【手続補正書】
【提出日】平成19年2月19日(2007.2.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）対形成しないスプライスドナー配列によって３’末端に定義されるエキソンに機能的に連結された第１のプロモーターと、
（ｂ）対形成しないスプライスドナー配列によって３’末端に定義されるエキソンに機能的に連結された第２のプロモーターと
を含み、前記エキソンの一方又は両方において、スプライスドナーに先行したエキソン配列が天然の真核生物遺伝子に由来する又は合成物であるベクター。
【請求項２】
（ａ）第１の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第１の転写調節配列と、
（ｂ）第２の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第２の転写調節配列と
を含み、前記第１の転写調節配は前記第２の転写調節配列の向きに対して逆向きであるベクター。
【請求項３】
ベクターを含む細胞であって、前記ベクターが
（ａ）第１の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第１の転写調節配列と、
（ｂ）第２の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第２の転写調節配列と
を含み、前記ベクターは細胞のゲノム内へ非相同的に組み込まれ、それによって内在性遺伝子が活性化され、前記内在性遺伝子にコードされるタンパク質が発現される細胞。
【請求項４】
（ａ）第１の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第１の転写調節配列と、
（ｂ）第２の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第２の転写調節配列と
を含み、１つ又は複数の転位シグナルをさらに含むベクター。
【請求項５】
（ａ）第１の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第１の転写調節配列と、
（ｂ）第２の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第２の転写調節配列と
を含み、１つ又は複数のウイルス複製起点をさらに含むベクター。
【請求項６】
（ａ）第１の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第１の転写調節配列と、
（ｂ）第２の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第２の転写調節配列と
を含み、１つ又は複数のウイルス複製因子遺伝子をさらに含むベクター。
【請求項７】
（ａ）第１の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第１の転写調節配列と、
（ｂ）第２の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第２の転写調節配列と
を含み、ゲノムＤＮＡをさらに含むベクター。
【請求項８】
ベクターを含む細胞のライブラリーであって、前記ベクターが
（ａ）第１の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第１の転写調節配列と、
（ｂ）第２の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第２の転写調節配列と
を含み、ベクターが前記細胞のゲノム内に非相同的に組み込まれ、それによって内在性遺伝子が活性化され、前記内在性遺伝子にコードされるタンパク質が発現される細胞のライブラリー。
【請求項９】
内在性遺伝子にコードされるタンパク質を細胞内において活性化させるための方法であって、
（ａ）（ｉ）第１の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第１の転写調節配列と、
（ｉｉ）第２の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第２の転写調節配列と
を含むベクターで細胞をトランスフェクションするステップと、
（ｂ）前記細胞のゲノム内への前記ベクターの非相同組込みに好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップと
を含み、前記非相同組込みにより、前記細胞のゲノム内の内在性遺伝子の活性化と前記内在性遺伝子にコードされるタンパク質の産生がもたらされる方法。
【請求項１０】
前記第１のプロモーターが前記第２のプロモーターと同じ向きである請求項１に記載のベクター。
【請求項１１】
前記ベクターは線状である請求項１０に記載のベクター。
【請求項１２】
ベクターを含む細胞であって、前記ベクターが
（ａ）転写調節配列と、
（ｂ）対形成しないスプライスドナー配列と、
（ｃ）低頻度出現の制限酵素切断部位と、
（ｄ）線状化部位と
をこの順で含み、前記ベクターが細胞のゲノム内に非相同的に組み込まれることにより、前記細胞内で内在性遺伝子が活性化される細胞。
【請求項１３】
（ａ）転写調節配列と、
（ｂ）対形成しないスプライスドナー配列と、
（ｃ）低頻度出現の制限酵素切断部位と、
（ｄ）線状化部位と
をこの順で含み、１つ又は複数の転位シグナルをさらに含むベクター。
【請求項１４】
（ａ）転写調節配列と、
（ｂ）対形成しないスプライスドナー配列と、
（ｃ）低頻度出現の制限酵素切断部位と、
（ｄ）線状化部位と
をこの順で含み、１つ又は複数のウイルス複製起点をさらに含むベクター。
【請求項１５】
（ａ）転写調節配列と、
（ｂ）対形成しないスプライスドナー配列と、
（ｃ）低頻度出現の制限酵素切断部位と、
（ｄ）線状化部位と
をこの順で含み、１つ又は複数のウイルス複製因子遺伝子をさらに含むベクター。
【請求項１６】
（ａ）転写調節配列と、
（ｂ）対形成しないスプライスドナー配列と、
（ｃ）低頻度出現の制限酵素切断部位と、
（ｄ）線状化部位と
をこの順で含み、ゲノムＤＮＡをさらに含むベクター。
【請求項１７】
ベクターを含む細胞のライブラリーであって、前記ベクターが
（ａ）転写調節配列と、
（ｂ）対形成しないスプライスドナー配列と、
（ｃ）低頻度出現の制限酵素切断部位と、
（ｄ）線状化部位と
をこの順で含み、前記ベクターが前記細胞のゲノム内に非相同組換えにより組み込まれることにより、前記細胞において内在性遺伝子が活性化される細胞のライブラリー。
【請求項１８】
細胞における内在性遺伝子の活性化のための方法であって、
（ａ）（ｉ）転写調節配列と、
（ｉｉ）対形成しないスプライスドナー配列と、
（ｉｉｉ）低頻度出現の制限酵素切断部位と、
（ｉｖ）線状化部位と
をこの順で含むベクターによって細胞をトランスフェクションするステップと、
（ｂ）前記細胞のゲノム内への前記ベクターの非相同組込みに好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップと
を含み、前記非相同組込みにより、前記細胞のゲノム内の内在性遺伝子の活性化がもたらされる方法。
【請求項１９】
遺伝子を同定するための方法であって、
（ａ）（ｉ）転写調節配列と、
（ｉｉ）対形成しないスプライスドナー配列と、
（ｉｉｉ）低頻度出現の制限酵素切断部位と、
（ｉｖ）線状化部位と
をこの順で含むベクターによって複数の細胞をトランスフェクションするステップと、
（ｂ）細胞のゲノム内へのベクターの非相同組込みに好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップと、
（ｃ）ベクターが細胞のゲノム内に組み込まれた細胞を選択するステップと、
（ｄ）選択された細胞からＲＮＡを単離するステップと、
（ｅ）単離されたＲＮＡからｃＤＮＡを作製するステップと、
（ｆ）１つ又は複数のヌクレオチド配列を含有する１つ又は複数のｃＤＮＡ分子をベクターから単離することによってｃＤＮＡ内の遺伝子を同定するステップと
を含む方法。
【請求項２０】
スプライシングされない細胞転写物に由来するｃＤＮＡ分子を切断するための方法であって、
（ａ）（ｉ）転写調節配列と、
（ｉｉ）対形成しないスプライスドナー配列と、
（ｉｉｉ）低頻度出現の制限酵素切断部位と、
（ｉｖ）線状化部位と
をこの順で含むベクターを、１つ又は複数の細胞のゲノム内に組み込ませるステップと、
（ｂ）前記転写調節配列からの発現に好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップと、
（ｃ）前記細胞からＲＮＡを単離するステップと、
（ｄ）前記単離されたＲＮＡからｃＤＮＡを作製するステップと、
（ｅ）前記低頻度出現の制限酵素切断部位で切断する酵素により前記ｃＤＮＡを消化するステップと
を含む方法。
【請求項２１】
（ａ）転写調節配列と、
（ｂ）低頻度出現の制限酵素切断部位を含むエキソンと、
（ｃ）対形成しないスプライスドナー配列と、
（ｄ）線状化部位と
をこの順で含むベクター。
【請求項２２】
前記対形成しないスプライスドナー配列と前記線状化部位との間に位置する第２の低頻度出現の制限酵素切断部位をさらに含む、請求項２１に記載のベクター。
【請求項２３】
真核生物細胞内で機能する選択マーカーに機能的に連結された第１の転写調節配列を含み、選択マーカーは機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さず、対形成しないスプライスドナー配列を含むエキソンに機能的に連結された第２の転写調節配列をさらに含み、エキソンは翻訳開始コドンを欠損している又は翻訳開始コドンはあるが開始コドンに機能的に連結された翻訳終止コドンがないベクター。
【請求項２４】
ベクターを含む細胞であって、前記ベクターが機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さない選択マーカーに機能的に連結された第１の転写調節配列を含み、対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第２の転写調節配列をさらに含み、細胞のゲノム内へ非相同的に組み込まれた前記ベクターにより、前記細胞内で内在性遺伝子が活性化され、前記内在性遺伝子にコードされるタンパク質が発現される細胞。
【請求項２５】
機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さない選択マーカーに機能的に連結された第１の転写調節配列を含み、対形成しないスプライスドナー配列を含むエキソンに機能的に連結された第２の転写調節配列をさらに含み、前記エキソンが翻訳開始コドンを欠損している又は翻訳開始コドンはあるが前記開始コドンに機能的に連結された翻訳終止コドンがなく、１つ又は複数の転位シグナルをさらに含むベクター。
【請求項２６】
機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さない選択マーカーに機能的に連結された第１の転写調節配列を含み、対形成しないスプライスドナー配列を含むエキソンに機能的に連結された第２の転写調節配列をさらに含み、１つ又は複数のウイルス複製起点をさらに含むベクター。
【請求項２７】
機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さない選択マーカーに機能的に連結された第１の転写調節配列を含み、対形成しないスプライスドナー配列を含むエキソンに機能的に連結された第２の転写調節配列をさらに含み、１つ又は複数のウイルス複製因子遺伝子をさらに含むベクター。
【請求項２８】
機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さない選択マーカーに機能的に連結された第１の転写調節配列を含み、対形成しないスプライスドナー配列を含むエキソンに機能的に連結された第２の転写調節配列をさらに含み、１つ又は複数のゲノムＤＮＡをさらに含むベクター。
【請求項２９】
ベクターを含む細胞のライブラリーであって、前記ベクターが機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さない選択マーカーに機能的に連結された第１の転写調節配列を含み、対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第２の転写調節配列をさらに含み、前記ベクターが前記細胞のゲノム内に非相同組換えにより組み込まれ、それによって前記細胞内で内在性遺伝子が活性化され、前記内在性遺伝子にコードされるタンパク質が発現される細胞のライブラリー。
【請求項３０】
内在性遺伝子を細胞内において活性化させるための方法であって、ベクターによって細胞をトランスフェクションするステップを含み、前記ベクターが機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さない選択マーカーに機能的に連結された第１の転写調節配列を含み、前記ベクターが対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第２の転写調節配列をさらに含み、細胞のゲノム内へのベクターの非相同組込みに好適な条件のもとで細胞を培養するステップをさらに含み、前記組込みにより、前記細胞のゲノム内の内在性遺伝子の活性化が起こり、前記内在性遺伝子にコードされるタンパク質が発現される方法。
【請求項３１】
前記転写調節配列はプロモーターである、請求項３、１２又は２４のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項３２】
前記第１の転写調節配列又は前記第２の転写調節配列はプロモーターである、請求項２、４〜７、１３〜１６、２１〜２３又は２５〜２８のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項３３】
前記プロモーターは、ＣＭＶ即時初期遺伝子プロモーター、ＳＶ４０Ｔ抗原プロモーター、テトラサイクリン誘導性プロモーター及びβ−アクチンプロモーターからなる群から選択される、請求項３１に記載の細胞。
【請求項３４】
前記転写調節配列はプロモーターである、請求項９、１８〜２０又は３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記プロモーターは、ＣＭＶ即時初期遺伝子プロモーター、ＳＶ４０Ｔ抗原プロモーター、テトラサイクリン誘導性プロモーター及びβ−アクチンプロモーターからなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記選択マーカーは、ネオマイシン遺伝子、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子、ピューロマイシン遺伝子、ジヒドロオラターゼ遺伝子、グルタミンシンセターゼ遺伝子、ヒスチジンＤ遺伝子、カルバミルリン酸シンターゼ遺伝子、ジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子、多剤耐性１遺伝子、アスパラギン酸トランスカルバミラーゼ遺伝子、キサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子、アデノシンデアミナーゼ遺伝子及びチミジンキナーゼ遺伝子からなる群から選択される、請求項２３又は２５〜２８のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項３７】
請求項１、２、４〜７、１３〜１６、２１〜２３又は２５〜２８のいずれか１項に記載されるベクターを含む真核生物細胞。
【請求項３８】
動物細胞である、請求項３７に記載の真核生物細胞。
【請求項３９】
前記動物細胞は、哺乳動物細胞、昆虫細胞、鳥類細胞、環形動物細胞、両生類細胞、爬虫類細胞及び魚類細胞からなる群から選択される、請求項３８に記載の真核生物細胞。
【請求項４０】
前記動物細胞は哺乳動物細胞である、請求項３８に記載の真核生物細胞。
【請求項４１】
前記哺乳動物細胞はヒト細胞である、請求項４０に記載の真核生物細胞。
【請求項４２】
植物細胞である、請求項３７に記載の真核生物細胞。
【請求項４３】
真菌細胞である、請求項３７に記載の真核生物細胞。
【請求項４４】
酵母細胞である、請求項４３に記載の真核生物細胞。
【請求項４５】
単離された細胞である、請求項３８に記載の真核生物細胞。
【請求項４６】
前記ベクターは前記細胞のゲノムに組み込まれている、請求項３８に記載の真核生物細胞。
【請求項４７】
ベクターが非相同組換えによりゲノムに組み込まれている細胞であって、前記ベクターが
（ａ）翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列と、
（ｂ）４つ以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列をコードする核酸配列であって、前記アミノ酸配列は、単独ではシグナルペプチド活性を構成するには不十分であるが、前記核酸配列が内在性遺伝子のエキソンと一緒にされた場合、又は前記核酸配列が内在性遺伝子の上流に存在する場合にはシグナルペプチド活性を構成するには十分である核酸配列と、
（ｃ）対形成しないスプライスドナー配列と
を含む、ベクターの組込みが内在性遺伝子を活性化する細胞。
【請求項４８】
内在性遺伝子の発現産物を産生させるための方法であって、
（ａ）（ｉ）翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列と、
（ｉｉ）４つ以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列をコードする核酸配列であって、前記アミノ酸配列は、単独ではシグナルペプチド活性を構成するには不十分であるが、前記核酸配列が内在性遺伝子のエキソンと一緒にされた場合、又は前記核酸配列が内在性遺伝子の上流に存在する場合にはシグナルペプチド活性を構成するには十分である核酸配列と、
（ｉｉｉ）対形成しないスプライスドナー配列と
を含むベクターを細胞に導入するステップと、
（ｂ）ベクターを細胞のゲノム内に非相同組換えによって組み込ませるステップと、
（ｃ）内在性遺伝子を細胞内で過剰発現させるステップと
を含む方法。
【請求項４９】
（ａ）翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列と、
（ｂ）４つ以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列をコードする核酸配列であって、前記アミノ酸配列は、単独ではシグナルペプチド活性を構成するには不十分であるが、前記核酸配列が内在性遺伝子のエキソンと一緒にされた場合、又は前記核酸配列が内在性遺伝子の上流に存在する場合にはシグナルペプチド活性を構成するには十分である核酸配列と、
（ｃ）対形成しないスプライスドナー配列と
を含むベクター。
【請求項５０】
（ａ）翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列と、
（ｂ）４つ以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列をコードする核酸配列であって、前記アミノ酸配列は、単独ではシグナルペプチド活性を構成するには不十分である が、前記核酸配列が内在性遺伝子のエキソンと一緒にされた場合、又は前記核酸配列が内在性遺伝子の上流に存在する場合にはシグナルペプチド活性を構成するには十分である核酸配列と、
（ｃ）対形成しないスプライスドナー配列と
を含み、１つ又は複数のウイルス複製起点をさらに含むベクター。
【請求項５１】
（ａ）翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列と、
（ｂ）４つ以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列をコードする核酸配列であって、前記アミノ酸配列は、単独ではシグナルペプチド活性を構成するには不十分であるが、前記核酸配列が内在性遺伝子のエキソンと一緒にされた場合、又は前記核酸配列が内在性遺伝子の上流に存在する場合にはシグナルペプチド活性を構成するには十分である核酸配列と、
（ｃ）対形成しないスプライスドナー配列と
を含み、１つ又は複数のウイルス複製起点をさらに含むベクター。
【請求項５２】
（ａ）翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列と、
（ｂ）４つ以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列をコードする核酸配列であって、前記アミノ酸配列は、単独ではシグナルペプチド活性を構成するには不十分であるが、前記核酸配列が内在性遺伝子のエキソンと一緒にされた場合、又は前記核酸配列が内在性遺伝子の上流に存在する場合にはシグナルペプチド活性を構成するには十分である核酸配列と、
（ｃ）対形成しないスプライスドナー配列と
を含み、ゲノムＤＮＡをさらに含むベクター。
【請求項５３】
ベクターが非相同組換えによりゲノムに組み込まれた細胞のライブラリーであって、前記ベクターが
（ａ）翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列と、
（ｂ）４つ以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列をコードする核酸配列であって、前記アミノ酸配列は、単独ではシグナルペプチド活性を構成するには不十分であるが、前記核酸配列が内在性遺伝子のエキソンと一緒にされた場合、又は前記核酸配列が内在性遺伝子の上流に存在する場合にはシグナルペプチド活性を構成するには十分である核酸配列と、
（ｃ）対形成しないスプライスドナー配列と
を含み、ベクターの組込みが内在性遺伝子を活性化する細胞のライブラリー。
【請求項５４】
細胞内の内在性遺伝子を活性化させるための方法であって、
（ａ）（ｉ）翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列と、
（ｉｉ）４つ以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列をコードする核酸配列であって、前記アミノ酸配列は、単独ではシグナルペプチド活性を構成するには不十分であるが、前記核酸配列が内在性遺伝子のエキソンと一緒にされた場合、又は前記核酸配列が内在性遺伝子の上流に存在する場合にはシグナルペプチド活性を構成するには十分である核酸配列と、
（ｉｉｉ）対形成しないスプライスドナー配列と
を含むベクターを細胞に導入するステップと、
（ｂ）細胞のゲノム内へのベクターの非相同組込みに好適な条件のもとで細胞を培養するステップと
を含み、非相同組換えによる組込みにより、細胞における内在性遺伝子の活性化がもたらされる方法。
【請求項５５】
遺伝子を同定するための方法であって、
（ａ）（ｉ）翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列と、
（ｉｉ）４つ以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列をコードする核酸配列であって、前記アミノ酸配列は、単独ではシグナルペプチド活性を構成するには不十分であるが、前記核酸配列が内在性遺伝子のエキソンと一緒にされた場合、又は前記核酸配列が内在性遺伝子の上流に存在する場合にはシグナルペプチド活性を構成するには十分である核酸配列と、
（ｉｉｉ）対形成しないスプライスドナー配列と
を含むベクターで多数の細胞をトランスフェクションするステップと、
（ｂ）細胞のゲノム内へのベクターの非相同組込みに好適な条件のもとで細胞を培養するステップと
（ｃ）ベクターが非相同組換えによって前記細胞のゲノム内に組み込まれた細胞を選択するステップと、
（ｄ）選択された細胞からＲＮＡを単離するステップと、
（ｅ）単離されたＲＮＡからｃＤＮＡを作製するステップと、
（ｆ）１つ又は複数のヌクレオチド配列を含有する１つ又は複数のｃＤＮＡ分子を前記ベクターから単離することによってｃＤＮＡ内の遺伝子を同定するステップと
を含む方法。
【請求項５６】
ベクターを含む真核生物細胞であって、前記ベクターが
（ａ）翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列と、
（ｂ）４つ以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列をコードする核酸配列であって、前記アミノ酸配列は、単独ではシグナルペプチド活性を構成するには不十分であるが、前記核酸配列が内在性遺伝子のエキソンと一緒にされた場合、又は前記核酸配列が内在性遺伝子の上流に存在する場合にはシグナルペプチド活性を構成するには十分である核酸配列と、
（ｃ）対形成しないスプライスドナー配列と
を含み、前記ベクターが相同組換えのための標的配列を含まない真核生物細胞。
【請求項５７】
ゲノムに組み込まれたベクターを含む細胞であって、前記ベクターが
（ａ）翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列と、
（ｂ）４つ以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列をコードする核酸配列であって、前記アミノ酸配列は、単独ではシグナルペプチド活性を構成するには不十分であるが、前記核酸配列が内在性遺伝子のエキソンと一緒にされた場合、又は前記核酸配列が内在性遺伝子の上流に存在する場合にはシグナルペプチド活性を構成するには十分である核酸配列と、
（ｃ）対形成しないスプライスドナー配列と
を含み、前記ベクターが相同組換えのための標的配列を含まない細胞。
【請求項５８】
ベクターを真核生物細胞に導入することを含む真核生物細胞の作製方法であって、前記ベクターが
（ａ）翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列と、
（ｂ）４つ以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列をコードする核酸配列であって、前記アミノ酸配列は、単独ではシグナルペプチド活性を構成するには不十分であるが、前記核酸配列が内在性遺伝子のエキソンと一緒にされた場合、又は前記核酸配列が内在性遺伝子の上流に存在する場合にはシグナルペプチド活性を構成するには十分である核酸配列と、
（ｃ）対形成しないスプライスドナー配列と
を含み、前記ベクターが相同組換えのための標的配列を含まない真核生物細胞の作製方法。
【請求項５９】
ベクターにより形質転換された細胞の集団を含む細胞ライブラリーであって、前記ベクターが
（ａ）翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列と、
（ｂ）４つ以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列をコードする核酸配列であって、前記アミノ酸配列は、単独ではシグナルペプチド活性を構成するには不十分であるが、前記核酸配列が内在性遺伝子のエキソンと一緒にされた場合、又は前記核酸配列が内在性遺伝子の上流に存在する場合にはシグナルペプチド活性を構成するには十分である核酸配列と、
（ｃ）対形成しないスプライスドナー配列と
を含み、前記ベクターが相同組換えのための標的配列を含まず、前記ベクターが細胞のゲノム内に非相同組換えによって組み込まれている細胞ライブラリー。
【請求項６０】
ベクターを含む真核生物細胞ライブラリーであって、前記ベクターが
（ａ）翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列と、
（ｂ）４つ以上のアミノ酸からなるアミノ酸配列をコードする核酸配列であって、前記アミノ酸配列は、単独ではシグナルペプチド活性を構成するには不十分であるが、前記核酸配列が内在性遺伝子のエキソンと一緒にされた場合、又は前記核酸配列が内在性遺伝子の上流に存在する場合にはシグナルペプチド活性を構成するには十分である核酸配列と、
（ｃ）対形成しないスプライスドナー配列と
を含み、前記ベクターが相同組換えのための標的配列を含まない真核生物細胞ライブラリー。
【請求項６１】
ベクターが１つ又は複数の増幅可能なマーカーをさらに含む、請求項４７、５６又は５７のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項６２】
前記転写調節配列はプロモーターである、請求項４７、５６又は５７のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項６３】
前記プロモーターはウイルスプロモーターである、請求項６２の細胞。
【請求項６４】
前記ウイルスプロモーターはサイトメガロウイルス即時初期遺伝子プロモーターである、請求項６３に記載の細胞。
【請求項６５】
前記プロモーターは非ウイルスプロモーターである、請求項６３に記載の細胞。
【請求項６６】
前記プロモーターは誘導性プロモーターである、請求項６３に記載の細胞。
【請求項６７】
請求項４９〜５２のいずれか１項に記載されるベクターを細胞に導入することを含む細胞の作製方法。
【請求項６８】
内在性遺伝子の発現産物を産生させるための方法であって、
（ａ）請求項４９〜５２のいずれか１項に記載のベクターを細胞に導入するステップと、
（ｂ）前記ベクターを前記細胞のゲノム内に非相同組換えによって組み込ませるステップと、
（ｃ）前記内在性遺伝子を前記細胞内で過剰発現させるステップと
を含む方法。
【請求項６９】
前記発現産物を前記細胞から単離することをさらに含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
請求項４９〜５２のいずれか1項に記載されるベクターによって形質転換された細胞の集団を含む細胞ライブラリーであって、前記ベクターが前記細胞のゲノム内に非相同組換えによって組み込まれている細胞ライブラリー。
【請求項７１】
細胞のライブラリーから遺伝子産物を得るための方法であって、請求項７０に記載されたライブラリーを前記遺伝子産物の発現についてスクリーニングすること、 前記遺伝子産物を過剰発現する細胞を前記ライブラリーから選択すること、及び前記選択された細胞から前記遺伝子産物を得ることを含む方法。
【請求項７２】
内在性膜タンパク質をコードする内在性遺伝子を発現する細胞を同定するための方法であって、
（ａ）真核生物細胞からゲノムＤＮＡを単離するステップと、
（ｂ）（ｉ）開始コドンを含有するエキソン配列に機能的に連結された転写調節配列、
（ｉｉ）シグナル配列、及び
（ｉｉｉ）対形成しないスプライスドナー配列を伴うエピトープ標識
を含むベクターと、前記単離されたｃＤＮＡとを一緒にして、ｃＤＮＡ−ベクター複合体を形成させるステップと、
（ｃ）前記ｃＤＮＡ−ベクター複合体を真核生物細胞に導入するステップと、
（ｄ）前記転写調節配列による前記遺伝子のアップレギュレーションによって内在性遺伝子を前記細胞において過剰発現させるステップと、
（ｅ）前記細胞の表面における前記エピトープ標識の発現について前記細胞をスクリーニングするステップと
を含む方法。
【請求項７３】
内在性膜タンパク質をコードする内在性遺伝子を発現する細胞を同定するための方法であって、
（ａ）真核生物細胞からｃＤＮＡを調製するステップと、
（ｂ）（ｉ）開始コドンを含有するエキソン配列に機能的に連結された転写調節配列、
（ｉｉ）シグナル配列、及び
（ｉｉｉ）対形成しないスプライスドナー配列を伴うエピトープ標識
を含むベクターと、前記単離されたｃＤＮＡを一緒にして、ｃＤＮＡ−ベクター複合体を形成させるステップと、
（ｃ）前記ｃＤＮＡ−ベクター複合体を真核生物細胞に導入するステップと、
（ｄ）前記転写調節配列による前記遺伝子のアップレギュレーションによって内在性遺伝子を前記細胞において過剰発現させるステップと、
（ｅ）前記細胞の表面における前記エピトープ標識の発現について前記細胞をスクリーニングするステップと
を含む方法。
【請求項７４】
前記エピトープ標識を発現する前記細胞を単離することをさらに含む、請求項７２又は請求項７３のいずれかに記載の方法。
【請求項７５】
前記単離された細胞から前記の過剰発現した内在性遺伝子を単離することをさらに含む、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
ベクターを含む細胞であって、前記細胞が、
（ａ）エキソン及び対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第１のプロモーターと、
（ｂ）機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さない選択マーカーに機能的に連結された第２のプロモーターと
を含み、前記ベクターが細胞のゲノム内に非相同的に組み込まれ、それによって内在性遺伝子が活性化され、前記内在性遺伝子によりコードされるタンパク質が発現される細胞。
【請求項７７】
（ａ）翻訳開始コドンを欠損している又は翻訳開始コドンはあるが前記開始コドンに機能的に連結された翻訳終止コドンがないエキソンと、対形成しないスプライスドナー配列とに機能的に連結された第１のプロモーターと、
（ｂ）機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さない選択マーカーに機能的に連結された第２のプロモーターと
を含み、１つ又は複数の転位シグナルをさらに含むベクター。
【請求項７８】
（ａ）エキソン及び対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第１のプロモーターと、
（ｂ）機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さない選択マーカーに機能的に連結された第２のプロモーターと
を含み、１つ又は複数のウイルス複製起点をさらに含むベクター。
【請求項７９】
（ａ）エキソン及び対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第１のプロモーターと、
（ｂ）機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さない選択マーカーに機能的に連結された第２のプロモーターと
を含み、１つ又は複数のウイルス複製因子遺伝子をさらに含むベクター。
【請求項８０】
（ａ）エキソン及び対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第１のプロモーターと、
（ｂ）機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さない選択マーカーに機能的に連結された第２のプロモーターと
を含み、ゲノムＤＮＡをさらに含むベクター。
【請求項８１】
ベクターを含む細胞のライブラリーであって、ベクターが
（ａ）エキソン及び対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第１のプロモーターと、
（ｂ）機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さない選択マーカーに機能的に連結された第２のプロモーターと
を含み、前記ベクターが前記細胞のゲノム内に非相同組換えにより組み込まれ、それによって内在性遺伝子が活性化され、前記内在性遺伝子にコードされるタンパク質が発現される細胞のライブラリー。
【請求項８２】
細胞内の内在性遺伝子を活性化させるための方法であって、ベクターで細胞をトランスフェクションするステップを含み、前記ベクターが
（ａ）エキソン及び対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第１のプロモーターと、
（ｂ）機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さない選択マーカーに機能的に連結された第２のプロモーターと
を含み、細胞のゲノム内へのベクターの非相同組込みに好適な条件のもとで細胞を培養するステップをさらに含み、組込みにより細胞における内在性遺伝子の活性化が起こり、前記内在性遺伝子にコードされるタンパク質が発現される方法。
【請求項８３】
前記の第１のプロモーター及び第２のプロモーターは同じ向きで前記ベクター内において存在する、請求項７７〜８０のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項８４】
前記ベクターは線状であり、かつ前記選択マーカーは前記第１のプロモーターの３’に位置する、請求項８３に記載のベクター。
【請求項８５】
前記ベクターは線状であり、かつ前記第２のプロモーターは前記対形成しないスプライスドナー配列の５’に位置する、請求項８３に記載のベクター。
【請求項８６】
（ａ）翻訳開始コドンを欠損している又は翻訳開始コドンはあるが前記開始コドンに機能的に連結された翻訳終止コドンがないエキソンと、対形成しないスプライスドナー配列とに機能的に連結された第１のプロモーターと、
（ｂ）機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さない選択マーカーに機能的に連結された第２のプロモーターと
を含むベクターであって、選択マーカーは真核生物細胞内で機能し、前記の第１のプロモーター及び第２のプロモーターは前記ベクター内において同じ向きで存在するベクター。
【請求項８７】
（ａ）翻訳開始コドンを欠損している又は翻訳開始コドンはあるが前記開始コドンに機能的に連結された翻訳終止コドンがないエキソンと、対形成しないスプライスドナー配列とに機能的に連結された第１のプロモーターと、
（ｂ）機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さない選択マーカーに機能的に連結された第２のプロモーターと
を含むベクターであって、選択マーカーは真核生物細胞内で機能し、前記ベクターは線状であり、かつ前記選択マーカーは前記第１のプロモーターの３’に位置するベクター。
【請求項８８】
（ａ）翻訳開始コドンを欠損している又は翻訳開始コドンはあるが前記開始コドンに機能的に連結された翻訳終止コドンがないエキソンと、対形成しないスプライスドナー配列とに機能的に連結された第１のプロモーターと、
（ｂ）機能的に連結されたポリアデニル化シグナルを有さない選択マーカーに機能的に連結された第２のプロモーターと
を含むベクターであって、選択マーカーは真核生物細胞内で機能し、前記ベクターは線状であり、かつ前記第２のプロモーターは前記対形成しないスプライスドナー配列の５’に位置するベクター。
【請求項８９】
前記エキソンは翻訳開始コドン及びシグナル分泌配列を含む、請求項７６に記載の細胞。
【請求項９０】
（ａ）第１のプロモーターと、
（ｂ）ポジティブ選択マーカーと、
（ｃ）ネガティブ選択マーカーと、
（ｄ）対形成しないスプライスドナー配列と
を含むベクターであって、
前記ベクターにコードされるスプライスドナー配列とゲノムにコードされるスプライスアクセプター配列との間でスプライシングが生じるような方法で前記ベクターが真核生物細胞のゲノム内に組み込まれたとき、前記ポジティブ選択マーカーは活性化形態で発現し、かつ前記ネガティブ選択マーカーは発現しないか、又は不活性な形態で発現する向きで、前記ポジティブ選択マーカー、前記ネガティブ選択マーカー及び前記スプライスドナー配列が前記ベクターにおいて配向しているベクター。
【請求項９１】
前記ポジティブ選択マーカー及び前記ネガティブ選択マーカーは融合遺伝子として存在する、請求項９０に記載のベクター。
【請求項９２】
前記ポジティブ選択マーカー及び前記ネガティブ選択マーカーの両方、又は前記ポジティブ選択マーカー若しくは前記ネガティブ選択マーカーがポリアデニル化部位を有さない、請求項９０に記載のベクター。
【請求項９３】
第２の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第２のプロモーターをさらに含む、請求項９０に記載のベクター。
【請求項９４】
第１のプロモーター及び第２のプロモーターを含み、前記の第１のプロモーター及び第２のプロモーターは同じ向きで配向しているベクターであって、
（ａ）前記第２のプロモーターではなく、前記第１のプロモーターが、対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結され、
（ｂ）前記第１のプロモーター又は前記第２のプロモーターのいずれの下流にもポリアデニル化シグナルを機能的に連結されない
ことを特徴とするベクター。
【請求項９５】
ベクターを含む細胞であって、前記ベクターが第１のプロモーター及び第２のプロモーターを含み、前記の第１のプロモーター及び第２のプロモーターは同じ向きで配向し、
（ａ）前記第２のプロモーターではなく、前記第１のプロモーターが、対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結され、
（ｂ）前記第１のプロモーター又は前記第２のプロモーターのいずれの下流にもポリアデニル化シグナルを機能的に連結されない
ことを特徴とし、前記ベクターが細胞のゲノム内に非相同的に組み込まれ、内在性遺伝子が前記細胞内で活性化される細胞。
【請求項９６】
第１のプロモーター及び第２のプロモーターを含み、前記の第１のプロモーター及び第２のプロモーターは同じ向きで配向しているベクターであって、
（ａ）前記第２のプロモーターではなく、前記第１のプロモーターが、対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結され、
（ｂ）前記第１のプロモーター又は前記第２のプロモーターのいずれの下流にもポリアデニル化シグナルを機能的に連結されない
ことを特徴とし、１つ又は複数の転位シグナルをさらに含むベクター。
【請求項９７】
第１のプロモーター及び第２のプロモーターを含み、前記の第１のプロモーター及び第２のプロモーターは同じ向きで配向しているベクターであって、
（ａ）前記第２のプロモーターではなく、前記第１のプロモーターが、対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結され、
（ｂ）前記第１のプロモーター又は前記第２のプロモーターのいずれの下流にもポリアデニル化シグナルを機能的に連結されない
ことを特徴とし、１つ又は複数のウイルス複製起点をさらに含むベクター。
【請求項９８】
第１のプロモーター及び第２のプロモーターを含み、前記の第１のプロモーター及び第２のプロモーターは同じ向きで配向しているベクターであって、
（ａ）前記第２のプロモーターではなく、前記第１のプロモーターが、対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結され、
（ｂ）前記第１のプロモーター又は前記第２のプロモーターのいずれの下流にもポリアデニル化シグナルを機能的に連結されない
ことを特徴とし、１つ又は複数のウイルス複製因子遺伝子をさらに含むベクター。
【請求項９９】
第１のプロモーター及び第２のプロモーターを含み、前記の第１のプロモーター及び第２のプロモーターは同じ向きで配向しているベクターであって、
（ａ）前記第２のプロモーターではなく、前記第１のプロモーターが、対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結され、
（ｂ）前記第１のプロモーター又は前記第２のプロモーターのいずれの下流にもポリアデニル化シグナルを機能的に連結されない
ことを特徴とし、ゲノムＤＮＡをさらに含むベクター。
【請求項１００】
ベクターを含む細胞のライブラリーであって、ベクターが第１のプロモーター及び第２のプロモーターを含み、前記の第１のプロモーター及び第２のプロモーターは同じ向きで配向しているベクターであって、
（ａ）前記第２のプロモーターではなく、前記第１のプロモーターが、対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結され、
（ｂ）前記第１のプロモーター又は前記第２のプロモーターのいずれの下流にもポリアデニル化シグナルを機能的に連結されない
ことを特徴とし、内在性遺伝子が活性化されるように前記ベクターが前記細胞のゲノム内に非相同組換えにより組み込まれた細胞のライブラリー。
【請求項１０１】
細胞内の内在性遺伝子を活性化させるための方法であって、ベクターによって細胞をトランスフェクションするステップを含み、前記ベクターが第１のプロモーター及び第２のプロモーターを含み、前記の第１のプロモーター及び第２のプロモーターは同じ向きで配向しているベクターであって、
（ａ）前記第２のプロモーターではなく、前記第１のプロモーターが、対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結され、
（ｂ）前記第１のプロモーター又は前記第２のプロモーターのいずれの下流にもポリアデニル化シグナルを機能的に連結されない
ことを特徴とし、細胞のゲノム内への前記ベクターの非相同組込みに好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップをさらに含み、組込みにより細胞のゲノム内の内在性遺伝子の活性化が起こる方法。
【請求項１０２】
遺伝子を同定するための方法であって、
（ａ）ベクターが第１のプロモーター及び第２のプロモーターを含み、前記の第１のプロモーター及び第２のプロモーターは同じ向きで配向しているベクターであって、
（ｉ）前記第２のプロモーターではなく、前記第１のプロモーターが、対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結され、
（ｉｉ）前記第１のプロモーター又は前記第２のプロモーターのいずれの下流にもポリアデニル化シグナルを機能的に連結されない
ことを特徴とするベクターで多数の細胞をトランスフェクションするステップと、
（ｂ）前記細胞のゲノム内への前記ベクターの非相同組込みに好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップと
（ｃ）ベクターが非相同組換えによって細胞のゲノム内に組み込まれた細胞を選択するステップと、
（ｄ）選択された細胞からＲＮＡを単離するステップと、
（ｅ）単離されたＲＮＡからｃＤＮＡを作製するステップと、
（ｆ）１つ又は複数のヌクレオチド配列を含有する１つ又は複数のｃＤＮＡ分子を前記ベクターから単離することによってｃＤＮＡ内の遺伝子を同定するステップと
を含む方法。
【請求項１０３】
前記ベクターは線状であり、かつ前記第２のプロモーターは前記第１のプロモーターの３’に位置する、請求項９４又は請求項９６〜９９のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１０４】
（ａ）対形成しないスプライスドナー配列を含有する第１の選択マーカーに機能的に連結された第１のプロモーターと、
（ｂ）第２の選択マーカーに機能的に連結された第２のプロモーターと
を含むベクターであって、前記の第１の選択マーカー又は第２の選択マーカーはいずれもポリアデニル化シグナルを含有さないベクター。
【請求項１０５】
前記の第１の選択マーカー及び第２の選択マーカーはポジティブ選択マーカーである、請求項１０４に記載のベクター。
【請求項１０６】
前記第１の選択マーカーは前記第２の選択マーカーの上流に位置する、請求項１０４に記載のベクター。
【請求項１０７】
（ａ）第１のエキソン及び第１の対形成しないスプライスドナー部位に機能的に連結された第１のプロモーターと、
（ｂ）第２のエキソン及び第２の対形成しないスプライスドナー部位に機能的に連結された第２のプロモーターと
を含むベクターであって、前記第１のエキソンのヌクレオチド配列は前記第２のエキソンのヌクレオチド配列と異なるベクター。
【請求項１０８】
前記の第１のエキソン及び第２のエキソンはそれぞれ、翻訳開始コドンと、停止コドンで終了しないオープンリーディングフレームとを含む、請求項１０７に記載のベクター。
【請求項１０９】
前記の第１のエキソン及び第２のエキソンの両方、又は、前記第１のエキソン若しくは前記第２のエキソンは翻訳開始コドンを有さない、請求項１０７に記載のベクター。
【請求項１１０】
（ａ）ポジティブ選択マーカーに機能的に連結された第１のプロモーターと、
（ｂ）ネガティブ選択マーカーに機能的に連結された第２のプロモーターと、
（ｃ）対形成しないスプライスドナー配列と
を含むベクターであって、ゲノム内の内在性遺伝子が転写的に活性化される方法で前記ベクターが真核生物細胞のゲノム内に組み込まれたとき、前記ポジティブ選択マーカーは活性化形態で発現し、かつ前記ネガティブ選択マーカーは発現しないか又は不活性な形態で発現する向きで、前記ポジティブ選択マーカー、前記ネガティブ選択マーカー及び前記スプライスドナー配列が前記ベクターにおいて配向しているベクター。
【請求項１１１】
第２の対形成しないスプライスドナー配列に機能的に連結された第３のプロモーターをさらに含む、請求項１１０に記載のベクター。
【請求項１１２】
１つ又は複数の増幅可能なマーカーをさらに含む、請求項９０、１０４、１０７、１１０又は１１１のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１１３】
１つ又は複数の転位シグナルをさらに含む、請求項９０、１０４、１０７、１１０又は１１１のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１１４】
１つ又は複数のウイルス複製起点をさらに含む、請求項９０、１０４、１０７、１１０又は１１１のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１１５】
１つ又は複数のウイルス複製因子遺伝子をさらに含む、請求項９０、１０４、１０７、１１０又は１１１のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１１６】
前記増幅可能なマーカーは、ジヒドロ葉酸レダクターゼ、アデノシンデアミナーゼ、アスパラギン酸トランスカルバミラーゼ、ジヒドロオロターゼ、及びカルバミルリン酸シンターゼからなる群から選択される、請求項１１３に記載のベクター。
【請求項１１７】
前記ウイルス複製起点は、エプスタインバールウイルスのｏｒｉＰ及びＳＶ４０のｏｒｉからなる群から選択される、請求項５、１４、２６、５０、７９、９７又は１１４のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１１８】
ゲノムＤＮＡをさらに含む、請求項９０、１０４、１０７、１１０又は１１１のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１１９】
請求項１、２、４〜７、１３〜１６、２１〜２３、２５〜２８、４９〜５２、７７〜８０、８６〜８８、９０、９４、９６〜９９、１０４、１０７又は１１０のいずれか１項に記載のベクターを含む細胞。
【請求項１２０】
単離された細胞である、請求項１１９に記載の細胞。
【請求項１２１】
ベクターは細胞ゲノムに組み込まれている、請求項１１９に記載の細胞。
【請求項１２２】
内在性遺伝子が、前記ベクターの前記転写調節配列による前記遺伝子のアップレギュレーションによって前記細胞において過剰発現される、請求項１２１に記載の細胞。
【請求項１２３】
請求項１、２、４〜７、１３〜１６、２１〜２３、２５〜２８、４９〜５２、７７〜８０、８６〜８８、９０、９４、９６〜９９、１０４、１０７又は１１０のいずれか１項に記載のベクターを含む細胞のライブラリー。
【請求項１２４】
細胞内における内在性遺伝子の活性化のための方法であって、
（ａ）請求項１、２、４〜７、１３〜１６、２１〜２３、２５〜２８、４９〜５２、７７〜８０、８６〜８８、９０、９４、９６〜９９、１０４、１０７又は１１０のいずれか１項に記載のベクターで細胞をトランスフェクションするステップと、
（ｂ）前記細胞のゲノム内への前記ベクターの非相同組込みに好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップと
を含み、前記組込みにより、前記細胞のゲノム内の内在性遺伝子の活性化がもたらされる方法。
【請求項１２５】
遺伝子を同定するための方法であって、
（ａ）請求項１、２、４〜７、１３〜１６、２１〜２３、２５〜２８、４９〜５２、７７〜８０、８６〜８８、９０、９４、９６〜９９、１０４、１０７又は１１０のいずれか１項に記載のベクターにより複数の細胞をトランスフェクションするステップと、
（ｂ）細胞のゲノム内へのベクターの非相同組込みに好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップと、
（ｃ）ベクターが前記細胞のゲノム内に組み込まれた細胞を選択するステップと、
（ｄ）前記選択された細胞からＲＮＡを単離するステップと、
（ｅ）前記単離されたＲＮＡからｃＤＮＡを作製するステップと、
（ｆ）１つ又は複数のヌクレオチド配列を含有する１つ又は複数のｃＤＮＡ分子を前記ベクターから単離することによって前記ｃＤＮＡ内の遺伝子を同定するステップと
を含む方法。
【請求項１２６】
（ｆ）における前記同定は、前記ｃＤＮＡを前記ベクターにハイブリダイゼーションすることによって達成される、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
（ｆ）における前記同定は、前記ｃＤＮＡを配列決定し、前記ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を前記ベクターのヌクレオチド配列と比較することによって達成される、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２８】
前記対形成しないスプライスドナー配列は、前記第１の選択マーカーの上流又は前記第１の選択マーカーの内部に位置し、その結果、前記ベクターが真核生物細胞のゲノム内に組み込まれ、前記対形成しないスプライスドナー配列からゲノムコードのスプライスアクセプター配列へのスプライシングが生じたとき、前記第１の選択マーカーは不活性な形態で発現するか、又は全く発現しない、請求項１０４に記載のベクター。
【請求項１２９】
単一エキソン遺伝子が活性化された細胞を単離するための方法であって、
（ａ）請求項１２８に記載されるベクターで多数の真核生物細胞をトランスフェクションするステップと、
（ｂ）前記細胞のゲノム内へのベクターの非相同組込みに好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップと、
（ｃ）前記の第１の選択マーカー及び第２の選択マーカーがその活性化形態で発現する細胞を選択するステップと
を含む方法。
【請求項１３０】
（ａ）選択された細胞からＲＮＡを単離するステップと、
（ｂ）前記単離されたＲＮＡからｃＤＮＡを作製するステップと、
（ｃ）前記ｃＤＮＡから単一エキソン遺伝子を単離するステップと
をさらに含む、請求項１２９に記載の方法。
【請求項１３１】
遺伝子のエキソンＩを単離するための方法であって、
（ａ）請求項７７〜８０、８３、８５、８６、８８、９４、９６〜９９、１０４又は１０７のいずれか１項に記載されるベクターにより１つ又は複数の真核生物細胞をトランスフェクションするステップと、
（ｂ）前記細胞のゲノム内へのベクターの非相同組込みに好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップと、
（ｃ）前記ベクターによって、１つ又は複数のエキソンを含有する内在性遺伝子が転写的に活性化された細胞を選択するステップと、
（ｄ）前記選択された細胞からＲＮＡを単離するステップと、
（ｅ）前記単離されたＲＮＡからｃＤＮＡを作製するステップと、
（ｆ）前記内在性遺伝子に由来する第２のエキソンにスプラシングされた前記ベクター由来の第１のエキソンを含有するｃＤＮＡ分子を回収し、それによって１つ又は複数のベクターエキソン標識ｃＤＮＡ分子を得るステップと、
（ｇ）前記ベクターエキソン標識ｃＤＮＡ分子を使用して、エキソンＩを含有する活性化された内在性遺伝子を回収するステップと
を含む方法。
【請求項１３２】
遺伝子のエキソンＩを含有する転写物を発現させるための方法であって、
（ａ）請求項７７〜８０、８３、８５、８６、８８、９４、９６〜９９、１０４又は１０７のいずれか１項に記載されるベクターにより１つ又は複数の真核生物細胞をトランスフェクションするステップと、
（ｂ）前記細胞のゲノム内へのベクターの非相同組込みに好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップと、
（ｃ）内在性遺伝子に由来するエキソンＩを含有する転写物の発現に好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップと
を含む方法。
【請求項１３３】
遺伝子産物を産生させるための方法であって、
（ａ）少なくとも１つの遺伝子を含有するゲノムＤＮＡを真核生物細胞から単離するステップと、
（ｂ）１つ又は複数の転位シグナル、１つ又は複数のプロモーター、１つ又は複数のエキソン、及び１つ又は複数の対形成しないスプライスドナー配列を含むベクターを、前記単離されたゲノムＤＮＡにインビトロ転位によって挿入し、それによってゲノムＤＮＡ−ベクター複合体を形成させるステップと、
（ｃ）前記ゲノムＤＮＡ−ベクター複合体を真核生物細胞に導入するステップと、
（ｄ）前記遺伝子の発現に好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップと
を含む方法。
【請求項１３４】
前記遺伝子の発現産物を単離することをさらに含む、請求項１３３に記載の方法。
【請求項１３５】
内在性の細胞ゲノム遺伝子によってコードされる遺伝子産物を産生させるための方法であって、
（ａ）少なくとも１つの遺伝子を含有するゲノムＤＮＡを真核生物細胞から単離するステップと、
（ｂ）請求項７７〜８０、８３、８５、８６、８８、９４、９６〜９９、１０４又は１０７のいずれか1項に記載されるベクターを、前記単離されたゲノムＤＮＡ内に挿入するか、そうでなければ前記単離されたゲノムＤＮＡと一緒にし、それによってベクター−ゲノムＤＮＡ複合体を作製するステップと、
（ｃ）前記ベクター−ゲノムＤＮＡ複合体を好適な真核生物細胞にトランスフェクションするステップと、
（ｄ）前記ベクター−ゲノムＤＮＡ複合体に含有される前記ベクターによってコードされる１つ又は複数の遺伝子の転写を生じさせるのに好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップと
を含む方法。
【請求項１３６】
（ａ）前記転写によって産生されるＲＮＡを前記細胞から単離するステップと、
（ｂ）前記単離されたＲＮＡから１つ又は複数のｃＤＮＡ分子を作製するステップと、
（ｃ）前記ｃＤＮＡ分子の５’末端にベクター配列を含有する１つ又は複数のｃＤＮＡ分子を回収し、それによって前記遺伝子を単離するステップと、
をさらに含む、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３７】
前記ベクターは１つ又は複数の転位シグナルをさらに含み、前記ベクターは前記単離されたゲノムＤＮＡにインビトロ転位によって組み込まれる、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３８】
前記単離されたゲノムＤＮＡはクローニングベクターに存在する、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３９】
タンパク質を産生させるための方法であって、
（ａ）ゲノムＤＮＡを１つ又は複数の細胞から単離するステップと、
（ｂ）請求項７７〜８０、８３、８５、８６、８８、９４、９６〜９９、１０４又は１０７のいずれか1項に記載されるベクターを、前記単離されたゲノムＤＮＡ内に挿入するか、そうでなければ前記単離されたゲノムＤＮＡと一緒にし、それによってベクター−ゲノムＤＮＡ複合体を作製するステップと、
（ｃ）前記ベクター−ゲノムＤＮＡ複合体を好適な細胞にトランスフェクションするステップと、
（ｄ）前記ベクター−ゲノムＤＮＡ複合体に含有される前記ゲノムＤＮＡからのタンパク質発現を生じさせるのに好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップと
を含む方法。
【請求項１４０】
タンパク質を産生させるための方法であって、
（ａ）ゲノムＤＮＡを１つ又は複数の細胞から単離するステップと、
（ｂ）１つ又は２以上の転位シグナルと、エキソン対形成しないスプライスドナー複合体に機能的に連結された転写調節配列とを含むベクターを、前記単離されたゲノムＤＮＡ内に転位によって組み込ませ、それによってベクター−ゲノムＤＮＡ複合体を形成させるステップと、
（ｃ）前記ベクター−ゲノムＤＮＡ複合体を好適な細胞にトランスフェクションするステップと、
（ｄ）前記ベクター−ゲノムＤＮＡ複合体に含有される前記ゲノムＤＮＡからのタンパク質発現を生じさせるのに好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップと
を含む方法。
【請求項１４１】
遺伝子を発現させるための方法であって、
（ａ）１つ又は複数の遺伝子を含有するゲノムＤＮＡを１つ又は複数の真核生物細胞から単離するステップと、
（ｂ）（ｉ）選択マーカーと
（ｉｉ）翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列と、
（ｉｉｉ）分泌シグナル配列と、
（ｉｖ）エピトープ標識と、
（ｖ）対形成しないスプライスドナー配列と
を含むベクターと、前記単離されたゲノムＤＮＡとを一緒にし、それによってベクター−ゲノムＤＮＡ複合体を作製するステップと、
（ｃ）前記ベクター−ゲノムＤＮＡ複合体を細胞に導入するステップと、
（ｄ）前記ベクター−ゲノムＤＮＡ複合体を含有する細胞を選択するステップと、
（ｅ）前記ベクター−ゲノムＤＮＡ複合体に含有される遺伝子の発現を生じさせるのに好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップと
を含む方法。
【請求項１４２】
前記細胞は、タンパク質発現を生じさせるのに好適な条件で培養される前に、その途中で、又はその後で、前記トランスフェクションされたベクター−ゲノムＤＮＡ複合体を含有する細胞について選択される、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１４３】
前記ベクターは選択マーカーをさらに含み、そして前記細胞は、タンパク質又は遺伝子の発現を生じさせるのに好適な条件で培養される前に、前記トランスフェクションされたベクター−ゲノムＤＮＡ複合体を含有する細胞について選択される、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４４】
前記クローニングベクターは、ＢＡＣ、ＹＡＣ、ＰＡＣ、コスミド、ファージ及びプラスミドからなる群から選択される、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４５】
前記タンパク質を単離することをさらに含む、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１４６】
請求項１３９、１４１、１４２、１４３又は１４５のいずれか1項に記載される方法により産生されるタンパク質。
【請求項１４７】
タンパク質を発現させるための方法であって、
（ａ）（ｉ）翻訳開始コドンを有さないか、あるいは翻訳開始コドンと、停止コドンによって終了していないオープンリーディングフレームとをコードするかのいずれかである異種のエキソンと、
（ｉｉ）異種のスプライスドナー配列と、
（ｉｉｉ）遺伝子又はその一部をコードするゲノムＤＮＡフラグメントと
（ｉｖ）１つ又は複数の選択マーカーと
に機能的に連結された異種のプロモーターを含むベクターにより細胞をトランスフェクションするステップと、
（ｂ）前記トランスフェクションされたベクターを含有する細胞を選択するステップと、
（ｃ）前記ベクターからのタンパク質発現に好適な条件のもとで、前記の選択されたトランスフェクションされた細胞を培養するステップと
を含む方法。
【請求項１４８】
前記ベクターはウイルス複製起点をさらに含む、請求項１４７に記載の方法。
【請求項１４９】
前記ウイルス複製起点はエプスタインバールウイルスのｏｒｉＰである、請求項１４８に記載の方法。
【請求項１５０】
（ａ）異種のプロモーターと、
（ｂ）異種のエキソンと、
（ｃ）異種のスプライスドナー配列と、
（ｄ）遺伝子又はその一部をコードするゲノムフラグメントと、
（ｅ）１つ又は複数の選択マーカーと、
（ｆ）１つ又は複数のウイルス複製起点と
を含むベクターであって、前記異種のエキソンは翻訳開始コドンを有さないか、あるいは翻訳開始コドンと、停止コドンによって終了していないオープンリーディングフレームとをコードしているかのいずれかであり、そして前記ベクターが細胞に導入されたときに前記ゲノムフラグメントによりコードされる前記遺伝子又はその一部からタンパク質が発現するように、前記ゲノムフラグメントが、前記異種のプロモーター、前記エキソン及び前記スプライスドナー配列の下流に配向しているベクター。
【請求項１５１】
前記選択マーカーはポリアデニル化シグナルを有さない、請求項１５０に記載のベクター。
【請求項１５２】
１つ又は複数のウイルス複製タンパク質をコードする１つ又は複数の遺伝子をさらに含む、請求項１５０に記載のベクター。
【請求項１５３】
増幅可能なマーカーをさらに含む、請求項１５０に記載のベクター。
【請求項１５４】
請求項１５０〜１５３のいずれか1項に記載されるベクターを含む細胞。
【請求項１５５】
前記細胞は単離された細胞である、請求項１５４に記載の細胞。
【請求項１５６】
前記第１の転写調節配列は、前記ベクターにおいて、前記第２の転写調節配列と同じ向きである、請求項２３又は２５〜２８のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１５７】
前記ポジティブ選択マーカーは、ネオマイシン遺伝子、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子、ピューロマイシン遺伝子、ジヒドロオラターゼ遺伝子、グルタミンシンセターゼ遺伝子、ヒスチジンＤ遺伝子、カルバミルリン酸シンターゼ遺伝子、ジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子、多剤耐性１遺伝子、アスパラギン酸トランスカルバミラーゼ遺伝子、キサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子及びアデノシンデアミナーゼ遺伝子からなる群から選択される、請求項９０又は１１０に記載のベクター。
【請求項１５８】
前記ネガティブ選択マーカーは、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子、チミジンキナーゼ遺伝子及びジフテリアトキシン遺伝子からなる群から選択される、請求項９０又は１１０に記載のベクター。
【請求項１５９】
前記ネガティブ選択マーカーは前記ポジティブ選択マーカーの上流に位置する、請求項１１０に記載のベクター。
【請求項１６０】
タンパク質を安定的に発現する細胞であって、プロモーター、エキソン／スプライスドナー複合体、及び前記タンパク質又はその一部をコードするゲノムフラグメントを含むベクターを含み、前記プロモーター及びエキソン／スプライスドナー複合体は前記ゲノムフラグメントに対して異種である細胞。
【請求項１６１】
前記ベクターは前記細胞のゲノム内に組み込まれる、請求項１６０に記載の細胞。
【請求項１６２】
前記ベクターはウイルス複製起点をさらに含み、エピソームとして前記細胞内に維持される、請求項１６０に記載の細胞。
【請求項１６３】
前記ベクターは１つ又は複数の選択マーカーをさらに含む、請求項１５９又は請求項１６０に記載の細胞。
【請求項１６４】
前  記ウイルス複製起点はエプスタインバールウイルスのｏｒｉＰである、請求項１６１に記載の細胞。
【請求項１６５】
（ａ）遺伝子に機能的に連結された転写調節配列と、
（ｂ）ウイルス複製起点と、
（ｃ）増幅可能なマーカーと
を含むベクターであって、前記ベクターが相同組換えのための標的配列を含まないベクター。
【請求項１６６】
遺伝子の発現を増大させるための方法であって、
（ａ）（ｉ）遺伝子に機能的に連結された転写調節配列と、
（ｉｉ）ウイルス複製起点と、
（ｉｉｉ）増幅可能なマーカーと
を含むベクターであって、エピソームとして細胞内に維持されるベクターを細胞内に導入するステップと、
（ｂ）前記増幅可能なマーカー及び前記遺伝子の増大した発現について選択するステップと
を含む方法。
【請求項１６７】
スプライシングされない細胞転写物分子に由来するｃＤＮＡ分子を切断するための方法であって、
（ａ）請求項１３〜１６又は請求項２２のいずれか1項に記載されるベクターを、１つ又は複数の真核生物細胞のゲノム内に組み込ませるステップと、
（ｂ）前記転写調節配列からの発現に好適な条件のもとで前記細胞を培養するステップと、
（ｃ）前記細胞からＲＮＡを単離するステップと、
（ｄ）前記単離されたＲＮＡからｃＤＮＡを作製するステップと、
（ｅ）前記低頻度出現の制限酵素切断部位で切断する酵素により前記ｃＤＮＡを消化するステップと
を含む方法。
【請求項１６８】
細胞は単離されクローン化されたものである、請求項３、１２、２４、３１、３７〜４７、５６、５７、６２、７６、８９、９５、１１９、１２１又は１２２のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項１６９】
内在性遺伝子が活性化又は過剰発現された細胞を単離及びクローニングすることをさらに含む、請求項１８、３０、３４、４８、５４、５８、６７、６８、８２、１０１又は１２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７０】
薬物を発見するための方法であって、
（ａ）ベクターを真核生物宿主細胞のゲノム内に組み込ませるステップと、ここで、前記ベクターの組込みにより、前記宿主細胞における内在性遺伝子の発現が活性化され、
（ｂ）前記活性化された遺伝子の発現に好都合な条件のもとで前記細胞を培養し、それにより、前記活性化された遺伝子の遺伝子産物を産生させるステップと、
（ｃ）薬物の活性についてスクリーニングされる１つ又は複数の試験化合物により前記細胞を処理するステップと、
（ｄ）前記遺伝子産物と反応するか、又は前記遺伝子産物によって誘導される細胞表現型に影響を及ぼす前記１つ又は複数の試験化合物の能力を決定するステップと
を含む方法。
【請求項１７１】
薬物を発見するための方法であって
（ａ）ベクターを真核生物宿主細胞のゲノム内に組み込ませるステップと、ここで、前記ベクターの組込みにより、前記宿主細胞における内在性遺伝子の発現が活性化され、
（ｂ）前記活性化された遺伝子の遺伝子産物の生成に好都合な条件のもとで、血清低下培地中で前記細胞を培養し、それによって、前記遺伝子産物を含有する細胞馴化培地を作製するステップと、
（ｃ）１つ又は複数の試験化合物を、前記細胞馴化培地中の前記遺伝子産物と相互作用する前記試験化合物の能力を決定することによって薬物の活性についてスクリーニングするステップと
を含む方法。
【請求項１７２】
（ｃ）における前記スクリーニングの前に前記細胞馴化培地を濃縮することをさらに含む、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１７３】
（ｃ）における前記スクリーニングの前に前記細胞馴化培地を濃縮することをさらに含む、請求項１７１に記載の方法。