【手続補正書】
【提出日】平成19年3月23日(2007.3.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６８】
ａ）３−クロロ−２−ニトロ−Ｎ−(トリシクロ[３.３.１.１３,７]デシ−１−イルメチル)−ベンズアミド
０℃でのジクロロメタン(１０ml)中の３−クロロ−２−ニトロ安息香酸(２.６８ｇ)の懸濁液に、塩化オキサリル(３ml)およびジメチルホルムアミド(１滴)を加えた。その結果得られた混合物を窒素雰囲気下に室温で１時間撹拌した後、減圧下に濃縮して、固形物質を得た。その固形物質をジクロロメタン(１０ml)に溶解して、０℃まで冷却した。ジクロロメタン(１０ml)中の１−アダマンタンメチルアミン(２.１９ｇ)およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(１１ml)の溶液を滴加して、その結果得られた溶液を窒素雰囲気下に室温で２時間撹拌した。その反応混合物を水に注ぎ入れ、有機相を分離して、２Ｎ 塩酸、１０％ 水性水酸化ナトリウムおよび飽和ブラインで洗浄した。次いで、その有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下に濃縮して、その結果得られた固形物質をイソプロパノールから再結晶化させて、副題の化合物(３.５２ｇ)を固形物質として得た。
ＭＳ（ＡＰＣＩ ＋ve）３４９ (Ｍ＋Ｈ)＋。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ８.７４(１Ｈ，ｔ)；７.８９(１Ｈ，ｍ)；７.７５−７.６９(２Ｈ，ｍ)；２.９１(２Ｈ，ｄ)；１.９３(３Ｈ，bs)；１.６４(６Ｈ，dd)；１.４７(６Ｈ，ｄ)。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７２】
ａ）２−アミノ−３−(４−{１,１−ジメチルエチル}オキシカルボニル]−ピペラジン−１−イル)−Ｎ−(トリシクロ[３.３.１.１３,７]デシ−１−イルメチル)−ベンズアミド
２：１のエタノール／水(９０ml)中の３−(４−{１,１−ジメチルエチル}オキシカルボニル]−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−Ｎ−(トリシクロ[３.３.１.１３,７]デシ−１−イルメチル)−ベンズアミド(３.８ｇ、実施例１ｂ)、鉄粉(２.１３ｇ)および塩化アンモニウム(２.０４ｇ)の懸濁液を窒素雰囲気下に還流温度で２時間加熱した。冷却した反応混合物を濾過して、濾液を水と酢酸エチルとの間で分配した。有機層を分離して、水でさらに２回洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下に濃縮して、残留物を得た。イソヘキサン中の２０％ 酢酸エチルで溶出するシリカゲルでのクロマトグラフィーににより残留物を精製して、副題の化合物(２.２７ｇ)を固形物質として得た。
ＭＳ（ＡＰＣＩ ＋ve）４６９ (Ｍ＋Ｈ)＋。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７５】
ａ）２−クロロ−３−(４−{１,１−ジメチルエチル}オキシカルボニル]−ピペラジン−１−イル)−Ｎ−(トリシクロ[３.３.１.１３,７]デシ−１−イルメチル)−ベンズアミド
テトラヒドロフラン(２３ml)中の２−アミノ−３−(４−{１,１−ジメチルエチル}オキシカルボニル]−ピペラジン−１−イル)−Ｎ−(トリシクロ[３.３.１.１３,７]デシ−１−イルメチル)−ベンズアミド(１ｇ、実施例２ａ)の溶液に、１Ｍ 水性塩酸(２.７８ml)および水(１０ml)を加えた。その溶液を０℃まで冷却して、内部温度を５℃以下に維持しながら、亜硝酸ナトリウム(１.９１ｇ)を滴加した。０−５℃で０.５時間撹拌した後、その淡黄色の懸濁液に、水(２０ml)中の塩化銅（Ｉ）(１０.５８ｇ)および塩化銅（II）の予め冷却しておいた懸濁液を滴加した。その混合物を、０℃で０.５時間、次いで、室温で０.５時間撹拌した。その反応混合物を、水およびジクロロメタンの混合物に注ぎ入れて、水相が均一となるまで、１／１：０.８８のアンモニア／水を加えた。層を分離して、水相をジクロロメタンでさらに２回抽出した。水層が無色となるまで、合わせた有機抽出物を１／１：０.８８のアンモニア／水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下に濃縮して、油状物質を得た。２０−３５％ 酢酸エチル／イソヘキサンで溶出するシリカゲルでのクロマトグラフィーにより精製して、副題の化合物(０.４５ｇ)を固形物質として得た。
ＭＳ（ＡＰＣＩ ＋ve）３８８ (Ｍ−ＢＯＣ)＋。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ８.２７(１Ｈ，ｔ)；７.３２(１Ｈ，ｔ)；７.１９(１Ｈ，ｄ)；７.０４(１Ｈ，ｄ)；３.４８(４Ｈ，ｍ)；２.９３−２.９１(６Ｈ，ｍ)；１.９４(３Ｈ，bs)；１.６４(３Ｈ，ｄ)；１.５９(３Ｈ，ｄ)；１.５２(６Ｈ，ｓ)；１.４３(９Ｈ，ｓ)。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８３】
ｂ）４−(３−カルボキシ−４−クロロフェニル)ヘキサヒドロ−１Ｈ−１,４−ジアゼピン−１−カルボン酸，１,１−ジメチルエチルエステル
１：１のエタノール／水(７ml)中の４−[４−クロロ−３−(エトキシカルボニル)フェニル]ヘキサヒドロ−１Ｈ−１,４−ジアゼピン−１−カルボン酸，１,１−ジメチルエチルエステル(実施例５ａ、０.２１ｇ)、水酸化リチウム 一水和物(３Ｍ 水溶液の１.０５ml)の懸濁液を室温で１４時間撹拌した。さらなる水酸化リチウム 一水和物(３Ｍ 水溶液の０.５５ml)を加え、続いて、テトラヒドロフラン(１ml)を加えた。その結果得られた溶液を室温で４時間撹拌した後、水に注ぎ入れて、ジエチルエーテルで抽出した。水相を分離し、２Ｍ 塩酸で酸性とした後、ジクロロメタンで３回抽出した。合わせたジクロロメタン層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下に蒸発させて、副題の化合物をガラス状物質として得た。
ＭＳ（ＡＰＣＩ ＋ve）２９８／３００ (Ｍ−ｔＢu)＋。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５９】
ａ）４−ブロモ−２−クロロ−Ｎ−(トリシクロ[３.３.１.１３,７]デシ−１−イルメチル)−ベンズアミド
０℃でのジクロロメタン(２５ml)中の４−ブロモ−２−クロロ安息香酸(５.００ｇ)の懸濁液に、塩化オキサリル(３.７ml)およびジメチルホルムアミド(５滴)を加えた。その結果得られた混合物を窒素雰囲気下に室温で１時間撹拌した後、減圧下に濃縮して、固形物質を得た。その固形物質をジクロロメタン(２０ml)に溶解して、ジクロロメタン(２０ml)中の１−アダマンタンメチルアミン(３.３６ｇ)およびＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(５.５５ml)の溶液に滴加した。その結果得られた溶液を窒素雰囲気下に室温で２０時間撹拌した。その反応混合物をジクロロメタンで希釈して、水、１０％ 水性炭酸カリウム、１０％ 水性硫酸水素カリウムおよび飽和ブラインで洗浄した。次いで、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下に濃縮して、副題の化合物(４.２８ｇ)を固形物質として得た。
ＭＳ（ＡＰＣＩ ＋ve）３８２／３８４ (Ｍ＋Ｈ)＋。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ８.３９−８.３４(１Ｈ，ｔ)；７.７８(１Ｈ，ｍ)；７.６２−７.５９(１Ｈ，ｍ)；７.３７−７.３４(１Ｈ，ｄ)；２.９４−２.９２(２Ｈ，ｄ)；１.９４(３Ｈ，br s)；１.６９−１.５７(６Ｈ，br ＡＢ)；１.５２(６Ｈ，ｓ)。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６０】
ｂ）２−クロロ−４−(４−ピペラジン−１−イル)−Ｎ−(トリシクロ[３.３.１.１３,７]デシ−１−イルメチル)−ベンズアミド，塩酸塩
無水トルエン(３ml)中の４−ブロモ−２−クロロ−Ｎ−(トリシクロ[３.３.１.１３,７]デシ−１−イルメチル)−ベンズアミド(実施例４１ａ、０.３０ｇ)、ピペラジン−１−カルボン酸，１,１−ジメチルエチルエステル(０.１８ｇ)、炭酸セシウム(０.３６ｇ)および(Ｒ)−ＢＩＮＡＰ(０.０３６ｇ)の懸濁液に、酢酸パラジウム（II）(０.００９ｇ)を加えて、窒素を流した加圧容器中、その混合物を１００ ℃で１４時間加熱した。冷却した反応混合物を減圧下に蒸発させて、油状物質を得、これをシリカゲルでのクロマトグラフィー（２：１／イソヘキサン：酢酸エチル）により精製して、t−ブチルオキシカルボニル(ＢＯＣ)で保護された化合物を無色の泡状物質として得る。その泡状物質をメタノール(１５ml)に溶解して、ジオキサン中の４Ｎ 塩酸(１５ml)を加えた。反応がＬＣＭＳにより完了したと判定されるまで、その溶液を窒素雰囲気下に室温で撹拌した。蒸発させ、続いて、ジエチルエーテルおよびメタノールでトリチュレーションして、標記化合物(０.１６１ｇ)をオフホワイト色の固形物質／泡状物質として得た。
ＭＳ（ＡＰＣＩ ＋ve）３８８／３９０ (Ｍ＋Ｈ)＋。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ８.９８(２Ｈ，bs)；８.１１−８.０７(１Ｈ，ｔ)；７.３３−７.３１(１Ｈ，ｄ)；７.０５(１Ｈ，ｍ)；６.９９−６.９５(１Ｈ，ｍ)；３.４６−３.４３(４Ｈ，ｍ)；３.２０(４Ｈ，bs)；１.９４(３Ｈ，bs)；１.６９−１.５７(６Ｈ，ｂ ＡＢ)；１.５１(６Ｈ，bs)。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４３】
この方法では、実施例１−８８の標記化合物を各々、Ｐ２Ｘ７受容体でのアンタゴニスト活性に関して試験した。そこで、その試験を９６ウェルの平底マイクロタイタープレートにおいて行い、そのウェルを、１０−４Ｍ 臭化エチジウムを含むＴＨＰ−１細胞の懸濁液（２.５×１０６細胞／ml）２００μl、１０−５Ｍ bbＡＴＰを含む高カリウム緩衝液２５μl、および３×１０−５Ｍ 試験化合物を含む高カリウム緩衝液２５μlを含んでなる試験溶液２５０μlで満たした。そのプレートをプラスチックシートで覆って、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、そのプレートを、Ｐerkin−Ｅlmerの蛍光プレート読取装置，励起 ５２０nm，発光 ５９５nm，スリット幅：Ｅx １５nm，Ｅm ２０nmで読取った。比較の目的で、bbＡＴＰ（Ｐ２Ｘ７受容体アゴニスト）およびピリドキサール ５−リン酸（Ｐ２Ｘ７受容体アンタゴニスト）を対照として別々に試験で使用した。得られた読取値から、pＩＣ５０値を各々の試験化合物に関して計算し、この値は、bbＡＴＰアゴニスト活性を５０％まで減少させるのに必要な試験化合物の濃度の対数に負号をつけたものである。実施例１−８８の化合物は各々、アンタゴニスト活性を実証し、＞４.５０のpＩＣ５０値を有していた。