）配列番号２１９のＣＤＲＨ１、配列番号２２０のＣＤＲＨ２、配列番号２２１のＣＤＲＨ３、配列番号２２２のＣＤＲＬ１、配列番号２２３のＣＤＲＬ２、配列番号２２４のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、治療上有効な量の、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質と
を含んでなる。
【０１９４】
一つの実施態様では、非ホジキンリンパ腫の処置のための薬剤の製造における組合せの使用が企図され、前記組合せは、
ｉ）ＭＭＡＦとコンジュゲートされた、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、配列番号２００のＣＤＲＨ３、配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、配列番号６のＣＤＲＬ３またはそれらの変異体を含んでなる抗ＢＣＭＡ抗体を含んでなる免疫複合体である、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質と、
ｉｉ）配列番号２１９のＣＤＲＨ１、配列番号２２０のＣＤＲＨ２、配列番号２２１のＣＤＲＨ３、配列番号２２２のＣＤＲＬ１、配列番号２２３のＣＤＲＬ２、配列番号２２４のＣＤＲＬ３、またはそれらの変異体を含んでなる、治療上有効な量の、ＯＸ４０と結合する抗原結合タンパク質と
を含んでなる。
【０１９５】
また、癌を処置するための本発明の組合せを含んでなる医薬組成も提供される。本発明はまた、本発明の医薬組成物を１種類以上の薬学上許容可能な担体とともに含んでなる組合せキットも提供する。本キットは場合により使用説明書を含んでもよい。
【０１９６】
Ｂ細胞障害は、Ｂ細胞の発達／免疫グロブリン産生の欠陥（免疫不全）および過度の／制御を欠いた増殖（リンパ腫、白血病）に分けることができる。本明細書で使用する場合、Ｂ細胞障害は両タイプの疾患を指し、Ｂ細胞障害を抗原結合タンパク質で処置するための方法が提供される。
【０１９７】
癌、特に、Ｂ細胞介在または形質細胞介在疾患または抗体介在疾患または障害の例としては、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、非分泌型多発性骨髄腫、くすぶり型多発性骨髄腫、意義不明単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、孤立性形質細胞腫（骨、髄外）、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）、ワルデンストロームマクログロブリン血症、形質細胞白血病、原発性アミロイドーシス（ＡＬ）、Ｈ鎖病、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、ＰＯＥＭＳ症候群／骨硬化性骨髄腫、Ｉ型およびＩＩ型寒冷グロブリン血症、軽鎖沈着症、グッドパスチャー症候群、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、急性糸球体腎炎、天疱瘡および類天疱瘡障害、および後天性表皮水疱症；または任意の非ホジキンリンパ腫性Ｂ細胞白血病（ＮＨＬ）またはホジキンリンパ腫（ＨＬ）が挙げられる。
【０１９８】
特定の実施態様では、疾患または障害は、多発性骨髄腫（ＭＭ）、非ホジキンリンパ腫性Ｂ細胞白血病（ＮＨＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）からなる群から選択される。
【０１９９】
本発明の一つの実施態様では、疾患は、多発性骨髄腫、または非ホジキンリンパ腫性Ｂ細胞白血病（ＮＨＬ）である。
【０２００】
本発明の一つの実施態様では、疾患は多発性骨髄腫である。
【０２０１】
好適には、本発明は、本明細書に記載されるように癌を処置する、またはその重篤度を軽減するための方法に関する。
【０２０２】
本発明の組合せは、単独で使用してもよいし、または１以上の他の治療薬と併用してもよい。
【０２０３】
本発明の医薬組成物または組合せが癌の処置のために投与される場合、用語「投与する」およびその派生語は、本明細書で使用する場合、本明細書で記載される組合せ、および化学療法（例えば、抗新生物薬）、放射線処置、および手術を含む、癌の処置において有用であることが知られるさらなる有効成分または成分の同時投与または個別逐次投与の任意の様式のいずれかを意味する。さらなる有効成分または成分という用語は、本明細書で使用する場合、癌の処置を必要とする患者に投与された際に有利な特性を示すことが知られる、または有利な特性を示すいずれの化合物または治療薬も含む。好ましくは、投与が同時でない場合、これらの化合物は互いに近接した時間内に投与される。さらに、これらの化合物は同じ投与形で投与されるかどうかは問題ではなく、例えば、ある化合物を静脈内投与し、別の化合物を経口投与してもよい。
【０２０４】
一般に、処置される感受性腫瘍に対して活性を有するいずれの抗新生物薬も、本発明の癌の処置において本明細書に記載の組合せとともに投与してよい。このような薬剤の例としては、Cancer Principles and Practice f Oncology by V.T. Devita and S. Hellman (編),第6版 (2001年2月15日), Lippincott Williams & Wilkins Publishersに見出すことができる。当業者ならば、関与する薬物および癌の特定の性質に基づいて薬剤のどの組合せが有用であるかを識別することができるであろう。本発明において有用な典型的抗新生物薬なとしては、限定されるものではないが、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドなどの微小管阻害剤；白金錯体；ナイトロジェンマスタード、オキシアザホスホリン、アルキルスルホネート、ニトロソ尿素、およびトリアゼンなどのアルキル化剤；アントラサイクリン、アクチノマイシンおよびブレオマイシンなどの抗生物薬；エピポドフィロトキシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤；プリンおよびピリミジン類似体ならびに葉酸拮抗化合物などの代謝拮抗物質；カンプトテシンなどのトポイソメラーゼＩ阻害剤；ホルモンおよびホルモン類似体；シグナル伝達経路阻害剤；非受容体型チロシン血管新生阻害剤；免疫治療薬；アポトーシス促進薬；および細胞周期シグナル伝達阻害剤が含まれる。抗新生物薬の非限定例を本明細書に示す。
【０２０５】
本明細書に記載の組合せとともに投与するためのさらなる１または複数の有効成分の例は化学療法薬である。
【０２０６】
微小管阻害剤または有糸分裂阻害剤は、細胞周期のＭ期、すなわち有糸分裂期の間に腫瘍細胞の微小管に対して活性である細胞周期特異的薬剤である。微小管阻害剤の例としては、限定されるものではないが、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドが挙げられる。
【０２０７】
ジテルペノイドは、天然源に由来し、細胞周期のＧ２／Ｍ期に作用する細胞周期特異的抗癌剤である。ジテルペノイドは、微小管のβ−チューブリンサブユニットと結合することによりこのタンパク質を安定化させると考えられている。その後タンパク質の分解が阻害され、有糸分裂が停止し、細胞死をたどると思われる。ジテルペノイドの例としては、限定されるものではないが、パクリタキセルおよびその類似体であるドセタキセルが挙げられる。
【０２０８】
パクリタキセル、５β，２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサ−ヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン４，１０−ジアセテート２−ベンゾエートの（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンゾイル−３−フェニルイソセリンとの１３−エステルは、タイヘイヨウイチイ(Taxus brevifolia)から単離された天然ジテルペン生成物であり、注射液タキソール(TAXOL)（登録商標）として市販されている。パクリタキセルは、テルペンのタキサンファミリーのメンバーである。パクリタキセルは、１９７１年に、Wani et al.  J.  Am.  Chem, Soc., 93:2325. 1971)によって初めて単離され、彼らは化学的方法およびＸ線結晶学的方法によってその構造を同定した。その活性の一つの機序は、パクリタキセルの、チューブリンに結合することで癌細胞の増殖を阻害する能力に関連する。Schiff et al., Proc. Natl, Acad, Sci. USA, 77:1561-1565 (1980); Schiff et al., Nature, 277:665-667 (1979); Kumar, J. Biol, Chem, 256: 10435-10441 (1981)。数種のパクリタキセル誘導体の合成および抗癌活性に関する総説としては、D. G. I. Kingston et al., Studies in Organic Chemistry vol. 26, entitled “New trends in Natural Products Chemistry 1986”, Attaur-Rahman, P.W. Le Quesne編(Elsevier, Amsterdam, 1986) pp 219-235を参照。
【０２０９】
パクリタキセルは、米国における難治性卵巣癌の治療に用(Markman et al., Yale Journal of Biology and Medicine, 64:583, 1991; McGuire et al., Ann. lntem, Med., 111:273,1989)および乳癌の治療(Holmes et al., J. Nat. Cancer Inst., 83:1797,1991)に承認されている。パクリタキセルは、皮膚における新生物(Einzig et. al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 20:46)および頭頸部癌(Forastire et. al., Sem. Oncol., 20:56, 1990)の治療のための潜在的候補である。またこの化合物は、多発性嚢胞腎疾患(Woo et. al., Nature, 368:750. 1994)、肺癌、およびマラリアの治療にも可能性を示している。パクリタキセルで患者を治療すると、閾値濃度（５０ｎＭ）を超える投与期間に関連して(Kearns, C.M. et. al., Seminars in Oncology, 3(6) p.16-23, 1995)、骨髄抑制が起こる（複数の細胞系譜、Ignoff, R.J. et. al, Cancer Chemotherapy Pocket Guide, 1998）。
【０２１０】
ドセタキセル、（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−カルボキシ−３−フェニルイソセリン，Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルエステルの５β−２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン４−アセテート２−ベンゾエートとの１３−エステルの三水和物は、注射液としてタキソテール(TAXOTERE)（登録商標）として市販されている。ドセタキセルは、乳癌の治療に指示される。ドセタキセルは、ヨーロッパイチイの針葉から抽出した天然の前駆物質１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩを使用して製造された、パクリタキセル（前項参照）の半合成誘導体である。ドセタキセルの用量制限毒性は好中球減少症である。
【０２１１】
ビンカアルカロイドは、ニチニチソウ由来の細胞周期特異的抗新生物薬である。ビンカアルカロイドは、チューブリンと特異的に結合することによって細胞周期のＭ期（有糸分裂）に作用する。その結果、結合されたチューブリン分子は、重合して微小管になることができない。有糸分裂は中期で停止し、細胞死をたどると考えられている。ビンカアルカロイドの例としては、限定されるものではないが、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビノレルビンが挙げられる。
【０２１２】
ビンブラスチン、硫酸ビンカロイコブラスチンは、注射液としてベルバン(VELBAN)（登録商標）として市販されている。ビンブラスチンは、種々の固形腫瘍の第二選択療法として指示される可能性があるが、精巣癌、ならびにホジキン病、リンパ球性および組織球性リンパ腫を含む種々のリンパ腫の治療に主として指示される。骨髄抑制がビンブラスチンの用量制限副作用である。
【０２１３】
ビンクリスチン、ビンカロイコブラスチンの２２−オキソ−硫酸塩は、注射液としてオンコビン(ONCOVIN)（登録商標）として市販されている。ビンクリスチンは、急性白血病の治療に指示されており、ホジキンおよび非ホジキン悪性リンパ腫の治療計画の中でも使用されている。脱毛および神経学的作用がビンクリスチンの最も一般的な副作用であり、程度は低いが、骨髄抑制および胃腸粘膜炎作用が生じる。
【０２１４】
酒石酸ビノレルビンの注射液（ナベルビン(NAVELBINE)（登録商標））として市販されているビノレルビン、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−Ｃ’−ノルビンカロイコブラスチン［Ｒ−（Ｒ＊，Ｒ＊）−２，３−ジヒドロキシブタン二酸（１：２）（塩）］は、半合成ビンカアルカロイドである。ビノレルビンは、単剤として、またはシスプラチンなどの他の化学療法薬と組み合わせて、種々の固形腫瘍、特に、非小細胞肺癌、進行性乳癌、およびホルモン不応性前立腺癌の治療に指示される。骨髄抑制がビノレルビンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０２１５】
白金配位錯体は、非細胞周期特異的抗癌剤であり、ＤＮＡと相互作用する。白金錯体は、腫瘍細胞に侵入し、アクア化を受け、ＤＮＡとの鎖内架橋および鎖間架橋を形成し、腫瘍に対して有害な生物学的作用を引き起こす。白金配位錯体の例としては、限定されるものではないが、シスプラチンおよびカルボプラチンが挙げられる。
【０２１６】
シスプラチン、シス−ジアンミンジクロロ白金は、注射液としてプラチノール(PLATINOL)（登録商標）として市販されている。シスプラチンは、主として転移性の精巣癌および卵巣癌ならびに進行性膀胱癌の治療に指示される。シスプラチンの主要な用量制限副作用は、腎毒性（これは水分補給および利尿により管理できる）、および耳毒性である。
【０２１７】
カルボプラチン、ジアンミン［１，１−シクロブタン−ジカルボキシレート（２−）−Ｏ，Ｏ’］白金は、注射液としてパラプラチン(PARAPLATIN)（登録商標）として市販されている。カルボプラチンは、主として進行性卵巣癌の第一選択および第二選択治療に指示される。骨髄抑制がカルボプラチンの用量制限毒性である。
【０２１８】
アルキル化剤は、非細胞周期特異的抗癌剤(non-phase anti-cancer specific agents)であり、かつ、強力な求電子試薬である。一般に、アルキル化剤は、アルキル化によって、リン酸基、アミノ基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、およびイミダゾール基などのＤＮＡ分子の求核部分を介してＤＮＡと共有結合を形成する。このようなアルキル化によって核酸機能が破壊され細胞死に至る。アルキル化剤の例としては、限定されるものではないが、シクロホスファミド、メルファラン、およびクロラムブシルなどのナイトロジェンマスタード；ブスルファンなどのスルホン酸アルキル；カルムスチンなどのニトロ尿素；ならびにダカルバジンなどのトリアゼンが挙げられる。
【０２１９】
シクロホスファミド、２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］テトラヒドロ−２Ｈ−１，３，２−オキシアザホスホリン２−オキシド一水和物は、注射液または錠剤としてシトキサン(CYTOXAN)（登録商標）として市販されている。シクロホスファミドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、および白血病の治療に指示される。脱毛症、悪心、嘔吐および白血球減少症がシクロホスファミドの最も一般的な用量制限副作用である。
【０２２０】
メルファラン、４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｌ−フェニルアラニンは、注射液または錠剤としてアルケラン(ALKERAN)（登録商標）として市販されている。メルファランは、多発性骨髄腫および切除不能な卵巣上皮癌の待期療法に指示される。骨髄抑制がメルファランの最も一般的な用量制限副作用である。
【０２２１】
クロラムブシル、４−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］ベンゼンブタン酸は、ロイケラン(LEUKERAN)（登録商標）錠剤として市販されている。クロラムブシルは、慢性リンパ性白血病、ならびにリンパ肉腫、巨大濾胞性リンパ腫、およびホジキン病などの悪性リンパ腫の待期療法に指示される。骨髄抑制がクロラムブシルの最も一般的な用量制限副作用である。
【０２２２】
ブスルファン、ジメタンスルホン酸１，４−ブタンジオールは、マイレラン(MYLERAN)（登録商標）錠剤として市販されている。ブスルファンは、慢性骨髄性白血病の待期療法に指示される。骨髄抑制がブスルファンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０２２３】
カルムスチン、１，３−［ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソ尿素は、ＢｉＣＮＵ（登録商標）として凍結乾燥物質の単一バイアルとして市販されている。カルムスチンは、脳腫瘍、多発性骨髄腫、ホジキン病、および非ホジキンリンパ腫用に、単剤として、または他の薬剤と組み合わせて、待期療法に指示される。遅延型骨髄抑制がカルムスチンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０２２４】
ダカルバジン、５−（３，３−ジメチル−１−トリアゼノ）−イミダゾール−４−カルボキサミドは、材料の単一バイアルとしてＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）として市販されている。ダカルバジンは、転移性悪性黒色腫の治療、および他の薬剤と組み合わせてホジキン病の第二選択治療に指示される。悪心、嘔吐、および食欲不振症がダカルバジンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０２２５】
抗生物質系抗新生物薬は、非細胞周期特異的薬剤であり、ＤＮＡと結合するかまたはＤＮＡにインターカレートする。一般に、このような作用によって安定なＤＮＡ複合体かまたは鎖の切断が生じ、それにより核酸の通常機能が乱れ、細胞死に至る。抗生物質系抗新生物薬の例としては、限定されるものではないが、ダクチノマイシンなどのアクチノマイシン；ダウノルビシンおよびドキソルビシンなどのアントロサイクリン；ならびにブレオマイシンが挙げられる。
【０２２６】
ダクチノマイシンは、アクチノマイシンＤとしても知られ、注射液の形態でコスメゲン(COSMEGEN)（登録商標）として市販されている。ダクチノマイシンは、ウィルムス腫瘍および横紋筋肉腫の治療に指示される。悪心、嘔吐、および食欲不振症がダクチノマイシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０２２７】
ダウノルビシン、（８Ｓ−シス−）−８−アセチル−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リクソ−ヘキソピラノシル）オキシ］−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、リポソーム注射形態としてダウノキソーム(DAUNOXOME)（登録商標）として、または注射液としてセルビジン(CERUBIDINE)（登録商標）として市販されている。ダウノルビシンは、急性非リンパ球性白血病および進行性ＨＩＶ関連カポジ肉腫の治療における寛解導入に指示される。骨髄抑制がダウノルビシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０２２８】
ドキソルビシン、（８Ｓ，１０Ｓ）−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−α−Ｌ−リクソ−ヘキソピラノシル）オキシ］−８−グリコロイル，７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２ナフタセンジオン塩酸塩は、注射可能な形態としてルベックス(RUBEX)（登録商標）またはアドリアマイシンＲＤＦ(ADRIAMYCIN RDF)（登録商標）として市販されている。ドキソルビシンは、主として急性リンパ芽球性白血病および急性骨髄芽球性白血病の治療に指示されるが、いくつかの固形腫瘍およびリンパ腫の治療における有用成分でもある。骨髄抑制がドキソルビシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０２２９】
ブレオマイシン、ストレプトミセス・ヴェルチシルス(Streptomyces verticillus)の株から単離された細胞傷害性グリコペプチド系抗生物薬の混合物は、ベレノキサン(BLENOXANE)（登録商標）として市販されている。ブレオマイシンは、単剤として、または他の薬剤と組み合わせて、扁平上皮癌、リンパ腫、および精巣癌の待期療法に指示される。肺および皮膚毒性がブレオマイシンの最も一般的な用量制限副作用である。
【０２３０】
トポイソメラーゼＩＩ阻害剤としては、限定されるものではないが、エピポドフィロトキシンが挙げられる。
【０２３１】
エピポドフィロトキシンは、マンドレイク植物由来の細胞周期特異的抗新生物薬である。エピポドフィロトキシンは、一般に、トポイソメラーゼＩＩとＤＮＡとの三元複合体を形成してＤＮＡ鎖の切断を引き起こすことによって、細胞周期のＳ期およびＧ２期において細胞に影響を及ぼす。この鎖切断が蓄積し、細胞死をたどる。エピポドフィロトキシンの例としては、限定されるものではないが、エトポシドおよびテニポシドが挙げられる。エピポドフィロトキシンの例としては、限定されるものではないが、エトポシドおよびテニポシドが挙げられる。
【０２３２】
エトポシド、４’−デメチル−エピポドフィロトキシン９［４，６−０−（Ｒ）−エチリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、注射液またはカプセル剤としてベプシド(VePESID)（登録商標）として市販されており、一般にＶＰ−１６として知られている。エトポシドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、精巣癌および非小細胞肺癌の治療に指示される。白血球減少症の罹患率は血小板減少症よりも重篤である傾向がある。
【０２３３】
テニポシド、４’−デメチル−エピポドフィロトキシン９［４，６−０−（Ｒ）−テニリデン−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、注射液としてブモン(VUMON)（登録商標）として市販されており、一般にＶＭ−２６として知られている。テニポシドは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、小児における急性白血病の治療に指示される。骨髄抑制がテニポシドの最も一般的な用量制限副作用である。テニポシドは、白血球減少症および血小板減少症の両方を含み得る。
【０２３４】
代謝拮抗性抗新生物薬は、ＤＮＡ合成を阻害すること、またはプリンもしくはピリミジン塩基の合成を阻害し、それによりＤＮＡ合成を制限することによって細胞周期のＳ期（ＤＮＡ合成）に作用する、細胞周期特異的抗新生物薬である。その結果、Ｓ期は進行せず、細胞死をたどる。代謝拮抗性抗新生物薬の例としては、限定されるものではないが、フルオロウラシル、メトトレキサート、シタラビン、メカプトプリン(mecaptopurine)、チオグアニン、およびゲムシタビンが挙げられる。
【０２３５】
５−フルオロウラシル、５−フルオロ−２，４−（１Ｈ，３Ｈ）ピリミジンジオンは、フルオロウラシルとして市販されている。５−フルオロウラシルを投与すると、チミジル酸合成が阻害され、またＲＮＡおよびＤＮＡの両方に組み込まれる。その結果は一般に細胞死である。５−フルオロウラシルは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、乳癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、および膵癌の治療に指示される。骨髄抑制および粘膜炎が５−フルオロウラシルの用量制限副作用である。他のフルオロピリミジン類似体としては、５−フルオロデオキシウリジン（フロクスウリジン）および５−フルオロデオキシウリジン一リン酸が挙げられる。
【０２３６】
シタラビン、４−アミノ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−２（１Ｈ）−ピリミジノンは、シトサール−Ｕ(CYTOSAR-U)（登録商標）として市販されており、一般にＡｒａ−Ｃとして知られている。シタラビンは、成長中のＤＮＡ鎖へのシタラビンの末端組み込みによってＤＮＡ鎖の伸長を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示すと考えられている。シタラビンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に指示される。他のシチジン類似体としては、５−アザシチジンおよび２’，２’−ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）が挙げられる。シタラビンには、白血球減少症、血小板減少症、および粘膜炎が含まれる。 
メルカプトプリン、１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオン一水和物は、プリントール(PURINETHOL)（登録商標）として市販されている。メルカプトプリンは、現時点でまだ特定されていないメカニズムによってＤＮＡ合成を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示す。メルカプトプリンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に指示される。骨髄抑制および消化管粘膜炎が高用量でのメルカプトプリンの予想される副作用である。有用なメルカプトプリン類似体はアザチオプリンである。
【０２３７】
チオグアニン、２−アミノ−１，７−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−チオンは、タブロイド(TABLOID)（登録商標）として市販されている。チオグアニンは、現時点でまだ特定されていないメカニズムによってＤＮＡ合成を阻害することにより、Ｓ期で細胞期特異性を示す。チオグアニンは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、急性白血病の治療に指示される。白血球減少症、血小板減少症、および貧血を含む骨髄抑制がチオグアニン投与の最も一般的な用量制限副作用である。しかしながら、消化管副作用も起こり、用量制限となり得る。他のプリン類似体としては、ペントスタチン、エリスロヒドロキシノニルアデニン、リン酸フルダラビン、およびクラドリビンが挙げられる。
【０２３８】
ゲムシタビン、２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロシチジン一塩酸塩（β−異性体）は、ジェムザール(GEMZAR)（登録商標）として市販されている。ゲムシタビンは、Ｓ期にて、またＧ１／Ｓ境界を通る細胞の進行を遮断することによって、細胞期特異性を示す。ゲムシタビンは、シスプラチンと組み合わせて局所進行性非小細胞肺癌の治療に指示され、また単独で局所進行性膵癌の治療に指示される。白血球減少症、血小板減少症、および貧血を含む骨髄抑制がゲムシタビン投与の最も一般的な用量制限副作用である。
【０２３９】
メトトレキサート、Ｎ−［４［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸は、メトトレキサートナトリウムとして市販されている。メトトレキサートは、プリンヌクレオチドおよびチミジル酸の合成に必要とされるジヒドロ葉酸レダクターゼの阻害を介して、ＤＮＡの合成、修復、および／または複製を阻害することによって、特にＳ期に細胞周期作用を示す。メトトレキサートは、単剤として、または他の化学療法薬と組み合わせて、絨毛癌、髄膜白血病、非ホジキンリンパ腫、ならびに乳癌、頭部癌、頸部癌、卵巣癌、および膀胱癌の治療に指示される。骨髄抑制（白血球減少症、血小板減少症、および貧血）および粘膜炎がメトトレキサート投与の予想される副作用である。
【０２４０】
カンプトテシンおよびカンプトテシン誘導体を含むカンプトテシン類は、トポイソメラーゼＩ阻害剤として入手可能または開発中である。カンプトテシン細胞傷害活性は、そのトポイソメラーゼＩ阻害活性に関連すると考えられている。カンプトテシンの例としては、限定されるものではないが、イリノテカン、トポテカン、および下記の７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０−カンプトテシンの種々の光学形態が挙げられる。
【０２４１】
イリノテカンＨＣｌ、（４Ｓ）−４，１１−ジエチル−４−ヒドロキシ−９−［（４−ピペリジノピペリジノ）カルボニルオキシ］−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン塩酸塩は、注射液カンプトサール(CAMPTOSAR)（登録商標）として市販されている。
【０２４２】
イリノテカンは、その活性代謝物ＳＮ−３８とともにトポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体と結合する、カンプトテシンの誘導体である。細胞傷害性は、トポイソメラーゼＩ：ＤＮＡ：イリンテカンまたはＳＮ−３８の三元複合体と複製酵素との相互作用により引き起こされる回復不能な二本鎖切断の結果として生じると考えられている。イリノテカンは、結腸または直腸の転移性癌の治療に指示される。イリノテカンＨＣｌの用量制限副作用は、好中球減少症を含む骨髄抑制、および下痢を含むＧＩ効果である。
【０２４３】
トポテカンＨＣｌ、（Ｓ）−１０−［（ジメチルアミノ）メチル］−４−エチル−４，９−ジヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３’，４’，６，７］インドリジノ［１，２−ｂ］キノリン−３，１４−（４Ｈ，１２Ｈ）−ジオン一塩酸塩は、注射液ハイカムチン(HYCAMTIN)（登録商標）として市販されている。トポテカンは、トポイソメラーゼＩ−ＤＮＡ複合体と結合して、ＤＮＡ分子のねじれ歪みに応答してトポイソメラーゼＩにより引き起こされる一本鎖切断の再連結を妨げるカンプトテシンの誘導体である。トポテカンは、転移性の卵巣癌および小細胞肺癌の第二選択治療に指示される。トポテカンＨＣｌの用量制限副作用は骨髄抑制、主として好中球減少症である。
【０２４４】
また、ラセミ混合物（Ｒ，Ｓ）形態ならびにＲおよびＳ鏡像異性体を含む、現在開発中の下式Ａのカンプトテシン誘導体も注目され、
【化１】
2019505476.tif 000002
【０２４５】
化学名７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｒ，Ｓ）−カンプトテシン（ラセミ混合物）または７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｒ）−カンプトテシン（Ｒ鏡像異性体）または７−（４−メチルピペラジノ−メチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｓ）−カンプトテシン（Ｓ鏡像異性体）として知られる。このような化合物ならびに関連化合物は、製造方法を含め、米国特許第６，０６３，９２３号；第５，３４２，９４７号；第５，５５９，２３５号；第５，４９１，２３７号および１９９７年１１月２４日出願の係属中米国特許出願第０８／９７７，２１７号に記載されている。
【０２４６】
ホルモンおよびホルモン類似体は、ホルモンと癌の増殖および／または増殖の欠如との間に関係がある癌を治療するために有用な化合物である。癌治療に有用なホルモンおよびホルモン類似体の例としては、限定されるものではないが、小児の悪性リンパ腫および急性白血病の治療において有用なプレドニゾンおよびプレドニゾロンなどの副腎皮質ステロイド；副腎皮質癌およびエストロゲン受容体を含むホルモン依存性乳癌の治療において有用な、アミノグルテチミドおよびその他のアロマターゼ阻害剤、例えば、アナストロゾール、レトラゾール、ボラゾール、およびエキセメスタン；ホルモン依存性乳癌および子宮内膜癌の治療において有用な酢酸メゲストロールなどのプロゲクチン；前立腺癌および良性前立腺肥大の治療において有用なエストロゲン、アンドロゲン、および抗アンドロゲン作用薬、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、酢酸シプロテロンおよび５α−レダクターゼ、例えば、フィナステリドおよびデュタステライド；ホルモン依存性乳癌およびその他の感受性癌の治療において有用なタモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェンなどの抗エストロゲン作用薬、ならびに米国特許第５，６８１，８３５号、同第５，８７７，２１９号、および同第６，２０７，７１６号に記載されているものなどの選択的エストロゲン受容体調節薬（ＳＥＲＭＳ）；ならびに前立腺癌の治療のために黄体形成ホルモン（ＬＨ）および／または卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の放出を刺激するゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）およびその類似体、例えば、ＬＨＲＨアゴニストおよびアンタゴニスト、例えば、酢酸ゴセレリンおよびルプロリドが挙げられる。
【０２４７】
レトロゾール（商標フェマーラ）は、術後のホルモン応答性乳癌の治療のための経口非ステロイド系アロマターゼ阻害剤である。エストロゲンは、アロマターゼ酵素の活性を介したアンドロゲンの変換により産生される。次に、エストロゲンはエストロゲン受容体と結合し、細胞を分裂させる。レトロゾールは、そのシトクロムＰ４５０単位のヘムに競合的可逆的に結合することによりアロマターゼのエストロゲン産生を妨げる。この作用は特殊であり、レトロゾールは鉱質またはコルチコステロイドの産生を低下させない。
【０２４８】
シグナル伝達経路阻害剤は、細胞内変化を引き起こす化学プロセスを遮断または阻害する阻害剤である。本明細書で使用する場合、この変化は細胞増殖または分化である。本発明において有用なシグナル伝達阻害剤としては、限定されるものではないが、受容体チロシンキナーゼ、非受容体型チロシンキナーゼ、ＳＨ２／ＳＨ３ドメイン遮断剤、セリン／トレオニンキナーゼ、ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ、ミオイノシトールシグナル伝達およびＲａｓ癌遺伝子の阻害剤が含まれる。
【０２４９】
いくつかのタンパク質チロシンキナーゼは、細胞増殖の調節に関与する種々のタンパク質の特定のチロシル残基のリン酸化を触媒する。このようなタンパク質チロシンキナーゼは、大きく受容体または非受容体型キナーゼとして分類することができる。
【０２５０】
受容体チロシンキナーゼは、細胞外リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、およびチロシンキナーゼドメインを有する膜貫通タンパク質である。受容体チロシンキナーゼは細胞増殖の調節に関与し、一般に、成長因子受容体と呼ばれる。これらのキナーゼの多くの不適当なまたは制御を欠いた活性化、すなわち、例えば、過剰発現または突然変異による異常なキナーゼ成長因子受容体活性は、制御を欠いた細胞増殖をもたらすことが示されている。よって、このようなキナーゼの異常な活性は悪性組織増殖に関連付けられている。結果として、このようなキナーゼの阻害剤は癌治療法を提供することができる。成長因子受容体には、例えば、上皮細胞成長因子受容体（ＥＧＦｒ）、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦｒ）、ｅｒｂＢ２、ｅｒｂＢ４、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦｒ）、免疫グロブリン様および上皮細胞成長因子同一性ドメインを有するチロシンキナーゼ(tyrosine kinase with immunoglobulin-like and epidermal growth factor homology domains)（ＴＩＥ−２）、インスリン成長因子−Ｉ（ＩＧＦＩ）受容体、マクロファージコロニー刺激因子（ｃｆｍｓ）、ＢＴＫ、ｃｋｉｔ、ｃｍｅｔ、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）受容体、Ｔｒｋ受容体（ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、およびＴｒｋＣ）、エフリン（ｅｐｈ）受容体、およびＲＥＴ癌原遺伝子が挙げられる。増殖受容体のいくつかの阻害剤が開発下にあり、リガンドアンタゴニスト、抗体、チロシンキナーゼ阻害剤およびアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。成長因子受容体および成長因子受容体機能を阻害する薬剤は、例えば、Kath, John C., Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(6):803-818; Shawver et al DDT Vol 2, No. 2 February 1997；およびLofts, F. J. et al, “Growth factor receptors as targets”, New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, Workman, Paul and Kerr, David編, CRC press 1994, Londonに記載
されている。
【０２５１】
成長因子受容体キナーゼでないチロシンキナーゼは、非受容体型チロシンキナーゼである。抗癌薬の標的または潜在的標的となる、本発明において有用な非受容体型チロシンキナーゼには、ｃＳｒｃ、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｙｅｓ、Ｊａｋ、ｃＡｂｌ、ＦＡＫ（接着斑キナーゼ）、ブルトン型チロシンキナーゼ、およびＢｃｒ−Ａｂｌが含まれる。このような非受容体型キナーゼおよび非受容体型チロシンキナーゼ機能を阻害する薬剤は、Sinh, S. and Corey, S.J., (1999) Journal of Hematotherapy and Stem Cell Research 8 (5): 465-80;およびBolen, J.B., Brugge, J.S., (1997) Annual review of Immunology. 15: 371-404に記載されている。
【０２５２】
ＳＨ２／ＳＨ３ドメイン遮断剤は、ＰＩ３−Ｋ  ｐ８５サブユニット、Ｓｒｃファミリーキナーゼ、アダプター分子（Ｓｈｃ、Ｃｒｋ、Ｎｃｋ、Ｇｒｂ２）およびＲａｓ−ＧＡＰをはじめとする、様々な酵素またはアダプタータンパク質においてＳＨ２またはＳＨ３ドメイン結合を混乱させる薬剤である。抗癌薬の標的としてのＳＨ２／ＳＨ３ドメインは、Smithgall, T.E. (1995), Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 34(3) 125-32に記載されている。
【０２５３】
セリン／トレオニンキナーゼの阻害剤、例えば、ＭＡＰキナーゼカスケード遮断剤、これには、Ｒａｆキナーゼ（ｒａｆｋ）、マイトジェンまたは細胞外調節キナーゼ(Mitogen or Extracellular Regulated Kinase)（ＭＥＫ）、および細胞外調節キナーゼ（ＥＲＫ）の遮断剤；およびＰＫＣ（α、β、γ、ε、μ、λ、ι、ζ）の遮断剤を含むタンパク質キナーゼＣファミリーメンバー遮断剤が含まれる。ＩｋＢキナーゼファミリー（ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ）、ＰＫＢファミリーキナーゼ、ＡＫＴキナーゼファミリーメンバー、およびＴＧＦβ受容体キナーゼ。このようなセリン／トレオニンキナーゼおよびそれらの阻害剤は、Yamamoto, T., Taya, S., Kaibuchi, K., (1999), Journal of Biochemistry. 126 (5) 799-803; Brodt, P, Samani, A., and Navab, R. (2000), Biochemical Pharmacology, 60. 1101-1107; Massague, J., Weis-Garcia, F. (1996) Cancer Surveys. 27:41-64; Philip, P.A., and Harris, A.L. (1995), Cancer Treatment and Research. 78: 3-27, Lackey, K. et al Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, (10), 2000, 223-226;米国特許第6,268,391号;およびMartinez-Iacaci, L., et al, Int. J. Cancer (2000), 88(1), 44-52に記載されている。
【０２５４】
ＰＩ３−キナーゼ、ＡＴＭ、ＤＮＡ−ＰＫ、およびＫの遮断剤を含むホスファチジルイノシトール(Phosphotidyl inositol)−３キナーゼファミリーメンバーの阻害剤もまた本発明において有用である。このようなキナーゼは、Abraham, R.T. (1996), Current Opinion in Immunology. 8 (3) 412-8; Canman, C.E., Lim, D.S. (1998), Oncogene 17 (25) 3301-3308; Jackson, S.P. (1997), International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 29 (7):935-8; and Zhong, H. et al, Cancer res, (2000) 60(6), 1541-1545に記載されている。
【０２５５】
また、ホスホリパーゼＣ遮断剤およびミオイノシトール類似体などのミオイノシトールシグナル伝達阻害剤も本発明において有用である。このようなシグナル阻害剤は、Powis, G., and Kozikowski A., (1994) New Molecular Targets for Cancer Chemotherapy, Paul Workman and David Kerr編, CRC press 1994, Londonに記載されている。
【０２５６】
シグナル伝達経路阻害剤の別の群は、Ｒａｓ癌遺伝子の阻害剤である。このような阻害剤には、ファルネシルトランスフェラーゼ、ゲラニル−ゲラニルトランスフェラーゼ、およびＣＡＡＸプロテアーゼの阻害剤、ならびにアンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイムおよび免疫療法が含まれる。このような阻害剤は、野生型突然変異ｒａｓを含有する細胞においてｒａｓ活性化を遮断し、それにより抗増殖薬として作用することが示されている。Ｒａｓ癌遺伝子阻害は、Scharovsky, O.G., Rozados, V.R., Gervasoni, S.I. Matar, P. (2000), Journal of Biomedical Science. 7(4) 292-8; Ashby, M.N. (1998), Current Opinion in Lipidology. 9 (2) 9-102; and Bennett, C.F. and Cowsert, L.M. BioChim. Biophys. Acta, (1999) 1489(1):19-30で考察されている。
【０２５７】
前述のように、受容体キナーゼリガンド結合に対する抗体アンタゴニストもまたシグナル伝達阻害剤として働き得る。この群のシグナル伝達経路阻害剤には、受容体チロシンキナーゼの細胞外リガンド結合ドメインに対するヒト化抗体の使用が含まれる。例えば、Ｉｍｃｌｏｎｅ  Ｃ２２５  ＥＧＦＲ特異的抗体（Green, M.C. et al, Monoclonal Antibody Therapy for Solid Tumors, Cancer Treat. Rev., (2000), 26(4), 269-286参照）ハーセプチン（登録商標）ｅｒｂＢ２抗体（Tyrosine Kinase Signalling in Breast cancer:erbB Family Receptor Tyrosine Kinases, Breast cancer Res., 2000, 2(3), 176-183参照）；および２ＣＢ  ＶＥＧＦＲ２特異的抗体（Brekken, R.A. et al, Selective Inhibition of VEGFR2 Activity by a monoclonal Anti-VEGF antibody blocks tumor growth in mice, Cancer Res. (2000) 60, 5117-5124参照）。
【０２５８】
非受容体型キナーゼ血管新生阻害剤もまた、本発明において使用が見出せる。血管新生関連ＶＥＧＦＲおよびＴＩＥ２の阻害剤は、シグナル伝達阻害剤に関して上述されている（両受容体とも受容体型チロシンキナーゼである）。ｅｒｂＢ２およびＥＧＦＲの阻害剤は血管新生、主としてＶＥＧＦ発現を阻害することが示されているので、血管新生は一般に、ｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲシグナル伝達に関連する。よって、ｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲ阻害剤と血管新生阻害剤の組合せは意味を成す。従って、非受容体型チロシンキナーゼ阻害剤は、本発明のＥＧＦＲ／ｅｒｂＢ２阻害剤と併用可能である。例えば、ＶＥＧＦＲ（受容体型チロシンキナーゼ）を認識しないがそのリガンドと結合する抗ＶＥＧＦ抗体；血管新生を阻害するインテグリン（αｖβ３）の小分子阻害剤；エンドスタチンおよびアンギオスタチン（非ＲＴＫ）も、開示されているｅｒｂファミリー阻害剤と組み合わせると有用であることが分かり得る（Bruns CJ et al (2000), Cancer Res., 60: 2926-2935; Schreiber AB, Winkler ME, and Derynck R. (1986), Science, 232: 1250-1253; Yen L et al. (2000), Oncogene 19: 3460-3469参照）。
【０２５９】
ボトリエント（登録商標）として市販されているパゾパニブは、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）である。パゾパニブは、化学名５−［［４−［（２，３−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−６−イル）メチルアミノ］−２−ピリミジニル］アミノ］−２−メチルベンゼンスルホンアミド一塩酸塩の、塩酸塩として提供されている。パゾパニブは、進行性腎細胞癌患者の治療に承認されている。
【０２６０】
アバスチン（登録商標）として市販されているベバシスマブは、ＶＥＧＦ−Ａを遮断するヒト化モノクローナル抗体である。アバスチン（登録商標）は、結腸直腸癌、肺癌、乳癌、腎癌、および膠芽腫を含む様々な癌の治療に承認されている。
【０２６１】
リツキシマブは、キメラモノクローナル抗体であり、リツキサン（登録商標）およびマブセラ（登録商標）として市販されている。リツキシマブは、Ｂ細胞上のＣＤ２０と結合し、細胞アポトーシスを引き起こす。リツキシマブは静脈内に投与され、関節リウマチおよびＢ細胞非ホジキンリンパ腫の治療に承認されている。
【０２６２】
オファツムマブは、完全ヒトモノクローナル抗体であり、アルゼラ（登録商標）として市販されている。オファツムマブは、Ｂ細胞上のＣＤ２０と結合し、フルダラビン（フルダラ）およびアレムツズマブ（キャンパス）治療に不応の成人において慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ；白血球の癌の一種）を治療するために使用されている。
【０２６３】
トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））は、ＨＥＲ２受容体と結合するヒト化モノクローナル抗体である。その元の適応はＨＥＲ２陽性乳癌である。トラスツズマブエメタシン（商標カドサイラ）は、細胞傷害性薬剤（ＤＭ１と連結されたモノクローナル抗体トラスツズマブ（ハーセプチン）からなる抗体−薬物複合体である。トラスツズマブは単独で、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体と結合することにより癌細胞の増殖を停止させ、一方、ＤＭ１は細胞に入ってチューブリンと結合することによりそれらを破壊する。このモノクローナル抗体はＨＥＲ２を標的とし、ＨＥＲ２は癌細胞においてのみ過剰発現されるので、この複合体は毒素を腫瘍細胞に特異的に送達する。［８］この複合体はＴ−ＤＭ１と略される。
【０２６４】
セツキシマブ（エルビタックス（登録商標））は、上皮細胞成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を阻害するキメラマウスヒト抗体である。
【０２６５】
ｍＴＯＲ阻害剤としては、限定されるものではないが、ラパマイシン（ＦＫ５０６）およびラパログ、ＲＡＤ００１またはエベロリムス（アフィニトール）、ＣＣＩ−７７９またはテムシロリムス、ＡＰ２３５７３、ＡＺＤ８０５５、ＷＹＥ−３５４、ＷＹＥ−６００、ＷＹＥ−６８７およびＰｐ１２１が挙げられる。
【０２６６】
エベロリムスは、ノバルティス社によりアフィニトール（登録商標）として販売され、シロリムスの４０−Ｏ−（２−ヒドロキシエチル）誘導体であり、シロリムスと同様にｍＴＯＲ（ラパマイシンの哺乳動物標的）阻害剤として働く。エベロリムスは現在、臓器移植拒絶の予防および腎細胞癌の治療のために免疫抑制薬として使用されている。また、複数の癌に使用するためにエベロリムスおよび他のｍＴＯＲ阻害剤に対して多くの研究が行われてきた。エベロリムスは以下の化学構造（式ＩＩ）：
【化２】
2019505476.tif 000003
【０２６７】
を有し、化学名はジヒドロキシ−１２−［（２Ｒ）−１−［（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ）−４−（２−ヒドロキシエトキシ）−３−メトキシシクロヘキシル］プロパン−２−イル］−１９，３０−ジメトキシ−１５，１７，２１，２３，２９，３５−ヘキサメチル−１１，３６−ジオキサ−４−アザトリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ−１６，２４，２６，２８−テトラエン−２，３，１０，１４，２０−ペントンである。
【０２６８】
ベキサロテンは、ターグレチン（登録商標）として販売され、レチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）を選択的に活性化するレチノイドのサブクラスのメンバーである。これらのレチノイド受容体は、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）とは異なる生物活性を有する。化学名は４−［１−（５，６，７，８−テトラヒドロ−３，５，５，８，８−ペンタメチル−２−ナフタレニル）エテニル］安息香酸である。ベキサロテンは、疾患が少なくとも１種類の他の投薬で上手く治療できなかった人で、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ、皮膚癌の一種）を治療するために使用される。
【０２６９】
ネクサバール（登録商標）として市販されているソラフェニブは、マルチキナーゼ阻害剤と呼ばれる薬剤の一種である。その化学名は、４−［４−［［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］カルバモイルアミノ］フェノキシ］−Ｎ−メチル−ピリジン−２−カルボキサミドである。ソラフェニブは、進行性腎細胞癌（腎臓で始まる癌の一種）を治療するために使用される。ソラフェニブはまた、切除不能肝細胞癌（手術で治療できない肝臓癌一種）を治療するためにも使用される。
【０２７０】
免疫療法計画に使用される薬剤もまた式（Ｉ）の化合物を組み合わせて有用であり得る。ｅｒｂＢ２またはＥＧＦＲに対する免疫応答を生成するためには複数の免疫戦略がある。これらの戦略は一般に腫瘍ワクチン接種の領域である。免疫アプローチの有効性は、小分子阻害剤を用いたｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲシグナル伝達経路の複合阻害を介して大幅に増強され得る。ｅｒｂＢ２／ＥＧＦＲに対する免疫／腫瘍ワクチンアプローチの考察は、Reilly RT et al. (2000),  Cancer Res. 60:  3569-3576;およびChen Y, Hu D, Eling DJ, Robbins J, and Kipps TJ. (1998),  Cancer Res. 58: 1965-1971に見出すことができる。
【０２７１】
ｅｒｂＢ阻害剤の例としては、ラパチニブ、エルロチニブ、およびゲフィチニブが挙げられる。ラパチニブ、Ｎ−（３−クロロ−４−｛［（３−フルオロフェニル）メチル］オキシ｝フェニル）−６−［５−（｛［２−（メチルスルホニル）エチル］アミノ｝メチル）−２−フラニル］−４−キナゾリンアミン（示されているように式ＩＩＩで表される）は、ＨＥＲ２−陽性転移性乳癌の治療にカペシタビンと組み合わせて承認されている、強力な経口、小分子の、ｅｒｂＢ−１およびｅｒｂＢ−２（ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２）チロシンキナーゼの二重阻害剤である。
【化３】
2019505476.tif 000004
【０２７２】
式（ＩＩＩ）の化合物の遊離塩基、ＨＣｌ塩、および二トシル酸は、１９９９年７月１５日公開のＷＯ９９／３５１４６；および２００２年１月１０日公開のＷＯ０２／０２５５２に開示されている手順に従って製造することができる。
【０２７３】
商標タルセバとして市販されているエルロチニブ、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス｛［２−（メチルオキシ）エチル］オキシ｝−４−キナゾリンアミンは示されているように式ＩＶで表される。
【化４】
2019505476.tif 000005
【０２７４】
エルロチニブの遊離塩基およびＨＣｌ塩は、例えば米国特許第５，７４７，４９８号の実施例２０に従って製造することができる。
【０２７５】
ゲフィチニブ、４−キナゾリンアミン，Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−［３−４−モルホリン）プロポキシ］は、示されるような式ＩＶで表される。
【化５】
2019505476.tif 000006
【０２７６】
商標イレッサ登録商標）（Ａｓｔｒａ−Ｚｅｎｅｎｃａ）として市販されているゲフィチニブは、白金に基づくおよびドセタキセルの両化学療法が上手くいかなかった後に局所進行性または転移性非小細胞肺癌患者の治療に単剤療法として指示されるｅｒｂＢ−１阻害剤である。ゲフィチニブの遊離塩基、ＨＣｌ塩、および二ＨＣｌ塩は、１９９６年４月２３日に出願され、１９９６年１０月３１日にＷＯ９６／３３９８０として公開された国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ９６／００９６の手順に従って製造することができる。
【０２７７】
トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））は、ＨＥＲ２受容体と結合するヒト化モノクローナル抗体である。その元の適応は、ＨＥＲ２陽性乳癌である。
【０２７８】
セツキシマブ（エルビタックス（登録商標））は、上皮細胞成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を阻害するキメラマウスヒト抗体である。
【０２７９】
ペルツズマブ（２Ｃ４とも呼ばれる、商標オムニターグ）は、モノクローナル抗体である。「ＨＥＲ二量体化阻害剤」と呼ばれる薬剤系列のそのクラスの筆頭。ＨＥＲ２と結合することにより、それはＨＥＲ２と他のＨＥＲ受容体との二量体化を阻害し、腫瘍増殖の緩徐化をもたらすのではないかと推測されている。ペルツズマブは２００１年１月４日公開のＷＯ０１／００２４５に記載されている。
【０２８０】
リツキシマブは、キメラモノクローナル抗体であり、リツキサン（登録商標）およびマブセラ（登録商標）として市販されている。リツキシマブは、Ｂ細胞上のＣＤ２０と結合し、細胞アポトーシスを引き起こす。リツキシマブは静脈内に投与され、関節リウマチおよびＢ細胞非ホジキンリンパ腫の治療に承認されている。
【０２８１】
オファツムマブは、完全ヒトモノクローナル抗体であり、アルゼラ（登録商標）として市販されている。オファツムマブは、Ｂ細胞上のＣＤ２０と結合し、フルダラビン（フルダラ）およびアレムツズマブ（キャンパス）治療に不応の成人において慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ；白血球の癌の一種）を治療するために使用されている。
【０２８２】
アポトーシス誘導計画に使用される薬剤（例えば、ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチド）もまた、本発明の組合せにおいて使用可能である。Ｂｃｌ−２ファミリータンパク質のメンバーはアポトーシスを遮断する。従って、ｂｃｌ−２のアップレギュレーションは化学耐性に関連付けられている。研究によれば、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）はｂｃｌ−２ファミリーの抗アポトーシスメンバー（すなわち、ｍｃｌ−１）を刺激することが示されている。従って、腫瘍においてｂｃｌ−２の発現をダウンレギュレートするように設計された戦略は、実証された臨床利益を有し、現在、第ＩＩ／ＩＩＩ相治験下にある（すなわち、ＧｅｎｔａのＧ３１３９  ｂｃｌ−２アンチセンスオリゴヌクレオチド）。ｂｃｌ−２に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド戦略を使用するこのようなアポトーシス誘導戦略は、Water JS et al. (2000), J. Clin. Oncol. 18: 1812-1823;およびKitada S et al. (1994), Antisense Res. Dev. 4: 71-79に考察されている。
【０２８３】
細胞周期シグナル伝達阻害剤は、細胞周期の制御に関与する分子を阻害する。サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）と呼ばれるタンパク質キナーゼファミリーおよびそれらとサイクリンと呼ばれるタンパク質ファミリーとの相互作用が、真核細胞周期の進行を制御している。細胞周期の正常な進行には、種々のサイクリン／ＣＤＫ複合体の協調した活性化および不活化が不可欠である。細胞周期シグナル伝達のいくつかの阻害剤が開発下にある。例えば、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、およびＣＤＫ６をはじめとするサイクリン依存性キナーゼおよびそれらの阻害剤の例は、例えば、Rosania et al, Exp. Opin. Ther. Patents (2000) 10(2):215-230に記載されている。
【０２８４】
本明細書で使用する場合、「免疫調節薬」は、モノクローナル抗体を含め、免疫系に作用するいずれの物質も意味する。本発明のＰＤ−１およびＯＸ４０抗原結合タンパク質結合タンパク質は、免疫調節薬と見なすことができる。免疫調節薬は癌の治療のために抗新生物薬として使用できる。例えば、免疫調節薬としては、限定されるものではないが、イピリムマブ（ヤーボイ（登録商標））などの抗ＣＴＬＡ−４抗体、ならびに抗ＰＤ−１抗体（オプジーボ／ニボルマブおよびキートルーダ／ペンブロリズマブ）が含まれる。他の免疫調節薬としては、限定されるものではないが、ＯＸ−４０抗体、ＰＤ−Ｌ１抗体、ＬＡＧ３抗体、ＴＩＭ−３抗体、４１ＢＢ抗体およびＧＩＴＲ抗体が含まれる。
【０２８５】
ヤーボイ（登録商標）（イピリムマブ）は、Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂにより市販されている完全ヒトＣＴＬＡ−４抗体である。イピリムマブのタンパク質構造および使用方法は、米国特許第６，９８４，７２０号および第７，６０５，２３８号に記載されている。
【０２８６】
オプジーボ（登録商標）／ニボルマブは、Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂにより市販されている、免疫増強活性を有する、負の免疫調節ヒト細胞表面受容体ＰＤ−１（プログラム細胞死−１またはプログラム細胞死−１／ＰＣＤ−１）に対する完全ヒトモノクローナル抗体である。ニボルマブは、Ｉｇスーパーファミリー膜貫通タンパク質であるＰＤ−１と結合し、そのリガンドＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２によるＰＤ−１の活性化を遮断して、Ｔ細胞の活性化および腫瘍細胞または病原体に対する細胞媒介性免疫応答をもたらす。活性化ＰＤ−１は、Ｔ細胞の活性化、およびＰ１３ｋ／Ａｋｔ経路の活性化の抑制を介したエフェクター機能に負の調節を行う。ニボルマブの他の名称としては、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ−１１０６、およびＯＮＯ−４５３８が含まれる。ニボルマブのアミノ酸配列ならびに使用および製造方法は、米国特許第８，００８，４４９号に開示されている。
【０２８７】
キートルーダ（登録商標）／ペンブロリズマブは、肺癌の治療のためにＭｅｒｃｋにより市販されている抗ＰＤ−１抗体である。ペンブロリズマブのアミノ酸配列および使用方法は、米国特許第８，１６８，７５７号に開示されている。
【０２８８】
ＯＸ４０としても知られるＣＤ１３４は、ＣＤ２８とは異なり、休止中のナイーブＴ細胞上には構成的に発現されない受容体のＮＦＲスーパーファミリーのメンバーである。ＯＸ４０は、活性化の２４〜７２時間後に発現される二次的補助刺激分子であり；そのリガンドＯＸ４０Ｌもまた休止中の抗原提示細胞では発現されないが、それらの活性化後には発現される。ＯＸ４０の発現は、Ｔ細胞の完全な活性化に依存し、ＣＤ２８が無ければ、ＯＸ４０の発現は遅れ、４分の１のレベルとなる。ＯＸ−４０抗体、ＯＸ−４０融合タンパク質およびそれらの使用方法は、米国特許第７，５０４，１０１号；同第７，７５８，８５２号；同第７，８５８，７６５号；同第７，５５０，１４０号；同第７，９６０，５１５号；ＷＯ２０１２０２７３２８；ＷＯ２０１３０２８２３１に開示されている。
【０２８９】
ＰＤ−Ｌ１（ＣＤ２７４またはＢ７−Ｈ１とも呼ばれる）に対する抗体および使用方法は、米国特許第７，９４３，７４３号；同第８，３８３，７９６号；ＵＳ２０１３００３４５５９、ＷＯ２０１４０５５８９７、米国特許第８，１６８，１７９号；および同第７，５９５，０４８号に開示されている。ＰＤ−Ｌ１抗体は、癌治療のための免疫調節薬として開発中である。
【０２９０】
別の実施態様では、治療上有効な量の
ａ）本発明の組合せ；および
ｂ）少なくとも１種類の抗新生物薬
を必要とする哺乳動物に投与することを含んでなる、哺乳動物において癌を処置する方補が提供される。
【０２９１】
別の実施態様では、治療上有効な量の
ａ）本発明の組合せ；および
ｂ）少なくとも１種類の免疫調節薬
を必要とする哺乳動物に投与することを含んでなる、哺乳動物において癌を処置する方補が提供される。
【０２９２】
一つの実施態様では、治療上有効な量の本発明の組合せを投与することを含んでなる、必要とするヒトにおいて癌を処置する方法が提供され、前記組合せは、治療上有効な量の、ＢＣＭＡに結合する抗原結合タンパク質および治療上有効な量の、ＰＤ−１に結合する抗原結合タンパク質および治療上有効な量の、ＯＸ−４０に結合する抗原結合タンパク質を含んでなる。
【０２９３】
実施態様では、本発明の組合せは、癌処置の他の治療的方法と併用してもよい。特に、抗新生物療法では、他の化学療法薬、ホルモン薬、抗体薬ならびに上記のもの以外の外科的処置および／または放射線処置との併用療法が想定される。
【０２９４】
一つの実施態様では、さらなる抗癌療法は、外科的療法および／または放射線療法である。
【０２９５】
一つの実施態様では、さらなる抗癌療法は、少なくとも１種類の付加的抗新生物薬である。
【０２９６】
処置される感受性腫瘍に対して活性を有するいずれの抗新生物薬も本組合せで使用可能である。有用な典型的な抗新生物薬としては、限定されるものではないが、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドなどの微小管阻害剤；白金錯体；ナイトロジェンマスタード、オキシアザホスホリン、アルキルスルホネート、ニトロソ尿素、およびトリアゼンなどのアルキル化剤；アントラサイクリン、アクチノマイシンおよびブレオマイシンなどの抗生物薬；エピポドフィロトキシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤；プリンおよびピリミジン類似体ならびに葉酸拮抗化合物などの代謝拮抗物質；カンプトテシンなどのトポイソメラーゼＩ阻害剤；ホルモンおよびホルモン類似体；シグナル伝達経路阻害剤；非受容体型チロシン血管新生阻害剤；免疫治療薬；アポトーシス促進薬；および細胞周期シグナル伝達阻害剤が含まれる。
【０２９７】
一つの実施態様では、本発明の組合せは、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質と、ＰＤ−１またはＯＸ４０抗原結合タンパク質のいずれかと、微小管阻害剤、白金錯体、アルキル化剤、抗生物薬、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ホルモンおよびホルモン類似体、シグナル伝達経路阻害剤、非受容体型チロシンＭＥＫ血管新生阻害剤(non-receptor tyrosine MEKngiogenesis inhibitors)、免疫治療薬、アポトーシス促進薬、および細胞周期シグナル伝達阻害剤から選択される少なくとも１種類の抗新生物薬とを含んでなる。
【０２９８】
一つの実施態様では、本発明の組合せは、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質とＰＤ−１またはＯＸ４０抗原結合タンパク質と少なくとも１種類の抗新生物薬、すなわち、ジテルペノイドおよびビンカアルカロイドから選択される微小管阻害剤とを含んでなる。
【０２９９】
さらなる実施態様では、少なくとも１種類の抗新生物薬は、ジテルペノイドである。
【０３００】
さらなる実施態様では、少なくとも１種類の抗新生物薬は、ビンカアルカロイドである。
【０３０１】
一つの実施態様では、本発明の組合せは、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質とＰＤ−１またはＯＸ４０抗原結合タンパク質と少なくとも１種類の抗新生物薬、すなわち、白金錯体とを含んでなる。
【０３０２】
さらなる実施態様では、少なくとも１種類の抗新生物薬は、パクリタキセル、カルボプラチン、またはビノレルビンである。
【０３０３】
さらなる実施態様では、少なくとも１種類の抗新生物薬は、カルボプラチンである。
【０３０４】
さらなる実施態様では、少なくとも１種類の抗新生物薬は、ビノレルビンである。
【０３０５】
さらなる実施態様では、少なくとも１種類の抗新生物薬は、パクリタキセルである。
【０３０６】
一つの実施態様では、本発明の組合せは、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質とＰＤ−１またはＯＸ４０抗原結合タンパク質と少なくとも１種類の抗新生物薬、すなわち、シグナル伝達経路阻害剤とを含んでなる。
【０３０７】
さらなる実施態様では、シグナル伝達経路阻害剤は、成長因子受容体キナーゼＶＥＧＦＲ２、ＴＩＥ２、ＰＤＧＦＲ、ＢＴＫ、ｅｒｂＢ２、ＥＧＦｒ、ＩＧＦＲ−１、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣ、またはｃ−ｆｍｓの阻害剤である。
【０３０８】
さらなる実施態様では、シグナル伝達経路阻害剤は、セリン／トレオニンキナーゼｒａｆｋ、ａｋｔ、またはＰＫＣ−ζの阻害剤である。
【０３０９】
さらなる実施態様では、シグナル伝達経路阻害剤は、ｓｒｃファミリーのキナーゼから選択される非受容体型チロシンキナーゼの阻害剤である。
【０３１０】
さらなる実施態様では、シグナル伝達経路阻害剤は、ｃ−ｓｒｃの阻害剤である。
【０３１１】
さらなる実施態様では、シグナル伝達経路阻害剤は、ファルネシルトランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニルトランスフェラーゼの阻害剤から選択されるＲａｓ癌遺伝子の阻害剤である。
【０３１２】
さらなる実施態様では、シグナル伝達経路阻害剤は、ＰＩ３Ｋからなる群から選択されるセリン／トレオニンキナーゼの阻害剤である。
【０３１３】
さらなる実施態様では、シグナル伝達経路阻害剤は、二重ＥＧＦｒ／ｅｒｂＢ２阻害剤、例えば、Ｎ−｛３−クロロ−４−［（３−フルオロベンジル）オキシ］フェニル｝−６−［５−（｛［２−（メタンスルホニル）  エチル］アミノ｝メチル）−２−フリル］−４−キナゾリンアミン（以下の構造）である。
【化６】
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【０３１４】
定義
本明細書で使用する場合、用語「アゴニスト」は、補助シグナル伝達受容体と接触した際に、（１）その受容体を刺激または活性化すること、（２）その受容体の活性、機能もしくは存在を増強、増大もしくは促進、誘導もしくは延長すること、（３）その受容体を介して１以上のシグナル伝達事象を誘発すること、天然リガンドの１以上の機能を模倣すること、またはその受容体を介した既知の機能もしくはシグナル伝達において見られる１以上の部分的もしくは完全な立体配座変化を誘発することを含むこと、および／または（４）その受容体の発現を増強、増大、促進または誘導することのうち１以上を生じる、限定されるものではないが抗体を含む抗原結合タンパク質を意味する。アゴニスト活性は、限定されるものではないが、細胞シグナル伝達、細胞増殖、免疫細胞活性化マーカー、サイトカイン産生の測定などの当技術分野で公知の様々なアッセイによってｉｎ  ｖｉｔｒｏで測定することができる。アゴニスト活性はまた、限定されるものではないが、Ｔ細胞増殖またはサイトカイン産生の測定などのサロゲートエンドポイントを測定する様々なアッセイによってｉｎ  ｖｉｖｏで測定することもできる。
【０３１５】
本明細書で使用する場合、用語「アンタゴニスト」は、補助シグナル伝達受容体と接触した際に、（１）その受容体を減弱、遮断もしくは不活性化すること、および／またはその天然リガンドによる受容体の活性化を遮断すること、（２）その受容体の活性、機能もしくは存在を低下、低減もしくは短縮すること、ならびに／または（３）その受容体の発現を低下、低減、排除することのうち１以上を生じさせる、限定されるものではないが抗体を含む、抗原結合タンパク質を意味する。アンタゴニスト活性は、限定されるものではないが、細胞シグナル伝達、細胞増殖、免疫細胞活性化マーカー、サイトカイン産生の増加または減少の測定などの当技術分野で公知の様々なアッセイによってｉｎ  ｖｉｔｒｏで測定することができる。アンタゴニスト活性はまた、限定されるものではないが、Ｔ細胞増殖またはサイトカイン産生の測定などのサロゲートエンドポイントを測定する様々なアッセイによってｉｎ  ｖｉｖｏで測定することもできる。
【０３１６】
よって、本明細書で使用する場合、用語「本発明の組合せ」は、抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質、好適には、アンタゴニスト抗ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質と、ＰＤ−１抗原結合タンパク質、好適には、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗原結合タンパク質またはＯＸ４０抗原結合タンパク質、好適には、アゴニストＯＸ４０抗原結合タンパク質のいずれかを含んでなる組合せを意味し、そのそれぞれは本明細書で記載されるよう個別に投与されても、または同時に投与されてもよい。
【０３１７】
本明細書で使用する場合、用語「癌」、「新生物」、および「腫瘍」は、単数形または複数形で互換的に使用され、悪性形質転換を受けた、または異常なもしくは調節を欠いた増殖もしくは過剰増殖をもたらす細胞変化を受けた細胞を意味する。このような変化または悪性形質転換は通常、このような細胞を宿主生物にとって病的とし、よって、病的となったまたは病的となる可能性があり、本発明からの利益を必要とするまたは受け得る前癌または前癌細胞も含まれるものとする。原発性癌細胞（すなわち、悪性形質転換の部位近傍から得られる細胞）は、十分に確立された技術、特に、組織検査によって非癌細胞から容易に識別することができる。癌細胞の定義は、本明細書で使用する場合、原発性癌細胞だけでなく、癌細胞祖先に由来するいずれの細胞も含む。これには転移癌細胞、ならびに癌細胞に由来するｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養物および細胞株が含まれる。通常固形腫瘍として発現する癌のタイプに関して、「臨床的に検出可能な」腫瘍は、例えばＣＡＴスキャン、ＭＲイメージング、Ｘ線、超音波または触診などの手法による腫瘍塊に基づいて検出可能なもの、および／または患者から取得可能なサンプル中での１以上の癌特異的抗原の発現のために検出可能なものである。言い換えれば、これらの用語は本明細書において、臨床医が前癌、腫瘍、上皮内増殖、ならびに後期転移性増殖と呼ぶものを含め、いずれの病期の細胞、新生物、癌、および腫瘍も含む。腫瘍は、造血系腫瘍、例えば、液性腫瘍を意味する血液細胞の腫瘍などであってもよい。このような腫瘍に基づく臨床状態の具体的な例として、慢性骨髄球性白血病または急性骨髄球性白血病などの白血病；多発性骨髄腫などの骨髄腫；リンパ腫などが挙げられる。
【０３１８】
本明細書で使用する場合、用語「薬剤」は、組織、系、動物、哺乳動物、ヒト、または他の対象において所望の効果をもたらす物質を意味するものと理解される。よって、用語「抗新生物薬」は、組織、系、動物、哺乳動物、ヒト、または他の対象において抗新生物効果をもたらす物質を意味するものと理解される。また、「薬剤」は、単一の化合物であっても、または２以上の化合物の組合せもしくは組成物であってもよいと理解される。
【０３１９】
用語「処置する」およびその派生語は、本明細書で使用する場合、治療的療法を意味する。特定の病態に関して処置は、（１）その病態の生物学的発現の１以上の状態を改善すること、（２）（ａ）その病態につながるもしくはその病態の原因である生物学的カスケードの１以上の点、もしくは（ｂ）その病態の生物学的発現の１以上に干渉すること、（３）その病態に関連する症状、影響もしくは副作用の１以上、またはその病態もしくはその処置に関連する症状、影響もしくは副作用の１以上を緩和すること、（４）その病態もしくはその病態の生物学的発現の１以上の進行を緩徐化すること、および／または（５）寛解の期間に付加的処置無く、その発現に関して寛解状態であると見なされる期間、その病態の生物学的発現の１以上を排除するもしくは検出不能なレベルにまで軽減することにより、前記病態もしくは前記病態の生物学的発現の１以上を治癒させることを意味する。当業者は、特定の疾患または病態に関して寛解と見なされる期間を理解するであろう。予防的療法もまた企図される療法である。当業者は、「予防」が絶対的な用語でないことを認識するであろう。医学では、「予防」は、ある病態もしくはその生物学的発現の尤度もしくは重篤度を実質的に減らすため、またはこのような病態もしくはその生物学的発現の発生を遅延させるための薬物の予防的投与を意味すると理解される。予防的療法は、例えば、対象が癌の強い家族歴を有する場合または対象が発癌物質に曝されていた場合など、対象に癌を発症する高いリスクがあると見なされる場合に適当である。
【０３２０】
本明細書で使用する場合、用語「有効量」は、例えば、研究者または臨床医により求められる組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を惹起する薬物または医薬剤の量を意味する。さらに、用語「治療上有効な量」は、そのような量を受容していない対応する対象に比べて、治療、治癒、予防の改善、または疾患、障害、もしくは副作用の改善、または疾患もしくは障害の進行速度の低下をもたらすいずれの量も意味する。この用語はまた、その範囲内に、正常な生理学的機能を増進するのに有効な量も含む。
【０３２１】
「抗原結合タンパク質」は、抗体または抗体と同様に機能する操作分子を含め、抗原と結合するタンパク質を意味する。このような別の抗体形式としては、トリアボディ、テトラボディ、ミニ抗体、およびミニボディが含まれる。また、本開示に従って任意の分子の１以上のＣＤＲが、好適な非免疫グロブリンタンパク質足場または骨格上に配置された別の足場、例えば、アフィボディ、ＳｐＡ足場、ＬＤＬ受容体クラスＡドメイン、アビマー（例えば、米国特許出願公開第２００５／００５３９７３号、同第２００５／００８９９３２号、同第２００５／０１６４３０１号参照）またはＥＧＦドメインも含まれる。ＡＢＰはまた、このような抗体または他の分子の抗原結合フラグメントも含む。さらに、本発明の組合せのＡＢＰ、またはその方法もしくは使用は、適当な軽鎖と対合される場合、全長抗体、（Ｆａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂフラグメント、二重特異性もしくは二重パラトープ分子またはその等価物（例えば、ｓｃＦＶ、ビ、トリまたはテトラボディ、Ｔａｎｄａｂｓなど）形式とされたＶＨ領域を含んでなってもよい。抗原結合タンパク質は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４；またはＩｇＭ；ＩｇＡ、ＩｇＥもしくはＩｇＤまたはその修飾変異体である抗体を含んでなり得る。抗体重鎖の定常ドメインは相応に選択することができる。軽鎖定常ドメインは、κまたはλ定常ドメインであり得る。ＡＢＰはまた、抗原結合領域と非免疫グロブリン領域を含んでなるＷＯ８６／０１５３３に記載のタイプのキメラ抗体であってもよい。
【０３２２】
抗原結合タンパク質はまたキメラ抗原受容体であってもよい。用語「キメラ抗原受容体」（「ＣＡＲ」）は、本明細書で使用する場合、細胞外標的結合ドメイン（通常、モノクローナル抗体に由来する）、スペーサー領域、膜貫通領域、および１以上の細胞内エフェクタードメインからなる操作された受容体を意味する。ＡＲはまたキメラＴ細胞受容体またはキメラ免疫受容体（ＣＩＲ）とも呼称されてきた。ＣＡＲは一般に、特異性を所望の細胞表面抗原に向け直すためにＴ細胞などの造血細胞に導入される。
【０３２３】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、ＭＨＣ−抗原ペプチド複合体と結合する必要なくＴ細胞に新規な特異性を作り出すための人工ＴＣＲとして開発された。これらの合成受容体は、単一の融合分子中に、フレキシブルリンカーを介して１以上のシグナル伝達ドメインと会合された標的結合ドメインを含む。標的結合ドメインは、病的細胞の表面の特異的標的にＴ細胞を標的化するために使用され、シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞の活性化および増殖のための分子機構を含む。Ｔ細胞膜を貫通する（すなわち、膜貫通ドメインを形成する）フレキシブルリンカーは、ＣＡＲの標的結合ドメインの細胞膜提示を可能とする。ＣＡＲは、Ｔ細胞を、リンパ腫および固形腫瘍を含む種々の悪性腫瘍から腫瘍細胞の表面で発現される抗原に対して向け直すことを首尾良く可能とした(Jena et al. (2010) Blood, 116(7):1035-44)。
【０３２４】
ＣＡＲの開発はこれまで３世代からなった。第１世代ＣＡＲは、ＣＤ３ζの細胞質領域またはＦｃ受容体γ鎖に由来するシグナル伝達ドメインに結合された標的結合ドメインを含んでなった。第１世代ＣＡＲは、選択された標的にＴ細胞を首尾良く向け直すことが示されたが、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてそれらは長期的な拡大増殖および抗腫瘍活性を提供することができなかった。第２および第３世代ＣＡＲは、ＣＤ２８、ＯＸ−４０（ＣＤ１３４）および４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）などの補助刺激分子を含むことにより改変されたＴ細胞の生存の増進および増殖の増大に焦点を当てたものであった。
【０３２５】
ＣＡＲを有するＴ細胞は、疾患状態で病的細胞を排除するために使用することができた。一つの臨床目的は、アフェレーシスおよびＴ細胞単離後に、ベクター（例えば、レンチウイルスベクター）を介して患者細胞を組換えＤＮＡを含有するＣＡＲ用の発現構築物で形質転換することであろう。Ｔ細胞の拡大増殖後、それらを病的標的細胞を標的化して死滅させる目的で患者に再注入する。
【０３２６】
用語「抗体」は、本明細書で使用する場合、抗原結合ドメイン、場合により、免疫グロブリン様ドメインまたはそのフラグメントを有する分子を意味し、モノクローナル（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥおよびその修飾変異体）、組換え、ポリクローナル、キメラ、ヒト化、二重パラトープ性、二重特異性およびヘテロコンジュゲート抗体、または閉鎖立体配座多重特異性抗体が含まれる。「抗体」は、異種、同種異系、同系、または他のその修飾形態を含んだ。抗体は単離または精製されてよい。抗体はまた、組換え型、すなわち、組換え手段によって生産されてもよく、例えば、参照抗体と９０％同一の抗体は、当技術分野で公知の組換え分子生物学技術を用い、特定の残基の突然変異誘発により作製することができる。よって、本発明の抗体は、天然抗体構造の形式とされてもよいし、あるいは適当な軽鎖と対合とされる場合、全長組換え抗体、（Ｆａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂフラグメント、二重特異性もしくは二重パラトープ分子またはその等価物（例えば、ｓｃＦＶ、ビ、トリまたはテトラボディ、Ｔａｎｄａｂｓなど）の形式とされてもよい、本発明の組合せ、またはその方法もしくは使用の重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含んでなり得る。抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３，またはＩｇＧ４またはその修飾変異体であり得る。抗体重鎖の定常ドメインは相応に選択することができる。軽鎖定常ドメインは、κまたはλ定常ドメインであり得る。抗体はまた、抗原結合領域と非免疫グロブリン領域を含んでなるＷＯ８６／０１５３３に記載のタイプのキメラ抗体であってもよい。
【０３２７】
当業者ならば、本発明の抗原結合タンパク質はそれらの標的上のエピトープと結合することを認識するであろう。抗原結合タンパク質のエピトープは、その抗原の、抗原結合タンパク質が結合する領域である。２つの抗原結合タンパク質は、それぞれがその抗原に対する他方の結合を競合的に阻害する（遮断する）場合には、同じまたは重複するエピトープに結合する。すなわち、競合結合アッセイで測定した場合に、競合抗体を含まない対照に比べて、１倍、５倍、１０倍、２０倍または１００倍を超える一方の抗体が、他方の結合を少なくとも５０％、好ましくは、７５％、９０％またはさらには９９％阻害する（例えば、引用することにより本明細書の一部とされるJunghans et al., Cancer Res. 50:1495, 1990参照）。あるいは、一方の抗体の結合を低減または排除する抗原における本質的に総てのアミノ酸突然変異が他方の結合を低減または排除する場合には、２つの抗体は同じエピトープを有する。また、同じエピトープは、例えば、一方の抗体の結合を低減または排除するいくつかのアミノ酸突然変異が他方の結合を低減または排除する場合には、「重複するエピトープ」を含み得る。
【０３２８】
結合の強度は、本発明の組合せ、またはその方法もしくは使用の抗原結合タンパク質の用量および投与に重要であり得る。一つの実施態様では、本発明の抗原結合タンパク質は、その標的（例えば、ＢＣＭＡまたはＰＤ−１またはＯＸ４０）に高い親和性で結合する。親和性は、ある分子、例えば、本発明の組合せ、またはその方法もしくは使用の抗体と、別の分子、例えば、その標的抗原との単一の結合部位での結合の強度である。抗体とその標的との結合親和性は、平衡法（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））、または速度論（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ分析）によって決定することができる。例えば、当技術分野で公知のＢｉａｃｏｒｅ法が結合親和性を測定するために使用可能である。
【０３２９】
アビディティーは、例えば相互作用価を考慮した、２分子の複数部位の互いの結合の合計強度である。
【０３３０】
本明細書では、本発明の組合せ、またはその方法もしくは使用の抗原結合タンパク質の機能的フラグメントが企図される。
【０３３１】
よって、「結合フラグメント」および「機能的フラグメント」は、無傷抗体のＦｃフラグメントを欠き、循環からより急速に排除され、無傷抗体よりも非特異的組織結合が少ない可能性があるＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメント (Wahl et al., J. Nuc. Med. 24:316-325 (1983)) であり得る。また、Ｆｖフラグメント(Hochman, J. et al. (1973) Biochemistry 12:1130-1135; Sharon, J. et al.(1976) Biochemistry 15:1591-1594)も含まれる。これらの種々のフラグメントは、プロテアーゼ切断または化学切断（例えば、Rousseaux et al., Meth. Enzymol., 121:663-69 (1986)参照）などの従来の技術を用いて作製される。
【０３３２】
「機能的フラグメント」は、本明細書で使用する場合、抗原結合部位を含みかつ親抗原結合タンパク質と同じ標的と結合し得る、例えば、限定されるものではないが、同じエピトープと結合し得る、かつまた、本明細書に記載のまたは当技術分野で公知の１以上の調節または他の機能も保持する、本発明の組合せ、またはその方法もしくは使用の抗原結合タンパク質の部分またはフラグメントを意味する。
【０３３３】
本発明の抗原結合タンパク質は、天然抗体構造の形式とされ得る本発明の組合せ、またはその方法もしくは使用の重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含んでなり得るので、機能的フラグメントは、本明細書に記載の全長抗原結合タンパク質の結合または１以上の機能を保持するものである。よって、本発明の組合せ、またはその方法もしくは使用の抗原結合タンパク質の結合フラグメントは、適当な軽鎖と対合され得る場合、ＶＬまたはＶＨ領域、（Ｆａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂフラグメント、二重特異性もしくは二重パラトープ分子またはその等価物（例えば、ｓｃＦＶ、ビ、トリまたはテトラボディ、Ｔａｎｄａｂｓなど）のフラグメントを含んでなり得る。
【０３３４】
用語「ＣＤＲ」は、本明細書で使用する場合、抗原結合タンパク質の相補性決定領域アミノ酸配列を意味する。これらは、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の超可変領域である。免疫グロブリンの可変部分には３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲ（またはＣＤＲ領域）が存在する。
【０３３５】
ＣＤＲ配列には様々なナンバリング規則が存在することは当業者には自明であろう；Ｃｈｏｔｈｉａ(Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883)、Ｋａｂａｔ(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第4版, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987))、ＡｂＭ（バース大学）およびＣｏｎｔａｃｔ（ユニヴァーシティ・カレッジ・ロンドン）。「最小結合単位」を得るためには、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭおよびｃｏｎｔａｃｔ法のうち少なくとも２つを用いて最小オーバーラッピング領域を決定することができる。最小結合単位は、ＣＤＲの一部分であり得る。抗体の構造およびタンパク質フォールディングは、他の残基がＣＤＲ配列の一部と考えられ、また、当業者によりそのように理解されるであろうことを意味し得る。ＣＤＲ定義のいくつかは使用される個々の刊行物によって異なる場合があることに留意されたい。
【０３３６】
そうではないことが述べられない限り、および／または具体的に示される配列がなければ、本明細書で「ＣＤＲ」、「ＣＤＲＬ１」（または「ＬＣ  ＣＤＲ１」）、「ＣＤＲＬ２」（または「ＬＣ  ＣＤＲ２」）、「ＣＤＲＬ３」（または「ＬＣ  ＣＤＲ３」）、「ＣＤＲＨ１」（または「ＨＣ  ＣＤＲ１」）、「ＣＤＲＨ２」（または「ＨＣ  ＣＤＲ２」）、「ＣＤＲＨ３」（または「ＨＣ  ＣＤＲ３」）という場合には、既知の規則のいずれかに従ってナンバリングされたアミノ酸配列を意味し、あるいは、ＣＤＲは、可変軽鎖の「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」、「ＣＤＲ３」、ならびに可変重鎖の「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」、および「ＣＤＲ３」と呼称される。特定の実施態様では、ナンバリング規則は、Ｋａｂａｔ規則である。
【０３３７】
用語「変異体」は、本明細書で使用する場合、少なくとも１つ、例えば、１、２または３つのアミノ酸置換、欠失または付加により修飾された重鎖可変領域または軽鎖可変領域を意味し、ここで、重鎖または軽鎖変異体を含んでなる修飾抗原結合タンパク質は、修飾前の抗原結合タンパク質の生物学的特徴を実質的に保持する。一つの実施態様では、変異体重鎖可変領域または軽鎖可変領域配列を含む抗原結合タンパク質は、修飾前の抗原結合タンパク質の６０％、７０％、８０％、９０％、１００％の生物学的特徴を保持する。各重鎖可変領域もしくは軽鎖可変領域は単独で、または別の重鎖可変領域もしくは軽鎖可変領域と組み合わせて修飾され得ることが認識されるであろう。本開示の抗原結合タンパク質は、本明細書に記載の重鎖可変領域アミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％相同な重鎖可変領域アミノ酸配列を含む。本開示の抗原結合タンパク質は、本明細書に記載の軽鎖可変領域アミノ酸配列と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％相同な軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
【０３３８】
相同性パーセントは、全重鎖可変領域および／もしくは全軽鎖可変領域にわたってもよいし、または相同性パーセントはフレームワーク領域に限定されてもよいが、ＣＤＲに相当する配列は、重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域内で本明細書に開示されるＣＤＲと１００％の同一性を有する。
【０３３９】
用語「ＣＤＲ変異体」は、本明細書で使用する場合、少なくとも１つ、例えば、１、２または３つのアミノ酸置換、欠失または付加により修飾されたＣＤＲを意味し、ここで、ＣＤＲ変異体を含んでなる修飾抗原結合タンパク質は、修飾前の抗原結合タンパク質の生物学的特徴を実質的に保持する。一つの実施態様では、変異体ＣＤＲを含む抗原結合タンパク質は、修飾前の抗原結合タンパク質の６０％、７０％、８０％、９０％、１００％の生物学的特徴を保持する。修飾可能な各ＣＤＲは単独で、または別のＣＤＲと組み合わせて修飾され得ることが認識されるであろう。一つの態様では、修飾は、置換、特に、例えば表１に示されるような保存的置換である。
【表１】
2019505476.tif 000008
【０３４０】
例えば、あるＣＤＲ変異体において、最小結合単位のアミノ酸残基は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ定義の一部としてＣＤＲを含んでなるフランキング残基が保存的アミノ酸残基で置換されていてもよいこと以外は同じままであり得る。
【０３４１】
上記のような修飾ＣＤＲまたは最小結合単位を含んでなるこのような抗原結合タンパク質は、本明細書では、「機能的ＣＤＲ変異体」または「機能的結合単位変異体」と呼称する場合がある。
【０３４２】
抗体は、いずれの種のものであってもよく、または交差種に投与するために好適となるように修飾されてもよい。例えば、マウス抗体由来のＣＤＲはヒトへの投与のためにヒト化され得る。いずれの実施態様においても、抗原結合タンパク質は場合によりヒト化抗体である。
【０３４３】
「ヒト化抗体」は、非ヒトドナー免疫グロブリンに由来するそのＣＤＲを有し、その分子の残りの免疫グロブリン由来部分は１つ（または複数）のヒト免疫グロブリンに由来する操作抗体の一種を意味する。加えて、フレームワーク支持残基は、結合親和性を保存するように変更されてもよい（例えば、Queen et al., Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson et al., Bio/Technology, 9:421 (1991)参照）。好適なヒトアクセプター抗体は、従来のデータベース、例えば、ＫＡＢＡＴ（登録商標）データベース、Ｌｏｓ  Ａｌａｍｏｓデータベース、およびＳｗｉｓｓタンパク質データベースから、ドナー抗体のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列との相同性により選択されたものであり得る。ドナー抗体のフレームワーク領域との相同性（アミノ酸ベースでの）を特徴とするヒト抗体は、重鎖定常領域および／またはドナーＣＤＲの挿入のための重鎖可変フレームワーク領域を提供するために好適であり得る。軽鎖定常または可変フレームワーク領域を供与し得る好適なアクセプター抗体も同様に選択され得る。アクセプター抗体重鎖および軽鎖は同じアクセプター抗体に起源する必要はないことに留意されたい。従来技術はこのようなヒト化抗体を生産するいくつかの方法を記載している−例えば、ＥＰ−Ａ−０２３９４００およびＥＰ−Ａ−０５４９５１参照。
【０３４４】
なおさらなる実施態様では、ヒト化抗体は、ＩｇＧであるヒト抗体定常領域である。別の実施態様では、ＩｇＧは、上記の参照文献または特許公報のいずれかに開示されている配列である。
【０３４５】
「増強されたＦｃγＲＩＩＩＡ媒介エフェクター機能」とは、本明細書で使用する場合、抗原結合タンパク質の通常のエフェクター機能がその通常レベルに比べて故意に増大されていることを表す。これは例えば、ＦｃＹＲＩＩＩＡ結合に対する親和性を増大させる突然変異による、または抗原結合タンパク質のグリコシル化の変更（例えば、フコシルトランスフェラーゼのノックアウト）によるなどの当技術分野で公知のいずれの手段によって行ってもよい。
【０３４６】
ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列に関して、用語「同一の」または「同一性」は、最適にアラインされ、適当な挿入または欠失を伴って比較された場合の２つの核酸配列または２つのアミノ酸配列の間の同一性の程度を示す。
【０３４７】
２配列間の同一性パーセントは、それらの２配列の最適なアラインメントのために導入する必要のあるギャップの数、および各ギャップの長さを考慮した、それらの配列に共有される同一の位置の数の関数（すなわち、同一性％＝同一の位置の数／位置の総数×１００）である。２配列間の配列の比較および同一性パーセントの決定は、下記のように、数学的アルゴリズムを用いて達成することができる。
【０３４８】
クエリー核酸配列とサブジェクト核酸配列の間の同一性パーセントは、ペアワイズＢＬＡＳＴＮアラインメントが実行された後にサブジェクト核酸配列がクエリー核酸配列と１００％のクエリー被覆率を有する場合にＢＬＡＳＴＮアルゴリズムにより計算される、パーセンテージとして表される「同一性」の値である。このようなクエリー核酸配列とサブジェクト核酸配列の間のペアワイズＢＬＡＳＴＮアラインメントは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのウェブサイトで利用可能なＢＬＡＳＴＮアルゴリズムのデフォルト設定を用い、低複雑性領域のフィルターを解除して行われる。重要なこととして、クエリー核酸配列は、本明細書の１以上の請求項で特定される核酸配列により記載され得る。
【０３４９】
クエリーアミノ酸配列とサブジェクトアミノ酸配列の間の同一性パーセントは、ペアワイズＢＬＡＳＴＮアラインメントが実行された後にサブジェクトアミノ酸配列がクエリーアミノ酸配列と１００％のクエリー被覆率を有する場合にＢＬＡＳＴＰアルゴリズムにより計算される、パーセンテージとして表される「同一性」の値である。このようなクエリーアミノ酸配列とサブジェクトアミノ酸配列の間のペアワイズＢＬＡＳＴＰアラインメントは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのウェブサイトで利用可能なＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのデフォルト設定を用い、低複雑性領域のフィルターを解除して行われる。重要なこととして、クエリーアミノ酸配列は、本明細書の１以上の請求項で特定される核酸配列により記載され得る。
【０３５０】
本明細書に記載される本発明の一つの実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列表に  示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。特定の実施態様では、抗原結合タンパク質は、配列表に見られるものと少なくとも９８％、例えば、９９％の配列同一性を有する。
【０３５１】
本明細書に記載されるいずれの参照文献または刊行物も、引用することにより本明細書の一部とされる。
【実施例】
【０３５２】
以下の実施例は本発明の様々な限定されない態様を示す。
【０３５３】
実施例１  ＢＣＭＡ抗原結合タンパク質の生産
本明細書に記載される本発明による抗原結合タンパク質の生産および毒素とのコンジュゲーションおよびこのような抗原結合タンパク質の個々の結合親和性は、引用することにより本明細書の一部とされるＷＯ２０１２１６３８０５に見出すことができる。
【０３５４】
実施例２  免疫原性細胞死（ＩＣＤ）
免疫原性細胞死のプロセスは、樹状細胞の活性化をもたらす危険分子の産生を誘導し得る（図１Ａ参照）。ＢＣＭＡ  ＡＤＣ（ＭＭＡＦとコンジュゲートされた抗ＢＣＭＡ抗体：ＧＳＫ２８５７９１）で処理したＮＣＩ−Ｈ９２９細胞は、細胞死滅の際に３つの危険分子（ＡＴＰ、ＨＭＧＢ１およびＣＲＴ）を産生した（図１Ｂ）。樹状細胞の活性化に対する、ＢＣＭＡ  ＡＤＣによるＮＣＩ−Ｈ９２９細胞死滅の効果を検討するために、ＢＣＭＡ  ＡＤＣで処理したＮＣＩ−Ｈ９２９細胞およびｉｎ  ｖｉｔｒｏにてＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−４処理を用いてヒト単球から分化させた未熟樹状細胞（ｉＤＣ）で共培養試験を行った。この過程で樹状細胞の活性化に対するＢＣＭＡ  ＡＤＣにより誘導される細胞死の効果を評価するために、複数の樹状細胞成熟マーカーならびに活性化時に樹状細胞により分泌される２つの主要サイトカインＩＬ−１０およびＩＬ−１２ｐ７０をモニタリングした。
【０３５５】
アッパープロビデンス献血施設から、３名の健常ドナーからの新鮮なヒト全血を、液体ナトリウムヘパリン（Ｓａｇｅｎｔ  １０ＩＵ／ｍＬ終濃度）でコーティングしたシリンジを用いて取得した。新鮮なヒト全血から、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ単球濃縮キット（カタログ番号１５０６８）を用いて単球を単離し、細胞表面ＣＤ１４（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅカタログ番号５６２６９８）の発現を、フローサイトメトリーを用いて評価した。単離された単球（１．５×１０６細胞／ウェル）を、１％自己血漿、５０ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ、２１５−ＧＭ−０５０）および１００ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ−４（Ｒ＆Ｄ、２０４−ＩＬ−０５０）を添加した２ｍＬのＸ−Ｖｉｖｏ−１５培地中、３７℃／５％ＣＯ２にて７日間培養した。これらの培養物に対し、刺激因子濃度を維持しつつ、３日目または４日目に培地の半分を交換した。ＮＣＩ−Ｈ９２９多発性骨髄腫細胞は、３７℃、５％ＣＯ２、湿度９０％の空気にて、１０％ＦＢＳを添加したＲＰＭＩ−１６４０中、解凍から２代以上継代培養した。細胞を１２ウェルプレートにて２ｍＬ中７．５×１０５細胞／ｍｌの密度で播種した。Ｊ６Ｍ０  ＡＤＣにより増強された抗原結合タンパク質の用量応答を培地に加え、細胞を３７℃／５％ＣＯ２で４８時間インキュベートした。
【０３５６】
７日目にｉＤＣを、９６ウェルプレートにてＪ６Ｍ０  ＡＤＣにより増強された抗原結合タンパク質で処理したＮＣＩ−Ｈ９２９細胞と１：１比で２４時間共培養した。共培養の開始時に全細胞を計数し、Ｘ−Ｖｉｖｏ−１５培地で７．５×１０５細胞／ｍＬの密度に希釈した。各７．５×１０４細胞／ウェル（１００μｌ）のｉＤＣと前処理済みのＮＣＩ−Ｈ９２９細胞を、９６ウェルプレートの各ウェルで合わせた。共培養細胞を３７℃／５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした。ＣＤ１ａ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＨＬＡ−ＤＲ、およびＣＤ１４からなるフローサイトメトリーパネルを用い、ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩにて新鮮なＦｃＲ遮断樹状細胞分化および成熟を評価した。加えて、細胞上清を回収し、−２０℃で冷凍し、ＭＳＤキットを用いてＩＬ−１０およびＩＬ−１２ｐ７０に関してアッセイした。
【０３５７】
データ分析は、フローサイトメトリーパネル用のＦｌｏｗ  Ｊｏ  ｖ７．６．５で行い、腫瘍細胞から樹状細胞を識別するためにＣＤ１１ｃ＋細胞またはＨＬＡ−ＤＲ＋細胞のいずれかのゲート設定を使用した。ＮＣＩ−Ｈ９２９細胞ＨＬＡ−ＤＲ陰性であり、樹状細胞よりもはるかに低いＣＤ１１ｃ発現を示し、これらの細胞集団の明瞭に異なるゲート設定が可能となる。共培養アッセイの上清からの分泌ＩＬ−１０およびＩＬ−１２ｐ７０のデータをＭＳＤ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈ  ｖ４．０．１２で分析した。
【０３５８】
これらの結果は、ＢＣＭＡ  ＡＤＣによるＮＣＩ−Ｈ９２９細胞の死滅は樹状細胞に対して刺激効果を持ち、樹状細胞の活性化に至り得ることを示唆する。ＩＬ−１２ｐ７０およびＩＬ−１０をモニタリングしたところ、ＩＬ−１２ｐ７０は総ての条件下で検出限界を下回った。ＩＬ−１０は検出でき、Ｉｌ−１０産生に対してＢＣＭＡ  ＡＤＣの有意な阻害効果が存在した。しかしながら、ＢＣＭＡ  ＡＤＣ単独で処置したＮＣＩ−Ｈ９２９細胞でＩＬ−１０に対する阻害効果が見られたことから、この効果は、ＢＣＭＡ  ＡＤＣにより誘導されるＮＣＩ−Ｈ９２９細胞の免疫原性細胞死による樹状細胞の活性化に関連付けることができない。ＩＬ−１０産生に対する阻害効果は、免疫応答の刺激に有益である（図２および図３参照）。
【０３５９】
実施例３
Ｔ細胞は、細胞表面に発現されるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）および補助刺激分子の会合を介して活性化され得る。Ｔ細胞が活性化すると、複数の付加的な表面マーカーがアップレギュレートされる。Ｔ細胞の活性化および機能に対するＢＣＭＡ  ＡＤＣ（ＭＭＡＦとコンジュゲートされた抗ＢＣＭＡ抗体：ＧＳＫ２８５７９１）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ効果は、これらのＴ細胞活性化関連マーカーのいくつかをモニタリングすることにより特徴づけた。さらに、活性化の際、Ｔ細胞はＩＦＮγおよびＩＬ−４などのサイトカインを産生する。刺激されたＴ細胞におけるＩＦＮγおよびＩＬ−４産生に対するＢＣＭＡ  ＡＤＣの効果も検討した。これらの試験は、Ｔ細胞の活性化および機能に対するＢＣＭＡ  ＡＤＣの効果に関するデータを提供できる。加えて、ＢＣＭＡ  ＡＤＣの存在下で刺激された際のヒトＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖も評価した。ヒト血液を、グラクソスミスクライン社の血液ドナー獲得プログラムから取得した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ヒト全血からのフィコール密度勾配遠心分離（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により単離した。コーティングバッファー（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４２１７０１）で希釈した抗ヒトＣＤ３抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号１６−００３７−８５、クローンＯＫＴ３）で９６ウェル平底プレートを一晩コーティングした。
【０３６０】
３．１  ＰＢＭＣにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激によるＴ細胞活性化に対するＢＣＭＡ  ＡＤＣの効果
ＢＣＭＡ  ＡＤＣ（ＭＭＡＦとコンジュゲートされた抗ＢＣＭＡ抗体：ＧＳＫ２８５７９１）をＰＢＭＣ  Ｔ細胞活性化アッセイで試験した。この試験では、ＢＣＭＡ  ＡＤＣ処理とＰＢＭＣ活性化を同時に行い、それらの効果を２４時間および７２時間でモニタリングした。この試験を２名の異なるドナーからの血液を用いて２回反復した（ｎ＝２）。この試験では、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ−１６４０（Ｈｙｃｌｏｎｅ；カタログ番号ＳＨ３００７１．０３）中、１００μＬのＰＢＭＣ（２×１０６細胞／ｍＬ）を、可溶性０．５μｇ／ｍＬ抗ＣＤ２８抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号１６−０２８９、クローンＣＤ２８．２）とともに、または伴わずに抗ＣＤ３抗体でコーティングしたウェルに加えた。９．６ｍｇ／ｍＬ  ＢＣＭＡ  ＡＤＣまたは４．６ｍｇ／ｍＬ  ＢＣＭＡ  Ａｂ  ＩｇＧ対照の保存溶液をまず、抗体濃度が１ｍｇ／ｍＬとなるようにＲＰＭＩ−１６４０培地で希釈し、これをさらに抗体濃度が６０、６および０．６μｇ／ｍＬとなるように等量のＲＰＭＩ−１６４０培地で希釈した。各１００μＬの最終希釈抗体溶液をＲＰＭＩ−１６４０／１０％ＦＢＳ中１００μＬのＰＢＭＣに加え、抗体終濃度３０、３および０．３μｇ／ｍＬとした。各アッセイ条件について３回のテクニカル反復を含んだ。ＰＢＭＣを３７℃および５％ＣＯ２で、上記に示した様々な時間培養した。細胞を９６ディープウェルプレートに移し、１ｍＬ染色バッファー（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５４６５６）で２回洗浄し、蛍光コンジュゲート抗体またはアイソタイプ対照で染色し（第３．３節  薬物および材料参照）、氷上で３０分間インキュベートした。免疫蛍光分析はＦＡＣＳ  ＣＡＮＴＯ  ＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で行い、ＤＩＶＡソフトウエア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。フローサイトメトリーを用いて、所与のマーカーを発現するＣＤ４またはＣＤ８細胞のパーセンテージ、およびＣＤ４またはＣＤ８細胞におけるこのマーカーの平均蛍光強度（ＭＦＩ）をモニタリングした。
【０３６１】
３．２  ＰＢＭＣにおける抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激時のＴ細胞によるＩＦＮγおよびＩＬ−４産生に対するＢＣＭＡ  ＡＤＣの効果
この試験は、２名の異なるドナーからの血液を用いて２回反復した（ｎ＝２）。１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ−１６４０中、１００μＬのＰＢＭＣ（１×１０６細胞／ｍＬ）を、可溶性０．５μｇ／ｍＬ抗ＣＤ２８抗体とともに、または伴わずに抗ＣＤ３抗体でコーティングしたウェルに加えた。次に、各１００μＬの希釈ＢＣＭＡ  ＡＤＣ（ＭＭＡＦとコンジュゲートされた抗ＢＣＭＡ抗体：ＧＳＫ２８５７９１）およびＩｇＧ対照溶液（抗体希釈プロトコールについては第３．１節を参照）を加え、ＰＢＭＣを３７℃および５％ＣＯ２で４８時間および７２時間培養した。各アッセイ条件について３回のテクニカル反復を含んだ。試験の終了時に、第３．１節に記載されているように細胞を移し、洗浄し、染色し、フローサイトメトリーにより分析した。細胞内染色については、細胞をサイトフィックスバッファー（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５４６５５）により室温で２０分間固定し、透過処理／洗浄バッファー（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５４７２３）により室温で３０分間透過処理を行った後、抗体またはアイソタイプ対照で染色した。
【０３６２】
３．３  抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激時のＴ細胞増殖に対するＢＣＭＡ  ＡＤＣの効果
新鮮な正常末梢血から単離されたＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞を受け取り、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＶｉＣｅｌｌを用いて計数した後、３３０ｇで７分間遠心分離した。次に、細胞をＰＢＳ／０．５％ＢＳＡ中、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｔｒａｃｅ  ＣＦＳＥ（カタログ番号Ｃ３４５５４）増殖色素（５〜１０μＭ）で染色した。細胞を５分間氷上でインキュベートした後、氷上、冷ＲＰＭＩ  １６４０／１０％ＦＢＳ中で５分間さらにインキュベーションを行った。遊離している色素を３００ｇで５分間のさらに２回の細胞の遠心分離により除去した。細胞を完全培地ＲＰＭＩ  １６４０／１０％ＦＢＳ／ＩＬ−２（２．８ｎｇ／ｍＬ）中に再懸濁した。次に、細胞を抗ＣＤ３（１μｇ／ｍＬ）および抗ＣＤ２８（１μｇ／ｍＬ）で予めコーティングした９６ウェル組織培養プレート中に播種した（１０５細胞／１００μＬ容量／ウェル）。ＢＣＭＡ  ＡＤＣ（ＭＭＡＦとコンジュゲートされた抗ＢＣＭＡ抗体：ＧＳＫ２８５７９１）をプレートの播種直後に細胞に加え、３７℃で９６時間インキュベートした。
【０３６３】
４日のインキュベーションの後、細胞上清を採取し、−８０℃で冷凍し、フローサイトメトリー染色のために細胞を回収した。ＣＡＮＴＯ  ＩＩフローサイトメーターを４８８ｎｍ励起フィルターおよびＣｅｌｌ  Ｔｒａｃｅ  ＣＦＳＥのためのフルオレセイン（ＦＩＴＣ）に適当な発光フィルターとともに用いて分析した。
【０３６４】
フローサイトメトリー分析によりモニタリングされるマーカーとしての抗体およびアイソタイプを以下の表２に示す。
【表２】
2019505476.tif 000009
【０３６５】
各マーカーについて、ＢＣＭＡ  ＡＤＣの各濃度でのパーセンテージおよびＭＦＩの生データを、統計分析にて対応するＩｇＧ対照と比較した。異なる血液ドナーの変動を説明するために、データ分析に線形混合効果モデルを使用した。簡単に述べれば、ドナーおよびドナーと群（ＢＣＭＡ  ＡＤＣ処置またはＩｇＧ対照）の間の相互作用をランダム効果として処理し、群をそのモデルの固定効果として処理した。混合効果モデル分析の後、次いで、各ＢＣＭＡ  ＡＤＣ処理群をＩｇＧ対照群と比較した。多重比較のため、ダネットの方法を、全第一種誤り率を制御するために使用した。ダネットの方法による補正後ｐ値≦０．０５は、特定のＢＣＭＡ  ＡＤＣ濃度でのパーセンテージまたはＭＦＩ値に関して有意であると認められた。ＢＣＭＡ  ＡＤＣは、３つの濃度のうち少なくとも２つの濃度のＢＣＭＡ  ＡＤＣがあるマーカーのパーセンテージまたはＭＦＩ値の統計的に有意な（ｐ値≦０．０５）変化を誘導した場合に、そのマーカーの発現を有意に変化させると見なした。
【０３６６】
データ報告に関しては、各ＢＣＭＡ  ＡＤＣ濃度で３回のテクニカル反復間の平均パーセンテージまたは平均ＭＦＩ値を出し、差分値％を、差分％＝（Ａｖｇ  ９１６−Ａｖｇ  ＩｇＧ）＊１００／Ａｖｇ  ＩｇＧとして算出し、式中、Ａｖｇ  ９１６およびＡｖｇ  ＩｇＧはそれぞれＢＣＭＡ  ＡＤＣ処理群およびＩｇＧ対照群の平均値を表す。所与のＢＣＭＡ  ＡＤＣ濃度および時点での、所与のマーカーに関する異なるドナーによる差分値％を用いて平均差分値％およびＣＶ（変動係数）を計算し、これらを図４Ａ〜Ｃに報告した。正および負の差分値％はそれぞれマーカーのアップレギュレーションおよびダウンレギュレーションを表す。
【０３６７】
ＣＤ４％およびＣＤ８％は、各試験の３群で独立に測定し、各群３回のテクニカル反復とした。各群で上記のように統計分析を行った。ＣＤ４％およびＣＤ８％値の変化は、３群のうち少なくとも２群が有意な変化（ｐ値≦０．０５）を示した場合に有意と見なした。データ報告に関しては、３群のＣＶの平均を取ることによりプールされたＣＶを得た。
【０３６８】
この試験では、Ｔ細胞の活性化および機能に対するＢＣＭＡ  ＡＤＣのｉｎ  ｖｉｔｒｏ効果を、マーカーに関連するいくつかのＴ細胞活性化に対する化合物の効果をモニタリングすることにより特徴づけた。これらのマーカーの大多数はＴ細胞の活性化に際にアップレギュレートされる。これらのマーカーには、Ｔ細胞活性化マーカーＣＤ２５およびＣＤ６９；補助阻害マーカーＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４；補助刺激マーカーＩＣＯＳ、ＯＸ−４０およびＣＤ１３７；ならびにＴ細胞枯渇マーカーＴＩＭ３およびＬＡＧ３が含まれる。ＣＤ７３およびＣＤ３９は、アデノシン経路の活性化に関与する表面タンパク質であり、Ｔ細胞の活性化の補助阻害分子と考えられる。それらの発現レベルとＴ細胞の活性化の間の相関はあまりよく理解されていない。全体的に見れば、これらのデータは、ＢＣＭＡ  ＡＤＣは、ＰＢＭＣにおいて抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８により刺激されたＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞の活性化に最小の効果しか持たないことを示す。ＢＣＭＡ  ＡＤＣは、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激の後に、ＰＢＭＣにおいてＣＤ４細胞およびＣＤ８細胞の両方でＩＦＮγおよびＩＬ−４産生に対して有意な効果を持たない。これらのデータはヒトＴ細胞上にはＢＣＭＡ発現がないことと一致する
実施例４：  抗ＯＸ４０抗体との組み合わせた場合のＢＣＭＡ  ＡＤＣのｉｎ  ｖｉｖｏ有効性
動物に対する総ての手順は、試験開始前にＧＳＫ所内動物実験委員会(GSK Institutional Animal Care and Use Committee)により検証および承認された。
【０３６９】
４．１  同系ＥＬ４−Ｌｕｃ２−ｈＢＣＭＡマウスモデル
これらの試験の目的は、マウス同系腫瘍形成モデルにおいて本明細書に記載の組合せを評価することであった。ＥＬ４−Ｌｕｃ２（Ｂｉｏｗａｒｅ  Ｕｌｔｒａ  ＥＬ４−ｌｕｃ２  ＃  ５８２３０Ｃ４０）を、ヒトＢＣＭＡをコードするプラスミドでトランスフェクトした。ＥＬ４は、Ｃ５７ＢＬマウスにおいてＤＢＭＡ（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−３９）により誘導されたマウスリンパ腫細胞である。１３日前に、Ｃ５７ＢＬ／６雌マウス（ｎ＝１０）の体重を測定し、右側腹部に１×１０５の形質導入ＥＬ４−Ｌｕｃ２−ｈＢＣＭＡ細胞を接種し、腫瘍体積が約７００ｍｍ３に達するまで成長させた。腫瘍成長はＦｏｗｌｅｒ「ＰｒｏＭａｘ」デジタルノギスを用いて測定した。腫瘍の長さ（Ｌ）および幅（Ｗ）を測定し、式：腫瘍体積＝０．５２×Ｌ×Ｗ２を用いて腫瘍体積を求めた。
【０３７０】
４．２  投与計画
目的腫瘍体積に到達した０日目に、マウスを１２の処置群に無作為化した。処置は４日目、７日目、１１日目、および１５日目に投与した。腫瘍体積および体重を０日目に開始し２７日まで週に３回測定した。腫瘍が２０００ｍｍ３の体積に達した際に動物を安楽死させた。投与計画を表３にまとめる。
【表３】
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【０３７１】
４．３  結果
実施例４の結果を図５に再現する。図５Ａは腫瘍体積を表す。Ｘ軸は試験の日数を表し、Ｙ軸は腫瘍体積（ｍｍ３）を表す。図５Ａの一つのグラフ内の各直線は一個体のマウスを表す（各処置群ｎ＝１０マウス）。図５Ｂは全生存率を表す。これらの結果は、ＢＣＭＡ  ＡＣＤ（ＭＭＡＦとコンジュゲートされた抗ＢＣＭＡ抗体：ＧＳＫ２８５７９１）を抗ＯＸ４０抗体と組み合わる場合に腫瘍体積の退縮がある程度増強されることを示す。
【０３７２】
実施例５：抗ＰＤ−１抗体と組み合わせた場合の抗ＢＣＭＡ抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性
動物に対する総ての手順は、試験開始前にＧＳＫ所内動物実験委員会により検証および承認された。
【０３７３】
５．１  同系ＥＬ４−Ｌｕｃ２−ｈＢＣＭＡマウスモデル
実施例４に記載されるものと同じＥＬ４−Ｌｕｃ２−ｈＢＣＭＡマウスモデルを用いた。
【０３７４】
５．２  投与計画
腫瘍体積が平均２００ｍｍ３に到達した０日目に、マウスを１３の処置群に無作為化した。処置は０日目、４日目、８日目、１１日目、１５日目、および１７日目に投与した。処置日および投与計画を表４にまとめる。腫瘍体積および体重を０日目に開始し５７日まで測定した。腫瘍が２０００ｍｍ３の体積に達した際に動物を安楽死させた。投与計画を表４にまとめる。
【表４】
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【０３７５】
５．３  結果
実施例５に関して得られた腫瘍体積を図６に表す。Ｘ軸は試験の日数を表し、Ｙ軸は腫瘍体積（ｍｍ３）を表す。図６の一つのグラフ内の各直線は一個体のマウスを表す（各処置群ｎ＝１０マウス）。
【０３７６】
実施例６：  組合せのｉｎ  ｖｉｖｏ有効性
動物に対する総ての手順は、試験開始前にＧＳＫ所内動物実験委員会により検証および承認された。
【０３７７】
６．１  同系ＥＬ４−Ｌｕｃ２−ｈＢＣＭＡマウスモデル
実施例４に記載されるものと同じＥＬ４−Ｌｕｃ２−ｈＢＣＭＡマウスモデルを用いた。
【０３７８】
６．２  投与計画
目的腫瘍体積に到達した０日目に、マウスを１４の処置群に無作為化した。処置は０日目、３日目、７日目、１０日目、１４日目、および１７日目に投与した。腫瘍体積および体重を０日目に開始し１０２日まで測定した。腫瘍が２０００ｍｍ３の体積に達した際に動物を安楽死させた。投与計画を表４にまとめる。投与計画を表５にまとめる。
【表５】
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【０３７９】
６．３  結果
実施例６に関して得られた腫瘍体積を図７のグラフにより表す。Ｘ軸は試験の日数を表し、Ｙ軸は腫瘍体積（ｍｍ３）を表す。図７の一つのグラフ内の各直線は一個体のマウスを表す（各処置群ｎ＝１０マウス）。結果は、ＢＣＭＡ  ＡＤＣ（ＭＭＡＦとコンジュゲートされた抗ＢＣＭＡ抗体：ＧＳＫ２８５７９１）と抗ＰＤ−１抗体の組合せによる処置は、ＢＣＭＡ  ＡＤＣ（ＭＭＡＦとコンジュゲートされた抗ＢＣＭＡ抗体：ＧＳＫ２８５７９１）単独または抗ＰＤ−１抗体単独による処置に比べて中等度の一貫した腫瘍体積の退縮をもたらすことを示す。
【表６】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ−１】
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【図４Ａ−２】
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【図４Ａ−３】
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【図４Ｂ−１】
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【図４Ｂ−２】
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【図４Ｂ−３】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ−１】
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【図５Ａ−２】
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【図５Ｂ】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図６−３】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図７−３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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