【手続補正書】
【提出日】平成19年6月7日(2007.6.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１である配列
Xaa1-Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys-Pro-Pro-Cys-Pro-Ala-Pro-
Xaa16-Xaa17-Xaa18-Gly-Gly-Pro-Ser-Val-Phe-Leu-Phe-Pro-Pro-Lys-Pro-
Lys-Asp-Thr-Leu-Met-Ile-Ser-Arg-Thr-Pro-Glu-Val-Thr-Cys-Val-
Val-Val-Asp-Val-Ser-Gln-Glu-Asp-Pro-Glu-Val-Gln-Phe-Asn-Trp-
Tyr-Val-Asp-Gly-Val-Glu-Val-His-Asn-Ala-Lys-Thr-Lys-Pro-Arg-
Glu-Glu-Gln-Phe-Xaa80-Ser-Thr-Tyr-Arg-Val-Val-Ser-Val-Leu-Thr-
Val-Leu-His-Gln-Asp-Trp-Leu-Asn-Gly-Lys-Glu-Tyr-Lys-Cys-Lys-
Val-Ser-Asn-Lys-Gly-Leu-Pro-Ser-Ser-Ile-Glu-Lys-Thr-Ile-Ser-
Lys-Ala-Lys-Gly-Gln-Pro-Arg-Glu-Pro-Gln-Val-Tyr-Thr-Leu-Pro-
Pro-Ser-Gln-Glu-Glu-Met-Thr-Lys-Asn-Gln-Val-Ser-Leu-Thr-Cys-
Leu-Val-Lys-Gly-Phe-Tyr-Pro-Ser-Asp-Ile-Ala-Val-Glu-Trp-Glu-
Ser-Asn-Gly-Gln-Pro-Glu-Asn-Asn-Tyr-Lys-Thr-Thr-Pro-Pro-Val-
Leu-Asp-Ser-Asp-Gly-Ser-Phe-Phe-Leu-Tyr-Ser-Arg-Leu-Thr-Val-
Asp-Lys-Ser-Arg-Trp-Gln-Glu-Gly-Asn-Val-Phe-Ser-Cys-Ser-Val-
Met-His-Glu-Ala-Leu-His-Asn-His-Tyr-Thr-Gln-Lys-Ser-Leu-Ser-
Leu-Ser-Leu-Gly-Xaa230 (SEQ ID NO:1)
（ここで、
位置１のＸａａは、Ａｌａであるか、存在しない、
位置１６のＸａａは、ＰｒｏまたはＧｌｕであり、 
位置１７のＸａａは、Ｐｈｅ、ＶａｌまたはＡｌａであり、
位置１８のＸａａは、Ｌｅｕ、ＧｌｕまたはＡｌａであり、
位置８０のＸａａは、ＡｓｎまたはＡｌａであり、
位置２３０のＸａａは、Ｌｙｓであるか、存在しない）
を含む免疫グロブリンのＦｃ部分に融合した治療用活性ペプチドを含む非相同融合蛋白質。
【請求項２】
a) Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO:2)、
b) Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO:4)、
c) Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO:6)、
d) Asp-Ala-Ala-Ala-Lys-Glu-Ala-Ala-Ala-Lys-Asp-Ala-Ala-Ala-Arg-Glu-Ala-Ala-Ala-Arg-Asp-Ala-Ala-Ala-Lys (SEQ ID NO:7)、
e) Asn-Val-Asp-His-Lys-Pro-Ser-Asn-Thr-Lys-Val-Asp-Lys-Arg (SEQ ID NO:8)
からなる群から選択される配列を含むペプチド・リンカーを介し、治療用活性ペプチドのＣ末端アミノ酸がＦｃ部分のＮ末端アラニン残基と融合している、請求項１記載の非相同融合蛋白質。
【請求項３】
請求項１または２に記載の非相同融合蛋白質を含有する、医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、治療用活性ペプチドおよび治療用活性ペプチドのインビボ半減期を長くする効果を有する免疫グロブリンの定常Ｈ鎖（Ｆｃ）部分を含む非相同融合蛋白質に関する。これらの非相同融合タンパク質は、ヒトの疾患ならびに多様な症状または疾患を処置するために使用され得る。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
ヒトの免疫グロブリンは５種類あり、それぞれ異なるエフェクター機能と薬物動態特性を有している。ＩｇＧは５種類のうち最も安定しており、ヒト血清の半減期は約２３日である。ＩｇＧには４種類のサブクラス （Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、およびＧ４）があり、それぞれエフェクター機能と呼ばれる異なる生物機能を有している。こういうエフェクター機能は通常Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）との相互作用を通して仲介される。または免疫グロブリンＧまたは免疫グロブリンＭのＨ鎖を認識し、それと結合して、古典的補体活性化経路を開始する補体１（Ｃ１ｑ）の亜成分と結合することにより仲介される。ＦｃγＲとの結合は抗体依存細胞仲介で細胞を溶解する場合があり、補体因子との結合は補体仲介で細胞を溶解する場合がある。非相同融合蛋白質をデザインするにあたり、半減期を長くする機能のためだけにＦｃ部分を利用する場合、エフェクター機能を抑えることが重要である。従って、本発明の非相同融合蛋白質は、ＦｃγＲおよび補体因子との結合能力がＩｇＧの他の亜型と比べて低いＩｇＧ４  Ｆｃ部位に由来する。しかしＩｇＧ４はヒトの標的細胞を枯渇させることが証明されている［アイザックス（Ｉｓｓａｃｓ）等, Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０６：４２７−４３３（１９９６）］。本発明の非相同融合蛋白質は体内の種々の器官の細胞を標的にするので、非相同融合蛋白質にＩｇＧ４由来の部位を使用すれば、非相同融合蛋白質と標的細胞に存在する受容体との相互作用を通して、細胞に対する免疫反応が始まる場合がある。従って、本発明の非相同融合蛋白質の一部であるＩｇＧ４  Ｆｃ部位には、エフェクター機能を排除する置換が含まれている。本発明の非相同融合蛋白質のＩｇＧ４  Ｆｃ部分は、残基２３３のグルタミン酸塩をプロリンで置換、残基２３４のフェニルアラニンをアラニンまたはバリンで置換、および残基２３５のロイシンをアラニンまたはグルタミン酸塩で置換（ＥＵ番号付け, カバット（Ｋａｂａｔ）、Ｅ．Ａ．等（１９９１）免疫学的関心の蛋白質の配列（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）, 第５版, 米国保健福祉省, メリーランド州べテスダ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ）, ＮＩＨ出版番号９１−３２４２)、の１つまたはそれ以上を含んでいる場合がある。こういう残基はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置１６、１７、および１８に対応している。更に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置８０に相当する残基２９７（ＥＵ番号付け）のＡｓｎをＡｌａで置換することによりＩｇＧ４  Ｆｃ部位のＮ連結グリコシル化部位を除去するのも、非相同融合蛋白質の残存するエフェクター活性を排除する方法である。 
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
天然分子に存在するＣ末端のリジン残基は、本出願記載の非相同融合蛋白質のＩｇＧ４由来Ｆｃ部分から削除されている場合がある（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置２３０、削除されたリジンはｄｅｓ−Ｋと呼ばれる）。リジンがＣ末端コドンでコード化されているある種の細胞型（例えばＮＳＯ細胞）で発現される非相同融合蛋白質は、分子のある部分がＣ末端アミノ酸としてリジンを有し、別の部分のリジンが削除されているので、非相同である。削除が起きるのは、ある種の哺乳類細胞で発現するときに生じる蛋白質分解酵素の作用の所為である。従って、この非相同を避けるため、非相同融合発現構築体は、リジンについてＣ末端コドンが欠如していることが望ましい。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
治療用活性ペプチド部分のＣ末端アミノ酸をグリシンの豊富なリンカーを介して、ＩｇＧ４  Ｆｃ類似体部分のＮ末端に融合するのが望ましい。本発明の非相同融合蛋白質のインビボ機能と安定性は、小ペプチド・リンカーを加え、望ましくないドメイン間の相互作用の可能性を防止することにより、最適化が可能である。更に、グリシンの豊富なリンカーは構造上の柔軟性を提供するので、治療用活性ペプチド部分が標的細胞の受容体と生産的に相互作用できるようになる。しかしこういうリンカーは、非相同融合蛋白質がインビボで免疫原生となるリスクを有意に高める場合がある。従って、望ましくないドメイン間の相互作用を阻止するのに必要な長さ、および／または生物活性および／または安定性を最適化するのに必要な長さ以上の長さにしないのが望ましい。グリシンの豊富な好ましいリンカーには、配列Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO:2)も含まれる。本発明の非相同融合蛋白質では、このリンカーの複数コピーを用いることもできるが、長期および反復投与に伴う免疫原生の危険性を最小限に抑えるには、この単一のリンカーを使用するのが望ましい。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
本出願で使用される“相補的”または“相補性”と言う用語は、二本鎖核酸において水素結合により連結している塩基対（プリンおよびピリミジン）を意味する。グアニンおよびシトシン、アデニンおよびチミン、そしてアデニンおよびウラシルの塩基対が相補的である。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７３】
絶食状態およびグルコースの段階的静脈内注射期間中のラットに３種類の用量の単回皮下注射を行なった後の薬力学的試験：
慢性的にカニューレを挿入されたラットを溶媒対照（生理食塩水）または３つの処置グループ（ＧＬＰ−１融合蛋白質：０．０１７９ｍｇ／ｋｇ、０．１７９ｍｇ／ｋｇまたは１．７９ｍｇ／ｋｇ）のいずれかに割り当てる。ＧＬＰ−１融合タンパク質および溶媒を皮下注射により投与する。処置の２４時間後、一晩絶食状態（１６時間）にあるラットにグルコースの段階的静脈内注射試験を行う。グルコースの段階的静脈内注射は、生理食塩水注入のベースライン期間（２０分）、次に３０分のグルコース注入を２度（５ｍｇ／ｋｇ／分および１５ｍｇ／ｋｇ／分）行なう期間で構成される。血漿サンプルの採取は、グルコース注入（ベースライン）の２０分前、１０分前、０分（ベースライン）、そして１０分、２０分、３０分、４０分、５０分、および６０分後に行なう。