【誤訳訂正書】
【提出日】平成19年6月7日(2007.6.7)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】請求項１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【請求項１】
単一検査で患者を凝固性低下状態、正常状態、または凝固性亢進状態であると同定する方法であって、
（ａ）患者から試験サンプルを用意するステップと、
（ｂ）１０ピコモラー以下の濃度で組織因子を含む凝固活性化剤を含む単一試薬を用いて、サンプル中の凝固を開始させ、内在するテナーゼ依存性フィブリン重合を誘発するステップと、
（ｃ）時間依存性プロファイルを導き出すために、前記内在するテナーゼ依存性フィブリン重合の形成について時間をかけてモニタリングするステップと、
（ｄ）試験サンプルの止血能を評価するため、及び患者を凝固性低下状態、正常状態、または凝固性亢進状態であると同定するために時間依存性プロファイルからエンドポイントを調べるステップと
を含む方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００５】
凝固の開始もしくは始動は、血管損傷、プラーク破裂もしくは炎症の結果としての単核白血球発現を原因とする組織因子の露出によって発生する。極微量のＦＶＩＩａおよび組織因子が外因系Ｘａｓｅ複合体を形成している。この複合体は活性酵素ＸａおよびＩＸａの形成を生じさせる第ＸおよびＩＸ因子に向かってＶＩＩａの触媒活性を増強する。外因系Ｘａｓｅ複合体により生成する第Ｘａ因子は小量のトロンビン（ＩＩａ）を形成する。生成したトロンビンは小量の補因子ＶＩＩＩおよびＶを活性化することができる。インビボでは、外因系Ｘａｓｅ複合体はＴＦ（組織因子）、ＶＩＩａおよびＸａから構成される四次複合体の形成を通して組織因子経路凝固阻害剤（Ｔｉｓｓｕｅ Ｐａｔｈｗａｙ Ｆａｃｔｏｒ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）（ＴＦＰＩ）によって急速に不活化される。生理的条件下では外因系Ｘａｓｅはピコモラー量のトロンビンしか生成しない。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
凝固の伝播相中には、外因系Ｘａｓｅの役割は最小限に抑えられ、第Ｘａ因子はあるいはまた酵素ＩＸａとその補因子ＶＩＩＩａとの複合体によって生成される。この酵素複合体は内因系Ｘａｓｅと呼ばれている。内因系Ｘａｓｅ複合体によるＸａの形成効率は外因系Ｘａｓｅの約５０倍以上高い。第Ｘａ因子およびその活性化補因子ＦＶａは、活性化血小板の表面上で複合体を形成する。これはプロトロンビンからトロンビンへの転換にとって有効な触媒であり、プロトロンビナーゼ複合体と呼ばれている。内因系Ｘａｓｅ複合体を通して形成されたトロンビンは正のフィードバック（活性化）によって自己産生を増幅させることができる。トロンビンは第ＶＩＩＩ因子および第Ｖ因子を活性化し、第ＸＩ因子活性化は内因系Ｘａｓｅの酵素成分（第ＩＸａ因子）の一層の産生をもたらす。正常なトロンビン産生は高度に調節かつ局所化されている。ＴＦＰＩはトロンビン生成に対するトリガーを中和する。播種性血栓症を回避するためには、活性プロテアーゼ類（ＩＩａ、Ｘａ、ＩＸａ）がプロテアーゼ阻害剤によって不活化されなければならない。これらの阻害剤の中で最も重要なものはアンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）である。膜表面から遊離したトロンビンおよびＸａの両方、およびこれより少ない程度のＩＸａはＡＴＩＩＩによって急速に抑制される。トロンビンはさらにまた受容体分子であるトロンボモジュリン（ＴＭ）を通して非損傷性内皮下層へ結合することができる。ＩＩａ／ＴＭ複合体の形成は、凝固促進剤から抗凝固剤へトロンビンの基質特異性を変化させる。ＴＭに結合したトロンビンはプロテインＣの強力な活性化剤であり、プロテインＣを活性酵素活性化プロテインＣ（ＡＰＣ）へ転換させる。ＡＰＣはその補因子であるプロテインＳと一緒に活性化補因子ＦＶＩＩＩａおよびＦＶａを分解させ、それらの不活性形であるＦＶＩＩＩｉおよびＦＶｉを生じさせる。トロンボモジュリンもまたＡＴＩＩＩによるトロンビンの不活化を加速させる。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１３】
Ｄｕｃｈｅｍｉｎらは、外因性トロンボモジュリンを添加することによってプロテインＣ経路が評価されるＥＴＰのまた別の変形について報告している。この方法はさらにまた、アンチトロンビンＩＩＩを含む抗凝固活性を調節するタンパク質を考慮に入れるために修正された。ＥＴＰと同様に、この修正されたアッセイはトロンビン生成を測定するためだけに設計されており、トロンビンの作用、即ち動力学的血餅形成を測定するためには設計されていない。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１４】
他の研究者らは凝固プロセスの生物学的コンポーネントの合成物およびそれらの相互作用に対して感受性であるアッセイを設計することを試みてきた。そのような例の１つはＫｒａｕｓ（カナダ特許出願第２，２５２，９８３号）によって記載されている。しかしこの方法は、凝固検査においてトロンボモジュリンおよびトロンボプラスチンを添加することによってサンプルの抗凝固能を判定することに限定されている。上記の方法では、凝固装置の測定時間中にプロテインＣの十分な活性化を可能にするために十分に緩徐な速度でトロンビンが産生するようにトロンボプラスチンの希釈率に重点が置かれている。この方法の欠点は、トロンボプラスチンの量が凝固時間に依存するのでより限定的であり、トロンボモジュリンが添加された時点の凝固時間の増加を補正するためにより高濃度が必要とされることにある。上記の方法は包括的止血能ではなく抗凝固能を評価することを目的としているので、このアッセイは伝播相および増幅相における欠陥、血餅重合の動態またはトロンビン生成の原因となる因子間の相互関係に対しては感受性ではない。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４０】
図１０は、凝固性亢進、凝固性低下および正常血漿に対する結果に種々の組織因子およびトロンボモジュリン濃度のｍｉｎ＿１値が及ぼす作用を示している。これらのデータは、正常、凝固性亢進および凝固性低下血漿間の区別を容易にするための最適濃度を定義できることを示している。さらに、他の濃度の組織因子およびトロンボモジュリンは、他のタイプの状態の感受性および特異性を犠牲にして特定状態に対する感受性および特異性における向上を容易にする。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４１】
表２および３には、一連の定義された患者血漿とともに動態パラメーターであるｍｉｎ  １およびｍｉｎ  ２を測定する結果がまとめられている。ＴＦの濃度は１０ｐＭへ、ＴＭの濃度は１０ｎＭへ調整した。リン脂質濃度は１５０マイクロモラーで一定に維持した。データは、試薬がＴＭの存在下で単一試薬調製物を用いて凝固性亢進血漿と凝固性低下血漿を区別できることを証明している。さらに、データは凝固性低下血漿と正常標準血漿プールとを識別するためにはＴＭが不可欠ではないことを示している。データはトロンボモジュリンを含む、および含まない正常プールに対する比率として計算される。ｍｉｎ  ２パラメーターの比率は凝固性亢進血漿に対する対応するｍｉｎ  １値より高かった。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４２】
表２および３は、動態エンドポイントｍｉｎ＿１およびｍｉｎ＿２によって測定されるトロンボモジュリンの存在下および不在下で定義された血漿の挙動を示している。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４８】
図８および９は、正常に比較したときの凝固性亢進および凝固性低下標本に対する区別を示している。表２および３には、動態エンドポイントｍｉｎ＿１およびｍｉｎ＿２によって測定されるトロンボモジュリンの存在下および不在下の定義された血漿の挙動が示されている。図１０は、凝固性亢進、凝固性低下および正常血漿からの結果に種々の組織因子およびトロンボモジュリンが及ぼす作用を示している。これらのデータは、濃度の変動が別のタイプの状態の感受性および特異性を犠牲にして１つの状態での感受性および特異性における向上を容易にすることを示している。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４９】
ある好ましい実施形態では、ＴＦは約１０ピコモラー以下の濃度で、およびリン脂質濃度は約１０〜３００μＭの濃度でサンプルへ添加される。ＴＦは３〜１０ピコモラーの濃度でサンプルへ添加でき、リン脂質小胞は１００〜１５０マイクロモラーで添加できる。好ましくは、トロンボモジュリンは０〜３０ナノモラーで、最も好ましくは５〜１５ナノモラーの濃度で添加される。塩化カルシウムは、最も好ましくは約２５ｍＭの濃度で添加される。本明細書に記載したすべての試薬コンポーネント濃度は、キュベット内の血漿／緩衝液マトリックス中ではさらに１：３に希釈される。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５３】
１つ以上の抗凝固経路の活性化剤は抗凝固活性化剤と一緒に添加することができる。このような追加の活性化剤は、例えばプロテインＣ経路のような抗凝固経路のあらゆる活性化剤であってよい。トロンボモジュリンは１つの例であり、これは精製ヒトトロンボモジュリン、精製非ヒト哺乳動物トロンボモジュリン、可溶性もしくは膜結合トロンボモジュリン、天然トロンボモジュリンまたは添加されたヘパリン様分子を含むリン脂質を用いて再構成した部分的もしくは完全にグリコシル化したトロンボモジュリンもしくは完全に脱グリコシル化したトロンボモジュリンの形態で添加できる。凝固活性化剤は、組み換え型もしくは精製組織因子、先端が欠損した組織因子、または表面上で組織因子を発現する細胞を含むあらゆる適切な活性化剤であってよい。小胞もしくはリポソームが添加される場合は、それらは血小板、細胞破片、リン脂質もしくは血小板微粒子の形状であってよい。金属塩が添加される場合は、マグネシウム、カルシウムもしくはマンガンのハロゲン化物またはその他の二価金属塩であってよい。所望の場合は緩衝剤および安定剤もまた添加できよう。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５４】
止血能を評価するための試薬もしくはキットは凝固活性化剤を有していなければならない。試薬もしくはキットの追加のコンポーネントには、上記の小胞類、金属塩もしくはイオン類、および所望の場合は抗凝固経路活性化剤を含めることができよう。キット内では、コンポーネントをすべて個別容器で提供することも、または１つ以上の容器でのあらゆる組み合わせで一緒に混合することができよう。リン脂質小胞が添加される場合は、それらはあらゆる適切なリン脂質またはホスファチジルコリン、ホスファチジルエタンダミンおよびホスファチジルセリンのうちの１種以上を含むリン脂質類の組み合わせであってよく、それらは約５〜３０モル％のホスファチジルエタンダミン、１〜１０％のホスファチジルセリンおよび残りがホスファチジルコリンという比率で提供できる。これらの小胞類は様々なサイズのリポソームを産生するために種々の方法で調製できる。リン脂質は、例えば１０〜３００マイクロモラーの濃度、および好ましくは５０〜２００マイクロモラーの範囲内の速度限定性ではない濃度で提供できる。組織因子は１０ピコモラー以下、８ピコモラー以下、または好ましくは６ピコモラー以下の濃度で提供できる。この濃度は３ピコモラー以下であってよいが、組織因子がどのような濃度であっても、上記に記載したような止血能評価を許容しなければならない。トロンボモジュリンを添加することが所望の場合は、トロンボモジュリンは３０ナノモラー以下、好ましくは５〜２０ナノモラーの範囲内の濃度で提供できる。金属塩を添加しなければならない場合は、金属塩は試薬もしくはキット内で５〜５０ｍＭ、好ましくは１５〜３５ｍＭの濃度で提供できる。