【手続補正書】
【提出日】平成19年3月6日(2007.3.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞の移動能力の調節方法であって、細胞におけるＭＥＭＯ、またはＭＥＭＯ相同体の活性の調節を含み、ＭＥＭＯが添付配列表Ｉに示されたアミノ酸配列を有するものである方法。
【請求項２】
細胞の後期移動段階の実行能力を調節する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
細胞の後期移動段階の実行能力を、初期移動段階の実施能力よりも優先的に調節する、請求項２記載の方法。
【請求項４】
調節が阻害である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
細胞の移動能力が、移動誘導シグナルに応答したものである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
移動誘導シグナルがＥｒｂＢ２受容体からのシグナルである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
移動誘導シグナルが、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）２受容体または上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）受容体からのシグナルである、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
移動誘導シグナルが、当該受容体とリガンドの接触から生じる、請求項６または請求項７に記載の方法。
【請求項９】
活性の阻害が、細胞におけるＭＥＭＯまたはＭＥＭＯ相同体のダウンレギュレーションにより誘発される、請求項４〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
ダウンレギュレーションがｓｉＲＮＡにより誘発される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
活性の阻害が、細胞におけるＭＥＭＯまたはＭＥＭＯ相同体と結合相手との相互作用を阻害することにより誘発される、請求項４〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
結合相手がＥｒｂＢ２である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
結合相手がｓｈｃである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
相互作用の阻害が、抗体または抗体フラグメントから選択される阻害剤により誘発される、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
細胞移動を調節する物質の同定方法であって、物質が、ＭＥＭＯ、またはその変異型またはそれらのフラグメントから選択されるＭＥＭＯポリペプチドに結合し、および／またはその活性を調節するか否かを測定することを含む方法。
【請求項１６】
調節が阻害である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
阻害が、初期移動段階よりも後期移動段階を優先的とする、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
（ｉ）ＭＥＭＯまたは細胞移動を介助する能力を有するＭＥＭＯの変異型を発現する細胞を、試験物質と接触させ、そして
（ii）細胞においてＭＥＭＯまたはその変異型の活性を阻害する物質を同定する
段階を含む、請求項１６または請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
（ｉ）試験物質の存在および非存在下、ＭＥＭＯポリペプチドを結合相手と接触させ、
（ii）試験物質の存在が、ＭＥＭＯポリペプチドおよびその結合相手との間の相互作用を阻害するか否かを測定する
段階を含む、請求項１６または請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
ＭＥＭＯポリペプチドまたはその結合相手の一方を、検出可能な標識で標識し、他方を固体支持体に固定化する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
（ｉ）ＭＥＭＯポリペプチド、その結合相手およびレポーター遺伝子構築物を発現し得る細胞を準備し、
（ii）細胞を試験物質と接触させ、
それによって、試験物質によるＭＥＭＯポリペプチドおよびその結合相手間の結合阻害が、レポーター遺伝子の発現の低減化として観察され得る請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ＭＥＭＯの変異型またはフラグメントが、細胞移動を介助する能力を有する、請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
ＭＥＭＯのフラグメントが、少なくとも２０、３０、４０、５０、７５、１００、１５０またはそれ以上の大きさのアミノ酸である、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
結合相手が、請求項５０〜６２のいずれか１項に記載の方法により提供される、請求項１８〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
結合相手が上流因子である、請求項１９〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
上流因子がＥｒｂＢ２またはそのフラグメントである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
（ｉ）Ｙ１２２７に対応するリン酸化残基を含む、ＥｒｂＢ２またはそのフラグメントであるＥｒｂＢ２ポリペプチドを準備し、
（ii）試験物質の存在下および非存在下においてＥｒｂＢ２ポリペプチドをＭＥＭＯポリペプチドと接触させ、
（iii）試験物質の存在または非存在のいずれの場合に、ＥｒｂＢ２ポリペプチドおよびＭＥＭＯポリペプチド間の相互作用が阻害されるかを測定する
段階を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
段階（iii）が、試験物質が、ＥｒｂＢ２ポリペプチドによるＭＥＭＯポリペプチドの化学的修飾を阻害するか否かを測定することにより実施される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
段階（iii）が、試験物質が、ＭＥＭＯおよびＥｒｂＢ２ポリペプチド間の物理的会合を阻害するか否かを測定することにより実施される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
上流因子がｓｈｃまたはそのフラグメントである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
物質が、移動誘導シグナルに応答した細胞の移動を阻害することを確認する段階をさらに含む、請求項１５〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
添付配列表Ｉに示されたアミノ酸配列を含む単離ＭＥＭＯポリペプチド。
【請求項３３】
請求項１のＭＥＭＯポリペプチドの変異型であり、それと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％アミノ酸配列相同性を有する、単離ポリペプチド。
【請求項３４】
細胞移動を介助する能力を有する請求項３３に記載の変異型である単離ポリペプチド。
【請求項３５】
請求項３２〜３４のいずれか１項のポリペプチドをコードするＭＥＭＯポリヌクレオチド配列を有する核酸を含むベクター。
【請求項３６】
ＭＥＭＯポリヌクレオチド配列が添付配列表Ｉに示されたものである、請求項３５に記載のベクター。
【請求項３７】
上記核酸に機能し得るように結合されたプロモーターを含む発現ベクターである、請求項３５または請求項３６に記載のベクター。
【請求項３８】
ポリペプチドの製造方法であって、ポリペプチドをコードする当該核酸をベクターにより発現させる条件下において、請求項３７に記載の発現ベクターにより形質転換またはトランスフェクションされた宿主細胞を培養し、発現されたポリペプチドを回収することを含む方法。
【請求項３９】
請求項３２〜３４のいずれか１項の異種ポリペプチドを発現する宿主細胞。
【請求項４０】
請求項３６または請求項３７に記載のＭＥＭＯポリヌクレオチドと相補的であるポリヌクレオチド配列を有する核酸。
【請求項４１】
ＭＥＭＯ、ＭＥＭＯ相同体またはそのフラグメントをコードするＲＮＡ配列を含み、ＭＥＭＯが添付配列表Ｉに示されたアミノ酸配列を有するものである、２本鎖ＲＮＡ。
【請求項４２】
２０〜２５ｂｐから成るｓｉＲＮＡ二重らせんである、請求項４１に記載の２本鎖ＲＮＡ。
【請求項４３】
ＭＥＭＯまたはＭＥＭＯ相同体またはそのフラグメントをコードするＲＮＡ配列が、添付配列表Ｉに示されたＭＥＭＯポリヌクレオチド配列の４６０〜４８０位に対応する、請求項４２に記載のｓｉＲＮＡ二重らせん。
【請求項４４】
請求項４１〜４３のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡまたはｓｉＲＮＡ二重らせんをコードするベクター。
【請求項４５】
請求項４２または請求項４３のｓｉＲＮＡ二重らせんの製造方法であって、請求項４４のベクターを宿主細胞へ導入し、細胞においてベクターからの転写を誘発または可能にすることを含む方法。
【請求項４６】
請求項４２または請求項４３のｓｉＲＮＡ二重らせんの製造方法であって、
（ｉ）ｓｉＲＮＡ二重らせんのセンス配列をコードするベクター、および
（ii）ｓｉＲＮＡ二重らせんのアンチセンス配列をコードするベクター
を、宿主細胞へ導入し、細胞においてベクターからの転写を誘発または可能にすることを含む方法。
【請求項４７】
細胞の移動能力が阻害されたトランスジェニック非ヒト哺乳類の製造方法であって、そのＭＥＭＯ相同体の遺伝子座へ傷害(lesion)を組込むことを含む方法であり、ＭＥＭＯが添付配列表Ｉに示されたアミノ酸配列を有するものである方法。
【請求項４８】
ＭＥＭＯ相同体の発現が、そこでの細胞の移動能力を調節するように修飾されており、ＭＥＭＯが添付配列表Ｉに示されたアミノ酸配列を有するものである、トランスジェニック非ヒト動物。
【請求項４９】
ＭＥＭＯへ特異的に結合する単離抗体であって、ＭＥＭＯが添付配列表Ｉに示されたアミノ酸配列を有するものである抗体。
【請求項５０】
ＭＥＭＯの結合相手の同定方法であって、
（ｉ）ＭＥＭＯ、その変異型またはフラグメントから選択されるＭＥＭＯポリペプチドを準備し、
（ii）ＭＥＭＯポリペプチドを推定されるＭＥＭＯの結合相手と接触させ、
（iii）ＭＥＭＯの結合相手がＭＥＭＯポリペプチドに結合できるか否かを測定する
ことを含み、
ＭＥＭＯが添付配列表Ｉに示されたアミノ酸配列を有するものである方法。
【請求項５１】
ＭＥＭＯの変異型またはフラグメントが細胞移動を介助する能力を有する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ＭＥＭＯのフラグメントが、少なくとも２０、３０、４０、５０、７５、１００、１５０残基またはそれ以上の大きさのアミノ酸である、請求項４０または請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
ＭＥＭＯポリペプチドが活性型で提供される、請求項５０〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
ＭＥＭＯポリペプチドを固体支持体に固定化し、固定化ＭＥＭＯポリペプチドを推定されるＭＥＭＯの結合相手と接触させる、請求項５０〜５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
固定化ＭＥＭＯポリペプチドを、
（ｉ）推定される多様な結合相手を含む試料と接触させ、
（ii）未結合物質を洗い流し、
（iii）固定化ＭＥＭＯポリペプチドに結合した物質を解離させ、そして
（iv）次いで固定化ＭＥＭＯポリペプチドに結合したタンパク質の同一性を評価する
請求項５４記載の方法。
【請求項５６】
ＭＥＭＯポリペプチド、およびその推定される結合相手、およびレポーター遺伝子構築物を発現し得る細胞を準備することを含み、ＭＥＭＯポリペプチドおよびその結合相手との間の結合がレポーター遺伝子発現により観察され得る、請求項５０〜５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
細胞移動メディエーターの同定方法であって、請求項５０〜５６のいずれか１項に記載の方法を実施し、ＭＥＭＯ結合相手が細胞移動メディエーターであることを確認することを含む方法。
【請求項５８】
ＭＥＭＯの結合相手が細胞移動の初期段階よりも後期段階の特異的メディエーターである、請求項５７記載の方法。
【請求項５９】
（ｉ）ＭＥＭＯの結合相手の活性が調節される細胞を準備し、
（ii）上記調節が初期段階移動事象に影響を与えるか否かを検出し、
（iii）上記調節が後期段階移動事象に影響を与えるか否かを検出する
段階を含む請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
調節が阻害である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６１】
ＭＥＭＯの結合相手が、ＥｒｂＢ２残基Ｙ１２０１またはＹ１２２７からのシグナル伝達に必要とされるか否かを測定する段階を含む、請求項５８〜６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
ｉ）ＥｒｂＢ２−誘導細胞移動シグナリングが、Ｙ１２０１ではなくＹ１２２７により伝達される第一細胞を準備し、
ii）ＥｒｂＢ２−誘導細胞移動シグナリングが、Ｙ１２２７ではなくＹ１２０１により伝達される第二細胞を準備し、
iii）上記細胞において興味の対象であるＭＥＭＯの結合相手の活性を阻害する
段階を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
細胞運動の制御が望まれる病気に罹患した患者の処置を目的とする医薬の製造方法であって、
医薬としてＭＥＭＯ活性の阻害剤を処方することを含み、
ＭＥＭＯが添付配列表Ｉに示されたアミノ酸配列を有するものである方法。
【請求項６４】
細胞運動の制御が望まれる病気に罹患した患者の処置で使用されるＭＥＭＯ活性の阻害剤。
【請求項６５】
細胞運動の制御が望まれる病気に罹患した患者の処置を目的とする医薬の製造におけるＭＥＭＯ活性の阻害剤の使用。
【請求項６６】
阻害剤が請求項１６〜３１のいずれか１項の方法により提供される、請求項６３〜６５のいずれか１項記載の方法、阻害剤または使用。
【請求項６７】
処置が癌の転移および／または血管新生を阻止することである、請求項６３〜６６のいずれか１項に記載の方法、阻害剤または使用。
【請求項６８】
処置が請求項４〜１４のいずれかに記載の方法の使用を含み、その方法が、細胞においてＭＥＭＯ、またはＭＥＭＯ相同体の活性を阻害することにより患者における細胞の移動能力を阻害することを含む、請求項６３〜６６のいずれか１項に記載の方法、阻害剤または使用。
【請求項６９】
細胞が、腫瘍細胞または癌または他の転移性疾患に関係した他の細胞である、請求項６８に記載の方法、阻害剤または使用。
【請求項７０】
細胞運動性の促進が望まれる病気に罹患した患者の処置を目的とする方法であって、細胞においてＭＥＭＯ、またはＭＥＭＯ相同体の活性を促進することにより、患者における細胞の移動能力を促進することを含む、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項７１】
創傷治癒の促進のための請求項７０記載の方法。