【手続補正書】
【提出日】平成19年10月16日(2007.10.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  Rhesusハイブリッドボックス、上流Rhesusボックス又は下流Rhesusボックスを表し、その配列が、図８〜図１０に示されてなる、核酸分子構造。
【請求項２】  共通のRHD陰性ハプロタイプを示し、該RHD陰性ハプロタイプが、ハイブリッドRhesusボックスを含有するRhD抗原陰性ハプロタイプのことを言う、請求項１記載の核酸分子構造。
【請求項３】  上流Rhesusボックス、下流Rhesusボックス又はその両方を含むRHD遺伝子欠損を含有するRHD陰性ハプロタイプを示してなる、請求項１記載の核酸分子構造。
【請求項４】  共通のRHD陽性ハプロタイプを示し、該RHD陽性ハプロタイプが、RHD遺伝子に特異的なDNA配列を含有するハプロタイプのことを言う、請求項１記載の核酸分子構造。
【請求項５】  血清学的にRhD陰性に分類されたRHD陽性ハプロタイプを含有した試料に由来し、該RHD陽性ハプロタイプが、常套的な血清学的アッセイを用いて、RhD抗原の存在について試験され、アッセイの結果が陰性であった試料を記載する、請求項１記載の核酸分子構造。
【請求項６】  該試料が、カフカス人集団から選ばれたものである、請求項５記載の核酸分子構造。
【請求項７】  PCR-RFLP、PCR-SSP又はロング−レンジPCRにより、配列が、図８〜１０に示されるハイブリッドRhesusボックス又は上流Rhesusボックス又は下流Rhesusボックス、あるいは請求項２〜６のいずれかの１項に記載の構造的特徴を用いることによる、試料中におけるRHD遺伝子のタンパク質産物の発現を終結又は消すRHD遺伝子内のナンセンス変異、ミスセンス変異、スプライス部位変異、部分欠失、部分挿入、部分逆位又はその組合せにより引き起こされるRHD陰性ハプロタイプの特異的検出方法。
【請求項８】  請求項１〜６いずれか１項に記載の核酸分子構造を含有してなる、ベクター。
【請求項９】  請求項８記載のベクターにより形質転換されてなる、非ヒト宿主。
【請求項１０】  請求項１〜６いずれか１項に記載の核酸分子構造の部分にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするオリゴヌクレオチドであって、
該部分が前記ハイブリッド遺伝子のブレークポイントを含む領域、又はその相補的な部分にハイブリダイズし、該ブレークポイントを含む領域が、上流RHDボックスの5'部分が下流RHDボックスの3'部分と空間的に隣接することを特徴とし、該オリゴヌクレオチドが20ヌクレオチドを含有して、実際のブレークポイントの5'及び3'に位置する、オリゴヌクレオチド。
【請求項１１】  ストリンジェントな条件下に、請求項１０記載のオリゴヌクレオチドを、ヒトから得られた試料に含有された核酸分子にハイブリダイズするステップ、及び該ハイブリダイゼーションを検出するステップを含む、請求項１〜６いずれか１項に記載の核酸分子構造により特徴付けられたRHD遺伝子の欠損を保持する、核酸分子の試料中における存在の試験方法。
【請求項１２】  該ハイブリダイゼーションの産物を制限酵素で消化するステップ、及び該消化の産物を解析するステップをさらに含む、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】  請求項１〜６のいずれか１項に記載の核酸分子構造の少なくとも一部分で、かつ該ハイブリッド遺伝子のブレークポイントをコードする部分の核酸配列を決定するステップを含む、請求項１〜６いずれか１項に記載の核酸分子構造により特徴付けられたRHD遺伝子の欠損を保持する核酸分子の試料中における存在の試験方法。
【請求項１４】  該核酸配列を決定する前に、該核酸分子構造の少なくとも前記部分を増幅するステップをさらに含む、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】  該配列の少なくとも一部を増幅するプライマーのセットを用いて増幅反応を行なう工程を含む、請求項１〜６いずれか１項に記載の核酸分子構造により特徴付けられたRHD遺伝子の欠失を保持する核酸分子の試料中における存在の試験方法であって、該増幅反応に用いられるプライマーの少なくとも一つが、請求項１〜６いずれか１項に記載の核酸分子構造の部分に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするオリゴヌクレオチドであり、該部分が、該ハイブリッド遺伝子のブレークポイントを含む領域、又はその相補的な部分にハイブリダイズし、ブレークポイントを含む該領域が、上流RHDボックスの5'部分が下流RHDボックスの3'部分と空間的に隣接することを特徴とする、試験方法。
【請求項１６】  該増幅が、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)により行われるか、あるいは該増幅反応が、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)である、請求項１４又は１５記載の方法。
【請求項１７】  該PCRが、PCR-RFLP、PCR-SSP又はロング−レンジPCRである、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】  増幅産物の分子量を解析する、請求項１４〜１７いずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】  下記ステップ：
(a)  血液試料又は血液ドナーから得られる試料からDNAを単離するステップ；
(b)  ストリンジェントな条件下に、少なくとも２つの逆に向き合うプライマーを、DNAにハイブリダイズさせてPCRを行なうステップ；
(c)  標的配列を増幅するステップ；
(d)  ゲル上で増幅産物を分離するステップ；及び
(e)  増幅産物を解析するステップ
を含む、RHD陽性対立遺伝子をコードする請求項５又は６記載の核酸分子構造の存在の試験方法。
【請求項２０】  該RHD陽性対立遺伝子が、血清学的にRhD陰性試料に由来するものである、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】  該試料が、カフカス人集団から選ばれる、請求項１９又は２０記載の方法。
【請求項２２】  該試料が、血液、血清、血漿、胎児組織、唾液、尿、粘膜組織、粘液、膣組織、膣から得られた胎児組織、皮膚、毛髪、毛包又は他のヒト組織である、請求項７及び１１〜２１いずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】  胎児細胞を富化すること又は末梢血、血清若しくは血漿などの母体組織から胎児DNA若しくはmRNAを抽出することを含む、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】  該試料由来の該核酸分子又はタンパク質性物質を固体支持体に固定する、請求項７及び１１〜２３いずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】  該固体支持体が、チップである、請求項２４記載の方法。
【請求項２６】  陰性又は陽性Rhesus D表現型の解析のための、請求項１〜６いずれか１項に記載の核酸分子構造の使用。
【請求項２７】  請求項２、５及び６いずれか１項に記載の１以上の核酸分子構造の存在について、患者由来の試料を試験するステップを含み、ここで、２つの異なる該核酸分子構造に対する陽性試験が、Rh陰性血液の輸血を必要とすることを示す、血液輸血の必要がある患者が、ドナーのRhD陰性血液を輸血されるべきかどうかを決定する方法。
【請求項２８】  請求項１〜６いずれか１項に記載の１以上の核酸分子構造の存在について、ドナー由来の試料を試験するステップを含み、ここで、請求項４〜６いずれか１項に記載の１以上の核酸分子構造に対する陰性試験を行うか、あるいは行わないものである請求項２記載の核酸分子構造に対する陰性試験が、RhD陰性にタイプ分けされる患者へのドナーの血液の輸血を排除する、ドナーの血液が、輸血を必要とする患者への輸血に用られるかどうかを決定する方法。
【請求項２９】  請求項１〜６いずれか１項に規定された１以上の核酸分子構造の存在について、胎児の父から得られた試料を評価するステップを含む、RhD陰性母がRhD陽性胎児を妊娠若しくはもつリスク、又は抗D力価をもつ母が、新生児の溶血性疾患を発症するリスクをもって胎児を妊娠若しくはもつリスクの評価方法。
【請求項３０】  該核酸分子構造が、変異又は欠失を保持する、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】  請求項１〜６いずれか１項に記載の１以上の核酸分子構造の存在について、男性から得られた試料をアッセイすることによる男性が子供の父である可能性又は見込みの評価方法であり、ここで、試験結果は、該男性が、子供の父である可能性又は見込みを推量するのに用いられた請求項２及び４〜６いずれか１項に記載の核酸分子構造のホモ接合、ヘテロ接合又は非存在を決定するために用いられる、男性が子供の父である可能性又は見込みの評価方法。
【請求項３２】  (a)  請求項１０記載のオリゴヌクレオチド；及び／又は
(b)  請求項１５〜１７いずれか１項に記載の増幅反応を行うに有用な一対のプライマー
を含有してなるキット。
【請求項３３】  請求項１〜６いずれか記載の核酸分子構造の部分にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするためのオリゴヌクレオチドの使用であって、該部分が、該ハイブリッド遺伝子のブレークポイントを含む領域、又はその相補的な部分にハイブリダイズし、ブレークポイントを含む該領域が、上流Rhesusボックスの5'部分が下流Rhesusボックスの3'部分と空間的に隣接することを特徴とする、オリゴヌクレオチドの使用。
【請求項３４】  下記ステップ：
(a)  血液試料又は血液ドナーから得られる試料からDNAを単離するステップ；
(b)  ストリンジェントな条件下に、少なくとも２つの逆に向き合うプライマーを、DNAにハイブリダイズさせてPCRを行なうステップ；
(c)  標的配列を増幅するステップ；
(d)  ゲル上で増幅産物を分離するステップ；及び
(e)  増幅産物を解析するステップ
を含む、共通のRHD陰性ハプロタイプを示す請求項３記載の核酸分子構造の存在の試験方法。