【手続補正書】
【提出日】平成19年2月26日(2007.2.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項８】哺乳動物の癌の治療または免疫抑制のための請求項７に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
したがって、この発明は、細胞のナイアシンアミドモノヌクレオチド形成を阻害する生物学的に活性な化合物を提供する。この活性を有する化合物は、以下に記載するスクリーニング試験（以下、ＮＡＰＲＴ試験ともいう）によって容易に同定される。本発明の化合物は、かかる試験において、前駆体ナイアシンアミドからの細胞ＮＡＤ生合成に対して、≦10μＭの濃度で、好ましくは少なくとも50％、より好ましくは少なくとも80％、そして最も好ましくは少なくとも90％阻害活性を示す。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
【表３ａ】
2002537380.tif 000001
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
【表３ａつづき】
2002537380.tif 000002
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
【表３ｂ】
2002537380.tif 000003
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
【表５】
2002537380.tif 000004
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８０】
［式中、
Ｒ1は、水素、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、ベンジルオキシ、アミノカルボニル、カルボキシ、フェニル、フェノキシ、フェニルチオ、ピリジルオキシ、ピリジルチオ、
アルキル、特にＣ1−Ｃ6−アルキル、
アルケニル、特にＣ3−Ｃ6−アルケニル、
アルキニル、特にＣ3−Ｃ6−アルキニル、
ヒドロキシアルキル、特にＣ1−Ｃ6−ヒドロキシアルキル、
アルコキシ、特にＣ1−Ｃ6−アルコキシ、
アルケニルオキシ、特にＣ3−Ｃ6−アルケニルオキシ、
アルキニルオキシ、特にＣ3−Ｃ6−アルキニルオキシ、
アルカノイルオキシ、特にＣ1−Ｃ7−アルカノイルオキシ、
アルコキシカルボニルオキシ、特にＣ2−Ｃ7−アルコキシカルボニルオキシ
アルキルチオ、特にＣ1−Ｃ6−アルキルチオ、
アルケニルチオ、特にＣ3−Ｃ6−アルケニルチオ、
アルキニルチオ、特にＣ3−Ｃ6−アルキニルチオ、
シクロアルキル、特にＣ3−Ｃ8−シクロアルキル、
シクロアルキルオキシ、特にＣ3−Ｃ8−シクロアルキルオキシ、
シクロアルキルチオ、特にＣ3−Ｃ8−シクロアルキルチオ、
アルコキシカルボニル、特にＣ2−Ｃ7−アルコキシカルボニル、
アルキルアミノカルボニル、特にＣ2−Ｃ7−アルキルアミノカルボニル、
ジアルキルアミノカルボニル、特にＣ3−Ｃ13−ジアルキルアミノカルボニル、または
ＮＲ5Ｒ6であり、ここで
Ｒ5および
Ｒ6は、それぞれ独立して、水素
アルキル、特にＣ1−Ｃ6−アルキル、
アルケニル、特にＣ3−Ｃ6−アルケニル、および
アルキニル、特にＣ3−Ｃ6−アルキニルから選択される、
Ｒ2は、水素、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、ベンジルオキシ、
アルキル、特にＣ1−Ｃ6−アルキル、
アルコキシ、特にＣ1−Ｃ6−アルコキシまたは
アルカノイルオキシ、特にＣ1−Ｃ7−アルカノイルオキシであり、
ここで、Ｒ1およびＲ2は、もしそれらが隣接しているならば、
−（ＣＨ2）4−、−（ＣＨ＝ＣＨ）2−および−ＣＨ2Ｏ−ＣＲ7Ｒ8−Ｏ−から選択される結合を任意に形成していてもよく、ここで
Ｒ7および
Ｒ8は、それぞれ独立して、水素またはアルキル、特にＣ1−Ｃ6−アルキルであり、
Ｒ3は、水素、ハロゲン、アルキル、特にＣ1−Ｃ6−アルキル、トリフルオロメチルまたはヒドロキシアルキル、特にＣ1−Ｃ6−ヒドロキシアルキルであり、そして
Ｒ4は、水素、ヒドロキシ、ベンジルオキシ、
アルキル、特にＣ1−Ｃ6−アルキル、
アルケニル、特にＣ3−Ｃ6−アルケニル、
アルキニル、特にＣ3−Ｃ6−アルキニル、
シクロアルキル、特にＣ3−Ｃ6−シクロアルキルまたは
アルコキシ、特にＣ1−Ｃ6−アルコキシであり、
ｋは、０または１であり、
Ａは、少なくとも２つの炭素原子を有するアルケニレン、特にＣ2−Ｃ6−アルケニレンであり、これはＣ1−Ｃ3−アルキル、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ3−アルコキシ、フッ素、シアノまたはフェニルで１〜３回任意に置換されていてもよい、または
少なくとも４つの炭素原子を有するアルカジエニレン、特にＣ4−Ｃ6−アルカジエニレンであり、これはＣ1−Ｃ3−アルキル、フッ素、シアノまたはフェニルで１〜２回任意に置換されていてもよい、
Ｃ1−Ｃ3−アルキル、フッ素、シアノまたはフェニルで任意に置換されていてもよい１，３，５−ヘキサトリエニレン
エチニレンであり、
Ｄは、アルキル、特にＣ1−Ｃ6−アルキル、ヒドロキシ、またはアルコキシ、特にＣ1−Ｃ6−アルコキシで１回または２回任意に置換されていてもよいアルキレン、特にＣ1−Ｃ10−アルキレン、
アルキル、特にＣ1−Ｃ6−アルキル、ヒドロキシ、またはアルコキシ、特にＣ1−Ｃ6−アルコキシで１回または２回任意に置換されていてもよく、２重結合が環Ｅに結合していてもよい、少なくとも２つの炭素原子を有するアルケニレン、特にＣ2−Ｃ10−アルケニレン、
アルキル、特にＣ1−Ｃ6−アルキル、ヒドロキシ、またはアルコキシ、特にＣ1−Ｃ6−アルコキシで１回または２回任意に置換されていてもよく、少なくとも３つの炭素原子を有するアルキニレン、特にＣ3−Ｃ10−アルキニレン、
１〜３のメチレン単位がＯ、Ｓ、ＮＲ9、ＣＯ、ＳＯまたはＳＯ2でそれぞれ等価的に置き
換えられている、アルキレン、特にＣ1−Ｃ10−アルキレン、少なくとも２つの炭素原子を有するアルケニレン、特にＣ2−Ｃ10−アルケニレンまたは、少なくとも３つの炭素原子を有するアルキニレン、特にＣ3−Ｃ10−アルキニレン
から選択され、ここで
Ｒ9は、水素、アルキル、特にＣ1−Ｃ6−アルキル、アルケニル、特にＣ3−Ｃ6−アルケニル、アルキニル、特にＣ3−Ｃ6−アルキニル、アシル、特にＣ1−Ｃ6−アシルまたはアルキルスルホニル、特にＣ1−Ｃ6−アルキルスルホニルから選択され、
Ｅは、
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２１】
［式中、Ｒ1は、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、カルボキシ；
アルキル、アルケニル、アルキニルまたはシクロアルキルのような、飽和、１〜数個の不飽和、分岐状もしくは直鎖状もしくは環式炭化水素残基；
トリフルオロメチル又はヒドロキシアルキル；
フェニルのようなアリールまたはピリジルのようなヘテロアリール；
アルコキシ、シクロアルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、またはベンジルオキシ基のようなアラルキルオキシ、アルコキシカルボニル；アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アルカノイルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ；
アルキルチオ、シクロアルキルチオ、アルケニルチオ、アルキニルチオ；
フェノキシのようなアリールオキシ、ピリジルオキシのようなヘテロアリールオキシ、ピリジルチオのようなヘテロアリールチオ、及びＮＲ5Ｒ6［式中、Ｒ5およびＲ6は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニルのような飽和もしくは不飽和炭化水素残基またはフェニルのようなアリールおよびベンジルのようなアラルキルから互いに独立して選択される］
から選択され；
Ｒ2は、水素、ハロゲン、シアノ、アルキルのような飽和炭化水素残基、またはトリフルオロメチルのようなハロゲン化炭化水素残基、ヒドロキシ、アルコキシ、ベンジルオキシのようなアラルキルオキシ残基ならびにアルカノイルオキシから選択され、
ここで、Ｒ1およびＲ2が、互いに隣接している場合には、−（ＣＨ2）4−および−（ＣＨ＝ＣＨ）2−および−ＣＨ2Ｏ−ＣＲ7Ｒ8−Ｏ−［式中、Ｒ7およびＲ8は互いに独立して水素およびアルキル残基から選択される］から選択される橋かけを任意に形成し；
Ｒ3は、水素、ハロゲン、アルキルのような飽和炭化水素残基、またはトリフルオロメチルのようなハロゲン化炭化水素残基、またはヒドロキシアルキルから選択され；
Ｒ4は、水素、ヒドロキシ、またはアルキル、アルケニル、アルキニルもしくはシクロアルキルのような１〜数個の飽和、不飽和、分岐状もしくは直鎖状もしくは環式炭化水素残基、アルコキシおよびベンジルオキシのようなアラルキルオキシから選択され；
ｋは、０または１であり；
Ａは、少なくとも２個の炭素原子を有し、アルキルのような直鎖状もしくは分岐状炭化水素残基、ヒドロキシ、アルコキシ、フッ素のようなハロゲン、またはフェニルのようなアリールで、１〜３個任意に置換されているアルキレン、
少なくとも２個の炭素原子を有するアルキレン［式中、メチレン単位が、等配電子的にＯ、Ｓ、ＮＲ9、ＣＯ、ＳＯまたはＳＯ2で置きかえられており、ＣＯを除いて、等配電子的な置換はアミド基に隣接することができず、ＮＲ9において、残基Ｒ9は水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アシルまたはアルカンスルホニルから選択される］；
１，２−シクロプロピレンのようなシクロアルキレン；
少なくとも２個の炭素原子を有し、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、フッ素、シアノまたはフェニルのようなアリールで１〜３個任意に置換されているアルケニレン；
少なくとも４個の炭素原子を有し、アルキル、フッ素、シアノまたはフェニルのようなアリールで１または２個任意に置換されたアルカジエニレン；
アルキル、フッ素、シアノまたはフェニルのようなアリールで任意に置換された１，３，５−ヘキサトリエニレン；ならびに
エチニレン
から選択され、
Ｄは、少なくとも２個の炭素原子を有し、アルキル、ヒドロキシまたはアルコキシで１または２個任意に置換されたアルキレン；
少なくとも４個の炭素原子を有し、アルキル、ヒドロキシまたはアルコキシで１または２個任意に置換されたアルケニレン；
少なくとも４個の炭素原子を有し、アルキル、ヒドロキシまたはアルコキシで１または２個任意に置換されたアルキニレンならびに、
それぞれ少なくとも２個又は４個の炭素原子を有するアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン［式中、１〜３のメチレン単位が各々等配電子的に、Ｏ、Ｓ、ＮＲ10、ＣＯ、ＳＯまたはＳＯ2で置きかえられている［式中、Ｒ10は、Ｒ9と同じ意味を有するが、独立して選択される］］から選択され；
Ｅは、
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２５】
［ここで、複素環は、任意に二重結合を有していてもよく、かつ
ｎとｐは、互いに独立して０、１、２又は３であってもよく、但しｎ＋ｐ≦４であり、
ｑは、１、２または３であり；
Ｒ11は、水素、アルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、カルボキシもしくは少なくとも２個の炭素原子を有するアルコキシカルボニルから選択され、
Ｒ12は、水素、アルキルもしくは窒素原子に隣接したオキソ基から選択され、または、
Ｒ11およびＲ12は一緒になって、２環式環系を形成するＣ1−Ｃ3アルキレン橋かけを任意に形成する］から選択され、
Ｇは、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４またはＧ５から選択され、
ここで、Ｇ1は、基
−（ＣＨ2）r−（ＣＲ14Ｒ15）s−Ｒ13              （Ｇ１）
[ｒは、０〜３の数であり、
ｓは、０または１であり；
Ｒ13は、水素、飽和又は環式基に少なくとも３個の炭素原子を有するアルキル又はアルケニル、アルキニル、シクロアルキル；
Ｎおよび／またはＳおよび／またはＯから選択される１または２個のヘテロ原子を含んでもよい飽和もしくは不飽和、４〜７員のヘテロ環；
ベンジル、フェニル；
Ｎおよび／またはＳおよび／またはＯから選択された１〜３個のヘテロ原子を含んでもよく、直接結合するか、またはメチレン基を介して結合した、単環式芳香族５−または６−員のヘテロ環；
８〜１８、好ましくは１６個までの環原子および少なくとも１つの芳香環を有する縮合２もしくは３環式芳香族または部分的に水素化された炭化水素環系［ここで、その結合は芳香環もしくは水素化された環を介するか、または直接もしくはメチレン基を介していてもよい］；
８〜１８、好ましくは１６個までの環原子および少なくとも１つの芳香環を有する、縮合２および３環式芳香族または部分的に水素化されたヘテロ環式環系［ここで、１〜３個の環原子はＮおよび／またはＳおよび／またはＯから選択されてもよく、結合は芳香環もしくは水素化された環を介するか、または直接もしくはメチレン基を介していてもよい］
から選択され；
Ｒ14は、Ｒ13と同じ意味を有するが、独立して選択され；
Ｒ15は、水素、ヒドロキシ、メチル、ベンジル、フェニル；
Ｎおよび／またはＳおよび／またはＯの基から選択される１〜３個のヘテロ原子を含んでもよく、直接結合するかまたはメチレン基を介して結合した単環式芳香族５もしくは６員のヘテロ環；
８〜１８、好ましくは１６個までの環原子および少なくとも１つの芳香環を有する、縮合２および３環式芳香族もしくは部分的に水素化された炭化水素環系［式中、連結は芳香環または水素化された環を介するか、または直接もしくはメチレン基を介する］；
８〜１８、好ましくは１６個までの環原子および少なくとも１つの芳香環を有する、縮合２および３環式芳香族もしくは部分的に水素化されたヘテロ環式環系［式中、１〜３個の環原子は、Ｎおよび／またはＳおよび／またはＯから選択されてもよく、連結は、芳香環もしくは水素化された環を介するか、または直接もしくはメチレン基を介する］
から選択される｝であり、
Ｇ2は、
＝（Ｃ）uＲ13Ｒ15              （Ｇ２）
｛ここで、Ｒ13とＲ15は上記の意味を有し、かつ
ｕは、０もしくは１の数を示すか、又はｕ＝１である場合に二重結合によってＥに結合される基
＝ＣＲ13Ｒ15
を意味するか、又は少なくとも３個の炭素原子を有するシクロアルキル；Ｎ及び/又はＳ及び/又はＯから選択される１もしくは２個のヘテロ原子を含むことができる４〜７員の飽和された複素環；８〜１８、好ましくは１６個までの環原子と少なくとも１つの芳香環を有する縮合された二-及び三環式の部分的に水素化された炭素環式環系；１〜３個の環原子がＮ及び/又はＳ及び/又はＯから選択され、８〜１８、好ましくは１６個までの環原子と少なくとも１つの芳香環を有する縮合された二-及び三環式の部分的に水素化された複素環式環系から選択される、炭素原子を介して結合する環系を意味するか、又は
ｕ＝０である場合に、２つの本来の置換基Ｒ13とＲ15が、シクロアルキル、Ｎ及び/又はＳ及び/又はＯから選択される１もしくは２個のヘテロ原子を含むことができる飽和した４〜７員の複素環；８〜１８、好ましくは１６個の環原子と少なくとも１つの芳香環を有する縮合された二-及び三環式の部分的に水素化された炭素環式環系；１〜３個の環原子がＮ及び/又はＳ及び/又はＯから選択され、８〜１８、好ましくは１６個までの環原子と少なくとも１つの芳香環を有する縮合された二-及び三環式の部分的に水素化された複素環式環系から選択される環Ｅの結合原子とともに、スピロ環を形成できる｝を意味し、
Ｇ3は、
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３７】
｛ここで、ｒおよびｓならびに置換基Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、Ａｒ1とＡｒ2は上記の意味を有し、かつ、
Ｗは０又はＳである｝を意味し、
ここで、置換基Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ13、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ16、Ｒ17、Ａｒ1とＡｒ2における環系  ＝ＣＲ13Ｒ15、−ＮＲ13Ｒ15及び任意にＥＲ13Ｒ15ならびに芳香環系
は、ハロゲン、シアノ、アルキル、トリフルオロメチル、少なくとも３個の炭素原子を有するシクロアルキル、フェニル、ベンジル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、フッ素で完全にもしくは部分的に置換されたアルコキシ、ベンジルオキシ、フェノキシ、メルカプト、アルキルチオ、カルボキシ、カルボキシアルキル、少なくとも２個の炭素原子を有するカルボキシアルケニルもしくは少なくとも２個の炭素原子を有するアルコキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ニトロ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ及び芳香環の２つの隣り合う基に対しては、メチレンジオキシから選択される同じ又は異なる１〜３個の基で互いに独立して置換されていてもよく、かつ基Ｇ1〜Ｇ5でのアルキル、アルケニル及びシクロアルキル基は、ヒドロキシ、カルボキシ、少なくとも２個の炭素原子を有するアルコキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、アミノ、モノアルキルアミノ及びジアルキルアミノから選択される同じか又は異なる１もしくは２個の基で置換されていてもよく、
ここで、Ｇは、同時に、
Ｒ13が、水素、アルキル又はハロゲン、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシもしくはトリフルオロメチルで任意に置換されるフェニルであり、
Ｒ14及び／又はＲ15が、ハロゲン、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシもしくはトリフルオロメチルで任意に置換されるピリジルもしくはフェニルであり、
Ａが、エテニレン又はブタジエニレンで任意に置換されるアルキレン、
Ｄがアルキレン、かつ
Ｅが４位で置換されたピペリジン
である際に、
−ＣＨＲ14−Ｒ13  又は  −Ｃ（ＯＨ）Ｒ14−Ｒ13  又は
＝ＣＲ13Ｒ15  又は  −Ｏ−ＣＨＲ14−Ｒ13
を意味することができない］
の化合物、
それらのシス−およびトランス−異性体、上記化合物のＥ−およびＺ−異性体、特にＡがシクロプロパン環であるか、もしくはＤが１以上の二重結合を含む場合には、上記化合物の鏡像異性体、ジアステレオマーおよびその他の異性体を含み、さらにそれらのラセミもしくは非ラセミ混合物、ならびに上記化合物の純粋なエンド−及び／又はエキソ異性体、さらにその混合物；
それらのそれぞれの互変異性化合物；及び
それらの水和物および溶媒和物を含む上記化合物の酸付加塩。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４７】
［式中、置換基は次の意味を有する：
Ｒ1は、水素、ハロゲン、シアノ、アルキル、アルケニル、アルキニル、トリフルオロメチルのようなフルオロアルキル、シクロアルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、シクロアルキルオキシ、ベンジルオキシのようなアラルキルオキシ、アルカノイルオキシ、アルキルチオ、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、カルボキシ、フェニルのようなアリール、フェノキシのようなアリールオキシ、フェニルチオのようなアリールチオ、ピリジルオキシのようなヘテロアリールオキシ、ピリジルチオのようなヘテロアリールチオ及びＮＲ4Ｒ5から選択され（ここで、Ｒ4及びＲ5は互いに独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ベンジルのようなアラルキル及びフェニルのようなアリールから選択される）、
Ｒ2は、水素、ハロゲン、シアノ、アルキル、トリフルオロメチルのようなフルオロア
ルキル、ヒドロキシ、アルコキシ及びベンジルオキシのようなアラルキルオキシから選択され、
Ｒ3は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、アルコキシ及びベンジルオキシのようなアラルキルオキシから選択され、
ｋは、０又は１であり、
Ａは、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、フッ素もしくはフェニルのようなアリールで任意に１〜３個置換されたアルキレン；
メチレン単位がＯ、Ｓ、ＮＲ6、ＣＯ、ＳＯもしくはＳＯ2で等配電子的に置換されたアルキレン（ここで、ＣＯを除いて、等配電子的な置換はアミド基には隣接することはできず、Ｒ6は水素、アルキル、アルケニル、アシルもしくはアルカンスルホニルから選択される）；
１，２−シクロプロピレン；
アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、フッ素、シアノもしくはフェニルのようなアリールで１もしくは２回任意に置換されたアルケニレン；
アルキル、フッ素、シアノもしくはフェニルのようなアリールで１もしくは２回任意に置換されたアルカジエニレン；
アルキル、フッ素、シアノ、フェニルのようなアリールで任意に置換された１，３，５−ヘキサトリエニレン；及び
エチニレンから選択され、
Ｄは、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシもしくはフェニルのようなアリールで１もしくは２回任意に置換された、少なくとも炭素原子３つのアルキレン；
アルキル、ヒドロキシ、アルコキシもしくはフェニルのようなアリールで１もしくは２回任意に置換された、少なくとも炭素原子３つのアルケニレンもしくは少なくとも炭素原子５つのアルカジエニレン；
アルキル、ヒドロキシ、アルコキシもしくはフェニルのようなアリールで１もしくは２回任意に置換された、少なくとも炭素原子３つのアルキニレンもしくは少なくとも炭素原子５つのアルケニニレン；及び
（Ｇ）−末端メチレン基を除く１〜３のメチレン単位が、Ｏ、Ｓ、ＮＲ7、ＣＯ、ＳＯもしくはＳＯ2で等配電子的に置換された、それぞれ少なくとも炭素原子３つのアルキレン、アルケニレンもしくはアルキニレン（ここで、Ｒ7はＲ6と同じ意味）（これらは独立して選ばれる）から選択され；
Ｇは、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４、Ｇ５又はＧ６から選択され、但しＧは少なくとも一つの芳香環を含むものとし、
Ｇ１は、
−（CR9R10）m−R8          （Ｇ１）
を意味し、ここでｍは０又は１、及び
R8は、ベンジル又はジフェニルメチルのようなアラルキル、フェニルのようなアリール；
Ｎ及び／又はＳ及び／又はＯから選択された１〜３の異原子を含有でき、直接又はメチレン基を介して結合している単環式の芳香族５又は６員ヘテロ環；
８〜１８の環原子及び少なくとも一つの芳香環を有する縮合された２及び３環式の芳香族又は部分的に水素化された炭素環式環系であって、連結は芳香環又は水素化された環上に、直接又はメチレン基を介して存在することができる；
８〜１８の環原子及び少なくとも一つの芳香環を有する縮合された２及び３環式の芳香族又は部分的に水素化されたヘテロ環式環系であって、１〜３の環原子はＮ及び／又はＳ及び／又はＯから選ばれ、連結は芳香環又は水素化された環のいずれにあってもよく、直接又はメチレン基を介して存在することができる；から選ばれ、
R9は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル；
ベンジルのようなアラルキル、フェニルのようなアリール；
Ｎ及び／又はＳ及び／又はＯから選ばれる１又は２のヘテロ原子を含んでいてもよく、
飽和又は不飽和の４〜６員のヘテロ環；
Ｎ及び／又はＳ及び／又はＯから選ばれる１〜３のヘテロ原子を含んでいてもよく、直接又はメチレン基を介して存在することができ、単環式芳香族５又は７員のヘテロ環；
８〜１８の環原子及び少なくとも一つの芳香環を有する縮合された２及び３環式の芳香族又は部分的に水素化された炭素環式環系であって、連結は芳香環又は水素化された環のいずれにあってもよく、直接又はメチレン基を介して存在することができ；
８〜１８の環原子及び少なくとも一つの芳香環を有する縮合された２及び３環式の芳香族又は部分的に水素化されたヘテロ環式環系であって、１〜３の環原子はＮ及び／又はＳ及び／又はＯから選ばれ、連結は芳香環又は水素化された環上のいずれかに、直接又はメチレン基を介して存在することができ；から選ばれる、
R10は、R9と同義であるがそれらから独立して選択することができ、及びヒドロキシであってもよく；
Ｇ2は、二重結合によってDと結合する基
＝CR8R9 （Ｇ２）
（式中、R8及びR9は上記と同義、もしくはこの基＝CR8R9は炭素原子を介して結合した環系であってもよく；
８〜１８の環原子を有し、少なくとも１つの芳香環を有する縮合された２又は３環式の部分的に水素化された炭素環式系；
８〜１８の環原子を有し、少なくとも１つの芳香環を有する縮合された２又は３環式の部分的に水素化されたヘテロ環式系であって、Ｎ及び／又はＳ及び／又はＯから選ばれる１又は３のヘテロ原子をさらに含んでいてもよい；から選ばれる）、
Ｇ３は、
−X−（ＣＨ2）n−（CR9R10）m−R8 （Ｇ３ａ）
又は
−ＮＲ8Ｒ9 （Ｇ３ｂ）
（式中、ｍ及び置換基Ｒ8、Ｒ9及びＲ10は上記と同義であることができ、及び
ｎは、０、１又は２であり、
Ｘは、ＮＲ11、Ｏ又はＳであり、ここで
Ｒ11は、Ｒ4と同義であるがそれらから独立して選択することができ、もしくは基−ＮＲ8Ｒ9は窒素原子を介して結合した窒素へテロ環であってもよく、
８から１８の環原子と少なくとも一つの芳香環を有する縮合された２又は３環式の芳香族又は部分的に水素化されたヘテロ環式系であって、必須の窒素原子のほかは、Ｎ及び／又はＳ及び／又はＯから選択された一つ又は二つのさらなる異原子を含んでいてもよい；から選ばれる）、
Ｇ4は、
−ＮＲ11−Ｃ（＝Ｏ）−Ｙ−（ＣＲ9Ｒ10）m−Ｒ8 （Ｇ４ａ）
又は
−ＮＲ11−Ｃ（＝Ｚ）−ＮＲ8Ｒ9 （Ｇ４ｂ）ただし、構造要素Ｄ−Ｇは合計１以上のアミド基を含有することはできない（＞Ｎ−ＣＯ−Ｃ  又はＣ−ＣＯ−Ｎ＜）、ｍ及び置換基Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11及び基ＮＲ8Ｒ9は上記と同義、ただし、残基
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６１】
成長培地
リヒター（Richter’ｓ）改良最小必須培地、亜鉛オプション（IMEM-ZO）を、Gibco BRL，Life  Technologies  （Eggenstein，Germany）から購入した（Richter，A．，Sanford，K，K．およびEvans，V．J．（1972），J．Natl．Cancer  Inst．49：1705−1712）。
培地粉末を脱イオン水に溶解し、HCl／NaOHでｐH７．２に滴定し、濾過により滅菌した。培地に５％又は１０％牛胎児血清（FCS）（PAN Systems  ＧｍｂＨ，Aidenbach，Germany）；インシュリン100μｇ／l（Boehringer，  Mannheim，Germany）および50,000IU/ｌペニシリン＋50mg／lストレプトマイシン（Sigma，Deisenhofen，Germany）を加えた。
HEPES−緩衝  IMEM−ZO：HepG2細胞を放射性標識前駆体とともに培養するのにこの培地を用いた。上記のリヒターIMEM−ZOとは対照的に、この培地は、ナイアシンアミド、ＮａＨＣＯ3およびＦＣＳを含んでいなかった。この培地は、GibcoBRL，Life  Technologies  （Eggenstein，Germany）によって特別に調製された。培地は20ｍM HEPES（Sigma，Deisenhofen，Germany）で緩衝され、ｐHは７．２に調整された。培地は濾過により滅菌された。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７３】
細胞の医薬培養期間は、氷冷TCA溶液250μｌを成長培地に加えることにより止められた。冷蔵庫中で１時間培養した後、上澄液を捨て、深皿を脱イオン水で５回すすぎ、室温（RT）で乾燥し、最後に染色するまで冷蔵庫中で保管した。SRB溶液０．５mlを各ウェルに加え、室温で３０分間培養した；その後で染色溶液をデカントし、深皿１％（ｖ／ｖ）酢酸で４回洗浄し、再び室温で乾燥した。ウェル当たり１０ｍMトリス緩衝液１mlを加え、５分間緩く振って、プロテインに不特定に結合したSRBステインを離した。各ウェルの１００μｌアリコートを９６−ウェルマイクロタイタープレートに移し、波長490ｎｍまたは515ｎｍにおける軽い消失をELISA−リーダー（Bio，Deelux，Godensdorf，Germany）で読んだ。ネガティブコントロールウェルの平均値をテストサンプルの読み取り値から差し引いた。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７５】
ナイアシンアミド・ホスホリボシル・トランスフェラーゼ（ＮＡＰＲＴ）試験
材料および方法
セルライン：
ヒトのセルラインＫ−562（慢性の骨髄性白血病）は、American  Type  Culture Collection（ATCC  CCＬ  243），Rockville，Maryland，USAから入手する。このK細胞を、10％牛胎児血清（PAN Systems  GmbH，Aidenbach，Germany）、NaHCO3  ２．２g／l（Merck，Darmstadt，Germany）、50,000IU／ｌペニシリンおよびストレプトマイシン（Sigma）50ｍｇ／ｌを含む RPMI（Sigma，Deisenhofen，Germany，製品Ｎｏ．：Ｒ6504）中で、培養する。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７７】
反応試剤：
CMF−PBS：          Ｃａ2+Ｍｇ2+を含まない燐酸緩衝食塩水を次のように
して調製する：溶液A：KH2PO4（製品No.：4873.0250）
１ｇ、NaCl（製品No.：6400）40ｇ、KCl（製品No.：4933）
１ｇおよびNa2HPO4×２H2O（製品No.：6580）5.75ｇを精
製水400mlに溶解する。化学物質はすべてMerckから入
手する。ワーキング溶液： 溶液A 320ｍｌ、ゲンタマイ
シンサルフェート133.4ｍｇ、ペニシリンG 606.1ｍｇ、
精製水約4リットル。ｐHを７．２に調整し、溶液を濾過
により滅菌する。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８２】
方法
ナイアシンアミド・ホスホリボシルトランスフェラーゼ活性は、50ｍM トリス緩衝液ｐH8.8（試験における最終濃度）中の5ｍM MgCl2、2ｍM ATP、0.5ｍM PRPP、および［14Ｃ］ナイアシンアミド（10-5M〜10-7M）からなる反応溶液0.5ml中で決定される。100〜120μｌの細胞抽出物を加えることにより反応が始まる。37で1時間インキュベートした後、コールド(cold) ナイアシンアミド（反応混合物0.5ml当たり100ｍMナイアシンアミド溶液50μｌ）を加え、加熱ブロック上で加熱（2分間、105℃）することにより、酵素反応を止める。析出物を遠心分離（2，500×ｇ、10分間、４℃）により除去し、上澄液をスクリューキャップ付きの250μｌポリプロピレンバイアル中に集め、さらなる分析まで−20℃で貯蔵する。上澄液から10μｌアリコートを取り、放射能の全量を決定する。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８９】
ＮＡＭの定量のための代替法として、次の記載に従ったアセトン沈殿が適用できる。
Elliottら、Anal．Biochem．107：199−205（1980）
・NAPRT試験終了後、反応混合物のサンプル50μｌのデュプリケートを除去して、アセトンの２mlアリコートを分離する。（この手順は酵素反応を止めるだろう。反応混合物へのコールド ナイアシンアミドの添加および100℃での加熱はもはや必要ではない。）
・アセトンに予備浸漬された、各サンプル用のWhatman GF/Aフィルター2.5cmを吸引マニフォルドに置く。
・サンプルをフィルターに通す前に、フィルターをアセトン2mlで1回すすぐ。2mlのアセトンが３〜５秒間にフィルターを通過するように、緩やかな吸引を維持する。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
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