【手続補正書】
【提出日】平成19年6月7日(2007.6.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成するための方法であって、以下の工程：
（ａ）ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクターを宿主細胞に導入し、ここで該宿主細胞はＮタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質を発現し、一過性にトランスフェクトされたプラスミド発現ベクターからＲＮＡポリメラーゼを一過性に発現するところの工程；および
（ｂ）該宿主細胞から組み立てられた感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項２】
モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成するための方法であって、以下の工程：
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼ、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし、その一過性発現を指令する１つまたはそれ以上の一過性発現ベクターを、該ベクターの同時発現および組換えウイルスの生成を可能とするのに十分な条件下で、好適な宿主細胞中に導入する、ここでＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性発現ベクターはプラスミドである、工程；
該宿主細胞をプラークエキスパンション細胞を含む共培養物中に移す工程；および
該共培養物中から組み立てられた感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項３】
モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成するための方法であって、以下の工程：
（ａ）ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物を合成させるために発現制御配列と作動可能に連結された非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクターを、
（１）ＲＮＡポリメラーゼ、
（２）Ｎタンパク質、
（３）Ｐタンパク質、および
（４）Ｌタンパク質、
を一過性に発現させる宿主細胞であって、ＲＮＡポリメラーゼ、Ｎ、ＰおよびＬタンパク質のそれぞれが一過性にトランスフェクトされたプラスミド発現ベクターから発現される宿主細胞中に導入する工程；および
（ｂ）該宿主細胞から組み立てられた感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項４】
モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成する方法であって、以下の工程：
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼ、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし、その一過性発現を指令する１つまたはそれ以上の一過性発現ベクターを、好適な宿主細胞中に導入する、ここでＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性発現ベクターはプラスミドである、工程；
該宿主細胞から組み立てられた感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項５】
モノネガウイルス目の感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成するための組成物であって、
（ａ）好適な宿主細胞においてウイルスｃＤＮＡからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター；
（ｂ）宿主細胞にて
（１）Ｎタンパク質、
（２）Ｐタンパク質、および
（３）Ｌタンパク質、
をエンコードし、その発現を指令する、１つまたはそれ以上の補助ベクター；および、
（ｃ）ＲＮＡポリメラーゼをエンコードし且つ宿主細胞中で一過性に発現させる一過性プラスミド発現ベクター、
を含む組成物。
【請求項６】
モノネガウイルス目の増殖−または複製−欠損非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成する方法であって、以下の工程：
（ａ）ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物を合成させるために発現制御配列と作動可能に連結された増殖−または複製−欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクターを、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質を発現し且つ一過性にトランスフェクトされたプラスミド発現ベクターからＲＮＡポリメラーゼを一過性に発現する宿主細胞中に導入する工程；および
（ｂ）該宿主細胞から組み立てられた増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項７】
モノネガウイルス目の増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成する方法であって、以下の工程：
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された増殖−または複製−欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼ、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし、その一過性発現を指令する１つまたはそれ以上の一過性発現ベクターを、該ベクターの同時発現および組換えウイルスの生成を可能とするのに十分な条件下で、好適な宿主細胞中に導入する、ここでＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性発現ベクターはプラスミドである、工程；
該宿主細胞をプラークエキスパンション細胞を含む共培養物中に移す工程；および
該共培養物中から組み立てられた増殖−または複製−欠損、感染性、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項８】
モノネガウイルス目の増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成する方法であって、以下の工程：
（ａ）ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された増殖−または複製−欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクターを、
（１）ＲＮＡポリメラーゼ
（２）Ｎタンパク質、
（３）Ｐタンパク質、および
（４）Ｌタンパク質
を一過性に発現する宿主細胞であって、ＲＮＡポリメラーゼ、Ｎ、ＰおよびＬタンパク質のそれぞれが一過性にトランスフェクトされた発現ベクターから発現される宿主細胞中に導入する、ここでＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性にトランスフェクトされた発現ベクターはプラスミドである、工程；および
（ｂ）該宿主細胞から組み立てられた増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項９】
モノネガウイルス目の増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成する方法であって、以下の工程：
ウイルスｃＤＮＡ発現ベクターからウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された増殖−または複製−欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター、並びにＲＮＡポリメラーゼ、Ｎタンパク質、Ｐタンパク質およびＬタンパク質をエンコードし、その一過性発現を指令する１つまたはそれ以上の一過性発現ベクターを、好適な宿主細胞中に導入する、ここでＲＮＡポリメラーゼをエンコードする一過性発現ベクターはプラスミドである、工程；および
該宿主細胞から組み立てられた増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを回収する工程、
を含む方法。
【請求項１０】
モノネガウイルス目の増殖−または複製−欠損、非分節型、ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスを生成するための組成物であって、
（ａ）ウイルスのｃＤＮＡからのウイルスＲＮＡ転写物の合成を指令するために発現制御配列と作動可能に連結された増殖−または複製−欠損非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルスのゲノムまたはアンチゲノムをエンコードするポリヌクレオチドを含むウイルスｃＤＮＡ発現ベクター；
（ｂ）該宿主細胞にて
（１）Ｎタンパク質、
（２）Ｐタンパク質、および
（３）Ｌタンパク質
をエンコードし、一過性発現を指令する１つまたはそれ以上の発現ベクター；および
（ｃ）宿主細胞中にてＲＮＡポリメラーゼをエンコードし、その宿主細胞中で一過性発現を指令する一過性プラスミド発現ベクター、
を含む組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４２】
図３Ａと３Ｂ（パネルＡ−Ｃ）（配列番号２−５３、各々、出現した順番通り）は、異種のネガティブ鎖ＲＮＡウイルスで同定された種々の変異を、弱毒性または他の所望の表現型変化を生じさせるために本発明の組換え非分節型ネガティブ鎖ＲＮＡウイルス中に（この場合ＨＰＩＶ１構築物中に）組み込むことができることを実証する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１２】
【表２−１】
2007500017.tif 000001
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１３】
【表２−２】
2007500017.tif 000002