【手続補正書】
【提出日】平成19年3月6日(2007.3.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インスリンポリペプチド−オリゴマーコンジュゲートの合成方法であって、
（ａ）（ｉ）インスリンポリペプチドと、
（ｉｉ）開裂によりインスリンポリペプチドを産生できるペプチド結合によりインスリンポリペプチドに結合された一以上の非インスリンポリペプチドと
を含むプロインスリンポリペプチドと、親水性成分及び／又は親油性成分を含むオリゴマーとを、前記プロインスリンポリペプチドへ前記オリゴマーを結合させてプロインスリンポリペプチド−オリゴマーコンジュゲートを得るのに十分な条件下で接触させるステップと、
（ｂ）前記プロインスリンポリペプチド−オリゴマーコンジュゲートから一以上の非インスリンポリペプチドを開裂させて、インスリンポリペプチド−オリゴマーコンジュゲートを得るステップと
を含む、方法。
【請求項２】
（ｃ）前記プロインスリンポリペプチドは、そのインスリンポリペプチド部分上に一以上のコンジュゲーション部位を含み、
（ｄ）ステップ１（ａ）は、そのインスリンポリペプチド部分上に一以上のオリゴマーを含むプロインスリンポリペプチド−オリゴマーを産生する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ステップ１（ａ）は、プロインスリンポリペプチド−オリゴマーコンジュゲートを産生し、非インスリンポリペプチドはコンジュゲートではない、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記オリゴマーは脂肪酸であり、ステップ１（ａ）は脂肪酸によるアシル化を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
（ｃ）前記プロインスリンポリペプチドは、Ｂ２９に単一のリジンを有し、
（ｄ）前記インスリンポリペプチド−オリゴマーコンジュゲートは、Ｂ２９モノコンジュゲートである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
（ｃ）前記プロインスリンポリペプチドは、Ｂ２９にリジンを有し、Ｂ１にコンジュゲーション部位を有し、
（ｄ）前記インスリンポリペプチド−オリゴマーコンジュゲートは、Ｂ１，Ｂ２９ジコンジュゲートである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記連結ペプチドは、Ｃ−ペプチドポリペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
（ｃ）前記Ｃ−ペプチドは、リジンを含み、
（ｄ）ステップ１（ａ）は、前記Ｃ−ペプチドのリジンがオリゴマーに結合している、ポリペプチドプロインスリンポリペプチド−オリゴマーを産生する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記連結ペプチドにリジン残基が欠けている、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記プロインスリンポリペプチドは、Ｂ鎖ポリペプチドのＮ末端に結合したリーダーペプチドをさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
（ｃ）前記リーダーペプチドは、リジンを含み、
（ｄ）ステップ１（ａ）は、前記リーダーペプチドのリジンがオリゴマーに結合している、ポリペプチドプロインスリンポリペプチド−オリゴマーを産生する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記リーダーペプチドにリジン残基が欠けている、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
（ｃ）前記インスリンポリペプチドがＡ鎖ポリペプチドとＢ鎖ポリペプチドとを含み、
（ｄ）Ｂ鎖ポリペプチドのＣ末端がＡ鎖ポリペプチドのＮ末端に結合している、
請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記プロインスリンポリペプチドがプロインスリンである、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記プロインスリンポリペプチドが、開裂性ペプチド結合によりＢ鎖のＮ末端でリーダーペプチドに結合したプロインスリンである、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記インスリンポリペプチドがインスリンである、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記オリゴマーが、前記インスリンのＢ２９位でリジンに結合している、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記インスリンポリペプチドは、ＧｌｙA21インスリン、ヒト；ＧｌｙA2lＧｌｎB3インスリン、ヒト；ＡｌａA21インスリン、ヒト；ＡｌａA2lＧｌｎB3インスリン、ヒト；ＧｌｎB3インスリン、ヒト；ＧｌｎB30インスリン、ヒト；ＧｌｙA21ＧｌｕB30インスリン、ヒト；ＧｌｙA21ＧｌｎB3ＧｌｕB30インスリン、ヒト；ＧｌｎB3ＧｌｕB30インスリン、ヒト；ＡｓｐB28インスリン、ヒト；ＬｙｓB28インスリン、ヒト；ＬｅｕB28インスリン、ヒト；ＶａｌB28インスリン、ヒト；ＡｌａB28インスリン、ヒト、ＡｓｐB28ＰｒｏB29インスリン、ヒト；ＬｙｓB28ＰｒｏB29インスリン、ヒト；ＬｅｕB28ＰｒｏB29インスリン、ヒト；ＶａｌB28ＰｒｏB29インスリン、ヒト；ＡｌａB28ＰｒｏB29インスリン、ヒトからなる群から選択されるインスリン類似体である、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記親水性成分は、ポリアルキレングリコール成分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記ポリアルキレングリコール成分は、ポリエチレングリコール成分である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記ポリアルキレングリコール成分は、ポリアルキレングリコールサブユニット１〜５０個を有する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記ポリアルキレングリコール成分は、ポリアルキレングリコールサブユニット２〜１０個を有する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記ポリアルキレングリコール成分は、ポリアルキレングリコールサブユニット少なくとも２個を有する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
前記親油性成分は、アルキル又は脂肪酸成分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記親油性成分は、炭素原子１〜２８個を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記親油性成分は、炭素原子２〜２４個を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記親油性成分は、炭素原子３〜１８個を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
プロインスリンポリペプチドからインスリンポリペプチドを合成する方法であって、前記方法は、
（ａ）請求項１に記載の方法によりインスリンポリペプチド−オリゴマーコンジュゲートを合成するステップと、
（ｂ）インスリンポリペプチド−オリゴマーコンジュゲートからオリゴマーを加水分解して、インスリンポリペプチドを産生するステップと
を含む、方法。
【請求項２９】
前記インスリンポリペプチドは、インスリンである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記開裂ステップ１（ｂ）により、トリプシン開裂部位を含む一以上の部位で、プロインスリンポリペプチド−オリゴマーコンジュゲートを開裂させる、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
前記開裂ステップは、アルギニン開裂部位を含む一以上の部位で、プロインスリンポリペプチド−オリゴマーコンジュゲートを開裂させる、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
一以上の非インスリンポリペプチドを、プロインスリンポリペプチド−オリゴマーコンジュゲートから開裂させるステップは、一以上の非インスリンポリペプチドとインスリンポリペプチドとの間の結合を切断できる一以上の酵素と、プロインスリンポリペプチド−オリゴマーコンジュゲートとを、プロインスリンポリペプチド−オリゴマーコンジュゲートから一以上の非インスリンポリペプチドを開裂させるのに十分な条件下に、接触させることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記一以上の酵素は、トリプシン、カルボキシペプチダーゼＢ及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
プロインスリンポリペプチドは、
（ａ）Ｂ鎖−Ａｒｇ−Ａ鎖
（ｂ）Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｂ鎖−Ａｒｇ−Ａ鎖
（ｃ）Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｂ鎖−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａ鎖
（ｄ）リーダーペプチド−Ａｒｇ−Ｂ鎖−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａ鎖
（ｅ）リーダーペプチド−Ａｒｇ−Ｂ鎖−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａ鎖
（ｆ）Ｂ鎖−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａ鎖
の構造から選択される構造を持つ、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
オリゴマーは、式：
【化１】
2006520384.tif 000001
式中、
（ａ）Ａは−Ｃ（Ｏ）−ＯＨ、−Ｃ（Ｓ）−ＯＨ、−Ｃ（Ｓ）−ＳＨ、−ＯＨ、−ＳＨ、または−ＮＨ2であり、
（ｂ）Ｘは、酸素原子または共有結合であり（ただしＡが−ＯＨであるときにＸは酸素原子ではない）、
（ｃ）Ｙは、エステル、エーテル、カルバメート、カルボナート、またはアミド結合成分であり、
（ｄ）ｍは０〜３０であり、
（ｅ）ｎは０〜５０であり、
（ｆ）ｍとｎは両方が０にはならず、
（ｇ）Ｒは、アルキル成分、糖成分、コレステロール、アダマンタン、アルコール成分、または脂肪酸成分である
の構造を有する、請求項１の方法。
【請求項３６】
インスリン−アシルオリゴマーコンジュゲートを合成する方法であって、以下の構造：
【化２】
2006520384.tif 000002
を有するプロインスリンポリペプチド−アシルオリゴマーコンジュゲートからリーダーペプチド及びＣ−ペプチドを酵素により開裂させて、以下の構造：
【化３】
2006520384.tif 000003
を有するインスリン−アシルオリゴマーコンジュゲートを得るステップを含む方法。
【請求項３７】
Ｘが、目標ポリペプチドである、Ｘ−オリゴマーコンジュゲートを合成する方法であって、前記方法は、
（ａ）一以上のＸポリペプチドを含むプロ−Ｘポリペプチドと、親水性成分及び／又は親油性成分を含むオリゴマーとを、前記プロインスリンポリペプチドに前記オリゴマーを結合させてプロ−Ｘポリペプチド−オリゴマーコンジュゲートを得るのに十分な条件下で接触させるステップと、
但し、プロ−Ｘポリペプチドは、
（ｉ）Ｘポリペプチド一以上と、
（ｉｉ）開裂によりＸポリペプチドを産生できるペプチド結合によりＸポリペプチドに結合された非Ｘポリペプチド一以上と
を含む、
（ｂ）前記プロ−Ｘポリペプチド−オリゴマーコンジュゲートから一以上の非Ｘポリペプチドを開裂させて、Ｘポリペプチド−オリゴマーコンジュゲートを得るステップと
を含む方法。
【請求項３８】
Ｘは、上皮小体ホルモン、上皮小体ホルモン（１−３４）（ＰＴＨ（１−３４））、ヒトＢタイプナトリウム利尿ペプチド（ｈＢＮＰ）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ１）、管腔内コレシストキニン放出因子（ＬＣＲＦ）、Ｃ−ペプチド、ロイエンケファリン、メトエンケファリン及びリジン−ロイエンケファリンからなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。