【手続補正書】
【提出日】平成19年8月29日(2007.8.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、または少なくとも２０ヌクレオチド長のいずれか１つの前記配列の連続部分と少なくとも９５％の配列同一性を有する核酸配列を含む単離された核酸。
【請求項２】
高ストリンジェンシーの条件下で請求項１の核酸にハイブリダイズする単離された核酸。
【請求項３】
中ストリンジェンシーの条件下で請求項１の核酸にハイブリダイズする単離された核酸。
【請求項４】
低ストリンジェンシーの条件下で請求項１の核酸にハイブリダイズする単離された核酸。
【請求項５】
配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、または少なくとも２０ヌクレオチド長のいずれか１つの前記配列の連続部分と少なくとも９５％の配列同一性を有する核酸配列を含むベクター。
【請求項６】
核酸がＲＮＡまたはＤＮＡである、請求項１の単離された核酸。
【請求項７】
配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、または少なくとも１０ヌクレオチド長のいずれか１つの前記配列の連続部分を含む核酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する核酸によってエンコードされる単離されたポリペプチド。
【請求項８】
配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、または少なくとも１０アミノ酸長のいずれか１つの前記配列の連続部分と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド。
【請求項９】
請求項８のポリペプチドに特異的に結合する単離された抗体。
【請求項１０】
抗体がポリクローナル抗体、モノクローナル抗体またはキメラ抗体である、請求項９の抗体。
【請求項１１】
ＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ−５３４３の識別特性を含む、単離されたSeneca Valleyウイルスまたはその誘導体。
【請求項１２】
配列番号１と少なくとも９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％または６５％同一の配列を含むゲノムを有する、単離されたSeneca Valleyウイルスまたはその誘導体または類縁体。
【請求項１３】
以下の特徴を含む、単離されたSeneca Valleyウイルスまたはその誘導体または類縁体：約７．５ｋｂの一本鎖ＲＮＡゲノム；直径〜２７ｎｍ；約３１ｋＤａ、約３６ｋＤａ、および約２７ｋＤａの概算の分子量を有する少なくとも３種のタンパク質を含むキャプシド；ＣｓＣｌ勾配上の浮遊密度約１．３４ｇ／ｍｌ；および腫瘍細胞での複製能。
【請求項１４】
以下の特徴を含む、単離されたSeneca Valleyウイルスまたはその誘導体または類縁体：腫瘍細胞での複製能、腫瘍細胞親和性、および正常細胞での細胞溶解の欠如。
【請求項１５】
ウイルスが、神経内分泌特性を有する腫瘍細胞型において複製能を有する、請求項１２または１３のウイルス。
【請求項１６】
３１ｋＤａタンパク質が、配列番号８と少なくとも９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、または６５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１２のウイルス。
【請求項１７】
３６ｋＤａタンパク質が、配列番号４と少なくとも９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、または６５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１２のウイルス。
【請求項１８】
２７ｋＤａタンパク質が、配列番号６と少なくとも９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、または６５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１２のウイルス。
【請求項１９】
請求項１１〜１８のいずれか一項の有効量のウイルスおよび製薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１１〜１８のいずれか一項のウイルスを含む細胞。
【請求項２１】
請求項１１〜１８のいずれか一項のウイルスの抗原を含有するウイルスライセート。
【請求項２２】
請求項１１〜１８のいずれか一項のウイルスから取得される単離されたウイルス抗原。
【請求項２３】
癌の処置方法であって、該癌を処置するために有効量のウイルスまたはその誘導体を投与することを含み、この場合、該ウイルスは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９または２１と少なくとも９５％同一の配列を含むゲノム配列を有する、方法。
【請求項２４】
癌の処置方法であって、配列番号３、５または７と少なくとも９５％同一の配列を含むキャプシドエンコード領域を有するウイルスの有効量を投与することを含む方法。
【請求項２５】
癌の進行を阻害するための方法であって、癌細胞をウイルスまたはその誘導体と接触させることを含み、この場合、該ウイルスは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９または２１と少なくとも９５％同一の配列を含むゲノムを有する、方法。
【請求項２６】
癌細胞を死滅させるための方法であって、癌細胞を有効量のウイルスまたはその誘導体と接触させることを含み、この場合、該ウイルスは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９または２１と少なくとも９５％同一の配列を含むゲノムを有する、方法。
【請求項２７】
ウイルスがピコルナウイルスである、請求項２３、２４、２５または２６の方法。
【請求項２８】
ピコルナウイルスがカルジオウイルスである、請求項２７の方法。
【請求項２９】
カルジオウイルスが以下からなる群から選択される、請求項２８の方法：vilyuiskヒト脳脊髄炎ウイルス、Theilerのマウス脳脊髄炎ウイルス、脳心筋炎ウイルスおよびSeneca Valleyウイルス。
【請求項３０】
脳心筋炎ウイルスが以下からなる単離体の群から選択される、請求項２９の方法：ＣＡ−１３１３９５、ＬＡ−９７−１２７８、ＩＬ−９２−４８９６３、ＩＡ−８９−４７７５２、ＮＪ−９０−１０３２４、ＭＮ−８８−３６６９５、およびＮＣ−８８−２３６２６。
【請求項３１】
Seneca ValleyウイルスがＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５３４３を有する、請求項２９の方法。
【請求項３２】
請求項１１〜１８のいずれか一項のウイルスを精製する方法であって、以下の段階を含む方法：
ａ．請求項１１〜１８のいずれか一項のウイルスを細胞に感染させる段階；
ｂ．細胞ライセートを回収する段階；
ｃ．細胞ライセートを少なくとも１ラウンドの勾配遠心分離に付する段階；および
ｄ．勾配から該ウイルスを単離する段階。
【請求項３３】
異常増殖性細胞を死滅させる方法であって、該細胞を請求項１１〜１８のいずれか一項のウイルスと接触させることを含む方法。
【請求項３４】
異常増殖性細胞が腫瘍細胞である、請求項３３の方法。
【請求項３５】
腫瘍細胞が以下からなる群から選択される、請求項３４の方法：ヒト小細胞肺癌、ヒト網膜芽細胞腫、ヒト神経芽細胞腫、ヒト髄芽腫、マウス神経芽細胞腫、ウィルムス腫瘍、およびヒト非小細胞肺癌。
【請求項３６】
対象における新生物症状を処置する方法であって、該対象に請求項１１〜１８のいずれか一項のウイルスの有効量を投与することを含む方法。
【請求項３７】
新生物症状が神経内分泌癌である、請求項３６の方法。
【請求項３８】
対象がヒトである、請求項３６の方法。
【請求項３９】
請求項１１〜１８のいずれか一項のウイルスを製造する方法であって、以下の段階を含む方法：請求項１１〜１８のいずれか一項のウイルスを感染させた細胞を、該ウイルスの複製を許容する条件下で培養する段階および該細胞または上清から該ウイルスを回収する段階。
【請求項４０】
細胞がＰＥＲ．Ｃ６細胞である、請求項３９の方法。
【請求項４１】
細胞がＨ４４６細胞である、請求項３９の方法。
【請求項４２】
細胞が２００，０００を超えるウイルス粒子／細胞を生産する、請求項３９の方法。
【請求項４３】
請求項１１〜１８のいずれか一項のウイルスを検出する方法であって、以下の段階を含む方法：請求項１１〜１８のいずれか一項のウイルスを含有すると考えられる試験材料からＲＮＡを単離する段階；配列番号１の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対応するＲＮＡを標識する段階；標識済みＲＮＡを用いて試験材料を検査（プローブ）する段階；および標識済みＲＮＡと試験材料から単離されたＲＮＡの結合を検出する段階、この場合、結合は該ウイルスの存在を示す。
【請求項４４】
配列番号１の少なくとも１５連続ヌクレオチドに対応するヌクレオチド配列を含む核酸プローブ。
【請求項４５】
腫瘍溶解性ウイルスの作成方法であって、以下の段階を含む方法：
（ａ）Seneca Valleyウイルスのゲノム配列を試験ウイルスのゲノム配列と比較する段階；
（ｂ）Seneca Valleyウイルスのゲノム配列によってエンコードされるポリペプチドおよび試験ウイルスのゲノム配列によってエンコードされるポリペプチド間の少なくとも第一のアミノ酸の差異を同定する段階；
（ｃ）試験ウイルスのゲノム配列を変異させて、試験ウイルスのゲノム配列によってエンコードされるポリペプチドが有する、Seneca Valleyウイルスのゲノム配列によってエンコードされるポリペプチドに対するアミノ酸の差異が、少なくとも１つ少ないようにする段階；
（ｄ）変異した試験ウイルスのゲノム配列を腫瘍細胞内にトランスフェクトする段階；および
（ｅ）該変異した試験ウイルスのゲノム配列が該腫瘍細胞に溶菌的に感染したかどうかを判定する段階。
【請求項４６】
Seneca Valleyウイルスのゲノムが配列番号１と少なくとも９５％同一の配列を含む、請求項４５の方法。
【請求項４７】
試験ウイルスがピコルナウイルスである、請求項４５の方法。
【請求項４８】
試験ウイルスがカルジオウイルスである、請求項４５の方法。
【請求項４９】
アミノ酸の差異がSeneca Valleyウイルスのキャプシドタンパク質および試験ウイルスのキャプシドタンパク質間に存在する、請求項４５の方法。
【請求項５０】
試験ウイルスのゲノム配列を変異させる段階が、試験ウイルスのゲノム配列を有するｃＤＮＡを変異させることを含む、請求項４５の方法。
【請求項５１】
変異した試験ウイルスのゲノム配列をトランスフェクトする段階がＲＮＡをトランスフェクトすることを含み、この場合、該ＲＮＡは該変異した試験ウイルスのゲノム配列を有するｃＤＮＡから作成される、請求項４５の方法。
【請求項５２】
カルジオウイルスのゲノム配列が以下からなる群から選択される、請求項４８の方法：vilyuiskヒト脳脊髄炎ウイルス、Theilerのマウス脳脊髄炎ウイルス、および脳心筋炎ウイルス。
【請求項５３】
カルジオウイルスのゲノム配列が脳心筋炎ウイルスから選択される、請求項５２の方法。
【請求項５４】
脳心筋炎ウイルスが以下からなる単離体の群から選択される、請求項５３の方法：ＣＡ−１３１３９５、ＬＡ−９７−１２７８、ＩＬ−９２−４８９６３、ＩＡ−８９−４７７５２、ＮＪ−９０−１０３２４、ＭＮ−８８−３６６９５、およびＮＣ−８８−２３６２６。
【請求項５５】
カルジオウイルスが、配列番号１と少なくとも９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、または６５％同一の配列を含むゲノムを有する単離体から選択される、請求項５２の方法。
【請求項５６】
アミノ酸の差異が、配列番号４、６、８、または少なくとも１０アミノ酸長のいずれか１つの前記配列の連続部分と少なくとも９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、または６５％同一の配列を含むポリペプチド内に存在する、請求項４５の方法。
【請求項５７】
改変された細胞型親和性を有する変異ウイルスの作成方法であって、以下の段階を含む方法：
（ａ）多数の核酸配列を含むウイルス変異体のライブラリーを作成する段階；
（ｂ）ウイルス変異体のライブラリーを許容細胞内にトランスフェクトし、多数の変異ウイルスを生産させる段階；
（ｃ）多数の変異ウイルスを単離する段階；
（ｄ）単離された多数の変異ウイルスと非許容細胞をインキュベートする段階；および
（ｅ）非許容細胞で生産された変異ウイルスを回収し、それにより、改変された親和性を有する変異ウイルスを作成する段階。
【請求項５８】
ウイルス変異体のライブラリーが、配列番号１と少なくとも９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、または６５％同一の配列を含む親配列から作成される、請求項５７の方法。
【請求項５９】
さらに以下の段階を含む、請求項５７の方法：
（ｆ）回収された変異ウイルスを非許容細胞においてインキュベートする段階；および
（ｇ）非許容細胞で生産された変異ウイルスを回収する段階。
【請求項６０】
段階（ｆ）および（ｇ）を反復して繰り返すことをさらに含む、請求項５９の方法。
【請求項６１】
マルチウェルハイスループットプラットフォームにおいてインキュベーションを行い、この場合、該プラットフォームは各ウェルに異なる非許容細胞型を含む、請求項５７または５９の方法。
【請求項６２】
プラットフォームをスクリーニングして、どのウェルが細胞を死滅させる変異ウイルスを含有するかを同定することをさらに含む、請求項６１の方法。
【請求項６３】
各ウェルの吸光度を分析することによってスクリーニングを行う、請求項６２の方法。
【請求項６４】
非許容細胞が腫瘍細胞である、請求項５７の方法。
【請求項６５】
ウイルス変異体のライブラリーの作成段階が以下の段階を含む、請求項５７の方法：
（ｉ）ウイルスのゲノム配列の部分と同一の配列を有するポリヌクレオチドを提供する段階；
（ｉｉ）該ポリヌクレオチドを変異させて、多数の種々の変異ポリヌクレオチド配列を作成する段階；および
（ｉｉｉ）段階（ｉ）のポリヌクレオチドが含有するウイルスのゲノム配列の部分を除くウイルスのゲノム配列を有するベクターに、多数の変異したポリヌクレオチドをライゲートし、それによりウイルス変異体のライブラリーを作成する段階。
【請求項６６】
ウイルスのゲノム配列がピコルナウイルス由来である、請求項６５の方法。
【請求項６７】
ウイルスのゲノム配列が、配列番号１と少なくとも９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、または６５％同一の配列を含む、請求項６５の方法。
【請求項６８】
ピコルナウイルスがカルジオウイルスである、請求項６６の方法。
【請求項６９】
カルジオウイルスが以下からなる群から選択される、請求項６８の方法：vilyuiskヒト脳脊髄炎ウイルス、Theilerのマウス脳脊髄炎ウイルス、脳心筋炎ウイルスおよびＳＶＶ。
【請求項７０】
脳心筋炎ウイルスが以下からなる単離体の群から選択される、請求項６９の方法：ＣＡ−１３１３９５、ＬＡ−９７−１２７８、ＩＬ−９２−４８９６３、ＩＡ−８９−４７７５２、ＮＪ−９０−１０３２４、ＭＮ−８８−３６６９５、およびＮＣ−８８−２３６２６。
【請求項７１】
ポリヌクレオチド内にヌクレオチドをランダムに挿入することによって段階（ｉｉ）の変異を行う、請求項５７の方法。
【請求項７２】
ポリヌクレオチドのキャプシドエンコード領域において段階（ｉｉ）の変異を行う、請求項５７の方法。
【請求項７３】
トリヌクレオチド変異誘発（ＴＲＩＭ）によってヌクレオチドのランダムな挿入を行う、請求項７１の方法。
【請求項７４】
ポリヌクレオチド内に挿入されるヌクレオチドの少なくとも部分がエピトープタグをエンコードする、請求項７１の方法。
【請求項７５】
改変された細胞型親和性を有する変異カルジオウイルスの作成方法であって、以下の段階を含む方法：
（ａ）カルジオウイルスの変異ポリヌクレオチド配列のライブラリーを作成する段階、この場合、該作成段階は以下の段階を含む：
−カルジオウイルスのキャプシド領域をエンコードするポリヌクレオチドを提供する段階；
−該ポリヌクレオチドを変異させて、多数の種々の変異キャプシドエンコードポリヌクレオチド配列を作成する段階；および
−キャプシドエンコード領域を除く該カルジオウイルスのゲノム配列を有するベクターに、多数の変異したキャプシドエンコードポリヌクレオチドをライゲートし、それにより該カルジオウイルスの変異ポリヌクレオチド配列のライブラリーを作成する段階；
（ｂ）変異ポリヌクレオチド配列のライブラリーを許容細胞内にトランスフェクトし、多数の変異ウイルスを生産させる段階；
（ｃ）多数の変異ウイルスを単離する段階；
（ｄ）単離された多数の変異ウイルスと非許容細胞をインキュベートする段階；および
（ｅ）非許容細胞で生産された変異ウイルスを回収し、それにより、改変された親和性を有する変異カルジオウイルスを作成する段階。
【請求項７６】
さらに以下の段階を含む、請求項７５の方法：
（ｆ）回収された変異ウイルスを非許容細胞においてインキュベートする段階；および
（ｇ）非許容細胞で生産された変異ウイルスを回収する段階。
【請求項７７】
段階（ｆ）および（ｇ）を反復して繰り返すことをさらに含む、請求項７６の方法。
【請求項７８】
カルジオウイルスが、配列番号１と少なくとも９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％または６５％同一の配列を含むゲノムを有する、請求項７５の方法。
【請求項７９】
キャプシドエンコードポリヌクレオチド内にヌクレオチドをランダムに挿入することによって変異を行う、請求項７５の方法。
【請求項８０】
キャプシドエンコードポリヌクレオチド内にランダムに挿入されるヌクレオチドの少なくとも部分がエピトープタグをエンコードする、請求項８０の方法。
【請求項８１】
トリヌクレオチド変異誘発（ＴＲＩＭ）によってヌクレオチドのランダムな挿入を行う、請求項８０の方法。
【請求項８２】
多数の種々の変異キャプシドエンコードポリヌクレオチド配列が１０8を超える種々のキャプシドエンコードポリヌクレオチド配列を含む、請求項７５の方法。
【請求項８３】
多数の種々の変異キャプシドエンコードポリヌクレオチド配列が１０9を超える種々のキャプシドエンコードポリヌクレオチド配列を含む、請求項７５の方法。
【請求項８４】
改変された細胞型親和性を有する変異Seneca Valleyウイルスの作成方法であって、以下の段階を含む方法：
（ａ）Seneca Valleyウイルス変異体のｃＤＮＡライブラリーを作成する段階；
（ｂ）Seneca Valleyウイルス変異体のｃＤＮＡライブラリーからSeneca ValleyウイルスのＲＮＡを作成する段階；
（ｃ）Seneca ValleyウイルスのＲＮＡを許容細胞内にトランスフェクトし、多数の変異Seneca Valleyウイルスを生産させる段階；
（ｄ）多数の変異Seneca Valleyウイルスを単離する段階；
（ｅ）単離された多数の変異Seneca Valleyウイルスと非許容腫瘍細胞をインキュベートする段階；および
（ｆ）非許容腫瘍細胞に溶菌的に感染する変異Seneca Valleyウイルスを回収し、それにより、改変された親和性を有する変異Seneca Valleyウイルスを作成する段階。
【請求項８５】
以下の段階をさらに含む、請求項８４の方法：
（ｇ）回収された変異Seneca Valleyウイルスを非許容細胞においてインキュベートする段階；および
（ｈ）非許容腫瘍細胞に溶菌的に感染する変異Seneca Valleyウイルスを回収する段階。
【請求項８６】
段階（ｇ）および（ｈ）を反復して繰り返すことをさらに含む、請求項８５の方法。
【請求項８７】
マルチウェルハイスループットプラットフォームにおいてインキュベーションを行い、この場合、該プラットフォームは各ウェルに異なる非許容腫瘍細胞型を含む、請求項８５の方法。
【請求項８８】
プラットフォームをスクリーニングして、どのウェルが細胞に溶菌的を感染する変異Seneca Valleyウイルスを含有するかを同定することをさらに含む、請求項８７の方法。
【請求項８９】
各ウェルの吸光度を分析することによってスクリーニングを行う、請求項８８の方法。
【請求項９０】
Seneca Valleyウイルス変異体のｃＤＮＡライブラリーが多数の変異Seneca Valleyウイルスキャプシドポリヌクレオチド配列を含む、請求項８４の方法。
【請求項９１】
配列番号３、５または７と少なくとも９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％または６５％の配列同一性を有する配列を含むキャプシドエンコード領域内にヌクレオチドをランダムに挿入することによって多数の変異Seneca Valleyウイルスキャプシドポリヌクレオチド配列を作成する、請求項９０の方法。
【請求項９２】
ランダムに挿入されるヌクレオチドの配列の少なくとも部分がエピトープタグをエンコードする、請求項９１の方法。
【請求項９３】
トリヌクレオチド変異誘発（ＴＲＩＭ）によってヌクレオチドのランダムな挿入を行う、請求項９１の方法。
【請求項９４】
ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５３４３のSeneca Valleyウイルスまたは、配列番号１と少なくとも９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％または６５％の配列同一性を有する配列を含むゲノムを有するウイルスからSeneca Valleyウイルス変異体のｃＤＮＡライブラリーを作成する、請求項８４の方法。
【請求項９５】
非許容腫瘍細胞が腫瘍セルラインまたは患者から単離された腫瘍細胞型である、請求項８４の方法。
【請求項９６】
非許容腫瘍セルラインが以下からなる群から選択される、請求項９５の方法：Ｍ０５９Ｋ、ＫＫ、Ｕ１１８ＭＧ、ＤＭＳ７９、Ｈ６９、ＤＭＳ１１４、ＤＭＳ５３、Ｈ４６０、Ａ３７５−Ｓ２、ＳＫ−ＭＥＬ−２８、ＰＣ３、ＰＣ３Ｍ２ＡＣ６、ＬＮＣａＰ、ＤＵ１４５、Ｈｅｐ３Ｂ、Ｈｅｐ２Ｇ、ＳＷ６２０、ＳＷ８３９、５６３７、ＨｅＬａＳ３、Ｓ８、ＨＵＶＥＣ、ＨＡＥＣ、Ｗ１３８、ＭＲＣ−５、ＩＭＲ９０、ＨＭＶＥＣ、ＨＣＮ−１Ａ、ＨＲＣＥ、ＣＭＴ−６４、ＬＬＣ−１、ＲＭ−１、ＲＭ−２、ＲＭ−９、ＭＬＴＣ−１、ＫＬＮ−２０５、ＣＭＴ−９３、Ｂ１６Ｆ０、Ｎｅｕｒｏ−２Ａ、Ｃ８Ｄ３０、ＰＫ１５、ＦＢＲＣ、ＭＤＢＫ、ＣＳＬ５０３、およびＯＦＲＣ。
【請求項９７】
患者から単離された非許容腫瘍細胞型が以下からなる癌の群から選択される、請求項９５の方法：グリア芽細胞腫、リンパ腫、小細胞肺癌、大細胞肺癌、黒色腫、前立腺癌、肝癌、結腸癌、腎臓癌、結腸癌、膀胱癌、直腸癌および扁平細胞肺癌。
【請求項９８】
インビボにおいて腫瘍細胞型親和性を有する変異ウイルスの作成方法であって、以下の段階を含む方法：
（ａ）多数の核酸配列を含むウイルス変異体のライブラリーを作成する段階；
（ｂ）ウイルス変異体のライブラリーを許容細胞内にトランスフェクトし、多数の変異ウイルスを生産させる段階；
（ｃ）多数の変異ウイルスを単離する段階；
（ｄ）腫瘍を有する哺乳類に、単離された多数の変異ウイルスを投与する段階、この場合、該哺乳類は該変異ウイルスの未変異型の天然の宿主ではない；および
（ｅ）腫瘍中で複製したウイルスを回収し、それにより、インビボで腫瘍細胞型親和性を有する変異ウイルスを作成する段階。
【請求項９９】
ウイルス変異体のライブラリーの作成段階が以下の段階を含む、請求項９８の方法：
−ウイルスのキャプシド領域をエンコードするポリヌクレオチドを提供する段階；
−該ポリヌクレオチドを変異させて、多数の種々の変異キャプシドエンコードポリヌクレオチド配列を作成する段階；および
−キャプシドエンコード領域を除く該ウイルスのゲノム配列を有するベクターに、多数の変異したキャプシドエンコードポリヌクレオチドをライゲートし、それによりウイルス変異体のライブラリーを作成する段階。
【請求項１００】
段階（ｅ）で回収されたウイルスが腫瘍の細胞に溶菌的に感染する、請求項９８の方法。
【請求項１０１】
腫瘍が異種移植片、同系腫瘍、正所性腫瘍または遺伝子組換え腫瘍である、請求項９８の方法。
【請求項１０２】
哺乳類がマウスである、請求項９８の方法。
【請求項１０３】
ウイルス変異体がピコルナウイルスである、請求項９８の方法。
【請求項１０４】
ピコルナウイルスがカルジオウイルスである、請求項９８の方法。
【請求項１０５】
ピコルナウイルスがSeneca Valleyウイルスまたはその類縁体または誘導体である、請求項１０４の方法。
【請求項１０６】
Seneca ValleyウイルスがＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５３４３を有するSeneca Valleyウイルスであるか、あるいは配列番号１と少なくとも９５％同一の配列を含むゲノム配列を有する、請求項１０５の方法。
【請求項１０７】
請求項４５、５７、７５、８４または９８に記載の方法によって作成される腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項１０８】
腫瘍溶解性ウイルスを用いて患者を処置するための方法であって、以下の段階を含む方法：
（ａ）請求項１０７の腫瘍溶解性ウイルスを、該腫瘍溶解性ウイルスが非感染性になり、該腫瘍溶解性ウイルスの親和性は影響を受けないように不活性化する段階；および
（ｂ）腫瘍を患う患者に該不活性化された腫瘍溶解性ウイルスを投与する段階。
【請求項１０９】
不活性化された腫瘍溶解性ウイルスに毒素を結合させることをさらに含む、請求項１０８の方法。
【請求項１１０】
Seneca Valleyウイルスを用いて腫瘍を有する患者を処置するための方法であって、以下の段階を含む方法：
（ａ）Seneca Valleyウイルスを、該ウイルスが非感染性になり、該ウイルスの親和性は影響を受けないように不活性化する段階；および
（ｂ）腫瘍を患う患者に該不活性化されたSeneca Valleyウイルスを投与する段階。
【請求項１１１】
不活性化されたSeneca Valleyウイルスに毒素を結合させることをさらに含む、請求項１１０の方法。
【請求項１１２】
不活性化されたSeneca Valleyウイルスを含むSeneca Valleyウイルス組成物。
【請求項１１３】
キャプシド領域に組み込まれたエピトープタグを含むSeneca Valleyウイルス。
【請求項１１４】
Seneca Valleyウイルスを用いて腫瘍を有する対象を処置するための方法であって、以下の段階を含む方法：
（ａ）キャプシド中においてエンコードされるエピトープタグを含む変異Seneca Valleyウイルスを作成する段階；
（ｂ）該エピトープタグに毒素を結合させる段階；および
（ｃ）腫瘍を患う対象に該結合毒素を伴う変異Seneca Valleyウイルスを投与する段階。
【請求項１１５】
作成段階が以下の段階を含む、請求項１１４の方法：
−エピトープタグをエンコードするオリゴヌクレオチドをSeneca Valleyウイルスのキャプシドエンコード領域ポリヌクレオチド内に挿入する段階。
【請求項１１６】
変異Seneca Valleyウイルスが、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−５３４３のSeneca Valleyウイルスと比べて改変された細胞型親和性を有さない、請求項１１５の方法。
【請求項１１７】
変異Seneca Valleyウイルスを、該変異Seneca Valleyウイルスが感染性ではなくなるように不活性化することをさらに含む、請求項１１６の方法。
【請求項１１８】
サンプル中の腫瘍細胞の検出方法であって、以下の段階を含む方法：
（ａ）患者から腫瘍サンプルを単離する段階；
（ｂ）該腫瘍サンプルをエピトープタグ付きSeneca Valleyウイルスとインキュベートする段階；および
（ｃ）エピトープタグの検出により結合型Seneca Valleyウイルスに関して腫瘍サンプルをスクリーニングする段階。
【請求項１１９】
インビボでの腫瘍細胞の検出方法であって、以下の段階を含む方法：
（ａ）放射線照射されたエピトープタグ付きSeneca Valleyウイルスを患者に投与する段階、この場合、該エピトープタグに標識をコンジュゲートする；および
（ｂ）患者において該標識を検出する段階。
【請求項１２０】
Seneca Valleyウイルスが変異体、誘導体または類縁体である、請求項１１８または１１９の方法。
【請求項１２１】
ＳＶＶを用いる癌の処置方法であって、以下の段階を含む方法：
（ａ）欠失したパッケージングシグナル配列を含むＳＶＶ変異体を作成する段階；および
（ｂ）該ＳＶＶ変異体を腫瘍細胞に感染させ、それにより、ＳＶＶ媒介性の宿主細胞のシャットオフによって該腫瘍細胞の死滅を引き起こす段階。
【請求項１２２】
請求項１１に記載の単離されたウイルスに特異的に結合する単離された抗体。
【請求項１２３】
抗体がキメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体である請求項１２２に記載の抗体。