【手続補正書】
【提出日】平成19年8月6日(2007.8.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  遺伝子改変樹状細胞の調製方法であって、
（ａ）ヒト被験者から樹状細胞前駆体を得る段階と、
（ｂ）前記樹状細胞前駆体から付着樹状細胞前駆体を調製する段階と、
（ｃ）少なくとも１つの異種遺伝子を有する少なくとも１つの組換えアデノ随伴ウィルス（ＡＡＶ）で前記付着樹状細胞前駆体を形質導入して、前記異種遺伝子を発現する遺伝子改変樹状細胞を得る段階と
を含む方法。
【請求項２】  前記異種遺伝子が、前記形質導入前駆体の細胞増殖を促進して遺伝子改変樹状細胞を産生する少なくとも１種のサイトカインをコードする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】  前記方法がさらに、培地中で前記形質導入前駆体をインキュベートする段階と、次に形質導入後に前記形質導入前駆体の分化を促進する少なくとも１種のサイトカインを加える段階とを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】  前記培地が、前記形質導入前駆体の細胞増殖を促進する少なくとも１種のサイトカインを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】  細胞増殖を促進する前記サイトカインがＧＭ−ＣＳＦであり、前記前駆体の分化を促進する前記サイトカインがＩＬ−４である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】  遺伝子改変樹状細胞の調製方法であって、
（ａ）ヒト被験者から樹状細胞前駆体を得る段階と、
（ｂ）前記樹状細胞前駆体から付着樹状細胞前駆体を調製する段階と、
（ｃ）抗原をコードする遺伝子、サイトカインをコードする遺伝子およびそれらの１個または複数の遺伝子の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの異種遺伝子を含む少なくとも１つの組換えアデノ随伴ウィルス（ＡＡＶ）で前記付着樹状細胞前駆体を形質導入する段階と、
（ｄ）前記付着樹状細胞前駆体が、前記樹状細胞のゲノムに安定に組み込まれた前記異種遺伝子を含む樹状細胞に分化する条件下で、培地中にて前記付着樹状細胞前駆体をインキュベートして、遺伝子改変樹状細胞を得る段階と
を含む方法。
【請求項７】  前記異種遺伝子が、前記形質導入前駆体の細胞増殖を促進して遺伝子改変樹状細胞を産生する少なくとも１種のサイトカインをコードする、請求項６に記載の方法。
【請求項８】  前記方法がさらに、培地中で前記形質導入前駆体をインキュベートする段階と、次に形質導入後に前記形質導入前駆体の分化を促進する少なくとも１種のサイトカインを加える段階とを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】  前記培地が、前記形質導入前駆体の細胞増殖を促進する少なくとも１種のサイトカインを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】  前記培地が、前記前駆体の細胞増殖を促進する少なくとも１種のサイトカインを含み、次に、前記前駆体の分化を促進するサイトカインを、形質導入後に前記培地に加える、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】  細胞増殖を促進する前記サイトカインがＧＭ−ＣＳＦであり、前記前駆体の分化を促進する前記サイトカインがＩＬ−４である、請求項８から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】  前記遺伝子が、ＣＳＦ、インターロイキン（ＩＬ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）およびそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１種のサイトカインをコードする、請求項６から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】  前記抗原が、疾患特異的抗原、病原体特異的抗原または腫瘍特異的抗原からなる群から選択される、請求項６から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】  前記抗原が、ヒト乳頭腫ウイルス抗原、肝炎抗原、ＨＩＶ抗原および乳癌特異的抗原からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】  前記抗原が、ヒト乳頭腫ウィルスＥ６、ヒト乳頭腫ウィルスＥ７、ヒト乳頭腫ウィルスＬ１カプシド遺伝子、Ｂ型肝炎ウィルス抗原、Ｃ型肝炎ウィルス抗原、ＢＡ４６、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕおよびＣＤ２４からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】  請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法によって調製される遺伝子改変樹状細胞。
【請求項１７】  野生型ＡＡＶゲノム中に存在する２つのＢｓａＩ部位の間のＡＡＶ内部配列が欠失しているが、ＡＡＶゲノムの少なくとも一部、ならびに抗原をコードする遺伝子、サイトカインをコードする遺伝子、およびそれらの１個または複数の遺伝子の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの異種遺伝子を有する組換えアデノ随伴ウィルス（ＡＡＶ）。
【請求項１８】  前記抗原が、疾患特異的抗原、病原体特異的抗原または腫瘍特異的抗原からなる群から選択される、請求項１７に記載の組換えＡＡＶ。
【請求項１９】  前記抗原が、ヒト乳頭腫ウイルス抗原、肝炎ウィルス抗原、ＨＩＶ抗原および乳癌特異的抗原からなる群から選択される、請求項１８に記載の組換えＡＡＶ。
【請求項２０】  前記抗原が、ヒト乳頭腫ウィルスＥ６、ヒト乳頭腫ウィルスＥ７、ヒト乳頭腫ウィルスＬ１カプシド遺伝子、Ｂ型肝炎ウィルス抗原、Ｃ型肝炎ウィルス抗原、ＢＡ４６、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕおよびＣＤ２４からなる群から選択される、請求項１９に記載の組換えＡＡＶ。
【請求項２１】  前記遺伝子が、ＣＳＦ、インターロイキン（ＩＬ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）およびそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１種のサイトカインをコードする、請求項１７から２０のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ。
【請求項２２】  樹状細胞のゲノムに安定に組み込まれた請求項１７から２１のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶを有する遺伝子改変樹状細胞。
【請求項２３】  疾患に罹患した患者の免疫系を刺激する方法において、
ａ）前記疾患に関連する抗原をコードする遺伝子、サイトカインをコードする遺伝子およびそれらの１個または複数の遺伝子の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの異種遺伝子を有する少なくとも１つの組換えＡＡＶを含む、治療上有効量の遺伝子改変樹状細胞を前記患者に投与する段階、あるいは
ｂ）前記疾患に関連する抗原をコードする遺伝子、サイトカインをコードする遺伝子およびそれらの１個または複数の遺伝子の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの異種遺伝子を有する少なくとも１つの組換えＡＡＶを含む遺伝子改変樹状細胞によって刺激された、治療上有効量の刺激Ｔ細胞を前記患者に投与する段階を含み、
前記異種遺伝子を前記樹状細胞で発現させ、前記患者の免疫系を前記患者のＴ細胞応答の刺激によって刺激する方法。
【請求項２４】  前記遺伝子改変樹状細胞が、
（ａ）前記患者から樹状細胞前駆体を得る段階と、
（ｂ）前記樹状細胞前駆体から付着樹状細胞前駆体を調製する段階と、
（ｃ）前記疾患に関連する抗原をコードする遺伝子、サイトカインをコードする遺伝子およびそれらの１個または複数の遺伝子の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの異種遺伝子を有する少なくとも１つの組換えアデノ随伴ウィルス（ＡＡＶ）で前記付着樹状細胞前駆体を形質導入する段階と、
（ｄ）前記付着樹状細胞前駆体が、前記樹状細胞のゲノムに安定に組み込まれた前記異種遺伝子を含む樹状細胞に分化する条件下で、培地中にて前記付着樹状細胞前駆体をインキュベートして、遺伝子改変樹状細胞を得る段階と
を含む方法に従って得られる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】  前記刺激Ｔ細胞が、
（ａ）前記患者から樹状細胞前駆体を得る段階と、
（ｂ）前記樹状細胞前駆体から付着樹状細胞前駆体を調製する段階と、
（ｃ）前記疾患に関連する抗原をコードする遺伝子、サイトカインをコードする遺伝子およびそれらの１個または複数の遺伝子の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの異種遺伝子を有する少なくとも１つの組換えＡＡＶで前記樹状細胞前駆体を形質導入する段階と、
（ｄ）前記樹状細胞前駆体が、前記樹状細胞のゲノムに安定に組み込まれた前記異種遺伝子を含む樹状細胞に分化する条件下で、培地中にて前記樹状細胞前駆体をインキュベートして、遺伝子改変樹状細胞を得る段階と、
（ｅ）前記遺伝子改変樹状細胞を前記患者のＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞とともにインキュベートして刺激Ｔ細胞を得る段階と
を含む方法に従って得られる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】  前記異種遺伝子が、前記形質導入前駆体の細胞増殖を促進して遺伝子改変樹状細胞を産生する少なくとも１種のサイトカインをコードする、請求項２３から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】  前記方法がさらに、培地中で前記形質導入前駆体をインキュベートする段階と、次に形質導入後に前記形質導入前駆体の分化を促進する少なくとも１種のサイトカインを加える段階とを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】  前記培地が、前記形質導入前駆体の細胞増殖を促進する少なくとも１種のサイトカインを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】  前記培地が、前記前駆体の細胞増殖を促進する少なくとも１種のサイトカインを含み、次に、前記前駆体の分化を促進するサイトカインを、形質導入後に前記培地に加える、請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項３０】  細胞増殖を促進する前記サイトカインがＧＭ−ＣＳＦであり、前記前駆体の分化を促進する前記サイトカインがＩＬ−４である、請求項２６から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】  前記遺伝子が、ＣＳＦ、インターロイキン（ＩＬ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）およびそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１種のサイトカインをコードする、請求項２３から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】  前記抗原が、疾患特異的抗原、病原体特異的抗原または腫瘍特異的抗原からなる群から選択される、請求項２３から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】  前記抗原が、ヒト乳頭腫ウイルス抗原、肝炎抗原、ＨＩＶ抗原および乳癌特異的抗原からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】  前記抗原が、ヒト乳頭腫ウィルスＥ６、ヒト乳頭腫ウィルスＥ７、ヒト乳頭腫ウィルスＬ１カプシド遺伝子、Ｂ型肝炎ウィルス抗原、Ｃ型肝炎ウィルス抗原、ＢＡ４６、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕおよびＣＤ２４からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】  前記患者に対して前記遺伝子改変樹状細胞を投与する前に、前記遺伝子改変樹状細胞を前記患者のＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞とともにインキュベートする段階をさらに含む、請求項２３から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】  前記遺伝子改変樹状細胞を前記患者のＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞とともにインキュベートして、刺激Ｔ細胞を得る段階をさらに含む、請求項２３から３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】  医薬的に許容される担体、ならびに
ａ）抗原をコードする遺伝子、サイトカインをコードする遺伝子および前記樹状細胞のゲノムに安定に組み込まれた１個または複数の遺伝子の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの異種遺伝子を有する組換えＡＡＶを含む遺伝子改変樹状細胞、
ｂ）ａ）の細胞によって刺激されたＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞、
ｃ）ａ）の細胞によって刺激されたＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞、および
ｄ）ａ）、ｂ）およびｃ）のうちの少なくとも２つの組合せ
からなる群から選択される細胞を含む医薬組成物。
【請求項３８】請求項３７に記載の医薬組成物であって、前記遺伝子改変樹状細胞が、
（ａ）ヒト被験者から樹状細胞前駆体を得る段階と、
（ｂ）前記樹状細胞前駆体から付着樹状細胞前駆体を調製する段階と、
（ｃ）少なくとも１つの異種遺伝子を含む少なくとも１種の組換えＡＡＶで前記付着樹状細胞を形質導入して、前記異種遺伝子を発現する遺伝子改変樹状細胞を得る段階と、
（ｄ）前記付着樹状細胞前駆体が、前記樹状細胞のゲノムに安定に組み込まれた前記異種遺伝子を含む樹状細胞に分化する条件下で、培地中にて前記付着樹状細胞前駆体をインキュベートして、遺伝子改変樹状細胞を得る段階と
を含む方法により得られる前記医薬組成物。
【請求項３９】請求項１６に記載の治療上有効量の遺伝子改変樹状細胞、または請求項１６に記載の遺伝子改変樹状細胞により刺激された治療上有効量の刺激Ｔ細胞の、疾患に罹患した患者の免疫応答を刺激するための使用。
【請求項４０】請求項１６に記載の治療上有効量の遺伝子改変樹状細胞、または請求項１６に記載の遺伝子改変樹状細胞により刺激された治療上有効量の刺激Ｔ細胞の、疾患に罹患した患者の免疫応答を刺激するための医薬を製造するための使用。