【手続補正書】
【提出日】平成19年3月22日(2007.3.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類細胞の組み換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）導入を高める方法であって、哺乳類細胞を、少なくとも１つのｒＡＡＶおよびｒＡＡＶ導入を相加的にもしくは相乗的に高めるのに有効な量の少なくとも２つの因子と接触させることを含んでなる方法。
【請求項２】
ｒＡＡＶがマーカー遺伝子もしくは選択可能な遺伝子を含んでなる請求項１の方法。
【請求項３】
一本鎖から二本鎖へのｒＡＡＶゲノム転化を改変する因子と細胞を接触させることをさらに含んでなる請求項１の方法。
【請求項４】
ｒＡＡＶの細胞取り込みを改変する因子と細胞を接触させることをさらに含んでなる請求項１の方法。
【請求項５】
該因子が、ｒＡＡＶおよび該因子の１つと接触させた対応する哺乳類細胞の形質導入、もしくは少なくとも１つのｒＡＡＶと接触させるが該因子と接触させない対応する哺乳類細胞の形質導入、に対して形質導入を少なくとも２倍高める請求項１の方法。
【請求項６】
該因子が、ｒＡＡＶおよび該因子の１つと接触させた対応する哺乳類細胞の形質導入、もしくは少なくとも１つのｒＡＡＶと接触させるが該因子と接触させない対応する哺乳類細胞の形質導入、に対して形質導入を少なくとも４倍高める請求項１の方法。
【請求項７】
該因子が、ｒＡＡＶおよび該因子の１つと接触させた対応する哺乳類細胞の形質導入、もしくは少なくとも１つのｒＡＡＶと接触させるが該因子と接触させない対応する哺乳類細胞の形質導入、に対して形質導入を少なくとも１０倍高める請求項１の方法。
【請求項８】
該因子の１つが化学療法薬、脂質低下薬、抗生物質もしくは食品添加剤である請求項１の方法。
【請求項９】
１つのｒＡＡＶが、連結された：
ｉ）ＡＡＶの５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）を含んでなる第一のＤＮＡセグメント；
ｉｉ）異種のＤＮＡを含んでなる第二のＤＮＡセグメント；および
ｉｉｉ）ＡＡＶの３’ＩＴＲを含んでなる第三のＤＮＡセグメント
を含んでなる第一の組み換えＤＮＡ分子を含んでなる請求項１の方法。
【請求項１０】
連結された：
ｉ）ＡＡＶの５’ＩＴＲを含んでなる第一のＤＮＡセグメント、および
ｉｉ）第一の組み換えＤＮＡ分子の第二のＤＮＡセグメントにおける配列と異なる配列を有する異種のＤＮＡを含んでなる第二のＤＮＡセグメント；および
ｉｉｉ）ＡＡＶの３’ＩＴＲを含んでなる第三のＤＮＡセグメント
を含んでなる第二の組み換えＤＮＡ分子を含んでなる第二のｒＡＡＶをさらに含んでなる請求項９の方法。
【請求項１１】
第一の組み換えＤＮＡ分子の第二のＤＮＡセグメントが、場合により少なくとも１つの転写調節要素に作動可能に連結されていてもよい、遺伝子産物のオープンリーディングフレームの一部、およびオープンリーディングフレームの部分に対して３’のスプライスドナー部位を含んでなり、そして第二の組み換えＤＮＡ分子の第二のＤＮＡセグメントが、第一の組み換えＤＮＡ分子の第二のＤＮＡセグメントと一緒になって機能性遺伝子産物をコードする、オープンリーディングフレームの残りに対して５’のスプライスアクセプター部位を含んでなる、請求項１０の方法。
【請求項１２】
転写調節要素がプロモーターである請求項１１の方法。
【請求項１３】
転写調節要素がエンハンサーである請求項１１の方法。
【請求項１４】
第一の組み換えＤＮＡ分子の第二のＤＮＡセグメントがエンハンサーを含んでなり、そして第二の組み換えＤＮＡ分子の第二のＤＮＡセグメントが機能性遺伝子産物をコードするオープンリーディングフレームを含んでなる請求項１０の方法。
【請求項１５】
第一の組み換えＤＮＡ分子の第二のＤＮＡセグメントがプロモーターを含んでなり、そして第二の組み換えＤＮＡ分子の第二のＤＮＡセグメントが機能性遺伝子産物をコードするオープンリーディングフレームを含んでなる請求項１０の方法。
【請求項１６】
細胞が肺細胞、上皮細胞、肝細胞、筋肉細胞、造血細胞、心臓細胞もしくは神経細胞である請求項１の方法。
【請求項１７】
機能性遺伝子産物の発現が高められる請求項１１、１４もしくは１５の方法。
【請求項１８】
第二のＤＮＡセグメントが機能性遺伝子産物をコードする請求項９の方法。
【請求項１９】
機能性遺伝子産物が治療ペプチドもしくはポリペプチドまたは予防ペプチドもしくはポリペプチドである請求項１１、１４、１５もしくは１８の方法。
【請求項２０】
機能性ポリペプチドが嚢胞性線維症膜貫通調節タンパク質、β−グロビン、γ−グロビン、チロシンヒドロキシラーゼ、グルコセレブロシダーゼ、アリールスルファターゼＡ、第ＶＩＩＩ因子、ジストロフィンもしくはエリスロポエチンである請求項１９の方法。
【請求項２１】
該因子の１つがエポキソミシン（ｅｐｏｘｏｍｉｃｉｎ）、ドキソルビシン、ドキシル、ダウノルビシン、イダルビシン、エピルビシン、アクラルビシン、カンプトテシン、シムバスタチン、タンニン酸、シスプラチン、ＬＬｎＬもしくはＺ−ＬＬＬである請求項１の方法。
【請求項２２】
細胞がヒト細胞、イヌ細胞、マウス細胞、ラット細胞もしくはウサギ細胞である請求項１の方法。
【請求項２３】
細胞をウイルスと接触させる前に細胞を少なくとも１つの因子と接触させる請求項１の方法。
【請求項２４】
細胞を少なくとも１つの因子と接触させる前に細胞をウイルスと接触させる請求項１の方法。
【請求項２５】
該因子の少なくとも１つがミクロフィラメントもしくは微小管を調節する請求項１の方法。
【請求項２６】
該因子の少なくとも１つがｒＡＡＶエンドサイトーシスを調節する請求項１の方法。
【請求項２７】
該因子の少なくとも１つが細胞におけるｒＡＡＶ輸送を調節する請求項１の方法。
【請求項２８】
該因子の少なくとも１つが細胞におけるｒＡＡＶプロセシングを調節する請求項１の方法。
【請求項２９】
該因子の少なくとも１つが細胞におけるｒＡＡＶ核酸分解を調節する請求項１の方法。
【請求項３０】
該因子の少なくとも１つが細胞におけるｒＡＡＶタンパク質分解を調節する請求項１の方法。
【請求項３１】
該因子の少なくとも１つが核へのｒＡＡＶ輸送を調節する請求項１の方法。
【請求項３２】
該因子の少なくとも１つが核へのウイルスゲノム輸送を調節する請求項１の方法。
【請求項３３】
内在性遺伝子産物の異常発現と関連する症状の危険性があるかもしくはそれを有する哺乳類の該症状を抑制するかもしくは処置するための組成物であって、ＡＡＶ導入を高める少なくとも１つの因子の有効量、および機能性遺伝子産物であって哺乳類におけるその発現が該症状の少なくとも１つの徴候を抑制するかもしくは処置する該機能性遺伝子産物の少なくとも一部をコードする導入遺伝子を含んでなる少なくとも１つのｒＡＡＶの有効量を含んでなり、ここで該因子は化学療法薬、脂質低下薬、抗生物質もしくは食品添加剤である、上記組成物。
【請求項３４】
異常発現が、内在性遺伝子産物の欠如もしくはその減少した発現である請求項３３の組成物。
【請求項３５】
１つのｒＡＡＶが、連結された：
ｉｖ）ＡＡＶの５’ＩＴＲを含んでなる第一のＤＮＡセグメント；
ｖ）異種のＤＮＡを含んでなる第二のＤＮＡセグメント；および
ｖｉ）ＡＡＶの３’ＩＴＲを含んでなる第三のＤＮＡセグメント
を含んでなる第一の組み換えＤＮＡ分子を含んでなる請求項３３の組成物。
【請求項３６】
連結された：
ｉｉ）ＡＡＶの５’ＩＴＲを含んでなる第一のＤＮＡセグメント、および
ｉｉ）第一の組み換えＤＮＡ分子の第二のＤＮＡセグメントにおける配列と異なる配列を有する異種のＤＮＡを含んでなる第二のＤＮＡセグメント；および
ｉｉｉ）ＡＡＶの３’ＩＴＲを含んでなる第三のＤＮＡセグメント
を含んでなる第二の組み換えＤＮＡ分子を含んでなる第二のｒＡＡＶをさらに含んでなる請求項３５の組成物。
【請求項３７】
第一の組み換えＤＮＡ分子の第二のＤＮＡセグメントが、場合により転写調節要素に連結されていてもよい、遺伝子産物のオープンリーディングフレームの一部、およびオープンリーディングフレームの部分に対して３’のスプライスドナー部位を含んでなり、第二の組み換えＤＮＡ分子の第二のＤＮＡセグメントが、第一の組み換えＤＮＡ分子の第二のＤＮＡセグメントと一緒になって機能性遺伝子産物をコードする、オープンリーディングフレームの残りに対して５’のスプライスアクセプター部位を含んでなる請求項３６の組成物。
【請求項３８】
転写調節要素がプロモーターである請求項３７の組成物。
【請求項３９】
第一の組み換えＤＮＡ分子の第二のＤＮＡセグメントがエンハンサーを含んでなり、そして第二の組み換えＤＮＡ分子の第二のＤＮＡセグメントが機能性遺伝子産物をコードするオープンリーディングフレームを含んでなる請求項３６の組成物。
【請求項４０】
第一の組み換えＤＮＡ分子の第二のＤＮＡセグメントがプロモーターを含んでなり、そして第二の組み換えＤＮＡ分子の第二のＤＮＡセグメントが機能性遺伝子産物をコードするオープンリーディングフレームを含んでなる請求項３６の組成物。
【請求項４１】
導入遺伝子の発現が高められる請求項３３の組成物。
【請求項４２】
導入遺伝子が嚢胞性線維症膜貫通調節タンパク質、β−グロビン、γ−グロビン、チロシンヒドロキシラーゼ、グルコセレブロシダーゼ、アリールスルファターゼＡ、第ＶＩＩＩ因子、ジストロフィンもしくはエリスロポエチンをコードする請求項３３の組成物。
【請求項４３】
哺乳類細胞を少なくとも１つのｒＡＡＶおよびｒＡＡＶ導入を高めるために有効な、ｒＡＡＶエンドサイトーシス、細胞内コンパートメントにおけるｒＡＡＶ輸送もしくはプロセシング、ウイルス核酸もしくはタンパク質分解、ウイルスもしくはウイルスゲノムの核輸送を改変する少なくとも１つの因子と接触させることを含んでなり、ただし該因子はプロテオソームタンパク質分解活性のインヒビターではない、哺乳類細胞のｒＡＡＶ導入を高める方法。
【請求項４４】
ｒＡＡＶがマーカー遺伝子もしくは選択可能な遺伝子を含んでなる請求項４３の方法。
【請求項４５】
一本鎖から二本鎖へのｒＡＡＶゲノム転化を改変する因子と細胞を接触させることをさらに含んでなる請求項４３の方法。
【請求項４６】
ｒＡＡＶの細胞取り込みを改変する因子と細胞を接触させることをさらに含んでなる請求項４３の方法。
【請求項４７】
該因子の１つが化学療法薬、脂質低下薬、抗生物質もしくは食品添加剤である請求項４３の方法。
【請求項４８】
細胞が肺細胞、上皮細胞、肝細胞、心臓細胞、造血細胞、筋肉細胞もしくは神経細胞である請求項４３の方法。
【請求項４９】
ｒＡＡＶが治療もしくは予防遺伝子産物を発現する請求項４３の方法。
【請求項５０】
細胞がヒト細胞、イヌ細胞、マウス細胞、ラット細胞もしくはウサギ細胞である請求項４３の方法。
【請求項５１】
少なくとも１つの因子がミクロフィラメントもしくは微小管を調節する請求項４３の方法。
【請求項５２】
少なくとも１つの因子がｒＡＡＶエンドサイトーシスを調節する請求項４３の方法。
【請求項５３】
少なくとも１つの因子が細胞におけるｒＡＡＶ輸送を調節する請求項４３の方法。
【請求項５４】
少なくとも１つの因子が細胞におけるｒＡＡＶプロセシングを調節する請求項４３の方法。
【請求項５５】
少なくとも１つの因子が細胞におけるｒＡＡＶ核酸分解を調節する請求項４３の方法。
【請求項５６】
少なくとも１つの因子が細胞におけるｒＡＡＶタンパク質分解を調節する請求項４３の方法。
【請求項５７】
少なくとも１つの因子が核へのｒＡＡＶ輸送を調節する請求項４３の方法。
項１の方法。
【請求項５８】
少なくとも１つの因子が核へのウイルスゲノム輸送を調節する請求項４３の方法。
【請求項５９】
少なくとも１つの因子がプロテオソームの細胞内局在性を調節する請求項４３の方法。
【請求項６０】
少なくとも１つの因子がエポキソミシン、ドキソルビシン、ドキシル、ダウノルビシン、イダルビシン、エピルビシン、アクラルビシン、シムバスタチンもしくはタンニン酸である請求項３３もしくは４３の方法。
【請求項６１】
ｒＡＡＶ媒介遺伝子治療を必要とする哺乳類におけるｒＡＡＶ導入を相加的にもしくは相乗的に高めるための薬剤の製造のための哺乳類細胞のｒＡＡＶ導入を高める２つもしくはそれ以上の因子の使用。
【請求項６２】
哺乳類における機能性遺伝子産物の少なくとも一部をコードする導入遺伝子を含んでなる少なくとも１つのｒＡＡＶの導入を高めるための薬剤の製造のための、化学療法薬、脂質低下薬、抗生物質もしくは食品添加剤の使用。
【請求項６３】
哺乳類における機能性遺伝子産物の少なくとも一部をコードする導入遺伝子を含んでなる少なくとも１つのｒＡＡＶの導入を高めるための薬剤の製造のための、ｒＡＡＶエンドサイトーシス、細胞内コンパートメントにおけるｒＡＡＶ輸送もしくはプロセシング、ウイルス核酸もしくはタンパク質分解、ウイルスもしくはウイルスゲノムの核輸送を改変する少なくとも１つの因子の使用であって、ただし該因子はプロテオソームタンパク質分解活性のインヒビターではない、上記使用。
【請求項６４】
薬剤がｒＡＡＶをさらに含んでなる請求項６１〜６３のいずれか１つの使用。
【請求項６５】
薬剤が少なくとも２つの異なるｒＡＡＶを含んでなる請求項６４の使用。
【請求項６６】
哺乳類が、導入遺伝子で抑制するかもしくは処置することのできる内在性遺伝子産物の異常発現と関連する症状を有する請求項６２もしくは６３の使用。