(57)【要約】ＬＡＩＲ−１を調節するための組成物及びその使用方法を提供する。例えば、ＬＡＩＲ−１の発現、リガンド結合、架橋、負のシグナル伝達、またはそれらの組み合わせを減少させる免疫調節剤が提供される。そのような作用物質は、免疫応答の増大を、それを必要とする対象にもたらすために使用することができる。作用物質の例は（ｉ）可溶性ＬＡＩＲ−２ポリペプチドまたは融合タンパク質、（ｉｉ）可溶性ＬＡＩＲ１ポリペプチドまたは融合タンパク質、（ｉｉｉ）機能遮断性抗ＬＡＩＲ−１抗体、（ｉｖ）ＬＡＩＲ−１陽性細胞を枯渇させる抗体、及び（ｖ）それらの組み合わせを含む。ＬＡＩＲ−１の発現、リガンド結合、架橋、負のシグナル伝達、またはそれらの組み合わせを増加させる免疫調節性作用物質も提供する。そのような作用物質を使用して免疫応答の減少を、それを必要とする対象にもたらすことができる。作用物質の例は（ｉ）機能賦活性抗ＬＡＩＲ−１抗体、（ｉｉ）機能遮断性抗ＬＡＩＲ−２抗体、及び（ｉｉｉ）それらの組み合わせを含む。【選択図】図１Ａ
2019528311.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫応答の増大を、それを必要とする対象にもたらすための医薬組成物であって、
（ｉ）可溶性ＬＡＩＲ−２ポリペプチドまたは融合タンパク質、
（ｉｉ）可溶性ＬＡＩＲ−１ポリペプチドまたは融合タンパク質、
（ｉｉｉ）免疫応答を増大させるＬＡＩＲ−１  ｍＡｂ、
（ｉｖ）ＬＡＩＲ−１陽性細胞を枯渇させる抗体、及び
（ｉｖ）それらの組み合わせ
からなる群から選択される、ＬＡＩＲ−１の発現、リガンド結合、架橋、負のシグナル伝達、またはそれらの組み合わせを減少させる免疫調節性作用物質
を有効量含んでいる、前記医薬組成物。
【請求項２】
前記免疫調節性作用物質がＬＡＩＲ−２融合タンパク質である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記ＬＡＩＲ−２融合タンパク質が、免疫グロブリンドメインに繋げられたＬＡＩＲ−２の細胞外ドメインまたはその機能性変異型を含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記ＬＡＩＲ−２融合タンパク質がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記免疫調節性作用物質がＬＡＩＲ−１融合タンパク質である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記ＬＡＩＲ−１融合タンパク質が、免疫グロブリンドメインに繋げられたＬＡＩＲ−１の細胞外ドメインまたはその機能性変異型を含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記ＬＡＩＲ−１融合タンパク質がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記免疫調節性作用物質がＬＡＩＲ−２タンパク質またはその機能性断片もしくは変異型である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記ＬＡＩＲ−２タンパク質またはその機能性断片もしくは変異型が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６との少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記免疫調節性作用物質が、可溶性ＬＡＩＲ−１タンパク質またはその機能性断片もしくは変異型である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記ＬＡＩＲ−１タンパク質が、ＬＡＩＲ−１の細胞外ドメインまたはその機能性断片もしくは変異型からなる、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記ＬＡＩＲ−１タンパク質またはその機能性断片もしくは変異型が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２との少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記免疫応答が、
抗原に対する一次免疫応答または、
Ｔ細胞の抗原特異的増殖の増進、Ｔ細胞によるサイトカイン産生の強化、分化の刺激、もしくはそれらの組み合わせなどの、エフェクター細胞機能の増強
である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
免疫応答の増大を、それを必要とする対象にもたらす方法であって、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項１５】
前記対象が、がんを有している、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記がんが、ＬＡＩＲ−１発現の増加、ＬＡＩＲ−１リガンド発現の増加、ＬＡＩＲ−２発現の減少、またはそれらの組み合わせによって特徴付けられる、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記がんが、卵巣癌、肺癌または消化器癌である、請求項１４または請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記対象が感染性疾患を有している、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
ワクチンまたはその成分と同時に前記医薬組成物が前記対象に投与される、請求項１４〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記対象に第２の治療用物質を投与することをさらに含む、請求項１４〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
免疫応答の減少を、それを必要とする対象にもたらすための医薬組成物であって、
（ｉ）機能賦活性抗ＬＡＩＲ−１抗体、
（ｉｉ）機能遮断性抗ＬＡＩＲ−２抗体、及び
（ｉｉｉ）それらの組み合わせ
からなる群から選択される、ＬＡＩＲ−１の発現、リガンド結合、架橋、負のシグナル伝達またはそれらの組み合わせを増加させる免疫調節性作用物質
を有効量含んでいる、医薬組成物。
【請求項２２】
前記免疫応答が、
抗原に対する一次免疫応答または、
Ｔ細胞の抗原特異的増殖の増進、Ｔ細胞によるサイトカイン産生の強化、分化の刺激、もしくはそれらの組み合わせなどの、エフェクター細胞機能の増強
である、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
免疫応答の減少を、それを必要とする対象にもたらす方法であって、請求項２１または請求項２２に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２４】
前記対象が炎症を有している、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記対象が自己免疫障害を有している、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記自己免疫障害が関節リウマチである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記対象または疾患もしくは状態が、ＬＡＩＲ−１発現の減少、ＬＡＩＲ−１リガンド発現の減少、ＬＡＩＲ−２発現の増加、またはそれらの組み合わせによって特徴付けられる、請求項２１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記対象に第２の治療用物質を投与することをさらに含む、請求項２１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＬＡＩＲ−１が、骨髄細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはそれらの組み合わせにおいて発現される、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物または方法。
【請求項３０】
前記骨髄細胞が抗原提示細胞である、請求項２９に記載の組成物または方法。
【請求項３１】
前記抗原提示細胞が、単球、マクロファージまたは樹状細胞である、請求項３０に記載の組成物または方法。
【請求項３２】
白血病の治療を、それを必要とする対象に施すための方法であって、
白血病細胞におけるＬＡＩＲ−１シグナル伝達を抑制するかまたは減少させ、それによって白血病細胞の生存を抑制するかまたは白血病細胞に対する抗腫瘍免疫応答を促進するために、ＬＡＩＲ−１モノクローナル抗体、可溶性ＬＡＩＲ−１ポリペプチド、可溶性ＬＡＩＲ−２ポリペプチド、ＬＡＩＲ−１融合タンパク質、ＬＡＩＲ−２融合タンパク質またはそれらの組み合わせを含んでいる有効量の医薬組成物を前記対象に投与すること
を含む、前記方法。
【請求項３３】
前記白血病が急性骨髄性白血病である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
１Ｅ１１、１Ｇ７、４Ｂ３、５Ａ６、５Ｅ１、６Ｂ２、６Ｆ４、６Ｇ６、７Ｇ３、９Ｈ６、１１Ｂ３、１２Ｅ１０ａ、及び１２Ｅ１０ｂからなる群から選択されるハイブリドーマによって産生される、抗ＬＡＩＲ抗体。
【請求項３５】
請求項３４に記載の抗体の少なくとも１本の軽鎖または少なくとも１本の重鎖を含む、抗ＬＡＩＲ抗体。
【請求項３６】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、２７、３５、４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９、１０７及び１１５からなる可変軽鎖の群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖との配列同一性が少なくとも９５％である可変軽鎖を含む、抗ＬＡＩＲ抗体。
【請求項３７】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、３１、３９、４７、５５、６３、７１、７９、８７、９５、１０３及び１１１からなる可変重鎖の群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖との配列同一性が少なくとも９５％である可変重鎖を含む、抗ＬＡＩＲ抗体。
【請求項３８】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０〜２２、２４〜２６、２８〜３０、３２〜３４、３６〜３８、４０〜４２、４４〜４６、４８〜５０、５２〜５４、５６〜５８、６０〜６２、６４〜６６、６８〜７０、７２〜７４、７６〜７８、８０〜８２、８４〜８６、８８〜９０、９２〜９４、９６〜９８、１００〜１０２、１０４〜１０６、１０８〜１１０、１１２〜１１４、及び１１６〜１１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）の群から選択されるＣＤＲを含む、抗ＬＡＩＲ抗体。
【請求項３９】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０〜２２、２４〜２６、２８〜３０、３２〜３４、３６〜３８、４０〜４２、４４〜４６、４８〜５０、５２〜５４、５６〜５８、６０〜６２、６４〜６６、６８〜７０、７２〜７４、７６〜７８、８０〜８２、８４〜８６、８８〜９０、９２〜９４、９６〜９８、１００〜１０２、１０４〜１０６、１０８〜１１０、１１２〜１１４、及び１１６〜１１８からなる群から選択される複数のＣＤＲを有する、抗ＬＡＩＲ抗体。
【請求項４０】
前記複数のＣＤＲが、２〜１２個のＣＤＲである、請求項３９に記載の抗体。
【請求項４１】
がんを治療するための方法であって、それを必要とする対象に有効量のＬＡＩＲ−２  Ｆｃを抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片に併用または代用して投与することを含む、前記方法。
【請求項４２】
前記がんが卵巣癌である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
腫瘍負荷の軽減を、それを必要とする対象にもたらす方法であって、それを必要とする対象に有効量のＬＡＩＲ−２  Ｆｃを抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片に併用または代用して投与することを含む、前記方法。
【請求項４４】
前記腫瘍が卵巣腫瘍である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記がんまたは腫瘍がリンパ腫である、請求項４１または請求項４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
初代Ｔ細胞増殖の促進を、それを必要とする対象にもたらすための方法であって、治療的有効量のＬＡＩＲ−２  Ｆｃを宿主に投与することを含む、前記方法。
【請求項４７】
ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４８】
ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４９】
ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５０】
ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５１】
ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５２】
ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５３】
ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５４】
ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５５】
ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５６】
ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５７】
ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５８】
ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５９】
ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６０】
ヒトＦｃドメインを含む、請求項４７〜５９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６１】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する重鎖、及び／または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する軽鎖
を含む、抗体。
【請求項６２】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する重鎖、及び／または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３０に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する軽鎖
を含む、抗体。
【請求項６３】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する重鎖、及び／または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する軽鎖
を含む、抗体。
【請求項６４】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４０に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する重鎖、及び／または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する軽鎖
を含む、抗体。
【請求項６５】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４、１３０、１３６もしくは１４２の軽鎖アミノ酸配列、及び／または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０、１２２、１２６、１２８、１３２、１３４、１３８もしくは１４０の重鎖アミノ酸
を含む抗体をコードする、核酸配列。
【請求項６６】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、２７、３５、４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９、１０７もしくは１１５の可変軽鎖、及び／または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、３１、３９、４７、５５、６３、７１、７９、８７、９５、１０３もしくは１１１の可変重鎖
をコードする、核酸配列。
【請求項６７】
ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を構成的または誘導的に発現している細胞であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、２７、３５、４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９、１０７、１１５、２３、３１、３９、４７、５５、６３、７１、７９、８７、９５、１０３、１１１またはそれらの組み合わせのアミノ酸配列
をコードする１種類またはそれより多くの核酸を含む、前記細胞。
【請求項６８】
ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を構成的または誘導的に発現している細胞であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２またはそれらの組み合わせのアミノ酸配列
をコードする１種類またはそれより多くの核酸を含む、前記細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１６年８月３日に出願された米国仮特許出願第６２／３７０，３３４号及び２０１７年１月２５日に出願された米国仮特許出願６２／４５０，３００号に基づく利益及び優先権を主張し、参照によりそれらの両方の全体を援用する。
【０００２】
配列表の参照
２０１７年８月３日に作成した１３６キロバイトのサイズの「ＬＡＩＲ１ＳＴ２５．ｔｘｔ」と名付けたテキストファイルとして２０１７年８月３日に提出された配列表を参照によりこれをもって３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．５２（ｅ）（５）に従って援用する。
【０００３】
発明の分野
本発明は、総じて免疫調節の分野に関し、より詳しくは、ＬＡＩＲ−１シグナル伝達を調節して免疫応答を増大または減少させるためならびに白血病細胞の生存及び自己再生の直接的調節によって白血病を治療するための、組成物及び方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
白血球関連免疫グロブリン様受容体−１（ＬＡＩＲ−１）は、多くの免疫細胞上に発現し、細胞質側にある２つの免疫受容体チロシン依存性抑制モチーフ（ＩＴＩＭ）ドメインを介して抑制性シグナル伝達を起こさせる、抑制性細胞表面受容体である（Ｖｅｒｂｒｕｇｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．７９：８２８−８３６（非特許文献１））。ＬＡＩＲ−１は、多様なコラーゲン、補体成分Ｃ１ｑ及びサーファクタントプロテインＤ（ＳＰ−Ｄ）と架橋して、免疫細胞の成熟、増殖及び脱顆粒を抑制する負のシグナル伝達を誘導する（Ｌｅｂｂｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｍａｔｒｉｘ  Ｂｉｏｌ．２８：２０２−２１０（非特許文献２）、Ｍｅｙａａｒｄ．，２００８，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．８３：７９９−８０３（非特許文献３））。マウスではないがヒトのゲノムは、可溶性ＬＡＩＲ−２タンパク質をコードする（Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｇｅｎｅ  ５５２：１４０−１４５（非特許文献４））。ＬＡＩＲ−２タンパク質は、ＬＡＩＲ−１と同じリガンドと結合し、したがって、ＬＡＩＲ−１を介した抑制性シグナル伝達を減少させるデコイとして機能し得る。
【０００５】
ＬＡＩＲ−１による抑制性シグナル伝達は、紅斑性狼瘡、関節リウマチ、自己免疫性甲状腺疾患及びアテローム性動脈硬化症などの自己免疫疾患、ならびに接触過敏症を防止し得る（Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｇｅｎｅ  ５５２：１４０−１４５（非特許文献４））。慢性リンパ性白血病細胞上でのＬＡＩＲ−１発現の減少は疾患の増悪と関連している（Ｐｏｇｇｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２２：９８０−９８８（非特許文献５）、Ｐｅｒｂｅｌｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｈａｅｍａｔｏｌａｇｉｃａ  ９９：８８１−８８７（非特許文献６））。ＬＡＩＲ−１はまた、上皮卵巣癌細胞上及び他のヒト腫瘍上に発現することも示されているが、固形腫瘍上に発現したＬＡＩＲ−１の機能は不明なままである（Ｍｅｙａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７：２８３−２９０（非特許文献７）、Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．４５８：３９９−４０４（非特許文献８））。
【０００６】
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞上、及び潜在的には急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）細胞上でのＬＡＩＲ−１発現は、白血病幹細胞のアポトーシス及び分化を抑制してこれらの細胞の自己再生能または『幹細胞性』を保持するホスファターゼ非依存性ＬＡＩＲ−１−ＳＨＰ−１−ＣＡＭＫ１−ＣＲＥＢシグナル伝達経路を介したそれらの白血病細胞の成長にとって不可欠であることが示された（Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１７：６６５−６７７（非特許文献９））。
【０００７】
総合すると、ＬＡＩＲ−１に関して蓄積されたデータは、免疫恒常性における重要な役割を示唆しているが、依然として疾患及び障害の治療のためにＬＡＩＲ−１を調節する組成物及び方法は必要とされ続けている。
【０００８】
したがって、本発明の目的は、ＬＡＩＲ−１による負のシグナル伝達を増加させる組成物と、炎症性の疾患及び障害ならびに自己免疫疾患を治療するためのその使用方法とを提供することである。
【０００９】
本発明の目的はさらに、ＬＡＩＲ−１による負のシグナル伝達を減少させる組成物と、がん及び感染性疾患の治療のためのその使用方法とを提供することである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｖｅｒｂｒｕｇｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．７９：８２８−８３６
【非特許文献２】Ｌｅｂｂｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｍａｔｒｉｘ  Ｂｉｏｌ．２８：２０２−２１０
【非特許文献３】Ｍｅｙａａｒｄ．，２００８，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．８３：７９９−８０３
【非特許文献４】Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｇｅｎｅ  ５５２：１４０−１４５
【非特許文献５】Ｐｏｇｇｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２２：９８０−９８８
【非特許文献６】Ｐｅｒｂｅｌｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｈａｅｍａｔｏｌａｇｉｃａ  ９９：８８１−８８７
【非特許文献７】Ｍｅｙａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７：２８３−２９０
【非特許文献８】Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．４５８：３９９−４０４
【非特許文献９】Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１７：６６５−６７７
【発明の概要】
【００１１】
ＬＡＩＲ−１を調節するための組成物及びその使用方法を提供する。例えば、ＬＡＩＲ−１の発現、リガンド結合、架橋、シグナル伝達、またはそれらの組み合わせを減少させる免疫調節性作用物質が提供される。ＬＡＩＲ−１は、例えば、骨髄細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはそれらの組み合わせによって発現され得る。骨髄細胞は、抗原提示細胞、例えば、単球、マクロファージまたは樹状細胞であり得る。いくつかの実施形態では、組成物は上記細胞種のうちの１つ以上を特異的に標的とする。
【００１２】
免疫応答の増大を、それを必要とする対象にもたらすために、開示される作用物質を使用することができる。免疫応答は、例えば、抗原に対する一次免疫応答、またはエフェクター細胞機能の増強、例えば、Ｔ細胞の抗原特異的増殖の増進、Ｔ細胞によるサイトカイン産生の強化、分化の刺激、もしくはそれらの組み合わせであり得る。例示的な作用物質としては、（ｉ）可溶性ＬＡＩＲ−２ポリペプチドまたは融合タンパク質、（ｉｉ）可溶性ＬＡＩＲ−１ポリペプチドまたは融合タンパク質、（ｉｉｉ）機能遮断性抗ＬＡＩＲ−１抗体、（ｉｖ）ＬＡＩＲ−１陽性細胞を枯渇させるために使用することができる抗体、及び（ｖ）それらの組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態では、免疫調節性作用物質はＬＡＩＲ−１のアンタゴニストである。
【００１３】
特定の実施形態では、作用物質は、ＬＡＩＲ−２融合タンパク質、例えば、免疫グロブリンドメインに繋げられたＬＡＩＲ−２の細胞外ドメインまたはその機能性変異型を含む融合タンパク質である。例示的な融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含む。
【００１４】
他の実施形態では、作用物質は、ＬＡＩＲ−２タンパク質またはその機能性断片もしくは変異型である。例えば、ＬＡＩＲ−２タンパク質またはその機能性断片もしくは変異型は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６との少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有し得る。
【００１５】
作用物質は、ＬＡＩＲ−１融合タンパク質、例えば、免疫グロブリンドメインに繋げられたＬＡＩＲ−１の細胞外ドメインまたはその機能性変異型を含む融合タンパク質とすることができる。例示的なＬＡＩＲ−１融合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を含む。
【００１６】
他の実施形態では、作用物質は、可溶性ＬＡＩＲ−１タンパク質またはその機能性断片もしくは変異型である。例えば、可溶性ＬＡＩＲ−１タンパク質は、ＬＡＩＲ−１の細胞外ドメインまたはその機能性断片もしくは変異型からなり得る。例示的な可溶性タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２との少なくとも８０％、９０％、９５％または１００％の配列同一性を有する。
【００１７】
対象における免疫応答を増大させる方法は、典型的には、それを必要とする対象に、ＬＡＩＲ−１の発現、リガンド結合、架橋、シグナル伝達、またはそれらの組み合わせを減少させる免疫調節性作用物質を有効量投与することを含む。対象は、例えば、がんまたは感染性疾患を有し得る。
【００１８】
いくつかの実施形態では、対象、がんまたは疾患は、ＬＡＩＲ−１発現の増加、ＬＡＩＲ−１リガンド発現の増加、ＬＡＩＲ−２発現の減少、またはそれらの組み合わせによって特徴付けられる。特定の実施形態では、がんは、卵巣癌、肺癌、消化器癌、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）である。作用物質はワクチンまたはその成分と同時に、または組み合わせて、単一の組成物として投与することができる。
【００１９】
さらに、ＬＡＩＲ−１の発現、リガンド結合、架橋、負のシグナル伝達、またはそれらの組み合わせを増加させる免疫調節性作用物質が提供される。そのような作用物質を使用して免疫応答の減少を、それを必要とする対象にもたらすことができる。例示的な作用物質としては、（ｉ）機能賦活性抗ＬＡＩＲ−１抗体、（ｉｉ）機能遮断性抗ＬＡＩＲ−２抗体、及び（ｉｉｉ）それらの組み合わせが挙げられる。
【００２０】
ある実施形態は、１Ｅ１１、１Ｇ７、４Ｂ３、５Ａ６、５Ｅ１、６Ｂ２、６Ｆ４、６Ｇ６、７Ｇ３、９Ｈ６、１１Ｂ３、１２Ｅ１０ａ、及び１２Ｅ１０ｂからなる群から選択されるハイブリドーマによって産生される抗ＬＡＩＲ抗体を提供する。
【００２１】
別の実施形態は、１Ｅ１１、１Ｇ７、４Ｂ３、５Ａ６、５Ｅ１、６Ｂ２、６Ｆ４、６Ｇ６、７Ｇ３、９Ｈ６、１１Ｂ３、１２Ｅ１０ａ、及び１２Ｅ１０ｂからなる群から選択されるハイブリドーマのうちの１つ以上によって産生される抗体の少なくとも１本の軽鎖または少なくとも１本の重鎖を有する抗ＬＡＩＲ抗体を提供する。
【００２２】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、２７、３５、４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９、１０７または１１５のアミノ酸配列を有する可変軽鎖との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９または１００％である可変軽鎖を有する抗ＬＡＩＲ抗体を提供する。
【００２３】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、３１、３９、４７、５５、６３、７１、７９、８７、９５、１０３または１１１のアミノ酸配列を有する可変重鎖との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９または１００％である可変重鎖を有する抗ＬＡＩＲ抗体を提供する。
【００２４】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、２７、３５、４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９、１０７または１１５のアミノ酸配列を有する可変軽鎖との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９または１００％である可変軽鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、３１、３９、４７、５５、６３、７１、７９、８７、９５、１０３または１１１のアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９または１００％である可変重鎖とを有する抗ＬＡＩＲ抗体を提供する。
【００２５】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０〜２２、２４〜２６、２８〜３０、３２〜３４、３６〜３８、４０〜４２、４４〜４６、４８〜５０、５２〜５４、５６〜５８、６０〜６２、６４〜６６、６８〜７０、７２〜７４、７６〜７８、８０〜８２、８４〜８６、８８〜９０、９２〜９４、９６〜９８、１００〜１０２、１０４〜１０６、１０８〜１１０、１１２〜１１４、及び１１６〜１１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）の群から選択されるＣＤＲを有する抗ＬＡＩＲ抗体を提供する。
【００２６】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０〜２２、２４〜２６、２８〜３０、３２〜３４、３６〜３８、４０〜４２、４４〜４６、４８〜５０、５２〜５４、５６〜５８、６０〜６２、６４〜６６、６８〜７０、７２〜７４、７６〜７８、８０〜８２、８４〜８６、８８〜９０、９２〜９４、９６〜９８、１００〜１０２、１０４〜１０６、１０８〜１１０、１１２〜１１４、及び１１６〜１１７からなる群から選択される複数のＣＤＲを有する抗ＬＡＩＲ抗体を提供する。複数のＣＤＲは２〜１２個であり得る。
【００２７】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する重鎖、及び／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、キメラ抗体を提供する。
【００２８】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する重鎖、及び／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３０に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、キメラ抗体を提供する。
【００２９】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する重鎖、及び／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、キメラ抗体を提供する。
【００３０】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４０に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する重鎖、及び／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、キメラ抗体を提供する。
【００３１】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４、１３０、１３６もしくは１４２の軽鎖アミノ酸配列、及び／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０、１２２、１２６、１２８、１３２、１３４、１３８もしくは１４０の重鎖アミノ酸を有する抗体をコードする、核酸配列を提供する。
【００３２】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、２７、３５、４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９、１０７もしくは１１５の可変軽鎖、及び／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、３１、３９、４７、５５、６３、７１、７９、８７、９５、１０３もしくは１１１の可変重鎖をコードする、核酸配列を提供する。軽鎖及び／または重鎖をコードする核酸を発現ベクターの一部とすることができる。核酸は、細胞で発現させることができる。発現は、誘導性または構成的とすることができる。
【００３３】
別の実施形態は、ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を構成的または誘導的に発現している細胞であって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、２７、３５、４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９、１０７、１１５、２３、３１、３９、４７、５５、６３、７１、７９、８７、９５、１０３、１１１またはそれらの組み合わせのアミノ酸配列をコードする１種類またはそれより多くの核酸を有する、当該細胞を提供する。
【００３４】
別の実施形態は、ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を構成的または誘導的に発現している細胞であって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２またはそれらの組み合わせのアミノ酸配列をコードする１種類またはそれより多くの核酸を有する、当該細胞を提供する。
【００３５】
対象における免疫応答を減少させる方法は、典型的には、それを必要とする対象に、ＬＡＩＲ−１の発現、リガンド結合、架橋、負のシグナル伝達、またはそれらの組み合わせを増加させる免疫調節性作用物質を有効量投与することを含む。いくつかの実施形態では、対象は、炎症、自己免疫障害を有する。特定の実施形態では、対象は関節リウマチを有する。
【００３６】
いくつかの実施形態では、対象または疾患もしくは状態は、ＬＡＩＲ−１発現の減少、ＬＡＩＲ−１リガンド発現の減少、ＬＡＩＲ−２発現の増加、またはそれらの組み合わせによって特徴付けられる。
【００３７】
開示されるいずれの方法も、対象に免疫調節性作用物質を単独で、または１つ以上の付加的治療用物質と組み合わせて投与することを含み得る。
【００３８】
ある実施形態は、白血病細胞におけるＬＡＩＲ−１シグナル伝達を抑制するかまたは減少させ、それによって白血病細胞の生存を抑制するかまたは白血病細胞に対する抗腫瘍免疫応答を促進するためにＬＡＩＲ−１モノクローナル抗体、可溶性ＬＡＩＲ−１ポリペプチド、可溶性ＬＡＩＲ−２ポリペプチド、ＬＡＩＲ−１融合タンパク質、ＬＡＩＲ−２融合タンパク質またはそれらの組み合わせを含んでいる有効量の医薬組成物を対象に投与することによって、白血病の治療を、それを必要とする対象に施すための方法を提供する。白血病は急性骨髄性白血病であり得る。
【００３９】
ある実施形態は、治療を必要とする対象の細胞を検査して細胞がＬＡＩＲ、ＬＡＩＲの結合相手またはその両方を発現するか否かを判定することによって、抗ＬＡＩＲ結合部分を使用する治療の有効性を評価または予測する方法を提供する。検査される細胞の例としては、限定されないが、対象から得られたがん細胞が挙げられる。がん細胞の例としては、限定されないが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞が挙げられる。相互作用する多様な抑制性受容体を発現しているがん細胞は、抗ＬＡＩＲ結合部分を使用する治療に対する応答が良好であると考えられる。ＬＡＩＲ結合相手の例としては、限定されないが、膜貫通型コラーゲン（ＸＩＩＩ、ＸＶＩＩ及びＸＸＩＩＩ）及びＬＩＬＲＢ４が挙げられる。図３は、がん細胞上のＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−１の結合相手の存在に基づいて予測される治療転帰を示す。
【００４０】
ある実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７または１８の融合タンパク質を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１Ａ】クローン１Ｅ１１、１Ｇ７、４Ｂ３、５Ａ６、５Ｅ１、６Ｂ２、６Ｆ４、６Ｇ６、７Ｇ３、９Ｈ６、１１Ｂ３、１２Ｅ１０ａ、及び１２Ｅ１０ｂから得られる抗ＬＡＩＲ−１抗体の可変軽鎖のアミノ酸配列を示す表である。
【図１Ｂ】クローン１Ｅ１１、１Ｇ７、４Ｂ３、５Ａ６、５Ｅ１、６Ｂ２、６Ｆ４、６Ｇ６、７Ｇ３、９Ｈ６、１１Ｂ３及び１２Ｅ１０（ａ及びｂ）から得られる抗ＬＡＩＲ−１抗体の可変重鎖のアミノ酸配列を示す表である。
【図２Ａ】示されているハイブリドーマから得られる可変軽鎖の多元アラインメントの図式である。
【図２Ｂ】示されているハイブリドーマから得られる可変重鎖の多元アラインメントの図式である。
【図３】ＬＡＩＲ−１、ＬＡＩＲ−１結合相手またはそれらの組み合わせの発現に基づいて予想される治療転帰を示す表である。
【図４】免疫機能及び恒常性のＬＡＩＲ調節を例示する概略図である。
【図５】治療薬としてのＬＡＩＲ−２  Ｆｃ及びＬＡＩＲ−１モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の概略図である。
【図６】図６Ａは、ＬＡＩＲ−２  ＦｃのＳＤＳ  ＰＡＧＥゲルを示す。図６Ｂは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃのサイズ排除クロマトグラムを示す。
【図７Ａ】図７Ａは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで染色した後に抗ｈＩｇ−ＰＥで染色したＫ５６２−Ｃｏｌ１７細胞の蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）ヒストグラムである。
【図７Ｂ】図７Ｂは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで染色した後に抗ｈＩｇ−ＰＥで染色した対照細胞のＦＡＣＳヒストグラムである。
【図７Ｃ】図７Ｃは、ＬＡＩＲ−１  Ｆｃで染色した後に抗ｈＩｇ−ＰＥで染色した対照細胞のＦＡＣＳヒストグラムである。
【図７Ｄ】図７Ｄは、ＬＡＩＲ−１  Ｆｃで染色した後に抗ｈＩｇ−ＰＥで染色した対照細胞のＦＡＣＳヒストグラムである。
【図７Ｅ】図７Ｅは、ＬＡＩＲ−１  Ｆｃ及びＬＡＩＲ−２  Ｆｃの非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルである。
【図７Ｆ】図７Ｆは、ＬＡＩＲ−１  Ｆｃ及びＬＡＩＲ−２  Ｆｃの還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルである。
【図８】図８Ａは、α−ＬＡＩＲ−１で染色したＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞のＦＡＣＳヒストグラムである。図８Ｂは、ＬＡＩＲ−１  Ｆｃで染色したＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞のＦＡＣＳヒストグラムである。図８Ｃは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで染色したＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞のＦＡＣＳヒストグラムである。図８Ｄは、α−ＬＡＩＲ−１で染色したＫ５６２  Ｃｏｌ１７細胞のＦＡＣＳヒストグラムである。図８Ｅは、ＬＡＩＲ−１  Ｆｃで染色したＫ５６２  Ｃｏｌ１７細胞のＦＡＣＳヒストグラムである。図８Ｆは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで染色したＫ５６２  Ｃｏｌ１７細胞のＦＡＣＳヒストグラムである。図８Ｇは、α−ＬＡＩＲ−１で染色したＴＨＰ−１  ＡＭＬ細胞のＦＡＣＳヒストグラムである。図８Ｈは、ＬＡＩＲ−１  Ｆｃで染色したＫ５６２  Ｃｏｌ１７細胞のＦＡＣＳヒストグラムである。図８Ｉは、ＬＡＩＲ−２Ｆｃで染色したＫ５６２  Ｃｏｌ１７細胞のＦＡＣＳヒストグラムである。
【図９Ａ】図９Ａは、抗ＣＤ３（μｇ／ｍｌ）に対するＮＦ−ｋＢ−ＧＦＰ＋％の線グラフである。ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ（●）、対照Ｆｃ（■）及び培地（▲）。
【図９Ｂ】図９Ｂは、タンパク質（μｇ／ｍｌ）に対するＮＦＡＴ−Ｌｕｃｉａ（ＲＬＵ）の線グラフである。ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ（●）及び対照Ｆｃ（■）。
【図９Ｃ】図９Ｃは、１０μｇ／ｍのタンパク質に対するＩＬ−２（ｐｇ／ｍｌ）の棒グラフであり、左がＬＡＩＲ−２  Ｆｃ、右が対照Ｆｃについてのものである。
【図９Ｄ】図９Ｄは、１０μｇ／ｍのタンパク質に対するＴＮＦ−α（ｐｇ／ｍｌ）の棒グラフであり、左がＬＡＩＲ−２  Ｆｃ、右が対照Ｆｃについてのものである。
【図１０】図１０Ａは、対照Ｆｃ（■）に比べてＬＡＩＲ−２  Ｆｃ（●）が用量依存的にＴＨＰ−１細胞と結合することを示しているＭＦＩ対タンパク質（μｇ／ｍｌ）の線グラフである。図１０Ｂは、棒グラフである。図１０Ｂは、１μｇ／ｍｌのＬＰＳと、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ（各対の右の棒）または対照Ｆｃ（各対の左の棒）とで処理したＴＨＰ−１細胞についてのＩＲＦ（インターフェロン調節因子）誘導−ＲＬＵの棒グラフである。図１０Ｃは、ＲＰＭＩ培地と、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ（各対の右の棒）または対照Ｆｃ（各対の左の棒）とで処理したＴＨＰ−１細胞についてのＩＲＦ誘導−ＲＬＵの棒グラフである。
【図１１】図１１Ａは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ（●）または対照Ｆｃ（▼）で処理したＣＤ４＋  Ｔ細胞についての、ＣＦＳＥ希釈細胞集団によって測定される、ＯＫＴ３（μｇ／ｍｌ）に対するＴ細胞増殖％の線グラフである。図１１Ｂは、ＬＡＩＲ−Ｆｃ（●）または対照Ｆｃ（▼）で処理したＣＤ８＋  細胞についての、ＯＫＴ３（μｇ／ｍｌ）に対するＴ細胞増殖ＣＦＳＥ増殖％の線グラフである。
【図１２−１】図１２Ａは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離されたドナー１７１０  ＣＤ３＋ＣＤ４＋  Ｔ細胞のヒストグラムである。図１２Ｂは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離されたドナー１７１０  ＣＤ３＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞のヒストグラムである。図１２Ｃは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離されたドナー１７１０  ＣＤ３−ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋  ＮＫＣ細胞のヒストグラムである。図１２Ｄは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離されたドナー１７１０  ＣＤ１４＋単球のヒストグラムである。図１２Ｅは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離されたドナー１７１１  ＣＤ３＋ＣＤ４＋  Ｔ細胞のヒストグラムである。図１２Ｆは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離されたドナー１７１１  ＣＤ３＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞のヒストグラムである。図１２Ｇは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離されたドナー１７１１  ＣＤ３−ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋  ＮＫＣ細胞のヒストグラムである。図１２Ｈは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離されたドナー１７１１  ＣＤ１４＋単球のヒストグラムである。図１２Ｉは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離されたドナー１７１２  ＣＤ３＋ＣＤ４＋  Ｔ細胞のヒストグラムである。図１２Ｊは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離されたドナー１７１２  ＣＤ３＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞のヒストグラムである。図１２ＣＫは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離されたドナー１７１２  ＣＤ３−ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋  ＮＫＣ細胞のヒストグラムである。図１２Ｌは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離されたドナー１７１２  ＣＤ１４＋単球のヒストグラムである。
【図１２−２】図１２−１の説明を参照のこと。
【図１３Ａ】生体内でのＯＴ−１  Ｔ細胞増殖のための治療の図である。図１３Ｂは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ（□）または対照Ｆｃ（○）で処理した細胞についての、全ＣＤ８＋  Ｔ細胞についての、ＯＴ−１移植日数に対するＯＴ−１（ドナー）％の線グラフである。
【図１３Ｂ】図１３Ａの説明を参照のこと。
【図１４】図１４Ａは、オボアルブミン（ＯＶＡ）ペプチドなしでＣＤ４５．１脾細胞を負荷されたマウスにおけるＣＦＳＥレベル及び比率の注射前評価を示すフローサイトメトリーヒストグラムである。図１４Ｂは、ＯＶＡペプチド負荷された（ＣＦＳＥ高）ＣＤ４５．１脾細胞を負荷されたマウスにおけるＣＦＳＥレベル及び比率の注射前評価を示すフローサイトメトリーヒストグラムである。図１４Ｃは、ＯＶＡペプチド負荷なし（ＣＦＳＥ低）及びＯＶＡペプチド負荷あり（ＣＦＳＥ高）のＣＤ４５．１脾細胞を負荷されたマウスにおけるＣＦＳＥレベル及び比率の注射前評価を示すフローサイトメトリーヒストグラムである。図１４Ｄは、脾細胞移入から４８時間後のサイトメトリーヒストグラムであり、ナイーブ対照（ＯＴ−１なし）を使用して脾臓の標識細胞を評価したものである（ＣＤ４５．１＋細胞によって篩に掛けた）（宿主細胞はＣＤ４５．２）。図１４Ｅは、脾細胞移入から４８時間後のサイトメトリーヒストグラムであり、ＯＴ−１対照Ｆｃで処理された脾臓の標識細胞を評価したものである（ＣＤ４５．１＋細胞によって篩に掛けた）（宿主細胞はＣＤ４５．２）。図１４Ｆは、脾細胞移入から４８時間後のサイトメトリーヒストグラムであり、ＯＴ−１  ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理された脾臓の標識細胞を評価したものである（ＣＤ４５．１＋細胞によって篩に掛けた）（宿主細胞はＣＤ４５．２）。図１４Ｇは、Ｆｃで処置したマウス（左の棒）及びＬＡＩＲ−２  Ｆｃ（右の棒）で処置したマウスについて特異的溶解％＝［１−（非ＯＴ−Ｉ対照比率）／実測比率］×１００として算出した特異的溶解％の棒グラフである。
【図１５Ａ】図１５Ａは、０日目に５ｅ６ＩＤ８−ＯＶＡ腫瘍細胞を腹腔内注射（ｉｐ）された処置モデルの図である。ＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞は腫瘍から３週間後にｉｐ注射した。合計５回の投薬として、Ｔ細胞移入の１日後から開始して４日ごとに２００ｕｇのＬＡＩＲ−２  Ｆｃまたは対照Ｆｃで処置した。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、ＩＤ８．ＯＶＡ接種後日数に対する体重増加率（腫瘍負荷）の線グラフである。対照（○）、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ（●）。
【図１５Ｃ】図１５Ｃは、ＩＤ８．ＯＶＡ接種後日数に対する生存パーセントの線グラフである。対照（破線）、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ（実線）。
【図１６】ＩＤ８−ＯＶＡ腫瘍が注射され、合計５回の投薬としてＴ細胞移入の１日後から開始して４日ごとに２００ｕｇのＬＡＩＲ−２  Ｆｃもしくは対照Ｆｃで処置されたかまたは示されている処置がなされたマウスの、ＩＤ８．ＯＶＡ接種後日数に対する生存の線グラフである。データは、抗ＰＤ−１を伴ったＬＡＩＲ−２  Ｆｃが卵巣癌において効果的な併用免疫療法であることを示す。（□）シスプラチン、（△）シスプラチン＋ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ、（○）抗ＰＤ−１＋ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ、（▽）抗ＰＤ−１、（◇）ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ、（六角形）対照ＩｇＧ。
【図１７Ａ】図１７Ａは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃによるリンパ腫処置計画例の図である。
【図１７Ｂ】図１７Ｂは、対照Ｆｃ（○）またはＬＡＩＲ−２  Ｆｃ（□）で処置したマウスの腫瘍接種後日数に対する腫瘍体積対の線グラフである。
【図１７Ｃ】図１７Ｃは、対照Ｆｃ（破線）またはＬＡＩＲ−２  Ｆｃ（実線）で処置したマウスの腫瘍接種後日数に対する生存パーセントの線グラフである。
【図１８】各群の左から右に向かって以下の細胞株に対する、示されている（モノクローナル抗体）ｍＡｂの結合の、陽性パーセントの棒グラフである：ＨＬ−６０（ＬＡＩＲ−１＋）、ＭＶ−４−１１（ＬＡＩＲ−１＋）、トランスフェクトしたＫ５６２−ＬＡＩＲ−１、及びＵ２６６Ｂ１（陰性対照）。
【図１９】示されているｍＡｂについての吸光度（４５０ｎｍ）の棒グラフであり、コラーゲンＩ及びＩＩＩへのＬＡＩＲ−１  Ｆｃの結合の遮断または増強を示す。各ｍＡｂについて、コラーゲンＩは左の棒、コラーゲンＩＩＩは右の棒である。
【図２０】Ｃ１ｑ及びＳＰ−Ｄへの結合についての、示されているｍＡｂの吸光度（４５０ｎｍ）の棒グラフである。各組の左の棒はＣ１ｑであり右の棒はＳＰ−Ｄである。
【図２１】ＬＡＩＲ−１キメラｍＡｂエピトープ結合アッセイの結果を示す表である。一重下線を引いた抗体は非遮断を示す。二重下線を引いた抗体は遮断を示す。第１及び第２ｍＡｂとして同じｍＡｂを使用する場合（下線なし、斑点模様の背景）に観測され得るように、同じエピトープと結合するｍＡｂは結合飽和のためにＬＡＩＲ−１  Ｆｃとの結合が遮断されるであろう。
【図２２】ＬＡＩＲ−１キメラｍＡｂビニングマップの図である。このマップは、ｍＡｂの顕著な重複があると同時に多くがＬＡＩＲ−１分子上の別個の部位を占めていることを示す。
【図２３】Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ９６機器（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用して実施した、示されているＬＡＩＲ−１  ｍＡｂについての最適化親和性評価を示す表である。
【図２４Ａ】図２４Ａは、示されているＬＡＩＲ−１  ｍＡｂについてのＩＲＦ誘導−ＲＬＵの棒グラフであり、プレートにｍＡｂを塗布する場合のＴＨＰ−１細胞におけるインターフェロンレポーター活性の示差的誘起を示す。
【図２４Ｂ】図２４Ｂは、示されているＬＡＩＲ−１  ｍＡｂについてのＩＲＦ誘導−ＲＬＵの棒グラフであり、ｍＡｂを可溶性タンパク質として添加する場合のＴＨＰ−１細胞におけるインターフェロンレポーター活性の示差的誘起を示す。
【図２５Ａ】図２５Ａは、示されているｍＡｂについてのＮＦＡＴ誘導−ＲＬＵの棒グラフであり、プレートに０．５μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）を塗布する場合のＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞レポーター活性の誘起を示す。ＯＫＴ３を吸引した後、１０ｕｇ／ｍｌのＬＡＩＲ−１  ｍＡｂまたはＬＡＩＲ−２  Ｆｃ及び対照Ｆｃを塗布して２４時間置いた。Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞ＮＦＡＴ−Ｌｕｃｉａ経路レポーター細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を添加する前に、未結合タンパク質を吸引した。Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞を５０，０００細胞／ウェルで総体積２００ｕｌとして播種した。４８時間目に１０ｕｌの上清を取り出して別のプレートに移した。Ｑｕａｎｔｉ−Ｌｕｃ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）をプロトコールに従って添加した。Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用して発光を評価した。
【図２５Ｂ】図２５Ｂは、示されているｍＡｂについてのＮＦＡＴ誘導−ＲＬＵの棒グラフであり、ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂ、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ及び対照Ｆｃを可溶形態で添加する場合の、図２５Ａと同様のＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞レポーター活性の誘起を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
発明の詳細な説明
Ｉ．定義
本明細書中で使用する場合、分子が第２分子と「免疫特異的に結合する」ことができると言われるのは、そのような結合が抗体のその同族抗原に対する特異性及び親和性を呈する場合である。抗体が抗原の標的領域または配座（「エピトープ」）に免疫特異的に結合することができると言われるのは、そのような結合に免疫グロブリン分子の抗原認識部位が関与する場合である。特定の抗原に免疫特異的に結合する抗体は、他抗原が例えばイムノアッセイ、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイまたは当技術分野で知られている他のアッセイで決定したときに抗原認識部位によって認識される配列または配座の類似性を有している場合には低い親和性で当該他抗原と結合することがあるが、全く無関係な抗原には結合しないものである。但し、いくつかの実施形態では、抗体（及びその抗原結合断片）は他抗原と交差反応しないものである。抗体は、ＦｃＲ受容体のような他分子に対して、抗原認識部位が関与しない当該分子の他領域／ドメインの結合ドメイン、例えばＦｃ領域による非免疫特異的な結合をする場合もある。
【００４３】
本明細書中で使用する場合、分子が第２分子と「生理特異的に結合する」と言われるのは、そのような結合が受容体のその同族結合リガンドに対する特異性及び親和性を呈する場合である。分子は、１つより多い他分子と生理特異的に結合することができることがある。
【００４４】
本明細書中で使用する場合、「抗体」という用語は、「可変領域」抗原認識部位をもつ免疫グロブリン分子を表すことを意図する。「可変領域」という用語は、免疫グロブリンのそのようなドメインを、広く抗体に共通するドメイン（例えば抗体Ｆｃドメイン）と区別することを意図する。可変領域は、残基が抗原結合を担っている「超可変領域」を含む。超可変領域は、「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（すなわち、典型的には軽鎖可変ドメインのおよそ２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）及び８９〜９７（Ｌ３）の残基ならびに重鎖可変ドメインのおよそ２７〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）及び９５〜１０２（Ｈ３）の残基、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））、及び／または「超可変ループ」からの残基（すなわち、軽鎖可変ドメインの２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）及び９１〜９６（Ｌ３）の残基ならびに重鎖可変ドメインの２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）及び９６〜１０１（Ｈ３）の残基、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）を含む。「フレームワーク領域」すなわち「ＦＲ」残基は、本明細書において定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。抗体という用語は、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、合成抗体、キメラ抗体、ラクダ化抗体（例えば、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２６：２３０、Ｎｕｔｔａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｃｕｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１：２５３、Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，１９９９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２３１：２５、国際公開第ＷＯ９４／０４６７８号及び第ＷＯ９４／２５５９１号、米国特許第６，００５，０７９号を参照のこと）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照のこと）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、イントラボディ、及び抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗体に対する抗Ｉｄ抗体及び抗抗Ｉｄ抗体）を含む。特に、そのような抗体は任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）またはサブクラスの免疫グロブリン分子を含む。
【００４５】
本明細書中で使用する場合、抗体の「抗原結合断片」という用語は、抗体の「可変領域」抗原認識部位を含む抗体の相補性決定領域（「ＣＤＲ」）及び場合によってはフレームワーク残基を含有し、抗原に免疫特異的と結合する能力を呈する、抗体の１つ以上の部分を指す。そのような断片としては、例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖（ＳｃＦｖ）及びそれらの突然変異体、天然に存在する変異型、ならびに抗体の「可変領域」抗原認識部位と異種タンパク質（例えば、毒素、異なる抗原に対する抗原認識部位、酵素、受容体または受容体リガンドなど）とを含む融合タンパク質が挙げられる。
【００４６】
本明細書中で使用する場合、「断片」という用語は、少なくとも５連続アミノ酸残基、少なくとも１０連続アミノ酸残基、少なくとも１５連続アミノ酸残基、少なくとも２０連続アミノ酸残基、少なくとも２５連続アミノ酸残基、少なくとも４０連続アミノ酸残基、少なくとも５０連続アミノ酸残基、少なくとも６０連続アミノ残基、少なくとも７０連続アミノ酸残基、少なくとも８０連続アミノ酸残基、少なくとも９０連続アミノ酸残基、少なくとも１００連続アミノ酸残基、少なくとも１２５連続アミノ酸残基、少なくとも１５０連続アミノ酸残基、少なくとも１７５連続アミノ酸残基、少なくとも２００連続アミノ酸残基または少なくとも２５０連続アミノ酸残基のアミノ酸配列を含むペプチドまたはポリペプチドを指す。
【００４７】
本明細書中で使用する場合、「調節」という用語は、効果、結果または活性（例えばシグナル伝達）を変化させる能力に関する。そのような調節は、作動的または拮抗的であり得る。拮抗的調節は、部分的である（つまり、減衰させるが消滅させない）場合もあるし、またはそのような活性を完全に消滅させる（例えば中和する）場合もある。調節は、抗体の結合に続く受容体の内在化、または標的細胞上の受容体の発現の低減を含み得る。作動的調節は、活性（例えばシグナル伝達）を強化し得るかあるいは増大させるかまたは強化し得る。さらなる実施形態では、そのような調節は、導き出されるシグナル伝達の性質を変化させるようにリガンドとその同族受容体との相互作用の性質を変化させ得る。例えば、分子は、リガンドまたは受容体に結合することによって、他のリガンドまたは受容体に結合するそのような分子の能力を変化させることができ、それによってそれらの全体的活性を変化させることができる。いくつかの実施形態では、そのような調節は、測定可能な免疫系活性の少なくとも１０％の変化、そのような活性の少なくとも５０％の変化、またはそのような活性の少なくとも２倍、５倍、１０倍または少なくとも１００倍の変化をもたらすであろう。
【００４８】
「実質的に」という用語は、結合性または発揮される効果に関して使用される場合、観測される効果が生理学的または治療的に妥当であることを表すことを意図する。したがって例えば、分子がリガンドまたは受容体の活性を実質的に遮断することができるというのは、遮断の程度が生理学的または治療的に妥当である場合（例えば、そのような程度が６０％超完全、７０％超完全、７５％超完全、８０％超完全、８５％超完全、９０％超完全、９５％超完全、または９７％超完全である場合）である。同様に、分子が別の分子と実質的に同じ免疫特異性及び／または特質を有すると言われるのは、そのような免疫特異性及び特質が６０％超同一、７０％超同一、７５％超同一、８０％超同一、８５％超同一、９０％超同一、９５％超同一、または９７％超同一である場合である。
【００４９】
本明細書中で使用する場合、「共刺激」シグナルは、正の共刺激シグナル（例えば、活性の強化をもたらすシグナル）及び負の共刺激シグナル（例えば、活性の抑制をもたらすシグナル）を包含する。
【００５０】
「誘導体」という用語は、親または基準抗体の標的と同じ標的に免疫特異的に結合するが、親もしくは基準抗体またはその抗原結合断片に比べて１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれより多くのアミノ酸置換、付加、欠失または修飾を含む点で親もしくは基準抗体またはその抗原結合断片とはアミノ酸配列が異なる、抗体またはその抗原結合断片を指す。いくつかの実施形態では、そのような誘導体は、親もしくは基準抗体またはその抗原結合断片と実質的に同じ免疫特異性及び／もしくは特質、または同じ免疫特異性及び特質を有するであろう。そのような誘導体のアミノ酸置換または付加は、天然に存在する（つまりＤＮＡによってコードされる）かまたは天然に存在しないアミノ酸残基を含み得る。「誘導体」という用語は、例えば、キメラまたはヒト化変異型、及び強化または弱化されたエフェクターまたは結合特質を呈する変異型Ｆｃ領域を有する例えば抗体などを形成すべく改変されたＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３またはＣＨ４領域を有する変異型を包含する。
【００５１】
本明細書中で使用する場合、「キメラ抗体」は、当該抗体の別個の部分が別個の免疫グロブリン分子に由来している分子、例えば、非ヒト抗体由来の可変領域とヒト免疫グロブリン定常領域とを有する抗体である。
【００５２】
本明細書中で使用する場合、「ヒト化抗体」という用語は、ヒトフレームワーク領域と非ヒト（大抵、マウスまたはラット）免疫グロブリンからの１つ以上のＣＤＲとを含む免疫グロブリンを指す。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンを「ドナー」と呼び、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンを「アクセプター」と呼ぶ。定常領域は存在する必要はないが、存在する場合にはヒト免疫グロブリン定常領域と実質的に同一、つまり少なくとも約８５〜９９％または約９５％またはそれを上回って同一でなければならない。したがって、おそらくＣＤＲを除けば、ヒト化免疫グロブリンの全ての部分は、天然ヒト免疫グロブリン配列の対応する部分と実質的に同一である。ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖及びヒト化重鎖免疫グロブリンを含む抗体である。例えば、ヒト化抗体は、典型的なキメラ抗体を包含しないものであり、それは例えばキメラ抗体の可変領域全体が非ヒトであるからである。
【００５３】
「内因性濃度」という用語は、細胞（この細胞は正常細胞、がん細胞または感染細胞であり得る）によって分子が天然に（つまり、発現ベクターまたは組換えプロモーターの非存在下で）発現するレベルを指す。
【００５４】
本明細書中で使用する場合、「治療する」、「治療すること」、「治療」及び「治療用途」という用語は、疾患または障害のうちの１つ以上の症候の排除、軽減または改善を指す。本明細書中で使用する場合、「治療的有効量」は、そのような症候の臨床的に意義のある排除、軽減または改善を媒介するのに十分な、治療剤の量を指す。効果が臨床的に意義があるのは、その大きさが、レシピエント対象の健康または予後に影響を及ぼすのに十分である場合である。治療的有効量は、疾患の発症を遅らせるかまたは最小限に抑えること、例えばがんの拡大を遅らせるかまたは最小限に抑えることのために十分な、治療剤の量を指し得る。治療的有効量はまた、疾患の治療または管理において治療的利益を提供する治療剤の量も指し得る。
【００５５】
本明細書中で使用する場合、「予防剤」という用語は、障害または疾患のいかなる症候の検出にも先立ってそのような障害または疾患の防止に使用することができる薬剤を指す。「予防的有効」量は、そのような防護を媒介するのに十分な予防剤の量である。予防的有効量はまた、疾患の防止において予防的利益を提供する予防剤の量も指し得る。
【００５６】
本明細書中で使用する場合、「がん」という用語は、細胞の制御されない異常な成長の結果として生じる新生物または腫瘍を指す。本明細書中で使用する場合、がんは、白血病及びリンパ腫を明示的に含む。「がん」という用語は、遠位部位に転移する潜在能を有する、非がん細胞とは異なる表現型形質、例えば軟寒天などの三次元基質中でのコロニー形成または三次元基底膜中もしくは細胞外マトリックス製剤中での管状ネットワークもしくはウェブ様マトリックスの形成を呈する細胞が関与する疾患を指す。非がん細胞は軟寒天中でコロニーを形成せず、三次元基底膜中または細胞外マトリックス製剤中で別個な球様構造体を形成する。
【００５７】
本明細書中で使用する場合、「免疫細胞」は、限定されないがＴ細胞、Ｂ細胞、単球、樹状細胞及びマクロファージを含めた、血液由来の任意の細胞を指す。
【００５８】
本明細書中で使用する場合、「炎症性分子」は、限定されないがサイトカイン及びメタロプロテアーゼ、例えば、限定されないが、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−ベータ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１７、ＩＬ−６、ＩＬ−２３、ＩＬ−２２、ＩＬ−２１及びＭＭＰを含めた、炎症応答を生じさせる分子を指す。
【００５９】
本明細書中で使用する場合、「価数」は、１分子あたりの利用可能な結合部位の数を指す。
【００６０】
本明細書中で使用する場合、「免疫学的（ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ）」、「免疫学的（ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ）」または「免疫」応答という用語は、レシピエント患者のペプチドを指向する有益な体液性（抗体媒介性）及び／または（抗原特異的Ｔ細胞またはその分泌産物によって媒介される）細胞性の応答の発達のことである。そのような応答は、免疫原の投与によって誘発される能動的応答、または抗体もしくは初回刺激を受けたＴ細胞の投与によって誘発される受動的応答であり得る。細胞性免疫応答は、クラスＩまたはクラスＩＩのＭＨＣ分子と会合したポリペプチドエピトープの提示によって導き出され、抗原特異的なＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞及び／またはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞を活性化させる。当該応答には、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、好塩基球、樹状細胞、星状膠細胞、ミクログリア細胞、好酸球の活性化、好中球または自然免疫の他の成分の活性化または動員も関与し得る。細胞媒介性免疫学的応答の存在は、増殖アッセイ（ＣＤ４＋Ｔ細胞）またはＣＴＬ（細胞傷害性Ｔリンパ球）アッセイによって判定することができる。免疫原の保護的または治療的効能への体液性応答と細胞性応答との相対的寄与は、免疫化された同系動物からの抗体とＴ細胞とを別々に単離して第２の対象における保護的または治療的効能を測定することによって、判別することができる。
【００６１】
「免疫原性物質」または「免疫原」は、哺乳類に対して場合によってアジュバントと併せて投与されると、それ自体に対する免疫学的応答を誘発することができる。
【００６２】
本明細書中で使用する場合、「個体」、「宿主」、「対象」及び「患者」という用語は、本明細書中では交換可能に使用され、限定されないがヒト、齧歯動物、例えばマウス及びラット、ならびに他の実験動物を含めた哺乳動物を指す。
【００６３】
本明細書中で使用する場合、「ポリペプチド」という用語は、修飾（例えばリン酸化またはグリコシル化）にかかわらず、任意の長さのアミノ酸の鎖を指す。ポリペプチドという用語はタンパク質及びその断片を含む。ポリペプチドは、それが「異種」のものである、つまり、利用されている宿主細胞にとって外来のもの、例えば細菌細胞によって産生されたヒトポリペプチドであるという意味で、「外因性」であり得る。ポリペプチドは、本明細書においてアミノ酸残基配列として開示される。それらの配列は、アミノ末端からカルボキシ末端へ向かって左から右に記される。標準的な命名法に従ってアミノ酸残基配列は、以下に示すような３文字か１文字かのどちらかのコードで命名される：アラニン（Ａｌａ、Ａ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ、Ｐ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、スレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）、トリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）及びバリン（Ｖａｌ、Ｖ）。
【００６４】
本明細書中で使用する場合、「変異型」という用語は、基準ポリペプチドまたはポリヌクレオチドとは異なるが本質的特性は保持しているポリペプチドまたはポリヌクレオチドを指す。ポリペプチドの典型的な変異型は、アミノ酸配列が別の基準ポリペプチドとは異なっている。差異は一般に、基準ポリペプチドと変異型とで配列が全体的に類似し多くの領域で同一となるように限られる。変異型と基準ポリペプチドとはアミノ酸配列が１つ以上の改変（例えば、置換、付加及び／または欠失）によって異なり得る。置換または挿入されたアミノ酸残基は、遺伝コードによってコードされている場合もあるし、コードされていない場合もある。ポリペプチドの変異型は、対立遺伝子変異型などの天然に存在するものである場合もあるし、または天然に存在することが知られていない変異型である場合もある。
【００６５】
本開示のポリペプチドの構造に改変及び変化をもたらすことができ、なおも当該ポリペプチドと類似した特質を有する分子を得ることができる（例えば、保存的アミノ酸置換）。例えば、明らかな活性喪失を伴わずに配列中の特定のアミノ酸を他のアミノ酸で置換することができる。ポリペプチドの生物学的機能活性を規定しているのはそのポリペプチドの相互作用する能力及び性質であるため、ポリペプチド配列にある特定アミノ酸配列置換を作りつつ、なおも同様の特性を有するポリペプチドを得ることができる。
【００６６】
そのような変化を生じさせる際にはアミノ酸の疎水性指標が考慮され得る。ポリペプチドに相互作用の生物学的機能を付与する上での疎水性アミノ酸指標の重要性については当技術分野で一般に理解されている。ある特定のアミノ酸を類似した疎水性指標またはスコアを有する他のアミノ酸で置換して、なおも類似した生物学的活性を有するポリペプチドを得ることができることは既知である。各アミノ酸にはその疎水性及び電荷特質に基づいて疎水性指標が割り当てられている。それらの指標は、イソロイシン（＋４．５）、バリン（＋４．２）、ロイシン（＋３．８）、フェニルアラニン（＋２．８）、システイン／シスチン（＋２．５）、メチオニン（＋１．９）、アラニン（＋１．８）、グリシン（−０．４）、スレオニン（−０．７）、セリン（−０．８）、トリプトファン（−０．９）、チロシン（−１．３）、プロリン（−１．６）、ヒスチジン（−３．２）、グルタミン酸塩（−３．５）、グルタミン（−３．５）、アスパラギン酸塩（−３．５）、アスパラギン（−３．５）、リジン（−３．９）及びアルギニン（−４．５）である。
【００６７】
アミノ酸の相対的疎水特質は、得られるポリペプチドの二次構造を決定付けると考えられ、代わってそれは、ポリペプチドと、酵素、基質、受容体、抗体、抗原及び補因子などの他分子との相互作用を規定する。アミノ酸を、類似した疎水性指標を有するアミノ酸で置換して、なおも機能的に等価なポリペプチドを得ることができることは当技術分野において既知である。そのような変化では、疎水性指標が±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内にあるそれは特に好ましく、±０．５以内にあるものがよりいっそう特に好ましい。
【００６８】
類似したアミノ酸の置換は、とりわけそれによって作り出される生物学的機能的等価ポリペプチドまたはペプチドが免疫学的実施形態で使用するためのものである場合には、親水性に基づいてなされることもできる。アミノ酸残基に以下の親水性値が割り当てられている：アルギニン（＋３．０）、リジン（＋３．０）、アスパラギン酸塩（＋３．０±１）、グルタミン酸塩（＋０．３±１）、セリン（＋０．３）、アスパラギン（＋０．２）、グルタミン（＋０．２）、グリシン（０）、プロリン（−０．５±１）、スレオニン（−０．４）、アラニン（−０．５）、ヒスチジン（−０．５）、システイン（−１．０）、メチオニン（−１．３）、バリン（−１．５）、ロイシン（−１．８）、イソロイシン（−１．８）、チロシン（−２．３）、フェニルアラニン（−２．５）、トリプトファン（−３．４）。アミノ酸を、類似した親水性値を有する別のもので置換して、なおも生物学的に等価な、特に免疫学的に等価なポリペプチドを得ることができることは理解される。そのような変化では、親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内にあるそれは特に好ましく、±０．５以内にあるものがよりいっそう特に好ましい。
【００６９】
上に概説したように、アミノ酸置換は通常、アミノ酸側鎖置換基の相対的類似性、例えばそれらの疎水性、親水性、電荷、大きさなどに基づく。様々な上記特質を考慮に入れた例示的な置換は、当業者によく知られており、（元の残基：例示的な置換）：（Ａｌａ：Ｇｌｙ、Ｓｅｒ）、（Ａｒｇ：Ｌｙｓ）、（Ａｓｎ：Ｇｌｎ、Ｈｉｓ）、（Ａｓｐ：Ｇｌｕ、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ）、（Ｇｌｎ：Ａｓｎ）、（Ｇｌｕ：Ａｓｐ）、（Ｇｌｙ：Ａｌａ）、（Ｈｉｓ：Ａｓｎ、Ｇｌｎ）、（Ｉｌｅ：Ｌｅｕ、Ｖａｌ）、（Ｌｅｕ：Ｉｌｅ、Ｖａｌ）、（Ｌｙｓ：Ａｒｇ）、（Ｍｅｔ：Ｌｅｕ、Ｔｙｒ）、（Ｓｅｒ：Ｔｈｒ）、（Ｔｈｒ：Ｓｅｒ）、（Ｔｉｐ：Ｔｙｒ）、（Ｔｙｒ：Ｔｒｐ、Ｐｈｅ）及び（Ｖａｌ：Ｉｌｅ、Ｌｅｕ）を含む。したがって、本開示の実施形態において、上に示したようなポリペプチドの機能的または生物学的均等物は想定内である。詳しくは、ポリペプチドの実施形態は、関心対象のポリペプチドとの配列同一性が約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを上回る変異型を含み得る。
【００７０】
「配列同一性パーセント（％）」という用語は、必要に応じてギャップを導入しつつ配列同士のアラインメントを行って最大の配列同一性パーセントが得られた後での、基準核酸配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸と同一である候補配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸の百分率として定義される。配列同一性パーセントを決定することを目的とするアラインメントは、当技術分野の技量範囲内の様々な方法で、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ−２またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して成し遂げることができる。アラインメントを測定するのに適するパラメータは、比較される配列の全長にわたって最大限のアラインメントを実現するのに必要とされる任意のアルゴリズムを含めて、既知の方法によって決定され得る。
【００７１】
本明細書における目的において、所与の核酸配列Ｄに対する、またはそれとの、またはそれと比べた、所与のヌクレオチドまたはアミノ酸配列Ｃの配列同一性％（あるいはこれを、所与の配列Ｄに対する、またはそれとの、またはそれと比較して特定の配列同一性％を有するまたは含む所与の配列Ｃとして表現することができる）は以下のとおりに算出される：
分数Ｗ／Ｚを１００で乗じる
（ここで、Ｗは、配列アラインメントプログラムによってそのプログラムのＣとＤとのアラインメントにおいて同一の一致として評価されるヌクレオチドまたはアミノ酸の数であり、Ｚは、Ｄのヌクレオチドまたはアミノ酸の総数である）。配列Ｃの長さが配列Ｄの長さと同一でない場合には、Ｄに対するＣの配列同一性％がＣに対するＤの配列同一性％と等しくならないであろうことは理解されよう。
【００７２】
本明細書中で使用する場合、「薬学的に許容できる担体」という用語は、任意の標準的医薬担体、例えば、リン酸緩衝生理食塩水、水及びエマルジョン、例えば水中油または油中水エマルジョン、ならびに様々な種類の湿潤剤を包含する。
【００７３】
ＩＩ．組成物
ＬＡＩＲタンパク質を介したシグナル伝達を調節するのに有用なＬＡＩＲ結合部分を提供する。図４は、免疫機能及び恒常性のＬＡＩＲ調節を示す。図５は、ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂ及びＬＡＩＲ−２  Ｆｃが治療薬としてどのように使用され得るかを示す。
【００７４】
Ａ．ＬＡＩＲポリペプチド
ＬＡＩＲ−１及びＬＡＩＲ−２ポリペプチドを開示する。当該ポリペプチドは、完全長のＬＡＩＲ−１もしくはＬＡＩＲ−２タンパク質、またはその断片もしくは変異型、またはその融合タンパク質の、アミノ酸配列を含み得る。
【００７５】
ＬＡＩＲ−１は、多くの免疫細胞上に発現し、細胞質側にある２つの免疫受容体チロシン依存性抑制モチーフ（ＩＴＩＭ）を介して抑制性シグナル伝達を起こさせる、抑制性細胞表面受容体である（Ｖｅｒｂｒｕｇｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）（図４）。マウスではないがヒト及び非ヒト霊長類のゲノムは、ＬＡＩＲ−１の可溶性相同体であるＬＡＩＲ−２遺伝子をコードする（Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＬＡＩＲ−２は、膜貫通ドメイン及び細胞質側ドメインを欠くが、ＬＡＩＲ−１と同じリガンドと結合し、それゆえ、ＬＡＩＲ−１を介した抑制シグナルを減少させるデコイとして機能し得る（Ｍｅｙａａｒｄ，２００８）。ＬＡＩＲ−１及びＬＡＩＲ−２は、線維性コラーゲンＩ及びＩＩＩならびに膜貫通型コラーゲン１３、１７及び２３を含めた多様なコラーゲンと相互作用するが、カノニカルＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐヒドロキシプロリン反復配列の認識ゆえに他のコラーゲンとも様々な程度で結合し得る（Ｍｅｙａａｒｄ，２００８）。ＬＡＩＲ−１及びＬＡＩＲ−２は、補体成分Ｃ１ｑ、サーファクタントプロテインＤ（ＳＰ−Ｄ）及びマンノース結合型レクチン（ＭＢＬ）にも結合する。これらの分子と白血球原形質膜上のＬＡＩＲ−１との架橋は、免疫細胞の成熟、増殖及び脱顆粒を抑制する負のシグナル伝達を誘導する（Ｌｅｂｂｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）、Ｍｅｙａａｒｄ．，（２００８））。
【００７６】
ＬＡＩＲ−１による抑制性シグナル伝達は、紅斑性狼瘡、関節リウマチ、自己免疫性甲状腺疾患及びアテローム性動脈硬化症などの自己免疫疾患、ならびに接触過敏症を防止し得る（Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。一方、ＬＡＩＲ−２の過剰発現はＬＡＩＲ−１リガンドのデコイ結合によって自己免疫性を促進し得る。ＬＡＩＲ−２のＬＡＩＲ−１リガンドとの結合は、ＬＡＩＲ−１の細胞表面架橋を本質的に減少させることができ、過剰反応性の免疫機能を招く抑制性シグナル伝達経路に限界を設けることができる。反対に、ＬＡＩＲ−２のレベルの上昇は同じ機序によって抗腫瘍免疫性を促進することができるという仮説が立てられた。
【００７７】
慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞上でのＬＡＩＲ−１発現の減少は疾患の増悪と関連付いている（Ｐｏｇｇｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００８、Ｐｅｒｂｅｌｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。反対に、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）での増加したＬＡＩＲ−１発現は、幹細胞様状態を維持して分化及びアポトーシスを防止することによってＡＭＬ生存を促進することが研究によって示唆されている（Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。この見解を支持して他の研究も、ＡＭＬ及び急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）のがんでＬＡＩＲ−１が増加したことを示した（Ｍｉｒｋｏｗｓｋａ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２０１３、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，２０１５、Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ｒｅｖｉｅｗ  ｉｎ  ｌｉｆｅ．ｓｃｉｅｃｈｉｎａ．ｃｏｍ，２０１５）。ＬＡＩＲ−１はまた、上皮卵巣癌細胞上及び他のヒト腫瘍上に発現することも示されているが、固形腫瘍上に発現したＬＡＩＲ−１の機能は不明なままである（Ｍｅｙａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７、Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【００７８】
腫瘍微小環境は、コラーゲンを含めた細胞外マトリックスタンパク質（ＥＣＭ）に富むことが多い（Ｒｙｇｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。それゆえ、腫瘍微小環境に局在するＬＡＩＲ−１発現細胞は、Ｌａｉｒ−１のコラーゲン架橋結合及びその後の抑制性シグナル伝達によって著しく抑制され得る。興味深いことに、コラーゲン及びＣ１ｑはどちらも、ＬＡＩＲ−１を介する抗原提示細胞（単球／マクロファージ／ＤＣ）の分化及び活性化を制限する、または変化させることが示された。研究は、ＮＫ細胞、そのＴ細胞において架橋しているＬａｉｒ−１が増殖及び機能を抑制し得ることを示した。しかしながら、抗腫瘍免疫性の調節におけるＬＡＩＲ−１の役割についてはさらなる研究が必要とされる。
【００７９】
総合すると、ＬＡＩＲ−１に関して蓄積されたデータは、免疫調節における重要な役割を示唆している。しかしながら、マウス及びヒト細胞上での示差的ＬＡＩＲ−１発現、及びＬＡＩＲ−２がヒトには存在するがマウスには存在しないことは、マウス研究がヒトにおけるＬＡＩＲ−１／ＬＡＩＲ−２の機能を示していない可能性があることを暗示した。一方で、ヒト系は、ＬＡＩＲ−２の存在ゆえにより簡単に治療的に採用され得るという仮説が立てられる。換言すれば、ヒトにおけるＬＡＩＲ−１機能を調節するためにＬＡＩＲ−２を治療的に利用することができ、これはマウス系においては可能でない。したがって、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃデコイタンパク質または遮断（アンタゴニスト）ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂは、細胞表面ＬＡＩＲ−１を介したシグナル伝達を防止することによって免疫機能を強化するがん免疫療法に有効であり得る（図５）。反対に、作動性ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂ、またはｍＡｂによるＬＡＩＲ−２の遮断は、ＬＡＩＲ−１を介したシグナル伝達を本質的に増加させてそれゆえに免疫応答を下方制御するであろうことから、自己免疫疾患の治療のために利用することができるであろう。
【００８０】
１．ＬＡＩＲ−１
ＬＡＩＲ−１の配列を提供する。いくつかの実施形態では、先頭のメチオニンアミノ酸はタンパク質の翻訳後形態において切断されている。
【００８１】
ａ．ヒトＬＡＩＲ−１
ヒトＬＡＩＲ−１の配列は当技術分野において既知である。例えば、ＬＡＩＲ−１ａ（アイソフォーム１）のコンセンサス配列は、
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（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ６ＧＴＸ８（ＬＡＩＲ１＿ＨＵＭＡＮ））であり、ここで、アミノ酸１〜２１はシグナル配列であり、アミノ酸２２〜１６５（下線部）は細胞外ドメインであり、アミノ酸１６６〜１８６は膜貫通ドメインであり、アミノ酸１８７〜２８７は細胞質側ドメインである。アミノ酸２９〜１１７はＩｇ様Ｃ２ドメインを形成する。アミノ酸２４９〜２５４及び２７９〜２８４はそれぞれＩＴＩＭモチーフ１及び２を形成する。ＬＡＩＲ−１ｂ（アイソフォーム２としても知られる）は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に比べてアミノ酸１２２〜１３８が欠けている。ＬＡＩＲ−１ｃ（アイソフォーム３としても知られる）は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に比べてアミノ酸２３〜２３及び１２２〜１３８が欠けている。ＬＡＩＲ−１ｄ（アイソフォーム４としても知られる）は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に比べてアミノ酸２１０〜２８７が欠けている。
【００８２】
上に提示したように、ヒトＬＡＩＲ−１の細胞外ドメインは、
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（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）またはその断片、例えばＩｇ様Ｃ２ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の下線部のアミノ酸８〜９６）、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸４９〜１０１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸２８〜８０、斜字体で示されている）の間にジスルフィド結合を形成するシステインによって形作られる領域であり得る。
【００８３】
ＬＡＩＲ−１の既知の変異型及び突然変異体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に比べてＥ６３Ｄ、Ｙ２５１Ｆ及びＹ２５１Ｆを含む。Ｙ２１５Ｆがチロシンリン酸化を減少させたこと、ならびにＰＴＰＮ６及びＣＳＫへの結合性の喪失、ならびに抑制活性の完全な喪失、ならびにＦ−２８１が関係する場合におけるリン酸化及びカルシウム動員抑制の消失を示す証拠がある（Ｘｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１７４４０−１７４４６（２０００）、Ｖｅｒｂｒｕｇｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５：１３４９−１３５８（２００３）、Ｖｅｒｂｒｕｇｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３６：１９０−１９８（２００６））。Ｙ２８１Ｆは、減少したチロシンリン酸化、及びＰＴＰＮ６に対する結合性の喪失、及び細胞傷害活性の部分的抑制を示す。
【００８４】
Ｍｅｙａａｒｄ，２００８，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．８３：７９９−８０３は、ＬＡＩＲ−１がヒト免疫細胞上に広く発現することを示唆している。研究論文の実際のフローサイトメトリー発現データを調べると、ＬＡＩＲ−１がＴ細胞及びＮＫ細胞よりも単球、マクロファージ及び樹状細胞などの骨髄系統細胞においてよりはるかに多く発現することを示している（Ｍｅｙａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ７：２８３−２９０）。しかしながら、Ｂ細胞は分化中に高レベルのＬＡＩＲ−１を差次的に発現する（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｖｕｕｒｓｔ  ｄｅ  Ｖｒｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：３１６０−３１６７）。また、ＬＡＩＲ−１は、急性骨髄性白血病細胞上、急性リンパ芽球性白血病細胞上及び慢性リンパ性白血病細胞上に発現することも見出されている（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｖｕｕｒｓｔ  ｄｅ  Ｖｒｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：３１６０−３１６７、Ｐｏｇｇｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：２７５１−２７５８、Ｚｏｃｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：３６６７−３６７５、Ｐｅｒｂｅｌｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ，９９：８８１−８８７、（Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１７：６６５−６７７）。最後に、ＬＡＩＲ−１はいくつかのヒト腫瘍細胞株において発現することが示された（Ｍｅｙａａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７：２８３−２９０、Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ，Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．４５８：３９９−４０４、（Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１７：６６５−６７７）。
【００８５】
ヒト及びマウスにおいて、ＬＡＩＲ−１は高い親和性でいくつかの種類のコラーゲンと結合する（Ｍｅｙａａｒｄ，２００８，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．８３：７９９−８０３、及びＭｅｙａａｒｄ，２０１０，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．１２８：２６−２８）。さらに、ヒトにおいてＬＡＩＲ−１は、補体成分Ｃ１ｑと結合すること（Ｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０９：Ｅ３１６０−３１６７）、ならびにコラーゲン様Ｃ型レクチン、サーファクタントプロテインＤ（ＳＰ−Ｄ）、細菌及び抗原攻撃に対する肺の自然免疫応答において重要な役割を果たすコラーゲン様糖結合性糖タンパク質（コレクチン）と結合すること（Ｏｌｄｅ  Ｎｏｒｄｋａｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．９６：１０５−１１１）も示されている。マウスＬＡＩＲ−１がＣ１ｑ及びＳＰ−Ｄと結合する能力については調べられていない。
【００８６】
全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）は、免疫寛容の喪失によって特徴付けられる典型的な自己免疫疾患である。Ｃ１ｑの免疫抑制的役割は、Ｃ１ｑ欠損個体が高率でＳＬＥを発症することによって支持されている。Ｓｏｎ博士及び彼女のＦｅｉｎｓｔｅｉｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅの協力者であるＢｅｔｔｙ  Ｄｉａｍｏｎｄ博士、Ｆｒａｎｃｅｓ  Ｓａｎｔｉａｇｏ−Ｓｃｈｗａｒｚ博士及びＹｏｕｓｅｆ  Ａｌ−Ａｂｅｄ博士は、Ｃ１ｑが、普遍的コラーゲン受容体として知られるＬＡＩＲ−１の機能性リガンドであることを示した。彼らはさらに、Ｃ１ｑが、ＬＡＩＲ−１の係合を介して単球からＤＣへの分化及びｐＤＣ活性化を抑制することによって寛容を促進することを示した（Ｓｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉａｍｏｎｄ，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，２０１５，２０：５５９−５６８、Ｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，１０９（４６）：Ｅ３１６０−３１６７）。この発見は狼瘡分野に大きな影響を与える、というのも、これらの知見は、補体系が寛容を調節して狼瘡などの自己免疫疾患を防止する機序を明らかにするからである。
【００８７】
全てのコラーゲンは、Ｇｌｙ−Ｘ−Ｘ’の繰り返し配列によって特徴付けられる３つのポリペプチド鎖からなり、ここで、Ｘはプロリンであることが多く、Ｘ’は４−Ｒ−ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ，Ｏ）であることがよくある（Ｂｒｏｎｄｉｊｋ，Ｂｌｏｏｄ，１１５（７）：１３６４−１３７３（２０１０））。このＧＰＯ三つ組みは、ほとんどコラーゲンのみにみられる特徴であり、特徴的な三重らせんコラーゲン構造の形成を可能にする。
【００８８】
既知の免疫グロブリンスーパーファミリーコラーゲン受容体であるＬＡＩＲ−１、ＧＰＶＩ及びＯＳＣＡＲの外部ドメインは、１つまたは２つの免疫グロブリン様ドメインからなる。ＧＰＶＩとＬＡＩＲ−１とは機能的に異なっているが、それらはコラーゲン結合特性が類似している。しかしながら、Ｚｈｏｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１２７（５）：５２９−５３７（２０１６）において論じられているように、当該３つのタンパク質はそれらの構造的相同性にもかかわらず非常に異なったコラーゲン認識部位を有する。ＧＰＶＩは、コラーゲンＩＩＩのグリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン（ＧＰＯ）に富む区域（ＧＰＯ）１０の配列を有するコラーゲン関連ペプチドモデル、及び１つまたは２つのＧＰＯ三つ組みを含有する少数のＴｏｏｌｋｉｔペプチド（ＩＩＩ−１、ＩＩＩ−３０及びＩＩＩ−４０）と、最も強く結合する（Ｊａｒｖｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１１１（１０）：４９８６−４９９６（２００８））。ＬＡＩＲ−１も、ＩＩＩ−３０、及びアミノ酸に富むペプチドのサブセットに対して高い親和性を呈するが、ＩＩＩ−１及びコラーゲン関連ペプチドとは結合それほど強固に結合しない（Ｌｅｂｂｉｎｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｔｒｉｘ  Ｂｉｏｌ．，２８（４）：２０２−２１０（２００９））。
【００８９】
突然変異誘発及び核磁気共鳴滴定は、ＬＡＩＲ−１の膜遠位領域にある残基区画が、Ｃ鎖、Ｃ９鎖、Ｆ鎖及びＦＧループからなる溝の中にある三重らせんペプチド（ＴＨＰ）モデルと接触していることを示唆した（Ｂｒｏｎｄｉｊｋ，Ｂｌｏｏｄ，１１５（７）：１３６４−１３７３（２０１０）、これを参照により全体を具体的に援用する）。例えば、固定されたコラーゲンＩ、ＩＩＩ及びＩＶに対する接着性は、Ｒ５９Ａ、Ｅ６１Ａ、Ｒ６５Ａ及びＥ１１１Ａ突然変異体では顕著に低下したが、影響の大きさは試験したコラーゲンの種類に依存していた。さらに、突然変異体Ｒ６２Ａ及びＮ６９Ａでは接着性がいくぶん低下し、それらはフローサイトメトリーアッセイにおいて野生型に近いコラーゲン結合性を示した。Ｂｒｏｎｄｉｊｋ，ｅｔ  ａｌ．，は、ＬＡＩＲ−１の残基Ｅ６１、Ｓ６６、Ｙ６８、Ｉ１０２、Ｗ１０９及びＹ１１５がファンデルワールス相互作用を提供するのに対し、リガンドとの水素結合にはＬＡＩＲ−１の残基Ｒ５９、Ｅ６３、Ｒ１００、Ｅ１１１及びＱ１１２が関与していることがよくあるという報告をしており、Ｒ５９、Ｅ６１、さらにはＷ１０９がコラーゲン結合部位のコアを構成する一方、より外側にあるＥ１１１などの残基は結合性に対する寄与がより少ないと結論付けている（残基は例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に関する）。
【００９０】
ｂ．マウスＬＡＩＲ−１
マウスＬＡＩＲ−１（ｍＬＡＩＲ−１）の配列は当技術分野において既知である。例えば、ｍＬＡＩＲ−１ａ（アイソフォーム１）のコンセンサス配列は、
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（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ８ＢＧ８４（ＬＡＩＲｌ＿ＭＯＵＳＥ））であり、ここで、アミノ酸１〜２１はシグナル配列であり、アミノ酸２２〜１４４（下線部）は細胞外ドメインであり、アミノ酸１４５〜１６５は膜貫通ドメインであり、アミノ酸１６６〜２６３は細胞質側ドメインである。アミノ酸２７〜１１５はＩｇ様Ｃ２ドメインを形成する。アミノ酸２２６〜２３１及び２５５〜２６０はそれぞれＩＴＩＭモチーフ１及び２を形成する。ｍＬＡＩＲ−１ｂ（アイソフォーム２としても知られる）は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に比べてアミノ酸１２４〜１３３が欠けている。アイソフォーム３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に比べて、アミノ酸２５〜５６［ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の
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（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）］が
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（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）で置き換わっており、アミノ酸５７〜２６３が欠けている。ｍＬＡＩＲ−１ｄ（アイソフォーム５としても知られる）は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に比べてアミノ酸２４〜１７２が欠けている。ｍＬＡＩＲ−１ｅ（アイソフォーム６としても知られる）は、アミノ酸１３４〜１７２が欠けている。
【００９１】
上に提示したように、マウスＬＡＩＲ−１の細胞外ドメインは、
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（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）またはその断片、例えばＩｇ様Ｃ２ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の下線部のアミノ酸６〜９４）、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸４９〜９９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸２８〜７８、斜字体で示されている）の間にジスルフィド結合を形成するシステインによって形作られる領域であり得る。ヒトとマウスとの細胞外ドメインのアラインメント例を以下に示す。
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Ｑｕｅｒｙ１はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２でありＳｂｊｃｔはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４である。
【００９２】
ＬＡＩＲ−１の既知の変異型及び突然変異体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に対するアミノ酸位置１４３〜１４５でのＩＹＩ→ＭＹＭ、Ｖ１４９Ｇ、Ｌ１５４Ｐ及びＨ２６３Ｒを含む。
【００９３】
Ｍｅｙａａｒｄ（２００８，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．８３：７９９−８０３）は、ＬＡＩＲ−１がマウス免疫細胞上に広く発現することを示唆しており、１つの主な違いは、Ｂ細胞上でＬＡＩＲ−１が、ヒトＢ細胞のサブセットにおける高発現とは対照的に陰性であると見受けられることである。ヒト発現パターンに関して、ＬＡＩＲ−１発現の実際のフローサイトメトリーデータを調べると、またしてもＬＡＩＲ−１が単球、マクロファージ及びＤＣで高発現する一方でＴ細胞、ＮＫ細胞及びＧｒ−１＋細胞が比較的より低いレベルでＬＡＩＲ−１を発現することが分かる（Ｌｅｂｂｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００７  Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９：１０１１−１０１９、Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８８：５４８−５５８）。
【００９４】
Ｔａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８８：５４８−５５８）はＬＡＩＲ−１欠損マウスの表現型を調べた。ＫＯマウスは健常かつ生殖能力を有し、改変された免疫機能の兆候を呈するが、ＣＴＬＡ−４  ＫＯマウスにおいて認められる重篤な自己免疫性または炎症はない。ＬＡＩＲ−１  ＫＯマウスは、樹状細胞、脾Ｂ細胞及び制御性Ｔ細胞の数が増えているだけでなく、活性化及びメモリーＴ細胞の頻度がより高くなっており、強化されたＴ細胞反応性が示唆される。しかしながら、ＬＡＩＲ−１  ｗｔ及びＫＯマウスにおいてＥＡＥ及び大腸炎疾患モデルに差異はなかった。これらの疾患モデルはＬＡＩＲ−１  ＫＯ表現型を調べるのに最適でなかった可能性があり、試験管内でのＬＡＩＲ−１欠損型免疫細胞サブセットの機能研究は行われていなかった。また、ＬＡＩＲ−１  ＫＯマウスはヒトにおける可溶性ＬＡＩＲ−２の差次的発現及び存在ゆえにヒトにおけるＬＡＩＲ−１の役割を示していない可能性があるとも推測される。マウスとヒトとでの内臓におけるＬＡＩＲ−１の遺伝的経路の差異はＳｕｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，５５２：１４−１４５（２０１４）において論じされており、マウスモデルを利用する実験を設計及び評価する場合に説明が付く可能性がある。
【００９５】
２．ＬＡＩＲ−２
ＬＡＩＲ−２及びその融合タンパク質の配列を提供する。いくつかの実施形態では、先頭のメチオニンアミノ酸はタンパク質の翻訳後形態において切断されている。
【００９６】
ヒトＬＡＩＲ−２の配列は当技術分野において既知である。例えば、ＬＡＩＲ−２ａ（アイソフォーム１）のコンセンサス配列は、
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（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ６ＩＳＳ４（ＬＡＲ２＿ＨＵＭＡＮ））であり、ここで、アミノ酸１〜２１はシグナル配列であり、アミノ酸２２〜１５２（下線部）は白血球関連免疫グロブリン様受容体２ドメインである。アミノ酸２９〜１１７はＩｇ様Ｃ２ドメインを形成する。ＬＡＩＲ−２ｂ（アイソフォーム２としても知られる）はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に比べてアミノ酸１２２〜１３８を欠く。
【００９７】
上に提示したように、ヒトＬＡＩＲ−２の白血球関連免疫グロブリン様受容体２ドメインは、
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（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）またはその断片、例えばＩｇ様Ｃ２ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の下線部のアミノ酸８〜９６）、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸４９〜１０１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸２８〜８０、斜字体で示されている）の間にジスルフィド結合を形成するシステインによって形作られる領域であり得る。
【００９８】
ＬＡＩＲ−２の既知の変異型及び突然変異体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に比べてＧ７８Ｓ、Ｈ８７Ｒ及びＦ１１５Ｙを含む。
【００９９】
ヒトにおいてＬＡＩＲ−２は、ＬＡＩＲ−１よりも高い親和性でコラーゲン及びＳＰ−Ｄと結合することが示されている（Ｍｅｙａａｒｄ，２００８，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．８３：７９９−８０３）。Ｌｉｎｄｅ  Ｍｅｙａａｒｄ博士は、ＬＡＩＲ−２はＣ１ｑ及びマンノース結合型レクチン（ＭＢＬ）とも結合することを示したが、それらはどちらもコラーゲン様ドメインを含有する（Ｏｌｄｅ  Ｎｏｒｄｋａｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎ．，２０１４，６（３）：２８４−９２）。この知見は、ＬＡＩＲ−２とＣ１ｑに結合するというＳｏｎ  ｅｔ  ａｌによる証拠を裏付ける（Ｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０９：Ｅ３１６０−３１６７）。コラーゲン及びＣ１ｑは普遍的に発現するが、ＳＰ−Ｄは主に、病原体からの最前線の自然防御としてそれが機能する場所である粘膜表面（肺胞表面及び消化管）に限られている（Ｈｅｒｉａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：３３２４−３３３２）。
【０１００】
ヒトＬＡＩＲ−１とヒトＬＡＩＲ−２との細胞外ドメインのアラインメント例を以下に示す。
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ＱｕｅｒｙはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２であり、ＳｂｊｃｔはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６である。
【０１０１】
Ｂ．免疫調節性作用物質
ＬＡＩＲ−１のアゴニスト及びアンタゴニストならびにＬＡＩＲ−２のアンタゴニストを含む免疫調節性作用物質を提供する。ＬＡＩＲ−１のアゴニストは、典型的には、ＬＡＩＲ−１による負のシグナル伝達を誘導する、強める、または活性化させる。ＬＡＩＲ−１のアンタゴニストは、典型的には、ＬＡＩＲ−１による負のシグナル伝達を防止する、減少させる、または遮断する。ＬＡＩＲ−２のアンタゴニストは、典型的には、ＬＡＩＲ−２がＬＡＩＲ−１とＬＡＩＲ−２との共通のリガンドを含めたそのリガンドと結合する能力を減退させる、または阻止する。組成物及び方法を用いて、例えば抗原提示細胞（例えば、単球、マクロファージまたは樹状細胞）、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはそれらの組み合わせを含めた骨髄細胞におけるＬＡＩＲ−１による負のシグナル伝達を調節することができる。いくつかの実施形態では、組成物は１つ以上の細胞種を特異的に指向するものである。ＬＡＩＲ−１のアゴニストまたはアンタゴニスト及びＬＡＩＲ−２のアンタゴニストとすることができる例示的な分子については以下でより詳しく述べる。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、抗ＬＡＩＲ−１機能遮断性抗体を含めたＬＡＩＲ−１アンタゴニストは、ＬＡＩＲ−１のコラーゲン結合ドメイン、Ｃ１ｑ結合ドメイン、ＳＰ−Ｄ結合ドメインまたはそれらの組み合わせに結合あるいは干渉する。例えば、いくつかの実施形態では、ＬＡＩＲ−１アンタゴニストは、ＬＡＩＲ−１の残基Ｒ５９、Ｅ６１、Ｒ６２、Ｅ６３、Ｒ６５、Ｓ６６、Ｙ６８、Ｎ６９、Ｉ１０２、Ｒ１００、Ｗ１０９、Ｅ１１１、Ｑ１１２及びＹ１１５または上記のいずれかの任意の組み合わせに結合するか、それを遮断するか、それの配座変化を作り出すか、あるいはそれに干渉する。いくつかの実施形態では、ＬＡＩＲ−１機能遮断性抗体またはその機能性断片は、（例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に関する）Ｒ５９、Ｅ６１、Ｒ６２、Ｅ６３、Ｒ６５、Ｓ６６、Ｙ６８、Ｎ６９、Ｉ１０２、Ｒ１００、Ｗ１０９、Ｅ１１１、Ｑ１１２及びＹ１１５のうちの１つ以上を含むエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、免疫調節性作用物質は、ＯＳＣＡＲの結合性もしくは活性、ＧＰＶＩの結合性もしくは活性、またはそれらの組み合わせに干渉しない。
【０１０３】
１．抗体
免疫調節性作用物質は抗体であり得る。適する抗体は当技術分野において既知であるかまたは当業者によって作製されることができる。ＬＡＩＲ−１及びＬＡＩＲ−２の核酸及びポリペプチド配列は当技術分野において既知であり、例示的なタンパク質配列は上に提供されている。以下でより詳しく述べるように、配列は、ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２に対して特異的である抗体またはその抗原結合断片を作製するために当業者によって使用されることができる。したがって、抗体または抗原結合断片はＬＡＩＲ−１のアゴニストもしくはアンタゴニストまたはＬＡＩＲ−２のアンタゴニストであり得る。
【０１０４】
ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２に特異的な抗体またはその抗原結合断片（すなわちアゴニストまたはアンタゴニスト）の活性は、当技術分野で知られている機能アッセイを用いて決定することができ、以下に述べるアッセイを含む。典型的には、アッセイは、抗体またはその抗原結合断片がＬＡＩＲ−１を介したシグナル伝達を増加させる（つまりアゴニストである）のかまたは減少させる（つまりアンタゴニストである）のかを判定することを含む。いくつかの実施形態では、アッセイは、ＬＡＩＲ−１によって負に調節される免疫応答を抗体またはその抗原結合断片が減少させる（つまりアゴニストである）のかまたは増大させる（つまりアンタゴニストである）のかを判定することを含む。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、開示される抗体及びその抗原結合断片は、ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１〜６のいずれか１つ）に免疫特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体はＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２の細胞外ドメインに結合する。
【０１０６】
例えば、以下のＬＡＩＲ−１に免疫特異的に結合することができる分子が提供される：
（Ｉ）細胞（特に生細胞）の表面に並んでいる、
（ＩＩ）細胞（特に生細胞）の表面に内因性濃度で並んでいる、
（ＩＩＩ）生細胞の表面に並んでおり、ＬＡＩＲ−１とそのリガンドとの結合を調節する、
（ＩＶ）生細胞の表面に並んでおり、ＬＡＩＲ−１による免疫抑制を減弱または阻害する、
（Ｖ）生細胞の表面に並んでおり、ＬＡＩＲ−１による免疫抑制を誘導または強化する、
（ＶＩ）生細胞の表面に並んでおり、当該細胞が、抗原提示細胞（例えば、単球、マクロファージまたは樹状細胞）、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはそれらの組み合わせを含めた骨髄細胞である、
（ＶＩＩ）Ｉ〜ＩＶとＶＩとの組み合わせである、
（ＶＩＩＩ）Ｉ〜ＩＩＩとＶ〜ＩＶとの組み合わせである、及び
（ＩＸ）骨髄由来またはリンパ由来のがん生細胞（ＡＭＬまたはＡＬＬ）の表面に並んでおり、アポトーシス及び分化を強化してがん幹細胞の自己再生を減少させる。
【０１０７】
さらに、可溶性内因性ＬＡＩＲ−２と免疫特異的に結合することができる分子が提供される。いくつかの実施形態では、分子は、ＬＡＩＲ−２がそのリガンドと結合あるいは相互作用するのを軽減または防止する。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、分子は、ＬＡＩＲ−１発現細胞の、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）または他の機序による細胞アポトーシスを誘導することができる。
【０１０９】
ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を作製するには、精製タンパク質、ポリペプチド、断片、融合体、またはＬＡＩＲ−１もしくはＬＡＩＲ−２に対するエピトープ、またはポリペプチドであって、その核酸配列から発現したものを使用することができる。抗体またはその抗原結合断片は、以下でより詳しく述べるような、当技術分野で知られている任意の適切な方法を用いて作製することができる。
【０１１０】
ａ．ヒト及びヒト化抗体
多くの非ヒト抗体（例えば、マウス、ラットまたはウサギに由来するもの）は、天然ではヒトにおいて抗原性であり、それゆえヒトに投与すると望ましくない免疫応答を引き起こしかねない。そのため、方法においてヒトまたはヒト化抗体を使用することは、ヒトに投与した抗体が望ましくない免疫応答を惹起する可能性を低くするのに役立つ。
【０１１１】
内因性免疫グロブリン産生の非存在下で免疫化によってありとあらゆるヒト抗体レパートリーを産生することができる遺伝子導入動物（例えばマウス）を採用することができる。例えば、キメラ及び生殖細胞系突然変異マウスにおける抗体重鎖結合領域（Ｊ（Ｈ））遺伝子のホモ接合型欠失の結果として内因性抗体産生が完全に阻害されることが記載されている。そのような生殖細胞系突然変異マウスへのヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子アレイの移入の結果、抗原攻撃によってヒト抗体が産生するであろう。
【０１１２】
任意で、他の種において抗体を生成させ、ヒトに投与するために「ヒト化」する。非ヒト（例えばマウス）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、その免疫グロブリン鎖または断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合配列）である。ヒト化抗体は、レシピエント抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基で置き換わった、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含む。ある場合には、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が、対応する非ヒト残基で置き換えられる。ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列にもみられない残基をさらに含有する場合もある。一般に、ヒト化抗体は少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインを実質的に全て含有するものであるが、当該可変ドメインにおいて、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。場合によってヒト化抗体は、典型的にはヒト免疫グロブリンの、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部をさらに含有することになる。
【０１１３】
非ヒト抗体をヒト化する方法は当技術分野でよく知られている。例えば、Ｊｏｎｅｓ，Ｐ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．（１９８６）．Ｒｅｐｌａｃｉｎｇ  ｔｈｅ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｉｎ  ａ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｗｉｔｈ  ｔｈｏｓｅ  ｆｒｏｍ  ａ  ｍｏｕｓｅ．Ｎａｔｕｒｅ  ３２１，５２２−５２５を参照されたい。一般に、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から導入された１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば「移入」残基と呼ばれ、これは典型的には「移入」可変ドメインから得られる。抗体ヒト化技術には通常、抗体分子の１つ以上のポリペプチド鎖をコードするＤＮＡ配列を操作する組換えＤＮＡ技術の利用を伴う。ヒト化は本質的に、齧歯動物のＣＤＲまたはＣＤＲ配列でヒト抗体の対応する配列を置き換えることによって実施することができる。したがって、非ヒト抗体（またはその断片）のヒト化形態は、ヒト可変ドメインの全体よりもかなり少ない部分が非ヒト種からの対応する配列で置き換わった、キメラ抗体または断片である。実際には、ヒト化抗体は、いくつかのＣＤＲ残基と、場合によってはいくつかのＦＲ残基とが齧歯動物抗体の類似部位からの残基で置き換わったヒト抗体であることが典型的である。
【０１１４】
ヒト化抗体を作るために使用するヒト可変ドメインの選択は、軽鎖でも重鎖でも、抗原性を低くするには非常に重要である。「ｂｅｓｔ−ｆｉｔ」法によれば、齧歯動物抗体の可変ドメインの配列のスクリーニングが、既知のヒト可変ドメイン配列の全ライブラリーに対して行われる。そして、齧歯動物に最も近いヒト配列がヒト化抗体のためのヒトフレームワーク（ＦＲ）として許容される。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定サブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークが異なるいくつかのヒト化抗体に使用され得る。
【０１１５】
抗体は、抗原に対する高親和性及びその他の好都合な生物学的特性を保持したままヒト化されていることがさらに重要である。この目的を達成するために、親及びヒト化配列の三次元モデルを使用して親配列及び様々な概念的ヒト化産物の解析のプロセスによってヒト化抗体が作製され得る。三次元免疫グロブリンモデルは一般的に入手可能であり、当業者によく知られている。選出された候補免疫グロブリン配列のあり得る三次元配座構造体を説明及び表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示を詳しく調べることによって、候補免疫グロブリンの機能において残基が果たし得る役割の解析、すなわち、候補免疫グロブリンのその抗原に結合する能力に影響を与える残基の解析が可能になる。このようにして、所望の抗体特質、例えば標的抗原（複数可）に対する向上した親和性が得られるようにコンセンサス及び移入配列からＦＲ残基を選択して組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合性に対する影響が直接的であり、なおかつ最も大きい。
【０１１６】
抗体を、基質に結合させるか、または検出可能部分で標識するか、または結合させるとともに標識することができる。本発明の組成物に関して企図される検出可能部分としては、例えば、蛍光マーカー、酵素マーカー及び放射性マーカーが挙げられる。
【０１１７】
ｂ．一本鎖抗体
一本鎖抗体を生成する方法は当業者によく知られている。一本鎖抗体は、短いペプチドリンカーを使用して重軽鎖の可変ドメイン同士を融合させてそれによって単一分子上に抗原結合部位を再構築することによって作り出される。抗原結合性または結合の特異性を大きく乱すことなく、一方の可変ドメインのＣ末端を他方の可変ドメインのＮ末端に１５〜２５アミノ酸のペプチドまたはリンカーで繋ぎとめた一本鎖抗体可変断片（ｓｃＦｖ）が開発された。リンカーは、重軽鎖がそれらの適切な配座配向で結合し合うのを可能にするように選択される。これらのＦｖは、天然抗体の重軽鎖に存在する定常領域（Ｆｃ）を欠く。
【０１１８】
ｃ．一価抗体
試験管内方法も一価抗体の作製に適している。抗体を消化してその断片、特にＦａｂ断片を生成させることは、当技術分野で知られている慣例的技術を用いて成し遂げることができる。例えば、消化はパパインを使用して実施することができる。抗体のパパイン消化は通常、単一の抗原結合部位を各々有する同一な２つのＦａｂ断片と呼ばれる抗原結合断片と、残部のＦｃ断片とを生成させる。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有しかつ抗原との架橋がなおも可能であるＦ（ａｂ’）２断片と呼ばれる断片を生成する。
【０１１９】
抗体消化で生成するＦａｂ断片はさらに、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１定常ドメインも含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含む重鎖ドメインのカルボキシ末端にある少数の残基が付け加わっている点でＦａｂ断片とは異なっている。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域でのジスルフィド架橋によって繋げられた２つのＦａｂ’断片を含む二価断片である。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有しているＦａｂ’に対する本明細書中での呼称である。抗体断片は元々、ヒンジシステインを間に有するＦａｂ’断片の対として作り出された。抗体断片の他の化学的カップリングも知られている。
【０１２０】
ｄ．ハイブリッド抗体
抗体はハイブリッド抗体とすることもできる。ハイブリッド抗体では、一方の重軽鎖対は、あるエピトープに対して産生された抗体にみられるものと相同であるが、他方の重軽鎖対は、別のエピトープに対して産生された抗体にみられる対と相同である。これにより、多重機能性価数の特性、すなわち少なくとも２つの異なるエピトープに同時に結合する能力がもたらされる。そのようなハイブリッドは、各構成成分抗体を産生するハイブリドーマの融合によって、または組換え技術によって形成させることができる。勿論、キメラ鎖を使用してそのようなハイブリッドを形成させてもよい。
【０１２１】
ｅ．抗体断片の複合体または融合体
抗体またはその断片を治療用物質に連結することによって抗体の標的指向機能を治療的に用いることができる。抗体または断片（例えば、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部）と治療用物質とのそのような連結は、抗体または抗体断片と治療用物質とを含んで免疫複合体を作ること、または融合タンパク質を作ることによって実現することができる。
【０１２２】
抗体または断片と治療用物質とのそのような連結は、抗体または抗体断片と治療用物質とを含んで免疫複合体を作ること、または融合タンパク質を作ること、または抗体もしくは断片をｓｉＲＮＡなどの核酸と繋げることによって実現することができる。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、抗体の半減期を変化させるように抗体を改変する。いくつかの実施形態では、抗体がより長い期間にわたって循環流中または治療部位に存在するように抗体の半減期を延ばすことが望ましい。例えば、循環流または治療される場所における抗体の力価を長期にわたって維持することが望ましい場合がある。例えばＸｔｅｎｄ（商標）抗体半減期延長技術（Ｘｅｎｃｏｒ，Ｍｏｎｒｏｖｉａ，ＣＡ）を用いて、半減期を延ばすＦｃ変異型を有する抗体を構築することができる。他の実施形態では、潜在的な副作用を軽減するために抗ＤＮＡ抗体の半減期を短くする。開示される複合体は、所与の生物学的応答を改変するために使用することができる。薬物部分は、古典的な化学療法剤に限定されると解釈されるべきでない。例えば、薬物部分は、所望の生物学的活性をもつタンパク質またはポリペプチドであってもよい。そのようなタンパク質としては、例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素またはジフテリア毒素などの毒素が挙げられる。
【０１２４】
ｆ．例示的な抗体
ある実施形態は、１Ｅ１１、１Ｇ７、４Ｂ３、５Ａ６、５Ｅ１、６Ｂ２、６Ｆ４、６Ｇ６、７Ｇ３、９Ｈ６、１１Ｂ３、１２Ｅ１０ａ、及び１２Ｅ１０ｂからなる群から選択されるハイブリドーマによって産生される抗ＬＡＩＲ抗体を提供する。
【０１２５】
別の実施形態は、１Ｅ１１、１Ｇ７、４Ｂ３、５Ａ６、５Ｅ１、６Ｂ２、６Ｆ４、６Ｇ６、７Ｇ３、９Ｈ６、１１Ｂ３、１２Ｅ１０ａ、及び１２Ｅ１０ｂからなる群から選択されるハイブリドーマのうちの１つ以上によって産生される抗体の少なくとも１つの軽鎖または少なくとも１つの重鎖を有する抗ＬＡＩＲ抗体を提供する。
【０１２６】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、２７、３５、４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９、１０７または１１５のアミノ酸配列を有する可変軽鎖との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９または１００％である可変軽鎖を有する、抗ＬＡＩＲ抗体を提供する。
【０１２７】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、３１、３９、４７、５５、６３、７１、７９、８７、９５、１０３または１１１のアミノ酸配列を有する可変重鎖との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９または１００％である可変重鎖を有する、抗ＬＡＩＲ抗体を提供する。
【０１２８】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、２７、３５、４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９、１０７または１１５のアミノ酸配列を有する可変軽鎖との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９または１００％である可変軽鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、３１、３９、４７、５５、６３、７１、７９、８７、９５、１０３または１１１のアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９または１００％である可変重鎖とを有する、抗ＬＡＩＲ抗体を提供する。
【０１２９】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０〜２２、２４〜２６、２８〜３０、３２〜３４、３６〜３８、４０〜４２、４４〜４６、４８〜５０、５２〜５４、５６〜５８、６０〜６２、６４〜６６、６８〜７０、７２〜７４、７６〜７８、８０〜８２、８４〜８６、８８〜９０、９２〜９４、９６〜９８、１００〜１０２、１０４〜１０６、１０８〜１１０、１１２〜１１４、及び１１６〜１１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）の群から選択されるＣＤＲを含む、抗ＬＡＩＲ抗体を提供する。
【０１３０】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０〜２２、２４〜２６、２８〜３０、３２〜３４、３６〜３８、４０〜４２、４４〜４６、４８〜５０、５２〜５４、５６〜５８、６０〜６２、６４〜６６、６８〜７０、７２〜７４、７６〜７８、８０〜８２、８４〜８６、８８〜９０、９２〜９４、９６〜９８、１００〜１０２、１０４〜１０６、１０８〜１１０、１１２〜１１４、及び１１６〜１１７からなる群から選択される複数のＣＤＲを有する、抗ＬＡＩＲ抗体を提供する。複数のＣＤＲは２〜１２個であり得る。
【０１３１】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する重鎖、及び／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、キメラ抗体を提供する。
【０１３２】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する重鎖、及び／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３０に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、キメラ抗体を提供する。
【０１３３】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する重鎖、及び／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、キメラ抗体を提供する。
【０１３４】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４０に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する重鎖、及び／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％であるアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、キメラ抗体を提供する。
【０１３５】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４、１３０、１３６もしくは１４２の軽鎖アミノ酸配列、及び／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０、１２２、１２６、１２８、１３２、１３４、１３８もしくは１４０の重鎖アミノ酸を有する抗体をコードする、核酸配列を提供する。
【０１３６】
別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、２７、３５、４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９、１０７もしくは１１５の可変軽鎖、及び／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、３１、３９、４７、５５、６３、７１、７９、８７、９５、１０３もしくは１１１の可変重鎖をコードする、核酸配列を提供する。軽鎖及び／または重鎖をコードする核酸を発現ベクターの一部とすることができる。核酸は、細胞で発現させることができる。発現は、誘導可能または恒常的なものとすることができる。
【０１３７】
２．タンパク質及びポリペプチド
ａ．タンパク質及びポリペプチド組成物
免疫調節性作用物質は、タンパク質、ポリペプチドまたは融合タンパク質であり得る。例えば、免疫調節性作用物質は、ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２の、単離された、または組換えのタンパク質もしくはポリペプチドまたはその機能性断片、変異型もしくは融合タンパク質であり得る。
【０１３８】
タンパク質もしくはポリペプチドまたはその機能性断片、変異型もしくは融合タンパク質は、アゴニストまたはアンタゴニストであり得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＬＡＩＲ−１のアンタゴニストは、ＬＡＩＲ−１のリガンドに結合する、ＬＡＩＲ−１もしくはＬＡＩＲ−２ポリペプチドまたはその断片もしくは融合タンパク質である。ポリペプチドは、可溶性断片、例えば、ＬＡＩＲ−１もしくはＬＡＩＲ−２の細胞外ドメインまたはその機能性断片またはその融合タンパク質であり得る。いくつかの実施形態では、ＬＡＩＲ−１の可溶性リガンドがアゴニストとしての役割を果たし得、ＬＡＩＲ−１を介したシグナル伝達を増加させ得る。
【０１３９】
ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２のタンパク質もしくはポリペプチドまたはその任意の断片、変異型もしくは融合タンパク質（すなわちアゴニストまたはアンタゴニスト）の活性は、当技術分野で知られている機能アッセイを用いて決定することができ、以下に述べるアッセイを含む。典型的には、アッセイは、タンパク質、ポリペプチド、またはその断片、変異型もしくは融合タンパク質が、ＬＡＩＲ−１受容体を介したシグナル伝達を増加させる（つまりアゴニストである）のかまたは減少させる（つまりアンタゴニストである）のかを判定することを含む。いくつかの実施形態では、アッセイは、タンパク質、ポリペプチド、またはその断片、変異型もしくは融合タンパク質が、ＬＡＩＲ−１に関連する免疫応答を増大させるのか（つまりアゴニストである）または減少させるのか（つまりアンタゴニストである）（つまり共刺激性であるのかまたは共抑制性であるのか）を判定することを含む。典型的には、アッセイは、タンパク質、ポリペプチド、またはその断片、変異型もしくは融合タンパク質が、ＬＡＩＲ−１を介したシグナル伝達を増加させる（つまりアゴニストである）のかまたは減少させる（つまりアンタゴニストである）のかを判定することを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質、ポリペプチド、またはその断片、変異型もしくは融合タンパク質が、ＬＡＩＲ−１によって負に調節される免疫応答を、減少させる（つまりアゴニストである）のかまたは増大させる（つまりアンタゴニストである）のかを判定することを含む。いくつかの実施形態では、アッセイは、タンパク質、ポリペプチド、またはその断片、変異型もしくは融合タンパク質が、急性骨髄性白血病細胞及び急性リンパ芽球性白血病細胞のアポトーシス及び分化を増進して（つまりアンタゴニストとなって）結果的にＡＭＬ及びＡＬＬ幹細胞の自己再生能を減退させるのか否かを判定することを含む。
【０１４０】
ＬＡＩＲ−１及びＬＡＩＲ−２に対する核酸及びポリペプチド配列は、当技術分野において既知であり、例示的なタンパク質及びペプチド配列が上に提供されている。以下でより詳しく述べるように、配列は、ＬＡＩＲ−１もしくはＬＡＩＲ−２の任意のタンパク質もしくはポリペプチドまたはその任意の断片、変異型もしくは融合タンパク質を作製するために当業者によって使用されることができる。ＬＡＩＲ−１及びＬＡＩＲ−２のタンパク質、ポリペプチド、その変異型及び融合体は通常、シグナル配列をコードする配列を含む核酸から発現される。通常、シグナル配列は未成熟ポリペプチドから切断されて、シグナル配列を欠く成熟ポリペプチドが生成する。標準的な分子生物学技術を用いてシグナル配列を別のポリペプチドのシグナル配列で置き換えて、ポリペプチドの発現レベル、分泌、溶解度またはその他の特性に影響を及ぼすことができる。ＬＡＩＲ−１及びＬＡＩＲ−２は、シグナル配列を有するもの及び有さないものが両方とも開示される。当技術分野において既知であるかまたは記述がなされているように、いくつかの事例において成熟タンパク質すなわちシグナル配列を有さないタンパク質配列は、推定上の成熟タンパク質である。正常な細胞発現の間、シグナル配列が細胞ペプチダーゼによって除去されて成熟タンパク質が生まれ得る。成熟タンパク質の配列は、当技術分野で知られている方法を用いて決定または確認することができる。
【０１４１】
ｉ．断片
本明細書中で使用する場合、ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２は、完全長タンパク質よりも少なくとも１アミノ酸だけ短いポリペプチドの任意のサブセットを指す。有用な断片には、それの天然の１つ以上のリガンドに結合する能力を保持している断片が含まれる。任意の完全長ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２の断片であるポリペプチドは、典型的には、それぞれ完全長タンパク質に比べてその天然のリガンドに結合する能力が少なくとも２０パーセント、３０パーセント、４０パーセント、５０パーセント、６０パーセント、７０パーセント、８０パーセント、９０パーセント、９５パーセント、９８パーセント、９９パーセント、１００パーセント、ひいては１００パーセント超である。
【０１４２】
ＬＡＩＲ−１及びＬＡＩＲ−２の断片は、細胞不含断片を含む。細胞不含ポリペプチドは、産生細胞から排出、分泌あるいは抽出される、完全長の膜貫通ポリペプチドの断片であり得る。ポリペプチドの細胞不含断片は、ポリペプチドの細胞外ドメインのいくらかまたは全てを含み得、完全長タンパク質の細胞内及び／または膜貫通ドメインのいくらかまたは全てを欠き得る。一実施形態において、ポリペプチド断片は完全長タンパク質の細胞外ドメイン全体を含む。他の実施形態では、ポリペプチドの細胞不含断片は、完全長タンパク質の生物学的活性を保持する細胞外ドメインの断片を含む。細胞外ドメインは、膜貫通ドメインからの１、２、３、４もしくは５連続アミノ酸、及び／またはシグナル配列からの１、２、３、４もしくは５連続アミノ酸を含み得る。あるいは、細胞外ドメインは、Ｃ末端、Ｎ末端またはそれらの両方から１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれより多くのアミノ酸が除去されたものであり得る。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、断片の唯一の機能性ドメイン（例えばリガンド結合ドメイン）である。
【０１４３】
ｉｉ．変異型
また、ＬＡＩＲ−１及びＬＡＩＲ−２の変異型ならびにその断片も提供される。いくつかの実施形態では、変異型はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１〜６のいずれかと少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８または９９パーセント同一である。有用な変異型には、本明細書に記載のいずれかのアッセイで示される生物学的活性を増大させるもの、またはタンパク質の半減期を延ばすもしくは安定性を高めるものが含まれる。ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２のタンパク質及びポリペプチドならびにその断片、変異型及び融合タンパク質は、生物学的活性を向上させるように操作することができる。例えば、いくつかの実施形態では、ＬＡＩＲ−２ポリペプチド、タンパク質またはその変異型もしくは融合体は、その機能を増強する少なくとも１つのアミノ酸置換、欠失または挿入によって改変されている。
【０１４４】
他の変異型は、ＬＡＩＲ−１及び／またはＬＡＩＲ−２リガンドのうちの１つ以上のタイプに対して他のＬＡＩＲ−１及び／またはＬＡＩＲ−２リガンドよりも選択的に結合するように操作されている変異型である。例えば、１つ以上のコラーゲン、ＳＰ−Ｄ、Ｃ１ｑもしくはＭＢＬまたはそれらの特定の組み合わせに対して優先的に結合するように変異型を操作することができる。優先的な結合とは、あるタイプのリガンドに対して別のタイプのリガンドよりも少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％以上強く結合することを指す。
【０１４５】
さらに他の変異型は、あるリガンドに対する結合性が別のリガンドよりも低くなるように操作することができる。これらの変異型は、適度な影響力で免疫応答を調節すべく、より強い結合特性を有する変異型と組み合わせて使用することができる。
【０１４６】
さらに他の実施形態では、変異型は、１つ以上のコラーゲン結合部位に対する結合性が他よりも低くなるように操作することができる。Ｂｒｏｎｄｉｊｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１８（１１５）；１３６４−７３（２０１０）で考察されているように、ＬＡＩＲ−１に関する残基の突然変異は、種々のコラーゲンリガンドとの結合性に対して示差的影響を与え得る。例えば、Ｒ５９Ａ、Ｅ６１Ａ、Ｒ６５Ａ及びＥ１１１Ａ突然変異体では、固定されたコラーゲンＩ、ＩＩＩ及びＩＶに対する接着性が顕著に低下したが、影響の大きさは試験したコラーゲンの種類に依存していた。さらに、突然変異体Ｒ６２Ａ及びＮ６９Ａでは接着性がいくぶん低下していた。いくつかの実施形態では、変異型は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に比べてＲ５９、Ｅ６１、Ｒ６２、Ｅ６３、Ｒ６５、Ｓ６６、Ｙ６８、Ｎ６９、Ｉ１０２、Ｒ１００、Ｗ１０９、Ｅ１１１、Ｑ１１２及びＹ１１５のうちの１つ以上において突然変異している。いくつかの実施形態では、変異型は、Ｒ５９、Ｅ６１、Ｒ６５、Ｅ１１１、Ｒ６２Ａ及びＮ６９Ａのうちの１つ以上において突然変異している。特定の実施形態では、突然変異（複数可）はアラニンによる置換である。
【０１４７】
最後に、変異型ポリペプチドは、野生型に比べて半減期が延びるように操作することができる。これらの変異型は、典型的には酵素消化に耐えるように修飾されている。例示的な改変としては、酵素消化に耐える修飾型アミノ酸残基及び修飾型ペプチド結合が挙げられる。これを実現する様々な修飾が当技術分野で知られている。変異型は、血清及びエンドソームｐＨにおいて受容体との親和性がタンパク質、ポリペプチド、その断片または融合体の半減期に対して与える影響を調節すべく修飾されているものとすることができる。
【０１４８】
ｉｉｉ．融合タンパク質
融合ポリペプチドは、ポリペプチドＬＡＩＲ−１またはＬｉａｒ−２の全部または一部を含んでいる第１融合相手が直接、または第２ポリペプチドと融合させたリンカーペプチド配列を介して、第２ポリペプチドと融合したものを有する。融合タンパク質は、場合によって、２つ以上の融合タンパク質を二量体化または多量体化させるように機能するドメインを含有する。ペプチド／ポリペプチドリンカードメインは、別個のドメインである場合もあるし、あるいは融合タンパク質の他のドメイン（第１ポリペプチドまたは第２ポリペプチド）のうちの１つの中に含まれている場合もある。同様に、融合タンパク質を二量体化または多量体化させるように機能するドメインは、別個のドメインである場合もあるし、あるいは融合タンパク質の他のドメイン（第１ポリペプチド、第２ポリペプチドまたはペプチド／ポリペプチドリンカードメイン）のうちの１つの中に含まれている場合もある。ある実施形態では、二量体化／多量体化ドメインとペプチド／ポリペプチドリンカードメインとは同じである。
【０１４９】
本明細書に開示される融合タンパク質は、式Ｉ：
Ｎ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｃ
を有し、ここで、「Ｎ」は融合タンパク質のＮ末端を表し、「Ｃ」は融合タンパク質のＣ末端を表す。いくつかの実施形態では、「Ｒ１」は、ＬＡＩＲ−１もしくはＬｉａｒ−２のポリペプチドもしくはタンパク質、またはその断片もしくは変異型であり、「Ｒ２」は任意選択のペプチド／ポリペプチドリンカードメインであり、「Ｒ３」は第２ポリペプチドである。あるいは、Ｒ３がＬＡＩＲ−１もしくはＬｉａｒ−２のポリペプチドもしくはタンパク質、またはその断片もしくは変異型であってもよく、Ｒ１が第２ポリペプチドであってもよい。いくつかの実施形態では、ＬＡＩＲ−１またはＬｉａｒ−２ポリペプチドは、細胞外ドメインまたはその断片、例えばＩｇ様Ｃ２ドメイン、または上に述べたようなジスルフィド結合を形成するシステインによって形作られた領域である。
【０１５０】
二量体化または多量体化は、２つ以上の融合タンパク質間で二量体化または多量体化ドメインを介して起こり得る。あるいは、融合タンパク質の二量体化または多量体化は化学的架橋によって起こり得る。形成される二量体または多量体は、同種二量体／同種多量体または異種二量体／異種多量体であり得る。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、ＬＡＩＲ−１もしくはＬＡＩＲ−２の細胞外ドメインまたはその断片もしくは変異型をＩｇＦｃ領域と融合させたものを含む。組換えＩｇ融合タンパク質は、細胞外ドメインまたはその断片もしくは変異型の細胞外ドメインのコード領域を、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４またはマウスＩｇＧ２ａまたは以前に記述（Ｃｈａｐｏｖａｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，４５：２４７−２５５（２０００））がなされたような他の適切なＩｇドメインのＦｃ領域と融合させることによって作製することができる．
【０１５２】
ｉｖ．例示的な融合タンパク質
例示的な融合タンパク質を以下に提供する。シグナル配列を二重下線で示し、ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２細胞外ドメインを一重下線で示し、Ｉｇドメインを斜字体で示す。成熟タンパク質ではシグナル配列が取り除かれていることが典型的である。さらに、製造中に宿主からの融合タンパク質の分泌を強化するために、他のポリペプチドまたは生物から得られるシグナルペプチドを使用（例えば代用）することができる。
【０１５３】
ｈＬＡＩＲ１．ｈＧ１
いくつかの実施形態では、ヒトＬＡＩＲ１−ｈＩｇ融合タンパク質（ｈＩｇＧ１）（ｈＬＡＩＲ１．ｈＧ１）は、アミノ酸配列：
2019528311.tif 000013
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）との配列同一性が、シグナル配列の有無にかかわらず少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％である。
【０１５４】
シグナル配列を含まないＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９は、
2019528311.tif 000014
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）である。
【０１５５】
ヒトＬＡＩＲ１−ｈＩｇ（ｈＩｇＧ１）（ｈＬＡＩＲ１．ｈＧ１）は、ＬＡＩＲ−１リガンドに対するデコイとしての役割を果たすことによってＬＡＩＲ−１シグナル伝達のアンタゴニストとなることができ、がんまたは感染性疾患の治療に利用することができる。ｈＬＡＩＲ１．ｈＧ１はまた、ｈＬＡＩＲ２．ｈＧ１の活性を試験するための対照とすることもできる。
【０１５６】
ｈＬＡＩＲ１．ｍＧ２ａ
いくつかの実施形態では、ヒトＬＡＩＲ１−ｍＩｇ融合タンパク質（ｍＩｇＧ２ａ）（ｈＬＡＩＲ１．ｍＧ２ａ）は、アミノ酸配列：
2019528311.tif 000015
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）との配列同一性が、シグナル配列の有無にかかわらず少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％である。
【０１５７】
シグナル配列を含まないＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１は、
2019528311.tif 000016
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）である。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、ヒトＬＡＩＲ１−ｍＩｇ融合タンパク質（ｍＩｇＧ２ａ）（ｈＬＡＩＲ１．ｍＧ２ａ）を使用して抗ｈＬＡＩＲ１抗体を生成することができる。例えば、抗体はＬＡＩＲ−１アンタゴニスト抗体（例えばｍＡｂまたはその断片）であり得、これはがんの治療に使用することができ、または抗体はＬＡＩＲ−１アゴニスト抗体（例えばｍＡｂまたはその断片）であり得、これは自己免疫疾患の治療に使用することができる。
【０１５９】
ｍＬＡＩＲ１．ｍＧ２ａ
いくつかの実施形態では、マウスＬＡＩＲ１−ｍＩｇ融合タンパク質（ｍＬＡＩＲ１．ｍＧ２ａ）は、アミノ酸配列：
2019528311.tif 000017
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）との配列同一性が、シグナル配列の有無にかかわらず少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％である。
【０１６０】
シグナル配列を含まないＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３は、
2019528311.tif 000018
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）である。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、マウスＬＡＩＲ１−ｍＩｇ融合タンパク質は、マウスモデルにおける生体内研究のために使用されるマウス類縁体である。
【０１６２】
ｈＬＡＩＲ２．ｈＧ１
いくつかの実施形態では、ヒトＬＡＩＲ２−ｈＩｇ融合タンパク質（ｈＩｇＧ１）（ｈＬＡＩＲ２．ｈＧ１）は、アミノ酸配列：
2019528311.tif 000019
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）との配列同一性が、シグナル配列の有無にかかわらず少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％である。
【０１６３】
シグナル配列を含まないＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５は、
2019528311.tif 000020
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）である。
【０１６４】
ヒトＬＡＩＲ２−ｈＩｇ融合タンパク質（ｈＩｇＧ１）（ｈＬＡＩＲ２．ｈＧ１）は、ＬＡＩＲ−１リガンドに対するデコイとしての役割を果たすことによってＬｉａｒ−１シグナル伝達のアンタゴニストとなることができ、がんまたは感染性疾患の治療に利用されることができる。
【０１６５】
ＬＡＩＲ２．ｍＩｇ
いくつかの実施形態では、ヒトＬＡＩＲ２．ｍＩｇ融合タンパク質（ｍＩｇＧ２ａ）は、アミノ酸配列：
2019528311.tif 000021
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）との配列同一性が、シグナル配列の有無にかかわらず少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％である。
【０１６６】
シグナル配列を含まないＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７は、
2019528311.tif 000022
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）である。
【０１６７】
ヒトＬＡＩＲ２．ｍＩｇ融合タンパク質（ｍＩｇＧ２ａ）を使用して拮抗性抗ＬＡＩＲ２（例えばｍＡｂまたはその断片）を生成することができ、これは自己免疫疾患の治療のために使用することができる。
【０１６８】
ｖ．ポリペプチド修飾
ポリペプチド及び融合タンパク質は、正常細胞環境においてポリペプチドに存在し得る化学部分によって修飾されていてもよく、例えば、リン酸化、メチル化、アミド化、硫酸化、アシル化、グリコシル化、スモイル化及びユビキチン化がある。融合タンパク質はまた、限定されないが放射性同位体及び蛍光化合物を含めた、検出可能な信号を直接的あるいは間接的に提供することができるラベルで修飾されていてもよい。
【０１６９】
ポリペプチド及び融合タンパク質はまた、細胞環境においてポリペプチドに対して普通は加えられない化学部分によって修飾されていてもよい。例えば、開示される融合タンパク質は、限定されないがポリエチレングリコールポリマー（ＰＥＧ）鎖（つまりペグ化）を含めたポリマー鎖が共有結合的に取り付けられることによって修飾されていてもよい。ＰＥＧによる巨大分子の複合は近年、様々な薬物の薬理動態（ＰＫ）プロファイルを変化させるための、したがってそれらの治療潜在能を向上させるための効果的な方策であることが明らかになった。ＰＥＧ複合は、酵素消化から守ることによって循環流における薬物の保持力を高め、腎臓による濾過を遅延させ、中和抗体の発生を減少させる。さらに、ＰＥＧ複合体は、融合タンパク質の多量体化を可能にするために使用することができる。
【０１７０】
修飾は、標的とするポリペプチドのアミノ酸残基を、選択された側鎖または末端残基との反応が可能な有機誘導体化剤と反応させることによって分子内に導入され得る。もう１つの修飾は、タンパク質の環化である。
【０１７１】
ポリペプチドの化学誘導体の例としては、スクシン酸またはその他のカルボン酸の無水物で誘導体化されたリシニル残基及びアミノ末端残基が挙げられる。環状無水カルボン酸による誘導体化は、リシニル残基の電荷を逆転させる効果を有する。アミノ含有残基を誘導体化するのに適した他の試薬としては、例えば、メチルピコリニミデートなどのイミドエステル、リン酸ピリドキサール、ピリドキサール、クロロボロハイドライド、トリニトロベンゼンスルホン酸、Ｏ−メチルイソウレア、２，４ペンタンジオン、及びグリオキシレートとのトランスアミナーゼ触媒反応が挙げられる。カルボキシル側基、アスパルチルまたはグルタミルは、カルボジイミド（Ｒ−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−−Ｒ’）、例えば１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニル−（４−エチル）カルボジイミドまたは１−エチル−３−（４−アゾニア−４，４−ジメチルペンチル）カルボジイミドとの反応によって選択的に修飾され得る。さらに、アスパルチル及びグルタミル残基をアンモニアとの反応によってアスパラギニル及びグルタミニル残基に変換することができる。融合タンパク質はまた、１つ以上のＬ−アミノ酸を置換した１つ以上のＤ−アミノ酸を含んでいてもよい。
【０１７２】
ｖｉ．改変された結合特性
タンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型及び融合体の結合特性は、投与される用量及び投薬計画と関係がある。一実施形態において、開示されるタンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型及び融合体は、ＬＡＩＲ−１リガンドと結合する他の受容体分子よりも強い表現またはより高い百分率で（例えばリガンド上の）結合部位を占有することを示すＬＡＩＲ−１リガンドとの結合特性を有する。他の実施形態では、開示されるタンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型及び融合体は、野生型タンパク質に比べて低下したＬＡＩＲ−１リガンドとの親和性を有する。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、タンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型及び融合体は、ＬＡＩＲ−１リガンドとの親和性が比較的高く、よって解離速度が比較的遅い。他の実施形態では、タンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型及び融合体を数日、数週間または数ヶ月の期間にわたって断続的に投与して、次の投与の前に回復することに備えて免疫応答を弱めるが、これは、免疫応答を完全に有効にしたり無効にしたりすることなく免疫応答を変化させるのに役立ち得、また長期の副作用を回避し得る。
【０１７４】
３．単離核酸分子
タンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型及び融合体をコードする単離核酸配列を本明細書に開示する。本明細書中で使用する場合、「単離核酸」は、哺乳動物ゲノムにおいて当該核酸の片側または両側に通常隣接している核酸を含めた哺乳動物ゲノム中に存在する他の核酸分子から分離された核酸を指す。また、核酸に関して本明細書中で使用する「単離」という用語は、天然に存在しないいかなる核酸配列との組み合わせも含む、というのも、そのような天然に存在しない配列は天然にはみられず、天然に存在するゲノム中ですぐ近くに連続する配列を有していないからである。
【０１７５】
単離核酸は、例えばＤＮＡ分子であり得、但し、天然に存在するゲノム中でそのＤＮＡ分子のすぐ両脇に通常認められる核酸配列のうちの一方が、除去されているかまたは存在していないことを条件とする。したがって、単離核酸は、限定されないが、他の配列とは無関係な別個の分子として存在するＤＮＡ分子（例えば、化学合成された核酸、またはＰＣＲもしくは制限エンドヌクレアーゼ処理によって生成したｃＤＮＡもしくはゲノムＤＮＡ断片）及び、ベクター中、自律的に複製するプラスミド中、ウイルス（例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルスまたはヘルペスウイルス）中または原核生物もしくは真核生物のゲノムＤＮＡ中に組み込まれている組換えＤＮＡを含む。さらに、単離核酸は、ハイブリッドまたは融合核酸の一部である組換えＤＮＡ分子などの操作型核酸を含み得る。例えばｃＤＮＡライブラリー中またはゲノムライブラリー中またはゲノムＤＮＡ制限消化物を含有するゲル薄片中に数百〜数百万個の他の核酸の中で存在している核酸は、単離核酸とみなされるべきではない。
【０１７６】
タンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型及び融合体をコードする核酸は、選択された発現宿主における発現に関して最適化され得る。核酸配列が由来する哺乳動物と発現宿主とでのコドン使用の差を考慮するためにコドンを、同じアミノ酸をコードする代替コドンで置換してもよい。このように、発現宿主にとって好ましいコドンを使用して核酸を合成してもよい。
【０１７７】
核酸は、センス配向もしくはアンチセンス配向とすることができ、またはＬＡＩＲ−１もしくはＬＡＩＲ−２のポリペプチドまたはタンパク質をコードする基準配列に対して相補的なものとすることができる。核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡまたは核酸類縁体であり得る。核酸類縁体は、塩基部分、糖部分またはリン酸主鎖において修飾されているものであり得る。そのような修飾は、例えば核酸の安定性、ハイブリダイゼーションまたは溶解性を改善することができる。塩基部分における修飾としては、例えば、デオキシチミジンに対するデオキシウリジン、デオキシシチジンに対する５−メチル−２’−デオキシシチジンまたは５−ブロモ−２’−デオキシシチジンを挙げることができる。糖部分の修飾としては、例えば、リボース糖の２’ヒドロキシルを修飾して２’−Ｏ−メチルまたは２’−Ｏ−アリル糖を形成することを挙げることができる。デオキシリボースリン酸主鎖を修飾して、各塩基部分が６員環のモルホリノ環と繋がったモルホリノ核酸、またはデオキシリン酸主鎖が擬似ペプチド主鎖で置き換わっており４つの塩基が保持されているペプチド核酸を生成させることができる。例えば、Ｓｕｍｍｅｒｔｏｎ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｅｒ  （１９９７）Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．７：１８７−１９５、及びＨｙｒｕｐ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｂｉｏｏｒｇａｎ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４：５−２３を参照されたい。さらには、デオキシリン酸主鎖を例えばホスホロチオエートもしくはホスホロジチオエート主鎖、ホスホロアミダイトまたはアルキルホスホトリエステル主鎖で置き換えることができる。
【０１７８】
ポリペプチドをコードする核酸は、それを必要とする対象に投与することができる。核送達は、「外来」核酸を細胞内及び最終的には生きた動物内に導入することを必要とする。核酸を対象に送達するための組成物及び方法は当技術分野において既知である（Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｅｍｏｉｎｅ，Ｎ．Ｒ．，ｅｄ．，ＢＩＯＳ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，２００８を参照のこと）。
【０１７９】
４．ベクター及び宿主細胞
タンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型及び融合体をコードするベクターも提供する。核酸、例えば上に記載した核酸を細胞での発現のためにベクターに挿入することができる。本明細書中で使用する場合、「ベクター」は、挿入されたセグメントの複製を引き起こすために中に別のＤＮＡセグメントが挿入され得るレプリコン、例えば、プラスミド、ファージ、ウイルスまたはコスミドである。ベクターは発現ベクターであり得る。「発現ベクター」は、１つ以上の発現制御配列を含むベクターであり、「発現制御配列」は、別のＤＮＡ配列の転写及び／または翻訳を制御及び調節するＤＮＡ配列である。
【０１８０】
ベクター中の核酸は１つ以上の発現制御配列に機能可能に繋げられ得る。本明細書中で使用する場合、「機能可能に繋げられる」は、関心対象のコード配列の発現を発現制御配列が効果的に制御するように、ゲノム構築物中に組み込まれるという意味である。発現制御配列の例としては、プロモーター、エンハンサー及び転写終結領域が挙げられる。プロモーターは、ＤＮＡ分子の転写開始点の上流１００ヌクレオチド以内（大抵はＲＮＡポリメラーゼＩＩの開始部位の近く）にあることが典型的である領域からなる発現制御配列である。コード配列をプロモーターの制御下とするには、ポリペプチドの翻訳リーディングフレームの翻訳開始部位をプロモーターの下流１〜約５０ヌクレオチドのところに配置する必要がある。エンハンサーは、時間、場所及びレベルに関する発現特異性を提供する。プロモーターとは違ってエンハンサーは、転写部位から様々な距離のところに位置しているときに機能することができる。エンハンサーはまた、転写開始部位の下流に配置されることもできる。コード配列は、ＲＮＡポリメラーゼがコード配列をｍＲＮＡに転写することができる場合、「機能可能に繋げられ」ており、かつ細胞内で発現制御配列の「制御下」にあり、次いでそれは、コード配列によってコードされるタンパク質に翻訳され得る。
【０１８１】
適する発現ベクターとしては、限定されないが、例えばバクテリオファージ、バキュロウイルス、タバコモザイクウイルス、ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、ワクチニアウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルスに由来する、プラスミド及びウイルスベクターが挙げられる。多数のベクター及び発現システムがＮｏｖａｇｅｎ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）、及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）などの会社から市販されている。
【０１８２】
発現ベクターはタグ配列を含むことができる。タグ配列は、典型的には、コードされるポリペプチドとの融合体として発現する。そのようなタグは、カルボキシ末端あるいはアミノ末端を含めたポリペプチド内のどこにでも挿入することができる。有用なタグの例としては、限定されないが、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ポリヒスチジン、ｃ−ｍｙｃ、ヘマグルチニン、Ｆｌａｇ（商標）タグ（Ｋｏｄａｋ，Ｎｅｗ  Ｈａｖｅｎ，ＣＴ）、マルトースＥ結合タンパク質及びプロテインＡが挙げられる。ある実施形態では、開示されるポリペプチドのうちの１つをコードする核酸分子は、例えばヒト免疫グロブリンＣγ１鎖のヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３領域に対応するアミノ酸配列を有するＩｇ重鎖定常領域の１つ以上のドメインをコードする核酸を含有するベクター中に存在する。
【０１８３】
発現させようとする核酸を含有するベクターを、宿主細胞内に移入することができる。「宿主細胞」という用語は、組換え発現ベクターが導入されることができる原核生物及び真核生物細胞を含むことが意図される。本明細書中で使用する場合、「形質転換された」及び「トランスフェクトされた」は、多くの技術のうちの１つによる細胞内への核酸分子（例えばベクター）の導入を包含する。特定の技術に限定されないが、これらの技術のいくつかは当技術分野において十分に確立されている。例えば電気穿孔または塩化カルシウム媒介形質転換によって、原核生物細胞を核酸で形質転換することができる。例えばリン酸カルシウム共沈、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、リポフェクション、電気穿孔またはマイクロインジェクションを含む技術によって、核酸を哺乳動物細胞にトランスフェクトすることができる。宿主細胞（例えば、原核生物細胞または真核生物細胞、例えばＣＨＯ細胞）を使用して、例えば本明細書に記載のタンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型及び融合体を産生させることができる。
【０１８４】
記載のベクターを使用して、タンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型及び融合体を細胞内で発現させることができる。例示的なベクターとしては、限定されないが、アデノウイルスベクターが挙げられる。１つの手法は、培養下の初代細胞内への核酸移入とそれに続く宿主内の全体または特定臓器もしくは組織への生体外形質転換細胞の自立的移植を含む。生体外方法は、例えば、細胞を対象から採取し、細胞を培養し、それらを発現ベクターで形質導入し、コードされるポリペプチドの発現に適した条件下で細胞を維持するステップを含み得る。これらの方法は、分子生物学の技術分野で既知である。形質導入ステップは、例えばリン酸カルシウム、リポフェクション、電気穿孔、ウイルス感染及び微粒子銃遺伝子移入を含めた生体外遺伝子療法に用いられる任意の標準的手段によって成し遂げることができる。あるいは、リポソームまたはポリマー微粒子を使用することができる。その後、成功裏に形質導入された細胞が、例えばコード配列または薬物耐性遺伝子の発現に関して選択され得る。その後、細胞は（所望により）致死的に放射線照射され得、対象内へ注射または埋植され得る。ある実施形態では、融合タンパク質をコードする核酸を含有する発現ベクターを、それを必要とする対象に投与される細胞に、トランスフェクトする。
【０１８５】
生体内核酸療法は、生体内で哺乳動物の体性組織または臓器への機能活性ＤＮＡの直接移入によって成し遂げることができる。例えば、本明細書に開示されるポリペプチドをコードする核酸をリンパ組織に直接投与することができる。あるいは、リンパ組織特異的な転写調節エレメント（ＴＲＥ）、例えば、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球または樹状細胞に特異的なＴＲＥを使用して、リンパ組織特異的標的化を実現することができる。リンパ組織特異的なＴＲＥは当技術分野において既知である。
【０１８６】
また、ウイルス手段によって核酸を生体内投与してもよい。当技術分野でよく知られているように、増殖能欠損型レトロウイルスを産生するパッケージング細胞株を使用して、融合タンパク質をコードする核酸分子をレトロウイルスベクターにパッケージングしてもよい。非増殖性にされ得る組換えアデノウイルス及びワクチニアウイルスを含めた他のウイルスベクターを使用してもよい。裸のＤＮＡもしくはＲＮＡ、またはウイルスベクターの他に、操作された細菌をベクターとして使用してもよい。
【０１８７】
また、リポソーム、ポリマー微粒子及びポリマーナノ粒子ならびにポリカチオン、例えばアシアロ糖タンパク質／ポリリジンを含めた他の担体で核酸を送達してもよい。
【０１８８】
ウイルス及び担体によって媒介される生体内遺伝子移入に加えて、プラスミドＤＮＡの投与及び粒子撃込媒介遺伝子移入を含めた当技術分野でよく知られている物理的手段をＤＮＡの直接移入のために用いることができる。
【０１８９】
ある実施形態は、ＬＡＩＲ−１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を構成的または誘導的に発現する細胞を提供し、当該細胞は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、２７、３５、４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９、１０７、１１５、２３、３１、３９、４７、５５、６３、７１、７９、８７、９５、１０３、１１１またはそれらの組み合わせのアミノ酸配列をコードする１種類またはそれより多くの核酸を有する。
【０１９０】
５．小分子
免疫調節性作用物質は小分子とすることができる。小分子であるＬＡＩＲ−１のアゴニスト及びアンタゴニスト、ならびにＬＡＩＲ−２のアンタゴニストは、当技術分野において既知であるか、または慣例的なスクリーニング方法を用いて同定することができる。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、スクリーニングアッセイは、試験化合物の大ライブラリーに対する無作為的なスクリーニングを含み得る。あるいは、ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２のレベルを調節する疑いのある特定部類の化合物に絞ったアッセイを用いてもよい。アッセイは、ＬＡＩＲ−１シグナル伝達活性、またはＬＡＩＲ−１により媒介される抑制応答を決定することを含み得る。他のアッセイは、核酸転写または翻訳、ｍＲＮＡレベル、ｍＲＮＡ安定性、ｍＲＮＡ分解、転写速度及び翻訳速度を決定することを含み得る。
【０１９２】
Ｃ．医薬組成物
開示される免疫調節性作用物質を含む医薬組成物を提供する。免疫調節性作用物質を含有する医薬組成物は、非経口的（粘膜内、腹腔内、静脈内（ＩＶ）または皮下への注射）、経皮的（受動的、あるいはイオン導入または電気穿孔を用いる）、または経粘膜的（経鼻的、経膣的、経直腸的または舌下）投与経路によるかまたは生体分解性挿入物を用いる投与のためのものとすることができ、各投与経路に適した剤形に製剤化することができる。
【０１９３】
いくつかの生体内手法では、本明細書に開示される組成物を対象に治療的有効量投与する。本明細書中で使用する場合、「有効量」または「治療的有効量」という用語は、治療されようとしている障害の１つ以上の症候を治療、抑制または緩和するかさもなければ所望の薬理学的及び／または生理学的効果を提供するのに十分な投薬量を意味する。正確な投薬量は、対象依存変数（例えば、年齢、免疫系の健康状態など）、疾患、及びもたらされようとしている治療などの様々な因子によって様々であろう。
【０１９４】
開示される免疫調節性作用物質については、さらなる研究が行われるにつれて、様々な患者の様々な状態の治療に適した投薬レベルに関する情報が明らかになるであろうし、当業者であればレシピエントの治療内容、年齢及び総合的健康状態を考慮して適切な投薬を突き止めることができるであろう。選択される投薬量は、望まれる治療的作用、投与経路、及び望まれる治療継続期間に依存する。開示される免疫調節性作用物質については、大抵、０．００１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重のレベルの投薬量を毎日哺乳動物に投与する。大抵、静脈内への注射または点滴のための投薬量はより低めであり得る。
【０１９５】
ある特定の実施形態では、例えば治療される部位への直接注射によって、免疫調節性作用物質を局所投与する。典型的には、注射は、全身投与によって得ることができる局所濃度よりも高い、増加した免疫調節性作用物質組成物の局所濃度をもたらす。免疫調節性作用物質組成物は、治療される部位の外へのポリペプチドの受動的拡散を軽減することによってポリペプチド組成物の上昇した局所濃度を作り出すのに役立つ上記のようなマトリックスと併用することができる。
【０１９６】
１．非経口投与のための製剤
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、ペプチド及びポリペプチドを含有するものを含めて、非経口注射によって水溶液で投与される。製剤はまた、懸濁液またはエマルジョンの形態であってもよい。一般的には、有効量のペプチドまたはポリペプチドを含み、場合によって薬学的に許容できる希釈剤、保存剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバント及び／または担体を含む、医薬組成物が提供される。そのような組成物は、任意で以下のうちの１つ以上を含む：希釈剤、無菌水、含有する緩衝剤（例えば、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨ及びイオン強度が様々である緩衝生理食塩水、ならびに添加剤、例えば、界面活性剤及び可溶化剤（例えば、ＴＷＥＥＮ２０（ポリソルベート２０）、ＴＷＥＥＮ８０（ポリソルベート８０））、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、ピロ亜硫酸ナトリウム）、及び保存剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール）、及び増量性物質（例えば、ラクトース、マンニトール）。非水溶液またはビヒクルの例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油及びトウモロコシ油、ゼラチン、及び注射用有機エステル、例えばオレイン酸エステルである。製剤は、凍結乾燥させておいて使用直前に再溶解／再懸濁させてもよい。製剤は、例えば細菌保持フィルターに通す濾過、組成物中への滅菌剤の組込み、組成物の照射、または組成物の加熱によって滅菌され得る。
【０１９７】
２．経口投与のための製剤
実施形態では、組成物は経口送達のために製剤化される。経口用固形剤形については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄ．１９９０（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．Ｅａｓｔｏｎ  Ｐａ．１８０４２）の８９章において全般的な記載がなされている。固形剤形としては、例えば、錠剤、カプセル剤、丸剤、トローチ剤または口内錠、カシェ剤、小丸薬、散剤、または顆粒剤、またはポリ乳酸、ポリグリコール酸などのポリマー化合物の微粒子調製物中もしくはリポソーム中に材料を組み込んだものが挙げられる。そのような組成物は、開示物の物理的状態、安定性、生体内での放出速度及び生体内でのクリアランス速度に影響を与え得る。例えば、参照により本明細書に援用されるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄ．（１９９０，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．１８０４２）の１４３５〜１７１２を参照されたい。組成物は、液体形態に調製してもよいし、乾燥粉末（例えば凍結乾燥）形態としてもよい。リポソームカプセル化またはタンパク質様カプセル化を用いて組成物を製剤化してもよい。リポソームカプセル化を用いてもよく、リポソームを様々なポリマーで誘導体化してもよい（例えば、米国特許第５，０１３，５５６号）。Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ｋ．Ｉｎ：Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｇ．Ｓ．Ｂａｎｋｅｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｔ．Ｒｈｏｄｅｓ  Ｃｈａｐｔｅｒ  １０，１９７９も参照されたい。製剤は大抵、ペプチド（またはその化学的改変形態）と、胃環境内でペプチドを保護する不活性成分とを含み、腸内で生物学的活性材料を放出することになる。
【０１９８】
作用物質を化学的に変性させて誘導体の経口送達を効果的なものにすることができる。概して、企図される化学修飾は、成分分子自体への少なくとも１つの部分の取付けであり、当該部分は、胃もしくは腸から血流中への取込みまたは腸粘膜内への直接的取込みを可能にするものである。さらに望まれるのは、１つ以上の成分の全体的安定性の向上及び体内循環時間の延長である。ペグ化は医薬用途での化学的修飾の代表例である。使用され得る他の部分としては、例えば、プロピレングリコール、エチレングリコールとプロピレングリコールとのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリプロリン、ポリ１，３−ジオキソラン及びポリ１，３，６−トリオキソランが挙げられる［例えば、Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｓ（１９８１）“Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒ−Ｅｎｚｙｍｅ  Ａｄｄｕｃｔｓ，”ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｓ  Ｄｒｕｇｓ．Ｈｏｃｅｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｒｏｂｅｒｔｓ，ｅｄｓ．（Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．）ｐｐ．３６７−３８３、及びＮｅｗｍａｒｋ，ｅｔ  ａｌ．（１９８２）Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４：１８５−１８９を参照のこと］。
【０１９９】
別の実施形態は、薬学的に許容できるエマルジョン、溶液、懸濁液及びシロップを含む、経口投与のための液体剤形を提供し、当該液体製剤は、不活性希釈剤；アジュバント、例えば湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤；ならびに甘味剤、香味剤及び芳香剤を含めた他の成分を含有していてもよい。
【０２００】
制御放出型経口製剤であることが望ましい場合がある。拡散か滲出かのどちらかの機序による放出を可能にする不活性マトリックス、例えばガムの中に薬剤を組み込むことができる。また、緩やかに変質するマトリックスを製剤中に組み込んでもよい。制御放出の別の形態は、Ｏｒｏｓ治療システム（Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐ．）に基づくものであり、つまり、浸透圧効果によって水が浸入して薬物を単一の小開口部から押し出すことを可能にする半透過膜の中に、薬物が封入されている。
【０２０１】
経口製剤の場合、放出の場所は胃、小腸（十二指腸、空腸または回腸）または大腸であり得る。いくつかの実施形態では、放出は、薬剤（または誘導体）の保護または胃環境よりも先、例えば腸での薬剤（または誘導体）の放出によって、胃環境の悪影響を回避することになる。十分な胃耐性を確保するには、少なくともｐＨ５．０に対して不透過性であるコーティングが必須である。腸溶性コーティングとして使用されるより一般的な不活性原料の例は、セルロースアセテートトリメリテート（ＣＡＴ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、ＨＰＭＣＰ５０、ＨＰＭＣＰ５５、ポリビニルアセテートフタレート（ＰＶＡＰ）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ３０Ｄ（商標）、Ａｑｕａｔｅｒｉｃ（商標）、セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ（商標）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ（商標）及びＳｈｅｌｌａｃ（商標）である。これらのコーティングを混合フィルムとして使用してもよい。
【０２０２】
３．局所投与のための製剤
開示される免疫調節性作用物質は、局所適用することができる。局所投与は、ほとんどのペプチド製剤ではあまり効かないが、特に肺、鼻腔粘膜、口腔粘膜（舌下、頬側）、膣粘膜または直腸粘膜に適用される場合には有効となり得る。
【０２０３】
組成物は、エアゾール剤か、約５ミクロン未満の空気動力学径を有する噴霧乾燥粒子かのどちらかとして送達された場合、吸入される間に肺へ送達されることができ、肺上皮層を横切って血流へ移行することができる。
【０２０４】
治療製品の肺送達のために考案された、限定されないがネブライザー、定量吸入器及びパウダー吸入器を含めた多種多様な機械的装置を使用することができ、これらは全て、当業者によく知られている。市販の装置のいくつかの具体例は、Ｕｌｔｒａｖｅｎｔネブライザー（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ  Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）、Ａｃｏｒｎ  ＩＩネブライザー（Ｍａｒｑｕｅｓｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｎｇｌｅｗｏｏｄ，Ｃｏｌｏ．）、Ｖｅｎｔｏｌｉｎ定量吸入器（Ｇｌａｘｏ  Ｉｎｃ．，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，Ｎ．Ｃ．）、及びＳｐｉｎｈａｌｅｒパウダー吸入器（Ｆｉｓｏｎｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｅｄｆｏｒｄ，Ｍａｓｓ．）である。Ｎｅｋｔａｒ社、Ａｌｋｅｒｍｅｓ社及びＭａｎｎｋｉｎｄ社はいずれも、承認済みまたは治験中の吸入用インスリンパウダー製剤を取り扱っており、その技術は本明細書に記載の製剤に応用できるであろう。
【０２０５】
粘膜への投与のための製剤は、典型的には噴霧乾燥薬物粒子であろう。これを錠剤、ゲル剤、カプセル剤、懸濁液またはエマルジョンの中に組み込んでもよい。標準的な薬学的賦形剤は任意の製剤製造業者から入手することができる。
【０２０６】
また、経皮製剤を調製してもよい。これらは典型的には、軟膏剤、ローション剤、スプレー剤またはパッチ剤であろう。これらは全て、標準的技術を用いて調製することができる。経皮製剤は、浸透促進剤を含むことを必要とすることがある。
【０２０７】
４．制御送達ポリマーマトリックス
本明細書に開示される免疫調節性作用物質は、制御放出製剤として投与されることもできる。ポリマー装置（棒状物、円柱、フィルム、円盤）の埋植または注射（微粒子）の後に、全身的な長期放出のための制御放出ポリマー装置がもたらされ得る。マトリックスは、微小球などの微粒子の形態であり得、作用物質が固体ポリマーマトリックスまたはマイクロカプセルの中に分散されており、コアがポリマーシェルとは異なる様々な材料からなり、液体または固体の性質を有し得るコアの中にペプチドが分散または懸濁されている。本明細書中で具体的に定義されない限り、微粒子、微小球及びマイクロカプセルは交換可能に使用される。あるいは、ポリマーを数ナノメートル〜４センチメートルに及ぶ薄板もしくはフィルム、粉砕もしくは他の標準的技術によって製造される粉末、さらにはヒドロゲルなどのゲルとして成形してもよい。
【０２０８】
融合ポリペプチドまたは融合ポリペプチドをコードする核酸の送達のために非生体分解性か生体分解性かのどちらかであるマトリックスを使用することができるが、いくつかの実施形態では生体分解性マトリックスが好ましい。これらは天然ポリマーであっても合成ポリマーであってもよいが、いくつかの実施形態では、分解及び放出プロファイルに関する特徴がより良好であることから合成ポリマーが好まれる。ポリマーは、望まれる放出期間に基づいて選択される。ある事例では線形放出が最も有用となり得るが、他の事例ではパルス放出または「バルク放出」の方がより効果的な結果をもたらし得る。ポリマーは、（典型的には吸収している水分が約９０重量％以下である）ヒドロゲルの形態であってもよく、場合によって多価イオンまたはポリマーで架橋されることができる。
【０２０９】
マトリックスは、溶媒蒸発、噴霧乾燥、溶媒抽出及び当業者に知られている他の方法によって形成されることができる。生体分解性微小球は、例えばＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ  ａｎｄ  Ｌａｎｇｅｒ，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，５：１３−２２（１９８７）、Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ，ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，６：２７５−２８３（１９８７）、及びＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉ．，３５：７５５−７７４（１９８８）によって記載されているような、薬物送達用の微小球を作るために開発されたいずれかの方法を用いて作製することができる。
【０２１０】
埋植または注射された場所を治療する局所放出―これは典型的には、身体全体の治療のための投薬量よりもはるかに少ない投薬量を送達することになる―または全身送達のための装置を製剤化することができる。これらは、皮下、筋肉内もしくは脂肪内に埋植もしくは注射されるかまたは嚥下されることができる。
【０２１１】
ＩＩＩ．製造方法
Ａ．抗体を作る方法
抗体は、細胞培養、ファージ、または限定されないがウシ、ウサギ、ヤギ、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ヒツジ、イヌ、ネコ、サル、チンパンジー、類人猿を含めた様々な動物において生成させることができる。したがって、一実施形態において、抗体は哺乳動物抗体である。ファージ技術を用いて、初期抗体を単離することまたは、特異性もしくはアビディティー特質が変化した変異型を生成することができる。そのような技術は慣例的なものであり、当技術分野でよく知られている。一実施形態において、抗体は、当技術分野で知られている組換え手段によって作られる。例えば、抗体をコードするＤＮＡ配列を含むベクターを宿主細胞にトランスフェクトすることによって組換え抗体を作ることができる。１つ以上のベクターを使用して、１つのＶＬ領域と１つのＶＨ領域とを少なくとも発現するＤＮＡ配列を宿主細胞にトランスフェクトすることができる。抗体を生成及び製造する組換え手段についての例示的な記載としては、Ｄｅｌｖｅｓ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ：Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｗｉｌｅｙ，１９９７）、Ｓｈｅｐｈｅｒｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０００）、Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  Ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９３）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ｍｏｓｔ  ｒｅｃｅｎｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ）が挙げられる。
【０２１２】
開示される抗体は、所望の機能を媒介する抗体の有効性がより高くなるように組換え手段によって改変されることができる。したがって、組換え手段を用いて抗体を置換によって改変することができることは本発明の範囲内である。典型的には、置換は保存的置換であろう。例えば、抗体の定常領域の少なくとも１つのアミノ酸を異なる残基で置き換えることができる。例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、米国特許第６，１９４，５５１号、出願番号第ＷＯ９９５８５７２号、及びＡｎｇａｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５−０８（１９９３）を参照されたい。アミノ酸の改変としては、例えば、アミノ酸の欠失、付加及び置換が挙げられる。ある事例では、そのような変更は、望まれない活性、例えば補体依存性細胞傷害を軽減するためになされる。抗体は、検出可能な信号を提供する物質との共有結合か非共有結合かのどちらかの結合によって標識されることがよくある。多種多様な標識及び複合技術が知られており、科学文献及び特許文献の両方において広く報告されている。ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２のタンパク質、ポリペプチドまたは融合タンパク質との結合に関するスクリーニングがこれらの抗体に対して行われ得る。例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９６）を参照されたい。
【０２１３】
例えば、試験管内アッセイ、例えば、限定されないが、増殖、遊走、接着、軟寒天成長、血管新生、細胞間伝達、アポトーシス、輸送、シグナル伝達、及び腫瘍成長の抑制などの生体内アッセイを用いて、所望の生物学的活性を有する適切な抗体を同定することができる。本明細書において提供される抗体は診断用途にも有用であり得る。特定抗原の受容体結合活性または生物学的活性を抑制することなく当該抗原に結合する能力に関するスクリーニングを捕捉抗体または非中和抗体としての抗体に対して行うことができる。中和抗体としての抗体は競合的結合アッセイにおいて有用であり得る。
【０２１４】
開示される組成物及び方法に使用することができる抗体としては、例えば、任意のクラスの全免疫グロブリン（すなわち完全抗体）、その断片、及び少なくとも抗体の抗原結合可変ドメインを含有する合成タンパク質が挙げられる。可変ドメインは、抗体によって配列が異なり、各特定抗体のその特定抗原に対する結合性及び特異性において使用される。しかしながら、可変性はいつも抗体の可変ドメインに一様に分布しているわけではない。それは、軽鎖及び重鎖のどちらの可変ドメインにおいても、相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中していることが典型的である。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重軽鎖の可変ドメインは、３つのＣＤＲに連結されておりかつ概してベータシート配置をとっている各々４つのＦＲ領域を含み、ＣＤＲは、ベータシート構造を連結しており、ある場合にはその一部を形成しているループを形成する。各鎖のＣＤＲはＦＲ領域によって極めて接近してまとめ合わされており、他方の鎖のＣＤＲと共に抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。
【０２１５】
さらに、生物活性を有する抗体の断片を開示する。断片は、他の配列に取り付けられているか否かにかかわらず、特定領域または特定アミノ酸残基の挿入、欠失、置換または選択される他の改変を含み、但し、断片の活性が非改変型の抗体または抗体断片に比べて顕著に変化または損なわれないことを条件とする。
【０２１６】
抗原ペプチドに特異的な一本鎖抗体を作るために技術を適合させることもできる。一本鎖抗体を作る方法は当業者によく知られている。一本鎖抗体は、短いペプチドリンカーを使用して重軽鎖の可変ドメイン同士を融合させてそれによって単一分子上に抗原結合部位を再構築することによって作り出すことができる。抗原結合性または結合の特異性を大きく乱すことなく、一方の可変ドメインのＣ末端を他方の可変ドメインのＮ末端に１５〜２５アミノ酸のペプチドまたはリンカーで繋ぎとめた一本鎖抗体可変断片（ｓｃＦｖ）が開発された。リンカーは、重軽鎖がそれらの適切な配座配向で結合し合うのを可能にするように選択される。
【０２１７】
２つのｓｃＦｖを繋げることによって二価一本鎖可変断片（ｄｉ−ｓｃＦｖ）を構築することができる。これは、一本のペプチド鎖と共に２つのＶＨ領域及び２つのＶＬ領域を生成させてタンデムｓｃＦｖを生むことによって行われ得る。２つの可変領域が折りたたまれ合うには短すぎるリンカーペプチド（約５アミノ酸）を有するｓｃＦｖを構築してｓｃＦｖが二量体化するように仕向けることもできる。このタイプはダイアボディとして知られている。ダイアボディは、解離定数が対応するｓｃＦｖの４０分の１以下であり、それらの標的に対する親和性がよりはるかに高いことを意味している。さらに短いリンカー（１または２アミノ酸）は、三量体（トリアボディまたはトリボディ）の形成を引き起こす。テトラボディも作られている。それらはダイアボディよりもいっそう高いそれらの標的との親和性を呈する。
【０２１８】
モノクローナル抗体は実質的に同種の抗体集団から得られ、つまり、集団中の個々の抗体は、抗体分子の小サブセット中に存在することがあり得る天然起源の突然変異を除けば同一である。モノクローナル抗体は、所望の拮抗的活性を呈する限りにおいて「キメラ」抗体及びそのような抗体の断片を含むが、当該キメラ抗体は、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定種に由来するかまたは特定抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体において対応する配列と同一または相同的である一方、鎖（複数可）の残部が、別種に由来するかまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体において対応する配列と同一または相同的である。
【０２１９】
モノクローナル抗体は、モノクローナル抗体を生成させる任意の手順を用いて作られることができる。ハイブリドーマ法では、マウスまたはその他の適切な宿主動物を典型的には免疫化剤で免疫化して、免疫化剤に特異的に結合する抗体を産生するまたは産生することができるリンパ球を誘出する。あるいは、リンパ球を試験管内で免疫化してもよい。
【０２２０】
抗体を組換えＤＮＡ法によって作ってもよい。開示される抗体をコードするＤＮＡは、従来の（例えば、マウス抗体の重軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによる）手順を用いて容易に単離及び配列決定することができる。ファージディスプレイ技術を用いて、抗体または活性抗体断片のライブラリーを生成してスクリーニングを行うこともできる。
【０２２１】
タンパク質化学を用いて抗体を作る方法も当技術分野で知られている。抗体を含むタンパク質を生成させる１つの方法は、タンパク質化学技術によって２つ以上のペプチドまたはポリペプチドを繋ぎ合わせることである。例えば、Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）またはＢｏｃ（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボノイル）化学を用いて、現在入手できる実験設備を使用してペプチドまたはポリペプチドを化学的に合成することができる。（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）。当業者であれば、例えば抗体に対応するペプチドまたはポリペプチドを標準的化学反応によって合成できることを容易に認識することができる。例えば、ペプチドまたはポリペプチドを合成してその合成樹脂から切り離さないでおくことができるのに対し、抗体の他方の断片を合成してその後に樹脂から切り離すこと、したがって他方の断片上で官能基遮断される末端基を露出させることができる。ペプチド縮合反応により、これら２つの断片をそれらのそれぞれカルボキシ末端及びアミノ末端におけるペプチド結合によって共有結合的に継ぎ合わせて抗体またはその断片を形成することができる。あるいは、ペプチドまたはポリペプチドは独立して上記のように生体内で合成される。これらの独立したペプチドまたはポリペプチドは、一旦単離されると、同様のペプチド縮合反応によって連結されて抗体またはその抗原結合断片を形成し得る。
【０２２２】
例えば、クローニングされた、または合成のペプチドセグメントの酵素的連結は、比較的短いペプチド断片を継ぎ合わせてより大きいペプチド断片、ポリペプチドまたは全タンパク質ドメインを生成させることを可能にする。あるいは、合成ペプチドの天然の化学的連結を利用して大きいペプチドまたはポリペプチドをより短いペプチド断片から合成的に構築することができる。この方法は、２ステップの化学反応からなる。第１のステップでは、非保護合成ペプチド−アルファ−チオエステルと、アミノ末端Ｃｙｓ残基を含有する別の非保護ペプチドセグメントとを化学選択的に反応させてチオエステル結合中間体を初期共有結合生成物として得る。反応条件の変更なしでこの中間体は自発的で迅速な分子内反応を受けて連結部位に天然のペプチド結合を形成する。
【０２２３】
Ｂ．タンパク質を生成する方法
開示されるタンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型及び融合体は、当技術分野で知られている従来技術を用いて製造することができる。単離融合タンパク質は、例えば、化学合成、または宿主細胞での組換え産生によって得ることができる。タンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型もしくは融合体を組換え的に産生させるには、タンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型もしくは融合体をコードするヌクレオチド配列を含有する核酸を使用して細菌または真核生物宿主細胞（例えば、昆虫、酵母または哺乳動物細胞）に対して形質転換、遺伝子導入またはトランスフェクションを行うことができる。一般に、核酸構築物は、タンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型もしくは融合体をコードするヌクレオチド配列に機能可能に繋げられた調節配列を含む。調節配列（本明細書中では発現制御配列とも呼ぶ）は、典型的には遺伝子産物をコードしないが、その代わりに機能可能に繋げられている核酸配列の発現に影響を及ぼす。
【０２２４】
ポリペプチドの発現及び産生に有用な原核生物及び真核生物系は、例えばＢＬ−２１などのエシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）系統、及びＣＨＯ細胞などの培養哺乳動物細胞を含めて、当技術分野でよく知られている。
【０２２５】
真核生物宿主細胞では、ウイルスに基づく多くの発現系を利用して融合タンパク質を発現させることができる。ウイルスに基づく発現系は当技術分野でよく知られており、限定されないが、バキュロウイルス、ＳＶ４０、レトロウイルスまたはワクチニア系ウイルスのベクターを含む。
【０２２６】
タンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型もしくは融合体を安定的に発現する哺乳動物細胞株は、適切な制御エレメントと選択マーカーとを有する発現ベクターを使用して製造することができる。例えば、真核生物発現ベクターｐＣＲ３．１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及びｐ９１０２３（Ｂ）（Ｗｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：８１０−８１５を参照のこと）は、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ−１細胞、ヒト胚性腎臓２９３細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＢＨＫ２１細胞、ＭＤＣＫ細胞及びヒト血管上皮細胞（ＨＵＶＥＣ）におけるタンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型もしくは融合体の発現に適する。さらなる適切な発現系としては、例えば、Ｌｏｎｚａ  Ｇｒｏｕｐ  Ｌｔｄ．から入手できるＧＳ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（商標）が挙げられる。
【０２２７】
電気穿孔、リポフェクション、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウム共沈、ＤＥＡＥデキストランまたはその他の適切なトランスフェクション方法による発現ベクターの導入に続いて、安定な細胞株を（例えば、代謝選抜、またはＧ４１８、カナマイシンもしくはヒグロマイシンに対する抗生物質耐性によって）選抜することができる。トランスフェクトされた細胞を、関心対象のポリペプチドが発現するように培養することができ、ポリペプチドを例えば細胞培養上清または溶解細胞から回収することができる。あるいは、タンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型もしくは融合体は、（ａ）増幅した配列をｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）などの哺乳動物発現ベクターにライゲートすること、及び（ｂ）コムギ胚芽抽出物またはウサギ網状赤血球溶解物を使用して試験管内で転写及び翻訳させることによって生成させることができる。
【０２２８】
タンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型もしくは融合体は、例えば、親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ＤＥＡＥイオン交換、ゲル濾過及びヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーなどのクロマトグラフィー法を用いて単離することができる。いくつかの実施形態では、タンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型もしくは融合体は、親和性マトリックス上にポリペプチドが捕捉されるのを可能にするアミノ酸配列を含有する追加ドメインを含有するように操作することができる。例えば、プロテインＡカラムを使用して細胞培養上清中または細胞質抽出物中のＦｃ融合ポリペプチドを単離することができる。さらに、ｃ−ｍｙｃ、ヘマグルチニン、ポリヒスチジンまたはＦｌａｇ（商標）（Ｋｏｄａｋ）などのタグを使用してポリペプチド精製に役立てることができる。そのようなタグは、カルボキシ末端あるいはアミノ末端を含めたポリペプチド内のどこにでも挿入されることができる。他の有用であり得る融合体は、ポリペプチドの検出に役立つ酵素、例えばアルカリホスファターゼを含む。免疫親和性クロマトグラフィーを用いてポリペプチドを精製することもできる。融合タンパク質はさらに、（分泌シグナルが既に存在していない場合に）タンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型もしくは融合体がそれを産生する細胞によって分泌されることを引き起こす分泌シグナルを含有するように操作することができる。その後、分泌されたタンパク質、ポリペプチド、その断片、変異型もしくは融合体を細胞培地から簡便に単離することができる。
【０２２９】
Ｃ．単離核酸分子を生成する方法
単離核酸分子は、限定されないが、一般的な分子クローニング及び化学的核酸合成技術を含めた標準的技術によって生成させることができる。例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術を用いて、変異型ポリペプチドをコードする単離核酸を得ることができる。ＰＣＲは、標的核酸を酵素的に増幅する技術である。典型的には、増幅する鋳型の対向鎖と配列が同一であるオリゴヌクレオチドプライマーを設計するために関心対象の領域の端部またはその先からの配列情報を採用することができる。ゲノムＤＮＡ全体または細胞ＲＮＡ全体からの配列を含めて、ＤＮＡ及びＲＮＡからの特定配列を、ＰＣＲを用いて増幅することができる。プライマーは、典型的には長さが１４〜４０ヌクレオチドであるが、長さが１０〜数百ヌクレオチドに及ぶこともある。一般的なＰＣＲ技術は、例えば、ＰＣＲ  Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｅｄ．ｂｙ  Ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈ  ａｎｄ  Ｄｖｅｋｓｌｅｒ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９５に記載されている。ＲＮＡを鋳型の元として使用する場合には、逆転写酵素を使用して相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）鎖を合成することができる。リガーゼ連鎖反応、鎖置換増幅、自家持続配列複製または核酸配列ベース増幅を用いて単離核酸を得ることもできる。例えば、Ｌｅｗｉｓ（１９９２）Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｎｅｗｓ  １２：１、Ｇｕａｔｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：１８７４−１８７８、及びＷｅｉｓｓ（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５４：１２９２−１２９３を参照されたい。
【０２３０】
単離核酸は、単一の核酸分子として、あるいは（例えば、３’から５’の方向への自動化ＤＮＡ合成のためのホスホロアミダイト技術を用いて）一連のオリゴヌクレオチドとして化学的に合成することができる。例えば、オリゴヌクレオチド対がアニーリングされるときに二本鎖が形成されるような短い相補性セグメント（例えば約１５ヌクレオチド）が各対に含まれている、所望の配列を含有する１対以上の長い（例えば１００ヌクレオチド超の）オリゴヌクレオチドを合成することができる。ＤＮＡポリメラーゼを使用してオリゴヌクレオチドを伸長させることができ、結果としてオリゴヌクレオチド１対あたり１つの二本鎖核酸分子が得られ、次にこれをベクターにライゲートすることができる。また、突然変異誘発によって単離核酸を得ることもできる。オリゴヌクレオチド誘発突然変異導入及び／またはＰＣＲによる部位特異的変異導入を含めた標準的技術を用いて、タンパク質をコードする核酸を突然変異させることができる。例えば、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｃｈａｐｔｅｒ  ８，Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ，１９９２を参照されたい。
【０２３１】
ＩＶ．アッセイ及び抗体スクリーニング
がん療法のためのＬＡＩＲ−２Ｆｃ融合タンパク質（「ＬＡＩＲ−２−Ｆｃ」）の製造は、ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂの開発及びスクリーニングの必要性を回避する。ＬＡＩＲ−２はＬＡＩＲ−１よりも親和性が高いため、いくつかの実施形態ではＬＡＩＲ−１  Ｆｃ融合タンパク質（「ＬＡＩＲ−１−Ｆｃ」）よりもＬＡＩＲ−２−Ｆｃの方が治療処置として選択される。いくつかの実施形態では、マウスにはＬＡＩＲ−２が存在していないため、ＬＡＩＲ−１−Ｆｃがマウス前臨床モデルで利用され得る。
【０２３２】
Ａ．ＬＡＩＲ−２−Ｆｃのアッセイ
１．コラーゲンの複数の形態、ＳＰ−Ｄ、Ｃ１ｑ及びＭＢＬと結合する能力のＥＬＩＳＡによる確認。
２．複数のコラーゲン、ＳＰ−Ｄ及びＣ１ｑのＬＡＩＲ−１への結合を阻害するＬＡＩＲ−２−Ｆｃの能力の確認。これは、滴定量のＬＡＩＲ−２−Ｆｃ及び蛍光標識されたＬＡＩＲリガンドの存在下でインキュベートされたＬＡＩＲ−１トランスフェクト細胞を使用して１）ＥＬＩＳＡ競合アッセイ及び２）フローサイトメトリーによって試験することができる。
３．ＬＡＩＲ−１と比較したときの、リガンドに対するＬＡＩＲ−２−Ｆｃの結合親和性の分析。
４．ＬＡＩＲ−２−ＦｃがＬＡＩＲ−１発現細胞によるシグナル伝達を阻止することを確認する機能アッセイ。レポーター細胞をこれらのアッセイに利用してもよく、または別の選択肢に初代ＬＡＩＲ−１＋細胞がある。
【０２３３】
Ｂ．ＬＡＩＲ−２遮断ｍＡｂのアッセイ及び抗体スクリーニング
ＬＡＩＲ−２はマウスには存在していないため、ＬＡＩＲ−２に対する高親和性ｍＡｂを生成するために野生型マウスを利用することができる。ＬＡＩＲ−２は可溶性であり、可溶性リガンドに結合するため、トランスフェクト細胞のスクリーニングはこの分子のための選択肢にならない。
１．第Ｉ段階のスクリーニング：ＥＬＩＳＡによる、ＬＡＩＲ−１ではなくＬＡＩＲ−２に対するｍＡｂの結合。これらのｍＡｂはＬＡＩＲ−２に対して高度に特異的でなければならない。
２．第ＩＩ段階のスクリーニング：ＬＡＩＲ−２特異的ｍＡｂは、複数のコラーゲン、ＳＰ−Ｄ、Ｃ１ｑ及びＭＢＬに対するＬＡＩＲ−２の結合を遮断するものでなければならない。３種全てのリガンドとの結合を遮断するｍＡｂは１つもない可能性があり、それゆえ、最大の治療的効能を得るためには全ての相互作用を遮断する製剤として多数のＬＡＩＲ−２  ｍＡｂを同時に使用せねばならないことがある。
３．第ＩＩＩ段階のスクリーニング：滴定量の可溶性ＬＡＩＲ−２の存在下、滴定量の複数のコラーゲン、ＳＰ−Ｄ、Ｃ１ｑ及びＭＢＬの存在下でＬＡＩＲ−２  ｍＡｂまたはｍＡｂの組み合わせがＬＡＩＲ−１シグナル伝達を増加させることを確認する機能アッセイ。（つまり、ＬＡＩＲ−２  ｍＡｂは、可溶性ＬＡＩＲ−２へのリガンドの到達を遮断するもの、よってリガンドを細胞表面のＬＡＩＲ−１に結合させて負のシグナル伝達経路を誘導するものでなければならない。）
第ＩＩ及び第ＩＩＩ段階のアッセイは、生体内で生理学的レベルのリガンドを遮断するのに要求されるＬＡＩＲ−２  ｍＡｂ（複数可）の濃度を予測するために用いることができる。
【０２３４】
Ｃ．ＬＡＩＲ−１遮断ｍＡｂまたはＬＡＩＲ−１枯渇ｍＡｂのアッセイ及び抗体スクリーニング
独自の免疫化技術を用いてＬＡＩＲ−１に対する高親和性ｍＡｂを生成するために、ＬＡＩＲ−１欠損（「ノックアウト」）マウスまたは野生型マウスを利用することができる。
１．第Ｉ段階のスクリーニング：ＥＬＩＳＡによる、ＬＡＩＲ−２ではなくＬＡＩＲ−１に対するｍＡｂの結合。細胞表面ＬＡＩＲ−１を発現するようにトランスフェクトされた細胞株に対するｍＡｂ結合。加えて、ｍＡｂは、初代ヒト細胞サブセットの表面に内因的に発現したＬＡＩＲ−１と結合する能力を有していなければならない。これらのｍＡｂは、ＬＡＩＲ−１に対して高度に特異的でなければならない。
２．第ＩＩ段階のスクリーニング：ＬＡＩＲ−１特異的ｍＡｂは、複数のコラーゲン、ＳＰ−Ｄ及びＣ１ｑのうちの１つ以上に対するＬＡＩＲ−１の結合を遮断するものでなければならない。３種全てのリガンドとの結合を遮断するｍＡｂは１つもない可能性があり、それゆえ、最大の治療的効能を得るためには全ての相互作用を遮断する製剤として多数のＬＡＩＲ−１  ｍＡｂを同時に使用せねばならないことがある。
３．第ＩＩＩ段階のスクリーニング：滴定量の複数のコラーゲン、ＳＰ−Ｄ及びＣ１ｑの存在下でＬＡＩＲ−１  ｍＡｂまたはｍＡｂの組み合わせがＬＡＩＲ−１シグナル伝達を減少させる（アンタゴニストまたは遮断ｍＡｂである）ことを確認する機能アッセイ。これらのアッセイは、内因性ＬＡＩＲ−１を発現する細胞株、例えばＴＨＰ−１細胞、または初代細胞、例えばヒト単球、マクロファージ及び樹状細胞サブセットを利用してＬＡＩＲ−１  ｍＡｂの存在下での機能を評価することになる。加えて、レポーター細胞株を使用して、ＮＦｋＢ（ＮＦｋＢレポーター）またはＮＦＡＴ（ＮＦＡＴレポーター）などのシグナル伝達経路がＬＡＩＲ−１  ｍＡｂとの培養の後に変化するか否かを判定してもよい。
４．第ＩＶ段階のスクリーニング：ＬＡＩＲ−１発現細胞株の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、または他の機序による細胞アポトーシスをＬＡＩＲ−１  ｍＡｂが誘導することができるか否かを判定する、機能アッセイ。特に、ＬＡＩＲ−１を細胞表面に発現することが知られているＴＨＰ−１などの白血病細胞株をこれらの方法のうちの１つによって枯渇させる、ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂの能力を試験することになる。また、ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂを、ＬＡＩＲ−１発現細胞を枯渇させるように操作して、既知の方法によって本書中で後に記載するように試験してもよい。
５．第Ｖ段階のスクリーニング：ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂが、ＬＡＩＲ−１を介してＬＡＩＲ−１発現細胞内に負のシグナルを伝達または誘導して細胞機能を抑制することができる（アゴニストである）か否かを判定する機能アッセイ。ＬＡＩＲ−１を内因的に発現するＴＨＰ−１もしくはＵ９３７などの細胞株、またはトランスフェクトされたＫ５６２などの細胞株を、ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂとの培養後に抑制について評価することになる。他のアッセイでは、レポーター細胞株を使用して、正のシグナル伝達経路、例えばＮＦ−ｋＢ（ＮＦ−ｋＢレポーター）または他の既知の細胞シグナルレポーターをＬＡＩＲ−１  ｍＡｂが弱めることを判定することになる。ＴＨＰ−１及びＵ９３７などの細胞株におけるアポトーシスの誘導についても評価されることになる。
第ＩＩ及び第ＩＩＩ段階のアッセイは、生体内で生理学的レベルのリガンドを遮断するのに要求されるＬＡＩＲ−１  ｍＡｂ（複数可）の濃度を予測するために用いることができる。
【０２３５】
Ｖ．使用方法
今日までの証拠は、ＬＡＩＲ−１細胞表面受容体にとっての抑制的役割を示し、また、ＬＡＩＲ−２が、ＬＡＩＲ−１と同じリガンドと結合することによってＬＡＩＲ−１の機能に間接的に拮抗し、それによって本質的にデコイ受容体としての役割を果たしたことを示している。腫瘍微小環境は、ＬＡＩＲ−１リガンドコラーゲンを含めた細胞外マトリックスタンパク質（ＥＣＭ）に富むことが多い（Ｒｙｇｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４９：４０２−４０６）。このため、腫瘍微小環境に局在するＬＡＩＲ−１発現細胞は、ＬＡＩＲ−１のコラーゲン架橋及びその後の抑制性シグナル伝達によって著しく抑制され得る。ＬＡＩＲ−１発現及びシグナル伝達の増加は、いくつかの免疫細胞サブセットの増殖、分化及び機能を抑制することが示され、それゆえ、抗腫瘍免疫性をとりわけＬＡＩＲ−１リガンドであるコラーゲン、Ｃ１ｑ及びＳＰ−Ｄのレベルが高い腫瘍微小環境において抑制すると考えられている。
【０２３６】
コラーゲン及びＣ１ｑはどちらもＬＡＩＲ−１を介して抗原提示細胞（単球／マクロファージ／樹状細胞（ＤＣ））の分化及び活性化を制限する、または変化させることが示されている。ＬＡＩＲ−１は、ＡＰＣ上での発現よりもはるかに低いレベルではあるがＮＫ細胞上及びＴ細胞上にも発現することが分かっている。それにもかかわらず、研究は、ＮＫ細胞及びＴ細胞において架橋しているＬＡＩＲ−１が増殖及び機能を抑制し得ることを示した。このため、ＬＡＩＲ−１架橋を減少させることでがん及び感染性疾患に対する免疫応答を増大させることができると考えられている。ＬＡＩＲ−２の上昇したレベルは、同じ機序によって抗腫瘍免疫性を促進すると考えられている。したがって、ＬＡＩＲ−１及びＬＡＩＲ−２ポリペプチドならびにＬＡＩＲ−１及びＬＡＩＲ−２融合タンパク質を含めて可溶性ＬＡＩＲ−１及び可溶性ＬＡＩＲ−２はヒト疾患の治療のために利用することができる。例えば、ＬＡＩＲ−２Ｆｃタンパク質をがん免疫療法のために使用して、ＬＡＩＲ−１とのリガンドの結合を防止することによって免疫機能を強化することができる。この方策は大いに有望である、というのも、ＬＡＩＲ−２はＬＡＩＲ−１よりも高い親和性でリガンドに結合するからである。
【０２３７】
あるいは、高レベルのＬＡＩＲ−１を発現するＡＭＬ癌細胞上のＬＡＩＲ−１を介したシグナル伝達は、独特のＬＡＩＲ−１−ＳＨＰ−１−ＣＡＭＫ１−ＣＲＥＢ経路を介してアポトーシス及び分化を抑制することによってＡＭＬ細胞の自己再生能または『幹細胞性』を維持する（Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１７：６６５−６７７）。これらのがんでは、ＬＡＩＲ−１シグナル伝達の減少はＡＭＬ細胞死につながる。したがって、白血病におけるＬＡＩＲ−１シグナル伝達の遮断（すなわち拮抗作用）は、白血病の根絶のための治療法であると考えられている。このことから、ＬＡＩＲ−１モノクローナル抗体による、またはＬＡＩＲ−１及びＬＡＩＲ−２ポリペプチドならびにＬＡＩＲ−１及びＬＡＩＲ−２融合タンパク質を含めた可溶性ＬＡＩＲ−１及び可溶性ＬＡＩＲ−２によるＬＡＩＲ−１シグナル伝達の遮断は、がん細胞生存の直接的抑制による、及び抗腫瘍免疫応答の促進による白血病の治療のために利用され得る。
【０２３８】
反対に、ＬＡＩＲ−１の発現または機能の低下はいくつかの自己免疫症状発現に関連しており、一方、ＬＡＩＲ−２の過剰発現はＬＡＩＲ−１リガンドのデコイ結合によって自己免疫性を促進し得る。ＬＡＩＲ−２のＬＡＩＲ−１リガンドとの結合は、ＬＡＩＲ−１の細胞表面架橋を本質的に減少させることができ、過剰反応性の免疫機能を招く抑制性シグナル伝達経路に限界を設けることができる。このことから、ＬＡＩＲ−１架橋の増加は、例えば自己免疫性の疾患または炎症の場合での活動し過ぎる、または不適切である免疫応答を減少させることができると考えられている。例えば、ｍＡｂによるＬＡＩＲ−２の遮断を自己免疫疾患の治療に利用することができるであろう、というのも、これはＬＡＩＲ−１に対するリガンド結合を増加させ、したがって免疫応答を下方制御するであろうからである。ＬＡＩＲ−２を標的とすることは、関節リウマチの場合に示されているように（Ｌｅｂｂｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８０：１６６２−１６６９）、細胞表面でのＬＡＩＲ−１と可溶性ＬＡＩＲ−２との間に発現の不均衡が存在する疾患において大いに有効であろう。
【０２３９】
例示的な方法について以下でより詳しく述べる。
【０２４０】
Ａ．免疫応答の刺激
１．治療方策
対象において免疫応答を誘発または強化する方法を提供する。典型的には、本方法は、免疫調節性作用物質、または免疫調節性作用物質による生体外での初回刺激を受けた細胞を対象に有効量投与することを含む。免疫応答は、例えば、抗原に対する一次免疫応答または、エフェクター細胞機能の増強、例えば、Ｔ細胞の抗原特異的増殖の増進、Ｔ細胞によるサイトカイン産生の強化、分化の刺激、もしくはそれらの組み合わせであり得る。いくつかの実施形態では、作用物質は、Ｔｈ１、Ｔｈ１７、Ｔｈ２２、またはその他の、限定されないがＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−ベータ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１７、ＩＬ−６、ＩＬ−２３、ＩＬ−２２、ＩＬ−２１及びＭＭＰを含めた炎症性分子を分泌するかもしくは他細胞に分泌させる細胞にナイーブＴ細胞が発達することを増進することができる。いくつかの実施形態では、作用物質は、Ｔｒｅｇの活性を低減または抑制すること、ＴｒｅｇからのＩＬ−１０などのサイトカインの産生を減少させること、Ｔｒｅｇの分化を減少させること、Ｔｒｅｇの数を減少させること、免疫細胞集団中のＴｒｅｇの比率を低減すること、またはＴｒｅｇの生存を低減することができる。免疫調節性作用物質は、それを必要とする対象に、Ｔ細胞消耗及び／またはＴ細胞アネルギーを克服するのに有効な量で投与することができる。Ｔ細胞消耗またはＴ細胞アネルギーの克服は、既知の技術を用いてＴ細胞機能を測定することによって判定することができる。
【０２４１】
本方法は、免疫応答を刺激する治療適用として生体内または生体外で用いることができる。かくして、いくつかの実施形態では、作用物質、または作用物質をコードする核酸を対象に直接投与する。いくつかの実施形態では、作用物質、または作用物質をコードする核酸を細胞（例えば免疫細胞）と生体外で接触させ、処理細胞を対象に投与する（例えば養子移入）。総じて、開示される免疫調節性作用物質は、対象の免疫系によって免疫応答が向けられる任意の疾患もしくは障害を有するまたはその素因を有する対象を治療するために使用することができる。作用物質は、より堅牢な免疫応答を可能にすることができる。開示される組成物は、Ｔ細胞が関与する免疫応答を刺激または強化するのに有用である。
【０２４２】
免疫応答を増大させるために利用される免疫調節性作用物質は、典型的には、ＬＡＩＲ−１の発現、リガンド結合、架橋、負のシグナル伝達、またはそれらの組み合わせを減少させるものである。例えば、作用物質は、ＬＡＩＲ−１のアンタゴニスト、例えば、アンタゴニスト（遮断）抗ＬＡＩＲ−１抗体またはその抗原結合断片であり得る。いくつかの実施形態では、アンタゴニストはＬＡＩＲ−１コラーゲン結合ドメインに結合する（例えば、参照により全体を具体的に援用するＢｒｏｎｄｉｊｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１８（１１５）：１３６４−７３（２０１０）ならびにＺｈｏｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１２７（５）：５２９−５３７（２０１６）及びその補足情報を参照のこと）。いくつかの実施形態では、ＬＡＩＲ−１アンタゴニスト、例えば機能遮断性抗体またはその機能性断片は、ＬＡＩＲ−１の（例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に関する）Ｒ５９、Ｅ６１、Ｒ６２、Ｅ６３、Ｒ６５、Ｓ６６、Ｙ６８、Ｎ６９、Ｉ１０２、Ｒ１００、Ｗ１０９、Ｅ１１１、Ｑ１１２及びＹ１１５のうちの１つ以上を含むエピトープに特異的に結合する。作用物質は、１つ以上のＬＡＩＲ−１リガンドのデコイ受容体としての役割を果たすことができるＬＡＩＲ−１ポリペプチド、例えば可溶性ポリペプチドまたはその融合タンパク質とすることもできる。作用物質は、１つ以上のＬＡＩＲ−１リガンドのデコイ受容体としての役割を果たすことができるＬＡＩＲ−２またはその機能性断片もしくは融合タンパク質とすることもできる。
【０２４３】
例えば、いくつかの実施形態では、がんまたは感染症を有する対象に有効量のＬＡＩＲ−２融合タンパク質、例えばＬＡＩＲ−２−Ｆｃを投与する。ＬＡＩＲ−２−Ｆｃによる患者の治療は、ＬＡＩＲ−１受容体の架橋を減少させ、これに続いてＬＡＩＲ−１＋細胞の抑制性シグナル伝達を減少させ、免疫機能を向上させるであろう。細胞表面ＬＡＩＲ−１に比べて可溶性ＬＡＩＲ−２のレベルを上昇させる方向に比率を傾けることは、とりわけＬＡＩＲ−１／２リガンドが高発現する腫瘍微小環境において、抗腫瘍免疫性を強化するのに有利に働くであろう。
【０２４４】
両方のコラーゲン、ＳＰ−Ｄ及び／またはＣ１ｑのレベルが高く、高レベルのＬＡＩＲ−１を発現する免疫浸潤物を有する腫瘍微小環境は、開示される免疫療法（例えばＬＡＩＲ−２−Ｆｃ免疫療法）によって理想的であろう。卵巣癌はコラーゲンのレベルが高いが、ＳＰ−Ｄ及びＣ１ｑレベルが高いかどうかは不明である。これに対して、肺癌及び消化器癌は、コラーゲンとＳＰ−Ｄとが両方とも高レベルであり得、それゆえ、ＬＡＩＲ−２−Ｆｃの標的となるがんであり得る。他の実施形態では、可溶性ＬＡＩＲ−２、可溶性ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−１融合タンパク質（例えばＬＡＩＲ−１−Ｆｃ）を利用する。いくつかの実施形態では、ＬＡＩＲ−２に基づく分子を選択する場合がある、というのも、ＬＡＩＲ−２はＬＡＩＲ−１よりも高い親和性でリガンドと結合するからである。
【０２４５】
例えば機能遮断性抗ＬＡＩＲ−１抗体を使用する、ＬＡＩＲ−１遮断は、可溶性のＬＡＩＲ−１及びＬＡＩＲ−２ポリペプチド及び融合タンパク質の代替物質または補完物質となり得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＬＡＩＲ−１遮断を可溶性ＬＡＩＲ−１もしくはＬＡＩＲ−２またはその融合タンパク質などのデコイ受容体と組み合わせる。併用治療（例えばＬＡＩＲ−２−ＦｃとＬＡＩＲ−１遮断）は相補的であり得る。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、（例えばがんまたは感染症の治療における）免疫応答刺激療法は、ＬＡＩＲ−１＋細胞の枯渇を含む。ＬＡＩＲ−１はマウス及びヒト卵巣癌腹水において高発現する。ＬＡＩＲ−１の上方制御は免疫調節性マクロファージ及びＦ４／８０＋ＤＣに限られ、これらはどちらも高レベルのＰＤ−Ｌ１を共発現する。したがって、ＬＡＩＲ−１発現細胞の枯渇を標的化することは腫瘍微小環境の卵巣症状を免疫調節集団の除去によって改善するであろう。卵巣癌においては他の細胞サブセット上でのＬＡＩＲ−１の発現は認められていないが、ＬＡＩＲ−１は普遍的に抑制性であるため、他のＬＡＩＲ−１＋細胞の枯渇もまた、免疫抑制を減少させ抗腫瘍免疫性を向上させる効果を有するであろう。ＬＡＩＲ−１は、急性骨髄性白血病癌の表面に発現しかつその発達に必須であるということも示されている（Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ１７，Ｎｏ  ５，２０１５；ｐｐ６６５−６７９）。したがって、ＬＡＩＲ−１枯渇ｍＡｂによる造血器（「血液」）がんの枯渇には、ＬＡＩＲ−１陽性がんを減少させる、または根絶する直接的効果があるであろう。
【０２４７】
ＬＡＩＲ−１枯渇ｍＡｂの開発及び同定は、本明細書に記載のものを含めた既知の構築及びスクリーニング方法に従って行うことができる。例えば、ヒトＣ１ｑに結合し、ヒト補体存在下での補体依存性細胞溶解（ＣＤＣＣ）、及びヒトエフェクター細胞による抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する抗ＣＤ２０キメラ抗体の作製について記載しているＲｅｆｆ，ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ．Ｖｏｌ８３，Ｎｏ  ２，１９９４：ｐｐ４３５−４４５を参照されたい。リツキシマブはＢ細胞を破壊するものであり、それゆえ、Ｂ細胞の過活動、機能不全、または過剰な数によって特徴付けられる疾患を治療するために使用される。他のＢ細胞枯渇抗体としては、例えば、オクレリズマズ及びオファツムマブが挙げられる。別の例では、ＣＤ３  Ａｂは、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇを温存しながら活性化エフェクターＴ細胞を優先的に指向し枯渇させることができる。これらの抗体はＴ細胞を一過的に枯渇させるが、それは補体依存性及び抗体依存性の細胞傷害を全くまたはほとんど呈さない。しかしながら、２つの異なる細胞（一方は細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞、他方は他の標的Ｔ細胞）によって発現されたＣＤ３分子同士を架橋させる能力による、指向性転換された細胞溶解は、Ｔ細胞枯渇が主としてＡＩＣＤによって生じることを示している（Ｙｏｕ，Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１５；６：２４２で総説された）。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、細胞枯渇抗体はＬＡＩＲ−１陽性マクロファージ、Ｆ４／８０＋ＤＣ、がん細胞またはそれらの組み合わせの数を減少させる。
【０２４９】
２．治療される対象
ａ．がんの治療
開示される組成物及び方法を用いてがんを治療することができる。総じて、作用物質は、ＬＡＩＲ−１の発現、リガンド結合、架橋、負のシグナル伝達、またはそれらの組み合わせを減少させる一定量の免疫調節性作用物質を対象に投与することによって対象におけるがんに対する免疫応答を刺激または強化するために使用される。方法は、がんの１つ以上の症候を軽減することができる。
【０２５０】
免疫系は、がんの開始及び成長に対する立証済みの防御である。免疫応答の調節は、がん細胞の活性化または抑制を含む特定経路に沿って免疫細胞機能を差し向ける細胞表面相互作用によって統制される。ＬＡＩＲ−１は、最適な免疫応答を防止するいくつかの免疫細胞（白血球）サブセットの表面にある抑制性受容体である。これに対して、ＬＡＩＲ−２は、ＬＡＩＲ−１によって媒介される抑制を遮断するデコイとして機能する可溶性相同体である。
【０２５１】
一実施形態では、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ融合タンパク質は試験管内及び生体内での免疫応答を促進する。別の実施形態では、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃは、腫瘍成長を減少させ、生存を促進する。さらに別の実施形態では、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃは抗ＰＤ−１免疫療法を促進する。本明細書に提供されるデータは、ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂが試験管内でヒトＴ細胞及び骨髄細胞株における活性を有することを実証し、特異的ｍＡｂクローンの特異的なアゴニスト及びアンタゴニスト活性を示している。これらの知見は、がん及びその他の疾患における免疫療法介入のためのＬＡＩＲ−２  ＦｃまたはＬＡＩＲ−１  ｍＡｂによる潜在的なＬＡＩＲ−１経路調節を実証する。
【０２５２】
別の実施形態では、ＬＡＩＲ−Ｆｃは、ＴＣＲ刺激に対する初代ヒトＴ細胞の応答性を増大させる。別の実施形態では、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃは生体内での抗原特異的Ｔ細胞応答を増大させる。
【０２５３】
がん細胞はその発達中に、様々な機序によってではあるが、特徴的な機能的能力のセットを獲得する。そのような能力としては、例えば、アポトーシスの回避、成長シグナルの自己十分性、抗成長シグナルに対する非感受性、組織浸潤／転移、制限のない発展する潜在能、及び持続的血管新生が挙げられる。「がん細胞」という用語は、前悪性及び悪性がん細胞を両方とも包含することを意味する。いくつかの実施形態では、がんは、局在したままの良性腫瘍を指す。他の実施形態では、がんは、近隣の身体構造体を侵襲及び破壊して遠くの部位にまで広がった悪性腫瘍を指す。さらに他の実施形態では、がんは、特定のがん抗原（例えば、汎癌腫抗原（ＫＳ１／４）、卵巣癌腫抗原（ＣＡ１２５）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＨＥＲ２／ｎｅｕなど）に関連するものである。
【０２５４】
本明細書に開示される方法及び組成物は、様々ながん、または（限定されないが）以下を含めたその他の異常増殖性疾患を治療または防止するのに有用である：膀胱、乳房、結腸、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、胃、子宮、甲状腺及び皮膚のものを含め扁平上皮癌腫を含めた癌腫；白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、バーキット（Ｂｅｒｋｅｔｔｓ）リンパ腫を含めたリンパ球系統の造血器腫瘍；急性及び慢性骨髄性白血病、前骨髄球性白血病を含めた骨髄系統の造血器腫瘍；線維肉腫及び横紋筋肉腫を含めた間葉起源の腫瘍；メラノーマ、精上皮腫、奇形癌腫（ｔｅｔｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、神経芽腫及び神経膠腫を含めた他の腫瘍；星細胞腫、神経芽腫、神経膠腫及びシュワン細胞腫を含めた中枢及び抹消神経系の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫及び骨肉腫を含めた間葉起源の腫瘍；ならびに、メラノーマ、色素性乾皮症（ｘｅｎｏｄｅｒｍａ  ｐｅｇｍｅｎｔｏｓｕｍ）、ケラトアカンソーマ（ｋｅｒａｔｏａｃｔａｎｔｈｏｍａ）、精上皮腫、濾胞性甲状腺癌及び奇形癌腫を含めた他の腫瘍。
【０２５５】
アポトーシスの異常によって引き起こされるがんも、開示される方法及び組成物で治療することができる。そのようながんとしては、限定されないが例えば、濾胞性リンパ腫、ｐ５３突然変異を有する癌腫、乳房、前立腺及び卵巣のホルモン依存性腫瘍、ならびに前がん病巣、例えば、家族性腺腫性ポリポーシス及び骨髄異形成症候群が挙げられ得る。具体的な実施形態では、卵巣、膀胱、乳房、結腸、肺、皮膚、膵臓または子宮において、悪性腫瘍または異常増殖性変化（例えば化生及び異形成）、または過剰増殖性障害が当該方法及び組成物によって治療または防止される。他の具体的な実施形態では、肉腫、メラノーマまたは白血病が当該方法及び組成物によって治療または防止される。
【０２５６】
開示される組成物及び方法は、異常に高レベルのＬＡＩＲ−１、高レベルのＬＡＩＲ−１リガンド、低レベルのＬＡＩＲ−２またはそれらの組み合わせを発現する細胞に関連するがんを治療するのに特に有用である。
【０２５７】
本明細書に開示される方法及び組成物で治療または防止することができる具体的ながん及び関連障害としては、限定されないが例えば、白血病、限定されないが例えば、急性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、例えば骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、赤白血病性の白血病、及び骨髄異形成症候群、慢性白血病、限定されないが例えば、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ性白血病、有毛細胞白血病；真性多血症；リンパ腫、限定されないが例えば、ホジキン病または非ホジキン病リンパ腫（例えば、びまん性退形成性リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）陰性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、びまん性退形成性リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、退形成性リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）陽性のＡＬＫ＋退形成性大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）、急性骨髄性リンパ腫（ＡＭＬ））；多発性骨髄腫、限定されないが例えば、くすぶり型多発性骨髄腫、非分泌型骨髄腫、骨硬化性骨髄腫、形質細胞性白血病、孤立性形質細胞腫及び髄外性形質細胞腫；ワルデンストレームマクログロブリン血症；意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症；良性単クローン性ガンマグロブリン血症；重鎖病；骨及び結合組織の肉腫、限定されないが例えば、骨肉腫（ｂｏｎｅ  ｓａｒｃｏｍａ）、骨肉腫（ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ）、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性巨細胞腫、骨の線維肉腫、脊索腫、骨膜性肉腫、軟部組織肉腫、脈管肉腫（血管肉腫）、線維肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、神経鞘腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫；脳腫瘍、限定されないが例えば、神経膠腫、星細胞腫、脳幹部神経膠腫、上衣腫、乏突起神経膠腫、非膠細胞系腫瘍、聴神経鞘腫、頭蓋咽頭腫、髄芽腫、髄膜腫、松果体細胞腫、松果体芽腫、原発性脳リンパ腫；乳癌、限定されないが例えば、腺癌、小葉（小細胞）癌腫、乳管内癌腫、髄様乳癌、粘液乳癌、管状乳癌、乳頭乳癌、パジェット病及び炎症性乳癌；副腎癌、限定されないが例えば、クロム親和性細胞及び副腎皮質の癌腫；甲状腺癌、限定されないが例えば、甲状腺乳頭癌または濾胞性甲状腺癌、甲状腺髄様癌及び退形成性甲状腺癌；膵臓癌、限定されないが例えば、インスリノーマ、ガストリノーマ、グルカゴノーマ、ビポーマ、ソマトスタチン分泌腫瘍及び、カルチノイドまたは膵島細胞腫瘍；下垂体癌、限定されないが例えば、クッシング病、プロラクチン分泌腫瘍、先端巨大症及び尿崩症；眼部癌、限定されないが例えば、眼メラノーマ、例えば、虹彩メラノーマ、脈絡膜メラノーマ及び毛様体メラノーマ、ならびに網膜芽細胞腫；膣癌、限定されないが例えば、扁平上皮癌腫、腺癌及びメラノーマ；外陰癌、限定されないが例えば、扁平上皮癌腫、メラノーマ、腺癌、基底細胞癌腫、肉腫及びパジェット病；子宮頸癌、限定されないが例えば、扁平上皮癌腫及び腺癌；子宮癌、限定されないが例えば、子宮内膜癌腫及び子宮肉腫；卵巣癌、限定されないが例えば、卵巣上皮癌腫、境界腫瘍、胚細胞腫瘍及び間質腫瘍；食道癌、限定されないが例えば、扁平上皮癌、腺癌、腺様嚢胞癌腫、粘表皮癌腫、腺扁平上皮癌腫、肉腫、メラノーマ、形質細胞腫、疣贅性癌腫及び燕麦細胞（小細胞）癌腫；胃���、限定されないが例えば、腺癌、菌状（ポリープ様）、潰瘍性、表在拡大型、散在拡大型の悪性リンパ腫、脂肪肉腫、線維肉腫及び癌肉腫；結腸癌；直腸癌；肝臓癌、限定されないが例えば、肝細胞癌腫及び肝芽腫、胆嚢癌、限定されないが例えば腺癌；胆管癌腫、限定されないが例えば、乳頭状、結節型及びびまん性のもの；肺癌、限定されないが例えば、非小細胞肺癌、扁平上皮癌腫（類表皮癌腫）、腺癌、大細胞癌腫及び小細胞肺癌；精巣癌、限定されないが例えば、胚細胞性腫瘍、精上皮腫、異形成性、古典的（典型的）、精母細胞性の非精上皮腫、胎児性癌腫、奇形癌腫、絨毛癌腫（卵黄嚢腫瘍）、前立腺癌、限定されないが例えば、腺癌、平滑筋肉腫及び横紋筋肉腫；陰茎癌（ｐｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒｓ）；口腔癌、限定されないが例えば、扁平上皮癌腫；基底癌；唾液腺癌、限定されないが例えば、腺癌、粘表皮癌腫及び腺様嚢胞癌腫；咽頭癌、限定されないが例えば、扁平上皮癌及び疣贅性のもの；皮膚癌、限定されないが例えば、基底細胞癌腫、扁平上皮癌腫及びメラノーマ、表在拡大型メラノーマ、結節型メラノーマ、悪性黒子型メラノーマ、末端黒子型メラノーマ；腎臓癌、限定されないが例えば、腎細胞癌、腺癌、副腎腫、線維肉腫、移行上皮癌（腎盂及び／または尿管）；ウィルムス腫瘍；膀胱癌、限定されないが例えば、移行上皮癌腫、扁平上皮癌、腺癌、癌肉腫が挙げられる。さらに、がんとしては、例えば、粘液肉腫、骨原性肉腫、内皮肉腫、リンパ管内皮肉腫、中皮腫、滑液膜腫、血管芽腫、上皮癌腫、嚢胞腺癌、気管支原性癌腫、汗腺癌腫、皮脂腺癌腫、乳頭状癌腫及び乳頭状腺癌が挙げられる（そのような障害の総説については、Ｆｉｓｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２ｄ  Ｅｄ．，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  ａｎｄ  Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｉｎｆｏｒｍｅｄ  Ｄｅｃｉｓｉｏｎｓ：Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ａｎｄ  Ｒｅｃｏｖｅｒｙ，Ｖｉｋｉｎｇ  Ｐｅｎｇｕｉｎ，Ｐｅｎｇｕｉｎ  Ｂｏｏｋｓ  Ｕ．Ｓ．Ａ．，Ｉｎｃ．，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａを参照のこと）。
【０２５８】
ｂ．感染症の治療
開示される組成物及び方法を用いて感染症及び感染性疾患を治療することができる。総じて、作用物質は、ＬＡＩＲ−１の発現、リガンド結合、架橋、負のシグナル伝達、またはそれらの組み合わせを減少させる一定量の免疫調節性作用物質を対象に投与することによって対象における感染原因物質に対する免疫応答を刺激または強化するために使用される。本方法は、感染症の１つ以上の症候を軽減することができる。さらに、可溶性ＬＡＩＲ−１及び／またはＬＡＩＲ−２は補体因子Ｃ１ｑと結合することができるため、いくつかの事例では、異常に高いレベルの可溶性ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２を発現している対象は感染の補体媒介免疫クリアランスが低下していることがある。それゆえ、異常に高いレベルのＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２を有し、減弱された補体機能を呈すると認められる対象には、補体カスケードを改善すべく、したがって感染に対する自然免疫応答を改善すべく、補体因子Ｃ１ｑとのＬＡＩＲ−１及びＬＡＩＲ−２の結合を遮断する作用物質、例えばそれぞれＬＡＩＲ−１  ｍＡｂ及びＬＡＩＲ−２  ｍＡｂを投与することができる。
【０２５９】
感染症または疾患は、細菌、ウイルス、原生動物、寄生蠕虫、または細胞内に侵入しかつ攻撃すなわち細胞傷害性Ｔリンパ球による攻撃を受ける他の微生物病原体によって引き起こされ得る。
【０２６０】
感染症または疾患は、急性または慢性のものであり得る。急性感染症は、典型的には短期間持続する感染症である。急性細菌感染症の間、免疫細胞は、免疫調節性受容体を発現し始める。したがって、いくつかの実施形態では、方法は、急性感染症に対する免疫刺激応答を増大させることを含む。
【０２６１】
感染症は、限定されないが例えば、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ナイセリア・メニンジティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、エシェリキア・コリ、アシネトバクター・バウマンニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、またはマイコバクテリウム属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）によって引き起こされ得る。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、開示される組成物は、慢性感染症、例えば、Ｔ細胞消耗またはＴ細胞アネルギーが起こって宿主に感染症が長期間にわたって存続する原因となっている感染症を治療するために、使用される。
【０２６３】
治療される例示的な感染症は、肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトＴリンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ）、ヘルペスウイルス、エプスタイン・バーウイルス、またはヒトパピローマウイルスによって引き起こされる慢性感染症である。
【０２６４】
ウイルス感染症は主にＴ細胞によって除去されるので、Ｔ細胞活性の増大は、動物またはヒト対象にとってより迅速または完全な感染性ウイルス物質のクリアランスが有益である状況において治療上役立つであろう。したがって、開示される組成物は、限定されないが免疫不全（例えばＨＩＶ）、パピローマ（例えばＨＰＶ）、ヘルペス（例えばＨＳＶ）、脳炎、インフルエンザ（例えばヒトインフルエンザウイルスＡ）、及び一般的な風邪（例えばヒトライノウイルス）ならびに、例えばＨＴＬＶ、肝炎ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ワクチニアウイルス及び狂犬病ウイルスによって引き起こされる他のウイルス感染症を含めた局所または全身ウイルス感染の治療のために投与することができる。ウイルス性皮膚疾患、例えばヘルペス病巣もしくは帯状疱疹または陰部疣贅を治療するために分子を局所投与することができる。また、限定されないが、エイズ、インフルエンザ、一般的な風邪、または脳炎を含めた全身性ウイルス性疾患を治療するために分子を全身投与することもできる。
【０２６５】
治療することができる代表的な感染症としては、限定されないが例えば、限定されないがアクチノミセス属（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ）、アナベナ属（Ａｎａｂａｅｎａ）、バシラス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ブデロビブリオ属（Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ）、ボルデテラ属（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）、ボレリア属（Ｂｏｒｒｅｌｉａ）、カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、コーロバクター属（Ｃａｕｌｏｂａｃｔｅｒ）、クラミジア属（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、クロロビウム属（Ｃｈｌｏｒｏｂｉｕｍ）、クロマチウム属（Ｃｈｒｏｍａｔｉｕｍ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、サイトファーガ属（Ｃｙｔｏｐｈａｇａ）、デイノコッカス属（Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、フランキセラ属（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ）、ハロバクテリウム属（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ヘリオバクター属（Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ）、ヘモフィルス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）Ｂ型（ＨＩＢ）、ヒフォミクロビウム属（Ｈｙｐｈｏｍｉｃｒｏｂｉｕｍ）、レジオネラ属（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、レプトスピローシス（Ｌｅｐｔｓｐｉｒｏｓｉｓ）、リステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、髄膜炎菌（Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｕｓ）Ａ、Ｂ及びＣ、メタノバクテリウム属（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ミクロコッカス属（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ミオバクテリウム（Ｍｙｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、マイコプラスマ属（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）、ミクソコッカス属（Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ）、ナイセリア属（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、ニトロバクター属（Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）、オシラトリア属（Ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｉａ）、プロクロロン属（Ｐｒｏｃｈｌｏｒｏｎ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、ホドスピリルム属（Ｐｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）、リケッチア属（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、シゲラ属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、スピリルム属（Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）、スピロヘータ属（Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔａ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、スルホロブス属（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ）、サーモプラスマ属（Ｔｈｅｒｍｏｐｌａｓｍａ）、チオバチルス属（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ならびにトレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ）、ビブリオ属（Ｖｉｂｒｉｏ）、エルシニア属（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、クリプトコックス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ヒストプラスマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、カンジダ・アルビカンス、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、ノカルジア・アステロイデス（Ｎｏｃａｒｄｉａ  ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ）、リケッチア・リケッチイ（Ｒｉｃｋ��ｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｓｉｉ）、リケッチア・チフィ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｔｙｐｈｉ）、マイコプラズマ・ニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、クラミジア・プシタッシ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ  ｐｓｉｔｔａｃｉ）、クラミジア・トラコーマティス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、トリパノソーマ・ブルーセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ）、エントアメーバ・ヒストリティカ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、トキソプラズマ・ゴンヂ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、トリコモナス・バギナリス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、ならびにマンソン住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉ）を含めた微生物によって引き起こされる感染症が挙げられる。
【０２６６】
開示される組成物及び方法を用いて治療することができる他の微生物としては、例えば、細菌、例えばクレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、セラシア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、パスツレラ属（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）の細菌；コレラ、破傷風、ボツリヌス中毒症、炭疽病、ペスト及びライム病に関連する病原体；または、真菌性もしくは寄生虫性の病原体、例えば、カンジダ属（アルビカンス、クルセイ（ｋｒｕｓｅｉ）、グラブラータ（ｇｌａｂｒａｔａ）、トロフィカリス（ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）など）、クリプトコックス属（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）（フミガーツス（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ニガー（ｎｉｇｅｒ）など）、ムコラーレス属（Ｇｅｎｕｓ  Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ）（ムコール（ｍｕｃｏｒ）、アブシヂア（ａｂｓｉｄｉａ）、リゾフス（ｒｈｉｚｏｐｈｕｓ））、スポロトリクス属（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ）（シェンキー（ｓｃｈｅｎｋｉｉ））、ブラストミセス属（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ）（デルマティティディス（ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ））、パラコクシジオイデス属（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ）（ブラシリエンシス（ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ））、コクシジオイデス属（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ）（イミティス（ｉｍｍｉｔｉｓ））及びヒストプラスマ属（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）（カプスラーツマ（ｃａｐｓｕｌａｔｕｍａ））、エントアメーバ・ヒストリティカ、バランチジウム・コリ（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ  ｃｏｌｉ）、ネグレリア・フォウレリ（Ｎａｅｇｌｅｒｉａ  ｆｏｗｌｅｒｉ）、アカンソアメーバ属の種（Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ  ｓｐ．）、ギアリダ・ランビア（Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｉａ）、クリプトスポリジウム属の種（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｓｐ．）、ニューモシスチス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）、プラスモディウム・ビバックス（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、バベシア・ミクロチ（Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ）、トリパノソーマ・ブルーセイ、トリパノソーマ・クルージ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）、トキソプラズマ・ゴンヂなど）、スポロトリクス属、ブラストミセス属、パラコクシジオイデス属、コクシジオイデス属、ヒストプラスマ属、エントアメーバ・ヒストリティカ、バランチジウム属（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ）、ネグレリア属（Ｎａｅｇｌｅｒｉａ）、アカンソアメーバ属、ギアリダ属（Ｇｉａｒｄｉａ）、クリプトスポリジウム属、ニューモシスチス属（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ）、プラスモディウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）、バベシア属（Ｂａｂｅｓｉａ）もしくはトリパノソーマ属（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ）などが挙げられる。
【０２６７】
Ｂ．免疫応答の抑制
１．治療方策
対象における免疫応答を減少させる、または抑制する方法を提供する。典型的には、方法は、免疫調節性作用物質、または免疫調節性作用物質による生体外での初回刺激を受けた細胞を対象に有効量投与することを含む。免疫応答は、例えば、抗原に対する一次免疫応答または、エフェクター細胞機能の増強、例えば、Ｔ細胞の抗原特異的増殖の増進、Ｔ細胞によるサイトカイン産生の強化、分化の刺激、もしくはそれらの組み合わせであり得る。したがって、いくつかの実施形態では、作用物質は、Ｔ細胞増殖、Ｔ細胞サイトカイン産生、Ｔ細胞分化またはそれらの組み合わせを減少させる。いくつかの実施形態では、作用物質は、Ｔｈ１、Ｔｈ１７、Ｔｈ２２、またはその他の、限定されないがＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−ベータ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１７、ＩＬ−６、ＩＬ−２３、ＩＬ−２２、ＩＬ−２１及びＭＭＰを含めた炎症性分子を分泌するかもしくは他細胞に分泌させる細胞にナイーブＴ細胞が発達することを減少させることができる。いくつかの実施形態では、作用物質は、Ｔｒｅｇの活性を増大させるまたは促進すること、ＴｒｅｇからのＩＬ−１０などのサイトカインの産生を増進すること、Ｔｒｅｇの分化を増進すること、Ｔｒｅｇの数を増加させること、免疫細胞集団中のＴｒｅｇの比率を増加させること、またはＴｒｅｇの生存を増加させることができる。
【０２６８】
本方法は、免疫応答を抑制する治療適用として生体内または生体外で用いられることができる。かくして、いくつかの実施形態では、作用物質、または作用物質をコードする核酸を対象に直接投与する。いくつかの実施形態では、作用物質、または作用物質をコードする核酸を細胞（例えば免疫細胞）と生体外で接触させ、処理細胞を対象に投与する（例えば養子移入）。総じて、開示される免疫調節性作用物質は、対象の免疫系によって活動し過ぎるもしくは不適切である免疫応答が向けられる任意の疾患もしくは障害を有するまたはその素因を有する対象を治療するために使用することができる。作用物質は、より堅牢性の低い免疫応答を可能にすることができる。開示される組成物は、Ｔ細胞が関与する免疫応答を減少させるまたは抑制するのに有用である。
【０２６９】
免疫応答を減少させるために利用される免疫調節性作用物質は、典型的には、ＬＡＩＲ−１の発現、リガンド結合、架橋、負のシグナル伝達、またはそれらの組み合わせを増加させるものである。例えば、作用物質は、ＬＡＩＲ−１のアゴニスト、例えばアゴニスト（刺激）抗ＬＡＩＲ−１抗体またはその抗原結合断片であり得る。作用物質はまた、１つ以上のＬＡＩＲ−１リガンドのデコイ受容体としての役割を果たすＬＡＩＲ−２の能力を減退させるＬＡＩＲ−２のアンタゴニスト、例えば拮抗性（遮断）抗ＬＡＩＲ−２抗体とすることもできる。
【０２７０】
例えば、いくつかの実施形態では、自己免疫疾患または炎症性疾患もしくは障害を有する対象に、ＬＡＩＲ−２遮断を誘発する有効量の作用物質を投与する。ＬＡＩＲ−１シグナル伝達は、免疫応答に限界を設けるように機能し、これは、自己免疫及び免疫自己反応性の症状発現を防止するのに大いに重要である。したがって、ＬＡＩＲ−１発現の減少は、自己免疫性を増大させ得る。あるいは、上昇したレベルのＬＡＩＲ−２は、ＬＡＩＲ−１によるリガンド架橋及び抑制性シグナル伝達を防止することによって自己免疫性を促進することができる。実際、関節リウマチを有する患者においてＬＡＩＲ−２のレベルの上昇が報告されている（Ｏｌｄｅ  Ｎｏｒｄｋａｍｐ  ｅｔ  ａｌ．２０１１，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．６３：３７４９−３７５７）。このように、関節リューマチ患者におけるＬＡＩＲ−１のレベルの上昇にもかかわらず、ＬＡＩＲ−２がより高いリガンド親和性を有するので、ＬＡＩＲ−１発現の増加はほとんど影響を及ぼさないであろう。したがって、コラーゲン、ＳＰ−Ｄ及びＣ１ｑへのＬＡＩＲ−２の結合の遮断はＬＡＩＲ−１の架橋を増加させるとともに、それに続く免疫炎症経路を減少させるであろう。ＬＡＩＲ−２を枯渇させるかまたはＬＡＩＲ−２リガンド結合を遮断するｍＡｂは、全身性または局在性のＬＡＩＲ−２のレベルが上昇した自己免疫疾患の治療に大いに有効であり得る。事実、ＬＡＩＲ−２及びＬＡＩＲ−１の発現が両方とも増加した自己免疫疾患は、ＬＡＩＲ−２  ｍＡｂ免疫療法が成功する可能性が最も高いであろう、というのも、ひとたびＬＡＩＲ−２が中和されれば高レベルのＬＡＩＲ−１は、ＬＡＩＲ−１発現レベルが低い疾患の場合よりも大きい抑制作用を有するであろうからである。かくして、いくつかの実施形態では、関節リウマチを有する対象を治療するためにＬＡＩＲ−２  ｍＡｂ免疫療法を利用する。
【０２７１】
ａ．炎症性応答
開示される組成物及び方法を用いて炎症を治療することができる。総じて、作用物質は、ＬＡＩＲ−１の発現、リガンド結合、架橋、負のシグナル伝達、またはそれらの組み合わせを増加させる一定量の免疫調節性作用物質を対象に投与することによって対象における免疫応答を減少させるまたは抑制するために使用される。方法は、炎症の１つ以上の症候を軽減することができる。炎症は、急性、慢性または持続性の炎症であり得る。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、免疫調節性作用物質は免疫系を遅延させる。例えば、作用物質は、健常組織の損傷を引き起こす過剰な炎症性応答を制御するために使用することができる。したがって、いくつかの実施形態では、過剰な炎症性応答を被っている対象に作用物質を投与する。そのような事例では、過度の免疫応答を制御することは対象にとって有益となり得る。
【０２７３】
ｂ．炎症性及び自己免疫性の疾患／障害
ＬＡＩＲ−１の発現、リガンド結合、架橋、負のシグナル伝達、またはそれらの組み合わせを増加させる作用物質は、炎症性または自己免疫性の疾患及び障害を治療するために使用することもできる。代表的な炎症性または自己免疫性の疾患／障害としては、限定されないが例えば、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群（ａｌｐｓ）、自己免疫性血小板減少性紫斑（ＡＴＰ）、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、瘢痕性類天疱瘡、寒冷凝集素症、クレスト症候群、クローン病、デゴス病、皮膚筋炎、若年性皮膚筋炎、円板状狼瘡、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛−線維筋炎、グレーブス病、ギラン・バレー、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、インスリン依存性糖尿病（Ｉ型）、若年性関節炎、メニエール病、混合性結合組織疾患、多発性硬化症、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群（ｐｏｌｙｇｌａｎｃｕｌａｒ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ）、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎及び皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身強直症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ぶどう膜炎、脈管炎、白斑、及びヴェーゲナー肉芽腫症が挙げられる。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、炎症性または自己免疫性の疾患は、病原体によって引き起こされているか、または感染症の結果である。
【０２７５】
Ｖ．併用療法
開示される免疫調節性作用物質は、それを必要とする対象に単独で、または１つ以上の付加的治療用物質と組み合わせて投与することができる。いくつかの実施形態では、免疫調節性作用物質と付加的治療用物質とを別々にではあるが、同時に投与する。免疫調節性作用物質と付加的治療用物質とを同じ組成物の一部として投与することもできる。他の実施形態では、免疫調節性作用物質と第２の治療用物質とを、別々に異なる時にではあるが、同じ治療計画の一部として投与する。
【０２７６】
対象には、第２の治療用物質の投与の１、２、３、４、５、６時間、またはそれ以上前または１、２、３、４、５、６、７日、またはそれ以上前に第１の治療用物質が投与され得る。いくつかの実施形態では、対象には毎回、第２の作用物質の最初の投与の１、２、３、４、５、６、７、１４、２１、２８、３５または４８日前に第１の作用物質が１回以上投与され得る。免疫調節性作用物質は、第１または第２の治療用物質であり得る。
【０２７７】
免疫調節性作用物質及び付加的治療用物質は、治療計画の一部として投与され得る。例えば、対象に第１の治療用物質が４日ごとに投与され得る場合、第２の治療用物質は第１日、第２日、第３日もしくは第４日またはそれらの組み合わせにおいて投与され得る。第１の治療用物質または第２の治療用物質を治療計画全体にわたって反復投与してもよい。
【０２７８】
例示的な分子としては、限定されないが、サイトカイン、化学療法剤、放射性核種、その他の免疫療法薬、酵素、抗生物質、抗ウイルス薬（特に、プロテアーゼ阻害剤単独、またはそれとＨＩＶまたはＢ型もしくはＣ型肝炎の治療のためのヌクレオシドとの組み合わせ）、抗寄生虫（蠕虫、原生動物）薬、成長因子、成長抑制薬、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、抗体及びその生物活性断片（ヒト化、一本鎖及びキメラ抗体を含む）、抗原及びワクチン製剤（アジュバントを含む）、ペプチド薬、抗炎症薬、Ｔｏｌｌ様受容体に結合して自然免疫系を活性化させるリガンド（限定されないが、ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む）、適応免疫系を動員及び最適化する分子、細胞傷害性Ｔリンパ球、ナチュラルキラー細胞及びヘルパーＴ細胞の作用を活性化または上方制御する他の分子、ならびにサプレッサーもしくは制御性Ｔ細胞を不活性化または下方制御する他の分子が挙げられる。
【０２７９】
付加的治療用物質は、治療する状態、障害または疾患に基づいて選択される。例えば、免疫調節性作用物質は、免疫応答を強化もしくは促進する、または免疫応答を減少させるもしくは抑制する１つ以上の付加的作用物質と共投与され得る。
【０２８０】
Ａ．免疫応答の増大
１．抗微生物薬
例えば、上に述べたような疾患を治療及び防止する防止的または予防的役割においても、また大きな火傷、開放骨折、事故による切断、またはその他の創傷のような重度の外傷との関連においても、ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２免疫調節性作用物質を使用することができる。したがって、ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２免疫調節性作用物質は、抗生物質、抗真菌薬、抗ウイルス薬、抗寄生虫薬または精油などの抗微生物薬と組み合わせて対象に投与することができる。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、病院への受け入れ時に対象にＬＡＩＲ−１もしくはＬＡＩＲ−２免疫調節性作用物質及び／または抗微生物薬を投与して、さらなる細菌性、真菌性またはウイルス性の合併症を防止する。抗生物質は病原体を標的とすることができ、ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２免疫調節性作用物質は免疫系を刺激して応答の強化をもたらすことができ、さらなる感染症または疾患を治療または防止することができる。
【０２８２】
２．化学療法剤
ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２免疫調節性作用物質を１つ以上の化学療法剤及びアポトーシス誘導剤と組み合わせることができる。代表的な化学療法剤としては、限定されないが例えば、アムサクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、クリサンタスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシカルバミド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロイコボリン、リポソームドキソルビシン、リポソームダウノルビシン、ロムスチン、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、サトラプラチン、ストレプトゾシン、テガフール・ウラシル、テモゾロミド、テニポシド、チオテパ、チオグアニン、トポテカン、トレオスルファン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビンまたはそれらの組み合わせが挙げられる。代表的なアポトーシス誘導剤としては、限定されないが例えば、フルダラビンタウロスポリン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ）、シクロヘキシミド、アクチノマイシンＤ、ラクトシルセラミド、１５ｄ−ＰＧＪ（２）及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【０２８３】
３．その他の免疫調節薬
ａ．ＰＤ−１アンタゴニスト
いくつかの実施形態では、ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２免疫調節性作用物質はＰＤ−１アンタゴニストと共投与される。プログラム死−１（ＰＤ−１）は、Ｔ細胞上に誘導された場合に負の免疫応答を伝達する受容体のＣＤ２８ファミリーのメンバーである。ＰＤ−１とそのリガンド（Ｂ７−Ｈ１またはＢ７−ＤＣ）の１つとの接触は、Ｔ細胞増殖及び／または、Ｔ細胞応答の強さ及び／または持続期間を減少させる、抑制性応答を誘発する。適するＰＤ−１アンタゴニストは、米国特許第８，１１４，８４５号、第８，６０９，０８９号及び第８，７０９，４１６号に記載されており、参照によりそれら全体を具体的に本明細書に援用するが、ＰＤ−１のリガンドに結合してそれを遮断してＰＤ−１受容体に対するリガンドの結合を妨害または阻害するか、あるいはＰＤ−１受容体を介した抑制性シグナル伝達を誘導することなくＰＤ−１受容体に直接結合してそれを遮断する、化合物または作用物質を含む。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１受容体アンタゴニストは、抑制性シグナル伝達の誘因となることなくＰＤ−１受容体に直接結合し、またＰＤ−１受容体のリガンドにも結合して、リガンドがＰＤ−１受容体を介したシグナル伝達の誘因となることを軽減または抑制する。ＰＤ−１受容体に結合し抑制性シグナルの伝達の誘因となるリガンドの、数及び／または量を減少させることにより、ＰＤ−１シグナル伝達によって伝達される負のシグナルによって弱化する細胞はより少なくなり、より堅牢な免疫応答を得ることができる。
【０２８５】
ＰＤ−１シグナル伝達は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）によって提示されるペプチド抗原の極めて近くにおけるＰＤ−１リガンド（例えばＢ７−Ｈ１またはＢ７−ＤＣ）との結合によって促されると考えられている（例えば、Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ，１０５：１０２７５−１０２７６（２００８）を参照のこと）。したがって、Ｔ細胞膜上でのＰＤ−１及びＴＣＲの並立的結合を防止するタンパク質、抗体または小分子もまた、有用なＰＤ−１アンタゴニストである。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、ＰＤ−１受容体アンタゴニストは、とりわけＰＤ−１のリガンドまたはＰＤ−１自体に結合した結果としてＰＤ−１とＴＣＲとの並立的結合が起こらず、したがってＰＤ−１受容体を介した抑制性シグナル伝達の誘因とならない場合に、そのような結合によってＰＤ−１受容体シグナル伝達を減少させるかまたは妨害する、小分子のアンタゴニストまたは抗体である。本発明の方法によって企図される他のＰＤ−１アンタゴニストには、ＰＤ−１またはＰＤ−１のリガンドに結合する抗体、及びその他の抗体が含まれる。
【０２８７】
適する抗ＰＤ−１抗体としては、限定されないが例えば、以下の刊行物に記載されているものが挙げられる：
ＰＣＴ／ＩＬ０３／００４２５（Ｈａｒｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ／２００３／０９９１９６）
ＰＣＴ／ＪＰ２００６／３０９６０６（Ｋｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ／２００６／１２１１６８）
ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００８９２５（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ／２００９／０１４７０８）
ＰＣＴ／ＪＰ０３／０８４２０（Ｈｏｎｊｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ／２００４／００４７７１）
ＰＣＴ／ＪＰ０４／００５４９（Ｈｏｎｊｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ／２００４／０７２２８６）
ＰＣＴ／ＩＢ２００３／００６３０４（Ｃｏｌｌｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ／２００４／０５６８７５）
ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８８８５１（Ａｈｍｅｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ／２００８／０８３１７４）
ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２６０４６（Ｋｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ／２００７／００５８７４）
ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０８４９２３（Ｔｅｒｒｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ／２００９／０７３５３３）
Ｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１４：３０４４３０５１（２００８）。
【０２８８】
抗ＰＤ−１抗体の具体例は、ヒト抗ＰＤ−１抗体である、Ｋｏｓａｋ，ＵＳ２００７０１６６２８１（２００７年７月１９日公開、第４２段落）に記載されている抗体であり、これはいくつかの実施形態では３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【０２８９】
例示的な抗Ｂ７−Ｈ１抗体としては、限定されないが、以下の刊行物に記載されているものが挙げられる：
ＰＣＴ／ＵＳ０６／０２２４２３（ＷＯ／２００６／１３３３９６、２００６年１２月１４日公開）
ＰＣＴ／ＵＳ０７／０８８８５１（ＷＯ／２００８／０８３１７４、２００８年７月１０日公開）
ＵＳ  ２００６／０１１０３８３（２００６年５月２５日公開）。
【０２９０】
抗Ｂ７−Ｈ１抗体の具体例は、ヒト抗Ｂ７−Ｈ１抗体である、記載（ＷＯ／２００７／００５８７４、２００７年１月１１日公開）のなされている抗体である。
【０２９１】
さらなる抗ＰＤ−１及び抗Ｂ７−Ｈ１抗体は、２０１４／００４４７３８において開示されており、参照によりこの全体を本明細書に具体的に援用する。
【０２９２】
抗Ｂ７−ＤＣ抗体については、７，４１１，０５１、７，０５２，６９４、７，３９０，８８８、及び米国公開出願第２００６／００９９２０３号を参照されたい。
【０２９３】
他の例示的なＰＤ−１受容体アンタゴニストとしては、限定されないがＢ７−ＤＣポリペプチドが挙げられ、これらの相同体及び変異型、ならびに上記のいずれかの活性断片、ならびにこれらのいずれかを組み入れる融合タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、ヒトＩｇＧなどの抗体のＦｃ部分に連結されたＢ７−ＤＣの可溶性部分を含み、ヒトＢ７−ＤＣの膜貫通部分の全部または一部が組み込まれていない。
【０２９４】
また、ＰＤ−１アンタゴニストを、例えばマウスまたはヒトなどの霊長類からの哺乳動物Ｂ７−Ｈ１の断片とすることもでき、この場合、断片は、ＰＤ−１に結合してそれを遮断するが、ＰＤ−１を介した抑制性シグナル伝達には至らない。また、断片を融合タンパク質、例えばＩｇ融合タンパク質の一部とすることもできる。
【０２９５】
他の有用なポリペプチドＰＤ−１アンタゴニストとしては、例えば、ＰＤ−１受容体のリガンドに結合するものが挙げられる。これらは、Ｂ７−Ｈ１またはＢ７−ＤＣなどのＰＤ−１リガンドと結合することができるＰＤ−１受容体タンパク質またはその可溶性断片を含み、内因性ＰＤ−１受容体との結合を防止し、それによって抑制性シグナル伝達を防止する。Ｂ７−Ｈ１は、タンパク質Ｂ７．１にも結合することが示された（Ｂｕｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｖｏｌ．２７，ｐｐ．１１１−１２２，（２００７））。また、そのような断片には、天然リガンドへの結合性を向上させる突然変異、例えばＡ９９Ｌ突然変異を含むＰＤ−１タンパク質の可溶性ＥＣＤ部分も含まれる（Ｍｏｌｎａｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，１０５：１０４８３−１０４８８（２００８））。また、Ｂ７−Ｈ１リガンドに結合すること及び内因性ＰＤ−１受容体との結合を防止してそれによって抑制性シグナル伝達を防止することができる、Ｂ７−１またはその可溶性断片も有用である。
【０２９６】
ＰＤ−１及びＢ７−Ｈ１アンチセンス核酸は、ＤＮＡであっても、ＲＮＡであっても、またｓｉＲＮＡ分子であっても、ＰＤ−１アンタゴニストとなり得る。そのようなアンチセンス分子は、Ｔ細胞上のＰＤ−１の発現ならびに、Ｂ７−Ｈ１、ＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２などのＴ細胞リガンドの産生を防止する。例えば、ポリエチレンイミンなどの担体に複合体化されたｓｉＲＮＡ（例えば、約２１ヌクレオチド長であり、ＰＤ−１またはＰＤ−１リガンドをコードする遺伝子に対して特異的であり、商業的に容易に購入することができる、オリゴヌクレオチド）（Ｃｕｂｉｌｌｏｓ−Ｒｕｉｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１９（８）：２２３１−２２４４（２００９）を参照のこと）は、ＰＤ−１及びＰＤ−１のリガンドを発現する細胞に直ちに取り込まれ、これらの受容体及びリガンドの発現を減少させてＴ細胞における抑制性シグナル伝達の減少をもたらし、それによってＴ細胞を活性化させる。
【０２９７】
ｂ．ＣＴＬＡ４アンタゴニスト
免疫応答においてＴ細胞の作用を媒介するのに有用な他の分子も、付加的治療用物質として企図される。いくつかの実施形態では、分子はＣＴＬＡ４のアンタゴニスト、例えば拮抗性抗ＣＴＬＡ４抗体である。本発明の方法に使用するために企図される抗ＣＴＬＡ４抗体の一例としては、ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４３６９０（Ｆｉｓｃｈｋｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ／２００７／０５６５３９）に記載されている抗体が挙げられる。
【０２９８】
抗ＰＤ−１、抗Ｂ７−Ｈ１及び抗ＣＴＬＡ４抗体の投薬量は、当技術分野で既知であり、例えば、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲、またはより狭い１〜５０ｍｇ／ｋｇもしくは１０〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。ヒト対象に適する用量は５〜１５ｍｇ／ｋｇであり得、具体的な実施形態では１０ｍｇ／ｋｇの抗体（例えば、ヒト抗ＰＤ−１抗体）とする。
【０２９９】
本発明の方法において有用な抗ＣＴＬＡ４抗体の具体例は、例えば約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与するヒト抗ＣＴＬＡ４抗体のイピリムマブ、及び例えば約１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与するヒト抗ＣＴＬＡ４抗体のトレメリムマブである。２００９年１２月にオンラインで公開されたＳａｍｍａｒｔｉｎｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ，３（２）：１３５−１３７（２０１０）も参照されたい。
【０３００】
他の実施形態では、アンタゴニストは小分子である。一連の小さい有機化合物が、Ｂ７−１リガンドに結合してＣＴＬＡ４との結合を防止することが示されている（Ｅｒｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７：７３６３−７３６８（２００２）を参照のこと）。そのような小さい有機物を単独で、または抗ＣＴＬＡ４抗体と一緒に投与してＴ細胞の抑制性シグナル伝達を減少させることができよう。
【０３０１】
４．強化剤
いくつかの実施形態では、付加的治療用物質は強化剤を含む。強化剤は、本発明の広範な実践に正確な作用機序が必須ではないがおそらく２つ以上の機序によって、免疫応答上方制御薬の有効性を向上させるように働く。
【０３０２】
いくつかの実施形態では、強化剤はシクロホスファミドである。シクロホスファミド（ＣＴＸ、シトキサン（登録商標）、またはネオサール（登録商標））はオキサアザホスホリン薬であり、類縁体には、イホスファミド（ＩＦＯ、Ｉｆｅｘ）、ペルホスファミド、トロホスファミド（トロフォスファミド；Ｉｘｏｔｅｎ）ならびに薬学的に許容できるそれらの塩、溶媒和物、プロドラッグ及び代謝物が含まれる（全体が援用される米国特許出願第２００７０２０２０７７号）。イホスファミド（ＭＩＴＯＸＡＮＡ（登録商標））は、シクロホスファミドの構造類縁体であり、その作用機序はシクロホスファミドのそれと同一であるまたは実質的に類似していると考えられる。ペルホスファミド（４−ヒドロペルオキシシクロホスファミド）及びトロホスファミドも、シクロホスファミドに構造的に関係しているアルキル化剤である。例えば、ペルホスファミドはＤＮＡをアルキル化し、それによってＤＮＡ複製ならびにＲＮＡ及びタンパク質の合成を阻害する。宿主毒性を低減して選択性及び応答を改善することを企図して新規オキサアザホスホリン誘導体が考案及び評価された（Ｌｉａｎｇ  Ｊ，Ｈｕａｎｇ  Ｍ，Ｄｕａｎ  Ｗ，Ｙｕ  ＸＱ，Ｚｈｏｕ  Ｓ．Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｎｅｗ  ｏｘａｚａｐｈｏｓｐｈｏｒｉｎｅ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇｓ．Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ．２００７；１３（９）：９６３−７８．Ｒｅｖｉｅｗ）。これらには、マフォスファミド（ＮＳＣ３４５８４２）、グルフォスファミド（Ｄ１９５７５、ベータ−Ｄ−グルコシルイソホスホルアミドマスタード）、Ｓ−（−）−ブロモフォスファミド（ＣＢＭ−１１）、ＮＳＣ６１２５６７（アルドホスファミドペルヒドロチアジン）、及びＮＳＣ６１３０６０（アルドホスファミドチアゾリジン）が含まれる。マフォスファミドは、４−ヒドロキシ−ＣＰＡの化学的に安定な４−チオエタンスルホン酸塩であるオキサアザホスホリン類縁体である。グルフォスファミドは、ＩＦＯのアルキル化代謝物であるイソホスホルアミドマスタードがベータ−Ｄ−グルコース分子とグルコシド結合しているＩＦＯ誘導体である。さらなるシクロホスファミド類縁体は、「Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ  ａｎａｌｏｇｓ  ｕｓｅｆｕｌ  ａｓ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ａｇｅｎｔｓ」と題した米国特許第５，１９０，９２９号に記載されており、参照によりその全体を本明細書に援用する。
【０３０３】
ＣＴＸ自体は無毒であるが、その代謝物のうちのいくつかは、ＤＮＡ架橋を誘導し、より高い用量では鎖切断を誘導する、細胞傷害性アルキル化剤である。多くの細胞はＣＴＸに対して耐性である、というのも、それらは高レベルの解毒酵素アルデヒド脱水素酵素（ＡＬＤＨ）を発現するからである。リンパ球（造血幹細胞でない）がＡＬＤＨを低レベルでしか発現しないためＣＴＸは増殖リンパ球を標的とし、循環細胞はＤＮＡアルキル化剤に対する感受性が最も高い。
【０３０４】
低用量のＣＴＸ（２００ｍｇ／ｋｇ未満）は、がんのヒト及びマウスモデルにおける抗腫瘍免疫応答の刺激を含めた免疫刺激作用を有する（Ｂｒｏｄｅ  ＆Ｃｏｏｋｅ  Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：１０９−１２６（２００８））。これらの低用量は治療水準未満であり、直接的な抗腫瘍活性を有しない。対照的に、高用量のＣＴＸは抗腫瘍応答を抑制する。抗腫瘍免疫応答の強化におけるＣＴＸの役割はいくつかの機序によって説明され得る：（ａ）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋  Ｔｒｅｇ（具体的には、ことのほか抑制性であり得る増殖Ｔｒｅｇ）の枯渇、（ｂ）Ｂリンパ球の枯渇、（ｃ）腫瘍細胞成長をきたす酸化窒素（ＮＯ）の誘導、（ｄ）ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ−１＋  ＭＤＳＣの動因及び増殖。これらの一次的効果は、多くの二次的効果を有し、例えばＴｒｅｇ枯渇後、マクロファージはより多くのＩＦＮ−γ及びより少ないＩＬ−１０を産生する。ＣＴＸはまた、Ｉ型ＩＦＮ発現を誘導すること及びリンパ球の恒常的増殖を促進することも示されている。
【０３０５】
Ｔｒｅｇ枯渇は、ＣＴＸが抗腫瘍免疫応答を強化する機序として最もよく引用される。この結論は養子移入実験の結果を根拠の一部としている。ＡＢ１−ＨＡ腫瘍モデルでは、９日目のＣＴＸ処置によって７５％の治癒率が得られる。１２日目の精製Ｔｒｅｇの移入はＣＴＸ応答をほぼ完全に抑制した（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｍｏｓｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５８：１２１９−１２２８（２００９））。同様の結果がＨＨＤ２腫瘍モデルにおいて認められ、ＣＴＸ前処置後のＣＤ４＋ＣＤ２５＋  Ｔｒｅｇの養子移入によってワクチンに対する治療的応答がなくなった（Ｔａｉｅｂ，Ｊ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６：２７２２−２７２９（２００６））。
【０３０６】
数々のヒト治験は、低用量のＣＴＸが抗腫瘍免疫応答を促進するのに安全で十分に寛容される有効な薬剤であることを実証した（Ｂａｓ，＆Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｏ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．４７：１−１２（１９９８））。
【０３０７】
抗腫瘍免疫応答を強化するのに最適なＣＴＸの用量は、Ｔｒｅｇレベルを正常範囲より低くすることによってＴ細胞総数を減少させるが、治療水準未満である用量である（Ｍａｃｈｉｅｌｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：３６８９−３６９７（２００１）を参照のこと）。
【０３０８】
ＣＴＸを免疫強化剤として使用したヒト治験では、３００ｍｇ／ｍ２の用量が大抵用いられた。平均的男性（６フィート、１７０ポンド（７８ｋｇ）、体表面積１．９８ｍ２）の場合、３００ｍｇ／ｍ２は８ｍｇ／ｋｇ、または６２４ｍｇの総タンパク質である。がんのマウスモデルでは、有効性は１５〜１５０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量でみられたが、これは３０ｇのマウスにおいて０．４５〜４．５ｍｇの総タンパク質に関係している（（Ｍａｃｈｉｅｌｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：３６８９−３６９７（２００１），Ｈｅｎｇｓｔ  ｅｔ  ａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４１：２１６３−２１６７（１９８１），Ｈｅｎｇｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４０：２１３５−２１４１（１９８０））。
【０３０９】
より大きい哺乳動物、例えば霊長類、例えばヒトの患者の場合、そのようなｍｇ／ｍ２用量が用いられ得るが、有限時間間隔をまたいで投与される単位用量も用いられ得る。そのような単位用量は、３日以下または５日以下または７日以下または１０日以下または１５日以下または２０日以下または２５日以下などの有限期間にわたって日基準で投与され得るものであり、全て本発明によって具体的に想定されている。本明細書中で挙げられている他の強化剤に同じ投薬計画を適用してもよい。
【０３１０】
他の実施形態では、強化剤は、制御性Ｔリンパ球（Ｔ−ｒｅｇ）の活性及び／または数を減少させる薬剤、例えば、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標））、抗ＴＧＦβまたはイマチニブ（ＧＬＥＥＶＡＣ（登録商標））である。挙げられている治療計画には、アジュバントを投与することも含まれ得る。
【０３１１】
有用な強化剤には、有糸分裂阻害薬、例えば、パクリタキソール、アロマターゼ阻害薬（例えばレトロゾール）及び血管新生阻害薬（ＶＥＧＦ阻害薬、例えば、アバスチン、ＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ）（例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａ  ＧＭ−ＣＳＦ−ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００６  Ｎｏｖ  １５；１２（２２）：６８０８−１６．を参照のこと）、アントラサイクリン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、ＴＬＲ４アンタゴニスト及びＩＬ−１８アンタゴニストも含まれる。
【０３１２】
Ｂ．免疫応答の軽減
１．免疫抑制性作用物質
いくつかの実施形態では、ＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−２免疫調節性作用物質と、免疫抑制薬である第２の薬剤とを対象に投与することによって免疫応答または炎症性／自己免疫性の疾患／障害を治療する。免疫抑制性作用物質としては、限定されないが例えば、他のリンパ球表面マーカー（例えば、ＣＤ４０、アルファ−４インテグリン）もしくはサイトカインに対する抗体、融合タンパク質（例えば、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（オレンシア（登録商標））、ＴＮＦＲ−Ｉｇ（エンブレル（登録商標）））、ＴＮＦ−α遮断薬、例えばエンブレル、レミケード、シムジア及びヒュミラ、シクロホスファミド（ＣＴＸ）（すなわち、エンドキサン（登録商標）、シトキサン（登録商標）、ネオサール（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（商標））、メトトレキサート（ＭＴＸ）（すなわち、リウマトレックス（登録商標）、Ｔｒｅｘａｌｌ（登録商標））、ベリムマム（すなわちベンリスタ（登録商標））、または他の免疫抑制薬（例えば、シクロスポリンＡ、ＦＫ５０６様化合物、ラパマイシン化合物またはステロイド）、抗増殖薬、細胞傷害性作用物質、または免疫抑制を支援し得る他の化合物が挙げられる。
【０３１３】
治療用物質は、ＣＴＬＡ−４融合タンパク質、例えばＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（アバタセプト）であり得る。ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ融合タンパク質はＴ細胞上で抗原提示細胞上のＣＤ８０／ＣＤ８６（Ｂ７−１／Ｂ７−２）との結合に関して共刺激性受容体ＣＤ２８と競合し、したがってＴ細胞活性化を抑制するように機能する。別の実施形態では、治療用物質は、ベラタセプトとして知られるＣＴＬＡ−４−Ｉｇ融合タンパク質である。ベラタセプトは、生体内でＣＤ８６との親和性を著しく向上させる２つのアミノ酸置換（Ｌ１０４Ｅ及びＡ２９Ｙ）を含有する。別の実施形態では、治療用物質はＭａｘｙ−４である。
【０３１４】
別の実施形態では、治療用物質はシクロホスファミド（ＣＴＸ）である。シクロホスファミド（エンドキサン（登録商標）、シトキサン（登録商標）、ネオサール（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（商標）のジェネリック名）は、サイトホスファンとしても知られ、オキサゾホリン類から得られるナイトロジェンマスタードアルキル化剤である。それは様々な種類のがん及びいくつかの自己免疫障害を治療するために使用される。シクロホスファミド（ＣＴＸ）は、腎性狼瘡を有する患者のびまん性増殖性糸球体腎炎のために使用される一次薬である。
【０３１５】
治療用物質は、抗二本鎖ＤＮＡ（抗ｄｓＤＮＡ）自己抗体の血中もしくは血漿中レベルを低下させるため及び／またはそれを必要とする患者のタンパク尿を減少させるために有効量投与することができる。
【０３１６】
別の実施形態では、治療剤は血清中のアデノシンの量を増加させる。例えば、ＷＯ０８／１４７４８２を参照されたい。例えば、第２の治療用物質はＣＤ７３−Ｉｇ、組換えＣＤ７３、またはＣＤ７３の発現を増加させる別の薬剤（例えば、サイトカインまたはモノクローナル抗体または小分子）であり得る。例えば、ＷＯ０４／０８４９３３を参照されたい。別の実施形態では、治療用物質はインターフェロン−ベータである。
【０３１７】
治療用物質は、Ｔｈ１、Ｔｈ１７、Ｔｈ２２及び／またはその他の、限定されないがＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−ベータ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１７、ＩＬ−６、ＩＬ−２３、ＩＬ−２２、ＩＬ−２１及びＭＭＰを含めた炎症性分子を分泌するかもしくは他細胞に分泌させる細胞による、分化、増殖、活性、及び／またはサイトカイン産生及び／または分泌を、抑制する小分子であり得る。別の実施形態では、治療用物質は、Ｔｒｅｇと相互作用する、Ｔｒｅｇ活性を強化する、ＴｒｅｇによるＩＬ−１０分泌を促進または強化する、Ｔｒｅｇの数を増加させる、Ｔｒｅｇの抑制能力を向上させる、またはそれらの組み合わせである、小分子である。
【０３１８】
いくつかの実施形態では、組成物はＴｒｅｇの活性または産生を増加させる。例示的なＴｒｅｇ増強剤としては、限定されないが、グルココルチコイド  フルチカゾン、サルメテロール（ｓａｌｍｅｔｅｒｏａｌ）、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γ及びＩＬ−４に対する抗体；ビタミンＤ３、及びデキサメタゾン、ならびにそれらの組み合わせが挙げられる。
【０３１９】
いくつかの実施形態では、治療用物質は、抗体、例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−２３、ＩＬ−２２またはＩＬ−２１などの炎症促進性分子に対する機能遮断性抗体である。
【０３２０】
本明細書中で使用する場合、「ラパマイシン化合物」という用語は、中性の三環式化合物ラパマイシン、ラパマイシン誘導体、ラパマイシン類縁体、及びラパマイシンと同じ作用機序（例えばサイトカイン機能の阻害）を有すると考えられる他のマクロライド化合物を含む。「ラパマイシン化合物」という表現は、治療的有効性を強化すべく改変された、ラパマイシンと構造的に類似している化合物、例えば同様の大環状構造を有する化合物を含む。ラパマイシン化合物の例は当技術分野において既知である（例えば、ＷＯ９５１２２９７２、ＷＯ９５１１６６９１、ＷＯ９５１０４７３８、米国特許第６，０１５，８０９号、第５，９８９，５９１号、米国特許第５，５６７，７０９号、第５，５５９，１１２号、第５，５３０，００６号、第５，４８４，７９０号、第５，３８５，９０８号、第５，２０２，３３２号、第５，１６２，３３３号、第５，７８０，４６２号、第５，１２０，７２７を参照のこと）。
【０３２１】
「ＦＫ５０６様化合物」という表現は、ＦＫ５０６、ならびにＦＫ５０６の誘導体及び類縁体、例えばＦＫ５０６と構造的に類似している化合物、例えば、治療的有効性を強化すべく改変された同様の大環状構造を有する化合物を含む。ＦＫ５０６様化合物の例としては、例えば、ＷＯ００１０１３８５に記載されているものが挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書中で使用される「ラパマイシン化合物」という表現は、ＦＫ５０６様化合物を含まない。
【０３２２】
２．抗炎症薬
他の適切な治療用物質としては、限定されないが例えば、抗炎症剤が挙げられる。抗炎症剤は、非ステロイド系、ステロイド系またはそれらの組み合わせであり得る。ある実施形態は、約１％（ｗ／ｗ）〜約５％（ｗ／ｗ）、典型的には約２．５％（ｗ／ｗ）の抗炎症剤を含有する経口組成物を提供する。非ステロイド系抗炎症剤の代表例としては、限定されないが、オキシカム、例えば、ピロキシカム、イソキシカム、テノキシカム、スドキシカム；サリチル酸塩、例えば、アスピリン、ジサルシド、ベノリラート、トリリサート、サファピリン（ｓａｆａｐｒｙｎ）、ソルピリン（ｓｏｌｐｒｉｎ）、ジフルニサル及びフェンドサル；酢酸誘導体、例えば、ジクロフェナク、フェンクロフェナク、インドメタシン、スリンダク、トルメティン、イソキセパック、フロフェナク、チオピナク、ジドメタシン、アセメタシン（ａｃｅｍａｔａｃｉｎ）、フェンチアザク、ゾメピラク、クリンダナク、オキセピナク、フェルビナク及びケトロラク；フェナム酸塩、例えば、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、ニフルミン酸及びトルフェナム酸；プロピオン酸誘導体、例えば、イブプロフェン、ナプロキセン、ベノキサプロフェン、フルビプロフェン、ケトプロフェン、フェノプロフェン、フェンブフェン、インドプロフェン、ピルプロフェン、カルプロフェン、オキサプロジン、プラノプロフェン、ミロプロフェン、チオキサプロフェン、スプロフェン、アルミノプロフェン及びチアプロフェン（ｔｉａｐｒｏｆｅｎｉｃ）；ピラゾール、例えば、フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾン、フェプラゾン、アザプロパゾン及びトリメタゾンが挙げられる。これらの非ステロイド系抗炎症剤の混合物を採用してもよい。
【０３２３】
ステロイド系抗炎症薬の代表例としては、限定されないが、コルチコステロイド、例えば、ヒドロコルチゾン、ヒドロキシトリアムシノロン、アルファ−メチルデキサメタゾン、リン酸デキサメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、吉草酸クロベタゾール、デソニド、デソキシメタゾン、酢酸デソキシコルチコステロン、デキサメタゾン、ジクロリソン、ジフロラゾン二酢酸塩、吉草酸ジフルコルトロン、フルアドレノロン、フルクロロロンアセトニド、フルドロコルチゾン、ピバル酸フルメタゾン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルコルチンブチルエステル、フルオコルトロン、フルプレドニデン（フルプレドニリデン）酢酸塩、フルランドレノロン、ハルシノニド、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、トリアムシノロンアセトニド、コルチゾン、コルトドキソン、フルセトニド、フルドロコルチゾン、ジフルオロゾン二酢酸塩、フルラドレノロン、フルドロコルチゾン、ジフルロゾン二酢酸塩、フルラドレノロンアセトニド、メドリソン、アムシナフェル、アムシナフィド、ベタメタゾン及びそのエステルの平衡状態、クロロプレドニゾン、酢酸クロロプレドニゾン、クロロコルテロン、クレスシノロン、ジクロリソン、ジフルプレドナート、フルクロロニド、フルニソリド、フルオロメタロン、フルペロロン、フルプレドニゾロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、シクロペンチルプロピオン酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルタメート、メプレドニゾン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、トリアムシノロン及びそれらの混合物が挙げられる。
【０３２４】
ＶＩ．ＡＭＬバイオマーカー
ある実施形態は、治療を必要とする対象の細胞を評価して細胞がＬＡＩＲ、ＬＡＩＲの結合相手またはそれらの両方を発現するか否かを判定することによって、抗ＬＡＩＲ結合部分を使用する治療の有効性を評価または予測する方法を提供する。検査される細胞の例としては、限定されないが、対象から得られたがん細胞が挙げられる。がん細胞の例としては、限定されないが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞が挙げられる。相互作用する多様な抑制性受容体を発現しているがん細胞は、抗ＬＡＩＲ結合部分を使用する治療に対する応答が良好であると考えられる。ＬＡＩＲ結合相手の例としては、限定されないが、膜貫通型コラーゲン（ＸＩＩＩ、ＸＶＩＩ及びＸＸＩＩＩ）及びＬＩＬＲＢ４が挙げられる。図３は、がん細胞上のＬＡＩＲ−１またはＬＡＩＲ−１の結合相手の存在に基づいて予測される治療転帰を示す。
【０３２５】
ＶＩＩ．キット
開示されるＬＡＩＲ−１及びＬＡＩＲ−２免疫調節性作用物質は、量表示のある気密容器、例えばアンプルまたは小袋で包装され得る。薬剤を、乾燥し滅菌され凍結乾燥した粉末または水不含濃縮物として気密容器に入れて供給することができ、例えば水または生理食塩水で対象への投与に適した濃度に再構成することができる。例えば、薬剤を、乾燥した滅菌凍結乾燥粉末として少なくとも５ｍｇ、または少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、または少なくとも７５ｍｇの単位投薬量で気密容器に入れて供給することができる。凍結乾燥された薬剤は、その元々の容器内で２〜８℃で貯蔵され得、典型的には再構成されてから１２時間以内または６時間以内または５時間以内または３時間以内または１時間以内に投与される。
【０３２６】
代替実施形態では、薬剤を液体形態で量及び濃度の表示のある気密容器に入れて供給する。いくつかの実施形態では、液体形態の薬剤は、気密容器に少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２００ｍｇ／ｍｌの薬剤が入った状態で供給される。
【０３２７】
薬剤が充填された１つ以上の容器を含む医薬品パック及びキットも提供する。さらに、疾患の処置に有用な１つ以上の他の予防剤または治療性作用物質も医薬品パックまたはキットの中に含まれ得る。医薬品パックまたはキットはまた、開示される医薬組成物の成分のうちの１つ以上が充填された１つ以上の容器も含み得る。場合によっては、医薬品または生物学的製剤の製造、使用または販売を規制する政府機関によって定められた形式の、ヒト投与のための製造、使用または販売の機関による承認を反映した通知がそのような容器（複数可）に添付され得る。
【０３２８】
上記方法のために考案されたキットも提供する。実施形態は典型的には１つ以上のＬＡＩＲ−１及び／またはＬＡＩＲ−２免疫調節性作用物質を含む。特定の実施形態では、キットはさらに、がんの処置に有用な１つ以上の他の予防剤または治療剤を１つ以上の容器の中に含む。他の実施形態では、キットはさらに、炎症性及び自己免疫性の疾患の治療に有用な１つ以上の抗炎症剤を１つ以上の容器の中に含む。
【実施例】
【０３２９】
実施例１：ＬＡＩＲ抗体及びその重軽鎖配列
材料及び方法
マウス抗ヒトＬＡＩＲ−１モノクローナル抗体
マウスＧ２ａ  Ｆｃに融合させた可溶性ヒトＬＡＩＲ−１（可溶性ＬＡＩＲ−１とは、ＬＡＩＲ−１の細胞外ドメインを指す）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）でマウスを免疫化した。２週間後にマウスを同じ免疫原で負荷した。２週間後にマウスに３回目の抗原を投薬した。最終追加免疫から３日後にマウス脾細胞を採取し、１０％のＦＢＳとグルタミンとが補充されたＲＰＭＩ中に再懸濁させ、後に融合させてハイブリドーマを形成した。
【０３３０】
ＲＡＣＥ
以下のプロトコールに従って重軽鎖のＲＡＣＥ（ｃＤＮＡ端部の高速増幅）による同定を実施した：（１）ｍＲＮＡ変性、（２）ｃＤＮＡ合成、（３）５’ＲＡＣＥ反応、（４）ＰＣＲ結果の分析（増幅されたＤＮＡ断片を可視化するためのアガロースゲルで、正しい抗体可変領域ＤＮＡ断片は５００〜７００塩基対の大きさを有するはずである）、（５）ＰＣＲ陽性バンドのＴＯＰＯクローニング、（６）ＴＯＰＯクローンのＰＣＲ増幅、その後のゲル電気泳動、及びアガロースゲルからの回収、（７）合計２１８クローンの配列決定、（８）配列決定データを使用するＣＤＲ解析の実施（ＣＤＲ領域はｖｂａｓｅ２．ｏｒｇから入手できるＶＢＡＳＥ２を使用して定義した）。
【０３３１】
結果
ＲＡＣＥ法を用いて抗体がクローニングされた。抗体配列解析により、本明細書において１Ｅ１１、１Ｇ７、４Ｂ３、５Ａ６、５Ｅ１、６Ｂ２、６Ｆ４、６Ｇ６、７Ｇ３、９Ｈ６、１１Ｂ３、１２Ｅ１０ａ、及び１２Ｅ１０ｂと呼称される１３種の抗体ハイブリドーマについて、１本の可変重鎖及び１本の可変軽鎖が同定された。配列は下記及び上記に提供されている。重軽鎖配列及びＣＤＲは上記、下記に提供され、ならびに図１Ａ及び図１Ｂに示されている。
【０３３２】
１Ｅ１１の配列
１Ｅ１１  ＶＬのアミノ酸配列
2019528311.tif 000023
【０３３３】
１Ｅ１１  ＶＬのＣＤＲ１
１Ｅ１１  ＶＬのＣＤＲ１のアミノ酸は、
2019528311.tif 000024
を含む。
【０３３４】
１Ｅ１１  ＶＬのＣＤＲ２
１Ｅ１１  ＶＬのＣＤＲ２のアミノ酸は、
ＱＭＳＳＬＡＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）
を含む。
【０３３５】
１Ｅ１１  ＶＬのＣＤＲ３
１Ｅ１１  ＶＬのＣＤＲ３のアミノ酸は、
ＡＱＮＬＥＬＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）
を含む。
【０３３６】
１Ｅ１１  ＶＨアミノ酸配列
2019528311.tif 000025
【０３３７】
１Ｅ１１  ＶＨのＣＤＲ１
１Ｅ１１  ＶＨのＣＤＲ１のアミノ酸は、
ＳＹＤＩＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）
を含む。
【０３３８】
１Ｅ１１  ＶＨのＣＤＲ２
１Ｅ１１  ＶＨのＣＤＲ２のアミノ酸は、
2019528311.tif 000026
を含む。
【０３３９】
１Ｅ１１  ＶＨのＣＤＲ３
１Ｅ１１  ＶＨのＣＤＲ３のアミノ酸は、
ＧＧＹＹＤＹＤＧＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）
を含む。
【０３４０】
１Ｇ７の配列
１Ｇ７  ＶＬのアミノ酸配列
2019528311.tif 000027
【０３４１】
ＩＧ７  ＶＬのＣＤＲ１
１Ｇ７  ＶＬのＣＤＲ１のアミノ酸は、
ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）
を含む。
【０３４２】
ＩＧ７  ＶＬのＣＤＲ２
１Ｇ７  ＶＬのＣＤＲ２のアミノ酸は、
ＡＡＴＳＬＡＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）
を含む。
【０３４３】
ＩＧ７  ＶＬのＣＤＲ３
１Ｇ７  ＶＬのＣＤＲ３のアミノ酸は、
ＱＱＬＹＳＴＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）
を含む。
【０３４４】
１Ｇ７  ＶＨのアミノ酸配列
2019528311.tif 000028
【０３４５】
１Ｇ７  ＶＨのＣＤＲ１
１Ｇ７  ＶＨのＣＤＲ１のアミノ酸は、
ＴＮＡＭＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２）
を含む。
【０３４６】
１Ｇ７  ＶＨのＣＤＲ２
１Ｇ７  ＶＨのＣＤＲ２のアミノ酸は、
2019528311.tif 000029
を含む。
【０３４７】
１Ｇ７  ＶＨのＣＤＲ３
１Ｇ７  ＶＨのＣＤＲ３のアミノ酸は、
ＧＧＳＧＦＦＡＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）
を含む。
【０３４８】
４Ｂ３の配列
４Ｂ３  ＶＬのアミノ酸配列
2019528311.tif 000030
【０３４９】
４Ｂ３  ＶＬのＣＤＲ１
４Ｂ３  ＶＬのＣＤＲ１のアミノ酸は、
2019528311.tif 000031
を含む。
【０３５０】
４Ｂ３  ＶＬのＣＤＲ２
４Ｂ３  ＶＬのＣＤＲ２のアミノ酸は、
ＧＡＳＴＲＥＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）
を含む。
【０３５１】
４Ｂ３  ＶＬのＣＤＲ３
４Ｂ３  ＶＬのＣＤＲ３のアミノ酸は、
ＱＮＤＨＳＹＰＦＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）
を含む。
【０３５２】
４Ｂ３  ＶＨのアミノ酸配列
2019528311.tif 000032
【０３５３】
４Ｂ３  ＶＨのＣＤＲ１
４Ｂ３  ＶＨのＣＤＲ１のアミノ酸は、
ＳＹＧＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）
を含む。
【０３５４】
４Ｂ３  ＶＨのＣＤＲ２
４Ｂ３  ＶＨのＣＤＲ２のアミノ酸は、
2019528311.tif 000033
を含む。
【０３５５】
４Ｂ３  ＶＨのＣＤＲ３
４Ｂ３  ＶＨのＣＤＲ３のアミノ酸は、
2019528311.tif 000034
を含む。
【０３５６】
５Ａ６の配列
５Ａ６  ＶＬのアミノ酸配列
2019528311.tif 000035
【０３５７】
５Ａ６  ＶＬのＣＤＲ１
５Ａ６  ＶＬのＣＤＲ１のアミノ酸は、
ＲＡＳＱＤＩＧＳＳＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）
を含む。
【０３５８】
５Ａ６  ＶＬのＣＤＲ２
５Ａ６  ＶＬのＣＤＲ２のアミノ酸は、
ＡＴＳＳＬＤＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５）
を含む。
【０３５９】
５Ａ６  ＶＬのＣＤＲ３
５Ａ６  ＶＬのＣＤＲ３のアミノ酸は、
ＬＱＹＤＳＦＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６）
を含む。
【０３６０】
５Ａ６  ＶＨのアミノ酸配列
2019528311.tif 000036
【０３６１】
５Ａ６  ＶＨのＣＤＲ１
５Ａ６  ＶＨのＣＤＲ１のアミノ酸は、
ＳＹＧＩＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）
を含む。
【０３６２】
５Ａ６  ＶＨのＣＤＲ２
５Ａ６  ＶＨのＣＤＲ２のアミノ酸は、
2019528311.tif 000037
を含む。
【０３６３】
５Ａ６  ＶＨのＣＤＲ３
５Ａ６  ＶＨのＣＤＲ３のアミノ酸は、
ＱＬＦＡＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０）
を含む。
【０３６４】
５Ｅ１の配列
５Ｅ１  ＶＬのアミノ酸配列
2019528311.tif 000038
【０３６５】
５Ｅ１  ＶＬのＣＤＲ１
５Ｅ１  ＶＬのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、
ＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２）
を含む。
【０３６６】
５Ｅ１  ＶＬのＣＤＲ２
５Ｅ１  ＶＬのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、
ＹＴＳＲＬＨＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３）
を含む。
【０３６７】
５Ｅ１  ＶＬのＣＤＲ３
５Ｅ１  ＶＬのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、
ＱＱＧＮＴＬＰＲＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４）
を含む。
【０３６８】
５Ｅ１  ＶＨのアミノ酸配列
2019528311.tif 000039
【０３６９】
５Ｅ１  ＶＨのＣＤＲ１
５Ｅ１  ＶＨのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、
ＧＹＦＭＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６）
を含む。
【０３７０】
５Ｅ１  ＶＨのＣＤＲ２
５Ｅ１  ＶＨのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000040
を含む。
【０３７１】
５Ｅ１  ＶＨのＣＤＲ３
５Ｅ１  ＶＨのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、
ＦＤＹＳＮＳＦＡＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８）
を含む。
【０３７２】
６Ｂ２の配列
６Ｂ２  ＶＬのアミノ酸配列
2019528311.tif 000041
【０３７３】
６Ｂ２  ＶＬのＣＤＲ１
６Ｂ２  ＶＬのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、
ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０）
を含む。
【０３７４】
６Ｂ２  ＶＬのＣＤＲ２
６Ｂ２  ＶＬのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、
ＡＡＴＳＬＡＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１）
を含む。
【０３７５】
６Ｂ２  ＶＬのＣＤＲ３
６Ｂ２  ＶＬのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、
ＱＱＬＹＳＴＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２）
を含む。
【０３７６】
６Ｂ２  ＶＨのアミノ酸配列
2019528311.tif 000042
【０３７７】
６Ｂ２  ＶＨのＣＤＲ１
６Ｂ２  ＶＨのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、
ＩＮＡＭＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４）
を含む。
【０３７８】
６Ｂ２  ＶＨのＣＤＲ２
６Ｂ２  ＶＨのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000043
を含む。
【０３７９】
６Ｂ２  ＶＨのＣＤＲ３
６Ｂ２  ＶＨのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、
ＳＬＷＦＶＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６）
を含む。
【０３８０】
６Ｆ４の配列
６Ｆ４  ＶＬのアミノ酸配列
2019528311.tif 000044
【０３８１】
６Ｆ４  ＶＬのＣＤＲ１
６Ｆ４のＣＤＲ１のアミノ酸配列は、
ＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８）
を含む。
【０３８２】
６Ｆ４  ＶＬのＣＤＲ２
６Ｆ４のＣＤＲ２のアミノ酸配列は、
ＲＡＮＲＬＶＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９）
を含む。
【０３８３】
６Ｆ４  ＶＬのＣＤＲ３
６Ｆ４のＣＤＲ３のアミノ酸配列は、
ＬＱＹＤＥＦＰＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０）
を含む。
【０３８４】
６Ｆ４  ＶＨのアミノ酸配列
2019528311.tif 000045
【０３８５】
６Ｆ４  ＶＨのＣＤＲ１
６Ｆ４  ＶＨのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、
ＳＹＷＭＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２）
を含む。
【０３８６】
６Ｆ４  ＶＨのＣＤＲ２
６Ｆ４  ＶＨのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000046
を含む。
【０３８７】
６Ｆ４  ＶＨのＣＤＲ３
６Ｆ４  ＶＨのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、
ＮＦＤＱ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４）
を含む。
【０３８８】
６Ｇ６の配列
６Ｇ６  ＶＬのアミノ酸配列
2019528311.tif 000047
【０３８９】
６Ｇ６  ＶＬのＣＤＲ１
６Ｇ６  ＶＬのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、
ＫＡＳＱＮＶＧＴＡＶＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６）
を含む。
【０３９０】
６Ｇ６  ＶＬのＣＤＲ２
６Ｇ６  ＶＬのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、
ＷＡＳＩＲＨＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７）
を含む。
【０３９１】
６Ｇ６  ＶＬのＣＤＲ３
６Ｇ６  ＶＬのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、
ＱＱＹＳＳＨＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８）
を含む。
【０３９２】
６Ｇ６  ＶＨのアミノ酸配列
2019528311.tif 000048
【０３９３】
６Ｇ６  ＶＨのＣＤＲ１
６Ｇ６  ＶＨのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、
ＴＹＹＭＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０）
を含む。
【０３９４】
６Ｇ６  ＶＨのＣＤＲ２
６Ｇ６  ＶＨのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000049
を含む。
【０３９５】
６Ｇ６  ＶＨのＣＤＲ３
６Ｇ６  ＶＨのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、
ＧＫＳＬＡＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２）
を含む。
【０３９６】
７Ｇ３の配列
７Ｇ３  ＶＬのアミノ酸配列
2019528311.tif 000050
【０３９７】
７Ｇ３  ＶＬのＣＤＲ１
７Ｇ３  ＶＬのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000051
を含む。
【０３９８】
７Ｇ３  ＶＬのＣＤＲ２
７Ｇ３  ＶＬのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、
ＱＭＳＮＬＡＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５）
を含む。
【０３９９】
７Ｇ３  ＶＬのＣＤＲ３
７Ｇ３  ＶＬのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、
ＡＱＮＬＥＦＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６）
を含む。
【０４００】
７Ｇ３  ＶＨのアミノ酸配列
2019528311.tif 000052
【０４０１】
７Ｇ３  ＶＨのＣＤＲ１
７Ｇ３  ＶＨのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、
ＴＹＤＩＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８）
を含む。
【０４０２】
７Ｇ３  ＶＨのＣＤＲ２
７Ｇ３  ＶＨのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000053
を含む。
【０４０３】
７Ｇ３  ＶＨのＣＤＲ３
７Ｇ３  ＶＨのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、
ＧＧＹＹＤＹＤＧＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０）
を含む。
【０４０４】
９Ｈ６の配列
９Ｈ６  ＶＬのアミノ酸配列
2019528311.tif 000054
【０４０５】
９Ｈ６  ＶＬのＣＤＲ１
９Ｈ６  ＶＬのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、
ＬＡＳＱＴＩＧＴＷＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２）
を含む。
【０４０６】
９Ｈ６  ＶＬのＣＤＲ２
９Ｈ６  ＶＬのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、
ＡＡＴＳＬＡＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３）
を含む。
【０４０７】
９Ｈ６  ＶＬのＣＤＲ３
９Ｈ６  ＶＬのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、
ＱＱＬＹＳＴＰＦＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４）
を含む。
【０４０８】
９Ｈ６  ＶＨのアミノ酸配列
2019528311.tif 000055
【０４０９】
９Ｈ６  ＶＨのＣＤＲ１
９Ｈ６  ＶＨのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、
ＴＨＡＭＮ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６）
を含む。
【０４１０】
９Ｈ６  ＶＨのＣＤＲ２
９Ｈ６  ＶＨのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000056
を含む。
【０４１１】
９Ｈ６  ＶＨのＣＤＲ３
９Ｈ６  ＶＨのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、
ＬＲＧＧＦＬＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８）
を含む。
【０４１２】
１１Ｂ３の配列
１１Ｂ３  ＶＬのアミノ酸配列
2019528311.tif 000057
【０４１３】
１１Ｂ３  ＶＬのＣＤＲ１
１１Ｂ３  ＶＬのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、
ＫＡＳＥＤＩＹＩＲＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００）
を含む。
【０４１４】
１１Ｂ３  ＶＬのＣＤＲ２
１１Ｂ３  ＶＬのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、
ＴＡＴＳＬＥＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１）
を含む。
【０４１５】
１１Ｂ３  ＶＬのＣＤＲ３
１１Ｂ３  ＶＬのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、
ＱＱＹＷＳＴＰＹＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２）
を含む。
【０４１６】
１１Ｂ３  ＶＨのアミノ酸配列
2019528311.tif 000058
【０４１７】
１１Ｂ３  ＶＨのＣＤＲ１
１１Ｂ３  ＶＨのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、
ＴＹＡＭＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４）
を含む。
【０４１８】
１１Ｂ３  ＶＨのＣＤＲ２
１１Ｂ３  ＶＨのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000059
を含む。
【０４１９】
１１Ｂ３  ＶＨのＣＤＲ３
１１Ｂ３  ＶＨのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、
ＤＲＹＧＧＡＭＤＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６）
を含む。
【０４２０】
１２Ｅ１０ａの配列
クローン１２Ｅ１０は２種の軽鎖を有することが分かった（１２Ｅ１０ａ及び１２Ｅ１０ｂ）。ｍｂ
【０４２１】
１２Ｅ１０ａ  ＶＬのアミノ酸配列
2019528311.tif 000060
【０４２２】
１２Ｅ１０ａ  ＶＬのＣＤＲ１
１２Ｅ１０ａ  ＶＬのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、
ＫＡＳＱＮＶＲＳＡＶＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８）
を含む。
【０４２３】
１２Ｅ１０ａ  ＶＬのＣＤＲ２
１２Ｅ１０ａ  ＶＬのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、
ＬＡＳＮＲＨＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９）
を含む。
【０４２４】
１２Ｅ１０ａ  ＶＬのＣＤＲ３
１２Ｅ１０ａ  ＶＬのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、
ＬＱＨＷＮＹＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０）
を含む。
【０４２５】
１２Ｅ１０（ａ及びｂ）  ＶＨのアミノ酸配列
2019528311.tif 000061
【０４２６】
１２Ｅ１０  ＶＨのＣＤＲ１
１２Ｅ１０  ＶＨのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、
ＳＣＧＬＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２）
を含む。
【０４２７】
１２Ｅ１０  ＶＨのＣＤＲ２
１２Ｅ１０  ＶＨのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000062
を含む。
【０４２８】
１２Ｅ１０  ＶＨのＣＤＲ３
１２Ｅ１０  ＶＨのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000063
を含む。
【０４２９】
１２Ｅ１０ｂ  ＶＬのアミノ酸配列
2019528311.tif 000064
【０４３０】
１２Ｅ１０ｂ  ＶＬのＣＤＲ１
１２Ｅ１０ｂ  ＶＬのＣＤＲ１のアミノ酸配列は、
ＲＡＳＱＳＩＳＮＮＬＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６）
を含む。
【０４３１】
１２Ｅ１０ｂ  ＶＬのＣＤＲ２
１２Ｅ１０ｂ  ＶＬのＣＤＲ２のアミノ酸配列は、
ＹＡＳＱＳＩＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７）
を含む。
【０４３２】
１２Ｅ１０ｂ  ＶＬのＣＤＲ３
１２Ｅ１０ｂ  ＶＬのＣＤＲ３のアミノ酸配列は、
ＱＱＳＮＳＷＰＬＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８）
を含む。
【０４３３】
実施例２：ＬＡＩＲ−２  Ｆｃの精製
方法及び材料
Ｌｏｎｚａ  ＧＳベクターがトランスフェクトされたＣＨＯＫ１ＳＶ  ＫＯ親株を使用して、ＬＡＩＲ−２  ｈＩｇＧ１（以降、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃと呼ぶ）を生成した。この細胞株は、リード候補であるＬＡＩＲ−２  ｈＩｇＧ１（天然ＩｇＧ１）、及び突然変異Ｆｃ形態であるＬＡＩＲ２−ｈＩｇＧ１  Ｆｃ（Ｌ１４５Ａ／Ｌ１４６Ａ）のどちらの発現させるためにも使用された。ＬＡＩＲ−２  ＦｃをプロテインＡクロマトグラフィーによって精製し、純度についてＳＤＳ−ＰＡＧＥ（図６Ａ）及びサイズ排除クロマトグラフィー（図６Ｂ）によって評価した。ＬＡＩＲ−１  Ｆｃを対照ＬＡＩＲ−２  Ｆｃとして同様に作製し、サイズ排除クロマトグラフィーによって精製し、ＳＤＳ  ＰＡＧＥを用いて可視化した。
【０４３４】
結果
図６Ａは、還元条件下及び非還元条件下でのＬＡＩＲ−２  Ｆｃを示すＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルである。図６Ｂは、３８．５５０分に単一の主要ピークを示しているクロマトグラムである。データは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃの予想された大きさ、及びここに記載される試験に使用したＬＡＩＲ−２  Ｆｃタンパク質の高い純度レベルを裏付けている。
【０４３５】
実施例３：ＬＡＩＲ−２Ｆｃはコラーゲンに結合する
材料及び方法
コラーゲン１７を安定的に発現するＫ５６２  ＡＭＬ細胞株、またはコラーゲン１７を欠く対照を、１ｕｇのＬＡＩＲ−２  Ｆｃ及びＬＡＩＲ−１  Ｆｃで染色し、氷上で３０分間インキュベートし、その後、ＦＡＣＳ用緩衝液（ＰＢＳ＋１％のＦＢＳ）中で細胞を洗浄し、次いで０．０５ｕｇの抗ｈＩｇＧ−ＰＥによる染色を氷上で３０分間行った。細胞を洗浄し、ＦＡＣＳ固定用緩衝液（ＰＢＳ中３％のパラホルムアルデヒド）中に再懸濁させ、フローサイトメトリーで評価した。
【０４３６】
結果
Ｋ５６２細胞表面上に発現した内因性膜貫通型リガンドコラーゲン１７に結合する能力によってＬＡＩＲ−２  Ｆｃ（図７Ａ及び図７Ｂ）及びＬＡＩＲ−１  Ｆｃ（図７Ｃ及び図７Ｄ）の機能性が評価された。ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ及びＬＡＩＲ−１  ＦｃのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を用いて、この試験及びその後の試験で使用するタンパク質の純度を評価した（図７Ｅ及び図７Ｆ）。ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ及びＬＡＩＲ−１  Ｆｃの９５％より高い純度は、ここに示す全てのデータの標準であった。
【０４３７】
実施例４：ＡＭＬ細胞株におけるＬＡＩＲ−１発現ならびにＬＡＩＲ−１  Ｆｃ及びＬＡＩＲ−２  Ｆｃの結合性
方法及び材料
Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞、Ｋ５６２  Ｃｏｌ１７細胞、及びＴＨＰ−１細胞を、ＴｒｕＳｔａｉｎ  ＦｃＸ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及びｈＩｇＧ（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）によるＦｃ受容体の遮断の後に、１０ｍｇ／ｍＬの抗ＬＡＩＲ−１−ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ＮＫＴＡ２５５）または１０ｍｇ／ｍＬのビオチン化ＬＡＩＲ−１  ＦｃまたはＬＡＩＲ−２  Ｆｃで染色した。３０分間インキュベートした後、細胞をＦＡＣＳ用緩衝液で洗浄し、０．４ｕｇ／ｍＬのストレプトアビジン−ＰＥで染色した。発現をフローサイトメトリーで評価した。
【０４３８】
結果
ＬＡＩＲ−１は、特定ＡＭＬ細胞株において高発現することが確認されている。ＬＡＩＲ−２  Ｆｃは特定ＡＭＬ細胞株の表面上の未知分子に結合するのに対し、ＬＡＩＲ−１  Ｆｃの結合は認められなかった。
【０４３９】
試験管内アッセイに有用である細胞株を評価するために、造血器由来のＡＭＬ細胞株を、ＬＡＩＲ−１発現ならびに、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ及びＬＡＩＲ−１  Ｆｃ結合による潜在的結合に関して評価した（図８Ａ〜８Ｉ）。
【０４４０】
図８Ａ〜８Ｉは、抗ＬＡＩＲ−１、ＬＡＩＲ−１  ＦｃまたはＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理された、示されている細胞株のフローサイトメトリーの度数分布図である。図８Ａ〜８Ｃはそれぞれ、抗ＬＡＩＲ−１、ＬＡＩＲ−１  Ｆｃ及びＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理したＪｕｒｋａｔ細胞を示す。
【０４４１】
図８Ｄ〜８Ｆはそれぞれ、抗ＬＡＩＲ−１、ＬＡＩＲ−１  Ｆｃ及びＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理したＫ５６２  Ｃｏｌ１７細胞を示す。
【０４４２】
図８Ｇ〜８Ｉはそれぞれ、抗ＬＡＩＲ−１、ＬＡＩＲ−１  Ｆｃ及びＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理したＴＨＰ−１細胞を示す。
【０４４３】
示されているように、Ｔ細胞白血病であるＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞、及び単球白血病であるＴＨＰ−１細胞は両方とも高レベルのＬＡＩＲ−１を発現したが、Ｋ５６２細胞はそうならない。さらに、ＬＡＩＲ−２  ＦｃはＴＨＰ−１細胞及び陽性対照Ｋ５６２−コラーゲン１７発現細胞に結合したが、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞ではそうならなかった。これらの結果から、シグナル伝達経路レポーターで形質導入されたＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞及びＴＨＰ−１細胞を試験管内試験のために選択した。
【０４４４】
実施例５：ＬＡＩＲ−２  ＦｃはＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞におけるＮＦ−ｋＢ及びＮＦＡＴシグナル伝達を誘導する
材料及び方法
９６ウェル平底プレートに滴定量の抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）を塗布して一晩置き、その後、細胞添加に先立って吸引を行った。１０ｕｇ／ｍｌのＬＡＩＲ−２  Ｆｃもしくは対照Ｆｃの存在下またはタンパク質なしで、ＮＦ−ｋＢ−ＧＦＰ経路レポーターを有するＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞を５０，０００細胞／ウェル／２００ｕｌ  ＲＰＭＩ−Ｃで播種した。細胞を１日培養した。細胞をプレートから採集し、フローサイトメトリーでＧＦＰ発現を評価した。
【０４４５】
ＮＦＡＴ経路レポーターを有するＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞は、塗布された０．５ｕｇ／ｍＬの抗ＣＤ３、及び滴定量の可溶性ＬＡＩＲ−２  Ｆｃまたは対照Ｆｃの存在下で培養された。およそ２４時間後に、プロトコール（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）に従って上清の分泌Ｌｕｃｉａレベルを評価した。読み値をＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで記録した。
【０４４６】
１０ｕｇ／ｍｌのＬＡＩＲ−２  Ｆｃまたは対照Ｆｃで処理されたＪｕｒｋａｔ−ＮＦＡＴ−Ｌｕｃｉａ  Ｔ細胞からの上清のＩＬ−２レベル及びＴＮＦレベルを、ＭＳＤサイトカイン分析によって評価した。
【０４４７】
結果
試験管内アッセイは、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃが造血器由来の白血病細胞株の活性を誘起することができることを指し示す。ＮＦ−ｋＢ−ＧＦＰ経路レポーターを有するＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞は、１０ｕｇ／ｍｌのＬＡＩＲ−２  Ｆｃ、対照Ｆｃまたは培地対照の存在下で、塗布された滴定濃度の抗ＣＤ３と共に培養され、フローサイトメトリーによるＧＦＰ＋細胞パーセントの分析によってＮＦ−ｋＢ誘導が評価された（図９Ａ）。このアッセイは、ＬＡＩＲ−２  ＦｃがＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞におけるＮＦ−ｋＢシグナル伝達の誘導を促進することを示している。この効果はＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞に対するＬＡＩＲ−２  Ｆｃの明らかな結合を伴うことなく生じ、したがって、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞の形質膜上に発現したＬＡＩＲ−１に結合するリガンドに対してＬＡＩＲ−２  Ｆｃがデコイとしての役割を果たすことを指し示している。
【０４４８】
ＮＦＡＴ−Ｌｕｃｉａ経路レポーターを有する第２のＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞株を使用して、設定濃度の抗ＣＤ３の存在下でＬＡＩＲ−２  Ｆｃ用量依存的にＮＦＡＴが誘導されることが実証された（図９Ｂ）。
【０４４９】
ＮＦＡＴレポーターアッセイでの１０ｕｇ／ｍｌのＬＡＩＲ−２  Ｆｃまたは対照Ｆｃの存在下でのＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞からの上清を、ＩＬ−２及びＴＮＦサイトカインレベルについて試験した（図９Ｃ及び図９Ｄ）。ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ培養されたＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞は、経路レポーター誘導との一貫性を有してどちらのサイトカインもより高いレベルで呈した。ＬＡＩＲ−２  ＦｃはＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞に直接結合することが示されていないことから、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃは、ＬＡＩＲ−１と可溶性因子との相互作用を妨害している、またはＪｕｒｋａｔレポーター活性を強化すべく他の機序によってＬＡＩＲ−１による抑制性シグナル伝達を妨害している、と推断される。
【０４５０】
実施例６：ＬＡＩＲ−２  ＦｃはＴＨＰ−１細胞に結合してレポーター活性を誘起する
材料及び方法
Ｔｒｕｓｔａｉｎ  ＦｃＸ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及びｈＩｇＧ（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）でＦｃ受容体を遮断した後に、氷上でＴＨＰ−１細胞に０．１ｕｇ／ｍｌのビオチン化ＬＡＩＲ−２  Ｆｃを添加した。続いて、細胞をＦＡＣＳ用緩衝液で洗浄し、０．４ｕｇ／ｍＬのストレプトアビジン−ＰＥ二次（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で３０分間氷上で染色した。細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーで分析した。
【０４５１】
９６ウェル平底プレートにＴＨＰ−１細胞を５０，０００細胞／ウェルで加えた。終濃度１ｕｇ／ｍｌのＬＰＳ、またはＲＰＭＩ完全培地を添加し、その後、終濃度１０ｕｇ／ｍｌのＬＡＩＲ−２  Ｆｃまたは対照Ｆｃを添加した。全てのウェルは２００ｕｌの終体積を含んでいた。示されている日数にわたって細胞をインキュベートし、その後、プロトコール（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）に従って上清を分泌Ｌｕｃｉａについて分析した。読み取りはＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用して実施した。
【０４５２】
結果
ＬＡＩＲ−２  Ｆｃまたは対照Ｆｃの存在下でのＴＨＰ−１経路レポーター細胞の応答も評価された。興味深いことに、ＬＡＩＲ−１発現の他にも、ＴＨＰ−１細胞にはＬＡＩＲ−２  Ｆｃが用量依存的に結合することが分かった（図１０Ａ）。これはおそらく、ＴＨＰ−１細胞は既知のＬＡＩＲ−２リガンドである膜貫通型コラーゲンを発現するからである（データ示さず）。ＴＨＰ−１細胞においてインターフェロン経路を誘導することが知られているＴｏｌｌ様受容体リガンドであるＬＰＳと共に、またはそれなしで、ＴＨＰ−１細胞が培養された。ＬＰＳ及びＬＡＩＲ−２  Ｆｃの存在下では、ＬＰＳ及び対照Ｆｃの存在下での場合に比べてインターフェロン調節因子（ＩＲＦ）誘導が有意に増加した（図１０Ｂ）。しかも、ＬＡＩＲ−２  ＦｃはＬＰＳの非存在下においてさえインターフェロンシグナル伝達誘導を引き起こすことができ、共シグナル伝達を必要とせずにＴＨＰ−１細胞に対して直接的に効果を有することを示していた（図１０Ｃ）。ＬＡＩＲ−２  Ｆｃが膜貫通型コラーゲンを介したシグナル伝達を誘導することができる可能性は低いことから、作用機序は膜貫通型コラーゲンとのＬＡＩＲ−１の結合の遮断である可能性がある。
【０４５３】
実施例７：ＬＡＩＲ−２  Ｆｃは初代Ｔ細胞の増殖を強化する
材料及び方法
ＣＤ４＋及びＣＤ８＋  Ｔ細胞を含めて汎Ｔ細胞を健常ドナーのＰＢＭＣから単離した。ＰＢＭＣ全体からＣＤ４＋  Ｔ細胞及びＣＤ８＋  Ｔ細胞をＭＡＣＳ磁気ビーズ濃縮（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）によって単離し、１ｕＭのＣＦＳＥ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で標識し、滴定量の抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）が予め塗布され４℃で一晩経った９６ウェルプレートに加えた。１０ｕｇ／ｍｌのＬＡＩＲ−２  Ｆｃまたは対照Ｆｃを加え、細胞を７２時間培養し、その後、フローサイトメトリーで分析した。特定Ｔ細胞サブセットのフローサイトメトリー分析のために、細胞を抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８  ｍＡｂで染色した。ＣＤ４及びＣＤ８  Ｔ細胞サブセットをこうして篩に掛け、増殖の尺度としてのＣＦＳＥ減弱を評価した。
【０４５４】
結果
初代ヒトＴ細胞に対するＬＡＩＲ−２  Ｆｃの作用が次に評価された。結果は、ＣＤ４＋  Ｔ細胞及びＣＤ８＋  Ｔ細胞がどちらもＬＡＩＲ−２  Ｆｃの存在下で増殖が増大することを指し示している（図１１Ａ及び図１１Ｂ）。
【０４５５】
実施例８：ＬＡＩＲ−２  ＦｃはヒトＰＢＭＣ細胞サブセットに直接結合しない
材料及び方法
３名の正常な健常ドナーからの新鮮なヒトＰＢＭＣをＣＤ３＋ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ３＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞、ＣＤ３−ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋  ＮＫ細胞、及びＣＤ１４＋単球で染色し、フローサイトメトリーで分析した。
【０４５６】
結果
この作用がＬＡＩＲ−２  ＦｃとＴ細胞との結合によるものであるか否かを判定するために、健常ドナーのＰＢＭＣをＬＡＩＲ−２  Ｆｃで染色した。図１２Ａ〜１２Ｄはそれぞれ、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理されたドナー１７１０からのＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ細胞及び単球を示す。図１２Ｅ〜１２Ｈはそれぞれ、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理されたドナー１７１１からのＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ細胞及び単球を示す。図１２Ｉ〜１２Ｌはそれぞれ、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処理されたドナー１７１２からのＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ細胞及び単球を示す。
【０４５７】
データは、ＬＡＩＲ−２  ＦｃがヒトＴ細胞に直接結合しなかったことを示している。しかも、ＬＡＩＲ−２  ＦｃはどのＰＢＭＣ細胞サブセットとも大したレベルで結合するとは見受けられない。こういったことから、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃは、ＬＡＩＲ−１と、この培養系中に存在しているまたは発現したＬＡＩＲリガンドとの相互作用を妨害している可能性がある。これらの知見はさらに、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃが生体内での造血細胞枯渇に何ら影響を与えていないはずであるということも示唆しているが、膜貫通型ＬＡＩＲリガンドを発現している細胞が未研究の他の方法で潜在的に枯渇されるまたは直接影響を受ける可能性はある。
【０４５８】
実施例９：ＬＡＩＲ−２  Ｆｃは生体内での抗原特異的ＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖を促進する
材料及び方法
マウスＣ５７ＢＬ／６  ＭＨＣクラスＩ（Ｈ−２Ｋｂ）に関してモデル抗原である鶏卵オボアルブミン（ＯＶＡ）に対して特異的であるＣＤ８＋  Ｔ細胞を使用した。ＣＤ８＋  ＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞は、Ｈ−２Ｋｂと結合しているときのＯＶＡペプチドＳＩＩＮＦＥＫＬ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９）を認識する。アジュバントの存在下でＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞は増殖期を経てその後に収縮期を経る。ＯＶＡ及びポリＩ：Ｃアジュバントを使用して、ＯＴ−Ｉ増殖が増大するか否か、及び／または収縮が遅延されるか否かを判定した。
【０４５９】
実験計画を図１３Ａに示す。マウス１０匹／群を、−２日目及び５日目に５００ｕｇの対照ＦｃまたはＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処置した。０日目にＭＡＣＳ分離（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）によってＣＤ８＋  Ｔ細胞をＯＴ−Ｉ×Ｌｙ５．１  Ｆ１マウスから単離し、２ｅ５個の細胞を腹腔内注射した。１日目に１００ｕｇのＳＩＩＮＦＥＫＬ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９）ペプチド（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）及び１５０ｕｇのポリＩ：Ｃアジュバント（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を総体積３００ｕｌ／マウスとして腹腔内注射した。免疫化前の０日目、ならびに１、３、５、７、１０及び１４日目にマウスから採血し、ＴＣＲ  Ｖβ２＋ＣＤ８＋  Ｔ細胞及びＬｙ５．１（ＣＤ４５．１）によって篩に掛けることによって血中のＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞をフローサイトメトリーで分析した。
【０４６０】
結果
ＬＡＩＲ−２  Ｆｃを、抗原特異的なＴ細胞応答をＬＡＩＲ−２  Ｆｃが強化するか否かを判定するために次に生体内で試験した。図１３Ｂは、対照Ｆｃに比べて、ＣＤ８＋  Ｔ細胞に対するＯＴ−Ｉの百分率が５日目までに有意に増加することを示している。結果は、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃの存在下ではＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞が、対照Ｆｃで処置されたマウスに比べて有意に強化された増殖を経ることを指し示している（図１３Ｂ）。これらの結果は、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞応答を評価するＯＶＡ発現腫瘍モデルに直接関係してくる。
【０４６１】
実施例１０：ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ処置マウスは抗原特異的リコール応答が有意に改善される
材料及び方法
初回増殖後の約１０週間目にマウスを、ＯＶＡペプチドが負荷されているか（ＣＦＳＥ高）、ペプチドなしであるか（ＣＦＳＥ低）のどちらかである等しい個数（各々１ｅ６個）のＣＤ４５．１脾細胞で負荷した。４８時間後にマウスを安楽死させ、ＯＴ−Ｉ媒介抗原特異的メモリーＣＴＬ殺傷活性の尺度としての、ＯＶＡ負荷された脾細胞に対する負荷なしの脾細胞の比率について脾細胞をフローサイトメトリーで評価した。
【０４６２】
結果
ＯＴ−Ｉ発現実験（実施例９）からのマウスを、約１０週間休ませ、その後、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃによって強化される増殖が、抗原負荷された脾細胞のＣＴＬ殺傷で例証される機能性リコール応答の強化に変換されたか否かを判定すべく、抗原特異的メモリーＣＴＬリコール応答について評価した。
【０４６３】
ＣＦＳＥピークでのゲーティング及び開始時比率のために非注射対照が評価された（図１４Ａ〜１４Ｃ）。各群のＣＦＳＥ低に対するＣＦＳＥ高の比率の代表例を図１４Ｄ〜１４Ｆに示す。結果は、ＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞の初回増殖の間にＬＡＩＲ−２  Ｆｃで処置された（リコール応答の間は何の処置も施さなかったことに留意されたい）マウスではＯＶＡ負荷された脾細胞の特異的溶解として判定されるリコール応答が著しくより良好であることを示している（図１４Ｃ）。
【０４６４】
実施例１１：ＬＡＩＲ−２  Ｆｃは１Ｄ８−ＯＶＡ卵巣癌成長を制御し生存率を延ばす
材料及び方法
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに５ｅ６個のＩＤ８−ＯＶＡ細胞を腹腔内注射し、続いて３週間後に１ｅ６個のＣＤ８＋  ＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞を腹腔内注射した。その後、合計５回の処置として、ＯＴ−Ｉ移入の１日後から始めて４日ごとに、マウスをＬＡＩＲ−２  Ｆｃまたは対照Ｆｃで処置した。２〜３日ごとに体重増加を追跡評価した。生存能を評価するために、腹水産生が認められかつマウスの体重が開始時から５０％増加したときにマウスを安楽死させた。図１５Ａは、０日目に５ｅ６個のＩＤ８−ＯＶＡ腫瘍細胞を腹腔内注射した例示的な処置計画の図である。
【０４６５】
結果
ＬＡＩＲ−２  Ｆｃによって媒介される抗原特異的Ｔ細胞応答の向上が抗腫瘍免疫性の向上に変換されたか否かを、ＯＶＡ発現腫瘍モデル及びＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞を使用して調べた。腫瘍接種から３週間後に移入させたＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞が保護的でないこと、及びＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞が機能不全になったまたは消耗した表現型を発達させることは、以前に判定された。したがってこれは、抗原特異的Ｔ細胞応答を促進すること及び／または消耗が起こるのを逆転させる／防止することができるものとして免疫療法を判定する上で、有用なモデルである。
【０４６６】
結果は、有意に遅延した体重増加及び有意に向上した長期生存を示した（図１５Ｂ及び図１５Ｃ）。マウスのうちの６０％は長期にわたって生存し、これに対して対照では２０％であり、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃによって治癒が全体的に有意であったことが示唆された（図１５Ｃ）。
【０４６７】
実施例１２：ＬＡＩＲ−２  Ｆｃと抗ＰＤ−１は卵巣癌において有効な併用免疫療法である
材料及び方法
より多く（６ｅ６個）のＩＤ８−ＯＶＡ腫瘍細胞を０日目に腹腔内注射したこと及びより少ないＯＴ−Ｉ  Ｔ細胞（５ｅ５個）を３週目に養子移入させたことを除けば図１５Ａの場合と同様にしてマウスを処置した。合計５回の投薬として、Ｔ細胞移入の１日後から初めて４日ごとに、２００ｕｇのＬＡＩＲ−２  Ｆｃまたは対照Ｆｃによる処置を行った。マウスの体重を２〜３日ごとに追跡評価し、腹水産生が認められかつマウスの体重が開始時から５０％増加したときにマウスを安楽死させた。
【０４６８】
結果
相乗効果を調査するために、ＬＡＩＲ−２  Ｆｃ単独を抗ＰＤ−１免疫療法及びシスプラチン化学療法ならびにＰＤ−１及びシスプラチンとの併用と比較して研究した（図１６）。結果は、このモデルにおけるＬＡＩＲ−２  Ｆｃ単独による中程度の効果を示している。しかしながら、最大の応答はＬＡＩＲ−２  Ｆｃと抗ＰＤ−１との併用によって認められ、マウスのうち５０％が１３週間後に生存していた。他の単剤療法または併用療法では１３週目まで生存したマウスはいなかった。
【０４６９】
実施例１３：ＬＡＩＲ−２  Ｆｃは皮下リンパ腫モデルにおいて腫瘍成長を遅延させ生存を向上させる
材料及び方法
４ｅ５  Ａ２０腫瘍細胞を０日目に皮下（ｓｃ）埋植した。合計５回の処置として、４日目から初めて４日ごとに、２００ｕｇのＬＡＩＲ−２  Ｆｃまたは対照Ｆｃを腹腔内投与した。腫瘍成長を追跡して週に２〜３回測定し、平均腫瘍径が１５ｍｍまたは２０００ｍｍ３に達したときにマウスを屠殺した。図１７Ａは、Ａ２０腫瘍モデルを使用する例示的な処置計画である。
【０４７０】
結果
結果は、腫瘍成長が有意に遅延したことを示している（図１７Ｂ）。加えて、生存が有意に延長され、１匹の動物は長期にわたって無腫瘍のままであった（図１７Ｃ）。
【０４７１】
実施例１４：ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂの生成、選抜及び特性評価
材料及び方法
Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＣＲＯからの提供を受けて抗ヒトＬＡＩＲ−１  ｍＡｂの免疫化、融合及びクローニングを実施した。ＮｅｘｔＣｕｒｅは５匹のＳＪＬ系統マウスの免疫化及び追加免疫のためのヒトＬＡＩＲ−１  ｍＧ２ａ  Ｆｃ融合タンパク質をＰｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙにて製造した。高力価の２匹のマウスからの脾細胞及びリンパ節を使用して電気的融合を実施した。ヒトＬＡＩＲ−１  ｈＧ１  Ｆｃ融合タンパク質との結合性に関してはＥＬＩＳＡによって、また内因性ＬＡＩＲ−１を発現するＡＭＬ腫瘍細胞株（Ｊｕｒｋａｔ、ＨＬ−６０）との結合性に関してはフローサイトメトリーによって、およそ１２００個のハイブリドーマクローンに対するスクリーニングを行った。
【０４７２】
ＬＡＩＲ−１を発現することが知られている細胞株（ＨＬ−６０、ＭＶ−４−１１）、特異性に関して試験するためにＬＡＩＲ−１（Ｋ５６２−ＬＡＩＲ−１）がトランスフェクトされたＬＡＩＲ−１陰性の細胞株、及びＬＡＩＲ−１発現陰性であることが知られている細胞株（Ｕ２６６Ｂ１）と共に、抗ヒトＬＡＩＲ−１ハイブリドーマクローン上清をインキュベートした。手短に述べると、９６ウェル丸底プレート内で３０分間、５０ｕｌの上清を１ｅ５個の細胞と共にインキュベートした。細胞をＦＡＣＳ用緩衝液（ＰＢＳ＋１％のＦＢＳ）で洗浄し、０．０５ｕｇの抗マウスＩｇＧ−ＰＥ二次抗体（Ａｂ）で３０分間染色した。細胞を洗浄し、フローサイトメトリー分析のために１００ｕｌのＰＢＳ中３％のパラホルムアルデヒドの中で固定した。示されているデータは、バックグラウンドである培地＋二次染色対照（最後列）よりも強く染色される細胞の百分率である。
【０４７３】
結果
最終選抜された１５種のクローンについての結果を示す（図１８）。ハイブリドーマからの上清は特定細胞種に対する示差的レベルの結合性を有する。これは、細胞上清中のｍＡｂのレベルが様々であること、または形質膜上のＬＡＩＲ−１に対する結合の強度（アビディティー）が様々であることに起因している可能性がある。しかしながら、いくつかの上清は特定細胞種上のＬＡＩＲ−１に対してより高いレベルで結合したことから、ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂクローンが特定のグリコフォームあるいは腫瘍細胞株上の改変形態のＬＡＩＲ−１に結合している可能性は残っている。
【０４７４】
以下の配列では、下線付きの太字はリーダー配列を表す。いくつかの実施形態では、リーダー配列が除去されている。
【０４７５】
キメラ１Ｅ１１の配列：
ｈＧ１  ＨＣ
ｈＧ１重鎖のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000065
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０）である。
ｈＧ１重鎖の核酸配列は、
2019528311.tif 000066
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１）である。
ｈＧ４Ｐ  ＨＣ
ｈＧ４Ｐ重鎖のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000067
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２）である。
ｈＧ４Ｐの核酸配列は、
2019528311.tif 000068
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３）である。
軽鎖
キメラ１Ｅ１１の軽鎖のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000069
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４）である。
キメラ１Ｅ１１の軽鎖の核酸配列は、
2019528311.tif 000070
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５）である。
【０４７６】
キメラ５Ｅ１の配列
ｈＧ１  ＨＣ
ｈＧ１重鎖のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000071
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２６）である。
ｈＧ１重鎖の核酸配列は、
2019528311.tif 000072
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２７）である。
ｈＧ４Ｐ  ＨＣ
ｈＧ４Ｐ重鎖のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000073
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２８）である。
ｈＧ４Ｐ重鎖の核酸配列は、
2019528311.tif 000074
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２９）である。
軽鎖
キメラ５Ｅ１の軽鎖のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000075
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３０）である。
キメラ１Ｅ５の軽鎖の核酸配列は、
2019528311.tif 000076
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３１）である。
【０４７７】
キメラ６Ｇ６の配列
ｈＧ１重鎖
ｈＧ１重鎖のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000077
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３２）である。
ｈＧ１重鎖の核酸配列は、
2019528311.tif 000078
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３３）である。
ｈＧ４Ｐ重鎖のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000079
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４）である。
ｈＧ４Ｐ重鎖の核酸配列は、
2019528311.tif 000080
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３５）である。
軽鎖のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000081
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６）である。
軽鎖の核酸配列は、
2019528311.tif 000082
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３７）である。
【０４７８】
キメラ１１Ｂ３の配列
ｈＧ１  ＨＣ
ｈＧ１重鎖のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000083
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８）である。
ｈＧ１重鎖の核酸配列は、
2019528311.tif 000084
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３９）である。
ｈＧ４Ｐ  ＨＣ
ｈＧ４Ｐ重鎖のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000085
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４０）である。
ｈＧ４Ｐ重鎖の核酸配列は、
2019528311.tif 000086
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１）である。
軽鎖
軽鎖のアミノ酸配列は、
2019528311.tif 000087
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４２）である。
軽鎖の核酸配列は、
2019528311.tif 000088
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４３）である。
【０４７９】
キメラ抗体は、軽鎖と開示される重鎖のうちの１つとを組み合わせることによって作られる。
【０４８０】
実施例１５：コラーゲンＩ及びＩＩＩとのＬＡＩＲ−１  Ｆｃ結合の遮断または強化に関する、ＬＡＩＲ−１ハイブリドーマ上清に対するスクリーニング
材料及び方法
ＰＢＳ中１ｕｇ／ｍｌのコラーゲンＩまたはコラーゲンＩＩＩ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を（別々のスクリーニングのために別々のプレートに）塗布して一晩置いた。プレートを洗浄し、ＥＬＩＳＡ遮断用緩衝液（ＰＢＳ中５％のＢＳＡ）で遮断した。洗浄後、５０ｕｌのＬＡＩＲ−１ハイブリドーマ上清をプレートに加え、続いて２ｕｇ／ｍｌのヒトＬＡＩＲ−１Ｆｃ−ビオチンを５０ｕｌ加えた。プレートを洗浄し、ＳＡ−ＨＲＰ（ｅＢｉｏ）を１：１００００希釈で加えた。３０分間インキュベートした後、ＴＭＢを加え、続いて停止溶液を加えた。吸光度をＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎ分析器で決定した。
【０４８１】
結果
図１９は、ＬＡＩＲ−１ハイブリドーマスクリーニングの結果を示す。コラーゲンＩ及びＩＩＩに対するＬＡＩＲ−１  Ｆｃの結合の増強剤としてクローンＰ１−Ａ４、Ｐ１−Ｄ６及びＰ６−Ｆ４が同定された。クローンＰ１−Ｅ１１、Ｐ２−Ａ１０、Ｐ４−Ｂ３、Ｐ５−Ａ６、Ｐ５−Ｅ１、Ｐ６−Ｂ２、Ｐ６−Ｇ６、Ｐ７−Ｇ３、Ｐ９−Ｈ６、Ｐ１０−Ｇ７、Ｐ１１−Ｂ３及びＰ１２−Ｅ１０はコラーゲンＩ及びＩＩＩに対するＬＡＩＲ−１  Ｆｃの結合の遮断剤であることが分かった。
【０４８２】
実施例１６：Ｃ１ｑ及びＳＰ−ＤとのＬＡＩＲ−１  Ｆｃ結合の遮断または強化に関する、ＬＡＩＲ−１ハイブリドーマ上清に対するスクリーニング
材料及び方法
ＰＢＳ中１ｕｇ／ｍｌのＣ１ｑ（Ｓｉｇｍａ）またはＳＰ−Ｄ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を（別々のスクリーニングのために別々のプレートに）塗布して一晩置いた。プレートを洗浄し、ＥＬＩＳＡ遮断用緩衝液（ＰＢＳ中５％のＢＳＡ）で遮断した。洗浄後、５０ｕｌのＬＡＩＲ−１ハイブリドーマ上清をプレートに加え、続いて２ｕｇ／ｍｌのヒトＬＡＩＲ−１Ｆｃ−ビオチンを５０ｕｌ加えた。プレートを洗浄し、ＳＡ−ＨＲＰ（ｅＢｉｏ）を１：１００００希釈で加えた。３０分間インキュベートした後、ＴＭＢを加え、続いて停止溶液を加えた。吸光度をＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎ分析器で決定した。
【０４８３】
結果
図２０はスクリーニングアッセイの結果を示す。クローンＰ１−Ａ４、Ｐ１−Ｄ６及びＰ６−Ｆ４は、Ｃ１ｑ及びＳＰ−Ｄに対するＬＡＩＲ−１  Ｆｃの結合を強化することが分かった。クローンＰ１−Ｅ１１、Ｐ２−Ａ１０、Ｐ４−Ｂ３、Ｐ５−Ａ６、Ｐ５−Ｅ１、Ｐ６−Ｂ２、Ｐ６−Ｇ６、Ｐ７−Ｇ３、Ｐ９−Ｈ６、Ｐ１０−Ｇ７、Ｐ１１−Ｂ３及びＰ１２−Ｅ１０はＣ１ｑ及びＳＰ−Ｄに対するＬＡＩＲ−１  Ｆｃの結合の遮断剤であることが分かった。
【０４８４】
実施例１７：ＬＡＩＲ−１キメラｍＡｂビニング
方法及び材料
Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ９６器械（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）をビニングアッセイのために使用した。ＬＡＩＲ−１  Ｆｃ（ｈＩｇＧ１）を抗ヒトＩｇＧセンサーに結合させた。センサー上でのＬＡＩＲ−１  Ｆｃの安定性を確認した後、左側の列に列挙されている第１ｍＡｂを有するウェルにセンサーを漬けた。過剰なｍＡｂをＬＡＩＲ−１  Ｆｃと結合させることによって第１ｍＡｂの結合を飽和させた。次に、最上行全体に示されている第２ｍＡｂを含有するウェルにセンサーを入れた。第１及び第２ｍＡｂとして同じｍＡｂを使用する場合に認めることができるように、同じエピトープに結合するｍＡｂは結合飽和のためにＬＡＩＲ−１  Ｆｃとの結合が遮断されるであろう（図２１、下線なしで斑点模様のセル）。遮断がないことは、エピトープが遠くにあること及び立体障害の欠如を示唆した。部分的な遮断は、ｍＡｂ結合部位が近隣にあることによるエピトープのわずかな重複または結合の立体障害に起因している可能性がある。結合が非常に弱い（アビディティーが低い）ことに基づいてクローンのうちの３つをさらなる試験から除外し、１２種のクローンが残った。ＤＸ２６とＮＫＴＡとの２つの市販の抗ヒトＬＡＩＲ−１クローンを比較目的のために含めた。
【０４８５】
結果
図２１は、ＬＡＩＲ−１キメラＡｂビニングの結果を示す。遮断なしは一重下線で示されている。遮断は二重下線で示されている。データは、ＬＡＩＲ−１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）上の類似している、重複している、または別個である部位（エピトープ）に結合するｍＡｂの同定を可能にし、ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂ結合のエピトープマップの構築を可能にした。
【０４８６】
ビニング結果から、この１２種のクローンのセット内にｍＡｂの４つの主なビンが存在することが決定された（図２２）。これらは、ビン１：１１Ｂ３、６Ｂ２、６Ｆ４；ビン２：５Ｅ１及び４Ｂ３；ビン３：５Ａ６及び６Ｇ６；ビン４：１Ｅ１１、７Ｇ３、１Ａ４及び１０Ｇ７である。
【０４８７】
実施例１８：ＬＡＩＲ−１キメラｍＡｂビニングマップ
材料及び方法
相対的な結合部位を視覚化するために、図２１で生成したビニングデータを使用して結合部位のマップを２Ｄ形式で構築した。
【０４８８】
結果
相対的な結合部位を視覚化するために、実施例１７で生成したビニングデータを使用して結合部位のマップが２Ｄ形式で構築された（図２２）。このマップは、ｍＡｂの顕著な重複があることを実証する。同時に、多くのｍＡｂはＬＡＩＲ−１分子上の別個の部位を占めている。重複、及びＬＡＩＲ−１との結合の遮断が最も大きいｍＡｂはビンとみなされる。総合すると、このデータは、ｍＡｂパネルがＬＡＩＲ−１タンパク質の大部分を覆っていることを示唆している。
【０４８９】
実施例１９：Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ９６器械（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用して最適化親和性評価を実施した
材料及び方法
抗ヒトＩｇＧ捕捉センサーを使用して、溶液中の様々な濃度の単量体ＬＡＩＲ−１−Ｈｉｓ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）との１：１での結合を確保する密度でキメラＬＡＩＲ−１  ｍＡｂと結合させた。アッセイ用緩衝液は、０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳであり、再生用緩衝液はｐＨ１．５の１０ｍＭのグリシンであった。まず、キメラＬＡＩＲ−１  ｍＡｂをセンサーに負荷した。これに続いて、ＬＡＩＲ−１−Ｈｉｓとの会合ステップ、及び別個のＬＡＩＲ−１−Ｈｉｓ不含ウェルでの解離ステップを行った。データはＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析ソフトウェア９．０を使用して処理した。基準ウェルを差し引いた後に大域的近似を用いた。報告されている平均ＫＤ値は、Ｘ２及びＲ２値に基づく精度信頼性の高い少なくとも３回の独立したＯｃｔｅｔ実行からのものである。１２Ｅ１０の２つのキメラ形態を試験したことに留意されたい。どちらも親和性が比較的低かったが、１２Ｅ１０Ｖ２  ｍＡｂを非常に低い親和性ゆえに利用から除外した。
【０４９０】
結果
図２３は、親和性評価の結果を示す。解離定数（Ｋｄ）は３列目に解離速度（Ｋｄｉｓ）及び結合速度（Ｋｏｎ）に基づいてｎＭ値で示されている。ほとんどのｍＡｂは非常に強い結合速度を有していたが、比較的速い解離速度も有していた。１Ｅ１１、７Ｇ３及び１１Ｂ３、５Ｅ１及び６Ｇ６は全て、５ｎＭ未満のＫｄ値を有しており、ＬＡＩＲ−１に対する非常に強い親和性を示唆していた。
【０４９１】
実施例２０：ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂはＴＨＰ−１細胞においてインターフェロンレポーター活性の示差的誘起を実証する
材料及び方法
インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）レポーターを有するＴＨＰ−１−Ｄｕａｌ細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を９６ウェルプレートの２５，０００細胞／ウェルで、ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂ（１０ｕｇ／ｍｌ）が予め塗布されたプレート（図２４Ａ）か、左の未塗布プレート（図２４Ｂ）かのどちらかに播種した。図２４Ｂの場合、ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂは１０ｕｇ／ｍｌの可溶性タンパク質として添加した。さらに、陽性及び陰性対照としてＬＡＩＲ−２  Ｆｃまたは対照Ｆｃを塗布したか（図２４Ａ）、または可溶性タンパク質として添加した（図２４Ｂ）。
【０４９２】
ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂがＩＲＦ経路誘導を強化するのかまたは抑制するのかを試験するために、低レベルのＩＲＦ誘導のための１ｕｇ／ｍｌとしてＬＰＳを添加した。７２時間目に１０ｕｌの上清をアッセイプレートから取り出して別の分析用プレートへ移した。Ｑｕａｎｔｉ−ｌｕｃ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）をプロトコールに従って添加し、発光をＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎで測定した。
【０４９３】
結果
プレート結合ＬＡＩＲ−１  ｍＡｂは、１１Ｂ３、６Ｇ６、及び５Ｅ１の３つのｍＡｂがＩＲＦシグナル伝達を強化し得る一方、１Ｅ１１と７Ｇ３との２つのｍＡｂがＩＲＦ誘導にほとんど影響を与えないかまたは実質的に抑制し得ることを示唆した（図２４Ａ）。ｍＡｂは可溶形態において同様の影響を与えた（図２４Ｂ）。興味深いことに、同じビンに分類される１Ｅ１１及び７Ｇ３は類似した機能を有すると見受けられる。反対に、１１Ｂ３、６Ｇ６及び５Ｅ１は、別個のビンに分類されるが類似した機能を有すると見受けられ、これはクローン１Ｅ１１及び７Ｇ３とは対照的である。
【０４９４】
実施例２１：Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞レポーター活性の誘起に関するＬＡＩＲ−１  ｍＡｂスクリーニング
材料及び方法
９６ウェルプレートに０．５ｕｇ／ｍｌの抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）を塗布して４℃で一晩置いた。未結合ＣＤ３を吸引によって除去した。ＯＫＴ３を除去した後、１０ｕｇ／ｍｌのＬＡＩＲ−１  ｍＡｂまたはＬＡＩＲ−２  Ｆｃ及び対照Ｆｃを塗布して２４時間置いた（図２５Ａ）。Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞ＮＦＡＴ−Ｌｕｃｉａ経路レポーター細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を添加する前に、未結合タンパク質を吸引した。Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞を５０，０００細胞／ウェルで総体積２００ｕｌとして播種した。４８時間目に１０ｕｌの上清を取り出して別のプレートに移した。Ｑｕａｎｔｉ−Ｌｕｃ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）をプロトコールに従って添加した。Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用して発光を評価した。図２５Ｂについては、図２５Ａと同様に実施したが、タンパク質はプレートに塗布するのではなく可溶形態で添加した。
【０４９５】
結果
結果は、１Ｅ１１がＮＦＡＴレポーター誘導にほとんどまたは全く影響を与えない一方、１１Ｂ３、６Ｇ６及び５Ｅ１がＮＦＡＴ誘導を誘導したことを示した（図２５Ａ）。同様のアッセイにおいてＬＡＩＲ−１  ｍＡｂまたはＬＡＩＲ−２  Ｆｃ及び対照Ｆｃは可溶性タンパク質として添加された（図２５Ｂ）。このアッセイでは、どの処理でも影響がほとんど認められなかった。７Ｇ３はＴＨＰ−１アッセイにおいてのみ試験し、Ｊｕｒｋａｔアッセイでは試験しなかったことに留意されたい。
【０４９６】
全体として実施例のデータは、細胞株経路レポーターに基づくアッセイにおけるＬＡＩＲ−１  ｍＡｂの特異的機能性を示している。
【０４９７】
別段の定義がなされていない限り、本明細書中で使用される全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野において技量を有する者によって普通に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中で引用する刊行物、及びそれらが引用されている資料は、参照により具体的に援用される。
【０４９８】
当業者であれば、慣例的な実験しか用いずに本明細書に記載の本発明の具体的実施形態の多くの均等物を見出す、または見出すことができるであろう。そのような均等物は以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【図１Ａ】
2019528311.tif 000089
【図１Ｂ】
2019528311.tif 000090
【図２Ａ】
2019528311.tif 000091
【図２Ｂ】
2019528311.tif 000092
【図３】
2019528311.tif 000093
【図４】
2019528311.tif 000094
【図５】
2019528311.tif 000095
【図６】
2019528311.tif 000096
【図７Ａ】
2019528311.tif 000097
【図７Ｂ】
2019528311.tif 000098
【図７Ｃ】
2019528311.tif 000099
【図７Ｄ】
2019528311.tif 000100
【図７Ｅ】
2019528311.tif 000101
【図７Ｆ】
2019528311.tif 000102
【図８】
2019528311.tif 000103
【図９Ａ】
2019528311.tif 000104
【図９Ｂ】
2019528311.tif 000105
【図９Ｃ】
2019528311.tif 000106
【図９Ｄ】
2019528311.tif 000107
【図１０】
2019528311.tif 000108
【図１１】
2019528311.tif 000109
【図１２−１】
2019528311.tif 000110
【図１２−２】
2019528311.tif 000111
【図１３Ａ】
2019528311.tif 000112
【図１３Ｂ】
2019528311.tif 000113
【図１４】
2019528311.tif 000114
【図１５Ａ】
2019528311.tif 000115
【図１５Ｂ】
2019528311.tif 000116
【図１５Ｃ】
2019528311.tif 000117
【図１６】
2019528311.tif 000118
【図１７Ａ】
2019528311.tif 000119
【図１７Ｂ】
2019528311.tif 000120
【図１７Ｃ】
2019528311.tif 000121
【図１８】
2019528311.tif 000122
【図１９】
2019528311.tif 000123
【図２０】
2019528311.tif 000124
【図２１】
2019528311.tif 000125
【図２２】
2019528311.tif 000126
【図２３】
2019528311.tif 000127
【図２４Ａ】
2019528311.tif 000128
【図２４Ｂ】
2019528311.tif 000129
【図２５Ａ】
2019528311.tif 000130
【図２５Ｂ】
2019528311.tif 000131
【配列表】
2019528311000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年6月14日(2019.6.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６との少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、融合タンパク質。
【請求項２】
請求項１に記載の融合タンパク質をコードするベクター。
【請求項３】
発現ベクターである、請求項２に記載のベクター。
【請求項４】
請求項１に記載の融合タンパク質を発現する細胞。
【請求項５】
チャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項４に記載の細胞。
【請求項６】
請求項１に記載の融合タンパク質を含む医薬組成物。
【請求項７】
初代Ｔ細胞増殖を促進するための、請求項１に記載の融合タンパク質を含む医薬組成物。
【請求項８】
抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を促進するための、請求項１に記載の融合タンパク質を含む医薬組成物。
【請求項９】
卵巣癌を治療するための、請求項１に記載の融合タンパク質を含む医薬組成物。
【請求項１０】
リンパ腫を治療するための、請求項１に記載の融合タンパク質を含む医薬組成物。
【請求項１１】
がんを治療するための、請求項１に記載の融合タンパク質を含む医薬組成物。
【請求項１２】
感染症または感染性疾患を治療するための、請求項１に記載の融合タンパク質を含む医薬組成物。
【請求項１３】
非経口投与のために製剤化される、請求項６〜１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
抗ＰＤ−１免疫療法をさらに含む、または抗ＰＤ−１免疫療法と組み合わせて使用される、請求項６〜１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
化学療法剤をさらに含む、または化学療法剤と組み合わせて使用される、請求項６〜１２および１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
初代Ｔ細胞増殖を促進するための薬剤の製造における、請求項１に記載の融合タンパク質の使用。
【請求項１７】
抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を促進するための薬剤の製造における、請求項１に記載の融合タンパク質の使用。
【請求項１８】
卵巣癌を治療するための薬剤の製造における、請求項１に記載の融合タンパク質の使用。
【請求項１９】
リンパ腫を治療するための薬剤の製造における、請求項１に記載の融合タンパク質の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
ある実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７または１８の融合タンパク質を提供する。
[本発明1001]
免疫応答の増大を、それを必要とする対象にもたらすための医薬組成物であって、
（ｉ）可溶性ＬＡＩＲ−2ポリペプチドまたは融合タンパク質、
（ｉｉ）可溶性ＬＡＩＲ−1ポリペプチドまたは融合タンパク質、
（ｉｉｉ）免疫応答を増大させるＬＡＩＲ−1  ｍＡｂ、
（ｉｖ）ＬＡＩＲ−1陽性細胞を枯渇させる抗体、及び
（ｉｖ）それらの組み合わせ
からなる群から選択される、ＬＡＩＲ−1の発現、リガンド結合、架橋、負のシグナル伝達、またはそれらの組み合わせを減少させる免疫調節性作用物質
を有効量含んでいる、前記医薬組成物。
[本発明1002]
前記免疫調節性作用物質がＬＡＩＲ−2融合タンパク質である、本発明1001の医薬組成物。
[本発明1003]
前記ＬＡＩＲ−2融合タンパク質が、免疫グロブリンドメインに繋げられたＬＡＩＲ−2の細胞外ドメインまたはその機能性変異型を含む、本発明1002の医薬組成物。
[本発明1004]
前記ＬＡＩＲ−2融合タンパク質がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：16のアミノ酸配列を含む、本発明1003の医薬組成物。
[本発明1005]
前記免疫調節性作用物質がＬＡＩＲ−1融合タンパク質である、本発明1001の医薬組成物。
[本発明1006]
前記ＬＡＩＲ−1融合タンパク質が、免疫グロブリンドメインに繋げられたＬＡＩＲ−1の細胞外ドメインまたはその機能性変異型を含む、本発明1005の医薬組成物。
[本発明1007]
前記ＬＡＩＲ−1融合タンパク質がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：9のアミノ酸配列を含む、本発明1006の医薬組成物。
[本発明1008]
前記免疫調節性作用物質がＬＡＩＲ−2タンパク質またはその機能性断片もしくは変異型である、本発明1001の医薬組成物。
[本発明1009]
前記ＬＡＩＲ−2タンパク質またはその機能性断片もしくは変異型が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：6との少なくとも80％、90％、95％または100％の配列同一性を含む、本発明1002の医薬組成物。
[本発明1010]
前記免疫調節性作用物質が、可溶性ＬＡＩＲ−1タンパク質またはその機能性断片もしくは変異型である、本発明1001の医薬組成物。
[本発明1011]
前記ＬＡＩＲ−1タンパク質が、ＬＡＩＲ−1の細胞外ドメインまたはその機能性断片もしくは変異型からなる、本発明1010の医薬組成物。
[本発明1012]
前記ＬＡＩＲ−1タンパク質またはその機能性断片もしくは変異型が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：2との少なくとも80％、90％、95％または100％の配列同一性を含む、本発明1010の医薬組成物。
[本発明1013]
前記免疫応答が、
抗原に対する一次免疫応答または、
Ｔ細胞の抗原特異的増殖の増進、Ｔ細胞によるサイトカイン産生の強化、分化の刺激、もしくはそれらの組み合わせなどの、エフェクター細胞機能の増強
である、本発明1001〜1012のいずれかの医薬組成物。
[本発明1014]
免疫応答の増大を、それを必要とする対象にもたらす方法であって、本発明1001〜1013のいずれかの医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
[本発明1015]
前記対象が、がんを有している、本発明1014の方法。
[本発明1016]
前記がんが、ＬＡＩＲ−1発現の増加、ＬＡＩＲ−1リガンド発現の増加、ＬＡＩＲ−2発現の減少、またはそれらの組み合わせによって特徴付けられる、本発明1015の方法。
[本発明1017]
前記がんが、卵巣癌、肺癌または消化器癌である、本発明1014または本発明1015の方法。
[本発明1018]
前記対象が感染性疾患を有している、本発明1014の方法。
[本発明1019]
ワクチンまたはその成分と同時に前記医薬組成物が前記対象に投与される、本発明1014〜1018のいずれかの方法。
[本発明1020]
前記対象に第2の治療用物質を投与することをさらに含む、本発明1014〜1019のいずれかの方法。
[本発明1021]
免疫応答の減少を、それを必要とする対象にもたらすための医薬組成物であって、
（ｉ）機能賦活性抗ＬＡＩＲ−1抗体、
（ｉｉ）機能遮断性抗ＬＡＩＲ−2抗体、及び
（ｉｉｉ）それらの組み合わせ
からなる群から選択される、ＬＡＩＲ−1の発現、リガンド結合、架橋、負のシグナル伝達またはそれらの組み合わせを増加させる免疫調節性作用物質
を有効量含んでいる、医薬組成物。
[本発明1022]
前記免疫応答が、
抗原に対する一次免疫応答または、
Ｔ細胞の抗原特異的増殖の増進、Ｔ細胞によるサイトカイン産生の強化、分化の刺激、もしくはそれらの組み合わせなどの、エフェクター細胞機能の増強
である、本発明1021の医薬組成物。
[本発明1023]
免疫応答の減少を、それを必要とする対象にもたらす方法であって、本発明1021または本発明1022の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
[本発明1024]
前記対象が炎症を有している、本発明1023の方法。
[本発明1025]
前記対象が自己免疫障害を有している、本発明1023の方法。
[本発明1026]
前記自己免疫障害が関節リウマチである、本発明1025の方法。
[本発明1027]
前記対象または疾患もしくは状態が、ＬＡＩＲ−1発現の減少、ＬＡＩＲ−1リガンド発現の減少、ＬＡＩＲ−2発現の増加、またはそれらの組み合わせによって特徴付けられる、本発明1021〜1026のいずれかの方法。
[本発明1028]
前記対象に第2の治療用物質を投与することをさらに含む、本発明1021〜1027のいずれかの方法。
[本発明1029]
前記ＬＡＩＲ−1が、骨髄細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはそれらの組み合わせにおいて発現される、先行本発明のいずれかの組成物または方法。
[本発明1030]
前記骨髄細胞が抗原提示細胞である、本発明1029の組成物または方法。
[本発明1031]
前記抗原提示細胞が、単球、マクロファージまたは樹状細胞である、本発明1030の組成物または方法。
[本発明1032]
白血病の治療を、それを必要とする対象に施すための方法であって、
白血病細胞におけるＬＡＩＲ−1シグナル伝達を抑制するかまたは減少させ、それによって白血病細胞の生存を抑制するかまたは白血病細胞に対する抗腫瘍免疫応答を促進するために、ＬＡＩＲ−1モノクローナル抗体、可溶性ＬＡＩＲ−1ポリペプチド、可溶性ＬＡＩＲ−2ポリペプチド、ＬＡＩＲ−1融合タンパク質、ＬＡＩＲ−2融合タンパク質またはそれらの組み合わせを含んでいる有効量の医薬組成物を前記対象に投与すること
を含む、前記方法。
[本発明1033]
前記白血病が急性骨髄性白血病である、本発明1032の方法。
[本発明1034]
1Ｅ11、1Ｇ7、4Ｂ3、5Ａ6、5Ｅ1、6Ｂ2、6Ｆ4、6Ｇ6、7Ｇ3、9Ｈ6、11Ｂ3、12Ｅ10ａ、及び12Ｅ10ｂからなる群から選択されるハイブリドーマによって産生される、抗ＬＡＩＲ抗体。
[本発明1035]
本発明1034の抗体の少なくとも1本の軽鎖または少なくとも1本の重鎖を含む、抗ＬＡＩＲ抗体。
[本発明1036]
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：19、27、35、43、51、59、67、75、83、91、99、107及び115からなる可変軽鎖の群から選択されるアミノ酸配列を有する可変軽鎖との配列同一性が少なくとも95％である可変軽鎖を含む、抗ＬＡＩＲ抗体。
[本発明1037]
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：23、31、39、47、55、63、71、79、87、95、103及び111からなる可変重鎖の群から選択されるアミノ酸配列を有する可変重鎖との配列同一性が少なくとも95％である可変重鎖を含む、抗ＬＡＩＲ抗体。
[本発明1038]
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：20〜22、24〜26、28〜30、32〜34、36〜38、40〜42、44〜46、48〜50、52〜54、56〜58、60〜62、64〜66、68〜70、72〜74、76〜78、80〜82、84〜86、88〜90、92〜94、96〜98、100〜102、104〜106、108〜110、112〜114、及び116〜118からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）の群から選択されるＣＤＲを含む、抗ＬＡＩＲ抗体。
[本発明1039]
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：20〜22、24〜26、28〜30、32〜34、36〜38、40〜42、44〜46、48〜50、52〜54、56〜58、60〜62、64〜66、68〜70、72〜74、76〜78、80〜82、84〜86、88〜90、92〜94、96〜98、100〜102、104〜106、108〜110、112〜114、及び116〜118からなる群から選択される複数のＣＤＲを有する、抗ＬＡＩＲ抗体。
[本発明1040]
前記複数のＣＤＲが、2〜12個のＣＤＲである、本発明1039の抗体。
[本発明1041]
がんを治療するための方法であって、それを必要とする対象に有効量のＬＡＩＲ−2  Ｆｃを抗ＰＤ−1抗体またはその抗原結合断片に併用または代用して投与することを含む、前記方法。
[本発明1042]
前記がんが卵巣癌である、本発明1040の方法。
[本発明1043]
腫瘍負荷の軽減を、それを必要とする対象にもたらす方法であって、それを必要とする対象に有効量のＬＡＩＲ−2  Ｆｃを抗ＰＤ−1抗体またはその抗原結合断片に併用または代用して投与することを含む、前記方法。
[本発明1044]
前記腫瘍が卵巣腫瘍である、本発明1043の方法。
[本発明1045]
前記がんまたは腫瘍がリンパ腫である、本発明1041または本発明1043のいずれかの方法。
[本発明1046]
初代Ｔ細胞増殖の促進を、それを必要とする対象にもたらすための方法であって、治療的有効量のＬＡＩＲ−2  Ｆｃを宿主に投与することを含む、前記方法。
[本発明1047]
ＬＡＩＲ−1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：20、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：21及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：22に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：24、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：25及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：26に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明1048]
ＬＡＩＲ−1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：28、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：29及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：30に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：32、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：33及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：34に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明1049]
ＬＡＩＲ−1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：36、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：37及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：38に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：40、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：41及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：42に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明1050]
ＬＡＩＲ−1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：44、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：45及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：46に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：48、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：49及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：50に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明1051]
ＬＡＩＲ−1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：52、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：53及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：54に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：56、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：57及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：58に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明1052]
ＬＡＩＲ−1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：60、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：61及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：62に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：64、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：65及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：66に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明1053]
ＬＡＩＲ−1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：68、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：69及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：70に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：72、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：73及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：74に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明1054]
ＬＡＩＲ−1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：76、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：77及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：78に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：80、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：81及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：82に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明1055]
ＬＡＩＲ−1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：84、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：85及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：86に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：88、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：89及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：90に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明1056]
ＬＡＩＲ−1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：92、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：93及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：94に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：96、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：97及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：98に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明1057]
ＬＡＩＲ−1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：100、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：101及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：102に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：104、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：105及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：106に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明1058]
ＬＡＩＲ−1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：108、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：109及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：110に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：112、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：113及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：114に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明1059]
ＬＡＩＲ−1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：116、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：117及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：118に示すアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域と、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：112、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：113及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：114に示すアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域と
を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
[本発明1060]
ヒトＦｃドメインを含む、本発明1047〜1059のいずれかの抗体。
[本発明1061]
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：120もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：122に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも50、60、70、80、85、90、95、96、97、98、99もしくは100％であるアミノ酸配列を有する重鎖、及び／または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：123に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも50、60、70、80、85、90、95、96、97、98、99もしくは100％であるアミノ酸配列を有する軽鎖
を含む、抗体。
[本発明1062]
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：126もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：128に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも50、60、70、80、85、90、95、96、97、98、99もしくは100％であるアミノ酸配列を有する重鎖、及び／または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：130に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも50、60、70、80、85、90、95、96、97、98、99もしくは100％であるアミノ酸配列を有する軽鎖
を含む、抗体。
[本発明1063]
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：132もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：134に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも50、60、70、80、85、90、95、96、97、98、99もしくは100％であるアミノ酸配列を有する重鎖、及び／または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：136に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも50、60、70、80、85、90、95、96、97、98、99もしくは100％であるアミノ酸配列を有する軽鎖
を含む、抗体。
[本発明1064]
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：138もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：140に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも50、60、70、80、85、90、95、96、97、98、99もしくは100％であるアミノ酸配列を有する重鎖、及び／または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：142に示すアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも50、60、70、80、85、90、95、96、97、98、99もしくは100％であるアミノ酸配列を有する軽鎖
を含む、抗体。
[本発明1065]
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：124、130、136もしくは142の軽鎖アミノ酸配列、及び／または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：120、122、126、128、132、134、138もしくは140の重鎖アミノ酸
を含む抗体をコードする、核酸配列。
[本発明1066]
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：19、27、35、43、51、59、67、75、83、91、99、107もしくは115の可変軽鎖、及び／または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：23、31、39、47、55、63、71、79、87、95、103もしくは111の可変重鎖
をコードする、核酸配列。
[本発明1067]
ＬＡＩＲ−1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を構成的または誘導的に発現している細胞であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：19、27、35、43、51、59、67、75、83、91、99、107、115、23、31、39、47、55、63、71、79、87、95、103、111またはそれらの組み合わせのアミノ酸配列
をコードする1種類またはそれより多くの核酸を含む、前記細胞。
[本発明1068]
ＬＡＩＲ−1に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を構成的または誘導的に発現している細胞であって、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142またはそれらの組み合わせのアミノ酸配列
をコードする1種類またはそれより多くの核酸を含む、前記細胞。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2019528311000001.app
【国際調査報告】
2019528311.tif 000132
2019528311.tif 000133
2019528311.tif 000134
2019528311.tif 000135