【手続補正書】
【提出日】平成19年7月27日(2007.7.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の段階を含む、細胞表面に発現された標的CD20に特異的に結合する治療リガンドにより、治療が必要な患者の治療をモニタリングする方法：
a)患者から得たCD20+細胞を含有する体液を含む試料を含有する容器を得る段階；
b)下記の段階の1つを実行する段階：
ii)容器内のアッセイ成分を、CD20に特異的に結合し、かつ第一の識別可能な蛍光標識に複合した第一の可溶性リガンドと共に、CD20と第一のリガンドとの複合体形成を可能にする条件下および時間、インキュベーションする段階；または
iii)B細胞へ特異的に結合し、かつ第二の蛍光標識と複合した第二の可溶性リガンドを、アッセイ成分間の複合体形成を可能にする条件下および時間、容器へ添加する段階；または
iv)下記の段階の組合せ：
CD20抗原に連結された捕捉粒子を容器へ添加する段階；
容器内の細胞を透過化する段階；および
容器内のアッセイ成分を、細胞内CD20に特異的に結合し、かつ第三の識別可能な蛍光標識と複合した第三の可溶性リガンドと共に、細胞内CD20と第三のリガンドとの複合体形成を可能にする条件下および時間、インキュベーションする段階；ならびに
c)容器内で形成された複合体中の蛍光標識からの蛍光の存在を検出し、患者の治療をモニタリングする段階。
【請求項２】
以下の段階を含む、細胞表面に発現された標的CD20に特異的に結合する治療リガンドにより、治療が必要な患者の治療をモニタリングする方法：
a)下記のアッセイ成分間の複合体形成を可能にする条件下および十分な時間、容器内で共にインキュベーションする段階：
i)患者から得た血液または骨髄を含む試料；
ii)第一の識別可能な蛍光標識に複合したCD20+細胞へ特異的に結合する第一のリガンド；
iii)第二の識別可能な蛍光標識に複合したB細胞へ特異的に結合する第二のリガンド；および
iv)CD20抗原へ連結された捕捉粒子；
b)容器内の細胞を透過化する段階；
c)容器内のアッセイ成分を、第三の識別可能な蛍光標識に複合した細胞内CD20に特異的に結合する第三のリガンドと、細胞内CD20と第三のリガンドとの間の結合を可能にする条件下および時間、インキュベーションする段階；ならびに
d)容器内に形成された複合体中の第一、第二または第三の蛍光標識からの蛍光を検出し、患者の治療をモニタリングする段階。
【請求項３】
以下の段階を含む、細胞表面に発現された標的CD52に特異的に結合する治療リガンドにより、治療が必要な患者の治療をモニタリングする方法：
a)患者から得たCD52+細胞を含有する体液を含む試料を含有する容器を得る段階；
b)容器内の試料を、以下と共に、複合体形成を可能にする条件下および十分な時間、インキュベーションする段階：
i)第一の識別可能な蛍光標識に複合した治療リガンドの結合部位において発現された標的に特異的に結合する第一のリガンド、および
ii)以下から選択される1種のアッセイ成分：
a)第二の識別可能なリガンドへ複合した治療リガンドとは異なる結合部位において発現される標的に結合する第二のリガンド；
b)第三の識別可能な蛍光標識に複合したヒト免疫グロブリンに特異的に結合する第三のリガンド；および、
c)CD52抗原へ連結された第一の識別可能な捕捉粒子；および
d)治療リガンドへ連結された第二の識別可能な捕捉粒子；ならびに
c)容器内で形成された複合体中の蛍光標識からの蛍光を実質的に同時に検出し、患者の治療をモニタリングする段階。
【請求項４】
以下の段階を含む、細胞表面に発現された標的CD52に特異的に結合する治療リガンドにより、治療が必要な患者の治療をモニタリングする方法：
a)容器内で以下のアッセイ成分を、それらの間の複合体形成を可能にする条件下および十分な時間、インキュベーションする段階：
1)患者から得た血液または骨髄を含む試料；
2)CD52抗原に連結された第一の識別可能な捕捉粒子；および
3)治療リガンドへ連結された第二の識別可能な捕捉粒子；
b)段階a)において形成された複合体を、以下の追加のアッセイ成分との結合相互作用を可能にする条件下および十分な時間、容器内でインキュベーションする段階：
4)治療リガンドとは異なる結合部位において、発現された標的へ結合し、かつ第一の識別可能な蛍光標識に複合した第一のリガンド；
5)第二の識別可能な蛍光標識に複合した治療リガンドの結合部位において、発現された標的へ特異的に結合する第二のリガンド；および
6)第三の識別可能な蛍光標識に複合したヒト免疫グロブリンへ特異的に結合する第三のリガンド；ならびに
c)容器内で形成された複合体中の第一、第二および第三の蛍光標識の少なくとも1種からの蛍光を実質的に同時に検出し、患者の治療をモニタリングする段階。
【請求項５】
以下の段階を含む、ヘパリン療法の副作用を、モニタリングが必要な患者においてモニタリングする方法：
a)容器内で以下のアッセイ成分を、それらの間の複合体形成を可能にする条件下および十分な時間、インキュベーションする段階：
1)患者の全血を含む試料；
2)ヘパリン:血小板第4因子複合体に連結された識別可能な捕捉粒子；
3)血小板活性化抗原に特異的に結合し、かつ第一の蛍光標識に複合した、第一の可溶性リガンド；ならびに
4)血小板に特異的に結合し、かつ第二の蛍光標識に複合した、第二の可溶性リガンド；
b)段階a)で形成された複合体と、ヒト免疫グロブリンに特異的に結合し、かつ第三の識別可能な蛍光標識に複合した第三のリガンドとの間での複合体形成を可能にする条件下および十分な時間、容器内でインキュベーションし、これによりその中に複合体の混合物を形成する段階；ならびに
c)複合体の混合物中の第一の蛍光標識、第二の蛍光標識または第三の蛍光標識からの蛍光を検出し、患者におけるヘパリン療法をモニタリングする段階。
【請求項６】
以下を含む、細胞表面に発現された標的CD20に特異的に結合する治療リガンドにより、患者の治療をモニタリングするためのキット：
a)第一の識別可能な蛍光色素に複合したCD20に特異的に結合する第一の可溶性リガンド；ならびに、以下の1種または複数種：
b)細胞内CD20+細胞へ特異的に結合する第二の識別可能な蛍光色素に複合した第二の可溶性リガンド；
c)B細胞へ特異的に結合する第三の識別可能な蛍光色素に複合した第三の可溶性リガンド；および
d)CD20抗原に連結された捕捉粒子。
【請求項７】
以下を含む、CD52抗原に特異的に結合する治療リガンドにより患者の治療をモニタリングするためのキット：
a)CD52抗原に連結された第一の識別可能な捕捉粒子；および
b)第一の識別可能な蛍光標識へ複合した治療リガンドの結合部位において発現された標的へ特異的に結合する第一の可溶性リガンド。
【請求項８】
以下を含む、患者のヘパリン療法をモニタリングするキット：
a)ヘパリン:血小板第4因子複合体に連結された識別可能な捕捉粒子；ならびに、以下の1種または複数種：
b)第一の識別可能な蛍光標識に複合した血小板活性化抗原に特異的に結合する第一の可溶性リガンド；
c)第二の識別可能な蛍光標識に複合した血小板へ特異的に結合する第二の可溶性リガンド；および
d)第三の識別可能な蛍光標識に複合したヒト免疫グロブリンに特異的に結合する第三の可溶性リガンド。
【請求項９】
以下の段階を含む、少なくとも1つの細胞標的を提示する少なくとも1つの細胞種および少なくとも1つの可溶性被検体を含有する生物学的試料を評価する方法：
(a)単一の容器へ該試料を以下と共に添加する段階
(i)該細胞標的に結合する少なくとも1つの可溶性リガンド、
(ii)該可溶性被検体に結合する少なくとも1つの可溶性リガンド、または少なくとも1つの競合的可溶性被検体；および
(iii)該可溶性被検体に直接的に結合する、該可溶性被検体に間接的に結合する、または該可溶性被検体に結合する該可溶性リガンドに結合する、固相捕捉媒体；および
(b)該細胞標的と該少なくとも1つの可溶性リガンドとの間で形成される複合体、および、該可溶性被検体に直接的に結合した該補足媒体との間、または該可溶性被検体と間接的に結合した該可補足媒体との間、または該捕捉媒体と該可溶性被検体に結合した該可溶性リガンドとの間で形成される複合体を含む複合体を物理的に分離することなく、(a)の該試料を同時に分析する段階。
【請求項１０】
以下の段階をさらに含む、請求項９記載の方法：
(a)において：
(i)該試料に、該可溶性被検体に結合することが可能な多種の第一のリガンドを固定化した固相捕捉媒体を添加する段階であって、かつ該捕捉媒体、該第一のリガンド、および該可溶性被検体が第一の複合体を形成する、段階；
(ii)(i)により得た試料に、該細胞標的に特異的に結合する可溶性の第二のリガンドを添加する段階であって、第二のリガンドそれぞれが第一の検出可能な標識と結合し、かつ多種の第二のリガンドが単一の標的細胞と結合し第二の複合体を形成することが可能である、段階；
(iii)(ii)により得た試料に、第二の検出可能な標識と結合し、かつ該第一の複合体と特異的に結合する第三のリガンドを添加する段階であって、該第三のリガンドと該第一の複合体とが第三の複合体を形成する、段階、および；
(b)該第三の複合体と該第二の複合体とを弁別することにより、該複合体を物理的に分離することなく、(aiii)により得た試料を同時に分析する段階。
【請求項１１】
該可溶性被検体が、血清マーカー、タンパク質、ウイルス、ホルモン、脂質、核酸配列、糖質、薬学的薬物、毒素、および細胞より流出した抗原からなる群より選択される、請求項９記載の方法。
【請求項１２】
敗血症、炎症、自己免疫疾患、心血管疾患、ウイルス感染、細菌感染、および薬物相互作用からなる群より選択される疾患または状態の診断に有用である、請求項９記載の方法。
【請求項１３】
該細胞標的がCD64(N)、HLA-DR(Mo)、CD11a、CD14/CD16、CD142からなる群より選択され；かつ該可溶性標的がIL-6、IL-10、IL-1、TNF-α、ネオプテリン、C反応性タンパク質、プロカルシトニン、および活性化プロテインCからなる群より選択される、請求項９記載の方法を実行することにより敗血症を診断し、またはその進行をモニタリングするための方法。
【請求項１４】
該細胞標的が活性化T細胞および活性化B細胞からなる群より選択され；かつ該可溶性標的がC反応性タンパク質、ケモカイン、およびサイトカインからなる群より選択される、請求項９記載の方法を実行することにより自己免疫疾患を診断し、またはその進行をモニタリングするための方法。
【請求項１５】
該細胞標的が血小板-白血球凝集物およびCD142(TF)からなる群より選択され；かつ該可溶性標的がhsC反応性タンパク質、トロポニン、およびミオグロビンからなる群より選択される、請求項９記載の方法を実行することにより心血管疾患を診断し、またはその進行をモニタリングするための方法。
【請求項１６】
該細胞標的がHLA-DR、CD4/CD8、CD64(N)、CD14/CD16からなる群より選択され；かつ該可溶性標的がIFNγ、ネオプテリン、およびC反応性タンパク質からなる群より選択される、請求項９記載の方法を実行することによりウイルスおよび細菌感染を診断し、またはその進行をモニタリングするための方法。
【請求項１７】
以下の段階を含む、細胞表面に発現された標的CD20に特異的に結合する治療リガンドにより、治療が必要な患者の治療をモニタリングする方法：
a)患者から得たCD20+細胞を含有する体液を含む試料を含有する容器を得る段階；
b)下記の段階の1つを実行する段階：
i)容器内のアッセイ成分を、CD20に特異的に結合し、かつ第一の識別可能な蛍光標識に複合した第一の可溶性リガンドと共に、CD20と第一のリガンドとの複合体形成を可能にする条件下および時間、インキュベーションする段階；または
ii)B細胞へ特異的に結合し、かつ第二の蛍光標識と複合した第二の可溶性リガンドを、アッセイ成分間の複合体形成を可能にする条件下および時間、容器へ添加する段階；または
iii)下記の段階の組合せ：
CD20抗原に連結された捕捉粒子を容器へ添加する段階；
容器内の細胞を透過化する段階；および
容器内のアッセイ成分を、細胞内CD20に特異的に結合し、かつ第三の識別可能な蛍光標識と複合した第三の可溶性リガンドと共に、細胞内CD20と第三のリガンドとの複合体形成を可能にする条件下および時間、インキュベーションする段階；ならびに
c)容器内で形成された複合体中の蛍光標識からの蛍光の存在を検出し、患者の治療をモニタリングする段階。
【請求項１８】
段階b)iii)の実行が選択され、段階b)iii)の実行前に、容器へ：
a)第二の識別可能な蛍光標識に複合したB細胞へ特異的に結合する第二の可溶性リガンド；および／または、CD20+細胞へ特異的に結合する第三の可溶性リガンド、および／またはCD20抗原を含む捕捉粒子を添加する段階；ならびに
b)容器の内容物を、その中のアッセイ成分間での複合体形成を可能にする条件下および十分な時間、インキュベーションする段階；
を更に含む、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
試料が全血である、請求項１７記載の方法。
【請求項２０】
リガンドが抗体である、請求項１７記載の方法。
【請求項２１】
治療リガンドが、Rituximab(登録商標)またはBexxar(商標)モノクローナル抗体である、請求項１７記載の方法。
【請求項２２】
複合体中の蛍光標識の相対強度が、蛍光計またはフローサイトメーターにより検出される、請求項１７記載の方法。
【請求項２３】
以下の段階を含む、細胞表面に発現された標的CD52に特異的に結合する治療リガンドにより、治療が必要な患者の治療をモニタリングする方法：
a)患者から得たCD52+細胞を含有する体液を含む試料を含有する容器を得る段階；
b)容器内の試料を、以下と共に、複合体形成を可能にする条件下および十分な時間、インキュベーションする段階：
i)第一の識別可能な蛍光標識に複合した治療リガンドの結合部位において発現された標的に特異的に結合する第一のリガンド、および
ii)以下から選択される1種のアッセイ成分：
a)第二の識別可能なリガンドへ複合した治療リガンドとは異なる結合部位において発現される標的に結合する第二のリガンド；
b)第三の識別可能な蛍光標識に複合したヒト免疫グロブリンに特異的に結合する第三のリガンド；および、
c)CD52抗原へ連結された第一の識別可能な捕捉粒子；および
d)治療リガンドへ連結された第二の識別可能な捕捉粒子；ならびに
c)容器内で形成された複合体中の蛍光標識からの蛍光を実質的に同時に検出し、患者の治療をモニタリングする段階。
【請求項２４】
段階b)ii)において、第二のリガンドが選択され、該方法が：
段階a)において、第一の捕捉粒子または治療リガンドへ連結された第二の識別可能な捕捉粒子のいずれかを、容器へ添加する段階；または
段階b)ii)において、第三のリガンド、ならびに第一の捕捉粒子および第二の捕捉粒子のいずれか一方または双方を添加する段階を更に含む、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
段階b)ii)において、第二のリガンドが選択され、方法が、段階a)において、第一の捕捉粒子および治療リガンドへ連結された第二の識別可能な捕捉粒子の一方または双方を容器へ添加する段階を更に含む、請求項２３記載の方法。
【請求項２６】
段階b)ii)において、第三のリガンドが選択され、方法が、段階a)において、CD52抗原に連結された第一の識別可能な捕捉粒子および第二の捕捉粒子の一方または双方を容器へ添加する段階を更に含む、請求項２３記載の方法。
【請求項２７】
治療リガンドが、CAMPATH-1Hモノクローナル抗体であり、かつ第一のリガンドが、CAMPATH-1の結合したエピトープとは異なるCD52のエピトープへ特異的に結合する抗体である、請求項２３記載の方法。 
【請求項２８】
治療がB細胞慢性リンパ性白血病の治療である、請求項２３記載の方法。
【請求項２９】
以下の段階を含む、ヘパリン療法の副作用を、モニタリングが必要な患者においてモニタリングする方法：
a)容器内で以下のアッセイ成分を、それらの間の複合体形成を可能にする条件下および十分な時間、インキュベーションする段階：
i)患者の全血を含む試料；
ii)ヘパリン:血小板第4因子複合体に連結された識別可能な捕捉粒子；
iii)血小板活性化抗原に特異的に結合し、かつ第一の蛍光標識に複合した、第一の可溶性リガンド；ならびに
iv)血小板に特異的に結合し、かつ第二の蛍光標識に複合した、第二の可溶性リガンド；
b)段階a)で形成された複合体と、ヒト免疫グロブリンに特異的に結合し、かつ第三の識別可能な蛍光標識に複合した第三のリガンドとの間での複合体形成を可能にする条件下および十分な時間、容器内でインキュベーションし、これによりその中に複合体の混合物を形成する段階；ならびに
c)複合体の混合物中の第一の蛍光標識、第二の蛍光標識または第三の蛍光標識からの蛍光を検出し、患者におけるヘパリン療法をモニタリングする段階。
【請求項３０】
試料が全血または血小板に富む血漿を含む、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
リガンドが抗体である、請求項２９記載の方法。
【請求項３２】
検出が、蛍光計またはフローサイトメーターによる、請求項２９記載の方法。
【請求項３３】
以下を含むキット：
(a)液体試料において細胞標的と結合する少なくとも1つの可溶性リガンド；
(b)該試料における可溶性被検体と結合する少なくとも1つの可溶性リガンド、または検出可能な標識と関連する少なくとも1つの可溶性被検体；および
(c)該可溶性被検体に直接的に結合する、該可溶性被検体に間接的に結合する、または該可溶性被検体に結合する該可溶性リガンドに結合する、固相捕捉媒体。
【請求項３４】
(a)〜(c)の成分の1つまたは混合物を含む容器を更に含む、請求項３３記載のキット。
【請求項３５】
以下を含む、細胞表面に発現された標的CD20に特異的に結合する治療リガンドにより、患者の治療をモニタリングするための、請求項３３記載のキット：
a)CD20に特異的に結合する第一の可溶性リガンド；ならびに、以下の1種または複数種：
b)細胞内CD20+細胞へ特異的に結合する、複合した第二の可溶性リガンド；
c)B細胞へ特異的に結合する第三の可溶性リガンド；および
d)CD20抗原に連結された捕捉粒子。
【請求項３６】
以下を含む、CD52抗原に特異的に結合する治療リガンドにより患者の治療をモニタリングするための、請求項３３記載のキット：
a)CD52抗原に連結された第一の識別可能な捕捉粒子；および
b)第一の識別可能な蛍光標識へ複合した治療リガンドの結合部位において発現された標的へ特異的に結合する第一の可溶性リガンド。
【請求項３７】
患者のヘパリン療法をモニタリングするためのキットであり、かつ以下を含む、請求項３３記載のキット：
a)ヘパリン:血小板第4因子複合体に連結された識別可能な捕捉粒子；ならびに、以下の1種または複数種：
b)血小板活性化抗原に特異的に結合する第一の可溶性リガンド；
c)血小板へ特異的に結合する第二の可溶性リガンド；および
d)ヒト免疫グロブリンに特異的に結合する第三の可溶性リガンド。
【請求項３８】
該捕捉媒体が生理学的に適合性のあるビーズである、請求項９記載の方法。
【請求項３９】
以下の段階を含む、細胞表面に発現された抗原に特異的に結合する治療リガンドにより、治療が必要な患者の治療をモニタリングする方法：
a)患者から得た抗原を含有する体液を含む試料を含有する容器を得る段階；
b)下記の段階の1つを実行する段階：
i)容器内のアッセイ成分を、細胞表面抗原に特異的に結合し、かつ第一の識別可能な蛍光標識に複合した第一の可溶性リガンドと共に、標的と第一のリガンドとの複合体形成を可能にする条件下および時間、インキュベーションする段階；または
ii)ある規定された細胞系列特異的抗原へ特異的に結合し、かつ第二の蛍光標識と複合した第二の可溶性リガンドを、アッセイ成分間の複合体形成を可能にする条件下および時間、容器へ添加する段階；または
iii)下記の段階の組合せ：
標的抗原に連結された捕捉粒子を容器へ添加する段階；および
容器内のアッセイ成分を、細胞表面抗原上の分離した異なるエピトープに特異的に結合し、かつ第三の識別可能な蛍光標識と複合した、第一の可溶性リガンドとは異なる第三の可溶性リガンドと共に、細胞表面抗原と第三のリガンドとの複合体形成を可能にする条件下および時間、インキュベーションする段階；ならびに
c)容器内で形成された複合体中の蛍光標識からの蛍光の存在を検出し、患者の治療をモニタリングする段階。
【請求項４０】
以下の段階を含む、細胞内に発現された標的抗原に特異的に結合する治療リガンドにより、治療が必要な患者の治療をモニタリングする方法：
a)患者から得た抗原を含有する体液を含む試料を含有する容器を得る段階；
b)下記の段階の1つを実行する段階：
i)ある規定された細胞系列特異的抗原へ特異的に結合し、かつ第一の蛍光標識と複合した第一の可溶性リガンドを、アッセイ成分間の複合体形成を可能にする条件下および時間、容器へ添加する段階；または
ii)下記の段階の組合せ：
抗原に連結された捕捉粒子を容器へ添加する段階；
容器内の細胞を透過化する段階；ならびに
iii)容器内のアッセイ成分を、関心対象の細胞内抗原に特異的に結合し、かつ第二の識別可能な蛍光標識と複合した第二の可溶性リガンドと共に、第二のリガンドとの複合体形成を可能にする条件下および時間、インキュベーションする段階；または
iv)容器内のアッセイ成分を、細胞内抗原上の分離した異なるエピトープに特異的に結合し、かつ第三の識別可能な蛍光標識と複合した、第一の可溶性リガンドとは異なる第三の可溶性リガンドと共に、細胞内抗原と第三のリガンドとの複合体形成を可能にする条件下および時間、インキュベーションする段階；ならびに
c)容器内で形成された複合体中の蛍光標識からの蛍光の存在を検出し、患者の治療をモニタリングする段階。
【請求項４１】
抗原がCD20またはCD52である、請求項３９または４０記載の方法。