【手続補正書】
【提出日】平成19年8月16日(2007.8.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  亜麻種子において興味ある核酸配列の発現方法であり、
（ａ）転写の５‘から３’方向において作動可能に結合した成分として、
（１）亜麻から得た種子特異的プロモーターと、
（２）前記種子特異的プロモーターに非天然性である前記興味ある核酸配列とからなるキメラ核酸構築物を調製し、
（ｂ）前記キメラ核酸構築物を亜麻植物細胞へ導入し、
（ｃ）前記興味ある核酸配列が種子において前記種子特異的プロモーターの制御下において発現し、前記亜麻植物細胞を種子をつけることが可能な成熟亜麻植物へ成長させることからなる方法。
【請求項２】  前記種子特異的プロモーターによってその天然核酸配列へ与えられた少なくとも1つの発現特性が、前記非天然核酸配列に与えられることを特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項３】  前記発現特性が、発現のタイミング、発現レベル、光状態における変化への応答、温度における変化への応答、化学薬品の濃度の変化への応答である事を特徴とする請求項２記載の方法。
【請求項４】  前記特異的亜麻植物特異的プロモーターは、オレオシンプロモーター、２Ｓ貯蔵タンパク質プロモーター、レグミンライク 種子貯蔵タンパク質プロモーターからなるプロモーターの群から選択されることを特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項５】  前記種子特異的プロモーターが、
（ａ）ＴはＵとすることもできる、図1（配列認識番号１）に示されるヌクレオチド１から２０２３からなる核酸配列、
（ｂ）（ａ）の核酸配列に相補的である核酸配列、
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）の核酸配列と実質的な配列相同性を有する核酸配列、
（ｄ）（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）の核酸配列のアナログである核酸配列、又は、
（ｅ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、からなることを特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項６】  前記種子特異的なプロモーターが、
（ａ）ＴはＵとすることもできる、図２（配列認識番号４）に示されるヌクレオチド１から１８５２からなる核酸配列、
（ｂ）（ａ）の核酸配列に相補的である核酸配列、
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）の核酸配列と実質的な配列相同性を有する核酸配列、
（ｄ）（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）の核酸配列のアナログである核酸配列、又は、
（ｅ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、からなることを特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項７】  前記種子特異的なプロモーターが、
（ａ）ＴはＵとすることもできる、図３（配列認識番号６）に示されるヌクレオチド１から４１７からなる核酸配列、
（ｂ）（ａ）の核酸配列に相補的である核酸配列、
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）の核酸配列と実質的な配列相同性を有する核酸配列、
（ｄ）（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）の核酸配列のアナログである核酸配列、又は、
（ｅ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、からなることを特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項８】  前記種子特異的なプロモーターが、
（ａ）ＴはＵとすることもできる、図４（配列認識番号８）に示されるヌクレオチド１から２０３７からなる核酸配列、
（ｂ）（ａ）の核酸配列に相補的である核酸配列、
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）の核酸配列と実質的な配列相同性を有する核酸配列、
（ｄ）（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）の核酸配列のアナログである核酸配列、又は、
（ｅ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、からなることを特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項９】  興味ある核酸配列の発現が、前記種子においてタンパク質又は脂肪酸組成物において変更修正を生じることを特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項１０】  （ａ）転写の５‘から３’方向において作動可能に結合した成分として、
（１）亜麻から得た種子特異的プロモーターと、
（２）前記種子特異的プロモーターに非天然性である前記興味ある核酸配列とからなるキメラ核酸構築物を調製し、
（ｂ）前記キメラ核酸構築物を亜麻植物細胞へ導入し、
（ｃ）前記興味ある核酸配列が種子において前記種子特異的プロモーターの制御下において発現する前記植物細胞を種子をつけることが可能な成熟亜麻植物へ成長させることからなる方法によって調製したトランスジェニック亜麻種子。
【請求項１１】  前記種子特異的プロモーターによってその天然核酸配列へ与えられた少なくとも1つの発現特性が、前記非天然核酸配列に与えられることを特徴とする請求項１０記載のトランスジェニック亜麻種子。
【請求項１２】  前記発現特性が、発現のタイミング、又は発現レベルである事を特徴とする請求項１１記載のトランスジェニック亜麻種子。
【請求項１３】  前記種子特異的プロモーターが、種子貯蔵タンパク質プロモーター、オレオシンプロモーター、２Ｓ貯蔵タンパク質プロモーター、レグミンライク 種子貯蔵タンパク質プロモーターからなるプロモーターの群から選択されることを特徴とする請求項１１記載のトランスジェニック亜麻種子。
【請求項１４】  前記種子特異的プロモーターが、
（ａ）ＴはＵとすることもできる、図1（配列認識番号１）に示されるヌクレオチド１から２０２３からなる核酸配列、
（ｂ）（ａ）の核酸配列に相補的である核酸配列、
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）の核酸配列と実質的な配列相同性を有する核酸配列、
（ｄ）（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）の核酸配列のアナログである核酸配列、又は、
（ｅ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、からなることを特徴とする請求項１１記載のトランスジェニック亜麻種子。
【請求項１５】  前記種子特異的プロモーターが、
（ａ）ＴはＵとすることもできる、図２（配列認識番号４）に示されるヌクレオチド１から１８５２からなる核酸配列、
（ｂ）（ａ）の核酸配列に相補的である核酸配列、
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）の核酸配列と実質的な配列相同性を有する核酸配列、
（ｄ）（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）の核酸配列のアナログである核酸配列、又は、
（ｅ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、からなることを特徴とする請求項１１記載のトランスジェニック亜麻種子。
【請求項１６】  前記種子特異的プロモーターが、
（ａ）ＴはＵとすることもできる、図３（配列認識番号６）に示されるヌクレオチド１から４１７からなる核酸配列、
（ｂ）（ａ）の核酸配列に相補的である核酸配列、
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）の核酸配列と実質的な配列相同性を有する核酸配列、
（ｄ）（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）の核酸配列のアナログである核酸配列、又は、
（ｅ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、からなることを特徴とする請求項１１記載のトランスジェニック亜麻種子。
【請求項１７】  前記種子特異的プロモーターが、
（ａ）ＴはＵとすることもできる、図４（配列認識番号８）に示されるヌクレオチド１から２０３７からなる核酸配列、
（ｂ）（ａ）の核酸配列に相補的である核酸配列、
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）の核酸配列と実質的な配列相同性を有する核酸配列、
（ｄ）（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）の核酸配列のアナログである核酸配列、又は、
（ｅ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、からなることを特徴とする請求項１１記載のトランスジェニック亜麻種子。
【請求項１８】  興味ある前記非天然遺伝子の発現が、種子タンパク質又は脂肪酸組成物において変更修正を生じることを特徴とする請求項１１記載のトランスジェニック亜麻種子。
【請求項１９】  （ａ）転写の５‘から３’方向において作動可能に結合した成分として、
（１）亜麻から得た種子特異的プロモーターと、
（２）前記種子特異的プロモーターに非天然性である前記興味ある核酸配列とからなるキメラ核酸構築物を調製し、
（ｂ）前記キメラ核酸構築物を亜麻植物細胞へ導入し、
（ｃ）前記興味ある核酸配列が種子において前記種子特異的プロモーターの制御下において発現する前記植物細胞を種子をつけることが可能な成熟亜麻植物へ成長させることからなる方法によって調製した、種子をつけることが可能なトランスジェニック亜麻植物。
【請求項２０】  （ａ）ＴはＵとすることもできる、図1（配列認識番号１）に示されるヌクレオチド１から２０２３からなる核酸配列、
（ｂ）（ａ）の核酸配列に相補的である核酸配列、
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）の核酸配列と実質的な配列相同性を有する核酸配列、
（ｄ）（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）の核酸配列のアナログである核酸配列、又は、
（ｅ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、
からなる、植物において種子特異的な発現を誘導する能力を有する単離された核酸配列。
【請求項２１】  （ａ）ＴはＵとすることもできる、図２（配列認識番号４）に示されるヌクレオチド１から１８５２からなる核酸配列、
（ｂ）（ａ）の核酸配列に相補的である核酸配列、
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）の核酸配列と実質的な配列相同性を有する核酸配列、
（ｄ）（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）の核酸配列のアナログである核酸配列、又は、
（ｅ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、
からなる、植物において種子特異的な発現を誘導する能力を有する単離された核酸配列。
【請求項２２】  （ａ）ＴはＵとすることもできる、図３（配列認識番号６）に示されるヌクレオチド１から４１７からなる核酸配列、
（ｂ）（ａ）の核酸配列に相補的である核酸配列、
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）の核酸配列と実質的な配列相同性を有する核酸配列、
（ｄ）（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）の核酸配列のアナログである核酸配列、又は、
（ｅ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、
からなる、植物において種子特異的な発現を誘導する能力を有する単離された核酸配列。
【請求項２３】  （ａ）ＴはＵとすることもできる、図４（配列認識番号８）に示されるヌクレオチド１から２０３７からなる核酸配列、
（ｂ）（ａ）の核酸配列に相補的である核酸配列、
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）の核酸配列と実質的な配列相同性を有する核酸配列、
（ｄ）（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）の核酸配列のアナログである核酸配列、又は、
（ｅ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、
からなる、植物において種子特異的な発現を誘導する能力を有する単離された核酸配列。
【請求項２４】  （ａ）（１）ＴはＵとすることもできる、図1（配列認識番号１）に示されるヌクレオチド１から２０２３からなる核酸配列、
（２）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、
（３）（ａ）の核酸配列に相補的な核酸配列、又は、
（４）(ａ)の核酸配列と実質的な配列相同性を有する核酸配列からなる、亜麻から得られた種子特異的プロモーターからなる第一の核酸配列と、
（ｂ）前記亜麻種子特異的プロモーターに非天然の第二の核酸配列、
とからなる単離されたキメラ核酸配列。
【請求項２５】  （ａ）（１）ＴはＵとすることもできる、図２（配列認識番号４）に示されるヌクレオチド１から１８５２からなる核酸配列、
（２）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、
（３）（ａ）の核酸配列に相補的な核酸配列、又は、
（４）(ａ)の核酸配列と実質的な配列相同性を有する核酸配列からなる、亜麻から得られた種子特異的プロモーターからなる第一の核酸配列と、
（ｂ）前記亜麻種子特異的プロモーターに非天然の第二の核酸配列、
とからなる単離されたキメラ核酸配列。
【請求項２６】  （ａ）（１）ＴはＵとすることもできる、図３（配列認識番号６）に示されるヌクレオチド１から４１７からなる核酸配列、
（２）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、
（３）（ａ）の核酸配列に相補的な核酸配列、又は、
（４）(ａ)の核酸配列と実質的な配列相同性を有する核酸配列からなる、亜麻から得られた種子特異的プロモーターからなる第一の核酸配列と、
（ｂ）前記亜麻種子特異的プロモーターに非天然の第二の核酸配列、
とからなる単離されたキメラ核酸配列。
【請求項２７】  （ａ）（１）ＴはＵとすることもできる、図４（配列認識番号８）に示されるヌクレオチド１から２０３７からなる核酸配列、
（２）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、
（３）（ａ）の核酸配列に相補的な核酸配列、又は、
（４）(ａ)の核酸配列と実質的な配列相同性を有する核酸配列からなる、亜麻から得られた種子特異的プロモーターからなる第一の核酸配列と、
（ｂ）前記亜麻種子特異的プロモーターに非天然の第二の核酸配列、
とからなる単離されたキメラ核酸配列。
【請求項２８】  興味ある核酸を植物種子において発現するための方法であり、
（ａ）請求項１５に記載のキメラ核酸配列を植物細胞の中に導入し、
（ｂ）前記植物細胞を種子をつけることが可能な成熟植物に成長させることからなり、第二核酸配列が種子において種子特異的プロモーターの制御下で発現することを特徴とする方法。
【請求項２９】  前記植物細胞が、大豆(Glycine max)、菜種(Brassica napus, Brassica campestris), ひまわり(Helianthus annuus)、綿(Gossypium hirsutum)、コーン(Zea mays)、タバコ(Nicotiana tobacum)、アルファルファ(Medicago sativa)、小麦(Triticum sp.)、大麦(Hordeum vulgare)、オート麦（Avena sativa L.）、サトウモロコシ(Sorghum bicolor)、アラビドープシス サリアナ(Arabidopsis thaliana)、ポテト(Solanum sp．)、亜麻／亜麻の種子(Linum usitatissimum)、べにばな(Carthamus tinctorius)、油やし(Eleais guineeis)、落花生（Arachis hypogaea）、ブラジルナッツ（Bertholletia excelsa）、ココナッツ(Cocus nucifera)、ひまし(トウゴマ)(Ricinus communis)、コリアンダー(Coriandrum sativum)、かぼちゃ(Cucurbita maxima)、ホホバ(Simmondsia chinensis)、 米(Oryza sativa)からなる植物の群から選択されることを特徴とする請求項２８記載の方法。
【請求項３０】  請求項２８記載の方法によって調製される植物。
【請求項３１】  請求項２４記載のキメラ核酸配列を含む植物細胞。
【請求項３２】  請求項２４記載のキメラ核酸配列を含む植物種子。
【請求項３３】  請求項２５記載の方法によって調製した植物から得られた植物種子。
【請求項３４】  請求項２３記載の核酸配列を含む組み換え発現ベクター。
【請求項３５】  請求項２４記載の核酸配列を含む組み換え発現ベクター。
【請求項３６】  （ａ）ＴはＵとすることもできる、図1（配列認識番号１）、図２（配列認識番号４）、図3（配列認識番号６）、又は図4（配列認識番号８）に示す核酸配列、
（ｂ）（ａ）の核酸配列に相補的である核酸配列、
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）の核酸配列と実質的な配列相同性を有する核酸配列、
（ｄ）（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）の核酸配列のアナログである核酸配列、又は、
（ｅ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、
からなる単離された核酸配列。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
好ましい実施態様において、前記種子特異的プロモーターが、
（ａ）ＴはＵとすることもできる、図１のヌクレオチド１から２０２３（配列認識番号１）、図２のヌクレオチド１から１８５２（配列認識番号４）、図３のヌクレオチド１から４１７（配列認識番号６）、又は図４のヌクレオチド１から２０３７（配列認識番号８）に示す核酸配列、
（ｂ）（ａ）の核酸配列に相補的である核酸配列、
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）の核酸配列に相同な実質的配列を有する核酸配列、
（ｄ）（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）の核酸のアナログである核酸配列、又は、
（ｅ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、からなる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
さらなる側面において、本発明は、亜麻種子及び他の植物種の種子において非天然遺伝子の発現に役立つ新規種子特異的プロモーターを提供する。プロモーターを種子の例えば、タンパク質、オイル又はポリサッカライド成分を変更するのに使用することができる。好ましい実施態様において、種子特異的プロモーターは、
（ａ）ＴはＵとすることもできる、図１のヌクレオチド１から２０２３（配列認識番号１）、図２のヌクレオチド１から１８５２（配列認識番号４）、図３のヌクレオチド１から４１７（配列認識番号６）、又は図４のヌクレオチド１から２０３７（配列認識番号８）に示す核酸配列、
（ｂ）（ａ）の核酸配列に相補的である核酸配列、
（ｃ）（ａ）又は（ｂ）の核酸配列に相同な実質的配列を有する核酸配列、
（ｄ）（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）の核酸のアナログである核酸配列、又は、
（ｅ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（ａ）、（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、からなる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
本発明の好ましい実施態様において、種子特異的プロモーターは、２Ｓ貯蔵タンパク質プロモーター、グロブリンプロモーター、オレオシンプロモーター、レグミンライク種子貯蔵タンパク質プロモーターからなる亜麻種子特異的プロモーターの群から選択される。特異的プロモーター配列を、図１のヌクレオチド１から２０２３（配列認識番号１）、図２のヌクレオチド１から１８５２（配列認識番号４）、図３のヌクレオチド１から４１７（配列認識番号６）、又は図４のヌクレオチド１から２０３７（配列認識番号８）に示す。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４７】
さらに、本発明は、亜麻以外の植物種において、図１のヌクレオチド１から２０２３（配列認識番号１）、図２のヌクレオチド１から１８５２（配列認識番号４）、図３のヌクレオチド１から４１７（配列認識番号６）、又は図４のヌクレオチド１から２０３７（配列認識番号８）に示す新規プロモーターを使用する方法を提供する。したがって、本発明は、図１、図２、図３、及び図４に示すプロモーター群から選択されるプロモーター及び興味の核酸配列を含むキメラ核酸構築物の調製、及び亜麻プロモーターの制御下において亜麻以外の植物種において興味の核酸配列の種子特異的手法における発現も含む。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４８】
本発明の別の側面において、（ａ）転写の５‘から３’方向において作動可能に結合した成分として、
（１）（ｉ）ＴはＵとすることもできる、図１のヌクレオチド１から２０２３（配列認識番号１）、図２のヌクレオチド１から１８５２（配列認識番号４）、図３のヌクレオチド１から４１７（配列認識番号６）、又は図４のヌクレオチド１から２０３７（配列認識番号８）に示す核酸配列、
（ii）（ｉ）の核酸配列に相補的な核酸配列、
（iii）(i)又は（ii）の核酸配列に相同な実質的な配列を有する核酸配列、
（iV）（i）、（ii）、又は（iii）の核酸配列のアナログである核酸配列、
（v）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で（i）、（ii）（iii）又は（iV）の核酸配列とハイブリダイズする核酸配列、
（２）前記興味の核酸、を含むキメラ核酸構築物を調製し、
（ｂ）キメラ核酸構築物を植物細胞の中へ導入し、
（ｃ）前記植物細胞を種子をつけることが可能な成熟植物に成長させることからなる植物種子において興味の核酸配列を発現する方法であって、前記興味の核酸が種子において前記種子特異的プロモーターの制御下で発現することを特徴とする方法を提供する。