【手続補正書】
【提出日】平成18年12月11日(2006.12.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
内因性シグマ−１受容体遺伝子中に中断を含む突然変異を含むゲノムを有する、内因性シグマ−１受容体に欠陥のある非-ヒト突然変異体哺乳動物であり、前記遺伝子中断が検出可能なレベルの内因性シグマ−１受容体を欠く非-ヒト突然変異体哺乳動物を生じさせる非-ヒト突然変異体哺乳動物。
【請求項２】
前記非-ヒト突然変異体哺乳動物が、前記突然変異に対しヘテロ接合性の突然変異体である、請求項１に記載の非-ヒト突然変異体哺乳動物。
【請求項３】
前記非-ヒト突然変異体哺乳動物が、前記突然変異に対しホモ接合性の突然変異体である、請求項１に記載の非-ヒト突然変異体哺乳動物。
【請求項４】
前記非-ヒト哺乳動物がマウスである、請求項１に記載の非-ヒト突然変異体哺乳動物。
【請求項５】
前記非ヒト-突然変異体哺乳動物のゲノムが、陽性選定マーカーをコードする遺伝子を含んで成る導入遺伝子を内因性シグマ-1受容体遺伝子中に導入された突然変異の内部に含んで成る、請求項１に記載の非-ヒト突然変異体哺乳動物。
【請求項６】
前記導入遺伝子がネオマイシンホスホトランスフェラーゼ(neo)遺伝子を含んで成る、請求項５に記載の非-ヒト突然変異体哺乳動物。
【請求項７】
前記非-ヒト突然変異体哺乳動物が、内因性シグマ-1受容体に欠陥があり、マウスシグマ-1受容体遺伝子に対しホモ接合性であり、生殖能力があり、前記neo遺伝子を含む前記遺伝子中に中断を含んで成るゲノムを有する突然変異体マウスである、請求項１に記載の非-ヒト突然変異体哺乳動物。
【請求項８】
ａ）陽性選定マーカーをコードするヌクレオチド配列の5’末端に位置する第一の相同性領域、ここで前記第一の相同性領域が、シグマ−１受容体遺伝子の第一の配列と実質的に同一であるヌクレオチド配列を有す；
ｂ）陽性選定マーカーをコードするヌクレオチド配列；
ｃ）陽性選定マーカーをコードする前記ヌクレオチド配列の3’末端に位置する第二の相同性領域、ここで前記第二の相同性領域が、前記シグマ−１受容体遺伝子の第二の配列と実質的に同一であるヌクレオチド配列を有し、前記シグマ−１受容体遺伝子の第二の配列が、野生型内因性シグマ−１遺伝子におけるシグマ−１受容体遺伝子の第一の配列に対し3’位に位置する;及び
ｄ）陰性選定マーカーをコードするヌクレオチド配列、
を含んで成る、陽性-陰性選定マーカーを有するホモ接合組換えベクター。
【請求項９】
陽性選定マーカーをコードする前記ヌクレオチド配列が、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ(neo)遺伝子を含んで成る、請求項８に記載のベクター。
【請求項１０】
陰性選定マーカーをコードする前記ヌクレオチド配列が、単純ヘルペスウィルス(HSV)のチミジンキナーゼ(tk)遺伝子を含んで成る、請求項８に記載のベクター。
【請求項１１】
アクセスナンバーCECT 5737でCECTに供託され、pHR53TKとして識別される、請求項８に記載のベクター。
【請求項１２】
内因性シグマ−１受容体に欠陥のある請求項８から１１のいずれか1項に記載の陽性-陰性選定マーカーを有する相同組換えベクターによりトランスフェクトされた内因性シグマ−１受容体遺伝子を含んで成るゲノムを有す宿主細胞。
【請求項１３】
内因性シグマ−１受容体遺伝子を含むゲノムを有す前記宿主細胞が、シグマ−１受容体遺伝子の産物を正常に発現する分化した細胞、及び多能性胚細胞の中から選定される、請求項１２に記載の細胞。
【請求項１４】
突然変異したシグマ-1受容体遺伝子の対立遺伝子を含んで成る、請求項１２に記載の細胞。
【請求項１５】
請求項１から７のいずれか１項に記載の内因性シグマ受容体に欠陥のある非-ヒト突然変異体哺乳動物、又はその子孫から由来する単離細胞。
【請求項１６】
シグマ−１受容体遺伝子の突然変異した対立遺伝子の１つ又は両方を含んで成る、請求項１５に記載の細胞。
【請求項１７】
増殖させた及び任意に不死化させた、請求項１５又は１６に記載の細胞。
【請求項１８】
請求項１から７のいずれか１項に記載の内因性シグマ−１受容体に欠陥のある非-ヒト突然変異体哺乳動物の子孫。
【請求項１９】
内因性シグマ−１受容体遺伝子の対立遺伝子と請求項８から１１のいずれか１項に記載の陽性-陰性選定マーカーを有する相同性組換えベクターとの間での細胞中での相同性組換えによる細胞ゲノムに存在する内因性シグマ−１受容体遺伝子中への機能的中断の導入、陽性-陰性選定マーカー技術による相同組換え体の選定、胚の中への前記相同性組換え体の導入、偽妊娠している雌性哺乳動物受容体中へのそれらの移植及びそれらの出産、胚芽株によりそれらの子孫に前記相同組換え体の遺伝子型を効果的に伝播できるキメラの選定；前記キメラを非-ヒト野生型哺乳動物と交配させて、ヘテロ接合突然変異体を得て、内因性シグマ−１受容体遺伝子を中断させて、そして所望されるならば前記ヘテロ接合変異体を互いに交配させて、ホモ接合変異体を得ること、を含んで成る、請求項１から７のいずれか１項に記載の非-ヒト突然変異体哺乳動物を作製する方法。
【請求項２０】
In vivo検査において導入されるコントロール動物としての、請求項１から７のいずれか１項に記載の非-ヒト突然変異体哺乳動物の使用。
【請求項２１】
中枢神経系疾患を予防及び/又は治療する；
記憶障害を予防及び/又は治療する；
ストレス症状を予防及び/又は治療する；
薬剤依存症を予防及び/又は治療する；
無感覚症を生じる；或いは
神経保護を生じること、
を意味する潜在的に有用な化合物を評価するためのシグマ-1受容体に欠陥のある非-ヒト突然変異体哺乳動物の使用、又はシグマ-1受容体に欠陥のある細胞株の使用。
【請求項２２】
検査される化合物と請求項１から７のいずれか１項に記載の非-ヒト突然変異体哺乳動物とを接触させ、そして前記化合物との接触の応答として前記非-ヒト突然変異体哺乳動物中での生理学的な変化の存在又は不存在を検出することを含んで成る、内因性シグマ−１受容体遺伝子に欠陥のある非-ヒト哺乳動物で検査される化合物の効果を決定するための方法。
【請求項２３】
請求項１から７のいずれか１項に記載の非-ヒト突然変異体哺乳動物に検査される化合物を投与し；機能的内因性シグマ−１受容体を発現するコントロール非-ヒト哺乳動物へ前記検査される化合物を投与し；そして当該コントロール非-ヒト哺乳動物と比較した場合、前記化合物が前記非-ヒト突然変異体哺乳動物の表現型に影響を有するかどうかを観察すること、を含んで成る、内因性シグマ−１受容体遺伝子に欠陥のある非-ヒト哺乳動物で検査される化合物の効果を決定するための方法。
【請求項２４】
細胞が請求項１から７のいずれか１項に記載の非-ヒト突然変異体哺乳動物から単離又は樹立されたものである細胞集団又はそれらの均質化物の中に検査される化合物を導入し、機能的シグマ−１受容体を発現するコントロール非-ヒト哺乳動物細胞の集団、又はそれらの均質化物へ検査される前記化合物を投与し、そして前記検査される化合物が、コントロール非-ヒト哺乳動物の当該細胞と比較した場合、前記非-ヒト突然変異体哺乳動物の細胞中の前記シグマ−１受容体の発現に影響を有するか否かを観察もしくは分析すること、を含んで成る前記シグマ−１受容体を発現する細胞へ、及び前記シグマ−１受容体を発現しない細胞への化合物の効果を決定するための方法。