【手続補正書】
【提出日】平成19年6月5日(2007.6.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  血清アルブミンに結合する、アミノ酸配列 Asp-Xaa-Cys-Leu-Pro-Xaa-Trp-Gly-Cys-Leu-Trp (配列番号：116)（ここでXaa はアミノ酸である）を含む、ペプチドリガンド。
【請求項２】  アミノ酸配列が、 Asp-Ile-Cys-Leu-Pro-Arg-Trp-Gly-Cys-Leu-Trp (配列番号：120)である、請求項１に記載のペプチドリガンド。
【請求項３】  アミノ酸配列が、 Met-Glu-Asp-Ile-Cys-Leu-Pro-Arg-Trp-Gly-Cys-Leu-Trp-Glu-Asp (配列番号：121)である、請求項１に記載のペプチドリガンド。
【請求項４】  アミノ酸配列が、 Gln-Arg-Leu-Met-Glu-Asp-Ile-Cys-Leu-Pro-Arg-Trp-Gly-Cys-Leu-Trp-Glu-Asp-Asp-Phe (配列番号：122)である、請求項１に記載のペプチドリガンド。
【請求項５】  アミノ酸配列が、 Gln-Gly-Leu-Ile-Gly-Asp-Ile-Cys-Leu-Pro-Arg-Trp-Gly-Cys-Leu-Trp-Gly-Asp-Ser-Val (配列番号：123)である、請求項１に記載のペプチドリガンド。
【請求項６】  アミノ酸配列が、 Gln-Gly-Leu-Ile-Gly-Asp-Ile-Cys-Leu-Pro-Arg-Trp-Gly-Cys-Leu-Trp-Gly-Asp-Ser-Val-Lys (配列番号：124)である、請求項１に記載のペプチドリガンド。
【請求項７】  アミノ酸配列が、 Glu-Asp-Ile-Cys-Leu-Pro-Arg-Trp-Gly-Cys-Leu-Trp-Glu-Asp-Asp (配列番号：125)である、請求項１に記載のペプチドリガンド。
【請求項８】  アミノ酸配列が、 Arg-Leu-Met-Glu-Asp-Ile-Cys-Leu-Pro-Arg-Trp-Gly-Cys-Leu-Trp-Glu-Asp-Asp (配列番号：126)である、請求項１に記載のペプチドリガンド。
【請求項９】  アミノ酸配列が、 Met-Glu-Asp-Ile-Cys-Leu-Pro-Arg-Trp-Gly-Cys-Leu-Trp-Glu-Asp-Asp (配列番号：127)である、請求項１に記載のペプチドリガンド。
【請求項１０】  アミノ酸配列が、配列番号：207-209, 211-217, 223-227, 229, 230, 232-235, 237, 238, 243-247, 249-252, 255, 256, 263-266及び268-492からなる群から選択される何れかの配列である、請求項１に記載のペプチドリガンド。
【請求項１１】  アミノ酸配列が、ジスルフィド結合したCys残基の存在により環化している、請求項１に記載のペプチドリガンド。
【請求項１２】  ペプチドリガンドが、５０アミノ酸残基未満である、請求項１に記載のペプチドリガンド。
【請求項１３】  ペプチドリガンドが、４０アミノ酸残基未満である、請求項１に記載のペプチドリガンド。
【請求項１４】  ペプチドリガンドが、１０〜３０アミノ酸残基である、請求項１に記載のペプチドリガンド。
【請求項１５】  ペプチドリガンドが、１ｎＭより低い血清アルブミンに対する親和性を有する、請求項１に記載のペプチドリガンド。
【請求項１６】  ペプチドリガンドが、高分子に非共有吸着又は共有結合している、請求項１に記載のペプチドリガンド。
【請求項１７】  高分子が固体支持体である、請求項１６に記載のペプチドリガンド。
【請求項１８】  ペプチドリガンドが、検出可能成分で標識されている、請求項１に記載のペプチドリガンド。
【請求項１９】  （ａ）請求項１ないし１５の何れか１項に記載のペプチドリガンド；及び
（ｂ）生理活性化合物
を含むハイブリッド分子。
【請求項２０】  生理活性化合物が、治療薬又は診断薬である、請求項１９に記載のハイブリッド分子。
【請求項２１】  治療薬が、酵素、ホルモン、サイトカイン、抗体、抗体断片、鎮痛薬、解熱剤、抗炎症剤、抗生物質、抗ウィルス剤、抗真菌剤、心血管作動薬、中枢神経系に作用する薬剤、腎機能及び電解質代謝に効果のある薬剤、化学療法剤からなる群から選択される何れかの薬剤である、請求項２０に記載のハイブリッド分子。
【請求項２２】  ペプチドリガンドが Gln-Arg-Leu-Met-Glu-Asp-Ile-Cys-Leu-Pro-Arg-Trp-Gly-Cys-Leu-Trp-Glu-Asp-Asp-Phe (配列番号：122)であり、治療薬が抗組織因子Ｆａｂ又は(Ｆａｂ')２抗体断片である、請求項２０に記載のハイブリッド分子。
【請求項２３】  請求項１９ないし２２の何れか１項に記載のハイブリッド分子と製薬的に許容可能な担体とを含む組成物。
【請求項２４】  治療的方法に使用するための請求項１９ないし２２の何れか１項に記載のハイブリッド分子。
【請求項２５】  診断的方法に使用するための請求項１９ないし２２の何れか１項に記載のハイブリッド分子。
【請求項２６】  請求項１９ないし２２の何れか１項に記載のハイブリッド分子の薬剤製造における使用。
【請求項２７】  請求項１９ないし２２の何れか１項に記載のハイブリッド分子の診断薬製造における使用。
【請求項２８】  請求項１ないし１８の何れか１項に記載のペプチドリガンドをコードする核酸。
【請求項２９】  請求項１９ないし２２の何れか１項に記載のハイブリッド分子をコードする核酸。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６０】
実施例６
血清アルブミンペプチドリガンド
ファージライブラリ及び選択条件−ファージディスプレイペプチドライブラリをウサギ、ラット及びヒトアルブミンに対して選択した。遺伝子８に融合するランダムペプチド配列を発現するファージライブラリ（Lowman等, Biochem. 37, 8870(1998)）は５つのグループにプールした：プールＡはＣＸ２ＧＰＸ４Ｃ (配列番号：133)、Ｘ４ＣＸ２ＧＰＸ４ＣＸ４ (配列番号：134)及びＸｉＣＸｊＣＸｋを含み、ここでｊ＝８−１０；プールＢはＸ２０及びＸｉＣＸｊＣＸｋを含み、ここでｊ＝４−７；プールＣはＸ８及びＸ２ＣＸｊＣＸ２を含み、ここでｊ＝４−６；プールＤはＸ２ＣＸｊＣＸ２を含み、ここでｊ＝７−１０；プールＥはＣＸ６ＣＸ６ＣＣＸ３ＣＸ６Ｃ (配列番号：135)、ＣＣＸ３ＣＸ６Ｃ (配列番号：136)、ＣＣＸ５ＣＸ４ＣＸ４ＣＣ (配列番号：137)、ＣＸＣＸ７ＣＸ３ＣＸ６ (配列番号：138)を含み、ここでＸは２０の天然発生Ｌアミノ酸を示す。それぞれの場合において、ｉ＋ｊ＋ｋ＝１８及び｜ｉ−ｋ｜＜２。１０のライブラリのそれぞれが１０８のクローン以上である。
ファージライブラリプールを結合バッファ（ＰＢＳ、１％のオボアルブミン、０．００５％のＴｗｅｅｎ-２０）に懸濁し、maxisorpプレート（ＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌ、４℃で一晩；プレートはブロッカーカゼイン（Pierce Chemical, Rockford, IL）で遮断した）上に直接固定したウサギ、ラット又はヒトアルブミンに対して分類した。２時間後、結合していないファージを洗浄（ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ-２０）を繰り返して取り除き、結合したファージを５００ｍＭのＫＣｌ、１０ｍＭのＨＣｌ、ｐＨ２で溶出した。溶出したファージをＶＣＳＭ１３ヘルパーファージ（Stratagene, La Jolla, CA）でＸＬ１-Ｂｌｕｅ細胞で増殖した。濃縮を、オボアルブミン又はカゼインでの成功裏の被覆に比較して成功裏に被覆されたアルブミンと結合したファージの数の滴定によって監視した。
ファージＥＬＩＳＡ−ファージクローン（〜１０１１ファージ）をラット、ウサギ又はヒトアルブミンで被覆したプレートに加えた。マイクロタイタープレートを洗浄バッファーで洗浄し、結合したファージをＨＲＰ／抗Ｍ１３コンジュゲートで溶出した。結合したＨＲＰの量をＡＢＳＴ／Ｈ２Ｏ２基質を用いて４０５ｎｍでの変化を監視することにより測定した。