(57)【要約】アレルギーの予防において使用するための、天然アレルゲン由来のペプチドを含む調製物。
2019530702.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アレルギーの発生の予防において使用するための、天然アレルゲン由来のペプチドを含む調製物。
【請求項２】
前記調製物は２〜１０回投与される、請求項１に記載の調製物。
【請求項３】
前記調製物は２〜１０日の間隔で投与される、請求項２に記載の調製物。
【請求項４】
前記調製物は一定量で投与される、請求項２又は請求項３のいずれかに記載の調製物。
【請求項５】
前記調製物は免疫刺激アジュバントを含まない、請求項１〜請求項４のいずれか一項に記載の調製物。
【請求項６】
アレルゲンの前記ペプチドは加水分解アレルゲンペプチドである、請求項１〜請求項５のいずれか一項に記載の調製物。
【請求項７】
前記加水分解アレルゲンペプチドは、
（ａ）アレルゲンタンパク質を含むアレルゲンの天然源を抽出して抽出物を生成すること、
（ｂ）前記抽出物を精製し非タンパク成分を除去して精製抽出物を生成すること、
（ｃ）前記精製抽出物を変性させて精製変性抽出物を生成すること、
（ｄ）前記精製変性抽出物を加水分解して加水分解アレルゲンペプチドを生成すること
により得ることができる、請求項６に記載の調製物。
【請求項８】
前記加水分解アレルゲンペプチドは、
（ａ）アレルゲンタンパク質を含むアレルゲン源を抽出して抽出物を生成すること、
（ｂ）前記抽出物を精製し非タンパク成分を除去して精製抽出物を生成すること、
（ｃ）前記精製抽出物を第１の変性剤で変性させて精製変性抽出物を生成すること、
（ｄ）前記精製変性抽出物を純化し、それにより不純物を除去して純化変性抽出物を生成すること、
（ｅ）前記純化変性抽出物を第２の変性剤で変性させて変性アレルゲン混合物を生成すること、及び
（ｆ）前記変性アレルゲン混合物を加水分解して前記加水分解アレルゲンペプチドを生成すること
により得ることができる、請求項６に記載の調製物。
【請求項９】
前記アレルゲンが、花粉アレルゲン、ミルクアレルゲン、毒液アレルゲン、卵アレルゲン、雑草アレルゲン、牧草アレルゲン、樹木アレルゲン、灌木アレルゲン、花アレルゲン、野菜アレルゲン、穀物アレルゲン、菌類アレルゲン、果物アレルゲン、液果アレルゲン、ナッツアレルゲン、種子アレルゲン、豆アレルゲン、魚類アレルゲン、甲殻類／貝類アレルゲン、海産物アレルゲン、肉類アレルゲン、香辛料アレルゲン、昆虫アレルゲン、ダニアレルゲン、カビアレルゲン、動物アレルゲン、ハトダニアレルゲン、蠕虫アレルゲン、軟質珊瑚アレルゲン、動物の鱗屑アレルゲン、線虫アレルゲン、パラゴムノキのアレルゲンの中から選択される、請求項１〜請求項８のいずれか一項に記載の調製物。
【請求項１０】
変性が、カオトロピック剤、還元剤、及びこれらの混合物からなる群（好ましくは尿素、塩化グアニジン、ジチオスレイトール、チオグリセロール、β−メルカプトエタノール、ＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）、及びこれらの混合物）の中から選択される変性剤を用いて行われる、請求項１〜請求項９に記載の調製物。
【請求項１１】
前記加水分解が、酵素（好ましくはペプシン、トリプシン、又はキモトリプシン）を用いて、より好ましくは加水分解が（好ましくは尿素及び塩化グアニジンから選択される）カオトロピック剤と（好ましくはＴＣＥＰ又はＤＴＴから選択される）還元剤との存在下で行われる、請求項１〜請求項１０のいずれか一項に記載の調製物。
【請求項１２】
さらに前記加水分解アレルゲンを精製して分子量が１００００Ｄａ超のペプチド及び１０００Ｄａ未満のペプチドを除去することを含み、前記ペプチドの７０％（より好ましくは８０％）は１００００Ｄａ〜１０００Ｄａの範囲内にある、請求項１〜請求項１１のいずれか一項に記載の調製物。
【請求項１３】
アレルギーワクチンとして使用するための、請求項１〜請求項１２のいずれか一項に記載の調製物。
【請求項１４】
前記調製物は前記調製物に用いられる前記アレルゲンに対するアレルギーの発生より前に投与される、請求項１〜請求項１３のいずれか一項に記載の調製物。
【請求項１５】
天然アレルゲン由来のペプチドを含む調製物を前記天然アレルゲンに対するアレルギーを発生するリスクを有する患者に投与することを含む、アレルギーの発生の予防方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アレルギーの発生を予防するための調製物、並びにそれに関連する方法及び使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アレルギーは、通常大抵の人にはほとんど又は全く問題を引き起こさない、環境中の何かに対する免疫システムの過敏性に基づくものである。アレルギーには、花粉症、食物アレルギー、アトピー性皮膚炎、アレルギー性喘息、及びアナフィラキシーが含まれる。アレルギーは先進国では一般的である。
【０００３】
一般的なアレルゲンは、花粉、イエダニ、カビ、薬物、食物、並びに動物の毛及び鱗屑である。
【０００４】
アレルギー性疾患には強い遺伝的関係がある。アレルギー体質の親はアレルギー体質の子供をもうける傾向が強い。アレルギー発生の可能性が遺伝するものと思われる。
【０００５】
最も一般的なアレルギー性疾患は、鼻炎、喘息、及びアトピー性皮膚炎である。アレルギー性喘息は慢性炎症性疾患である。アレルギー性疾患の対症療法は、抗ヒスタミン剤、β−アンタゴニスト、及びコルチコステロイドの投与を含む。
【０００６】
さらに、いわゆる「特異的」免疫療法は減感作に基づいている。通常、確認されたアレルギーの患者は特異的な原因アレルゲンを皮下注射により投与される。治療は少ないアレルゲン投与量から開始し、投与量を増加させる。治療は通常は数年間続けられる。この種の治療は患者薬剤服用順守の低さに悩まされ、患者が激しいアナフィラキシー反応に悩まされ得るため安全上の理由により疑問視されてきた。
【０００７】
反復皮下注射を含む方法に加え、経口減感作の方法もある。
【０００８】
米国特許第４、８２２、６１１号は、アレルゲンによる経口治療を含む既存アレルギーの治療方法を開示している。市販の「バルク」アレルゲン抽出物を使用すると、バッチごとのばらつきや、異なる製造者由来の抽出物間における差異が見られることを記載している。これらの抽出物の調製については記載されていない。
【０００９】
英国特許第１  ２４７  ６１４号は、アレルゲンの抽出方法を開示している。この方法の目的は、アレルゲンの抽出可能な全ての成分を含めることにより、より完全で効果的なアレルゲン抽出物を得ることである。
【００１０】
米国特許第５、７７０、６９８号は、アレルギー的に活性なタンパク質の抽出物を精製する工程を開示している。図２のスペクトルは２８０ｎｍのピークを示していない。これは、前記抽出物がかなりの量の非タンパク不純物を含むことを意味している。
【００１１】
国際公開第９９／２２７６２号も類似の方法を開示しており、したがって、この生成物も大量の非タンパク不純物を含む。
【００１２】
米国特許第６、３１２、７１１号はストレスタンパク質及び抗原構造のエピトープの複合体の投与を含む、移植片拒絶又はアレルギー性自己免疫反応に関連した病気の治療を目的とした医薬品又は食品成分を開示している。
【００１３】
国際公開第２０１３／０１１０９５号は０．５ｎｇ〜２００μｇのＨＳＰ７０及び０．５〜１００μｇの抗原構造のフラグメントを含む皮下注射用の医薬品調製物を開示している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
治療法の開発に力を入れているにもかかわらず、まだ十分に対処されていない。今もなお、アレルギー治療の改善が必要である。
【００１５】
アレルゲンへの暴露を回避すること以外の予防的治療はこれまでなかった。
【００１６】
驚いたことに、アレルギーの発生を回避するための予防的治療を行うことが可能であることが分かってきた。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
ある実施形態はアレルギーの予防において使用するための、天然アレルゲン由来のペプチドを含む調製物である。例えば、これらのペプチドは加水分解により天然アレルゲンから得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】医薬品としてのピーナッツペプチドでのマウスの処置は、２８日目までは特異的な抗ＡＲＡタンパク質ＩｇＧの非常に弱い産生をもたらすことを示す。
【図２】医薬品としてのピーナッツペプチドでのマウスの処置は、２８日目までは特異的な抗ＡＲＡタンパク質ＩｇＧの非常に弱い産生をもたらすことを示す。
【図３】ＡＲＡペプチドで処置されたグループとプラセボグループに属するマウスの血清中の特異的な抗ＡＲＡタンパク質ＩｇＧの産生を示す。
【図４】ＡＲＡペプチドで処置されたグループとプラセボグループに属するマウスの血清中の特異的な抗ＡＲＡタンパク質ＩｇＧの産生を示す。
【図５】医薬品としてのイエダニペプチドでのマウスの処置は、２８日目までは特異的な抗ＨＤＭタンパク質ＩｇＧの弱い産生をもたらすことを示す。
【図６】医薬品としてのイエダニペプチドでのマウスの処置は、２８日目までは特異的な抗ＨＤＭタンパク質ＩｇＧの弱い産生をもたらすことを示す。
【図７】ＨＤＭペプチドで処置されたグループに属するマウスの血清中の特異的な抗ＨＤＭタンパク質ＩｇＧの産生を示す。
【図８】ＨＤＭペプチドで処置されたグループに属するマウスの血清中の特異的な抗ＨＤＭタンパク質ＩｇＧの産生を示す。
【図９】医薬品としてのブタクサペプチドの両方の濃度でのマウスの処置は、２８日目までは特異的な抗ＲＡＧタンパク質ＩｇＧの弱い産生をもたらすことを示す。
【図１０】医薬品としてのブタクサペプチドの両方の濃度でのマウスの処置は、２８日目までは特異的な抗ＲＡＧタンパク質ＩｇＧの弱い産生をもたらすことを示す。
【図１１】ＲＡＧペプチドで処置されたグループに属するマウスの血清中の特異的な抗ＲＡＧタンパク質ＩｇＧの産生を示す。
【図１２】ＲＡＧペプチドで処置されたグループに属するマウスの血清中の特異的な抗ＲＡＧタンパク質ＩｇＧの産生を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明は、アレルギーが後に発生するのを予防するために、少量のペプチドを投与することによりアレルギーの発生を予防するアレルゲン由来のペプチドを用いる。
【００２０】
先行技術によると、アレルギー患者はアレルギー症状を抑える薬剤又はアレルゲンに対する患者の反応を減少させ得る減感作により治療される。
【００２１】
これらの方法に対し、本発明はアレルギーを発生するリスクを有する患者においてアレルギーの発生を予防することを目的とする。
【００２２】
したがって、本発明の主題は、アレルギーの予防において使用するための、又はより具体的にはアレルギー発生の予防のための、天然アレルゲンのペプチドを含む調製物である。
【００２３】
本発明の主題は、アレルギーの発生の予防において使用するための、天然アレルゲン由来のペプチドを含む調製物である。
【００２４】
つまり、本発明は、リスクを有する患者において、まだアレルギーを誘発していないがアレルギーを誘発する可能性のある化合物に対して寛容原性効果又はポジティブ記憶効果が引き起こされ得る方法を提供する。
【００２５】
前記調製物は２〜１０回投与されることが好ましく、２〜１０日の間隔で、例えば１週間に１回、投与されることが好ましい。
【００２６】
前記調製物は一定量で又は量を増やして投与されてもよい。
【００２７】
好ましくは、前記調製物は免疫刺激アジュバントを含まない。
【００２８】
例えば、片親又は両親がピーナッツアレルギー患者であれば、子供も同様にピーナッツアレルギーを発症するリスクが高まる。ピーナッツアレルギーは生命を脅かす可能性がある。
【００２９】
本発明の方法によると、ピーナッツに対するアレルギーの発生を予防する免疫システムの状態を発達させるために、ピーナッツに接触する前に子供が処置され得る。
【００３０】
ある実施形態では、前記アレルゲンのペプチドは加水分解アレルゲンペプチドである。
【００３１】
ある実施形態では、前記加水分解アレルゲンペプチドは、
（ａ）アレルゲンタンパク質を含むアレルゲンの天然源を抽出して抽出物を生成すること、
（ｂ）前記抽出物を精製し非タンパク成分を除去して精製抽出物を生成すること、
（ｃ）前記精製抽出物を変性させ精製変性抽出物を生成すること、及び
（ｄ）前記精製変性抽出物を加水分解して加水分解アレルゲンペプチドを生成すること
により得ることができる。
【００３２】
さらなる実施形態では、前記加水分解アレルゲンペプチドは、
（ａ）アレルゲンタンパク質を含むアレルゲンの源を抽出して抽出物を生成すること、
（ｂ）前記抽出物を精製し非タンパク成分を除去して精製抽出物を生成すること、
（ｃ）前記精製抽出物を第１の変性剤で変性させ精製変性抽出物を生成すること、
（ｄ）前記精製変性抽出物を純化し、それにより不純物を除去して純化変性抽出物を生成すること、
（ｅ）前記純化変性抽出物を第２の変性剤で変性させて変性アレルゲン混合物を生成すること、及び
（ｆ）前記変性アレルゲン混合物を加水分解して前記加水分解アレルゲンペプチドを生成すること
により得ることができる。
【００３３】
好ましいアレルゲンは、花粉アレルゲン、ミルクアレルゲン、毒液アレルゲン、卵アレルゲン、雑草アレルゲン、牧草アレルゲン、樹木アレルゲン、灌木アレルゲン、花アレルゲン、野菜アレルゲン、穀物アレルゲン、菌類アレルゲン、果物アレルゲン、液果アレルゲン、ナッツアレルゲン、種子アレルゲン、豆アレルゲン、魚類アレルゲン、甲殻類／貝類アレルゲン、海産物アレルゲン、肉類アレルゲン、香辛料アレルゲン、昆虫アレルゲン、ダニアレルゲン、カビアレルゲン、動物アレルゲン、ハトダニアレルゲン、蠕虫アレルゲン、軟質珊瑚アレルゲン、動物の鱗屑アレルゲン、線虫アレルゲン、パラゴムノキのアレルゲンの中から選択される。
【００３４】
組み換え調製物も同じように適切であるかもしれないが、天然アレルゲンが用いられ加水分解されることが好ましい。
【００３５】
ある実施形態では、カオトロピック剤、還元剤、及びこれらの混合物からなる群（好ましくは尿素、塩化グアニジン、ジチオスレイトール、チオグリセロール、β−メルカプトエタノール、ＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）、及びこれらの混合物）の中から選択される変性剤を用いて変性を行う。
【００３６】
ある実施形態では、前記加水分解を酵素（好ましくはペプシン、トリプシン、又はキモトリプシン）を用いて、より好ましくは加水分解が（好ましくは尿素及び塩化グアニジンから選択される）カオトロピック剤と（好ましくはＴＣＥＰ又はＤＴＴから選択される）還元剤との存在下で行われる。
【００３７】
ある実施形態では、前記方法はさらに前記加水分解アレルゲンを精製して分子量が１００００Ｄａ超のペプチド及び１０００Ｄａ未満のペプチドを除去することを含み、前記ペプチドの７０％（より好ましくは８０％）は１００００Ｄａ〜１０００Ｄａの範囲内にある。
【００３８】
さらなる実施形態は、アレルギーワクチンとしての前記調製物の使用である。
【００３９】
さらなる実施形態は、本発明の前記調製物をアレルギーを発生するリスクを有する患者に投与することを含む、アレルギーの予防方法である。
【００４０】
国際公開第２００８／０００７８３号は先行技術の欠点の少なくとも一部を克服するアレルゲンの精製方法を記載しており、特に、粗アレルゲン抽出物と比較してアレルギー性反応を誘発する能力が著しく低いが同じようにＴ細胞を刺激し得る天然アレルゲン由来の抗原を提供する。
【００４１】
国際公開第２０１２／１７２０３７号は加水分解アレルゲンの生産方法を開示している。
【００４２】
国際公開第２００８／０００７８３号及び国際公開第２０１２／１７２０３７号の開示はその全体が本出願に組み込まれる。
【００４３】
本明細書において引用されるすべての文献は、取り込みが本明細書における明確な定義と矛盾しない限りにおいて参照により取り込まれる。
【実施例】
【００４４】
本発明の効果を以下に例示する。
【００４５】
実施例１−ピーナッツ
１．研究目的
３週間、週に２回、マンニトール−トレハロース環境中の４００μｇのピーナッツペプチド（ＡＲＡ／ＰＥＰ＿ＳＯＬ  ＵＢＴ１３Ｊ０３）で処理され（アジュバントなしで皮下に注射を行った）、アジュバントなしで１００μｇのピーナッツ天然タンパク質の特有の腹腔内（ｉｐ）注射により刺激したＢａｌｂ／ｃマウスにおいて起こり得る「記憶効果」の誘導の評価。
【００４６】
２．プロトコルの概要
【表１】
2019530702.tif 000003
【００４７】
３．グループの名称
【表２】
2019530702.tif 000004
【００４８】
４．処置開始後の日数と刺激後の日数との間の対応
全てのグループは２８日目までの処置段階について同じカレンダーを有する。
【表３】
2019530702.tif 000005
【００４９】
注意
ＡＲＡ／ＰＥＰ＿ＳＯＬは、一般的にピーナッツペプチドに用いる。
ＡＲＡ／ＡＬＬ＿ＳＯＬは、一般的にピーナッツタンパク質に用いる。
【００５０】
５．結果
特異的な抗ＡＲＡタンパク質（天然−天然タンパク質コーティング）ＩｇＧの産生に対し、ＥＬＩＳＡにより得られた結果は以下の通りである。
【００５１】
ａ．刺激前のＩｇＧ産生の発展（０日目〜２８日目）
図１及び図２は、医薬品としてのピーナッツペプチドでのマウスの処置は、２８日目までは特異的な抗ＡＲＡタンパク質ＩｇＧの非常に弱い産生をもたらすことを示している。プラセボで処置されたマウスは、特異的な抗ＡＲＡタンパク質ＩｇＧの産生を示さない。
【００５２】
ｂ．刺激後のＩｇＧ産生の発展（刺激日〜刺激後４２日目）
注意：全てのグループがこの刺激後４２日目に達するわけではない。
図３及び図４は、ＡＲＡペプチドで処置されたグループとプラセボグループに属するマウスの血清中の特異的な抗ＡＲＡタンパク質ＩｇＧの産生を示している。この産生は、刺激が起こった時点によって異なる速度で増加する。処置開始後２８日目、３５日目、及び５６日目に刺激を行う場合、プラセボと比べると、特異的な抗ＡＲＡタンパク質ＩｇＧの産生が刺激の２週間後に始まることが観察できる。処置開始後４２日目及び４９日目に起こった刺激を有するグループでは、刺激後２１日目（Ｄ４２−刺激グループ＝グループ３に対してはさらに刺激後２８日目）までＩｇＧ産生におけるプラセボとの差が観察されない。
【００５３】
グループ１については、処置開始後２８日目に刺激を行うと、刺激後２８日目に特異的な抗ＡＲＡタンパク質ＩｇＧの産生は最大値に達し、処置後３５日目（及びその後）にプレート状態になるようだ。
【００５４】
グループ２については、処置開始後３５日目に刺激を行うと、刺激後３５日目に最大値に達するが、その後の時間の点がないため、この点が完全に最大値であるのか、又は産生がその後の時間の点で再び増加するのかについて結論を出すことができない。
【００５５】
各グループのより高い力価の値は以下の通りである。
【００５６】
【表４】
2019530702.tif 000006
【００５７】
６．結論
これら全ての結果から、以下の点を結論づけることができる。
・このプロトコルで述べたようなＡＲＡ−ペプチドでの処置は、２８日目までは特異的な抗ＡＲＡタンパク質ＩｇＧの非常に弱い産生を引き起こす（処置開始後）。
・２８日目までの処置段階の間はプラセボグループでは特異的なＩｇＧ産生は観察されない（処置開始後）。
・１００μｇのＡＲＡ天然タンパク質の特有の投与による刺激は、処置開始後２８日目に刺激したグループに対し、刺激後４週間で最大に達する特異的な抗ＡＲＡタンパク質ＩｇＧの産生を誘導させる処置の効果に可能性を持たせる。この効果は同じ刺激を受けたプラセボグループにおいては観察されない。よって、（プラセボグループで観察されるように）この刺激自体は刺激後４週間でＩｇＧ産生を引き起こすのに十分というわけではないが、ＡＲＡペプチドでの処置の発現を許容すると結論づけることができる。明らかに、ＡＲＡペプチドでの処置は天然タンパク質での刺激後に「記憶効果」を許容するように免疫システムを予備刺激することができる。
・ＩｇＧ応答の振幅は、処置の終わりと刺激を隔てる期間によって左右される。この応答は処置開始後２８日目、３５日目、及び５６日目に刺激されたグループでより高くなる。驚いたことに、処置開始後４２日目及び４９日目に刺激されたグループはプラセボグループに比べ意味のある差を示さないようだ。これらのグループではおそらく産生が遅いのであろう。後の時点を検証すればその問題に答えることができるかもしれない。
・これら全ての結果は天然アレルゲンに最も近いタンパク質であるＡＲＡ天然タンパク質に関連している。
【００５８】
実施例２  イエダニ
３週間、週に２回、マンニトール−トレハロース環境中の４００μｇのイエダニペプチド（ＨＤＭ／ＰＥＰ＿ＳＯＬ  ＵＢＴ１５Ｈ２０）で処置され（アジュバントなしで皮下に注射を行った）、アジュバントなしで１００μｇのイエダニ天然タンパク質の特有のｉｐ注射により刺激したＢａｌｂ／ｃマウスにおいて起こり得る「記憶効果」の誘導の評価。
【００５９】
７．プロトコルの概要
【表５】
2019530702.tif 000007
【００６０】
８．グループの名称
【表６】
2019530702.tif 000008
【００６１】
９．処置開始後の日数と刺激後の日数との間の対応
全てのグループは２８日目までの処置段階について同じカレンダーを有する。
【表７】
2019530702.tif 000009
【００６２】
１０．結果
特異的な抗イエダニタンパク質（天然−天然タンパク質コーティング）ＩｇＧの産生に対し、ＥＬＩＳＡにより得られた結果は以下の通りである。
【００６３】
ａ．刺激前のＩｇＧ産生の発展（０日目〜２８日目）
図５及び図６は、医薬品としてのイエダニペプチドでのマウスの処置は、２８日目までは特異的な抗ＨＤＭタンパク質ＩｇＧの弱い産生をもたらすことを示している。プラセボで処置されたマウスは、特異的な抗ＨＤＭタンパクＩ質ｇＧの産生を示さない（グループ５〜８は同じレベルである）。
【００６４】
ｂ．刺激後のＩｇＧ産生の発展（刺激日〜刺激後６３日目）
図７及び図８は、ＨＤＭペプチドで処置されたグループに属するマウスの血清中の特異的な抗ＨＤＭタンパク質ＩｇＧの産生を示している。この産生は、刺激後１４日目に最大に達するよう増加した後、刺激後２８日目（グループ１、２、及び４に対して）又は３５日目（グループ３に対して）に相対的なプレート状態に達する。この産生（ＩｇＧ力価のレベル）は、刺激が起こった時点と関係しているようであり、ＩｇＧ産生は、グループ３及び４（それぞれ処置開始後４２日目及び４９日目に刺激）の方がグループ１及び２（それぞれ処置開始後２８日目及び３５日目に刺激）よりも高い。
【００６５】
これら特定の時点での力価の値は以下の通りである。
【００６６】
【表８】
2019530702.tif 000010
【００６７】
１１．結論
これら全ての結果から、以下の点を結論づけることができる。
・このプロトコルで述べたようなＨＤＭ−ペプチドでの処置は、２８日目までは、特異的な抗ＨＤＭタンパク質ＩｇＧの弱い産生を引き起こす（処置開始後）。
・２８日目までの処置段階の間はプラセボグループでは特異的なＩｇＧ産生は観察されない（処置開始後）。
・１００μｇのＨＤＭ天然タンパク質の特有の投与による刺激は、刺激後２週間で最大に達する特異的な抗ＨＤＭタンパク質ＩｇＧの産生の誘導を許容する処置の効果に可能性を持たせる。この効果は同じ刺激を受けたプラセボグループにおいては観察されない。よって、（プラセボグループで観察されるように）この刺激単独ではＩｇＧ産生を引き起こすのに十分ではないが、ＨＤＭペプチドでの処置の発現を許容すると結論づけることができる。明らかに、ＨＤＭペプチドでの処置は天然タンパク質での刺激後に「記憶効果」を許容するように免疫システムを予備刺激することができる。
・ＩｇＧ応答の振幅は、処置の終わりと刺激を隔てる期間によって左右される。この応答は後期に刺激されたグループでより高くなる。
・これら全ての結果は天然アレルゲンに最も近いタンパク質であるＨＤＭ天然タンパク質に関連している。
【００６８】
実施例３  ブタクサ
３週間、週に２回、マンニトール−トレハロース環境中の１００μｇ又は４００μｇのブタクサペプチド（ＲＡＧ／ＰＥＰ＿ＳＯＬ  ＵＢＴ１６Ｅ０３）で処置され（アジュバントなしで皮下に注射を行った）、アジュバントなしで１００μｇのブタクサ天然タンパク質の特有のｉｐ注射により刺激したＢａｌｂ／ｃマウスにおいて起こり得る「記憶効果」の誘導の評価。
【００６９】
７．プロトコルの概要
【表９】
2019530702.tif 000011
【００７０】
８．グループの名称
【表１０】
2019530702.tif 000012
【００７１】
９．処置開始後の日数と刺激後の日数との間の対応
全てのグループは２８日目までの処置段階について同じカレンダーを有する。
【００７２】
【表１１】
2019530702.tif 000013
【００７３】
１０．結果
特異的な抗ブタクサタンパク質（天然−天然タンパク質コーティング）ＩｇＧの産生に対し、ＥＬＩＳＡにより得られた結果は以下の通りである。
【００７４】
ａ．刺激前のＩｇＧ産生の発展（０日目〜２８日目）
図９及び図１０は、医薬品としてのブタクサペプチドの両方の濃度でのマウスの処置は、２８日目までは特異的な抗ＲＡＧタンパク質ＩｇＧの弱い産生をもたらすことを示している（グループ１〜６）。プラセボで処置されたマウスは、特異的な抗ＲＡＧタンパク質ＩｇＧの産生を示さない（グループ７）。
【００７５】
ｂ．刺激後のＩｇＧ産生の発展（刺激日〜刺激後５６日目）
図１１及び図１２は、ＲＡＧペプチドで処置されたグループに属するマウスの血清中の特異的な抗ＲＡＧタンパク質ＩｇＧの産生を示している。この産生は、刺激後１４〜２１日目に最大に達するよう増加した後、２８〜４２日目に相対的なプレート状態に達する。この産生（ＩｇＧ力価のレベル）は、刺激が起こった時点と関係しているようであり、ＩｇＧ産生はグループ３及び６（それぞれ処置開始後５６日目に刺激）の方がグループ１、２、４及び５（それぞれ処置開始後２８日目及び４２日目に刺激）よりも高い。
【００７６】
これら特異的な時間の点での力価の値は以下の通りである。
【００７７】
【表１２】
2019530702.tif 000014
【００７８】
１１．結論
これら全ての結果から、我々は以下の点を結論づけることができる。
・このプロトコルで述べたようなＲＡＧ−ペプチドでの処置は、２８日目までは、特異的な抗ＲＡＧタンパク質ＩｇＧの弱い基礎的な産生を引き起こす（処置開始後）。
・研究の全ての期間でプラセボグループでは特異的なＩｇＧ産生は観察されない（処置後及び刺激後）。
・１００μｇのＲＡＧ天然タンパク質の特有の投与による刺激は、刺激後２週間で最大に達する特異的な抗ＲＡＧタンパク質ＩｇＧの産生の誘導を許容する処置の効果に可能性を持たせる。この効果は同じ刺激を受けたプラセボグループにおいては観察されない。よって、（プラセボグループで観察されるように）この刺激単独ではＩｇＧ産生を引き起こすのに十分ではないが、ＲＡＧペプチドでの処置効果の発現を許容すると結論づけることができる。要するに、ＲＡＧペプチドでの処置は天然タンパク質での刺激後に「記憶効果」を許容するように免疫システムを予備刺激することができる。
・ＩｇＧ応答の振幅は、処置の終わりと刺激との間の遅延によって左右される。この応答は後期に刺激されたグループでより高くなる。
・刺激後のＩｇＧ応答の振幅は、処置の投与量に依存し、２８日目及び４２日目に刺激を行う場合、１００μｇより４００μｇの方がより高い応答を有する。後期に刺激を行う場合（５６日目）、おそらく応答の振幅によるものであるが、ＩｇＧ応答はどちらの投与量でも同様である。
・これら全ての結果は天然アレルゲンに最も近いタンパク質であるＲＡＧ天然タンパク質に関連している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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