(57)【要約】  本発明は、ヒトＣＧＲＰへ結合する抗体、このようなＣＧＲＰ抗体を含む組成物及びキット、ならびにヒトＣＧＲＰの検出のためにこのようなＣＧＲＰ抗体を用いる方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含む、ヒトＣＧＲＰへ結合する抗体またはその抗体フラグメントであって、前記ＬＣＶＲが、ＣＤＲＬ１にて配列番号１のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ２にて配列番号２のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ３にて配列番号３のアミノ酸配列と、を含み、前記ＨＣＶＲが、ＣＤＲＨ１にて配列番号４のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ２にて配列番号５のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ３にて配列番号６のアミノ酸配列と、を含む、抗体またはその抗体フラグメント。
【請求項２】
前記ＬＣＶＲが配列番号７のアミノ酸配列を有し、前記ＨＣＶＲが配列番号８のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
軽鎖（ＬＣ）が配列番号９のアミノ酸配列を有し、重鎖（ＨＣ）が配列番号１０のアミノ酸配列を有する、前記ＬＣと、前記ＨＣと、を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
各ＬＣが配列番号９のアミノ酸配列であり、各ＨＣが配列番号１０のアミノ酸配列である、２つのＬＣと、２つのＨＣと、を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
前記抗体が、抗体のＦａｂフラグメントである、請求項１に記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体が、検出可能な標識で標識されている、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体を含む、キット。
【請求項８】
第２のＣＧＲＰ抗体をさらに含む、請求項７に記載のキット。
【請求項９】
前記第２のＣＧＲＰ抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含み、前記ＬＣＶＲが、ＣＤＲＬ１にて配列番号１３のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ２にて配列番号１４のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ３にて配列番号１５のアミノ酸配列と、を含み、前記ＨＣＶＲが、ＣＤＲＨ１にて配列番号１６のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ２にて配列番号１７のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ３にて配列番号１８のアミノ酸配列と、を含む、請求項８に記載のキット。
【請求項１０】
前記第２のＣＧＲＰ抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含み、前記ＬＣＶＲが、ＣＤＲＬ１にて配列番号１９のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ２にて配列番号２０のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ３にて配列番号２１のアミノ酸配列と、を含み、前記ＨＣＶＲが、ＣＤＲＨ１にて配列番号２２のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ２にて配列番号２３のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ３にて配列番号２４のアミノ酸配列と、を含む、請求項８に記載のキット。
【請求項１１】
患者試料を第１のＣＧＲＰ抗体と接触させることと、前記第１のＣＧＲＰ抗体へ結合したＣＧＲＰの量を、請求項１〜５のいずれか１項に記載の第２の抗ＣＧＲＰ抗体を用いて検出することと、を含む、前記患者試料においてヒトＣＧＲＰを検出する方法。
【請求項１２】
前記患者試料が、血漿またはＥＤＴＡ血漿、ヘパリン血漿、血清、脳脊髄液、または滑液である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
サンドイッチ免疫測定法からなる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記第１のＣＧＲＰ抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含み、前記ＬＣＶＲが、ＣＤＲＬ１にて配列番号１３のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ２にて配列番号１４のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ３にて配列番号１５のアミノ酸配列と、を含み、前記ＨＣＶＲが、ＣＤＲＨ１にて配列番号１６のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ２にて配列番号１７のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ３にて配列番号１８のアミノ酸配列と、を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記第１のＣＧＲＰ抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含み、前記ＬＣＶＲが、ＣＤＲＬ１にて配列番号１９のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ２にて配列番号２０のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ３にて配列番号２１のアミノ酸配列と、を含み、前記ＨＣＶＲが、ＣＤＲＨ１にて配列番号２２のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ２にて配列番号２３のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ３にて配列番号２４のアミノ酸配列と、を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記第１のＣＧＲＰ抗体が、検出可能な標識で標識されている、請求項１１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記第２のＣＧＲＰ抗体が、検出可能な標識で標識されている、請求項１１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
患者試料を請求項１〜５のいずれか１項に記載の第１の抗ＣＧＲＰ抗体と接触させることと、前記第１のＣＧＲＰ抗体へ結合したＣＧＲＰの量を、第２のＣＧＲＰ抗体を用いて検出することと、を含む、前記患者試料においてヒトＣＧＲＰを検出する方法。
【請求項１９】
前記患者試料が、ＥＤＴＡ血漿、ヘパリン血漿、血清、脳脊髄液、または滑液である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
サンドイッチ免疫測定法からなる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記第２のＣＧＲＰ抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含み、前記ＬＣＶＲが、ＣＤＲＬ１にて配列番号１３のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ２にて配列番号１４のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ３にて配列番号１５のアミノ酸配列と、を含み、前記ＨＣＶＲが、ＣＤＲＨ１にて配列番号１６のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ２にて配列番号１７のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ３にて配列番号１８のアミノ酸配列と、を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記第２のＣＧＲＰ抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含み、前記ＬＣＶＲが、ＣＤＲＬ１にて配列番号１９のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ２にて配列番号２０のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ３にて配列番号２１のアミノ酸配列と、を含み、前記ＨＣＶＲが、ＣＤＲＨ１にて配列番号２２のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ２にて配列番号２３のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ３にて配列番号２４のアミノ酸配列と、を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記第１のＣＧＲＰ抗体が、検出可能な標識で標識されている、請求項１８〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記第２のＣＧＲＰ抗体が、検出可能な標識で標識されている、請求項１８〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
患者試料を第１のＣＧＲＰ抗体と接触させることと、前記第１のＣＧＲＰ抗体へ結合したＣＧＲＰの量を、請求項１〜５のいずれか１項に記載の第２の抗ＣＧＲＰ抗体を用いて検出することと、を含む、前記患者試料１ミリリットル（ｍＬ）において０．０２〜２ピコグラム（ｐｇ）のヒトＣＧＲＰを検出する方法。
【請求項２６】
患者試料を請求項１〜５のいずれか１項に記載の第１の抗ＣＧＲＰ抗体と接触させることと、前記第１のＣＧＲＰ抗体へ結合したＣＧＲＰの量を、第２のＣＧＲＰ抗体を用いて検出することと、を含む、前記患者試料１ｍＬにおいて０．０２〜２ｐｇのヒトＣＧＲＰを検出する方法。
【請求項２７】
患者試料においてＣＧＲＰの量を測定する上での使用のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２８】
患者試料においてＣＧＲＰを測定するための検出試薬の製造のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）に結合する抗体、ならびに患者試料においてＣＧＲＰを検出するためのキット及び方法における当該抗体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＣＧＲＰは、中枢神経系及び末梢神経系の神経によって分泌される、３７アミノ酸の神経ペプチドである。ＣＧＲＰは、末梢神経系及び中枢神経系の両方の感覚神経において広範に分布し、多数の異なる生物活性を示す。三叉神経及び他の神経の線維から放出されるとき、ＣＧＲＰは、特異的細胞表面受容体への結合によってその生物学的応答を仲介すると考えられている。ＣＧＲＰのレベル上昇は、片頭痛、群発頭痛及び骨関節症性疼痛を含む、いくつかの容態において役割を担っている。
【０００３】
ＣＧＲＰに対する抗体は、当該技術分野で周知である。例えば、米国特許第８，２９８，５３６号は、いくつかの抗ＣＧＲＰ抗体を開示している。患者試料においてＣＧＲＰのレベルを測定する方法も当該技術分野で既知である。例えば、Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（登録商標）は、種々の患者試料においてＣＧＲＰを測定することのできるＣＧＲＰ（ヒト）酵素免疫測定法（ＥＩＡ）キットを市販している。しかしながら、患者試料において低レベルのＣＧＲＰを測定するためのより高感度の抗体及びキットについての必要性がなおも残っている。
【発明の概要】
【０００４】
本発明の範囲内の抗体、キット、及び方法は、患者試料において低レベルのＣＧＲＰを検出するように高感度である所望の特徴を有する。本発明は、ヒトＣＧＲＰ（アルファ及びベータ）へ結合する抗体であって、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含み、当該ＬＣＶＲが、ＣＤＲＬ１にて配列番号１のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ２にて配列番号２のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ３にて配列番号３のアミノ酸配列と、を含み、当該ＨＣＶＲが、ＣＤＲＨ１にて配列番号４のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ２にて配列番号５のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ３にて配列番号６のアミノ酸配列と、を含む、抗体を提供する。実施形態において、本発明は、配列番号７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、配列番号８のアミノ酸配列によって与えられる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含む、ヒトＣＧＲＰへ結合する抗体を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号９のアミノ酸配列によって与えられる軽鎖（ＬＣ）と、配列番号１０のアミノ酸配列によって与えられる重鎖（ＨＣ）と、を含む、ヒトＣＧＲＰへ結合する抗体を提供する。より詳細な実施形態において、本発明は、各ＬＣが配列番号９のアミノ酸配列を有する２つのＬＣと、各ＨＣが配列番号１０のアミノ酸配列を有する２つのＨＣと、を含む、ヒトＣＧＲＰへ結合する抗体を提供する。
【０００５】
別の実施形態において、本発明は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含む、ヒトＣＧＲＰへ結合する抗体を含むキットであって、当該ＬＣＶＲが、ＣＤＲＬ１にて配列番号１のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ２にて配列番号２のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ３にて配列番号３のアミノ酸配列と、を含み、当該ＨＣＶＲが、ＣＤＲＨ１にて配列番号４のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ２にて配列番号５のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ３にて配列番号６のアミノ酸配列と、を含む、キットを提供する。実施形態において、本発明は、配列番号７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、配列番号８のアミノ酸配列によって与えられる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含む、ヒトＣＧＲＰへ結合する抗体、を含むキットを提供する。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号９のアミノ酸配列によって与えられる軽鎖（ＬＣ）と、配列番号１０のアミノ酸配列によって与えられる重鎖（ＨＣ）と、を含む、ヒトＣＧＲＰへ結合する抗体、を含むキットを提供する。より詳細な実施形態において、本発明は、各ＬＣが配列番号９のアミノ酸配列を有する２つのＬＣと、各ＨＣが配列番号１０のアミノ酸配列を有する２つのＨＣと、を含む、ヒトＣＧＲＰへ結合する抗体、を含むキットを提供する。
【０００６】
さらなる実施形態において、キットは、各ＬＣが配列番号９のアミノ酸配列を有する２つのＬＣと、各ＨＣが配列番号１０のアミノ酸配列を有する２つのＨＣと、を含む、ヒトＣＧＲＰへ結合する抗体と、第２の抗ＣＧＲＰ抗体と、を含む。より詳細には、当該第２の抗ＣＧＲＰ抗体は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含み、当該ＬＣＶＲは、ＣＤＲＬ１にて配列番号１３のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ２にて配列番号１４のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ３にて配列番号１５のアミノ酸配列と、を含み、当該ＨＣＶＲは、ＣＤＲＨ１にて配列番号１６のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ２にて配列番号１７のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ３にて配列番号１８のアミノ酸配列と、を含む。より詳細な実施形態において、当該第２の抗ＣＧＲＰ抗体は、軽鎖（ＬＣ）と、重鎖（ＨＣ）と、を含み、当該ＬＣは、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、当該ＨＣは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。別の詳細な実施形態において、当該第２の抗ＣＧＲＰ抗体は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含み、当該ＬＣＶＲは、ＣＤＲＬ１にて配列番号１９のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ２にて配列番号２０のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ３にて配列番号２１のアミノ酸配列と、を含み、当該ＨＣＶＲは、ＣＤＲＨ１にて配列番号２２のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ２にて配列番号２３のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ３にて配列番号２４のアミノ酸配列と、を含む。より詳細な実施形態において、当該第２の抗ＣＧＲＰ抗体は、軽鎖（ＬＣ）と、重鎖（ＨＣ）と、を含み、当該ＬＣは、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、当該ＨＣは、配列番号２８のアミノ酸配列と、を含む。
【０００７】
本発明は、患者試料を本発明の抗体と接触させることを含む、患者試料１ミリリットル（ｍＬ）あたりの０．１ピコグラム（ｐｇ）超のヒトＣＧＲＰを検出する方法も提供する。実施形態において、本発明は、患者試料を本発明の抗体と接触させることを含む、患者試料において０．０１〜２ｐｇ／ｍｌのヒトＣＧＲＰを検出する方法を提供する。別の実施形態において、本発明は、患者試料を本発明の抗体と接触させることを含む、患者試料において０．０１〜０．５ｐｇ／ｍｌのヒトＣＧＲＰを検出する方法を提供する。詳細な実施形態において、本発明は、患者試料を本発明の抗体と接触させることを含む、患者試料において０．０２〜０．２ｐｇ／ｍｌのヒトＣＧＲＰを検出する方法を提供する。より詳細な実施形態において、本発明は、患者試料を本発明の抗体と接触させることを含む、患者試料において０．０２ｐｇ／ｍｌのヒトＣＧＲＰを検出する方法を提供する。詳細な実施形態において、当該患者試料は、ＥＤＴＡ血漿、ヘパリン血漿、血清、脳脊髄液、または滑液である。別の詳細な実施形態において、当該方法は、ＥＬＩＳＡからなる。
【０００８】
本発明は、患者試料を第１の抗ＣＧＲＰ抗体と接触させることと、当該抗体へ結合したＣＧＲＰの量を、２つのＬＣと、２つのＨＣと、を含む、抗体を用いて検出することと、を含む、当該試料においてヒトＣＧＲＰを検出する方法であって、各ＬＣのアミノ酸配列が配列番号９のアミノ酸配列であり、各ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１０のアミノ酸配列である、方法も提供する。詳細な実施形態において、当該患者試料は、ＥＤＴＡ血漿、ヘパリン血漿、血清、脳脊髄液、または滑液である。別の詳細な実施形態において、当該方法は、ＥＬＩＳＡからなる。別の実施形態において、当該第１の抗ＣＧＲＰ抗体は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含み、当該ＬＣＶＲは、ＣＤＲＬ１にて配列番号１３のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ２にて配列番号１４のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ３にて配列番号１５のアミノ酸配列と、を含み、当該ＨＣＶＲは、ＣＤＲＨ１にて配列番号１６のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ２にて配列番号１７のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ３にて配列番号１８のアミノ酸配列と、を含む。別の実施形態において、当該第１の抗ＣＧＲＰ抗体は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含み、当該ＬＣＶＲは、ＣＤＲＬ１にて配列番号１９のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ２にて配列番号２０のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ３にて配列番号２１のアミノ酸配列と、を含み、当該ＨＣＶＲは、ＣＤＲＨ１にて配列番号２２のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ２にて配列番号２３のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ３にて配列番号２４のアミノ酸配列と、を含む。
【０００９】
本発明は、患者試料を２つのＬＣと、２つのＨＣと、を含む、抗体と接触させ、各ＬＣのアミノ酸配列が配列番号９のアミノ酸配列であり、各ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１０のアミノ酸配列であることと、当該抗体へ結合したＣＧＲＰの量を、第２の抗ＣＧＲＰ抗体を用いて検出することと、を含む、当該試料においてヒトＣＧＲＰを検出する方法も提供する。詳細な実施形態において、当該患者試料は、ＥＤＴＡ血漿、ヘパリン血漿、血清、脳脊髄液、または滑液である。別の詳細な実施形態において、当該方法は、ＥＬＩＳＡからなる。別の実施形態において、当該第２の抗ＣＧＲＰ抗体は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含み、当該ＬＣＶＲは、ＣＤＲＬ１にて配列番号１３のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ２にて配列番号１４のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ３にて配列番号１５のアミノ酸配列と、を含み、当該ＨＣＶＲは、ＣＤＲＨ１にて配列番号１６のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ２にて配列番号１７のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ３にて配列番号１８のアミノ酸配列と、を含む。別の実施形態において、当該第２の抗ＣＧＲＰ抗体は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含み、当該ＬＣＶＲは、ＣＤＲＬ１にて配列番号１９のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ２にて配列番号２０のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ３にて配列番号２１のアミノ酸配列と、を含み、ＨＣＶＲは、ＣＤＲＨ１にて配列番号２２のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ２にて配列番号２３のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ３にて配列番号２４のアミノ酸配列と、を含む。
【００１０】
本発明は、ヒトＣＧＲＰへ結合しかつ軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含む、抗体であって、当該ＬＣＶＲが、ＣＤＲＬ１にて配列番号１のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ２にて配列番号２のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ３にて配列番号３のアミノ酸配列と、を含み、当該ＨＣＶＲが、ＣＤＲＨ１にて配列番号４のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ２にて配列番号５のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ３にて配列番号６のアミノ酸配列と、を含む、ヒト試料においてＣＧＲＰの量を測定する上での使用のための抗体も提供する。実施形態において、本発明は、配列番号７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、配列番号８のアミノ酸配列によって与えられる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含む、ヒト試料においてＣＧＲＰの量を測定する上での使用のための、ヒトＣＧＲＰへ結合する抗体を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号９のアミノ酸配列によって与えられる軽鎖（ＬＣ）と、配列番号１０のアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）と、を含む、ヒト試料においてＣＧＲＰの量を測定する上での使用のための、ヒトＣＧＲＰへ結合する抗体を提供する。より詳細な実施形態において、本発明は、各ＬＣが配列番号９のアミノ酸配列を有する２つのＬＣと、各ＨＣが配列番号１０のアミノ酸配列を有する２つのＨＣと、を含む、ヒト試料においてＣＧＲＰの量を測定する上での使用のための、ヒトＣＧＲＰへ結合する抗体を提供する。
【００１１】
別の実施形態において、本発明は、ヒトＣＧＲＰへ結合しかつ軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含む抗体であって、当該ＬＣＶＲが、ＣＤＲＬ１にて配列番号１のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ２にて配列番号２のアミノ酸配列と、ＣＤＲＬ３にて配列番号３のアミノ酸配列と、を含む、当該ＨＣＶＲが、ＣＤＲＨ１にて配列番号４のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ２にて配列番号５のアミノ酸配列と、ＣＤＲＨ３にて配列番号６のアミノ酸配列と、を含む、患者試料においてＣＧＲＰを測定するための検出試薬の製造のための、抗体を提供する。実施形態において、本発明は、配列番号７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と、配列番号８のアミノ酸配列によって与えられる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、を含む、患者試料においてＣＧＲＰを測定する検出試薬の製造のための、ヒトＣＧＲＰへ結合する抗体を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、配列番号９のアミノ酸配列によって与えられる軽鎖（ＬＣ）と、配列番号１０のアミノ酸配列によって与えられる重鎖（ＨＣ）と、を含む、患者試料においてＣＧＲＰを測定するための検出試薬の製造のための、ヒトＣＧＲＰへ結合する抗体を提供する。より詳細な実施形態において、本発明は、各ＬＣが配列番号９のアミノ酸配列を有する２つのＬＣと、各ＨＣが配列番号１０のアミノ酸配列を有する２つのＨＣと、を含む、患者試料においてＣＧＲＰを測定するための検出試薬の製造のための、ヒトＣＧＲＰへ結合する抗体を提供する。
【００１２】
本発明の抗体は、本明細書で「ＣＧＲＰ」と呼ばれる、アルファ及びベータ両方のＣＧＲＰへ結合する。本明細書で使用する場合、「抗体」とは、ジスルフィド結合によって相互に接続される２つの重鎖（ＨＣ）と、２つの軽鎖（ＬＣ）と、を含む、免疫グロブリン分子である。各ＬＣ及びＨＣのアミノ末端部分は、当該部分に含有される相補性決定領域（ＣＤＲ）を介した抗原認識に関与する可変領域を含む。当該ＣＤＲには、フレーム領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が散在している。当該可変領域の各々について、重鎖可変領域（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３）及び軽鎖可変領域（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３）の各々には３つのＣＤＲがある。本発明の抗体のＬＣＶＲ領域及びＨＣＶＲ領域内のＣＤＲドメインに対するアミノ酸の割り当ては、周知のＫａｂａｔ付番変換（Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２−９３（１９７１）、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１））、及びＮｏｒｔｈ付番変換（Ｎｏｒｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ａ  Ｎｅｗ  Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＣＤＲ  Ｌｏｏｐ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，４０６：２２８〜２５６（２０１１））に基づく。先の方法に従って、本発明のＣＤＲを決定した（表１）。
【００１３】
「抗体Ｆａｂフラグメント」は、本明細書で使用する場合、抗原結合部位を含むインタクトな抗体の部分または当該インタクトな抗体の可変領域として定義され、当該部分は、当該インタクトな抗体のＦｃ領域の重鎖定常ドメイン（すなわち、抗体のアイソタイプに応じてＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４）を含まない。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、及びＦｖフラグメント；ダイアボディ；（ｌ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、（２）関連する重鎖部分を有しない、１つのみの軽鎖可変ドメインを含有する一本鎖ポリペプチド、または当該軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含有するそのフラグメント、及び（３）関連する軽鎖部分を有しない、１つのみの重鎖可変ドメインを含有する一本鎖ポリペプチド、または当該重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含有するそのフラグメント、を含むがこれらに限定されない、連続したアミノ酸残基の１つの中断されていない配列からなる一次構造を有するポリペプチドである何らかの抗体フラグメント（本明細書では「一本鎖抗体フラグメント」または「一本鎖ポリペプチド」と呼ばれる）；ならびに抗体フラグメントから形成された多重特異的構造または多価構造が挙げられる。１つ以上の重鎖を含む抗体フラグメントにおいて、当該重鎖（複数可）は、インタクトな抗体の非Ｆｃ領域において見出される何らかの定常ドメイン配列（例えば、ＣＨＩ）を含有することができ、及び／またはインタクトな抗体において見出される何らかのヒンジ部配列を含有することができる。好ましくは、当該抗体フラグメントは、Ｆａｂフラグメントである。
【００１４】
本発明のＣＧＲＰ免疫測定法は、競合的測定法またはサンドイッチ測定法のいずれかであり得る。当該第１の及び／または第２の抗体のうちの少なくとも１つは、検出可能な標識で標識され得、または固体支持体上に固定され得る。抗体または抗体フラグメントを検出可能な標識で標識するための方法は、当業者に既知である。検出可能な標識の例としては、放射性同位体、酵素、蛍光物質、発光物質、及び粒子が挙げられるが、これらに限定されない。検出可能な標識を用いた抗体の標識は、当業者に既知の方法、例えば、Ｋｏｎｏ  ｅｔ  ａｌ．（Ｋａｋｕ−Ｉｇａｋｕ  Ｇｉｊｕｔｕ，１３（１），２，（１９９３））によって説明される方法によって実施されることができる。
【００１５】
本明細書で使用する場合、「キット」という用語は、アッセイを実施するために必要とされる試薬及び他の材料の組み合わせに関して使用される。当該キットは、少なくとも１つの抗ヒトＣＧＲＰ抗体、好ましくは本発明のＣＡ１１抗体を含むことが企図される。より好ましくは、当該キットは、本発明の抗体Ｉまたは抗体ＩＩのいずれかも含む。「キット」という用語が、試薬及び／または他の材料の特定の組み合わせに限定されるべきであるとは企図されていない。本明細書で使用する場合、「サンドイッチ免疫測定法」または「サンドイッチ測定法」という用語は、各々が抗原または抗原の部分に指向される一対の抗体（例えば、抗体「Ａ」及び抗体「Ｂ」）を用いて抗原を検出するためのアッセイを指す。例としての当該対の抗体について、抗体「Ａ」は、レポーター分子（例えば、電気化学発光を可能にする分子または蛍光を可能にする分子）に共有結合または非共有結合のいずれかで標識される。抗体「Ａ」の非共有結合性標識の例は、抗体「Ａ」に対する二次標識抗体を抗体「Ａ」へ結合させることであろう。抗体「Ｂ」は、アッセイプレート、ビーズ、磁石または電極のような固体支持体へ直接付着する（または間接的に付着させられる）。サンドイッチ免疫測定法に適した検出技術は、電気化学発光、化学発光、及び蛍光発生性化学発光を含む。
【００１６】
「競合アッセイ」は、抗体へ結合するために、標識した分析物と競合する、試料中の非標識分析物を指す。結合していない分析物を洗い流した後、標識した分析物の量を測定する。
【００１７】
「接触すること」という用語は、抗体が抗原と相互作用し、または抗原へ結合するような様式に、抗体と抗原を含有する材料とを互いにもたらすことを指す。「検出する」または「検出すること」という用語は、試料中の分析物の存在（ｐｒｅｓｅｎｃｅ）または存在（ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ）を、非標識抗体または標識抗体を用いて特定することを指す。
【００１８】
本発明の抗体は、モノクローナル抗体（「ｍＡｂ」）である。モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ技術、組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、例えばＣＤＲ移植、または当該技術分野で既知のこのような技術もしくは他の技術の組み合わせによって産生することができる。本発明の別の実施形態において、当該抗体または当該抗体をコードする核酸が、単離された形態で提供される。本明細書で使用する場合、「単離された」という用語は、天然では見出されない、及び細胞環境において見出される他の巨大分子種を含まないまたは実質的に含まない、タンパク質、ペプチドまたは核酸を指す。「実質的に含まない」は、本明細書で使用する場合、関心対象のタンパク質、ペプチドまたは核酸が、存在する巨大分子種の８０％超（モルベース）、好ましくは９０％超、より好ましくは９５％超を含むことを意味する。
【００１９】
本明細書で使用する場合、「患者」という用語は、ヒト対象を指す。「試料」または患者試料という用語は、相互交換可能に使用され、本明細書において使用されるとき、患者から得られた試料を指す。当該試料は、何らかの生物学的な組織、細胞または流体であり得る。このような試料は、血漿（及びＥＤＴＡ血漿またはヘパリン血漿）、血清、脳脊髄液、または滑液を含む。
【実施例】
【００２０】
抗体の発現及び精製
ＣＧＲＰ反応性抗体ＣＡ１１をＨＥＫ２９３細胞において一過性に発現させる。当該抗体は、マウスＩｇＧ１／カッパであり、プロテインＧを用いて精製した。簡潔には、ｍＩｇＧ１  ＣＡ１１のＬＣベクター及びＨＣベクターをトランスフェクトした細胞由来の２ＬのＨＥＫ２９３上清を、トランスフェクションの５日後に回収し、低温室において５ｍＬのプロテインＧカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅカタログ番号１７−０４０５−０３）へと２ｍＬ／分で一晩負荷する。翌日、プロテインＧカラムを５カラム容積のＰＢＳ（ｐＨ７．４）を用いて、５ｍＬ／分で洗浄する。結合したＣＡ１１抗体をプロテインＧカラムから５ｍＬ／分で、１０ｍＭクエン酸（ｐＨ約３）を用いて溶出し、１／１０容積の１Ｍトリス（ｐＨ８）を用いて即時中和する。ＣＡ１１抗体をＰＢＳ（ｐＨ７．４）へと緩衝液交換し、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ遠心分離濃縮装置において１．７ｍｇ／ｍＬまで濃縮する。当該抗体の純度を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びサイズ排除クロマトグラフィーを用いて評価する。Ｎ末端配列決定及びＭＡＬＤＩ−ＴＯＦを使用して、ＣＡ１１抗体の同一性をさらに確認する。ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）結合を実施して、ＣＧＲＰペプチドに対するＣＡ１１抗体の結合親和性を決定する。例示された抗体の配列を表１に提供する。
【表１】
2019501152.tif 000002
【００２１】
ＣＧＲＰ  Ｆａｂ結合ＥＬＩＳＡ
ＥＬＩＳＡ系アッセイを用いて、ＣＡ１１分子及び親（「Ｃ１ＷＴ」）Ｆａｂ分子の相対的な親和性を測定する。簡潔には、９６ウェルプレートを、ＰＢＳ７．４中のヤギ抗ヒトカッパ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈカタログ番号２０６０−０１）を含有する１μｇ／ｍＬ溶液を５０μＬ／ウェルで、４℃で一晩入れることによってコーティングする。インキュベーション後、プレートを２００μＬ／ウェルのカゼイン／ＰＢＳ溶液（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号３７５２８）を用いて室温で１時間ブロッキングする。プレートを、０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−２０（ＰＢＳ−Ｔ）含有ＰＢＳを用いて３回洗浄する。５０μＬの各Ｆａｂを２μｇ／ｍＬの濃度に対して標準化し、プレート上で分離カラムへ添加し、３７℃で１時間インキュベートする。このプレートをＰＢＳ−Ｔを用いて３回洗浄した後、５０μＬのＮ末端ビオチン標識ヒトＣＧＲＰ（Ａｂｇｅｎｔ  Ｃｕｓｔｏｍ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅカタログ番号３５５０６１５３２）とともにインキュベートする。２０ｎＭで出発して、Ｎ末端ビオチン標識ＣＧＲＰペプチドの３倍連続希釈液を、この捕捉したＦａｂへ添加し、３７℃で１時間インキュベートする。このプレートをＰＢＳ−Ｔを用いて３回洗浄する。この捕捉したＦａｂからのヒトＣＧＲＰペプチドの解離を容易にするために、ＰＢＳ−Ｔをさらに２００μＬ、各ウェルへ添加し、３７℃で２時間インキュベートする。このプレートを洗浄し、ＰＢＳ−Ｔ中に１：１０００希釈した５０μＬのアルカリホスファターゼ結合ニュートラアビジン（Ｐｉｅｒｃｅカタログ番号３１００２）を添加し、このプレートを３７℃で１時間インキュベートする。このプレートを洗浄し、水中に２５倍希釈した５０μＬのアルカリホスファターゼ基質を添加する。比色法による顕色後、このプレートを、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＶＭａｘ  Ｋｉｎｅｔｉｃ  ＥＬＩＳＡ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒを用いて読み取り、５６０ｎｍでの吸光度をヒトＣＧＲＰ濃度の関数として記録し、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）Ｅｘｃｅｌを用いてプロットする。
【表２】
2019501152.tif 000003
【００２２】
表２に示すデータは、ＣＡ１１がＣＧＲＰに結合することを実証している。
【００２３】
高感度ＣＧＲＰ  ＭＳＤ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標））ＥＬＩＳＡ
Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）（ＭＳＤ）アッセイを用いて、ヒトＣＧＲＰを検出する上でのＣＡ１１抗体の能力を決定する。プレートを、１５０μＬ／ウェルの３％ブロッキング溶液Ａ／ＰＢＳを入れることによってブロッキングし、室温で６０分間、６５０ｒｐｍで回転させながらインキュベートする。プレートをＰＢＳ−Ｔを用いて３回洗浄し、希釈したビオチン標識抗ＣＧＲＰ抗体（抗体Ｉ、０．１％のブロッキング溶液Ａ／ＰＢＳ中の０．１μｇ／ｍＬ）をストレプトアビジンプレートのウェルへと入れる。プレートを室温で１時間、回転させながらインキュベートする（６５０ｒｐｍ）。
【００２４】
プレートを洗浄し、２５μｌのヒト健常ドナー血清試料、ヘパリン血漿試料、脳脊髄液試料、または滑液試料（または標準物質アルファ−ＣＧＲＰ（Ｂａｃｈｅｍ））をウェルへ添加し、室温で回転させながら２時間インキュベートする。プレートを洗浄し、２５μＬのＳｕｌｆｏ−Ｔａｇ標識抗ＣＧＲＰ（ＣＡ１１）（０．５μｇ／ｍＬ）を添加し、プレートを室温で１時間、回転させながらインキュベートする。プレートを洗浄し、１５０ｕＬ／ウェルの２Ｘ  ＭＳＤ  Ｒｅａｄ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｔを各ウェルに添加する。プレートをＭＳＤ機で読み取り、未知数をＭＳＤ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェアまたは等価物に関してｌｏｇ−ｌｏｇ４−５ＰＬ適合を用いて算出する。ヒトドナー試料由来のＣＧＲＰ濃度を表２に要約する。
【００２５】
各マトリックスにおける添加及び回収を測定するために、異なる濃度のＣＧＲＰ標準物質をヒトＥＤＴＡ血漿、ヘパリン血漿、血清、脳脊髄液、または滑液へと添加する。各マトリックスにおけるＣＧＲＰの回収を表３に要約する。
【表３】
2019501152.tif 000004
【００２６】
表２におけるデータは、ＣＡ１１抗体を用いたＣＧＲＰ  ＭＳＤアッセイが、健常ドナーにおけるＣＧＲＰを検出したことを実証している。
【表４】
2019501152.tif 000005
【００２７】
表３におけるデータは、ＣＡ１１抗体を用いたＣＧＲＰ  ＭＳＤアッセイが、ヒトＥＤＴＡ血漿、血清、ヘパリン、脳脊髄液、及び滑液におけるＣＧＲＰを検出したことを実証している。
【００２８】
Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ（商標）Ｓｉｍｏａ（商標）アッセイ
ビーズ（０．５ｍｇ／ｍｌ）をＱｕａｎｔｅｒｉｘ（商標）プロトコルによって抗体ＩＩへ結合させる。１０ｍｌのビーズ溶液（５００万個／ｍＬ）、１０ｍＬのビオチン化ＣＡ１１抗体溶液（０．１μｇ／ｍＬ）、及び１０ｍＬのストレプトアビジン−ベータ−ガラクトシダーゼ溶液（ＳＢＧ、１５０ｐＭ）を調製し、個別の１５ｍＬボトルへと移す。ビーズ、ＣＡ１１抗体、較正物質、ＳＢＧ、及び供給されたレゾルフィン−ベータ−ＤガラクトピラノシドＲＧＰ試薬を、Ｓｉｍｏａ（商標）ＨＤ−１  Ａｎａｌｙｚｅｒ  Ｕｓｅｒ  Ｇｕｉｄｅにより当該機器へとロードする。試行を、Ｓｉｍｏａ（商標）ＨＤ−１  Ａｎａｌｙｚｅｒ  Ｕｓｅｒ  ＧｕｉｄｅのＨｏｍｅｂｒｅｗの章により、当該機器において開始し及び実行する。結合データを表４に示す。
【００２９】
ＣＡ１１抗体を用いたＱｕａｎｔｅｒｉｘ（商標）アッセイにおける添加及び回収を測定するために、ＣＧＲＰをヒト血漿へと添加する。ＣＧＲＰ添加後の回収の百分率を表５に要約する。
【００３０】
ＣＡ１１抗体を用いたＣＧＲＰ  Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ（商標）アッセイの感度を判定するために、健常ドナー血漿におけるＣＧＲＰレベルを検出する。健常ドナー血漿から検出されたＣＧＲＰの濃度を表６に示す。
【表５】
2019501152.tif 000006
【００３１】
表４におけるデータは、ＣＡ１１抗体を用いるＣＧＲＰ  Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ（商標）アッセイが、０．０２ｐｇ／ｍｌと同じくらい低い血漿中のヒトＣＧＲＰを検出したことを実証している。
【表６】
2019501152.tif 000007
【００３２】
表５におけるデータは、ＣＡ１１抗体を用いたＣＧＲＰ  Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ（商標）アッセイが、７７％〜９９％の範囲の回収百分率で、ＥＤＴＡ血漿に添加したＣＧＲＰ添加を検出したことを実証している。
【表７】
2019501152.tif 000008
【００３３】
表６におけるデータは、ＣＡ１１抗体を用いたＣＧＲＰ  Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ（商標）アッセイが健常ドナーＥＤＴＡ血漿における約０．９３ｐｇ／ｍＬのＣＧＲＰを、健常ドナーヘパリン血漿における約１．０２ｐｇ／ｍＬのＣＧＲＰを検出したことを実証している。
配列表
配列番号１（ＣＡ１１ＬＣＤＲ１）
ＳＡＳＳＳＩＳＳＩＹＬＨ
配列番号２（ＣＡ１１ＬＣＤＲ２）
ＹＲＡＫＮＬＡＳ
配列番号３（ＣＡ１１ＬＣＤＲ３）
ＱＱＧＳＴＩＰＦＴ
配列番号４（ＣＡ１１ＨＣＤＲ１）
ＫＡＳＧＹＴＦＴＲＳＶＭＨ
配列番号５（ＣＡ１１ＨＣＤＲ２）
ＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧ
配列番号６（ＣＡ１１ＨＣＤＲ３）
ＡＫＳＧＮＤＧＹ
配列番号７（ＣＡ１１ＬＣＶＲ）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＴＴＭＡＡＳＰＧＥＫＩＴＩＴＣＳＡＳＳＳＩＳＳＩＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＦＳＰＫＶＬＩＹＲＡＫＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＧＴＭＥＡＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＧＳＴＩＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号８（ＣＡ１１ＨＣＶＲ）
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＳＶＭＨＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＫＳＧＮＤＧＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号９（ＣＡ１１ＬＣ）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＴＴＭＡＡＳＰＧＥＫＩＴＩＴＣＳＡＳＳＳＩＳＳＩＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＦＳＰＫＶＬＩＹＲＡＫＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＧＴＭＥＡＥＤＶＡＴＹＹＣＱＱＧＳＴＩＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ
配列番号１０（ＣＡ１１ＨＣ）
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＳＶＭＨＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＫＳＧＮＤＧＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ
配列番号１１（ＣＡ１１ＬＣ  ＤＮＡ）
ＧＡＡＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＣＣＡＣＣＡＴＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＡＧＡＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＴＣＣＧＣＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＴＣＡＧＣＴＣＣＡＴＣＴＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＡＧＣＣＣＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＧＧＧＣＣＡＡＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＣＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＧＧＣＡＣＣＡＴＧＧＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡＣＧＴＧＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＧＣＡＣＣＡＴＣＣＣＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＣＧＧＧＣＴＧＡＴＧＣＧＧＣＧＣＣＣＡＣＴＧＴＡＴＣＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＡＧＣＡＧＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＣＣＴＣＡＧＴＣＧＴＧＴＧＣＴＴＣＴＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＴＧＴＣＡＡＧＴＧＧＡＡＧＡＴＴＧＡＴＧＧＣＡＧＴＧＡＡＣＧＡＣＡＡＡＡＴＧＧＣＧＴＣＣＴＧＡＡＣＡＧＴＴＧＧＡＣＴＧＡＴＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＡＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＡＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＣＡＣＧＴＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＣＧＡＧＴＡＴＧＡＡＣＧＡＣＡＴＡＡＣＡＧＣＴＡＴＡＣＣＴＧＴＧＡＧＧＣＣＡＣＴＣＡＣＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＴＴＧＴＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＡＡＴＧＡＧＴＧＴ
配列番号１２（ＣＡ１１ＨＣ  ＤＮＡ）
ＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＡＴＧＡＧＣＴＧＴＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＧＧＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＣＡＴＣＡＡＣＣＣＣＴＡＣＡＡＣＧＡＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＡＧＧＡＴＡＧＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＡＧＴＣＧＧＧＣＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＡＧＣＧＣＣＡＡＡＡＣＧＡＣＡＣＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＡＴＣＣＧＣＴＡＧＣＣＣＣＴＧＧＡＴＣＴＧＣＣＧＣＣＣＡＧＡＣＣＡＡＣＡＧＣＡＴＧＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＡＣＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＡＣＣＴＧＧＡＡＣＡＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＴＣＴＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＡＴＴＣＣＣＴＧＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＡＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＣＡＴＧＧＣＣＴＡＧＣＧＡＧＡＣＣＧＴＧＡＣＡＴＧＣＡＡＣＧＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＣＴＴＣＴＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＴＧＣＣＣＡＧＡＧＡＣＴＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＧＣＣＴＴＧＣＡＴＣＴＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＣＡＡＧＣＣＣＡＡＧＧＡＣＧＴＧＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＣＣＣＡＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＴＧＴＴＧＴＧＧＴＡＧＡＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＡＴＧＡＴＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＴＧＴＡＧＡＴＧＡＴＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＣＡＧＣＴＣＡＧＡＣＧＣＡＡＣＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＴＴＴＣＣＧＣＴＣＡＧＴＣＡＧＴＧＡＡＣＴＴＣＣＣＡＴＣＡＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＣＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＴＣＡＡＡＴＧＣＡＧＧＧＴＣＡＡＣＡＧＴＧＣＡＧＣＴＴＴＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＡＡＡＧＧＣＡＧＡＣＣＧＡＡＧＧＣＴＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＡＴＴＣＣＡＣＣＴＣＣＣＡＡＧＧＡＧＣＡＧＡＴＧＧＣＣＡＡＧＧＡＴＡＡＡＧＴＣＡＧＴＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＴＧＡＴＡＡＣＡＧＡＣＴＴＣＴＴＣＣＣＴＧＡＡＧＡＣＡＴＴＡＣＴＧＴＧＧＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＡＧＣＧＧＡＧＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣＡＣＴＣＡＧＣＣＣＡＴＣＡＴＧＧＡＣＡＣＡＧＡＴＧＧＣＴＣＴＴＡＣＴＴＣＧＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＡＴＧＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＣＴＧＧＧＡＧＧＣＡＧＧＡＡＡＴＡＣＴＴＴＣＡＣＣＴＧＣＴＣＴＧＴＧＴＴＡＣＡＴＧＡＧＧＧＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＣＡＴＡＣＴＧＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＡＣＴＣＴＣＣＴＧＧＴＡＡＡ
配列番号１３（抗体Ｉ  ＬＣＤＲ１）
ＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮ
配列番号１４（抗体Ｉ  ＬＣＤＲ２）
ＹＴＳＥＹＨＳ
配列番号１５（抗体Ｉ  ＬＣＤＲ３）
ＱＱＧＤＡＬＰＰＴ
配列番号１６（抗体Ｉ  ＨＣＤＲ１）
ＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱ
配列番号１７（抗体Ｉ  ＨＣＤＲ２）
ＡＩＹＥＧＴＧＤＴＲＹＩＱＫＦＡＧ
配列番号１８（抗体Ｉ  ＨＣＤＲ３）
ＬＳＤＹＶＳＧＦＳＹ
配列番号１９（抗体ＩＩ  ＬＣＤＲ１）
ＲＡＳＫＤＩＳＫＹＬＮ
配列番号２０（抗体ＩＩ  ＬＣＤＲ２）
ＹＴＳＧＹＨＳ
配列番号２１（抗体ＩＩ  ＬＣＤＲ３）
ＱＱＧＤＡＬＰＰＴ
配列番号２２（抗体ＩＩ  ＨＣＤＲ１）
ＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱ
配列番号２３（抗体ＩＩ  ＨＣＤＲ２）
ＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＤ
配列番号２４（抗体ＩＩ  ＨＣＤＲ３）
ＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹ
配列番号２５（抗体Ｉ  ＬＣ）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＤＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＥＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２６（抗体Ｉ  ＨＣ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＤＴＲＹＩＱＫＦＡＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＳＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
配列番号２７（抗体ＩＩ  ＬＣ）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＫＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＧＹＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＤＡＬＰＰＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２８（抗体ＩＩ  ＨＣ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＧＮＹＷＭＱＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＩＹＥＧＴＧＫＴＶＹＩＱＫＦＡＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＳＤＹＶＳＧＦＧＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ
【配列表】
2019501152000001.app
【国際調査報告】
2019501152.tif 000009
2019501152.tif 000010
2019501152.tif 000011
2019501152.tif 000012
2019501152.tif 000013