(57)【要約】  本開示は、インターロイキン１０受容体に結合し、これを通して細胞内シグナル伝達を刺激する抗体サイトカイングラフトタンパク質を提供する。提供される抗体サイトカイングラフトタンパク質は、免疫関連障害の治療、改善および予防において、抗炎症細胞応答を増強し、炎症促進効果を減少させることに用途を見出している。抗体サイトカイングラフトタンパク質をコードするポリヌクレオチドおよびベクター、ならびに抗体サイトカイングラフトタンパク質を産生することができる宿主細胞、ならびに免疫関連障害の治療において抗体サイトカイングラフトタンパク質を他の治療剤と組み合わせる方法がさらに提供される。
2019505173.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と；
（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と；
（ｃ）前記ＶＨまたは前記ＶＬのＣＤＲにグラフトしたインターロイキン１０（ＩＬ１０）単量体分子と
を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項２】
前記ＩＬ１０単量体分子が重鎖ＣＤＲにグラフトされている、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項３】
前記重鎖ＣＤＲがＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２またはＨＣＤＲ３である、請求項２に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項４】
前記ＩＬ１０単量体分子が前記ＨＣＤＲ１にグラフトされている、請求項３に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項５】
前記ＩＬ１０単量体分子が軽鎖ＣＤＲにグラフトされている、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項６】
前記軽鎖ＣＤＲがＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２またはＬＣＤＲ３である、請求項５に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項７】
前記ＩＬ１０単量体分子が前記ＬＣＤＲ１にグラフトされている、請求項６に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項８】
組換えヒトＩＬ１０と比較すると、Ｔ細胞またはＮＫ細胞のより少ない活性化が可能である、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項９】
ｒｈＩＬ１０よりも長い半減期を有する、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１０】
前記ＩＬ１０単量体分子が配列番号２０９からなる、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１１】
ＩｇＧクラス抗体重鎖をさらに含む、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１２】
前記ＩｇＧクラス重鎖がＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択される、請求項１１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１３】
前記ＣＤＲの標的タンパク質への結合特異性が前記グラフトＩＬ１０単量体分子の存在下で低下している、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１４】
前記ＣＤＲの標的タンパク質への結合特異性が前記グラフトＩＬ１０単量体分子の存在下で保持されている、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１５】
前記ＣＤＲの結合特異性が前記ＩＬ１０単量体分子のサイトカイン受容体結合特異性とは異なる、請求項１４に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１６】
前記ＣＤＲの結合特異性がヒト以外の標的に対するものである、請求項１４に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１７】
前記ＶＨまたはＶＬがヒト化またはヒトである、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１８】
（ｉ）（ａ）配列番号１９３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１９４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１９６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１９７のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１９８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉ）（ａ）配列番号９７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号９９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１００のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１０１のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１０２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉｉ）（ａ）配列番号１のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号４のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｖ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号２０のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２１のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号２２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖ）（ａ）配列番号３３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号３６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３７のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号３８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖｉ）（ａ）配列番号４９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５０のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号５２のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５３のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号５４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖｉｉ）（ａ）配列番号６５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号６６のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号６７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号６８のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号６９のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号７０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖｉｉｉ）（ａ）配列番号８１のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号８２のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号８３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号８４のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８５のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号８６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｘ）（ａ）配列番号１１３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１１４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１１５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１１６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１１７のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１１８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘ）（ａ）配列番号１２９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１３０のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１３１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１３２のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１３３のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１３４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉ）（ａ）配列番号１４５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１４６のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１４７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１４８のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１４９のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１５０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｉ）（ａ）配列番号１６１のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１６２のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１６３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１６４のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１６５のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１６６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｉｉ）（ａ）配列番号１７７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１７８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１７９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１８０のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１８１のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１８２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｖ）（ａ）配列番号２１０のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２１１のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２１２のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号２１３のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２１４のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号２１５のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；または
（ｘｖ）（ａ）配列番号２２６のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２２７のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２２８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号２２９のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２３０のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号２３１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１９】
（ｉ）配列番号２０５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２０６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｉ）配列番号１０９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１１０を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｉｉ）配列番号１３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｖ）配列番号２９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３０を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｖ）配列番号４５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号４６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｖｉ）配列番号６１を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号６２を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｖｉｉ）配列番号７７を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号７８を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｖｉｉｉ）配列番号９３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号９４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｘ）配列番号１２５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１２６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｘ）配列番号１４１を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１４２を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｘｉ）配列番号１５７を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１５８を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｘｉｉ）配列番号１７３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１７４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｘｉｉｉ）配列番号１８９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１９０を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｘｉｖ）配列番号２２２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２２３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
（ｘｖ）配列番号２３８を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２３９を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項２０】
低下したエフェクター機能に対応する修飾Ｆｃ領域をさらに含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項２１】
前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａの１つまたは複数から選択される突然変異を含む、請求項２０に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項２２】
前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａからなる群から選択される、請求項２１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項２３】
配列番号１９３のＨＣＤＲ１、配列番号１９４のＨＣＤＲ２、配列番号１９５のＨＣＤＲ３、配列番号１９６のＬＣＤＲ１、配列番号１９７のＬＣＤＲ２、配列番号１９８のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域からなる抗体サイトカイングラフトタンパク質であって、ｒｈＩＬ１０と比較すると、Ｔ細胞またはＮ細胞の活性化が少ない抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項２４】
前記ＣＤＲの結合特異性がヒト以外の標的に対するものである、請求項２３に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項２５】
ｒｈＩＬ１０よりも長い半減期を有する、請求項２３に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項２６】
（ｉ）配列番号２４６の重鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列および配列番号２４７の軽鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列；
（ｉｉ）配列番号２４８の重鎖コードポリヌクレオチド配列および配列番号２４９の軽鎖コードポリヌクレオチド配列；
（ｉｉｉ）配列番号２４２の重鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列および配列番号２４３の軽鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列；または
（ｉｖ）配列番号２４４の重鎖コードポリヌクレオチド配列および配列番号２４５の軽鎖コードポリヌクレオチド配列
を含む単離核酸。
【請求項２７】
抗体サイトカイングラフトタンパク質の重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドをコードする請求項２６に記載の核酸と、場合により分泌シグナルとを含む、抗体サイトカイングラフトタンパク質の産生に適した組換え宿主細胞。
【請求項２８】
前記細胞が哺乳類細胞である、請求項２７に記載の宿主細胞。
【請求項２９】
請求項１から２６のいずれかに記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項３０】
治療上有効量の請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質を個体に投与するステップを含む、治療または予防を必要とする個体の免疫関連障害を治療または予防する方法。
【請求項３１】
前記免疫関連障害が、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、乾癬、Ｉ型糖尿病、急性膵炎、ブドウ膜炎、シェーグレン病、ベーチェット病、サルコイドーシスおよび移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗体サイトカイングラフトタンパク質が別の治療剤と組み合わせて投与される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記治療剤が、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ゴリムマブ、ナタリズマブおよびベドリズマブからなる群から選択される抗ＴＮＦ剤である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記治療剤が、スルファサラジン、メサラミン、バルサラジド、オルサラジンおよび５−アミノサリチル酸の他の誘導体からなる群から選択されるアミノサリチル酸剤である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記治療剤が、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、ブデニソニド、メサラミンおよびデキサメタゾンからなる群から選択される副腎皮質ステロイドである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記治療剤が抗菌剤である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
請求項１から２５のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質を投与するステップを含む、それを必要とする患者の単球を活性化する方法。
【請求項３８】
単球が活性化され、Ｔ細胞もＮＫ細胞も活性化されない、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗体サイトカイングラフトタンパク質の投与がＴＮＦα産生を減少させる、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
免疫関連障害の治療における、
（ｉ）（ａ）配列番号１９３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１９４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１９６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１９７のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１９８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；または
（ｉｉ）（ａ）配列番号９７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号９９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１００のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１０１のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１０２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質の使用。
【請求項４１】
炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、乾癬、Ｉ型糖尿病、急性膵炎、ブドウ膜炎、シェーグレン病、ベーチェット病、サルコイドーシスおよび移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）からなる群から選択される免疫関連障害の治療における請求項４０に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質の使用。
【請求項４２】
前記抗体サイトカイングラフトタンパク質が別の治療剤と組み合わせて投与される、請求項４０に記載の使用。
【請求項４３】
前記治療剤が、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ゴリムマブ、ナタリズマブおよびベドリズマブからなる群から選択される抗ＴＮＦ剤である、請求項４２に記載の使用。
【請求項４４】
前記治療剤が、スルファサラジン、メサラミン、バルサラジド、オルサラジンおよび５−アミノサリチル酸の他の誘導体からなる群から選択されるアミノサリチル酸剤である、請求項４２に記載の使用。
【請求項４５】
前記治療剤が、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、ブデニソニド、メサラミンおよびデキサメタゾンからなる群から選択される副腎皮質ステロイドである、請求項４２に記載の使用。
【請求項４６】
前記治療剤が抗菌剤である、請求項４２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、インターロイキン１０受容体（ＩＬ１０Ｒ）に結合し、この受容体を通してシグナル伝達を刺激する抗体−サイトカイングラフト組成物（antibody-cytokine engrafted composition）に関する。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン１０（ＩＬ１０）は、Ｔｈ１ヘルパー細胞および抗原提示細胞（ＡＰＣ）に効果を及ぼすサイトカイン合成阻害因子として同定された。ドメイン交換非共有結合ホモ二量体として存在する１６１アミノ酸タンパク質であるＩＬ１０は、１個のホモ二量体：４個のＩＬ−１０ＲＩサブユニットの化学量論で高親和性ＩＬ−１０受容体Ｉ（ＩＬ−１０ＲＩ）に結合し、この高親和性ＩＬ−１０受容体Ｉは、ＩＬ−１０Ｒ２を動員し、ＪＡＫ１／ＴＹＫ２経路を通してシグナル伝達を活性化する。ＩＬ１０は、炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、ＧＭ−ＣＳＦ、ならびに反応性酸素および窒素中間体の単球およびマクロファージ合成を阻害し、自己免疫の多数の前臨床モデルにおいて強力な有効性を示している。ＩＬ１０有効性は、単球、マクロファージおよびＴ細胞の活性化およびエフェクター機能を阻害するその能力に起因すると考えられている。しかしながら、ＩＬ１０は極めて広い範囲の生物学的活性を有する多面的免疫調節性サイトカインである。ＩＬ１０はまた、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、細胞傷害性およびヘルパーＴ細胞、肥満細胞、顆粒球、樹状細胞、角化細胞およびさらに内皮細胞の増殖および分化を促進することが示されており、これが炎症促進機能も有することを示している（Moore et al., Annu Rev Immunol. 2001;19:683-765）。
【０００３】
自己免疫および炎症状態、具体的には炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するための治療剤としてのＩＬ１０は、動物モデル系ならびに遺伝学で支持されている。例えば、マウスにおけるＩＬ１０のノックアウトおよびＩＬ−１０Ｒ欠損を有するマウスは、大腸炎を自然発症する。ヒトでは、クローン病患者の９〜１６％がＩＬ１０産生欠陥または減少に関連するＮＯＤ２突然変異を有し、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）患者の２０％が３’ＵＴＲ中に疾患関連ＩＬ１０  ＳＮＰを有する。最後に、ヒトにおけるＩＬ−１０Ｒ１の一定の突然変異が、まれな重症型のクローン病を引き起こす（Glocker at al., N Engl J Med. 2009; 361(21):2033-45）。
【０００４】
強力な遺伝連鎖データにもかかわらず、組換えヒトＩＬ１０は、最大２５μｇ／ｋｇまで健康なボランティアおよび特定の患者集団における耐容性および安全性、ならびに最大１００μｇ／ｋｇまでレシピエントのサブセットで軽度の効果を実証したが、特定の患者集団ではごく軽度の臨床的有効性しか見られず、臨床的開発は有効性の欠如のために中断された。試験の再調査が試みられ、結果のいくつかの可能性が確認された。例えば、限られた有効性は、ＩＬ１０の短い半減期による標的器官（結腸）の乏しい曝露、高用量で現れ、低用量ＩＬ１０の抗炎症有効性を相殺するＩＬ１０の炎症促進効果のためである（Lindsay and Hodgson, Aliment Pharmacol Ther. 2001; 15(11) 1709-1716）。この可能性と一致して、高用量のＩＬ１０は、炎症増加に関連する全身ＩＦＮγ、グランザイムおよびネオプテリンレベルの上昇と関連していた（Tilg et al., Gut 2002; 50(2)191-5）。
【０００５】
組換えヒトＩＬ１０の臨床的失敗に対処する改善したプロファイルを与えるより有効なＩＬ１０治療剤を生成するために、抗体サイトカイングラフトタンパク質が開発された。この改善した治療プロファイルには、炎症促進活性の著しい低下、延長した半減期、投与の容易さおよび安定性を含む強力な抗炎症性ＩＬ１０効力が含まれる。よって、本開示は、改善したＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質および免疫関連障害を治療する方法を提供する。
【発明の概要】
【０００６】
本開示は、公知であり、診療所で使用されている組換えＩＬ１０およびＩＬ１０構築物に対して好ましい治療プロファイルを有する抗体−サイトカイングラフトタンパク質を提供する。特に、天然または組換えヒトＩＬ１０の所望の抗炎症活性を維持しているが、炎症促進活性の著しい低下が保持されている抗体サイトカイングラフトタンパク質が提供される。さらに、抗体サイトカイングラフトタンパク質は、組換えヒトＩＬ１０タンパク質（ｒｈＩＬ１０）に対して改善した半減期、安定性および投与の容易さを有する。これらの組成物の好ましい特性は、診療所で以前から使用され、文献に記載されているものよりも好ましい治療組成物をもたらす。よって、本開示は、ＩＬ１０受容体に結合し、ＩＬ１０受容体を通してシグナル伝達を促進し、一定の細胞型を刺激する抗体サイトカイングラフトタンパク質を提供する。（ｉ）重鎖可変領域（ＶＨ）ならびにＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３領域を含む重鎖定常領域を含む免疫グロブリン重鎖配列と、（ｉｉ）軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む免疫グロブリン軽鎖配列とを含む抗体サイトカイングラフトタンパク質であって、単量体ＩＬ１０分子がＶＨまたはＶＬの相補性決定領域（ＣＤＲ）にグラフトされている、抗体サイトカイングラフトタンパク質が提供される。
【０００７】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、配列番号１３を含む可変重鎖と配列番号１４を含む可変軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、配列番号２９を含む可変重鎖と配列番号３０を含む可変軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、配列番号４５を含む可変重鎖と配列番号４６を含む可変軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、配列番号６１を含む可変重鎖と配列番号６２を含む可変軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、配列番号７７を含む可変重鎖と配列番号７８を含む可変軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、配列番号９３を含む可変重鎖と配列番号９４を含む可変軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、配列番号１０９を含む可変重鎖と配列番号１１０を含む可変軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、配列番号１２５を含む可変重鎖と配列番号１２６を含む可変軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、配列番号１４１を含む可変重鎖と配列番号１４２を含む可変軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、配列番号１５７を含む可変重鎖と配列番号１５８を含む可変軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、配列番号１７３を含む可変重鎖と配列番号１７４を含む可変軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、配列番号１８９を含む可変重鎖と配列番号１９０を含む可変軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、配列番号２０５を含む可変重鎖と配列番号２０６を含む可変軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、配列番号２２２を含む可変重鎖と配列番号２２３を含む可変軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、配列番号２３８を含む可変重鎖と配列番号２３９を含む可変軽鎖とを含む。
【０００８】
特定の実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、ＩｇＧクラス抗体Ｆｃ領域を含む。特定の実施形態では、免疫グロブリンがＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４サブクラスＦｃ領域から選択される。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、場合により抗体または抗体断片とＦｃ受容体の結合を調節する（すなわち、増加させるまたは減少させる）少なくとも１つの修飾を含む。抗体サイトカイングラフトタンパク質の免疫グロブリン重鎖は、場合により修飾されたエフェクター機能を与える修飾を含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される、低下したエフェクター機能を与える突然変異を含む。
【０００９】
関連する態様では、本開示はさらに、本明細書に記載される抗体サイトカイングラフトタンパク質の少なくとも重鎖および／または軽鎖タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供する。別の関連する態様では、本開示はさらに、本明細書に記載される抗体サイトカイングラフトタンパク質の産生に適した宿主細胞を提供する。特定の実施形態では、宿主細胞が、抗体サイトカイングラフトタンパク質の重鎖および／または軽鎖ポリペプチドをコードする核酸を含む。さらに別の態様では、本明細書に記載される提供される宿主細胞を抗体サイトカイングラフトタンパク質の発現、形成および分泌に適した条件下で培養するステップと、培養物から抗体サイトカイングラフトタンパク質を回収するステップとを含む、本開示の抗体サイトカイングラフトタンパク質を製造する方法が提供される。さらなる態様では、本開示はさらに、本明細書に記載される抗体サイトカイングラフトタンパク質を含むキットを提供する。
【００１０】
別の関連する態様では、本開示はさらに、本明細書に記載される抗体サイトカイングラフトタンパク質と、薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、固体に投与するための、本開示の抗体サイトカイングラフトタンパク質を含む医薬組成物を提供する。
【００１１】
別の態様では、本開示は、治療上有効量の本明細書に記載される本開示の抗体サイトカイングラフトタンパク質を個体に投与するステップを含む、治療を必要とする個体の免疫関連障害を治療する方法を提供する。さらなる態様では、本開示は、個体の免疫関連障害の治療または予防に使用するための抗体サイトカイングラフトタンパク質を提供する。
【００１２】
いくつかの実施形態では、患者が免疫関連障害、例えば炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、乾癬、Ｉ型糖尿病、急性膵炎、ブドウ膜炎、シェーグレン病、ベーチェット病、サルコイドーシスおよび移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を有する。特定の実施形態では、炎症性腸疾患がクローン病または潰瘍性大腸炎である。
【００１３】
いくつかの実施形態では、本開示が、
（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と；
（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と；
（ｃ）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲにグラフトしたインターロイキン１０（ＩＬ１０）単量体分子と
を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質を提供する。
【００１４】
ＩＬ１０単量体分子が重鎖ＣＤＲにグラフトされている、抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００１５】
重鎖ＣＤＲがＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２またはＨＣＤＲ３から選択される、抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００１６】
ＩＬ１０単量体分子がＨＣＤＲ１にグラフトされている、抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００１７】
ＩＬ１０単量体分子が軽鎖ＣＤＲにグラフトされている、抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００１８】
軽鎖ＣＤＲがＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２またはＬＣＤＲ３から選択される、抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００１９】
ＩＬ１０単量体分子がＬＣＤＲ１にグラフトされている、抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００２０】
ＩＬ１０と比較するとＴ細胞またはＮＫ細胞の活性化が少ない、抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００２１】
ｒｈＩＬ１０よりも長い半減期を有する抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００２２】
ＩＬ１０単量体分子が配列番号２０９からなる、抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００２３】
ＩｇＧクラス抗体重鎖をさらに含む抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００２４】
ＩｇＧクラス重鎖がＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択される、抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００２５】
ＣＤＲと標的タンパク質の結合特異性がグラフトＩＬ１０単量体分子の存在によって低下している、抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００２６】
ＣＤＲと標的タンパク質の結合特異性がグラフトＩＬ１０単量体分子の存在下で保持されている、抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００２７】
ＣＤＲの結合特異性がＩＬ１０単量体分子のサイトカイン受容体結合特異性とは異なる標的タンパク質に対するものである、抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００２８】
ＣＤＲの結合特異性がヒト以外の標的に対するものである、抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００２９】
ヒト化またはヒトである、抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００３０】
（ｉ）（ａ）配列番号１９３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１９４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１９６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１９７のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１９８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉ）（ａ）配列番号９７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号９９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１００のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１０１のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１０２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉｉ）（ａ）配列番号１のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号４のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｖ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号２０のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２１のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号２２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖ）（ａ）配列番号３３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号３６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３７のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号３８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖｉ）（ａ）配列番号４９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５０のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号５２のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５３のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号５４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖｉｉ）（ａ）配列番号６５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号６６のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号６７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号６８のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号６９のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号７０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖｉｉｉ）（ａ）配列番号８１のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号８２のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号８３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号８４のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８５のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号８６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｘ）（ａ）配列番号１１３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１１４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１１５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１１６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１１７のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１１８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘ）（ａ）配列番号１２９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１３０のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１３１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１３２のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１３３のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１３４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉ）（ａ）配列番号１４５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１４６のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１４７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１４８のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１４９のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１５０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｉ）（ａ）配列番号１６１のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１６２のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１６３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１６４のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１６５のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１６６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｉｉ）（ａ）配列番号１７７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１７８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１７９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１８０のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１８１のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１８２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｖ）（ａ）配列番号２１０のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２１１のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２１２のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号２１３のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２１４のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号２１５のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；ならびに
（ｘｖ）（ａ）配列番号２２６のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２２７のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２２８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号２２９のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２３０のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号２３１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００３１】
（ｉ）配列番号２０５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２０６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｉ）配列番号１０９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１１０を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｉｉ）配列番号１３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｖ）配列番号２９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３０を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｖ）配列番号４５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号４６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｖｉ）配列番号６１を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号６２を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｖｉｉ）配列番号７７を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号７８を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｖｉｉｉ）配列番号９３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号９４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｘ）配列番号１２５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１２６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｘ）配列番号１４１を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１４２を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｘｉ）配列番号１５７を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１５８を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｘｉｉ）配列番号１７３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１７４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｘｉｉｉ）配列番号１８９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１９０を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｘｉｖ）配列番号２２２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２２３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；ならびに
（ｘｖ）配列番号２３８を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２３９を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００３２】
低下したエフェクター機能に対応する修飾Ｆｃ領域をさらに含む抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００３３】
修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａの１つまたは複数から選択される突然変異を含む、抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００３４】
修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａからなる群から選択される、抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００３５】
配列番号１９３のＨＣＤＲ１、配列番号１９４のＨＣＤＲ２、配列番号１９５のＨＣＤＲ３、配列番号１９６のＬＣＤＲ１、配列番号１９７のＬＣＤＲ２、配列番号１９８のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域からなる抗体サイトカイングラフトタンパク質であって、ＩＬ１０と比較すると、Ｔ細胞またはＮ細胞の活性化が少ない抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００３６】
ＣＤＲの結合特異性がヒト以外の標的に対するものである、抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００３７】
ｒｈＩＬ１０よりも長い半減期を有する抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００３８】
（ｉ）配列番号２４６の重鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列および配列番号２４７の軽鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列；
（ｉｉ）配列番号２４８の重鎖コードポリヌクレオチド配列および配列番号２４９の軽鎖コードポリヌクレオチド配列；
（ｉｉｉ）配列番号２４２の重鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列および配列番号２４３の軽鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列；または
（ｉｖ）配列番号２４４の重鎖コードポリヌクレオチド配列および配列番号２４５の軽鎖コードポリヌクレオチド配列
を含む単離核酸。
【００３９】
抗体サイトカイングラフトタンパク質の重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドをコードする核酸と、場合により分泌シグナルとを含む抗体サイトカイングラフトタンパク質の産生に適した組換え宿主細胞。
【００４０】
哺乳動物である宿主細胞。
【００４１】
抗体サイトカイングラフトタンパク質と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【００４２】
治療上有効量の抗体サイトカイングラフトタンパク質を個体に投与するステップを含む、治療または予防を必要とする個体の免疫関連障害を治療または予防する方法。
【００４３】
免疫関連障害が、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、乾癬、Ｉ型糖尿病、急性膵炎、ブドウ膜炎、シェーグレン病、ベーチェット病、サルコイドーシスおよび移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）からなる群から選択される、方法。
【００４４】
抗体サイトカイングラフトタンパク質が別の治療剤と組み合わせて投与される、方法。
【００４５】
治療剤が、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ゴリムマブ、ナタリズマブおよびベドリズマブからなる群から選択される抗ＴＮＦ剤である、方法。
【００４６】
治療剤が、スルファサラジン、メサラミン、バルサラジド、オルサラジンおよび５−アミノサリチル酸の他の誘導体からなる群から選択されるアミノサリチル酸剤である、方法。
【００４７】
治療剤が、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、ブデニソニド、メサラミンおよびデキサメタゾンからなる群から選択される副腎皮質ステロイドである、方法。
【００４８】
治療剤が抗菌剤である、方法。
【００４９】
抗体サイトカイングラフトタンパク質を投与するステップを含む、それを必要とする患者の単球を活性化する方法。
【００５０】
単球が活性化され、Ｔ細胞もＮＫ細胞も活性化されない、方法。
【００５１】
抗体サイトカイングラフトタンパク質の投与がＴＮＦα産生を減少させる、方法。
【００５２】
免疫関連障害の治療における、
（ｉ）（ａ）配列番号１９３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１９４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１９６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１９７のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１９８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；ならびに
（ｉｉ）（ａ）配列番号９７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号９９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１００のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１０１のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１０２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質の使用。
【００５３】
炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、乾癬、Ｉ型糖尿病、急性膵炎、ブドウ膜炎、シェーグレン病、ベーチェット病、サルコイドーシスおよび移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）からなる群から選択される免疫関連障害の治療において治療剤として使用するための抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【００５４】
抗体サイトカイングラフトタンパク質が別の治療剤と組み合わせて投与される、使用。
【００５５】
治療剤が、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ゴリムマブ、ナタリズマブおよびベドリズマブからなる群から選択される抗ＴＮＦ剤である、使用。
【００５６】
治療剤が、スルファサラジン、メサラミン、バルサラジド、オルサラジンおよび５−アミノサリチル酸の他の誘導体からなる群から選択されるアミノサリチル酸剤である、使用。
【００５７】
治療剤が、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、ブデニソニド、メサラミンおよびデキサメタゾンからなる群から選択される副腎皮質ステロイドである、使用。
【００５８】
治療剤が抗菌剤である、使用。
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】ＩＬ１０の生物学的効果、これが作用する細胞型および生物学的効果が抗炎症性であるか炎症促進性であるかを示す図である。抗体サイトカイングラフトタンパク質は、図表の右側に描かれる炎症促進性生物学的効果を低減する。
【図２】ＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質の構造を示す図である。挿入パネルは抗体のＬＣＤＲ１に挿入された単量体ＩＬ１０を示している。暗色残基は抗体サイトカイングラフトタンパク質に場合により組み込まれる例示的なＦｃ修飾を示している。
【図３】図３Ａ〜図３Ｂは、組換えヒトＩＬ１０（ｒｈＩＬ１０、灰色正方形）およびＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３抗体サイトカイングラフトタンパク質（黒色三角形）のインビトロ生物学的アッセイの結果を示す図である。図３Ａは、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３が、ＣＤ８  Ｔ細胞アッセイでＩＦＮγ誘導によって測定される、ｒｈＩＬ１０と比較して低下した炎症促進活性を実証したことを示す図である。読み出し測定としてグランザイムＢを使用しても、ヒト始原ＮＫ細胞、Ｂ細胞および肥満細胞で同様の差次的活性が見られた。図３Ｂは、ｒｈＩＬ１０とＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３が、全血アッセイでＴＮＦαの阻害によって測定される同様の抗炎症活性を実証することを示す図である。
【図４】等モル量の組換えヒトＩＬ１０  ｒｈＩＬ１０（左側パネル）またはＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３（右側パネル）で刺激したヒト全血中のＩＬ１０依存性ｐＳＴＡＴ３シグナル伝達のＣｙＴＯＦ分析の結果を示す図である。ＩＬ１０は単球において抗炎症活性を誘導し；Ｔ、ＢまたはＮＫ細胞の活性化は炎症性サイトカインを誘導する。非刺激に対する細胞の活性化の倍数変化の結果をヒートマップ（陰影の変化）によって示す。左側パネルは、ｒｈＩＬ１０が全てのＩＬ１０感受性細胞型（輪郭線有り）にわたる刺激を与えることを示しているが、右側パネルに見られるように、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３は、非刺激細胞と同様またはそれよりわずかに上のレベルで、Ｔ、ＢおよびＮＫ細胞に対するあまり強力でない刺激を与え；ＩｇＧ−ＩＬ１０ＭおよびｒｈＩＬ１０で、単球（輪郭線有り）およびｍＤＣ細胞の刺激の同様の効果が実証された。これらの関連する細胞型（単球、ｍＤＣ）は、炎症性腸疾患で腸恒常性を維持するための重要な細胞である。
【図５】図５Ａ〜５Ｄは、インビボアッセイで抗体サイトカイングラフトタンパク質ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３の改善した特性を示す図である。図５Ａ〜Ｂは、ｒｈＩＬ１０およびＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３の薬物動態試験の結果を示す図である。静脈内投与後、抗体サイトカイングラフトタンパク質が４．４日後に依然として検出可能であったので（図５Ｂ）、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３は延長した薬物動態（半減期）を実証している一方、ｒｈＩＬ１０は約１時間の半減期を有していた（図５Ａ）。図５Ｃおよび図５Ｄは、抗体サイトカイングラフトタンパク質のインビボ活性の薬力学的アッセイの結果を示している。図５Ｃは、投薬７２時間後にｐＳＴＡＴ３シグナル伝達によって測定される結腸組織のインビボ活性を示す図である。図５Ｄは、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３の投与後のＬＰＳ曝露に応じたＴＮＦαの阻害によって測定される、ｒｈＩＬ１０と比較して改善したＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３のインビボ応答の持続期間を示す図である。
【図６】ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３がＬＰＳ曝露４８時間後のＴＮＦα誘導を減少させることを実証する、ＬＰＳ曝露モデルの結果を示す図である。
【図７】ＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質の改善したＣＭＡＸ％を表すグラフである。
【図８】ｒｈＩＬ１０またはＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３で刺激した場合の健康な対象および患者の種々の免疫細胞におけるｐＳＴＡＴ３活性のＣｙＴＯＦデータを示す図である。
【図９Ａ】図９Ａ〜９Ｃは、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３がｒｈＩＬ１０と比較して低下したＰＨＡ刺激ヒト全血における炎症促進活性を有することを実証するグラフ表示である。
【図９Ｂ】図９Ａ〜９Ｃは、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３がｒｈＩＬ１０と比較して低下したＰＨＡ刺激ヒト全血における炎症促進活性を有することを実証するグラフ表示である。
【図９Ｃ】図９Ａ〜９Ｃは、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３がｒｈＩＬ１０と比較して低下したＰＨＡ刺激ヒト全血における炎症促進活性を有することを実証するグラフ表示である。
【図９Ｄ】図９Ｄは、ｒｈＩＬ１０およびＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３を用いた滴定実験のグラフである。
【図１０Ａ】図１０Ａ〜１０Ｂは、抗体サイトカイングラフトタンパク質の凝集特性と比較した、リンカーを介してＦｃに結合した場合のＩＬ１０野生型または単量体の凝集特性を示す図である。
【図１０Ｂ】図１０Ａ〜１０Ｂは、抗体サイトカイングラフトタンパク質の凝集特性と比較した、リンカーを介してＦｃに結合した場合のＩＬ１０野生型または単量体の凝集特性を示す図である。
【図１１】ＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質が依然としてＲＳＶに結合することを示すＥＬＩＳＡデータを示す図である。
【図１２】ＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質の作用機序の図である。左側パネルは、どのように正常なｒｈＩＬ１０二量体がＩＬ−１０Ｒ１に結合し、強力なｐＳＴＡＴ３シグナル伝達を開始するかを示している。右側パネルは、どのように抗体のＣＤＲにグラフトしたＩＬ１０単量体がＩＬ−１０Ｒ１とのあまり効率的でない結合を有するように強制され、弱いｐＳＴＡＴ３シグナルを生成するのかを示している。
【図１３】図１３Ａ〜Ｃは、パリビズマブのＬＣＤＲ１にグラフトしたＩＬ１０単量体の結晶構造分析を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００６０】
定義
「抗体」は、四量体構造単位を含む免疫グロブリンファミリーの分子を指す。各四量体は、ポリペプチド鎖の２つの同一の対で構成され、各対はジスルフィド結合を通して接続された１本の「軽」鎖（約２５ｋＤ）と１本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤ）を有する。認識される免疫グロブリン遺伝子には、κ、λ、α、γ、δ、εおよびμ定常領域遺伝子ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。軽鎖はκまたはλとして分類される。重鎖はγ、μ、α、δまたはεとして分類され、今度はこれらがそれぞれ免疫グロブリンクラス、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥを定義する。抗体は、いずれかのアイソタイプ／クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥ）またはいずれかのサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）のものであり得る。
【００６１】
軽鎖と重鎖の両方が構造的および機能的相同性の領域に分割される。「定常」および「可変」という用語は構造的および機能的に使用される。各鎖のＮ末端は、抗原認識を主に担う約１００〜１１０個またはそれを超えるアミノ酸の可変（Ｖ）領域またはドメインを規定する。可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）という用語は、それぞれ軽鎖および重鎖のこれらの領域を指す。ＶＨとＶＬの対形成によって、単一の抗原結合部位が形成される。Ｖ領域に加えて、重鎖と軽鎖の両方が定常（Ｃ）領域またはドメインを含む。免疫グロブリンＣ領域の分泌型は、３つのＣドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、場合によりＣＨ４（Ｃμ）およびヒンジ領域から構成される。免疫グロブリンＣ領域の膜結合型も膜および細胞内ドメインを有する。各軽鎖はＮ末端のＶＬ、引き続いて他端の定常領域（Ｃ）を有する。軽鎖（ＣＬ）および重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３）の定常ドメインは、分泌、経胎盤移動性、Ｆｃ受容体結合、相補的結合等などの重要な生物学的特性を与える。慣例では、定常領域ドメインの番号付けは、それらが抗体の抗原結合部位またはアミノ末端から遠位になるにつれて増加する。Ｎ末端は可変領域であり、Ｃ末端は定常領域であり；ＣＨ３およびＣＬドメインはそれぞれ重鎖および軽鎖のカルボキシ末端ドメインを実際に含む。ＶＬはＶＨと一列に整列し、ＣＬは重鎖の第１の定常ドメインと一列に整列する。本明細書で使用される場合、「抗体」は従来の抗体構造および抗体の変異型を包含する。よって、全長抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体およびこれらの抗体断片が本概念の範囲内にある。
【００６２】
抗体は、完全免疫グロブリン鎖としてまたは種々のペプチダーゼによる消化によって産生された、いくつかの十分特徴付けられた抗体断片として存在する。本明細書で使用される「抗体断片」という用語は、抗原のエピトープと特異的に相互作用する（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布により）能力を保持する抗体の１つまたは複数の部分を指す。よって、例えば、ペプシンは、ヒンジ領域のジスルフィド結合下で抗体を消化して、それ自体ジスルフィド結合によってＶＨ−ＣＨ１と連結した軽鎖であるＦ（ａｂ）’２、Ｆａｂ’の二量体を産生する。Ｆ（ａｂ）’２はヒンジ領域のジスルフィド結合を破壊する温和な条件下で還元さし、それによってＦ（ａｂ）’２二量体をＦａｂ’単量体に変換することができる。Ｆａｂ’単量体は本質的にヒンジ領域の一部を有するＦａｂである。Paul, Fundamental Immunology 3d ed. (1993)。種々の抗体断片が完全抗体の消化の点で定義されているが、当業者であれば、このような断片を化学的にまたは組換えＤＮＡ方法論を用いて新規に合成することができることを認識するだろう。本明細書で使用される場合、「抗体断片」とは、結合特異性および機能的活性を保持した、抗体全体の修飾によって産生された抗体、または組換えＤＮＡ方法論を用いて新規に合成された抗体の１つまたは複数の部分を指す。抗体断片の例としては、同じ結合特異性を有するＦｖ断片、単鎖抗体（ＳｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｄ（ＶｈおよびＣＨ１ドメイン）、ｄＡｂ（Ｖｈおよび単離ＣＤＲ）；およびこれらの断片の多量体版（例えば、Ｆ（ａｂ’）２）が挙げられる。抗体断片をサイトカイングラフトタンパク質に組み込んで、本開示で提供される結合特異性および活性を達成することもできる。
【００６３】
本明細書で使用される「Ｆａｂ」ドメインは、重鎖可変ドメイン、定常領域ＣＨ１ドメイン、軽鎖可変ドメインおよび軽鎖定常領域ＣＬドメインを含む。ドメインの相互作用は、ＣＨ１とＣＬドメインとの間のジスルフィド結合によって安定化される。いくつかの実施形態では、Ｆａｂの重鎖ドメインが、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ−ＣＨの順であり、Ｆａｂの軽鎖ドメインが、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＬ−ＣＬの順である。いくつかの実施形態では、Ｆａｂの重鎖ドメインが、Ｎ末端からＣ末端に、ＣＨ−ＶＨの順であり、Ｆａｂの軽鎖ドメインがＣＬ−ＶＬの順である。Ｆａｂは歴史的に完全免疫グロブリンのパパイン消化によって同定されたが、本開示の文脈では、「Ｆａｂ」は典型的には任意の方法によって組換え的に産生される。各Ｆａｂ断片は抗原結合に関して一価である、すなわち、単一抗原結合部位を有する。
【００６４】
「相補性決定ドメイン」または「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）は、互換的にＶＬおよびＶＨの超可変領域を指す。ＣＤＲは、このような標的タンパク質に対する特異性を持つ抗体鎖の標的タンパク質結合部位である。各ヒトＶＬまたはＶＨには、可変ドメインの約１５〜２０％を構成する３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１〜３、Ｎ末端から順次番号付け）が存在する。ＣＤＲは、標的タンパク質のエピトープと構造的に相補的であり、よって、結合特異性を直接担う。ＶＬまたはＶＨの残りの伸長、いわゆるフレームワーク領域（ＦＲ）は、示すアミノ酸配列の変動が少ない（Kuby, Immunology, 4th ed., Chapter 4. W.H. Freeman & Co., New York, 2000）。
【００６５】
ＣＤＲおよびフレームワーク領域の位置は、当技術分野における種々の周知の定義、例えばＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース（ＩＭＧＴ）およびＡｂＭ（例えば、Johnson et al., Nucleic Acids Res., 29:205-206 (2001)；Chothia and Lesk, J. Mol. Biol., 196:901-917 (1987)；Chothia et al., Nature, 342:877-883 (1989)；Chothia et al., J. Mol. Biol., 227:799-817 (1992)；Al-Lazikani et al., J.Mol.Biol., 273:927-748 (1997)参照）を用いて決定することができる。抗原結合部位の定義も以下に記載されている：Ruiz et al., Nucleic Acids Res., 28:219-221 (2000)；およびLefranc, M.P., Nucleic Acids Res., 29:207-209 (2001)；MacCallum et al., J. Mol. Biol., 262:732-745 (1996)；およびMartin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:9268-9272 (1989)；Martin et al., Methods Enzymol., 203:121-153 (1991)；およびRees et al., In Sternberg M.J.E. (ed.), Protein Structure Prediction, Oxford University Press, Oxford, 141-172 (1996)。
【００６６】
Ｋａｂａｔでは、ＶＨのＣＤＲアミノ酸残基を３１〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）と番号付けし；ＶＬのＣＤＲアミノ酸残基を２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）および８９〜９７（ＬＣＤＲ３）と番号付けする。Ｃｈｏｔｈｉａでは、ＶＨのＣＤＲアミノ酸を２６〜３２（ＨＣＤＲ１）、５２〜５６（ＨＣＤＲ２）および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）と番号付けし；ＶＬのＣＤＲアミノ酸残基を２６〜３２（ＬＣＤＲ１）、５０〜５２（ＬＣＤＲ２）および９１〜９６（ＬＣＤＲ３）と番号付けする。ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの両方のＣＤＲ定義を組み合わせることにより、ＣＤＲはヒトＶＨ中アミノ酸残基２６〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）ならびにヒトＶＬ中アミノ酸残基２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）および８９〜９７（ＬＣＤＲ３）からなる。
【００６７】
本明細書で使用される「抗体可変軽鎖」または「抗体可変重鎖」は、それぞれＶＬまたはＶＨを含むポリペプチドを指す。内因性ＶＬは遺伝子セグメントＶ（可変）およびＪ（接合）によってコードされ、内因性ＶＨはＶ、Ｄ（多様性）およびＪによってコードされる。ＶＬまたはＶＨの各々がＣＤＲならびにフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。「可変領域」または「Ｖ領域」という用語は互換的にＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４を含む重鎖または軽鎖を指す。Ｖ領域は天然、組換えまたは合成であり得る。本出願では、抗体軽鎖および／または抗体重鎖が時々、「抗体鎖」と一括して呼ばれ得る。本明細書で提供され、さらに記載されるように、「抗体可変軽鎖」もしくは「抗体可変重鎖」および／または「可変領域」および／または「抗体鎖」は場合により、ＣＤＲにグラフトしたサイトカインポリペプチド配列を含む。
【００６８】
例えば、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む、本明細書で開示される免疫グロブリン重鎖のＣ末端部分は「Ｆｃ」ドメインである。本明細書で使用される「Ｆｃ領域」は第１の定常領域（ＣＨ１）免疫グロブリンドメインを除く抗体の定常領域を指す。Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにこれらのドメインに対してＮ末端の可撓性ヒンジを指す。ＩｇＡおよびＩｇＭについては、ＦｃがＪ鎖を含み得る。ＩｇＧについては、Ｆｃが免疫グロブリンドメインＣγ２およびＣγ３ならびにＣγ１とＣγとの間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｋａｂａｔら（1991, NIH Publication 91-3242, National Technical Information Service, Springfield, Va.）の通りのＥＵ指針による番号付けを用いて、そのカルボキシ末端に対して残基Ｃ２２６またはＰ２３０を含むと定義されることが当技術分野で理解される。「Ｆｃ領域」は、単離におけるこの領域、または抗体もしくは抗体断片の文脈におけるこの領域を指し得る。「Ｆｃ領域」は、例えばエフェクター機能を調節する修飾を含む、例えばＣＨ２およびＣＨ３領域中のＦｃ領域の天然対立遺伝子変異型を含む。Ｆｃ領域はまた、生物学的機能に対する変化をもたらさない変異型も含む。例えば、１個または複数のアミノ酸が、生物学的機能を実質的に喪失することなく、免疫グロブリンのＦｃ領域のＮ末端またはＣ末端から欠失される。例えば、特定の実施形態では、Ｃ末端リジンが修飾、置き換えまたは除去される。特定の実施形態では、Ｆｃ領域の１個または複数のＣ末端残基が変化させられるまたは除去される。特定の実施形態では、Ｆｃの１個または複数のＣ末端残基（例えば、末端リジン）が欠失される。一定の他の実施形態では、Ｆｃの１個または複数のＣ末端残基が、代わりのアミノ酸で置換される（例えば、末端リジンが置き換えられる）。このような変異型は、活性に対してもたらす効果が最小となるように当技術分野で公知の一般的規則に従って選択される（例えば、Bowie, et al., Science 247:306-1310, 1990参照）。ＦｃドメインはＦｃＲなどの細胞受容体によって認識され、相補的活性化タンパク質Ｃ１  ｑが結合する免疫グロブリン（Ｉｇ）の部分である。ＣＨ２エクソンの５’部分にコードされる下側ヒンジ領域は、ＦｃＲ受容体との結合のために抗体内の可撓性を提供する。
【００６９】
「キメラ抗体」は、（ａ）抗原結合部位（可変領域）が、異なるもしくは変化させたクラス、エフェクター機能および／または種の定常領域、あるいはキメラ抗体に新たな特性を与える完全に異なる分子、例えば酵素、毒素、ホルモン、成長因子および薬物と結合するように、定常領域またはその一部が変化させられ、置き換えられまたは交換されている；または（ｂ）可変領域またはその一部が、異なるまたは変化させた抗原特異性を有する可変領域を用いて変化させられ、置き換えられまたは交換されている抗体分子である。
【００７０】
「ヒト化」抗体は、ヒト以外の抗体の反応性（例えば、結合特異性、活性）を保持しながら、ヒトにおける免疫原性が少ない抗体である。これは、例えば、ヒト以外のＣＤＲ領域を保持し、抗体の残りの部分をヒト対応物で置き換えることによって達成することができる。例えば、Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)；Morrison and Oi, Adv. Immunol., 44:65-92 (1988)；Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)；Padlan, Molec. Immun., 28:489-498 (1991)；Padlan, Molec. Immun., 31(3):169-217 (1994)を参照されたい。
【００７１】
「ヒト抗体」は、フレームワークとＣＤＲ領域の両方がヒト起源の配列に由来する可変領域を有する抗体を含む。さらに、抗体が定常領域を含む場合、定常領域もこのようなヒト配列、例えばヒト生殖系列配列、またはヒト生殖系列配列の変異型または例えばKnappik et al., J. Mol. Biol. 296:57-86, 2000に記載されるようなヒトフレームワーク配列解析から得られた抗体含有コンセンサスフレームワーク配列に由来する。ヒト抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでランダムもしくは部位特異的変異によって、またはインビボで体細胞突然変異によって、または安定性もしくは製造を促進するための保存的置換によって導入される突然変異）を含んでもよい。
【００７２】
「対応するヒト生殖系列配列」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン可変領域配列によってコードされる他の全ての他の全ての公知の可変領域アミノ酸配列と比較して、基準可変領域アミノ酸配列または部分列と最も高い決定されたアミノ酸配列同一性を共有するヒト可変領域アミノ酸配列または部分列をコードする核酸配列を指す。対応するヒト生殖系列配列はまた、他の全ての評価された可変領域アミノ酸配列と比較して、基準可変領域アミノ酸配列または部分列と最も高いアミノ酸配列同一性を有するヒト可変領域アミノ酸配列または部分列も指し得る。対応するヒト生殖系列配列は、フレームワーク領域のみ、相補性決定領域のみ、フレームワークと相補性決定領域、可変セグメント（上で定義される）、または可変領域を含む配列もしくは部分列の他の組合せであり得る。配列同一性は、本明細書に記載される方法を用いて、例えばＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮもしくは当技術分野で公知の別のアラインメントアルゴリズムを用いて２つの配列を整列させて決定することができる。対応するヒト生殖系列核酸またはアミノ酸配列は、基準可変領域核酸またはアミノ酸配列と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％配列同一性を有することができる。対応するヒト生殖系列配列は、例えば、公的に入手可能な国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース（ＩＭＧＴ）およびＶベースを通して決定することができる。
【００７３】
本明細書で使用される「価数」は、ポリペプチド中の潜在的な標的結合部位の数を指す。各標的結合部位は、１個の標的分子または標的分子上の特異的部位と特異的に結合する。ポリペプチドが２つ以上の標的結合部位を含む場合、各標的結合部位は、同じまたは異なる分子と特異的に結合することができる（例えば、異なる分子、例えば異なる抗原、または同じ分子上の異なるエピトープに結合することができる）。例えば、慣用的な抗体は、２つの結合部位を有し、二価である；「三価」および「四価」は、抗体分子中の、それぞれ３個の結合部位および４個の結合部位の存在を指す。抗体サイトカイングラフトタンパク質は一価（すなわち、１個の標的分子と結合する）、二価または多価（２個以上の標的分子と結合する）であり得る。
【００７４】
「特異的に結合する」または「結合特異性」という句は、サイトカイングラフトする前後の元の抗体標的（例えば、抗原）と抗体サイトカイングラフトタンパク質との間の相互作用を記載する文脈で使用される場合。一定の指定される条件下、特定の結合特異性を有する抗体サイトカイングラフトタンパク質は、バックグラウンドの少なくとも２倍、元の標的に結合し、試料中に存在する他の標的には、有意な量で実質的には結合しない。一実施形態では、指定される条件下、特定の結合特異性を有する抗体サイトカイングラフトタンパク質が、バックグラウンドの少なくとも１０倍、元の標的に結合し、試料中に存在する他の標的には、有意な量で実質的には結合しない。このような条件下での抗体サイトカイングラフトタンパク質の特異的結合は、抗体サイトカイングラフトタンパク質を特定の標的に対するその特異性について選択することを要求し得る。結合特異性を決定する方法は、例えば、タンパク質と特異的に免疫反応性の抗体を選択するために日常的に使用される固相ＥＬＩＳＡ免疫測定法である（例えば、特異的免疫反応性を決定するために使用することができる免疫測定法フォーマットおよび条件の記載については、Harlow & Lane, Using Antibodies, A Laboratory Manual (1998)参照）。
【００７５】
本明細書で使用される場合、「サイトカイン受容体結合特異性」または「サイトカイン受容体特異性」は、ＩＬ１０受容体に選択的に結合する抗体サイトカイングラフトタンパク質を含み、他のサイトカイン受容体スーパーファミリーメンバーと交差反応する抗体サイトカイングラフトタンパク質を含まない。いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ１０Ｒに選択的に結合し、ヒト以外の霊長類ＩＬ１０Ｒ（例えば、カニクイザルＩＬ１０Ｒ）と交差反応する抗体サイトカイングラフトタンパク質が選択される。いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ１０Ｒ１に選択的に結合する抗体グラフトタンパク質が選択される。
【００７６】
「平衡解離定数（ＫＤ、Ｍ）」という用語は、解離速度定数（ｋｄ、時間−１）÷会合速度定数（ｋａ、時間−１、Ｍ−１）を指す。平衡解離定数は、当技術分野で公知の任意の方法を用いて測定することができる。本開示の抗体サイトカイングラフトタンパク質は、一般的に約１０−７または１０−８Ｍ未満、例えば約１０−９Ｍまたは１０−１０Ｍ未満、いくつかの実施形態では、約１０−１１Ｍ、１０−１２Ｍまたは１０−１３Ｍ未満の平衡解離定数を有する。
【００７７】
「ＩＬ１０」または「インターロイキン１０」または「インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）」という用語は、互換的に、マクロファージの活性化を下方制御すると同時に、抗原提示および樹状細胞の成熟を減少させることができる強力な抗炎症性サイトカインを指す。全長天然ヒトの残基１９〜１７８を含むＩＬ１０がアゴニスト抗体サイトカイングラフトタンパク質の構築に利用されている。本明細書で開示されているヒトＩＬ１０は、その全長にわたって、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００５６３として公開されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％配列同一性を有する。ＩＬ１０タンパク質をコードするヒトＩＬ１０核酸は、その全長にわたって、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００５７２で公開されている核酸配列と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％配列同一性を有する。
【００７８】
「単量体ＩＬ１０」または「ＩＬ１０Ｍ」は、配列番号２０９のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％配列同一性を有する分子を指す。いくつかの実施形態では、単量体ＩＬ１０分子が配列番号２０９の配列を含む。いくつかの実施形態では、単量体ＩＬ１０分子が配列番号２０９の配列からなる。
【００７９】
「アゴニスト」という用語は、受容体を活性化して完全なまたは部分的な受容体媒介応答を誘導することができる抗体サイトカイングラフトタンパク質を指す。例えば、ＩＬ１０ＲのアゴニストはＩＬ１０Ｒに結合し、ＩＬ１０Ｒ媒介細胞内シグナル伝達および／または細胞活性化を誘導する。抗体サイトカイングラフトタンパク質は、いくつかの点で天然リガンド、ヒトＩＬ１０と同様にＩＬ１０Ｒを通してシグナル伝達を刺激する。ｈＩＬ１０とＩＬ１０Ｒの結合は、ＩκＢの分解によりＮＦκＢ活性化を誘導する。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質アゴニストが、ＩＬ１０Ｒに結合し、ＳＴＡＴ３リン酸化を誘導し、炎症性サイトカイン（例えば、ＴＮＦα、ＩＬ１、ＩＬ６、ＩＬ１２、ＩＦＮγ）の産生ならびに／あるいはマクロファージの分化および増殖を誘導し；Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋ＣＴＬまたはＣＤ４＋Ｔｈ細胞）増殖、生存、細胞溶解活性および／またはサイトカイン産生（例えば、ＩＦＮγ、ＩＬ１０、ＩＬ１３、ＴＮＦα）を誘導するその能力によって、あるいは本明細書に記載されるように同定され得る。
【００８０】
核酸またはタンパク質に適用する場合の「単離」という用語は、核酸またはタンパク質が、自然の状態で会合している他の細胞成分を本質的に含まないことを表す。これは好ましくは均質な状態である。これは無水溶液または水溶液であり得る。純度および均質性は、典型的にはポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーなどの分析化学技術を用いて決定される。調製物中に存在する主な種であるタンパク質が実質的に精製される。特に、単離遺伝子は、その遺伝子に隣接し、対象となる遺伝子以外のタンパク質をコードするオープンリーディングフレームから分離される。「精製」という用語は、核酸またはタンパク質が電気泳動ゲル中に本質的に１つのバンドを生じることを表す。特に、これは、核酸またはタンパク質が少なくとも８５％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、最も好ましくは少なくとも９９％純粋であることを意味する。
【００８１】
「核酸」または「ポリヌクレオチド」という用語は、一本鎖または二本鎖型のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）およびこれらのポリマーを指す。特に限定しない限り、この用語は、基準核酸と類似の結合特性を有し、天然ヌクレオチドと類似の様式で代謝される天然ヌクレオチドの公知の類似体を含む核酸を包含する。特に指示しない限り、特定の核酸配列はまた、その保存的に修飾された変異型（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰｓおよび相補的配列ならびに明示的に示される配列を包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つまたは複数の選択された（または全ての）コドンの３番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を生成することによって達成され得る（Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19:5081 (1991)；Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985)；およびRossolini et al., Mol. Cell. Probes 8:91-98 (1994)）。
【００８２】
「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書において互換的に使用される。これらの用語を、１個または複数のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の人工的な化学模倣物であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然アミノ酸ポリマーおよび非天然アミノ酸ポリマーに適用する。
【００８３】
「アミノ酸」という用語は、天然および合成アミノ酸、ならびに天然アミノ酸と類似の様式で機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣物を指す。天然アミノ酸は、遺伝暗号によってコードされるもの、ならびに後で修飾されるアミノ酸、例えばヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸およびＯ−ホスホセリンである。アミノ酸類似体は、天然アミノ酸と同じ基本的化学構造、すなわち水素に結合したα−炭素、カルボキシル基、アミノ基およびＲ基を有する化合物、例えばホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。このような類似体は修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然アミノ酸と同じ基本的化学構造を保持している。アミノ酸模倣物は、アミノ酸の一般的化学構造とは異なる構造を有するが、天然アミノ酸と類似の様式で機能する化学化合物を指す。
【００８４】
「保存的に修飾された変異型」をアミノ酸配列と核酸配列の両方に適用する。特定の核酸配列に関して、保存的に修飾された変異型は、同一もしくは本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸を指す、また核酸がアミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同一の配列を指す。遺伝暗号の縮重のために、多数の機能的に同一の核酸が任意の所与のタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧおよびＧＣＵは全てアミノ酸アラニンをコードする。よって、アラニンがコドンによって指定される全ての位置で、コードされるポリペプチドを変化させることなく、コドンを記載される対応するコドンのいずれかに変化させることができる。このような核酸変異型は、保存的に修飾された変異型のある種である「サイレント変異型」である。ポリペプチドをコードする本明細書の全ての核酸配列は、核酸の全ての可能なサイレント変異型も記載する。当業者であれば、核酸の各コドン（通常はメチオニンについての唯一のコドンであるＡＵＧ、および通常はトリプトファンの唯一のコドンであるＴＧＧを除く）を修飾して機能的に同一の分子を得ることができることを認識するだろう。したがって、ポリペプチドをコードする核酸の各サイレント変異型は各記載される配列に暗示されている。
【００８５】
アミノ酸配列に関して、当業者であれば、変化が化学的に類似のアミノ酸によるアミノ酸の置換をもたらす場合、コードされる配列中の単一アミノ酸またはアミノ酸の少ない割合を変化、付加または欠失する、核酸、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質配列に対する個々の置換、欠失または付加が、「保存的に修飾された変異型」であることを認識するだろう。機能的に類似のアミノ酸を提供する保存的置換表は当技術分野で周知である。このような保存的に修飾された変異型は、多型変異型、種間ホモログおよび対立遺伝子に加えたものであり、これらを除外しない。以下の８つの群はそれぞれ、互いに保存的置換であるアミノ酸を含む：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；および８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Creighton, Proteins (1984)参照）。
【００８６】
「配列同一性の割合」は、比較窓に対して２つの最適に整列した配列を比較することによって決定され、比較窓中のポリヌクレオチド配列の一部は、２つの配列の最適アラインメントのための付加も欠失も含まない基準配列（例えば、ポリペプチド）と比較して付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含んでよい。割合は、同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が両配列中に生じる位置の数を決定して、一致した位置の数を得て、一致した位置の数を比較窓の位置の総数で割って、結果に１００を掛けて、配列同一性の割合を得ることによって計算される。
【００８７】
２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈における「同一」または「同一性」％という用語は、同じ配列である２つ以上の配列または部分列を指す。以下の配列比較アルゴリズムの１つを用いてまたは手動のアラインメントおよび目視によって測定して最大の対応となるように比較および整列させた場合に、比較窓または指定される領域にわたって同じである（すなわち、指定された領域、または指定されていない場合、基準配列の配列全体にわたって少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％配列同一性）、指定された割合のアミノ酸残基またはヌクレオチドを２つの配列が有する場合、２つの配列は「実質的に同一」である。本開示は、それぞれ本明細書で例示されるポリペプチドまたはポリヌクレオチドと実質的に同一なポリペプチドまたはポリヌクレオチドを提供する（例えば、配列番号１３、配列番号１４、配列番号２９、配列番号３０、配列番号４５、配列番号４６、配列番号６１、配列番号６２、配列番号７７、配列番号７８、配列番号９３、配列番号９４、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号２０５、配列番号２０６；配列番号２２２、配列番号２２３、配列番号２３８  配列番号２３９のいずれか１つに例示される可変領域；配列番号１５、配列番号１６、配列番号３１、配列番号３２、配列番号４７、配列番号４８、配列番号６３、配列番号６４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号９５、配列番号９６、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１７５、配列番号１７６、配列番号１９１、配列番号１９２、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２２４、配列番号２２５、配列番号２４０、配列番号２４１のいずれか１つに例示される可変領域；配列番号１３、配列番号１４、配列番号２９、配列番号３０、配列番号４５、配列番号４６、配列番号６１、配列番号６２、配列番号７７、配列番号７８、配列番号９３、配列番号９４、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号２０５、配列番号２０６、配列番号２２２、配列番号２２３、配列番号２３８および配列番号２３９のいずれか１つに例示されるＣＤＲ。場合により、少なくとも約１５、２５または５０ヌクレオチド長である領域にわたって、より好ましくは１００〜５００または１０００以上のヌクレオチド長である領域にわたって、または基準配列の全長にわたって、同一性が存在する。アミノ酸配列に関して、少なくとも５、１０、１５または２０アミノ酸長、場合により少なくとも約２５、３０、３５、４０、５０、７５または１００アミノ酸長、場合により少なくとも約１５０、２００または２５０アミノ酸長である領域にわたって、または基準配列の全長にわたって、同一性または実質的同一性が存在し得る。より���いアミノ酸配列、例えば２０個以下のアミノ酸のアミノ酸配列に関して、本明細書で定義される保存的置換に従って、１個または２個のアミノ酸残基が保存的に置換されている場合、実質的同一性が存在する。
【００８８】
配列比較のために、典型的には１つの配列が、試験配列を比較する基準配列として作用する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列と基準配列をコンピュータに入力し、必要に応じて、後の座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。デフォルトプログラムパラメータを使用することができる、あるいは代わりのパラメータを指定することができる。次いで、配列比較アルゴリズムが、プログラムパラメータに基づいて、基準配列に対する試験配列の配列同一性％を計算する。
【００８９】
本明細書で使用される「比較窓」は、２０〜６００、通常約５０〜約２００、さらに通常約１００〜約１５０からなる群から選択されるいずれか１つの数の連続する位置の（of any one of the number of contiguous positions selected from）セグメントであって、配列を、同じ数の連続する位置の基準配列と、それら２つの配列を最適に整列させた後に比較することができる、セグメントを参照することを含む。比較のために配列を整列させる方法は当技術分野で周知である。比較のための配列の最適アラインメントは、例えばSmith and Waterman (1970) Adv. Appl. Math. 2:482cの局所相同性アルゴリズム、Needleman and Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:443の相同性アラインメントアルゴリズム、Pearson and Lipman (1988) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444の類似性のための検索方法、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ）または手動アラインメントおよび目視（例えば、Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (1995 supplement)）によって行うことができる。
【００９０】
配列同一性および配列類似性％を決定するために適したアルゴリズムの２つの例は、それぞれAltschul et al. (1977) Nuc. Acids Res. 25:3389-3402およびAltschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410に記載されているＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ解析を行うためのソフトウェアは、国立バイオテクノロジー情報センターを通して公的に入手可能である。このアルゴリズムは、データベース配列中の同じ長さのワードと整列させた場合に、ある正の値の閾値スコアＴに一致するまたはこれを満たすクエリー配列中の長さＷの短いワードを同定することによって、高スコア配列ペア（ＨＳＰ）を最初に同定することを含む。Ｔは近隣ワードスコア閾値と呼ばれる（Altschul et al.、上記）。これらの初期近隣ワードヒットが、それらを含むより長いＨＳＰを見つけるための検索を開始するための種として作用する。累積アラインメントスコアを増加させることができる限り、ワードヒットを各配列に沿って両方向に拡張する。累積スコアは、ヌクレオチド配列については、パラメータＭ（一致残基のペアについての報酬スコア；常に＞０）およびＮ（ミスマッチ残基についてのペナルティスコア；常に＜０）を用いて計算する。アミノ酸配列については、スコアリングマトリクスを使用して累積スコアを計算する。累積アラインメントスコアがその最大達成値から量Ｘ減った場合；１つまたは複数の負のスコアの残基アラインメントの蓄積のために累積スコアが０以下になった場合；または各配列の端に達した場合、各方向のワードヒットの拡張を停止する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、ＴおよびＸは、アラインメントの感度および速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）１１、期待値（Ｅ）または１０、Ｍ＝５、Ｎ＝４および両鎖の比較を使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、ワード長３、および期待値（Ｅ）１０、およびＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリクス（Henikoff and Henikoff (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915参照）アラインメント（Ｂ）５０、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝４、および両鎖の比較を使用する。
【００９１】
ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列間の類似性の統計解析も行う（例えば、Karlin and Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5787参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は最小和確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の一致が偶然に起こる確率の指標を提供する。例えば、試験核酸と基準核酸の比較における最小和確率が約０．２未満、より好ましくは約０．０１未満、最も好ましくは約０．００１未満である場合に、核酸を基準配列と類似とみなす。
【００９２】
２つの核酸配列またはポリヌクレオチドが実質的に同一である指標は、第１の核酸によってコードされるポリペプチドが、以下に記載されるように、第２の核酸によってコードされるポリペプチドに対して生じる抗体と免疫学的に交差反応性であることである。よって、例えば、２個のペプチドが保存的置換によってのみ異なる場合、ポリペプチドは第２のポリペプチドと典型的に実質的に同一である。２つの核酸配列が実質的に同一である別の指標は、２個の分子またはその相補物が以下に記載されるようなストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズすることである。２つの核酸配列が実質的に同一であるさらに別の指標は、同じプライマーを使用して配列を増幅することができることである。
【００９３】
「抗体サイトカイングラフトタンパク質」または「抗体サイトカイングラフト」または「グラフトした」という用語は、少なくとも１つのサイトカインを抗体のＣＤＲに直接組み込んで、ＣＤＲの配列を中断することを意味する。サイトカインをＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２またはＬＣＤＲ３に組み込むことができる。サイトカインをＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２またはＬＣＤＲ３に組み込むことができ、ＣＤＲのＮ末端配列に向けてまたはＣＤＲのＣ末端配列に向けて組み込むことができる。ＣＤＲに組み込まれたサイトカインは抗体部分とその標的タンパク質の特異的結合を減少させることができる、または抗体サイトカイングラフトタンパク質はその標的タンパク質との特異的結合を保持することができる。
【００９４】
「免疫関連障害」または「免疫疾患」とは、体の自身の免疫系が健康な組織を攻撃する免疫系の機能障害を指す。機能障害は、免疫細胞の成分にあり得、過活動免疫系と不活発免疫系の両方を含む。
【００９５】
「対象」、「患者」および「個体」という用語は、互換的に哺乳動物、例えば、ヒトまたはヒト以外の霊長類哺乳動物を指す。哺乳動物は、実験室哺乳動物、例えばマウス、ラット、ウサギ、ハムスターであってもよい。いくつかの実施形態では、哺乳動物が農業用哺乳動物（例えば、ウマ、ヒツジ、ウシ、ブタ、ラクダ）または家庭用哺乳動物（例えば、イヌ、ネコ）であり得る。
【００９６】
本明細書で使用される場合、任意の疾患または障害の「治療する」、「治療すること」または「治療」という用語は、一実施形態では、疾患または障害を改善する（すなわち、疾患の発達またはその臨床症状の少なくとも１つを遅延または停止または低減する）ことを指す。別の実施形態では、「治療する」、「治療すること」または「治療」が、患者によって認識され得ないものを含む、少なくとも１つの物理パラメータを緩和または改善することを指す。さらに別の実施形態では、「治療する」、「治療すること」または「治療」が、物理的（例えば、認識可能な症状の安定化）、生理的（例えば、物理パラメータの安定化）またはその両方で、疾患または障害を調節することを指す。さらに別の実施形態では、「治療する」、「治療すること」または「治療」または「予防」が、疾患または障害の発症または発達または進行を防止するまたは遅延させることを指す。
【００９７】
「治療的に許容される量」または「治療上有効用量」という用語は、互換的に所望の結果（すなわち、炎症の減少、疼痛の抑制、炎症の予防、炎症反応の抑制または予防）を及ぼすために十分な量を指す。いくつかの実施形態では、治療的に許容される量が、望ましくない副作用を誘発もせず、引き起こしもしない。治療的に許容される量は、最初に低用量を投与し、次いで、所望の効果が達成されるまで、その用量を徐々に増加させることによって決定することができる。「予防上有効投与量」および「治療上有効投与量」のＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質は、免疫関連障害に関連する症状を含む疾患症状を、それぞれ、その開始を防止する、またはその重症度の低下をもたらすことができる。
【００９８】
「同時投与する」という用語は、個体における２種（またはそれよりも多く）の活性剤の同時の存在を指す。同時投与される活性剤は同時にまたは順次送達することができる。
【００９９】
本明細書で使用される場合、「〜から本質的になる」という句は、方法または組成物に含まれる活性医薬剤、ならびに方法または組成物の意図した目的のための任意の不活性担体または賦形剤の属または種を指す。いくつかの実施形態では、「〜から本質的になる」という句が、ＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質以外の１種または複数の追加の活性剤の包含を明示的に除外する。いくつかの実施形態では、「〜から本質的になる」という句が、ＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質および第２の同時投与薬剤以外の追加の活性剤の包含を明示的に除外する。
【０１００】
「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」という用語は、特に文脈上明確に指示しない限り、複数指示対象を含む。
【０１０１】
詳細な説明
ＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質
インターロイキン−１０（ＩＬ１０）は、免疫刺激活性と免疫抑制活性の両方を有する多機能性ホモ二量体免疫調節性サイトカインである。ＩＬ１０は、活性化単球およびマクロファージ中のいくつかの炎症性サイトカインを誘導するが、未成熟および成熟リンパ球、肥満細胞ならびにＢ細胞の補助刺激分子である（Mosmann, Adv. Immunol. 1994; 56:1-26；Moore et al., Annu Rev Immunol. 2001;19:683-765に概説）。抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）にグラフトした単量体ＩＬ１０を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質が本明細書で提供される。抗体サイトカイングラフトタンパク質は、ヒト患者で使用するのに適した特性を示す、例えば、これらは天然または組換えヒトＩＬ１０と類似の免疫抑制活性を保持しているが、炎症促進効果は減少している。
【０１０２】
したがって、本開示は、選択的活性プロファイルを有するＩＬ１０受容体のアゴニストである抗体サイトカイングラフトタンパク質を提供する。提供される抗体サイトカイングラフトタンパク質は、免疫グロブリン重鎖配列および免疫グロブリン軽鎖配列を含む。各免疫グロブリン重鎖配列は重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を含み、重鎖定常領域はＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３定常領域からなる。各免疫グロブリン軽鎖配列は軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。各抗体サイトカイングラフトタンパク質では、単量体ＩＬ１０分子がＶＨまたはＶＬ領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）にグラフトされている。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が重鎖ＣＤＲにグラフトした単量体ＩＬ１０を含む。特定の実施形態では、単量体ＩＬ１０が重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）にグラフトされている。特定の実施形態では、単量体ＩＬ１０が重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）にグラフトされている。特定の実施形態では、単量体ＩＬ１０が重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）にグラフトされている。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が軽鎖ＣＤＲにグラフトした単量体ＩＬ１０を含む。特定の実施形態では、単量体ＩＬ１０が軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）にグラフトされている。特定の実施形態では、単量体ＩＬ１０が軽鎖相補性決定領域２（ＬＣＤＲ２）にグラフトされている。特定の実施形態では、単量体ＩＬ１０が軽鎖相補性決定領域３（ＬＣＤＲ３）にグラフトされている。好ましい実施形態では、単量体ＩＬ１０が軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）にグラフトされている。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質がＣＤＲにグラフトした単量体ＩＬ１０を含み、ＩＬ１０配列がＣＤＲ配列に挿入されている。グラフトしたＩＬ１０はＣＤＲのＮ末端部分もしくはその近く、ＣＤＲの中心領域またはＣＤＲのＣ末端部分もしくはその近くにあり得る。他の実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質がＣＤＲに組み込まれた単量体ＩＬ１０を含み、ＩＬ１０配列がＣＤＲ配列の全てまたは一部に置き換わっている。置換はＣＤＲの開始もしくはその近く、ＣＤＲの中央領域またはＣＤＲの末端もしくはその近くにあり得る。置換はＣＤＲ配列のわずか１個もしくは２個のアミノ酸、またはＣＤＲ配列全体ほどであり得る。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、単量体ＩＬ１０がペプチドリンカーなしにＣＤＲに直接グラフトされている。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質がＩｇＧクラス抗体重鎖の免疫グロブリン重鎖を含む。特定の実施形態では、ＩｇＧ重鎖がＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４サブクラスのいずれか１つである。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、公知の、臨床的に利用される免疫グロブリン配列から選択される重鎖免疫グロブリン配列および軽鎖免疫グロブリン配列を含む。特定の実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、ヒト化配列である重鎖免疫グロブリン配列および軽鎖免疫グロブリン配列を含む。他の特定の実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、ヒト配列である重鎖免疫グロブリン配列および軽鎖免疫グロブリン配列を含む。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、生殖系列免疫グロブリン配列から選択される重鎖免疫グロブリン配列および軽鎖免疫グロブリン配列を含む。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、ＩＬ１０単量体のサイトカイン受容体結合特異性とは異なる、標的に対する免疫グロブリン可変ドメインの結合特異性を有する重鎖免疫グロブリン配列および軽鎖免疫グロブリン配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン可変ドメインの結合特異性がグラフトしたサイトカインの存在下で保持されている。特定の実施形態では、抗体結合特異性がヒト以外の抗原に対するものである。他の実施形態では、結合特異性がＩＬ１０療法と併せた治療上の有用性を有する標的に対するものである。特定の実施形態では、免疫グロブリンの結合特異性を調節することがＩＬ１０成分に追加の治療上の利益をもたらす。特定の実施形態では、免疫グロブリンの結合特異性が、ＩＬ１０単量体との相乗的活性をもたらす。
【０１１１】
さらに他の実施形態では、免疫グロブリンの結合特異性が、ＩＬ１０グラフトサイトカインの存在下で低下している。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質がヒトＩＬ１０または組換えヒトＩＬ１０と類似の抗炎症特性を与え、グラフトタンパク質がヒトＩＬ１０または組換えヒトＩＬ１０と比較して低下した相対的炎症促進活性を与える。いくつかの実施形態では、相対的（proportional）炎症促進活性がＩＬ１０と比較して少なくとも２５％低下している。いくつかの実施形態では、相対的炎症促進活性がＩＬ１０と比較して少なくとも３５％低下している。いくつかの実施形態では、相対的炎症促進活性がＩＬ１０と比較して少なくとも５０％低下している。いくつかの実施形態では、相対的炎症促進活性がＩＬ１０と比較して少なくとも６５％低下している。いくつかの実施形態では、相対的炎症促進活性がＩＬ１０と比較して少なくとも７５％低下している。いくつかの実施形態では、相対的炎症促進活性がＩＬ１０と比較して少なくとも８０％低下している。いくつかの実施形態では、相対的炎症促進活性がＩＬ１０と比較して少なくとも８０％低下している。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、修飾されたエフェクター機能を与える修飾されたＦｃを有する修飾された免疫グロブリンＩｇＧを含む。特定の実施形態では、修飾されたＦｃ領域が、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａの１つまたは複数から選択される突然変異を含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含み得る。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号１３の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号１４の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号２９の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号３０の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号４５の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号４６の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号６１の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号６２の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号７７の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号７８の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号９３の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号９４の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号１０９の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号１１０の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号１２５の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号１２６の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号１４１の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号１４２の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号１５７の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号１５８の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号１７３の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号１７４の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号１８９の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号１９０の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号２０５の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２０６の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号２２２の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２２３の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号２３８の重鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２３９の軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。免疫グロブリン鎖は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択されるＩｇＧクラスである。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号１５と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖と、（ｉｉ）配列番号１６と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖とを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号３１と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖と、（ｉｉ）配列番号３２と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖とを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号４７と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖と、（ｉｉ）配列番号４８と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖とを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号６３と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖と、（ｉｉ）配列番号６４と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖とを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号７９と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖と、（ｉｉ）配列番号８０と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖とを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号９５と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖と、（ｉｉ）配列番号９６と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖とを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号１１１と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖と、（ｉｉ）配列番号１１２と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖とを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号１２７と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖と、（ｉｉ）配列番号１２８と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖とを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号１４３と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖と、（ｉｉ）配列番号１４４と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖とを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号１５９と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖と、（ｉｉ）配列番号１６０と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖とを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号１７５と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖と、（ｉｉ）配列番号１７６と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖とを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号１９１と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖と、（ｉｉ）配列番号１９２と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖とを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号２０７と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖と、（ｉｉ）配列番号２０８と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖とを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号２２４と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖と、（ｉｉ）配列番号２２５と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖とを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、（ｉ）配列番号２４０と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する重鎖と、（ｉｉ）配列番号２４１と少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖とを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリン重鎖が、場合によりＤ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａのいずれかから選択される低下したエフェクター機能を与える突然変異または突然変異の組合せを含む。
【０１４４】
操作および修飾された抗体サイトカイングラフトタンパク質
抗体サイトカイングラフトタンパク質は、単量体ＩＬ１０配列を免疫グロブリン足場のＣＤＲ領域にグラフトすることによって生成される。重鎖免疫グロブリンと軽鎖免疫グロブリンの両方を製造して最終的な抗体グラフトタンパク質を生成する。抗体サイトカイングラフトタンパク質はＩＬ１０の好ましい治療上の抗炎症特性を与えるが、抗体サイトカイングラフトタンパク質は、天然または組換えヒトＩＬ１０（ｒｈＩＬ１０）と比較して低下した相対的炎症促進活性を有する。
【０１４５】
グラフト構築物を設計するために、全長ＩＬ１０の残基１９〜１７８および残基１３４と１３５との間の６つのアミノ酸配列を含む単量体ＩＬ１０（ＩＬ１０Ｍ、配列番号２０９）を、免疫グロブリン足場のＣＤＲループにグラフトした。グラフト構築物は、種々の臨床設定で利用されている公知の免疫グロブリン配列、現在発見および／または臨床開発中の公知の免疫グロブリン配列、ヒト生殖系列抗体配列、ならびに新規な抗体免疫グロブリン鎖の配列のいずれかを用いて調製することができる。抗体サイトカイングラフトタンパク質は、関連する配列をコードする組換えＤＮＡを利用する標準的な分子生物学方法論を用いて生成される。ＧＦＴＸ１およびＧＦＴＸ３と呼ばれる２つの例示的な足場中のＩＬ１０Ｍの配列を表１に示す。ＩＬ１０単量体の挿入点は、入手可能な構造的または相同性モデルデータに基づいてループの中心点となるよう選択したが、ＣＤＲループの一端または他端に向けて挿入点を調節してもよい。
【０１４６】
よって、本開示は、抗体サイトカイングラフトタンパク質を生成するために種抗体タンパク質またはポリペプチドに組換え的に挿入されたＩＬ１０Ｍタンパク質を含む、サイトカイン受容体がＩＲ１０Ｒタンパク質に特異的に結合する抗体サイトカイングラフトタンパク質またはその断片を提供する。特に、本開示は、本明細書に記載される抗体もしくは抗体の抗原結合断片、または任意の他の関連する足場抗体ポリペプチド（例えば、完全抗体免疫グロブリンタンパク質、Ｆａｂ断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、ＶＨドメイン、ＶＨ  ＣＤＲ、ＶＬドメイン、ＶＬ  ＣＤＲ等）および異種サイトカインタンパク質、ポリペプチドまたはペプチド、例えばＩＬ１０Ｍを含むグラフトタンパク質を提供する。タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドを抗体または抗体断片に結合する方法は当技術分野で公知である。例えば、米国特許第５３３６６０３号明細書、第５６２２９２９号明細書、第５３５９０４６号明細書、第５３４９０５３号明細書、第５４４７８５１号明細書および第５１１２９４６号明細書；欧州特許第３０７４３４号明細書および欧州特許第３６７１６６号明細書；国際公開第９６／０４３８８号パンフレットおよび国際公開第９１／０６５７０号パンフレット；Ashkenazi et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 10535-10539；Zheng et al., 1995, J. Immunol. 154:5590-5600；およびVil et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:11337-11341を参照されたい。さらに、抗体サイトカイングラフトタンパク質は、遺伝子シャフリング、モチーフシャフリング、エクソンシャフリングおよび／またはコドンシャフリング（まとめて「ＤＮＡシャフリング」と呼ぶ）の技術を通して生成することができる。ＤＮＡシャフリングを使用して、抗体サイトカイングラフトタンパク質を調製するおよび／または抗体もしくはその断片の活性を変化させることができる（例えば、高い親和性および低い解離速度を有する抗体またはその断片）。概して、米国特許第５６０５７９３号明細書、第５８１１２３８号明細書、第５８３０７２１号明細書、第５８３４２５２号明細書および第５８３７４５８号明細書；Patten et al., 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33；Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2):76-82；Hansson, et al., 1999, J. Mol. Biol. 287:265-76；およびLorenzo and Blasco, 1998, Biotechniques 24(2):308-313（これらの特許および刊行物はその全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。抗体もしくはその断片、またはコードされた抗体もしくはその断片をランダム突然変異誘発に供する、エラープローンＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入または組換え前の他の方法により変化させることができる。対象となる抗原タンパク質に特異的に結合する抗体またはその断片をコードするポリヌクレオチドを、本明細書で提供される抗体サイトカイングラフトタンパク質を調製するために、１個または複数の異種サイトカイン分子、例えばＩＬ１０Ｍの１つまたは複数の成分、モチーフ、セクション、部分、ドメイン、断片等で組み換えることができる。
【０１４７】
抗体Ｆａｂは、サイトカインタンパク質の潜在的な挿入部位として役立ち得る６つのＣＤＲループ、軽鎖の３つ（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３）および重鎖の３つ（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３）を含む。どのＣＤＲループ（複数可）にサイトカインを挿入するかを決定するために、構造的および機能的検討を考慮する。ＣＤＲループサイズおよびコンフォメーションは様々な抗体で大いに変化するので、挿入のための最適なＣＤＲは、各特定の抗体／タンパク質組合せについて経験的に決定することができる。さらに、サイトカインタンパク質をＣＤＲループに挿入するので、これはサイトカインタンパク質の構造にさらなる制約を課し得る。例えば、サイトカインタンパク質のアミノおよびカルボキシ末端は、空間的に比較的近くに（約２５Å）限定される可能性を許すべきである。さらに、抗体サイトカイングラフトタンパク質は、生物学的活性についてオリゴマー化に依拠すべきでない。
【０１４８】
ＩＬ１０はドメイン交換構造を使用するホモ二量体サイトカインである。天然型では、ドメイン交換構造が形成され得ない（すなわち、Ｎ末端とＣ末端の両方がループに束縛されている）ので、ＩＬ１０は抗体グラフトに適さないだろう。しかしながら、ＤヘリックスとＥヘリックスとの間に６個の残基配列（（ＧＧＧＳＧＧ）（配列番号２５１））を挿入することによって作製された設計された単量体ＩＬ１０（ＩＬ１０Ｍ）は、ＥヘリックスとＦヘリックス（天然二量体構造では、交換により他のＩＬ１０単量体中にある）が同じ単量体に折り重なって（Josephson et al J. Biol.Chem. 2000; 275(18) 13552-7）、図２および図１３に示される抗体サイトカイングラフトタンパク質中に存在する構造を作り出すことを可能にする。Ｊｏｓｅｐｈｓｏｎらは、６個のアミノ酸挿入を有するＩＬ１０単量体が野生型二量体よりも熱安定性であり、ＩＬ１０受容体鎖（ＩＬ１０Ｒ１）と１：１相互作用を形成することもできることを実証した。ＩＬ１０Ｍはまた、野生型ＩＬ１０より９〜１８倍活性が低いが、インビトロ活性を有する。ＩＬ１０Ｍの別の特徴は、Ｎ末端とＣ末端が互いに空間的に近く、これによって修飾されたサイトカインタンパク質が抗体グラフトに適したものになっているということである。
【０１４９】
本開示の抗体サイトカイングラフトタンパク質は、出発抗体から変化した特性を有していてもよい修飾抗体サイトカイングラフトタンパク質を設計するために、出発材料として本明細書（例えば、表１）に示されるＣＤＲおよび／またはＶＨおよび／またはＶＬ配列の１つまたは複数を有する抗体を用いて調製することができる。あるいは、任意の公知の抗体配列を足場として利用して修飾された抗体サイトカイングラフトタンパク質を設計してもよい。例えば、任意の公知の、臨床的に利用される抗体を、抗体サイトカイングラフトタンパク質を調製するための出発材料足場として利用することができる。公知の抗体および対応する免疫グロブリン配列は、例えばパリビズマブ、アリロクマブ、メポリズマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、ジヌツキシマブ、セクキヌマブ、エボロクマブ、ブリナツモマブ、ペンブロリズマブ、ラムシルマブ、ベドリズマブ、シルツキシマブ、オビヌツズマブ、トラスツズマブ、ラキシバクマブ、ペルツズマブ、ベリムマブ、イピリムマブ、デノスマブ、トシリズマブ、オファツムマブ、カナキヌマブ、ゴリムマブ、ウステキヌマブ、セルトリズマブ、カツマキソマブ、エクリズマブ、ラニビズマブ、パニツムマブ、ナタリズマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、エファリズマブ、オマリズマブ、トシツモマブ、イブリツモマブチウキセタン、アダリムマブ、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、ダクリズマブ、リツキシマブ、アブシキシマブ、ムロモナブまたはこれらの修飾を含む。公知の抗体および免疫グロブリン配列はまた、生殖系列抗体配列も含む。フレームワーク配列は、生殖系列抗体遺伝子配列を含む公的ＤＮＡデータベースまたは公開されている参考文献から得ることができる。例えば、ヒト重鎖可変領域遺伝子および軽鎖可変領域遺伝子についての生殖系列ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖系列配列データベース、ならびにKabat, E. A., et al., 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242；Tomlinson, I. M., et al., 1992 J. fol. Biol. 227:776-798；およびCox, J. P. L. et al., 1994 Eur. J Immunol. 24:827-836に見出すことができる。さらに他の例では、早期の発見および／または薬物開発であり得る他の公知の実体からの抗体および対応する免疫グロブリン配列を同様に出発材料として適合させて、修飾された抗体サイトカイングラフトタンパク質を設計することができる。
【０１５０】
得られるポリペプチドがサイトカイン（例えば、ＩＬ１０Ｍ）の組み込みを受け容れる少なくとも１つの結合領域を含む限り、多種多様な抗体／免疫グロブリンフレームワークまたは足場を使用することができる。このようなフレームワークまたは足場は、ヒト免疫グロブリンまたはその断片の５つの主要なイディオタイプを含み、好ましくはヒト化および／またはヒト側面を有する他の動物種の免疫グロブリンを含む。新規な抗体、フレームワーク、足場および断片が当業者によって発見および開発され続けている。
【０１５１】
抗体は当技術分野で公知の方法を用いて生成することができる。モノクローナル抗体を調製するために、当技術分野で公知の任意の技術を使用することができる（例えば、Kohler & Milstein, Nature 256:495-497 (1975)；Kozbor et al., Immunology Today 4:72 (1983)；Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, pp. 77-96. Alan R. Liss, Inc. 1985参照）。単鎖抗体を製造するための技術（米国特許第４９４６７７８号明細書）を適合させて、本開示の抗体グラフトタンパク質に使用するための抗体を製造することができる。また、トランスジェニックマウスまたは他の生物（他の哺乳動物など）を使用して、霊長類化またはヒト化またはヒト抗体を発現させ、同定することができる。あるいは、ファージディスプレイ技術を使用して、抗体サイトカイングラフトタンパク質に使用するために選択された抗原に特異的に結合する抗体およびヘテロマーＦａｂ断片を同定することができる（例えば、McCafferty et al.,上記; Marks et al., Biotechnology, 10:779-783, (1992)参照）。
【０１５２】
ヒト以外の抗体を霊長類化またはヒト化する方法は当技術分野で周知である。一般的に、霊長類化またはヒト化抗体は、霊長類以外またはヒト以外の供給源からそこに導入された１個または複数のアミノ酸残基を有する。このような霊長類以外またはヒト以外のアミノ酸残基はしばしばインポート残基と呼ばれ、典型的にはインポート可変ドメインからとられる。ヒト化は、本質的にはヒト抗体の対応する配列の代わりにげっ歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列を用いることによって、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法（例えば、Jones et al., Nature 321:522-525 (1986)；Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988)；Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988)およびPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)参照）に従って行うことができる。したがって、このようなヒト化抗体はキメラ抗体（米国特許第４８１６５６７号明細書）であり、完全ヒト可変ドメインより実質的に少ないものがヒト以外の種の対応する配列によって置換されている。実際、霊長類化またはヒト化抗体は、典型的にはある相補性決定領域（「ＣＤＲ」）残基およびおそらくはあるフレームワーク（「ＦＲ」）残基が元の種（例えば、げっ歯類抗体）の類似の部位の残基によって置換されて結合特異性を与える霊長類またはヒト抗体である。
【０１５３】
あるいはまたはさらに、ヒト以外の抗体と同じ結合特性を維持するまたはこれより優れた結合特性を提供しながら、抗体においてヒト以外の抗体可変領域をヒト可変領域で置き換えるインビボ法を利用して、ヒト以外の抗体を設計されたヒト抗体に変換することができる。例えば、米国特許出願公開第２００５０００８６２５号明細書、米国特許出願公開第２００５／０２５５５５２号明細書を参照されたい。あるいは、基準抗体Ｖセグメントの一部のみを最初にヒト配列のライブラリーによって置き換え、次いで、残りの基準抗体アミノ酸配列において結合を支持する同定されたヒト「カセット」を第２のライブラリースクリーンで組み換えて、ヒトＶセグメントを完全に生成する順次カセット置換によって、ヒトＶセグメントライブラリーを生成することができる（米国特許出願公開第２００６／０１３４０９８号明細書参照）。
【０１５４】
抗体サイトカイングラフトタンパク質の調製に使用するための種々の抗体または抗原結合断片は、完全抗体の酵素的もしくは化学的修飾によって製造することができる、または組換えＤＮＡ方法論（例えば、単鎖Ｆｖ）を用いて新規に合成することができる、またはファージディスプレイライブラリーを用いて同定することができる（例えば、McCafferty et al., Nature 348:552-554, 1990参照）。例えば、当技術分野、例えばVaughan and Sollazzo, Comb Chem High Throughput Screen. 4:417-30 2001で記載されている方法を用いて、ミニ抗体（minibody）を生成することができる。二重特異性抗体は、ハイブリドーマのグラフトまたはＦａｂ’断片の連結を含む種々の方法によって製造することができる。例えば、Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990)；Kostelny et al., J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992)を参照されたい。単鎖抗体は、ファージディスプレイライブラリーまたはリボソームディスプレイライブラリー、遺伝子シャッフルライブラリーを用いて同定することができる。このようなライブラリーは、合成、半合成または天然および免疫適格供給源から構築することができる。よって、選択された免疫グロブリン配列を本明細書で提供される抗体サイトカイングラフトタンパク質の調製に利用することができる。
【０１５５】
本開示で使用する抗体または抗原結合分子は、二重特異性抗体をさらに含む。二重特異性または二官能性抗体は、２つの異なる重／軽鎖ペアおよび２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。他の抗原結合断片または抗体部分には、二価ｓｃＦｖ（ダイアボディ）、二重特異性ｓｃＦｖ抗体（抗体分子が２つの異なるエピトープを認識する）、単一結合ドメイン（ｄＡｂ）およびミニ抗体が含まれる。選択された免疫グロブリン配列を本明細書で提供される抗体サイトカイングラフトタンパク質の調製に利用することができる。
【０１５６】
抗体の抗原結合断片、例えばＦａｂ断片、ｓｃＦｖを、抗体サイトカイングラフトタンパク質を構築するための構築ブロックとして使用することができ、これらは場合により多価フォーマットを含む。いくつかの実施形態では、このような多価分子が、抗体の定常領域（例えば、Ｆｃ）を含む。
【０１５７】
抗体サイトカイングラフトタンパク質は、抗体の一方または両方の可変領域（すなわち、ＶＨおよび／またはＶＬ）内、例えば１つまたは複数のＣＤＲ領域内の１個または複数の残基を修飾することによって設計することができ、このような適合ＶＨおよび／またはＶＬ領域配列を、抗体サイトカイングラフトタンパク質を調製するためのサイトカインの組み込みに利用することができる。行うことができる１つのタイプの可変領域設計はＣＤＲグラフトである。抗体は主に６つの重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）に位置するアミノ酸残基を通して標的抗原と相互作用する。この理由のために、ＣＤＲ内のアミノ酸配列はＣＤＲの外側の配列よりも個々の抗体間で多様である。ＣＤＲ配列はほとんどの抗体−抗原相互作用を担い、異なる特性を有する異なる抗体のフレームワーク配列上にグラフトした特異的抗体のＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することによって、特異的抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現することが可能である（例えば、Riechmann, L. et al., 1998 Nature 332:323-327；Jones, P. et al., 1986 Nature 321:522-525；Queen, C. et al., 1989 Proc. Natl. Acad., U.S.A. 86:10029-10033；Ｗｉｎｔｅｒの米国特許第５２２５５３９号明細書ならびにＱｕｅｅｎらの米国特許第５５３０１０１号明細書；第５５８５０８９号明細書；第５６９３７６２号明細書および第６１８０３７０号明細書参照）。一定の例では、フレームワーク内の残基を突然変異させて抗体の抗原結合能力を維持または増強することが有益である（例えば、Ｑｕｅｅｎらの米国特許第５５３０１０１号明細書；第５５８５０８９号明細書；第５６９３７６２号明細書および第６１８０３７０号明細書参照）。
【０１５８】
いくつかの態様では、「親和性成熟」として知られている、対象となる抗体の１つまたは複数の結合特性（例えば、親和性）を改善するためのＶＨおよび／またはＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基の突然変異が、例えば、サイトカイングラフトタンパク質の状況と併せて抗体の抗原結合を最適化するのに有益となり得る。部位特異的突然変異誘発またはＰＣＲ媒介突然変異誘発を行って、突然変異（複数可）および抗体結合に対する効果を導入することができる、または対象となる他の機能的特性を本明細書に記載されるインビトロまたはインビボアッセイで評価し、実施例および／または当技術分野で公知の代替もしくは追加のアッセイで提供することができる。保存的修飾を導入することができる。突然変異はアミノ酸置換、付加または欠失であり得る。さらに、典型的にはＣＤＲ領域内の１個、２個、３個、４個または５個以下の残基を変化させる。
【０１５９】
設計された抗体または抗体断片は、例えば抗体の特性を改善するために、ＶＨおよび／またはＶＬ内のフレームワーク残基に修飾がなされたものである。いくつかの実施形態では、このようなフレームワーク修飾を行って抗体の免疫原性を低下させる。例えば、１つの手法は、１個または複数のフレームワーク残基を対応する生殖系列配列へと「復帰突然変異（backmutate）」させることである。より具体的には、体細胞突然変異を経験した抗体は、抗体が由来する生殖系列配列とは異なるフレームワーク残基を含む。このような残基は、抗体フレームワーク配列を抗体が由来する生殖系列配列と比較することによって同定することができる。フレームワーク領域配列をその生殖系列構成に戻すために、例えば、部位特異的突然変異誘発によって、体細胞突然変異を生殖系列配列に「復帰突然変異」させることができる。このような「復帰突然変異」抗体も本開示によって包含されることを意図している。さらなるフレームワーク修飾は、フレームワーク領域内または１つもしくは複数のＣＤＲ領域内の１個または複数の残基を突然変異させてＴ細胞エピトープを除去し、それによって抗体の潜在的な免疫原性を低下させることを含む。この手法はまた「脱免疫化（deimmunization）」とも呼ばれ、Ｃａｒｒらによる米国特許出願公開第２００３／０１５３０４３号明細書にさらに詳細に記載されている。
【０１６０】
抗体サイトカイングラフトタンパク質の調製に利用される抗体または抗体断片の定常領域は、適宜、任意のタイプまたはサブタイプであってよく、本方法によって治療される対象の種（例えば、ヒト、ヒト以外の霊長類または他の哺乳動物、例えば農業用哺乳動物（例えば、ウマ、ヒツジ、ウシ、ブタ、ラクダ）、家庭用哺乳動物（例えば、イヌ、ネコ）またはげっ歯類（例えば、ラット、マウス、ハムスター、ウサギ））のものとなるよう選択することができる。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質に利用される抗体がヒト化またはＨｕｍａｎｅｅｒｅｄ（登録商標）抗体を生成するよう設計される。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質に利用される抗体がヒト抗体である。いくつかの実施形態では、抗体定常領域アイソタイプがＩｇＧ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４である。特定の実施形態では、定常領域アイソタイプがＩｇＧ１である。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質がＩｇＧを含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質がＩｇＧ１  Ｆｃを含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質がＩｇＧ２  Ｆｃを含む。
【０１６１】
フレームワークまたはＣＤＲ領域内になされた修飾に加えてまたはその代わりに、抗体サイトカイングラフトタンパク質の調製に利用される抗体または抗体断片を、典型的には抗体の１つまたは複数の機能的特性、例えば血清中半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合および／または抗原依存性細胞傷害性を変化させるためにＦｃ領域内に修飾を含むように設計することができる。さらに、抗体または抗体断片を化学的に修飾する（例えば、１つまたは複数の化学的部分を抗体に結合させることができる）またはそのグリコシル化を変化させるよう修飾して、抗体サイトカイングラフトタンパク質の１つまたは複数の機能的特性を同様に変化させることができる。
【０１６２】
一実施形態では、ヒンジ領域中のシステイン残基の数を変化させる、例えば増加または減少させるように、ＣＨ１のヒンジ領域を修飾する。例えば、Ｂｏｄｍｅｒらによって米国特許第５６７７４２５号明細書にさらに記載されている手法では、ＣＨ１のヒンジ領域中のシステイン残基の数が、例えば、軽鎖および重鎖の集合を容易にする、または抗体サイトカイングラフトタンパク質の安定性を増加もしくは減少させるよう変化させられる。別の実施形態では、抗体のＦｃヒンジ領域が抗体サイトカイングラフトタンパク質の生物学的半減期を変化させるよう突然変異させられる。より具体的には、抗体サイトカイングラフトタンパク質が天然Ｆｃ−ヒンジドメインＳｐＡ結合に対して損なわれたブドウ球菌（Staphylococcyl）タンパク質（ＳｐＡ）結合を有するように、１つまたは複数のアミノ酸突然変異がＦｃヒンジ断片のＣＨ２−ＣＨ３ドメイン界面領域に導入される。この手法はＷａｒｄらによる米国特許第６１６５７４５号明細書にさらに詳細に記載されている。
【０１６３】
本開示は、インビボで延長した半減期を有するＩＬ１０Ｒタンパク質に特異的に結合する抗体サイトカイングラフトタンパク質を提供する。別の実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、その生物学的半減期を増加させるよう修飾される。種々の手法が可能である。インビボで増加した半減期を有する抗体サイトカイングラフトタンパク質は、１つまたは複数のアミノ酸修飾（すなわち、置換、挿入または欠失）をＩｇＧ定常ドメインまたはそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくは、ＦｃまたはヒンジＦｃドメイン断片）に導入して生成することもできる。例えば、Ｗａｒｄらの米国特許第６２７７３７５号明細書に記載されるように、以下の突然変異の１つまたは複数を導入することができる：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆ。例えば、国際公開第９８／２３２８９号パンフレット；国際公開第９７／３４６３１号パンフレット；および米国特許第６２７７３７５号明細書を参照されたい。あるいは、Ｐｒｅｓｔａらの米国特許第５８６９０４６号明細書および第６１２１０２２号明細書に記載されるように、抗体サイトカイングラフトタンパク質を、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループからとられるサルベージ受容体結合エピトープを含むようにＣＨ１またはＣＬ領域内を変化させる。さらに他の実施形態では、少なくとも１個のアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置き換えることによってＦｃ領域を変化させて、抗体サイトカイングラフトタンパク質のエフェクター機能を変化させる。例えば、抗体サイトカイングラフトタンパク質がエフェクターリガンドに対して変化した親和性を有するが、親抗体の抗原結合能力を保持するように、１個または複数のアミノ酸を異なるアミノ酸残基で置き換えることができる。親和性を変化させるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）または補体のＣ１成分であり得る。この手法は、共にＷｉｎｔｅｒらによる米国特許第５６２４８２１号明細書および第５６４８２６０号明細書にさらに詳細に記載されている。
【０１６４】
別の実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が変化したＣ１ｑ結合および／または減少もしくは消滅した補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を有するように、アミノ酸残基から選択される１個または複数のアミノ酸を異なるアミノ酸残基で置き換えることができる。この手法はＩｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６１９４５５１号明細書にさらに詳細に記載されている。
【０１６５】
このような突然変異を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をあまり媒介しないまたは全く媒介しない。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１定常領域のアミノ酸残基Ｌ２３４およびＬ２３５がＡｌａ２３４およびＡｌａ２３５に置換している。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１定常領域のアミノ酸残基Ｎ２６７がＡｌａ２６７に置換している。
【０１６６】
別の実施形態では、１個または複数のアミノ酸残基を変化させ、それによって抗体サイトカイングラフトタンパク質が補体を結合する能力を変化させる。この手法はＢｏｄｍｅｒらによる国際公開第９４／２９３５１号パンフレットにさらに記載されている。
【０１６７】
さらに別の実施形態では、Ｆｃ領域を、１個または複数のアミノ酸を修飾することによって、抗体が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する能力を増加させるおよび／またはＦｃγ受容体に対する抗体サイトカイングラフトタンパク質の親和性を増加させるよう修飾する。この手法はＰｒｅｓｔａによる国際公開第００／４２０７２号パンフレットにさらに記載されている。さらに、ＦｃγＲｌ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎについてのヒトＩｇＧ１上の結合部位がマッピングされており、結合が改善した変異型が記載されている（Shields, R.L. et al., 2001 J. Biol. Chem. 276:6591-6604参照）。
【０１６８】
さらに別の実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質のグリコシル化を修飾する。例えば、非グリコシル化抗体サイトカイングラフトタンパク質を作製することができる（すなわち、抗体サイトカイングラフトタンパク質がグリコシル化を欠いている）。グリコシル化を変化させて、例えば、「抗原」に対する抗体の親和性を高めることができる。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内のグリコシル化の１つまたは複数の部位を変化させることによって達成することができる。例えば、１つまたは複数の可変領域フレームワークグリコシル化部位の除去をもたらす１つまたは複数のアミノ酸置換を行い、それによってその部位のグリコシル化を除去することができる。このような非グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を高めることができる。このような手法はＣｏらによる米国特許第５７１４３５０号明細書および第６３５０８６１号明細書にさらに詳細に記載されている。
【０１６９】
さらにまたはあるいは、変化したグリコシル化型を有する抗体サイトカイングラフトタンパク質、例えばフコシル残基の量が減少した低フコシル化（hypofucosylated）抗体サイトカイングラフトタンパク質または二分ＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体を作製することができる。このような変化したグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ活性を増加させることが実証されている。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体サイトカイングラフトタンパク質を、グリコシル化機構が変化した宿主細胞中で発現させることによって達成することができる。グリコシル化機構が変化した細胞は、当技術分野で記載されており、組換え抗体サイトカイングラフトタンパク質を発現し、それによってグリコシル化が変化した抗体サイトカイングラフトタンパク質を製造する宿主細胞として使用することができる。例えば、Ｈａｎｇらによる欧州特許第１１７６１９５号明細書は、細胞株中で発現する抗体サイトカイングラフトタンパク質が低フコシル化を示すように、フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子が機能的に破壊された細胞株を記載している。Ｐｒｅｓｔａによる国際公開第０３／０３５８３５号パンフレットは、フコースをＡｓｎ（２９８）結合炭水化物に結合させる能力が低下して、同様に宿主細胞中で発現する抗体サイトカイングラフトタンパク質の低フコシル化をもたらす変異型ＣＨＯ細胞株、Ｌｅｃｌ３細胞を記載している（Shields, R.L. et al., 2002 J. Biol. Chem. 277:26733-26740も参照）。Ｕｍａｎａらによる国際公開第９９／５４３４２号パンフレットは、設計された細胞株中で発現する抗体サイトカイングラフトタンパク質が抗体のＡＤＣＣ活性増加をもたらす二分ＧｌｃＮａｃ構造の増加を示すように、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、β（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するよう設計された細胞株を記載している（Umana et al., 1999 Nat. Biotech. 17:176-180も参照）。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質の１つまたは複数のドメインまたは領域がリンカー、例えばペプチドリンカー、例えば当技術分野で周知のものを介して接続されている（例えば、Holliger, P., et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448；Poljak, RJ., et al. (1994) Structure 2:1121-1123参照）。ペプチドリンカーは長さが変化し得る、例えば、リンカーは１〜１００アミノ酸長であり得、典型的にはリンカーは５〜５０アミノ酸長、例えば５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０アミノ酸長である。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、単量体ＩＬ１０を場合により１つまたは複数のペプチドリンカー配列と共にＣＤＲ配列に組み込む。特定の実施形態では、１つまたは複数のペプチドリンカーが、（Ｇｌｙｎ−Ｓｅｒ）ｍ配列、（Ｇｌｙｎ−Ａｌａ）ｍ配列または（Ｇｌｙｎ−Ｓｅｒ）ｍ／（Ｇｌｙｎ−Ａｌａ）ｍ配列（式中、各ｎは独立に１〜５の整数であり、各ｍは独立に０〜１０の整数である）の任意の組合せから独立に選択される。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーが（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）ｍ（式中、ｍは０〜１０の整数である）である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーが（Ｇｌｙ４−Ａｌａ）ｍ（式中、ｍは０〜１０の整数である）である。リンカーの例としては、それだけに限らないが、１つまたは複数のリンカーがＧ４Ｓ反復、例えばＧｌｙ−ＳｅｒリンカーＧＧＧＧＳ（配列番号２５２）または（ＧＧＧＧＳ）ｍ（式中、ｍは１以上の正の整数である）を含む特定の実施形態が挙げられる。例えば、ｍ＝１、ｍ＝２、ｍ＝３、ｍ＝４、ｍ＝５およびｍ＝６、ｍ＝７、ｍ＝８、ｍ＝９およびｍ＝１０である。いくつかの実施形態では、リンカーが、それだけに限らないが、（ＧＧＧＧＳ）３または（ＧＧＧＧＳ）４を含むＧＧＧＧＳ（配列番号２５２）の複数の反復を含む。いくつかの実施形態では、ＳｅｒをＡｌａで置き換えることができ、これは例えば（ＧＧＧＧＡ）（配列番号２５３）または（ＧＧＧＧＡ）ｍ（式中、ｍは１以上の正の整数である）などのリンカーＧ／Ａとなる。いくつかの実施形態では、リンカーがＧＧＧＧＡ（配列番号２５３）の複数の反復を含む。他の実施形態では、リンカーがＧＧＧＧＳ（配列番号２５２）およびＧＧＧＧＡ（配列番号２５３）の組合せおよび倍数を含む。
【０１７２】
さらに、抗体サイトカイングラフトタンパク質をマーカー配列、例えば抗体サイトカイングラフトタンパク質の精製を容易にするペプチドに結合することができる。好ましい実施形態では、マーカーアミノ酸配列がヘキサ−ヒスチジンペプチド、例えば中でもその多くが商業的に入手可能であるｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、９２５９  Ｅｔｏｎ  Ａｖｅｎｕｅ、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ、９１３１１）で提供されるタグである。例えば、Gentz et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-824に記載されるように、ヘキサ−ヒスチジンはグラフトタンパク質の簡便な精製を提供する。精製に有用な他のペプチドタグには、それだけに限らないが、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質（Wilson et al., 1984, Cell 37:767）に由来するエピトープに相当するヘマグルチニン（「ＨＡ」）タグおよび「ｆｌａｇ」タグが含まれる。
【０１７３】
抗体を、標的抗原の免疫測定法または精製に特に有用な固体支持体に付着させることもできる。このような固体支持体には、それだけに限らないが、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニルまたはポリプロピレンが含まれる。
【０１７４】
抗体サイトカイングラフトタンパク質活性についてのアッセイ
抗体サイトカイングラフトタンパク質を同定するためのアッセイは当技術分野で公知であり、本明細書に記載されている。抗体サイトカイングラフトタンパク質はＩＬ１０受容体（ＩＬ１０Ｒ）に結合し、抗炎症効果ならびに免疫刺激効果をもたらす細胞内シグナル伝達を促進、誘導および刺激する。
【０１７５】
抗体サイトカイングラフトタンパク質とＩＬ−１０Ｒの結合は、当技術分野で公知の任意の方法を用いて測定することができる。例えば、ＩＬ−１０Ｒとの結合は、限定されないが、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット法、表面プラズモン共鳴法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ）およびフローサイトメトリーを含む公知の技術を用いて測定することができる。
【０１７６】
ＩＬ−１０Ｒを通した細胞内シグナル伝達は、当技術分野で公知の任意の方法を用いて測定することができる。例えば、ＩＬ−１０Ｒを通した活性化はＳＴＡＴ３リン酸化およびシグナル伝達を促進する。ＳＴＡＴ３活性化を測定する方法は当技術分野で標準的である（例えば、ＳＴＡＴ３タンパク質のリン酸化状態、レポーター遺伝子アッセイ、下流シグナル伝達アッセイ等）。ＩＬ−１０Ｒを通した活性化は、炎症性サイトカインの抑制ならびにマクロファージの分化および増殖を含む抗炎症効果を有する。さらに、ＩＬ−１０Ｒを通した活性化は、Ｂ細胞増殖、肥満細胞増殖（例えば、ＭＣ／９）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞増殖の刺激ならびに一定の炎症性サイトカインの誘導を含む炎症刺激効果を有する。細胞の増殖を測定する方法は当技術分野で標準的である（例えば、３Ｈ−チミジン組み込みアッセイ、ＣＦＳＥ標識）。サイトカイン産生を測定する方法は当技術分野で周知である（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ、ＥＬＩＳｐｏｔアッセイ）。インビトロアッセイを行う場合、アゴニスト抗体サイトカイングラフトタンパク質と接触した試験細胞または試験細胞からの培養物上清を、アゴニスト抗体サイトカイングラフトタンパク質と接触させていない対照細胞または対照細胞からの培養物上清ならびに／あるいは組換えヒトＩＬ１０（ｒｈＩＬ１０）と接触させたものと比較することができる。
【０１７７】
抗体サイトカイングラフトタンパク質のＩＬ１０受容体アゴニスト活性を体外および／またはインビボで測定することもできる。いくつかの態様では、未処理動物および／またはｒｈＩＬ１０で同様に処理した動物と比較した、抗体サイトカイングラフトタンパク質で処理した動物の体外での種々の細胞型にわたるＳＴＡＴ３活性化を測定する方法を使用して、細胞型にわたる抗体グラフトタンパク質の示差活性を示すことができる。好ましい抗体サイトカイングラフトタンパク質は、単球を活性化および増殖する能力を有する。例えば、単球のインビボ活性化および増殖は、当技術分野で公知の任意の方法を用いて、例えばフローサイトメトリーによって測定することができる。抗体サイトカイングラフトタンパク質は、刺激後の炎症促進応答のレベルを抑制するのに治療上有用となり得る。炎症性サイトカインのレベルは、刺激剤（例えば、ＬＰＳ）による処理前、中および／または後に、抗体サイトカイングラフトタンパク質で処理した動物から単離した試料において、当技術分野で公知の任意の方法を用いて測定することができ、結果を未処理対照動物および／または組換えヒトＩＬ１０（ｒｈＩＬ１０）療法で同様に処理した動物と比較することができる。好ましいアゴニスト抗体サイトカイングラフトタンパク質は、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、乾癬、Ｉ型糖尿病、急性膵炎、ブドウ膜炎、シェーグレン病、ベーチェット病、サルコイドーシスおよび移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防、低減、阻害または排除するのに治療上有効となり得る。アゴニスト抗体サイトカイングラフトタンパク質の有効性は、治療上有効量の抗体サイトカイングラフトタンパク質を対象に投与し、抗体サイトカイングラフトタンパク質の投与前後の対象を比較することによって決定することができる。炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、乾癬、Ｉ型糖尿病、急性膵炎、ブドウ膜炎、シェーグレン病、ベーチェット病、サルコイドーシスおよび移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）のための療法におけるアゴニスト抗体サイトカイングラフトタンパク質の有効性も、治療上有効量の抗体サイトカイングラフトタンパク質を試験対象に投与し、試験対象を、抗体サイトカイングラフトタンパク質を投与しなかった対照の対象と比較するおよび／またはｒｈＩＬ１０で同様に処理した対象と比較することによって決定することができる。
【０１７８】
抗体サイトカイングラフトタンパク質をコードするポリヌクレオチド
別の態様では、抗体サイトカイングラフトタンパク質の重鎖タンパク質および軽鎖タンパク質をコードする単離核酸が提供される。抗体サイトカイングラフトタンパク質は、それだけに限らないが、組換え発現、化学合成および抗体四量体の酵素的消化を含む当技術分野で公知の任意の手段によって製造することができる。組換え発現は、当技術分野で公知の任意の適当な宿主細胞、例えば哺乳動物宿主細胞、細菌宿主細胞、酵母宿主細胞、昆虫宿主細胞等からであり得る。
【０１７９】
配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号２０５および配列番号２０６のいずれか１つに例示される可変領域；配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号２０７、配列番号２０８のいずれか１つに例示される可変領域、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号２０５および配列番号２０６のいずれか１つに例示されるＣＤＲ；配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号２０７および配列番号２０８のいずれか１つに例示される重鎖および軽鎖をコードするポリヌクレオチドが本明細書で提供される。
【０１８０】
よって、本開示は、本明細書に記載される抗体サイトカイングラフトタンパク質の重鎖および／または軽鎖ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、例えば本明細書に記載される相補性決定領域を含む重鎖または軽鎖可変領域またはセグメントをコードするポリヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドが、配列番号２４２のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％核酸配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドが、配列番号２４３のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％核酸配列同一性を有する配列を含む。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドが、配列番号２４６のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％核酸配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドが、配列番号２４７のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％核酸配列同一性を有する配列を含む。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、重鎖をコードするポリヌクレオチドが、配列番号２４４のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％核酸配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、軽鎖をコードするポリヌクレオチドが、配列番号２４５のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％核酸配列同一性を有する。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、重鎖をコードするポリヌクレオチドが、配列番号２４８のポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％核酸配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、軽鎖をコードするポリヌクレオチドが、配列番号２４９の選択されたポリヌクレオチドと少なくとも８５％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％核酸配列同一性を有する。
【０１８４】
ポリヌクレオチドは、抗体サイトカイングラフトタンパク質の可変領域配列をコードすることができる。これらはまた、抗体サイトカイングラフトタンパク質の可変領域と定常領域の両方をコードすることができる。ポリヌクレオチド配列のいくつかは、抗体サイトカイングラフトタンパク質の１つの重鎖と軽鎖の両方の可変領域を含むポリペプチドをコードする。いくつかの他のポリヌクレオチドは、抗体タンパク質グラフトタンパク質の１つの重鎖および軽鎖の可変領域とそれぞれ実質的に同一の２つのポリペプチドセグメントをコードする。
【０１８５】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドまたは核酸がＤＮＡを含む。他の実施形態では、ポリヌクレオチドまたは核酸がＲＮＡを含み、これが一本鎖であっても二本鎖であってもよい。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のサイトカイングラフトタンパク質またはその断片と、場合により分泌シグナルとをコードする核酸を含む組換え宿主細胞が提供される。特定の実施形態では、組換え宿主細胞が、抗体サイトカイングラフトタンパク質またはその断片と、分泌シグナルとをコードするベクターを含む。他の特定の実施形態では、組換え宿主細胞が、抗体サイトカイングラフトタンパク質の２本の免疫グロブリンタンパク質鎖と分泌シグナルとをコードする１つまたは複数のベクターを含む。いくつかの実施形態では、組換え宿主細胞が、抗体サイトカイングラフトタンパク質の２本の免疫グロブリンタンパク質鎖と分泌シグナルとをコードする単一ベクターを含む。いくつかの実施形態では、組換え宿主細胞が、１つは抗体サイトカイングラフトタンパク質のヘテロ二量体の重鎖免疫グロブリンタンパク質鎖をコードし、もう１つは抗体サイトカイングラフトタンパク質のヘテロ二量体の軽鎖免疫グロブリンタンパク質鎖をコードし、それぞれが分泌シグナルを含む２つのベクターを含む。組換え宿主細胞は原核細胞であっても真核細胞であってもよい。いくつかの実施形態では、宿主細胞が真核細胞株である。いくつかの実施形態では、宿主細胞が哺乳動物細胞株である。
【０１８７】
抗体サイトカイングラフトタンパク質を製造する方法がさらに提供される。いくつかの実施形態では、本方法が、（ｉ）抗体サイトカイングラフトタンパク質の免疫グロブリンタンパク質鎖をコードする１つまたは複数のベクターを含む宿主細胞を、抗体サイトカイングラフトタンパク質の発現、形成および分泌に適した条件下で培養するステップと、（ｉｉ）抗体サイトカイングラフトタンパク質を回収するステップとを含む。
【０１８８】
ポリヌクレオチド配列は、新規な固相ＤＮＡ合成または抗体サイトカイングラフトタンパク質のポリペプチド鎖をコードする既存の配列（例えば、本明細書に記載される配列）のＰＣＲ突然変異誘発によって製造することができる。核酸の直接化学合成は、当技術分野で公知の方法、例えばNarang et al., Meth. Enzymol. 68:90, 1979のホスホトリエステル法；Brown et al., Meth. Enzymol. 68:109, 1979のホスホジエステル法；Beaucage et al., Tetra. Lett., 22:1859, 1981のジエチルホスホロアミダイト法；および米国特許第４４５８０６６号明細書の固体支持体法によって達成することができる。ＰＣＲにより突然変異をポリヌクレオチド配列に導入することは、例えば、PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification, H.A. Erlich (Ed.), Freeman Press, NY, NY, 1992；PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Innis et al. (Ed.), Academic Press, San Diego, CA, 1990；Mattila et al., Nucleic Acids Res. 19:967, 1991；およびEckert et al., PCR Methods and Applications 1:17, 1991に記載されるように行うことができる。
【０１８９】
上記の抗体サイトカイングラフトタンパク質を製造するための発現ベクターおよび宿主細胞も本開示で提供される。種々の発現ベクターを使用して、抗体サイトカイングラフトタンパク質の免疫グロブリンポリペプチド鎖または断片をコードするポリヌクレオチドを発現させることができる。ウイルス発現ベクターと非ウイルス発現ベクターの両方を使用して、哺乳動物宿主細胞で免疫グロブリンタンパク質を製造することができる。非ウイルスベクターおよび系には、典型的にはタンパク質またはＲＮＡを発現するための発現カセットを含むプラスミド、エピソームベクター、およびヒト人工染色体が含まれる（例えば、Harrington et al., Nat Genet 15:345, 1997参照）。例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）細胞中での抗体サイトカイングラフトタンパク質ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの発現に有用な非ウイルスベクターには、ｐＴｈｉｏＨｉｓ  Ａ、ＢおよびＣ、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｉｓ、ｐＥＢＶＨｉｓ  Ａ、ＢおよびＣ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、ＭＰＳＶベクター、および他のタンパク質を発現するための当技術分野で公知の多数の他のベクターが含まれる。有用なウイルスベクターには、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスに基づくベクター、ＳＶ４０、パピローマウイルス、ＨＢＰエプスタイン・バーウイルスに基づくベクター、ワクシニアウイルスベクターおよびセムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）が含まれる。Brent et al.,上記；Smith, Annu. Rev. Microbiol. 49:807, 1995；およびRosenfeld et al., Cell 68:143, 1992を参照されたい。
【０１９０】
発現ベクターの選択は、ベクターを発現させる、意図する宿主細胞に依存する。典型的には、発現ベクターは、プロモーターと、抗体サイトカイングラフトタンパク質をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結した他の調節配列（例えば、エンハンサー）とを含む。いくつかの実施形態では、誘導性プロモーターを使用して誘導条件下以外での挿入した配列の発現を防ぐ。誘導性プロモーターには、例えば、アラビノース、ｌａｃＺ、メタロチオネインプロモーターまたはヒートショックプロモーターが含まれる。形質転換生物の培養物を、その発現産物が宿主細胞によってよりよく耐えられるコード配列に集団を偏らせることなく、非誘導条件下で増殖させることができる。プロモーターに加えて、抗体サイトカイングラフトタンパク質の免疫グロブリン鎖または断片の効率的な発現のために他の調節要素も要求され得るまたは望まれ得る。これらの要素には、典型的にはＡＴＧ開始コドンおよび隣接リボース結合部位または他の配列が含まれる。さらに、使用している細胞系に適したエンハンサーを含めることによって、発現の効率を増強することができる（例えば、Scharf et al., Results Probl. Cell Differ. 20:125, 1994；およびBittner et al., Meth. Enzymol., 153:516, 1987参照）。例えば、ＳＶ４０エンハンサーまたはＣＭＶエンハンサーを使用して哺乳動物宿主細胞中での発現を増加させることができる。
【０１９１】
発現ベクターはまた、抗体サイトカイングラフトタンパク質配列によってコードされる配列に加えて、異種タンパク質を形成するための分泌シグナル配列も提供することができる。しばしば、抗体サイトカイングラフトタンパク質の挿入された免疫グロブリン配列はベクターに包含される前にシグナル配列と作動可能に連結している。免疫グロブリン軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインをコードする配列を受け入れるために使用されるベクターは、定常領域またはその一部もコードする。このようなベクターは、定常領域を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質としての可変領域の発現を可能にし、それによって完全抗体サイトカイングラフトタンパク質またはその断片の製造をもたらす。典型的には、このような定常領域はヒトである。
【０１９２】
抗体サイトカイングラフトタンパク質鎖を有し、発現するための宿主細胞は原核生物であっても真核生物であってもよい。大腸菌（E. coli）が本開示のポリヌクレオチドをクローニングおよび発現するための有用な１つの原核生物宿主である。使用するのに適した他の微生物宿主には、桿菌、例えば枯草菌（Bacillus subtilis）および他の腸内細菌科、例えばサルモネラ属（Salmonella）、セラチア属（Serratia）および種々のシュードモナス属（Pseudomonas）種が含まれる。これらの原核生物宿主では、典型的には宿主細胞と適合性の発現制御配列（例えば、複製起点）を含む発現ベクターを作製することもできる。さらに、ラクトースプロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、β−ラクタマーゼプロモーター系またはファージλのプロモーター系などの任意の数の種々の周知のプロモーターが存在するだろう。プロモーターは、典型的には場合によりオペレーター配列と共に発現を制御し、転写および翻訳を開始および完了するためのリボソーム結合部位配列などを有する。酵母などの他の微生物を使用して抗体サイトカイングラフトタンパク質を発現させることもできる。バキュロウイルスベクターと組み合わせた昆虫細胞も使用することができる。
【０１９３】
いくつかの好ましい実施形態では、哺乳動物宿主細胞を使用して本開示の抗体サイトカイングラフトタンパク質を発現し、製造する。例えば、これらは外因性発現ベクターを有する哺乳動物細胞株であり得る。これらには、任意の正常な致死の、または正常なもしくは異常な不死の動物またはヒト細胞が含まれる。例えば、ＣＨＯ細胞株、種々のＣｏｓ細胞株、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞株、形質転換Ｂ細胞およびハイブリドーマを含む、完全免疫グロブリンを分泌することができるいくつかの適切な宿主細胞株が開発されている。ポリペプチドを発現させるための哺乳動物組織細胞培養物の使用は、一般的に、例えば、Winnacker, From Genes to Clones, VCH Publishers, N.Y., N.Y., 1987に論じられている。哺乳動物宿主細胞のための発現ベクターは、発現制御配列、例えば複製起点、プロモーターおよびエンハンサー（例えば、Queen et al., Immunol. Rev. 89:49-68, 1986）、ならびに必要なプロセシング情報部位、例えばリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライシング部位、ポリアデニル化部位および転写終結配列を含むことができる。これらの発現ベクターは通常、哺乳動物遺伝子または哺乳動物ウイルス由来のプロモーターを含む。適切なプロモーターは、構成的、細胞型特異的、段階特異的および／または調節可能もしくは制御可能であり得る。有用なプロモーターには、それだけに限らないが、メタロチオネインプロモーター、構成型アデノウイルス主要後期プロモーター、デキサメタゾン誘導性ＭＭＴＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＭＲＰ  ｐｏｌＩＩＩプロモーター、構成型ＭＰＳＶプロモーター、テトラサイクリン誘導性ＣＭＶプロモーター（ヒト最初期ＣＭＶプロモーターなど）、構成型ＣＭＶプロモーターおよび当技術分野で公知のプロモーター−エンハンサー組合せが含まれる。
【０１９４】
対象となるポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターを導入する方法は、細胞宿主型に応じて変化する。例えば、原核細胞には塩化カルシウムトランスフェクションが一般的に利用されるが、他の細胞宿主にはリン酸カルシウム処理または電気穿孔が使用され得る（一般的に上記のSambrook et al.参照）。他の方法には、例えば、電気穿孔、リン酸カルシウム処理、リポソーム媒介形質転換、注入および微量注入、衝撃法、ビロゾーム、イムノリポソーム（immunoliposome）、ポリカチオン：核酸複合体、ネイキッドＤＮＡ、人工ビリオン、ヘルペスウイルス構造タンパク質ＶＰ２２へのグラフト（Elliot and O'Hare, Cell 88:223, 1997）、ＤＮＡの薬剤増強取り込み、および体外形質導入が含まれる。組換えタンパク質の長期の高収率の製造のために、安定な発現が通常望まれる。例えば、抗体サイトカイングラフトタンパク質免疫グロブリン鎖を安定に発現する細胞株は、ウイルス複製起点または内因性発現エレメントおよび選択マーカー遺伝子を含む発現ベクターを使用して調製することができる。ベクターの導入後、細胞を富化培地で１〜２日間増殖させた後、これらを選択培地に切り替える。選択マーカーの目的は、選択に対する耐性を与えることであり、その存在によって、選択培地中で、導入配列の発現に成功した細胞の増殖が可能になる。耐性の安定にトランスフェクトした細胞は、細胞型に適した組織培養技術を用いて増殖させることができる。
【０１９５】
抗体サイトカイングラフトタンパク質を含む組成物
薬学的に許容される担体と併せて製剤化された抗体サイトカイングラフトタンパク質を含む医薬組成物が提供される。場合により、医薬組成物は、所与の障害を治療または予防するのに適した他の治療剤をさらに含む。薬学的に許容される担体は組成物を増強もしくは安定化する、または組成物の調製を促進する。薬学的に許容される担体には、生理学的に適合性の溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張化剤および吸収遅延剤などが含まれる。
【０１９６】
本開示の医薬組成物は、当技術分野で公知の種々の方法によって投与することができる。投与の経路および／または様式は所望の結果に応じて変化する。投与が非経口投与（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、髄腔内、動脈内または皮下）による、または標的部位の近位に投与されることが好ましい。薬学的に許容される担体は、静脈内、筋肉内、腹腔内、髄腔内、動脈内、皮下、鼻腔内、吸入、脊髄または表皮投与（例えば、注射または注入による）のいずれか１つまたは複数による投与に適している。投与経路に応じて、活性化合物、例えば抗体サイトカイングラフトタンパク質を材料で保護して、化合物を不活性化し得る酸および他の自然条件の作用から化合物を保護することができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物が静脈内投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬組成物が皮下投与のための製剤である。
【０１９７】
抗体サイトカイングラフトタンパク質は、単独でまたは他の適切な成分と組み合わせて、吸入を介して投与するためのエアゾール製剤に加工することができる（すなわち、これらを「噴霧する」ことができる）。エアゾール製剤は加圧された許容される噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などに入れることができる。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、医薬組成物が滅菌および流体である。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散の場合、必要な粒径を維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持することができる。多くの場合、等張化剤、例えば、糖、ポリアルコール（マンニトールまたはソルビトールなど）、および塩化ナトリウムを組成物に含めることが好ましい。注射組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを組成物に含めることによってもたらすことができる。特定の実施形態では、適切な賦形剤（例えば、スクロース）を用いて凍結乾燥型で貯蔵するための組成物を調製することができる。
【０１９９】
医薬組成物は、当技術分野で周知の日常的に実施される方法に従って調製することができる。薬学的に許容される担体は、一部は、投与している具体的な組成物ならびに組成物を投与するために使用される具体的な方法によって決定される。したがって、本開示の医薬組成物の多種多様な適切な製剤が存在する。抗体サイトカイングラフトタンパク質を製剤化し、適切な投与およびスケジュールを決定するための適用可能な方法は、例えば、その各々が参照により本明細書に組み込まれる、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21stEd., University of the Sciences in Philadelphia, Eds., Lippincott Williams & Wilkins (2005)；およびMartindale: The Complete Drug Reference, Sweetman, 2005, London: Pharmaceutical Press.、およびMartindale, Martindale: The Extra Pharmacopoeia, 31st Edition., 1996, Amer Pharmaceutical Assn, and Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978に見出すことができる。医薬組成物は、好ましくはＧＭＰ条件下で製造される。典型的には、治療上有効用量または効果的用量の抗体サイトカイングラフトタンパク質が医薬組成物に使用される。抗体サイトカイングラフトタンパク質は、当業者に公知の慣用的な方法によって薬学的に許容される剤形に製剤化される。投薬レジメンは、所望の応答（例えば、治療的応答）をもたらすよう調整される。治療上または予防上有効用量を決定する場合、低用量を投与し、次いで、望ましくない副作用が最小であるまたは全くなしに所望の応答が達成されるまで、漸増することができる。例えば、単一ボーラスを投与してもよいし、いくつかの分割用量を経時的に投与してもよいし、または用量を緊急の治療状況によって指示されるように相対的に減少もしくは増加させてもよい。投与の容易さおよび投薬の均一性のために親組成物を投薬単位形態に製剤化することが特に有利である。本明細書で使用される投薬単位形態は、治療する対象のための一体型投薬として適した物理的に分離した単位を指す；各単位は、要求される医薬担体と合わせて所望の治療効果をもたらすよう計算された所定の量の活性化合物を含む。
【０２００】
本開示の医薬組成物中の有効成分の実際の投薬レベルは、患者に有毒となることなく、特定の患者、組成物および投与様式に望ましい治療応答を達成するのに有効な量の有効成分を得るために変化させることができる。選択される投薬レベルは、使用される本開示の特定の組成物、またはそのエステル、塩もしくはアミドの特定の組成物の活性、投与経路、投与時間、使用している特定の化合物の排泄速度、治療の持続期間、使用される特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／または物質、治療している患者の年齢、性別、体重、状態、全身の健康状態および以前の病歴ならびに同様の因子を含む種々の薬物動態因子に依存する。
【０２０１】
第２の薬剤との共製剤化（co-formulation）
いくつかの実施形態では、薬理学的組成物が、抗体サイトカイングラフトタンパク質と、１種または複数の追加の薬理学的薬剤（複数可）との混合物を含む。本抗体サイトカイングラフトタンパク質との混合物に含めるための例示的な第２の薬剤には、限定されないが、抗炎症剤、免疫調節剤、アミノサリチル酸および抗生物質が含まれる。適切な選択は、好ましい製剤、投薬および／または送達方法に依存し得る。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が抗炎症剤と共製剤化される（すなわち、混合物として提供されるまたは混合物で調製される）。特定の実施形態では、副腎皮質ステロイド抗炎症剤が抗体サイトカイングラフトタンパク質と併せて使用され得る。使用するための副腎皮質ステロイドは、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、ブデニソニド、メサラミンおよびデキサメタゾンのいずれかから選択され得る。適切な選択は、製剤および送達の選択に依存する。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が免疫調節剤と共製剤化される。特定の実施形態では、免疫調節剤が、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、シクロスポロリンＡ、タクロリムスおよびメトトレキサートのいずれかから選択される。特定の実施形態では、免疫調節剤が、抗ＴＮＦ剤（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ゴリムマブ）、ナタリズマブおよびベドリズマブから選択される。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質がアミノサリチル酸剤と共製剤化される。特定の実施形態では、アミノサリチル酸がスルファサラジン、メサラミン、バルサラジド、オルサラジンまたは５−アミノサリチル酸の他の誘導体から選択される。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が抗菌剤と共製剤化される。例示的な抗菌剤には、限定されないが、スルホンアミド（例えば、スルファニルアミド、スルファジアジン、スルファメトキサゾール、スルフィソキサゾール、スルファセタミド）、トリメトプリム、キノロン（例えば、ナリジクス酸、シノキサシン、ノルフロキサシン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシン、フレロキサシン、ペルロキサシン、レボフロキサシン、ガレノキサシンおよびゲミフロキサシン）、メテナミン、ニトロフラントイン、ペニシリン（例えば、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、メチシリンオキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、ナフシリン、アンピシリン、アモキシシリン、カルベニシリン、チカルシリン、メズロシリンおよびピペラシリン）セファロスポリン（例えば、セファゾリン、セファレキシン、セファドロキシル、セフォキシチン、セファクロル、セフプロジル、セフロキシム、セフロキシムアセチル、ロラカルベフ、セフォテタン、セフォラニド、セフォタキシム、セフポドキシムプロキセチル、セフィブテン、セフジニル、セフジトレンピボルキシル、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフォペラゾン、セフタジジムおよびセフェピン）、カルバペネム（例えば、イミペネム、アズトレオナム）およびアミノグリコシド（例えば、ネオマイシン、カナマイシン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、トラマイシン、ネチルマイシンおよびアミカシン）が含まれる。
【０２０６】
製品／キット
いくつかの態様では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が製品（すなわち、キット）で提供される。抗体サイトカイングラフトタンパク質は、一般的にバイアルまたは容器中にある。よって、製品は、容器と、容器上または容器に随伴したラベルまたは添付文書とを含む。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、溶液バッグ等が含まれる。適宜、抗体サイトカイングラフトタンパク質は液体形態または乾燥（例えば、凍結乾燥）形態であり得る。容器は、単独でまたは別の組成物と組み合わせて、免疫関連障害を治療、予防および／または改善するための組成物を調製するのに有効な組成物を保持する。ラベルまたは添付文書は、組成物が免疫関連障害を治療、予防および／または改善するために使用されることを示す。本明細書に記載される抗体サイトカイングラフトタンパク質を含む製品（キット）は、場合により１種または複数の追加の薬剤を含む。いくつかの実施形態では、製品（キット）が抗体サイトカイングラフトタンパク質と、薬学的に許容される希釈剤とを含む。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、同じ製剤で（例えば、混合物として）、１種または複数の追加の活性剤を含む製品（キット）で提供される。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、別個の製剤で（例えば、別個の容器で）、第２または第３の薬剤を含む製品（キット）で提供される。特定の実施形態では、製品（キット）が、抗体サイトカイングラフトタンパク質のアリコートを含み、アリコートが１回または複数回用量を提供する。いくつかの実施形態では、用量が均一であるまたは異なる複数回投与のためのアリコートが提供される。特定の実施形態では、変化する投薬レジメンは適宜、漸増または漸減投薬レジメンである。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質および第２の薬剤の投与量が独立に均一であるまたは独立に変化する。特定の実施形態では、製品（キット）が、抗炎症剤、免疫調節剤、アミノサリチル酸および抗生物質のいずれかから選択される追加の薬剤を含む。１種または複数の追加の薬剤の選択は、投薬量、送達および治療される疾患状態に依存する。
【０２０７】
免疫関連障害の治療方法および免疫関連障害における抗体サイトカイングラフトタンパク質の使用
治療または予防の対象となる状態
抗体サイトカイングラフトタンパク質は、免疫関連障害の治療、改善または予防において用途を見出している。一態様では、本開示は、治療上有効量の本明細書に記載される抗体サイトカイングラフトタンパク質を個体に投与するステップを含む、治療を必要とする個体の免疫関連障害を治療する方法を提供する。本開示はまた、一態様で、治療剤として使用するための抗体サイトカイングラフトタンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、個体の免疫関連障害の治療または予防において治療剤として使用するための抗体サイトカイングラフトタンパク質が提供される。いくつかの実施形態では、治療を必要とする個体の免疫関連障害を治療するための医薬品を製造するための抗体サイトカイングラフトタンパク質の使用が提供される。さらなる態様では、本開示は、治療または改善を必要とする個体の免疫関連障害の治療または改善に使用するためのこのような抗体サイトカイングラフトタンパク質を含む組成物を提供する。
【０２０８】
治療目的については、個体が免疫関連障害を有し得る。防止または予防目的については、個体は免疫関連障害の活性状態からの寛解にあり得る、または将来の発症が予想され得る。いくつかの実施形態では、患者が免疫関連障害を有する、免疫関連障害を有する疑いがある、または免疫関連障害からの寛解にある。抗体サイトカイングラフトタンパク質による治療の対象となる免疫関連障害は通常、本明細書に記載されるＩＬ１０受容体シグナル伝達の活性化からの利益を得る。治療の対象となる免疫関連障害には、限定されないが、症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、乾癬、Ｉ型糖尿病、急性膵炎、ブドウ膜炎、シェーグレン病、ベーチェット病、サルコイドーシスおよび移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）が含まれる。
【０２０９】
抗体サイトカイングラフトタンパク質の投与
医師または獣医師は、所望の治療効果を達成するのに必要とされるより低いレベルで医薬組成物に使用される抗体サイトカイングラフトタンパク質の用量を開始し、所望の効果が達成されるまで、投与量を徐々に増加させることができる。一般に、本開示の組成物の有効用量は、治療される具体的な疾患または状態、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトであるか動物であるか、投与される他の医薬品、および治療が予防的であるか治療的であるかを含む多くの異なる因子に応じて変化する。治療投与量は、典型的には安全性および有効性を最適化するために滴定を要する。抗体サイトカイングラフトタンパク質の投与のために、投薬は約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、より通常は０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ宿主体重に及ぶ。例えば、投薬は１ｍｇ／ｋｇ体重または１０ｍｇ／ｋｇ体重または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内にあり得る。投薬は、毎日、毎週、隔週、毎月または必要もしくは所望により多かれ少なかれ頻繁にすることができる。例示的な治療レジメンは、１週間に１回、２週間毎に１回、または１ヶ月に１回、または３〜６ヶ月毎に１回の投与を伴う。
【０２１０】
抗体サイトカイングラフトタンパク質は、単一用量または分割用量で投与することができる。抗体サイトカイングラフトタンパク質は通常、複数の時に投与される。単一投薬間の間隔は、必要または所望により、毎週、隔週、毎月または毎年とすることができる。間隔はまた、患者の抗体サイトカイングラフトタンパク質の血中レベルを測定することによって示されるように不規則とすることもできる。いくつかの方法では、投薬量が１〜１０００μｇ／ｍｌの血漿中抗体サイトカイングラフトタンパク質濃度、いくつかの方法では２５〜３００μｇ／ｍｌを達成するように調整される。あるいは、抗体サイトカイングラフトタンパク質を徐放製剤として投与することができ、この場合、あまり頻繁でない投与が要求される。投薬量および頻度は、患者中の抗体サイトカイングラフトタンパク質の半減期に応じて変化する。一般に、抗体サイトカイングラフトタンパク質は天然サイトカイン（例えば、ＩＬ１０）よりも長い半減期を示す。投薬量および投与頻度は、治療が予防的であるか治療的であるかに応じて変化し得る。一般に、予防的適用については、比較的低い投薬量が長期間にわたって比較的まれな間隔で投与される。生涯にわたって治療を受け続ける患者もいる。一般に、治療的適用については、疾患の進行が減少または停止するまで、好ましくは患者が疾患の症状の部分的または完全な改善を示すまで、比較的短い間隔での比較的高い投薬量がしばしば要求される。その後、患者に予防的レジメンを投与することができる。
【０２１１】
第２の薬剤との同時投与
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、１種または複数の追加の薬理学的薬剤と同時投与される。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質と追加の１種または複数の薬剤が混合物として投与される。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質と追加の１種または複数の薬剤が別個の製剤として投与される。別個の製剤が利用される特定の実施形態では、投与が同時である。別個の製剤が利用される特定の実施形態では、投与が連続的である。別個の製剤が利用される特定の実施形態では、投与が同じ経路を介する。別個の製剤が利用される特定の実施形態では、投与が異なる経路を介する。抗体サイトカイングラフトタンパク質と同時投与するための例示的な追加の薬剤には、限定されないが、抗炎症剤、免疫調節剤、アミノサリチル酸および抗生物質が含まれる。適切な選択は好ましい製剤、投薬量および／または送達方法に依存し得る。抗体サイトカイングラフトタンパク質はまた、免疫関連障害状態を治療するための追加の確立された処置、例えば外科手術との併用療法に用途を見出している。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が抗炎症剤と同時投与される。特定の実施形態では、副腎皮質ステロイド抗炎症剤が抗体サイトカイングラフトタンパク質と併せて使用され得る。使用するための副腎皮質ステロイドは、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、ブデニソニド、メサラミンおよびデキサメタゾンのいずれかから選択され得る。適切な選択は製剤および送達の選択に依存する。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が免疫調節剤と同時投与される。特定の実施形態では、免疫調節剤が、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、シクロスポロリンＡ、タクロリムスおよびメトトレキサートのいずれかから選択される。特定の実施形態では、免疫調節剤が、抗ＴＮＦ剤（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ゴリムマブ）、ナタリズマブおよびベドリズマブから選択される。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質がアミノサリチル酸剤と同時投与される。特定の実施形態では、アミノサリチル酸剤が、スルファサラジン、メサラミン、バルサラジド、オルサラジンまたは５−アミノサリチル酸の他の誘導体から選択される。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、抗体サイトカイングラフトタンパク質が抗菌剤と同時投与される。例示的な抗菌剤には、限定されないが、スルホンアミド（例えば、スルファニルアミド、スルファジアジン、スルファメトキサゾール、スルフィソキサゾール、スルファセタミド）、トリメトプリム、キノロン（例えば、ナリジクス酸、シノキサシン、ノルフロキサシン、シプロフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシン、フレロキサシン、ペルロキサシン、レボフロキサシン、ガレノキサシンおよびゲミフロキサシン）、メテナミン、ニトロフラントイン、ペニシリン（例えば、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、メチシリンオキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、ナフシリン、アンピシリン、アモキシシリン、カルベニシリン、チカルシリン、メズロシリンおよびピペラシリン）セファロスポリン（例えば、セファゾリン、セファレキシン、セファドロキシル、セフォキシチン、セファクロル、セフプロジル、セフロキシム、セフロキシムアセチル、ロラカルベフ、セフォテタン、セフォラニド、セフォタキシム、セフポドキシムプロキセチル、セフィブテン、セフジニル、セフジトレンピボルキシル、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフォペラゾン、セフタジジムおよびセフェピン）、カルバペネム（例えば、イミペネム、アズトレオナム）およびアミノグリコシド（例えば、ネオマイシン、カナマイシン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、トラマイシン、ネチルマイシンおよびアミカシン）が含まれる。
【実施例】
【０２１６】
実施例１：免疫グロブリン−ＩＬ１０グラフト構築物の作製
単量体ＩＬ１０配列を種々の免疫グロブリン足場のＣＤＲ領域中に操作することによって、グラフト構築物ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ２、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ３、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ４、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ５、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ６、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ７、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ８、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ９、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１０、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１１、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１２、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１４およびＩｇＧＩＬ１０Ｍ１５を生成し、次いで、重鎖免疫グロブリン鎖と軽鎖免疫グロブリン鎖の両方を製造して最終的なタンパク質構築物を生成した。ＩｇＧＩＬ１０Ｍグラフト構築物はＩＬ１０の好ましい治療的抗炎症特性を与えるが、ＩｇＧＩＬ１０Ｍグラフト構築物はｒｈＩＬ１０と比較して低下した相対的炎症促進活性を有する。
【０２１７】
抗体サイトカイングラフトタンパク質を作製するために、残基１３４と１３５との間に６アミノ酸リンカーを有する全長ＩＬ１０（配列番号２０９）の残基１９〜１７８を含む単量体ＩＬ１０（ＩＬ１０Ｍ）を免疫グロブリン鎖足場の種々のＣＤＲループに挿入した。グラフト構築物を、臨床設定で利用されている種々の公知の免疫グロブリン配列ならびに生殖系列抗体配列を用いて調製した。ＧＦＴＸ１およびＧＦＴＸ３と呼ばれる２つの例示的な足場のＩＬ１０Ｍの配列を表１に示す。挿入点を、入手可能な構造的または相同性モデルデータに基づいてＣＤＲループの中央点となるよう選択した。抗体サイトカイングラフトタンパク質を、関連配列をコードする組換えＤＮＡを利用する標準的な分子生物学的方法論を用いて製造した。
【０２１８】
例えば、６つのＣＤＲの１つに挿入されたＩＬ１０Ｍを含む各抗体の可変領域を合成した。可変領域をコードするＤＮＡを、ＰＣＲを介して増幅し、得られた断片を、軽鎖定常領域または重鎖定常領域のいずれかとＦｃ領域を含むベクターにサブクローニングした。このようにして、ＩＬ１０Ｍの６ＣＤＲ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）の各々への挿入に対応するＩＬ１０Ｍ抗体サイトカイングラフトタンパク質を作製した。得られた構築物を表１に示す。重鎖および軽鎖ベクターの適切な組合せのトランスフェクションは、２個のグラフトＩＬ１０Ｍ分子（各Ｆａｂアーム中１個のＩＬ１０単量体）を有する組換え抗体の発現をもたらす。図２を参照されたい。
【０２１９】
どのＣＤＲをサイトカイングラフトに選択するかという選択を、必要な生物学、生物物理学特性および好ましい発達プロファイルのパラメータで選択する。この時、モデル化ソフトウェアは、どのＣＤＲおよびＣＤＲ内のどの位置が所望のパラメータを提供するかを予測することにおいて部分的に有用であるにすぎず、そのため、６個全ての可能な抗体サイトカイングラフトを作製し、次いで、生物学的アッセイで評価する。必要な生物学的活性が達成されたら、抗体サイトカイングラフト分子の構造分析などの生物物理学的特性を解明した。
【０２２０】
ＩＬ１０をＣＤＲにグラフトすることによって、抗体サイトカイングラフトタンパク質の抗体部分は、以下に論じられるようにＩＬ１０受容体との結合に影響を及ぼす独特の構造を有するＩＬ１０単量体を提供する。抗体部分によるオフターゲット効果はない。さらに、抗体サイトカイングラフトタンパク質のＦｃ部分を、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）およびＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）に関して完全にサイレントとなるよう修飾した。
【０２２１】
要約すると、各ＣＤＲへの挿入点を、ＣＤＲへのグラフトがあるレベルの立体障害をＩＬ１０受容体の個々のサブユニットに提供するという仮説を用いた構造原則で選択した。どのＣＤＲグラフトが特定のサイトカインにとって最良であるかの最終的な選択は、所望の生物学および生物物理学的特性に基づく。サイトカイン受容体の性質、サイトカイン／受容体相互作用およびシグナル伝達の機構も役割を果たし、これを、それぞれの特性について各個々の抗体サイトカイングラフト分子を比較することによって解明した。例えば、ＩＬ１０の軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲＬ１）へのグラフトは、活性化単球の所望の生物学的活性をもたらしたが、ＮＫ細胞などの他の細胞についてはもたらさなかった。これは、例示的な抗体サイトカイングラフトタンパク質ＩｇＧＩＬ１０Ｍ７およびＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３で見られた。
【０２２２】
【表１−１】
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【０２２３】
【表１−２】
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【０２２４】
【表１−３】
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【０２２５】
【表１−４】
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【０２２６】
【表１−５】
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【０２２７】
【表１−６】
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【０２２８】
【表１−７】
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【０２２９】
【表１−８】
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【０２３０】
【表１−９】
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【０２３１】
【表１−１０】
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【０２３２】
【表１−１１】
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【０２３３】
【表１−１２】
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【０２３４】
【表１−１３】
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【０２３５】
【表１−１４】
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【０２３６】
【表１−１５】
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【０２３７】
【表１−１６】
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【０２３８】
【表１−１７】
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【０２３９】
【表１−１８】
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【０２４０】
【表１−１９】
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【０２４１】
【表１−２０】
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【０２４２】
【表１−２１】
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【０２４３】
【表１−２２】
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【０２４４】
【表１−２３】
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【０２４５】
【表１−２４】
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【０２４６】
【表１−２５】
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【０２４７】
【表１−２６】
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【０２４８】
【表１−２７】
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【０２４９】
【表１−２８】
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【０２５０】
【表１−２９】
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【０２５１】
【表１−３０】
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【０２５２】
【表１−３１】
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【０２５３】
【表１−３２】
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【０２５４】
【表１−３３】
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【０２５５】
【表１−３４】
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【０２５６】
【表１−３５】
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【０２５７】
【表１−３６】
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【０２５８】
【表１−３７】
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【０２５９】
【表１−３８】
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【０２６０】
【表１−３９】
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【０２６１】
【表１−４０】
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【０２６２】
【表１−４１】
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【０２６３】
【表１−４２】
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【０２６４】
【表１−４３】
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【０２６５】
【表１−４４】
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【０２６６】
【表１−４５】
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【０２６７】
【表１−４６】
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【０２６８】
【表１−４７】
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【０２６９】
【表１−４８】
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【０２７０】
【表１−４９】
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【０２７１】
実施例２：抗体サイトカイングラフトタンパク質は抗炎症活性を有する
診療所においてｒｈＩＬ１０の炎症促進活性の裏付けで開発されたアッセイ（Lauw et al., J Immunol. 2000; 165(5):2783-9）を用いて、ヒト全血中のＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３の炎症促進活性を評価した。炎症促進活性を評価するために、抗体サイトカイングラフトタンパク質を、活性化一次ヒトＣＤ８  Ｔ細胞においてインターフェロンγ（ＩＦＮγ）またはグランザイムＢを誘導するその能力について特性を明らかにした。ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３などの抗体サイトカイングラフトタンパク質が、ＩＦＮγ産生によって測定されたとき、組換えヒトＩＬ１０（ｒｈＩＬ１０）よりも有意に低い炎症促進活性を示すことが分かった。このデータを図３Ａに示す。同様の結果が、グランザイムＢを測定するアッセイ（データは示さず）ならびに他の例示的な抗体サイトカイングラフトタンパク質（ＩｇＧＩＬ１０Ｍ７）でも見られた。ｒｈＩＬ１０と比較して有意に低下した、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３によって示される炎症促進活性は、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３をより広い用量範囲にわたって投与することができるので、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３が免疫関連障害を治療するのにｒｈＩＬ１０よりも優れていることを示している。
【０２７２】
抗炎症活性を調べるため、抗体サイトカイングラフトタンパク質およびｒｈＩＬ１０を、ヒト全血中でＬＰＳ誘導ＴＮＦαを阻害するその能力について試験した。このデータを図３Ｂに示す（ｒｈＩＬ１０またはＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３の濃度が上昇するとＴＮＦα産生が減少した）。ｒｈＩＬ１０およびＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３曲線が類似であり、両分子が強力な抗炎症活性を有していたことを示していることに留意されたい。
【０２７３】
要約すると、これらの結果は、抗体サイトカイングラフトタンパク質が、ＩＬ１０と同様の抗炎症特性を有するが、用量制限がなく、不要な炎症促進特性もないという所望の特性を有することを示している。
【０２７４】
実施例３：ＩＬ１０依存性シグナル伝達
ヒトＰＢＭＣおよび全血におけるインビトロシグナル伝達試験は、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３などの抗体サイトカイングラフトタンパク質が、ｒｈＩＬ１０と比較するとより特異的なシグナル伝達プロファイルを有したことを示す。ＣｙＴＯＦ、質量分析を利用するＦＡＣＳに基づく方法を用いて、全血中の複数の異なる細胞集団の抗体サイトカイングラフトタンパク質シグナル伝達をｐＳＴＡＴ３検出によって評価した（図４）。ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３などの抗体サイトカイングラフトタンパク質は、μＭ濃度より上（最大１．８μＭ）で単球、マクロファージおよび形質細胞様樹状細胞上でのみｐＳＴＡＴ３シグナルを誘導した。これらの細胞型の全てがＩＬ１０受容体の発現増加を有することが知られている。ｒｈＩＬ１０は、単球上だけでなく、Ｔ細胞、Ｂ細胞およびＮＫ細胞などのさらなる細胞型上でもｐＳＴＡＴ３シグナルを誘導した。これは、低いｎＭ濃度のｒｈＩＬ１０でさえ見られた。１００ｎＭの濃度のｒｈＩＬ１０で処理した全血では、ｐＳＴＡＴ３シグナルが単球および骨髄樹上細胞で見られ、Ｔ、ＮＫ、Ｂ細胞および顆粒球のさらなる中程度の活性化が見られた。ｐＳＴＡＴ３シグナル伝達の機能的重要性は、ＣＤ８  Ｔ細胞およびＮＫ細胞からのＩＦＮγおよびグランザイムＢの産生増加をもたらす。ｒｈＩＬ１０シグナル伝達に応答したＢ細胞の増殖も存在する。ヒト全血におけるｒｈＩＬ１０のこの炎症促進活性は、抗炎症ＩＣ９０より上の５倍未満の曝露で観察される。ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３などの抗体サイトカイングラフトタンパク質のより選択的な細胞プロファイルは、より優れた抗炎症有効性につながる炎症促進活性の低下をもたらした。
【０２７５】
実施例４：種々の種における抗体サイトカイングラフトタンパク質シグナル伝達
ｒｈＩＬ１０は、ヒト単球、ＰＢＭＣおよび全血においてＬＰＳ誘導炎症性サイトカイン産生を強力に阻害する。抗体サイトカイングラフトタンパク質ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３は、標的細胞上でｐＭ効力を示すが、ｒｈＩＬ１０よりも効果が１０倍少ない。表２は、ヒト全血ならびに選択された毒性種の全血におけるＩＬ１０またはＩｇＧＬ１０Ｍ１３活性についての効力比較である。
【０２７６】
効力計算は、マウス、カニクイザルまたはヒトからの体外全血アッセイに基づく。試験する各種について、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３またはｒｈＩＬ１０を滴定し、ＬＰＳ誘導ＴＮＦα産生を阻害する能力について評価した。ＩＣ５０を、全ＴＮＦαシグナルの５０％阻害をもたらす分子レベルとして計算した。ＩＣ９０およびＩＣ３０を、以下の式を用いて、各アッセイについてのＨｉｌｌ勾配値を考慮して計算した：
ｌｏｇＥＣ５０＝ｌｏｇＥＣＦ−（１／Ｈｉｌｌ勾配）＊ｌｏｂ（Ｆ／１００−Ｆ））（ＥＣＦは全ＴＮＦαシグナルのＦ％の応答を与える濃度である）。
【０２７７】
【表２】
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【０２７８】
実施例５：抗体サイトカイングラフトタンパク質薬物動態の評価
ｒｈＩＬ１０は半減期が短いため、その標的組織曝露は限定され、患者が複数回投薬を受けることが要求される。抗体サイトカイングラフトタンパク質の半減期をＣ５７Ｂｌ／６マウスで評価した。抗体サイトカイングラフトタンパク質（例えば、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３）を０．２ｍｇ／ｋｇで皮下注射し、注射５分後に開始し、注射１４４時間後まで血液をサンプリングした。ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３は、約１時間の半減期を有するｒｈＩＬ１０（図５Ａ）と比較して、約４．４日の有意な半減期延長（図５Ｂ）を有していた。
【０２７９】
実施例６：抗体サイトカイングラフトタンパク質薬力学の評価
半減期延長と一致して、抗体サイトカイングラフトタンパク質はまた、薬力学の改善も実証した。ＩＬ１０受容体活性化およびシグナル伝達のマーカーであるホスホ−ＳＴＡＴ３（ｐＳＴＡＴ３）を、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３の皮下投与後にマウス結腸で監視した。少なくとも最大投与７２時間後にｐＳＴＡＴ３シグナル増強が検出され、投与１４４時間後までには存在しなくなった。図５Ｃを参照されたい。このプロファイルは、投与２４時間後までにはシグナルが存在しなくなるｒｈＩＬ１０に対する劇的な改善である。図５Ｄは、抗体サイトカイングラフトタンパク質投薬後のＬＰＳ曝露に応じた血中のＴＮＦαの阻害によって測定されるとき、ｒｈＩＬ１０と比較して改善したＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３のインビボ応答の持続時間を示している。
【０２８０】
実施例７：マウスモデルにおける抗体サイトカイングラフトタンパク質の有効性
ＬＰＳ曝露後のＴＮＦα阻害についての有効性の直接比較を行った。Ｃ５７／ＢＬ６マウスに、ビヒクル、または組換えＩＬ１０とＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３の両方について計算した１１０ｎｍｏｌ／マウスの等モルレベルのＩＬ１０を皮下投与した。次いで、マウスに腹腔内送達されるＬＰＳを曝露して、ＴＮＦαレベルのＩＬ１０依存性阻害を評価した。ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３は、ＴＮＦα産生によって測定されたとき、０．５時間の最初の評価時間でｒｈＩＬ１０に匹敵する有効性を実証したが、少なくとも投与４８時間後まで、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３はｒｈＩＬ１０に対して優れた有効性を維持した。このデータを図６に示す。
【０２８１】
実施例８：抗体サイトカイングラフトタンパク質は改善した曝露を有する
抗体サイトカイングラフトタンパク質のピーク血清濃度（Ｃｍａｘ）をＣ５７Ｂｌ／６マウスで評価した。抗体サイトカイングラフトタンパク質を０．９％食塩水中０．２ｍｇ／ｋｇ（１０ｍｌ／ｋｇ用量体積）で皮下注射し、注射１時間後に開始し、注射１４４時間後まで血液をサンプリングした。各時点で、全血をヘパリン処理管に回収し、４℃で１０分間、１２５００ｒｐｍで遠心分離した。血漿上清を回収し、全時点を回収するまで−８０℃で保存した。血漿中の抗体サイトカイングラフトタンパク質レベルを２つの異なる免疫測定法を用いて測定して、抗体サイトカイングラフトタンパク質のＩＬ１０と抗体ドメインの両方の検出を可能にした。図７に示されるように、抗体サイトカイングラフトタンパク質（例えば、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３）は、過去１００時間６０％超のＣｍａｘを維持した。対照的に、ｒｈＩＬ１０レベルは３．５時間以内に２０％未満のＣｍａｘに低下した。
【０２８２】
実施例９：抗体サイトカイングラフトタンパク質はヒト患者において一定の細胞型にのみ作用する
ヒトの健康なドナーおよびクローン病の患者の免疫細胞に対して、ＣｙＴＯＦを前記のように実行した（実施例３ならびに以下の材料および方法参照）。図８のグラフに示されるように、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３は単球のみを刺激し、ｐＳＴＡＴ３レベルによって測定される刺激はｒｈＩＬ１０に匹敵する。単球はクローン病および潰瘍性大腸炎などの炎症関連障害に関する標的細胞であり、非常に高レベルのＩＬ１０受容体を発現する。しかしながら、図９はまた、ｒｈＩＬ１０の不要な炎症促進効果、例えば、ＣＤ４  Ｔ細胞、ＣＤ８  Ｔ細胞およびＮＫ細胞でのｐＳＴＡＴ３シグナル伝達増加を示す。ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３が、正常なヒト細胞またはクローン病患者からとった細胞のいずれにおいてもこの望ましくない炎症促進効果を示さないことは注目に値する。このことは、抗体サイトカイングラフトタンパク質の投与が所望の細胞型にのみ作用し、クローン病および潰瘍性大腸炎などの免疫関連障害を悪化させるにすぎないＣＤ８  Ｔ細胞などの他の細胞型には作用しないので、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３がより大きく、安全な治療指数を有することを実証している。
【０２８３】
実施例１０：ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３は、ｒｈＩＬ１０と比較して低下したＰＨＡ刺激ヒト全血中での炎症促進活性を有する
遺伝的ＩＬ１０欠損とＩＢＤ感受性を関連付ける広範な臨床データにもかかわらず、ｒｈＩＬ１０はＩＢＤ臨床試験において軽度の有効性しか示さなかった（Herfarth et al., Gut 2002: 50(2):146-147）。試験データの遡及的分析は、ｒｈＩＬ１０の有効性が、ＩＦＮγの産生増加などのその固有の炎症促進活性によって限定されることを示唆している。前に論じられるように、ヒト機能的細胞ベースアッセイで、ｒｈＩＬ１０シグナル伝達は、Ｔ細胞およびＮＫ細胞からのＩＦＮγおよびグランザイムＢの産生をもたらす。
【０２８４】
クローン病の患者から全血を採取し、ｒｈＩＬ１０、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３およびＰＨＡ単独による刺激後にＩＦＮγレベルを測定した。このデータを図９Ａ〜図９Ｃに示す。ｒｈＩＬ１０の用量増加はＩＦＮγの鋭い増加を引き起こし、次いでこれが定常に達する。対照的に、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３によるこれらの細胞の処理では、ＩＦＮγの産生がごくわずかしか〜全く見られず、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３がＴ細胞またはＮＫ細胞からＩＦＮγ産生を誘導しなかったまたはごく低レベルでしか誘導しなかったことを示している。
【０２８５】
これらの患者ドナー試料を用いて追加の滴定実験を行った。この実験では、ドナー患者血清からのＩＬ１０レベルを測定し、これが１．５〜５フェムトモル濃度（ｆＭ）の範囲にあることを見出したが、科学文献は、患者のＩＬ１０レベルが２０ｆＭにもなり得ると報告している（Szkaradkiewicz et al., Arch. Immunol. Ther Exp 2009: 57(4):291-294）。ｒｈＩＬ１０を２フェムトモル濃度（ｆＭ）、２ｐＭ、２ｎＭおよび２００ｎＭの固定濃度でドナー患者細胞に投与した。これらの固定濃度のｒｈＩＬ１０に、増加する濃度の抗体サイトカイングラフトタンパク質ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３を投与し、ＩＦＮγ産生をアッセイした。データを図９Ｄに示す。２ｆＭおよび２ｐＭの固定濃度では、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３はｒｈＩＬ１０に競合し、ＩＦＮγ産生をベースラインレベルに低下させた。２ｎＭの固定濃度では、ＩＦＮγ産生がナノモル濃度のＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３によって減少した。最終的に、２００ｎＭ  ｒｈＩＬ１０の固定過剰濃度では、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３によるＩＦＮγ産生のごくわずかな減少しか見られなかった。このことは、生理学的レベルのＩＬ１０で、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３がＩＬ１０と競合し、ＩＦＮγの産生および不要な炎症促進効果を減少させることを示している。
【０２８６】
実施例１１：抗体サイトカイングラフトタンパク質の凝集特性
ＩＢＤに関する臨床試験では、ｒｈＩＬ１０が極めて短い半減期を有することが認められた；しかしながら、半減期を延ばすためのＩＬ１０二量体との単一Ｆｃ融合物は、このような分子には凝集特性があるので、追求されなかった。図１０Ａは、Ｆｃと結合したＩＬ１０野生型とＦｃと結合したＩＬ１０単量体の両方の凝集を示している。しかしながら、図１０Ｂに示されるように、抗体サイトカイングラフトタンパク質の抗体構造はＩＬ１０凝集を防ぐので、投与の容易さを促進する。さらに、凝集の低下は、治療剤に対する免疫反応および抗薬物抗体の産生を減らすという利益を有する。
【０２８７】
実施例１２：抗体サイトカイングラフトタンパク質の保持された結合
パリビズマブは抗ＲＳＶ抗体であり、これをサイトカイングラフトのための抗体構造として選択した。この抗体は公知の構造という利点を有し、その標的がヒト以外の標的であるＲＳＶであった。ヒト以外の標的の選択は、オフターゲットヒト抗原との抗体サイトカイングラフトタンパク質結合に関連する毒性がないことを保障するためであった。ＩＬ１０Ｍのパリビズマブへのグラフト後も、最終的なＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質がＲＳＶ標的タンパク質に依然として結合するかどうかは不確実であった。ＥＬＩＳＡによって分析されるように、ＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質は、ＩＬ１０Ｍの存在にもかかわらず、ＲＳＶ標的タンパク質に依然として結合していた。このデータを図１１に示す。
【０２８８】
実施例１３：抗体サイトカイングラフトタンパク質の構造的コンフォメーションは細胞型にわたる示差的活性をもたらす
抗体サイトカイングラフトタンパク質（例えば、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３）では、単量体ＩＬ１０（配列番号２０９）が抗体の軽鎖ＣＤＲ１に組み込まれている（図２）。ＩＬ１０のＤヘリックスとＥヘリックスとの間の６アミノ酸グリシン−セリンリンカーの挿入によって、通常はヘテロ二量体の分子が、ドメイン交換二量体化できなくなる。よって、ＩＬ１０Ｍの抗体へのグラフトによって、２個の単量体ＩＬ１０分子を有する抗体サイトカイングラフトタンパク質が得られる。しかしながら、抗体Ｆａｂアームの可撓性のために、ＩＬ１０単量体間の角度および距離は野生型ＩＬ１０二量体のように固定されないので、ＩＬ１０Ｒ１／Ｒ２受容体複合体との相互作用に影響を及ぼす。これを図１２に図表で示す。具体的には、抗体グラフトのために、グラフトＩＬ１０二量体の角度がより大きく、可変的になり、ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞、Ｂ細胞およびＮＫ細胞などの炎症促進性細胞型で見られるように低いＩＬ１０Ｒ１およびＲ２の発現レベルを有する細胞上のシグナル伝達があまり効率的でなくなる。対照的に、抗体サイトカイングラフトタンパク質は、単球などの高いＩＬ−１０Ｒ１およびＲ２発現を有する細胞上でより効率的にシグナル伝達する。ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３のクラス平均陰性株ＥＭ試験は、さらなる可撓性および単量体間のより広い角度を強調し、ｒｈＩＬ１０と比較して幾何学が変化したことを確認している。ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３中のＩＬ１０二量体のより制限された幾何学は、ＩＬ１０Ｒ複合体との相互作用を変化させる。結果として、ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３抗体サイトカイングラフトタンパク質の構造が、高レベルのＩＬ１０Ｒ１およびＲ２発現を有する細胞型上で増殖性シグナルを生成するだけであるという生物学的効果をもたらす。
【０２８９】
実施例１４：ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３の結晶構造
ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３  Ｆａｂを、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ８．０、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ中１６．２ｍｇ／ｍｌに濃縮し、懸滴蒸気拡散結晶化試験に直接使用した。結晶化スクリーンを、タンパク質溶液０．２μｌをリザーバー溶液０．２μｌと混合し、同じリザーバー溶液５０μｌに対して平衡化することによって設定した。データ収集のための結晶が、２０％ＰＥＧ３３５０、２００ｍＭ酢酸マグネシウム、ｐＨ７．９のリザーバー溶液から２０℃で３〜４週間後に現れた。データ収集前に、結晶を、２０％エチレングリコールを補充したリザーバー溶液に浸漬し、液体窒素にフラッシュ冷却した。回折データを、ＡＤＳＣ  Ｑｕａｎｔｕｍ  ３１５Ｒ検出器を用いてＡＬＳベースライン５．０．３で収集した。ＨＫＬ２０００ソフトウェアパッケージを用いてデータを索引付けおよびスケーリングした（Otwinowski and Minor. (1997) Methods in Enzymology, Volume 276: Macromolecular Crystallography, part A, p.307-326）。ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３  Ｆａｂについてのデータを、セル寸法ａ＝８０．６Å、ｂ＝１０４．７Å、ｃ＝８２．８Å、α＝９０°、β＝１１５．３°、γ＝９０°の空間群Ｐ２１中２．４０Åに処理した。探索モデルとしてのパリビズマブＦａｂ構造（ＰＤＢコード：２ＨＷＺ）および単量体ＩＬ１０構造（ＰＤＢコード：１ＬＫ３鎖Ａ）により、ＰＨＡＳＥＲ（McCoy et al., (2007) J. Appl. Cryst. 40:658-674）を用いて分子置換によって構造を解明した。分子置換により解かれた最上位の構造（the top molecular replacement solution）は、非対称単位の２分子のＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３  Ｆａｂを含んでいた。最終的なモデルをＣＯＯＴ（Emsley & Cowtan (2004) Acta Cryst. D60:2126-2132）で構築し、ＰＨＥＮＩＸ（Adams et al., (2010) Acta Cryst. D66, 213-221）で精緻化した。ＲｗｏｒｋおよびＲｆｒｅｅ値はそれぞれ１８．８％および２３．９％であり、理想結合長および結合角度の二乗平均平方根（ｒ．ｍ．ｓ）偏差値はそれぞれ０．００５Åおよび０．８８２°であった。
【０２９０】
全体構造
ＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３  Ｆａｂは、非対称単位であるが、共に類似のコンフォメーションを有する２つの分子で結晶化した。電子密度図は両分子で類似であった。全体構造（図１３Ａ）は、Ｆａｂおよびグラフト単量体ＩＬ１０（ＩＬ１０Ｍ）が共線配置をとり得ることを示している（Ｆａｂ軽鎖は白色、Ｆａｂ重鎖は黒色、ＩＬ１０Ｍは暗灰色）。図１３Ｂは、ＣＤＲ−Ｌ１のグラフト点のより近い図を示している。３個の隣接ＣＤＲ残基が暗灰色バーで示されている。破線は、おそらくこれらの領域の構造的可撓性による、電子密度の欠如のために、モデルに当てはまることができなかった構造の部分を示している。２つの領域は、グラフト点の直後のＩＬ１０ＭのＮ末端の６個残基およびＩＬ１０Ｍ中のヘリックス４とヘリックス５との間の８個の残基を含み、挿入された６残基リンカー（ＧＧＧＳＧＧ）（配列番号２５１）を包含する。グラフトＩＬ１０Ｍ分子とＦａｂ重鎖の部分との間に３対の水素結合相互作用も存在する（図１３Ｃ）。これらには、Ｒ１３８とＮ１０４（側鎖）、Ｒ１３５とＤ５６（側鎖）、およびＮ３８とＫ５８（主鎖／側鎖）が含まれる。
【０２９１】
材料および方法
抗炎症アッセイ（ＬＰＳ曝露ヒト全血）
アッセイ培地（グルタミン（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１０％熱不活性化ＦＢＳ（Ｏｍｅｇａ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）、５０μＭ  ２−メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ｐｈ７．４（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、０．１ｍＭ非必須アミノ酸（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｈｙｃｌｏｎｅ）および１×ヒトインスリン／トランスフェリン／セレン（Ｇｉｂｃｏ）を含むＲＰＭＩ１６４０）中１０００ｎｇ／ｍｌで、１０倍でＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質を調製した。アッセイ培地中各１０倍ストックのＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質を１：３系列希釈して１１点の用量滴定を作製した。
【０２９２】
ヒト全血をアッセイ培地中９０％に希釈し、穏やかに混合した。非刺激希釈全血をｎ＝３ウェルに蒔き（４５μｌ／ウェル）、アッセイ培地を添加して（５μｌ／ウェル）、最終ウェル体積を５０μｌとした。リポ多糖（ＬＰＳ、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎストック１００μｇ／ｍｌ）を希釈全血に２２０ｎｇ／ｍｌでスパイクとして添加し、穏やかに混合した。次いで、ＬＰＳスパイク全血を蒔き、ＩＬ１０タンパク質を各それぞれのウェルに添加し、次いで、穏やかに混合し、３７℃インキュベーター、５％ＣＯ２中で約２０時間インキュベートした。次いで、プレートを穏やかに混合し、室温で５分間、１４００ｒｐｍで遠心分離し、製造業者の指示に従ってヒトＴＮＦα  ＨＴＲＦキット（Ｃｉｓｂｉｏ（登録商標））を用いてＴＮＦα検出するために、アッセイプレートから代用プレートに１０μｌ／ウェル移すことによって上清を収集し、結果を、製造業者によって提供される対照を用いて作成した標準曲線と比較した。
【０２９３】
炎症促進アッセイ（ヒト一次ＣＤ８  Ｔ細胞活性化）
末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をＢｌｕｔｓｐｅｎｄｅ  Ｚｅｎｔｒｕｍ  Ｂａｓｅｌのバフィーコートから単離した。バフィーコート１つ当たり８本のＬｅｕｃｏｓｅｐチューブ（Ｇｒｅｉｎｅｒ、２２７２９０）にそれぞれＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ＰＬＵＳ（登録商標）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、１７−１４４０−０３）１５ｍｌを充填し、遠心分離した（１分、１０００ｇ、２０℃）。バフィーコートをリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ７．４（Ｇｉｂｃｏ、１００１０−０１５）に１：４希釈し、３５ｍｌを各Ｆｉｃｏｌｌ勾配上に置いた。遠心分離（８００ｇ、２０分、２０℃）後、リンパ球が白血球層に分離する。この細胞層を新しいチューブに移し、ＰＢＳで洗浄した。細胞ペレットを１チューブ当たり２ｍｌのＧｅｙの赤血球溶解緩衝液（１５５ｍＭ  ＮＨ４Ｃｌ、１０ｍＭ  ＫＨＣＯ３、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ）に再懸濁することによって、赤血球を溶解した。５分間インキュベートした後、細胞をＰＢＳで２回洗浄した。最後の洗浄後、ＰＢＭＣをＴ細胞培地（ＴＣＭ）に再懸濁した。ＴＣＭはＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ、２１８７５−０３４）、１０％ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ、１００８２１４７）、１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ、１５０７００６３）、２ｍＭ  ＧｌｕｔａＭａｘ（Ｇｉｂｃｏ、３５０５０−０３８）および５０Ｕ／ｍｌペニシリン、５０μｇ／ｍｌストレプトマイシンを含んでいる。ＰＢＭＣを４０μｍセルストレーナー（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ、７３４−０００２）を通して濾過して単一細胞懸濁液を得て、計数した。ＣＤ８＋Ｔ細胞を、Ｂｉｇ  Ｅａｓｙ  Ｍａｇｎｅｔ（登録商標）（ＳｔｅｍＣｅｌｌ、１８００１）についての製造業者のプロトコルに従って、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞濃縮キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ、１９０５３）を用いてＰＢＭＣから精製した。単離後、細胞を洗浄し、計数し、ＴＣＭに１．８×１０６個細胞／ｍｌの濃度で再懸濁した。抗ＣＤ３／ＣＤ２８コーディングプレート（２．１．１節参照）を１ウェル当たり２ｍｌのＴＣＭで１回洗浄し、引き続いて１ウェル当たり１ｍｌ中１．８×１０６個ＣＤ８＋Ｔ細胞を添加した。プレートを遠心分離し（５分、５２０ｇ、２０℃）、３７℃、５％ＣＯ２、湿度９５％のセルインキュベーター（Ｂｉｎｄｅｒ）で３日間インキュベートした。
【０２９４】
ＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質による刺激
３日間のインキュベーション後、活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞を２４ウェルプレートからプールし、ＴＣＭで１回洗浄した。細胞を計数し、ＴＣＭに３×１０６個細胞／ｍｌで再懸濁し、１００μｌ中３０００００個細胞／ウェルをＮｕｎｃｌｏｎ  Ｄｅｌｔａ  Ｓｕｒｆａｃｅ（登録商標）９６ウェル丸底プレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１６３３２０）に添加した。最終濃度の２倍のＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質予備希釈物を、以下の濃度で別個のプレート中ＴＣＭに調製した：４０、４、０．４、０．０４、０．００４および０ｎＭ。これらの予備希釈物１００μｌを、細胞懸濁液１００μｌに繰り返して添加して、２０、２、０．２、０．０２、０．００２および０ｎＭの抗体サイトカイングラフトタンパク質の最終濃度を得た。プレートを３７℃で４８時間インキュベートした。
【０２９５】
ＰＭＡおよび抗ＣＤ３刺激およびＧｏｌｇｉｓｔｏｐ
インキュベーション期間後、プレートを遠心分離し（２分、９７０ｇ、２０℃）、上清を捨てた。細胞ペレットを、２ｎｇ／ｍｌ酢酸ミリスチン酸ホルボール（ＰＭＡ、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、７９３４６）、２．５μｇ／ｍｌ抗ＣＤ３（ＢＤ、５５５３３６）および１：１５００ＧｏｌｇｉＳｔｏｐ（ＢＤ、５５４７２４）を含むＴＣＭ２００μｌに再懸濁した。プレートを３７℃で５時間インキュベートして細胞を再刺激した。その後、プレートを遠心分離し（２分、９７０ｇ、２０℃）、上清を捨て、氷冷ＰＢＳ２００μｌを添加して細胞ペレットを洗浄した。遠心分離（２分、９７０ｇ、２０℃）後、ＰＢＳを除去し、細胞を、２％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（Ｓｅｒｖａ、３９７９５）を含む氷冷２００ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．１）２００μｌに再懸濁して細胞を溶解した。プレートを１５分間氷上に放置し、遠心分離して（１０分、９７０ｇ、４℃）細片を除去した。上清を新たな９６ウェルプレートに慎重に移し、保存のために凍結した。インターフェロン−γ（上清中のＩＦＮ−γ）を検出するために、ヒトＩＦＮ−γ  ＤｕｏＳｅｔ（登録商標）ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、ＤＹ２８５）を製造業者のプロトコルに従って使用した。２．１．５節に記載されるように得られた上清を、推奨されるアッセイ希釈剤に１：２希釈した。上清中のグランザイムＢ（ＧｒｚＢ）を検出するために、ヒトグランザイムＢ（登録商標）ＥＬＩＳＡ（Ｍａｂｔｅｃｈ、３４８５−１Ｈ−２０）を製造業者のプロトコルに従って使用した。上清を推奨されるアッセイ希釈剤に１：５０希釈した。ＥＬＩＳＡプレートの光学濃度（ＯＤ）をＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）３４０ＰＣプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）によって取得し、自動的に作成される標準曲線に従ってＳｏｆｔＭａｘ（登録商標）Ｐｒｏソフトウェアにより濃度に変換した。データをＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌにエクスポートし、ここで濃度をその希釈計数に関して逆算した。
【０２９６】
ＩＬ１０依存性シグナル伝達
ＣｙＴＯＦは、単一因子による複数の細胞集団の活性化を同時に評価するためのＦＡＣＳ／質量分析技術である。抗体サイトカイングラフトタンパク質をヒト全血と２０分間インキュベートした。刺激後、ＰＢＭＣを、細胞特異的表面受容体ＣＤ１４、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ５６およびシグナル伝達マーカーｐＳＴＡＴ３に対する金属コンジュゲート抗体で処理し、ＣｙＴＯＦによって分析した。結果は、全ての用量のＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３が単球およびマクロファージ細胞集団を主に活性化し、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞および樹状細胞集団の活性化はほとんどなかったことを示している。逆に、ｒｈＩＬ１０は、試験した全ての細胞集団をある程度まで活性化した。
【０２９７】
薬物動態評価
抗体サイトカイングラフトタンパク質の半減期をＣ５７Ｂｌ／６マウスで評価した。抗体サイトカイングラフトタンパク質を０．９％生理食塩水中０．２ｍｇ／ｋｇ（１０ｍｌ／ｋｇ用量体積）で皮下注射し、注射１時間後に開始し、注射１４４時間後まで血液をサンプリングした。各時点で、全血をヘパリン処理管に回収し、４℃で１０分間、１２５００ｒｐｍで遠心分離した。血漿上清を回収し、全時点を回収するまで−８０℃で保存した。血漿中の抗体サイトカイングラフトタンパク質レベルを２つの異なる免疫測定法を用いて測定して、抗体サイトカイングラフトタンパク質のＩＬ１０と抗体ドメインの両方の検出を可能にした。第１の方法は、推奨されるように使用される商業的に入手可能なＩＬ−１０  ＥＬＩＳＡキットを利用した（ＢＤ  ＯｐｔＥＩＡ（登録商標）ヒトＩＬ１０  ＥＬＩＳＡセット、捕捉：ｒｈＩＬ１０／検出：ビオチン−ｒｈＩＬ１０）。第２の方法は、ＧｙｒｏＬａｂ（登録商標）ｘＰワークステーション（Ｇｙｒｏｓ  ＡＢ  Ｕｏｐｐｓａｌａ、スウェーデン）で実行されるＩＬ１０に基づく捕捉およびＦｃに基づく検出免疫測定法からなっていた。具体的には、使用される試薬が、ビオチン化ヒトＩＬ１０捕捉（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＢＡＦ２１７）およびＡｌｅｘａｆｌｕｏｒ  ６４７ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃγ特異的検出（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ＃１０９−６０５−０９８）からなっていた。アッセイは、Ｇｙｒｏｓ承認ウィザート法を用いて２００ｎＬ  ＣＤ（Ｇｙｒｏｓ＃Ｐ０００４１８０）で実行した。使用した緩衝液は、標準についてはＲｅｘｘｉｐ  Ａ（登録商標）（Ｇｙｒｏｓ＃Ｐ０００４８２０）、検出調製については試料希釈物およびＲｅｘｘｉｐ（登録商標）（Ｇｙｒｏｓ＃Ｐ０００４８２５）とした。Ｇｙｒｏｌａｂ（登録商標）データ分析ソフトウェアを用いて結果の分析を行った。
【０２９８】
薬力学評価
半減期延長と一致して、抗体サイトカイングラフトタンパク質はまた、薬力学の改善も実証した。ＩＬ１０Ｒ活性化のマーカーであるホスホ−ｓｔａｔ３（ｐＳＴＡＴ３）を、皮下投与後に標的組織（血液および結腸）で監視した。抗体サイトカイングラフトタンパク質を０．９％生理食塩水中０．２ｍｇ／ｋｇ（１０ｍｌ／ｋｇ用量体積）で皮下注射した。末端全血および結腸組織（回盲連結部２ｃｍ）を、注射１時間後に開始し、注射１４４時間後まで採取した。全血を、１×ホスファターゼ阻害剤（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｈａｌｔホスファターゼ阻害剤カクテル）を含むヘパリン処理管に回収し、ホスホ−Ｓｔａｔ３アッセイまで氷上に保持した。結腸組織を、冷ＰＢＳおよび１×ホスファターゼ阻害剤を含むチューブに回収した。いったん全ての組織を時点で回収したら、結腸組織を、鋼ビーズならびに１０μＭ  ＤＴＴ、１×プロテアーゼ阻害剤カクテル、１０×ホスファターゼ阻害剤カクテルおよび１０×細胞溶解緩衝液（Ａｃｔｉｖｅ  Ｍｏｔｉｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｅｘｔｒａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ）と共にＰＢＳを含む完全細胞溶解緩衝液７００μｌを含むチューブに移した。結腸組織を室温で５分間、３０ｒｐｓで組織ライザーによってホモジナイズした。溶解組織を４℃で１０分間１４０００×ｇで遠心分離した。上清を回収し、ホスホ−ＳＴＡＴ３アッセイまで氷上で保存した。
【０２９９】
ホスホ−Ｓｔａｔ３アッセイプレート（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）ｐＳＴＡＴ３（Ｔｙｒ７０５）アッセイ）を、全血および結腸組織の回収および処理と同じ日に実行した。用意した１×ホスファターゼ阻害剤２、１×ホスファターゼ阻害剤３および１×ホスファターゼ阻害剤を含む１×ＭＳＤ溶解緩衝液を用いて、氷冷全血を溶解した。全血の各チューブを４℃で１０分間、１２５００ｒｐｍで遠心分離した。血漿を回収し、捨てた。ペレット化全血をＭＳＤ溶解緩衝液＋阻害剤２２０μｌに再懸濁し、徹底的にボルテックスした。溶解した全血を５０μｌ／ウェルでホスホ−ＳＴＡＴ３アッセイプレートのそれぞれのウェルに蒔いた。Ｂｒａｄｆｏｒｄ  Ａｓｓａｙ（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて結腸組織上清タンパク質検出を行った。次いで、結腸タンパク質を５０μｌ／ウェルでホスホ−ＳＴＡＴ３アッセイプレートに蒔いた。プレートを室温で２時間インキュベートし、洗浄し、ホスホ−ＳＴＡＴ３または全ＳＴＡＴ３抗体（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）で処理した。ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ２４００（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）でプレートを相対蛍光単位（ＲＦＵ）について分析した。全血ホスホ−ＳＴＡＴ３  ＲＦＵを全ＳＴＡＴ３  ＲＦＵに正規化した。結腸タンパク質ホスホ−ＳＴＡＴ３  ＲＦＵを充填タンパク質濃度に正規化した。増強されたｐＳＴＡＴ３シグナルは、少なくとも最大投与７２時間後に両組織で検出され、投与１４４時間後までに存在しなくなる。図５を参照されたい（図示せず）。このプロファイルは、そのシグナルが投与２４時間後までに存在しなくなるｒｈＩＬ１０に対する劇的改善である。
【０３００】
体外有効性
ＬＰＳ曝露後のＴＮＦα阻害についての有効性の直接比較を行った。アッセイでは、Ｃ５７／Ｂｌ６マウスにビヒクル、０．２ｍｇ／ｋｇのＩｇＧＩＬ１０Ｍ１３（１０ｍｇ／ｋｇ用量体積）または等モルレベルのｒｈＩＬ１０を皮下投与した。全血を投与前、投与１．５時間後および最大投与１４４時間後に回収した。全血をヘパリン処理チューブに回収した。血液回収前に、アッセイ培地を調製した。アッセイ培地は、１０％熱不活性化ＦＢＳ（Ｏｍｅｇａ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）、５０μＭ  ２−メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ｐｈ７．４（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、０．１ｍＭ非必須アミノ酸（Ｈｙｃｌｏｎｅ）および１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を含むグルタミン（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を含むＲＰＭＩ１６４０を含んでいた。マウス全血を３８４ウェルプレート上２５μｌ／ウェル／複製／マウスに蒔いた。アッセイ培地を非刺激対照ウェルに添加して（２５μｌ／ウェル）、最終ウェル体積を５０μｌにした。ＬＰＳ曝露のために、ＬＰＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ストック１００μｇ／ｍｌ）を２００ｎｇ／ｍｌ［アッセイ中１００ｎｇ／ｍｌ最終］でアッセイ培地にスパイクとして添加し、穏やかに混合した。次いで、ＬＰＳスパイクＢＣＭを、マウス全血を含む各必要なウェルに２５μｌ／ウェルで蒔いた。プレートを穏やかに混合し、３７℃インキュベーター、５％ＣＯ２で２１時間インキュベートした。翌日、アッセイプレートを室温で５分間、１４００ｒｐｍで遠心分離した。各ウェルからの上清を回収し、全ての時点をアッセイするまで−８０℃で凍結した。いったん全時点を分析することができたら、上清をＭＳＤ  Ｖ−ｐｌｅｘ（登録商標）マウス炎症性トカインアッセイプレート（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）に蒔いた。ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒ  ２４００（登録商標）（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）でプレートをＴＮＦα（ｐｇ／ｍｌ）について分析した。
【０３０１】
免疫刺激アッセイ
ＭＣ／９細胞増殖
ＭＣ／９（マウス胎仔肝に由来する肥満細胞株）細胞増殖を刺激する能力を調べることによって、ＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質の免疫刺激活性を評価した。第１に、ＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質を、Ｔ−ＳＴＩＭを含まない増殖培地中７×で別個の３８４ウェルプレートに希釈した（７×＝７００ｎｇ／ｍｌ）。ＩＬ−４を陽性対照として含めた（７×＝１０００ｎｇ／ｍｌ、［最終］＝１４３ｎｇ／ｍｌ）。第２に、１．６７×１０４個細胞／ｍｌ  ＭＣ／９細胞３０μｌを、Ｔ−ＳＴＩＭを含まない培地中３８４ウェルＴＣ処理プレート（５００個細胞／ウェル）に蒔いた（アッセイ前の細胞の洗浄は必要なかった）。第３に、希釈ＩＬ１０抗体サイトカイングラフトタンパク質５μｌを細胞に添加した。プレートを、プレートミキサーを用いて手短に混合し、次いで、１０００ｒｐｍでパルス回転させた。プレートをカスタム多孔質蓋で覆って細胞に通気した。第４に、プレートを３７℃で７２時間インキュベートした。第５に、Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）３０μｌを細胞に添加し、室温で１０分間インキュベートし、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標）で読み取った（０．１秒間の読み取り）。
【０３０２】
Ｂ細胞増殖
ＰＢＭＣを上記のようにヒトバフィーコートから単離した。Ｂ細胞を単離するために、ヒトＢ細胞濃縮キット（登録商標）（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ、１９０５４）を、Ｂｉｇ  Ｅａｓｙ  Ｍａｇｎｅｔ（登録商標）（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ、１８００１）についての製造業者のプロトコルに従って使用した。単離後、Ｂ細胞をＢ細胞培地（ＢＣＭ）で洗浄し、計数し、４×１０５個細胞／ｍｌの濃度で再懸濁した。ＢＣＭは、ＲＰＭＩ１６４０、１０％ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ  １００８２１４７）、１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ、１５０７００６３）および２ｍＭ  ＧｌｕｔａＭａｘ（Ｇｉｂｃｏ、３５０５０−０３８）、１％非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ、１１１４００３５）および１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ、１１３６０−０３９）、５０Ｕ／ｍｌペニシリンおよび５０μｇ／ｍｌストレプトマイシンを含んでいる。単離Ｂ細胞を計数し、４×１０５個細胞／ｍｌの濃度でＢＣＭに再懸濁した。Ｂ細胞を刺激するために、８．４μｇ／ｍｌ抗ＣＤ４０および４０Ｕ／ｍｌ組換えヒトＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、２０２−ＩＬ−５０）を懸濁液に添加した。次いで、Ｂ細胞を１００μｌ中４×１０４個細胞の濃度でＮｕｎｃｌｏｎ  Ｄｅｌｔａ  Ｓｕｒｆａｃｅ（登録商標）９６ウェル丸底プレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１６３３２０）のウェルに添加した。最終濃度の２倍でのＩＬ１０抗体グラフトタンパク質予備希釈物を別個のプレートに調製した。以下の濃度を得て、化合物の滴定を行った：４０、４、０．４、０．０４、０．００４および０ｎＭ。これらの予備希釈物１００μｌを、細胞懸濁液１００μｌに繰り返して添加して、２０、２、０．２、０．０２、０．００２および０ｎＭの化合物の最終濃度ならびに４．２ｍｇ／ｍｌ抗ＣＤ４０および２０Ｕ／ｍｌ組換えＩＬ−２の最終濃度を得た。プレートを細胞培養液インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２、湿度９５％）中で５日間インキュベートした。５日間のインキュベーション後、チミジン組み込みアッセイによってＢ細胞の増殖を測定した。細胞に、３７℃で培養期間の最後の１６時間、ＢＣＭ２０μｌ中、１ウェル当たり０．５μ  Ｃｉ  ３Ｈ−チミジン（ＡＮＡＷＡ、ＡＲＴ−１７８）を瞬間適用した。ＴｏｍＴｅｃ９６００（登録商標）ハーベスターを用いて、細胞を製造業者のプロトコルに従って膜上に収穫した。膜をバッグに密封し、シンチレーション液を添加し、シンチレーションカウンターで放射活性を測定した。抗体グラフトタンパク質の各々について、２０ｎＭでの増殖の割合（「上部」）を、それぞれのバックグラウンドサイトカイン産生（「下部」）に関して、等モル量のｒｈＩＬ１０での増殖に対して計算した。得られた最大の％値を以下の式を用いて計算した：
最大の％＝（上部化合物−下部化合物）／（上部ｒｈＩＬ−１０−下部ｒｈＩＬ−１０）＊１００
化合物を３人以上のドナーで測定した場合、異なる実験系列の平均値を決定し、平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を計算した。
【０３０３】
本明細書に記載される実施例および実施形態は例示目的であること、およびこれに照らした種々の修正または変更が当業者によって示唆され、本出願および添付の特許請求の範囲の精神および範囲に含まれることが理解される。本明細書で引用される全ての刊行物、配列受託番号、特許および特許出願は、全ての目的のために全体が参照により組み込まれる。
【図１】
2019505173.tif 000053
【図２】
2019505173.tif 000054
【図３】
2019505173.tif 000055
【図４】
2019505173.tif 000056
【図５】
2019505173.tif 000057
【図６】
2019505173.tif 000058
【図７】
2019505173.tif 000059
【図８】
2019505173.tif 000060
【図９Ａ】
2019505173.tif 000061
【図９Ｂ】
2019505173.tif 000062
【図９Ｃ】
2019505173.tif 000063
【図９Ｄ】
2019505173.tif 000064
【図１０Ａ】
2019505173.tif 000065
【図１０Ｂ】
2019505173.tif 000066
【図１１】
2019505173.tif 000067
【図１２】
2019505173.tif 000068
【図１３】
2019505173.tif 000069
【配列表】
2019505173000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年8月17日(2018.8.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と；
（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と；
（ｃ）前記ＶＨまたは前記ＶＬのＣＤＲにグラフトしたインターロイキン１０（ＩＬ１０）単量体分子と
を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項２】
前記ＩＬ１０単量体分子が重鎖ＣＤＲにグラフトされている、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項３】
前記重鎖ＣＤＲがＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２またはＨＣＤＲ３である、請求項２に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項４】
前記ＩＬ１０単量体分子が前記ＨＣＤＲ１にグラフトされている、請求項３に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項５】
前記ＩＬ１０単量体分子が軽鎖ＣＤＲにグラフトされている、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項６】
前記軽鎖ＣＤＲがＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２またはＬＣＤＲ３である、請求項５に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項７】
前記ＩＬ１０単量体分子が前記ＬＣＤＲ１にグラフトされている、請求項６に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項８】
組換えヒトＩＬ１０と比較すると、Ｔ細胞またはＮＫ細胞のより少ない活性化が可能である、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項９】
ｒｈＩＬ１０よりも長い半減期を有する、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１０】
前記ＩＬ１０単量体分子が配列番号２０９からなる、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１１】
ＩｇＧクラス抗体重鎖をさらに含む、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１２】
前記ＩｇＧクラス重鎖がＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択される、請求項１１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１３】
前記ＣＤＲの標的タンパク質への結合特異性が前記グラフトＩＬ１０単量体分子の存在下で低下している、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１４】
前記ＣＤＲの標的タンパク質への結合特異性が前記グラフトＩＬ１０単量体分子の存在下で保持されている、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１５】
前記ＣＤＲの結合特異性が前記ＩＬ１０単量体分子のサイトカイン受容体結合特異性とは異なる、請求項１４に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１６】
前記ＣＤＲの結合特異性がヒト以外の標的に対するものである、請求項１４に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１７】
前記ＶＨまたはＶＬがヒト化またはヒトである、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１８】
（ｉ）（ａ）配列番号１９３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１９４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１９６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１９７のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１９８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉ）（ａ）配列番号９７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号９９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１００のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１０１のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１０２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｉｉ）（ａ）配列番号１のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号４のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｖ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号２０のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２１のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号２２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖ）（ａ）配列番号３３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号３５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号３６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号３７のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号３８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖｉ）（ａ）配列番号４９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５０のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号５１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号５２のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号５３のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号５４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖｉｉ）（ａ）配列番号６５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号６６のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号６７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号６８のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号６９のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号７０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｖｉｉｉ）（ａ）配列番号８１のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号８２のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号８３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号８４のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号８５のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号８６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｘ）（ａ）配列番号１１３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１１４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１１５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１１６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１１７のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１１８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘ）（ａ）配列番号１２９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１３０のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１３１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１３２のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１３３のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１３４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉ）（ａ）配列番号１４５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１４６のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１４７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１４８のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１４９のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１５０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｉ）（ａ）配列番号１６１のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１６２のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１６３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１６４のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１６５のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１６６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｉｉ）（ａ）配列番号１７７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１７８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１７９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１８０のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１８１のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１８２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｖ）（ａ）配列番号２１０のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２１１のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２１２のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号２１３のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２１４のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号２１５のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；または
（ｘｖ）（ａ）配列番号２２６のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２２７のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号２２８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号２２９のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２３０のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号２３１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項１９】
（ｉ）配列番号２０５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２０６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｉ）配列番号１０９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１１０を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｉｉ）配列番号１３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｖ）配列番号２９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３０を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｖ）配列番号４５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号４６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｖｉ）配列番号６１を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号６２を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｖｉｉ）配列番号７７を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号７８を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｖｉｉｉ）配列番号９３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号９４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｉｘ）配列番号１２５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１２６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｘ）配列番号１４１を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１４２を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｘｉ）配列番号１５７を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１５８を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｘｉｉ）配列番号１７３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１７４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｘｉｉｉ）配列番号１８９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１９０を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｘｉｖ）配列番号２２２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２２３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または
（ｘｖ）配列番号２３８を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２３９を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項２０】
低下したエフェクター機能に対応する修飾Ｆｃ領域をさらに含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項２１】
前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａの１つまたは複数から選択される突然変異を含む、請求項２０に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項２２】
前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａからなる群から選択される、請求項２１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項２３】
配列番号１９３のＨＣＤＲ１、配列番号１９４のＨＣＤＲ２、配列番号１９５のＨＣＤＲ３、配列番号１９６のＬＣＤＲ１、配列番号１９７のＬＣＤＲ２、配列番号１９８のＬＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域からなる抗体サイトカイングラフトタンパク質であって、ｒｈＩＬ１０と比較すると、Ｔ細胞またはＮ細胞の活性化が少ない抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項２４】
前記ＣＤＲの結合特異性がヒト以外の標的に対するものである、請求項２３に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項２５】
ｒｈＩＬ１０よりも長い半減期を有する、請求項２３に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
【請求項２６】
（ｉ）配列番号２４６の重鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列および配列番号２４７の軽鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列；
（ｉｉ）配列番号２４８の重鎖コードポリヌクレオチド配列および配列番号２４９の軽鎖コードポリヌクレオチド配列；
（ｉｉｉ）配列番号２４２の重鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列および配列番号２４３の軽鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列；または
（ｉｖ）配列番号２４４の重鎖コードポリヌクレオチド配列および配列番号２４５の軽鎖コードポリヌクレオチド配列
を含む単離核酸。
【請求項２７】
抗体サイトカイングラフトタンパク質の重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドをコードする請求項２６に記載の核酸と、場合により分泌シグナルとを含む、抗体サイトカイングラフトタンパク質の産生に適した組換え宿主細胞。
【請求項２８】
前記細胞が哺乳類細胞である、請求項２７に記載の宿主細胞。
【請求項２９】
請求項１から２６のいずれかに記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項３０】
治療上有効量の請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質を含む、治療または予防を必要とする個体の免疫関連障害を治療または予防するための医薬組成物。
【請求項３１】
（ｉ）（ａ）配列番号１９３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１９４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号１９５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１９６のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１９７のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１９８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；または
（ｉｉ）（ａ）配列番号９７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列番号９９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１００のＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１０１のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１０２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質を含む、免疫関連障害の治療のための医薬組成物。
【請求項３２】
前記免疫関連障害が、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、乾癬、Ｉ型糖尿病、急性膵炎、ブドウ膜炎、シェーグレン病、ベーチェット病、サルコイドーシスおよび移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）からなる群から選択される、請求項３０または３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記抗体サイトカイングラフトタンパク質が別の治療剤と組み合わせて投与される、請求項３０〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記治療剤が、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ゴリムマブ、ナタリズマブおよびベドリズマブからなる群から選択される抗ＴＮＦ剤である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記治療剤が、スルファサラジン、メサラミン、バルサラジド、オルサラジンおよび５−アミノサリチル酸の他の誘導体からなる群から選択されるアミノサリチル酸剤である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３６】
前記治療剤が、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、ブデニソニド、メサラミンおよびデキサメタゾンからなる群から選択される副腎皮質ステロイドである、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３７】
前記治療剤が抗菌剤である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３８】
請求項１から２５のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質を含む、それを必要とする患者の単球を活性化する剤。
【請求項３９】
単球が活性化され、Ｔ細胞もＮＫ細胞も活性化されない、請求項３８に記載の剤。
【請求項４０】
前記抗体サイトカイングラフトタンパク質がＴＮＦα産生を減少させる、請求項３８に記載の剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０３】
本明細書に記載される実施例および実施形態は例示目的であること、およびこれに照らした種々の修正または変更が当業者によって示唆され、本出願および添付の特許請求の範囲の精神および範囲に含まれることが理解される。本明細書で引用される全ての刊行物、配列受託番号、特許および特許出願は、全ての目的のために全体が参照により組み込まれる。
本発明は以下の態様を含み得る。
［１］
（ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変
領域（ＶＨ）と；
（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と；
（ｃ）前記ＶＨまたは前記ＶＬのＣＤＲにグラフトしたインターロイキン１０（ＩＬ１０
）単量体分子と
を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質。
［２］
前記ＩＬ１０単量体分子が重鎖ＣＤＲにグラフトされている、請求項１に記載の抗体サ
イトカイングラフトタンパク質。
［３］
前記重鎖ＣＤＲがＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２またはＨＣＤＲ３である、請求項２に記載の
抗体サイトカイングラフトタンパク質。
［４］
前記ＩＬ１０単量体分子が前記ＨＣＤＲ１にグラフトされている、請求項３に記載の抗
体サイトカイングラフトタンパク質。
［５］
前記ＩＬ１０単量体分子が軽鎖ＣＤＲにグラフトされている、請求項１に記載の抗体サ
イトカイングラフトタンパク質。
［６］
前記軽鎖ＣＤＲがＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２またはＬＣＤＲ３である、請求項５に記載の
抗体サイトカイングラフトタンパク質。
［７］
前記ＩＬ１０単量体分子が前記ＬＣＤＲ１にグラフトされている、請求項６に記載の抗
体サイトカイングラフトタンパク質。
［８］
組換えヒトＩＬ１０と比較すると、Ｔ細胞またはＮＫ細胞のより少ない活性化が可能で
ある、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
［９］
ｒｈＩＬ１０よりも長い半減期を有する、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体
サイトカイングラフトタンパク質。
［１０］
前記ＩＬ１０単量体分子が配列番号２０９からなる、請求項１に記載の抗体サイトカイ
ングラフトタンパク質。
［１１］
ＩｇＧクラス抗体重鎖をさらに含む、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタン
パク質。
［１２］
前記ＩｇＧクラス重鎖がＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４から選択される、請求項１
１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
［１３］
前記ＣＤＲの標的タンパク質への結合特異性が前記グラフトＩＬ１０単量体分子の存在
下で低下している、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
［１４］
前記ＣＤＲの標的タンパク質への結合特異性が前記グラフトＩＬ１０単量体分子の存在
下で保持されている、請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
［１５］
前記ＣＤＲの結合特異性が前記ＩＬ１０単量体分子のサイトカイン受容体結合特異性と
は異なる、請求項１４に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
［１６］
前記ＣＤＲの結合特異性がヒト以外の標的に対するものである、請求項１４に記載の抗
体サイトカイングラフトタンパク質。
［１７］
前記ＶＨまたはＶＬがヒト化またはヒトである、請求項１に記載の抗体サイトカイング
ラフトタンパク質。
［１８］
（ｉ）（ａ）配列番号１９３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１９４のＨＣＤＲ２、（ｃ
）配列番号１９５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１９６のＬＣ
ＤＲ１、（ｅ）配列番号１９７のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１９８のＬＣＤＲ３を
含む軽鎖可変領域；
（ｉｉ）（ａ）配列番号９７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配
列番号９９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１００のＬＣＤＲ１
、（ｅ）配列番号１０１のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１０２のＬＣＤＲ３を含む軽
鎖可変領域；
（ｉｉｉ）（ａ）配列番号１のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列
番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号４のＬＣＤＲ１、（ｅ）
配列番号５のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
（ｉｖ）（ａ）配列番号１７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配
列番号１９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号２０のＬＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号２１のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号２２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変
領域；
（ｖ）（ａ）配列番号３３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号３４のＨＣＤＲ２、（ｃ）配列
番号３５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号３６のＬＣＤＲ１、（
ｅ）配列番号３７のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号３８のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領
域；
（ｖｉ）（ａ）配列番号４９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号５０のＨＣＤＲ２、（ｃ）配
列番号５１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号５２のＬＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号５３のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号５４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変
領域；
（ｖｉｉ）（ａ）配列番号６５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号６６のＨＣＤＲ２、（ｃ）
配列番号６７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号６８のＬＣＤＲ１
、（ｅ）配列番号６９のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号７０のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可
変領域；
（ｖｉｉｉ）（ａ）配列番号８１のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号８２のＨＣＤＲ２、（ｃ
）配列番号８３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号８４のＬＣＤＲ
１、（ｅ）配列番号８５のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号８６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖
可変領域；
（ｉｘ）（ａ）配列番号１１３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１１４のＨＣＤＲ２、（ｃ
）配列番号１１５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１１６のＬＣ
ＤＲ１、（ｅ）配列番号１１７のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１１８のＬＣＤＲ３を
含む軽鎖可変領域；
（ｘ）（ａ）配列番号１２９のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１３０のＨＣＤＲ２、（ｃ）
配列番号１３１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１３２のＬＣＤ
Ｒ１、（ｅ）配列番号１３３のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１３４のＬＣＤＲ３を含
む軽鎖可変領域；
（ｘｉ）（ａ）配列番号１４５のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１４６のＨＣＤＲ２、（ｃ
）配列番号１４７のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１４８のＬＣ
ＤＲ１、（ｅ）配列番号１４９のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１５０のＬＣＤＲ３を
含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｉ）（ａ）配列番号１６１のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１６２のＨＣＤＲ２、（
ｃ）配列番号１６３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１６４のＬ
ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１６５のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１６６のＬＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｉｉ）（ａ）配列番号１７７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１７８のＨＣＤＲ２、
（ｃ）配列番号１７９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１８０の
ＬＣＤＲ１、（ｅ）配列番号１８１のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１８２のＬＣＤＲ
３を含む軽鎖可変領域；
（ｘｉｖ）（ａ）配列番号２１０のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２１１のＨＣＤＲ２、（
ｃ）配列番号２１２のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号２１３のＬ
ＣＤＲ１、（ｅ）配列番号２１４のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号２１５のＬＣＤＲ３
を含む軽鎖可変領域；または
（ｘｖ）（ａ）配列番号２２６のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号２２７のＨＣＤＲ２、（ｃ
）配列番号２２８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号２２９のＬＣ
ＤＲ１、（ｅ）配列番号２３０のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号２３１のＬＣＤＲ３を
含む軽鎖可変領域
を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質。
［１９］
（ｉ）配列番号２０５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２０６を含む軽鎖可
変領域（ＶＬ）；
（ｉｉ）配列番号１０９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１１０を含む軽鎖可
変領域（ＶＬ）；
（ｉｉｉ）配列番号１３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１４を含む軽鎖可変
領域（ＶＬ）；
（ｉｖ）配列番号２９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号３０を含む軽鎖可変領
域（ＶＬ）；
（ｖ）配列番号４５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号４６を含む軽鎖可変領域
（ＶＬ）；
（ｖｉ）配列番号６１を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号６２を含む軽鎖可変領
域（ＶＬ）；
（ｖｉｉ）配列番号７７を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号７８を含む軽鎖可変
領域（ＶＬ）；
（ｖｉｉｉ）配列番号９３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号９４を含む軽鎖可
変領域（ＶＬ）；
（ｉｘ）配列番号１２５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１２６を含む軽鎖可
変領域（ＶＬ）；
（ｘ）配列番号１４１を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１４２を含む軽鎖可変
領域（ＶＬ）；
（ｘｉ）配列番号１５７を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１５８を含む軽鎖可
変領域（ＶＬ）；
（ｘｉｉ）配列番号１７３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１７４を含む軽鎖
可変領域（ＶＬ）；
（ｘｉｉｉ）配列番号１８９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号１９０を含む軽
鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｘｉｖ）配列番号２２２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２２３を含む軽鎖
可変領域（ＶＬ）；または
（ｘｖ）配列番号２３８を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および配列番号２３９を含む軽鎖可
変領域（ＶＬ）
を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質。
［２０］
低下したエフェクター機能に対応する修飾Ｆｃ領域をさらに含む、請求項１から１９の
いずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質。
［２１］
前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ
およびＬ２３５Ａの１つまたは複数から選択される突然変異を含む、請求項２０に記載の
抗体サイトカイングラフトタンパク質。
［２２］
前記修飾Ｆｃ領域が、Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ
／Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ａ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ／Ｌ２３４Ａ／Ｌ
２３５Ａからなる群から選択される、請求項２１に記載の抗体サイトカイングラフトタン
パク質。
［２３］
配列番号１９３のＨＣＤＲ１、配列番号１９４のＨＣＤＲ２、配列番号１９５のＨＣＤ
Ｒ３、配列番号１９６のＬＣＤＲ１、配列番号１９７のＬＣＤＲ２、配列番号１９８のＬ
ＣＤＲ３、突然変異Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａを含む修飾Ｆｃ領域からなる抗体サイトカイ
ングラフトタンパク質であって、ｒｈＩＬ１０と比較すると、Ｔ細胞またはＮ細胞の活性
化が少ない抗体サイトカイングラフトタンパク質。
［２４］
前記ＣＤＲの結合特異性がヒト以外の標的に対するものである、請求項２３に記載の抗
体サイトカイングラフトタンパク質。
［２５］
ｒｈＩＬ１０よりも長い半減期を有する、請求項２３に記載の抗体サイトカイングラフ
トタンパク質。
［２６］
（ｉ）配列番号２４６の重鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列および配列番号２４
７の軽鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列；
（ｉｉ）配列番号２４８の重鎖コードポリヌクレオチド配列および配列番号２４９の軽鎖
コードポリヌクレオチド配列；
（ｉｉｉ）配列番号２４２の重鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列および配列番号２
４３の軽鎖可変領域コードポリヌクレオチド配列；または
（ｉｖ）配列番号２４４の重鎖コードポリヌクレオチド配列および配列番号２４５の軽鎖
コードポリヌクレオチド配列
を含む単離核酸。
［２７］
抗体サイトカイングラフトタンパク質の重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドをコ
ードする請求項２６に記載の核酸と、場合により分泌シグナルとを含む、抗体サイトカイ
ングラフトタンパク質の産生に適した組換え宿主細胞。
［２８］
前記細胞が哺乳類細胞である、請求項２７に記載の宿主細胞。
［２９］
請求項１から２６のいずれかに記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質と薬学的に
許容される担体とを含む医薬組成物。
［３０］
治療上有効量の請求項１に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質を個体に投与す
るステップを含む、治療または予防を必要とする個体の免疫関連障害を治療または予防す
る方法。
［３１］
前記免疫関連障害が、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、乾癬
、Ｉ型糖尿病、急性膵炎、ブドウ膜炎、シェーグレン病、ベーチェット病、サルコイドー
シスおよび移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）からなる群から選択される、請求項３０に記載の
方法。
［３２］
前記抗体サイトカイングラフトタンパク質が別の治療剤と組み合わせて投与される、請
求項３０に記載の方法。
［３３］
前記治療剤が、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ゴリムマブ、ナタ
リズマブおよびベドリズマブからなる群から選択される抗ＴＮＦ剤である、請求項３２に
記載の方法。
［３４］
前記治療剤が、スルファサラジン、メサラミン、バルサラジド、オルサラジンおよび５
−アミノサリチル酸の他の誘導体からなる群から選択されるアミノサリチル酸剤である、
請求項３２に記載の方法。
［３５］
前記治療剤が、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、ブデニソニ
ド、メサラミンおよびデキサメタゾンからなる群から選択される副腎皮質ステロイドであ
る、請求項３２に記載の方法。
［３６］
前記治療剤が抗菌剤である、請求項３２に記載の方法。
［３７］
請求項１から２５のいずれか一項に記載の抗体サイトカイングラフトタンパク質を投与
するステップを含む、それを必要とする患者の単球を活性化する方法。
［３８］
単球が活性化され、Ｔ細胞もＮＫ細胞も活性化されない、請求項３７に記載の方法。
［３９］
前記抗体サイトカイングラフトタンパク質の投与がＴＮＦα産生を減少させる、請求項
３７に記載の方法。
［４０］
免疫関連障害の治療における、
（ｉ）（ａ）配列番号１９３のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号１９４のＨＣＤＲ２、（ｃ）
配列番号１９５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１９６のＬＣＤ
Ｒ１、（ｅ）配列番号１９７のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１９８のＬＣＤＲ３を含
む軽鎖可変領域；または
（ｉｉ）（ａ）配列番号９７のＨＣＤＲ１、（ｂ）配列番号９８のＨＣＤＲ２、（ｃ）配
列番号９９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに（ｄ）配列番号１００のＬＣＤＲ１
、（ｅ）配列番号１０１のＬＣＤＲ２および（ｆ）配列番号１０２のＬＣＤＲ３を含む軽
鎖可変領域
を含む抗体サイトカイングラフトタンパク質の使用。
［４１］
炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、乾癬、Ｉ型糖尿病、急性膵
炎、ブドウ膜炎、シェーグレン病、ベーチェット病、サルコイドーシスおよび移植片対宿
主病（ＧＶＨＤ）からなる群から選択される免疫関連障害の治療における請求項４０に記
載の抗体サイトカイングラフトタンパク質の使用。
［４２］
前記抗体サイトカイングラフトタンパク質が別の治療剤と組み合わせて投与される、請
求項４０に記載の使用。
［４３］
前記治療剤が、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ゴリムマブ、ナタ
リズマブおよびベドリズマブからなる群から選択される抗ＴＮＦ剤である、請求項４２に
記載の使用。
［４４］
前記治療剤が、スルファサラジン、メサラミン、バルサラジド、オルサラジンおよび５
−アミノサリチル酸の他の誘導体からなる群から選択されるアミノサリチル酸剤である、
請求項４２に記載の使用。
［４５］
前記治療剤が、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、ブデニソニ
ド、メサラミンおよびデキサメタゾンからなる群から選択される副腎皮質ステロイドであ
る、請求項４２に記載の使用。
［４６］
前記治療剤が抗菌剤である、請求項４２に記載の使用。
【国際調査報告】
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2019505173.tif 000071
2019505173.tif 000072
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