(57)【要約】  本開示は、ヒトＬＲＲＣ１５に結合する抗体、抗体結合断片、及び抗体薬物コンジュゲート、それらを作製する方法、並びにがんを有する患者を治療するためのそれらの使用を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍を治療する方法であって、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍を有するヒトに、治療上の利益を提供するのに十分な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの量を投与することを含み、ＡＤＣは、式（Ｉ）：
（Ｉ）  ［Ｄ−Ｌ−ＸＹ−］ｎ−Ａｂ
の構造又はその塩による、リンカーを介して抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体に連結されたＤＮＡインターカレート剤を含み、式中、
Ｄは、ＤＮＡインターカレート剤であり；
Ｌは、リンカーであり；
Ａｂは、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体であり；
ＸＹは、抗体ＡｂにリンカーＬを連結している共有結合的連結を表し；
ｎは、２〜８の範囲の整数であり；
Ａｂは、
配列番号１６の配列に対応するＶＨ鎖及び配列番号１７の配列に対応するＶＬ鎖、
配列番号２６の配列に対応するＶＨ鎖及び配列番号２７の配列に対応するＶＬ鎖、
配列番号３６の配列に対応するＶＨ鎖及び配列番号３７の配列に対応するＶＬ鎖、
配列番号４６の配列に対応するＶＨ鎖及び配列番号４７の配列に対応するＶＬ鎖、
配列番号５６の配列に対応するＶＨ鎖及び配列番号５７の配列に対応するＶＬ鎖、
配列番号６６の配列に対応するＶＨ鎖及び配列番号６７の配列に対応するＶＬ鎖、又は
配列番号７６の配列に対応するＶＨ鎖及び配列番号７７の配列に対応するＶＬ鎖
を含む、方法。
【請求項２】
ｎが２、３又は４である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＸＹが、抗体Ａｂ上のスルフヒドリル基を用いて形成されるチオエーテル結合である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｌが、Ｖａｌ−Ｃｉｔ又はＶａｌ−Ａｌａを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
Ｄがピロロベンゾジアゼピンである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ＡｂがＩｇＧ１である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ＡＤＣが、式（ＩＩｂ）：
【化１】
2019501124.tif 000073
の構造を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ｎが２、３又は４である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
Ａｂが、
（ａ）配列番号１８、１００、１０２、若しくは１０３のアミノ酸配列を有する重鎖；及び配列番号１９の軽鎖；又は
（ｂ）配列番号２８、１０１、１０４、若しくは１０５のアミノ酸配列を有する重鎖；及び配列番号２９の軽鎖
を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
ＡＤＣが、式（ＩＩＩｂ）：
【化２】
2019501124.tif 000074
の構造を有する、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
ｎが２又は４である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
Ａｂが、
（ａ）配列番号１８、１００、１０２、若しくは１０３のアミノ酸配列を有する重鎖；及び配列番号１９の軽鎖；又は
（ｂ）配列番号２８、１０１、１０４、若しくは１０５のアミノ酸配列を有する重鎖；及び配列番号２９の軽鎖
を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍を治療する方法であって、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍を有するヒトに、治療上の利益を提供するのに十分な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの量を投与することを含み、ＡＤＣは、式（Ｉ）：
（Ｉ）  ［Ｄ−Ｌ−ＸＹ−］ｎ−Ａｂ
の構造又はその塩による、リンカーを介して抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体に連結された抗有糸分裂剤を含み、式中、
Ｄは、抗有糸分裂剤であり；
Ｌは、リンカーであり；
Ａｂは、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体であり；
ＸＹは、抗体ＡｂにリンカーＬを連結している共有結合的連結を表し；
ｎは、２〜８の範囲の整数であり；
Ａｂは、
配列番号１６の配列に対応するＶＨ鎖及び配列番号１７の配列に対応するＶＬ鎖、
配列番号２６の配列に対応するＶＨ鎖及び配列番号２７の配列に対応するＶＬ鎖、
配列番号３６の配列に対応するＶＨ鎖及び配列番号３７の配列に対応するＶＬ鎖、
配列番号４６の配列に対応するＶＨ鎖及び配列番号４７の配列に対応するＶＬ鎖、
配列番号５６の配列に対応するＶＨ鎖及び配列番号５７の配列に対応するＶＬ鎖、
配列番号６６の配列に対応するＶＨ鎖及び配列番号６７の配列に対応するＶＬ鎖、又は
配列番号７６の配列に対応するＶＨ鎖及び配列番号７７の配列に対応するＶＬ鎖
を含む、方法。
【請求項１４】
ｎが２、３又は４である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ＸＹが、抗体Ａｂ上のスルフヒドリル基を用いて形成されるチオエーテル結合である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
Ｌが、Ｖａｌ−Ｃｉｔ又はＶａｌ−Ａｌａを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
Ｄがアウリスタチンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
ＡｂがＩｇＧ１である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
ＡＤＣが、式（ＩＩａ）：
【化３】
2019501124.tif 000075
の構造を有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
ｎが２、３又は４である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
Ａｂが、
（ａ）配列番号１８、１００、１０２、若しくは１０３のアミノ酸配列を有する重鎖；及び配列番号１９の軽鎖；又は
（ｂ）配列番号２８、１０１、１０４、若しくは１０５のアミノ酸配列を有する重鎖；及び配列番号２９の軽鎖
を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
ＡＤＣが、式（ＩＩＩａ）：
【化４】
2019501124.tif 000076
の構造を有する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
ｎが２又は４である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
Ａｂが、
（ａ）配列番号１８、１００、１０２、若しくは１０３のアミノ酸配列を有する重鎖；及び配列番号１９の軽鎖；又は
（ｂ）配列番号２８、１０１、１０４、若しくは１０５のアミノ酸配列を有する重鎖；及び配列番号２９の軽鎖
を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍が、再発性、難治性、又は再発性及び難治性である、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍が、神経膠芽腫、肉腫又は黒色腫である、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
ＡＤＣが単独療法として投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
ＡＤＣが、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約６．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で静脈内投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍が、再発性、難治性、又は再発性及び難治性である、請求項１３に記載の方法。
【請求項３０】
ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍が、神経膠芽腫、肉腫又は黒色腫である、請求項１３に記載の方法。
【請求項３１】
ＡＤＣが単剤療法として投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項３２】
ＡＤＣが、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約６．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で静脈内投与される、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年１１月３０日に出願された米国仮出願第６２／２６１，１１４号、及び２０１６年１１月４日に出願された米国仮出願第６２／４１７，４８９号の、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．１１９（ｅ）下の利益を主張し、両者の内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
２．配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０１６年１１月１１日に作成されたこのＡＳＣＩＩコピーは、３８１４９３−２６０ＷＯ（１４４３５８）＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズは１０６，４８４バイトである。
【０００３】
３．分野
本出願は、とりわけ、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体、抗体薬物コンジュゲート（「ＡＤＣ」）、ＡＤＣを含む組成物、ＡＤＣを作製する方法、及びＡＤＣを用いてがんを治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
４．背景
がん療法は、手術、放射線、及び化学療法を含む広範な治療アプローチを含む。しばしば相補的なアプローチが、がんを治療するために医師に利用可能である幅広い選択を可能にするが、既存の治療剤は、正常な健康細胞よりもがん細胞を標的とする選択性の欠如、治療に対してがんにより耐性が生じることなどの、多数の不利益を与える。
【０００５】
正常細胞よりも優先的にがん細胞の細胞プロセスに干渉する標的化された治療薬に基づく最近のアプローチは、放射線治療のような標的化されていない療法と比較して副作用がより少ない化学療法レジメンをもたらしている。しかしながら、標的化された治療薬で治療されたがんであっても、やはり耐性を生じる場合がある。例えば、ＶＥＧＦ陽性がん細胞を標的とするモノクローナル抗体治療薬であるベバシズマブに対する耐性が、いくつかの結腸直腸がんにおいて報告されている（Ｍｅｓａｎｇｅら、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ  ２０１４年；５巻（１３号）：４７０９〜４７２１頁）。
【０００６】
治療耐性のメカニズムは、腫瘍微小環境における活性化された線維芽細胞（例えば、がん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）、間葉系幹細胞（ＭＳＣ））によるフォーメーションであり、これによって、がん薬物ががん細胞に物理的に到達するのを妨げていると考えられている（Ｋａｌｌｕｒｉ  Ｒ．、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ、２０１６年；１６巻：５８２〜５９８頁）。さらに、線維芽細胞媒介性の間質障壁は、免疫エフェクター細胞が腫瘍の深部に浸透してがん細胞を標的とするのを妨げることができる免疫抑制環境を生じさせると理解されている（Ｔｕｒｌｅｙ、Ｓ．Ｊ．、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２０１５年；１５巻：６６９〜６８２頁）。したがって、腫瘍微小環境内でこれらの間質線維芽細胞集団を標的とするがん薬物は、既存の治療戦略を補完し、そして化学療法耐性を克服して、免疫媒介性療法に対する感受性を高めることができる。
【０００７】
治療耐性の別の根源は、がん細胞の可塑性であると考えられている。例えば、上皮状態と間葉状態の間のがん細胞の可塑性は、腫瘍を開始させることができ、並びに転移の出発点として働くことができるがん幹細胞の生成のメカニズムとして関与している。例えば、Ｙｅ、Ｘ．；Ｗｅｉｎｂｅｒｇ、Ｒ．Ａ．、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２０１５年；２５巻（１１号）：６７５〜６８６頁を参照されたい。さらに、間葉系がん細胞は、ドセタキセルのような標準的ながん療法に対して耐性であることが報告されている。Ｓｉｎｇｈ及びＳｅｔｔｌｅｍａｎ．、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２０１０年；２９巻（３４号）：４７４１〜４７５１頁；Ｉｐｐｏｌｉｔｏ、Ｌ．ら、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ、２０１６年；７巻（３８号）：６１８９０〜６１９０４頁を参照されたい。これらの耐性がん細胞に対して有効ながん療法は、既存の療法アプローチを補完する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｍｅｓａｎｇｅら、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ  ２０１４年；５巻（１３号）：４７０９〜４７２１頁
【非特許文献２】Ｋａｌｌｕｒｉ  Ｒ．、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ、２０１６年；１６巻：５８２〜５９８頁
【非特許文献３】Ｔｕｒｌｅｙ、Ｓ．Ｊ．、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２０１５年；１５巻：６６９〜６８２頁
【非特許文献４】Ｙｅ、Ｘ．；Ｗｅｉｎｂｅｒｇ、Ｒ．Ａ．、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２０１５年；２５巻（１１号）：６７５〜６８６頁
【非特許文献５】Ｓｉｎｇｈ及びＳｅｔｔｌｅｍａｎ．、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２０１０年；２９巻（３４号）：４７４１〜４７５１頁
【非特許文献６】Ｉｐｐｏｌｉｔｏ、Ｌ．ら、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ、２０１６年；７巻（３８号）：６１８９０〜６１９０４頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
したがって、正常細胞を救い、臨床的耐性を生じにくいがん療法は、既存の標準的な療法レジメンを増強することによるものなどの、がんを治療するための選択肢を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（発明の要旨）
５．要旨
ヒトＬＲＲＣ１５（ロイシンリッチリピート含有タンパク質１５）は、５８７個のアミノ酸（配列番号１；ＮＰ＿００１１２８５２９．２）を含有するアイソフォーム、及び配列番号１の長いアイソフォームと比較して、Ｎ末端が短縮されている５８１個のアミノ酸（配列番号３；ＮＰ＿５７０８４３．２）を含有する別のアイソフォームの、２つのアイソフォームで存在することが報告されている、細胞表面タンパク質である。両方のアイソフォームのアミノ酸配列を、図１Ａ〜１Ｄに示す。検討を容易にするために、ヒトＬＲＲＣ１５を本明細書において「ｈｕＬＲＲＣ１５」と略記する。この略語は、いずれかのアイソフォームを指すことが意図される。特定のアイソフォームが意図される場合、配列番号１の長いアイソフォーム及び配列番号３の短いアイソフォームについてそれぞれ、略語「ｈｕＬＲＲＣ１５ｌ」及び「ｈｕＬＲＲＣ１５ｓ」が使用される。
【００１１】
図１Ｃ〜１Ｄ（配列番号３）を参照すると、ｈｕＬＲＲＣ１５は、残基２２〜５３８にわたる細胞外ドメイン（「ＥＣＤ」）、残基５３９〜５５９にわたる膜貫通ドメイン（「ＴＭＤ」）、及び残基５６０〜５８１にわたる細胞内ドメイン（「ＩＣＤ」）を含む。ｈｕＬＲＲＣ１５のリーダー配列は、図１Ａ〜１Ｂ（配列番号１）に示され、太字で示されていて、膜貫通ドメインには下線が引かれ、それによりそれらのアイソフォームのＥＣＤ、ＴＭＤ及びＩＣＤを示す。再び図１Ｃ〜１Ｄ（配列番号３）を参照すると、ＥＣＤはおおよそ残基Ａｒｇ５２７とＳｅｒ５２８との間にタンパク質分解切断部位を含み、その切断により、およそ残基２４〜５２７にわたるＥＣＤの部分（「脱落ＥＣＤ（ｓｈｅｄＥＣＤ）」又は「ｓＥＣＤ」）が細胞表面から血流に脱落する。ｈｕＬＲＲＣ１５は、いくつかの固形腫瘍の間質微小環境（及び具体的にはがん関連線維芽細胞）において高度に発現され（例えば、実施例４及び図７を参照されたい）、正常組織型において限定された発現を示す（例えば、実施例５及び図８を参照されたい）。それはまた、特定のがん細胞自体（例えば、肉腫、黒色腫及び脳がん、例えば、神経膠芽腫のような神経膠腫）において発現される。本明細書中に提示されたデータは、ｈｕＬＲＲＣ１５を特異的に標的化する抗体薬物コンジュゲート（「ＡＤＣ」）が、ｈｕＬＲＲＣ１５が腫瘍間質微小環境において発現されるとともにがん細胞自体に発現される固形腫瘍（本明細書において「ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍」と称する）に対する強力な抗腫瘍効果を示すことを初めて実証している。単独療法として投与された抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣのインビボでの抗腫瘍効力を実証するデータは、実施例１２及び図１４Ａ〜１４Ｅに提示されている。なんらかの動作原理に束縛されることを意図するものではないが、この強力な抗腫瘍効果は、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣによる直接的ながん細胞の死滅と標的化されたバイスタンダー死滅効果とを合わせた効果である腫瘍局在化濃度効果により、少なくとも部分的に媒介されるものと考えられる。がん細胞の増殖を停止させそして／又はがん細胞を死滅させるために、ＡＤＣの局所的な取り込み及びそれに続くがん細胞内での細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤の放出に加えて、ｈｕＬＲＲＣ１５を発現する間質細胞の間接的な死滅もまた役割を果たし得る。この強力な抗腫瘍活性は、驚くべきことに、細胞表面から脱落するｈｕＬＲＲＣ１５  ＥＣＤドメインの部分に特異的に結合する抗ＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを用いて観察され、このような抗ＬＲＲＣ１５  ＡＤＣが、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍の処置に治療的に使用され得ることを初めて実証する。
【００１２】
したがって、一態様において、本開示は、ｈｕＬＲＲＣ１５に特異的に結合するＡＤＣ（「抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ」）を提供する。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、リンカーを介して、細胞表面から脱落するＥＣＤの部分においてｈｕＬＲＲＣ１５に特異的に結合する、抗原結合部分に連結された、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を含む。抗原結合部分は、ｈｕＬＲＲＣ１５に特異的に結合することができる任意の部分であり得る。いくつかの実施形態において、抗原結合部分は、抗体及び／又は抗体抗原結合断片である。
【００１３】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体及び／又は結合断片は、一般的に、本明細書においてＶＨＣＤＲ＃１、ＶＨＣＤＲ＃２、及びＶＨＣＤＲ＃３（Ｎ→Ｃ順で）と称される３つの相補性決定領域（「ＣＤＲ」）を有する可変領域（ＶＨ）を含む重鎖、並びに本明細書においてＶＬＣＤＲ＃１、ＶＬＣＤＲ＃２、及びＶＬＣＤＲ＃３（Ｎ→Ｃ順で）と称される３つの相補性決定領域を有する可変領域（ＶＬ）を含む軽鎖を含む。例示的なＣＤＲのアミノ酸配列、並びに抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗原結合部分に含まれ得る例示的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は結合断片の重鎖及び軽鎖のＶＨ領域及びＶＬ領域のアミノ酸配列が、本明細書に提供される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの具体的な実施形態には、限定されないが、これらの例示的なＣＤＲ及び／又はＶＨ配列及び／又はＶＬ配列を含む抗体及び／又は結合断片、並びにこのような抗体及び／又は結合断片によるｈｕＬＲＲＣ１５への結合に対して競合する抗体及び／又は結合断片を含むものが挙げられる。
【００１４】
抗体は、全長抗体、二重特異性抗体、二重可変ドメイン抗体、多重鎖又は一本鎖抗体、サロボディ（代理軽鎖構築物を含む）、単一ドメイン抗体、ラクダ化抗体、ｓｃＦｖ−Ｆｃ抗体などの形態であってもよい。それらは、例えば、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１若しくはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはＩｇＧ４）、ＩｇＭ、又はＩｇＹを含む任意のアイソタイプのものであってもよく、又はそれらに由来するものであってもよい。いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体はＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）である。抗体は、ヒト起源であってもよく又は非ヒト起源であってもよい。非ヒト起源の例には、限定されないが、哺乳動物起源（例えば、サル、げっ歯類、ヤギ及びウサギ）又は鳥類起源（例えば、ニワトリ）が含まれる。具体的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体は、例えば、ヒト化抗体及び／又は完全ヒト抗体のようにヒトへの投与に適している。
【００１５】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体抗原結合断片は、ｈｕＬＲＲＣ１５に特異的に結合することができる抗体の任意の断片を含み得る。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣに含まれ得る抗体抗原結合断片の具体的な例には、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ及びｓｃＦｖが含まれる。
【００１６】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体及び／又は結合断片は、当該技術分野において公知である、抗体及び／又は断片の特性を変更する修飾及び／又は突然変異、例えば半減期を延長させ、又はＡＤＣＣを増加させるかもしくは減少させる、修飾及び／又は突然変異を含むことができる。
【００１７】
治療的使用について、少なくとも１００ｎＭの親和性でｈｕＬＲＲＣ１５に結合する抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを利用することが望まれ得る。したがって、いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、少なくとも約１００ｎＭ又はさらにはそれより高い親和性で、例えば、少なくとも約９０ｎＭ、８０ｎＭ、７０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０１ｎＭ又はそれ以上である親和性で、ｈｕＬＲＲＣ１５に結合する抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は抗ｈｕＬＲＲＣ１５結合断片を含む。抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は結合断片の親和性は、例えば、ＥＬＩＳＡ、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、又は蛍光偏光アッセイのような、当該技術分野において周知である技術又は本明細書に記載されている技術を用いて決定することができる。
【００１８】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤は、細胞の増殖及び／若しくは複製を阻害し、並びに／又は細胞を死滅させることが知られている任意の薬剤であり得る。細胞毒性及び／又は細胞増殖抑制性を有する多数の薬剤が文献で公知である。細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤のクラスの非限定的な例には、例として及び限定されないが、細胞周期調節剤、アポトーシス制御剤、キナーゼ阻害剤、タンパク質合成阻害剤、アルキル化剤、ＤＮＡ架橋剤、インターカレート剤、ミトコンドリア阻害剤、核外輸送阻害剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ＲＮＡ／ＤＮＡ代謝拮抗剤及び抗有糸分裂剤が含まれる。
【００１９】
「詳細な説明」でより詳細に検討されるように、なんらかの特定の動作原理に束縛されることを意図するものではないが、本明細書に含まれるデータは、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣが、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを所望の作用部位に局在化させる濃度効果により少なくとも部分的に媒介される、強力な抗腫瘍活性を発揮することを実証する。例えば、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、標的化されていないアイソタイプ対照ＡＤＣと比較して顕著に大きな、インビトロでのＬＲＲＣ１５を発現する細胞を殺傷する活性を有することが、本明細書において実証される（例えば、実施例１０及び１１、並びに図１３Ａ〜１３Ｆを参照されたい）。具体的には、ｈｕＬＲＲＣ１５を発現するがん細胞株のインビトロでの細胞殺傷は、微小管阻害剤であるモノメチルアウリスタチンＥ（「ＭＭＡＥ」）及びＤＮＡ副溝結合剤であるピロロベンゾジアゼピン（「ＰＢＤ」）を含有するｈｕＬＲＲＣ１５−ＡＤＣについて、実証される（例えば、実施例１０、実施例１１、及び図１３Ａ〜１３Ｆを参照されたい）。さらに、リソソーム酵素によって切断可能なリンカーを介して抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体に連結された微小管阻害剤であるモノメチルアウリスタチンＥ（「ＭＭＡＥ」）を含む抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍を強力に阻害しそして／又は死滅させるが（図１４Ａ〜１４Ｅ）、より弱くｈｕＬＲＲＣ１５を発現している骨肉腫を、アイソタイプ対照ＡＤＣよりも有意に強い様式で阻害しないかまたは死滅させない（例えば、実施例１２及び図１４Ｆを参照されたい）。まとめると、これらのデータは、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを用いて、２つの異なる作用機序又は両方の機序の組み合わせを介して、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍を強力に阻害するために、ＬＲＲＣ１５（＋）間質細胞及びがん細胞に細胞増殖抑制剤及び／又は細胞毒性剤を局在化させることができる。ここで、第一の機序は、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤が、ｈｕＬＲＲＣ１５を発現する間質細胞及びがん細胞自体に細胞毒性及び／又は細胞抑制性であり、それにより、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍の支持及び／又は増殖に不可欠である間質微小環境を破壊し及び／又は崩壊させ、そしてがん細胞を直接死滅させるものであり；第二の機序は、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤が、ｈｕＬＲＲＣ１５を発現する間質細胞に対して必ずしも細胞毒性及び／又は細胞増殖抑制性である必要はないが、急速に分裂しているｈｕＬＲＲＣ１５を発現しているがん細胞に対して細胞増殖抑制性及び／又は細胞毒性であるものである。当業者は、この後者の作用機序について、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤は、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣから一旦切断されると、細胞膜を横切ることが可能であるはずであることを理解する。前者の作用機序について、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣから一旦切断されると、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤は、細胞膜を横切ることが可能である必要性はない。標的化されたバイスタンダー効果を介して腫瘍を阻害及び／又���死滅させるのに有用であるような細胞膜を横断するのに十分な疎水性を有する細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤は、当業者に公知である慣用方法を用いて同定することができる。細胞膜を横切って、細胞に浸透することができる、疎水性を有する細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤は、本明細書では「細胞透過性の細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤」と呼ばれる。
【００２０】
また、当業者は、上記２つの作用機序が互いに排他的ではなく、いくつかの実施形態において、両方の作用機序を介して、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍に対して抗腫瘍活性を発揮することができる抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを利用することが望まれ得ることを理解する。具体的な例として、このような抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、切断可能なリンカーを介してｈｕＬＲＲＣ１５抗体に連結された、ｈｕＬＲＲＣ１５を発現する間質細胞とｈｕＬＲＲＣ１５を発現するがん腫瘍細胞の両方に対して細胞毒性及び／又は細胞増殖抑制性である細胞透過性の細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を含み得る。別の具体的な実施形態として、このような抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、ｈｕＬＲＲＣ１５を発現する間質細胞に細胞毒性及び／又は細胞増殖抑制性である（及び任意選択的に、必然的ではないが、ｈｕＬＲＲＣ１５がん（＋）腫瘍細胞に細胞毒性及び／又は細胞増殖抑制性でもある）第一の細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤；並びにｈｕＬＲＲＣ１５を発現するがん細胞に細胞毒性及び／又は細胞増殖抑制性である第２の細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤の、２つの異なる細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を含み得る。第１の薬剤は、必然的ではないが、細胞透過性の細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤であってもよく、必然的ではないが、切断可能なリンカーを介して抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの抗原結合部分に結合されてもよい。第２の薬剤は、細胞透過性の細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤であり、切断可能なリンカーを介して抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの抗原結合部分に連結されている。
【００２１】
特定の実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤は、例えばアウリスタチンのような細胞透過性の抗有糸分裂剤である。細胞透過性アウリスタチンの具体的な例には、限定されないが、ドラスタチン−１０及びモノメチルアウリスタチンＥ（「ＭＭＡＥ」）が含まれる。別の具体的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤は、細胞透過性の副溝（ｍｉｎｏｒ  ｇｒｏｏｖｅ）結合ＤＮＡ架橋剤のような細胞透過性ＤＮＡ架橋剤である。細胞透過性ＤＮＡ副溝ブ結合剤の具体的な例には、限定されないがピロロベンゾジアゼピン（「ＰＢＤ」）及びＰＢＤ二量体が含まれる。
【００２２】
細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの抗原結合部分に連結するリンカーは、本来は長く、短く、柔軟性があり、剛性であり、親水性であっても疎水性であってもよく、又は柔軟性のセグメント、剛性のセグメント等のような異なる特性を有するセグメントを含んでもよい。リンカーは、細胞外環境（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ）に対して化学的に安定であっても、例えば、血中で科学的に安定であってもよく又は、安定ではなくかつ細胞毒性剤及び／若しくは細胞増殖抑制剤を細胞外周囲環境（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍｉｌｉｅｕ）に放出する結合を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、リンカーは、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣが細胞内に内在化される際に細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を放出するように設計された連結を含む。いくつかの具体的な実施形態において、リンカーは、細胞内部で切断され、そして／又は特異的又は非特異的に犠牲となる（ｉｍｍｏｌａｔｅ）か若しくは別の様式で崩壊するように設計された連結を含む。ＡＤＣとの関連で抗体のような抗原結合部分に薬物を連結するのに有用な広範なリンカーは、当該技術分野において公知である。これらのリンカーのいずれか、並びに他のリンカーを用いて、本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの抗原結合部分に細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を連結することができる。
【００２３】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの抗原結合部分に連結される細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤の数は、変動し得（「薬物対抗体比」又は「ＤＡＲ」と呼ばれる）、抗原結合部分上の利用可能な結合部位の数及び単一のリンカーに連結される薬剤の数によっても制限される。典型的には、リンカーは、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの抗原結合部分に単一の細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を連結する。単一よりも多くの細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を含む抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの実施形態において、各薬剤は同一であってもよく又は異なってもよい。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣが、使用条件下及び／又は保存条件下で容認できないレベルの凝集を示さない限り、２０以上のＤＡＲを有する抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣが企図される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、約１〜１０、１〜８、１〜６、又は１〜４の範囲のＤＡＲを有してもよい。特定の具体的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、２、３又は４のＤＡＲを有し得る。
【００２４】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、構造式（Ｉ）：
（Ｉ）  ［Ｄ−Ｌ−ＸＹ］ｎ−Ａｂ
による化合物又はその塩であって、各々の「Ｄ」は、他とは独立して、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を表し；各々の「Ｌ」は、他とは独立して、リンカーを表し；「Ａｂ」は、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体又は結合断片のような抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗原結合部分を表し；各々の「ＸＹ」は、リンカー上の官能基Ｒｘと抗原結合部分上の「相補的な」官能基Ｒｙの間に形成される連結を表し；ｎは、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣのＤＡＲを表す。具体的な例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、構造式（Ｉ）による化合物であって、各「Ｄ」は同一であり、細胞透過性アウリスタチン（例えば、ドラスタチン−１０若しくはＭＭＡＥ）又は細胞透過性副溝結合ＤＮＡ架橋剤（例えば、ＰＢＤ又はＰＢＤ二量体）のいずれかであり；各「Ｌ」は同一であり、リソソーム酵素によって切断可能なリンカーであり；各「ＸＹ」は、マレイミドとスルフヒドリル（ｓｕｌｆｙｄｒｙｌ）基との間に形成される連結であり；「Ａｂ」は、抗体ｈｕＭ２５、ｈｕＡＤ２０８．４．１、ｈｕＡＤ２０８．１２．１、ｈｕＡＤ２０８．１４．１、ｈｕ１３９．１０、ｍｕＡＤ２１０．４０．９又はｍｕＡＤ２０９．９．１の６つのＣＤＲに対応する６つのＣＤＲを含む抗体、又はこのような抗体によるｈｕＬＲＲＣ１５への結合に対して競合する抗体であり；ｎは２，３、又は４である。この例示的な実施形態又は構造式（Ｉ）の抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの具体的な実施形態において、「Ａｂ」は、ヒト化抗体、例えば、抗体ｈｕＭ２５、ｈｕＡＤ２０８．４．１、ｈｕＡＤ２０８．１２．１、ｈｕＡＤ２０８．１４．１、又はｈｕ１３９．１０のＶＨ鎖及びＶＬ鎖に対応するＶＨ及びＶＬ鎖を含むヒト化抗体である。この例示的な実施形態及び構造式（Ｉ）の抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの別の具体的な実施形態において、Ａｂは、ｈｕＭ２５、ｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ、ｈｕＡＤ２０８．４．１、ｈｕＡＤ２０８．４．１−Ｓ２３９Ｃ、ｈｕＡＤ２０８．１２．１、ｈｕＡＤ２０８．１４．１及びｈｕ１３９．１０から選択されるヒト化抗体である。
【００２５】
別の態様において、本開示は、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを含む組成物を提供する。組成物は、一般的に、本明細書に記載されている１つ以上の抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ、及び／又はその塩、並びに１つ以上の賦形剤、担体又は希釈剤を含む。組成物は、医薬用途又は他の用途のために製剤化され得る。１つの具体的な実施形態において、組成物は医薬用途のために製剤化され、構造式（Ｉ）による抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ又はその具体的な例示的な実施形態のいずれか、及び薬学的に許容される賦形剤、担体又は希釈剤を含む。
【００２６】
医薬用途のために製剤化された組成物は、複数回投与に適したバルク形態で包装されてもよく、又は単回投与に適した単位用量の形態で包装されてもよい。バルク又は単位用量の形態で包装しているかどうかにかかわらず、組成物は、凍結乾燥形態のような乾燥形態で存在してもよく、又は液体形態で存在してもよい。単位投薬の液体組成物は、単回投与に適した量の抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣで予め充填されたシリンジの形態で、便利であるように包装されてもよい。
【００２７】
また、コンジュゲートされていない抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は結合断片が提供される。このような抗体は、インビトロ及びインビボでの様々な状況で使用することができ、これらの状況としては、限定されないが、例として、生物学的アッセイのための細胞染色剤として、及びｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍の治療を（この治療が抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣであるか若しくは他の薬剤であるか、又は薬物の組合せであるかどうかにかかわらず）モニターするための診断剤として、使用することが挙げられる。抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は結合断片は、診断又は他のアッセイにおける検出を助けるための部分で標識されてもよく、又は標識されなくてもよい。適切な標識としては、限定されないが、例として、同位体標識、蛍光標識、化学発光標識、酵素の基質又は他の結合分子などが挙げられる。抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は結合断片の例示的な実施形態は、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣに関連して本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は、結合断片に関連して本明細書に記載されている様々な例示的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は結合断片を含む。
【００２８】
また、本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗原結合部分（例えば、抗体及び／又は結合断片）をコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドで形質転換又はトランスフェクトされた宿主細胞、並びに本明細書に記載されている種々の抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの作製に有用な組成物及び方法が、提供される。
【００２９】
上記のように、細胞透過性の細胞毒性剤及び／又は細胞分裂抑制剤を含む抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍に対して強力な抗腫瘍活性を示し、この強力な抗腫瘍活性は、標的化されたバイスタンダー死滅効果によって、少なくとも部分的に媒介されると考えられ、またこの活性は、細胞表面から脱落し得るｈｕＬＲＲＣ１５  ＥＣＤの部分に特異的に結合する抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを用いて観察される。これは、驚くべきことである。何故なら、脱落ＥＣＤは、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの「シンク（ｓｉｎｋ）」又は「デコイ（ｄｅｃｏｙ）」として利用可能であり、それによって、ｈｕＬＲＲＣ１５を発現する細胞に結合して細胞内に内在化する抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの能力を妨げるからである。本明細書に提供されているデータは、ｈｕＬＲＲＣ１５を標的とするＡＤＣがｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍の処置に治療的に使用され得ることを初めて実証する。
【００３０】
したがって、別の態様において、本開示は、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍の処置に治療的に抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを使用する方法を提供する。方法は、一般的に、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍を有するヒト患者に、治療上の利益を提供するのに十分な量の抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを投与することを伴う。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを用いて有益に処置することができるヒトＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍には、限定されないが、脳がん（例えば、神経膠腫、例えば、神経膠芽腫）、肉腫（例えば、骨肉腫、軟部組織肉腫、脂肪肉腫、平滑筋肉腫、滑膜肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、上皮肉腫、ユーイング肉腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、未分化多形肉腫、未分化紡錘形肉腫、軟骨肉腫、間葉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、血管肉腫、カポジ肉腫、子宮肉腫）、及び黒色腫が挙げられる。がんは、新たに診断された治療を受けたことがないものであっても、又は再発、難治性、若しくは再発性及び難治性であってもよく、又はｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍の転移形態であってもよい。
【００３１】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、単一の治療剤（単剤療法）として投与されてもよく、又は他の抗がん治療及び／若しくは治療剤（典型的には必ずしもそうである必要はないが、治療されるｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍のタイプを治療するために使用される治療剤）とともに若しくはそれに対して補助的に投与されてもよい。実際に、本明細書に提示されているデータは、他の標的化された若しくは標的化されていない化学療法に耐性を示す腫瘍が、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣに対する感受性を有することを実証する（例えば、実施例１５及び図１８Ａ〜図１８Ｄを参照されたい）。理論に束縛されることを望むものではないが、本開示の抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの１つの可能な作用機序は、標準的な療法に耐性を与える間葉系様の特性を示すがん細胞の死滅であり得る。したがって、本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍の治療に対する現在の標的化されたアプローチ及び標的化されていないアプローチよりも有意な利点を提供する。補助的な療法及び／又は治療剤は、典型的には、承認された用量、投与経路及び投与頻度で使用されるが、より低い用量及び／又はより少ない頻度で使用されてもよい。単剤療法として投与する場合、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、典型的には、患者の便宜性と治療上の利益のバランスをとるスケジュールで投与される。１週間に１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、４週間ごとに１回、５週間ごとに１回、６週間ごとに１回、７週間ごとに１回又は８週間ごとに１回投与される抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣが、治療上の利益を与えることが企図されるが、より高いか又は低い頻度の投与が有益である場合もある。別の療法及び／又は薬剤に対して補助的に又はそれとともに投与する場合、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、他の療法又は薬剤の前、後又は同時に投与され得る。
【００３２】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、限定されないが、静脈内注入及び／又は注射及び皮下注射を含む様々な投与経路又は投与様式を介して投与され得る。投与される量は、当該技術分野において周知であるように、投与経路、投薬スケジュール、治療されるがんのタイプ、治療されるがんのステージ、及びに患者の年齢及び体重のような他のパラメータに依存する。治療上の利益を提供することが予想される具体的な例示的な投薬スケジュールは、詳細な説明に提供されている。一般的に、週１回から例えば８週間ごとに１回までの週単位で、静脈内投与する場合、約０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲の抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの量は、治療上の利益をもたらすことが予想される。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１Ａ】ヒトＬＲＲＣ１５の２つの報告済みアイソフォームのアミノ酸配列、及びそれぞれをコードした対応するＤＮＡ配列を与える図である。図１Ａ〜１Ｂは、長鎖ｈｕＬＲＲＣ１５アイソフォーム１に関するコードＤＮＡ配列（配列番号２）及びアミノ酸配列（配列番号１）を示す。図１ＡはコードＤＮＡ残基１〜１０２０に対応し、図１ＢはコードＤＮＡ残基１０２１〜１７６１に対応する。図１Ｃ〜１Ｄは、短鎖ｈｕＬＲＲＣ１５アイソフォーム２に関するコードＤＮＡ配列（配列番号４）及びアミノ酸配列（配列番号３）を示す。図１ＣはコードＤＮＡ残基１〜１０２０に対応し、図１ＤはコードＤＮＡ残基１０２１〜１７４３に対応する。予想シグナルペプチドは太字のイタリック体で示し、予想プロテアーゼ切断部位は枠で囲い、予想膜貫通ドメインには下線を引く。
【図１Ｂ】ヒトＬＲＲＣ１５の２つの報告済みアイソフォームのアミノ酸配列、及びそれぞれをコードした対応するＤＮＡ配列を与える図である。図１Ａ〜１Ｂは、長鎖ｈｕＬＲＲＣ１５アイソフォーム１に関するコードＤＮＡ配列（配列番号２）及びアミノ酸配列（配列番号１）を示す。図１ＡはコードＤＮＡ残基１〜１０２０に対応し、図１ＢはコードＤＮＡ残基１０２１〜１７６１に対応する。図１Ｃ〜１Ｄは、短鎖ｈｕＬＲＲＣ１５アイソフォーム２に関するコードＤＮＡ配列（配列番号４）及びアミノ酸配列（配列番号３）を示す。図１ＣはコードＤＮＡ残基１〜１０２０に対応し、図１ＤはコードＤＮＡ残基１０２１〜１７４３に対応する。予想シグナルペプチドは太字のイタリック体で示し、予想プロテアーゼ切断部位は枠で囲い、予想膜貫通ドメインには下線を引く。
【図１Ｃ】ヒトＬＲＲＣ１５の２つの報告済みアイソフォームのアミノ酸配列、及びそれぞれをコードした対応するＤＮＡ配列を与える図である。図１Ａ〜１Ｂは、長鎖ｈｕＬＲＲＣ１５アイソフォーム１に関するコードＤＮＡ配列（配列番号２）及びアミノ酸配列（配列番号１）を示す。図１ＡはコードＤＮＡ残基１〜１０２０に対応し、図１ＢはコードＤＮＡ残基１０２１〜１７６１に対応する。図１Ｃ〜１Ｄは、短鎖ｈｕＬＲＲＣ１５アイソフォーム２に関するコードＤＮＡ配列（配列番号４）及びアミノ酸配列（配列番号３）を示す。図１ＣはコードＤＮＡ残基１〜１０２０に対応し、図１ＤはコードＤＮＡ残基１０２１〜１７４３に対応する。予想シグナルペプチドは太字のイタリック体で示し、予想プロテアーゼ切断部位は枠で囲い、予想膜貫通ドメインには下線を引く。
【図１Ｄ】ヒトＬＲＲＣ１５の２つの報告済みアイソフォームのアミノ酸配列、及びそれぞれをコードした対応するＤＮＡ配列を与える図である。図１Ａ〜１Ｂは、長鎖ｈｕＬＲＲＣ１５アイソフォーム１に関するコードＤＮＡ配列（配列番号２）及びアミノ酸配列（配列番号１）を示す。図１ＡはコードＤＮＡ残基１〜１０２０に対応し、図１ＢはコードＤＮＡ残基１０２１〜１７６１に対応する。図１Ｃ〜１Ｄは、短鎖ｈｕＬＲＲＣ１５アイソフォーム２に関するコードＤＮＡ配列（配列番号４）及びアミノ酸配列（配列番号３）を示す。図１ＣはコードＤＮＡ残基１〜１０２０に対応し、図１ＤはコードＤＮＡ残基１０２１〜１７４３に対応する。予想シグナルペプチドは太字のイタリック体で示し、予想プロテアーゼ切断部位は枠で囲い、予想膜貫通ドメインには下線を引く。
【図２Ａ】抗体ｈｕＭ２５、ｈｕＡＤ２０８．４．１、ｈｕＡＤ２０８．１２．１、ｈｕＡＤ２０８．１４．１、ｈｕ１３９．１０、ｍｕＡＤ２１０．４０．９及びｍｕＡＤ２０９．９．１のＶＨ鎖のアミノ酸配列を与える図である。ＣＤＲには下線を引く。
【図２Ｂ】抗体ｈｕＭ２５、ｈｕＡＤ２０８．４．１、ｈｕＡＤ２０８．１２．１、ｈｕＡＤ２０８．１４．１、ｈｕ１３９．１０、ｍｕＡＤ２１０．４０．９及びｍｕＡＤ２０９．９．１のＶＬ鎖のアミノ酸配列を与える図である。ＣＤＲには下線を引く。
【図３Ａ】抗体ｈｕＭ２５の重鎖のアミノ酸配列を与える図である（配列番号１８）。ＣＤＲには下線を引き、定常領域（Ｆｃガンマ）はイタリック体で示す。直鎖状アミノ酸配列のナンバリングを示す。
【図３Ｂ】抗体ｈｕＭ２５の軽鎖のアミノ酸配列を与える図である（配列番号１９）。ＣＤＲには下線を引き、定常領域（カッパ）はイタリック体で示す。直鎖状アミノ酸配列のナンバリングを示す。
【図４】ｈｕＬＲＲＣ１５を発現する細胞と結合する、抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣ中に含まれ得るＣＤＲを有した様々な例示的抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体の能力を説明する、グラフを与える図である。
【図５】ｈｕＬＲＲＣ１５の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）と結合する、抗ｈｕＬＲＲＣ１５中に含まれ得るＣＤＲを有した様々な例示的抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体の能力を説明する、グラフを与える図である。
【図６Ａ】抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣ中に含まれ得るＣＤＲを有した例示的抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体が、ｈｕＬＲＲＣ１５上の異なるエピトープと結合することを説明した、抗体競合アッセイの結果を与える図である。図６Ａは、ｍｕＭ２５、ｈｕＭ２５、ｈｕ１３９．１０又はｍｕＭ２５−ＡＦ４８８に対するアイソタイプ抗体の結合競合を示す。図６Ｂは、ｍｕＭ２５、ｍｕＡＤ２０８．４．１、ｍｕＡＤ２０８．１２．１、ｍｕＡＤ２０８．１４．１、ｍｕＡＤ２０９．９．１又はｍｕＭ２５−ＡＦ４８８に対するアイソタイプ抗体の結合競合を示す。
【図６Ｂ】抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣ中に含まれ得るＣＤＲを有した例示的抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体が、ｈｕＬＲＲＣ１５上の異なるエピトープと結合することを説明した、抗体競合アッセイの結果を与える図である。図６Ａは、ｍｕＭ２５、ｈｕＭ２５、ｈｕ１３９．１０又はｍｕＭ２５−ＡＦ４８８に対するアイソタイプ抗体の結合競合を示す。図６Ｂは、ｍｕＭ２５、ｍｕＡＤ２０８．４．１、ｍｕＡＤ２０８．１２．１、ｍｕＡＤ２０８．１４．１、ｍｕＡＤ２０９．９．１又はｍｕＭ２５−ＡＦ４８８に対するアイソタイプ抗体の結合競合を示す。
【図７】様々な固形腫瘍において、ｈｕＬＲＲＣ１５が高度に発現されることを説明した、免疫組織化学法（ＩＨＣ）及び免疫蛍光（ＩＦ）染色組織の画像を与える図である。
【図８】様々な正常組織型において、ｈｕＬＲＲＣ１５が発現されないか、又はごくわずかに発現されることを説明した、ＩＨＣ染色組織の画像を与える図である。
【図９Ａ】１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの不在（−）又は存在（＋）下で、患者由来乳がん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）溶解物、又は市販の患者骨髄由来の間葉系幹細胞（ＭＳＣ）溶解物において、ウエスタンブロット分析により測定したｈｕＬＲＲＣ１５の発現レベルを示す図である。検出に使用した抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、ｍｕＡＤ２１０．４０．９であった。
【図９Ｂ】フローサイトメトリーにより測定した、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ有り又は無しでの市販の間葉系幹細胞（ＭＳＣ）株におけるｈｕＬＲＲＣ１５の発現を示す図である。図９ＢはヒトＢＭ−ＭＳＣ細胞（Ｌｏｎｚａ）においてアイソタイプと比較したｈｕＬＲＲＣ１５の発現を示す。図９ＣはネズミＢａｌｂ／ｃＢＭ−ＭＳＣ細胞（Ｃｙａｇｅｎ）においてアイソタイプと比較したｈｕＬＲＲＣ１５の発現を示す。検出に使用した抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、ＡＦ６４７標識ｈｕＭ２５であった。
【図９Ｃ】フローサイトメトリーにより測定した、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ有り又は無しでの市販の間葉系幹細胞（ＭＳＣ）株におけるｈｕＬＲＲＣ１５の発現を示す図である。図９ＢはヒトＢＭ−ＭＳＣ細胞（Ｌｏｎｚａ）においてアイソタイプと比較したｈｕＬＲＲＣ１５の発現を示す。図９ＣはネズミＢａｌｂ／ｃＢＭ−ＭＳＣ細胞（Ｃｙａｇｅｎ）においてアイソタイプと比較したｈｕＬＲＲＣ１５の発現を示す。検出に使用した抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、ＡＦ６４７標識ｈｕＭ２５であった。
【図１０】１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ、ＳｔｅｍＸＶｉｖｏ（商標）ＥＭＴ誘導培地サプリメント（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、「ＥＭＴキット」）、又は対照で５日間処理したＡ５４９肺がん細胞又はＰＡＮＣ１膵臓がん細胞の、ウエスタンブロット分析により測定したｈｕＬＲＲＣ１５、Ｓｎａｉｌ、ＴＣＦ８／ＺＥＢ１、Ｎ−カドヘリン、Ｅ−カドヘリン、及びＧＡＰＤＨの発現レベルを示す図である。検出に使用した抗ＬＲＲＣ１５抗体は、ｍｕＡＤ２１０．４０．９であった。すべての他の抗体はＥＭＴ抗体パネル（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）から入手した。
【図１１Ａ】１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ、ＳｔｅｍＸＶｉｖｏ（商標）ＥＭＴ誘導培地サプリメント（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、「ＥＭＴキット」）、又は対照で５日間処理した、Ａ５４９肺がん又はＰＡＮＣ１膵臓がん細胞において、蛍光によって測定したタンパク質発現を示す図である。ＡＦ６４７標識アイソタイプ（「アイソタイプ−ＡＦ６４７」）、ＡＦ６４７標識ｈｕＭ２５（「ｈｕＭ２５−ＡＦ６４７」）、ＰＥ標識アイソタイプ（「アイソタイプ−ＰＥ」）、及びＰＥ標識抗ＥｐＣＡＭ（「抗ＥｐＣＡＭ−ＰＥ」抗体を使用した蛍光を示す。
【図１１Ｂ】９日間にわたる１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの連続処理（左上、「連続処理」）、又は５日間１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβでの処理、次に洗浄及びさらに４日間ＴＧＦβの不在下での培養（左下、「不連続処理」）後の、Ａ５４９細胞の顕微鏡画像を示す図である。フローサイトメトリー（中央及び右図）は、連続処理、不連続処理後、又は対照の、ｈｕＬＲＲＣ１５（中央の上下）及びＥｐＣＡＭ（右側の上下）レベルを示す。抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＭ２５−ＡＦ６４７をこの分析において使用した。
【図１１Ｃ】１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ又はＳｔｅｍＸＶｉｖｏ（商標）ＥＭＴ誘導培地サプリメント（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、「ＥＭＴキット」）の９日間にわたる連続処理、又は５日間ＴＧＦβ若しくはＥＭＴキットを用いた処理、次に洗浄及びさらに４日間の培養後の、Ａ５４９肺がん（左のグラフ）又はＰＡＮＣ１膵臓がん細胞（右のグラフ）において蛍光によって測定したタンパク質発現を示す図である。上図はｈｕＬＲＲＣ１５のレベルを示し、下図はＥｐＣＡＭのレベルを示す。
【図１２】ＡＤＣ調製物のクロマトグラムを与える図である。上図は、実施例８に従い実施したクロマトグラフィーによるコンジュゲーションの解析を説明する。ゼロ（「ＤＡＲ０」）、２（「ＤＡＲ２」）、４（「ＤＡＲ４」）、６（「ＤＡＲ６」）及び８（「ＤＡＲ８」）つの細胞増殖抑制剤及び／又は細胞毒性剤が結合した抗体に対応するいくつかのピークが存在する。調製物は４の平均ＤＡＲを有する。この粗製平均ＤＡＲ４調製物に疎水性相互作用クロマトグラフィーを施して、ＤＡＲ２に対応するピークを単離した。ＤＡＲ２が富化した生成調製物（本明細書中「Ｅ２」調製物と呼ぶ）のクロマトグラムを、下図中に示す。Ｅ２富化ＡＤＣ調製物はＤＡＲ２を有するＡＤＣの純度が約９８％である。
【図１３Ａ】種々のＬＲＲＣ１５を発現する細胞に対する例示的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの強力なインビトロ細胞殺傷能力を示すグラフを与える図である。図１３Ａは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｂは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｃは、Ｇ２９２クローンＡ１４１Ｂ１骨肉腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｄは、ＥＢＣ−１扁平上皮細胞非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｅは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｆは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｇは、アイソタイプＳ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（実線）又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（破線）による、ＬＲＲＣ１５でトランスフェクトされた３Ｔ１２細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｈは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのヒトＢＭ−ＭＳＣ（Ｌｏｎｚａ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｉは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのマウスＢａｌｂ／ｃ  ＢＭ−ＭＳＣ（Ｃｙａｇｅｎ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｊは、アイソタイプ−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、ｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ抗体による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ（下のグラフ）の存在下での上皮から間葉移行（ＥＭＴ）しているＡ５４９肺がん細胞（上のグラフ）又はＡ５４９細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。Ｙ軸はパーセント細胞生存率を示す；Ｘ軸は抗体又はＡＤＣ濃度（ｎＭ）を示す。
【図１３Ｂ】種々のＬＲＲＣ１５を発現する細胞に対する例示的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの強力なインビトロ細胞殺傷能力を示すグラフを与える図である。図１３Ａは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｂは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｃは、Ｇ２９２クローンＡ１４１Ｂ１骨肉腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｄは、ＥＢＣ−１扁平上皮細胞非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｅは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｆは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｇは、アイソタイプＳ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（実線）又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（破線）による、ＬＲＲＣ１５でトランスフェクトされた３Ｔ１２細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｈは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのヒトＢＭ−ＭＳＣ（Ｌｏｎｚａ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｉは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのマウスＢａｌｂ／ｃ  ＢＭ−ＭＳＣ（Ｃｙａｇｅｎ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｊは、アイソタイプ−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、ｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ抗体による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ（下のグラフ）の存在下での上皮から間葉移行（ＥＭＴ）しているＡ５４９肺がん細胞（上のグラフ）又はＡ５４９細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。Ｙ軸はパーセント細胞生存率を示す；Ｘ軸は抗体又はＡＤＣ濃度（ｎＭ）を示す。
【図１３Ｃ】種々のＬＲＲＣ１５を発現する細胞に対する例示的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの強力なインビトロ細胞殺傷能力を示すグラフを与える図である。図１３Ａは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｂは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｃは、Ｇ２９２クローンＡ１４１Ｂ１骨肉腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｄは、ＥＢＣ−１扁平上皮細胞非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｅは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｆは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｇは、アイソタイプＳ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（実線）又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（破線）による、ＬＲＲＣ１５でトランスフェクトされた３Ｔ１２細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｈは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのヒトＢＭ−ＭＳＣ（Ｌｏｎｚａ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｉは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのマウスＢａｌｂ／ｃ  ＢＭ−ＭＳＣ（Ｃｙａｇｅｎ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｊは、アイソタイプ−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、ｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ抗体による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ（下のグラフ）の存在下での上皮から間葉移行（ＥＭＴ）しているＡ５４９肺がん細胞（上のグラフ）又はＡ５４９細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。Ｙ軸はパーセント細胞生存率を示す；Ｘ軸は抗体又はＡＤＣ濃度（ｎＭ）を示す。
【図１３Ｄ】種々のＬＲＲＣ１５を発現する細胞に対する例示的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの強力なインビトロ細胞殺傷能力を示すグラフを与える図である。図１３Ａは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｂは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｃは、Ｇ２９２クローンＡ１４１Ｂ１骨肉腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｄは、ＥＢＣ−１扁平上皮細胞非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｅは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｆは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｇは、アイソタイプＳ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（実線）又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（破線）による、ＬＲＲＣ１５でトランスフェクトされた３Ｔ１２細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｈは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのヒトＢＭ−ＭＳＣ（Ｌｏｎｚａ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｉは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのマウスＢａｌｂ／ｃ  ＢＭ−ＭＳＣ（Ｃｙａｇｅｎ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｊは、アイソタイプ−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、ｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ抗体による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ（下のグラフ）の存在下での上皮から間葉移行（ＥＭＴ）しているＡ５４９肺がん細胞（上のグラフ）又はＡ５４９細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。Ｙ軸はパーセント細胞生存率を示す；Ｘ軸は抗体又はＡＤＣ濃度（ｎＭ）を示す。
【図１３Ｅ】種々のＬＲＲＣ１５を発現する細胞に対する例示的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの強力なインビトロ細胞殺傷能力を示すグラフを与える図である。図１３Ａは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｂは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｃは、Ｇ２９２クローンＡ１４１Ｂ１骨肉腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｄは、ＥＢＣ−１扁平上皮細胞非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｅは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｆは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｇは、アイソタイプＳ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（実線）又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（破線）による、ＬＲＲＣ１５でトランスフェクトされた３Ｔ１２細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｈは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのヒトＢＭ−ＭＳＣ（Ｌｏｎｚａ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｉは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのマウスＢａｌｂ／ｃ  ＢＭ−ＭＳＣ（Ｃｙａｇｅｎ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｊは、アイソタイプ−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、ｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ抗体による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ（下のグラフ）の存在下での上皮から間葉移行（ＥＭＴ）しているＡ５４９肺がん細胞（上のグラフ）又はＡ５４９細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。Ｙ軸はパーセント細胞生存率を示す；Ｘ軸は抗体又はＡＤＣ濃度（ｎＭ）を示す。
【図１３Ｆ】種々のＬＲＲＣ１５を発現する細胞に対する例示的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの強力なインビトロ細胞殺傷能力を示すグラフを与える図である。図１３Ａは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｂは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｃは、Ｇ２９２クローンＡ１４１Ｂ１骨肉腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｄは、ＥＢＣ−１扁平上皮細胞非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｅは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｆは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｇは、アイソタイプＳ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（実線）又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（破線）による、ＬＲＲＣ１５でトランスフェクトされた３Ｔ１２細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｈは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのヒトＢＭ−ＭＳＣ（Ｌｏｎｚａ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｉは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのマウスＢａｌｂ／ｃ  ＢＭ−ＭＳＣ（Ｃｙａｇｅｎ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｊは、アイソタイプ−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、ｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ抗体による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ（下のグラフ）の存在下での上皮から間葉移行（ＥＭＴ）しているＡ５４９肺がん細胞（上のグラフ）又はＡ５４９細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。Ｙ軸はパーセント細胞生存率を示す；Ｘ軸は抗体又はＡＤＣ濃度（ｎＭ）を示す。
【図１３Ｇ】種々のＬＲＲＣ１５を発現する細胞に対する例示的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの強力なインビトロ細胞殺傷能力を示すグラフを与える図である。図１３Ａは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｂは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｃは、Ｇ２９２クローンＡ１４１Ｂ１骨肉腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｄは、ＥＢＣ−１扁平上皮細胞非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｅは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｆは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｇは、アイソタイプＳ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（実線）又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（破線）による、ＬＲＲＣ１５でトランスフェクトされた３Ｔ１２細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｈは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのヒトＢＭ−ＭＳＣ（Ｌｏｎｚａ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｉは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのマウスＢａｌｂ／ｃ  ＢＭ−ＭＳＣ（Ｃｙａｇｅｎ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｊは、アイソタイプ−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、ｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ抗体による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ（下のグラフ）の存在下での上皮から間葉移行（ＥＭＴ）しているＡ５４９肺がん細胞（上のグラフ）又はＡ５４９細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。Ｙ軸はパーセント細胞生存率を示す；Ｘ軸は抗体又はＡＤＣ濃度（ｎＭ）を示す。
【図１３Ｈ】種々のＬＲＲＣ１５を発現する細胞に対する例示的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの強力なインビトロ細胞殺傷能力を示すグラフを与える図である。図１３Ａは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｂは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｃは、Ｇ２９２クローンＡ１４１Ｂ１骨肉腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｄは、ＥＢＣ−１扁平上皮細胞非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｅは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｆは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｇは、アイソタイプＳ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（実線）又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（破線）による、ＬＲＲＣ１５でトランスフェクトされた３Ｔ１２細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｈは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのヒトＢＭ−ＭＳＣ（Ｌｏｎｚａ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｉは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのマウスＢａｌｂ／ｃ  ＢＭ−ＭＳＣ（Ｃｙａｇｅｎ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｊは、アイソタイプ−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、ｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ抗体による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ（下のグラフ）の存在下での上皮から間葉移行（ＥＭＴ）しているＡ５４９肺がん細胞（上のグラフ）又はＡ５４９細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。Ｙ軸はパーセント細胞生存率を示す；Ｘ軸は抗体又はＡＤＣ濃度（ｎＭ）を示す。
【図１３Ｉ】種々のＬＲＲＣ１５を発現する細胞に対する例示的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの強力なインビトロ細胞殺傷能力を示すグラフを与える図である。図１３Ａは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｂは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｃは、Ｇ２９２クローンＡ１４１Ｂ１骨肉腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｄは、ＥＢＣ−１扁平上皮細胞非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｅは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｆは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｇは、アイソタイプＳ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（実線）又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（破線）による、ＬＲＲＣ１５でトランスフェクトされた３Ｔ１２細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｈは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのヒトＢＭ−ＭＳＣ（Ｌｏｎｚａ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｉは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのマウスＢａｌｂ／ｃ  ＢＭ−ＭＳＣ（Ｃｙａｇｅｎ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｊは、アイソタイプ−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、ｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ抗体による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ（下のグラフ）の存在下での上皮から間葉移行（ＥＭＴ）しているＡ５４９肺がん細胞（上のグラフ）又はＡ５４９細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。Ｙ軸はパーセント細胞生存率を示す；Ｘ軸は抗体又はＡＤＣ濃度（ｎＭ）を示す。
【図１３Ｊ】種々のＬＲＲＣ１５を発現する細胞に対する例示的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの強力なインビトロ細胞殺傷能力を示すグラフを与える図である。図１３Ａは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｂは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｃは、Ｇ２９２クローンＡ１４１Ｂ１骨肉腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｄは、ＥＢＣ−１扁平上皮細胞非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ｈｕＭ２５抗体及びＭＭＡＥ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｅは、Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｆは、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞の生存率における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣ及びアイソタイプＰＢＤ  ＡＤＣの効果を記述する。図１３Ｇは、アイソタイプＳ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（実線）又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２（破線）による、ＬＲＲＣ１５でトランスフェクトされた３Ｔ１２細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｈは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのヒトＢＭ−ＭＳＣ（Ｌｏｎｚａ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｉは、アイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２又はｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβの存在下でのマウスＢａｌｂ／ｃ  ＢＭ−ＭＳＣ（Ｃｙａｇｅｎ）間葉系幹細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。図１３Ｊは、アイソタイプ−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、ｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２、又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ抗体による、１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβ（下のグラフ）の存在下での上皮から間葉移行（ＥＭＴ）しているＡ５４９肺がん細胞（上のグラフ）又はＡ５４９細胞におけるインビトロ細胞殺傷を示す。Ｙ軸はパーセント細胞生存率を示す；Ｘ軸は抗体又はＡＤＣ濃度（ｎＭ）を示す。
【図１４Ａ】様々な間質（＋）／がん（＋）腫瘍に対する例示的抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣの強いインビボ効果を実証するグラフを与える図である。グラフ中、矢印は投与日数を表す。それぞれの異種移植片モデルを代表する体積１００〜８００ｍｍ３の未処理異種移植片腫瘍においてＩＨＣにより評価した、がん細胞におけるＬＲＲＣ１５の発現を説明する画像も示す。図１４Ａは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のインビボ活性を実証する；図１４Ｂは、患者由来のＣＴＧ−０２４１異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のインビボ活性を実証する；図１４Ｃは、患者由来のＣＴＧ−１０９５異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のインビボ活性を実証する；図１４Ｄは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４及びｈｕ１３９．１０−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４のインビボ活性を実証する；図１４Ｅは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４、ｈｕＡＤ２０８．４．１−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４及びｈｕＡＤ２０８．１４．１−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４のインビボ活性を実証する。
【図１４Ｂ】様々な間質（＋）／がん（＋）腫瘍に対する例示的抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣの強いインビボ効果を実証するグラフを与える図である。グラフ中、矢印は投与日を表す。それぞれの異種移植片モデルを代表する体積１００〜８００ｍｍ３の未処理異種移植片腫瘍においてＩＨＣにより評価した、がん細胞におけるＬＲＲＣ１５の発現を説明する画像も示す。図１４Ａは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のインビボ活性を実証する；図１４Ｂは、患者由来のＣＴＧ−０２４１異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のインビボ活性を実証する；図１４Ｃは、患者由来のＣＴＧ−１０９５異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のインビボ活性を実証する；図１４Ｄは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４及びｈｕ１３９．１０−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４のインビボ活性を実証する；図１４Ｅは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４、ｈｕＡＤ２０８．４．１−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４及びｈｕＡＤ２０８．１４．１−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４のインビボ活性を実証する。
【図１４Ｃ】様々な間質（＋）／がん（＋）腫瘍に対する例示的抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣの強いインビボ効果を実証するグラフを与える図である。グラフ中、矢印は投与日を表す。それぞれの異種移植片モデルを代表する体積１００〜８００ｍｍ３の未処理異種移植片腫瘍においてＩＨＣにより評価した、がん細胞におけるＬＲＲＣ１５の発現を説明する画像も示す。図１４Ａは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のインビボ活性を実証する；図１４Ｂは、患者由来のＣＴＧ−０２４１異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のインビボ活性を実証する；図１４Ｃは、患者由来のＣＴＧ−１０９５異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のインビボ活性を実証する；図１４Ｄは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４及びｈｕ１３９．１０−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４のインビボ活性を実証する；図１４Ｅは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４、ｈｕＡＤ２０８．４．１−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４及びｈｕＡＤ２０８．１４．１−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４のインビボ活性を実証する。
【図１４Ｄ】様々な間質（＋）／がん（＋）腫瘍に対する例示的抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣの強いインビボ効果を実証するグラフを与える図である。グラフ中、矢印は投与日を表す。それぞれの異種移植片モデルを代表する体積１００〜８００ｍｍ３の未処理異種移植片腫瘍においてＩＨＣにより評価した、がん細胞におけるＬＲＲＣ１５の発現を説明する画像も示す。図１４Ａは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のインビボ活性を実証する；図１４Ｂは、患者由来のＣＴＧ−０２４１異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のインビボ活性を実証する；図１４Ｃは、患者由来のＣＴＧ−１０９５異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のインビボ活性を実証する；図１４Ｄは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４及びｈｕ１３９．１０−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４のインビボ活性を実証する；図１４Ｅは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４、ｈｕＡＤ２０８．４．１−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４及びｈｕＡＤ２０８．１４．１−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４のインビボ活性を実証する。
【図１４Ｅ】様々な間質（＋）／がん（＋）腫瘍に対する例示的抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣの強いインビボ効果を実証するグラフを与える図である。グラフ中、矢印は投与日を表す。それぞれの異種移植片モデルを代表する体積１００〜８００ｍｍ３の未処理異種移植片腫瘍においてＩＨＣにより評価した、がん細胞におけるＬＲＲＣ１５の発現を説明する画像も示す。図１４Ａは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のインビボ活性を実証する；図１４Ｂは、患者由来のＣＴＧ−０２４１異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のインビボ活性を実証する；図１４Ｃは、患者由来のＣＴＧ−１０９５異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のインビボ活性を実証する；図１４Ｄは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４及びｈｕ１３９．１０−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４のインビボ活性を実証する；図１４Ｅは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４、ｈｕＡＤ２０８．４．１−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４及びｈｕＡＤ２０８．１４．１−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４のインビボ活性を実証する。
【図１４Ｆ】ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４が、Ｓａｏｓ−２骨肉腫細胞を用いて作製された異種移植片に対するアイソタイプ対照と比較して、インビボで統計的により活性でないことを示すグラフを与える図である。矢印は投与日を示す。また、この異種移植片モデルのがん細胞におけるＬＲＲＣ１５発現を示す代表的なＩＨＣ画像も示されている。
【図１５】例示的抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣであるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４を用いた処理後に再成長するＵ１１８ＭＧ腫瘍は、ｈｕＬＲＲＣ１５の発現を維持しており、したがって抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣに対する感受性を維持していることを実証するグラフを与える図である。矢印は投与日数を表す。代表的な未処理Ｕ１１８ＭＧ異種移植片腫瘍においてＩＨＣにより評価した、がん細胞におけるＬＲＲＣ１５発現を説明する画像も示す。
【図１６Ａ】生存率（図１６Ａ）又は体重減少（図１６Ｂ）によって評価すると、同等の薬物に基づいて、抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣのＥ２富化調製物は、多量ロードＥ４調製物より良く耐容することを実証するデータを与える図である。矢印は投与日数を表す。
【図１６Ｂ】生存率（図１６Ａ）又は体重減少（図１６Ｂ）によって評価すると、同等の薬物に基づいて、抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣのＥ２富化調製物は、多量ロードＥ４調製物より良く耐容することを実証するデータを与える図である。矢印は投与日数を表す。
【図１７】同等の薬物に基づいて、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣのＥ２富化調製物が、多量薬物ロードＡＤＣ調製物（例えば、Ｅ４又はＤＡＲ４）よりもＵ１１８ＭＧ異種移植片に対してより高い有効性を有することを示すデータを与える図である。矢印は投与日数を示す。また、この異種移植片モデルのがん細胞におけるＬＲＲＣ１５発現を示す代表的なＩＨＣ画像が示されている。
【図１８Ａ】例示的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣのインビボ有効性が、複数の間質（＋）／がん（＋）腫瘍にわたって、比較化学療法薬よりも統計学的に有意に高いことを実証するデータを与える図である。グラフにおいて、矢印は投薬日数を表す。また、各異種移植片モデルを代表する、体積が１００〜８００ｍｍ３の未処置腫瘍においてＩＨＣによって評価されるように、がん細胞上のＬＲＲＣ１５発現を示す画像が示される。図１８Ａは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるアイソタイプ抗体又はテモゾロミドと比較したｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２の効果を示す；図１８Ｂは、ＣＴＧ−０２４１骨肉腫患者由来異種移植片におけるアイソタイプ抗体、アイソタイプＡＤＣ、シスプラチン、ドキソルビシン、ゲムシタビン、又はイホスファミドと比較したｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２の効果を示す；図１８Ｃは、ＣＴＧ−１０９５骨肉腫患者由来異種移植片におけるアイソタイプ抗体、アイソタイプＡＤＣ又はシスプラチンと比較したｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２の効果を示す；図１８Ｄは、ＣＴＧ−１０９５骨肉腫患者由来異種移植片におけるアイソタイプ抗体又はアイソタイプ−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２  ＡＤＣと比較したｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２又はゲムシタビンの単独又は組み合わせによる効果を示す。
【図１８Ｂ】例示的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣのインビボ有効性が、複数の間質（＋）／がん（＋）腫瘍にわたって比較化学療法薬よりも統計学的に有意に高いことを実証するデータを与える図である。グラフにおいて、矢印は投薬日数を表す。また、各異種移植片モデルを代表する、体積が１００〜８００ｍｍ３の未処置腫瘍においてＩＨＣによって評価されるように、がん細胞上のＬＲＲＣ１５発現を示す画像が示される。図１８Ａは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるアイソタイプ抗体又はテモゾロミドと比較したｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２の効果を示す；図１８Ｂは、ＣＴＧ−０２４１骨肉腫患者由来異種移植片におけるアイソタイプ抗体、アイソタイプＡＤＣ、シスプラチン、ドキソルビシン、ゲムシタビン、又はイホスファミドと比較したｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２の効果を示す；図１８Ｃは、ＣＴＧ−１０９５骨肉腫患者由来異種移植片におけるアイソタイプ抗体、アイソタイプＡＤＣ又はシスプラチンと比較したｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２の効果を示す；図１８Ｄは、ＣＴＧ−１０９５骨肉腫患者由来異種移植片におけるアイソタイプ抗体又はアイソタイプ−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２  ＡＤＣと比較したｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２又はゲムシタビンの単独又は組み合わせによる効果を示す。
【図１８Ｃ】例示的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣのインビボ有効性が、複数の間質（＋）／がん（＋）腫瘍にわたって比較化学療法薬よりも統計学的に有意に高いことを実証するデータを与える図である。グラフにおいて、矢印は投薬日数を表す。また、各異種移植片モデルを代表する、体積が１００〜８００ｍｍ３の未処置腫瘍においてＩＨＣによって評価されるように、がん細胞上のＬＲＲＣ１５発現を示す画像が示される。図１８Ａは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるアイソタイプ抗体又はテモゾロミドと比較したｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２の効果を示す；図１８Ｂは、ＣＴＧ−０２４１骨肉腫患者由来異種移植片におけるアイソタイプ抗体、アイソタイプＡＤＣ、シスプラチン、ドキソルビシン、ゲムシタビン、又はイホスファミドと比較したｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２の効果を示す；図１８Ｃは、ＣＴＧ−１０９５骨肉腫患者由来異種移植片におけるアイソタイプ抗体、アイソタイプＡＤＣ又はシスプラチンと比較したｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２の効果を示す；図１８Ｄは、ＣＴＧ−１０９５骨肉腫患者由来異種移植片におけるアイソタイプ抗体又はアイソタイプ−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２  ＡＤＣと比較したｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２又はゲムシタビンの単独又は組み合わせによる効果を示す。
【図１８Ｄ】例示的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣのインビボ有効性が、複数の間質（＋）／がん（＋）腫瘍にわたって比較化学療法薬よりも統計学的に有意に高いことを実証するデータを与える図である。グラフにおいて、矢印は投薬日数を表す。また、各異種移植片モデルを代表する、体積が１００〜８００ｍｍ３の未処置腫瘍においてＩＨＣによって評価されるように、がん細胞上のＬＲＲＣ１５発現を示す画像が示される。図１８Ａは、Ｕ１１８ＭＧ異種移植片におけるアイソタイプ抗体又はテモゾロミドと比較したｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２の効果を示す；図１８Ｂは、ＣＴＧ−０２４１骨肉腫患者由来異種移植片におけるアイソタイプ抗体、アイソタイプＡＤＣ、シスプラチン、ドキソルビシン、ゲムシタビン、又はイホスファミドと比較したｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２の効果を示す；図１８Ｃは、ＣＴＧ−１０９５骨肉腫患者由来異種移植片におけるアイソタイプ抗体、アイソタイプＡＤＣ又はシスプラチンと比較したｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２の効果を示す；図１８Ｄは、ＣＴＧ−１０９５骨肉腫患者由来異種移植片におけるアイソタイプ抗体又はアイソタイプ−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２  ＡＤＣと比較したｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２又はゲムシタビンの単独又は組み合わせによる効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
７．詳細な説明
本開示は、ヒトＬＲＲＣ１５に特異的に結合する抗体薬物コンジュゲート、ＡＤＣを含む組成物、ＡＤＣを含むことができる抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は結合断片、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体をコードするポリヌクレオチド及び／又はＡＤＣを含む結合断片、抗体及び／又は結合断片を産生することができる宿主細胞、抗体、結合断片及びＡＤＣを作製するために有用な方法及び組成物、並びにＡＤＣを使用する様々な方法に関する。
【００３５】
当業者には理解されるように、抗体及び／又は結合断片は、本質的に「モジュール式」である。本開示を通して、抗体及び／又は結合断片を構成する様々な「モジュール」の様々な具体的な実施形態が記載されている。具体的な非限定的な例として、ＶＨＣＤＲ、ＶＨ鎖、ＶＬＣＤＲ及びＶＬ鎖の様々な具体的な実施形態が記載されている。各々の具体的な組合せが明示的に個別に記載されているのと同じく、具体的な実施形態のすべてが互いに組み合わせられ得ることを意図する。
【００３６】
本明細書に開示されているＡＤＣはまた、本質的に「モジュール式」である。本開示を通して、ＡＤＣを構成する様々な「モジュール」の様々な具体的な実施形態が記載されている。具体的な非限定的な例として、ＡＤＣを含み得る抗体、リンカー、及び細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤の特定の実施形態が記載されている。各々の具体的な組合せが明示的に個別に記載されているのと同じく、記載されている具体的な実施形態のすべてが互いに組み合わせ得ることを意図する。
【００３７】
また、当業者は、本明細書に記載されている様々なＡＤＣが塩の形態であってもよく、いくつかの具体的な実施形態において薬学的に許容される塩であってもよいことを理解する。十分に酸性である官能基、十分に塩基性である官能基、又は両方の官能基を有する本開示のＡＤＣは、多数の無機塩基、並びに無機酸及び有機酸のいずれかと反応して塩を形成することができる。あるいは、四級窒素を有する化合物のような、固有に帯電した化合物は、適切な対イオン、例えば、臭化物、塩化物又はフッ化物のようなハロゲン化物と塩を形成することができる。
【００３８】
酸付加塩を形成するために一般的に用いられる酸は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸などのような無機酸、及びｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、ｐ−ブロモフェニル−スルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸などのような有機酸である。塩基付加塩には、アンモニウム及びアルカリ又はアルカリ土類金属の水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩などのような無機塩基に誘導されるものが含まれる。
【００３９】
７．１．略語
本明細書に記載されている抗体、結合断片、ＡＤＣ及びポリヌクレオチドは、多数の実施形態において、それぞれのポリペプチド配列又はポリヌクレオチド配列によって記載されている。別段に示されない限り、ポリペプチド配列はＮ→Ｃ配向で提供されている；ポリヌクレオチド配列は５’→３’配向で提供されている。ポリペプチド配列について、以下の表１に示すように、遺伝的にコードされたアミノ酸の通常の３文字略語又は１文字略語を使用することができる。
【００４０】
【表１】
2019501124.tif 000002
【００４１】
特定の配列は、特定のクラス（例えば、脂肪族、疎水性など）に属するアミノ酸残基を特定する構造式によって定義される。本明細書において使用される遺伝的にコードされたアミノ酸が属する種々のクラスは、以下の表２に記述されている。いくつかのアミノ酸は、１を超えるクラスに属する場合がある。スルフヒドリル基を含有するシステイン、及び立体構造的に制約されているプロリンは、クラスに割り当てられない。
【００４２】
【表２】
2019501124.tif 000003
【００４３】
７．２．定義
本明細書において別段に定義されない限り、本開示に関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。
【００４４】
７．３．抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体薬物コンジュゲート
一態様において、本開示は、ヒトＬＲＲＣ１５アイソフォーム１（配列番号１）又はアイソフォーム２（配列番号３）に特異的に結合する抗体薬物コンジュゲート（「ＡＤＣ」）に関する。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、一般的に、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗原結合部分、例えば、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体又は結合断片を含み、１つ以上のリンカーを介してそれに連結された１つ以上の細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を有する。
【００４５】
７．３．１．抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び結合断片
具体的な例示的な実施形態において、抗原結合部分は、抗体又は抗体抗原結合断片である。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体及び／又は結合断片は、細胞表面から血中に放出される細胞外ドメインの領域（配列番号３の残基２２〜５２７）（「脱落ＥＣＤ」又は「ｓＥＣＤ」）でｈｕＬＲＲＣ１５に特異的に結合し、続いて配列番号３のＡｒｇ５２７とＳｅｒ５２８の間のタンパク質分解切断部位で切断される。
【００４６】
本明細書で使用するとき、用語「抗体」（Ａｂ）とは、特定の抗原（ここではｈｕＬＲＲＣ１５のｓＥＣＤ）に特異的に結合し又は免疫学的にそれと反応する免疫グロブリン分子を指す。抗体は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの両方において、超可変領域としても知られている相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。当該技術分野で知られているように、抗体の超可変領域を記述するアミノ酸位置／境界は、文脈及び当該技術分野において知られている様々な定義に応じて変化し得る。可変ドメイン内のいくつかの位置は、一セットの基準の下で超可変領域内にあるものとみなすことができる一方で、異なるセットの基準の下では超可変領域外にあるとみなされるという点において、これらの位置は、ハイブリッド超可変位置として考えることができる。これらの位置の１つ以上はまた、伸長された超可変領域に見出すことができる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ４つのＦＲ領域を含み、主にβシート構造をとることによって３つのＣＤＲに連結する。このＣＤＲは、該βシート構造に連結するループを形成し、いくつかの場合には、該βシート構造の一部を形成する。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲ領域と近接して一緒に保持され、他の鎖由来のＣＤＲとともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  （Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、  Ｂｅｔｈｅｓｄａ、  Ｍｄ．  １９８７）を参照されたい。本明細書で使用するとき、免疫グロブリンアミノ酸残基の番号付けは、別段に指示がなければ、Ｋａｂａｔらの免疫グロブリンアミノ酸残基の番号付けシステムに従って行われる。
【００４７】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体は、本質的にポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、遺伝子操作された抗体、及び／又は他の方法で修飾された抗体であってもよく、限定されないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、霊長類化抗体、一本鎖抗体、二重特異性抗体、二重可変ドメイン抗体などが挙げられる。様々な実施形態において、抗体は、抗体の定常領域の全部又は一部を含む。いくつかの実施形態において、定常領域は、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１又はＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）、ＩｇＭ及びＩｇＹから選択されるアイソタイプである。特定の実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体は、ＩｇＧ１定常領域アイソタイプを含む。
【００４８】
用語「モノクローナル抗体」とは、本明細書で使用するとき、ハイブリドーマ技術によって生成される抗体に限定されない。モノクローナル抗体は、任意の真核生物、原核生物又はファージクローンを含む単一のクローンから、当該技術分野において利用可能な又は公知の手段によって誘導される。本開示で有用なモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、及びファージディスプレイ技術、又はそれらの組合せの使用を含む、当該技術分野において公知である多種多様な技術を用いて調製することができる。ヒトにおける抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体を含むＡＤＣのインビボでの使用を含む本開示の多数の用途において、キメラ抗体、霊長類化抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体が適切に使用され得る。
【００４９】
用語「キメラ」抗体とは、本明細書で使用するとき、ラット抗体又はマウス抗体のような非ヒト免疫グロブリンに由来する可変配列、及び典型的にはヒト免疫グロブリン鋳型から選択されるヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体を指す。キメラ抗体を生成するための方法は、当該技術分野で公知である。例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれるＭｏｒｒｉｓｏｎ、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９巻（４７１９号）：１２０２〜７頁；Ｏｉら、１９８６年、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、４巻：２１４〜２２１頁；Ｇｉｌｌｉｅｓら、１９８５年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１２５巻：１９１〜２０２頁；米国特許第５，８０７，７１５号；第４，８１６，５６７号；及び第４，８１６，３９７号を参照されたい。
【００５０】
非ヒト（例えばマウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ免疫グロブリンである。一般的に、ヒト化抗体は、実質的にすべての少なくとも１つの可変ドメイン、及び典型的には２つの可変ドメインを含み、ここで、すべての又は実質的にすべてのＣＤＲ領域は非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、すべての又は実質的にすべてのＦＲ領域はヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列の免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部を含むことができる。抗体をヒト化する方法は当該技術分野で公知である。例えば、すべて参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれるＲｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８年、Ｎａｔｕｒｅ、３３２巻：３２３〜７頁；米国特許第５，５３０，１０１号；第５，５８５，０８９号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７６２号；Ｑｕｅｅｎらの米国特許第６，１８０，３７０号；欧州特許第２３９４００号；ＰＣＴ出願公開第９１／０９９６７号；米国特許第５，２２５，５３９号；欧州特許第５９２１０６号；欧州特許第５１９５９６号；Ｐａｄｌａｎ、１９９１年、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２８巻：４８９〜４９８頁；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、１９９４年、Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．、７巻：８０５〜８１４頁；Ｒｏｇｕｓｋａら、１９９４年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、９１巻：９６９〜９７３頁；及び米国特許第５，５６５，３３２号を参照されたい。
【００５１】
「ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体であり、ヒト免疫グロブリンライブラリーから単離され、又は１つ以上のヒト免疫グロブリンについてトランスジェニックな動物から単離され、内因性の免疫グロブリンを発現しない抗体を含む。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを用いるファージディスプレイ法を含む、当該技術分野において公知である様々な方法によって作製することができる。例えば、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第４，４４４，８８７号及び第４，７１６，１１１号；ＰＣＴ国際公開第９８／４６６４５号；国際公開第９８／５０４３３号；国際公開第９８／２４８９３号；国際公開第９８／１６６５４号；国際公開第９６／３４０９６号；国際公開第９６／３３７３５号；及び国際公開第９１／１０７４１号を参照されたい。ヒト抗体はまた、機能的な内因性の免疫グロブリンを発現することができないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを用いて、生成することができる。参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ国際公開第９８／２４８９３号；国際公開第９２／０１０４７号；国際公開第９６／３４０９６号；国際公開第９６／３３７３５号；米国特許第５，４１３，９２３号；第５，６２５，１２６号；第５，６３３，４２５号；第５，５６９，８２５号；第５，６６１，０１６号；第５，５４５，８０６号；第５，８１４，３１８号；第５，８８５，７９３号；第５，９１６，７７１号；及び第５，９３９，５９８号を参照されたい。さらに、Ｍｅｄａｒｅｘ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）、Ａｓｔｅｌｌａｓ  Ｐｈａｒｍａ（Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、ＩＬ）、Ａｍｇｅｎ（Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ、ＣＡ）及びＲｅｇｅｎｅｒｏｎ（Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ、ＮＹ）のような企業は、上述されるものと同様の技術を用いて、選択抗原に対するヒト抗体を提供することを契約し得る。選択されたエピトープを認識する完全ヒト抗体は、「誘導選択」と呼ばれる技術を用いて生じさせることができる。このアプローチにおいて、選択された非ヒトモノクローナル抗体、例えばマウス抗体を用いて、同じエピトープを認識する完全ヒト抗体の選択を誘導する（Ｊｅｓｐｅｒｓら、１９８８年、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１２巻：８９９〜９０３頁を参照されたい）。
【００５２】
「霊長類化抗体」は、サルの可変領域及びヒト定常領域を含む。霊長類化抗体を生成するための方法は、当該技術分野において公知である。例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる米国特許第５，６５８，５７０号；第５，６８１，７２２号；及び第５，６９３，７８０号を参照されたい。
【００５３】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、完全長（インタクト）抗体分子、並びにｈｕＬＲＲＣ１５に特異的に結合することができる抗原結合断片を含み得る。抗体結合断片の例には、限定されないが、例としてＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、一本鎖Ｆｖ断片及び単一ドメイン断片が含まれる。
【００５４】
Ｆａｂ断片は、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ２）を含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含む重鎖ＣＨ２ドメインのカルボキシル末端に少数の残基を付加することによってＦａｂ断片と区別される。Ｆ（ａｂ’）断片は、Ｆ（ａｂ’）２ペプシン消化産物のヒンジシステインでのジスルフィド結合の切断によって生成される。抗体断片のさらなる化学的カップリングは、当業者に公知である。Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片は、インタクトな抗体のＦｃ断片を欠損しており、動物の循環からより迅速に除去され、インタクトな抗体よりも非特異的な組織結合が少なくなる場合がある（例えば、Ｗａｈｌら、１９８３年、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．、２４巻：３１６頁を参照されたい）。
【００５５】
「Ｆｖ」断片は、完全な標的認識及び結合部位を含有する抗体の最小断片である。この領域は、緊密に非共有結合している１つの重鎖及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる（ＶＨ−ＶＬ二量体）。この構造において、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を規定する。しばしば、６つのＣＤＲは、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、場合によっては、単一の可変ドメイン（又は、標的に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえも、結合部位全体よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識して結合する能力を有し得る。
【００５６】
「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体結合断片は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、この場合、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。一般的に、Ｆｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。
【００５７】
「単一ドメイン抗体」は、ｈｕＬＲＲＣ１５に対して十分な親和性を示す単一のＶＨドメイン又はＶＬドメインで構成される。具体的な実施形態において、単一ドメイン抗体はラクダ化抗体である（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ、１９９９年、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２３１巻：２５〜３８頁を参照されたい）。
【００５８】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体はまた、二重特異性抗体であってもよい。二重特異性抗体は、同一であるか又は異なる抗原上の２つの異なるエピトープに対して結合特異性を有するモノクローナル抗体であり、しばしばヒト抗体又はヒト化抗体である。本開示において、結合特異性の一方はｈｕＬＲＲＣ１５に指向させることができ、他方は、任意の他の抗原であってもよく、例えば、細胞表面タンパク質、受容体、受容体サブユニット、組織特異的抗原、ウイルス由来タンパク質、ウイルスによってコードされたエンベロープタンパク質、細菌由来タンパク質、又は細菌表面タンパク質などが挙げられる。
【００５９】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体を誘導体化してもよい。誘導体化抗体は、典型的には、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／遮断基による誘導体化、タンパク質分解性切断、細胞リガンド又は他のタンパク質への連結によって修飾される。多数の化学修飾のいずれも、公知の技術、例えば、限定されないが、特異的な化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などによって実施され得る。さらに、誘導体は、１つ以上の非天然アミノ酸を  例えば、アムブレックス（ａｍｂｒｘ）技術を用いて含有させてもよい。例えば、Ｗｏｌｆｓｏｎ、２００６年、Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．、１３巻（１０号）：１０１１〜２頁を参照されたい。
【００６０】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体又は結合断片は、その配列が少なくとも１つの定常領域媒介性の生物学的エフェクター機能を変更するように改変されている抗体又は断片であってもよい。例えば、いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、非修飾抗体と比較して少なくとも１つの定常領域媒介性の生物学的エフェクター機能を減少させるために修飾されることができ、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）への結合を減少させ得る。ＦｃγＲ結合は、ＦｃγＲ相互作用に必要な特定の領域で抗体の免疫グロブリン定常領域セグメントを突然変異させることによって減少させることができる（例えば、Ｃａｎｆｉｅｌｄ及びＭｏｒｒｉｓｏｎ、１９９１年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１７３巻：１４８３〜１４９１頁；Ｌｕｎｄら、１９９１年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７巻：２６５７〜２６６２頁を参照されたい）。また、ＦｃγＲ結合を減少させることにより、オプソニン作用、食作用及び抗原依存性の細胞毒性（「ＡＤＣＣ」）のような、ＦｃγＲ相互作用に依存する他のエフェクター機能を減少させることができる。
【００６１】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体又は結合断片は、例えば、ＦｃＲｎ相互作用に関与する特定の領域で免疫グロブリン定常領域セグメントを突然変異させることによって、新生児Ｆｃ受容体であるＦｃＲｎに対するそれらの結合親和性を増加又は減少させる修飾を含み得る（例えば、国際公開第２００５／１２３７８０号を参照されたい）。特定の実施形態において、ＩｇＧクラスの抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、重鎖定常領域のアミノ酸残基２５０、３１４及び４２８の少なくとも１つが単独で置換されるか、又は位置２５０及び４２８、若しくは位置２５０及び３１４、若しくは位置３１４及び４２８、若しくは位置２５０、３１４、及び４２８のような任意の組合せで置換されるように突然変異させられ、ここで、位置２５０及び４２８における置換は特定の組合せである。位置２５０について、置換アミノ酸残基は、スレオニン以外の任意のアミノ酸残基、例えば、限定されないが、アラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、バリン、トリプトファン、又はチロシンであってもよい。位置３１４については、置換アミノ酸残基は、ロイシン以外の任意のアミノ酸残基、例えば、限定されないが、アラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、スレオニン、バリン、トリプトファン、又はチロシンであってもよい。位置４２８について、置換アミノ酸残基は、メチオニン以外の任意のアミノ酸残基、例えば、限定されないが、アラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、ロイシン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、スレオニン、バリン、トリプトファン、又はチロシンであってもよい。適切なアミノ酸置換の具体的な組合せは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，２１７，７９７号の表１に示されている。なおさらに別の実施形態において、変異体Ｆｃドメインは、ＦｃＲｎに対する親和性を高める少なくとも１つ以上の修飾、例えば、１つ以上のアミノ酸残基２５１〜２５６、２８５〜２９０、３０８〜３１４、３８５〜３８９、及び４２８〜４３６の修飾（例えば、Ｍ４２８Ｌ）、又は位置２５０及び４２８での修飾（例えば、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ）を有する。例えば、Ｈｉｎｔｏｎら、２００４年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７９巻（８号）：６２１３〜６２１６頁；国際公開第９７／３４６３１号及び国際公開第０２／０６０９１９号を参照されたい。このような突然変異は、ＦｃＲｎへの結合を増加させ、これは、抗体を分解から保護し、その半減期を増加させる。
【００６２】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は結合断片は、例えば、Ｊｕｎｇ及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、１９９７年、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、１０巻：９号、９５９〜９６６頁；Ｙａｚａｋｉら、２００４年、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ  Ｓｅｌ．、１７巻（５号）：４８１〜９頁；及び米国特許出願第２００７／０２８０９３１に記載されている、１つ以上の超可変領域に挿入された１つ以上のアミノ酸を有してもよい。
【００６３】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣに含まれる抗体の翻訳後修飾には、グリコシル化が含まれ得る。一般的な二分岐複合体は、２つのＮ−アセチルグルコサミン残基を有するコア構造、３つのマンノース、及び２つのアンテナを形成するためのα−６マンノースとα−３マンノースとにβ−１，２連結した２つのＧｌｃＮＡｃを含むことができる。１つ以上のフコース（Ｆｕｃ）、ガラクトース（Ｇａｌ）、高マンノースグリカンＭａｎ−５又はＭａｎ−９、バイセクティングＧｌｃＮａｃ、及びＮ−アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）又はＮ−グリコリルノイラミン酸（ＮＧＮＡ）残基を含むシアル酸はコアに結合され得る。Ｎ連結したグリコフォームは、Ｇ０（コア二分岐グリコシル化構造を有するタンパク質）、Ｇ０Ｆ（フコシル化Ｇ０）、Ｇ０Ｆ  ＧｌｃＮＡｃ、Ｇ１（１つのガラクトース残基を有するコアグリコシル化構造を有するタンパク質）、Ｇ１Ｆ（フコシル化Ｇ１）、Ｇ２（２つのガラクトース残基を有するコアグリコシル化構造を有するタンパク質）、及び／又はＧ２Ｆ（フコシル化Ｇ２）を含み得る。
【００６４】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣに含まれる抗体は、フコースのレベルが低い、又はフコースを欠損している可能性がある。フコースを欠損している抗体は、特に低用量の抗体で、ＡＤＣＣ活性の増強と相関している。Ｓｈｉｅｌｄｓら、２００２年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７７巻：２６７３３〜２６７４０頁；Ｓｈｉｎｋａｗａら、２００３年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７８件：３４６６〜７３を参照されたい。フコース不含抗体を調製する方法には、ラット骨髄腫ＹＢ２／０細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６６２）における増殖が含まれる。ＹＢ２／０細胞は、ポリペプチドのフコシル化に必要な酵素であるα−１，６−フコシルトランスフェラーゼをコードする、低レベルのＦＵＴ８  ｍＲＮＡを発現する。
【００６５】
ｈｕＬＲＲＣ１５に対する高い親和性を有する抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は結合断片は、治療用途に望まれ得る。したがって、本開示は、ｈｕＬＲＲＣ１５に対する高い結合親和性を有する抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は結合断片を含むＡＤＣを企図する。具体的な実施形態において、抗体及び／又は結合断片は、少なくとも約１００ｎＭの親和性でｈｕＬＲＲＣ１５に結合するが、より高い親和性、例えば、少なくとも約９０ｎＭ、８０ｎＭ、７０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２５ｎＭ、２０ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０１ｎＭ、又はそれ以上を示し得る。いくつかの実施形態において、抗体は、約１ｐＭ〜約１００ｎＭの範囲の親和性、又は限定されないが約０．０１〜１００、０．０１〜１０、０．０１〜２、０．１〜１００、０．１〜１０、又は０．１〜２ｎＭのような前述の値のいずれの間の範囲にある親和性でｈｕＬＲＲＣ１５に結合する。
【００６６】
ｈｕＬＲＲＣ１５に対する抗体及び／又は結合断片の親和性は、例えば、限定されないが、ＥＬＩＳＡ、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー又は蛍光偏光アッセイのような、当該技術分野において周知である技術又は本明細書に記載されている技術を用いて決定することができる。
【００６７】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体及び／又は結合断片は、ＶＨＣＤＲ＃１、ＶＨＣＤＲ＃２及びＶＨＣＤＲ＃３が、以下の表中のそれぞれのＶＨＣＤＲ配列から選択される配列を有する３つのＣＤＲを有するＶＨ鎖を含む。
【００６８】
【表３】
2019501124.tif 000004
2019501124.tif 000005
【００６９】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体及び／又は結合断片は、ＶＬＣＤＲ＃１、ＶＬＣＤＲ＃２及びＶＬＣＤＲ＃３が、以下の表中のそれぞれのＶＬＣＤＲ配列から選択される配列を有する３つのＣＤＲを有するＶＬ鎖を含む。
【００７０】
【表４】
2019501124.tif 000006
2019501124.tif 000007
【００７１】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体及び／又は結合断片は、ＶＨＣＤＲ＃１、ＶＨＣＤＲ＃２及びＶＨＣＤＲ＃３が、以下の表中のそれぞれのＶＨＣＤＲ配列から選択される配列を有する３つのＣＤＲを有するＶＨ鎖、並びにＶＬＣＤＲ＃１、ＶＬＣＤＲ＃２及びＶＬＣＤＲ＃３が、以下の表中のそれぞれのＶＬＣＤＲ配列から選択される配列を有する３つのＣＤＲを有するＶＬ鎖を含む。
【００７２】
【表５】
2019501124.tif 000008
2019501124.tif 000009
【００７３】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体及び／又は結合断片は、３つのＣＤＲを有するＶＨ鎖を含み、
ＶＨＣＤＲ＃１は配列番号１０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２は配列番号１１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３は配列番号１２の配列に対応し；又は
ＶＨＣＤＲ＃１は配列番号２０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２は配列番号２１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３は配列番号２２の配列に対応し；又は
ＶＨＣＤＲ＃１は配列番号３０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２は配列番号３１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３は配列番号３２の配列に対応し；又は
ＶＨＣＤＲ＃１は配列番号４０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２は配列番号４１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３は配列番号４２の配列に対応し；又は
ＶＨＣＤＲ＃１は配列番号５０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２は配列番号５１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３は配列番号５２の配列に対応し；又は
ＶＨＣＤＲ＃１は配列番号６０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２は配列番号６１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３は配列番号６２の配列に対応し；又は
ＶＨＣＤＲ＃１は配列番号７０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２は配列番号７１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３は配列番号７２の配列に対応する。
【００７４】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体及び／又は結合断片は、３つのＣＤＲを有するＶＬ鎖を含み、
ＶＬＣＤＲ＃１は配列番号１３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２は配列番号１４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３は配列番号１５の配列に対応し；又は
ＶＬＣＤＲ＃１は配列番号２３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２は配列番号２４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３は配列番号２５の配列に対応し；又は
ＶＬＣＤＲ＃１は配列番号３３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２は配列番号３４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３は配列番号３５の配列に対応し；又は
ＶＬＣＤＲ＃１は配列番号４３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２は配列番号４４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３は配列番号４５の配列に対応し；又は
ＶＬＣＤＲ＃１は配列番号５３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２は配列番号５４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３は配列番号５５の配列に対応し；又は
ＶＬＣＤＲ＃１は配列番号６３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２は配列番号６４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３は配列番号６５の配列に対応し；又は
ＶＬＣＤＲ＃１は配列番号７３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２は配列番号７４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３は配列番号７５の配列に対応する。
【００７５】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体及び／又は結合断片は、
ＶＨＣＤＲ＃１は配列番号１０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２は配列番号１１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３は配列番号１２の配列に対応する３つのＣＤＲを有するＶＨ鎖、並びにＶＬＣＤＲ＃１は配列番号１３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２は配列番号１４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３は配列番号１５の配列に対応する３つのＣＤＲを有するＶＬ鎖；又は
ＶＨＣＤＲ＃１は配列番号２０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２は配列番号２１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３は配列番号２２の配列に対応する３つのＣＤＲを有するＶＨ鎖、並びにＶＬＣＤＲ＃１は配列番号２３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２は配列番号２４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３は配列番号２５の配列に対応する３つのＣＤＲを有するＶＬ鎖；又は
ＶＨＣＤＲ＃１は配列番号３０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２は配列番号３１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３は配列番号３２の配列に対応する３つのＣＤＲを有するＶＨ鎖、並びにＶＬＣＤＲ＃１は配列番号３３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２は配列番号３４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３は配列番号３５の配列に対応する３つのＣＤＲを有するＶＬ鎖；又は
ＶＨＣＤＲ＃１は配列番号４０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２は配列番号４１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３は配列番号４２の配列に対応する３つのＣＤＲを有するＶＨ鎖、並びにＶＬＣＤＲ＃１は配列番号４３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２は配列番号４４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３は配列番号４５の配列に対応する３つのＣＤＲを有するＶＬ鎖；又は
ＶＨＣＤＲ＃１は配列番号５０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２は配列番号５１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３は配列番号５２の配列に対応する３つのＣＤＲを有するＶＨ鎖、並びにＶＬＣＤＲ＃１は配列番号５３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２は配列番号５４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３は配列番号５５の配列に対応する３つのＣＤＲを有するＶＬ鎖；又は
ＶＨＣＤＲ＃１は配列番号６０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２は配列番号６１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３は配列番号６２の配列に対応する３つのＣＤＲを有するＶＨ鎖、並びにＶＬＣＤＲ＃１は配列番号６３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２は配列番号６４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３は配列番号６５の配列に対応する３つのＣＤＲを有するＶＬ鎖；又は
ＶＨＣＤＲ＃１は配列番号７０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２は配列番号７１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３は配列番号７２の配列に対応する３つのＣＤＲを有するＶＨ鎖、並びにＶＬＣＤＲ＃１は配列番号７３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２は配列番号７４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３は配列番号７５の配列に対応する３つのＣＤＲを有するＶＬ鎖を含む。
【００７６】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体及び／又は結合断片は、以下の表中の配列の１つから選択される配列に対応する配列を有するＶＨ鎖を含む。
【００７７】
【表６】
2019501124.tif 000010
【００７８】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体及び／又は結合断片は、以下の表中の配列の１つから選択される配列に対応する配列を有するＶＬ鎖を含む。
【００７９】
【表７】
2019501124.tif 000011
【００８０】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体及び／又は結合断片は、
配列番号１６に対応する配列を有するＶＨ鎖及び配列番号１７の配列に対応するＶＬ鎖；又は
配列番号２６に対応する配列を有するＶＨ鎖及び配列番号２７の配列に対応するＶＬ鎖；又は
配列番号３６に対応する配列を有するＶＨ鎖及び配列番号３７の配列に対応するＶＬ鎖；又は
配列番号４６に対応する配列を有するＶＨ鎖及び配列番号４７の配列に対応するＶＬ鎖；又は
配列番号５６に対応する配列を有するＶＨ鎖及び配列番号５７の配列に対応するＶＬ鎖；又は
配列番号６６に対応する配列を有するＶＨ鎖及び配列番号６７の配列に対応するＶＬ鎖；又は
配列番号７６に対応する配列を有するＶＨ鎖及び配列番号７７の配列に対応するＶＬ鎖
を含む。
【００８１】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは多数の用途を有し、特にヒトにおけるｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍の処置に治療的に有用である。したがって、いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する結合断片は、ヒトへの投与に適している。特定の実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体はヒト化される。いくつかの実施形態において、ヒト化された抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する結合断片は、配列番号１６、配列番号２６、配列番号３６、配列番号４６又は配列番号５６の配列に対応するＶＨ鎖、及び配列番号１７、配列番号２７、配列番号３７、配列番号４７又は配列番号５７の配列に対応するＶＬ鎖を含む抗体及び／又は結合断片である。いくつかの実施形態において、ヒト化された抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は結合断片は、ｈｕＭ２５、ｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ、ｈｕＡＤ２０８．４．１、ｈｕＡＤ２０８．４．１−Ｓ２３９Ｃ、ｈｕＡＤ２０８．１２．１、ｈｕＡＤ２０８．１４．１及びｈｕ１３９．１０から選択される全長抗体である。
【００８２】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ及び／又は抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する結合断片はＩｇＧ１である。
【００８３】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、直鎖アミノ酸配列の番号付けによって配列番号１８の残基１２１〜４５０の配列に対応する定常領域を有する重鎖を含む。
【００８４】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、直鎖アミノ酸配列の番号付けによって配列番号１９の残基１０８〜２１４の配列に対応する定常領域を有する軽鎖を含む。
【００８５】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、直鎖アミノ酸配列の番号付けによって配列番号１８の残基１２１〜４５０の配列に対応する定常領域を有する重鎖、及び配列番号１９の残基１０８〜２１４の配列に対応する定常領域を有する軽鎖を含む。
【００８６】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する結合断片は、参照抗体を用いたインビトロアッセイにおいて、ｈｕＬＲＲＣ１５又はｈｕＬＲＲＣ１５のｓＥＣＤを発現する細胞上のｈｕＬＲＲＣ１５の結合について競合する。参照抗体は、ｓＥＣＤの領域内のｈｕＬＲＲＣ１５に特異的に結合する任意の抗体であり得る。特定の一実施形態において、参照抗体は、ｈｕＭ２５、ｈｕＡＤ２０８．４．１、ｈｕＡＤ２０８．１２．１、ｈｕＡＤ２０８．１４．１、ｈｕ１３９．１０、ｍｕＡＤ２１０．４０．９又はｍｕＡＤ２０９．９．１である。
【００８７】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、
【００８８】
【化１】
2019501124.tif 000012
による重鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）、及び配列番号１９で示される軽鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）を有し、下線を付したアミノ酸はＣＤＲを表し、イタリック体のアミノ酸は定常領域を表す。
【００８９】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、
【００９０】
【化２】
2019501124.tif 000013
による重鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）、及び配列番号１９による軽鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）を有し、下線を付したアミノ酸はＣＤＲを表し、イタリック体のアミノ酸は定常領域を表す。
【００９１】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、
【００９２】
【化３】
2019501124.tif 000014
による重鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）、及び配列番号１９による軽鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）を有し、下線を付したアミノ酸はＣＤＲを表し、イタリック体のアミノ酸は定常領域を表す。
【００９３】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、配列番号１８又は１０２による重鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）；及び
【００９４】
【化４】
2019501124.tif 000015
による軽鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）を有し、下線を付したアミノ酸はＣＤＲを表し、イタリック体のアミノ酸は定常領域を表す。
【００９５】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、
【００９６】
【化５】
2019501124.tif 000016
による重鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）、及び
【００９７】
【化６】
2019501124.tif 000017
による軽鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）を有し、下線を付したアミノ酸はＣＤＲを表し、イタリック体のアミノ酸は定常領域を表す。
【００９８】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、
【００９９】
【化７】
2019501124.tif 000018
による重鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）、及び配列番号２９による軽鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）を有し、下線を付したアミノ酸はＣＤＲを表し、イタリック体のアミノ酸は定常領域を表す。
【０１００】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、
【０１０１】
【化８】
2019501124.tif 000019
による重鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）、及び配列番号２９による軽鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）を有し、下線を付したアミノ酸はＣＤＲを表し、イタリック体のアミノ酸は定常領域を表す。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、
【０１０３】
【化９】
2019501124.tif 000020
による重鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）、及び配列番号２９による軽鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）を有し、下線を付したアミノ酸はＣＤＲを表し、イタリック体のアミノ酸は定常領域を表す。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、配列番号２８又は１０４による重鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）；及び
【０１０５】
【化１０】
2019501124.tif 000021
による軽鎖アミノ酸配列（Ｎ→Ｃ）を有し、下線を付したアミノ酸はＣＤＲを表し、イタリック体のアミノ酸は定常領域を表す。
【０１０６】
競合アッセイには、限定されないが、放射性物質標識イムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、サンドイッチＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリーアッセイ及び表面プラズモン共鳴アッセイが含まれる。
【０１０７】
参照抗体と試験抗体（種又はアイソタイプにかかわらず）の間の抗体競合アッセイを行うための１つの例示的な実施形態において、最初に、フルオロフォア、ビオチン又は酵素（又はさらには放射性標識）のような検出可能な標識で参照を標識し、続く検出を可能にすることができる。この場合、ｈｕＬＲＲＣ１５を発現する細胞又はｈｕＬＲＲＣ１５のｓＥＣＤを、標識されていない試験抗体とともにインキュベートし、標識された参照抗体を添加して、結合した標識の強度を測定する。試験抗体が同じエピトープ、近位エピトープ又は重複エピトープに結合することによって標識された参照抗体と競合する場合、検出シグナルの強度は、試験抗体なしで実施された対照反応と比較して減少する。
【０１０８】
このアッセイの特定の実施形態において、アッセイ条件（例えば、細胞の特定の密度又はｓＥＣＤの指定された濃度）下で最大結合の８０％（「ｃｏｎｃ８０％」）を生じる、標識された参照抗体の濃度が最初に決定され、競合アッセイは、１０×のｃｏｎｃ８０％の標識されていない試験抗体及びｃｏｎｃ８０％の標識された参照抗体を用いて実施される。
【０１０９】
フローサイトメトリー競合アッセイを実施する別の例示的な実施形態において、ｈｕＬＲＲＣ１５を発現する細胞は、蛍光標識した抗ｈｕＬＲＲＣ１５参照抗体に対する標識していない試験抗体の増加した比を含む抗体の滴定シリーズとともにインキュベートされる。標識された参照抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、固定された濃度Ｘ（例えば、Ｘ＝１μｇ／ｍｌ）で使用され、標識されていない試験抗体は、ある範囲の濃度（例えば、１０−４×〜１００×）で使用される。細胞又はｓＥＣＤは、標識されていない試験抗体と標識された参照抗体の両方とともに同時にインキュベートされる。フローサイトメトリーデータは、蛍光標識された参照抗体単独に対して標準化され、この場合、標識されていない試験抗体なしで実施された試料の蛍光強度が、１００％結合として割り当てられる。試験抗体がｈｕＬＲＲＣ１５の結合に対して標識された参照抗体と競合させて、各々の等しい濃度（例えば、標識されていない試験抗体の１μｇ／ｍＬ及び標識された参照抗体の１μｇ／ｍＬ）を用いて実施されるアッセイは、１００％対照と比較して蛍光強度が約５０％低下する場合、これは約５０％結合を示す。
【０１１０】
阻害は、阻害定数又はＫｉとして表すことができ、これは、以下の式：
Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋［参照Ａｂ濃度］／Ｋｄ）
に従って計算され、ＩＣ５０は、参照抗体の結合の５０％減少をもたらす試験抗体の濃度であり、Ｋｄは、ｈｕＬＲＲＣ１５に対するその親和性の尺度である、参照抗体の解離定数である。参照抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体と競合する抗体は、本明細書に記載されるアッセイ条件下で１０ｐＭ〜１０ｎＭのＫｉを有することができる。
【０１１１】
様々な実施形態において、試験抗体は、ｈｕＬＲＲＣ１５若しくはｓＥＣＤを発現する細胞への参照抗体の結合を、少なくとも約２０％以上、例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％若しくはさらにそれらを超えて減少させる場合、又は使用される特定のアッセイ条件下で最大結合の８０％である参照抗体濃度、及び参照抗体濃度よりも１０倍高い試験抗体濃度で、上記値のいずれかの間の範囲にあるパーセンテージに減少させる場合、参照抗体と競合するものと考えられる。
【０１１２】
フローサイトメトリー競合アッセイの様々な実施形態において、試験抗体は、ｈｕＬＲＲＣ１５を発現する細胞への参照抗体の結合を、少なくとも約２０％以上、例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％若しくはさらにそれらを超えて減少させる場合、又は参照抗体濃度よりも１０倍高い試験抗体濃度で、上記値のいずれかの間の範囲にあるパーセンテージに減少させる場合、参照抗体と競合するものと考えられる。
【０１１３】
抗体が本明細書に記載されている参照抗体とｈｕＬＲＲＣ１５の結合について競合するかどうかを評価するために有用な特異的アッセイ及びアッセイ条件は、実施例３に与えられている。
【０１１４】
本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、ｈｕＬＲＲＣ１５及び／又はｈｕＬＲＲＣ１５  ｓＥＣＤの精製を補助するため、インビトロ、インビボ及びエクスビボでの診断、細胞及び／又は組織染色などの様々な目的で、非ＡＤＣ条件で使用することができる。特異的な例として、抗体は、生物学的試料中のｈｕＬＲＲＣ１５のレベルを定性的及び／又は定量的に測定するためのイムノアッセイにおいて使用される。例えば、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９８８年）を参照されたい。
【０１１５】
このような使用に関して、検出は、抗体を検出可能な物質にカップリングさせることによって容易にすることができる。検出可能な物質の例には、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性物質、種々の陽電子放出断層撮影法を用いた陽電子放出金属、及び非放射性常磁性金属イオンが含まれる。検出可能な物質は、当該技術分野において公知である技術を用いて、中間体（例えば、当該技術分野において公知であるリンカーなど）を介して抗体（又はその断片）に直接的又は間接的にカップリング又はコンジュゲートさせることができる。酵素的標識の例には、ルシフェラーゼ（例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ；米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ウレアーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）のようなペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、サッカライドオキシダーゼ（例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ）、複素環オキシダーゼ（ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼのような）、ラクトペルオキシダーゼ、マイクロペルオキシダーゼなどが挙げられる。適切な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが含まれる；適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロライド又はフィコエリトリンが含まれる；発光物質の例には、ルミノールが含まれる；生物発光物質の例には、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリンが含まれる；及び適切な放射性物質の例には、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、又は９９ｍＴｃが含まれる。
【０１１６】
ｈｕＬＲＲＣ１５の発現の検出は、一般的に、生物学的サンプル（個体の細胞、組織、又は体液）を、本明細書に記載されている１つ以上の抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体（任意選択的により検出可能な部分にコンジュゲートされている）と接触させ、試料がｈｕＬＲＲＣ１５発現について陽性であるかどうか、又は試料が対照試料と比較して変化した（例えば、減少した又は増加した）発現を有するかどうかを検出することを伴う。
【０１１７】
７．３．２．抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体をコードするポリヌクレオチド、発現系及び抗体の作製方法
抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は、宿主細胞中の免疫グロブリン軽鎖遺伝子及び重鎖遺伝子の組換え発現によって調製することができる。抗体を組換え的に発現させるために、宿主細胞は、抗体の免疫グロブリン軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡ断片を有する１つ以上の組換え発現ベクターを用いてトランスフェクトされ、それにより、軽鎖及び重鎖が宿主細胞中で発現され、任意選択的に、宿主細胞を培養する培地中に分泌され、その培地から抗体を回収することができる。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ；Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第二版（Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｆｒｉｔｓｃｈ及びＭａｎｉａｔｉｓ（編集）、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８９年）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ、Ｆ．Ｍ．ら、編集、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、１９８９年）及び米国特許第４，８１６，３９７号に記載されている方法論のように、標準的な組換えＤＮＡ方法論を用いて、抗体重鎖遺伝子及び軽鎖遺伝子を得、これらの遺伝子を組換え発現ベクターに組み込み、宿主細胞にベクターを導入する。
【０１１８】
このような抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体をコードする核酸を作製するために、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域をコードするＤＮＡ断片が最初に得られる。これらのＤＮＡは、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて、軽鎖及び重鎖可変配列をコードする生殖系列ＤＮＡ又はｃＤＮＡの増幅及び改変によって得ることができる。ヒト重鎖可変領域遺伝子及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列は、当該技術分野において公知である（例えば、「ＶＢＡＳＥ」ヒト生殖系列配列データベースを参照されたい；さらに、各々の内容が参照により本明細書に組み込まれるＫａｂａｔら、１９９１年、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第五版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、１９９２年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２Ｔ：１１６〜１９８頁；Ｃｏｘら、１９９４年、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４巻：８２７〜８３６頁を参照されたい）。
【０１１９】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体に関連するＶＨセグメント及びＶＬセグメントをコードするＤＮＡ断片が得られると、これらのＤＮＡ断片は、例えば、全長抗体鎖遺伝子に、Ｆａｂ断片遺伝子又はｓｃＦｖ遺伝子に可変領域遺伝子を変換するために、標準組換えＤＮＡ技術によってさらに操作され得る。これらの操作において、ＶＬ又はＶＨをコードするＤＮＡ断片は、抗体定常領域又は可撓性リンカーのような別のタンパク質をコードする別のＤＮＡ断片に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」とは、この文脈で使用されるとき、２つのＤＮＡ断片が、その２つのＤＮＡ断片によってコードされるアミノ酸配列がインフレームのままであるように接続されることを意味することが意図される。
【０１２０】
ＶＨ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＨをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意選択的にＣＨ４）をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって全長重鎖遺伝子に変換することができる。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において公知であり（例えば、Ｋａｂａｔら、１９９１年、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第五版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照されたい）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ又はＩｇＤ定常領域であり得るが、ある種の実施形態において、ＩｇＧ１定常領域又はＩｇＧ４定常領域である。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子について、ＶＨコードＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することができる。
【０１２１】
ＶＬ領域をコードする単離されたＤＮＡは、軽鎖定常領域ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子にＶＬをコードするＤＮＡを作動可能に連結することにより、全長軽鎖遺伝子（並びにＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換することができる。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において公知であり（例えば、Ｋａｂａｔら、１９９１年、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第五版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照されたい）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、カッパ又はラムダ定常領域であり得るが、特定の実施形態において、カッパ定常領域である。ｓｃＦｖ遺伝子を作製するために、ＶＨ及びＶＬをコードするＤＮＡ断片は、例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４〜Ｓｅｒ）３（配列番号８２）をコードする、可撓性リンカーをコードする別の断片に作動可能に連結され、それにより、ＶＨ及びＶＬ配列は、ＶＬ領域及びＶＨ領域が可撓性リンカーによって連結されている、連続した一本鎖タンパク質として発現され得る（例えば、Ｂｉｒｄら、１９８８年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２巻：４２３〜４２６頁；Ｈｕｓｔｏｎら、１９８８年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５巻：５８７９〜５８８３頁；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、１９９０年、Ｎａｔｕｒｅ、３４８巻：５５２〜５５４頁を参照されたい）。
【０１２２】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体を発現させるために、上記のようにして得られた部分又は全長の軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡを発現ベクターに挿入し、それにより、遺伝子は転写制御配列及び翻訳制御配列に作動可能に連結される。これに関連して、用語「作動可能に連結された」とは、ベクター内の転写制御配列及び翻訳制御配列が、抗体遺伝子の転写及び翻訳を制御するそれらの意図された機能を果たすように、抗体遺伝子がベクターにライゲートされることを意味する。発現ベクター及び発現調節配列は、使用される発現宿主細胞と適合するように選択される。抗体軽鎖遺伝子及び抗体重鎖遺伝子を別々のベクターに挿入することができ、又はより典型的には、両方の遺伝子を同じ発現ベクターに挿入することができる。
【０１２３】
抗体遺伝子は、標準的な方法（例えば、抗体遺伝子断片及びベクター上の相補的な制限部位のライゲーション、又は制限部位が存在しない場合の平滑末端ライゲーション）によって発現ベクターに挿入される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体関連軽鎖又は重鎖配列を挿入する前に、発現ベクターは、既に抗体定常領域配列を有していてもよい。例えば、抗ｈＰＧモノクローナル抗体に関連するＶＨ及びＶＬ配列を全長抗体遺伝子に変換するための１つのアプローチは、それらを重鎖定常領域及び軽鎖定常領域をそれぞれ既にコードする発現ベクターに挿入することであり、それにより、ＶＨセグメントは、ベクター内のＣＨセグメント（単数又は複数）に作動可能に連結され、ＶＬセグメントは、ベクター内のＣＬセグメントに作動可能に連結される。それに加えて又はそれに代えて、組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードすることができる。シグナルペプチドが抗体鎖遺伝子のアミノ末端にインフレームで連結されるように、ベクターに抗体鎖遺伝子をクローニングすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチド又は異種シグナルペプチド（すなわち、非免疫グロブリンタンパク質由来のシグナルペプチド）であり得る。
【０１２４】
抗体鎖遺伝子に加えて、組換え発現ベクターは、宿主細胞における抗体鎖遺伝子の発現を調節する制御配列を有する。用語「制御配列」は、抗体鎖遺伝子の転写又は翻訳を調節するプロモーター、エンハンサー及び他の発現調節エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことが意図される。このような制御配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ、Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、１９９０年に記載されている。当業者には、制御配列の選択を含む発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現レベルのような因子に依存し得ることが理解される。哺乳動物の宿主細胞発現に適切な制御配列には、（ＣＭＶプロモーター／エンハンサーのような）サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、（ＳＶ４０プロモーター／エンハンサーのような）シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））及びポリオーマに由来するプロモーター及び／又はエンハンサーのような哺乳動物細胞において高レベルのタンパク質発現を検出するウイルスエレメントが含まれる。ウイルス制御エレメント及びそれらの配列のさらなる説明については、例えば、Ｓｔｉｎｓｋｉによる米国特許第５，１６８，０６２号、Ｂｅｌｌらによる米国特許第４，５１０，２４５号、及びＳｃｈａｆｆｎｅｒらによる米国特許第４，９６８，６１５号を参照されたい。
【０１２５】
本開示の組換え発現ベクターは、宿主細胞におけるベクターの複製を制御する配列（例えば、複製起点）及び選択マーカー遺伝子のような抗体鎖遺伝子及び制御配列に加えて配列を有することができる。選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞の選択を容易にする（例えば、Ａｘｅｌらによる米国特許第４，３９９，２１６号、第４，６３４，６６５号及び第５，１７９，０１７号を参照されたい）。例えば、典型的には、選択マーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞上のＧ４１８、ハイグロマイシン又はメトトレキセートのような薬物に対して耐性を付与する。適切な選択マーカー遺伝子には、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキセート選択／増幅を伴うＤＨＦＲ−宿主細胞における使用）及びｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択用）が含まれる。軽鎖及び重鎖の発現について、重鎖及び軽鎖をコードする発現ベクター（単数又は複数）は、標準的な技術によって宿主細胞にトランスフェクトされる。用語「トランスフェクション」の様々な形態は、原核又は真核宿主細胞への外因性ＤＮＡの導入に一般的に使用される多種多様な手法、例えばエレクトロポレーション、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを包含することが意図される。
【０１２６】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体を、原核宿主細胞又は真核宿主細胞のいずれかにおいて発現させることができる。特定の実施形態において、抗体の発現は、適切に折りたたまれた、免疫学的に活性な抗体の分泌に最適な真核細胞、例えば哺乳動物の宿主細胞において行われる。本開示の組換え抗体を発現するための例示的な哺乳動物の宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Ｕｒｌａｕｂ及びＣｈａｓｉｎ、１９８０年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７巻：４２１６〜４２２０頁に記載されているＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞であって、例えば、Ｋａｕｆｍａｎ及びＳｈａｒｐ、１９８２年、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１５９巻：６０１〜６２１頁に記載されているＤＨＦＲ選択マーカーとともに使用される）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞が含まれる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが哺乳動物の宿主細胞に導入される場合、抗体は、宿主細胞における抗体の発現、又は宿主細胞を増殖させる、抗体の培地中への分泌を可能にするのに十分な期間、宿主細胞を培養することによって産生される。抗体は、標準的なタンパク質精製法を用いて培地から回収することができる。また、宿主細胞を用いて、Ｆａｂ断片又はｓｃＦｖ分子のような完全な抗体の部分を生成することができる。上記手法の変形は、本開示の範囲内であることが理解される。例えば、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体の軽鎖又は重鎖のいずれか（しかし両方ではない）をコードするＤＮＡを用いて宿主細胞をトランスフェクトすることが望ましい場合がある。
【０１２７】
また、組換えＤＮＡ技術を用いて、ｈｕＬＲＲＣ１５への結合に必要でない軽鎖及び重鎖のいずれか又はそれらの両方をコードするＤＮＡの一部又は全部を除くことができる。このような短縮されたＤＮＡ分子から発現される分子もまた、本開示の抗体によって包含される。
【０１２８】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体の組換え発現について、宿主細胞は、重鎖由来のポリペプチドをコードする第１ベクター、及び軽鎖由来のポリペプチドをコードする第２ベクターの２つの発現ベクターで同時トランスフェクトされ得る。２つのベクターは、同一の選択マーカーを含むことができ、又はそれぞれは別個の選択マーカーを含むことができる。あるいは、重鎖ポリペプチドと軽鎖ポリペプチドの両方をコードする単一のベクターを使用することができる。
【０１２９】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体の１つ以上の部分をコードする核酸が得られた後、さらなる変更又は突然変異をコード配列に導入して、例えば、異なるＣＤＲ配列を有する抗体をコードする核酸、Ｆｃ受容体に対して親和性が減少した抗体、又は異なるサブクラスの抗体を生じさせることができる。
【０１３０】
また、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成する抗体及び／又は結合断片は、化学合成によって（例えば、Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第二版、１９８４年、Ｔｈｅ  Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌに記載されている方法によって）生成することができる。変異抗体はまた、細胞不含プラットフォームを用いて生じさせることができる。例えば、Ｃｈｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉａ  Ｎｏ．２、２００１年（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、及びＭｕｒｒａｙら、２０１３年、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１７巻：４２０〜４２６を参照させたい。
【０１３１】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は結合断片が組換え発現によって生成されると、それは、免疫グロブリン分子の精製のための当該技術分野において公知である任意の方法、例えばクロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、及びサイズによるカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差溶解度によって、又はタンパク質の精製のための任意の他の標準的な技術によって、精製され得る。さらに、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は結合断片は、精製を容易にするために、本明細書中に記載されている異種ポリペプチド配列又は他には当該技術分野において公知である異種ポリペプチド配列に融合され得る。
【０１３２】
一旦単離されると、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は結合断片は、所望であれば、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって（例えば、Ｆｉｓｈｅｒ、  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｗｏｒｋ  ａｎｄ  Ｂｕｒｄｏｎ、編集、  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、  １９８０）、又はＳｕｐｅｒｄｅｘ（商標）７５カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）上のゲル濾過クロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
【０１３３】
７．４．特異的抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体薬物コンジュゲート
上記のように、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、一般的に、同一であってもよく又は異なってもよい１つ以上の細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を有し、それに、また同一であってもよく又は異なってもよい１つ以上のリンカーを介して連結された、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は結合断片のような抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗原結合部分を含む。特定の実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、構造式（Ｉ）：
（Ｉ）  ［Ｄ−Ｌ−ＸＹ］ｎ−Ａｂ
による化合物又はその塩であって、各々の「Ｄ」は、他とは独立して、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤（「薬物」）を表し；各々の「Ｌ」は、他とは独立して、リンカーを表し；「Ａｂ」は、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体又は結合断片のような抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗原結合部分を表し；各々の「ＸＹ」は、リンカー上の官能基Ｒｘと抗原結合部分上の「相補的な」官能基Ｒｙの間に形成される連結を表し；ｎは、Ａｂに連結された薬物の数、又はＡＤＣの薬物対抗体比（ＤＡＲ）を表す。
【０１３４】
構造式（Ｉ）によるＡＤＣを構成し得る様々な抗体又は結合断片（Ａｂ）の特定の実施形態は、上記される抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及び／又は結合断片の様々な実施形態を含む。
【０１３５】
構造式（Ｉ）によるＡＤＣ又はそれらの塩のいくつかの特定の実施形態において、各々のＤは同一であり、及び／又は各々のＬは同一である。
【０１３６】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを構成し得る細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤（Ｄ）及びリンカー（Ｌ）の特定の実施形態、並びに抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣに連結された細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤の数は、下記により詳細に記載される。
【０１３７】
７．４．１．細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤
細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤は、細胞、特にがん細胞及び／又は腫瘍細胞の増殖及び／若しくは複製を阻害し、並びに／又はそれらの細胞を死滅させることが知られている任意の薬剤であり得る。細胞毒性及び／又は細胞増殖抑制性を有する多数の薬剤が文献に知られている。細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤のクラスの非限定的な例には、例として及び限定されないが、放射性核種、アルキル化剤、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡインターカレート剤（例えば、副溝結合剤のようなグルーブ結合剤）、細胞周期調節剤、アポトーシス制御剤、キナーゼ阻害剤、タンパク質合成阻害剤、ミトコンドリア阻害剤、核外輸送阻害剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ＲＮＡ／ＤＮＡ代謝拮抗剤及び抗有糸分裂剤が含まれる。
【０１３８】
これらの様々なクラスの特定のものの中で、薬剤の特定の非限定的な例を以下に示す。
【０１３９】
アルキル化剤：Ａｓａｌｅｙ（Ｌ−ロイシン、Ｎ−［Ｎ−アセチル−４−［ビス−（２−クロロエチル）アミノ］−ＤＬ−フェニルアラニル］−、エチルエステル）；ＡＺＱ（１，４−シクロヘキサジエン−１，４−ジカルバミン酸、２，５−ビス（１−アジリジニル）−３，６−ジオキソ−、ジエチルエステル）；ＢＣＮＵ（Ｎ、Ｎ’−ビス（２−クロロエチル）−Ｎ−ニトロソウレア）；Ｂｕｓｕｌｆａｎ（１，４−ブタンジオールジメタンスルホネート）；（カルボキシフタラト）白金；ＣＢＤＣＡ（シス−（１，１−シクロブタンジカルボキシラト）ジアミン白金（ＩＩ）））；ＣＣＮＵ（Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ’−シクロヘキシル−Ｎ−ニトロソウレア）；ＣＨＩＰ（イプロプラチン；ＮＳＣ  ２５６９２７）；クロラムブシル；クロロゾトシン（２−［［［（２−クロロエチル）ニトロソアミノ］カルボニル］アミノ］−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノース）；シス−プラチン（シスプラチン）；クロメゾン；シアノモルホリノドキソルビシン；シクロジソン；ジアンヒドロガラクチトール（５，６−ジエポキシデュルシトール）；フルロドパン（（５−［２−クロロエチル）−（２−フルオロエチル）アミノ］−６−メチルウラシル）；ヘプスルファム；ヒカントン；インドリノベンゾジアゼピン二量体ＤＧＮ４６２；メルファラン；メチルＣＣＮＵ（（１−（２−クロロエチル）−３−（トランス−４−メチルシクロヘキサン）−１−ニトロソウレア）；マイトマイシンＣ；ミトゾルアミド；ナイトロジェンマスタード（ビス（２−クロロエチル）メチルアミン塩酸塩）；ＰＣＮＵ（（１−（２−クロロエチル）−３−（２，６−ジオキソ−３−ピペリジル）−１−ニトロソウレア））；ピペラジンアルキレーター（（１−（２−クロロエチル）−４−（３−クロロプロピル）−ピペラジン二塩酸塩））；ピペラジンジオン；ピポブロマン（Ｎ、Ｎ’−ビス（３−ブロモプロピノイル）ピペラジン）；ポルフィロマイシン（Ｎ−メチルマイトマイシンＣ）；スピロヒダントインマスタード；テロキシロン（トリグリシジルイソシアヌレート）；テトラプラチン；チオ−テパ（Ｎ、Ｎ’、Ｎ’’−トリ−１，２−エタンジイルチオホスホルアミド）；トリエチレンメラミン；ウラシル窒素マスタード（デスメチルドパン）；Ｙｏｓｈｉ−８６４（（ビス（３−メシルオキシプロピル）アミン塩酸塩）。
【０１４０】
ＤＮＡアルキル化様薬剤：シスプラチン；カルボプラチン；ネダプラチン；オキサリプラチン；サトラプラチン；トリプラチン四硝酸塩；プロカルバジン；アルトレタミン；ダカルバジン；ミトゾロミド；テモゾロミド。
【０１４１】
アルキル化抗新生物剤：カルボクオン；カルムスチン；クロルナファジン；クロロゾトシン；デュオカルマイシン；エボフォスファミド；フォテムスチン；グルフォスファミド；ロムスチン；マンノスルファン；ニムスチン；フェナントリプラチン；ピポブロマン；ラニムスチン；セムスチン；ストレプトゾトシン；ＴｈｉｏＴＥＰＡ；トレオスルファン；トリアジクオン；トリエチレンメラミン；トリプラチン四硝酸塩。
【０１４２】
ＤＮＡ複製及び修復阻害剤：アルトレタミン；ブレオマイシン；ダカルバジン；ダクチノマイシン；ミトブロニトール；マイトマイシン；ピンギャングマイシン（Ｐｉｎｇｙａｎｇｍｙｃｉｎ）；プリカマイシン；プロカルバジン；テモゾロミド；ＡＢＴ−８８８（ベリパリブ）；オラパリブ；ＫＵ−５９４３６；ＡＺＤ−２２８１；ＡＧ−０１４６９９；ＢＳＩ−２０１；ＢＧＰ−１５；ＩＮＯ−１００１；ＯＮＯ−２２３１。
【０１４３】
細胞周期調節剤：パクリタキセル；ナブ−パクリタキセル；ドセタキセル；ビンクリスチン；ビンブラスチン；ＡＢＴ−３４８；ＡＺＤ−１１５２；ＭＬＮ−８０５４；ＶＸ−６８０；オーロラＡ特異的キナーゼ阻害剤；オーロラＢ特異的キナーゼ阻害剤及び汎オーロラキナーゼ阻害剤；ＡＺＤ−５４３８；ＢＭＩ−１０４０；ＢＭＳ−０３２；ＢＭＳ−３８７；ＣＶＴ−２５８４；フラボピリドール；ＧＰＣ−２８６１９９；ＭＣＳ−５Ａ；ＰＤ０３３２９９１；ＰＨＡ−６９０５０９；セリシクリブ（ＣＹＣ−２０２、Ｒ−ロスコビチン）；ＺＫ−３０４７０９；ＡＺＤ４８７７、ＡＲＲＹ−５２０；ＧＳＫ９２３２９５Ａ。
【０１４４】
アポトーシス制御剤：ＡＴ−１０１（（−）ゴシポール）；Ｇ３１３９又はオブリメルセン（Ｏｂｌｉｍｅｒｓｅｎ）（Ｂｃｌ−２−標的化アンチセンスオリゴヌクレオチド）；ＩＰＩ−１９４；ＩＰＩ−５６５；Ｎ−（４−（４−（（４’−クロロ（１，１’−ビフェニル）−２−イル）メチル）ピペラジン−１−イルベンゾイル）−４−（（（１Ｒ）−３−（ジメチルアミノ）−１−（（フェニルスルファニル）メチル）プロピル）アミノ）−３−ニトロベンゼンスルホンアミド）；Ｎ−（４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−５，５−ジメチル−１−シクロヘキサ−１−エン−１−イル）メチル）ピペラジン−１−イル）ベンゾイル）−４−（（（１Ｒ）−３−（モルホリン−４−イル）−１−（（フェニルスルファニル）メチル）プロピル）アミノ）−３−（（トリフルオロメチル）スルホニル）ベンゼンスルホンアミド；ＧＸ−０７０（Ｏｂａｔｏｃｌａｘ（登録商標）；１Ｈ−インドール、２−（２−（（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチレン）−３−メトキシ−２Ｈ−ピロール−５−イル）；ＨＧＳ１０２９；ＧＤＣ−０１４５；ＧＤＣ−０１５２；ＬＣＬ−１６１；ＬＢＷ−２４２；ベネトクラックス；ＥＴＲ２−ＳＴ０１、ＧＤＣ０１４５、ＨＧＳ−１０２９、ＬＢＹ−１３５、ＰＲＯ−１７６２のようなＴＲＡＩＬ又は死受容体（例えば、ＤＲ４及びＤＲ５）を標的とする薬剤；カスパーゼを標的とする薬剤、カスパーゼ制御剤、ＢＣＬ−２ファミリーメンバー、死ドメインタンパク質、ＴＮＦファミリーメンバー、Ｔｏｌｌファミリーメンバー、及び／又はＮＦ−カッパ−Ｂタンパク質。
【０１４５】
血管新生阻害剤：ＡＢＴ−８６９；ＡＥＥ−７８８；アキシチニブ（ＡＧ−１３７３６）；ＡＺＤ−２１７１；ＣＰ−５４７、６３２；ＩＭ−８６２；ペガプタミブ；ソラフェニブ；ＢＡＹ４３−９００６；パゾパニブ（ＧＷ−７８６０３４）；バタラニブ（ＰＴＫ−７８７、ＺＫ−２２２５８４）；スニチニブ；ＳＵ−１１２４８；ＶＥＧＦトラップ；バンデタニブ；ＡＢＴ−１６５；ＺＤ−６４７４；ＤＬＬ４阻害剤。
【０１４６】
プロテアソーム阻害剤：ボルテゾミブ；カルフィルゾミブ；エポキソミシン；イキサゾミブ；サリノスポラミドＡ。
【０１４７】
キナーゼ阻害剤：アファチニブ；アキシチニブ；ボスチニブ；クリゾチニブ；ダサチニブ；エルロチニブ；フォスタマチニブ；ゲフィチニブ；イブチニブ；イマチニブ；ラパチニブ；レンバチニブ；ムブリチニブ；ニロチニブ；パゾパニブ；ペガプタニブ；ソラフェニブ；スニチニブ；ＳＵ６６５６；バンデタニブ；ベムラフェニブ；ＣＥＰ−７０１（レサウルチニブ）；ＸＬ０１９；ＩＮＣＢ０１８４２４（ルキソリチニブ）；ＡＲＲＹ−１４２８８６（セレメチニブ）；ＡＲＲＹ−４３８１６２（ビニメチニブ）；ＰＤ−３２５９０１；ＰＤ−９８０５９；ＡＰ−２３５７３；ＣＣＩ−７７９；エベロリムス；ＲＡＤ−００１；ラパマイシン；テムシロリムス；ＡＴＰ競合性ＴＯＲＣ１／ＴＯＲＣ２阻害剤、例えば、ＰＩ−１０３、ＰＰ２４２、ＰＰ３０、Ｔｏｒｉｎ  １；ＬＹ２９４００２；ＸＬ−１４７；ＣＡＬ−１２０；ＯＮＣ−２１；ＡＥＺＳ−１２７；ＥＴＰ−４５６５８；ＰＸ−８６６；ＧＤＣ−０９４１；ＢＧＴ２２６；ＢＥＺ２３５；ＸＬ７６５。
【０１４８】
タンパク質合成阻害剤：ストレプトマイシン；ジヒドロストレプトマイシン；ネオマイシン；フラミセチン；パロモマイシン；リボスタマイシン；カナマイシン；アミカシン；アルベカシン；ベカナマイシン；ジベカシン；トブラマイシン；スペクチノマイシン；ハイグロマイシンＢ；パロモマイシン；ゲンタマイシン；ネチルミシン；シソミシン；イセパミシン；ベルダミシン；アストロミシン；テトラサイクリン；ドキシサイクリン；クロルテトラサイクリン；クロモサイクリン；デメクロサイクリン；ライムサイクリン；メクロシクリン；メタサイクリン；ミノサイクリン；オキシテトラサイクリン；ペニメピサイクリン；ロリテトラサイクリン；テトラサイクリン；グリシルサイクリン；チゲサイクリン；オキサゾリジノン；エペレゾリド；リネゾリド；ポシゾリド；ラデゾリド；ランベゾリド；ステゾリド；テジゾリド；ペプチジルトランスフェラーゼ阻害剤；クロラムフェニコール；アジダムフェニコール；チアムフェニコール；フロルフェニコール；プレウロムチリン；レタパムリン；チアムリン；バルネムリン；アジスロマイシン；クラリスロマイシン；ジリスロマイシン；エリスロマイシン；フロリトロマイシン；ヨサマイシン；ミデカマイシン；ミオカマイシン；オレアンドマイシン；ロキタマイシン；ロキシスロマイシン；スピラマイシン；トロレアンドマイシン；タイロシン；ケトライド；テリスロマイシン；セスロマイシン；ソリスロマイシン；クリンダマイシン；リンコマイシン；ピルリマイシン；ストレプトグラミン；プリスチナマイシン；キヌプリスチン／ダルホプリスチン；バージニアマイシン。
【０１４９】
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤：ボリノスタット（Ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ）；ロミデプシン（Ｒｏｍｉｄｅｐｓｉｎ）；チダミド（Ｃｈｉｄａｍｉｄｅ）；パノビノスタット（Ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ）；バルプロ酸；ベリノスタット（Ｂｅｌｉｎｏｓｔａｔ）；モセチノスタット（Ｍｏｃｅｔｉｎｏｓｔａｔ）；アベキシノスタット（Ａｂｅｘｉｎｏｓｔａｔ）；エンチノスタット（Ｅｎｔｉｎｏｓｔａｔ）；ＳＢ９３９（プラシノスタット（ｐｒａｃｉｎｏｓｔａｔ））；レスミノスタット（Ｒｅｓｉｎｏｓｔａｔ）；ギビノスタット（Ｇｉｖｉｎｏｓｔａｔ）；キシノスタット（Ｑｕｉｓｉｎｏｓｔａｔ）；チオウレイドブチロニトリル（Ｋｅｖｅｔｒｉｎ（商標））；ＣＵＤＣ−１０；ＣＨＲ−２８４５（テフィノスタット）；ＣＨＲ−３９９６；４ＳＣ−２０２；ＣＧ２００７４５；ＡＣＹ−１２１５（ロシリノスタット）；ＭＥ−３４４；スルフォラファン。
【０１５０】
トポイソメラーゼＩ阻害剤：カンプトテシン；種々のカンプトテシン誘導体及び類似体（例えば、ＮＳＣ１００８８０、ＮＳＣ６０３０７１、ＮＳＣ１０７１２４、ＮＳＣ６４３８３３、ＮＳＣ６２９９７１、ＮＳＣ２９５５００、ＮＳＣ２４９９１０、ＮＳＣ６０６９８５、ＮＳＣ７４０２８、ＮＳＣ１７６３２３、ＮＳＣ２９５５０１、ＮＳＣ６０６１７２、ＮＳＣ６０６１７３、ＮＳＣ６１０４５８、ＮＳＣ６１８９３９、ＮＳＣ６１０４５７、ＮＳＣ６１０４５９、ＮＳＣ６０６４９９、ＮＳＣ６１０４５６、ＮＳＣ３６４８３０、及びＮＳＣ６０６４９７）；モルホリニソキソルビシン；ＳＮ−３８。
【０１５１】
トポイソメラーゼＩＩ阻害剤：ドキソルビシン；アモナフィド（ベンゾイソキノリンジオン）；ｍ−ＡＭＳＡ（４’−（９−アクリジニルアミノ）−３’−メトキシメタンスルホンアニリド）；アントラピラゾール誘導体（（ＮＳＣ３５５６４４）；エトポシド（ＶＰ−１６）；ピラゾロアクリジン（（ピラゾロ［３，４，５−ｋ］アクリジン−２（６Ｈ）−プロパンアミン、９−メトキシ−Ｎ、Ｎ−ジメチル−５−ニトロ−、モノメタンスルホネート）；ビスアントレン塩酸塩；ダウノルビシン；デオキシドキソルビシン；ミトキサントロン；メノガリル；Ｎ、Ｎ−ジベンジルダウノマイシン；オキサントラゾール；ルビダゾン；テニポシド。
【０１５２】
ＤＮＡインターカレート剤：アントラマイシン；チカマイシンＡ；トマイマイシン；ＤＣ−８１；シビロマイシン；ピロロベンゾジアゼピン誘導体；ＳＧＤ−１８８２（（Ｓ）−２−（４−アミノフェニル）−７−メトキシ−８−（３−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−５−オキソ−５，１１ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）プロポキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン）；ＳＧ２０００（ＳＪＧ−１３６；（１１ａＳ，１１ａ’Ｓ）−８，８’−（プロパン−１，３−ジイルビス（オキシ））ビス（７−メトキシ−２−メチレン−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン））。
【０１５３】
ＲＮＡ／ＤＮＡ代謝拮抗剤：Ｌ−アラノシン；５−アザシチジン；５−フルオロウラシル；アシビシン；アミノプテリン誘導体Ｎ−［２−クロロ−５−［［（２，４−ジアミノ−５−メチル−６−キナゾリニル）メチル］アミノ］ベンゾイル］Ｌ−アスパラギン酸（ＮＳＣ１３２４８３）；アミノプテリン誘導体Ｎ−［４−［［（２，４−ジアミノ−５−エチル−６−キナゾリニル）メチル］アミノ］ベンゾイル］Ｌ−アスパラギン酸；アミノプテリン誘導体Ｎ−［２−クロロ−４−［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］アミノ］ベンゾイル］Ｌ−アスパラギン酸一水和物；葉酸拮抗剤ＰＴ５２３（（Ｎα−（４−アミノ−４−デオキシプテロイル）−Ｎγ−ヘミフタロイル−Ｌ−オルニチン））；ベーカーの可溶性抗鬱剤（ＮＳＣ１３９１０５）；ジクロロアリル・ローソン（ｄｉｃｈｌｏｒａｌｌｙｌ  ｌａｗｓｏｎｅ）（２−（３，３−ジクロロアリル）−３−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン）；ブレキナール；フトラフール（（プロドラッグ；５−フルオロ−１−（テトラヒドロ−２−フリル）−ウラシル）；５，６−ジヒドロ−５−アザシチジン；メトトレキセート；メトトレキセート誘導体（Ｎ−［［４−［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］−１−ナフタレニル］カルボニル］Ｌ−グルタミン酸  ）；ＰＡＬＡ（（Ｎ−（ホスホノアセチル）−Ｌ−アスパルテート）；ピラゾフリン；トリメトレキセート。
【０１５４】
ＤＮＡ代謝拮抗剤：３−ＨＰ；２’−デオキシ−５−フルオロウリジン；５−ＨＰ；α−ＴＧＤＲ（α−２’−デオキシ−６−チオグアノシン）；アフィジコリングリシネート；アラＣ（シトシンアラビノシド）；５−アザ−２’−デオキシシチジン；β−ＴＧＤＲ（β−２’−デオキシ−６−チオグアノシン）；シクロシチジン；グアナゾール；ヒドロキシウレア；イノシングリコジアルデヒド；マクベシンＩＩ；ピラゾロイミダゾール；チオグアニン；チオプリン。
【０１５５】
ミトコンドリア阻害剤：パンクチスタチン；フェンパンスタチン；ローダミン−１２３；エデルホシン；ｄ−α−トコフェロールスクシネート；化合物１１β；アスピリン；エリプチシン；ベルベリン；セルレニン；ＧＸ０１５−０７０（Ｏｂａｔｏｃｌａｘ（登録商標）；１Ｈ−インドール、２−（２−（（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチレン）−３−メトキシ−２Ｈ−ピロール−５−イル）；セラストロール（トリプテリン）；メトホルミン；ブリリアントグリーン；ＭＥ−３４４。
【０１５６】
抗有糸分裂剤：アロコルヒチン；ＭＭＡＥ（モノメチルアウリスタチンＥ）及びＭＭＡＦ（モノメチルアウリスタチンＦ）のようなアウリスタチン；ハリコンドリンＢ；セマドチン；コルヒチン；コルヒチン誘導体（Ｎ−ベンゾイル−デアセチルベンズアミド）；ドラスタチン−１０；ドラスタチン−１５；マイタンシン；ＤＭ１（Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン）のようなマイタンシノイド；ロザキシン；パクリタキセル；パクリタキセル誘導体（（２’−Ｎ−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］グルタラメートパクリタキセル）；ドセタキセル；チオコルヒチン；トリチルシステイン；硫酸ビンブラスチン；硫酸ビンクリスチン。
【０１５７】
核外輸送阻害剤：カリースタチンＡ；デラクトンマイシン；ＫＰＴ−１８５（プロパン−２−イル（Ｚ）−３−［３−［３−メトキシ−５−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾール−１−イル］プロパ−２−エノエート）；カズサマイシンＡ；レプトスタチン；レプトフラニンＡ；レプトマイシンＢ；ラタヤドン；Ｖｅｒｄｉｎｅｘｏｒ（（Ｚ）−３−［３−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾール−１−イル］−Ｎ’−ピリジン−２−イルプロパ−２−エンヒドラジド）。
【０１５８】
ホルモン療法剤：アナストロゾール；エキセメスタン；アルゾキシフェン；ビカルタミド；セトロレリクス；デガレリクス；デスロレリン；トリロスタン；デキサメサゾン；フルタミド；ラロキシフェン；ファドロゾール；トレミフェン；フルベストラント；レトロゾール；ホルメスタン；グルココルチコイド；ドキセルカルシフェロール；炭酸セベラマー；ラソフォキシフェン；酢酸ロイプロリド；メゲステロール；ミフェプリストン；ニルタミド；クエン酸タモキシフェン；アバレリクス；プレドニゾン；フィナステリド；リロスタン；ブセレリン；黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）；ヒストレリン；トリロスタン又はモドラスタン；フォスレリン；ゴセレリン。
【０１５９】
抗体及び／若しくは結合断片への結合の部位を含むが又はそれを含むように修飾され得るこれらの薬剤のいずれかは、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣに含まれ得る。
【０１６０】
本明細書中に提示されているデータは、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣが、少なくとも部分的に、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを所望の標的がん細胞に局在化させる濃度効果によって媒介される、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍に対して強力な抗腫瘍活性を、発揮することを実証する。したがって、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、ｈｕＬＲＲＣ１５を発現するがん細胞によって直接的に取り込まれ、細胞内で細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を放出し、直接的な細胞死滅を引き起こすことができる。さらに、直接的ながん細胞死滅は、ｈｕＬＲＲＣ１５を発現する間質細胞における取り込み及びその後の細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤の放出の際に、標的化されたバイスタンダー活性によって補完され得る。例えば、図１３Ａ〜図１３Ｄに示されるように、ｈｕＬＲＲＣ１５を発現するがん細胞は、薬物としてモノメチルアウリスタチンＥ（「ＭＭＡＥ」）を含有する抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣに対してインビトロで感受性である。インビボにおいて、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）Ｕ１１８ＭＧ神経膠芽腫の異種移植片は、図１４Ａ、１４Ｄ及び１４Ｅにおいて実証されるように、対応するアイソタイプＡＤＣと比較して、ＭＭＡＥを含有する抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣに対してより感受性であり、相対的インビトロ細胞毒性活性のみに基づいて予測されるよりも感受性が高い。これはまた、図１４Ｂ及び１４Ｃにおいて実証されているように、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）患者由来の骨肉腫異種移植片においても観察される。まとめると、これらのデータは、細胞透過性の細胞増殖抑制剤及び／又は細胞毒性剤を含有する抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣが、多数のがん細胞モデルにおいて標的化されたバイスタンダー抗腫瘍効果によって補充される細胞殺傷活性を発揮するために、ｈｕＬＲＲＣ１５（＋）がん細胞内に抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを局在化させる濃度効果を介して、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍に対して抗腫瘍活性を発揮することを実証する。したがって、本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍の処置に治療的に有用であることを実証する。
【０１６１】
したがって、いくつかの実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣに含まれる細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤は、ＡＤＣの切断時に、細胞膜を横切ることができる（「細胞透過性の細胞増殖抑制剤及び／又は細胞毒性剤」）。目的とする特定の細胞毒性剤及び／若しくは細胞増殖抑制剤、並びに／又はこのような薬剤を含むＡＤＣの切断産物は、当業者に公知である日常的な方法を用いて細胞膜を横切る能力について試験することができる。膜を横断する分子の透過率（Ｐ）は、Ｐ＝ＫＤ／Δｘとして表すことができ、式中、Ｋは分配係数であり、Ｄは拡散係数であり、Δｘは細胞膜の厚さである。拡散係数（Ｄ）は、分子の分子量又は分子の大きさに依存する、細胞質への侵入速度の尺度である。Ｋは、脂質中の物質の溶解度の尺度である。Ｋの値が低いことは、脂質に溶けない水のような分子を指す。図形的には、Ｄ及びΔｘが定数である場合、分配係数（Ｋ）の関数としての透過性（Ｐ）は直線的に増加することが期待される。（Ｗａｌｔｅｒ  ＆  Ｇｕｔｋｎｅｃｈｔ、１９８６年、「Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｎｏｎｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｌｉｐｉｄ  ｂｉｌａｙｅｒ  ｍｅｍｂｒａｎｅｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、９０巻：２０７〜２１７頁；Ｄｉａｍｏｎｄ及びＫａｔｚ、１９７４年、「Ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｎｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ  ｐａｒｔｉｔｉｏｎ  ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌ  ｌｅｃｉｔｈｉｎ  ａｎｄ  ｗａｔｅｒ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１７巻：１２１〜１５４）。
【０１６２】
特定の実施形態において、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤は、細胞透過性の有糸分裂阻害剤である。
【０１６３】
別の特定の実施形態において、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤は、例えばドラスタチン−１０又はＭＭＡＥのような細胞透過性のアウリスタチンである。
【０１６４】
別の特定の実施形態において、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤は、例えばピロロベンゾジアゼピン（「ＰＢＤ」）二量体のような細胞透過性の副溝結合ＤＮＡ架橋剤である。
【０１６５】
７．４．２．リンカー
本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣにおいて、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤は、リンカーを介して抗原結合部分に連結される。リンカーは、短鎖、長鎖、疎水性、親水性、可撓性若しくは剛性であってもよく、又はリンカーが様々な特性を有するセグメントを含み得るように、上記した特性の１つ以上をそれぞれ独立して有するセグメントから構成されてもよい。リンカーは、抗体上の単一の部位に１を超える薬剤を共有結合的に連結させるように多価であってもよく、又は共有結合的に抗体上の単一の部位に単一の薬剤を連結するように一価であってもよい。
【０１６６】
当業者に認識されるように、リンカーは、１つの位置で細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤と共有結合的連結を形成し、別の位置で抗原結合性部分と共有結合的連結を形成することによって、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を抗原結合部分に連結する。共有結合的連結は、リンカー上の官能基と抗原及び抗原結合部分上の官能基の間の反応によって形成される。本明細書で使用するとき、表現「リンカー」は、（ｉ）リンカーを細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤に共有結合的に連結することができる官能基、及びリンカーを抗体のような抗原結合部分に共有結合的に連結することができる官能基を含むリンカーのコンジュゲートしていない形態；（ｉｉ）リンカーを抗体のような抗原結合部分に共有結合的に連結することができる官能基を含み、細胞毒性剤及び／若しくは細胞増殖抑制剤に共有結合的に連結され、又はその反対であるリンカーの部分的にコンジュゲートした形態並びに（ｉｉｉ）細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤と抗体のような抗原結合性部分の両方に共有結合的に連結されるリンカーの完全にコンジュゲートした形態を含むことが意図される。本明細書に記載されているリンカー及びＡＤＣ、並びに抗体にリンカー−薬剤をコンジュゲートするために使用されるシントンのいくつかの特定の実施形態において、リンカー上の官能基を含む部分、及びリンカーと抗体の間に形成される共有結合的連結は、具体的にはそれぞれＲｘ及びＸＹとして示されている。
【０１６７】
リンカーは、好ましくは、細胞外の状態に対して化学的に安定であるが、必ずしもそうである必要はなく、細胞内部で切断されるか、犠牲となるか、及び／又は他の方法で特異的に分解されるように設計され得る。あるいは、細胞内で特異的に切断及び分解されるように設計されていないリンカーを使用してもよい。特定のリンカーはまた、腫瘍間質に高レベルで存在する酵素によって、腫瘍微小環境において細胞外でプロセッシングされ得る。安定なリンカー対不安定なリンカーの選択は、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤の毒性に依存し得る。ＡＤＣとの関連で薬物を抗体に連結するのに有用である多種多様なリンカーは、当該技術分野において公知である。これらのリンカーのいずれか、並びに他のリンカーを用いて、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を、本明細書に記載されているＡＤＣの抗体に連結することができる。
【０１６８】
多数の細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を単一の抗体分子に連結するために使用され得る例示的な多価リンカーは、例えば、内容全体が参照により組み込まれる国際公開第２００９／０７３４４５号；国際公開第２０１０／０６８７９５号；国際公開第２０１０／１３８７１９号；国際公開第２０１１／１２００５３号；国際公開第２０１１／１７１０２０号；国際公開第２０１３／０９６９０１号；国際公開第２０１４／００８３７５号；国際公開第２０１４／０９３３７９号；国際公開第２０１４／０９３３９４号；国際公開第２０１４／０９３６４０号に記載されている。例えば、Ｍｅｒｓａｎａらによって開発されたフレキサマーリンカー技術は、良好な物理化学的特性を有する高ＤＡＲ  ＡＤＣを可能にする潜在力を有する。以下に示されるように、メルサナ技術は、一連のエステル結合を介して薬物分子を可溶化ポリアセタール骨格に組み込むことに基づいている。この方法論は、良好な物理化学的特性を維持しながら、高負荷ＡＤＣ（最大２０のＤＡＲ２０）の状態にする。
【０１６９】
樹枝状リンカーのさらなる例は、各々が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００６／１１６４２２号；米国特許出願公開第２００５／２７１６１５号；ｄｅ  Ｇｒｏｏｔら（２００３年）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．、編集、４２巻：４４９０〜４４９４頁；Ａｍｉｒら（２００３年）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．、編集、４２巻：４４９４〜４４９９頁；Ｓｈａｍｉｓら（２００４年）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１２６巻：１７２６〜１７３１頁；Ｓｕｎら（２００２年）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２巻：２２１３〜２２１５頁；Ｓｕｎら（２００３年）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １１巻：１７６１〜１７６８頁；Ｋｉｎｇら（２００２年）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４３：１９８７〜１９９０に見出すことができる。
【０１７０】
使用され得る例示的な一価リンカーは、例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれるＮｏｌｔｉｎｇ、２０１３年、Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１０４５巻：７１〜１００頁；Ｋｉｔｓｏｎら、２０１３年、ＣＲＯｓ／ＣＭＯｓ−Ｃｈｅｍｉｃａ  Ｏｇｇｉ−Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｔｏｄａｙ、３１巻（４号）：３０〜３８頁；Ｄｕｃｒｙら、２０１０年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．、２１巻：５〜１３頁；Ｚｈａｏら、２０１１年、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、５４巻：３６０６〜３６２３頁；米国特許第７，２２３，８３７号；米国特許第８，５６８，７２８号；米国特許第８，５３５，６７８号；及び国際公開第２００４／０１０９５７号に記載されている。
【０１７１】
例として、限定されないが、本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣに含まれ得るいくつかの切断可能リンカー及び切断不能なリンカーを、以下に記載する。
【０１７２】
７．４．２．１．切断可能なリンカー
特定の実施形態において、選択されたリンカーは、インビボで切断可能である。切断可能なリンカーは、化学的若しくは酵素的に不安定な連結又は分解可能な連結を含み得る。切断可能なリンカーは、一般的に、細胞質の減少、リソソーム中の酸性条件への曝露、又は細胞内の特定のプロテアーゼ若しくは他の酵素による切断のような、薬物を遊離させるための細胞内部のプロセスに依存する。切断可能なリンカーは、一般的に、化学的又は酵素的に切断可能である１つ以上の化学結合を組み込み、一方、リンカーの残りの部分は切断不能である。特定の実施形態において、リンカーは、ヒドラゾン基及び／又はジスルフィド基のような化学的に不安定な基を含む。化学的に不安定な基を含むリンカーは、血漿といくつかの細胞質コンパートメントとの間で異なる特性を利用する。ヒドラゾン含有リンカーの薬物放出を促進する細胞内条件は、エンドソーム及びリソソームの酸性環境であり、一方、ジスルフィド含有リンカーは、高いチオール濃度を含むサイトゾル中で還元されるリンカーであり、例えばグルタチオンが挙げられる。特定の実施形態において、化学的に不安定な基を含むリンカーの血漿安定性は、化学的に不安定な基の近傍の置換基を用いて立体障害を導入することによって増加させることができる。
【０１７３】
ヒドラゾンのような酸に不安定な基は、血液の中性ｐＨ環境（ｐＨ７．３〜７．５）で体循環している間は完全なままであり、加水分解を受け、ＡＤＣが細胞の軽度の酸性エンドソーム（ｐＨ５．０〜６．５）及びリソソーム（ｐＨ４．５〜５．０）コンパートメント内に内在化されると、薬物を放出する。このｐＨ依存性放出機構は、薬物の非特異的放出に関連付けられている。リンカーのヒドラゾン基の安定性を増加させるために、化学的修飾、例えば置換によってリンカーを変化させ、リソソームにおいてより効率的な放出を達成させ得るようにし、循環中の損失を最小限にすることができる。
【０１７４】
ヒドラゾン含有リンカーは、付加的な酸に不安定な切断部位及び／又は酵素的に不安定な切断部位のようなさらなる切断部位を含み得る。例示的なヒドラゾン含有リンカーを含むＡＤＣは、以下の構造：
【０１７５】
【化１１】
2019501124.tif 000022
を含み、式中、Ｄ及びＡｂは、それぞれ細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤（薬物）及び抗体を表し、ｎは、抗体に連結された薬物−リンカーの数を表す。リンカー（Ｉｇ）のような特定のリンカーにおいて、リンカーは２つの切断可能な基（ジスルフィド部分及びヒドラゾン部分）を含む。このようなリンカーの場合、非修飾の遊離薬物の有効な放出には、酸性ｐＨ、又はジスルフィド還元及び酸性ｐＨが必要である。（Ｉｈ）及び（Ｉｉ）のようなリンカーは、単一のヒドラゾン切断部位で有効であることが示されている。
【０１７６】
リンカーに含まれ得る他の酸に不安定な基には、シス−アコニチル含有リンカーが含まれる。シス−アコニチル化学は、酸性条件下でアミド加水分解を促進するためにアミド結合に並置されたカルボン酸を使用する。
【０１７７】
切断可能なリンカーはまた、ジスルフィド基を含み得る。ジスルフィドは、生理学的なｐＨで熱力学的に安定であり、細胞内の内在化時に薬物を放出するように設計されており、細胞質は、細胞外環境と比較して有意により還元する環境を提供する。ジスルフィド結合の切断は、一般的には、ジスルフィド含有リンカーが循環において合理的に安定であり、細胞質ゾル中の薬物を選択的に放出するように、（還元）グルタチオン（ＧＳＨ）のような細胞質チオール補因子の存在を必要とする。細胞内酵素タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ又はジスルフィド結合を切断することができる同様の酵素はまた、細胞内のジスルフィド結合の優先的切断に寄与し得る。ＧＳＨは、０．５〜１０ｍＭの濃度範囲で細胞中に存在することが、ＧＳＨ又は最も豊富な低分子量チオールであるシステインの循環における有意に低い濃度（約５μＭ）と比較して、報告されている。不規則な血流が低酸素状態をもたらす腫瘍細胞は、還元酵素の活性を高め、したがって高いグルタチオン濃度をもたらす。特定の実施形態において、ジスルフィド含有リンカーのインビボでの安定性は、リンカーの化学修飾、例えば、ジスルフィド結合に隣接する立体障害の使用によって増強され得る。
【０１７８】
例示的なジスルフィド含有リンカーを含むＡＤＣは、以下の構造：
【０１７９】
【化１２】
2019501124.tif 000023
を含み、式中、Ｄ及びＡｂは、それぞれ薬物及び抗体を表し、ｎは、抗体に連結した薬物−リンカーの数を表し、Ｒは、例えば水素又はアルキルから独立して選択される。特定の実施形態において、ジスルフィド結合に隣接する立体障害を増加させると、リンカーの安定性が増加する。（Ｉｊ）及び（Ｉｌ）のような構造は、１つ以上のＲ基がメチルのような低級アルキルから選択される場合、インビボでの安定性の増加を示す。
【０１８０】
使用され得る切断可能なリンカーの別のタイプは、酵素によって特異的に切断されるリンカーである。このようなリンカーは、典型的には、ペプチドベースであり、又は酵素の基質として作用するペプチド領域を含む。ペプチドベースのリンカーは、化学的に不安定なリンカーよりも、血漿及び細胞外環境においてより安定である傾向がある。内因性阻害剤及び好ましくない血液のｐＨ値（リソソームに比べて高い）に起因して、リソソームタンパク質分解酵素が血中で非常に低い活性を有するので、一般的に、ペプチド結合は、良好な血清安定性を有する。抗体からの薬物の放出は、リソソームプロテアーゼ、例えばカテプシン及びプラスミンの作用のために特異的に起こる。これらのプロテアーゼは、特定の腫瘍細胞において高いレベルで存在し得る。
【０１８１】
例示的な実施形態において、切断可能なペプチドは、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号８０）、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号８１）のようなテトラペプチド、又はＶａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｍｅｔ−（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ−（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｖａｌ−（Ｄ）Ａｓｐ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｉｌｅ−Ｖａｌ、Ａｓｐ−Ｖａｌ、Ｈｉｓ−Ｖａｌ、ＮｏｒＶａｌ−（Ｄ）Ａｓｐ、Ａｌａ−（Ｄ）Ａｓｐ、Ｍｅｔ−Ｌｙｓ、Ａｓｎ−Ｌｙｓ、Ｉｌｅ−Ｐｒｏ、Ｍｅ３Ｌｙｓ−Ｐｒｏ、ＰｈｅｎｙｌＧｌｙ−（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｍｅｔ−（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ−（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｐｒｏ−（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｍｅｔ−（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ−（Ｄ）Ｌｙｓ、Ｍｅｔ−（Ｄ）Ｌｙｓ、Ａｓｎ−（Ｄ）Ｌｙｓのようなジペプチドから選択される。特定の実施形態において、ジペプチドは、より長いペプチドは疎水性であるため、より長いポリペプチドよりも好ましい。
【０１８２】
ドキソルビシン、マイトマイシン、カンポトテシン、タリソマイシン及びアウリスタチン／アウリスタチンファミリーメンバーのような薬物を抗体に連結するのに有用な種々のジペプチドベースの切断可能なリンカーが記載されている（各々が参照により本明細書に組み込まれるＤｕｂｏｗｃｈｉｋら、１９９８年、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６７巻：１８６６〜１８７２頁；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら、１９９８年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、８巻（２１号）：３３４１〜３３４６頁；Ｗａｌｋｅｒら、２００２年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１２巻：２１７〜２１９号；Ｗａｌｋｅｒら、２００４年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１４巻：４３２３〜４３２７頁；Ｆｒａｎｃｉｓｃｏら、２００３年、Ｂｌｏｏｄ、１０２号：１４５８〜１４６５頁、Ｄｏｒｎｉｎａら、２００８年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９巻：１９６０〜１９６３頁を参照されたい）。これらのジペプチドリンカー、又はこれらのジペプチドリンカーの修飾バージョンはすべて、本明細書に記載されているＡＤＣに使用することができる。使用され得る他のジペプチドリンカーは、Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓのブレンツキシマブ・ベドチン（Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ  Ｖｅｎｄｏｔｉｎ）ＳＧＮ−３５（Ａｄｃｅｔｒｉｓ（商標））、Ｓｅａｔｔｌｅ  ＧｅｎｅｔｉｃｓのＳＧＮ−７５（抗ＣＤ−７０、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＭＭＡＦ）、Ｃｅｌｌｄｅｘ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのグレムバツムマブ（ｇｌｅｍｂａｔｕｍｕｍａｂ）（ＣＤＸ−０１１）（抗ＧＰＮＭＢ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＭＭＡＥ）、及びＣｙｔｏｇｅｎのＰＳＭＡ−ＡＤＣ（ＰＳＭＡ−ＡＤＣ−１３０１）（抗ＰＳＭＡ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＭＭＡＥ）のようなＡＤＣに見出されるジペプチドリンカーを含む。
【０１８３】
酵素的に切断可能なリンカーは、薬物を酵素的な切断部位から空間的に分離するための自己犠牲スペーサーを含むことができる。ペプチドリンカーへの薬物の直接結合は、薬物のアミノ酸付加物のタンパク質分解放出をもたらし、それによりその活性を損なう可能性がある。自己犠牲スペーサーの使用は、アミド結合の加水分解の際に、完全に活性な、化学的に修飾されていない薬物の排除を可能にする。
【０１８４】
１つの自己犠牲スペーサーは、アミノ基を介してペプチドに結合してアミド結合を形成する二官能性パラ−アミノベンジルアルコール基であり、一方、アミン含有薬物は、カルバメート官能基を介して、リンカーのベンジル基ヒドロキシル基（ＰＡＢＣ）に結合され得る。得られたプロドラッグは、プロテアーゼ媒介性の切断により活性化され、修飾されていない薬物、二酸化炭素及びリンカー基の残留物を放出する１，６−脱離反応をもたらす。以下のスキームは、ｐ−アミドベンジルエーテルの断片化及び薬物の放出を記述する：
【０１８５】
【化１３】
2019501124.tif 000024
Ｘ−Ｄは非修飾薬物を表す。
【０１８６】
この自己犠牲基の複素環式変異体は、報告されてもいる。例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，９８９，４３４号を参照されたい。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、酵素的に切断可能なリンカーは、β−グルクロン酸ベースのリンカーである。薬剤の容易な放出は、リソソーム酵素であるβ−グルクロニダーゼによるβ−グルクロニドグリコシド結合の切断によって実現され得る。この酵素はリソソーム内に豊富に存在し、いくつかの腫瘍型において過剰発現され、一方、細胞外の酵素活性は低い。β−グルクロン酸ベースのリンカーは、β−グルクロニドの親水性のためにＡＤＣが凝集を起こすのを回避するために使用することができる。いくつかの実施形態において、β−グルクロン酸ベースのリンカーは、疎水性薬物に連結されたＡＤＣのリンカーとして好ましい。以下のスキームは、β−グルクロン酸ベースのリンカーを含有するＡＣＤからの薬物の放出を記述する。
【０１８８】
【化１４】
2019501124.tif 000025
【０１８９】
アウリスタチン、カンプトテシン及びドキソルビシン類似体、ＣＢＩ副溝結合剤、及びプシムベリン（ｐｓｙｍｂｅｒｉｎ）のような薬物を抗体に連結するのに有用な、様々な切断可能なβ−グルクロン酸ベースのリンカーが記載されている（例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれるＮｏｌｔｉｎｇ、第５章、「Ｌｉｎｋｅｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」、Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１０４５巻、７１〜１００頁、Ｌａｕｒｅｎｔ  Ｄｕｃｒｙ（編集）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｍｅｄｉｃａ、ＬＬＣ、２０１３年；Ｊｅｆｆｒｅｙら、２００６年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．、１７巻：８３１〜８４０頁；Ｊｅｆｆｒｅｙら、２００７年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１７巻：２２７８〜２２８０頁；Ｊｉａｎｇら、２００５年、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１２７巻：１１２５４〜１１２５５頁を参照されたい）。これらのβ−グルクロン酸ベースのリンカーはすべて、本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣに使用することができる。
【０１９０】
さらに、フェノール基を含有する細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤は、フェノール性酸素を介してリンカーに共有結合的に連結することができる。国際公開第２００７／０８９１４９号に記載されているこのようなリンカーの１つは、ジアミノ−エタン「ＳｐａｃｅＬｉｎｋ」を従来の「ＰＡＢＯ」ベースの自己犠牲基と組み合わせて使用してフェノールを送達する方法論による。リンカーの切断は以下に模式的に示されており、この場合、Ｄは、フェノール性ヒドロキシル基を有する細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を表す。
【０１９１】
【化１５】
2019501124.tif 000026
【０１９２】
切断可能なリンカーは、切断不能な部分若しくはセグメントを含んでもよく、及び／又は切断可能なセグメント若しくは部分が切断不能なリンカーに含まれることにより切断不能にされてもよい。一例でしかないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及び関連するポリマーは、ポリマー骨格中に切断可能な基を含み得る。例えば、ポリエチレングリコール又はポリマーリンカーは、ジスルフィド、ヒドラゾン又はジペプチドのような１つ以上の切断可能な基を含み得る。
【０１９３】
リンカーに使用され得る他の分解可能な連結としては、限定されないが、生物学的に活性な薬剤上のアルコール基とＰＥＧカルボン酸又は活性化されたＰＥＧカルボン酸を反応させることにより形成されるエステル連結が含まれ、このようなエステル基は、一般的に、生理学的条件下で加水分解して、生物学的に活性な薬剤を放出する。加水分解的に分解可能な連結としては、限定されないが、カーボネート連結；アミンとアルデヒドの反応から生じるイミン連結；リン酸基とアルコールを反応させることによって形成されるリン酸エステル連結；アルデヒドとアルコールの反応生成物であるアセタール連結；ホルメートとアルコールの反応生成物であるオルトエステル連結；及び、限定されないが、ポリマーの末端にオリゴヌクレオチドの５’−ヒドロキシル基を含む、ホスホルアミダイト基によって形成されるオリゴヌクレオチド連結が挙げられる。
【０１９４】
特定の実施形態において、リンカーは、酵素的に切断可能なペプチド部分、例えば、構造式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｃ）又は（ＩＶｄ）：
【０１９５】
【化１６】
2019501124.tif 000027
を含むリンカー又はその塩を含み、
ペプチドは、リソソーム酵素によって切断可能なペプチド（Ｃ→Ｎを示すが、カルボキシ及びアミノ「末端」を示さない）を表し；
Ｔは、１つ以上のエチレングリコール単位若しくはアルキレン鎖、又はそれらの組合せを含むポリマーを表し；
Ｒａは、水素、アルキル、スルホネート及びメチルスルホネートから選択され；
ｐは、０〜５の範囲の整数であり；
ｑは、０又は１であり；
ｘは、０又は１であり；
ｙは、０又は１であり；
【０１９６】
【化１７】
2019501124.tif 000028
は、リンカーの細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤への結合点を表し；
＊は、リンカーの残りの部分への結合点を表す。
【０１９７】
特定の実施形態において、ペプチドは、トリペプチド又はジペプチドから選択される。特定の実施形態において、ジペプチドは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｖａｌ；Ａｌａ−Ａｌａ；Ａｌａ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｌａ；Ａｓｎ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｓｎ；Ｃｉｔ−Ｃｉｔ；Ｖａｌ−Ｇｌｕ；Ｇｌｕ−Ｖａｌ；Ｓｅｒ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｓｅｒ；Ｌｙｓ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｌｙｓ；Ａｓｐ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｓｐ；Ａｌａ−Ｖａｌ；Ｖａｌ−Ａｌａ；Ｐｈｅ−Ｌｙｓ；Ｖａｌ−Ｌｙｓ；Ａｌａ−Ｌｙｓ；Ｐｈｅ−Ｃｉｔ；Ｌｅｕ−Ｃｉｔ；Ｉｌｅ−Ｃｉｔ；Ｐｈｅ−Ａｒｇ；及びＴｒｐ−Ｃｉｔから選択される。
【０１９８】
本明細書に記載されているＡＤＣに含まれ得る構造式（ＩＶａ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態は、以下：
【０１９９】
【化１８】
2019501124.tif 000029
2019501124.tif 000030
に示されるリンカーを含む（示されているように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合的に連結するのに適した基を含む）。
【０２００】
本明細書に記載されているＡＤＣに含まれ得る構造式（ＩＶｂ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態は、以下：
【０２０１】
【化１９】
2019501124.tif 000031
2019501124.tif 000032
2019501124.tif 000033
2019501124.tif 000034
2019501124.tif 000035
に示されるリンカーを含む（示されているように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合的に連結するのに適した基を含む）。
【０２０２】
本明細書に記載されているＡＤＣに含まれ得る構造式（ＩＶｃ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態は、以下：
【０２０３】
【化２０】
2019501124.tif 000036
2019501124.tif 000037
に示されるリンカーを含む（示されているように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合的に連結するのに適した基を含む）。
【０２０４】
本明細書に記載されているＡＤＣに含まれ得る構造式（ＩＶｄ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態は、以下：
【０２０５】
【化２１】
2019501124.tif 000038
2019501124.tif 000039
2019501124.tif 000040
2019501124.tif 000041
に示されるリンカーを含む（示されているように、リンカーは、リンカーを抗体に共有結合的に連結するのに適した基を含む）。
【０２０６】
特定の実施形態において、構造式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｃ）又は（ＩＶｄ）を含むリンカーは、酸性媒体への曝露によって切断可能なカーボネート部分をさらに含む。特定の実施形態において、リンカーは、酸素を介して細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤に結合される。
【０２０７】
７．４．２．２．切断不能なリンカー
切断可能なリンカーは特定の利点を提供し得るが、本明細書に記載されているＡＤＣを構成するリンカーは切断性である必要はない。切断不能なリンカーについて、薬物の放出は、血漿となんらかの細胞質コンパートメントの間の差異特性に依存しない。薬物の放出は、抗原媒介性エンドサイトーシス及びリソソームコンパートメントへの送達によるＡＤＣの内在化後に起こると仮定され、この場合、抗体は、細胞内のタンパク質分解によりアミノ酸レベルまで分解される。このプロセスは、薬物、リンカー、及びリンカーが共有結合したアミノ酸残基によって形成される薬物誘導体を放出する。切断不能なリンカーとのコンジュゲートからのアミノ酸薬物代謝産物はより親水性であり、一般的に、膜透過性が低く、切断可能なリンカーを有するコンジュゲートと比較してバイスタンダー効果が少なく、非特異的な毒性が少ない。一般的に、切断不能なリンカーを有するＡＤＣは、切断可能なリンカーを有するＡＤＣよりも循環中の安定性が高い。切断不能なリンカーは、アルキレン鎖であってもよく、又は、例えば、ポリアルキレングリコールポリマー、アミドポリマーに基づくもののような、本質的にポリマー性であってもよく、又はアルキレン鎖、ポリアルキレングリコール及び／若しくはアミドポリマーのセグメントを含んでもよい。
【０２０８】
薬物を抗体に連結するために使用される様々な切断不能なリンカーが記載されている。各々が参照により本明細書に組み込まれるＪｅｆｆｒｅｙら、２００６年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．、１７巻；８３１〜８４０頁；Ｊｅｆｆｒｅｙら、２００７年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１７巻：２２７８〜２２８０頁；Ｊｉａｎｇら、２００５年、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１２７巻：１１２５４〜１１２５５頁を参照されたい。これらのリンカーはすべて、本明細書に記載されているＡＤＣに含まれ得る。
【０２０９】
特定の実施形態において、リンカーはインビボで切断不能であり、例えば、構造式（ＶＩａ）、（ＶＩｂ）、（ＶＩｃ）又は（ＶＩｄ）：
【０２１０】
【化２２】
2019501124.tif 000042
によるリンカー（示されているように、リンカーは、抗体にリンカーを共有結合的に連結するのに有用な基を含む）又はその塩であり
Ｒａは、水素、アルキル、スルホネート及びメチルスルホネートから選択され；
Ｒｘは、リンカーを抗体に共有結合的に連結させることができる官能基を含む部分であり；並びに
【０２１１】
【化２３】
2019501124.tif 000043
は、リンカーの細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤へのリンカーの結合点を表す。
【０２１２】
本明細書に記載されているＡＤＣに含まれ得る構造式（ＶＩａ）〜（ＶＩｄ）によるリンカーの特定の例示的な実施形態には、以下に示されるリンカーを含む（示されているように、リンカーは、抗体にリンカーを共有結合的に連結するのに適した基を含み、
【０２１３】
【化２４】
2019501124.tif 000044
は、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤への結合点を表す）：
【０２１４】
【化２５】
2019501124.tif 000045
【０２１５】
７．４．２．３．抗体にリンカーを結合させるために使用される基
種々の基を用いてリンカー−薬物シントンを抗体に結合させて、ＡＤＣを生成することができる。結合基は、本質的に求電子性であり得、マレイミド基、活性化ジスルフィド、ＮＨＳエステル及びＨＯＢｔエステルのような活性エステル、ハロホルメート、酸ハライド、ハロアセトアミドのようなアルキルハライド及びベンジルハライドを含む。以下で検討するように、本開示に従って使用することができる「自己安定化する」マレイミド及び「架橋ジスルフィド」に関連する新たな技術もまた存在する。使用される特定の基は、部分的には、抗体への結合部位に依存する。
【０２１６】
改善された安定性を有するＡＤＣ種を与えるために抗体コンジュゲーション条件下で自発的に加水分解する「自己安定化する」マレイミド基の一例を以下の模式図に記述する。米国特許出願公開第２０１３／０３０９２５６号；さらにＬｙｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｏｎｌｉｎｅ、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２９６８を参照されたい。
【０２１７】
【化２６】
2019501124.tif 000046
【０２１８】
【化２７】
2019501124.tif 000047
【０２１９】
ＰｏｌｙＴｈｅｒｉｃｓは、天然ヒンジジスルフィド結合の還元に由来する、一対のスルフヒドリル基を架橋する方法を開示している。Ｂａｄｅｓｃｕら、２０１４年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．、２５巻：１１２４〜１１３６頁を参照されたい。反応は、以下の模式図に示されている。この方法論の利点は、ＩｇＧの完全な還元（４対のスルフヒドリルを与える）により、続いて４当量のアルキル化剤との反応により均質なＤＡＲ４  ＡＤＣを合成する能力である。「架橋ジスルフィド」を含有するＡＤＣはまた、安定性が増大していると主張されている。
【０２２０】
【化２８】
2019501124.tif 000048
【０２２１】
同様に、以下に記述するように、一対のスルフヒドリル基を架橋することができるマレイミド誘導体（下記の１）が開発されている。国際公開第２０１３／０８５９２５号を参照されたい。
【０２２２】
【化２９】
2019501124.tif 000049
【０２２３】
７．４．２．４．リンカーの選択に関する考慮事項
当業者に知られているように、特定のＡＤＣについて選択されるリンカーは、様々な因子、例えば、限定されないが、抗体への結合部位（例えば、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ又は他のアミノ酸残基）、薬物ファーマコフォアの構造的制約及び薬物の親油性によって影響を受ける場合がある。ＡＤＣについて選択される特定のリンカーは、特異的な抗体／薬物の組合せに関して、これらの異なる因子のバランスをとるよう努める必要がある。ＡＤＣにおけるリンカーの選択によって影響される因子の概説については、Ｎｏｌｔｉｎｇ、第５章、「Ｌｉｎｋｅｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１０４５巻、７１〜１００頁、Ｌａｕｒｅｎｔ  Ｄｕｃｒｙ（編集）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｍｅｄｉｃａ、ＬＬＣ、２０１３年を参照されたい。
【０２２４】
例えば、上記で検討されるように、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（−）腫瘍についてｈｕＬＲＲＣ１５を発現する間質細胞の近傍に存在するがん細胞のバイスタンダー死滅を誘導することが観察されている。ＡＤＣによるバイスタンダー細胞死滅のメカニズムは、ＡＤＣの細胞内プロセッシングの間に形成される代謝産物が役割を果たす可能性があることを示している。ｈｕＬＲＲＣ１５を発現する細胞におけるＡＤＣの代謝によって生成される細胞透過性の細胞毒性及び／又は細胞増殖抑制性の代謝物は、バイスタンダー細胞死滅において役割を果たすようであるが、一方、細胞透過性ではない代謝物は、細胞膜を横切って培地中に拡散することができず、バイスタンダー死滅に影響を及ぼすことができない。特定の実施形態において、リンカーは、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣのバイスタンダー死滅効果をもたらすか、増強するか又は増加させるように選択される。
【０２２５】
リンカーの特性はまた、使用及び／又は保存の条件下でのＡＤＣの凝集に影響を与え得る。典型的には、文献において報告されているＡＤＣは、抗原結合部分あたり、例えば抗体分子あたり、３〜４個以下の薬物分子を含有する（例えば、Ｃｈａｒｉ、２００８年、Ａｃｃ  Ｃｈｅｍ  Ｒｅｓ、４１巻：９８〜１０７頁を参照されたい）。より高い薬物対抗体比（「ＤＡＲ」）を得るという試みは、特に、薬物とリンカーの両方が疎水性である場合、しばしば、ＡＤＣの凝集のために失敗している（Ｋｉｎｇら、２００２年、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ、４５巻：４３３６〜４３４３頁；Ｈｏｌｌａｎｄｅｒら、２００８年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ、１９巻：３５８〜３６１頁；Ｂｕｒｋｅら、２００９年、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ、２０巻：１２４２〜１２５０頁）。多くの場合、３〜４より高いＤＡＲは、効力を増加させる手段として有益であり得る。細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤が本質的に疎水性である場合、特に３〜４より大きいＤＡＲＳが望ましい場合、ＡＤＣ凝集を減少させる手段として相対的に親水性であるリンカーを選択することが望ましいことがある。したがって、特定の実施形態において、リンカーは、保存中及び／又は使用中のＡＤＣの凝集を減少させる化学的部分を組み込む。リンカーは、ＡＤＣの凝集を減少させるために、荷電基又は生理学的なｐＨ下で帯電するようになる基などの極性基又は親水性基を組み込むことができる。例えば、リンカーは、生理学的なｐＨで脱プロトン化する塩又は基、例えばカルボン酸塩、又はプロトン酸塩、例えばアミンのような荷電基を組み込むことができる。
【０２２６】
多数の細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を抗体に連結するために使用され得る２０程度の大きさのＤＡＲを生じることが報告されている例示的な多価リンカーは、国際公開第２００９／０７３４４５号；国際公開第２０１０／０６８７９５号；国際公開第２０１０／１３８７１９号；国際公開第２０１１／１２００５３号；国際公開第２０１１／１７１０２０号；国際公開第２０１３／０９６９０１号；国際公開第２０１４／００８３７５号；国際公開第２０１４／０９３３７９号；国際公開第２０１４／０９３３９４号；国際公開第２０１４／０９３６４０号に記載されていて、それらの内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０２２７】
特定の実施形態において、保存中又は使用中のＡＤＣの凝集は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定すると、約１０％未満である。特定の実施形態において、保存中又は使用中のＡＤＣの凝集は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定すると、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、約１％未満、約０．５％未満、約０．１％未満、又はさらにそれ未満などの、１０％未満である。特定の実施形態において、保存中又は使用中のＡＤＣの凝集は、限定されないが、約０．１％〜１０％、０．１％〜５％、０．５％〜１０％、０．５％〜５％、又は１％〜１０％のような前述の値の任意の２つの範囲内である。
【０２２８】
７．４．３．抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体薬物コンジュゲートの実施形態
上記のように、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの実施形態は、式（Ｉ）：［Ｄ−Ｌ−ＸＹ］ｎ−Ａｂ（Ｉ）による構造を有する化合物又はその塩を含み、式中、Ｄは細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤であり；Ｌはリンカーであり；Ａｂは抗体であり；ＸＹは、リンカーＬを抗体Ａｂに連結する共有結合的連結を表し；ｎは２〜８の範囲の整数である。
【０２２９】
いくつかの実施形態において、ＸＹは、アミド若しくはチオ尿素のような、抗体Ａｂ上のアミノ基とともに形成される連結、又はチオエーテルのような、抗体Ａｂ上のスルフヒドリル基とともに形成される結合で形成される連結である。特定のこのような実施形態において、Ｘ−Ｙはチオエーテルである。
【０２３０】
いくつかの実施形態において、Ｌは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ又はＶａｌ−Ａｌａを含む。
【０２３１】
いくつかの実施形態において、構造式（Ｉ）による化合物は、式（ＩＩａ）：
【０２３２】
【化３０】
2019501124.tif 000050
の構造を有する。
【０２３３】
いくつかの実施形態において、構造式（Ｉ）による化合物は、式（ＩＩｂ）：
【０２３４】
【化３１】
2019501124.tif 000051
の構造を有する。
【０２３５】
式（Ｉ）、（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）の化合物のいくつかの実施形態において、Ｄは、有糸分裂阻害剤又はＤＮＡインターカレート剤である。いくつかのこのような実施形態において、Ｄは、細胞透過性の有糸分裂阻害剤である抗有糸分裂剤である。特定のこのような実施形態において、細胞透過性の抗有糸分裂剤はＭＭＡＥである。他のこのような実施形態において、Ｄは、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）二量体であるＤＮＡインターカレート剤である。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、構造式（Ｉ）による化合物は、式（ＩＩＩａ）：
【０２３７】
【化３２】
2019501124.tif 000052
の構造を有する。
【０２３８】
いくつかの実施形態において、構造式（Ｉ）による化合物は、式（ＩＩＩｂ）：
【０２３９】
【化３３】
2019501124.tif 000053
の構造を有する。
【０２４０】
式（Ｉ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩＩａ）、又は（ＩＩＩｂ）の化合物のいくつかの実施形態において、Ａｂは、それぞれ配列番号１０、配列番号１１及び配列番号１２の配列に対応する３つのＶＨＣＤＲ、並びにそれぞれ配列番号１３、配列番号１４及び配列番号１５の配列に対応する３つのＶＬＣＤＲを含む抗体である。いくつかのこのような実施形態において、Ａｂは、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号１７のアミノ酸配列を有するＶＬを有する抗体である。他の実施形態において、Ａｂは、それぞれ配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２の配列に対応する３つのＶＨＣＤＲ、並びにそれぞれ配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５の配列に対応する３つのＶＬＣＤＲを含む抗体である。いくつかのこのような実施形態において、Ａｂは、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＶＬを有する抗体である。いくつかの実施形態において、ＡｂはヒトＩｇＧ１である。いくつかのこのような実施形態において、Ａｂは、配列番号１８又は１０２のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有する軽鎖を有する抗体である。他のこのような実施形態において、Ａｂは、配列番号１００又は１０３のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有する軽鎖を有する抗体である。他のこのような実施形態において、Ａｂは、配列番号２８又は１０１のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号２９のアミノ酸配列を有する軽鎖を有する抗体である。他のこのような実施形態において、Ａｂは、配列番号１０４又は１０５のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号２９のアミノ酸配列を有する軽鎖を有する抗体である。いくつかの実施形態において、Ａｂは、ｈｕＭ２５、ｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ、ｈｕＡＤ２０８．４．１及びｈｕＡＤ２０８．４．１−Ｓ２３９Ｃから選択される抗体である。特定のこのような実施形態において、ＡｂはｈｕＭ２５である。他のこのような実施形態において、ＡｂはｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃである。さらに他のこのような実施形態では、ＡｂはｈｕＡＤ２０８．４．１である。さらに他のこのような実施形態において、ＡｂはｈｕＡＤ２０８．４．１−Ｓ２３９Ｃである。
【０２４１】
式（Ｉ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩＩａ）、又は（ＩＩＩｂ）の化合物のいくつかの実施形態において、ｎは２、３、又は４である。特定のこのような実施形態において、ｎは２又は４である。
【０２４２】
７．５．抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体薬物コンジュゲートを作製する方法
本明細書に記載されているＡＤＣは、周知である化学を用いて合成することができる。選択される化学は、とりわけ、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤（単数又は複数）、並びにリンカー及びリンカーを抗体に結合させるために使用される基の固有性に依存する。一般的に、式（Ｉ）によるＡＤＣは、以下のスキーム：
Ｄ−Ｌ−Ｒｘ＋Ａｂ−Ｒｙ  →  （Ｉ）  ［Ｄ−Ｌ−ＸＹ］ｎ−Ａｂ
に従って調製することができ、式中、Ｄ、Ｌ、Ａｂ、ＸＹ及びｎは、先に定義した通りであり、Ｒｘ及びＲｙは、上記で検討したように互いに共有結合的連結を形成し得る相補的な基を表す。
【０２４３】
基Ｒｘ及びＲｙの固有性は、シントンＤ−Ｌ−Ｒｘを抗体に連結するために使用される化学反応に依存する。一般的に、使用される化学は、抗体の完全性、例えば、その標的に結合する能力を変更すべきではない。好ましくは、コンジュゲートされた抗体の結合特性は、コンジュゲートされていない抗体の結合特性に非常に類似している。抗体のような生物学的分子に分子をコンジュゲートさせるための様々な化学及び技術は、当該技術分野において公知であり、特に抗体については周知である。例えば、Ａｍｏｎら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら、編集、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．、１９８５年；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、ｉｎ：Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、編集、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、第二版、１９８７年；Ｔｈｏｒｐｅ、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ」、ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら、編集、１９８５年；「Ａｎａｌｙｓｉｓ、Ｒｅｓｕｌｔｓ、ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」、ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら、編集、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８５年；Ｔｈｏｒｐｅら、１９８２年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２巻：１１９〜５８頁；ＰＣＴ国際公開第８９／１２６２４号を参照されたい。これらの化学のいずれかを使用して、抗体にシントンを連結することができる。
【０２４４】
シントンを接近可能なリジン残基に連結するのに有用な多数の官能基Ｒｘ及び化学は公知であり、例えば、限定されないが、ＮＨＳ−エステル及びイソチオシアネートが挙げられる。
【０２４５】
シントン残基に接近可能な遊離スルフヒドリル基にシントンを連結するのに有用な多数の官能基Ｒｘ及び化学は公知であり、例として、限定されないが、ハロアセチル及びマレイミドが挙げられる。
【０２４６】
しかしながら、コンジュゲーション化学は、利用可能な側鎖基に限定されない。アミンのような側鎖は、適切な小分子をアミンに連結させることによって、ヒドロキシルのような他の有用な基に変換することができる。この戦略は、抗体の接近可能なアミノ酸残基の側鎖に多官能性小分子をコンジュゲートさせることにより、抗体上の利用可能な連結部位の数を増加させるために使用することができる。次に、これらの「変換された」官能基にシントンを共有結合的に連結させるのに適した官能基Ｒｘは、シントンに含まれる。
【０２４７】
抗体はまた、コンジュゲーションのためのアミノ酸残基を含むように遺伝子操作されてもよい。ＡＤＣとの関連で薬剤をコンジュゲートさせるために有用な非遺伝的にコードされたアミノ酸残基を含むように抗体を遺伝子操作するアプローチは、化学及び官能基がコードされていないアミノ酸にシントンを連結するのに有用であることが、Ａｘｕｐら、２０１２年、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．、１０９巻（４０号）：１６１０１〜１６１０６頁によって報告されている。
【０２４８】
典型的には、シントンは、抗体のアミノ酸残基の側鎖、例えば、接近可能なリジン残基の第一アミノ基又は接近可能なシステイン残基のスルフヒドリル基などに連結される。遊離スルフヒドリル基は、鎖間のジスルフィド結合を還元することによって得ることができる。
【０２４９】
Ｒｙがスルフヒドリル基である場合（例えば、Ｒｘがマレイミドである場合）の連結に関して、抗体は、一般的に、システイン残基間の鎖間ジスルフィド架橋を破壊するために、最初に完全に又は部分的に還元される。例示的な抗体ｈｕＭ２５、ｈｕＡＤ２０８．４．１、ｈｕＡＤ２０８．１２．１、ｈｕＡＤ２０８．１４．１、ｈｕ１３９．１０、ｍｕＡＤ２０８．９．１、ｍｕＡＤ２１０．４０．９についてのスルフヒドリル基へのコンジュゲーションに適した基を含む、薬剤−リンカーシントンの結合のために還元され得る特定のシステイン残基及び鎖間ジスルフィド架橋は、例として、限定されないが、ヒトＩｇＧ１重鎖上の残基Ｃ２３３、Ｃ２３９、及びＣ２４２（Ｋａｂａｔ番号付けシステム；残基Ｃ２２０、Ｃ２２６、及びＣ２２９  Ｅｕ番号付けに対応する）及びヒトＩｇκ軽鎖上の残基Ｃ２１４（Ｋａｂａｔ番号付けシステム）を含む。
【０２５０】
ジスルフィド架橋に関与しないシントン結合のためのシステイン残基は、１つ以上のコドンの突然変異によって抗体へと遺伝子操作され得る。これらの不対システインを還元することにより、コンジュゲーションに適したスルフヒドリル基が得られる。遺伝子操作されたシステインを組み込むための好ましい位置としては、例として、限定されないが、ヒトＩｇＧ１重鎖上の位置Ｓ１１２Ｃ、Ｓ１１３Ｃ、Ａ１１４Ｃ、Ｓ１１５Ｃ、Ａ１７６Ｃ、Ｓ１８０Ｃ、Ｓ２３９Ｃ、Ｓ２５２Ｃ、Ｖ２８６Ｃ、Ｖ２９２Ｃ、Ｓ３５７Ｃ、Ａ３５９Ｃ、Ｓ３９８Ｃ、Ｓ４２８Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付け）、及びヒトＩｇカッパ軽鎖上の位置Ｖ１１０Ｃ、Ｓ１１４Ｃ、Ｓ１２１Ｃ、Ｓ１２７Ｃ、Ｓ１６８Ｃ、Ｖ２０５Ｃ（Ｋａｂａｔ番号付け）が含まれる（例えば、米国特許第７，５２１，５４１号、米国特許第７，８５５，２７５号及び米国特許第８，４５５，６２２号を参照されたい）。
【０２５１】
既存のジスルフィド架橋に関与することが知られているシステイン残基の突然変異はまた、結果として生じる不対システインパートナーが薬物に対するスルフィドリンカーを形成するために利用できるように遺伝子操作することができる。遺伝子操作されたシステイン突然変異の例には、限定されないが、軽鎖定常Ｃ２１４突然変異、例えばＣ２１４Ａが含まれる。
【０２５２】
当業者に理解されるように、抗体分子に連結された細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤の数は、ＡＤＣ調製物が本質的に不均一であり得るように変動し得、この場合、調製物中のいくつかの抗体は、１つの連結された薬剤を含有し、いくつかは２つであり、いくつかは３つであるなどである（いくつかは無しである）。不均一性の程度は、とりわけ、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を連結するために使用される化学に依存する。例えば、抗体が還元されて、結合のためのスルフヒドリル基を生じる場合、分子あたり０個、２個、４個、６個又は８つ個の連結された薬剤を有する抗体の不均一な混合物がしばしば生成される。さらに、結合化合物のモル比を制限することにより、１分子あたり０個、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個又は８個の結合した薬剤を有する抗体がしばしば生成される。したがって、文脈に応じて、記述された薬物抗体比（ＤＡＲ）は、抗体の回収についての平均であり得ることが理解される。例えば、「ＤＡＲ４」は、特定のＤＡＲピークを単離するために精製に供されておらず、抗体あたり、異なる数（例えば、抗体あたり０個、２個、４個、６個、８個の薬剤）の結合した細胞増殖抑制剤及び／又は細胞毒性剤を有するＡＤＣ分子の不均一な混合物を含むが、平均薬物対抗体比は４である。同様に、「ＤＡＲ８」とは、平均薬物対抗体比が８である不均一なＡＤＣ調製物を指す。
【０２５３】
不均一なＡＤＣ調製物は、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィー（「ＨＩＣ」）によって処理して、目的とする特定のＤＡＲ（又は２つ以上の特定のＤＡＲＳの混合物）を有するＡＤＣにおいて富化された調製物を得ることができる。このような富化された調製物は、本明細書において「ＥＸ」として記され、この場合、「Ｅ」は、ＡＤＣ調製物が処理され、特定のＤＡＲを有するＡＤＣにおいて富化されていることを示し、「Ｘ」はＡＤＣ分子あたり連結された細胞増殖抑制剤及び／又は細胞毒性剤の数を表す。２つの特定のＤＡＲを有するＡＤＣの混合物において富化された調製物は、「ＥＸ／ＥＹ」と記され、３つの特定のＤＡＲは「ＥＸ／ＥＹ／ＥＺ」等と記され、この場合、「Ｅ」は、ＡＤＣ調製物が処理され、特定のＤＡＲを富化していることを示し、「Ｘ」、「Ｙ」及び「Ｚ」は富化されたＤＡＲを表す。特定の例として、「Ｅ２」は、ＡＤＣ分子あたり２つの細胞増殖抑制剤及び／又は細胞毒性剤が連結したＡＤＣを主に含有するように富化されたＡＤＣ調製物を指す。「Ｅ４」は、ＡＤＣ分子あたり４つの細胞増殖抑制剤及び／又は細胞毒性剤が結合したＡＤＣを主に含有するように富化されたＡＤＣ調製物を指す。「Ｅ２／Ｅ４」は、一方がＡＤＣ分子あたり２つの細胞増殖抑制剤及び／又は細胞毒性剤を連結し、もう一方がＡＤＣ分子あたり４つの細胞増殖抑制剤及び／又は細胞毒性剤を連結した２つのＡＤＣ集団を主に含有するように富化されたＡＤＣ調製物を指す。
【０２５４】
富化された「Ｅ」調製物はまた、例えば、システイン残基の挿入又は欠失によって、特定部位で薬剤への連結を形成するように遺伝子操作された抗体から調製されたＡＤＣを指すことができる。例えば、各重鎖中のＳ２３９Ｃ突然変異を有する抗体は、主に、その部位でリンカーを介して結合された薬物を有することができ、したがって、クロマトグラフィー処理のような追加の処理なしで大部分がＤＡＲ２を有するＥ２  ＡＤＣ調製物を得ることができる。
【０２５５】
本明細書で使用するとき、富化された「Ｅ」調製物は、一般的に、記載されたＤＡＲ  ＡＤＣにおいて少なくとも約８０％以上の純度であるが、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９８％、９９％又はさらにより高い純度のようなより高いレベルの純度を得ることができ、それが望ましい。いくつかの実施形態において、富化された「Ｅ」調製物は、限定されないが、約８０〜９９％、８０〜９８％、８５〜９５％、９０〜９８％、９５〜９８％、又は８０〜９０％のような、上記の値のいずれか２つのうちの純度の範囲を有する。例えば、「ＥＸ」調製物は、一般的には、ＡＤＣ分子あたりＸの細胞増殖抑制剤及び／又は細胞毒性剤が連結したＡＤＣにおいて少なくとも約８０％の純度を有する。例えば「ＥＸ／ＥＹ」調製物のような「高次の」富化された調製物について、ＡＤＣ分子あたりに連結されたＸ及びＹの細胞増殖抑制剤及び／又は細胞毒性剤を有するＡＤＣの総量は、一般的に、調製物において少なくとも約８０％の全ＡＤＣを含む。同様に、富化された「ＥＸ／ＥＹ／ＥＺ」調製物において、ＡＤＣ分子あたり連結されたＸ、Ｙ及びＺの細胞増殖抑制剤及び／又は細胞毒性剤を有するＡＤＣの総量は、調製物において少なくとも約８０％の全ＡＤＣを含む。
【０２５６】
純度は、当該技術分野において公知であるように、様々な方法によって評価することができる。特定の例として、ＡＤＣ調製物は、ＨＰＬＣ又は他のクロマトグラフィーによって分析することができ、純度は、得られたピークの曲線下の面積を分析することによって評価することができる。ＡＤＣ調製物の純度を評価するために用いることができる特定のクロマトグラフィー法を実施例８に提供する。
【０２５７】
図１２は例示的なものである。上段パネルは、実施例８に従って調製されたＡＤＣの粗調製物のクロマトグラムを示す。調製物は、細胞増殖抑制剤及び／又は細胞毒性剤を結合していない抗体（ＤＡＲ０）、２つの薬剤が結合した抗体（ＤＡＲ２）、４つの薬剤が結合した抗体（ＤＡＲ４）、６つの薬剤が結合した抗体（ＤＡＲ６）及び８つの薬剤が結合した抗体（ＤＡＲ８）を含有する。この粗調製物は、平均ＤＡＲが４である。ＨＩＣクロマトグラフィーは、調製物中のＡＤＣの約９５％が、ＡＤＣ分子あたり２つの細胞増殖抑制剤及び／又は細胞毒性剤を連結しているＥ２調製物を生じる（言い換えれば、ＡＤＣの約９５％がＤＡＲ２である）。
【０２５８】
平均ＤＡＲが４であるヒト化抗体ｈｕＭ２５を含むＡＤＣの異種混合物を得るための特定の方法、並びに２つ及び４つ連結した薬剤を含有する高度に精製された調製物は、実施例のセクションにおいて提供される。これらの特定の方法は、他の抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体、リンカー並びに／又は細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を含有する不均一及び／又は均一のＡＤＣを得るために慣用的な技術を用いて改変することができる。
【０２５９】
７．６．組成物
本明細書に記載されているＡＤＣは、ＡＤＣ、並びに１つ以上の担体、賦形剤及び／又は希釈剤を含む組成物の形態であってもよい。組成物は、獣医学的使用又はヒトにおける薬学的使用のような特定の使用のために製剤化され得る。組成物の形態（例えば、乾燥粉末、液体製剤など）、並びに使用される賦形剤、希釈剤及び／又は担体は、抗体及び／又はＡＤＣの意図された使用、及び治療的使用については投与様式に依存する。
【０２６０】
治療的使用について、組成物は、薬学的に許容される担体を含む無菌の医薬組成物の一部として供給されてもよい。この組成物は、（患者に投与する所望の方法に応じて）任意の適切な形態であり得る。医薬組成物は、経口、経皮、皮下、鼻腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、くも膜下腔内、局所又は局所経路のような様々な経路によって患者に投与することができる。任意の所与の場合の投与に最も適切した経路は、特定の抗体及び／又はＡＤＣ、対象、並びに疾患の性質及び重症度、並びに対象の身体的状態に依存する。典型的には、医薬組成物は、静脈内又は皮下に投与される。
【０２６１】
医薬組成物は、用量あたり本明細書に記載されている所定量の抗体及び／又はＡＤＣを含有する単位剤形で、便利に提示することができる。単位用量に含まれる抗体及び／又はＡＤＣの量は、治療される疾患並びに当該技術分野において周知である他の因子に依存する。このような単位投薬量は、単回投与に適した量の抗体及び／又はＡＤＣを含有する凍結乾燥粉末の形態であってもよく、又は液体の形態であってもよい。乾燥粉末単位剤形は、シリンジ、適切な量の希釈剤及び／又は投与に有用な他の成分を有するキットに包装されてもよい。液体形態の単位投薬量は、単回投与に適した量の抗体及び／又はＡＤＣで予め充填されたシリンジの形態で都合よく供給されてもよい。
【０２６２】
医薬組成物はまた、複数回の投与に適した量のＡＤＣを含有するバルク形態で供給することができる。
【０２６３】
医薬組成物は、当該技術分野において典型的に使用される薬学的に許容される任意の担体、賦形剤又は安定剤（これらはすべて、本明細書中で「担体」と呼ばれる）、例えば、緩衝剤、安定剤、防腐剤、等張剤、非イオン性界面活性剤、酸化防止剤、及び他の様々な添加剤と、所望の程度の純度を有する抗体及び／又はＡＤＣを混合することにより、凍結乾燥製剤又は水性溶液として保存するために調製することができる。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６班（Ｏｓｏｌ、編集、１９８０年）を参照されたい。このような添加剤は、使用される投薬量及び濃度でレシピエントに対して無毒である必要がある。
【０２６４】
緩衝剤は、生理学的条件に近い範囲のｐＨを維持するのに役立つ。これらは、多種多様な濃度で存在し得るが、典型的には、約２ｍＭ〜約５０ｍＭの範囲の濃度で存在する。本開示との使用に適した緩衝剤には、クエン酸緩衝液（例えば、クエン酸一ナトリウム−クエン酸二ナトリウム混合物、クエン酸−クエン酸三ナトリウム混合物、クエン酸−クエン酸一ナトリウム混合物など）、コハク酸緩衝液（例えば、コハク酸−コハク酸一ナトリウム混合物、コハク酸−水酸化ナトリウム混合物、コハク酸−コハク酸二ナトリウム混合物など）、酒石酸緩衝剤（例えば、酒石酸−酒石酸ナトリウム混合物、酒石酸−酒石酸カリウム混合物、酒石酸−水酸化ナトリウム混合物など）、フマル酸緩衝液（例えば、フマル酸−フマル酸一ナトリウム混合物、フマル酸−フマル酸二ナトリウム混合物、フマル酸一ナトリウム−フマル酸二ナトリウム混合物など）、グルコン酸緩衝剤（例えば、グルコン酸−グルコン酸ナトリウム混合物、グルコン酸−水酸化ナトリウム混合物、グルコン酸−グルコン酸カリウム混合物など）、シュウ酸塩緩衝液（例えば、シュウ酸−シュウ酸ナトリウム混合物、シュウ酸−水酸化ナトリウム混合物、シュウ酸−シュウ酸カリウム混合物など）、乳酸緩衝液（例えば、乳酸−乳酸ナトリウム混合物、乳酸−水酸化ナトリウム混合物、乳酸−乳酸カリウム混合物など）、及び酢酸緩衝液（例えば、酢酸−酢酸ナトリウム混合物、酢酸−水酸化ナトリウム混合物など）のような有機酸と無機酸の両方、及びそれらの塩が含まれる。さらに、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、及びトリスのようなトリメチルアミン塩を使用することができる。
【０２６５】
防腐剤は、微生物増殖を遅らせるために添加することができ、約０．２％〜１％（ｗ／ｖ）の範囲の量で加えることができる。本開示との使用に適した防腐剤には、フェノール、ベンジルアルコール、メタ−クレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド、ベンズアルコニウムハライド（例えば、塩化物、臭化物及びヨウ化物）、ヘキサメトニウムクロライド、並びにメチルパラベン又はプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、及び３−ペンタノールのようなアルキルパラベンが含まれる。時々「安定剤」として知られている等張化剤は、本開示の液体組成物の等張性を確実にするために添加されることができ、多価糖アルコール、例えば、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール及びマンニトールのような３価以上の糖アルコールを含むことができる。安定剤とは、増量剤から、治療薬を可溶化し、又は変性若しくは器壁への付着を防止するのに役立つ添加剤まで機能に幅を持たせることができる幅広い範疇の賦形剤を指す。典型的な安定剤は、多価糖アルコール（上記に列挙されている）；アルギニン、リジン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ−ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニン等のようなアミノ酸、ラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオイノシトール、ガラクチトール、グリセロール等のような有機糖又は糖アルコール、例えば、イノシトールのようなシクリトール；ポリエチレングリコール；アミノ酸ポリマー；尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α−モノチオグリセロール及びチオ硫酸ナトリウムのような硫黄含有還元剤；低分子量ポリペプチド（例えば、１０残基以下のペプチド）；ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリンのようなタンパク質；キシロース、マンノース、フルクトース、グルコースのようなポリビニルピロリドン単糖のような親水性ポリマー；ラクトース、マルトース、スクロース及びトレハロースのような二糖；ラフィノースのような三糖；並びにデキストランのような多糖であり得る。安定剤は、ＡＤＣの重量あたり０．５〜１０重量％の範囲の量で存在し得る。
【０２６６】
非イオン性サーファクタント又は界面活性剤（「湿潤剤」としても知られている）を添加して、糖タンパク質を可溶化し、撹拌誘発された凝集から糖タンパク質を保護するのを助け、これにより、タンパク質の変性を引き起こすことなしに応力が与えられた剪断表面に製剤を曝露することを助けてもよい。適切な非イオン性サーファクタントには、ポリソルベート（２０、８０など）、ポロキサマー（１８４、１８８など）、及びプルロニックポリオールが含まれる。非イオン性界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１．０ｍｇ／ｍＬの範囲、例えば、約０．０７ｍｇ／ｍＬ〜約０．２ｍｇ／ｍＬの範囲で存在し得る。
【０２６７】
追加の様々な賦形剤には、増量剤（例えば、デンプン）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ）、及び共溶媒が含まれる。
【０２６８】
静脈内注入による投与に適した水性組成物の特定の例示的な実施形態は、２０ｍｇ／ｍＬの抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ、１０ｍＭのヒスチジン緩衝液、ｐＨ６．０、７％（ｗ／ｖ）のスクロース、０．０３％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を含む。組成物は、５．２ｍＬの滅菌水又は注射若しくは注入に適した他の溶液（例えば、０．９％生理食塩水、リンゲル溶液、乳酸加リンゲル溶液など）を用いて再構成することにより上記の水性組成物を提供する凍結乾燥粉末の形態であってもよい。この実施形態又は組成物の他の実施形態は、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの単回投与に適した一定量の組成物が予め充填されたシリンジ又は注射及び／若しくは注入に適した他のデバイスの形態であってもよい。
【０２６９】
７．７．使用の方法
前述したように、様々な固形腫瘍について、ｈｕＬＲＲＣ１５は、腫瘍間質微小環境において発現され、並びにがん細胞自体に発現される。本明細書において提供されるデータは、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣが、インビボでこれらの間質（＋）／がん（＋）腫瘍に対して強力な抗腫瘍活性を発揮することを実証する。したがって、ＡＤＣ及び／又はＡＤＣを含む医薬組成物は、間質（＋）／がん（＋）腫瘍の処置に治療的に使用され得る。
【０２７０】
一般的に、この方法は、間質（＋）／がん（＋）腫瘍を有するヒト患者に、治療上の利益を提供するのに有効な量の抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを投与することを伴う。ＡＤＣを用いて治療することができる間質（＋）／がん（＋）腫瘍には、限定されないが、脳がん、（例えば、神経膠腫、例えば、神経膠芽腫）、肉腫（例えば、骨肉腫、軟部組織肉腫、脂肪肉腫、平滑筋肉腫、滑膜肉腫、横紋筋肉腫、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、上皮肉腫、ユーイング肉腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、未分化多形肉腫、未分化紡錘形肉腫、軟骨肉腫、間葉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、血管肉腫、カポジ肉腫、子宮肉腫）、黒色腫、及び間葉腫瘍である。間葉腫瘍は、良性又は悪性（すなわち、肉腫）のいずれかであり得、多数の身体器官において生じ得る（例えば、乳房、肺、膵臓、脳又は胃の間葉性腫瘍）。がんは、新たに診断されたものであっても、治療を受けたことがないものであっても、又は再発性、難治性、又は再発性及び難治性のものであってもよく、又はｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍の転移形態であってもよい。実際には、図１８Ａ〜図１８Ｃにおいて実証されているように、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、様々な間質（＋）／がん（＋）腫瘍に対する抗がん剤の標準ケアよりも、有効である。
【０２７１】
理論に縛られることを望まないが、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、上皮間葉移行（ＥＭＴ）を受け、間葉表現型のような幹細胞様特性を獲得したがん細胞を死滅させることによって部分的に抗腫瘍効果を示し得る。本明細書中に与えられたデータは、間葉様特性を獲得したがん細胞が、上皮特性を有する細胞より高いｈｕＬＲＲＣ１５発現を示すことを指示した（図１０及び１１Ａ〜１１Ｃ）。ＥＭＴ移行を受けたがん細胞は、上皮がん細胞よりも抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣに対してより感受性であった（図１３Ｊ）。より高い死滅効果は、部分的には、ＡＤＣのＬＲＲＣ１５発現細胞への局在、その後の細胞毒性剤の放出に起因する可能性がある。
【０２７２】
また、図９Ａ〜図９Ｃは、腫瘍微小環境に局在化し、腫瘍間質の一部を形成すると仮定された骨髄由来の間葉系幹細胞は、顕著なｈｕＬＲＲＣ１５発現を示すことを実証する（Ｋａｒｎｏｕｂ、ＡＥら、Ｎａｔｕｒｅ、（２００７年）、４４９巻、５５７〜５６３頁；Ｄｒｏｕｊｉｎｉｎｅ、  ＩＡら、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ（２０１３年）、４巻（５号）、６５１〜６６４頁）。さらに、有意なｈｕＬＲＲＣ１５発現が、これらの間葉系幹細胞においてＴＧＦβによって誘導され得る。有意なレベルのＬＲＲＣ１５を発現するためにＴＧＦβで刺激された骨髄間葉系幹細胞（ＢＭ−ＭＳＣ）は、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣによる死滅に対して感受性であった（図１３Ｈ及び１３Ｉ）。死滅効果は、部分的には、ＡＤＣによるＬＲＲＣ１５発現細胞への局在化、続いて細胞毒性剤の放出の結果であり得る。図１３Ｈ及び１３Ｉは、間葉系幹細胞を直接死滅させ、そして細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤の放出を介したバイスタンダー効果により間葉系幹細胞に近接したがん細胞を死滅させ得る抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを、間葉系幹細胞が取り込みそして処理することができることを、実証している。
【０２７３】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、単独で（単独療法）投与されてもよく、又は他の抗がん療法及び／又は標的化されたか若しくは標的化されていない抗がん療法に対して補助的に又はそれとともに投与されてもよい。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ単独療法として投与される場合、１つ以上の抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを使用することができる。単独療法として投与されるか、又は他の療法若しくは薬剤に対して補助的に又はそれとともに投与されるかどうかにかかわらず、一定量の抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、全体的な治療レジメンが治療上の利益を与えるように投与される。
【０２７４】
治療上の利益とは、患者におけるがんを治療するための抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの使用が、治療なし（適切な場合）又は公知の標準治療と比較して、生存の実証された改善をもたらすことを意味する。いくつかの場合において、治療上の利益は、症状又は生活の質の改善とともに、疾患進行までの時間の改善を構成し得る。他の場合において、治療上の利益は、疾患制御期間の延長につながるわけではなく、むしろ症状の苦しみを著しく軽減することによって改善された生活の質をもたらす場合がある。当業者には明らかなように、治療上の利益は、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを単独（単独療法）で用いるか、又は他の抗がん療法及び／又は標的化された若しくは標的化されていない抗がん剤に対して補助的に又はそれとともに併用して用いて観察され得る。
【０２７５】
典型的には、治療上の利益は、がんの新たな治療に対する応答を測定するために設計された標準的な臨床試験を用いて評価される。本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの治療上の利益を評価するために、以下の試験の１つ以上の組合せを使用することができる：（１）固形腫瘍における応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）バージョン１．１、（２）免疫関連ＲＥＣＩＳＴ（ｉｒＲＥＣＩＳＴ）、（３）米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）パフォーマンス・ステイタス、（４）免疫関連の反応基準（ｉｒＲＣ）、（５）腫瘍抗原の評価によって評価可能な疾患、（６）有効な患者報告のアウトカムスケール、及び／又は（７）全生存期間及び無増悪生存期間のカプラン−マイヤー推定値。
【０２７６】
腫瘍負荷の変化の評価は、がん療法の臨床評価の重要な特徴である。がんの臨床試験において、腫瘍縮小（客観的な反応）と疾患進行の発生の両方は重要なエンドポイントである。ＲＥＣＩＳＴ（固形腫瘍の応答評価基準）として知られている標準化された対応基準は、２０００年に公表された。更新（ＲＥＣＩＳＴ  １．１）は２００９年になされた。ＲＥＣＩＳＴ基準は、典型的には、客観的な対応が主な研究エンドポイントである臨床試験において、並びに安定した疾患の評価、腫瘍の進行又は無増悪期間の分析が行われる試験において使用される。これは、これらの結果の尺度が、解剖学的腫瘍負荷の評価及び試験の経過におけるその変化に基づいているためである。表３は、本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣのような研究薬物に対する客観的な腫瘍応答を決定するために使用される応答基準の定義を提供する。
【０２７７】
【表８】
2019501124.tif 000054
【０２７８】
本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの治療上の利益を決定するために使用され得る二次結果尺度には、客観的回答率（ＯＲＲ）、無進行生存率（ＰＦＳ）、全生存率（ＯＳ）、全体的な応答の持続時間（ＤＯＲ）、及び応答の深さ（ＤｐＲ）が含まれる。ＯＲＲは、完全応答（ＣＲ）又は部分応答（ＰＲ）を達成した参加者の割合として定義される。ＰＦＳは、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの最初の投与日から疾患進行又は死亡までの時間のいずれか早いほうまでの時間として定義される。ＯＳは、疾患の診断日又は治療開始日からの時間の長さとして定義され、疾患と診断された患者はまだ生きている。ＤＯＲは、参加者の初期ＣＲ又はＰＲから疾患進行の時間までの時間として定義される。ＤｐＲは、ベースライン腫瘍負荷と比較して、最大応答点で観察された腫瘍縮小の割合として定義される。ＯＲＲとＰＦＳの両方の臨床エンドポイントは、上記のＲＥＣＩＳＴ  １．１基準に基づいて決定することができる。
【０２７９】
免疫療法治療を受けているがん患者に特有の臨床評価のために使用され得るさらなる基準には、標準化された免疫関連ＲＥＣＩＳＴ（ｉｒＲＥＣＩＳＴ）基準が含まれる。例えば、Ｎｉｓｈｉｎｏ、Ｍ．ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｒａｄｉｏｌ．、８４巻（７号）、１２５９〜１２６８頁（２０１５年７月）を参照されたい。これらのガイドラインは、潜在的な免疫調節効果を考慮して上記のＲＥＣＩＳＴ  １．１基準を変更した。表５は、本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣのような免疫調節薬に対する客観的な腫瘍応答を決定するために使用される応答基準の定義を与える。
【０２８０】
【表９】
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【０２８１】
表５に示されるパフォーマンス・ステイタスのＥＣＯＧスケールは、患者自身のケア能力、毎日の活動及び身体能力の点で患者の機能レベルを説明するために使用される。このスケールは、現在のＥＣＯＧ−ＡＣＲＩＮがんリサーチグループの一部であるＥａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）によって開発され、１９８２年に公開された。
【０２８２】
【表１０】
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【０２８３】
抗体に基づくがん療法などの、免疫療法剤に対する応答を完全に特徴付け、及びそれへの応答を決定するために使用することができる基準の別のセットは、２００９年における固形腫瘍の測定について開発され、２０１３年に更新された免疫関連応答基準（ｉｒＲＣ）（各々が参照により全体が本明細書に組み込まれるＷｏｌｃｈｏｋら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００９年；１５巻（２３号）：７４１２〜７４２０頁、Ｎｉｓｈｉｎｏら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２０１３年；１９巻（１４号）：３９３６〜３９４３頁）である。更新されたｉｒＲＣ基準は、典型的には、腫瘍負荷に対する、本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣなどの免疫療法剤の効果を評価するために使用され、表６に記載されている応答を定義する。
【０２８４】
【表１１】
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【０２８５】
本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの治療上の利益を評価するために使用することができる腫瘍抗原には、ＡｐｏＥ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ４０、ＣＤ４５（ＰＴＰＲＣ）、ＣＤ４９Ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ８０、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＴＳＤ、ＧＺＭＢ、Ｌｙ８６、ＭＳ４Ａ７、ＰＩＫ３ＡＰ１、ＰＩＫ３ＣＤ、ＣＤ７４、ＣＣＬ５、ＣＣＲ５、ＣＸＣＬ１０、ＩＦＮＧ、ＩＬ１０ＲＡ１、ＩＬ−６、ＡＣＴＡ２、ＣＯＬ７Ａ１、ＬＯＸ、ＬＲＲＣ１５、ＭＣＰＴ８、ＭＭＰ１０、ＮＯＧ、ＳＥＲＰＩＮＥ１、ＳＴＡＴ１、ＴＧＦＢＲ１、ＣＴＳＳ、ＰＧＦ、ＶＥＧＦＡ、Ｃ１ＱＡ、Ｃ１ＱＢ、ＡＮＧＰＴＬ４、ＥＧＬＮ、ＡＮＧＰＴＬ４、ＥＧＬＮ３、ＢＮＩＰ３、ＡＩＦ１、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＩＦＩ６、ＰＬＯＤ２、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＳＴＣ２、ＤＤＩＴ４、ＰＦＫＦＢ３、ＰＧＫ１、ＰＤＫ１、ＡＫＲ１Ｃ１、ＡＫＲ１Ｃ２、ＣＡＤＭ１、ＣＤＨ１１、ＣＯＬ６Ａ３、ＣＴＧＦ、ＨＭＯＸ１、ＫＲＴ３３Ａ、ＬＵＭ、ＷＮＴ５Ａ、ＩＧＦＢＰ３、ＭＭＰ１４、ＣＤＣＰ１、ＰＤＧＦＲＡ、ＴＣＦ４、ＴＧＦ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＣＤ１１ｂ、ＡＤＧＲＥ１（ＥＭＲ１、Ｆ４／８０）、ＣＤ８６、ＣＤ６８、ＭＨＣ−クラスＩＩ、ＣＤ３、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ４、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＴＣＲαβ、ＴＣＲγδ、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＣＴＬＡ−４、酸性ホスファターゼ、ＡＣＴＨ、アルカリホスファターゼ、アルファ−フェトプロテインＣＡ−１２５、ＣＡ１５−３、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１９５、Ｃ−２１２、ＣＡ−５４９、カルシトニン、カテコールアミン、カテプシンＤ、ＣＥＡ、ＥＲＢＢ２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、クロマグラニン−Ａ、ｃ−Ｍｙｃ、ＥＧＦＲ、ＥＲＡ（エストロゲン受容体アッセイ）、フェリチン、ガストリン、５−ＨＩＡＡ、ｈＣＧ、アルファ−ＨＣＧ、ベータ−ＨＣＧ、ＨＶＡ、ＬＤＨ１−５、ＮＳＥ（ニューロン特異的エノラーゼ）、膵ポリペプチド、ＰＬＡＰ、ＰＬＰ、ＰＲＡ（プロゲステロン受容体Ａ）、プロインスリンＣペプチド、ＰＳＡ、ＳＭＡ、ＳＣＣ、チログロブリン、ＴＤＴ、ＴＰＡ、及びアルファ−ＴＳＨが含まれる。これらの抗原は、ＤＮＡシーケンシング技術、ＲＮＡシーケンシング技術、遺伝子チップマイクロアレイ、ＰＣＲベースの方法、フローサイトメトリー又は当業者に知られている免疫組織化学法を用いて、ＤＮＡ、ＲＮＡ又はタンパク質レベルで評価することができる。
【０２８６】
間質（＋）／がん（＋）腫瘍を治療するための、本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの使用から生じる一例の治療上の利益は、単独療法として投与されるか又は他の療法若しくは薬剤に対して補助的に又はそれとともに併投与されるかどうかにかかわらず、完全な応答である。間質（＋）／がん（＋）腫瘍を治療するための、本明細書に記載されている抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの使用から生じる別の例示的な治療上の利益は、単独療法として投与されるか又は他の療法若しくは薬剤に対して補助的に又はそれとともに投与されるかどうかにかかわらず、部分的な応答である。
【０２８７】
検証された患者報告のアウトカムスケールはまた、特定の報告システムを介して各患者が提供する応答を示すために使用することができる。病気に焦点を当てるというのではなく、このようなアウトカムスケールは、慢性状態を管理しながら、機能を維持することに関係している。検証された患者報告のアウトカムスケールの１つの非限定的な例は、米国国立衛生研究所からのＰＲＯＭＩＳ（登録商標）（患者報告のアウトカム測定情報システム）である。例えば、成人がん患者のためのＰＲＯＭＩＳ（登録商標）身体機能計測器は、上肢（例えば、器用さ）、下肢（例えば、歩行又は移動）、及び中枢領域（例えば、首、背中の可動性）の機能について自己報告した能力を評価することができ、また、お使いのなどの日常的な活動を含む。
【０２８８】
カプラン−マイヤー曲線（Ｋａｐｌａｎ及びＭｅｉｅｒ、Ｊ．Ａｍ．Ｓｔａｔ．Ａｓｓｏｃ．、１９５８年；５３巻（２８２号）：４５７〜４８１頁）もまた、標準治療と比較して、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体又はＡＤＣ療法を受けているがん患者の全生存期間及び無増悪生存期間を推定するために使用することができる。
【０２８９】
７．７．１．補助的療法
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、抗がん特性を有する他の薬剤若しくは治療に対して補助的に又はそれとともに使用することができる。補助的に使用される場合、抗ｈｕＬＲＲＣ１５及び他の薬剤（単数又は複数）は、単一の組合せ医薬製剤に一緒に製剤化されてもよく、又は単一の協調された投与レジメン若しくは異なる投薬レジメンのいずれかで個別に製剤化及び投与されてもよい。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣとともに補助的に投与される薬剤は、典型的には、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣに対して相補的な活性を有し、そのため、ＡＤＣ及び他の薬剤が互いに悪影響を及ぼさない。
【０２９０】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣとともに補助的に使用され得る薬剤としては、限定されないが、アルキル化剤、血管新生阻害剤、抗生物質、代謝拮抗剤、有糸分裂阻害剤、抗増殖剤、抗ウイルス剤、オーロラキナーゼ阻害剤、アポトーシス促進剤（例えば、Ｂｃｌファミリー阻害剤）、死受容体経路の活性化剤、Ｂｃｒ−Ａｂ１キナーゼ阻害剤、ＢｉＴＥ（二重特異性Ｔ細胞係合作用因子（Ｂｉ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｅｎｇａｇｅｒ））抗体、抗体薬物コンジュゲート体、生物反応修飾物質、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、細胞周期阻害剤、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、ＤＶＤ、白血病ウイルス発癌遺伝子相同体（ＥｒｂＢ２）受容体阻害剤、増殖因子阻害剤、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）−９０阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、ホルモン療法剤、免疫剤、アポトーシスタンパク質阻害物質（ＩＡＰ）の阻害剤、インターカレート抗生物質、キナーゼ阻害剤、キネシン阻害剤、Ｊａｋ２阻害剤、ラパマイシン阻害剤の哺乳動物標的、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、マイトジェン活性化細胞外シグナル調節キナーゼ阻害剤、多価結合性タンパク質、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ポリＡＤＰ（アデノシンジホスフェート）−リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤、白金化学療法薬、ポロ様キナーゼ（Ｐｌｋ）阻害剤、ホスホイノシチド−３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤、プロテアソーム阻害剤、プリン類似体、ピリミジン類似体、受容体チロシンキナーゼ阻害剤、レチノイド／デルトイド植物体アルカロイド、阻害性小分子リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）、トポイソメラーゼ阻害剤、ユビキチンリガーゼ阻害剤など、及びこれらの薬剤の１つ以上の組合せが挙げられる。
【０２９１】
ＢｉＴＥ抗体は、Ｔ細胞とがん細胞の２つの細胞に同時に結合することによってＴ細胞をがん細胞に攻撃するように指向させる二重特異性抗体である。次に、Ｔ細胞は標的がん細胞を攻撃する。ＢｉＴＥ抗体の例としては、アデカツムマブ（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ  ＭＴ２０１）、ブリナツモマブ（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ  ＭＴ１０３）などが挙げられる。理論によって制限されることなく、Ｔ細胞が標的がん細胞のアポトーシスを誘発するメカニズムの１つは、パーフォリン及びグランザイムＢを含む細胞溶解性顆粒成分のエキソサイトーシスによる。
【０２９２】
ｓｉＲＮＡは、内因性ＲＮＡ塩基又は化学的に修飾されたヌクレオチドを有する分子である。この修飾は、細胞活性を無効にするものではないが、むしろ、安定性の増大及び／又は細胞効力の増大を賦与するものである。化学的修飾の例としては、ホスホロチオエート基、２’−デオキシヌクレオチド、２’−ＯＣＨ３含有リボヌクレオチド、２’−Ｆ−リボヌクレオチド、２’−メトキシエチルリボヌクレオチド、これらの組合せが挙げられる。このｓｉＲＮＡは、様々な長さ（例えば、１０〜２００ｂｐ）及び構造（例えば、ヘアピン、一重鎖／二重鎖、バルジ、ニック／ギャップ、ミスマッチ）を有し得、細胞中でプロセッシングされて、活性遺伝子のサイレンシングをもたらす。二重鎖ｓｉＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）は、同数のヌクレオチドをそれぞれの鎖（平滑末端）又は非対称末端（オーバーハング）に有し得る。この１〜２個のヌクレオチドのオーバーハングは、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖に存在することができ、並びに所与の鎖の５’末端及び／又は３’末端に存在し得る。
【０２９３】
多価結合性タンパク質は、２つ以上の抗原結合部位を含む結合性タンパク質である。多価結合性タンパク質は、３つ以上の抗原結合部位を有するように遺伝子操作され、一般的には、天然に存在する抗体ではない。用語「多重特異性結合性タンパク質」とは、２つ以上の関係する標的又は関係しない標的に結合することができる結合性タンパク質を意味する。デュアル可変ドメイン（ＤＶＤ）結合性タンパク質は、２つ以上の抗原結合部位を含む四価又は多価結合性タンパク質である。このようなＤＶＤは、単一特異性（すなわち、１つの抗原に結合することができる）又は多重特異性（すなわち、２つ以上の抗原に結合することができる）であり得る。２つの重鎖ＤＶＤポリペプチド及び２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むＤＶＤ結合性タンパク質は、ＤＶＤ  Ｉｇと呼ばれる。それぞれの半分のＤＶＤ  Ｉｇは、１つの重鎖ＤＶＤポリペプチド、１つの軽鎖ＤＶＤポリペプチド、及び２つの抗原結合部位を含む。それぞれの結合部位は、１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインを含み、１つの抗原結合部位あたり全部で６つのＣＤＲが抗原結合に関与している。
【０２９４】
アルキル化剤としては、限定されないが、アルトレタミン、ＡＭＤ−４７３、ＡＰ−５２８０、アパジクオン、ベンダムスチン、ブロスタリシン、ブスルファン、カルボコン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、クロラムブシル、ＣＬＯＲＥＴＡＺＩＮＥ（登録商標）（ラロムスチン、ＶＮＰ４０１０１Ｍ）、シクロホスファミド、デカルバジン、エストラムスチン、フォテムスチン、グルフォスファミド、イホスファミド、ＫＷ−２１７０、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、マフォスファミド、メルファラン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ニムスチン、ナイトロジェンマスタードＮ−オキサイド、ラニムスチン、テモゾロマイド、チオテパ、ＴＲＥＡＮＤＡ（登録商標）（ベンダムスチン）、トレオスルファン、及びトロフォスファミドが挙げられる。
【０２９５】
血管新生阻害剤としては、限定されないが、内皮特異的受容体チロシンキナーゼ（Ｔｉｅ−２）阻害剤、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、インスリン増殖因子−２受容体（ＩＧＦＲ−２）阻害剤、マトリクスメタロプロテアーゼ−２（ＭＭＰ−２）阻害剤、マトリックスメタロプロテアーゼ−９（ＭＭＰ−９）阻害剤、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）阻害剤、トロンボスポンジン類似体、及び血管上皮増殖因子受容体チロシンキナーゼ（ＶＥＧＦＲ）阻害剤が挙げられる。
【０２９６】
代謝拮抗剤としては、限定されないが、ＡＬＩＭＴＡ（登録商標）（ペメトレキセド二ナトリウム、ＬＹ２３１５１４、ＭＴＡ）、５−アザシチジン、ＸＥＬＯＤＡ（登録商標）（カペシタビン）、カルモフール、ＬＥＵＳＴＡＴ（登録商標）（クラドリビン）、クロファラビン、シタラビン、シタラビンオクホスファート、シトシンアラビノシド、デシタビン、デフェロキサミン、ドキシフルリジン、エフロルニチン、ＥＩＣＡＲ（５−エチニル−１−β−Ｄ−リボフラノシルイミダゾール−４−カルボキサミド）、エノシタビン、エトニルシチジン、フルダラビン、５−フルオロウラシル単独若しくはロイコボリンとの併用、ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）（ゲムシタビン）、ヒドロキシ尿素、ＡＬＫＥＲＡＮ（登録商標）（メルファラン）、メルカプトプリン、６−メルカプトプリンリボシド、メトトレキセート、ミコフェノール酸、ネララビン、ノラトレキセド、オクフォセート、ペリトレキソール、ペントスタチン、ラルチトレキセード、リバビリン、トリアピン、トリメトレキセート、Ｓ−１、チアゾフリン、テガフール、ＴＳ−１、ビダラビン、及びＵＦＴが挙げられる。
【０２９７】
抗ウイルス剤としては、限定されないが、リトナビル、アシクロビル、シドフォビル、ガンシクロビル、フォスカーネット、ジドブジン、リバビリン、及びヒドロキシクロロキンが挙げられる。
【０２９８】
オーロラキナーゼ阻害剤としては、限定されないが、ＡＢＴ−３４８、ＡＺＤ−１１５２、ＭＬＮ−８０５４、ＶＸ−６８０、オーロラＡ特異的キナーゼ阻害剤、オーロラＢ特異的キナーゼ阻害剤及びパンオーロラキナーゼ阻害剤が挙げられる。
【０２９９】
Ｂｃｌ−２タンパク質阻害剤としては、限定されないが、ＡＴ−１０１（（−）ゴシポール）、ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標）（Ｇ３１３９又はオブリメルセン（Ｂｃｌ−２標的アンチセンスオリゴヌクレオチド））、ＩＰＩ−１９４、ＩＰＩ−５６５、Ｎ−（４−（４−（（４’−クロロ（１，１’−ビフェニル）−２−イル）メチル）ピペラジン−１−イル）ベンゾイル）−４−（（（１Ｒ）−３−（ジメチルアミノ）−１−（（フェニルスルファニル）メチル）プロピル）アミノ）−３−ニトロベンゼンスルホンアミド）、Ｎ−（４−（４−（（２−（４−クロロフェニル）−５，５−ジメチル−１−シクロヘキサ−１−エン−１−イル）メチル）ピペラジン−１−イル）ベンゾイル）−４−（（（１Ｒ）−３−（モルホリン−４−イル）−１−（（フェニルスルファニル）メチル）プロピル）アミノ）−３−（（トリフルオロメチル）スルホニル）ベンゼンスルホンアミド、ベネトクラックス、及びＧＸ−０７０（オバトクラックス）が挙げられる。
【０３００】
Ｂｃｒ−Ａｂ１キナーゼ阻害剤としては、限定されないが、ＤＡＳＡＴＩＮＩＢ（登録商標）（ＢＭＳ−３５４８２５）及びＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）（イマチニブ）が挙げられる。
【０３０１】
ＢＲＡＦキナーゼ阻害剤には、限定されないが、ＴＡＦＩＮＬＡＲ（登録商標）（ダブラフェニブ）及びＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標）（ベムラフェニブ）が含まれる。
【０３０２】
ＣＤＫ阻害剤としては、限定されないが、ＡＺＤ−５４３８、ＢＭＩ−１０４０、ＢＭＳ−０３２、ＢＭＳ−３８７、ＣＶＴ−２５８４、フラボピリドール、ＧＰＣ−２８６１９９、ＭＣＳ−５Ａ、ＰＤ０３３２９９１、ＰＨＡ−６９０５０９、セリシクリブ（ＣＹＣ−２０２、Ｒ−ロスコビチン）、及びＺＫ−３０４７０９が挙げられる。
【０３０３】
ＣＯＸ−２阻害剤としては、限定されないが、ＡＢＴ−９６３、ＡＲＣＯＸＩＡ（登録商標）（エトリコキシブ）、ＢＥＸＴＲＡ（登録商標）（バルデコキシブ）、ＢＭＳ３４７０７０、ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）（セレコキシブ）、ＣＯＸ−１８９（ルミラコキシブ）、ＣＴ−３、ＤＥＲＡＭＡＸＸ（登録商標）（デラコキシブ）、ＪＴＥ−５２２、４−メチル−２−（３、４−ジメチルフェニル）−１−（４−スルファモイルフェニル−１Ｈ−ピロール）、ＭＫ−６６３（エトリコキシブ）、ＮＳ−３９８、パレコキシブ、ＲＳ−５７０６７、ＳＣ−５８１２５、ＳＤ−８３８１、ＳＶＴ−２０１６、Ｓ−２４７４、Ｔ−６１４、ＶＩＯＸＸ（登録商標）（ロフェコキシブ）が挙げられる。
【０３０４】
ＥＧＦＲ阻害剤としては、限定されないが、ＡＢＸ−ＥＧＦ、抗ＥＧＦＲ免疫リポゾーム、ＥＧＦ−ワクチン、ＥＭＤ−７２００、ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）（セテュキマブ）、ＨＲ３、ＩｇＡ抗体、ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）（ゲフィチニブ）、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）（エルロチニブ又はＯＳＩ−７７４）、ＴＰ−３８、ＥＧＦＲ融合タンパク質、及びＴＹＫＥＲＢ（登録商標）（ラパチニブ）が挙げられる。
【０３０５】
ＥｒｂＢ２受容体阻害剤としては、限定されないが、ＣＰ−７２４−７１４、ＣＩ−１０３３（カネルチニブ）、ハーセプチン（登録商標）（トラスツズマブ）、ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）（ラパチニブ）、ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標）（２Ｃ４、ペルツズマブ）、ＴＡＫ−１６５、ＧＷ−５７２０１６（イオナファミブ）、ＧＷ−２８２９７４、ＥＫＢ−５６９、ＰＩ−１６６、ｄＨＥＲ２（ＨＥＲ２ワクチン）、ＡＰＣ−８０２４（ＨＥＲ−２ワクチン）、ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（Ｔ−ＤＭ１）、抗ＨＥＲ／２ｎｅｕ二重特異性抗体、Ｂ７．ｈｅｒ２ＩｇＧ３、ＡＳＨＥＲ２三官能性二重特異性抗体、ｍＡＢＡＲ−２０９、及びｍＡＢ２Ｂ−１が挙げられる。
【０３０６】
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤としては、限定されないが、デプシペプチド、ＬＡＱ−８２４、ＭＳ−２７５、トラポキシン、スベロイラニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、ＴＳＡ、バルプロ酸が挙げられる。
【０３０７】
ＨＳＰ−９０阻害剤としては、限定されないが、１７−ＡＡＧ−ｎａｂ、１７−ＡＡＧ、ＣＮＦ−１０１、ＣＮＦ−１０１０、ＣＮＦ−２０２４、１７−ＤＭＡＧ、ゲルダナマイシン、ＩＰＩ−５０４、ＫＯＳ−９５３、ＭＹＣＯＧＲＡＢ（登録商標）（ＨＳＰ−９０に対するヒト組換え抗体）、ＮＣＳ−６８３６６４、ＰＵ２４ＦＣ１、ＰＵ−３、ラジシコール、ＳＮＸ−２１１２、ＳＴＡ−９０９０、及びＶＥＲ４９００９が挙げられる。
【０３０８】
アポトーシスタンパク質の阻害剤としては、限定されないが、ＨＧＳ１０２９、ＧＤＣ−０１４５、ＧＤＣ−０１５２、ＬＣＬ−１６１、及びＬＢＷ−２４２が挙げられる。
【０３０９】
死受容体経路の活性化剤としては、限定されないが、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ又は死受容体（例えば、ＤＲ４及びＤＲ５）を標的とする抗体又は他の薬剤、例えば、Ａｐｏｍａｂ、コナツムマブ、ＥＴＲ２−ＳＴ０１、ＧＤＣ０ｌ４５（レキサツムマブ）、ＨＧＳ−１０２９、ＬＢＹ−１３５、ＰＲＯ−１７６２及びトラツズマブが挙げられる。
【０３１０】
キネシン阻害剤としては、限定されないが、ＡＺＤ４８７７、ＡＲＲＹ−５２０のようなＥｇ５阻害剤；及びＧＳＫ９２３２９５ＡのようなＣＥＮＰＥ阻害剤が含まれる。
【０３１１】
ＪＡＫ−２阻害剤としては、限定されないが、ＣＥＰ−７０１（レスアウルチニブ）、ＸＬ０１９及びＩＮＣＢ０１８４２４が挙げられる。
【０３１２】
ＭＥＫ阻害剤としては、限定されないが、ＡＲＲＹ−１４２８８６、ＡＲＲＹ−４３８１６２、ＰＤ−３２５９０１、及びＰＤ−９８０５９が挙げられる。
【０３１３】
ｍＴＯＲ阻害剤としては、限定されないが、ＡＰ−２３５７３、ＣＣＩ−７７９、エベロリムス、ＲＡＤ−００１、ラパマイシン、テムシロリムス、ＡＴＰ競合性ＴＯＲＣ１／ＴＯＲＣ２阻害剤、例えば、ＰＩ−１０３、ＰＰ２４２、ＰＰ３０、及びＴｏｒｉｎ  １が挙げられる。
【０３１４】
非ステロイド系抗炎症薬としては、限定されないが、ＡＭＩＧＥＳＩＣ（登録商標）（サルサレート）、ＤＯＬＯＢＩＤ（登録商標）（ジフルニサル）、ＭＯＴＲＩＮ（登録商標）（イブプロフェン）、ＯＲＵＤＩＳ（登録商標）（ケトプロフェン）、ＲＥＬＡＦＥＮ（登録商標）（ナブメトン）、ＦＥＬＤＥＮＥ（登録商標）（ピロキシカム）、イブプロフェンクリーム、ＡＬＥＶＥ（登録商標）（ナプロキセン）及びＮＡＰＲＯＳＹＮ（登録商標）（ナプロキセン）、ＶＯＬＴＡＲＥＮ（登録商標）（ジクロフェナク）、ＩＮＤＯＣＩＮ（登録商標）（インドメタシン）、ＣＬＩＮＯＲＩＬ（登録商標）（スリンダク）、ＴＯＬＥＣＴＩＮ（登録商標）（トルメチン）、ＬＯＤＩＮＥ（登録商標）（エトドラク）、ＴＯＲＡＤＯＬ（登録商標）（ケトロラク）、及びＤＡＹＰＲＯ（登録商標）（オキサプロジン）が挙げられる。
【０３１５】
ＰＤＧＦＲ阻害剤としては、限定されないが、Ｃ−４５１、ＣＰ−６７３及びＣＰ−８６８５９６が挙げられる。
【０３１６】
白金系化学療法薬としては、限定されないが、シスプラチン、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標）（オキサリプラチン）、エプタプラチン、ロバプラチン、ネダプラチン、ＰＡＲＡＰＬＡＴＩＮ（登録商標）（カルボプラチン）、サトラプラチン及びピコプラチンが挙げられる。
【０３１７】
ポロ様キナーゼ阻害剤としては、限定されないが、ＢＩ−２５３６が挙げられる。
【０３１８】
ホスホイノシチド−３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤としては、限定されないが、ワートマニン、ＬＹ２９４００２、ＸＬ−１４７、ＣＡＬ−１２０、ＯＮＣ−２１、ＡＥＺＳ−１２７、ＥＴＰ−４５６５８、ＰＸ−８６６、ＧＤＣ−０９４１、ＢＧＴ２２６、ＢＥＺ２３５、及びＸＬ７６５が挙げられる。
【０３１９】
トロンボスポンジン類似体としては、限定されないが、ＡＢＴ−５１０、ＡＢＴ−５６７、ＡＢＴ−８９８、及びＴＳＰ−１が挙げられる。
【０３２０】
ＶＥＧＦＲ阻害剤としては、限定されないが、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（ベバシズマブ）、ＡＢＴ−８６９、ＡＥＥ−７８８、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（商標）（血管新生を阻害するリボザイム（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｂｏｕｌｄｅｒ、ＣＯ．）及びＣｈｉｒｏｎ（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ））、アキシチニブ（ＡＧ−１３７３６）、ＡＺＤ−２１７１、ＣＰ−５４７、６３２、ＩＭ−８６２、ＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標）（（ペガプタミブ）、ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）（ソラフェニブ、ＢＡＹ４３−９００６）、パゾパニブ（ＧＷ−７８６０３４）、バタラニブ（ＰＴＫ−７８７、ＺＫ−２２２５８４）、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）（スニチニブ、ＳＵ−１１２４８）、ＶＥＧＦトラップ、及びＺＡＣＴＩＭＡ（商標）（バンデタニブ、ＺＤ−６４７４）が挙げられる。
【０３２１】
抗生物質としては、限定されないが、インターカレート抗生物質であるアクラルビシン、アクチノマイシンＤ、アムルビシン、アンナマイシン、アドリアマイシン、ＢＬＥＮＯＸＡＮＥ（登録商標）（ブレオマイシン）、ダウノルビシン、ＣＡＥＬＹＸ（登録商標）又はＭＹＯＣＥＴ（登録商標）（リポソーマルドキソルビシン）、エルサミツルシン、エピルビシン、グラルブイシン、ＺＡＶＥＤＯＳ（登録商標）（イダルビシン）、マイトマイシンＣ、ネモルビシン、ネオカルチノスタチン、ペプロマイシン、ピラルビシン、レベッカマイシン、スチマラマー、ストレプトゾシン、ＶＡＬＳＴＡＲ（登録商標）（バルルビシン）、及びジノスタチンが挙げられる。
【０３２２】
トポイソメラーゼ阻害剤としては、限定されないが、アクラルビシン、９−アミノカンプトセシン、アモナフィド、アムサクリン、ベカテカリン、ベロテカン、ＢＮ−８０９１５、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）（イリノテカン塩酸塩）、カンプトセシン、ＣＡＲＤＩＯＸＡＮＥ（登録商標）（デクスラゾキシン）、ジフロモテカン、エドテカリン、ＥＬＬＥＮＣＥ（登録商標）又はＰＨＡＲＭＯＲＵＢＩＣＩＮ（登録商標）（エピルビシン）、エトポシド、エキサテカン、１０−ヒドロキシカンプトセシン、ジマテカン、ルルトテカン、ミトキサントロン、Ｏｎｉｖｙｄｅ（商標）（リポソームイリノテカン）、オラテシン、ピラルビシン、ピキサントロン、ルビテカン、ソブゾキサン、ＳＮ−３８、タフルポシド、及びトポテカンが挙げられる。
【０３２３】
抗体としては、限定されないが、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（ベバシズマブ）、ＣＤ４０特異抗体、ｃｈＴＮＴ−１／Ｂ、デノスマブ、ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）（セテュキシマブ）、ＨＵＭＡＸ−ＣＤ４（登録商標）（ザノリムマブ）、ＩＧＦ１Ｒ特異抗体、リンツズマブ、ＰＡＮＯＲＥＸ（登録商標）（エドレコロマブ）、ＲＥＮＣＡＲＥＸ（登録商標）（ＷＸＧ２５０）、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）（リツキシマブ）、チシリムマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）（パニツムマブ）並びにＣＤ２０抗体タイプＩ及びＩＩなどが挙げられる。
【０３２４】
ホルモン療法薬としては、限定されないが、ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）（アナストロゾール）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）（エキセメスタン）、アルゾキシフェン、ＣＡＳＯＤＥＸ（登録商標）（ビカルタミド）、ＣＥＴＲＯＴＩＤＥ（登録商標）（セトロレリクス）、デガレリックス、デスロレリン、ＤＥＳＯＰＡＮ（登録商標）（トリロスタン）、デキサメタゾン、ＤＲＯＧＥＮＩＬ（登録商標）（フルタミド）、ＥＶＩＳＴＡ（登録商標）（ラロキシフェン）、ＡＦＥＭＡ（商標）（ファドロゾール）、ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）（トレミフェン）、ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）（フルベストラント）、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）（レトロゾール）、ホルメスタン、グルココルチコイド、ＨＥＣＴＯＲＯＬ（登録商標）（ドキセルカルシフェロール）、ＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）（セベラメルカルボネート）、ラソフォキシフェン、酢酸ロイプロリド、ＭＥＧＡＣＥ（登録商標）（メゲステロール）、ＭＩＦＥＰＲＥＸ（登録商標）（ミフェプリストン）、ＮＩＬＡＮＤＲＯＮＺ（商標）（ニルタミド）、ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）（クエン酸タモキシフェン）、ＰＬＥＮＡＸＩＳ（商標）（アバレリクス）、プレドニゾン、ＰＲＯＰＥＣＩＡ（登録商標）（フィナステリド）、リロスタン、ＳＵＰＲＥＦＡＣＴ（登録商標）（ブセレリン）、ＴＲＥＬＳＴＡＲ（登録商標）（黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ））、ＶＡＮＴＡＳ（登録商標）（ヒストレリンインプラント）、ＶＥＴＯＲＹＬ（登録商標）（トリロスタン又はモドラスタン）、及びＺＯＬＡＤＥＸ（登録商標）（フォスレリン、ゴセレリン）が挙げられる。
【０３２５】
デルトイド及びレチノイドとしては、限定されないが、セオカルシトール（ＥＢ１０８９、ＣＢ１０９３）、レクサカルシトロール（ＫＨ１０６０）、フェンレチニド、ＰＡＮＲＥＴＩＮ（登録商標）（アリレチノイン）、ＡＴＲＡＧＥＮ（登録商標）（リポソームトレチノイン）、ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標）（ベキサロテン）、及びＬＧＤ−１５５０が挙げられる。
【０３２６】
ＰＡＲＰ阻害剤としては、限定されないが、ＡＢＴ−８８８（ベリパリブ）、オラパリブ、ＫＵ−５９４３６、ＡＺＤ−２２８１、ＡＧ−０１４６９９、ＢＳＩ−２０１、ＢＧＰ−１５、ＩＮＯ−１００１、及びＯＮＯ−２２３１が挙げられる。
【０３２７】
植物体アルカロイドとしては、限定されないが、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、及びビノレルビンが挙げられる。
【０３２８】
プロテアソーム阻害剤としては、限定されないが、ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）（ボルテゾミブ）、ＫＹＰＲＯＬＩＳ（登録商標）（カルフィルゾミブ）、ＭＧ１３２、ＮＰＩ−００５２、及びＰＲ−１７１が挙げられる。
【０３２９】
免疫剤の例としては、インターフェロン、免疫チェックポイント阻害剤、共刺激剤、及び他の免疫増強剤が挙げられる。インターフェロンとしては、インターフェロンアルファ、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ−１ａ、ＡＣＴＩＭＭＵＮＥ（登録商標）（インターフェロンガンマ−１ｂ）又はインターフェロンガンマ−ｎ１、これらの組合せなどが挙げられる。免疫チェックポイント阻害剤には、ＰＤ−１（例えば、ペンブロリズマブ及びニボルマブ）、ＰＤ−Ｌ１（例えば、ドゥバレマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ及びＭＰＤＬ３２８０Ａ）、及びＣＴＬＡ４（細胞毒性リンパ球抗原４；例えば、イピリムマブ、トレメリムマブ）を標的とする抗体が含まれる。追加の例示的な抗ＰＤ−１抗体には、米国仮特許出願第６２／３９４，３１４号に記載されているものが含まれ、例えば、
【０３３０】
【化３４】
2019501124.tif 000058
に記載されている重鎖アミノ酸配列を有する抗ＰＤ−１抗体、及び
【０３３１】
【化３５】
2019501124.tif 000059
に記載されている軽鎖アミノ酸配列を有する抗ＰＤ−１抗体が挙げられ、下線が付されたアミノ酸はＣＤＲを表し、イタリック体のアミノ酸は定常領域を表す。
【０３３２】
共刺激剤としては、限定されないが、ＣＤ３、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ１３７（例えば、ウレルマブ）、Ｂ７Ｈ１、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＨＬＡ−ＤＲ、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ−Ｒ、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＮＫＧ２Ａ、ＫＩＲ（例えば、リリルマブ）、ＴＧＦ−β（例えば、フレゾリムマブ）に対する抗体、及びそれらの組合せが挙げられる。
【０３３３】
他の薬剤としては、限定されないが、ＡＬＦＡＦＥＲＯＮＥ（登録商標）（ＩＦＮ−α）、ＢＡＭ−００２（酸化グルタチオン）、ＢＥＲＯＭＵＮ（登録商標）（タソネルミン）、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）（トシツモマブ）、ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標）（アレムツズマブ）、ダカルバジン、デニロイキン、エプラツズマブ、ＧＲＡＮＯＣＹＴＥ（登録商標）（レノグラスチム）、レンチナン、白血球アルファインターフェロン、イミキモド、メラノーマワクチン、ミツモマブ、モルグラモスチム、ＭＹＬＯＴＡＲＧ（商標）（ゲムツズマブ  オゾガミシン）、ＮＥＵＰＯＧＥＮ（登録商標）（フィルグラスチム）、オンコＶＡＣ−ＣＬ、ＯＶＡＲＥＸ（登録商標）（オレゴボマブ）、ペムツモマブ（Ｙ−ｍｕＨＭＦＧ１）、ＰＲＯＶＥＮＧＥ（登録商標）（シプロイセル−Ｔ）、サルガラモツチム、シゾフィラン、テセロイキン、ＴＨＥＲＡＣＹＳ（登録商標）（バチルス・カルメット−ゲラン（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ））、ウベニメクス、ＶＩＲＵＬＩＺＩＮ（登録商標）（免疫治療剤、Ｌｏｒｕｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、Ｚ−１００（丸山の特異的物質（ＳＳＭ））、ＷＦ−１０（テトラクロロデカオキシド（ＴＣＤＯ））、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）（アルデスロイキン）、ＺＡＤＡＸＩＮ（登録商標）（サイマルファシン）、ＺＩＮＢＲＹＴＡ（登録商標）（ダクリズマブ高収率プロセス）、及びＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標）（９０Ｙ−イブリツモマブ・チウキセタン）が挙げられる。
【０３３４】
生体反応改変剤は、組織細胞の生存、増殖又は分化のような、生物の防衛機構又は生体反応を改変して、その生物が抗腫瘍活性を有するように誘導する薬剤であり、このようなものとしては、限定されないが、クレスチン、レンチナン、シゾフィラン、ピシバニルＰＦ−３５１２６７６（ＣｐＧ−８９５４）、ウベニメクスなどが挙げられる。
【０３３５】
ピリミジン類似体としては、限定されないが、シタラビン（ａｒａＣ又はアラビノシドＣ）、シトシンアラビノシド、ドキシフルリジン、ＦＬＵＤＡＲＡ（登録商標）（フルダラビン）、５−ＦＵ（５−フルオロウラシル）、フロクスウリジン、ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）（ゲムシタビン）、ＴＯＭＵＤＥＸ（登録商標）（ラチトレキセド）、ＴＲＯＸＡＴＹＬ（商標）（トリアセチルウリジン・トロキサシタビン）が挙げられる。
【０３３６】
プリン類似体としては、限定されないが、ＬＡＮＶＩＳ（登録商標）（チオグアニン）及びＰＵＲＩ−ＮＥＴＨＯＬ（登録商標）（メルカプトプリン）が挙げられる。
【０３３７】
有糸分裂阻害剤としては、限定されないが、バタブリン、エポチロンＤ（ＫＯＳ−８６２）、Ｎ−（２−（（４−ヒドロキシフェニル）アミノ）ピリジン−３−イル）−４−メトキシベンゼンスルホンアミド、イクサベピロン（ＢＭＳ２４７５５０）、ＴＡＸＯＬ（登録商標）（パクリタキセル）、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）（ドセタキセル）、ＰＮＵ１００９４０（１０９８８１）、パツピロン、ＸＲＰ−９８８１（ラロタキセル）、ビンフルニン、及びＺＫ−ＥＰＯ（合成エポチロン）が挙げられる。
【０３３８】
ユビキチンリガーゼ阻害剤としては、限定されないが、ナッツリンのようなＭＤＭ２阻害剤、及びＭＬＮ４９２４のようなＮＥＤＤ８阻害剤が挙げられる。
【０３３９】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣはまた、放射線療法の効果を高めるために使用され得る。放射線療法の例としては、外照射療法、内部放射線療法（すなわち、近接照射療法）、及び全身照射療法が含まれる。
【０３４０】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、他の化学療法剤に対して補助的に又はそれとともに投与することができ、化学療法剤としては、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）（ＡＢＩ−００７）、ＡＢＴ−１００（ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤）、ＡＤＶＥＸＩＮ（登録商標）（Ａｄ５ＣＭＶ−ｐ５３ワクチン）、ＡＬＴＯＣＯＲ（登録商標）又はＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）（ロバスタチン）、ＡＭＰＬＩＧＥＮ（登録商標）（ポリＩ：ポリＣ１２Ｕ、合成ＲＮＡ）、ＡＰＴＯＳＹＮ（商標）（エキシスリンド）、ＡＲＥＤＩＡ（登録商標）（パミドロン酸）、アルグラビン、Ｌ−アスパラギナーゼ、アタメスタン（１−メチル−３、１７−ジオン−アンドロスタ−１、４−ジエン）、ＡＶＡＧＥ（登録商標）（タザロテン）、ＡＶＥ−８０６２（コムブレアスタチン誘導体）、ＢＥＣ２（ミツモマブ）、カケクチン又はカケキシン（腫瘍壊死因子）、カンバキシン（ワクチン）、ＣＥＡＶＡＣ（商標）（がんワクチン）、ＣＥＬＥＵＫ（登録商標）（セルモロイキン）、ＣＥＰＬＥＮＥ（登録商標）（ヒスタミン二塩酸塩）、ＣＥＲＶＡＲＩＸ（登録商標）（ヒトパピローマウイルスワクチン）、ＣＨＯＰ（登録商標）（Ｃ：ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）（シクロホスファミド）；Ｈ：ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）（ヒドロキシドキソルビシン）；Ｏ：ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；Ｐ：プレドニゾン）、ＣＹＰＡＴ（商標）（酢酸シプロテロン）、コムブレスタチンＡ４Ｐ、ＤＡＢ（３８９）ＥＧＦ（Ｈｉｓ−Ａｌａリンカーを介してヒト表皮増殖因子に融合されているジフテリア毒素の触媒及び転座ドメイン）又はＴｒａｎｓＭＩＤ−１０７Ｒ（商標）（ジフテリア毒素）、ダカルバジン、ダクチノマイシン、５，６−ジメチルキサンテノン−４−酢酸（ＤＭＸＡＡ）、エニルウラシル、ＥＶＩＺＯＮ（商標）（乳酸スクワラミン）、ＤＩＭＥＲＩＣＩＮＥ（登録商標）（Ｔ４Ｎ５リポソームローション）、ディスコデルモライド、ＤＸ−８９５１ｆ（エキサテカンメシレート）、エンザスタウリン、ＥＰＯ９０６（エピトリイロンＢ）、ＧＡＲＤＡＳＩＬ（登録商標）（四価ヒトパピローマウイルス（６、１１、１６、１８型）組換えワクチン）、ＧＡＳＴＲＩＭＭＵＮＥ（登録商標）、ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標）、ＧＭＫ（ガングリオシドコンジュゲートワクチン）、ＧＶＡＸ（登録商標）（前立腺がんワクチン）、ハロフジノン、ヒステレリン、ヒドロキシカルバミド、イバンドロン酸、ＩＧＮ−１０１、ＩＬ−１３−ＰＥ３８、ＩＬ−１３−ＰＥ３８ＱＱＲ（シントレデキン・ベスドトックス）、ＩＬ−１３−シュードモナス・エキソトキシン、インターフェロン−アルファ、インターフェロン−ガンマ、ＪＵＮＯＶＡＮ（商標）又はＭＥＰＡＣＴ（商標）（ミファムルチド）、ロナファルニブ、５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸塩、ミルテフォシン（ヘキサデシルホスホコリン）、ＮＥＯＶＡＳＴＡＴ（登録商標）（ＡＥ−９４１）、ＮＥＵＴＲＥＸＩＮ（登録商標）（グルクロン酸トリメトレキセート）、ＮＩＰＥＮＴ（登録商標）（ペントスタチン）、ＯＮＣＯＮＡＳＥ（登録商標）（リボヌクレアーゼ酵素）、ＯＮＣＯＰＨＡＧＥ（登録商標）（メラノーマワクチン治療薬）、���ＮＣＯＶＡＸ（ＩＬ−２ワクチン）、ＯＲＡＴＨＥＣＩＮ（商標）（ルビテカン）、ＯＳＩＤＥＭ（登録商標）（抗体系細胞薬）、ＯＶＡＲＥＸ（登録商標）ＭＡｂ（マウスモノクローナル抗体）、パジタキセル、ＰＡＮＤＩＭＥＸ（商標）（２０（Ｓ）プロトパナキサジオール（ａＰＰＤ）及び２０（Ｓ）プロトパナキサトリオール（ａＰＰＴ）を含む朝鮮人参由来のアグリコンサポニン）、パニツムマブ、ＰＡＮＶＡＣ（登録商標）−ＶＦ（治験がんワクチン）、ペグアスパラガーゼ、ＰＥＧインターフェロンＡ、フェノキソディオル、プロカルバジン、レビマスタット、ＲＥＭＯＶＡＢ（登録商標）（カツマキソマブ）、ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標）（レナリドマイド）、ＲＳＲ１３（エファプロキシラル）、ＳＯＭＡＴＵＬＥＮＥ（登録商標）ＬＡ（ランレオチド）、ＳＯＲＩＡＴＡＮＥ（登録商標）（アシトレチン）、スタウロスポリン（ストレプトミセス・スタウロスポレス）、タラブロスタット（ＰＴ１００）、ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標）（ベキサロテン）、タキソプレキシン（登録商標）（ＤＨＡ−パクリタキセル）、ＴＥＬＣＹＴＡ（商標）（カンフォスファミド、ＴＬＫ２８６）、テミリフェン、ＴＥＭＯＤＡＲ（登録商標）（テモゾロマイド）、テスミリフェン、サリドマイド、ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）（ＳＴｎ−ＫＬＨ）、チミタック（２−アミノ−３，４−ジヒドロ−６−メチル−４−オキソ−５−（４−ピリジルチオ）キナゾリン二塩酸塩）、ＴＮＦＥＲＡＤＥ（商標）（アデノベクター：腫瘍壊死因子−アルファの遺伝子を含有するＤＮＡ担体）、ＴＲＡＣＬＥＥＲ（登録商標）又はＺＡＶＥＳＣＡ（登録商標）（ボセンタン）、トレチノイン（Ｒｅｔｉｎ−Ａ）、テトランドリン、ＴＲＩＳＥＮＯＸ（登録商標）（三酸化ヒ素）、ＶＩＲＵＬＩＺＩＮ（登録商標）、ウクライン（オオクサノオウ植物体由来のアルカロイド誘導体）、バイタクシン（抗アルファベータ３抗体）、ＸＣＹＴＲＩＮ（登録商標）（モテクサフィンガドリニウム）、ＸＩＮＬＡＹ（商標）（アトラセンタン）、ＸＹＯＴＡＸ（商標）（パクリタキセルポリグルメックス）、ＹＯＮＤＥＬＩＳ（商標）（トラベクテジン）、ＺＤ−６１２６、ＺＩＮＥＣＡＲＤ（登録商標）（デクスラゾキサン）、ＺＯＭＥＴＡ（登録商標）（ゾレドロン酸）、及びゾルビシン、並びにこれらの薬剤のいずれかの組合せが挙げられる。
【０３４１】
７．８．投薬量及び投与レジメン
投与される抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの量は、様々な因子に依存し、例えば、限定されないが、治療される間質（＋）／がん（＋）腫瘍の特定のタイプ、治療される間質（＋）／がん（＋）腫瘍の段階、投与様式、投与頻度、所望の治療上の利益、並びに患者の年齢、体重及び他の特徴などの他のパラメータなどが挙げられる。特定の投与様式及び投与頻度について治療上の利益を与えるのに有効な投薬量の決定は、当業者の能力の範囲内である。
【０３４２】
治療上の利益を与えるのに有効な投薬量は、最初にインビボ動物モデル又は臨床から推定することができる。多種多様な疾患に適切な動物モデルは、当該技術分野において公知である。
【０３４３】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、治療される状態に適切な任意の経路によって投与することができる。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、典型的には、非経口的に、すなわち、注入、皮下、筋肉内、静脈内（ＩＶ）、皮内、くも膜下腔内、ボーラス、腫瘍内注射又は硬膜外（（Ｓｈｉｒｅら、２００４年、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、９３巻（６号）：１３９０〜１４０２頁））に投与される。一実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、バイアル中の凍結乾燥粉末として提供される。バイアルは、５０ｍｇ、１００ｍｇ又は２００ｍｇの抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを含むことができる。投与前に、凍結乾燥粉末を注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）又は他の適切な培地で再構成して、２０ｍｇ／ｍＬの抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣを含む溶液を与える。得られた再構成された溶液を生理食塩水又は他の適切な培地でさらに希釈し、７日ごとに１回、１４日ごとに１回、２１日ごとに１回、又は２８日ごとに１回、静脈内注入によって投与する。いくつかの実施形態において、第１のサイクルについての注入は１８０分間にわたり、その後の注入は９０分間にわたる。他の実施形態において、注入は６０分間にわたる。
【０３４４】
１つの例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．３ｍｇ／ｋｇ、６．６ｍｇ／ｋｇ、６．９ｍｇ／ｋｇ、又は７．２ｍｇ／ｋｇで１４日ごとに１回投与される。
【０３４５】
別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、又は４．２ｍｇ／ｋｇで７日ごとに１回投与される。
【０３４６】
別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．３ｍｇ／ｋｇ、６．６ｍｇ／ｋｇ、６．９ｍｇ／ｋｇ、７．２ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、７．８ｍｇ／ｋｇ、８．１ｍｇ／ｋｇ、又は８．４ｍｇ／ｋｇで２８日ごとに１回投与される。
【０３４７】
別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．３ｍｇ／ｋｇ、６．６ｍｇ／ｋｇ、６．９ｍｇ／ｋｇ、又は７．２ｍｇ／ｋｇで２１日ごとに１回投与される。
【０３４８】
他の化学療法剤のような他の薬剤に対して補助的に又はそれとともに投与される場合、ＡＤＣは、他の薬剤（単数又は複数）と同じスケジュールで、又は異なるスケジュールで投与され得る。同じスケジュールで投与される場合、ＡＤＣは、他の薬剤の前に、後に、又は同時に投与され得る。ＡＤＣが標準ケアに対して補助的に又はそれとともに投与されるいくつかの実施形態において、ＡＤＣは、標準的療法の開始前、例えば、１日前、数日前、１週間前、数週間前、１カ月前、又はさらにはケア療法の標準の開始の数カ月前に開始され得る。
【０３４９】
一つの例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、神経膠芽腫を治療するために放射線に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。典型的には、分画された局在化された放射線療法（３０〜３３回の異なる１．８〜２Ｇｙ線量／分画の６０Ｇｙ）が、外照射療法を介して５〜７週間にわたって適用される。また、より短い低分画レジメン（例えば、１．８Ｇｙの２８分画における５０Ｇｙ、又は２Ｇｙの１５分画における４０Ｇｙ）は、低性能状態（ｌｏｗ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｓｔａｔｕｓ）の患者において使用することができる。放射線分画の数及び放射線線量レベルは、患者の健康状態及び年齢、並びに投与される外照射療法のタイプに応じて変動し得る。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／放射線療法は、疾患が進行するまで又は患者によってそれ以上耐容されなくなるまで、継続される。
【０３５０】
別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、神経膠芽腫を治療するためにテモゾロミド及び放射線に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。典型的には、分画された局在化された放射線療法（３０〜３３回の異なる１．８〜２Ｇｙ線量／分画の６０Ｇｙ）が、外照射療法を介して５〜７週間にわたって適用されるが、これは、使用される外照射療法のタイプ、並びに患者の年齢及び健康状態に応じて変動する。テモゾロミドは、７５ｍｇ／ｍ２の用量で９０分にわたって静脈内注射によって投与され、又は放射線と併せて最大６週間、１日１回、経口カプセル（７５ｍｇ／ｍ２）によって投与される。その後のサイクルは、放射線なしで４週ごとに５日間、１日１回、１５０ｍｇ／ｍ２のテモゾロミド注射からなる必要がある。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／テモゾロミド／放射線療法は、疾患が進行するまで又は患者によってそれ以上耐容されなくなるまで継続される。
【０３５１】
別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、神経膠芽腫を治療するために注射用のカルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。カルムスチンの推奨される用量及びスケジュールは、６週ごとに静脈内注射として投与される１５０〜２００ｍｇ／ｍ２である。用量は、単回投与で与えられてもよく、又は２日連続で７５〜１００ｍｇ／ｍ２のような毎日の注射に分割されてもよい。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／ＢｉＣＮＵ（登録商標）療法は、疾患が進行するまで又は患者により耐容されなくなるまで継続される。
【０３５２】
別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、神経膠芽腫を治療するためにロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。ロムスチンの推奨される用量及びスケジュールは、６週ごとに単回経口投薬として投与される１３０ｍｇ／ｍ２である。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／ＣｅｅＮＵ（登録商標）療法は、疾患が進行するまで又は患者により耐容されなくなるまで継続される。
【０３５３】
別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、神経膠芽腫を治療するためにベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。ベバシズマブの推奨される用量及びスケジュールは、２週ごとに３０、６０又は９０分かけて静脈内注射として投与される１０ｍｇ／ｋｇである。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）療法は、疾患が進行するまで又は患者により耐容されなくなるまで継続される。
【０３５４】
別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、神経膠芽腫を治療するためにＡＢＴ−４１４に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。ＡＢＴ−４１４の推奨される用量及びスケジュールは、２週ごとにＩＶ注射として１．２５ｍｇ／ｍ２である。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／ＡＢＴ−４１４療法は、疾患が進行するまで又は患者により耐容されなくなるまで継続される。
【０３５５】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、肉腫を治療するために放射線に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。典型的には、分画された局在化された放射線療法（３０〜３３回の異なる１．８〜２Ｇｙ線量／分画の６０Ｇｙ）が、外照射療法を介して５〜７週間にわたって適用されるが、これは、使用される外照射療法のタイプ、並びに患者の年齢及び健康状態に応じて変動する。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／放射線療法は、疾患が進行するまで又は患者によってそれ以上耐容されなくなるまで継続される。
【０３５６】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、肉腫を治療するためにシスプラチンに対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇ．で１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。シスプラチンは、２〜４週ごとに１回、２０〜１００ｍｇ／ｍ２で静脈内に投与される。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／シスプラチン療法は、疾患が進行するまで又は患者により耐容されなくなるまで継続される。
【０３５７】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、肉腫を治療するためにカルボプラチンに対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。カルボプラチンは、４週毎に１回、３００〜４００ｍｇ／ｍ２で静脈内投与される。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／カルボプラチン療法は、疾患が進行するまで又は患者により耐容されなくなるまで継続される。
【０３５８】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、肉腫を治療するためにゲムシタビンに対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日ごとに１回、静脈内注入により投与される。ゲムシタビンは、１０００ｍｇ／ｍ２の用量で、７週間まで毎週１回、３０分間にわたり静脈内注入によって投与され、続いて治療から１週間休止される。骨髄抑制が観察される場合、ゲムシタビンの処方情報に示されているような用量変更を用いることができる。その後のサイクルは、４週毎の周期の中で連続する３週間にわたり、週１回の注入からなるべきである。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／ゲムシタビン治療は、疾患が進行するまで又は患者によってそれ以上耐容されなくなるまで継続される。
【０３５９】
さらに、別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、肉腫を治療するためにパゾパニブに対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。パゾパニブは、１日１回、８００ｍｇで経口投与され；又は基準肝機能障害を有する患者において１日１回、２００ｍｇで経口投与される。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／パゾパニブ療法は、疾患が進行するまで又は患者により耐容されなくなるまで継続される。
【０３６０】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、肉腫を治療するためにイホスファミドに対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで２１日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。イホスファミドは、５日間連続して１日あたり２０００〜２４００ｍｇ／ｍ２の用量で静脈内投与される。治療は、３週毎又は血液毒性からの回復（血小板≧１００，０００／μＬ、ＷＢＣ≧４，０００／μＬ）後に反復される。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／イホスファミド療法は、疾患が進行するまで又は患者がもはや耐容されなくなるまで継続される。
【０３６１】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、肉腫を治療するためにカルボプラチンに対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。カルボプラチンは、４週毎に３００〜５００ｍｇ／ｍ２で静脈内投与される。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／カルボプラチン療法は、疾患が進行するまで又は患者により耐容されなくなるまで継続される。
【０３６２】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、肉腫を治療するためにドキソルビシンに対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで２１日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。他の薬剤と組み合わせて使用する場合、ドキソルビシンの最も一般的に使用される用量は、２１〜２８日毎に単回静脈内注射として与えられる２０〜６０ｍｇ／ｍ２である。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／ドキソルビシン療法は、疾患が進行するまで又は患者により耐容されなくなるまで継続される。
【０３６３】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、肉腫を治療するためにイマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標））に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。イマチニブの投薬量は、１００ｍｇ／日〜８００ｍｇ／日で変化する。共通して使用される投薬量は、１００ｍｇ／日、３００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日、３４０ｍｇ／ｍ２／日、６００ｍｇ／日又は８００ｍｇ／日を含む。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／イマチニブ療法は、疾患が進行するまで又は患者によってそれ以上耐容されなくなるまで継続される。
【０３６４】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、肉腫を治療するために、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標））に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日ごとに１回、静脈内注入によって投与される。ニボルマブは、１〜３ｍｇ／ｋｇで２〜３週間ごとに６０分間にわたり静脈内注入により投与される。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／ニボルマブ治療は、疾患が進行するまで又は患者によりそれ以上耐容されなくなるまで継続される。
【０３６５】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、肉腫を治療するために、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで２１日ごとに１回、静脈内注入によって投与される。ペンブロリズマブは、２ｍｇ／ｋｇで３週間ごとに３０分間にわたり静脈内注入として投与される。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／ペンブロリズマブ治療は、疾患が進行するまで又は患者によりそれ以上耐容されなくなるまで継続される。
【０３６６】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、黒色腫を治療するために放射線に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０、ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６、ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２、ｍｇ／ｋｇ、４．５、ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。典型的には、局所化された分画された放射線療法（８Ｇｙ又は２．５Ｇｙ分画）が、外照射療法を介して適用されるが、これは、使用される外照射療法のタイプ、並びに患者の健康状態及び年齢に応じて変動する。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／放射線療法は、疾患が進行するまで又は患者によってそれ以上耐容されなくなるまで継続される。
【０３６７】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、肉腫を治療するために、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標））に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日ごとに１回、静脈内注入により投与される。ニボルマブは、１〜３ｍｇ／ｋｇで２〜３週間ごとに６０分間にわたって静脈内注入により投与される。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／ニボルマブ療法は、疾患が進行するまで又は患者によってそれ以上耐容されなくなるまで継続される。
【０３６８】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、肉腫を治療するために、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））に対して補助的に使用することができる。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで２１日ごとに１回、静脈内注入により投与される。ペンブロリズマブは、２ｍｇ／ｋｇで３週間ごとに３０分間にわたって静脈内注入として投与される。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／ペンブロリズマブ療法は、疾患が進行するまで又は患者によってそれ以上耐容されなくなるまで継続される。
【０３６９】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、黒色腫を治療するためにイピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、又は６．０ｍｇ／ｋｇで２１日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。イピリムマブは、３カ月間、３週ごとに９０分かけて３ｍｇ／ｋｇで静脈内に投与され、又は４回の投薬について３週ごとに９０分かけて１０ｍｇ／ｋｇで静脈内に投与され、続いて最大３年間、又はアジュバント黒色腫の設定において疾患が再発するまで若しくは容認できない毒性が明らかになるまで１２週ごとに１０ｍｇ／ｋｇで投与される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ療法は、疾患が進行するまで又は患者によってそれ以上耐容されなくなるまで継続される。
【０３７０】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、黒色腫を治療するためにベムラフェニブ（ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標））に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。ベムラフェニブは、食事の有無にかかわらず、１日２回、約１２時間空けて９６０ｍｇで経口的に投与される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／ベムラフェニブ療法は、疾患が進行するまで又は患者により耐容されなくなるまで継続される。
【０３７１】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、黒色腫を治療するためにベムラフェニブ（ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標））及びコビメチニブ（ＣＯＴＥＬＬＩＣ（登録商標））に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。ベムラフェニブは、食事の有無にかかわらず、１日２回、約１２時間空けて９６０ｍｇで経口的に投与される。コビメチニブは、各２８日サイクルの最初の２１日間は１日１回、６０ｍｇで経口投与される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／ベムラフェニブ／コビメチニブ療法は、疾患が進行するまで又は患者により耐容されなくなるまで継続される。
【０３７２】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、黒色腫を治療するためにダブラフェニブ（ＴＡＦＩＮＬＡＲ（登録商標））に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。ダブラフェニブは、１日２回、１５０ｍｇで経口投与される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／ダブラフェニブ療法は、疾患が進行するまで又は患者により耐容されなくなるまで継続される。
【０３７３】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、黒色腫を治療するためにダブラフェニブ（ＴＡＦＩＮＬＡＲ（登録商標））及びトラメチニブ（ＭＥＫＩＮＩＳＴ（登録商標））に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。ダブラフェニブは、１日１回の２ｍｇのトラメチニブを組み込まれて、１日２回、１５０ｍｇで経口投与される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／ダブラフェニブ／トラメチニブ療法は、疾患が進行するまで又は患者により耐容されなくなるまで継続される。
【０３７４】
さらに別の例示的な実施形態において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、黒色腫を治療するためにニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標））及びイピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））に対して補助的に使用される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、２．１ｍｇ／ｋｇ、２．４ｍｇ／ｋｇ、２．７ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、３．６ｍｇ／ｋｇ、３．９ｍｇ／ｋｇ、４．２ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、４．８ｍｇ／ｋｇ、５．１ｍｇ／ｋｇ、５．４ｍｇ／ｋｇ、５．７ｍｇ／ｋｇ又は６．０ｍｇ／ｋｇで１４日毎に１回、ＩＶ注射により投与される。ニボルマブは、１ｍｇ／ｋｇで静脈内注射によって投与され、イピリムマブは、３ｍｇ／ｋｇの静脈内注射による４回の投薬で３週ごとに投与される。補助的な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ／ニボルマブ／イピリムマブ療法は、疾患が進行するまで又は患者により耐容されなくなるまで継続される。
【０３７５】
当業者に理解されるように、上記の様々な薬剤の推奨される用量は、患者の応答を最適化し、治療上の利益を最大にするために調節される必要があり得る。
【実施例】
【０３７６】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣの例示的実施形態の特定の特徴及び性質を強調する以下の実施例は、限定ではなく説明の目的で与える。
【０３７７】
［実施例１］  例示的抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体の調製
ｈｕＬＲＲＣ１５に対する抗体を、標準的技法を使用して、ｈｕＬＲＲＣ１５を発現する細胞株（Ｕ１１８ＭＧグリオブラストーマ細胞）に対して調製した。特異的アフィニティー、及び他の望ましい特徴、例えばカニクイザルＬＲＲＣ１５（「ｃｙｎｏＬＲＲＣ１５」）との交差反応性を有する例示的抗体を単離し、特定のこれらの抗体をヒト化した。例示的ヒト化抗体にはｈｕＭ２５、ｈｕＡＤ２０８．４．１、ｈｕＡＤ２０８．１２．１、ｈｕＡＤ２０８．１４．１、ｈｕ１３９．１があり、例示的ネズミ抗体にはｍｕＡＤ２０９．９．１及びｍｕＡＤ２１０．４０．９がある。これらの例示的抗体のＶＨ及びＶＬ鎖の配列は、それぞれ図２Ａ及び２Ｂ中に与える。例示的抗体ｈｕＭ２５の重鎖及び軽鎖の配列は、それぞれ図３Ａ及び３Ｂ中に与える。
【０３７８】
これらの例示的抗体と内在ｈｕＬＲＲＣ１５の結合、及びそれらの各ＥＣ５０を、０．０００１μｇ／ｍＬ、０．００１μｇ／ｍＬ、０．０１μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ及び１００μｇ／ｍＬの試験抗体濃度を使用し従来のフローサイトメトリーアッセイを介してＵ１１８ＭＧグリオブラストーマ細胞で実証した。アイソタイプ対照抗体（マウス又はヒト）を適切に使用した。様々な代表的抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体に関するフローサイトメトリーの結合データは図４中に示す。表７は、フローサイトメトリーにより決定した、様々な抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体に関するＥＣ５０値を与える。
【０３７９】
【表１２】
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【０３８０】
［実施例２］  抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は細胞表面から脱落したｈｕＬＲＲＣ１５の細胞外ドメインと結合する
細胞表面から脱落したｈｕＬＲＲＣ１５の細胞外ドメインの一部と例示的抗ｈｕＬＲＲＣ１５の結合を、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて実証した。ｈｕＬＲＲＣ１５−Ｆｃ融合タンパク質を、切断部位に対するｈｕＬＲＲＣ１５細胞外タンパク質ドメインの一部に対応する配列番号３のアミノ酸残基２２〜５２６を使用して作製した。９６ウェルＩｍｍｕｌｏｎ４ＨＢＸプレート（Ｔｈｅｒｍｏ、カタログ番号３８５５）を、カルボネート−バイカルボネートバッファー（Ｔｈｅｒｍｏ、カタログ番号２８３８２）ｐＨ９．４中２μｇ／ｍＬで、１００μＬ／ウェルのこのｈｕＬＲＲＣ１５融合ＥＣＤタンパク質でコーティングし、４℃において一晩結合させた。プレートはＰＢＳＴで３回洗浄し、次いで室温において１時間ＰＢＳＴ＋０．３％ＢＳＡ中で様々な濃度の抗体とインキュベートした。プレートはＰＢＳＴで３回洗浄し、次いで室温において３０分間１００μＬのヤギ抗ヒトカッパ軽鎖ＨＲＰ（Ｂｅｔｈｙｌ、カタログ番号Ａ８０−１１５Ｐ）とインキュベートした。プレートはＰＢＳＴで３回洗浄し、１００μＬのＴＭＢ（Ｓｕｒｍｏｄｉｃｓ  ＢｉｏＦｘカタログ番号ＴＭＢＷ−１０００−０１）をそれぞれのウェルに加え、発色するまで室温においてインキュベートした（約１０分間）。６５０ｎｍのＳｔｏｐ  Ｒｅａｇｅｎｔ  ｆｏｒ  ＴＭＢ（Ｓｕｒｍｏｄｉｃｓ  ＢｉｏＦｘカタログ番号ＢＳＴＰ−０１００−０１）の添加によって反応を停止させ、光学濃度（ＯＤ）を６５０ｎｍで読み取った（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｖｅｒｓａｍａｘ  ＰＬＵＳ）。特定の例示的抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体に関するＥＬＩＳＡの結合データは図５中に示す。様々な抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体に関するＥＣ５０（ｎＭ）値は以下の表８中に与える。
【０３８１】
【表１３】
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【０３８２】
試験したすべての抗体はナノモル未満範囲のＥＣ５０でｈｕＬＲＲＣ１５融合体と結合し、切断後に細胞表面から脱落したｈｕＬＲＲＣ１５細胞外ドメインの一部とこれらの抗体が結合することを示した。
【０３８３】
［実施例３］  例示的抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体は異なるエピトープと結合する
ｈｕＬＲＲＣ１５発現細胞との結合に関してｍｕＭ２５と競合する様々な例示的抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体の能力を、すなわち抗体が同一であるエピトープ又は異なるエピトープと結合するかどうかを、「参照抗体」として蛍光標識ｍｕＭ２５（「ｍｕＭ２５−ＡＦ４８８」）及び「試験抗体」として非標識抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体を使用して、フローサイトメトリー競合アッセイにおいて評価した。このアッセイ用に、Ｕ１１８ＭＧ細胞のアリコート（ウェルあたり２００，０００細胞）を１μｇ／ｍＬの標識ｍｕＭ２５及び０．０００１、０．００１、０．０１、０．１、１、１０又は１００μｇ／ｍＬいずれかの非標識試験抗体と同時にインキュベートし、（１μｇ／ｍＬの標識ｍｕＭ２５のみとインキュベートした対照アリコートに標準化した）結合した抗体の量をフローサイトメトリーにより決定した。アイソタイプ対照抗体（ヒト又はマウス）を陰性対照として使用し、非標識ｍｕＭ２５は陽性対照として使用した。
【０３８４】
このアッセイでは、標識参照抗体と同一であり又は近接したエピトープと試験抗体の結合による競合によって、参照標識抗体の結合が低減する。参照抗体の濃度の１０倍を超える試験抗体濃度で、蛍光標識参照抗体の結合の２０％以上を試験抗体が阻害すると、このアッセイにおいてプラスの結果が生じる。
【０３８５】
予想通り、非標識ｈｕＭ２５は標識ｍｕＭ２５と完全に競合する（図６Ａ）。ネズミ抗体ｍｕＡＤ２０８．４．１及びｍｕＡＤ２０８．１４．１はｈｕＭ２５と部分的に競合する（図６Ｂ）。これらの抗体の両方が標識ｍｕＭ２５の結合を２０％超で阻害する。これは、それらがｍｕＭ２５と同一であり又は近接したｈｕＬＲＲＣ１５エピトープと結合することを示す。対照的に、ｍｕ１３９．１０、ｍｕＡＤ２０８．１２．１及びｍｕＡＤ２０９．９．１は標識ｍｕＭ２５の結合を阻害せず、それらがｈｕＬＲＲＣ１５の異なるエピトープと結合することを実証する（図６Ｂ）。
【０３８６】
［実施例４］  ｈｕＬＲＲＣ１５は主な固形腫瘍型の間質及び細胞において高度に発現される
様々な固形腫瘍型の間質及び細胞におけるｈｕＬＲＲＣ１５の発現を、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織での免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を使用して評価した。異なる腫瘍型由来の生検材料を使用して組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）を作製し、これらをｈｕＬＲＲＣ１５の発現に関して評価した。組織切片（４μｍ）を切断し、脱パラフィン処理し、１２５℃で１分間ＢＯＲＧ  Ｄｅｃｌｏａｋｅｒ抗原賦活バッファーを使用して抗原賦活を実施した。Ｌｅｉｃａ自動染色装置を使用してスライドをブロッキング処理し、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体（ｍｕＡＤ２１０．４０．９、１μｇ／ｍＬで６０分間）及びＨＲＰ抗マウス二次抗体（Ｄａｋｏ）並びに検出用ＤＡＢ試薬（Ｄａｋｏ）とインキュベートした。実験の結果は表９及び図７中に示す。
【０３８７】
【表１４】
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【０３８８】
ＴＭＡ試料を０〜４のスケールで記録した。２以上のスコアを選択して、高レベルでｈｕＬＲＲＣ１５を発現する腫瘍を確認した。表９中のｈｕＬＲＲＣ１５染色及び発現データは、ｈｕＬＲＲＣ１５間質陽性、がん陽性腫瘍において見られたもの（図７）を表す。
【０３８９】
［実施例５］  ｈｕＬＲＲＣ１５は正常組織中で限られた発現を示す
正常、健常組織におけるｈｕＬＲＲＣ１５の発現を、正常組織のタンパク質免疫組織化学染色を使用して評価した。結果は図８中に示す。ｈｕＬＲＲＣ１５は大部分の正常組織中で限られた発現があり、発現は胃中の噴門／幽門、脾臓小柱周囲、骨芽細胞、及び毛包（「ＥＣＭ」は細胞外マトリックスを指す）を含めた特定組織に局在していた。限られた発現は扁桃及び胎盤においても観察された（データ示さず）。主要器官（例えば心臓、肝臓、膵臓、肺）ではｈｕＬＲＲＣ１５の発現は観察されなかった。
【０３９０】
［実施例６］  ｈｕＬＲＲＣ１５は間葉系幹細胞によって発現される
ｈｕＬＲＲＣ１５の発現を、図９Ａ中に示すようにビオチニル化抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２１０．４０．９を使用し、ウエスタンブロットによる乳がん患者からのがん関連線維芽（ＣＡＦ）溶解物のタンパク質又は市販の間葉系幹細胞（ＭＳＣ）溶解物の分析によって測定した。ｈｕＬＲＲＣ１５はＴＧＦβを用いた処理で乳がんＣＡＦ溶解物試料において上方制御されることを観察し、ＴＧＦβの不在下で低発現であるか又はごくわずかに検出可能な発現があった。対照的に、全３個のＭＳＣ溶解物試料においてＴＧＦβの不在下ではｈｕＬＲＲＣ１５発現は高度であり、この発現はＴＧＦβ処理により有意に上方制御された。以前に論じられたように、ＭＳＣは腫瘍間質中のがん関連線維芽細胞集団の大部分を構成すると考えられている（Ｃｉｒｒｉ、Ｐ  ａｎｄ  Ｃｈｉａｒｕｇｉ  Ｐ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ２０１１；１（４）：４８２〜４９７頁）。
【０３９１】
ｈｕＬＲＲＣ１５発現の同様の上方制御を、ＴＧＦβを用いた処理で２つの市販の間葉系幹細胞集団のフローサイトメトリーによって観察した（図９Ｂ、９Ｃ）。ヒトＢＭ−ＭＳＣ（Ｌｏｎｚａ）では、陽性ＭＳＣマーカーとしてＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６、及び陰性ＭＳＣマーカーとしてＣＤ１４、ＣＤ３４、及びＣＤ４５を使用し、ｈｕＬＲＲＣ１５を発現するＭＳＣ集団における有意な陽性シフトを、アイソタイプと比較してＴＧＦβを用いた処理で観察した（図９Ｂ）。それに応じて、ネズミＢａｌｂ／ｃＢＭ−ＭＳＣ（Ｃｙａｇｅｎ）では、陽性ＭＳＣマーカーとしてＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ３４、及びＳｃａ−１、及び陰性ＭＳＣマーカーとしてＣＤ１１７を使用し、ｍｕＬＲＲＣ１５を発現するＭＳＣ集団における有意な増大を、アイソタイプと比較してＴＧＦβを用いた処理で観察した（図９Ｃ）。
【０３９２】
［実施例７］  ｈｕＬＲＲＣ１５は上皮間葉系移行を起こしている細胞と関連がある
上皮間葉系移行（ＥＭＴ）は、がん細胞において細胞可塑性をもたらすと考えられる細胞のメカニズムである。さらに間葉系の表現型へのこの移行によって初代がん細胞の運動性と侵襲性が増大すると考えられ、おそらくがんの転移、薬物耐性、又は免疫系の逸脱につながる。例えば、Ｙｅ、Ｘ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｂｅｒｇ、Ｒ．Ａ．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２０１５、２５（１１）、６７５〜６８６頁を参照。この実施例中に与えるデータは、ＥＭＴを起こしたがん細胞は、それらの親上皮がん細胞と比較してｈｕＬＲＲＣ１５の発現が増大したことを実証する。
【０３９３】
図１０は、ＥＭＴを誘導するためのＴＧＦβ又はＳｔｅｍＸＶｉｖｏ（商標）ＥＭＴ誘導培地サプリメント（「ＥＭＴキット」、カタログ番号ＣＣＭ０１７、Ｒ  ａｎｄ  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）でベースライン処理した陰性Ａ５４９（肺がん）又はＰＡＮＣ１（膵臓がん）細胞の、ウエスタンブロット分析により決定した影響を示す。ＥＭＴの指標として認識されたタンパク質は、Ｎ−カドヘリン、Ｓｎａｉｌ、ＴＣＦ８／ＺＥＢ１を含めて発現が増大し、Ｅ−カドヘリンのように上皮細胞の特徴を示したタンパク質は発現が低下した。ハウスキーピングタンパク質及びタンパク質をロードした対照ＧＡＰＤＨの発現は有意に変化しなかった。（抗ＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２１０．４０．９を使用して測定した）ｈｕＬＲＲＣ１５の発現が、ＴＧＦβ又はＥＭＴキットのいずれかで処理し後にＥＭＴを起こしているＡ５４９細胞とＰＡＮＣ１細胞の両方において増大したことを観察した。
【０３９４】
図１１Ａ〜１１Ｃは、ｈｕＬＲＲＣ１５の発現がＥＭＴを起こしている細胞において増大し、ＥＭＴインデューサーの除去により逆方向上皮間葉系移行（ＥＭＴ）プロセスが生じたことを示す。図１１Ａは、未処理、又は５日間ＴＧＦβ若しくはＥＭＴキットで処理した、Ａ５４９細胞又はＰＡＮＣ１細胞を示す。Ａ５４９細胞又はＰＡＮＣ１細胞では、ＥｐＣＡＭ発現（上皮様の特徴を示す）が未処理細胞において最高であった。ＴＧＦβ又はＥＭＴキットを用いた処理後、両細胞型においてｈｕＬＲＲＣ１５が誘導されたが（ＡＦ６４７標識ｈｕＭ２５を用いて測定）、他方で上皮マーカーＥｐＣＡＭは低減しており、このことは、より間葉系の表現型へ移行していること（ｈｕＬＲＲＣ１５陽性）を示唆した。図１１Ｂは（９日間続けて１０ｎｇ／ｍＬの）ＴＧＦβで処理したＡ５４９細胞の形態を示している（左上）。間葉系のように見える線維様突起を有する延長型細胞を示すが、他方（５日間続けて１０ｎｇ／ｍＬの）ＴＧＦβで処理し次いで洗浄してＴＧＦβを除去したＡ５４９細胞は、さらに４日後（合計９日間に相当）間葉系細胞形態をもはや示さなかった（左下）。したがって、ＴＧＦβにより誘導したＥＭＴはその除去時に可逆的であった。ＴＧＦβによるＥＭＴの誘導及び間葉系に似た性質の逆転もフローサイトメトリーによって観察した（図１１Ｂ）。（より間葉系に似た特徴を示す）ｈｕＬＲＲＣ１５発現の増大（中央上）、及び（あまり上皮に似ていない特徴を示す）ＥｐＣＡＭ発現の低減（右上）を、ＴＧＦβ又はＥＭＴキットを用いた処理後に観察した。ＴＧＦβ又はＥＭＴキット処理の中断によって、ｈｕＬＲＲＣ１５のレベルはベースラインで観察したレベルに逆戻りした（下グラフ）。
【０３９５】
図１１Ｃは、インビトロでのＡ５４９細胞（左グラフ）又はＰＡＮＣ１細胞（右グラフ）におけるｈｕＬＲＲＣ１５（上グラフ）及びＥｐＣＡＭレベル（下グラフ）により示した、ＴＧＦβで処理した細胞の間葉系の特徴の増大、及び対応する上皮の特徴の低減を示す。Ａ５４９細胞とＰＡＮＣ１細胞の両方において、９日間にわたるＴＧＦβ又はＥＭＴキットを用いた細胞の処理によりｈｕＬＲＲＣ１５の発現は増大し、他方で上皮特徴の指標であるＥｐＣＡＭ発現は低減した。図１１Ｂ中の細胞形態データと同じく、ｈｕＬＲＲＣ１５とＥｐＣＡＭのタンパク質発現は、ＴＧＦβ又はＥＭＴキットの除去、及びさらに４日間にわたる細胞培養後に、上皮のような状態に逆戻りしたＬＲＲＣ１５陽性間葉系細胞を示した。
【０３９６】
［実施例８］  異種ＤＡＲｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥＡＤＣの調製
ＤＡＲが異種であるｈｕＭ２５−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＭＭＡＥＡＤＣ組成物を、以下に説明する２ステップの化学的プロセス、ｈｕＭ２５のジスルフィド還元、次にマレイミドカプロイルバリン−シトルリン（「ｖａｌ−ｃｉｔ」）パラ−アミノベンジルアルコール（「ＰＡＢＡ」）モノメチルアウリスタチンＥ（本明細書では「ｖｃＭＭＡＥ」と呼ぶ）とのアルキル化（コンジュゲーション）によって調製した。
【０３９７】
【化３６】
2019501124.tif 000063
【０３９８】
第１のステップでは、限定数のｈｕＭ２５の鎖間ジスルフィド結合を、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（「ＴＣＥＰ」）（０．８当量以上）で還元する。次いで部分的に還元されたｈｕＭ２５をＤＭＳＯ中のｖｃＭＭＡＥ（１．８当量以上）とコンジュゲートさせる。残留未処理ｖｃＭＭＡＥはＮ−アセチル−Ｌ−システインでクエンチする。
【０３９９】
図１２の上図は、生成したＡＤＣ調製物のクロマトグラフィーによる解析を示す。見ての通り、生成したＡＤＣ調製物は、ゼロ個のＭＭＡＥ分子が結合した抗体（「ＤＡＲ０」ピーク）、２個のＭＭＡＥ分子が結合した抗体（「ＤＡＲ２」ピーク）、４個のＭＭＡＥ分子が結合した抗体（「ＤＡＲ４」ピーク）、６個のＭＭＡＥ分子が結合した抗体（「ＤＡＲ６」ピーク）及び８個のＭＭＡＥ分子が結合した抗体（「ＤＡＲ８」ピーク）を含有する異種混合物であり、４の平均ＤＡＲを有する。一例としてｈｕＭ２５を使用し、４の平均ＤＡＲを有し異種混合物を含む特異的ＡＤＣ調製物を「ＤＡＲ４」、例えばｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４と本明細書中で示す。
【０４００】
［実施例９］  ＤＡＲ２が富化されたｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥＡＤＣの調製
ＤＡＲ２が富化されたｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥＡＤＣ（本明細書では「ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２」と呼ぶ）の調製物を、疎水性相互作用クロマトグラフィー（「ＨＩＣ」）による実施例８の異種ＤＡＲＡＤＣ組成物の解像度によって得た。ＨＩＣを介して異種ＡＤＣ混合物を分離しＤＡＲ２及びＤＡＲ４ピークのような特異的均質種を単離するための一般的な方法は、Ｈａｍｂｌｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．、２００４、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ１０：７０６３〜７０７０頁によって記載される。
【０４０１】
ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２富化ＡＤＣ調製物のクロマトグラムは図１２の下図に示す。この調製物はＤＡＲ２ＡＤＣの純度約９８％である。一例としてｈｕＭ２５を使用してＤＡＲ２が富化された特異的ＡＤＣ調製物を「Ｅ２」、例えばｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２と本明細書中で示す。
【０４０２】
ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２を調製するため、実施例８中に記載した異種ＤＡＲＡＤＣ物質を、１／３体積の４．５Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４を加えて１１０ｍＳの伝導性を与えることによりカラム結合塩状態に調節した。この荷重物質を、７０ｍＬのＧＥブチルセファロース−ＨＰ樹脂をロードした２．６×１５０ｃｍカラムにポンプで送り、ＧＥ  ＡＫＴＡｐｒｉｍｅ  ｐｌｕｓ液体クロマトグラフィーシステムを使用して、バッファーＡ［１．５Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４、２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７］で平衡状態にした。ロード及びベースラインまでの洗浄後、非コンジュゲート抗体ｈｕＭ２５（「ＤＡＲ０」）をバッファーＡとＢ（バッファーＢ＝２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７＋２５％イソプロパノール）の９０ｍＳステップ勾配ブレンド（ｓｔｅｐ−ｇｒａｄｉｅｎｔ）で溶出させた（保持時間＝３分間）。次に、バッファーＡとＢの６０ｍＳステップ勾配ブレンドを用いた溶出によりｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２を調製した（保持時間＝４分間）。ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ２が富化された物質の溶出プールをバッファー交換し、１５ｍＭのＭＥＳバッファー、ｐＨ６．０を使用しＰｅｌｌｉｃｏｎ（登録商標）タンジェンシャルフロー濾過システム（膜ＸＬ−３０ｋＤ）に濃縮してＥ２調製物を得た。「Ｅ４」（４ＭＭＡＥ分子を含有するｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥの富化調製物）、及び「Ｅ６」（６ＭＭＡＥ分子を含有するｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥの富化調製物）、及び「Ｅ８」（８ＭＭＡＥ分子を含有するｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥの富化調製物）の調製物もこの勾配で単離することができる。最終物質を、２８０ｎｍでの吸光度により定量化し、ＨＩＣにより純度を評価し、サイズ排除クロマトグラフィー（「ＳＥＣ」）により凝集を評価した。
【０４０３】
［実施例１０］  ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ  ＡＤＣはＬＲＲＣ１５を発現する細胞に対して強力なインビトロ有効性がある
ｈｕＬＲＲＣ１５陰性細胞株であるＥＢＣ−１（扁平ＮＳＣＬＣ）と対比して、ｈｕＬＲＲＣ１５を発現する細胞であるＵ１１８ＭＧ（神経膠芽腫）、ＲＰＭＩ−７９５１（黒色腫）、及びＧ２９２クローンＡ１４１Ｂ１（骨肉腫）に対する抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ  ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２及びｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４の強力なインビトロでの細胞殺傷能力は、図１３Ａ〜１３Ｄにおいて実証される。インビトロ細胞殺傷アッセイにおいて、細胞は、抗体及びＡＤＣの濃度を変化させた（１μＭ〜３ｐＭ）９６ウェルプレートにウェルあたり５００〜３０００細胞で播種される。細胞は、培養して４日間インキュベートされ、未処理細胞に対するパーセント細胞生存率は、処理された細胞内のＡＴＰ含有量をＣｅｌｌ  ＴｉｔｅｒＧｌｏ（商標）を用いて測定され、決定される。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ（例えば、ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２、ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４）による標的とする特異的細胞殺傷は、標的化されていないアイソタイプ−ｖｃＭＭＡＥ  ＡＤＣで見られるものよりも優れた、ｈｕＬＲＲＣ１５を内因的に発現するがん細胞株において観察される。ｈｕＬＲＲＣ１５陰性がん細胞株（ＥＢＣ−１）において、最小限のがん細胞殺傷は、ｈｕＬＲＲＣ１５標的化されたＡＤＣで見られ、観察された非特異的な細胞殺傷はアイソタイプ−ｖｃＭＭＡＥ  ＡＤＣで見られたものと同様であった（図１３Ｄ）。
【０４０４】
［実施例１１］  抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＰＢＤ  ＡＤＣはＬＲＲＣ１５を発現する細胞に対して強力なインビトロ有効性がある
実施例７で上記したように、ＥＭＴを起こしたがん細胞は、ＥＭＴを起こさなかった細胞と比較して、ｈｕＬＲＲＣ１５の発現が増加していた。本実施例において提示されたデータは、この増加したｈｕＬＲＲＣ１５発現のレベルが、ｈｕＬＲＲＣ１５を標的化したＡＤＣに対する感受性の増加と相関することを示す。したがって、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣは、乳房の間葉系がん、肉腫、黒色腫又は神経膠芽腫のような間葉系腫瘍を有する患者において有効であり得る。
【０４０５】
実験用に、ピロロベンゾジアゼピン二量体（「ＰＢＤ」）細胞増殖抑制剤及び／又は細胞毒性剤を含む抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣを、抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＭ２５又はアイソタイプ対照抗体と以下に説明するＰＢＤシントンのコンジュゲートにより調製して２のＤＡＲを得た。ｈｕＭ２５−ＰＢＤ−ＤＡＲ２ＡＤＣの調製を、実施例８中に記載した手順に従い実施した。
【０４０６】
【化３７】
2019501124.tif 000064
【０４０７】
図１３Ｅは、Ｕ１１８ＭＧ（神経膠芽腫）細胞におけるアイソタイプ対照ＰＢＤ  ＤＡＲ２  ＡＤＣと比較して、強力な抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ  ｈｕＭ２５−ＰＢＤ−ＤＡＲ２のインビトロでの４日間の細胞殺傷能力を示す。ＭＭＡＥ  ＡＤＣと同様に、ｈｕＬＲＲＣ１５を発現する細胞株において、抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの有意に高い細胞殺傷能力が、等しい薬物基準で観察されている。
【０４０８】
同様に、ＰＢＤ含有ＡＤＣは、定常領域（「ｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ」）に遺伝子操作されたＳ２３９Ｃ突然変異を含むｈｕＭ２５を用いて調製され、上記で示されているＰＢＤ連結部分を有するＤＡＲ２  ＡＤＣの優先的生成を可能にした。本明細書で使用するｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃは、配列番号１００又は１０３に従う重鎖アミノ酸配列、及び配列番号１９に従う軽鎖アミノ酸配列を有する抗ｈｕＬＲＲＣ１５抗体又はＡＤＣを指す。したがって、Ｓ２３９Ｃ突然変異を含むＡＤＣはクロマトグラフィーによる分離を必要とせずにＤＡＲ２を有するＡＤＣの富化を示した。それゆえ、ｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃを含むものを含め、ｈｕＬＲＲＣ１５抗体及びＳ２３９Ｃ突然変異を含むよう調製したＡＤＣを、本明細書では「Ｅ２」と呼ぶ（例えばｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２）。
【０４０９】
図１３Ｆは、ＰＢＤの等価薬物ロードを示すアイソタイプＡＤＣと比較した、ＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞株における抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ  ｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２のインビトロ細胞殺傷能力を示す。
【０４１０】
図１３Ｇは、ｈｕＬＲＲＣ１５標的化ＡＤＣｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２による３Ｔ１２−ｈｕＬＲＲＣ１５トランスフェクト細胞のインビトロ細胞殺傷は、同じ形式で示される同じＦｃ領域とＰＢＤ薬物を有するアイソタイプＡＤＣアイソタイプ−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２のそれより有意に高度であることを示す。おそらく、このような結果は、細胞毒性ＰＢＤ剤の放出の前の、ｈｕＬＲＲＣ１５発現細胞表面へのＡＤＣｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２の局在化によるものである。
【０４１１】
図１３Ｈ及び１３Ｉ中に示したように、ヒト及びマウスＬＲＲＣ１５と交差反応性があった抗ＬＲＲＣ１５ＡＤＣｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２は、インビトロでＬＲＲＣ１５発現間葉系幹細胞に対して細胞殺傷効果を実証した。１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦβで処理したヒトＢＭ−ＭＳＣ（Ｌｏｎｚａ）において、ｈｕＡＤ２０８．４．１−ＰＢＤ−ＤＡＲ２は、同じ用量でアイソタイプ−ＰＢＤ−ＤＡＲ２より高度な細胞殺傷効果を示した（図１３Ｈ）。同様のインビトロ細胞殺傷効果プロファイルを、ＴＧＦβ（１０ｎｇ／ｍＬ）及びそれぞれのＡＤＣで処理したネズミＢａｌｂ／ｃＢＭ−ＭＳＣ（Ｃｙａｇｅｎ）においても観察した（図１３Ｉ）。
【０４１２】
さらに図１３Ｊは、抗ｈｕＬＲＲＣＡＤＣが上皮間葉移行（ＥＭＴ）を起こしたＡ５４９肺がん細胞を殺傷した実験を示す。標準Ａ５４９細胞は、アイソタイプ−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２又はｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２を用いた処理後に生存率の差を示さなかった（上グラフ）。しかしながら、ＥＭＴをもたらすためにＴＧＦβで処理したＡ５４９では、ｈｕＬＲＲＣ１５特異的ＡＤＣｈｕＭ２５−Ｓ２３９Ｃ−ＰＢＤ−Ｅ２は、アイソタイプＡＤＣより有意に高い細胞殺傷効果を示した（アイソタイプＡＤＣに関してＥＣ５０＝０．０１ｎＭ対２．３ｎＭ）（下グラフ）。
【０４１３】
［実施例１２］  ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２ＡＤＣは、ＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍に対して強力な有効性がある
ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍に対する例示的抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣ、ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２の強力な抗腫瘍活性を、Ｕ１１８ＭＧ（神経膠芽腫）細胞を用いて異種移植片モデルにおいて実証した。実験用に、インビトロで増殖した１０００万個の細胞（Ｕ１１８ＭＧ）を、メスＳＣＩＤマウスの右脇腹にマウスごとに皮下接種した。腫瘍は約１００ｍｍ３でサイズマッチし、図１４Ａ中に示すようにＱ６Ｄ×２腹腔内（ＩＰ）投与した（６日ごとに１投与施し合計２投与）。腫瘍の長さ（Ｌ）及び幅（Ｗ）の測定は電動キャリパーにより行い、体積は以下の等式：Ｖ＝Ｌ×Ｗ２／２に従い計算した。８ｍｇ／ｋｇで処理したマウスでは、９７％の最大腫瘍増殖阻害（ＴＧＩｍａｘ）がｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２処理で示され、同じレジメンで投与したアイソタイプ対照抗体又は対応するアイソタイプ対照ＡＤＣでの処理と比較して、有意に改善されていた（ｐ＜０．００１）（図１４Ａ）。
【０４１４】
ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２の強力な抗腫瘍活性はまた、患者由来のＣＴＧ−０２４１（ヒト骨肉腫）細胞を有する患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルにおいて実証された。メスｎｕ／ｎｕマウスは、宿主動物から採取され、特定の継代ロットからそれぞれ移植されたＣＴＧ−０２４１腫瘍断片を用いて、左脇腹領域に片側移植された。腫瘍が約２５０〜３５０ｍｍ３に達したとき、動物を、腫瘍体積により処置群及び対照群にマッチングし、投薬を開始した（０日目）。投薬は、図１４Ｂに示されるように、腹腔内（ＩＰ）でＱ４Ｄ×６（４日毎に１投与施して合計６投与）で行われた。６ｍｇ／ｋｇで処理したマウスでは、９１％のＴＧＩｍａｘ値が示され、同じレジメンで投与したアイソタイプ対照抗体又は対応するアイソタイプ対照ＡＤＣでの処理と比較して、有意に改善されていた（ｐ＜０．００１）（図１４Ｂ）。
【０４１５】
ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２の強力な抗腫瘍活性はまた、患者由来のＣＴＧ−１０９５（ヒト骨肉腫）細胞を用いたＰＤＸモデルにおいて実証された。メスＮＳＧマウスは、宿主動物から採取され、特定の継代ロットからそれぞれ移植されたＣＴＧ−１０９５腫瘍断片を用いて、左脇腹領域に片側移植された。腫瘍が約２５０〜３５０ｍｍ３に達したとき、動物を、腫瘍体積により処置群及び対照群にマッチングし、投薬を開始した（０日目）。投薬は、図１４Ｃに示されるように、腹腔内（ＩＰ）でＱ４Ｄ×６（４日毎に１投与施し合計６投与）で行われた。１２ｍｇ／ｋｇで処理したマウスでは、８７％のＴＧＩｍａｘが示され、同じレジメンで投与したアイソタイプ対照抗体又は対応するアイソタイプ対照ＡＤＣでの処理と比較して、有意に改善されていた（ｐ＜０．００１）（図１４Ｃ）。
【０４１６】
抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２は、異なる腫瘍モデルにおいて強力な抗腫瘍活性を示す（図１４Ａ、１４Ｂ、１４Ｃ）。抗腫瘍効果は、神経膠芽腫異種移植片モデルにおいていくつかの抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ（図１４Ｄ、１４Ｅ）について観察された。ｈｕＡＤ２０８．４．１−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４、ｈｕＡＤ２０８．１４．１−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４及びｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４の有効性は、Ｕ１１８ＭＧ腫瘍において４ｍｇ／ｋｇで投薬した場合、規模（ＴＧＩｍａｘ）及び期間（ＴＧＤ）において同様であり（図１４Ｅ）、ｈｕ１３９．１０−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４は、６ｍｇ／ｋｇで投薬した場合、ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４に匹敵していた（図１４Ｄ）。同じレジメンで投与したアイソタイプ対照抗体又は対応するアイソタイプ対照コンジュゲートでの処理と比較して、これらの有効性は有意に改善されていた（ｐ＜０．００１）。
【０４１７】
ＩＨＣ（１＋スコア）によって観察される適度なｈｕＬＲＲＣ１５発現に起因する可能性があるアイソタイプ対照と比較して、異種移植片モデルＳａｏｓ−２（骨肉腫）におけるｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４については統計的に有意な抗腫瘍活性の差は観察されなかった。この実験において、インビトロで増殖させた５００万個の細胞（Ｓａｏｓ−２）を、メスＳＣＩＤ−Ｂｅｉｇｅマウスの右脇腹にマウス毎に皮下接種した。腫瘍が約２５０〜３５０ｍｍ３に達したとき、動物を、腫瘍体積により処置群及び対照群にマッチングし、投薬を開始した（０日目）。投薬は、図１４Ｆに示されるように、腹腔内（ＩＰ）でＱ４Ｄ×６（４日毎に１投与施し合計６投与）で行われた。６ｍｇ／ｋｇで処置されたマウスにおいて、同じ薬物ロードを有するアイソタイプＡＤＣと比較して、抗腫瘍活性の増強は観察されなかった（図１４Ｆ）。
【０４１８】
［実施例１３］  抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣは、処置の初期ラウンド後に再成長する巨大腫瘍に対して活性がある
抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣを用いた処置後に再成長する腫瘍は、抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣに対して感受性があることを実証するため、抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣを用いて腫瘍を処理し、再増殖させ再処理した。実験用に、Ｕ１１８ＭＧヒト神経膠芽腫細胞をインビトロで増殖させ、マウスあたり１０００万個の細胞を、メスＳＣＩＤマウスの右脇腹に皮下接種した。腫瘍は約１５０ｍｍ３でサイズマッチし、抗体とイムノコンジュゲートを、それぞれ１０ｍｇ／ｋｇと６ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×６ＩＰ投与した（４日ごとに１投与施し合計６投与）。サイズマッチ後第１６５日、腫瘍が約４５０ｍｍ３まで再成長したとき、６ｍｇ／ｋｇ、ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４ＩＰＱ４Ｄ×３（４日ごとに１投与施し合計３投与）で動物を再処置した。
【０４１９】
結果を図１５中に示す。ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４を用いた初期処置で、９８％の最大腫瘍増殖阻害（ＴＧＩｍａｘ）を観察した。同じレジメンで投与したアイソタイプ対照抗体又は対応するアイソタイプ対照コンジュゲートより、それは有意であった（ｐ＜０．００１）。
【０４２０】
増殖後の再治療後、腫瘍の退縮が再び観察された。これは、腫瘍がｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ（ＤＡＲ４）に感受性があったこと、全体のＴＧＩｍａｘが再投薬時の腫瘍体積に対して７０％（ｐ＜０．０１）であることを示した。ｈｕＬＲＲＣ１５の発現は、これらの事前に処置した腫瘍において維持されていた。
【０４２１】
［実施例１４］  Ｅ２ＡＤＣは同等であるか又はより良い治療指数を有する
ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のＥ２、Ｅ４及びＥ２／Ｅ４調製物の安全性プロファイルをラットの耐性試験において評価した（図１６Ａ、１６Ｂ）。アッセイ用に、Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ野生型ラットに、各抗体薬物コンジュゲートのＭＭＡＥ当量レベルで１回ＩＶ用量を投与した。ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ４を用いると、ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２に関して見られたもの（第８日、２５％）より、初期（第３／４日）に高い割合（５０％）で死亡が発生した（図１６Ａ）。２倍のタンパク質抗体用量を等量のＭＭＡＥと共に送達すると、Ｅ４に優るＥ２の生存率の改善が見られた。Ｅ２を投与した動物においてはＥ４ＡＤＣを投与した動物より死亡の発生が少なく、第８日後に死亡が発生した。広域薬物分布ＤＡＲ４は２０ｍｇ／ｋｇのＭＴＤを有する。６０ｍｇ／ｋｇで投与するとｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２に関して体重減少は有意ではなかったが、ＭＭＡＥ当量レベルの３０ｍｇ／ｋｇ及びｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ４を投与したラットに関して体重減少が増大した（図１６Ｂ）。この観察結果は、抗体あたり２細胞増殖抑制剤及び／又は細胞毒性剤（Ｅ２）のような低いＭＭＡＥ薬物抗体比で多量タンパク質用量を送達するときほど、より多くの薬物をロードした抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣは充分に耐容されないことを実証する。
【０４２２】
異なる相対的ＤＡＲプロファイル（Ｅ２、Ｅ２／Ｅ４、Ｅ４又はＤＡＲ４）を有する４つのｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ調製物を、Ｕ１１８ＭＧ腫瘍における有効性に関して試験した。１０００万個の細胞をＳＣＩＤマウスの皮下に移植し、腫瘍群の平均体積が約１００ｍｍ３に達したときにマウスを無作為に分配した。ＨｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥは、計３回の投薬について７日毎にＭＭＡＥ等量で腹腔内に投与された。８４％以上の最大腫瘍増殖阻害（ＴＧＩｍａｘ）はｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２で処置された群についてみとめられた。これは、同じレジメンで投与されたアイソタイプ対照抗体又は対応するアイソタイプ対照コンジュゲートよりも有意に（ｐ＜０．００１）良好であった（図１７）。すべての用量は十分に耐容され、有意な体重減少は観察されなかった（データ示さず）。ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２についてＵ１１８ＭＧ腫瘍モデルにおける有効性は、ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２Ｅ４（すなわち、ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥのＥ２／Ｅ４調製物）に匹敵し（８２％のＴＧＩｍａｘ）、ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ４（７６％のＴＧＩｍａｘ）及びｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−ＤＡＲ４（６７％のＴＧＩｍａｘ）について観察されたものよりも優れていた。これは、最適な抗腫瘍効力のためにより高次のＤＡＲが必要なのではなく、ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２を用いたより高い抗体用量が、より多くの薬物をロードしたＡＤＣで観察されたものと同等又はそれ以上の有効性を与えることを、示唆する。
【０４２３】
低い（Ｅ２の）薬物抗体比（ＤＡＲ）で多量の全抗体用量の投与によりさらに多くのＭＭＡＥを投与する能力が、高い薬物抗体比（例えばＥ４）で少ない抗体用量を投与したときより低い毒性をもたらしたことが、ラット耐性試験において示された（図１６Ａ、１６Ｂ）。また、図１７は、より低い薬物−抗体比のＥ２を用いることにより、ＭＭＡＥ同等レベルで投薬した場合、より多くの薬物のロード（例えば、Ｅ２／Ｅ４、ＤＡＲ４、Ｅ４）を含有するＡＤＣ調製物と同等の又は改善された抗腫瘍効力を提供することを示す。一緒にして考えると、これらのデータは、多量のＤＡＲを含有するＡＤＣ調製物（例えばＤＡＲ４、Ｅ４）と比較して、抗体あたり２薬物／リンカーを含有する抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣを使用することによって、改善された治療指数を得ることができることを実証する。これらのデータは、少量のＤＡＲを含有する抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣは多量のＤＡＲを含有するＡＤＣ（例えば、ＤＡＲ４又はＥ４）より高いレベルで臨床投与することができ、改善された治療指数を有することを示唆する。
【０４２４】
［実施例１５］  抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣは現行の標準的ケア物質より優れている
現行の標準治療と比較した抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣの効力を、異種移植片モデルＵ１１８ＭＧ（神経膠芽腫）、並びに患者由来異種移植片モデルＣＴＧ−０２４１（骨肉腫）及びＣＴＧ−１０９５（骨肉腫）において評価した。抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣ  ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２を、テモゾロミド、シスプラチン、ドキソルビシン、ゲムシタビン、又はイホスファミドと比較した。標準的な治療剤を、最大有効用量レベル又は最大耐容用量レベルで投薬した。図１８Ａ（Ｕ１１８ＭＧ）について、１０００万個の細胞をメスＳＣＩＤマウスに皮下移植し、腫瘍が約１００ｍｍ３に達したときに無作為に分配し、Ｑ７Ｄ×２（７日毎に１投与施し合計２投与）で腹腔内に８ｍｇ／ｋｇで生物製剤を投与した。他方、テオゾロミドを、２０ｍｇ／ｋｇで７日間のサイクルの最初の５日間における毎日の経口投薬を、２サイクル行った。ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２（８８％のＴＧＩｍａｘ）の抗腫瘍効果は、テモゾロミド（６７％のＴＧＩｍａｘ）について観察されたものよりも優れていた。
【０４２５】
図１８Ｂにおいて、メスｎｕ／ｎｕマウスは、宿主動物から採取され、特定の継代ロットからそれぞれ移植されたＣＴＧ−０２４１腫瘍断片を用いて、左脇腹領域に片側移植された。腫瘍が約２５０〜３５０ｍｍ３に達したとき、動物を、腫瘍体積により処置群及び対照群にマッチングし、投薬を開始した（０日目）。アイソタイプｍＡｂ又はＡＤＣを用いた投薬は、ＩＰで６ｍｇ／ｋｇのＱ４Ｄ×６（４日毎に１投与施し合計６投与）で行われ、一方、シスプラチンは、７．５ｍｇ／ｋｇのＱ７Ｄ×３（７日毎に１投与施し合計３投与）でＩＰ投薬され、ドキソルビシンは、１日１回、１ｍｇ／ｋｇで５日間、静脈内（ＩＶ）に投薬され、ゲムシタビンは、８０ｍｇ／ｋｇのＱ３Ｄ×４（３日毎に１投与施し合計４投与）でＩＰ投薬され、イホスファミドは、１２０ｍｇ／ｋｇのＱＤ×３（毎日１投与施し合計３投与）ＩＰ投薬された。ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２（９１％のＴＧＩｍａｘ）の抗腫瘍効果は、シスプラチン（４４％のＴＧＩｍａｘ）、ドキソルビシン（２７％のＴＧＩｍａｘ）、ゲムシタビン（６４％のＴＧＩｍａｘ）、又はイホスファミド（１０％のＴＧＩｍａｘ）について観察されたものよりも優れていた。
【０４２６】
図１８Ｃにおいて、メスＮＳＧマウスは、宿主動物から採取され、特定の継代ロットからそれぞれ移植されたＣＴＧ−１０９５腫瘍断片を用いて、左脇腹領域に片側移植された。腫瘍が約１５０〜３００ｍｍ３に達したとき、動物を、腫瘍体積により処置群及び対照群にマッチングし、投薬を開始した（０日目）。アイソタイプｍＡｂ又はＡＤＣを用いた投薬は、ＩＰで１２ｍｇ／ｋｇのＱ４Ｄ×６（４日毎に１投与施し合計６投与）で行われ、一方、シスプラチンは、腹腔内に７．５ｍｇ／ｋｇのＱ７Ｄ×２（７日毎に１投与施し合計２投与）で投薬された。ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２の抗腫瘍効果（８７％のＴＧＩｍａｘ）は、シスプラチン（７０％のＴＧＩｍａｘ）よりも優れていた。
【０４２７】
図１８Ｄにおいて、メスＮＳＧマウスは、宿主動物から採取され、特定の継代ロットからそれぞれ移植されたＣＴＧ−１０９５腫瘍断片を用いて左脇腹領域に片側移植された。腫瘍が約２００ｍｍ３に達したとき、動物を、腫瘍体積により処置群及び対照群にマッチングし、投薬を開始した（０日目）。アイソタイプｍＡｂ又はＡＤＣを用いた投薬は、ＩＰで６ｍｇ／ｋｇのＱ４Ｄ×６（４日毎に１投与施し合計６投与）で行われ、一方、ゲムシタビンは、ＩＰで８０ｍｇ／ｋｇのＱ３Ｄ×４（３日毎で合計４投与）投薬された。ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２及びゲムシタビンの組み合わせについての抗腫瘍効果（８８％のＴＧＩｍａｘ；ＴＧＤ＞３１９％）は、ゲムシタビン単独（８４％のＴＧＩｍａｘ；ＴＧＤ  ２４１％）又はｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２単独（７５％のＴＧＩｍａｘ；ＴＧＤ  １９３％）について観察されたものよりも優れていた。
【０４２８】
図１８Ａ〜１８Ｃ中に示すインビボ有効性データは、ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のような抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣは、がん療法において一般に使用される標準的ケア薬剤（例えばテモゾロミド、シスプラチン、ドキソルビシン、ゲムシタビン、又はイホスファミド）より性能が優れていたという、いくつかの例を示す。このデータは、抗ｈｕＬＲＲＣ１５ＡＤＣ（例えばｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２）は、一般に使用される特定抗がん療法剤より臨床上一層有効であり得ることを示唆する。
【０４２９】
さらに、図１８Ｄに提示されているデータは、ｈｕＭ２５−ｖｃＭＭＡＥ−Ｅ２のような抗ｈｕＬＲＲＣ１５  ＡＤＣと標準的な治療剤（例えば、ゲムシタビン）の組み合わせを支持して、いずれかの薬剤単独の投薬で観察されるよりも大きな抗腫瘍効果をもたらす。
【０４３０】
９．実施形態
１．ｈｕＬＲＲＣ１５細胞外ドメインに特異的に結合する抗体又はその結合断片であって、上記細胞外ドメインが、配列番号３のＡｒｇ５２７及びＳｅｒ５２８によって規定されるタンパク質分解切断部位を含む、抗体又はその結合断片。
【０４３１】
２．ヒトＬＲＲＣ１５を発現する細胞への結合について、ｈｕＭ２５、ｈｕＡＤ２０８．４．１、ｈｕＡＤ２０８．１２．１、ｈｕＡＤ２０８．１４．１、ｈｕ１３９．１０、ｍｕＡＤ２１０．４０．９、及びｍｕＡＤ２０９．９．１から選択される対照抗体と競合する実施形態１に記載の抗体又は結合断片。
【０４３２】
３．対照抗体がｈｕＭ２５である、実施形態１に記載の抗体又は結合断片。
【０４３３】
４．対照抗体がｈｕＡＤ２０８．４．１である、実施形態１に記載の抗体又は結合断片。
【０４３４】
５．ＶＨＣＤＲ＃１が配列番号１０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２が配列番号１１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３が配列番号１２の配列に対応し；
ＶＨＣＤＲ＃１が配列番号２０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２が配列番号２１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３が配列番号２２の配列に対応し；
ＶＨＣＤＲ＃１が配列番号３０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２が配列番号３１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３が配列番号３２の配列に対応し；
ＶＨＣＤＲ＃１が配列番号４０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２が配列番号４１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３が配列番号４２の配列に対応し；
ＶＨＣＤＲ＃１が配列番号５０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２が配列番号５１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３が配列番号５２の配列に対応し；
ＶＨＣＤＲ＃１が配列番号６０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２が配列番号６１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３が配列番号６２の配列に対応し；又は
ＶＨＣＤＲ＃１が配列番号７０の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃２が配列番号７１の配列に対応し、ＶＨＣＤＲ＃３が配列番号７２の配列に対応する、３つのＣＤＲを有するＶＨ鎖を含む、実施形態１に記載の抗体又は結合断片。
【０４３５】
６．ＶＬＣＤＲ＃１が配列番号１３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２が配列番号１４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３が配列番号１５の配列に対応し；
ＶＬＣＤＲ＃１が配列番号２３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２が配列番号２４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３が配列番号２５の配列に対応し；
ＶＬＣＤＲ＃１が配列番号３３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２が配列番号３４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３が配列番号３５の配列に対応し；
ＶＬＣＤＲ＃１が配列番号４３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２が配列番号４４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３が配列番号４５の配列に対応し；
ＶＬＣＤＲ＃１が配列番号５３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２が配列番号５４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３が配列番号５５の配列に対応し；
ＶＬＣＤＲ＃１が配列番号６３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２が配列番号６４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３が配列番号６５の配列に対応し；
ＶＬＣＤＲ＃１が配列番号７３の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃２が配列番号７４の配列に対応し、ＶＬＣＤＲ＃３が配列番号７５の配列に対応する、３つのＣＤＲを有するＶＬ鎖を含む、実施形態１に記載の抗体又は結合断片。
【０４３６】
７．配列番号１６の配列に対応するＶＨ鎖及び配列番号１７の配列に対応するＶＬ鎖を含む、実施形態１に記載の抗体又は結合断片。
【０４３７】
８．配列番号２６の配列に対応するＶＨ鎖及び配列番号２７の配列に対応するＶＬ鎖を含む、実施形態１に記載の抗体又は結合断片。
【０４３８】
９．配列番号１８の配列に対応する重鎖及び配列番号１９の配列に対応する軽鎖を含む、実施形態１〜７のいずれか１つに記載の抗体又は結合断片。
【０４３９】
１０．ＩｇＧ１である実施形態１に記載の抗体。
【０４４０】
１１．遊離スルフヒドリル基を有する１つ以上の還元システイン残基を有する、実施形態１に記載の抗体。
【０４４１】
１２．リンカーを介して抗体に連結された細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤を含む抗体薬物コンジュゲート（「ＡＤＣ」）であって、上記抗体が実施形態１〜１１のいずれか１つに記載の抗体であり、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤が細胞膜を横切ることができ、リンカーがリソソーム酵素によって切断可能である抗体薬物コンジュゲート。
【０４４２】
１３．平均薬物−抗体比が１〜１０の範囲である、実施形態１２に記載のＡＤＣ。
【０４４３】
１４．平均薬物−抗体比が２〜４の範囲である、実施形態１２に記載のＡＤＣ。
【０４４４】
１５．リソソーム酵素がカテプシンＢである、実施形態１２に記載のＡＤＣ。
【０４４５】
１６．リンカーが、構造式（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（ＩＶｃ）、又は（ＩＶｄ）：
【０４４６】
【化３８】
2019501124.tif 000065
によるセグメント又はその塩を含み、
ペプチドは、リソソーム酵素によって切断可能なペプチド（Ｃ→Ｎを示すが、カルボキシ及びアミノ「末端」を示さない）を表し；
Ｔは、１つ以上のエチレングリコール単位若しくはアルキレン鎖、又はそれらの組合せを含むポリマーを表し；
Ｒａは、水素、アルキル、スルホネート及びメチルスルホネートから選択され；
ｐは、０〜５の範囲の整数であり；
ｑは、０又は１であり；
ｘは、０又は１であり；
ｙは、０又は１であり；
【０４４７】
【化３９】
2019501124.tif 000066
は、リンカーの細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤への結合点を表し；
＊は、リンカーの残りの部分への結合点を表す、実施形態１５に記載のＡＤＣ。
【０４４８】
１７．ペプチドが、Ｖａｌ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｖａｌ；Ａｌａ−Ａｌａ；Ａｌａ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｌａ；Ａｓｎ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｓｎ；Ｃｉｔ−Ｃｉｔ；Ｖａｌ−Ｇｌｕ；Ｇｌｕ−Ｖａｌ；Ｓｅｒ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｓｅｒ；Ｌｙｓ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ｌｙｓ；Ａｓｐ−Ｃｉｔ；Ｃｉｔ−Ａｓｐ；Ａｌａ−Ｖａｌ及びＶａｌ−Ａｌａ、及びそれらの塩からなる群から選択される、実施形態１６に記載のＡＤＣ。
【０４４９】
１８．リソソーム酵素がβグルクロニダーゼである、実施形態１２に記載のＡＤＣ。
【０４５０】
１９．細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤がＭＭＡＥである、実施形態１２に記載のＡＤＣ。
【０４５１】
２０．細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤がＰＢＤ二量体である、実施形態１２のＡＤＣ。
【０４５２】
２１．抗体が、配列番号１０、配列番号１１及び配列番号１２の配列にそれぞれ対応する３つのＶＨＣＤＲ、並びに配列番号１３、配列番号１４及び配列番号１５の配列にそれぞれ対応する３つのＶＬＣＤＲを含む、実施形態１２に記載のＡＤＣ。
【０４５３】
２２．抗体が、配列番号１６の配列に対応するＶＨを含む、実施形態２１に記載のＡＤＣ。
【０４５４】
２３．抗体が、配列番号１７の配列に対応するＶＬを含む、実施形態２１に記載のＡＤＣ。
【０４５５】
２４．抗体が、配列番号１６の配列に対応するＶＨ、及び配列番号１７の配列に対応するＶＬを含む、実施形態２１に記載のＡＤＣ。
【０４５６】
２５．ＩｇＧ１である、実施形態２４に記載のＡＤＣ。
【０４５７】
２６．抗体が、それぞれ配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２の配列に対応する３つのＶＨＣＤＲ、並びにそれぞれ配列番号：２３、配列番号：２４及び配列番号：２５の配列に対応する３つのＶＬＣＤＲを含む、実施形態２１に記載のＡＤＣ。
【０４５８】
２７．抗体が、配列番号２６の配列に対応するＶＨ鎖を含む、実施形態２６に記載のＡＤＣ。
【０４５９】
２８．抗体が、配列番号２７の配列に対応するＶＬ鎖を含む、実施形態２６に記載のＡＤＣ。
【０４６０】
２９．抗体が、配列番号２６の配列に対応するＶＨ鎖、及び配列番号２７の配列に対応するＶＬ鎖を含む、実施形態２６に記載のＡＤＣ。
【０４６１】
３０．ＩｇＧ１である、実施形態２９に記載のＡＤＣ。
【０４６２】
３１．抗体がｈｕＭ２５である、実施形態１２に記載のＡＤＣ。
【０４６３】
３２．抗体がｈｕＡＤ２０８．４．１である、実施形態１２に記載のＡＤＣ。
【０４６４】
３３．抗体が、インビトロアッセイにおいて、ｈｕＭ２５の結合についてｈｕＬＲＲＣ１５と競合する実施形態１２に記載のＡＤＣ。
【０４６５】
３４．抗体が、インビトロアッセイにおいて、ｈｕＡＤ２０８．４．１の結合についてｈｕＬＲＲＣ１５と競合する実施形態１２に記載のＡＤＣ。
【０４６６】
３５．構造式（Ｉ）：
（Ｉ）  ［Ｄ−Ｌ−ＸＹ−］ｎ−Ａｂ
による化合物又はその塩であって、
Ｄは、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤であり；
Ｌは、リンカーであり；
Ａｂは、抗体であり；
ＸＹは、リンカーＬを抗体Ａｂに連結する共有結合的連結を表し；
ｎは、２〜８の範囲の整数である、実施形態１２に記載のＡＤＣ。
【０４６７】
３６．ｎが２、３又は４である、実施形態３５に記載のＡＤＣ。
【０４６８】
３７．ＸＹが、抗体Ａｂ上のアミノ基とともに形成される結合である、実施形態３５に記載のＡＤＣ。
【０４６９】
３８．ＸＹが、アミド又はチオ尿素である、実施形態３７に記載のＡＤＣ。
【０４７０】
３９．ＸＹが、抗体Ａｂ上のスルフヒドリル基と形成される連結である、実施形態３５に記載のＡＤＣ。
【０４７１】
４０．ＸＹがチオエーテルである、実施形態３９に記載のＡＤＣ。
【０４７２】
４１．構造式（Ｉ）による化合物が、式（ＩＩａ）：
【０４７３】
【化４０】
2019501124.tif 000067
（式中、Ａｂは抗体ｈｕＭ２５である）
の構造を有する、実施形態３５に記載のＡＤＣ。
【０４７４】
４２．構造：
【０４７５】
【化４１】
2019501124.tif 000068
（式中、Ａｂは抗体ｈｕＭ２５であり、ｎは２又は４である）
を有する、実施形態３５に記載のＡＤＣ。
【０４７６】
４３．構造式（Ｉ）による化合物が、式（ＩＩｂ）：
【０４７７】
【化４２】
2019501124.tif 000069
（式中、Ａｂは、抗体ｈｕＭ２５である）
の構造を有する、実施形態３５に記載のＡＤＣ。
【０４７８】
４４．構造：
【０４７９】
【化４３】
2019501124.tif 000070
（式中、ＡｂはｈｕＭ２５であり、ｎは２又は４である）
を有する、実施形態３５に記載のＡＤＣ。
【０４８０】
４５．実施形態１２〜４４のいずれか１つに記載のＡＤＣ、並びに担体、賦形剤及び／又は希釈剤を含む組成物。
【０４８１】
４６．ヒトにおける薬学的に使用するために製剤化されている、実施形態４５に記載の組成物。
【０４８２】
４７．単位剤形である、実施形態４５に記載の組成物。
【０４８３】
４８．ｈｕＬＲＲＣ１５細胞外ドメインに特異的に結合する抗体であって、上記細胞外ドメインは、配列番号３のＡｒｇ５２７及びＳｅｒ５２８によって規定されるタンパク質分解性切断部位を、構造式（ＩＩＩ）Ｄ−Ｌ−Ｒｘによるシントン（Ｄは、細胞膜を通過することができる細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤であり、Ｌは、リソソーム酵素によって切断可能なリンカーであり、Ｒｘは、該シントンを該抗体に共有結合的に連結させることができる官能基を含む）と、該シントンを該抗体に供給結合する条件下で接触させることによって、形成されるＡＤＣ。
【０４８４】
４９．抗体がｈｕＭ２５であり、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤がＭＭＡＥである、実施形態４８に記載のＡＤＣ。
【０４８５】
５０．構造：
【０４８６】
【化４４】
2019501124.tif 000071
（式中、Ａｂは抗体であり、ｎは２又は４である）
を有する、実施形態４９に記載のＡＤＣ。
【０４８７】
５１．抗体がｈｕＭ２５であり、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤がＰＢＤ二量体である、実施形態４８に記載のＡＤＣ。
【０４８８】
５２．構造：
【０４８９】
【化４５】
2019501124.tif 000072
（式中、Ａｂは抗体であり、ｎは２又は４である）
を有する、実施形態５１に記載のＡＤＣ。
【０４９０】
５３．ＡＤＣが２、３又は４のＤＡＲを有するような条件下で、接触ステップが実施される、実施形態４８〜５２のいずれか１つに記載のＡＤＣ。
【０４９１】
５４．実施形態４８に記載のＡＤＣ、並びに賦形剤、担体及び／又は希釈剤を含む組成物。
【０４９２】
５５．ヒトにおける薬学的使用のために製剤化される、実施形態５４に記載の組成物。
【０４９３】
５６．単位剤形である、実施形態５５に記載の組成物。
【０４９４】
５７．ｈｕＬＲＲＣ１５細胞外ドメインに特異的に結合する抗体であって、上記細胞外ドメインは、配列番号３のＡｒｇ５２７及びＳｅｒ５２８によって規定されるタンパク質分解性切断部位を含む抗体を、構造式（ＩＩＩ）Ｄ−Ｌ−Ｒｘ（Ｄは、細胞膜を通過することができる細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤であり、Ｌは、リソソーム酵素によって切断可能なリンカーであり、Ｒｘは、該シントンを該抗体に共有結合させることができる官能基を含む）と、該シントンを該抗体に共有結合的に連結する条件下で接触させることを含む、ＡＤＣを作製する方法。
【０４９５】
５８．抗体がｈｕＭ２５であり、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤がＭＭＡＥである、実施形態５７に記載の方法。
【０４９６】
５９．抗体がｈｕＭ２５であり、細胞毒性剤及び／又は細胞増殖抑制剤がＰＢＤ二量体である、実施形態５７に記載の方法。
【０４９７】
６０．ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍を有するヒトに、治療上の利益を提供するのに十分な、何らかの量の実施態様１２〜２１のいずれか１つに記載のＡＤＣを投与することを含む、ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍を治療する方法。
【０４９８】
６１．ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍が、再発性、難治性、又は再発性及び難治性である、実施形態６０に記載の方法。
【０４９９】
６２．ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍が、神経膠芽腫、肉腫又は黒色腫である、実施形態６０に記載の方法。
【０５００】
６３．ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍が転移性がんである、実施形態６０に記載の方法。
【０５０１】
６４．ＡＤＣが単独療法として投与される、実施形態６０に記載の方法。
【０５０２】
６５．ＡＤＣが、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約６．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で静脈内投与される、実施形態６４に記載の方法。
【０５０３】
６６．ＡＤＣが、別の抗がん療法又は抗がん剤に対して補助的に又はそれとともに投与される、実施形態６０に記載の方法。
【０５０４】
６７．抗がん療法又は抗がん剤が非標的化の抗がん療法である、実施形態６６に記載の方法。
【０５０５】
６８．非標的化抗がん療法が、シスプラチン、ゲムシタビン、ドセタキセル、カルボプラチン、ドキソルビシン、イホスファミド、テモゾロミド、又は放射線である、実施形態６７に記載の方法。
【０５０６】
６９．抗がん療法又は抗がん剤が標的化された抗がん療法である、実施形態６６に記載の方法。
【０５０７】
７０．ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍が神経膠芽腫であり、標的化された抗がん剤が、ベバシズマブ、セツキシマブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、セジラニブ、イマチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、チピファルニブ、ロナファミブ、タモキシフェン、エンザスタウリン、シロリムス、テムシロリムス、エベロリムス、ＡＢＴ−４１４、ビロニスタット、又はシレンギチドである、実施形態６９に記載の方法。
【０５０８】
７１．ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍が肉腫であり、標的化された抗がん剤が、イマチニブ、ダサチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、レゴラフェニブ、パゾパニブ、トラスツズマブ、リツキシマブ、ペンブロリズマブ、又はニボルマブである、実施形態６９に記載の方法。
【０５０９】
７２．ｈｕＬＲＲＣ１５間質（＋）／がん（＋）腫瘍が黒色腫であり、標的化された抗がん剤が、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、トラメチニブ、コビメチニブ、イピリムマブ、ペンブロリズマブ、又はニボルマブである、実施形態６９に記載の方法。
【０５１０】
７３．ＡＤＣが、標的化されていない抗がん療法及び標的化された抗がん療法とともに又はそれに対して補助的に投与される、実施形態６０に記載の方法。
【０５１１】
本出願に引用されているすべての刊行物、特許、特許出願及び他の文書は、恰も個々の刊行物、特許、特許出願又は他の文書がそれぞれすべての目的のために個別に示されているのと同程度に、すべての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０５１２】
様々な特定の実施形態を例示及び記載したが、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく様々な変更を行うことができることが、理解される。
【図１Ａ】
2019501124.tif 000077
【図１Ｂ】
2019501124.tif 000078
【図１Ｃ】
2019501124.tif 000079
【図１Ｄ】
2019501124.tif 000080
【図２Ａ】
2019501124.tif 000081
【図２Ｂ】
2019501124.tif 000082
【図３Ａ】
2019501124.tif 000083
【図３Ｂ】
2019501124.tif 000084
【図４】
2019501124.tif 000085
【図５】
2019501124.tif 000086
【図６Ａ】
2019501124.tif 000087
【図６Ｂ】
2019501124.tif 000088
【図７】
2019501124.tif 000089
【図８】
2019501124.tif 000090
【図９Ａ】
2019501124.tif 000091
【図９Ｂ】
2019501124.tif 000092
【図９Ｃ】
2019501124.tif 000093
【図１０】
2019501124.tif 000094
【図１１Ａ】
2019501124.tif 000095
【図１１Ｂ】
2019501124.tif 000096
【図１１Ｃ】
2019501124.tif 000097
【図１２】
2019501124.tif 000098
【図１３Ａ】
2019501124.tif 000099
【図１３Ｂ】
2019501124.tif 000100
【図１３Ｃ】
2019501124.tif 000101
【図１３Ｄ】
2019501124.tif 000102
【図１３Ｅ】
2019501124.tif 000103
【図１３Ｆ】
2019501124.tif 000104
【図１３Ｇ】
2019501124.tif 000105
【図１３Ｈ】
2019501124.tif 000106
【図１３Ｉ】
2019501124.tif 000107
【図１３Ｊ】
2019501124.tif 000108
【図１４Ａ】
2019501124.tif 000109
【図１４Ｂ】
2019501124.tif 000110
【図１４Ｃ】
2019501124.tif 000111
【図１４Ｄ】
2019501124.tif 000112
【図１４Ｅ】
2019501124.tif 000113
【図１４Ｆ】
2019501124.tif 000114
【図１５】
2019501124.tif 000115
【図１６Ａ】
2019501124.tif 000116
【図１６Ｂ】
2019501124.tif 000117
【図１７】
2019501124.tif 000118
【図１８Ａ】
2019501124.tif 000119
【図１８Ｂ】
2019501124.tif 000120
【図１８Ｃ】
2019501124.tif 000121
【図１８Ｄ】
2019501124.tif 000122
【配列表】
2019501124000001.app
【国際調査報告】
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