【手続補正書】
【提出日】平成18年12月13日(2006.12.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  式(Ｉ)：
【化１】
2002533470.tif 000001
［式中、
ｎは１または２であり、
Ｒ４は、Ｈ、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ２、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２、ＮＯ２、Ｃ1−6アルキル、Ｃ2−6アルケニル、Ｃ2−6アルキニル、ハロゲン、ＣＯＲａ(ここで、ＲａはＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル)およびＣＯＯＲｂ(ここで、ＲｂはＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニル)から選択され、
Ｒ３は、ＨまたはＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニルであり、
Ｘは、Ｈ、モノホスフェート、ジホスフェート、トリホスフェート、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ６−１０アリールにより置換されたカルボニル、または
【化２】
2002533470.tif 000002
(式中、各Ｒcは独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニルまたはヒドロキシ保護基から選択される)から選択され、そして
ヌクレオシドが(−)鏡像体、(＋)鏡像体およびラセミ混合物を含むそれらの混合物形態である］
で示される、シス‐ヌクレオシドおよびその医薬的に許容し得る塩類。
【請求項２】  ヌクレオシドが(−)形態で存在し、(＋)形態について少なくとも９５％不含有である、請求項１記載のヌクレオシド。
【請求項３】  ヌクレオシドが(−)形態で存在し、(＋)形態について少なくとも９７％不含有である、請求項１記載のヌクレオシド。
【請求項４】  ヌクレオシドが(−)形態で存在し、(＋)形態について少なくとも９９％不含有である、請求項１記載のヌクレオシド。
【請求項５】  ヒドロキシ保護基が、アセチル−２−チオエチルエステル、ピバロイルオキシメチルエステルまたはイソプロピルオキシカルボニルオキシメチルエステルから選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項６】  ＸがＨである、請求項１記載の化合物。
【請求項７】  ｎが１である、請求項１記載の化合物。
【請求項８】  Ｒ３がＨまたはメチルであるかまたはＲ４がＨである、請求項７記載の化合物。
【請求項９】  Ｒ４が、Ｈ、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ２、Ｃ1−6アルキル、Ｃ2−6アルケニル、Ｃ2−6アルキニルまたはＣＯＯＲｂであり、ＲｂがＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニルまたはＣ２−６アルキニルである、請求項７記載の化合物。
【請求項１０】  Ｒ４が、Ｈ、ＣＯＯＨまたはＣ１−６アルキルである、請求項７記載の化合物。
【請求項１１】  Ｒ４がメチルまたはエチルである、請求項７記載の化合物。
【請求項１２】  Ｒ４がＣＯＯＨである、請求項７記載の化合物。
【請求項１３】  Ｒ３およびＲ４がＨである、請求項７記載の化合物。
【請求項１４】  化合物シス−２−ヒドロキシメチル−４−(２'−アミノ−６'−シクロプロピルアミノ−プリン−９'−イル)−１,３−ジオキソランおよびその医薬的に許容し得る塩類。
【請求項１５】  化合物シス−２−ヒドロキシメチル−４−(２'−アミノ−６'−シクロブチルアミノ−プリン−９'−イル)−１,３−ジオキソランおよびその医薬的に許容し得る塩類。
【請求項１６】  化合物シス−２−ヒドロキシメチル−４−(２'−アミノ−６'−［１−カルボン酸−シクロプロピルアミノ］−プリン−９'−イル)−１,３−ジオキソランおよびその医薬的に許容し得る塩類。
【請求項１７】  対応する(＋)鏡像体について少なくとも９７％不含有である化合物(−)−(２Ｒ,４Ｒ)−２−ヒドロキシメチル−４−(２'−アミノ−６'−シクロプロピルアミノ−プリン−９'−イル)−１,３−ジオキソラン。
【請求項１８】  対応する(−)鏡像体について少なくとも９７％不含有である化合物(＋)−(２Ｓ,４Ｓ)−２−ヒドロキシメチル−４−(２'−アミノ−６'−シクロプロピルアミノ−プリン−９'−イル)−１,３−ジオキソラン。
【請求項１９】  対応する(＋)鏡像体について少なくとも９７％不含有である化合物(−)−(２Ｒ,４Ｒ)−２−ヒドロキシメチル−４−(２'−アミノ−６'−シクロブチルアミノ−プリン−９'−イル)−１,３−ジオキソラン。
【請求項２０】  対応する(−)鏡像体について少なくとも９７％不含有である化合物(＋)−(２Ｓ,４Ｓ)−２−ヒドロキシメチル−４−(２'−アミノ−６'−シクロブチルアミノ−プリン−９'−イル)−１,３−ジオキソラン。
【請求項２１】  対応する(＋)鏡像体について少なくとも９７％不含有である化合物(−)−(２Ｒ,４Ｒ)−２−ヒドロキシメチル−４−(２'−アミノ−６'−［１−カルボン酸−シクロプロピルアミノ］−プリン−９'−イル)−１,３−ジオキソラン。
【請求項２２】  対応する(−)鏡像体について少なくとも９７％不含有である化合物(＋)−(２Ｓ,４Ｓ)−２−ヒドロキシメチル−４−(２'−アミノ−６'−［１−カルボン酸−シクロプロピルアミノ］−プリン−９'−イル)−１,３−ジオキソラン。
【請求項２３】  請求項１〜２１のいずれか１項記載の少なくとも１種の化合物またはその医薬的に許容し得る塩類を含み、ヌクレオシド類似体、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤(ＮＮＲＴＩ)またはプロテアーゼ阻害剤から選択される少なくとも１種のさらに別の治療剤を含む、ウイルス感染症の処置に有用な組み合わせ剤。
【請求項２４】  ヌクレオシド類似体がジドブジン、ジダノシン、ザルシタビン、スタブジンまたはラミブジンから選択される、請求項２３記載の組み合わせ剤。
【請求項２５】  非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤がネビラピン、デラビルジンまたはエファビレンズから選択される、請求項２３記載の組み合わせ剤。
【請求項２６】  プロテアーゼ阻害剤がインジナビル、ネルフィナビル、サキナビルまたはリトナビルから選択される、請求項２３記載の組み合わせ剤。
【請求項２７】  薬物療法で使用される、請求項１〜２２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２８】  ウイルス感染症の処置で使用される、請求項１〜２２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２９】  ＨＩＶ感染症の処置に使用される、請求項１〜２２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項３０】  ＨＢＶ感染症の処置に使用される、請求項１〜２２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項３１】  ウイルス感染症処置用医薬の製造を目的とする請求項１〜２２のいずれか１項記載の化合物の用途。
【請求項３２】  処置を必要とする対象に請求項１〜２２のいずれか１項記載の化合物の治療有効量を投与することを含む、ウイルス感染症の処置方法。
【請求項３３】  ウイルス感染症がＨＩＶ感染症である、請求項３２記載の方法。
【請求項３４】  ウイルス感染症がＨＢＶ感染症である、請求項３２記載の方法。
【請求項３５】  請求項１〜２２のいずれか１項記載の少なくとも１種の化合物を少なくとも１種の医薬的に許容し得る担体または賦形剤と一緒に含む医薬製剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９９】
ＴＨＦおよび水の１：１混合物中メチル−２−(Ｒ,Ｓ)−ベンゾイルオキシメチル−１,３−ジオキソラン−４−(Ｒ)−カルボキシレート(４１１g、１.５４ミリモル、１当量、シスおよびトランス異性体の２：１混合物)の溶液に、反応フラスコ温度を３０℃未満に保ちながら、水酸化リチウム(６４.８g、１.５４モル、１当量)を３０分間にわたり分割して加えた。９０分後、ＴＨＦを真空除去し、３０％(w／w)硫酸の滴下により水溶液をｐＨ２.５−３.２に酸性化した。生成した溶液をジクロロメタン(４×４００mL)で抽出した。有機相を合わせ、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮すると、３８０gの黒色油状物が生成された。異性体を、ジクロロメタン中２％酢酸を用いるシリカゲルカラム・クロマトグラフィーにより分離すると、２２０gのシス異性体(５６.５％)および１１６gのトランス異性体(３０％)が生成された。異性体を各々独立して次の段階に使用した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１３】
認可された抗ＨＩＶ薬剤と化合物Ａ(−)の比較。化合物Ａ(−)は、ＭＴ−２細胞においてＨＩＶ−１IIIbに対し０.０８３マイクロモルＥＣ５０を有しており、これはラミブジン、スタブジン、ザルシタビンおよびアバカビルと同レベルの抗ＨＩＶ−１活性であるが、ジドブジンよりも低活性である(表１)。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１７】
さらに、異なる型のＨＩＶ−１株を用いて、化合物Ａ(−)の抗レトロウイルス活性についても評価した。表３における結果は、化合物Ａ(−)が非シンシチウム誘導性(ＨＩＶ−１9882)、デュアルトロピック(dual tropic)(ＨＩＶ−１macBAL)およびモノサイトロピック(monocytropic)(ＨＩＶ−１WRM８4８８)株に対して活性であることを示していた。
表３。異なる型のＨＩＶ−１株に対する化合物Ａ(−)の抗ＨＩＶ活性(ｐ２４により測定)
【表３】
2002533470.tif 000003
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２３】
ＨＰＬＣ分析
分析条件：
ＨＰＬＣシステム：２つのウォーターズ６１６ポンプシステムおよび２つのＰＤＡ９９６とのアライアンス２６９０システム
カラム：フェノメネックス・ルナＣ１８(２)、５μm、２５０＊４.６mm、
勾配：２０分で０−３５％溶媒Ａ。溶媒Ａは０.０１％ＴＦＡと共にアセトニトリルを含み、溶媒Ｂは０.０１％ＴＦＡと共にミリポア水(０.２５μmフィルター)を含む。
流速：１.０ml／分、ＵＶ：２００−３５０nm
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２８】
実施例１５
臨床ＨＩＶ−１分離株に対する化合物Ａ(−)の効力。
正常ドナーからのＰＢＭＣとの共培養によるＨＩＶ−１感染個体のＰＢＭＣから臨床株を分離した。ＨＩＶ−１臨床分離株のＲＴ遺伝子型を決定するため、プロウイルスＤＮＡを、感染ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＰＢＭＣから抽出し、完全ＲＴコーディング領域を先に報告された要領(Guら、１９９２)でＰＣＲにより増幅した。ＰＣＲ産物を精製し、次いでＲＴコーディング領域の５'部分(ＨＸＢ２−Ｄ同等物(co-ordinates)のヌクレオシド２６０３−２６２１)に位置するプライマーＲＴＳ(５'−CCAAAAGTTAAACAATGGC-３')を用いて直接配列決定した。実施例１０の記載に従い抗ウイルス活性を評価した。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３８】
ＷＳＴ−１染色実験において、５×１０４細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレート中ＲＰＭＩ培地においてセルラインを培養した。ＣＢＭＣを０.５×１０６／ウェルの濃度で平板培養した。化合物(１０ −４−１０−７モル)を０日目に加えた。供給業者により提供されたプロトコルに従いＷＳＴ−１試薬(ベーリンガー・マンハイム)を用いて細胞生存能力を７日目に評価した。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３９】
化合物Ａ(−)は、［３Ｈ］チミジン取り込みおよびＷＳＴ−１染色の両方により評価された異なる型の細胞においてジドブジンおよびザルシタビンの両方よりも細胞傷害性がかなり低かった(表１４)。
表１４．化合物Ａ(−)の細胞傷害性
【表１４】
2002533470.tif 000004
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４１】
実施例１９
本発明化合物の薬物動態試験
化合物Ａ(−)、ＤＡＰＤおよびＤＸＧを、１０mg／kgで頚静脈からの静脈内経路または２０、１２５、５００、１０００または２０００mg／kgでの経口経路のいずれかにより１回用量として投与した。経口投与処置前に全ラットを１２時間絶食させた。静脈内および経口投与の両方に使用した賦形剤は、蒸留水中０.１％カルボキシメチルセルロースおよび０.１％トウィーン＊８０であり、１ＮのＨＣｌでｐＨ３.１５に酸性化された。血液サンプルを、全経口投与に関する下記スケジュールに示された時点でラットから採取した。各投与に関して全部で１０ラットから、頚静脈による静脈内投与(２、５、１５、３０、６０、１２０および２４０分)および２０mg／kgでの経口投与(５−３６０分)について７時点を取り、１２５−２０００mg／kgの経口用量について４８０および１４４０分での２追加時点を取った。結果として、各時点とも同じもの４通りで行ったが、ただし１４４０分時点については全ラットからの頚静脈より血液サンプルを採取した後、安楽死させた。
＊  登録商標
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４６】
表１５：ラットにおける静脈内(１０mg／kg)または経口(２０mg／kg)投与後の化合物Ａ(−)に関するＰＫパラメーター
【表１６】
2002533470.tif 000005
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４８】
以下、本願明細書全体で引用されている参考文献を完全に列挙する。
１．De Muys,J.-M.、Gourdeau,N.Nguyen-Ba、D.T.Taylor,P.、S.Ahmed、T.Mansour、C.Locas、N.Richard、M.A.Wainbergおよび R.F.Rando、１９９９。抗ヒト免疫不全ウイルス１型活性、細胞内代謝、および２'−デオキシ−３’−オキサ−４’−チオシチジンの薬物動態評価。Antimicrob. Agents Chemother.４３：１８３５−１８４４。
２．Gu,Z.、Q.Gao、M.A.ParniakおよびM.A.Wainberg、１９９２。２',３'−ジデオキシイノシンおよび２',３'−ジデオキシシチジンに対する交差耐性をコード化するヒト免疫不全ウイルス１型逆転写酵素遺伝子における新規突然変異。J.Virol.６６：１２−１９。
３．Gu,Z.、Q.Gao、H.Fang、H.Salomon、M.A.Parniak、E.Goldberg、J.CameronおよびM.A.Wainberg、１９９４ａ。２',３'−ジデオキシシチジンおよび２',３'−ジデオキシ−３'−チアシチジンに対するヒト免疫不全ウイルス耐性をコード化する逆転写酵素のＩＫＫＫモチーフのコドン６５における突然変異の同定。Antimicrob. Agents Chemother.３８：２７５−２８１。
４．Gu,Z.、M.A. Wainberg、N.Nguyen-Ba、L.L'Heureux、J.-M. de Muys、T.L.BowlinおよびR.F.Rando、１９９９。感受性および薬剤耐性ヒト免疫不全ウイルス１型変異体に対する１',３'−ジオキソラニルプリンヌクレオシド類似体の作用機構およびインビトロ活性。Antimicrobial Agents and Chemotherapy, ４３：２３７６−２３８２。
５．Chou,T.C.およびｐ Talalay、１９８４。用量効果関係の定量分析：多重薬剤または酵素阻害剤の組み合わせ効果。Adv. Enzyme Regul.２２：２７−５５。
６．Prichard,M.N.、L.E.Prichardおよび C.Shipman,Jr.、１９９３。抗ウイルス薬剤組み合わせの戦略的設計および３次元分析。Antimicrob. Agents Chenmother.３７：５４０−５４５。
７．Rando,R.、J.Ojwang、A.Elbaggari、G.R.Reyes、R.Tinder、M.S.McGrathおよび M.E.Hogan、１９９５。分子内４分子を形成するオリゴヌクレオチドによるインビボヒト免疫不全ウイルス１型活性の抑制。J.Biol.Chem.２７０：１７５４−１７６０。
８．Salomon,H.、A.Belmonte、K.Nguyen、Z.Gu、M.GelfandおよびM.A.Wainberg、１９９４。ヒト免疫不全ウイルス１型を含むウイルス単離および薬剤感受性試験用標的としての臍帯血および末梢血単核細胞の比較。J.Clin.Microbiol.３２：２０００−２００２。