【手続補正書】
【提出日】平成19年10月19日(2007.10.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経変性症状を処置、予防または改善するのに有用な調節因子を同定する方法であって、候補調節因子が表３または３Ａに開示するものからなる群から選択されるタンパク質の生化学的機能を調節する能力についてアッセイすることを含む方法。
【請求項２】
該方法が、同定された調節因子が該症状のインビトロまたはインビボモデルで観察される病的効果を逆行させる能力についてアッセイすることをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該方法が、同定された調節因子が該症状を有する対象の臨床研究で観察される病的効果を逆行させる能力についてアッセイすることをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
該症状がＡＤである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
神経変性症状を処置、予防または改善するのに有用な調節因子を同定する方法であって、候補調節因子が表３または３Ａに開示するものからなる群から選択されるタンパク質の遺伝子発現を調節する能力についてアッセイすることを含む方法。
【請求項６】
該方法が、同定された阻害性調節因子が該症状のインビトロまたはインビボモデルで観察される病的効果を逆行させる能力についてアッセイすることをさらに含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
該方法が、同定された阻害性調節因子が該症状を有する対象の臨床研究で観察される病的効果を逆行させる能力についてアッセイすることをさらに含む、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
該症状がＡＤである、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
神経変性症状を処置、予防または改善するのに、それを必要としている対象において有効な量の、表３または３Ａに開示するものからなる群から選択されるタンパク質の調節因子を含む医薬組成物。
【請求項１０】
該症状がＡＤである、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
該調節因子が、該タンパク質の生化学的機能を阻害する、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
該調節因子が、該タンパク質に対する１種またはそれ以上の抗体またはそれらのフラグメントを含み、該抗体またはそれらのフラグメントが、該タンパク質の生化学的機能を阻害できる、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
該調節因子が、該タンパク質の生化学的機能を増強する、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
該調節因子が、該タンパク質の遺伝子発現を阻害する、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
該調節因子が、アンチセンスオリゴヌクレオチド、三重らせんＤＮＡ、リボザイム、ＲＮＡアプタマー、ｓｉＲＮＡ、二本鎖および一本鎖ＲＮＡからなる群から選択される１種またはそれ以上の物質を含み、該物質が該タンパク質の遺伝子発現を阻害するように設計されている、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
該調節因子が、該タンパク質の遺伝子発現を増強する、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
神経変性症状を患っている、表３または３Ａに開示するものからなる群から選択されるタンパク質の調節因子を用いる処置に適する候補であり得る対象の診断方法であって、該対象に由来する生物学的サンプルにおける、該タンパク質の１種またはそれ以上のｍＲＮＡレベルをアッセイすることを含み、対照と比較して変更されたレベルを有する対象は、調節因子による処置に適する候補である、方法。
【請求項１８】
神経変性症状を患っている、表３または３Ａに開示するものからなる群から選択されるタンパク質の調節因子を用いる処置に適する候補であり得る対象の診断方法であって、該対象に由来する生物学的サンプルにおける、該タンパク質の１種またはそれ以上のレベルを検出することを含み、対照と比較して変更されたレベルを有する対象は、調節因子による処置に適する候補である、方法。
【請求項１９】
神経変性を処置、予防または改善するための請求項１ないし請求項１６のいずれかに記載の医薬組成物であって、対象における表３または３Ａに開示するものからなる群から選択されるタンパク質のｍＲＮＡレベルについてアッセイし、対照と比較して変更されたレベルの該タンパク質のｍＲＮＡを有する対象に、該症状の病的効果を処置、予防または改善するのに十分な量で投与するための、医薬組成物。
【請求項２０】
該症状がＡＤである、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
該調節因子が、該タンパク質の遺伝子発現を増強する、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
該調節因子が、該タンパク質の遺伝子発現を阻害する、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
神経変性症状を処置、予防または改善するための請求項１ないし請求項１６のいずれかに記載の医薬組成物あって、対象における表３または３Ａに開示するものからなる群から選択されるタンパク質のレベルについてアッセイし、対照と比較して変更されたレベルの該タンパク質を有する対象に、該症状の病的効果を処置、予防または改善するのに十分な量で投与するための、医薬組成物。
【請求項２４】
該症状がＡＤである、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
該調節因子が、該タンパク質の生化学的機能を増強する、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
該調節因子が、該タンパク質の生化学的機能を阻害する、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
生物学的サンプルにおける表３または３Ａに開示するものからなる群から選択されるタンパク質のｍＲＮＡレベルを検出するための診断キットであって、該キットが、
（ａ）表３または３Ａに記載のポリペプチドのポリヌクレオチドまたはそれらのフラグメント；
（ｂ）（ａ）のものに相補的なヌクレオチド配列；
（ｃ）（ａ）のポリヌクレオチドにコードされる、本発明の表３または３Ａのポリペプチド；
（ｄ）（ｃ）のポリペプチドに対する抗体；
（ｅ）（ａ）のものに相補的なＲＮＡｉ配列、
を含み、成分（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）が実質的な成分を構成し得る、キット。
【請求項２８】
生物学的サンプルにおける表３または３Ａに開示するものからなる群から選択されるタンパク質のレベルを検出するための診断キットであって、該キットが、
（ａ）表３または３Ａに記載のポリペプチドのポリヌクレオチドまたはそれらのフラグメント；
（ｂ）（ａ）のものに相補的なヌクレオチド配列；
（ｃ）（ａ）のポリヌクレオチドにコードされる、本発明の表３または３Ａのポリペプチド；
（ｄ）（ｃ）のポリペプチドに対する抗体；
（ｅ）（ａ）のものに相補的なＲＮＡｉ配列、
を含み、成分（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）が実質的な成分を構成し得る、キット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】
用語「アンチセンス」は、本明細書で使用するとき、特定のＤＮＡまたはＲＮＡ配列に相補的なヌクレオチド配列を表す。用語「アンチセンス鎖」は、「センス」鎖に相補的な核酸鎖に言及して使用される。アンチセンス分子は、関心のある遺伝子をウイルスプロモーターに逆向きにライゲーションすること（これは、相補鎖の合成を可能にする）による合成を含む、任意の方法で産生し得る。一度細胞に導入されると、この転写された鎖は、その細胞により産生される天然の配列と合わさり、二本鎖を形成する。次いで、これらの二本鎖は、さらなる転写または翻訳を妨げる。名称「ネガティブ」は、アンチセンス鎖に言及して使用されるときがあり、「ポジティブ」は、センス鎖に言及して使用されるときがある。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７９】
突然変異遺伝子のｃＤＮＡを、例えば当業者に周知の技法であるＰＣＲを使用して単離し得る。この場合、オリゴ−ｄＴオリゴヌクレオチドを、突然変異型対立遺伝子を担持すると推定される個体で発現されると知られているか、または疑われる、組織から単離したｍＲＮＡにハイブリダイズさせ、そして逆転写酵素で新しい鎖を伸長させることにより、第１のｃＤＮＡ鎖を合成し得る。次いで、第２の相補鎖（ｃＤＮＡ）を、正常な遺伝子の５'末端に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを使用して合成する。次いで、当業者に周知の方法を介し、これらの２つのプライマーを使用して、ＰＣＲを介して産物を増幅し、適するベクターにクローニングし、ＤＮＡ配列分析に付す。突然変異遺伝子のＤＮＡ配列を正常な遺伝子のものと比較することにより、突然変異型遺伝子産物の機能の喪失または変更を担う突然変異を確認できる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８６】
特別な実施態様では、核酸を、それが発現されてコードする産物を産生する場所に、インビボで直接投与する。これは、当分野で知られている多数の方法により達成でき、例えば、それを適切な核酸発現ベクターの一部として構築し、細胞内に行くように投与することにより、例えば、欠損または弱毒化したレトロウイルスまたは他のウイルスベクターを使用する感染により（例えば、米国特許第４,９８０,２８６号および下記で言及する他のもの参照）、または、裸のＤＮＡの直接注入により、または、微小粒子銃、例えば遺伝子銃；Biolistic, Dupont の使用、または、脂質または細胞表面受容体または形質移入物質による被覆、リポソーム、微小粒子または微小カプセル中でのカプセル化、核に入ると知られているペプチドに連結して投与することにより、受容体媒介エンドサイトーシスに付されるリガンドに連結して投与する（その受容体を特異的に発現する細胞タイプを標的化するのに使用できる）ことによる（例えば、米国特許番号５,１６６,３２０；５,７２８,３９９；５,８７４,２９７および６,０３０,９５４、これらは全て、出典明示により全体を本明細書の一部とする）。他の実施態様では、エンドソームを乱すためにリガンドが融合性ウイルスペプチドを含む核酸−リガンド複合体を形成でき、核酸がリソソームで分解されるのを回避できるようにする。なお他の実施態様では、特異的受容体を標的化することにより、核酸をインビボで細胞特異的取込みおよび発現に標的化できる。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０６１８０；ＷＯ９２／２２６３５；ＷＯ９２／２０３１６；ＷＯ９３／１４１８８およびＷＯ９３／２０２２１参照。あるいは、核酸を細胞内に導入でき、発現のために宿主細胞ＤＮＡ内に相同組換えにより組み込むことができる。例えば、米国特許番号５,４１３,９２３；５,４１６,２６０および５,５７４,２０５；および前出の Zijlstra et al. (1989) 参照。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０９】
検出の容易さのために、特に好ましいのは、サンドイッチアッセイである。それには数々の変法が存在し、それらの全てが本発明に包含されると意図する。例えば、典型的な順行アッセイでは、非標識抗体を固体表面に固定し、試験すべきサンプルを、結合した分子と接触させる。適当なインキュベーション期間、抗体−抗原二成分複合体を形成させるのに十分な時間の後、その時点で、検出可能なシグナルを誘導する能力のあるレポーター分子で標識した二次抗体を添加し、インキュベートし、抗体−抗原−標識抗体の三成分複合体の形成に十分な時間をおく。未反応の物質を洗い流し、抗原の存在を、シグナルの観察により決定するか、または、既知量の抗原を含有する対照サンプルと比較することにより定量し得る。順行アッセイの変法には、サンプルと抗体の両方を同時に結合抗体に添加する同時アッセイ、または、標識抗体と試験すべきサンプルを最初に合わせ、インキュベートし、非標識表面結合抗体に添加する逆行アッセイが含まれる。これらの技法は当業者に周知であり、些細な変法の可能性は容易に明らかであろう。本明細書で使用するとき、「サンドイッチアッセイ」は、基礎的な二部位技法の全ての変法を包含すると意図する。本発明の免疫アッセイでは、唯一の限定的要素は、標識抗体が、表３または３Ａのポリペプチド、それらのフラグメントまたは変異体に特異的な抗体であることである。