(57)【要約】  本発明の主題は、９５％より高い純度を有する、式（Ｉ）のラタノプロステンブノドを製造する方法であって、順相重力シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用したクロマトグラフィーが用いられ、用いられたシリカゲルが破砕状シリカゲルまたは球状シリカゲルであり、溶離液として、無極性溶媒および極性溶媒からなる溶離液混合物が用いられ、必要に応じて、溶媒から生じる式Ｉの精製化合物の不純物混入を、シリカゲル濾過クロマトグラフィーによって除去する、方法である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
９５％より高い純度を有する、式（Ｉ）のラタノプロステンブノドを製造する方法であって、
【化１】
2019501146.tif 000030
シリカゲルとして、
ａ．）粒径６３〜２００ミクロンの順相破砕状シリカゲル、または
ｂ．）粒径５０〜１５０ミクロンの順相球状シリカゲル、および
溶離液として、無極性溶媒および極性溶媒からなる溶離液混合物
を用いた順相重力シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用して、式（Ｉ）の粗ラタノプロステンブノドをクロマトグラフィーで精製し、
必要に応じて、式（Ｉ）の化合物の精製クロマトグラフィーで用いた溶離液から生じる不純物をシリカゲル濾過クロマトグラフィーで除去する、前記方法。
【請求項２】
溶離液混合物が、無極性溶媒として、直鎖状もしくは分枝鎖状の脂肪族炭化水素、環状炭化水素、または芳香族炭化水素、ハロゲン化脂肪族炭化水素、またはエーテル系溶媒を含む、請求項１に記載の方法ａ．）または方法ｂ．）。
【請求項３】
無極性溶媒として、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、ジクロロメタン、またはジイソプロピルエーテル、好ましくはヘキサンが利用される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
極性溶媒として、直鎖状アルキル基または分枝鎖状アルキル基を含んだ、アルコール系溶媒、エステル系溶媒、またはケトン系溶媒が利用される、請求項１に記載の方法ａ．）または方法ｂ．）。
【請求項５】
極性溶媒として、Ｃ１〜５アルコール、好ましくはエチルアルコールまたはイソプロピルアルコールが利用される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
溶離液混合物が、６：１〜８：１の体積比のヘキサンおよびエチルアルコールを含む勾配混合物である、請求項３または５に記載の方法。
【請求項７】
極性溶媒として、ケトン系溶媒、好ましくはアセトンが利用される、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
溶離液混合物が、２：１の体積比のヘキサンおよびアセトンを含む、請求項３または７に記載の方法。
【請求項９】
溶離液混合物が、無極性溶媒および極性溶媒を含む、請求項１に記載の濾過クロマトグラフィー方法。
【請求項１０】
溶離液混合物が、無極性溶媒として、場合によりハロゲン置換された、直鎖状もしくは分枝鎖状の開鎖炭化水素、または環状炭化水素、または芳香族炭化水素を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
溶離液混合物が、極性溶媒として、直鎖状もしくは分枝鎖状の開鎖アルキル基、または環状のアルキル基、またはシクロアルキル基を含んだ、アルコール系溶媒、エーテル系溶媒、エステル系溶媒、またはケトン系溶媒を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
溶離液混合物が、２：１の体積比のジクロロメタンおよび酢酸エチルを含む、請求項１１および１２に記載の方法。
【請求項１３】
以下の品質要件を満たす、式（Ｉ）の高純度ラタノプロステンブノド。
【表１】
2019501146.tif 000031
【請求項１４】
以下の品質要件を満たす、式（Ｉ）の純粋ラタノプロステンブノド。
【表２】
2019501146.tif 000032
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、９５％より高い純度を有する、式（Ｉ）のラタノプロステンブノドの製造、その中でも、新規の高純度（＞９９．２％）ラタノプロステンブノドの製造に関連する。
【化１】
2019501146.tif 000002
【背景技術】
【０００２】
緑内障は、視野の損失をもたらし、治療されない場合、不可逆的失明をもたらす、眼圧の増大による視神経の損傷である。その病気の罹患率は高く、年齢と共に増加する。世界的な推定試算によれば、２０１３年に約６０．５百万の人々が、原発開放隅角緑内障または原発閉塞隅角緑内障を患っていた。緑内障に罹患した人の数は、平均年齢が高くなるほど著しく増加することになる（非特許文献１）。
【０００３】
緑内障は、房水生成を低減することによって（β受容体遮断薬、α２受容体作用薬、局所炭酸脱水酵素遮蔽薬によって）、またはプロスタグランジン活性成分を含む点眼薬でぶどう膜強膜流出量を増やすことによって、治療することができる。
【０００４】
ラタノプロストは、緑内障の治療で用いられた第１のプロスタグランジン誘導体であり（非特許文献２）、その後さらなるＰＧＦ２α誘導体（トラボプロスト、ビマトプロスト、タフルプロスト、ウノプロストン）が続いた（非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５、ダウンロード日：２０１５年１０月１５日）。
【０００５】
しかし、従来の眼圧の調整は、抗緑内障薬によって標的となった経路においてではなく、小柱網およびシュレム管を介した房水流出の調整によって進められている。生理的条件の下、従来、重要な細胞シグナル分子、内因性一酸化窒素もまた、眼圧調整の方法に用いられている（最近の報告書：非特許文献６、ダウンロード日：２０１５年１０月１５日）。
【０００６】
従来の眼圧調整の経路（眼液の小柱排出（ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ  ｄｒａｉｎ−ａｗａｙ））、およびＰＧＦ２α型抗緑内障薬の作用メカニズム（眼液のぶどう膜強膜排出）は、特許明細書特許文献１に記載のプロスタグランジンニトロオキシ誘導体によって組み合わされる。
【０００７】
選択された分子は、式Ｉのラタノプロスト酸誘導体であり、
【化２】
2019501146.tif 000003
明細書においてＮＣＸ−１１６、ＩＮＮ名：ラタノプロステンブノドと称され、体内でラタノプロスト酸および一酸化窒素へ加水分解される。
【０００８】
特許明細書特許文献１は、実施例部分において、式Ｉの分子（ＮＣＸ−１１６）をｍｇ規模で製造することを記載しているが、生成物の品質および精製方法は述べられていない。
【０００９】
特許文献１によるラタノプロステンブノドの製造：
側鎖の製造：
【化３】
2019501146.tif 000004
ラタノプロスト酸のアルキル化：
【化４】
2019501146.tif 000005
ラタノプロスト酸は、ラタノプロストのアルカリ加水分解によって得られる：
【化５】
2019501146.tif 000006
【００１０】
現在の技術水準において、活性成分は、新式のクロマトグラフィー技術を利用して所望の純度で製造することができる。しかし、生成物の純度を高めることは、生産費用を著しく上げる。最も有効な精製は、高圧の、順相および逆相の、分取液体クロマトグラフィー法を利用して成し遂げることができる。しかし、この非常に有効な精製方法には、いくつかの欠点がある。最も重要な要因は、費用であり、この方法によって精製された生成物の価格が著しく高くなる。高圧技術は、費用がかかる耐圧装置、高価な、粒径５〜１０ミクロンのシリカゲル（固定相）、ならびに高価な、濾過されたおよび／または蒸留された高純度溶媒（移動相）を必要とする。
【００１１】
さらなる欠点は時間要件である。分離サイクルの実行時間は短く、１〜２時間であるが、工業規模の生産は、数十の、または数百回の実行が必要であることがあり、分離に要する時間もかなり長くなる。
【００１２】
さらなる課題は、各実行のまとめた主分画中の溶液中の、既に精製され、化学的にしばしば影響を受けやすい生成物が、方法の間に引き続いて分解しないことを確実にすることであり得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】ＷＯ２００５０６８４２１
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｏｐｈｔａｌｍｏｌｏｇｙ、２０１４、１２１、２０８１〜２０９０
【非特許文献２】Ｓｔｊｅｒｎｓｃｈａｎｔｚ  Ｊ、Ｒｅｓｕｌ  Ｂ．、Ｐｈｅｎｙｌ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  ａｎａｌｏｇｓ  ｆｏｒ  ｇｌａｕｃｏｍａ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ、Ｄｒｕｇｓ  Ｆｕｔｕｒｅ、１９９２；１７、６９１〜７０４
【非特許文献３】Ａｚ  Ｅｇｅｓｚｓｅｇｕｇｙｉ  Ｍｉｎｉｓｚｔｅｒｉｕｍ  ｓｚａｋｍａｉ  ｐｒｏｔｏｋｏｌｌｊａ：Ａ  ｇｌａｕｋｏｍａ  ｋｅｚｅｌｅｓｅｒｏｌ／Ｐｒｏｔｏｃｏｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｍｉｎｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ｏｆ  Ｈｕｎｇａｒｙ：Ａｂｏｕｔ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｇｌａｕｃｏｍａ
【非特許文献４】Ｓｕｖｅｇｅｓ、Ｉｌｄｉｋｏ：Ｓｚｅｍｅｓｚｅｔ、Ｍｅｄｉｃｉｎａ  Ｋｏｎｙｖｋｉａｄｏ、２０１０：Ａ  ｇｌａｕｋｏｍａ  ｔｉｐｕｓａｉ  ｅｓ  ｋｅｚｅｌｅｓｕｋ／Ｓｕｖｅｇｅｓ、Ｉｌｄｉｋｏ、ｉｎ  ｂｏｏｋ  Ｏｐｈｔａｌｍｏｌｏｇｙ、Ｍｅｄｉｃｉｎａ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ、２０１０：Ｔｙｐｅｓ  ｏｆ  ｇｌａｕｃｏｍａ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ／、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｔａｎｋｏｎｙｖｔａｒ．ｈｕ／ｈｕ／ｔａｒｔａｌｏｍ／ｔａｍｏｐ４２５／２０１１＿０００１＿５２４＿ｓｚｅｍｅｓｚｅｔ／ｃｈ１０ｓ０４．ｈｔｍｌ
【非特許文献５】Ｌｅｅ，Ｄａｖｉｄ  Ａ．，Ｈｉｇｇｉｎｂｏｔｈａｍ、Ｅｖｅ  Ｊ．：Ｇｌａｕｃｏｍａ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ：Ａ  ｒｅｖｉｅｗ、Ａｍ．Ｊ．Ｈｅａｌｔｈ＿Ｓｙｓｔ  Ｐｈａｒｍ．、２００５、６２、６９１〜６９９
【非特許文献６】Ｍｅｇａｎ  Ｅ．Ｃａｖｅｔ、Ｊａｓｏｎ  Ｌ．Ｖｉｔｔｉｔｏｗ、Ｆｒａｎｃｅｓｃｏ  Ｉｍｐａｇｎａｔｉｅｌｌｏ、Ｅｎｎｉｏ  Ｏｎｇｉｎｉ、およびＥｌｅｎａ  Ｂａｓｔｉａ、Ｎｉｔｒｉｃ  Ｏｘｉｄｅ（ＮＯ）：Ａｎ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｇｌａｕｃｏｍａ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．、２０１４、５５、５００５〜５０１５  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｏｖｓ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／５５／８／５００５．ｓｈｏｒｔ
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の目的は、特許明細書特許文献１に記載の方法によって製造された、式Ｉの粗生成物のためのクロマトグラフィー精製方法を精巧に考案することであり、その方法は、経済的で、強固で、規模拡大可能であり、得られる精製生成物が、許容範囲を超える、より高濃度の異性体不純物および技術的不純物を含まないことを確実にする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
重力シリカゲルカラムクロマトグラフィーによってラタノプロステンブノド粗生成物を精製することにより、本発明の目的を達成することができることを見出した。というのは、この精製方法は、経費削減になり、強固で、容易に規模拡大するからである。その方法を利用すると、生成物の異性体不純物および技術的不純物の量を所望の基準まで減らすことができる。方法のさらなる利点は、費用のかかる装置、高価なシリカゲル、および大量の精製溶媒を必要としないことである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明のクロマトグラフィー実験に基づいて、発明者らは、
ラタノプロステンブノド粗生成物が、ラタノプロスト酸を含まず、
不純物ｘ−１（ＲＲＴ＝０．３３）およびラタノプロスト（ＲＲＴ＝０．８１）を、２種のシリカゲルのいずれかで充填されたカラムで、研究された溶離液混合物のいずれかを用いることによって除去することができ、
不純物１５Ｓ−ラタノプロステンブノドについて、アセトンを含んだ溶離液を用いてのみ、有意に減少させることができ、より高価な球状シリカゲルで充填されたカラムにおいてのみ、良好な収率（約７４％）を得ることができ、
５，６−ｔｒａｎｓ−ラタノプロステンブノド不純物の量を、球状シリカゲルで充填されたカラムで、ヘキサン：アセトン＝２：１溶離液混合物を用いて、有意に減らすことができ（９６％）、収率：約７４％、
不純物ｘ−２（ＲＲＴ＝１．４６）を、最も経済的な破砕状シリカゲルで充填されたカラムで、良好な収率（＞８３％）で完全に除去することができるが、その量は、やはり、球状シリカゲルで充填されたカラムで、ヘキサン：アセトン＝２：１溶離液混合物を用いることによって、有意に減少し（９５％）、収率約７４％、
特定されておらず、定められていない全ての他の不純物を、破砕状シリカゲルで充填されたカラムで、ヘキサン：エタノール溶離液混合物を用いることによって、または球状シリカゲルで充填されたカラムで、ヘキサン：アセトン＝２：１溶離液混合物を用いることによって、良好な収率で、粗生成物から除去することができることを明らかにした。
【００１８】
上記の結果に基づいて、所望の、予め定められた品質のラタノプロステンブノド生成物は、適切なシリカゲルおよび溶離液混合物を選択した、経済的な重力カラムクロマトグラフィーによって製造することができる。
【００１９】
ラタノプロステンブノドについて、ＵＳＰ要件は設定されていない。発明者らは、正当な理由で、ラタノプロステンブノド生成物の不純物プロファイルが、最も広く用いられる抗緑内障プロスタグランジン活性物質、ラタノプロストのＵＳＰ要件に合わなければならないか、またはラタノプロストのＵＳＰ要件を類似的に満たさなければならないと仮定する。
【００２０】
【表１】
2019501146.tif 000007
【００２１】
類似の品質に達するために、最も厳しい難題は、ラタノプロステンブノドの不純物ＲＲＴ＝１．４６（ｘ−２）を除去することであった。
【００２２】
固定相の場合に、孔径６０オングストローム、粒径６３〜２００ミクロンの、最も経済的な、工業的に利用できる破砕状シリカゲルが選択された。
【００２３】
移動相について、様々な組成の、無極性溶媒および極性溶媒の二成分混合物が選択された。
【００２４】
二成分混合物の無極性溶媒として、炭化水素、ハロゲン化脂肪族炭化水素、またはエーテル系溶媒、例えば、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、ジクロロメタン、またはジイソプロピルエーテルが選択された。
【００２５】
極性溶媒として、直鎖状アルキル基または分枝鎖状アルキル基を含んだ、アルコール系溶媒、エステル系溶媒、またはケトン系溶媒が利用された。
【００２６】
不純物ＲＲＴ＝１．４６は、研究された溶媒中で、シリカゲルの量に応じて、良好に精製された。また収率を考慮すると、ヘキサン：エタノール勾配混合物が最も有利であると分かった。
【００２７】
６：１組成、８：１組成のヘキサン：エタノール溶離液混合物を用いて規模拡大する間、精製クロマトグラフィーの収率は、８５〜９２％であった。
【００２８】
溶媒から生じる不純物を除去するために、精製クロマトグラフィーの蒸発させた主な分画は、シリカゲルで濾過された。この操作は濾過クロマトグラフィーと称される。
【００２９】
固定相について、孔径６０オングストロームおよび粒径６３〜２００ミクロンの破砕状シリカゲルが再度選択された。
【００３０】
移動相について、ジクロロメタン：酢酸エチル勾配混合物が選択された。規模拡大中の濾過クロマトグラフィーの収率は、９１〜９５％であった。
【００３１】
したがって、精巧に考案された精製方法は、１００ｇ規模まで規模拡大された。
【００３２】
この精製方法から得られるラタノプロステンブノドバッチのＨＰＬＣ純度は、予め設定された要件を満たした。
【００３３】
【表２】
2019501146.tif 000008
【００３４】
これらの実験データは、重力クロマトグラフィー法が、やはり高純度ラタノプロステンブノドの製造に好適であることを支持する。
【００３５】
高純度品質を得るために、特定されていない不純物の濃度が０．１％未満まで低くなければならないだけでなく、既知の、化学的に類似の、それゆえに除去が困難な異性体不純物、すなわち、１５Ｓ−ラタノプロステンブノドおよび５，６−ｔｒａｎｓ−ラタノプロステンブノドの量も有意に減少しなければならない。
【００３６】
高純度ラタノプロステンブノドを製造するために、粗ラタノプロステンブノドは、粒径６３〜２００ミクロンの破砕状シリカゲルで、またはより高価な粒径５０〜１５０ミクロンの球状シリカゲルで充填されたカラムで精製された。
【００３７】
溶離液について、様々な組成の、無極性溶媒および極性溶媒の二成分混合物を利用した。二成分混合物の無極性溶媒として、炭化水素、ハロゲン化脂肪族炭化水素、またはエーテル系溶媒、例えば、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、およびジクロロメタン、またはジイソプロピルエーテルが利用された。
【００３８】
極性溶媒として、直鎖状アルキル基または分枝鎖状アルキル基を含んだ、アルコール系溶媒、エステル系溶媒、またはケトン系溶媒が利用された。
【００３９】
ケトン系溶媒を含んだ溶離液混合物においてのみ、１５Ｓ−ラタノプロステンブノド不純物の量が減少した。
【００４０】
５，６−ｔｒａｎｓ−ラタノプロステンブノド不純物の量は、ヘキサン：アセトン溶離液混合物、ジイソプロピルエーテル：アセトン溶離液混合物を用いたクロマトグラフィーの間に十分に減少した。しかし、クロマトグラフィーの収率は、より高価な球状シリカゲルを利用した場合のみ、満足すべきものであった。
【００４１】
球状シリカゲルで充填されたカラムを用いて、ヘキサン：エタノール溶離液混合物は、やはりトランス異性体の分離に好適であった。
【００４２】
不純物の合計に関して、高純度ラタノプロステンブノドを製造するために、粗生成物は、球状シリカゲルで充填されたカラムで、ヘキサン：アセトン＝２：１溶離液混合物を用いて、クロマトグラフィーにより分析されなければならない。
【００４３】
精製クロマトグラフィーの収率は７２〜７６％である。上記実験結果に基づいて、以下の特性を有する高純度ラタノプロステンブノドを製造することが可能である。
【００４４】
【表３】
2019501146.tif 000009
【００４５】
その場合においても、精製クロマトグラフィーで用いられた溶離液からの有機揮発性不純物を除去するために、精製クロマトグラフィーの主な分画は、シリカゲルで濾過しなければならない。濾過クロマトグラフィーの条件は、上記のものと同じである。固定相は、孔径６０オングストロームおよび粒径６３〜２００ミクロンの破砕状シリカゲルである。
【００４６】
移動相として、ジクロロメタン：酢酸エチル溶離液の勾配混合物が利用される。
【００４７】
濾過クロマトグラフィーの収率は９１〜９５％である。
【００４８】
重力クロマトグラフィーによる精製を介して、様々な品質のラタノプロステンブノド活性物質を製造する方法が実施された。
【００４９】
方法は、粒径６３〜２００ミクロンの、経済的な破砕状Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０シリカゲルを利用することによって、ＵＳＰ品質のラタノプロストの不純物濃度に一致する、不純物濃度を有するラタノプロステンブノドを製造するのに好適である。
【００５０】
方法はまた、より高価な球状シリカゲル固定相を利用しなければならない場合に、高純度ラタノプロステンブノド（不純物の合計≦０．８０％）を製造するのにも好適である。
【００５１】
上記によれば、本発明は、９５％より高い純度を有する、式（Ｉ）のラタノプロステンブノドを製造する方法であって、
【化６】
2019501146.tif 000010
シリカゲルとして、
ａ．）粒径６３〜２００ミクロンの順相破砕状シリカゲル、または
ｂ．）粒径５０〜１５０ミクロンの順相球状シリカゲル、および
溶離液として、無極性溶媒および極性溶媒を含む溶離液混合物
を用いた順相重力シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用して、式（Ｉ）の粗ラタノプロステンブノドをクロマトグラフィーで精製し、
必要に応じて、式（Ｉ）の化合物の精製クロマトグラフィーで用いた溶離液から生じる不純物をシリカゲル濾過クロマトグラフィーで除去する、方法に関連する。
【００５２】
本発明の方法において、以下の品質要件を満たすラタノプロステンブノド生成物を製造することができる。
【００５３】
【表４】
2019501146.tif 000011
【００５４】
無極性溶媒として、溶離液混合物は、直鎖状もしくは分枝鎖状の脂肪族炭化水素、環状炭化水素、または芳香族炭化水素、ハロゲン化脂肪族炭化水素、またはエーテル系溶媒、有利には、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、ジクロロメタン、またはジイソプロピルエーテル、好ましくはヘキサンを含む。
【００５５】
極性溶媒として、直鎖状アルキル基または分枝鎖状アルキル基を含んだ、アルコール系溶媒、エステル系溶媒、またはケトン系溶媒、例えばＣ１〜５アルコール、好ましくはエチルアルコールまたはイソプロピルアルコールを利用することができる。
【００５６】
本発明の一実施形態によれば、６：１〜８：１の体積比のヘキサンおよびエチルアルコールの勾配混合物を含む溶離液と共に、シリカゲルとして粒径６３〜２００ミクロンの順相破砕状シリカゲルが利用される。
【００５７】
本発明の他の実施形態によれば、５，６−ｔｒａｎｓ−ラタノプロステンブノドを除去するために、極性溶媒として、有利には、ケトン系溶媒、好ましくは、アセトンが利用される。最も好ましい一実施形態によれば、シリカゲルとして粒径７５ミクロンの球状シリカゲル、および溶離液としてヘキサン：アセトンが２：１の体積比の混合物が用いられる。
【００５８】
式Ｉの精製化合物の品質が以下の品質要件を満たす場合：
【表５】
2019501146.tif 000012
【００５９】
必要に応じて、式の化合物の精製クロマトグラフィーで用いた溶離液から生じる不純物をシリカゲル濾過クロマトグラフィーで除去する。濾過クロマトグラフィーの溶離液混合物は、極性溶媒および無極性溶媒で構成される。
【００６０】
無極性溶媒として、場合によりハロゲン置換された、直鎖状もしくは分枝鎖状の開鎖脂肪族炭化水素、または環状炭化水素、または芳香族炭化水素があり、一方極性溶媒として、直鎖状もしくは分枝鎖状の開鎖アルキル基、または環状アルキル基、またはシクロアルキル基を含んだ、アルコール系溶媒、エーテル系溶媒、エステル系溶媒、またはケトン系溶媒がある。好ましい一実施形態において、溶離液混合物は、２：１の体積比のジクロロメタンおよび酢酸エチルを含む。
【００６１】
濾過クロマトグラフィーを実施する前に、溶離液として用いられる溶媒は、プレ分画（ｐｒｅ−ｆｒａｃｔｉｏｎ）として約１０％を取り、残留物として約１０％を残した後、溶媒の約８０％がクロマトグラフィーに用いられるように蒸留された。
【００６２】
蒸留前の購入した溶媒の品質：
ジクロロメタン：ＧＣによる純度≧９９．０％
酢酸エチル：ＧＣによる純度≧９９．５％
【００６３】
分取クロマトグラフィー法および／またはフラッシュクロマトグラフィー法と比較した、本発明の精製方法の利点：
費用削減でき、工業的に容易に実現される。
非常に有効な精製方法は、最も費用削減されるクロマトグラフィー法である、重力クロマトグラフィーによって実施される。というのは：
中圧および高圧の液体クロマトグラフィーシステムのような高価な耐圧装置を必要とせず、
重力クロマトグラフィーの固定相として用いられるシリカゲルが、中圧および高圧のクロマトグラフィーシステムで用いられるシリカゲルよりもより安価であり、
重力カラムで、精製を、１回の実行で行うことができ、このことにより製造時間が短くなるからである。
【００６４】
本発明のさらなる詳細は、本発明を実施例に限定することなく、実施例に明示されている。
【実施例１】
【００６５】
ラタノプロステンブノドの精製
４−ニトロオキシブチル（Ｚ）−７−［（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−２−［（３Ｒ）−３−ヒドロキシ−５−フェニル−ペンチル］シクロペンチル］ヘプタ−５−エノエート
粗ラタノプロステンブノド４６１．０ｇをジクロロメタンに溶解させた。溶液を、百倍の量（粗生成物に対し算出）の、孔径６０オングストローム、粒径６３〜２００ミクロンの破砕状シリカゲルで充填されたカラムで、ヘキサン：エタノール＝８：１〜６：１溶離液混合物を用いた重力クロマトグラフィーによって精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：４０１．１ｇ（８７％）。精製クロマトグラフィーで用いられた溶離液から生じる、生成物の不純物は、濾過クロマトグラフィーによって除去された。溶解には、ジクロロメタン：酢酸エチル混合物を用いた。溶液を、１０倍の量（蒸発させた生成物に対し算出）の、孔径６０オングストローム、粒径６３〜２００ミクロンの破砕状シリカゲルで充填されたカラムで、ジクロロメタン：酢酸エチル＝２：１溶離液混合物を用いた重力クロマトグラフィーによって精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：３６４．９ｇ（９１％）。
【００６６】
精製中のラタノプロステンブノドの品質の改善（ＨＰＬＣ面積％）：
【表６】
2019501146.tif 000013
【実施例２】
【００６７】
粗ラタノプロステンブノド５０．０ｇをトルエンに溶解させた。ヘキサン：アセトン混合物を添加し、溶液を、粒径７５ミクロン、孔径６０オングストロームのＹＭＣ球状シリカゲル５０００ｇで充填されたカラムで、ヘキサン：アセトン＝２：１混合溶離液を用いた重力クロマトグラフィーで精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：３８．０ｇ（７６％）。
【００６８】
【表７】
2019501146.tif 000014
【実施例３】
【００６９】
粗ラタノプロステンブノド１．０ｇをジクロロメタンに溶解させた。ジイソプロピルエーテル：メタノール混合物を添加し、溶液を、粒径６３〜２００ミクロン、孔径６０オングストロームの破砕状シリカゲル２５ｇで充填されたカラムで、溶離液としてジイソプロピルエーテル：メタノール勾配混合物を用いた重力クロマトグラフィーによって精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：０．７０４ｇ（７０％）。
【００７０】
【表８】
2019501146.tif 000015
【実施例４】
【００７１】
粗ラタノプロステンブノド１．０ｇをトルエンに溶解させた。ヘキサン：アセトン混合物を添加し、溶液を、粒径６３〜２００ミクロン、孔径６０オングストロームの破砕状シリカゲル５０ｇで充填されたカラムで、ヘキサン：アセトン＝２：１混合溶離液を用いた重力クロマトグラフィーによって精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：０．５５ｇ（５５％）。
【００７２】
【表９】
2019501146.tif 000016
【実施例５】
【００７３】
粗ラタノプロステンブノド１．０ｇをトルエンに溶解させた。ヘキサン：アセトン混合物を添加し、溶液を、粒径６３〜２００ミクロン、孔径６０オングストロームの破砕状シリカゲル１００ｇで充填されたカラムで、ヘキサン：アセトン＝２：１混合溶離液を用いた重力クロマトグラフィーによって精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：０．５１ｇ（５１％）。
【００７４】
【表１０】
2019501146.tif 000017
【実施例６】
【００７５】
粗ラタノプロステンブノド１．０ｇをトルエンに溶解させた。ヘキサン：アセトン混合物を添加し、溶液を、粒径７５ミクロン、孔径６０オングストロームのＹＭＣ球状シリカゲル１００ｇで充填されたカラムで、ヘキサン：アセトン＝２：１混合溶離液を用いた重力クロマトグラフィーによって精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：０．７４ｇ（７４％）。
【００７６】
【表１１】
2019501146.tif 000018
【実施例７】
【００７７】
粗ラタノプロステンブノド１．０ｇをトルエンに溶解させた。ヘキサン：アセトン混合物を添加し、溶液を、粒径７５ミクロン、孔径６０オングストロームのＹＭＣ球状シリカゲル１００ｇで充填されたカラムで、ヘキサン：アセトン＝３：２混合溶離液を用いた重力クロマトグラフィーによって精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：０．６１ｇ（６１％）。
【００７８】
【表１２】
2019501146.tif 000019
【実施例８】
【００７９】
粗ラタノプロステンブノド１．０ｇをジクロロメタンに溶解させた。ジイソプロピルエーテル：アセトン混合物を添加し、溶液を、粒径６３〜２００ミクロン、孔径６０オングストロームの破砕状シリカゲル１００ｇで充填されたカラムで、溶離液としてジイソプロピルエーテル：アセトン勾配混合物を用いた重力クロマトグラフィーによって精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：０．４７ｇ（４７％）。
【００８０】
【表１３】
2019501146.tif 000020
【実施例９】
【００８１】
粗ラタノプロステンブノド１．０ｇをジクロロメタンに溶解させた。ヘキサン：イソプロパノール混合物を添加し、溶液を、粒径６３〜２００ミクロン、孔径６０オングストロームの破砕状シリカゲル１００ｇで充填されたカラムで、ヘキサン：イソプロパノール＝５：１混合溶離液を用いた重力クロマトグラフィーによって精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：０．５６ｇ（５６％）。
【００８２】
【表１４】
2019501146.tif 000021
【実施例１０】
【００８３】
粗ラタノプロステンブノド１．０ｇをジクロロメタンに溶解させた。ヘキサン：エタノール混合物を添加し、溶液を、粒径６３〜２００ミクロン、孔径６０オングストロームの破砕状シリカゲル１００ｇで充填されたカラムで、ヘキサン：エタノール＝８：１混合溶離液を用いた重力クロマトグラフィーによって精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：０．５２ｇ（５２％）。
【００８４】
【表１５】
2019501146.tif 000022
【実施例１１】
【００８５】
粗ラタノプロステンブノド１．０ｇをジクロロメタンに溶解させた。ヘキサン：エタノール混合物を添加し、溶液を、粒径７５ミクロン、孔径６０オングストロームのＹＭＣ球状シリカゲル１００ｇで充填されたカラムで、ヘキサン：エタノール＝６：１混合溶離液を用いた重力クロマトグラフィーによって精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：０．５７ｇ（５７％）。
【００８６】
【表１６】
2019501146.tif 000023
【実施例１２】
【００８７】
粗ラタノプロステンブノド１．０ｇをジクロロメタンに溶解させた。ヘキサン：エタノール混合物を添加し、溶液を、粒径６３〜２００ミクロン、孔径６０オングストロームの破砕状シリカゲル２５ｇで充填されたカラムで、溶離液としてヘキサン：エタノール勾配混合物を用いた重力クロマトグラフィーによって精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：０．６４ｇ（６４％）。
【００８８】
【表１７】
2019501146.tif 000024
【実施例１３】
【００８９】
粗ラタノプロステンブノド１．０ｇをジクロロメタンに溶解させた。ヘキサン：エタノール混合物を添加し、溶液を、粒径６３〜２００ミクロン、孔径６０オングストロームの破砕状シリカゲル５０ｇで充填されたカラムで、ヘキサン：エタノール勾配混合溶離液を用いた重力クロマトグラフィーによって精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：０．７５ｇ（７５％）。
【００９０】
【表１８】
2019501146.tif 000025
【実施例１４】
【００９１】
粗ラタノプロステンブノド１．０ｇをジクロロメタンに溶解させた。ヘキサン：エタノール混合物を添加し、溶液を、粒径６３〜２００ミクロン、孔径６０オングストロームの破砕状シリカゲル１００ｇで充填されたカラムで、溶離液としてヘキサン：エタノール勾配混合物を用いた重力クロマトグラフィーによって精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：０．９２ｇ（９２％）。
【００９２】
【表１９】
2019501146.tif 000026
【実施例１５】
【００９３】
粗ラタノプロステンブノド１．０ｇをジクロロメタンに溶解させた。ヘキサン：エタノール混合物を添加し、溶液を、粒径６３〜２００ミクロン、孔径６０オングストロームの破砕状シリカゲル１００ｇで充填されたカラムで、溶離液としてヘキサン：エタノール勾配混合物を用いた重力クロマトグラフィーによって精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：０．８３ｇ（８３％）。
【００９４】
【表２０】
2019501146.tif 000027
【実施例１６】
【００９５】
粗ラタノプロステンブノド１．０ｇをジクロロメタンに溶解させた。ヘキサン：エタノール混合物を添加し、溶液を、粒径７５ミクロン、孔径６０オングストロームのＹＭＣ球状シリカゲル１００ｇで充填されたカラムで、ヘキサン：エタノール＝６：１混合溶離液を用いた重力クロマトグラフィーによって精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：０．４８ｇ（４８％）。
【００９６】
【表２１】
2019501146.tif 000028
【実施例１７】
【００９７】
粗ラタノプロステンブノド１．０ｇをジクロロメタンに溶解させた。溶液を、粒径６３〜２００ミクロン、孔径６０オングストロームの破砕状シリカゲル１０ｇで充填されたカラムで、溶離液としてジクロロメタン：酢酸エチル勾配混合物を用いた重力クロマトグラフィーによって精製した。適切な純度の分画を、まとめて、蒸発させた。収率：０．７５ｇ（７５％）。
【００９８】
【表２２】
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【００９９】
上記全ての実施例で用いられたＨＰＬＣ手順は、薬物物質中のラタノプロステンブノドの関連物質も定量する、安定性を示すイソクラティック順相ＨＰＬＣ分析法である。測定条件は以下である。
【０１００】
分析（ＨＰＬＣ）
装置
装置：ＵＶ検出器またはダイオードアレイ検出器を備えたイソクラティックＨＰＬＣシステム、電子データ管理システム、およびオートサンプラ
カラム：Ｋｒｏｍａｓｉｌ６０５ＳＩＬ；２５０×４．６ｍｍ、５μｍまたは等価物
クロマトグラフィー条件
溶離液：ｎ−ヘキサン：エタノール：イソプロパノール：酢酸＝９３０：３５：３５：１検出：２１０ｎｍ
流量：２ｍｌ／分
注入量：１０μｌ
カラム温度：３５℃
実施時間：２５分
【国際調査報告】
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