(57)【要約】  【解決手段】  本明細書においては、未成熟終止コドン（ＰＴＣ）を擁するメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）のＰＴＣリードスルーの促進により、個体において免疫反応を引き起こし、かつ／または、（増殖性などの）異常細胞の表面上のネオアンチゲンの発現を誘発するための組成物及び方法が、特に提供される。  【選択図】      図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする個体において免疫反応を引き起こす方法であって、未成熟終止コドンの発生をもたらすフレームシフト変異を有するｍＲＮＡにおいて、未成熟終止コドンのリードスルーを促進する一定量の化合物を前記個体に投与する工程を有し、前記量は前記ｍＲＮＡのタンパク質への翻訳をもたらすのに十分である、方法。
【請求項２】
異常細胞の表面上に１つまたはそれ以上のネオアンチゲンの発現を誘発する方法であって、未成熟終止コドンの発生をもたらすフレームシフト変異を有するｍＲＮＡにおいて、未成熟終止コドンのリードスルーを促進する化合物を前記細胞に接触させる工程を有し、前記未成熟終止コドンのリードスルーは、前記ｍＲＮＡのタンパク質への翻訳と、前記細胞の表面上の１つまたはそれ以上のネオアンチゲンの発現とをもたらす、方法。
【請求項３】
請求項１または請求項２記載の方法において、前記フレームシフト変異を有するｍＲＮＡから翻訳されるタンパク質は非機能性である、方法。
【請求項４】
請求項１の方法において、前記免疫反応は、免疫細胞による前記ｍＲＮＡの翻訳からの処理タンパク質の認識によって媒介される、方法。
【請求項５】
請求項４の方法において、前記免疫細胞はＴ細胞またはＢ細胞である、方法。
【請求項６】
請求項４の方法において、前記免疫反応はクラスＩまたはクラスＩＩ主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子によって媒介される、方法。
【請求項７】
請求項１または３〜６のいずれか１項記載の方法において、前記免疫反応はＴ細胞によって媒介される、方法。
【請求項８】
請求項１または３〜６のいずれか１項記載の方法において、前記免疫反応はＢ細胞によって媒介される、方法。
【請求項９】
請求項５または請求項７記載の方法において、前記Ｔ細胞は、ガンマデルタＴ細胞、アルファベータＴ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞である、方法。
【請求項１０】
請求項１または３〜６のいずれか１項の方法において、前記免疫反応は炎症反応である、方法。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項記載の方法において、前記ｍＲＮＡは増殖性細胞中に発現する、方法。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項記載の方法において、前記増殖性細胞は癌細胞である、方法。
【請求項１３】
請求項１２記載の方法において、前記癌は、結腸癌、乳癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、メルケル細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽腫、網膜芽細胞種、例えば、急性リンパ性白血病及び急性骨髄性白血病、慢性白血病などの白血病、真性多血症、リンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、並びに重鎖病からなる群から選択される、方法。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項記載の方法であって、さらに、１つまたはそれ以上の免疫チェックポイント分子を阻害する化合物を投与する工程を有する、方法。
【請求項１５】
請求項１４記載の方法において、前記免疫チェックポイント分子は、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、またはＴＩＭ３のうち１つまたはそれ以上である、方法。
【請求項１６】
請求項１５記載の方法において、前記１つまたはそれ以上の免疫チェックポイント分子を阻害する化合物は、アンタゴニスト抗体である、方法。
【請求項１７】
請求項１６記載の方法において、前記アンタゴニスト抗体は、イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、トレメリムマブ、またはアベルマブである、方法。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか１項記載の方法であって、さらに、１つまたはそれ以上のエピジェネティック調節化合物を投与する工程を有する、方法。
【請求項１９】
請求項１８記載の方法において、前記エピジェネティック調節化合物は、ボリノスタット、ロミデプシン、デシタビン、５−アザシチジン、パノビノスタット、及び／またはベリノスタットのうち１つまたはそれ以上である、方法。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか１項記載の方法において、前記化合物は小分子化学化合物である、方法。
【請求項２１】
請求項２０記載の方法において、前記化合物はアタルレンである、方法。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか１項記載の方法において、前記個体は哺乳類である、方法。
【請求項２３】
請求項２２記載の方法において、前記哺乳類はヒトである、方法。
【請求項２４】
それを必要とする個体において免疫反応を引き起こす方法であって、未成熟終止コドンの発生をもたらすナンセンス変異を有するｍＲＮＡにおいて、未成熟終止コドンのリードスルーを促進する一定量の化合物を前記個体に投与する工程を有し、前記量は前記ｍＲＮＡのタンパク質への翻訳をもたらすのに十分である、方法。
【請求項２５】
異常細胞の表面上に１つまたはそれ以上のネオアンチゲンの発現を誘発する方法であって、未成熟終止コドンの発生をもたらすナンセンス変異を有するｍＲＮＡにおいて、未成熟終止コドンのリードスルーを促進する化合物を前記細胞に接触させる工程を有し、未成熟終止コドンのリードスルーは、前記ｍＲＮＡのタンパク質への翻訳と、前記細胞の表面上の１つまたはそれ以上のネオアンチゲンの発現とをもたらす、方法。
【請求項２６】
請求項２４または請求項２５記載の方法において、前記ナンセンス変異を有するｍＲＮＡから翻訳されるタンパク質は腫瘍抑制遺伝子ではない、方法。
【請求項２７】
請求項２４または請求項２５記載の方法において、前記ナンセンス変異を有するｍＲＮＡから翻訳されるタンパク質は、ジストロフィン、アルファ−Ｌ−イズロニダーゼ、及び／または嚢胞性繊維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）タンパク質のうち１つまたはそれ以上ではない、方法。
【請求項２８】
請求項２４記載の方法において、前記免疫反応は、免疫細胞による前記ｍＲＮＡの翻訳からの処理タンパク質の認識によって媒介される、方法。
【請求項２９】
請求項２８記載の方法において、前記免疫細胞はＴ細胞またはＢ細胞である、方法。
【請求項３０】
請求項２８記載の方法において、前記免疫反応はクラスＩまたはクラスＩＩ主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子によって媒介される、方法。
【請求項３１】
請求項２４または２６〜２９のいずれか１項記載の方法において、前記免疫反応はＴ細胞によって媒介される、方法。
【請求項３２】
請求項２４または２６〜２９のいずれか１項記載の方法において、前記免疫反応はＢ細胞によって媒介される、方法。
【請求項３３】
請求項２９または請求項３１記載の方法において、前記Ｔ細胞は、ガンマデルタＴ細胞、アルファベータＴ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞である、方法。
【請求項３４】
請求項２４または２６〜２９のいずれか１項記載の方法において、前記免疫反応は炎症反応である、方法。
【請求項３５】
請求項２４〜３４のいずれか１項記載の方法において、前記ｍＲＮＡは増殖性細胞中に発現する、方法。
【請求項３６】
請求項２４〜３５のいずれか１項記載の方法において、前記増殖性細胞は癌細胞である、方法。
【請求項３７】
請求項３６記載の方法において、前記癌は、結腸癌、乳癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、メルケル細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽腫、網膜芽細胞種、例えば、急性リンパ性白血病及び急性骨髄性白血病、慢性白血病などの白血病、真性多血症、リンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、並びに重鎖病からなる群から選択される、方法。
【請求項３８】
請求項２４〜３７のいずれか１項記載の方法であって、さらに、１つまたはそれ以上の免疫チェックポイント分子を阻害する化合物を投与する工程を有する、方法。
【請求項３９】
請求項３８記載の方法において、前記免疫チェックポイント分子は、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−１、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、またはＴＩＭ３のうち１つまたはそれ以上である、方法。
【請求項４０】
請求項３９記載の方法において、前記１つまたはそれ以上の免疫チェックポイント分子を阻害する化合物は、アンタゴニスト抗体である、方法。
【請求項４１】
請求項４０記載の方法において、前記アンタゴニスト抗体は、イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、トレメリムマブ、またはアベルマブである、方法。
【請求項４２】
請求項２４〜４１のいずれか１項記載の方法であって、さらに、１つまたはそれ以上のエピジェネティック調節化合物を投与する工程を有する、方法。
【請求項４３】
請求項４２記載の方法において、前記エピジェネティック調節化合物は、ボリノスタット、ロミデプシン、デシタビン、５−アザシチジン、パノビノスタット、及び／またはベリノスタットのうち１つまたはそれ以上である、方法。
【請求項４４】
請求項５４〜４３のいずれか１項記載の方法において、前記化合物は小分子化学化合物である、方法。
【請求項４５】
請求項４４記載の方法において、前記化合物はアタルレンである、方法。
【請求項４６】
請求項２４〜４５のいずれか１項記載の方法において、前記個体は哺乳類である、方法。
【請求項４７】
請求項４６記載の方法において、前記哺乳類はヒトである、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２０１５年１２月２３日に出願された米国仮特許出願番号第６２／３８７，５６５号に対する優先権を主張する。その出願の開示は、その全体が、本参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
この発明は、一般に、それらに対する免疫反応を誘発するために、未成熟終止コドン（ＰＴＣ）リードスルーを促進するための組成物及び方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
過去二十年にわたってなされた癌治療薬の開発における進歩にもかかわらず、免疫システムに異常増殖している細胞を攻撃させることに基づく治療は、転移性疾患への進行を含む腫瘍の進行の遅延においては、限定的な成功しか収めていない。この一つの理由は、癌細胞に対する免疫システムによる天然発生性の反応は弱いという事実にある。これは、部分的には、癌細胞が、免疫システムが異物として認識する抗原を一般的には発現しないからである。たいてい、従来型の癌ワクチンは、体中に免疫反応を引き起こすために、腫瘍細胞上に発現される免疫原性が弱い抗原に依存する。しかしながら、最善の癌ワクチンですら、疾患進行を一時的にだけ遅延することにしか効果的でなく、疾患進行を逆行させることができると示されているものは殆どない。
【０００４】
かくして、癌細胞の表面上のネオアンチゲンの発現を誘発させるための改善された組成物及び方法に対し、特に需要がある。そのような新規抗原は、個体において強力な免疫反応をもたらすことができ、その個体の体じゅうの癌細胞の破壊及び排除につながるであろう。
【０００５】
本明細書の至る箇所において、様々な特許、特許出願、及び他の種類の刊行物（例えば、ジャーナル記事、電子データベースエントリー、など）が参照される。本明細書において引用されるすべての特許、特許出願、及び他の刊行物の開示は、その全体があらゆる目的のため本参照により本明細書に組み込まれる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本明細書において提供される発明は、とくに、未成熟終止コドン（ＰＴＣ）リードスルーを促進することにより、個体において免疫反応を引き起こす、かつ／または、異常（増殖性などの）細胞の表面上のネオアンチゲンの発現を誘発するための組成物及び方法を開示する。
【０００７】
従って、いくらかの態様においては、本明細書においては、免疫反応をそれを必要とする個体において引き起こす方法が提供され、その方法は、未成熟終止コドンの発生をもたらすフレームシフト変異を有するｍＲＮＡにおいて未成熟終止コドンのリードスルーを促進するある量の化合物をその個体に投与する工程を有し、その量はそのｍＲＮＡのタンパク質への翻訳をもたらすのに十分である。別の一態様においては、本明細書においては、異常細胞の表面上の１つまたはそれ以上のネオアンチゲンの発現を誘発するための方法が提供され、その方法は、未成熟終止コドンの発生をもたらすフレームシフト変異を有するｍＲＮＡにおいて未成熟終止コドンのリードスルーを促進する化合物をその細胞に接触させる工程を有し、その未成熟終止コドンのリードスルーは、そのｍＲＮＡのタンパク質への翻訳と、その細胞の表面上の１つまたはそれ以上のネオアンチゲンの発現とをもたらす。
【０００８】
本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、そのフレームシフト変異を有するｍＲＮＡから翻訳されるタンパク質は非機能性である。いくらかの実施形態においては、その免疫反応は、そのｍＲＮＡの翻訳からの処理タンパク質の、免疫細胞による認識により媒介される。いくらかの実施形態においては、その免疫細胞はＴ細胞またはＢ細胞である。いくらかの実施形態においては、その免疫反応はクラスＩまたはクラスＩＩ主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子により媒介される。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、その免疫反応はＴ細胞により媒介される。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、その免疫反応はＢ細胞により媒介される。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、そのＴ細胞は、ガンマデルタＴ細胞、アルファベータＴ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞である。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、その免疫反応は炎症反応である。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、そのｍＲＮＡは増殖性細胞中に発現する。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、その増殖性細胞は癌細胞である。いくらかの実施形態においては、その癌は、結腸癌、乳癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、メルケル細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽腫、網膜芽細胞種、例えば、急性リンパ性白血病及び急性骨髄性白血病、慢性白血病などの白血病、真性多血症、リンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、並びに重鎖病かならなる群から選択される。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、その方法は、１つまたはそれ以上の免疫チェックポイント分子を阻害する化合物の投与をさらに有する。いくらかの実施形態においては、その免疫チェックポイント分子は、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、またはＴＩＭ３のうち一つまたはそれより多くである。いくらかの実施形態においては、その１つまたはそれ以上の免疫チェックポイント分子を阻害する化合物は、アンタゴニスト抗体である。いくらかの実施形態においては、そのアンタゴニスト抗体は、イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、トレメリムマブ、またはアベルマブである。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、その方法は、１つまたはそれ以上のエピジェネティック調節化合物の投与をさらに有する。いくらかの実施形態においては、そのエピジェネティック調節化合物は、ボリノスタット、ロミデプシン、デシタビン、５−アザシチジン、パノビノスタット、及び／またはベリノスタットのうち一つまたはそれより多くである。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、その化合物は小分子化学化合物である。いくらかの実施形態においては、その化合物はアタルレンである。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、その個体は哺乳類である。いくらかの実施形態においては、その哺乳類はヒトである。
【０００９】
他の態様においては、本明細書においては、免疫反応をそれを必要とする個体において引き起こす方法が提供され、その方法は、未成熟終止コドンの発生をもたらすナンセンス変異を有するｍＲＮＡにおいて未成熟終止コドンのリードスルーを促進するある量の化合物をその個体に投与する工程を有し、その量はそのｍＲＮＡのタンパク質への翻訳をもたらすのに十分である。さらに別の一態様においては、本明細書においては、異常細胞の表面上の１つまたはそれ以上のネオアンチゲンの発現を誘発するための方法が提供され、その方法は、未成熟終止コドンの発生をもたらすナンセンス変異を有するｍＲＮＡにおいて未成熟終止コドンのリードスルーを促進する化合物を細胞に接触させる工程を有し、その未成熟終止コドンのリードスルーは、そのｍＲＮＡのタンパク質への翻訳と、その細胞の表面上の１つまたはそれ以上のネオアンチゲンの発現とをもたらす。
【００１０】
本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、そのナンセンス変異を有するｍＲＮＡから翻訳されるタンパク質は、腫瘍抑制遺伝子ではない。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、そのナンセンス変異を有するｍＲＮＡから翻訳されるタンパク質は、ジストロフィン、アルファ−Ｌ−イズロニダーゼ、及び／または嚢胞性繊維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）タンパク質のうち一つまたはそれより多くではない。いくらかの実施形態においては、その免疫反応は、そのｍＲＮＡの翻訳からの処理タンパク質の、免疫細胞による認識により媒介される。いくらかの実施形態においては、その免疫細胞はＴ細胞またはＢ細胞である。いくらかの実施形態においては、その免疫反応はクラスＩまたはクラスＩＩ主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子により媒介される。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、その免疫反応はＴ細胞により媒介される。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、その免疫反応はＢ細胞により媒介される。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、そのＴ細胞は、ガンマデルタＴ細胞、アルファベータＴ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞である。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、その免疫反応は炎症反応である。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、そのｍＲＮＡは増殖性細胞中に発現する。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、その増殖性細胞は癌細胞である。いくらかの実施形態においては、その癌は、結腸癌、乳癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、メルケル細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽腫、網膜芽細胞種、例えば、急性リンパ性白血病及び急性骨髄性白血病、慢性白血病などの白血病、真性多血症、リンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、並びに重鎖病かならなる群から選択される。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、その方法は、１つまたはそれ以上の免疫チェックポイント分子を阻害する化合物の投与をさらに有する。いくらかの実施形態においては、その免疫チェックポイント分子は、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、またはＴＩＭ３のうち１つまたはそれ以上である。いくらかの実施形態においては、その１つまたはそれ以上の免疫チェックポイント分子を阻害する化合物は、アンタゴニスト抗体である。いくらかの実施形態においては、そのアンタゴニスト抗体は、イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、トレメリムマブ、またはアベルマブである。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、その方法は、１つまたはそれ以上のエピジェネティック調節化合物の投与をさらに有する。いくらかの実施形態においては、そのエピジェネティック調節化合物は、ボリノスタット、ロミデプシン、デシタビン、５−アザシチジン、パノビノスタット、及び／またはベリノスタットのうち１つまたはそれ以上である。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、その化合物は小分子化学化合物である。いくらかの実施形態においては、その化合物はアタルレンである。本明細書において開示されるあらゆる実施形態のいくらかの実施形態においては、その個体は哺乳類である。いくらかの実施形態においては、その哺乳類はヒトである。
【００１１】
本明細書において開示される態様及び実施形態のそれぞれは、その実施形態または態様の文脈から明確にあるいは明白に除外されない限り、一緒に使用されることが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、ＰＴＣ１２４（アタルレン）投与の腫瘍体積（ｍｍ３）に対する効果を比較するグラフを描写する。
【図２】図２は、ＰＴＣ１２４（アタルレン）及び／または抗ＣＴＬＡ−４投与の腫瘍体積（ｍｍ３）に対する効果を比較するグラフを描写する。
【図３】図３は、ＰＴＣ１２４（アタルレン）及び／または抗ＰＤ−１投与の腫瘍体積（ｍｍ３）に対する効果を比較するグラフを描写する。
【図４】図４は、治療後の免疫細胞浸潤を示す腫瘍切片の顕微鏡写真の図を描写する。
【図５】図５は、ＰＴＣ１２４（アタルレン）での治療後の腫瘍内Ｔ細胞浸潤についてのＦＡＣＳ解析の結果を示すバーグラフを描写する。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
癌免疫治療のためのチェックポイント遮断の有効性に対する主な障害は、膨大な免疫エディティングを経た後期癌により発現される有力な腫瘍ネオアンチゲンの欠乏に関する。この免疫エディティングのプロセスは、腫瘍のライフサイクルの初期に起こり、免疫原性のあるまたは強力な腫瘍特異的抗原を発現しゆえに細胞傷害性Ｔ細胞により標的とされた腫瘍細胞の集団の欠落をもたらす。成熟腫瘍は、従って、主に、弱い腫瘍抗原のみの発現などの複数の免疫回避戦略を展開し、ゆえに細胞傷害性Ｔ細胞により効果的には標的とされにくい腫瘍細胞からなる。癌における免疫治療モダリティーとしてのチェックポイント遮断の最近の成功にもかかわらず、これらの薬の有効性は、強力な腫瘍ネオアンチゲンの利用可能性と非常によく相関する。とりわけ、これらの薬が最も効果的である腫瘍は、黒色腫、及び非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）などの、最大の変異搭載量を有する腫瘍である。黒色腫、及び非小細胞肺癌は、ともに、それぞれ、ＵＶ損傷及び喫煙の、強力な環境誘発性変異シグナチャーを擁する。
【００１４】
免疫治療における進歩とならぶ腫瘍ワクチン開発における努力は、腫瘍試料に対し実施されるＲＮＡｓｅｑ／エクソームシークエンシングが変異転写物を同定し、その転写物はそれから強力なネオアンチゲンとしてはたらくことができるかの能力に対して選択され、それからワクチン開発のベースとして使用される現在のアプローチをもたらした。これらの変異検出方法の特性ゆえ、検出されるｍＲＮＡ種の圧倒的多数が、ヌクレオチド転移及び転換により引き起こされ、サイレント置換または一アミノ酸置換のいずれかをもたらした、コード配列中にミスセンス変異を含有するものである。これらのタンパク質はネオアンチゲンとしてはたらく能力はあるが、一つよりも多いアミノ酸相違を有する変異ｍＲＮＡ種を同定するのが、ずっと好ましいであろう。その変異ｍＲＮＡ種は、よりずっと強力なネオアンチゲンとしてはたらきうる。
【００１５】
強力な腫瘍ネオアンチゲンを生じるより望ましい腫瘍ｍＲＮＡプールは、未成熟終止コドン（ＰＴＣ）を含有するものであろう。これらのｍＲＮＡ種は、挿入、欠失、ナンセンス変異、及び不終止（終止が遅延する）変異などのはるかにより有害な変異を含有する。しかしながら、皮肉なことに、これらの同じＰＴＣ含有性種は非常に不安定であり、かつナンセンス依存性分解（ＮＭＤ）経路により迅速に分解される。従ってそれらの種は、一般に、その非常に少量しか存在しないまたは完全に存在しないためＲＮＡ配列中では検出不可能であり、またタンパク質に翻訳されるとしても稀である。ＰＣＴ含有性ｍＲＮＡは、リーディングフレームにけるシフト及び／または代わりの終止コドンの使用ゆえに、野生型配列とは異なる多くのアミノ酸をコードする可能性を有する。タンパク質がＰＣＴ含有性ｍＲＮＡ種から転写されうるならば、そのタンパク質は、非常に異なる配列を有するタンパク質をコードしうるため、極めて強力な腫瘍ネオアンチゲンの供給源であることを意味するであろう。腫瘍においてＰＣＴリードスルーを促進することを目的とする治療アプローチは、ＰＣＴ含有性転写物が翻訳され、強いネオアンチゲンがｉｎ  ｖｉｖｏで発現されることを許容する。
【００１６】
従って、この発明は、とくに、未成熟終止コドン（ＰＴＣ）を擁する１つまたはそれ以上のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子を発現する細胞を有する個体において、それらの細胞の表面上の１つまたはそれ以上のネオアンチゲンの発現を誘発することにより、免疫反応を引き起こすための、方法及び組成物を提供する。本発明は、部分的には、ＰＴＣリードスルー促進剤が、「リードスルー」、及びそれに続く、対応する野生型タンパク質とは異なる、時には顕著に異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドへの、ＰＴＣを擁するｍＲＮＡの翻訳をもたらすという発明者の発見に基づく。理論には拘束されないが、これらのペプチドのタンパク質分解及び腫瘍組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子による細胞表面上の提示は、例えばＴ細胞などの免疫システムの構成成分による攻撃のための非常に抗原性の高い標的をもたらしうる。本発明は、迅速に分裂する細胞の超可変的性質ゆえ、癌などの過剰増殖細胞により特徴描写される疾患の治療に対し、とくに有用性を有する。癌細胞は、免疫システムによる検出を、部分的にはその表面上に抗原性が弱いまたは非抗原性ペプチドのみを提示することにより、回避する。従って、一実施形態においては、本明細書において開示される組成物及び方法は、癌細胞の表面上にネオアンチゲンの発現を誘発し、それにより免疫システムによる攻撃に脆弱にさせる、効果的な方法を提示する。
Ｉ．一般的な技法
【００１７】
本発明の実施は、別に示されない限り、当業者に周知である、分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学、核酸化学、及び免疫学の従来型の技法を利用する。そのような技法は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｆｏｕｒｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｔｈｉｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌ，２００１），（本明細書においては合わせて「Ｓａｍｂｒｏｏｋ」と呼ばれる）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７，２０１４までの補足を含む）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  ＮＹ（Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ，ｅｄ．，２０１４），Ｂｅａｕｃａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ&Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２０００，（２０１４までの補足を含む）、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｍａｋｒｉｄｅｓ，ｅｄ．，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｂ．Ｖ．，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，２００３）、及びＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｈｏｒｇａｎ  Ｋ  ａｎｄ  Ｓ．Ｓｈａｗ（１９９４）（２０１４までの補足を含む）などの文献に完全に説明される。
ＩＩ．定義
【００１８】
本明細書において開示される「未成熟終止コドン」（ＰＴＣ）または「未成熟ストップコドン」は、変異の結果生じる（内因性終止コドンの前の）ｍＲＮＡ中へのストップコドンの導入を指す。
【００１９】
本明細書において使用される「ナンセンス変異」は、転写ｍＲＮＡにおけるＰＴＣもしくはナンセンスコドンを、及び短縮され不完全で通常は非機能性のタンパク質産物をもたらす、ＤＮＡの配列における点変異である。ナンセンス変異は、さまざまな疾患、とくに遺伝的に受け継がれる疾患の基礎となりうる、遺伝子変異である。例えば癌においては、ナンセンス変異は一般に、獲得性であり、あるいは腫瘍における体細胞変異である。いくらかの実施形態においては、そのナンセンス変異は体細胞変異である。別の一実施形態においては、そのナンセンス変異は生殖細胞変異ではない。
【００２０】
「不終止」は、ｍＲＮＡの、３'非翻訳領域への継続的及び不適切翻訳をもたらす、内因性終止コドン中の点変異である。不終止変異は、変則的なアミノ酸配列の導入、及び下流の終止コドンの利用をもたらす。いくらかの実施形態においては、不終止変異は、体細胞変異である。別の一実施形態においては、その不終止変異は生殖細胞変異ではない。
【００２１】
「フレームシフト変異」は、オープンリーディングフレーム内の１つまたはそれ以上のヌクレオチドの欠失または挿入を指す。例えば、コーディング領域のリーディングフレームがヌクレオチド一つまたは二つぶんシフトする、単一ヌクレオチドまたはジヌクレオチドの欠失または挿入である。従って、フレームシフト変異を擁するｍＲＮＡから翻訳されるポリペプチドのアミノ酸配列は、対応する野生型配列とは非常に異なる。いくらかの実施形態においては、フレームシフト変異はＰＴＣを産生する。いくらかの実施形態においては、フレームシフト変異は、ａ＋１または＋２フレームシフト変異をもたらす、ヌクレオチドまたはジヌクレオチド欠失である。しかしながら、フレームシフト変異が起こるならば、あらゆる数のヌクレオチド欠失が起こりうる。あるいは、１つまたはそれ以上のヌクレオチドの挿入がフレームシフトを生じさせるかもしれず、そのような変異もまた本発明の一部を形成する。フレームシフトを生じさせる他の遺伝的改変もまた、本発明の一部を形成する。その改変は、エクソンスキップもたくはイントロン配列保持をもたらすスプライス部位の変異、あるいは、異なる位置からの翻訳開始またはイントロンもしくは５'もしくは３'非翻訳領域内などのコーディング領域外の変異をもたらすヌクレオチド配列の変化などである。その変異は、翻訳の誤り、及び変異タンパク質の産生をもたらしうる。この種類の遺伝子変異においては、変異タンパク質は、完全に変異型のアミノ酸配列であろうし、また野生型配列を含有しないであろう。いくらかの実施形態においては、フレームシフト変異は、未成熟終止コドン（ｍＲＮＡ中の早くに起こる場合）、あるいは、遅延終止コドン（内因性終止コドンの近くで起こる場合）をもたらしうる。いくらかの実施形態においては、そのフレームシフト変異は体細胞変異である。別の一実施形態においては、そのフレームシフト変異は生殖細胞変異ではない。
【００２２】
本明細書において使用される「非機能的」ポリペプチドは、１つまたはそれ以上の変異ゆえに、対応する非変異（野生型）ポリペプチドと比べて、細胞の文脈において機能を果たすことができないポリペプチドを指す。「機能的」ポリペプチドは、１つまたはそれ以上の変異アミノ酸を有するかもしれないが、対応する非変異（野生型）ポリペプチドと比べて、少なくともある程度は細胞機能を果たしうるポリペプチドである。
【００２３】
本明細書において使用される「リードスルー」は、リボソーム翻訳において未成熟終止コドンをスキップし、またはアミノ酸を置換し、または未成熟終止コドンを有するｍＲＮＡの分解を抑制することを意味する。
【００２４】
本明細書において使用される「ポリペプチド」は、タンパク質、ペプチド、ポリペプチドの断片、及び融合ポリペプチドを含む。
【００２５】
用語「患者」または「個体」は、本明細書においては互換的に使用され、治療されることになる対象者を意味する。いくらかの実施形態においては、個体は哺乳類である。他の実施形態においては、哺乳類はヒトである。いくらかの場合においては、本発明の方法は、実験動物において、獣医学的適用において、並びに、マウス、ラット、及びハムスターを含む齧歯類、並びに霊長類を含むがこれらに限定されない、疾患のための動物モデルの開発において、用いられる。
【００２６】
「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「〜を含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「〜により特徴付けられる（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ  ｂｙ）」と同意義である転換語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」は、包括的または開放型であり、追加の列挙されていない要素または方法ステップを除外しない。これに対し、転換語「〜を有する（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」は、特許請求の範囲において特定されないあらゆる要素、ステップ、または成分を除外する。転換語「実質的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」は、特許請求の範囲の範囲を、その特定される材料またはステップ、及び特許請求の範囲に係る発明の「基本的及び新規特徴に実質的には影響しないもの」に限定する。
【００２７】
本明細書において使用されるすべての技術的及び科学的用語は、本明細書において別に定義されない限り、この発明が関連する技術分野の当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
【００２８】
本明細書においては、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに別に示さない限り、その複数形の参照対象を含む。
ＩＩＩ．  組成物
【００２９】
未成熟終止コドン（ＰＴＣ）変異は、塩基置換またはフレームシフト変異が、センスコドンを三つの終止コドン（ＵＡＡ、ＵＡＧ、またはＵＧＡ）のうちの一つへと変化させる変異である。酵母、ヒト遺伝疾患、及びイムノグロブリンファミリー遺伝子発現の研究が、そのような鎖終止変異を含有するナンセンスＲＮＡの、翻訳を最小限にし、かつＲＮＡ安定性を調節する、ｍＲＮＡ監視メカニズムを同定した。この監視メカニズムは、「ナンセンス依存性分解」（「ＮＭＤ」）と呼ばれる。例えば、Ｈｅｎｔｚｅ&Ｋｕｌｏｚｉｋ，Ｃｅｌｌ  ９６：３０７−３１０（１９９９）；Ｃｕｌｂｅｒｔｓｏｎ，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：７４−８０（１９９９）；及びＬｉ&Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ８：１３５−１４１（１９９８）を参照。ＮＭＤは、正常細胞（例えばＢ、及びＴ細胞）と遺伝子変異を有する細胞（つまり、細胞増殖を制御する遺伝子に変異を有する細胞）との両者において作動可能である、転写後メカニズムである。
【００３０】
異常な転写産物を検出するプロセスは、ｍＲＮＡの翻訳の間に起こる。哺乳類における異常転写産物の検出のための一般的なモデルは、翻訳の第一ラウンドの間に、リボソームが、スプライシングが起こった後にｍＲＮＡに結合しているエクソン−エクソン接合複合体を除去することを提唱する。この翻訳の第一ラウンドの後にこれらのタンパク質いずれかがｍＲＮＡに結合したままであれば、ＮＭＤが活性化される。ＰＴＣの下流に位置するエクソン−エクソン接合複合体は、リボソームが複合体に到達する前に放出されるため、転写産物からは除去されない。翻訳の停止は、ＵＰＦ１、ＳＭＧ１、並びに放出因子ｅＲＦ１及びｅＲＦ２からなる複合体の、ｍＲＮＡ上での集合をもたらす。転写産物がＰＴＣを含有するためにエクソン接合複合体（ＥＪＣ）がｍＲＮＡ上に残されたら、ＵＰＦ１がＵＰＦ２及びＵＰＦ３と接触し、ＵＰＦ１のリン酸化を引き起こす。
【００３１】
従って、理論には拘束されることなく、また本発明の一態様においては、ＰＴＣを擁するｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳を誘発するために、ＰＴＣのリードスルーを促進する化合物が提供され、ゆえにリボソームによる最初のラウンドの間のｍＲＮＡに結合するすべてのＥＪＣの除去を確実にする。
Ａ．  ＰＴＣリードスルーを促進する化合物
【００３２】
ＰＴＣを擁するｍＲＮＡのリードスルーを促進することが可能であるあらゆる化合物が、本発明における使用のために適切である。今日まで、哺乳類細胞中で活性がある最もよく報告されるＰＴＣリードスルー化合物は、抗生剤のアミノグリコシドクラスに属してきた。一定の種類のアミノグリコシドは、ｎｅａｒ  ｃｏｇｎａｔｅトラスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）によるランダムなアミノ酸の挿入により、リボソームにＰＴＣ変異をリードスルーするように誘発しうる。アミノグリコシドの治療的可能性は、研究室において、嚢胞性繊維症（例えば、Ｄｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８０．５９５−６０４を参照）、筋萎縮症（例えば、Ｌｏｕｆａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｅ．Ｂｉｏｌ．２４：６７１−６７６を参照）、ハーラー症候群（Ｋｅｅｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．１０：２９１−２９９）、シスチン症（Ｈｅｌｉｐ−Ｗｏｏｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ  Ｍｅｔａｂ．７５：１２８−１３３）、脊髄性筋萎縮症（Ｓｏｓｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．９：１  １３−１２０）、毛細血管拡張性運動失調症（Ｌａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０１：１５６７６−１５６８１）、及び１型アッシャー症候群（Ｒｅｂｉｂｏ−Ｓａｂｂａｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００７．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１２２：３７３−３８１）などの異なる遺伝学的モデルに対し評価されてきた。臨床試験もまた、アミノグリコシドがいくらかの機能的タンパク質産生を誘発しうることを示す。しかしながら、治療的利益は不明確のままである（例えば、Ｐｏｌｉｔａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ａｃｔａ  Ｍｙｏｌ．２２：１５−２１を参照）。
【００３３】
より効率的な非アミノグリコシドリードスルー化合物アルタレン（以前はＰＴＣ１２４として知られていた）が、ルシフェレースベースのハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）アッセイを使用して、>８００，０００化学物質及びアナログをスクリーニングすることにより、合成的に開発された（例えば、Ｗｅｌｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｎａｔｕｒｅ．４４７：８７−９１を参照）。嚢胞性繊維症におけるフェーズＩ臨床研究は、アタルレンが一般的に良好な耐用性を示し、アミノグリコシドよりも効率的なリードスルー活性を有するようであることを確認した（Ｈｉｒａｗａｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４７：４３０−４４４）。さらに、ＰＴＣ１２４は、正常終止コドンのリボソームリードスルーは誘発しない。
【００３４】
従って、一実施形態においては、ＰＴＣリードスルーを促進する化合物は、式Ｉの化合物１，２，４−オキサジアゾール安息香酸化合物：
【化１】
2019505578.tif 000003
【００３５】
あるいは、その薬学的に許容可能な塩、水和物、包接化合物、プロドラッグ、多形体、エナンチオマー、ジアステレオマー、ラセミ体を含む立体異性体、または立体異性体の混合物である。
【００３６】
ここで、Ｚは、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、置換もしくは未置換シクロアルキル、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換アルケニル、置換もしくは未置換ヘテロ環、置換もしくは未置換アリールアルキルであり；
【００３７】
Ｒ１は、水素、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換シクロアルキル、置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、−（ＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＲ６、またはあらゆる生体加水分解性基であり；
【００３８】
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６は、独立に、水素、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換アルケニル、置換もしくは未置換アルキニル、置換もしくは未置換シクロアルキル、置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、ハロゲン、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＯＣＨＦ２、ＣＮ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ７、ＳＯ２Ｒ７、ＮＯ２、ＮＨ２、またはＮ（Ｒ７）２であり；
【００３９】
各出現Ｒ７は、独立に、水素、置換もしくは未置換アルキル、置換もしくは未置換アルケニル、置換もしくは未置換アルキニル、置換もしくは未置換シクロアルキル、置換もしくは未置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは未置換アリール、置換もしくは未置換ヘテロアリール、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、ハロゲン、またはＣＦ３であり；
【００４０】
ｎは１から７の整数である。
【００４１】
さらなる実施形態においては、ＰＴＣリードスルーを促進する化合物は、３−［５−（２−フルオロフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］安息香酸化合物である。
【００４２】
いくらかの態様においては、ＰＴＣリードスルーを促進する化合物は、小分子である。小分子は、好ましくは本明細書において定義される結合ポリペプチドまたは抗体以外の有機分子である。有機小分子は、既知の方法論を使用して同定かつ化学合成されうる（例えば、ＰＣＴ出願公報第ＷＯ００／００８２３号及び第ＷＯ００／３９５８５号を参照）。有機小分子は、通常はサイズが約２０００ダルトンより小さく、あるいはサイズが約１５００、７５０、５００、２５０、または２００ダルトンより小さい。ここで、本明細書において開示されるＰＴＣリードスルーを促進するそのような有機小分子は、周知の技法を使用して過剰な実験なしに同定されうる。この点に関しては、ＰＴＣリードスルーを促進することが可能な分子について有機小分子ライブラリーをスクリーニングするための技法は、当技術分野において周知であることが特筆される（例えば、米国特許出願公報第２００４／０２１４１９３及び２００３／００４９６６６号；並びに国際特許出願公報第ＷＯ２００１／０４４５１６号を参照、それらの開示内容は、本参照により本明細書に組み込まれる）。
【００４３】
有機小分子は、例えば、アルデヒド、ケトン、オキシム、ヒドラゾン、セミカルバゾン、カルバジド、第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン、Ｎ−置換ヒドラジン、ヒドラジド、アルコール、エーテル、チオール、チオエーテル、ジスルフィド、カルボン酸、エステル、アミド、尿素、カルバマート、炭酸塩、ケタール、チオケタール、アセタール、チオアセタール、ハロゲン化アリール、アリールスルホネート、ハロゲン化アルキル、アルキルスルホネート、芳香族化合物、複素環化合物、アニリン、アルケン、アルキン、ジオール、アミノアルコール、オキサゾリジン、オキサゾリン、チアゾリジン、エナミン、スルホンアミド、エポキシド、アジリジン、イソシアン酸塩、塩化スルホニル、ジアゾ化合物、酸塩化物、またはそれらの類似物でありうる。
【００４４】
いくらかの態様においては、小分子化合物は、コンビナトリアルな化学物質ライブラリーの構成要素である。コンビナトリアル化学物質ライブラリーは、より小さいサブユニットまたはモノマーからなる、複数種の化学化合物の収集物である。コンビナトリアルライブラリーは、数百から何十万種にわたる異なる種の化学化合物など、様々なサイズを有する。また、炭水化物、オリゴヌクレオチド、及び小有機分子などの化合物からなる、オリゴマー及びポリマーのライブラリーを含む、さまざまなライブラリーの種類も存在する。そのようなライブラリーは、化学化合物の固定及びクロマトグラフィー分離、並びに、ＰＴＣリードスルーを促進するまたは目的の生物活性（ＰＴＣを擁するｍＲＮＡの翻訳などだがこれに限定されない）を媒介することが可能なリガンドを同定かつ特徴描写するための使用など、さまざまな使用を有する。
【００４５】
個相支持体上で化合物ライブラリーを合成するためのさまざまな技法が、当技術分野において知られている。固相支持体は、一般に、ライブラリーの化合物を形成するためにサブユニットまたはモノマーと結合するように機能化されている表面を有するポリマー物体である。一つのライブラリーの合成には、一般に、多数の固相支持体が関与する。コンビナトリアルライブラリーを作成するためには、固相支持体が、化合物の１つまたはそれよ以上のサブユニットと、また１つまたはそれ以上の試薬と、慎重に制御される所定の化学反応の順序に従い、反応させられる。別の言葉では、ライブラリーは、固相支持体上で「成長」させられる。より大きいライブラリーは、より多数の反応を必要とし、ライブライーをなす複数種の化合物の化学組成物について絶えず把握するタスクを複雑化する。いくらかの実施形態においては、小分子は、サイズが約２０００ダルトンより小さく、あるいはサイズが約１５００、７５０、５００、２５０、または２００ダルトンより小さい。
【００４６】
本明細書におけるあらゆる態様において開示される小分子薬剤は、個体支持体上で実施されうるあらゆる種類の化学反応に由来しうる。そのような化学反応は、ブタジエンのトラッピングを含む２＋２環化付加；イソキサゾリン、フラン、及び修飾ペプチドの合成を含む［２＋３］環化付加；ジオール、アルデヒド、及びケトンの固定を含むアセタール形成；アルデヒドの誘導体化、プロパンジオールの合成を含むアルドール縮合；アルデヒドの誘導体化を含むベンゾイン縮合；ベンゾジアゼピン及びヒダントイン、チアゾリジン、ターンミメティック、ポルフィリン、フタロシアニンを含む環状縮合；ジエステルの環化を含むディークマン環化；アクリル酸の誘導体化を含むディールスアルダー反応；アルコールのアルケンへの付加を含む求電子付加；アルデヒドの誘導体化を含むグリニャール反応；二置換アルケンの合成を含むヘック反応；ｉｎ  ｓｉｔｕでのニトリルオキシドの合成を含むヘンリー反応（［２＋３］環化付加を参照）；フェロモン及びペプチドの合成（アルケンの水素化）を含む接触水素化；スルファニルケトン、ビシクロ［２．２．２］オクタンの合成を含むマイケル反応；アリールエーテル、ペプチジルホスホナート、及びチオエーテルを含むミツノブ反応；キノロンの合成を含む求核芳香置換；アルデヒド及びケトンの合成を含む酸化；ペンチノールでのノルボルナジエンの環化を含むポーソン−カンド環化付加；ヘリセンの合成を含む光化学環化；アルデヒド及び塩化アクリルの誘導体化を含む有機金属化合物を伴う反応；カルボニル、カルボン酸、エステル、及びニトロ基の還元を含む錯水素化物及びスズ化合物を伴う反応；カルボキシル基の還元を含むそ合反応；ビフェニル誘導体の合成を含むスティル反応；置換シクロヘキサノンの合成を含むストーク反応；キノロンの合成を含む還元的アミノ化；フェニル酢及び酸誘導体の合成を含む鈴木反応；並びにアルデヒド、フェロモン、及びスルファニルケトンの反応を含むウィッティヒ−ホーナー反応を含むが、これらに限定されない。
【００４７】
化学ライブラリーの合成、並びに個々の固相支持体上へのそれらのライブラリーの個々の化合物のデコンボリューションを開示する参考文献は、米国特許出願第２００９／００３２５９２号；Ｎｅｅｄｅｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：１０７００−１０７０４；及びＰＣＴ出願公報第ＷＯ９７／１５３９０号において見つけられうる。それらの開示は、本参照により本明細書に組み込まれる。
【００４８】
一定の実施形態においては、本明細書において開示される方法における使用のためのＰＴＣリードスルーを促進するための化合物は、
【化２】
2019505578.tif 000004
【００４９】
いくらかの実施形態においては、本明細書において開示されるいずれかの方法における使用のために適するＰＴＣリードスルーを促進するための化合物は、限定することなく、アミカシン、Ｇ４１８（ゲネチシン）、ゲンタマイシン、またはパロモマイシンなどの、アミノグリコシドである。他の実施形態においては、ＰＴＣリードスルー化合物は、限定することなく、ＮＢ５４、ＮＢ７４、ＮＢ８４、またはＴＣ００７などの、アミノグリコシド誘導体である。さらなる実施形態においては、ＰＴＣリードスルーを促進するための化合物は、限定することなく、ネガマイシンまたはタイロシンなどの非アミノグリコシドである（Ｂｉｄｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌｅｃ．Ｍｅｄ．１８（１１）：６７９−８８；ＭｃＫｉｎｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，ＡＣＳ  Ｍｅｄ．Ｌｅｔ．，６：９３０−９５５；及びＤｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２０６（１０）：２２８５−９７を参照、これらは本参照により本明細書に組み込まれる）。
【００５０】
さらなる実施形態においては、本明細書において開示される方法における使用のためのＰＴＣリードスルーを促進するための化合物は、
【化３】
2019505578.tif 000005
【００５１】
さらに他の実施形態においては、本明細書において開示される方法における使用のためのＰＴＣリードスルーを促進するための化合物は、限定することなく、
【化４】
2019505578.tif 000006
2019505578.tif 000007
などの、ネガマイシン誘導体でありうる。
【００５２】
本明細書において開示される方法における使用のために適切である更なるＰＴＣリードスルー薬は、限定することなく、イセパマイシン、トブラマイシン、ＲＴＣ＃１、ＲＴＣ＃２、ＲＴＣ＃３、ＲＴＣ＃４、ＲＴＣ＃７、ＲＴＣ＃９、ＲＴＣ＃１０、ＲＴＣ＃１１、ＲＴＣ＃１６、ＲＴＣ＃１７、クリトシン、マクロライドスピラマイシン、マクロライドジョサマイシン、マクロライドタイロシン、ＮＢ３０、ストレプトマイシン、ハイグロマイシン、ピューロマイシン、リビドマイシン、ＴＣ００１、ＴＣ００３、ＴＣ００３２、ＪＬ０２２、ＪＬ０２３、ハイグロマイシンＢ、カナマイシンＡ、カナマイシンＢ及びその「ＪＬ」誘導体、ネオマイシン及びその「ＴＣ」誘導体、パロアミン及びその合成誘導体、パロモマイシン及びその「ＮＢ」誘導体、またはオレアンドマイシンを含む（Ｌｅｅ&Ｄｏｕｇｈｅｒｔｙ，２０１２，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ&Ｔｈｅｒａｐ．，１３６：２２７−６６を参照、これらの開示は本参照により本明細書に組み込まれる）。他のＰＴＣリードスルー薬は、ネガマイシン及びゲンタマイシンを含む。
【００５３】
本発明における使用のためのＰＴＣリードスルーを促進するために適切である他の化合物は、米国特許出願公報第２０１５／０２７４６７４号、第２０１５／００５１２５１号、第２０１３／０２１７７１７号、第２０１２／００８７８９６号、第２０１１／００４６１３６号、第２０１１／０００３８４３号、第２０１０／００９３８６７号、第２００８／０２０７５３８号、第２００７／０２０３１２３号、第２００６／０１６６９２６号、及び第２００６／０１６７２８３号；国際特許出願公報第ＷＯ２０１５／１３４７１１号、第ＷＯ２０１５／１０９２４８号、第２０１３／１４２３４６号、第ＷＯ２０１２／０１６９３０号、第ＷＯ２００８／１０１９３５号、第ＷＯ２００４／００９９５８号、第ＷＯ２００４／００９６１０号、第ＷＯ２００４／００９５３３号、及び第ＷＯ２０１４／０５５６４４号、並びに、米国特許第８，１６３，７８２号、及び第６，９９２，０９６号において見つけられうる。これら各々の開示は、その全体が本参照により本明細書に組み込まれる。
Ｂ．  医薬組成物
【００５４】
本明細書においては、本明細書において開示されるＰＴＣリードスルーを促進する化合物のいずれかを有する医薬組成物もまた提供される。本発明の医薬組成物は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、粉末剤、ペレット剤、カプレット剤、ミニ錠剤、トローチ剤、ミニ錠剤及び／またはペレット剤で満たされたカプセル剤、多層錠剤、懸濁液のための顆粒剤、小袋に詰められた顆粒剤または粉末剤のうち一つまたはそれより多くを含みうる。他の実施形態においては、本発明の組成物は、フィルムコート錠剤を与えるようにコーティングされうる。
【００５５】
本発明の組成物は、薬学的に賦形剤を混合する工程、及び、その賦形剤を、ＰＴＣリードスルーを促進する化合物の水溶液またはアルコール溶液と、並びに糖と、任意で薬学的に許容可能な賦形剤と共に顆粒化する工程により、調製されうる。その顆粒剤は、乾燥かつ潤滑化され、適切な剤形へと変換されうる。
【００５６】
ＰＴＣリードスルーを促進する化合物またはそれらの薬学的に許容可能な塩の安定個体医薬組成物は、直接圧縮、湿式または乾式顆粒化、スラギング、ホットメルト顆粒化、ホットメルト押出、流動層顆粒化、押出球状化、噴霧乾燥、及び溶媒蒸発などの薬学的技術の当業者に知られるプロセスにより、調製されうる。ある実施形態においては、ＰＴＣリードスルーを促進する化合物またはそれらの薬学的に許容可能な塩の安定医薬組成物は、その化合物を、１つまたはそれ以上の糖と、１つまたはそれ以上の薬学的に許容可能な賦形剤とともに乾式／湿式顆粒化する工程、及び任意でその顆粒剤を他の賦形剤と混合する工程により、調製される。
【００５７】
薬学的に許容可能な賦形剤は、１つまたはそれ以上の結合剤、充てん剤、潤滑剤、可溶化剤、安定化剤、崩壊剤、滑剤、及びそれらの類似物を含みうる。
【００５８】
適切な「希釈剤」は、ラクトース、微結晶セルロース、リン酸カルシウム、デキストリン、デキストロース、デキストレート、マンニトール、ソルビトール、スクロース、及びそれらの類似物のうち一つまたはそれより多くを含みうる。とくに、希釈剤は、ラクトース及び微結晶セルロースである。希釈剤は、組成物の顆粒剤外及び／または顆粒剤内部分に存在しうる。
【００５９】
適切な「崩壊剤」は、クロスポビドン（ポリプラスドン）、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロース、カルボキシスターチナトリウム、カルメロースカルシウム、コーンスターチ、部分的にアルファー化されたスターチ、クロスカルメロースナトリウム、スターチグリコール酸ナトリウム、及びそれらの類似物のうち一つまたはそれより多くを含みうる。とくに、崩壊剤は、クロスポビドンである。崩壊剤は、組成物の顆粒剤外及び／または顆粒剤内部分に存在しうる。
【００６０】
適切な「結合剤」は、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン（ポビドンＫ３０）、ポリビニルアルコール、これらが部分的にサポニン化されたもの、スターチ、及びそれらの類似物のうち一つまたはそれより多くを含みうる。とくに、結合剤はポリビニルピロリドンである。
【００６１】
適切な「可溶化剤」は、ポロキサマー、ポリエチレングリコール、ポリソルベート、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリルモノステアラート、グリセリルモノオレエート、レシチン、ポリオキシエチレンアルキルエステル、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、及びそれらの類似物のうち一つまたはそれより多くを含みうる。とくに、可溶化剤は、ポロキサマー及びグリセリルモノオレエートである。
【００６２】
適切な「安定化剤」は、クエン酸、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、ビタミンＥアセタート、及びそれらの類似物のうち１つまたはそれ以上を含みうる。とくに、安定化剤は、ビタミンＥアセタートである。
【００６３】
適切な「潤滑剤／滑剤」は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、フマル酸ステアリルナトリウム、ベヘン酸グリセリル、タルク、及びそれらの類似物のうち１つまたはそれ以上を含む。
【００６４】
本発明に従うＰＴＣリードスルーを促進するあらゆる化合物が、１つまたはそれ以上の薬学的に許容可能な担体または賦形剤を使用して従来型の方式で製剤化されうる。従って、本発明に従う使用のための化合物は、例えば、経口、舌下、口腔内、腸管外、直腸、膣内、または鼻腔内投与のために、あるいは吸入または送気（口または鼻のいずれかを介する）による投与に適切な形態で、あるいは局所投与に、好ましくは目における局所適用に適切な形態で製剤化されうる。別の一実施形態においては、ＰＴＣリードスルーを促進するための化合物は、局所または皮下投与のために製剤化される。
【００６５】
経口投与のためには、医薬組成剤は、例えば、結合剤（例えば、アルファー化トウモロコシスターチ、ポリビニルピロリドン、またはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充てん剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロース、またはリン酸カルシウム）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、またはシリカ）；崩壊剤（例えば、ポテトスターチ、またはスターチグリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容可能な賦形剤を用いて、従来型の方法により調製される錠剤またはカプセル剤の形態を取りうる。錠剤は、当技術分野において周知の方法によりコーティングされうる。経口投与のための液体調製物は、例えば、溶液、シロップ、または懸濁液の形態をとってもよく、あるいは、水または他の適切な媒体での使用前の構成のための乾燥産物として提示されうる。そのような液体調製物は懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、または食用硬化油）；乳化剤（例えば、レシチン、またはアカシア）；非水性媒体（例えば、アーモンド油、エステル油、またはエチルアルコール）；及び保存剤（例えば、メチルもしくはｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル、またはソルビン酸）などの薬学的に許容可能な添加剤を用いて、従来型の方法により調製されうる。
【００６６】
口腔内投与については、組成物は、従来型の様式で製剤化される錠剤またはトローチ剤の形態をとりうる。
【００６７】
本発明に従う使用のためのＰＴＣリードスルーを促進するための化合物は、注射による腸管外投与、便利には静脈内、筋肉内、腫瘍内、または皮下注射、例えば、ボーラス注射または継続的静脈内注入のために製剤化されうる。注射のための製剤は、例えば、アンプル中または複数用量容器中、任意では添加された保存剤とともに、単位剤形で提示される。腸管外投与のための組成物は、油性または水性媒体中の懸濁液、溶液、または乳液などの形態をとってもよく、また、懸濁、安定化、及び／または分散剤などの製剤用剤を含有してもよい。あるいは、有効成分は、例えば滅菌パイロジェンフリーの水または等張食塩水などの適切な媒体を用いる使用前の構成のための、粉末、結晶、またはフリーズドライ個体などの乾燥形態をとってもよい。製剤は、例えば滅菌アンプルまたはバイアル中に提示されうる。
【００６８】
本発明に従う使用のためのＰＴＣリードスルーを促進するための化合物は、例えばココアバターまたは他のグリセリドなどの従来型の坐薬ベースなどを含有する、坐薬または停留浣腸などの直腸組成物中に製剤化されてもよい。
【００６９】
舌下投与のための錠剤は、従来型の様式で製剤化されうる。
【００７０】
鼻腔内投与のためには、例えば、スプレーまたはドロップの形態で提示される例えば溶液、懸濁液、または乳液などの液体の形態で、あるいは粉末剤として、本発明に従う使用のためのＰＴＣリードスルーを促進するための化合物が使用されうる。好ましくは、鼻腔内投与のための調製物は、送気装置から、または加圧パックもしくは適切な推進剤の使用を伴ってネブライザーから、スプレーまたはエアロゾルの形態で送達される。
【００７１】
吸入による投与については、本発明に従う使用のためのＰＣＴリードスルーを促進するための化合物が、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、テトラフルオロエタン、ヘプタフルオロプロパン、二酸化炭素、または他の適切な気体などの適切な推進剤の使用を伴って、加圧パックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレー提示の形態で便利に送達されうる。加圧エアロゾルの場合には、用量単位は、計量される量を送達するためにバルブを提供することにより決定されうる。例えば吸入器または送気装置における使用のためのゼラチンの、カプセル及びカートリッジは、本発明の化合物と、ラクトースまたはスターチなどの適切な粉末ベースとの粉末混合物を含有して製剤化されうる。
【００７２】
局所投与については、医薬組成物は、例えば、目への局所適用に適するクリーム、ジェル、ローション、フォーム、またはドロップの形態で提示される溶液、懸濁液、または乳液（ナノ粒子またはリポソーム含有性乳液など）の、液体でありうる。
【００７３】
組成物は、各投薬量が、約１ｍｇから約５ｍｇ、１ｍｇから約１０ｍｇ、約１ｍｇから約２０ｍｇ、約１ｍｇから約３０ｍｇ、約１ｍｇから約４０ｍｇ、約１ｍｇから約５０ｍｇ、約１ｍｇから約６０ｍｇ、約１ｍｇから約７０ｍｇ、約１ｍｇから約８０ｍｇ、または約１ｍｇから約９０のうちいずれかなど、約５ｍｇから約１００ｍｇまたはそれ以上の有効成分を含んで、単位剤形へと製剤化されうる。範囲は、包括的であり、これらの値間のあらゆる範囲を含む。用語「単位剤形」は、個体のための単位投薬量として適する物理的に個別の単位を指し、各単位は、適切な医薬賦形剤または担体との関連で、望ましい治療効果を産生するように計算される、所定の量の活性材料を含有する。
ＩＶ．本発明の方法
【００７４】
いくらかの態様においては、本明細書においては、免疫反応をそれを必要とする個体において引き起こすための方法、及び異常細胞の表面上の１つまたはそれ以上のネオアンチゲンの発現を誘発する方法が開示される。これは、上で開示のＰＴＣリードスルーを促進する有効量の化合物一つまたはそれより多くを、それを必要とする個体に投与する工程により果たされる。一実施形態においては、ＰＴＣリードスルー後のｍＲＮＡから翻訳されるタンパク質は非機能的タンパク質である。有効量は、以下及び本明細書において開示されるように機能性をもたらしうる。
【００７５】
いくらかの実施形態においては、個体に投与されるＰＴＣリードスルーを促進するための化合物の量は、以下の範囲のいずれかに含まれる：約０．５から約５ｍｇ／ｋｇ、約５から約１０ｍｇ／ｋｇ、約１０から約１５ｍｇ／ｋｇ、約１５から約２０ｍｇ／ｋｇ、約２０から約２５ｍｇ／ｋｇ、約２０から約５０ｍｇ／ｋｇ、約２５から約５０ｍｇ／ｋｇ、約５０から約７５ｍｇ／ｋｇ、約５０から約１００ｍｇ／ｋｇ、約７５から約１００ｍｇ／ｋｇ、約１００から約１２５ｍｇ／ｋｇ、約１２５から約１５０ｍｇ／ｋｇ、約１５０から約１７５ｍｇ／ｋｇ、約１７５から約２００ｍｇ／ｋｇ、約２００から約２２５ｍｇ／ｋｇ、約２２５から約２５０ｍｇ／ｋｇ、約２５０から約３００ｍｇ／ｋｇ、約３００から約３５０ｍｇ／ｋｇ、約３５０から約４００ｍｇ／ｋｇ、約４００から約４５０ｍｇ／ｋｇ、または約４５０から約５００ｍｇ／ｋｇ。いくらかの実施例においては、個体に投与される治療有効量のテロメラーゼ阻害剤の量は、約３０ｍｇから約３００ｍｇ、または約５０ｍｇから約２００ｍｇ、または約１０ｍｇから約１００ｍｇなどの、約５ｍｇから約５００ｍｇの範囲にある。
【００７６】
他の実施形態においては、個体に投与されるＰＴＣリードスルーを促進するための化合物の濃度は、希釈（約０．１ｍｇ／ｍｌ）または濃縮（約２００ｍｇ／ｍｌ）されており、例えば、約０．１から約２００ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約１８０ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約１６０ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約１４０ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約１２０ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約１００ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約８０ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約６０ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約４０ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約２０ｍｇ／ｍｌ、約０．１から約１０ｍｇ／ｍｌ約２から約４０ｍｇ／ｍｌ、約４から約３５ｍｇ／ｍｌ、約６から約３０ｍｇ／ｍｌ、約８から約２５ｍｇ／ｍｌ、約１０から約２０ｍｇ／ｍｌ、約１２から約１５ｍｇ／ｍｌのうちいずれか、あるいは、約０．１ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．６ｍｇ／ｍｌ、０．７ｍｇ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、０．９ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、１．１ｍｇ／ｍｌ、１．２ｍｇ／ｍｌ、１．３ｍｇ／ｍｌ、１．４ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、１．６ｍｇ／ｍｌ、１．７ｍｇ／ｍｌ、１．８ｍｇ／ｍｌ、１．９ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、２．１ｍｇ／ｍｌ、２．２ｍｇ／ｍｌ、２．３ｍｇ／ｍｌ、２．４ｍｇ／ｍｌ、または２．５ｍｇ／ｍｌのうちいずれかを含む。
【００７７】
いくらかの実施形態においては、ＰＴＣリードスルーを促進するための化合物の濃度は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２１ｍｇ／ｋｇ、２２ｍｇ／ｋｇ、２３ｍｇ／ｋｇ、２４ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２６ｍｇ／ｋｇ、２７ｍｇ／ｋｇ、２８ｍｇ／ｋｇ、２９ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３１ｍｇ／ｋｇ、３２ｍｇ／ｋｇ、３３ｍｇ／ｋｇ、３３．３ｍｇ／ｋｇ、３４ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、３６ｍｇ／ｋｇ、３７ｍｇ／ｋｇ、３８ｍｇ／ｋｇ、３９ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４１ｍｇ／ｋｇ、４２ｍｇ／ｋｇ、４３ｍｇ／ｋｇ、４４ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、４６ｍｇ／ｋｇ、４７ｍｇ／ｋｇ、４８ｍｇ／ｋｇ、４９ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、５１ｍｇ／ｋｇ、５２ｍｇ／ｋｇ、５３ｍｇ／ｋｇ、５４ｍｇ／ｋｇ、５５ｍｇ／ｋｇ、５６ｍｇ／ｋｇ、５７ｍｇ／ｋｇ、５８ｍｇ／ｋｇ、５９ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、６１ｍｇ／ｋｇ、６２ｍｇ／ｋｇ、６３ｍｇ／ｋｇ、６４ｍｇ／ｋｇ、６５ｍｇ／ｋｇ、６６ｍｇ／ｋｇ、６７ｍｇ／ｋｇ、６８ｍｇ／ｋｇ、６９ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、７１ｍｇ／ｋｇ、７２ｍｇ／ｋｇ、７３ｍｇ／ｋｇ、７４ｍｇ／ｋｇ、７５ｍｇ／ｋｇ、７６ｍｇ／ｋｇ、７７ｍｇ／ｋｇ、８８ｍｇ／ｋｇ、８９ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、９１ｍｇ／ｋｇ、９２ｍｇ／ｋｇ、９３ｍｇ／ｋｇ、９４ｍｇ／ｋｇ、９５ｍｇ／ｋｇ、９６ｍｇ／ｋｇ、９７ｍｇ／ｋｇ、９８ｍｇ／ｋｇ、９９ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１１０ｍｇ／ｋｇ、１２０ｍｇ／ｋｇ、１３０ｍｇ／ｋｇ、１４０ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１６０ｍｇ／ｋｇ、１７０ｍｇ／ｋｇ、１８０ｍｇ／ｋｇ、１９０ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２１０ｍｇ／ｋｇ、２２０ｍｇ／ｋｇ、２３０ｍｇ／ｋｇ、２４０ｍｇ／ｋｇ、または２５０ｍｇ／ｋｇのうち少なくともおおよそいずれかである。
【００７８】
さらなる実施形態においては、本明細書において開示される方法のいずれかに従うＰＴＣリードスルーを促進するための１つまたはそれ以上の化合物を用いる治療は、ＰＴＣリードスルーを促進するための１つまたはそれ以上の化合物で治療されていない腫瘍と比較して、少なくとも約１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の腫瘍のサイズの縮小をもたらす。
【００７９】
いくらかの実施形態においては、本明細書において開示される方法のいずれかに従うＰＴＣリードスルーを促進するための１つまたはそれ以上の化合物を用いる治療は、ＰＴＣリードスルーを促進するための１つまたはそれ以上の化合物で治療されていない腫瘍中のＴ細胞反応と比較して、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ３＋、及び／またはＣＤ４５＋エフェクターＴ細胞反応のいずれか（例えば、腫瘍内Ｔ細胞浸潤）において、少なくとも約１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の増加をもたらす。
【００８０】
別の一実施形態においては、本明細書において開示される方法のいずれかに従うＰＴＣリードスルーを促進するための１つまたはそれ以上の化合物を用いる治療は、ＰＴＣリードスルーを促進するための１つまたはそれ以上の化合物で治療されていない個体と比較して、少なくとも約１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の腫瘍阻害効果を呈する。
Ｃ．免疫反応の引き起こし
【００８１】
本明細書において開示される方法により引き出される免疫反応は、ＰＴＣ含有性ｍＲＮＡの翻訳から作成される処理タンパク質の、免疫細胞による認識により媒介される。いくらかの実施形態においては、その免疫細胞はＴ細胞またはＢ細胞であり、それらは骨髄中の造血幹細胞に由来する主な種類のリンパ球である。Ｂ細胞は液性免疫反応に関与し、一方でＴ細胞は細胞性免疫反応に関与する。Ｂ細胞とＴ細胞との両者が、特定の標的を認識する受容体分子を擁する。Ｔ細胞は、抗原が処理され腫瘍組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子との組み合わせで提示された後に「非自己」標的を認識し、そのようなタンパク質は、ナンセンスまたはフレームシフト変異により引き起こされるＰＴＣを含有するｍＲＮＡから翻訳される。Ｔ細胞には二つの主なサブタイプがある：キラーＴ細胞、及びヘルパーＴ細胞。キラーＴ細胞はクラスＩＭＨＣ分子と組み合わせられた抗原しか認識しない。一方で、ヘルパーＴ細胞はクラスＩＩＭＨＣ分子と組み合わせられた抗原しか認識しない。抗原提示のこれら二つのメカニズムは、二種類のＴ細胞の異なる役割を反映する。第三の、マイナーなサブタイプは、ＭＨＣ受容体に結合していない完全な抗原を認識するγδＴ細胞である（Ｈｏｌｔｍｅｉｅｒ&Ｋａｂｅｌｉｔｚ（２００５），Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ａｌｌｅｒｇｙ，８６：１５１−８３）。
【００８２】
従って、本明細書において開示されるあらゆる方法において、免疫反応は、Ｂ細胞またはＴ細胞のいずれかと、クラスＩＭＨＣ分子及びクラスＩＩＭＨＣ分子のいずれかにより提示される新規の抗原とにより媒介される。例えば、キラーＴ細胞は、損傷を受けたまたは機能不全の細胞を殺す、Ｔ細胞の亜群である。キラーＴ細胞は、そのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）が、別の細胞のＭＨＣクラスＩ受容体との複合体でのこの特異的抗原に結合すると、活性化される。Ｔ細胞はそれから、ＭＨＣ  Ｉ受容体がこの抗原を擁する細胞を探して、体中を移動する。活性化Ｔ細胞がそのような細胞に接触すると、パーフォリンなどのサイトトキシンを放出し、パーフォリンは標的細胞の形質膜中に孔を形成し、イオン、水、及びトキシンが進入するのを許容する。Ｔ細胞活性化は、厳格に制御され、一般には非常に強いＭＨＣ／抗原活性化シグナル、あるいは「ヘルパー」Ｔ細胞により提供される追加の活性化シグナルを要する。
【００８３】
Ｂ細胞に関しては、Ｂ細胞は、その表面上の抗体が特異的な異物抗原に結合する際に、標的を認識する。この抗原／抗体複合体は、Ｂ細胞により取込まれ、タンパク質分解によりペプチドへと処理される。そのＢ細胞はそれから、これらの抗原性ペプチドをその表面のＭＨＣクラスＩＩ分子上に提示する。このＭＨＣと抗原との組合せが、匹敵するヘルパーＴ細胞を引き寄せ、そのヘルパーＴ細胞はリンフォカインを放出しＢ細胞を活性化する。活性化Ｂ細胞はそれから分裂し始めるにつれ、その子孫（形質細胞）がこの抗原を認識する何百ものコピーの抗体を分泌する。これらの抗体は血液血漿及びリンパ中を循環し、その抗原を発現する病原に結合し、補体活性化による破壊のため、あるいは貪食細胞による取込み及び破壊のために、その病原を標識する。
【００８４】
所与の化合物が本明細書において開示のあらゆる方法に従って投与される場合に免疫反応を引き起こすか否かは、フローサイトメトリーによる数え上げ、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細胞反応、並びにＴｅｇ反応を含むがこれらに限定されない当技術分野において既知のあらゆる方法によって測定されうる。
Ｄ．異常細胞
【００８５】
本明細書において開示の方法のいくらかの態様においては、１つまたはそれ以上の新規抗原の発現が、異常細胞の表面上に誘発される。一定の実施形態においては、異常細胞は、癌などの超増殖性細胞である。
【００８６】
本発明の組成物及び方法により予防かつ／または治療されうる癌は、ヒト肉腫及び癌腫、例えば癌腫、例えば、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、メルケル細胞腫、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、メルケル細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽腫、網膜芽細胞種、白血病、例えば、急性リンパ性白血病及び急性骨髄性白血病（骨髄芽球性、前骨芽球性、骨髄単球性、単球性、及び赤白血病）、慢性白血病（慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、及び慢性リンパ球性白血病）、並びに真性多血症、リンパ腫（ホジキン病、及び非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、並びに重鎖病を含むがこれらに限定されない。
Ｅ．チェックポイント阻害剤
【００８７】
本明細書において開示の方法のいくらかの実施形態においては、その方法は、１つまたはそれ以上の免疫チェックポイント阻害剤を阻害する１つまたはそれ以上の化合物を投与する工程をさらに有する。免疫チェックポイントは、シグナル（共刺激分子）を上げるまたはシグナルを下げる、免疫システムにおける分子である。チェックポント阻害剤は、癌細胞が免疫システムによる検出を回避する主な方法のうちの１つを克服するように設計される。Ｔリンパ球は日常的に疾患の兆候について細胞を監視する。細胞表面上の抗原が細胞は異常であることを示唆する場合、Ｔ細胞は、免疫反応が体内の正常組織を損傷することを防ぐための追加の分子の発現を増加させることを含む、免疫反応を始動する。これらの分子が免疫チェックポイントとして知られる。
【００８８】
癌細胞は、しばしば、免疫システムによる攻撃を回避または抑制するために、免疫チェックポイント分子を使用する。従って、癌細胞表面上の免疫チェックポイント分子の発現は、Ｔ細胞などの免疫細胞が癌細胞を「異物」または「異常」として認識することを予防する。結果として、チェックポイント阻害剤は、阻害性免疫チェックポイント分子を遮断する化合物であり、Ｔ細胞認識を介する免疫システムの活性化をもたらす。
【００８９】
当初は進行性黒色腫に対する適用とされた二つのチェックポイント阻害薬−イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（商標）；ＣＴＬＡ−４を標的とすることにより免疫システムを活性化させるように機能するモノクローナル抗体）、及びペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（商標）；ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  １（ＰＤ−１）受容体を標的とするヒト化抗体）の有効性ゆえ、阻害性チェックポイント分子は、癌免疫療法のための新しい標的としてますますみなされている。ニボルマム（Ｏｐｄｉｖｏ（商標））として知られる別の一チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１とｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｌｉｇａｎｄ  １（ＰＤ−Ｌ１）との相互作用を遮断し免疫反応の阻害を予防する。
【００９０】
１つまたはそれ以上の免疫チェックポイント分子を阻害可能であるあらゆる分子が、本明細書において開示される方法において使用されうる。これらの分子は、限定することなく、抗体またはその機能的断片、阻害性ポリペプチド、小分子化学化合物、及び／または阻害性核酸（アンチセンスオリゴヌクレオチド、小阻害性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及び／またはリボザイムなどの触媒性核酸などだがこれらに限定されない）を含む。本明細書において開示されるあらゆる方法における使用のための、チェックポイント阻害剤により標的とするための適切な免疫チェックポイント分子は、限定することなく、アデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２ＡＲ）、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６としてもしられる；例えば、ＭＧＡ２７１）、ｃｙｔｏｔｏｘｙｃ  Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４（ＣＴＬＡ−４；ＣD１５２としても知られる；例えば、イピリムマブ；ＡＧＥＮ−１８８４（Ａｇｅｎｕｓ））、ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｌｉｇａｎｄ  １（ＰＤ−Ｌ１；ＣＤ２７４としても知られる；例えば、ＭＤＸ−１１０５（Ｂｒｙｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＷＢＰ−３１５５（Ｃ−ｓｔｏｎｅ）、ＬＹ３３０００５４（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ））、ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１（ＰＤ−１；ＣＤ２７９としても知られる；例えば、ペンブロリズマブ、ＳＨＲ−１２１０（Ｉｎｃｙｔｅ）、ＳＴＩ−Ａ１１１０（Ｓｏｒｒｅｎｔｏ）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ））、ＣＴ−０１１（ピジリズマブ；Ｃｕｒｅｔｅｃｈ）、ＰＤＲ−００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＧＢ−Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ）、ＴＳＲ−０４２（Ｔｅｓａｒｏ）、ＥＮＵＭＣ−８（Ｅｎｎｕｍｅｒａｌ）、ＭＧＤ−０１３（Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｓ；ＰＤ１及びＬａｇ３に対する二重特異性抗体）、Ｂ７−Ｈ４（ＴＩＭ３；ＶＴＣＮ１としても知られる）、Ｔ−ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ａｎｄ  ｍｕｃｉｎ−ｄｏｍａｉｎ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ−３（ＴＩＭ−３；ＨＡＶＣＲ２としても知られる）、Ｂ  ａｎｄ  Ｔ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  Ａｔｔｅｎｕａｔｅｏｒ（ＢＴＬＡ；ＣＤ２７２としても知られる）、ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ−ｐｙｒｒｏｌｅ  ２，３−ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ（ＩＤＯ）、ｋｉｌｌｅｒ−ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ（ＫＩＲｓ；例えば、リリルマブ）、ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｇｅｎｅ  ３（ＬＡＧ−３；例えば、ＢＭＳ−９８６０１６）、Ｔ  ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｗｉｔｈ  Ｉｇ  ａｎｄ  ＩＴＩＭ  ｄｏｍａｉｎｓ（ＴＩＧＩＴ；ＷＵＣＡＭ及びＶｓｔｍ３としても知られる）、ＩＬＴ−３、ＩＬＴ−４、及び／またはＶ−ｄｏｍａｉｎ  Ｉｇ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ（ＶＩＳＴＡ）のうち一つまたはそれより多くを含む。
【００９１】
いくらかの実施形態においては、チェックポイント阻害剤は、イピリムマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ペンブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ）デュルバルマブ（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、アテゾリズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）、トレメリムマブ（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、及び／またはアベルマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）のうち一つまたはそれより多くなどであるがこれらに限定されない、アンタゴニスト抗体である。
【００９２】
これらなどのアンタゴニスト抗体が癌の治療に対していくらかの有望性を示している一方、個体へのモノクローナル抗体の投与は、望まれない免疫反応ゆえ、有害事象及び重篤な副作用にも関連付けられている。特に、モノクローナル抗体の投与は、急性アナフィラキシー、血清病、及び抗体の産生などの免疫反応のリスクを有する。さらに、感染及び癌、自己免疫疾患、並びに、心臓毒性、肝炎、肺臓炎、及び大腸炎などの臓器特異的有害事象を含む、その特異的標的と関連して、モノクローナル抗体に関する多数の有害効果が存在する。免疫チェックポント療法を受けている個体が、同時に複数の免疫チェックポイントタンパク質を標的とするために、１つよりも多いモノクローナル抗体を投与されることは、しばしば起こることである。残念ながら、副作用及び毒性のリスクは、治療レジュメンの一部として個体に投与されるモノクローナル抗体の数にあわせて指数関数的に上昇する。かくして、腫瘍成長を阻害する能力に関して現在複数のモノクローナル抗体を使用する治療レジュメンと比べてより効果的または同じくらい効果的でありながら、複数のモノクローナル抗体の投与に関連する有害効果を生じない治療レジュメンが、非常に必要とされている。
【００９３】
以下にさらに議論されることになるが、いくらかの実施形態においては、本明細書においては、ＰＴＣリードスルーを促進するための１つまたはそれ以上の化合物と、免疫チェックポイントタンパク質を阻害する化合物（抗体など、例えばモノクローナル抗体）との組合せを投与することにより、個体において腫瘍成長を阻害するための方法が開示される。そのＰＴＣリードスルー促進／免疫チェックポイント阻害の組合せは、２つまたはそれ以上の抗体ベースの免疫チェックポイント阻害性療法と比較して、腫瘍成長を阻害するにあたり、同じだけ効果的、あるいはより効果的である。さらに、本明細書において開示される方法に従う、ＰＴＣリードスルーを促進するための１つまたはそれ以上の化合物と、免疫チェックポイントタンパク質を阻害する化合物との組合せの投与は、２つまたはそれ以上の抗体ベースの免疫チェックポイント阻害性療法（例えば、抗ＰＤ−１及び抗ＣＴＬＡ−４抗体の組合せ）と比較して、副作用及び有害事象を減少させる（例えば、副作用及び有害事象の減少が約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％のうちいずれか、またこれらのパーセンテージの間にあたるすべての値を含む）。
【００９４】
別の一実施形態においては、本明細書において開示される方法のいずれかに従って投与される、１つまたはそれ以上の免疫チェックポイントタンパク質を阻害する１つまたはそれ以上の化合物との組合せでの、ＰＴＣリードスルーを促進するための１つまたはそれ以上の化合物は、１つまたはそれ以上の免疫チェックポイントタンパク質を阻害する１つまたはそれ以上の化合物との組合せでのＰＴＣリードスルーを促進するための１つまたはそれ以上の化合物で治療されていない腫瘍と比較して、少なくとも約１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の腫瘍阻害効果を提供する。一実施形態においては、そのＰＴＣリードスルー阻害剤は、アタルレン（ＰＴＣ１２４）である。別の一実施形態においては、ＰＴＣリードスルー阻害剤（例えば、アタルレン）は、ＰＤ−１に対する抗体との組合せで投与される。別の一実施形態においては、ＰＴＣリードスルー阻害剤（例えば、アタルレン）は、ＣＴＬＡ−４に対する抗体との組合せで投与される。さらなる実施形態においては、ＰＴＣリードスルー阻害剤（例えば、アタルレン）と免疫チェックポイントタンパク質を阻害する単一の化合物（例えば、抗ＰＤ−１抗体または抗ＣＴＬＡ−４抗体）との組合せは、免疫チェックポイントタンパク質を阻害する２つまたはそれ以上の化合物の組合せ（例えば、抗ＰＤ−１抗体と抗ＣＴＬＡ−４抗体との組合せ）単独と比較して、腫瘍成長の阻害において、同じだけまたはより効果的である。
【００９５】
さらなる一実施形態においては、本明細書において開示される方法のいずれかに従って投与される、１つまたはそれ以上の免疫チェックポイントタンパク質を阻害する２つまたはそれ以上の化合物との組合せでの、ＰＴＣリードスルーを促進するための１つまたはそれ以上の化合物は、１つまたはそれ以上の免疫チェックポイントタンパク質を阻害する２つまたはそれ以上の化合物との組合せでのＰＴＣリードスルーを促進するための１つまたはそれ以上の化合物で治療されていない腫瘍と比較して、少なくとも約１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の腫瘍阻害効果を提供する。一実施形態においては、そのＰＴＣリードスルー阻害剤は、アタルレン（ＰＴＣ１２４）である。別の一実施形態においては、ＰＴＣリードスルー阻害剤（例えば、アタルレン）は、ＰＤ−１に対する抗体及びＣＴＬＡ−４に対する抗体との組合せで投与される。
Ｆ．エピジェネチック調節化合物
【００９６】
本明細書において開示される方法のいずれかのいくらかの実施形態においては、その方法は、１つまたはそれ以上のエピジェネティック調節化合物の投与をさらに有する。本明細書において使用される「エピジェネティック」は、細胞中で染色体及び遺伝子に課される物理的変化を指すことを意図し、その変化は、染色体中のＤＮＡ及び遺伝子の機能に影響し、遺伝子中のＤＮＡのヌクレオチド配列は変化させない。エピジェネティック調節の代表的な例は、メチル化及びアセチル化などのＤＮＡの共有結合性の化学修飾、並びに、ＤＮＡーＤＮＡスーパーコイルの非共有結合性及び非化学修飾、及びヒストンのような染色体タンパク質との結合を含むが、これらに限定されない。エピジェネティック変化の結果の代表的で非限定的な例は、一定の遺伝子により産生されるＲＮＡの、それによりタンパク質産物のレベルの増加もしくは減少、及び／または、転写因子が遺伝子プロモーターに結合する様式の変化を含む。
【００９７】
本発明の方法における使用のための適切なエピジェネティック調節化合物は、限定することなく、ヒストンジアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、アゾシチジン、ＢＥＴ阻害剤、ＥＺＨ２阻害剤、及び／またはｄｏｔ１Ｌのうち一つまたはそれより多くを含む。いくらかの実施形態においては、エピジェネティック調節化合物は、ベリノスタット（Ｍｅｒｃｋ）、ロミデプシン（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、デシタビン（Ｏｔｕｋａ）；及び５−アゾシチジン（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、パノビノスタット（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、またはベリノスタット（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ）のうち１つまたはそれ以上である。
Ｇ．癌治療
【００９８】
本発明の方法は、アジュバント環境において実施されうる。「アジュバント環境」は、個体が増殖性疾患、とくに癌の罹患歴を有し、かつ、（必ずしもではないが）一般的には、手術、放射線療法、及び／または化学療法を含むがこれらに限定されない治療法に応答してきた臨床的環境を指す。しかしながら、増殖性疾患の罹患歴ゆえ、これらの個体は、その疾患を発病するリスクを有するとみなされる。「アジュバント環境」における治療または投与は、続く治療のモードを指す。
【００９９】
本明細書において提供される方法は、「ネオアジュバント環境」においても実施されうる。すなわち、その方法は、一次／決定的治療の前に実行されうる。いくらかの態様においては、個体は、以前に治療されている。他の態様においては、個体は、以前に治療を受けていない。いくらかの態様においては、治療は、第一選択治療である。
【０１００】
いくらかの態様においては、本明細書において開示の方法のいずれも、治療的有効量の抗癌療法の、それを必要とする個体への投与を含む。本明細書において使用される、抗癌療法の「治療的有効量」または「治療的有効投薬量」は、有益なまたは望ましい結果をもたらすのに十分な量である。治療用の使用のためには、有益なまたは望ましい結果は、癌から生じる１つまたはそれ以上の症状の減少、癌で苦しむ人の生活の質の増大、癌を治療するのに必要となる他の医薬品の用量の減少、標的によるなど他の医薬品の効果の増強、疾患の進行の遅延、及び／または生存の延長をなどの臨床結果を含む。有効投薬量は、１つまたはそれ以上の投与で投与されうる。本発明の目的のためには、抗癌療法の有効投薬量は、直接的または間接的に治療的処置を達成するのに十分な量である。臨床的文脈において理解される、抗癌療法の治療的有効投薬量は、別の抗癌療法と共に達成されてもよく、あるいはそうでなくてもよい。
【０１０１】
いくらかの態様においては、本明細書において開示の方法のいずれも、個体に１つまたはそれ以上の追加の抗癌療法を投与する工程をさらに有しうる。様々なクラスの抗癌剤が使用されうる。非限定的な例は、放射線療法、アルキル化剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、またはオキサリプラチン）、抗代謝剤（例えば、アザチオプリン、またはメルカプトプリン）、アントラサイクリン、植物アルカロイド（例えば、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、またはビンデシンなど）、及びタキサン（パクリタキセル、タキソール、またはドセタキセルなど）を含む）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、またはテニポシド）、ポドフィロトキシン（及び、エトポシド及びテニポシドなどのその誘導体）、抗体（例えば、モノクローナルまたはポリクローナル）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、メシル酸イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）またはＧｌｉｖｅｃ（登録商標）））、ホルモン療法、可溶性受容体、並びに他の抗新生物剤（例えば、ダクチノマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ブレオマイシン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、またはイホスファミド）を含む。
Ｈ．Ｔ細胞アゴニスト
【０１０２】
本明細書において開示のいずれか方法のいくらかの実施形態においては、その方法は、Ｔ細胞を活性化させる１つまたはそれ以上の化合物の投与を有する。これらのポリペプチドは、しばしば「刺激性チェックポイント分子」と呼ばれ、ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリー、及びＢ７−ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバーである。本発明における使用のために適切であるＴ細胞アゴストの非限定的例は、限定することなく、ＣＤ２７（例えば、ＣＤＸ−１１２７（Ｃｅｌｌｄｅｘ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ））、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ２８（例えば、ＴＧＮ１４１２）、ＣＤ４０、インターロイキン−２受容体サブユニットベータ（ＩＬＲ２β；ＣＤ１２２としても知られる；例えば、ＮＫＴＲ−２１４）、ＣＤ１３７（ＴＮＦＲＳＦ９、４−１ＢＢ、及びｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ（ＩＬＡ）としても知られる）、並びに／またはＯＸＯ４０（ＣＤ１３４及びＴＮＦＲＳＦ４としても知られる；例えば、ＭＥＤＩ０５６２、ＭＥＤＩ６４６９、及びＭＥＤＩ６３８３（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ））を含む。
Ｉ．分子アジュバント
【０１０３】
本明細書において開示のいずれか方法のいくらかの実施形態においては、その方法は、１つまたはそれ以上の分子アジュバントの投与を有する。本明細書において使用される「分子アジュバント」は、限定することなく、樹状細胞を活性化させる薬剤を含む免疫反応を増強する分子を指す。分子アジュバントは、限定することなく、タンパク質、脂質、核酸、炭水化物、または化学化合物を含んでもよく、樹状細胞はその分子アジュバントに対する受容体を有し、その受容体の占有は、細胞内シグナル伝達、及び樹状細胞のフェノタイプの変化をもたらし、続いて起こる免疫反応の量または質の向上をもたらす。分子アジュバントの非限定的例は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンド、及び細胞内ＤＮＡセンサーアゴニストを含む。
１．分子アジュバントとしてのＴＮＦＲＳＦアゴニスト
【０１０４】
ＴＮＦＲＳＦは、樹状細胞、マクロファージ、及びＴ細胞上の多くの重要な受容体を含む。例えば、ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ４０（ＣＤ４０）は、抗原提示細胞上に見られ、その活性化に必要である共刺激タンパク質である。ＴＨ細胞上のＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）のＣＤ４０への結合は、抗原提示細胞を活性化し、様々な下流の効果を誘発する。ＣＤ４０Ｌは、ＤＣ上のＣＤ８０及びＣＤ８６の発現を強くアップレギュレートし、ＣＤ４＋Ｔ細胞をＴｈ１細胞の方へと分化させる。
【０１０５】
分子アジュバントとして顕著な可能性を有することが示されてきた他のＴＮＦＲＳＦアゴニストは、限定することなく、４−１ＢＢ、ＣＤ３０、ｈｅｒｐｅｓ  ｖｉｒｕｓ  ｅｎｔｒｙ  ｍｅｄｉａｔｏｒ、ＣＤ４０、ＣＤ２７、及びｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ＴＮＦＲ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＧＩＴＲ）を含み、そのリガンドはそれぞれ、４−１ＢＢＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ２７Ｌ／ＣＤ７０、及びＧＩＴＲＬである（Ｓｏ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６），Ｉｎｔ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．８３，１ー１１）。
２．ＴＬＲアゴニスト
【０１０６】
本明細書において使用される用語「Ｔｏｌｌ様受容体」（または「ＴＬＲ」）は、微生物産物を感知し、かつ／または適応免疫反応を始動させるＴｏｌｌ様受容体ファミリータンパク質またはその断片を指す。一実施形態においては、ＴＬＲは、樹状細胞（ＤＣ）活性化する。Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、微生物病原体を認識する先天性免疫のセンサーとして当初は同定された、パターン認識受容体のファミリーである。ＴＬＲは、ロイシンリッチな繰返しのエクトドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ＴＩＲ（Ｔｏｌｌ／ＩＬ−１Ｒ）ドメインを含有する、保存された膜貫通性分子のファミリーを有する。ＴＬＲは、しばしば「ＰＡＭＰＳ」（ｐａｔｈｏｇｅｎ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐａｔｔｅｒｎｓ）と呼ばれる、微生物中の特徴的な構造を認識する。ＴＬＲへのリガンド結合は、炎症及び免疫に関与する因子の産生を誘発する細胞内シグナリング経路のカスケードを引き起こす。
【０１０７】
ヒトにおいては、十のＴＬＲが同定されている。細胞表面上に発現するＴＬＲは、ＴＬＲ−１、−２、−４、−５、及び−６を含み、一方でＴＬＲ−３、−７／８、及び−９は、ＥＲ区画と共に発現される。ヒト樹状細胞サブセットは、特徴的なＴＬＲ発現パターンを基に同定されうる。例としては、骨髄系または「従来型」のＤＣサブセット（ｍＤＣ）は刺激されるとＴＬＲ１−８を発現し、活性化マーカーのカスケード（例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＭＨＣクラスＩ及びＩＩ、ＣＣＲ７）、炎症性サイトカイン、及びケモカインが産生される。この刺激及びその結果生じる発現の結果は、抗原特異的ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞プライミングである。これらのＤＣは、抗原を取込み、それを適切な形でＴ細胞に提示する増強された能力を獲得する。これに対し、ＤＣの形質細胞様サブセット（ｐＤＣ）は、活性化に際しＴＬＲ７及びＴＬＲ９のみを発現し、その結果起こるＮＫ細胞並びにＴ細胞の活性化が伴う。瀕死の細胞はＤＣ機能に対しては悪影響を及ぼしうるため、ＤＣをＴＬＲアゴニストで活性化することは、癌治療に対する免疫療法アプローチにおいて抗腫瘍免疫をプライムするために有益でありうると提唱されてきた。また、放射線及び化学療法を使用する乳癌の成功を伴う治療には、ＴＬＲ４が必要とされることも提唱されてきた。
【０１０８】
当技術分野において知られ、かつ本発明における使用が見いだされるＴＬＲアゴニストは、以下を含むが、これらに限定されない：Ｐａｍ３Ｃｙｓ、ＴＬＲ−１／２アゴニスト；ＣＦＡ、ＴＬＲ−２アゴニスト；ＭＡＬＰ２、ＴＬＲ−２アゴニスト；Ｐａｍ２Ｃｙｓ、ＴＬＲ−２アゴニスト；ＦＳＬ−１、ＴＬＲ−２アゴニスト；Ｈｉｂ−ＯＭＰＣ、ＴＬＲ−２アゴニスト；ｐｏｌｙｒｉｂｏｓｉｎｉｃ：ｐｏｌｙｒｉｂｏｃｙｔｉｄｉｃ  ａｃｉｄ（Ｐｏｌｙ  Ｉ：Ｃ）、ＴＬＲ−３アゴニスト；ｐｏｌｙａｄｅｎｏｓｉｎｅ−ｐｏｌｙｕｒｉｄｙｌｉｃ  ａｃｉｄ（ｐｏｌｙ  ＡＵ）、ＴＬＲ−３アゴニスト；ｐｏｌｙ−Ｌ−ｌｙｓｉｎｅ及びカルボキシメチルセルロースで安定化されたＰｏｌｙｉｎｏｓｉｎｉｃ−Ｐｏｌｙｃｙｔｉｄｙｌｉｃ  ａｃｉｄ（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ（登録商標））、ＴＬＲ−３アゴニスト；ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ  ｌｉｐｉｄ  Ａ（ＭＰＬ）、ＴＬＲ−４アゴニスト；ＬＰＳ、ＴＬＲ−４アゴニスト；細菌フラジェリン、ＴＬＲ−５アゴニスト；シアリル−Ｔｎ（ＳＴｎ）、多数のヒト癌細胞上のＭＵＣ１ムチンに関連する炭化水素かつＴＬＲ−４アゴニスト；イミキモド、ＴＬＲ−７アゴニスト；レシキモド、ＴＬＲ−７／８アゴニスト；ロキソリビン、ＴＬＲ−７／８アゴニスト；及び非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド（ＣｐＧ−ＯＤＮ）、ＴＬＲ−９アゴニスト。
３．  細胞内ＤＮＡセンサーアゴニスト
【０１０９】
ｃＧＡＳ−ＳＴＩＮＧ経路は、細胞質ＤＮＡの存在を検出し、応答として炎症性遺伝子の発現を引き起こすようにはたらく、先天性免疫システムの構成要素である。ＤＮＡは、通常は細胞の核中に見られる。ＤＮＡの細胞質への局在は、腫瘍化またはウィルス感染と関連付けられる。ｃＧＡＳ−ＳＴＩＮＧ経路は、細胞質ＤＮＡを検出し、免疫反応を誘発するようにはたらく。
【０１１０】
ＤＮＡへの結合に際し、タンパク質サイクリックＧＭＰ−ＡＭＰ合成酵素（ｃＧＡＳ）は、サイクリックＧＭＰ−ＡＭＰ（ｃＧＡＭＰ）を形成するようにＡＭＰ及びＧＭＰの二量体化を引き起こす。ｃＧＡＭＰは、Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｇｅｎｅｓ（ＳＴＩＮＧ）に結合し、このことはＴＢＫ１が下流の転写因子ＩＲＦ３をリン酸化することを引き起こし、これが１型ＩＦＮ反応及びＳＴＡＴ６を誘発し、ＳＴＡＴ６は、ＩＲＦ３とは独立にＣＣＬ２及びＣＣＬ２０などのケモカインを誘発する（Ｂｕｒｄｅｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｎａｔｕｒｅ  ４７８，  ５１５−１８）。ＳＴＩＮＧにより活性化されるシグナリング経路は、合わさって、細胞質中の異所性ＤＮＡを有する細胞に対する先天性免疫反応を誘発する。ＳＴＩＮＧ活性の喪失は、マウス胚性線維芽細胞が一定のウィルスによる感染と戦う能力を阻害し、より一般的には、導入された細胞質ＤＮＡに対する１型ＩＦＮ反応に必要とされる（Ｉｓｈｉｋａｗａ，ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｎａｔｕｒｅ  ４６１，７８８−９２）。
【０１１１】
ＤＮＡは、ワクチンによりコードされる抗原に対する免疫反応をブーストするための強力なアジュバントであることが示されてきた。ｃＧＭＡＰは、ＳＴＩＮＧのＩＲＦ３活性化を介して、インターフェロンの転写を刺激する。このことは、ｃＧＡＭＰを、炎症反応をブーストすることが可能な強力なワクチンアジュバントにする（Ｄｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ．，３（５）：１３５５−６１）。研究は、ニワトリ抗原であるｏｖａｌｂｕｍｉｎ（ＯＶＡ）がコードされるワクチンは、ｃＧＡＭＰと共同で、ｉｎ  ｖｉｖｏで、ＳＴＩＮＧ依存的に抗原特異的Ｔ細胞及びＢ細胞を活性化できたことを示してきた。ＯＶＡ＋ｃＧＡＭＰでワクチン接種をされたマウスからのＴ細胞は、ＯＶＡペプチドで刺激されると、ＯＶＡのみを受けた動物と比べて、上昇したＩＦＮ−ｇ及びＩＬ−２を有することが示された（Ｘｉａｏ−Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３４１（６１５２）：１３９０−９４）。さらに、ｃＧＡＭＰの増強された安定性は、その特有の２'−５'ホスホジエステル結合ゆえ、ｉｎ  ｖｉｖｏ適用のためのＤＮＡに対する好ましいアジュバントとしうる。
Ｊ．微小環境調節剤
【０１１２】
本明細書において開示されるいずれかの方法の他の実施形態においては、その方法は、１つまたはそれ以上の微小環境調節因子の投与をさらに有する。「微小環境調節剤」は、腫瘍成長を支持する免疫抑制性腫瘍微小環境を産生することが可能である因子を指す（Ｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ  Ｔｈｅｒ．，Ｓ１３）。そのような一調節剤は、やはりチェックポイントタンパク質として同定された、インドールアミン（２，３）−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）である（ｓｕｐｒａ参照）。ＩＤＯは、必須アミノ酸トリプトファンを分解する代謝経路における第一ステップにおいてはたらく、二つのアイソフォーム（ＩＤＯ１及びＩＤＯ２）を有する酵素である。ＩＤＯは、免疫システムのエフェクターＴ細胞を遮断することによりその免疫調節性効果を呈する（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．２０１２；２（８）：７７２−７３５）。ＩＤＯ発現は、主な機能が免疫反応の最後においてＴ細胞媒介性免疫を遮断することであるＴ細胞のサブセットである、調節性Ｔ細胞をも直接的に活性化させる。
【０１１３】
他の一微小環境調節剤は、トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）である。ＴＤＯは、ヒトの体において、トリプトファンの流動の生理学的調節において中心的な役割を果たす。ＴＤＯは、キヌレニン経路に沿ってのトリプトファン分解の第一かつ律速ステップを触媒し、これにより全身のトリプトファンレベルを調節する。トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼは、かなりの割合のヒト腫瘍において発現されることが示されてきた（Ｐｉｌｏｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １０９（７）：２４９７−５０２）。同じ研究において、腫瘍によるトリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ発現は、免疫マウスによる腫瘍拒絶を防止した。そのグループにより開発されたトリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ阻害剤は、マウスがトリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ発現腫瘍を拒絶する能力を復活させた。このことは、トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ阻害剤が、癌療法における潜在性を提示することを示す。
【０１１４】
本発明の方法における使用のために適切である他の微小環境調節剤は、限定することなく、ＩＤＯ、ＴＤＯ、ＣＤ７３、ＣＯＸ２阻害剤、ＣＤ３９阻害剤、及びＡ２Ａ受容体アゴニストを含みうる。
Ｋ．ケモカイン受容体アンタゴニスト
【０１１５】
本明細書において開示されるいずれかの方法のさらに他の実施形態においては、その方法は、１つまたはそれ以上の受容体アンタゴニストの投与をさらに有する。ケモカイン受容体は、主にリンパ球の表面上に見られる七回膜貫通ドメインを含有するＧタンパク質共役受容体である。ケモカイン受容体は、異なるファミリーに分けられる：結合するケモカインの四つの個別のサブファミリーに対応する、ＣＸＣケモカイン受容体、ＣＣケモカイン受容体、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体、及びＸＣケモカイン受容体である。
【０１１６】
いくらかの実施形態においては、本発明の方法は、ＣＸＣケモカイン受容体ファミリーのケモカイン受容体に対する１つまたはそれ以上のアンタゴニストを含む。適切なＣＸＣファミリーメンバーの標的は、ＣＸＣＲ１（ＩＬ８ＲＡまたはＣＤ１８１としても知られる）、及びＣＸＣＲ４（ｆｕｓｉｎまたはＣＤ１８４としても知られる）を含む。ＣＸＣＲ１は、腫瘍生存に必要となる細胞成長及び血管新生において役割を有すると考えられている。
【０１１７】
他の実施形態においては、本発明の方法は、ＣＣケモカイン受容体（またはベータケモカイン受容体）ファミリーのケモカイン受容体に対する１つまたはそれ以上のアンタゴニストを含み、それは、限定することなく、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、及び／またはＣＣＲ４を含みうる。
Ｌ．サイトカイン療法
【０１１８】
本明細書において開示されるいずれかの方法の他の実施形態においては、その方法は、１つまたはそれ以上のサイトカイン療法の投与をさらに有する。サイトカインは、免疫反応を調節する能力を有する、腫瘍内に存在する多くの種類の細胞により産生されるタンパク質の幅広いグループである。これらの免疫調節効果は、サイトカインが、免疫反応を引き起こすための薬として使用されることを許容する。一般的に使用されるサイトカインの２つのグループは、インターフェロン及びインターロイキンである。
【０１１９】
本発明における使用のために適切であるサイトカイン療法の非限定的な例は、限定することなく、Ｉ型ＩＦＮ（ＩＦＮα）、ＩＬ−２、ＩＬ−１７、ＩＬ−１５、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１、ＦＬＴ３、及び／または抗ＴＧＦβを含む。これらのタンパク質に対する受容体（例えば、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−７Ｒ、ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−１０Ｒ、ＩＬ−１２Ｒ、またはＩＬ−２１Ｒなど）もまた、標的とされうる（例えば、活性化薬（例えば、小分子）、抗体、またはポリペプチドを使用して）。
Ｍ．他の免疫療法
【０１２０】
本明細書において開示の方法を用いる使用のために適切である他の免疫療法は、限定することなく、免疫原性化学療法、ＸＲＴ、腫瘍溶解性ウィルス、凍結療法、ＴＡＣＥ、免疫調節剤の腫瘍内注射、発癌性経路（ＭＡＰＫ、ベータカテニン、ＰＩ３Ｋ／ＰＴＥＮなど）に対する標的療法、エピジェネティック療法、ＣＳＦ１／ＣＳＦＲ１枯渇性抗体、及び、抗ＣＣＲ４（例えば、モガブリズマブ；Ｋｙｏｗａ）、抗ＩＬ−８／ＩＬ−８Ｒ、抗ＣＣＲ２、抗ＣＣＲ５、抗ＣＸＣＲ１／ＣＸＣＲ２、抗ＣＴＬＡ４、抗ＣＣＲ４、抗ＣＣＲ８、抗ＣＤ２５、抗ＫＩＲ、抗ＮＫＧ２Ｄａ、抗ＮＫＧ２ＤＬ（ＭＩＣＡ）、アルギナーゼ、ＩＤＯ／ＴＤＯ、アデノシン、Ａ２ＡＲ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＰＩ３Ｋガンマ、抗ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ９４、並びに、ＣＤ４７／ＳＩＲＰａ、Ｍｅｒ／Ａｘｌ／Ｔｙｒｏ３、ＴＩＭ３、ＭＦＧ−Ｅ８／ＧＡＳ６、及び／またはＤＤ１アルファのうち一つまたはそれより多くを活性化または阻害するための療法を含む。免疫療法に関するさらなる情報は、Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃ．，１４：６０３−２２；Ｗｅｉｎｍａｎｎ，２０１６，ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ，１１：４５０−６６；及びＺｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．Ｔｏｄａｙ，２１（６）：１０２７−３６において見つけられうる。これらの開示は、本参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２１】
本明細書の至る所で与えられる最大の数値的制限のそれぞれは、それより低い数値的制限が本明細書においてあたかも明確に書かれたかのように、そのようなそれより低い数値的制限それぞれを含むことが意図される。本明細書の至る所で与えられる最小の数値的制限それぞれは、それより高い数値的制限が本明細書においてあたかも明確に書かれたかのように、そのようなそれより高い数値的制限それぞれを含むことになる。本明細書の至る所で与えられる数値的範囲それぞれは、それより狭い数値的制限が本明細書においてあたかも明確に書かれたかのように、そのようなより広い数値的範囲内にあるそのようなそれより狭い数値的制限それぞれを含むことになる。
【０１２２】
本発明は、以下の実施例への参照によりさらに理解されうる。その実施例は、例証として提供され、限定的であるとは意図されない。
【実施例１】
【０１２３】
実施例１：同系免疫応答性マウスにおける腫瘍の、ＰＴＣリードスルーを促進する化合物での治療
この実施例は、ＰＴＣリードスルーを促進する化合物が、免疫反応の産生、及び腫瘍の縮小をもたらすことを示す。
材料及び方法
【０１２４】
同系免疫応答性腫瘍モデルは、マウス癌細胞株を用いて作成される。細胞株の例は、数ある中、膵臓（Ｐａｎ０２）、前立腺（ＲＭ１）、結腸（ＣＴ−２６、Ｃｏｌｏｎ−２６、ＭＣ３８−２６）、腎臓（Ｒｅｎｃａ）、膀胱（ＭＢＴ−２）、肺（ＬＬ／２、ＫＬＮ２０５）、黒色腫（Ｂ１６ＢＬ６、Ｂ１６Ｆ１０、Ｓ９１）、乳（４Ｔ１、ＥＭＴ６、ＪＣ）、繊維肉腫（ＷＥＨＩ−１６４）、白血病（Ｃ１４９８、Ｌ１２１０）、肝臓（Ｈ２２、Ｈｅｐａｌ−６）、リンパ腫（Ａ２０、ＥＬ−４、Ｅ．Ｇ&−ＯＶＡ、Ｌ５１７８−Ｒ、Ｐ３８８Ｄ１）、肥満細胞腫（Ｐ８１５）、骨髄腫（ＭＰＣ−１１）、神経芽腫（Ｎｅｕｒｏ−２ａ）を含む（ｗｏｒｌｄ  ｗｉｄｅ  ｗｅｂ．ｃｒｏｗｎｂｉｏ．ｃｏｍ／ｏｎｃｏｌｏｇｙ／ｉｎ−ｖｉｖｏ−ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ｓｙｎｇｅｎｅｉｃ−ｔｕｍｏｒ−ｍｏｄｅｌｓ／）。マウスに腫瘍細胞の懸濁液が皮下注射され、その懸濁液は注射からおよそ４−６週間後に腫瘍へと発達する。
【０１２５】
早期の確立されたマウス腫瘍に対する治療の有効性を試験するため、グループあたり１０匹のマウスのコホートが、第３−７日から、あるいは腫瘍が触知可能であるときに、薬（またはシャム対照）を与えられる。薬は毎日、毎日二回、毎週数回与えられ、あるいは、マウスが４−６週間にて屠殺されるまで、または腫瘍がサイズ３−５ｃｍに達するもしくは潰瘍化するまで継続的に投薬される。治療の間、腫瘍体積は、週に三回、キャリパーにより三次元測定値を使用して決定された。腫瘍は、屠殺の後に回収され、最終腫瘍体積を決定するために重量測定された。
【０１２６】
腫瘍を擁する他のコホートは、腫瘍中の免疫Ｔ細胞反応を調べるため、より早い時点において屠殺される。腫瘍内免疫反応は、フローサイトメトリーによる計数、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細胞反応、並びにＴｒｅｇ反応を使用して評価される。完治した動物は、ネオアンチゲンに対して記憶抗腫瘍反応が誘発されているかを決定するため、同一の腫瘍でリチャレンジされる。
【０１２７】
同じ腫瘍細胞株は、ネオアンチゲンを同定するためにｉｎ  ｖｉｔｒｏにて薬で処理される。処理の前及び後でＲＮＡｓｅｑが実施され、ネオアンチゲンを予測するためにコンピューターにより解析される。誘発されたネオアンチゲン特異的Ｔ細胞反応を示すため、これらの同じ薬で処理された細胞株が、腫瘍を擁する薬で治療された動物から得られたＴ細胞を刺激するために使用される。
【０１２８】
この実施例においては、薬がＰＴＣリードスルー阻害剤アタルレンまたは他の一リードスルー化合物（ＲＴＣ）である場合、グループあたり１０匹のマウスのコホートが、ＤＭＳＯ（１０ｍｇ／ｋｇについては２％、１００ｍｇ／ｋｇについては２０％）及び（２−ヒドロキシプロピル）−β−シクロデキストリン（２２％）（Ｃａｔ．＃Ｈ５７８４、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を含有するＰＢＳ中に溶解された１０または１００ｍｇ／ｋｇのアタルレン（Ｓｅｌｌｅｃｋ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ，ＵＳＡ）で、連続する２日にわたり毎日四回腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により治療される（Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ，２０１４）。
【０１２９】
Ｍｄｘマウス（週齢４週）が、腹腔内にＲＴＣ１３またはＰＴＣ１２４（ＤＭＳＯ中に懸濁）を注射され、注射は、４週間にわたり５日毎に一回３０ｍｇ／ｋｇの濃度にて実施された（Ｋｅｙａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．２０１２）。
【実施例２】
【０１３０】
実施例２：同系免疫応答性マウス中の腫瘍の、ＲＴＣと免疫療法剤との組合せでの治療
この実施例は、同系免疫応答性マウス中の腫瘍の、ＲＴＣと、チェックポイント遮断などの免疫療法剤との組合せでの治療の効果を示す。これらのアプローチを組み合わせること（局所または全身性のいずれか）は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの強力な腫瘍ネオアンチゲンの産生ゆえに、癌免疫療法の有効性を多いに増強させうる。以前まで隠れていた強い内因性の腫瘍抗原を呼び起こすことは、新たにされた免疫監視のラウンドをおそらく誘発することになり、それは各個体の腫瘍に固有のこれらの変異に対する免疫を駆動する他のアプローチ（チェックポイント遮断、免疫アジュバント）の同時の使用によりさらに増強されうる。
【０１３１】
現在、チェックポイント遮断は、存在する細胞傷害性Ｔ細胞にその腫瘍を撲滅するという仕事を完遂することを可能にするために、Ｔ細胞阻害性経路の除去のみを要する継続する獲得免疫を有する、免疫学的に「ホット」な腫瘍を有する個体での、主な治療に関する進歩であってきた。ＰＣＴリードスルーは、内因性ワクチン効果を通じて新規のＴ細胞増殖を駆動することにより、免疫学的に「コールド」な腫瘍を「ホット」な腫瘍に変換する潜在性を有する。このことは、チェックポイント遮断からの利益を受けるであろう患者の潜在的な数を広げる。
材料及び方法
【０１３２】
使用された癌のマウスモデルは、上で開示の通りである。
【０１３３】
腫瘍サイズ、腫瘍内免疫反応、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細胞反応、並びにＴｒｅｇ反応の評価は、上で開示の通りである。
【０１３４】
薬がＲＴＣである場合、グループあたり１０匹のマウスのコホートが、１０または１００ｍｇ／ｋｇの薬で、薬（ＤＭＳＯ中に再懸濁されている）の腹腔内注射、口腔注入、または他の投与経路により、治療された。注射は、３０ｍｇ／ｋｇの濃度にて毎日２−４回実施された（Ｋｅｙａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．２０１２）。
【０１３５】
１つまたはそれ以上の免疫療法剤との組合せは、腫瘍に対する免疫反応を増強するための薬（とくに、ＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１及び／またはＣＴＬＡ４の調節剤）を含む（Ｃｕｒｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，２０１０；Ｄｕｒａｉｓｗａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１３）。これらは、以下を含むがそれらに限定されない：チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＴＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、Ｂ−７Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＩＬＴ−３、ＩＬＴ−４、及び／またはＶＩＳＴＡの阻害剤）、Ｔ細胞アゴニスト（例えば、ＣＤ２７、ＯＸ−４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、Ｂ７−Ｈ３、及び／またはＣＤ１３７のアゴニスト）、分子アジュバント（例えば、ＣＤ４０、ＴＬＲリガンド、及び／または細胞内ＤＮＡセンサーアゴニスト（ＳＴＩＮＧ））、微小環境調節剤（例えば、ＣＤ７３、ＩＤＯ、ＴＤＯ、ＣＯＸ２阻害剤、ＣＤ３９阻害剤、Ａ２Ａ受容体アゴニスト）、ケモカイン受容体アンタゴニスト（例えば、ＣＸＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、ＣＣＲ４、及び／またはＣＸＣＲ４のアンタゴニスト）、並びに／あるいはサイトカイン療法（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、及び／または抗ＴＧＦ−β）。
【実施例３】
【０１３６】
実施例３：ＲＴＣのエピジェネティック調節薬との組合せ
この実施例は、同系免疫応答性マウス中の腫瘍の、ＲＴＣと、エピジェネティック調節薬との組合せでの治療の効果を示す。１つまたはそれ以上のエピジェネティック調節剤の追加は、ネオアンチゲンの免疫認識を増強する潜在性を有する。
材料及び方法
【０１３７】
使用された癌のマウスモデルは、上で開示の通りである。
【０１３８】
腫瘍サイズ、腫瘍内免疫反応、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細胞反応、並びにＴｒｅｇ反応の評価は、上で開示の通りである。
【０１３９】
腫瘍のエピジェネティック調節剤での治療は、免疫反応に関与する遺伝子の抑制を除去しうる。ＲＴＣとエピジェネティック調節薬との組合せは、ネオアンチゲンの認識を増強するであろう。エピジェネティック調節薬の非限定的な例は、限定することなく、ＨＤＡＣ阻害剤、アゾシチジン、ＢＥＴ阻害剤、ＥＺＨ２阻害剤、及び／またはｄｏｔ１Ｌ阻害剤（例えば、ピノメトスタット）を含む。
【実施例４】
【０１４０】
実施例４：ＲＴＣの放射線療法との組合せ
この実施例は、同系免疫応答性マウス中の腫瘍の、ＲＴＣと放射線療法との組合せでの治療の効果を示す。放射線療法（ＲＴ）の前のＲＴＣでの治療は、免疫刺激性細胞死の前に腫瘍中のネオアンチゲンの発現を増加させ、増強されたネオアンチゲン提示をもたらすであろう。
材料及び方法
【０１４１】
使用された癌のマウスモデルは、上で開示の通りである。
【０１４２】
腫瘍サイズ、腫瘍内免疫反応、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細胞反応、並びにＴｒｅｇ反応の評価は、上で開示の通りである。
【０１４３】
腫瘍を標的とする放射線療法（ＲＴ）の間のＲＴＣでの継続的な治療は、変異誘発及びＤＮＡ損傷によりネオアンチゲンを産生する可能性を秘める。細胞死の間のこれらの抗原の放出と共に、腫瘍特異的Ｔ細胞を活性化させるように免疫反応を引き起こす炎症性シグナル。放射線療法は、腫瘍の微小環境に影響を及ぼして活性化Ｔ細胞の浸潤を増強し、腫瘍拒絶の障壁を克服しうる。ＲＴＣ及び免疫療法剤（実施例４）のＲＴとの組合せは、ネオアンチゲンの発現を増強させることにより、個々の患者におけるプライミング（抗原提示）と免疫反応のエフェクターフェーズとの両者に対する放射線の効果を増強させる（Ｄｅｍａｒｉａ  ｅｔ  ａｌ，ＪＡＭＡ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０１５）。
【実施例５】
【０１４４】
実施例５：ＲＴＣの化学療法との組合せ
この実施例は、同系免疫応答性マウス中の腫瘍の、ＲＴＣと放射線療法との組合せでの治療の効果を示す。化学療法の前のＲＴＣでの治療は、免疫刺激性細胞死の前に腫瘍中のネオアンチゲンの発現を増加させ、増強されたネオアンチゲン提示をもたらすであろう。
材料及び方法
【０１４５】
使用された癌のマウスモデルは、上で開示の通りである。
【０１４６】
腫瘍サイズ、腫瘍内免疫反応、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細胞反応、並びにＴｒｅｇ反応の評価は、上で開示の通りである。
【０１４７】
化学療法の間のＲＴＣでの継続的な治療は、変異誘発及びＤＮＡ損傷によりネオアンチゲンを、また免疫反応を引き起こす炎症性シグナルをと共に、細胞死の間のこれらの抗原の放出を産生し、腫瘍特異的Ｔ細胞を活性化させる可能性を秘める。化学療法は、腫瘍の微小環境に影響を及ぼして活性化Ｔ細胞の浸潤を増強し、腫瘍拒絶の障壁を克服しうる。ＲＴＣ及び免疫療法剤（実施例３）の化学療法との組合せは、ネオアンチゲンの発現を増強させることにより、個々の患者におけるプライミングと免疫反応のエフェクターフェーズとの両者に対する化学療法の効果を増強させる。
【実施例６】
【０１４８】
実施例６：ＲＴＣと腫瘍溶解性ウィルスとの組合せ
この実施例は、同系免疫応答性マウス中の腫瘍の、ＲＴＣと腫瘍溶解性ウィルスとの組合せでの治療の効果を示す。
材料及び方法
【０１４９】
使用された癌のマウスモデルは、上で開示の通りである。
【０１５０】
腫瘍サイズ、腫瘍内免疫反応、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細胞反応、並びにＴｒｅｇ反応の評価は、上で開示の通りである。
【０１５１】
免疫原性細胞死を誘発するための他のアプローチは、選択的に腫瘍細胞を殺すための腫瘍溶解性ウィルスの使用を含む。従って、患者のＲＴＣでの前もっての治療は、腫瘍溶解性ウィルスに、誘発されたネオアンチゲンの抗原提示を、次いで増強されたＴ細胞反応を向上させることを、可能とするであろう。
【実施例７】
【０１５２】
実施例７：ＲＴＣのワクチン療法との組合せ
この実施例は、同系免疫応答性マウス中の腫瘍の、ＲＴＣとワクチン療法との組合せでの治療の効果を示す。
材料及び方法
【０１５３】
使用された癌のマウスモデルは、上で開示の通りである。
【０１５４】
腫瘍サイズ、腫瘍内免疫反応、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細胞反応、並びにＴｒｅｇ反応の評価は、上で開示の通りである。
【０１５５】
ネオアンチゲンワクチンは、癌において潜在的に有効であえるワクチンアプローチとして新たに現れている。今日まで、ネオアンチゲンはアミノ酸置換を含んできたが、一方でＲＴＣ化合物は、ネオアンチゲンの範囲を単一アミノ酸置換を超えて広くするだろう。ＲＴＣから産生された異常なペプチド、またはそれら産物をコードするＤＮＡもしくはＲＮＡは、個別化ワクチンの構成要素を象徴する。ＲＴＣで治療された患者の腫瘍の転写プロファイリングは、そのようなワクチンを産生するために使用されうる異常リードスルータンパク質の候補を提供する。ＲＴＣで治療された腫瘍全体は、ホールセルワクチンのための基礎としても使用されうる。誘発されたネオアンチゲンに対するそのようなワクチンは、他のワクチンに加え、これらの実施例のあらゆる薬剤と組み合わされうる。
【実施例８】
【０１５６】
実施例８：ＲＴＣの、ＣＡＲ−Ｔ細胞または患者由来腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）との組合せ
この実施例は、同系免疫応答性マウス中の腫瘍の、ＲＴＣとＡＲ−Ｔ細胞または患者由来腫瘍浸潤性リンパ球との組合せでの治療の効果を示す。
材料及び方法
【０１５７】
使用された癌のマウスモデルは、上で開示の通りである。
【０１５８】
腫瘍サイズ、腫瘍内免疫反応、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細胞反応、並びにＴｒｅｇ反応の評価は、上で開示の通りである。
【０１５９】
ＲＴＣで治療された患者において誘発されたＴ細胞は、これらの薬により産生されたネオアンチゲンを認識するように誘発されるだろう。これらの特異的Ｔ細胞は、ｅｘ  ｖｉｖｏで増殖されて直接患者に再注入されうる。あるいは、そのＴＣＲがクローニングされて再注入のためのＣＡＲ−Ｔ細胞を工学操作するために使用されうる。
【実施例９】
【０１６０】
実施例９：マウス腫瘍モデルにおける、ＲＴＣ単独での、及びＲＴＣと１つまたはそれ以上の免疫療法剤との組合せでの、使用
この実施例は、腫瘍を擁するＣ５７ＢＬ／６マウスの治療に対する、ＲＴＣ単独での、及びＲＴＣと１つまたはそれ以上の免疫療法剤との組合せの有効性を評価した。
材料及び方法
【０１６１】
動物：週齢６−８週（播種時の推定週齢）のメスＣ５７ＢＬ／６マウスは、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｌｉｎｇｃｈａｎｇ  Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．Ｌｔｄ（ＬＣ、Ｓｈａｎｇｈａｉ、Ｃｈｉｎａ）から入手した。動物は、２０−２６℃において、１２時間の明と１２時間の暗サイクルで収容された。
【０１６２】
細胞培養：ＭＣ３８腫瘍細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで単層培養として、１０％ウシ胎児血清が補足されたＤＭＥＭ培地中で、３７℃にて空気中５％ＣＯ２の空気中で維持された。その腫瘍細胞は、常に週に二回、継代培養された。指数成長フェーズにある細胞が回収され、腫瘍は種のために計数された。
【０１６３】
治療用化合物：アタルレン（ＰＴＣ１２４）は、Ｓｅｌｌｅｃｋ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｈｏｕｓｔｏｎ、ＴＸ）から入手した。抗ＰＤ−１及び抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ＢｉｏＸＣｅｌｌから、また抗ＣＤ８抗体も同様に、入手した。化合物は、表１に示されるように製剤化された。化合物は製剤化され、
【表１】
2019505578.tif 000008
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【０１６４】
腫瘍播種：腫瘍発育のため、各マウスは、右横腹下部領域に、ＰＢＳ０．１ｍＬ中のＭＣ３８腫瘍細胞（１ｘ１０６）が皮下に播種された。治療は、平均腫瘍サイズがおよそ５０ｍｍ３に達した際に開始された。化合物が投与され、各実験グループにおける動物数は表２に示される。腫瘍細胞播種の日にちは、第０日として示される。
【０１６５】
グループ割り振り：グループ化及び治療の前に、すべての動物が重量測定され、キャリパーを使用して腫瘍体積が測定された。腫瘍体積は、定誤差を最小限にするため、選択された動物を特定のグループへとランダム化するための数値的パラメーターとして使用された。グループ化は、ＳｔｕｄｙＤｉｒｅｃｔｏｒ（商標）ソフトウェア（Ｓｔｕｄｙｌｏｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して実施された。グループ割り当てのためには、グループごとの腫瘍体積の最小変度を示す一つの最適なランダム化設計（Ｍａｔｃｈｅｄ分布により作成された）が選択された。
【表２】
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注
・Ｎ：動物数；
・投薬体積は１０μｌ／ｇ；
・ＰＴＣ１２４はランダム化にて第一用量が与えられた（腫瘍サイズ〜５０ｍｍ３）。
ＣＤ８、ＣＴＬＡ−４、及びＰＤ−１抗体は、腫瘍サイズが到達した際（７５−１００ｍｍ３）にルーチンで与えられた。それはＰＴＣ１２４を与えてから３−４日後であった。
・試験化合物及び抗体が同じ日に投与された場合、ＰＴＣ１２４は午前中に与えられ、抗体は午後に与えられた。
【０１６６】
ＦＡＣＳ解析：腫瘍細胞が各治療グループから単離され、ＦＡＣＳ解析が、当技術分野において周知である方法に従って実施された。ＦＡＣＳ解析のために使用された試薬は、下の表３において示される。
【表３】
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【０１６７】
免疫組織化学（ＩＨＣ）：腫瘍試料からのホルマリン固定パラフィン埋め込み（ＦＦＰＥ）組織が４μｍに切片化された。抗原回復（ＡＲ）は、１００℃にてＥＤＴＡ緩衝液中でｐＨ９．０にて２０分にわたり実施された。一次抗体（検証済みの濃度に希釈）、ＲＴ６０分＋二次抗体（使用準備済み）、ＲＴ６０分＋Ｂｏｎｄ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｒｅｆｉｎｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ。使用された抗体及び試薬は、表４中に示される。
【表４】
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結果：
【０１６８】
腫瘍細胞播種の後、動物は、毎日、病的状態及び死亡数に加え、病的状態、食料及び水消費の目測、体重増加／減少、目／毛の艶喪失、並びにあらゆる他の異常効果などの正常行動に対する腫瘍成長及び治療のあらゆる影響について確認された。腫瘍体積は、キャリパーを使用して少なくとも二次元で週に二回測定され、体積が、式：Ｖ＝０．５ａｘｂ２を使用してｍｍ３で表現された。ここで、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長径及び短径である。
【０１６９】
実験期間にわたる各治療グループについての平均腫瘍体積は表５中に示され、腫瘍体積のパーセント阻害は表６中に示される。
【表５】
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【表６】
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【０１７０】
表６に示されるように、ＰＴＣリードスルー阻害剤（ＰＴＣ１２４）は、それ自身で（グループ２；図１）、また免疫療法剤抗ＰＤ−１との（グループ４；図３）及び抗ＣＴＬＡ−４との（グループ５；図２）組合せで、腫瘍阻害を促進する特性を有する。とくに、ＰＴＣ１２４のＣＴＬＡ−４との組合せは、腫瘍阻害に関して、抗ＰＤ−１抗体と抗ＣＴＬＡ−４抗体との組合せでの治療（グループ８）と同じだけ有効であった。一つよりも多い抗体ベースの治療薬を利用する免疫療法は、急性アナフィラキシー、血清病、及び抗体産生などの有害事象及び副作用と関連付けられてきたため、このことは意義深い。さらに、抗ＣＤ８抗体での治療はＰＴＣ１２４の有益な治療効果を無効にすることが示されたため、ＰＴＣ１２４での治療はＴ細胞媒介性であることが示された（グループ３；図１）。
【０１７１】
図４に示されるように、免疫組織化学解析は、ＰＴＣリードスルー阻害剤での治療が、腫瘍組織に浸潤する顕著な数のＣＤ３＋免疫細胞をもたらしたことを示した。図４はまた、この効果は、治療がＰＤ−１に対する抗体及びＣＴＬＡ−４に対する抗体と組合せられると増強されたことも示す。さらに、図５に示されるように、ＦＡＣＳ解析は、ＰＴＣ１２４での治療が、腫瘍内Ｔ細胞浸潤（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、及びＣＤ４＋細胞）の増加と関連付けられたことを明らかにした。
【実施例１０】
【０１７２】
実施例１０：ＲＴＣの、免疫療法剤の組合せとの組合せでの使用
この実施例は、腫瘍を擁するＣ５７ＢＬ／６マウスの治療に対する、ＲＴＣと二つの免疫療法剤（抗ＰＤ−１及び抗ＣＴＬＡ−４）との組合せの有効性を評価する。
材料及び方法
【０１７３】
動物維持、細胞培養、播種、グループ割り振り、並びにアタルレン（ＰＣＴ１２４）、抗ＰＤ−１、及び抗ＣＴＬＡ−４抗体の製剤化は、実施例９において議論されるように実施された。
【０１７４】
化合物が投与され、各実験グループにおける動物数は、表７に示される。腫瘍細胞播種の日は、第０日として示される。
【表７】
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結果：
【０１７５】
腫瘍細胞播種の後、動物は、毎日、病的状態及び死亡数に加え、病的状態、食料及び水消費の目測、体重増加／減少、目／毛の艶喪失、並びにあらゆる他の異常効果などの正常行動に対する腫瘍成長及び治療のあらゆる影響について確認された。腫瘍体積は、キャリパーを使用して少なくとも二次元で週に２回測定され、体積が、式：Ｖ＝０．５ａｘｂ２を使用してｍｍ３で表現された。ここで、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長径及び短径である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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