【手続補正書】
【提出日】平成18年12月12日(2006.12.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  高収率の活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質の発現のための方法であって、約２７℃〜約３５℃の低温を有する培養系において、所望のレセプター−Ｉｇ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質転換された宿主を培養する工程を包含し、
ここで、該レセプター−Ｉｇ融合タンパク質は、ＴＮＦファミリーのレセプターのメンバーを含む、
方法。
【請求項２】  請求項１に記載の方法であって、前記温度が約２７℃〜約３２℃である、方法。
【請求項３】  請求項１に記載の方法であって、前記形質転換された宿主が、まず、約３３℃より高い温度で、該宿主の増殖を可能にするに十分な期間培養される、方法。
【請求項４】  請求項１に記載の方法であって、前記ＴＮＦレセプターファミリーのメンバーが、リンフォトキシン−βレセプター、ＴＮＦＲ−５５、ＨＶＥＭまたはそれらのフラグメントからなる群より選択される、方法。
【請求項５】  請求項１に記載の方法であって、該方法がさらに、疎水性相互作用クロマトグラフィーにより前記培養系から活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質を回収する工程を包含する、方法。
【請求項６】  請求項１に記載の方法であって、前記培養系が、昆虫細胞または細菌細胞を含有する、方法。
【請求項７】  約２７℃〜約３５℃の低温を有する培養系において、レセプター−Ｉｇ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質転換された宿主を培養することにより得られる、生物学的に活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質を含み、
ここで、該レセプター−Ｉｇ融合タンパク質は、ＴＮＦファミリーのレセプターのメンバーを含む、
高収率の調製物。
【請求項８】  前記レセプター−Ｉｇ融合タンパク質が、ＬＴ−βレセプターまたはそのフラグメントを含有する、請求項７に記載の調製物。
【請求項９】  前記レセプター−Ｉｇ融合タンパク質が、ＨＶＥＭまたはそのフラグメントを含有する、請求項７に記載の調製物。
【請求項１０】  前記調製物が、少なくとも７０％生物学的に活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質を含む、請求項７に記載の調製物。
【請求項１１】  前記調製物が、少なくとも８３％生物学的に活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質を含む、請求項７に記載の調製物。
【請求項１２】  活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質を含有する薬学的調製物を作製する方法であって、該方法は、以下：
（ａ）約２７℃〜約３２℃の低温を有する培養系において、該レセプター−Ｉｇ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質転換された宿主を培養し、それにより活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質を発現する、工程；
（ｂ）該培養系から活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質を回収する、工程；および
（ｃ）工程（ｂ）の活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質と薬学的に受容可能なキャリアとを組み合わせる、工程
を包含し、
ここで、該レセプター−Ｉｇ融合タンパク質は、ＴＮＦファミリーのレセプターのメンバーを含む、
方法。
【請求項１３】  請求項１２に記載の方法であって、前記レセプター−Ｉｇ融合タンパク質が、リンフォトキシン−βレセプターまたはそのフラグメントを含有する、方法。
【請求項１４】  請求項１２に記載の方法であって、前記レセプター−Ｉｇ融合タンパク質が、ＨＶＥＭまたはそのフラグメントを含有する、方法。
【請求項１５】  活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質を含む薬学的調製物であって、該薬学的調製物が、以下：
（ａ）約２７℃〜約３２℃の低温を有する培養系において、該レセプター−Ｉｇ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質転換された宿主を培養し、それにより活性なタンパク質−Ｉｇ融合物を発現させる、工程；
（ｂ）該培養系から活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質を回収する、工程；および
（ｃ）工程（ｂ）の活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質と薬学的に受容可能なキャリアとを組み合わせる、工程
により得られ、
ここで、該レセプター−Ｉｇ融合タンパク質は、ＴＮＦファミリーのレセプターのメンバーを含む、
薬学的調製物。
【請求項１６】  請求項１５に記載の薬学的調製物であって、前記レセプター−Ｉｇ融合タンパク質が、リンフォトキシン−βレセプターまたはそのフラグメントを含有する、薬学的調製物。
【請求項１７】  請求項１５に記載の薬学的調製物であって、前記レセプター−Ｉｇ融合タンパク質が、ＨＶＥＭまたはそのフラグメントを含有する、薬学的調製物。
【請求項１８】  高収率の活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質を発現するための方法であって、約１０℃〜約２５℃の低温を有する培養系において、所望の活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質転換された酵母を培養する工程を包含し、
ここで、該レセプター−Ｉｇ融合タンパク質は、ＴＮＦファミリーのレセプターのメンバーを含む、
方法。
【請求項１９】  請求項１８に記載の方法であって、前記温度が、約１５℃〜約２０℃である、方法。
【請求項２０】  請求項１８に記載の方法であって、前記形質転換された宿主が、まず、約３０℃より高い温度で、該宿主の増殖を可能にするに十分な期間培養される、方法。
【請求項２１】  請求項１８に記載の方法であって、前記ＴＮＦレセプターファミリーのメンバーが、リンフォトキシン−βレセプターまたはそのフラグメントである、方法。
【請求項２２】  請求項１８に記載の方法であって、該方法がさらに、疎水性相互作用クロマトグラフィーにより前記培養系から活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質を回収する工程を包含する、方法。
【請求項２３】  生物学的に活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質を含む高収率の調製物であって、該レセプター−Ｉｇ融合タンパク質は、約１０℃〜約２５℃の低温を有する培養系において、該所望のレセプター−Ｉｇ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質転換された酵母を培養することにより得られ、ここで、該レセプター−Ｉｇ融合タンパク質は、ＴＮＦファミリーのレセプターのメンバーを含む、高収率の調製物。
【請求項２４】  前記レセプター−Ｉｇ融合タンパク質は、ＬＴ−βレセプターまたはそのフラグメントを含有する、請求項２３に記載の調製物。
【請求項２５】  前記レセプター−Ｉｇ融合タンパク質は、ＨＶＥＭまたはそのフラグメントを含有する、請求項２３に記載の調製物。
【請求項２６】  Ｉｇ  Ｆｃドメインおよびペプチド鎖を有する活性なタンパク質−Ｉｇ融合物を含有する薬学的調製物であって、ここで、該Ｉｇ  Ｆｃドメインが、改変され、それにより該タンパク質−Ｉｇ融合物のヒンジ領域におけるジスルフィド形成の速度を改変する、薬学的調製物。
【請求項２７】  請求項２６に記載の調製物であって、前記Ｉｇ  Ｆｃドメインが、少なくとも１つのシステイン残基をアラニンで置換することによって改変される、調製物。
【請求項２８】  ＴＮＦファミリー由来のペプチドに架橋されたＩｇ−Ｆｃドメインを含有するタンパク質−Ｉｇ融合物であって、ここで、該Ｉｇ−Ｆｃドメイン上の少なくとも１つのシステイン残基がアラニンで置換される、タンパク質−Ｉｇ融合物。
【請求項２９】  前記ペプチドが、リンフォトキシン−βレセプター由来である、請求項２８に記載のタンパク質−Ｉｇ融合物。
【請求項３０】  少なくとも１つのシステイン残基をアラニンへ変異誘発し、それにより発現された活性な形態の融合物の収率を増大させる工程により、ＴＮＦレセプターファミリー由来のペプチドに架橋されたＩｇ  Ｆｃドメインを含むタンパク質−Ｉｇ融合物を作製する、方法。
【請求項３１】  前記ペプチドがＬＴβＲであり、そして位置１０１および位置１０８のシステインが、アラニンへ変異誘発される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】  前記ＬＴβＲペプチドの位置１０１および位置１０８にアラニンを含有する、ＬＴβＲ−Ｉｇ融合タンパク質。
【請求項３３】  活性な形態のレセプター−Ｉｇ融合タンパク質および不活性な形態のレセプター−Ｉｇ融合タンパク質を含む細胞培養調製物であって、不活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質のパーセンテージは、該調製物における全レセプター−Ｉｇ融合タンパク質の５０％未満であり、かつ該レセプター−Ｉｇ融合タンパク質は、ＴＮＦファミリーのレセプターのメンバーを含む、細胞培養調製物。
【請求項３４】  前記レセプター−Ｉｇ融合タンパク質が、ＬＴ−βレセプターまたはそのフラグメントを含有する、請求項３３に記載の細胞培養調製物。
【請求項３５】  前記レセプター−Ｉｇ融合タンパク質が、ＨＶＥＭまたはそのフラグメントを含有する、請求項３３に記載の細胞培養調製物。
【請求項３６】  前記不活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質の量は、前記調製物における全レセプター−Ｉｇ融合タンパク質の３０％以下である、請求項３４に記載の細胞培養調製物。
【請求項３７】  前記不活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質の量は、前記調製物における全レセプター−Ｉｇ融合タンパク質の１７％以下である、請求項３４に記載の細胞培養調製物。
【請求項３８】  少なくとも７０％生物学的に活性なレセプター−Ｉｇ融合タンパク質を含む組成物であって、該レセプター−Ｉｇ融合タンパク質は、約２７℃〜約３５℃の温度を有する培養系において該レセプター−Ｉｇ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質転換された哺乳動物宿主細胞を培養することによって得られ、ここで、該レセプター−Ｉｇ融合タンパク質は、ＴＮＦファミリーのレセプターのメンバーを含む、組成物。
【請求項３９】  前記レセプター−Ｉｇ融合タンパク質は、ＬＴ−βレセプターを含む、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】  前記レセプター−Ｉｇ融合タンパク質は、ＨＶＥＭを含む、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４１】  少なくとも７０％生物学的に活性なＬＴ−βレセプター−Ｉｇ融合タンパク質を含む組成物であって、約２７℃〜約３５℃の温度を有する培養系においてＬＴ−βレセプター−Ｉｇ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質転換された哺乳動物宿主細胞を培養することによって得られる、組成物。
【請求項４２】  生物学的に活性なＬＴ−βレセプター−Ｉｇ融合タンパク質の高レベル発現のための方法であって、該方法は、約２７℃〜約３５℃の温度を有する培養系において該ＬＴ−βレセプター−Ｉｇ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質転換された哺乳動物宿主細胞を培養する工程を包含し、ここで、該培養系が、少なくとも７０％生物学的に活性なＬＴ−βレセプターＩｇ融合タンパク質を含む細胞培養物をもたらす、方法。
【請求項４３】  前記温度が、約２７℃〜約３２℃である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】  前記形質転換された宿主が、まず、約３３℃より高い温度で、該宿主の増殖を可能にするに十分な期間培養される、請求項４２に記載の方法。