【手続補正書】
【提出日】平成19年4月11日(2007.4.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  単離され、弱毒化された組換え（-）鎖（negative stranded）RNAウイルスをコードする1種又はそれ以上の単離ポリヌクレオチド分子から前記（-）鎖RNAウイルスを産生する方法であって：
細胞又は無細胞系において、組換えゲノム又はアンチゲノムをコードする1つ又はそれ以上のポリヌクレオチド分子を含む1つ又はそれ以上の発現ベクターと前記組換え（-）鎖RNAウイルスの感染性ウイルス粒子を産生するのに必要な必須ウイルスタンパク質を同時発現させることを含んでなり、前記組換えゲノム又はアンチゲノムは、前記組換えウイルスの組換えタンパク質の内部において、異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異のアミノ酸位置に対応するアミノ酸位置での突然変異をコードするように修飾され、前記突然変異が前記組換えタンパク質内部に取り込まれることにより前記組換えウイルスに弱毒化の表現型を与える、前記方法。
【請求項２】  前記組換え（-）鎖RNAウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（RSV）である、請求項1に記載の方法。
【請求項３】  前記RSVがヒトRSV亜群A、ヒトRSV亜群B、ウシRSV、マウスRSV、又はトリニューモウイルスである、請求項2に記載の方法。
【請求項４】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスが異種RSV、ヒトパラインフルエンザウイルス（HPIV）1、HPIV2、HPIV3、ウシPIV（BPIV）、センダイウイルス（SeV）、ニューカッスル病ウイルス（NDV）、シミアン・ウイルス5（SV5）、ムンプスウイルス（MuV）、麻疹ウイルス（MeV）、イヌ・ジステンパーウイルス（CDV）、狂犬病ウイルス（RaV）、又は小疱性口内炎ウイルス（VSV）である、請求項2に記載の方法。
【請求項５】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスがRSV cpts248（ATCC VR 2450）、RSV cpts248／404（ATCC VR 2454）、RSV cpts248／955（ATCC VR 2453）、RSV cpts530（ATCC VR 2452）、RSV cpts530／1009（ATCC VR 2451）、RSV cpts530／1030（ATCC VR 2455）、RSV B-1 cp52／2B5（ATCC VR 2542）、又はRSV B-1 cp-23（ATCC VR 2579）である、請求項4に記載の方法。
【請求項６】  前記組換えゲノム又はアンチゲノムがRSV NS1、NS2、N、P、M、SH、M2（ORF1）、M2（ORF2）、L、F又はGタンパク質の内部でアミノ酸の置換、欠失又は挿入をコードするように修飾される、請求項2に記載の方法。
【請求項７】  前記組換えタンパク質の内部に取り込まれる前記突然変異が前記組換え（-）鎖RNAウイルスに温度感受性（ts）の表現型を与える、請求項2に記載の方法。
【請求項８】  前記組換えタンパク質の内部に取り込まれる前記突然変異がRSV Lタンパク質の内部にアミノ酸置換を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項９】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がヒトRSV cpts530（ATCC VR 2452）のLタンパク質の521位にあるフェニルアラニンのアミノ酸置換を含む、請求項8に記載の方法。
【請求項１０】  前記組換え（-）鎖RNAウイルスがパラインフルエンザウイルス（PIV）である、請求項1に記載の方法。
【請求項１１】  前記PIVがヒトPIV1（HPIV1）、ヒトPIV2（HPIV2）、ヒトPIV3（HPIV3）、ウシPIV（BPIV）、又はマウスPIV（MPIV）である、請求項10に記載の方法。
【請求項１２】  前記異種の突然変異ウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（RSV）、ヒトパラインフルエンザウイルス（HPIV）1、HPIV2、HPIV3、ウシPIV（BPIV）、センダイウイルス（SeV）、ニューカッスル病ウイルス（NDV）、シミアン・ウイルス5（SV5）、ムンプスウイルス（MuV）、麻疹ウイルス（MeV）、イヌ・ジステンパーウイルス（CDV）、狂犬病ウイルス（RaV）、又は小疱性口内炎ウイルス（VSV）である、請求項10に記載の方法。
【請求項１３】  前記組換えゲノム又はアンチゲノムがPIV N、P、C、D、V、M、F、HN又はLタンパク質の内部でアミノ酸の置換、欠失又は挿入をコードするように修飾される、請求項10に記載の方法。
【請求項１４】  前記組換えタンパク質の内部に取り込まれた突然変異が前記組換え（-）鎖RNAウイルスに温度感受性（ts）の表現型を与える、請求項10に記載の方法。
【請求項１５】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスがHPIV3 JS cp45である、請求項10に記載の方法。
【請求項１６】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がHPIV3 JS cp45 Lタンパク質の内部にアミノ酸置換を含む、請求項15に記載の方法。
【請求項１７】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がHPIV3 JS cp45のLタンパク質の942位にあるチロシンのアミノ酸置換を含む、請求項16に記載の方法。
【請求項１８】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がHPIV3 JS cp45のLタンパク質の992位にあるロイシンのアミノ酸置換を含む、請求項16に記載の方法。
【請求項１９】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がHPIV3 JS cp45のLタンパク質の1558位にあるトレオニンのアミノ酸置換を含む、請求項16に記載の方法。
【請求項２０】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がHPIV3 JS cp45のFタンパク質の内部にアミノ酸置換を含む、請求項15に記載の方法。
【請求項２１】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がHPIV3 JS cp45のFタンパク質の420位にあるイソロイシンのアミノ酸置換を含む、請求項20に記載の方法。
【請求項２２】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がHPIV3 JS cp45のFタンパク質の450位にあるアラニンのアミノ酸置換を含む、請求項20に記載の方法。
【請求項２３】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がヒトRSV cpts530（ATCC VR 2452）のLタンパク質の521位にあるフェニルアラニンのアミノ酸置換を含む、請求項10に記載の方法。
【請求項２４】  組換え（-）鎖RNAウイルスがヒトPIV（HPIV3）であり、前記組換えタンパク質の内部に取り込まれる前記突然変異が前記HPIV3のLタンパク質の456位にあるフェニルアラニンのアミノ酸置換を含む、請求項23に記載の方法。
【請求項２５】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がSeVのCタンパク質の170位にあるフェニルアラニンのアミノ酸置換を含む、請求項10に記載の方法。
【請求項２６】  組換え（-）鎖RNAウイルスがヒトPIV（HPIV3）であり、前記組換えタンパク質の内部に取り込まれる前記突然変異が前記HPIV3のCタンパク質の164位にあるフェニルアラニンのアミノ酸置換を含む、請求項25に記載の方法。
【請求項２７】  前記組換え（-）鎖RNAウイルスが麻疹ウイルス（MeV）である、請求項1に記載の方法。
【請求項２８】  前記異種の突然変異ウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（RSV）、ヒトパラインフルエンザウイルス（HPIV）1、HPIV2、HPIV3、ウシPIV（BPIV）、センダイウイルス（SeV）、ニューカッスル病ウイルス（NDV）、シミアン・ウイルス5（SV5）、ムンプスウイルス（MuV）、麻疹ウイルス（MeV）、イヌ・ジステンパーウイルス（CDV）、狂犬病ウイルス（RaV）、又は小疱性口内炎ウイルス（VSV）である、請求項27に記載の方法。
【請求項２９】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスがHPIV3 JS cp45である、請求項27に記載の方法。
【請求項３０】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がHPIV3 JS cp45のLタンパク質の942位にあるチロシンか又は992位にあるロイシンのアミノ酸置換を含む、請求項29に記載の方法。
【請求項３１】  組換え（-）鎖RNAウイルスが、1つの種、亜群又は株の（-）鎖RNAウイルスの一部又は全部のゲノム又はアンチゲノムを、異なる種、亜群又は株の（-）鎖RNAウイルスの異種遺伝子又は遺伝子セグメントと組み合わせて含んでなる組換えゲノム又はアンチゲノムを有するキメラウイルスである、請求項1に記載の方法。
【請求項３２】  前記弱毒化突然変異が前記異種遺伝子又は遺伝子セグメントによりコードされるタンパク質又はタンパク質領域の内部に取り込まれる、請求項31に記載の方法。
【請求項３３】  キメラウイルスが、1つのPIVの種、亜群又は株の一部又は全部のゲノム又はアンチゲノムを、異種PIVの種、亜群又は株のHN及びF糖タンパク質遺伝子の少なくとも1つの遺伝子又は遺伝子セグメントと組み合わせて含んでなる組換えゲノム又はアンチゲノムを有するパラインフルエンザウイルス（PIV）である、請求項31に記載の方法。
【請求項３４】  ヒトPIV3のHN及びF遺伝子がヒトPIV1のHN及びF遺伝子により置換される、請求項33に記載の方法。
【請求項３５】  キメラウイルスが、1つのRSVの種、亜群又は株の一部又は全部のゲノム又はアンチゲノムを、異種RSVの種、亜群又は株のF、G及びSH糖タンパク質遺伝子の少なくとも1つの遺伝子又は遺伝子セグメントと組み合わせて含んでなる組換えゲノム又はアンチゲノムを有する呼吸器合胞体ウイルス（RSV）である、請求項31に記載の方法。
【請求項３６】  ヒトRSV亜群AのF及びG糖タンパク質がヒトRSV亜群BのF及びG糖タンパク質遺伝子により置換される、請求項35に記載の方法。
【請求項３７】  組換えゲノム又はアンチゲノムが、生物学的に誘導される突然変異（-）鎖RNAウイルスから採られる1つ又はそれ以上の追加の弱毒化突然変異をコードするようにさらに修飾される、請求項1に記載の方法。
【請求項３８】  組換え（-）鎖RNAウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（RSV）であり、組換えゲノム又はアンチゲノムが生物学的に誘導される突然変異RSV株のパネル内に存在する少なくとも1つ及び全数までの弱毒化突然変異をコードする、請求項37に記載の方法であって、前記パネルがcpts RSV 248（ATCC VR 2450）、cpts RSV 248／404（ATCC VR 2454）、cpts RSV 248／955（ATCC VR 2453）、cpts RSV 530（ATCC VR 2452）、cpts RSV 530／1009（ATCC VR 2451）、cpts RSV 530／1030（ATCC VR 2455）、RSV B-1 cp52／2B5（ATCC VR 2542）、及びRSV B-1 cp-23（ATCC VR 2579）を含んでなる、前記方法。
【請求項３９】  組換え（-）鎖RNAウイルスがパラインフルエンザウイルス（PIV）であり、組換えゲノム又はアンチゲノムがHPIV3 JS cp45の内部に存在する少なくとも1つ及び全数までの弱毒化突然変異をコードする、請求項37に記載の方法。
【請求項４０】  組換えゲノム又はアンチゲノムが、突然変異を特定するコドンにおける多数のヌクレオチド変化により安定化される少なくとも1つの弱毒化突然変異を包含する、請求項37に記載の方法。
【請求項４１】  組換えゲノム又はアンチゲノムが、増殖特性の変化、弱毒化、温度感受性、低温適応、小プラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性の変化から選択される表現型の変化を特定するヌクレオチド修飾によりさらに修飾される、請求項1に記載の方法。
【請求項４２】  組換え（-）鎖RNAウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（RSV）であり、組換えゲノム又はアンチゲノムがSH、NS1、NS2又はG遺伝子の修飾を取り込む、請求項41に記載の方法。
【請求項４３】  SH、NS1又はNS2遺伝子が欠失しているか、又はその遺伝子の発現が除外されている、請求項42に記載の方法。
【請求項４４】  ヌクレオチド修飾が、組換えゲノム又はアンチゲノムの内部にある選択RSV遺伝子のcis作用性調節配列にあるヌクレオチドの欠失、挿入、付加又は再配置を含む、請求項42に記載の方法。
【請求項４５】  組換え（-）鎖RNAウイルスがサブウイルス粒子である、請求項1に記載の方法。
【請求項４６】  単離された弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルスであって：
組換えゲノム又はアンチゲノムと、前記組換え（-）鎖RNAウイルスの感染性ウイルス粒子を産生するのに必要な必須ウイルスタンパク質を含んでなり、前記組換えゲノム又はアンチゲノムは、前記組換えウイルスの組換えタンパク質の内部において、異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異のアミノ酸位置に対応するアミノ酸位置での突然変異をコードするように修飾され、前記組換えタンパク質内部に取り込まれる突然変異が前記組換えウイルスに弱毒化の表現型を与える、前記ウイルス。
【請求項４７】  前記組換え（-）鎖RNAウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（RSV）である、請求項46に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項４８】  前記RSVがヒトRSV亜群A、ヒトRSV亜群B、ウシRSV、マウスRSV、又はトリRSVである、請求項47に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項４９】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（RSV）、ヒトパラインフルエンザウイルス（HPIV）1、HPIV2、HPIV3、ウシPIV（BPIV）、センダイウイルス（SeV）、ニューカッスル病ウイルス（NDV）、シミアン・ウイルス5（SV5）、ムンプスウイルス（MuV）、麻疹ウイルス（MeV）、イヌ・ジステンパーウイルス（CDV）、狂犬病ウイルス（RaV）、又は小疱性口内炎ウイルス（VSV）である、請求項47に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項５０】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスがRSV cpts248（ATCC VR 2450）、RSV cpts248／404（ATCC VR 2454）、RSV cpts248／955（ATCC VR 2453）、RSV cpts530（ATCC VR 2452）、RSV cpts530／1009（ATCC VR 2451）、RSV cpts530／1030（ATCC VR 2455）、RSV B-1 cp52／2B5（ATCC VR 2542）、又はRSV B-1 cp-23（ATCC VR 2579）である、請求項49に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項５１】  前記組換えゲノム又はアンチゲノムがRSV NS1、NS2、N、P、M、SH、M2（ORF1）、M2（ORF2）、L、F又はG遺伝子の内部でアミノ酸の置換、欠失又は挿入をコードするように修飾される、請求項47に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項５２】  前記組換えタンパク質の内部に取り込まれる突然変異が前記組換え（-）鎖RNAウイルスに温度感受性（ts）の表現型を与える、請求項47に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項５３】  前記組換えタンパク質の内部に取り込まれる突然変異がRSV Lタンパク質の内部にアミノ酸置換を含む、請求項47に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項５４】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がヒトRSV cpts530（ATCC VR 2452）のLタンパク質の521位にあるフェニルアラニンのアミノ酸置換を含む、請求項47に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項５５】  前記組換え（-）鎖RNAウイルスがパラインフルエンザウイルス（PIV）である、請求項46に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項５６】  前記PIVがヒトPIV1（HPIV1）、ヒトPIV2（HPIV2）、ヒトPIV3（HPIV3）、ウシPIV（BPIV）、又はマウスPIV（MPIV）である、請求項55に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項５７】  前記異種の突然変異ウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（RSV）、ヒトパラインフルエンザウイルス（HPIV）1、HPIV2、HPIV3、ウシPIV（BPIV）、センダイウイルス（SeV）、ニューカッスル病ウイルス（NDV）、シミアン・ウイルス5（SV5）、ムンプスウイルス（MuV）、麻疹ウイルス（MeV）、イヌ・ジステンパーウイルス（CDV）、狂犬病ウイルス（RaV）、又は小疱性口内炎ウイルス（VSV）である、請求項55に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項５８】  前記組換えゲノム又はアンチゲノムがPIV N、P、C、D、V、M、F、HN又はLタンパク質の内部でアミノ酸の置換、欠失又は挿入をコードするように修飾される、請求項55に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項５９】  前記組換えタンパク質の内部に取り込まれる突然変異が前記組換え（-）鎖RNAウイルスにts表現型を与える、請求項55に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項６０】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスがHPIV3 JS cp45である、請求項55に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項６１】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がHPIV3 JS cp45 Lタンパク質の内部にアミノ酸置換を含む、請求項60に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項６２】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がHPIV3 JS cp45のLタンパク質の942位にあるチロシンのアミノ酸置換を含む、請求項60に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項６３】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がHPIV3 JS cp45のLタンパク質の992位にあるロイシンのアミノ酸置換を含む、請求項60に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項６４】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がHPIV3 JS cp45のLタンパク質の1558位にあるトレオニンのアミノ酸置換を含む、請求項60に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項６５】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がHPIV3 JS cp45のFタンパク質の内部にアミノ酸置換を含む、請求項60に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項６６】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がHPIV3 JS cp45のFタンパク質の420位にあるイソロイシンのアミノ酸置換を含む、請求項60に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項６７】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がHPIV3 JS cp45のFタンパク質の450位にあるアラニンのアミノ酸置換を含む、請求項60に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項６８】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がヒトRSV cpts530（ATCC VR 2452）のLタンパク質の521位にあるフェニルアラニンのアミノ酸置換を含む、請求項55に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項６９】  組換え（-）鎖RNAウイルスがヒトPIV（HPIV3）であり、前記組換えタンパク質の内部に取り込まれる前記突然変異が前記HPIV3のLタンパク質の456位にあるフェニルアラニンのアミノ酸置換を含む、請求項68に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項７０】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がSeVのCタンパク質の170位にあるフェニルアラニンのアミノ酸置換を含む、請求項55に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項７１】  組換え（-）鎖RNAウイルスがヒトPIV（HPIV3）であり、前記組換えタンパク質の内部に取り込まれる前記突然変異が前記HPIV3のCタンパク質の164位にあるフェニルアラニンのアミノ酸置換を含む、請求項70に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項７２】  前記組換え（-）鎖RNAウイルスが麻疹ウイルス（MeV）である、請求項46に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項７３】  前記異種の突然変異ウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（RSV）、ヒトパラインフルエンザウイルス（HPIV）1、HPIV2、HPIV3、ウシPIV（BPIV）、センダイウイルス（SeV）、ニューカッスル病ウイルス（NDV）、シミアン・ウイルス5（SV5）、ムンプスウイルス（MuV）、麻疹ウイルス（MeV）、イヌ・ジステンパーウイルス（CDV）、狂犬病ウイルス（RaV）、又は小疱性口内炎ウイルス（VSV）である、請求項72に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項７４】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスがHPIV3 JS cp45である、請求項72に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項７５】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がHPIV3 JS cp45のLタンパク質の942位にあるチロシンのアミノ酸置換を含む、請求項74に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項７６】  前記異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異がHPIV3 JS cp45のLタンパク質の992位にあるロイシンのアミノ酸置換を含む、請求項74に記載の弱毒化組換え（-）鎖RNAウイルス。
【請求項７７】  請求項４６〜７６のいずれか１項記載の組換え（-）鎖ウイルスの組換えゲノム又はアンチゲノムをコードする単離されたポリヌクレオチド分子。
【請求項７８】  組換え（-）鎖RNAウイルスが、1つの種、亜群又は株の（-）鎖RNAウイルスの一部又は全部のゲノム又はアンチゲノムを、異なる種、亜群又は株の（-）鎖RNAウイルスの異種遺伝子又は遺伝子セグメントと組み合わせて含んでなる組換えゲノム又はアンチゲノムを有するキメラウイルスである、請求項77に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項７９】  前記弱毒化突然変異が前記異種遺伝子又は遺伝子セグメントによりコードされるタンパク質又はタンパク質領域の内部に取り込まれる、請求項78に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８０】  キメラウイルスが、1つのPIVの種、亜群又は株の一部又は全部のゲノム又はアンチゲノムを、異種PIVの種、亜群又は株のHN及びF糖タンパク質遺伝子の少なくとも1つの遺伝子又は遺伝子セグメントと組み合わせて含んでなる組換えゲノム又はアンチゲノムを有するパラインフルエンザウイルス（PIV）である、請求項78に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８１】  ヒトPIV3のHN及びF遺伝子がヒトPIV1のHN及びF遺伝子により置換される、請求項80に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８２】  キメラウイルスが、1つのRSVの種、亜群又は株の一部又は全部のゲノム又はアンチゲノムを、異種RSVの種、亜群又は株のF、G及びSH糖タンパク質遺伝子の少なくとも1つの遺伝子又は遺伝子セグメントと組み合わせて含んでなる組換えゲノム又はアンチゲノムを有する呼吸器合胞体ウイルス（RSV）である、請求項78に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８３】  ヒトRSV亜群AのF及びG糖タンパク質がヒトRSV亜群BのF及びG糖タンパク質遺伝子により置換される、請求項82に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８４】  組換えゲノム又はアンチゲノムが、生物学的に誘導される突然変異（-）鎖RNAウイルスから採られる1つ又はそれ以上の追加の弱毒化突然変異をコードするようにさらに修飾される、請求項77に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８５】  組換え（-）鎖RNAウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（RSV）であり、組換えゲノム又はアンチゲノムが生物学的に誘導される突然変異RSV株のパネル内に存在する少なくとも1つ及び全数までの弱毒化突然変異をコードする、請求項84に記載の単離ポリヌクレオチドであって、前記パネルがcpts RSV 248（ATCC VR 2450）、cpts RSV 248／404（ATCC VR 2454）、cpts RSV 248／955（ATCC VR 2453）、cpts RSV 530（ATCC VR 2452）、cpts RSV 530／1009（ATCC VR 2451）、cpts RSV 530／1030（ATCC VR 2455）、RSV B-1 cp52／2B5（ATCC VR 2542）、及びRSV B-1 cp-23（ATCC VR 2579）を含んでなる、前記単離ポリヌクレオチド。
【請求項８６】  組換え（-）鎖RNAウイルスがパラインフルエンザウイルス（PIV）であり、組換えゲノム又はアンチゲノムがPIV3 JS cp45の内部に存在する少なくとも1つ及び全数までの弱毒化突然変異をコードする、請求項84に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８７】  組換えゲノム又はアンチゲノムが、突然変異を特定するコドンにおける多数のヌクレオチド変化により安定化される少なくとも1つの弱毒化突然変異を包含する、請求項77に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８８】  組換えゲノム又はアンチゲノムが、増殖特性の変化、弱毒化、温度感受性、低温適応、小プラークサイズ、宿主範囲制限、又は免疫原性の変化から選択される表現型の変化を特定するヌクレオチド修飾によりさらに修飾される、請求項77に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項８９】  組換え（-）鎖RNAウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（RSV）であり、組換えゲノム又はアンチゲノムがSH、NS1、NS2又はG遺伝子の修飾を取り込む、請求項88に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項９０】  SH、NS1又はNS2遺伝子が欠失しているか、又はその遺伝子の発現が除外されている、請求項88に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項９１】  ヌクレオチド修飾が、組換えゲノム又はアンチゲノムの内部にある選択RSV遺伝子のcis作用性調節配列にあるヌクレオチドの欠失、挿入、付加又は再配置を含む、請求項88に記載の単離ポリヌクレオチド。
【請求項９２】  機能可能的に連結した転写プロモーター、組換え（-）鎖RNAウイルスの組換えゲノム又はアンチゲノムをコードするポリヌクレオチド分子、及び転写ターミネーターを含んでなる発現ベクターであって、前記組換えゲノム又はアンチゲノムは、前記ウイルスの組換えタンパク質の内部において、異種の突然変異（-）鎖RNAウイルスにおいて同定される弱毒化突然変異のアミノ酸位置に対応するアミノ酸位置での突然変異をコードするように修飾され、前記組換えタンパク質内部に取り込まれる突然変異が前記組換えウイルスに弱毒化の表現型を与える、前記ベクター。
【請求項９３】  請求項46に記載の弱毒化組換え（-）鎖ウイルスの免疫学的に十分な量を生理学的に許容される担体とともに含む、（-）鎖RNAウイルスに対する免疫応答を誘発するための免疫原性組成物。
【請求項９４】  弱毒化組換え（-）鎖ウイルスが呼吸器合胞体ウイルス（RSV）であるか又はパラインフルエンザウイルス（PIV）である、請求項93に記載の免疫原性組成物。