(57)【要約】本明細書に開示される組成物、及びその使用方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させるためのものを含み、対象にアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を含む組成物を投与する。ある場合においては、本明細書に開示される組成物及びその使用方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療の有効性を低下させない。アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を含む組成物の投与を含む、サイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを経験した対象におけるサイトカイン産生を減少させる、又は阻害するための組成物及びその使用方法も本明細書に開示される。【選択図】図２Ｂ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）癌治療中のＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖速度を維持する、又は増加させる方法であって、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を含む組成物をＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受ける対象に投与するステップを含み、前記対象における前記増殖速度が、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清も投与されない対象と比較して維持される、又は増加する、方法。
【請求項２】
前記方法が、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療の有効性を低下させない、又は阻害しない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率が、前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清も投与されない対象と比較して抑制される、又は減少する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記アポトーシス細胞又は前記アポトーシス細胞上清を含む前記組成物が、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の前に、該治療と同時に、又は該治療の後に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記アポトーシス細胞上清がアポトーシス細胞−白血球上清であり、前記アポトーシス細胞−白血球上清の採取前に白血球が前記アポトーシス細胞と共培養され、前記白血球が、食細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞及びＮＫ細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記方法が前記対象におけるＩＬ−２レベルを、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清も投与されない対象と比較して維持する、又は増加させる、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）癌治療の有効性を高める方法であって、ＣＡＲ  Ｔ細胞と、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む群から選択される追加の薬剤とを投与するステップを含み、前記対象における前記ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療の有効性が、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記追加の薬剤を投与されない対象と比較して増加する、方法。
【請求項８】
少なくとも１種の炎症誘発性サイトカインの産生レベルが、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記薬剤を含む組成物を投与されない対象における前記炎症誘発性サイトカインのレベルと比較して低下する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記炎症誘発性サイトカインがＩＬ−６を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清が投与されたときに、前記方法が前記対象におけるＩＬ−２レベルを、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清も投与されない対象と比較して維持する、又は増加させる、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率が、前記追加の薬剤を投与されない対象と比較して抑制される、又は減少する、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＣＡＲ  Ｔ細胞及び前記追加の薬剤又はそれらの任意の組合せが、単一の組成物又は少なくとも２つの組成物に含まれ、前記追加の薬剤又はそれらの薬剤の組合せが、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞を含まない組成物に含まれるとき、前記薬剤又は複数の薬剤を含む前記組成物が前記ＣＡＲ  Ｔ細胞の投与の前に、投与と同時に、又は投与の後に投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
前記アポトーシス細胞上清がアポトーシス細胞−白血球上清であり、前記アポトーシス細胞−白血球上清の採取前に白血球が前記アポトーシス細胞と共培養され、前記白血球が、食細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞及びＮＫ細胞からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
対象における癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する方法であって、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）及び追加の薬剤を投与するステップを含み、前記追加の薬剤が、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含み、前記方法が、前記対象における癌又は腫瘍を、ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたが前記追加の薬剤を投与されない対象と比較して、処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する、方法。
【請求項１５】
前記方法は、前記対象における前記癌又は前記腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する有効性が、ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたが前記追加の薬剤を投与されない対象と比較して高い、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
少なくとも１種の炎症誘発性サイトカインの産生レベルが、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたが前記薬剤を含む組成物を投与されない対象における前記炎症誘発性サイトカインのレベルと比較して低下する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記炎症誘発性サイトカインがＩＬ−６を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記追加の薬剤がアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を含むとき、及び前記方法が前記対象におけるＩＬ−２レベルを、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたが前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清も投与されない対象と比較して増加させる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＣＡＲ  Ｔ細胞及び前記追加の薬剤又はそれらの任意の組合せが、単一の組成物又は少なくとも２つの組成物に含まれ、前記追加の薬剤又はそれらの薬剤の組合せが、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞を含まない組成物に含まれるとき、前記薬剤又は複数の薬剤を含む前記組成物が前記ＣＡＲ  Ｔ細胞の投与の前に、投与と同時に、又は投与の後に投与される、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記アポトーシス細胞上清がアポトーシス細胞−白血球上清であり、前記アポトーシス細胞−白血球上清の採取前に白血球が前記アポトーシス細胞と共培養され、前記白血球が、食細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞及びＮＫ細胞からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書に開示されるのは、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療中にキメラ抗原受容体発現Ｔ細胞の増殖速度を維持する、又は増加させるための組成物及びその方法である。さらに、本明細書に開示されるのは、キメラ抗原受容体Ｔ細胞癌治療の有効性を高める組成物及びその方法であって、サイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを経験する対象の発生率が減少又は抑制される組成物及びその方法である。本明細書に開示される方法としては、ＣＡＲ  Ｔ細胞と、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む追加の薬剤との投与を含むものなどが挙げられる。
【背景技術】
【０００２】
癌の標準治療は手術、化学療法及び放射線療法であるが、標的免疫療法などの改善された方法が現在開発され、試験されている。１つの有望な技術は、養子細胞移入（ＡＣＴ：ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｃｅｌｌ  ｔｒａｎｓｆｅｒ）を使用し、免疫細胞がそれらの腫瘍を認識し、攻撃するように改変される。ＡＣＴの一例は、患者自身又はドナーの細胞傷害性Ｔ細胞が、腫瘍細胞の表面で発現される腫瘍特異性抗原を標的にするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ（ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）Ｔ細胞）を発現するように操作されたときである。その場合、これらのＣＡＲ  Ｔ細胞は、腫瘍特異性抗原を発現する細胞にのみ細胞傷害性である。臨床試験によれば、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療は、とりわけ、進行急性リンパ性白血病（ＡＬＬ：ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）及びリンパ腫を制御するのに大きな可能性を有する。
【０００３】
しかし、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療及び別の免疫療法を受けた一部の患者は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ：ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）又はサイトカインストームと呼ばれる危険な、時には生命にかかわる副作用を経験し、注入された活性化Ｔ細胞が全身性炎症反応を起こし、サイトカインが血流中に急速に多量に放出され、危険なほどに低い血圧、高熱及び震えをもたらす。
【０００４】
ＣＲＳの重症例においては、患者は、サイトカインストーム（別名、サイトカインカスケード又は高サイトカイン血症）を経験し、サイトカインと白血球の間でサイトカインレベルの極めて高い正のフィードバックループが存在する。これは、心機能不全、成人呼吸促迫症候群、神経毒性、腎及び／又は肝不全、肺水腫並びに播種性血管内凝固を含めて、生命にかかわる恐れがある合併症を引き起こし得る。
【０００５】
例えば、Ｔ細胞上のＣＤ２８受容体に結合するモノクローナル抗体ＴＧＮ１４１２を投与された最近の第Ｉ相試験の６名の患者は、サイトカインストーム及び多臓器不全の重症例を示した。これは、ＴＧＮ１４１２用量が動物において安全であることが判明している用量の１／５００であったにもかかわらずに起こった（非特許文献１）。
【０００６】
ＣＤ１９に対して特異性を有するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変Ｔ細胞は、極めて難治性の血液悪性腫瘍に対して著しい有望性を示した。完全寛解率が９０％と高い臨床反応が、再発／難治性急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）の小児及び成人において報告された。しかし、極めて重大な毒性が認められ、ＣＡＲ−Ｔ細胞を投与された対象の３０％もが、重症型ＣＲＳ及び恐らくは関連した神経毒性を起こす。ＣＲＳは、主にマクロファージ／単球からの炎症誘発性サイトカインの大量分泌に起因し、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）及び恐らくは追加のサイトカインを分泌するＣＡＲ−Ｔに反応する、マクロファージ活性化症候群及び血球貪食に似ている。
【０００７】
現在まで、コルチコステロイド、抗ＩＬ６療法などの生物学的療法、及び抗炎症薬が、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を受けた患者におけるサイトカイン放出症候群を制御するのに評価されている。しかし、ステロイドは、ＣＡＲ  Ｔ細胞の活性及び／又は増殖に影響する可能性があり、患者を敗血症及び日和見感染の危険にさらす可能性がある。抗炎症薬は、サイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの制御には有効でない可能性がある。というのは、サイトカインストームは極めて多数のサイトカインを含むものの、患者に抗炎症薬を注入する能力には限界があるからである。ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の可能性を実現するために、サイトカイン放出症候群、特にサイトカインストームを制御する新規戦略が必要である。
【０００８】
サイトカインストームは、別の感染性及び非感染性刺激後の問題でもある。サイトカインストームにおいては、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−６、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）などの多数の炎症誘発性サイトカインが放出され、低血圧、出血、最終的に多臓器不全をもたらす。さらに、ＩＦＮ−γは、マクロファージも刺激し、マクロファージは、ＩＬ−６及びＴＮＦ−αを含めて、膨大な量の炎症誘発性サイトカインを分泌する可能性がある。
【０００９】
ＣＲＳは、ＣＡＲ  Ｔ細胞に関連する最も一般的な重症化する可能性のある毒性であるが、ブリナツモマブなどの二重特異性Ｔ細胞誘導（ＢｉＴＥ）抗体を含めて、Ｔ細胞に癌細胞を殺させる別の療法、及びＲｉｔｕｘａｎなどの非Ｔ細胞治療においてさえも起こる。それでも、患者の８０〜１００％における発生率はＣＡＲ  Ｔ細胞に独特であり、ＡＬＬ患者の３０％は重症型毒性を有し、一部の患者では致死的になり得る。
【００１０】
１９１８年のＨ１Ｎ１インフルエンザ汎流行、及びより最近の鳥インフルエンザＨ５Ｎ１感染症における、恐らくは健康な免疫系を有する、若年者における比較的高い死亡率は、サイトカインストームに起因する。この症候群は、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ：ｓｅｖｅｒｅ  ａｃｕｔｅ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、エプスタインバーウイルス関連血球貪食性リンパ組織球症、グラム陰性菌敗血症、マラリア、及びエボラ感染症を含めた多数の他の感染症の進行した又は末期の症例において起こることも知られている。サイトカインストームは、急性膵炎、重度の熱傷又は外傷、急性呼吸促迫症候群などの非感染性原因から生じることもある。
【００１１】
神経毒性は、症候群とは別にも、症候群の一部としても考えられるが、精神状態変化、可逆的譫妄及び発作様活動を含む。患者は、錯乱、喚語困難及び失語症が徐々に進行し、最終的に昏迷状態になり得る。３つの症例においては、これらの神経学的合併症は、気道保護のために挿管及び機械的換気が必要であった。神経学的合併症患者は、一部の症例では可能性がある白質脳症のほかには変化を示さない脳のＣＴ及びＭＲＩ、並びに脳波（ＥＥＧ）及び腰椎穿刺で評価された。ＥＥＧでは発作様活動が確認され、抗てんかん処置後に消散した。明白な神経学的合併症のときに３名の患者において腰椎穿刺によって得られた脳脊髄液（ＣＳＦ）の分析によれば、リンパ球増加症が明らかになり、リンパ球増加症は、更なるｑＰＣＲ分析によって、少なくとも部分的にＣＡＲ  Ｔ細胞で構成されることが分かった。
【００１２】
ＣＡＲ−Ｔ細胞注入後のＣＲＳの高い発生率にもかかわらず、該症候群の根底にある生物学についてはほとんど理解されていない。その状態は、血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）及びマクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ：ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）に似ており、サイトカイン及びケモカインの著しい上昇に付随する。
【００１３】
現在、ＣＲＳの処置に使用されるモダリティはほとんどない。トシリズマブは、リウマチ障害の処置に使用されるＩＬ−６受容体拮抗薬である。それは、臨床試験においてはＣＲＳ関連毒性の処置に使用されたが、現在、ＣＡＲ  Ｔ細胞注入後の毒性に対して広く適応外使用されている。トシリズマブは、ＣＡＲ  Ｔ細胞注入後のＣＲＳ関連毒性を軽減又は抑制することができる。非対照試験の示唆するところによれば、ＡＬＬ患者を処置すると、ＣＡＲ  Ｔ細胞に起因するＣＲＳを処置するためにトシリズマブを投与されたときでも完全寛解が起こる。しかし、抗悪性腫瘍結果に対するトシリズマブの影響の正式な研究が行われていないので、トシリズマブがＣＡＲ  Ｔ細胞に起因する抗悪性腫瘍反応の程度又は持続時間をわずかに損なう多少の懸念が残る。さらに、トシリズマブを用いたほとんどの発表体験は、ＡＬＬに関するものである。トシリズマブは、ＡＬＬに対するＣＡＲ  Ｔ細胞の活性を損なわないとしても、リンパ腫又は別の悪性腫瘍に対するＣＡＲ  Ｔ細胞の有効性を損なう可能性がある。
【００１４】
ＣＲＳが最初のトシリズマブ投与で改善しない場合、追加用量のトシリズマブを投与すべきであり、又はコルチコステロイドなどの別の免疫抑制剤を考えるべきであるという一般的合意が存在する。ＣＲＳの特定の段階に対してではなく、具体的な血行動態及び臓器機能閾値を超えたときにトシリズマブを投与する人もいる。血液脳関門を越えるその能力についての懸念、及びトシリズマブが神経毒性を改善しなかった明らかに極少数の患者における経験から、トシリズマブは、神経毒性に対して投与されるべきではないと示唆されている。
【００１５】
全身性コルチコステロイドは、ＣＲＳ関連毒性を抑制するのに有効に使用されたが、抗ＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞注入後のＡＬＬ患者において以前に報告された通り、コルチコステロイドがＣＡＲ  Ｔ細胞持続性及び抗悪性腫瘍有効性を阻害し得る幾らかの証拠がある。このため、コルチコステロイド療法は、トシリズマブがＣＲＳを改善できなかった後に使用するために保留されている。ＣＲＳの管理に使用された、又は考慮された別の免疫抑制剤としては、シルツキシマブ、エタネルセプト、インフリキシマブ及びアナキンラが挙げられる。データ不足のために、他よりも推奨された第二選択薬はない。
【００１６】
ＣＡＲ  Ｔ細胞は、幾つかの機序によって、より重要ではないが更なる毒性を生じる可能性がある。ＣＡＲが標的とする腫瘍関連抗原が正常組織上で発現される場合、正常Ｂ細胞が抗ＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞によって使い果たされた場合と同様に、その組織は損傷を受ける可能性がある。ＣＡＲ  Ｔ細胞は、腫瘍細胞上で発現されないタンパク質と予想外に交差反応することによって正常組織を傷つける可能性がある。急性アナフィラキシー及び腫瘍崩壊症候群（ＴＬＳ：ｔｕｍｏｒ  ｌｙｓｉｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）は、ＣＡＲ  Ｔ細胞の注入後に発生するが、これらの毒性はＣＲＳよりもはるかに頻度が少ない。
【００１７】
ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の安全性に影響する要因に加えて、複数の別の要因がＣＡＲ  Ｔ細胞の有効性に影響する。有効性は、遺伝子改変ＣＡＲ  Ｔ細胞の持続性及び残存、患者に特有であると思われる細胞の最終定常状態数としての細胞数、並びに標的抗原の発現の減少又は低下を含めて、幾つかの要因に依存し得る。
【００１８】
したがって、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の有効性を維持する、又は高めると同時に、サイトカイン放出症候群、特にサイトカインストームを含む安全性の問題を管理する新規戦略が必要である。さらに、ＣＡＲ改変Ｔ細胞を用いた、又は用いない、ＣＲＳのインビトロ及びインビボモデルの開発が必要である。本明細書に開示されるのは、早期アポトーシス細胞集団の効果をサイトカイン放出及びＣＡＲ  Ｔ細胞毒性に対するそれらの有効性について試験するＣＲＳのインビトロ及びインビボモデルである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１９】
【非特許文献１】Ｓｔ．Ｃｌａｉｒ  ＥＷ：Ｔｈｅ  ｃａｌｍ  ａｆｔｅｒ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｓｔｏｒｍ：Ｌｅｓｓｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ＴＧＮ１４１２  ｔｒｉａｌ、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １１８：１３４４〜１３４７、２００８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２０】
一態様においては、本明細書に開示されるのは、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）癌治療中のＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖速度を維持する、又は増加させる方法であって、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を含む組成物をＣＡＲ  Ｔ細胞治療を受ける対象に投与するステップを含み、対象における前記増殖速度が、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清も投与されない対象と比較して維持される、又は増加する、方法である。
【００２１】
関連する一態様においては、該方法は、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療の有効性を低下させず、阻害もしない。別の関連する一態様においては、前記対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率が、前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清も投与されない対象と比較して抑制される、又は減少する。
【００２２】
関連する一態様においては、前記アポトーシス細胞は、早期アポトーシス状態のアポトーシス細胞を含む。別の関連する一態様においては、前記アポトーシス細胞は、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞治療によって処置される対象の自己のものであり、又はプールされた第三者ドナー細胞である。
【００２３】
関連する一態様においては、前記アポトーシス細胞又は前記アポトーシス細胞上清を含む前記組成物は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の前に、該治療と同時に、又は該治療の後に投与される。別の関連する一態様においては、前記アポトーシス細胞又は前記アポトーシス上清は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の前に、該治療と同時に、又は該治療の後に投与される。
【００２４】
関連する一態様においては、アポトーシス細胞上清は、アポトーシス細胞−白血球上清であり、白血球は、アポトーシス細胞−白血球上清の採取前にアポトーシス細胞と共培養される。別の関連する一態様においては、白血球は、食細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞及びＮＫ細胞からなる群から選択される。
【００２５】
関連する一態様においては、該方法は、対象におけるＩＬ−２レベルを、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清も投与されない対象と比較して維持する、又は増加させる。
【００２６】
一態様においては、本明細書に開示されるのは、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）癌治療の有効性を高める方法であって、ＣＡＲ  Ｔ細胞と、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む群から選択される追加の薬剤とを投与するステップを含み、対象における前記有効性前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記追加の薬剤を投与されない対象と比較して増加する、方法である。関連する一態様においては、少なくとも１種の炎症誘発性サイトカインの産生レベルが、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記薬剤を含む組成物を投与されない対象における前記炎症誘発性サイトカインのレベルと比較して低下する。別の関連する一態様においては、炎症誘発性サイトカインはＩＬ−６を含む。
【００２７】
関連する一態様においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清が投与されたときに、前記方法は、対象におけるＩＬ−２レベルを、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清も投与されない対象と比較して維持する、又は増加させる。別の関連する一態様においては、前記対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率が、前記追加の薬剤を投与されない対象と比較して抑制される、又は減少する。
【００２８】
関連する一態様においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞及び前記追加の薬剤又はそれらの任意の組合せは、単一の組成物に含まれる。別の関連する一態様においては、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞及び前記追加の薬剤又はそれらの任意の組合せは、少なくとも２つの組成物に含まれる。別の関連する一態様においては、前記追加の薬剤又はそれらの薬剤の任意の組合せは、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞を含まない組成物に含まれ、前記薬剤又は複数の薬剤を含む前記組成物は、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞の投与の前に、投与と同時に、又は投与の後に投与される。
【００２９】
関連する一態様においては、前記アポトーシス細胞は、早期アポトーシス状態のアポトーシス細胞を含む。別の関連する一態様においては、前記アポトーシス細胞は、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞治療によって治療される対象の自己のものであり、又はプールされた第三者ドナー細胞である。別の一態様においては、前記薬剤を含む前記組成物は、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞の投与の前に、投与と同時に、又は投与の後に投与される。
【００３０】
関連する一態様においては、前記アポトーシス細胞上清は、アポトーシス細胞−白血球上清であり、白血球は、アポトーシス細胞−白血球上清の採取前にアポトーシス細胞と共培養される。別の関連する一態様においては、供給される白血球は、食細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞及びＮＫ細胞からなる群から選択される。
【００３１】
一態様においては、本明細書に開示されるのは、対象における癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する方法であって、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）及び追加の薬剤を投与するステップを含み、前記追加の薬剤が、アポトーシス細胞、アポトーシス上清若しくはＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含み、前記方法が、前記対象における癌又は腫瘍を、ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたが前記追加の薬剤を投与されない対象と比較して、処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する、方法である。
【００３２】
関連する一態様においては、前記方法は、前記対象における前記癌又は前記腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する有効性が、ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたが前記追加の薬剤を投与されない対象と比較して高い。
【００３３】
別の関連する一態様においては、少なくとも１種の炎症誘発性サイトカインの産生レベルが、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたが前記薬剤を含む組成物を投与されない対象における前記炎症誘発性サイトカインのレベルと比較して低下する。別の関連する一態様においては、前記炎症誘発性サイトカインはＩＬ−６を含む。別の関連する一態様においては、前記追加の薬剤は、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を含み、前記方法が対象におけるＩＬ−２レベルを、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたが前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清も投与されない対象と比較して維持する、又は増加させる。
【００３４】
別の関連する一態様においては、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞及び前記追加の薬剤又はそれらの任意の組合せは、単一の組成物に含まれる。更に別の関連する一態様においては、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞及び前記追加の薬剤又はそれらの任意の組合せは、少なくとも２つの組成物に含まれる。別の関連する一態様においては、前記追加の薬剤又はそれらの薬剤の任意の組合せは、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞を含まない組成物に含まれ、前記薬剤又は複数の薬剤を含む前記組成物は、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞の投与の前に、投与と同時に、又は投与の後に投与される。
【００３５】
関連する一態様においては、前記追加の薬剤は、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞の投与の前に、投与と同時に、又は投与の後に投与される。別の関連する一態様においては、前記アポトーシス細胞は、早期アポトーシス状態のアポトーシス細胞を含む。別の関連する一態様においては、前記アポトーシス細胞は、前記対象の自己のものであり、又はプールされた第三者ドナー細胞である。
【００３６】
関連する一態様においては、前記アポトーシス細胞上清は、アポトーシス細胞−白血球上清であり、白血球は、アポトーシス細胞−白血球上清の採取前にアポトーシス細胞と共培養される。別の関連する一態様においては、供給される白血球は、食細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞及びＮＫ細胞からなる群から選択される。
【００３７】
本明細書に開示される主題は、本明細書の結論の部分に特に指摘され、明瞭にクレームされている。しかし、本明細書に開示される組成物及び方法は、機構と操作法の両方に関して、その目的、特徴及び効果と共に、以下の詳細な説明を参照して、添付図面と一緒に読むときに、最も良く理解することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】早期アポトーシス細胞集団の製造プロセスの一実施形態中のステップを示し、抗凝固薬がプロセスに含まれた、フローチャートである。
【図２Ａ】標準ＣＡＲ  Ｔ細胞治療（図２Ａ）を示す模式図である。
【図２Ｂ】患者自身の細胞（自己）を用いてアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を産生する、患者における安全で有効なＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療の方法の実施形態を示す模式図である。
【図３】ドナー細胞を用いてアポトーシス細胞又はアポトーシス上清を産生する、患者における安全で有効なＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療の方法の実施形態を示す模式図である。
【図４】導入Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の抗ＣＤ１２４分析のフローサイトメトリー結果を示すＴ細胞の導入の検証を示す図である。
【図５】２４ウェルプレート中のＳＫＯＶ３−ｌｕｃ増殖を示す図である。ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞３．８×１０４〜３．８×１０５個／ウェルを２４ウェルプレートで培養し、ルシフェラーゼ活性を毎日記録した。
【図６】Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞がＳＫＯＶ３−ｌｕｃ卵巣腺癌細胞の増殖を減少させたことを示す図である。細胞毒性試験の結果を棒グラフで示す。ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞の単層を非導入Ｔ細胞又はＴ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞によって培養した。
【図７】アポトーシス細胞がＴ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞抗腫瘍活性を抑制しないことを示す図である。結果は、細胞毒性試験に基づき、ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞の単層を、非導入Ｔ細胞又はＴ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞と一緒に、ビヒクル（Ｈａｒｔｍａｎｎ液）、又はアポトーシス細胞（Ａｐｏｃｅｌｌ）、又はアポトーシス細胞の上清（ＡｐｏＳｕｐ）、又はアポトーシス細胞と単球／マクロファージの共培養の上清（ＡｐｏＭｏｎ  Ｓｕｐ）の存在下で培養した。
【図８】ＣＡＲ−Ｔ細胞傷害性中に高レベルで分泌されるＩｌ−６は、アポトーシス細胞、又はＡｐｏＣｅｌｌ上清（ＡｐｏＳｕｐ）、又はアポトーシス細胞と単球／マクロファージの共培養物（ＡｐｏＭｏｎ  Ｓｕｐ）によって下方制御される。  ここに示す結果は、ＳＫＯＶ３−ｌｕｃとヒト単球／マクロファージの共培養の効果が、癌及びＣＡＲ−１９の存在下で、アポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）、又はＡｐｏＣｅｌｌ上清（ＡｐｏＳｕｐ）、又はアポトーシス細胞と単球／マクロファージの共培養物（ＡｐｏＭｏｎ  Ｓｕｐ）にさらされたことを示している。
【図９Ａ】アポトーシス細胞が、癌環境におけるマクロファージ活性化症候群のＬＰＳ−無菌モデルにおいて誘導されるサイトカインストームのインビトロモデルにおいてサイトカインストームを予防することを示す図である。ＬＰＳによって誘導されるＩＬ−１０レベルが、マクロファージ活性化症候群モデルにおいて癌の存在下でＡｐｏｃｅｌｌの投与後にマクロファージ／単球：Ａｐｏｃｅｌｌ比１：８及び１：１６において、２つの期間（６時間及び２４時間）で低下することを示している。
【図９Ｂ】アポトーシス細胞が、癌環境におけるマクロファージ活性化症候群のＬＰＳ−無菌モデルにおいて誘導されるサイトカインストームのインビトロモデルにおいてサイトカインストームを予防することを示す図である。ＬＰＳによって誘導されるＩＬ−６レベルが、マクロファージ活性化症候群モデルにおいてＡｐｏｃｅｌｌの投与後に癌及びＣＡＲ−１９の存在下で、マクロファージ／単球：Ａｐｏｃｅｌｌ比１：８及び１：１６において、２つの期間（６時間及び２４時間）で低下することを示している。
【図９Ｃ】アポトーシス細胞が、癌環境におけるマクロファージ活性化症候群のＬＰＳ−無菌モデルにおいて誘導されるサイトカインストームのインビトロモデルにおいてサイトカインストームを予防することを示す図である。ＬＰＳによって誘導されるＭＩＰ−１αレベルが、マクロファージ活性化症候群モデルにおいて癌及びＣＡＲ−１９の存在下で、Ａｐｏｃｅｌｌの投与後にマクロファージ／単球：Ａｐｏｃｅｌｌ比１：８及び１：１６において、２つの期間（６時間及び２４時間）で低下することを示している。
【図９Ｄ】アポトーシス細胞が、癌環境におけるマクロファージ活性化症候群のＬＰＳ−無菌モデルにおいて誘導されるサイトカインストームのインビトロモデルにおいてサイトカインストームを予防することを示す図である。ＬＰＳによって誘導されるＩＬ−８レベルが、マクロファージ活性化症候群モデルにおいて癌及びＣＡＲ−１９の存在下で、Ａｐｏｃｅｌｌの投与後にマクロファージ／単球：Ａｐｏｃｅｌｌ比１：８及び１：１６において、２つの期間（６時間及び２４時間）で低下することを示している。
【図９Ｅ】アポトーシス細胞が、癌環境におけるマクロファージ活性化症候群のＬＰＳ−無菌モデルにおいて誘導されるサイトカインストームのインビトロモデルにおいてサイトカインストームを予防することを示す図である。ＬＰＳによって誘導されるＴＮＦ−αレベルが、マクロファージ活性化症候群モデルにおいて癌及びＣＡＲ−１９の存在下で、Ａｐｏｃｅｌｌの投与後にマクロファージ／単球：Ａｐｏｃｅｌｌ比１：８及び１：１６において、２つの期間（６時間及び２４時間）で低下することを示している。
【図９Ｆ】アポトーシス細胞が、癌環境におけるマクロファージ活性化症候群のＬＰＳ−無菌モデルにおいて誘導されるサイトカインストームのインビトロモデルにおいてサイトカインストームを予防することを示す図である。ＬＰＳによって誘導されるＭＩＰ−１βレベルが、マクロファージ活性化症候群モデルにおいて癌及びＣＡＲ−１９の存在下で、Ａｐｏｃｅｌｌの投与後にマクロファージ／単球：Ａｐｏｃｅｌｌ比１：４、１：８、１：１６、１：３２及び１：６４において２４時間で低下することを示している。
【図９Ｇ】アポトーシス細胞が、癌環境におけるマクロファージ活性化症候群のＬＰＳ−無菌モデルにおいて誘導されるサイトカインストームのインビトロモデルにおいてサイトカインストームを予防することを示す図である。ＬＰＳによって誘導されるＭＩＰ−１βレベルが、マクロファージ活性化症候群モデルにおいて癌及びＣＡＲ−１９の存在下で、Ａｐｏｃｅｌｌの投与後にマクロファージ／単球：Ａｐｏｃｅｌｌ比１：４、１：８、１：１６、１：３２及び１：６４において２４時間で低下することを示している。
【図９Ｈ】アポトーシス細胞が、癌環境におけるマクロファージ活性化症候群のＬＰＳ−無菌モデルにおいて誘導されるサイトカインストームのインビトロモデルにおいてサイトカインストームを予防することを示す図である。ＬＰＳによって誘導されるＩＬ−９レベルが、マクロファージ活性化症候群モデルにおいて癌及びＣＡＲ−１９の存在下で、Ａｐｏｃｅｌｌの投与後にマクロファージ／単球：Ａｐｏｃｅｌｌ比１：８及び１：１６において、２つの期間（６時間及び２４時間）で低下することを示している。
【図９Ｉ】アポトーシス細胞が、癌環境におけるマクロファージ活性化症候群のＬＰＳ−無菌モデルにおいて誘導されるサイトカインストームのインビトロモデルにおいてサイトカインストームを予防することを示す図である。ＬＰＳによって誘導されるＩＬ−２Ｒレベルが、マクロファージ活性化症候群モデルにおいて癌及びＣＡＲ−１９の存在下で、Ａｐｏｃｅｌｌの投与後にマクロファージ／単球：Ａｐｏｃｅｌｌ比１：４、１：８、１：１６、１：３２及び１：６４において２４時間で増加することを示している。
【図９Ｊ】アポトーシス細胞が、癌環境におけるマクロファージ活性化症候群のＬＰＳ−無菌モデルにおいて誘導されるサイトカインストームのインビトロモデルにおいてサイトカインストームを予防することを示す図である。アポトーシス細胞が細胞からのＩＬ−２放出を下方制御しないことを示す図である。アポトーシス細胞をマクロファージ／単球と一緒に癌及びＣＡＲ−１９の存在下で２４時間、アポトーシス細胞の用量を増やしながら（ｎ＝３）インキュベートした。白抜きの棒（輪郭のみ）−アポトーシス細胞２．５×１０６個／ウェル、黒色−アポトーシス細胞５×１０６個／ウェル、灰色−アポトーシス細胞１０×１０６個／ウェル。
【図１０】ＣＡＲ  Ｔ細胞臨床治療を模倣したＣＡＲ  Ｔ細胞処置中のＬＰＳ曝露後のアポトーシス細胞、又はアポトーシス細胞上清、又はアポトーシス細胞と単球の共培養の効果を示す図である。リポ多糖（ＬＰＳ）を細胞毒性試験に添加したときのＩＬ−６の極めて高い分泌については記述されている。結果によれば、アポトーシス細胞（Ａｐｏｃｅｌｌ）、又はアポトーシス細胞の上清（ＡｐｏＳｕｐ）、又はアポトーシス細胞と単球／マクロファージの共培養の上清（ＡｐｏＭｏｎ  Ｓｕｐ）への曝露は、ＩＬ−６を下方制御し、ＩＬ−６は許容レベルに減少する。
【図１１Ａ】選別時のマウスの体重及び腫瘍サイズを示す図である。図１１Ａは、実験期間の体重変化を示す。青色−対照  ４．５×１０６個のＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞は投与されなかった。赤色−０．５×１０６個のＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞。緑色−１．０×１０６個のＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞。紫色−４．５×１０６個のＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞。
【図１１Ｂ】選別時のマウスの体重及び腫瘍サイズを示す図である。注射後３９日目の４．５×１０６個のＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞を投与したマウスの代表的なＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍である。
【図１２】ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍増殖を示す図である。生物発光イメージング（ＢＬＩ）によって画像化されたＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍を有するマウスであり、対照（ＰＢＳ）と０．５×１０６、１×１０６及び４．５×１０６個のＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞接種の差を示す。
【図１３Ａ】ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍量を示す図である。インビボのＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍の生物発光（ＢＬＩ）の定量化（図１２参照）。６００光子カウントカットオフを製造者によって指示された通りに行った。０．５×１０６個のＳＫＯＶ３−ｌｕｃを接種したマウス。
【図１３Ｂ】ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍量を示す図である。インビボのＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍の生物発光（ＢＬＩ）の定量化（図１２参照）。６００光子カウントカットオフを製造者によって指示された通りに行った。１×１０６個のＳＫＯＶ３−ｌｕｃを接種したマウス。
【図１３Ｃ】ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍量を示す図である。インビボのＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍の生物発光（ＢＬＩ）の定量化（図１２参照）。６００光子カウントカットオフを製造者によって指示された通りに行った。４．５×１０６個のＳＫＯＶ３−ｌｕｃを接種したマウス。
【図１３Ｄ】ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍量を示す図である。インビボのＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍の生物発光（ＢＬＩ）の定量化（図１２参照）。６００光子カウントカットオフを製造者によって指示された通りに行った。平均ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍増殖。
【図１４】Ｒａｊｉ  Ｂｕｒｋｅｔｔリンパ腫細胞の細胞傷害性較正を示す図である。Ｒａｊｉ細胞を様々な細胞密度で培養し、遠心分離の直前に細胞溶解した。結果は、Ｒａｊｉ細胞数（ｘ軸）対４９２ｎｍにおける吸光度（ｙ軸）を示す。すべての細胞数は、不溶対応物に比べて有意な読みを示した。
【図１５】早期アポトーシス細胞の添加がＣＡＲ  Ｔ細胞抗腫瘍活性に影響しないことを示す図である。Ｅ／Ｔ比は、ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞とＨｅＬａ細胞の比を示す。生存は、ＣＤ１９＋腫瘍細胞のものである。塗りつぶしの円ＣＤ１９＋Ｈｅｌａ、白抜きの三角形ＣＤ１９＋Ｈｅｌａ＋ナイーブＴ細胞、塗りつぶしの三角形ＣＤ１９＋Ｈｅｌａ＋ＣＡＲ  Ｔ−ＣＤ１９、白抜きの円ＣＤ１９＋Ｈｅｌａ＋ＣＡＲ  Ｔ−ＣＤ１９＋ＡｐｏＣｅｌｌ。
【図１６】アポトーシス細胞の存在下及び非存在下でのＲａｊｉ  Ｂｕｒｋｅｔｔリンパ腫細胞におけるサイトカイン分析（ＧＭ−ＣＳＦ）を示す図である。棒グラフは、単球及びＬＰＳの存在下でインキュベートされ、続いてナイーブＴ細胞（Ｒａｊｉ＋ナイーブＴ）、ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞（Ｒａｊｉ＋ＣＡＲ  Ｔ）、ＣＡＲ  Ｔ細胞：ＡｐｏＣｅｌｌ１：８の比のＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞とアポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）（Ｒａｊｉ＋ＣＡＲ  Ｔ＋ＡｐｏＣｅｌｌ１：８）、ＣＡＲ  Ｔ細胞：ＡｐｏＣｅｌｌ１：３２の比のＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞とアポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）（Ｒａｊｉ＋ＣＡＲ  Ｔ＋ＡｐｏＣｅｌｌ１：３２）、及びＣＡＲ  Ｔ細胞：ＡｐｏＣｅｌｌ１：６４の比のＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞とアポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）（Ｒａｊｉ＋ＣＡＲ  Ｔ＋ＡｐｏＣｅｌｌ１：６４）が添加されたＲａｊｉ細胞の培養上清中に存在するサイトカインＧＭ−ＣＳＦ（ｐｇ／ｍｌ）の濃度測定を示す。
【図１７】アポトーシス細胞の存在下及び非存在下でのＲａｊｉ  Ｂｕｒｋｅｔｔリンパ腫細胞におけるサイトカイン分析（ＴＮＦ−アルファ）を示す図である。棒グラフは、単球及びＬＰＳの存在下でインキュベートされ、続いてナイーブＴ細胞（Ｒａｊｉ＋ナイーブＴ）、ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞（Ｒａｊｉ＋ＣＡＲ  Ｔ）、ＣＡＲ  Ｔ細胞：ＡｐｏＣｅｌｌ１：８の比のＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞とアポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）（Ｒａｊｉ＋ＣＡＲ  Ｔ＋ＡｐｏＣｅｌｌ１：８）、ＣＡＲ  Ｔ細胞：ＡｐｏＣｅｌｌ１：３２の比のＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞とアポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）（Ｒａｊｉ＋ＣＡＲ  Ｔ＋ＡｐｏＣｅｌｌ１：３２）、及びＣＡＲ  Ｔ細胞：ＡｐｏＣｅｌｌ１：６４の比のＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞とアポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）（Ｒａｊｉ＋ＣＡＲ  Ｔ＋ＡｐｏＣｅｌｌ１：６４）が添加されたＲａｊｉ細胞の培養上清中に存在するサイトカインＴＮＦ−アルファ（ＴＮＦ−α）（ｐｇ／ｍｌ）の濃度測定を示す。
【図１８Ａ】ＣＡＲ  Ｔ細胞治療に対するアポトーシス細胞の影響を分析する実験スキームを示す図である。ＳＣＩＤマウスに１日目にＲａｊｉ癌細胞を注射し、続いて６日目にＣＡＲ  Ｔ−ＣＤ１９細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞治療）及びアポトーシス細胞を投与した。
【図１８Ｂ】ＣＡＲ  Ｔ細胞治療がＡｐｏＣｅｌｌの同時投与によって負の影響を受けなかったことを示す図である。生存曲線：ＳＣＩＤマウスに、早期アポトーシス細胞を添加して、又は添加せずに、ＣＤ１９＋Ｒａｊｉ細胞を注射した。
【図１９Ａ】固形腫瘍インビボモデルにおいて、腫瘍からの炎症誘発性サイトカインの放出の増加を示す図である。ＢＡＬＢ／ｃ及びＳＣＩＤマウスの腹膜に存在する固形腫瘍から放出されるＩＬ−６のわずかな増加を示し、ＩＬ−６放出は、ＨｅＬａ  ＣＡＲ−ＣＤ−１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞の存在下でかなり増加する。
【図１９Ｂ】固形腫瘍インビボモデルにおいて、腫瘍からの炎症誘発性サイトカインの放出の増加を示す図である。ＢＡＬＢ／ｃ及びＳＣＩＤマウスの腹膜に存在する固形腫瘍から放出されるＩＰ−１０のわずかな増加を示し、ＩＰ−１０放出は、ＨｅＬａ  ＣＡＲ−ＣＤ−１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞の存在下でかなり増加する。
【図１９Ｃ】固形腫瘍インビボモデルにおいて、腫瘍からの炎症誘発性サイトカインの放出の増加を示す図である。驚くべきことに、ＴＮＦ−α放出でさえもＨｅＬａ  ＣＡＲ−ＣＤ−１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞の存在下で増加することを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
以下の詳細な説明においては、本明細書に開示される方法を十分に理解するために、多数の具体的詳細を述べる。しかし、これらの方法をこれらの具体的詳細なしに実行し得ることを当業者は理解されたい。別の例においては、本明細書に開示される方法を不明瞭にしないように、周知の方法、手順及び構成要素を詳述しなかった。
【００４０】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）癌治療中のＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖速度を維持する、又は増加させる方法であって、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を含む組成物を前記対象に投与するステップを含み、対象における前記増殖速度が、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清も投与されない対象と比較して維持される、又は増加する、方法である。
【００４１】
関連する一実施形態においては、該方法は、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療の有効性を低下させず、阻害もしない。別の関連する一実施形態においては、前記対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率が、前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清も投与されない対象と比較して抑制される、又は減少する。
【００４２】
一実施形態においては、ＣＲＳは、自発的に発生する。別の一実施形態においては、ＣＲＳは、ＬＰＳに反応して発生する。別の一実施形態においては、ＣＲＳは、ＩＦＮ−γに反応して発生する。
【００４３】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）癌治療の有効性を高める方法であって、ＣＡＲ  Ｔ細胞と、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む群から選択される追加の薬剤とを投与するステップを含み、対象における前記有効性前記ＣＡＲ  Ｔ細胞が、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記追加の薬剤を投与されない対象と比較して増加する、方法である。関連する一実施形態においては、少なくとも１種の炎症誘発性サイトカインの産生レベルが、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記薬剤を含む組成物を投与されない対象における前記炎症誘発性サイトカインのレベルと比較して低下する。別の関連する一実施形態においては、炎症誘発性サイトカインはＩＬ−６を含む。
【００４４】
関連する一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清が投与されたときに、前記方法が対象におけるＩＬ−２レベルを、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清も投与されない対象と比較して増加させる。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清が投与されたときに、前記方法が対象におけるＩＬ−２レベルを、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清も投与されない対象と比較して維持する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清が投与されたときに、前記方法が対象におけるＩＬ−２レベルを、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清も投与されない対象と比較して維持する、又は増加させる。別の関連する一実施形態においては、前記対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率が、前記追加の薬剤を投与されない対象と比較して抑制される、又は減少する。
【００４５】
関連する一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞及び前記追加の薬剤又はそれらの任意の組合せは、単一の組成物に含まれる。別の関連する一実施形態においては、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞及び前記追加の薬剤又はそれらの任意の組合せは、少なくとも２つの組成物に含まれる。
【００４６】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する方法であって、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）及び追加の薬剤を投与するステップを含み、前記追加の薬剤が、アポトーシス細胞、アポトーシス上清若しくはＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含み、前記方法が、前記対象における癌又は腫瘍を、ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたが前記追加の薬剤を投与されない対象と比較して、処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する、方法である。
【００４７】
関連する一実施形態においては、前記方法は、前記対象における前記癌又は前記腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する有効性が、ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたが前記追加の薬剤を投与されない対象と比較して高い。別の関連する一実施形態においては、少なくとも１種の炎症誘発性サイトカインの産生レベルが、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたが前記薬剤を含む組成物を投与されない対象における前記炎症誘発性サイトカインのレベルと比較して低下する。別の関連する一実施形態においては、前記炎症誘発性サイトカインはＩＬ−６を含む。別の関連する一実施形態においては、前記追加の薬剤は、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を含み、前記方法が対象におけるＩＬ−２レベルを、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたが前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清も投与されない対象と比較して増加させる。別の関連する一実施形態においては、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞及び前記追加の薬剤又はそれらの任意の組合せは、単一の組成物に含まれる。更に別の関連する一実施形態においては、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞及び前記追加の薬剤又はそれらの任意の組合せは、少なくとも２つの組成物に含まれる。
【００４８】
関連する一実施形態においては、前記追加の薬剤は、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞の投与の前に、投与と同時に、又は投与の後に投与される。別の関連する一実施形態においては、前記アポトーシス細胞は、早期アポトーシス状態のアポトーシス細胞を含む。別の関連する一実施形態においては、前記アポトーシス細胞は、前記対象の自己のものであり、又はプールされた第三者ドナー細胞である。
【００４９】
関連する一実施形態においては、前記アポトーシス細胞上清は、（ａ）アポトーシス細胞を用意するステップ、（ｂ）ステップ（ａ）の細胞を培養するステップ、及び（ｃ）上清を細胞から分離するステップを含む方法によって得られる。別の関連する一実施形態においては、前記アポトーシス細胞上清は、アポトーシス細胞−白血球上清であり、前記方法は、更に（ｄ）白血球を用意するステップ、（ｅ）場合によってはアポトーシス細胞及び白血球を洗浄するステップ、（ｆ）アポトーシス細胞と白血球を共培養するステップを含み、ステップ（ｄ）〜（ｆ）は、ステップ（ｂ）の代わりである。別の関連する一実施形態においては、供給される白血球は、食細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞及びＮＫ細胞からなる群から選択される。したがって、一部の実施形態においては、アポトーシス上清は、アポトーシス細胞をマクロファージと一緒に培養することによって生成する上清を含み、マクロファージはアポトーシス細胞を摂取し、この共培養から生成した上清が使用される。一部の実施形態においては、アポトーシス上清は、アポトーシス細胞を培養することによって生成する上清を含み、上清は、アポトーシス細胞によって分泌される材料から生成する。
【００５０】
遺伝子改変免疫細胞
免疫細胞の遺伝子改変は、癌に対する免疫細胞治療の戦略としてよく知られている。これらの免疫細胞治療は、必要としている対象の自己又は同種免疫細胞の操作及び投与に基づく。免疫細胞に基づく治療としては、ナチュラルキラー細胞治療、樹状突起細胞治療、並びにナイーブＴ細胞、ヘルパーＴ細胞としても知られるエフェクターＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、及び制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を利用するものを含めたＴ細胞免疫療法が挙げられる。
【００５１】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、遺伝子改変免疫細胞を含む組成物である。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞は、Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞はナイーブＴ細胞である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞はナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞はナイーブＴ細胞である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞はナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞は、樹状細胞である。更に別の一実施形態においては、遺伝子改変Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ細胞）である。別の一実施形態においては、遺伝子改変Ｔ細胞は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。別の一実施形態においては、遺伝子改変Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、遺伝子改変Ｔ細胞は、遺伝子改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ：Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）細胞である。
【００５２】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、遺伝子改変免疫細胞と、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む群から選択される追加の薬剤とを含む組成物である。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、遺伝子改変免疫細胞と、アポトーシス細胞と、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む群から選択される追加の薬剤とを含む組成物である。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、遺伝子改変免疫細胞と、アポトーシス細胞上清と、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む群から選択される追加の薬剤とを含む組成物である。
【００５３】
一実施形態においては、免疫細胞は細胞傷害性である。別の一実施形態においては、遺伝子改変用細胞傷害性細胞は、対象（自己）又はドナー（同種）の骨髄から得ることができる。別の場合には、細胞は、幹細胞から得られる。例えば、細胞傷害性細胞は、ヒト胚性幹細胞、ヒト誘導多能性Ｔ細胞などのヒト多能性幹細胞から誘導することができる。人工多能性幹細胞（ＩＰＳＣ：ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ）の場合、こうした多能性Ｔ細胞は、遺伝子改変細胞傷害性細胞が供給される対象からの体細胞を用いて得ることができる。一実施形態においては、免疫細胞は、静脈穿刺によって、除去療法によって、白血球動員とそれに続く除去療法若しくは静脈穿刺によって、又は骨髄穿刺によって、細胞を収集することによって、対象又はドナーから得ることができる。
【００５４】
一実施形態においては、免疫細胞、例えばＴ細胞は、特定の要因の存在によってインビボで産生され、増殖する。別の一実施形態においては、Ｔ細胞の産生及び維持は、インビボでサイトカインによって影響される。別の一実施形態においては、インビボでヘルパーＴ細胞の産生及び維持に影響するサイトカインは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＩＬ−２５、ＩＬ−３３及びＴＧＦβを含む。別の一実施形態においては、Ｔｒｅｇ細胞は、ナイーブＴ細胞からサイトカイン誘導によってインビボで産生される。更に別の一実施形態においては、ＴＧＦ−β及び／又はＩＬ−２は、ナイーブＴ細胞が分化してＴｒｅｇ細胞になるのにある役割を果たす。
【００５５】
別の一実施形態においては、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＩＬ−２５、ＩＬ−３３及びＴＧＦβを含む群から選択されるサイトカインの存在は、インビボでＴ細胞の増殖速度を維持するか、若しくは増加させるか、又は維持し、増加させる。別の一実施形態においては、サイトカインＩＬ−２及び／又はＴＧＦβの存在は、インビボでＴ細胞の増殖速度を維持するか、若しくは増加させるか、又は維持し、増加させる。別の一実施形態においては、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＩＬ−２５、ＩＬ−３３及びＴＧＦβを含む群から選択されるサイトカインの存在は、インビボでＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖速度を維持するか、若しくは増加させるか、又は維持し、増加させる。別の一実施形態においては、サイトカインＩＬ−２及び／又はＴＧＦβの存在は、インビボでＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖速度を維持するか、若しくは増加させるか、又は維持し、増加させる。別の一実施形態においては、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＩＬ−２５、ＩＬ−３３及びＴＧＦβを含む群から選択されるサイトカインの存在は、インビボでＴＣＲ  Ｔ細胞の増殖速度を維持するか、若しくは増加させるか、又は維持し、増加させる。別の一実施形態においては、サイトカインＩＬ−２及び／又はＴＧＦβの存在は、インビボでＴＣＲ  Ｔ細胞の増殖速度を維持するか、若しくは増加させるか、又は維持し、増加させる。別の一実施形態においては、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＩＬ−２５、ＩＬ−３３及びＴＧＦβを含む群から選択されるサイトカインの存在は、インビボでＴ−ｒｅｇ細胞の増殖速度を維持するか、若しくは増加させるか、又は維持し、増加させる。別の一実施形態においては、サイトカインＩＬ−２及び／又はＴＧＦβの存在は、インビボでＴ−ｒｅｇ細胞の増殖速度を維持するか、若しくは増加させるか、又は維持し、増加させる。
【００５６】
一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質又はＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の発現又は形態が変化したＴ細胞は、長期間維持されるか、若しくは増殖速度が速いか、又は長期間維持され、増殖速度が速い。別の一実施形態においては、前記発現の変化は、発現ＳＴＡＴ５Ｂポリペプチドを増加させる。別の一実施形態においては、前記発現の変化は、ＢＡＣＨ２ポリペプチドの発現を増加させる。
【００５７】
別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の発現が変化したＴ細胞は、インビボで長期間維持されるか、又は増殖速度が速い。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の発現が変化したＴ細胞は、インビボで長期間維持されるか、又は増殖速度が速い。別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の形態が変化したＴ細胞は、インビボで長期間維持されるか、又は増殖速度が速い。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の形態が変化したＴ細胞は、インビボで長期間維持されるか、又は増殖速度が速い。
【００５８】
別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の発現が変化したＴ細胞は、インビボで１年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の発現が変化したＴ細胞は、インビボで２年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の発現が変化したＴ細胞は、インビボで３年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の発現が変化したＴ細胞は、インビボで４年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の発現が変化したＴ細胞は、インビボで５年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の発現が変化したＴ細胞は、インビボで１０年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の発現が変化したＴ細胞は、インビボで２０年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。
【００５９】
別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の発現が変化したＴ細胞は、インビボで１年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の発現が変化したＴ細胞は、インビボで２年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の発現が変化したＴ細胞は、インビボで３年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の発現が変化したＴ細胞は、インビボで４年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の発現が変化したＴ細胞は、インビボで５年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の発現が変化したＴ細胞は、インビボで１０年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の発現が変化したＴ細胞は、インビボで２０年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。
【００６０】
別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の形態が変化したＴ細胞は、インビボで１年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の形態が変化したＴ細胞は、インビボで２年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の形態が変化したＴ細胞は、インビボで３年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の形態が変化したＴ細胞は、インビボで４年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の形態が変化したＴ細胞は、インビボで５年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の形態が変化したＴ細胞は、インビボで１０年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の形態が変化したＴ細胞は、インビボで２０年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。
【００６１】
別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の形態が変化したＴ細胞は、インビボで１年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の形態が変化したＴ細胞は、インビボで２年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の形態が変化したＴ細胞は、インビボで３年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の形態が変化したＴ細胞は、インビボで４年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の形態が変化したＴ細胞は、インビボで５年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の形態が変化したＴ細胞は、インビボで１０年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の形態が変化したＴ細胞は、インビボで２０年以上それらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。
【００６２】
別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の発現が変化したＣＡＲ  Ｔ細胞は、インビボで長期間維持されるか、又は増殖速度が速い。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の発現が変化したＣＡＲ  Ｔ細胞は、インビボで長期間維持されるか、又は増殖速度が速い。別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の形態が変化したＣＡＲ  Ｔ細胞は、インビボで長期間維持されるか、又は増殖速度が速い。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の形態が変化したＣＡＲ  Ｔ細胞は、インビボで長期間維持されるか、又は増殖速度が速い。
【００６３】
別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の発現が変化したＴＣＲ  Ｔ細胞は、インビボで長期間維持されるか、又は増殖速度が速い。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の発現が変化したＴＣＲ  Ｔ細胞は、インビボで長期間維持されるか、又は増殖速度が速い。別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の形態が変化したＴＣＲ  Ｔ細胞は、インビボで長期間維持されるか、又は増殖速度が速い。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の形態が変化したＴＣＲ  Ｔ細胞は、インビボで長期間維持されるか、又は増殖速度が速い。
【００６４】
別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の発現が変化したＴｒｅｇ細胞は、インビボでそれらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の発現が変化したＴｒｅｇ細胞は、インビボでそれらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＳＴＡＴ５Ｂにコードされたタンパク質の形態が変化したＴｒｅｇ細胞は、インビボでそれらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。別の一実施形態においては、ＢＡＣＨ２にコードされたタンパク質の形態が変化したＴｒｅｇ細胞は、インビボでそれらの増殖速度を維持するか、又は増加させる。
【００６５】
一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞の増殖速度を維持する、又は増加させる方法が本明細書に開示され、該方法は、アポトーシス細胞又はアポトーシス上清を投与するステップを含む。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞の有効性を高める方法が本明細書に開示され、該方法は、アポトーシス細胞、アポトーシス上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む追加の薬剤を投与するステップを含む。別の一実施形態においては、本明細書に開示される癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する方法は、遺伝子改変免疫細胞及び追加の薬剤を投与し、前記追加の薬剤は、アポトーシス細胞、アポトーシス上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む。
【００６６】
キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）
一実施形態においては、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、細胞外腫瘍結合部分と融合した細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインで構成される抗原標的受容体の１タイプ、最も一般的にはモノクローナル抗体由来の単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。ＣＡＲは、ＭＨＣ媒介性提示とは無関係に、細胞表面抗原を直接認識し、すべての患者において任意の所与の抗原に特異的な単一受容体構築物の使用を可能にする。最初のＣＡＲは、抗原認識ドメインをＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体のＣＤ３ζ活性化鎖に融合させた。これらの第一世代ＣＡＲは、Ｔ細胞エフェクター機能をインビトロで誘導したが、それらは、インビボで抗腫瘍効率が低いために制約が大きかった。それに続くＣＡＲの後継は、ＣＤ２８、又は４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）などの種々のＴＮＦ受容体ファミリー分子由来の細胞内ドメインを含めて、ＣＤ３ζと協同して第二の共刺激シグナルを含んだ。さらに、第三世代受容体は、最も一般的にはＣＤ２８及び４−１ＢＢ由来の、ＣＤ３ζに加えて２つの共刺激シグナルを含んだ。第二及び第三世代ＣＡＲは、抗腫瘍効率を劇的に改善し、場合によっては、進行癌患者において完全寛解をもたらした。
【００６７】
一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、抗原受容体を含む免疫応答細胞であり、その受容体がその抗原に結合すると活性化される。
【００６８】
一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法に使用されるＣＡＲ  Ｔ細胞は、第一世代ＣＡＲ  Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法に使用されるＣＡＲ  Ｔ細胞は、第二世代ＣＡＲ  Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法に使用されるＣＡＲ  Ｔ細胞は、第三世代ＣＡＲ  Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法に使用されるＣＡＲ  Ｔ細胞は、第四世代ＣＡＲ  Ｔ細胞である。一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞の各世代は、前の世代のＣＡＲ  Ｔ細胞よりも強力である。
【００６９】
一実施形態においては、第一世代ＣＡＲは、１つのシグナル伝達ドメイン、一般にはＣＤ３  ＴＣＲζ鎖の細胞質シグナル伝達ドメインを有する。
【００７０】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるＣＡＲ  Ｔ細胞は、第二世代ＣＡＲ  Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるＣＡＲ  Ｔ細胞は、三要素キメラ受容体（ＴＰＣＲ：ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）を含む。一実施形態においては、本明細書に開示されるＣＡＲ  Ｔ細胞は、共刺激に依存しない様式でナイーブＴ細胞を活性化する１個以上のシグナル伝達部分を含む。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、更に腫瘍壊死因子受容体ファミリーの１つ以上のメンバーをコードし、該メンバーは、一実施形態においては、ＣＤ２７、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）若しくはＯＸ４０（ＣＤ１３４）又はそれらの組合せである。
【００７１】
第三世代ＣＡＲ  Ｔ細胞は、２つの共刺激ドメイン、すなわち一実施形態においては、ＣＤ２８ドメイン、続いて４−１ＢＢ又はＯＸ−４０シグナル伝達ドメインのシグナル伝達能力を利用しようとするものである。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法に使用されるＣＡＲ  Ｔ細胞は、一実施形態においてはＣＤ２８である、共刺激シグナル伝達ドメインを更にコードする。別の一実施形態においては、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ鎖、ＣＤ９７、ＧＤＩ  ｌａ−ＣＤ１８、ＣＤ２、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＣＤ１５４、ＣＤＳ、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、又はそれらの組合せである。
【００７２】
一実施形態においては、テロメア長及び複製能力は、養子移入Ｔ細胞系の移植効率及び抗腫瘍効率と相関する。一実施形態においては、ＣＤ２８刺激は、Ｔ細胞におけるテロメア長を維持する。
【００７３】
一実施形態においては、ＣＡＲ改変Ｔ細胞能力は、増殖性サイトカイン（すなわち、ＩＬ−１２）又は共刺激リガンド（すなわち、４−１ＢＢＬ）をコードするものを含めて、追加の遺伝子の導入によって更に増強することができ、したがって「強化された（ａｒｍｏｒｅｄ）」第四世代ＣＡＲ改変Ｔ細胞を生成することができる。一実施形態においては、「強化されたＣＡＲ  Ｔ細胞」は、抑制性腫瘍微小環境から保護されたＣＡＲ  Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、「強化された」ＣＡＲ技術は、全身性副作用を最小限にすることを目的に、可溶性シグナル伝達タンパク質の局所分泌を取り込んで、腫瘍微小環境内の免疫応答を増幅する。一実施形態においては、シグナル伝達タンパク質シグナルは、Ｔ細胞活性化及び動員を刺激することができるＩＬ−１２である。一実施形態においては、「強化された」ＣＡＲ技術は、固形腫瘍適応症において特に有用であり、微小環境及び強力な免疫抑制機序は、堅牢な抗腫瘍応答の確立をより困難にする可能性がある。
【００７４】
一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、遺伝子改変されて、アポトーシス予防、腫瘍微小環境の再構築、恒常的増殖の誘導、及び定方向のＴ細胞ホーミングを促進するケモカイン受容体に関与する分子をコードする。
【００７５】
別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法に使用されるＣＡＲ  Ｔ細胞治療は、サイトカイン導入遺伝子の発現、小分子阻害剤との併用療法、又はモノクローナル抗体を用いて、強化される。別の一実施形態においては、腫瘍細胞をより明確に標的にする二重ＣＡＲ及びケモカイン受容体を用いることを含めて、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の改良を目的とした別の戦略は、本明細書に開示されるＣＡＲ  Ｔ細胞及びＣＡＲ  Ｔ細胞治療の一部と考えられる。
【００７６】
一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法のＣＡＲ  Ｔ細胞は、癌細胞対正常細胞に対するＣＡＲ  Ｔ細胞の特異性を高めるために、抑制又は増幅シグナルをもたらし得る第２の結合ドメインを含む。例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、１種の標的タンパク質の存在下で誘発されるが、第２のタンパク質が存在する場合には抑制されるように、操作することができる。あるいは、最大活性化には２種の標的タンパク質が必要であるように操作することもできる。これらの手法は、正常組織に比べて腫瘍に対するＣＡＲの特異性を高めることができる。
【００７７】
一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法に使用されるＣＡＲ  Ｔ細胞は、抗体に基づいた外部受容体構造、及び免疫受容活性化チロシンモチーフで構成されるシグナル伝達モジュールをコードするサイトゾルドメインをコードする。
【００７８】
一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、更に、免疫抑制活性を有するポリペプチドに結合する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）をコードする。別の一実施形態においては、免疫抑制活性を有するポリペプチドは、ＣＤ４７、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４又はそれらの組合せである。
【００７９】
一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、更に、免疫賦活性を有するポリペプチドに結合する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）をコードする。別の一実施形態においては、免疫賦活性を有するポリペプチドは、ＣＤ２８、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ又はそれらの組合せである。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、更に、一実施形態においては抗原の免疫賦活性を増強する、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）をコードする。
【００８０】
一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、免疫細胞を対象から得るステップ、及び免疫細胞を遺伝子改変して、キメラ抗原受容体を発現するステップを含む。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、免疫細胞を対象から得るステップ、免疫細胞を遺伝子改変して、キメラ抗原受容体を発現するステップ、及びアポトーシス細胞集団と組み合わせるステップを含み、対象におけるサイトカイン産生が減少するが、アポトーシス細胞集団を投与されないＣＡＲを発現する免疫細胞に比べて細胞傷害性が実質的に影響されない（図２Ａ〜２Ｂ及び３）。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、免疫細胞を対象から得るステップ、免疫細胞を遺伝子改変して、キメラ抗原受容体を発現するステップ、及びアポトーシス細胞上清又は上清を含む組成物と組み合わせるステップを含み、対象におけるサイトカイン産生が減少するが、アポトーシス細胞上清を投与されないＣＡＲを発現する免疫細胞に比べて細胞傷害性が実質的に影響されない。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞集団又はアポトーシス細胞からの上清の投与は、キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞の有効性を低下させない。
【００８１】
したがって、本明細書に開示される一実施形態は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む細胞傷害性免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞又はＴ細胞）に関し、該細胞は、それらの細胞傷害機能を保持する。別の一実施形態においては、キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞に対して外来性である。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、組換え発現される。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ベクターから発現される。
【００８２】
一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞の生成に利用されるＴ細胞は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞の生成に利用されるＴ細胞は、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞の生成に利用されるＴ細胞は、エフェクターＴ細胞である。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞の生成に利用されるＴ細胞は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞の生成に利用されるＴ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。
【００８３】
ＣＡＲ  Ｔ細胞は、文献に広範に記述されており、例えば、Ｔｈｅｍｅｌｌｉら（２０１５）、Ｎｅｗ  Ｃｅｌｌ  Ｓｏｕｒｃｅｓ  ｆｏｒ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ａｄｏｐｔｉｖｅ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ、Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  １６：３５７〜３６６；Ｓｈａｒｐｅ及びＭｏｕｎｔ（２０１５）、Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ：  ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ、Ｄｉｓｅａｓ  Ｍｏｄｅｌｓ  ＆  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ８：３３７〜３５０；Ｈａｎら（２０１３）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ６：４７〜５３；Ｗｉｌｋｉｅら（２０１０）Ｊ  Ｂｉｏ  Ｃｈｅｍ  ２８５（３３）：２５５３８〜２５５４４；及びｖａｎ  ｄｅｒ  Ｓｔｅｇｅｎら（２０１３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９１：４５８９〜４５９８を参照されたい。ＣＡＲ  Ｔ細胞は、Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｌａｂｓ（ＮＹ  ＵＳＡ）などの商業供給源から注文することができ、Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｌａｂｓ（ＮＹ  ＵＳＡ）は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の注文に応じた構成及び製造サービスを提供し、組換えアデノウイルスワクチンによってコードされた防御免疫を誘導することができる既製のＣＡＲ構築物貯蔵品も提供する。
【００８４】
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）細胞
一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞に加えて、又はその代わりに、デザイナーＴ細胞受容体（ＴＣＲ）細胞を利用する。ＴＣＲは、Ｔ細胞の抗原特異的活性化を媒介する多サブユニット膜貫通複合体である。ＴＣＲは、２本の異なるポリペプチド鎖で構成される。ＴＣＲは、標的細胞、例えば腫瘍又は癌細胞上の抗原エピトープを認識することによって、Ｔ細胞上で抗原特異性を与える。腫瘍又は癌細胞上に存在する抗原との接触後、Ｔ細胞は増殖して、表現型を獲得し、それらが癌又は腫瘍細胞を除去できるように機能する。
【００８５】
一実施形態においては、ＴＣＲ  Ｔ細胞治療は、目的タンパク質のエピトープに特異的であるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をＴ細胞に導入するステップを含む。別の一実施形態においては、目的タンパク質は、腫瘍関連抗原である。別の一実施形態においては、遺伝子操作されたＴＣＲは、Ｔ細胞活性化ドメインと一緒に腫瘍細胞上で主要組織適合複合体（ＭＨＣ：ｍａｊｏｒ  ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｃｏｍｐｌｅｘ）によって提示される腫瘍抗原エピトープを認識する。別の一実施形態においては、Ｔ細胞受容体は、抗原をそれらの細胞内又は膜局在化に無関係に認識する。別の一実施形態においては、ＴＣＲは、腫瘍関連抗原を細胞内で発現する腫瘍細胞を認識する。一実施形態においては、ＴＣＲは内部抗原を認識する。別の一実施形態においては、ＴＣＲは、血管新生因子を認識する。別の一実施形態においては、血管新生因子は、新しい血管の形成に関与する分子である。種々の遺伝子改変Ｔ細胞受容体及びそれらの製造方法が当該技術分野で既知である。
【００８６】
一実施形態においては、ＴＣＲ  Ｔ細胞治療を使用して、癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、改善する、その発生率を減少させる、又は軽減する。一実施形態においては、ＴＣＲ  Ｔ細胞治療を使用して、血液腫瘍（リンパ腫及び白血病）及び固形腫瘍（難治性黒色腫、肉腫）を有するものを含めて、進行型転移性疾患を処置する、予防する、阻害する、改善する、その発生率を減少させる、又は軽減する。一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法に使用されるＴＣＲ  Ｔ細胞治療は、Ｓａｄｅｌａｉｎら（Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．２０１３  Ａｐｒ；３（４）：３８８〜３９８）の表１に列挙された悪性腫瘍を処置する。
【００８７】
別の一実施形態においては、Ｔ細胞受容体は、ＮＹ−ＥＳＯ−１エピトープに結合するように遺伝子改変され、ＴＣＲが操作されたＴ細胞は、抗ＮＹ−ＥＳＯ−１である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞受容体は、ＨＰＶ−１６  Ｅ６エピトープに結合するように遺伝子改変され、ＴＣＲが操作されたＴ細胞は、抗ＨＰＶ−１６  Ｅ６である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞受容体は、ＨＰＶ−１６  Ｅ７エピトープに結合するように遺伝子改変され、ＴＣＲが操作されたＴ細胞は、抗ＨＰＶ−１６  Ｅ７である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞受容体は、ＭＡＧＥ  Ａ３／Ａ６エピトープに結合するように遺伝子改変され、ＴＣＲが操作されたＴ細胞は、抗ＭＡＧＥ  Ａ３／Ａ６である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞受容体は、ＭＡＧＥ  Ａ３エピトープに結合するように遺伝子改変され、ＴＣＲが操作されたＴ細胞は、抗ＭＡＧＥ  Ａ３である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞受容体は、ＳＳＸ２エピトープに結合するように遺伝子改変され、ＴＣＲが操作されたＴ細胞は、抗ＳＳＸ２である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞受容体は、本明細書に開示される標的抗原に結合するように遺伝子改変される。当該技術分野で周知であるツールを用いて、当業者は、Ｔ細胞受容体を癌又は腫瘍細胞上に存在する標的抗原に結合するように遺伝子改変することができ、ＴＣＲが操作されたＴ細胞が抗腫瘍又は抗癌細胞を含むことを理解されたい。
【００８８】
一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、免疫細胞を対象から得るステップ、及び免疫細胞を遺伝子改変して、組換えＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するステップを含む。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、免疫細胞を対象から得るステップ、免疫細胞を遺伝子改変して、組換えＴＣＲを発現するステップ、及び追加の薬剤と組み合わせるステップを含み、前記追加の薬剤は、アポトーシス細胞集団、アポトーシス細胞上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む。
【００８９】
一実施形態においては、ＴＣＲ  Ｔ細胞の生成に利用されるＴ細胞は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、ＴＣＲ  Ｔ細胞の生成に利用されるＴ細胞は、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、ＴＣＲ  Ｔ細胞の生成に利用されるＴ細胞は、エフェクターＴ細胞である。別の一実施形態においては、ＴＣＲ  Ｔ細胞の生成に利用されるＴ細胞は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。別の一実施形態においては、ＴＣＲ  Ｔ細胞の生成に利用されるＴ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。
【００９０】
ＴＣＲ  Ｔ細胞は、文献に広範に記述されており、例えば、Ｓｈａｒｐｅ及びＭｏｕｎｔ（２０１５）同上；Ｅｓｓａｎｄ  Ｍ、Ｌｏｓｋｏｇ  ＡＳＩ（２０１３）、Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ（Ｒｅｖｉｅｗ）．Ｊ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  ２７３：１６６〜１８１；並びにＫｅｒｓｈａｗら（２０１４）、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ＆  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３：１〜７を参照されたい。
【００９１】
抗原のターゲティング
一実施形態においては、ＣＡＲは、抗原に対する抗体又は抗体断片を介して抗原のエピトープに結合する。別の一実施形態においては、抗体は、モノクローナル抗体である。別の一実施形態においては、抗体は、ポリクローナル抗体である。別の一実施形態においては、抗体断片は、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。
【００９２】
一実施形態においては、ＴＣＲは、抗原のエピトープに遺伝子改変Ｔ細胞受容体を介して結合する。
【００９３】
別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物のＣＡＲ  Ｔ細胞は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ：ｔｕｍｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ）に結合する。別の一実施形態においては、前記腫瘍関連抗原は、ムチン１、細胞表面関連（ＭＵＣ１）若しくは多形性上皮性ムチン（ＰＥＭ：ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｍｕｃｉｎ）、高アルギニン初期変異腫瘍（Ａｒｍｅｔ：Ａｒｇｉｎｉｎｅ−ｒｉｃｈ，  ｍｕｔａｔｅｄ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ｓｔａｇｅ  ｔｕｍｏｒｓ）、熱ショックタンパク質６０（ＨＳＰ６０：Ｈｅａｔ  Ｓｈｏｃｋ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ６０）、カルネキシン（ＣＡＮＸ）、メチレンテトラヒドロ葉酸デヒドロゲナーゼ（ＮＡＤＰ＋依存）２、メテニルテトラヒドロ葉酸シクロヒドロラーゼ（ＭＴＨＦＤ２）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ：ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、マトリックスメタロペプチダーゼ（ＭＭＰ６）、Ｂ黒色腫抗原１（ＢＡＧＥ−１）、Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶの異常転写物（ＧｎＴＶ）、Ｑ５Ｈ９４３、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｐｍｅｌ、カリクレイン−４、マンマグロビン−１、ＭＡＲＴ−１、ＧＰＲ１４３−ＯＡ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ：ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ）、ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＦＧＰ−５、ＮＥＵ癌原遺伝子、Ａｆｔ、ＭＭＰ−２、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ：ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｎｔｉｇｅｎ）、テロメラーゼ関連タンパク質−２、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ：Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ  ａｃｉｄ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）、ウロプラキンＩＩ又はプロテイナーゼ３である。
【００９４】
別の一実施形態においては、ＣＡＲは、白血病におけるようにＢ細胞を破壊したい場合に、ＣＤ１９又はＣＤ２０に結合してＢ細胞を標的にする。ＣＤ１９は、Ｂ細胞系譜特異的表面受容体であり、プロＢ細胞から初期形質細胞までのその広範な発現によってＢ細胞悪性腫瘍の免疫療法の魅力的な標的になる。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＲＯＲ１、ＣＤ２２又はＧＤ２に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＮＹ−ＥＳＯ−１に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＭＡＧＥファミリータンパク質に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、メソテリンに結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ｃ−ｅｒｂＢ２に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異、ＢＣＲ−ＡＢＬ転座などの腫瘍特異的である変異性抗原に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＨＤにおけるＥＢＶ、子宮頚癌におけるＨＰＶ、メルケル癌におけるポリオーマウイルスなどの腫瘍特異的であるウイルス抗原に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する。
【００９５】
一実施形態においては、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞は、ＣＤ１９抗原に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＣＤ２２抗原に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、アルファ葉酸受容体に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＣＡＩＸに結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＣＤ２０に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＣＤ２３に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＣＤ２４に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＣＤ３０に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＣＤ３３に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＣＤ３８に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＣＤ４４ｖ６に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＣＤ４４ｖ７／８に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＣＤ１２３に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＣＤ１７１に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＥＧＦＲｖＩＩＩに結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＥＧＰ−２に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＥＧＰ−４０に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＥｐｈＡ２に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、Ｅｒｂ−Ｂ２に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、Ｅｒｂ−Ｂ２，３，４に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、Ｅｒｂ−Ｂ３／４に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＦＢＰに結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、胎児アセチルコリン受容体に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＧＤ２に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＧＤ３に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＨＥＲ２に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＨＭＷ−ＭＡＡに結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＩＬ−１１Ｒアルファに結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＩＬ−１３Ｒアルファ１に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＫＤＲに結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、カッパ−軽鎖に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、Ｌｅｗｉｓ  Ｙに結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、Ｌ１細胞接着分子に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＭＡＧＥ−Ａ１に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、メソテリンに結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＣＭＶ感染細胞に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＭＵＣ１に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＭＵＣ１６に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＮＫＧ２Ｄリガンドに結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＮＹ−ＥＳＯ−１（アミノ酸１５７〜１６５）に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、癌胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＰＳＣＡに結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＰＳＭＡに結合する。別の一実施形態において���、ＣＡＲは、ＲＯＲ１に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＴＡＧ−７２に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＶＥＧＦ−Ｒ２又は別のＶＥＧＦ受容体に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、Ｂ７−Ｈ６に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＣＡ９に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、αｖβ６インテグリンに結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、８Ｈ９に結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、ＮＣＡＭに結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、胎児アセチルコリン受容体に結合する。
【００９６】
別の一実施形態においては、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞は、ＣＤ１９抗原を標的にし、Ｂ細胞悪性腫瘍、ＡＬＬ、濾胞性リンパ腫、ＣＬＬ及びリンパ腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＤ２２抗原を標的にし、Ｂ細胞悪性腫瘍を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、アルファ葉酸受容体又は葉酸受容体アルファを標的にし、卵巣癌又は上皮癌を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＡＩＸ又はＧ２５０／ＣＡＩＸを標的にし、腎細胞癌を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＤ２０を標的にし、リンパ腫、Ｂ細胞悪性腫瘍、Ｂ細胞リンパ腫、外套細胞リンパ腫及び無痛性Ｂ細胞リンパ腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＤ２３を標的にし、ＣＬＬを有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＤ２４を標的にし、膵臓腺癌を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＤ３０を標的にし、リンパ腫又はホジキンリンパ腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＤ３３を標的にし、ＡＭＬを有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＤ３８を標的にし、非ホジキンリンパ腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＤ４４ｖ６を標的にし、幾つかの悪性腫瘍を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＤ４４ｖ７／８を標的にし、頚癌を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＤ１２３を標的にし、骨髄性悪性腫瘍を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＥＡを標的にし、結腸直腸癌を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＥＧＦＲｖＩＩＩを標的にし、グリア芽細胞腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＥＧＰ−２を標的にし、複数の悪性腫瘍を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＥＧＰ−４０を標的にし、結腸直腸癌を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＥｐｈＡ２を標的にし、グリア芽細胞腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、Ｅｒｂ−Ｂ２又はＥｒｂＢ３／４を標的にし、乳癌など、前立腺癌、結腸癌、種々の腫瘍を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、Ｅｒｂ−Ｂ２，３，４を標的にし、乳癌などを有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＦＢＰを標的にし、卵巣癌を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、胎児アセチルコリン受容体を標的にし、横紋筋肉腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＧＤ２を標的にし、神経芽細胞腫、黒色腫又はユーイング肉腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＧＤ３を標的にし、黒色腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＨＥＲ２を標的にし、髄芽腫、膵臓腺癌、グリア芽細胞腫、骨肉腫又は卵巣癌を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＨＭＷ−ＭＡＡを標的にし、黒色腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＩＬ−１１Ｒアルファを標的にし、骨肉腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＩＬ−１３Ｒアルファ１を標的にし、神経膠腫、グリア芽細胞腫又は髄芽腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＩＬ−１３受容体アルファ２を標的にし、幾つかの悪性腫瘍を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＫＤＲを標的にし、腫瘍新血管系を標的にすることによって腫瘍を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、カッパ−軽鎖を標的にし、Ｂ細胞悪性腫瘍（Ｂ−ＮＨＬ、ＣＬＬ）を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、Ｌｅｗｉｓ  Ｙを標的にし、種々の癌腫又は上皮由来の腫瘍を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、Ｌ１細胞接着分子を標的にし、神経芽細胞腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＭＡＧＥ−Ａ１又はＨＬＡ−Ａ１  ＭＡＧＥ  Ａ１を標的にし、黒色腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、メソテリンを標的にし、中皮腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＭＶ感染細胞を標的にし、ＣＭＶを有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＭＵＣ１を標的にし、乳癌又は卵巣癌を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＭＵＣ１６を標的にし、卵巣癌を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＮＫＧ２Ｄリガンドを標的にし、骨髄腫、卵巣及び他の腫瘍を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＮＹ−ＥＳＯ−１（１５７−１６５）又はＨＬＡ−Ａ２  ＮＹ−ＥＳＯ−１を標的にし、多発性骨髄腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、癌胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）を標的にし、種々の腫瘍を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＰＳＣＡを標的にし、前立腺癌を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＰＳＭＡを標的にし、前立腺癌／腫瘍血管系を有���る対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＲＯＲ１を標的にし、Ｂ−ＣＬＬ及び外套細胞リンパ腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＴＡＧ−７２を標的にし、腺癌又は消化器癌を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＶＥＧＦ−Ｒ２又は別のＶＥＧＦ受容体を標的にし、腫瘍新血管系を標的にすることによって腫瘍を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＡ９を標的にし、腎細胞癌を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＤ１７１を標的にし、腎臓神経芽細胞腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＮＣＡＭを標的にし、神経芽細胞腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、胎児アセチルコリン受容体を標的にし、横紋筋肉腫を有する対象に対して治療効果を有する。別の一実施形態においては、ＣＡＲは、参照によりその全体を本明細書に援用するＳａｄｅｌａｉｎら（Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．２０１３  Ａｐｒ；３（４）：３８８〜３９８）の表１に列挙された標的抗原の１つに結合する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、炭水化物又は糖脂質構造に結合する。
【００９７】
一実施形態においては、ＣＡＲは、血管新生因子に結合し、それによって腫瘍血管系を標的にする。一実施形態においては、血管新生因子はＶＥＧＦＲ２である。別の一実施形態においては、血管新生因子はエンドグリンである。別の一実施形態においては、本発明の血管新生因子は、アンジオゲニン、アンジオポエチン−１、Ｄｅｌ−１、線維芽細胞増殖因子：酸性（ａＦＧＦ）及び塩基性（ｂＦＧＦ）、フォリスタチン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ：Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）／散乱因子（ＳＦ：ｓｃａｔｔｅｒ  ｆａｃｔｏｒ）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、レプチン、ミッドカイン、胎盤成長因子、血小板由来内皮細胞成長因子（ＰＤ−ＥＣＧＦ：Ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）、血小板由来増殖因子−ＢＢ（ＰＤＧＦ−ＢＢ：Ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−ＢＢ）、プレイオトロフィン（ＰＴＮ）、プログラニュリン、プロリフェリン、形質転換成長因子−アルファ（ＴＧＦ−アルファ：Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−ａｌｐｈａ）、形質転換成長因子−ベータ（ＴＧＦ−ベータ）、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−アルファ：Ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ−ａｌｐｈａ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ：Ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）／血管透過性因子（ＶＰＦ：ｖａｓｃｕｌａｒ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｆａｃｔｏｒ）である。別の一実施形態においては、血管新生因子は、血管新生タンパク質である。一実施形態においては、成長因子は、血管新生タンパク質である。一実施形態においては、本発明の組成物及び方法に使用される血管新生タンパク質は、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ：Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）；ＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＲ及びニューロピリン１（ＮＲＰ−１）；アンジオポエチン１（Ａｎｇ１）及びＴｉｅ２；血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ；ＢＢ−ホモ二量体）及びＰＤＧＦＲ；形質転換成長因子−ベータ（ＴＧＦ−β）、エンドグリン及びＴＧＦ−β受容体；単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１：ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１）；インテグリンαＶβ３、αＶβ５及びα５β１；ＶＥ−カドヘリン及びＣＤ３１；エフリン；プラスミノゲン活性化因子；プラスミノゲン活性化因子阻害剤−１；一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）及びＣＯＸ−２；ＡＣ１３３；又はＩｄ１／Ｉｄ３である。一実施形態においては、本発明の組成物及び方法に使用される血管新生タンパク質は、アンジオポエチンであり、一実施形態においては、アンジオポエチン１、アンジオポエチン３、アンジオポエチン４又はアンジオポエチン６である。一実施形態においては、エンドグリンは、ＣＤ１０５、ＥＤＧ、ＨＨＴ１、ＯＲＷ又はＯＲＷ１としても知られる。一実施形態においては、エンドグリンは、ＴＧＦベータ補助受容体である。
【００９８】
別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、感染病原体に関連する抗原に結合する。一実施形態においては、感染病原体は、結核菌である。一実施形態においては、前記結核菌関連抗原は、抗原８５Ｂ、リポタンパク質ＩｐｑＨ、推定ＡＴＰ依存性ヘリカーゼ、特徴づけられていないタンパク質Ｒｖ０４７６／ＭＴＯ４９４１前駆体、又は特徴づけられていないタンパク質Ｒｖ１３３４／ＭＴ１３７６前駆体である。
【００９９】
別の一実施形態においては、ＣＡＲは、抗体に結合する。一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、「抗体結合Ｔ細胞受容体」（ＡＣＴＲ：ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｃｏｕｐｌｅｄ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）である。この実施形態によれば、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、汎用ＣＡＲ  Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、抗体受容体を有するＣＡＲ  Ｔ細胞は、抗体投与の前に、後に、又は投与と同時に投与され、次いで抗体に結合し、Ｔ細胞を腫瘍又は癌に近づける。別の一実施形態においては、抗体は、腫瘍細胞抗原に対するものである。別の一実施形態においては、抗体は、ＣＤ２０に対するものである。別の一実施形態においては、抗体はリツキシマブである。
【０１００】
別の一実施形態においては、抗体は、ＥＲＢＢ２に対するトラスツヅマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）：ヒト化ＩｇＧ１である。別の一実施形態においては、抗体は、ＶＥＧＦに対するベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）：ヒト化ＩｇＧ１である。別の一実施形態においては、抗体は、ＥＧＦＲに対するセツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）：キメラヒト−マウスＩｇＧ１である。別の一実施形態においては、抗体は、ＥＧＦＲに対するパニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ；Ａｍｇｅｎ）：ヒトＩｇＧ２である。別の一実施形態においては、抗体は、ＣＴＬＡ４に対するイピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）：ＩｇＧ１である。
【０１０１】
別の一実施形態においては、抗体は、ＣＤ５２に対するアレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ；Ｇｅｎｚｙｍｅ）：ヒト化ＩｇＧ１である。別の一実施形態においては、抗体は、ＣＤ２０に対するオファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ；Ｇｅｎｍａｂ）：ヒトＩｇＧ１である。別の一実施形態においては、抗体は、ＣＤ３３に対するゲムツズマブオゾガミシン（Ｍｙｌｏｔａｒｇ；Ｗｙｅｔｈ）：ヒト化ＩｇＧ４である。別の一実施形態においては、抗体は、ＣＤ３０に対するブレンツキシマブベドチン（Ａｄｃｅｔｒｉｓ；Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）：キメラＩｇＧ１である。別の一実施形態においては、抗体は、ＣＤ２０に対する９０Ｙ標識イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）：マウスＩｇＧ１である。別の一実施形態においては、抗体は、ＣＤ２０に対する１３１Ｉ標識トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ；ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）：マウスＩｇＧ２である。
【０１０２】
別の一実施形態においては、抗体は、血管内皮増殖因子受容体−２（ＶＥＧＦＲ−２：ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−２）に対するラムシルマブである。別の一実施形態においては、抗体は、ラムシルマブ（Ｃｙｒａｍｚａ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ）、ブリナツモマブ（ＢＬＩＮＣＹＴＯ、Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．）、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ、Ｍｅｒｃｋ  Ｓｈａｒｐ  ＆  Ｄｏｈｍｅ  Ｃｏｒｐ．）、オビヌツズマブ（ＧＡＺＹＶＡ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、以前はＧＡ１０１として知られた）、ペルツズマブ注射剤（ＰＥＲＪＥＴＡ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）又はデノスマブ（Ｘｇｅｖａ、Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．）である。別の一実施形態においては、抗体は、バシリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）である。別の一実施形態においては、抗体は、ダクリズマブ（Ｚｅｎａｐａｘ；Ｒｏｃｈｅ）である。
【０１０３】
別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞が結合する抗体は、本明細書に記載された、及び／又は当該技術分野で既知である、腫瘍若しくは癌抗原又はその一部に対するものである。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞が結合する抗体は、腫瘍関連抗原に対するものである。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞が結合する抗体は、血管新生因子である腫瘍関連抗原又はその一部に対するものである。
【０１０４】
当業者は、ＣＡＲが結合する上記抗原のいずれかを認識するように遺伝子改変ＴＣＲを操作できることを理解されたい。一実施形態においては、ＴＣＲ  Ｔ細胞は、ＣＡＲ  Ｔ細胞結合標的として上述された抗原に結合する。別の一実施形態においては、ＴＣＲは、本明細書に開示される任意の抗原を認識する。別の一実施形態においては、ＴＣＲが認識する抗体は、本明細書に記載された、及び／又は当該技術分野で既知である、腫瘍若しくは癌抗原又はその一部である。別の一実施形態においては、ＴＣＲは、腫瘍関連抗原を認識する。別の一実施形態においては、ＴＣＲは、血管新生因子である腫瘍関連抗原又はその一部を認識する。
【０１０５】
樹状細胞
一実施形態においては、樹状細胞（ＤＣ：ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ）は、抗原材料を処理し、それを細胞表面で免疫系のＴ細胞に提示し、それによって新しい抗原とリコール抗原の両方に対してＴ細胞を感作させることができる、哺乳動物免疫系の抗原産生及び提示細胞である。別の一実施形態においては、ＤＣは、自然免疫系と適応免疫系の間のメッセンジャーとして働く、最も強力な抗原産生細胞である。ＤＣ細胞を使用して、一実施形態においては、腫瘍を攻撃し、溶解させる、エフェクター細胞の生成によって、特異的抗腫瘍免疫を刺激することができる。
【０１０６】
樹状細胞は、皮膚（ランゲルハンス細胞と呼ばれる分化した樹状細胞型が存在する）並びに鼻、肺、胃及び腸の内側などの外部環境と接触する組織中に存在する。それらは、血中に未成熟状態で見ることもできる。活性化後、それらは、リンパ節に移動し、そこでＴ細胞及びＢ細胞と相互作用して、適応免疫応答を惹起し、形成する。ある発生段階においては、それらは、細胞にその名称を与える樹状突起である、分岐突起部を生成させる。樹状細胞は、特別な腫瘍抗原を発現するように操作することができる。
【０１０７】
Ｔ細胞活性化に必要な３つのシグナルは、（ｉ）自己ＭＨＣ分子における同種抗原の提示、（ｉｉ）膜結合受容体−リガンド対による共刺激、及び（ｉｉｉ）後続の免疫応答の極性化を導く可溶性因子である。樹状細胞（ＤＣ）は、それらを優れた癌ワクチンプラットホームにするＴ細胞活性化に必要な３つのシグナルのすべてを提供することができる。
【０１０８】
したがって、一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、樹状細胞と追加の薬剤とを含む組成物であり、前記追加の薬剤は、アポトーシス細胞、アポトーシス上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む。
【０１０９】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する方法であって、樹状細胞と追加の薬剤を含む組成物とを前記対象に投与するステップを含み、前記薬剤は、アポトーシス細胞、アポトーシス上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む。
【０１１０】
サイトカインストーム及びサイトカイン放出症候群
一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、ＮＫ細胞、樹状細胞、ＴＣＲ  Ｔ細胞、操作されたキメラ抗原受容体を含むＴ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）などの免疫細胞を、対象に起こり得る毒性サイトカイン放出又は「サイトカイン放出症候群」（ＣＲＳ）又は「重症サイトカイン放出症候群」（ｓＣＲＳ：ｓｅｖｅｒｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）又は「サイトカインストーム」を減少させる少なくとも１種の追加の薬剤と一緒に供給するステップを含む。別の一実施形態においては、ＣＲＳ、ｓＣＲＳ又はサイトカインストームは、免疫細胞の投与の結果として起こる。別の一実施形態においては、ＣＲＳ、ｓＣＲＳ又はサイトカインストームは、免疫細胞とは別の刺激、条件又は症候群の結果である（下記参照）。別の一実施形態においては、サイトカインストーム、サイトカインカスケード又は高サイトカイン血症は、より重症型のサイトカイン放出症候群である。
【０１１１】
一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、アポトーシス細胞、又は前記アポトーシス細胞を含む組成物を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、アポトーシス細胞上清、又は前記上清を含む組成物を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、ＣＴＬＡ−４遮断薬を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物、及びＣＴＬＡ−４遮断薬を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、アルファ−１抗トリプシン又はその断片若しくはその類似体を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物、及びアルファ−１抗トリプシン又はその断片若しくはその類似体を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、テルル化合物を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物、及びテルル化合物を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、免疫調節剤を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物、及び免疫調節剤を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、Ｔｒｅｇ細胞を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物、及びＴｒｅｇ細胞を含む。
【０１１２】
当業者は、毒性サイトカイン放出又は毒性サイトカインレベルを減少させるステップが、対象における毒性サイトカインレベルの生成を減少させる、若しくは阻害するステップ、又は対象におけるサイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームの発生率を抑制する、若しくは減少させるステップを含むことを理解されたい。別の一実施形態においては、毒性サイトカインレベルは、ＣＲＳ又はサイトカインストーム中に減少する。別の一実施形態においては、毒性サイトカインレベルの生成を減少させる、又は阻害するステップは、ＣＲＳ又はサイトカインストームを処置するステップを含む。別の一実施形態においては、毒性サイトカインレベルの生成を減少させる、又は阻害するステップは、ＣＲＳ又はサイトカインストームを予防するステップを含む。別の一実施形態においては、毒性サイトカインレベルの生成を減少させる、又は阻害するステップは、ＣＲＳ又はサイトカインストームを軽減するステップを含む。別の一実施形態においては、毒性サイトカインレベルの生成を減少させる、又は阻害するステップは、ＣＲＳ又はサイトカインストームを改善するステップを含む。別の一実施形態においては、毒性サイトカインは、炎症誘発性サイトカインを含む。別の一実施形態においては、炎症誘発性サイトカインはＩＬ−６を含む。別の一実施形態においては、炎症誘発性サイトカインは、ＩＬ−１βを含む。別の一実施形態においては、炎症誘発性サイトカインは、ＴＮＦ−αを含む。別の一実施形態においては、炎症誘発性サイトカインは、ＩＬ−６、ＩＬ−１β若しくはＴＮＦ−α又はそれらの任意の組合せを含む。
【０１１３】
一実施形態においては、サイトカイン放出症候群は、高レベルの幾つかの炎症性サイトカイン、及び低血圧、高熱、震えなどの対象における有害な身体的反応を特徴とする。別の一実施形態においては、炎症性サイトカインは、ＩＬ−６、ＩＬ−１β及びＴＮＦ−αを含む。別の一実施形態においては、ＣＲＳは、高レベルのＩＬ−６、ＩＬ−１β若しくはＴＮＦ−α又はそれらの任意の組合せを特徴とする。別の一実施形態においては、ＣＲＳは、高レベルのＩＬ−８若しくはＩＬ−１３又はそれらの任意の組合せを特徴とする。別の一実施形態においては、サイトカインストームは、ＴＮＦ−アルファ、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−５、フラクタルカイン、又はそれらの組合せ若しくはそれらのサブセットの増加を特徴とする。更に別の一実施形態においては、ＩＬ−６は、ＣＲＳ又はサイトカインストームのマーカーを含む。別の一実施形態においては、腫瘍量の多い患者ほど、サイトカイン放出症候群の発生率及び重症度が高い。
【０１１４】
別の一実施形態においては、ヒト及びマウスにおけるＣＲＳ又はサイトカインストームにおいて増加するサイトカインは、下表１及び２に列挙したサイトカインの任意の組合せを含み得る。
【０１１５】
表１：ヒト及び／又はマウスにおけるＣＲＳ又はサイトカインストームにおいて増加するサイトカインのパネル
【０１１６】
【表１】
2019505552.tif 000003
【０１１７】
一実施形態においては、表１のサイトカインＦｌｔ−３Ｌ、フラクタルカイン、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２及びＩＬ−１３は、ＣＲＳ又はサイトカインストームにおいて有意と考えられる。別の一実施形態においては、表１のＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１及びＩＬ−１Ｒαは、ＣＲＳ又はサイトカインストームにおいて重要であると思われる。別の一実施形態においては、Ｍ−ＣＳＦの重要性は不明である。別の一実施形態においては、表１に列挙した任意のサイトカイン又はそれらの組合せを、ＣＲＳ又はサイトカインストームのマーカーとして使用することができる。
【０１１８】
表２：ヒト及び／又はマウスにおけるＣＲＳ又はサイトカインストームにおいて増加するサイトカインのパネル
【０１１９】
【表２】
2019505552.tif 000004
【０１２０】
一実施形態においては、表２のＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＰ−１０、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β及びＴＮＦ−αは、ＣＲＳ又はサイトカインストームにおいて有意と考えられる。別の一実施形態においては、表２のＩＬ−２７、ＭＣＰ−３、ＰＧＥ２、ＲＡＮＴＥＳ、ＴＧＦ−β、ＴＮＦ−αＲ１及びＭＩＧは、ＣＲＳ又はサイトカインストームにおいて重要であると思われる。別の一実施形態においては、ＩＬ−２３及びＩＬ−２５の重要性は不明である。別の一実施形態においては、表２に列挙した任意のサイトカイン又はそれらの組合せを、ＣＲＳ又はサイトカインストームのマーカーとして使用することができる。別の一実施形態においては、マウスサイトカインＩＬ−１０、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＰ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＦＮα、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２ｐ７０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒ及びＩＬ−７は、ＣＲＳ又はサイトカインストームにおいて重要であると思われる。
【０１２１】
当業者は、「サイトカイン」という用語が、サイトカイン（例えば、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、腫瘍壊死因子アルファ）、ケモカイン（例えば、ＭＩＰ１アルファ、ＭＩＰ１ベータ、ＲＡＮＴＥＳ）、及び反応性酸素種、一酸化窒素などの他の炎症の可溶性媒介物質を包含し得ることを理解されたい。
【０１２２】
一実施形態においては、特定のサイトカインの放出の増加は、有意、重要又は重要性不明であろうとなかろうと、特定のサイトカインがサイトカインストームの一部であることを演繹的に意味しない。一実施形態においては、少なくとも１種のサイトカインの増加は、サイトカインストーム又はＣＲＳの結果ではない。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、高レベルの特定のサイトカイン又はサイトカイングループの供給源であり得る。
【０１２３】
別の一実施形態においては、サイトカイン放出症候群は、以下の症候のいずれか又はすべてを特徴とする：悪寒を伴う、又は伴わない発熱、倦怠感、疲労、食欲不振、筋痛、関節痛、悪心、嘔吐、頭痛  皮疹、悪心、嘔吐、下痢、頻呼吸、低酸素血、心血管頻拍、脈圧拡大、低血圧、心拍出量増加（初期）、心拍出量の潜在的減少（後期）、Ｄダイマー増加、出血を伴う、又は伴わない低フィブリノーゲン血症、高窒素血症  肝臓高トランスアミナーゼ血症、高ビリルビン血症、頭痛、精神状態変化、錯乱、譫妄、喚語困難又は顕症の失語症、幻覚、振戦、測定障害、歩調変化、発作。別の一実施形態においては、サイトカインストームは、ＩＬ−２放出及びリンパ球増殖を特徴とする。別の一実施形態においては、サイトカインストームは、ＣＡＲ  Ｔ細胞によって放出されるサイトカインの増加を特徴とする。別の一実施形態においては、サイトカインストームは、ＣＡＲ  Ｔ細胞以外の細胞によって放出されるサイトカインの増加を特徴とする。
【０１２４】
別の一実施形態においては、サイトカインストームは、心機能不全、成人呼吸促迫症候群、神経毒性、腎及び／又は肝不全、並びに播種性血管内凝固を含めて、潜在的に生命にかかわる合併症を引き起こす。
【０１２５】
当業者は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの特性が、ＣＲＳ又はサイトカインストームの誘発後数日から数週間で起こると推定されることを理解されたい。一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの誘因である。別の一実施形態においては、ＣＲＳ又はサイトカインストームの誘因は、ＣＡＲ  Ｔ細胞ではない。
【０１２６】
一実施形態においては、サイトカインストームの指標としてのサイトカインレベル又は濃度の測定は、サイトカインレベル又は濃度の増加倍数、パーセント（％）増加、純増加又は変化率として表すことができる。別の一実施形態においては、あるレベル又は濃度を超える絶対的なサイトカインレベル又は濃度は、サイトカインストームを起こした対象、又は経験しようとしている対象の指標であり得る。別の一実施形態においては、あるレベル又は濃度の絶対的なサイトカインレベル又は濃度、例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けていない対照対象において通常見られるレベル又は濃度は、ＣＡＲ  Ｔ細胞を受ける対象におけるサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法の指標であり得る。
【０１２７】
当業者は、「サイトカインレベル」という用語が、濃度の尺度、倍率変化の尺度、パーセント（％）変化の尺度、又は変化率の尺度を包含し得ることを理解されたい。さらに、血液、唾液、血清、尿及び血漿中のサイトカインを測定する方法は、当該技術分野でよく知られている。
【０１２８】
一実施形態においては、サイトカインストームが幾つかの炎症性サイトカインの増加に関連するという認識にもかかわらず、ＩＬ−６レベルを、サイトカインストームの一般的尺度として、及び／又はサイトカインストームの処置の有効性の一般的尺度として、使用することができる。当業者は、他のサイトカイン、例えば、ＴＮＦ−α、ＩＢ−１α、ＩＬ−８、ＩＬ−１３又はＩＮＦ−γをサイトカインストームのマーカーとして使用できることを理解されたい。さらに、サイトカインを測定する分析方法は、当該技術分野でよく知られている。当業者は、サイトカインストームに影響を及ぼす方法が、サイトカイン放出症候群にも同様に影響し得ることを理解されたい。
【０１２９】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、サイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを経験した対象におけるサイトカイン産生を減少させる、又は阻害する方法である。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、サイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを経験しやすい対象におけるサイトカイン産生を減少させる、又は阻害する方法である。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、サイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを経験した対象におけるサイトカイン産生を減少させ、又は阻害し、表１及び／又は２に列挙した任意のサイトカイン又はサイトカイングループの産生が減少する、又は阻害される。別の一実施形態においては、サイトカインＩＬ−６産生が減少する、又は阻害される。別の一実施形態においては、サイトカインＩＬ−ベータ１産生が減少する、又は阻害される。別の一実施形態においては、サイトカインＩＬ−８産生が減少する、又は阻害される。別の一実施形態においては、サイトカインＩＬ−１３産生が減少する、又は阻害される。別の一実施形態においては、サイトカインＴＮＦ−アルファ産生が減少する、又は阻害される。別の一実施形態においては、サイトカインＩＬ−６産生、ＩＬ−１ベータ産生若しくはＴＮＦ−アルファ産生又はそれらの任意の組合せが減少する、又は阻害される。
【０１３０】
一実施形態においては、サイトカイン放出症候群は、段階分けされる。別の一実施形態においては、グレード１は、症候が生命にかかわらず、対症療法のみを必要とするサイトカイン放出症候群、例えば、発熱、悪心、疲労、頭痛、筋痛、倦怠感を示す。別の一実施形態においては、グレード２症候は、酸素、流体、低血圧用昇圧剤などの適度の介入を必要とし、それに反応する。別の一実施形態においては、グレード３症候は、積極的な介入を必要とし、それに反応する。別の一実施形態においては、グレード４症候は、生命にかかわる症候であり、人工呼吸器を必要とし、患者は臓器毒性を示す。
【０１３１】
別の一実施形態においては、サイトカインストームは、ＩＬ−６及びインターフェロンガンマ放出を特徴とする。別の一実施形態においては、サイトカインストームは、表１及び２に列挙した任意のサイトカイン又はそれらの組合せの放出を特徴とする。別の一実施形態においては、サイトカインストームは、当該技術分野で既知である任意のサイトカイン又はそれらの組合せの放出を特徴とする。
【０１３２】
一実施形態においては、発症は、注入開始後数分から数時間で始まる。別の一実施形態においては、症候は、ピークサイトカインレベルと一致する。
【０１３３】
一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法は、アポトーシス細胞集団若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物を投与するステップを含む。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞集団若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を支援することができる。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞集団若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの発生率抑制又は減少を支援することができる。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞集団若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの処置を支援することができる。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞集団若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの予防を支援することができる。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞集団若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの改善を支援することができる。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞集団若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの軽減を支援することができる。
【０１３４】
一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受け、アポトーシス細胞集団若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物を投与される対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法は、追加の薬剤を投与するステップを含む。別の一実施形態においては、追加の薬剤は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を支援することができる。別の一実施形態においては、追加の薬剤は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの発生率抑制又は減少を支援することができる。別の一実施形態においては、追加の薬剤は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの処置を支援することができる。別の一実施形態においては、追加の薬剤は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの予防を支援することができる。別の一実施形態においては、追加の薬剤は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの改善を支援することができる。別の一実施形態においては、追加の薬剤は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの軽減を支援することができる。
【０１３５】
一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法は、追加の薬剤を投与するステップを含む。別の一実施形態においては、追加の薬剤は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を支援することができる。一実施形態においては、ＴＣＲ  Ｔ細胞癌治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法は、追加の薬剤を投与するステップを含む。別の一実施形態においては、追加の薬剤は、ＴＣＲ  Ｔ細胞治療を支援することができる。一実施形態においては、治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法は、追加の薬剤を投与するステップを含む。別の一実施形態においては、追加の薬剤は、治療を支援することができる。一実施形態においては、ＮＫ細胞治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法は、追加の薬剤を投与するステップを含む。別の一実施形態においては、追加の薬剤は、ＮＫ細胞治療を支援することができる。
【０１３６】
別の一実施形態においては、追加の薬剤は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの発生率抑制又は減少を支援することができる。別の一実施形態においては、追加の薬剤は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの処置を支援することができる。別の一実施形態においては、追加の薬剤は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの予防を支援することができる。別の一実施形態においては、追加の薬剤は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの改善を支援することができる。別の一実施形態においては、追加の薬剤は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの軽減を支援することができる。
【０１３７】
一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、アポトーシス細胞、又は前記アポトーシス細胞を含む組成物を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、アポトーシス細胞上清、又は前記上清を含む組成物を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、ＣＴＬＡ−４遮断薬を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物、及びＣＴＬＡ−４遮断薬を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、アルファ−１抗トリプシン又はその断片若しくはその類似体を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物、及びアルファ−１抗トリプシン又はその断片若しくはその類似体を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、テルル化合物を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物、及びテルル化合物を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、免疫調節剤を含む。別の一実施形態においては、有害なサイトカイン放出を減少させる追加の薬剤は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物、及び免疫調節剤を含む。
【０１３８】
別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞とイピリムマブなどの１種以上のＣＴＬＡ−４遮断薬との併用療法を利用する。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法は、アポトーシス細胞、ＣＡＲ  Ｔ細胞及び１種以上のＣＴＬＡ−４遮断薬を含む併用療法を利用する。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法は、ＴＣＲ  Ｔ細胞とイピリムマブなどの１種以上のＣＴＬＡ−４遮断薬との併用療法を利用する。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法は、アポトーシス細胞、ＴＣＲ  Ｔ細胞及び１種以上のＣＴＬＡ−４遮断薬を含む併用療法を利用する。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法は、樹状細胞とイピリムマブなどの１種以上のＣＴＬＡ−４遮断薬との併用療法を利用する。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法は、アポトーシス細胞、樹状細胞及び１種以上のＣＴＬＡ−４遮断薬を含む併用療法を利用する。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法は、ＮＫ細胞とイピリムマブなどの１種以上のＣＴＬＡ−４遮断薬との併用療法を利用する。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法は、アポトーシス細胞、ＮＫ細胞及び１種以上のＣＴＬＡ−４遮断薬を含む併用療法を利用する。
【０１３９】
別の一実施形態においては、ＣＴＬＡ−４は、自己寛容を維持するのに役立つＴ細胞活性化の強力な阻害剤である。別の一実施形態においては、別の一実施形態においては抗体である抗ＣＴＬＡ−４遮断薬の投与は、Ｔ細胞活性化の正味の効果をもたらす。
【０１４０】
別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法によって処置する、予防する、阻害する、改善する、発生率を減少させる、又は軽減することができる、ＣＡＲ  Ｔ細胞、ＴＣＲ  Ｔ細胞、樹状細胞又はＮＫ細胞投与に起因する別の毒性は、Ｂ細胞形成不全又は腫瘍崩壊症候群（ＴＬＳ）を含む。
【０１４１】
一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の有効性に影響しない。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受ける対象におけるＣＲＳ又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の有効性を約５％を超えて低下させる。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受ける対象におけるＣＲＳ又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の有効性を約１０％を超えて低下させる。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受ける対象におけるＣＲＳ又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の有効性を約１５％を超えて低下させる。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受ける対象におけるＣＲＳ又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の有効性を約２０％を超えて低下させる。
【０１４２】
細胞傷害性を定量化する任意の適切な方法を使用して、ＣＡＲを発現するように改変された免疫細胞における活性が実質的に不変であるかどうか判定することができる。例えば、細胞傷害性は、実施例に記載の細胞毒性試験などの細胞培養に基づくアッセイによって定量化することができる。細胞毒性試験は、死細胞のＤＮＡを優先的に染色する染料を採用することができる。別の場合には、細胞集団における生細胞と死細胞の相対数を測定する蛍光及び発光アッセイを使用することができる。こうしたアッセイでは、プロテアーゼ活性は、細胞生存率及び細胞毒性のマーカーとして役立ち、標識された細胞透過性ペプチドは、試料中の生細胞の数に比例した蛍光シグナルを発生する。例えば、細胞毒性試験は、フローサイトメトリー分析において７−ＡＡＤを使用することができる。種々の細胞毒性試験のためのキットは、Ｐｒｏｍｅｇａ、Ａｂｃａｍ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓなどの製造者から市販されている。
【０１４３】
別の一実施形態においては、細胞傷害性の尺度は、定性的とすることができる。別の一実施形態においては、細胞傷害性の尺度は、定量的とすることができる。更なる一実施形態においては、細胞傷害性の尺度は、細胞傷害性サイトカインの発現変化に関連し得る。別の一実施形態においては、細胞傷害性の尺度は、骨髄及び肝臓における生存曲線及び腫瘍量によって決定することができる。
【０１４４】
一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、同種ドナー細胞の拒絶を克服するのに有用である追加のステップを含む。一実施形態においては、該方法は、一実施形態においては同種ＣＡＲ  Ｔ細胞である、ＣＡＲ  Ｔ細胞の投与前に、完全又は部分的リンパ球除去のステップを含む。別の一実施形態においては、リンパ球除去は、前記同種Ｔ細胞が対象とされる腫瘍を攻撃するのに十分な期間、ただし骨髄移植による宿主免疫系の救出を必要とするには不十分な程度に、宿主対移植片反応を遅延するように調節される。別の一実施形態においては、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン−１，３−ジオール（ＦＴＹ７２０）、５−［４−フェニル−５−（トリフルオロメチル）チオフェン−２−イル］−３−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］１，２，４−オキサジアゾール（ＳＥＷ２８７１）、３−（２−（−ヘキシルフェニルアミノ）−２−オキソエチルアミノ）プロパン酸（Ｗ１２３）、リン酸水素２−アンモニオ−４−（２−クロロ−４−（３−フェノキシフェニルチオ）フェニル）−２−（ヒドロキシメチル）ブチル（ＫＲＰ−２０３ホスファート）、当該技術分野で既知である他の薬剤など、リンパ節からの同種Ｔ細胞の放出を遅延させる薬剤を、本明細書に開示される組成物及び方法の一部として使用して、有効性を有するが移植片対宿主病を惹起しない同種ＣＡＲ  Ｔ細胞の使用を可能にすることができる。一実施形態においては、同種Ｔ細胞によるＭＨＣ発現は、同種細胞の拒絶を抑制するために停止される。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、同種細胞の拒絶を予防する。
【０１４５】
ＣＡＲ  Ｔ細胞治療に関連するサイトカイン放出
一実施形態においては、サイトカイン放出は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療などの免疫療法の実施後に数日〜２週間発生する。一実施形態においては、低血圧及び他の症候が、サイトカイン放出に続き、すなわち数日から数週間続く。したがって、一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を対象に免疫療法と同時に予防として投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から２〜３日後に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から７日後に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から１０日後に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から１４日後に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から２〜１４日後に対象に投与する。
【０１４６】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を免疫療法の実施から２〜３時間後に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から７時間後に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から１０時間後に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から１４時間後に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から２〜１４時間後に対象に投与する。
【０１４７】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を免疫療法の前に予防として対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の１日前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の２〜３日前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の７日前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の１０日前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の１４日前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の２〜１４日前に対象に投与する。
【０１４８】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を免疫療法の実施の２〜３時間前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の７時間前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の１０時間前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の１４時間前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の２〜１４時間前に対象に投与する。
【０１４９】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清は、サイトカイン放出症候群が発生した後、治療投与することができる。一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清は、サイトカイン放出症候群の始まりに至る、又は始まりを証明するサイトカイン放出が検出された後、投与することができる。一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清は、サイトカインレベルの増加又はサイトカイン放出症候群を終結させ、その続発症を回避することができる。
【０１５０】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清は、複数の時点で治療投与することができる。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清の投与は、本明細書に記載の少なくとも２つの時点である。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清の投与は、本明細書に記載の少なくとも３つの時点である。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清の投与は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの前、及びサイトカイン放出症候群が発生した後、及びそれらの任意の組合せである。
【０１５１】
一実施形態においては、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）治療とアポトーシス細胞治療又は上清を一緒に投与する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療をアポトーシス細胞治療又は上清後に実施する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療をアポトーシス細胞治療又は上清前に実施する。この態様によれば、また、一実施形態においては、アポトーシス細胞治療又は上清をＣＡＲ  Ｔ細胞治療から約２〜３週間後に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞治療又は上清をＣＡＲ  Ｔ細胞治療から約６〜７週間後に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞治療又は上清をＣＡＲ  Ｔ細胞治療から約９週間後に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞治療をＣＡＲ  Ｔ細胞治療から数か月後までに実施する。
【０１５２】
したがって、一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を対象に免疫療法と同時に予防として投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から２〜３日後に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から７日後に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から１０日後に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から１４日後に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から２〜１４日後に対象に投与する。
【０１５３】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を免疫療法の実施から２〜３時間後に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から７時間後に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から１０時間後に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から１４時間後に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施から２〜１４時間後に対象に投与する。
【０１５４】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を免疫療法の前に予防として対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の１日前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の２〜３日前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の７日前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の１０日前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の１４日前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の２〜１４日前に対象に投与する。
【０１５５】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を免疫療法の実施の２〜３時間前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の７時間前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の１０時間前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の１４時間前に対象に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清を免疫療法の実施の２〜１４時間前に対象に投与する。
【０１５６】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清は、サイトカイン放出症候群が発生した後、治療投与することができる。一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清は、サイトカイン放出症候群の始まりに至る、又は始まりを証明するサイトカイン放出が検出された後、投与することができる。一実施形態においては、アポトーシス細胞又は上清は、サイトカインレベルの増加又はサイトカイン放出症候群を終結させ、その続発症を回避することができる。
【０１５７】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清は、複数の時点で治療投与することができる。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清の投与は、本明細書に記載の少なくとも２つの時点である。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清の投与は、本明細書に記載の少なくとも３つの時点である。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清の投与は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの前、及びサイトカイン放出症候群が発生した後、及びそれらの任意の組合せである。
【０１５８】
一実施形態においては、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）治療とアポトーシス細胞治療又は上清を一緒に投与する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療をアポトーシス細胞治療又は上清後に実施する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療をアポトーシス細胞治療又は上清前に実施する。この態様によれば、また、一実施形態においては、アポトーシス細胞治療又は上清をＣＡＲ  Ｔ細胞治療から約２〜３週間後に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞治療又は上清をＣＡＲ  Ｔ細胞治療から約６〜７週間後に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞治療又は上清をＣＡＲ  Ｔ細胞治療から約９週間後に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞治療をＣＡＲ  Ｔ細胞治療から数か月後までに実施する。
【０１５９】
別の実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法と同時に予防として対象に投与する。一実施形態においては、追加の薬剤は、アポトーシス細胞、アポトーシス上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節化合物、又はそれらの任意の組合せを含む。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施から２〜３日後に対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施から７日後に対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施から１０日後に対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施から１４日後に対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施から２〜１４日後に対象に投与する。
【０１６０】
別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施から２〜３時間後に対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施から７時間後に対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施から１０時間後に対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施から１４時間後に対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施から２〜１４時間後に対象に投与する。
【０１６１】
別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の前に予防として対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施の１日前に対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施の２〜３日前に対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施の７日前に対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施の１０日前に対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施の１４日前に対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施の２〜１４日前に対象に投与する。
【０１６２】
別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施の２〜３時間前に対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施の７時間前に対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施の１０時間前に対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施の１４時間前に対象に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤を免疫療法の実施の２〜１４時間前に対象に投与する。
【０１６３】
別の一実施形態においては、サイトカイン放出症候群が発生した後、追加の薬剤を治療投与する。一実施形態においては、サイトカイン放出症候群の始まりに至る、又は始まりを証明するサイトカイン放出が検出された後、追加の薬剤を投与する。一実施形態においては、追加の薬剤は、サイトカインレベルの増加又はサイトカイン放出症候群を終結させ、その続発症を回避することができる。
【０１６４】
別の一実施形態においては、追加の薬剤を複数の時点で治療投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤の投与は、本明細書に記載の少なくとも２つの時点である。別の一実施形態においては、追加の薬剤の投与は、本明細書に記載の少なくとも３つの時点である。別の一実施形態においては、追加の薬剤の投与は、ＣＲＳ又はサイトカインストームの前、及びサイトカイン放出症候群が発生した後、及びそれらの任意の組合せである。
【０１６５】
一実施形態においては、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）治療と追加の薬剤を一緒に投与する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を追加の薬剤の前に投与する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を追加の薬剤の前に投与する。この態様によれば、また、一実施形態においては、追加の薬剤をＣＡＲ  Ｔ細胞治療から約２〜３週間後に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤をＣＡＲ  Ｔ細胞治療から約６〜７週間後に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤をＣＡＲ  Ｔ細胞治療から約９週間後に投与する。別の一実施形態においては、追加の薬剤をＣＡＲ  Ｔ細胞治療から数か月後までに投与する。
【０１６６】
一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、対象に対して異種である。一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、１人以上のドナーに由来する。一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、１人以上の骨髄ドナーに由来する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、１つ以上の血液銀行提供に由来する。一実施形態においては、ドナーは適合ドナーである。一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、汎用同種ＣＡＲ  Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、同系ＣＡＲ  Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、不適合第三者ドナーに由来する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、プールされた第三者ドナーＴ細胞に由来する。一実施形態においては、ドナーは、骨髄ドナーである。別の一実施形態においては、ドナーは、血液銀行ドナーである。一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法のＣＡＲ  Ｔ細胞は、１種以上のＭＨＣ非制限腫瘍特異的キメラ受容体を含む。一実施形態においては、非自己Ｔ細胞を当該技術分野で既知である手順に従って操作又は投与して、参照によりその全体を本明細書に援用する米国特許出願第２０１３０１５６７９４号に記載のものなど、自己免疫反応を予防又は最小限にすることができる。
【０１６７】
別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、対象に対して自己である。一実施形態においては、患者自身の細胞を使用する。この実施形態においては、患者自身の細胞を使用する場合、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療をアポトーシス細胞治療後に実施する。
【０１６８】
一実施形態においては、アポトーシス細胞は、対象に対して異種である。一実施形態においては、アポトーシス細胞は、１人以上のドナーに由来する。一実施形態においては、アポトーシス細胞は、１人以上の骨髄ドナーに由来する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、１つ以上の血液銀行提供に由来する。一実施形態においては、ドナーは適合ドナーである。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、不適合第三者ドナーに由来する。一実施形態においては、アポトーシス細胞は、汎用同種アポトーシス細胞である。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、同系ドナーに由来する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、プールされた第三者ドナー細胞に由来する。一実施形態においては、ドナーは、骨髄ドナーである。別の一実施形態においては、ドナーは、血液銀行ドナーである。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、対象に対して自己である。この実施形態においては、患者自身の細胞を使用する。
【０１６９】
一部の実施形態によれば、本明細書に開示される治療用単核濃縮細胞調製物、又はアポトーシス細胞上清を対象に全身投与する。別の一実施形態においては、投与は、静脈内経路を介する。あるいは、治療用単核濃縮細胞又は上清は、非経口、腹腔内、関節内、筋肉内及び皮下経路を含めて、ただしそれらに限定されない、様々な別の経路によって対象に投与することができる。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態となる。
【０１７０】
一部の実施形態によれば、本明細書に開示される治療用単核濃縮細胞調製物、又は追加の薬剤を対象に全身投与する。別の一実施形態においては、投与は、静脈内経路を介する。あるいは、治療用単核濃縮細胞又は追加の薬剤は、非経口、腹腔内、関節内、筋肉内及び皮下経路を含めて、ただしそれらに限定されない、様々な別の経路によって対象に投与することができる。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態となる。
【０１７１】
一実施形態においては、例えば調製物を患者の体の特定の領域に直接注射することによって、調製物を全身ではなく局所投与する。別の一実施形態においては、特定の領域は、腫瘍又は癌を含む。
【０１７２】
別の一実施形態においては、食塩水、ＰＢＳ、ＨＢＳＳなど、ただしそれらに限定されない適切な生理学的緩衝剤に懸濁された治療用単核濃縮細胞又は上清を対象に投与する。さらに、懸濁媒体は、細胞の生存能を維持する助けになる補助剤を更に含むことができる。別の一実施形態においては、食塩水、ＰＢＳ、ＨＢＳＳなど、ただしそれらに限定されない適切な生理学的緩衝剤に懸濁された追加の薬剤を対象に投与する。
【０１７３】
一部の実施形態によれば、医薬組成物を静脈内投与する。別の一実施形態によれば、医薬組成物を単回投与する。別の実施形態によれば、医薬組成物を複数回投与する。別の一実施形態によれば、医薬組成物を２回投与する。別の一実施形態によれば、医薬組成物を３回投与する。別の一実施形態によれば、医薬組成物を４回投与する。別の一実施形態によれば、医薬組成物を５回以上投与する。一部の実施形態によれば、医薬組成物を静脈内注射用に処方する。
【０１７４】
一実施形態においては、改変ＣＡＲ発現免疫細胞を対象に供給する任意の適切な方法を、本明細書に記載の方法のために使用することができる。一実施形態においては、細胞を対象に供給する方法は、造血細胞移植（ＨＣＴ：ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）、ドナー由来ＮＫ細胞の癌患者への注入、又はそれらの組合せを含む。
【０１７５】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法であって、アポトーシス細胞を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む方法である。
【０１７６】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法であって、アポトーシス細胞−食細胞上清などのアポトーシス細胞上清を前記対象に投与するステップを含む方法である。
【０１７７】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法であって、少なくとも１種の追加の薬剤を前記対象に投与するステップを含む方法である。
【０１７８】
ある実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療は、ＣＡＲ  Ｔ細胞及びアポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清、又は本明細書に開示される別の若しくは組合せの追加の薬剤を含む本明細書に開示される組成物を投与するステップを含む。別の実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療は、ＣＡＲ  Ｔ細胞を含む本明細書に開示される組成物、及びアポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清を含む組成物、又は本明細書に開示される追加の薬剤若しくはその組合せを投与するステップを含む。
【０１７９】
非ＣＡＲ  Ｔ細胞適用に関連するサイトカイン放出
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、サイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームを経験した対象、又はサイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームにかかりやすい対象におけるサイトカイン産生を減少させる、又は阻害する方法であって、アポトーシス細胞又はアポトーシス上清を含む組成物を前記対象に投与するステップを含み、前記投与ステップが、前記対象におけるサイトカイン産生を減少させる、又は阻害する、方法である。別の一実施形態においては、サイトカイン産生の減少又は阻害は、サイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームを経験した対象、又はサイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームにかかりやすく、アポトーシス細胞もアポトーシス上清も投与されない対象と比較される。別の一実施形態においては、サイトカイン産生を減少させる、又は阻害する方法は、炎症誘発性サイトカイン産生を減少させる、又は阻害する。別の一実施形態においては、サイトカイン産生を減少させる、又は阻害する方法は、少なくとも１種の炎症誘発性サイトカインの産生を減少させる、又は阻害する。別の一実施形態においては、サイトカイン産生を減少させる、又は阻害する方法は、少なくともサイトカインＩＬ−６の産生を減少させる、又は阻害する。別の一実施形態においては、サイトカイン産生を減少させる、又は阻害する方法は、少なくともサイトカインＩＬ−１ベータの産生を減少させる、又は阻害する。別の一実施形態においては、サイトカイン産生を減少させる、又は阻害する方法は、少なくともサイトカインＴＮＦ−アルファの産生を減少させる、又は阻害する。別の一実施形態においては、サイトカイン産生を減少させる、又は阻害する本明細書に開示される方法は、前記対象において、サイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームを経験した対象、又はサイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームにかかりやすく、アポトーシス細胞もアポトーシス上清も投与されない対象と比較して、サイトカインＩＬ−６、ＩＬ−１β若しくはＴＮＦ−α又は任意の組合せの産生の減少又は阻害をもたらす。
【０１８０】
癌又は腫瘍は、炎症誘発性サイトカインを含むサイトカインの絶対レベルにも影響し得る。対象における腫瘍量のレベルは、サイトカインレベル、特に炎症誘発性サイトカイン（ｐｒｏＯｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ）に影響し得る。当業者は、「減少させる、又は阻害する」という句又はその文法上の変異形が、サイトカイン産生の倍率低下若しくは阻害、又はサイトカイン産生の正味の減少若しくは阻害、又はパーセント（％）低下若しくは阻害を包含し、又はサイトカイン産生の減少若しくは阻害の変化率を包含し得ることを理解されたい。
【０１８１】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、サイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームを経験した対象、又はサイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームにかかりやすい対象におけるサイトカイン産生を減少させる、又は阻害する方法であって、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む方法である。
【０１８２】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、サイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームを経験した対象、又はサイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームにかかりやすい対象におけるサイトカイン産生を減少させる、又は阻害する方法であって、アポトーシス細胞−食細胞上清などのアポトーシス細胞上清、又は前記上清を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む方法である。
【０１８３】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、サイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームを経験した対象、又はサイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームにかかりやすい対象におけるサイトカイン産生を減少させる、又は阻害する方法であって、アポトーシス細胞、アポトーシス上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む群から選択される追加の薬剤などのアポトーシス細胞上清、又は前記上清を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む方法である。
【０１８４】
一実施形態においては、感染症は、対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを引き起こす。一実施形態においては、感染症は、インフルエンザ感染症である。一実施形態においては、インフルエンザ感染症はＨ１Ｎ１である。別の一実施形態においては、インフルエンザ感染症は、Ｈ５Ｎ１鳥インフルエンザである。別の一実施形態においては、感染症は、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ：ｓｅｖｅｒｅ  ａｃｕｔｅ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）である。別の一実施形態においては、対象は、エプスタインバーウイルス関連血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）を有する。別の一実施形態においては、感染症は敗血症である。一実施形態においては、敗血症はグラム陰性である。別の一実施形態においては、感染症はマラリアである。別の一実施形態においては、感染症は、エボラウイルス感染症である。別の一実施形態においては、感染症は、痘瘡ウイルスである。別の一実施形態においては、感染症は、全身性グラム陰性細菌感染症である。別の一実施形態においては、感染症は、ヤーリッシュ  ヘルクスハイマー症候群である。
【０１８５】
一実施形態においては、対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの原因は、血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）である。別の一実施形態においては、ＨＬＨは、散発性ＨＬＨである。別の一実施形態においては、ＨＬＨは、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ：ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）である。別の一実施形態においては、対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの原因は、ＭＡＳである。
【０１８６】
一実施形態においては、対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの原因は、慢性関節炎である。別の一実施形態においては、対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの原因は、スティル病としても知られる全身性若年性特発性関節炎（ｓＪＩＡ：ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｊｕｖｅｎｉｌｅ  Ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）である。
【０１８７】
一実施形態においては、対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの原因は、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ：Ｃｒｙｏｐｙｒｉｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）である。別の一実施形態においては、ＣＡＰＳは、家族性寒冷蕁麻疹（ＦＣＵ：Ｆａｍｉｌｉａｌ  Ｃｏｌｄ  Ｕｒｔｉｃａｒｉａ）としても知られる家族性寒冷自己炎症性症候群（ＦＣＡＳ：Ｆａｍｉｌｉａｌ  Ｃｏｌｄ  Ａｕｔｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）を含む。別の一実施形態においては、ＣＡＰＳは、マックル  ウェルズ症候群（ＭＷＳ：Ｍｕｃｋｌｅ−Ｗｅｌｌ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）を含む。別の一実施形態においては、ＣＡＰＳは、慢性乳児神経皮膚関節（ＣＩＮＣＡ：Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｉｎｆａｎｔｉｌｅ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｉｃｕｌａｒ）症候群を含む。更に別の一実施形態においては、ＣＡＰＳは、ＦＣＡＳ、ＦＣＵ、ＭＷＳ若しくはＣＩＮＣＡ症候群又はそれらの任意の組合せを含む。別の一実施形態においては、対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの原因は、ＦＣＡＳである。別の一実施形態においては、対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの原因は、ＦＣＵである。別の一実施形態においては、対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの原因は、ＭＷＳである。別の一実施形態においては、対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの原因は、ＣＩＮＣＡ症候群である。更に別の一実施形態においては、対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの原因は、ＦＣＡＳ、ＦＣＵ、ＭＷＳ若しくはＣＩＮＣＡ症候群又はそれらの任意の組合せである。
【０１８８】
別の一実施形態においては、対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの原因は、ＣＩＡＳＩ遺伝子としても知られるＮＬＲＰ３遺伝子に遺伝性又は新規機能獲得変異を含むクリオピリン関連周期性症候群（ｃｒｙｏｐｙｒｉｎｏｐａｔｈｙ）である。
【０１８９】
一実施形態においては、対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの原因は、遺伝性自己炎症性障害である。
【０１９０】
一実施形態においては、炎症性サイトカインの放出の引き金は、リポ多糖（ＬＰＳ）、グラム陽性毒素、真菌毒素、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）、又はＲＩＧ−１遺伝子発現の変化である。
【０１９１】
別の一実施形態においては、サイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを経験した対象は、感染症を持たない。一実施形態においては、対象は、急性膵炎を有する。別の一実施形態においては、対象は、一実施形態においては重度の熱傷又は外傷である、組織傷害を有する。別の一実施形態においては、対象は、急性呼吸促迫症候群を有する。別の一実施形態においては、対象は、薬物使用に続発するサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを有する。別の一実施形態においては、対象は、毒素吸入に続発するサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを有する。
【０１９２】
別の一実施形態においては、対象は、一実施形態においてはスーパーアゴニストＣＤ２８特異的モノクローナル抗体（ＣＤ２８ＳＡ）を用いた免疫療法である、免疫療法を受けた後のサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを有する。一実施形態においては、ＣＤ２８ＳＡはＴＧＮ１４１２である。別の一実施形態においては、免疫療法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療である。別の一実施形態においては、免疫療法。
【０１９３】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞若しくは上清若しくはＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを使用して、医薬組成物の投与に起因するサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを制御することができる。一実施形態においては、医薬組成物は、オキサリプラチン、シタラビン、レナリドマイド又はそれらの組合せである。
【０１９４】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞若しくは上清若しくはＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを使用して、抗体の投与に起因するサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを制御することができる。一実施形態においては、抗体は、モノクローナルである。別の一実施形態においては、抗体は、ポリクローナルである。一実施形態においては、抗体は、リツキシマブである。別の一実施形態においては、抗体は、オルソクローンＯＫＴ３（ムロモナブ−ＣＤ３）である。別の一実施形態においては、抗体は、アレムツズマブ、トシツズマブ（ｔｏｓｉｔｕｚｕｍａｂ）、ＣＰ−８７０，８９３、ＬＯ−ＣＤ２ａ／ＢＴＩ−３２２又はＴＧＮ１４１２である。
【０１９５】
別の一実施形態においては、炎症性サイトカイン産生の制御が有益であり得る疾患の例としては、癌、アレルギー、任意のタイプの感染症、毒素性ショック症候群、敗血症、任意のタイプの自己免疫疾患、関節炎、クローン病、ループス、乾癬、又は対象において有害作用を引き起こす毒性サイトカイン放出を特徴とする任意の他の疾患が挙げられる。
【０１９６】
アルファ−１−抗トリプシン（ＡＡＴ）
アルファ−１−抗トリプシン（ＡＡＴ）は、主に肝臓によって産生される循環５２ｋＤａ糖タンパク質である。ＡＡＴは、主にセリンプロテアーゼ阻害剤として知られ、遺伝子ＳＥＲＰＩＮＡ１によってコードされる。ＡＡＴは、好中球エラスターゼを阻害し、循環ＡＡＴの遺伝的欠損は、肺組織劣化及び肝疾患をもたらす。健康な個体における血清ＡＡＴ濃度は、炎症中に２倍に増加する。
【０１９７】
ＡＡＴレベルと幾つかの炎症性疾患の重症度の間には、負の関連性がある。例えば、ＡＡＴのレベル又は活性の低下が、ＨＩＶ感染症、真性糖尿病、Ｃ型肝炎感染誘導性慢性肝疾患、及び幾つかのタイプの血管炎の患者において記述されている。
【０１９８】
増え続ける証拠の示すところによれば、ヒト血清由来のアルファ−１−抗トリプシン（ＡＡＴ）は、炎症誘発性サイトカインの産生を減少させ、抗炎症性サイトカインを誘導し、樹状細胞の成熟を妨害する。
【０１９９】
実際、ＡＡＴをヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ：ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌｓ）に添加すると、ＬＰＳによって誘導されるＴＮＦ−α及びＩＬ−１βの放出が阻害されるが、ＩＬ−１受容体拮抗薬（ＩＬ−１Ｒａ）及びＩＬ−１０の産生が増加する。
【０２００】
ＡＡＴは、インビトロでＩＬ−１β媒介性膵島毒性を低下させ、ＡＡＴ単独療法は、移植膵島細胞生着を延長し、マウスにおける抗原特異的免疫寛容を促進し、非肥満糖尿病（ＮＯＤ：ｎｏｎ−ｏｂｅｓｅ  ｄｉａｂｅｔｉｃ）マウスにおける糖尿病の進展を遅らせる。ＡＡＴは、実験モデルにおいてＬＰＳ誘導性急性肺損傷を阻止することが示された。最近、ＡＡＴは、急性心筋虚血再潅流障害のマウスモデルにおける梗塞サイズ及び心不全の重症度を低下させることが示された。
【０２０１】
臨床等級のヒトＡＡＴ（ｈＡＡＴ）を用いた単独療法は、循環炎症誘発性サイトカインを減少させ、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ：Ｇｒａｆｔ  ｖｓ  Ｈｏｓｔ  Ｄｉｓｅａｓｅ）重症度を低下させ、実験的同種骨髄移植後の動物生存を延長した（Ｔａｗａｒａら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２０１２  Ｊａｎ  １０；１０９（２）：５６４〜９）。参照により本明細書に援用する。ＡＡＴ処置は、アロ反応性Ｔエフェクター細胞の増殖を減少させたが、Ｔ制御性Ｔ細胞（Ｔ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ−ｃｅｌｌｓ）（Ｔｒｅｇｓ）の回復を増強し、したがってドナーＴエフェクターとＴ制御性細胞の比を病理過程の抑制に有利なように変えた。インビトロで、ＡＡＴは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１βなどの炎症誘発性サイトカインのＬＰＳ誘導性インビトロ分泌を抑制し、抗炎症性サイトカインＩＬ−１０の産生を増強し、宿主樹状細胞におけるＮＦ−κＢ転位を阻害した。参照により本明細書に援用するＭａｒｃｏｎｄｅｓ、Ｂｌｏｏｄ．２０１４（Ｏｃｔ  ３０；１２４（１８）：２８８１〜９１）によれば、ＡＡＴ処置は、ＧｖＨＤを改善するだけでなく、移植片対白血病（ＧＶＬ：ｇｒａｆｔ  ｖｓ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）効果を維持し、恐らくは増強さえした。
【０２０２】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）とアルファ−１−抗トリプシン（ＡＡＴ）とを含む組成物である。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞とアルファ−１−抗トリプシン（ＡＡＴ）は、別々の組成物中にある。別の一実施形態においては、ＡＡＴは、完全長ＡＡＴ又はその機能的断片を含む。別の一実施形態においては、ＡＡは、完全長ＡＡＴの類似体又はその機能的断片を含む。別の一実施形態においては、ＡＡＴを含む組成物は、更にアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を含む。
【０２０３】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する方法であって、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）、及びアルファ−１−抗トリプシン（ＡＡＴ）を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む方法である。別の一実施形態においては、該方法は、更にアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を含む。
【０２０４】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法であって、アルファ−１−抗トリプシン（ＡＡＴ）を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む方法である。別の一実施形態においては、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを処置する方法は、アルファ−１−抗トリプシン（ＡＡＴ）を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。別の一実施形態においては、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを予防する方法は、アルファ−１−抗トリプシン（ＡＡＴ）を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。別の一実施形態においては、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを改善する方法は、アルファ−１−抗トリプシン（ＡＡＴ）を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。別の一実施形態においては、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを軽減する方法は、アルファ−１−抗トリプシン（ＡＡＴ）を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。
【０２０５】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、サイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームを経験した対象、又はサイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームにかかりやすい対象におけるサイトカイン産生を減少させる、又は阻害する方法であって、アルファ−１−抗トリプシン（ＡＡＴ）を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む方法である。
【０２０６】
一実施形態においては、ＡＡＴを単独で投与して、サイトカイン放出を制御する。別の一実施形態においては、ＡＡＴとアポトーシス細胞若しくはその組成物の両方、又はアポトーシス細胞上清若しくはその組成物を投与して、サイトカイン放出を制御する。
【０２０７】
免疫調節剤
当業者は、免疫調節剤が、細胞外媒介物質、受容体、細胞内シグナル伝達経路の媒介物質、翻訳及び転写の制御因子、並びに免疫細胞を包含し得ることを理解されたい。一実施形態においては、本明細書に開示される追加の薬剤は、当該技術分野で既知である免疫調節剤である。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法における免疫調節剤の使用は、少なくとも１種のサイトカインのレベルを低下させる。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法における免疫調節剤の使用は、ＣＲＳ又はサイトカインストームを減少させ、又は阻害する。
【０２０８】
一実施形態においては、免疫調節剤は、サイトカイン又はケモカインの放出を遮断する、阻害する、又は減少させる化合物を含む。別の一実施形態においては、免疫調節剤は、ＩＬ−２１若しくはＩＬ−２３又はそれらの組合せの放出を遮断する、阻害する、又は減少させる化合物を含む。別の一実施形態においては、免疫調節剤は、ケモカイン受容体−５（ＣＣＲ５）受容体拮抗薬クラスの抗レトロウイルス薬、例えば、マラビロクを含む。別の一実施形態においては、免疫調節剤は、抗ＤＮＡＭ−１抗体を含む。別の一実施形態においては、免疫調節剤は、ヘパリン硫酸、ＡＴＰ及び尿酸又はそれらの任意の組合せを含む群から選択される損傷／病原体関連分子（ＤＡＭＰ／ＰＡＭＰ）を含む。別の一実施形態においては、免疫調節剤は、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン（シグレック）を含む。別の一実施形態においては、免疫調節剤は、寛容性の細胞媒介物質、例えば、制御性ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞（Ｔｒｅｇｓ）又はインバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫ  Ｔ細胞）を含む。別の一実施形態においては、免疫調節剤は、樹状細胞を含む。別の一実施形態においては、免疫調節剤は、単球を含む。別の一実施形態においては、免疫調節剤は、マクロファージを含む。別の一実施形態においては、免疫調節剤は、ルキソリチニブ及びトファシチニブを含む群から選択されるＪＡＫ２又はＪＡＫ３阻害剤を含む。別の一実施形態においては、免疫調節剤は、脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）阻害剤、例えば、フォスタマチニブを含む。別の一実施形態においては、免疫調節剤は、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤ボリノスタットアセチル化ＳＴＡＴ３を含む。別の一実施形態においては、免疫調節剤は、ＮＥＤＤ化阻害剤、例えば、ＭＬＮ４９２４を含む。別の一実施形態においては、免疫調節剤は、ｍｉＲ−１４２拮抗物質を含む。別の一実施形態においては、免疫調節剤は、シチジンの化学類似体、例えば、アザシチジンを含む。別の一実施形態においては、免疫調節剤は、ヒストン脱アセチル化酵素の阻害剤、例えば、ボリノスタットを含む。別の一実施形態においては、免疫調節剤は、ヒストンメチル化の阻害剤を含む。
【０２０９】
テルル化合物
テルルは、人体中に存在する微量元素である。種々のテルル化合物は、免疫調節性を有し、多様な前臨床及び臨床試験において有益な効果を有することが示された。テルル含有化合物の特に有効なファミリーは、例えば、米国特許第４，７５２，６１４号、同４，７６１，４９０号、同４，７６４，４６１号及び同４，９２９，７３９号に開示されている。テルル含有化合物のこのファミリーの免疫調節性は、例えば、本明細書に完全に記載されたが如く参照によりすべて本明細書に援用する、米国特許第４，９６２，２０７号、同５，０９３，１３５号、同５，１０２，９０８号及び同５，２１３，８９９号に記載されている。
【０２１０】
１つの有望な化合物は、アンモニウムトリクロロ（ジオキシエチレン−Ｏ，Ｏ’）テルラートであり、本明細書及び当該技術分野においてはＡＳ１０１とも称される。ＡＳ１０１は、上で考察したテルル含有化合物のファミリーの代表例として、抗ウイルス性（Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎ．Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｒｅｇｕｌ．７（３）：１６３〜８、１９８８；ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ  Ｈｕｍ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ．８（５）：６１３〜２３、１９９２）及び殺腫瘍活性（Ｎａｔｕｒｅ  ３３０（６１４４）：１７３〜６、１９８７；Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１３（９）：２３４２〜５３、１９９５；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６１（７）：３５３６〜４２、１９９８）を示す。さらに、ＡＳ１０１は、低毒性を特徴とする。
【０２１１】
一実施形態においては、テルル含有免疫調節化合物を含む組成物は、本明細書に開示される方法に使用することができ、テルル化合物は、免疫応答の生得及び獲得アームを刺激する。例えば、ＡＳ１０１は、マウス（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８８（１８）：１２７６〜８４、１９９６）及びヒト（Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎ．Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｒｅｇｕｌ．９（３）：１８２〜９０、１９９０；Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７０（４）：４７３〜７、１９９０；Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８８（１８）：１２７６〜８４、１９９６）において、インターフェロン（ＩＦＮ）の強力な活性化剤であることが示された。
【０２１２】
別の一実施形態においては、テルル化合物は、ＩＬ−１α、ＩＬ−６、ＴＮＦ−αなどの一連のサイトカインの分泌を誘導する。
【０２１３】
別の一実施形態においては、テルル化合物は、免疫調節性を有することが当該技術分野で知られているテルル化合物を含む。別の一実施形態においては、テルル化合物は、アンモニウムトリクロロ（ジオキシエチレン−Ｏ，Ｏ’）テルラートを含む。
【０２１４】
一実施形態においては、テルル化合物は、少なくとも１種のサイトカインの分泌を阻害する。別の一実施形態においては、テルル化合物は、少なくとも１種のサイトカインの分泌を減少させる。別の一実施形態においては、テルル化合物は、サイトカインストームのサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を阻害する、又は減少させる。
【０２１５】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）とテルル化合物とを含む組成物である。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞とテルル化合物は、別々の組成物中にある。別の一実施形態においては、ＡＡＴは、完全長ＡＡＴ又はその機能的断片を含む。別の一実施形態においては、ＡＡは、完全長ＡＡＴの類似体又はその機能的断片を含む。
【０２１６】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する方法であって、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）、及びテルル化合物を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む方法である。
【０２１７】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法であって、テルル化合物を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む方法である。別の一実施形態においては、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを処置する方法は、テルル化合物を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。別の一実施形態においては、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを予防する方法は、テルル化合物を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。別の一実施形態においては、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを改善する方法は、テルル化合物を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。別の一実施形態においては、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを軽減する方法は、テルル化合物を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。
【０２１８】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、サイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームを経験した対象、又はサイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームにかかりやすい対象におけるサイトカイン産生を減少させる、又は阻害する方法であって、テルル化合物を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む方法である。
【０２１９】
一実施形態においては、テルル化合物を単独で投与して、サイトカイン放出を制御する。別の一実施形態においては、テルル化合物とアポトーシス細胞若しくはその組成物の両方、又はアポトーシス細胞上清若しくはその組成物を投与して、サイトカイン放出を制御する。
【０２２０】
遺伝子改変
一実施形態においては、Ｔ細胞、樹状細胞及び／又はアポトーシス細胞の遺伝子改変は、ＲＮＡ、ＤＮＡ、組換えウイルス又はそれらの組合せを用いて行うことができる。一実施形態においては、ガンマレトロウイルス又はレンチウイルスに由来するベクターを、本明細書に開示される組成物及び方法に使用する。別の一実施形態においては、これらのベクターは、宿主ゲノムに組み込むことができ、導入遺伝子を潜在的に恒久的に発現し、固有の免疫原性が低い。別の一実施形態においては、宿主ゲノムに組み込まれ、及び／又は固有の免疫原性が低い、別のベクターを、本明細書に開示される組成物及び方法に使用することができる。別の一実施形態においては、非ウイルスベクター媒介性ｓｌｅｅｐｉｎｇ  ｂｅａｕｔｙ（眠れる森の美女）トランスポゾンシステムを使用して、ＣＡＲ及び他の遺伝子をＴ細胞に挿入する。別の一実施形態においては、「自殺遺伝子」がＴ細胞に組み込まれ、アポトーシス促進性遺伝子の発現が、全身送達薬物に応答性である誘導性プロモーターの制御下にある。
【０２２１】
一実施形態においては、遺伝子改変は、一過性であり得る。別の一実施形態においては、遺伝子改変は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を利用することができる。別の一実施形態においては、多数の細胞を複数の機会にｍＲＮＡ導入Ｔ細胞などの一時的に操作されたＴ細胞に注入することができる。別の一実施形態においては、インビトロで転写されたｍＲＮＡを用いたリンパ球のＲＮＡベースの電気穿孔法は、タンパク質の一過性発現を約１週間媒介し、ウイルスベクターを組み込むリスクを取り除く。別の一実施形態においては、ｍＲＮＡ導入樹状細胞又はｍＲＮＡ電気穿孔Ｔ及びＮＫリンパ球。
【０２２２】
遺伝子改変Ｔ細胞は、養子移入後に有害作用なしに１０年以上存続し得ることが実証され、遺伝子改変ヒトＴ細胞が基本的に安全であることが示された。
【０２２３】
別の一実施形態においては、組成物の遺伝子改変、及び本明細書に開示される方法においては、当該技術分野で既知である任意の方法とすることができる。
【０２２４】
アポトーシス細胞
一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法に使用されるアポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）は、参照によりその全体を本明細書に援用する国際公開第２０１４／０８７４０８号に記載の通りである。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法に使用されるアポトーシス細胞は、当該技術分野で既知である任意の方法で製造される。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法に使用されるアポトーシス細胞は、治療を受ける対象の自己のものである。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法に使用されるアポトーシス細胞は、治療を受ける対象と同種のものである。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞を含む組成物は、本明細書に開示される、又は当該技術分野で既知である、アポトーシス細胞を含む。
【０２２５】
一実施形態においては、アポトーシス細胞は、単核濃縮細胞を含む細胞調製物を含み、調製物は単核球少なくとも８５％を含み、調製物中の細胞の少なくとも４０％は早期アポトーシス状態であり、調製物中の細胞の少なくとも８５％は生細胞であり、調製物は、ＣＤ１５ｈｉｇｈ発現細胞１５％以下を含む。
【０２２６】
当業者は、「早期アポトーシス状態」という用語が、アポトーシスの後期徴候なしにアポトーシスの早期徴候を示す細胞を包含し得ることを理解されたい。細胞におけるアポトーシスの早期徴候の例としては、ホスファチジルセリン（ＰＳ）の露出、及びミトコンドリア膜電位の低下が挙げられる。後期事象の例としては、細胞中へのヨウ化プロピジウム（ＰＩ：ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ  ｉｏｄｉｄｅ）の進入、及び最終ＤＮＡ切断が挙げられる。細胞が「早期アポトーシス」状態にあることを記述するために、一実施形態においては、アネキシン−ＶによるＰＳ露出検出、及びＰＩ染色が利用され、アネキシンＶで染色されるがＰＩでは染色されない細胞は、「早期アポトーシス細胞」であると考えられる。別の一実施形態においては、アネキシン−Ｖ  ＦＩＴＣとＰＩの両方で染色される細胞は、「後期アポトーシス細胞」であると考えられる。別の一実施形態においては、アネキシン−ＶにもＰＩにも染まらない細胞は、非アポトーシス生細胞と考えられる。
【０２２７】
一実施形態においては、アポトーシス細胞は、早期アポトーシス状態の細胞を含む。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、前記細胞の少なくとも９０％が早期アポトーシス状態である細胞を含む。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、前記細胞の少なくとも８０％が早期アポトーシス状態である細胞を含む。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、前記細胞の少なくとも７０％が早期アポトーシス状態である細胞を含む。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、前記細胞の少なくとも６０％が早期アポトーシス状態である細胞を含む。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、前記細胞の少なくとも５０％が早期アポトーシス状態である細胞を含む。
【０２２８】
別の一実施形態においては、早期アポトーシス細胞は安定である。別の一実施形態においては、早期アポトーシス細胞は、少なくとも２４時間安定である。別の一実施形態においては、早期アポトーシス細胞は、２４時間安定である。別の一実施形態においては、早期アポトーシス細胞は、２４時間を超えて安定である。別の一実施形態においては、早期アポトーシス細胞は、少なくとも３６時間安定である。別の一実施形態においては、早期アポトーシス細胞は、４８時間安定である。別の一実施形態においては、早期アポトーシス細胞は、少なくとも３６時間安定である。別の一実施形態においては、早期アポトーシス細胞は、３６時間を超えて安定である。別の一実施形態においては、早期アポトーシス細胞は、少なくとも４８時間安定である。別の一実施形態においては、早期アポトーシス細胞は、４８時間安定である。別の一実施形態においては、早期アポトーシス細胞は、少なくとも４８時間安定である。別の一実施形態においては、早期アポトーシス細胞は、４８時間を超えて安定である。別の一実施形態においては、早期アポトーシス細胞は、少なくとも７２時間安定である。別の一実施形態においては、早期アポトーシス細胞は、７２時間安定である。別の一実施形態においては、早期アポトーシス細胞は、少なくとも７２時間安定である。別の一実施形態においては、早期アポトーシス細胞は、７２時間を超えて安定である。
【０２２９】
当業者は、「安定」という用語が、ＰＳ陽性（ホスファチジルセリン陽性）のままであり、ＰＩ陽性（ヨウ化プロピジウム陽性）の割合が極めて少ないアポトーシス細胞を包含することを理解されたい。ＰＩ陽性細胞は膜安定性の指標を与え、ＰＩ陽性細胞は細胞への進入を可能にし、膜がより不安定であることを示す。一実施形態においては、安定な早期アポトーシス細胞は、少なくとも２４時間、少なくとも３６時間、少なくとも４８時間、又は少なくとも７２時間早期アポトーシスのままである。別の一実施形態においては、安定な早期アポトーシス細胞は、２４時間、３６時間、４８時間又は７２時間早期アポトーシスのままである。別の一実施形態においては、安定な早期アポトーシス細胞は、２４時間を超えて、３６時間を超えて、４８時間を超えて、又は７２時間を超えて早期アポトーシスのままである。別の一実施形態においては、安定な早期アポトーシス細胞は、その状態を長期間維持する。一実施形態においては、アポトーシス細胞を含む組成物は、更に抗凝固薬を含む。
【０２３０】
一実施形態においては、抗凝固薬は、ヘパリン、クエン酸デキストロース（ＡＣＤ：ａｃｉｄ  ｃｉｔｒａｔｅ  ｄｅｘｔｒｏｓｅ）Ｆｏｒｍｕｌａ  Ａ及びそれらの組合せからなる群から選択される。
【０２３１】
一実施形態においては、組成物は、更にメチルプレドニゾロンを含む。一実施形態においては、メチルプレドニゾロンの濃度は３０μｇ／ｍｌを超えない。一実施形態においては、約１４０×１０６個〜２１０×１０６個のアポトーシス細胞を投与する。
【０２３２】
一実施形態においては、アポトーシス細胞は、高用量で使用される。一実施形態においては、アポトーシス細胞は、高濃度で使用される。一実施形態においては、ヒトアポトーシス多形核好中球（ＰＭＮ）が使用される。一実施形態においては、５０％がアポトーシス細胞である細胞群が使用される。一実施形態においては、アポトーシス細胞は、メイ  ギムザ染色細胞標本によって確認される。一実施形態においては、細胞の生存率は、トリパンブルー排除によって評価される。一実施形態においては、細胞のアポトーシス及び壊死状態は、アネキシンＶ／ヨウ化プロピジウム染色とＦＡＣＳ検出によって確認される。
【０２３３】
一部の実施形態においては、本明細書に開示されるアポトーシス細胞は、壊死細胞を含まない。一部の実施形態においては、本明細書に開示されるアポトーシス細胞は、１％未満の壊死細胞を含む。一部の実施形態においては、本明細書に開示されるアポトーシス細胞は、２％未満の壊死細胞を含む。一部の実施形態においては、本明細書に開示されるアポトーシス細胞は、３％未満の壊死細胞を含む。一部の実施形態においては、本明細書に開示されるアポトーシス細胞は、４％未満の壊死細胞を含む。一部の実施形態においては、本明細書に開示されるアポトーシス細胞は、５％未満の壊死細胞を含む。
【０２３４】
一実施形態においては、１０×１０６個のアポトーシス細胞の用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０７個のアポトーシス細胞の用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０８個のアポトーシス細胞の用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０９個のアポトーシス細胞の用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０１０個のアポトーシス細胞の用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０１１個のアポトーシス細胞の用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０１２個のアポトーシス細胞の用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０５個のアポトーシス細胞の用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０４個のアポトーシス細胞の用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０３個のアポトーシス細胞の用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０２個のアポトーシス細胞の用量を投与する。
【０２３５】
一実施形態においては、高用量のアポトーシス細胞を投与する。一実施形態においては、３５×１０６個のアポトーシス細胞の用量を投与する。別の一実施形態においては、２１０×１０６個のアポトーシス細胞の用量を投与する。別の一実施形態においては、７０×１０６個のアポトーシス細胞の用量を投与する。別の一実施形態においては、１４０×１０６個のアポトーシス細胞の用量を投与する。別の一実施形態においては、３５〜２１０×１０６個のアポトーシス細胞の用量を投与する。
【０２３６】
一部の実施形態によれば、本明細書に開示される製造方法に従って単核濃縮細胞組成物を得ることは、白血球除去輸血によって行われる。当業者は、「白血球除去輸血」という用語が、白血球をドナーの血液から分離するアフェレーシス手順を包含し得ることを理解されたい。一部の実施形態によれば、ドナーの血液は白血球除去輸血を受け、したがって単核濃縮細胞組成物が本明細書に開示される製造方法に従って得られる。なお、収集細胞の凝固を予防するために、当該技術分野で知られているように、白血球除去輸血中に少なくとも１種の抗凝固薬の使用が必要である。
【０２３７】
一部の実施形態によれば、白血球除去輸血手順は、本明細書に開示される製造方法に従って単核濃縮細胞組成物の収集を可能にするように構成される。一部の実施形態によれば、白血球除去輸血によって得られる細胞収集物は、少なくとも６５％を構成する。別の実施形態においては、少なくとも７０％、又は少なくとも８０％単核球。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態となる。一部の実施形態によれば、細胞ドナー由来の血漿が収集され、並行して本明細書に開示される製造方法に従って単核濃縮細胞組成物が得られる。一部の実施形態によれば、細胞ドナー由来の血漿約３００〜６００ｍｌが収集され、並行して本明細書に開示される製造方法に従って単核濃縮細胞組成物が得られる。一部の実施形態によれば、本明細書に開示される製造方法に従って単核濃縮細胞組成物が得られるのと並行して収集された血漿は、凍結及び／又はインキュベーション媒体の一部として使用される。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態となる。本明細書に開示される組成物及び方法に使用される濃縮アポトーシス細胞集団を得る更なる詳細な方法は、参照によりその全体を本明細書に援用する国際公開第２０１４／０８７４０８号に見ることができる。
【０２３８】
なお、一部の実施形態によれば、最初の単核濃縮細胞調製物は、少なくとも６５％の単核球、少なくとも７０％、又は少なくとも８０％の単核球を含むが、本明細書に開示される最終医薬組成物は、本明細書に開示される製造方法に従って、少なくとも８５％を含む。別の一実施形態においては、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％単核球。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態となる。
【０２３９】
一実施形態においては、アポトーシス細胞は、静脈内、皮下、節内、腫瘍内、髄腔内、胸膜内、腹腔内、及び胸腺に直接を含めて、ただしそれらに限定されない、当該技術分野で既知である任意の方法によって投与することができる。
【０２４０】
一実施形態においては、アポトーシス細胞は同種である。一実施形態においては、アポトーシス細胞は、プールされた第三者ドナーに由来する。一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、参照によりその全体を本明細書に援用する米国特許出願第２０１３０１５６７９４号に記載の１つ以上のステップを含めて、同種ドナー細胞の拒絶を克服するのに有用である追加のステップを含む。一実施形態においては、該方法は、一実施形態においては同種アポトーシス細胞である、アポトーシス細胞の投与前に、完全又は部分的リンパ球除去のステップを含む。一実施形態においては、同種アポトーシス細胞がサイトカイン放出を制御するのに十分な期間、宿主対移植片反応を遅らせるように、リンパ球除去を調節する。別の一実施形態においては、該方法は、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン−１，３−ジオール（ＦＴＹ７２０）、５−［４−フェニル−５−（トリフルオロメチル）チオフェン−２−イル］−３−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］１，２，４−オキサジアゾール（ＳＥＷ２８７１）、３−（２−（−ヘキシルフェニルアミノ）−２−オキソエチルアミノ）プロパン酸（Ｗ１２３）、リン酸水素２−アンモニオ−４−（２−クロロ−４−（３−フェノキシフェニルチオ）フェニル）−２−（ヒドロキシメチル）ブチル（ＫＲＰ−２０３ホスファート）、当該技術分野で既知である他の薬剤など、リンパ節からの同種アポトーシスＴ細胞の放出を遅延させる薬剤を投与するステップを含み、本明細書に開示される組成物及び方法の一部として使用して、有効性を有するが移植片対宿主病を惹起しない同種アポトーシス細胞の使用を可能にすることができる。別の一実施形態においては、同種アポトーシスＴ細胞によるＭＨＣ発現は、同種細胞の拒絶を抑制するために停止される。
【０２４１】
別の一実施形態においては、該方法は、ドナーからのＷＢＣ由来のアポトーシス細胞を、レシピエントに投与する前に照射するステップを含む。一実施形態においては、アポトーシス細胞集団内の残留生細胞の増殖及び／又は活性化をしないように細胞を照射する。別の一実施形態においては、照射されたアポトーシス細胞は、すべてのそれらの早期アポトーシス性、免疫調節性、安定性を維持する。別の一実施形態においては、照射ステップは、ＵＶ照射を使用する。別の一実施形態においては、照射ステップは、ガンマ線照射を使用する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、減少した割合の生きている非アポトーシス細胞を含み、アポトーシス細胞調製物内に存在する任意の生きている非アポトーシス細胞の細胞活性化が抑制された調製物を含み、若しくはアポトーシス細胞調製物内に存在する任意の生きている非アポトーシス細胞の増殖が減少した調製物を含み、又はそれらの任意の組合せを含む。
【０２４２】
一実施形態においては、早期アポトーシス状態の単核球を含むプールされた単核アポトーシス細胞調製物、前記プールされた単核アポトーシス細胞は、減少した割合の生きている非アポトーシス細胞、任意の生きている非アポトーシス細胞の細胞活性化が抑制された調製物、若しくは任意の生きている非アポトーシス細胞の増殖が減少した調製物、又はそれらの任意の組合せを含む。別の一実施形態においては、プールされた単核アポトーシス細胞は、照射されている。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、一部の実施形態においては供血された血液から得られた白血球画分（ＷＢＣ：ｗｈｉｔｅ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）に由来する、プールされた単核アポトーシス細胞調製物である。
【０２４３】
一実施形態においては、アポトーシス細胞調製物は照射される。別の一実施形態においては、前記照射は、ガンマ照射又はＵＶ照射を含む。更に別の一実施形態においては、照射調製物は、非照射アポトーシス細胞調製物と比較して非アポトーシス細胞数が少ない。別の一実施形態においては、照射調製物は、非照射アポトーシス細胞調製物と比較して増殖細胞数が少ない。別の一実施形態においては、照射調製物は、非照射アポトーシス細胞集団と比較して潜在的に免疫学的に活性な細胞の数が少ない。
【０２４４】
一実施形態においては、プールされた血液は、ドナーとレシピエントで適合しない第三者血液を含む。
【０２４５】
当業者は、「プール」という用語が、複数のドナーから収集され、調製され、場合によっては後で使用するために貯蔵される、血液を包含し得ることを理解されたい。この血液混合プールを次いで処理して、プールされた単核アポトーシス細胞調製物を製造することができる。別の一実施形態においては、プールされた単核アポトーシス細胞調製物によって、単核アポトーシス細胞の容易に入手可能な供給が確実に利用できるようになる。別の一実施形態においては、細胞は、アポトーシスが誘導されるインキュベーションステップの直前にプールされる。別の一実施形態においては、細胞は、インキュベーションステップ後の再懸濁ステップにおいてプールされる。別の一実施形態においては、細胞は、照射ステップの直前にプールされる。別の一実施形態においては、細胞は、照射ステップ後にプールされる。別の一実施形態においては、細胞は、調製方法における任意のステップにおいてプールされる。
【０２４６】
一実施形態においては、プールされたアポトーシス細胞調製物は、約２〜２５単位の血液中に存在する細胞に由来する。別の一実施形態においては、前記プールされたアポトーシス細胞調製物は、約２〜５、２〜１０、２〜１５、２〜２０、５〜１０、５〜１５、５〜２０、５〜２５、１０〜１５、１０〜２０、１０〜２５、６〜１３、又は６〜２５単位の血液中に存在する細胞で構成される。別の一実施形態においては、前記プールされたアポトーシス細胞調製物は、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５単位の血液中に存在する細胞で構成される。必要な血液の単位数は、血液からのＷＢＣ回収の効率にも依存する。例えば、ＷＢＣ回収効率が低いと追加の単位が必要となり、ＷＢＣ回収効率が高いと必要な単位が減少すると考えられる。一部の実施形態においては、各単位は、血液バッグである。別の一実施形態においては、プールされたアポトーシス細胞調製物は、少なくとも２５単位の血液、少なくとも５０単位の血液、又は少なくとも１００単位の血液中に存在する細胞で構成される。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態となる。
【０２４７】
一実施形態においては、血液の単位は、供血由来の白血球（ＷＢＣ）画分を含む。別の一実施形態においては、供血は、輸血センター又は血液銀行からとすることができる。別の一実施形態においては、供血は、プールされたアポトーシス細胞調製物の調製時に集められた病院内のドナーからとすることができる。別の一実施形態においては、複数のドナーからのＷＢＣを含む血液の単位は、本明細書に開示される組成物及びその方法のために設立された独立した血液銀行に保存され、維持される。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及びその方法のために創設された血液銀行は、複数のドナーからのＷＢＣを含む血液の単位を供給することができ、白血球除去輸血ユニットを含む。
【０２４８】
一実施形態においては、プールされたＷＢＣの単位は、ＨＬＡ適合によって制限されない。したがって、得られるプールされたアポトーシス細胞調製物は、ＨＬＡ適合によって制限されない細胞集団を含む。したがって、ある実施形態においては、プールされた単核アポトーシス細胞調製物は、同種細胞を含む。
【０２４９】
ＨＬＡ適合によって制限されないプールされたＷＢＣに由来するプールされた単核アポトーシス細胞調製物の利点は、容易に利用可能なＷＢＣ源であり、ＷＢＣの入手コストが削減されることである。
【０２５０】
一実施形態においては、プールされた血液は、ＨＬＡ適合と無関係な複数のドナーからの血液を含む。別の一実施形態においては、プールされた血液は、レシピエントとのＨＬＡ適合が考慮された複数のドナーからの血液を含む。例えば、１個のＨＬＡ対立遺伝子、２個のＨＬＡ対立遺伝子、３個のＨＬＡ対立遺伝子、４個のＨＬＡ対立遺伝子、５個のＨＬＡ対立遺伝子、６個のＨＬＡ対立遺伝子、又は７個のＨＬＡ対立遺伝子がドナーとレシピエントで適合する。別の一実施形態においては、複数のドナーが部分的に適合し、例えば、ドナーの一部がＨＬＡ適合し、１個のＨＬＡ対立遺伝子、２個のＨＬＡ対立遺伝子、３個のＨＬＡ対立遺伝子、４個のＨＬＡ対立遺伝子、５個のＨＬＡ対立遺伝子、６個のＨＬＡ対立遺伝子、又は７個のＨＬＡ対立遺伝子がドナーの一部とレシピエントで適合する。各可能性は、本明細書に開示される一実施形態を構成する。
【０２５１】
ある実施形態においては、一部の生存可能な非アポトーシス細胞（アポトーシス耐性）は、後述するアポトーシス誘導ステップ後に残り得る。これらの生存可能な非アポトーシス細胞の存在は、一実施形態においては、照射ステップ前に認められる。これらの生存可能な非アポトーシス細胞は、増殖又は活性化することができる。一実施形態においては、複数のドナーに由来するプールされた単核アポトーシス細胞調製物は、宿主に対して活性化することができ、互いに活性化することができ、又はその両方である。
【０２５２】
一実施形態においては、本明細書に開示される照射細胞調製物は、非照射細胞調製物と比較して細胞活性化が抑制され、増殖が減少する。別の一実施形態においては、照射は、ガンマ照射又はＵＶ照射を含む。別の一実施形態においては、照射細胞調製物は、非照射細胞調製物と比較して非アポトーシス細胞数が少ない。別の一実施形態においては、照射は、約１５グレイ（Ｇｒｅｙ）単位（Ｇｙ）を含む。別の一実施形態においては、照射は、約２０グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の一実施形態においては、照射は、約２５グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の一実施形態においては、照射は、約３０グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の一実施形態においては、照射は、約３５グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の一実施形態においては、照射は、約４０グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の一実施形態においては、照射は、約４５グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の一実施形態においては、照射は、約５０グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の一実施形態においては、照射は、約５５グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の一実施形態においては、照射は、約６０グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の一実施形態においては、照射は、約６５グレイ単位（Ｇｙ）を含む。別の一実施形態においては、照射は、最高２５００Ｇｙを含む。別の一実施形態においては、プールされた照射アポトーシス細胞調製物は、プールされた非照射アポトーシス細胞調製物と同じ又は類似のアポトーシスプロファイル、安定性及び有効性を維持する。
【０２５３】
一実施形態においては、本明細書に開示されるプールされた単核アポトーシス細胞調製物は、最高２４時間安定である。別の一実施形態においては、プールされた単核アポトーシス細胞調製物は、少なくとも２４時間安定である。別の一実施形態においては、プールされた単核アポトーシス細胞調製物は、２４時間を超えて安定である。更に別の一実施形態においては、本明細書に開示されるプールされた単核アポトーシス細胞調製物は、最高３６時間安定である。更に別の一実施形態においては、プールされた単核アポトーシス細胞調製物は、少なくとも３６時間安定である。更なる一実施形態においては、プールされた単核アポトーシス細胞調製物は、３６時間を超えて安定である。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるプールされた単核アポトーシス細胞調製物は、最高４８時間安定である。別の一実施形態においては、プールされた単核アポトーシス細胞調製物は、少なくとも４８時間安定である。別の一実施形態においては、プールされた単核アポトーシス細胞調製物は、４８時間を超えて安定である。
【０２５４】
一実施形態においては、照射ステップを含むプールされた細胞調製物を製造する方法は、単一の適合ドナーに由来するアポトーシス調製物において認められた早期アポトーシス性、免疫調節性及び安定性を維持する。細胞調製は、照射ステップを含まなくてもよい。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるプールされた単核アポトーシス細胞調製物は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ：ｇｒａｆｔ  ｖｅｒｓｕｓ  ｈｏｓｔ  ｄｉｓｅａｓｅ）反応を誘発しない。
【０２５５】
細胞調製物の照射は、当該技術分野において安全と考えられる。照射手順は、現在、ＷＢＣに対する反応を予防するために、供血された血液に対して常法に従って行われる。
【０２５６】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるプールされた単核アポトーシス細胞調製物中のアポトーシス細胞のパーセントは１００％に近く、それによって細胞調製物中の生きている非アポトーシス細胞の割合が減少する。一実施形態においては、アポトーシス細胞のパーセントは、少なくとも４０％である。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞のパーセントは、少なくとも５０％である。更に別の一実施形態においては、アポトーシス細胞のパーセントは、少なくとも６０％である。更に別の一実施形態においては、アポトーシス細胞のパーセントは、少なくとも７０％である。更に別の一実施形態においては、アポトーシス細胞のパーセントは、少なくとも８０％である。更に別の一実施形態においては、アポトーシス細胞のパーセントは、少なくとも９０％である。更に別の一実施形態においては、アポトーシス細胞のパーセントは、少なくとも９９％である。したがって、生きている非アポトーシス細胞の割合が少ない又は存在しない細胞調製物は、一実施形態においては、レシピエントにおいてＧＶＨＤを誘発しないプールされた単核アポトーシス細胞調製物を提供することができる。各可能性は、本明細書に開示される一実施形態となる。
【０２５７】
あるいは、別の一実施形態においては、生きている非アポトーシスＷＢＣの割合は、例えば標的沈殿によって、生きている細胞集団を限定して除去することによって低下する。別の一実施形態においては、生きている非アポトーシス細胞のパーセントは、ホスファチジルセリンに結合する磁気ビーズを用いて減少させることができる。別の一実施形態においては、生きている非アポトーシス細胞のパーセントは、アポトーシス細胞ではなく非アポトーシス細胞の細胞表面のマーカーに結合する磁気ビーズを用いて減少させることができる。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、非アポトーシス細胞ではなくアポトーシス細胞の細胞表面のマーカーに結合する磁気ビーズを用いた更なる調製のために選択することができる。更に別の一実施形態においては、生きている非アポトーシスＷＢＣの割合は、超音波の使用によって減少する。
【０２５８】
一実施形態においては、アポトーシス細胞は、プールされた第三者ドナーに由来する。
【０２５９】
一実施形態においては、プールされた細胞調製物は、リンパ球、単球及びナチュラルキラー細胞からなる群から選択される少なくとも１つの細胞型を含む。別の一実施形態においては、プールされた細胞調製物は、濃縮単核球集団を含む。一実施形態においては、プールされた単核は、単核濃縮細胞調製物であり、リンパ球、単球及びナチュラルキラー細胞からなる群から選択される細胞型を含む。別の一実施形態においては、単核濃縮細胞調製物は、顆粒球（すなわち、好中球、好塩基球及び好酸球）としても知られる多形核白血球１５％以下、あるいは１０％以下、典型的には５％以下を含む。別の一実施形態においては、プールされた単核球調製物は、顆粒球が無い。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態となる。
【０２６０】
別の一実施形態においては、プールされた単核濃縮細胞調製物は、ＣＤ１５ｈｉｇｈ発現細胞１５％以下、あるいは１０％以下、典型的には５％以下を含む。一実施形態においては、プールされたアポトーシス細胞調製物は、ＣＤ１５ｈｉｇｈ発現細胞１５％未満を含む。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態となる。
【０２６１】
一実施形態においては、本明細書に開示されるプールされた単核濃縮細胞調製物は、少なくとも８０％の単核球、少なくとも８５％の単核球、あるいは少なくとも９０％の単核球、又は少なくとも９５％の単核球を含む。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態である。一部の実施形態によれば、本明細書に開示されるプールされた単核濃縮細胞調製物は、少なくとも８５％の単核球を含む。
【０２６２】
別の一実施形態においては、単核球の最終プールパーセントが少なくとも８０％である任意のプールされた細胞調製物は、本明細書に開示されるプールされた単核濃縮細胞調製物と考えられる。したがって、細胞調製物が少なくとも８０％の単核球の生成「プール」を含む高い単核球を有する多形核細胞（ＰＭＮ）が増加した細胞調製物をプールすることは、本明細書に開示される調製物を含む。一部の実施形態によれば、単核球は、リンパ球及び単球を含む。
【０２６３】
当業者は、「単核球」という用語が、１個の分裂した核を有する白血球を包含し得ることを理解されたい。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるプールされたアポトーシス細胞調製物は、５％未満の多形核白血球を含む。
【０２６４】
一実施形態においては、アポトーシス細胞はＴ細胞である。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、ＣＡＲ  Ｔ細胞と同じプールされた第三者ドナーＴ細胞に由来する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、ＣＡＲ  Ｔ細胞集団に由来する。
【０２６５】
驚くべきことに、アポトーシス細胞は、ＩＬ−６、及びインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、単独又は組み合わせを含めて、ただしそれらに限定されないサイトカインストームに関連するサイトカインの産生を減少させるが、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の有効性は維持された（実施例２）。一実施形態においては、アポトーシス細胞は、マクロファージにおけるサイトカイン発現レベルに影響を及ぼす。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、マクロファージにおけるサイトカイン発現レベルを減少させる。一実施形態においては、アポトーシス細胞は、マクロファージにおけるサイトカイン発現レベルを抑制する。一実施形態においては、アポトーシス細胞は、マクロファージにおけるサイトカイン発現レベルを阻害する。一実施形態においては、アポトーシス細胞は、ＣＡＲ−Ｔ細胞投与前のレベルに一致又はほぼ一致するＩＦＮ−γレベルを維持する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、マクロファージにおけるサイトカイン発現レベルに影響を及ぼすが、ＣＡＲ  Ｔ細胞におけるサイトカイン発現レベルに影響を及ぼさない。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、ＤＣにおけるサイトカイン発現レベルに影響を及ぼすが、ＣＡＲ  Ｔ細胞におけるサイトカイン発現レベルに影響を及ぼさない。したがって、アポトーシス細胞がＣＡＲ  Ｔ細胞治療の有効性を維持するのに有用であることは予想外であった。
【０２６６】
別の一実施形態においては、マクロファージ、ＤＣ又はそれらの組合せにおけるサイトカイン発現レベルに対するアポトーシス細胞の効果は、ＣＲＳを減少させる。別の一実施形態においては、マクロファージ、ＤＣ又はそれらの組合せにおけるサイトカイン発現レベルに対するアポトーシス細胞の効果は、重症のＣＲＳを減少させる。別の一実施形態においては、マクロファージ、ＤＣ又はそれらの組合せにおけるサイトカイン発現レベルに対するアポトーシス細胞の効果は、ＣＲＳを抑制する。別の一実施形態においては、マクロファージ、ＤＣ又はそれらの組合せにおけるサイトカイン発現レベルに対するアポトーシス細胞の効果は、重症のＣＲＳを抑制する。別の一実施形態においては、マクロファージ、ＤＣ又はそれらの組合せにおけるサイトカイン発現レベルに対するアポトーシス細胞の効果は、ＣＲＳを阻止する。別の一実施形態においては、マクロファージ、ＤＣ又はそれらの組合せにおけるサイトカイン発現レベルに対するアポトーシス細胞の効果は、重症のＣＲＳを阻止する。別の一実施形態においては、マクロファージ、ＤＣ又はそれらの組合せにおけるサイトカイン発現レベルに対するアポトーシス細胞の効果は、ＣＲＳを予防する。別の一実施形態においては、マクロファージ、ＤＣ又はそれらの組合せにおけるサイトカイン発現レベルに対するアポトーシス細胞の効果は、重症のＣＲＳを予防する。
【０２６７】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、Ｔ細胞の死を誘発するが、サイトカイン発現レベルの変化を介さない。
【０２６８】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、マクロファージ及び樹状細胞の初回刺激に拮抗して、ともすればサイトカインストームを増強するサイトカインを分泌する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、Ｔｒｅｇを増加させ、それによって炎症反応を抑制する、及び／又はサイトカインの過剰放出を予防する。
【０２６９】
一実施形態においては、アポトーシス細胞の投与は、１種以上の炎症誘発性サイトカインを阻害する。一実施形態においては、炎症誘発性サイトカインは、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−６、ＴＮＦ−アルファ若しくはＩＦＮ−ガンマ又はそれらの任意の組合せを含む。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞の投与は、１種以上の抗炎症性サイトカインの分泌を促進する。一実施形態においては、抗炎症性サイトカインは、ＴＧＦ−ベータ、ＩＬ１０若しくはＰＧＥ２又はそれらの任意の組合せを含む。
【０２７０】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞の投与は、ＴＬＲリガンドに曝露後の樹状細胞成熟を阻害する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞の投与は、潜在的寛容原性樹状細胞を生成し、潜在的寛容原性樹状細胞は、一実施形態においては、移動可能であり、一実施形態においては、移動はＣＣＲ７による。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞の投与は、種々のシグナル伝達事象を誘発し、シグナル伝達事象は、一実施形態においては、ＴＡＭ受容体シグナル伝達（Ｔｙｒｏ３、Ａｘｌ及びＭｅｒ）であり、ＴＡＭ受容体シグナル伝達は、一実施形態においては、抗原提示細胞における炎症を阻止する。一実施形態においては、Ｔｙｒｏ−３、Ａｘｌ及びＭｅｒは、キナーゼドメイン及び接着分子様細胞外ドメイン内の保存配列を特徴とする受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ：ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ）のＴＡＭファミリーを構成する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞の投与は、ＭｅｒＴＫを介してシグナル伝達を活性化する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞の投与は、一実施形態においてはＮＦ−κＢをネガティブに調節するホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／ＡＫＴ経路を活性化する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞の投与は、一実施形態においては炎症誘発性サイトカイン分泌、ＤＣ成熟又はそれらの組合せの阻害をもたらす、インフラマソームをネガティブに調節する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞の投与は、Ｎｒ４ａ、Ｔｈｂｓ１、それらの組合せなどの抗炎症遺伝子の発現を上方制御する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞の投与は、一実施形態においてはパネキシン１に依存して蓄積する、高レベルのＡＭＰを誘導する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞の投与は、炎症を抑制する。
【０２７１】
アポトーシス細胞上清（ＡｐｏＳｕｐ及びＡｐｏＳｕｐ  Ｍｏｎ）
一実施形態においては、本明細書に開示される方法及び処置に使用される組成物は、本明細書に開示されるアポトーシス細胞上清を含む。
【０２７２】
一部の実施形態においては、アポトーシス細胞上清は、ａ）アポトーシス細胞を用意するステップ、ｂ）ステップａ）のアポトーシス細胞を培養するステップ、及びｃ）上清を細胞から分離するステップを含む方法によって得られる。
【０２７３】
一実施形態においては、本明細書に開示されるアポトーシス細胞上清の製造に使用されるアポトーシス細胞は、治療を受ける対象の自己のものである。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるアポトーシス細胞上清の製造に使用されるアポトーシス細胞は、治療を受ける対象と同種である。
【０２７４】
アポトーシス細胞上清が得られるアポトーシス細胞は、当業者に既知のアポトーシスを誘導する方法に供される、任意の細胞型の対象から選択される細胞、又は任意の市販細胞系とすることができる。アポトーシスを誘導する方法は、低酸素、オゾン、熱、照射、化学物質、浸透圧、ｐＨシフト、Ｘ線照射、ガンマ線照射、ＵＶ照射、血清除去、コルチコイド若しくはそれらの組合せ、又は本明細書に記載の若しくは当該技術分野で既知の任意の他の方法とすることができる。別の一実施形態においては、アポトーシスを誘導する方法は、早期アポトーシス状態のアポトーシス細胞を生成する。
【０２７５】
一実施形態においては、アポトーシス細胞は、白血球である。
【０２７６】
一実施形態においては、前記アポトーシス白血球は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）に由来する。別の一実施形態においては、前記白血球は、プールされた第三者ドナーに由来する。別の一実施形態においては、前記白血球は同種である。
【０２７７】
一実施形態によれば、アポトーシス細胞は、非接着白血球を選択し、それらをアポトーシス誘導、続いて培地中の細胞培養ステップに供することによって、提供される。アポトーシス細胞−食細胞上清を製造するために使用される「白血球」は、樹状細胞、マクロファージ、マスＴ細胞（ｍａｓＴ−ｃｅｌｌｓ）、好塩基球、造血幹細胞、骨髄細胞、ナチュラルキラー細胞などを含めて、ただしそれらに限定されない免疫系及び／又は造血系の有核細胞の任意の系統又は亜系統に由来し得る。白血球は、種々の適切な方法のいずれかにおいて、種々の適切な解剖学的区画のいずれかから、種々の一般に実施される方法のいずれかに従って、用途及び目的、所望の白血球系統などに応じて、誘導することができ、又は得ることができる。一実施形態においては、原料白血球は、初代白血球である。別の一実施形態においては、原料白血球は、初代末梢血白血球である。
【０２７８】
初代リンパ球及び単球は、好都合には、末梢血に由来し得る。末梢血白血球は、７０〜９５パーセントのリンパ球、及び５〜２５パーセントの単球を含む。
【０２７９】
特定のタイプの原料白血球を血液から得る方法は、常法に従って実施される。原料リンパ球及び／又は単球は、例えば、ヘパリン、シトラートなどの抗凝固薬の存在下で血液を採取することによって得ることができる。採取血液を、次いで、フィコールクッション上で遠心分離して、リンパ球及び単球を勾配界面で単離し、好中球及び赤血球をペレットに単離する。
【０２８０】
白血球は、標準免疫磁気選択又は免疫蛍光フローサイトメトリー技術によって、それらの特異的表面マーカーに従って、又は遠心溶出によって、互いに分離することができる。例えば、単球をＣＤ１４＋画分として選択することができ、Ｔリンパ球をＣＤ３＋画分として選択することができ、Ｂリンパ球をＣＤ１９＋画分として選択することができ、マクロファージをＣＤ２０６＋画分として選択することができる。
【０２８１】
リンパ球及び単球は、リンパ球ではなく単球の細胞接着基質への選択的接着をもたらす、組織培養処理培養レシピエントにおける静置培養などによる基質接着条件にこれらの細胞を供することによって、互いに単離することができる。
【０２８２】
白血球は、本明細書に記載の通りに単離することができる末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から得ることもできる。
【０２８３】
当業者は、所望の量の本明細書に開示される培養原料白血球を生成するように初代白血球を適切に培養するのに必要な専門知識を有し、こうした培養方法を実施するのに十分な手引きが当該技術分野の文献において利用可能である。
【０２８４】
当業者は、更に、アポトーシス白血球が由来する適切な樹立白血球細胞系を樹立する、購入する、又は入手するのに必要な専門知識を有する。適切な白血球細胞系は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｔｙｐｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）などの供給業者から得ることができる。アポトーシス白血球を産生するその能力を大きく妨げる技術によって原料白血球を得るべきでないことは当業者に明らかである。
【０２８５】
一実施形態においては、アポトーシス細胞は、単核濃縮細胞を含む細胞調製物を含み、調製物は単核球少なくとも８５％を含み、調製物中の細胞の少なくとも４０％は早期アポトーシス状態であり、調製物中の細胞の少なくとも８５％は生細胞であり、調製物は、ＣＤ１５ｈｉｇｈ発現細胞１５％以下を含む。
【０２８６】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞は、アポトーシスリンパ球とすることができる。初代リンパ球などのリンパ球のアポトーシスは、初代リンパ球を血清除去、コルチコステロイド又は照射で処理することによって誘導することができる。別の一実施形態においては、初代リンパ球のアポトーシスをコルチコステロイド処理によって誘導することは、初代リンパ球をデキサメタゾンで処理することによって行われる。別の一実施形態においては、デキサメタゾンを用いて濃度約１マイクロモルで。別の一実施形態においては、初代リンパ球のアポトーシスを照射によって誘導することは、初代リンパ球をガンマ線照射で処理することによって行われる。別の一実施形態においては、約６６ラドの線量で。こうした処理は、食細胞との共培養ステップに適切なアポトーシスリンパ球を生成する。
【０２８７】
更なる一実施形態においては、アポトーシス細胞は、初代単球などのアポトーシス単球とすることができる。アポトーシス単球を生成するために、単球を基質／表面接着のインビトロ条件に血清除去の条件下で供する。こうした処理は、食細胞との共培養ステップに適切な非炎症誘発性アポトーシス単球を生成する。
【０２８８】
別の実施形態においては、アポトーシス細胞は、同種アポトーシス細胞、第三者アポトーシス細胞、及びアポトーシス細胞のプールを含めて、本明細書に記載の任意のアポトーシス細胞とすることができる。
【０２８９】
別の実施形態においては、アポトーシス細胞上清は、アポトーシス細胞と別の細胞の共培養によって得ることができる。
【０２９０】
したがって、一実施形態においては、アポトーシス細胞上清は、ａ）アポトーシス細胞を用意するステップ、ｂ）別の細胞を用意するステップ、ｃ）場合によってはステップａ）及びｂ）からの細胞を洗浄するステップ、ｄ）ステップａ）及びｂ）の細胞を共培養するステップ、並びに場合によってはｅ）上清を細胞から分離するステップを含む方法によって得られるアポトーシス細胞上清である。
【０２９１】
一実施形態においては、アポトーシス細胞と共培養される別の細胞は、白血球である。
【０２９２】
したがって、一実施形態においては、アポトーシス細胞上清は、ａ）アポトーシス細胞を用意するステップ、ｂ）白血球を用意するステップ、ｃ）場合によってはステップａ）及びｂ）からの細胞を洗浄するステップ、ｄ）ステップａ）及びｂ）の細胞を共培養するステップ、並びに場合によってはｅ）上清を細胞から分離するステップを含む方法によって得られるアポトーシス細胞−白血球上清である。
【０２９３】
一実施形態においては、白血球は、マクロファージ、単球、樹状細胞などの食細胞とすることができる。
【０２９４】
一実施形態においては、白血球は、Ｂ細胞、Ｔ細胞又はナチュラルキラー（ＮＫ細胞）とすることができる。
【０２９５】
したがって、一実施形態においては、本明細書に開示される方法及び処置に使用される組成物は、参照によりその全体を本明細書に援用する国際公開第２０１４／１０６６６６号に記載のアポトーシス細胞−食細胞上清を含む。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法に使用されるアポトーシス細胞−食細胞上清は、当該技術分野で既知である任意の方法で製造される。
【０２９６】
一部の実施形態においては、アポトーシス上清は、食細胞とアポトーシス細胞の共培養から得られるアポトーシス細胞−食細胞上清を含む。
【０２９７】
一部の実施形態においては、アポトーシス細胞−食細胞上清は、ａ）食細胞を用意するステップ、ｂ）アポトーシス細胞を用意するステップ、ｃ）場合によってはステップａ）及びｂ）からの細胞を洗浄するステップ、ｄ）ステップａ）及びｂ）の細胞を共培養するステップ、並びに場合によってはｅ）上清を細胞から分離するステップを含む方法によって得られる。一部の実施形態においては、アポトーシス上清は、アポトーシス細胞を摂取する食細胞によって生成される上清を含む。
【０２９８】
「食細胞」という用語は、有害な外来粒子、細菌、及び死細胞又は瀕死の細胞を摂取する（貪食する）ことによって体を保護する細胞を表す。食細胞としては、例えば、好中球、単球、マクロファージ、樹状細胞及びマストＴ細胞、優先的に樹状細胞及び単球／マクロファージと呼ばれる細胞が挙げられる。食細胞は、樹状細胞（ＣＤ４＋ＨＬＡ−ＤＲ＋系統−ＢＤＣＡ１／ＢＤＣＡ３＋）、マクロファージ（ＣＤ１４＋ＣＤ２０６＋ＨＬＡ−ＤＲ＋）とすることができ、又は単球（ＣＤ１４＋）に由来することができる。これらの異なる食細胞を区別する技術は、当業者に知られている。
【０２９９】
一実施形態においては、単球は、プラスチック接着ステップによって得られる。前記単球は、マーカーＣＤ１４＋によってＢ及びＴ細胞から区別することができ、望ましくないＢ細胞はＣＤ１９＋を発現し、Ｔ細胞はＣＤ３＋を発現する。マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ：Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｃｏｌｏｎｙ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  Ｆａｃｔｏｒ）が成熟を誘導した後、得られたマクロファージは、一実施形態においては、マーカーＣＤ１４＋、ＣＤ２０６＋、ＨＬＡ−ＤＲ＋に陽性である。
【０３００】
一実施形態においては、前記食細胞は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）に由来する。
【０３０１】
食細胞は、食細胞を得る当該技術分野で既知である任意の方法によって用意することができる。一実施形態においては、マクロファージ、樹状細胞などの食細胞は、対象から直接単離することができ、又は前駆細胞から成熟ステップによって誘導することができる。
【０３０２】
一実施形態においては、マクロファージは、対象の腹膜腔から直接単離することができ、完全ＲＲＰＭＩ培地中で培養することができる。マクロファージは、脾臓から単離することもできる。
【０３０３】
食細胞は、末梢血単球から得ることもできる。前記例においては、単球は、培養時、それだけに限定されないがマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）を細胞培養培地に添加すると、単球由来マクロファージに分化する。
【０３０４】
例えば、食細胞は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）に由来することができる。例えば、ＰＢＭＣは、フィコール勾配遠心分離によって個体からの血球分離バッグから単離することができ、細胞接着ステップにおいて完全ＲＰＭＩ培地（１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン）中で９０分間培養することができる。非接着Ｔ細胞をプラスチック接着ステップによって除去し、接着Ｔ細胞を組換えヒトＭ−ＣＳＦを補充した完全ＲＰＭＩ環境で培養する。培養期間後、単球由来マクロファージが得られる。
【０３０５】
食細胞は、細胞接着ステップによって選択することができる。前記「細胞接着ステップ」は、食細胞、又は食細胞に成熟することができる細胞が、培養細胞が表面、すなわち細胞接着表面（例えば、組織培養皿、基質、適切なタイプのナイロン又はプラスチックの袋又はバッグ）に接着可能な培養条件で選択されることを意味する。当業者は、「細胞接着表面」という用語が、親水性及び負に帯電したものを包含することができ、当該技術分野で既知である種々の方法のいずれかにおいて得ることができ、別の一実施形態においては、ポリスチレン表面を、例えば、コロナ放電又はガスプラズマを用いて改質することによって得ることができることを理解されたい。これらのプロセスは、極めて活発な酸素イオンを生成し、該酸素イオンは、表面ポリスチレン鎖にグラフトして、表面は、親水性及び負に帯電したものになる。それへの細胞接着を促進するために設計された培養レシピエントは、様々な供給業者（例えば、Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｅｖｅｒｇｒｅｅｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｎｕｎｃなど）から入手可能である。
【０３０６】
Ｂ細胞、Ｔ細胞及びＮＫ細胞は、こうした細胞を得るための当該技術分野で既知である任意の方法によって用意することができる。一実施形態においては、Ｂ細胞、Ｔ細胞又はＮＫ細胞は、対象から直接単離することができ、又は前駆細胞から成熟ステップによって誘導することができる。別の一実施形態においては、Ｂ、Ｔ又はＮＫ細胞は、Ｂ、Ｔ又はＮＫ細胞系に由来することができる。当業者は、適切な樹立Ｂ細胞、Ｔ細胞及びＮＫ細胞系を樹立する、購入する、又は得るための必要な専門知識を有する。適切な細胞系は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｔｙｐｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）などの供給業者から得ることができる。
【０３０７】
一実施形態においては、食細胞、Ｂ、Ｔ又はＮＫ細胞などの前記アポトーシス細胞及び前記白血球は、共培養ステップｄ）の前に個々に培養される。
【０３０８】
食細胞の細胞成熟は、例えば、成熟因子を培地に添加したために、細胞培養中に起こる。一実施形態においては、前記成熟因子は、Ｍ−ＣＳＦであり、これは、例えば単球由来マクロファージを得るために使用することができる。
【０３０９】
食細胞の成熟又は選択に使用される培養ステップは、数時間から数日かかり得る。別の一実施形態においては、前記未熟食細胞は、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８時間適切な培地中で培養される。
【０３１０】
食細胞の培地は、当業者に既知であり、例えば、ＲＰＭＩ、ＤＭＥＭ、Ｘ−ｖｉｖｏ及びＵｌｔｒａｃｕｌｔｕｒｅ環境とすることができるが、それらに限定されない。
【０３１１】
一実施形態においては、アポトーシス細胞と食細胞の共培養は、生理溶液中で起こる。
【０３１２】
この「共培養」前に、細胞を洗浄ステップに供することができる。一実施形態においては、白血球（例えば、食細胞）及びアポトーシス細胞を共培養ステップ前に洗浄する。別の一実施形態においては、細胞をＰＢＳで洗浄する。
【０３１３】
前記共培養中に、白血球（例えば、マクロファージ、単球、食細胞などの食細胞、又はＢ、Ｔ若しくはＮＫ細胞）とアポトーシス細胞を１０：１、９：１；８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１若しくは１：１の比、又は（白血球：アポトーシス細胞）１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９若しくは１：１０の比で混合することができる。一例においては、白血球とアポトーシス細胞の比は１：５である。
【０３１４】
細胞の共培養は、数時間から数日とすることができる。一部の実施形態においては、前記アポトーシス細胞を２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２時間培養する。当業者は、抗炎症化合物の存在、白血球の生存可能な量、及びそれまでに除去されなかったアポトーシス細胞の量を測定することによって、共培養に最適な時間を評価することができる。
【０３１５】
食細胞によるアポトーシス細胞の除去は、アポトーシス細胞の消滅のために、光学顕微鏡法で観察可能である。
【０３１６】
一実施形態においては、白血球（例えば、マクロファージ、単球、食細胞などの食細胞、又はＢ、Ｔ若しくはＮＫ細胞）培養との共培養などのアポトーシス細胞の培養は、培地中で、及び／又は対象への投与、例えば注射に適合した生理溶液中で起こる。
【０３１７】
当業者は、「生理溶液」が、白血球の死を培養時間内に招かない溶液を包含し得ることを理解されたい。一部の実施形態においては、生理溶液は、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２時間にわたって死を招かない。別の実施形態においては、４８時間又は３０時間。
【０３１８】
一実施形態においては、白血球（例えば、マクロファージ、単球、食細胞などの食細胞、又はＢ、Ｔ若しくはＮＫ細胞）及びアポトーシス細胞を生理溶液中で少なくとも３０分間インキュベートする。この培養時間で、食作用を開始することができ、サイトカイン及び他の有益な物質を分泌することができる。
【０３１９】
一実施形態においては、こうした生理溶液は、白血球由来マクロファージによるアポトーシス白血球除去を阻害しない。
【０３２０】
培養又は共培養ステップの最後に、上清を場合によっては培養アポトーシス細胞又は共培養細胞から分離する。上清を細胞から分離する技術は、当該技術分野で既知である。例えば、上清を収集し、及び／又は濾過し、及び／又は遠心分離して、細胞及び残骸を除去することができる。例えば、上清を３０００ｒｐｍで１５分間室温で遠心分離して、それを細胞から分離する。
【０３２１】
上清は、例えば照射によって、使用前に「不活性化」することができる。したがって、アポトーシス細胞上清を調製する方法は、任意選択の追加の照射ステップｆ）を含むことができる。前記「照射」ステップは、血液製剤を不活性化するのに通常行われる、微生物を殺すのに十分な比率のＸ線照射（２５〜４５Ｇｙ）を用いる殺菌法として考えることができる。
【０３２２】
上清の照射は、当該技術分野において安全と考えられる。照射手順は、現在、ＷＢＣに対する反応を予防するために、供血された血液に対して常法に従って行われる。
【０３２３】
一実施形態においては、アポトーシス細胞上清は、本明細書に詳述されているように、対象への投与に適切な医薬組成物に処方される。
【０３２４】
一実施形態においては、最終生成物は＋４℃で貯蔵される。別の一実施形態においては、最終生成物は、次の４８時間内に使用される。
【０３２５】
一実施形態においては、アポトーシス細胞−食細胞上清などのアポトーシス細胞上清、又は上清を含む医薬組成物は、例えば−８０℃で貯蔵するために、凍結乾燥させることができる。
【０３２６】
特定の一実施形態においては、国際公開第２０１４／１０６６６６号の実施例１に記載のように、アポトーシス細胞−食細胞上清は、胸腺細胞をアポトーシス細胞として使用して製造することができる。単離後、胸腺細胞を照射し（例えば、３５Ｘグレイ照射）、完全ＤＭＥＭ培地中で例えば６時間培養して、アポトーシスを起こすことができる。並行して、マクロファージを腹膜腔から単離し、洗浄し、完全ＲＰＭＩ（１０％ＦＢＳ、Ｐｅｎｉ−Ｓｔｒｅｐｔｏ、ＥＡＡ、Ｈｅｐｅｓ、ＮａＰ及び２−メルカプトエタノール）中で培養する。次いで、マクロファージ及びアポトーシス細胞を洗浄し、フェノールフリーＸ−ｖｉｖｏ培地中で１／５マクロファージ／アポトーシス細胞比で更に４８時間共培養する。次いで、上清を収集し、遠心分離して、残骸を除去し、保存のために凍結又は凍結乾燥させることができる。マクロファージ濃縮は、ＦＡＣＳによるＦ４／８０の陽性染色によって確認することができる。アポトーシスは、アネキシン−Ｖ及び７ＡＡＤ排除の陽性染色を用いたＦＡＣＳによって確認することができる。
【０３２７】
一実施形態においては、アポトーシス細胞上清は、別々に培養されたマクロファージ又はアポトーシス細胞から得られる上清に比べて、ＴＧＦ−βの活性型と潜在型の両方でＴＧＦ−βレベルが高くなる。一実施形態においては、ＩＬ−１０レベルも、単独で培養されたマクロファージに比べて増加し、単独で培養されたアポトーシス細胞に比べて劇的に増加する。別の一実施形態においては、ＩＬ−６などの炎症性サイトカインは検出されず、ＩＬ−１β及びＴＮＦは検出不可能であるか、又は極めて低レベルである。
【０３２８】
一実施形態においては、アポトーシス細胞上清は、単独で培養されたマクロファージ又は単独で培養されたアポトーシス細胞由来の上清に比べて、ＴＧＦ−β及びＩＬ−１０に加えて、上清の免疫寛容を生じる役割に関係して炎症を抑制し得るＩＬ−１ｒａ、ＴＩＭＰ−１、ＣＸＣＬ１／ＫＣ及びＣＣＬ２／ＪＥ／ＭＣＰ１のレベルが増加する。
【０３２９】
別の特定の一実施形態においては、国際公開第２０１４／１０６６６６号の実施例３に記載のように、ヒトアポトーシス細胞−食細胞上清は、アポトーシスＰＢＭＣと一緒に培養された末梢血単核球（ＰＢＭＣ）由来のマクロファージの共培養から製造することができる。したがって、ＰＢＭＣは、健康なボランティアからの血球分離バッグから、例えばフィコール勾配遠心分離によって、単離される。次いで、ＰＢＭＣを完全ＲＰＭＩ培地（１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン）中で９０分間培養する。次いで、アポトーシスさせるために、非接着細胞を除去し、例えば３５Ｇｙ線量のＸ線照射によってアポトーシス性にし、完全ＲＰＭＩ環境で４日間培養する（最初の４８時間の培養後の細胞洗浄を含む）。並行して、非接着Ｔ細胞を、組換えヒトＭ−ＣＳＦ５０μｇ／ｍＬを補充した完全ＲＰＭＩ環境中で、最初の４８時間後の細胞洗浄を含めて４日間培養する。４日間の培養期間の最後に、単球由来マクロファージとアポトーシス細胞を洗浄し、一緒にＸ−ｖｉｖｏ培地中で再度４８時間、１マクロファージ：５アポトーシス細胞比で培養する。次いで、終わりの培養からの上清を収集し、遠心分離して細胞及び残骸を除去し、保存及び後続の使用のために凍結又は凍結乾燥させることができる。
【０３３０】
一実施形態においては、国際公開第２０１４／１０６６６６号に記載のように、ヒトアポトーシス細胞−食細胞上清は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から６日で得ることができる。培養でＭ−ＣＳＦ添加によってＰＢＭＣ由来マクロファージを得るのに４日間、及びＰＢＭＣ由来マクロファージと０日目に単離された非接着ＰＢＭＣに対応するアポトーシス細胞との共培養に更に２日間。
【０３３１】
一実施形態においては、国際公開第２０１４／１０６６６６号に記載のように、標準化ヒトアポトーシス細胞−食細胞上清を、ドナー又はＰＢＭＣ源（血球分離又はバフィーコート）とは無関係に得ることができる。プラスチック接着ステップは、濃縮単球のかなりの出発集団を得るのに十分である（プラスチック培養皿上の接着後に２０〜９３％のＣＤ１４＋細胞）。さらに、こうした接着細胞は、Ｂ及びＴ細胞の存在が極めて少ない（１．０％のＣＤ１９＋Ｂ細胞及び１２．８％のＣＤ３＋Ｔ細胞）。Ｍ−ＣＳＦの存在下でＴ細胞を４日間培養後、単球由来マクロファージの割合は、ＣＤ１４＋ＣＤ２０６＋ＨＬＡ−ＤＲ＋マクロファージ０．１％から７７．７％に著しく増加する。その際、単球由来マクロファージをアポトーシス非接着ＰＢＭＣ（アネキシンＶ染色及び７ＡＡＤ排除によって示されるアポトーシス４７．６％）と共培養して、アポトーシス細胞−食細胞上清を４８時間製造する。
【０３３２】
一実施形態においては、収集したアポトーシス細胞−食細胞上清は、単球由来マクロファージ単独又は炎症条件（＋ＬＰＳ）で処理された単球由来マクロファージの培養上清よりもかなり多い潜在型ＴＧＦを含み、ＩＬ−１β、ＴＮＦなどの炎症性サイトカインを微量又は低レベルしか含まない。
【０３３３】
一実施形態においては、アポトーシス細胞上清を含む組成物は、更に抗凝固薬を含む。一実施形態においては、抗凝固薬は、ヘパリン、クエン酸デキストロース（ＡＣＤ）Ｆｏｒｍｕｌａ  Ａ及びそれらの組合せからなる群から選択される。
【０３３４】
別の一実施形態においては、抗凝固薬をアポトーシス細胞の製造プロセス中に添加する。別の一実施形態においては、添加される抗凝固薬は、ＡＣＤ及びヘパリン又はそれらの任意の組合せを含む群から選択される。別の一実施形態においては、ＡＣＤは１％の濃度である。別の一実施形態においては、ＡＣＤは２％の濃度である。別の一実施形態においては、ＡＣＤは３％の濃度である。別の一実施形態においては、ＡＣＤは４％の濃度である。別の一実施形態においては、ＡＣＤは５％の濃度である。別の一実施形態においては、ＡＣＤは６％の濃度である。別の一実施形態においては、ＡＣＤは７％の濃度である。別の一実施形態においては、ＡＣＤは８％の濃度である。別の一実施形態においては、ＡＣＤは９％の濃度である。別の一実施形態においては、ＡＣＤは１０％の濃度である。別の一実施形態においては、ＡＣＤは約１〜１０％の濃度である。別の一実施形態においては、ＡＣＤは約２〜８％の濃度である。別の一実施形態においては、ＡＣＤは約３〜７％の濃度である。別の一実施形態においては、ＡＣＤは約１〜５％の濃度である。別の一実施形態においては、ＡＣＤは約５〜１０％の濃度である。別の一実施形態においては、ヘパリンは最終濃度０．５Ｕ／ｍｌである。別の一実施形態においては、ヘパリンは最終濃度約０．１Ｕ／ｍｌ〜１．０Ｕ／ｍｌである。別の一実施形態においては、ヘパリンは最終濃度約０．２Ｕ／ｍｌ〜０．９Ｕ／ｍｌである。別の一実施形態においては、ヘパリンは最終濃度約０．３Ｕ／ｍｌ〜０．７Ｕ／ｍｌである。別の一実施形態においては、ヘパリンは最終濃度約０．１Ｕ／ｍｌ〜０．５Ｕ／ｍｌである。別の一実施形態においては、ヘパリンは最終濃度約０．５Ｕ／ｍｌ〜１．０Ｕ／ｍｌである。別の一実施形態においては、ヘパリンは最終濃度約０．０１Ｕ／ｍｌ〜１．０Ｕ／ｍｌである。別の一実施形態においては、ヘパリンは最終濃度０．１Ｕ／ｍｌである。別の一実施形態においては、ヘパリンは最終濃度０．２Ｕ／ｍｌである。別の一実施形態においては、ヘパリンは最終濃度０．３Ｕ／ｍｌである。別の一実施形態においては、ヘパリンは最終濃度０．４Ｕ／ｍｌである。別の一実施形態においては、ヘパリンは最終濃度０．５Ｕ／ｍｌである。別の一実施形態においては、ヘパリンは最終濃度０．６Ｕ／ｍｌである。別の一実施形態においては、ヘパリンは最終濃度０．７Ｕ／ｍｌである。別の一実施形態においては、ヘパリンは最終濃度０．８Ｕ／ｍｌである。別の一実施形態においては、ヘパリンは最終濃度０．９Ｕ／ｍｌである。別の一実施形態においては、ヘパリンは最終濃度１．０Ｕ／ｍｌである。別の一実施形態においては、ＡＣＤは濃度５％であり、ヘパリンは最終濃度０．５Ｕ／ｍｌである。
【０３３５】
一実施形態においては、アポトーシス細胞上清を含む組成物は、更にメチルプレドニゾロンを含む。一実施形態においては、メチルプレドニゾロンの濃度は３０μｇ／ｍｌを超えない。
【０３３６】
一実施形態においては、組成物は、体重１キログラム当たり約２億個の細胞（７０ｋｇの対象の場合）に等しい血球分離によって得られる約１４×１０９個のＣＤ４５＋細胞の共培養から得られるアポトーシス細胞上清の総量又は一定分量で使用することができる。一実施形態においては、こうした総量は、体重１キログラム当たり約１億個の細胞から得られる上清の単位用量として投与され、及び／又は単位用量として１週間間隔で投与され、別の一実施形態においてはその両方である。この実施形態に係る適切な総量としては、体重１キログラム当たり約１０００万〜約４０億個の細胞から得られる上清の総量が挙げられる。別の一実施形態においては、上清は、体重１キログラム当たり約４０００万〜約１０億個の細胞から得られる。更に別の一実施形態においては、上清は、体重１キログラム当たり約８０００万〜約５億個の細胞から得られる。更に別の一実施形態においては、上清は、体重１キログラム当たり約１６０００万〜約２５０００万個の細胞から得られる。この実施形態に係る適切な単位用量としては、体重１キログラム当たり約４百万〜約４億個の細胞から得られる上清の単位用量が挙げられる。別の一実施形態においては、上清は、体重１キログラム当たり約８００万〜約２億個の細胞から得られる。別の一実施形態においては、上清は、体重１キログラム当たり約１６００万〜約１億個の細胞から得られる。更に別の一実施形態においては、上清は、体重１キログラム当たり約３２００万〜約５０００万個の細胞から得られる。
【０３３７】
別の一実施形態においては、約１０×１０６個のアポトーシス細胞の共培養から得られるアポトーシス細胞上清の用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０７個のアポトーシス細胞から得られる用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０８個のアポトーシス細胞から得られる用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０９個のアポトーシス細胞から得られる用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０１０個のアポトーシス細胞から得られる用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０１１個のアポトーシス細胞から得られる用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０１２個のアポトーシス細胞から得られる用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０５個のアポトーシス細胞から得られる用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０４個のアポトーシス細胞から得られる用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０３個のアポトーシス細胞から得られる用量を投与する。別の一実施形態においては、１０×１０２個のアポトーシス細胞から得られる用量を投与する。
【０３３８】
一実施形態においては、３５×１０６個のアポトーシス細胞から得られるアポトーシス細胞上清の用量を投与する。別の一実施形態においては、２１０×１０６個のアポトーシス細胞から得られる用量を投与する。別の一実施形態においては、７０×１０６個のアポトーシス細胞から得られる用量を投与する。別の一実施形態においては、１４０×１０６個のアポトーシス細胞から得られる用量を投与する。別の一実施形態においては、３５〜２１０×１０６個のアポトーシス細胞から得られる用量を投与する。
【０３３９】
一実施形態においては、アポトーシス細胞上清、又は前記アポトーシス細胞上清を含む組成物は、本明細書で詳細に考察するように、静脈内、皮下、節内、腫瘍内、髄腔内、胸膜内、腹腔内、及び胸腺に直接を含めて、ただしそれらに限定されない、当該技術分野で既知である任意の方法によって投与することができる。
【０３４０】
驚くべきことに、アポトーシス細胞−食細胞上清などのアポトーシス細胞上清は、ＩＬ−６などのサイトカインストームに関連するサイトカインの産生を減少させる。別のサイトカインＩＬ−２は、ＤＣ及びマクロファージによって少量分泌されるが、サイトカイン放出症候群に関与しない。しかし、それは、ＣＡＲ−Ｔ細胞の生存及び増殖に必要であり、大部分はこれらのＴ細胞によって産生される。予想外に、アポトーシス細胞−食細胞上清などのアポトーシス細胞上清は、ＩＬ−２レベルをＣＡＲ  Ｔ細胞の生存に負の影響を及ぼすのに十分なレベルに減少させない。
【０３４１】
一実施形態においては、アポトーシス細胞−食細胞上清などのアポトーシス細胞上清は、マクロファージ及びＤＣにおけるサイトカイン発現レベルに影響を及ぼすが、Ｔ細胞自体におけるサイトカイン発現レベルには影響を及ぼさない。したがって、アポトーシス細胞上清がＣＡＲ  Ｔ細胞治療を強化するのに有用であることは予想外であった。
【０３４２】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清は、Ｔ細胞の死を誘発するが、サイトカイン発現レベルの変化を介さない。
【０３４３】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞−食細胞上清などのアポトーシス細胞上清は、マクロファージ及び樹状細胞の初回刺激に拮抗して、ともすればサイトカインストームを増強するサイトカインを分泌する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清は、Ｔｒｅｇを増加させ、それによって炎症反応を抑制する、及び／又はサイトカインの過剰放出を予防する。
【０３４４】
一実施形態においては、アポトーシス細胞−食細胞上清などのアポトーシス細胞上清の投与は、１種以上の炎症誘発性サイトカインを阻害する。一実施形態においては、炎症誘発性サイトカインは、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−６、ＴＮＦ−アルファ若しくはＩＦＮ−ガンマ又はそれらの任意の組合せを含む。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清の投与は、１種以上の抗炎症性サイトカインの分泌を促進する。一実施形態においては、抗炎症性サイトカインは、ＴＧＦ−ベータ、ＩＬ１０若しくはＰＧＥ２又はそれらの任意の組合せを含む。
【０３４５】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞−食細胞上清などのアポトーシス細胞上清の投与は、ＴＬＲリガンドに曝露後の樹状細胞成熟を阻害する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清の投与は、潜在的寛容原性樹状細胞を生成し、潜在的寛容原性樹状細胞は、一実施形態においては、移動可能であり、一実施形態においては、移動はＣＣＲ７による。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清の投与は、種々のシグナル伝達事象を誘発し、シグナル伝達事象は、一実施形態においては、ＴＡＭ受容体シグナル伝達（Ｔｙｒｏ３、Ａｘｌ及びＭｅｒ）であり、ＴＡＭ受容体シグナル伝達は、一実施形態においては、抗原提示細胞における炎症を阻止する。一実施形態においては、Ｔｙｒｏ−３、Ａｘｌ及びＭｅｒは、キナーゼドメイン及び接着分子様細胞外ドメイン内の保存配列を特徴とする受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）のＴＡＭファミリーを構成する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清の投与は、ＭｅｒＴＫを介してシグナル伝達を活性化する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清の投与は、一実施形態においてはＮＦ−κＢをネガティブに調節するホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／ＡＫＴ経路を活性化する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清の投与は、一実施形態においては炎症誘発性サイトカイン分泌、ＤＣ成熟又はそれらの組合せの阻害をもたらす、インフラマソームをネガティブに調節する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清の投与は、Ｎｒ４ａ、Ｔｈｂｓ１、それらの組合せなどの抗炎症遺伝子の発現を上方制御する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清の投与は、一実施形態においてはパネキシン１に依存して蓄積する、高レベルのＡＭＰを誘導する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清の投与は、炎症を抑制する。
【０３４６】
組成物
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、本明細書に記載の症状又は疾患の処置用医薬組成物である。別の一実施形態においては、本明細書に開示される医薬組成物は、遺伝子改変免疫細胞の増殖速度を維持する、又は増加させるためのものである。更なる一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞の増殖速度を維持する、又は増加させる方法は、更に、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率を減少させる、又は抑制するステップを含む。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、遺伝子改変免疫細胞治療の有効性を高める医薬組成物である。別の一実施形態においては、免疫細胞治療の有効性を高める方法に使用される組成物は、更に、ＣＲＳ又はサイトカインストームの発生率を減少させる、又は抑制することを含む。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における腫瘍の癌を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する方法のための組成物である。別の一実施形態においては、対象における癌又は腫瘍を処置する、予防する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する方法に使用される組成物は、更に、ＣＲＳ又はサイトカインストームの発生率を減少させる、又は抑制することを含む。
【０３４７】
別の一実施形態においては、医薬組成物は、遺伝子改変免疫細胞又はその遺伝子改変受容体を含む。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞は、Ｔ細胞を含む。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞は、キメラ抗原受容体ＣＡＲ  Ｔ細胞を含む。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞は、キメラ抗原受容体ＴＣＲ  Ｔ細胞を含む。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球を含む。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞は、樹状細胞を含む。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞は、ナチュラルキラー細胞を含む。別の一実施形態においては、遺伝子改変受容体は、遺伝子改変Ｔ細胞受容体を含む。
【０３４８】
更に別の一実施形態においては、本明細書に記載の症状又は疾患の処置用医薬組成物は、有効量の遺伝子改変免疫細胞又はその遺伝子改変受容体を、本明細書に記載のように、薬学的に許容される賦形剤中に含む。別の一実施形態においては、本明細書に記載の症状又は疾患の処置用医薬組成物は、本明細書に記載の有効量のＣＡＲ  Ｔ細胞、及び薬学的に許容される賦形剤を含む。別の一実施形態においては、本明細書に記載の症状又は疾患の処置用医薬組成物は、本明細書に記載の有効量のＴＣＲ  Ｔ細胞、及び薬学的に許容される賦形剤を含む。別の一実施形態においては、本明細書に記載の症状又は疾患の処置用医薬組成物は、本明細書に記載の有効量の細胞傷害性Ｔ細胞、及び薬学的に許容される賦形剤を含む。別の一実施形態においては、本明細書に記載の症状又は疾患の処置用医薬組成物は、本明細書に記載の有効量の遺伝子改変樹状細胞、及び薬学的に許容される賦形剤を含む。別の一実施形態においては、本明細書に記載の症状又は疾患の処置用医薬組成物は、本明細書に記載の有効量の遺伝子改変ナチュラルキラー細胞、及び薬学的に許容される賦形剤を含む。別の一実施形態においては、本明細書に記載の症状又は疾患の処置用医薬組成物は、本明細書に記載の有効量の遺伝子改変Ｔ細胞受容体、及び薬学的に許容される賦形剤を含む。
【０３４９】
別の一実施形態においては、本明細書に記載の症状又は疾患は、腫瘍又は癌である。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、本明細書に記載の目的タンパク質又はペプチドに結合する、遺伝子改変免疫細胞又はその受容体、例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞を含む組成物である。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、本明細書に記載の目的タンパク質又はペプチドを認識し、それに結合する、遺伝子改変免疫細胞又はその受容体、例えば、ＴＣＲ  Ｔ細胞を含む組成物である。別の一実施形態においては、目的タンパク質又はペプチドは、腫瘍抗原又はその断片を含む。
【０３５０】
別の一実施形態においては、本明細書に開示され、本明細書に開示される方法に使用される組成物は、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清、及び薬学的に許容される賦形剤を含む。更に別の一実施形態においては、有効量の遺伝子改変免疫細胞又はその遺伝子改変受容体を含む組成物は、アポトーシス細胞集団又はアポトーシス細胞上清を含むものと同じ組成物とすることができる。別の一実施形態においては、有効量のＣＡＲ  Ｔ細胞、又はＴＣＲ  Ｔ細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞、又は遺伝子改変樹状細胞、又は遺伝子改変ナチュラルキラー細胞を含む組成物は、アポトーシス細胞集団又はアポトーシス細胞上清を含むものと同じ組成物とすることができる。更に別の一実施形態においては、有効量の遺伝子改変Ｔ細胞受容体を含む組成物は、アポトーシス細胞集団又はアポトーシス細胞上清を含むものと同じ組成物とすることができる。更に別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞、ＴＣＲ  Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞又は樹状細胞を含む群から選択される有効量の遺伝子改変免疫細胞を含む組成物は、アポトーシス細胞集団又はアポトーシス細胞上清を含むものと同じ組成物ではない。別の一実施形態においては、組成物は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）と、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清と、薬学的に許容される賦形剤とを含む。別の一実施形態においては、組成物は、遺伝子改変Ｔ細胞受容体発現Ｔ細胞（ＴＣＲ  Ｔ細胞）と、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清と、薬学的に許容される賦形剤とを含む。別の一実施形態においては、有効量の遺伝子改変Ｔ細胞受容体を含む組成物は、アポトーシス細胞集団又はアポトーシス細胞上清を含むものと同じ組成物ではない。
【０３５１】
別の一実施形態においては、組成物に含まれるアポトーシス細胞は、早期アポトーシス状態のアポトーシス細胞を含む。別の一実施形態においては、組成物に含まれるアポトーシス細胞は、プールされた第三者ドナー細胞である。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物に含まれるアポトーシス細胞上清は、早期アポトーシス細胞から収集される。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物に含まれるアポトーシス細胞上清は、収集されたプールされた第三者ドナー細胞である。
【０３５２】
一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ細胞を含む組成物は、更に、サイトカイン放出症候群患者又はサイトカインストームを経験した患者におけるサイトカイン放出を予防する、抑制する、又は調節するための追加の医薬組成物を含む。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ細胞とアポトーシス細胞とを含む組成物は、更に、サイトカイン放出症候群患者又はサイトカインストームを経験した患者におけるサイトカイン放出を予防する、抑制する、又は調節するための追加の医薬組成物を含む。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ細胞とアポトーシス細胞上清とを含む組成物は、更に、サイトカイン放出症候群患者又はサイトカインストームを経験した患者におけるサイトカイン放出を予防する、抑制する、又は調節するための追加の医薬組成物を含む。
【０３５３】
一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＴＣＲ  Ｔ細胞を含む組成物は、更に、サイトカイン放出症候群患者又はサイトカインストームを経験した患者におけるサイトカイン放出を予防する、抑制する、又は調節するための追加の医薬組成物を含む。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＴＣＲ  Ｔ細胞とアポトーシス細胞とを含む組成物は、更に、サイトカイン放出症候群患者又はサイトカインストームを経験した患者におけるサイトカイン放出を予防する、抑制する、又は調節するための追加の医薬組成物を含む。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＴＣＲ  Ｔ細胞とアポトーシス細胞上清とを含む組成物は、更に、サイトカイン放出症候群患者又はサイトカインストームを経験した患者におけるサイトカイン放出を予防する、抑制する、又は調節するための追加の医薬組成物を含む。
【０３５４】
一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えば樹状細胞を含む組成物は、更に、サイトカイン放出症候群患者又はサイトカインストームを経験した患者におけるサイトカイン放出を予防する、抑制する、又は調節するための追加の医薬組成物を含む。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えば樹状細胞とアポトーシス細胞とを含む組成物は、更に、サイトカイン放出症候群患者又はサイトカインストームを経験した患者におけるサイトカイン放出を予防する、抑制する、又は調節するための追加の医薬組成物を含む。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えば樹状細胞とアポトーシス細胞上清とを含む組成物は、更に、サイトカイン放出症候群患者又はサイトカインストームを経験した患者におけるサイトカイン放出を予防する、抑制する、又は調節するための追加の医薬組成物を含む。
【０３５５】
一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＮＫ細胞を含む組成物は、更に、サイトカイン放出症候群患者又はサイトカインストームを経験した患者におけるサイトカイン放出を予防する、抑制する、又は調節するための追加の医薬組成物を含む。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＮＫ細胞とアポトーシス細胞とを含む組成物は、更に、サイトカイン放出症候群患者又はサイトカインストームを経験した患者におけるサイトカイン放出を予防する、抑制する、又は調節するための追加の医薬組成物を含む。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＮＫ細胞とアポトーシス細胞上清をと含む組成物は、更に、サイトカイン放出症候群患者又はサイトカインストームを経験した患者におけるサイトカイン放出を予防する、抑制する、又は調節するための追加の医薬組成物を含む。
【０３５６】
一実施形態においては、追加の医薬組成物は、一実施形態においてはイピリムマブである、ＣＴＬＡ−４遮断薬を含む。別の一実施形態においては、追加の医薬組成物は、本明細書に開示されるアルファ−１抗トリプシン、又はその断片、又はその類似体を含む。別の一実施形態においては、追加の医薬組成物は、本明細書に開示されるテルル化合物を含む。別の一実施形態においては、追加の医薬組成物は、本明細書に開示される免疫調節剤を含む。別の一実施形態においては、追加の医薬組成物は、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節化合物、又はそれらの任意の組合せを含む。
【０３５７】
一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、アポトーシス細胞、又はアポトーシス細胞上清、テルル化合物、又は免疫調節剤のいずれか一つを含む医薬組成物は、単一の組成物を構成する。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、アポトーシス細胞、若しくはアポトーシス細胞上清、テルル化合物、若しくは免疫調節剤のいずれか一つ、又はそれらの任意の組合せを含む医薬組成物は、複数の組成物を構成し、一実施形態においてはＣＡＲ  Ｔ細胞である遺伝子改変免疫細胞、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、テルル化合物、若しくは免疫調節剤の各々、又はそれらの任意の組合せは、別の組成物に含まれる。更に別の一実施形態においては、一実施形態においてはＣＡＲ  Ｔ細胞である遺伝子改変免疫細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、テルル化合物、若しくは免疫調節剤のいずれか一つ、又はそれらの任意の組合せを含む医薬組成物は、複数の組成物を構成し、一実施形態においてはＣＡＲ  Ｔ細胞である遺伝子改変免疫細胞、ＣＴＬＡ−４遮断薬、若しくはアルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せ、又はそれらの任意の組合せは、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ細胞、組成物中に存在し、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清は、別の組成物に含まれる。
【０３５８】
一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＴＣＲ  Ｔ細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、アポトーシス細胞、又はアポトーシス細胞上清、テルル化合物、又は免疫調節剤のいずれか一つを含む医薬組成物は、単一の組成物を構成する。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＴＣＲ  Ｔ細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、アポトーシス細胞、若しくはアポトーシス細胞上清、テルル化合物、若しくは免疫調節剤のいずれか一つ、又はそれらの任意の組合せを含む医薬組成物は、複数の組成物を構成し、一実施形態においてはＴＣＲ  Ｔ細胞である遺伝子改変免疫細胞、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、テルル化合物、若しくは免疫調節剤の各々、又はそれらの任意の組合せは、別の組成物に含まれる。更に別の一実施形態においては、一実施形態においてはＴＣＲ  Ｔ細胞である遺伝子改変免疫細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、テルル化合物、若しくは免疫調節剤のいずれか一つ、又はそれらの任意の組合せを含む医薬組成物は、複数の組成物を構成し、一実施形態においてはＴＣＲ  Ｔ細胞である遺伝子改変免疫細胞、ＣＴＬＡ−４遮断薬、若しくはアルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せ、又はそれらの任意の組合せは、遺伝子改変免疫細胞、例えばＴＣＲ  Ｔ細胞、組成物中に存在し、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清は、別の組成物に含まれる。
【０３５９】
一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えば樹状細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、アポトーシス細胞、又はアポトーシス細胞上清、テルル化合物、又は免疫調節剤のいずれか一つを含む医薬組成物は、単一の組成物を構成する。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えば樹状細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、アポトーシス細胞、若しくはアポトーシス細胞上清、テルル化合物、若しくは免疫調節剤のいずれか一つ、又はそれらの任意の組合せを含む医薬組成物は、複数の組成物を構成し、一実施形態においては樹状細胞である遺伝子改変免疫細胞、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、テルル化合物、若しくは免疫調節剤の各々、又はそれらの任意の組合せは、別の組成物に含まれる。更に別の一実施形態においては、一実施形態においては樹状細胞である遺伝子改変免疫細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、テルル化合物、若しくは免疫調節剤のいずれか一つ、又はそれらの任意の組合せを含む医薬組成物は、複数の組成物を構成し、一実施形態においては樹状細胞である遺伝子改変免疫細胞、ＣＴＬＡ−４遮断薬、若しくはアルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せ、又はそれらの任意の組合せは、遺伝子改変免疫細胞、例えば樹状細胞、組成物中に存在し、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清は、別の組成物に含まれる。
【０３６０】
一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＮＫ細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、アポトーシス細胞、又はアポトーシス細胞上清、テルル化合物、又は免疫調節剤のいずれか一つを含む医薬組成物は、単一の組成物を構成する。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＮＫ細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、アポトーシス細胞、若しくはアポトーシス細胞上清、テルル化合物、若しくは免疫調節剤のいずれか一つ、又はそれらの任意の組合せを含む医薬組成物は、複数の組成物を構成し、一実施形態においてはＮＫ細胞である遺伝子改変免疫細胞、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、テルル化合物、若しくは免疫調節剤の各々、又はそれらの任意の組合せは、別の組成物に含まれる。更に別の一実施形態においては、一実施形態においてはＮＫ細胞である遺伝子改変免疫細胞を含む組成物、及びＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、テルル化合物、若しくは免疫調節剤のいずれか一つ、又はそれらの任意の組合せを含む医薬組成物は、複数の組成物を構成し、一実施形態においてはＮＫ細胞である遺伝子改変免疫細胞、ＣＴＬＡ−４遮断薬、若しくはアルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せ、又はそれらの任意の組合せは、遺伝子改変免疫細胞、例えばＮＫ細胞、組成物中に存在し、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清は、別の組成物に含まれる。
【０３６１】
当業者は、「医薬組成物」が、本明細書に記載の活性成分の１つ以上と生理的に適切な担体及び賦形剤などの別の化学成分の調製物を包含し得ることを理解されたい。薬剤組成物の目的は、生物体への化合物の投与を容易にすることである。
【０３６２】
当業者は、「生理的に許容される担体」、「薬学的に許容される担体」、「生理的に許容される賦形剤」及び「薬学的に許容される賦形剤」という句が、区別なく使用され、生物に重大な刺激を起こさず、投与された活性成分の生物活性及び性質を阻害しない担体、賦形剤又は希釈剤を包含し得ることを理解されたい。
【０３６３】
当業者は、「賦形剤」が、医薬組成物に添加して活性成分の投与を更に容易にする不活性物質を包含し得ることを理解されたい。一実施形態においては、賦形剤としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖及び種々のタイプのデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、並びにポリエチレングリコールが挙げられる。
【０３６４】
薬物の処方及び投与の技術は、参照により本明細書に援用する「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、イーストン、ＰＡ、最新版に記載されている。
【０３６５】
一実施形態においては、複数の組成物を同時に投与する。別の一実施形態においては、複数の組成物を異なる時間に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞を含む組成物を、注入又は遺伝子改変免疫細胞又はその受容体の前に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞を含む組成物をＣＡＲ−Ｔ細胞注入前に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞を含む組成物を細胞傷害性Ｔ細胞注入前に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞を含む組成物をナチュラルキラー細胞注入前に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞を含む組成物を樹状細胞注入前に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞を含む組成物を遺伝子改変Ｔ細胞受容体の注入前に投与する。
【０３６６】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清を含む組成物を、注入又は遺伝子改変免疫細胞又はその受容体の前に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清を含む組成物をＣＡＲ−Ｔ細胞注入前に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清を含む組成物を細胞傷害性Ｔ細胞注入前に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清を含む組成物をナチュラルキラー細胞注入前に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清を含む組成物を樹状細胞注入前に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清を含む組成物を遺伝子改変Ｔ細胞受容体の注入前に投与する。
【０３６７】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清を含む組成物を、遺伝子改変免疫細胞又はその受容体の注入前に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞を含む組成物を、遺伝子改変免疫細胞又はその受容体注入の約２４時間前に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞を含む組成物を、ＣＡＲ  Ｔ細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞、又はＴＣＲ  Ｔ細胞、又はナチュラルキラー細胞、又は樹状細胞、又は遺伝子改変Ｔ細胞受容体注入の約２４時間前に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清を含む組成物を、ＣＡＲ  Ｔ細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞、又はＴＣＲ  Ｔ細胞、又はナチュラルキラー細胞、又は樹状細胞、又は遺伝子改変Ｔ細胞受容体注入の約２４時間前に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞を含む組成物を、ＣＡＲ−Ｔ細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞、又はＴＣＲ  Ｔ細胞、又はナチュラルキラー細胞、又は樹状細胞、又は遺伝子改変Ｔ細胞受容体注入の約２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間  ２０時間、２２時間、２４時間、３６時間、４８時間、６０時間、又は７２時間前に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清を含む組成物を、ＣＡＲ  Ｔ細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞、又はＴＣＲ  Ｔ細胞、又はナチュラルキラー細胞、又は樹状細胞、又は遺伝子改変Ｔ細胞受容体注入の約２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間  ２０時間、２２時間、２４時間、３６時間、４８時間、６０時間、又は７２時間前に投与する。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態となる。
【０３６８】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞を含む組成物を、遺伝子改変免疫細胞又はその遺伝子改変受容体の注入後に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞を含む組成物を、ＣＡＲ−Ｔ細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞、又はＴＣＲ  Ｔ細胞、又はナチュラルキラー細胞、又は樹状細胞、又は遺伝子改変Ｔ細胞受容体注入後に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清を含む組成物を、遺伝子改変免疫細胞又はその遺伝子改変受容体の注入後に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清を含む組成物を、ＣＡＲ  Ｔ細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞、又はＴＣＲ  Ｔ細胞、又はナチュラルキラー細胞、又は樹状細胞、又は遺伝子改変Ｔ細胞受容体注入後に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞を含む組成物を、ＣＡＲ−Ｔ細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞、又はＴＣＲ  Ｔ細胞、又はナチュラルキラー細胞、又は樹状細胞、又は遺伝子改変Ｔ細胞受容体注入の約２４時間後に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞を含む組成物を、遺伝子改変免疫細胞又はその遺伝子改変受容体の注入後に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清を含む組成物を、ＣＡＲ  Ｔ細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞、又はＴＣＲ  Ｔ細胞、又はナチュラルキラー細胞、又は樹状細胞、又は遺伝子改変Ｔ細胞受容体注入の約２４時間後に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞を含む組成物を、ＣＡＲ−Ｔ細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞、又はＴＣＲ  Ｔ細胞、又はナチュラルキラー細胞、又は樹状細胞、又は遺伝子改変Ｔ細胞受容体注入の約２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間  ２０時間、２２時間、２４時間、３６時間、４８時間、６０時間、又は７２時間後に投与する。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞上清を含む組成物を、ＣＡＲ  Ｔ細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞、又はナチュラルキラー細胞、又は樹状細胞、又は遺伝子改変Ｔ細胞受容体注入の約２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間  ２０時間、２２時間、２４時間、３６時間、４８時間、６０時間、又は７２時間後に投与する。各可能性は、本明細書に開示される別個の実施形態となる。
【０３６９】
処方
遺伝子改変免疫応答細胞を含む、若しくはアポトーシス細胞を含む、若しくはアポトーシス細胞上清を含む本明細書に開示される組成物、又はそれらの任意の組合せは、好都合には、選択ｐＨに緩衝することができる無菌液体調製物、例えば、等張性水溶液、懸濁液、乳濁液、分散液又は粘稠性組成物として提供することができ、液体調製物は、通常は、ゲル、別の粘稠性組成物及び固体組成物よりも調製しやすい。さらに、液体組成物は、特に注射によって、投与するのに幾らかより好都合である。一方、粘稠性組成物は、特定の組織との接触期間をより長くするために、適切な粘度範囲内で処方することができる。液体又は粘稠性組成物は、担体を含むことができ、担体は、例えば、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）及びそれらの適切な混合物を含む溶媒又は分散媒とすることができる。
【０３７０】
無菌注射液は、所望のとおりに、本明細書に開示される方法の実施に利用される遺伝子改変免疫応答細胞又はアポトーシス細胞上清を、必要な量の適切な溶媒と様々な量の別の成分中に入れることによって調製することができる。こうした組成物は、滅菌水、生理食塩水、グルコース、デキストロースなどの適切な担体、希釈剤又は賦形剤と混合することができる。組成物は凍結乾燥させることもできる。組成物は、所望の投与経路及び調製に応じて、湿潤剤、分散剤、乳化剤（例えば、メチルセルロース）、ｐＨ緩衝剤、ゲル化又は増粘添加剤、防腐剤、香味剤、着色材などの補助物質を含むことができる。参照により本明細書に援用する「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥ」、１７版、１９８５などの標準的な教科書を調べて、適切な調製物を過度の実験なしに調製することができる。
【０３７１】
抗菌防腐剤、抗酸化剤、キレート剤及び緩衝剤を含めて、組成物の安定性及び無菌性を高める種々の添加剤を添加することができる。微生物の作用は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などによって確実に予防することができる。注射用剤形の吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを使用することによって延長することができる。しかし、本明細書の開示によれば、使用する任意のビヒクル、希釈剤又は添加剤は、遺伝子改変免疫応答細胞又はそれらの前駆体に適合しなければならないと考えられる。
【０３７２】
組成物は、等張性とすることができ、すなわち、血液及び涙液と同じ浸透圧を有することができる。本明細書に開示される組成物の所望の等張性は、塩化ナトリウム、又はデキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、他の無機若しくは有機溶質などの他の薬学的に許容される薬剤を用いて得ることができる。塩化ナトリウムは、特にナトリウムイオンを含む緩衝剤に好ましい場合がある。
【０３７３】
組成物の粘度は、所望であれば、薬学的に許容される増粘剤を用いて選択されたレベルに維持することができる。メチルセルロースは、容易に経済的に入手可能であり、取扱いが容易であるので、好ましい場合がある。
【０３７４】
別の適切な増粘剤としては、例えば、キサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボマーなどが挙げられる。増粘剤の好ましい濃度は、選択される薬剤に依存する。重要なポイントは、選択された粘度が得られる量を使用することである。言うまでもなく、適切な担体及び別の添加剤の選択は、正確な投与経路及び特定の剤形、例えば液体剤形の性質（例えば、組成物が溶液剤、懸濁液剤、ゲル剤、又は徐放性剤形、液体充填剤形などの別の液体剤形に処方されるかどうか）に依存する。
【０３７５】
当業者は、組成物の成分が、化学的に不活性であるように選択されるべきであり、本明細書に開示される方法に記載の遺伝子改変免疫応答細胞の生存率又は有効性に影響を及ぼさないことを認識するはずである。これは、化学及び薬学の原理を熟知した者には問題とならず、又は問題は、本開示、及び本明細書で引用する文献から、標準的な教科書を参照して、又は単純な実験（過度の実験を必要としない）によって、容易に回避することができる。
【０３７６】
本明細書に開示される遺伝子改変免疫応答細胞の治療上の使用に関する１つの考慮事項は、最適な効果を得るのに必要な細胞の量である。投与すべき細胞の量は、処置される対象ごとに異なる。一実施形態においては、１０４〜１０１０、１０５〜１０９、又は１０６〜１０８個の本明細書に開示される遺伝子改変免疫応答細胞をヒト対象に投与する。より有効な細胞ほど、より少数で投与することができる。一部の実施形態においては、少なくとも約１×１０８、２×１０８、３×１０８、４×１０８及び５×１０８個の本明細書に開示される遺伝子改変免疫応答細胞をヒト対象に投与する。何を有効量と考えるかの正確な決定は、特定の対象のそのサイズ、年齢、性別、体重及び状態を含めて、各対象それぞれの要因に基づき得る。投与量は、当業者が本開示及び当該技術分野における知識から容易に確認することができる。
【０３７７】
当業者は、組成物中の、本明細書に開示される方法において投与される、細胞並びに任意選択の添加剤、ビヒクル及び／又は担体の量を容易に決定することができる。一般に、（活性な細胞（単数又は複数）及び／又は薬剤（単数又は複数）に加えて）任意の添加剤は、リン酸緩衝食塩水中の０．００１〜５０％（重量）溶液の量で存在し、活性成分は、約０．０００１〜約５ｗｔ％などのマイクログラムからミリグラムの桁で存在する。別の一実施形態においては、約０．０００１〜約１ｗｔ％。更に別の一実施形態においては、約０．０００１〜約０．０５ｗｔ％又は約０．００１〜約２０ｗｔ％。更なる一実施形態においては、約０．０１〜約１０ｗｔ％。別の一実施形態においては、約０．０５〜約５ｗｔ％。言うまでもなく、動物又はヒトに投与される任意の組成物の場合、及び任意の特定の投与方法の場合、したがって、適切な動物モデル、例えば、マウスなどの齧歯類における致死量（ＬＤ：ｌｅｔｈａｌ  ｄｏｓｅ）及びＬＤ５０を測定することなどによって毒性を決定し、適切な応答を誘発する、組成物（単数又は複数）の投与量、その中の成分の濃度、及び組成物（単数又は複数）を投与するタイミングを決定することが好ましい。こうした決定は、当業者の知識、本開示、及び本明細書で引用する文献から過度の実験を必要としない。そして、連続投与時間を過度の実験なしに確認することができる。
【０３７８】
核酸配列、ベクター、細胞
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、本明細書に開示される組成物及び方法に使用される本明細書に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離核酸配列である。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、本明細書に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸配列を含むベクターである。
【０３７９】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、本明細書に開示される組成物及び方法に使用される本明細書に記載の遺伝子改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする単離核酸配列である。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、本明細書に記載の遺伝子改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする核酸配列を含むベクターである。
【０３８０】
免疫応答細胞（例えば、Ｔ細胞、ＣＴＬ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞）の遺伝子改変は、ほぼ均一な細胞組成物に組換えＤＮＡ構築物を導入することによって行うことができる。一実施形態においては、ＤＮＡ構築物を細胞に導入するのにレトロウイルスベクター（ガンマレトロウイルス又はレンチウイルス）を採用する。例えば、抗原（例えば、腫瘍抗原、又はバリアント（ｖａｌｉａｎｔ）、又はその断片）に結合する受容体をコードするポリヌクレオチドをレトロウイルスベクター中にクローン化することができ、その内在性プロモーターから、レトロウイルスの長末端反復から、又は目的の標的細胞型（ｔａｒｇｅＴ−ｃｅｌｌ  ｔｙｐｅ）に特異的なプロモーターから、発現を引き起こすことができる。非ウイルスベクターを同様に使用することもできる。
【０３８１】
細胞におけるタンパク質の発現に非ウイルス手法を採用することもできる。例えば、リポフェクション（Ｆｅｉｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４：７４１３、１９８７；Ｏｎｏら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １７：２５９、１９９０；Ｂｒｉｇｈａｍら、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．２９８：２７８、１９８９；Ｓｔａｕｂｉｎｇｅｒら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １０１：５１２、１９８３）、アシアロオロソムコイド−ポリリジン複合化（Ｗｕら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６３：１４６２１、１９８８；Ｗｕら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６４：１６９８５、１９８９）の存在下で核酸を投与することによって、又は外科的条件下の微量注入によって（Ｗｏｌｆｆら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：１４６５、１９９０）、核酸分子を細胞に導入することができる。遺伝子移入の別の非ウイルス手段としては、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥデキストラン、電気穿孔法、及びプロトプラスト融合を用いたインビトロ遺伝子導入が挙げられる。リポソームは、ＤＮＡを細胞に送達するのに潜在的に有益である可能性もある。正常遺伝子を対象の患部組織に移植することは、正常核酸を培養可能な細胞型にエクスビボで導入することによっても行うことができ（例えば、自己又は異種の初代細胞又はその子孫）、その後、細胞（又はその子孫）を標的組織に注射し、又は全身的に注射する。組換え受容体は、トランスポザーゼ又は標的ヌクレアーゼ（例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ又はＴＡＬＥヌクレアーゼ）を用いて誘導することもでき、又は得ることもできる。一過性発現は、ＲＮＡ電気穿孔法によって得ることができる。ポリヌクレオチド治療法に使用されるｃＤＮＡ発現は、任意の適切なプロモーター（例えば、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）又はメタロチオネインプロモーター）から誘導することができ、任意の適切な哺乳動物調節エレメント又はイントロン（例えば、伸長因子１ａエンハンサー／プロモーター／イントロン構造）によって調節することができる。例えば、所望であれば、特定の細胞型において遺伝子発現を優先的に誘導することが知られているエンハンサーを使用して、核酸の発現を誘導することができる。使用されるエンハンサーとしては、組織又は細胞特異的エンハンサーとして特徴づけられるものが挙げられるが、それらに限定されない。あるいは、ゲノムクローンが治療用構築物として使用される場合、調節は、同族の制御配列によって、又は、所望であれば、上記プロモーター若しくは調節エレメントのいずれかを含めて、異種の供給源に由来する制御配列によって、媒介することができる。
【０３８２】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、本明細書に開示されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸配列を含むベクターを含む細胞である。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、本明細書に開示される遺伝子改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする核酸配列を含むベクターを含む細胞である。
【０３８３】
キット
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、新形成、病原体感染症、自己免疫異常又は同種移植の処置用キットであり、キットは、本明細書に開示されるＣＡＲ  Ｔ細胞及びアポトーシス細胞を別々に又はあらかじめ混合して含む。
【０３８４】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減するためのキットであり、キットは、本明細書に開示されるＣＡＲ  Ｔ細胞及びアポトーシス細胞を別々に又はあらかじめ混合して含む。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減するためのキットであり、キットは、本明細書に開示されるＣＡＲ  Ｔ細胞及びアポトーシス細胞上清を別々に又はあらかじめ混合して含む。
【０３８５】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、新形成、病原体感染症、自己免疫異常又は同種移植の処置用キットであり、キットは、本明細書に開示されるＴＣＲ  Ｔ細胞及びアポトーシス細胞を別々に又はあらかじめ混合して含む。
【０３８６】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減するためのキットであり、キットは、本明細書に開示されるＴＣＲ  Ｔ細胞及びアポトーシス細胞を別々に又はあらかじめ混合して含む。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減するためのキットであり、キットは、本明細書に開示されるＴＣＲ  Ｔ細胞及びアポトーシス細胞上清を別々に又はあらかじめ混合して含む。
【０３８７】
本明細書に開示されるのは、新形成、病原体感染症、免疫不全若しくは同種移植の処置若しくは予防のためのキット、又は癌若しくは腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、若しくは軽減するためのキットである。一実施形態においては、キットは、単位剤形の有効量の本明細書に開示される免疫応答細胞及びアポトーシス細胞を含む治療又は予防組成物を含む。別の一実施形態においては、キットは、単位剤形の有効量の本明細書に開示される免疫応答細胞及びアポトーシス細胞上清を含む治療又は予防組成物を含む。特定の実施形態においては、細胞は、更に共刺激リガンドを含む。別の一実施形態においては、キットは、更に、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む群から選択される追加の薬剤を含む。一部の実施形態においては、キットは、治療又は予防ワクチンを含む無菌容器を含み、こうした容器は、箱、アンプル、瓶、バイアル、チューブ、バッグ、ポーチ、ブリスターパック、又は当該技術分野で既知の他の適切な容器形態とすることができる。こうした容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属箔、又は医薬品を保持するのに適切な他の材料で作製することができる。
【０３８８】
所望であれば、免疫応答細胞及びアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清は、新形成、病原体感染症、免疫不全若しくは同種移植若しくは腫瘍若しくは癌を有する、又は発症するリスクがある対象に細胞を投与するための説明書と一緒に提供される。説明書は、一般に、新形成、病原体感染症、免疫不全、同種移植、腫瘍又は癌の処置又は予防のための組成物の使用についての情報を含む。別の実施形態においては、説明書は、以下の少なくとも１つを含む：治療薬の記述；新形成、病原体感染症、免疫不全若しくは同種移植、癌、腫瘍、又はそれらの症候の処置又は予防のための投与計画及び投与；注意；警告；適応症；使用禁忌；過量情報；有害反応；動物薬理；臨床試験；及び／又は参考文献。説明書は、容器（存在するとき）に直接印刷することができ、又は容器に貼るラベルとして印刷することができ、又は容器の中若しくは容器と一緒に提供される分離したシート、パンフレット、カード若しくはフォルダとして印刷することができる。
【０３８９】
当業者は、「抗原認識受容体」という用語が、抗原結合に反応して免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を活性化することができる受容体を包含し得ることを理解されたい。例示的な抗原認識受容体は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を活性化することができる細胞内シグナル伝達ドメインに腫瘍抗原結合性ドメインが融合した天然若しくは内在性Ｔ細胞受容体又はキメラ抗原受容体とすることができる。
【０３９０】
当業者は、「抗体」という用語が、完全な抗体分子だけでなく、免疫原結合能力を保持する抗体分子の断片も意味することを理解されたい。こうした断片も当該技術分野でよく知られており、インビトロとインビボの両方で度々採用されている。したがって、当業者は、「抗体」という用語が、完全な免疫グロブリン分子だけでなく、周知の活性な断片Ｆ（ａｂ１）２及びＦａｂも意味することを理解されたい。完全抗体のＦｃ断片を欠くＦ（ａｂ’）２５及びＦａｂ断片は、循環からより急速に消滅し、完全抗体の非特異的組織結合が少ない可能性がある（Ｗａｈｌら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２４：３１６〜３２５（１９８３）。本明細書に開示される抗体は、全自然抗体、二重特異性抗体；キメラ抗体；Ｆａｂ、Ｆａｂ’、単鎖Ｖ領域断片（ｓｃＦｖ）、融合ポリペプチド、及び従来と異なる抗体を含む。
【０３９１】
当業者は、「単鎖可変断片」又は「ｓｃＦｖ」という用語が、ＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を形成するように共有結合した免疫グロブリンの重鎖（ＶＨ）と軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融合タンパク質を包含することを理解されたい。重鎖（ＶＨ）と軽鎖（ＶＬ）は、直接連結されるか、又はペプチドをコードするリンカー（例えば、３０、１５、２０、２５アミノ酸）によって連結され、リンカーは、ＶＨのＮ末端とＶＬのＣ末端、又はＶＨのＣ末端とＶＬのＮ末端を接続する。リンカーは、通常、柔軟性のためにグリシンが豊富であり、溶解性のためにセリン又はスレオニンが豊富である。定常領域の除去及びリンカーの導入にもかかわらず、ｓｃＦｖタンパク質は、最初の免疫グロブリンの特異性を保持する。単鎖Ｆｖポリペプチド抗体は、Ｈｕｓｔｏｎら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５：５８７９〜５８８３、１９８８）によって記述されたＶＨ及びＶＬコード配列を含む核酸から発現することができる。米国特許第５，０９１，５１３号、同５，１３２，４０５号及び同４，９５６，７７８号並びに米国特許出願公開第２００５０１９６７５４号及び同２００５０１９６７５４号も参照されたい。阻害活性を有する拮抗性ｓｃＦｖが記述されている（例えば、Ｚｈａｏら、Ｈｙｒｂｉｄｏｍａ（Ｌａｒｃｈｍｔ）２００８  ２７（６）：４５５〜５１；Ｐｅｔｅｒら、Ｊ  Ｃａｃｈｅｘｉａ  Ｓａｒｃｏｐｅ  ｉａ  Ｍｕｓｃｌｅ  ２０１２年８月１２日；Ｓｈｉｅｈら、Ｊ  Ｉｍｕｎｏｌ２００９  １８３（４）：２２７７〜８５；Ｇｉｏｍａｒｅｌｌｉら、Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ  ２００７  ９７（６）：９５５〜６３；Ｆｉｆｅ  ｅｔａ．、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｓｔ  ２００６  １  １６（８）：２２５２〜６１；Ｂｒｏｃｋｓら、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １９９７  ３（３）：１７３〜８４；Ｍｏｏｓｍａｙｅｒら、Ｔｈｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９５  ２（１０：３１〜４０）を参照されたい。刺激活性を有する作動性ｓｃＦｖが記述されている（例えば、Ｐｅｔｅｒら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００３  ２５２７８（３８）：３６７４０〜７；Ｘｉｅら、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  １  ９７  １５（８）：７６８〜７１；Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒら、Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ｌ９９７  １（５〜６）−．４２７〜５５；Ｈｏら、ＢｉｏＣｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  ２００３  １６３８（３）：２５７〜６６を参照されたい）。
【０３９２】
「親和性」とは、結合強度の尺度を意味する。理論に拘泥するものではないが、親和性は、抗体結合部位と抗原決定基の立体化学的一致度に依存し、それらの間の接触域のサイズに依存し、荷電基及び疎水基の分布に依存する。親和性は、「結合活性」という用語も含み、これは、可逆的複合体の形成後の抗原抗体結合の強度を指す。抗原に対する抗体の親和性を計算する方法は、親和性を計算する結合実験の使用を含めて、当該技術分野で既知である。機能分析（例えば、フローサイトメトリー分析）における抗体活性も抗体親和性を反映している。抗体及び親和性は、機能分析（例えば、フローサイトメトリー分析）によって表現型的に特徴づけ、比較することができる。
【０３９３】
当業者は、「キメラ抗原受容体」又は「ＣＡＲ」という用語が、免疫細胞を活性化又は刺激することができる細胞内シグナル伝達ドメインに融合した抗原結合ドメインを包含し得ることを理解されたい。一実施形態においては、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、マウス又はヒト化モノクローナル抗体の可変重鎖と軽鎖領域の融合から誘導される単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）で構成される。あるいは、Ｆａｂから誘導される（抗体からの代わりに、例えば、Ｆａｂライブラリから得られる）ｓｃＦｖを使用することができ、様々な実施形態においては、このｓｃＦｖは、膜貫通領域、次いで細胞内シグナル伝達ドメインと融合する。様々な実施形態においては、ＣＡＲは、抗原に対して高い親和性又は結合活性を有するように選択される。
【０３９４】
ポリペプチド及び類似体
本明細書に開示される方法に更に含まれるのは、抗ＭＵＣ１、ＣＤ２８、ＣＤ３ζ、及び免疫応答細胞において発現されるときにそれらの抗腫瘍活性を高めるように改変される種々のｓｃＦｖポリペプチド又はそれらの断片（例えば、ヒト化モノクローナル抗体）である。ある実施形態においては、本明細書に開示される方法は、配列を変化させることによってアミノ酸配列又は核酸配列を最適化するステップを含む。こうした変化としては、ある種の変異、欠失、挿入又は翻訳後修飾が挙げられる。本明細書の開示は、更に、本明細書に開示される任意の天然ポリペプチドの類似体も含む。類似体は、アミノ酸配列差、翻訳後修飾、又はその両方によって、本明細書に開示される天然ポリペプチドとは異なり得る。本明細書に開示される類似体は、一般に、本明細書に開示される天然アミノ酸配列の全部又は一部と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％＞、９９％以上同一である。配列比較の長さは、少なくとも５、１０、１５又は２０アミノ酸残基である。別の一実施形態においては、少なくとも２５、５０又は７５アミノ酸残基。更に別の一実施形態においては、１００個を超えるアミノ酸残基。また、同一性の程度を決定する例示的な一手法においては、ＢＬＡＳＴプログラムを使用することができ、ｅ”３〜ｅ”１００の確率スコアは、密接に関連した配列を示す。修飾としては、ポリペプチドのインビボ及びインビトロ化学誘導体化、例えば、アセチル化、カルボキシル化、リン酸化又はグリコシル化が挙げられ、こうした修飾は、ポリペプチド合成若しくはプロセシング中に起こり、又は単離修飾酵素による処理後に起こり得る。類似体は、本明細書に開示される天然ポリペプチドとは一次配列の変化分だけ異なることもできる。これらには、天然と誘導の両方の遺伝子変異体が含まれる（例えば、照射若しくは硫酸エタンメチル（ｅｔｈａｎｅｍｅｔｈｙｌ  ｓｕｌｆａｔｅ）曝露による、又はＳａｍｂｒｏｏｋ、Ｆｒｉｔｓｃｈ及びＭａｎｉａｔｉｓ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２版）、ＣＳＨ  Ｐｒｅｓｓ、１９８９、若しくはＡｕｓｕｂｅｌら、前掲に記載のように部位特異的変異誘発による、ランダム変異導入に起因する遺伝子変異体）。Ｌ−アミノ酸以外の残基、例えば、Ｄ−アミノ酸又は非天然若しくは合成アミノ酸、例えば、ベータ（β）若しくはガンマ（γ）アミノ酸を含む、環化ペプチド、分子及び類似体も含まれる。
【０３９５】
非タンパク質類似体は、本明細書に開示されるタンパク質の機能活性を模倣するように設計された化学構造を有する。こうした類似体は、本明細書に開示される方法に従って投与される。こうした類似体は、元のポリペプチドの生理学的活性を超える可能性がある。類似体設計方法は当該技術分野で周知であり、類似体の合成は、こうした方法に従って、得られる類似体が免疫応答細胞において発現されるときに元のポリペプチドの抗腫瘍活性を増大するように化学構造を改変することによって、行うことができる。これらの化学的改変としては、別のＲ基を置換すること、及び参照ポリペプチドの特定の炭素原子における飽和度を変えることが挙げられるが、それらに限定されない。別の一実施形態においては、タンパク質類似体はインビボでの分解に対して比較的耐性があり、投与後の治療効果がより長続きする。機能活性を測定するアッセイとしては、下記実施例に記載のものが挙げられるが、それらに限定されない。
【０３９６】
「免疫抑制活性」という用語は、免疫応答の減少をもたらす、細胞（例えば、活性化免疫応答細胞）におけるシグナル伝達又はタンパク質発現変化の誘導を表す。それらの結合を介して免疫応答を抑制する、又は減少させることが知られているポリペプチドとしては、ＣＤ４７、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、並びにＳＩＲＰａ、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−１及びＢ７−２を含めたそれらの対応するリガンドが挙げられる。こうしたポリペプチドは、腫瘍微小環境中に存在し、新生細胞に対する免疫応答を阻害する。様々な実施形態においては、免疫抑制ポリペプチド及び／又はそれらのリガンドの相互作用の阻害、遮断又は拮抗は、免疫応答細胞の免疫応答を増強する。
【０３９７】
「免疫賦活性」という用語は、免疫応答の増加をもたらす、細胞（例えば、活性化免疫応答細胞）におけるシグナル伝達又はタンパク質発現変化の誘導を表す。免疫賦活性は、炎症誘発活性を含み得る。それらの結合を介して免疫応答を刺激する、又は増加させることが知られているポリペプチドとしては、ＣＤ２８、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ、並びにＢ７−１、Ｂ７−２、ＯＸ−４０Ｌ及び４−１ＢＢＬを含めたそれらの対応するリガンドが挙げられる。こうしたポリペプチドは、腫瘍微小環境中に存在し、新生細胞に対する免疫応答を活性化する。様々な実施形態においては、炎症誘発性ポリペプチド及び／又はそれらのリガンドの促進、刺激又は作動は、免疫応答細胞の免疫応答を増強する。
【０３９８】
本明細書に開示される方法において有用な核酸分子としては、本明細書に開示されるポリペプチド又はその断片をコードする任意の核酸分子が挙げられる。こうした核酸分子は、内在性核酸配列と１００％同一である必要はないが、一般に実質的な同一性を示す。内在性配列に対して「実質的な同一性」を有するポリヌクレオチドは、一般に、二本鎖核酸分子の少なくとも一方の鎖とハイブリッド形成することができる。「ハイブリッド形成する」とは、相補的ポリヌクレオチド配列（例えば、本明細書に記載の遺伝子）又はその一部の間で様々な厳密性の条件下で二本鎖分子を形成する対を意味する。（例えば、Ｗａｈｌ，Ｇ．Ｍ．及びＳ．Ｌ．Ｂｅｒｇｅｒ（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：３９９；ｉｍｍｅｌ，Ａ．Ｒ．（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：５０７を参照されたい。）
【０３９９】
当業者は、「実質的に同一」という用語が、ポリペプチド又は核酸分子が、参照アミノ酸配列（例えば、本明細書に記載のアミノ酸配列のいずれか一つ）又は核酸配列（例えば、本明細書に記載の核酸配列のいずれか一つ）と少なくとも５０％同一であるポリペプチド又は核酸分子を包含し得ることを理解されたい。一実施形態においては、こうした配列は、アミノ酸レベル又は核酸で比較用配列に対して少なくとも６０％、８０％又は８５％、９０％、９５％、更には９９％同一である。
【０４００】
配列相同性は、一般に、配列解析ソフトウェア（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｅｎｔｅｒ、１７１０  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ａｖｅｎｕｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．５３７０５、ＢＬＡＳＴ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＧＡＰ又はＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）を用いて測定される。こうしたソフトウェアは、相同性の程度を種々の置換、欠失及び／又は他の修飾に対して割り当てることによって同一又は類似配列を整合する。保存的置換としては、一般に、以下の群内の置換が挙げられる：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、スレオニン；リジン、アルギニン；及びフェニルアラニン、チロシン。同一性の程度を決定する例示的な一手法においては、ＢＬＡＳＴプログラムを使用することができ、ｅ−３〜ｅ−１００の確率スコアは、密接に関連した配列を示す。
【０４０１】
当業者は、「類似体」という用語が、参照ポリペプチド又は核酸分子の機能を有する構造的に関連したポリペプチド又は核酸分子を包含し得ることを理解されたい。
【０４０２】
当業者は、「リガンド」という用語が、受容体に結合する分子を包含し得ることを理解されたい。特に、リガンドは別の細胞の受容体に結合し、細胞間の認識及び／又は相互作用を可能にする。
【０４０３】
当業者は、「構成的発現」という用語が、すべての生理的条件下の発現を包含し得ることを理解されたい。
【０４０４】
当業者は、「疾患」という用語が、細胞、組織又は器官の正常機能を損なう、又は妨害する任意の症状又は障害を包含し得ることを理解されたい。疾患の例としては、新形成又は細胞の病原体感染が挙げられる。
【０４０５】
当業者は、「有効量」という用語が、治療効果を有するのに十分な量を包含し得ることを理解されたい。一実施形態においては、「有効量」は、新形成の連続増殖、成長又は転移（例えば、浸潤又は移動）を抑止し、改善し、又は阻害するのに十分な量である。
【０４０６】
当業者は、「新形成」という用語が、細胞又は組織の病理学的増殖、及びそれに続く他の組織若しくは器官への移動又は他の組織若しくは器官の浸潤を特徴とする疾患を包含し得ることを理解されたい。新形成の成長は、一般に、制御されず、進行性であり、正常細胞の増殖を誘発しない、又は休止させる条件下で起こる。新形成は、膀胱、骨、脳、乳房、軟骨、グリア、食道、ファロピウス管、胆嚢、心臓、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、神経組織、卵巣、膵臓、前立腺、骨格筋、皮膚、脊髄、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、気管、尿生殖路、尿管、尿道、子宮及び膣からなる群から選択される器官、又はその組織若しくは細胞型を含めて、ただしそれらに限定されない種々の細胞型、組織又は器官に影響し得る。新形成としては、肉腫、癌腫又は形質細胞腫（形質細胞の悪性腫瘍）などの癌が挙げられる。
【０４０７】
当業者は、「病原体」という用語が、疾患を引き起こし得るウイルス、細菌、真菌、寄生生物又は原生動物を包含し得ることを理解されたい。
【０４０８】
当業者は、「腫瘍抗原」又は「腫瘍関連抗原」という用語が、正常又は非ＩＳ新生細胞と比較して、腫瘍細胞上で独自に又は差次的に発現される抗原（例えば、ポリペプチド）を包含し得ることを理解されたい。本明細書に開示される組成物及び方法に関連して、腫瘍抗原としては、抗原認識受容体（例えば、ＣＤ１９、ＭＵＣＩ）を介して免疫応答を活性化若しくは誘導することができる、又は受容体−リガンド結合（例えば、ＣＤ４７、ＰＤ−Ｌ１／Ｌ２、Ｂ７．１／２）を介して免疫応答を抑制することができる、腫瘍によって発現される任意のポリペプチドが挙げられる。
【０４０９】
当業者は、「ウイルス抗原」という用語が、免疫応答を誘導することができるウイルスによって発現されるポリペプチドを包含し得ることを理解されたい。
【０４１０】
「含む」（「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」）という用語は、米国特許法においてそれらに与えられる広範な意味を有することが意図され、「含む」（「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」）などを意味することができる。同様に、「からなる」及び「から本質的になる」という用語は、米国特許法においてそれらに与えられる意味を有する。本明細書に開示される組成物及び方法は、活性成分又は指定ステップを含む、活性成分又は指定ステップからなる、活性成分又は指定ステップから本質的になることが予見される。
【０４１１】
当業者は、「処置」という用語が、処置される個体又は細胞の疾患経過を変える試みにおける臨床的介入を包含し、予防のために、又は臨床病理の過程において、実施できることを理解されたい。処置の治療効果としては、疾患の発生又は再発の予防、症候の軽減、疾患の任意の直接的又は間接的な病理学的結果の軽減、転移の予防、疾患進行速度の低下、病態の回復又は緩和、及び寛解又は予後の改善が挙げられるが、それらに限定されない。疾患又は障害の進行を予防することによって、処置は、罹患した若しくは診断された対象、又は障害を有する疑いのある対象において障害による悪化を予防できるだけでなく、障害のリスクがある又は障害を有する疑いのある対象における障害の発生又は障害の兆候を予防することもできる。
【０４１２】
当業者は、「対象」という用語が、脊椎動物、一実施形態においては哺乳動物、一実施形態においてはヒトを包含し得ることを理解されたい。対象は、一実施形態においては、ウシ、ヒツジ、ウマ、ネコ、イヌなどの家畜、及びマウス、ラット、スナネズミ、ハムスターなどの実験動物も指し得る。
【０４１３】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、ＴＣＲが目的ペプチドに対するものであるＴＣＲ  Ｔ細胞である。一実施形態においては、ＴＣＲは、目的ペプチドに結合する。別の一実施形態においては、ＴＣＲは、目的ペプチドを認識する。別の一実施形態においては、ＴＣＲは、目的ペプチドのリガンドである。別の一実施形態においては、目的ペプチドは、ＴＣＲのリガンドである。これらの実施形態の各々は、本明細書に開示されるパートで検討される。
【０４１４】
一実施形態においては、本明細書に開示される免疫細胞は、Ｔ細胞ではない。別の一実施形態においては、本明細書に開示される免疫細胞は、ＮＫ細胞ではない。別の一実施形態においては、本明細書に開示される免疫細胞は、ＣＴＬではない。別の一実施形態においては、本明細書に開示される免疫細胞は、制御性Ｔ細胞ではない。別の一実施形態においては、免疫細胞は、ヒト胚性幹細胞ではない。別の一実施形態においては、免疫細胞は、リンパ球様細胞がそこから分化し得る多能性幹細胞ではない。
【０４１５】
使用方法
免疫療法の一手法は、患者自身の免疫細胞を操作して、それらの腫瘍を認識し、攻撃する遺伝子改変免疫細胞を作製することを含む。免疫細胞は、本明細書に記載のように、収集され、遺伝子改変されて、例えば、免疫細胞、例えばＴ細胞が、腫瘍又は癌細胞上の特定のタンパク質抗原を認識できるようにするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をそれらの細胞表面に生成する。次いで、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖集団を患者に投与する。一実施形態においては、投与された細胞は、患者の体内で増殖し、抗原をその表面に有する癌及び腫瘍細胞を認識し、死滅させる。別の一実施形態においては、投与された細胞は、患者の体内で増殖し、腫瘍関連抗原を認識し、死滅させ、癌及び腫瘍細胞の死をもたらす。
【０４１６】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、本明細書に開示される組成物を投与するステップを含む、癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する方法である。
【０４１７】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する方法であって、遺伝子改変免疫細胞と追加の薬剤を含む組成物とを投与するステップを含み、前記追加の薬剤が、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞由来の上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくは類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含み、前記方法が、前記遺伝子改変免疫細胞を投与されるが追加の薬剤を投与されない対象と比較して、前記対象における癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する、方法である。別の一実施形態においては、前記遺伝子改変免疫細胞は、遺伝子改変Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、エフェクターＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、ＮＫ細胞又は樹状細胞を含む。
【０４１８】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する方法であって、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）と追加の薬剤を含む組成物とを投与するステップを含み、前記追加の薬剤が、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞由来の上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくは類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含み、前記方法が、前記遺伝子改変免疫細胞を投与されるが追加の薬剤を投与されない対象と比較して、前記対象における癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する、方法である。
【０４１９】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する方法であって、遺伝子改変Ｔ細胞受容体細胞（ＴＣＲ  Ｔ細胞）と追加の薬剤を含む組成物とを投与するステップを含み、前記追加の薬剤が、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞由来の上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくは類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含み、前記方法が、前記遺伝子改変免疫細胞を投与されるが追加の薬剤を投与されない対象と比較して、前記対象における癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する、方法である。
【０４２０】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス上清又はそれらの組成物の投与は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞を投与する前記ステップの癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する有効性を低下させない。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞由来の上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくは類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む追加の薬剤、又はその組成物の投与は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞を投与する前記ステップの癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する有効性を低下させない。
【０４２１】
別の一実施形態においては、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス上清又はそれらの組成物の投与は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞を投与する前記ステップの癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する有効性を高める。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞由来の上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくは類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む追加の薬剤、又はその組成物の投与は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞を投与する前記ステップの癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する有効性を高める。
【０４２２】
一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞癌治療の有効性を高める方法は、前記遺伝子改変免疫細胞、及びアポトーシス細胞、アポトーシス細胞由来の上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくは類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む追加の薬剤、又はそれらの組成物を投与するステップを含み、有効性は、前記追加の薬剤を投与されない対象と比較して高くなる。別の一実施形態においては、前記遺伝子改変免疫細胞は、Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞はナイーブＴ細胞である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞はナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞はナイーブＴ細胞である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞はナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞は、樹状細胞である。更に別の一実施形態においては、遺伝子改変Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ細胞）である。別の一実施形態においては、遺伝子改変Ｔ細胞は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。別の一実施形態においては、遺伝子改変Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、遺伝子改変Ｔ細胞は、遺伝子改変Ｔ細胞受容体細胞（ＴＣＲ  Ｔ細胞）である。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療の有効性を高める方法は、前記遺伝子改変免疫細胞、及びアポトーシス細胞、アポトーシス細胞由来の上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくは類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む追加の薬剤、又はそれらの組成物を投与するステップを含み、有効性は、前記追加の薬剤を投与されない対象と比較して高くなる。
【０４２３】
別の一実施形態においては、本明細書の方法は、免疫癌治療を受けるが追加の薬剤を投与されない対象における前記炎症誘発性サイトカインのレベルと比較して、少なくとも１種の炎症誘発性サイトカインの産生レベルを低下させる。別の一実施形態においては、本明細書の方法は、遺伝子改変免疫細胞癌治療を受けるが追加の薬剤を投与されない対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる。
【０４２４】
別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、ＩＬ−６を減少させる。
【０４２５】
別の一実施形態においては、本明細書の方法は、免疫癌治療を受けるが追加の薬剤を投与されない対象における前記サイトカインのレベルと比較して、少なくとも１種のサイトカインの産生を増加させる。一部の実施形態においては、追加の薬剤は、アポトーシス細胞である。別の実施形態においては、追加の薬剤は、アポトーシス細胞上清である。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、ＩＬ−２を増加させる。
【０４２６】
当業者は、サイトカインに関連して本明細書で使用される「産生」という用語が、サイトカインの発現、及び細胞からのサイトカインの分泌を包含し得ることを理解されたい。一実施形態においては、サイトカイン産生の増加は、細胞からのサイトカインの分泌の増加をもたらす。別の一実施形態においては、サイトカイン産生の減少は、細胞からのサイトカインの分泌の減少をもたらす。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、少なくとも１種のサイトカインの分泌を減少させる。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、ＩＬ−６の分泌を減少させる。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、少なくとも１種のサイトカインの分泌を増加させる。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、ＩＬ−２の分泌を増加させる。
【０４２７】
別の一実施形態においては、少なくとも１種のサイトカインを分泌する細胞は、腫瘍細胞である。別の一実施形態においては、少なくとも１種のサイトカインを分泌する細胞は、Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、少なくとも１種のサイトカインを分泌する細胞は、免疫細胞である。別の一実施形態においては、少なくとも１種のサイトカインを分泌する細胞は、マクロファージである。別の一実施形態においては、少なくとも１種のサイトカインを分泌する細胞は、Ｂ細胞リンパ球である。別の一実施形態においては、少なくとも１種のサイトカインを分泌する細胞は、肥満細胞である。別の一実施形態においては、少なくとも１種のサイトカインを分泌する細胞は、内皮細胞である。別の一実施形態においては、少なくとも１種のサイトカインを分泌する細胞は、線維芽細胞である。別の一実施形態においては、少なくとも１種のサイトカインを分泌する細胞は、間質細胞である。当業者は、サイトカインレベルがサイトカイン分泌細胞において細胞の周囲の環境に応じて増減し得ることを認識されたい。
【０４２８】
更に別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法に使用される追加の薬剤は、少なくとも１種のサイトカインの分泌を増加させる。更に別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法に使用される追加の薬剤は、少なくとも１種のサイトカインの分泌を維持する。更に別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法に使用される追加の薬剤は、少なくとも１種のサイトカインの分泌を減少させない。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法に使用される追加の薬剤は、ＩＬ−２の分泌を増加させる。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法に使用される追加の薬剤は、ＩＬ−２Ｒの分泌を増加させる。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法に使用される追加の薬剤は、ＩＬ−２の分泌レベルを維持する。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法に使用される追加の薬剤は、ＩＬ−２Ｒの分泌レベルを維持する。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法に使用される追加の薬剤は、ＩＬ−２Ｒの分泌レベルを減少させない。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法に使用される追加の薬剤は、ＩＬ−２の分泌レベルを維持する、又は増加させる。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法に使用される追加の薬剤は、ＩＬ−２Ｒの分泌レベルを維持する、又は増加させる。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法に使用される追加の薬剤は、ＩＬ−２Ｒの分泌レベルを減少させない。
【０４２９】
更なる一実施形態においては、本明細書に開示される方法に使用される追加の薬剤は、ＩＬ−６の分泌を減少させる。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法に使用される追加の薬剤は、ＩＬ−２の分泌レベルを維持し、増加させ、又は減少させず、ＩＬ−６の分泌を減少させる。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法に使用される追加の薬剤は、ＩＬ−２Ｒの分泌レベルを維持し、増加させ、又は減少させず、ＩＬ−６の分泌を減少させる。
【０４３０】
一実施形態においては、本明細書に開示されるＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療の有効性を高める方法は、前記対象におけるＩＬ−６のレベルを減少させるステップを含み、前記方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞、及びアポトーシス細胞、アポトーシス細胞由来の上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくは類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む追加の薬剤、又はそれらの組成物を投与するステップを含み、有効性は、前記追加の薬剤を投与されない対象と比較して高くなる。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療の有効性を高める方法は、前記対象におけるＩＬ−２のレベルを増加させるステップを含み、前記方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞、及びアポトーシス細胞、アポトーシス細胞由来の上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくは類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む追加の薬剤、又はそれらの組成物を投与するステップを含み、有効性は、前記追加の薬剤を投与されない対象と比較して高くなる。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療の有効性を高める方法は、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖を増加させるステップを含み、前記方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞、及びアポトーシス細胞、アポトーシス細胞由来の上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくは類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む追加の薬剤、又はそれらの組成物を投与するステップを含み、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞の有効性及び増殖は、前記追加の薬剤を投与されない対象と比較して増加する。
【０４３１】
一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療の有効性を高める方法は、対象におけるサイトカイン産生を減少させ、又は阻害し、前記方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞及びＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくは類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せ、又はそれらの組成物を含む組成物を投与するステップを含む。別の一実施形態においては、癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する方法も、対象におけるサイトカイン産生を減少させ、又は阻害し、前記方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞及びＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくは類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せ、又はそれらの組成物を含む組成物を投与するステップを含む。
【０４３２】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを処置する方法である。
【０４３３】
別の一実施形態においては、癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する方法は、対象におけるサイトカイン産生を減少させ、又は阻害し、前記方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞及びＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくは類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せ、又はそれらの組成物を含む組成物を投与するステップを含む。
【０４３４】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを予防する方法である。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを軽減する方法である。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群又はサイトカインストームを改善する方法である。別の一実施形態においては、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス上清又はそれらの組成物の投与は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の有効性を低下させない。
【０４３５】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）癌治療を受ける対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率を抑制する、又は減少させる方法であって、該方法は、アポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む。別の一実施形態においては、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率抑制又は減少は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞癌治療を受けアポトーシス細胞又はアポトーシス上清を投与される対象におけるサイトカインレベルを測定することによって求められる。別の一実施形態においては、サイトカインの測定レベルは、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けない対象におけるサイトカインレベルと比較される。別の一実施形態においては、測定サイトカインレベルは、アポトーシス細胞もアポトーシス上清も投与されない対象におけるサイトカインレベルと比較される。更に別の一実施形態においては、測定サイトカインレベルは、対照対象と比較される。
【０４３６】
別の一実施形態においては、対象における炎症誘発性サイトカインのレベルは、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清もそれらの組成物も投与されない対象と比較して低下する。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記アポトーシス細胞も前記アポトーシス細胞上清もそれらの組成物も投与されない対象と比較して、少なくとも１種の炎症誘発性サイトカインの産生レベルを減少させ、又は抑制する。
【０４３７】
別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、更に追加の薬剤の投与を含むことができる。あるいは、本明細書に開示される方法は、追加の薬剤の投与、並びにアポトーシス細胞及びアポトーシス細胞上清の非投与を含むことができる。更なる一実施形態においては、追加の薬剤は、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を維持する、強化する、若しくは改善する、又はそれらの任意の組合せの化合物又は組成物とすることができる。更なる一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を維持する、強化する、又は改善する追加の薬剤としては、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその機能的断片、若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節薬、又はそれらの任意の組合せが挙げられる。別の一実施形態においては、追加の薬剤としては、アポトーシス細胞又はアポトーシス上清が挙げられる。別の一実施形態においては、本明細書に記載の追加の薬剤の投与は、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療の前、治療と同時、治療の後である。
【０４３８】
一実施形態においては、一実施形態においてはトシリズマブであるＩＬ−６受容体拮抗薬が、本明細書に開示される組成物及び方法に使用される。
【０４３９】
一実施形態においては、養子移入Ｔ細胞は、リンパ球減少宿主においてより効率的に移植され、増殖する。したがって、一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞又は別の改変免疫細胞の移入の前に、対象をリンパ球除去に供する。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞を受けた対象に、Ｔ細胞支持サイトカインを投与する。
【０４４０】
一実施形態においては、Ｔ細胞は、エフェクターＴ細胞である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞は、ナイーブＴ細胞である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞は、中心メモリー（ＴＣＭ）Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞は、Ｔｈ１７細胞である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞は、Ｔステムメモリー細胞である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞は、制御性Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞は、高い複製能力を有する。別の一実施形態においては、Ｔ細胞増殖が患者において発生する。別の一実施形態においては、少数の細胞を患者に導入することができる。別の一実施形態においては、Ｔ細胞増殖がインビトロで発生する。別の一実施形態においては、多数の細胞を患者に導入することができ、細胞及び／又は上清を患者に複数の機会に導入することができ、又はそれらの組合せとすることができる。
【０４４１】
一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞の利点は、それらが細胞表面分子に特異的であるので、ＭＨＣ拘束性ＴＣＲ認識の制約を受けず、抗原提示又はヒト白血球抗原発現の欠陥を介した腫瘍エスケープを予防することである。
【０４４２】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における腫瘍量を減少させる方法であり、前記方法は、前記対象に本明細書に記載の組成物のいずれかを投与するステップを含む。
【０４４３】
一実施形態においては、腫瘍量の減少は、対象における腫瘍細胞数の減少を含む。別の一実施形態においては、腫瘍量の減少は、対象における腫瘍サイズの減少を含む。別の一実施形態においては、腫瘍量の減少は、対象における腫瘍の消滅を含む。
【０４４４】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における腫瘍細胞死を誘導する方法であり、前記方法は、前記対象に本明細書に記載の組成物のいずれかを投与するステップを含む。別の一実施形態においては、対象における腫瘍細胞死を誘導する本明細書に開示される方法は、操作されたキメラ抗原受容体を含むＮＫ細胞、Ｔ細胞などの免疫細胞を少なくとも１種の追加の薬剤と一緒に投与して、対象における毒性サイトカイン放出又は「サイトカイン放出症候群」（ＣＲＳ）又は「重症サイトカイン放出症候群」（ｓＣＲＳ）又は「サイトカインストーム」を減少させるステップを含む。
【０４４５】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、新形成を有する対象の生存を高める、又は延長する方法であって、前記対象に本明細書に記載の組成物のいずれかを投与するステップを含む方法である。別の一実施形態においては、対象の生存を高める、又は延長する方法は、操作されたキメラ抗原受容体を含むＮＫ細胞、Ｔ細胞などの免疫細胞を少なくとも１種の追加の薬剤と一緒に投与して、対象における毒性サイトカイン放出又は「サイトカイン放出症候群」（ＣＲＳ）又は「重症サイトカイン放出症候群」（ｓＣＲＳ）又は「サイトカインストーム」を減少させるステップを含む。
【０４４６】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、新形成を有する対象の生存を高める、又は延長する方法であって、前記対象に本明細書に記載の組成物のいずれかを投与するステップを含む方法である。
【０４４７】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における新形成を予防する方法であり、前記方法は、前記対象に本明細書に記載の組成物のいずれかを投与するステップを含む。
【０４４８】
一実施形態においては、新形成は、血液癌、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病、非ホジキンリンパ腫、卵巣癌又はそれらの組合せからなる群から選択される。
【０４４９】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、それを必要とする対象における血液癌を処置する方法であって、前記対象に本明細書に記載の組成物のいずれかを投与するステップを含む方法である。一実施形態においては、血液癌は、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病及び非ホジキンリンパ腫からなる群から選択される。
【０４５０】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における癌又は腫瘍を処置する方法であり、前記方法は、前記対象に本明細書に記載の組成物のいずれかを投与するステップを含む。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における癌又は腫瘍を予防する方法であり、前記方法は、前記対象に本明細書に記載の組成物のいずれかを投与するステップを含む。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における癌又は腫瘍を阻害する方法であり、前記方法は、前記対象に本明細書に記載の組成物のいずれかを投与するステップを含む。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における癌又は腫瘍を減少させる方法であり、前記方法は、前記対象に本明細書に記載の組成物のいずれかを投与するステップを含む。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における癌又は腫瘍を改善する方法であり、前記方法は、前記対象に本明細書に記載の組成物のいずれかを投与するステップを含む。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、対象における癌又は腫瘍を軽減する方法であり、前記方法は、前記対象に本明細書に記載の組成物のいずれかを投与するステップを含む。
【０４５１】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、免疫療法中に遺伝子改変免疫細胞の増殖速度を維持する、又は増加させる方法であり、該方法は、アポトーシス細胞又はアポトーシス上清を含む組成物を免疫療法中に投与するステップを含む。別の一実施形態においては、前記遺伝子改変免疫細胞は、Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ細胞）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞、又は遺伝子改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）細胞を含む。別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、免疫療法中にＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖速度を維持する、又は増加させる方法であり、該方法は、アポトーシス細胞又はアポトーシス上清を含む組成物を免疫療法中に投与するステップを含む。
【０４５２】
別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞の増殖速度を維持する、又は増加させる方法は、免疫療法の有効性を低下させず、阻害しない。例えば、別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖速度を維持する、又は増加させる方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療の有効性を低下させず、阻害しない。別の一実施形態においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖速度を維持する、又は増加させる方法は、対象におけるサイトカイン産生を減少させる、又は阻害する。
【０４５３】
一実施形態においては、本明細書に開示される、サイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームを経験した対象、又はサイトカイン放出症候群若しくはサイトカインストームにかかりやすい対象におけるサイトカイン産生を減少させる、又は阻害する方法は、サイトカイン産生を減少させる、又は阻害する。別の一実施形態においては、該方法は、炎症誘発性サイトカイン産生を減少させる、又は阻害する。更なる一実施形態においては、該方法は、少なくとも１種の炎症誘発性サイトカインを減少させる、又は阻害する。対象がＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けている別の一実施形態においては、該方法は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の有効性を低下させない。
【０４５４】
本明細書に記載の方法は、既存の症状の緩和であれ、再発の予防であれ、所望の効果を得るのに有効な量の本明細書に開示されるＴ細胞、ＮＫ細胞又はＣＴＬ細胞を投与するステップを含む。処置のため、投与される量は、所望の効果を生じるのに有効な量である。有効量は、１回又は一連の投与で供給することができる。有効量は、大量瞬時投与で、又は連続潅流によって、供給することができる。
【０４５５】
当業者は、「有効量」（又は「治療有効量」）が、処置によって有益な又は所望の臨床結果を生じるのに十分な量を包含し得ることを認識されたい。有効量を対象に１回以上投与することができる。処置に関して、有効量は、疾患の進行を緩和する、改善する、安定化する、反転する、若しくは遅らせるのに、又は疾患の病理学的結果を軽減するのに十分な量である。有効量は、一般に、医師によって症例ごとに決定され、当業者の技能の範囲内である。有効量が得られる適切な投与量を決定するときには、幾つかの要因が一般に考慮される。これらの要因としては、対象の年齢、性別及び体重、処置される症状、症状の重症度、並びに投与される抗原結合断片の形態及び有効濃度が挙げられる。
【０４５６】
一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、単一の組成物に含まれる、遺伝子改変細胞及び追加の薬剤又はそれらの組合せを含む組成物を投与するステップを含む。別の一実施形態においては、方法は、単一の組成物に含まれる、ＣＡＲ  Ｔ細胞及び追加の薬剤又はそれらの組合せを含む組成物を投与するステップを含む。別の一実施形態においては、方法は、単一の組成物に含まれる、ＴＣＲ  Ｔ細胞及び追加の薬剤又はそれらの組合せを含む組成物を投与するステップを含む。
【０４５７】
一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、少なくとも２つの組成物に含まれる、遺伝子改変細胞及び追加の薬剤又はそれらの組合せを含む組成物を投与するステップを含む。別の一実施形態においては、方法は、少なくとも２つの組成物に含まれる、ＣＡＲ  Ｔ細胞及び追加の薬剤又はそれらの組合せを含む組成物を投与するステップを含む。別の一実施形態においては、方法は、少なくとも２つの組成物に含まれる、ＴＣＲ  Ｔ細胞及び追加の薬剤又はそれらの組合せを含む組成物を投与するステップを含む。
【０４５８】
抗原特異的Ｔ細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ細胞を用いた養子免疫治療の場合、１０６〜１０１０（例えば、１０９）個の細胞用量を一般に注入する。遺伝子改変細胞を宿主に投与し、続いて分化させると、特定の抗原に対して特異的であるＴ細胞が誘導される。Ｔ細胞の「誘導」は、欠失、アネルギーなどによる抗原特異的Ｔ細胞の不活性化を含み得る。不活性化は、自己免疫異常などにおける寛容性を確立又は再確立するのに特に有用である。改変細胞は、静脈内、皮下、節内、腫瘍内、髄腔内、胸膜内、腹腔内、及び胸腺に直接を含めて、ただしそれらに限定されない、当該技術分野で既知である任意の方法によって投与することができる。一実施形態においては、Ｔ細胞は、腹腔内に投与されない。一実施形態においては、Ｔ細胞は、腫瘍内に投与される。
【０４５９】
本明細書に開示される遺伝子改変免疫応答細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｎ細胞、ＣＴＬ細胞又はそれらの前駆体）を含む組成物は、新形成、病原体感染症又は感染性疾患を処置するために対象に全身的又は直接的に供給することができる。一実施形態においては、本明細書に開示される細胞は、目的器官（例えば、新形成に冒された器官）に直接注射される。あるいは、遺伝子改変免疫応答細胞を含む組成物は、例えば循環系（例えば、腫瘍血管系）への投与によって、目的器官に間接的に供給される。増殖剤及び分化剤を細胞の投与前、投与中又は投与後に供給して、Ｔ細胞、ＮＫ細胞又はＣＴＬ細胞の産生をインビトロ又はインビボで増加させることができる。
【０４６０】
本明細書に開示される方法において上述したように、追加の薬剤を含む組成物は、遺伝子改変免疫細胞の投与前に、投与と同時に、又は投与後に供給することができる。一実施形態においては、本明細書に開示される方法においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ細胞は、本明細書に開示される追加の薬剤の前に投与される。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ細胞は、本明細書に開示される追加の薬剤と同時に投与される。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法においては、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ  Ｔ細胞は、追加の薬剤の投与の後に投与される。
【０４６１】
一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、本明細書に開示されるアポトーシス細胞を含む組成物を投与する。別の一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、本明細書に開示されるアポトーシス細胞上清を含む組成物を投与する。
【０４６２】
改変細胞は、任意の生理的に許容されるビヒクル中で、通常は血管内に、投与することができるが、骨、又は細胞が再生及び分化に適切な部位を見つけることができる別の好都合な部位（例えば、胸腺）に導入することもできる。通常、少なくとも１×１０５個の細胞が投与され、最終的に１×１０１０個以上に達する。本明細書に開示される遺伝子改変免疫応答細胞は、精製細胞集団を含むことができる。当業者は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）などの様々な周知の方法を使用して、集団における遺伝子改変免疫応答細胞の割合を容易に測定することができる。一部の実施形態においては、遺伝子改変免疫応答細胞を含む集団における純度の範囲は、約５０〜約５５％、約５５〜約６０％、及び約６５〜約７０％である。別の実施形態においては、純度は、約７０〜約７５％、約７５〜約８０％、約８０〜約８５％である。更なる実施形態においては、純度は、約８５〜約９０％、約９０〜約９５％、及び約９５〜約１００％である。投与量は、当業者によって容易に調節することができる（例えば、純度の低下は、投与量の増加を必要とする可能性がある）。細胞は、注射、カテーテルなどによって導入することができる。所望であれば、インターロイキン、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＩＬ７、ＩＬ１２、ＩＬＩＳ、ＩＬ２１、並びに別のインターロイキン、Ｇ−、Ｍ−及びＧＭ−ＣＳＦなどのコロニー刺激因子、インターフェロン、例えばガンマ−インターフェロン、及びエリスロポイエチンを含めて、ただしそれらに限定されない因子も含めることができる。
【０４６３】
組成物としては、遺伝子改変免疫応答細胞又はそれらの前駆体及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が挙げられる。投与は、自己又は異種とすることができる。例えば、免疫応答細胞又は前駆体は、一対象から得られ、同じ対象又は異なる適合対象に投与することができる。本明細書に開示される末梢血由来免疫応答細胞又はそれらの子孫（例えば、インビボ、エクスビボ又はインビトロ由来）は、カテーテル投与を含めた局所注射、全身注射、局所注射、静脈内注射又は非経口投与によって投与することができる。本明細書に開示される治療用組成物（例えば、遺伝子改変免疫応答細胞を含有する医薬組成物）を投与するときには、それは、一般に、単位投与量注射剤型（溶液、懸濁液、乳濁液）で処方される。
【０４６４】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、ＣＡＲ  Ｔ細胞又は本明細書に開示される別の免疫細胞及びアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を含む組成物を製造する方法であり、該方法は、目的抗原に結合するＣＡＲをコードする核酸配列をＴ細胞又は免疫細胞に導入するステップを含む。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞又は本明細書に開示される別の免疫細胞を含む組成物は、アポトーシス細胞又はアポトーシス上清を含む組成物から分離される。
【０４６５】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、悪性腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する方法であって、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）及びアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を含む組成物を投与するステップを含む方法である。
【０４６６】
当業者は、遺伝子改変免疫細胞、例えばＣＡＲ改変Ｔ細胞によって誘発される抗腫瘍免疫応答が、能動又は受動免疫応答であり得ることを理解されたい。さらに、ＣＡＲ媒介性免疫応答は、ＣＡＲ改変Ｔ細胞がＣＡＲ中の抗原結合部分に特異的な免疫応答を誘導する養子免疫治療手法の一部であり得る。
【０４６７】
当業者は、免疫療法が、癌細胞を標的にして破壊する免疫エフェクター細胞及び分子の使用を包含し得ることを理解されたい。免疫エフェクターは、例えば、腫瘍細胞表面の何らかのマーカーに特異的な抗体とすることができる。抗体単体は、治療のエフェクターとして働くことができ、他の細胞を動員して、実際に細胞死滅させることができる。抗体は、薬物又は毒素（化学療法、放射性核種、リシンＡ鎖、コレラ毒素、百日咳毒素など）と複合化することもでき、単にターゲティング剤として働くこともできる。あるいは、エフェクターは、腫瘍細胞標的と直接的又は間接的に相互作用する表面分子を有するリンパ球とすることができる。種々のエフェクター細胞としては、細胞傷害性Ｔ細胞及びＮＫ細胞が挙げられる。
【０４６８】
悪性腫瘍
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する方法であって、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）とアポトーシス細胞若しくはアポトーシス細胞上清又はそれらの組成物を含む組成物とを投与するステップを含む方法である。本明細書に開示されるように、これらの方法は、更に、ＣＲＳ又はサイトカインストームの発生率を抑制する又は減少させる試みにおいて追加の薬剤を投与するステップを含むことができる。
【０４６９】
一実施形態においては、癌は、Ｂ細胞悪性腫瘍である。一実施形態においては、Ｂ細胞悪性腫瘍は白血病である。別の一実施形態においては、Ｂ細胞悪性腫瘍は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）である。別の一実施形態においては、Ｂ細胞悪性腫瘍は、慢性リンパ性白血病である。
【０４７０】
一実施形態においては、癌は白血病である。一実施形態においては、癌はリンパ腫である。一実施形態においては、リンパ腫は、大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
【０４７１】
一実施形態においては、腫瘍は、固形腫瘍である。別の一実施形態においては、固形腫瘍は、嚢胞も液体領域もない異常な組織塊である。別の一実施形態においては、固形腫瘍は、血液、骨髄又はリンパ細胞以外の体組織細胞の異常増殖によって形成された新生物（新しい細胞増殖）又は病変部（解剖構造の損傷、又は生理機能の撹乱）である。別の一実施形態においては、固形腫瘍は、肝臓、結腸、乳房、肺などの異なる組織タイプから生じ得る、その細胞起源の器官において最初に増殖する、異常細胞塊からなる。しかし、こうした癌は、疾患の進行期における転移性腫瘍増殖によって、別の器官に広がる可能性がある。
【０４７２】
一実施形態においては、腫瘍は、固形腫瘍である。別の一実施形態においては、固形腫瘍の例は、肉腫、癌腫及びリンパ腫である。一実施形態においては、固形腫瘍は、腹腔内腫瘍である。
【０４７３】
別の一実施形態においては、固形腫瘍は、副腎皮質腫瘍（腺腫及び癌腫）、癌腫、結腸直腸癌、類腱腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、内分泌腫瘍、ユーイング肉腫、胚細胞腫瘍、肝芽腫  肝細胞癌、黒色腫、神経芽細胞腫、骨肉腫、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、横紋筋肉腫以外の軟部組織肉腫、及びウィルムス腫瘍を含む。一実施形態においては、固形腫瘍は、乳腺腫である。別の一実施形態においては、固形腫瘍は、前立腺癌である。別の一実施形態においては、固形腫瘍は、結腸癌である。一実施形態においては、腫瘍は、脳腫瘍である。別の一実施形態においては、腫瘍は、膵腫瘍である。別の一実施形態においては、腫瘍は、直腸結腸腫瘍である。
【０４７４】
別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法は、肉腫及び癌腫（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌（ｎｉｌｅ  ｄｕｃｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、子宮癌、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫（ｏｌｉｇｏｄｅｎｒｏｇｌｉｏｍａ）、シュワン腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、及び網膜芽細胞腫）に対して治療効果及び／又は予防効果を有する。本明細書に開示される組成物及び方法を使用して、当該技術分野で既知である任意の固形腫瘍を処置する、予防する、阻害する、改善する、その発生率を減少させる、又は軽減することができる。
【０４７５】
別の一実施形態においては、腫瘍は、血液腫瘍である。一実施形態においては、血液腫瘍は、血液、骨髄及びリンパ節に影響する癌タイプである。血液腫瘍は、２つの初代血液細胞系列、すなわち、骨髄細胞系及びリンパ細胞系に由来し得る。骨髄細胞系は、通常、顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージ及びマスＴ細胞を生成し、リンパ細胞系は、Ｂ、Ｔ、ＮＫ及び形質細胞を生成する。リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫）、リンパ性白血病及び骨髄腫は、リンパ系に由来し、急性及び慢性骨髄性白血病（ＡＭＬ、ＣＭＬ）、骨髄異形成症候群及び骨髄増殖性疾患は、骨髄系が起源である。
【０４７６】
別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法は、白血病（例えば、急性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、急性赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病）、真性赤血球増多症、リンパ腫（ホジキン病、非ホジキン病）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病に対して治療効果及び／又は予防効果を有する。本明細書に開示される組成物及び方法を使用して、当該技術分野で既知である任意の血液腫瘍を処置する、予防する、阻害する、改善する、その発生率を減少させる、又は軽減することができる。
【０４７７】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、本明細書に開示されるポリペプチド又はペプチドドメインのいずれか一つの活性な断片である。当業者は、「断片」という用語が、少なくとも５、１０、１３又は１５個のアミノ酸を包含し得ることを理解されたい。別の実施形態においては、断片は、少なくとも２０個の隣接アミノ酸である。本明細書に開示される断片は、当業者に既知の方法によって生成することができ、又は通常のタンパク質プロセシング（例えば、生物活性に不要なアミノ酸の新生ポリペプチドからの除去、又は選択的ｍＲＮＡスプライシング若しくは選択的タンパク質プロセシング事象によるアミノ酸の除去）から得ることができる。
【０４７８】
「抗体」及び「免疫グロブリン」という用語は、最も広い意味で区別なく使用され、特に抗体の結合活性を保持するポリクローナル抗体、モノクローナル抗体又はそれらの任意の断片を指す。ある実施形態においては、本明細書に開示される方法は、キメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体の使用を含む。
【０４７９】
当業者は、「ポリクローナル抗体（単数又は複数）」という用語が、同じ抗原の異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体の集団を包含し得ることを理解されたい。
【０４８０】
当業者は、「モノクローナル抗体（単数又は複数）」という用語が、実質的に同種の抗体の集団を包含し得ることを理解されたい。すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量存在し得る場合によっては天然の変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原部位に対するものである。
【０４８１】
本明細書に開示されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）によって最初に記述されたハイブリドーマ法を用いて製造することができ、又は組換えＤＮＡ法によって製造することができる（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号）。
【０４８２】
ハイブリドーマ法においては、マウス、又はハムスターなどの別の適切な宿主動物は、免疫されて、免疫処置用タンパク質に特異的に結合する抗体を産生する、又は産生可能である、リンパ球を誘発する。目的タンパク質に対する抗体は、一般に、動物において所望の目的タンパク質及びアジュバントの皮下（ｓｃ）又は腹腔内（ｉｐ）注射によって産生される。一実施形態においては、動物は、担体タンパク質としてキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）に結合した目的タンパク質で免疫される。
【０４８３】
動物の免疫処置に使用される目的タンパク質は、当該技術分野で周知である方法を用いて調製される。例えば、目的タンパク質は、組換え法又はペプチド合成法によって製造することができる。
【０４８４】
あるいは、リンパ球は、インビトロで免疫し、次いでポリエチレングリコールなどの適切な融合剤を用いて骨髄腫細胞と融合して、ハイブリドーマ細胞を形成することができる（Ｇｏｄｉｎｇ、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ」、ｐｐ．５９〜１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８６）。
【０４８５】
モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎら、Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１０７：２２０（１９８０）のスキャッチャード分析によって決定することができる。
【０４８６】
本明細書に開示される抗体は、コンビナトリアルライブラリを用いて所望の活性を有する合成抗体クローンをスクリーニングすることによって、製造することができる。原則的には、合成抗体クローンは、当該技術分野で周知である方法を用いてファージコートタンパク質に融合される抗体可変領域（Ｆｖ）の種々の断片を提示するファージを含むファージライブラリをスクリーニングすることによって選択される。
【０４８７】
当業者は、「抗体の結合活性を保持するそれらの任意の断片」という用語が、完全抗体の標的抗原に結合することができる、その抗原結合又は可変領域を含み得る、抗体の一部を包含し得ることを理解されたい。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片が挙げられる。
【０４８８】
これらの抗体断片は、組換え技術によって、又は酵素消化などの従来手段によって、生成することができる。６種の抗体のパパイン消化は、各々が単一の結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片、及び残留「Ｆｃ」断片を生成する。ペプシン処理は、２個の抗原結合部位を有し、依然として抗原を架橋する能力がある、Ｆ（ａｂ’）２断片を生成する。「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び結合部位を含む最小抗体断片である。
【０４８９】
本明細書に開示されるポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体は、当該技術分野で周知である方法を用いて調製される。
【０４９０】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、ＣＡＲがＴ細胞に対して内在性であるＣＡＲ  Ｔ細胞又は関連組成物である。一実施形態においては、「内在性」は、細胞又は組織中で通常発現される核酸分子（例えば、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子）又はポリペプチドを含む。
【０４９１】
別の一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、ＣＡＲがＴ細胞に対して外来性であるＣＡＲ  Ｔ細胞又は関連組成物である。一実施形態においては、「外来性」は、細胞中に内在しない、又は人工的に過剰発現されたときに得られる機能的効果を得るのに十分なレベルで存在しない、核酸分子又はポリペプチドを含む。当業者は、「外来性」という用語が、したがって、異質な、異種の、過剰発現される核酸分子及びポリペプチドなどの細胞中で発現される任意の組換え核酸分子又はポリペプチドを包含することを理解されたい。
【０４９２】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、免疫細胞であり、一実施形態においては、Ｔ細胞が対象に対して自己のものであるＣＡＲ  Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、対象に対して異種である。一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は同種である。一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、汎用同種ＣＡＲ  Ｔ細胞である。別の一実施形態においては、Ｔ細胞は、自己、同種、又は操作された前駆体若しくは幹細胞からインビトロで誘導されたものとすることができる。
【０４９３】
別の一実施形態においては、本明細書に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞及びアポトーシス細胞は、どちらも同じ供給源に由来する。更なる一実施形態においては、本明細書に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞及びアポトーシス細胞は、どちらも対象に由来する（図２Ｂ）。別の一実施形態においては、本明細書に記載のＣＡＲ  Ｔ細胞及びアポトーシス細胞は、異なる供給源に由来する。更に別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は自己であり、本明細書に記載のアポトーシス細胞は同種である（図３）。当業者は、同様に、アポトーシス細胞上清が、一実施形態においては自己細胞であり得るＣＡＲ  Ｔ細胞と同じ供給源に由来する細胞から製造することができ、又はアポトーシス細胞上清が、ＣＡＲ  Ｔ細胞の供給源とは異なる供給源に由来する細胞から製造することができることを理解されたい。さらに、アポトーシス細胞上清は、異なる供給源から得ることができる。一部の実施形態においては、アポトーシス上清は、アポトーシスを起こす細胞から得られる。一部の実施形態においては、アポトーシス上清は、組合せ細胞培養から得られ、アポトーシス細胞がマクロファージと共培養され、上清が収集される。
【０４９４】
一部の実施形態においては、ドナーは、ＨＬＡ適合ドナーを含む。一部の実施形態においては、ドナーは、不適合ＨＬＡドナーである。
【０４９５】
当業者は、「異種」という用語が、異なる生物に由来する組織、細胞、核酸分子又はポリペプチドを包含し得ることを理解されたい。一実施形態においては、異種タンパク質は、レシピエントとは異なるＴ細胞型又は異なる種から最初にクローン化された、又は由来する、タンパク質であり、細胞又は細胞から得られる試料中には通常存在しないタンパク質である。
【０４９６】
当業者は、「自己」という用語が、ドナーとレシピエントが同じ人である組織、細胞、核酸分子又はポリペプチドを包含し得ることを理解されたい。
【０４９７】
当業者は、「同種」という用語が、同じ種の別々の個体に由来する組織、細胞、核酸分子又はポリペプチドを包含し得ることを理解されたい。一実施形態においては、同種ドナー細胞は、レシピエントとは遺伝的に異なる。
【０４９８】
別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法は、本明細書に開示されるアポトーシス細胞又はアポトーシス上清とイピリムマブなどの１種以上のＣＴＬＡ−４遮断薬との併用療法を利用する。一実施形態においては、ＣＴＬＡ−４は、自己寛容を維持するのに役立つＴ細胞活性化の強力な阻害剤である。一実施形態においては、別の一実施形態においては抗体である抗ＣＴＬＡ−４遮断薬の投与は、Ｔ細胞活性化の正味の効果をもたらす。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法は、アポトーシス細胞、ＣＡＲ  Ｔ細胞及び１種以上のＣＴＬＡ−４遮断薬を含む併用療法を利用する。
【０４９９】
ある場合には、本明細書に開示される方法のポリペプチド、及び該方法に使用されるポリペプチドは、無修飾アミノ酸配列に比べて少なくとも１個の保存的アミノ酸置換を含む。別の場合には、ポリペプチドは、非保存的アミノ酸置換を含む。こうした場合、こうした修飾を有するポリペプチドは、こうしたアミノ酸置換のないポリペプチドに比べて安定性が高く、又は半減期が長い。
【０５００】
一実施形態においては、本明細書に開示される方法は、本明細書に記載の様々な治療及び予防目的のための本明細書に記載の組成物の使用として表され、又は本明細書に記載の様々な治療及び予防目的のための医薬品又は治療用組成物又は組成物の調製における本明細書に記載の組成物の使用として表され得る。
【０５０１】
一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法は、種々の成分又はステップを含む。しかし、別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法は、種々の成分又はステップから本質的になり、別の成分又はステップが含まれてもよい。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物及び方法は、種々の成分又はステップからなる。
【０５０２】
一部の実施形態においては、「含む」という用語は、当該技術分野で既知であり得る組成物の有効性に影響する組成物の別の成分を含むことを包含し得る。一部の実施形態においては、「から本質的になる」という用語は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）を有する組成物、及びアポトーシス細胞又は任意のアポトーシス細胞上清を含む。しかし、組成物の有用性に直接必要とされない別の成分を含むこともできる。一部の実施形態においては、「からなる」という用語は、本明細書に記載の任意の形態又は実施形態において、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）を有する組成物、及び本明細書に開示されるアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を包含する。
【０５０３】
一実施形態においては、「処置」は治療処置を含み、「予防」は予防策又は予防策を含み、目的は、標的とされる上記病態又は障害を予防する、又は軽減することである。したがって、一実施形態においては、処置は、疾患、障害若しくは症状又はそれらの組合せに直接影響を及ぼす、又は治癒させる、抑制する、阻害する、予防する、重症度を低下させる、発症を遅らせる、付随する症候を軽減することを含むことができる。したがって、一実施形態においては、「処置」、「改善」及び「軽減」は、とりわけ、進行の遅延、寛解の促進、寛解の誘導、寛解の増強、回復の加速、別の治療法の有効性向上若しくは別の治療法に対する抵抗性の減少、又はそれらの組合せを指す。一実施形態においては、「予防」は、とりわけ、症候の発生の遅延、疾患の再発予防、再発エピソードの数若しくは頻度の減少、症候エピソード間の潜伏の増加、又はそれらの組合せを指す。一実施形態においては、「抑制」又は「阻害」は、とりわけ、症候の重症度の低下、急性発症の重症度の低下、症候の数の減少、疾患関連症候の発生率の減少、症候の潜伏の減少、症候の改善、二次的症状の軽減、二次感染の減少、患者生存の延長、又はそれらの組合せを指す。
【０５０４】
一実施形態においては、本明細書に開示される組成物は、１回投与される。別の一実施形態においては、組成物は２回投与される。別の一実施形態においては、組成物は３回投与される。別の一実施形態においては、組成物は４回投与される。別の一実施形態においては、組成物は少なくとも４回投与される。別の一実施形態においては、組成物は４回を超えて投与される。
【０５０５】
一実施形態においては、本明細書に開示されるＣＡＲ  Ｔ細胞は、１回投与される。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は２回投与される。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は３回投与される。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は４回投与される。別の一実施形態においては、ＣＡＲ  Ｔ細胞は少なくとも４回投与される。別の一実施形態においては、組成物は４回を超えて投与される。
【０５０６】
当業者は、「約」という用語が、示された数又は数値範囲から０．０００１〜５％の逸脱を包含し得ることを理解されたい。さらに、それは、示された数又は数値範囲から１〜１０％の逸脱を包含し得る。さらに、それは、示された数又は数値範囲から最高２５％の逸脱を包含し得る。
【０５０７】
当業者は、単数形「１つの（ａ、ａｎ）」及び「前記（ｔｈｅ）」は、特に明示しない限り、複数形を含むことを理解されたい。例えば、「薬剤」又は「少なくとも１種の薬剤」という用語は、それらの混合物を含めて複数の薬剤を含み得る。
【０５０８】
本願を通して、本明細書に開示される様々な実施形態は、範囲形式で示すことができる。範囲形式の記述は、単に便宜及び簡略のためにすぎず、開示範囲を頑なに制限するものと解釈すべきではないことを理解すべきである。したがって、範囲の記述は、可能な部分範囲すべて、及びその範囲内の個々の数値を明確に開示したものと考えるべきである。例えば、１〜６などの範囲の記述は、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６などの部分範囲、及びその範囲内の個々の数、例えば、１、２、３、４、５及び６を明確に開示したものと考えるべきである。これは、範囲の幅にかかわらない。
【０５０９】
数値範囲が本明細書に示されるときはいつでも、それは、示された範囲内の任意の引用数字（分数又は整数）を含むものとする。第１の示された数と第２の示された数の「間の範囲（ｒａｎｇｉｎｇ／ｒａｎｇｅｓ）」及び第１の示された数「から」第２の示された数「までの範囲」という句は、本明細書で区別無く使用され、第１と第２の示された数、並びにその間のすべての分数及び整数を含むものとする。
【０５１０】
一実施形態においては、本明細書に開示される組成物は、治療用組成物である。別の一実施形態においては、本明細書に開示される組成物は、治療効果を有する。
【０５１１】
一実施形態においては、本明細書に開示されるのは、ＣＡＲ  Ｔ細胞を単独で含む組成物に比べて炎症性サイトカイン又はケモカイン放出が少ないが、ＣＡＲ  Ｔ細胞を単独で含む組成物に匹敵する細胞傷害性を有する組成物である。
【実施例】
【０５１２】
実施例１：アポトーシス細胞製造プロセス
目的：本明細書に記載の方法に使用される早期アポトーシス細胞を製造すること
方法：
早期アポトーシス細胞の集団を製造する方法は、本明細書にその全体を援用する、国際公開第２０１４／０８７４０８号及び米国特許出願公開第２０１５／０２７５１７５号Ａ１に詳細に記録されており、例えば、実施例の前の方法のセクション「ＡｐｏＣｅｌｌ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ」及び「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ」（パラグラフ［０２２３］〜［０２８８］）、並びに実施例１１、１２、１３及び１４を参照されたい。
【０５１３】
図１に示したフローチャートは、早期アポトーシス細胞の集団の製造プロセス中に使用されたステップの一実施形態の概要であり、抗凝固薬が調製ステップに含まれる。フローチャートに示されたのは、抗凝固薬が製造プロセス中に添加された時点である。国際公開第２０１４／０８７４０８号及び米国特許出願公開第２０１５−０２７５１７５号Ａ１の実施例１４に詳述されているように、細胞集団を調製し、抗凝固薬を凍結の時間、インキュベーションの時間、又は凍結の時間とインキュベーションの時間に添加した。抗凝固薬ＡＣＤ式Ａに１０Ｕ／ｍｌヘパリンを総体積の５％ＡＣＤ及び０．５Ｕ／ｍｌヘパリンの最終濃度で補充した。抗凝固薬を含む方法は、高トリグリセリド濃度を含む血漿の存在下でも、一貫して少なくとも４０％早期アポトーシス細胞の収率であった。
【０５１４】
上記方法のセクション及び実施例１１は、抗凝固薬の非存在下であるアポトーシス細胞集団の別の一実施形態を調製する詳細を提供する。
【０５１５】
結果：
凍結の時間と解凍後のインキュベーション中の両方における抗凝固薬の含有は、安定な早期アポトーシス細胞の最も一貫した高収率をもたらした。安定な早期アポトーシス細胞のこの一貫した高収率は、ドナー血漿のトリグリセリドが高い場合でも得られた（国際公開第２０１４／０８７４０８号及び米国特許出願公開第２０１５−０２７５１７５号Ａ１の実施例１２及び１３参照）。抗凝固薬は、注入用最終早期アポトーシス細胞用量の処方に使用されるＰＢＳ媒体には添加されなかったことに留意されたい。
【０５１６】
下の表３は、添加抗凝固薬あり及びなしで調製された細胞集団（細胞のバッチ）の比較を示す。
【０５１７】
表３：抗凝固薬あり及びなしで調製されたバッチ間の細胞集団分析比較
【０５１８】
【表３】
2019505552.tif 000005
【０５１９】
抗凝固薬が添加されない早期アポトーシス細胞の調製方法は、少なくとも４０％早期アポトーシス細胞、しばしば少なくとも５０％早期アポトーシス細胞の早期アポトーシス細胞集団を生成した。
【０５２０】
実施例２：インビトロサイトカインストームモデルにおけるサイトカイン放出に対するアポトーシス細胞の効果
目的：マクロファージ活性化症候群のＬＰＳ無菌モデルにおいて誘発されるサイトカインストームにおけるサイトカインストームマーカー（サイトカインＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＭＩＰ−１α、ＩＬ−８、ＴＮＦ−α、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１及びＩＬ−９）のレベルに対するアポトーシス細胞の効果を試験する
方法：
細胞系及び培養試薬
ヒトリンパ腫細胞系Ｒａｊｉ（ｅＣＡＣＣ、ＵＫ、アクセス番号８５０１１４２９）、ヒト子宮頚部腺癌細胞系ＨｅＬａ（ＡＴＣＣ、ＵＳＡ、番号：ＣＣＬ−２）及びＨｅＬａ−ＣＤ１９（ＰｒｏＭａｂ、ＵＳＡ、カタログ番号ＰＭ−Ｈｅｌａ−ＣＤ１９）を、以下「完全培地」と称する、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、南アメリカ、カタログ番号１２６５７−０２９）、２ｍＭ  ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、カタログ番号３５０５０−０３８）及び１００Ｕ／ｍｌペニシリン＋１００Ｕ／ｍｌストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、カタログ番号１５１４０−１２２）を補充したＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、カタログ番号３１８７０−０２５）中で培養した。ＨｅＬａ−ＣＤ１９培地に更に１μｇ／ｍｌピューロマイシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＳＡ、カタログ番号Ｐ９６２０）を選択的抗生物質として標準培養中に補充した。
【０５２１】
全細胞をコンフルエント未満の条件で維持した。Ｒａｊｉ細胞を濃度範囲０．３×１０６〜２×１０６細胞／ｍｌで維持した。容器が９０％コンフルエントに満たされたときに、ＨｅＬａ及びＨｅＬａ−ＣＤ１９細胞を継代した。
【０５２２】
初代単球を供血バフィーコート（Ｓｈｅｂａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ、イスラエル）から単離した。まず、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をフィコール密度勾配（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ＰＬＵＳ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＵＫ、カタログ番号１７−１４４０−０３）で単離した。遠心分離（８００ｘｇ、２〜８℃、ｂｒｅａｋ  ０で２０分間）後、ＰＢＭＣを含む相間を新しい試験管に移し、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｌｏｎｚａ、スイス、カタログ番号ＢＥ１７−６０５Ｅ）及び１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（Ｌｏｎｚａ、スイス、カタログ番号ＢＥ１７−７３７Ｂ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０（Ｌｏｎｚａ、スイス、カタログ番号ＢＥ１２−９１８Ｆ）、以下「洗浄培地」で洗浄し、遠心分離した（６５０ｘｇ、２〜８℃、１０分間）。ペレット化した細胞を「洗浄培地」に濃度１５×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。細胞を０．９ｍｌ液滴として３５ｍｍプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＵＳＡ、カタログ番号４３０１６５）の中央に播いた。プレートを加湿恒温器（３７℃、５％ＣＯ２）中で１．５時間インキュベートし、単球を接着させ、次いで予熱したＰＢＳ（Ｌｏｎｚａ、スイス、カタログ番号ＢＥ１７−５１６Ｆ）で３回洗浄し、他の細胞型を除去した。洗浄後、細胞を１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、南アメリカ、カタログ番号１２６５７−０２９）、２ｍＭ  ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、カタログ番号３５０５０−０３８）及び１００Ｕ／ｍｌペニシリン＋１００Ｕ／ｍｌストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、カタログ番号１５１４０−１２２）を補充した２ｍｌ  ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、カタログ番号３１８７０−０２５）、別名「完全培地」中で培養した。
【０５２３】
全細胞系を５％ＣＯ２を含む加湿恒温器中で３７℃で培養した。
【０５２４】
手短に述べると、製造者の指針に従って、標的細胞（ＨｅＬａ又はＨｅＬａ−ＣＤ１９）を単独で、又は単球と併せて培養した。標的細胞がプレートに接着した後（６時間−終夜）、培養物をｙ×１０６個のＡｐｏＣｅｌｌｓＡｐｏＣｅｌｌｓ細胞に１時間曝露し、その後にこれらの細胞をＲＰＭＩで４〜５回洗浄した。ＡｐｏＣｅｌｌ細胞の除去を光学顕微鏡下で視覚的に確認した。１０ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＳＡ、カタログ番号Ｌ４３９１）を共培養に導入し、１時間インキュベートした。インキュベーション後、ＲＰＭＩを用いた３〜５回の洗浄サイクルによってＬＰＳを除去した。生存可能なＣＤ１９−ＣＡＲ  Ｔ細胞又はナイーブＴ細胞を指定Ｅ／Ｔ比（単数又は複数）で添加し、４時間インキュベートした。培地を収集するために、プレートを２５０ｘｇ、２〜２５℃で４分間遠心分離して（Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ  ５８１０Ｒ、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、ドイツ）、細胞を沈降させた。各ウェルからの上清培地５０μｌを新しい平底９６ウェルマイクロプレートウェル（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＵＳＡ、カタログ番号３５９６）に移し、５０μｌ  ＣｙｔｏＴｏｘ  ９６試薬を各ウェルに添加した。プレートを暗所で室温で３０分間インキュベートし、その後、５０μｌ／ウェルの停止液の添加によって反応を終結させた。吸光度をＩｎｆｉｎｉｔｅ  Ｆ５０（Ｔｅｃａｎ、スイス）を用いて４９２ｎｍで読み、Ｍａｇｅｌｌａｎ  Ｆ５０ソフトウェアを用いて取り込んだ。データ解析及びグラフ作成をＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ  ２０１０を用いて行った。
【０５２５】
アポトーシス細胞と一緒のインキュベーション、又はアポトーシス細胞由来の上清と一緒のインキュベーション後に、サイトカイン放出の分析をＬｉｍｉｎｅｘ技術を用いて行った。
【０５２６】
結果：図９Ａ〜９Ｈによれば、マクロファージ活性化症候群のインビトロモデルにおいてＬＰＳによって誘導されるサイトカインストームマーカーＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＭＩＰ−１α、ＩＬ−８、ＴＮＦ−α、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１及びＩＬ−９のレベルが有意に減少した。マクロファージ：ＡｐｏＣｅｌｌ比１：８を満たすＡｐｏｃｅｌｌの投与によって、培地に放出されたＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＭＩＰ−１α、ＩＬ−８、ＴＮＦ−α、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１及びＩＬ−９のレベルが有意に減少し（図９Ａ、９Ｂ、９Ｃ、９Ｄ、９Ｅ、９Ｆ、９Ｇ、９Ｈ）、マクロファージ：ＡｐｏＣｅｌｌ比１：１６を満たすＡｐｏｃｅｌｌの投与によって、このモデルにおけるサイトカインＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＭＩＰ−１α、ＩＬ−８、ＴＮＦ−α、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１及びＩＬ−９の放出が実際に阻害され、又はほぼ阻害された。
【０５２７】
アポトーシス細胞の添加によって、マクロファージ活性化において誘導される少なくとも２０種の炎症誘発性サイトカイン及びケモカインが阻害された。結果の一例を図９Ａ〜９Ｈに示す。炎症誘発性サイトカイン及びケモカイン放出の共通機序は、ＮＦ−κＢ阻害である。
【０５２８】
類似条件下でのサイトカインＩＬ−２Ｒ（ＩＬ−２受容体）レベルの検討によれば、放出されたＩＬ−２Ｒレベルは、炎症誘発性サイトカインと同様には影響されず、炎症誘発性サイトカイン及びケモカインの放出の阻害は、特異的であると思われる。（図９Ｉ）。アポトーシス細胞の添加によって、１：４及び１：８比におけるＩＬ−２Ｒの放出が増加した。さらに、図９Ｊによれば、アポトーシス細胞は、ＩＬ−２の放出に対して２４時間影響を及ぼさなかった。ＩＬ−２受容体の活性化は、寛容性を含めた免疫系の重要な機能において本質的な役割を有すると考えられる。
【０５２９】
結論：癌及びＣＡＲ−１９の存在下でマクロファージ活性化症候群のサイトカインストームモデルにおける早期アポトーシス細胞の添加は、炎症誘発性サイトカイン、例えば、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＭＩＰ−１α、ＩＬ−８、ＴＮＦ−α、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１及びＩＬ−９を有意に減少させ、驚くべきことに阻止さえしたが、サイトカインＩＬ−２Ｒレベルを増加させ、又はサイトカインＩＬ−２Ｒレベルに影響を及ぼさなかった。したがって、ここでの結果によれば、炎症誘発性サイトカインは、アポトーシス細胞とのインキュベーションによって減少したが、ＩＬ−２及びＩＬ−２Ｒは、早期アポトーシス細胞のインキュベーションによって同様には影響されなかった。したがって、Ｔ細胞関連サイトカインは、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療＋アポトーシス細胞によって影響されず、自然免疫サイトカイン、例えば、単球、マクロファージ及び樹状細胞から放出されるものは影響される。
【０５３０】
実施例３：ＣＡＲ−Ｔ細胞有効性に対して負の効果のない、サイトカインストームに対するアポトーシス細胞の効果
目的：腫瘍細胞上のサイトカインストームマーカーサイトカイン及びＣＡＲ  Ｔ細胞の有効性に対するアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞に由来する上清の効果を試験する
方法：
Ｔ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞
マウスにおいてサイトカインストームを誘発すると報告された固形腫瘍モデル（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｓｔｅｇｅｎら、２０１３、同書）を利用した。このモデルにおいては、Ｔ細胞は、頭頚部腫瘍、卵巣癌などの特定の固形腫瘍においてしばしば高度に上方制御されるある種のＥｒｂＢ二量体（Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞）を標的にするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を用いて操作された。Ｔ細胞は、ＣＤ３マイクロビーズを用いて末梢血から分離されたＰＢＭＣから単離された。キメラＴ４＋受容体を含むベクターを構築し、単離Ｔ細胞に導入して、Ｔ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞を得た。ここで行われた実験では、Ｔ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞をＣｒｅａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｌａｂｓ（ＮＹ  ＵＳＡ）又はＰｒｏｍａｂ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ＣＡ  ＵＳＡ）から購入した。図４は、抗ＣＤ１２４モノクローナル抗体を用いてＴ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞上の４αβキメラ受容体の表面発現を検証するフローサイトメトリー曲線である（Ｗｉｌｋｉｅら、同書）。さらに、ＰＣＲ手順を実施して、導入Ｔ細胞中のベクターの存在を検証した。
【０５３１】
ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞
ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ卵巣腺癌組織培養細胞をＣｅｌｌ  ＢｉｏＬａｂｓから購入した（ｃａｔ．＃ＡＫＲ−２３２）。ＳＫＯＶ３−ｌｕｃは、ＥｒｂＢ受容体を高度に発現し、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の標的である（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｓｔｅｇｅｎら、２０１３、同書）。これらの細胞を、ホタルルシフェラーゼ遺伝子を恒常的に発現するように更に操作して、細胞増殖をインビトロで、腫瘍増殖及び縮小をインビボで追跡できるようにした。
【０５３２】
アポトーシス細胞
アポトーシス細胞を実施例１に従って調製した。
【０５３３】
アポトーシス細胞上清
８百万個／ウェルのアポトーシス細胞を１２ウェルプレートに播いた。２４時間後に細胞を遠心分離した（２９０ｇ、４℃、１０分間）。上清を収集し、使用まで一定分量を−８０℃で凍結した。異なる数の細胞を使用して上清を製造する。幾つかの一定分量は、濃縮上清を含む。
【０５３４】
単球単離
健康な適格ドナーから得られる末梢血／バフィーコートからフィコール（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、英国）を用いてＰＢＭＣを単離した。細胞をＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、ＭＡ、ＵＳＡ）中で濃度１５×１０６細胞／ｍｌにし、０．９ｍｌ液滴として３５ｍｍプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ、ＵＳＡ）の中央に播いた。次いで、プレートを３７℃で５％ＣＯ２中で１時間インキュベートした。インキュベーションの最後に細胞をＰＢＳ（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｂｅｉｔ  Ｈａｅｍｅｋ、イスラエル）で３回洗浄し、接着を光学顕微鏡によって判定した。次いで、細胞を完全培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％熱失活ＦＢＳ＋１％Ｇｌｕｔａｍａｘ＋１％ＰｅｎＳｔｒｅｐ、すべてのＧｉｂｃｏ製）と一緒にインキュベートした。
【０５３５】
単球単離の別法も使用し、ヒト単核球をヘパリン処置末梢血から密度勾配遠心法によって単離した。次いで、単球をＣＤ１４＋画分として磁気ビーズ分離（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ．、オーバーン、ＣＡ、ＵＳＡ）によってポジティブ選択し、Ｂ細胞をＣＤ２２＋画分としてポジティブ選択し、Ｔ細胞をＣＤ１４−ＣＤ２２−画分としてネガティブ選択することによって、単離単核球を単球、Ｂ細胞及びＴ細胞集団に分離した。純度は、単球で９５パーセントを超えた。
【０５３６】
マクロファージ分化のために、接着の最後に細胞をＰＢＳで３回洗浄し、次いでＲＰＭＩ１６４０＋１％Ｇｌｕｔａｍａｘ＋１％ＰｅｎＳｔｒｅｐ及び１０％熱失活ヒトＡＢ血清（Ｓｉｇｍａ、ＭＯ、ＵＳＡ）と一緒にインキュベートした。細胞を３７℃及び５％で７〜９日間インキュベートし、培地を３及び６日目に交換した。分化を光学顕微鏡により形態で判定した。
【０５３７】
ａｐｏ＋単球由来の上清
ＣＤ１４＋単球を上で調製したアポトーシス細胞と一緒に１：１６の比で２４時間培養した。単球の数は、１２ウェルプレート中５０万細胞／ウェルであり、アポトーシス細胞の数は、１２ウェルプレート中８百万細胞／ウェルであった。２４時間インキュベーション後、細胞を遠心分離した（２９０ｇ、４℃、１０分間）。上清を収集し、使用まで一定分量を−８０℃で凍結した。同様の手順を異なる単球：アポトーシス細胞比で、及び／又はマクロファージ、樹状細胞などの別の細胞源を用いて、行うことができた。
【０５３８】
インビトロ培養条件
ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ癌細胞をアポトーシス細胞又はアポトーシス上清と一緒に１時間インキュベートし、続いてＴ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞（＋／−単球−マクロファージ）と４８時間共培養することによって、最初の実験を行った。
【０５３９】
インビボ条件をシミュレートするために、１×１０５個／ｍｌのＴＨＰ−１細胞（ＨＴＣＣ  ＵＳＡ）、又は単球若しくはマクロファージ若しくは樹状細胞を、２００ｎＭ（１２３．４ｎｇ／ｍｌ）酢酸ミリスチン酸ホルボール（ＰＭＡ：ｐｈｏｒｂｏｌ  ｍｙｒｉｓｔａｔｅ  ａｃｅｔａｔｅ）を用いて７２時間分化させ、次いでＰＭＡを含まない完全培地中で更に２４時間培養する。次に、癌又は腫瘍細胞、例えばＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞を２４ウェルプレート中でＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞５×１０５個／ウェルで分化ＴＨＰ−１細胞上で培養する。癌又は腫瘍細胞の最初の培養後、４×１０５〜８×１０５個のアポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）を培養物に１〜３時間添加して、免疫寛容環境を誘導する。癌細胞とＡｐｏＣｅｌｌの比を各細胞型に対して最適化する。洗浄後、共培養物を１０ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳで処理し、その後、１×１０６個のＴ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞（又はエフェクター／標的（Ｅ／Ｔ）比グラフによって求められる量）を添加する。各腫瘍又は癌細胞型のエフェクター／標的（Ｅ／Ｔ）比グラフを作成するために、腫瘍細胞とＴ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞の比を変更する。
【０５４０】
ＳＫＯＶ３癌細胞傷害性を分析するために、溶解物を調製し、ルシフェラーゼ活性を４８時間のインキュベーション期間後に測定した。癌又は腫瘍細胞傷害性を別の癌細胞型について４８時間インキュベーション期間に時々分析する追加の実験を行う。あるいは、ＰｒｏｍｅｇａのＣｙｔｏＴｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ｃａｔ  ＃Ｇ１７８０）を使用する。
【０５４１】
溶解物調製
ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ単層をＰＢＳで洗浄して、残留血清を除去し、７０μｌ  ＣＣＬＲ溶解緩衝剤ｘ１／ウェル（２４ウェルプレートの場合）を添加することによって、ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞溶解物を調製した。ウェル底部を物理的にこすることによって剥離を更に促進した。１５秒間ボルテックス撹拌後、溶解物を１２，０００ｇで２分間４℃で遠心分離した。上清を収集し、−８０℃で貯蔵した。
【０５４２】
インビトロルシフェラーゼ活性
培養中のＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞におけるルシフェラーゼ活性を検出するために、Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ｃａｔ．＃Ｅ１５０１）を使用した。照度計リーダー（Ｃｏｒｅ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ、医学部、Ｅｉｎ  Ｋｅｒｅｍ、ヘブライ大学）を備えたこのキットをＱｕａｎｔｉＬｕｍ組換えルシフェラーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ｃａｔ．＃Ｅ１７０Ａ）によって較正した。６１２ａｇ〜６１．２μｇ（１０−２０〜１０−９モル）を使用して、検出範囲を決定し、製造者の指針に従った。手短に述べると、２０μｌ体積の各ルシフェラーゼ量を黒色９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ）のウェルに入れた。各量を３つ組で行った。１００μｌのＬＡＲ（Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍキットのルシフェリン基質）を各ウェルに添加し、すぐに１０秒曝露して読んだ。
【０５４３】
ルシフェラーゼ活性の読み取りのために、溶解物を氷上で解凍し、２０μｌの試料を黒色９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ）中で培養した。各試料を二つ組で読み取った。１００μｌのＬＡＲを添加し、発光を１０秒の曝露期間について２．５分ごとに２５分間及び４０秒ごとに次の１０分間読み取った。
【０５４４】
サイトカイン分析
ＩＬ−２、ＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）、ＩＬ−６、ＩＬ−１α、ＩＬ−４、ＩＬ−２、ＴＮＦ−αの最初の分析を行った。ＩＬ−２、ＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）、ＩＬ−６、ＩＬ−１α、ＩＬ−４、ＩＬ−２、ＴＮＦ−α及び別のサイトカインのサイトカイン放出減少を分析するために、上清を収集し、選択されたサイトカインについてＬｕｍｉｎｅｘ  ＭａｇＰｉｘリーダー及びＥＬＩＳＡアッセイによって調べた。
【０５４５】
結果：
ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ増殖
ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ増殖をルシフェラーゼ活性を指標として追跡して、その後の実験における標的ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞数を決定した。ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞３．８×１０４〜３．８×１０５個／ウェルを２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）で培養し、ルシフェラーゼ活性を３日間毎日モニターした。培養された１．９×１０５個／ウェル以上の細胞は、培養から２日後にコンフルエントに達し、ルシフェラーゼ活性によって示される増殖飽和を示す（図５）。ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞３．８×１０４〜１．１×１０５個／ウェルは、培養から３日後も線形又は指数増殖期であったことに留意されたい（図５、オレンジ、青緑色及び紫色のプロット）。負の対照（ＬＡＲ基質を含まない３．８×１０５個のＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞）は、バックグラウンドレベルの読みしか示さず、ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞からの生物発光の読みがルシフェラーゼ活性に起因することを示している。
【０５４６】
ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍細胞に対するＴ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞活性の検証
Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞活性を裏付けるために、ＳＫＯＶ３−ｌｕｃの単層を１，０００，０００（百万）個のＴ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞又は１，０００，０００（百万）個の非導入Ｔ細胞に曝露した。２４時間のインキュベーション後、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ増殖を非導入Ｔ細胞対照に比べて３０％減少させ（図６）、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の抗腫瘍活性を示した。
【０５４７】
ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍細胞に対する独立型Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性を、アポトーシス細胞曝露後の活性と比較した。
【０５４８】
アポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）及びアポトーシス細胞上清（ＡｐｏＳｕｐ及びＡｐｏＭｏｎ  Ｓｕｐ）を試験して、それらがＴ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞抗腫瘍活性を妨害するかどうか判定した。ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍細胞をアポトーシス細胞と一緒に１時間インキュベートし、続いてＴ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞（５００，０００、５０万）又はＴ４＋非導入Ｔ細胞（５００，０００、５０万）（Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞とアポトーシス細胞の比１：２）を添加した。次いで、腫瘍細胞／アポトーシス細胞／Ｔ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞を４８時間共培養した。対照ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍細胞をＴ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞及びＨａｒｔｍａｎ溶液（アポトーシス細胞のビヒクル）と、アポトーシス細胞なしで、４８時間共培養した。
【０５４９】
その結果によれば、４８時間のインキュベーション後、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞抗腫瘍活性は、非導入Ｔ細胞とのインキュベーションよりも優れた。同様のインキュベーションをアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清でも行った。驚くべきことに、Ｔ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞抗腫瘍活性は、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清に曝露してもしなくても同等であった。（図７）。
【０５５０】
ＣＡＲ−Ｔ処置に起因するサイトカインストームの回復、減少又は阻害に対するアポトーシス細胞の効果
サイトカインストームを減少させるアポトーシス細胞の効果を次に調べた。ＩＬ−６は、サイトカインストームにおいて放出される原型炎症誘発性サイトカインであり（Ｌｅｅ  ＤＷら（２０１４）Ｂｌｏｏｄ  １２４（２）：１８８〜１９５）、しばしばサイトカインストーム応答のマーカーとして使用される。
【０５５１】
インビボＣＡＲ  Ｔ細胞治療環境を模倣する培養を確立した。ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍細胞をヒト単球−マクロファージ及びＴ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞の存在下で培養した。培地中で測定されたＩｌ−６の濃度は、約５００〜６００ｐｇ／ｍｌであった。このＩＬ−６濃度は、サイトカインストームの代表的なものである。
【０５５２】
予想外に、腫瘍細胞が前もってアポトーシス細胞と一緒に１時間インキュベートされた（Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞とアポトーシス細胞の比１：２）、ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍細胞、ヒト単球−マクロファージ、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の培地中で測定されたＩＬ−６レベルは、劇的に低下した。同様に、腫瘍細胞が前もってアポトーシス細胞上清と一緒に１時間インキュベートされた、ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍細胞、ヒト単球−マクロファージ、Ｔ４＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の培地中で測定されたＩＬ−６レベルも、劇的に低下した。このＩＬ−６濃度の減少は、サイトカインストームにおける減少の代表的なものである（図８）。
【０５５３】
予想外に、アポトーシス細胞及びアポトーシス上清は、腫瘍細胞増殖に対するＣＡＲ−Ｔ細胞の効果を抑制せず、同時にそれらは、病的状態をもたらす主要なサイトカインとして記述されたＩＬ−６などの炎症誘発性サイトカインを下方制御すると結論された。
【０５５４】
より広範囲のサイトカインを用いた分析
実験手順中には産生されないが、臨床現場においてはヒトサイトカインストーム中に確かに出現する可能なより広い範囲及びレベルのサイトカインに対する効果を更に評価するために、ＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍｌ）を上で概説したＳＫＯＶ３−ｌｕｃ培養状態に添加した。ＬＰＳの添加は、サイトカインストームレベルを指数関数的に増加させると予想される。予想どおりに、ＬＰＳの添加は、サイトカインストーム効果を増強し、その結果、ＩＬ−６レベルは約３０，０００ｐｇ／ｍｌに増加した。サイトカインストーム中に高レベルで発現されることが知られている他のサイトカインは、レベルが上昇した。例えば、ＴＮＦ−α（２５０〜３００ｐｇ／ｍｌ）、ＩＬ−１０（２００〜３００ｐｇ／ｍｌ）、ＩＬ１−アルファ（４０〜５０ｐｇ／ｍｌ）及びＩＬ−１８（４〜５ｐｇ／ｍｌ）。図１０に示すように、アポトーシス細胞に曝露すると、サイトカインストームの指数関数状態でもＩＬ−６のレベルをほぼ正常レベルに劇的に低下させた。これは、臨床現場で見られる可能性はあるが、ＣＡＲ  Ｔ細胞を用いた実験手順では必ずしも見られない。この効果は、２０〜９０％の減少を示した他の炎症誘発性サイトカインＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−１０、ＩＬ１−アルファ、ＩＬ−１β及びＩＬ−１８でも同様であった。アポトーシス細胞の代わりにアポトーシス細胞上清を用いたときにも同様の結果が見られた。
【０５５５】
ＩＬ−２及びＩＬ−２Ｒに対するアポトーシス細胞の効果
ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞とＴ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞のインキュベーション後の培養上清中で測定されたＩＬ−２の濃度は、１０８４ｐｇ／ｍｌであった。驚くべきことに、ＳＫＯＣ３−ｌｕｃ細胞をまずアポトーシス細胞と、次いでＴ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞と一緒にインキュベートすると、ＩＬ−２の濃度が１１９０ｐｇ／ｍｌに増加した。同様に、ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞とＴ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞のインキュベーション後の培養上清中で測定されたＩＬ−２Ｒの濃度は、３８１７ｐｇ／ｍｌであった。驚くべきことに、ＳＫＯＣ３−ｌｕｃ細胞をまずアポトーシス細胞と、次いでＴ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞と一緒にインキュベートすると、ＩＬ−２Ｒの濃度が４５８０ｐｇ／ｍｌに増加した。ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ単独では、Ｉｌ−２の濃度は３．２ｐｇ／ｍｌであり、アポトーシス細胞を添加すると、濃度は１０．６ｐｇ／ｍｌであった。ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ単独では、Ｉｌ−２Ｒの濃度は２６．３ｐｇ／ｍｌであり、アポトーシス細胞を添加すると、濃度は２４．７ｐｇ／ｍｌであった。
【０５５６】
結論
ＣＡＲ−Ｔ細胞治療は、かなりの数の患者においてサイトカインストームを引き起こすと記述されている。これらの結果の示すところによれば、アポトーシス細胞及びアポトーシス細胞上清は、驚くべきことに、腫瘍細胞に対するＣＡＲ−Ｔ細胞有効性に影響を及ぼさずにサイトカインストームサイトカインマーカーを減少させた。さらに、アポトーシス細胞は、サイトカインＩＬ−２を増加させ、ＣＡＲ  Ｔ細胞増殖を維持する、又は増加させることによって、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の期間を延長し得ると思われる。
【０５５７】
実施例４：アポトーシス細胞治療は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を受けたマウスにおいてサイトカインストームを予防する
目的：Ｔ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞有効性及びサイトカインストームマーカーサイトカインのレベルを測定するために、固形腫瘍モデル（ＳＫＯＶ３卵巣腺癌）におけるアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清のインビボ効果を試験する
材料及び方法
インビトロ研究
製造方法、培養方法及び上記結果を解析する方法を含めた、ＥｒｂＢ標的抗原を認識するＴ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞（本明細書では「Ｔ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞」と称する、ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞、アポトーシス細胞、アポトーシス上清、単球、マクロファージの使用に関連するインビトロ方法並びに種々のアッセイはすべて、上の実施例１に記述されている。同じ方法をここでも使用した。
【０５５８】
インビボ研究
マウス
７〜８週齢のＳＣＩＤ−ベージュマウス及びＮＳＧＳマウスをＨａｒｌａｎ（イスラエル）から購入し、Ｓｈａｒｅｔｔ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＳＰＦ動物施設で飼育した。
【０５５９】
ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍細胞（１×１０６又は２×１０６）をＳＣＩＤベージュマウス又はＮＳＧＳマウスにＰＢＳ中のｉ．ｐ．で、又は２００ｍｌ  Ｍａｔｒｉｇｅｌ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中のｓ．ｃ．で接種する。腫瘍移植を生物発光イメージング（ＢＬＩ）によって注射後約１４〜１８日目に確認し、マウスをＴ細胞投与前に類似信号強度のグループに分類する。
【０５６０】
マウスに３０×１０６個のアポトーシス細胞をＴ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞の投与の２４時間前に、又はＴ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞（１０〜３０×１０６個のＴ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞）の投与と同時に投与する。腫瘍増殖の後に生物発光イメージング（ＢＬＩ）が続き、循環サイトカインレベルをＬｕｍｉｎｅｘによって測定する。
【０５６１】
インビボルシフェラーゼアッセイ
腫瘍増殖をホタルルシフェラーゼ活性によって毎週モニターした。手短に述べると、３ｍｇ  Ｄ−ルシフェリン（Ｅ１６０５．Ｐｒｏｍｅｇａ、ＵＳＡ）／マウス（１００μｌの３０ｍｇ／ｍｌ  Ｄ−ルシフェリン）をイソフルラン麻酔下のマウスにｉ．ｐ．注射し、腹側画像を注射から１０分後にＩＶＩＳ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ及びＬｉｖｅ  Ｉｍａｇｅ画像キャプチャーソフトウェア（どちらもＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、ＵＳＡ製）を用いて取得した。
【０５６２】
Ｄ−ルシフェリン注射「ａｕｔｏ」オプションから５分後に、０．５×１０６個／マウスのＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞を投与したマウスの画像化によって、画像収集パラメータを画像セッションごとに選択した。キャプチャーパラメータをビニング４、Ｆ／ストップ１．２及び露光２〜４分間に設定し、２４×レンズを用いた。データ解析及び定量化をＬｉｖｅ  Ｉｍａｇｅソフトウェアを用いて行い、グラフをＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌプログラムを用いて作成した。
【０５６３】
インビボ細胞傷害性
Ｔ細胞のインビボ毒性を評価するために、器官をマウスから収集し、ホルマリン固定し、病理組織学的分析に供した。
【０５６４】
サイトカイン分析
Ｌｕｍｉｎｅｘ  ＭａｇＰｉｘリーダー及び／又はＥＬＩＳＡキット、細胞数測定ビーズアレイ（Ｔｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ１７；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を製造者によって記述されたように用いて、上清及び血清を分析する。例えば、分析は、一例においてはＩＬ−６である炎症誘発性サイトカインとすることができるが、一実施形態においては、表１及び２に列挙した、又は当該技術分野で既知であるサイトカインのいずれかをここでは分析することができる。
【０５６５】
結果
ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍のインビボでの較正
０．５×１０６、１×１０６又は４．５×１０６個のＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞をＳＣＩＤベージュマウスにｉ．ｐ．注射し、腫瘍増殖を追跡するために、生物発光イメージング（ＢＬＩ）を「方法」に記載のように毎週行った（データ示さず）。
【０５６６】
マウスの臨床スコア
マウスは、最初の４週間に臨床症状を示さなかった。しかし、ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ注射後２８日目に、高用量（４．５×１０６；紫の線）投与したマウスは、着実に減量し始め（図１１Ａ）、マウスの外観全体が悪化し、嗜眠、異常な歩調、及び全般的な活動性消失として現れた。このグループを３９日目に選別し、腹部剖検を行って、腫瘍外観及びサイズを明らかにした（図１１Ｂ）。ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍は、大きく、固形であり、血管が形成され、やや白く光沢のある様相を呈した。１つの大きい腫瘍が、腹腔の尾側又は頭側の注射（左）側に目立った。この腫瘍は、腔の約２５〜７５％を含み、明らかに腸を圧迫し、妨害した。それより小さい病巣も腹腔内の様々な場所に観察された。腫瘍は腹腔内に含まれ、どのマウスの体の他のどの部分にも他の腫瘍は観察されなかった。低用量（０．５×１０６）又は中用量（１×１０６）のＳＫＯＶ３−ｌｕｃを投与されたマウスは、ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ注射後４０日目に体重増加が停止し、着実に減量し始めた。ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ注射後５０日目に実験を終了した。
【０５６７】
ＳＫＯＶ３−ｌｕｃ腫瘍動力学
ＰＢＳをＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞の対照に注射した。これらのマウスは、実験を通してルシフェラーゼ活性を示さなかった（図１２、左パネル）。腫瘍検出及び増殖は、用量依存的であった。低用量（０．５×１０６個のＳＫＯＶ３−ｌｕｃ細胞）は、注射後２５日目に腫瘍を示し始め（４／５の動物）、中用量（１×１０６）注射は、注射後１８日目に腫瘍を示し（４／５の動物）、一方、高用量（４．５×１０６）では、腫瘍が３／５の動物において早くも注射後１１日目に検出され、１８日目までにすべての動物が十分定着した腫瘍を示した（図１２及び図１３Ａ〜１３Ｄ）。
【０５６８】
ＣＡＲ  Ｔ細胞治療は、サイトカイン放出症候群を誘発する
３グループの腫瘍のないマウス及び腫瘍を有するマウスに漸増用量のＴ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞（３×１０６、１０×１０６又は３０×１０６）を投与する（ｉ．ｐ．又は腫瘍に直接）。最高用量では、腫瘍のないマウス及び腫瘍を有するマウスは、２４時間以内に挙動が抑制され、起毛し、移動度が減少し、同時に体重が急激に減少し、４８時間以内に死亡した。少なくともヒトインターフェロン−ガンマ及びマウスＩＬ−６が、最高用量のＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたマウスの血液試料中に検出可能である。異なる腫瘍抗原に対する高用量のＣＡＲ  Ｔ細胞を投与された動物は、体重減少も行動上の変化も示さない。
【０５６９】
アポトーシス細胞の投与は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療によって誘発されるサイトカイン放出症候群の発生率を抑制する、又は減少させる。
【０５７０】
最高用量のＣＡＲ  Ｔ細胞を投与された１グループのマウスに、安全で有効な用量であることが以前に実証された２．１０×１０８個／ｋｇのアポトーシス細胞を同時に投与する。ヒトＣＡＲ  Ｔ＋アポトーシス細胞を投与されたマウスは、マウスＩＬ−６レベルがかなり低く、体重減少が少なく、死亡率が低い。
【０５７１】
実施例５：インビトロびまん性腫瘍モデルに対する併用免疫療法の効果
目的：癌細胞及びサイトカインストームマーカーサイトカインのレベルに対するＣＡＲ  Ｔ細胞有効性を明らかにするために、癌が広範に広がり、局在も限局もしていないびまん性腫瘍モデルにおけるアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞に由来する上清の効果を試験する
方法：
ＣＤ１９＋Ｔ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞（「ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞」）
ＣＤ１９特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞をＰｒｏＭａｂから購入した（Ｌｏｔ＃０１２９１６）。Ｔ細胞は、ＣＡＲに対して３０％陽性であった（製造者のＦＡＣＳデータ−Ｆａｂ染色による）。手短に述べると、細胞をＡｉｍＶ＋５％熱失活ＦＢＳに解凍し、遠心分離し（３００ｇ、５分間、室温）、ＡｉｍＶに再懸濁させた。実験６日目に２０×１０６個／マウスの細胞をＩＶ注射した（７０％アネキシンＰＩ陰性、そのうち３０％はＣＡＲ陽性）。
【０５７２】
ＣＤ１９発現組換えＨｅＬａ細胞を、その細胞表面でもＣＤ１９を発現する対照細胞型として使用する。
【０５７３】
ＣＤ１２３＋ＣＡＲ  Ｔ細胞
Ｔ４＋ＣＡＲ  Ｔ細胞を、ＣＡＲを標的にするＣＤ１２３エピトープを用いても操作する（本明細書では「ＣＤ１２３＋ＣＡＲ  Ｔ細胞」と称する）。
【０５７４】
Ｒａｊｉ細胞、ＣＤ１９発現ＨｅＬａ細胞及びＣＤ１２３発現白血病細胞
Ｒａｊｉ細胞  Ｒａｊｉ細胞をＥＣＡＣＣから購入し（Ｃａｔ．＃：８５０１１４２９）、完全培地（１０％Ｈ．Ｉ．ＦＢＳ、１％Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ−１６４０）中で常法に従って培養し、３×１０５〜３×１０６細胞／ｍｌの濃度で維持した。実験１日目、０．１×１０６個／マウスの細胞をＩＶ注射した。
【０５７５】
同様に、ＣＤ１９発現ＨｅＬａ細胞を実験室で作製し、ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞の標的として使用する。ＣＤ１２３発現白血病細胞をＣＤ１２３＋ＣＡＲ  Ｔ細胞の標的として使用する。さらに、初代癌細胞をＣＡＲ  Ｔ細胞の標的として利用する。
【０５７６】
ＣＤ１９を発現するＨｅＬａ細胞を当該技術分野で既知である方法を用いて調製した。細胞を当該技術分野で周知の通りに培養する。
【０５７７】
ＣＤ１２３は、血液悪性腫瘍における膜バイオマーカー及び治療標的である。ＣＤ１２３発現白血病細胞、例えば白血病芽球及び白血病幹細胞を当該技術分野で既知の通りに培養する。
【０５７８】
アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清及び単球単離を、実施例１に記載の通りに調製する。生成した早期アポトーシス細胞は、少なくとも５０％のアネキシンＶ陽性及び５％未満のＰＩ陽性細胞であった。
【０５７９】
マクロファージ。ＣＤ１４陽性細胞から接着によって生成された。
【０５８０】
樹状細胞。ＩＬ４及びＧＭＣＳＦの存在下で増殖されたＣＤ１４由来であった。
【０５８１】
フローサイトメトリー。以下の抗体を使用した：ｈＣＤ１９−ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃａｔ．＃１２−０１９８−４２）；ｍＩｇＧ１−ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃａｔ．＃１２−０１９８−４２）；ｈＣＤ３−ＦＩＴＣ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃａｔ．＃１１−００３７−４２）；ｍＩｇＧ２ａ−ＦＩＴＣ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃａｔ．＃１１−４７２４−８２）。ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒ、ＢＤを用いて取得した。
【０５８２】
ナイーブＴ細胞。ナイーブＴ細胞をバフィーコートから磁気ビーズ（ＢＤ）を用いて単離し、９０％ヒトＡＢ血清及び１０％ＤＭＳＯ中で凍結保存した。解凍及び注射は、ＣＡＲ−Ｔ細胞と同じであった。
【０５８３】
インビトロ培養条件
細胞系及び培養試薬
ヒトリンパ腫細胞系Ｒａｊｉ（ｅＣＡＣＣ、ＵＫ、アクセス番号８５０１１４２９）、ヒト子宮頚部腺癌細胞系ＨｅＬａ（ＡＴＣＣ、ＵＳＡ、番号：ＣＣＬ−２）及びＨｅＬａ−ＣＤ１９（ＰｒｏＭａｂ、ＵＳＡ、カタログ番号ＰＭ−Ｈｅｌａ−ＣＤ１９）を、以下「完全培地」と称する、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、南アメリカ、カタログ番号１２６５７−０２９）、２ｍＭ  ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、カタログ番号３５０５０−０３８）及び１００Ｕ／ｍｌペニシリン＋１００Ｕ／ｍｌストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、カタログ番号１５１４０−１２２）を補充したＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、カタログ番号３１８７０−０２５）中で培養した。ＨｅＬａ−ＣＤ１９培地に更に１μｇ／ｍｌピューロマイシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＳＡ、カタログ番号Ｐ９６２０）を選択的抗生物質として標準培養中に補充した。
【０５８４】
全細胞をコンフルエント未満の条件で維持した。Ｒａｊｉ細胞を濃度範囲０．３×１０６〜２×１０６細胞／ｍｌで維持した。容器が９０％コンフルエントに満たされたときに、ＨｅＬａ及びＨｅＬａ−ＣＤ１９細胞を継代した。
【０５８５】
初代単球を供血バフィーコート（Ｓｈｅｂａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ、イスラエル）から単離した。まず、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をフィコール密度勾配（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ＰＬＵＳ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＵＫ、カタログ番号１７−１４４０−０３）で単離した。遠心分離（８００ｘｇ、２〜８℃、ｂｒｅａｋ  ０で２０分間）後、ＰＢＭＣを含む相間を新しい試験管に移し、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｌｏｎｚａ、スイス、カタログ番号ＢＥ１７−６０５Ｅ）及び１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（Ｌｏｎｚａ、スイス、カタログ番号ＢＥ１７−７３７Ｂ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０（Ｌｏｎｚａ、スイス、カタログ番号ＢＥ１２−９１８Ｆ）、以下「洗浄培地」で洗浄し、遠心分離した（６５０ｘｇ、２〜８℃、１０分間）。ペレット化した細胞を「洗浄培地」に濃度１５×１０６細胞／ｍｌで再懸濁した。細胞を０．９ｍｌ液滴として３５ｍｍプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＵＳＡ、カタログ番号４３０１６５）の中央に播いた。プレートを加湿恒温器（３７℃、５％ＣＯ２）中で１．５時間インキュベートし、単球を接着させ、次いで予熱したＰＢＳ（Ｌｏｎｚａ、スイス、カタログ番号ＢＥ１７−５１６Ｆ）で３回洗浄し、他の細胞型を除去した。洗浄後、細胞を１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、南アメリカ、カタログ番号１２６５７−０２９）、２ｍＭ  ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、カタログ番号３５０５０−０３８）及び１００Ｕ／ｍｌペニシリン＋１００Ｕ／ｍｌストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、カタログ番号１５１４０−１２２）を補充した２ｍｌ  ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、カタログ番号３１８７０−０２５）、別名「完全培地」中で培養した。
【０５８６】
全細胞系を５％ＣＯ２を含む加湿恒温器中で３７℃で培養した。
【０５８７】
ＣＤ１９−ＣＡＲ  Ｔ細胞（ＰｒｏＭａｂ、ＵＳＡ、カタログ番号ＦＭＣ６３）をＡＩＭ−Ｖ培地中で、又は凍結して、搬送した。インビトロ実験用凍結保存ＣＡＲ  Ｔ細胞を実験日に３５〜３８℃浴で解凍し、５％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、南アメリカ、カタログ番号１２６５７−０２９）を補充した予熱ＡＩＭ  Ｖ培地（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、カタログ番号１２０５５−０９１）にすぐに浸漬した。細胞を遠心分離し（３００ｘｇ、室温、５分間）、予熱ＡＩＭ  Ｖ培地に再懸濁させることによって、ＤＭＳＯを除去した。ＣＤ１９−ＣＡＲ＋細胞集団の濃度及び生存率を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメータ（ＢＤ、ＵＳＡ）で読み取る抗ＦＬＡＧ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、ＵＳＡ、カタログ番号６３７３１０）染色並びにアネキシンＶ及びＰＩ染色（ＭＥＢＣＹＴＯ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓキット、ＭＢＬ、ＵＳＡ、カタログ番号４７００）によって測定した。
【０５８８】
ナイーブＴ細胞単離の場合、Ｃｏｂｅ  Ｓｐｅｃｔｒａ（商標）アフェレーシス装置（Ｇａｍｂｒｏ  ＢＣＴ、ＵＳＡ）を用いてＬｅａｕｋａｐｈｅｒｅｓｉｓ  ＵｎｉｔのＳＯＰに従ってＨａｄａｓｓａｈ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｅｉｎ  Ｋｅｒｅｍ  Ｃａｍｐｕｓ、エルサレム、イスラエル）においてインフォームドコンセントを得た適格ドナーから収集した白血球除去輸血画分から、又はフィコール密度勾配で堆積され、８００ｘｇ、２〜８℃、２０分間遠心分離されたバフィーコート（Ｓｈｅｂａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ、イスラエル）から、ＰＢＭＣを抽出した。ＭａｇｎｉＳｏｒｔ  Ｈｕｍａｎ  ＣＤ３  Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ＵＳＡ、カタログ番号８８０２−６８３０−７４）を用いて製造者の指針に従ってＴ細胞を陽性画分から単離した。Ｔ細胞を、追加の２０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、南アメリカ、カタログ番号１２６５７−０２９）及び５％ＤＭＳＯ（ＣｒｙｏＳｕｒｅ−ＤＭＳＯ、ＷＡＫ−Ｃｈｅｍｉｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＧｍｂＨ、ドイツ、カタログ番号ＷＡＫ−ＤＭＳＯ−７０）を含む（上で定義した）「完全培地」中で凍結保存し、ＣＤ１９−ＣＡＲ  Ｔ細胞と同様に実験日に解凍した。
【０５８９】
ＬＤＨ細胞毒性試験
乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、安定細胞質ゾル酵素は、相関的に溶解される細胞によって放出される。したがって、培地中のＬＤＨレベルを使用して、細胞傷害活性を定量化することができる。ＣｙｔｏＴｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＵＳＡ、カタログ番号Ｇ１７８０）は、培地中のＬＤＨレベルを定量化する比色分析である。テトラゾリウム塩基質（ヨードニトロ−テトラゾリウムバイオレット、ＩＮＴ）を培地に過剰に導入すると、ＬＤＨは基質を赤いホルマザン生成物に変換する。形成された赤色の量は、溶解細胞数に正比例する。
【０５９０】
手短に述べると、製造者の指針に従って、標的細胞（ＨｅＬａ又はＨｅＬａ−ＣＤ１９）を単独で、又は単球と併せて培養した。標的細胞がプレートに接着した後（６時間−終夜）、培養物をｙ×１０６個のＡｐｏＣｅｌｌ細胞に１時間曝露し、その後にこれらの細胞をＲＰＭＩで４〜５回洗浄した。ＡｐｏＣｅｌｌ細胞の除去を光学顕微鏡下で視覚的に確認した。１０ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＳＡ、カタログ番号Ｌ４３９１）を共培養に導入し、１時間インキュベートした。インキュベーション後、ＲＰＭＩを用いた３〜５回の洗浄サイクルによってＬＰＳを除去した。生存可能なＣＤ１９−ＣＡＲ  Ｔ細胞又はナイーブＴ細胞を指定Ｅ／Ｔ比（単数又は複数）で添加し、４時間インキュベートした。培地を収集するために、プレートを２５０ｘｇ、２〜２５℃で４分間遠心分離して（Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ  ５８１０Ｒ、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、ドイツ）、細胞を沈降させた。各ウェルからの上清培地５０μｌを新しい平底９６ウェルマイクロプレートウェル（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＵＳＡ、カタログ番号３５９６）に移し、５０μｌ  ＣｙｔｏＴｏｘ  ９６試薬を各ウェルに添加した。プレートを暗所で室温で３０分間インキュベートし、その後、５０μｌ／ウェルの停止液の添加によって反応を終結させた。吸光度をＩｎｆｉｎｉｔｅ  Ｆ５０（Ｔｅｃａｎ、スイス）を用いて４９２ｎｍで読み、Ｍａｇｅｌｌａｎ  Ｆ５０ソフトウェアを用いて取り込んだ。データ解析及びグラフ作成をＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ  ２０１０を用いて行った。
【０５９１】
フローサイトメトリー細胞毒性試験
ＨｅＬａ−ＣＤ１９（標的）とＨｅＬａ（ｃｏｎｔｒｏｌ）細胞を５μＭカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＵＳＡ、カタログ番号Ｃ１１５７）で前もって染色し、混合し、新しいプレート上で、又は単離初代単球が集合するプレート上で、培養した。標的細胞がプレートに接着した後（６時間−終夜）、培養物をｙ×１０６個のＡｐｏＣｅｌｌ細胞に１時間曝露した。プレートをＲＰＭＩで３〜５回洗浄し、懸濁ＡｐｏＣｅｌｌ細胞が洗い流されたことを視覚的に確認した。１０ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳを共培養物に導入し、１時間インキュベートし、その後、ＲＰＭＩを用いた３〜５回の洗浄サイクルによってＬＰＳを除去した。次いで、生存可能なＣＤ１９−ＣＡＲ  Ｔ細胞を特定のＥ／Ｔ比（単数又は複数）で示される共培養物に添加し、４時間インキュベートした。インキュベーション後、トリプシン−ＥＤＴＡ（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、イスラエル、カタログ番号０３−０５２−１Ｂ）を添加し、４分間３７℃でインキュベートすることによって、細胞を採取した。酵素の活動を終了させるために、２〜４倍の体積の「完全培地」を添加した。細胞を収集し、２００ｘｇで５分間室温で遠心分離し、１００μｌ  ＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、カタログ番号１５１４０−１２２）に再懸濁させた。続いて、暗所で３０分間室温でインキュベートされた抗ＣＤ１９（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ＵＳＡ、カタログ番号１２−０１９８−４２）に対して最初に染色した。遠心分離（２９０ｘｇ、１分間、２〜８℃）及び３００μｌ  ＲＰＭＩに再懸濁後、細胞を抗７ＡＡＤ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ＵＳＡ、カタログ番号００−６９９３−５０）に対して染色した。分析を７ＡＤＤ陰性細胞（生細胞）に対して行い、生きた標的細胞（ＨｅＬａ−ＣＤ１９）及び生きた対照細胞（ＨｅＬａ）を計算した。生きた標的細胞パーセントを生きた対照細胞パーセントで割ることによって生存パーセントを計算した。出発細胞数及び自発的標的細胞死の変動を補正するために、標的細胞パーセントとエフェクター細胞（ＣＤ１９−ＣＡＲ  Ｔ細胞）なしで培養された対照細胞パーセントの比で生存パーセントを割った。最後に、補正生存百分率を１００％から減算して細胞傷害性パーセントを求めた。
【０５９２】
９６ウェルプレートにおいて５×１０４個／ウェルのＲａｊｉ細胞から始まるＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞と標的Ｒａｊｉ癌細胞の最適比を求めるために、Ｒａｊｉ癌細胞とＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞（＋／−単球−マクロファージ）を４８時間インキュベートすることによって最初の実験を行った。エフェクター／標的（Ｅ／Ｔ）比プレートをその結果に基づいて構築する。
【０５９３】
Ｒａｊｉ癌細胞をアポトーシス細胞又はアポトーシス上清と一緒に１時間インキュベートし、続いてＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞（＋／−単球−マクロファージ）と４８時間共培養することによって、併用免疫療法実験を行う。
【０５９４】
インビボ条件をシミュレートするために、１×１０５個／ｍｌのＴＨＰ−１細胞を、２００ｎＭ（１２３．４ｎｇ／ｍｌ）酢酸ミリスチン酸ホルボール（ＰＭＡ）を用いて７２時間分化させ、次いでＰＭＡを含まない完全培地中で更に２４時間培養する。次に、Ｒａｊｉ癌細胞を２４ウェルプレート中でＲａｊｉ細胞５×１０５個／ウェルで分化ＴＨＰ−１細胞上で培養する。
【０５９５】
Ｒａｊｉ癌細胞の最初の培養後、４×１０５〜８×１０５個のアポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）を培養物に１〜３時間添加して、免疫寛容環境を誘導する。癌細胞とＡｐｏＣｅｌｌの比を各細胞型に対して最適化する。洗浄後、共培養物をＥ／Ｔ比グラフに基づく所定数のＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞で処理する。ある実験においては、１０ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳをＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞の添加前に培地に添加する。別の実験では、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）をＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞の添加前に培地に添加する。ＬＰＳ又はＩＦＮ−γの添加は、サイトカインストームレベルを指数関数的に増加させると予想される。
【０５９６】
Ｒａｊｉ癌細胞傷害性を分析するために、溶解物を調製し、生存率を４８時間のインキュベーション期間後に測定する。Ｒａｊｉ細胞傷害性を４８時間インキュベーション期間に時々分析する追加の実験を行う。あるいは、ＰｒｏｍｅｇａのＣｙｔｏＴｏｘ  ９６  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ｃａｔ  ＃Ｇ１７８０）を使用する。
【０５９７】
同様の実験をＣＤ１９発現ＨｅＬａ細胞及びＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞でも行う。
【０５９８】
同様の実験をＣＤ１２３発現白血病細胞及びＣＤ１２３＋ＣＡＲ  Ｔ細胞でも行う。
【０５９９】
サイトカイン分析
最初のサイトカイン分析では、培養上清中のＭＩＰ１ａ、ＩＬ−４、ＩＬ−２、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−６、ＩＬ８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＮＦ−γ、ＧＭＣＳＦ、ＴＮＦ−αのレベルを調べる。
【０６００】
追加のサイトカイン分析では、サイトカインＩＬ−１０、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＰ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＦＮα、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２ｐ７０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒ、若しくはＩＬ−７、又はそれらの任意の組合せのレベルを調べる。
【０６０１】
インビボＣＡＲ  Ｔ細胞治療環境を模倣する培養を確立した。Ｒａｊｉ  Ｂｕｒｋｅｔｔリンパ腫細胞をヒト単球−マクロファージ、ＬＰＳ及びＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞の存在下でアポトーシス細胞を添加せずに、又は添加して培養した。
【０６０２】
Ｒａｊｉ細胞を単球及びＬＰＳの存在下でインキュベートし、続いてナイーブＴ細胞（Ｒａｊｉ＋ナイーブＴ）、ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞（Ｒａｊｉ＋ＣＡＲ  Ｔ）、ＣＡＲ  Ｔ細胞：ＡｐｏＣｅｌｌ１：８の比のＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞とアポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）（Ｒａｊｉ＋ＣＡＲ  Ｔ＋ＡｐｏＣｅｌｌ１：８）、ＣＡＲ  Ｔ細胞：ＡｐｏＣｅｌｌ１：３２の比のＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞とアポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）（Ｒａｊｉ＋ＣＡＲ  Ｔ＋ＡｐｏＣｅｌｌ１：３２）、及びＣＡＲ  Ｔ細胞：ＡｐｏＣｅｌｌ１：６４の比のＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞とアポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）（Ｒａｊｉ＋ＣＡＲ  Ｔ＋ＡｐｏＣｅｌｌ１：６４）を添加した。ＧＭ−ＣＳＦ及びＴＮＦ−α（ＴＮＦ−ａ）の後に濃度測定を行った。
【０６０３】
ＩＬ−６、ＩＬ−８及びＩＬ−１３並びに他のサイトカインのサイトカイン放出減少を分析するために、上清を収集し、選択されたサイトカインについてＬｕｍｉｎｅｘ  ＭａｇＰｉｘリーダー及びＥＬＩＳＡアッセイによって調べた。サイトカイン（マウス又はヒト）は、Ｌｕｍｉｎｅｘ技術によってＭＡＰＩＸシステム分析計（Ｍｅｒｅｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ））及びＭＩＬＩＰＬＥＸ分析ソフトウェア（Ｍｅｒｅｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて評価することができる。マウスＩＬ−６Ｒα、ＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）及びＴＧＦ−β１をＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）によって評価した。
【０６０４】
組織分析
骨髄及び肝臓をフローサイトメトリー及び免疫組織化学によって評価した。屠殺後、肝臓及び骨髄を組織病理学的分析用に収集した。組織を４％ホルマリンで４８時間室温で固定し、次いでヘブライ大学の動物施設に提出して、処理した。処理前に骨を脱灰した。パラフィン切片をヘマトキシリン及びエオシン並びにＣＤ１９について染色した。
【０６０５】
ＩＦＮ−γ効果
ＩＦＮ−γ効果をＳＴＡＴ１リン酸化と生物由来物質の両方によって評価する。
結果：
細胞毒性試験のための細胞数の較正
インビトロモデルに使用されるＲａｊｉ細胞の数を求めるために、細胞毒性試験の感度限界を評価した。５×１０４〜２０×１０４個／ウェルのＲａｊｉ細胞を９６ウェルプレート中で四つ組で培養した。依然として完全に生存可能である細胞と比較される四つ組のうち１セットに対して溶解を行った。溶解は瞬時であり、溶解溶液を遠心分離直前に添加して、部分的細胞傷害性をシミュレートした。実際、全細胞量が生細胞を十分超える読みを示し、５×１０４個の細胞数は、最大の相対読みを示した（図１４、データの外挿）。したがって、後続の実験は、実験設計によって必要とされない限り、この細胞数を初期設定として使用する。
【０６０６】
Ｒａｊｉ  Ｂｕｒｋｅｔｔリンパ腫細胞に対するＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞活性の検証
ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞活性を裏付けるために、Ｒａｊｉ癌細胞の単層を１，０００，０００（百万）個のＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞又は１，０００，０００（百万）個の非導入Ｔ細胞に曝露する。２４時間のインキュベーション後、ＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞は、Ｒａｊｉ癌細胞増殖を減少させ、ＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の抗腫瘍活性を示す。
【０６０７】
Ｒａｊｉ  Ｂｕｒｋｅｔｔリンパ腫細胞に対する独立型ＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性を、アポトーシス細胞曝露後の活性と比較した。
【０６０８】
アポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）及びアポトーシス細胞上清（ＡｐｏＳｕｐ及びＡｐｏＭｏｎ  Ｓｕｐ）を試験して、それらがＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞抗腫瘍活性を妨害するかどうか判定する。Ｒａｊｉ  Ｂｕｒｋｅｔｔリンパ腫細胞をアポトーシス細胞と一緒に１時間インキュベートし、続いてＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞（５００，０００、５０万）又はＣＤ１９＋非導入Ｔ細胞（５００，０００、５０万）（ＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞とアポトーシス細胞の比１：２）を添加する。次いで、腫瘍細胞／アポトーシス細胞／ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞を４８時間共培養する。対照Ｒａｊｉ  Ｂｕｒｋｅｔｔリンパ腫細胞をＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞及びＨａｒｔｍａｎ溶液（アポトーシス細胞のビヒクル）と、アポトーシス細胞なしで、４８時間共培養する。
【０６０９】
その結果によれば、４８時間のインキュベーション後、ＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞抗腫瘍活性は、非導入Ｔ細胞とのインキュベーションよりも優れた。同様のインキュベーションをアポトーシス細胞上清でも行う。驚くべきことに、ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞抗腫瘍活性は、アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清に曝露してもしなくても同等である。
【０６１０】
共にインビトロでのＣＤ１９と対比したＣＡＲ改変Ｔ細胞に対するアポトーシス細胞の負の効果が、アポトーシス細胞の存在又は非存在下でＣＡＲ  Ｔの類似のＥ／Ｔ比結果で見られた。
【０６１１】
ＨｅＬａ白血病細胞に対するＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞活性の検証
ＨｅＬａ細胞は、特異的ＣＤ１９発現細胞であり、それによってＣＡＲ  ＣＤ１９＋Ｔ細胞活性の影響を受けやすくなる。さらに、非接着細胞系であるＲａｊｉ細胞とは対照的に、ＨｅＬａ細胞は接着性である。
【０６１２】
ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞活性を裏付けるために、ＨｅＬａ癌細胞の単層を１，０００，０００（百万）個のＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞又は１，０００，０００（百万）個の非導入Ｔ細胞に曝露した。２４時間のインキュベーション後、ＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＨｅＬａ癌細胞増殖を減少させ、ＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の抗腫瘍活性を示す（図１５  ＣＤ１９＋＋ＲＰＭＩ及びＣＤ１９＋＋ＣＡＲ  Ｔ−１９細胞）。
【０６１３】
ＣＤ１９＋ＨｅＬａ腫細胞に対する独立型ＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性を、アポトーシス細胞曝露後の活性と比較した。
【０６１４】
アポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）を試験して、それらがＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞抗腫瘍活性を妨害するかどうか判定した。ＨｅＬａ細胞をアポトーシス細胞と一緒に１時間インキュベートし、続いてＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞（５００，０００、５０万）又はＣＤ１９＋非導入Ｔ細胞（ナイーブＴ細胞、５００，０００、５０万）（ＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞とアポトーシス細胞の比１：２）を添加した。次いで、腫瘍細胞／アポトーシス細胞／ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞を４８時間共培養した。対照ＨｅＬａ細胞をＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞及びＲＰＭＩ（アポトーシス細胞のビヒクル）と、アポトーシス細胞なしで、４８時間共培養した。ＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞：ＨｅＬａ細胞比（Ｅ／Ｔ比）は、５〜２０の範囲であった（図１５）。
【０６１５】
図１５によれば、４８時間のインキュベーション後、ＣＤ１９＋ＣＡＲ−Ｔ細胞抗腫瘍活性は、非導入Ｔ細胞（ナイーブ細胞）又は緩衝剤単独とのインキュベーションよりも優れた。同様のインキュベーションをアポトーシス細胞でも行った。驚くべきことに、ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞抗腫瘍活性は、アポトーシス細胞に曝露してもしなくても同等であった。同様の実験をアポトーシス細胞上清でも行う。図１５は、ＡｐｏＣｅｌｌを添加してもしなくてもＣＡＲ  Ｔ−ＣＤ１９治療と同じインビトロ細胞傷害効果を示す。
【０６１６】
ＣＤ１９＋ＨｅＬａ細胞と対比したＣＡＲ改変Ｔ細胞に対するアポトーシス細胞の負の効果は、アポトーシス細胞の存在下でも非存在下でも類似のＥ／Ｔ比で認められなかった。
【０６１７】
したがって、ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞の同じインビトロ細胞傷害効果が早期アポトーシス細胞を添加してもしなくても認められた。
【０６１８】
ＣＡＲ−Ｔ処置に起因するサイトカインストームの回復、減少又は阻害に対するアポトーシス細胞の効果
【０６１９】
サイトカインＩＬ−８及びＩＬ−１３は、培地中でＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞の添加前後に測定され、サイトカインストームと一致した濃度を示している。アポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清の添加は、培地中のＩＬ−８及びＩＬ−１３濃度の減少を示している。
【０６２０】
より広範囲のサイトカインを用いた分析
実験手順中には産生されないが、臨床現場においてはヒトサイトカインストーム中に確かに出現する可能なより広い範囲及びレベルのサイトカインに対する効果を更に評価するために、ＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍｌ）を上で概説したＲａｊｉ細胞培養状態に癌及びＣＡＲ−１９の存在下で添加した。ＬＰＳの添加は、サイトカインストームレベルを指数関数的に増加させると予想された。アポトーシス細胞への曝露は、サイトカインレベルを劇的に減少させた。図１６及び図１７の結果によれば、ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞の添加は、培地中のＧＭ−ＣＳＦ及びＴＮＦ−αのサイトカイン濃度（ｐｇ／ｍｌ）を大きく増加するが、アポトーシス細胞の存在下でＧＭ−ＣＳＦとＴＮＦ−αの両方がかなり減少する。サイトカイン濃度の減少は、ＣＡＲ  Ｔ細胞とアポトーシス細胞のアポトーシス細胞比に関して用量依存的である。
【０６２１】
結論：
アポトーシス細胞は、ＣＡＲ  Ｔ細胞臨床手順に関連するサイトカインストームのサイトカインマーカーを下方制御することができた。意義深いことに、アポトーシス細胞は、ＣＡＲ  Ｔ細胞の腫瘍活性に対して効果を示さなかった。アポトーシス細胞は、自然免疫に由来する炎症誘発性サイトカインを減少させ、ＩＦＮ−γレベル及びＣＡＲ−Ｔ細胞傷害性を損なわずにＩＦＮ−γ効果を阻害した。
【０６２２】
実施例６：アポトーシス細胞治療は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を受けたびまん性癌インビボモデルにおいてサイトカインストームを予防する
目的：癌細胞に対するＣＡＲ  Ｔ細胞有効性及びサイトカインストームマーカーサイトカインのレベルを測定するために、びまん性腫瘍モデルにおけるアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞に由来する上清のインビボ効果を試験する
材料及び方法
インビトロ研究
インビトロ研究のための実施例５に記載の方法を参照されたい。
【０６２３】
細胞及び細胞培養
Ｒａｊｉ  Ｂｕｒｋｉｔｔリンパ腫細胞（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ｃａｔ．＃８５０１１４２９）を製造者の指針に従って培養した。ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞、細胞培養、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、単球単離及びインビトロ測定は、上記実施例の通りである。生成した早期アポトーシス細胞は、少なくとも５０％のアネキシンＶ陽性及び５％未満のＰＩ陽性細胞であった。
【０６２４】
インビボ研究
マウス
７〜８週齢のＳＣＩＤベージュマウスを（かつてＨａｒｌａｎとして知られた）Ｅｎｖｉｇｏから購入した。マウスをＳＰＦフリー動物施設において施設のＩＡＣＵＣ指針に従って飼育した。実験の過程において、マウスを毎日モニターし、体重を週３回測定した。後肢麻痺を示したマウスを屠殺した。屠殺後、骨髄及び肝臓をＦＡＣＳ分析及び組織学的処理用に収集し、血清をサイトカインプロファイリング用に−８０℃で凍結した。
【０６２５】
インビボ実験
ＳＣＩＤベージュマウス（Ｃ．Ｂ−１７／ＩｃｒＨｓｄ−Ｐｒｋｄｃ−ＳＣＩＤ−Ｌｙｓｔ−ｂｇ、Ｈａｒｌａｎ、イスラエル）をＳＰＦ条件でＴｈｅ  Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ  ｆｏｒ  Ａｎｉｍａｌ  Ｆａｃｉｌｉｔｉｅｓ、ヘブライ大学（Ｅｉｎ  Ｋｅｒｅｍ  Ｃａｍｐｕｓ、イスラエル）において、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ（ＡＡＡＬＡＣ）に従って収容した。研究は、Ｔｈｅ  Ｈｅｂｒｅｗ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ａｎｉｍａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓによって認可され、動物の苦痛をできるだけ最小限にした。
【０６２６】
（図１８Ａ）播種性腫瘍モデルの場合、７〜８週齢雌性ＳＣＩＤベージュマウスに、２００μｌ  ＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ、カタログ番号１５１４０−１２２）中に懸濁された１×１０５個／マウスのＲａｊｉ細胞をｉ．ｖ．注射した（１日目）。６日目、関連グループのマウスに２００μｌ  Ｈａｒｔｍａｎｎ溶液乳酸加リンゲル注射、Ｔｅｖａ  Ｍｅｄｉｃａｌ、イスラエル、カタログ番号ＡＷＮ２３２４）中の３０×１０６個／マウスの細胞ＡｐｏＣｅｌｌをｉ．ｖ．接種した。６日目、関連グループのマウスに、２００μｌ  ＡＩＭ  Ｖ中の１０×１０６個／マウスの生存可能なＣＤ１９−ＣＡＲ  Ｔ細胞又はナイーブＴ細胞をｉ．ｖ．接種した。対照マウスに等体積のＲＰＭＩを各処置で投与した。
【０６２７】
マウスを臨床適応症について調べ、週２回計量し、後肢麻痺の発生後に屠殺した。骨及び肝臓の病理学的試料をヘブライ大学のＡｎｉｍａｌ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ  Ｕｎｉｔによって調製し、ヒトＣＤ２０（Ｃｅｌｌ  Ｍａｒｑｕｅ、ＵＳＡ、クローンＬ２６、カタログ番号１２０Ｍ−８４）に対して染色してＲａｊｉ細胞を検出し、ヒトＣＤ３（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ＵＳＡ、カタログ番号８５０６１）に対して染色してヒトＴ細胞を検出した。
【０６２８】
ある実験においては、ＬＰＳをＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞の添加前に動物対象に投与する。別の実験では、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）をＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞の添加前に投与する。ＬＰＳ又はＩＦＮ−γの添加は、サイトカインストームレベルを指数関数的に増加させると予想される。
【０６２９】
サイトカイン分析では、ＩＬ−１０、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＰ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＦＮα、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２ｐ７０、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒ、若しくはＩＬ−７、又はそれらの任意の組合せを含めて、ただしそれらに限定されないサイトカインのレベルを調べる。サイトカイン（マウス又はヒト）をＬｕｍｉｎｅｘ技術によってＭＡＰＩＸシステム分析計（Ｍｅｒｅｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ））及びＭＩＬＩＰＬＥＸ分析ソフトウェア（Ｍｅｒｅｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて評価する。マウスＩＬ−６Ｒα、ＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）及びＴＧＦ−β１をＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）によって評価する。
【０６３０】
組織分析
骨髄及び肝臓をフローサイトメトリー及び免疫組織化学によって評価する。屠殺後、肝臓及び骨髄を組織病理学的分析用に収集した。組織を４％ホルマリンで４８時間室温で固定し、次いでヘブライ大学の動物施設に提出して、処理した。処理前に骨を脱灰した。パラフィン切片をヘマトキシリン及びエオシン並びにＣＤ１９について染色した。
【０６３１】
ＩＦＮ−γ効果
ＩＦＮ−γ効果をＳＴＡＴ１リン酸化と生物由来物質の両方によって評価する。
【０６３２】
結果
ＣＡＲ  Ｔ細胞治療は、サイトカイン放出症候群を誘発する
３グループの腫瘍のないマウス及び腫瘍を有するマウスに漸増用量のＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞（３×１０６、１０×１０６又は３０×１０６）を投与する（ｉ．ｐ．又は腫瘍に直接）。最高用量では、腫瘍のないマウス及び腫瘍を有するマウスは、２４時間以内に挙動が抑制され、起毛し、移動度が減少し、同時に体重が急激に減少し、４８時間以内に死亡した。ヒトインターフェロン−ガンマ並びにマウスＩＬ−６、ＩＬ−８及びＩＬ−１３が、最高用量のＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたマウスの血液試料中に検出可能である。異なる腫瘍抗原に対する高用量のＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与された動物は、体重減少も行動上の変化も示さない。
【０６３３】
アポトーシス細胞の投与は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療によって誘発されるサイトカイン放出症候群の発生率を抑制する、又は減少させる。
【０６３４】
最高用量のＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与された１グループのマウスに、安全で有効な用量であることが以前に実証された２．１０×１０８個／ｋｇのアポトーシス細胞を同時に投与する。ヒトＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ＋アポトーシス細胞を投与されたマウスは、少なくとも１種のマウス炎症誘発性サイトカインのレベルがかなり低く、体重減少が少なく、死亡率が低い。
【０６３５】
ＣＡＲ  Ｔ細胞投与と組み合わせたアポトーシス細胞の投与は、ＣＡＲ  Ｔ細胞抗腫瘍活性に影響しなかった。
【０６３６】
図１８Ｂによれば、ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与せずにＣＤ１９＋Ｒａｊｉ細胞を注射したＳＣＩＤマウスの予想される死は、１８〜２１日目であった。ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたマウスの４０パーセント（４０％）が少なくとも３０日生存した（図１８青及び黄色の線）。生存者の割合は、アポトーシス細胞の添加と無関係であった（図１８）。生存マウスを３０日目に屠殺した。
【０６３７】
結論：インビボでＣＤ１９と対比して、生存は同等であり、ＣＡＲ改変Ｔ細胞に対するアポトーシス細胞の負の効果はなかった。
【０６３８】
ＩＬ−６、ＩＰ−１０、ＴＮＦ−ａ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１βを含めた炎症誘発性サイトカインの有意な下方制御（ｐ＜０．０１）が記述されている。ＩＦＮ−γは下方制御されなかったが、マクロファージ及び樹状細胞に対するその効果は、リン酸化ＳＴＡＴ１のレベルとＣＸＣＬ１０及びＣＸＣＬ９のＩＦＮ−γ誘導発現の両方で阻害された。
【０６３９】
結論：
アポトーシス細胞は、自然免疫に由来する炎症誘発性サイトカインを減少させ、ＩＦＮ−γレベル及びＣＡＲ−Ｔ細胞傷害性を損なわずにＩＦＮ−γ効果を阻害する。
【０６４０】
実施例７：アポトーシス細胞治療は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を受けた固形腫瘍癌インビボモデルにおいてサイトカインストームを予防する
目的：癌細胞に対するＣＡＲ  Ｔ細胞有効性及びサイトカインストームマーカーサイトカインのレベルを測定するために、固形腫瘍モデルにおけるアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞に由来する上清のインビボ効果を試験する
材料及び方法
インビトロ研究
細胞及び細胞培養
ＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞、ＴＭＣＤ２８を含む第二世代ＣＡＲ−Ｔ−ＣＤ１９細胞を使用し、細胞培養、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、単球単離及びインビトロ測定は、上記実施例１＆３＆５の通りであった。生成した早期アポトーシス細胞は、少なくとも５０％のアネキシンＶ陽性及び５％未満のＰＩ陽性細胞であった。
【０６４１】
インビボ研究
マウス
７〜８週齢のＳＣＩＤ−ベージュマウス及びＮＳＧＳマウスをＨａｒｌａｎ（イスラエル）から購入し、Ｓｈａｒｅｔｔ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＳＰＦ動物施設で飼育した。
【０６４２】
固形腹腔内腫瘍を形成するために、ＳＣＩＤベージュマウス又はＮＳＧＳマウスに、腹膜に接着することができるＣＤ１９発現ＨｅＬａ細胞を接種した。Ｔ細胞投与前にマウスをグループに分けた。
【０６４３】
ｉ．ｖ．接種後６日目、５日目に前条件づけしたアポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）と一緒に、又はアポトーシス細胞（ＡｐｏＣｅｌｌ）なしで、１０×１０６個のＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞をマウスに投与した。前条件づけを受けたマウスに５×１０６又は３０×１０６個のＡｐｏＣｅｌｌを投与した。腫瘍を毎週調査し、循環サイトカインレベルを毎週モニターし、Ｌｕｍｉｎｅｘシステムによって測定した。２５種のマウスサイトカイン及び３２種のヒトサイトカインをＬｕｍｉｎｅｘ技術によって評価した。実験終了後、マウスを選別し、器官（骨髄、肝臓及び脾臓）の腫瘍の存在／サイズを（ＦＡＣＳ及び免疫組織化学によって）調べた。
【０６４４】
サイトカイン分析では、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＭＩＰ−１α、ＴＮＦα、ＭＩＰ−１β、ＩＦＮα及びＩＰ−１０を含めて、ただしそれらに限定されないサイトカインのレベルを調べた。サイトカイン（マウス又はヒト）をＬｕｍｉｎｅｘ技術によってＭＡＰＩＸシステム分析計（Ｍｅｒｅｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ））及びＭＩＬＩＰＬＥＸ分析ソフトウェア（Ｍｅｒｅｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて評価した。マウスＩＬ−６Ｒα、ＭＩＧ（ＣＸＣＬ９）及びＴＧＦ−β１をＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）によって評価した。
【０６４５】
組織分析
骨髄及び肝臓をフローサイトメトリー及び免疫組織化学によって評価する。
【０６４６】
ＩＦＮ−γ効果
ＩＦＮ−γ効果をＳＴＡＴ１リン酸化と生物由来物質の両方によって評価した。
【０６４７】
結果
ＣＡＲ  Ｔ細胞治療は、サイトカイン放出症候群を誘発する
３グループの腫瘍のないマウス及び腫瘍を有するマウスに漸増用量のＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞（３×１０６、１０×１０６又は３０×１０６）を投与した（ｉ．ｐ．又は腫瘍に直接）。最高用量では、腫瘍のないマウス及び腫瘍を有するマウスは、２４時間以内に挙動が抑制され、起毛し、移動度が減少し、同時に体重が急激に減少し、４８時間以内に死亡した。
【０６４８】
図１９Ａ〜１９Ｃのグラフは、ＣＡＲ  Ｔ細胞の存在の前でさえ、腫瘍からのＩＬ−６、ＩＰ−１０及び驚くべきことにＴＮＦ−αサイトカイン放出までもレベルが増加することを示す。図１９Ａ〜１９Ｃによれば、予想外にＩＬ−６、ＩＰ−１０及びＴＮＦ−αは、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療なしでも、癌細胞の存在によって増加した。ＣＡＲ  Ｔ細胞治療（Ｈｅｌａ−ＣＡＲ  Ｔ細胞ＣＤ−１９）の存在下で、サイトカインの放出は、かなり増大した。これらの結果によれば、腫瘍自体が、炎症誘発性サイトカインを放出する。
【０６４９】
早期アポトーシス細胞の添加の利点を評価するために、サイトカインＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＭＩＰ−１α、ＴＮＦα、ＭＩＰ−１β、ＩＦＮα及びＩＰ−１０を３回の実験で測定した。その結果によれば、マクロファージ関連サイトカインは、ＡｐｏＣｅｌｌ投与の存在下で下方制御され、Ｔ細胞関連サイトカインレベルは、大きくは変化しなかった（表４）。
【０６５０】
表４：ＣＤ１９発現ＨｅＬａ細胞固形腫瘍、＋／−ＣＡＲ  Ｔ細胞ＣＤ１９治療、及び＋／−ＡｐｏＣｅｌｌを含む腹膜内インビボモデルのサイトカインレベル
【０６５１】
【表４】
2019505552.tif 000006
【０６５２】
表４は、ＣＡＲ  Ｔ細胞投与＋／−ＡｐｏＣｅｌｌ後２４時間のサイトカイン測定を示す。ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の結果としての細胞傷害性は、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−６、ＭＩＰ−１α、ＴＮＦα、ＭＩＰ−１β及びＩＰ−１０を含めたサイトカインを上昇させ、そのレベルは、ＡｐｏＣｅｌｌの存在下で有意に下方制御された（ｐ＜０．０５〜０．０００１）。これらのサイトカインは、主にマクロファージに関連する。それに対して、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ１５などのＴ細胞に関連するサイトカインのレベルは、大きく変化しなかった。
【０６５３】
図１９Ａ〜Ｃ及び表４の結果によれば、癌及びＣＡＲに関連したＣＲＳは、幾つかの要素を有する：サイトカインを分泌することができる腫瘍；腫瘍、ＣＡＲ及び他の因子に応答する自然免疫；並びに自然免疫に影響する死を引き起こすサイトカインを分泌するＣＡＲ  Ｔ細胞。ＡｐｏＣｅｌｌは、Ｔ細胞ともＣＡＲ  Ｔ細胞とも相互作用せずに、自然免疫、主にマクロファージ、単球及び樹状細胞と相互作用して、これらのマクロファージ、単球及び樹状細胞の応答を下方制御する。
【０６５４】
異なる腫瘍抗原に対する高用量のＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与された動物は、体重減少も行動上の変化も示さない。
【０６５５】
アポトーシス細胞の投与は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療によって誘発されるサイトカイン放出症候群の発生率を抑制する、又は減少させる。
【０６５６】
最高用量のＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与された１グループのマウスに、安全で有効な用量であることが以前に実証された２．１０×１０８個／ｋｇのアポトーシス細胞を同時に投与した。アポトーシス細胞は、ＣＤ１９に対して特異性を有するＣＡＲ改変Ｔ細胞に対してインビトロでもインビボでも負の効果を持たなかった。インビトロでアポトーシス細胞の存在下／非存在下でＣＡＲ  Ｔ細胞に対して類似のＥ／Ｔ比が存在し、インビボで類似の生存曲線が存在した（データ示さず）。
【０６５７】
ヒトＣＤ１９＋ＣＡＲ  Ｔ＋アポトーシス細胞を投与されたマウスは、少なくとも１種のマウス炎症誘発性サイトカインのレベルがかなり低く、体重減少が少なく、死亡率が低かった。
【０６５８】
インビボでＣＤ１９と対比したＣＡＲ改変Ｔ細胞に対するアポトーシス細胞の負の効果が、アポトーシス細胞の存在又は非存在下でＣＡＲ  Ｔの類似のＥ／Ｔ比結果で見られ、インビボで類似の生存曲線で見られた。
【０６５９】
ＩＬ−６、ＩＰ−１０、ＴＮＦ−ａ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１βを含めた炎症誘発性サイトカインの有意な下方制御（ｐ＜０．０１）が記述されている（データ示さず）。ＩＦＮ−γは下方制御されなかったが、マクロファージ及び樹状細胞に対するその効果は、リン酸化ＳＴＡＴ１のレベルとＣＸＣＬ１０及びＣＸＣＬ９のＩＦＮ−γ誘導発現の両方で阻害された（データ示さず）。
【０６６０】
結論：
ＣＲＳは、腫瘍生物学、単球／マクロファージ／樹状細胞との相互作用、並びにＣＡＲ  Ｔ細胞効果及び増殖に対する応答として含めて、幾つかの要因から発生する。アポトーシス細胞は、自然免疫に由来する炎症誘発性サイトカインを減少させ、ＩＦＮ−γレベル又はＣＡＲ−Ｔ細胞傷害性を損なわずに単球／マクロファージ／樹状細胞に対するＩＦＮ−ｇ効果を阻害する。したがって、アポトーシス細胞は、自然免疫に由来する炎症誘発性サイトカインを減少させ、ＩＦＮ−γレベル及びＣＡＲ−Ｔ細胞傷害性を損なわずにＩＦＮ−γ効果を阻害した。これらの結果は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を用いた臨床試験におけるＣＲＳの予防のためのＡｐｏＣｅｌｌの安全な使用を支持する。
【０６６１】
本明細書に開示されるある種の特徴を本明細書で説明し、記述したが、多数の改変、置換、変更及び均等物が当業者に現在想起されるはずである。したがって、添付の特許請求の範囲が、本明細書に開示される真の精神の範囲内のすべてのこうした改変及び変更を包含するものであることを理解すべきである。
【図１】
2019505552.tif 000007
【図２Ａ】
2019505552.tif 000008
【図２Ｂ】
2019505552.tif 000009
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2019505552.tif 000013
【図７】
2019505552.tif 000014
【図８】
2019505552.tif 000015
【図９Ａ】
2019505552.tif 000016
【図９Ｂ】
2019505552.tif 000017
【図９Ｃ】
2019505552.tif 000018
【図９Ｄ】
2019505552.tif 000019
【図９Ｅ】
2019505552.tif 000020
【図９Ｆ】
2019505552.tif 000021
【図９Ｇ】
2019505552.tif 000022
【図９Ｈ】
2019505552.tif 000023
【図９Ｉ】
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【図９Ｊ】
2019505552.tif 000025
【図１０】
2019505552.tif 000026
【図１１Ａ】
2019505552.tif 000027
【図１１Ｂ】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
2019505552.tif 000030
【図１３Ｂ】
2019505552.tif 000031
【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
2019505552.tif 000036
【図１７】
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2019505552.tif 000038
【図１８Ａ】
2019505552.tif 000039
【図１８Ｂ】
2019505552.tif 000040
【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年10月17日(2018.10.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象におけるキメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）癌治療中のＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖速度を維持する、又は増加させる医薬品の調製のためのアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を含む組成物の使用であって、前記医薬品が、前記対象における前記増殖速度を、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記組成物を含む前記医薬品を投与されない対照対象と比較して、維持する、又は増加させる、使用。
【請求項２】
前記医薬品が、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療の有効性を低下させない、又は阻害しない、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記医薬品が前記対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率を、前記対照対象と比較して抑制する、又は減少させる、請求項１又は請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記アポトーシス細胞又は前記アポトーシス細胞上清を含む前記組成物を含む前記医薬品が、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞治療の前に、該治療と同時に、又は該治療の後に投与されるように処方される、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記アポトーシス細胞上清がアポトーシス細胞−白血球上清であり、前記アポトーシス細胞−白血球上清の採取前に白血球が前記アポトーシス細胞と共培養され、前記白血球が、食細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞及びＮＫ細胞からなる群から選択される、請求項１から４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記医薬品が前記対象におけるＩＬ−２レベルを前記対照対象と比較して維持する、又は増加させる、請求項１から５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
対象におけるキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）癌治療の有効性を高める医薬品の調製のための、ＣＡＲ  Ｔ細胞と、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む群から選択される追加の薬剤とを含む組成物の使用であって、前記医薬品が前記対象における前記ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療の有効性を、ＣＡＲ  Ｔ細胞癌治療を受けるが前記追加の薬剤を含む前記組成物を含む前記医薬品を投与されない対照対象と比較して高める、使用。
【請求項８】
前記医薬品が、少なくとも１種の炎症誘発性サイトカインの産生レベルを、前記対照対象における前記炎症誘発性サイトカインのレベルと比較して低下させる、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
前記炎症誘発性サイトカインがＩＬ−６を含む、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記組成物を含む前記医薬品がアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を含むとき、前記医薬品が前記対象におけるＩＬ−２レベルを前記対照対象と比較して維持する、又は増加させる、請求項７から９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
前記医薬品が前記対象におけるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又はサイトカインストームの発生率を、前記対照対象と比較して抑制する、又は減少させる、請求項７から１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
前記組成物を含む前記医薬品が、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞及び前記追加の薬剤又はそれらの任意の組合せを単一の組成物又は少なくとも２つの組成物に含み、前記追加の薬剤又はそれらの薬剤の組合せが、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞を含まない組成物に含まれるとき、前記薬剤又は複数の薬剤を含む前記組成物が前記ＣＡＲ  Ｔ細胞を含む前記組成物の投与の前に、投与と同時に、又は投与の後に投与されるように処方される、請求項７から１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
前記アポトーシス細胞上清がアポトーシス細胞−白血球上清であり、前記アポトーシス細胞−白血球上清の採取前に白血球が前記アポトーシス細胞と共培養され、前記白血球が、食細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞及びＮＫ細胞からなる群から選択される、請求項７から１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
対象における癌又は腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する医薬品の調製のための、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞）と追加の薬剤とを含む組成物の使用であって、前記追加の薬剤が、アポトーシス細胞、アポトーシス細胞上清、ＣＴＬＡ−４遮断薬、アルファ−１抗トリプシン若しくはその断片若しくはその類似体、テルル化合物、若しくは免疫調節剤、又はそれらの任意の組合せを含む、使用。
【請求項１５】
前記医薬品は、前記対象における前記癌又は前記腫瘍を処置する、予防する、阻害する、その発生率を減少させる、改善する、又は軽減する有効性が、ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたが前記追加の薬剤を含む前記医薬品を投与されない対照対象と比較して高い、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
前記医薬品が、前記対象における少なくとも１種の炎症誘発性サイトカインの産生レベルを、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたが前記薬剤を含む前記組成物を含む前記医薬品を投与されない対照対象における前記炎症誘発性サイトカインのレベルと比較して低下させる、請求項１４から１５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
前記炎症誘発性サイトカインがＩＬ−６を含む、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
前記追加の薬剤がアポトーシス細胞又はアポトーシス細胞上清を含むとき、前記医薬品が前記対象におけるＩＬ−２レベルを、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞を投与されたが前記アポトーシス細胞又は前記アポトーシス細胞上清を含む前記医薬品を投与されない対照対象と比較して増加させる、請求項１４から１７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９】
前記医薬品が、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞及び前記追加の薬剤又はそれらの任意の組合せを、単一の組成物又は少なくとも２つの組成物に含み、前記追加の薬剤又はそれらの薬剤の組合せが、前記ＣＡＲ  Ｔ細胞を含まない組成物に含まれるとき、前記薬剤又は複数の薬剤を含む前記組成物を含む前記医薬品が前記ＣＡＲ  Ｔ細胞の投与の前に、投与と同時に、又は投与の後に投与されるように処方される、請求項１４から１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２０】
前記アポトーシス細胞上清がアポトーシス細胞−白血球上清であり、前記アポトーシス細胞−白血球上清の採取前に白血球が前記アポトーシス細胞と共培養され、前記白血球が、食細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞及びＮＫ細胞からなる群から選択される、請求項１４から１９のいずれか一項に記載の使用。
【国際調査報告】
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