【誤訳訂正書】
【提出日】平成19年5月21日(2007.5.21)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】特許請求の範囲
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  単離したポリペプチドであって、
（a）配列番号２のアミノ酸残基２３４〜１７９１からなるか、または、
（b）ポリペプチド（a）と少なくとも９５％同一であるが、
（b1）アミノ末端から１〜１０残基の欠失またはアミノ末端への１〜１０残基の付加、および/または、
（b2）カルボキシ末端から１〜１０残基の欠失またはカルボキシ末端への１〜１０残基の付加、および/または、
（b3)１またはそれ以上の保存的置換、の点でのみ（a）のポリペプチドと異なっているものであり、
該ポリペプチドがインシュリン様成長因子結合蛋白５型（ＩＧＦＢＰ−５）に対して蛋白分解活性を有する、ポリペプチド。
【請求項２】  ポリペプチドがリコンビナントポリペプチドである、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】  ポリペプチドがヒトタンパク質または該ポリペプチドと天然で関連している他のタンパク質を含んでいない、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４】  ポリペプチドが（b）のポリペプチドである、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項５】  ポリペプチドが１またはそれ以上の保存的置換によってのみ、（a）のポリペプチドと異なっているアミノ酸配列を含む、請求項４に記載のポリペプチド。
【請求項６】  ポリペプチドが配列番号２のアミノ酸２３４〜１７９１からなる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項７】  単離したポリペプチドであって、
（1）（a）配列番号２のアミノ酸残基２３４〜１７９１と同一であるか、または、
（b）成熟ＰＡＰＰ−Ａ２（配列番号２の残基２３４〜１７９１）の断片であって、長さが少なくとも５アミノ酸であり、ここで該断片は、
（i）インシュリン様成長因子結合蛋白５型（ＩＧＦＢＰ−５）に対して蛋白分解活性を有し、および/または、
（ii）成熟ＰＡＰＰ−Ａ２を認識する抗体またはその結合断片によって認識され、ここで該断片は配列番号２の次の領域の少なくとも１つを含むものである：Cys-403〜Cys-499、Cys-828〜Cys-881、Cys-1048〜Cys-1115、Cys-1390〜Cys-1396、Cys-1459〜Cys-1464、Cys-1521〜Cys-1525、Cys-1590〜Cys-1595、Cys-1646〜Cys-1653、Cys-1729〜Cys-1733；または、
（2）（1）のポリペプチドと免疫原運搬蛋白または融合の検知または精製を促進するために使用され得るタグとの融合からなる、ポリペプチド。
【請求項８】  （1）（b）の断片である、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項９】  成熟ＰＡＰＰ−Ａ２（配列番号２のアミノ酸残基２３４〜１７９１）の断片であり、長さが少なくとも１７アミノ酸である、請求項８に記載のポリペプチド。
【請求項１０】  配列番号２のアミノ酸残基２３４〜１７９１残基からなるポリペプチド（成熟ＰＡＰＰ−Ａ２）の、少なくとも１１６９の連続したアミノ酸を含む、請求項８に記載のポリペプチド。
【請求項１１】  伸長した亜鉛結合コンセンサス配列（配列番号２のアミノ酸７３３〜７４３）、ＬＮＲ１（配列番号２のアミノ酸５８６〜６１２）、ＬＮＲ２（配列番号２のアミノ酸６１９〜６４４）、ＬＮＲ３（配列番号２のアミノ酸１７３３〜１７５８）、ＳＣＲ１（配列番号２のアミノ酸１３９６〜１４５９）、ＳＣＲ２（配列番号２のアミノ酸１４６４〜１５２１）、ＳＣＲ３（配列番号２のアミノ酸１５２５〜１５９０）、ＳＣＲ４（配列番号２のアミノ酸１５９５〜１６４６）、ＳＣＲ５（配列番号２のアミノ酸１６５３〜１７２９）、および成熟ＰＡＰＰ−Ａ２のすべてのシステイン残基を含む、請求項８に記載のポリペプチド。
【請求項１２】  断片の長さが少なくとも５０アミノ酸である、請求項８に記載のポリペプチド。
【請求項１３】  単離したポリペプチドであって、（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜２２および（ii）（ａ）配列番号２のアミノ酸２３４〜１７９１からなる配列と（b）（a）と少なくとも９５％同一である配列からなる群から選択される配列を含み、ここで該ポリペプチドまたは配列（ii）を含む該ポリペプチドの開裂断片はインシュリン様成長因子結合蛋白５型（ＩＧＦＢＰ−５）に対して蛋白分解活性を有する、ポリペプチド。
【請求項１４】  単離したポリペプチドであって、（ｉ）配列番号２のアミノ酸２３〜２３３および（ii）（ａ）配列番号２のアミノ酸２３４〜１７９１からなる配列と（b）（a）と少なくとも９５％同一である配列からなる群から選択される配列を含み、ここで該ポリペプチドまたは配列（ii）を含む該ポリペプチドの開裂断片はインシュリン様成長因子結合蛋白５型（ＩＧＦＢＰ−５）に対して蛋白分解活性を有する、ポリペプチド。
【請求項１５】  単離したポリペプチドであって、（ｉ）配列番号２のアミノ酸１〜２３３および（ii）（ａ）配列番号２のアミノ酸２３４〜１７９１からなる配列と（b）（a）と少なくとも９５％同一である配列からなる群から選択される配列を含み、ここで該ポリペプチドまたは配列（ii）を含む該ポリペプチドの開裂断片はインシュリン様増殖因子成長蛋白５型（ＩＧＦＢＰ−５）に対して蛋白分解活性を有する、ポリペプチド。
【請求項１６】  細胞内タンパク質分解によって生じる成熟ＰＡＰＰ−Ａ２の断片である、請求項１３〜１５のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１７】  配列番号２のアミノ酸配列からなる、請求項１３〜１５のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１８】  付加が１〜５アミノ酸残基であるか、欠失が２〜５アミノ酸残基である、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１９】  成熟ＰＡＰＰ−Ａ２（配列番号２の２３４〜１７９１）の断片である、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項２０】  単離したポリペプチドであって、
（a）配列番号２のアミノ酸残基２３４〜１７９１からなるか、または
（b）（a）のポリペプチドと１６以下の挿入および/または欠失および/または置換で異なり、ここで該ポリペプチドがインシュリン様成長因子結合蛋白５型（ＩＧＦＢＰ−５）に対して蛋白分解活性を有する、ポリペプチド。
【請求項２１】  単離したポリペプチドであって、
（a）配列番号２のアミノ酸残基２３４〜１７９１からなるか、または
（b）（a）のポリペプチドと少なくとも９９％同一であり、１５４８〜１５６８アミノ酸からなる、ポリペプチド。
【請求項２２】  請求項１〜２１のいずれかに記載のポリペプチドをエンコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項２３】  請求項２２に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項２４】  請求項１〜２１のいずれかに記載のポリペプチドまたは請求項２２に記載のポリヌクレオチドもしくは請求項２３に記載のベクターを含む、非ヒト宿主細胞。
【請求項２５】  請求項１に記載のポリペプチドに対して特異的な結合親和性を有する、抗体。
【請求項２６】  該抗体がモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体からなる群から選ばれる、請求項２５に記載の抗体。
【請求項２７】  該抗体がモノクローナル抗体である、請求項２６に記載の抗体。
【請求項２８】請求項１に記載のポリペプチドに対して特異性を有する抗体の生成法であって、当該方法が、
ｉ）非ヒト宿主生体を提供し、
ii）その宿主生体を請求項１に記載のポリペプチドを用いて免疫し、そして
iii）当該抗体を得る、
ことからなるステップを含む、方法。
【請求項２９】  請求項２に記載のポリペプチドの生成法であって、当該方法が、
ｉ）好適な非ヒト宿主生体を提供し、
ii）ステップｉ）で提供された宿主生体を、請求項２２に記載のポリヌクレオチド、または請求項２３に記載のベクターを用いてトランスフェクトまたは形質転換し、
iii）ステップii）で得られた宿主生体を該ポリヌクレオチドまたはベクターによりエンコードされたポリペプチドの発現に好適な条件下で培養し、そして必要に応じて
iv）宿主生体による組み換え発現の結果生じるポリペプチドを、その宿主生体から単離する、
ことからなるステップを含む、方法。
【請求項３０】  該宿主生体が、非ヒト哺乳類細胞である、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項３１】  アンチセンス法を用いて、非ヒト細胞中のまたはイン・ビトロでＰＡＰＰ−Ａ２の発現を阻害および／または減少させる方法であって、当該方法が、
ｉ）請求項２２に記載のポリヌクレオチドを提供し、
ii）ステップｉ）において提供される当該ポリヌクレオチドを用いて、ＰＡＰＰ−Ａ２を発現可能な細胞をトランスフェクトまたは形質転換し、
iii）ステップii）において得られた細胞を、ＰＡＰＰ−Ａ２の発現に関与する当該細胞において、ステップｉ）で提供されたポリヌクレオチドの相補的なポリヌクレオチドへのハイブリダイゼーションに好適な条件下で培養し、そして
iv）当該細胞においてＰＡＰＰ−Ａ２の発現を阻害および／または減少させる、
ことからなるステップを含む、方法。
【請求項３２】  該アンチセンスポリヌクレオチドおよび該相補的なポリヌクレオチドが、別々のポリヌクレオチド分子から同時発現される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】  個体から得た生物学的サンプルにおけるＰＡＰＰ−Ａ２を検出またはＰＡＰＰ−Ａ２量を測定する方法であって、当該方法が、
ｉ）当該個体から生物学的サンプルを得て、
ii）そのサンプルについて、
ａ）請求項１に記載のポリペプチド；および／または
ｂ）ＰＡＰＰ−Ａ２発現に由来するｍＲＮＡ形態のポリヌクレオチド、および／または
ｃ）好ましくはＩＧＦＢＰ−５、その誘導体の開裂、またはＰＡＰＰ−Ａ２に対する他の任意の好適な基質を検出することによる、ＰＡＰＰ−Ａ２特異的プロテアーゼ活性、
を検出することによりサンプル中のＰＡＰＰ−Ａ２を検出する、
ことからなるステップを含む、方法。
【請求項３４】  該方法が、ステップii）で検出されたＰＡＰＰ−Ａ２またはＰＡＰＰ−Ａ２量を、
ｉ）予め決められたＰＡＰＰ−Ａ２の量および／または濃度；および／または
ii）予め決められたＰＡＰＰ−Ａ２ ｍＲＮＡの量および／または濃度；および／または
iii）予め決められたＰＡＰＰ−Ａ２特異的プロテアーゼ活性、
からなる群から選ばれる、予め決められた値と比較することからなるステップを更に含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】  該予め決められた値が、当該個体の正常な健康状態を示す、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】  該生物学的サンプルが、血液、尿、胸腔内液、口腔洗浄液、組織バイオパシー、および卵胞液からなる群から選ばれる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】  該ＰＡＰＰ−Ａ２量が、ＰＡＰＰ−Ａ２特異的プロテアーゼ活性として測定される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】  該ＰＡＰＰ−Ａ２量が、ＰＡＰＰ−Ａ２蛋白の量として測定される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】  該ＰＡＰＰ−Ａ２量が、ＰＡＰＰ−Ａ２のメッセンジャーＲＮＡの量として測定される、請求項３３に記載の方法。
【請求項４０】  該ＰＡＰＰ−Ａ２蛋白量が、免疫化学的分析により測定される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】  該ＰＡＰＰ−Ａ２蛋白量が、少なくとも１つのモノクローナル抗体により検出される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】  該ＰＡＰＰ−Ａ２蛋白が、少なくとも１つ更なる成分、好ましくはポリペプチドを含む複合体において検出される、請求項３３に記載の方法。
【請求項４３】  該ＰＡＰＰ−Ａ２が、ＰＡＰＰ−Ａ２単量体として検出される、請求項３３に記載の方法。
【請求項４４】  該ＰＡＰＰ−Ａ２が、ＰＡＰＰ−Ａ２二量体として検出される、請求項３３に記載の方法。
【請求項４５】  生物学的サンプルにおける請求項２２に記載のポリヌクレオチドの発現検出法であって、当該方法が:
ｉ）請求項２２に記載のポリヌクレオチドを含有する可能性のある生物学的サンプルを提供し、そして
ii）その生物学的サンプルを、ｉ）請求項２２に記載のポリヌクレオチドに相補的な、そしてii）それとハイブリダイズ可能な、鎖を含むポリヌクレオチドと接触させ、そして
iii）ハイブリダイゼーションが起こさせ、そして
iv）ステップiii）で得られたハイブリダイゼーション複合体を検出する、
ことからなるステップを含み、
該ハイブリダイゼーション複合体の存在が、請求項１に記載のポリヌクレオチド、またはそのフラグメントの生物学的サンプルにおける発現を示している、方法。
【請求項４６】  ＰＡＰＰ−Ａ２のプロテアーゼ活性を阻害する薬剤の同定法であって、当該方法が、
ｉ）ａ）請求項１に記載のポリペプチド、およびｂ）当該ポリペプチドに対して予め決められた基質、およびｃ）可能性のある阻害剤をインキュベートし、そして
ii）該基質の蛋白分解が阻害されるかどうかを決定する、
ことからなるステップを含む、方法。
【請求項４７】  該基質が、ポリペプチドを含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】  該基質が、内部でクエンチングした蛍光性ペプチドを含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】  該基質が、ＩＧＦＢＰ−５またはそのフラグメントを含むか、あるいはそれから本質的に構成される、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】  ＰＡＰＰ−Ａ２のプロテアーゼ活性を増強する薬剤の同定法であって、当該方法が、
ｉ）ａ）請求項１に記載のポリペプチド、およびｂ）当該ポリペプチドに対して予め決められた基質、およびｃ）可能性のある増強剤をインキュベートし、そして
ii）該基質の蛋白分解が促進されるかどうかを決定する、
ことからなるステップを含む、方法。
【請求項５１】  該基質が、ポリペプチドを含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】  該基質が、内部でクエンチングした蛍光性ペプチドを含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】  該基質が、ＩＧＦＢＰ−５またはそのフラグメントを含むか、あるいはそれから本質的に構成される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】  ｉ）請求項１に記載のポリペプチド、またはｉｉ）請求項４６に記載の方法で同定された阻害剤、または請求項５０に記載の方法で同定された増強剤を含む、薬剤。
【請求項５５】  ＰＡＰＰ−Ａ２またはＰＡＰＰ−Ａ２と他の蛋白との複合体の精製法であって、当該方法が、
ｉ）請求項１に記載のポリペプチドに対して特異的な結合親和性を有するポリクローナルまたはモノクローナル抗体を提供し、そして
ii）ＰＡＰＰ−Ａ２をアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製する、
ことからなるステップを含む、方法。
【請求項５６】  個体における病態または当該病態の素因の診断用薬剤であって、当該診断が、
ａ）当該個体からの体液サンプルを提供し；そして
ｂ）当該体液サンプル中のＰＡＰＰ−Ａ/proＭＢＰ、ＰＡＰＰ−Ａ２/proＭＢＰ、ＰＡＰＰ−Ａ/ＰＡＰＰ−Ａ２、ＰＡＰＰ−Ａ/ＰＡＰＰ−Ａ２/proＭＢＰ、proＭＢＰ/ＡＮＧ、およびproＭＢＰ/ＡＮＧ/Ｃ３ｄｇからなる群から選ばれる複合体の量を測定し；そして
ｃ）病態または病態の素因を判定（予め決められた値より上または下の複合体量が病態または病態の素因を示す）する、
ことからなるステップを含む、薬剤。
【請求項５７】  哺乳類の胎児における病態または当該病態の素因の診断用薬剤であって、当該診断が、
ａ）当該胎児の母親からの体液サンプルを提供し；そして
ｂ）当該体液サンプル中のＰＡＰＰ−Ａ/proＭＢＰ、ＰＡＰＰ−Ａ２/proＭＢＰ、ＰＡＰＰ−Ａ/ＰＡＰＰ−Ａ２、ＰＡＰＰ−Ａ/ＰＡＰＰ−Ａ２/proＭＢＰ、proＭＢＰ/ＡＮＧ、およびproＭＢＰ/ＡＮＧ/Ｃ３ｄｇからなる群から選ばれる複合体の量を測定し；そして
ｃ）病態または病態の素因を判定（予め決められた値より上または下の複合体量が病態または病態の素因を示す）する、
ことからなるステップを含む、薬剤。
【請求項５８】  該病態が、ダウン症、子癇前症、および不安定狭心症および心筋梗塞を含む急性冠症候群からなる群から選ばれる、請求項５７または５８に記載の薬剤。
【請求項５９】  該複合体が、ＰＡＰＰ−Ａ/proＭＢＰであって、該病態が、ダウン症、および不安定狭心症および心筋梗塞を含む急性冠症候群から選ばれる、請求項５７または５８に記載の薬剤。
【請求項６０】  該複合体が、proＭＢＰ/ＡＮＧであって、該病態が、ダウン症である、請求項５７または５８に記載の薬剤。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１３】
該ｃＤＮＡおよび組み換えＰＡＰＰ−Ａ２蛋白は、ＰＡＰＰ−Ａ２機能に影響を及ぼす化合物を同定するのにも使用され得る。ＰＡＰＰ−Ａ２アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスミメティクスは、臨床上ＰＡＰＰ−Ａ２蛋白の発現を減少させ、それによりＰＡＰＰ−Ａの効果にアンタゴニストとして作用するために有益となり得る。同様に、ＰＡＰＰ−Ａ２コード化配列は、遺伝子治療に対して、ターゲット細胞中にＰＡＰＰ−Ａ２を導入し、それによりＰＡＰＰ−Ａ２の効果を促進させるために使用可能である。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６０】
ＰＡＰＰ−Ａ２抗体アフィニティーカラムは、抗体をゲル支持体、たとえばＮ−ヒドロキシスクシンイミドで予め活性化されているゲル支持体Affigel-10（Biorad）に添加して、該抗体をアガロースゲルビーズ支持体と共有結合を形成させることにより作成することができる。該抗体は、スペーサーアームによりアミド結合を介して該ゲルに結合される。残りの活性化エステルが、その後１Ｍ エタノールアミン ＨＣｌ（ｐＨ８）でクエンチングされる。そのカラムを、水、次いで０.２３Ｍ グリシン ＨＣｌ（ｐＨ２.６）で洗浄して、いかなる非共役型抗体または外来蛋白をも除去する。次に、そのカラムをリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７.３）中で平衡化し、ＰＡＰＰ−Ａ２またはＰＡＰＰ−Ａ２フラグメントを含有する細胞培養上清または細胞抽出物をそのカラムにゆっくりと通過させる。次に、そのカラムを洗浄し、蛋白を溶出する。精製されたＰＡＰＰ−Ａ２蛋白を次に、リン酸緩衝生理食塩水で透析する。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８８】
医療用具
本発明は、患者の体内配置（例えば移植）用医療用具も特徴としており、それはＰＡＰＰ−Ａ２プロテアーゼ活性を阻害または活性化する薬剤を含む。好適な薬剤は、本明細書に記載の方法を用いて容易に同定される。用具は、該薬剤を含んだり、あるいは該試薬をコートすることが可能である。阻害剤の非制限的な例としては、抗−ＰＡＰＰ−Ａ２ポリクローナルまたはモノクローナルといった抗体、あるいは１,１０−フェナントロリンといったメタロプロテアーゼ阻害剤が挙げられる。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２９】
共有結合性または凝集性の機能的等価物およびその誘導体は、イムノアッセイにおける試薬として、またはアフィニティー精製法に有益である。例えば、本発明に記載のＰＡＰＰ−Ａ２のフラグメントは、それ自身既知の方法により臭化シアン活性化セファロースに共有結合することにより不可溶化され、抗ＰＡＰＰ−Ａ２抗体または細胞表面レセプターのアッセイまたは精製に使用されるグルタルアルデヒド架橋を用いてまたは用いないでポリオレフィン表面に吸収され得る。フラグメントは、検出可能な基で標識化、例えばクロラミンＴ法による放射性ヨウ素化される、希土類キレートに共有結合される、または例えば診断アッセイに使用する別の蛍光部分と共役され得る。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３３】
本発明によるＰＡＰＰ−Ａ２のフラグメントのホモ二量体およびヘテロ二量体を含む二量体を含むオリゴマーも提供され、本発明の範疇に該当する。ＰＡＰＰ−Ａ２の機能的等価物および変異体が、他のアミノ酸配列を有する、または天然のＰＡＰＰ−Ａ２配列を有するホモ二量体またはヘテロ二量体として生成可能である。ヘテロ二量体としては、いかなる生物活性をも有するまたは示す必要がない免疫反応性ＰＡＰＰ−Ａ２フラグメントならびにＰＡＰＰ−Ａ２フラグメントを含有する二量体である。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３５】
多細胞生体由来の細胞培養物は、好ましい宿主細胞である。原則として、脊椎動物培養由来であろうと無脊椎動物培養由来であろうと任意の真核細胞培養物が高等であるほど有効である。例えば有益な宿主細胞株は、ＶＥＲＯおよびＨｅＬａ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株、およびＷＩ３８、ＢＨＫ、ＣＯＳ−７、２９３およびＭＤＣＫ細胞株である。好ましい宿主細胞は、内因性のＰＡＰＰ−Ａ２を合成することが知られている真核細胞である。当該宿主細胞の培養物は、フラグメントの起源として単離および使用され得、あるいは成育状態を促進または阻害することを目的とする治療法、あるいはヒトまたは動物の身体に関して実施される診断方法を含む治療的処置法において使用され得る。