【手続補正書】
【提出日】平成19年4月23日(2007.4.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの、グルタミニルシクラーゼのインヒビター、又はその医薬として許容し得る塩を、任意に、慣用の担体、及び／又は賦形剤と共に含む、非経口、経腸、又は経口投与用医薬組成物。
【請求項２】
さらに、DP IV又はDP IV様酵素のインヒビター、及び／又はアミノぺプチダーゼインヒビターを含む、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
アルツハイマー病、ダウン症、ハンチントン病、ケネディ病、潰瘍性疾患、ピロリ菌（ヘリコバクターピロリ）感染を伴う、又は、伴わない胃癌、病原性精神病的状態、統合失調病、不妊症、新生組織形成、炎症性宿主反応、癌、悪性転移、メラノーマ、乾癬、関節リウマチ、アステローム性動脈硬化、体液性及び細胞性免疫反応障害、内皮における白血球接着及び遊走プロセス、摂食障害、睡眠覚醒障害、エネルギー代謝の恒常性調節障害、自律機能障害、ホルモンバランス障害、又は体液調節障害から選択される疾患の、予防又は治療用医薬の調製のための、請求項１、又は２記載の医薬組成物の使用。
【請求項４】
アルツハイマー病、ダウン症、ハンチントン病、ケネディ病、潰瘍性疾患、ピロリ菌（ヘリコバクターピロリ）感染を伴う、又は、伴わない胃癌、病原性精神病的状態、統合失調病、不妊症、新生組織形成、炎症性宿主反応、癌、悪性転移、メラノーマ、乾癬、関節リウマチ、アステローム性動脈硬化、体液性及び細胞性免疫反応障害、内皮における白血球接着及び遊走プロセス、摂食障害、睡眠覚醒障害、エネルギー代謝の恒常性調節障害、自律機能障害、ホルモンバランス障害、又は体液調節障害から選択される疾患の、予防又は治療用医薬の調製のための、グルタミニルシクラーゼのインヒビター、又はその医薬として許容し得る塩の使用。
【請求項５】
該疾患がアルツハイマー病、又はダウン症である、請求項３、又は４記載の使用。
【請求項６】
該疾患が関節リウマチ、又はアステローム性動脈硬化である、請求項３、又は４記載の使用。
【請求項７】
該グルタミニルシクラーゼのインヒビターが、DP IV、又はDP IV様酵素のインヒビター、及び／又は、アミノペプチダーゼインヒビターと共に使用される、請求項１〜６のいずれか１項記載の医薬組成物、又は使用。
【請求項８】
該グルタミニルシクラーゼインヒビターが競合阻害剤である、請求項１〜７のいずれか１項記載の医薬組成物、又は使用。
【請求項９】
該グルタミニルシクラーゼインヒビターが、0.0071 mM以下のKi値を有する、請求項１〜８のいずれか１項記載の医薬組成物、又は使用。
【請求項１０】
該グルタミニルシクラーゼインヒビターが、0.00041 mMから0.0071 mMの範囲のKi値を有する、請求項１〜９のいずれか１項記載の医薬組成物、又は使用。
【請求項１１】
該グルタミニルシクラーゼインヒビターが、
【化１】
2006525278.tif 000001
2006525278.tif 000002
から選択される、請求項１〜１０のいずれか１項記載の医薬組成物、又は使用。
【請求項１２】
Aβ3-40／42、[Gln3]Aβ3-40／42、[Glu11]Aβ11-40／42、[Gln11]Aβ11-40／42及びCCL 2から選択される、少なくとも１つのグルタミニルシクラーゼ基質の、Ｎ末端グルタミン酸又はグルタミン残基のピログルタミン酸残基への転換が阻害されることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか１項記載の医薬組成物、又は使用。
【請求項１３】
該DP IV様酵素のH-isoAsp-Ala-OH生成活性が阻害される、請求項７〜１２のいずれか１項記載の医薬組成物、又は使用。
【請求項１４】
該DP IV様酵素がDP IIである、請求項７〜１３のいずれか１項記載の医薬組成物、又は使用。
【請求項１５】
該DP IVインヒビターが、L-threo-イソロイシルチアゾリジン、L-allo-イソロイシルチアゾリジン、L-threo-イソロイシルピロリジン、L-allo-イソロイシルピロリジン、NVP-DPP728A（1-[[[2-[{5-シアノピリジン-2-イル}アミノ]エチル]アミノ]アセチル]-2-シアノ-（S）-ピロリジン）、LAF-237（1-[（3-ヒドロキシ-アダマント-1-イルアミノ）-アセチル]-ピロリジン-2（S）-カルボニトリル）； TSL-225（トリプトフィル-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-3-カルボン酸）、FE-999011、N-バリルプロリル、O-ベンゾイルヒドロキシルアミン、アラニルピロリジン、H-Asn-ピロリジン、H-Asn-チアゾリジン、H-Asp-ピロリジン、H-Asp-チアゾリジン、H-Asp（NHOH）-ピロリジン、H-Asp（NHOH）-チアゾリジン、H-Glu-ピロリジン、H-Glu-チアゾリジン、H-Glu（NHOH）-ピロリジン、H-Glu（NHOH）-チアゾリジン、H-His-ピロリジン、H-His-チアゾリジン、H-Pro-ピロリジン、H-Pro-チアゾリジン、H-Ile-アゼチジン、H-Ile-ピロリジン、H-L-allo-Ile-チアゾリジン、H-Val-ピロリジン及びH-Val-チアゾリジン、2-アミノオクタン酸-Pro-Ile、Abu-Pro-Ile、Aib-Pro-Ile、Aze-Pro-Ile、Cha-Pro-Ile、Ile-Hyp-Ile、Ile-Pro-allo-Ile、Ile-Pro-t-ブチル-Gly、Ile-Pro-Val、Nle-Pro-Ile、Nva-Pro-Ile、Orn-Pro-Ile、Phe-Pro-Ile、Phg-Pro-Ile、Pip-Pro-Ile、Ser（Bzl）-Pro-Ile、Ser（P）-Pro-Ile、Ser-Pro-Ile、t-ブチル-Gly-Pro-D-Val、t-ブチル-Gly-Pro-Gly、t-ブチル-Gly-Pro-Ile、t-ブチル-Gly-Pro-Ile-アミド、t-ブチル-Gly-Pro-t-ブチル-Gly、t-ブチル-Gly-Pro-Val、Thr-Pro-Ile、Tic-Pro-Ile、Trp-Pro-Ile、Tyr（P）-Pro-Ile、Tyr-Pro-allo-Ile、Val-Pro-allo-Ile、Val-Pro-t-ブチル-Gly、Val-Pro-Val、又はそれらの医薬として許容し得る塩からなる群から選択される、請求項７〜１３のいずれか１項記載の医薬組成物、又は使用。
【請求項１６】
該DP IVインヒビターが、
2-メチルカルボニル-1-N-[（L）-アラニル-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-メチルカルボニル-1-N-[（L）-バリニル-（L）-プロリル-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-[（アセチル-オキシ-メチル）カルボニル]-1-N-[（L）-アラニル-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-[(ベンゾイル-オキシ-メチル）カルボニル]-1-N-[{（L）-アラニル}-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-{[（2,6-ジクロロベンジル）チオメチル]カルボニル}-1-N-[{（L）-アラニル}-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジン、
2-[ベンゾイル-オキシ-メチル）カルボニル]-1-N-[グリシル-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-[（[1,3]-チアゾールチアゾール-2-イル）カルボニル]-1-N-[{（L）-アラニル}-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
2-[（ベンゾチアゾールチアゾール-2-イル）カルボニル]-1-N-[N-{（L）-アラニル}-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
2-[（-ベンゾチアゾールチアゾール-2-イル）カルボニル]-1-N-[{（L）-アラニル}-グリシル]-（2S）-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
2-[（ピリジン-2-イル）カルボニル]-1-N-[N-{（L）-アラニル}-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
1-シクロペンチル-3-メチル-1-オキソ-2-ペンタンアミニウムクロライド、
1-シクロペンチル-3-メチル-1-オキソ-2-ブタンアミニウムクロライド、
1-シクロペンチル-3,3-ジメチル-1-オキソ-2-ブタンアミニウムクロライド、
1-シクロヘキシル-3,3-ジメチル-1-オキソ-2-ブタンアミニウムクロライド、
3-（シクロペンチルカルボニル）-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリニウムクロライド、及び
N-（2-シクロペンチル-2-オキソエチル）シクロヘキサンアミニウムクロライドからなる群から選択されるか、又はそれらの医薬として許容し得る塩である、請求項７〜１３のいずれか１項記載の医薬組成物、又は使用。
【請求項１７】
該グルタミニルシクラーゼインヒビターが、グルタミニルシクラーゼの金属イオン結合活性部位に結合する、請求項１〜１６のいずれか１項記載の医薬組成物、又は使用。
【請求項１８】
下記工程を含む、グルタミニルシクラーゼのインヒビターの同定、及び選定のためのスクリーニング方法であって：
ａ）前記インヒビターとグルタミニルシクラーゼを、それらの間で結合が可能な条件下で接触させること；
ｂ）グルタミニルシクラーゼの基質を加えること；
ｃ）該基質の転換をモニターすること、又は任意に該残存ＱＣ活性を測定すること；及び
ｄ）該基質転換、及び／又は、グルタミニルシクラーゼの酵素活性の変化を計算し、グルタミニルシクラーゼのインヒビターを同定することを含む、前記スクリーニング方法。
【請求項１９】
下記工程を含む、グルタミニルシクラーゼの金属イオン結合活性部位に結合するインヒビターの同定、及び選定のためのスクリーニング方法であって：
ａ）グルタミニルシクラーゼの前記インヒビターを、それらの間で結合が可能な条件下で接触させること；
ｂ）グルタミニルシクラーゼの基質を加えること；
ｃ）該基質の転換をモニターすること、又は任意に該残存ＱＣ活性を測定すること；及び
ｄ）該基質転換、及び／又は、グルタミニルシクラーゼの酵素活性の変化を計算し、グルタミニルシクラーゼのインヒビターを同定することを含む、前記スクリーニング方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、アンモニアの遊離下における、Ｎ末端グルタミン残基のピログルタミン酸（5-オキソ-プロリン、pGlu*）への分子内環化反応、及び水の遊離下における、Ｎ末端グルタミン酸残基のピログルタミン酸への分子内環化反応を触媒する、グルタミニルシクラーゼ（ＱＣ、EC 2.3.2.5）に関するものである。
本発明は、哺乳動物ＱＣを金属酵素として同定し、哺乳動物における新規の生理学的基質、及びＱＣ活性の調整によって治療可能な病態の治療のための、ＱＣのエフェクターの使用、及びＱＣのエフェクターを含む医薬組成物を提供する。さらに、金属相互作用が、ＱＣインヒビターの開発に有用なアプローチであることが示される。
好ましい実施態様において、本発明は、ＱＣ、及び／又はDP IV活性の調整によって治療可能な病態の治療、又は緩和のために、DP IV、又はDP IV様酵素のインヒビターを組合せるＱＣ活性のエフェクターの使用を提供する。
また、ＱＣ活性のエフェクターの同定、及び選定のためのスクリーニング方法を提供する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
ＱＣ活性のエフェクターを哺乳動物に投与することによって、アルツハイマー病、ダウン症、ピロリ菌（ヘリコバクターピロリ）感染を伴う、又は伴わない、潰瘍性疾患及び胃癌、病原性精神病的状態、統合失調病、不妊症、新生組織形成、炎症性宿主反応、癌、悪性転移、メラノーマ、乾癬、関節リウマチ、アステローム性動脈硬化、体液性及び細胞性免疫反応障害、内皮における白血球接着及び遊走プロセス、摂食障害、睡眠覚醒障害、エネルギー代謝の恒常性調節障害、自律機能障害、ホルモンバランス障害、及び体液調節障害から選択される病態を、予防、又は緩和、又は治療することが可能である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
好ましいジペプチド化合物は、N-バリルプロリル、O-ベンゾイルヒドロキシルアミン、アラニルピロリジン、L-allo-イソロイシルチアゾリジン、L-threo-イソロイシルピロリジンのようなイソロイシルチアゾリジン、及びその塩、特にフマル酸塩、及び、L-allo-イソロイシルピロリジン、及びその塩である。特に好ましい化合物は、グルタミニルピロリジン、及びグルタミニルチアゾリジン、H-Asn-ピロリジン、H-Asn-チアゾリジン、H-Asp-ピロリジン、H-Asp-チアゾリジン、H-Asp（NHOH）-ピロリジン、H-Asp（NHOH）-チアゾリジン、H-Glu-ピロリジン、H-Glu-チアゾリジン、H-Glu（NHOH）-ピロリジン、H-Glu（NHOH）-チアゾリジン、H-His-ピロリジン、H-His-チアゾリジン、H-Pro-ピロリジン、H-Pro-チアゾリジン、H-Ile-アゼチジン、H-Ile-ピロリジン、H-L-allo-Ile-チアゾリジン、H-Val-ピロリジン、及びH-Val-チアゾリジン、及び医薬として許容し得るその塩である。これらの化合物は、国際公開第99／61431号、及び欧州特許出願公開第1 304 327号に記載されている。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
本発明に従ってＱＣのエフェクターと組合せて使用でき、さらに好ましいDP IVインヒビターは、ペプチジルケトンである。例を挙げると、下記化合物、及びその医薬として許容し得るその塩である：
2-メチルカルボニル-1-N-[（L）-アラニル-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジン臭化水素酸塩、2-メチルカルボニル-1-N-[（L）-バリニル-（L）-プロリル-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-[（アセチル-オキシ-メチル）カルボニル]-1-N-[（L）-アラニル-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-[（ベンゾイル-オキシ-メチル）カルボニル]-1-N-[{（L）-アラニル}-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-{[（2,6-ジクロロベンジル）チオメチル]カルボニル}-1-N-[{（L）-アラニル}-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジン、
2-[（ベンゾイル-オキシ-メチル）カルボニル]-1-N-[グリシル-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジン臭化水素酸塩、
2-[（[1,3]-チアゾールチアゾール-2-イル）カルボニル]-1-N-[{（L）-アラニル}-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
2-[（ベンゾチアゾールチアゾール-2-イル）カルボニル]-1-N-[N-{（L）-アラニル}-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、
2-[（ベンゾチアゾールチアゾール-2-イル）カルボニル]-1-N-[{（L）-アラニル}-グリシル]-（2S）-ピロリジントリフルオロ酢酸塩、及び
2-[（ピリジン-2-イル）カルボニル]-1-N-[N-{（L）-アラニル}-（L）-バリニル]-（2S）-ピロリジントリフルオロ酢酸塩である。これらの化合物は、国際公開第03／033524号に開示されている。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
さらに、本発明に従って、置換アミノケトンをＱＣエフェクターと組合せて使用することが可能である。好ましい置換ケトンを挙げると、
1-シクロペンチル-3-メチル-1-オキソ-2-ペンタンアミニウムクロライド、
1-シクロペンチル-3-メチル-1-オキソ-2-ブタンアミニウムクロライド、
1-シクロペンチル-3,3-ジメチル-1-オキソ-2-ブタンアミニウムクロライド、
1-シクロヘキシル-3,3-ジメチル-1-オキソ-2-ブタンアミニウムクロライド、
3-（シクロペンチルカルボニル）-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリニウムクロライド、
N-（2-シクロペンチル-2-オキソエチル）シクロヘキサンアミニウムクロライド、及び
その医薬として許容し得るその塩がある。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７４】
第九の実施態様において、さらなるＱＣの生理学的基質が、本発明の範囲内で同定された。これらは、[Gln1]CCL 2、[Gln1]CCL 7、[Gln1]CCL 8、[Gln1]CCL 16、[Gln1]CCL 18、及び[Gln1]フラクタルカインである。詳細は、表２を参照されたい。これらのポリペプチドは、骨髄性前駆細胞増殖、新生組織形成、炎症性宿主反応、癌、乾癬、関節リウマチ、アステローム性動脈硬化、体液性及び細胞性免疫反応、内皮における白血球接着及び遊走プロセスのような病態生理学的状態において、重要な役割を果たす。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８１】
【表３】
2006525278.tif 000003
2006525278.tif 000004
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３９】
（Glu-（NH-NH2）-Ser-Pro-Thr-Ala-NH2（配列番号：４７））
直鎖前駆体ペプチド（Fmoc-Glu-Ser-Pro-Thr-Ala-NH2（配列番号：４８））は、標準的Fmoc方法（Schilling, S.らの論文、2002 Biochemistry 41, 10849-10857）に従って、リンクアミド（Rink amide）MBHAリジン（Novabiochem社）において合成した。Fmoc保護ペプチドのレジンからの開裂後、該ペプチドを、ジエチルエーテル（Merck）で沈殿させ、濾過し、かつ乾燥させた。ジクロロメタン（DCM、Merck社）中で、該前駆体のγ-カルボン酸基（0.3等量）を結合させるのに、HMBA-AM レジン（1.16 mmol／g、Novabiochem社）を使用した。結合剤として、ジシクロへキシルカルボジイミド（DCC、Serva社）（4等量）、及びジメチルアミノピリジン（DMAP、Aldrich社）（0.1等量）を使用した。12時間後、レジンを、濾過し、DCMで洗い、反応を繰り返した。20％ピペリジンDMF溶液（5分間、3回）を用いたＮ末端Fmoc基の脱保護後、該ペプチドリジンを、5％ヒドラジン溶液（20 ml／g）で1.5時間処理した。該レジンを、濾過し、ジメチルホルムアミド（DMF、Roth社、ドイツ）、及びTFAで洗った。蒸発後、該粗ペプチドをエーテルで沈殿し、76％の収率を得た。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５９】
既に、1,10-フェナントロリンによるブタＱＣの阻害は、記載されている（Busby, W. H. J.らの論文、1987 J Biol Chem 262, 8532-8536、Bateman, R.C.J.らの論文、2001 Biochemistry 40, 11246-50）。しかしながら、EDTAがＱＣ触媒反応において活性化する効果を持つことが示されていた事実は、フェナントロリンによる阻害が金属キレートに起因しないことを示唆した（Busby, W. H. J.らの論文、1987 J Biol Chem 262, 8532-8536、Bateman, R.C.J.らの論文、2001 Biochemistry 40, 11246-50）。また、1,10-フェナントロリンによる阻害に加えて、ヒトＱＣ触媒の基質環化反応は、ジピコリン酸、及び8-ヒドロキシキノリン、他の金属酵素インヒビター存在下で消失した。これらのキレーターは、ＱＣを競合的、及び時間依存的に阻害し、すなわち、既に競合的に阻害された初期の活性は、該化合物の長時間インキュベート後、さらに低下することが見い出された（図１８、１９）。興味深いことに、EDTAは、インキュベート時間、又は条件にかかわらず、顕著な阻害を示さなかった。