【手続補正書】
【提出日】平成19年1月26日(2007.1.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  未分化の造血幹細胞または前駆細胞を増加／維持する方法において、
（ａ）未分化の造血幹細胞または前駆細胞を得る工程、および
（ｂ）上記未分化の造血幹細胞または前駆細胞を、生理学的に許容できる３次元の繊維ネットワークを形成している不織繊維マトリックスを含むシート状担体の上に３次元の間質細胞培養が予め樹立されている固定相栓流バイオリアクターの中に播いて、未分化の造血幹細胞または前駆細胞を増加／維持する工程を含む方法。
【請求項２】  未分化の造血幹細胞または前駆細胞が、臍帯血、動員された末梢血、および骨髄からなるグループより選択された組織から単離された細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】  未分化の造血幹細胞または前駆細胞、および間質細胞培養の間質細胞が、共通のＨＬＡ抗原をもつ、請求項１に記載の方法。
【請求項４】  未分化の造血幹細胞または前駆細胞、および間質細胞培養の間質細胞が、単一個体に由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】  未分化の造血幹細胞または前駆細胞、および間質細胞培養の間質細胞が、異なった個体に由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】  未分化の造血幹細胞または前駆細胞、および間質細胞培養の間質細胞が、同一種に由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】  未分化の造血幹細胞または前駆細胞、および間質細胞培養の間質細胞が、異種に由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】  間質細胞培養の間質細胞が、担体１立方センチメートルあたり少なくとも５×１０６細胞という密度にまで増殖している、請求項１に記載の方法。
【請求項９】  間質細胞培養の間質細胞が、担体１立方センチメートルあたり少なくとも１０７細胞という密度にまで増殖している、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】  固定相栓流バイオリアクターの中に未分化の造血幹細胞または前駆細胞を播く工程が行われてから少なくとも１０時間該バイオリアクターの中の流れが停止される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】  繊維の孔が、全容量に対する割合にして４０％から９５％を構成し、孔の大きさが１０ミクロンから１００ミクロンである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】  マトリックスが、直径または幅が０．５ミクロンから５０ミクロンである、へん平繊維、非丸形繊維、中空繊維、およびそれらの混合繊維からなるグループより選択された繊維からできている、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】  マトリックスが、幅２ミクロンから２０ミクロン、繊維の厚さに対する幅の割合が少なくとも２：１であるリボン状繊維から構成されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】  マトリックスが、全容量に対する割合が６０％から９５％の孔容量をもつ、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】  マトリックスの高さが５０〜１０００μｍである、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】  マトリックスの材料が、ポリエステル、ポリアルキレン、ポリフルオロクロロエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリスルホン、酢酸セルロース、ガラスファイバー、および不活性金属繊維からなるグループより選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】  マトリックスが、四角形、リング形、円盤形、および十字形からなるグループより選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】  マトリックスが円盤の形をしている、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】  マトリックスがポリ−Ｄ−リジンで被覆されている、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】  さらに、未分化の造血幹細胞または前駆細胞を単離する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】  未分化の造血幹細胞または前駆細胞を増加／維持する方法において、
（ａ）未分化の造血幹細胞または前駆細胞を得る工程、および
（ｂ）上記未分化の造血幹細胞または前駆細胞を、生理学的に許容できる３次元の繊維ネットワークを形成している不織繊維マトリックスを含むシート状担体の上に３次元の間質細胞培養が予め樹立されている固定相栓流バイオリアクターから得られた間質細胞馴化培地を含む培地の中で培養して、未分化の造血幹細胞または前駆細胞を増加／維持する工程を含む方法。
【請求項２２】  未分化の造血幹細胞または前駆細胞が、臍帯血、動員された末梢血、および骨髄からなるグループより選択された組織から単離された細胞である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】  未分化の造血幹細胞または前駆細胞、および間質細胞培養の間質細胞が、共通のＨＬＡ抗原をもつ、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】  未分化の造血幹細胞または前駆細胞、および間質細胞培養の間質細胞が、単一個体に由来する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】  未分化の造血幹細胞または前駆細胞、および間質細胞培養の間質細胞が、異なった個体に由来する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】  未分化の造血幹細胞または前駆細胞、および間質細胞培養の間質細胞が、同種に由来する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】  未分化の造血幹細胞または前駆細胞、および間質細胞培養の間質細胞が、異種に由来する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】  間質細胞培養の間質細胞が、担体１立方センチメートルあたり少なくとも５×１０６細胞という密度にまで増殖している、請求項２１に記載の方法。
【請求項２９】  間質細胞培養の間質細胞が、担体１立方センチメートルあたり少なくとも１０７細胞という密度にまで増殖している、請求項２１に記載の方法。
【請求項３０】  繊維の孔が、全容量に対する割合にして４０％から９５％を構成し、孔の大きさが１０ミクロンから１００ミクロンである、請求項２１に記載の方法。
【請求項３１】  マトリックスが、直径または幅が０．５ミクロンから５０ミクロンである、へん平繊維、非丸形繊維、中空繊維、およびそれらの混合繊維からなるグループより選択された繊維からできている、請求項２１に記載の方法。
【請求項３２】  マトリックスが、幅２ミクロンから２０ミクロン、繊維の厚さに対する幅の割合が少なくとも２：１であるリボン状繊維から構成されている、請求項２１に記載の方法。
【請求項３３】  マトリックスが、全容量に対する割合が６０％から９５％の孔容量をもつ、請求項２１に記載の方法。
【請求項３４】  マトリックスの高さが５０〜１０００μｍである、請求項２１に記載の方法。
【請求項３５】  マトリックスの材料が、ポリエステル、ポリアルキレン、ポリフルオロクロロエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリスルホン、酢酸セルロース、ガラスファイバー、および不活性金属繊維からなるグループより選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項３６】  マトリックスが、四角形、リング形、円盤形、および十字形からなるグループより選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項３７】  マトリックスが円盤の形をしている、請求項２１に記載の方法。
【請求項３８】  マトリックスがポリ−Ｄ−リジンで被覆されている、請求項２１に記載の方法。
【請求項３９】  未分化の造血幹細胞または前駆細胞を増加／維持する上で有用な間質細胞馴化培地を調製する方法において、
（ａ）固定相栓流バイオリアクターの中で、生理学的に許容できる３次元の繊維ネットワークを形成している不織繊維マトリックスを含むシート状担体の上に間質細胞培養を樹立して、未分化の造血幹細胞または前駆細胞を増加／維持する工程、および
（ｂ）所望の間質細胞密度に達したら、該固定相栓流バイオリアクターから培地を回収して、未分化の造血幹細胞または前駆細胞を増加／維持する上で有用な間質細胞馴化培地を得る工程を含む方法。
【請求項４０】  間質細胞培養の間質細胞が、担体１立方センチメートルあたり少なくとも５×１０６細胞という密度にまで増殖している、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】  間質細胞培養の間質細胞が、担体１立方センチメートルあたり少なくとも１０７細胞という密度にまで増殖している、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】  繊維の孔が、全容量に対する割合にして４０％から９５％を構成し、孔の大きさが１０ミクロンから１００ミクロンである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】  マトリックスが、直径または幅が０．５ミクロンから５０ミクロンである、へん平繊維、非丸形繊維、中空繊維、およびそれらの混合繊維からなるグループより選択された繊維からできている、請求項３９に記載の方法。
【請求項４４】  マトリックスが、幅２ミクロンから２０ミクロン、繊維の厚さに対する幅の割合が少なくとも２：１であるリボン状繊維から構成されている、請求項３９に記載の方法。
【請求項４５】  マトリックスが、全容量に対する割合が６０％から９５％の孔容量をもつ、請求項３９に記載の方法。
【請求項４６】  マトリックスの高さが５０〜１０００μｍである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４７】  マトリックスの材料が、ポリエステル、ポリアルキレン、ポリフルオロクロロエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリスルホン、酢酸セルロース、ガラスファイバー、および不活性金属繊維からなるグループより選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４８】  マトリックスが、四角形、リング形、円盤形、および十字形からなるグループより選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４９】  マトリックスが円盤の形をしている、請求項３９に記載の方法。
【請求項５０】  マトリックスがポリ−Ｄ−リジンで被覆されている、請求項３９に記載の方法。