(57)【要約】【課題】  紅茶抽出成分が肥満及び糖尿病に与える影響について鋭意研究し、その成果に基づいて紅茶抽出成分の新たな用途を提案する。【解決手段】  ＴＦ、ＴＦ３−Ｇ、ＴＦ３´−Ｇ及びＴＦ３，３´−Ｇの混合成分であるテアフラビン類を含有する紅茶抽出成分を有効成分とする、筋肉細胞におけるグルコース取込み活性化剤、筋肉細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション活性化剤、脂肪細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション抑制剤又は糖尿病合併症予防剤、並びに、これらのいずれか含有してなる飲食物を提案する。これらを摂取すれば、脂肪細胞におけるグルコースの取込みを抑制でき、同時に筋肉細胞においてはグルコース取込みを逆に活性化させることができる。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３'−ガレート及びテアフラビン−３，３'−ジガレートの混合成分であるテアフラビン類を含有する紅茶抽出成分を有効成分とする、筋肉細胞におけるグルコース取込み活性化剤。
【請求項２】
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３'−ガレート及びテアフラビン−３，３'−ジガレートの混合成分であるテアフラビン類を含有する紅茶抽出成分を有効成分とする、筋肉細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション活性化剤。
【請求項３】
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３'−ガレート及びテアフラビン−３，３'−ジガレートの混合成分であるテアフラビン類を含有する紅茶抽出成分を有効成分とする、脂肪細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション抑制剤。
【請求項４】
テアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３'−ガレート及びテアフラビン−３，３'−ジガレートの混合成分であるテアフラビン類を含有する紅茶抽出成分を有効成分とする、糖尿病合併症予防剤。
【請求項５】
請求項１のグルコース取込み活性化剤、請求項２のＧＬＵＴ４トランスロケーション活性化剤、請求項３のＧＬＵＴ４トランスロケーション抑制剤、請求項４の糖尿病合併症予防剤のいずれかを含有してなる飲食物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紅茶抽出成分の新たな用途、中でも肥満や糖尿病に関係する新たな用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
食生活が豊かになるにつれ、「肥満」は現代人が抱える最も深刻な悩みの一つとなっている。肥満は、美容的に好ましくないばかりか、糖尿病、動脈硬化、高トリアシルグリセロール血症、高コレステロール血症、血栓症等疾患などの様々な疾病を引き起こすことが知られている。
肥満は、脂肪細胞の分化・肥大、或いは脂肪細胞数そのものの増加により生じるが、いずれの場合にも“グルコースの取込み”が深く関与している。
グルコースは極性物質であるため、血中から各細胞にグルコースが取り込まれるには輸送担体（glucose transporter：ＧＬＵＴ）が必要である。現在９種類以上のＧＬＵＴがクローニングされており、その中で生体内の糖・脂質代謝に大きく関与する脂肪細胞には主にＧＬＵＴ１及びＧＬＵＴ４が発現している。その中でも特にＧＬＵＴ４は脂肪細胞の膜上におけるグルコースの取込み活性に主要な役割を果たしていることが知られている。
ＧＬＵＴ４は、インスリン感受型ＧＬＵＴと呼ばれ、通常は脂肪細胞及び筋肉細胞における細胞内小胞に存在し、インスリンの刺激を受けると細胞膜上に移行（トランスロケーション）し、グルコースを取り込める状態とする。ＧＬＵＴ４のトランスロケーションは、インスリンが受容体に結合し、受容体のβサブユニットが自己リン酸化することが情報伝達の開始となり、その後インスリン受容体基質（ＩＲＳ）のリン酸化、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）の活性化、Akt／Protein Kinase Bの活性化という経路を介して細胞内の小胞体から細胞膜へのエキソサイトーシスにより、移行が完了する。また、ＧＬＵＴ４は、筋肉細胞内により多くのグルコースを移動させる働きを為し、運動選手は一般の人よりもＧＬＵＴ４が多いことなども報告されている（「炭水化物ローディングの最新知見」慶応義塾大学スポーツ医学研究センター紀要  １９９６）。
【０００３】
肥満の増加を反映して、糖尿病患者数が増える傾向にある。糖尿病は、いったん発症するとなかなか完治しづらいばかりか、合併症を発症し易いやっかいな疾病である。
糖尿病患者に特異的に発症する合併症として、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害などあり、糖尿病三大合併症とも呼ばれている。これらの合併症は、細かい血管の病変に基づく細小血管障害に因ると考えられている。具体的には、プロテインキナーゼＣ等の酵素の働きが異常に亢進して細胞機能が低下したり、高血糖の持続により酵素などの蛋白質にグルコースが化学結合して酵素機能が低下したり、高血糖による代謝障害のためにソルビトール（糖アルコール）が細胞内に蓄積して細胞障害を起こしたりして、これが原因で細小血管の細胞や血液細胞に異常が生じ合併症を発症すると考えられている。
【０００４】
従来、このような肥満や糖尿病に対する茶抽出物やその抽出成分の影響について、次のような様々な提案や報告が為されている。
【０００５】
例えば特許文献１（特開平０６−８０５８０号）には、茶葉に含まれる多糖類（リボース，アラビノース及びグルコース）を有効成分とする血漿コレステロール低下剤が開示され、
特許文献２（特開平１０−１５８１８１号）には、茶より抽出した植物エキスを含有する脂肪分解促進剤が、全身あるいは局所の脂肪組織の減少を促進して肥満体質の改善、肥満の抑制・防止に効果を発揮する旨が開示され、
特許文献３（特開平１１−３０２１６８号）には、茶抽出物中のエピカテキンガレートを有効成分として含有するグルコース吸収阻害剤が、腸管でのグルコース吸収を抑制し、肥満や糖尿病などの治療等に有効である旨が開示され、
特許文献４（特開２００３−８１８２５号）には、カテキン類からなるグルコーストランスポーター４発現促進剤及び糖尿病予防・改善用容器詰飲料が開示され、
特許文献５（特開２００３−９５９４２号）には、カテキンガレート、ガレートエステルを備えたカテキン、茶抽出物のいずれかを有効成分とする脂肪細胞におけるグルコース取込阻害剤、インスリン刺激応答性グルコース取込阻害剤、ＧＬＵＴ４トランスロケーション抑制剤及び脂肪軽減飲食物が開示されている。
【０００６】
【特許文献１】特開平０６−８０５８０号公報
【特許文献２】特開平１０−１５８１８１号公報
【特許文献３】特開平１１−３０２１６８号公報
【特許文献４】特開２００３−８１８２５号公報
【特許文献５】特開２００３−９５９４２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明者は、紅茶抽出成分が肥満や糖尿病に与える影響について鋭意研究し、その結果得られた様々な知見に基づいて、紅茶抽出成分の新たな用途、特に肥満や糖尿病に関係する新たな用途を提案するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、紅茶抽出成分を有効成分とする、筋肉細胞におけるグルコース取込み活性化剤、筋肉細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション活性化剤、脂肪細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション抑制剤又は糖尿病合併症予防剤、並びに、これらのいずれか含有してなる飲食物を提案するものであり、前記の紅茶抽出成分とは、テアフラビン（ＴＦ）、テアフラビン−３−ガレート（ＴＦ３−Ｇ）、テアフラビン−３'−ガレート（ＴＦ３´−Ｇ）及びテアフラビン−３，３’−ジガレート（ＴＦ３，３´−Ｇ）の混合成分であるテアフラビン類を含有する点に特徴を有している。
また、本発明において、飲食物とは、飲料と食品の両方を包含する意である。
【０００９】
本発明の有効成分を摂取すれば、脂肪細胞におけるグルコースの取込み、特にインスリン刺激によって高まるグルコース取込みを抑制することができ、脂肪細胞量を軽減することができる。これによって、脂肪過剰状態すなわち肥満、並びに肥満に伴う糖尿病、動脈硬化、高トリアシルグリセロール血症、高コレステロール血症、血栓症等疾患などの様々な疾病の治療及び予防を図ることができる。
脂肪細胞においてグルコース取込み活性を阻害する機序としては、脂肪細胞に存在するＧＬＵＴ４のトランスロケーションの抑制、或いはインスリンレセプターへの結合など様々な機構が考えられるが、本発明者らは、本発明の有効成分はＧＬＵＴ４のトランスロケーションを特異的に抑制することを解明し、かかる知見に基づき、紅茶抽出成分を有効成分とする、脂肪細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション抑制剤及びこれを含有する飲食物を想到したものである。
【００１０】
本発明の有効成分は、脂肪細胞におけるグルコース取込みを抑制するだけでなく、筋肉細胞におけるグルコース取込みを逆に活性化させ、過剰なグルコースを筋肉細胞に取り込ませて消費させることができる。すなわち、本発明は、筋肉細胞におけるグルコース取込み活性化剤、筋肉細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション活性化剤、脂肪細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション抑制剤及び糖尿病合併症予防剤の群からなる２種類以上の組合わせからなる用途を備えた薬剤としても提供することができる。よって、本発明の有効成分を投与或いは摂取すれば、血中糖濃度を高めることがなく、肥満防止に伴う倦怠感などが無いばかりか、逆に活動力の向上を図ることができる。すなわち、本発明の有効成分を摂取すれば、筋肉細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーションを活性化し、筋肉細胞におけるグルコースの取込み活性を増大させることができ、その結果、筋肉細胞に多くのエネルギー源を取り込ませ、筋肉細胞量を増大させることができる。よって、筋肉組織の活性化、肉体疲労軽減、運動能力の向上、筋肉組織の増強・増大、引いては体質改造などに効果的に用いることができ、本発明の筋肉細胞におけるグルコース取込み活性化剤は、筋肉細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション活性化剤、或いは筋肉活性化剤としても利用することができる。
【００１１】
また、本研究では、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）投与により誘導した糖尿病のラットに対する紅茶抽出成分の影響を検討した結果、糖尿病ラットに対して紅茶抽出成分を投与すると、酸化ストレスの軽減や脂肪代謝の改善を図ることができ、これらの機能を介して糖尿病合併症、すなわち糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害を予防することができる旨の知見を得、かかる知見に基づき、紅茶抽出成分を有効成分とする、糖尿病合併症予防剤及びこれを含有する飲食物を提案するものである。
【００１２】
さらにまた、紅茶抽出成分は、筋肉におけるＡＭＰＫを活性化すること、並びにアディポサイトカインの分泌バランスを良好に保持し、脂肪酸の燃焼(β酸化)を促進することで血漿遊離脂肪酸含量を低下させることが今回新たに確認されており、本発明は、紅茶抽出成分を有効成分とする、筋肉内ＡＭＰＫ活性化剤、アディポサイトカイン分泌バランス調整剤或いは脂肪酸の燃焼(β酸化)促進剤も併せて提案する。
【００１３】
なお、本発明の有効成分は、インスリン分泌の前後いずれに摂取しても、効果が得られることを確認している。よって、本発明の有効成分は、食物摂取の前、食物摂取と同時、或いは食物摂取後のいずれに摂取しても効果を得ることができる。
しかも、本発明の有効成分は、古くから日常的に愛飲され、誰でも安心して摂取できる紅茶に由来する成分であるから、長期間無理なくかつ安心して摂取することができ、慢性的な症状及び疾病の根本治療並びに予防、更には体質改善に特に効果的である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明を実施するための最良の実施形態について説明するが、本発明の実施形態が以下の例に限定されるものではない。
【００１５】
本発明の「筋肉細胞におけるグルコース取込み活性化剤」、「筋肉細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション活性化剤」、「脂肪細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション抑制剤」、「糖尿病合併症予防剤」、「筋肉内ＡＭＰＫ活性化剤」、「アディポサイトカイン分泌バランス調整剤」及び「脂肪酸の燃焼(β酸化)促進剤」はいずれも、紅茶抽出成分を適宜濃度で配合することによって製造することができる。
【００１６】
紅茶とは、茶葉を完全発酵させたいわゆるブラックティー全般を意味し、産地、品種、茶葉の等級などを問わない。例えば、ダージリン種、アッサム種、ニルギリ種、ウバ種、ディンブラ種、ヌアラ種、その他のいずれであってもよいし、リーフグレイド、ブロークングレイド、その他の茶葉等級のいずれであってもよいが、特にウバ種が好ましい。
【００１７】
紅茶抽出成分は、採取した紅茶葉をそのまま或いは砕片化して、水、温水又は熱水、好ましくは４０℃〜１００℃の温熱水、中でも９０〜１００℃の熱水で抽出して得ることができる。
【００１８】
紅茶抽出成分中の成分としては、タンニン（ポリフェノール）、アミノ酸類、カフェイン、糖類、サポニンなどを挙げることができるが、中でもタンニン（ポリフェノール）が主要成分である。
紅茶抽出成分中のポリフェノールは、緑茶抽出物に比べてカテキン類が３０〜４０％に減少しており、その分、カテキン類の酸化重合物が多いという特徴がある。これは、茶葉の発酵工程で成分が酸化乃至重合しているためであり、カテキン類の酸化重合体であるテアフラビン類（ＴＦ（;Theaflavin、下記[化１]）、
ＴＦ３−Ｇ（;Theaflavin-3-gallate、下記[化２]）、
ＴＦ３´−Ｇ（;Theaflavin-3'-gallate、下記[化３]）、
ＴＦ３，３´−Ｇ（;Theaflavin-3',3'-digallate、下記[化４]）などを含む）やテアルビジン類、その他のカテキン類の酸化重合物は紅茶抽出成分中のポリフェノールの特徴的な成分であるが、本発明の有効成分としては、ＴＦ、ＴＦ３−Ｇ、ＴＦ３´−Ｇ及びＴＦ３，３´−Ｇを含有するテアフラビン類が重要である。
【００１９】
【化１】
2006001929.tif 000002
【００２０】
【化２】
2006001929.tif 000003
【００２１】
【化３】
2006001929.tif 000004
【００２２】
【化４】
2006001929.tif 000005
【００２３】
本発明が有効成分とする紅茶抽出成分は、上記の如く紅茶葉を抽出して得られた紅茶抽出液をそのまま有効成分とすることもできるが、紅茶抽出液を濃縮或いは乾燥させて紅茶抽出エキスとしたもの、特に好ましくはテアフラビン類の濃度をより一層高めた紅茶抽出エキスを有効成分とすることもできる。
【００２４】
また、紅茶抽出成分を単独で有効成分とすることもできるが、既に或いは将来的に「筋肉細胞におけるグルコース取込み活性化剤」、「筋肉細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション活性化剤」、「脂肪細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション抑制剤」、「糖尿病合併症予防剤」、「筋肉内ＡＭＰＫ活性化剤」、「アディポサイトカイン分泌バランス調整剤」及び「脂肪酸の燃焼(β酸化)促進剤」などの有効成分としての効果が認められた成分、例えば緑茶抽出物、中でもカテキンなどと混合してこの混合成分を有効成分とすることもできる。
【００２５】
この際、緑茶抽出物の好ましい例としては、緑茶を熱水抽出処理し、この抽出物を乾燥させてカテキン濃度を約３０％とした緑茶エキス（伊藤園社製商品名：テアフラン３０Ａ）や、緑茶を熱水抽出処理し、この抽出物をカテキン以外の成分を排除するためにカラム法により処理し乾燥させて、茶ポリフェノール濃度を約８５〜９５％とした緑茶エキス（伊藤園社製商品名：テアフラン９０Ｓ）などを例示することができる。
また、カテキンとしては、(−)−エピカテキンガレート、(−)−エピガロカテキンガレート、(−)−カテキンガレート、(−)−ガロカテキンガレートのいずれか、或いはこれらのいずれかの重合体、或いはこれらのうちの２種類以上の共重合体、或いはこれらのうちの２種類以上の混合物を挙げることができる。
【００２６】
紅茶抽出成分を単独で有効成分とする場合、例えば紅茶抽出物を精製水又は生理食塩水などに溶解して薬剤（例えば経口投与剤、腹腔内投与剤、脳内投与剤等）などとして提供することができる。
【００２７】
本発明の「筋肉細胞におけるグルコース取込み活性化剤」、「筋肉細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション活性化剤」、「脂肪細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション抑制剤」、「糖尿病合併症予防剤」、「筋肉内ＡＭＰＫ活性化剤」、「アディポサイトカイン分泌バランス調整剤」及び「脂肪酸の燃焼(β酸化)促進剤」はいずれも、経口投与剤または非経口投与剤（筋肉注射、静脈注射、皮下投与、直腸投与、経皮投与、経鼻投与など）として使用することができ、それぞれの投与に適した配合及び剤型とするのが好ましい。
剤型については、例えば経口投与剤用としては液剤、錠剤、散剤、顆粒、糖衣錠、カプセル、懸濁液、乳剤、丸剤などの形態に調製することができ、非経口投与剤用としては注射剤、アンプル剤、直腸投与剤、油脂性坐剤、水溶性坐剤などの形態に調製することができる。
配合（製剤）については、通常用いられている賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤化剤、崩壊剤、表面活性剤、潤滑剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、防腐剤、矯味矯臭剤、無痛化剤、安定化剤などを用いて常法により製造することができる。また、例えば乳糖、果糖、ブドウ糖、でん粉、ゼラチン、炭酸マグネシウム、合成ケイ酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースまたはその塩、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、シロップ、ワセリン、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、クエン酸、塩化ナトリウム、亜硫酸ソーダ、リン酸ナトリウムなどの無毒性の添加剤を配合することも可能である。
【００２８】
本発明の「筋肉細胞におけるグルコース取込み活性化剤」、「筋肉細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション活性化剤」、「脂肪細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション抑制剤」、「糖尿病合併症予防剤」、「筋肉内ＡＭＰＫ活性化剤」、「アディポサイトカイン分泌バランス調整剤」及び「脂肪酸の燃焼(β酸化)促進剤」はいずれも、医薬品のほか、医薬部外品、薬理効果を備えた健康食品・健康飲料・特定保健用食品・機能性食品、その他ヒト以外の動物に対する薬剤や飼料などとして提供することもできる。
例えば、医薬部外品として調製し、これを瓶ドリンク飲料等の飲用形態、或いはタブレット、カプセル、顆粒等の形態とすることにより、より一層摂取し易くすることができる。
また、薬理効果を備えた健康食品・健康飲料・特定保健用食品・機能性食品とする場合には、例えば本発明の有効成分を、炭酸、賦形剤（造粒剤含む）、希釈剤、或いは更に甘味剤、フレーバー、小麦粉、でんぷん、糖、油脂類等の各種タンパク質、糖質原料やビタミン、ミネラルなどの飲食品材料群から選ばれた１種類或いは２種類以上と混合したり、或いは、現在公知の飲食品、例えばスポーツ飲料、果実飲料、乳飲料、茶飲料、野菜ジュース、乳性飲料、アルコール飲料、ゼリー、ゼリー飲料、炭酸飲料、チューインガム、チョコレート、キャンディ、ビスケット、スナック、パン、乳製品、魚肉練り製品、畜肉製品、冷菓、乾燥食品、サプリメントなどに添加して製造することができる。
中でも、糖類を多く含んだ飲食物素材に紅茶抽出成分を添加してなる飲食物は、筋肉細胞におけるグルコース取込み活性効果と脂肪細胞におけるＧＬＵＴ４トランスロケーション抑制効果の両方の効果を備えるため、優れた脂肪軽減飲食物（言い換えればダイエット飲食物）、筋肉活性化飲食物などとして提供することができる。
【００２９】
本発明の有効成分である「紅茶抽出成分」の含有量は、使用方法によっても異なるが、医薬品であれば、テアフラビン乾燥重量換算にして０．００１〜１重量％、特に０．０１〜０．５重量％配合するのが好ましく、飲食品であれば、テアフラビン乾燥重量換算にして０．００１〜１重量％、特に０．０１〜０．５重量％配合するのが好ましい。
飲食物として調製する場合、紅茶抽出成分を飲食物中に０．００１〜１重量％配合し、テアフラビン乾燥重量換算で通常飲用されるお茶の５倍〜５００倍の濃度に調製するのが好ましい。
なお、摂取量としては、テアフラビン乾燥重量換算で一日に１０〜５０００ｍｇ、好ましくは１００〜１５００ｍｇ程度が好ましい。
【００３０】
＜試験１＞
本試験では、紅茶抽出成分をラットに自由摂取させた時の糖代謝及び脂質代謝の変化を調べるため、血液成分及び脂肪組織と筋肉組織でのグルコースの取込みの変化を調べた。
【００３１】
なお、本試験を含めて試験１〜試験４におけるすべての動物実験は、「実験動物の飼養及び保管等に関する基準」（昭和５５年３月総理府告示第６号）および「神戸大学における動物実験に関する指針」に従って試験を実施した。
【００３２】
（実験動物）
試験には生後６週齢のＷｉｓｔａｒ／ＳＴ雄性ラット２４匹（日本エスエルシー社製）を使用した。これらを６匹ずつ４群に分け、７日間の順化後、それぞれ（１）紅茶抽出液＋ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）投与（Ｔ−ＳＴＺ）、（２）紅茶抽出液のみ投与（Ｔ−ＣＯＮ）、（３）水＋ＳＴＺ投与（Ｗ−ＳＴＺ）、（４）水のみ投与（Ｗ−ＣＯＮ）を実施した。
（１）（２）のグループには紅茶抽出液を、（３）（４）のグループには対照として蒸留水を、それぞれ給水ビンに入れて、飼育開始日より屠殺するまでの３５日間自由摂取させた。この間、水、紅茶ともに連日交換し、飼料は市販の固形飼料を与えた。
【００３３】
（紅茶抽出液）
紅茶（品種：ウバ）の茶葉２０ｇを、９５℃のイオン交換水１Ｌで２分間抽出し、得られた抽出液をネル濾布にて濾して紅茶抽出液（以下単に「紅茶」という）とした。
得られた紅茶抽出液中のテアフラビン類（ＴＦｓ）量を高速液体クロマトグラフィ法により測定し、下記表１に示した。なお、表１に示した各値は３回の測定結果の平均値である。
【００３４】
【表１】
2006001929.tif 000006
【００３５】
（実験操作）
飼育開始７日目にＴ−ＳＴＺ群とＷ−ＳＴＺ群に０．０５Ｍのクエン酸緩衝液（ｐＨ４．５）に溶解したストレプトゾトシン（ＳＴＺ；和光純薬工業社製）を４０ｍｇ／ｋｇ・体重になるように、Ｔ−ＣＯＮ群とＷ−ＣＯＮにはその対照としてクエン酸緩衝液のみを尾静脈より投与し、Ｉ型糖尿病の発症を誘導した。その後、屠殺までの間に１週間に２回、計８回にわたり１２時間絶食後の血中グルコース濃度を測定し、定常時血糖値の推移を観察した。
飼育開始３１日目には、Ｄ−グルコースを２ｇ／ｋｇ・体重になるように経口負荷し、耐糖能試験（Oral Glucose Tolerance Test：ＯＧＴＴ）を行い、飼育最終日である３５日目に同じくグルコースを経口負荷し、その３０分後に心臓採血により屠殺し、肝臓、腎臓、膵臓、大腿筋、精巣上体脂肪組織を摘出し、小腸から上皮細胞を採取した。
【００３６】
（測定）
（１．定常時血糖値の測定）
ＳＴＺ投与前（０日目）、投与後３、７、１０、１４、１７、２０、２４、２８日目における空腹時の血糖値を測定し、飼育期間中の血糖調節を観察した。測定には血糖測定機器であるデキスターＺＩＩ（三共社製）を用い、１２時間絶食状態にしたラットの尾静脈血中のグルコース濃度を測定し、結果を図４に示した。
【００３７】
（２．ＯＧＴＴの測定）
飼育開始３１日目に、１２時間絶食状態にしたラットにＤ−グルコース水溶液を２  ｇ／ｋｇ・体重になるようにゾンデ針を用いて経口投与し、糖負荷前（０分）、負荷後１５、３０、６０、９０、１２０、１８０分後にラットの尾先端より採血し、エッペンドルフチューブに回収した。回収した血液から血清を調製し、血清中グルコース濃度をグルコースＣＩＩ−テストワコー（和光純薬工業社製）を用いて測定し、結果を図５に示した。
【００３８】
（３．３−Ｏ［メチル−３Ｈ］−Ｄ−グルコース（３−ＯＭＧ）取込み活性の測定）
屠殺後速やかに筋肉、脂肪組織を採取し、各組織を約５０ｍｇになるように切り取った。その後クレブス−リンガー−ＨＥＰＥＳ緩衝液（ＫＲＨ：５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（シグマアルドリッチジャパン社製）、ｐＨ７．４、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、４．８ｍＭ  ＫＣｌ、１．８５ｍＭ  ＣａＣｌ2、１．３ｍＭ  ＭｇＳＯ4）に浸漬し、３７℃で５分間インキュベート後、３−ＯＭＧ（Moravek Biochemicals, Inc社製）を終濃度６．５ｍＭ、０．５μＣｉになるように添加した。その２分後に各組織をＫＲＨで６回洗浄し、バイアル内でＮＣＳ II  Tissue Solubilizer（アマシャムバイオサイエンス社製）を用いて可溶化し、クリアゾルＩを添加後液体シンチレーションカウンターで３−ＯＭＧの組織への取込み量を測定し、筋肉組織における取込み量を図７に示し、脂肪組織における取込み量を図８に示した。
【００３９】
（４．過酸化脂質の測定）
血清、肝臓、腎臓、膵臓中のチオバルビツール酸反応物質（ＴＢＡＲＳ）を測定し評価した。
各臓器を重量の４倍容のリン酸緩衝液（ＰＢＳ（−）：１０ｍＭ Na phosphate、ｐＨ７．４、０．９％  ＮａＣｌ）とともに、ポリトロンホモジナイザーを用いて氷冷下でホモジナイズした。臓器ホモジネート及び血清に０．８％ ２，６−tert−ブチル−ｐ−クレゾール（ＢＨＴ）酢酸溶液、８．１％  ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、２０％  酢酸溶液（ｐＨ３．５）、０．８％  2−チオバルビツール水溶液（ＴＢＡ試薬）を添加後５℃で６０分間静置した。更に沸騰浴中で６０分間インキュベート後、室温まで冷却したところへ、水、ブタノール・ピリジン混合溶液（１５：１、ｖ／ｖ）を添加し攪拌後、反応混液を３０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、その上清の蛍光強度（Ｅｘ５３５ｎｍ−Ｅｍ５５３ｎｍ）を測定した。過酸化脂質の標準物質にはテトラエトキシプロパンを用いた。
臓器ホモジネートは、bovine serum albumin（ＢＳＡ；ウシ血清アルブミン）を標準物質としてタンパク質量をLowry法により求め、ＴＢＡＲＳ量をタンパク質量で除してマロンジアルデヒド当量として求めた。
【００４０】
（５．血清中脂質の測定）
屠殺時に心臓より採血した血清中のトリグリセリド量、総コレステロール量、遊離コレステロール量、遊離脂肪酸量、ＨＤＬ−コレステロール量はそれぞれトリグリセリドＧ−テストワコー、コレステロールＥ−テストワコー、ＮＥＦＡ  Ｃ−テストワコー、ＨＤＬ−コレステロールテストワコー、遊離コレステロールＥ−テストワコー（和光純薬工業社製）を用いて測定した。ＬＤＬ−コレステロール量は超遠心分画法を用いて分画し、その分画物をコレステロールＥ−テストワコーで測定して求めた。
【００４１】
（６．小腸二糖類加水分解酵素活性の測定）
採取した小腸細胞塊に重量の７倍容の１．１５％ＫＣｌを加え、氷冷下でホモジナイズした。スクロース、マルトースは０．１Ｍになるようにマレイン酸緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ６．０）に溶解し、それぞれスクロース溶液、マルトース溶液とした。調製したホモジネートにスクロース溶液を添加し、０、１０、２０、４０分間にわたり３７℃の温浴中においてスクロース分解酵素であるスクラーゼを反応させた。またマルトース溶液も同様にして、０、５、１０、２０分間の各時間でマルターゼを反応させた。その後、沸騰浴中で５分間インキュベートして酵素反応を停止させ、室温になるまで冷却した後３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、回収した上清中のグルコース量はグルコースＣＩＩ−テストワコーを用いて測定した。ホモジネート中のタンパク質量をLowry法により求め、グルコース量をタンパク質量で除して１分間当たりのスクラーゼ活性、マルターゼ活性を求め、結果をそれぞれ図１０、図１１に示した。
【００４２】
（７．フルクトサミンの測定）
nitroblue tetrazolium（ＮＢＴ）を０．４８ｍＭになるように炭酸ナトリウム緩衝液（２００ｍＭ、ｐＨ１０．３）に溶解しＮＢＴ溶液とした。屠殺時に採取した血清にウリカーゼ（和光純薬工業社製）を２．５ｋＵ／Ｌになるように溶解したＮＢＴ溶液を添加して３７℃で反応させた。反応開始１０分後と１５分後の５３０ｎｍにおける吸光度の差から、フルクトサミンの標準物質としてフルクトサミンキャリブレーター（シグマ  ディアグノスティック社製）を用いてフルクトサミン量を求め、結果を図６に示した。
【００４３】
（８．インスリンの測定）
１２時間絶食状態にしたラットに、Ｄ−グルコース水溶液を２ｇ／ｋｇ・体重になるようにゾンデ針を用いて経口投与し、糖負荷３０分後に心臓採血により得た血清中のインスリン量をMercodia Rat Insulin ＥＬＩＳＡキット（フナコシ社製）を用いて測定し、結果を図９に示した。
【００４４】
（統計分析）
Student's t-testを用いて実験結果を比較し、p値が０．０５以下になった場合を有意とみなした。
【００４５】
（結果及び考察）
（１．体重、摂食量、摂水量の変化）
飼育開始時点での４群間の体重は、ほぼ差がなく同程度であった。その後、飼育７日目にＳＴＺを投与した２群では、直後から体重減少、摂食量増加、摂水量増加といった糖尿病発症の特徴的な症状がみられた（図１−図３）。これらより、この２群はＳＴＺの投与がＩ型糖尿病の発症を誘導したことを示している。更にこの２群を比較すると、水投与群では紅茶投与群に比べ、これら３つの症状が顕著であった。一方で、ＳＴＺを投与しなかった２群間では、紅茶投与、水投与による差は観察されず、ともに飼育期間を通して順調な体重増加を示した。
【００４６】
（２．定常時血糖値の推移）
ＳＴＺ投与日（図４の０日目に相当する）には４群間の血糖値はほぼ同程度であったが、そのうちＳＴＺを投与した２群では、糖尿病発症のために有意に血糖値の上昇が誘導された。しかし、この２群間において紅茶投与により血糖値の上昇は有意に抑制されており、また飼育日数の経過につれてコントロールレベルにまで低下した。その一方、ＳＴＺを投与していないコントロール群では紅茶投与もしくは水投与による変化はみられなかった（図４）。
【００４７】
（３．ＯＧＴＴにおける血糖値変化）
糖尿病を発症した２群ともに、糖負荷後より急激に血糖値が上昇し、０、１５、３０分値において紅茶投与群は水投与群に比べ有意に低値を示した。しかし、その後は２群間に有意な差はみられなかった。一方、コントロール群においては水投与、紅茶投与の両群間での有意な差はみられなかった（図５）。
【００４８】
（４．紅茶のフルクトサミン量へ及ぼす影響）
血中において糖化したタンパクであるフルクトサミン量は、糖尿病群ではコントロール群と比較して有意に増加していた。しかし、その増加が紅茶投与により有意に抑制されていた。コントロール群においては水投与、紅茶投与による差はほとんどみられなかった（図６）。
【００４９】
（５．臓器重量の変化）
肝臓、腎臓、膵臓、精巣上体脂肪組織の各組織が体重に占める割合は、コントロール群（表２のNon-Diabeticに相当）では水投与もしくは紅茶投与による両群間での差はみられなかった。一方、糖尿病群（表２のDiabeticに相当）は、コントロール群に比べ、肝臓及び腎臓において有意に高値を示し、脂肪組織においては低値を示した。しかし、紅茶投与群では、水投与群と比較して糖尿病による肝臓、腎臓の臓器重量割合の上昇は有意に抑制された（表２参照）。
【００５０】
【表２】
2006001929.tif 000007
【００５１】
（６．３−ＯＭＧ取込み）
インスリン感受性組織である筋肉と脂肪組織の３−ＯＭＧ取込み活性を測定した。
コントロールの紅茶投与群と水投与群と比較すると脂肪組織で有意な差は観察されなかったが（図８）、筋肉組織では紅茶投与により有意に取込み量が上昇していた（図７）。
一方、糖尿病の２群間には差がみられなかった。また、コントロール群と比較して糖尿病群が高値を示した（図７−８）。
【００５２】
（７．紅茶のＴＢＡＲＳ量に及ぼす影響）
糖尿病群の過酸化脂質量をコントロール群と比較した場合、肝臓と腎臓とでは差がみられなかったが、血清では増加し、膵臓では減少した。ところが、この糖尿病群における血清の過酸化脂質量の増加は紅茶投与により有意に減少した。コントロールの水投与群、紅茶投与群との間では血清及び各臓器における過酸化脂質量の有意な差は認められなかった（表３）。
【００５３】
【表３】
2006001929.tif 000008
【００５４】
（８．紅茶のインスリン量へ及ぼす影響）
体内で唯一血糖値を下げる機能を持つホルモンであるインスリンの量は、コントロール群と比較して糖尿病群では有意に低値を示した。この糖尿病群でのインスリンの低下は、紅茶投与により有意に抑制され、インスリン量は高値を示した。更にコントロール群においても、水投与の場合と比較して紅茶投与は約３倍のインスリン量を示した（図９）。
【００５５】
（９．小腸二糖類加水分解酵素活性）
スクラーゼ活性は、コントロール群と比較して糖尿病群が有意に活性が上昇しており、また糖尿病の場合、紅茶投与によりその活性は有意に低下することがわかった。一方、コントロールの水投与群、紅茶投与群の２群間では差はみられなかった（図１０）。
マルターゼ活性では、糖尿病群、コントロール群のどちらでも紅茶投与により有意に活性の低下がみられた。また糖尿病の紅茶投与群の活性は、コントロールの水投与群と比較しても低値を示した（図１１）。
【００５６】
（１０．血清中脂質）
遊離脂肪酸量（ＮＥＦＡ）は、糖尿病群、コントロール群のどちらでも紅茶投与により有意に低値を示した。コントロールの水投与群と比較して、糖尿病の水投与群は有意に高値を示したが、糖尿病の紅茶投与群は有意に低値を示し、コントロールの紅茶投与群と同程度であった。
中性脂肪（Triacylglycerol）は、コントロール群と比較して糖尿病群で有意に高値を示し、糖尿病の紅茶投与群は水投与群の約３分の１と有意に低値を示した。一方、コントロールの水投与群、紅茶投与群の２群間では差はみられなかった。
総コレステロールは、コントロール群と比較して糖尿病群で有意に高値を示した。各群での水投与、紅茶投与による変化はみられなかった。
遊離コレステロールは、コントロール群と比較して糖尿病群で有意に高値を示した。糖尿病の水投与群、紅茶投与群の間には有意な差はみられなかったが、コントロール群では水投与と比較して紅茶投与により有意に上昇した。
ＨＤＬコレステロールは、コントロールの水投与群、紅茶投与群の２群間で差はみられず、糖尿病の紅茶投与群とほぼ同程度であった。一方、糖尿病の水投与群はコントロール群と比較して有意に低値を示した。
ＬＤＬコレステロールは、コントロール群と比較して糖尿病群で有意に高値を示したが、両群において水投与、紅茶投与による変化はみられなかった（表４）。
【００５７】
【表４】
2006001929.tif 000009
【００５８】
＜試験２＞
本試験では、高脂肪食或いは普通食で飼育したラットが紅茶抽出成分又は緑茶抽出成分を自由摂取した時の効果を調べるため、それぞれの血中コレステロール、血糖値、脂肪細胞及び筋肉細胞におけるグルコースの取込み活性、血中におけるレプチン・アディポネクチンの測定し比較検討した。
【００５９】
［試験計画］
４週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを日本エスエルシー社より購入した。飼育環境を２３±３℃とし、照明時間を９時−２１時とした。１週間の予備飼育後、高脂肪食飼育の水飲み群(ＨＦ−Ｗ)、緑茶飲み群(ＨＦ−Ｇ)、及び紅茶飲み群(ＨＦ−Ｂ)と、普通食飼育の水飲み群(Ｃ−Ｗ)、緑茶飲み群(Ｃ−Ｇ)及び紅茶飲み群(Ｃ−Ｂ)との６群に分け、さらにそれぞれ５匹ずつの６群を７週間と１４週間の計１２群で飼育した。なお、体重がそれぞれ同等になるように群分けし、下記表５の組成で飼料を与えた。
飼育期間最終日には心臓採血により屠殺し、筋肉、脂肪、肝臓、血清を回収した。
【００６０】
【表５】
2006001929.tif 000010
【００６１】
（緑茶抽出成分）
緑茶（品種：静岡産本山茶）の茶葉を２０ｇ／Ｌ、９５℃のイオン交換水で２分間抽出し、得られた抽出液をネル濾布にて濾して緑茶抽出液（以下単に「緑茶」という）とし、これを緑茶飲み群(ＨＦ−Ｇ)及び緑茶飲み群(Ｃ−Ｇ)に摂取させた。
【００６２】
（紅茶抽出成分）
紅茶（品種：ウバ）の茶葉を２０ｇ／Ｌ、９５℃のイオン交換水で２分間抽出し、得られた抽出液をネル濾布にて濾して紅茶抽出液（以下単に「紅茶」という）とし、これを紅茶飲み群(ＨＦ−Ｂ)及び紅茶飲み群(Ｃ−Ｂ)に摂取させた。
【００６３】
[実験方法]
（血糖・血中成分測定）
飼育開始後１、５、７、１０、１２及び１４週目の絶食時血糖を市販のキットで測定した。
耐糖能試験は１８時間絶食後、２ｇ／ｋｇ・体重で糖負荷をして、０、１５、３０、６０及び１２０分における血糖値を市販のキットで測定した。
血中脂質成分(Ｔ−コレステロール、Ｆ-コレステロール、ＨＤＬ-コレステロール、トリグリセリド)も同様に市販のキットを用いて測定した。
ＬＤＬ-コレステロールはFriedewald法により算出した。
マウスは飼育開始後７週目と１４週目に心臓採血により屠殺し、摘出した脂肪と筋肉を用いてグルコースの取り込み活性を測定した。
【００６４】
なお、グルコースの取り込み活性測定は、摘出した筋肉と脂肪を約１５ｍｇの切片にして、それぞれの組織をクレブス・リンガー・ＨＥＰＥＳ緩衝液(ＫＲＨ：５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、４．８ｍＭ  ＫＣｌ、１．８５ｍＭ  ＣａＣｌ2、１．３ｍＭ  ＭｇＳＯ4)１ｍｌ中で１０分間、３７℃でインキュベートした。次いで、ここに３-０-メチル-［3Ｈ］-Ｄ-グルコース (３−ＯＭＧ)を６．５ｍＭ、０．５μＣｉとなるように加えて２分間作用させた。取り込みを停止するために、直ちに反応混液を吸引除去し、組織を氷冷したＫＲＨで速やかに６回洗浄した後、濾紙で水分をふき取り、ＮＣＳIIで組織を可溶化した。可溶化液にシンチレーションカクテルを加えて取り込まれた３−ＯＭＧの放射活性を液体シンチレーションカウンターで測定した。非特異的な取り込み量は、グルコーストランスポーターの阻害剤である２０μＭサイトカラシンＢを組織に処理し、上記と同様の方法で取り込み活性を測定することで求めた。
【００６５】
[結果]
（体重変化）
図１２及び図１３より、高脂肪食摂取時の緑茶抽出成分、紅茶抽出成分の長期摂取は体重の増加を抑制したことが確認された。
普通食では、水、緑茶、紅茶のいずれの摂取群においても体重に差は見られなかった。一方、高脂肪食においては、紅茶摂取群では７週目より有意に差が見られ、８週目には緑茶においても差が見られるようになった。
なお、図１２及び図１３中の「a」と「ｂ」は、それぞれの水摂取群に対し緑茶摂取群と紅茶摂取群でStudent's t-testにより５％未満で有意差があることを示す。
【００６６】
（組織重量）
下記表６及び表７より、緑茶抽出成分や紅茶抽出成分の摂取は脂肪重量を減少させたことが確認された。すなわち、飼育開始７週目では、普通食において緑茶や紅茶の摂取は、脂肪重量の増加を有意に抑制しており、高脂肪食におけるそれは総脂肪重量だけでなく、各脂肪部位における増加を普通食レベルまで抑制していた。また、１４週目では、普通食、高脂肪食の両群とも緑茶、紅茶の摂取が脂肪重量の増加を抑制し、その割合は７週目よりさらに顕著であった。
なお、下記表における「*」は、水摂取群に対しStudent's t-testにより５％未満で有意差があることを示す。
【００６７】
【表６】
2006001929.tif 000011
【００６８】
【表７】
2006001929.tif 000012
【００６９】
（空腹時血糖の継時的変化）
図１４及び図１５より、緑茶抽出成分、紅茶抽出成分の摂取によって血糖値の上昇が抑制されることが確認された。すなわち、空腹時血糖は、１、５、７、１１、１４週目に尾静脈より血液を搾取し、その血清を用いて、市販のキットで測定した。
緑茶抽出成分や紅茶抽出成分の摂取は、高脂肪食、普通食のいずれにおいても血糖値を下げる傾向が見られた。緑茶飲み群(ＨＦ−Ｇ)と紅茶飲み群(Ｃ−Ｂ)においては５週目及び１１週目に有意な減少が認められた。
なお、図１４及び図１５中の「a」と「ｂ」は、それぞれの水摂取群に対し緑茶摂取群と紅茶摂取群でStudent's t-testにより５％未満で有意差があることを示す。
【００７０】
（血清脂質成分測定）
表８より、緑茶抽出成分や紅茶抽出成分の摂取は、血中のコレステロール量を有意に減少させ、長期の摂取によってトリグリセリドも減少させることが確認された。すなわち、飼育７週目と１４週目に得た血清を用いて、市販のキットで総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）、遊離コレステロール（Ｆ−ＣＨＯ）、ＨＤＬ-コレステロール（ＨＤＬ−ＣＨＯ）、トリグリセリド（ＴＧ）を測定したところ、高脂肪食では、緑茶や紅茶の摂取が総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）、ＨＤＬ-コレステロール（ＨＤＬ−ＣＨＯ）及びＬＤＬ−ＣＨＯ量を有意に減少させた。また、長期摂取（１４週）は高脂肪食においてトリグリセリド（ＴＧ）も減少させた。これらのことから、緑茶抽出成分および紅茶抽出成分の摂取は、血清中の脂質成分調節作用を有することから、脂質代謝改善効果が確認できた。
なお、下記表における「*」「**」は、水摂取群に対しそれぞれStudent's t-testにより、危険率５％未満で有意差があることを示す。
【００７１】
【表８】
2006001929.tif 000013
【００７２】
（耐糖能試験）
図１６（Ａ）−（Ｄ）より、耐糖能試験において、緑茶抽出成分や紅茶抽出成分の摂取はより血糖値の効果を促進することが確認された。
図１６（Ａ）−（Ｄ）について説明すると、（Ａ）及び（Ｃ）（白抜きのシンボル）は普通食摂取群、（Ｂ）及び（Ｄ）（黒埋めのシンボル）は高脂肪食摂取群の結果を示し、（Ａ）及び（Ｂ）は飼育５週目、（Ｃ）及び（Ｄ）は１２週目の結果を示す。また、それぞれ丸が水摂取群、四角が緑茶摂取群で、三角が紅茶摂取群である。
なお、図中の「a」「ｂ」はそれぞれの水摂取群に対し緑茶摂取群と紅茶摂取群でStudent's t-testにより５％未満で有意差があることを示す。
【００７３】
飼育５週目の高脂肪食摂取群において、緑茶抽出成分及び紅茶抽出成分の摂取は最高血糖値を抑制し、速やかな血糖値の降下が認められた。また、普通食摂取群においても、６０分と１２０分で有意な血糖値の効果が認められた。飼育１２週目においては同様に６０分と１２０分で有意な血糖値の効果が認められた。このことから、緑茶抽出成分及び紅茶抽出成分の摂取は、耐糖能異常の改善に寄与することが推測される。
【００７４】
（組織におけるグルコースの取り込み活性測定）
図１７（Ａ）（Ｂ）より、グルコースの取り込み活性測定において、緑茶抽出成分や紅茶抽出成分の摂取は脂肪でその活性を抑制し、筋肉でその活性を促進させたことを確認できた。なお、図１７（Ａ）（Ｂ）において、「*」はそれぞれの水摂取群に対してStudent's t-testにより危険率５％未満で有意差があることを示す。
【００７５】
脂肪組織では、紅茶抽出成分及び緑茶抽出成分の摂取によりグルコースの取り込み活性を抑制し、筋肉では、特に高脂肪食摂取群において有意にグルコースの取り込み活性を上昇させた。そこで、紅茶抽出成分及び緑茶抽出成分の摂取は、脂肪組織では血糖の取り込みを抑制することで脂肪細胞の肥大化を抑制し、逆に体内最大の組織である筋肉では血糖を取り込むことで、高血糖を抑制したと考えられた。
【００７６】
脂肪細胞と筋肉細胞におけるグルコースの取り込みは、その殆どがＧＬＵＴ４を介することが知られており、上記のように特に高脂肪食での紅茶抽出成分の効果が優れていることを考えると、紅茶抽出成分の摂取により、脂肪細胞に存在するＧＬＵＴ４のトランスロケーションが抑制されたことが示唆される。
【００７７】
（血中アディポサイトカイン量の測定）
本測定では、脂肪細胞が分泌するレプチンとアディポネクチンについてそれらの血清中での量を市販のＥＬＩＳＡキットで測定し、結果を図１８（Ａ）〜（Ｄ）に示した。
これらの図において、「*」と「**」は、それぞれ普通食と高脂肪食の水摂取群に対してStudent's t-testにより５％未満で有意差があることを示す。
【００７８】
それぞれのアディポサイトカインの血清中での量について、７週目における普通食の水摂取群での値を基準にして考えると、水摂取群では１４週目の普通食、７週目と１４週目の高脂肪食のいずれにおいてもレプチンとアディポネクチンは増加が認められた。
一方、緑茶抽出成分及び紅茶抽出成分の摂取群においては、１４週目の普通食においても、７週目と１４週目の高脂肪食においても変化認められなかった。
これらの結果から、飼育期間の延長や高脂肪食摂取による脂肪細胞の増加に伴ったレプチンとアディポネクチンの分泌亢進に対して、緑茶及び紅茶の摂取は抑制効果を示すことが認められた。
【００７９】
＜試験３＞
本試験では、紅茶抽出成分のインスリン感受性組織における糖代謝、脂質代謝におよぼす影響について検討した。
【００８０】
［実験方法］
（実験動物）
生後６週齢Ｗｉｓｔａｒ／ＳＴ雄性ラット（日本エスエルシー（株））を用いて試験を
実施した。
ラットを７日間の順化後、水投与のみ（Ｃ−Ｗ）群、紅茶投与のみ（Ｃ−Ｂ）群、ＳＴＺ+水投与（Ｓ−Ｗ）群、ＳＴＺ+紅茶投与（Ｓ−Ｂ）群の５群（各群６匹）に分けた。
Ｃ−Ｗ群とＳ−Ｗ群には蒸留水を、Ｃ−Ｂ群とＳ−Ｂ群には紅茶を、それぞれ給水ビンに入れて飼育開始日より屠殺するまでの３５日間自由摂取させた。この間、水、紅茶ともに連日交換し、飼料は市販の固形飼料を与えた。
【００８１】
（紅茶抽出成分）
紅茶葉（品種：ウバ）２０ｇに対し、９５℃のイオン交換水１Ｌで２分間抽出し、茶葉をネル濾布にて濾した液を紅茶抽出液（以下単に「紅茶」という）として給水ビンに入れて投与した。
【００８２】
（ＳＴＺの投与）
紅茶投与開始７日目に（飼育開始０日目とする）、Ｓ−Ｗ群とＳ−Ｂ群に０．０５Ｍのクエン酸緩衝液（ｐＨ４．５）に溶解したストレプトゾトシン（ＳＴＺ、和光純薬工業（株））を４０ｍｇ／ｋｇ・体重になるように、Ｃ−Ｗ群とＣ−Ｂ群にはその対照としてクエン酸緩衝液のみを尾静脈より投与し、Ｉ型糖尿病の発症を誘導した。
その後、屠殺までの間に１週間に２回、計８回にわたり１２時間絶食後の血中グルコース濃度を測定し定常時血糖値の推移を観察した。飼育開始３１日目には、Ｄ-グルコースを２ｇ／ｋｇ・体重になるように経口負荷し、耐糖能試験（Oral Glucose Tolerance Test :ＯＧＴＴ）を行い、飼育最終日である２８日目に同じくグルコースを経口負荷し、その３０分後に心臓採血により屠殺し、以下の実験に供した。
【００８３】
（血中インスリン、レプチン、アディポネクチン量の測定）
血清中のインスリン量はMercodia Rat Insulin ＥＬＩＳＡキット（フナコシ（株））
、レプチン量はモリナガラットレプチン測定キット（（株）森永生科学研究所）、アディ
ポネクチン量をマウス/ラットアディポネクチンＥＬＩＳＡキット（大塚製薬（株））を
用いてそれぞれ測定した。
【００８４】
（脂肪、筋肉、肝臓の細胞抽出液の調製）
各組織のホモジネートに等量のＲＩＰＡ緩衝液（１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ,ｐＨ８．０,３００ｍＭ  ＮａＣｌ、２．０％ (v/v) Nonidet-Ｐ４０（登録商標）(和光純薬工業（株）)、１．０％(w/v) デオキシコール酸ナトリウム(和光純薬工業（株）)、０．２％(w/v) ＳＤＳ、２ｍＭ ＰＭＳＦ、２０ｍｇ／ｍｌロイペプチン(和光純薬工業（株）)、２ｍＭ  Ｎａ3ＶＯ4 、１００ｍＭ ＮａＦ）を加え、氷上で時折混和しながら２時間可溶化した。その後、４℃、１９０００×ｇで２０分間遠心分離し、その上清を細胞抽出液とした。
この抽出液のタンパク質量をLowry法で定量後、タンパク質量が等量になるように調製してＳＤＳ化し、７．５％ポリアクリルアミドゲルを用いＳＤＳ−ＰＡＧＥに供した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離したタンパク質はＰＶＤＦ膜に転写した。それぞれ、筋肉組織はＡＭＰＫ−α(5´-ＡＭＰ-activated protein kinase-α)、phospho-ＡＭＰＫ−α、ＧＬＵＴ４(glucose transporter 4)、ＰＰＡＲ−α(peroxisome proliferator-activated receptorα)の検出に、脂肪組織はＳＲＥＢＰ−１(sterol regulatory binding protein-1)の検出に、肝臓組織はＡＭＰＫ−α、phospho-ＡＭＰＫ−α、ＰＰＡＲ−α、ＳＲＥＢＰ−１の検出に用いた。
【００８５】
（筋肉組織からの細胞膜画分の調製）
筋肉のホモジネートに２倍量の０．１％(v/v) Nonidet-Ｐ４０（登録商標）含有細胞膜溶解緩衝液 (１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ,ｐＨ７．９，１０ｍＭ  ＫＣｌ, １．５ｍＭ  ＭｇＣｌ2・６Ｈ2Ｏ,１ｍＭ  ＰＭＳＦ,０．５ｍＭ  ＤＴＴ,１０ｍｇ／ｍｌロイペプチン，５ｍｇ／ｍｌアプロチニン)を加え、氷上で時折混和しながら１０分間可溶化した。その後、９００×ｇ、１０分間４℃で遠心分離して得た沈殿にNonidet-Ｐ４０（登録商標）を含まない緩衝液を加えてよく混和し、再び９００×ｇ、１０分間４℃で遠心分離して沈殿を得た。そこへ１％(v/v) Nonidet-Ｐ４０（登録商標）を含む緩衝液を加えてよく混和し、氷上で２０分間放置した後に１９０００×ｇで２０分間遠心分離して得た上清を筋肉細胞膜抽出液とした。
この抽出液のタンパク質量をLowry法で定量し、タンパク質量が等量になるように調製してＳＤＳ化し、７．５％ポリアクリルアミドゲルを用いＳＤＳ−ＰＡＧＥに供した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離したタンパク質はＰＶＤＦ膜 (Hybond-P; Amersham Biosciences Ltd.) に転写し、そのＰＶＤＦ膜をＧＬＵＴ４、ＩＲ−β (insulin receptorβ)の検出に用いた。
【００８６】
（ウエスタンブロット法によるタンパク質発現の検出）
タンパク質を転写したＰＶＤＦ膜を１％(w/v) のスキムミルクを含むＴＢＳＴ緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ,ｐＨ８．０,１５０ｍＭ  ＮａＣｌ,０．０６％ (v/v) Ｔｗｅｅｎ-２０）で３０分間ブロッキングした。ＴＢＳＴ緩衝液でＰＶＤＦ膜を５分間計４回インキュベートして洗浄を行った後、１％のスキムミルクを含むＴＢＳＴ緩衝液に希釈した一次抗体（抗ＧＬＵＴ４抗体１：１０００、抗ＩＲ−ｂ抗体１：１０００、抗ＳＲＥＢＰ−１抗体１：１０００、抗ＰＰＡＲ−α抗体１：１０００(Santa Cruz Biotechnology Inc.社製)、抗ＡＭＰＫ−α抗体１：１０００、抗phospho-ＡＭＰＫ−α抗体１:１０００(Cell Signaling Technology, Inc.社製)を室温で１時間反応させた。再びＰＶＤＦ膜をＴＢＳＴ緩衝液で５分間計４回インキュベートして洗浄し、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識した二次抗体を０．５％のスキムミルクを含むＴＢＳＴ緩衝液に希釈し、それを３０分間反応させた。ＰＶＤＦ膜をＴＢＳＴ緩衝液で再度同様に洗浄した後、膜上の抗原抗体反応をＥＣＬ ｐｌｕｓ(Amersham Biosciences Ltd.社製)用いて発光させ、それを露光させたＸ線フィルムを現像することでタンパク質の発現を検出した。
【００８７】
［実験結果］
（血清中のアディポネクチン量とレプチン量に及ぼす影響）
脂肪細胞から分泌され、糖尿病の病態に深く関与するとされているアディポネクチン（図１９）とレプチン（図２０）の血中濃度を測定した。これらの図において、「Ｎ．Ｄ．」は測定不能（not detectable）を示し、「白色棒」は水摂取群を示し、「黒色棒」は紅茶摂取群を示している。
アディポネクチン量は、ＳＴＺ投与の２群は、その対照と比べて有意に減少していた。しかし、対照の２群間とＳＴＺ投与の２群間とのいずれの群内においても、紅茶投与によりアディポネクチン量が有意に高値を示した。また、レプチン量は、ＳＴＺ投与の２群はともに検出限界以下であった。対照の２群間では、紅茶を投与したＣ−Ｂ群が、Ｃ−Ｗ群と比較してレプチン量が有意に高値を示した。
【００８８】
（筋肉と肝臓組織におけるＡＭＰＫ−α、およびその活性型phospho-ＡＭＰＫ−αの発現量）
肝臓と筋肉組織のどちらにおいても、常在的に存在するＡＭＰＫ−αの発現量は４群間に差異は認められなかった（図２１（Ａ）（Ｂ））。ＡＭＰＫ−αはリン酸化されて活性型となるが、そのリン酸化したＡＭＰＫ−α（phospho-AMPK-α）の発現量を検出したところ（図２１（Ａ）（Ｂ））、phospho-ＡＭＰＫ−αの発現量は筋肉、肝臓どちらの組織においてもＣ−Ｂ群で増加しており、Ｃ−Ｗ群と比較して顕著な増加であった。ＳＴＺ投与の２群間で比較すると、筋肉におけるphospho-ＡＭＰＫ−αの発現量は紅茶投与により大幅に減少しており、また肝臓においてもわずかに減少傾向を示した。
【００８９】
この結果、紅茶抽出成分の摂取により、筋肉のＡＭＰＫ−αが活性化することが判明した。筋肉では、運動によりＡＭＰＫ−αがリン酸化(活性化)してＧＬＵＴ４のトランスロケーションが促進することが知られている。また、上記のアディポネクチンやレプチンもＡＭＰＫ−αを活性化する因子であることが示されている。したがって、正常動物の水摂取群（Ｃ−Ｗ群）ではアディポサイトカインの分泌亢進がＡＭＰＫ−α活性化を促進してＧＬＵＴ４のトランスロケーションに繋がる可能性もあると考えられる。ＳＴＺを投与したラットでは、水摂取群（Ｓ−Ｗ群）で正常動物の水摂取群（Ｃ−Ｗ群）と比べて増加したことは、ＡＭＰＫ−αが燃料センサーとして機能することから、この活性化は危機的状況に対応した活性化であり、糖尿病―紅茶摂取群（Ｓ−Ｂ群）では水摂取群（Ｓ−Ｗ群）ほどエネルギー供給が危機的ではない可能性を示唆している。実際、Ｓ−Ｗ群では血漿の遊離脂肪酸が高値を示したことから、糖に変わる代替エネルギーとして脂質の酸化が亢進していることが伺える。
総括的に見ると、正常(健康な動物)では、紅茶抽出成分の摂取がアディポサイトカインの分泌バランスを良好に保持し、脂肪酸の燃焼(β酸化)を促進することで血漿遊離脂肪酸含量を低下させることが確認され、一方、ＳＴＺによる糖尿病誘発ラットでは糖代謝―脂質代謝の生理的パラメーター全てがエネルギー消費側に傾いており、紅茶抽出成分はＳＴＺによる変調を正常化する方向へ導くことが確認された。
【００９０】
（筋肉と肝臓組織におけるＰＰＡＲ−αの発現量）
インスリン感受性組織である肝臓と筋肉におけるＰＰＡＲ−αのタンパク質発現量を検出したところ、筋肉におけるＰＰＡＲ−αの発現量は、Ｃ−Ｗ群と比較するとＣ−Ｂ群は明らかに増加していた（図２２（Ａ）（Ｂ））。Ｓ−Ｗ群は４群間において最も発現量が増加していたが、Ｓ−Ｂ群はＣ−Ｂ群と同程度であった。肝臓におけるＰＰＡＲ−αの発現量は、Ｃ−Ｗ群とＣ−Ｂ群とではほぼ同程度であったが、ＳＴＺ投与の２群は増加していた（図２２（Ａ）（Ｂ））。Ｓ−Ｗ群では発現量が著しく増加していた。
【００９１】
上記のアディポネクチンはＡＭＰＫ−αの活性化だけでなく、ＰＰＡＲ−αの活性化を介しても脂肪酸酸化を誘導することが知られている。ＰＰＡＲ−αはＲＸＲとヘテロ二量体を形成し転写因子として働く。ここでは、脂肪酸β酸化に関わる筋肉と脂肪組織で発現しているα型を調べた（脂肪ではγ型）。
正常動物の場合、紅茶摂取群（Ｃ−Ｂ群）では水摂取群（Ｃ−Ｗ群）と比べて筋肉で明らかにＰＰＡＲ−α発現量が増加し、アディポネクチンによりこの発現が誘導されてβ酸化亢進につながったことが考えられた。
糖尿病動物の場合、上記で記したようにＳＴＺ投与により、ＡＭＰＫ−αと同様にインスリン感受性組織へのグルコースによるエネルギー供給が不足しているために脂肪酸酸化を介して代替エネルギーを供給しようとしてβ酸化に関わる諸酵素の発現を支配しているＰＰＡＲ−αのたんぱく質発現が増加し、紅茶摂取群（Ｓ−Ｂ群）ではこの作用が緩和されていたことになる。
【００９２】
（細胞とその細胞膜へ移行したＧＬＵＴ４の発現量への影響）
筋肉細胞中に常在的に存在するＧＬＵＴ４の発現量は４群間に差異は認められなかった（図２３（Ａ））。そこで、グルコースを細胞内へ取り込む能力を有する細胞膜上に移行したＧＬＵＴ４の発現量を４群間で検証したところ、ＳＴＺを投与した２群では対照群と比較してＧＬＵＴ４の細胞膜への移行がほとんど認められなかった（図２３（Ｂ））。ＳＴＺ投与の２群間で比較すると、ほとんど検出できなかったＳ−Ｗ群に比べ、Ｓ−Ｂ群においては細胞膜への移行がわずかに認められた。さらに対照の２群を比較するとＣ−Ｂ群がＣ−Ｗ群よりもＧＬＵＴ４の細胞膜への移行が亢進していることがわかった。その一方、細胞膜上に存在するインスリンレセプター（ＩＲ−β）の発現量は４群間に差異はなかった（図２３（Ｂ））。これらのことから、対照群とＳＴＺ群どちらにおいても紅茶投与により、細胞内の小胞体から細胞膜への移行したＧＬＵＴ４の発現量が増加していた。
【００９３】
（脂肪と肝臓組織におけるＳＲＥＢＰ−１の発現量）
脂質合成能を有する臓器である脂肪組織と肝臓におけるＳＲＥＢＰ−１のタンパク質発現量を検出した（図２４（Ａ）（Ｂ））。
脂肪組織におけるＳＲＥＢＰ−１の発現量は、Ｃ−Ｗ群と比較するとＣ−Ｂ群では減少しており、Ｓ−Ｗ群では顕著に増加していた（図２４（Ａ））。Ｓ−Ｂ群もＣ−Ｗ群と比べて増加傾向がみられた。ＳＴＺ投与の２群間で比較するとＳ−Ｂ群はＳ−Ｗ群と比較して明らかな発現量の低下がみられた。
肝臓におけるＳＲＥＢＰ−１の発現量は、Ｃ−Ｗ群と比較するとＣ−Ｂ群は発現量のわずかな減少が確認でき、Ｓ−Ｗ群とＳ−Ｂ群の発現量は増加していた（図２４（Ｂ））。特にＳ−Ｗ群での増加は顕著であったが、Ｓ−Ｂ群ではＳ−Ｗ群と比べこの発現の減少が認められた。
【００９４】
肝臓や脂肪組織などの脂肪酸合成系を有する組織では、糖質由来のエネルギーの過剰供給に対して脂肪酸合成系酵素の活性が上昇して脂肪酸を合成することでエネルギーをトリグリセリドに変換して蓄積することが知られている。ＳＲＥＢＰｓは脂肪酸（ＳＲＥＢＰ−１）やコレステロール（ＳＲＥＢＰ−２）の合成を制御している。
上記のように、正常動物の場合は、紅茶摂取群（Ｃ−Ｂ群）と水摂取群（Ｃ−Ｗ群）では大きな変化はないが、特に脂肪組織で発現量が減少傾向にあった。これは、脂肪組織への糖の流入が減少したことに起因する可能性がある。
糖尿病動物の場合は、水摂取群（Ｓ−Ｗ群）で正常動物（Ｃ−Ｗ群）と比べて顕著に増加した。すでにＳＴＺによりインスリン分泌能が極端に低下した動物の肝臓では、高血糖による糖質の急激な流入に対してＳＲＥＢＰ−１の発現が誘導されることと、グルコースが発現誘導に関わることを効力すると、１２時間の絶食後の急激なグルコースの流入による高血糖がＳＲＥＢＰ−１発現に関わったと推測される。
【００９５】
［まとめ］
紅茶抽出成分を投与すると、糖尿病モデルラットにおいて、ＳＴＺによるインスリンの分泌低下を軽減することが示唆された。このことは、紅茶摂取群において、インスリンの刺激により細胞膜へ移行したＧＬＵＴ４が検出できたことと、脂肪組織の減少を軽減して脂肪細胞からレプチンとアディポネクチンの分泌を維持したことから検証できた。さらに、紅茶投与によりリン酸化型ＡＭＰＫ−ａとＰＰＡＲ−αとＳＲＥＢＰ−１の発現の低下が認められたことから、インスリン不足から生じる組織でのエネルギー不足が抑制されていたと考えられた。
他方、糖尿病を誘導していないコントロールラットにおいては、紅茶投与によりリン酸化型ＡＭＰＫ−αの発現が増加して、結果として細胞膜へ移行したＧＬＵＴ４の増加と、ＳＲＥＢＰ−１の減少が誘導されたことが考えられ、脂肪酸のβ酸化の促進と合成の低下が示唆された。
【００９６】
＜試験４＞
本試験では、紅茶抽出成分が小腸からの糖吸収におよぼす影響について検討した。
【００９７】
［実験方法］
（実験動物）
生後６週齢Ｗｉｓｔａｒ／ＳＤ雄性ラット（日本エスエルシー（株））を用い、上記試
験２と同様の条件で飼育し、飼育期間中は水、餌ともに自由摂取とした。飲用水は連日交換し、飼料は市販の固形飼料を与えた。
【００９８】
（紅茶抽出成分）
上記試験３と同じ紅茶抽出液を以下の実験に用いた。
【００９９】
（耐糖能試験）
ラットを１２時間絶食状態にし、紅茶抽出液１ｍｌを各種糖を負荷する５分前にゾンデ針で経口投与した。対照としては、同様に蒸留水を経口投与した。
紅茶若しくは水を投与した５分後にグルコース、スクロース、あるいはマルトース水溶液を２ｇ／ｋｇ・体重／１ｍｌになるようにゾンデ針を用いて経口投与した。糖負荷前（０分）、負荷後１５、３０、６０、９０、１２０、１８０分後における血糖値をグルコースＣII−テストワコー（和光純薬工業（株））を用いて測定した。
【０１００】
［実験結果］
図２５−２６において、各図（Ａ）中の○は水摂取群示し、●は紅茶摂取群を示しており、各図（Ｂ）中の「白色棒」は水摂取群を示し、「黒色棒」は紅茶摂取群を示している。
【０１０１】
（グルコース経口負荷による耐糖能試験）
ラットに水若しくは紅茶抽出液を、グルコースを経口負荷する５分前に投与した場合、１２０分間の血糖値に２群間の変化は認められず、糖代謝へおよぼす影響は認められなかった（図２５（Ａ））。また、血糖値のグラフの線下面積も２群間に差異は認められなかった（図２５（Ｂ））。
【０１０２】
（スクロース経口負荷による耐糖能試験）
ラットにスクロースを経口負荷する５分前に水若しくは紅茶抽出液を投与した場合、紅茶を事前に投与することにより血糖値の上昇が抑制される傾向が認められた（図２６（Ａ））。血糖値のグラフの線下面積を棒グラフに表した（図２６（Ｂ））。１２０分間にわたる血糖値の変化に水投与と紅茶投与による影響は認められなかった。
【０１０３】
（マルトース経口負荷による耐糖能試験）
マルトースを経口負荷する５分前に水若しくは紅茶抽出液を投与した場合も、紅茶を事前に投与することにより血糖値の上昇が抑制される傾向が認められた（図２７（Ａ））。特に、３０分値以降にその傾向が認められた。血糖値のグラフの線下面積を棒グラフに表したところ、水投与と比較して紅茶投与により１２０分間にわたる血糖値が有意に抑制された（図２７（Ｂ））。
【０１０４】
［まとめ］
単糖であるグルコースの腸管からの吸収や糖代謝には、紅茶抽出成分は影響をおよぼさなかった。スクロースやフルクトースなどの二糖類は小腸で酵素により加水分解され、単糖として吸収される。二糖類を経口投与する前に紅茶抽出成分を投与することで、血中のグルコース濃度の上昇が抑制される傾向が認められた。特に、グルコース２分子から成るマルトースを経口投与した場合では、投与後１２０分間の血糖値が有意に抑制された。このことから、紅茶抽出成分は緩やかな効果ではあるが、小腸の二糖類加水分解酵素の活性を阻害することが示唆された。
【図面の簡単な説明】
【０１０５】
【図１】試験１における紅茶摂取開始後のラットの体重の変化を経時的に示したグラフである。
【図２】試験１における紅茶摂取開始後のラットの摂食量の変化を経時的に示したグラフである。
【図３】試験１における紅茶摂取開始後のラットの摂水量の変化を経時的に示したグラフである。
【図４】試験１におけるラットの定常時血糖値の変化を経時的に示したグラフである。
【図５】試験１において、ＯＧＴＴにおける血糖値の変化を経時的に示したグラフである。
【図６】試験１終了時における血中フラクトサミン量を示したグラフである。
【図７】試験１における筋肉組織での３−ＯＭＧ取込み量を示したグラフである。
【図８】試験１における脂肪組織での３−ＯＭＧ取込み量を示したグラフである。
【図９】試験１における血清中インスリン量を示したグラフである。
【図１０】試験１において紅茶抽出成分が小腸におけるスクラーゼの加水分解活性に及ぼす影響を示すグラフである。
【図１１】試験１において紅茶抽出成分が小腸におけるマルターゼの加水分解活性に及ぼす影響を示すグラフである。
【図１２】試験２において、高脂肪食飼育ラットの体重変化を経時的に示したグラフである。
【図１３】試験２において、普通食飼育ラットの体重変化を経時的に示したグラフである。
【図１４】試験２において、高脂肪食飼育ラットの空腹時血糖の経時的に示したグラフである。
【図１５】試験２において、普通食飼育ラットの空腹時血糖の経時的に示したグラフである。
【図１６】試験２における耐糖能試験の結果を示したグラフであり、（Ａ）は、飼育５週目の普通食飼育の耐糖能試験結果を、（Ｂ）は、飼育５週目の高脂肪食飼育の耐糖能試験結果を、（Ｃ）は、飼育１２週目の普通食飼育の耐糖能試験結果を、（Ｄ）は、飼育１２週目の高脂肪食飼育の耐糖能試験結果を示している。
【図１７】試験２において、組織におけるグルコースの取り込み活性を測定した結果を示すグラフであり、（Ａ）は、脂肪細胞組織におけるグルコースの取り込み活性を、（Ｂ）は、筋肉細胞組織におけるグルコースの取り込み活性を示している。
【図１８】試験２において、血清中アディポサイトカイン量を測定した結果を示すグラフであり、（Ａ）は、飼育７週目における血清中レプチン量を、普通食群と高脂肪食群に分けて示したグラフであり、（Ｂ）は、飼育１４週目における血清中レプチン量を、普通食群と高脂肪食群に分けて示したグラフであり、（Ｃ）は、飼育７週目における血清中アディポネクチン量を、普通食群と高脂肪食群に分けて示したグラフであり、（Ｄ）は、飼育１４週目における血清中アディポネクチン量を、普通食群と高脂肪食群に分けて示したグラフである。
【図１９】試験３において、血清中のアディポネクチン量を測定した結果を示すグラフである。
【図２０】試験３において、血清中のレプチン量を測定した結果を示すグラフである。
【図２１】試験３において、肝臓又は筋肉組織におけるＡＭＰＫ−ａの発現量を測定した結果を示すスペクトル図であり、（Ａ）は筋肉組織、（Ｂ）は肝臓の結果である。
【図２２】試験３において、肝臓又は筋肉組織におけるＰＰＡＲ−αの発現量を測定した結果を示すスペクトル図であり、（Ａ）は筋肉組織、（Ｂ）は肝臓の結果である。
【図２３】試験３において、筋肉組織におけるＧＬＵＴ４の発現量を測定した結果を示すスペクトル図であり、（Ａ）は筋肉細胞中に常在的に存在するＧＬＵＴ４の発現量を示し、（Ｂ）は細胞膜上に移行したＧＬＵＴ４の発現量を示す。
【図２４】試験３において、肝臓又は筋肉組織におけるＳＲＥＢＰ−１のタンパク質発現量を測定した結果を示すスペクトル図であり、（Ａ）は脂肪組織におけるＳＲＥＢＰ−１のタンパク質発現量を示し、（Ｂ）は肝臓におけるＳＲＥＢＰ−１のタンパク質発現量を示す。
【図２５】試験４において、グルコース経口負荷による耐糖能試験の結果を示したグラフであり、（Ｂ）は、血糖値のグラフの線下面積を棒グラフで示したものである。
【図２６】試験４において、スクロース経口負荷による耐糖能試験の結果を示したグラフであり、（Ｂ）は、血糖値のグラフの線下面積を棒グラフで示したものである。
【図２７】試験４において、マルトース経口負荷による耐糖能試験の結果を示したグラフであり、（Ｂ）は、血糖値のグラフの線下面積を棒グラフで示したものである。
【図１】
2006001929.tif 000014
【図２】
2006001929.tif 000015
【図３】
2006001929.tif 000016
【図４】
2006001929.tif 000017
【図５】
2006001929.tif 000018
【図６】
2006001929.tif 000019
【図７】
2006001929.tif 000020
【図８】
2006001929.tif 000021
【図９】
2006001929.tif 000022
【図１０】
2006001929.tif 000023
【図１１】
2006001929.tif 000024
【図１２】
2006001929.tif 000025
【図１３】
2006001929.tif 000026
【図１４】
2006001929.tif 000027
【図１５】
2006001929.tif 000028
【図１６】
2006001929.tif 000029
【図１９】
2006001929.tif 000030
【図２０】
2006001929.tif 000031
【図２５】
2006001929.tif 000032
【図２６】
2006001929.tif 000033
【図２７】
2006001929.tif 000034
【図１７】
2006001929.tif 000035
【図１８】
2006001929.tif 000036
【図２１】
2006001929.tif 000037
【図２２】
2006001929.tif 000038
【図２３】
2006001929.tif 000039
【図２４】
2006001929.tif 000040