(57)【要約】  本発明は、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、及びクロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）のような伝達性海綿状脳症（ＴＳＥ）といった、タンパク質凝集に関連した疾患及び／又は神経変性疾患を治療することにおける使用に有効な治療薬剤である、３，５−ジフェニル−ジアゾール化合物の誘導体に関する。この治療効果は、脳のような罹患組織におけるタンパク質凝集の阻害によって引き起こされる。３，５−ジフェニル−ジアゾール誘導体は、タンパク質の凝集を阻害するのに有効であることが示されてきたが、水溶液にほとんど溶けないこともその特徴である。本発明のプロドラッグは、水溶液中でのその改善された溶解性とその増加したバイオアベイラビリティを特徴とする、修飾された３，５−ジフェニル−ジアゾール誘導体である。
2019501167.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の異性体構造Ｉａ及びＩｂ：
【化１】
2019501167.tif 000031
［式中、ＹとＺの一方はＮであって、他方はＣＲ２であり；
ここでＲ２は、水素、Ｃ１−４アルキル、少なくとも１個のハロゲンで置換されるＣ１−４アルキル；及びＣ６−１０アリールより選択され、ここで該アリール環は、未置換であるか又はＣ１−４アルキル又はハロゲンによって置換され；
式中、Ｘは
【化２】
2019501167.tif 000032
であってＨａｌは塩素又は臭素より選択されるハロゲンである、又は
式中、Ｘは
【化３】
2019501167.tif 000033
であってＨａｌは臭素である、のいずれかであり；そして
式中、それぞれのＲは、独立して、水素又はカチオンである］の１つによって定義される化合物。
【請求項２】
ＹがＮであって、Ｚが−ＣＨ−である、請求項１の化合物。
【請求項３】
【化４】
2019501167.tif 000034
［式中、Ｈａｌは、塩素又は臭素より選択されるハロゲンであり、好ましくは、ここでＨａｌは、臭素であり、そして式中、それぞれのＲは、独立して、水素又はカチオンより選択され、好ましくは、ここでＲは、ナトリウムである］である、請求項１の化合物。
【請求項４】
請求項１〜請求項３のいずれか１項の異性体構造Ｉａ及びＩｂの化合物の１つ又はそれらの混合物を含んでなり、医薬的に許容される添加剤を含んでいてもよい組成物。
【請求項５】
少なくとも１つのＲが、ナトリウム、リチウム、カリウム、及びアンモニウムより選択されるカチオンであるか又はエタノールアミン、コリン、リジン、メグルミン、ピペラジン、及びトロメタミンのプロトン化型である、請求項１〜請求項３のいずれか１項の化合物又は請求項４の組成物。
【請求項６】
両方のＲがナトリウムである、請求項５の化合物又は組成物。
【請求項７】
Ｈａｌが臭素である、請求項１〜請求項６のいずれか１項の化合物又は組成物。
【請求項８】
Ｈａｌが塩素である、請求項１〜請求項６のいずれか１項の化合物又は組成物。
【請求項９】
構造Ｉａを有する化合物と構造Ｉｂを有する化合物の混合物を含んでなる、請求項４〜請求項８のいずれか１項の組成物。
【請求項１０】
医薬品としての使用のための、請求項１〜請求項９のいずれか１項の化合物又は組成物。
【請求項１１】
タンパク質凝集に関連した疾患の治療又は予防における使用のための、請求項１〜請求項１０のいずれか１項の化合物又は組成物。
【請求項１２】
タンパク質凝集に関連した疾患が、少なくとも１つのタンパク質又はその断片又は誘導体の凝集型の存在を特徴とし、ここで該タンパク質は、プリオンタンパク質、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、α−シヌクレイン、スーパーオキシドジスムターゼ、タウ、免疫グロブリン、アミロイド−Ａ、トランスサイレチン、β２−ミクログロブリン、シスタチンＣ、アポリポプロテインＡ１、ＴＤＰ−４３、膵島アミロイドポリペプチド、ＡＮＦ、ゲルゾリン、インスリン、リゾチーム、フィブリノゲン、ハンチンチン、及びアタキシン、並びに、ポリＱストレッチがある他のタンパク質からなる群より選択される、請求項１１の使用のための化合物又は組成物。
【請求項１３】
疾患が、パーキンソン病、プリオン病、アルツハイマー病、多系統萎縮症、びまん性レビー小体病、前頭側頭型認知症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症と他のポリＱ病、遺伝性脳アミロイド血管症、家族性アミロイド多発性神経障害、原発性全身性アミロイドーシス（ＡＬアミロイドーシス）、反応性全身性アミロイドーシス（ＡＡアミロイドーシス）、ＩＩ型糖尿病、注射限局性アミロイドーシス、β−２ミクログロブリンアミロイドーシス、遺伝性非神経障害性アミロイドーシス、及びフィンランド型遺伝性全身性アミロイドーシスからなる群より選択される、請求項１１又は請求項１２の使用のための化合物又は組成物。
【請求項１４】
プリオン病が、散発性及び遺伝性クロイツフェルト・ヤコブ病、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ）、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）の感染性因子によって引き起こされるヒト障害、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群、致死性家族性不眠症、クールー、畜牛のＢＳＥ、ヒツジ及びヤギのスクレイピー、ネコの猫海綿状脳症（ＦＳＥ）、ミンクの伝達性ミンク脳症（ＴＭＥ）、ニアラ（Nyala）及びクーズー（Greater Kudu）の外来有蹄類脳症（ＥＵＥ）、並びにシカ及びエルクの慢性消耗症（ＣＷＤ）より選択される、請求項１３の使用のための化合物又は組成物。
【請求項１５】
タンパク質凝集に関連した疾患を治療するか又は予防する方法であって、請求項１〜請求項３のいずれか１項の化合物の治療有効量をその必要な患者へ投与することを含んでなる、前記方法。
【請求項１６】
タンパク質凝集に関連した疾患が、少なくとも１つのタンパク質又はその断片又は誘導体の凝集型の存在を特徴とし、ここで該タンパク質は、プリオンタンパク質、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、α−シヌクレイン、スーパーオキシドジスムターゼ、タウ、免疫グロブリン、アミロイド−Ａ、トランスサイレチン、β２−ミクログロブリン、シスタチンＣ、アポリポプロテインＡ１、ＴＤＰ−４３、膵島アミロイドポリペプチド、ＡＮＦ、ゲルゾリン、インスリン、リゾチーム、フィブリノゲン、ハンチンチン、及びアタキシン、並びに、ポリＱストレッチがある他のタンパク質からなる群より選択される、請求項１５の方法。
【請求項１７】
疾患が、パーキンソン病、プリオン病、アルツハイマー病、多系統萎縮症、びまん性レビー小体病、前頭側頭型認知症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症と他のポリＱ病、遺伝性脳アミロイド血管症、家族性アミロイド多発性神経障害、原発性全身性アミロイドーシス（ＡＬアミロイドーシス）、反応性全身性アミロイドーシス（ＡＡアミロイドーシス）、ＩＩ型糖尿病、注射限局性アミロイドーシス、β−２ミクログロブリンアミロイドーシス、遺伝性非神経障害性アミロイドーシス、及びフィンランド型遺伝性全身性アミロイドーシスからなる群より選択される、請求項１５又は請求項１６の方法。
【請求項１８】
プリオン病が、散発性及び遺伝性クロイツフェルト・ヤコブ病、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ）、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）の感染性因子によって引き起こされるヒト障害、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群、致死性家族性不眠症、クールー、畜牛のＢＳＥ、ヒツジ及びヤギのスクレイピー、ネコの猫海綿状脳症（ＦＳＥ）、ミンクの伝達性ミンク脳症（ＴＭＥ）、ニアラ及びクーズーの外来有蹄類脳症（ＥＵＥ）、並びにシカ及びエルクの慢性消耗症（ＣＷＤ）より選択される、請求項１７の方法。
【請求項１９】
請求項１〜請求項３のいずれか１項の化合物の、タンパク質凝集に関連した疾患を治療するか又は予防するための医薬品の製造への使用。
【請求項２０】
タンパク質凝集に関連した疾患が、少なくとも１つのタンパク質又はその断片又は誘導体の凝集型の存在を特徴とし、ここで該タンパク質は、プリオンタンパク質、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、α−シヌクレイン、スーパーオキシドジスムターゼ、タウ、免疫グロブリン、アミロイド−Ａ、トランスサイレチン、β２−ミクログロブリン、シスタチンＣ、アポリポプロテインＡ１、ＴＤＰ−４３、膵島アミロイドポリペプチド、ＡＮＦ、ゲルゾリン、インスリン、リゾチーム、フィブリノゲン、ハンチンチン、及びアタキシン、並びに、ポリＱストレッチがある他のタンパク質からなる群より選択される、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
疾患が、パーキンソン病、プリオン病、アルツハイマー病、多系統萎縮症、びまん性レビー小体病、前頭側頭型認知症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、脊髄小脳失調症と他のポリＱ病、遺伝性脳アミロイド血管症、家族性アミロイド多発性神経障害、原発性全身性アミロイドーシス（ＡＬアミロイドーシス）、反応性全身性アミロイドーシス（ＡＡアミロイドーシス）、ＩＩ型糖尿病、注射限局性アミロイドーシス、β−２ミクログロブリンアミロイドーシス、遺伝性非神経障害性アミロイドーシス、及びフィンランド型遺伝性全身性アミロイドーシスからなる群より選択される、請求項１９又は請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
プリオン病が、散発性及び遺伝性クロイツフェルト・ヤコブ病、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ）、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）の感染性因子によって引き起こされるヒト障害、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群、致死性家族性不眠症、クールー、畜牛のＢＳＥ、ヒツジ及びヤギのスクレイピー、ネコの猫海綿状脳症（ＦＳＥ）、ミンクの伝達性ミンク脳症（ＴＭＥ）、ニアラ及びクーズーの外来有蹄類脳症（ＥＵＥ）、並びにシカ及びエルクの慢性消耗症（ＣＷＤ）より選択される、請求項２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、及びクロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）のような伝達性海綿状脳症（ＴＳＥ）といった、タンパク質凝集に関連した疾患及び／又は神経変性疾患を治療することにおける使用に有効な治療薬剤である、３，５−ジフェニル−ジアゾール化合物の水溶性誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
その多くが今のところ治癒し得ない、数多くの神経系疾患及び神経変性疾患が知られている。よくある神経変性疾患は、いずれも、特定タンパク質の脳におけるミスフォールディング、凝集、及び／又は沈着を特徴とする。これらの疾患には、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）のような伝達性海綿状脳症（ＴＳＥ）、老年性認知症、ＡＡアミロイドーシス、動脈硬化性認知症、ハンチントン病（ＨＤ）、脳閉塞性血栓血管炎、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、他多数といった医学的状態が含まれる。２型糖尿病は、秩序だったタンパク質凝集がその病態発生に関与する、さらにもう１つの疾患である。
【０００３】
ＴＳＥの症例において、凝集物を形成する、誤って折り畳まれた（misfolded）タンパク質は、「プリオン（prion）」と呼ばれるが、これは、「タンパク質性の（proteinaceous）」と「感染性の（infectious）」に由来する。故に、ＴＳＥは、プリオン病とも呼ばれる。ＴＳＥの病態発生における中心的な事象は、細胞のプリオンタンパク質、ＰｒＰＣの病理学的なＰｒＰＳｃアイソフォームへの変換であって、これが大きなタンパク凝集物の中へ蓄積する。プリオンは、誤って折り畳まれたタンパク質状態を伝播させることによって増殖する。プリオンが健常な生物体に入ると、それは、既存の適切に折り畳まれたタンパク質を疾患に関連したプリオン型へ変換するよう誘導する。次いで、これらの新たに形成されたプリオンは、より多くのタンパク質をそれ自体で変換し続けるが、これが多量のプリオン型を産生する連鎖反応の引き金になる。すべての既知プリオンは、密集したβ−シートからなる凝集物へタンパク質が重合する、アミロイドフォールドの形成を誘導する。アミロイド凝集物は、原線維であって、その両端で成長して、切断により２つの成長末端が４つの成長末端になるときに、複製する。この改変された構造はきわめて安定していて、感染組織の中に蓄積する。プリオンタンパク質について記載される伝播理論は、他のタンパク質ミスフォールディング障害（ＰＭＤ）におけるアミロイド形成にも当てはまる場合がある。
【０００４】
別のクラスの神経変性疾患である、いわゆるシヌクレイノパチーは、α−シヌクレインを主に含有する、タンパク質の凝集物、オリゴマー、前原線維、及び原線維の細胞内蓄積を特徴とする。シヌクレイノパチーの症例では、α−シヌクレインのオリゴマー凝集物の形成とその後の膜細孔の形成によって神経細胞に対する病理学的な効果が誘導されると考えられている。シヌクレイノパチーの例は、パーキンソン病、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、及び多系統萎縮症である。
【０００５】
実のところ、ほとんどのＰＭＤの病態発生に関連したタンパク質コンホメーションの変化は、部分的にタンパク質分解に抵抗するβ−シート構造に富んでいて、より高次の凝集物を形成する高い傾向を有する、プリオンに似た異常なタンパク質の形成をもたらす。アミロイド形成は、誤って折り畳まれたタンパク質モノマーが遅く相互作用して、オリゴマー核を形成し、その周囲でより速い伸長反応期が進行することに依存する。オリゴマー分子種がそれ自身の成長の種を播く能力は、プリオンの自己増殖活性に類似している。
【０００６】
凝集の間に生じるこれらのオリゴマーは、文献において、細胞機能障害と細胞死をもたらす主たる毒性を有する因子であると記載されている。細胞死をもたらす１つのあり得る機序は、タンパク質凝集物によって引き起こされる膜穿孔である。患者の組織におけるタンパク質凝集によって引き起こされる疾患を治療するには、このタンパク質凝集を予防し、減少させること、あるいは、ともかくもその組織から除去することが求められる。
【０００７】
プリオン病の場合、このことは、感染性タンパク質（ＰｒＰＳｃ）の形成及び増幅に干渉することを狙った治療アプローチによって達成される可能性がある。細胞培養や生体内（in vivo）試験に由来する証拠では、ＰｒＰＳｃの形成を一度阻止すると、ＰｒＰＳｃのクリアランスが起こり得ることが示唆されている。従って、この治療戦略は、潜伏期間の後期にも、そして疾患の臨床徴候が顕現した後でも有効である可能性があり、これは、ヒトのプリオン病に対処するのに有用であるために絶対必要である。
【０００８】
アクリジン誘導体、コンゴーレッド（Congo Red）、ポルフィリン類／フタロシアニン類、Ｃｐ−６０、β−シートブレーカーペプチド、及びＰｒＰの変異体といった、ＰｒＰＳｃ増幅に試験管内で（in vitro）干渉するのに有効であることが示された数多くの化合物がある。しかしながら、これら化合物の中で、疾患治療のために、また治療効力や薬理学的特性が向上した化合物を開発するためのリード化合物として成功裡にこれまで使用されたことがあるものは、１つもない。
【０００９】
ＷＯ２０１０／００３７２には、タンパク質の凝集を阻害するのに有効であることが示された化合物が開示された。強蛍光ターゲットスキャニング（ＳＩＦＴ）とα−シヌクレイン（ＰＤ）及びプリオンタンパク質（ＣＪＤ）の凝集量を測定する細胞アッセイの組合せに基づいた広範なスクリーニングが行われ、このスクリーニングでは、３，５−ジフェニルピラゾール（ＤＰＰ）化合物が、有機合成によって容易に修飾し得る、高活性の分子骨格であることが判明した。この化合物群において約２５０種もの化合物が合成されて、その化合物について、上記に言及した様々な疾患（ＡＤ、ＣＪＤ、ＰＤ）を模倣する動物モデルにおいて、経口アベイラビリティと効力を評価した。以下の構造：
【００１０】
【化１】
2019501167.tif 000003
【００１１】
を有する、「ａｎｌｅ１３８ｂ」と呼称される化合物は、パーキンソン病（ＰＤ）（１，２）、アルツハイマー病（ＡＤ）（３）、及びクロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）（１，２）を模倣する動物モデルにおけるオリゴマー形成を調節するのに有効であることが確認された。オリゴマー誘発性の神経毒性の機序であり得る膜穿孔も、ａｎｌｅ１３８ｂによって阻害されることが示され得た（１）。
【００１２】
タンパク質凝集は不断に起きていて、神経機能障害と神経細胞損失をもたらすので、神経保護的な治療であれば、治療薬剤の慢性的な適用が求められよう。そのような療法では、慢性的な投薬で、そして有効な化合物濃度で毒性のないことが求められる。上記に記載したようないくつかのマウスモデルでは、１年以上の処置下でのａｎｌｅ１３８ｂの無毒性が示されている。必要な経口用量を最少化しても有効な化合物レベルに達するために、治療化合物はまた、経口適用後きわめて効率的に再吸収されるべきである。有効であるために、この治療薬剤は、経口で適用された後で腸管へ移行する必要があり、そこで吸収されて、タンパク質凝集によって影響を受ける組織へ血流を介して輸送されることが示された。故に、該化合物は、血液脳関門を通過することが可能であるはずである。有効であるために、血流への取込み前の該化合物の腸管中の濃度は、十分に高くなければならない。
【００１３】
しかしながら、３，５−ジフェニル−ピラゾール（ＤＰＰ）誘導体は、タンパク質の凝集を阻害するのに有効であることが示された一方で、ＤＰＰ誘導体はまた、水溶液にほとんど溶けないことが特徴であることがわかった。例えば、ａｎｌｅ１３８ｂの水中溶解度は、０．２μＭである。
【００１４】
この問題は、ａｎｌｅ１３８ｂの場合、該化合物をＤＭＳＯに希釈でして、その希釈化合物をオイル又はピーナッツバターに分散させることによって対処されてきた。ＤＭＳＯでは、１分量のａｎｌｅ１３８ｂを２分量のＤＭＳＯに溶かすことができる。そのようなオリーブオイル／ＤＭＳＯ懸濁液剤からの再吸収はきわめて効率的であることが分かっている。この組成物は、マウスとラットでは、十分忍容されることが証明された。しかしながら、ＤＭＳＯは、ヒトでの経口適用に受容されるものではない。故に、代わりの適用法を検討しなければならなかった。
【００１５】
１つのさらなるアプローチは、乾燥化合物を粉砕して、乾燥したマウス／ラットの食餌とそれを混合することであった。しかしながら、このことは、受容される物質レベルをマウスでのみもたらして、ラットではもたらさなかった。薬物動態試験は、ラットが該化合物をその乾燥食餌から吸収しないことを示した。この適用のやり方は、ヒト患者への長期療法にも適していない。
【００１６】
さらなるアプローチは、該治療薬剤をその水溶性を高めるように修飾することであった。先行技術では、リン酸塩、エステル、又はＰＥＧ化合物の使用により化合物の溶解度を高めることが考察された。ラットでは、ＰＥＧ／クレモフォール（cremophor）に基づく賦形剤とａｎｌｅ１３８ｂを組み合わせることによって、ｓｅｒｙ４３３の投与によって到達されるａｎｌｅ１３８ｂ曝露の２５％の曝露を達成し得ることがわかった。しかしながら、このアプローチには、いくつかの欠点がある。第一に、１のａｎｌｅ１３８に対して２０ほどの賦形剤の容量を使用しなければならないこと、そして第二に、ヒトを含めたいくつかの動物種では、この賦形剤が十分に忍容されないことである。例えば、クレモフォールは、ヒトにおいてアレルギー反応を誘発する。さらに、賦形剤が高額である上に、このカプセル剤の容量は、水溶性散剤での適用で求められる容量より数倍大きくなるだろう。さらに、臨床診療では、神経変性に罹患しているが故にしばしば嚥下に問題を抱える患者が多数の大型カプセル剤を服用する必要があるとなれば、コンプライアンスを危うくする可能性がある。
【００１７】
ａｎｌｅ１３８ｂの水溶性を高めることは、ａｎｌｅ１３８ｂの水溶性が０．２μＭ（即ち、７０ｎｇ／ｍｌ）にすぎないので、特に挑戦的であることがわかった。この溶解度は、系列の「凡庸（brickdust）」化合物、ＤＰ−ＴＡＴ−５９のそれよりずっと低いのである（４）。故に、この治療薬剤の成功する水溶性誘導体の設計は、先行技術において示唆されるアプローチを単に適用するだけでは克服し得ない、喫緊の課題なのである。
【００１８】
治療薬剤の成功する有効な誘導体を設計するには、その水溶性とバイオアベイラビリティを高めながらも、該薬剤の治療特性を維持しなければならない。例えば、治療化合物の修飾は、血流へ取り込まれることが可能であるように、腸管へ主に単分散型で送達される治療化合物をもたらす必要がある。非修飾の治療化合物の他のポジティブな特徴も維持されるか又はさらに改善される必要がある。例えば、修飾された化合物は、保存の間、そして経口から腸管への通過の間、安定でなければならない。それはまた、治療上の使用に適しているためには、毒性のないままでなければならない。
【００１９】
これらの化合物のよくある修飾品がいくつか試されてきたが、そのほとんどは、不安定であるか又は有用な血漿レベルに達しない、又はその両方である。
【発明の概要】
【００２０】
このように、本発明によって解決すべき課題は、タンパク質凝集に関連した疾患を治療することにおける使用に適した３，５−ジフェニル−ジアゾール化合物を、安定していて、治療上有用な濃度で適用し得て、好ましくは腸管において単分散溶液を提供する形態において提供することである。好ましくは、この３，５−ジフェニル−ジアゾール化合物は、多量の賦形剤と混合する工程を必要とせず、各投薬につき少量で達成することができる形態で提供されるべきである。特に、本発明の目的は、経口投与に使用することができる、水溶性型の３，５−ジフェニル−ジアゾール化合物を提供することである。さらに、上記の疾患は脳に影響を及ぼすので、該化合物の有効部分が血液脳関門を通過し得て、脳へ輸送され得る（即ち、化合物が腸管中で放出された後に安定したままであって、治療に十分である血漿レベルに達する）ことも必要である。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
本発明はまた、以下の図面を参照して説明される。
【図１】図１は、ｓｅｒｙ４３３（ａｎｌｅ１３８ｂのプロドラッグ）のＨＰＬＣ分析のクロマトグラムを示す。
【図２】図２は、ａｎｌｅ４２３ｂ（ａｎｌｅ２５３ｂのプロドラッグ）のＨＰＬＣ分析のクロマトグラムを示す。
【図３】図３は、１ｍｇ用量のプロドラッグ、ｓｅｒｙ４３３の適用後のマウスの組織におけるａｎｌｅ１３８ｂの濃度を示す。
【図４】図４は、プロドラッグｓｅｒｙ４３３の適用後のラットの血漿試料における、ａｎｌｅ１３８ｂの経時的な濃度を示す。この実験では、ＰＥＧ／クレモフォール中のａｎｌｅ１３８ｂ（「フェーズ１」）と水溶液中のｓｅｒｙ４３３（「フェーズ２」）の単回経口用量を１０ｍｇ／ｋｇの名目用量で雄性スプリーグ・ドーリー（Sprague Dawley）ラットへ投与した。この実験は、「１Ｍ」、「２Ｍ」及び「３Ｍ」と識別した３匹のラットで実行した。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
定義
本記載と特許請求の範囲では、以下の意味を有すると定義される、数多くの用語に言及する：
「３，５−ジフェニル−ジアゾール化合物」は、本発明の文脈において、２つの置換又は未置換フェニル基によって、３位と５位、又は２位と４位、又は２位と５位で置換されたジアゾールコアを有する化合物を意味する。このジアゾールコアは、ピラゾールからか又はイミダゾールから誘導される。換言すると、本発明の３，５−ジフェニル−ジアゾール化合物は、特に、３，５−ジフェニル−ピラゾール（ＤＰＰ）化合物又は２，４−ジフェニル−イミダゾール（ＤＰＩ）又は２，５−ジフェニルイミダゾール（ＤＰＩ）化合物であり、ここで該フェニル基は、置換又は未置換であり得る。あるＤＰＰ化合物が開示される場合はいつでも、その開示は、文脈が許容する限りにおいて、対応するＤＰＩ化合物にも適用されると理解される。
【００２３】
本発明の化合物のジアゾールコアは、２つの互変異性型で存在することが可能である。「ジアゾール」という用語には、それぞれの互変異性型単独、並びに両者の混合物が含まれる。
【００２４】
「ａｎｌｅ１３８ｂ」という用語は、５−（３−ブロモフェニル）−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾールとしても知られている治療薬剤について記載するために使用される。該化合物のピラゾール環は、２つの互変異性型で存在する：
【００２５】
【化２】
2019501167.tif 000004
【００２６】
故に「ａｎｌｅ１３８ｂ」は、以下の構造式によって記載することができる：
【００２７】
【化３】
2019501167.tif 000005
【００２８】
本明細書において、上記に言及した構造の１つが開示されるときはいつでも、他の構造、並びに両構造の混合物も含まれると企図される。本発明のジアゾール誘導体、例えば、ｓｅｒｙ３３５ｂとａｎｌｅ２５３ｂのような、本発明のＤＰＰ誘導体について記載する他の構造式へも同じことが適用される。
【００２９】
「タンパク質凝集に関連した疾患」という用語は、少なくとも１つのタンパク質又はその断片又は誘導体の凝集型の存在を特徴とするすべての状態、障害、又は疾患について使用され、ここで該タンパク質は、好ましくは、プリオンタンパク質、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、α−シヌクレイン、スーパーオキシドジスムターゼ、タウ、免疫グロブリン、アミロイド−Ａ、トランスサイレチン、β２−ミクログロブリン、シスタチンＣ、アポリポプロテインＡ１、ＴＤＰ−４３、膵島アミロイドポリペプチド、ＡＮＦ、ゲルゾリン、インスリン、リゾチーム、フィブリノゲン、ハンチンチン、及びアタキシン、並びにポリＱストレッチがある他のタンパク質からなる群より選択される。
【００３０】
「プリオン病」又はＴＳＥという用語は、プリオン（即ち、ミスフォールドして、他のタンパク質分子のミスフォールディングを誘発するタンパク質）の形成によって引き起こされるすべての状態、障害、又は疾患について使用される。プリオン病の例には、散発性及び遺伝性クロイツフェルト・ヤコブ病、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ）、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）の感染性因子によって引き起こされるヒト障害、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群、致死性家族性不眠症、及びクールーが含まれる。他の哺乳動物のＴＳＥには、畜牛のＢＳＥ、ヒツジ及びヤギのスクレイピー、ネコの猫海綿状脳症（ＦＳＥ）、ミンクの伝達性ミンク脳症（ＴＭＥ）、ニアラ（Nyala）及びクーズー（Greater Kudu）の外来有蹄類脳症（ＥＵＥ）、並びにシカ及びエルクの慢性消耗症（ＣＷＤ）が含まれる。
【００３１】
「神経変性疾患」という用語には、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）のような伝達性海綿状脳症（ＴＳＥ）、老年性認知症、ＡＡアミロイドーシス、動脈硬化性認知症、ハンチントン病（ＨＤ）、脳閉塞性血栓血管炎、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、前頭側頭型認知症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄小脳失調症、及び他のポリＱ病、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、遺伝性脳アミロイド血管症、家族性アミロイド多発性神経障害、原発性全身性アミロイドーシス（ＡＬアミロイドーシス）、反応性全身性アミロイドーシス（ＡＡアミロイドーシス）、ＩＩ型糖尿病、注射限局性アミロイドーシス、β−２ミクログロブリンアミロイドーシス、遺伝性非神経障害性アミロイドーシス、及びフィンランド型遺伝性全身性アミロイドーシスのような疾患又は状態が含まれる。
【００３２】
最も蔓延しているのは、現在、欧州、日本、及び米国において約７００万人の患者が罹患しているアルツハイマー病であって、その特徴は、アミロイド斑とタウタンパク質を生成して神経原線維のもつれを生じさせる、Ａβタンパク質の凝集である。タウの凝集は、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、及び前頭側頭型認知症（ピック病（Morbus Pick）が含まれる）の原因とも見られている。
【００３３】
パーキンソン病は、現在、上記に列挙した国々において約３５０万人の患者が罹患していて、レビー小体を形成するα−シヌクレインの凝集を特徴とする。多系統萎縮症（ＭＳＡ）とレビー小体病（ＬＢＤ）も、α−シヌクレインの凝集に関連している。
【００３４】
クロイツフェルト・ヤコブ病は、欧州において年間約５００名の新規患者がいる、さほど蔓延していない散発型の疾患である。新たな食肉処理規則により、若年性ＣＪＤの発生は多少なりとも根絶されてきた。タンパク質の凝集に関連しているさらなる神経変性疾患は、ハンチントン病（ＨＤ）、並びに筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である。
【００３５】
「タンパク質のミスフォールディング障害」（ＰＭＤ）又はプロテオパチー（proteopathy）という用語は、ある種のタンパク質が構造的に異常になることにより身体の細胞、組織、及び臓器の機能が破壊される、疾患、障害、又は状態について記載するために使用される。ニューロンが罹患細胞である、上記に言及したプリオン病と神経変性障害以外に、他の細胞種も、タンパク質ミスフォールディングによって影響を受ける可能性がある。１つの例は、２型糖尿病であり、ここではタンパク質のアミリン（「膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）」とも呼ばれる）が糖尿病に関連した膵島アミロイド沈着の主要因子である。
【００３６】
「プロドラッグ」という用語は、薬理学的に不活性な形態で患者へ投与されてから、正常な代謝プロセスにより活性型へ変換される化合物について記載するために使用される。故に、「プロドラッグ」は、薬物の前駆体となる化学化合物である。本発明の誘導体は、プロドラッグとして使用される。
【００３７】
本発明の記載
本発明は、タンパク質ミスフォールディング／凝集に関連した疾患を治療することに使用への治療薬剤の誘導体の提供に関わる。治療薬剤の誘導体である、本発明のジアゾール化合物誘導体（プロドラッグとも呼ばれる）は、水溶性であって、十分高い濃度で、患者の腸管へ経口投与することができる。このプロドラッグは、通常の保存条件下で安定している。本発明のプロドラッグは、治療濃度で毒性がなく、それ故に、長期の期間でも患者を治療することにおける使用に適している。このプロドラッグ（即ち、請求項１に特許請求されるような化合物）は、治療上不活性であるが、患者の体内で生理活性のある薬物へ変換されるはずである。
【００３８】
本出願において特許請求される化合物は、本発明の方法によって製造することができる、３，５−ジフェニル−ジアゾール化合物の水溶性誘導体である。好ましくは、該化合物は、３，５−ジフェニル−ピラゾール化合物のａｎｌｅ１３８ｂ、ｓｅｒｙ３３５ｂ、ｓｅｒｙ３４５、及びａｎｌｅ２５３ｂを含んでなる群より選択される。
【００３９】
上記に概説したように、本発明のジアゾール化合物は、互変異性体として存在し得て、この２つの互変異性体のそれぞれが、化合物の名称又は式より当業者によって、すべての化合物について推論可能である。故に、それぞれの互変異性体だけでなく、両方の互変異性体／異性体のあらゆる比の混合物も含まれる。さらに、以下では、上記に言及した３種の化合物のそれぞれ１つの互変異性体／異性体の構造を示すが、当業者によってすべての化合物について推論可能である他の異性体だけでなく、両方の互変異性体／異性体のあらゆる比の混合物も含まれる。
【００４０】
ａｎｌｅ１３８ｂ（５−（３−ブロモフェニル）−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾール）は、以下の構造によって定義される：
【００４１】
【化４】
2019501167.tif 000006
【００４２】
ｓｅｒｙ３３５ｂ（５−（３−クロロフェニル）−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾール）は、以下の構造によって定義される：
【００４３】
【化５】
2019501167.tif 000007
【００４４】
ａｎｌｅ１３８ｂよりさらに溶解しないａｎｌｅ２５３ｂは、以下の構造によって定義される：
【００４５】
【化６】
2019501167.tif 000008
【００４６】
ｓｅｒｙ３４５は、以下の構造によって定義される：
【００４７】
【化７】
2019501167.tif 000009
【００４８】
これらの化合物は、タンパク質凝集が関与する疾患を治療する場合のその効力により知られている。例えば、ａｎｌｅ１３８ｂには、ニューロンの機能性を回復させる能力がある（１，２）。しかしながら、これらの化合物は、そのごく低い水溶性によっても特徴付けられて、このことは、経口投与用の医薬調製品ではより所望されない。今回、本発明では、安定していてヒトでの経口使用に適したプロドラッグである誘導体を提供する。
【００４９】
本発明者は、驚くべきことに、３，５−ジフェニル−ピラゾール化合物又は３，５−ジフェニル−イミダゾール化合物のジアゾール環中の１つの窒素でのリン酸メチルの置換により、安定性を損なうことなく水溶性が改善することを見出した。本発明によるこの化学修飾は、以下の異性体構造によって定義される、上記の重要な治療薬剤のプロドラッグの提供をもたらす：
【００５０】
【化８】
2019501167.tif 000010
【００５１】
［式中、ＹとＺの一方はＮであって、他方はＣＲ２であり；
ここでＲ２は、水素、Ｃ１−４アルキル、少なくとも１個のハロゲンで置換されるＣ１−４アルキル；及びＣ６−１０アリール（ここで該アリール環は、Ｃ１−４アルキル又はハロゲンによって置換されていてもよい）より選択され；
式中、どちらかのＸは、
【００５２】
【化９】
2019501167.tif 000011
【００５３】
であって、Ｈａｌは、塩素又は臭素より選択されるハロゲンである、又は
式中、Ｘは、
【００５４】
【化１０】
2019501167.tif 000012
【００５５】
であって、Ｈａｌは、臭素であり；そして
式中、それぞれのＲは、独立して、水素又はカチオンである］。
好ましい態様において、本発明の化合物は、以下の異性体構造：
【００５６】
【化１１】
2019501167.tif 000013
【００５７】
［式中、Ｈａｌは、塩素又は臭素より選択されるハロゲンであり、そして式中、それぞれのＲは、独立して、水素又はカチオンより選択される］によって定義される。
さらに好ましい態様において、本発明の誘導体は、以下の異性体構造：
【００５８】
【化１２】
2019501167.tif 000014
【００５９】
［式中、それぞれのＲは、独立して、水素又はカチオンより選択される］がある、ａｎｌｅ２５３ｂのプロドラッグである。
このカチオンは、この種の化合物にとって医薬的に許容される、どのカチオンでもよい。好ましくは、該カチオンは、一価カチオンである。例は、ナトリウム、リチウム、カリウム、アンモニウムであり、特にナトリウムである。本発明の化合物のリン酸基と適合可能な基のさらなる例には、エタノールアミン、コリン、リジン、メグルミン、ピペラジン、及びトロメタミンといった、ＲＲ’Ｒ’’Ｎ構造の基がそのプロトン化型：ＲＲ’Ｒ’’ＮＨ＋で含まれる。本発明の化合物では、両方のＲが水素であり得る、両方のＲがカチオン（同じ又は異なるカチオン）であり得る、又は一方のＲが水素であり得て、他方がカチオンであり得る。Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、及びＺｎ２＋のような二価カチオン、又はＡｌ３＋のような三価カチオンは、生じる塩がより水溶性でないので、好ましくない。
【００６０】
さらに、本発明のリン酸メチル誘導体の遊離酸型（Ｒ＝Ｈ）も、プロドラッグとして適している。
本発明はまた、請求項１に定義されるような化合物の少なくとも１つを含む医薬組成物を提供する。本発明によれば、「医薬組成物」という用語は、患者、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトへの投与用の組成物に関する。本発明の医薬組成物は、上記に引用した化合物を含んで、本発明の化合物の特性を改変して、それによって、例えば、それらの機能を安定化する、調節する、及び／又は活性化することが可能なさらなる分子を含んでもよい。該組成物は、固体、液体、又は気体の形態であり得る。
【００６１】
本発明の医薬組成物は、経口、直腸、非経口、嚢内、膣内、腹腔内、局所的（散剤、軟膏剤、滴剤、又は経皮パッチ剤によるように）、経皮的、動脈内注射によって、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、頬内に、又は口腔又は経鼻スプレー剤として投与し得る。好ましくは、該医薬組成物は、経口投与されるべきである。
【００６２】
経口投与に関して言えば、本発明の医薬組成物は、例えば、錠剤、丸剤、散剤（溶解用の散剤が含まれる）、甘味入り錠剤（lozenge）、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁液剤、乳液剤、溶液剤、シロップ剤、エアゾール剤、又はカプセル剤の形態で、好ましくは、錠剤、丸剤、又は散剤（溶解用の散剤が含まれる）の形態で提供することができる。所望されるならば、該医薬組成物、そして特に上記に言及した経口製剤は、それらが迅速、持続、又は遅延放出、及び／又は身体を通過するある段階での放出（例えば、腸溶コーティング剤による）を提供するように、製剤化することができる。
【００６３】
本明細書に記載されるような医薬組成物は、製剤技術において通常使用される、１以上の医薬的に許容される添加剤［例えば、特に、フィードラー（Fiedler）の「Lexikon der Hilfstoffe（添加剤辞典）」（第５版）、Editio Cantor Verlag Aulendorf（2002）、「The Handbook of Pharmaceutical Excipients（医薬賦形剤ハンドブック）」（第４版）、American Pharmaceuticals Association（2003）において言及されるような］を使用して製剤化し得る。医薬的に許容される添加剤は、担体、希釈剤又は充填剤、結合薬剤／結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動化剤、安定化剤、界面活性剤、膜形成剤、軟化剤、湿潤剤、甘味剤、色素／着色剤、抗酸化剤、保存剤、等より選択され得る。好適な担体、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、及び流動化剤は、例えば、医薬的に許容される添加剤として本明細書の下記により詳しく記載されるものであり得る。そのような添加剤を含んでなる組成物を慣用の方法によって製剤化することができる。
【００６４】
好適な担体には、制限なしに、マンニトール、ソルビトール、キシリトールのようなポリオール類；乳糖（lactose）、ショ糖（sucrose）、ブドウ糖（dextrose）、及び麦芽糖（maltose）のような二糖類；マルトデキストリン及びデキストランのような多糖類；ドウモロコシデンプンのようなデンプン類；微結晶性セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、又はこれらの混合物のようなセルロース類；シクロデキストリン類、及びリン酸二カルシウム、リン酸水素カルシウム、ハイドロキシアパタイト、リン酸三カルシウム、タルカム、及びシリカのような無機薬剤が含まれる。
【００６５】
好適な結合剤には、制限なしに、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ゼラチン化デンプン、及びこれらの組合せが含まれる。
【００６６】
好適な崩壊剤には、制限なしに、カルボキシメチルセルロースカルシウム（ＣＭＣ−Ｃａ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ）、架橋型ＰＶＰ（例、クロスポビドン、Ｐｏｌｙｐｌａｓｄｏｎｅ（登録商標）、又はＫｏｌｌｉｄｏｎ（登録商標）ＸＬ）、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、グアーガム、架橋型ＣＭＣ（クロスカルメロースナトリウム、例、Ａｃ−Ｄｉ−Ｓｏｌ（登録商標））、カルボキシメチルデンプンＮａ（デンプングリコール酸ナトリウム）（例、Ｐｒｉｍｏｊｅｌ（登録商標）又はＥｘｐｌｏｔａｂ（登録商標））が含まれる。
【００６７】
好適な滑沢剤には、制限なしに、ステアリン酸マグネシウム、ケイ酸アルミニウム又はカルシウム、ステアリン酸、硬化ヒマシ油、タルク、ベヘン酸グリセリル、フマル酸ステアリルナトリウム（sodium stearate fumarate）、及びこれらの組合せが含まれる。
【００６８】
好適な流動化剤には、制限なしに、コロイド状ＳｉＯ２（例、Ａｅｒｏｓｉｌ（登録商標）２００）、三ケイ酸マグネシウム、粉末セルロース、タルク、及びこれらの組合せが含まれる。
【００６９】
このように、錠剤は、微結晶性セルロース、乳糖、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、二塩基性リン酸カルシウム、及びグリシンのような賦形剤、デンプン（例えば、トウモロコシ、ジャガイモ、又はタピオカデンプン）、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、及び特定の複合ケイ酸塩のような崩壊剤、並びにポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ショ糖、ゼラチン、及びアカシアのような造粒結合剤を含有し得る。追加的に、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル、及びタルクのような滑沢剤も含めてよい。
【００７０】
類似種の固体組成物も、ゼラチンカプセル剤中の充填剤として利用し得る。この点で好まれる賦形剤には、乳糖、デンプン、セルロース、又は高分子量ポリエチレングリコールが含まれる。
【００７１】
さらに、本明細書に記載されるような医薬組成物／剤形は、膜形成ポリマー、乳白剤、着色剤、及び可塑剤の混合物のような市販のコーティング材料を使用する、当業者によく知られたコーティング法を使用し、フィルムコーティング剤又は放出調節（modified release）コーティング剤を利用して、コート化し得る。
【００７２】
さらに好適な賦形剤のリストが、「Remington’s Pharmaceutical Sciences（レミントン製剤科学）」第18版（Alfonso R. Gennaro 監修; Mack Publishing Company、ペンシルヴェニア州イーストン（1990））；「Remington: the Science and Practice of Pharmacy（レミントン：調剤の科学及び実践）」第19版（Lippincott, Williams & Wilkins、1995)；「Handbook of Pharmaceutical Excipients（医薬賦形剤ハンドブック）」第3版（Arthur H. Kibbe 監修; Amer. Pharmaceutical Assoc、 1999）；「the Pharmaceutical Codex: Principles and Practice of Pharmaceutics（医薬品コーデックス：医薬品の原理と実践）」第12版（Walter Lund 監修; Pharmaceutical Press、ロンドン、1994);「The United States Pharmacopeia: The National Formulary（米国薬局方：国民医薬品集）」(United States Pharmacopeial Convention); 及び「Goodman and Gilman's: the Pharmacological Basis of Therapeutics（グッドマン及びギルマンの薬理書）」（Louis S. Goodman and Lee E. Limbird, 監修; McGraw Hill、1992）のような教科書にも見出し得て、その開示は、参照により本明細書に取り込まれる。
【００７３】
本明細書に記載されるような剤形は、例えば、「Pharmazeutische Technologie（製剤技術）」 第11版、Deutscher Apotheker Verlag（2010）、又は「Pharmazeutische Techologie（製剤技術）」 第9版、Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft Stuttgart（2012）に記載されるような、当業者によく知られた方法に従って製剤化し得る。
【００７４】
該医薬組成物は、個々の患者の臨床状態、医薬組成物の送達部位、投与の方法、投与の計画、及び医療実施者に知られた他の要因を考慮に入れた、良好な医療実務に一致したやり方で製剤化されて投薬されるものである。このように、本発明での目的のための医薬組成物の「治療有効量」は、そのような考慮事項によって決定される。
【００７５】
典型的には、個々の対象に最も適していると見込まれる実際の投与量を決定するのは、医師である。どの特別な個人への具体的な用量レベルと投与の頻度も変動する場合があって、利用される特定の化合物、投与の様式及び時間、特別な状態の重症度、及び治療を受けている個人（年齢、体重、健康状態、性別、等）が含まれる様々な要因に依拠するものである。
【００７６】
医薬組成物は、好ましくは、単位剤形で提供される。本発明の化合物は、典型的には、治療有効量で投与される。この量は、特に制限されないで、ヒト（概ね７０ｋｇの体重）への投与について提唱される、本発明による化合物の用量は、単位用量につき約１０〜約１０００ｍｇ、好ましくは約５０〜約５００ｍｇの有効成分である。この単位用量は、例えば、１日１〜４回投与し得る。この用量は、投与経路に依存するものである。患者の年齢及び体重、並びに治療される状態の重症度に依拠して投与量を定型的に変化させなければならない場合があることが理解されよう。正確な用量と投与の経路は、最終的には、担当医師の裁量によるものである。
【００７７】
該組成物は、本発明の化合物の一方の異性体型又は両方の異性体型を含むことが可能である。該組成物はまた、１より多い化合物を含み得て、組成物中に使用される化合物のいずれも、両方の異性体の一方であっても、それらの混合物であってもよい。従って、上記に言及した疾患の治療における使用のための医薬組成物は、異性体の一方又は両方の異性体の混合物を含み得る。体内では、両方の異性体型が生理活性薬へ変換される。
【００７８】
１つの態様において、本発明の化合物は、水溶液に溶けた形態で提供される。本発明において、「溶解型」は、本発明の化合物が選択された濃度で、室温（例、２５℃）で溶媒中に完全に溶けていて、不溶性の化合物を肉眼では見ることができないことを意味する。
【００７９】
本発明のリン酸二ナトリウム誘導体は、安定していて、脳及び血液において高レベルの活性化合物を生じることがわかった。
好ましい態様において、該化合物は、以下の構造の１つのリン酸二ナトリウム塩又はそれらの混合物である：
【００８０】
【化１３】
2019501167.tif 000015
【００８１】
好ましい態様において、本発明の誘導体は、治療薬剤ａｎｌｅ１３８ｂのメチルリン酸二ナトリウム（即ち、Ｈａｌが塩素又は臭素である、上記に示した化合物）である。前者の誘導体は、ｓｅｒｙ３３５ｂと呼ばれて、後者の誘導体は、ｓｅｒｙ４３３と呼ばれる。いずれも、異性体の一方の形態であっても、両方の異性体の混合物でもよい。異性体のｓｅｒｙ４３３ａ又はｓｅｒｙ４３３ｂを下記に示す：
【００８２】
【化１４】
2019501167.tif 000016
【００８３】
好ましい態様において、ｓｅｒｙ４３３は、例えば、２Ｄ−ＮＯＥＳＹ  ＮＭＲによって得られる実験データによればｓｅｒｙ４３３ｂ：ｓｅｒｙ４３３ａ＝２：３の比である、ｓｅｒｙ４３３ａとｓｅｒｙ４３３ｂの異性体混合物である。体内では、両方の異性体型が生理活性薬へ変換される。
【００８４】
驚くべきことに、本発明による化学修飾は、以下の好ましい特性のある治療化合物を提供することを見出した：
・正常な代謝プロセスを介した、活性型への効率的な変換
・通常の保存条件下での安定性
・改善された水溶性
・活性化合物の改善されたバイオアベイラビリティ
・非毒性、及び
・口腔から腸管への通過の間の安定性
改善された水溶性、並びに増加したバイオアベイラビリティの故に、本発明の化合物は、顕著により少量の医薬的に許容される添加剤の中で提供することが可能である。このことは、患者コンプライアンスを向上させる。さらに、通常の医薬的に許容される添加剤を利用することが可能である。それと対照的に、ａｎｌｅ１３８ｂでは、このきわめて脂溶性の化合物を投与するために、特別な添加剤（クレマフォアのような）が必要とされた。従って、本発明の化合物は、好ましくも、長期適用のために使用することができる。最後に、標準的な添加剤の使用により、本発明の化合物は、錠剤、丸剤、又は散剤（溶解用散剤が含まれる）といった標準剤形で容易に提供し得て、カプセル剤のようなより複雑な剤形でそれらを提供する必要はない。
【００８５】
下記に提示する実施例からわかるように、いくつかの他のプロドラッグアプローチが失敗してきただけに、上記に言及した利点が今回特許請求される化合物で達成され得ることは、全く驚くべきである。
【００８６】
本発明のプロドラッグは、親化合物に比べて改善された、その水溶液中での溶解性を特徴とする、修飾された３，５−ジフェニル−ジアゾール誘導体である。好ましいプロドラッグのｓｅｒｙ４３３では、ａｎｌｅ１３８ｂ／賦形剤での投与より４倍高いａｎｌｅ１３８ｂの曝露が達成される。従って、高用量の添加剤に対する不忍容性に伴う欠点が回避されて、より少量及び／又はより小型のカプセル剤／錠剤を必要とする好ましい投与プロトコールを実施することができる。
【００８７】
本発明のプロドラッグは、きわめて高い水溶性を特徴とする（実施例８を参照のこと）。本発明のプロドラッグはまた、水中でのその安定性を特徴とする（実施例９を参照のこと）。
【００８８】
本発明の誘導体を使用するとき、治療活性化合物は、治療有用量で脳と血液中に見出される。理論に束縛されずに言えば、その治療活性化合物は、膜結合性の腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）によって本発明のプロドラッグより遊離して、それによって腸管上皮に接近して、そこで血流の中へ直接移行すると想定される。おそらく、該化合物は、主に単分散型で遊離されるので、腸管から血液へ取り込まれることが可能なのであろう。本発明のプロドラッグの薬物動態特性は、マウスとラットの脳と血液において、治療上有用な活性化合物のレベルをもたらす（実施例１０と実施例１１を参照のこと）。最も重要にも、本発明のプロドラッグ、ｓｅｒｙ４３３についての薬物動態評価は、ＡＵＣとＣｍａｘの数値によって示されるように、曝露の顕著な改善を明らかにした。具体的には、プロドラッグｓｅｒｙ４３３の投与は、賦形剤ＰＥＧ／クレモフォールにおけるａｎｌｅ１３８ｂの適用に比較して、ＣｍａｘとＡＵＣのいずれに関しても、プロドラッグｓｅｒｙ４３３の場合に、ほぼ４倍の顕著に高いａｎｌｅ１３８ｂの全身曝露をもたらす（図面４を参照のこと）。
【００８９】
例えば、活性化合物のａｎｌｅ１３８ｂは、プロドラッグのｓｅｒｙ４３３より、膜結合性腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）による該化合物からのリン酸基の酵素的切断によって、腸壁で遊離される。理論に束縛されずに言えば、活性化合物の血液及び脳中での高レベルが可能であるのは、この活性化合物の腸壁での濃度が該活性化合物の沈殿をもたらす濃度未満であるからと考慮される。さらに、ＩＡＰは、切断する際に治療活性化合物を腸管の内腔へ遊離させるわけではなく、血液中への受動輸送のために該化合物が腸管膜上に渡るまで及び腸間膜を通過するまで、該化合物を保持し続けると考慮される。
【実施例】
【００９０】
本発明の好ましい態様について以下の実施例において概説するが、これを本発明の範囲及び精神を制限するものと解釈してはならない。
化合物を水溶性にする（即ち、それを帯電化する）ために脂溶性化合物を可溶化する様々な概念が存在する。このようなアプローチに関する最近の概説が Chem. Biodiversity 中の Muller（７）によって示されている。これまでの例では、様々な概念が検証されてきたが、そのほとんどは有用な生成物をもたらさなかった。
【００９１】
以下の実施例では、本発明の誘導体の製造と、比較のために、プロドラッグを創出するさらなるアプローチについて例証する。
材料と方法
出発材料と溶媒は、いずれも ABCR、Acros、Alfa Aesar、Fluorochem、シグマ・アルドリッチ、又はメルクより購入して、特に断らなければ、そのまま使用した。融点は、オープンガラス毛細管を使用する、Stuart Scientific（ビッビィ、イギリス）融点測定装置で決定して、補正しない。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：Macherey-Nagel プレコートシート、０．２５ｍｍ  ＡＬＵＧＲＡＭ（登録商標）ＳＩＬ  Ｇ／ＵＶ２５４プレート、ＵＶで検出、及び／又は１０重量％のエタノール性リンモリブデン酸試薬で焦がした後に２００℃で加熱。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、Merck シリカゲル６０（０．０６３〜０．１００ｍｍ）を使用することによって実施した。分析用及び分取用の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、Waters ＨＰＬＣシステムを Waters 996 フォトダイオードアレイ検出器とともに使用することによって実施した。いずれの分離も、水中０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（ｖ／ｖ）（溶媒Ａ）とアセトニトリル中０．１％  ＴＦＡ（溶媒Ｂ）の移動相を伴った。ＨＰＬＣは、逆相（ＲＰ）カラムの Eurospher RP 18，１００Ａ（オングストローム）、５μｍ，２５０×４．６ｍｍ（分析用）と２５０×１６ｍｍ（分取用）を１ｍＬ／分（分析用）と７ｍＬ／分（分取用）の流速で使用することによって実施した。エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）と液体クロマトグラフィー／質量分析法（ＬＣ／ＭＳ）の分析は、Waters Micromass ZQ 4000 質量分析計を上記の Waters ＨＰＬＣ装置に連結して使用することによって入手した。高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）は、Thermo Scientific LTQ Orbitrap XL ハイブリッド FTMS 質量分析計を使用することによって記録して、ｍ／ｚで報告する。ＮＭＲスペクトルは、２９８Ｋの温度で、TXI HCN ｚ−勾配プローブを取り付けた 400 MHz Bruker Avance 分光計（Bruker AG，ラインシュテッテン、ドイツ）を使用することによって記録した。いずれのスペクトルも、TOPSPIN2（Bruker AG，カールスルーエ、ドイツ）を使用することによって処理した。１Ｈ  ＮＭＲ化学シフト（δ）は、内部標準としてのＣＨＣｌ３と［Ｄ５］ＤＭＳＯに対する百万分率（ｐｐｍ）で報告する。データを以下のように報告する：化学シフト、多重性（ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｂ＝ブロード、ｍ＝多重項）、カップリング定数（Ｊ、Ｈｚで示す）、積分。１３Ｃ  ＮＭＲ化学シフト（δ）は、内部標準としてのＣＤＣｌ３と［Ｄ６］ＤＭＳＯに対する百万分率（ｐｐｍ）で報告する。以下の実験を使用して、化合物の共鳴を記録した：１Ｈ−１Ｄ、１３Ｃ−１Ｄ  ＮＭＲスペクトルと１３Ｃ−ＡＰＴ（１／１４５ｓの単一Ｊ放出時間での付属プロトンテスト、四級基とメチレン基が正符号を有して、メチル基とメチン基が負符号を有するようにスペクトルを処理する）。いくつかの化合物では、１Ｈ及びＡＰＴスペクトルにおける共鳴の重なりを分解して未検出の共鳴を復元するために、２Ｄ−［１３Ｃ，１Ｈ］−ＨＳＱＣ（異核種単一量子コヒーレンス法）、２Ｄ−［１３Ｃ，１Ｈ］−ＨＭＢＣ（異核多結合相関分光法）、及び２Ｄ−ＮＯＥＳＹを記録した。１，３−ジアリールプロパン−１，３−ジオンは、そのスペクトルではエノール型が優勢であるという事実に拘らず、図面ではジケトンとして提示する。
【００９２】
実施例１：ＩＡＰによって切断される可能性がある、ｓｅｒｙ４３３（ａｎｌｅ１３８ｂのプロドラッグ）の合成
【００９３】
【化１５】
2019501167.tif 000017
【００９４】
リン酸クロロメチルジｔｅｒｔ−ブチル（ｓｅｒｙ４３０）
化合物ｓｅｒｙ４３３は、公表されたプロトコール（７）に従って製造した。リン酸カリウムジｔｅｒｔ−ブチル（３５ｇ，１４１ミリモル）、Ｋ２ＨＰＯ４・３Ｈ２Ｏ（１２７ｇ，５５７ミリモル）、ｎ−Ｂｕ４ＮＨＳＯ４（４ｇ，１１ミリモル）、Ｈ２Ｏ（１２５ｍｌ）、及びｔＢｕＯＭｅ（１７０ｍｌ）の混合物へクロロ硫酸クロロメチル（３５ｇ，２１２ミリモル）のｔＢｕＯＭｅ（３５ｍｌ）溶液を連続的に激しく撹拌しながら０℃で２５分以内に滴下した。この添加が完了した後で、撹拌を室温で２時間続けた（この反応混合物は、内部温度が３０℃を超えたならば、冷やした）。この反応混合物をＨ２Ｏ（３５０ｍｌ）とｔＢｕＯＭｅ（２００ｍｌ）でクエンチし、有機相を分離し、１Ｍ  Ｋ２ＨＰＯ４水溶液（２００ｍｌ）、水（２００ｍｌ）、塩水（５０ｍｌ）で洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。硫酸ナトリウムを濾過し、その溶液へｎ−Ｂｕ３Ｎ（３ｍｌ）を加えて、この溶液を減圧下に濃縮して、生成物（３４．４ｇ，９４％）をオイルとして得た。フリーザー（−２１℃）中での保存の間の安定性を高めるために、この生成物へ追加分量のｎ−Ｂｕ３Ｎ（３ｍＬ）を加えた。
【００９５】
Ｓｅｒｙ４３２
ＤＭＳＯ（２００ｍｌ）中のａｎｌｅ１３８ｂ（１）（２５ｇ，７２．８ミリモル）、Ｃｓ２ＣＯ３（３５．６ｇ，１０９ミリモル）の混合物へリン酸クロロメチルジｔｅｒｔ−ブチル（２８．１ｇ，１０９ミリモル）を１分量で加えた。室温で５時間撹拌後、この反応混合物を水（１２００ｍｌ）で希釈して、ジエチルエーテル（５００＋２００＋１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機画分を水（５００ｍｌ）、塩水（１００ｍｌ）で洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。硫酸ナトリウムを濾過した後で、この溶液を減圧下に濃縮して、生成物（全量４９．５ｇ，４０．８ｇ  ｓｅｒｙ４３２，８２％，２：３の比である２種の異性体の混合物）をオイルとして得た。生じる生成物はまた、１Ｈ  ＮＭＲスペクトルに基づけば、１０．５％のｓｅｒｙ４３０と７．１％のＢｕ３Ｎを含有する。この生成物は、さらに精製せずに、次の工程に使用した。ｓｅｒｙ４３２は、２：３比の異性体の混合物である（１Ｈ  ＮＭＲ）。
【００９６】
Ｓｅｒｙ４３３
ｓｅｒｙ４３２（３４．４ｇ，６０．９ミリモル）のＤＣＭ（４００ｍｌ）中の冷却溶液へＴＦＡ（２３．５ｍｌ）を連続的に激しく撹拌しながら０℃で５分以内に加えた。２時間後、追加分量のＴＦＡ（２３ｍｌ）を加えて、この反応混合物を０℃で８時間撹拌した。冷トルエン（３００ｍｌ）で希釈後、この反応混合物を０℃で減圧下に濃縮し、残渣を冷トルエン（３００ｍｌ）と混合して、０℃でもう一度濃縮した（ＤＣＭを５０〜１００ミリバールで蒸発させ、ＴＦＡとトルエンを高真空ロータリーエバポレーターで蒸発させた）。生じる混合物を冷アセトニトリル（３００ｍｌ）で希釈して、０℃で１時間撹拌した。白色の沈殿を濾過して取って、減圧下に乾燥させて、酸型のｓｅｒｙ４３３（全量３１．０ｇ，２９．０ｇの酸型ｓｅｒｙ４３３と２ｇのアセトニトリル）を得た。この粗製の酸型ｓｅｒｙ４３３へ１Ｍ  ＮａＯＨ水溶液（１２９ｍｌ，１２９ミリモル、２当量）と水（８０ｍｌ）を加え、生じる溶液を濾過して（Millipore Express Plus フィルター）、濾液を凍結乾燥させて、ｓｅｒｙ４３３の二ナトリウム塩（３０．０ｇ，９９％，２：３の比である２種の異性体の混合物）を白色の粉末として得た。
【００９７】
本発明の誘導体である、ｓｅｒｙ４３３の２種の異性体を下記に示す。
【００９８】
【化１６】
2019501167.tif 000018
【００９９】
さらなるプロドラッグも製造した：
水溶液中での化合物の安定性は、ＮＭＲによって決定した。化合物（５ｍｇ）のＤ２Ｏ（０．５ｍｌ）溶液を含有する試料を室温で１日間インキュベートした；１Ｈスペクトルは、１２時間ごとに、即ち、０時間、１２時間、２４時間の時点で記録して分析した。結果を下記の表に示す。
【０１００】
【表１】
2019501167.tif 000019
【０１０１】
実施例２：ａｎｌｅ４２３ｂ（ａｎｌｅ２５３ｂのプロドラッグ）の合成
【０１０２】
【化１７】
2019501167.tif 000020
【０１０３】
Ａｎｌｅ４２３ａ
ａｎｌｅ２５３ｂ（５００ｍｇ，１．４６ミリモル）、Ｃｓ２ＣＯ３（６２０ｍｇ，１．９ミリモル）のＤＭＳＯ（５ｍｌ）中の混合物へリン酸クロロメチルジｔｅｒｔ−ブチル（５２５ｍｇ，１．９ミリモル）を１分量で加えた。室温で１５時間の撹拌後、反応の完了を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）（ＳｉＯ２，ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝２：１，Ｒｆ（遊離体）０．３３、Ｒｆ（生成物）０．１８）によって示した。この反応混合物を水（３０ｍｌ）で希釈して、酢酸エチル（２×１５ｍｌ）で抽出した。合わせた抽出物を水（１０ｍｌ）、塩水（１０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて減圧下に濃縮して、生成物（１．０８ｇ）をオイルとして得た。この生成物は、さらに精製せずに、次の工程に使用した。
【０１０４】
Ａｎｌｅ４２３ｂ（ジアンモニウム塩）
ａｎｌｅ４２３ａ（１．０８ｇ）のＤＣＭ（１０ｍｌ）中の冷却懸濁液へＴＦＡ（２ｍｌ）を連続的に激しく撹拌しながら０℃で１分以内に加えて、この反応混合物を０℃で８時間撹拌した。この混合物を濾過し（ＧＨＰ  ０．４５μｍ）、トルエン（１０ｍｌ）で希釈して、２０℃で減圧下に濃縮し、残渣をトルエン（１０ｍｌ）と混合して、２０℃でもう一度濃縮した（ＤＣＭを５０〜１００ミリバールで蒸発させ、ＴＦＡとトルエンを高真空ロータリーエバポレーターで蒸発させた）。生じるガラス状の粘稠な残渣を冷アセトン（３０ｍｌ）で摩砕し、０℃で１時間撹拌した。白色の沈殿を濾過して取り、アセトン（１０ｍＬ）で洗浄して減圧下に乾燥させて、酸型のａｎｌｅ４２３ｂ（４４８ｍｇ，０．９９ミリモル、６８％、２Ｄ−ＮＯＥＳＹ  ＮＭＲ実験によれば、ａｎｌｅ４２３ｂａ：ａｎｌｅ４２３ｂｂ＝３：２の比である２種の異性体の混合物）を黄色がかった粉末として得た。ａｎｌｅ４２３ｂ（二酸、１５６ｍｇ，０．３４５ミリモル）へ水（３ｍＬ）と２５％  ＮＨ４ＯＨ（１２．６Ｍ，１５０μＬ，１．８９ミリモル）を加えた。この混合物を、溶解が完了するまで撹拌し、生じる溶液を凍結させて凍結乾燥させて、ジアンモニウム塩のａｎｌｅ４２３ｂ（１６１ｍｇ，３３１マイクロモル、９６％，ａｎｌｅ４２３ｂａ：ａｎｌｅ４２３ｂｂ＝３：２の比である２種の異性体の混合物）を黄色がかった粉末として得た。
【０１０５】
【化１８】
2019501167.tif 000021
【０１０６】
比較実施例３：エステラーゼによって切断される可能性がある、ｓｅｒｙ４４７の合成
試験した１つのアプローチは、エステラーゼによって切断される可能性があって、カチオンを介した安定性を提供するはずである基の導入であった。
【０１０７】
このように、ａｎｌｅ１３８ｂのさらなる有望なプロドラッグを合成して、ｓｅｒｙ４４７と命名した：
【０１０８】
【化１９】
2019501167.tif 000022
【０１０９】
ニコチン酸クロロメチルエステル
ニコチン酸より出発する公表されたプロトコール（８）に従って化合物ｓｅｒｙ４４７を製造して、シリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製して、ニコチン酸クロロメチルエステル（収率５５％）を黄色のオイルとして得た。ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２）：ＲＦ＝０．２。
【０１１０】
Ｓｅｒｙ４４５
水素化ナトリウム（２２０ｍｇ，５．５ミリモル；鉱油中６０％懸濁液）の無水ＤＭＦ（１０ｍｌ）懸濁液へａｎｌｅ１３８ｂ（１．７１ｇ，５ミリモル）の無水ＤＭＦ（５ｍｌ）溶液を連続的に激しく撹拌しながら室温で１０分以内に加えた。この混合物を室温で３０分間撹拌してから、ニコチン酸クロロメチルエステル（０．９４ｇ，５．５ミリモル）の無水ＤＭＦ（５ｍｌ）溶液を滴下した。室温で２４時間のインキュベーション後にＤＭＦの減圧下での蒸発を続けて、残渣をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）に溶かして、この溶液を水（５０ｍｌ）、塩水（２５ｍｌ）で洗浄して、減圧下に濃縮した。この粗生成物を、勾配溶出を用いたシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、１：３（ｖ／ｖ）〜１：１（ｖ／ｖ））によって精製して、ｓｅｒｙ４４５（２．０５ｇ，８６％）を固形物として得た。Ｓｅｒｙ４４５は、１：２の比である異性体の混合物である（１Ｈ  ＮＭＲ）。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、１：３（ｖ／ｖ））：ＲＦ＝０．１３。
【０１１１】
Ｓｅｒｙ４４７
ｓｅｒｙ４４５（１ｇ，２．０９ミリモル）及びＭｅＩ（１．４８ｇ，１０．４ミリモル）のアセトニトリル（１５ｍｌ）溶液を室温で２２時間撹拌して、追加分量のＭｅＩ（０．４５ｇ，３．２ミリモル）の添加を続けた。室温でさらに２４時間撹拌後、この混合物を減圧下に濃縮して、残渣をＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）に再懸濁させた。生じる沈殿を濾過によって採取して乾燥させて、ｓｅｒｙ４４７（１．１７ｇ，９０％）を黄色の固形物として得た。Ｓｅｒｙ４４７は、１：１．２の比である異性体の混合物である（１Ｈ  ＮＭＲ）。
【０１１２】
しかしながら、実験データは、ｓｅｒｙ４４７がほとんど水に溶けない（１ｍＭ未満）ことを示した。故に、ｓｅｒｙ４４７は、上記に言及した問題を解決するのに適したプロドラッグとして分類されなかった。
【０１１３】
比較実施例４：ペプチダーゼによって切断される可能性がある、ｓｅｒｙ４３５の合成
別のアプローチでは、ペプチダーゼによって切断可能であるはずの基の導入について試験した。そのカチオンを介して安定性が提供されるはずである。ａｎｌｅ１３８ｂのさらなる有望なプロドラッグを合成して、ｓｅｒｙ４３５と命名した：
【０１１４】
【化２０】
2019501167.tif 000023
【０１１５】
Ｓｅｒｙ４３４ｂ
ａｎｌｅ１３８ｂ（１．０３ｇ，３．０ミリモル）及びＥｔ３Ｎ（０．８１ｇ，８ミリモル）のＤＣＭ（２５ｍｌ）懸濁液へ塩化ニコチノイル塩酸塩（０．６２ｇ，３．５ミリモル）を連続的に激しく撹拌しながら室温で少量ずつ加えた。室温で４日間撹拌後、追加分量の塩化ニコチノイル塩酸塩（０．２０ｇ，１．９ミリモル）とＥｔ３Ｎ（０．２２ｇ，２．２ミリモル）を加えて、撹拌をさらに３日間続けた。この混合物をＤＣＭ（２５ｍｌ）でクエンチし、水性１Ｍリン酸緩衝液（２５ｍｌ，ｐＨ７．０）、水（２５ｍｌ）、塩水（１０ｍｌ）で洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。この溶媒を減圧下に蒸発させて、残渣をシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、１：１（ｖ／ｖ））によって精製して、ｓｅｒｙ４３４ｂ（１．２ｇ，８９％）を固形物として得た。ｓｅｒｙ４３４ｂは、１：１．２の比である異性体の混合物である（１Ｈ  ＮＭＲ）。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、１：１（ｖ／ｖ））：ＲＦ＝０．６４。
【０１１６】
Ｓｅｒｙ４３５
ｓｅｒｙ４３４ｂ（１ｇ，２．２３ミリモル）及びＭｅＩ（１．５ｇ，１０．５６ミリモル）のアセトニトリル（１２ｍｌ）溶液を室温で２４時間撹拌した。生じる沈殿を濾過によって採取して乾燥させて、ｓｅｒｙ４３５（１ｇ，７６％）を黄色の固形物として得た。ｓｅｒｙ４３５は、１：１．２の比である異性体の混合物である（１Ｈ  ＮＭＲ）。
【０１１７】
しかしながら、実験データは、ｓｅｒｙ４３５がほとんど水に溶けない（１ｍＭ未満）ことを示した。故に、ｓｅｒｙ４３５は、上記に言及した問題を解決するのに適したプロドラッグとして分類されなかった。
【０１１８】
比較実施例５：加水分解によって切断される可能性がある、ｓｅｒｙ４５３の合成
さらなるアプローチでは、加水分解可能な基によって水溶性で安定したプロドラッグを提供し得るかどうかを試験した。ここでは、治療薬剤、ａｎｌｅ１３８ｂの遊離が加水分解を介して生じる可能性がある。
【０１１９】
ａｎｌｅ１３８ｂのさらなる有望なプロドラッグを合成して、ｓｅｒｙ４５３と命名した：
【０１２０】
【化２１】
2019501167.tif 000024
【０１２１】
Ｓｅｒｙ４５０
水素化ナトリウム（２２０ｍｇ，５．５ミリモル；鉱油中６０％懸濁液）の無水ＤＭＦ（１０ｍｌ）懸濁液へａｎｌｅ１３８ｂ（１．７１ｇ，５ミリモル）の無水ＤＭＦ（５ｍｌ）溶液を連続的に激しく撹拌しながら室温で１０分以内に加えた。この混合物を室温で３０分間撹拌してから、２−クロロエチルクロロメチルエーテル（０．７ｇ，５．５ミリモル）を滴下した。室温で３０分間のインキュベーション後に、ＤＭＦの減圧下での蒸発を続け、残渣をＥｔＯＡｃ（６０ｍｌ）に溶かして、この溶液を水（５０ｍｌ）、塩水（２５ｍｌ）で洗浄して、減圧下に濃縮した。この粗生成物をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、１：３（ｖ／ｖ））によって精製して、ｓｅｒｙ４５０（２．１ｇ，９６％）を得た。ｓｅｒｙ４５０は、１：１．３の比である異性体の混合物である（１Ｈ  ＮＭＲ）。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、１：３（ｖ／ｖ））：ＲＦ＝０．５８。
【０１２２】
Ｓｅｒｙ４５１
ｓｅｒｙ４５０（１．８７ｇ，４．３ミリモル）、ＮａＮ３（２．７９ｇ，４３ミリモル）、ＮａＩ（０．１ｇ）のＤＭＦ（２５ｍｌ）中の混合物を８０℃で１５時間撹拌してから減圧下に濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（９０ｍｌ）に溶かし、有機相を水（２×５０ｍｌ）、塩水で洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。硫酸ナトリウムを濾過した後で、この溶液を減圧下に濃縮して、生じる混合物をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、１：４（ｖ／ｖ））によって精製して、ｓｅｒｙ４５１（１．８１ｇ，９５％）を得た。ｓｅｒｙ４５１は、１：１．３の比である異性体の混合物である（１Ｈ  ＮＭＲ）。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、１：５（ｖ／ｖ））：ＲＦ＝０．３６。
【０１２３】
Ｓｅｒｙ４５２
ｓｅｒｙ４５１（１．６７ｇ，３．７８ミリモル）、Ｐｈ３Ｐ（１．４９ｇ，５．６７ミリモル）、水（２ｍｌ）のＴＨＦ（２５ｍｌ）中の混合物を室温で１８時間撹拌してから減圧下に濃縮した。生じる混合物を、勾配溶出を用いたシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ，３０：１（ｖ／ｖ）〜９：１（ｖ／ｖ））によって精製して、ｓｅｒｙ４５２（０．３８ｇ，９６％）を得た。ｓｅｒｙ４５２は、１：１．３の比である異性体の混合物である（１Ｈ  ＮＭＲ）。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ，９：１（ｖ／ｖ））：ＲＦ＝０．１９。
【０１２４】
Ｓｅｒｙ４５３
ｓｅｒｙ４５２（１．４５ｇ，３．４８ミリモル）、ＭｅＩ（２．９７ｇ，２０．９ミリモル）、ＫＨＣＯ３（２．１ｇ，２１ミリモル）のアセトニトリル（２５ｍｌ）中の混合物を室温で２４時間撹拌した。不溶性の材料を濾過して除き、濾液を減圧下に濃縮して、ヨウ素を対イオンとするｓｅｒｙ４５３を得た。陰イオン交換樹脂を使用して、このヨウ素対イオンを塩素対イオンに置き換えて、ｓｅｒｙ４５３（０．８８ｍｇ，５１％）を白色の固形物として得た。ｓｅｒｙ４５３は、１：１．３の比である異性体の混合物である（１Ｈ  ＮＭＲ）。
【０１２５】
実験データは、ｓｅｒｙ４５３が良好な水溶性を有するものの、マウスの脳と血液におけるａｎｌｅ１３８ｂの濃度が相対的に低いので、この化合物も上記に言及した問題を解決しないことを示した（実施例１０を参照のこと）。ｓｅｒｙ４５３は、ｓｅｒｙ４３３に比較して（２時間及び４時間の時点で）８〜１０倍低いレベルにしか到達しなかったので、さらに考慮しなかった。
【０１２６】
比較実施例６：ＩＡＰによって切断される可能性がある、ｓｅｒｙ４７４の合成
水溶性の安定したプロドラッグを提供するための試みにおいて、さらなるアプローチを使用した：内部のアルカリホスファターゼによって切断される可能性がある基を導入したのである。
【０１２７】
ａｎｌｅ１３８ｂのさらなる有望なプロドラッグを合成して、ｓｅｒｙ４７４と呼称した：
【０１２８】
【化２２】
2019501167.tif 000025
【０１２９】
Ｓｅｒｙ４６３
ａｎｌｅ１３８ｂ（１ｇ，２．９ミリモル）とピリジン（０．２７６ｇ，３．５ミリモル）のＤＣＭ（１０ｍｌ）中の混合物へクロロギ酸クロロメチル（０．４５２ｇ，３．５ミリモル）のＤＣＭ（５ｍｌ）溶液を連続的に激しく撹拌しながら室温で１０分以内に加えた。室温で２時間撹拌後、この反応混合物をＤＣＭ（２０ｍｌ）で希釈し、有機相を水（２×３０ｍｌ）、塩水で洗浄して、減圧下に濃縮した。生じる残渣をアセトニトリルより再結晶させて、ｓｅｒｙ４６３（０．８５ｇ，６７％）を白色の固形物として得た。ｓｅｒｙ４６３は、２：３の比である異性体の混合物である（１Ｈ  ＮＭＲ）。
【０１３０】
Ｓｅｒｙ４７０
ｓｅｒｙ４６３（０．８ｇ，１．８４ミリモル）、ＮａＩ（０．４１３ｇ，２．７６ミリモル）のアセトン（１５ｍｌ）中の混合物を４０℃で３日間撹拌してから減圧下に濃縮した。残渣をＤＣＭ（３０ｍｌ）に溶かし、有機相を水（２０ｍｌ）、１Ｍ  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（２０ｍｌ）、塩水で洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。硫酸ナトリウムを濾過した後で、この溶液を減圧下に濃縮して、生じる混合物をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、１：３（ｖ／ｖ））によって精製して、ｓｅｒｙ４７０（０．７３ｇ，７５％）を固形物として得た。ｓｅｒｙ４７０は、１：１．２の比である異性体の混合物である（１Ｈ  ＮＭＲ）。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、１：３（ｖ／ｖ））：ＲＦ＝０．５５。
【０１３１】
Ｓｅｒｙ４７３
ｓｅｒｙ４７０（５３ｍｇ，０．１ミリモル）、リン酸ジｔｅｒｔ−ブチルカリウム塩（４２ｍｇ，０．２ミリモル）、及びＡｇ２Ｏ（２４ｍｇ，０．１ミリモル）のアセトニトリル（３ｍｌ）中の混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、不溶性の材料を濾過して取って、この固形物をフィルター上にてアセトニトリル（２ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機溶液を減圧下に濃縮して、生じるオイルをシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、１：２（ｖ／ｖ））によって精製して、ｓｅｒｙ４７３（４５ｍｇ，７４％）をオイルとして得た。ｓｅｒｙ４７３は、１：１．２の比である異性体の混合物である（１Ｈ  ＮＭＲ）。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、１：２（ｖ／ｖ））：ＲＦ＝０．２４。
【０１３２】
Ｓｅｒｙ４７４
ｓｅｒｙ４７３（１０ｍｇ）、ＴＦＡ（２０ｍｇ）の重水素化クロロホルム（０．７ｍｌ）中の混合物をＮＭＲ試験管の中に入れて、反応の進行をＮＭＲによってモニターした。室温で６時間のインキュベーションの後で、１Ｈスペクトルは、反応の完了を明示し、中性条件下での水系の後処理をすると、ｓｅｒｙ４７４が分解してａｎｌｅ１３８ｂの生成をもたらした。
【０１３３】
実験データは、ｓｅｒｙ４７４が水に溶けるものの、それが十分な安定性を有さないので、上記の問題を解決し得ないことを示した。これは、アセタール官能基の自己加水分解によるものと仮定される。故に、ｓｅｒｙ４７４は、好適なプロドラッグとして分類されなかった。ｓｅｒｙ４７４の水溶液中での低い安定性により、これ以上の開発は打ち切った。
【０１３４】
比較実施例７：ペプチダーゼによって切断される可能性がある、ａｎｌｅ３８０の合成（ＰＥＧ６００に基づく）
水溶性で安定したプロドラッグを設計する場合のよくあるアプローチは、それ自体が水とあらゆる比率で混和する、ＰＥＧ６００二炭酸を介した誘導体化である。従って、ａｎｌｅ１３８のさらなる有望なプロドラッグを合成して、ａｎｌｅ３８０と呼称した：
【０１３５】
【化２３】
2019501167.tif 000026
【０１３６】
Ａｎｌｅ３８０
ＰＥＧベースのビスクロロ無水物（対応する二酸（ポリ（エチレングリコール）ビス（カルボキシメチル）エーテル、平均Ｍｎ：６００）（３ｇ，５ミリモル）とＳＯＣｌ２の反応によって製造する）、ａｎｌｅ１３８ｂ（３．４３ｇ，１０ミリモル）、及びＥｔ３Ｎ（１．０１ｇ，１０ミリモル）のＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）中の混合物を室温で２４時間撹拌した。不溶性の材料を濾過して除き、濾液をクエン酸の５％水溶液（５０ｍｌ）と塩水で洗浄した。生じる溶液をほぼ２０ｍｌの容量になるまで減圧下に濃縮してから、ヘキサン（１５０ｍｌ）中にゆっくり注いだ。白色の沈殿を濾過によって採取して乾燥させて、ａｎｌｅ３８０（５．８ｇ）を白色の固形物として得た。この混合物のＬＣ−ＭＳ分析によれば、所望される生成物の４種の異性体が主要成分である一方で、ａｎｌｅ１３８ｂと１つの複素環部分がある化合物（複数）が主要な不純物として検出された。
【０１３７】
しかしながら、実験データは、ａｎｌｅ３８０が水にほとんど溶けない（１ｍＭ未満）ことを示した。このＰＥＧ６００二炭酸誘導体が、２つのａｎｌｅ１３８ｂ部分が付いていることで（十分な）溶解度に到達しないことは、予想外であった。故に、ａｎｌｅ３８０は、好適なプロドラッグとして使用し得ない。
【０１３８】
実施例８：水溶性試験
各化合物の水溶性について、以下のプロトコールによって評価した。１０ｍｇの化合物を含有するガラス管の中へ脱イオン水（１ｍｌ）を加えた。１０分間振り混ぜた後で、この試料を目視検査して、溶液又は懸濁液の形成を報告した。結果を下記の表に示す。
【０１３９】
【表２】
2019501167.tif 000027
【０１４０】
この結果は、ｓｅｒｙ４３３とｓｅｒｙ４５２がａｎｌｅ１３８ｂよりほぼ２１９万倍水に溶けることを示している。
実施例９：安定性試験
化合物の水溶液中での安定性をＮＭＲによって判定した。化合物（５ｍｇ）のＤ２Ｏ（０．５ｍｌ）溶液を含有する試料を室温で１日間インキュベートして、１Ｈスペクトルを記録して、１２時間ごとに（即ち、０時間、１２時間、２４時間の時点で）分析した。例示の結果を以下の表に要約する。
【０１４１】
【表３】
2019501167.tif 000028
【０１４２】
故に、上記の比較実施例とは対照的に、本発明の誘導体は、安定している。活性化合物は、切断のためのごく豊富な酵素によって遊離されて、驚くべきことに、該酵素は、この疎水性の化合物を腸管の内腔中へ遊離させず、それが血液中への受動輸送のために腸管膜上に渡るまで、それを「保持」し続ける。
【０１４３】
実施例１０：ｓｅｒｙ４３３とｓｅｒｙ４５３のマウスにおける薬物動態分析
二ナトリウム塩としてのｓｅｒｙ４３３とｓｅｒｙ４５３（７．２５ｍｇ；５ｍｇのａｎｌｅ１３８ｂに等しい）の無菌ミリポア（Millipore）水（５０μｌ）溶液を強制摂食によってマウス（Ｃ５７／ＢＬ６，７７日齢）へ適用した。適用後１時間、２時間、４時間、及び８時間の時点（各時点につき２匹の動物）で動物を頸椎脱臼によって殺した。脳を取り出し、５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ７．０）で洗浄して、すぐに液体窒素で凍結させた。試料を−８０℃で保存した。
【０１４４】
この組織は、使用に先立って、４℃で解凍した。この組織を５ｍＬのアセトニトリルにおいて、ホモジナイザー（IKA ULTRA-TURRAX Tube drive workstation，ドイツ）を使用して３分間最高速度で２回ホモジナイズした。このホモジネートを３０℃で５分間超音波処理して、５．０００×ｇで１０分間遠心分離させた。上清のアリコート（１００μＬ）をＨＰＬＣシステムへ注入した。外部標準に対する化合物のピーク面積比を使用して、試料を定量した（図面３を参照のこと）。
【０１４５】
【表４】
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【０１４６】
実施例１１：ｓｅｒｙ４３３のラットにおける薬物動態分析
二ナトリウム塩としてのｓｅｒｙ４３３（用量レベル：１０ｍｇ／ｋｇ，投薬容量：１０ｍｌ／ｋｇ）の２５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）溶液を強制摂食によってＣＤラットへ適用した。血漿試料を対応する時点で採取し、液体窒素中で凍結させて、−８０℃で保存した。この組織は、使用に先立って、４℃で解凍した。それらを５ｍＬのアセトニトリルにおいて、ホモジナイザー（IKA ULTRA-TURRAX Tube drive workstation，ドイツ）を使用して３分間最高速度で２回ホモジナイズした。このホモジネートを３０℃で５分間超音波処理して、５．０００×ｇで１０分間遠心分離させた。上清のアリコート（１００μＬ）をＨＰＬＣシステムへ注入した。外部標準に対する化合物のピーク面積比を使用して、試料を定量した（図面３を参照のこと）。
【０１４７】
実施例１２：ｓｅｒｙ４３３のラットにおける薬物動態分析
本試験は、ａｎｌｅ１３８ｂ（フェーズ１）とｓｅｒｙ４３３（フェーズ２）の単回経口投与に続く、ａｎｌｅ１３８ｂとｓｅｒｙ４３３の雄性スプラーグ・ドーリーラットにおける薬物動態について評価するために設計した。フェーズ１とフェーズ２の間、動物は、適切に製剤化された各試験化合物を、交差法で、２つの別々の投薬事例の１つで摂取した。用量レベルは、いずれの化合物でも１０ｍｇ／ｋｇであった。ｓｅｒｙ４３３の量は、そのプロドラッグ中に存在するａｎｌｅ１３８ｂの量に対して補正しなかったので、ｓｅｒｙ４３３のより高い分子量の故に、実際には、より低い量の活性薬剤が投与されたことになる。
【０１４８】
【表５】
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【０１４９】
本試験は、２つのフェーズで実施した。
フェーズ１：３匹のナイーブ雄性ＣＤラットにａｎｌｅ１３８ｂを１０ｍｇ／ｋｇの目標用量レベルで経口投与した。
【０１５０】
フェーズ２：１週間（ウォッシュアウト期間）後、同じ動物へｓｅｒｙ４３３を１０ｍｇ／ｋｇの目標用量で経口投与した。
それぞれのフェーズの間、投与後２４時間の間にわたって、各動物より個別の連続血漿プロフィールを作成した。
【０１５１】
経口投与製剤の調製（フェーズ１）
クレモフォールＲＨ４０（最終容量の４５％）、ＰＥＧ４００（最終容量の３５％）、及びＣａｐｒｙｏｌ９０（最終容量の２０％）を秤量することによって、担体を調製した。この混合物をほぼ５０℃（例、恒温槽）で約１５分間撹拌して融かして、澄明な溶液を得た。次いで、試験化合物を秤量して、５０℃で撹拌しながら担体へ加えた。この混合物をさらに１５分間撹拌して１０分間音波処理して、澄明な（目視検査）溶液を得た。
【０１５２】
経口投与製剤の調製（フェーズ２）
Ｎａ２ＨＰＯ４（３．０ｇ／Ｌ）とＮａＣｌ（２．６４ｇ／Ｌ）を秤量してから１Ｎ  ＨＣｌ（ｐＨ７に達するために１．９ｍＬ）をフラスコ全量の半分のＨ２Ｏとともに加えて、この混合物を１０分間音波処理して、担体を調製した。次いで、試験化合物を秤量して、ほぼ１５分の磁気撹拌下に担体へ加えた。次いで、この混合物を約５分間音波処理して再び１５分間撹拌して、澄明な（目視検査）溶液を得た。
【０１５３】
リン酸緩衝液の名目濃度は、２０ｍＭであった。
経口投与後、各ラットの尾静脈より以下の時点で血液試料を採取した：投与前、投与後０．５時間、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、及び２４時間。
【０１５４】
この結果を図４に示す。見てわかるように、ｓｅｒｙ４３３の投与後のａｎｌｅ１３８ｂの血漿濃度は、そのままのａｎｌｅ１３８ｂの投与後のａｎｌｅ１３８ｂの対応する血漿濃度よりずっと高かった。
【０１５５】
参考文献
[1]  J. Wagner et al., "Anle138b: a novel oligomer modulator for disease-modifying therapy of neurodegenerative diseases such as prion and Parkinson’s disease", Acta Neuropathol. 125, 795-813 (2013).
[2]  J. Levin et al., "The oligomer modulator anle138b inhibits disease progression in a Parkinson mouse model even with treatment started after disease onset" Act. Neuropath. 127, 779-780 (2014).
[3]  J. Wagner, et al, ;"Reducing tau aggregates with anle138b delays disease progression in a mouse model of tauopathies" Act. Neuropathol (2015), in print (doi : 10.1007/s0041-015-1483-3).
[4]  J. Rautio  et al., "Prodrugs: design and clinical applications" Nat. Rew. Drug Disc. 7, 255-270 (2008).
[5]  A. H. Burstein, D. Cox, B. Mistry, N. Eddington "Phenytoin pharmacokinetics following oral administration of phenytoin suspension and fosphenytoin solution to rats" Epilepsy Res. 34:129-133 (1999).
[6]  T. Heimbach et al., "Enzyme-mediated precipitation of parent drugs from their phosphate Prodrugs" Int. J. Pharm. 261, 81-92 (2003).
[7]  C. E. Muller, "Prodrug approaches for enhancing the bioavailability of drugs with low solubility" Chem. Biodiversity 6,2071-2083(2009)ato, K. et al. Composition containing chloromethyl phosphate derivative with improved stability and method for producing the same. EP2133355A1 (2009).
[8]  Bodor, N. S. Redox systems for brain-targeted drug delivery. EP0327766A2 (1990).
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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