(57)【要約】少なくとも一つの腫瘍学的薬物とタウロリジンとを含む治療ナノ粒子であって、それにより少なくとも一つの腫瘍学的薬物とタウロリジンの同時送達を提供し、それによってタウロリジンの少なくとも一つの腫瘍学的薬物に対する相乗効果を利用する治療ナノ粒子。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療ナノ粒子であって、
少なくとも一つの腫瘍学的薬物と； 
タウロリジンと
を含み、それにより、少なくとも一つの腫瘍学的薬物とタウロリジンの同時送達を提供し、それによってタウロリジンの少なくとも一つの腫瘍学的薬物に対する相乗効果を利用する、前記治療ナノ粒子。
【請求項２】
少なくとも一つの腫瘍学的薬物が、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）を含む、請求項１に記載の治療ナノ粒子。
【請求項３】
軟部組織肉腫、食道がん及び結腸がんの細胞からなる群からの少なくとも一つを標的とするように構成されている、請求項２に記載の治療ナノ粒子。
【請求項４】
少なくとも一つの腫瘍学的薬物が、組換えヒトＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ｒｈＴＲＡＩＬ）を含む、請求項１に記載の治療ナノ粒子。
【請求項５】
食道がん及び結腸がんの細胞からなる群からの少なくとも一つを標的とするように構成されている、請求項４に記載の治療ナノ粒子。
【請求項６】
少なくとも一つの腫瘍学的薬物がＦａｓリガンドを含む、請求項１に記載の治療ナノ粒子。
【請求項７】
脳腫瘍細胞を標的とするように構成されている、請求項６に記載の治療ナノ粒子。
【請求項８】
少なくとも一つの腫瘍学的薬物が腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）を含む、請求項１に記載の治療ナノ粒子。
【請求項９】
固形腫瘍がんを標的とするように構成されている、請求項８に記載の治療ナノ粒子。
【請求項１０】
少なくとも一つの腫瘍学的薬物が抗新生物薬を含む、請求項１に記載の治療ナノ粒子。
【請求項１１】
神経芽細胞腫を標的とするように構成されている、請求項１０に記載の治療ナノ粒子。
【請求項１２】
少なくとも一つの腫瘍学的薬物が細胞毒性薬を含む、請求項１に記載の治療ナノ粒子。
【請求項１３】
細胞毒性薬が、ビンクリスチン及びドキソルビシンからなる群からの少なくとも一つを含む、請求項１２に記載の治療ナノ粒子。
【請求項１４】
神経芽細胞腫を標的とするように構成されている、請求項１２に記載の治療ナノ粒子。
【請求項１５】
少なくとも一つの賦形剤をさらに含む、請求項１に記載の治療ナノ粒子。
【請求項１６】
少なくとも一つの賦形剤が、タウロリジン及び／又は少なくとも一つの腫瘍学的薬物とタウロリジンの加水分解安定性の増強を提供するための緩衝液を含む、請求項１５に記載の治療ナノ粒子。
【請求項１７】
少なくとも一つの腫瘍学的薬物とタウロリジンをがんの部位に局所放出するように構成されたコーティングをさらに含む、請求項１に記載の治療ナノ粒子。
【請求項１８】
がんの部位が腫瘍である、請求項１７に記載の治療ナノ粒子。
【請求項１９】
コーティングが、少なくとも一つの腫瘍学的薬物とタウロリジンが、がんの部位に送達される前に身体に早期暴露されるのを防止するように構成されている、請求項１７に記載の治療ナノ粒子。
【請求項２０】
コーティングが、少なくとも一つの腫瘍学的薬物に由来する望ましくない副作用、及びタウロリジン及び／又は少なくとも一つの腫瘍学的薬物とタウロリジンの早期加水分解からなる群からの少なくとも一つを防止するように構成されている、請求項１７に記載の治療ナノ粒子。
【請求項２１】
コーティングが、吸収性ポリマー及び吸収性脂質からなる群からの少なくとも一つを含む、請求項１７に記載の治療ナノ粒子。
【請求項２２】
コーティングが、ｌ−ラクチド、グリコリド、ｅ−カプロラクトン、ｐ−ジオキサノン、及びトリメチレンカーボネートからなる群からの少なくとも一つから構築されるポリマーから誘導されたコポリマー及びマルチマーの組合せから創製される、請求項２１に記載の治療ナノ粒子。
【請求項２３】
コーティングがグリコールをさらに含む、請求項２２に記載の治療ナノ粒子。
【請求項２４】
グリコールがポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、請求項２３に記載の治療ナノ粒子。
【請求項２５】
グリコールが直鎖構造又は多分岐構造を含む、請求項２４に記載の治療ナノ粒子。
【請求項２６】
コーティングが、がんの治療のためのなくとも一つの腫瘍学的薬物とタウロリジンの効果を改良するために、ナノ粒子をがんの部位に標的化させるように構成されている、請求項１７に記載の治療ナノ粒子。
【請求項２７】
コーティングが、ナノ粒子を特定組織に標的送達するように構成された結合分子を含む、請求項２６に記載の治療ナノ粒子。
【請求項２８】
結合分子が、モノクローナル抗体のフラグメント抗原結合（Ｆａｂ）フラグメントを含む、請求項２７に記載の治療ナノ粒子。
【請求項２９】
結合分子が神経組織を標的とするように構成されている、請求項２７に記載の治療ナノ粒子。
【請求項３０】
結合分子が、神経芽細胞腫のＮ型カルシウムチャネル、グリシン受容体チャネル及び電位依存性カリウムチャネルからなる群からの少なくとも一つを標的とするように構成されている、請求項２９に記載の治療ナノ粒子。
【請求項３１】
標的神経組織が神経外胚葉性腫瘍を含む、請求項２９に記載の治療ナノ粒子。
【請求項３２】
結合分子が、Ｎ型カルシウムチャネルを発現している神経外胚葉性腫瘍に結合する、請求項３１に記載の治療ナノ粒子。
【請求項３３】
結合分子が、抗Ｎ型カルシウムチャネル外表面Ｆａｂフラグメントを含む、請求項３２に記載の治療ナノ粒子。
【請求項３４】
抗Ｎ型カルシウムチャネル外表面Ｆａｂフラグメントが、Ｃａｖ２．２、又はその結合等価物を含む、請求項３３に記載の治療ナノ粒子。
【請求項３５】
結合分子が、ナノ粒子の表面に包埋されているか又は共有結合されている、請求項２７に記載の治療ナノ粒子。
【請求項３６】
がんの治療法であって、該方法は、
少なくとも一つの腫瘍学的薬物と； 
タウロリジンと
を含む治療ナノ粒子を提供し；そして
前記治療ナノ粒子を身体に送達して、少なくとも一つの腫瘍学的薬物とタウロリジンの同時送達を提供し、それによってタウロリジンの少なくとも一つの腫瘍学的薬物に対する相乗効果を利用する
ことを含む方法。
【請求項３７】
少なくとも一つの腫瘍学的薬物が、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）を含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
治療ナノ粒子が、軟部組織肉腫、食道がん及び結腸がんの細胞からなる群からの少なくとも一つを標的とするように構成されている、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
少なくとも一つの腫瘍学的薬物が、組換えヒトＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ｒｈＴＲＡＩＬ）を含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
治療ナノ粒子が、食道がん及び結腸がんの細胞からなる群からの少なくとも一つを標的とするように構成されている、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
少なくとも一つの腫瘍学的薬物がＦａｓリガンドを含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項４２】
治療ナノ粒子が、脳腫瘍細胞を標的とするように構成されている、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
少なくとも一つの腫瘍学的薬物が腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）を含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項４４】
治療ナノ粒子が、固形腫瘍がんを標的とするように構成されている、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
少なくとも一つの腫瘍学的薬物が抗新生物薬を含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項４６】
治療ナノ粒子が神経芽細胞腫を標的とするように構成されている、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
少なくとも一つの腫瘍学的薬物が細胞毒性薬を含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項４８】
細胞毒性薬が、ビンクリスチン及びドキソルビシンからなる群からの少なくとも一つを含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
治療ナノ粒子が神経芽細胞腫を標的とするように構成されている、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
治療ナノ粒子が少なくとも一つの賦形剤をさらに含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項５１】
少なくとも一つの賦形剤が、タウロリジン及び／又は少なくとも一つの腫瘍学的薬物とタウロリジンの加水分解安定性の増強を提供するための緩衝液を含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
治療ナノ粒子が、少なくとも一つの腫瘍学的薬物とタウロリジンをがんの部位に局所放出するように構成されたコーティングをさらに含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項５３】
がんの部位が腫瘍である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
コーティングが、少なくとも一つの腫瘍学的薬物とタウロリジンが、がんの部位に送達される前に身体に早期暴露されるのを防止するように構成されている、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
コーティングが、少なくとも一つの腫瘍学的薬物に由来する望ましくない副作用、及びタウロリジン及び／又は少なくとも一つの腫瘍学的薬物とタウロリジンの早期加水分解からなる群からの少なくとも一つを防止するように構成されている、請求項５２に記載の方法。
【請求項５６】
コーティングが、吸収性ポリマー及び吸収性脂質からなる群からの少なくとも一つを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５７】
コーティングが、ｌ−ラクチド、グリコリド、ｅ−カプロラクトン、ｐ−ジオキサノン、及びトリメチレンカーボネートからなる群からの少なくとも一つから構築されるポリマーから誘導されたコポリマー及びマルチマーの組合せから創製される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
コーティングがグリコールをさらに含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
グリコールがポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
グリコールが直鎖構造又は多分岐構造を含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
コーティングが、がんの治療のための少なくとも一つの腫瘍学的薬物とタウロリジンの効果を改良するために、ナノ粒子をがんの部位に標的化させるように構成されている、請求項５２に記載の方法。
【請求項６２】
コーティングが、ナノ粒子を特定組織に標的送達するように構成された結合分子を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
結合分子が、モノクローナル抗体のフラグメント抗原結合（Ｆａｂ）フラグメントを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
結合分子が神経組織を標的とするように構成されている、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
結合分子が、神経芽細胞腫のＮ型カルシウムチャネル、グリシン受容体チャネル及び電位依存性カリウムチャネルからなる群からの少なくとも一つを標的とするように構成されている、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
標的神経組織が神経外胚葉性腫瘍を含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
結合分子が、Ｎ型カルシウムチャネルを発現している神経外胚葉性腫瘍に結合する、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
結合分子が、抗Ｎ型カルシウムチャネル外表面Ｆａｂフラグメントを含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
抗Ｎ型カルシウムチャネル外表面Ｆａｂフラグメントが、Ｃａｖ２．２、又はその結合等価物を含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
結合分子が、ナノ粒子の表面に包埋されているか又は共有結合されている、請求項６２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
係属中の先行特許出願への参照
本特許出願は、ＣｏｒＭｅｄｉｘ  Ｉｎｃ．社及びＲｏｂｅｒｔ  ＤｉＬｕｃｃｉｏにより２０１６年１月１１日に出願された、係属中の先行米国仮特許出願第６２／２７７，２４３号「神経芽細胞腫の治療のためのナノ粒子系(NANOPARTICLE SYSTEM FOR THE TREATMENT OF NEUROBLASTOMA)」（代理人整理番号ＣＯＲＭＥＤＩＸ−１４  ＰＲＯＶ）に基づく利益を主張し、上記特許出願は引用によって本明細書に援用する。
【０００２】
技術分野
本発明は、一般に、治療組成物に関し、さらに詳しくは、神経芽細胞腫及びその他のがん治療のための治療組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
神経芽細胞腫（ＮＢ）は、小児期の最も一般的な頭蓋外固形がんであり、乳幼児期の最も一般的ながんである。発生率は、米国で年間約６５０例、英国で年間１００例である。全神経芽細胞腫例のほぼ半数が２歳未満の子供に発生している。神経芽細胞腫は、交感神経系（ＳＮＳ）のいずれかの神経堤要素(neural crest element)から生じる神経内分泌腫瘍を引き起こす。神経内分泌腫瘍は、副腎の一つに発生するのが最も高頻度であるが、頸部、胸部、腹部、又は骨盤の神経組織でも発生しうる。
【０００４】
神経芽細胞腫は、未分化状態から完全に良性の細胞外観に自然退縮を示すことが知られている数少ないヒト悪性腫瘍の一つである。神経芽細胞腫は極度の異質性を示す疾患で、３つのリスクカテゴリー、すなわち、低、中、高リスクに分類（階層化）される。低リスク神経芽細胞腫疾患は、乳幼児期に最も多く、観察だけ又は手術で“良好な転帰”が一般的であるが、高リスク神経芽細胞腫疾患は、利用できる最も集中的・多モード的(multi-modal)な腫瘍学療法を用いても治療に成功することは困難である。
【０００５】
鼻腔神経芽細胞腫は、嗅神経芽細胞腫としても知られるが、嗅上皮から発生すると考えられ、その分類にはまだ議論の余地がある。しかしながら、交感神経系の悪性腫瘍ではないので、鼻腔神経芽細胞腫は異なる臨床単位(clinical entity)であり、神経芽細胞腫と混同されてはならない。
【０００６】
徴候及び症状
神経芽細胞腫の初期症状は曖昧なことが多く、診断を難しくしている。倦怠感、食欲不振、発熱及び関節痛が一般的である。症状は、原発腫瘍部位及び転移があればそれに依存する。
【０００７】
・腹部の場合、腫瘍は腹部腫脹及び便秘を引き起こしうる。
・胸部の腫瘍は、呼吸障害を引き起こしうる。
・脊髄を圧迫している腫瘍は、衰弱と、起立、匍匐、又は歩行不能を引き起こしうる。
【０００８】
・脚部及び腰部の骨病変は、疼痛及び跛行を引き起こしうる。
・眼又は眼窩周辺の骨の腫瘍は、明白な紫斑及び腫脹を引き起こしうる。
・骨髄浸潤は、貧血による蒼白を引き起こしうる。
【０００９】
神経芽細胞腫は、何らかの症状が明らかになる前に身体の他の部位に広がっていることが多く、全神経芽細胞腫例の５０〜６０％に転移がみられる。
神経芽細胞腫が発生する最も一般的な部位（すなわち原発腫瘍部位）は副腎である。これは、限局性腫瘍の４０％及び広汎性神経芽細胞腫疾患の症例の６０％にみられる。神経芽細胞腫は、交感神経系の連鎖に沿って頸部から骨盤までのどこにでも発生しうる。異なる部位における頻度は、頸部（１％）、胸部（１９％）、腹部（３０％、非副腎）、又は骨盤（１％）などである。稀な例では、原発腫瘍が認められないこともある。
【００１０】
稀ではあるが特徴的な症状としては、横断性脊髄症（腫瘍による脊髄圧迫、症例の５％）、治療抵抗性下痢（腫瘍による血管作動性腸ペプチド分泌、症例の４％）、Ｈｏｍｅｒ症候群（頸部腫瘍、症例の２．４％）、オプソクローヌス・ミオクローヌス（opsocinus myoclonus）症候群及び運動失調（腫瘍随伴原因疑い、症例の１．３％）、及び高血圧（カテコールアミン分泌又は腎動脈圧迫、症例の１．３％）などが挙げられる。
【００１１】
原因
神経芽細胞腫の病因はよく理解されていない。症例の大部分は散発的であり非家族性である。症例の約１〜２％は家系に遺伝し、特定の遺伝子突然変異に関連している。一部の症例における家族性神経芽細胞腫は、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）遺伝子における稀な生殖細胞系突然変異によって引き起こされる。ＰＨＯＸ２Ａ又はＫＩＦ１Ｂ遺伝子における生殖細胞系突然変異も家族性神経芽細胞腫に関与している。神経芽細胞腫は、フォン・レックリングハウゼン病とも呼ばれる神経線維腫症１型（ＮＦ１）及びベックウィズ・ヴィーデマン症候群の特徴でもある。
【００１２】
腫瘍内のＭＹＣＮがん遺伝子増幅は神経芽細胞腫の一般的所見である。増幅の程度は二峰性の分布を示し、３〜１０倍又は１００〜３００倍のいずれかである。この突然変異の存在は疾患の進行段階に高度に相関している（参考文献１）。
【００１３】
神経芽細胞腫の腫瘍細胞内のＬＭＯ１遺伝子の重複セグメントは、攻撃的ながんの形態の発生リスクを高めることが示されている（参考文献２）。
神経芽細胞腫は、ＮＢＰＦ１０遺伝子内のコピー数の多様性に関連している結果、１ｑ２１．１枯渇症候群又は１ｑ２１．１重複症候群をもたらす（参考文献３）。
【００１４】
神経芽細胞腫のいくつかのリスク因子が提案されており、継続中の研究の主題である。神経芽細胞腫は早期発症を特徴とするため、多くの研究は受胎及び妊娠に関する親の因子に焦点を当てている。調査された因子は、職業（すなわち特定産業における化学物質への暴露）、喫煙、飲酒、妊娠中の医薬品の使用及び出生因子などであるが、結果は結論に至っていない（参考文献４）。
【００１５】
他の研究では、アトピー及び乳幼児期における感染への暴露（参考文献５）、ホルモン及び排卵誘発剤の使用（参考文献６）、及び母親の染毛剤使用（参考文献７）との関連の可能性が調査されている。
【００１６】
生化学
神経芽細胞腫例の約９０％で、尿中又は血液中に高レベルのカテコールアミン又はそれらの代謝産物が見出されている。カテコールアミン及びそれらの代謝産物は、ドパミン、ホモバニリン酸（ＨＶＡ）及び／又はバニリルマンデル酸（ＶＭＡ）などである（参考文献８）。
【００１７】
治療
神経芽細胞腫病変が限局性の場合、一般的に治癒可能である。しかしながら、進行疾患を有する生後１８ヶ月以上の子供の長期生存は、積極的多モード的腫瘍学療法、例えば、強化化学療法、手術、放射線療法、幹細胞移植、分化薬イソトレチノイン（１３−シス−レチノイン酸とも呼ばれる）の使用、抗ＧＤ２を用いた免疫療法、抗ＧＤ２モノクローナル抗体療法を用いた免疫療法などにも関わらず、芳しくない。
【００１８】
生物学的及び遺伝的特徴は同定されているので、これを古典的な臨床病期分類に加えると、治療強度の計画を立てるために患者をリスク群に振り分けることが可能となる。これらの基準は、患者の年齢、疾患拡大の程度、顕微鏡像、ならびにＤＮＡ倍数性及びＮ−ｍｙｃがん遺伝子増幅（Ｎ−ｍｙｃはマイクロＲＮＡを調節する）を含む遺伝的特徴などで、患者を、低、中、及び高リスクの病状に分類するために使用されている。最近の生物学的研究（ＣＯＧ  ＡＮＢＬ００Ｂ１）で２６８７人の神経芽細胞腫患者が分析され、リスク割り当ての分布（スペクトル）が決定された。すなわち、神経芽細胞腫例の３７％が低リスク、１８％が中リスク、及び４５％が高リスクである。高リスク型と低リスク型は異なる機序によって引き起こされ、単に同じ機序の二つの異なる発現程度ではないという一定の証拠がある（参考文献９）。
【００１９】
これらの異なるリスクカテゴリーに対する治療法は非常に異なる。
・低リスク疾患は、しばしば全く何の治療もせずに観察、又は手術だけで治癒できる。
・中リスク疾患は、手術及び化学療法で治療される。
【００２０】
・高リスク神経芽細胞腫は、強化化学療法、手術、放射線療法、骨髄／造血幹細胞移植、１３−シス−レチノイン酸（イソトレチノイン又はアキュテイン(Accutane)）を用いた生物学的療法ならびに通常サイトカインＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−２サイトカインを投与する抗体療法で治療される。
【００２１】
現在の治療法で、低及び中リスク神経芽細胞腫疾患の患者は優れた予後を示す。治癒率は、低リスクの場合９０％超、中リスクの場合７０〜９０％である。これに対し、過去２０年間にわたり、高リスク神経芽細胞腫の治療は、わずか約３０％の治癒率しかもたらしていない。抗体療法を加えることで、高リスク神経芽細胞腫疾患の生存率は著しく上昇した。２００９年３月、２２６人の高リスク患者を用いた小児腫瘍学グループ（Children's Oncology Group，ＣＯＧ）研究の早期分析で、幹細胞移植の２年後、無作為化によりｃｈ１４．１８抗体（ＧＭ−ＣＳＦ及びＩＬ−２と共に）を受けたグループでは６６％が生存し、無病であったのに対し、抗体を受けなかったグループではわずか４６％であったことが示された。治験に参加した全患者が抗体療法を受けられるよう無作為化は中止された（参考文献１０）。
【００２２】
併用される化学療法薬は神経芽細胞腫に対して有効であることが見出されている。導入及び幹細胞移植コンディショニングに一般的に使用される薬剤は、白金化合物（シスプラチン、カルボプラチン）、アルキル化薬（シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、トポイソメラーゼII阻害薬）及びビンカアルカロイド（ビンクリスチン）である。いくつかのより新しいレジメンには、導入にトポイソメラーゼＩ阻害薬（トポテカン及びイリノテカン）が含まれ、再発疾患に対して有効であることが見出されている。
【００２３】
最近の焦点は、低及び中リスクの神経芽細胞腫患者に対する治療を、生存率を９０％に維持しながら縮小することであった。１９９７年から２００５年にかけてのＮＩＨ研究ＮＣＴ００４９９６１６の小児腫瘍学グループ部門による臨床試験Ａ３９６１に参加した４６７人の中リスク患者の研究で、このリスク群に対しては治療がうまく縮小できるという仮定が確認された。好ましい特徴（腫瘍悪性度及び応答）を有する者は４サイクル、好ましくない特徴を有する者は８サイクルの化学療法を受け、３年間の無イベント（無症候）生存率及び全生存率はグループ全体で９０％で安定していた。将来の計画は、１ｐ３６又は１１ｑ２３染色体の異常を有する患者ならびに治療に対する早期応答を欠く患者に対して治療を強化することである（参考文献１１、１２）。
【００２４】
一方、過去２０年以上の焦点は、高リスク神経芽細胞腫患者に対する治療を強化することであった。化学療法導入のバリエーション、手術の時期、幹細胞移植レジメン、様々な放射線照射スキーム、及び最小限の残存疾患を治療するためのモノクローナル抗体及びレチノイドの使用について研究は継続している。最近、高リスク疾患の生存率を改良するために無作為化第三相臨床試験が実施された。すなわち、
・１９８２〜１９８５：欧州神経芽細胞腫研究グループ（European Neuroblastoma Study Group，ＥＮＳＧ１）は、１６７人の子供を登録し、メルファラン自家骨髄移植又はそれ以上の治療なしに無作為化した（どの子供にも放射線療法なし）。移植及び非移植群の患者数はそれぞれ６５人であった。最近の長期追跡報告によれば、メルファラン移植群では、それ以上の治療なしに対して、１歳を超える子供のステージ４の神経芽細胞腫の著しく良好な５年間の無イベント生存率、すなわち、それぞれ３３％対１７％が明らかとなった（参考文献１３）。
【００２５】
・１９９０〜１９９９：欧州研究（ＥＵ−２０５９２又はＣＣＬＧＮＢ−１９９０−１１）では、１歳を超える２６２人の高リスクの子供を無作為化し、同じ合計用量で、迅速導入（１０日間サイクル）の方が標準導入（２１日間サイクル）よりも高い生存率であったことが明らかになった。１０年間の無イベント生存率はそれぞれ２７％及び１８％であった。両群とも、穏やかな外科的手法、放射線療法なし、及びメルファランのみの自家骨髄又は幹細胞移植であった（参考文献１４）。
【００２６】
・１９９１〜１９９６：３７９人の高リスク神経芽細胞腫患者に対して２回の連続無作為化を行う第三相試験が小児がんグループ（Children's Cancer Group，ＣＣＧ−３８９１）により実施され、４つの各試験群の５０人の患者で、骨髄機能廃絶療法（全身照射）と１３−シス−レチノイン酸（アキュテイン）による改良された生存率が示された（参考文献１５）。
【００２７】
・１９９６〜２００３：ドイツ（ＧＰＯＨ）試験ＮＢ９７は、幹細胞移植又は地固め(consolidation)化学療法に無作為化された２９５人の高リスク神経芽細胞腫患者の転帰を比較した。結果は幹細胞移植で生存率の増大が示された（参考文献１６）。
【００２８】
・２０００〜２００６：最近の研究（ＣＯＧ−Ａ３９３７）で、ＣＥＭ−ＬＩ（カルボプラチン、エトポシド、メルファラン、局所照射）移植のための幹細胞浄化の必要性に疑問が投げかけられた。この研究では４８６人の患者が集められた。幹細胞浄化で生存率が改良されることは見出されなかった（参考文献１７）。
【００２９】
・２０００〜２０１２：同時研究（ＣＯＧ−ＡＮＢＬ００３２）における早期検討で、インターロイキン２及びＧＭＣＳＦと共に抗体ｃｈ１４．１８を用いると（ドイツＧＰＯＨ  ＮＢ９０及びＮＢ９７で低用量及びサイトカインなしで後ろ向きに研究された）、生存率を改良することが決定された。患者は合計４２３人であった。後続の第三相試験ＣＯＧ−ＡＮＢＬ０９３１は、ＦＤＡ認可に向けて更なる安全性及び有効性データを収集するために、１０５人の患者を集めて２０１０年１月に開始された（参考文献１８）。
【００３０】
・２００２〜２００８：ＳＩＯＰ（International Society of Paediatric Oncology，国際小児がん学会）は、１９９４年に欧州ＳＩＯＰ神経芽細胞腫グループ（ＳＩＯＰＥＮ）を結成し、２００２年の第三相高リスク神経芽細胞腫プロトコル（ＳＩＯＰ−ＥＵＲＯＰＥ−ＨＲ−ＮＢＬ−１）を、“迅速”ＣＯＪＥＣ（１０日間の間隔で投与される８サイクルの化学療法）とその後のＣＥＭ（カルボプラチン、エトポシド、メルファラン）又はＢｕＭｅｌ（ブスルファン、メルファラン）への移植無作為化を用いて活性化した。そして、皮下ＩＬ２を投与する又は投与しないｃｈ１４．１８抗体治療（ＣＯＧでのようなＧＭ−ＣＳＦ投与なし）に子供を無作為に割り付けるために研究を補正した。この研究で成長因子（ＧＣＳＦ）の利益が報告され、全患者にレチノイン酸が投与された。この試験には１０００人の患者が参加した（年１７５人）（参考文献１８）。
【００３１】
・２００５〜２０１０：ドイツのＮＢ２００４の無作為化は、ＭＩＢＧ療法と最前線療法(up-front therapy)におけるトポテカンの使用を含み、全リスク群の合計６４２人の患者が参加した（ほぼ半数は高リスク）。移植後、高リスクプロトコルは、６ヶ月のシス−レチノイン酸、３ヶ月の休止、そしてさらに３ヶ月のレチノイン酸を含むものであった（参考文献１９）。
【００３２】
・２００７：ＣＯＧ第三相ＡＮＢＬ０５３２試験が４９５人の患者を対象に２００７年１２月に開始され、単回対複数回（タンデム）移植の比較がなされた。導入は２サイクルのトポテカンで開始された（参考文献２０）。
【００３３】
これらの第三相試験に加え、いくつかの研究機関がパイロット的な治療プロトコルを提供している。例えば、セントジュード（小児研究病院）は、２３人の子供に対して新たな最前線化学療法レジメンの試験を終えた（２００７）。これは、イリノテカン及びゲフィチニブと、幹細胞移植後、１３−シス−レチノイン酸とトポテカンを交互に経口投与する１６ヶ月の維持化学療法を含むものであった。ニューヨークのメモリアル・スローン・ケタリングがんセンターは、１９８０年代半ばからプロトコルに使用されているマウス由来モノクローナル抗体３Ｆ８を含む治療を提供している。この抗体は、最小限の残存疾患の治療又は幹細胞移植の代わりの地固めに使用されている。いくつかの小児腫瘍学グループ（ＣＯＧ）センターで新たに診断された（高リスクの）子供が利用できる新規パイロットプロトコルＣＯＧ−ＡＮＢＬ０９Ｐ１は、移植レジメンとしてＭＩＢＧ放射線療法及び化学療法を提供している（参考文献２１）。
【００３４】
一部の子供（特に高リスク症例の）は、最前線の治療（完全応答又は非常に良好な部分応答を有する）に完全には応答せず、難治性と見なされる。これら“難治性”の子供は、最前線療法（臨床試験）から除外されるので、新規療法を用いた臨床試験に適格である。多くの高リスク小児は最前線療法に良好な応答を有し、寛解を達成するが、後に疾患は繰り返す（再発する）。これらの子供も臨床試験で試験されている新規療法に適格である。
【００３５】
トポテカンとシクロホスファミドを用いた化学療法は、難治性の状況及び再発後にしばしば使用される。１１９人の患者を用いた無作為化試験（トポテカン単独と、トポテカンとシクロホスファミドを比較する）（２００４）により、トポテカンとシクロホスファミド群で、３１％の完全又は部分応答率と２年間の無進行生存率３６％が明らかになった。イリノテカン（静脈内又は経口）と経口テモゾロミドも、難治性及び再発神経芽細胞腫に使用されている（参考文献２２）。
【００３６】
多くの第一相及び第二相試験で現在、再発又は初期療法に抵抗性の子供の神経芽細胞腫に対する新薬が試験されている。研究者は、現在、新薬を、単独で又は新たな組合せで、小分子標的療法、１３１−Ｉ  ＭＩＢＧ放射線療法、血管新生薬、新規モノクローナル抗体、ワクチン、腫瘍溶解性ウィルス、ならびに新しい骨髄機能廃絶レジメンを用いて研究中である。
【００３７】
Ｎｅｗ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ  Ｔｈｅｒａｐｙ（ＮＡＮＴ）コンソーシアムとして知られる米国の１６の小児病院のグループは、Ｉ−１３１  ＭＩＢＧ放射線療法試験を調整(coordinate)している。ＮＡＮＴコンソーシアムは、フェンレチニドの経口粉末製剤、静脈内フェンレチニド、ビスホスホネート（ゾメタ）と他の薬剤を用いる試験、及びＩ−１３１  ＭＩＢＧと阻害薬ボリノスタットとを組み合わせる試験も提供している（参考文献２３）。
【００３８】
Ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ  ａｎｄ  Ｍｅｄｕｌｌｏｂｌａｓｔｏｍａ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ（ＮＭＴＲＣ）などのその他の研究調査グループも、再発神経芽細胞腫を治療するための臨床試験を実施している。欧州の機関は、再発を治療するための、ハプロタイプ一致(haploidentical)幹細胞移植を含む新規療法を研究中である。多くの病院は独自の機関研究も実施している。
【００３９】
タンパク質ｐ５３は、化学療法に対する耐性発現に役割を果たしていると考えられている。２００９年１１月のマウスを用いた研究で、腫瘍抑制因子ｐ５３を新薬ｎｕｔｌｉｎ−３で活性化すると腫瘍増殖を緩徐化できることが示されている。この研究で、ベルギーのＧｈｅｎｔ大学病院のＴｏｍ  Ｖａｎ  Ｍａｅｒｋｅｎ医師と彼の同僚は、ｎｕｔｌｉｎ−３を使用して、ｐ５３に結合してｐ５３のプログラム細胞死誘発能力を妨害するタンパク質であるＭＤＭ２を中和した。以前の研究で、ｎｕｔｌｉｎ−３は、ＭＤＭ２がｐ５３を無能化するのを特異的に防止できることが示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００４０】
発明の目的
薬物のタウロリジンは、いくつかの腫瘍学的薬物の活性を増強する能力を有することが観察されている。
【００４１】
その結果、本発明の一つの目的は、これらの腫瘍学的薬物に対するタウロリジンの相乗効果を利用して、より大きい効率と腫瘍学的薬物に随伴する毒性の低減を可能にすることである。
【００４２】
本発明の別の目的は、一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンとを、追加の賦形剤（例えば、タウロリジン及び／又は一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンの加水分解安定性の増強を提供するための緩衝液）と共に又は追加の賦形剤なしに含むナノ粒子を創製することにより、一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンの同時送達を提供し、それによってタウロリジンのこれらの腫瘍学的薬物に対する相乗効果を利用することである。
【００４３】
本発明のさらに別の目的は、一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンとを、追加の賦形剤（例えば、タウロリジン及び／又は一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンの加水分解安定性の増強を提供するための緩衝液）と共に又は追加の賦形剤なしに含み、そしてさらに一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンをがんの部位、例えば腫瘍に局所放出するように構成されたコーティングも含むナノ粒子を創製することである。本発明の一つの好適な形態において、コーティングは、一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンが、がんの部位、例えば腫瘍に送達される前に身体に早期暴露（premature exposure）されるのを防止するように構成される。これは、一つ又は複数の腫瘍学的薬物に由来する望まざる副作用、タウロリジンの早期加水分解などを防止するために重要でありうる。本発明の一つの好適な形態において、コーティングは吸収性のポリマー又は脂質を含む。
【００４４】
本発明のさらに別の目的は、一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンとを、追加の賦形剤（例えば、タウロリジン及び／又は一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンの加水分解安定性の増強を提供するための緩衝液）と共に又は追加の賦形剤なしに含み、そしてさらにコーティングも含むナノ粒子を提供することであり、前記コーティングは、がんの治療のための腫瘍学的薬物とタウロリジンの効果を改良するために、ナノ粒子ががん（例えば腫瘍）の部位を標的とするように構成されている。本発明の一つの好適な形態において、コーティングは、ナノ粒子を特定組織に標的送達するように構成された結合分子を含む。
【００４５】
本発明の別の目的は、神経芽細胞腫及び／又はその他の特定がんの治療のために特別に構成されたナノ粒子を提供することである。
【００４６】
タウロリジン総論
タウロリジン（ビス（１，１−ジオキソペルヒドロ−１，２，４−チアジアジニル−４）−メタン）は、抗菌性及び抗リポ多糖性を有している。タウロリジンはアミノ酸のタウリンから誘導される。その免疫調節作用は、マクロファージ及び多形核白血球のプライミング及び活性化によって媒介されると報告されている。
【００４７】
タウロリジンは、腹膜炎患者の治療及び全身性炎症反応症候群患者への抗内毒素剤(antiendoxic agent)として使用されている。タウロリジンは、重症の腹部敗血症及び腹膜炎のための救命抗菌剤である。タウロリジンは、グラム陽性菌、グラム陰性菌、真菌、マイコバクテリウムのほか、様々な抗生物質に対して耐性を有するメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、バンコマイシン中間耐性黄色ブドウ球菌（ＶＩＳＡ）、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌（ＶＲＳＡ）、オキサシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＯＲＳＡ）及びバンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）などの細菌も含む広範囲の微生物に対して活性である。さらに、タウロリジンは、多少の抗腫瘍性も示し、胃腸悪性腫瘍及び中枢神経系の腫瘍を治療するための薬物を用いた初期臨床試験で肯定的な結果が得られている。
【００４８】
タウロリジンは、カテーテル関連血流感染（ＣＲＢＳＩｓ）の予防及び治療のための抗菌性カテーテルロック溶液の活性成分であり、あらゆるカテーテルベースの血管アクセス器具への使用に適している。タウロリジンに対する細菌耐性は各種試験で観察されたことがない。
【００４９】
タウロリジンは、非選択的化学的反応によって作用する。水溶液中では、親分子のタウロリジンは、タウルルタム及びＮ−ヒドロキシメチルタウルルタムと平衡を形成し、タウリンアミドは下流誘導体である。タウロリジンの活性基はタウルルタム及びタウリンアミドのＮ−メチロール誘導体で、これが細菌の細胞壁、細胞膜、及びタンパク質と反応するほか、内毒素及び外毒素の第一アミノ基とも反応する。微生物は殺滅され、結果として生ずる毒素は不活化される。インビトロにおける破壊時間は３０分である。炎症性サイトカイン及び増強された腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）レベルは、タウロリジンがカテーテルロック溶液として使用されると低減する。タウロリジンは、線毛及び鞭毛を破壊することによって細菌及び真菌が宿主細胞に接着するのを低減するので、バイオフィルムの形成が防止される。
【００５０】
２時間かけ、４時間毎、少なくとも４８時間にわたる５ｇ用量のタウロリジンが様々な敗血症状態の治療のために静脈内投与されている。
【００５１】
腫瘍学的薬物の使用を伴う下記用途においてタウロリジンの相乗活性が観察されている
Ｋａｒｌｉｓｃｈら（参考文献２４）は、ヒトの横紋筋肉腫、平滑筋肉腫及び類上皮細胞肉腫で、アポトーシス及び増殖に対するＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）及びタウロリジンの効果を観察した。軟部組織肉腫（ＳＴＳ）は、悪性腫瘍の異質のグループで、成人の全悪性腫瘍の１％を占める。ＳＴＳの治療は個別的かつ多モード的であるべきであるが、断端にがん細胞がない(clear margin)完全外科的切除が相変わらず治療の中心である。播種性の軟部組織肉腫は依然として治療上のジレンマである。ドキソルビシン及びイホスファミドなどの一般的に使用される化学療法薬は、これらの症例では３０％未満しか有効でないことが分かっている。そこで、Ｋａｒｌｉｓｃｈらは、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）及びタウロリジンの、横紋筋肉腫（Ａ−２０４）、平滑筋肉腫（ＳＫ−ＬＭＳ−１）及び類上皮細胞肉腫（ＶＡ−ＥＳ−ＢＪ）細胞株に対するインビトロのアポトーシス効果及び抗増殖効果を試験した。生存性、アポトーシス及び壊死は、ＦＡＣＳ分析で定量化した（ヨウ化プロピジウム／アネキシンＶ染色）。遺伝子発現はＤＮＡマイクロアレイで分析し、結果は、選択遺伝子についてｒｔＰＣＲにより検証した。タンパク質レベルの変化はウェスタンブロット分析により記録した。細胞増殖はブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）ＥＬＩＳＡアッセイにより分析した。単一物質のＴＲＡＩＬ及びタウロリジンは、横紋筋肉腫及び類上皮細胞肉腫の細胞でアポトーシス細胞死及び増殖低下を有意に誘導した。ＴＲＡＩＬとタウロリジンの併用は、全３つの細胞株で相乗的なアポトーシス効果をもたらした。特に横紋筋肉腫細胞では４８時間のインキュベーション後、１８％の生存細胞を残すのみであった（ｐ＜０．０５）。差別的に調節された(differentially regulated)遺伝子の分析から、タウロリジンとＴＲＡＩＬは、ＴＮＦ受容体関連ミトコンドリア経路を含むアポトーシス経路に影響を及ぼしていることが明らかになった。マイクロアレイ分析からは、異なるアポトーシス経路及び他の経路との複数レベルでのクロストークに関与している様々な遺伝子の顕著な発現変化が明らかになった。このインビトロ研究は、ＴＲＡＩＬとタウロリジンが、異なるヒトＳＴＳ細胞株でアポトーシスの誘導と増殖の阻害に相乗作用していることを示している。遺伝子発現に対する効果は、肉腫の型(sarcoma entities)で関連的に異なる。これらの結果は、ＴＲＡＩＬ及びタウロリジンのＳＴＳにおける効果を評価するインビボ試験の実験的支持を提供するものであり、個別療法の手法を支持するものである。
【００５２】
Ｈａｒａｔｉら（参考文献２５）は、ＴＲＡＩＬとタウロリジンが、ＨＴ１０８０ヒト線維肉腫細胞で、ドキソルビシン、トラベクテジン及びマホスファミドの抗がん活性を増強することを観察した。播種性の線維肉腫は、有効な細胞増殖抑制剤がないために依然として治療上のジレンマである。そこで、ヒト線維肉腫（ＨＴ１０８０）に対して、確立された及び新規の化学療法薬に、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）及びタウロリジンを組み合わせると、アポトーシスを改良することが観察された。
材料及び方法：ヒト線維肉腫細胞（ＨＴ１０８０）を、ドキソルビシン、マホスファミド及びトラベクテジンと、単独で及びタウロリジンとＴＲＡＩＬと組み合わせて、インキュベートした。生存細胞、アポトーシス細胞及び壊死細胞はフローサイトメトリー分析を用いて定量化した。細胞増殖はブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）ＥＬＩＳＡアッセイを用いて分析した。
結果：ドキソルビシン及びトラベクテジンの単独適用は、ＨＴ１０８０細胞のアポトーシス細胞死を誘導し、増殖を著しく減少させた。併用療法では、タウロリジンとＴＲＡＩＬの添加が、単独療法と比べて細胞生存性の程度により強い低下をもたらした。トラベクテジンとタウロリジンは、ドキソルビシン単独の場合より増殖の阻害により大きい可能性を示した。
結論：ＴＲＡＩＬ及びタウロリジンと組み合わせた場合、ドキソルビシン及びトラベクテジンによる治療は、より強いアポトーシス誘導効果及び抗増殖効果を示した。
【００５３】
Ｍａｒｔｉｎｏｔｔｉら（参考文献２６）は、悪性中皮腫の治療のためのアスコルビン酸−薬物の相乗的組合せのインビトロスクリーニングを研究した。悪性中皮腫（ＭＭｅ）は、アスベストへの暴露の結果、漿膜腔の中皮から生じる致死性腫瘍である。現在の臨床研究は併用療法からなるが、有効な療法はまだ確立されておらず、新たな根治療法に対する差し迫ったニーズがある。アスコルビン酸は、がん治療の治療薬としても知られる栄養素である。この研究で、Ｍａｒｔｉｎｏｔｔｉらは、ＭＭｅ療法で使用される薬物、例えばシスプラチン、エトポシド、ゲムシタビン、イマチニブ、パクリタキセル、及びラルチトレキセド、ならびに有望な抗腫瘍化合物、例えばタウロリジン、ａ−トコフェロールスクシネート、及びエピガロカテキン−３−ガラート（ＥＧＣＧ）と組み合わせたアスコルビン酸のＭＭｅ細胞に対する細胞毒性を試験した。インビトロで増殖しているＭＭｅ細胞にニュートラルレッド取込み（ＮＲＵ）アッセイを適用することによって各化合物について得られた用量反応曲線から、単独で使用された各化合物についてＩＣ５０値を測定することができた。その後、各アスコルビン酸／薬物の組合せから得られたＮＲＵデータをＩＣ５０濃度でＴａｌｌａｒｉｄａのアイソボログラム(isobologram)を通じて分析したところ（Ｔａｌｌａｒｉｄａ、２０００）、アスコルビン酸／ゲムシタビン及びアスコルビン酸／ＥＧＣＧの相乗的相互作用が明らかになった。これらの結果は、理論的相加ＩＣ５０と固定比用量反応曲線から観察されたＩＣ５０との間の比較を、広範囲のＩＣレベルにわたり、Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの併用係数（Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙ、１９８４）を使用して行うことにより、さらに確認された。相乗的相互作用は、アポトーシス及び壊死の割合をカスパーゼ３及び乳酸デヒドロゲナーゼアッセイをそれぞれ用いて調べることによっても示された。従って、データから、アスコルビン酸／ゲムシタビン及びアスコルビン酸／ＥＧＣＧはＭＭｅ細胞の生存性に相乗効果を示し、この問題の多いがんの臨床治療におけるそれらの使用の可能性を示唆していることが示された。
【００５４】
Ｄａｉｇｅｌｅｒら（参考文献２７）は、食道の扁平上皮がん細胞に対するタウロリジンとＴＲＡＩＬの相乗的アポトーシス効果を観察した。食道がんの治療選択肢は外科的切除と考えられているが、治療後２０ヶ月時点のメジアン生存率は残念なものである。アジュバント又はネオアジュバントの放射線療法又は化学療法の利益は限定的で、現在のところ、利益は一定の腫瘍病期でしか確認されていない。従って、新しい治療選択肢が求められている。代替化学療法として、Ｄａｉｇｅｌｅｒらは、抗生物質タウロリジンを、ＫＹＳＥ２７０ヒト食道がん細胞に対して、単独で及びｒｈＴＲＡＩＬ（組換えヒトＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド）と組み合わせて試験した。生存性、アポトーシス及び壊死は，ＴＵＮＥＬアッセイによって視覚化され、ＦＡＣＳ分析によって定量化された。遺伝子発現はＲＮＡマイクロアレイによって分析された。単一物質としてのタウロリジンの最有効濃度（２５０ｍｍｏｌ／ｌ）は、投与１２時間後に最大４０％のアポトーシスを誘導し、４８時間後に４％の生存細胞を残すのみであった。これと比較して、ｒｈＴＲＡＩＬは有意な効果を示さなかった。両物質の組合せはタウロリジン単独の効果を倍増した。遺伝子発現プロファイリングから、タウロリジンは、内因性のＴＲＡＩＬ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＲＡＤＤ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ２１及びＦＡＤＤ、ならびにＭＡＰ２Ｋ４、ＪＡＫ２及びＢｃｌ２、Ｂｃｌ２１１、ＡＰＡＦｌ及びカスパーゼ−３をダウンレギュレートすることが明らかとなった。ＴＮＦＲＳＦ２５、シトクロム−ｃ、カスパーゼ−１、−８、−９、ＪＵＮ、ＧＡＤＤ４５Ａ及びＮＦＫＢＩＡはアップレギュレートされていた。ＴＲＡＩＬは、内因性のＴＲＡＩＬ、Ｂｃｌ２１１及びカスパーゼ−１の発現を減少させた。ＢＩＲＣ２、ＢＩＲＣ３、ＴＮＦＡＩＰ３、及びＮＦＫＢＩＡはアップレギュレートされていた。組合せ物質は、内因性のＴＲＡＩＬ、ＮＦＫＢＩＡ及びＪＵＮをアップレギュレートしたが、ＤＦＦＡ及びＴＲＡＦ３は、単独物質としてのタウロリジンと比較した場合、ダウンレギュレートされていた。Ｄａｉｇｅｌｅｒらは、タウロリジンは、ＫＹＳＥ２７０細胞におけるＴＲＡＩＬ耐性を克服すると結論付けた。相乗効果は、同じ及び別個のアポトーシス経路に依存し、共同して誘発されると増幅された応答をもたらす。ＴＮＦ受容体関連及びミトコンドリア経路を含むいくつかのアポトーシス経路は、遺伝子発現レベルで物質により差別的に調節されていた。さらに転写因子、特にＮＦＫＢも影響を受けるようである。内因性ＴＲＡＩＬの発現は物質の組合せによって増大するが、各物質単独では減少する。非毒性のタウロリジンがｒｈＴＲＡＩＬの毒性及び用量を低減できたことを考えると、タウロリジンとｒｈＴＲＡＩＬの併用療法は食道がん治療の新しい選択肢を提供しうる。
【００５５】
Ｃｈｒｏｍｉｋら（参考文献２８）は、ＨＣＴ１５結腸がん細胞におけるアポトーシス誘導に対するタウロリジンとｒｈＴＲＡＩＬの相乗効果を観察した。ＴＲＡＩＬ（ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド）による腫瘍細胞のアポトーシス誘導は腫瘍学における有望な治療選択肢であるが、毒性とＴＲＡＩＬに対する耐性が制限因子である。タウロリジンは低毒性の抗新生物薬なので、ＴＲＡＩＬとの併用療法の潜在的候補である。Ｃｈｒｏｍｉｋらの研究目的は、ＨＣＴ１５ヒト結腸がん細胞株におけるＴＲＡＩＬとタウロリジンの併用療法を評価することであった。ＨＣＴ１５細胞を培養し、組換えヒトＴＲＡＩＬ（５０〜５００ｎｇ／ｍＬ）又はタウロリジン（５０〜１０００ｍｍｏｌ／ｌ）の濃度を増加させながらインキュベートして、アポトーシス及び壊死に関する両物質の用量依存効果を評価した。その後、第二の実験で細胞を単独のＴＲＡＩＬ（５０及び２５０ｎｇ／ｍＬ）又はタウロリジン（１００及び１０００ｍｍｏｌ／ｌ）とインキュベートするとともに、異なる濃度の両薬剤の組合せともインキュベートした。様々な時点（３〜３６時間）で、細胞生存性、アポトーシス、及び壊死を、ヨウ化プロピジウム及びアネキシンＶ染色を用いてＦＡＣＳ分析により定量化した。結果は、平均として表され、統計分析は、ＡＮＯＶＡ、チューキー検定による一対比較によって実施された。Ｐ値の＜０．０５は統計的に有意と見なされた。タウロリジンとのインキュベーションにより、２４時間及び３６時間後に１００ｍｍｏｌ／ｌ及び１０００ｍｍｏｌ／ｌの最大効果を有する用量依存性の細胞死が誘導された結果、生存細胞が６０％から１７〜３３％へと減少した。２５０ｎｇ／ｍＬ及び５００ｎｇ／ｍＬのＴＲＡＩＬは、早くも６時間で生存細胞を７０％から６〜７％へと減少させたが、生存細胞は３６時間後に１３％に部分的に回復した。タウロリジン（１００ｍｍｏｌ／ｌ）とＴＲＡＩＬ（５０ｎｇ／ｍＬ）の併用療法は２４時間及び３６時間後にアポトーシスの持続誘導をもたらし、両物質の、単なる相加効果を明らかに超える有意の相乗効果を示した。タウロリジン（１００ｍｍｏｌ／ｌ）及びＴＲＡＩＬ（５０ｎｇ／ｍＬ）との２４時間のインキュベーション後、細胞は、単独のタウロリジン１００ｍｍｏｌ／ｌの４３．９％及びＴＲＡＩＬ５０ｎｇ／ｍＬの１７．７％と比べて、わずか２．１％しか生存していなかった。同様の結果は３６時間後にも観察された。Ｃｈｒｏｍｉｋらは、インビトロにおけるヒト結腸がん細胞のアポトーシス誘導に対する組換えヒトＴＲＡＩＬとタウロリジンの相乗効果を初めて示した。ＴＲＡＩＬとタウロリジンの併用療法は、単一薬剤適用より優れた持続細胞死をもたらした。ＴＲＡＩＬと非毒性のタウロリジンとの組合せは、腫瘍学療法に新しい治療的根拠を提供する。
【００５６】
Ｂｒａｕｍａｎｎら（参考文献２９）は、開腹術を受けている結腸がんラットでタウロリジン及びタウロリジン／ヘパリンによる局所及び全身化学療法を観察した。腹部悪性腫瘍の療法の実験的研究により、様々な細胞毒性薬が腹腔内（i.p.）の腫瘍増殖を抑制することが示されている。それでも、腫瘍再発を防止するための一般に認められた方法は存在しない。１０４の結腸腺がん細胞（ＤＨＤ／Ｋ１２／ＴＲｂ）の皮下（s.c.）及びi.p.注射後、タウロリジン又はタウロリジン／ヘパリンの両方がi.p.及びs.c.腫瘍増殖に及ぼす影響を、正中開腹術を受けている１０５匹のラットで調べた。動物を７群に無作為に割り付け、３０分間の間に手術した。タウロリジン又はヘパリンのいずれかが腫瘍増殖に及ぼすi.p.（局所）影響を調べるために、物質を適用した。i.p.全身及びi.p.効果を、物質のi.v.注射後に評価した。両方の適用形態も組み合わせて相乗効果を分析した。腫瘍重量のほか腹部創傷転移発生率を介入の４週間後に調べた。薬剤の効果を評価するために、血液を採取して末梢白血球数を測定した。タウロリジン（メジアン７．０ｍｇ、Ｐ＝０．０５）及びタウロリジン／ヘパリン（メジアン０ｍｇ、Ｐ＝０．０２）のi.p.適用を受けたラットのi.p.腫瘍増殖は、対照群（メジアン１８５ｍｇ）と比べて有意に低下した。両薬剤の同時点滴もi.p.腫瘍増殖を低減したが（メジアン４ｍｇ、Ｐ＝０．０４）、物質のi.v.注射は局所効果をもたらさなかった。これに対し、s.c.腫瘍増殖は全群で違いはなかった。全群で、腹部創傷再発は稀で、違いはなかった。薬剤及び適用形態とは無関係に、手術そのものが手術直後にわずかな白血球減少とその後の経過における白血球増加を引き起こしていた。タウロリジン又はヘパリンとの併用のいずれかのi.p.療法は、正中開腹術を受けているラットの局所腫瘍増殖及び腹部創傷再発を阻害する。i.p.もi.v.適用も、又は二つの薬剤の組合せも、s.c.腫瘍増殖に影響を及ぼさなかった。物質は末梢白血球の変化を変更しなかった。
【００５７】
Ｓｔｅｎｄｅｌら（参考文献３０）は、タウロリジンによるＦａｓリガンド媒介プログラム細胞死の増強を観察した。タウロリジンは、脳腫瘍細胞に対して直接的及び選択的な抗新生物効果を有することが見出された。様々な悪性神経膠腫細胞株においてＦａｓ媒介アポトーシスの増強により抗新生物作用を発揮するタウロリジンの能力を調べた。
材料及び方法：ヒト由来Ｕ３７３細胞を培養し、タウロリジンとインキュベートして、メジアン阻害濃度（ＩＣ５０）を計算した。フローサイトメトリー分析を実施してＤＮＡ含量の変化を評価した。細胞を光学顕微鏡検査及び電子顕微鏡検査を用いて定性的及び定量的に調べた。ＬＮ−１８及びＬＮ−２２９細胞を、Ｆａｓリガンド、タウロリジン又はそのそれぞれの組合せのいずれかの不在下又は存在下でインキュベートした。細胞生存性は、２倍濃縮ＷＳＴ−１試薬の添加によって決定した。ミトコンドリアのコハク酸レダクターゼの能力をＥＬＩＳＡリーダーで測定した。
結果：０３７３細胞のタウロリジンへの暴露は、濃度依存性の（ＩＣ５０  ３５．８±２．２ｍｇ／ｍＬ）の細胞生存性喪失をもたらした。フローサイトメトリー分析により、ｓｕｂ−Ｇ０／Ｇ１領域にＤＮＡデブリの濃度依存性出現が示された。６．２５ｖｏｌ．％のＦａｓリガンドの存在下で、ＬＮ−１８細胞は９０％を超える細胞生存性の喪失を示したが、ＬＮ−２９９細胞は、より高濃度のＦａｓリガンドで減少しただけであった。タウロリジン単独では試験濃度範囲でＬＮ−１８細胞の生存性に認められるほどの影響を及ぼさなかったが、ＬＮ−１８細胞に対するＦａｓリガンドの効果を増強できた。ＬＮ−２２９細胞のタウロリジン単独への暴露は、試験された最高濃度で約７０％という相当な細胞生存性の喪失を引き起こした。Ｆａｓリガンド（１０ｖｏｌ．％）による細胞破壊はタウロリジンの存在下で増強された。
結論：タウロリジンの抗新生物活性は、一部はＦａｓリガンド誘導アポトーシスの増強に基づいているようである。さらに、タウロリジンは、Ｆａｓリガンドとは無関係に抗新生物効果を持つことも示された。おそらく、タウロリジンは様々な機序に基づいて抗新生物活性を発揮するのであろう。
【００５８】
別の研究で、Ｂｒａｕｍａｎｎら（参考文献３１）は、ラットの腹腔内（i.p.）及び皮下（s.c.）腫瘍増殖に対する腹腔鏡検査中のタウロリジン及びタウロリジン／ヘパリンの腹腔内及び全身適用の影響を評価した。研究者らは、悪性腫瘍の腹腔鏡下切除後のポート部位転移の問題及び可能性ある病理的機序について調べた。これらの腫瘍の生着を防止するための一般に認められた方法はこれまでのところ存在しない。１０４個の結腸腺がん細胞（ＤＨＤ／Ｋ１２／ＴＲｂ）のs.c.及びi.p.注射後、タウロリジン又はタウロリジン／ヘパリンのいずれかがi.p.及びs.c.腫瘍増殖に及ぼす影響を、二酸化炭素を用いて腹腔鏡検査を受けている１０５匹のラットで調べた。次に、動物を無作為に７つの群に割り付けた。二酸化炭素を用いて気腹を３０分間確立した（８ｍｍＨｇ）。３つの切開が使用された。すなわち、中央に気腹針用、左右の下腹部にトロカール用。腫瘍増殖に対するタウロリジン及びヘパリンのi.p.（局所）影響を調べるために、物質をi.p.点滴した。全身効果は、物質をi.v.適用した場合に期待された。両適用形態を組み合わせた場合の相乗的影響を分析した。腫瘍の数及び重量、ならびに腹壁及びポート部位転移の発生率を介入の４週間後に調べた。血液を採取し、全身免疫反応に対するタウロリジン及びヘパリンの影響を、腹腔鏡検査の７日前、術後２時間、２日、７日、及び４週間に評価し、末梢リンパ球を測定した。タウロリジン（メジアン７ｍｇ）及びタウロリジン／ヘパリン（０ｍｇ）をi.p.投与されたラットのi.p.腫瘍重量は、対照群（５２ｍｇ）と比べて有意に減少していた（Ｐ＝０．００１）。群間でs.c.腫瘍増殖には違いはなかった（Ｐ＝０．４）。トロカール再発は、タウロリジンをi.p.（３／１５）、i.p.i.v.（４／１５）、及びヘパリンと組み合わせてi.p.（４／１５）適用した場合、対照群（１０／１５）と比較して減少した。介入直後、処置及び非処置群とも末梢リンパ球減少を示した。タウロリジン及びヘパリンとの併用によるi.p.療法は、i.p.腫瘍増殖及びトロカール再発を阻害する。i.p.も全身適用も、又はタウロリジンとヘパリンの併用も、s.c.腫瘍増殖を低減しなかった。介入はリンパ球減少を引き起こしたが、２日目に埋め合わされた。
【００５９】
Ｍｏｎｓｏｎら（参考文献３２）は、タウロリジンが腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の毒性を阻害することを、ＴＮＦと内毒素の相乗作用の証拠とともに観察した。固形腫瘍の治療における組換え腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の使用は、生命を脅かす毒性のために制限されてきた。さらに、ＴＮＦは、内毒素の作用の主たるメディエーターでありうる。最近の証拠によれば、内毒素（ピコグラムレベル）とＴＮＦ間の相乗作用がこの毒性に寄与している可能性が示唆されている。抗内毒素タウロリジンの使用は、この相乗作用を妨害することによりＴＮＦ毒性を低減できる。Ｃ５７／ＢＬ６マウス（ｎ＝１４０）に有毒用量（１２マイクログラム／マウス  ＩＶ）のＴＮＦを投与した。４群について研究した。Ａ群はタウロリジン（２００ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）をＴＮＦの３０分前に投与し、Ｂ群はＴＮＦの３０分後にタウロリジン（２００ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ）を投与し、Ｃ群は同一量（０．５ｍｌ）の生理食塩水をＴＮＦの３０分前に投与し、Ｄ群はタウロリジン（２００ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ）をＴＮＦの４５分前に投与した。ＴＮＦの３０分前に静脈内タウロリジンを投与されたマウスの死亡率は８．８％であった。これは、Ｂ、Ｃ及びＤ群で達成された死亡率（３３％対３９．４％対５０％）より有意に低かった（Ｐ＜０．００５）。ＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド, 3-(4,5-dimethylthinzol-2-microliters)-2,5-diphenyl tetrazolinm bromide)）アッセイを用いた更なる実験で、これはタウロリジンとＴＮＦの直接相互作用によるものではなく、おそらくは内毒素とＴＮＦの相乗作用を妨害することによるものであることが示された。マウスモデルにおける併用療法の研究で、タウロリジンはＴＮＦ感受性マウス線維肉腫細胞株Ｍｅｔｈ−Ａ肉腫に対するＴＮＦの抗腫瘍効果を低減しないことも示された。
【００６０】
神経芽細胞腫の治療のためのタウロリジンと薬物との相乗活性
Ｅｓｃｈｅｎｂｕｒｇら（参考文献３３）は、タウロリジンが神経芽細胞腫細胞で抗新生物薬と協力することを観察した。神経芽細胞腫では、ステージ４の疾患の転帰は不良に留まっているので、新たな治療アプローチの開発が急務である。カテーテル感染を阻害することが知られているタウロリジンは、様々ながんで抗新生物活性を示している。神経芽細胞腫の細胞株の増殖はタウロリジンによって阻害されることが最近示された。更なる分析で、４種類の神経芽細胞腫細胞株、ＳＨ−ＥＰ  ＴＥＴ２１Ｎ、ＳＫ−Ｎ−ＡＳ、ＳＫ−Ｎ−ＢＥ（２）−Ｍ１７及びＳＫ−Ｎ−ＳＨに対するタウロリジンの有意な負の増殖効果が開示された。検出されたＩＣ５０（５１〜２７４ｍＭ；４８時間）は有望で、臨床的に達成可能な血漿濃度に相当する。アポトーシスは、内因性及び外因性経路の同時活性化によって媒介される時間依存性の様式で誘導された（７６〜８６％；４８時間）。これは、カスパーゼ−３、−８及び−９の切断ならびに汎カスパーゼ阻害によるアポトーシスの阻止によって確認された。タウロリジンの適用は、細胞毒性薬ビンクリスチン／ドキソルビシンの顕著な増強をもたらし（４細胞株の２／３）、タウロリジンを将来の神経芽細胞腫治療レジメンに含めるべき有望な候補にしている。
【００６１】
Ｅｓｃｈｅｎｂｕｒｇら（参考文献３３）はまた、タウロリジンがインビトロで神経芽細胞腫細胞株の増殖を特異的に阻害することも観察した。タウロリジンの抗新生物特性は様々なヒトがん細胞で示されている。しかしながら、神経芽細胞腫に関するデータは不足している。そこで、Ｅｓｃｈｅｎｂｕｒｇらは、神経芽細胞腫細胞株の増殖に対するタウロリジンの効果を評価しようとした。
材料及び方法：神経芽細胞腫ＳＫ−Ｎ−ＢＥ（２）−Ｍ１７及びＳＫ−ＮＳＨ細胞と悪性でないヒト臍帯静脈内皮細胞（対照として）を、タウロリジンの濃度を増加させながら（１００、２５０、５００ｍＭ）インキュベートした。細胞増殖を暴露の１２、２４、及び４８時間後に調べた。
結果：タウロリジンによる細胞増殖の阻害は両方の悪性細胞株で見られた。ヒト臍帯静脈内皮細胞と比較した場合、神経芽細胞腫の細胞株はタウロリジンに対して有意に良く応答した。
結論：ＳＫ−Ｎ−ＢＥ（２）−Ｍ１７及びＳＫ−Ｎ−ＳＨで非常に際立った細胞増殖に対する観察された負の影響は、タウロリジン特異的作用様式を暗示しているが、それは細胞レベル及び分子レベルでの差異に依存するようである。その機序と臨床使用の可能性を評価するためには更なる研究が必要である。
【課題を解決するための手段】
【００６２】
本発明は、タウロリジンと様々な腫瘍学的薬物との相乗特性を利用する。さらに詳しくは、本発明は、一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンとを、追加の賦形剤（例えば、タウロリジン及び／又は一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンの加水分解安定性の増強を提供するための緩衝液）と共に又は追加の賦形剤なしに含むナノ粒子を提供及び使用することにより、一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンの同時送達を提供し、それによってタウロリジンのこれらの腫瘍学的薬物に対する相乗効果を利用することを含む。
【００６３】
本発明の一つの好適な形態において、ナノ粒子は、一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンとを、追加の賦形剤（例えば、タウロリジン及び／又は一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンの加水分解安定性の増強を提供するための緩衝液）と共に又は追加の賦形剤なしに含み、そしてさらに一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンをがんの部位、例えば腫瘍に局所放出するように構成されたコーティングも含む。本発明の一つの好適な形態において、コーティングは、一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンが、がんの部位、例えば腫瘍に送達される前に身体に早期暴露されるのを防止するように構成される。これは、一つ又は複数の腫瘍学的薬物に由来する望まざる副作用、タウロリジンの早期加水分解などを防止するために重要でありうる。本発明の一つの好適な形態において、コーティングは吸収性のポリマー又は脂質を含む。
【００６４】
また、本発明の一つの好適な形態において、ナノ粒子は、一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンとを、追加の賦形剤（例えば、タウロリジン及び／又は一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンの加水分解安定性の増強を提供するための緩衝液）と共に又は追加の賦形剤なしに含み、そしてさらにコーティングも含み、前記コーティングは、がんの治療のための一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンの効果を改良するために、ナノ粒子ががん（例えば腫瘍）の部位を標的とするように構成されている。本発明の一つの好適な形態において、コーティングは、ナノ粒子を特定組織に標的送達するように構成された結合分子を含む。
【００６５】
また、本発明の一つの好適な形態において、ナノ粒子は、神経芽細胞腫及び／又はその他の特定がんの治療のために特別に構成されている。
本発明の一つの好適な形態において、
少なくとも一つの腫瘍学的薬物と；そして
タウロリジンと
を含む治療ナノ粒子を提供することにより、少なくとも一つの腫瘍学的薬物とタウロリジンの同時送達を提供し、それによってタウロリジンの少なくとも一つの腫瘍学的薬物に対する相乗効果を利用する。
【００６６】
本発明の別の好適な形態において、がんの治療法を提供し、該方法は、
少なくとも一つの腫瘍学的薬物と；そして
タウロリジンと
を含む治療ナノ粒子を提供し；そして
前記治療ナノ粒子を身体に送達して、少なくとも一つの腫瘍学的薬物とタウロリジンの同時送達を提供することによってタウロリジンの少なくとも一つの腫瘍学的薬物に対する相乗効果を利用する
ことを含む。
【発明を実施するための形態】
【００６７】
本発明は、タウロリジンと様々な腫瘍学的薬物との相乗特性を利用する。さらに詳しくは、本発明は、一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンとを、追加の賦形剤（例えば、タウロリジン及び／又は一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンの加水分解安定性の増強を提供するための緩衝液）と共に又は追加の賦形剤なしに含むナノ粒子を提供及び使用することにより、一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンの同時送達を提供し、それによってタウロリジンのこれらの腫瘍学的薬物に対する相乗効果を利用することを含む。
【００６８】
本発明の一つの好適な形態において、ナノ粒子は、一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンとを、追加の賦形剤（例えば、タウロリジン及び／又は一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンの加水分解安定性の増強を提供するための緩衝液）と共に又は追加の賦形剤なしに含み、そしてさらに一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンをがんの部位、例えば腫瘍に局所放出するように構成されたコーティングも含む。本発明の一つの好適な形態において、コーティングは、一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンが、がんの部位、例えば腫瘍に送達される前に身体に早期暴露されるのを防止するように構成される。これは、一つ又は複数の腫瘍学的薬物に由来する望まざる副作用、タウロリジンの早期加水分解などを防止するために重要でありうる。本発明の一つの好適な形態において、コーティングは吸収性のポリマー又は脂質を含む。
【００６９】
また、本発明の一つの好適な形態において、ナノ粒子は、一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンとを、追加の賦形剤（例えば、タウロリジン及び／又は一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンの加水分解安定性の増強を提供するための緩衝液）と共に又は追加の賦形剤なしに含み、そしてさらにコーティングも含み、前記コーティングは、がんの治療のための一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンの効果を改良するために、ナノ粒子ががん（例えば腫瘍）の部位を標的とするように構成されている。本発明の一つの好適な形態において、コーティングは、ナノ粒子を特定組織に標的送達するように構成された結合分子を含む。
【００７０】
また、本発明の一つの好適な形態において、ナノ粒子は、神経芽細胞腫及び／又はその他の特定がんの治療のために特別に構成されている。
さらに詳しくは、本発明は、タウロリジンと様々な腫瘍学的薬物を、その腫瘍学的薬物とタウロリジンをがんの部位、例えば腫瘍に局所放出するように設計された特定のナノ粒子系に被包することにより、タウロリジンと様々な腫瘍学的薬物との相乗特性を利用する。
【００７１】
腫瘍学的薬物（一つ又は複数）とタウロリジンの放出特性を最適化するために、いくつかの吸収性ポリマー系が使用できる。特に、ｌ−ラクチド、グリコリド、ｅ−カプロラクトン、ｐ−ジオキサノン、及びトリメチレンカーボネートから構築されるポリマーから誘導されたコポリマー及びマルチマーの組合せから創製されるものである。これらは、直鎖構造又は多分岐(multi-arm)構造のいずれかでありうるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などのグリコールと結合していてもよい。
【００７２】
ナノ粒子中にタウロリジン、腫瘍学的薬物（一つ又は複数）及びポリマーを含有する系の最適化により、一般にがん、特に神経芽細胞腫の改良された治療がもたらされる。
さらに、研究により、神経芽細胞腫のＮ型カルシウムチャネル、グリシン受容体チャネル及び電位依存性カリウムチャネルに対するカンナビノイド活性が示されている。これらのそれぞれは、神経組織に特異的であると考えられ、細網内皮系（ＲＥＳ）細胞には存在しないと考えられている。従って、ナノ粒子に、神経組織（例えば、神経芽細胞腫のＮ型カルシウムチャネル、グリシン受容体チャネル及び電位依存性カリウムチャネル）を標的とする結合分子を提供すると、神経組織へのナノ粒子の標的送達が増強されるので、腫瘍学的薬物（一つ又は複数）の有効性も増強される（これは相乗的タウロリジンの存在によってさらに増強される）。
【００７３】
ナノ粒子の結合分子は他の重要な生物活性を持たないことが一般に重要である。他の重要な生物活性を持たない特異的結合を達成するために、モノクローナル抗体のフラグメント抗原結合（Ｆａｂ）フラグメント（抗原に結合する抗体上の領域）が利用される。しかしながら、抗電位依存性カリウムチャネル抗体に由来する重症の自己免疫性脳炎症候群が最近報告されているので、抗電位依存性カリウムチャネル抗体（例えばＫｖＲ）は標的として使用しないのが好ましい。その他の標的も、腫瘍随伴症候群の病因として自己免疫性脳炎の症例を報告している。これまでのところ、これらの標的のいずれもＫｖＲ病ほど重篤ではないが、これは偶然によるものかもしれない。従って、神経組織を標的にするために使用される結合分子の選択には留意せねばならない。
【００７４】
本発明の一つの好適な形態において、ナノ粒子のコーティングは、神経組織（例えば神経芽細胞腫の腫瘍）にナノ粒子を結合させるために、Ｎ型カルシウムチャネルに対するモノクローナル抗体（例えば、抗Ｎ型カルシウムチャネル外表面Ｆａｂフラグメント）を含む。そうすることにより、一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンは神経組織に同時に送達され（標的ナノ粒子を介して）、タウロリジンが一つ又は複数の腫瘍学的薬物に対する相乗効果を提供することにより、標的神経組織に対する一つ又は複数の腫瘍学的薬物の増強された効果が提供される。
【００７５】
本発明の一つの特に好適な形態において、ナノ粒子のコーティングに組み込まれる抗Ｎ型カルシウムチャネル外表面Ｆａｂフラグメントは、Ｃａｖ２．２、又はその結合等価物を含む。
【００７６】
従って、本発明の一形態において、細胞毒性化学療法薬（一つ又は複数）と相乗的タウロリジンを、タウロリジン及び／又は一つ又は複数の腫瘍学的薬物とタウロリジンの加水分解安定性の増強を提供するための適切な緩衝液中に含有するナノ粒子を提供する。ナノ粒子の表面は、化学療法薬（一つ又は複数）と相乗的タウロリジンの放出特性を調節する脂質エンベロープ又はポリマーである。ナノ粒子の表面は、好ましくは、神経組織を標的とする結合分子を含む。
【００７７】
本発明は、患者の神経芽細胞腫を治療するために使用できるナノ粒子を提供し、前記ナノ粒子は、化学療法薬（一つ又は複数）と相乗量のタウロリジンとを含み、前記化学療法薬（一つ又は複数）とタウロリジンは、化学療法薬とタウロリジンの放出特性を調節するポリマーに被包されていることは理解されるであろう。
【００７８】
好適な態様の変更
本発明の性質を説明するために本明細書中に記載及び例示されている詳細、材料、工程及び部品の配列には、多数の追加の変更が当業者によって可能であるが、それらもなお本発明の原理及び範囲に含まれることは理解されるはずである。
【００７９】
参考文献
【００８０】
【表１】
2019505586.tif 000002
【００８１】
【表２】
2019505586.tif 000003
【００８２】
【表３】
2019505586.tif 000004
【００８３】
【表４】
2019505586.tif 000005
【００８４】
【表５】
2019505586.tif 000006
【００８５】
【表６】
2019505586.tif 000007
【国際調査報告】
2019505586.tif 000008