【手続補正書】
【提出日】平成18年12月25日(2006.12.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  組換えプラスミド発現ベクターであって、
ａ）ウリジンホスホリラーゼ酵素活性を有するポリペプチドをコードする中温性細菌の少なくとも１つの遺伝子配列、および、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ酵素活性を有するポリペプチドをコードする中温性細菌の少なくとも１つの遺伝子配列と、
ｂ）テトラサイクリンおよび／またはカナマイシン耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子配列とを含むことを特徴とするベクター。
【請求項２】  組換えプラスミド発現ベクターであって、
ａ）ウリジンホスホリラーゼ酵素活性を有するポリペプチドをコードする中温性細菌の少なくとも１つの遺伝子配列、または、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ酵素活性を有するポリペプチドをコードする中温性細菌の少なくとも１つの遺伝子配列と、
ｂ）テトラサイクリンおよび／またはカナマイシン耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子配列とを含むことを特徴とするベクター。
【請求項３】  ウリジンホスホリラーゼ酵素活性を有するポリペプチドをコードする中温性細菌の少なくとも１つの遺伝子配列、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ酵素活性を有するポリペプチドをコードする中温性細菌の少なくとも１つの遺伝子配列、および、テトラサイクリンおよび／またはカナマイシン耐性をコードする少なくとも１つの遺伝子配列が、プラスミドｐＵＣ１８にクローニングされていることを特徴とする、請求項１に記載のプラスミドベクター。
【請求項４】  前記中温性細菌が大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）であることを特徴とする、請求項１または２に記載のプラスミドベクター。
【請求項５】  ウリジンホスホリラーゼ酵素活性を有するポリペプチドをコードする前記配列が配列ｕｄｐであることを特徴とする、請求項４に記載のプラスミドベクター。
【請求項６】  前記配列が受託番号Ｘ１５６８９を有するＥＭＢＬ配列であることを特徴とする、請求項５に記載のプラスミドベクター。
【請求項７】  プリンヌクレオシドホスホリラーゼ酵素活性を有するポリペプチドをコードする前記配列が配列ｄｅｏＤであることを特徴とする、請求項４に記載のプラスミドベクター。
【請求項８】  前記配列が受託番号Ｍ６０９１７を有するＥＭＢＬ配列であることを特徴とする、請求項７に記載のプラスミドベクター。
【請求項９】  テトラサイクリン耐性をコードする前記配列がｐＢＲ３２２のＴｅｔ遺伝子であることを特徴とする、請求項１または２に記載のプラスミドベクター。
【請求項１０】  カナマイシン耐性をコードする前記配列がｐＥＴ２９ｃのｋａｎ遺伝子であることを特徴とする、請求項１または２に記載のプラスミドベクター。
【請求項１１】  ウリジンホスホリラーゼ酵素活性を有するポリペプチドをコードする前記遺伝子配列と、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ酵素活性を有するポリペプチドをコードする前記遺伝子配列とが融合して、酵素ウリジンホスホリラーゼおよびプリンホスホリラーゼが互いに共有結合している融合蛋白質を発現することを特徴とする、請求項１に記載のプラスミドベクター。
【請求項１２】  ウリジンホスホリラーゼ酵素活性を有するポリペプチドをコードする前記遺伝子配列と、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ酵素活性を有するポリペプチドをコードする前記遺伝子配列とが融合して、酵素ウリジンホスホリラーゼおよびプリンヌクレオシドホスホリラーゼが２つ以上のアミノ酸ユニットのポリペプチドリンカーによって互いに結合している融合蛋白質を発現することを特徴とする、請求項１に記載のプラスミドベクター。
【請求項１３】  以下の配列：配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５を有するものから選択されることを特徴とする、プラスミドベクター。
【請求項１４】  請求項１から１３に記載の少なくとも１つのプラスミドベクターを含むことを特徴とする原核宿主細胞。
【請求項１５】  前記宿主細胞が、好ましくは大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）の細菌細胞であることを特徴とする、請求項１４に記載の宿主細胞。
【請求項１６】  前記宿主細胞がＫ１２株細胞、好ましくはＭＧ１６５５またはＤＨ５α株細胞であり、および／またはＢ株細胞であることを特徴とする、請求項１４に記載の宿主細胞。
【請求項１７】  請求項１１または１２に記載のプラスミドベクターを含むことを特徴とする請求項１４に記載の宿主細胞。
【請求項１８】  ウリジンホスホリラーゼ酵素活性および／またはプリンヌクレオシドホスホリラーゼ酵素活性を有するポリペプチドの産生における、請求項１から１３に記載の組み換えプラスミド発現ベクターを含む宿主細胞の使用。
【請求項１９】  供与体ヌクレオシドおよび受容体塩基の間でのグリコシル基転移反応の触媒としての、請求項１から１３に記載の組み換えプラスミド発現ベクターを含む宿主細胞の使用。
【請求項２０】  前記受容体塩基がプリンおよび／またはピリミジン塩基であることを特徴とする、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】  前記プリンおよび／またはピリミジン塩基が天然または置換ピリミジンおよびプリン塩基；プリン環の１、２および／または６位で置換されているプリン塩基；ピリミジン環の３および／または５位で置換されているピリミジン塩基；プリン、２−アザプリン、８−アザプリン、１−デアザプリン（イミダゾピリジン）、３−デアザプリン、７−デアザプリンから選択されることを特徴とする、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】  前記受容体塩基が、例えばイミダゾール類、トリアゾール類、およびピラゾール類などの、少なくとも１個の窒素原子を含む複素環化合物によって構成されることを特徴とする、請求項１９に記載の使用。
【請求項２３】  前記供与体ヌクレオシドが、Ｄ−リボースおよび２’−デオキシリボースを含む天然および／または改変ヌクレオシド；２’、３’および／または５’位で改変されたリボース基を含むヌクレオシド；ヌクレオシド中の糖がβ−Ｄ−アラビノース、α−Ｌ−キシロース、３’−デオキシリボース、３’，５’−ジデオキシリボース、２’，３’−ジデオキシリボース、５’−デオキシリボース、２’，５’−ジデオキシリボース、２’−アミノ−２’−デオキシリボース、３’−アミノ−３’−デオキシリボース、２’−フルオロ−２’−デオキシリボースであるヌクレオシドから選択されることを特徴とする、請求項１９に記載の使用。
【請求項２４】  １つ以上の窒素原子で置換されているプリンおよび／またはピリミジン塩基を有する複素環系を含むヌクレオシドの調製における、請求項１９に記載の使用。
【請求項２５】  加リン酸分解反応によるα−ペントース−１−リン酸糖類の調製における、請求項１９に記載の使用。
【請求項２６】  ヌクレオシドの産生における、請求項１９に記載の使用。
【請求項２７】  供与体ヌクレオシドおよび受容体塩基の間でのグリコシル基転移反応の触媒としての、請求項１７に記載の宿主細胞の未精製または精製抽出物の使用。
【請求項２８】  ウリジンホスホリラーゼおよびプリンヌクレオシドホスホリラーゼ酵素の両方の活性を有する融合蛋白質を産生するための方法であって、
（ａ）請求項１０または１１に記載のプラスミド発現ベクターを産生することと、
（ｂ）宿主細菌細胞を前記発現ベクターで形質転換させることと、
（ｃ）形質転換された細菌細胞から融合蛋白質を単離し、精製すること、とを含む方法。
【請求項２９】  前記宿主細菌細胞が大腸菌細胞（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）の細胞であることを特徴とする、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】  請求項２８または２９に記載の方法から得られる融合蛋白質。