(57)【要約】  本発明は、0.01%(w/w)以下のフェノールを含む、GLP-1ペプチドであるセマグルチドの医薬組成物、その調製物、このような組成物を含むキット、及びこれらの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
セマグルチド及び0.01%(w/w)以下のフェノールを含む液体医薬組成物であって、
a.非経口投与のためのものであり、
b.少なくとも60%w/wの水を含む水溶液であり、又は
c.バッファー又は等張剤からなる群から選択される1つ又は複数の薬学的に許容可能な賦形剤を更に含む、組成物。
【請求項２】
フェノールを含まない、請求項1に記載の組成物。
【請求項３】
少なくとも60%w/wの水を含む水溶液である、請求項1又は2に記載の組成物。
【請求項４】
セマグルチドの濃度が、前記組成物1ml当たり0.5〜10mg又は0.01〜5mgである、請求項1から3のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
1つ又は複数の薬学的に許容可能な賦形剤を含む、請求項1から4のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記1つ又は複数の薬学的に許容可能な賦形剤が、バッファー又は等張剤からなる群から選択される、請求項5に記載の組成物。
【請求項７】
防腐剤を含まない、請求項1から6のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
6.0〜10.0の範囲のpH、例えばpH7.0〜7.8を有する、請求項1から7のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
非経口投与のためのものである、請求項1から8のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記非経口投与が皮下投与である、請求項9に記載の組成物。
【請求項１１】
セマグルチド及び0.01%(w/w)以下のフェノールを含む液体医薬組成物、並びに使用のための指示を含むキット。
【請求項１２】
セマグルチド及び0.01%(w/w)以下のフェノールを含む液体医薬組成物、並びに前記組成物を対象に投与するための注射装置を含むキットであって、前記注射装置が、カートリッジ交換タイプのペン及びプレフィルドタイプのペンからなる群から選択される、キット。
【請求項１３】
前記医薬組成物が、請求項1〜10のいずれか一項に記載の通りである、請求項11又は12に記載のキット。
【請求項１４】
医学において使用するための、請求項1〜10のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
糖尿病又は肥満の治療において使用するための、請求項1〜10及び14のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、GLP-1ペプチドであるセマグルチドを含む医薬組成物の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
GLP-1ペプチドは、溶液内で安定性の損失を起こす、例えば、物理的安定性の損失を起こす傾向があることが知られている。したがって、安定性が更に良好な、GLP-1ペプチドを含む液体医薬組成物が望まれている。このようにして向上される安定性は、物理的安定性及び/又は化学的安定性であり得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】WO2006/097537
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】WHO Drug Information、第24巻、第1号、2010年
【非特許文献２】Naikiら、(1989)Anal. Biochem. 177、244〜249
【非特許文献３】LeVine(1999)Methods. Enzymol. 309、274〜284
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
一部の実施形態では、本発明は、セマグルチド及び0.01%(w/w)以下のフェノールを含む液体医薬組成物に関する。一部の実施形態では、本発明は、本明細書において規定される医薬組成物を含むキットに関する。一部の実施形態では、本発明は、医学において使用するための、本明細書において規定される医薬組成物に関する。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
本発明は、GLP-1ペプチドであるセマグルチド及び0.01%(w/w)以下のフェノールを含む液体医薬組成物に関する。驚くべきことに、本発明者らは、このような組成物の化学的及び/又は物理的安定性が向上していることを見出した。一部の実施形態では、組成物は、フェノールを含まない。一部の実施形態では、組成物は、0.01〜10mg/mlのセマグルチドを含む。一部の実施形態では、組成物は、6.0〜10.0の範囲のpH、例えばpH7.0〜7.8を有する。
【０００７】
一部の実施形態では、本発明の組成物は、セマグルチド及び0.01%(w/w)以下のフェノールを含む液体医薬組成物であって、
a.非経口投与のためのものであり、
b.少なくとも60%w/wの水を含む水溶液であり、又は
c.バッファー又は等張剤からなる群から選択される1つ又は複数の薬学的に許容可能な賦形剤を更に含む、組成物である。
【０００８】
一部の実施形態では、本発明の組成物は、セマグルチド、0.01%(w/w)以下のフェノール、及び場合によって、1つ又は複数の薬学的に許容可能な賦形剤を含む、液体医薬組成物であり、この製剤は、皮下投与等の非経口投与のためのものである。
【０００９】
一部の実施形態では、本発明の組成物は、セマグルチド、0.01%(w/w)以下のフェノール、少なくとも60%w/wの水、及び場合によって、1つ又は複数の薬学的に許容可能な賦形剤を含む、液体医薬組成物である。
【００１０】
一部の実施形態では、本明細書において使用される用語「安定性」は、液体医薬組成物内でのセマグルチドの安定性を指す。一部の実施形態では、安定性は、GLP-1ペプチドの化学的安定性(例えば、本明細書におけるアッセイ(I)等のHPLCによって判定される)、及び場合によって、GLP-1ペプチドの物理的安定性(例えば、本明細書におけるアッセイ(II)等のチオフラビンTアッセイによって判定される)である。
【００１１】
一部の実施形態では、本明細書において使用される、セマグルチドに関連する用語「化学的安定性」は、セマグルチド化合物の共有結合が実質的に無傷であることを指す。一部の実施形態では、GLP-1ペプチドの化学的安定性は、本明細書におけるアッセイ(I)等のHPLCによって判定される。一部の実施形態では、組成物は、その共有結合が、25℃で3ヶ月保存した後に、前記GLP-1ペプチドの少なくとも80%(w/v)において無傷であれば、化学的安定性を有する。一部の実施形態では、セマグルチドの化学的安定性は、本明細書におけるアッセイ(IV)によって判定される。
【００１２】
一部の実施形態では、本明細書において使用される、セマグルチドに関連する用語「物理的安定性」は、例えば小線維構造の形態の、凝集体を実質的に形成しないセマグルチドを指す。一部の実施形態では、物理的安定性は、本明細書におけるアッセイ(II)等のチオフラビンTアッセイによって判定される。
【００１３】
一部の実施形態では、本発明の組成物は、安定な医薬組成物である。本用語「安定な医薬組成物」は、明細書において使用される場合、GLP-1ペプチドを含み、保存後に前記GLP-1ペプチドの少なくとも80%(w/v)を含む(例えば、25℃で3ヶ月の静止状態での保存の後)医薬組成物、例えば溶液又は懸濁液を指す。安定性の試験のための保存条件は、2〜8℃、例えば5℃、又は5℃で少なくとも2.5年であり得る。或いは、安定性の試験のための保存条件は、少なくとも4週間、例えば6週間又は3ヶ月、場合によって30℃であり得る。この安定な医薬組成物のための保存の条件は、5℃で1又は2年であり得る。この安定な医薬組成物のための保存の条件は、5℃で3年であり得る。或いは、この保存の条件は、25℃で24時間又は1週間であり得る。更に別の代替手段では、この保存の条件は、室温で2ヶ月、例えば最大2ヶ月であり得る。
【００１４】
一部の実施形態では、GLP-1ペプチドの化学的安定性は、保存期間の最後に、前記GLP-1ペプチドの少なくとも80%(w/v)、例えば少なくとも90%(w/v)又は少なくとも95%(w/v)がその共有結合を無傷のまま有していることが必要である。一部の実施形態では、GLP-1ペプチドの化学的安定性は、保存期間の最後に、前記GLP-1ペプチドの少なくとも95%(w/v)、例えば少なくとも97%(w/v)又は少なくとも99%(w/v)がその共有結合を無傷のまま有していることが必要である。
【００１５】
本発明の組成物は、0.01%(w/w)以下のフェノールを含む。一部の実施形態では、組成物は、フェノールを実質的に含まない。
【００１６】
医薬組成物
用語「医薬組成物」及び「組成物」は、本明細書において区別せずに使用され、それを必要とする対象への投与に適した医薬組成物を指す。
【００１７】
一部の実施形態では、組成物は、0.01〜100mg/mlのセマグルチドを含む。一部の実施形態では、組成物は、0.1〜50mg/ml、例えば、0.5〜25mg/ml又は1〜15mg/mlのセマグルチドを含む。一部の実施形態では、組成物は、0.1-10mg/ml、例えば0.5〜5mg/ml又は1〜2mg/mlのセマグルチドを含む。一部の実施形態では、組成物は、0.01〜10mg/ml、例えば0.01〜5mg/mlのセマグルチドを含む。一部の実施形態では、組成物は、9mg/ml以下、例えば8mg/ml以下又は7mg/ml以下のセマグルチドを含む。一部の実施形態では、組成物は、6mg/ml以下、例えば5mg/ml以下又は4mg/ml以下のセマグルチドを含む。一部の実施形態では、組成物は、3mg/ml以下、例えば2mg/ml以下又は1mg/ml以下のセマグルチドを含む。一部の実施形態では、組成物は、少なくとも0.01mg/ml、例えば少なくとも0.02mg/ml又は少なくとも0.05mg/mlのセマグルチドを含む。一部の実施形態では、組成物は、1.34mg/mlのセマグルチドを含む。
【００１８】
一部の実施形態では、本発明の組成物は、3〜10の範囲のpH、例えばpH6〜10又は6〜9を有する。一部の実施形態では、本発明の組成物は、pH6.5〜8.5の範囲のpH、例えばpH7.0〜7.8を有する。
【００１９】
一部の実施形態では、本発明の組成物は、1つ又は複数の薬学的に許容可能な賦形剤を含む。
【００２０】
一部の実施形態では、本発明の組成物は、プロピレングリコール等の等張剤を含む。一部の実施形態では、等張剤は、プロピレングリコール又は塩化ナトリウムである。
【００２１】
一部の実施形態では、本発明の組成物は、リン酸バッファー、TRIS、クエン酸塩等のバッファーを含むか、又はバッファーを含まない。一部の実施形態では、リン酸バッファーは、リン酸水素二ナトリウム等のリン酸ナトリウムバッファーである。
【００２２】
一部の実施形態では、本発明の組成物は、防腐剤を含まない。
【００２３】
本発明の組成物は、液体医薬組成物の形態である。一部の実施形態では、液体医薬組成物は、溶液又は懸濁液である。一部の実施形態では、本発明の組成物は、水溶液等の溶液の形態である。一部の実施形態では、本明細書において使用される用語「水溶液」は、少なくとも60%w/wの水を含む溶液を指す。一部の実施形態では、水溶液は、60〜99%w/wの水を含む。一部の実施形態では、水溶液は、少なくとも75%w/wの水、例えば、少なくとも80%w/wの水又は少なくとも85%w/wの水を含む。一部の実施形態では、水溶液は、少なくとも90%w/wの水、例えば、少なくとも92%w/wの水又は少なくとも94%w/wの水を含む。
【００２４】
セマグルチド
GLP-1ペプチドであるセマグルチドは、WO2006/097537の実施例4において記載されている通りに調製することができる。セマグルチドはまた、N6,26-{18-[N-(17-カルボキシヘプタデカノイル)-L-γ-グルタミル]-10-オキソ-3,6,12,15-テトラオキサ-9,18-ジアザオクタデカノイル}-[8-(2-アミノ-2-プロパン酸),34-L-アルギニン]ヒトグルカゴン様ペプチド1(7〜37)としても知られている。WHO Drug Information、第24巻、第1号、2010年を参照されたい。一部の実施形態では、セマグルチドは、その完全に又は部分的にイオン化された形態で組成物内に存在し得る。例えば、1つ又は複数のカルボン酸基(-COOH)はカルボキシレート基(-COO-)に脱プロトン化され得、且つ/又は、1つ又は複数のアミノ基(-NH2)は-NH3+基にプロトン化され得る。一部の実施形態では、セマグルチドは、塩の形態で組成物に添加される。
【００２５】
投与及びキット
本発明の組成物は、非経口投与のためのものである。一部の実施形態では、組成物は、皮下投与のためのものである。
【００２６】
一部の実施形態では、本発明の組成物は、週に1回投与するためのものである。一部の実施形態では、本発明の組成物は、1日に1回、2日に1回、又は3日に1回投与するためのものである。
【００２７】
一部の実施形態では、本発明は、本明細書において規定される医薬組成物及び使用のための指示を含むキットに関する。一部の実施形態では、使用のための指示は、薬剤添付文書を含む。
【００２８】
一部の実施形態では、本発明は、本明細書において規定される医薬組成物及び注射装置を含むキットに関する。一部の実施形態では、注射装置は、カートリッジ交換タイプのペン(durable pen)及びプレフィルドタイプのペン(prefilled pen)からなる群から選択される。カートリッジ交換タイプのペンの例は、NovoPen(登録商標)4又はNovoPen(登録商標)5(共に、Novo Nordisk A/S社、デンマークから販売されている)である。プレフィルドタイプのペンの例は、FlexPen(登録商標)(Novo Nordisk A/S社、デンマーク)である。
【００２９】
適応症
一部の実施形態では、本発明の組成物は、医学において使用するためのものである。一部の実施形態では、本発明の組成物は、以下の医学的処置に使用することができる:
(i)高血糖、2型糖尿病、耐糖能異常、1型糖尿病、インスリン非依存型糖尿病、MODY(若年発症成人型糖尿病)、妊娠糖尿病等の、全ての形態の糖尿病の予防及び/若しくは治療、並びに/又はHbA1cの低減、
(ii)2型糖尿病の進行等の糖尿病性疾患の進行の遅延若しくは予防、耐糖能異常(IGT)からインスリン依存性2型糖尿病への進行の遅延、及び/又はインスリン非依存性2型糖尿病からインスリン依存性2型糖尿病への進行の遅延、
(iii)例えば、食糧摂取量の減少、体重の低減、食欲の抑制、満腹感の誘発による、肥満等の摂食障害の予防及び/若しくは治療、抗精神病薬若しくはステロイドの投与によって誘発される過食性障害、神経性過食症、及び/若しくは肥満の治療若しくは予防、胃運動機能の低減、並びに/又は胃内容排出の遅延。
【００３０】
一部の実施形態では、適応症は(i)である。一部の実施形態では、適応症は(ii)である。さらなる特定の態様では、適応症は(iii)である。一部の実施形態では、適応症は、2型糖尿病及び/又は肥満である。
【００３１】
一部の実施形態では、方法又は使用は、本明細書において規定される1つ又は複数の疾患又は状態における予防、治療、低減、及び/又は誘発を含む。一部の実施形態では、適応症は(i)及び(iii)である。一部の実施形態では、適応症は(ii)及び(iii)である。一部の実施形態では、本発明は、効果的な量のGLP-1ペプチドの投与を含む。一部の実施形態では、本発明は、効果的な量のGLP-1ペプチドの投与に関する。
【００３２】
全般に、肥満である全ての対象は、過体重でもあるとみなされる。一部の実施形態では、本発明は、肥満を治療又は予防するための方法に関する。一部の実施形態では、本発明は、肥満を治療又は予防するための組成物の使用に関する。一部の実施形態では、肥満である対象は、成人又は小児(乳児、幼児、及び青年を含む)等のヒトである。ボディマスインデックス(BMI)は、伸長及び体重に基づく体脂肪の尺度である。計算式は、BMI=キログラム単位の体重/メートル単位の伸長2である。肥満であるヒト対象は、≧30のBMIを有し得る。この対象はまた、肥満であると言われ得る。一部の実施形態では、肥満であるヒト対象は、≧35のBMI又は≧30から<40の範囲のBMIを有し得る。一部の実施形態では、肥満は、重度の肥満又は病的な肥満であり、この場合、ヒト対象は、≧40のBMIを有し得る。
【００３３】
一部の実施形態では、本発明は、場合によって少なくとも1つの体重に関連する併存症の存在下で、過体重を治療又は予防するための方法に関する。一部の実施形態では、本発明は、場合によって少なくとも1つの体重に関連する併存症の存在下で、過体重を治療又は予防するための組成物の使用に関する。一部の実施形態では、過体重である対象は、成人又は小児(乳児、幼児、及び青年を含む)等のヒトである。一部の実施形態では、過体重であるヒト対象は、≧25のBMI、例えば≧27のBMIを有し得る。一部の実施形態では、過体重であるヒト対象は、25から<30の範囲又は27から<30の範囲のBMIを有する。一部の実施形態では、体重に関連する併存症は、高血圧、糖尿病(2型糖尿病等)、脂質異常症、高コレステロール、及び閉塞性睡眠時無呼吸症からなる群から選択される。
【００３４】
一部の実施形態では、本発明は、体重を低減させるための方法に関する。一部の実施形態では、本発明は、体重を低減させるための組成物の使用に関する。本発明に従って体重を低減させられるヒトは、≧25のBMI、例えば≧27のBMI又は≧30のBMIを有し得る。一部の実施形態では、本発明に従って体重を低減させられるヒトは、≧35のBMI又は≧40のBMIを有し得る。用語「体重の低減」には、肥満及び/又は過体重の治療又は予防が含まれ得る。
【００３５】
一部の実施形態では、本明細書において使用される場合、数又は間隔に関連して示される具体的な値は、その具体的な値として、又はその具体的な値辺り(例えば、その具体的な値のプラス又はマイナス10パーセント)として理解され得る。
【００３６】
本発明の実施形態
以下は、本発明の非限定的な実施形態である。
【００３７】
1.セマグルチド及び0.01%(w/w)以下のフェノールを含む液体医薬組成物。
【００３８】
2.セマグルチドを含み、フェノールを実質的に含まない、液体医薬組成物。
【００３９】
3.フェノールを含まない、請求項1又は2に記載の組成物。
【００４０】
4.少なくとも60%w/wの水、例えば、少なくとも70%w/wの水又は少なくとも80%w/wの水を含む水溶液である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【００４１】
5.セマグルチドの濃度が、前記組成物1ml当たり0.5〜10mgである、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【００４２】
6.前記セマグルチドが、薬学的に許容可能な塩の形態である、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【００４３】
7. 1つ又は複数の薬学的に許容可能な賦形剤を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【００４４】
8. HCl、NaOH、又は酢酸塩等の、1つ又は複数のpH調整剤を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【００４５】
9.バッファー及び/又は等張剤を含む、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【００４６】
10.前記バッファーが前記組成物に対して0.01〜50mMの濃度で存在する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【００４７】
11.前記バッファーがリン酸バッファーである、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【００４８】
12.前記リン酸バッファーが、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、及びリン酸ナトリウムからなる群から選択される、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【００４９】
13.前記等張剤が、前記組成物1ml当たり8mgから50mg、例えば14mgから30mgの濃度で存在する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【００５０】
14.前記等張剤がプロピレングリコールである、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【００５１】
15.防腐剤を含まない、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【００５２】
16. 6.0〜10.0の範囲のpHを有する、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【００５３】
17.非経口投与のためのものである、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【００５４】
18.皮下投与のためのものである、前記請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【００５５】
19.前記請求項のいずれか一項に記載の医薬組成物、及び使用のための指示を含むキット。
【００５６】
20.前記請求項のいずれか一項に記載の医薬組成物、及び前記組成物を対象に投与するための注射装置を含むキットであって、前記注射装置が、カートリッジ交換タイプのペン及びプレフィルドタイプのペンからなる群から選択される、キット。
【００５７】
21.医学において使用するための、前記請求項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【００５８】
22.糖尿病又は肥満の治療において使用するための、前記請求項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【００５９】
23.前記請求項のいずれか一項に記載の医薬組成物が、それを必要とする対象に投与される、糖尿病又は肥満を予防又は治療するための方法。
【実施例】
【００６０】
［全般的な方法及び特徴付け］
セマグルチド組成物の調製:
別段の記載がない限り、セマグルチドの組成物は、バッファー(例えば、リン酸水素二ナトリウム二水和物)、等張剤(例えば、プロピレングリコール)、及び場合によって防腐剤(フェノール)を水に溶解することによって調製した。セマグルチドをそこに溶解し、pHを水酸化ナトリウム及び/又は塩酸を使用して7.4に調整し、組成物を最終的に、0.22μmの無菌フィルターを通して濾過することによって滅菌した。
【００６１】
リラグルチド組成物の調製:
別段の記載がない限り、リラグルチドの組成物は、溶液1及び溶液2から調製した。溶液1は、バッファー(リン酸水素二ナトリウム二水和物)、等張剤(マンニトール)、及び場合によって防腐剤(フェノール)を水に溶解することによって調製した。溶液2は、リラグルチドをゆっくりと撹拌しながら溶解することによって調製した。溶液1及び溶液2を混合し、pHを水酸化ナトリウム及び/又は塩酸を使用して8.15に調整し、組成物を最終的に、0.22μmの無菌フィルターを通して濾過することによって滅菌した。
【００６２】
アッセイ(I):セマグルチド組成物の高分子量タンパク質(HMWP)含有量の判定
HMWP含有量の判定は、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸、及びイソプロパノールの移動相を用い、アイソクラティック溶出及び280nmでの検出条件下で、Waters社のInsulin HMWPカラムを使用するサイズ排除クロマトグラフィー(SE-HPLC)を使用して行った。HMWPの含有量は、HMWPピーク及びセマグルチドモノマーピークの総面積に対する、セマグルチドモノマーピークより早く溶出するクロマトグラフィーピーク(すなわち、HMWPピーク)の組み合わされた面積として、%で表される。
【００６３】
アッセイ(II):ThTを介して評価されたセマグルチド組成物の物理的安定性
このアッセイの目的は、水溶液中でのGLP-1ペプチドの物理的安定性を評価することである。
【００６４】
ペプチド又はタンパク質の物理的安定性が低いことによって、アミロイド小線維の形成が生じ得る。小線維は、可溶性タンパク質の凝集によって形成され、ベータ-シート構造が主な、構造的に非常に規則正しい糸状の高分子構造である。成熟小線維は不溶性であり、分解に対して耐性である。薬品の質及び患者の安全性のために、治療用ペプチド及びタンパク質の医薬組成物におけるフィブリル化事象を最少化及び制御することが望ましい。フィブリル化を含むタンパク質の凝集は、試料の目視検査によって評価することができる。フィブリル化は、チオフラビンT(ThT)という、小線維に対して特異性が高い低分子指標プローブの使用によって評価することができる。ThTは、溶液中で小線維に結合すると、ThTと異なる蛍光サインを有する[Naikiら、(1989)Anal. Biochem. 177、244〜249; LeVine(1999)Methods. Enzymol. 309、274〜284]。
【００６５】
ペプチドの部分的にフォールディングした中間体の形成は、フィブリル化のための一般的な開始メカニズムと考えられる。少量のこれらの中間体は核形成して鋳型を形成し、その鋳型上にさらなる中間体が集合し得、そしてフィブリル化が進行する。ラグタイムは、臨界的な量の核が生成される間隔に対応し、見かけの速度定数は、小線維自体が形成される速度である。プレートリーダー上で行われるThTアッセイにおいて記載されるラグタイムは、したがって、溶液中でのペプチド組成物のフィブリル化の傾向の指標と考えられる。
【００６６】
アッセイを行う前に、ThTを、H2O中のストック溶液からの試料に、試料中における最終濃度20μMまで添加した。GLP-1ペプチドを含む組成物の200μlの試料アリコートを、各ウェル内にガラスビーズ(2.8〜3.2mm、Whitehouse Scientific社)を置いた96ウェルマイクロタイタープレート(オプティカル0.4mlブラックThermo Scientific Nunc)内に置いた。通常、各試料の8つの複製をプレート上に置いた。プレートをシーリングテープ(Thermo Scientific Nunc)でシールした。
【００６７】
所与の温度でのインキュベーション、振とう、及びThT蛍光発光の測定を、BMG FLUOStar Omega又はBMG FLUOStar Optimaで行った。プレートを、40℃で、2mmの振幅を有する、300rpmでの二重軌道の振とうを行いながら、インキュベートした。蛍光の測定を、450nmのフィルターを介する励起を使用して行い、発光の測定は、480nmのフィルターを介して行った。プレートを、20分毎に、所望の期間にわたり測定した。各測定の間に、プレートを振とうし、記載した通りに加熱した。
【００６８】
閾値を、1時間13分の時点でプレート上で測定された最大ThT蛍光(相対蛍光単位(RFU)で表される)プラス100RFUとして判定した。次いで、閾値を使用して、BMG FLUOstarソフトウェアの「閾値までの時間」の方法を使用してラグタイムを計算した。
【００６９】
アッセイ(III):リラグルチドの純度の判定
純度の判定は、一方の移動相が水性リン酸アンモニウムバッファー(pH8)/アセトニトリル混合物であり、他方の移動相が水中のアセトニトリルである、2つの移動相の勾配溶出で、Waters社のXTerra(商標)MS C18カラムを使用する高速液体クロマトグラフィー(HPLC)を使用して行った。検出は、215nmで行った。
【００７０】
アッセイ(IV):セマグルチドの不純物の合計の判定
セマグルチドの純度の判定は、アイソクラティック溶出と、その後の、一方の移動相が水性リン酸バッファー/アセトニトリル混合物であり、他方の移動相が水性アセトニトリル/イソプロパノール混合物である、2つの移動相の勾配溶出で、Kinetex C18カラムを使用する逆相高速液体クロマトグラフィー(RP-HPLC)を使用して行う。検出は、210nmで行った。セマグルチドの純度は、セマグルチドモノマーピークに対する、全てのクロマトグラフィーピークの組み合わせ面積として、%表示での不純物の合計として示す。
【００７１】
(実施例1:セマグルチド)
セマグルチドを含む組成物を、この実験において試験した。試験した組成物は、セマグルチド(Table 1(表1)に特定する通り)、プロピレングリコール(14mg/ml)、リン酸水素二ナトリウム二水和物(1.42mg/ml)、及び場合によってフェノール(5.5mg/ml)(Table 1(表1)に特定する通り)を、pH7.4で、水溶液中に含有していた。これらの組成物は、全般的な調製方法という節で本明細書において記載する通りに調製された。HMWPによって表される化学的安定性を、実験の開始時に、及び25℃、30℃、又は37℃での保存の後に、本明細書において記載されるアッセイ(I)によって判定した。チオフラビンT(ThT)アッセイによって表される物理的安定性を、本明細書において記載されるアッセイ(II)によって判定した。
【００７２】
結果をTable 2(表2)及びTable 3(表3)に示す。驚くべきことに、これらの結果は、セマグルチドの物理的及び化学的安定性が、フェノールを有する組成物における安定性と比較して、フェノールを有さない組成物において向上したことを示す。Table 3(表3)に示す結果は、試験した8つの試料の平均である。
【００７３】
【表１】
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【００７４】
【表２】
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【００７５】
【表３】
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【００７６】
(実施例2(参照):リラグルチド)
GLP-1化合物であるリラグルチドが、セマグルチドとは対照的に、フェノールを有さない組成物においてあまり化学的に安定ではないという事実を鑑みれば、実施例1の結果もまた驚くべきものである。これらの結果をTable 5(表5)に示す。
【００７７】
Table 5(表5)の結果は、以下のようにして得た:リラグルチドを含む組成物を試験した。試験した組成物は、リラグルチド(Table 4(表4)に特定する通り)、マンニトール(36.9mg/ml)、リン酸水素二ナトリウム(1.42mg/ml)、及び場合によってフェノール(Table 4(表4)に特定する通り)を、pH7.4で、水溶液中に含有していた。これらの組成物は、全般的な調製方法という節で本明細書において記載するように調製された。純度によって表される化学的安定性を、実験の開始時に、及び25℃又は37℃での保存の後に、本明細書において記載されるアッセイ(III)によって判定した。
【００７８】
【表４】
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【００７９】
【表５】
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【００８０】
(実施例3: セマグルチド-追加の実験)
セマグルチドを含む組成物を、この実験において試験した。試験した組成物は、セマグルチド、等張剤(プロピレングリコール(14mg/ml)又は塩化ナトリウム(6.3mg/ml))、場合によってバッファー(リン酸水素二ナトリウム二水和物(1.42mg/ml)又はクエン酸三ナトリウム二水和物(2.35mg/ml))、及び場合によってフェノール(5.5mg/ml又は0.1mg/ml)を、pH7.0、7.4、又は7.8で、水溶液中に含有していた。試験した各組成物の詳細をTable 6(表6)に示す。組成物は、全般的な調製方法という節で本明細書において記載するように調製された。HMWPによって表される化学的安定性、及び不純物の合計によって表される化学的安定性を、実験の開始時に、及び30℃での保存の後に、それぞれ、本明細書において記載されるアッセイ(I)及びアッセイ(IV)によって判定した。チオフラビンT(ThT)アッセイによって表される物理的安定性を、本明細書において記載されるアッセイ(II)によって判定した。
【００８１】
結果をTable 7(表7)及びTable 8(表8)に示す。実施例1の結果と一致して、これらの結果は、セマグルチドの物理的安定性及び化学的安定性が、フェノールを5.5mg/mlで有する組成物と比較して、フェノールを有さない又はフェノール濃度が低い組成物において向上したことを示す。当該結果は、セマグルチドの物理的安定性及び化学的安定性がまた、フェノールを有するものと比べて、バッファーであるクエン酸三ナトリウム二水和物を含むか、又はバッファー又は等張剤である塩化ナトリウムを含まない、フェノールを有さない組成物においても向上したことを示す。化学的及び物理的安定性は、0.1mg/mlのフェノールを有する組成物について、5.5mg/mlのフェノールを有する組成物と比較して向上しており、フェノールを有さない組成物と類似していた。これは、pH7.0〜7.8及びセマグルチド濃度0.1〜10mg/mlの組成物で実証された。
【００８２】
【表６】
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【００８３】
【表７Ａ】
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【００８４】
【表７Ｂ】
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【００８５】
【表８】
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【００８６】
本発明のある特定の特徴を本明細書において説明及び記載してきたが、多くの改変、置換、変更、及び同等物がここで当業者にとって明らかであると予想される。したがって、添付の特許請求の範囲は、本発明の真の趣旨の範囲に含まれる全てのこのような改変及び変更を網羅するものであることが理解される。
【国際調査報告】
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