【手続補正書】
【提出日】平成19年9月14日(2007.9.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞分裂の間の、スピンドル形成または微小管機能を阻害するための方法で用いる、
ａ）配列ＩＤ番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９にて表される核酸配列、
ｂ）１００残基にわたり、少なくとも２５％のａ）による核酸によってコードされているタンパク質と配列同一性を示し、および／またはＢＬＡＳＴ配列解析プログラムを用いたコンピュータ補助検索で、最大で１０−５のｅ値で検出可能である、ポリペプチドをコードしている核酸配列、
ｃ）中または高ストリンジェンシーの条件下で、（ａ）または（ｂ）に対応する配列を持つ核酸分子と、ハイブリッド形成可能な核酸分子の配列、
ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）で定義したような配列のいずれかのアンチセンス配列、ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）の断片、
ｆ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）にて定義したような配列のいずれかに対応する、アンチセンスまたはセンス方向での、２本鎖ＲＮＡまたは１本鎖ＲＮＡ、
からなる配列の群から選択される配列を持つ、核酸分子を含む単離核酸分子。
【請求項２】
該単離核酸分子が、請求項１に記載の配列のいずれかに対応する配列を持つ、低分子干渉ＲＮＡを含む、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３】
該核酸分子が、好適な条件下で、センスＲＮＡ鎖およびアンチセンスＲＮＡ鎖を含む２本鎖ＲＮＡ−分子を産出可能であるすくなくとも１つの核酸発現ベクター中に含有され、各ＲＮＡ鎖が、互いに独立して、１９〜３１ヌクレオチドの長さを有するか、または
該核酸分子が、第１プロモーターの制御下、センスＲＮＡ鎖に対応する核酸を含有する、第１発現カセット、および第２プロモーターの制御下、アンチセンスＲＮＡ鎖に対応する核酸を含有する、第２発現カセットを含む、少なくとも１つの核酸発現ベクターに含有されるか、または
該核酸分子が、１本鎖−ＲＮＡ−分子を導くプロモーターの制御下、センスＲＮＡ鎖およびアンチセンスＲＮＡ鎖に対応する核酸を含有する発現カセットを含む少なくとも１つ
の核酸発現ベクター中に含有され、該１本鎖ＲＮＡ−分子が、後方折り畳み、ステムループ構造を形成可能である、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項４】
各ＲＮＡ鎖が、互いに独立して、２０〜２５の長さ、好ましくは、２０〜２２ヌクレオチドの長さを有するか、または
各ＲＮＡ鎖が、互いに独立して、２６〜２８の長さ、好ましくは２７ヌクレオチドの長さを有する、請求項２または３のうちいずれか１項に記載の核酸分子。
【請求項５】
細胞分裂の間の、スピンドル形成または微小管機能を阻害するための方法で用いる、
（ａ）配列ＩＤ番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０にて開示されたような配列、
（ｂ）１００残基にわたり、少なくとも２５％の（ａ）による任意の配列との配列同一性を示す配列、
（ｃ）（ａ）または（ｂ）にて定義したような配列の断片、
からなる配列の群から選択される配列を持つ、ペプチドまたはポリペプチドを含む、単離ペプチドまたはポリペプチド。
【請求項６】
細胞分裂の間の、スピンドル形成または微小管機能を阻害するための方法で用いる、請求項５にて定義したような配列を持つ、少なくとも１つのペプチドまたはポリペプチドに対して指向される抗体。
【請求項７】
医薬品が、増殖疾患の治療用であり、特に、該疾患が、冠動脈再狭窄または新生物疾患であり、後者が好ましくは、リンパ腫、肺がん、大腸がん、卵巣がんおよび乳がんからなる群より選択される、請求項１〜６のうちいずれか１項に記載の核酸分子、ペプチド、ポリペプチドまたは抗体。
【請求項８】
細胞分裂の間の、スピンドル形成または微小管機能を活性化するための方法で用いる、ａ）配列ＩＤ番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９にて表される核酸配列、
ｂ）１００残基にわたり、少なくとも２５％のａ）による核酸によってコードされているタンパク質との配列同一性を示し、および／またはＢＬＡＳＴ配列解析プログラムを用いたコンピュータ補助検索で、最大で１０−５のｅ値で検出可能である、ポリペプチドをコードしている核酸配列、
ｃ）中または高ストリンジェンシーの条件下で、（ａ）または（ｂ）に対応する配列を持つ核酸分子と、ハイブリッド形成可能な核酸分子の配列、
ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）で定義したような任意の配列のアンチセンス配列、
ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）の断片、
ｆ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）にて定義したような任意の配列に対応する、ＲＮＡ配列、
からなる配列の群から選択される配列を持つ、核酸分子を含む単離核酸分子。
【請求項９】
細胞分裂の間の、スピンドル形成または微小管機能を活性化するための方法で用いる、（ａ）配列ＩＤ番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０にて開示されたような配列、
（ｂ）１００残基にわたり、少なくとも２５％の（ａ）による任意の配列との配列同一性を示す配列、
（ｃ）（ａ）または（ｂ）にて定義したような配列の断片、
からなる配列の群から選択される配列を持つ、ペプチドまたはポリペプチドを含む、単離ペプチドまたはポリペプチド。
【請求項１０】
細胞分裂の間の、スピンドル形成または微小管機能を活性化するための方法で用いる、請求項５にて定義したような配列を持つ、少なくとも１つのペプチドまたはポリペプチドに対して指向される抗体。
【請求項１１】
医薬品が、アポトーシスの増加、増殖遅延または傷治癒の遅れによって特徴づけられる疾患の治療用である、請求項８〜１０のうちいずれか１項に記載の核酸分子、ペプチド、ポリペプチドまたは抗体。
【請求項１２】
ａ）請求項１〜４のうちのいずれか１項で定義したような核酸分子または核酸発現ベクター、
ｂ）請求項５にて定義したような配列を含む、ペプチドまたはポリペプチド、
ｃ）（ｂ）による、少なくとも１つのペプチドまたはポリペプチドに対して指向する抗体、
からなる群より選択される単離核酸分子、ペプチド、ポリペプチドまたは抗体を含む、医薬品。
【請求項１３】
増殖性疾患または細胞分裂の間の異常なスピンドル形成または微小管機能に関連した疾患のｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断のための方法で用いる、請求項１にて定義したような配列を含む、単離核酸分子、または請求項５にて定義したような配列を含む、少なくとも１つのポリペプチドに特に結合するリガンドであって、特に、
該疾患が、冠動脈再狭窄または新生物疾患であり、後者が好ましくは、リンパ腫、肺がん、大腸がん、卵巣がんおよび乳がんからなる群より選択される、単離核酸分子またはリガンド。
【請求項１４】
増殖性疾患または細胞分裂の間の異常なスピンドル形成または微小管機能に関連した疾患のｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断において、請求項１または２にて定義したような単離核酸分子、および／または請求項５にて定義したような少なくとも１つのポリペプチドに対して指向するリガンドを含む、診断キット。
【請求項１５】
細胞分裂の間のスピンドル形成または微小管機能を阻害する、または活性化する薬物の同定および特性化のためのスクリーニングアッセイで用いる、請求項１〜４のうちいずれか１項に定義されるような単離核酸分子または核酸発現ベクター、または請求項５にて定義されたような配列を含む、少なくとも１つのポリペプチドに対して指向する抗体。
【請求項１６】
細胞分裂の間のスピンドル形成または微小管機能を阻害する、または活性化する相互作用薬物に関するスクリーニングアッセイで用いる、請求項５にて定義されたような配列を持つポリペプチド。
【請求項１７】
ａ）請求項１〜４のうちいずれか１項に定義したような核酸分子または核酸発現ベクターの、宿主細胞または宿主器官への形質導入、
ｂ）阻害または活性化分子に対する少なくとも１つの候補が存在する、または存在しないかいずれかで、段階ａ）の核酸によってコードされるか、または対応する、ポリペプチドまたはＲＮＡの過剰発現を許容する条件下での、段階ａ）にて得た、宿主細胞または宿主器官の培養、
ｃ）該培養細胞または器官における細胞分裂の間のスピンドル形成または微小管機能の解析、およびそれによる、細胞分裂の間のスピンドル形成または微小管機能の阻害剤または活性化物の同定、
の段階を含む、細胞分裂の間のスピンドル形成または微小管機能を阻害する、または活性化する、阻害剤または活性化分子の同定および特性化のためのスクリーニング方法。
【請求項１８】
ａ）宿主細胞内で、請求項１にて定義したような核酸分子配列によってコードされたポリペプチドを、組み換え体的に発現させること、
ｂ）該組み換え体的に発現した段階（ａ）のポリペプチドを、単離し、任意に精製すること、
ｃ）試験基質を任意に標識化すること、および／または該組み換え体的に発現したポリペプチドを標識化すること、
ｄ）該組み換え体的に発現したポリペプチドを、固体相に固定化すること、
ｅ）該固定化ポリペプチドと、少なくとも１つの試験基質を接触させること、
ｆ）任意に一回以上の洗浄段階、
ｇ）固体相にて固定化したポリペプチドに対する、少なくとも１つの試験基質の結合を検出すること、および
ｈ）細胞分裂の間のスピンドル形成または微小管機能の阻害または活性化のための、機能アッセイを実施すること、
の段階を含む、試験基質のライブラリーから、細胞分裂の間のスピンドル形成または微小管機能を阻害する、または活性化する相互作用分子の同定および特性化のためのスクリーニング方法。
【請求項１９】
細胞分裂の間のスピンドル形成または微小管機能の阻害剤または活性化物が、請求項１７または１８によって同定され、適切な量で合成され、薬理学的組成物中に処方されるか、または細胞分裂の間のスピンドル形成または微小管機能の阻害剤または活性化物が、請求項１７または１８によって提供され、薬理学的組成物内に処方される、薬理学的組成物の調製方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
この問題は、細胞分裂の間のスピンドル形成または微小管機能を阻害する医薬品の製造において、
ａ）配列ＩＤ番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９にて表される核酸配列、
ｂ）１００残基にわたり、少なくとも２５％のａ）による核酸によってコードされているタンパク質との配列同一性を示す、および／またはＢＬＡＳＴ配列解析プログラムを用いたコンピュータ補助検索で、最大で１０−５のｅ値で検出可能である、ポリペプチドをコードしている核酸配列、
ｃ）中または高ストリンジェンシーの条件下で、（ａ）または（ｂ）に対応する配列を持つ核酸分子と、ハイブリッド形成可能な核酸分子の配列、
ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）で定義したような任意の配列のアンチセンス配列、
ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）の断片、
ｆ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）にて定義したような任意の配列に対応する、アンチセンスまたはセンス方向での、２本鎖ＲＮＡまたは１本鎖ＲＮＡ、
からなる配列の群から選択される配列を持つ、核酸分子を含む単離核酸分子の利用によって解決される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
さらに好ましい実施形態によると、核酸分子は、中／高ストリンジェンシーの条件下、（ａ）または（ｂ）の核酸配列とハイブリッド形成可能である、ヌクレオチド配列を含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４２】
このＤＮＡまたはＲＮＡ配列が、特定のポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドプローブに「ハイブリッド形成」するかどうかを決定するために好適な実験条件は、５×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）緩衝液中、１０分間のハイブリッド形成と、５×ＳＳＣ、５×Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液、０．５％  ＳＤＳおよび１００ｍｇ／ｍｌの還元超音波処理サケ精子ＤＮＡ（Ｍａｎｉａｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）の溶液中でのフィルターの前ハイブリッド形成、それに続く、１０ｎｇ／ｍｌ濃度のランダムプライム化（Ｆｅｉｎｂｅｒｇ，Ａ．Ｐ．ａｎｄ  Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ，Ｂ．（１９８３），Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３２：６−１３）、３２Ｐ−ｄＣＴＰ標識化（特異的活性＞１×１０９ｃｐｍ／μｇ）プローブを含む同様の溶液中での、およそ４５℃にて１２時間のハイブリッド形成に関して試験するために、ＤＮＡまたはＲＮＡを含むフィルターの予浸が伴う。ついでフィルターを２回、３０分間、２×ＳＳＣ、０．５％  ＳＤＳ中、少なくとも５５℃（低ストリンジェンシー）、少なくとも６０℃（中ストリンジェンシー）、好ましくは少なくとも６５℃（中／高ストリンジェンシー）、より好ましくは、少なくとも７０℃（高ストリンジェンシー）、またはもっとも好ましくは、少なくとも７５℃（非常に高ストリンジェンシー）で、２回洗浄する。プローブが選択した条件下でハイブリッド形成する分子を、ｘ線フィルムまたは「リン撮像装置」を用いて検出する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７８】
好ましい実施形態において、本発明は、以上で同定した核酸配列に関して、ｓｉＲＮＡを産出可能なベクター系の利用に関し、そこで、配列は、１本鎖ＲＮＡ分子を導くプロモーターの制御下、センスＲＮＡ鎖の、およびアンチセンスＲＮＡ鎖の配列を含む発現カセットを含む、少なくとも１つの核酸発現ベクターに含まれ、１本鎖ＲＮＡ分子は、後方折り畳み（back-folded）、ステムループ構造を形成可能である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７９】
本ベクター系（また、Ｔｕｓｃｈｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２０，ｐｐ．４４６−４４８にて記述された）にて、単一ＲＮＡ鎖のみが、単一のプロモーターの制御下で産出され、そこで、ＲＮＡ分子鎖は、最終２本鎖ｓｉＲＮＡ分子のセンスおよびアンチセンス鎖両方を含む。この構造により、ステムループ形成下、相補
的センスおよびアンチセンス配列のハイブリッド形成によって、ＲＮＡ鎖の後方折り畳みが導かれる。最後に、この折り畳み後方ステムループ構造の細胞内処理によって、ｓｉＲＮＡができる。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８０】
本発明による他の好ましい実施形態において、「核酸発現ベクター（ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｖｅｃｔｏｒ）」には、１本鎖のＲＮＡ分子へ導く単一のプロモーターの制御下、センスＲＮＡ鎖の、およびアンチセンスＲＮＡ鎖の配列を含む発現カセットが含まれる。この１本鎖ＲＮＡ分子はそれによって、後方折り畳みステムループ構造を形成可能である。これらの発現した「ヘアピンＲＮＡ分子（ｈａｉｒｐｉｎ
ＲＮＡ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」が続いて、細胞内処理の後にｓｉＲＮＡとなる。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０４】
他の態様において、本発明は、細胞分裂の間のスピンドル形成または微小管機能の活性化する医薬品の製造のための、
ａ）配列ＩＤ番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９にて表される核酸配列、
ｂ）１００残基にわたり、少なくとも２５％のａ）による核酸によってコードされているタンパク質との配列同一性を示す、および／またはＢＬＡＳＴ配列解析プログラムを用いた、コンピュータ補助検索で、最大で１０−５のｅ値で検出可能である、ポリペプチドをコードしている核酸配列、
ｃ）中または高ストリンジェンシーの条件下で、（ａ）または（ｂ）に対応する配列を持つ核酸分子と、ハイブリッド形成可能な核酸分子の配列、
ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）で定義したような任意の配列のアンチセンス配列、
ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）の断片、
ｆ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）にて定義したような任意の配列に対応する、ＤＮＡ配列、
からなる配列の群から選択される配列を持つ、核酸分子を含む、単離核酸分子の利用に関する。