(57)【要約】  本出願は、ＥＲ陰性乳癌が抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体での処置によりルミナルライクフェノタイプの乳癌などのＥＲ陽性乳癌に転換され得ることを開示する。ルミナルライク型乳癌を含むＥＲ陽性乳癌は、抗エストロゲン処置で処置され得る。これに基づき、本出願は、驚くべきことに、抗エストロゲン処置を抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体での処置と組み合わせた場合に、ＥＲ陰性乳癌が抗エストロゲン処置で処置され得ることを開示する。上記処置は、例えば補助療法、例えば手術による原発腫瘍の摘出後の乳癌の再発リスクを低減することを目指した処置であり得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置のための、
ａ．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤、または
ｂ．ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤
を含む成分キット（ｋｉｔ−ｏｆ−ｐａｒｔｓ）。
【請求項２】
前記処置が、
ａ．それを必要とする個体への前記抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体または前記ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤の投与のステップと、
ｂ．前記抗エストロゲン剤の次の投与のステップと
を含む、ＥＲ陰性乳癌の処置における使用のための先行請求項のいずれか１項に記載の成分キット。
【請求項３】
前記個体が、ＥＲ陰性乳癌に罹患しており、かつ前記個体の前記乳癌が、手術により処置されており、かつ前記処置が、再発のリスクを低減する、請求項１および２のいずれか１項に記載の成分キット。
【請求項４】
前記個体への抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体またはＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤の初回投与が、前記抗エストロゲン剤の初回投与よりも前である、請求項２および３のいずれか１つに記載の成分キット。
【請求項５】
前記抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、ＰＤＧＦ−ＣＣを特異的に結合するモノクローナル抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の成分キット。
【請求項６】
前記抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、
ａ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２３０〜２５０、
ｂ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２２８〜２３８、
ｃ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸３０８〜３２２、
ｄ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２４２〜２５４、
ｅ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２８８〜３０８、
ｆ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸３２５〜３４５、
ｇ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２５６〜２７４、
ｈ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２５６〜２６４、および／または
ｉ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２５６〜２６０
に位置する、それを含むまたはそれからなるエピトープを結合できる、先行請求項のいずれか１項に記載の成分キットまたは方法。
【請求項７】
前記抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２３０〜２５０内に位置するエピトープを結合できる、先行請求項のいずれか１項に記載の成分キットまたは方法。
【請求項８】
前記ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤が、イマチニブである、先行請求項のいずれか１項に記載の成分キットまたは方法。
【請求項９】
前記抗エストロゲン剤が、エストロゲンアンタゴニストである、先行請求項のいずれか１項に記載の成分キットまたは方法。
【請求項１０】
前記エストロゲンアンタゴニストが、タモキシフェン、ラロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン（４−ｈｙｄｒｏｘｙｔｒａｍｏｘｉｆｅｎ）、トリオキシフェン、ケオキシフェン、アフィモキシフェン、ＬＹ１１７０１８、フルベストラントおよびトレミフェンからなる群から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の成分キット。
【請求項１１】
前記抗エストロゲン剤が、アロマターゼ阻害剤である、先行請求項のいずれか１項に記載の成分キットまたは方法。
【請求項１２】
前記抗エストロゲン剤が、エキセメスタン、ホルメスタン、アミノグルテチミド、ボロゾール、ファドロゾール、アナストロゾールおよびレトロゾールからなる群から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の成分キット。
【請求項１３】
前記ＥＲ陰性乳癌が、トリプルネガティブ型乳癌である、先行請求項のいずれか１項に記載の成分キット。
【請求項１４】
前記ＥＲ陰性乳癌が、ベーサルライク型乳癌である、先行請求項のいずれか１項に記載の成分キット。
【請求項１５】
前記ＥＲ陰性乳癌が、原発腫瘍がＥＲ陰性であった乳癌である、先行請求項のいずれか１項に記載の成分キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌の処置の分野、詳細にはＥＲ陰性乳癌の処置の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
２０１２年における世界全体の乳癌単独の発症率は、新たな症例で１，７００，０００例であった。乳癌は、５つの臨床的に関連するサブタイプ：ノーマルライク（ｎｏｒｍａｌ−ｌｉｋｅ）型、ルミナルＡ型、ルミナルＢ型、ＨＥＲ２型およびベーサルライク（ｂａｓａｌ−ｌｉｋｅ）型乳癌に細分することができる。乳癌の分子サブタイプは、再発率および再発までの時間の中央値に影響を及ぼす。乳癌患者全体のうち、ベーサルライク型腫瘍を有する女性は、最大の再発率（他のサブタイプ全体の２０％に対し３４％）および最短の再発までの時間の中央値（他のサブタイプ全体の５年に対し２．６年）を有する。したがってベーサルライク型乳癌を有する女性の予後は、サブタイプ全ての中で最も不良であり、今日提示される唯一の治療選択肢は高用量の化学療法であり、それは重度の副作用を伴う処置レジメンである。高用量化学療法に比較して軽度の副作用を伴う内分泌療法は、ベーサルライク型腫瘍に有効でない。
【０００３】
エストロゲン受容体発現の非存在を特徴とする乳癌（ＥＲ陰性乳癌）と診断された女性は、抗ホルモン剤での処置がＥＲ陰性乳癌に有効でないことが立証されているため、抗ホルモン剤で処置されない。例えば、Ｌａｎｃｅｔ  ２０１１（ｄｏｉ：１０．１０９３／ａｎｎｏｎｃ／ｍｄｓ１９４）に発表されたＥａｒｌｙ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｉａｌｉｓｔｓ’Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐ（ＥＢＣＴＣＧ）により実施されたメタ解析は、ＥＲ陰性疾患において、タモキシフェンは乳癌再発および死亡率にほとんど、または全く影響を有さなかったと結論づけている。同様に、複数の他の研究は、抗エストロゲン剤での補助療法がトリプルネガティブ型乳癌の処置に有効でないことを示した（例えば、Ｆｏｕｌｋｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（ｄｏｉ：１０．１０５６／ＮＥＪＭｒａ１００１３８９）；Ｊｏｅｎｓｕｕ  ｅｔ  ａｌ．（ｄｏｉ：１０．１０９３／ａｎｎｏｎｃ／ｍｄｓ１９４）；Ｂａｓｅｌｇａ  ｅｔ  ａｌ．（ｄｏｉ：１０．１２００／ＪＣＯ．２０１２．４６．２４０８）；Ｃｌｉｆｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（ｄｏｉ：１０．１６３４／ｔｈｅｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ．２０１１−Ｓ１−０１）；Ｌｉｅｄｔｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，（ｄｏｉ：１０．１２００／ＪＣＯ．２００７．１４．４１４７）参照）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
したがって、ＥＲ陰性乳癌の改善された処置が、非常に必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
興味深いこととして本発明は、ＥＲ陰性乳癌が、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体での処置により、ルミナル様フェノタイプの乳癌などのＥＲ陽性乳癌に転換され得ることを開示する。ルミナル様型乳癌を含むＥＲ陽性乳癌は、抗エストロゲン処置で処置できる。これに基づき、本発明は、驚くべきことに、抗エストロゲン処置を抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体での処置と併用すれば、ＥＲ陰性乳癌が抗エストロゲン処置で処置され得ることを開示する。上記処置は、補助療法、例えば手術による原発腫瘍の摘出後の乳癌の再発リスクを低減することを目指した処置であり得る。
【０００６】
したがって本発明は、それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置のための、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤を含む成分キット（ｋｉｔｓ−ｏｆ−ｐａｒｔｓ）を提供する。
【０００７】
本発明はまた、それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置のための、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤を含む部品キットを提供する。
【０００８】
本発明はまた、それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置のための方法であって、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤を上記個体に同時にまたは任意の順序で連続して投与し、それによりＥＲ陰性乳癌を処置することを含む、方法を提供する。
【０００９】
本発明はまた、それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置のための方法であって、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤を上記個体に同時にまたは任意の順序で連続して投与し、それによりＥＲ陰性乳癌を処置することを含む、方法を提供する。
【００１０】
本発明はまた、ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン処置に対し感受性にするための方法であって、抗ＰＤＧＦ−ＣＣをＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与し、それにより上記ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン処置に対し感受性にすることを含む、方法を提供する。
【００１１】
本発明はまた、ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン処置に対し感受性にするための方法であって、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与し、それにより上記ＥＲ陰性乳癌抗エストロゲン処置に対し感受性にすることを含む、方法を提供する。
【００１２】
本発明はまた、ＥＲ陰性乳癌をＥＲ陽性乳癌に転換する方法であって、抗ＰＤＧＦ−ＣＣをＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与し、それにより上記ＥＲ陰性乳癌をＥＲ陽性乳癌に転換することを含む、方法を提供する。
【００１３】
本発明はまた、ＥＲ陰性乳癌に罹患した個体におけるＥＲ陰性乳癌の再発のリスクを低減する方法であって、ここで上記個体の上記乳癌が手術により処置されており、
ａ．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与することにより、ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン剤での処置に対し感受性にすること；
ｂ．抗エストロゲン剤を上記個体に投与すること、
を含む、方法を提供する。
【００１４】
本発明はまた、ＥＲ陰性乳癌に罹患した個体におけるＥＲ陰性乳癌の再発のリスクを低減する方法であって、ここで上記個体の上記乳癌が手術により処置されており、
ａ．ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与することにより、ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン剤での処置に対し感受性にすること；
ｂ．抗エストロゲン剤を上記個体に投与し、それにより上記ＥＲ陰性乳癌の再発のリスクを低減すること、
を含む、方法を提供する。
【００１５】
本発明はまた、上述の方法における使用のための、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤を含む成分キットを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】ＰＤＧＦ−ＣＣの発現を示す。パネルＡおよびＢは、正常な乳房組織における発現を示す。パネルＣ〜Ｆは、乳房腫瘍における発現を示す。パネルＧは、臨床病理学的パラメータに相関した発現を示す。パネルＨは、ＰＤＧＦ−Ｃ陰性患者に比較してＰＤＧＦ−Ｃの中〜高発現を有する患者における生存月数を示す。パネルＩは、ＰＤＧＦＲの発現を示す。
【図２】パネルＡは、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスの腫瘍におけるＰＤＧＦ−ＣＣ、ＰＤＧＦＲαおよびＰＤＧＦＲβ発現を示す。パネルＢは、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスの乳腺腫瘍の腫瘍体積を示す。パネルＣ〜Ｄは、腫瘍潜伏期間および生存率を示す。パネルＥ〜Ｆは、腫瘍のステージおよび壊死を示す。パネルＧは、肺転移を示す。パネルＨは、移植後の腫瘍体積を示す。パネルＩは、注射後の腫瘍体積を示す。
【図３】パネルＡは、腫瘍切片のマッソントリクローム染色を示す。パネルＢは、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；Ｐｄｇｆｃｌａｃｚ／ｌａｃｚマウスが重度に出血していたことを示す。パネルＣは、ＨＩＦ−１αの免疫染色を示す。パネルＤは、定量ＰＣＲ分析により決定されたＶＥＧＦ−Ａの発現を示す。パネルＥ〜Ｆは、同所移植されたＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍を担持しておりＡ３Ｂ６抗体または対照抗体で処置されたＳＣＩＤマウスにおける、腫瘍体積および血管密度を示す。
【図４】パネルＡおよびパネルＢは、Ｆｏｘａ１；ｌａｃＺ／ｌａｃＺの発現がＰＤＧＦＣ−／−と同等であることを示す。パネルＣは、Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｔｌａｓプロジェクト内で収集された乳房腫瘍の転写プロファイルに基づき、Ｆｏｘａ１発現が非ベーサルライク型分子サブタイプと高度に相関することを示す。パネルＤは、ルミナルサブタイプの腫瘍の特異的性質としてのＦｏｘａ１の発現を示す。パネルＥは、Ｆｏｘａ１に関するヒト乳房腫瘍標本のコホートの免疫染色を示す。パネルＦは、乳房腫瘍細胞株におけるＰＤＧＦ−ＣＣの発現を示す。パネルＧは、Ｆｏｘａ１の発現がＰＤＧＦ−ＣＣの発現と逆相関することを示す。
【図５】パネルＡは、腫瘍タンパク質溶解物中のＦｏｘＡ１およびＥＲαの発現を示す。パネルＢは、定量ＰＣＲにより決定されたスタンニオカルシン（ＳＴＣ）−１、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）およびインスリン成長因子結合タンパク質３（ＩＧＦＢＰ３）の発現を示す。パネルＣ〜Ｅは、ＳＴＣ−１、ＨＧＦおよび／またはＩＧＦＢＰ３で刺激した後の、それぞれルミナルライクサブタイプマーカーＦｏｘＡ１、ＥＲαおよびＧＡＴＡ３の発現を示す。パネルＦは、タモキシフェンによる成長停止に対する感受性を示す。パネルＧは、間質線維芽細胞のコンディションメディウムが、３種のパラクリン型ＰＤＧＦ−ＣＣ誘導性因子で置き換えられ得ることを示す。パネルＨは、ＳＴＣ−１、ＨＧＦおよびＩＧＦＢＰ３についてのＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスの腫瘍の免疫染色を示す。
【図６】パネルＡは、タモキシフェン処置マウスおよび非処置マウスの野生型腫瘍の腫瘍成長を示す。パネルＢは、タモキシフェンでの処置によるＰｄｇｆｃ欠損マウスからの腫瘍の腫瘍成長を示す。パネルＣは、タモキシフェンでの処置後の完全に定着したＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍の腫瘍成長を示す。パネルＤは、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体Ａ３Ｂ６とタモキシフェンとの併用処置後の完全に定着したＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍の腫瘍成長を示す。パネルＥは、モノクローナル抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体Ａ３Ｂ６での処置後のＥＲαの発現を示す。パネルＦは、ＰＤＧＦ−ＣＣによるシグナル伝達の遮断後のＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍におけるＥＲα発現を示す。パネルＧは、乳房腫瘍の微細環境におけるパラクリンシグナル伝達ネットワークの理論的モデルを示す。
【図７】抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体、レトロゾール、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体とレトロゾールとの組み合わせ、および対照で処置されたマウスにおける腫瘍成長。
【図８】イマチニブ、タモキシフェン、イマチニブとタモキシフェンの組み合わせ、対象で処置されたマウスにおける腫瘍成長。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
定義
本明細書で用いられる用語「抗体」は、少なくとも１つの抗原結合部位を含む抗原を認識し結合できるポリペプチドまたはタンパク質である。上記抗原結合部位は、好ましくは少なくとも１つのＣＤＲを含む。抗体は、天然由来の抗体、天然由来の抗体の断片または合成の抗体であり得る。
【００１８】
本明細書で用いられる用語「抗原」は、少なくとも１つのエピトープを含む分子を指す。抗原は、例えばポリペプチド、多糖、タンパク質、リポタンパク質または糖タンパク質であり得る。
【００１９】
本明細書で用いられる用語「ベーサルライク型乳癌」は、トリプルネガティブフェノタイプの乳癌を指し、即ち上記癌は、エストロゲン受容体（ＥＲ）、プロゲステロン受容体（ＰＲ）およびヒト上皮成長因子受容体（ＨＥＲ）−２を検出可能なレベルで発現しない。さらにベーサル型の乳癌は、典型的にはＦｏｘＡ１を発現しない。ベーサルライク型乳癌は、高いグレード、予後不良、およびより若い患者の年齢に関連する。
【００２０】
本明細書で用いられる用語「エピトープ」は、抗原への特異的結合が可能な決定基を指す。本発明において、エピトープは、ＰＤＧＦ−ＣまたはＰＤＧＦ−ＣＣ内に含まれ得る。エピトープは通常、アミノ酸などの分子の化学的に活性の表面基（ｓｕｒｆａｃｅ  ｇｒｏｕｐｉｎｇｓ）からなり、通常、特定の三次元構造特性および特異的電荷特性を有する。エピトープは、立体構造型または非立体構造型であり得、後者ではなく前者への結合は、変性溶媒の存在下で消失する。エピトープは、連続性または非連続性であり得、非連続性エピトープは、タンパク質の一次配列中の少なくとも２つの分離した領域から形成されるタンパク質抗原上の、立体構造型エピトープである。
【００２１】
用語「ＥＲ陰性乳癌」は、エストロゲン受容体の発現が欠如した乳癌を指す。乳癌の腫瘍細胞の１０％以下が、エストロゲン受容体を免疫組織化学的測定により検出可能なレベルで発現する場合、上記乳癌は、ＥＲ陰性乳癌と見なされる。好ましくはＥＲ陰性乳癌は、乳癌の腫瘍細胞の１％未満がエストロゲン受容体を免疫組織化学的測定により検出可能なレベルで発現する乳癌である。
【００２２】
用語「ＥＲ陽性乳癌」は、エストロゲン受容体を発現する乳癌を指す。乳癌の腫瘍細胞の１０％より多くが、エストロゲン受容体を免疫組織化学的測定により検出可能なレベルで発現する場合、上記乳癌は、ＥＲ陽性乳癌と見なされる。
【００２３】
用語「ルミナルライク型乳癌」は、抗エストロゲン療法に応答性の乳癌を指す。詳細には「ルミナルライク型乳癌」は、エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現する。本発明による「ルミナルライク型乳癌」は、ルミナルＡ型またはルミナルＢ型乳癌などの真のルミナル型乳癌であり得る。
【００２４】
本明細書で用いられる用語「天然に発生する抗体」は、抗原を認識し結合でき、かつジスルフィド結合により相互に接続される２つの同一の重（Ｈ）鎖および２つの同一の軽（Ｌ）鎖を含む、ヘテロ四量体の糖タンパク質を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略される）および重鎖定常領域（本明細書ではＣＨと略される）を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略される）および軽鎖定常領域（本明細書ではＣＬと略される）を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに細分され得る。抗体は、複数の同一のヘテロ四量体を含み得る。
【００２５】
本明細書で用いられる用語「処置」は、任意の種類の処置を指し得る。処置は、治療的処置であり得、癌の改良処置および／または癌の影響を低減する処置でもあり得る。処置は、癌の進行を遅延させる処置でもあり得、例えば処置は、癌の成長を低減し得る、転移を低減し得る、または他の方法で癌の進行を遅延し得る。処置はまた、再発のリスクを低減する処置であり得る。
【００２６】
処置の方法
本発明は、それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置のための方法を提供する。本発明の方法は、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に同時に、または任意の順序で連続して投与し、それによりＥＲ陰性乳癌を処置することを含む。
【００２７】
本開示はまた、それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置のための方法であって、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に同時に、または任意の順序で連続して投与し、それによりＥＲ陰性乳癌を処置することを含む、方法を提供する。
【００２８】
本発明による処置の方法は、ＥＲ陰性乳癌の処置のための１つまたは複数の従来法と組み合わされ得る。したがって本発明の方法は、１つまたは複数の追加の方法と組み合わされる抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤での処置の組み合わせを含み得る。本発明の方法は、１つまたは複数の追加の方法と組み合わされるＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤での処置の組み合わせを含み得る。例えば上記ＥＲ陰性乳癌は、手術、放射線照射および化学療法からなる群から選択される方法によって処置され得る。詳細には本発明の方法で処置される個体は、手術による上記乳癌の処置を既に受けた、ＥＲ陰性乳癌に罹患した個体であり得る。したがって処置される個体は、原発腫瘍が手術により摘出された、ＥＲ陰性乳癌に罹患した個体であり得る。そのような場合、本発明の処置は多くの場合、再発のリスクを低減する補助療法と見なされ得る。詳細には処置は、処置の開始から５年以内の再発のリスクを低減するための処置であり得る。例えば処置は、処置の開始から５年以内の再発を予防するための処置であり得る。好ましくは抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤での処置は、手術後の遅くとも１ヶ月目、例えば手術後の遅くとも１週間目に開始される。処置は、より早期に、例えば手術前でも開始され得る。同様に、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤での処置は、手術後の遅くとも１ヶ月目、例えば手術後の遅くとも１週間目に開始される。処置は、より早期に、例えば手術前でも開始され得る。
【００２９】
抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤で処置される個体、またはＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤で処置される個体が手術を受けていないことも、本発明に含まれる。これは、特定の乳癌が手術不能の乳癌、手術による摘出にあまり適さない乳癌であるため、または個体がまだ手術を受けていないためであり得る。そのような処置は、例えばネオアジュバント処置であり得る。
【００３０】
抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＰＤＧＦ−ＣＣを結合できる任意の抗体、例えば本明細書の以下の「抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体」の節に記載される抗体のいずれかであり得る。抗エストロゲン剤は、抗エストロゲン効果を有する任意の化合物、例えば本明細書の以下の抗エストロゲン剤の節に記載される抗体のいずれかであり得る。
【００３１】
本発明はまた、ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン処置に対し感受性にするための方法を提供する。ＥＲ陰性乳癌は抗エストロゲン処置に応答性でないが（例えば、Ｅａｒｌｙ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｉａｌｉｓｔｓ’Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐ（ＥＢＣＴＣＧｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ０１４０−６７３６（１１）６０９９３−８参照）、本発明は、興味深いこととして、ＥＲ陰性乳癌が抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体での処置により抗エストロゲン剤での処置に対し感受性にされ得ることを開示する。
【００３２】
したがって本発明は、ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン処置に対し感受性にするための方法であって、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与し、それにより上記ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン処置に対し感受性にすることを含む、方法を提供する。
【００３３】
本開示はまた、ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン処置に対し感受性にするための方法であって、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与し、それにより上記ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン処置に対し感受性にすることを含む、方法を提供する。
【００３４】
詳細には本発明は、個体においてＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン処置に対し感受性にするための方法であって、上記個体がＥＲ陰性乳癌を罹患しており、上記個体の上記乳癌が手術により処置されており、上記個体における抗エストロゲン処置後に、再発が観察されないか再発のリスクが有意に低減される、方法を提供し得る。
【００３５】
したがって抗エストロゲン処置に対し感受性にされた乳癌は、抗エストロゲン剤で処置され得る。したがって方法は、抗エストロゲン剤をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与するステップを含み得、上記抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および上記抗エストロゲン剤は、同時に、または任意の順序で連続して投与され得る。
【００３６】
したがって本発明は、それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置の方法であって、
ａ．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与することにより、ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン剤での処置に対し感受性にすること；
ｂ．抗エストロゲン剤を上記個体に投与し、それにより上記ＥＲ陰性乳癌を処置すること、
を含む、方法も提供する。
【００３７】
本開示はまた、それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置の方法であって、
ａ．ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与することにより、ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン剤での処置に対し感受性にすること；
ｂ．抗エストロゲン剤を上記個体に投与し、それにより上記ＥＲ陰性乳癌を処置すること、
を含む、方法を提供する。
【００３８】
本発明はまた、個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置の方法であって、ここで上記個体がＥＲ陰性乳癌に罹患しており、かつ上記個体の上記乳癌が手術により処置されており、
ａ．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与することにより、ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン剤での処置に対し感受性にすること；
ｂ．抗エストロゲン剤を上記個体に投与し、それにより上記ＥＲ陰性乳癌の再発のリスクを低減すること、
を含む、方法を提供する。
【００３９】
本発明はまた、個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置の方法であって、ここで上記個体がＥＲ陰性乳癌に罹患しており、かつ上記個体の上記乳癌が手術により処置されており、
ａ．ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与することにより、ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン剤での処置に対し感受性にすること；
ｂ．抗エストロゲン剤を上記個体に投与し、それにより上記ＥＲ陰性乳癌の再発のリスクを低減すること、
を含む、方法を提供する。
【００４０】
本発明はまた、それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置の方法であって、
ａ．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与することにより、ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン剤での処置に対し感受性にすること；
ｂ．手術による上記ＥＲ陰性乳癌の処置；
ｃ．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与することにより、残留するＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン剤での処置に対し感受性にすること；
ｄ．抗エストロゲン剤を上記抗体に投与し、それにより上記ＥＲ陰性乳癌の再発のリスクを低減すること、
を含む、方法を提供する。
【００４１】
本発明はまた、それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置の方法であって、
ａ．ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与することにより、ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン剤での処置に対し感受性にすること；
ｂ．手術による上記ＥＲ陰性乳癌の処置；
ｃ．ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与することにより、残留するＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン剤での処置に対し感受性にすること；
ｄ．抗エストロゲン剤を上記抗体に投与し、それにより上記ＥＲ陰性乳癌の再発のリスクを低減すること、
を含む、方法を提供する。
【００４２】
本発明はまた、ＥＲ陰性乳癌をＥＲ陽性乳癌に転換する方法を提供する。そのような方法は、抗ＰＤＧＦ−ＣＣをＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与し、それにより上記ＥＲ陰性乳癌をＥＲ陽性乳癌に転換すること、を含む。
【００４３】
本発明はまた、ＥＲ陰性乳癌をルミナルライク型乳癌に転換する方法を提供する。そのような方法は、抗ＰＤＧＦ−ＣＣをＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与し、それにより上記ＥＲ陰性乳癌をルミナルライク型乳癌に転換すること、を含む。
【００４４】
乳癌がエストロゲン受容体（ＥＲ）を検出可能なレベルで発現する場合、上記乳癌は、ルミナルライク型乳癌と見なされる。上記乳癌の少なくとも１％、例えば少なくとも１０％がＥＲを検出可能なレベルで発現していることが、好ましい。
【００４５】
幾つかの実施形態において、上記方法は、乳癌がルミナルライク型乳癌および／またはＥＲ陽性乳癌に転換されているか否かをテストする追加のステップを含み得る。上記テストは、上記抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体の投与に続いて実施され得、一般には
ａ）上記乳癌から試料を得るステップと、
ｂ）上記試料中のエストロゲン受容体（ＥＲ）の発現をテストするステップと、
ｃ）上記試料中のＥＲの検出可能な発現が、上記乳癌がルミナルライク型乳癌またはＥＲ陽性乳癌に転換されたことの指標であるステップと、
を含み得る。
【００４６】
上記テストは、乳癌がＥＲを発現するか否かを決定するのに有用な任意のテストであり得る。一実施形態において、テストは、免疫組織化学的テスト、例えばＥＲを認識する抗体を用いてステップａ）で得られた試料を染色すること、およびそれに続く例えば顕微鏡測定によるＥＲ発現の検出をステップｂ）が含む、テストである。初期のＥＲ陰性腫瘍よりも大きな割合％の細胞がＥＲを発現する場合（例えば、腫瘍細胞の１％よりも多くが、ＥＲを発現する場合）、ＥＲは発現されたと見なされ得る。好ましくは上記試料の腫瘍細胞の少なくとも１０％がＥＲを発現する場合、乳癌はＥＲ陽性と見なされる。
【００４７】
したがって本発明は、それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置の方法であって、
ａ．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与することにより、ＥＲ陰性乳癌をルミナルライク型乳癌に転換すること；
ｂ．抗エストロゲン剤を上記個体に投与し、それにより上記ＥＲ陰性乳癌を処置すること、
を含む、方法を提供する。
【００４８】
本発明の方法は、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤を投与するステップを含み得る。上記抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および上記抗エストロゲン剤は、同時に、または任意の順序で連続して投与され得る。
【００４９】
あるいは本発明の方法は、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤を投与するステップを含み得る。上記ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および上記抗エストロゲン剤は、同時に、または任意の順序で連続して投与され得る。
【００５０】
本発明はまた、
個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置のための、
ａ）抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤、または
ｂ）ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤
を含む成分キットであって、ここで上記個体がＥＲ陰性乳癌に罹患しており、かつ上記抗体の上記乳癌が手術により処置されており、かつ上記処置が再発のリスクを低減する、成分キットを提供する。
【００５１】
本発明の幾つかの実施形態において、上記ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体または上記ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は、上記抗エストロゲン剤の投与と同時に上記個体に投与される。
【００５２】
しかし幾つかの実施形態において、ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体またはＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は、上記抗エストロゲン剤の投与よりも前に上記個体に投与されることが、好ましいかもしれない。そのような投与の順序は、上記抗エストロゲン剤の投与よりも前に、ＥＲ陰性乳癌が抗エストロゲン剤に対し確実に感受性にされ得る。
【００５３】
本発明の幾つかの実施形態において、ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体またはＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は、１回よりも多く投与され、例えばそれは、少なくとも３回などの少なくとも２回、例えば２〜１０回の範囲でなどの１〜２０回の範囲で投与され得る。
【００５４】
一実施形態において、ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体またはＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は、ＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に少なくとも２回投与され、ここで１回または複数の投与は手術による処置よりも前であり、かつ１回または複数の追加投与が手術による処置よりも後に施される。手術後の投与（複数可）は、抗エストロゲン処置と同時であり得る。
【００５５】
同様に、抗エストロゲン剤は、１回よりも多く投与され得る。多数回の抗エストロゲン剤が、長期間にわたって投与され、例えば長期間にわたって１日１回、１日２回またはさらにより頻繁に投与される。抗エストロゲン剤はまた、より少ない頻度で、例えば週に１〜６回の範囲で、または例えば１ヶ月に１〜４回の範囲で投与され得る。したがって抗エストロゲン剤の投与は、長期間にわたり、例えば少なくとも６ヶ月間などの少なくとも１ヶ月間、例えば数年間などの少なくとも１年間に非常に頻繁であり得る。例えば抗エストロゲン処置は、少なくとも１年間、例えば４〜６年間の範囲でなど、５年間などの１〜１０年間の範囲で、１日１回であり得る。そのような実施形態において、抗エストロゲン剤の初回投与は、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体またはＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤の少なくとも１回の投与と同時であり得るが、次の投与は個別に実施され得る。抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体またはＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤の各投与が抗エストロゲン剤の投与と同時に実施されるが、追加の抗エストロゲン剤が別個に投与される、ということも可能である。
【００５６】
本発明の一実施形態において、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体またはＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は、抗エストロゲン剤の初回投与よりも前に少なくとも１回投与される。したがって上記抗エストロゲン剤の初回投与量は、上記抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体または上記ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤の初回投与後１時間〜数週間の範囲で投与され得る。
【００５７】
典型的には抗エストロゲン剤は、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体またはＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤よりも長時間、投与される。したがって抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体またはＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は、例えば処置の開始時に投与され得るが、抗エストロゲン剤は、典型的には長時間に連続して投与され得る。したがって先に記載された通り、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体またはＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は、例えば１〜５回の範囲で投与され得るが、抗エストロゲン剤は、典型的には４〜６年間の範囲でなど、５年間などの１〜１０年の範囲で連続して投与され得る。抗エストロゲン剤の最終投与は、好ましくは抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体またはＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤の最終投与よりも後に与えられる。
【００５８】
投与経路は、個々の抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤に応じて選択され得る。多くの場合、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体またはＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は非経口投与される。ＰＤＧＦ−Ｒの阻害は非経口で、例えば静脈内配合剤として、かつ経腸的に、例えば錠剤の形態で経口的に投与され得る。非経口投与のための方法および有用な配合剤は、以下の「医薬配合剤」の節に記載される。抗エストロゲン剤は任意の有用な経路で投与され得、その経路は、用いられる個々の抗エストロゲン剤に応じて選択され得る。多くの場合、抗エストロゲン剤は経口投与される。経口投与のための方法および有用な配合剤は、以下の「医薬配合剤」の節に記載される。
【００５９】
処置される個体は、ＥＲ陰性乳癌に罹患した任意の個体であり得る。多くの場合、個体は、ヒト、例えば男性または女性のヒトであろう。好ましくは個体は、女性のヒトである。
【００６０】
幾つかの実施形態において、本開示の方法は、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤の投与を含み、抗エストロゲン剤は、以下の「抗エストロゲン剤」の節に記載されるエストロゲンアンタゴニストである。
【００６１】
幾つかの実施形態において、本開示の方法は、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤の投与を含み、抗エストロゲン剤は、タモキシフェン、ラロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン（４−ｈｙｄｒｏｘｙｔｒａｍｏｘｉｆｅｎ）、トリオキシフェン、ケオキシフェン、アフィモキシフェン、ＬＹ１１７０１８、フルベストラントおよびトレミフェンからなる群から選択されるエストロゲンアンタゴニストである。
【００６２】
幾つかの実施形態において、本開示の方法は、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体およびエストロゲンアンタゴニストの投与を含み、エストロゲンアンタゴニストは、タモキシフェンである。
【００６３】
幾つかの実施形態において、本開示の方法は、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤の投与を含み、抗エストロゲン剤は、以下の「抗エストロゲン剤」の節に記載されるアロマターゼ阻害剤である。
【００６４】
幾つかの実施形態において、本開示の方法は、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤の投与を含み、抗エストロゲン剤は、エキセメスタン、ホルメスタン、アミノグルテチミド、ボロゾール、ファドロゾール、アナストロゾールおよびレトロゾールからなる群から選択されるアロマターゼ阻害剤である。
【００６５】
幾つかの実施形態において、本開示の方法は、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤の投与を含み、抗エストロゲン剤は、レトロゾールである。
【００６６】
幾つかの実施形態において、本開示の方法は、抗ＰＤＧＦ−Ｒ抗体および抗エストロゲン剤の投与を含み、抗エストロゲン剤は、以下の「抗エストロゲン剤」の節に記載されるエストロゲンアンタゴニストである。
【００６７】
幾つかの実施形態において、本開示の方法は、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤の投与を含み、抗エストロゲン剤は、タモキシフェン、ラロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、アフィモキシフェン、ＬＹ１１７０１８、フルベストラントおよびトレミフェンからなる群から選択されるエストロゲンアンタゴニストである。
【００６８】
幾つかの実施形態において、本開示の方法は、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤の投与を含み、抗エストロゲン剤は、タモキシフェンである。
【００６９】
成分キット
本発明は、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤を含む成分キットを提供する。本発明はまた、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤を含む成分キットを提供する。成分キットは詳細には、それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置のためのものであり得る。したがって成分キットは、本明細書の先の「処置の方法」の節に記載された処置の方法のいずれかでの使用のために調製され得る。
【００７０】
成分キットは、別個の単位として、即ち、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体を含む１つまたは複数の単位、および抗エストロゲン剤を含む１つまたは複数の単位として提供されてよく、ここで単位は別個に提供される。あるいは成分キットは、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤を含む１つまたは複数の単位および抗エストロゲン剤を含む１つまたは複数の単位を含んでよく、ここで単位は別個に提供される。
【００７１】
したがって成分キットは連続投与のために調製され得、ここで成分キットの各成分は別個に提供および投与される。したがって抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤は、連続投与のために調製され得る。ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤もまた、連続投与のために調製され得る。上記成分キットが上記の「処置の方法」の節に記載される方法のいずれかによる投与のために調製されることが、本発明に含まれる。詳細には成分キットは、ＥＲ陰性乳癌の処置のために調製され得、ここで上記処置は、
ａ．それを必要とする個体への抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体の投与のステップ；
ｂ．抗エストロゲン剤の次の投与のステップ、
を含む。
【００７２】
あるいは成分キットは、ＥＲ陰性乳癌の処置のために調製され得、上記処置は、
ａ．必要とする個体へのＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤の投与のステップ；
ｂ．次の抗エストロゲン剤の投与のステップ、
を含む。
【００７３】
多くの場合、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体またはＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は、限られた回数での非経口投与のために調製される。例えば、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体またはＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は、本明細書の先の「処置の方法」の節に記載される通り非経口投与のために調製され得る。ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤はまた、多くの場合、経口投与のために、例えば錠剤の形態で、調製され得る。反対に、抗エストロゲン剤は、任意の手段による投与により調製され得る。したがって例えば抗エストロゲン剤は、本明細書の先の「処置の方法」の節に記載される通り、頻回の経口投与のために調製され得る。
【００７４】
幾つかの実施形態において、本開示の成分キットは、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤を含み、ここで抗エストロゲン剤は、以下の「抗エストロゲン剤」の節に記載される通りエストロゲンアンタゴニストである。
【００７５】
幾つかの実施形態において、本開示の成分キットは、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤を含み、ここで抗エストロゲン剤は、タモキシフェン、ラロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、アフィモキシフェン、ＬＹ１１７０１８、フルベストラントおよびトレミフェンからなる群から選択されるエストロゲンアンタゴニストである。
【００７６】
幾つかの実施形態において、本開示の成分キットは、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤を含み、ここで抗エストロゲン剤は、タモキシフェンである。
【００７７】
幾つかの実施形態において、本開示の成分キットは、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤を含み、ここで抗エストロゲン剤は、以下の「抗エストロゲン剤」の節に記載される通りアロマターゼ阻害剤である。
【００７８】
幾つかの実施形態において、本開示の成分キットは、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤を含み、ここで抗エストロゲン剤は、エキセメスタン、ホルメスタン、アミノグルテチミド、ボロゾール、ファドロゾール、アナストロゾールおよびレトロゾールからなる群から選択されるアロマターゼ阻害剤である。
【００７９】
幾つかの実施形態において、本開示の成分キットは、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤を含み、ここで抗エストロゲン剤は、レトロゾールである。
【００８０】
幾つかの実施形態において、本開示の成分キットは、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤を含み、ここで抗エストロゲン剤は、以下の「抗エストロゲン剤」の節に記載される通りエストロゲンアンタゴニストである。
【００８１】
幾つかの実施形態において、本開示の成分キットは、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤を含み、ここで抗エストロゲン剤は、タモキシフェン、ラロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、アフィモキシフェン、ＬＹ１１７０１８、フルベストラントおよびトレミフェンからなる群から選択されるエストロゲンアンタゴニストである。
【００８２】
幾つかの実施形態において、本開示の成分キットは、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤を含み、ここで抗エストロゲン剤は、タモキシフェンである。
【００８３】
抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体
本発明は、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体を含む成分キット、および抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体を用いる処置の方法に関する。上記抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＰＤＧＦ−ＣＣを結合できる任意の抗体であり得、詳細にはそれは、ＰＤＧＦ−ＣＣを特異的に結合する抗体であり得る。ＰＤＧＦ−ＣＣは、本明細書の以下の「ＰＤＧＦ−ＣＣ」の節に詳細に記載される。ＰＤＧＦ−ＣＣはＰＤＧＦ−Ｃの二量体であるので、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体はしたがって、ＰＤＧＦ−ＣＣおよびＰＤＧＦ−Ｃの両方を特異的に結合し得る。
【００８４】
本発明はまた、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤を含む成分キットおよびＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤を用いる処置の方法に関する。しかし、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体の使用が好ましく、なぜならこの抗体は大きな特異性でＰＤＧＦ−ＣＣを標的とするが、ＰＤＧＦファミリーの他のメンバーを標的とせず、それゆえ副作用が最小限であるからである。ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤もまた、ＰＤＧＦ−Ｒシグナル伝達経路を遮断するのに効果的であるが、それらはＰＤＧＦ−Ｒの全てに非特異的に作用し、それゆえ望ましくない影響をもたらし得る。しかしそのような望ましくない影響は、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤がＰＤＧＦ−Ｒに対する抗体である場合には、最小限に抑えられる。
【００８５】
抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、任意のＰＤＧＦ−ＣＣに結合し得る。しかし一般には、用いられる抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、処置される個体のＰＤＧＦ−ＣＣを結合できることが、好ましい。したがって、個体がヒトである本発明の実施形態において、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体はヒトのＰＤＧＦ−ＣＣを結合できることが、好ましい。ヒトＰＤＧＦ−Ｃの配列は、本明細書においてＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１として提供される。
【００８６】
本発明による抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＰＤＧＦ−ＣＣを認識し結合できる任意のポリペプチドまたはタンパク質であり得る。用語「特異的に結合する」は、非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ）に対するよりＰＤＧＦ−ＣＣに対して、少なくとも１０倍高い親和性で結合することを意味する。典型的には抗体は、ＩＣ５０値に基づく見かけの親和性として測定された場合に、約１０−８Ｍ以下など、約１０−９Ｍ以下などの約１０−７Ｍ以下、例えば約１０−１０Ｍ以下のＫＤに対応する親和性で結合する。
【００８７】
一実施形態において、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＰＤＧＦ−ＣＣを、そして場合によりＰＤＧＦ−Ｃも特異的に結合するが、任意の他のＰＤＧＦを特異的に結合しない。
【００８８】
一実施形態において、上記抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、天然由来の抗体またはその機能的相同体である。天然由来の抗体は、抗原を認識し結合できるヘテロ四量体の糖タンパク質であり、ジスルフィド結合により相互に接続された２つの同一の重（Ｈ）鎖および２つの同一の軽（Ｌ）鎖を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略される）および重鎖定常領域（本明細書ではＣＨと略される）を含む、または好ましくはそれらからなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略される）および軽鎖定常領域（本明細書ではＣＬと略される）を含む、または好ましくはそれらからなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに細分され得る。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含み、かつ好ましくはそれらからなり、それらはアミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４、で配列される。
【００８９】
本発明による天然由来の抗体は、１つのヘテロ四量体からなり得るか、またはそれらは複数の同一のヘテロ四量体を含み得る。したがって本発明による天然由来の抗体は、例えばＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥからなる群から選択され得る。これらの異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元構成は、周知である。本発明の好ましい実施形態において、抗体はＩｇＧ、例えばＩｇＧ−１、ＩｇＧ−２、ＩｇＧ−３およびＩｇＧ−４である。
【００９０】
本発明による天然由来の抗体は、特定の種の抗体であり得、例えば抗体は、ネズミ、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ニワトリ、ロバ、ラクダまたはヒトの抗体であり得る。しかし本発明による抗体は、例えば複数の種からの抗体間のハイブリッドでもあり得、例えば抗体は、ヒト化抗体などのキメラ抗体であり得る。
【００９１】
ヒトの治療に非ヒト抗体を用いることは必ずしも望ましくはなく、したがって本発明による抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ヒト抗体またはヒト化抗体、例えば天然由来のヒト抗体であり得る。
【００９２】
本発明による抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ヒト免疫グロブリンまたはヒト化免疫グロブリン、例えば天然由来のヒト免疫グロブリンであり得る。
【００９３】
本明細書で用いられるヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列を用いる系から得られる抗体である。ヒト抗体は、例えばヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックもしくはトランスクロモソーマル（ｔｒａｎｓｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ）である動物（例えば、マウス）またはそれから調製されたハイブリドーマから単離された抗体であり得る。ヒト抗体はまた、抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えばトランスフェクトーマから単離され得る。ヒト抗体はまた、組換え体のコンビナトリアルなヒト抗体ライブラリーから単離され得る。
【００９４】
ヒト抗体は、ヒト生殖系免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する。しかし特定の実施形態において、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ変異誘発またはインビボ体細胞変異誘発に供され得、したがって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系ＶＨおよびＶＬ配列に由来しそれらに関係するが、インビボでヒト抗体生殖系レパートリー内に天然に存在し得ない配列である。
【００９５】
ヒト抗体は、アミノ酸配列が野生型ヒト免疫グロブリン遺伝子によりコードされたアミノ酸配列に好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。
【００９６】
上記トランスジェニックまたはトランスクロモソーマル動物は、再配置されていないヒト重（μおよび／またはγ）鎖およびκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子のミニ遺伝子座（ｍｉｎｉｌｏｃｉ）を含み得る。さらにこの動物は、内在性の重鎖および軽鎖遺伝子座を不活性化する１つまたは複数の突然変異を含み得る。そのような動物の例は、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８  （６４７４）：８５６−８５９およびＷＯ０２／４３４７８に記載される。
【００９７】
本発明による抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、キメラ抗体、即ち異なる種に由来する領域を含む抗体であり得る。キメラ抗体は、例えば１つの種の動物からの可変領域と、他の種の動物からの定常領域とを含み得る。例えばキメラ抗体は、マウスモノクローナル抗体に由来する可変領域と、ヒトである定常領域とを有する抗体であり得る。そのような抗体は、ヒト化抗体と称される場合もある。
【００９８】
したがって本発明による抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体はまたヒト化抗体であってよく、それは部分的にヒト生殖系免疫グロブリン配列から得られる配列によりコードされ、部分的に他の配列からの配列によりコードされる。上記他の配列は、好ましくは他の種からの、より好ましくは他の哺乳動物種からの生殖系免疫グロブリンである。詳細にはヒト化抗体は、抗原結合部位が非ヒト種からの、好ましくは非ヒト哺乳動物からの、例えばマウスまたはラットからの免疫グロブリンに由来するが、分子の残りの免疫グロブリン由来部分の一部または全てはヒト免疫グロブリンに由来する、抗体であり得る。上記非ヒト種からの抗原結合部位は、例えば完全なＶＬもしくはＶＨもしくは両方から、またはＶＬもしくはＶＨもしくは両方の適当なヒトフレームワーク領域に移入された１つもしくは複数のＣＤＲからなり得る。したがってヒト化抗体において、ＣＤＲはマウスまたはラットモノクローナル抗体由来であり得、抗体の他の領域はヒト起源のものである。
【００９９】
本発明による抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、天然由来のモノクローナル抗体などのモノクローナル抗体であり得、またはそれは、天然由来のポリクローナル抗体などのポリクローナル抗体であり得る。
【０１００】
抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、単一のポリペプチド、タンパク質または糖タンパク質などの、抗原結合部位を含む任意のタンパク質またはポリペプチドであり得る。好ましくは抗原結合部位は、少なくとも１つのＣＤＲ、またはより好ましくは可変領域を含む。
【０１０１】
したがって抗原結合部位は、ＶＨおよび／またはＶＬを含み得る。１つの抗体において、ＶＨとＶＬが共に抗原結合部位を含む場合があるが、ＶＨまたはＶＬのいずれか一方が抗原結合部位を含んでもよい。
【０１０２】
抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、例えば抗体の抗原結合断片、好ましくは天然由来抗体、異種特異性抗体、一本鎖抗体または組換え抗体の抗原結合断片であり得る。
【０１０３】
本発明による抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、１つまたは複数の抗原結合部位を含み得る。天然由来のヘテロ四量体抗体は、２つの抗原結合部位を含む。
【０１０４】
本明細書の先に述べられた通り、本発明で用いられる抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＰＤＧＦ−ＣＣを認識し結合できる。したがって一般に抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＰＤＧＦ−ＣＣ上の１つまたは複数のエピトープを特異的に結合する。抗体がモノクローナル抗体である場合の本発明の実施形態において、抗体は一般に、ＰＤＧＦ−ＣＣ上の１つのエピトープを結合する。
【０１０５】
上記エピトープ（複数可）は、ＰＤＧＦ−ＣＣの任意の有用な部分に位置し得る。しかし本発明の好ましい実施形態において、抗体は阻害的抗体であり、即ち抗体は、ＰＤＧＦ−ＣＣ活性を阻害できる。詳細には、抗体が、ＰＤＧＦＲαホモ二量体へのおよび／またはＰＤＧＦＲα／βヘテロ二量体へのＰＤＧＦ−ＣＣの結合を阻害し得ることが、好ましいであろう。抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体はまた、ＰＤＧＦＲαホモ二量体のおよび／またはＰＤＧＦＲα／βヘテロ二量体の活性化を阻害できる。ＰＤＧＦＲαホモ二量体および／またはＰＤＧＦＲα／βヘテロ二量体の活性化は、例えばＰＤＧＦＲαホモ二量体および／またはＰＤＧＦＲα／βヘテロ二量体のキナーゼ活性を計測することにより決定され得る。
【０１０６】
一実施形態において、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体がＰＤＧＦ−ＣＣのタンパク質分解処理を阻害できることが、好ましい。
【０１０７】
本発明の一実施形態において、上記抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、米国特許出願第６２／３５７，５３６号に記載された抗体のいずれかであり得る。したがって抗ＰＤＧＦ−ＣＣは、米国特許出願第６２／３５７，５３６号に記載されるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）Ａ３Ｂ６、１１Ｆ５、１９Ｃ７および１２Ｆ５の、キメラ抗体ｃｈＡ３Ｂ６のまたはヒト化抗体ｈｕＡ３Ｂ６の、全抗体、断片または実質的に相同な断片を含み得る。断片は、米国特許出願第６２／３５７，５３６号に記載される通りＡ３Ｂ６、ｃｈＡ３Ｂ６、ｈｕＡ３Ｂ６、１０  １１Ｆ５、１２Ｆ５および１９Ｃ７の可変軽鎖および重鎖配列またはＣＤＲ領域の１つまたは一部を含み得る。抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、好ましい実施形態において、ヒト化抗体、詳細には米国特許出願第６２／３５７，５３６号に記載される抗体ｈｕＡ３Ｂ６であり得る。
【０１０８】
一実施形態において、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１として提供される全長配列の残基２３０〜３４５に提供される、ＰＤＧＦ−ＣＣコア活性ドメイン内の１つまたは複数のエピトープを結合し得る。
【０１０９】
したがって本発明の一実施形態において、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、切断部位を含むＰＤＧＦ−ＣＣの領域に位置するエピトープを結合することが、好ましい。ヒトＰＤＧＦ−Ｃにおいて、切断部位はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸配列２３１〜２３４に位置する。したがって、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２３１、２３２、２３３および２３４からなる群から選択されるアミノ酸の少なくとも一部を含むエピトープを結合できることが好ましい。詳細には抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２３１、２３２、２３３および２３４の少なくとも１つを含むエピトープを結合できる。別の実施形態において、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、切断部位の直ぐそばに隣接するエピトープを結合でき、それによりＰＤＧＦ−Ｃのタンパク質分解処理を阻害できる。したがって一実施形態において、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２３０〜２５０内に位置するエピトープを結合できる。
【０１１０】
本発明の一実施形態において、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＷＯ２００５／０８７８１２に記載されたＰＤＧＦ−Ｃエピトープを結合する。例えば抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２３１〜２７４で構成されるエピトープを結合し得る。
【０１１１】
本発明の一実施形態において、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＷＯ２００７／１２４３０８に記載されたＰＤＧＦ−Ｃエピトープを結合する。例えば抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２２８〜２３８の中に位置する、それを含む、またはそれからなるエピトープを結合し得る。
【０１１２】
本発明の一実施形態において、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＷＯ２０１３／１６０３５９に記載されたＰＤＧＦ−Ｃエピトープを結合する。例えば抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸３０８〜３２２の中に位置する、それを含む、またはそれからなるエピトープを結合し得る。
【０１１３】
本発明の一実施形態において、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２４２〜２５４の中に位置する、それを含む、またはそれからなるエピトープを結合し得る。
【０１１４】
本発明の一実施形態において、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２８８〜３０８の中に位置する、それを含む、またはそれからなるエピトープを結合し得る。
【０１１５】
本発明の一実施形態において、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸３２５〜３４５の中に位置する、それを含む、またはそれからなるエピトープを結合し得る。
【０１１６】
本発明の一実施形態において、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２５６〜２７４の中に位置する、それを含む、またはそれからなるエピトープを結合し得る。
【０１１７】
本発明の一実施形態において、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２５６〜２６４の中に位置する、それを含む、またはそれからなるエピトープを結合し得る。
【０１１８】
本発明の一実施形態において、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２５６〜２６０の中に位置する、それを含む、またはそれからなるエピトープを結合し得る。
【０１１９】
ＰＤＧＦ−ＣＣ
血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）は、正常な組織の成長および維持に重要な成長因子である。ＰＤＧＦ−Ｃは、潜在型二量体ＰＤＧＦ−ＣＣとして細胞から分泌される。ＰＤＧＦ−ＣＣは、ＰＤＧＦＲαを通して、詳細にはＰＤＧＦＲαホモ二量体および／またはＰＤＧＦＲα／βヘテロ二量体を通してシグナル伝達する。組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）は、高度に制限された基質特異性を有する分泌されたセリンプロテアーゼであり、ｔＰＡは、潜在型二量体ＰＤＧＦ−ＣＣを切断し活性化する。
【０１２０】
本発明の好ましい実施形態において、ＰＤＧＦ−ＣＣは、ヒトＰＤＧＦ−ＣＣである。ヒトＰＤＧＦ−Ｃの配列は、本明細書ではＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１として提供され、ヒトＰＤＧＦ−ＣＣは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の２つのポリペプチドの二量体である。
【０１２１】
しかしＰＤＧＦ−ＣＣはまた、ヒトＰＤＧＦ−Ｃの機能的相同体であり、例えば、それぞれがＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１と少なくとも７０％の、少なくとも８０％など、例えば少なくとも８５％、少なくとも９０％など、例えば少なくとも９５％の配列を共有する、ポリペプチドの二量体であり得る。
【０１２２】
したがってＰＤＧＦ−ＣＣはまた、他の哺乳動物のＰＤＧＦ−ＣＣであり得る。
【０１２３】
ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤
本開示は、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦ−Ｒ）の阻害剤を含む成分キット、およびＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤を用いる処置の方法に関する。本発明者らは、ＰＤＧＦ受容体の阻害が内分泌療法の作用に対するＥＲ陰性腫瘍の感受性化をもたらすことを見出した。
【０１２４】
ＰＤＧＦ−Ｒは、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）ファミリーのメンバーの細胞表面チロシンキナーゼ受容体である。ＰＤＧＦ−Ｒには２つの形態：アルファ（ＵｎｉＰｒｏｔアクセション番号Ｐ１６２３４；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）およびベータ（ＵｎｉＰｒｏｔアクセション番号Ｐ０９６１９；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９）があり、それぞれは異なる遺伝子にコードされている。どの成長因子が結合されるかにより、ＰＤＧＦ−Ｒは、ホモ二量体化、またはヘテロ二量体化し得る。受容体の細胞外領域は、５つの免疫グロブリン様ドメインからなるが、細胞内部分は、チロシンキナーゼドメインである。ＰＤＧＦは、ＰＤＧＦ−Ｒアルファまたはベータのチロシンキナーゼドメインを結合し、そうして受容体を二量体化させる。異なるＰＤＧＦは、異なる受容体二量体と相互作用する。二量体化はキナーゼの活性化に不可欠であり、キナーゼは受容体そのものの幾つかの重要な残基、および受容体の基質の幾つかの重要な残基をリン酸化する。受容体のリン酸化される残基は、細胞外領域の、シグナル伝達分子の通常は３つの特異的結合部位の付近に位置する。シグナル伝達分子は、異なる酵素活性を備え得るか、またはアダプター分子として作用し得、全例ではないが一部の例では、触媒活性を担うサブユニットとの複合体中に見出される。活性化受容体との相互作用により、触媒活性は、上方制御されるようになる。ＰＤＧＦ−Ｒシグナル伝達の主な下流メディエータは、Ｒａｓ／マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）、ＰＩ−３キナーゼおよびホスホリパーゼ−γ（ＰＬＣ−γ）経路であると思われる。加えて、活性酸素種（ＲＯＳ）依存性のＳＴＡＴ３活性化が、血管平滑筋細胞でのＰＤＧＦ−Ｒシグナル伝達の重要な下流メディエータであることが確定されている。
【０１２５】
両方の受容体および４つのＰＤＧＦそれぞれの発現は、独立した制御下にあり、これがＰＤＧＦ／ＰＤＧＦ−Ｒ系に高度の柔軟性を与える。異なる細胞型は、ＰＤＧＦアイソフォームと発現されるＰＤＧＦ−Ｒの比率を大きく変動させる。
【０１２６】
本発明者らは、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤の使用により、処置を支えるメカニズムは異なるが、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体を用いることにより得られた結果と類似の結果が得られることを見出した。
【０１２７】
本開示によるＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤またはその変種は、ＰＤＧＦ−Ｒと相互作用できかつそのチロシンキナーゼ活性を遮断できる任意の化合物であり得る。例えばＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は、ＰＤＧＦ−Ｒのチロシンキナーゼ部位を結合し特異的に占有し得る。
【０１２８】
本開示全体を通して、用語「ＰＤＧＦ−Ｒ」は、ＰＤＧＦ−Ｒアルファ（ＰＤＧＦ−Ｒα）およびＰＤＧＦ−Ｒベータ（ＰＤＧＦ−Ｒβ）の両方と、それらの変種、例えばＰＤＧＦ−ＲαおよびＰＤＧＦ−Ｒβの天然由来のアイソフォームを指す。
【０１２９】
幾つかの実施形態において、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は、ＰＤＧＦ−ＲαおよびＰＤＧＦ−Ｒβのチロシンキナーゼ活性を阻害できる。
【０１３０】
幾つかの実施形態において、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は、ＰＤＧＦ−Ｒαのチロシンキナーゼ活性を阻害できる。
【０１３１】
幾つかの実施形態において、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は、ＰＤＧＦ−Ｒβのチロシンキナーゼ活性を阻害できる。
【０１３２】
幾つかの実施形態において、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は、チロシンキナーゼ阻害剤である。
【０１３３】
ＰＤＧＦ−Ｒの複数の阻害剤、例えばイマチニブ、ニロチニブ、アキシチニブ、スニチニブ、ダサチニブ（ｄａｓｉｔｉｎｉｂ）、ソラフェニブ、ＳＵ６６６８、パゾパニブ、レンバチニブ、カボザニチブおよびニンテダニブが、公知である。
【０１３４】
好ましくは本開示の幾つかの実施形態において、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は、イマチニブである。
【０１３５】
本開示の他の実施形態において、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は、ＰＤＧＦ−Ｒに対する抗体である。幾つかの抗体は、実際にＰＤＧＦ−Ｒと相互作用できかつそれらの活性を遮断または中和し、詳細にはそれらは、ＰＤＧＦ−Ｒから発するシグナル伝達を遮断または中和できる。
【０１３６】
抗ＰＤＧＦ−Ｒ抗体は、任意のＰＤＧＦ−Ｒに結合し得る。しかし一般には、用いられる抗ＰＤＧＦ−Ｒ抗体が処置される個体のＰＤＧＦ−Ｒを結合できることが、好ましい。したがって、個体がヒトである場合の本発明の実施形態において、抗ＰＤＧＦ−Ｒ抗体がヒトＰＤＧＦ−Ｒ、例えばヒトＰＤＧＦ−Ｒαおよび／またはヒトＰＤＧＦ−Ｒβを結合できることが、好ましい。
【０１３７】
本発明による抗ＰＤＧＦ−Ｒ抗体は、ＰＤＧＦ−Ｒを認識し結合できる任意のポリペプチドまたはタンパク質であり得る。用語「特異的に結合する」は、非特異的抗体（例えば、ＢＳＡ）よりもＰＤＧＦ−Ｒ、ＰＤＧＦ−Ｒαおよび／またはＰＤＧＦ−Ｒβに対して少なくとも１０倍高い親和性で結合することを意味する。典型的には抗体は、ＩＣ５０値に基づく見かけの親和性として測定された場合、約１０−７Ｍ以下、約１０−８Ｍ以下など、約１０−９Ｍ以下など、例えば約１０−１０Ｍ以下のＫＤに対応する親和性で結合する。本発明による天然由来の抗体は、１つのヘテロ四量体からなり得るか、またはそれらは、複数の同一ヘテロ四量体を含み得る。したがって、本発明による天然由来抗体は、例えばＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥからなる群から選択され得る。これらの異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元構成は、周知である。
【０１３８】
一実施形態において、上記抗ＰＤＧＦ−Ｒ抗体は、「抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体」の節に定義された通り、天然由来抗体またはその機能的相同体である。
【０１３９】
先の抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体」の節に記載された通り、本発明による天然由来抗体は、特定の種の抗体であり得る。しかし抗体は、複数の種からの抗体の間のハイブリッドでもあり得、例えば抗体は、ヒト化抗体などのキメラ抗体であり得る。
【０１４０】
ヒト治療のために非ヒト抗体を使用することは、必ずしも望ましいわけではなく、したがって本発明による抗ＰＤＧＦ−Ｒ抗体は、ヒト抗体またはヒト化抗体、例えば先の抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体」の節に記載された天然由来ヒト抗体であり得る。
【０１４１】
本発明による抗ＰＤＧＦ−Ｒ抗体は、ヒト免疫グロブリンまたはヒト化免疫グロブリン、例えば天然由来のヒト免疫グロブリンであり得る。
【０１４２】
本発明による抗ＰＤＧＦ−Ｒ抗体は、先の「抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体」の節に記載された通り、天然由来モノクローナル抗体などのモノクローナル抗体であり得るか、またはそれは、天然由来ポリクローナル抗体などのポリクローナル抗体であり得る。
【０１４３】
抗ＰＤＧＦ−Ｒ抗体は、単一のポリペプチド、タンパク質または糖タンパク質などの、抗原結合部位を含む任意のタンパク質またはポリペプチドであり得る。好ましくは抗原結合部位は、少なくとも１つのＣＤＲ、またはより好ましくは可変領域を含む。
【０１４４】
本明細書の先に述べられた通り、本発明で用いられる抗ＰＤＧＦ−Ｒ抗体は、ＰＤＧＦ−Ｒαおよび／またはＰＤＧＦ−Ｒβを認識し結合できる。したがって一般に、抗ＰＤＧＦ−Ｒ抗体は、ＰＤＧＦ−Ｒαおよび／またはＰＤＧＦ−Ｒβ上の１つまたは複数のエピトープを特異的に結合する。抗体が、モノクローナル抗体である場合の本発明の実施形態において、抗体は、ＰＤＧＦ−Ｒαおよび／またはＰＤＧＦ−Ｒβ上の１つのエピトープを一般に結合する。
【０１４５】
ＰＤＧＦ−Ｒαおよび／またはＰＤＧＦ−Ｒβ上の１つまたは複数のエピトープを結合するポリクローナル抗体もまた、用いられ得る。
【０１４６】
幾つかの実施形態において、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤は、ＰＤＧＦ−ＲαおよびＰＤＧＦ−Ｒβの両方を標的とする抗体である。抗体はまた、ＰＤＧＦ−Ｒαに特異的であり得る。あるいは抗体は、ＰＤＧＦ−Ｒβに特異的であり得る。
【０１４７】
抗エストロゲン剤
本発明は、抗エストロゲン剤を含む成分キット、および抗エストロゲン剤を用いる処置の方法に関する。上記抗エストロゲン剤は、エストロゲンの生成または使用を低減できる任意の化合物であり得る。
【０１４８】
一般に抗エストロゲン剤は、２つの異なるサブクラス、即ちエストロゲンの生成を低減または阻害できる化合物と、エストロゲンの活性を低減および／または阻害できる化合物に分別され得る。後者の群は、エストロゲン受容体により媒介されたシグナル伝達を予防または低減できる化合物を包含する。
【０１４９】
したがって本発明の一実施形態において、抗エストロゲン剤は、アロマターゼ阻害剤である。アロマターゼ阻害剤は、哺乳動物においてエストロゲン合成を遮断または低減すること、およびそれによりエストロゲンレベルを低下させることにより作用する。アロマターゼ阻害剤の例としては、エキセメスタン、アナストロゾール、レトロゾール、アミノグルテチミド、テストラクトン、ボロゾール、ホルメスタンおよびファドロゾールが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５０】
別の実施形態において、抗エストロゲン剤は、エストロゲンアンタゴニストである。エストロゲンアンタゴニストの例としては、タモキシフェン、ラロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、アフィモキシフェン、ＬＹ１１７０１８、フルベストラントおよびトレミフェンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５１】
エストロゲンアンタゴニストは、エストロゲンのアンタゴニストおよび、部分的なアゴニストの両方である化合物であり得る。そのような抗エストロゲン剤の例は、タモキシフェンである。
【０１５２】
エストロゲンアンタゴニストは、エストロゲンの完全なアンタゴニストであり得る。そのような抗エストロゲン剤の例は、フルベストラントである。
【０１５３】
本発明で用いられる好ましい抗エストロゲン剤は、タモキシフェンである。タモキシフェンは、エストロゲン受容体（ＥＲ）に結合するトリフェニルアルキレン誘導体である。タモキシフェンの治療メカニズムは複雑であるが、タモキシフェンの主たる効果は、エストロゲン受容体を介して発揮され得る。タモキシフェンに加えて、その活性代謝産物Ｎ−デスメチルタモキシフェンおよびエンドキシフェン（４−ヒドロキシ−Ｎ−デスメチル−タモキシフェン）が、本発明で抗エストロゲン剤として用いられ得る。
【０１５４】
したがって本発明で用いられる抗エストロゲン剤は、タモキシフェンなどのトリフェニルアルキレン誘導体、またはクロミフェン、ならびにクロミフェン、タモキシフェン、ピロリジノタモキシフェン、トレミフェン、縮合環タモキシフェン、フィスペミフェンの４−ヒドロキシル化、脱アルキル化および４−ヒドロキシ−Ｎ−脱アルキル化類似体を含む構造的に類似した化合物、ならびに実質的に類似の構造を有する他の分子であり得る。前述のもののシスおよびトランス異性体もまた、用いられ得る。
【０１５５】
抗エストロゲン剤はまた、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）であり得る。本発明のＳＥＲＭとしては、トリフェニルアルキレンを含み、参照により本明細書に組み入れられる米国特許第４，５３６，５１６号に記載された２−［４−（１，２−ジフェニルブタ−１−エニル）フェノキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−エタンアミン（タモキシフェン）および他の化合物；参照により本明細書に組み入れられる米国特許第４，６２３，６６０号に記載された４’−ヒドロキシ−２−［４−（１，２−ジフェニルブタ−１−エニル）フェノキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−エタンアミン（４’−ヒドロキシタモキシフェン）および他の化合物、ならびに脱アルキル化変種４’−ヒドロキシ−２−［４−（１，２−ジフェニルブタ−１−エニル）フェノキシ］−Ｎ−モノメチル−エタンアミン（エンドキシフェンとしても知られるＮ−デスメチル−４’−ヒドロキシタモキシフェン）；縮合環タモキシフェンおよびその４’−ヒドロキシル、Ｎ−デスメチル、Ｎ−デスエチル、４’−ヒドロキシル−Ｎ−デスメチルおよび４’−ヒドロキシ−Ｎ−デスエチル形態（ｆｏｎｎｓ）；米国特許第５，０４７，４３１号に記載された１−［４’−（ジメチルアミノエトキシ）フェニル］−１−（３’ヒドロキシフェニル）−２−フェニルブタ−１−エン（ドロロキシフェン）および他の化合物、ならびにそれらの４’−ヒドロキシル、Ｎ−デスエチルおよび４’−ヒドロキシ−Ｎ−デスエチル形態；各々が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第４，６９６，９４９号、同第５，４９１，１７３号、および同第４，９９６，２２５号に記載された２−［ｐ−［４−クロロ−１，２−ジフェニル−１−ブテニル］フェノキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチルエチルアミン（トレミフェン）および他の化合物、ならびに４’−ヒドロキシトレミフェン、Ｎ−デスメチル−トレミフェンおよびＮ−デスメチル−４’−ヒドロキシトレミフェン；参照により本明細書に組み入れられる米国特許第４，８３９，１５５号に記載された１−（２−（４−（１−（４−ヨード−フェニル）−２−フェニル−ブタ−１−エニル）−フェノキシ）−エチル）−ピロリジノン（イドキシフェン）および他の化合物；ならびに４−ヒドロキシピロリジノタモキシフェン；それぞれが参照により本明細書に組み入れられる米国特許第７，５０４，５３０号に記載された２−（２−｛４−［（１Ｚ）−４−クロロ−１，２−ジフェニルブタ−１−エン−１−ニル］フェノキシエトキシ）エタン−１−オール（フィスペミフェン）および他の化合物、ならびに４’−ヒドロキシフィスペミフェン；クロミフェンおよびその両方の異性体；各々が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第号４，６９６，９４９号および同第５，４９１，１７３号および同第６，５７６，６４５号に記載された化合物、ならびに（Ｅ）４’−ヒドロキシクロミフェン、（Ｅ）Ｎ−デスエチル−クロミフェンおよび（Ｅ）Ｎ−デスエチル−４’−ヒドロキシクロミフェンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５６】
本発明で用いられるＳＥＲＭとしては、両者とも参照により本明細書に組み入れられる米国特許第４，４１８，０６８号および同第５，３９３，７６３号に記載された［６−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−ベンゾチオフェン−３−イル］−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ）フェニル］−メタノン（ラロキシフェン）および他の化合物；ＬＹ３５３３８１；ならびにＷＯ９８／４５２８６、ＷＯ９８／４５２８７およびＷＯ９８／４５２８８に記載されたＬＹ３３５５６３および他の化合物：などのベンゾチフェン誘導体；ＷＯ９６／２６２０１に記載された（＋）−７−ピバロイルオキシ−３−（４’ピバロイルオキシフェニル）−４−メチル−２−（４’’−（２’’ピペリジノエトキシ）フェニル）−２Ｈ−ベンゾピラン（ＥＭ８００／ＳＣＨ５７０５０）および他の化合物；（２Ｓ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジペトキシ（ｐｉｐｅｒｉｄｙｐｅｔｈｏｘｙ）］フェニル］−２Ｈ−クロメン−７−オール（ＥＭ６５２）：などのベンゾピラン誘導体；米国特許第５，５５２，４１２号に記載されたシス−６−フェニル−５４４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］−５，６，７，８−テトラヒドロナフタレン−２−オール（ラソフォキシフェン／ＣＰ３３６，１５６）および他の化合物；参照により本明細書に組み入れられる米国特許第４，２３０，８６２号に記載された３，４−ジヒドロ−２−（ｐ−メトキシフェニル）−１−ナフチル−ｐ−［２−（１−ピロリジニペトキシ（ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｙｐｅｔｈｏｘｙ）］フェニルケトン（トリオキシフェン／ＬＹ１３３３１４）および他の化合物；および参照により本明細書に組み入れられる米国特許第６，５０９，３５６号に記載されたものなどの１−（４−置換アルコキシ）ベンジル）ナフタレン化合物：などのナフタレン誘導体；ＷＯ９７／２５０３４、ＷＯ９７／２５０３５、ＷＯ９７／２５０３７、およびＷＯ９７／２５０３８に記載された３，４−トランス−２，２−ジメチル−３−フェニル−４−［４−（２（２−（ピロリジン−１−イペトキシ（ｙｐｅｔｈｏｘｙ））フェニル］−７−メトキシクロマン（レボルメロキシフェン）および他の化合物；ならびに参照により本明細書に組み入れられる米国特許第３，８２２，２８７号に記載された１−（２−（（４−（−メトキシ−２，２，ジメチル−３−フェニル−クロマン−４−イル）−フェノキシ）−エチル）−ピロリジン（セントクロマン）および他の化合物：などのクロマンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５７】
本発明の他のＳＥＲＭとしては、それぞれ参照により本明細書に組み入れられる米国特許第６，３８７，９２０号、同第６，７４３，８１５号、同第６，７５０，２１３号、同第６，８６９，９６９号、同第６，９２７，２２４号、同第７，０４５，５４０号、同第７、１３８，４２６号、同第７，１５１，１９６号、および第７，１５７，６０４号に記載された化合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５８】
本発明で用いられるさらなる非限定的な抗エストロゲン剤としては、６ａ−クロロ−１６ａ−メチル−プレグナ−４−エン−３，２０−ジオン（クロメテロン）；６−クロロ−１７−ヒドロキシプレグナ−１，４，６−トリエン−３，２０−ジオン（デルマジノン）；１−［２−［４−［１−（４−メトキシフェニル）−２−ニトロ−２−フェニルエテニル］フェノキシ］エチル］−ピロリジン（ニトロミフェン／ＣＮ−５５，９４５−２７）；および１−［２−［ｐ−（３，４−ジヒドロ−６−メトキシ−２−フェニル−１−ナフチル）フェノキシ］エチル］ピロリジン（ナフォキシデン）が挙げられる。
【０１５９】
本発明で用いられるさらなる非限定的な抗エストロゲン剤としては、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３３：２６３５−２６４０（１９９０）、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３０：１３１−１３６（１９８７）、ＣＡ０２８８９７７０  ２０１５−０４−２４  ＷＯ２０１４／０７０５２３  ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０６６１４１  ＷＯ９３／１０７４１、ＷＯ９５／１７３８３、ＷＯ９３／２３３７４、ならびに両者とも参照により本明細書に組み入れられる米国特許第６，５０３，９３８号および第６，０６９，１５３号に開示されたものなどのインドールが挙げられる。
【０１６０】
本発明で用いられるさらなる非限定的な抗エストロゲン剤としては、欧州特許第０２９６７４９号に記載された２−［３−（１−シアノ−１−メチル−エチル）−５−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イルメチル）フェニル］−２−メチル−プロパンニトリル（アナストロゾール）および他の化合物；参照により本明細書に組み入れられる米国特許第４，８０８，６１６号に記載された６−メチレンアンドロスタ−１，４−ジエン−３，１７−ジオン（エキセメスタン）および他の化合物；参照により本明細書に組み入れられる米国特許第５，４７３，０７８号に記載された４−［（４−シアノフェニル）−（１，２，４−トリアゾール−１−イル）メチルテンゾニトリル（ｍｅｔｈｙｌＴｈｅｎｚｚｏｎｉｔｒｉｌｅ）（レトロゾール）および他の化合物；参照により本明細書に組み入れられる米国特許第５，０４７，４３１号に記載された１−［４’−ジメチルアミノエトキシ）フェニル］−１−（３’−ヒドロキシフェニル）−２−フェニルブタ−１−エン（ドロロキシフェン）および他の化合物；２ａ、３ａ−エピチオ−５ａ−アンドロスタン−１７１３−０１（エピチオスタノール）；２ａ，３ａ−エピチオ−５ａ−アンドロスタン−１７１３−イル−１−メトキシシクロペンチルオキシ（メピチオスタン）；両者とも参照により本明細書に組み入れられる米国特許第２，４６４，２０３号および同第２，４６５，５０５号に記載された４−［（２Ｚ，４Ｚ）−４−（４−ヒドロキシフェニフェキサ（ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｐｈｅｘａ）−２，４−ジエン−３−イル］フェノール（シクラジエン（ｃｙｃｌａｄｉｅｎｅ））および他の化合物；Ｕｎｌｉｓｔｅｄ  Ｄｒｕｇｓ，２８（１０）：１６９（Ｏ）（１９７６）に記載されたＣＩ−６８０；Ｕｎｌｉｓｔｅｄ  Ｄｒｕｇｓ，２６（７）：１０６（１）（１９７４）に記載されたＣＩ−６２８；１３−エチル−１７ａ−エチニル−１７１３−ヒドロキシゴナ−４，９，１−トリエン−３−オン（Ｒ２３２３）；Ｇｅｙｎｅｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．３（１）：２−２９（１９７２）に両者とも記載されたジフェノールヒドロクリセンおよびエリチロ−ＭＥＡ（ｅｒｙｔｈｙｒｏ−ＭＥＡ）；Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ，１０ｔｈ  ｅｄ．，＃２１４９に記載された１−［１−クロロ−２，２−ビス（４−メトキシフェニル）エテニル］−４−メトキシ−ベンゼン（クロロトリアニセン）；Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ，１０ｔｈ  ｅｄ．，＃３６６８に記載された１４４−（２−ジエチルアミノエトキシ）フェニル１−フェニル−２−（ｐ−アニシル）エタノール（エタモキシトリフェトール）；ならびに参照により本明細書に組み入れられる米国特許第２，９１４，５６２号に記載された２−ｐ−クロロフェニル−１４ｐ−（２−ジエチルアミノエトキシ）フェニル］−１−ｐ−トリルエタノール（トリパラノール）および他の化合物が挙げられる。本発明のさらに別の抗エストロゲン剤としては、Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１３８（９）：３９０１−３９１１（１９９７）およびＷＯ９５／１０５１３に記載された（２ｅ）−３−（４−（（１ｅ）−１，２−ジフェニルブタ−１−エニル）フェニル）アクリル酸（ＧＷ５６３８）、ＧＷ７６０４および他の化合物；１４４−（２−ジエチルアミノエトキシ）フェニル］−２−（４−メトキシフェニル）−１−フェニル−エタノール（ＭＥＲ−２５）、Ｎ，Ｎ−ジエチル−２４４−（５−メトキシ−２−フェニル−３Ｈ−インデン−１−イル）フェノキシルエタンアミン塩酸塩（Ｕ−１１，５５５Ａ）、１−［２−［４−（６−メトキシ−２−フェニル−３，４−ジヒドロナフタレン−１−イル）フェノキシ］エチルピロリジン塩酸塩（Ｕ−１１，１００Ａ）、ＩＣＩ−４６，６６９、２−［４−［（Ｚ）−１，２−ジフェニルブタ−１−エニル］フェノキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−エタンアミン；Ｔｅｒｅｎｉｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｙｎｅｃ．Ｉｎｖｅｓｔ．，３：９６−１０７（１９７２）に記載された２−  ＣＡ  ０２８８９７７０  ２０１５−０４−２４  ＷＯ２０１４／０７０５２３  ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０６６１４１  ヒドロキシプロパン−１，２，３−トリカルボン酸（ＩＣＩ−４６，４７４）および他の化合物；２−ヒドロキシ−６−ナフタレンプロピオン酸（アレノール酸）；［４−［（４−アセチルオキシフェニル）−シクロヘキシリデン−メチル］フェニリアセタート（ｐｈｅｎｙｌｉａｃｅｔａｔｅ）（シクロフェニル（ｃｙｃｌｏｆｅｎｙｌ）／ＩＣＩ−４８２１３））；［６−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）ベンゾチオフェン−３−イル］−［４−［２−（１−ピペリジペトキシ（ｐｉｐｅｒｉｄｙｐｅｔｈｏｘｙ）］フェニリメタノン（ｐｈｅｎｙｌｉｍｅｔｈａｎｏｎｅ）（ケオキシフェン）；４−［（Ｚ）−１−［４−（２−ジメチルアミノエトキシ）フェニル］−２−（４−プロパン−２−イルフェニル）ブタ−１−エニル］フェノール（ＤＰ−ＴＡＴ−５９／ミプロキシフェン）；（１ＲＳ，２ＲＳ）−４，４’−ジアセトキシ−５，５’−ジフルオロ−（１−エチル−２−メチレン）ジ−ｍ−フェニレンジアセタート（アセフルラノール）；６−ヒドロキシ−２−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−ベンゾ（ｂ）チエン−３−イル［２−（１−ピロリジニル）−エトキシフェニル］ケトン（ＬＹ−１１７０１８）；ならびに［６−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−フェニル）ベンゾ（ｂ）チエン−３−イル］−［４−（２−（１−ピペルジニル）−エトキシ）フェニル］メタノン（ＬＹ−１５６７５８）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明のさらに別の抗エストロゲン剤としては、各々が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第５，６８１，８３５号、同第５，８７７，２１９号、同第６，２０７，７１６号、同第６，３４０，７７４号、および同第６，５９９，９２１号に記載されたものなどの非ステロイド系エストロゲン受容体リガンド；参照により本明細書に組み入れられる米国特許第４，６５９，５１６号に記載されたものなどのステロイド誘導体；ＷＯ９８／０７７４０に記載されたものなどの７ａ−１１−アミノアルキル−エストラトリエン；ＷＯ９９／３３８５５に記載されたものなどの１１−ｆ３−ハロゲン−７ａ−置換エストラトリエン；参照により本明細書に組み入れられる米国特許出願第１０／３０５，４１８号に記載されたものなどの１７ａ−アルキル−１７３−オキシ−エ��トラトリエン；参照により本明細書に組み入れられる米国特許第７．１３２，４１７号に記載されたものなどの２−フェニル−１４４−（２−アミノエトキシ）−ベンジル−インドール；参照により本明細書に組み入れられる米国特許第６，８４４，３３６号に記載されたものなどの４−フルオロアルキル−２ｈ−ベンゾプリアン（ｂｅｎｚｏｐｒｙａｎｓ）；参照により本明細書に組み入れられるＷＯ９５／１０５１３および米国特許第４，１３３，８１４号に記載された（４−（２−（２−アザ−ビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−イル）−エトキシ）−フェニル）−（６−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イル）−メタノン）および他のベンゾチオフェン；参照により本明細書に組み入れられる米国特許第５，９９８，４０２号に記載されたものなどの２−フェニル−１−［４−（２−アミノエトキシ）−ベンジル］−インドール；参照により本明細書に組み入れられる米国特許第５，９８５，９１０号に記載された３−［４−（２−フェニル−インドール−１−イルメチル）フェニル］−アクリルアミドおよび他の化合物；両者とも参照により本明細書に組み入れられる米国特許第５，７８０，４９７号および同第５，８８０，１３７号に記載された２−フェニル−１−［４−（アミノ−１−イル−アルカ−１−イニル）−ベンジル］−１Ｈ−インドール−５−オールおよび他の化合物；各々が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第６，４５５，５１７号、同第６，５４８，４９１号、同第６，７４７，０１８号、および同第７，０４１，８３９号に記載されたものなどのステロイド；参照により本明細書に組み入れられる米国特許第４，０９４，９９４号に記載されたものなどのジ−（３’−ヒドロキシフェニル）−アルカン化合物  ＣＡ  ０２８８９７７０  ２０１５−０４−２４  ＷＯ２０１４／０７０５２３  ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０６６１４１；参照により本明細書に組み入れられる米国特許第４，７５１，２４０号に記載されたものなどのフェノール誘導体；Ｓａｅｅｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，３３：３２１０−３２１６（１９９０）およびＳｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３３：３２１６−３２２９（１９９０）に記載されたものなどの２，３−ジアリール−２Ｈ−１−ベンゾピラン類似体；ならびにＤｕｒａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３２：１７００−１７０７（１９８９）に記載されたものなどのベンゾフランおよびトリアリールフラン類似体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６１】
本発明で用いられる抗エストロゲン剤はまた、前述の抗エストロゲン剤のいずれかの医薬的に許容できる塩、エステル、またはプロドラッグであり得る。医薬的に許容できる塩は、標準的手法で調製される。親化合物が、塩基である場合、それは適切な溶媒中の過剰の有機または無機酸で処理される。親化合物が、酸である場合、それは適切な溶媒中の無機または有機塩基で処理される。
【０１６２】
本発明の抗エストロゲン剤は、有効量の医薬的に許容できる担体または希釈剤と併用で、同時に、または一緒に、それらのアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩の形態で投与され得る。
【０１６３】
本発明の医薬組成物中での使用のための医薬的に許容できる酸付加塩の例としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸および硫酸などの鉱酸、ならびに酒石酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびアリールスルホン酸などの有機酸に由来するものが挙げられる。
【０１６４】
ＥＲ陰性乳癌
本発明の抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体、成分キットおよび方法は、ＥＲ陰性乳癌の処置に有用である。
【０１６５】
ＥＲ陰性乳癌は、エストロゲン受容体（ＥＲ）の発現の欠如を特徴とする任意の乳癌であり得る。本明細書での使用では、乳癌の腫瘍細胞の１０％以下がエストロゲン受容体を免疫組織化学的測定により検出可能なレベルで発現する場合、上記乳癌は、ＥＲ陰性乳癌と見なされる。本発明の幾つかの実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、腫瘍細胞の１％未満がエストロゲン受容体を免疫組織化学的測定により検出可能なレベルで発現する乳癌である。免疫組織化学的測定は好ましくは、ＥＲを認識する抗体を用いて乳癌から得られた試料を染色し、その後、例えば顕微鏡測定により、上記試料の細胞中のＥＲ発現を検出することを含む、テストであり得る。
【０１６６】
本発明の一実施形態において、Ｈａｍｍｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０によって記載される通りＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙにより推奨されるように、ＥＲ陰性乳癌は、腫瘍核の１％未満がＥＲ発現について陽性である乳癌である。
【０１６７】
本発明によれば、ＥＲ発現は、任意の有用な手段により、好ましくは任意の有用な免疫組織化学的方法により測定され得る。好ましくはＥＲ発現は、Ｈａｍｍｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０により記載された通り測定され得る。
【０１６８】
本発明の一実施形態において、ＥＲ陰性乳癌はまた、プロゲステロン受容体陰性（ＰＲ陰性）乳癌である。したがって処置される乳癌は、詳細にはＥＲ陰性かつＰＲ陰性の乳癌であり得る。上記ＰＲ陰性乳癌は、乳癌の腫瘍細胞の１０％以下がプロゲステロン受容体（ＰＲ）を免疫組織化学的測定により検出可能なレベルで発現する乳癌であり得る。本発明の幾つかの実施形態において、上記ＰＲ陰性乳癌は、乳癌の腫瘍細胞の２％未満がＰＲを免疫組織化学的測定により検出可能なレベルで発現する乳癌である。本発明の幾つかの実施形態において、上記ＰＲ陰性乳癌は、乳癌の腫瘍細胞の１％未満がＰＲを免疫組織化学的測定により検出可能なレベルで発現する乳癌である。ＰＲ発現は、任意の有用な手段により、好ましくは任意の有用な免疫組織化学的方法により、測定され得る。好ましくはＰＲ発現は、Ｈａｍｍｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０に記載された通り測定され得る。
【０１６９】
ＥＲ陰性乳癌は、幾つかの実施形態において、ヒト上皮成長因子受容体−２（ＨＥＲ−２）を発現し得る。
【０１７０】
本発明の別の実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、トリプルネガティブ型乳癌であり、即ち上記癌は、ＥＲ陰性、ＰＲ陰性かつヒト上皮成長因子受容体（ＨＥＲ）−２陰性である。ＥＲ陰性およびＰＲ陰性という用語は、先に説明されている。ＨＥＲ−２陰性乳癌は、検出可能なＨＥＲ−２を発現しない乳癌であり得る。ＨＥＲ−２発現についてのテストは、任意の有用な方法により、例えば免疫組織化学的方法またはＦＩＳＨにより実施され得る。好ましくはＨＥＲ−２陰性乳癌は、Ｗｏｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３で推奨される通り測定された場合にＨＥＲ−２陰性である。
【０１７１】
本発明の一実施形態において、ＥＲ陰性乳癌は、ベーサルライク型乳癌である。一実施形態において、上記ベーサルライク型乳癌は、トリプルネガティブ型乳癌であり得る。
【０１７２】
ベーサルライク型乳癌はまたＥＲ陰性乳癌であってよく、それは例えばＣＫ５／６、ＣＫ１４およびＣＫ１７からなる群から選択される、１種または複数の高分子量／ベーサルサイトケラチンを発現する。
【０１７３】
ベーサルライク型乳癌はまたＥＲ陰性かつＨＥＲ−２陰性の乳癌であってよく、それはＣＫ５／＆および／または上皮成長因子受容体を発現する。
【０１７４】
ベーサルライク型乳癌はまた、ＣＫ５／６および／またはＥＧＦＲを発現するトリプルネガティブ型乳癌であり得る。
【０１７５】
さらに、ベーサル型乳癌は、典型的にはＦｏｘＡ１を発現しない。ベーサルライク型乳癌は、高いグレード、予後不良、およびより若い患者の年齢に関連する。
【０１７６】
詳細にはＥＲ陰性乳癌は、最初の診断の時点でＥＲ陰性乳癌であった乳癌であり得る。したがってＥＲ陰性乳癌は、処置の結果としてＥＲ発現を喪失した乳癌というよりむしろ、発病時からのＥＲ陰性を特徴とし得る。ＥＲ陰性乳癌は、原発腫瘍がＥＲ陰性の乳癌であることが、好ましいであろう。
【０１７７】
医薬配合剤
本発明の抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤が未加工の化合物として投与されることは可能であるが、医薬配合剤の形態でそれらを供与することが、好ましい。医薬配合剤は、従来の技術、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２００５，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓに記載された通り、調製され得る。
【０１７８】
本発明で用いられる化合物は、非経口投与用に配合され得、任意の適切な形態、例えばアンプル、プレフィルドシリンジ、小容量の輸液の中で単位投与剤形として、または反復投与用コンテナ中で、場合により添加された防腐剤と共に、供与され得る。詳細には、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、非経口投与用に配合されることが予測されるが、抗エストロゲン剤もまた、非経口投与用に配合され得る。
【０１７９】
非経口投与では、配合剤は、油性または水性のビヒクル中の懸濁剤、溶液、またはエマルジョン、例えば水性ポリエチレングリコール中の溶液などの形態をとり得る。あるいは、有効成分は粉末形態であってよく、適切なビヒクル、例えば滅菌パイロジェンフリー水との使用前に構成のために滅菌固体の無菌単離によりまたは溶液からの凍結乾燥により得られる。配合剤は、例えばアンプル、バイアル、プレフィルドシリンジ、輸液バッグなどの単位投与もしくは反復投与用の密封コンテナで供与され得るか、または使用の直前に、注射用に、滅菌液体賦形剤、例えば水の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で貯蔵され得る。即時注射溶液（Ｅｘｔｅｍｐｏｒａｎｅｏｕｓ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒、および錠剤から調製され得る。
【０１８０】
油性または非水性担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、および注射可能な有機エステルが挙げられ、それらは、防腐剤、湿潤剤、乳化もしくは懸濁剤、安定化剤および／または分散剤などの配合剤を含有し得る。
【０１８１】
注射用配合剤は、約０．５〜約２５％重量の、溶液中の有効成分、例えば抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体を典型的に含有するであろう。例えば、投与量は１〜１００ｍｇ  抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体／ｋｇ体重の範囲であり、１〜２０ｍｇ  抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体／ｋｇ体重の範囲でなど、例えば５〜１５ｍｇ  抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体／ｋｇ体重の範囲であり得る。
【０１８２】
本発明の化合物は、経口投与用に非常に様々な配合剤に配合され得る。これは、抗エストロゲン剤に特にあてはまり得る。固体形態の調製物としては、粉末、錠剤、ドロップ剤、カプセル、カシェ剤、ロゼンジ、および分散性顆粒を挙げることができる。経口投与に適した他の形態としては、エマルジョン、シロップ、エリキシル、水性溶液、水性懸濁液、練歯磨き剤、ゲル歯磨き剤、キューインガムを含む液体形態の調製物、または使用の直前に溶液、懸濁剤およびエマルジョンなどの液体形態調製物に変換されることが意図される固体形態調製物を挙げることができる。
【０１８３】
粉末では、担体は、微粉化された活性成分との混合物である微粉化固体である。錠剤では、活性成分は、必要となる結合能力を有する担体と適切な割合で混合され、所望の形状およびサイズで圧縮される。適切な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオ脂などである。
【０１８４】
本発明によるドロップ剤は、滅菌または非滅菌の水性または油性の溶液または懸濁液を含み得、場合により殺菌剤および／または殺真菌剤および／または任意の他の適切な防腐剤を含んで、かつ場合により界面活性剤を含んで、適切な水溶液中に有効成分を溶解することにより調製され得る。油性溶液の調製のための適切な溶媒としては、グリセロール、希釈アルコールおよびプロピレングリコールが挙げられる。
【０１８５】
エマルジョンは、水性プロピレングリコール溶液中の溶液として調製され得るか、またはレシチン、モノオレイン酸ソルビタン、もしくはアラビアゴムなどの乳化剤を含有し得る。水溶液は、水中に活性成分を溶解して、適切な着色剤、香味剤、安定化剤および増粘剤を添加することにより調製され得る。水性懸濁液は、天然または合成のゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび他の周知の懸濁剤などの粘性材料と共に、微粉化活性成分を水中に分散させることにより調製され得る。
【０１８６】
製造業者によって推奨される通り、有効性に必要な場合に用いられる抗エストロゲン剤の任意の投与量を、用いることができる。抗エストロゲン剤の適切な投与量は、当該技術分野で公知である。したがって、ルミナルライク型乳癌の処置に用いられる従来の投与量を、本発明によるベーサルライク型乳癌の処置に用いることができる。例えば抗エストロゲン剤は、経口投与される場合に平均体重のヒトで０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重／日（好ましくは０．０５〜１．０ｍｇ／ｋｇ）の間の投与量範囲で投与用に調製され得、２０〜４０ｍｇ／日が好ましく、または非経口投与される場合に平均体重のヒトで０．００３〜３．０ｍｇ／ｋｇ体重／日（好ましくは０．０１５〜０．３ｍｇ／ｍｌ）の間の投与量範囲で投与用に調製され得、１．５ｍｇ／日で、特に３．０ｍｇ／日で、均等に二分割された用量であることが好ましい。
【０１８７】
配列表
【表１】
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【０１８８】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１  ヒトの血小板由来成長因子Ｃ前駆体
ＭＳＬＦＧＬＬＬＬＴＳＡＬＡＧＱＲＱＧＴＱＡＥＳＮＬＳＳＫＦＱＦＳＳＮＫＥＱＮＧＶＱＤＰＱＨＥＲＩＩＴ
ＶＳＴＮＧＳＩＨＳＰＲＦＰＨＴＹＰＲＮＴＶＬＶＷＲＬＶＡＶＥＥＮＶＷＩＱＬＴＦＤＥＲＦＧＬＥＤＰＥＤＤＩＣＫＹＤＦＶＥＶＥＥＰＳＤＧＴＩＬＧＲＷＣＧＳＧＴＶＰＧＫＱＩＳＫＧＮＱＩＲＩＲＦＶＳＤＥＹＦＰＳＥＰＧＦＣＩＨＹＮＩＶＭＰＱＦＴＥＡＶＳＰＳＶＬＰＰＳＡＬＰＬＤＬＬＮＮＡＩＴＡＦＳＴＬＥＤＬＩＲＹＬＥＰＥＲＷＱＬ
ＤＬＥＤＬＹＲＰＴＷＱＬＬＧＫＡＦＶＦＧＲＫＳＲＶＶＤＬＮＬＬＴＥＥＶＲＬＹＳＣＴＰＲＮＦＳＶＳＩＲＥ
ＥＬＫＲＴＤＴＩＦＷＰＧＣＬＬＶＫＲＣＧＧＮＣＡＣＣＬＨＮＣＮＥＣＱＣＶＰＳＫＶＴＫＫＹＨＥＶＬＱＬＲＰＫＴＧＶＲＧＬＨＫＳＬＴＤＶＡＬＥＨＨＥＥＣＤＣＶＣＲＧＳＴＧＧ
【０１８９】
項目
本発明を、以下の項目によりさらに定義できる：
１．それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置のための抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤を含む成分キット。
２．それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置のためのＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤を含む成分キット。
３．上記抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および上記抗エストロゲン剤が、連続投与用に調製される、項目１に記載の成分キット。
４．上記処置が、
ａ．それを必要とする個体への抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体の投与のステップと；
ｂ．抗エストロゲン剤の次の投与のステップと、
を含む、ＥＲ陰性乳癌の処置における使用のための項目１および３のいずれか１つに記載の成分キット。
５．上記ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および上記抗エストロゲン剤が、連続投与用に調製される、項目２に記載の成分キット。
６．上記処置が、
ａ．それを必要とする個体へのＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤の投与のステップと；
ｂ．抗エストロゲン剤の次の投与のステップと、
を含む、ＥＲ陰性乳癌の処置における使用のための項目２および５のいずれか１つに記載の成分キット。
７．上記個体がＥＲ陰性乳癌に罹患しており、かつ上記個体の上記乳癌が手術により処置されており、かつ上記処置が再発のリスクを低減する、上記項目のいずれか１つに記載の成分キット。
８．それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置のための方法であって、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体および抗エストロゲン剤を上記個体に同時に、または任意の順序で連続して投与すること、それにより該ＥＲ陰性乳癌を処置することを含む、方法。
９．それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置のための方法であって、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤および抗エストロゲン剤を上記個体に同時に、または任意の順序で連続して投与すること、それにより該ＥＲ陰性乳癌を処置することを含む、方法。
１０．ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン処置に対し感受性にするための方法であって、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体投与すること、それにより上記ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン処置に対し感受性にすることを含む、方法。
１１．ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン処置に対し感受性にするための方法であって、ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体投与し、それにより上記ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン処置に対し感受性にすることを含む、方法。
１２．ＥＲ陰性乳癌をＥＲ陽性乳癌に転換させるための方法であって、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体投与すること、それにより上記ＥＲ陰性乳癌をＥＲ陽性乳癌に転換させることを含む、方法。
１３．ＥＲ陽性乳癌が、ルミナルライク型乳癌である、項目１２に記載の方法。
１４．それを必要とする個体におけるＥＲ陰性乳癌の処置の方法であって、
ａ．項目８〜１１のいずれか１つに記載の方法を実施すること、
ｂ．抗エストロゲン剤を上記個体に投与し、それにより上記ＥＲ陰性乳癌を処置すること、
を含む、方法。
１５．ＥＲ陰性乳癌に罹患した個体におけるＥＲ陰性乳癌の再発のリスクを低減する方法であって、ここで上記個体の上記乳癌が手術により処置されており、
ａ．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与することにより、ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン剤での処置に対し感受性にすること；
ｂ．抗エストロゲン剤を上記個体に投与すること、それにより上記ＥＲ陰性乳癌の再発のリスクを低減すること、
を含む、方法。
１６．ＥＲ陰性乳癌に罹患した個体におけるＥＲ陰性乳癌の再発のリスクを低減する方法であって、ここで上記個体の上記乳癌が手術により処置されており、
ａ．ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤をＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に投与することにより、ＥＲ陰性乳癌を抗エストロゲン剤での処置に対し感受性にすること；
ｂ．抗エストロゲン剤を上記個体に投与すること、それにより上記ＥＲ陰性乳癌の再発のリスクを低減すること、
を含む、方法。
１７．上記個体への抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体の初回投与が、上記抗エストロゲン剤の初回投与よりも前である、項目４、７および８、１４のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
１８．上記個体へのＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤の初回投与が、上記抗エストロゲン剤の初回投与よりも前である、項目６、７、９、１４および１６のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
１９．上記抗エストロゲン剤の最終投与が、上記抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体の最終投与よりも後である、項目４、７、８、１４、１５および１７のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
２０．上記抗エストロゲン剤の最終投与が、上記ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤の最終投与よりも後である、項目６、７、９、１４、１６および１８のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
２１．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、ＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に少なくとも２回投与される、項目４、７、８、１４、１５、１７および１９のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
２２．ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、ＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に少なくとも２回投与され、１回または複数の投与が、手術による処置よりも前であり、かつ１回または複数の追加投与が、手術による処置よりも後に施される、項目４、７、８、１４、１５、１７、１９および２１のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
２３．ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤が、ＥＲ陰性乳癌に置換した個体に少なくとも２回投与される、項目６、７、９、１４、１６、１８および２０のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
２４．ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤が、ＥＲ陰性乳癌に罹患した個体に少なくとも２回投与され、１回または複数の投与が、手術による処置よりも前であり、かつ１回または複数の追加投与が、手術による処置よりも後に施される、項目６、７、９、１４、１６、１８、２０および２３のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
２５．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、１〜５回の範囲で投与され、抗エストロゲン剤が、４〜６年の範囲でなど、５年間など、１〜１０年間の範囲で連続で投与される、項目４、７、８、１４、１５、１７、１９、２１および２２のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
２６．ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤が、１〜５回の範囲で投与され、抗エストロゲン剤が、４〜６年の範囲でなど、５年間など、１〜１０年間の範囲で連続で投与される、項目６、７、９、１４、１６、１８、２０、２３および２４のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
２７．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、ＰＤＧＦ−ＣＣを特異的に結合するモノクローナル抗体である、項目１、３、４、７、８、１０、１２〜１５、１７、１９、２１、２２および２５のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
２８．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、ＰＤＧＦ−ＣＣを特異的に結合するヒトモノクローナル抗体である、項目１、３、４、７、８、１０、１２〜１５、１７、１９、２１、２２、２５および２７のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
２９．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、ヒト化抗体である、項目１、３、４、７、８、１０、１２〜１５、１７、１９、２１、２２、２５、２７および２８のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
３０．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、中和ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体である、項目１、３、４、７、８、１０、１２〜１５、１７、１９、２１、２２、２５、２７〜２９のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
３１．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、ＰＤＧＦ−ＣＣに結合すると、ＰＤＧＦ−ＣＣのタンパク質切断を阻害できる、項目１、３、４、７、８、１０、１２〜１５、１７、１９、２１、２２、２５、２７〜３０のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
３２．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、ヒトＰＤＧＦ−ＣＣを結合できる、項目１、３、４、７、８、１０、１２〜１５、１７、１９、２１、２２、２５、２７〜３１のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
３３．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、ＰＤＧＦ−ＣＣ活性を阻害できる、項目１、３、４、７、８、１０、１２〜１５、１７、１９、２１、２２、２５、２７〜３２のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
３４．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、ＰＤＧＦＲαホモ二量体へのおよび／またはＰＤＧＦＲα／βヘテロ二量体へのＰＤＧＦ−ＣＣの結合を阻害できる、項目１、３、４、７、８、１０、１２〜１５、１７、１９、２１、２２、２５、２７〜３３のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
３５．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、ＰＤＧＦＲαホモ二量体のおよび／またはＰＤＧＦＲα／βヘテロ二量体の活性を阻害できる、項目１、３、４、７、８、１０、１２〜１５、１７、１９、２１、２２、２５、２７〜３４のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
３６．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、ＰＤＧＦ−ＣＣのタンパク質分解処理を阻害できる、項目１、３、４、７、８、１０、１２〜１５、１７、１９、２１、２２、２５、２７〜３５のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
３７．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、
ａ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２３０〜２５０；
ｂ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２２８〜２３８；
ｃ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸３０８〜３２２；
ｄ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２４２〜２５４；
ｅ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２８８〜３０８；
ｆ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸３２５〜３４５；
ｇ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２５６〜２７４；
ｈ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２５６〜２６４；および／または
ｉ．  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２５６〜２６０、
に位置する、それを含む、またはそれからなる、エピトープを結合できる、項目１、３、４、７、８、１０、１２〜１５、１７、１９、２１、２２、２５、２７〜３６のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
３８．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２３０〜２５０に位置するエピトープを結合できる、項目１、３、４、７、８、１０、１２〜１５、１７、１９、２１、２２、２５、２７〜３７のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
３９．ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤が、チロシンキナーゼ阻害剤である、項目２、５〜７、９、１１、１４、１６、１８、２０、２３、２４、２６のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
４０．ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤が、ＰＤＧＦ−Ｒのチロシンキナーゼ活性を遮断できる、項目３９に記載の成分キットまたは方法。
４１．ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤が、イマチニブである、項目３９および４０のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
４２．ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤が、ＰＤＧＦ−Ｒαおよび／またはＰＤＧＦ−Ｒβを結合できる抗体である、項目２、５〜７、９、１１、１４、１６、１８、２０、２３、２４、２６のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
４３．ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤が、ＰＤＧＦ−Ｒαおよび／またはＰＤＧＦ−Ｒβを阻害できる抗体である、項目２、５〜７、９、１１、１４、１６、１８、２０、２３、２４、２６、４２のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
４４．ＰＤＧＦ−Ｒの阻害剤が、中和ＰＤＧＦ−Ｒαおよび／またはＰＤＧＦ−Ｒβ抗体である、項目２、５〜７、９、１１、１４、１６、１８、２０、２３、２４、２６、４２および４３のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
４５．抗エストロゲン剤が、エストロゲンアンタゴニストである、上記項目のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
４６．エストロゲンアンタゴニストが、タモキシフェン、ラロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、アフィモキシフェン、ＬＹ１１７０１８、フルベストラントおよびトレミフェンからなる群から選択される、項目４５に記載の成分キットまたは方法。
４７．抗エストロゲン剤が、エストロゲンの生成を阻害する化合物である、項目１〜４６のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
４８．抗エストロゲン剤が、アロマターゼ阻害剤である、項目１〜４４のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
４９．抗エストロゲン剤が、エキセメスタン、ホルメスタン、アミノグルテチミド、ボロゾール、ファドロゾール、アナストロゾールおよびレトロゾールからなる群から選択される、項目４８に記載の成分キットまたは方法。
５０．個体が、ヒトである、上記項目のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
５１．個体が、ヒトであり、原発乳癌腫瘍が、手術により摘出されている、上記項目のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
５２．ＥＲ陰性乳癌が、トリプルネガティブ型乳癌である、上記項目のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
５３．ＥＲ陰性乳癌が、ベーサルライク型乳癌である、上記項目のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
５４．ＥＲ陰性乳癌が、原発腫瘍がＥＲ陰性であった乳癌である、上記項目のいずれか１つに記載の成分キットまたは方法。
【０１９０】
実施例
本発明を以下の実施例によりさらに例示するが、実施例を本発明の限定と解釈するべきでない。
【０１９１】
実施例１．抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体は腫瘍をエストロゲン療法に対し感受性にする
患者コホートおよび乳腺腫瘍サブタイプの定義
１９６５年〜２００４年（中央値１９９９年７月）にＩｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，ＵＳＺで診断された原発浸潤性乳癌の患者８９０名の組織を分析した。すべての患者はＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄで認可されたプロトコルの下で志願者として登録しおよび試料のドナーは書面によるインフォームドコンセントを提出した。スイスのＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  ｏｆ  ＺｕｒｉｃｈのＴｈｅ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ＳＰＵＫ  ｓｕｒｇｉｃａｌ−Ａｎｅｓｔｈｅｔｉｃ−Ｐａｔｈｏｌｏｇｙは、参照番号ＳｔＶ  １２−２００５の本試験を認可した。これらの患者全員については、Ｃａｎｔｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｇｉｓｔｏｒｙからのフォローアップデータを入手可能であり、フォローアップ情報のない患者は、検討されなかった（Ｔｈｅｕｒｉｌｌａｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，２００７）。加えて、６９の正常組織および１５２のインサイチュ病巣（ＤＣＩＳ，ＬＮ）を分析した。癌分子サブタイプを、ＩＨＣにより検出されたＥＲ、ＨＥＲ２およびＣＫ５／６から定義した。ルミナル型：ＨＥＲ２陰性であったＥＲ陽性例；ＨＥＲ２型：ＨＥＲ２陽性例；ベーサルライク型：ＣＫ５／６陽性、ＥＲ陰性かつＨＥＲ−２陰性。全てのマーカーが陰性の例は、ＮＩＬ型と称した。
【０１９２】
組織マイクロアレイの構築
代表的な種類の正常なおよび悪性のヒト組織、ならびに腫瘍細胞株のホルマリン固定パラフィン包埋材料を、記載された通りに（Ｋｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００８）まとめて１つのブロック上に組立てた。
【０１９３】
ヒト腫瘍組織アレイの免疫組織化学的測定
様々な腫瘍タイプにおけるＰＤＧＦ−ＣＣ発現を評定するために、本発明者らは、製造業者の使用説明書にしたがって市販の腫瘍組織アレイ（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ）に、ＰＤＧＦ−ＣＣに対するウサギポリクローナル抗体６１５を用いた。乳腺腫瘍コホートについて、およびポリクローナル抗体６１５から得られた結果を確認するために、ｍａｂ抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体Ａ３Ｂ６（２μｇ／ｍｌ）を、自動化Ｖｅｎｔａｎａプラットフォームで用いた（前処置ではプロトコルＣＣ１、ＵＶｉｅｗ  ＨＲＰ検出システム）。Ａ３Ｂ６抗体のエピトープは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２５６〜２７４の配列内のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２５６〜２６０である。特異的免疫反応性は、過剰の活性ＰＤＧＦ−ＣＣにより完全に遮断された。基底細胞マーカーのサイトケラチンＣＫ５／６（クローンカクテルＤ５／１６Ｂ４、１：２５、Ｄａｋｏ、デンマーク所在）、ＨＥＲ２（クローン１０Ａ７、１：５０、Ｎｏｖｏｃａｓｔｒａ、英国所在）、ＥＧＦＲ（クローン３Ｃ６、希釈済み、Ｖｅｎｔａｎａ、米国ツーソン所在）およびＫｉ−６７（クローンＭｉｂ−１、１：２０、Ｄａｋｏ、デンマーク所在）を、並行して処理した。
【０１９４】
マウス組織の調製、組織学的検査および免疫染色
処置の完了時に、マウスを２．５％アベルチン（１２．５ｍｇ／ｋｇ体重；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で麻酔にかけ、血液３００μＬを心穿刺により採取し即座にＲＮＡｌａｔｅｒ溶液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と混合し、−２０℃で貯蔵した。マウスをＰＢＳで、その後、４％パラホルムアルデヒドで心臓灌流した（ｈｅａｒｔ−ｐｅｒｆｕｓｅｄ）（移植されたＦＶＢ／Ｎマウスのみ）。
【０１９５】
パラフィン固定では、臓器を４％パラホルムアルデヒドで２時間、後固定した後、包埋に進めた。パラフィン包埋切片を脱パラフィンし、再水和した後、圧力鍋で（ＥＲα）または９５℃の水浴で２０分間、高ｐＨ緩衝液（ｐＨ６；ＤＡＫＯ）中で抗原回復した（ＰＲ、ＳＴＣ１、ＩＧＦＢＰ３およびＨＧＦ）。ペルオキシダーゼ活性を、メタノール中の３％Ｈ２Ｏ２により室温で１０分間クエンチした後、ＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡで洗浄した。ＥＲα染色は、Ｍ．Ｏ．Ｍ．ブロッキング（Ｍｏｕｓｅ  ｏｎ  Ｍｏｕｓｅベーシックキット、Ｖｅｃｔｏｒｌａｂｓ）、ＣＡＳ−Ｂｌｏｃｋ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）およびＭ．Ｏ．Ｍ．希釈液での次のステップを必要とした。エストロゲン受容体ＥＲα（１：２００、クローン１Ｄ５；ＤＡＫＯ）に対する一次抗体を、Ｍ．Ｏ．Ｍ．希釈液中でインキュベートした。ＣＡＳ−Ｂｌｏｃｋを、ＳＴＣ１（１：２００；ＳＣ−３０１８３、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）、ＩＧＦＢＰ３（１：２００；ＳＣ−９０２８、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）およびＨＧＦ（１：２００；ａｂ８３７６０、Ａｂｃａｍ）に対する一次抗体のブロッキングおよびインキュベーションに用いた。一次インキュベーションを、加湿チャンバーにおいて４℃で一晩実施した。洗浄後、適当な二次ビオチン化抗体およびＡＢＣペルオキシダーゼ系（ＡＢＣ  Ｅｌｉｔｅスタンダードキット、Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、比色測定の基質としてのＤＡＢ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）と共に用いた。
【０１９６】
凍結保存のために、原発腫瘍、肺、肝臓および脳を３０％スクロース中、４℃で一晩保持し、その後、最適切削温度（ＯＣＴ）培地（ＨｉｓｔｏＬａｂ）中に包埋した。凍結切片を氷冷アセトンで固定した後、Ｓｅｒｕｍ  Ｆｒｅｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂｌｏｃｋ（ＤＡＫＯ）を用いて室温で９０分間より長くブロッキングした。ＰＤＧＦＲα（ＰＥコンジュゲート、１：２００；１２−１４０１、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）およびＰＤＧＦＲβ（１：２００；３１６９Ｓ、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）に対する一次抗体を、加湿チャンバーにおいて４℃で一晩インキュベートした。適当なＡｌｅｘａ４８８−フルオロクロムコンジュゲート二次抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、切片を４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）含有封入剤（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて最終的に封入した。
【０１９７】
ＲＮＡ単離および調製のために、原発腫瘍、肝臓、肺および脳を液体Ｎ２で瞬間凍結し、−８０℃で貯蔵した。
【０１９８】
マウス
動物実験は全て、Ｅｔｈｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ａｎｉｍａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ（Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ  Ｎｏｒｒａ  ｄｊｕｒｆｏｒｓｏｋｓｅｔｉｓｋａ  ｎａｍｎｄ，ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎ９６／１１、およびＬｕｎｄ，ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｍ１４２／１３）によって認可された。ＦＶＢ／Ｎ−Ｔｇ（ＭＭＴＶ−ＰｙＶＴ）６３４Ｍｕｌ／Ｊトランスジェニックマウスは、過去に記載されており（Ｇｕｙ  ｅｔ  ａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １９９２）、Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴトランスジーンの存在、ならびにヘテロ接合性およびホモ接合性ノックアウトＰＤＧＦ−Ｃ子孫の作製を、遺伝子型判定により検証した。ＤＮＡを、一般的な組織溶解、核酸抽出および精製プロトコルに従い、耳または尾のいずれかの生検から調製した。ＰＣＲ産物を１．５％アガロースゲル上で泳動させた。ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴプライマー対（５’→３’）：ＧＧＡＡＧＣＡＡＧＴＡＣＴＴＣＡＣＡＡＧＧＧ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２］およびＧＧＡＡＡＧＴＣＡＣＴＡＧＧＡＧＣＡＧＧＧ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３］。ＰＤＧＦ−Ｃ野生型の対：ＡＧＣＴＧＡＣＡＴＴＴＧＡＴＧＡＧＡＧＡＴ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４］およびＡＧＴＡＧＧＴＧＡＡＡＴＡＡＧＡＧＧＴＧＡＡＣＡ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５］。ＰＤＧＦ−Ｃ変異体の対：ＣＴＣＡＴＧＴＴＣＴＣＧＴＧＡＣＴＣＴＧＡ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６］およびＴＡＧＣＴＡＧＴＣＧＡＴＡＣＣＧＴＣＧＡ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７］。
【０１９９】
１０の異なる乳腺の腫瘍サイズを、１２週齢でキャリパーを用いて測定した。腫瘍体積を、長さ×幅２×π／６として計算した。異なる週齢のマウスをアベルチン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイス所在）で麻酔にかけ、その後、ハンクスバランス塩溶液（ＨＢＳＳ）で、次に４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）での心臓灌流により安楽死させた。左頸部および胸部乳腺を切除し、４％ＰＦＡ中で一晩固定した後、パラフィン中に包埋した。凍結切片作製では、腫瘍組織を３０％スクロースに供した後、ＯＣＴ中に包埋した。
【０２００】
乳腺脂肪体中への腫瘍片移植
３週齢ＦＶＢ／Ｎ（ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスおよびＰＤＧＦ−Ｃマウスの両方の一般的なバックグランド系統）雌マウスを麻酔にかけ手術の間イソフルラン（Ｉｓｏｌｆｌｕｏｒａｎｅ）下で保持した。右腹部乳腺の乳首の下４ｍｍを切開しポケットを作製し、２×２ｍｍの腫瘍片（氷上に保持された、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴまたはＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；ＰＤＧＦ−Ｃ腫瘍由来のいずれか）を挿入した。縫合を、６−Ｏ  Ｅｔｈｉｃｏｎポリアミドフィラメント（Ｅｔｈｉｃｏｎ）で実施した。痛み止めおよび抗炎症性Ｒｉｍａｄｙｌ（５ｍｇ／ｋｇ体重；Ｏｒｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈ）を、手術の終了時および後の２日間、腹腔内注射した。治療試験のために、タモキシフェン（２ｍｇ／ｍＬ）をコーン油（ビヒクル）で希釈して、強制経口投与により連日投与した。
【０２０１】
マウス乳腺細胞株ＭＭＴＶ．．．ＭＭＴＶ／ＰＤＧＦ−Ｃ−／−．．．（本発明者らの実験室で樹立）を、ＦＶＢ／Ｎマウスの鼠径部第四乳腺に同所的に注射した。さらに、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴおよびＭＭＴＶ−ＰＤＧＦ−ＣＣ−／−腫瘍の小さな腫瘍片（２ｍｍ３）を麻酔下で直接、同所移植した。マウスを、手術の直後および後の２日間、鎮痛のためにＲｉｍａｄｙｌに供した。腫瘍を週２回測定し、マウスを先に記載された通り安楽死させた。
【０２０２】
異種移植片の定着
２×１０６個のヒトＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、免疫欠損マウスに皮下接種した。腫瘍の成長をモニタリングし、生存する鎮痛された動物においてキャリパーで週１回、測定した。抗ＰＤＧＦ−ＣＣ（Ａ３Ｂ６）抗体またはＩｇＧ２ａ対照を、腫瘍定着日から開始して週２回、腹腔内注射により送達した（３００ｍｇ／ｋｇ／週）。腫瘍が触知できたなら（最長径＞３ｍｍ）、マウスを無作為化し連日の強制経口投与によりタモキシフェン（３ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（トウモロコシ油）で処置した。
【０２０３】
統計解析
統計解析は全て、ＳＰＳＳ  Ｖ１７（ＳＰＳＳ、米国シカゴ所在）を用いて計算した。スピアマン順位相関を利用して、ＰＤＧＦ−ＣＣ発現と臨床病理学的パラメータとの関連を決定した。カプラン・マイヤー解析（ログランク検定を含む）およびコックス回帰モデルを、単変量または多変量解析に利用した。マウス実験の統計解析は、両側独立スチューデントｔ検定を利用して評価し、Ｐ≦０．０５を有意と見なした。
【０２０４】
細胞培養
ネズミＭＭＴＶ−ＰｙＭＴまたはＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；ＰＤＧＦ−Ｃ−／−細胞およびヒトＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）およびグルタミン酸塩を補充したＤＭＥＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中の培養で保持した。
【０２０５】
インビトロ刺激
３×１０６個のＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；ＰＤＧＦ−Ｃ−／−細胞を、培地に播種した。２４時間後に、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を補充したＤＭＥＭ  Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で、細胞を２４時間飢餓させた。
細胞を、飢餓培地中でｒｍＳＴＣ１（４００ｎｇ／ｍＬ；ＢｉｏＶｅｎｄｏｒ）、ｒｍＨＧＦ（３０ｎｇ／ｍＬ）、ｒｈＩＧＦＢＰ３（２５０ｎｇ／ｍＬ；Ｒ＆Ｄ）またはこれらの因子の組み合わせにより４８時間、刺激した。細胞株ＣＡＦ２（Ｋｏｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ，ＰＮＡＳ，２０１０）を用いて、ＣＡＦコンディションメディウムを作製した。単層のＣＡＦ２細胞を、飢餓培地中で４８時間インキュベートした。このコンディションメディウムを遠心沈殿して（１５００×ｇ）、細胞を除去し、下流の実験に用いた。
【０２０６】
定量逆転写ＰＣＲ
インビトロで生育した細胞を、氷冷ＰＢＳで２回、洗浄した。ＲＮＡを、ＲＮＡｅａｓｙ  ＭｉｎｉＫｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて単離した。ｃＤＮＡを、ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（Ｂｉｏ  Ｒａｄ）を用いて調製した。ＫＡＰＡ  ＳＹＢＲ  ＦＡＳＴ  ｑＰＣＲ  Ｋｉｔ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（ＫＡＰＡ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を、定量リアルタイムＰＣＲに用いた。ｍＲＮＡ発現を、ハウスキーピング遺伝子Ｌ１９に対し正規化した。ＦＯＸＡ１では、ＥＧＦＲおよびＥＳＲ１  ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  Ｐｒｉｍｅｒアッセイ（Ｑｉａｇｅｎ）プライマーを用いた。Ｌ１９プライマー対（５’→３’）：ＧＧＴＧＡＣＣＴＧＧＡＴＧＡＧＡＡＧＧＡおよびＴＴＣＡＧＣＴＴＧＴＧＧＡＴＧＴＧＣＴＣ。ＧＡＴＡ３プライマー対（５’→３’）：ＣＡＡＴＧＣＣＴＧＣＧＧＡＣＴＣＴＡＣＣおよびＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＴＣＧＡＣＡＧＴＴＣＧ。
【０２０７】
ウェスタンブロット
インビトロで生育した細胞を氷冷ＰＢＳで２回洗浄し、５０μｌ溶解緩衝液（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ）で、氷上で３０分間溶解した。溶解物を１２０００×ｇで遠心沈殿し、ペレットを廃棄した。タンパク質濃度を、吸収分光法により決定した。タンパク質懸濁液を、５×ロード緩衝液と混合し、９６℃で２分間変性させ、１０％アクリルアミドゲル上でＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離した。タンパク質をエタノール活性化ＰＤＣＶ膜に移した。膜をＰＢＳＴ（ＰＢＳ中の０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０）中の５％粉乳で１時間ブロッキングし、ブロッキング緩衝液中の抗エストロゲン受容体アルファ抗体（ＥＲα  １：２００；ＳＣ−５４２、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）と４℃で一晩インキュベートした。洗浄後に、抗ウサギＨＳＰをブロッキング緩衝液中１：５０００で適用し、室温で２時間インキュベートした。膜を洗浄して、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌＲ  Ｗｅｓｔ  Ｐｉｃｏ  Ｃｈｅｍｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で展開した。発光シグナルを、ＣＣＤカメラ（ＦｌｕｏｒＣｈｅｍ  Ｅ、Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で測定した。
【０２０８】
インビトロでの４−ヒドロキシタモキシフェン処置
１５０００個の細胞（ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴまたはＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；ＰＤＧＦ−Ｃ−／−のいずれか）を、９６ウェルプレートに播種した。細胞を生育培地中で２４時間インキュベートし、その後、２４時間飢餓させ、ＣＡＦコンディションメディウムまたは組換え因子のいずれかで、先に記載された通り刺激した。
【０２０９】
細胞を、播種後４および６日目に各刺激培地中で、上昇濃度の４−ヒドロキシタモキシフェン（０〜５μＭ；Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）により処置した。細胞増殖試薬ＷＳＴ−１（Ｒｏｃｈｅ）を、７日目に生存性アッセイに用いた。
【０２１０】
腫瘍グレードの評定
ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；ＰＤＧＦ−Ｃ＋／−およびＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；ＰＤＧＦ−Ｃ−／−マウス（ｎ＝５匹／遺伝子型）からの腫瘍組織を、各ステージが占める変形した乳腺の面積を定量することにより、異なる進行度に分類した。進行は、正常脂肪組織から、前悪性の過形成および腺腫（若干の正常な管状および腺房状乳腺形態を保持）を特徴とする「前癌ステージ」へと、間質浸潤を伴うより上皮細胞が高密度の「早期癌腫」へと、そして最後に浸潤性で非常に高密度であり分裂指数の高い「後期ステージの癌腫」へと移行する。腫瘍を、乳腺脂肪組織、過形成組織、腺腫、早期癌腫および後期癌腫の割合について評価した。ＰＤＧＦ−Ｃ特異性壊死を病理医が記載し試料において盲検的にスコア付けした。
【０２１１】
ＥＲαの評定
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト異種移植片腫瘍組織を免疫染色し、核ＥＲα陽性を治療試験の終了時に評価した。該当する領域を、周囲の脂肪組織を含まずに、腫瘍塊に制限した。単一細胞および病巣の両方の定量（ｎ＞３細胞／病巣）を実施した。
【０２１２】
転移の定量
ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴの左肺葉を、組織固定の際にパラフィン中に包埋した。転移量を、全肺／肝葉の連続切片により評定した。２５番目ごとの切片へのヘマトキシリンおよびエオジン染色に続いて、転移巣（直径が細胞８個を超える）の数を、マウス１匹あたり１５より多い切片で、および１群あたり５匹より多いマウスで、計測した。
【０２１３】
結果
ＰＤＧＦ−ＣＣは、乳癌の生存不良に関する独立した予後因子である。ヒト乳房のＰＤＧＦ−ＣＣの発現パターンを検討するために、本発明者らは、８９０の腫瘍標本および正常乳房組織を含む組織マイクロアレイの免疫染色を実施した。正常乳房組織におけるＰＤＧＦ−ＣＣの発現は、筋上皮／基底細胞および毛細血管の内皮細胞に限定されたが、ほとんどのルミナル細胞が、ＰＤＧＦ−ＣＣ発現について陰性であることが見出された（図１ａ〜ｂ）。乳腺腫瘍において、ＰＤＧＦ−ＣＣは、悪性腫瘍細胞、腫瘍内毛細血管および間質線維芽細胞によって発現された（図１ｂ〜ｅ）。特にＰＤＧＦ−ＣＣの免疫反応性は、悪性腫瘍の上皮に直接隣接する間質において最も顕著であった（図１ｆ）。次に、ＰＤＧＦ−ＣＣの染色強度を、上皮区画と間質区画で独立してグレード付けし、臨床病理学的パラメータに相関させた（図１ｇ）。ＰＤＧＦ−ＣＣの間質免疫反応性は、患者の転帰に相関しなかった。明らかに対照的に、中〜高度のＰＤＧＦ−ＣＣ発現（２＋および３＋のスコア）は、単変量コックス回帰およびカプラン・マイヤー解析において、生存不良についての高度に有意な予後因子であることが見出された（ＲＲ１．５２、９５％ＣＩ  １．１６〜１．９９、ｐ＝０．００３；図１ｈ）。重要なこととして、とりわけ診断時の年齢、ステージ、グレードおよびリンパ節状態などの確立された臨床危険因子を適合させた多変量解析は、ＰＤＧＦ−ＣＣの上皮発現が生存不良の独立した予後因子として働くことを実証した（ＲＲ１．４８、９５％ＣＩ  １．０４〜２．１３、ｐ＝０．０３）。興味深いこととして、ＰＤＧＦファミリーの２種の受容体、即ちＰＤＧＦＲαおよびＰＤＧＦβは両者とも、間質線維芽細胞により排他的に発現されており、悪性腫瘍細胞が腫瘍微細環境の間葉細胞によるパラクリン伝達に関与することを示す（図１ｉ）。
【０２１４】
ＰＤＧＦ−ＣＣは、実験的乳癌の成長にとって機能的に重要である。次に、乳腺腫瘍生成の状況におけるＰＤＧＦ−ＣＣ発現の機能的態様を検討するために、本発明者らは、Ｐｄｇｆｃ（Ｐｄｇｆｃｌａｃｚ／ｌａｃｚ）が欠損したマウスと異種交配された、広く研究されていて臨床的に関連するＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスを基にして、乳癌の、遺伝子操作されたマウスモデルを作製した。ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスの腫瘍におけるＰＤＧＦ−ＣＣ、ＰＤＧＦＲαおよびＰＤＧＦＲβ発現の視覚化は、ヒト乳癌における発現パターンの忠実な再現を示し、かつ悪性腫瘍細胞と間質線維芽細胞の間のパラクリン回路の存在を確定した（図２ａ）。際立ったこととして、Ｐｄｇｆｃの遺伝子欠損は、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスの乳腺腫瘍の成長に大きく影響を与えた（図２ｂ）。対照マウスは平均サイズ２２０±ｘｘｍｍ３の腫瘍を示したが、Ｐｄｇｆｃをコードする遺伝子の単一コピーまたは両方のコピーの欠損は、平均腫瘍サイズをそれぞれ９８±ｘｘｍｍ３および９５±ｘｘｍｍ３に減少させた（図２ｂ）。Ｐｄｇｆｃの遺伝子欠損は、全腫瘍量を減少させたことに加えて、有意に長い腫瘍潜伏期および長期のＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウス生存に関連した（図２ｃ〜ｄ）。さらに、ＰＤＧＦＣをコードする遺伝子を欠損する、週齢が一致するマウスの腫瘍は、対照マウスの腫瘍と比較してより低いステージであり、実質的な壊死エリアを組み込んでいた（図２ｅ〜ｆ）。したがって１４週齢腫瘍担持マウスは、ＰＤＧＦ−ＣＣによるシグナル伝達の非存在下で２６．３％少ない肺転移を示した（図２ｇ）。しかし、１２週齢野生型マウスのコホートがＰｄｇｆｃを欠損する２週齢マウスと類似の転移量を示したため、上述のことは、疾患発病の遅延による可能性が最も高い（図２ｇ）。
【０２１５】
Ｐｄｇｆｃ欠損マウスにおける腫瘍発生の遅延が発達障害によるものでなかったことを確認するために、本発明者らは、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；Ｐｄｇｆｃ＋／＋およびＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；Ｐｄｇｆｃｌａｃｚ／ｌａｃｚマウスからの腫瘍断片を、若齢野生型マウスの乳腺脂肪体に同所移植した。トランスジェニック設定での本発明者らの知見と一致して、移植されたＰｄｇｆｃ欠損腫瘍は、Ｐｄｇｆｃ能力のある腫瘍と比較して劇的な成長阻害を示した（図２ｈ）。さらに、野生型ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスから単離された細胞株は、野生型またはＰｄｇｆｃ欠損マウスの乳腺脂肪体への同所移植後に腫瘍の指数関数的成長を即座に起こしたが、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；ＰｄｇｆｃｌａｃＺ／ｌａｃＺマウスの腫瘍から独立して単離された２種の細胞株は、触知できる腫瘍として定着できなかった（図２ｉ、データは示さない）。
【０２１６】
Ｐｄｇｆｃの欠損は腫瘍微細環境において鈍化した線維化反応および血管新生反応をもたらす
組織分析は、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；Ｐｄｇｆｃ＋／＋およびＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；Ｐｄｇｆｃｌａｃｚ／ｌａｃｚマウスからの腫瘍の構造における著しい差異を明らかにした。腫瘍切片のマッソントリクローム染色は、ＰＤＧＦ−ＣＣが乳腺腫瘍微細環境において間質線維芽細胞を動員するおよび／または活性化する働きがあるという考え方と一致して、Ｐｄｇｆｃ欠損腫瘍のマトリックス中の大きく減少した腫瘍内コラーゲン沈着を示した（図３ａ）。加えて、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；Ｐｄｇｆｃｌａｃｚ／ｌａｃｚマウスは、重度に出血し（図３ｂ）、ＨＩＦ−１αの免疫染色により示される通り、より著しい低酸素症を示した（図３ｃ）。それに応じて、定量ＰＣＲ分析は、ＰＤＧＦ−ＣＣの非存在下でのＶＥＧＦ−Ａの６５％低い発現を明らかにした（図３ｄ）。単剤療法としてのＰＤＧＦ−ＣＣの薬理学的ターゲットが乳腺腫瘍の成長または血管新生に影響を及ぼしたか否かを検討するために、本発明者らは、同所移植されたＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍（ベーサルライクサブタイプ）を担持するＳＣＩＤマウスを、ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体、Ａ３Ｂ６または対照抗体で週２回処置した。ＰＤＧＦ−ＣＣシグナル伝達の薬理学的遮断は、処置の４週間後の腫瘍成長および血管新生を、統計学的に有意であるがほんのわずかに低減した（図３ｅ〜ｆ）。まとめると、本発明者らは、Ｐｄｇｆｃの欠損が腫瘍微細環境において鈍化した線維化反応および血管新生反応をもたらすことを実証した。
【０２１７】
乳腺腫瘍におけるＰＤＧＦ−ＣＣの発現はベーサルライク型分子サブタイプと関連する
Ｐｄｇｆｃ欠損の分子的意義を解明するために、本発明者らは、乳腺腫瘍の発生および進行に重要な遺伝子の発現を分析するように設計された定量ＰＣＲアレイを利用して、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；Ｐｄｇｆｃ＋／＋およびＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；Ｐｄｇｆｃｌａｃｚ／ｌａｃｚマウスに由来する腫瘍で転写分析を実施した。分析は、最も差示的に調節された遺伝子がＦｏｘａ１であり、それが野生型マウスに比較してＰｄｇｆｃ欠損マウスの全腫瘍溶解物において平均８．９倍高く発現されることを明らかにした（図４ａ）。Ｆｏｘａ１の発現はまた、ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；Ｐｄｇｆｃｌａｃｚ／ｌａｃｚマウスから単離された腫瘍細胞株において劇的に上昇することが見出された（図４ｂ）。ヒト乳癌は、ノーマルライク型、ルミナルＡ型、ルミナルＢ型、ＨＥＲ２＋型などのＥＲ陽性乳癌およびＥＲ陰性乳癌、例えばベーサルライク型腫瘍を含む、異なる分子サブタイプに分類され得る。Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｔｌａｓプロジェクト内で収集された乳房腫瘍の転写プロファイルの分析は、Ｆｏｘａ１の発現がノンベーサルライク型分子サブタイプと高度に相関することを明らかにし（図４ｃ）、過去の研究を確認した（参照）。実際に、５０種の乳腺腫瘍細胞株のパネルからの転写データの発掘は、ルミナルサブタイプの腫瘍の特異的性質としてのＦｏｘａｌの発現を明らかにした（図４ｄ）。ヒト乳腺腫瘍標本のコホートの免疫染色は、代わりにホルモン受容体（エストロゲン受容体αおよびプロゲステロン受容体（ＰＲ））発現を用いて同定された通り、Ｆｏｘａｌとルミナルサブタイプとの関連を裏付けた（図４ｅ）。ＦｏｘａｌがＰＤＧＦ−ＣＣの非存在下で腫瘍溶解物中で上方制御されると見出されたという事実を考慮して、本発明者らは、乳癌におけるＦｏｘａｌとＰＤＧＦ−ＣＣの相関を検討した。最初に、ＰＤＧＦ−ＣＣの発現は、ベーサルライクサブタイプの乳腺腫瘍細胞株において排他的に観察されたが、ルミナルサブタイプ起源の細胞では観察されなかった（図４ｆ）。第二に、５０種の乳腺腫瘍細胞株のパネルにおいて、ＦｏｘａｌおよびＰＤＧＦ−ＣＣの発現が、逆相関することが見出された（図４ｇ）。第三に、ＰＤＧＦ−ＣＣと乳癌のベーサルライクサブタイプとの関連が、免疫染色による８９０のヒト乳腺腫瘍のコホート中のベーサルライク型マーカー（サイトケラチン５／６）の発現の分析により、さらに確定された。際立ったこととして、ＰＤＧＦ−ＣＣは、サイトケラチン５／６の発現と非常に顕著に関連したが、ＰＤＧＦ−ＣＣの低い発現または発現の不在は、Ｆｏｘａｌ、ＥＲおよびＰＲを発現するルミナルサブタイプの腫瘍を示した。
【０２１８】
ＰＤＧＦ−ＣＣにより確立される間質線維芽細胞中のパラクリンシグナル伝達回路は乳腺腫瘍細胞の分子サブタイプを決定する
転写分析にしたがって、ルミナルサブタイプマーカーＦｏｘＡ１およびＥＲαタンパク質が、Ｐｄｇｆｃ欠損マウスからの腫瘍タンパク質溶解物中でより豊富であることが見出された（図５ａ）。上皮から得られたＰＤＧＦ−ＣＣによるパラクリンシグナル伝達が乳腺腫瘍のベーサルライク型の特定化を誘発したメカニズムを解明するために、本発明者らは、不死化乳癌関連線維芽細胞株ＣＡＦ２をＰＤＧＦ−ＣＣで刺激した。本発明者らは、全体的な遺伝子発現分析に続いて、分泌されたタンパク質をコードする遺伝子に照準を合わせ、定量ＰＣＲによりこれらのうちの３つ、即ちスタニオカルシン（ＳＴＣ）−１、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）およびインスリン成長因子結合タンパク質３（ＩＧＦＢＰ３）を検証して、ＰＤＧＦ−ＣＣによる誘導を確認した（図５ｂ）。次に本発明者らは、ＳＴＣ−１、ＨＧＦおよびＩＧＦＢＰ３によるＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；Ｐｄｇｆｃｌａｃｚ／ｌａｃｚマウスの腫瘍から単離された原発性乳癌細胞の刺激が野生型ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスからの腫瘍細胞のベーサルライクフェノタイプを救済したか否かを、ルミナルライクサブタイプマーカーＦｏｘＡ１、ＥＲαおよびＧＡＴＡ３の発現を利用して、評定した。実際に、各因子は単独では様々な影響を有したが、ＳＴＣ−１、ＨＧＦおよびＩＧＦＢＰ３の協調的作用が、Ｐｄｇｆｃ欠損乳癌細胞のルミナルライク型特性を実質的に抑制した（図５ｃ〜ｅ）。重要なこととして、ＳＴＣ−１、ＨＧＦおよびＩＧＦＢＰ３によるルミナル型乳癌細胞の前処置はタモキシフェン誘導性成長停止に対するそれらの感受性を低減したため、ＥＲαの改変された発現は、機能的意義を保持した（図５ｆ）。加えて、間質線維芽細胞からのコンディションメディウムは、３種のパラクリンＰＤＧＦ−ＣＣ誘導性因子に置き換えることができた（図５ｇ）。ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴマウスからの腫瘍の腫瘍間質におけるＳＴＣ−１、ＨＧＦおよびＩＧＦＢＰ３の存在が、免疫染色により確認された（図５ｈ）。
【０２１９】
ＰＤＧＦ−ＣＣの遺伝子的または薬理学的ターゲディングはベーサルライク型乳腺腫瘍をホルモン療法に対し感受性にする
ルミナルサブタイプ乳腺腫瘍の臨床的に最も重要な際立った特性はＥＲαの発現であり、これは、タモキシフェンなどのホルモン療法への感受性を付与する。本発明者らは次に、ＰＤＧＦ−ＣＣのターゲティングが、ホルモン療法に対する感受性を、ベーサルライクサブタイプの過去に影響を受けなかったＥＲ陰性乳腺腫瘍へ伝えるか否かを検討することに着手した。ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；Ｐｄｇｆｃ＋／＋またはＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ；Ｐｄｇｆｃｌａｃｚ／ｌａｃｚマウスから同所移植された腫瘍を担持する非トランスジェニックマウスを、ｘ週齢から開始して連日、タモキシフェンで処置した。予測通り、タモキシフェン処置マウスの野生型腫瘍は、非処置マウスからの腫瘍と類似の速度で成長し続けた（図６ａ）。明らかに対照的に、およびそれらがＥＲ陽性であることと一致して（図５ａ）、Ｐｄｇｆｃ欠損マウスからの腫瘍は、タモキシフェンでの処置により成長が大きく阻止された（図６ｂ）。試験の終了時に、パラクリンＰＤＧＦ−ＣＣシグナル伝達が欠如したタモキシフェン処置マウスからの腫瘍は、体積の減少を有したが、非処置マウスは成長した腫瘍を示し、Ｐｄｇｆｃ欠損腫瘍の微細環境による乳腺腫瘍内のＥＲαシグナル伝達の機能的な感受性化を明らかにした。組織学的に、タモキシフェン処置マウスからの腫瘍が示された。最後に、ベーサルライクサブタイプの乳腺腫瘍をタモキシフェンの作用に対し感受性にするためのＰＤＧＦ−ＣＣを標的とする薬剤の治療的用途を最終的に実証するために、本発明者らは、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をＳＣＩＤマウスに同所移植した。対照抗体と一緒のタモキシフェンでの処置は、完全に確立されたＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍の成長に影響を与えられなかった（図６ｃ）。際立ったこととして、タモキシフェンとＰＤＧＦ−ＣＣ抗体Ａ３Ｂ６との併用投与は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍の有意な成長阻止を導いた（図６ｄ）。実際に、本来は有意義なレベルのＥＲαを発現しなかったベーサルライクサブタイプ腫瘍は、モノクローナル抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体Ａ３Ｂ６での処置によりＥＲαの発現を実質的に上方制御し、ベーサルライクサブタイプ乳腺腫瘍におけるＥＲαの非存在を確定する上でのＰＤＧＦ−ＣＣによるパラクリンシグナル伝達の役割を裏付ける（図６ｅ）。興味深いこととして、ＰＤＧＦ−ＣＣによるシグナル伝達の遮断後のＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍におけるＥＲα発現の上方制御は均一でなく、むしろ悪性腫瘍細胞の分化した病巣で生じた（図６ｆ）。
【０２２０】
理論に束縛されるものではないが、パラクリンシグナル伝達ネットワークが乳腺腫瘍微細環境において現れ、そこで上皮由来のＰＤＧＦ−ＣＣが、ＳＴＣ−１、ＨＧＦおよびＩＧＦＢＰ３を発現する癌関連の線維芽細胞との相互作用を通してベーサルライクサブタイプの特定化を調整することが示唆される（図６ｇ）。重要なこととして、遺伝子的手段または薬理学的手段のいずれかによるＰＤＧＦ−ＣＣの遮断が、タモキシフェンによるホルモン療法の作用に対する、過去に影響を受けなかったベーサルライクサブタイプの乳腺腫瘍の感受性化をもたらした（図６ｇ）。
【０２２１】
実施例２．抗ＰＤＧＦ−ＣＣおよびアロマターゼ阻害剤
治療的試験では、２×１０６個のヒトＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、ＳＣＩＤマウスの第四乳腺脂肪体に同所的に接種した。腫瘍の成長を、生存している鎮痛動物においてモニタリングし、週１回、キャリパーで測定した。マウスを、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ（マウスモノクローナル抗体クローンＡ３Ｂ６）抗体またはＩｇＧ２ａアイソタイプ対照抗体（Ｂｉｏ  Ｘ  Ｃｅｌｌ）での処置を受けるよう腫瘍への接種の前に無作為に割り付け、処置は腫瘍定着日から開始して週２回（３００μｇ／週）腹腔内注射により送達された。内分泌療法を含む治療的試験では、腫瘍が触知できた場合（最長径＞３ｍｍ）、マウスを処置群に交互に割り付けて、そこでマウスを、５５℃に加熱することによりエタノールおよびコーン油（Ｓｉｇｍａ）のビヒクル中に溶解されたレトロゾール（強制経口投与により連日１ｍｇ／用量、Ｓｉｇｍａ）で、またはビヒクル単独で処置した。全ての治療的投与は、非盲検であった。
【０２２２】
Ａ３Ｂ６＋レトロゾール群は、他の全ての群よりも統計学的に有意に小さく（ｐ＜０．０１対対照、ｐ＜０．０５対Ａ３Ｂ６、ｐ＜０．００１対レトロゾール、等しい分散を仮定した対応のない両側スチューデントｔ検定）；他の差は、統計学的に有意でない（図７）。
【０２２３】
結論：ＰＤＧＦ−ＣＣの中和は、過去に影響を受けなかったベーサルライク型／トリプルネガティブ型乳腺腫瘍を、アロマターゼ阻害剤の形態の内分泌療法の作用に対し感受性にする。
【０２２４】
実施例３．ＰＤＧＦ−Ｒ阻害剤およびエストロゲンアンタゴニスト
治療的試験では、２×１０６個のヒトＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、ＳＣＩＤマウスの第四乳腺脂肪体に同所的に接種した。腫瘍の成長を、生存している鎮痛動物においてモニタリングし、週１回、キャリパーで測定した。マウスを、ＰＦＧＦ−Ｒ阻害剤イマチニブまたはプラセボでの処置を受けるよう腫瘍への接種の前に無作為に割り付け、処置は腫瘍定着日から開始して週２回（３００μｇ／週）腹腔内注射により送達された。内分泌療法を含む治療的試験では、腫瘍が触知できた場合（最長径＞３ｍｍ）、マウスを処置群に交互に割り付けて、そこでマウスを、５５℃に加熱することによりエタノールおよびコーン油（Ｓｉｇｍａ）のビヒクル中に溶解されたタモキシフェン（強制経口投与により連日１ｍｇ／用量、Ｓｉｇｍａ）で、またはビヒクル単独で処置した。全ての治療的投与は、非盲検であった。
【０２２５】
イマチニブ＋タモキシフェン群は、他の全ての群よりも統計学的に有意に小さく（ｐ＜０．０１対対照、ｐ＜０．０５対Ａ３Ｂ６、ｐ＜０．００１対レトロゾール、等しい分散を仮定した対応のない両側スチューデントｔ検定）；他の差は、統計学的に有意でない（図８）。
【０２２６】
結論：ＰＤＧＦ−Ｒチロシンキナーゼの阻害は、過去に影響を受けなかったベーサルライク型／トリプルネガティブ型乳腺腫瘍を、タモキシフェンの形態の内分泌療法の作用に対し感受性にする。
【０２２７】
参考資料
Ｒｅｌｅｖａｎｃｅ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｓｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ｔａｍｏｘｉｆｅｎ：ｐａｔｉｅｎｔ−ｌｅｖｅｌ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ  ｔｒｉａｌｓ
Ｅａｒｌｙ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｉａｌｉｓｔｓ’  Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐ  （ＥＢＣＴＣＧ）
ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ０１４０−６７３６（１１）６０９９３−８
Ｔｒｉｐｌｅ−Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ
Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｄ．Ｆｏｕｌｋｅｓ，Ｍ．Ｂ．，Ｂ．Ｓ．，Ｐｈ．Ｄ．，Ｉａｎ  Ｅ．Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｄ．，ａｎｄ  Ｊｏｒｇｅ  Ｓ．Ｒｅｉｓ−Ｆｉｌｈｏ，Ｍ．Ｄ．，Ｐｈ．Ｄ．
ｄｏｉＩ：１０．１０５６／ＮＥＪＭｒａ１００１３８９）
Ａｄｊｕｖａｎｔ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｔｒｉｐｌｅ−ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒｓ  ｂｙ  Ｊｏｅｎｓｕｕ  ａｎｄ  Ｇｌｉｇｏｒｏｖ  Ｌａｎｃｅｔ  ２０１１；３７８：７７１−８４
ｄｏｉ：１０．１０９３／ａｎｎｏｎｃ／ｍｄｓ１９４
Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｎｔｉ−Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ  Ｗｉｔｈ  Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ  Ｖｅｒｓｕｓ  Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ  Ａｌｏｎｅ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  Ｔｒｉｐｌｅ−Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ
Ｊｏｓｅ  Ｂａｓｅｌｇａ↑，Ｐａｔｒｉｃｉａ  Ｇｏｍｅｚ，Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｇｒｅｉｌ，Ｓｏｆｉａ  Ｂｒａｇａ，Ｍｉｇｕｅｌ  Ａ．Ｃｌｉｍｅｎｔ，Ａｎｄｒｅｗ  Ｍ．Ｗａｒｄｌｅｙ，Ｂｅｌｌａ  Ｋａｕｆｍａｎ，Ｓａｌｏｍｏｎ  Ｍ．Ｓｔｅｍｍｅｒ，Ａｎｔｏｎｉｏ  Ｐｅｇｏ，Ａｒｌｅｎｅ  Ｃｈａｎ，Ｊｅａｎ−Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｇｏｅｍｉｎｎｅ，Ｍａｒｉｅ−Ｐａｓｃａｌｅ  Ｇｒａａｓ，Ｍ．Ｊｏｈｎ  Ｋｅｎｎｅｄｙ，Ｅｖａ  Ｍａｒｉａ  Ｃｉｒｕｅｌｏｓ  Ｇｉｌ，Ａｎｄｒｅａｓ  Ｓｃｈｎｅｅｗｅｉｓｓ，Ａｎｇｅｌａ  Ｚｕｂｅｌ，Ｊｕｔｔａ  Ｇｒｏｏｓ，Ｈｅｌｅｎａ  Ｍｅｌｅｚｉｎｋｏｖａ  ａｎｄ  Ａｈｍａｄ  Ａｗａｄａ
ｄｏｉ：１０．１２００／ＪＣＯ．２０１２．４６．２４０８
Ｔｒｉｐｌｅ−Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ：Ａｎ  Ｕｎｍｅｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｎｅｅｄ
Ｃｌｉｆｆｏｒｄ  Ａ．Ｈｕｄｉｓ  ａｎｄ  Ｌｕｃａ  Ｇｉａｎｎｉ
ｄｏｉ：１０．１６３４／ｔｈｅｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ．２０１１−Ｓ１−０１
Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ｎｅｏａｄｊｕｖａｎｔ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｌｏｎｇ−Ｔｅｒｍ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｔｒｉｐｌｅ−Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ
Ｃｏｒｎｅｌｉａ  Ｌｉｅｄｔｋｅ，Ｃｈａｆｉｋａ  Ｍａｚｏｕｎｉ，Ｋｅｎｎｅｔｈ  Ｒ．Ｈｅｓｓ，Ｆａｂｒｉｃｅ  Ａｎｄｒｅ，Ａｔｔｉｌａ  Ｔｏｒｄａｉ，Ｊａｉｍｅ  Ａ．Ｍｅｊｉａ，Ｗ．Ｆｒａｓｅｒ  Ｓｙｍｍａｎｓ，Ａｎａ  Ｍ．Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ａｎｇｕｌｏ，Ｂｒｙａｎ  Ｈｅｎｎｅｓｓｙ，Ｍａｒｊｏｒｉｅ  Ｇｒｅｅｎ，Ｍａｓｓｉｍｏ  Ｃｒｉｓｔｏｆａｎｉｌｌｉ，Ｇａｂｒｉｅｌ  Ｎ．Ｈｏｒｔｏｂａｇｙｉ  ａｎｄ  Ｌａｊｏｓ  Ｐｕｓｚｔａｉ
ｄｏｉ：１０．１２００／ＪＣＯ．２００７．１４．４１４７
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ／Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｓｔｓ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ．
Ｈａｍｍｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．２８，ｎｏ．１６，ｐ．２７８４−３５４３
Ｄｏｉ：１０．１２００／ＪＣＯ．２００９．２５．６５２９
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ／Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｓｔｓ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  Ｕｐｄａｔｅ．
Ｈａｍｍｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．３１  ｎｏ．３１  ３９９７−４０１３  ｄｏｉ：１０．１２００／ＪＣＯ．２０１３．５０．９９８４．
Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２０１３  Ｎｏｖ  １；３１（３１）：３９９７−４０１３．ｄｏｉ：１０．１２００／ＪＣＯ．２０１３．５０．９９８４．Ｅｐｕｂ  ２０１３  Ｏｃｔ  ７．
Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２  ｔｅｓｔｉｎｇ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ／Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｓｔｓ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｕｐｄａｔｅ．
Ｗｏｌｆｆ  ＡＣ，Ｈａｍｍｏｎｄ  ＭＥ，Ｈｉｃｋｓ  ＤＧ，Ｄｏｗｓｅｔｔ  Ｍ，ＭｃＳｈａｎｅ  ＬＭ，Ａｌｌｉｓｏｎ  ＫＨ，Ａｌｌｒｅｄ  ＤＣ，Ｂａｒｔｌｅｔｔ  ＪＭ，Ｂｉｌｏｕｓ  Ｍ，Ｆｉｔｚｇｉｂｂｏｎｓ  Ｐ，Ｈａｎｎａ  Ｗ，Ｊｅｎｋｉｎｓ  ＲＢ，Ｍａｎｇｕ  ＰＢ，Ｐａｉｋ  Ｓ，Ｐｅｒｅｚ  ＥＡ，Ｐｒｅｓｓ  ＭＦ，Ｓｐｅａｒｓ  ＰＡ，Ｖａｎｃｅ  ＧＨ，Ｖｉａｌｅ  Ｇ，Ｈａｙｅｓ  ＤＦ；Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ；Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｓｔｓ．
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図１Ｆ】
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【図１Ｇ】
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【図１Ｈ】
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【図１Ｉ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図２Ｇ】
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【図２Ｈ】
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【図２Ｉ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図３Ｆ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図４Ｆ】
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【図４Ｇ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図５Ｆ】
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【図５Ｇ】
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【図５Ｈ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図６Ｆ】
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【図６Ｇ】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年7月13日(2018.7.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
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