(57)【要約】本発明は、以下の式の免疫刺激性化合物、それらの組み合わせ、それらを含む薬学的又は栄養調製物、並びにＴヘルパー（Ｔｈ）及びＴ調節（Ｔｒｅｇ）細胞媒介免疫応答を調節するためのそれらの使用に関する。
2019501175.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩又はその薬学的に許容される塩
【化１】
2019501175.tif 000008
式中、各ｎは０〜２である。
【請求項２】
式（ＩＩ）を有する、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【化２】
2019501175.tif 000009
【請求項３】
医薬として使用するための、請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
治療に使用するための、請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
ワクチンのアジュバントとして使用するための、請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
Ｔｒｅｇ及び／又はＴｈ１型の誘発、及び／又はＴｈ２型免疫応答の阻害によって予防又は治療することができる状態の治療に用いるための、請求項１又は２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
前記状態がＩ型即時型アトピー性アレルギーである、請求項６に記載の使用のための化合物。
【請求項８】
前記状態が、以下からなる群から選択される、請求項６又は７に記載の使用のための化合物
ａ）アトピー性湿疹／皮膚炎症候群（ＡＥＤＳ）、
ｂ）アレルギー性喘息、
ｃ）アレルギー性鼻炎
ｄ）アレルギー性蕁麻疹、
ｅ）食物アレルギー、
ｆ）毒性アレルギー、及び
ｇ）アレルギー性鼻結膜炎。
【請求項９】
前記状態が感染性疾患である、請求項３〜５のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項１０】
状態が癌である、請求項３〜５のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項１１】
請求項１に記載の１種以上の化合物と、好ましくは経皮担体、経粘膜担体、経口担体、非経口担体、デポー製剤用担体、及び徐放製剤用担体からなる群から選択される薬学的に許容される担体を含む免疫刺激性組成物。
【請求項１２】
前記担体が、舌下及び／又は頬側投与のための経粘膜担体である、請求項１１に記載の免疫刺激性組成物。
【請求項１３】
特定のアレルゲン免疫療法のためのアレルゲン調製物；及び／又は追加のアレルギー若しくは喘息薬をさらに含む、請求項１１又は１２に記載の免疫刺激性組成物。
【請求項１４】
感染性疾患に対するワクチン接種のための微生物特異的抗原；及び／又は抗菌剤をさらに含む、請求項１１又は１２に記載の免疫刺激性組成物。
【請求項１５】
前記抗原を発現する癌細胞に対する特異的免疫応答を誘発するための癌抗原；及び／又は癌治療薬をさらに含む、請求項１１又は１２に記載の免疫刺激性組成物。
【請求項１６】
食品添加物又は栄養調製物としての使用のための、請求項１又は２に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫刺激性化合物、並びにＴヘルパー（Ｔｈ）及びＴ調節（Ｔｒｅｇ）細胞媒介免疫応答を調節するためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫応答は、ヘルパーＴ細胞と呼ばれるものによって調節され、ヘルパーＴ細胞は、分泌されるサイトカインに基づいて、Ｔｈ１、Ｔｈ２及び調節性Ｔｒｅｇ細胞にさらに分けることができる。Ｔｈ１細胞は、例えばインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）及び腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）を産生し、マクロファージを活性化して食作用によって吸収された微生物を殺す。さらに、Ｔｈ１細胞は感染細胞を殺すために細胞傷害性Ｔ細胞を活性化する。Ｔｈ２細胞は、特定の免疫細胞、すなわち好塩基球、肥満細胞及び好酸球を活性化する能力により、アレルギー性炎症に重要なインターロイキン（ＩＬ）４、５及び１３を産生することによって特徴的である。Ｔｈ１及びＴｈ２細胞によって分泌されるサイトカインは、相反する表現型の効果を阻害する。さらに、Ｔｒｅｇ細胞は、Ｔｈ１及びＴｈ２応答の両方を抑制するＩＬ−１０を分泌することによって、免疫系におけるバランスを維持するという課題を有する。
【０００３】
Ｔｈ２細胞によって分泌されたＩＬ−４は、Ｂ細胞を抗体を産生する形質細胞に分化させるが、これらの形質細胞は、好塩基球及び肥満細胞を刺激してヒスタミンやセロトニンなどの局所仲介物質を分泌させる免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）を産生し、この局所仲介物質は過剰な粘液分泌ならびに咳、くしゃみ、及び下痢を引き起こして、検出された抗原を除去するのである。一方、ＩＬ−５は、サイトカイン及びケモカインを産生する好酸球を活性化し、アレルゲン曝露部位に炎症応答を引き起こす。
【０００４】
アレルギーは、免疫系が通常は無害な物質と過度に反応するタイプＩの過敏症として正式に知られている過敏性障害の一種である。健康な被験者では、アレルゲン曝露は、無害な方法で体内からアレルゲンを除去するＩｇＧ４の分泌を引き起こすＴｒｅｇ及びＴｈ１細胞によって支配されるＴ細胞応答を引き起こす。しかし、アレルギーに罹患している対象では、応答はＴｈ２細胞によって強く支配され、前述の炎症反応を引き起こす。
【０００５】
アレルギーのある患者は、増加していく量の特定のアレルゲンの反復注射で治療することができる。このタイプの特異的免疫療法（ＳＩＴ）は、保護Ｔｈ１及びＴｒｅｇ応答に対するＴｈ２型炎症反応を正常化するように作用する。ＳＩＴは現在、アレルギーに関連する根底にある病理学的免疫応答を治療する唯一の方法である。それは長期的な保護を提供する有力な方法であるが、治療には３〜５年かかり、注入された大量のアレルゲンはアレルギー反応を引き起こし、重篤な症例ではアナフィラキシーを引き起こすことすらある。しかし、治療は、免疫応答を修飾する特定のタイプのアジュバント、その持続時間、及び正しいタイプの抗体の産生を増加させることによって最適化することができる。
【０００６】
ワクチンに使用される１つの一般的なアジュバントはミョウバン（水酸化アルミニウム）であり、残念なことにこれは好ましくないＩｇＥ産生を引き起こすＴｈ２型応答を促進する。しかし、いくつかの第Ｉ〜ＩＩ相臨床試験で有望な結果を示しているオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）や、ヒトの使用が承認されており、注射の使用回数が有意に減少したアレルギー反応に対する防御を提供することが示されているモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）などの有望な候補がいくつかある。しかしながら、これらの化合物の治療上の使用は問題がないわけではない。ＣｐＧ−ＯＤＮは遺伝子であり、大規模合成には高価であることに加えて、（遺伝子操作された食品などの）世論の潜在的な問題を意味する。ＭＰＬアジュバントは、今度は、単一の化学物質ではなく、脂肪酸鎖の数及び長さに反映された違いを有する類似体の混合物である。
【０００７】
天然β-（1→2）結合マンノシドの免疫刺激性特性は、既に長い間知られている。それらは、免疫力がない人に重度の血流感染を引き起こす可能性のある日和見性の真菌であるカンジダ・アルビカンス（Candida albicans）に対する抗体の産生を刺激することが、複数の場合に示されている。しかし、それはほとんどの人間によって運ばれ、実際には正常なヒト腸内細菌叢の一部であると考えられている。
【０００８】
このクラスの化合物の生物学的活性は、少なくとも部分的に、それらの独自の三次元溶液構造に起因すると考えられている。１つの解決策では、１回転につき３〜４個の糖単位を有する歪んだαヘリックスコンフォメーションを採用する。ユニークなコンフォメーションをもたらす立体的な衝突のため、このクラスの化合物は本質的に非常にまれであるが、カンジダ種のいくつかの真菌、主にＣ．アルビカンスの細胞表面に見いだすことができる。
【０００９】
国際特許出願WO2006/096970は、β-D-マンノピラノシル-（1→2）-β-D-マンノピラノースを含む複数のオリゴ糖を含み、前記オリゴ糖のそれぞれがリンカーを介してタンパク質担体に連結された免疫原性コンジュゲートを開示する。コンジュゲートは、カンジダ種、特にカンジダ・アルビカンス（C. albicans）に対して、免疫原性応答を引き出す、すなわち後天性免疫を誘発するワクチンの調製に有用である。
【００１０】
国際特許出願WO2007/010084は、β-（1→2）-連結鎖及びβ-（1→2）-D-オリゴマンノシドを含む免疫刺激性マンナン多糖類、及びTh媒介性免疫応答を調節するためのその使用を開示する。しかしながら、４つまでの単糖単位からなる合成された単純なβ-（1→2）-結合オリゴマンノシド鎖の活性は、天然粗オリゴ糖混合物と比較して劣っていた。したがって、これらの合成オリゴ糖鎖の新規修飾が必要であった。
【００１１】
国際特許出願WO 2012/175813は、Th及びTreg媒介免疫応答のモジュレーターとしての使用のためのβ-（1→2）オリゴマンノシドを開示する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
当技術分野では、免疫刺激性及び良好な水溶性を提供する免疫刺激性化合物であって、対応する医薬及び/又は栄養調製物の製剤化を容易にするさらなる免疫刺激性化合物に対するニーズがある。
【００１３】
本発明の目的は、Ｔヘルパー（Th）及びT調節（Treg）細胞媒介免疫応答を調節するための免疫刺激性化合物及び組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
驚くべきことに、式（I）の免疫刺激性化合物は、上記のTh媒介性免疫応答の調節を提供し、従って、対象におけるＩ型アトピー性アレルギー、感染性疾患、及び癌の予防又は治療に使用され得ることが見出された。
【化１】
2019501175.tif 000003
式中、各nは0〜2である。
【００１５】
本発明の化合物は、1）完全にアセチル化された3価のβ-（1→2）マンノビオース単位を有し、2）これらの単位はα結合を介して、中心核に結合されており、3）その結合はマンノビオースをトリアゾール基に結合するエチレングリコールベースのリンカーを介している。
【００１６】
したがって、一態様では、本発明は、式（I）の化合物、それらの任意の組み合わせ、及びTh及びTreg細胞媒介免疫応答を調節するためのそれを含む組成物を提供する。
【００１７】
別の態様では、本発明は、薬剤として使用するための式（I）の免疫刺激性化合物を提供する。さらに別の態様では、本発明は、Treg型及び/又はTh1型を誘導する、及び/又はTh2型免疫応答を阻害することによって予防又は治療することができる状態に罹患しているか又は罹患しやすい、ヒトを含む哺乳動物を治療するためのための薬剤として使用するための免疫刺激性化合物を提供する。
【００１８】
Treg型及び/又はTh1型免疫応答は、Ｔ細胞におけるIFN-γ産生の誘導、及び/又はTh2型Ｔ細胞、肥満細胞、好酸球顆粒球及び/又は好塩基球顆粒球の機能の阻害又は抑制によって誘導される。Th2型免疫応答は、Ｔ細胞におけるIL-10産生の誘導及び/又はTh2型Ｔ細胞、肥満細胞、好酸球顆粒球及び/又は好塩基球顆粒球の機能の阻害又は抑制によって阻害される。Th2型免疫応答の阻害はまた、アレルゲン誘導性IL-4及び/又はIL-5産生の抑制に基づく。
【００１９】
本発明はまた、I型即時型アトピー性アレルギーの治療に使用するための本発明の免疫刺激性化合物を提供する。好ましい実施形態において、I型即時型アトピー性アレルギーは、アトピー性湿疹/皮膚炎症候群（AEDS）、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性蕁麻疹、食物アレルギー、毒性アレルギー及びアレルギー性鼻結膜炎の群から選択される。さらなる実施形態では、本発明は、感染症又は癌の治療に使用するための本発明の免疫刺激性化合物を提供する。
【００２０】
本発明のさらなる態様は、ワクチンのアジュバントとして使用するための式（I）の免疫刺激性化合物を提供する。
【００２１】
本発明はまた、式（I）の１種以上の免疫刺激性化合物及び薬学的に許容される担体を含む免疫刺激性組成物に関する。
【００２２】
さらなる態様において、本発明は、食品添加物として使用するための式（I）の免疫刺激性化合物を提供する。
【００２３】
本発明はまた、Treg型及び/又はTh1型免疫応答を誘導するための方法を提供し、この方法は、Treg型及び/又はTh1型免疫応答を誘導するために有効な量の本発明の組成物を対象に投与することを含み、本発明の組成物又は本発明の食物を、Th2型免疫応答の発達を部分的又は完全に阻害するのに有効な量で対象に投与することを含む、Th2型免疫応答の阻害方法に関する。
【００２４】
本発明の他の目的、態様、詳細、利点、及び特定の実施形態は、以下の図面、詳細な説明、実施例、及び従属請求項から明らかになるであろう。
【００２５】
以下では、添付の図面を参照して好ましい実施形態により本発明をより詳細に説明する。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、化合物1、2、3、MPL及びCpG-ODNを含むか含まないBet vで刺激されたPBMCのIL-4応答を示す。
【図２】図２は、化合物1、2、3、MPL及びCpG-ODNを含む及び含まないBet vで刺激されたPBMCのTNF応答を示す。
【図３】図３は、マウスにおけるメラノーマ腫瘍増殖の抑制における化合物3の有効性を実証する。
【図４】図４は、参照化合物1のROESYスペクトルを示す。
【図５】図５は、参照化合物1の最も多く存在するコンフォメーションを示す。
【図６】図６は、参照化合物2のROESYスペクトルを示す。
【図７】図７は、参照化合物2の最も多く存在するコンフォメーションを示す。
【図８】図８は、化合物3のROESYスペクトルを示し、最も重要な相関を示す。
【図９】図９は、化合物3の最も多く存在するコンフォメーションを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、式（I）の合成免疫刺激性完全アセチル化3価β-（1→2）マンノオリゴ糖、それを含む組成物、及びヘルパーＴ細胞（Th）媒介性免疫応答を調節するためのその使用を提供し、ならびに対象におけるI型アトピー性皮膚炎、感染性疾患又は癌の予防又は治療のための医薬、又は医薬若しくは栄養製剤の製造における使用を提供する。
【００２８】
アレルギー性炎症は、IgE抗体産生、肥満細胞脱顆粒及び好酸球性炎症によって特徴付けられる。これらの応答は、IL-4及びIL-5などのサイトカインを分泌するアレルゲン特異的Th2型免疫細胞によって媒介される。他のタイプのヘルパーＴ細胞、すなわちTh1型免疫細胞は、IFN-γなどのサイトカインを分泌し、アレルゲン誘発Th2型免疫応答の抑制に関与する。さらに、調節性サイトカインIL-10は、Th2型免疫応答のダウンレギュレーションにおいて重要である。
【００２９】
式（I）の化合物は、上記のTh媒介免疫応答を調節することができる。前記調節は、少なくとも、以下の実施例において実証されるように、ヒト白血球におけるIL-4産生の抑制によって生じ得る。この活性のために、式（I）の化合物は、Th2媒介性免疫応答の強力な阻害剤であり、したがって対象におけるI型アトピー性アレルギー、感染症及び癌の予防又は治療における強力なアジュバントである。
【００３０】
式（I）の化合物は、1）完全にアセチル化された3価のβ-（1→2）マンノビオース単位を有し、2）α-結合を介して中心コアに結合しており、3）その結合はマンノビオースをトリアゾール基に結合するエチレングリコール系リンカーを介している。式（I）の化合物の合成は、好ましくはクリックケミストリープロトコルの使用に基づく。式（I）の化合物の単位の組み合わせの特定の選択は、十分な水溶性を提供する。
【００３１】
所望であれば、式（I）の化合物は、本発明の任意の態様又は実施形態における任意の組み合わせで使用することができる。本明細書中で使用される場合、用語「本発明の化合物」（単数形及び複数形）及びそれらの任意の等価表現は互換的に使用することができ、用語が単数形であるか複数形であるかにかかわらず、式（I）の1つ又は複数の化合物及び/又は式（II）の化合物を参照することができる。
【００３２】
好ましくは、本発明の化合物は、トリエチレングリコール系リンカー（すなわち、nは1である）を有し、したがって式（II）に従うか、又はその薬学的に許容される塩である。
【化２】
2019501175.tif 000004
【００３３】
式（II）の化合物は、（1,2,3-トリス（1-{2-[2-（2-[O-（2,3,4,6-テトラ-O-アセチル-β -D-マンノピラノシル）-（1→2）-3,4,6-トリ-O-アセチル-α-D-マンノピラノシルオキシ]-エトキシ）-エトキシ]エチル}-4-メチルオキシ-1,2,3-トリアゾリル ）プロパン）と呼ぶことができる。実験の項では、この化合物を化合物3と呼ぶ。
【００３４】
WO2012/175813に開示されている従来公知のβ-（1→2）オリゴマンノシドと比較して、より柔軟性があり、三次元的な折りたたみ構造が予測しにくい長いリンカー単位にもかかわらず、式（I）の化合物はカバノキ（birch）アレルギーに罹患したヒト由来のPBMCのBetula verrucosa（ビーチ、ヨーロッパダケカンバ）により誘発されたIL-4応答を誘導することができ、したがってアレルゲン免疫療法におけるアジュバントとして有望である。式（I）の化合物の三次元構造は、非常に特異的であり、生物学的活性に必要と思われる。
【００３５】
本明細書中で使用される場合、用語「対象」は、哺乳動物、好ましくはヒト個体を指す。他の哺乳動物対象の非限定的な例には、家畜、家畜（産業動物）、及びイヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、畜牛、乳牛、クマなどの動物園、スポーツ、ペット動物が含まれる。したがって、本発明の化合物及びそれを含む組成物は、ヒトの医学的処置のため、ならびに獣医学の目的のために使用され得る。
【００３６】
本明細書中で使用される場合、用語「免疫刺激性剤」又は「免疫刺激性化合物」は、Ｔヘルパー1型及び調節型Ｔ細胞応答を刺激することによって宿主免疫系の機能に影響を及ぼすか又は役割を果たす生物学的活性物質を指す。免疫刺激性化合物は、自然免疫応答を強化し修飾するその能力及びその継続時間のために、他の用途の中でも、免疫刺激性化合物と一緒に投与されるワクチン又はSIT免疫原に対する体液性及び細胞性の免疫応答を増強するためのワクチン又はSIT調製物におけるアジュバントとして使用するのに適している。
【００３７】
本明細書で使用する「自然免疫系」という用語は、「非特異的免疫系」としても知られており、免疫系の２つの異なる成分のうちの１つを指す。自然免疫系は、脊椎動物の体内に常に存在し、事前の感染又はワクチン接種なしに抗原が体内に出現してからすぐに又は数時間以内に外来の抗原と戦う準備ができている非特異的防御機構からなる。これらのメカニズムには、皮膚、血液中の化学物質、体内の外来細胞を攻撃する免疫系細胞などの物理的障壁が含まれる。自然免疫応答は、抗原の化学的性質によって活性化される。
【００３８】
本明細書で使用される「適応免疫系」という用語は、「後天性免疫系」としても知られており、免疫系の他の異なる成分、すなわち抗原特異的免疫応答を指す。適応免疫応答は自然免疫応答よりも複雑であり、先天的な免疫防御を回避又は克服した外来抗原と戦うために必要である。適応免疫系は通常はサイレントであるが、前記外来抗原の存在下で活性化される。第一に、抗原は処理され、認識されなければならない。一旦認識されると、適応免疫系は、その抗原を攻撃するように特別に設計された免疫細胞の軍（大群）を作り出す。適応免疫には、特定の抗原に対する将来の応答をより効率的にする「記憶」も含まれる。適応免疫系の体液成分は、Ｂリンパ球によって産生される抗体によって媒介され、他方の細胞媒介成分はＴリンパ球を介して作用する。
【００３９】
本明細書で使用される場合、用語「免疫原」は、免疫原自体に対する特異的な適応免疫応答を刺激する薬剤を指す。これは、共投与免疫原に対する特異的免疫応答を増強するために、免疫系の非特異的活性化を刺激する免疫刺激性剤とは対照的である。
【００４０】
従って、本発明の免疫刺激性化合物は、ワクチンのアジュバントとしての使用に適している。したがって、それは、標的抗原に対する免疫系の応答を刺激するためのアジュバントとしてワクチンに添加され得るが、それ自体は免疫を付与しない。特に、本発明の化合物は、脱感作又はアレルゲン特異的免疫療法の注射におけるアジュバントとしての使用に適している。また、本発明の化合物は、感染症又は癌に対するワクチンのアジュバントとして使用することができる。好ましくは、アジュバントとして使用する場合、本発明による免疫刺激性化合物は、主成分である問題になっている免疫原と共投与することができる。しかし、本発明による免疫刺激性化合物は、前記免疫原又はワクチン組成物の別の成分に結合するか又はさらに結合するように、任意に操作することができる。
【００４１】
本発明は、Treg及び/又はTh1型免疫応答を誘導するための方法も包含する。この方法は、Treg及び/又はTh1型サイトカインの合成を誘導するのに有効な量で、本発明の化合物又はその組成物を対象に投与することを含む。好ましい実施形態では、この方法は、Ｔ細胞におけるIFN-γ合成の誘導を含むが、これに限定されない。
【００４２】
本発明はさらに、Th2型免疫応答を阻害する方法を含む。この方法は、免疫原に対するTh2型免疫応答の発達を部分的又は完全に阻害するのに有効な量で、本発明の化合物、その任意の組み合わせ、又はそれを含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。好ましい実施形態では、阻害のメカニズムには、Ｔ細胞におけるIL-10産生の誘導及び/又はIL-4及び/又はIL-5産生の抑制が含まれるが、これに限定されない。この方法はまた、Th2型Ｔ細胞、肥満細胞及び好酸球及び好塩基球顆粒球の機能の阻害又は抑制によるTh2型免疫応答の抑制を含み得る。
【００４３】
より具体的には、本発明の免疫刺激性化合物又はその組成物は、Treg及び/又はTh1型免疫応答が
a）Ｔ細胞におけるIFN-γ産生の誘導、及び/又は
b）Th2型Ｔ細胞、肥満細胞、好酸球顆粒球及び/又は好塩基球顆粒球の機能の阻害又は抑制
によって誘導される応用に使用するのに特に適している。
【００４４】
さらに、本発明の免疫刺激性化合物又はその組成物は、Th2型免疫応答が
a）Ｔ細胞におけるIL-10産生の誘導、
b）Ｔ細胞におけるIL-4及び/又はIL-5産生の抑制、及び/又は
c）Th2型Ｔ細胞、肥満細胞、好酸球顆粒球及び/又は好塩基球顆粒球の機能の阻害又は抑制
によって誘導される応用に使用するのに特に適している。
【００４５】
本発明はまた、Th媒介免疫応答を調節するための方法を提供する。好ましくは、本発明に従って刺激された免疫応答は、Th1型応答に向かって偏向され、Th2型応答から離れる。一態様では、この方法は、Th1型サイトカインの産生を刺激するのに有効な量で、本発明の化合物、その任意の組み合わせ、又はそれを含む組成物を対象に投与することを含む。好ましい実施形態では、この方法は、Ｔ細胞におけるIFN-γ合成の誘導を含むが、これに限定されない。他の態様では、本方法は、免疫原に対するTh2型免疫応答の発達を部分的又は完全に阻害する有効量の式（I）の化合物、その任意の組み合わせ又はそれらを含む組成物を対象に投与することを含む。好ましい実施形態では、阻害のメカニズムには、Ｔ細胞におけるIL-10産生の誘導及び/又はIL-4及び/又はIL-5産生の抑制が含まれるが、これに限定されない。この方法はまた、Th2型Ｔ細胞、肥満細胞及び好酸球及び好塩基球顆粒球の機能の阻害又は抑制によるTh2型免疫応答の抑制を含み得る。
【００４６】
本発明はさらに、Ｉ型即時型アトピー性アレルギーの予防又は治療のための医薬、又は医薬製剤若しくは栄養調製物の製造のための本発明の化合物の使用に関する。好ましい実施形態において、Ｉ型即時型アトピー性アレルギーは、アトピー性湿疹/皮膚炎症候群（AEDS）、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性蕁麻疹、食物アレルギー、毒性アレルギー及びアレルギー性鼻結膜炎からなる群から選択される。さらなる実施形態では、本発明の化合物は、感染性病原体によって引き起こされる感染症の予防及び治療に使用することができる。さらなる実施形態において、本発明の化合物は、癌の予防又は治療に使用することができる。
【００４７】
本明細書中で使用される場合、「予防する」（prevent）、「予防」（prevention）、「予防する」（preventing）などの用語は、前記障害を有するか、又はその発症のリスクが高い対象における障害の展開又は発症を完全に又は部分的に阻害することをいう。
【００４８】
本明細書中で使用される場合、用語「治療する」（treat）、「治療」（treatment）、「治療する」（treating）などは、そのような治療を必要とする対象に、有効量の本発明の化合物、その任意の組み合わせ、又はそれらを含む組成物を投与して、障害の発症を予防し、障害の症状を緩和し、障害の進行を止め、又は障害を治癒することをいう。
【００４９】
本明細書で使用される場合、用語「有効量」は、所望の治療結果を達成するために十分な有効量、又は少なくともTh2媒介事象の有害な影響を改善するために十分な有効量をいう。本発明の化合物、その任意の組み合わせ、又はそれを含む組成物の投与量及び投与計画は、Ｉ型過敏症、感染症又は癌を治療する臨床分野の当業者によって容易に決定され得る。典型的には、治療有効量は、組成物及び特に投与様式に依存して、約1μgから数グラムまで変動する。例えば、本発明の三価アセチル化β-（1→2）結合マンノビオースの非経口投与のための典型的な量は、1μg〜100μg、好ましくは2μg〜30μg、最も好ましくは3μg〜10μgであり、経口投与については典型的な量ははるかに多く、数mgから数グラムまで変動する可能性がある。
【００５０】
さらなる実施形態では、本発明の医薬又は医薬製剤は、経腸、粘膜、非経口及び局所経路を含む、当該分野で公知の任意の経路によって対象に投与され得る。経腸経路には、経口経路及び胃腸管からの吸収を含む任意の経路が含まれる。粘膜経路には、経口経路、経鼻経路、舌下経路、頬側経路、肺経路、経皮経路及び眼経路が含まれるが、これらに限定されない。非経口経路には、静脈内、皮内、筋肉内及び皮下経路が含まれるが、これらに限定されない。
【００５１】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物、その任意の組み合わせ、又はそれらを含む組成物は、薬学的に許容される担体と組み合わせて使用することができる。本発明による免疫刺激性組成物は、典型的には、少なくとも１種の式（I）の免疫刺激性化合物、及び薬学的に許容される担体を含む。「薬学的に許容される担体」という用語は、有効成分が組み合わされて対象への適用を容易にし、かつレシピエントにとって生理学的に許容される担体物質を指す。薬学的に許容される担体は、当該分野で容易に入手可能であり、意図される投与経路に依存して、経皮担体、経粘膜担体、経口担体、非経口担体、デポー製剤用担体、 徐放性製剤のための担体からなる群から選択され得るが、これらには限定されない。
【００５２】
本発明の免疫刺激性化合物、その任意の組み合わせ、又はそれらを含む組成物は、徐放性の全身送達を提供することができるマトリックスにカプセル化、取り込み又は溶解することができる。局所的な組織領域内、例えばアレルギー反応の部位、感染部位又はワクチン接種部位内での延長された送達を提供するために任意に適合させることができる。そのような持続放出又は制御放出は、インビボでのデポー又はその成分の生体分解の結果として、又は代謝変換又は溶解が前記免疫刺激性化合物を放出した結果として生じる放出を包含することが意図される。例えば、免疫刺激性化合物が免疫原と一緒にアジュバントとして使用される皮下注射においては、それ自体が経時的に血液/周辺組織に漏出するデポーとして機能し得る。
【００５３】
あるいは、本発明の免疫刺激性化合物は、コアユニット又は担体から脂質基に直接結合して、次いでデポー製剤を提供することができる。このような脂質修飾又は脂質化免疫刺激性化合物は、懸濁液の形成、乳濁液への取り込み、脂質膜、脂質小胞、リポソームなどのために使用することができる。
【００５４】
さらなる実施形態において、本発明の医薬組成物は、別の治療化合物を含み得る。本明細書で使用する「治療化合物」という用語は、好ましくは、アレルギー薬、喘息薬、抗菌薬又は癌医薬である。
【００５５】
他の実施形態では、本発明の医薬組成物は抗原を含む。用語「抗原」は、宿主免疫系によって認識され、特異的免疫応答を誘発することができる任意のタイプの分子（例えば、タンパク質、ペプチド、多糖類、糖タンパク質、核酸、又はそれらの組合せ）を広く含む。その抗原に対する免疫応答を刺激するための本発明の組成物において使用される抗原は、合成の、天然に存在する又は単離された分子又はその断片であり得、そして単一又は複数のエピトープを含み得る。したがって、本発明の組成物は、1つ又は複数の抗原の単一又は複数のエピトープに向けられた免疫応答を刺激することができる。本発明の組成物に言及する場合、「抗原」及び「免疫原」という用語は互換的に使用することができる。
【００５６】
いくつかの実施形態では、抗原は、特異的なアレルゲン免疫療法（アレルゲンワクチン接種又は舌下免疫療法）のためのアレルゲン調製物である。本明細書中で使用される場合、用語「アレルゲン」は、感受性対象においてアレルギー性又は喘息性の応答を誘導することができる物質を指し、花粉、昆虫毒、動物のふけ、真菌の胞子及びハウスダストのダニが挙げられる。本明細書で使用される「特異的アレルゲン免疫療法」という用語は、アレルゲン免疫療法、減感作療法又は免疫脱感作としても知られており、既知の経路のいずれかによって徐々に増加する量のアレルゲンを投与してアレルゲンへの寛容化を誘導して、さらなるアレルギー反応を防ぐことによりアレルギー障害を有する対象の治療をいう。従って、本発明の組成物はまた、特異的なアレルゲン免疫療法のためのアレルゲン調製物、及び/又は追加のアレルギー若しくは喘息医薬を含み得る。
【００５７】
あるいは、本発明の医薬組成物は、感染症及び/又は抗菌剤に対するワクチン接種又は免疫化のための微生物特異的抗原調製物をさらに含み得る。「感染性疾患」という用語は、体内の外来微生物又は感染性病原体の存在に起因する疾患を指す。用語「感染性病原体」、すなわち微生物は、ウイルス、細菌及び寄生虫を指す。このように、感染性病原体という用語は、望ましくない通常の菌叢も含む。一態様では、本発明の医薬組成物と微生物抗原の併用投与は、病原体に対する免疫応答の増強を刺激するのに有用である。本明細書で使用される「微生物抗原」という用語は、無傷の微生物、ならびに天然の微生物抗原と同一又は類似の天然単離物及びその断片又は誘導体、並びに合成化合物を含む。さらに他の実施形態では、本発明の医薬組成物は、微生物抗原に特異的に結合又は認識する抗体又は抗体断片を含み得る。
【００５８】
いくつかのさらなる実施形態において、本発明の医薬組成物は、抗原を発現する癌細胞に対する特異的免疫応答を誘発するための癌抗原を含み得る。本明細書で使用される用語「癌抗原」及び「腫瘍抗原」は互換的に使用することができ、癌細胞又は腫瘍細胞によって発現され、免疫応答を引き起こすことができるペプチドなどの化合物を指す。より具体的には、「腫瘍特異的抗原」は、腫瘍細胞と特異的に関連するが正常細胞とは関連しない抗原である。腫瘍特異的抗原の非限定的な例は、腫瘍遺伝子、サプレッサー遺伝子、及び内部欠失又は染色体転座から生じる融合タンパク質などの変異細胞遺伝子によってコードされるものである。「腫瘍関連抗原」は、腫瘍細胞及び正常細胞の両方に存在するが、腫瘍細胞において異なる量又は異なる形態で存在する。さらに他の癌抗原は、RNA及びDNAウイルスに担持されたものなどのウイルス遺伝子によってコードされる。正常及び癌細胞における癌抗原の差次的発現は、癌細胞を標的とするために利用することができる。
【００５９】
いくつかの実施形態では、本発明の方法、化合物、及び組成物によって治療される癌は、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、白血病、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸癌、胃癌、膵臓癌、神経内分泌癌、グリア芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、脳腫瘍、肝癌、乳癌、結腸癌、大腸癌、子宮内膜又は子宮癌、食道癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、頭頸部癌、及びそれらの組み合わせを含むが、これらには限定されない。本発明に従って治療される好ましい癌の種類はメラノーマである。
【００６０】
異なる癌に特異的な又は関連する癌抗原は、当技術分野において周知である。従って、当業者は、治療すべき癌のタイプに応じて、本発明の組成物に含まれる癌抗原を容易に選択することができる。癌抗原は、当技術分野で周知の方法によって調製することができる。例えば、これらの抗原は、癌細胞の粗抽出物を調製することにより、抗原を部分的に精製することにより、組換え技術により、又は公知の抗原の新規合成により、癌細胞から調製することができる。さらに、抗原は完全な抗原であってもよく、又は少なくとも1つのエピトープを含む完全な抗原の断片であってもよい。
【００６１】
さらに他の実施形態では、本発明の化合物は食品添加物として使用することができる。本発明の化合物は、栄養調製物であってもよい。栄養調製物は優先的に経腸投与可能であり、例えば、粉末、錠剤、カプセル、液体濃縮物、固体製品、又はすぐに飲める飲料である。あるいは、栄養調製物は、通常の食品の添加物として適切なマトリックスと組み合わせられる。他の実施形態では、本発明の栄養調製物は、幼児用調合乳又は他の機能性食品の改良に使用される。本発明の組成物を含むさらなる実施形態は、チューインガムであり得る。
【実施例】
【００６２】
総括
合成作業のための全ての試薬は、Sigma-Aldrichから購入し、少なくとも試薬等級であり、さらに精製することなく使用した。乾燥CH2Cl2をCaH2上での蒸留により得、乾燥DMFをそのまま購入し、モレキュラーシーブ上で保存した。シリカゲル60F254（Merck）で予めコーティングしたアルミニウムシート上でTLCを行い、スポットをUVにより可視化し、MeOH（20％v/v）中のH2SO4で処理し、続いて加熱することにより炭化した。カラムクロマトグラフィーは、シリカゲル60（0.040-0.060mm Merck）を用いて行った。旋光度は、パーキンエルマー（Perkin-Elmer）241偏光計で、589nmのナトリウムのD線を用いて測定した。HRMSは、ポジティブモードで動作するエレクトロスプレーイオン化を用いてBruker MicroToF-Qで記録した。NMRスペクトルは、600.13Hz又は500.13Hz（1H）及び150.90Hz又は125.77Hz（13C）のいずれかで操作するBruker Avance分光計で記録した。プロトン及び炭素スペクトルの完全な帰属は、NMR実験の標準セット、1H NMR、13C NMR、DQF-COSY、HSQC（共役及び脱共役の両方）及びHMBCを記録することによって行った。1D-TOCSYを使用することにより、スペクトルの複雑さが単糖レベルに低下した。ROESY及びDOSY法を使用して立体配座研究を助けた。化学シフトは、内部標準（テトラメチルシラン、1H及び13Cの両方でδ= 0.0ppm）又は残留溶媒シグナル（CDCl3、1Hでは7.26ppm、13Cでは77.16ppm）を基準とし、1H NMRでは小数点以下第２位及び13C NMRでは小数点以下第１位で報告する。これが信号を分離するのに十分でない場合は、追加の小数を報告する。正確なカップリング定数は、可能であれば、NMRシミュレーションソフトウェアPERCHで決定し、１桁で報告した。NMRデータの不必要な膨張を避けるために、各結合定数は最初に遭遇したときにのみ報告される。
【００６３】
分子モデリングと視覚化はMaestroで行われ、計算はMaestroの内蔵インターフェースを使用してDesmondによって実行した。当初、分子はマエストロで構築され、その後、マエストロの内蔵インターフェースを介して制御されたDesmondを用いて計算が行われた。分子動力学シミュレーションの良好な出発点を得るために、分子を構築した後に1000ステップを超える迅速な最小化シーケンスを実施し、その結果が妥当かどうかを視覚的に検査した。分子動力学シミュレーションは、温度を最初に600Kに上昇させた後、溶媒信号がNMRスペクトルにおいて重要な信号と重複しないように溶媒信号をシフトさせるため、我々のケースでは周囲温度よりも低い最終シミュレーション温度からゆっくりと下降させるシミュレーテッドアニーリングシーケンスで開始した。さらに、より低い温度は、重なり合うプロトンシグナルのいくつかを離れたところにシフトさせ、ROESYスペクトルから情報を抽出することを容易にした。アニーリングを繰り返して、分子が高エネルギーの極小でくっついていないことを確認した。アニーリング後、分子動力学シミュレーションを2ns実行し、その間に1ps毎に構造が保存された。これらの構造から、プロトン間の平均距離が測定され、NOE効果は1/r6に比例するので、この係数は平均距離を計算する際に重量として使用された。生成された構造のうち、最も多く分布したコンフォメーションファミリーを分析し、記録されたROESYスペクトルに見られる相関を用いて検証した。
【００６４】
式（I）の化合物の実験的合成
式（I）の化合物は、例えば以下の反応スキームに従って合成することができる：
【化３】
2019501175.tif 000005
【００６５】
式（II）の化合物は、例えば以下の反応スキームに従って合成することができる：
【化４】
2019501175.tif 000006
【００６６】
2-[2-（2-アジドエトキシ）エトキシ]エチル2-O-アセチル-4,6-O-ベンジリデン-3-O-（4-メトキシベンジル）-α-D-マンノピラノシド（5）：
−40℃で乾燥CH2Cl2（40ml）中のフェニル2-アセチル-4,6-O-ベンジリデン-3-O-（4-メトキシ-ベンジル）-チオ-α-D-マンノピラノシド（1000mg、1.92mmol、1当量）及び2-[2-(2-アジドエトキシ）エトキシ]エタノール（403mg、2.30mmol、1.2当量）の溶液に、4ÅモレキュラーシーブNIS（517mg、2.30mmol、1.2当量）及びTMSOTf（83μl、0.23mmol、0.24当量）を加えた。反応混合物を-40℃で2時間撹拌し、次いでNaHCO3（20ml）の飽和溶液を添加して反応を停止させた。反応混合物を室温にし、CH2Cl2（50ml）で希釈し、飽和NaHCO3溶液（50ml）で洗浄し、その後、水層をCH2Cl2（2×50ml）で抽出した。合わせた有機層をブライン（100ml）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮した。粗混合物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：EtOAc 2：1→1：1）で精製して、わずかに黄色の油として純粋な生成物5を得た。Rf：0.33（ヘキサン：EtOAc 1：1）。収量790mg（70％）。
【００６７】
[α]D24= +20.0° (c 2.30, CHCl3). 
1H NMR (600.13 MHz, CDCl3, 25 °C): δ = 7.50 (m, 2 H, 芳香族H), 7.40-7.34 (m, 3 H, 芳香族H), 7.27 (m, 2 H, 芳香族H), 6.83 (m, 2 H, 芳香族H), 5.62 (s, 1 H, 4,6-OCHPh), 5.42, (dd, 1 H, JH-2, H-1 = 1.6 Hz, JH-2, H-3 = 3.5 Hz, H-2), 4.83, (d, 1 H, H-1), 4.64 and 4.58 (各 d, 各 1 H, J = -11.56 Hz, 3-OCH2Ph), 4.25 (dd, 1 H, JH-6a, H-5 = 4.8 Hz, JH-6a, H-6b = -10.24 Hz, H-6a), 4.03 (dd, 1 H, JH-4, H-3 = 10.0 Hz, JH-4, H-5 = 9.5 Hz, H-4), 4.01 (dd, 1 H, H-3), 3.91 (ddd, 1 H, JH-5, H-6b = 10.4 Hz, H-5), 3.83 (dd, 1 H, H-6b), 3.80 (m, 1 H, H-1’a), 3.79 (s, 3 H, 3-OCH3), 3.68-3.61 (m, 9 H, H-1’b, H-2’, H-3’, H-4’, H-5’), 3.34 (m, 2 H, H-6’), 2.15 (s, 3 H, COCH3).
13C NMR (150.9 MHz, CDCl3, 25 °C): δ =170.2 (2-OCOCH3), 159.2, 137.5, 130.1, 129.3, 128.9, 128.1, 126.1, 113.7 (芳香族C), 101.5 (4,6-OCHPh), 98-8 (C-1), 78.3 (C-4) 73.6 (C-3), 71.8 (3-OCH2Ph), 70.8, 70.7, 70.1 (C-2’, C-3’, C-4’, C-5’), 69.7 (C-2), 68.7 (C-6), 67.0 (C-1’), 63.8 (C-5), 55.2 (3-OCH3), 50.6 (C-6’), 21.0 (2-OCOCH3).
HRSM: m/z 計算値 C29H41N4O10[M+NH4]+: 605.2817, 実測値: 605.2829, m/z 計算値 C29H37N3NaO10 [M+Na]+: 610.2371, 実測値: 610.2361.
【００６８】
2-[2-（2-アジドエトキシ）エトキシ]エチル4,6-O-ベンジリデン-3-O-（4-メトキシベンジル）-α-D-マンノピラノシド（7）：
アルゴン雰囲気下での乾燥メタノール（4ml）中の5（490mg、0.83mmol）の溶液のpHを、MeOH中のNaOMeの5.4M溶液を数滴添加することによって〜10-12に調整した。反応混合物を室温で30分間撹拌し、次いでDOWEX-50WX8 H+型で中和した。反応混合物を濾過し、濃縮して、純粋な生成物7を黄色/橙色の油状物として得た。収量：441mg（97％）。
【００６９】
[α]D24= +21.0° (c 1.10, CHCl3). 
1H NMR (600.13 MHz, CDCl3, 25 °C): δ = 7.51 (m, 2 H, 芳香族H), 7.42-7.35 (m, 3 H, 芳香族H), 7.30 (m, 2 H, 芳香族H), 6.88 (m, 2 H, 芳香族H), 5.61 (s, 1 H, 4,6-OCHPh), 4.91 (d, 1 H, JH-1, H-2 = 1.5 Hz, H-1), 4.78 and 4.65 (各 d, 各 1 H, J = -11.4 Hz, 3-OCH2Ph), 4.26 (dd, 1 H, JH-6a, H-5 = 4.5 Hz, JH-6a, H-6b = -9.3 Hz, H-6a), 4.081 (dd, 1 H, JH-2, H-3 = 3.5 Hz, H-2), 4.076 (dd, 1 H, JH-4, H-3 = 9.6 Hz, JH-4, H-5 = 9.5 Hz, H-4), 3.93 (dd, 1 H, H-3), 3.88 (ddd, 1 H, JH-5, H-6b = 9.6 Hz, H-5), 3.84 (dd, 1 H, H-6b), 3.85-3.82 (m, 1 H, H-1’a), 3.81 (s, 3 H, 3-OCH3), 3.71-3.65 (m, 9 H, H-1’b, H-2’, H-3’, H-4’, H-5’), 3.37 (m, 2 H, H-6’).
13C NMR (150.9 MHz, CDCl3, 25 °C): δ = 159.5, 137.7, 130.3, 129.6, 129.0, 128.3, 126.2, 114.0 (芳香族C), 101.6 (4,6-OCHPh), 101.1 (C-1), 79.0 (C-4), 75.4 (C-3), 72.8 (3-OCH2Ph), 70.91, 70.87, 70.4, 70.3 (C-2’, C-3’, C-4’, C-5’), 70.0 (C-2), 69.0 (C-6), 66.9 (C-1’), 63.4 (C-5), 55.4 (3-OCH3), 50.8 (C-6’).
HRSM: m/z 計算値 C27H39N4O9[M+NH4]+: 563.2712, 実測値: 563.2691, m/z 計算値 C27H35N3NaO9 [M+Na]+: 568.2266, 実測値: 568.2267.
【００７０】
2-[2-（2-アジドエトキシ）エトキシ]エチルO-[4,6-O-ベンジリデン-2,3-ジ-O-（4-メトキシベンジル）-β-D-マンノピラノシル]-（1→2）-4,6-O-ベンジリデン-3-O-（4-メトキシベンジル）-α-D-マンノピラノシド（9）：
乾燥CH2Cl2（15ml）及び1-オクテン（5ml）中のフェニル4,6-O-ベンジリデン-2,3-ジ-O-（4-メトキシ-ベンジル）-チオ-α-D-マンノピラノシド（1059mg、1.76mmol、1.3当量）の溶液に、4Åモレキュラーシーブを添加した後、溶液を-60℃に冷却した。BSP（526mg、2.12mmol、1.56当量）、TTBP（568mg、2.71mmol、2当量）及びTf2O（386μl、2.29mmol、1.69当量）を加え、反応混合物を-60℃で30分間攪拌した。次いで、反応混合物を-78℃に冷却し、乾燥CH2Cl2（5ml）中の7（740mg、1.36mmol、1当量）を添加した。反応混合物を-78℃で3時間撹拌し、次いでEt3N（1ml）を添加して反応停止させ、反応混合物を30分かけて室温に戻した。反応混合物をCH2Cl2（50ml）で希釈し、次いで飽和NaHCO3溶液（50ml）で洗浄した。水層をCH2Cl2（2×50ml）で抽出し、合わせた有機層をブライン（100ml）で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：EtOAc 2：1→1：1）により、透明の油状物として純粋な9を得た。Rf=0.35（ヘキサン：EtOAc 1：1）。収量：613mg（43％）。
【００７１】
[α]D24= -36.0° (c 1.36, CHCl3). 
1H NMR (600.13 MHz, CDCl3, 25 °C): δ = 7.51-7.47 (m, 4 H, 芳香族H), 7.43 (m, 2 H, 芳香族H), 7.40-7.32 (m, 8 H, 芳香族H), 7.19 (m, 2 H, 芳香族H), 6.86-6.79 (m, 6 H, 芳香族H), 5.59 (s, 1 H, 4B,6B-OCHPh), 5.51 (s, 1 H, 4A,6A-OCHPh), 4.96 and 4.89 (各 d, 各 1 H, J = -11.9 Hz, 2B-OCH2Ph), 4.84 (d, 1 H, JH-1A, H-2A = 0.7 Hz, H-1A), 4.71 and 4.62 (各 d, 各 1 H, J = -11.5 Hz, 3A-OCH2Ph), 4.60 and 4.53 (各 d, 各 1 H, J = -12.0 Hz, 3B-OCH2Ph), 4.60 (s, 1 H, H-1B), 4.27 (dd, 1 H, JH-2A, H-3A = 3.0 Hz, H-2A), 4.26 (dd, 1 H, JH-6Ba, H-5B = 5.9 Hz, JH-6Ba, H-6Bb = -10.6 Hz, H-6Ba), 4.25 (dd, 1 H, JH-6Aa, H-5 = 4.9 Hz, JH-6Aa, H-6Ab = -11.2 Hz, H-6Aa), 4.22 (dd, 1 H, JH-4B, H-3B = 9.8 Hz, JH-4B, H-5B = 9.5 Hz, H-4b), 4.08 (dd, 1 H, JH-4A, H-3A = 9.9 Hz, JH-4A, H-5A = 9.7 Hz, H-4A), 3.96 (dd, 1 H, H-3A), 3.93 (d, 1 H, JH-2B, H-3B = 3.1 Hz, H-2B) 3.87 (dd, 1 H, JH-6Bb, H-5B = 9,9 Hz, H-6Bb), 3.85 (ddd, 1 H, JH-5A, H-6Ab = 9.9 Hz, H-5A), 3.82 (m, 1 H, H-1’), 3.80 (s, 3 H, OCH3), 3.774 (s, 3 H, OCH3), 3.766 (dd, 1 H, H-6Ab), 3.76 (s, 3 H, OCH3), 3.69-3.59  (m, 9 H, H-1’b, H-2’, H-3’, H-4’, H-5’), 3.55 (dd, 1 H, H-3B), 3.32 (m, 2 H, H-6’), 3.30 (ddd, 1 H, H-5B).
13C NMR (150.9 MHz, CDCl3, 25 °C): δ = 159.23, 159.22, 159.1, 137.71, 137.70, 131.1, 130.7, 130.52, 130.45, 129.3, 129.2, 128.9, 128.30, 128.26, 126.22, 126.15, 113.79, 113.65, 113.6 (芳香族C), 101.7 (4A,6A-OCHPh), 101.5 (4B,6B-OCHPh), 101.0 (C-1B), 98.5 (C-1A), 78.7 (C-4A), 78.6 (C-4B), 77.3 (C-3B), 75.3 (C-2B), 74.9 (C-2A), 74.2 (2B-OCH2Ph), 72.0 (3B-OCH2Ph), 70.94 (3A-OCH2Ph), 70.91, 70.8, 70.3, 70.2 (C-2’, C-3’, C-4’, C-5’), 69.0 (C-6A), 68.7 (C-6B), 67.9 (C-5B), 67.0 (C-1’), 64.3 (C-5A), 55.38, 55.36, 55,3 (3 × OCH3), 50.7 (C-6’).
HRSM: m/z 計算値 C56H69N4O16[M+NH4]+: 1053.4703, 実測値: 1053.4669, m/z 計算値 C56H65N3NaO16[M+Na]+: 1058.4257, 実測値: 1058.4208.
【００７２】
2-（2-（2-アジドエトキシ）エトキシ）エチルO-（2,3,4,6-テトラ-O-アセチル-β-D-マンノピラノシル）-（1→2）-3,4,6-トリ-O-アセチル-α-D-マンノピラノシド（11）：
10mlのCH2Cl2中の9（200mg、0.19mmol、1当量）の溶液に、1,3-プロパンジチオール（155μl、1,54mmol、8当量）を加え、混合物を氷浴上で冷却した。TFA（4ml）及びH2O（1ml）を加え、反応混合物を室温で3時間撹拌した。次いで、反応混合物をH2O（100ml）で希釈し、CH2Cl2（4×50ml）で洗浄した後、水層を濃縮し、トルエンと共濃縮させた。残渣をピリジン（20ml）に溶解し、Ac2O（10ml）を添加しながら氷浴上で冷却した。次いで、反応混合物を室温で18時間撹拌し、その後、反応物を氷浴上で冷却し、メタノール（10ml）を加えて反応を停止させた。反応混合物をCH2Cl2（50ml）で希釈し、H2O（4×50ml）及びブライン（50ml）で洗浄した。有機層をNa2SO4で乾燥し、濃縮した。粗混合物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：EtOAc 1：1→CH2Cl2：メタノール 20：1）で精製して、透明な油状物として純粋な11を得た。Rf=0.34（CH2Cl2：メタノール 20：1）。収量：113mg（75％）。
【００７３】
[α]D24 = -51.5° (c 1.62, CHCl3). 
1H NMR (600.13 MHz, CDCl3, 25 °C): δ = 5.51 (dd, 1 H, JH-2B, H-1B = 0.7 Hz, JH-2B, H-3B = 3.4 Hz, H-2B), 5.27 (t, 1 H, JH-4A, H-3A = JH-4A, H-5A = 10.1 Hz, H-4A), 5.22 (dd, 1 H, JH-4B, H-3B = 10.0 Hz, JH-4B, H-5B = 9.9 Hz, H-4B), 5.05 (dd, 1 H, H-3B), 5.02 (dd, 1 H, JH-3A, H-2A = 3.4 Hz, H-3A), 4.88 (d, 1 H, JH-1A, H-2A = 1.8 Hz, H-1A), 4.69 (d, 1 H, H-1B), 4.36 (dd, 1 H, H-2A), 4.32 (dd, 1 H, JH-6Bb, H-5B = 6.0 Hz, JH-6Bb, H-6Ba = -12.2 Hz, H-6Bb), 4.26 (dd, 1 H, JH-6Ab, H-5A = 3.8 Hz, JH-6Ab, H-6Aa = -12.3 Hz, H-6Ab) 4.06 (dd, 1 H, JH-6Aa, H-5A = 2.3 Hz, H-6Aa), 4.02 (dd, 1 H, JH-6Ba, H-5B = 2.4 Hz, H-6Ba), 3.94 (ddd, 1 H, H-5A), 3.81 (m, 1 H, H-1’a), 3.72-3.64 (m, 9 H, H-1’b, H-2’, H-3’, H-4’, H-5’), 3.64 (ddd, 1 H, H-5B), 3.40 (m, 2 H, H-6’), 2.25 (s, 3 H, 2B-COCH3), 2.13 (s, 3 H, 6A-COCH3), 2.10 (s, 3 H, 6B-COCH3), 2.05 (s, 3 H, 4A-COCH3), 2.03 (s, 3 H, 4B-COCH3), 2.02 (s, 3 H, 3A-COCH3), 2.01 (s, 3 H, 3B-COCH3).
13C NMR (150.9 MHz, CDCl3, 25 °C): δ = 171.0 (6A-COCH3), 170.7 (6B-COCH3), 170.3 (2B-COCH3), 170.2 (3A-COCH3), 170.0 (3B-COCH3), 169.7 (4B-COCH3), 169.3 (4A-COCH3), 97.5 (C-1A), 96.3 (C-1B), 72.22 (C-5B), 72.17 (C-2A), 70.73, 70.72 (C-3’, C-4’), 70.6 (C-3B), 70.3 (C-3A), 70.2 (C-2’), 70.1 (C-5’), 68.52 (C-2B), 68.50 (C-5A), 67.1 (C-1’), 66.1 (C-4B), 65.1 (C-4A), 62.5 (C-6B), 61.8 (C-6A), 50.7 (C-6’), 20.8, 20.74, 20.70, 20.62, 20.57 (COCH3).
HRSM: m/z 計算値 C32H51N4O20[M+NH4]+: 811.3091, 実測値: 811.3083, m/z 計算値 C32H47N3NaO20 [M+Na]+: 816.2645, 実測値: 816.2621.
【００７４】
1,2,3-トリス（1-{2-[2-（2-[O-（2,3,4,6-テトラ-O-アセチル-β-D-マンノピラノシル）-（1→2）-3,4,6-トリ-O-アセチル-α-D-マンノピラノシルオキシ]エトキシ）エトキシ]エチル}-4-メチルオキシ-1,2,3-トリアゾリル）プロパン（3）：
CH2Cl2（2mL）中の11（70mg、0.088mmol、3.3当量）及び1,2,3-トリス（プロプ-2-イン-1-イルオキシ）プロパン（5.5mg、0.027mmol、e当量）に、t-BuOH（2ml）及びH2O（2ml）を添加した。CuSO4（2.8mg、0.017mmol、0.66当量）及びNa-アスコルビン酸塩（7.0mg、0.035mmol、1.32当量）を加え、反応混合物を55℃で18時間撹拌した。NH4Cl（10ml）及びH2O（10ml）の飽和溶液を加え、反応混合物をCH2Cl2（4×20ml）で抽出した。合わせた有機層をNa2SO4で乾燥し、濃縮した。粗混合物をカラムクロマトグラフィー（CH2Cl2：メタノール 20：1→5：1）で精製して、純粋な生成物3を白色固体として得た。Rf=0.16（CH2Cl2：メタノール 20：1）。収量：62mg（89％）。
【００７５】
[α]D24 = -37.0° (c 1.05, CHCl3). 
1H NMR (600.13 MHz, CDCl3, 25 °C): δ = 7.81, 7.772, 7.769 (各 s, 各 1 H, 3 × トリアゾH), 5.52-5.49 (m, 3 H, 3 × H-2B), 5.27 (m, 3 H, 3 × H-4A), 5.23 (m, 3 H, 3 × H-4B), 5.06 (m, 3 H, 3 × H-3B), 5.01-4.97 (m, 3 H, 3 × H-3A), 4.85 (m, 3 H, 3 × H-1A), 4.78 (s, 2 H, G2-OCH2), 4.72 (m, 3 H, 3 × H-1B), 4.64 (s, 4 H, G1-OCH2), 4.60-4.51 (m, 6 H, 6 × H-6’), 4.36-4.30 (m, 6 H, 3 × H-6Bb, H-2A), 4.24 (m, 3 H, 3 × H-6Ab), 4.06 (m, 3 H, 3× H-6Aa), 4.03-3.98 (m, 3 H, 3 × H-6Ba), 3.95-3.86 (m, 9 H, 3 × H-5A, 6 × H-5’), 3.85-3.75 (m, 4 H, H-G2, 3 × H-1’a), 3.68-3.58 (m, 28 H, 3 × H-5B, 4 × H-G1, 3 × H-1’b, 6 × H-2’, 6 × H-3’, 6 × H-4’), 2.24, 2.12, 2.09, 2.04, 2.03, 2.02, 2.01 (各 s, 各 9 H, 21 × COCH3).
13C NMR (150.9 MHz, CDCl3, 25 °C): δ = 171.0, 170.6, 170.33, 170.29, 170.0, 169.7, 169.3 (COCH3), 145.1, 144.7 (C-4, triaz.), 124.0, 123.9 (C-5, triaz.), 97.6 (C-1A), 96.29, 96.27 (C-1B), 77.2 (C-G2), 72.11, 72.08 (C-5B, C-2A), 70.67, 70.65 (C-3B), 70.51, 70.49 (C-3’, C-4’),70.29, 70.26 (C-3A), 70.2 (C-G1), 70.1 (C-2’), 69.5 (C-5’), 68.53 (C-2B), 68.49 (C-5A), 67.0 (C-1’), 66.1 (C-4B), 65.1 (C-4A), 64.8 (G1-OCH2), 63.8 (G2-OCH2), 62.4 (C-6B), 61.8 (C-6A), 50.20, 50.16 (C-6’), 20.79, 20.75, 20.7, 20.62, 20.57 (COCH3).
HRSM: m/z 計算値 C108H155N9NaO63[M+Na]+: 2608.9094, 実測値: 2608.8944.
【００７６】
生物学的研究
アレルゲンにより誘発されるサイトカイン応答
生物学的研究対象
花粉の季節に、アレルギー性鼻結膜炎を有する14人の成人のカバノキアレルギー対象（１２人の女性及び２人の男性）を実験に参加させた（平均年齢42.5歳、標準偏差12.4歳、平均カバノキ特異的IgE（Immunocap、Thermo Fisher Scientific Phadia、Uppsala、Sweden ）36.1 kU / l、SD 31.5 kU / l）。彼らは、花粉の季節中のカバノキに誘導されたIL-4応答に基づく早期のコホートからの研究のために選択された。インフォームドコンセントの後、すべてのサンプルを採取した。調査は地元倫理委員会の承認を受けた。
【００７７】
生物学的研究におけるアジュバント
化合物1（1,2,3-トリス[1-（3-{O-（2,3,4,6-テトラ-O-アセチル-β-D-マンノピラノシル）-（1→2）-3,4,6-トリ-O-アセチル-α-D-マンノピラノシルオキシ}エチル）-4-メチルオキシ-1,2,3-トリアゾリル]プロパン）及び化合物2（1,2,3-トリス[1-（3-{O-（2,3,4,6-テトラ-O-アセチル-β-D-マンノピラノシル）-（1→2）-3,4,6-トリ-O-アセチル-α-D-マンノピラノシルオキシ}プロピル）-4-メチルオキシ-1,2,3-トリアゾリル]プロパン）をWO2012/175813に記載されているように合成した。化合物3（1,2,3-トリス（1-{2-[2-（2-[O-（2,3,4,6-テトラ-O-アセチル-β-D-マンノピラノシル）-（1→2）-3,4,6-トリ-O-アセチル-α-D-マンノピラノシルオキシ]エトキシ）-エトキシ]エチル}-4-メチルオキシ-1,2,3-トリアゾリル）プロパン）を、本明細書に記載の方法に従って調製した。合成MPL及びCpG-ODN（tlrl-2006）はInvivogen（San Diego、CA、USA）から購入した。CpG-ODNは、以前の研究で使用されたものと同一の5'-TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT-3 '（配列番号1）の配列を有していた。
【化５】
2019501175.tif 000007
【００７８】
PBMC培養
花粉の季節の研究対象からのヘパリン化血液サンプルから、Ficoll-Paque密度勾配遠心分離（Ficoll-Paque PLUS、GE Healthcare Bio-Sciences AB、Uppsala、Sweden）により末梢血単核細胞（PBMC）を単離した。PBMCを、NaHCO3（pH 7.4）で緩衝したハンクス平衡塩類溶液（HBSS）で2回洗浄し、5％自己血清、2.5mMのL-グルタミン(Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO)及び100μg/ mlの硫酸ゲンタマイシン（Biological Industries Ltd.、Kibbutz Beit Haemek、イスラエル）を補充したRPMI-1640培地（Invitrogen Co.、Carlsbad、CA、USA）に再懸濁し、48ウェル平底細胞培養プレート（Costar、Corning Inc.、New York、United States）上に、106/mlの密度で培養した。細胞を、カバノキアレルゲン（50μg/ml、Betula verrucosa、Bet v、Aquagen、ALK-AbelloA / S、Hoersholm、Denmark）及び化合物1、2、3及び1、10及び100μg/ mlの濃度のMPL及び2、20及び200μg/ mlの濃度のアジュバントCpG-ODNの存在下で共培養し、等価のモルを達成した。培地のみのものを非刺激対照として用いた。すべてのインキュベーションは、5％CO2を含む加湿雰囲気中で+37℃で実施した。二連で実施された培養物からの上清を、刺激の開始から72時間後に収集し、-70℃で保存した。
【００７９】
IL-4及びTNF産生
上清中のサイトカインIL-4及びTNFを、高感受性ヒトサイトカインLincoplexキット（LINCO Research、St. Charles、MO、USA）を用いて測定した。アッセイは、ルミネックス（Luminex）技術を用いることにより、製造業者のプロトコルに従って実施した。
【００８０】
統計
WilcoxonのSigned Rank検定を用いてPBMC実験における統計的有意性を試験した。単一マウス群を、GraphPad Prismソフトウェア（v.5、GraphPad Software Inc.、La Jolla、CA、USA）を用いたノンパラメトリックなMann-Whitney U検定によって比較した。データは平均±SEMとして表され、0.05未満のP値は統計的に有意であると考えられる。
【００８１】
結果
カバノキアレルギー性鼻炎患者14人のPBMC培養物におけるアレルゲン（Bet v）誘発サイトカイン応答に対する化合物1,2,3、MPL及びCpG-ODNの効果を図1に示す。カバノキを用いた刺激は、非刺激培養物（平均0.4pg/ml、SEM 0.2pg/ml）（p=0.0015）と比較して、Th2サイトカインIL-4（平均45.3pg/ml、SEM 11.2pg/ml）の有意の応答を誘発した。化合物2の10（p <0.001）及び100μg/ml（p=0.036）、化合物３の10（p=0.016）及び100μl/ml（p=0.021）、化合物３の10（p=0.016）及び100μg/ml（p=0.006）、MPLの1（p=0.002）及び10μg/ ml（P = 0.0.013）、及び200μg/mlのCpG-ODN（p=0.002）では、カバノキ誘発IL-4産生の有意な抑制が見られた。CpG-ODNの濃度が低いほどIL-4産生が増加し、MPLの最高濃度が抑制効果を示さなかったので、抑制の用量反応曲線は化合物1〜3でのみ見られた。100μg/ml（p=0.021）の化合物2、100μl/ml（p=0.0039）の化合物3及び20（p = 0.0026）及び200μg/ml（p<0.001）のCpG-ODNで、前炎症性サイトカインTNFの産生の有意な増加が見られた（図2）。
【００８２】
癌免疫療法のインビボ（in vivo）異種移植モデル
材料と方法
100μlのPBS中の3×106個のB16メラノーマ細胞を、7週齢のメスC57BL/6マウスの右脇腹に皮下注射した。化合物3を0日目から開始して、3日間隔で5回200μlPBS中の50μg/注射を腹腔内投与した。各処置群には10匹のマウスが含まれていた。腫瘍体積は、式0.5 *長さ*幅2を用いて計算した。腫瘍容積が800mm3に達したときに動物を犠牲にした。Etela-Suomen Aluehallintavirasto（許可ESAVI/480/04.10.07/2016）によって受け入れられた手順に従って、動物実験を行った。
【００８３】
結果
マウスの腫瘍増殖は極めて活発であり、マウスは13日目に屠殺しなければならなかった。腫瘍成長は、化合物3で処置したマウスでは後期に開始し、対照と比較して9日目まで遅かった。9日目に、対照マウスと比較して化合物3で処置したマウスで腫瘍体積が統計的に有意に小さかった（図3）。
【００８４】
立体配座研究
生物学的に活性な分子の効果を予測して正確に決定するためには、溶液中のそれらの挙動を調べることが重要である。そのような研究には、典型的には、分子の三次元構造及びそれらの経時変化に関する研究が含まれる。そのような研究は、分子の動的挙動に影響を及ぼす温度及び溶媒を含むいくつかの要因を伴い、必ずしも直接的ではない。本研究では、化合物1、2及び3を、拡散秩序分光法（DOSY）及び回転フレームオーバハウザー効果分光法（ROESY）法を含むNMR分光法によって研究した。
【００８５】
NOE効果は、溶液中で急速に動き回る小さな分子に対して陽性であるか、又はよりゆっくり動き回るタンパク質などのより大きな分子に対して陰性であり得る。この結果、NOE効果がゼロになり得る領域が存在する。二糖類から六糖類（約400〜1500Da）の範囲にあるオリゴ糖が頻繁に存在するのはこの領域内である。この研究で研究された分子はこれより幾分大きいが、NOEの影響はやや弱い。したがって、常に正のシグナルを与えるROESY実験が用いられた。ROESYは、どのプロトンが空間において互いに接近しているかを評価し、分子の配座に関する重要な情報を提供することを可能にする。さらに、これらのデータは、分子動力学シミュレーションから生じる結果と比較することもできる。
【００８６】
一方、DOSYは、分子の拡散係数を計算することができ、分子の拡散係数は、分子が占有する流体力学的半径（体積）に関する情報を与える。化合物1〜3の生物学的評価は水中で実施されたが、水溶性が乏しく、非現実的に長い実験時間に至ったであろうから、NMR実験は重水素化メタノール中で行った。メタノールの性質は、極性及び誘電率（水及びメタノールについて、それぞれ、ｐ=1.85D、ε=80.1、及びｐ=1.69D、ε=32.7）に関して水とかなり類似している。残念なことに、3つの異なるマンノビオース単位からのシグナルは、互いに実質的に区別がつかず、全てのマンノビオース部分の化学的環境はかなり類似していることが示された。注目すべきことに、ROESY実験が行われたので、相関の欠如は、NOESY類似体よりも分子運動に対して感受性が低いので、相関自体と同じくらいの情報を提供することができる。
【００８７】
計算プロトコルについては、「一般的な」セクションで説明する。特に、分子動力学シミュレーションにより得られた幾何学的形状は、重要なプロトン相互距離を抽出するために使用され、これは、確立されたアプローチを用いてNOESY実験から推定されたものと比較された。
【００８８】
結果
DOSYを用いて分子の大きさを推定した。むしろ驚くべきことに、1〜3のリンカー長は著しく変化するが、拡散係数は実質的に同一である。直感的には、立体相互作用を最小限に抑えるために、分子の3つのアームが可能な限り広がるように試みることが予想される。しかし、これは事実ではないようである。高極性溶媒（重水素化メタノール）の使用により、これらの非極性分子は、むしろ自分自身と相互作用し、溶媒との接触を最小限に抑えようとし、したがって自分自身の上に折り返した折れ曲がった構造を形成する。ROESYスペクトルの厳しい重複は、異なるマンノビオース単位間の相関を1つの特定の実体内で生じるものと区別することを不可能にする。したがって、ここでは、観測されたROEについて、対応する距離が4Åよりも大きくなることはできないと安全上仮定して、観測された相関のみを報告する。これは、このサイズの分子においてNOE効果を生じる距離のおおよその上限である。
【００８９】
参照化合物1
多くの回転可能な結合を有する大きな分子の場合、エネルギー最小値はそれほど明確に定義されていない。これは、溶液中で、多数の異なる立体配座が存在することを意味する。これは本件でも同様である。分子動力学シミュレーションの間に、多数の立体配座が観察された。アニーリングシーケンスの高温中、分子の支配的なコンフォメーションは、各アームがまっすぐに向いているものであったが、系が冷却するにつれて、分子が一緒に折り畳まれ始めた。実際、低温ではこれが支配的な立体配座であった。
【００９０】
折りたたまれた構造を支持するこの分子の最も重要なROESY相関は、トリアゾール及びリンカープロトンからの相関であった。トリアゾールプロトンは、H-2A及びH-3Aプロトン及びアノマープロトンH1A（図4）との相関を示した。分子動力学シミュレーションから得られた距離はそれぞれ3.3Å、3.2Å及び4.0Åであった。さらに、H-2Bプロトンは、分子中に存在するβ-（1→2）結合マンノシドのαβ配置に特徴的なH-1Aプロトンとの相関を示した。最も重要な相関関係を図4に示す。さらに、プロトンH3AとH5A、ならびにH1B、H3B及びH5Bの間に相関が見られた。これは、炭水化物部分が4C1立体配座であることを確認した。NOEデータと一致する、分子動力学シミュレーション中の化合物1のための最も多く存在する形態の立体配座を図5に示す。
【００９１】
参照化合物2
わずかに大きい化合物2の挙動は、化合物1の挙動と非常に類似していた。ROESYスペクトルの主な相違点は、1つ以上の-CH2-部分を付加したことにより、トリアゾール環が、炭水化物プロトンとのROE相関が起きないように十分離れたところに位置しているということであった。トリアゾールプロトンとの関連性のある相関は見られなかったので、リンカーと炭水化物プロトンとの間の相関を調べることによって立体配座を決定した。この場合の関連する相関は、H1A-H1'（2.4Å）、H1A-H2'（4.0Å）、H5A-H1'（2.6Å）、H5A-H2'（3.6Å）、及びH5A-H3'（3.6Å）であった（図6）。実験データと一致した分子動力学シミュレーションから抽出された最も多く存在する立体配座を図7に示す。
【００９２】
化合物3
予想通り、最も大きな分子の挙動は他の2つのものとわずかに異なっていた。リンカーユニットは有意により長いものとなり、これはより高い柔軟性を可能にし、したがって2つのより小さい分子に比べて、より明確に定義されていないエネルギー最小値を可能にする。
【００９３】
ROESYスペクトルにおいて、種々の炭水化物プロトンからリンカーユニットへの相関が見られた。これは、図9に示すようなコンパクトな構造に一致していた。特に、H4A及びH4B以外のリンカー陽子とほとんどすべての糖プロトンとの相関があった（図8）。この事実は、炭水化物部分間のグリコシド結合が高度に珍しい立体配座を採用しない限り期待されるはずである。分子動力学シミュレーションによれば、グリコシド結合は、グリコシドΦ角度が約60°で、グリコシドΨ角度が約20〜30°である期待通りの立体配座であったが、これはβ-（1→2）結合マンノシドの典型的な立体配座と一致した。他の2つの構造と同様に、グリセロールプロトンと炭水化物又はリンカープロトンとの間の相関は見られなかった。分子動力学シミュレーションから抽出された化合物3の最も多く存在する立体配座を図9に示す。
【００９４】
結論
3つ全ての化合物の折りたたまれた構造は、分子の外側にトリアゾール部分を残す。これによりこれらの化合物が生物学的標的に接近可能となり、トリアゾールが生物学的事象に関与することが知られている。実際、いくつかの医薬品はトリアゾール部分の周りに設計されている。この場合、グリコクラスター1、2及び3の生物学的活性に対するトリアゾール部分の可能な影響は完全に排除することはできないが、非常に多数のオリゴ原子価のβ-（1→2）マンノシドがスクリーニングされ、その中にはトリアゾール単位も含まれており、有望なインビトロ活性を示す唯一の化合物は以前に知られた化合物1及び2ならびにそれらの新規アナログ化合物3であった。これら３つの活性化合物による共通の特徴は：１）十分にアセチル化された３価のβ-（1→2）マンノビオース単位である、2）それらがβ-結合を介して中心核に結合している、3）その結合は異なるサイズのリンカーを介しているということである。この三次元構造は高度に特異的であり、少なくとも生体外PBMCモデルにおいて不活性である対応する脱アセチル化された又はβ-結合を介してリンカー及び中心核に結合された化合物1の類似体との生物学的活性に必要と思われる。さらに、3つの分子すべてにおいて、グリセロール骨格は糖部分の反対側にある、すなわち、グリカン部分は全て分子の同じ側に折り畳まれる。これは、骨格中のプロトンが炭水化物プロトンとのROESY相関を示さないという事実によって支持される。
【００９５】
技術が進歩するにつれて、本発明の概念は様々な方法で実施できることは、当業者には明らかであろう。本発明及びその実施形態は、上記の例に限定されず、特許請求の範囲内で変更することができる。
【配列表フリーテキスト】
【００９６】
配列番号１：＜２２３＞  合成CpG-ODN
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2019501175.tif 000020
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