【手続補正書】
【提出日】平成19年5月28日(2007.5.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  骨盤部分における神経分布臓器から生じる末梢機能障害を罹患した患者を処置するための、神経増殖因子（ＮＧＦ）単独の使用を除く、神経膠細胞系誘導の神経向性因子（ＧＤＮＦ）ファミリー関連化合物もしくはニューロトロフィン（ＮＴＦ）またはその保存的に置換された変種を単独で、またはその受容体、その結合物質、または該因子をコードするヌクレオチド配列ならびにそのいずれかの機能部分このいずれかの組合せにより含む神経向性因子を含有する、促進性または抑制性の栄養機能として作用する医薬組成物。
【請求項２】  神経向性因子が、神経膠細胞系誘導の神経向性因子（ＧＤＮＦ）ファミリー関連化合物であることを特徴とする、請求項１の医薬組成物。
【請求項３】  神経膠細胞系誘導の神経向性因子（ＧＤＮＦ）ファミリー関連化合物が、ニュールツリン（ＮＲＴＮ）、神経膠細胞系誘導の神経向性因子（ＧＤＮＦ）、アルテミン（ＡＲＴＮ）および／またはペルセフィン（ＰＳＰＮ）を含むことを特徴とする、請求項１または２の医薬組成物。
【請求項４】  ＧＤＮＦファミリー関連化合物が、ニュールツリン（ＮＲＴＮ）であることを特徴とする、請求項１から３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５】  ＧＤＮＦファミリー関連化合物が、神経膠細胞系誘導の神経向性因子（ＧＤＮＦ）であることを特徴とする、請求項１から３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】  神経向性因子が、ニューロトロフィン（ＮＴＦ）を含むことを特徴とする、請求項１の医薬組成物。
【請求項７】  ニューロトロフィン（ＮＴＦ）が、神経増殖因子（ＮＧＦ）、脳誘導の神経向性因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）および／またはニューロトロフィン−４／５（ＮＴ−４／５）を含むことを特徴とする、請求項１または６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８】  骨盤部分における神経分布臓器が、骨盤神経叢、後根神経節（ＤＲＧ）および／または神経節前自律神経ニューロンである、請求項１から７いずれかに記載の医薬組成物。
【請求項９】  末梢神経機能障害が、急性陰茎打撲、陰茎手術、前立腺手術、膀胱手術または他の骨盤手術から生じることを特徴とする、請求項１から８のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１０】  促進性または抑制性の栄養機能として作用する医薬組成物が、経口または非経口で投与される組成物として提供されることを特徴とする、請求項１から９いずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１１】  促進性または抑制性の栄養機能として作用する医薬組成物が、神経向性因子を発現し得るヌクレオチド配列で形質転換された細胞を、陰茎の海綿体または根部に埋め込むのに有用な形態にて提供されることを特徴とする、請求項１から１０のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１２】  埋め込まれる細胞が半透過性膜に封入されることを特徴とする、請求項１１の医薬組成物。
【請求項１３】  促進性または抑制性の栄養機能として作用する医薬組成物が、組換えＤＮＡ法によりつくられたベクターの形態で提供され、該ベクターが少なくとも一つ神経向性因子をコードするヌクレオチド配列を含むことを特徴とする、請求項１から１２いずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１４】  栄養機能が、活性成分としての神経向性因子に加えて、投与経路に適合する少なくとも１つの任意の薬学的に許容される助剤を含むことを特徴とする、請求項１から１３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１５】  患者の骨盤神経叢または陰茎感覚ニューロンについて促進性または抑制性の栄養機能として作用する医薬品が、ＧＤＮＦファミリー受容体αＧＦＲα１−４、ｔｒｋＡ、ｔｒｋＢ、ｔｒｋＣチロシン・キナーゼ受容体ならびにｐ７５受容体を含むＲｅｔチロシン・キナーゼ受容体についての結合基質であることを特徴とする、請求項１から１４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１６】  促進性または抑制性の栄養機能として作用する医薬組成物が、ＧＤＮＦファミリー受容体αＧＦＲα１−４、ｔｒｋＡ、ｔｒｋＢ、ｔｒｋＣチロシン・キナーゼ受容体ならびにｐ７５受容体を含むＲｅｔチロシン・キナーゼ受容体により介されるシグナル伝達の調節によって媒介されることを特徴とする、請求項１から１５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１７】  急性陰茎打撲、陰茎手術、前立腺手術、膀胱手術、または骨盤神経叢、後根神経節（ＤＲＧ）および／または神経節前自律神経ニューロンを含む骨盤部分の神経分布臓器における他の骨盤手術を原因とする末梢機能障害を罹患した患者を処置するための、ニュールツリン（ＮＲＴＮ）または保存的に置換されたその変種を単独、または神経膠細胞系誘導の神経向性因子（ＧＤＮＦ）ファミリー関連化合物またはニューロトロフィン（ＮＴＦ）、その受容体、その結合物質または該因子をコードするヌクレオチド配列ならびにいずれかのその機能部分との併用にて含有する、促進性または抑制性の栄養機能として作用する医薬組成物。
【請求項１８】  急性陰茎打撲、陰茎手術、前立腺手術、膀胱手術、または骨盤神経叢、後根神経節（ＤＲＧ）および／または神経節前自律神経ニューロンを含む骨盤部分の神経分布臓器における他の骨盤手術を原因とする末梢機能障害を罹患した患者を処置するための、神経膠細胞系誘導の神経向性因子（ＧＤＮＦ）ファミリー関連化合物または保存的に置換されたその変種を単独、または神経膠細胞系誘導の神経向性因子（ＧＤＮＦ）ファミリー関連化合物またはニューロトロフィン（ＮＴＦ）、その受容体、その結合物質または該因子をコードするヌクレオチド配列ならびにいずれかのその機能部分との併用にて含有する、促進性または抑制性の栄養機能として作用する医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
（図面の簡単な説明）
図１は、陰茎根部におけるＮＴＮｍＲＮＡ発現を示す。
図２は、ＭＰＧにおけるＮＴＮ受容体成分についてのｍＲＮＡ発現を示す。
図３は、成ラットの骨盤臓器におけるＮＴＮｍＲＮＡ発現のノーザンブロット分析を示す。
図４は、１２５Ｉ−ＮＴＮの陰茎根部からＭＰＧおよびＤＲＧへの逆行性軸索性輸送を示す。
図５は、両側海綿体神経の軸索切開（ａｘ）および擬操作後の成ラットの陰茎中のＮＴＮｍＲＮＡレベルを示す。
図６は、ＧＦＲα２-/-および野生型マウスの陰茎におけるＮＡＤＰＨジアフォラーゼの組織化学を示す。
図７は、陰茎根部におけるＧＤＮＦｍＲＮＡ発現を示す。
図８は、成ラットの骨盤臓器におけるＧＤＮＦｍＲＮＡ発現のノーザンブロット分析を示す。
図９は、１２５Ｉ−ＧＤＮＦの成ラットＭＰＧおよび異なるＤＲＧへの逆行性輸送についての数量化および特性を示す。
図１０は、１２５Ｉ−ＧＤＮＦの陰茎根部からＭＰＧおよびＤＲＧへの逆行性軸索性輸送を示す。
図１１は、受胎１３日のマウス三叉神経の神経節のコラーゲンゲルにおける３日後の軸索発芽後成長を示す。
図１２は、成マウスＭＰＧにおけるＧＦＲα３およびＲｅｔのｍＲＮＡ発現およびＳ１ＤＲＧにおけるＧＦＲα３のｍＲＮＡ発現を示す。
図１３は、成マウスの骨盤におけるＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ−３のｍＲＮＡのＲＮＡ調製およびノーザンハイブリダイゼーションを示す。
図１４は、１２５Ｉ−ＮＴＮ、１２５Ｉ−ＢＤＮＦ、１２５Ｉ−ＭＴ−３の成ラットＭＰＧおよび異なるＤＲＧへの逆行性輸送についての数量化および特性を示す。
図面は、発明の一般的説明の後に詳細に説明する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
「誘導体または変種」なる用語は、本発明の「神経向性因子」の二つの主たるグループとして、その各受容体のシグナル伝達に作用する化合物を意味する。「誘導体または変種」は、該神経向性因子のヒト型と、アミノ酸レベルで少なくとも８０％、好ましくは８５％、極めて好ましくは９０％以上の意味ある類似性または同一性を持つ「実質的に相同」のポリペプチドを含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
「神経向性因子およびその保存的に置換された変種」なる用語は、上に定義した「神経向性因子」に特有の構造、性質および機能を持つポリペプチドを含む。すなわち、「神経向性因子およびその保存的に置換された変種」なる用語は、上記の神経向性因子を含み、そこでは１個またはそれ以上のアミノ酸残基が別のアミノ酸残基で置換されている。さらに、該神経向性因子の切断型、複合型または化学的置換型もこの用語に含まれる。化学的置換型は、神経向性因子の性質および機能を妨げない限り、メチル基またはエチル基のような小さい分子を用いた置換度の小さい、アルキル型、エステル型、エーテル型、アミド型などを含む。該ポリペプチドの切断型、複合型および／または置換型変種は、酵素的および組替えＤＮＡ技術を含め、合成的または半合成的に作ることができる。他の前提要件は、変種が実質的に相同であって該神経向性因子に特有の性質を持ち、および／またはその機能を発現することである。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
「神経向性因子をコードする核酸配列」なる用語は、神経膠細胞系誘導の神経向性因子（ＧＤＮＦ）ファミリー関連化合物またはニューロトロフィン（ＮＴＦ）、その受容体およびその結合物質をコードする核酸配列を意味する。さらに、該因子をコードするヌクレオチド配列もこの定義に含まれる。ＧＤＮＦファミリー関連化合物は、ニュールツリン（ＮＴＮ）、神経膠細胞系誘導の神経向性因子（ＧＤＮＦ）、アルテミン（ＡＲＴＮ）および／またはペルセフィン（ＰＳＰＮ）を含む。ニューロトロフィン（ＮＴＦ）は、「実質的に同一または類似の核酸配列」のみならず、神経因子（ＮＧＦ）、脳誘導の神経向性因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）および／またはニューロトロフィン−４／５（ＮＴ−４／５）を含む。該「ヌクレオチド配列」または、その相補的配列またはその一部を構成する配列、例えば３’−末端または５’−末端で切断したフラグメントおよび点変異を含むヌクレオチド配列は、該核酸配列を運ぶ細胞または細胞株を生産するためのＤＮＡ構成物を作るプローブまたはプライマーとして特に有用である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４８】
ＮＴＮの役割は、陰茎の副交感神経系ニューロンに対する標的誘導の神経向性因子として特徴づけられた。得られたデータは、いくつかのＧＤＮＦファミリー族が陰茎の感覚および副交感神経系ニューロンの機能を制御するのと協調して作用することを示している。陰茎神経に対するＧＤＮＦおよびＮＴＮの役割を評価するため、成熟ラットの陰茎の根部におけるその発現が、インシトゥ・ハイブリッド形成法およびノーザン・ハイブリッド形成法によって研究された。ＧＤＮＦ  ｍＲＮＡを発現する陰茎細胞の特徴づけに免疫細胞化学が用いられた。１２５Ｉ−ＧＤＮＦまたは１２５Ｉ−ＮＴＮが静脈内投与され、その逆行性輸送が知覚および副交感神経系陰茎神経で研究された。陰茎でのＮＴＮ  ｍＲＮＡの合成が神経細胞性制御下にあるかどうかを調べるため、その発現が海綿体神経の軸索切断後に研究された。陰茎投射神経のＧＦＲα２媒介シグナリングの生理学的重要性をさらに明らかにするため、ＧＦＲα２-/-マウスにて陰茎神経支配が研究された。その結果は、陰茎の感覚神経および勃起誘発神経の神経支配／維持／再生におけるニューロトロフィンの役割を示唆する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
ニューツリン（ＮＴＮ）および、これに限定しないがアルテミンおよびペルセフィンを含む、神経向性因子の神経膠細胞系誘導の神経向性因子（ＧＤＮＦ）ファミリーの他のメンバーは、発育中および成熟したげっ歯類における中脳ドーパミン作用性ニューロン、感覚ニューロンおよび運動ニューロンを含む、中枢性および末梢性神経系ニューロンの幾つかの母集団の存続を促進する。ＮＴＮは陰茎投射の副交換神経性ニューロンの内因性栄養因子と同定された。ＮＴＮ  ｍＲＮＡは、成熟ラットの陰茎血管平滑筋および陰茎海綿体、ならびに他の二、三の骨盤器官内にもに発現された。ＮＴＮ受容体構成要素であるＧＦＲα２およびＲｅｔ  ｍＲＮＡは陰茎副交感神経系ニューロンの至る所で発現された。副交感神経系および感覚ニューロンにおける、陰茎に注射した１２５Ｉ−ＮＴＮの逆行性輸送によって、この系のＮＴＮの機能性が確認された。陰茎内のＮＴＮ  ｍＲＮＡレベルは、両側性空洞性神経の軸索切断後も変わらなかった。ＧＦＲα２-/-マウスの背面陰茎神経および海綿体神経の両方において、神経線維を含む一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）の意味ある大きな減少は、陰茎神経支配に対するＧＦＲα２の生理的重要性を示した。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
ＧＦＲα２-/-マウスには(Rossi, 1996)、すべてではないが幾つかの副交感神経系ニューロンに欠陥があるとの最近の観察が、陰茎の一酸化窒素作用性神経支配がこの遺伝子の除去によって変わるかどうかを研究するきっかけとなった。ＧＦＲα２を欠くマウスは、背面神経および陰茎脚の両方に線維を含む、かなり減少した数のＮＯＳを持っていることが分った。陰茎における一酸化窒素作用性線維の密度の減少がニューロンの欠損または軸索分枝の減少に因るのかどうかは、将来の研究で示されるであろう。理由はともあれ、現データは陰茎の副交感神経系ニューロンへのＧＦＲα２介在シグナリングの機能的役割についての証拠を提供する。この観点で、ＧＦＲα２-/-マウスが多産であることは、少々驚異的なことのように思われる(Rossi, 1999)。しかしながら、当結果が繁殖成果のわずかなな欠陥を除外するものではない。他方、遺伝子を除去されたマウスにおいては、除去された遺伝子に高度に依存すると思われる働きを、代償機構が引き継ぐのは一般的なことである。例えば、神経性ＮＯＳ遺伝子の標的除去を受けたマウスは、陰茎の内皮性ＮＯＳの発現を増加させる(Burnett, 1996)。他のＧＤＮＦファミリー族の代償作用は、ＧＦＲα２-/-マウスにおける陰茎の一酸化窒素作用性の神経支配が部分的に存在することに対する、もうひとつの可能な説明である。好ましい補受容体のＧＦＲα１が陰茎のＭＰＧニューロンの半分以上で発現するから、この結果は特にＧＤＮＦの代償作用の役割を示している。他の神経栄養因子により仲介される機能もまた合理的な可能性を持っている。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
副交感神経系陰茎ニューロンの栄養因子としてのＮＴＮの役割は、陰茎平滑筋におけるＮＴＮ  ｍＲＮＡの発現および神経末端から大骨盤神経節（ＭＰＧ）ニューロンの細胞体への１２５Ｉ―ＮＴＮの輸送によって示される。さらに、これれの結果は、陰茎でのＮＴＮ  ｍＲＮＡ発現は海綿体神経切除の後で変わらなかったことを示している。ＧＦＲα２-/-マウスにおいて神経線維を含むＮＯＳの減少は、インビボ副交換神経系陰茎ニューロンへのＧＦＲα２介在シグナリングの生理的役割に注意を向けさせる。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０３】
結果５
ＧＦＲα２-/-マウスの陰茎神経におけるＮＡＤＰＨジアフォラーゼ着色の喪失
ＧＦＲα２-/-および野生型マウスの陰茎根部およびクラーレの近位部分についての組織化学的検査において、ＮＡＤＰＨ陽性神経線維の明白なパターンを認めた。ＧＦＲα２-/-マウスは背面陰茎神経に非常に少ないＮＡＤＰＨ陽性神経線維を有し、一方、野生型マウスの線維密度はラットでの報告（Jung, 1998）に同じであった（図６、Ａ、Ｂ、Ｅ）。クラーレの海綿体管を供給する神経の染色パターンに明確な差異がなかった（図６、ＣおよびＤ)。しかし、クラーレにおいてＮＡＤＰＨ陽性神経線維が血管周囲部の外側で顕著に減少した（図６、Ｃ、Ｄ、Ｅ）。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０４】
結果６
成ラットの陰茎根部におけるＧＤＮＦｍＲＮＡ発現
図７Ａは、３５Ｓ標識ＧＤＮＦリボプローブとのハイブリダイゼーション後に得た組織切片のオートラジオグラムを示す。強いシグナルが白膜と海綿体との境界に位置する細胞層に見られる（図７、ＡおよびＣ）。一方、センスプローブとハイブリダイズされた切片では検出可能なシグナルがなかった（図７Ｂ）。ＧＤＮＦｍＲＮＡ発現細胞はヘマトキシリン着色により明らかになった顕著な核を有する（図７Ｃ）。ビメンチンまたはＳ１００βに対する抗体で着色された隣接切片が、これらの細胞において免疫反応性を表した（図７、ＤおよびＥ）。ＰＧＰ９.５に対する抗体および平滑筋αアクチンでの着色は、これらの細胞で免疫反応性を示さなかった（データを表示せず）。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１５】
図６は、ＧＦＲα２-/-および野生型マウスの陰茎におけるＮＡＤＰＨジアフォラーゼの組織化学を示す。野生型（Ａ）およびＧＦＲα２-/-（Ｂ）マウスの陰茎根部の近位部分の断面図である。背面陰茎神経の着色（矢印）がＧＦＲα２-/-マウスで顕著に消失する。（ＣおよびＤ）野生型および４匹のＧＦＲα２-/-マウスについての結果を平均±ＳＥＤで示す。＊＊、Ｐ＜０.０１（２テイルStudent's t 検定が不均衡分散を推定する）。［尺度バー：Ａ−Ｄ、１００μｍ］。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】  陰茎根部におけるＮＴＮｍＲＮＡ発現を示す。
【図２】  ＭＰＧにおけるＮＴＮ受容体成分についてのｍＲＮＡ発現を示す。
【図３】  成ラットの骨盤臓器におけるＮＴＮｍＲＮＡ発現のノーザンブロット分析を示す。
【図４】  １２５Ｉ−ＮＴＮの陰茎根部からＭＰＧおよびＤＲＧへの逆行性軸索性輸送を示す。
【図５】  両側海綿体神経の軸索切開（ａｘ）および擬操作後の成ラットの陰茎中のＮＴＮｍＲＮＡレベルを示す。
【図６】  ＧＦＲα２-/-および野生型マウスの陰茎におけるＮＡＤＰＨジアフォラーゼの組織化学を示す。
【図７】  陰茎根部におけるＧＤＮＦｍＲＮＡ発現を示す。
【図８】  成ラットの骨盤臓器におけるＧＤＮＦｍＲＮＡ発現のノーザンブロット分析を示す。
【図９】  １２５Ｉ−ＧＤＮＦの成ラットＭＰＧおよび異なるＤＲＧへの逆行性輸送についての数量化および特性を示す。
【図１０】  １２５Ｉ−ＧＤＮＦの陰茎根部からＭＰＧおよびＤＲＧへの逆行性軸索性輸送を示す。
【図１１】  受胎１３日のマウス三叉神経の神経節のコラーゲンゲルにおける３日後の軸索発芽後成長を示す。
【図１２】  成マウスＭＰＧにおけるＧＦＲα３およびＲｅｔのｍＲＮＡ発現およびＳ１ＤＲＧにおけるＧＦＲα３のｍＲＮＡ発現を示す。
【図１３】  成マウスの骨盤におけるＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ−３のｍＲＮＡのＲＮＡ調製およびノーザンハイブリダイゼーションを示す。
【図１４】  １２５Ｉ−ＮＴＮ、１２５Ｉ−ＢＤＮＦ、１２５Ｉ−ＭＴ−３の成ラットＭＰＧおよび異なるＤＲＧへの逆行性輸送についての数量化および特性を示す。