【手続補正書】
【提出日】平成18年12月20日(2006.12.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の前立腺組織を特徴決定する方法であり、
a)対象由来の前立腺組織試料を提供する工程；および
b)該試料中のヘプシン発現の存在または非存在を検出し、これにより該前立腺組織試料を特徴決定する工程
を含む方法。
【請求項２】
ヘプシン発現の存在の検出がヘプシンmRNAの存在の検出を含む、請求項1記載の方法。
【請求項３】
ヘプシンmRNA発現の存在の検出が、ヘプシンmRNAを、該ヘプシンmRNAに相補的な核酸プローブに曝す工程を含む、請求項2記載の方法。
【請求項４】
ヘプシン発現の存在の検出がヘプシンポリペプチドの存在の検出を含む、請求項1記載の方法。
【請求項５】
ヘプシンポリペプチドの存在の検出が、該ヘプシンポリペプチドを、該ヘプシンポリペプチドに特異的な抗体に曝す工程、および該抗体の該ヘプシンポリペプチドへの結合を検出する工程を含む、請求項4記載の方法。
【請求項６】
対象がヒト対象を含む、請求項1記載の方法。
【請求項７】
試料が腫瘍組織を含む、請求項1記載の方法。
【請求項８】
腫瘍組織試料が術後の腫瘍組織試料であり、c)ヘプシン発現の存在または非存在の検出を基に、前立腺特異抗原再上昇のリスクを確定する工程をさらに含む、請求項7記載の方法。
【請求項９】
前立腺組織の特徴決定が、前立腺組織中の前立腺癌の病期を確定する工程を含む、請求項1記載の方法。
【請求項１０】
病期が、高度の前立腺上皮内腫瘍、良性前立腺肥大、前立腺癌、および転移性前立腺癌からなる群より選択される、請求項9記載の方法。
【請求項１１】
c)予後判定を対象へ提供する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項１２】
予後判定が前立腺特異抗原再上昇の発生のリスクを含む、請求項11記載の方法。
【請求項１３】
予後判定が前立腺癌の発生のリスクを含む、請求項12記載の方法。
【請求項１４】
対象の前立腺組織を特徴決定する方法であり、
a)対象由来の前立腺組織試料を提供する工程；および
b)該試料中のpim-1発現の存在または非存在を検出し、これにより該前立腺組織試料を特徴決定する工程
を含む方法。
【請求項１５】
pim-1発現の存在の検出がpim-1 mRNAの存在の検出を含む、請求項14記載の方法。
【請求項１６】
pim-1 mRNA発現の存在の検出が、pim-1 mRNAを、pim-1 mRNAに相補的な核酸プローブに曝す工程を含む、請求項15記載の方法。
【請求項１７】
pim-1発現の存在の検出がpim-1ポリペプチドの存在の検出を含む、請求項14記載の方法。
【請求項１８】
pim-1ポリペプチドの存在の検出が、pim-1ポリペプチドを、pim-1ポリペプチドに特異的な抗体に曝す工程、および該抗体の該pim-1ポリペプチドへの結合を検出する工程を含む、請求項17記載の方法。
【請求項１９】
対象がヒト対象を含む、請求項14記載の方法。
【請求項２０】
試料が腫瘍組織を含む、請求項14記載の方法。
【請求項２１】
腫瘍組織試料が術後の腫瘍組織試料であり、c)ヘプシン発現の存在または非存在の検出を基に、前立腺特異抗原再上昇のリスクを確定する工程をさらに含む、請求項20記載の方法。
【請求項２２】
前立腺組織の特徴決定が前立腺組織中の前立腺癌の病期を確定する工程を含む、請求項14記載の方法。
【請求項２３】
病期が、高度の前立腺上皮内腫瘍、良性前立腺肥大、前立腺癌、および転移性前立腺癌からなる群より選択される、請求項22記載の方法。
【請求項２４】
c)予後判定を対象へ提供する工程をさらに含む、請求項14記載の方法。
【請求項２５】
予後判定が前立腺特異抗原再上昇の発生のリスクを含む、請求項24記載の方法。
【請求項２６】
予後判定が前立腺癌の発生のリスクを含む、請求項24記載の方法。
【請求項２７】
対象の前立腺組織を特徴決定する方法であり、
a)対象由来の前立腺組織試料を提供する工程；および
b)該試料中のEZH2発現の存在または非存在を検出し、これにより前立腺組織試料を特徴決定する工程
を含む方法。
【請求項２８】
EZH2発現の存在の検出がEZH2 mRNAの存在の検出を含む、請求項27記載の方法。
【請求項２９】
EZH2 mRNA発現の存在の検出が、EZH2 mRNAを、EZH2 mRNAに相補的な核酸プローブに曝す工程を含む、請求項28記載の方法。
【請求項３０】
EZH2発現の存在の検出がEZH2ポリペプチドの存在の検出を含む、請求項27記載の方法。
【請求項３１】
EZH2ポリペプチドの存在の検出が、EZH2ポリペプチドを、EZH2ポリペプチドに特異的な抗体に曝す工程、および該抗体のEZH2ポリペプチドへの結合を検出する工程を含む、請求項30記載の方法。
【請求項３２】
対象がヒト対象を含む、請求項27記載の方法。
【請求項３３】
試料が腫瘍組織を含む、請求項27記載の方法。
【請求項３４】
前立腺組織の特徴決定が、前立腺組織中の前立腺癌の病期を確定する工程を含む、請求項27記載の方法。
【請求項３５】
病期が、高度の前立腺上皮内腫瘍、良性前立腺肥大、前立腺癌、および転移性前立腺癌からなる群より選択される、請求項34記載の方法。
【請求項３６】
c)予後判定を対象へ提供する工程をさらに含む、請求項27記載の方法。
【請求項３７】
予後判定が転移性前立腺癌発生のリスクを含む、請求項36記載の方法。
【請求項３８】
対象において前立腺癌を特徴決定するキットであり、
a)ヘプシン発現の非存在の存在を特異的に検出することが可能である試薬；および
d)対象における癌を特徴決定するための該キットの使用に関する指示書
を備えるキット。
【請求項３９】
試薬がヘプシンmRNAに相補的な核酸プローブを含む、請求項38記載のキット。
【請求項４０】
試薬がヘプシンポリペプチドに特異的に結合する抗体を含む、請求項38記載のキット。
【請求項４１】
指示書が米国食品医薬品局が要求するインビトロ診断用医薬品の使用に関する指示書を含む、請求項38記載のキット。
【請求項４２】
対象において前立腺癌を特徴決定するキットであり、
a)pim-1発現の非存在の存在を特異的に検出することが可能である試薬；および
d)対象における癌を特徴決定するための該キットの使用に関する指示書
を備えるキット。
【請求項４３】
試薬がpim-1 mRNAに相補的な核酸プローブを含む、請求項42記載のキット。
【請求項４４】
試薬がpim-1ポリペプチドに特異的に結合する抗体を含む、請求項42記載のキット。
【請求項４５】
指示書が米国食品医薬品局が要求するインビトロ診断用医薬品の使用に関する指示書を含む、請求項42記載のキット。
【請求項４６】
対象において前立腺癌を特徴決定するキットであり、
a)EZH2発現の非存在の存在を特異的に検出することが可能である試薬；および
d)対象における癌を特徴決定するための該キットの使用に関する指示書
を備えるキット。
【請求項４７】
試薬がEZH2 mRNAに相補的な核酸プローブを含む、請求項46記載のキット。
【請求項４８】
試薬がEZH2ポリペプチドに特異的に結合する抗体を含む、請求項46記載のキット。
【請求項４９】
指示書が米国食品医薬品局が要求するインビトロ診断用医薬品の使用に関する指示書を含む、請求項46記載のキット。
【請求項５０】
化合物のスクリーニング法であり、
a)i)前立腺細胞試料；および、
ii)1種または複数の被験化合物
を提供する工程；
b)前立腺細胞試料を被験化合物と接触させる工程；ならびに
c)被験化合物非存在下に対する被験化合物存在下での、前立腺細胞試料中のヘプシン発現の変化を検出する工程
を含む方法。
【請求項５１】
検出がヘプシンmRNAの検出を含む、請求項50記載の方法。
【請求項５２】
検出がヘプシンポリペプチドの検出を含む、請求項50記載の方法。
【請求項５３】
細胞がインビトロにある、請求項50記載の方法。
【請求項５４】
細胞がインビボにある、請求項50記載の方法。
【請求項５５】
被験化合物がアンチセンス化合物を含む、請求項50記載の方法。
【請求項５６】
被験化合物が薬剤を含む、請求項50記載の方法。
【請求項５７】
化合物のスクリーニング法であり、
a)i)前立腺細胞試料；および
ii)1種または複数の被験化合物
を提供する工程；
b)前立腺細胞試料を被験化合物と接触させる工程；ならびに
c)被験化合物非存在下に対する被験化合物存在下での、前立腺細胞試料中のpim-1発現の変化を検出する工程
を含む方法。
【請求項５８】
検出がpim-1 mRNAの検出を含む、請求項57記載の方法。
【請求項５９】
検出がpim-1ポリペプチドの検出を含む、請求項57記載の方法。
【請求項６０】
細胞がインビトロにある、請求項57記載の方法。
【請求項６１】
細胞がインビボにある、請求項57記載の方法。
【請求項６２】
被験化合物がアンチセンス化合物を含む、請求項57記載の方法。
【請求項６３】
被験化合物が薬剤を含む、請求項57記載の方法。
【請求項６４】
化合物のスクリーニング法であり、
a)i)前立腺細胞試料；および
ii)1種または複数の被験化合物
を提供する工程；
b)該前立腺細胞試料を該被験化合物と接触させる工程；および
c)該被験化合物非存在下に対する該被験化合物存在下での、該前立腺細胞試料中のEZH2発現の変化を検出する工程を含む方法。
【請求項６５】
検出がEZH2 mRNAの検出を含む、請求項64記載の方法。
【請求項６６】
検出がEZH2ポリペプチドの検出を含む、請求項64記載の方法。
【請求項６７】
細胞がインビトロにある、請求項64記載の方法。
【請求項６８】
細胞が、インビボにある、請求項64記載の方法。
【請求項６９】
被験化合物がアンチセンス化合物を含む、請求項64記載の方法。
【請求項７０】
被験化合物が薬剤を含む、請求項64記載の方法。
【請求項７１】
対象の決定的でない前立腺生検組織を特徴決定する方法であり、
a)対象由来の決定的でない前立腺生検組織試料を提供する工程；および
b)該試料中のAMACR発現の存在を検出し、これにより決定的でない前立腺生検組織試料を特徴決定する工程
を含む方法。
【請求項７２】
AMACR発現の存在の検出がAMACR mRNAの存在の検出を含む、請求項71記載の方法。
【請求項７３】
AMACR mRNA発現の存在の検出が、AMACR mRNAを、AMACR mRNAの少なくとも一部分に相補的な核酸プローブに曝す工程を含む、請求項72記載の方法。
【請求項７４】
AMACR発現の存在の検出がAMACRポリペプチドの存在の検出を含む、請求項71記載の方法。
【請求項７５】
AMACRポリペプチドの存在の検出が、AMACRポリペプチドを、AMACRポリペプチドに特異的な抗体に曝す工程、および該抗体のAMACRポリペプチドへの結合を検出する工程を含む、請求項74記載の方法。
【請求項７６】
対象がヒト対象を含む、請求項71記載の方法。
【請求項７７】
決定的でない生検組織中のAMACR発現の存在が、対象における前立腺癌の指標である、請求項71記載の方法。
【請求項７８】
34βE12およびp63からなる群より選択される、基底細胞マーカーの発現を検出する工程をさらに含み、基底細胞マーカー発現の非存在およびAMACR発現の存在が対象における前立腺癌の指標である、請求項71記載の方法。
【請求項７９】
体液中のAMACR発現を検出する方法であり、
a)i)対象由来の体液；および
ii)生物学的液体中のAMACR発現を検出する試薬
を提供する工程；ならびに
b)該試薬が該体液中のAMACR発現を検出するような条件下で、該体液を該試薬と接触させる工程
を含む方法。
【請求項８０】
体液が、血清、尿、全血、リンパ液、および粘液からなる群より選択される、請求項79記載の方法。
【請求項８１】
体液中のAMACRの存在が癌の指標である、請求項79記載の方法。
【請求項８２】
癌が前立腺癌である、請求項79記載の方法。
【請求項８３】
対象において決定的でない前立腺生検組織を特徴決定するキットであり、
a)AMACR発現の存在または非存在を特異的に検出することが可能である試薬；および
b)対象における決定的でない生検組織を特徴決定するためのキットの使用に関する指示書
を備えるキット。
【請求項８４】
試薬が、AMACR mRNAの少なくとも一部に相補的な核酸プローブを含む、請求項83記載のキット。
【請求項８５】
試薬がAMACRポリペプチドに特異的に結合する抗体を含む、請求項83記載のキット。
【請求項８６】
第二の試薬をさらに含み、第二の試薬は、34βE12およびp63からなる群より選択される基底細胞マーカーの発現を特異的に検出することが可能である、請求項83記載のキット。
【請求項８７】
指示書が第二の試薬および対象における決定的でない生検組織を特徴決定するための該試薬の使用に関する指示書をさらに含む、請求項86記載のキット。
【請求項８８】
指示書が米国食品医薬品局が要求するインビトロ診断用医薬品の使用に関する指示書を含む、請求項83記載のキット。
【請求項８９】
対象の組織を特徴決定する方法であり、
a)対象由来の組織試料を提供する工程であり、組織試料は、乳房組織、卵巣組織、リンパ組織、および骨髄腫組織からなる群より選択される工程；および
b)該試料中のAMACR発現の存在または非存在を検出し、これにより乳房組織試料を特徴決定する工程
を含む方法。
【請求項９０】
対象の癌を診断する方法であり、
a)対象由来の組織試料を提供する工程であり、組織試料は、乳房組織、卵巣組織、リンパ組織、および黒色腫組織からなる群より選択され；ここで対象は、乳癌を有する疑いがある工程；ならびに
b)該試料中のAMACR発現の存在を検出し、これにより対象の癌を診断する工程を含む方法。
【請求項９１】
対象の癌を診断する方法であり、
a)癌を有する疑いのある対象由来の血液試料を提供する工程；および
b)該血液試料中のAMACRに対する免疫応答を検出し、これにより対象の癌を診断する工程
を含む方法。
【請求項９２】
癌が前立腺癌である、請求項91記載の方法。
【請求項９３】
免疫応答の検出が血液試料中のAMACRに対する抗体を検出する工程を含む、請求項91記載の方法。
【請求項９４】
細胞の増殖を阻害する方法であり、
a)i)EZH2を発現する細胞；および
ii)該細胞におけるEZH2発現を阻害する試薬
を提供する工程；
b)該細胞におけるEZH2発現が阻害されるような条件下で、該細胞を該試薬と接触させる工程
を含む方法。
【請求項９５】
試薬がアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項94記載の方法。
【請求項９６】
試薬がRNA二重鎖である、請求項94記載の方法。
【請求項９７】
試薬が薬剤である、請求項94記載の方法。
【請求項９８】
細胞が前立腺癌細胞である、請求項94記載の方法。
【請求項９９】
細胞がインビトロにある、請求項94記載の方法。
【請求項１００】
細胞がインビボにある、請求項94記載の方法。
【請求項１０１】
接触が細胞増殖の減少をさらに生じる、請求項94記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３５７】
D. レーザーキャプチャーマイクロダイセクション
治験審査委員会の手順に従って、2つの根治的前立腺切除試料の切片をOCT中で凍結した。凍結切片（厚さ5μm）を70%アルコール中で10分間固定した後、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。前立腺癌および良性前立腺を、μCUTレーザーキャプチャーマイクロダイセクター（MMI GmbH、ドイツハイデルベルグ）上で精査した。約6000個の細胞を採取した。Qiagen微量単離キット（Qiagen、カリフォルニア州サンディエゴ）を用いて、全RNAを単離した。オリゴdTおよびランダムヘキサマープライマーを用いて、逆転写を行った。特定の遺伝子産物を増幅するために用いたプライマーは、：
AMACRセンス、
2005518522.tif 000001
AMACRアンチセンス、
2005518522.tif 000002
GAPDHセンス、
2005518522.tif 000003
およびGAPDHアンチセンス、
2005518522.tif 000004
である。AMACRおよびGAPDHのPCR条件は、94℃で5分間の熱変性、94℃で1分間、60℃で1分間、および72℃で1分間のサイクル（GAPDHの場合は32サイクル、AMACRの場合は40サイクル）、ならびに72℃で5分の最終的な伸長段階である。PCR産物を2%アガロースゲル電気泳動により分離し、UV照射により可視化した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2005518522000001.app