(57)【要約】本開示は、ポリペプチドの特異的結合メンバーとその結合パートナーとの結合時に誘導される切断事象後に様々な細胞プロセスを調節する、キメラポリペプチドを提供する。キメラポリペプチドを使用して、例えば、遺伝子発現の誘導を含む、細胞機能を調節する方法もまた提供される。主題のキメラポリペプチドをコードする核酸ならびに関連する発現カセット及びベクターだけでなく、そのような核酸及び／または発現カセット及びベクターを含有する細胞もまた提供される。記載される構成要素及び方法を使用して対象を治療する方法だけでなく、主題の方法を実施するためのキットもまた提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラポリペプチドであって、
Ｎ末端からＣ末端まで共有結合で、
ａ）ペプチド−主要組織適合複合体（ペプチド−ＭＨＣ）に特異的に結合する特異的結合メンバーを含む、細胞外ドメインと、
ｂ）１つ以上のタンパク質分解切断部位を含む、タンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドと、
ｃ）転写活性化因子を含む、細胞内ドメインと
を有し、
前記ペプチド−ＭＨＣへの前記特異的結合メンバーの結合が、前記１つ以上のタンパク質分解切断部位での前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドの切断を誘導し、それにより前記細胞内ドメインを放出する、
キメラポリペプチド。
【請求項２】
前記特異的結合メンバーは、抗体を含む、請求項１に記載のキメラポリペプチド。
【請求項３】
前記抗体は、ナノボディ、ダイアボディ、トリアボディ、もしくはミニボディ、Ｆ（ａｂ’）2 断片、Ｆａｂ断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）である、請求項２に記載のキメラポリペプチド。
【請求項４】
前記特異的結合メンバーは、細胞内がん抗原ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する、請求項１〜３のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
【請求項５】
前記細胞内がん抗原ペプチドは、ＷＴ１ペプチドまたはＮＹ−ＥＳＯペプチドである、請求項４に記載のキメラポリペプチド。
【請求項６】
前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、そのＮ末端に、１つ以上の上皮成長因子（ＥＧＦ）反復を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
【請求項７】
前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、そのＮ末端に、２〜１１個のＥＧＦ反復を含む、請求項６に記載のキメラポリペプチド。
【請求項８】
前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、合成リンカーを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
【請求項９】
前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、１つ以上のＥＧＦ反復と１つ以上のタンパク質分解切断部位との間に合成リンカーを含む、請求項８に記載のキメラポリペプチド。
【請求項１０】
前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、５０アミノ酸長〜１０００アミノ酸長を有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
【請求項１１】
前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、３００アミノ酸長〜４００アミノ酸長を有する、請求項１０に記載のキメラポリペプチド。
【請求項１２】
前記１つ以上のタンパク質分解切断部位は、Ｓ２タンパク質分解切断部位、Ｓ３タンパク質分解切断部位、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
【請求項１３】
前記１つ以上のタンパク質分解切断部位は、Ａｌａ−Ｖａｌジペプチド配列を含むＡＤＡＭ−１７型プロテアーゼ切断部位であるＳ２タンパク質分解切断部位を含む、請求項１２に記載のキメラポリペプチド。
【請求項１４】
前記１つ以上のタンパク質分解切断部位は、Ｇｌｙ−Ｖａｌジペプチド配列を含むガンマ−セクレターゼ（γ−セクレターゼ）切断部位であるＳ３タンパク質分解切断部位を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
【請求項１５】
前記１つ以上のタンパク質分解切断部位は、Ｓ１タンパク質分解切断部位を更に含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
【請求項１６】
前記Ｓ１タンパク質分解切断部位は、アミノ酸配列Ａｒｇ−Ｘ−（Ａｒｇ／Ｌｙｓ）−Ａｒｇ（配列番号１３０）を含むフューリン様プロテアーゼ切断部位である（式中、Ｘは任意のアミノ酸）、請求項１５に記載のキメラポリペプチド。
【請求項１７】
前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｓ１タンパク質分解切断部位を欠如する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
【請求項１８】
前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、図３１Ａ〜３２Ｂに提示される配列と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
【請求項１９】
前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、図３１Ａに提示される配列または図３１Ｂに提示される配列と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有する、請求項１８に記載のキメラポリペプチド。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載のキメラポリペプチドをコードする、核酸。
【請求項２１】
目的のポリペプチド（ＰＯＩ）をコードする核酸配列に作動可能に連結した転写活性化因子に応答性の転写制御要素を更に含む、請求項２０に記載の核酸。
【請求項２２】
前記ＰＯＩは、レポータータンパク質、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、抗体、キメラ二重特異的結合メンバー、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、及び自然免疫応答誘導因子からなる群から選択される異種ポリペプチドである、請求項２１に記載の核酸。
【請求項２３】
請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の核酸を含む、組み換え発現ベクター。
【請求項２４】
細胞内で異種ポリペプチドの発現を誘導する方法であって、
細胞をペプチド−主要組織適合複合体（ペプチド−ＭＨＣ）と接触させることを含み、
前記細胞が、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のキメラポリペプチドを発現し、前記キメラポリペプチドの前記転写活性化因子に応答性の転写制御要素に作動可能に連結した前記異種ポリペプチドをコードする配列を含み、それにより前記キメラポリペプチドの前記細胞内ドメインを放出し、前記異種ポリペプチドの発現を誘導する、
方法。
【請求項２５】
前記異種ポリペプチドは、レポータータンパク質、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、抗体、キメラ二重特異的結合メンバー、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、及び自然免疫応答誘導因子である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
宿主細胞であって、
ａ）第１のペプチド−主要組織適合複合体（ペプチド−ＭＨＣ）に特異的に結合する請求項２０〜２２のいずれか一項に記載のキメラポリペプチドをコードする核酸と、
ｂ）目的のポリペプチド（ＰＯＩ）をコードする核酸に作動可能に連結した前記キメラポリペプチドの前記転写活性化因子に応答性の転写制御要素と
を含む、宿主細胞。
【請求項２７】
遺伝子改変されており、前記核酸及び前記転写制御要素が、前記宿主細胞のゲノム内に存在する、請求項２６に記載の宿主細胞。
【請求項２８】
前記核酸及び前記転写制御要素が、前記宿主細胞内で染色体外に存在する、請求項２６に記載の宿主細胞。
【請求項２９】
前記ＰＯＩは、異種ポリペプチドである、請求項２６〜２８のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項３０】
前記異種ポリペプチドが、レポータータンパク質、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、抗体、キメラ二重特異的結合メンバー、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、及び自然免疫応答誘導因子からなる群から選択される、請求項２９に記載の宿主細胞。
【請求項３１】
前記異種ポリペプチドは、第２のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合するＣＡＲである、請求項３０に記載の宿主細胞。
【請求項３２】
前記キメラポリペプチドの前記特異的結合メンバーが、第１の細胞内がん抗原ペプチドを含む第１のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合し、前記ＣＡＲが、第２の細胞内がん抗原ペプチドを含む第２のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する、請求項３１に記載の宿主細胞。
【請求項３３】
前記第１の細胞内がん抗原ペプチドは、ＷＴ１ペプチドであり、前記第２の細胞内がん抗原ペプチドは、ＮＹ−ＥＳＯペプチドである、請求項３２に記載の宿主細胞。
【請求項３４】
前記第１の細胞内がん抗原ペプチドは、ＮＹ−ＥＳＯペプチドであり、前記第２の細胞内がん抗原ペプチドは、ＷＴ１ペプチドである、請求項３２に記載の宿主細胞。
【請求項３５】
前記異種ポリペプチドは、第２のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する操作されたＴＣＲである、請求項３０に記載の宿主細胞。
【請求項３６】
前記キメラポリペプチドの前記特異的結合メンバーが、第１の細胞内がん抗原ペプチドを含む第１のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合し、前記操作されたＴＣＲが、第２の細胞内がん抗原ペプチドを含む第２のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する、請求項３５に記載の宿主細胞。
【請求項３７】
前記第１の細胞内がん抗原ペプチドは、ＷＴ１ペプチドであり、前記第２の細胞内がん抗原ペプチドは、ＮＹ−ＥＳＯペプチドである、請求項３６に記載の宿主細胞。
【請求項３８】
前記第１の細胞内がん抗原ペプチドは、ＮＹ−ＥＳＯペプチドであり、前記第２の細胞内がん抗原ペプチドは、ＷＴ１ペプチドである、請求項３６に記載の宿主細胞。
【請求項３９】
宿主細胞であって、
ａ）キメラポリペプチドをコードする核酸であって、前記キメラポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで共有結合で、
ｉ）がん細胞の表面上に存在する標的分子に特異的に結合する特異的結合メンバーを含む、細胞外ドメインと、
ｉｉ）１つ以上のタンパク質分解切断部位を含む、タンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドと、
ｉｉｉ）転写活性化因子を含む、細胞内ドメインとを有し、前記キメラポリペプチドをコードする核酸、及び、
ｂ）前記転写活性化因子に応答性の転写制御要素に作動可能に連結したキメラ二重特異的結合メンバーをコードする核酸
を含み、
前記標的分子への前記特異的結合メンバーの結合が、前記１つ以上のタンパク質分解切断部位での前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドの切断を誘導し、それにより前記細胞内ドメインを放出し、前記転写制御要素を活性化し、前記キメラ二重特異的結合メンバーを発現させる、
宿主細胞。
【請求項４０】
前記キメラ二重特異的結合メンバーは、がん抗原に特異的な結合ドメインと、免疫細胞の表面上に発現されるタンパク質に特異的な結合ドメインとを含む、請求項３９に記載の宿主細胞。
【請求項４１】
前記キメラ二重特異的結合メンバーは、少なくとも１つの抗体由来抗原−結合ドメインを含む、請求項３９または４０に記載の宿主細胞。
【請求項４２】
前記キメラ二重特異的結合メンバーは、二重特異性抗体またはその断片である、請求項４１に記載の宿主細胞。
【請求項４３】
前記キメラ二重特異的結合メンバーは、リガンド−受容体結合対の少なくとも１つの受容体またはリガンド結合ドメインを含む、請求項３９〜４１のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項４４】
前記キメラ二重特異的結合メンバーは、少なくとも１つの抗体由来抗原−結合ドメインと、リガンド−受容体結合対の少なくとも１つの受容体またはリガンド結合ドメインとを含む、請求項３９〜４３のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項４５】
免疫細胞の表面上に発現される前記タンパク質は、ＣＤ３である、請求項４０〜４４のいずれかに記載の宿主細胞。
【請求項４６】
免疫細胞の表面上に発現される前記タンパク質は、ナチュラルキラーグループ２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）受容体である、請求項４０〜４４のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項４７】
前記標的分子は、がん抗原である、請求項３９〜４６のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項４８】
前記標的分子は、組織特異的分子である、請求項３９〜４６のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項４９】
前記標的分子は、器官特異的分子である、請求項３９〜４６のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項５０】
前記標的分子は、細胞型特異的分子である、請求項３９〜４６のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項５１】
対象の新生物を治療する方法であって、
前記対象に、請求項３９〜５０のいずれか一項に記載の有効量の宿主細胞を投与することを含み、
前記新生物が、前記標的分子及びがん抗原を発現する、
方法。
【請求項５２】
宿主細胞であって、
ａ）キメラポリペプチドをコードする核酸であって、前記キメラポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで共有結合で、
ｉ）がん細胞の表面上に存在する標的分子に特異的に結合する特異的結合メンバーを含む、細胞外ドメインと、
ｉｉ）１つ以上のタンパク質分解切断部位を含む、タンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドと、
ｉｉｉ）転写活性化因子を含む、細胞内ドメインとを有し、前記キメラポリペプチドをコードする核酸、及び、
ｂ）前記転写活性化因子に応答性の転写制御要素に作動可能に連結した抗Ｆｃキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸
を含み、
前記標的分子への前記特異的結合メンバーの結合が、前記１つ以上のタンパク質分解切断部位での前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドの切断を誘導し、それにより前記細胞内ドメインを放出し、前記転写制御要素を活性化し、前記抗Ｆｃ  ＣＡＲを発現させる、
宿主細胞。
【請求項５３】
前記標的分子は、がん抗原である、請求項５２に記載の宿主細胞。
【請求項５４】
前記標的分子は、組織特異的分子である、請求項５２に記載の宿主細胞。
【請求項５５】
前記標的分子は、器官特異的分子である、請求項５２に記載の宿主細胞。
【請求項５６】
前記標的分子は、細胞型特異的分子である、請求項５２に記載の宿主細胞。
【請求項５７】
前記宿主細胞が、がん細胞の表面上に存在するがん抗原に特異的な抗体をコードし、かつ前記抗Ｆｃ  ＣＡＲによって結合されるＦｃ領域を含む核酸を更に含む、請求項５２〜５６のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項５８】
前記抗体をコードする前記核酸が、前記転写制御要素に作動可能に連結される、請求項５７に記載の宿主細胞。
【請求項５９】
対象の新生物を治療する方法であって、
前記対象に、請求項５２〜５８のいずれかに記載の有効量の宿主細胞を投与することを含み、
前記新生物が、前記標的分子を発現する、
方法。
【請求項６０】
前記対象に、がん細胞の表面上に存在するがん抗原に特異的であり、かつ前記抗Ｆｃ  ＣＡＲによって結合されるＦｃ領域を含む抗体を投与することを更に含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
宿主細胞であって、
ａ）キメラポリペプチドをコードする核酸であって、前記キメラポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで共有結合で、
ｉ）がん細胞の表面上に存在する標的分子に特異的に結合する特異的結合メンバーを含む、細胞外ドメインと、
ｉｉ）１つ以上のタンパク質分解切断部位を含む、タンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドと、
ｉｉｉ）転写活性化因子を含む、細胞内ドメインとを有し、前記キメラポリペプチドをコードする核酸、及び、
ｂ）前記転写活性化因子に応答性の転写制御要素に作動可能に連結した自然免疫応答誘導因子をコードする核酸
を含み、
前記標的分子への前記特異的結合メンバーの結合が、前記１つ以上のタンパク質分解切断部位での前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドの切断を誘導し、それにより前記細胞内ドメインを放出し、前記転写制御要素を活性化し、前記自然免疫応答誘導因子を発現させる、
宿主細胞。
【請求項６２】
前記標的分子は、組織特異的分子である、請求項６１に記載の宿主細胞。
【請求項６３】
前記標的分子は、器官特異的分子である、請求項６１に記載の宿主細胞。
【請求項６４】
前記標的分子は、細胞型特異的分子である、請求項６１に記載の宿主細胞。
【請求項６５】
前記標的分子は、がん抗原である、請求項６１に記載の宿主細胞。
【請求項６６】
前記自然免疫応答誘導因子は、細菌タンパク質またはその断片である、請求項６１〜６５のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項６７】
前記自然免疫応答誘導因子は、ウイルスタンパク質またはその断片である、請求項６１〜６５のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項６８】
前記自然免疫応答誘導因子が、真菌タンパク質またはその断片である、請求項６１〜６５のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項６９】
前記自然免疫応答誘導因子は、哺乳動物寄生虫によって発現されるタンパク質またはその断片である、請求項６１〜６８のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項７０】
前記哺乳動物寄生虫は、ヒト寄生虫である、請求項６９に記載の宿主細胞。
【請求項７１】
対象の領域内で局所自然免疫応答を誘導する方法であって、
前記対象に、請求項６１〜７０のいずれか一項に記載の有効量の宿主細胞を投与することを含み、
前記領域が、前記標的分子を発現する、
方法。
【請求項７２】
前記対象の前記領域は、新生物を含む、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
宿主細胞であって、
ａ）キメラポリペプチドをコードする核酸であって、前記キメラポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで共有結合で、
ｉ）がん細胞の表面上に存在する標的分子に特異的に結合する特異的結合メンバーを含む、細胞外ドメインと、
ｉｉ）１つ以上のタンパク質分解切断部位を含む、タンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドと、
ｉｉｉ）転写活性化因子を含む、細胞内ドメインとを有し、前記キメラポリペプチドをコードする核酸、及び、
ｂ）前記転写活性化因子に応答性の転写制御要素に作動可能に連結した免疫抑制因子をコードする核酸
を含み、
前記標的分子への前記特異的結合メンバーの結合が、前記１つ以上のタンパク質分解切断部位での前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドの切断を誘導し、それにより前記細胞内ドメインを放出し、前記転写制御要素を活性化し、前記免疫抑制因子を発現させる、
宿主細胞。
【請求項７４】
前記標的分子は、組織特異的分子である、請求項７３に記載の宿主細胞。
【請求項７５】
前記標的分子は、器官特異的分子である、請求項７３に記載の宿主細胞。
【請求項７６】
前記標的分子は、細胞型特異的分子である、請求項７３に記載の宿主細胞。
【請求項７７】
前記標的分子は、自己抗原である、請求項７３に記載の宿主細胞。
【請求項７８】
前記免疫抑制因子は、免疫抑制サイトカインである、請求項７３〜７７のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項７９】
前記免疫抑制サイトカインは、ＩＬ−１０である、請求項７８に記載の宿主細胞。
【請求項８０】
前記免疫抑制因子は、細胞間シグナリング免疫抑制リガンドである、請求項７３〜７７のいずれかに記載の宿主細胞。
【請求項８１】
前記細胞間シグナリング免疫抑制リガンドは、ＰＤ−Ｌ１である、請求項８０に記載の宿主細胞。
【請求項８２】
対象における免疫応答を抑制する方法であって、
前記対象に、請求項７３〜８１のいずれか一項に記載の有効量の宿主細胞を投与することを含み、
前記対象が、前記標的分子を発現する、
方法。
【請求項８３】
前記対象は、自己免疫疾患を有する、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
不均一腫瘍を殺傷する方法であって、
殺傷抗原を発現する第１の細胞ならびに前記殺傷抗原及び感作抗原を発現する第２の細胞を含む不均一腫瘍を、操作された免疫細胞と接触させることを含み、
前記操作された免疫細胞は、
前記感作抗原に特異的に結合する、タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドと、
前記殺傷抗原に特異的に結合する治療ポリペプチドをコードする核酸配列と、
前記タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドに応答性である核酸に作動可能に連結した転写制御要素とを含み、
前記感作抗原への前記タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの結合が、前記転写制御要素を活性化して、前記殺傷抗原への結合時に前記不均一腫瘍の前記第１及び第２の細胞を殺傷する前記治療ポリペプチドの発現を誘導する、
方法。
【請求項８５】
前記治療ポリペプチドは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記治療ポリペプチドは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）である、請求項８４に記載の方法。
【請求項８７】
前記治療ポリペプチドは、治療抗体である、請求項８４に記載の方法。
【請求項８８】
前記治療ポリペプチドは、キメラ二重特異的結合メンバーである、請求項８４に記載の方法。
【請求項８９】
前記感作抗原または前記殺傷抗原のうちの少なくとも１つは、ＭＨＣとの関連で提示される細胞内抗原である、請求項８４〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記感作抗原及び前記殺傷抗原の両方は、ＭＨＣとの関連で提示される細胞内抗原である、請求項８４〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
慣習的に、細胞挙動及び活性の制御は、発現時に細胞挙動及び／または活性を改変するタンパク質の発現を推進する、誘導性発現構築物の使用を通して達成されてきた。研究設定において、誘導性発現系は、細胞生物学、分子生物学、遺伝学、生化学、及び他のものを含む、生命科学の多くの分野についての我々の理解を大いに進歩させている。良く研究された誘導性細胞系（例えば、化学的誘導性、光学的誘導性など）は一般に、細胞挙動及び活性に網羅的に影響を与え、及び／またはある集団の特定の細胞に対する活性の変化を制限するために、または系を制御する（例えば、システムを「オン」もしくは「オフ」に切り替える）ために、ユーザ提供の入力を必要とする。近年、細胞操作は、細胞が、例えば、隣接細胞によってもたらされるようなそれらの環境内のシグナルを検出し、そのようなシグナリング入力を所望の挙動または活性出力へと自主的に伝達するような再プログラミングを試みる能力を提供している。
【発明の概要】
【０００２】
本開示は、ポリペプチドの特異的結合メンバーとその結合パートナーとの結合時に誘導される切断事象後に様々な細胞プロセスを調節する、キメラポリペプチドを提供する。キメラポリペプチドを使用して、例えば、遺伝子発現の誘導を含む、細胞機能を調節する方法もまた提供される。主題のキメラポリペプチドをコードする核酸ならびに関連する発現カセット及びベクターだけでなく、そのような核酸及び／または発現カセット及びベクターを含有する細胞もまた提供される。記載される構成要素及び方法を使用して対象を治療する方法だけでなく、主題の方法を実施するためのキットもまた提供される。
【０００３】
本開示の態様は、キメラポリペプチドであって、キメラポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで共有結合で、ａ）ペプチド−主要組織適合複合体（ペプチド−ＭＨＣ）に特異的に結合する特異的結合メンバーを含む、細胞外ドメインと、ｂ）１つ以上のタンパク質分解切断部位を含む、タンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドと、ｃ）転写活性化因子または抑制因子を含む、細胞内ドメインとを含み、ペプチド−ＭＨＣへの特異的結合メンバーの結合が、１つ以上のタンパク質分解切断部位でのＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの切断を誘導し、それにより細胞内ドメインを放出する、キメラポリペプチドを含む。
【０００４】
いくつかの実施形態において、特異的結合メンバーは、抗体を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ナノボディ、ダイアボディ、トリアボディ、もしくはミニボディ、Ｆ（ａｂ’）2 断片、Ｆａｂ断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）である。
【０００５】
いくつかの実施形態において、特異的結合メンバーは、細胞内がん抗原ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、細胞内がん抗原ペプチドは、ＷＴ１ペプチドまたはＮＹ−ＥＳＯペプチドである。
【０００６】
いくつかの実施形態において、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、そのＮ末端に、１つ以上の上皮成長因子（ＥＧＦ）反復を含む。いくつかの実施形態において、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、そのＮ末端に、２〜１１個のＥＧＦ反復を含む。いくつかの実施形態において、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、合成リンカーを含む。いくつかの実施形態において、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、１つ以上のＥＧＦ反復と１つ以上のタンパク質分解切断部位との間に合成リンカーを含む。いくつかの実施形態において、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、５０アミノ酸長〜１０００アミノ酸長を有する。いくつかの実施形態において、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、３００アミノ酸長〜４００アミノ酸長を有する。いくつかの実施形態において、１つ以上のタンパク質分解切断部位は、Ｓ２タンパク質分解切断部位、Ｓ３タンパク質分解切断部位、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、１つ以上のタンパク質分解切断部位は、Ａｌａ−Ｖａｌジペプチド配列を含むＡＤＡＭファミリー型プロテアーゼ切断部位（例えば、ＡＤＡＭ−１７型プロテアーゼ切断部位など）であるＳ２タンパク質分解切断部位を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上のタンパク質分解切断部位は、Ｇｌｙ−Ｖａｌジペプチド配列を含むガンマ−セクレターゼ（γ−セクレターゼ）切断部位であるＳ３タンパク質分解切断部位を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上のタンパク質分解切断部位は、Ｓ１タンパク質分解切断部位を更に含む。いくつかの実施形態において、Ｓ１タンパク質分解切断部位は、アミノ酸配列Ａｒｇ−Ｘ−（Ａｒｇ／Ｌｙｓ）−Ａｒｇ（配列番号１３０）（式中、Ｘは任意のアミノ酸）を含むフューリン様プロテアーゼ切断部位である。いくつかの実施形態において、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｓ１タンパク質分解切断部位を欠如する。いくつかの実施形態において、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、図３１Ａ〜３２Ｂに提示される配列と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、図３１Ａに提示される配列または図３１Ｂに提示される配列と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有する。
【０００７】
本開示の態様は、上記のキメラポリペプチドのいずれかをコードする核酸を含む。
【０００８】
いくつかの実施形態において、核酸は、目的のポリペプチド（ＰＯＩ）をコードする核酸配列に作動可能に連結した転写活性化因子または抑制因子に応答性の転写制御要素を更に含む。いくつかの実施形態において、ＰＯＩは、レポータータンパク質、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、抗体、キメラ二重特異的結合メンバー、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、及び自然免疫応答誘導因子からなる群から選択される異種ポリペプチドである。
【０００９】
本開示の態様は、上記の核酸のいずれかを含む組み換え発現ベクターを含む。
【００１０】
本開示の態様は、細胞内で異種ポリペプチドの発現を誘導する方法であって、細胞をペプチド−主要組織適合複合体（ペプチド−ＭＨＣ）と接触させることを含み、細胞が、上記のキメラポリペプチドのいずれかを発現し、キメラポリペプチドの転写活性化因子に応答性の転写制御要素に作動可能に連結した異種ポリペプチドをコードする配列を含み、それによりキメラポリペプチドの細胞内ドメインを放出し、異種ポリペプチドの発現を誘導する、方法を含む。
【００１１】
いくつかの実施形態において、異種ポリペプチドは、レポータータンパク質、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、抗体、キメラ二重特異的結合メンバー、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、及び自然免疫応答誘導因子である。
【００１２】
本開示の態様は、宿主細胞であって、ａ）第１のペプチド−主要組織適合複合体（ペプチド−ＭＨＣ）に特異的に結合する上記のキメラポリペプチドのいずれかをコードする核酸と、ｂ）目的のポリペプチド（ＰＯＩ）をコードする核酸に作動可能に連結したキメラポリペプチドの転写活性化因子に応答性の転写制御要素とを含む、宿主細胞を含む。
【００１３】
いくつかの実施形態において、宿主細胞は、遺伝子改変されており、核酸及び転写制御要素は、宿主細胞のゲノム内に存在する。いくつかの実施形態において、核酸及び転写制御要素は、宿主細胞内で染色体外に存在する。いくつかの実施形態において、ＰＯＩは、異種ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、異種ポリペプチドは、レポータータンパク質、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、抗体、キメラ二重特異的結合メンバー、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、及び自然免疫応答誘導因子からなる群から選択される異種ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、異種ポリペプチドは、第２のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合するＣＡＲである。いくつかの実施形態において、キメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、第１の細胞内がん抗原ペプチドを含む第１のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合し、ＣＡＲは、第２の細胞内がん抗原ペプチドを含む第２のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、第１の細胞内がん抗原ペプチドは、ＷＴ１ペプチドであり、第２の細胞内がん抗原ペプチドは、ＮＹ−ＥＳＯペプチドである。いくつかの実施形態において、第１の細胞内がん抗原ペプチドは、ＮＹ−ＥＳＯペプチドであり、第２の細胞内がん抗原ペプチドは、ＷＴ１ペプチドである。いくつかの実施形態において、異種ポリペプチドは、第２のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する操作されたＴＣＲである。いくつかの実施形態において、キメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、第１の細胞内がん抗原ペプチドを含む第１のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合し、操作されたＴＣＲは、第２の細胞内がん抗原ペプチドを含む第２のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、第１の細胞内がん抗原ペプチドは、ＷＴ１ペプチドであり、第２の細胞内がん抗原ペプチドは、ＮＹ−ＥＳＯペプチドである。いくつかの実施形態において、第１の細胞内がん抗原ペプチドは、ＮＹ−ＥＳＯペプチドであり、第２の細胞内がん抗原ペプチドは、ＷＴ１ペプチドである。
【００１４】
本開示の態様は、宿主細胞であって、ａ）キメラポリペプチドをコードする核酸であって、キメラポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで共有結合で、ｉ）がん細胞の表面上に存在する標的分子に特異的に結合する特異的結合メンバーを含む、細胞外ドメインと、ｉｉ）１つ以上のタンパク質分解切断部位を含む、タンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドと、ｉｉｉ）転写活性化因子を含む、細胞内ドメインとを含む、キメラポリペプチドをコードする核酸と、ｂ）転写活性化因子に応答性の転写制御要素に作動可能に連結したキメラ二重特異的結合メンバーをコードする核酸とを含み、標的分子への特異的結合メンバーの結合が、１つ以上のタンパク質分解切断部位でのＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの切断を誘導し、それにより細胞内ドメインを放出し、転写制御要素を活性化し、キメラ二重特異的結合メンバーを発現させる、宿主細胞を含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、キメラ二重特異的結合メンバーは、がん抗原に特異的な結合ドメインと、免疫細胞の表面上に発現されるタンパク質に特異的な結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態において、キメラ二重特異的結合メンバーは、少なくとも１つの抗体由来抗原−結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、キメラ二重特異的結合メンバーは、二重特異性抗体またはその断片である。いくつかの実施形態において、キメラ二重特異的結合メンバーは、リガンド−受容体結合対の少なくとも１つの受容体またはリガンド結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、キメラ二重特異的結合メンバーは、少なくとも１つの抗体由来抗原−結合ドメインと、リガンド−受容体結合対の少なくとも１つの受容体またはリガンド結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態において、免疫細胞の表面上に発現されるタンパク質は、ＣＤ３である。いくつかの実施形態において、免疫細胞の表面上に発現されるタンパク質は、ナチュラルキラーグループ２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）受容体である。いくつかの実施形態において、標的分子は、がん抗原である。いくつかの実施形態において、標的分子は、組織特異的分子である。いくつかの実施形態において、標的分子は、器官特異的分子である。いくつかの実施形態において、標的分子は、細胞型特異的分子である。
【００１６】
本開示の態様は、対象の新生物を治療する方法であって、対象に、上記のいずれかに従う有効量の宿主細胞を投与することを含み、新生物が、標的分子及びがん抗原を発現する、方法を含む。
【００１７】
本開示の態様は、宿主細胞であって、ａ）キメラポリペプチドをコードする核酸であって、キメラポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで共有結合で、ｉ）がん細胞の表面上に存在する標的分子に特異的に結合する特異的結合メンバーを含む、細胞外ドメインと、ｉｉ）１つ以上のタンパク質分解切断部位を含む、タンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドと、ｉｉｉ）転写活性化因子を含む、細胞内ドメインとを含む、キメラポリペプチドをコードする核酸と、ｂ）転写活性化因子に応答性の転写制御要素に作動可能に連結した抗Ｆｃキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸とを含み、標的分子への特異的結合メンバーの結合が、１つ以上のタンパク質分解切断部位でのＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの切断を誘導し、それにより細胞内ドメインを放出し、転写制御要素を活性化し、抗Ｆｃ  ＣＡＲを発現させる、宿主細胞を含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、標的分子は、がん抗原である。いくつかの実施形態において、標的分子は、組織特異的分子である。いくつかの実施形態において、標的分子は、器官特異的分子である。いくつかの実施形態において、標的分子は、細胞型特異的分子である。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、がん細胞の表面上に存在するがん抗原に特異的な抗体をコードし、かつ抗Ｆｃ  ＣＡＲによって結合されるＦｃ領域を含む核酸を更に含む。いくつかの実施形態において、抗体をコードする核酸は、転写制御要素に作動可能に連結される。
【００１９】
本開示の態様は、対象の新生物を治療する方法であって、対象に、上記の有効量の宿主細胞のいずれかを投与することを含み、新生物が、標的分子を発現する、方法を含む。
【００２０】
いくつかの実施形態において、本方法は、対象に、がん細胞の表面上に存在するがん抗原に特異的であり、かつ抗Ｆｃ  ＣＡＲによって結合されるＦｃ領域を含む抗体を投与することを更に含む。
【００２１】
本開示の態様は、宿主細胞であって、ａ）キメラポリペプチドをコードする核酸であって、キメラポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで共有結合で、ｉ）がん細胞の表面上に存在する標的分子に特異的に結合する特異的結合メンバーを含む、細胞外ドメインと、ｉｉ）１つ以上のタンパク質分解切断部位を含む、タンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドと、ｉｉｉ）転写活性化因子を含む、細胞内ドメインとを含む、キメラポリペプチドをコードする核酸と、ｂ）転写活性化因子に応答性の転写制御要素に作動可能に連結した自然免疫応答誘導因子をコードする核酸とを含み、標的分子への特異的結合メンバーの結合が、１つ以上のタンパク質分解切断部位でのＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの切断を誘導し、それにより細胞内ドメインを放出し、転写制御要素を活性化し、自然免疫応答誘導因子を発現させる、宿主細胞を含む。
【００２２】
いくつかの実施形態において、標的分子は、組織特異的分子である。いくつかの実施形態において、標的分子は、器官特異的分子である。いくつかの実施形態において、標的分子は、細胞型特異的分子である。いくつかの実施形態において、標的分子は、がん抗原である。いくつかの実施形態において、自然免疫応答誘導因子は、細菌タンパク質またはその断片である。いくつかの実施形態において、自然免疫応答誘導因子は、ウイルスタンパク質またはその断片である。いくつかの実施形態において、自然免疫応答誘導因子は、真菌タンパク質またはその断片である。いくつかの実施形態において、自然免疫応答誘導因子は、哺乳動物寄生虫によって発現されるタンパク質またはその断片である。いくつかの実施形態において、哺乳動物寄生虫は、ヒト寄生虫である。
【００２３】
本開示の態様は、対象の領域内で局所自然免疫応答を誘導する方法であって、対象に、上記の有効量の宿主細胞を投与することを含み、領域が、標的分子を発現する、方法を含む。いくつかの実施形態において、対象の領域は、新生物を含む。
【００２４】
本開示の態様は、宿主細胞であって、ａ）キメラポリペプチドをコードする核酸であって、キメラポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで共有結合で、ｉ）がん細胞の表面上に存在する標的分子に特異的に結合する特異的結合メンバーを含む、細胞外ドメインと、ｉｉ）１つ以上のタンパク質分解切断部位を含む、タンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドと、ｉｉｉ）転写活性化因子を含む、細胞内ドメインとを含む、キメラポリペプチドをコードする核酸と、ｂ）転写活性化因子に応答性の転写制御要素に作動可能に連結した免疫抑制因子をコードする核酸とを含み、標的分子への特異的結合メンバーの結合が、１つ以上のタンパク質分解切断部位でのＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの切断を誘導し、それにより細胞内ドメインを放出し、転写制御要素を活性化し、免疫抑制因子を発現させる、宿主細胞を含む。
【００２５】
いくつかの実施形態において、標的分子は、組織特異的分子である。いくつかの実施形態において、標的分子は、器官特異的分子である。いくつかの実施形態において、標的分子は、細胞型特異的分子である。いくつかの実施形態において、標的分子は、自己抗原である。いくつかの実施形態において、免疫抑制因子は、免疫抑制サイトカインである。いくつかの実施形態において、免疫抑制サイトカインは、ＩＬ−１０である。いくつかの実施形態において、免疫抑制因子は、細胞間シグナリング免疫抑制リガンドである。いくつかの実施形態において、細胞間シグナリング免疫抑制リガンドは、ＰＤ−Ｌ１である。
【００２６】
本開示の態様は、対象における免疫応答を抑制する方法であって、対象に、上記の有効量の宿主細胞のいずれかを投与することを含み、対象が、標的分子を発現する、方法を含む。いくつかの実施形態において、対象は、自己免疫疾患を有する。
【００２７】
本開示の態様は、不均一腫瘍を殺傷する方法であって、殺傷抗原を発現する第１の細胞ならびに殺傷抗原及び感作抗原を発現する第２の細胞を含む不均一腫瘍を、操作された免疫細胞と接触させることを含み、操作された免疫細胞が、感作抗原に特異的に結合する、タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドと、殺傷抗原に特異的に結合する治療ポリペプチドをコードする核酸配列と、タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドに応答性である核酸に作動可能に連結した転写制御要素とを含み、感作抗原へのタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの結合が、転写制御要素を活性化して、殺傷抗原への結合時に不均一腫瘍の第１及び第２の細胞を殺傷する治療ポリペプチドの発現を誘導する、方法を含む。
【００２８】
いくつかの実施形態において、治療ポリペプチドは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。いくつかの実施形態において、治療ポリペプチドは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）である。いくつかの実施形態において、治療ポリペプチドは、治療抗体である。いくつかの実施形態において、治療ポリペプチドは、キメラ二重特異的結合メンバーである。いくつかの実施形態において、感作抗原または殺傷抗原のうちの少なくとも１つが、ＭＨＣとの関連で提示される細胞内抗原である。いくつかの実施形態において、感作抗原及び殺傷抗原の両方が、ＭＨＣとの関連で提示される細胞内抗原である。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】受信細胞上に発現されるタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチド（ｓｙｎＮｏｔｃｈ）の一実施形態と、送信細胞の主要組織適合複合体（ＭＨＣ）提示抗原とが特異的に結合して、受信細胞内で遺伝子またはコード配列（「Ｘ」）の発現を誘導することを模式的に示す。
【図２】図１に一般的に示される、ＭＨＣ提示ＷＴ１抗原に特異的な、本明細書に記載の一実施形態に従うタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドを発現する受信細胞内での、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ）レポーターの特異的発現を実証する。レポーターは、受信細胞がＭＨＣ提示ＷＴ１抗原を発現する送信細胞に接触した場合には発現されるが、この抗原を発現しない送信細胞に接触した場合には発現されない。
【図３】タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドのＷＴ１細胞内抗原に依存した活性化を示す図２に関連する、定量化を提示する。
【図４】本明細書に記載の一実施形態に従う、抗ＭＨＣ提示ＷＴ１のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの感受性及び抗原濃度に依存したレポーター活性化を実証する。
【図５】一実施形態に従う、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞内での、抗ＭＨＣ提示ＷＴ１のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの感受性及び抗原濃度に依存したレポーター活性化を実証する。
【図６】ＭＨＣ提示ＮＹ−ＥＳＯ１抗原に特異的なＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の発現を推進するＭＨＣ提示ＷＴ１特異的キメラポリペプチドを利用する、タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチド開閉型回路を模式的に示す。示された実施形態において、Ｔ細胞は、ＷＴ１及びＮＹ−ＥＳＯ１細胞内抗原の両方を発現する標的細胞に接触した場合にのみ活性化される。
【図７】ＷＴ１及びＮＹ−ＥＳＯ１細胞内抗原の両方を発現する標的細胞に接触した場合のみの、図６に示される系に従う、（ＣＤ６９活性化マーカー発現によって示される）タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチド開閉型Ｔ細胞活性化を示す。
【図８】操作されたＴ細胞がＷＴ１及びＮＹ−ＥＳＯ１細胞内抗原の両方を発現する標的細胞に接触した場合のみの、図６に示される系に従う、有意なタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチド開閉型標的細胞殺傷を示す。
【図９】ＭＨＣ提示ＮＹ−ＥＳＯ１抗原に特異的なＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の発現を推進する抗ＧＦＰ特異的キメラポリペプチドを利用する、タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチド開閉型回路を模式的に示す。
【図１０】表面−ＧＦＰ及びＮＹ−ＥＳＯ１細胞内抗原の両方を発現する標的に接触した場合の、図９に示されるＴ細胞の活性化を模式的に示す。
【図１１】表面−ＧＦＰ及びＮＹ−ＥＳＯ１細胞内抗原の両方を発現する標的細胞に接触した場合のみの、図９及び図１０に示される系に従う、（ＣＤ６９活性化マーカー発現によって示される）有意なタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチド開閉型Ｔ細胞活性化を示す。
【図１２】表面−ＧＦＰ及びＮＹ−ＥＳＯ１細胞内抗原の両方を発現する標的細胞に接触した場合の、図９及び図１０に示される系に従う、タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチド開閉型Ｔ細胞増殖を示す。
【図１３】表面−ＧＦＰ及びＮＹ−ＥＳＯ１細胞内抗原の両方を発現する標的細胞に接触した場合のみの、図９及び図１０に示される系に従う、有意なタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチド開閉型Ｔ２標的細胞殺傷を示す。
【図１４】表面−ＧＦＰ及びＮＹ−ＥＳＯ１細胞内抗原の両方を発現する標的細胞に接触した場合のみの、図９及び図１０に示される系に従う、有意なタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチド開閉型Ａ３７５標的細胞殺傷を示す。抗ＮＹ−ＥＳＯ１  ＴＣＲを恒常的に発現するＣＤ８  Ｔ細胞による標的細胞殺傷との比較は、開閉型ＴＣＲ発現についての特異性の増強を実証することが示される。
【図１５】第１の細胞内抗原（「抗原Ａ」）に特異的なタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチド（ｓｙｎＮｏｔｃｈ）の一実施形態を利用して、第２の細胞内抗原（「抗原Ｂ」）に特異的なＴＣＲの発現を推進する、二重細胞内−抗原回路の一般的な模式図を提示する。
【図１６】Ｔ細胞をＣＤ１９＋腫瘍へと再標的化するα−ＣＤ１９／ＣＤ３二重特異性抗体であるブリナツモマブの発現を制御する、α−ＧＦＰ  ｓｙｎＮｏｔｃｈレセプターで操作したＣＤ４＋Ｔ細胞を示す。
【図１７】表面ＧＦＰ＋のみ、ＣＤ１９＋のみ、または表面ＧＦＰ／ＣＤ１９＋Ｋ５６２と共に同時培養した後に、ｓｙｎＮｏｔｃｈ  Ｔ細胞上のＣＤ６９（活性化マーカー）発現を示す、図１６に関連するヒストグラムデータを提示する。Ｔ細胞は、表面ＧＦＰ／ＣＤ１９  Ｋ５６２の存在下では強く活性化し、ＣＤ１９＋のみＫ５６２と共にインキュベートした場合には、ブリナツモマブ発現の低レベルの基礎漏出のために、わずかなパーセンテージのＴ細胞が活性化する。
【図１８】ＣＤ１９−非標的Ｋ５６２及び標的ＣＤ１９＋を、それぞれ左側腹部及び右側腹部に皮下注射したＮＳＧマウスを示す。腫瘍移植の４日後、ブリナツモマブ（α−ＣＤ１９／ＣＤ３  ＢｉＴＥ）発現を制御するα−ＧＦＰ  ｓｙｎＮｏｔｃｈ  Ｔ細胞を、マウスに静脈内注射した。２５日間にわたって、腫瘍をカリパスによって測定した。
【図１９】（図１８に示される）ブリナツモマブ（α−ＣＤ１９／ＣＤ３  ＢｉＴＥ）発現を制御するα−ＧＦＰ  ｓｙｎＮｏｔｃｈレセプターで操作したＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞で治療したマウスにおける、両側のＣＤ１９＋及びＧＦＰ／ＣＤ１９＋Ｋ５６２腫瘍成長曲線を提示する。二重抗原ＧＦＰ／ＣＤ１９＋腫瘍は、選択的に除去される（ｎ＝５匹のマウス、誤差＝平均値の標準誤差、有意性はスチューデントｔ検定によって決定、**ｐ≦０．０１）。
【図２０】フラゲリンの発現を制御するα−ＧＦＰ  ｓｙｎＮｏｔｃｈレセプターで操作したＣＤ４＋Ｔ細胞を示す。レポーターアッセイにおいて、表面ＧＦＰ＋Ｋ５６２またはＧＦＰ−Ｋ５６２と共に同時培養した後にＴ細胞から上清を収集し、ｈＴＬＲ５  ＨＥＫ青色分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポーター細胞に添加した。２４時間後、ＳＥＡＰ活性を監視し、上清中のフラゲリンのレベルを測定した。
【図２１】図２０に示される、誘導された自然免疫メディエーターレポーターアッセイの定量化を提示する。
【図２２】本明細書に記載の一実施形態に従って、不均一腫瘍を認識し、それを治療するようなＴ細胞のプログラミングを模式的に示す。
【図２３】本明細書に記載の一実施形態に従って、ＧＦＰ「感作」抗原及びＣＤ１９「殺傷」抗原を発現する不均一腫瘍を認識し、それを治療するようなＴ細胞のプログラミングを実証するように設計したモデル系を模式的に示す。
【図２４】図２３に従う、インビトロでモデリングした二重抗原不均一腫瘍（「不均一混合物」）の効果的な標的化及び殺傷を実証する。
【図２５】様々な比率の感作抗原発現細胞及び殺傷抗原発現細胞のモデル腫瘍を使用する、図２３に示される不均一腫瘍殺傷のモデルの更なる定量化を提示する。「ＣＤ１９＋標的」のバーは上部にあり、「ＧＦＰ／ＣＤ１９＋標的」のバーは下部にある。
【図２６】１：３の比率の感作抗原発現細胞対殺傷抗原発現細胞を有する腫瘍の、図２３に示されるモデル系に従う不均一腫瘍殺傷の時間経過を提示する。
【図２７】１：１９の比率の感作抗原発現細胞対殺傷抗原発現細胞を有する腫瘍の、図２３に示されるモデル系に従う不均一腫瘍殺傷の時間経過を提示する。
【図２８】免疫抑制物質ＰＤ−Ｌ１及びＩＬ−１０の発現を制御する、α−ＣＤ１９  ｓｙｎＮｏｔｃｈレセプターで操作したＣＤ４＋Ｔ細胞を模式的に示す。
【図２９】図２８に示されるように、ＣＤ１９＋Ｋ５６２またはＣＤ１９−Ｋ５６２と共に２４時間同時培養した後に、ＰＤ−Ｌ１及び細胞内ＩＬ−１０を発現するｓｙｎＮｏｔｃｈ  Ｔ細胞のパーセンテージの定量化を提示する。上清中のＩＬ−１０の量もまた、ＥＬＩＳＡによって決定した。
【図３０−１】Ａ〜Ｄは、本開示のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの例示的なＮｏｔｃｈ制御領域の模式図を提示する。
【図３０−２】Ｅ〜Ｇは、本開示のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの例示的なＮｏｔｃｈ制御領域の模式図を提示する。
【図３１Ａ−１】様々な種のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜７）を提示する。
【図３１Ａ−２】様々な種のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜７）を提示する。
【図３１Ｂ−１】様々な種のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜７）を提示する。
【図３１Ｂ−２】様々な種のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜７）を提示する。
【図３１Ｃ】様々な種のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜７）を提示する。
【図３１Ｄ−１】様々な種のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜７）を提示する。
【図３１Ｄ−２】様々な種のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜７）を提示する。
【図３１Ｅ−１】様々な種のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜７）を提示する。
【図３１Ｅ−２】様々な種のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜７）を提示する。
【図３１Ｆ−１】様々な種のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜７）を提示する。
【図３１Ｆ−２】様々な種のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜７）を提示する。
【図３１Ｇ−１】様々な種のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜７）を提示する。
【図３１Ｇ−２】様々な種のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜７）を提示する。
【図３２】Ａ及びＢは、ＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドのＮｏｔｃｈ制御領域の例及びその中の構成要素（配列番号１６〜１７）を示す。
【図３３】野生型親和性ＴＣＲまたは増強親和性ＴＣＲのいずれかの発現を推進する、タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチド開閉型回路を模式的に示す。
【図３４】図３３に示される系に従う、二重抗原開閉型サイトカイン分泌を示す。
【図３５】操作されたＣＤ４  Ｔ細胞内でＴＣＲの発現を推進する、タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチド開閉型回路を模式的に示す。
【図３６】図３５に示される系に従う、標的化二重抗原を発現する標的細胞に応答した高レベルのサイトカイン分泌を示す。
【図３７】操作されたＣＤ４  Ｔ細胞またはＣＤ８  Ｔ細胞を使用して、臨床的に関連する抗原対を標的化する、タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチド開閉型回路を模式的に示す。
【図３８】図３７に示される系に従う、操作されたＣＤ８  Ｔ細胞及びＣＤ４  Ｔ細胞の両方による、臨床的に関連する抗原対を発現する標的細胞の特異的殺傷を示す。
【図３９】ＨＬＡ−Ａ２／Ｍａｒｔ１に特異的なＴＣＲの発現を推進する抗ＧＦＰ特異的キメラポリペプチドを利用する、タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチド開閉型回路を模式的に示す。
【図４０】表面ＧＦＰ及びＨＬＡ−Ａ２／Ｍａｒｔ１抗原の両方を発現する標的細胞の存在下でのみ、図３９に模式的に示される回路を発現するＴ細胞の特異的活性化を示す。
【図４１】抗ＨＥＲ２  ＣＡＲの発現を推進する抗ＨＬＡ−Ａ２／ＷＴ１特異的キメラポリペプチドを利用する、タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチド開閉型内部−外部回路を模式的に示す。
【図４２】内部抗原（ＨＬＡ−Ａ２／ＷＴ１）及び外部抗原（ＨＥＲ２）の両方を発現する標的細胞の存在下でのみ、図４１に模式的に示される回路を発現するＴ細胞の特異的活性化を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
定義
本明細書で互換的に使用される「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は、任意の長さのヌクレオチドの重合体形態、つまりリボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれかを指す。したがって、この用語は、一本鎖、二本鎖、または多重鎖のＤＮＡまたはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド、あるいはプリン塩基及びピリミジン塩基、または他の天然、化学修飾もしくは生化学修飾、非天然、もしくは誘導体化ヌクレオチド塩基を含む重合体を含むが、これらに限定されない。
【００３１】
「作動可能に連結した」は、そのように記載される構成要素がその意図される様式で機能することを可能する関係にある、並立を指す。例えば、プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を与える場合、そのプロモーターはそのコード配列に作動可能に連結される。作動可能に連結した核酸配列は、隣接していてもよいが、必ずしも隣接している必要はない。例えば、場合によっては、プロモーターに作動可能に連結したコード配列は、プロモーターに隣接していてもよい。場合によっては、プロモーターに作動可能に連結したコード配列は、コード配列及び非コード配列を含む１つ以上の介在配列によって分離されてもよい。また、場合によっては、３つ以上の配列が作動可能に連結されてもよい（例えば、２つ以上のコード配列が単一のプロモーターに作動可能に連結される場合を含むが、これに限定されない）。
【００３２】
「ベクター」または「発現ベクター」は、プラスミド、ファージ、ウイルス、またはコスミドなどのレプリコンであり、これに対して別のＤＮＡセグメント（すなわち、「挿入断片」）が結合して、細胞内で結合されたセグメントの複製をもたらす。
【００３３】
本明細書で使用される場合、「異種」は、それぞれ天然（例えば、天然に存在する）核酸またはタンパク質には見出されないヌクレオチドまたはポリペプチド配列を意味する。異種核酸またはポリペプチドは、その核酸またはポリペプチドが存在するか、または発現される生物もしくは細胞とは異なる種に由来し得る。したがって、異種核酸またはポリペプチドは一般に、それが存在する細胞または生物と比較して、異なる進化的起源を持つ。
【００３４】
「抗体」及び「免疫グロブリン」という用語は、任意のアイソタイプの抗体または免疫グロブリン、抗原への特異的結合を保持する抗体の断片（Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びＦｄ断片を含むが、これらに限定されない）、キメラ抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体（ｓｃＡｂ）、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）、単一ドメイン重鎖抗体、単一ドメイン軽鎖抗体、ナノボディ、二重特異性抗体、多特異性抗体、ならびに抗体及び非抗体タンパク質の抗原−結合（本明細書では抗原結合とも称される）部分を含む融合タンパク質を含む。抗体は、例えば、放射性同位体、検出可能な産物を生成する酵素、蛍光タンパク質などで検出可能に標識され得る。抗体は、特異的結合対のメンバー（例えば、ビオチン（ビオチン−アビジン特異的結合対のメンバー）などの他の部分に更に共役されてもよい。抗体はまた、ポリスチレンプレートまたはビーズなどを含むが、これらに限定されない、固体支持体にも結合してもよい。Ｆａｂ’、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）2 、及びまたは抗原への特異的結合を保持する他の抗体断片、ならびにモノクローナル抗体もまた、この用語によって包含される。本明細書で使用される場合、モノクローナル抗体は、それら全てが反復細胞複製によって単一の細胞から産生された同一の細胞群によって産生される抗体である。つまり、細胞のクローンは、単一の抗体種のみを産生する。モノクローナル抗体は、雑種細胞産生技術を使用して産生することができるが、当業者にとって既知である他の産生方法（例えば、抗体ファージ提示ライブラリ由来の抗体）が使用されてもよい。抗体は、一価または二価であり得る。抗体は、４つのポリペプチド鎖（ジスルフィド結合によって接続された２つの重鎖及び２つの軽鎖）からなる「Ｙ形」分子であるＩｇ単量体であり得る。
【００３５】
本明細書で使用される場合、「ヒト化免疫グロブリン」という用語は、異なる起源の免疫グロブリンの部分を含む免疫グロブリンを指し、少なくとも１つの部分が、ヒト起源のアミノ酸配列を含むものである。例えば、ヒト化抗体は、必要な特異性を有する非ヒト起源（マウスなど）の免疫グロブリンに由来する部分と、ヒト起源の免疫グロブリン配列に由来する部分（例えば、キメラ免疫グロブリン）とを慣習的な技術（例えば、合成）によって化学的に共に接合させたもの、または遺伝子操作技術を使用して近接ポリペプチドとして調製したもの（例えば、キメラ抗体のタンパク質部分をコードするＤＮＡを発現させて、近接ポリペプチド鎖を産生することができる）を含み得る。ヒト化免疫グロブリンの別の例は、非ヒト起源の抗体に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）と、ヒト起源の軽鎖及び／または重鎖に由来するフレームワーク領域とを含む、１つ以上の免疫グロブリン鎖を含有する免疫グロブリン（例えば、フレームワーク変化を有するＣＤＲ移植抗体またはそれを有しないＣＤＲ移植抗体）である。キメラまたはＣＤＲ移植単鎖抗体もまた、ヒト化免疫グロブリンという用語によって包含される。例えば、Ｃａｂｉｌｌｙらの米国特許第４，８１６，５６７号、Ｃａｂｉｌｌｙらの欧州特許第０，１２５，０２３Ｂ１号、Ｂｏｓｓらの米国特許第４，８１６，３９７号、Ｂｏｓｓらの欧州特許第０，１２０，６９４Ｂ１号、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｓ．らのＷＯ８６／０１５３３、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｓ．らの欧州特許第０，１９４，２７６Ｂ１号、Ｗｉｎｔｅｒの米国特許第５，２２５，５３９号、Ｗｉｎｔｅｒの欧州特許第０，２３９，４００Ｂ１号、Ｐａｄｌａｎ，Ｅ．Ａ．らの欧州特許出願第０，５１９，５９６Ａ１号を参照されたい。単鎖抗体に関して、Ｌａｄｎｅｒらの米国特許第４，９４６，７７８号、Ｈｕｓｔｏｎの米国特許第５，４７６，７８６号、及びＢｉｒｄ，Ｒ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２：４２３−４２６（１９８８）もまた参照されたい。
【００３６】
本明細書で使用される場合、「ナノボディ」（Ｎｂ）という用語は、天然に存在する重鎖抗体に由来する最小の抗原結合断片または単一可変ドメイン（ＶＨＨ）を指し、当業者にとって既知である。それらは、ラクダ類に見られる重鎖のみ抗体に由来する（Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎら、１９９３；Ｄｅｓｍｙｔｅｒら、１９９６）。「ラクダ類」の科では、軽鎖ポリペプチドを欠く免疫グロブリンが見出される。「ラクダ類」は、旧世界ラクダ（Ｃａｍｅｌｕｓ  ｂａｃｔｒｉａｎｕｓ及びＣａｍｅｌｕｓ  ｄｒｏｍｅｄａｒｉｕｓ）ならびに新世界ラクダ（例えば、Ｌｌａｍａ  ｐａｃｃｏｓ、Ｌｌａｍａ  ｇｌａｍａ、Ｌｌａｍａ  ｇｕａｎｉｃｏｅ、及びＬｌａｍａ  ｖｉｃｕｇｎａ）を含む。単一可変ドメイン重鎖抗体は、本明細書ではナノボディまたはＶＨＨ抗体と称される。
【００３７】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分、例えば、インタクトな抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2 、及びＦｖ断片、ダイアボディ、直鎖抗体（Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５））、ドメイン抗体（ｄＡｂ、Ｈｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：４８４）、単鎖抗体分子、ならびに抗体断片から形成される多特異性抗体が挙げられる。抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片（各々が単一抗原結合部位を有する）と、容易に結晶化する能力を反映する名称である残りの「Ｆｃ」断片とがもたらされる。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を有し、かつ依然として抗原を架橋することができるＦ（ａｂ’）2 断片がもたらされる。
【００３８】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含有する最小の抗体断片である。この領域は、緊密な非共有結合性会合にある１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。この構成において、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶH −ＶL 二量体の表面上に抗原結合部位を画定する。合わせて、６つのＣＤＲが抗体に抗原結合特異性を与える。しかしながら、結合部位全体よりも低い親和性を備えてはいるが、単一可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえも、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。
【００３９】
「Ｆａｂ」断片はまた、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ1 ）も含有する。Ｆａｂ断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含む重鎖ＣＨ1 ドメインのカルボキシル末端に数個の残基が付加されている点でＦａｂ’断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を持つＦａｂ’の本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）2 抗体断片は元来、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学結合もまた既知である。
【００４０】
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ及びラムダと呼ばれる２つの明確に異なる型のうちの１つに割り当てることができる。それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭという５つの主要なクラスが存在し、これらのクラスのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２に更に分けることができる。サブクラスは、例えば、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂなどの型に更に分けることができる。
【００４１】
「単鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶH ドメイン及びＶL ドメインを含み、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖内に存在する。いくつかの実施形態において、Ｆｖポリペプチドは、ＶH ドメインとＶL ドメインとの間にポリペプチドリンカーを更に含み、これにより、ｓＦｖが抗原結合のために所望の構造を形成することが可能になる。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい。
【００４２】
「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小抗体断片を指し、これらの断片は、同じポリペプチド鎖（ＶH −ＶL ）内の軽鎖可変ドメイン（ＶL ）に接続した重鎖可変ドメイン（ＶH ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短過ぎるリンカーを使用することによって、ドメインを別の鎖の相補的ドメインと対合させ、２つの抗原結合部位を作製させる。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ９３／１１１６１、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８により詳細に記載されている。
【００４３】
本明細書で使用される場合、「親和性」という用語は、２つの物質（例えば、抗体及び抗原）の可逆結合の平衡定数を指し、解離定数（ＫD ）として表される。親和性は、無関係のアミノ酸配列に対する抗体の親和性よりも、少なくとも１倍大きい、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも３０倍大きい、少なくとも４０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも６０倍大きい、少なくとも７０倍大きい、少なくとも８０倍大きい、少なくとも９０倍大きい、少なくとも１００倍、もしくは少なくとも１，０００倍大きいか、またはそれ以上大きくあり得る。標的タンパク質に対する抗体の親和性は、例えば、約１００ナノモル（ｎＭ）〜約０．１ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１ピコモル（ｐＭ）、もしくは約１００ｎＭ〜約１フェムトモル（ｆＭ）、またはそれ以上であり得る。本明細書で使用される場合、「結合力」という用語は、２つ以上の物質の複合体の希釈後の解離に対する耐性を指す。「免疫反応性」及び「優先的に結合する」という用語は、抗体及び／または抗原結合断片に関して本明細書で互換的に使用される。
【００４４】
「結合」という用語は、例えば、共有結合、静電結合、疎水結合、及びイオン結合、及び／または水素結合の相互作用（塩橋及び水架橋などの相互作用を含む）による２つの分子間の直接会合を指す。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドの細胞外ドメイン内に存在する特異的結合メンバーは、ペプチド−主要組織適合複合体（ペプチド−ＭＨＣ）に特異的に結合する。「特異的結合」は、少なくとも約１０-7Ｍ以上、例えば、５×１０-7Ｍ、１０-8Ｍ、５×１０-8Ｍ、及びそれ以上の親和性を有する結合を指す。「非特異的結合」は、約１０-7Ｍ未満の親和性を有する結合、例えば、１０-6Ｍ、１０-5Ｍ、１０-4Ｍなどの親和性を有する結合を指す。
【００４５】
本明細書で互換的に使用される「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、任意の長さのアミノ酸（遺伝子コードアミノ酸及び非遺伝子コードアミノ酸、化学修飾もしくは生化学修飾アミノ酸、または誘導体化アミノ酸を含み得る）の重合体形態ならびに修飾ペプチド主鎖を有するポリペプチドを指す。この用語は、異種アミノ酸配列を有する融合タンパク質、Ｎ末端メチオニン残基の有無に関わらず異種及び相同リーダー配列を有する融合タンパク質、免疫学的にタグ付けされたタンパク質などを含むが、これらに限定されない、融合タンパク質を含む。
【００４６】
「単離」ポリペプチドは、その天然環境の構成要素から特定され、分離及び／または回収されたものである。その天然環境の混入構成要素は、そのポリペプチドの診断上または治療上の使用に干渉する材料であり、これらには、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が含まれ得る。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、（１）ローリー法によって決定される、抗体の９０重量％超、９５重量％超、もしくは９８重量％超、例えば、９９重量％超まで、（２）回転カップ配列決定装置の使用によって、Ｎ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るために十分な程度まで、または（３）還元もしくは非還元条件下でクーマシーブルーもしくは銀染色を使用して、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって均一になるまで、精製される。単離ポリペプチドは、組み換え細胞内にインサイチュでポリペプチドを含むが、これは、ポリペプチドの天然環境の少なくとも１つの構成要素が存在しないためである。場合によっては、単離ポリペプチドは、少なくとも１つの精製ステップにより調製される。
【００４７】
本明細書で互換的に使用される「キメラ抗原受容体」及び「ＣＡＲ」という用語は、細胞外ドメイン（例えば、リガンド／抗原結合ドメイン）、膜貫通ドメイン、及び１つ以上の細胞内シグナリングドメインを一般には含むが、これらのみを排他的に含むわけではない免疫細胞の活性化を引き起こすか、またはそれを阻害することができる人工的な多モジュール分子を指す。ＣＡＲという用語は、特にＣＡＲ分子のみに限定されず、ＣＡＲバリアントもまた含まれる。ＣＡＲバリアントには、ＣＡＲの細胞外部分（例えば、リガンド結合部分）及び細胞内部分（例えば、細胞内シグナリング部分）が２つの別々の分子上に存在する、分離ＣＡＲが含まれる。ＣＡＲバリアントには、例えば、分離ＣＡＲの２つの部分の条件的なヘテロ二量体化が薬理学的に制御されている分離ＣＡＲ（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／１２７２６１Ａ１号及び米国特許出願第２０１５／０３６８３４２Ａ１号に記載のものであり、これらの開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる）を含む条件的に活性化可能なＣＡＲである、ＯＮスイッチＣＡＲも含まれる。ＣＡＲバリアントには、一次ＣＡＲの活性を増幅または阻害し得る二次ＣＡＲ結合ドメインを含む、二重特異性ＣＡＲも含まれる。ＣＡＲバリアントには、例えば、二次ＣＡＲ結合ドメインの結合が一次ＣＡＲ活性化の阻害をもたらす二重特異性ＣＡＲ系の構成要素として使用され得る、阻害キメラ抗原受容体（ｉＣＡＲ）も含まれる。ＣＡＲ分子及びそれらの誘導体（すなわち、ＣＡＲバリアント）は、例えば、ＰＣＴ出願第ＵＳ２０１４／０１６５２７号、Ｆｅｄｏｒｏｖ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ（２０１３）；５（２１５）：２１５ｒａ１７２、Ｇｌｉｅｎｋｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｆｒｏｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（２０１５）６：２１、Ｋａｋａｒｌａ＆Ｇｏｔｔｓｃｈａｌｋ  ５２  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ（２０１４）２０（２）：１５１−５、Ｒｉｄｄｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ（２０１４）２０（２）：１４１−４、Ｐｅｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ（２０１４）２０（２）：１２７−３３、Ｃｈｅａｄｌｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ（２０１４）２５７（１）：９１−１０６、Ｂａｒｒｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｍｅｄ（２０１４）６５：３３３−４７、Ｓａｄｅｌａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ（２０１３）３（４）：３８８−９８、Ｃａｒｔｅｌｌｉｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ（２０１０）９５６３０４に記載され、これらの開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。有用なＣＡＲには、Ｎｏｖａｒｔｉｓ（Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）によって商品化されるレンチウイルス負荷ＣＴＬ０１９（チサゲンレクロイセル−Ｔ）ＣＡＲ−Ｔ細胞によって発現される、抗ＣＤ１９−４−１ＢＢ−ＣＤ３ζＣＡＲもまた含まれる。
【００４８】
本明細書で使用される場合、「治療」、「治療すること」、「治療する」などの用語は、所望の薬理学的及び／または生理学的効果を得ることを指す。その効果は、疾患もしくはその症状を完全にもしくは部分的に予防するという観点で予防的であり得、及び／または疾患及び／またはその疾患に起因する有害作用の部分的もしくは完全な治癒という観点で治療的であり得る。本明細書で使用される場合、「治療」は、哺乳動物、特にヒトにおける疾患の任意の治療を包含し、（ａ）その疾患に罹りやすいが、まだそれを有するとは診断されていない対象において疾患の発生を予防すること、（ｂ）その疾患を阻害すること、すなわち、その発症を抑止すること、及び（ｃ）その疾患を軽減すること、すなわち、その疾患の退行を引き起こすことを含む。
【００４９】
「治療有効量」または「有効量」は、疾患を治療するために哺乳動物または他の対象に投与した場合に、その疾患のそのような治療をもたらすために十分である、ある薬剤の量または２つの薬剤の合計量を指す。「治療有効量」は、薬剤（複数可）、疾患及びその重症度、ならびに治療される対象の年齢、体重などに応じて変動する。
【００５０】
本明細書で互換的に使用される「個体」、「対象」、「宿主」、及び「患者」は、マウス（例えば、ラット、マウス）、非ヒト霊長類、ヒト、イヌ、ネコ、有蹄動物（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ）、ウサギ類などを含むが、これらに限定されない、哺乳動物を指す。場合によっては、個体は、ヒトである。場合によっては、個体は、非ヒト霊長類である。場合によっては、個体は、齧歯類、例えば、ラットまたはマウスである。場合によっては、個体は、ウサギ類、例えば、ウサギである。
【００５１】
本明細書で使用される場合、「免疫細胞」という用語は一般に、骨髄内で産生される造血幹細胞（ＨＳＣ）に由来する白血球細胞（白血球）を含む。「免疫細胞」には、例えば、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）及び骨髄系由来細胞（好中球、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、樹状細胞）が含まれる。
【００５２】
「Ｔ細胞」には、Ｔヘルパー細胞（ＣＤ４+ 細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８+ 細胞）、Ｔ制御細胞（Ｔｒｅｇ）、及びガンマ−デルタＴ細胞を含む、ＣＤ３を発現する全ての型の免疫細胞が含まれる。
【００５３】
「細胞傷害性細胞」には、ＣＤ８+ Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、及び好中球が含まれ、これらの細胞は、細胞傷害性応答を媒介することができる。
【００５４】
本明細書で使用される場合、「合成」という用語は一般に、人工由来のポリペプチドまたは天然に存在しない核酸をコードするポリペプチドを指す。そのような合成ポリペプチド及び／または核酸は、例えば、単一アミノ酸、単一ヌクレオチドなどを含む塩基性サブユニットから新規に組み立てられても、例えば、組み換え法を通して、人工由来であるか人工由来であるかに関わらず、既存のポリペプチドまたはポリヌクレオチドに由来してもよい。
【００５５】
本明細書で使用される場合、「組み換え」という用語は、その起源または操作のために、本来それが会合するポリヌクレオチド配列の全部または一部と会合しない核酸分子（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡ、ウイルス、半合成、及び／または合成起源のポリヌクレオチド）を説明する。タンパク質またはポリペプチドに関して使用される、組み換えという用語は、組み換えポリヌクレオチドからの発現によって産生されるポリペプチドを意味する。宿主細胞またはウイルスに関して使用される、組み換えという用語は、組み換えポリヌクレオチドが導入されている宿主細胞またはウイルスを意味する。組み換えはまた、本明細書において、材料（例えば、細胞、核酸、タンパク質、またはベクター）に関して、その材料が異種材料（例えば、細胞、核酸、タンパク質、またはベクター）の導入によって修飾されていることを指すためにも使用される。
【００５６】
本発明を更に説明する前に、本発明は、記載される特定の実施形態に限定されず、したがって、当然ながら変動し得ることを理解されたい。本明細書で使用される専門用語は、特定の実施形態を説明するためのものに過ぎず、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、限定的であるようには意図されないことも理解されたい。
【００５７】
値の範囲が提示される場合、別途文脈が明確に指示しない限り、下限値の単位の１０分の１までの、その範囲の上限値と下限値との間の各介在値、ならびにその記載範囲内の任意の他の記載値または介在値が、本発明に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限値及び下限値は独立して、より小さい範囲内に含まれてもよく、また記載範囲内の任意の具体的に除外される限度に従って、本発明にも包含される。上限値及び下限値の一方または両方が記載範囲に含まれる場合、それらの含まれる上限値及び下限値の一方または両方を除外する範囲もまた、本発明に包含される。
【００５８】
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載の方法及び材料と同様もしくは同等の任意の方法及び材料を本発明の実施または試験に使用してもよいが、好ましい方法及び材料は、これから説明されるものである。本明細書に言及される全ての出版物は、それらに関連して出版物が引用される方法及び／または材料を開示し、説明するために、参照により本明細書に組み込まれる。
【００５９】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、別途文脈が明確に指示しない限り、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、複数の参照対象を含むことに留意されたい。したがって、例えば、「細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」への言及は、複数のそのような細胞を含み、「細胞（ｔｈｅ  ｃｅｌｌ）」への言及は、１つ以上の細胞及び当業者に既知のそれらの同等物への言及を含むなどである。特許請求の範囲が、いかなる任意の要素も除外するように立案されてもよいことに更に留意されたい。したがって、この記載は、特許請求の範囲の要素の引用との関連での「単に」、「のみ」などの排他的な専門用語の使用、または「否定的な」限定の使用のための先行記述として機能することが意図される。
【００６０】
明確さのために、別々の実施形態との関連で記載される本発明の特定の特徴が、単一の実施形態において組み合わせで提供され得ることが理解される。逆に、簡潔さのために、単一の実施形態との関連で記載される本発明の様々な特徴もまた、別々に、または任意の好適な下位組み合わせで提供され得る。本発明に関連する実施形態の全ての組み合わせは、本発明によって具体的に包含され、ありとあらゆる組み合わせが個々にかつ明確に開示されたかのように、本明細書に開示される。加えて、様々な実施形態及びそれらの要素の全ての下位組み合わせもまた、本発明によって具体的に包含され、ありとあらゆるそのような下位組み合わせが個々にかつ明確に本明細書に開示されたかのように、本明細書に開示される。
【００６１】
本明細書に考察される出版物は、本出願の出願日前のそれらの開示に対してのみ提供される。本明細書におけるいずれの内容も、本発明が先行発明のためにそのような出版物に先行する資格がないことを認めるものと解釈されるべきではない。更に、提供される出版物の日付は、実際の出版日とは異なる場合があり、独立して確認する必要があり得る。
【００６２】
本開示は、キメラポリペプチドの特異的結合メンバーとその結合パートナーとの結合時に誘導される切断事象後に様々な細胞プロセスを調節する、キメラポリペプチドを提供する。キメラポリペプチドを使用して、例えば、遺伝子発現の誘導を含む、細胞機能を調節する方法もまた提供される。主題のキメラポリペプチドをコードする核酸ならびに関連する発現カセット及びベクターだけでなく、そのような核酸及び／または発現カセット及びベクターを含有する細胞もまた提供される。記載される構成要素及び方法を使用して対象を治療する方法だけでなく、主題の方法を実施するためのキットもまた提供される。
【００６３】
方法
結合誘導切断事象を受けて、キメラポリペプチドから細胞内ドメインを放出するキメラポリペプチドを使用して、１つ以上の細胞プロセス及び／または活性及び／または機能を調節するための方法が提供される。より詳細に後述されるように、本開示のキメラポリペプチドは一般に、ａ）特異的結合メンバーを含む細胞外ドメインと、ｂ）１つ以上のタンパク質分解切断部位を含む、タンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドと、ｃ）細胞内ドメインとを含み得る。本開示の方法は、そのようなキメラポリペプチドを使用して、特異的結合メンバーとその結合パートナーとの結合時に、１つ以上の細胞プロセス及び／または活性及び／または機能を調節することを含む。
【００６４】
場合によっては、本明細書に記載の方法に従って、キメラポリペプチドは、キメラポリペプチドをコードする、細胞内のまたは細胞に導入された核酸から発現される。したがって、場合によっては、本方法は、キメラポリペプチドをコードする核酸と細胞とを接触させることを含んでもよく、そのような接触は、核酸を細胞に導入するために十分である。ウイルストランスフェクション、電気穿孔、リポフェクション、照射、化学形質転換、形質導入可能な担体（例えば、形質導入可能な担体タンパク質）の使用などを含むが、これらに限定されない、核酸を細胞に導入する任意の簡便な方法が本明細書において用途を見出し得る。
【００６５】
導入された核酸は、細胞内に維持されても、一過的に存在してもよい。したがって、場合によっては、導入された核酸は、細胞内に維持され得る（例えば、ゲノム内に組み込まれ得る）。例えば、ウイルス系組み込み、トランスポゾン系組み込み、相同組み換え系組み込みなどを含むが、これらに限定されない、任意の簡便な核酸組み込み方法が主題の方法において用途を見出し得る。場合によっては、導入された核酸は、一過的に存在し得る（例えば、細胞内で染色体外に存在し得る）。一過的に存在する核酸は、例えば、任意の簡便な一過的にトランスフェクトされたベクターの一部として存続し得る。
【００６６】
本開示のキメラポリペプチドをコードする導入された核酸は、キメラポリペプチドの発現を推進するプロモーターに作動可能に連結されるような様式で導入され得る。そのようなプロモーターの供給源は変動し得、例えば、プロモーターが、例えば、発現構築物の一部として核酸と共に導入される場合、またはプロモーターが核酸の導入前に細胞内に存在するか、もしくは核酸の後に導入される場合を含み得る。本明細書により詳細に記載されるように、有用なプロモーターには、内在プロモーター及び異種プロモーターが含まれ得る。例えば、場合によっては、核酸は、核酸に作動可能に連結した異種プロモーターを含有する発現構築物の一部として導入されてもよい。場合によっては、核酸は、核酸が導入される細胞に内在するプロモーターの複製物を含有する発現構築物の一部として導入されてもよい。場合によっては、核酸はプロモーターなしで導入されてもよく、細胞のゲノムへの組み込み時に、核酸はその細胞内に既に存在する内在プロモーターに作動可能に連結されてもよい。利用される確認及び／またはプロモーターに応じて、核酸からのキメラポリペプチドの発現は、恒常的、誘導性、組織特異的、細胞型特異的（それらの組み合わせを含む）などであるように構成され得る。
【００６７】
導入方法に関わらず、細胞内の本開示のキメラポリペプチドは一般に、そのようなキメラポリペプチドの特異的結合メンバーがその結合パートナーに結合していない場合には、血漿膜内に存在し、不活性のままである。本明細書で使用される場合、本開示のキメラポリペプチドとの関係で、「不活性」は、キメラポリペプチドの細胞内ドメインが切断可能なポリペプチド（例えば、切断可能なＮｏｔｃｈポリペプチド）に連結されたままであるために、細胞内ドメインが隔絶され、細胞内機能及び／または細胞活性を調節することができないことを意味する。特異的結合メンバーとその結合パートナーとの結合時に、キメラポリペプチドは活性になると言うことができ、ここで「活性」という用語は一般に、結合によって引き起される切断事象により、キメラポリペプチドから細胞内ドメインが放出されるために、細胞内ドメインが解放され、細胞内機能及び／または細胞活性に影響を与え得ることを指す。
【００６８】
本方法に従って調節され得る細胞プロセス及び／または活性及び／または機能は変化することになり、それらとしては、遺伝子または他のコード配列の発現の調節、例えば、遺伝子またはコード配列の発現の誘導、遺伝子またはコード配列の発現の抑制などが挙げられるが、これらに限定されない。したがって、場合によっては、主題の方法において使用されるキメラポリペプチドの細胞内ドメインには、例えば、転写活性化因子または転写抑制因子を含む転写調節因子が含まれてもよい。
【００６９】
場合によっては、調節され得る細胞プロセス及び／または活性及び／または機能としては、例えば、細胞の遺伝子産物の発現、細胞の増殖、細胞のアポトーシス、非アポトーシス性細胞死、細胞の分化、細胞の脱分化、細胞の遊走、細胞からの分子の分泌（例えば、治療ポリペプチドの分泌、サイトカインの分泌など）、細胞の細胞接着、免疫細胞活性化（例えば、Ｔ細胞活性化など）、エフェクター分子（例えば、サイトカイン、抗体、成長因子など）の産生、標的核酸の転写、標的ｍＲＮＡの翻訳、オルガネラ活性、細胞内輸送などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７０】
場合によっては、サイトカインの発現及び／または分泌が調節され得る。サイトカインの非限定的な例、それらの調節され得る発現／分泌としては、例えば、インターロイキン及び関連物（例えば、ＩＬ−１様、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ＲＡ、ＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−６様、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＩＬ−１０様、ＩＬ−１０、ＩＬ−２０、ＩＬ−１４、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７など）、インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γなど）、ＴＮＦファミリー（例えば、ＣＤ１５４、ＬＴ−β、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、４−１ＢＢＬ、ＡＰＲＩＬ、ＣＤ７０、ＣＤ１５３、ＣＤ１７８、ＧＩＴＲＬ、ＬＩＧＨＴ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＡＬＬ−１、ＴＲＡＩＬ、ＴＷＥＡＫ、ＴＲＡＮＣＥなど）、ＴＧＦ−βファミリー（例えば、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３など）などが挙げられるが、これらに限定されない。場合によっては、本開示のキメラポリペプチド（複数可）を通した細胞の活性化は、キメラポリペプチドが存在しないか、もしくは別様に不活性である同等の細胞のサイトカイン発現及び／または分泌と比較して、サイトカイン発現及び／または分泌の増加を誘導し得る。増加の量は変動してもよく、例えば、１０％以上、２５％以上、５０％以上、７５％以上、１００％以上、１５０％以上、２００％以上、２５０％以上、３００％以上、３５０％以上、４００％以上などを含むが、これらに限定されない、１０％以上の増加からの範囲であり得る。
【００７１】
場合によっては、より詳細に後述される二重抗原認識が用いられる場合、標的細胞の両方の抗原の結合によって活性化される細胞は、１つの抗原のみに結合した対応する細胞と比較して、細胞活性化またはサイトカインの発現／分泌の増加を示し得る。場合によっては、そのような増加は、例えば、１０％以上、２５％以上、５０％以上、７５％以上、１００％以上、１５０％以上、２００％以上、２５０％以上、３００％以上、３５０％以上、４００％以上などを含むが、これらに限定されない、１０％以上の増加からの範囲であり得る。
【００７２】
場合によっては、本明細書に記載の方法は、細胞をキメラポリペプチドの特異的結合メンバーの結合パートナーと接触させることによって、本開示のキメラポリペプチドを発現する細胞内でポリペプチドの発現を誘導する方法を含む。特定の構成に応じて、そのような方法は、内在遺伝子もしくはコード配列または異種遺伝子もしくはコード配列の発現を誘導することを含み得る。場合によっては、特異的結合メンバーの結合パートナーは、細胞の表面上に存在してもよい。場合によっては、特異的結合メンバーの結合パートナーは、細胞の表面上に存在していなくてもよく、例えば、未結合または自由拡散型の基質（例えば、プレートまたはビーズの表面などの固体支持体）に結合していてもよい。したがって、本明細書に記載の方法が、細胞をキメラポリペプチドの特異的結合メンバーの結合パートナーと接触させることを含む場合、そのような接触は、例えば、自由拡散型の結合パートナーを含有する培地との接触、それらの表面上に結合パートナーを発現する細胞との接触、結合パートナーが結合している基質との接触などを含み得るが、これらに限定されない。未結合または自由拡散型の特異的結合メンバーは、場合によっては、例えば、錨細胞と受信細胞との間の結合を促進して、主題の切断可能なキメラポリペプチドの活性化に必要な力を生成する可溶性アダプター分子（例えば、ＰＣＴ出願第ＵＳ２０１６／０１９１８８号（公開第ＷＯ２０１６／１３８０３４号）に記載されるようなものであり、この開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる）として機能し得る。場合によっては、未結合または自由拡散型の結合パートナーは、その後、例えば、未結合または自由拡散型の結合パートナーに特異的に結合し、かつ基質または細胞表面に結合または別様に会合する追加の結合パートナーの導入を含むが、これに限定されない、任意の簡便な手段によって捕捉または繋留され得る。
【００７３】
主題の方法において、任意の簡便な特異的結合メンバーと結合パートナーとの対を利用することができるが、但し、その対が、キメラポリペプチドを活性化するために十分に互いに特異的に結合することを条件とする。場合によっては、有用な特異的結合メンバーと結合パートナーとの対は、例えば、抗体が特異的結合メンバーとして利用され、抗原が結合パートナーとして利用されるか、または抗原が特異的結合メンバーとして利用され、抗体が結合パートナーとして利用される、抗原抗体対を含み得る。
【００７４】
場合によっては、本明細書に記載の方法は、ペプチド−ＭＨＣがキメラポリペプチドの特異的結合メンバーに結合する十分な条件下で、細胞をペプチド−主要組織適合複合体（ペプチド−ＭＨＣ）と接触させることによって、キメラポリペプチドを発現する細胞の細胞活性を調節する方法を含む。場合によっては、ペプチド−ＭＨＣとキメラポリペプチドとの結合は、細胞内ドメインを放出し、細胞内でポリペプチドの発現を誘導するキメラポリペプチドを活性化する。
【００７５】
本開示の方法が、キメラポリペプチドを発現する細胞を結合パートナーと接触させて、遺伝子またはコード配列の発現を誘導することを含む場合、本質的に任意の天然または組み換えポリペプチドが発現されるように誘導され得る。場合によっては、発現されるポリペプチドは、目的のポリペプチド（ＰＯＩ）と称され得る。ＰＯＩは、本質的に任意のポリペプチドであり得、研究目的のポリペプチド（例えば、レポーターポリペプチド、変異ポリペプチド、新規合成ポリペプチドなど）、治療目的のポリペプチド（例えば、天然に存在する治療タンパク質、組み換え治療ポリペプチドなど）、産業目的のポリペプチド（例えば、産業用途（例えば、製造など）において使用されるポリペプチド）などを含み得るが、これらに限定されない。
【００７６】
場合によっては、発現のために誘導されるポリペプチドは、例えば、レポータータンパク質、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、抗体、キメラ二重特異的結合メンバー、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、自然免疫応答誘導因子などを含み得るが、これらに限定されない。
【００７７】
本方法の「接触」は文脈に応じて変動し得、インビトロ接触、エキソビボ接触、及びインビボ接触を含み得る。例えば、場合によっては、例えば、キメラポリペプチドを発現する細胞がインビトロで培養される場合、接触は、結合パートナーまたは結合パートナーを発現する細胞または結合パートナーが結合した基質を、インビトロ培養物に添加することを含み得る。場合によっては、例えば、結合パートナーがある個体内にインビボで存在する場合（例えば、個体内にインビボで存在する細胞上に存在する場合を含む）、接触は、キメラポリペプチドを発現する細胞をその個体に投与することを含み得る。場合によっては、例えば、キメラポリペプチドを発現する細胞がある個体内にインビボで存在する場合、接触は、結合パートナーをその個体に投与すること、細胞をその個体から除去し、細胞をエキソビボで結合パートナーと接触させること、キメラポリペプチド及び結合パートナーの両方をインビボで同時に発現させることなどを含み得る。
【００７８】
細胞の活性を調節するための本開示の方法は、単一細胞内または多細胞環境内（例えば、天然に存在する組織、人工組織など）で実行することができる。細胞の活性を調節するための本開示の方法は、並行または連続で実行することができる。
【００７９】
本開示の方法は、例えば、細胞を結合パートナーと接触させる前に細胞を培養すること、細胞を結合パートナーと接触させながら細胞を培養すること、細胞を結合パートナーと接触させた後に細胞を培養することを含むが、これらに限定されない、本開示のキメラポリペプチドを発現する細胞を培養することを更に含み得る。任意の簡便な細胞培養方法を用いることができる一方で、そのような方法は、例えば、培養される細胞の型、細胞の意図される用途（例えば、細胞が研究目的で培養されるのか、治療目的で培養されるのか）などを含むが、これらに限定されない、様々な要因に基づいて変動する。場合によっては、本開示の方法は、例えば、細胞培養物を播種すること、細胞培養物に栄養を与えること、細胞培養物を継代培養すること、細胞培養物を分離すること、細胞培養物を分析すること、細胞培養物を薬物で処理すること、細胞培養物を収集することなどを含むが、これらに限定されない、一般的な細胞培養のプロセスを更に含み得る。
【００８０】
本開示の方法は、場合によっては、主題の方法に使用される細胞を受容及び／または採取することを更に含み得る。場合によっては、細胞は、対象から採取される。対象から細胞を採取することは、対象から組織試料を得、組織試料の細胞を富化、単離、及び／または増殖させることを含み得る。細胞の単離及び／または富化は、例えば、培養（例えば、接着培養、懸濁培養など）、細胞選別（例えば、ＦＡＣＳ）などによる単離／富化を含む、任意の簡便な方法を使用して実行することができる。細胞は、例えば、血液（例えば、末梢血、臍帯血などを含む）、骨髄、生検、皮膚試料、口腔粘膜検体などを含むが、これらに限定されない、任意の簡便な細胞組織試料から採取してもよい。場合によっては、細胞は、例えば、血液バンク、組織バンクなどを含む供給源から受容される。受容される細胞は、以前に単離されたものであっても、または組織試料の一部として受容されるもの（したがって、細胞受容後かつ使用前に単離／富化が実行され得る）であってもよい。特定の例において、受容される細胞は、例えば、培養細胞株の細胞を含む非初代細胞であってもよい。本明細書に記載の方法で使用するために好適な細胞を、本明細書において更に詳述する。
【００８１】
治療方法
本開示の方法は、本明細書に記載の１つ以上のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドを使用して、対象を治療する方法を含む。キメラポリペプチドを送達する任意の簡便な方法が、主題の方法において用途を見出し得る。場合によっては、主題のキメラポリペプチドは、対象に、キメラポリペプチドを発現する細胞を投与することによって送達され得る。場合によっては、主題のキメラポリペプチドは、対象に、キメラポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を投与することによって送達され得る。対象にキメラポリペプチドをコードする核酸を投与することは、対象に、核酸（核酸は発現されていても、まだ発現されていなくてもよい）を含有する細胞を投与することを含み得る。場合によっては、対象にキメラポリペプチドをコードする核酸を投与することは、対象に、核酸を細胞に送達するように設計したベクターを投与することを含み得る。
【００８２】
したがって、主題の治療方法において、キメラポリペプチドをコードする核酸は、インビトロ、エキソビボ、またはインビボで投与され得る。場合によっては、細胞を対象から採取し、核酸でトランスフェクトしてもよく、更なる操作（例えば、インビトロ増殖を含むが、これに限定されない）をして、または操作をせずに、トランスフェクトした細胞を対象に投与してもよい。場合によっては、例えば、送達ベクターを有する核酸またはそれを有しない核酸を、対象に直接投与してもよい。
【００８３】
主題のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの使用を通して調節され得る細胞活性の多様性を考慮すると、本治療方法は、様々な用途に利用することができる。非限定的な例として、本方法は、例えば、Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ感染症、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ感染症、アデノウイルス感染症、ＡＤＨＤ（注意欠陥／多動障害）、ＡＩＤＳ（後天性免疫不全症候群）、ＡＬＳ（筋萎縮性側索硬化症）、アルツハイマー病、アメーバ症、腸（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ感染症）、アナプラズマ症、ヒト、貧血、Ａｎｇｉｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ感染症、動物関連疾患、Ａｎｉｓａｋｉｓ感染症（アニサキス症）、炭疽、大動脈瘤、大動脈解離、アレナウイルス感染症、関節炎（例えば、小児関節炎、線維筋痛症、痛風、ループス（ＳＬＥ）（全身性エリテマトーデス）、変形性関節症、関節リウマチなど）、Ａｓｃａｒｉｓ感染症（回虫症）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ感染症（アスペルギルス症）、喘息、注意欠陥／多動障害、自閉症、鳥インフルエンザ、Ｂウイルス感染症（ヘルペスＢウイルス）、Ｂ．ｃｅｐａｃｉａ感染症（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ感染症）、バベシア症（Ｂａｂｅｓｉａ感染症）、細菌性髄膜炎、細菌性腟症（ＢＶ）、Ｂａｌａｍｕｔｈｉａ感染症（Ｂａｌａｍｕｔｈｉａ  ｍａｎｄｒｉｌｌａｒｉｓ感染症）、Ｂａｌａｍｕｔｈｉａ  ｍａｎｄｒｉｌｌａｒｉｓ感染症、バランチジウム症、Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ感染症（バランチジウム症）、Ｂａｙｌｉｓａｓｃａｒｉｓ感染症、Ｂｉｌｈａｒｚｉａ、先天異常、黒肺塵症（炭坑夫塵肺）、Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｓ  ｈｏｍｉｎｉｓ感染症、Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｓ感染症、ブラストミセス症、出血障害、血液障害、コロモジラミ（Ｐｅｄｉｃｕｌｕｓ  ｈｕｍａｎｕｓ  ｃｏｒｐｏｒｉｓ）、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ感染症、ボツリヌス中毒（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｉｍ）、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、ブレーナード下痢症（Ｂｒａｉｎｅｒｄ  Ｄｉａｒｒｈｅａ）、乳癌、細気管支炎、気管支炎、Ｂｒｕｃｅｌｌａ感染症（ブルセラ症）、ブルセラ症、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ感染症（Ｂ．ｃｅｐａｃｉａ感染症）、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍａｌｌｅｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ感染症、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ感染症（カンピロバクター症）、カンピロバクター症、がん（例えば、結腸直腸（結腸）癌、婦人科癌、肺癌、前立腺癌、皮膚癌など）、Ｃａｎｄｉｄａ感染症（カンジダ症）、カンジダ症、イヌインフルエンザ、Ｃａｐｉｌｌａｒｉａ感染症（毛細虫症）、毛細虫症、カルバペネム耐性Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ肺炎（ＣＲＫＰ）、ネコノミ条虫、住血吸虫性皮膚炎、脳性麻痺、子宮頚癌、シャーガス病（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ感染症）、水痘（水痘病）、チクングニア熱（ＣＨＩＫＶ）、小児関節炎、風疹（風疹ウイルス）、麻疹、流行性耳下腺炎、ロタウイルス感染症、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ病）、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染症、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ病、コレラ（Ｖｉｂ��ｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ感染症）、慢性疲労症候群（ＣＦＳ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、シガテラ魚中毒、シガトキシン、古典的クロイツフェルト・ヤコブ病、肝吸虫症、Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ感染症（肝吸虫症）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｉｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染症、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ感染症、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ感染症、凝固障害、ＣＭＶ（Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ感染症）、炭坑夫塵肺、コクシジオイデス症、結腸直腸（結腸）癌、感冒、結膜炎、クーリー貧血、ＣＯＰＤ（慢性閉塞性肺疾患）、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ感染症、Ｃｏｘｉｅｌｌａ  ｂｕｒｎｅｔｉｉ感染症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ＣＲＫＰ（カルバペネム耐性Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ肺炎）、クローン病、クリプトコッカス症、クリプトスポリジウム症、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ感染症（クリプトスポリジウム症）、Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒａ感染症（シクロスポラ症）、シクロスポラ症、のう虫症、Ｃｙｓｔｏｉｓｏｓｐｏｒａ感染症（シストイソスポーラ症）、シストイソスポーラ症、サイトメガロウイルス感染症（ＣＭＶ）、デング熱（ＤＦ）、デング出血熱（ＤＨＦ）、皮膚糸状菌、皮膚症、糖尿病、ダイアモンド・ブラックファン貧血（ＤＢＡ）、Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｆｒａｇｉｌｉｓ感染症、ジフテリア（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ感染症）、裂頭条虫症、Ｄｉｐｈｙｌｌｏｂｏｔｈｒｉｕｍ感染症（裂頭条虫症）、Ｄｉｐｙｌｉｄｉｕｍ感染症、イヌノミ条虫、ダウン症（２１番染色体トリソミー）、メジナ虫症、小形条虫（Ｈｙｍｅｎｏｌｅｐｉｓ感染症）、Ｅ．ｃｏｌｉ感染症（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ感染症）、耳感染症（中耳炎）、東部馬脳炎（ＥＥＥ）、エボラ出血熱、エキノコックス症、エーリキア症、象皮症、脳炎（蚊媒介性及びダニ媒介性）、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ感染症、Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ  ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ感染症、Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ感染症（非ポリオ）、発疹チフス、てんかん、エプスタイン・バーウイルス感染症（ＥＢＶ感染症）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ感染症、広範囲薬剤耐性ＴＢ（ＸＤＲ  ＴＢ）、Ｆａｓｃｉｏｌａ感染症（肝蛭症）、Ｆａｓｃｉｏｌｏｐｓｉｓ感染症（肥大吸虫症）、線維筋痛症、伝染性紅斑（パルボウイルスＢ１９感染症）、調味料関連肺疾患、毛包炎、食品関連疾患、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ感染症、脆弱Ｘ症候群、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ感染症、性器カンジダ症（外陰部カンジダ症（ＶＶＣ））、性器ヘルペス（単純ヘルペスウイルス感染症）、性器疣贅、風疹（風疹ウイルス）、Ｇｉａｒｄｉａ感染症（ジアルジア症）、鼻疽（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍａｌｌｅｉ）、Ｇｎａｔｈｏｓｔｏｍａ感染症、顎口虫症（Ｇｎａｔｈｏｓｔｏｍａ感染症）、淋病（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ感染症）、痛風、アメーバ性肉芽腫性脳炎（ＧＡＥ）、グループＡ  Ｓｔｒｅｐ感染症（ＧＡＳ）（グループＡ連鎖球菌感染症）、グループＢ  Ｓｔｒｅｐ感���症（ＧＢＳ）（グループＢ連鎖球菌感染症）、ギニア虫病（メジナ虫症）、婦人科癌（例えば、子宮頸癌、卵巣癌、子宮癌、腟癌及び外陰癌など）、Ｈ１Ｎ１インフルエンザ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ感染症（Ｈｉｂ感染症）、手足口病（ＨＦＭＤ）、ハンセン病、ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ）、アタマジラミ（Ｐｅｄｉｃｕｌｕｓ  ｈｕｍａｎｕｓ  ｃａｐｉｔｉｓ）、心疾患（循環器系疾患）、熱ストレス、ヘモクロマトーシス、血友病、ヘンドラウイルス感染症、ヘルペスＢウイルス、単純ヘルペスウイルス感染症、Ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｅｓ感染症（異形吸虫症）、Ｈｉｂ感染症（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ感染症）、血圧上昇、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ病、ヒストプラスマ症（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ病）、温浴毛包炎（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ感染症）、ＨＰＶ感染症（ヒトパピローマウイルス感染症）、ヒトエーリキア症、ヒト免疫不全ウイルス、ヒトヒトパピローマウイルス感染症（ＨＰＶ感染症）、膜様条虫感染症、高血圧症、高熱、低体温、膿痂疹、伝染性単核症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、インフルエンザ、鳥インフルエンザ、Ｈ１Ｎ１インフルエンザ、新型インフルエンザ、季節性インフルエンザ、ブタインフルエンザ、侵襲性カンジダ症、鉄過剰症（ヘモクロマトーシス）、Ｉｓｏｓｐｏｒａ感染症（イソスポーラ症）、日本脳炎、黄疸、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｋａｌａ−Ａｚａｒ、川崎症候群（ＫＳ）、核黄疸、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ラクロス脳炎（ＬＡＣ）、ラクロス脳炎ウイル（ＬＡＣＶ）、ラッサ熱、ラテックスアレルギー、鉛中毒、レジオネラ病（レジオネラ症）、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ感染症（リーシュマニア症）、ハンセン病、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ感染症（レプトスピラ症）、レプトスピラ症、白血病、シラミ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ感染症（リステリア症）、リステリア症、肝疾患及び肝炎、Ｌｏａ  ｌｏａ感染症、開口障害、ルー・ゲーリック病、肺癌、ループス（ＳＬＥ）（全身性エリテマトーデス）、ライム病（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ感染症）、リンパ管フィラリア症、リンパ浮腫、リンパ球性脈絡髄膜炎（ＬＣＭＶ）、Ｌｙｍｐｈｏｇｒａｎｕｌｏｍａ  ｖｅｎｅｒｅｕｍ感染症（ＬＧＶ）、マラリア、マールブルグ出血熱、麻疹、類鼻疽（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ感染症）、髄膜炎（髄膜炎菌病）、髄膜炎菌病、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）、微量栄養素欠乏、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａ感染症、伝染性軟属腫、サルＢウイルス、サル痘、モルジェロンズ、蚊媒介性疾患、ムコール症、多剤耐性ＴＢ（ＭＤＲ  ＴＢ）、流行性耳下腺炎、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ感染症、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ複合体（ＭＡＣ）、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染症、はえ幼虫症、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ感染症（原発性アメーバ性髄膜脳炎（ＰＡＭ））、壊死性筋膜炎、顧みられない熱帯病（ＮＴＤ）、���ｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ感染症、神経嚢虫症、新変異型クロイツフェルト・ヤコブ病、新生児黄疸（核黄疸）、ニパウイルス脳炎、ノカルジア症、非ポリオエンテロウイルス感染症、非病原性（無害）腸内原虫、ノロウイルス感染症、ノーウォーク様ウイルス（ＮＬＶ）、新規Ｈ１Ｎ１インフルエンザ、オンコセルカ症、Ｏｐｉｓｔｈｏｒｃｈｉｓ感染症、口腔癌、オーフウイルス、中咽頭カンジダ症（ＯＰＣ）、変形性関節症（ＯＡ）、骨粗鬆症、中耳炎、卵巣癌、新型インフルエンザ、肺吸虫症、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ感染症（肺吸虫症）、寄生虫症、パルボウイルスＢ１９感染症、Ｐｅｄｉｃｕｌｕｓ  ｈｕｍａｎｕｓ  ｃａｐｉｔｉｓ、Ｐｅｄｉｃｕｌｕｓ  ｈｕｍａｎｕｓ  ｃｏｒｐｏｒｉｓ、骨盤内炎症性疾患（ＰＩＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、百日咳、ケジラミ症、結膜炎（Ｐｉｎｋ  Ｅｙｅ）（結膜炎（Ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ））、蟯虫感染（Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ  ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ感染症）、ペスト（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ感染症）、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ肺炎、肺炎、ポリオ感染症（灰白髄炎感染症）、ポンティアック熱、プリオン病（伝達性海綿状脳症（ＴＳＥ））、前立腺癌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ感染症、オウム病、毛ジラミ（ケジラミ症）、肺高血圧症、Ｑ熱（Ｃｏｘｉｅｌｌａ  ｂｕｒｎｅｔｉｉ感染症）、狂犬病、アライグマ回虫感染症（Ｂａｙｌｉｓａｓｃａｒｉｓ感染症）、鼡咬症（ＲＢＦ）（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ感染症）、レクレーション水病（ＲＷＩ）、回帰熱、ＲＳウイルス感染症（ＲＳＶ）、関節リウマチ（ＲＡ）、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ感染症、リフトバレー熱（ＲＶＦ）、白癬（皮膚糸状菌）、動物白癬、眼オンコセルカ症（オンコセルカ症）、ロッキー山紅斑熱（ＲＭＳＦ）（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ感染症）、ロタウイルス感染症、ＲＶＦ（リフトバレー熱）、ＲＷＩ（レクレーション水病）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ感染症（サルモネラ症）、疥癬、猩紅熱、住血吸虫症（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ感染症）、季節性インフルエンザ、重症急性呼吸器症候群、性行為感染症（ＳＴＤ）（例えば、細菌性腟症（ＢＶ）、クラミジア、性器ヘルペス、淋病、ヒトパピローマウイルス感染
症、骨盤内炎症性疾患、梅毒、トリコモナス症、ＨＩＶ／ＡＩＤＳなど）、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ（Ｓｈｉｇｅｌｌｏｓｉｓ）、Ｓｈｉｎｇｌｅｓ（Ｖａｒｉｃｅｌｌａ  Ｚｏｓｔｅｒ  Ｖｉｒｕｓ（ＶＺＶ））、鎌状赤血球症、単一遺伝子疾患、副鼻腔感染症（副鼻腔炎）、皮膚癌、睡眠病（アフリカトリパノソーマ症）、痘瘡（大痘瘡及び小痘瘡）、口内炎感染症（オーフウイルス）、南部ダニ関連発疹病（ＳＴＡＲＩ）、開放性二分脊椎症（脊髄髄膜瘤）、スポロトリクム症、紅斑熱群Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ（ＳＦＧＲ）、セントルイス脳炎、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ感染症、Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ感染症、連鎖球菌疾患、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染症、脳卒中、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ感染症（糞線虫症）、乳児突然死症候群（ＳＩＤＳ）、セルカリア皮膚炎（住血吸虫性皮膚炎）、ブタインフルエンザ、梅毒（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ感染症）、全身性エリテマトーデス、条虫感染症（Ｔａｅｎｉａ感染症）、精巣癌、破傷風疾患（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ感染症）、鵞口瘡（中咽頭カンジダ症（ＯＰＣ））、ダニ媒介性回帰熱、ダニ媒介性疾患（例えば、アナプラズマ症、バベシア症、エーリキア症、ライム病、トゥレット症候群（ＴＳ）、毒素ショック症候群（ＴＳＳ）、トキソカラ症（Ｔｏｘｏｃａｒａ感染症）、トキソプラスマ症（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ感染症）、トラコーマ感染症、伝達性海綿状脳症（ＴＳＥ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、旋毛虫症（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌｏｓｉｓ）（旋毛虫症（Ｔｒｉｃｈｉｎｏｓｉｓ））、トリコモナス症（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ感染症）、結核（ＴＢ）（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染症）、野兎病（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ感染症）、腸チフス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ感染症）、子宮癌、腟癌及び外陰癌、バンコマイシン中等度／耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ感染症（ＶＩＳＡ／ＶＲＳＡ）、バンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ感染症（ＶＲＥ）、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ）、水痘帯状疱疹ウイルス感染症、大痘瘡及び小痘瘡、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ感染症、Ｖｉｂｒｉｏ  ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ感染症、Ｖｉｂｒｉｏ  ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ感染症、ウイルス性胃腸炎、ウイルス性出血熱（ＶＨＦ）、ウイルス性ヘルペス、ウイルス性髄膜炎（無菌性髄膜炎）、フォン・ヴィルブランド病、外陰部カンジダ症（ＶＶＣ）、ウエストナイルウイルス感染症、西部馬脳炎感染症、鞭虫感染症（鞭虫症）、ホイットモア病（Ｗｈｉｔｍｏｒｅ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ）、百日咳、異種指向性マウス白血病ウイルス関連ウイルス感染症、黄熱、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ感染症、エルシニア症（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ感染症）、動物由来鉤虫、接合菌症などを含むが、これらに限定されない、様々な疾患を対象とする治療において用途を見出し得る。
【００８４】
場合によっては、本開示の１つ以上のタンパク質分解により切断可能なポリペプチドを利用する治療方法は、がんの治療において用途を見出し得る。がんであって、それらの治療が本開示の１つ以上のタンパク質分解により切断可能なポリペプチドの使用を含み得るがんは、変動し得るが、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連癌（例えば、カポジ肉腫、リンパ腫など）、肛門癌、虫垂癌、星細胞腫、非定型奇形腫／ラブドイド腫瘍、基底細胞癌、胆管癌（肝臓外）、膀胱癌、骨癌（例えば、ユーイング肉腫、骨肉腫、及び悪性線維性組織球腫など）、脳幹神経膠腫、脳腫瘍（例えば、星細胞腫、中枢神経系胚芽腫、中枢神経系胚細胞性腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣腫など）、乳癌（例えば、女性乳癌、男性乳癌、小児乳癌など）、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍（例えば、小児、胃腸など）、原発不明腫瘍、心臓（心）腫瘍、中枢神経系（例えば、非定型奇形腫／ラブドイド腫瘍、中枢神経系胚芽腫、胚細胞性腫瘍、リンパ腫など）、子宮頚癌、小児癌、脊索腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄増殖性腫瘍、結腸癌、結腸直腸癌、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、管（例えば、胆管、肝臓外など）、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、中枢神経系胚芽腫、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、鼻腔神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼癌（例えば、眼球内黒色腫、網膜芽細胞腫など）、骨線維性組織球腫（例えば、悪性、骨肉腫など）、胆嚢癌、胃癌（Ｇａｓｔｒｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ）（胃癌（Ｓｔｏｍａｃｈ  Ｃａｎｃｅｒ））、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、胚細胞腫瘍（例えば、頭蓋外、性腺外、卵巣、精巣など）、妊娠性絨毛性疾患、神経膠腫、有毛細胞性白血病、頭頸部癌、心臓癌、肝細胞（肝臓）癌、組織球増加症（例えば、ランゲルハンス細胞など）、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、眼内黒色腫、膵島腫瘍（例えば、膵神経内分泌腫瘍など）、カポジ肉腫、腎臓癌（例えば、腎細胞、ウィルムス腫瘍、小児腎臓腫瘍など）、ランゲルハンス細胞組織球症、喉頭癌、白血病（例えば、急性リンパ芽球性（ＡＬＬ）、急性骨髄性（ＡＭＬ）、慢性リンパ性（ＣＬＬ）、慢性骨髄性（ＣＭＬ）、有毛細胞性など）、口唇癌及び口腔癌、肝臓癌（原発性）、非浸潤性小葉癌（ＬＣＩＳ）、肺癌（例えば、非小細胞、小細胞など）、リンパ腫（例えば、ＡＩＤＳ関連、バーキット、皮膚Ｔ細胞、ホジキン、非ホジキン、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）など）、マクログロブリン血症（例えば、ヴァルデンストレームなど）、男性乳癌、骨悪性線維性組織球及び骨肉腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、原発不明転移性扁平上皮性頸部癌、ＮＵＴ遺伝子関連正中線管癌、口腔癌、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病（例えば、慢性（ＣＭＬ）など）、骨髄性白血病（例えば、急性（ＡＭＬ）など）、骨髄増殖性疾患（例えば、慢性など）、鼻腔癌及び副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、口腔癌（��ｒａｌ  Ｃａｎｃｅｒ）、口腔癌（Ｏｒａｌ  Ｃａｖｉｔｙ  Ｃａｎｃｅｒ）（例えば、口唇など）、口腔咽頭癌、骨肉腫及び骨悪性線維性組織球腫、卵巣癌（例えば、上皮性、胚細胞腫瘍、低悪性度腫瘍など）、膵臓癌、膵神経内分泌腫瘍（膵島細胞腫瘍）、乳頭腫、傍神経節腫、副鼻腔癌及び鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、下垂体部腫瘍、胸膜肺芽腫、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞（腎臓）癌、腎盂及び尿管、移行上皮癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫（例えば、ユーイング、カポジ、骨肉腫、横紋筋肉腫、軟部組織、子宮など）、セザリー症候群、皮膚癌（例えば、小児、黒色腫、メルケル細胞癌、非黒色腫など）、小細胞肺癌、小腸癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、扁平上皮性頸部癌（例えば、原発不明、転移性など）、胃癌（Ｓｔｏｍａｃｈ  Ｃａｎｃｅｒ）（胃癌（Ｇａｓｔｒｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ））、Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、咽喉癌、胸腺腫及び胸腺癌、甲状腺癌、腎盂及び尿管の移行上皮癌、尿管癌及び腎盂腎癌、子宮癌（例えば、子宮内膜など）、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍などを含み得るが、これらに限定されない。
【００８５】
場合によっては、本開示の方法は、新生物を有する対象に、本開示のキメラポリペプチドを発現する細胞または本開示のキメラポリペプチドをコードする核酸を投与することによって新生物を治療することを含む。場合によっては、そのような方法は、対象に、キメラポリペプチドの細胞内ドメインによって制御される転写制御要素に作動可能に連結した核酸を投与することを更に含み得る。本明細書で使用される場合、「新生物」という用語は一般に、固形腫瘍、血液癌など（例えば、本明細書に列挙されるがんを含む、例えば、任意のがんを含む）を含むが、これらに限定されない、組織の異常成長または異常増殖細胞もしくは細胞集団を指す。新生物は、良性または悪性であり得る。
【００８６】
場合によっては、本方法は、不均一腫瘍の治療に適用することができる。本明細書で使用される場合、「不均一腫瘍」という用語は一般に、少なくとも１つの抗原を差次的に発現する、少なくとも２つの異なる型の腫瘍細胞を有する腫瘍を指す。例えば、不均一腫瘍は、第１の抗原を発現する１つの型の腫瘍細胞と、その抗原を発現しない第２の型の腫瘍細胞とを含み得る。場合によっては、不均一腫瘍は、第１の抗原を高度に発現する１つの型の腫瘍細胞と、その抗原が低発現である第２の型の腫瘍細胞とを含み得る。「低発現」は、治療薬での抗原の直接的な標的化が非実用的になるレベルで、抗原が発現されることを意味する。本明細書に記載の不均一腫瘍を標的化する方法は一般に、少なくとも２つの異なる細胞型の腫瘍（例えば、抗原を差次的に発現する２つの細胞型を含む）を治療的に標的化することを含む。したがって、不均一腫瘍を標的化する本明細書に記載の方法は、本方法において標的化される細胞型の抗原を発現しないか、またはその低発現を示す、ある細胞型の腫瘍に対する治療効果を可能にし得る。
【００８７】
不均一腫瘍を治療する記載の方法に有用な、差次的に発現される抗原は本質的に、例えば、がん細胞抗原（例えば、表面発現がん抗原、細胞内がん抗原など）、組織特異的抗原、細胞型特異的抗原などを含むが、これらに限定されない、本明細書に記載の特異的結合メンバーで標的化され得る任意の抗原を含み得る。場合によっては、抗原は、細胞によって内在的に発現される。場合によっては、抗原は、それが発現される細胞に対して異種であり得る（例えば、発現される異種タンパク質が抗原として機能する場合を含む）。
【００８８】
場合によっては、不均一腫瘍を治療する方法は、腫瘍を、感作抗原に特異的なタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドを発現するように操作された免疫細胞と接触させることを含み得る。本明細書で使用される場合、「感作抗原」という用語は一般に、不均一腫瘍の近くでキメラポリペプチドを活性化するために十分な抗原を指す。場合によっては、感作抗原は、不均一腫瘍の細胞のサブセット内に存在する抗原、例えば、不均一腫瘍のいくつかの細胞上に存在するが、不均一腫瘍の全ての細胞には存在しない抗原であり得る。場合によっては、感作抗原によるキメラポリペプチドの活性化時に、キメラポリペプチドの解放された細胞内ドメインは、第２の抗原特異的ポリペプチドの発現を誘導し得る。場合によっては、第２の抗原特異的ポリペプチドの抗原は、本明細書では「治療抗原」または「殺傷抗原」と称され得る。本明細書で使用される場合、「治療抗原」という用語は一般に、治療構築物が指向される抗原、例えば、治療構築物によって直接標的化される抗原（例えば、抗体、ＣＡＲ、ＴＣＲ、キメラ二重特異的結合メンバーなどを含むが、これらに限定されない）を指し得る。本明細書で使用される場合、「殺傷抗原」という用語は一般に、細胞を殺傷に標的化するように設計した構築物が指向される抗原、例えば、殺傷抗原を発現する細胞の免疫細胞による殺傷をもたらす構築物によって標的化される抗原（例えば、抗体、ＣＡＲ、ＴＣＲ、キメラ二重特異的結合メンバーなどを含むが、これらに限定されない）を指し得る。場合によっては、第２の抗原特異的ポリペプチドは、不均一腫瘍の全てまたはほぼ全てまたは大部分の細胞に存在する治療抗原に指向され得る。
【００８９】
場合によっては、本明細書に記載の方法は、対象において自然免疫応答を誘導することを含む。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドは、発現時に対象において自然免疫応答を誘導するポリペプチドの発現を誘導し得る。本開示のキメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、特定の抗原への結合に応答してキメラポリペプチドを活性化するように操作され得るため、場合によっては、自然免疫応答は、特定の抗原の存在に応答して誘導され得る。キメラポリペプチドは、例えば、がん抗原、細胞型特異的抗原、組織特異的抗原、感染性疾患抗原（例えば、細菌抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、病原抗原など）などを含むが、これらに限定されない、任意の簡便かつ適切な抗原によって活性化されるように操作され得る。場合によっては、自然免疫応答は、例えば、抗原の局所的存在、例えば、腫瘍内に局所的に存在する抗原、腫瘍微小環境内に局所的に存在する抗原、感染領域または組織に局所的に存在する抗原などに基づいて、局所的に活性化され得る。
【００９０】
場合によっては、本明細書に記載の方法は、対象において１つ以上の免疫抑制因子の発現を制御することを含む。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドは、発現時に対象において免疫抑制を誘導するポリペプチドの発現を誘導し得る。本開示のキメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、特定の抗原への結合に応答してキメラポリペプチドを活性化するように操作され得るため、場合によっては、免疫抑制応答は、特定の抗原の存在に応答して誘導され得る。キメラポリペプチドは、例えば、自己抗原（例えば、自己免疫応答を誘導する自己抗原）、細胞型特異的抗原、組織特異的抗原などを含むが、これらに限定されない、任意の簡便かつ適切な抗原によって活性化されるように操作され得る。場合によっては、免疫抑制は、例えば、抗原の局所的存在、例えば、組織内に局所的に存在する抗原、器官内に局所的に存在する抗原などに基づいて、局所的に活性化され得る。場合によっては、免疫抑制は、例えば、網羅的に存在する抗原を使用して、本開示のキメラポリペプチドを活性化することによって網羅的に実行され得る。場合によっては、本明細書に記載の方法に従う免疫抑制を必要とする対象は、自己免疫疾患を有する対象であり得る。
【００９１】
容易に理解されるように、本明細書に記載の治療方法は、場合によっては、１つ以上の慣習的な治療と組み合わせることができる。例えば、腫瘍学の場合、本明細書に記載の方法は、場合によっては、例えば、慣習的な化学療法、慣習的な放射線療法、慣習的な免疫療法、手術などを含むが、これらに限定されない、慣習的ながん療法と組み合わせることができる。場合によっては、本明細書に記載の方法は、慣習的な療法の前または後に使用することができる。例えば、本明細書に記載の方法は、例えば、対象が慣習的な療法から改善を見た後に補助療法として使用しても、対象が慣習的な療法に応答していない場合に使用してもよい。場合によっては、本明細書に記載の方法は、追加療法の前に使用して、例えば、対象を追加療法（例えば、本明細書に記載の慣習的な療法）に対して準備してもよい。
【００９２】
慣習的ながん療法はまた、例えば、Ａｄｏ−トラスツズマブエムタンシン（Ｋａｄｃｙｌａ）標的化ＨＥＲ２（ＥＲＢＢ２／ｎｅｕ）（乳癌における使用に承認）；アファチニブ（Ｇｉｌｏｔｒｉｆ）標的化ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１／ＥＲＢＢ１）、ＨＥＲ２（ＥＲＢＢ２／ｎｅｕ）（非小細胞肺癌における使用に承認）；アルデスロイキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ）標的化（腎細胞癌、黒色腫における使用に承認）；アレクチニブ（Ａｌｅｃｅｎｓａ）標的化ＡＬＫ（非小細胞肺癌における使用に承認）；アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）標的化ＣＤ５２（Ｂ細胞慢性リンパ性白血病における使用に承認）；アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ）標的化ＰＤ−Ｌ１（尿路上皮癌、非小細胞肺癌における使用に承認）；アベルマブ（Ｂａｖｅｎｃｉｏ）標的化ＰＤ−Ｌ１（メルケル細胞癌における使用に承認）；アキシチニブ（Ｉｎｌｙｔａ）標的化ＫＩＴ、ＰＤＧＦＲβ、ＶＥＧＦＲ１／２／３（腎細胞癌における使用に承認）；ベリムマブ（Ｂｅｎｌｙｓｔａ）標的化ＢＡＦＦ（エリテマトーデスにおける使用に承認）；ベリノスタット（Ｂｅｌｅｏｄａｑ）標的化ＨＤＡＣ（末梢Ｔ細胞リンパ腫における使用に承認）；ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）標的化ＶＥＧＦリガンド（子宮頚癌、結腸直腸癌、卵管癌、膠芽腫、非小細胞肺癌、卵巣癌、腹膜癌、腎細胞癌における使用に承認）；ブリナツモマブ（Ｂｌｉｎｃｙｔｏ）標的化ＣＤ１９／ＣＤ３（急性リンパ芽球性白血病（前駆Ｂ細胞）における使用に承認）；ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ）標的化プロテアソーム（多発性骨髄腫、マントル細胞リンパ腫における使用に承認）；ボスチニブ（Ｂｏｓｕｌｉｆ）標的化ＡＢＬ（慢性骨髄性白血病における使用に承認）；ブレンツキシマブベドチン（Ａｄｃｅｔｒｉｓ）標的化ＣＤ３０（ホジキンリンパ腫、未分化大細胞リンパ腫における使用に承認）；ブリガチニブ（Ａｌｕｎｂｒｉｇ）標的化ＡＬＫ（非小細胞肺癌（ＡＬＫ＋）における使用に承認）；カボザンチニブ（Ｃａｂｏｍｅｔｙｘ、Ｃｏｍｅｔｒｉｑ）標的化ＦＬＴ３、ＫＩＴ、ＭＥＴ、ＲＥＴ、ＶＥＧＦＲ２（甲状腺髄様癌、腎細胞癌における使用に承認）；カルフィルゾミブ（Ｋｙｐｒｏｌｉｓ）標的化プロテアソーム（多発性骨髄腫における使用に承認）；セリチニブ（Ｚｙｋａｄｉａ）標的化ＡＬＫ（非小細胞肺癌における使用に承認）；セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ）標的化ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１／ＥＲＢＢ１）（結腸直腸癌、頭頸部扁平上皮細胞癌における使用に承認）；コビメチニブ（Ｃｏｔｅｌｌｉｃ）標的化ＭＥＫ（黒色腫における使用に承認）；クリゾチニブ（Ｘａｌｋｏｒｉ）標的化ＡＬＫ、ＭＥＴ、ＲＯＳ１（非小細胞肺癌における使用に承認）；ダブラフェニブ（Ｔａｆｉｎｌａｒ）標的化ＢＲＡＦ（黒色腫、非小細胞肺癌における使用に承認）；ダラツムマブ（Ｄａｒｚａｌｅｘ）標的化ＣＤ３８（多発性骨髄腫における使用に承認）；ダサチニブ（Ｓｐｒｙｃｅｌ）標的化ＡＢＬ（慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病における使用に承認）；デノスマブ（Ｘｇｅｖａ）標的化ＲＡＮＫＬ（骨巨細胞腫における使用に承認）；ジヌツキシマブ（Ｕｎｉｔｕｘｉｎ）標的化Ｂ４ＧＡＬＮＴ１（ＧＤ２）（小児神経芽細胞腫に���ける使用に承認）；デュルバルマブ（Ｉｍｆｉｎｚｉ）標的化ＰＤ−Ｌ１（尿路上皮癌における使用に承認）；エロツズマブ（Ｅｍｐｌｉｃｉｔｉ）標的化ＳＬＡＭＦ７（ＣＳ１／ＣＤ３１９／ＣＲＡＣＣ）（多発性骨髄腫における使用に承認）；エナシデニブ（Ｉｄｈｉｆａ）標的化ＩＤＨ２（急性骨髄性白血病における使用に承認）；エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ）標的化ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１／ＥＲＢＢ１）（非小細胞肺癌、膵臓癌における使用に承認）；エベロリムス（Ａｆｉｎｉｔｏｒ）標的化ｍＴＯＲ（膵臓、胃腸、または肺起源の神経内分泌腫瘍、腎細胞癌、切除不可能な上衣下巨細胞性星状細胞腫、乳癌における使用に承認）；ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ）標的化ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１／ＥＲＢＢ１）（非小細胞肺癌における使用に承認）；イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ）標的化ＣＤ２０（非ホジキンリンパ腫における使用に承認）；イブルチニブ（Ｉｍｂｒｕｖｉｃａ）標的化ＢＴＫ（マントル細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症における使用に承認）；イデラリシブ（Ｚｙｄｅｌｉｇ）標的化ＰＩ３Ｋδ（慢性リンパ性白血病、濾胞性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫における使用に承認）；イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ）標的化ＫＩＴ、ＰＤＧＦＲ、ＡＢＬ（消化管間質腫瘍（ＫＩＴ＋）、隆起性皮膚線維肉腫、多発性血液系腫瘍における使用に承認）；イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ）標的化ＣＴＬＡ−４（黒色腫における使用に承認）；イキサゾミブ（Ｎｉｎｌａｒｏ）標的化プロテアソーム（多発性骨髄腫における使用に承認）；ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ）標的化ＨＥＲ２（ＥＲＢＢ２／ｎｅｕ）、ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１／ＥＲＢＢ１）（乳癌（ＨＥＲ２＋）における使用に承認）；レンバチニブ（Ｌｅｎｖｉｍａ）標的化ＶＥＧＦＲ２（腎細胞癌、甲状腺癌における使用に承認）；ミドスタウリン（Ｒｙｄａｐｔ）標的化ＦＬＴ３（急性骨髄性白血病（ＦＬＴ３＋）における使用に承認）；ネシツムマブ（Ｐｏｒｔｒａｚｚａ）標的化ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１／ＥＲＢＢ１）（扁平上皮非小細胞肺癌における使用に承認）；ネラチニブ（Ｎｅｒｌｙｎｘ）標的化ＨＥＲ２（ＥＲＢＢ２／ｎｅｕ）（乳癌における使用に承認）；ニロチニブ（Ｔａｓｉｇｎａ）標的化ＡＢＬ（慢性骨髄性白血病における使用に承認）；ニラパリブ（Ｚｅｊｕｌａ）標的化ＰＡＲＰ（卵巣癌、卵管癌、腹膜癌における使用に承認）；ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ）標的化ＰＤ−１（結腸直腸癌、頭頸部扁平上皮細胞癌、ホジキンリンパ腫、黒色腫、非小細胞肺癌、腎細胞癌、尿路上皮癌における使用に承認）；オビヌツズマブ（Ｇａｚｙｖａ）標的化ＣＤ２０（慢性リンパ性白血病、濾胞性リンパ腫における使用に承認）；オファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ、ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０）標的化ＣＤ２０（慢性リンパ性白血病における使用に承認）；オラパリブ（Ｌｙｎｐａｒｚａ）標的化ＰＡＲＰ（卵巣癌における使用に承認）；オララツマブ（Ｌａｒｔｒｕｖｏ）標的化ＰＤＧＦＲα（軟部組織肉腫における使用に承認）；オシメルチニブ（Ｔａｇｒｉｓｓｏ）標的化ＥＧＦＲ（非小細胞肺癌における使用に承認）；パルボシクリブ（Ｉｂｒａｎｃｅ）標的化ＣＤＫ４、ＣＤＫ６（乳癌における使用に承認）；パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ）標的化ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１／ＥＲＢＢ１）（結腸直腸癌における使用に承認）；パノビノスタット（Ｆａｒｙｄａｋ）標的化ＨＤＡＣ（多発性骨髄腫における使用に承認）；パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ）標的化ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＫＩＴ（腎細胞癌における使用に承認）；ペムブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ）標的化ＰＤ−１（古典的ホジキンリンパ腫、黒色腫、非小細胞肺癌（ＰＤ−Ｌ１＋）、頭頸部扁平上皮細胞癌、固形腫瘍（ＭＳＩ−Ｈ）における使用に承認）；ペルツズマブ（Ｐｅｒｊｅｔａ）標的化ＨＥＲ２（ＥＲＢＢ２／ｎｅｕ）（乳癌（ＨＥＲ２＋）における使用に承認）；ポナチニブ（Ｉｃｌｕｓｉｇ）標的化ＡＢＬ、ＦＧＦＲ１−３、ＦＬＴ３、ＶＥＧＦＲ２（慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病における使用に承認）；ラムシルマブ（Ｃｙｒａｍｚａ）標的化ＶＥＧＦＲ２（結腸直腸癌、胃癌または食道胃接合部（ＧＥＪ）腺癌、非小細胞肺癌における使用に承認）；レゴラフェニブ（Ｓｔｉｖａｒｇａ）標的化ＫＩＴ、ＰＤＧＦＲβ、ＲＡＦ、ＲＥＴ、ＶＥＧＦＲ１／２／３（結腸直腸癌、消化管間質腫瘍、肝細胞癌腫における使用に承認）；リボシクリブ（Ｋｉｓｑａｌｉ）標的化ＣＤＫ４、ＣＤＫ６（乳癌（ＨＲ＋、ＨＥＲ２−）における使用に承認）；リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ、Ｍａｂｔｈｅｒａ）標的化ＣＤ２０（非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、関節リウマチ、多発血管炎性肉芽腫症における使用に承認）；リツキシマブ／ヒアルロニダーゼヒト（Ｒｉｔｕｘａｎ  Ｈｙｃｅｌａ）標的化ＣＤ２０（慢性リンパ性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫における使用に承認）；ロミデプシン（Ｉｓｔｏｄａｘ）標的化ＨＤＡＣ（皮膚Ｔ細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫における使用に承認）；ルカパリブ（Ｒｕｂｒａｃａ）標的化ＰＡＲＰ（卵巣癌における使用に承認）；ルキソリチニブ（Ｊａｋａｆｉ）標的化ＪＡＫ１／２（骨髄線維症における使用に承認）；シルツキシマブ（Ｓｙｌｖａｎｔ）標的化ＩＬ−６（多中心性キャッスルマン病における使用に承認）；シプロイセルＴ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ）標的化（前立腺癌における使用に承認）；ソニデギブ（Ｏｄｏｍｚｏ）標的化スムーズンド（基底細胞癌における使用に承認）；ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ）標的化ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＫＩＴ、ＲＡＦ（肝細胞癌腫、腎細胞癌、甲状腺癌における使用に承認）；テムシロリムス（Ｔｏｒｉｓｅｌ）標的化ｍＴＯＲ（腎細胞癌における使用に承認）；トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ）標的化ＣＤ２０（非ホジキンリンパ腫における使用に承認）；トラメチニブ（Ｍｅｋｉｎｉｓｔ）標的化ＭＥＫ（黒色腫、非小細胞肺癌における使用に承認）；トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）標的化ＨＥＲ２（ＥＲＢＢ２／ｎｅｕ）（乳癌（ＨＥＲ２＋）、胃癌（ＨＥＲ２＋）における使用に承認）；バンデタニブ（Ｃａｐｒｅｌｓａ）標的化ＥＧＦＲ（ＨＥＲ１／ＥＲＢＢ１）、ＲＥＴ、ＶＥＧＦＲ２（甲状腺髄様癌における使用に承認）；ベムラフェニブ（Ｚｅｌｂｏｒａｆ）標的化ＢＲＡＦ（黒色腫における使用に承認）；ベネトク��クス（Ｖｅｎｃｌｅｘｔａ）標的化ＢＣＬ２（慢性リンパ性白血病における使用に承認）；ビスモデギブ（Ｅｒｉｖｅｄｇｅ）標的化ＰＴＣＨ、スムーズンド（基底細胞癌における使用に承認）；ボリノスタット（Ｚｏｌｉｎｚａ）標的化ＨＤＡＣ（皮膚Ｔ細胞リンパ腫における使用に承認）；Ｚｉｖ−アフリベルセプト（Ｚａｌｔｒａｐ）標的化ＰＩＧＦ、ＶＥＧＦＡ／Ｂ（結腸直腸癌における使用に承認）などを含むが、これらに限定されない、がんに対する標的化療法も含む。
【００９３】
場合によっては、本開示の方法は、いかなる追加の慣習的な療法もなしで使用することができる（例えば、本明細書に記載の方法が対象の治療に使用される唯一の方法である場合を含む）。例えば、腫瘍学の場合、本明細書に記載の方法は、場合によっては、対象のがんの治療に使用される唯一の方法であり得る。
【００９４】
キメラポリペプチド
本開示は、タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドを提供する。本開示のキメラポリペプチドは一般に、ａ）特異的結合メンバーを含む細胞外ドメインと、ｂ）１つ以上のタンパク質分解切断部位を含む、タンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドと、ｃ）細胞内ドメインとを含み得る。特異的結合メンバーとその結合パートナーとの結合は一般に、１つ以上のタンパク質分解切断部位でのタンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターの切断を誘導し、それにより細胞内ドメインを放出する。細胞内ドメインの放出は、細胞の活性を調節し得るか、または一般に細胞内に含有されるか、細胞表面上に発現されるか、もしくは分泌される、負荷量の産生を引き起こし得る。本開示のキメラポリペプチドは一般に、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドに対して異種である（すなわち、Ｎｏｔｃｈレセプターに由来しない）少なくとも１つの配列を含む（例えば、細胞外ドメインがＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドに対して異種である場合、細胞内ドメインがＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドに対して異種である場合、細胞外ドメイン及び細胞内ドメインの両方がＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドに対して異種である場合などを含む）。
【００９５】
ドメイン、例えば、細胞外ドメイン、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチド制御ドメイン、細胞内ドメインなどは、直接、すなわち、介在アミノ酸残基なしで接合されても、２つのドメインを接合するペプチドリンカーを含んでもよい。ペプチドリンカーは、合成由来または天然由来（例えば、天然に存在するポリペプチドの断片を含む）であり得る。
【００９６】
ペプチドリンカーは、例えば、３アミノ酸長〜１０アミノ酸長、５アミノ酸長〜１５アミノ酸長、１０アミノ酸長〜２５アミノ酸長、２５アミノ酸長〜５０アミノ酸長、５０アミノ酸長〜７５アミノ酸長、７５アミノ酸長〜１００アミノ酸長、１００アミノ酸長〜１２５アミノ酸長、１２５アミノ酸長〜１５０アミノ酸長、１５０アミノ酸長〜１７５アミノ酸長、または１７５アミノ酸長〜２００アミノ酸長を含むが、これらに限定されない、約３アミノ酸長（ａａ）以下〜約２００酸長以上で変動し得る。ペプチドリンカーは、３アミノ酸長〜３０アミノ酸長、例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０アミノ酸長を有し得る。ペプチドリンカーは、５アミノ酸長〜５０アミノ酸長、例えば、５アミノ酸長〜４０アミノ酸長、５アミノ酸長〜３５アミノ酸長、５アミノ酸長〜３０アミノ酸長、５アミノ酸長〜２５アミノ酸長、５アミノ酸長〜２０アミノ酸長、５アミノ酸長〜１５アミノ酸長、または５アミノ酸長〜１０アミノ酸長を有し得る。
【００９７】
細胞外ドメイン
本開示のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドは一般に、特異的結合パートナーに特異的に結合する特異的結合メンバーを含む、細胞外ドメインを含む。特異的結合メンバーとその特異的結合パートナーとの結合は、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドのタンパク質分解切断を引き起こし、キメラポリペプチドを発現する細胞の活性を調節する細胞内ドメインを放出する。
【００９８】
細胞外ドメインの特異的結合メンバーは一般に、キメラポリペプチドの特異性を決定する。場合によっては、キメラポリペプチドは、その特異的結合メンバーに基づいて決定されるその特異性に従って称され得る。例えば、結合パートナー「Ｘ」を有する特異的結合メンバーは、Ｘキメラポリペプチドまたは抗Ｘキメラポリペプチドと称され得る。
【００９９】
例えば、抗原−抗体対、リガンド受容体対、足場タンパク質対などを含むが、これらに限定されない、任意の簡便な特異的結合対、すなわち、特異的結合メンバー及び特異的結合パートナー対が、本開示のキメラポリペプチドにおいて用途を見出し得る。場合によっては、特異的結合メンバーは抗体であり得、その結合パートナーは抗体が特異的に結合する抗原であり得る。場合によっては、特異的結合メンバーは受容体であり得、その結合パートナーは受容体が特異的に結合するリガンドであり得る。場合によっては、特異的結合メンバーは足場タンパク質であり得、その結合パートナーは足場タンパク質が特異的に結合するタンパク質であり得る。
【０１００】
場合によっては、キメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、抗体である。抗体は、任意の抗原結合抗体系ポリペプチドであることができ、それらは様々なものが当該技術分野において既知である。場合によっては、特異的結合メンバーは、モノクローナル抗体、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂなどであるか、またはそれを含む。他の抗体系認識ドメイン（ｃＡｂ  ＶＨＨ（ラクダ類抗体可変ドメイン）及びヒト化バージョン、ＩｇＮＡＲ  ＶＨ（サメ抗体可変ドメイン）及びヒト化バージョン、ｓｄＡｂ  ＶＨ（単一ドメイン抗体可変ドメイン）、ならびに「ラクダ化」抗体可変ドメインの使用が好適である。場合によっては、単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴｖ、ＶαＶβを含有する単鎖２ドメインＴＣＲ）などのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）系認識ドメインの使用もまた好適である。
【０１０１】
本開示のキメラポリペプチドの特異的結合メンバーが抗体系結合メンバーである場合、キメラポリペプチドは、抗体系結合メンバーに対する結合パートナー（例えば、抗体系結合メンバーによって特異的に結合される抗原を含む）の存在下で活性化され得る。場合によっては、抗体系結合メンバーは、関連技術において一般的に行われるように、抗体系結合メンバーによって結合される抗原に基づいて定義され得る（例えば、抗体系結合メンバーが「抗」抗原抗体、例えば、抗ＣＤ１９抗体として説明されている場合を含む）。したがって、本開示のキメラポリペプチドに含めるために好適な抗体系結合メンバーは、様々な抗原結合特異性を有し得る。
【０１０２】
場合によっては、抗原結合ドメインは、がん抗原、すなわち、新生物またはがん細胞によって発現される（合成される）抗原、すなわち、がん細胞関連抗原またはがん（もしくは腫瘍）特異的抗原に特異的である。
【０１０３】
がん細胞関連抗原は、例えば、乳癌細胞、Ｂ細胞リンパ腫、膵臓癌、ホジキンリンパ腫細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、中皮腫、肺癌細胞（例えば、非小細胞肺癌細胞）、非ホジキンＢ細胞リンパ腫（Ｂ−ＮＨＬ）細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、中皮腫細胞、肺癌細胞（例えば、小細胞肺癌細胞）、黒色腫細胞、慢性リンパ性白血病細胞、急性リンパ性白血病細胞、神経芽細胞腫細胞、神経膠腫、膠芽腫、髄芽細胞腫、結腸直腸癌細胞などに関連する抗原であり得る。がん細胞関連抗原はまた、非がん性細胞によっても発現され得る。
【０１０４】
がん細胞特異的抗原は、がん及び／または特定のがん型もしくはがん細胞型（例えば、乳癌細胞、Ｂ細胞リンパ腫、膵臓癌、ホジキンリンパ腫細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、中皮腫、肺癌細胞（例えば、非小細胞肺癌細胞）、非ホジキンＢ細胞リンパ腫（Ｂ−ＮＨＬ）細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、中皮腫細胞、肺癌細胞（例えば、小細胞肺癌細胞）、黒色腫細胞、慢性リンパ性白血病細胞、急性リンパ性白血病細胞、神経芽細胞腫細胞、神経膠腫、膠芽腫、髄芽細胞腫、結腸直腸癌細胞などを含む）に特異的な抗原であり得る。がん（または腫瘍）特異的抗原は一般に、非がん性細胞（または非腫瘍細胞）によっては発現されない。場合によっては、がん（または腫瘍）特異的抗原は、１つ以上の非がん性細胞型（または非腫瘍細胞型）によって最小限で発現され得る。「最小限で発現される」は、１細胞当たりの発現レベルまたは発現する細胞数のいずれかに関する発現レベルが、最小限で、わずかに、または検出不能に特異的結合メンバーと抗原を発現する非がん性細胞との結合をもたらすことを意味する。
【０１０５】
場合によっては、キメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子と組み合わせてタンパク質（例えば、ペプチド）の断片を含む標的に特異的に結合し得る。ＭＨＣ分子は、細胞内に発現されるタンパク質及び細胞外に発現されるタンパク質の両方のペプチド断片を提示するため、ＭＨＣ−ペプチド複合体に指向される特異的結合メンバーは、細胞内抗原及び細胞外に発現される抗原の標的化を可能にする。
【０１０６】
細胞内に発現される標的タンパク質（例えば、細胞質内に発現される（すなわち、細胞質タンパク質）、核内に発現される（すなわち、核タンパク質）など）は、細胞内抗原（例えば、細胞質抗原、核抗原など）と称され得る。したがって、本開示の特異的結合メンバーは、ＭＨＣと複合体化した細胞内抗原断片、例えば、ペプチド−ＭＨＣ複合体（場合によっては、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）−ペプチド複合体とも記載される）に特異的であり得る。
【０１０７】
全ての内在細胞タンパク質（宿主または病原体）は、ＨＬＡ分子に関連して細胞表面上での提示のために短いペプチドへとプロセシングされる。細胞表面上に提示されるペプチド−ＨＬＡクラスＩ複合体は、Ｔ細胞媒介免疫応答において重要な役割を果たす。約９残基長のペプチドは、細胞内のプロテアソームによって消化されるタンパク質に起源を持つ。Ｔ細胞受容体がペプチドを自己または非自己として認識するかに応じて、免疫応答が開始され得る。がん細胞の表面上に特異的に提示されるペプチド−ＨＬＡ複合体は、操作されたＴ細胞または「ＴＣＲ様」抗体を含む、標的化がん治療薬を開発するための優れた機会を提供する。例えば、ＭＨＣ系四量体技術を含む様々な技術の出現により、ＴＣＲ様抗ＨＬＡ／ペプチド特異的抗体を開発する能力が進歩している。
【０１０８】
場合によっては、主題のキメラポリペプチドの特異的結合メンバーの結合パートナーは、ペプチド−ＭＨＣまたはＨＬＡ／ペプチド複合体を含み得る。場合によっては、主題のキメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、例えば、ＨＬＡ−Ａ／ペプチド複合体、ＨＬＡ−Ｂ／ペプチド複合体、またはＨＬＡ−Ｃ／ペプチド複合体を含む、ＭＨＣクラスＩ  ＭＨＣ−ペプチド複合体に特異的である。場合によっては、主題のキメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、例えば、ＨＬＡ−ＤＰＡ１／ペプチド複合体、ＨＬＡ−ＤＰＢ１／ペプチド複合体、ＨＬＡ−ＤＱＡ１／ペプチド複合体、ＨＬＡ−ＤＱＢ１／ペプチド複合体、ＨＬＡ−ＤＲＡ／ペプチド複合体、またはＨＬＡ−ＤＲＢ１／ペプチド複合体を含む、ＭＨＣクラスＩＩ  ＭＨＣ−ペプチド複合体に特異的である。場合によっては、主題のキメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、ＭＨＣクラスＩＩＩ  ＭＨＣ−ペプチド複合体に特異的である。
【０１０９】
ペプチド−ＭＨＣ結合パートナーは一般に、ＭＨＣとの関連で提示される標的タンパク質断片ペプチドを含む。そのようなペプチドのサイズは、例えば、それらが結合しているＭＨＣ分子のクラスを含む、多数の要因に応じて変動する。例えば、クラスＩ  ＭＨＣ関連ペプチドは一般に９アミノ酸長であるが、サイズは変動し得る（例えば、８アミノ酸長または１０アミノ酸長を含むが、これらに限定されない、約９アミノ酸長未満または約９アミノ酸長超を含む）。一方で、クラスＩＩ  ＭＨＣ関連ペプチドのサイズもまた、例えば、１３アミノ酸長、１４アミノ酸長、１５アミノ酸長、１６アミノ酸長、１７アミノ酸長、１８アミノ酸長、１９アミノ酸長、２０アミノ酸長、２１アミノ酸長、２２アミノ酸長、２３アミノ酸長、２４アミノ酸長、または２５アミノ酸長を含むが、これらに限定されない、約１３アミノ酸長〜約２５アミノ酸長まで変動し得る。
【０１１０】
ペプチド−ＭＨＣ複合体を標的化する特異的結合メンバーが指向され得る例示的なタンパク質標的、及び各タンパク質標的のＭＨＣとの関連の例示的なペプチドを、以下の表１に提示する。
【０１１１】
【表１−１】
2019528077.tif 000002
【０１１２】
【表１−２】
2019528077.tif 000003
【０１１３】
場合によっては、本開示のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、表１の細胞内がん抗原ペプチドを有するペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する。場合によっては、本開示のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、ＷＴ１ペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する。場合によっては、本開示のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する。
【０１１４】
場合によっては、本開示のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、表１の細胞内がん抗原ペプチドを有するペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する抗体（例えば、ｓｃＦｖ）である。場合によっては、本開示のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、ＷＴ１ペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する抗体（例えば、ｓｃＦｖ）である。
【０１１５】
場合によっては、ＷＴ１ペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する抗体は、ＳＹＡＭＳ（配列番号６１）、ＱＩＤＰＷＧＱＥＴＬＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６２）、及びＬＴＧＲＦＤＹ（配列番号６３）の重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ配列のうちの１つ以上または全てを含む。
【０１１６】
場合によっては、ＷＴ１ペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する抗体は、ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号６４）、ＳＡＳＱＬＱＳ（配列番号６５）、及びＱＱＧＰＧＴＰＮＴ（配列番号６６）の軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ配列のうちの１つ以上または全てを含む。
【０１１７】
場合によっては、ＷＴ１ペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する抗体は、以下のアミノ酸配列を有するｓｃＦｖである。
【０１１８】
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＱＩＤＰＷＧＱＥＴＬＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＬＴＧＲＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＴＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＱＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＰＧＴＰＮＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＡ（配列番号６７）。
【０１１９】
場合によっては、本開示のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、ＮＹ−ＥＳＯ−１ペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する抗体（例えば、ｓｃＦｖ）である。
【０１２０】
場合によっては、本開示のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、ＫＲＡＳ−Ｇ１２Ｖペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する抗体（例えば、ｓｃＦｖ）である（例えば、抗ＨＬＡ−Ａ２／ＫＲＡＳ−Ｇ１２Ｖ  ｓｃＦｖ）。
【０１２１】
場合によっては、ＫＲＡＳ−Ｇ１２Ｖペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する抗体は、以下のアミノ酸配列を有するｓｃＦｖである。
【０１２２】
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＹＹＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＡＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＮＧＳＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＤＰＥＴＧＹＳＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＤＳＡＳＤＡＭＤ  ＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６８）。
【０１２３】
場合によっては、本開示のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、ＫＲＡＳ−Ｇ１２Ｖ／Ｃペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する抗体（例えば、ｓｃＦｖ）である（例えば、抗ＨＬＡ−Ａ２／ＫＲＡＳ−Ｇ１２Ｖ／Ｃ  ｓｃＦｖ）。
【０１２４】
場合によっては、ＫＲＡＳ−Ｇ１２Ｖ／Ｃペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する抗体は、以下のアミノ酸配列を有するｓｃＦｖである。
【０１２５】
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＡＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＹＹＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＡＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＨＩＮＧＳＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＫＷＶＡＹＩＤＰＥＴＧＹＳＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＡＩＳＡＤＭＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＤＳＡＳＤＡＭ  ＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６９）。
【０１２６】
場合によっては、本開示のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、ＥＧＦＲ−Ｌ８５８Ｒペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する抗体（例えば、ｓｃＦｖ）である（例えば、抗ＨＬＡ−Ａ３／ＥＧＦＲ−Ｌ８５８Ｒ  ｓｃＦｖ）。
【０１２７】
場合によっては、ＥＧＦＲ−Ｌ８５８Ｒペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する抗体は、以下のアミノ酸配列を有するｓｃＦｖである。
【０１２８】
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＳＹＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＡＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＴＳＳＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＰＥＤＧＹＡＲＨＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＤＤＴＹＹＹＳＡ  ＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７０）。
【０１２９】
場合によっては、本開示のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの特異的結合メンバー（例えば、抗体、ｓｃＦｖなど）は、例えば、ＮＬＲＰ４ペプチド（例えば、ＨＬＳＰＩＤＣＥＶ（配列番号７１））−ＭＨＣ複合体、ＵＭＯＤＬ１ペプチド（例えば、ＬＴＳＭＷＳＰＡＶ（配列番号７２））−ＭＨＣ複合体、ＮＬＲＰ４ペプチド（例えば、ＨＬＤＨＰＨＰＡＶ（配列番号７３））−ＭＨＣ複合体、ＭＡＧＥＣ２ペプチド（例えば、ＳＬＳＶＭＳＳＮＶ（配列番号７４））−ＭＨＣ複合体、ＮＬＲＰ４ペプチド（例えば、ＭＭＡＷＳＤＮＫＩ（配列番号７５））−ＭＨＣ複合体、ＣＯＸ７Ｂ２ペプチド（例えば、ＴＱＩＧＩＥＷＮＬ（配列番号７６））−ＭＨＣ複合体、ＮＬＲＰ４ペプチド（例えば、ＣＬＦＥＭＱＤＰＡ（配列番号７７））−ＭＨＣ複合体、ＵＭＯＤＬ１ペプチド（例えば、ＹＬＳＨＰＳＣＮＶ（配列番号７８））−ＭＨＣ複合体、ＣＯＸ７Ｂ２ペプチド（例えば、ＧＩＥＷＮＬＳＰＶ（配列番号７９））−ＭＨＣ複合体、ＭＡＧＥＡ１１ペプチド（例えば、ＧＬＧＣＳＰＡＳＩ（配列番号８０））−ＭＨＣ複合体、ＲＰＥ６５ペプチド（例えば、ＲＱＡＦＥＦＰＱＩ（配列番号８１））−ＭＨＣ複合体、ＮＬＲＰ４ペプチド（例えば、ＧＭＷＴＤＴＦＥＦ（配列番号８２））−ＭＨＣ複合体、ＴＲＩＭ５１ペプチド（例えば、ＹＬＮＷＱＤＴＡＶ（配列番号８３））−ＭＨＣ複合体、ＭＡＧＥＡ１１ペプチド（例えば、ＶＬＷＧＰＩＴＱＩ（配列番号８４））−ＭＨＣ複合体、ＮＬＲＰ４ペプチド（例えば、ＴＬＤＨＴＧＶＶＶ（配列番号８５））−ＭＨＣ複合体、ＲＰＥ６５ペプチド（例えば、ＴＭＧＶＷＬＨＩＡ（配列番号８６））−ＭＨＣ複合体、ＭＡＧＥＣ２ペプチド（例えば、ＫＶＷＶＱＧＨＹＬ（配列番号８７））−ＭＨＣ複合体、ＵＭＯＤＬ１ペプチド（例えば、ＫＩＮＣＮＮＦＲＬ（配列番号８８））−ＭＨＣ複合体などを含むが、これらに限定されない、Ｄｈａｎｉｋ  ｅｔ  ａｌ．ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（２０１６）１７：２８６に記載のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合し、この開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３０】
例えば、米国特許第６，０４２，８３１号、同第６，２５２，０５２号、同第６，２９１，４３０号、同第６，６０２，５１０号、同第７，１５７，０９１号、同第７，６２２，５６９号、同第７，６３２，９２３号、同第７，６３８，１２４号、同第７，７１８，７７７号、同第８，１１９，１３９号、同第８，６４７，６２９号、同第８，８１５，５２８号、同第８，９６１，９８５号、同第９，０２３，３４８号、同第９，０４０，６６９号、同第９，０７４，０００号、同第９，０９５，５３３号、同第９，３３４，３１７号、米国特許出願公開第２００７００９２５３０号、同第２００９００４２２８５号、同第２００９０２２６４７４号、同第２００９０３０４６７９号、同第２０１０００６２００１号、同第２０１００１１１９５７号、同第２０１００１５８９２７号、同第２０１００１５８９３１号、同第２０１１００２０３５７号、同第２０１１００３３４７３号、同第２０１１０２９３６２３号、同第２０１１０３１８３６９号、同第２０１２０１４１５１７号、同第２０１２０２９４８７４号、同第２０１３０１０１５９４号、同第２０１４００２４８０９号、同第２０１４００６５７０８号、同第２０１４０２７１６４４号、同第２０１４０２９４８４１号、同第２０１４０２９６４９２号、同第２０１４０３６３４４０号、同第２０１５０１２５４７７号、同第２０１５０１２５４７８号、同第２０１５０２５９４３６号、同第２０１５０３２０８４８号、同第２０１５０３２２１５４号、同第２０１５０３６８２９８号、同第２０１６００１７０３１号、同第２０１６０１６８２００号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００２０１４８７０号、同第ＷＯ２００３０６８２０１号、同第ＷＯ２００５１２０１６６号、同第ＷＯ２００７０３０４５１号、同第ＷＯ２００７１４３１０４号、同第ＷＯ２００８１２０２０２号、同第ＷＯ２００８１２０２０３号、同第ＷＯ２００９１０８３７２号、同第ＷＯ２００９１２５３９４号、同第ＷＯ２００９１２５３９５号、同第ＷＯ２００９１３８２３６号、同第ＷＯ２０１００３７５１４号、同第ＷＯ２０１０１０６４３１号、同第ＷＯ２０１１０６２５６０号、同第ＷＯ２０１２００７９５０号、同第ＷＯ２０１２００７９５１号、同第ＷＯ２０１２０１７００３号、同第ＷＯ２０１２１０９６５９号、同第ＷＯ２０１２１３５８５４号、同第ＷＯ２０１４０１１４８９号、同第ＷＯ２０１４１４３８３５号、同第ＷＯ２０１５０１８８０５号、同第ＷＯ２０１５０６３３０２号、同第ＷＯ２０１５０７００６１号、同第ＷＯ２０１５０７００７８号、同第ＷＯ２０１５０９０２２９号、同第ＷＯ２０１５１３０７６６号、同第ＷＯ２０１５１４２６７５号、同第ＷＯ２０１５１６９９４５号、同第ＷＯ２０１５１９３３５９号、同第ＷＯ２０１５１９９６１７号、同第ＷＯ２０１６１０２２７２号などに記載の、例えば、好適な抗ペプチド−ＭＨＣ結合メンバー及び抗体、ならびにそれらの好適なエピトープに対する抗体を含むが、これらに限定されない、任意の好適な抗ペプチド−ＭＨＣ特異的結合メンバー（例えば、抗ペプチド−ＭＨＣ抗体）が、本明細書に記載の主題のキメラポリペプチドの細胞外ドメインの特異的結合メンバーとして用途を見出すことができ、これらの開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３１】
場合によっては、本明細書に記載の主題のキメラポリペプチドの細胞外ドメインの特異的結合メンバーとして用途を見出し得る抗ペプチド−ＭＨＣ特異的結合メンバー（例えば、抗ペプチド−ＭＨＣ抗体）としては、例えば、Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  Ｃａｒｓ  Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ａｇａｉｎｓｔ  ＨＬＡ−０２０１  ｅＲｍｆ  ＷＴ−１  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｃａｎ  Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ  Ｅｒａｄｉｃａｔｅ  ＷＴ１＋Ａ０２０１＋Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ  ｉｎ−Ｖｉｔｒｏ．（２０１４）Ｂｉｏｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、Ａ  ｎｏｖｅｌ  ＴＣＲ−ｌｉｋｅ  ＣＡＲ  ｗｉｔｈ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｆｏｒ  ＰＲ１／ＨＬＡ−Ａ２  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｗｈｅｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ａｄｕｌｔ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  ｃｏｒｄ  ｂｌｏｏｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．（２０１６）Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ、Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ｃａｒｒｙｉｎｇ  ａ  Ｎａｔｉｖｅ  ＴＣＲ  ｖｅｒｓｕｓ  ＴＣＲ−ｌｉｋｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｂａｓｅｄ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  Ｉｎｄｉｃａｔｅｓ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ／Ａｖｉｄｉｔｙ  Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄｓ．（２０１４）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｌｉｋｅ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｗｉｌｍｓ  ｔｕｍｏｒ  １  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｇｒｅａｔｌｙ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．（２０１５）Ｌｅｕｋｅｍｉａ、Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｌｉｋｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｎｄ  ＣＡＲ−Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｆｏｒ  ｍｉｎｏｒ  ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ  ａｎｔｉｇｅｎ  ＨＡ−１Ｈ．（２０１４）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ＷＴ１  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ．（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ａ  ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｆａｂ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  Ｉ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｆｏｒ  ＭＡＧＥ−Ａ１  ａｌｌｏｗｓ  ｆｏｒ  ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．（２００１）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｅｎｇａｇｅｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ＷＴ１．（２０１５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭＡＮＡｂｏｄｉｅｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔｏ  ＨＬＡ−ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ  ｅｐｉｔｏｐｅｓ  ｅｎｃｏ��ｅｄ  ｂｙ  ｓｏｍａｔｉｃａｌｌｙ  ｍｕｔａｔｅｄ  ｇｅｎｅｓ．（２０１５）ＰＮＡＳ、Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｍａｊｏｒ  Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｃｌａｓｓ  ｉ−Ｈｅｒ２  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．（２０１３）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ａｎｔｉ−ｍｅｌａｎｏｍａ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａ  ＴＣＲ−ｌｉｋｅ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．（２０１４）Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｐｏｒｔｓなどに記載の、例えば、好適な抗ペプチド−ＭＨＣ結合メンバー及び抗体、ならびにそれらの好適なエピトープに対する抗体を挙げることができるが、これらに限定されない。
【０１３２】
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、例えば、Ｄａｈａｎ＆Ｒｅｉｔｅｒ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ““Ｍｅｄ．”  ”（２０１２）１４：ｅ６及び／またはＣｏｈｅｎ＆Ｒｅｉｔｅｒ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（２０１３），２：５１７−５３４に記載のもの（例えば、クローンＧ２Ｄ１２標的化ＨＬＡ−Ａ２／ｇｐ１００−１５４；クローン１Ａ７標的化ＨＬＡ−Ａ２／ｇｐ１００−２０９；クローンＧ１標的化ＨＬＡ−Ａ２／ｇｐ１００−２０９；クローン２Ｆ１標的化ＨＬＡ−Ａ２／ｇｐ１００−２８０；クローンＴＡ２標的化ＨＬＡ−Ａ２／チロシナーゼ−３６９；クローンＣＡＧ１０、ＣＬＡ１２標的化ＨＬＡ−Ａ２／ＭＡＲＴ−１−２６；クローンＦａｂ−Ｇ８標的化ＨＬＡ−Ａ１／ＭＡＧＥ−Ａ１；クローンＦａｂ−Ｈｙｂ３標的化ＨＬＡ−Ａ１／ＭＡＧＥ−Ａ１；クローン７Ｄ４標的化ＨＬＡ−Ａ２／ＭＡＧＥ３−２７１；クローンＲＬ６Ａ標的化ＨＬＡ−Ａ２／ｐ６８  ＲＮＡヘリカーゼ−１２８；クローン３Ｍ４Ｅ５、３Ｍ４Ｆ４標的化ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹＥＳＯ−１−１５７；クローンＴ１標的化ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹＥＳＯ−１−１５７；クローンＤ２標的化ＨＬＡ−Ａ２／ＴＡＲＰ−２９；クローンＲＬ４Ｂ、１Ｂ１０標的化ＨＬＡ−Ａ２／ｈＣＧβ−４７；クローン３Ｆ９標的化ＨＬＡ−Ａ２／ｈＣＧβ−４０；クローン１Ｂ８標的化ＨＬＡ−Ａ２／Ｈｅｒ２−３６９；クローン８Ｆ４標的化ＨＬＡ−Ａ２／ＰＲ１；クローンＦ２標的化ＨＬＡ−Ａ２／ＷＴ１−ｄｂ１２６；クローンＭ３Ａ１、Ｍ３Ｂ８標的化ＨＬＡ−Ａ２／ＭＵＣ−１−Ｄ６−１３；クローン４Ａ９、４Ｇ９標的化ＨＬＡ−Ａ２／テロメラーゼ−５４０；クローン３Ｇ３、３Ｈ２標的化ＨＬＡ−Ａ２／テロメラーゼ−８６５；クローンＴ３Ａ４、Ｔ３Ｄ４、Ｔ３Ｅ３、Ｔ３Ｆ２、Ｔ３Ｄ３、Ｔ２Ｈ９標的化ＨＬＡ−Ａ２／ＴＡＸ−１１；クローンＭ１−Ｄ１、Ｍ１−Ｇ８、Ｍ１−Ｄ１２、Ｍ１−Ａ２標的化ＨＬＡ−Ａ２／Ｍ１−５８；クローン標的化ＨＬＡ−Ａ２／ＥＮＶ−１８３；クローンＣ３標的化ＨＬＡ−Ｃ７／Ｎｅｆ−１０５；クローン４Ｆ７標的化ＨＬＡ−Ａ２／ｅＩＦ４Ｇ−７２０；クローンｓｃＦｖ♯３、ｓｃＦｖ♯２７標的化ＨＬＡ−Ａ２４／Ｎｅｆ−１３８；クローンＨ９標的化ＨＬＡ−Ａ２／ｐｐ６５−４９５などを含むが、これらに限定されない）を含むが、これらに限定されない、Ｔ細胞受容体様抗ペプチド−ＭＨＣ抗体を含み得、これらの開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３３】
本明細書に記載のペプチド−ＭＨＣ結合パートナーに加えて、またはそれと引き換えに、本開示のキメラポリペプチドは、場合によっては、表面発現抗原を標的化することができる。本明細書で使用される場合、「表面発現抗原」という用語は一般に、タンパク質の少なくとも一部分が細胞の外側に曝露され、結合パートナーとの結合に利用可能となるように、少なくとも部分的に細胞外に発現される抗原タンパク質を指す。本質的に、任意の表面発現タンパク質が、本開示のキメラポリペプチドの標的として用途を見出し得る。表面発現抗原の非限定的な例としては、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３８、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＥＲＢＢ２、ＣＡ１２５、ＭＵＣ−１、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＣＤ４４表面上接着分子、メソテリン、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、高分子量−黒色腫関連抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、ＧＤ２などが挙げられるが、これらに限定されない。標的化され得る表面発現抗原としては、例えば、慣習的ながん療法において特異的に標的化されるもの（例えば、本明細書に記載の標的化がん治療薬の標的を含む）もまた挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３４】
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、がん関連抗原を標的化することができる。場合によっては、本開示の特異的結合メンバーは、がん関連抗原に特異的な抗体を含み得る。がん関連抗原の非限定的な例としては、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３８、ＣＤ３０、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＥＲＢＢ２、ＣＡ１２５、ＭＵＣ−１、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＣＤ４４表面上接着分子、メソテリン、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、高分子量−黒色腫関連抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、ＧＤ２などが挙げられるが、これらに限定されない。がん関連抗原としては、例えば、４−１ＢＢ、５Ｔ４、腺癌抗原、アルファ−胎児タンパク質、ＢＡＦＦ、Ｂリンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、ＣＡ−１２５、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、Ｃ−ＭＥＴ、ＣＣＲ４、ＣＤ１５２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２００、ＣＤ２２、ＣＤ２２１、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２８、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＥＡ、ＣＮＴＯ８８８、ＣＴＬＡ−４、ＤＲＳ、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３、ＦＡＰ、フィブロネクチンエクストラドメインＢ、葉酸受容体１、ＧＤ２、ＧＤ３ガングリオシド、糖タンパク質７５、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ヒト散乱係数受容体キナーゼ、ＩＧＦ−１受容体、ＩＧＦ−Ｉ、ＩｇＧ１、Ｌ１−ＣＡＭ、ＩＬ−１３、ＩＬ−６、インスリン様成長因子Ｉ受容体、インテグリンα５β１、インテグリンαｖβ３、ＭＯＲＡｂ−００９、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１、ムチンＣａｎＡｇ、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、ＮＰＣ−１Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｒα、ＰＤＬ１９２、ホスファチジルセリン、前立腺癌細胞、ＲＡＮＫＬ、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＳＣＨ  ９００１０５、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ＴＡＧ−７２、テネイシンＣ、ＴＧＦベータ２、ＴＧＦ−β、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ２、及びビメンチンも挙げられる。
【０１３５】
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドの特異的結合メンバーは、例えば、Ｔｈｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（ＪＣＩ  Ｉｎｓｉｇｈｔ．２０１６；１（９）：ｅ８７６０７）に記載のＰＲＬ３−ズマブなどの、再生肝ホスファターゼ３（ＰＲＬ−３、ＰＴＰ４Ａ３としても知られる）を標的化する抗体の全部または一部を標的化しても、それを含んでもよく、この開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３６】
場合によっては、キメラポリペプチドの細胞外ドメインは、１つの特異的結合メンバーのみを含み得る。場合によっては、キメラポリペプチドの細胞外ドメインは、単一特異性であり得る。
【０１３７】
場合によっては、キメラポリペプチドの細胞外ドメインは、多特異的（例えば、二重特異的を含む）であり得る。場合によっては、キメラポリペプチドの二重特異性細胞外ドメインは、二重特異性キメラ結合メンバーまたはその一部分（例えば、二重特異性抗体を含むが、これに限定されない、例えば、本明細書に記載のものを含む）を含み得る。場合によっては、二重特異性細胞外ドメインは、互いに連結される（例えば、直接連結を含む）か、またはリンカーを介して連結される、２つの特異的結合ドメインを含み得る。
【０１３８】
場合によっては、キメラポリペプチドの細胞外ドメインは、２つ以上の特異的結合メンバーを含む２つ以上の特異的結合メンバーを含んでもよく、これには、２つ以上の特異的結合メンバーが互いに連結（直接的もしくは間接的（例えば、リンカーの使用を通して）のいずれか）されても、またはそれらの各々がキメラポリペプチドの別の構成要素に連結（直接的もしくは間接的（例えば、リンカーの使用を通して）のいずれか）されてもよい、２つ以上の特異的結合メンバーが含まれる。
【０１３９】
多特異的細胞外ドメインは、任意の組み合わせの結合パートナーを認識するか、またはそれに結合することができ、したがって、例えば、本明細書に記載の結合パートナー及び標的を含むが、これらに限定されない、任意の組み合わせの標的を標的化することができる。したがって、例えば、二重特異性細胞外ドメインは、例えば、２つの異なる細胞内抗原、２つの異なる細胞外（例えば、表面発現）抗原、または細胞内抗原及び細胞外（例えば、表面発現）抗原を含むが、これらに限定されない、２つの異なる抗原を標的化することができる。場合によっては、二重特異性細胞外ドメインは、例えば、各々が抗原（例えば、本明細書に記載の抗原を含む）に結合する本明細書に記載の２つの特異的結合メンバーを含む、２つの特異的結合メンバーを含み得る。
【０１４０】
多特異的細胞外ドメインの特異的結合ドメインは各々、それらが一部分をなすキメラポリペプチドを活性化し得る。二重特異性細胞外ドメインの特異的結合ドメインは各々、それらが一部分をなすキメラポリペプチドを活性化し得る。場合によっては、多特異的または二重特異的結合ドメインは、本明細書に記載の分子回路の一部分として（例えば、本明細書に記載の回路のＯＲゲートとして）用途を見出し得る。
【０１４１】
場合によっては、特異的結合ドメインによって結合される結合パートナーは、野生型結合パートナーと比較して、変異していてもよい。場合によっては、変異結合パートナーを認識する特異的結合ドメインは、野生型結合パートナーに特異的に結合しなくてもよい。場合によっては、変異結合パートナーを認識する特異的結合ドメインは、変異結合パートナーとのその結合親和性と比較して、より低い親和性で野生型結合パートナーに特異的に結合してもよい。
【０１４２】
任意の結合パートナー（例えば、本明細書に記載のものを含む）は変異していても、変異結合パートナーであってもよい。したがって、本開示のキメラポリペプチドは、変異（すなわち、非野生型）結合パートナーに特異的に結合する特異的結合メンバーを含み得る。変異結合パートナーの非限定的な例としては、例えば、変異抗原、変異がん抗原、変異自己抗原、変異細胞外抗原、変異細胞外がん抗原、変異細胞外自己抗原、変異表面抗原、変異表面がん抗原、変異表面自己抗原、変異抗原ペプチドを提示するペプチド−ＭＨＣ複合体、変異がん抗原ペプチドを提示するペプチド−ＭＨＣ複合体、変異自己抗原ペプチドを提示するペプチド−ＭＨＣ複合体などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４３】
がんは一般に、その疾患に関連する変異タンパク質に関与する。がんにおいて一般に変異される遺伝子としては、例えば、ＡＢＩ１、ＡＢＬ１、ＡＢＬ２、ＡＣＫＲ３、ＡＣＳＬ３、ＡＣＳＬ６、ＡＦＦ１、ＡＦＦ３、ＡＦＦ４、ＡＫＡＰ９、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＡＬＤＨ２、ＡＬＫ、ＡＭＥＲ１、ＡＰＣ、ＡＲＨＧＡＰ２６、ＡＲＨＧＥＦ１２、ＡＲＩＤ１Ａ、ＡＲＩＤ２、ＡＲＮＴ、ＡＳＰＳＣＲ１、ＡＳＸＬ１、ＡＴＦ１、ＡＴＩＣ、ＡＴＭ、ＡＴＰ１Ａ１、ＡＴＰ２Ｂ３、ＡＴＲＸ、ＡＸＩＮ１、ＢＡＰ１、ＢＣＬ１０、ＢＣＬ１１Ａ、ＢＣＬ１１Ｂ、ＢＣＬ２、ＢＣＬ３、ＢＣＬ６、ＢＣＬ７Ａ、ＢＣＬ９、ＢＣＯＲ、ＢＣＲ、ＢＩＲＣ３、ＢＬＭ、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＲＡＦ、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＩＰ１、ＢＴＧ１、ＢＵＢ１Ｂ、Ｃ１５ｏｒｆ６５、Ｃ２ｏｒｆ４４、ＣＡＣＮＡ１Ｄ、ＣＡＬＲ、ＣＡＭＴＡ１、ＣＡＮＴ１、ＣＡＲＤ１１、ＣＡＲＳ、ＣＡＳＣ５、ＣＡＳＰ８、ＣＢＦＡ２Ｔ３、ＣＢＦＢ、ＣＢＬ、ＣＢＬＢ、ＣＢＬＣ、ＣＣＤＣ６、ＣＣＮＢ１ＩＰ１、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＤ２、ＣＣＮＤ３、ＣＣＮＥ１、ＣＤ２７４、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤＣ７３、ＣＤＨ１、ＣＤＨ１１、ＣＤＫ１２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＤＸ２、ＣＥＢＰＡ、ＣＥＰ８９、ＣＨＣＨＤ７、ＣＨＥＫ２、ＣＨＩＣ２、ＣＨＮ１、ＣＩＣ、ＣＩＩＴＡ、ＣＬＩＰ１、ＣＬＰ１、ＣＬＴＣ、ＣＬＴＣＬ１、ＣＮＢＰ、ＣＮＯＴ３、ＣＮＴＲＬ、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ２Ａ１、ＣＯＸ６Ｃ、ＣＲＥＢ１、ＣＲＥＢ３Ｌ１、ＣＲＥＢ３Ｌ２、ＣＲＥＢＢＰ、ＣＲＬＦ２、ＣＲＴＣ１、ＣＲＴＣ３、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＴＮＮＢ１、ＣＵＸ１、ＣＹＬＤ、ＤＡＸＸ、ＤＣＴＮ１、ＤＤＢ２、ＤＤＩＴ３、ＤＤＸ１０、ＤＤＸ５、ＤＤＸ６、ＤＥＫ、ＤＩＣＥＲ１、ＤＮＭ２、ＤＮＭＴ３Ａ、ＥＢＦ１、ＥＣＴ２Ｌ、ＥＧＦＲ、ＥＩＦ３Ｅ、ＥＩＦ４Ａ２、ＥＬＦ４、ＥＬＫ４、ＥＬＬ、ＥＬＮ、ＥＭＬ４、ＥＰ３００、ＥＰＳ１５、ＥＲＢＢ２、ＥＲＣ１、ＥＲＣＣ２、ＥＲＣＣ３、ＥＲＣＣ４、ＥＲＣＣ５、ＥＲＧ、ＥＴＶ１、ＥＴＶ４、ＥＴＶ５、ＥＴＶ６、ＥＷＳＲ１、ＥＸＴ１、ＥＸＴ２、ＥＺＨ２、ＥＺＲ、ＦＡＭ４６Ｃ、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、ＦＡＳ、ＦＢＸＯ１１、ＦＢＸＷ７、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＦＣＲＬ４、ＦＥＶ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ１ＯＰ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＨ、ＦＨＩＴ、ＦＩＰ１Ｌ１、ＦＬＣＮ、ＦＬＩ１、ＦＬＴ３、ＦＮＢＰ１、ＦＯＸＡ１、ＦＯＸＬ２、ＦＯＸＯ１、ＦＯＸＯ３、ＦＯＸＯ４、ＦＯＸＰ１、ＦＳＴＬ３、ＦＵＢＰ１、ＦＵＳ、ＧＡＳ７、ＧＡＴＡ１、ＧＡＴＡ２、ＧＡＴＡ３、ＧＭＰＳ、ＧＮＡ１１、ＧＮＡＱ、ＧＮＡＳ、ＧＯＬＧＡ５、ＧＯＰＣ、ＧＰＣ３、ＧＰＨＮ、Ｈ３Ｆ３Ａ、Ｈ３Ｆ３Ｂ、ＨＥＲＰＵＤ１、ＨＥＹ１、ＨＩＰ１、ＨＩＳＴ１Ｈ４Ｉ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＦ、ＨＭＧＡ１、ＨＭＧＡ２、ＨＮＦ１Ａ、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１、ＨＯＯＫ３、ＨＯＸＡ１１、ＨＯＸＡ１３、ＨＯＸＡ９、ＨＯＸＣ１１、ＨＯＸＣ１３、ＨＯＸＤ１１、ＨＯＸＤ１３、ＨＲＡＳ、ＨＳＰ９０ＡＡ１、ＨＳＰ９０ＡＢ１、ＩＤＨ１、ＩＤＨ２、ＩＫＺＦ１、ＩＬ２、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ７Ｒ、ＩＲＦ４、ＩＴＫ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＪＡＺＦ１、ＪＵＮ、ＫＡＴ６Ａ、ＫＡＴ６Ｂ、ＫＣＮＪ５、ＫＤＭ５Ａ、ＫＤＭ５Ｃ、ＫＤＭ６Ａ、ＫＤＲ、ＫＤＳＲ、ＫＩＡＡ１５４９、ＫＩＡＡ１５９８、ＫＩＦ５Ｂ、ＫＩＴ、ＫＬＦ４、ＫＬＦ６、ＫＬＫ２、ＫＭＴ２Ａ、ＫＭＴ２Ｃ、ＫＭＴ２Ｄ、ＫＲＡＳ、ＫＴＮ１、ＬＡＳＰ１、ＬＣＫ、ＬＣＰ１、ＬＨＦＰ、ＬＩＦＲ、ＬＭＮＡ、ＬＭＯ１、ＬＭＯ２、ＬＰＰ、ＬＲＩＧ３、ＬＳＭ１４Ａ、ＬＹＬ１、ＭＡＦ、ＭＡＦＢ、ＭＡＬＴ１、ＭＡＭＬ２、ＭＡＰ２Ｋ１、ＭＡＰ２Ｋ２、ＭＡＰ２Ｋ４、ＭＡＸ、ＭＤＭ２、ＭＤＭ４、ＭＥＣＯＭ、ＭＥＤ１２、ＭＥＮ１、ＭＥＴ、ＭＩＴＦ、ＭＫＬ１、ＭＬＦ１、ＭＬＨ１、ＭＬＬＴ１、ＭＬＬＴ１０、ＭＬＬＴ１１、ＭＬＬＴ３、ＭＬＬＴ４、ＭＬＬＴ６、ＭＮ１、ＭＮＸ１、ＭＰＬ、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６、ＭＳＩ２、ＭＳＮ、ＭＴＣＰ１、ＭＵＣ１、ＭＵＴＹＨ、ＭＹＢ、ＭＹＣ、ＭＹＣＬ、ＭＹＣＮ、ＭＹＤ８８、ＭＹＨ１１、ＭＹＨ９、ＭＹＯ５Ａ、ＮＡＢ２、ＮＡＣＡ、ＮＢＮ、ＮＣＫＩＰＳＤ、ＮＣＯＡ１、ＮＣＯＡ２、ＮＣＯＡ４、ＮＤＲＧ１、ＮＦ１、ＮＦ２、ＮＦＡＴＣ２、ＮＦＥ２Ｌ２、ＮＦＩＢ、ＮＦＫＢ２、ＮＩＮ、ＮＫＸ２−１、ＮＯＮＯ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＰＭ１、ＮＲ４Ａ３、ＮＲＡＳ、ＮＲＧ１、ＮＳＤ１、ＮＴ５Ｃ２、ＮＴＲＫ１、ＮＴＲＫ３、ＮＵＭＡ１、ＮＵＰ２１４、ＮＵＰ９８、ＮＵＴＭ１、ＮＵＴＭ２Ａ、ＮＵＴＭ２Ｂ、ＯＬＩＧ２、ＯＭＤ、Ｐ２ＲＹ８、ＰＡＦＡＨ１Ｂ２、ＰＡＬＢ２、ＰＡＴＺ１、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ＰＡＸ７、ＰＡＸ８、ＰＢＲＭ１、ＰＢＸ１、ＰＣＭ１、ＰＣＳＫ７、ＰＤＣＤ１ＬＧ２、ＰＤＥ４ＤＩＰ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＥＲ１、ＰＨＦ６、ＰＨＯＸ２Ｂ、ＰＩＣＡＬＭ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＰＩＭ１、ＰＬＡＧ１、ＰＬＣＧ１、ＰＭＬ、ＰＭＳ１、ＰＭＳ２、ＰＯＴ１、ＰＯＵ２ＡＦ１、ＰＯＵ５Ｆ１、ＰＰＡＲＧ、ＰＰＦＩＢＰ１、ＰＰＰ２Ｒ１Ａ、ＰＲＣＣ、ＰＲＤＭ１、ＰＲＤＭ１６、ＰＲＦ１、ＰＲＫＡＲ１Ａ、ＰＲＲＸ１、ＰＳＩＰ１、ＰＴＣＨ１、ＰＴＥＮ、ＰＴＰＮ１１、ＰＴＰＲＢ、ＰＴＰＲＣ、ＰＴＰＲＫ、ＰＷＷＰ２Ａ、ＲＡＢＥＰ１、ＲＡＣ１、ＲＡＤ２１、ＲＡＤ５１Ｂ、ＲＡＦ１、ＲＡＬＧＤＳ、ＲＡＮＢＰ１７、ＲＡＰ１ＧＤＳ１、ＲＡＲＡ、ＲＢ１、ＲＢＭ１５、ＲＥＣＱＬ４、ＲＥＬ、ＲＥＴ、ＲＨＯＨ、ＲＭＩ２、ＲＮＦ２１３、ＲＮＦ４３、ＲＯＳ１、ＲＰＬ１０、ＲＰＬ２２、ＲＰＬ５、ＲＰＮ１、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ３、ＲＵＮＸ１、ＲＵＮＸ１Ｔ１、ＳＢＤＳ、ＳＤＣ４、ＳＤＨＡＦ２、ＳＤＨＢ、ＳＤＨＣ、ＳＤＨＤ、ＳＥＰＴ５、ＳＥＰＴ６、ＳＥＰＴ９、ＳＥＴ、ＳＥＴＢＰ１、ＳＥＴＤ２、ＳＦ３Ｂ１、ＳＦＰＱ、ＳＨ２Ｂ３、ＳＨ３ＧＬ１、ＳＬＣ３４Ａ２、ＳＬＣ４５Ａ３、ＳＭＡＤ４、ＳＭＡＲＣＡ４、ＳＭＡＲＣＢ１、ＳＭＡＲＣＥ１、ＳＭＯ、ＳＯＣＳ１、ＳＯＸ２、ＳＰＥＣＣ１、ＳＲＧＡＰ３、ＳＲＳＦ２、ＳＲＳＦ３、ＳＳ１８、ＳＳ１８Ｌ１、ＳＳＸ１、ＳＳＸ２、ＳＳＸ２Ｂ、ＳＳＸ４、ＳＳＸ４Ｂ、ＳＴＡＧ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＳＴＡＴ６、ＳＴＩＬ、ＳＴＫ１１、ＳＵＦＵ、ＳＵＺ１２、ＳＹＫ、ＴＡＦ１５、ＴＡＬ１、ＴＡＬ２、ＴＢＬ１ＸＲ１、ＴＣＥＡ１、ＴＣＦ１２、ＴＣＦ３、ＴＣＦ７Ｌ２、ＴＣＬ１Ａ、ＴＥＲＴ、ＴＥＴ１、ＴＥＴ２、ＴＦＥ３、ＴＦＥＢ、ＴＦＧ、ＴＦＰＴ、ＴＦＲＣ、ＴＨＲＡＰ３、ＴＬＸ１、ＴＬＸ３、ＴＭＰＲＳＳ２、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＮＦＲＳＦ１４、ＴＮＦＲＳＦ１７、ＴＯＰ１、ＴＰ５３、ＴＰＭ３、ＴＰＭ４、ＴＰＲ、ＴＲＡＦ７、ＴＲＩＭ２４、ＴＲＩＭ２７、ＴＲＩＭ３３、ＴＲＩＰ１１、ＴＲＲＡＰ、ＴＳＣ１、ＴＳＣ２、ＴＳＨＲ、ＴＴＬ、Ｕ２ＡＦ１、ＵＢＲ５、ＵＳＰ６、ＶＨＬ、ＶＴＩ１Ａ、ＷＡＳ、ＷＨＳＣ１、ＷＨＳＣ１Ｌ１、ＷＩＦ１、ＷＲＮ、ＷＴ１、ＷＷＴＲ１、ＸＰＡ、ＸＰＣ、ＸＰＯ１、ＹＷＨＡＥ、ＺＢＴＢ１６、ＺＣＣＨＣ８、ＺＭＹＭ２、ＺＮＦ３３１、ＺＮＦ３８４、ＺＮＦ５２１、及びＺＲＳＲ２が挙げられる。場合によっては、特異的結合メンバーは、例えば、上記に列挙されるものを含むが、これらに限定されない、がんにおいて一般に変異される遺伝子の変異バージョンに結合する。場合によっては、特異的結合メンバーは、例えば、上記に列挙されるものを含むが、これらに限定されない、がんにおいて一般に変異される遺伝子の変異バージョンに由来する変異がん抗原ペプチドを提示するペプチド−ＭＨＣ複合体に結合する。場合によっては、特異的結合メンバーは、変異ＫＲＡＳペプチドを提示するペプチド−ＭＨＣ複合体に結合する。
【０１４４】
場合によっては、結合パートナー／特異的結合メンバー対は、直交化され得る。本明細書で使用される場合、「直交化」は、それらの元来の形態または野生型の形態から修飾されることで、直交対が互いに特異的に結合するが、その対の非修飾構成要素または野生型構成要素には特異的または実質的に結合しないことを意味する。例えば、本明細書に記載の結合パートナー／特異的結合対を含むが、これらに限定されない、いずれの結合パートナー／特異的結合対が直交化されてもよい。
【０１４５】
本明細書に記載のキメラポリペプチドならびに方法及び回路における使用に適合され得る、特定の細胞外ドメイン及びそれらの構成要素としては、例えば、ＰＣＴ出願第ＵＳ２０１６／０１９１８８号（公開第ＷＯ２０１６／１３８０３４号）に記載のものが挙げられるが、これらに限定されず、この開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１４６】
Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチド
上記のように、本開示のキメラポリペプチドは、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドを含む。主題のキメラポリペプチドのＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの長さは変動し、約５０アミノ酸長以下〜約１０００アミノ酸長以上の範囲であってもよく、一般に１つ以上のリガンド誘導性タンパク質分解切断部位を含む。Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｎｏｔｃｈ制御領域またはその修飾形態を含む合成受容体を含む。
【０１４７】
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、５０アミノ酸長（ａａ）〜１０００アミノ酸長、例えば、５０アミノ酸長〜７５アミノ酸長、７５アミノ酸長〜１００アミノ酸長、１００アミノ酸長〜１５０アミノ酸長、１５０アミノ酸長〜２００アミノ酸長、２００アミノ酸長〜２５０アミノ酸長、２５０アミノ酸長〜３００アミノ酸長、３００アミノ酸長〜３５０アミノ酸長、３５０アミノ酸長〜４００アミノ酸長、４００アミノ酸長〜４５０アミノ酸長、４５０アミノ酸長〜５００アミノ酸長、５００アミノ酸長〜５５０アミノ酸長、５５０アミノ酸長〜６００アミノ酸長、６００アミノ酸長〜６５０アミノ酸長、６５０アミノ酸長〜７００アミノ酸長、７００アミノ酸長〜７５０アミノ酸長、７５０アミノ酸長〜８００アミノ酸長、８００アミノ酸長〜８５０アミノ酸長、８５０アミノ酸長〜９００アミノ酸長、９００アミノ酸長〜９５０アミノ酸長、または９５０アミノ酸長〜１０００アミノ酸長を有する。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、３００アミノ酸長〜４００アミノ酸長を有する。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、３００アミノ酸長〜３５０アミノ酸長を有する。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、３００アミノ酸長〜３２５アミノ酸長を有する。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、３５０アミノ酸長〜４００アミノ酸長を有する。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、７５０アミノ酸長〜８５０アミノ酸長を有する。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、５０アミノ酸長〜７５アミノ酸長を有する。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、３１０アミノ酸長〜３２０アミノ酸長、例えば、３１０アミノ酸長、３１１アミノ酸長、３１２アミノ酸長、３１３アミノ酸長、３１４アミノ酸長、３１５アミノ酸長、３１６アミノ酸長、３１７アミノ酸長、３１８アミノ酸長、３１９アミノ酸長、または３２０アミノ酸長を有する。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、３１５アミノ酸長を有する。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、３６０アミノ酸長〜３７０アミノ酸長、例えば、３６０アミノ酸長、３６１アミノ酸長、３６２アミノ酸長、３６３アミノ酸長、３６４アミノ酸長、３６５アミノ酸長、３６６アミノ酸長、３６７アミノ酸長、３６８アミノ酸長、３６９アミノ酸長、または３７０アミノ酸長を有する。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、３６７アミノ酸長を有する。
【０１４８】
場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、例えば、配列番号１、２、及び５〜１５のいずれかを含むＮｏｔｃｈレセプターのアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、ＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドのＮｏｔｃｈ制御領域は、例えば、マウスＮｏｔｃｈ（例えば、マウスＮｏｔｃｈ１、マウスＮｏｔｃｈ２、マウスＮｏｔｃｈ３、もしくはマウスＮｏｔｃｈ４）制御領域、ラットＮｏｔｃｈ制御領域（例えば、ラットＮｏｔｃｈ１、ラットＮｏｔｃｈ２、もしくはラットＮｏｔｃｈ３）、ヒトＮｏｔｃｈ制御領域（例えば、ヒトＮｏｔｃｈ１、ヒトＮｏｔｃｈ２、ヒトＮｏｔｃｈ３、もしくはヒトＮｏｔｃｈ４）などを含むが、これらに限定されない、哺乳動物Ｎｏｔｃｈ制御領域であるか、または哺乳動物Ｎｏｔｃｈ制御領域に由来し、かつ例えば、配列番号１、２、及び５〜１５のいずれかを含む哺乳動物Ｎｏｔｃｈレセプターアミノ酸配列の哺乳動物Ｎｏｔｃｈ制御領域のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％のアミノ酸配列同一性を有するＮｏｔｃｈ制御領域である。
【０１４９】
主題のＮｏｔｃｈ制御領域は、それらの様々な構成要素（例えば、ドメイン、切断部位など）を含んでも、除外してもよい。必要に応じて全体的または部分的に存在しても、不在でもよいＮｏｔｃｈ制御領域のそのような構成要素の例としては、例えば、１つ以上のＥＧＦ様反復ドメイン、１つ以上のＬｉｎ１２／Ｎｏｔｃｈ反復ドメイン、１つ以上のヘテロ二量体化ドメイン（例えば、ＨＤ−ＮもしくはＨＤ−Ｃ）、膜貫通ドメイン、１つ以上のタンパク質分解切断部位（例えば、フューリン様プロテアーゼ部位（例えば、Ｓ１部位）、ＡＤＡＭ−ファミリープロテアーゼ部位（例えば、Ｓ２部位）、及び／またはガンマ−セクレターゼプロテアーゼ部位（例えば、Ｓ３部位））などが挙げられる。Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、場合によっては、例えば、デルタ結合ドメインなどのＮｏｔｃｈリガンド結合ドメインを含む、１つ以上のＮｏｔｃｈ細胞外ドメインの全部または一部を除外してもよい。Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、場合によっては、例えば、デルタ結合ドメインなどのＮｏｔｃｈリガンド結合ドメインを含む、１つ以上のＮｏｔｃｈ細胞外ドメインの１つ以上の非機能性バージョンを含んでもよい。Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、場合によっては、例えば、Ｎｏｔｃｈ  Ｒｂｐ関連分子ドメイン（すなわち、ＲＡＭドメイン）、Ｎｏｔｃｈアンキリン反復ドメイン、Ｎｏｔｃｈトランス活性化ドメイン、Ｎｏｔｃｈ  ＰＥＳＴドメインなどを含む、１つ以上のＮｏｔｃｈ細胞内ドメインの全部または一部を除外してもよい。Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、場合によっては、例えば、非機能性Ｎｏｔｃｈ  Ｒｂｐ関連分子ドメイン（すなわち、ＲＡＭドメイン）、非機能性Ｎｏｔｃｈアンキリン反復ドメイン、非機能性Ｎｏｔｃｈトランス活性化ドメイン、非機能性Ｎｏｔｃｈ  ＰＥＳＴドメインなどを含む、１つ以上のＮｏｔｃｈ細胞内ドメインの１つ以上の非機能性バージョンを含んでもよい。
【０１５０】
ＴＭドメインを含むＮｏｔｃｈレセプターポリペプチド
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、以下のアミノ酸配列、ＩＰＹＫＩＥＡＶＫＳＥＰＶＥＰＰＬＰＳＱＬＨＬＭＹＶＡＡＡＡＦＶＬＬＦＦＶＧＣＧＶＬＬＳＲＫＲＲＲＱＬＣＩＱＫＬ（配列番号８９）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、式中、ＴＭドメインには下線が引かれ、ＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドはＳ２タンパク質分解切断部位及びＳ３タンパク質分解切断部位を含み、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは５０アミノ酸長（ａａ）〜６５アミノ酸長、例えば、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、または６５アミノ酸長を有する。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、以下のアミノ酸配列、ＩＰＹＫＩＥＡＶＫＳＥＰＶＥＰＰＬＰＳＱＬＨＬＭＹＶＡＡＡＡＦＶＬＬＦＦＶＧＣＧＶＬＬＳＲＫＲＲＲＱＬＣＩＱＫＬ（配列番号８９）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、式中、ＴＭドメインには下線が引かれ、ＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドはＳ２タンパク質分解切断部位及びＳ３タンパク質分解切断部位を含み、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは５６アミノ酸長を有する。
【０１５１】
ＬＮＲセグメント、ＨＤ−Ｎセグメント、ＨＤ−Ｃセグメント、及びＴＭドメインを含むＮｏｔｃｈレセプターポリペプチド
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順で、ｉ）ＬＮＲ−Ａセグメント、ｉｉ）ＬＮＲ−Ｂセグメント、ｉｉｉ）ＬＮＲ−Ｃセグメント、ｉｖ）ＨＤ−Ｎセグメント、ｖ）ＨＤ−Ｃセグメント、及びｖｉ）ＴＭドメインを含む。ＬＮＲ−Ａセグメント、ＬＮＲ−Ｂセグメント、及びＬＮＲ−Ｃセグメントは合わせて、「ＬＮＲセグメント」と称され得る。そのようなＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドを、図３０Ａに模式的に示す。
【０１５２】
ＬＮＲセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１４４２〜１５６２、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ９０アミノ酸長〜１５０アミノ酸長、例えば、９０アミノ酸長（ａａ）〜１００アミノ酸長、１００アミノ酸長〜１１０アミノ酸長、１１０アミノ酸長〜１２０アミノ酸長、１２０アミノ酸長〜１３０アミノ酸長、１３０アミノ酸長〜１４０アミノ酸長、または１４０アミノ酸長〜１５０アミノ酸長を有し得る。場合によっては、ＬＮＲセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１４４２〜１５６２、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ１１５アミノ酸長〜１２５アミノ酸長、例えば、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、または１２５アミノ酸長を有する。
【０１５３】
ＬＮＲセグメントは、以下のアミノ酸配列、ＰＰＱＩＥＥＡＣＥＬＰＥＣＱＶＤＡＧＮＫＶＣＮＬＱＣＮＮＨＡＣＧＷＤＧＧＤＣＳＬＮＦＮＤＰＷＫＮＣＴＱＳＬＱＣＷＫＹＦＳＤＧＨＣＤＳＱＣＮＳＡＧＣＬＦＤＧＦＤＣＱＬＴＥＧＱＣＮＰＬＹＤＱＹＣＫＤＨＦＳＤＧＨＣＤＱＧＣＮＳＡＥＣＥＷＤＧＬＤＣ（配列番号９０）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ１１８〜１２２アミノ酸長（例えば、１１８、１１９、１２０、１２１、または１２２アミノ酸長）を有し得る。
【０１５４】
ＨＤ−Ｎセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１５６３〜１６６４、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ９０アミノ酸長（ａａ）〜１１０アミノ酸長、例えば、９０アミノ酸長〜９５アミノ酸長、９５アミノ酸長〜１００アミノ酸長、１００アミノ酸長〜１０５アミノ酸長、または１０５アミノ酸長〜１１０アミノ酸長を有し得る。場合によっては、ＨＤ−Ｎセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１５６３〜１６６４、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ９５アミノ酸長〜１０５アミノ酸長、例えば、９５、９６、９８、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、または１０５アミノ酸長を有する。
【０１５５】
ＨＤ−Ｃセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１６６５〜１７３３、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ６０アミノ酸長（ａａ）〜８０アミノ酸長、例えば、６０アミノ酸長〜６５アミノ酸長、６５アミノ酸長〜７０アミノ酸長、７０アミノ酸長〜７５アミノ酸長、または７５アミノ酸長〜８０アミノ酸長を有し得る。場合によっては、ＨＤ−Ｃセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１６６５〜１７３３、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ６５アミノ酸長〜７５アミノ酸長、例えば、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、または７５アミノ酸長を有する。
【０１５６】
ＨＤセグメント（ＨＤ−ＮプラスＨＤ−Ｃ）は、以下のアミノ酸配列、ＡＡＧＴＬＶＬＶＶＬＬＰＰＤＱＬＲＮＮＳＦＨＦＬＲＥＬＳＨＶＬＨＴＮＶＶＦＫＲＤＡＱＧＱＱＭＩＦＰＹＹＧＨＥＥＥＬＲＫＨＰＩＫＲＳＴＶＧＷＡＴＳＳＬＬＰＧＴＳＧＧＲＱＲＲＥＬＤＰＭＤＩＲＧＳＩＶＹＬＥＩＤＮＲＱＣＶＱＳＳＳＱＣＦＱＳＡＴＤＶＡＡＦＬＧＡＬＡＳＬＧＳＬＮＩＰＹＫＩＥＡＶＫＳＥＰＶＥＰＰＬＰ（配列番号９１）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ１５０、１５１、１５２、１５３、または１５４アミノ酸長を有し得る。
【０１５７】
膜貫通セグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１７３６〜１７５６、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ１５アミノ酸長（ａａ）〜２５アミノ酸長、例えば、１５、１６、１７、１８、２９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸長を有し得る。
【０１５８】
膜貫通セグメントは、以下のアミノ酸配列、ＨＬＭＹＶＡＡＡＡＦＶＬＬＦＦＶＧＣＧＶＬＬＳ（配列番号９２）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸長を有し得る。
【０１５９】
場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、約３１０アミノ酸長（ａａ）〜約３２０アミノ酸長（例えば、３１０アミノ酸長、３１１アミノ酸長、３１２アミノ酸長、３１３アミノ酸長、３１４アミノ酸長、３１５アミノ酸長、３１６アミノ酸長、３１７アミノ酸長、３１８アミノ酸長、３１９アミノ酸長、または３２０アミノ酸長）を有し、かつ図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１４４２〜１７５６、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１６０】
場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、以下のアミノ酸配列、ＰＰＱＩＥＥＡＣＥＬＰＥＣＱＶＤＡＧＮＫＶＣＮＬＱＣＮＮＨＡＣＧＷＤＧＧＤＣＳＬＮＦＮＤＰＷＫＮＣＴＱＳＬＱＣＷＫＹＦＳＤＧＨＣＤＳＱＣＮＳＡＧＣＬＦＤＧＦＤＣＱＬＴＥＧＱＣＮＰＬＹＤＱＹＣＫＤＨＦＳＤＧＨＣＤＱＧＣＮＳＡＥＣＥＷＤＧＬＤＣＡＥＨＶＰＥＲＬＡＡＧＴＬＶＬＶＶＬＬＰＰＤＱＬＲＮＮＳＦＨＦＬＲＥＬＳＨＶＬＨＴＮＶＶＦＫＲＤＡＱＧＱＱＭＩＦＰＹＹＧＨＥＥＥＬＲＫＨＰＩＫＲＳＴＶＧＷＡＴＳＳＬＬＰＧＴＳＧＧＲＱＲＲＥＬＤＰＭＤＩＲＧＳＩＶＹＬＥＩＤＮＲＱＣＶＱＳＳＳＱＣＦＱＳＡＴＤＶＡＡＦＬＧＡＬＡＳＬＧＳＬＮＩＰＹＫＩＥＡＶＫＳＥＰＶＥＰＰＬＰＳＱＬＨＬＭＹＶＡＡＡＡＦＶＬＬＦＦＶＧＣＧＶＬＬＳ（配列番号９３）と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ３００アミノ酸長〜３１０アミノ酸長（例えば、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、または３１０アミノ酸長）を有する。
【０１６１】
場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、以下のアミノ酸配列、ＰＣＶＧＳＮＰＣＹＮＱＧＴＣＥＰＴＳＥＮＰＦＹＲＣＬＣＰＡＫＦＮＧＬＬＣＨＩＬＤＹＳＦＴＧＧＡＧＲＤＩＰＰＰＱＩＥＥＡＣＥＬＰＥＣＱＶＤＡＧＮＫＶＣＮＬＱＣＮＮＨＡＣＧＷＤＧＧＤＣＳＬＮＦＮＤＰＷＫＮＣＴＱＳＬＱＣＷＫＹＦＳＤＧＨＣＤＳＱＣＮＳＡＧＣＬＦＤＧＦＤＣＱＬＴＥＧＱＣＮＰＬＹＤＱＹＣＫＤＨＦＳＤＧＨＣＤＱＧＣＮＳＡＥＣＥＷＤＧＬＤＣＡＥＨＶＰＥＲＬＡＡＧＴＬＶＬＶＶＬＬＰＰＤＱＬＲＮＮＳＦＨＦＬＲＥＬＳＨＶＬＨＴＮＶＶＦＫＲＤＡＱＧＱＱＭＩＦＰＹＹＧＨＥＥＥＬＲＫＨＰＩＫＲＳＴＶＧＷＡＴＳＳＬＬＰＧＴＳＧＧＲＱＲＲＥＬＤＰＭＤＩＲＧＳＩＶＹＬＥＩＤＮＲＱＣＶＱＳＳＳＱＣＦＱＳＡＴＤＶＡＡＦＬＧＡＬＡＳＬＧＳＬＮＩＰＹＫＩＥＡＶＫＳＥＰＶＥＰＰＬＰＳＱＬＨＬＭＹＶＡＡＡＡＦＶＬＬＦＦＶＧＣＧＶＬＬＳ（配列番号９４）と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ３５０アミノ酸長〜３７０アミノ酸長（例えば、３５０、３５１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、または３７０アミノ酸長）を有する。
【０１６２】
単一ＥＧＦ反復、ＬＮＲセグメント、ＨＤ−Ｎセグメント、ＨＤ−Ｃセグメント、及びＴＭドメインを含むＮｏｔｃｈレセプターポリペプチド
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順で、ｉ）単一ＥＧＦ反復、ｉｉ）ＬＮＲセグメント、ｉｉｉ）ＨＤ−Ｎセグメント、ｉｖ）ＨＤ−Ｃセグメント、及びｖ）ＴＭドメインを含む。そのようなＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドを、図３０Ｂに模式的に示す。
【０１６３】
ＥＧＦ反復は、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１３９０〜１４３０、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ３５アミノ酸長（ａａ）〜４５アミノ酸長（例えば、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、または４５アミノ酸長）を有し得る。
【０１６４】
ＥＧＦ反復は、以下の配列、ＰＣＶＧＳＮＰＣＹＮＱＧＴＣＥＰＴＳＥＮＰＦＹＲＣＬＣＰＡＫＦＮＧＬＬＣＨ（配列番号９５）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ３５アミノ酸長〜４０アミノ酸長（例えば、３５、３６、３７、３８、３９、または４０アミノ酸長）を有し得る。
【０１６５】
ＬＮＲセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１４４２〜１５６２、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ９０アミノ酸長〜１５０アミノ酸長、例えば、９０アミノ酸長（ａａ）〜１００アミノ酸長、１００アミノ酸長〜１１０アミノ酸長、１１０アミノ酸長〜１２０アミノ酸長、１２０アミノ酸長〜１３０アミノ酸長、１３０アミノ酸長〜１４０アミノ酸長、または１４０アミノ酸長〜１５０アミノ酸長を有し得る。場合によっては、ＬＮＲセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１４４２〜１５６２、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ１１５アミノ酸長〜１２５アミノ酸長、例えば、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、または１２５アミノ酸長を有する。
【０１６６】
ＬＮＲセグメントは、以下のアミノ酸配列、ＰＰＱＩＥＥＡＣＥＬＰＥＣＱＶＤＡＧＮＫＶＣＮＬＱＣＮＮＨＡＣＧＷＤＧＧＤＣＳＬＮＦＮＤＰＷＫＮＣＴＱＳＬＱＣＷＫＹＦＳＤＧＨＣＤＳＱＣＮＳＡＧＣＬＦＤＧＦＤＣＱＬＴＥＧＱＣＮＰＬＹＤＱＹＣＫＤＨＦＳＤＧＨＣＤＱＧＣＮＳＡＥＣＥＷＤＧＬＤＣ（配列番号９０）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ１１８〜１２２アミノ酸長（例えば、１１８、１１９、１２０、１２１、または１２２アミノ酸長）を有し得る。
【０１６７】
ＨＤ−Ｎセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１５６３〜１６６４、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ９０アミノ酸長（ａａ）〜１１０アミノ酸長、例えば、９０アミノ酸長〜９５アミノ酸長、９５アミノ酸長〜１００アミノ酸長、１００アミノ酸長〜１０５アミノ酸長、または１０５アミノ酸長〜１１０アミノ酸長を有し得る。場合によっては、ＨＤ−Ｎセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１５６３〜１６６４、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ９５アミノ酸長〜１０５アミノ酸長、例えば、９５、９６、９８、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、または１０５アミノ酸長を有する。
【０１６８】
ＨＤ−Ｃセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１６６５〜１７３３、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ６０アミノ酸長（ａａ）〜８０アミノ酸長、例えば、６０アミノ酸長〜６５アミノ酸長、６５アミノ酸長〜７０アミノ酸長、７０アミノ酸長〜７５アミノ酸長、または７５アミノ酸長〜８０アミノ酸長を有し得る。場合によっては、ＨＤ−Ｃセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１６６５〜１７３３、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ６５アミノ酸長〜７５アミノ酸長、例えば、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、または７５アミノ酸長を有する。
【０１６９】
ＨＤセグメント（ＨＤ−ＮプラスＨＤ−Ｃ）は、以下のアミノ酸配列、ＡＡＧＴＬＶＬＶＶＬＬＰＰＤＱＬＲＮＮＳＦＨＦＬＲＥＬＳＨＶＬＨＴＮＶＶＦＫＲＤＡＱＧＱＱＭＩＦＰＹＹＧＨＥＥＥＬＲＫＨＰＩＫＲＳＴＶＧＷＡＴＳＳＬＬＰＧＴＳＧＧＲＱＲＲＥＬＤＰＭＤＩＲＧＳＩＶＹＬＥＩＤＮＲＱＣＶＱＳＳＳＱＣＦＱＳＡＴＤＶＡＡＦＬＧＡＬＡＳＬＧＳＬＮＩＰＹＫＩＥＡＶＫＳＥＰＶＥＰＰＬＰ（配列番号９１）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ１５０、１５１、１５２、１５３、または１５４アミノ酸長を有し得る。
【０１７０】
膜貫通セグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１７３６〜１７５６、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ１５アミノ酸長（ａａ）〜２５アミノ酸長、例えば、１５、１６、１７、１８、２９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸長を有し得る。
【０１７１】
膜貫通セグメントは、以下のアミノ酸配列、ＨＬＭＹＶＡＡＡＡＦＶＬＬＦＦＶＧＣＧＶＬＬＳ（配列番号９２）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸長を有し得る。
【０１７２】
場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、約３６０アミノ酸長（ａａ）〜約３７５アミノ酸長（例えば、３６０アミノ酸長、３６１アミノ酸長、３６２アミノ酸長、３６３アミノ酸長、３６４アミノ酸長、３６５アミノ酸長、３６６アミノ酸長、３６７アミノ酸長、３６８アミノ酸長、３６９アミノ酸長、３７０アミノ酸長、３７１アミノ酸長、３７２アミノ酸長、３７３アミノ酸長、３７４アミノ酸長、または３７５アミノ酸長）を有し、かつ図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１３９０〜１７５６、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１７３】
場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、合成リンカーを含む。例えば、場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順で、ｉ）合成リンカー、ｉｉ）ＥＧＦ反復、ｉｉｉ）ＬＮＲセグメント、ｉｖ）ＨＤ−Ｎセグメント、ｖ）ＨＤ−Ｃセグメント、及びｖｉ）ＴＭドメインを含む。そのようなＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドを、図３０Ｃに模式的に示す。
【０１７４】
合成リンカーは、約１０アミノ酸長（ａａ）〜約２００アミノ酸長、例えば、１０アミノ酸長〜２５アミノ酸長、２５アミノ酸長〜５０アミノ酸長、５０アミノ酸長〜７５アミノ酸長、７５アミノ酸長〜１００アミノ酸長、１００アミノ酸長〜１２５アミノ酸長、１２５アミノ酸長〜１５０アミノ酸長、１５０アミノ酸長〜１７５アミノ酸長、または１７５アミノ酸長〜２００アミノ酸長を有し得る。合成リンカーは、１０アミノ酸長〜３０アミノ酸長、例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０アミノ酸長を有し得る。合成リンカーは、３０アミノ酸長〜５０アミノ酸長、例えば、３０アミノ酸長〜３５アミノ酸長、３５アミノ酸長〜４０アミノ酸長、４０アミノ酸長〜４５アミノ酸長、または４５アミノ酸長〜５０アミノ酸長を有し得る。
【０１７５】
場合によっては、本明細書に記載の合成リンカーは、細胞外タンパク質構成ドメインまたはその一部分を含み得る。合成リンカーとしての使用に好適な細胞外タンパク質構成ドメインとしては、例えば、Ｉｇ様細胞外構成ドメイン、Ｆｃ細胞外構成ドメイン、フィブロネクチン細胞外構成ドメインなどが挙げられるが、これらに限定されない。場合によっては、合成リンカーは、複数の細胞外タンパク質構成ドメインを含み得、この複数のドメインは、複数の同じドメインまたは複数の異なるドメインを含み得る。
【０１７６】
２〜１１個のＥＧＦ反復、ＬＮＲセグメント、ＨＤ−Ｎセグメント、ＨＤ−Ｃセグメント、及びＴＭドメインを含むＮｏｔｃｈレセプターポリペプチド
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順で、ｉ）２〜１１個のＥＧＦ反復、ｉｉ）ＬＮＲセグメント、ｉｉｉ）ＨＤ−Ｎセグメント、ｉｖ）ＨＤ−Ｃセグメント、及びｖ）ＴＭドメインを含む。そのようなＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドを、図３０Ｄに模式的に示す。
【０１７７】
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順で、ｉ）２個のＥＧＦ反復、ｉｉ）ＬＮＲセグメント、ｉｉｉ）ＨＤ−Ｎセグメント、ｉｖ）ＨＤ−Ｃセグメント、及びｖ）ＴＭドメインを含む。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順で、ｉ）３個のＥＧＦ反復、ｉｉ）ＬＮＲセグメント、ｉｉｉ）ＨＤ−Ｎセグメント、ｉｖ）ＨＤ−Ｃセグメント、及びｖ）ＴＭドメインを含む。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順で、ｉ）４個のＥＧＦ反復、ｉｉ）ＬＮＲセグメント、ｉｉｉ）ＨＤ−Ｎセグメント、ｉｖ）ＨＤ−Ｃセグメント、及びｖ）ＴＭドメインを含む。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順で、ｉ）５個のＥＧＦ反復、ｉｉ）ＬＮＲセグメント、ｉｉｉ）ＨＤ−Ｎセグメント、ｉｖ）ＨＤ−Ｃセグメント、及びｖ）ＴＭドメインを含む。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順で、ｉ）６個のＥＧＦ反復、ｉｉ）ＬＮＲセグメント、ｉｉｉ）ＨＤ−Ｎセグメント、ｉｖ）ＨＤ−Ｃセグメント、及びｖ）ＴＭドメインを含む。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順で、ｉ）７個のＥＧＦ反復、ｉｉ）ＬＮＲセグメント、ｉｉｉ）ＨＤ−Ｎセグメント、ｉｖ）ＨＤ−Ｃセグメント、及びｖ）ＴＭドメインを含む。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順で、ｉ）８個のＥＧＦ反復、ｉｉ）ＬＮＲセグメント、ｉｉｉ）ＨＤ−Ｎセグメント、ｉｖ）ＨＤ−Ｃセグメント、及びｖ）ＴＭドメインを含む。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順で、ｉ）９個のＥＧＦ反復、ｉｉ）ＬＮＲセグメント、ｉｉｉ）ＨＤ−Ｎセグメント、ｉｖ）ＨＤ−Ｃセグメント、及びｖ）ＴＭドメインを含む。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順で、ｉ）１０個のＥＧＦ反復、ｉｉ）ＬＮＲセグメント、ｉｉｉ）ＨＤ−Ｎセグメント、ｉｖ）ＨＤ−Ｃセグメント、及びｖ）ＴＭドメインを含む。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドに存在するＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順で、ｉ）１１個のＥＧＦ反復、ｉｉ）ＬＮＲセグメント、ｉｉｉ）ＨＤ−Ｎセグメント、ｉｖ）ＨＤ−Ｃセグメント、及びｖ）ＴＭドメインを含む。
【０１７８】
ＥＧＦ反復は、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１３９０〜１４３０、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ３５アミノ酸長（ａａ）〜４５アミノ酸長（例えば、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、または４５アミノ酸長）を有し得る。
【０１７９】
ＥＧＦ反復は、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸８６９〜９０５（ＤＩＮＥＣＶＬＳＰＣＲＨＧＡＳＣＱＮＴＨＧＧＹＲＣＨＣＱＡＧＹＳＧＲＮＣＥ、配列番号９６）、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ３５アミノ酸長〜約４０アミノ酸長（ａａ）（例えば、３５、３６、３７、３８、３９、または４０アミノ酸長）を有し得る。
【０１８０】
ＥＧＦ反復は、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸９０７〜９４３（ＤＩＤＤＣＲＰＮＰＣＨＮＧＧＳＣＴＤＧＩＮＴＡＦＣＤＣＬＰＧＦＲＧＴＦＣＥ、配列番号９７）、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ３５アミノ酸長〜約４０アミノ酸長（ａａ）（例えば、３５、３６、３７、３８、３９、または４０アミノ酸長）を有し得る。
【０１８１】
ＥＧＦ反復は、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸９４５〜９８１（ＤＩＮＥＣＡＳＤＰＣＲＮＧＡＮＣＴＤＣＶＤＳＹＴＣＴＣＰＡＧＦＳＧＩＨＣＥ、配列番号９８）、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ３５アミノ酸長〜約４０アミノ酸長（ａａ）（例えば、３５、３６、３７、３８、３９、または４０アミノ酸長）を有し得る。
【０１８２】
ＥＧＦ反復は、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸９８８〜１０１９（ＴＥＳＳＣＦＮＧＧＴＣＶＤＧＩＮＳＦＴＣＬＣＰＰＧＦＴＧＳＹＣＱ、配列番号９９）、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ３０アミノ酸長〜３５アミノ酸長（ａａ）（例えば、３０、３１、３２、３３、３４、または３５アミノ酸長）を有し得る。
【０１８３】
ＥＧＦ反復は、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１０２１〜１０５７（ＤＶＮＥＣＤＳＱＰＣＬＨＧＧＴＣＱＤＧＣＧＳＹＲＣＴＣＰＱＧＹＴＧＰＮＣＱ、配列番号１００）、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ３５アミノ酸長〜約４０アミノ酸長（ａａ）（例えば、３５、３６、３７、３８、３９、または４０アミノ酸長）を有し得る。
【０１８４】
ＥＧＦ反復は、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１０６４〜１０９０（ＤＳＳＰＣＫＮＧＧＫＣＷＱＴＨＴＱＹＲＣＥＣＰＳＧＷＴ、配列番号１０１）、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ２５アミノ酸長（ａａ）〜３０アミノ酸長（例えば、２５、２６、２７、２８、２９、または３０アミノ酸長）を有し得る。
【０１８５】
ＥＧＦ反復は、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１１４６〜１１８０（ＬＶＤＥＣＳＰＳＰＣＱＮＧＡＴＣＴＤＹＬＧＧＹＳＣＫＣＶＡＧＹＨＧＶＮＣ、配列番号１０２）、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ３５アミノ酸長〜約４０アミノ酸長（ａａ）（例えば、３５、３６、３７、３８、３９、または４０アミノ酸長）を有し得る。
【０１８６】
ＥＧＦ反復は、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１１８４〜１２１９（ＩＤＥＣＬＳＨＰＣＱＮＧＧＴＣＬＤＬＰＮＴＹＫＣＳＣＰＲＧＴＱＧＶＨＣＥ、配列番号１０３）、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ３５アミノ酸長〜約４０アミノ酸長（ａａ）（例えば、３５、３６、３７、３８、３９、または４０アミノ酸長）を有し得る。
【０１８７】
ＥＧＦ反復は、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１２３８〜１２６５（ＣＦＮＮＧＴＣＶＤＱＶＧＧＹＳＣＴＣＰＰＧＦＶＧＥＲＣＥ、配列番号１０４）、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ２５アミノ酸長（ａａ）〜３０アミノ酸長（例えば、２５、２６、２７、２８、２９、または３０アミノ酸長）を有し得る。
【０１８８】
ＥＧＦ反復は、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１２６７〜１３０５（ＤＶＮＥＣＬＳＮＰＣＤＡＲＧＴＱＮＣＶＱＲＶＮＤＦＨＣＥＣＲＡＧＨＴＧＲＲＣＥ、配列番号１０５）、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ３５アミノ酸長〜約４０アミノ酸長（ａａ）（例えば、３５、３６、３７、３８、３９、または４０アミノ酸長）を有し得る。
【０１８９】
ＥＧＦ反復は、以下の配列、ＰＣＶＧＳＮＰＣＹＮＱＧＴＣＥＰＴＳＥＮＰＦＹＲＣＬＣＰＡＫＦＮＧＬＬＣＨ（配列番号９５）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ３５アミノ酸長〜４０アミノ酸長（例えば、３５、３６、３７、３８、３９、または４０アミノ酸長）を有し得る。
【０１９０】
ＬＮＲセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１４４２〜１５６２、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ９０アミノ酸長〜１５０アミノ酸長、例えば、９０アミノ酸長（ａａ）〜１００アミノ酸長、１００アミノ酸長〜１１０アミノ酸長、１１０アミノ酸長〜１２０アミノ酸長、１２０アミノ酸長〜１３０アミノ酸長、１３０アミノ酸長〜１４０アミノ酸長、または１４０アミノ酸長〜１５０アミノ酸長を有し得る。場合によっては、ＬＮＲセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１４４２〜１５６２、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ１１５アミノ酸長〜１２５アミノ酸長、例えば、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、または１２５アミノ酸長を有する。
【０１９１】
ＬＮＲセグメントは、以下のアミノ酸配列、ＰＰＱＩＥＥＡＣＥＬＰＥＣＱＶＤＡＧＮＫＶＣＮＬＱＣＮＮＨＡＣＧＷＤＧＧＤＣＳＬＮＦＮＤＰＷＫＮＣＴＱＳＬＱＣＷＫＹＦＳＤＧＨＣＤＳＱＣＮＳＡＧＣＬＦＤＧＦＤＣＱＬＴＥＧＱＣＮＰＬＹＤＱＹＣＫＤＨＦＳＤＧＨＣＤＱＧＣＮＳＡＥＣＥＷＤＧＬＤＣ（配列番号９０）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ１１８〜１２２アミノ酸長（例えば、１１８、１１９、１２０、１２１、または１２２アミノ酸長）を有し得る。
【０１９２】
ＨＤ−Ｎセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１５６３〜１６６４、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ９０アミノ酸長（ａａ）〜１１０アミノ酸長、例えば、９０アミノ酸長〜９５アミノ酸長、９５アミノ酸長〜１００アミノ酸長、１００アミノ酸長〜１０５アミノ酸長、または１０５アミノ酸長〜１１０アミノ酸長を有し得る。場合によっては、ＨＤ−Ｎセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１５６３〜１６６４、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ９５アミノ酸長〜１０５アミノ酸長、例えば、９５、９６、９８、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、または１０５アミノ酸長を有する。
【０１９３】
ＨＤ−Ｃセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１６６５〜１７３３、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ６０アミノ酸長（ａａ）〜８０アミノ酸長、例えば、６０アミノ酸長〜６５アミノ酸長、６５アミノ酸長〜７０アミノ酸長、７０アミノ酸長〜７５アミノ酸長、または７５アミノ酸長〜８０アミノ酸長を有し得る。場合によっては、ＨＤ−Ｃセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１６６５〜１７３３、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ６５アミノ酸長〜７５アミノ酸長、例えば、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、または７５アミノ酸長を有する。
【０１９４】
ＨＤセグメント（ＨＤ−ＮプラスＨＤ−Ｃ）は、以下のアミノ酸配列、ＡＡＧＴＬＶＬＶＶＬＬＰＰＤＱＬＲＮＮＳＦＨＦＬＲＥＬＳＨＶＬＨＴＮＶＶＦＫＲＤＡＱＧＱＱＭＩＦＰＹＹＧＨＥＥＥＬＲＫＨＰＩＫＲＳＴＶＧＷＡＴＳＳＬＬＰＧＴＳＧＧＲＱＲＲＥＬＤＰＭＤＩＲＧＳＩＶＹＬＥＩＤＮＲＱＣＶＱＳＳＳＱＣＦＱＳＡＴＤＶＡＡＦＬＧＡＬＡＳＬＧＳＬＮＩＰＹＫＩＥＡＶＫＳＥＰＶＥＰＰＬＰ（配列番号９１）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ１５０、１５１、１５２、１５３、または１５４アミノ酸長を有し得る。
【０１９５】
膜貫通セグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１７３６〜１７５６、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ１５アミノ酸長（ａａ）〜２５アミノ酸長、例えば、１５、１６、１７、１８、２９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸長を有し得る。
【０１９６】
膜貫通セグメントは、以下のアミノ酸配列、ＨＬＭＹＶＡＡＡＡＦＶＬＬＦＦＶＧＣＧＶＬＬＳ（配列番号９２）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸長を有し得る。
【０１９７】
場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、約４９０アミノ酸長（ａａ）〜約９００アミノ酸長を有し、かつ図３１Ａに示されるアミノ酸配列のｉ）アミノ酸１２６７〜１７５６、ｉｉ）１２３８〜１７５６、ｉｉｉ）１１８４〜１７５６、ｉｖ）１１４６〜１７５６、ｖ）１０６４〜１７５６、ｖｉ）１０２１〜１７５６、ｖｉｉ）９８８〜１７５６、ｖｉｉｉ）９４５〜１７５６、ｉｘ）９０７〜１７５６、またはｘ）８６９〜１７５６、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１９８】
場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、合成リンカーを含む。例えば、場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順で、ｉ）２〜１１個のＥＧＦ反復、ｉｉ）合成リンカー、ｉｉｉ）ＬＮＲセグメント、ｉｖ）ＨＤ−Ｎセグメント、ｖ）ＨＤ−Ｃセグメント、及びｖｉ）ＴＭドメインを含む。そのようなＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドを、図３０Ｅに模式的に示す。
【０１９９】
合成リンカーは、約１０アミノ酸長（ａａ）〜約２００アミノ酸長、例えば、１０アミノ酸長〜２５アミノ酸長、２５アミノ酸長〜５０アミノ酸長、５０アミノ酸長〜７５アミノ酸長、７５アミノ酸長〜１００アミノ酸長、１００アミノ酸長〜１２５アミノ酸長、１２５アミノ酸長〜１５０アミノ酸長、１５０アミノ酸長〜１７５アミノ酸長、または１７５アミノ酸長〜２００アミノ酸長を有し得る。合成リンカーは、１０アミノ酸長〜３０アミノ酸長、例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０アミノ酸長を有し得る。合成リンカーは、３０アミノ酸長〜５０アミノ酸長、例えば、３０アミノ酸長〜３５アミノ酸長、３５アミノ酸長〜４０アミノ酸長、４０アミノ酸長〜４５アミノ酸長、または４５アミノ酸長〜５０アミノ酸長を有し得る。
【０２００】
ＨＤ−Ｃセグメント及びＴＭドメインを含むＮｏｔｃｈレセプターポリペプチド
場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順で、ｉ）ＨＤ−Ｃセグメント及びｉｉ）ＴＭドメインを含み、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、ＬＮＲセグメントを含まない。場合によっては、ＬＮＲセグメントは、異種ポリペプチドで置き換えられる。そのようなＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドを、図３０Ｆに模式的に示す。
【０２０１】
ＨＤ−Ｃセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１６６５〜１７３３、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ６０アミノ酸長（ａａ）〜８０アミノ酸長、例えば、６０アミノ酸長〜６５アミノ酸長、６５アミノ酸長〜７０アミノ酸長、７０アミノ酸長〜７５アミノ酸長、または７５アミノ酸長〜８０アミノ酸長を有し得る。場合によっては、ＨＤ−Ｃセグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１６６５〜１７３３、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ６５アミノ酸長〜７５アミノ酸長、例えば、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、または７５アミノ酸長を有する。
【０２０２】
膜貫通セグメントは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１７３６〜１７５６、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ１５アミノ酸長（ａａ）〜２５アミノ酸長、例えば、１５、１６、１７、１８、２９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸長を有し得る。
【０２０３】
膜貫通セグメントは、以下のアミノ酸配列、ＨＬＭＹＶＡＡＡＡＦＶＬＬＦＦＶＧＣＧＶＬＬＳ（配列番号９２）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、かつ２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸長を有し得る。
【０２０４】
場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１６６５〜１７５６、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ８５アミノ酸長（ａａ）〜９５アミノ酸長（例えば、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、または９５アミノ酸長）を有する。
【０２０５】
場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、図３１Ａに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１６６５〜１７５６、または別のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの対応するセグメント（対応するセグメントの例は図３１Ｂ〜３１Ｇに示す）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドのＮ末端にインフレームで融合した異種ポリペプチドを含む。
【０２０６】
タンパク質分解切断部位
上記のように、本開示のキメラポリペプチドは、例えば、５０アミノ酸長〜１０００アミノ酸長を有し、かつ１つ以上のタンパク質分解切断部位を有する、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドを含む。
【０２０７】
場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、１つのタンパク質分解切断部位のみを含む。場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、２つのタンパク質分解切断部位を含む。場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、３つのタンパク質分解切断部位を含む。単純さのために、切断部位は、本明細書では「Ｓ１」、「Ｓ２」、及び「Ｓ３」タンパク質分解切断部位と称される。
【０２０８】
場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｓ１タンパク質分解切断部位を含む。Ｓ１タンパク質分解切断部位は、ＨＤ−ＮセグメントとＨＤ−Ｃセグメントとの間に位置し得る。場合によっては、Ｓ１タンパク質分解切断部位は、フューリン様プロテアーゼ切断部位である。フューリン様プロテアーゼ切断部位は、標準配列Ａｒｇ−Ｘ−（Ａｒｇ／Ｌｙｓ）−Ａｒｇ（配列番号１３０）（式中、Ｘは任意のアミノ酸）を有し得、、このプロテアーゼは、標準配列に対してすぐＣ末端で切断される。例えば、場合によっては、Ｓ１タンパク質分解切断部位を含むアミノ酸配列は、アミノ酸配列ＧＲＲＲＲＥＬＤＰＭ（配列番号１０６）を有し得、切断は「ＲＥ」配列間で発生する。別の例として、Ｓ１タンパク質分解切断部位を含むアミノ酸配列は、アミノ酸配列ＲＱＲＲＥＬＤＰＭ（配列番号１０７）を有し得、切断は「ＲＥ」配列間で発生する。
【０２０９】
場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｓ２タンパク質分解切断部位を含む。Ｓ２タンパク質分解切断部位は、ＨＤ−Ｃセグメント内に位置し得る。場合によっては、Ｓ２タンパク質分解切断部位は、例えば、ＡＤＡＭ−１７型プロテアーゼ切断部位などのＡＤＡＭファミリー型プロテアーゼ切断部位である。ＡＤＡＭ−１７型プロテアーゼ切断部位は、Ａｌａ−Ｖａｌジペプチド配列を含み得、酵素は、ＡｌａとＶａｌとの間で切断される。例えば、場合によっては、Ｓ２タンパク質分解切断部位を含むアミノ酸配列は、アミノ酸配列ＫＩＥＡＶＫＳＥ（配列番号１０８）を有し得、切断は「ＡＶ」配列間で発生する。別の例として、Ｓ２タンパク質分解切断部位を含むアミノ酸配列は、アミノ酸配列ＫＩＥＡＶＱＳＥ（配列番号１０９）を有し得、切断は「ＡＶ」配列間で発生する。
【０２１０】
場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｓ３タンパク質分解切断部位を含む。Ｓ３タンパク質分解切断部位は、ＴＭドメイン内に位置し得る。場合によっては、Ｓ３タンパク質分解切断部位は、ガンマ−セクレターゼ（γ−セクレターゼ）切断部位である。γ−セクレターゼ切断部位は、Ｇｌｙ−Ｖａｌジペプチド配列を含み得、酵素は、ＧｌｙとＶａｌとの間で切断される。例えば、場合によっては、Ｓ３タンパク質分解切断部位は、アミノ酸配列ＶＧＣＧＶＬＬＳ（配列番号１１０）を有し、切断は「ＧＶ」配列間で発生する。場合によっては、Ｓ３タンパク質分解切断部位は、アミノ酸配列ＧＣＧＶＬＬＳ（配列番号１１１）を含む。
【０２１１】
場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｓ１タンパク質分解切断部位を欠如する。場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｓ２タンパク質分解切断部位を欠如する。場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｓ３タンパク質分解切断部位を欠如する。場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｓ１タンパク質分解切断部位及びＳ２タンパク質分解切断部位の両方を欠如する。場合によっては、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｓ３タンパク質分解切断部位を含み、かつＳ１タンパク質分解切断部位及びＳ２タンパク質分解切断部位の両方を欠如する。例を図３０Ｇに模式的に示す。
【０２１２】
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドのＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、図３２Ａ〜３２ＢのＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドであっても、図３２Ａ〜３２Ｂに提示されるＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの全部または１つ以上の部分を含んでもよい。
【０２１３】
本明細書に記載のキメラポリペプチドならびに方法及び回路における使用に適合され得る、特定のＮｏｔｃｈレセプターポリペプチド及びそれらの構成要素としては、例えば、ＰＣＴ出願第ＵＳ２０１６／０１９１８８号（公開第ＷＯ２０１６／１３８０３４号）に記載のものが挙げられるが、これらに限定されず、この開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１４】
細胞内ドメイン
上記のように、本開示のキメラポリペプチドは、キメラポリペプチドと細胞外特異的結合メンバーの結合パートナーとの結合後に放出される細胞内ドメインを含み、そのような結合は、上述のタンパク質分解切断部位の切断を誘導する。
【０２１５】
細胞内ドメインは、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドに対して異種であるアミノ酸配列を含む。換言すると、細胞内ドメインは、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドに天然に存在しないアミノ酸配列を含む。
【０２１６】
場合によっては、細胞内ドメインは、キメラポリペプチドからの放出時に細胞内で転写応答を誘導するか、または別様に転写を調節する。例えば、場合によっては、細胞内ドメインは、細胞内で転写を活性化し、したがって、転写活性化因子として機能し、転写活性化ドメインを含有し得る。
【０２１７】
細胞内ドメインは、発現されるペプチドまたはタンパク質に起因し得る本質的に任意のエフェクター機能を提供することができ、そのようなエフェクター機能としては、例えば、細胞による１つ以上のサイトカインの産生の増加、細胞による１つ以上のサイトカインの産生の低減、細胞によるホルモンの産生の増加または減少、細胞による抗体の産生、小器官活性の変化、細胞内のポリペプチド輸送の変化、標的遺伝子の転写の変化、タンパク質の活性の変化、細胞活性の変化（例えば、細胞死）、細胞増殖、細胞分化に対する影響、細胞生存に対する影響、細胞シグナリング応答の調節などを挙げることができるが、これらに限定されない。場合によっては、細胞内ドメインは、キメラポリペプチドからの放出時に標的遺伝子の転写の変化を提供する。場合によっては、細胞内ドメインは、キメラポリペプチドからの放出時に標的遺伝子の転写の増加を提供する。場合によっては、細胞内ドメインは、キメラポリペプチドからの放出時に標的遺伝子の発現の減少を提供する。
【０２１８】
場合によっては、本開示のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの細胞内ドメインは、転写活性化因子を含む。任意の簡便な転写活性化因子は、本開示のキメラポリペプチドの細胞内ドメインにおいて用途を見出し得る。細胞内または系内で、転写活性化因子は、転写活性化因子に応答性の転写制御要素と対合して、例えば、転写制御要素に作動可能に連結した目的のポリペプチドをコードする核酸の発現を推進することができる。有用な転写活性化因子、転写制御要素、活性化因子／制御要素対、及びそのような系の構成要素としては、例えば、誘導性発現系において使用されるもの（例えば、Ｇｏｖｅｒｄｈａｎａ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．（２００５）１２（２）：１８９−２１１、米国特許出願公開第２０１６０１５２７０１号、同第２０１５０３７６６２７号、同第２０１３０２１２７２２号、同第２００７００７７６４２号、同第２００５０１６４２３７号、同第２００５００６６３７６号、同第２００４０２３５１６９号、同第２００４００３８２４９号、同第２００３０２２０２８６号、同第２００３０１９９０２２号、同第２００２０１０６７２０号に記載のものを含むが、これらに限定されない）を挙げることができるが、これらに限定されず、これらの開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１９】
場合によっては、有用な転写活性化因子は、哺乳動物転写因子またはそれらの操作された形態もしくは変異形態を含み得る。場合によっては、有用な転写活性化因子は、ヒト転写因子またはそれらの操作された形態もしくは変異形態を含み得る。場合によっては、有用な転写活性化因子は、マウス転写因子またはそれらの操作された形態もしくは変異形態を含み得る。場合によっては、有用な転写活性化因子は、ラット転写因子またはそれらの操作された形態もしくは変異形態を含み得る。場合によっては、有用な転写活性化因子は、ウシ転写因子またはそれらの操作された形態もしくは変異形態を含み得る。場合によっては、有用な転写活性化因子は、ブタ転写因子またはそれらの操作された形態もしくは変異形態を含み得る。
【０２２０】
場合によっては、哺乳動物転写因子の使用は、転写因子が哺乳動物において免疫応答を誘導する可能性を低減し得る。場合によっては、例えば、変異または操作された哺乳動物転写因子を含む、操作された転写因子または変異転写因子の使用は、転写因子が哺乳動物において免疫応答を誘導する可能性を低減し得る。有用な哺乳動物転写因子としては、例えば、亜鉛フィンガー（ＺｎＦ）タンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２１】
場合によっては、細胞内ドメインは、転写活性化因子である。場合によっては、細胞内ドメインは、以下のテトラサイクリン制御転写活性化因子（ｔＴＡ）アミノ酸配列、ＭＳＲＬＤＫＳＫＶＩＮＳＡＬＥＬＬＮＥＶＧＩＥＧＬＴＴＲＫＬＡＱＫＬＧＶＥＱＰＴＬＹＷＨＶＫＮＫＲＡＬＬＤＡＬＡＩＥＭＬＤＲＨＨＴＨＦＣＰＬＥＧＥＳＷＱＤＦＬＲＮＮＡＫＳＦＲＣＡＬＬＳＨＲＤＧＡＫＶＨＬＧＴＲＰＴＥＫＱＹＥＴＬＥＮＱＬＡＦＬＣＱＱＧＦＳＬＥＮＡＬＹＡＬＳＡＶＧＨＦＴＬＧＣＶＬＥＤＱＥＨＱＶＡＫＥＥＲＥＴＰＴＴＤＳＭＰＰＬＬＲＱＡＩＥＬＦＤＨＱＧＡＥＰＡＦＬＦＧＬＥＬＩＩＣＧＬＥＫＱＬＫＣＥＳＧＧＰＡＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＰＡＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＰＡＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＰＧ（配列番号１１２）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ約２４５アミノ酸長〜２５２アミノ酸長（例えば、２４８、２４９、２５０、２５１、または２５２アミノ酸長）を有する。
【０２２２】
いくつかの実施形態において、細胞内ドメインは、転写活性化因子を含む。場合によっては、転写活性化因子は、ＧＡＬ４−ＶＰ１６である。場合によっては、転写活性化因子は、ＶＰ６４  Ｚｉｐ（＋）である。場合によっては、転写活性化因子は、亜鉛フィンガーなどの操作されたタンパク質、またはＶＰ６４などのエフェクタードメインに融合したＴＡＬＥ系ＤＮＡ結合ドメインである。当該技術分野において既知である様々な他の転写トランス活性化因子の使用が好適である。
【０２２３】
場合によっては、細胞内ドメインは、以下のＧＡＬ４−ＶＰ６４配列、ＭＫＬＬＳＳＩＥＱＡＣＤＩＣＲＬＫＫＬＫＣＳＫＥＫＰＫＣＡＫＣＬＫＮＮＷＥＣＲＹＳＰＫＴＫＲＳＰＬＴＲＡＨＬＴＥＶＥＳＲＬＥＲＬＥＱＬＦＬＬＩＦＰＲＥＤＬＤＭＩＬＫＭＤＳＬＱＤＩＫＡＬＬＴＧＬＦＶＱＤＮＶＮＫＤＡＶＴＤＲＬＡＳＶＥＴＤＭＰＬＴＬＲＱＨＲＩＳＡＴＳＳＳＥＥＳＳＮＫＧＱＲＱＬＴＶＳＡＡＡＧＧＳＧＧＳＧＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳ（配列番号１１３）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ２０８〜２１４アミノ酸長（例えば、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、または２１４アミノ酸長）を有する。
【０２２４】
場合によっては、細胞内ドメインは、以下のＶＰ６４Ｚｉｐ（＋）転写活性化因子配列、ＰＫＫＫＲＫＶＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＬＥＩＥＡＡＦＬＥＲＥＮＴＡＬＥＴＲＶＡＥＬＲＱＲＶＱＲＬＲＮＲＶＳＱＹＲＴＲＹＧＰＬＧＧＧＫ（配列番号１１４）と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ１０５〜１１５アミノ酸長（例えば、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、または１１５アミノ酸長）を有する。
【０２２５】
場合によっては、本開示のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの細胞内ドメインは、キメラポリペプチドの活性化時に、ＰＯＩの発現を誘導する。ＰＯＩは、本質的に任意のポリペプチドであり得、研究目的のポリペプチド（例えば、レポーターポリペプチド、変異ポリペプチド、新規合成ポリペプチドなど）、治療目的のポリペプチド（例えば、天然に存在する治療タンパク質、組み換え治療ポリペプチドなど）、産業目的のポリペプチド（例えば、産業用途（例えば、製造など）において使用されるポリペプチド）などを含み得るが、これらに限定されない。
【０２２６】
場合によっては、ＰＯＩは、例えば、腫瘍、がんなどの新生物を治療するための治療ポリペプチドを含むが、これに限定されない、治療ポリペプチドであり得る。場合によっては、新生物を治療するための治療ＰＯＩは、がんの免疫療法において使用されるＰＯＩであり得る。場合によっては、治療ＰＯＩは、ＣＡＲであり得る。場合によっては、治療ＰＯＩは、ＴＣＲであり得る。場合によっては、治療ＰＯＩは、抗体であり得る。場合によっては、治療ＰＯＩは、キメラ二重特異的結合メンバーであり得る。場合によっては、治療ＰＯＩは、自然免疫応答誘導因子であり得る。場合によっては、治療ＰＯＩは、免疫抑制因子であり得る。
【０２２７】
本開示のＰＯＩは、直交化ＰＯＩを含む。直交化ＰＯＩは、それらの元来の形態または野生型の形態から修飾されていることで、直交ＰＯＩが特定の直交化パートナーと特異的に反応または結合するが、非修飾パートナーまたは野生型パートナーとは特異的または実質的に反応も結合もしない、ＰＯＩを含む。例えば、本明細書に記載のＰＯＩを含むが、これらに限定されない、任意のＰＯＩが直交化され得る。
【０２２８】
場合によっては、治療ＰＯＩは、抗Ｆｃ  ＣＡＲであり得る。抗Ｆｃ  ＣＡＲは一般に、Ｆｃ受容体の細胞外ドメインと、細胞内シグナリングドメインと、任意で同時刺激ドメインとを含む。治療の状況に応じて、抗Ｆｃ  ＣＡＲは、例えば、Ｆｃ−ガンマ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ））、Ｆｃ−アルファ受容体（例えば、ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９））、またはＦｃ−イプシロン受容体（例えば、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３））を含む、任意のＦｃ受容体の細胞外ドメインを含み得る。例えば、場合によっては、抗Ｆｃ  ＣＡＲは、ＣＤ１６  Ｆｃ受容体の細胞外ドメインを含み得る。場合によっては、抗Ｆｃ  ＣＡＲは、ＣＤ１６  Ｆｃ受容体の細胞外ドメインと、ＣＤ３−ゼータ細胞内シグナリングドメインと、４−１ＢＢ同時刺激ドメインとを含み得る。場合によっては、抗Ｆｃ  ＣＡＲは、抗体結合Ｔ細胞受容体（ＡＣＴＲ）（例えば、Ｕｎｕｍ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡから入手可能なもの）であり得る。
【０２２９】
場合によっては、抗Ｆｃ  ＣＡＲの１つ以上のドメインは、変異ドメインであってもよく、これは例えば、結合パートナーに対する親和性の調節（例えば、親和性の増加または親和性の減少）、細胞内シグナリング特性の調節（例えば、シグナリングの増加またはシグナリングの減少）などのために、ドメインが変異している場合を含む。
【０２３０】
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドは、キメラポリペプチドの特異的結合パートナーへの結合時に、キメラポリペプチドの細胞内ドメインが細胞内の核酸配列からの抗Ｆｃ  ＣＡＲの転写を誘導するように、細胞上で発現され得る。場合によっては、抗Ｆｃ  ＣＡＲに結合する抗体及び腫瘍抗原は、そのような細胞も投与される対象に投与され得る。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドは、キメラポリペプチドの特異的結合パートナーへの結合時に、キメラポリペプチドの細胞内ドメインが細胞内の１つ以上の核酸配列からの抗Ｆｃ  ＣＡＲ及び抗Ｆｃ  ＣＡＲに結合する抗体、ならびに腫瘍抗原の転写を誘導するように、細胞上で発現され得る。
【０２３１】
場合によっては、治療ＰＯＩは、キメラ二重特異的結合メンバーであり得る。本明細書で使用される場合、「キメラ二重特異的結合メンバー」は、２つの異なる結合パートナー（例えば、２つの異なる抗原）に対する二重特異性を有するキメラポリペプチドを意味する。キメラ二重特異的結合メンバーの非限定的な例としては、二重特異性抗体、二重特異性共役モノクローナル抗体（ｍａｂ）2 、二重特異性抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ）2、二重特異性ｓｃＦｖ、二重特異性ダイアボディ、単鎖二重特異性ダイアボディなど）、二重特異性Ｔ細胞エンゲイジャー（ＢｉＴＥ）、二重特異性共役単一ドメイン抗体、ミカボディ（ｍｉｃａｂｏｄｙ）、及びそれらの変異体などが挙げられる。キメラ二重特異的結合メンバーの非限定的な例には、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ．ＭＡｂｓ．（２０１２）４（２）：１８２−１９７、Ｓｔａｍｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ２０１２，１（２），１７２−１９８、Ｆａｒｈａｄｆａｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｕｋ  Ｒｅｓ．（２０１６）４９：１３−２１、Ｂｅｎｊａｍｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅｒ  Ａｄｖ  Ｈｅｍａｔｏｌ．（２０１６）７（３）：１４２−５６、Ｋｉｅｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．（２０１６）  ２７０（１）：１７８−９２、Ｆａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｏｎｃｏｌ．（２０１５）８：１３０、Ｍａｙ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｙｓｔ  Ｐｈａｒｍ．（２０１６）７３（１）：ｅ６−ｅ１３に記載のキメラ二重特異性物質もまた含まれ、これらの開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２３２】
場合によっては、キメラ二重特異的結合メンバーは、二重特異性抗体であり得る。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドの活性化に応答して発現され得る二重特異性抗体は、例えば、本明細書に記載の少なくとも１つの（例えば、２つを含む）がん抗原を含むが、これらに限定されない、少なくとも１つのがん抗原（例えば、２つのがん抗原を含む）を標的化する二重特異性抗体であり得る。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドの活性化に応答して発現され得る二重特異性抗体は、例えば、本明細書に記載のがん抗原及び本明細書に記載の免疫抗原を含むが、これらに限定されない、１つのがん抗原及び１つの免疫細胞抗原を標的化する二重特異性抗体であり得る。
【０２３３】
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドの活性化に応答して発現され得る二重特異性抗体は、例えば、ｂｓＡｂ  ＭＤＸ−２１０（Ｈｅｒ２及びＣＤ６４を標的化）、ＭＤＸ−Ｈ２１０（Ｈｅｒ２及びＣＤ６４を標的化）、ＭＤＸ−４４７（標的化ＥＧＦＲ及びＣＤ６４）、ＨＲＳ−３／Ａ９（ＣＤ３０抗原及び受容体ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６））を標的化する二重特異性Ｆ（ａｂ’）2 抗体）、抗ＣＤ３×抗ＥｐＣＡＭ  ＴｒｉｏｍＡｂ／ｂｓＡｂ、カツマキソマブ、エルツマキソマブ、Ｂｉ２０（リンフォマン（Ｌｙｍｐｈｏｍｕｎ）またはｆＢＴＡ０５）、抗ＣＤ１９×ＣＤ３ダイアボディ、抗ＣＤ１９×ＣＤ１６ダイアボディ、抗ＥＧＦＲ×ＣＤ３ダイアボディ、抗ＰＳＭＡ×ＣＤ３ダイアボディ、ｒＭ２８及びＮＧ２を標的化するダイアボディ、抗ＣＤ２８×ＣＤ２０二重特異性タンデムｓｃＦｖなどであり得る。
【０２３４】
場合によっては、キメラ二重特異的結合メンバーは、二重特異性Ｔ細胞エンゲイジャー（ＢｉＴＥ）であり得る。ＢｉＴＥは一般に、免疫細胞抗原に結合する特異的結合メンバー（例えば、ｓｃＦｖ）を、がん抗原（例えば、腫瘍関連抗原、腫瘍特異的抗原など）に結合する特異的結合メンバー（例えば、ｓｃＦｖ）に融合することによって作製される。例えば、例示的なＢｉＴＥとしては、短いペプチドリンカー（例えば、５アミノ酸長リンカー、例えば、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１５））を介して抗腫瘍関連抗原（例えば、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ１９など）ｓｃＦｖに融合した抗ＣＤ３  ｓｃＦｖが挙げられる。
【０２３５】
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドの活性化に応答して発現され得るＢｉＴＥは、例えば、本明細書に記載のがん抗原を含むが、これに限定されない、少なくとも１つのがん抗原を標的化するＢｉＴＥであり得る。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドの活性化に応答して発現され得るＢｉＴＥは、例えば、本明細書に記載のがん抗原及び本明細書に記載の免疫抗原を含むが、これらに限定されない、１つのがん抗原及び１つの免疫細胞抗原を標的化するＢｉＴＥであり得る。
【０２３６】
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドは、キメラポリペプチドの特異的結合パートナーへの結合時に、キメラポリペプチドの細胞内ドメインが細胞内の核酸配列からのＢｉＴＥの転写を誘導するように、細胞上で発現され得る。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドは、ペプチド−ＭＨＣ特異的結合パートナーへの結合時に、キメラポリペプチドの細胞内ドメインがＢｉＴＥの転写を誘導するように、細胞上で発現され得る。場合によっては、本明細書に記載のような使用に好適なＢｉＴＥとしては、例えば、抗ＣＤ３×抗ＣＤ１９  ＢｉＴＥ（例えば、ブリナツモマブ）、抗ＥｐＣＡＭ×抗ＣＤ３  ＢｉＴＥ（例えば、ＭＴ１１０）、抗ＣＥＡ×抗ＣＤ３  ＢｉＴＥ（例えば、ＭＴ１１１／ＭＥＤＩ−５６５）、抗ＣＤ３３×抗ＣＤ３  ＢｉＴＥ、抗ＨＥＲ２  ＢｉＴＥ、抗ＥＧＦＲ  ＢｉＴＥ、抗ＩｇＥ  ＢｉＴＥなどが挙げられる。
【０２３７】
場合によっては、キメラ二重特異的結合メンバーは、ミカボディまたはその変異体であり得る。ミカボディは一般に、ＮＫＧ２Ｄ受容体に特異的に結合する少なくとも１つのドメインに連結した抗原特異的結合部分を含む。場合によっては、ミカボディまたはその変異体は、ＮＫＧ２Ｄ受容体に特異的に結合する、操作されたＭＩＣＡ  α１−α２ドメインを含む。
【０２３８】
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドの活性化に応答して発現され得るミカボディまたはその変異体は、例えば、本明細書に記載のがん抗原を含むが、これに限定されない、少なくとも１つのがん抗原を標的化するミカボディまたはその変異体であり得る。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドの活性化に応答して発現され得るミカボディまたはその変異体は、ＨＥＲ２を標的化するミカボディまたはその変異体（例えば、抗ＨＥＲ２ミカボディまたはその変異体）であり得る。ミカボディ及び関連する構成要素の非限定的な例、ならびに作動原理は、例えば、Ｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０１０）７０（２４）：１０１２１−３０、Ｂａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．（１９９９）２８５（５４２８）：７２７−９、Ｍｏｒｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ．（２０１６）１６（１）：７−１９に記載され、これらの開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２３９】
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドは、キメラポリペプチドの特異的結合パートナーへの結合時に、キメラポリペプチドの細胞内ドメインが細胞内の核酸配列からのミカボディまたはその変異体の転写を誘導するように、細胞上で発現され得る。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドは、ペプチド−ＭＨＣ特異的結合パートナーへの結合時に、キメラポリペプチドの細胞内ドメインがミカボディまたはその変異体の転写を誘導するように、細胞上で発現され得る。ミカボディ及びそれらの変異体としては、ＡｖｉｄＢｉｏｔｉｃｓ（Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）によって開発され、オンライン上で（ａｖｉｄｂｉｏｔｉｃｓ（ｄｏｔ）ｃｏｍ）に記載のものが挙げられる。
【０２４０】
場合によっては、キメラ二重特異的結合メンバーは、ＣＡＲ  Ｔ細胞アダプターであり得る。本明細書で使用される場合、「ＣＡＲ  Ｔ細胞アダプター」は、ＣＡＲの抗原認識ドメインに結合し、ＣＡＲを第２の抗原に再指向する、発現される二重特異性ポリペプチドを意味する。一般に、ＣＡＲ  Ｔ細胞アダプターは、２つの結合領域を有し、１つは、それが指向されるＣＡＲ上のエピトープに特異的であり、１つは、結合時にＣＡＲを活性化する結合シグナルを伝達する結合パートナーに指向される第２のエピトープに特異的である。有用なＣＡＲ  Ｔ細胞アダプターとしては、例えば、Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．（２０１５）１３７（８）：２８３２−５、Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．（２０１６）１１３（４）：Ｅ４５０−８、及びＣａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  Ｅｎｇｌ．（２０１６）５５（２６）：７５２０−４に記載のものが挙げられるが、これらに限定されず、これらの開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２４１】
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドによって誘導される治療ＰＯＩは、抗体である。好適な抗体としては、例えば、α４β１及びα４β７インテグリンのα４サブユニットを標的化するナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ、Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ／Ｅｌａｎ）（多発性硬化症及びクローン病の治療に使用されるもの）、α４β７インテグリンを標的化するベドリズマブ（ＭＬＮ２、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｔａｋｅｄａ）（潰瘍性大腸炎及びクローン病の治療に使用されるもの）、ＢＡＦＦを標的化するベリムマブ（Ｂｅｎｌｙｓｔａ、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）（ＳＬＥの治療に使用されるもの）、ＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬを標的化するアタシセプト（ＴＡＣＩ−Ｉｇ、Ｍｅｒｃｋ／Ｓｅｒｏｎｏ）（ＳＬＥの治療に使用されるもの）、ＣＤ２を標的化するアレファセプト（Ａｍｅｖｉｖｅ、Ａｓｔｅｌｌａｓ）（尋常性乾癬、移植片対宿主病の治療に使用されるもの）、ＣＤ３を標的化するオテリキシズマブ（ＴＲＸ４、Ｔｏｌｅｒｘ／ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）（１型糖尿病の治療に使用されるもの）、ＣＤ３を標的化するテプリズマブ（ＭＧＡ０３１、ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ／Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）（１型糖尿病の治療に使用されるもの）、ＣＤ２０を標的化するリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ／Ｍａｂｔｈｅｒａ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ／Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）（非ホジキンリンパ腫、（ＴＮＦ遮断に対して不適切な応答を有する患者における）ＲＡ、及びＣＬＬの治療に使用されるもの）、ＣＤ２０を標的化するオファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ、Ｇｅｎｍａｂ／ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）（ＣＬＬ、ＲＡの治療に使用されるもの）、ＣＤ２０を標的化するオクレリズマブ（２Ｈ７、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ／Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）（ＲＡ及びＳＬＥの治療に使用されるもの）、ＣＤ２２を標的化するエプラツズマブ（ｈＬＬ２、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ／ＵＣＢ）（ＳＬＥ及び非ホジキンリンパ腫の治療に使用されるもの）、ＣＤ５２を標的化するアレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ／ＭａｂＣａｍｐａｔｈ、Ｇｅｎｚｙｍｅ／Ｂａｙｅｒ）（ＣＬＬ、ＭＳの治療に使用されるもの）、ＣＤ８０及びＣＤ８６を標的化するアバタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）（ＲＡ及び若年性特発性関節炎、潰瘍性大腸炎及びクローン病、ＳＬＥの治療に使用されるもの）、Ｃ５補体タンパク質を標的化するエクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ、Ａｌｅｘｉｏｎ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）（発作性夜間ヘモグロビン尿症の治療に使用されるもの）、ＩｇＥを標的化するオマリズマブ（Ｘｏｌａｉｒ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）（中等度から重度の持続性アレルギー性喘息の治療に使用されるもの）、ＩＬ−１βを標的化するカナキヌマブ（Ｉｌａｒｉｓ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）（クリオピリン関連周期熱症候群、全身型若年性特発性関節炎、新生児期発症多臓器性炎症性疾患、及び急性痛風の治療に使用されるもの）、ＩＬ−５を標的化するメポリズマブ（Ｂｏｓａｔｒｉａ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）（好酸��増加症候群の治療に使用されるもの）、ＩＬ−５を標的化するレスリズマブ（ＳＣＨ５５７００、Ｃｅｐｔｉｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）（好酸球性食道炎の治療に使用されるもの）、ＩＬ−６Ｒを標的化するトシリズマブ（Ａｃｔｅｍｒａ／ＲｏＡｃｔｅｍｒａ、Ｃｈｕｇａｉ／Ｒｏｃｈｅ）（ＲＡ、若年性特発性関節炎の治療に使用されるもの）、ＩＬ−１２及びＩＬ−２３を標的化するウステキヌマブ（Ｓｔｅｌａｒａ、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）（尋常性乾癬、乾癬性関節炎、クローン病の治療に使用されるもの）、ＩＬ−１２及びＩＬ−２３を標的化するブリアキヌマブ（ＡＢＴ−８７４、Ａｂｂｏｔｔ）（乾癬及び尋常性乾癬の治療に使用されるもの）、ＴＮＦを標的化するエタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ、Ａｍｇｅｎ／Ｐｆｉｚｅｒ）（ＲＡ、若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎、大動脈弁狭窄症、及び尋常性乾癬の治療に使用されるもの）、ＴＮＦを標的化するインフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ／Ｍｅｒｃｋ）（クローン病、ＲＡ、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸炎、大動脈弁狭窄症、及び尋常性乾癬の治療に使用されるもの）、ＴＮＦを標的化するアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ／Ｔｒｕｄｅｘａ、Ａｂｂｏｔｔ）（ＲＡ、若年性特発性関節炎、乾癬性関節炎、クローン病、大動脈弁狭窄症、及び尋常性乾癬の治療に使用されるもの）、ＴＮＦを標的化するセルトリズマブペゴル（Ｃｉｍｚｉａ、ＵＣＢ）（クローン病及びＲＡの治療に使用されるもの）、ＴＮＦを標的化するゴリムマブ（Ｓｉｍｐｏｎｉ、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）（ＲＡ、乾癬性関節炎、及び大動脈弁狭窄症の治療に使用されるもの）などが挙げられる。
【０２４２】
場合によっては、産生が誘導される抗体は、がんの治療のための治療抗体である。そのような抗体としては、例えば、ＣＴＬＡ−４を標的化するイピリムマブ（黒色腫、前立腺癌、腎細胞癌の治療に使用されるもの）、ＣＴＬＡ−４を標的化するトレメリムマブ（結腸直腸癌、胃癌、黒色腫、非小細胞肺癌の治療に使用されるもの）、ＰＤ−１を標的化するニボルマブ（黒色腫、非小細胞肺癌、腎細胞癌の治療に使用されるもの）、ＰＤ−１を標的化するＭＫ−３４７５（黒色腫の治療に使用されるもの）、ＰＤ−１を標的化するピディリズマブ（血液系腫瘍の治療に使用されるもの）、ＰＤ−Ｌ１を標的化するＢＭＳ−９３６５５９（黒色腫、非小細胞肺癌、卵巣癌、腎細胞癌の治療に使用されるもの）、ＰＤ−１を標的化するＭＥＤＩ４７３６、ＰＤ−Ｌ１を標的化するＭＰＤＬ３３２８０Ａ（黒色腫の治療に使用されるもの）、ＣＤ２０を標的化するリツキシマブ（非ホジキンリンパ腫の治療に使用されるもの）、イブリツモマブチウキセタン及びトシツモマブ（リンパ腫の治療に使用されるもの）、ＣＤ３０を標的化するブレンツキシマブベドチン（ホジキンリンパ腫の治療に使用されるもの）、ＣＤ３３を標的化するゲムツズマブオゾガマイシン（急性骨髄性白血病の治療に使用されるもの）、ＣＤ５２を標的化するアレムツズマブ（慢性リンパ性白血病の治療に使用されるもの）、ＥｐＣＡＭを標的化するＩＧＮ１０１及びアデカツムマブ（上皮性腫瘍（乳腺腫瘍、結腸腫瘍、及び肺腫瘍）の治療に使用されるもの）、ＣＥＡを標的化するラベツズマブ（乳腺腫瘍、結腸腫瘍、及び肺腫瘍の治療に使用されるもの）、ｇｐＡ３３を標的化するｈｕＡ３３（結腸直腸癌の治療に使用されるもの）、ムチンを標的化するペムツモマブ及びオレゴボマブ（乳腺腫瘍、結腸腫瘍、肺腫瘍、及び卵巣腫瘍の治療に使用されるもの）、ＴＡＧ−７２を標的化するＣＣ４９（ミンレツモマブ）（乳腺腫瘍、結腸腫瘍、及び肺腫瘍の治療に使用されるもの）、ＣＡＩＸを標的化するｃＧ２５０（腎細胞癌の治療に使用されるもの）、ＰＳＭＡを標的化するＪ５９１（前立腺癌の治療に使用されるもの）、葉酸結合タンパク質を標的化するＭＯｖ１８及びＭＯＲＡｂ−００３（ファーレツズマブ）（卵巣腫瘍の治療に使用されるもの）、ガングリオシド（ＧＤ２、ＧＤ３、及びＧＭ２など）を標的化する３Ｆ８、ｃｈ１４．１８、及びＫＷ−２８７１（神経外胚葉性腫瘍及び一部の上皮性腫瘍の治療に使用されるもの）、Ｌｅ  ｙを標的化するｈｕ３Ｓ１９３及びＩｇＮ３１１（乳腺腫瘍、結腸腫瘍、肺腫瘍、及び前立腺腫瘍の治療に使用されるもの）、ＶＥＧＦを標的化するベバシズマブ（腫瘍脈管構造の治療に使用されるもの）、ＶＥＧＦＲを標的化するＩＭ−２Ｃ６及びＣＤＰ７９１（上皮由来固形腫瘍の治療に使用されるもの）、インテグリン＿Ｖ＿３を標的化するエタラシズマブ（腫瘍脈管構造の治療に使用されるもの）、インテグリン＿５＿１を標的化するボロシキシマブ（腫瘍脈管構造の治療に使用されるもの）、ＥＧＦＲを標的化するセツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、及び８０６（神経膠腫、肺腫瘍、乳腺腫瘍、結腸腫瘍、及び頭頸部腫瘍の治療に使用されるもの）、ＥＲＢＢ２を標的化するトラスツズマブ及���ペルツズマブ（乳腺腫瘍、結腸腫瘍、肺腫瘍、卵巣腫瘍、及び前立腺腫瘍の治療に使用されるもの）、ＥＲＢＢ３を標的化するＭＭ−１２１（乳腺腫瘍、結腸腫瘍、肺腫瘍、卵巣腫瘍、及び前立腺腫瘍の治療に使用されるもの）、ＭＥＴを標的化するＡＭＧ１０２、ＭＥＴＭＡＢ、及びＳＣＨ９００１０５（乳腺腫瘍、卵巣腫瘍、及び肺腫瘍の治療に使用されるもの）、ＩＧＦ１Ｒを標的化するＡＶＥ１６４２、ＩＭＣ−Ａ１２、ＭＫ−０６４６、Ｒ１５０７、及びＣＰ７５１８７１（神経膠腫、肺癌、乳癌、頭頸部癌、前立腺癌、及び甲状腺癌の治療に使用されるもの）、ＥＰＨＡ３を標的化するＫＢ００４及びＩＩＩＡ４（肺腫瘍、腎臓腫瘍、及び結腸腫瘍、黒色腫、神経膠腫、ならびに血液系腫瘍の治療に使用されるもの）、ＴＲＡＩＬＲ１を標的化するマパツズマブ（ＨＧＳ−ＥＴＲ１）（結腸腫瘍、肺腫瘍、及び膵臓腫瘍、ならびに血液系腫瘍の治療に使用されるもの）、ＴＲＡＩＬＲ２を標的化するＨＧＳ−ＥＴＲ２及びＣＳ−１００８、ＲＡＮＫＬを標的化するデノスマブ（前立腺癌及び骨転移の治療に使用されるもの）、ＦＡＰを標的化するシブロツズマブ及びＦ１９（結腸腫瘍、乳腺腫瘍、肺腫瘍、膵臓腫瘍、及び頭頸部腫瘍の治療に使用されるもの）、テネイシンを標的化する８１Ｃ６（神経膠腫、乳腺腫瘍、及び前立腺腫瘍の治療に使用されるもの）、ＣＤ３を標的化するブリナツモマブ（Ｂｌｉｎｃｙｔｏ、Ａｍｇｅｎ）（ＡＬＬの治療に使用されるもの）、がん免疫療法において使用されるＰＤ−１を標的化するペムブロリズマブ、ｃ−Ｍｙｃを標的化する９Ｅ１０抗体などが挙げられる。
【０２４３】
場合によっては、有用な抗体（それらの発現が本開示のキメラポリペプチドによって誘導され得るもの）としては、８Ｈ９、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アビツズマブ、アブリルマブ、アクトクスマブ、アデュカヌマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブペゴール、ＡＬＤ５１８、アリロクマブ、アルツモマブペンテタート、アマツキシマブ、アナツモマブマフェナトックス、アネツマブラブタンシン、アニフロルマブ、アンルキンズマブ、アポリズマブ、アルシツモマブ、アスクリンバクマブ、アセリズマブ、アテゾリズマブ、アチヌマブ、アトリズマブ／トシリズマブ、アトロリムマブ、バピネオズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベゲロマブ（Ｂｅｇｅｌｏｍａｂ）、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ／ラニビズマブ、ベズロトクスマブ、ビシロマブ、ビマグルマブ、ビメキズマブ、ビバツズマブメルタンシン、ブロソズマブ、ボコシズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブロダルマブ、ブロルシズマブ、ブロンチクツズマブ、カンツズマブメルタンシン、カンツズマブラブタンシン、カプラシズマブ、カプロマブペンデチド、カルルマブ、カツマキソマブ、ｃＢＲ９６−ドキソルビシン免疫複合体、セデリツマブ、Ｃｈ．１４．１８、シタツズマブボガトクス、シズツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コドリツズマブ、コルツキシマブラブタンシン、コナツムマブ、コンシズマブ（Ｃｏｎｃｉｚｕｍａｂ）、ＣＲ６２６１、クレネズマブ、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダピロリズマブペゴル、ダラツムマブ、デクトレクマブ、デミシズマブ、デニンツズマブマホドチン、デルロツキシマブビオチン、デツモマブ、ジヌツキシマブ、ジリダブマブ（Ｄｉｒｉｄａｖｕｍａｂ）、ドルリモマブアリトクス、ドロジツマブ、デュリゴツマブ、デュピルマブ、デュルバルマブ、デュシギツマブ、エクロメキシマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エフングマブ、エルデルマブ、エルゲムツマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エマクツズマブ、エミベツズマブ、エナバツズマブ、エンフォルツマブベドチン、エンリモマブペゴール、エノビリツズマブ、エノキズマブ、エノチクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブシツキセタン（Ｅｐｉｔｕｍｏｍａｂ  ｃｉｔｕｘｅｔａｎ）、エルリズマブ、エルツマキソマブ、エトロリズマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、エクスビビルマブ、ファノレソマブ、ファラリモマブ、ファーレツズマブ、ファシヌマブ、ＦＢＴＡ０５、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フィリブマブ、フランボツマブ、フレキクマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレソリムマブ、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲボキズマブ、ギレンツシキマブ、グレムバツムマブベドチン、ゴミリキシマブ、グセルクマブ、イバリズマブ、イバリズマブ、イクルクマブ、イダルシズマブ、イゴボマブ、ＩＭＡＢ３６２、イマルマブ、インシロマブ、イムガツズマブ、インクラクマブ、インダツキシマブラブタンシン、インデュサツマブベドチ���、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、インテツムマブ、イラツムマブ、イサツキシマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ、ケリキシマブ、ランブロリズマブ、ランパリズマブ、レブリキズマブ、レマレソマブ、レンジルマブ、レルデリムマブ、レクサツムマブ、リビビルマブ、リファスツズマブベドチン、リゲリズマブ、リロトマブサテトラキセタン、リンツズマブ、リリルマブ、ロデルシズマブ、ロキベトマブ、ロルボツズマブメルタンシン、ルカツムマブ、ルリズマブペゴール、ルミリキシマブ、ルムレツズマブ、マルゲツキシマブ、マスリモマブ、マツズマブ、マブリリムマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミルベツキシマブソラブタンシン、ミツモマブ、モガムリズマブ、モロリムマブ、モロリムマブ免疫、モタビズマブ、モキセツモマブパスドトクス、ムロモナブ−ＣＤ３、ナコロマブタフェナトキス、ナミルマブ、ナプツモマブエスタフェナトクス、ナルナツマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネモリズマブ、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ノフェツモマブメルペンタン、オビルトキサキシマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オデュリモマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オナルツズマブ、オンツキシズマブ、オピシヌマブ（Ｏｐｉｃｉｎｕｍａｂ）、オポルツズマブモナトクス、オルチクマブ、オトレルツズマブ、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パンコマブ、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パソツキシズマブ（Ｐａｓｏｔｕｘｉｚｕｍａｂ）、パテクリズマブ、パトリツマブ、ペラキズマブ、パキセリズマブ、ピナツズマブベドチン、ピンツモマブ、プラクルマブ、ポラツズマブベドチン、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリトキサキシマブ、プリツムマブ、ＰＲＯ１４０、クイリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラルパンシズマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レファネツマブ、レガビルマブ、リロツムマブ、リヌクマブ、ロバツムマブ、ロレデュマブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ラプリズマブ、サシツズマブゴビテカン、サマリズマブ、サリルマブ、サツモマブペンデチド、セクキヌマブ、セリバンツマブ、セトキサキシマブ、セビルマブ、ＳＧＮ−ＣＤ１９Ａ、ＳＧＮ−ＣＤ３３Ａ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソフィツズマブベドチン、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ、タバルマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タプリツモマブパプトクス、タレクスツマブ、テフィバズマブ、テリモマブアリトクス、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプロツムマブ、テシドルマブ、テツロマブ、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ／トレメリムマブ、ティガツズマブ、チルドラキズマブ、ＴＮＸ−６５０、トラリズマブ、トサトクスマブ、トベツマブ、トラロキヌマブ、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、トレボグルマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、ウブリツキシマブ、ウロクプルマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、バンドルツズマブベドチン（Ｖａｎｄｏｒｔ���ｚｕｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ）、バンチクツマブ、バヌシズマブ、バパリキシマブ、バルリルマブ、バテリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビジリズマブ、ボルセツズマブマフォドチン、ボツムマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ、ジラリムマブ（Ｚｉｒａｌｉｍｕｍａｂ）、ゾリモマブアリトックスなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４４】
場合によっては、本開示のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドは、細胞内でＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の発現を誘導し得る。本開示の方法を使用して、例えば、様々なエピトープ（例えば、がん細胞の表面上に発現されるエピトープ、がん細胞の表面上のペプチド−ＭＨＣ複合体などを含む）のいずれかに特異的なＴＣＲを含む、任意のＴＣＲをキメラポリペプチドによって誘導することができる。ＴＣＲは一般に、アルファ鎖及びベータ鎖を含み、主要組織適合複合体によって提示された場合に抗原を認識する。場合によっては、ＴＣＲは、操作されたＴＣＲである。
【０２４５】
本開示の方法を使用して、免疫細胞活性化機能を有する任意の操作されたＴＣＲを誘導することができる。そのようなＴＣＲとしては、例えば、抗原特異的ＴＣＲ、モノクローナルＴＣＲ（ＭＴＣＲ）、単鎖ＭＴＣＲ、高親和性ＣＤＲ２変異体ＴＣＲ、ＣＤ１結合ＭＴＣＲ、高親和性ＮＹ−ＥＳＯ  ＴＣＲ、ＶＹＧ  ＨＬＡ−Ａ２４テロメラーゼＴＣＲ（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００３／０２０７６３号、同第ＷＯ２００４／０３３６８５号、同第ＷＯ２００４／０４４００４号、同第ＷＯ２００５／１１４２１５号、同第ＷＯ２００６／０００８３０号、同第ＷＯ２００８／０３８００２号、同第ＷＯ２００８／０３９８１８号、同第ＷＯ２００４／０７４３２２号、同第ＷＯ２００５／１１３５９５号、同第ＷＯ２００６／１２５９６２、Ｓｔｒｏｍｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．２０１４；２５７（１）：１４５−６４、Ｓｃｈｍｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１３；１２２（３）：３４８−５６、Ｃｈａｐｕｌｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ““Ｍｅｄ．”  ”２０１３；５（１７４）：１７４ｒａ２７、Ｔｈａｘｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｈｕｍ  Ｖａｃｃｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１４；１０（１１）：３３１３−２１（ＰＭＩＤ：２５４８３６４４）、Ｇｓｃｈｗｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．２０１４；２５７（１）：２３７−４９（ＰＭＩＤ：２４３２９８０１）、Ｈｉｎｒｉｃｈｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．２０１４；２５７（１）：５６−７１（ＰＭＩＤ：２４３２９７８９）、Ｚｏｅｔｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３；４：２６８（ＰＭＩＤ：２４０６２７３８）、Ｍａｒｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２；１６７（２）：２１６−２５（ＰＭＩＤ：２２２３５９９７）、Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．２０１２；６４（８）：７５６−６２（ＰＭＩＤ：２２１７８９０４）、Ｃｈｈａｂｒａ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｗｏｒｌｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ．  ２０１１；１１：１２１−９（ＰＭＩＤ：２１２１８２６９）、Ｂｏｕｌｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５；１４２（３）：４５４−６０（ＰＭＩＤ：１６２９７１５７）、Ｓａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  Ｄｅｓ  Ｓｅｌ．２００７；２０（８）：３９７−４０３、Ｂｏｕｌｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．２００３；１６（９）：７０７−１１、Ａｓｈｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．ＩＤｒｕｇｓ．２００６；９（８）：５５４−９、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５；２３（３）：３４９−５４、Ｄｕｎｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．２００６；１５（４）：７１０−２１、Ｌｉｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１０；４５（２）、Ｌｉｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ““Ｍｅｄ．”  ”２０１２；１８（６）：９８０−７、Ｏａｔｅｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１３；２（２）：ｅ２２８９１、ＭｃＣｏｒｍａｃｋ，ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１３Ａｐｒ；６２（４）：７７３−８５、Ｂｏｓｓｉ  ｅｔ  ��ｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１４；６３（５）：４３７−４８、及びＯａｔｅｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１５Ｏｃｔ；６７（２ＰｔＡ）：６７−７４に記載のものを含む）が挙げられ、これらの開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２４６】
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドは、例えば、細胞内がん抗原を含むがん抗原を標的化する、操作されたＴＣＲの発現を誘導する。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドによって発現されるように誘導される、操作されたＴＣＲは、以下の表２に列挙される抗原標的を標的化する、操作されたＴＣＲである。
【０２４７】
【表２】
2019528077.tif 000004
【０２４８】
場合によっては、特定の抗原を標的化する、発現されるＴＣＲは、抗［抗原］ＴＣＲと記載され得る。したがって、場合によっては、本開示のキメラポリペプチドによって発現されるように誘導され得る例示的なＴＣＲとしては、例えば、抗ＮＹ−ＥＳＯ−１  ＴＣＲ、抗ＭＡＲＴ−１  ＴＣＲ、抗ＭＡＧＥ−Ａ３  ＴＣＲ、抗ＭＡＧＥ−Ａ３  ＴＣＲ、抗ＣＥＡ  ＴＣＲ、抗ｇｐ１００  ＴＣＲ、抗ＷＴ１  ＴＣＲ、抗ＨＢＶ  ＴＣＲ、抗ｇａｇ（ＷＴ及び／またはα／６）ＴＣＲ、抗Ｐ５３  ＴＣＲ、ＤＲ４に結合した抗−ＴＲＡＩＬ  ＴＣＲ、抗ＨＰＶ−１６（Ｅ６及び／またはＥ７）ＴＣＲ、抗スルビビンＴＣＲ、抗ＫＲＡＳ変異体ＴＣＲ、抗ＳＳＸ２  ＴＣＲ、抗ＭＡＧＥ−Ａ１０  ＴＣＲ、抗ＭＡＧＥ−Ａ４  ＴＣＲ、抗ＡＦＰ  ＴＣＲなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４９】
場合によっては、ＴＣＲは、抗ＮＹ−ＥＳＯ１  ＴＣＲ（例えば、抗ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１  ｓｃＴｖ）である。場合によっては、抗ＮＹ−ＥＳＯ１  ＴＣＲは、以下の配列を有する。
【０２５０】
ＭＥＴＬＬＧＬＬＩＬＷＬＱＬＱＷＶＳＳＫＱＥＶＴＱＩＰＡＡＬＳＶＰＥＧＥＮＬＶＬＮＣＳＦＴＤＳＡＩＹＮＬＱＷＦＲＱＤＰＧＫＧＬＴＳＬＬＬＩＱＳＳＱＲＥＱＴＳＧＲＬＮＡＳＬＤＫＳＳＧＲＳＴＬＹＩＡＡＳＱＰＧＤＳＡＴＹＬＣＡＶＲＰＬＬＤＧＴＹＩＰＴＦＧＲＧＴＳＬＩＶＨＰＧＳＡＤＤＡＫＫＤＡＡＫＫＤＧＫＳＭＳＩＧＬＬＣＣＡＡＬＳＬＬＷＡＧＰＶＮＡＧＶＴＱＴＰＫＦＱＶＬＫＴＧＱＳＭＴＬＱＣＡＱＤＭＮＨＥＹＭＳＷＹＲＱＤＰＧＭＧＬＲＬＩＨＹＳＶＧＡＧＴＴＤＲＧＥＶＰＮＧＹＮＶＳＲＳＴＩＥＤＦＰＬＲＬＬＳＡＡＰＳＱＴＳＶＹＦＣＡＳＳＹＶＧＤＴＧＥＬＦＦＧＥＧＳＲＬＴＶＬ（配列番号１１６）。
【０２５１】
有用なＴＣＲとしては、それらのそれぞれの抗原に対して野生型親和性を有するもの、及びそれらのそれぞれの抗原に対して増強親和性を有するものが挙げられる。それらのそれぞれの抗原に対して増強された親和性を有するＴＣＲは、「親和性増強」ＴＣＲまたは「増強親和性」ＴＣＲと称され得る。ＴＣＲの親和性は、結合部位操作（すなわち、合理的設計）、スクリーニング（例えば、ＴＣＲ提示）などを含むが、これらに限定されない、任意の簡便な手段によって増強することができる。親和性増強ＴＣＲ、及び親和性増強ＴＣＲを生成する方法の非限定的な例としては、例えば、ＰＣＴ公開第２０１５０１１８２０８号、同第２０１３２５６１５９号、同第２０１６００８３４４９号、同第２０１４０３４９８５５号、同第２０１００１１３３００号、同第２０１４０３７１０８５号、同第２００６０１２７３７７号、同第２００８０２９２５４９号、同第２０１６０２８０７５６号、同第２０１４００６５１１１号、同第２０１３００５８９０８号、同第２０１１００３８８４２号、同第２０１１００１４１６９号、同第２００３２７６４０３号などに記載のものが挙げられるが、これらに限定されず、これらの開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２５２】
有用なＴＣＲには、場合によっては、１つ以上のシステイン修飾を含む修飾ＴＣＲ鎖も含まれ得る。そのようなシステイン修飾は、２つの修飾ＴＣＲ鎖間で対合され得る。２つのＴＣＲ鎖間で対合された場合、対応する修飾は、対合した鎖間に組み換えジスルフィド結合をもたらし得る。
【０２５３】
いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、アルファ鎖内に第１のシステイン修飾及びベータ鎖内に第２のシステイン修飾を含んでもよく、第１及び第２のシステイン修飾は、両方の鎖が細胞内に存在する場合、アルファ鎖とベータ鎖との間に組み換えジスルフィド結合を形成する。組み換えジスルフィド結合を形成するそのようなシステイン修飾は、「対応するシステイン修飾」と称され得る。
【０２５４】
場合によっては、修飾ＴＣＲアルファ鎖は、組み換えジスルフィド結合を生成するために十分なシステイン修飾をもたらす、システインへの残基の置換を含み得る。システインへの変異時に組み換えジスルフィド結合をもたらす、ＴＣＲベータ鎖内に対応する残基を有するＴＣＲアルファ鎖の任意の適切な残基を、システイン修飾アルファ鎖の生成に用いることができる。場合によっては、置換される残基は、ＴＣＲアルファ定常領域内に存在する残基である。場合によっては、置換は、チロシンからシステインへの置換である。場合によっては、置換は、以下のヒトＴＣＲアルファ鎖定常領域配列、ＰＮＩＱＮＰＤＰＡＶＹＱＬＲＤＳＫＳＳＤＫＳＶＣＬＦＴＤＦＤＳＱＴＮＶＳＱＳＫＤＳＤＶＹＩＴＤＫＣＶＬＤＭＲＳＭＤＦＫＳＮＳＡＶＡＷＳＮＫＳＤＦＡＣＡＮＡＦＮＮＳＩＩＰＥＤＴＦＦＰＳＰＥＳＳＣＤＶＫＬＶＥＫＳＦＥＴＤＴＮＬＮＦＱＮＬＳＶＩＧＦＲＩＬＬＬＫＶＡＧＦＮＬＬＭＴＬＲＬＷＳＳ（配列番号１３１）に存在するＴ４８Ｃ置換などの、Ｔ４８Ｃ置換または対応する変異である。場合によっては、置換は、以下のマウスＴＣＲアルファ鎖定常領域配列、ＰＹＩＱＮＰＥＰＡＶＹＱＬＫＤＰＲＳＱＤＳＴＬＣＬＦＴＤＦＤＳＱＩＮＶＰＫＴＭＥＳＧＴＦＩＴＤＫＴＶＬＤＭＫＡＭＤＳＫＳＮＧＡＩＡＷＳＮＱＴＳＦＴＣＱＤＩＦＫＥＴＮＡＣＹＰＳＳＤＶＰＣＤＡＴＬＴＥＫＳＦＥＴＤＭＮＬＮＦＱＮＬＳＶＭＧＬＲＩＬＬＬＫＶＡＧＦＮＬＬＭＴＬＲＬＷＳＳ（配列番号１３２）に存在するＴ８４Ｃ置換などの、Ｔ８４Ｃ置換または対応する変異である。
【０２５５】
場合によっては、主題のＴＣＲアルファ鎖またはその対応するドメイン（例えば、アルファ可変ドメイン、アルファ定常ドメイン、アルファ膜貫通ドメイン、アルファ接続ペプチドドメインなど）は、例えば、上記に提示されるＴ４８ＣまたはＴ８４Ｃ含有ＴＣＲアルファ配列などのシステイン修飾アルファ鎖と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。
【０２５６】
場合によっては、修飾ＴＣＲベータ鎖は、組み換えジスルフィド結合を生成するために十分なシステイン修飾をもたらす、システインへの残基の置換を含み得る。システインへの変異時に組み換えジスルフィド結合をもたらす、ＴＣＲベータ鎖内に対応する残基を有するＴＣＲベータ鎖の任意の適切な残基を、システイン修飾ベータ鎖の生成に用いることができる。場合によっては、置換される残基は、ＴＣＲベータ定常領域内に存在する残基である。場合によっては、置換は、セリンからシステインへの置換である。場合によっては、置換は、以下のヒトＴＣＲベータ鎖定常領域配列、ＥＤＬＮＫＶＦＰＰＥＶＡＶＦＥＰＳＥＡＥＩＳＨＴＱＫＡＴＬＶＣＬＡＴＧＦＦＰＤＨＶＥＬＳＷＷＶＮＧＫＥＶＨＳＧＶＣＴＤＰＱＰＬＫＥＱＰＡＬＮＤＳＲＹＣＬＳＳＲＬＲＶＳＡＴＦＷＱＮＰＲＮＨＦＲＣＱＶＱＦＹＧＬＳＥＮＤＥＷＴＱＤＲＡＫＰＶＴＱＩＶＳＡＥＡＷＧＲＡＤＣＧＦＴＳＶＳＹＱＱＧＶＬＳＡＴＩＬＹＥＩＬＬＧＫＡＴＬＹＡＶＬＶＳＡＬＶＬＭＡＭＶＫＲＫＤＦ（配列番号１３３）に存在するＳ５８Ｃ置換などの、Ｓ５８Ｃ置換または対応する変異である。場合によっては、置換は、以下のマウスＴＣＲベータ鎖定常領域配列、ＥＤＬＲＮＶＴＰＰＫＶＳＬＦＥＰＳＫＡＥＩＡＮＫＱＫＡＴＬＶＣＬＡＲＧＦＦＰＤＨＶＥＬＳＷＷＶＮＧＫＥＶＨＳＧＶＳＴＤＰＱＡＹＫＥＳＮＹＳＹＣＬＳＳＲＬＲＶＣＡＴＦＷＨＮＰＲＮＨＦＲＣＱＶＱＦＨＧＬＳＥＥＤＫＷＰＥＧＳＰＫＰＶＴＱＮＩＳＡＥＡＷＧＲＡＤＣＧＩＴＳＡＳＹＱＱＧＶＬＳＡＴＩＬＹＥＩＬＬＧＫＡＴＬＹＡＶＬＶＳＴＬＶＶＭＡＭＶＫＲＫＮＳ（配列番号１３４）に存在するＳ７９Ｃ置換などの、Ｓ７９Ｃ置換または対応する変異である。
【０２５７】
場合によっては、主題のＴＣＲベータ鎖またはその対応するドメイン（例えば、ベータ可変ドメイン、ベータ定常ドメイン、ベータ膜貫通ドメイン、ベータ接続ペプチドドメインなど）は、例えば、上記に提示されるＳ５８ＣまたはＳ７９Ｃ含有ＴＣＲアルファ配列などのシステイン修飾ベータ鎖と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。
【０２５８】
場合によっては、治療ＰＯＩは、自然免疫応答誘導因子であり得る。本明細書で使用される場合、「自然免疫応答誘導因子」は、哺乳動物における発現時に自然免疫応答を誘導する任意のタンパク質を意味する。自然免疫誘導因子としては、例えば、細菌由来のタンパク質またはそれらの断片、ウイルス由来のタンパク質またはそれらの断片、真菌由来のタンパク質またはそれらの断片、哺乳動物寄生虫（例えば、ヒト寄生虫を含む）由来のタンパク質またはそれらの断片が挙げられるが、これらに限定されない。哺乳動物細胞による発現時に自然免疫応答を誘導する任意のタンパク質が、本開示の自然免疫誘導因子として用途を見出し得る。場合によっては、自然免疫応答誘導因子は、フラゲリンタンパク質であり得る。
【０２５９】
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドは、キメラポリペプチドの特異的結合パートナーへの結合時に、キメラポリペプチドの細胞内ドメインが細胞内の核酸配列からの自然免疫応答誘導因子の転写を誘導するように、細胞上で発現され得る。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドは、ペプチド−ＭＨＣ特異的結合パートナーへの結合時に、キメラポリペプチドの細胞内ドメインが自然免疫応答誘導因子の転写を誘導するように、細胞上で発現され得る。
【０２６０】
場合によっては、治療ＰＯＩは、免疫抑制因子であり得る。本明細書で使用される場合、「免疫抑制因子」は、哺乳動物における発現時に免疫応答を抑制する任意のタンパク質を意味する。免疫抑制因子としては、例えば、免疫抑制サイトカイン（例えば、ＩＬ−１０）、免疫抑制細胞間シグナリングリガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１）、免疫抑制分泌タンパク質（例えば、ＴＧＦ−ベータ）、免疫抑制抗体（例えば、抗ＣＤ３抗体（例えば、Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ  ＯＫＴ３（ムロモナブ−ＣＤ３としても知られる）など）、抗ＣＤ２５抗体（例えば、バシリキシマブ、ダクリズマブなど）抗ＣＤ５２抗体（例えば、Ｃａｍｐａｔｈ−１Ｈ（アレムツズマブとしても知られる）など）などが挙げられるが、これらに限定されない。哺乳動物細胞による発現時に免疫応答を抑制する任意のタンパク質が、本開示の免疫抑制因子として用途を見出し得る。場合によっては、免疫抑制因子は、ＩＬ−１０であり得る。場合によっては、免疫抑制因子は、ＰＤ−Ｌ１であり得る。場合によっては、免疫抑制因子は、ＴＧＦ−ベータであり得る。場合によっては、免疫抑制因子は、免疫抑制抗体（例えば、（例えば、抗ＣＤ３抗体（例えば、Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ  ＯＫＴ３（ムロモナブ−ＣＤ３としても知られる）など）、抗ＣＤ２５抗体（例えば、バシリキシマブ、ダクリズマブなど）、抗ＣＤ５２抗体（例えば、Ｃａｍｐａｔｈ−１Ｈ（アレムツズマブとしても知られる）など）であり得る。
【０２６１】
場合によっては、キメラポリペプチドは、例えば、免疫抑制サイトカイン及び免疫抑制細胞間シグナリングリガンド、２つ以上の免疫抑制サイトカイン、２つ以上の免疫抑制細胞間シグナリングリガンドなどを含む、２つ以上の免疫抑制因子の発現を推進し得る。場合によっては、キメラポリペプチドは、ＩＬ−１０及びＰＤ−Ｌ１の両方の発現を推進し得る。場合によっては、キメラポリペプチドは、３つ以上の免疫抑制因子の発現を推進し得る。
【０２６２】
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドは、キメラポリペプチドの特異的結合パートナーへの結合時に、キメラポリペプチドの細胞内ドメインが細胞内の核酸配列からの免疫抑制因子の転写を誘導するように、細胞上で発現され得る。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドは、ペプチド−ＭＨＣ特異的結合パートナーへの結合時に、キメラポリペプチドの細胞内ドメインが免疫抑制因子の転写を誘導するように、細胞上で発現され得る。
【０２６３】
場合によっては、治療ＰＯＩは、ケモカインであり得る。発現されるケモカインは、細胞遊走を含むが、これに限定されない、１つ以上の細胞挙動に影響を与え得る。場合によっては、本開示のキメラ受容体ポリペプチドの細胞内ドメインは、ケモカインの発現を誘導し得る。好適なケモカインの例としては、例えば、ＭＩＰ−１、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＰ１０などが挙げられる。好適なケモカインの追加の例としては、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド−２（ＣＣＬ２、単球走化性タンパク質−１またはＭＣＰ１とも称される）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド−３（ＣＣＬ３、マクロファージ炎症性タンパク質−１ＡまたはＭＩＰ１Ａとも称される）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド−５（ＣＣＬ５、ＲＡＮＴＥＳとしても知られる）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド−１７（ＣＣＬ１７、胸腺及び活性化制御ケモカインまたはＴＡＲＣとしても知られる）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド−１９（ＣＣＬ１９、ＥＢＩ１リガンドケモカインまたはＥＬＣとしても知られる）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド−２１（ＣＣＬ２１、６Ｃｋｉｎｅとしても知られる）、Ｃ−Ｃケモカイン受容体７型（ＣＣＲ７）、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド９（ＣＸＣＬ９、ガンマインターフェロンによって誘導されるモノカインまたはＭＩＧとしても知られる）、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１０（ＣＸＣＬ１０、インターフェロンガンマ誘導タンパク質１０またはＩＰ−１０としても知られる）、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１１（ＣＸＣＬ１１、インターフェロン誘導性Ｔ細胞アルファ化学誘引物質またはＩ−ＴＡＣとも呼ばれる）、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１６（ＣＸＣＬ１６、ケモカイン（Ｃモチーフ）リガンド（ＸＣＬ１、リンホタクチンとしても知られる）、及びマクロファージコロニー刺激因子（ＭＣＳＦ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６４】
本明細書に記載のキメラポリペプチドならびに方法及び回路における使用に適合され得る、特定の細胞内ドメイン及びそれらの構成要素としては、例えば、ＰＣＴ出願第ＵＳ２０１６／０１９１８８号（公開第ＷＯ２０１６／１３８０３４号）に記載のものが挙げられるが、これらに限定されず、この開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２６５】
追加のポリペプチド
本開示のキメラポリペプチドは、１つ以上の追加のポリペプチドを更に含んでもよく、好適な追加のポリペプチドとしては、シグナル配列、エピトープタグ、親和性ドメイン、核局在化シグナル（ＮＬＳ）、及び検出可能なシグナルを生成するポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。１つ以上の追加の配列は、適切な場合、例えば、Ｎ末端、Ｃ末端、２つのドメイン間（例えば、細胞外ドメインと膜貫通ドメインとの間、細胞外ドメインとＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドとの間、Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドと細胞内シグナリングドメインとの間など）を含む、本質的にどの位置でもキメラポリペプチドに付加されてもよい。追加の配列は、他のドメインとは独立してキメラポリペプチドと共に機能しても、キメラポリペプチドの任意のドメインと関連し、それと共に機能してもよい。
【０２６６】
本開示のキメラポリペプチドにおける使用に好適であるシグナル配列としては、天然に存在するシグナル配列、合成（例えば、人工）シグナル配列などを含む、任意の真核生物シグナル配列が挙げられる。
【０２６７】
好適なエピトープタグとしては、赤血球凝集素（ＨＡ、例えば、ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号１１７）、ＦＬＡＧ（例えば、ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号１１８）、ｃ−ｍｙｃ（例えば、ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ、配列番号１１９）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６８】
親和性ドメインは、例えば、特定または精製に有用である固体支持体上に固定化されたものなどの、結合パートナーと相互作用し得るペプチド配列を含む。ヒスチジンなどの複数の連続した単一アミノ酸は、本開示のキメラポリペプチドに融合している場合、ニッケルＳｅｐｈａｒｏｓｅなどの樹脂カラムへの高親和性結合によって組み換えキメラポリペプチドの１ステップ精製に使用することができる。例示的な親和性ドメインとしては、Ｈｉｓ５（ＨＨＨＨＨ）（配列番号１２０）、ＨｉｓＸ６（ＨＨＨＨＨＨ）（配列番号１２１）、Ｃ−ｍｙｃ（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ）（配列番号１１９）、Ｆｌａｇ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）（配列番号１１８）、ＳｔｒｅｐＴａｇ（ＷＳＨＰＱＦＥＫ）（配列番号１２２）、赤血球凝集素、例えば、ＨＡタグ（ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ）（配列番号１１７）、ＧＳＴ、チオレドキシン、セルロース結合ドメイン、ＲＹＩＲＳ（配列番号１２３）、Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ（配列番号１２４）、キチン結合ドメイン、Ｓ−ペプチド、Ｔ７ペプチド、ＳＨ２ドメイン、Ｃ末端ＲＮＡタグ、ＷＥＡＡＡＲＥＡＣＣＲＥＣＣＡＲＡ（配列番号１２５）、金属結合ドメイン、例えば、亜鉛結合ドメインまたはカルシウム結合ドメイン（例えば、カルモジュリン、トロポニンＣ、カルシニューリンＢ、ミオシン軽鎖、リカバリン、Ｓ−モジュリン、ビジニン、ＶＩＬＩＰ、ニューロカルシン、ヒポカルシン、フリクエニン、カルトラクチン、カルパイン大サブユニット、Ｓ１００タンパク質、パルブアルブミン、カルビンディンＤ９Ｋ、カルビンディンＤ２８Ｋ、及びカルレチニンなどのカルシウム結合タンパク質由来のもの）、インテイン、ビオチン、ストレプトアビジン、ＭｙｏＤ、Ｉｄ、ロイシンジッパー配列、ならびにマルトース結合タンパク質が挙げられる。
【０２６９】
好適な核局在化シグナル（「ＮＬＳ」、本明細書では「核局在化配列」とも称される）としては、例えば、ＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号１２６）、ＫＲＰＡＡＴＫＫＡＧＱＡＫＫＫＫ（配列番号１２７）、ＭＶＰＫＫＫＲＫ（配列番号１２８）、ＭＡＰＫＫＫＲＫＶＧＩＨＧＶＰＡＡ（配列番号１２９）などが挙げられる。ＮＬＳは、本開示のキメラポリペプチドのＮ末端、本開示のキメラポリペプチドのＮ末端付近（例えば、Ｎ末端の５アミノ酸以内、１０アミノ酸以内、もしくは２０アミノ酸以内）、本開示のキメラポリペプチドのＣ末端、本開示のキメラポリペプチドのＣ末端付近（例えば、Ｃの末端の５アミノ酸以内、１０アミノ酸以内、もしくは２０アミノ酸以内）、または本開示のキメラポリペプチド内部に存在し得る。
【０２７０】
好適な検出可能なシグナル生成タンパク質としては、例えば、蛍光タンパク質、産物として検出可能なシグナルを生成する反応を触媒する酵素などが挙げられる。
【０２７１】
好適な蛍光タンパク質としては、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）またはそのバリアント、ＧＦＰの青色蛍光バリアント（ＢＦＰ）、ＧＦＰのシアン蛍光バリアント（ＣＦＰ）、ＧＦＰの黄色蛍光バリアント（ＹＦＰ）、増強ＧＦＰ（ＥＧＦＰ）、増強ＣＦＰ（ＥＣＦＰ）、増強ＹＦＰ（ＥＹＦＰ）、ＧＦＰＳ６５Ｔ、Ｅｍｅｒａｌｄ、Ｔｏｐａｚ（ＴＹＦＰ）、Ｖｅｎｕｓ、Ｃｉｔｒｉｎｅ、ｍＣｉｔｒｉｎｅ、ＧＦＰｕｖ、不安定化ＥＧＦＰ（ｄＥＧＦＰ）、不安定化ＥＣＦＰ（ｄＥＣＦＰ）、不安定化ＥＹＦＰ（ｄＥＹＦＰ）、ｍＣＦＰｍ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、Ｔ−Ｓａｐｐｈｉｒｅ、ＣｙＰｅｔ、ＹＰｅｔ、ｍＫＯ、ＨｃＲｅｄ、ｔ−ＨｃＲｅｄ、ＤｓＲｅｄ、ＤｓＲｅｄ２、ＤｓＲｅｄ−ｍｏｎｏｍｅｒ、Ｊ−Ｒｅｄ、ｄｉｍｅｒ２、ｔ−ｄｉｍｅｒ２（１２）、ｍＲＦＰ１、ポシロポリン、Ｒｅｎｉｌｌａ  ＧＦＰ、Ｍｏｎｓｔｅｒ  ＧＦＰ、ｐａＧＦＰ、Ｋａｅｄｅタンパク質及びキンドリングタンパク質、フィコビリンタンパク質及びフィコビリンタンパク質共役体（Ｂ−フィコエリトリン、Ｒ−フィコエリトリン、及びアロフィコシアニンを含む）が挙げられるが、これらに限定されない。蛍光タンパク質の他の例としては、ｍＨｏｎｅｙｄｅｗ、ｍＢａｎａｎａ、ｍＯｒａｎｇｅ、ｄＴｏｍａｔｏ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ｍＴａｎｇｅｒｉｎｅ、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｍＧｒａｐｅ１、ｍＲａｓｐｂｅｒｒｙ、ｍＧｒａｐｅ２、ｍＰｌｕｍ（Ｓｈａｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２：９０５−９０９）などが挙げられる。例えば、Ｍａｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：９６９−９７３に記載の、Ａｎｔｈｏｚｏａｎ種由来の様々な蛍光及び有色タンパク質のいずれの使用も好適である。
【０２７２】
好適な酵素としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、ベータ−ガラクトシダーゼ（ＧＡＬ）、グルコース−６−リン酸脱水素酵素、ベータ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、β−グルクロニダーゼ、インベルターゼ、キサンチンオキシダーゼ、ホタルルシフェラーゼ、グルコース酸化酵素（ＧＯ）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７３】
本明細書に記載のキメラポリペプチドならびに方法及び回路における使用に適合され得る、特定の追加のポリペプチド及びそれらの構成要素としては、例えば、ＰＣＴ出願第ＵＳ２０１６／０１９１８８号（公開第ＷＯ２０１６／１３８０３４号）に記載のものが挙げられるが、これらに限定されず、この開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２７４】
核酸
本開示は、本開示のタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸は、発現ベクター内に含有される。したがって、本開示は、本開示のキメラポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を含む組み換え発現ベクターを提供する。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、転写制御要素（例えば、プロモーター、エンハンサーなど）に作動可能に連結される。場合によっては、転写制御要素は、誘導性である。場合によっては、転写制御要素は、恒常的である。場合によっては、プロモーターは、真核細胞内で機能性である。場合によっては、プロモーターは、細胞型特異的プロモーターである。場合によっては、プロモーターは、組織特異的プロモーターである。
【０２７５】
利用される宿主／ベクター系に応じて、恒常的及び誘導性プロモーター、転写エンハンサー要素、転写ターミネーターなどを含む、いくつかの好適な転写及び翻訳制御要素のいずれが、発現ベクター内で使用されてもよい（例えば、Ｂｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１５３：５１６−５４４を参照されたい）。
【０２７６】
プロモーターは、恒常的に活性なプロモーター（すなわち、恒常的に活性／「オン」の状態にあるプロモーター）であってもよく、それは、誘導性プロモーター（すなわち、その状態（活性／「オン」または不活性／「オフ」）が外部刺激（例えば、特定の温度、化合物、またはタンパク質の存在）によって制御されるプロモーター）であってもよく、それは、空間的に制限されたプロモーター（すなわち、転写制御要素、エンハンサーなど）（例えば、組織特異的プロモーター、細胞型特異的プロモーターなど）であってもよく、それは、時間的に制限されたプロモーター（すなわち、プロモーターは、胚発生の特定の段階中または生物学的プロセス（例えば、マウスにおける毛包周期など）の特定の段階中に「オン」状態または「オフ」状態にある）であってもよい。
【０２７７】
好適なプロモーター及びエンハンサー要素は、当該技術分野において既知である。細菌細胞内での発現のために、好適なプロモーターとしては、ｌａｃＩ、ｌａｃＺ、Ｔ３、Ｔ７、ｇｐｔ、ラムダＰ、及びｔｒｃが挙げられるが、これらに限定されない。真核細胞内での発現のために、好適なプロモーターとしては、軽鎖及び／または重鎖免疫グロブリン遺伝子プロモーター及びエンハンサー要素、サイトメガロウイルス最初期プロモーター、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼプロモーター、初期及び後期ＳＶ４０プロモーター、レトロウイルスの末端反復配列内に存在するプロモーター、マウスメタロチオネイン−Ｉプロモーター、ならびに様々な当該技術分野において既知である組織特異的プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７８】
場合によっては、本明細書に記載の核酸の転写制御要素は、シス作用制御配列を含み得る。任意の好適なシス作用制御配列が、本明細書に記載の核酸において用途を見出し得る。例えば、場合によっては、シス作用制御配列は、上流活性化配列（ｕｐｓｔｒｅａｍ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）または上流活性化配列（ｕｐｓｔｒｅａｍ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）（ＵＡＳ）であっても、それを含んでもよい。場合によっては、本明細書に記載の核酸のＵＡＳは、Ｇａｌ４応答性ＵＡＳであってもよい。
【０２７９】
可逆誘導性プロモーターを含む好適な可逆プロモーターが、当該技術分野において既知である。そのような可逆プロモーターは、多くの生物（例えば、真核生物及び原核生物）から単離しても、それらに由来してもよい。第２の生物において使用するための、第１の生物由来の可逆プロモーターの修飾（例えば、第１の原核生物及び第２の真核生物、第１の真核生物及び第２の原核生物など）が、当該技術分野において周知である。そのような可逆プロモーター、及びそのような可逆プロモーターに基づくが追加の制御タンパク質もまた含む系としては、アルコール制御プロモーター（例えば、アルコール脱水素酵素Ｉ（ａｌｃＡ）遺伝子プロモーター、アルコールトランス活性化因子タンパク質（ＡｌｃＲ）に応答性のプロモーターなど）、テトラサイクリン制御プロモーター（例えば、ＴｅｔＡｃｔｉｖａｔｏｒ、ＴｅｔＯＮ、ＴｅｔＯＦＦなどを含むプロモーター系）、ステロイド制御プロモーター（例えば、ラットグルココルチコイド受容体プロモーター系、ヒトエストロゲン受容体プロモーター系、レチノイドプロモーター系、甲状腺プロモーター系、エクジソンプロモーター系、ミフェプリストンプロモーター系など）、金属制御プロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター系など）、病原性関連制御プロモーター（例えば、サリチル酸制御プロモーター、エチレン制御プロモーター、ベンゾチアジアゾール制御プロモーターなど）、温度制御プロモーター（例えば、熱ショック誘導性プロモーター（例えば、ＨＳＰ−７０、ＨＳＰ−９０、大豆熱ショックプロモーターなど）、光制御プロモーター、合成誘導性プロモーターなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２８０】
使用に好適である誘導性プロモーターとしては、本明細書に記載されるか、または当業者に既知である、任意の誘導性プロモーターが挙げられる。誘導性プロモーターの例としては、非限定的に、アルコール制御プロモーターなどの化学／生化学制御及び物理制御プロモーター、テトラサイクリン制御プロモーター（例えば、テトラサイクリン抑制因子タンパク質（ｔｅｔＲ）、テトラサイクリン作動配列（ｔｅｔＯ）、及びテトラサイクリントランス活性化因子融合タンパク質（ｔＴＡ）を含む、アンヒドロテトラサイクリン（ａＴｃ）応答性プロモーター及び他のテトラサイクリン応答性プロモーター系）、ステロイド制御プロモーター（例えば、ラットグルココルチコイド受容体、ヒトエストロゲン受容体、ガエクジソン受容体に基づくプロモーター、及びステロイド／レチノイド／甲状腺受容体スーパーファミリー由来のプロモーター）、金属制御プロモーター（例えば、酵母、マウス、及びヒト由来のメタロチオネイン（金属イオンに結合して隔絶するタンパク質）遺伝子）由来のプロモーター、（例えば、サリチル酸、エチレン、またはベンゾチアジアゾール（ＢＴＨ）によって誘導される）病原性制御プロモーター、温度／熱誘導性プロモーター（例えば、熱ショックプロモーター）、ならびに光制御プロモーター（例えば、植物細胞由来の光応答性プロモーター）が挙げられる。
【０２８１】
場合によっては、プロモーターは、ＣＤ８細胞特異的プロモーター、ＣＤ４細胞特異的プロモーター、好中球特異的プロモーター、またはＮＫ特異的プロモーターである。例えば、ＣＤ４遺伝子プロモーターが使用されてもよく、例えば、Ｓａｌｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：７７３９、及びＭａｒｏｄｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｂｌｏｏｄ１０１：３４１６を参照されたい。別の例として、ＣＤ８遺伝子プロモーターが使用されてもよい。ＮＫ細胞特異的発現は、Ｎｃｒ１（ｐ４６）プロモーターの使用によって達成することができ、例えば、Ｅｃｋｅｌｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｂｌｏｏｄ１１７：１５６５を参照されたい。
【０２８２】
場合によっては、本開示のキメラポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸は、組み換え発現ベクターであるか、または組み換え発現ベクター内に含まれる。いくつかの実施形態において、組み換え発現ベクターは、ウイルス構築物、例えば、組み換えアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）構築物、組み換えアデノウイルス構築物、組み換えレンチウイルス構築物、組み換えレトロウイルス構築物などである。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸は、組み換えレンチウイルスベクターである。場合によっては、本開示のキメラポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸は、組み換えＡＡＶベクターである。
【０２８３】
好適な発現ベクターとしては、ウイルスベクター（例えば、ワクシニアウイルス、ポリオウイルス、アデノウイルスに基づくウイルスベクター（例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ３５：２５４３  ２５４９，１９９４、Ｂｏｒｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ６：５１５  ５２４，１９９９、Ｌｉ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄｓｏｎ，ＰＮＡＳ９２：７７００  ７７０４，１９９５、Ｓａｋａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ５：１０８８  １０９７，１９９９、ＷＯ９４／１２６４９、ＷＯ９３／０３７６９、ＷＯ９３／１９１９１、ＷＯ９４／２８９３８、ＷＯ９５／１１９８４、及びＷＯ９５／００６５５を参照されたい）、アデノ関連ウイルス（例えば、Ａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ９：８１  ８６，１９９８、Ｆｌａｎｎｅｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ９４：６９１６  ６９２１，１９９７、Ｂｅｎｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ３８：２８５７  ２８６３，１９９７、Ｊｏｍａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ４：６８３  ６９０，１９９７、Ｒｏｌｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ１０：６４１  ６４８，１９９９、Ａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ５：５９１  ５９４，１９９６、ＳｒｉｖａｓｔａｖａのＷＯ９３／０９２３９、Ｓａｍｕｌｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒ．（１９８９）６３：３８２２−３８２８、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒｏｌ．（１９８８）１６６：１５４−１６５、及びＦｌｏｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ（１９９３）９０：１０６１３−１０６１７を参照されたい）、ＳＶ４０、単純ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、Ｍｉｙｏｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ９４：１０３１９  ２３，１９９７、Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ７３：７８１２  ７８１６，１９９９を参照されたい）、レトロウイルスベクター（例えば、マウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ならびにラウス肉腫ウイルス、ハーベイ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、レンチウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス、及び乳房腫瘍ウイルスなどのレトロウイルス由来のベクター）などが挙げられるが、これらに限定されない。場合によっては、ベクターは、レンチウイルスベクターである。ピギーバックベクター及びスリーピングビューティーベクターなどのトランスポゾン媒介ベクターもまた好適である。
【０２８４】
本開示の核酸は、目的のポリペプチド（ＰＯＩ）をコードする核酸配列を含み得る。ＰＯＩは、本質的に任意のポリペプチドであり得、研究目的のポリペプチド（例えば、レポーターポリペプチド、変異ポリペプチド、新規合成ポリペプチドなど）、治療目的のポリペプチド（例えば、天然に存在する治療タンパク質、組み換え治療ポリペプチドなど）、産業目的のポリペプチド（例えば、産業用途（例えば、製造など）において使用されるポリペプチド）などを含み得るが、これらに限定されない。
【０２８５】
場合によっては、ＰＯＩは、転写活性化因子であり得る。場合によっては、ＰＯＩは、ＣＡＲであり得る。場合によっては、ＰＯＩは、ＴＣＲであり得る。場合によっては、ＰＯＩは、抗体であり得る。場合によっては、ＰＯＩは、キメラ二重特異的結合メンバーであり得る。場合によっては、ＰＯＩは、自然免疫応答誘導因子であり得る。場合によっては、ＰＯＩは、免疫抑制因子であり得る。場合によっては、ＰＯＩは、本明細書に記載の（例えば、本明細書に記載の多構成要素回路において使用される）タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドであり得る。
【０２８６】
本明細書に記載のキメラポリペプチドならびに方法及び回路における使用に適合され得る、特定の核酸及びそれらの構成要素としては、例えば、ＰＣＴ出願第ＵＳ２０１６／０１９１８８号（公開第ＷＯ２０１６／１３８０３４号）に記載のものが挙げられるが、これらに限定されず、この開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２８７】
細胞
本開示は、本明細書に記載のキメラポリペプチドを発現するように操作された細胞を含む。場合によっては、本開示の細胞は、本明細書に記載のキメラポリペプチドをコードする核酸を含む。場合によっては、本開示の細胞は、本開示のキメラポリペプチドの解放された細胞内ドメインに応答性であり、それによりキメラポリペプチドの活性化時に核酸の発現を誘導する、転写制御要素（例えば、転写活性化因子）に作動可能に連結された核酸を含む。任意の目的のポリペプチドが、本開示のキメラポリペプチドに応答性の転写制御要素に作動可能に連結した細胞内の核酸からコードされ得る。
【０２８８】
本開示の方法を使用して、任意の真核細胞の活性を調節することができる。場合によっては、細胞は、インビボである。場合によっては、細胞は、エキソビボである。場合によっては、細胞は、インビトロである。場合によっては、細胞は、哺乳動物細胞である。場合によっては、細胞は、ヒト細胞である。場合によっては、細胞は、非ヒト霊長類細胞である。場合によっては、細胞は、齧歯類細胞である。場合によっては、細胞は、マウス細胞である。場合によっては、細胞は、ラット細胞である。
【０２８９】
好適な細胞としては、神経細胞、肝臓細胞、腎臓細胞、免疫細胞、心臓細胞、骨格筋細胞、平滑筋細胞、肺細胞などが挙げられる。
【０２９０】
好適な細胞としては、幹細胞（例えば、胚性幹（ＥＳ）細胞、誘導多能性幹（ｉＰＳ）細胞）、胚細胞（例えば、卵母細胞、精子、卵原細胞、精原細胞など）、体細胞、例えば、線維芽細胞、オリゴデンドロサイト、グリア細胞、造血細胞、ニューロン、筋細胞、骨細胞、肝細胞、膵臓細胞などが挙げられる。
【０２９１】
好適な細胞としては、ヒト胚性幹細胞、胎児心筋細胞、筋線維芽細胞、間葉系幹細胞、自家移植増殖心筋細胞、脂肪細胞、全能性細胞、多能性細胞、血液幹細胞、筋芽細胞、成体幹細胞、骨髄細胞、間葉系細胞、胚性幹細胞、実質細胞、上皮細胞、内皮細胞、中皮細胞、線維芽細胞、骨芽細胞、軟骨細胞、外来細胞、内在細胞、幹細胞、造血幹細胞、骨髄由来前駆細胞、心筋細胞、骨格細胞、胎児細胞、未分化細胞、多能性前駆細胞、単能性前駆細胞、単球、心筋芽細胞、骨格筋芽細胞、マクロファージ、毛細血管内皮細胞、異種間細胞、同種間細胞、及び出生後幹細胞が挙げられる。
【０２９２】
場合によっては、細胞は、免疫細胞、ニューロン、上皮細胞、及び内皮細胞、または幹細胞である。場合によっては、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、またはマクロファージである。場合によっては、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。場合によっては、免疫細胞は、ヘルパーＴ細胞である。場合によっては、免疫細胞は、制御Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。
【０２９３】
場合によっては、細胞は、幹細胞である。場合によっては、細胞は、誘導多能性幹細胞である。場合によっては、細胞は、間葉系幹細胞である。場合によっては、細胞は、造血幹細胞である。場合によっては、細胞は、成体幹細胞である。
【０２９４】
好適な細胞としては、気管支肺胞上皮幹細胞（ＢＡＳＣ）、バルジ上皮幹細胞（ｂＥＳＣ）、角膜上皮幹細胞（ＣＥＳＣ）、心筋幹細胞（ＣＳＣ）、表皮神経堤幹細胞（ｅＮＣＳＣ）、胚性幹細胞（ＥＳＣ）、内皮前駆細胞（ＥＰＣ）、肝臓卵形細胞（ＨＯＣ）、造血幹細胞（ＨＳＣ）、ケラチノサイト幹細胞（ＫＳＣ）、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、神経幹細胞（ＮＳＣ）、膵幹細胞（ＰＳＣ）、網膜幹細胞（ＲＳＣ）、及び皮膚由来前駆体（ＳＫＰ）が挙げられる。
【０２９５】
場合によっては、幹細胞は、造血幹細胞（ＨＳＣ）であり、転写因子は、ＨＳＣの分化を誘導して、赤血球細胞、血小板、リンパ球、単球、好中球、好塩基球、または好酸球へと分化させる。場合によっては、幹細胞は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）であり、転写因子は、骨、軟骨、平滑筋、腱、靱帯、間質、髄、真皮、または脂肪の細胞などの結合組織細胞へのＭＳＣの分化を誘導する。
【０２９６】
本開示の細胞は、例えば、本開示の核酸で修飾された遺伝子改変宿主細胞、すなわち、本開示のキメラポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸で遺伝子改変された宿主細胞であってもよい。一実施形態において、本開示は、細胞（例えば、本発明の核酸を含有するように遺伝子改変された宿主細胞）内で異種ポリペプチドの発現を誘導する方法を提供する。本方法は一般に、細胞を、本開示のキメラポリペプチドの特異的結合メンバーの結合パートナーと接触させることに関与する。そのような結合は、１つ以上のタンパク質分解切断部位でのＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの切断を誘導し、それにより細胞内ドメインを放出する。細胞内ドメインの放出は、細胞の活性を調節（例えば、異種遺伝子またはコード配列の発現を誘導）し得る。
【０２９７】
一実施形態において、本開示の方法は一般に、細胞を、本開示のキメラポリペプチドの特異的結合メンバーに結合するペプチド−ＭＨＣと接触させることに関与する。そのような結合は、１つ以上のタンパク質分解切断部位でのＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドの切断を誘導し、それにより細胞内ドメインを放出する。細胞内ドメインの放出は、細胞の活性を調節（例えば、異種遺伝子またはコード配列の発現を誘導）し得る。
【０２９８】
場合によっては、細胞は、真核細胞である。場合によっては、細胞は、哺乳動物細胞、両生類細胞、爬虫類細胞、鳥類細胞、または植物細胞である。場合によっては、細胞は、植物細胞である。
【０２９９】
場合によっては、細胞は、哺乳動物細胞である。場合によっては、細胞は、ヒト細胞である。場合によっては、細胞は、マウス細胞である。場合によっては、細胞は、ラット細胞である。場合によっては、細胞は、非ヒト霊長類細胞である。場合によっては、細胞は、ウサギ類細胞である。場合によっては、細胞は、有蹄動物細胞である。
【０３００】
場合によっては、細胞は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、単球などである。場合によっては、細胞は、Ｔ細胞である。場合によっては、細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８+ Ｔ細胞）である。場合によっては、細胞は、ヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４+ Ｔ細胞）である。場合によっては、細胞は、制御Ｔ細胞（「Ｔｒｅｇ」）である。場合によっては、細胞は、Ｂ細胞である。場合によっては、細胞は、マクロファージである。場合によっては、細胞は、樹状細胞である。場合によっては、細胞は、末梢血単核球である。場合によっては、細胞は、単球である。場合によっては、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。場合によっては、細胞は、ＣＤ４+ 、ＦＯＸＰ３+ Ｔｒｅｇ細胞である。場合によっては、細胞は、ＣＤ４+ 、ＦＯＸＰ３- Ｔｒｅｇ細胞である。
【０３０１】
場合によっては、細胞は、個体から得られる。例えば、場合によっては、細胞は、初代細胞である。別の例として、細胞は、個体から得られる幹細胞または前駆細胞である。
【０３０２】
非限定的な一例として、場合によっては、細胞は、個体から得られる免疫細胞である。一例として、細胞は、個体から得られるＴリンパ球である。別の例として、細胞は、個体から得られる細胞傷害性細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞など）である。別の例として、細胞は、個体から得られるヘルパーＴ細胞であり得る。別の例として、細胞は、個体から得られる制御Ｔ細胞であり得る。別の例として、細胞は、個体から得られるＮＫ細胞であり得る。別の例として、細胞は、個体から得られるマクロファージであり得る。別の例として、細胞は、個体から得られる樹状細胞であり得る。別の例として、細胞は、個体から得られるＢ細胞であり得る。別の例として、細胞は、個体から得られる末梢血単核球であり得る。
【０３０３】
場合によっては、宿主細胞は、体細胞、例えば、線維芽細胞、造血細胞、ニューロン、膵臓細胞、筋細胞、骨細胞、肝細胞、脾臓細胞、上皮細胞、内皮細胞、心筋細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、骨細胞などである。
【０３０４】
場合によっては、細胞は、例えば、２つの異なる本開示のキメラポリペプチド、３つの異なる本開示のキメラポリペプチド、４つの異なる本開示のキメラポリペプチド、５つの異なる本開示のキメラポリペプチドなどを含むが、これらに限定されない、２つ以上の異なる本開示のキメラポリペプチドを発現するように遺伝子改変されている。
【０３０５】
キメラポリペプチドにおける使用に適合され得る、及び／または本明細書に記載の方法及び回路において調節され得る、特定の細胞ならびにそれらの構成要素及び活性としては、例えば、ＰＣＴ出願第ＵＳ２０１６／０１９１８８号（公開第ＷＯ２０１６／１３８０３４号）に記載のものが挙げられるが、これらに限定されず、この開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０３０６】
回路
本開示のキメラポリペプチドの細胞内ドメインは、細胞外ドメインの特異的結合メンバーへの結合パートナーの結合時に放出されると、本明細書に記載の様々なポリペプチドの発現を誘導し得る。場合によっては、２つ以上のポリペプチドの誘導された発現は、論理開閉型回路を生成し得る。そのような論理開閉型回路としては、例えば、高次ＡＮＤゲート、高次ＯＲゲート、高次ＮＯＴゲート、高次組み合わせゲート（すなわち、ＡＮＤ、ＯＲ、及び／またはＮＯＴゲートのいくつかの組み合わせを使用するゲート）を含む、例えば、高次ゲートを含む、例えば、「ＡＮＤゲート」、「ＯＲゲート」、「ＮＯＴゲート」、及びそれらの組み合わせを挙げることができるが、これらに限定されない。
【０３０７】
本開示の「ＡＮＤ」ゲートは、シグナルの伝播に２つ以上の入力が必要とされる場合を含む。例えば、場合によっては、ＡＮＤゲートは、本開示のキメラポリペプチド及び第２の結合依存分子を通したシグナリングを可能にする。ＡＮＤゲートでは、２つの入力、例えば、回路を通したシグナリングに２つの抗原が必要とされる。
【０３０８】
本開示の「ＯＲ」ゲートは、２つ以上の入力のいずれかがシグナルの伝播を可能にする場合を含む。例えば、場合によっては、ＯＲゲートは、本開示の２つの異なるキメラポリペプチドのいずれかを通したシグナリングを可能にする。ＯＲゲートでは、いずれか１つの入力、例えば、２つの抗原のいずれかが、回路のシグナリング出力を誘導し得る。一実施形態において、ＯＲゲートは、２つの別々の分子または構築物の使用を通して達成され得る。別の実施形態において、ＯＲゲートは、例えば、各々が異なる結合パートナーに結合するが、いずれかがキメラポリペプチドを活性化することができる、２つの異なる特異的結合メンバーを有するタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドを含む、２つの抗原を認識する単一の構築物の使用を通して達成され得る。場合によっては、ＯＲゲートは、例えば、各々が異なる抗原に結合するが、いずれかの抗原がキメラポリペプチドを活性化することができる、２つの異なる抗体特異的結合メンバーを有するタンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドを含む、２つの抗原を認識する単一の構築物の使用を通して達成され得る。
【０３０９】
本開示の「ＮＯＴ」ゲートは、入力がシグナルの伝播を予防することができる場合を含む。例えば、場合によっては、ＮＯＴゲートは、本開示のキメラポリペプチドを通したシグナリングを阻害する。一実施形態において、ＮＯＴゲートは、結合相互作用の阻害を含み得る。例えば、本開示の分離キメラポリペプチドの一部の結合を予防する競合的阻害剤は、回路を通したシグナリングを予防するＮＯＴゲートとして機能し得る。別の実施形態において、ＮＯＴゲートは、回路の要素の機能的阻害を含み得る。例えば、本開示のキメラポリペプチドを通したシグナリング、または回路を通したシグナリングの結果を機能的に予防する阻害剤は、ＮＯＴゲートとして機能し得る。
【０３１０】
場合によっては、免疫抑制物質（例えば、免疫抑制因子）の生成は、本明細書に記載の多入力回路においてＮＯＴゲート機能性を提供し得る。
【０３１１】
多入力ゲートは、様々な異なる方法でＮＯＴゲートを利用して、回路のいくつかの他の構成要素を通したシグナリングを予防するか、またはＮＯＴゲートを活性化するシグナル（例えば、特定の陰性抗原）が存在する場合及び／または場所で細胞応答をオフにし得る。例えば、ＡＮＤ＋ＮＯＴゲートは、第１の抗原の存在下で特定の細胞活性に正の影響を与える本開示のキメラポリペプチドと、第２の抗原の存在下で特定の細胞活性に負の影響を与える本開示のキメラポリペプチドとを含み得る。
【０３１２】
場合によっては、本開示の回路は、細胞内抗原のペプチドを提示するペプチド−ＭＨＣ複合体に特異的な特異的結合メンバーによって提供される細胞内抗原の認識を利用し得る。細胞内抗原認識を利用する回路は、場合によっては、細胞内抗原認識を第２の抗原の認識と組み合わせることができ、第２の抗原もまた、細胞内抗原であっても、細胞外（例えば、表面発現）抗原であってもよい。したがって、場合によっては、回路は、回路が２つの細胞内抗原の認識に依存する「内部−内部」回路であってもよい。場合によっては、回路は、回路が細胞内抗原の第１の認識及び細胞外抗原の第２の認識に依存する「内部−外部」回路であってもよい。場合によっては、回路は、回路が細胞外抗原の第１の認識及び細胞内抗原の第２の認識に依存する「外部−内部」回路であってもよい。場合によっては、回路は、回路が２つの細胞外抗原の認識に依存する「外部−外部」回路であってもよい。そのような回路は、２つの抗原に限定されず、場合によっては、例えば、内部−内部−内部抗原回路、内部−内部−外部抗原回路、内部−外部−内部抗原回路、外部−内部−内部抗原回路、内部−外部−外部抗原回路などを含み得る。
【０３１３】
一実施形態において、「内部−内部」回路は、ペプチド−ＭＨＣとの関連の第１の細胞内抗原への結合時に、例えば、ＴＣＲ、ＣＡＲ、抗体、キメラ二重特異的結合メンバーなどを含む、ペプチド−ＭＨＣとの関連の第２の細胞内抗原を認識する治療薬の発現を誘導する、第１のキメラポリペプチドを含み得る。一実施形態において、「内部−内部」回路は、ＭＨＣとの関連のＷＴ１細胞内抗原への結合時に、例えば、ＴＣＲ、ＣＡＲ、抗体、キメラ二重特異的結合メンバーなどを含む、ペプチド−ＭＨＣとの関連の第２の細胞内抗原を認識する治療薬の発現を誘導する、第１のキメラポリペプチドを含み得る。一実施形態において、「内部−内部」回路は、ＭＨＣとの関連のＮＹ−ＥＳＯ１細胞内抗原への結合時に、例えば、ＴＣＲ、ＣＡＲ、抗体、キメラ二重特異的結合メンバーなどを含む、ペプチド−ＭＨＣとの関連の第２の細胞内抗原を認識する治療薬の発現を誘導する、第１のキメラポリペプチドを含み得る。
【０３１４】
一実施形態において、「内部−外部」回路は、ペプチド−ＭＨＣとの関連の細胞内抗原への結合時に、例えば、ＴＣＲ、ＣＡＲ、抗体、キメラ二重特異的結合メンバーなどを含む、細胞外抗原を認識する治療薬の発現を誘導する、キメラポリペプチドを含み得る。一実施形態において、「内部−外部」回路は、ＭＨＣとの関連のＷＴ１細胞内抗原への結合時に、例えば、ＴＣＲ、ＣＡＲ、抗体、キメラ二重特異的結合メンバーなどを含む、細胞外抗原を認識する治療薬の発現を誘導する、キメラポリペプチドを含み得る。一実施形態において、「内部−外部」回路は、ＭＨＣとの関連のＮＹ−ＥＳＯ１細胞内抗原への結合時に、例えば、ＴＣＲ、ＣＡＲ、抗体、キメラ二重特異的結合メンバーなどを含む、細胞外抗原を認識する治療薬の発現を誘導する、キメラポリペプチドを含み得る。
【０３１５】
本開示の多入力回路及び論理開閉型系は、具体的に記載されるものに限定されず、代替的な構成及び／または記載のものと比較してより高次のゲートを含み得る。例えば、場合によっては、本開示の論理開閉型系は、２入力ゲート、３入力ゲート、４入力ゲート、５入力ゲート、６入力ゲート、７入力ゲート、８入力ゲート、９入力ゲート、１０入力ゲート、またはそれ以上の入力ゲートであり得る。例えば、キメラポリペプチド、ＣＡＲ、ＴＣＲ、キメラ二重特異的結合メンバーなどを含む本明細書に記載の任意の構築物は、例えば、キメラポリペプチド、ＣＡＲ、ＴＣＲ、キメラ二重特異的結合メンバー、第２のキメラポリペプチド、第２のＣＡＲ、第２のＴＣＲ、第２のキメラ二重特異的結合メンバーなどを含む、本明細書に記載の任意の他の構築物と組み合わせて回路において用途を見出し得る。
【０３１６】
本明細書に記載のキメラポリペプチド及び方法と共に使用するために適合され得る、特定の回路及びそれらの構成要素としては、例えば、ＰＣＴ出願第ＵＳ２０１６／０１９１８８号（公開第ＷＯ２０１６／１３８０３４号）に記載のものが挙げられるが、これらに限定されず、この開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０３１７】
キット
本開示は、本明細書に記載の方法を実行するため、及び／または１つ以上のキメラポリペプチド、キメラポリペプチドをコードする核酸、それらの構成要素などを構築するためのキットを提供する。
【０３１８】
場合によっては、主題のキットは、本開示のキメラポリペプチドまたはその１つ以上の部分をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを含む。場合によっては、主題のキットは、本開示のキメラポリペプチドを含む。
【０３１９】
場合によっては、主題のキットは、本開示のキメラポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸で遺伝子改変さているか、またはそれで遺伝子改変される予定である細胞（例えば、宿主細胞または宿主細胞株）を含む。場合によっては、主題のキットは、本開示のキメラポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む組み換え発現ベクターで遺伝子改変さているか、またはそれで遺伝子改変される予定である細胞（例えば、宿主細胞）を含む。キット構成要素は、同じ容器内にあっても、別々の容器内にあってもよい。
【０３２０】
上述のキットのいずれも、１つ以上の追加の試薬を更に含んでもよく、そのような追加の試薬は、希釈緩衝液、再構成溶液、洗浄緩衝液、対照試薬、対照発現ベクター、陰性対照ポリペプチド（例えば、結合時に細胞内ドメインが放出されないように、１つ以上のタンパク質分解切断部位を欠如するキメラポリペプチド）、陽性対照ポリペプチド、キメラポリペプチドのインビトロ産生用の試薬などから選択され得る。
【０３２１】
上述の構成要素に加えて、主題のキットは、キットの構成要素を使用して主題の方法を実施するための説明書を更に含んでもよい。主題の方法を実施するための説明書は一般に、好適な記録媒体上に記録される。例えば、説明書は、紙またはプラスチックなどの基材に印刷されてもよい。したがって、説明書は、添付文書としてキット内、キットまたはその構成要素の容器のラベル内（すなわち、パッケージまたはサブパッケージに関連して）などに存在し得る。他の実施形態において、説明書は、好適なコンピューター可読記憶媒体（例えば、ＣＤ−ＲＯＭ、ディスケット、フラッシュドライブなど）上に存在する電子記憶データファイルとして存在する。更に他の実施形態において、実際の説明書がキット内に存在するのではなく、例えば、インターネットを介して、遠隔ソースから説明書を得るための手段が提供される。この実施形態の一例は、説明書を閲覧することができる、及び／または説明書をダウンロードすることができるウェブアドレスを含むキットである。説明書と同様に、説明書を得るためのこの手段は、好適な基材に記録されていてもよい。
【０３２２】
本開示の非限定的な態様の例
上述した本発明の主題の実施形態を含む態様は、単独で、または１つ以上の他の態様または実施形態との組み合わせで有益であり得る。上述の説明を限定することなく、以下の通り番号付けした本開示の特定の非限定的な態様が提供される。本開示の閲読時に当業者に明らかとなるように、個々に番号付けした態様の各々を、先行または後続の個々に番号付けした態様のうちのいずれかと共に使用しても、組み合わせてもよい。これは、態様の全てのそのような組み合わせに対する支持を提供することが意図され、以下に明示的に提示される態様の組み合わせに限定されない。
【０３２３】
１．キメラポリペプチドであって、
Ｎ末端からＣ末端まで共有結合で、
ａ）ペプチド−主要組織適合複合体（ペプチド−ＭＨＣ）に特異的に結合する特異的結合メンバーを含む、細胞外ドメインと、
ｂ）１つ以上のタンパク質分解切断部位を含む、タンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドと、
ｃ）転写活性化因子を含む、細胞内ドメインとを有し、
前記ペプチド−ＭＨＣへの前記特異的結合メンバーの結合が、前記１つ以上のタンパク質分解切断部位での前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドの切断を誘導し、それにより前記細胞内ドメインを放出する、
キメラポリペプチド。
２．前記特異的結合メンバーは、抗体を含む、態様１に記載のキメラポリペプチド。
３．前記抗体は、ナノボディ、ダイアボディ、トリアボディ、もしくはミニボディ、Ｆ（ａｂ’）2 断片、Ｆａｂ断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）である、態様２に記載のキメラポリペプチド。
４．前記特異的結合メンバーは、細胞内がん抗原ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する、態様１〜３のいずれかに記載のキメラポリペプチド。
５．前記細胞内がん抗原ペプチドは、ＷＴ１ペプチドまたはＮＹ−ＥＳＯペプチドである、態様４に記載のキメラポリペプチド。
【０３２４】
６．前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、そのＮ末端に、１つ以上の上皮成長因子（ＥＧＦ）反復を含む、態様１〜５のいずれかに記載のキメラポリペプチド。
７．前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、そのＮ末端に、２〜１１個のＥＧＦ反復を含む、態様６に記載のキメラポリペプチド。
８．前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、合成リンカーを含む、態様１〜７のいずれかに記載のキメラポリペプチド。
９．前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、１つ以上のＥＧＦ反復と１つ以上のタンパク質分解切断部位との間に合成リンカーを含む、態様８に記載のキメラポリペプチド。
１０．前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、５０アミノ酸長〜１０００アミノ酸長を有する、態様１〜９のいずれかに記載のキメラポリペプチド。
【０３２５】
１１．前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、３００アミノ酸長〜４００アミノ酸長を有する、態様１０に記載のキメラポリペプチド。
１２．前記１つ以上のタンパク質分解切断部位は、Ｓ２タンパク質分解切断部位、Ｓ３タンパク質分解切断部位、またはそれらの組み合わせを含む、態様１〜１１のいずれかに記載のキメラポリペプチド。
１３．前記１つ以上のタンパク質分解切断部位は、Ａｌａ−Ｖａｌジペプチド配列を含むＡＤＡＭ−１７型プロテアーゼ切断部位であるＳ２タンパク質分解切断部位を含む、態様１２に記載のキメラポリペプチド。
１４．前記１つ以上のタンパク質分解切断部位は、Ｇｌｙ−Ｖａｌジペプチド配列を含むガンマ−セクレターゼ（γ−セクレターゼ）切断部位であるＳ３タンパク質分解切断部位を含む、態様１〜１３のいずれかに記載のキメラポリペプチド。
１５．前記１つ以上のタンパク質分解切断部位は、Ｓ１タンパク質分解切断部位を更に含む、態様１〜１４のいずれかに記載のキメラポリペプチド。
【０３２６】
１６．前記Ｓ１タンパク質分解切断部位は、アミノ酸配列Ａｒｇ−Ｘ−（Ａｒｇ／Ｌｙｓ）−Ａｒｇ（配列番号１３０）を含むフューリン様プロテアーゼ切断部位である（式中、Ｘは任意のアミノ酸）、態様１５に記載のキメラポリペプチド。
１７．前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、Ｓ１タンパク質分解切断部位を欠如する、態様１〜１６のいずれかに記載のキメラポリペプチド。
１８．前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、図３１Ａ〜３２Ｂに提示される配列と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有する、態様１〜１７のいずれかに記載のキメラポリペプチド。
１９．前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドは、図３１Ａに提示される配列または図３１Ｂに提示される配列と少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有する、態様１８に記載のキメラポリペプチド。
２０．態様１〜１９のいずれかに記載のキメラポリペプチドをコードする、核酸。
【０３２７】
２１．目的のポリペプチド（ＰＯＩ）をコードする核酸配列に作動可能に連結した転写活性化因子に応答性の転写制御要素を更に含む、態様２０に記載の核酸。
２２．前記ＰＯＩは、レポータータンパク質、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、抗体、キメラ二重特異的結合メンバー、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、及び自然免疫応答誘導因子からなる群から選択される異種ポリペプチドである、態様２１に記載の核酸。
２３．態様２０〜２２のいずれかに記載の核酸を含む、組み換え発現ベクター。
２４．細胞内で異種ポリペプチドの発現を誘導する方法であって、
細胞をペプチド−主要組織適合複合体（ペプチド−ＭＨＣ）と接触させることを含み、
前記細胞が、態様１〜１９のいずれかに記載のキメラポリペプチドを発現し、前記キメラポリペプチドの前記転写活性化因子に応答性の転写制御要素に作動可能に連結した前記異種ポリペプチドをコードする配列を含み、それにより前記キメラポリペプチドの前記細胞内ドメインを放出し、前記異種ポリペプチドの発現を誘導する、
方法。
２５．前記異種ポリペプチドは、レポータータンパク質、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、抗体、キメラ二重特異的結合メンバー、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、及び自然免疫応答誘導因子である、態様２４に記載の方法。
【０３２８】
２６．宿主細胞であって、
ａ）第１のペプチド−主要組織適合複合体（ペプチド−ＭＨＣ）に特異的に結合する態様２０〜２２のいずれかに記載のキメラポリペプチドをコードする核酸と、
ｂ）目的のポリペプチド（ＰＯＩ）をコードする核酸に作動可能に連結した前記キメラポリペプチドの前記転写活性化因子に応答性の転写制御要素とを含む、宿主細胞。
２７．遺伝子改変されており、前記核酸及び前記転写制御要素が、前記宿主細胞のゲノム内に存在する、態様２６に記載の宿主細胞。
２８．前記核酸及び前記転写制御要素が、前記宿主細胞内で染色体外に存在する、態様２６に記載の宿主細胞。
２９．前記ＰＯＩは、異種ポリペプチドである、態様２６〜２８のいずれかに記載の宿主細胞。
３０．前記異種ポリペプチドが、レポータータンパク質、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、抗体、キメラ二重特異的結合メンバー、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、及び自然免疫応答誘導因子からなる群から選択される、態様２９に記載の宿主細胞。
【０３２９】
３１．前記異種ポリペプチドは、第２のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合するＣＡＲである、態様３０に記載の宿主細胞。
３２．前記キメラポリペプチドの前記特異的結合メンバーが、第１の細胞内がん抗原ペプチドを含む第１のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合し、前記ＣＡＲが、第２の細胞内がん抗原ペプチドを含む第２のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する、態様３１に記載の宿主細胞。
３３．前記第１の細胞内がん抗原ペプチドは、ＷＴ１ペプチドであり、前記第２の細胞内がん抗原ペプチドは、ＮＹ−ＥＳＯペプチドである、態様３２に記載の宿主細胞。
３４．前記第１の細胞内がん抗原ペプチドは、ＮＹ−ＥＳＯペプチドであり、前記第２の細胞内がん抗原ペプチドは、ＷＴ１ペプチドである、態様３２に記載の宿主細胞。
３５．前記異種ポリペプチドは、第２のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する操作されたＴＣＲである、態様３０に記載の宿主細胞。
【０３３０】
３６．前記キメラポリペプチドの特異的結合メンバーが、第１の細胞内がん抗原ペプチドを含む第１のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合し、前記操作されたＴＣＲが、第２の細胞内がん抗原ペプチドを含む第２のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する、態様３５に記載の宿主細胞。
３７．前記第１の細胞内がん抗原ペプチドは、ＷＴ１ペプチドであり、前記第２の細胞内がん抗原ペプチドは、ＮＹ−ＥＳＯペプチドである、態様３６に記載の宿主細胞。
３８．前記第１の細胞内がん抗原ペプチドは、ＮＹ−ＥＳＯペプチドであり、前記第２の細胞内がん抗原ペプチドは、ＷＴ１ペプチドである、態様３６に記載の宿主細胞。
３９．宿主細胞であって、
ａ）キメラポリペプチドをコードする核酸であって、
前記キメラポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで共有結合で、
ｉ）がん細胞の表面上に存在する標的分子に特異的に結合する特異的結合メンバーを含む、細胞外ドメインと、
ｉｉ）１つ以上のタンパク質分解切断部位を含む、タンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドと、
ｉｉｉ）転写活性化因子を含む、細胞内ドメインとを有し、前記キメラポリペプチドをコードする核酸、及び、
ｂ）前記転写活性化因子に応答性の転写制御要素に作動可能に連結したキメラ二重特異的結合メンバーをコードする核酸を含み、
前記標的分子への前記特異的結合メンバーの結合が、前記１つ以上のタンパク質分解切断部位での前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドの切断を誘導し、それにより前記細胞内ドメインを放出し、前記転写制御要素を活性化し、前記キメラ二重特異的結合メンバーを発現させる、
宿主細胞。
４０．前記キメラ二重特異的結合メンバーは、がん抗原に特異的な結合ドメインと、免疫細胞の表面上に発現されるタンパク質に特異的な結合ドメインとを含む、態様３９に記載の宿主細胞。
【０３３１】
４１．前記キメラ二重特異的結合メンバーは、少なくとも１つの抗体由来抗原−結合ドメインを含む、態様３９または４０に記載の宿主細胞。
４２．前記キメラ二重特異的結合メンバーは、二重特異性抗体またはその断片である、態様４１に記載の宿主細胞。
４３．前記キメラ二重特異的結合メンバーは、リガンド−受容体結合対の少なくとも１つの受容体またはリガンド結合ドメインを含む、態様３９〜４１のいずれかに記載の宿主細胞。
４４．前記キメラ二重特異的結合メンバーは、少なくとも１つの抗体由来抗原−結合ドメインと、リガンド−受容体結合対の少なくとも１つの受容体またはリガンド結合ドメインとを含む、態様３９〜４３のいずれかに記載の宿主細胞。
４５．免疫細胞の表面上に発現される前記タンパク質は、ＣＤ３である、態様４０〜４４のいずれかに記載の宿主細胞。
【０３３２】
４６．免疫細胞の表面上に発現される前記タンパク質は、ナチュラルキラーグループ２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）受容体である、態様４０〜４４のいずれかに記載の宿主細胞。
４７．前記標的分子は、がん抗原である、態様３９〜４６のいずれかに記載の宿主細胞。
４８．前記標的分子は、組織特異的分子である、態様３９〜４６のいずれかに記載の宿主細胞。
４９．前記標的分子は、器官特異的分子である、態様３９〜４６のいずれかに記載の宿主細胞。
５０．前記標的分子は、細胞型特異的分子である、態様３９〜４６のいずれかに記載の宿主細胞。
【０３３３】
５１．対象の新生物を治療する方法であって、
前記対象に、態様３９〜５０のいずれかに記載の有効量の宿主細胞を投与することを含み、
前記新生物が、前記標的分子及びがん抗原を発現する、
方法。
５２．宿主細胞であって、
ａ）キメラポリペプチドをコードする核酸であって、前記キメラポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで共有結合で、
ｉ）がん細胞の表面上に存在する標的分子に特異的に結合する特異的結合メンバーを含む、細胞外ドメインと、
ｉｉ）１つ以上のタンパク質分解切断部位を含む、タンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドと、
ｉｉｉ）転写活性化因子を含む、細胞内ドメインとを有し、前記キメラポリペプチドをコードする核酸、及び、
ｂ）前記転写活性化因子に応答性の転写制御要素に作動可能に連結した抗Ｆｃキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸を含み、
前記標的分子への前記特異的結合メンバーの結合が、前記１つ以上のタンパク質分解切断部位での前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドの切断を誘導し、それにより前記細胞内ドメインを放出し、前記転写制御要素を活性化し、前記抗Ｆｃ  ＣＡＲを発現させる、
宿主細胞。
５３．前記標的分子は、がん抗原である、態様５２に記載の宿主細胞。
５４．前記標的分子は、組織特異的分子である、態様５２に記載の宿主細胞。
５５．前記標的分子は、器官特異的分子である、態様５２に記載の宿主細胞。
【０３３４】
５６．前記標的分子は、細胞型特異的分子である、態様５２に記載の宿主細胞。
５７．前記宿主細胞は、がん細胞の表面上に存在するがん抗原に特異的な抗体をコードし、かつ前記抗Ｆｃ  ＣＡＲによって結合されるＦｃ領域を含む核酸を更に含む、態様５２〜５６のいずれかに記載の宿主細胞。
５８．前記抗体をコードする前記核酸が、前記転写制御要素に作動可能に連結される、態様５７に記載の宿主細胞。
５９．対象の新生物を治療する方法であって、
前記対象に、態様５２〜５８のいずれかに記載の有効量の宿主細胞を投与することを含み、
前記新生物が、前記標的分子を発現する、
方法。
６０．前記対象に、がん細胞の表面上に存在するがん抗原に特異的であり、かつ前記抗Ｆｃ  ＣＡＲによって結合されるＦｃ領域を含む抗体を投与することを更に含む、態様５９に記載の方法。
【０３３５】
６１．宿主細胞であって、
ａ）キメラポリペプチドをコードする核酸であって、前記キメラポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで共有結合で、
ｉ）がん細胞の表面上に存在する標的分子に特異的に結合する特異的結合メンバーを含む、細胞外ドメインと、
ｉｉ）１つ以上のタンパク質分解切断部位を含む、タンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドと、
ｉｉｉ）転写活性化因子を含む、細胞内ドメインとを有し、前記キメラポリペプチドをコードする核酸、及び、
ｂ）前記転写活性化因子に応答性の転写制御要素に作動可能に連結した自然免疫応答誘導因子をコードする核酸を含み、
前記標的分子への前記特異的結合メンバーの結合が、前記１つ以上のタンパク質分解切断部位での前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドの切断を誘導し、それにより前記細胞内ドメインを放出し、前記転写制御要素を活性化し、前記自然免疫応答誘導因子を発現させる、
宿主細胞。
６２．前記標的分子は、組織特異的分子である、態様６１に記載の宿主細胞。
６３．前記標的分子は、器官特異的分子である、態様６１に記載の宿主細胞。
６４．前記標的分子は、細胞型特異的分子である、態様６１に記載の宿主細胞。
６５．前記標的分子は、がん抗原である、態様６１に記載の宿主細胞。
【０３３６】
６６．前記自然免疫応答誘導因子は、細菌タンパク質またはその断片である、態様６１〜６５のいずれかに記載の宿主細胞。
６７．前記自然免疫応答誘導因子は、ウイルスタンパク質またはその断片である、態様６１〜６５のいずれかに記載の宿主細胞。
６８．前記自然免疫応答誘導因子は、真菌タンパク質またはその断片である、態様６１〜６５のいずれかに記載の宿主細胞。
６９．前記自然免疫応答誘導因子は、哺乳動物寄生虫によって発現されるタンパク質またはその断片である、態様６１〜６８のいずれかに記載の宿主細胞。
７０．前記哺乳動物寄生虫は、ヒト寄生虫である、態様６９に記載の宿主細胞。
【０３３７】
７１．対象の領域内で局所自然免疫応答を誘導する方法であって、
前記対象に、態様６１〜７０のいずれかに記載の有効量の宿主細胞を投与することを含み、
前記領域が、前記標的分子を発現する、
方法。
７２．前記対象の前記領域は、新生物を含む、態様７１に記載の方法。
７３．宿主細胞であって、
ａ）キメラポリペプチドをコードする核酸であって、前記キメラポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端まで共有結合で、
ｉ）がん細胞の表面上に存在する標的分子に特異的に結合する特異的結合メンバーを含む、細胞外ドメインと、
ｉｉ）１つ以上のタンパク質分解切断部位を含む、タンパク質分解により切断可能なＮｏｔｃｈレセプターポリペプチドと、
ｉｉｉ）転写活性化因子を含む、細胞内ドメインとを有し、前記キメラポリペプチドをコードする核酸、及び、
ｂ）前記転写活性化因子に応答性の転写制御要素に作動可能に連結した免疫抑制因子をコードする核酸を含み、
前記標的分子への前記特異的結合メンバーの結合が、前記１つ以上のタンパク質分解切断部位での前記Ｎｏｔｃｈレセプターポリペプチドの切断を誘導し、それにより前記細胞内ドメインを放出し、前記転写制御要素を活性化し、前記免疫抑制因子を発現させる、
宿主細胞。
７４．前記標的分子は、組織特異的分子である、態様７３に記載の宿主細胞。
７５．前記標的分子は、器官特異的分子である、態様７３に記載の宿主細胞。
【０３３８】
７６．前記標的分子は、細胞型特異的分子である、態様７３に記載の宿主細胞。
７７．前記標的分子は、自己抗原である、態様７３に記載の宿主細胞。
７８．前記免疫抑制因は、免疫抑制サイトカインである、態様７３〜７７のいずれかに記載の宿主細胞。
７９．前記免疫抑制サイトカインは、ＩＬ−１０である、態様７８に記載の宿主細胞。
８０．前記免疫抑制因子は、細胞間シグナリング免疫抑制リガンドである、態様７３〜７７のいずれかに記載の宿主細胞。
【０３３９】
８１．前記細胞間シグナリング免疫抑制リガンドは、ＰＤ−Ｌ１である、態様８０に記載の宿主細胞。
８２．対象における免疫応答を抑制する方法であって、
前記対象に、態様７３〜８１のいずれかに記載の有効量の宿主細胞を投与することを含み、
前記対象が、前記標的分子を発現する、
方法。
８３．前記対象は、自己免疫疾患を有する、態様８２に記載の方法。
８４．不均一腫瘍を殺傷する方法であって、
殺傷抗原を発現する第１の細胞ならびに前記殺傷抗原及び感作抗原を発現する第２の細胞を含む不均一腫瘍を、操作された免疫細胞と接触させることを含み、
前記操作された免疫細胞は、
前記感作抗原に特異的に結合する、タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドと、
前記殺傷抗原に特異的に結合する治療ポリペプチドをコードする核酸配列と、
前記タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドに応答性である核酸に作動可能に連結した転写制御要素とを含み、
前記感作抗原への前記タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドの結合が、前記転写制御要素を活性化して、前記殺傷抗原への結合時に前記不均一腫瘍の前記第１及び第２の細胞を殺傷する前記治療ポリペプチドの発現を誘導する、
方法。
８５．前記治療ポリペプチドは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、態様８４に記載の方法。
【０３４０】
８６．前記治療ポリペプチドは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）である、態様８４に記載の方法。
８７．前記治療ポリペプチドは、治療抗体である、態様８４に記載の方法。
８８．前記治療ポリペプチドは、キメラ二重特異的結合メンバーである、態様８４に記載の方法。
８９．前記感作抗原または前記殺傷抗原のうちの少なくとも１つは、ＭＨＣとの関連で提示される細胞内抗原である、態様８４〜８８のいずれかに記載の方法。
９０．前記感作抗原及び前記殺傷抗原の両方は、ＭＨＣとの関連で提示される細胞内抗原である、態様８４〜８９のいずれかに記載の方法。
【実施例】
【０３４１】
以下の実施例は、本発明の作製及び使用方法についての完全な開示及び説明を当業者に提供するように提示され、本発明者らが自身の発明と見なすものの範囲を限定するようには意図されておらず、それらは、以下の実験が全てまたは唯一の実行される実験であることを表すようにも意図されない。使用される数値（例えば、量、温度など）に関する正確さを確実にする努力がなされているが、いくつかの実験誤差及び偏差が計上されるはずである。別途示されない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏温度であり、圧力は大気圧または大気圧付近である。標準的な略語が使用されてもよく、例えば、ｂｐは塩基対（複数可）、ｋｂはキロベース（複数可）、ｐｌはピコリットル（複数可）、ｓまたはｓｅｃは秒（複数可）、ｍｉｎは分（複数可）、ｈまたはｈｒは時間（複数可）、ａａはアミノ酸（複数可）、ｋｂはキロベース（複数可）、ｂｐは塩基対（複数可）、ｎｔはヌクレオチド（複数可）、ｉ．ｍ．は筋肉内（に）、ｉ．ｐ．は腹腔内（に）、ｓ．ｃ．は皮下（に）などである。
【０３４２】
実施例１：ペプチド−主要組織適合複合体（ペプチド−ＭＨＣ）誘導シグナリング。
切断可能なキメラＮｏｔｃｈポリペプチドによるペプチド−ＭＨＣの認識を通して、細胞シグナリングに影響を与える能力を調査した。図１に示されるように、「送信細胞」の細胞内抗原のペプチド−ＭＨＣに特異的に結合する特異的結合メンバーを含む、細胞外ドメインに連結した切断可能なＮｏｔｃｈポリペプチドを含むキメラポリペプチドを設計した。「受信細胞」によって発現されるキメラポリペプチドの細胞外ドメインは、「送信細胞」のペプチド−ＭＨＣに結合する。そのような結合時に、切断可能なＮｏｔｃｈポリペプチドは切断されて、例えば、解放された細胞内ドメインに応答性のプロモーターに作動可能に連結した導入遺伝子（例えば、図１の「Ｘ」）の発現を含む、細胞内プロセスに影響を与え得る細胞内部分を放出する。
【０３４３】
代表例として、ウィルムス腫瘍タンパク質１（ＷＴ１）ペプチド−ＭＨＣに結合する細胞外ドメインと、解放時に青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ）に作動可能に連結した上流活性化配列（ＵＡＳ）に結合して、この系をＣＤ８受信細胞内に操作導入した場合に活性化レポーターとして機能するＧＡＬ４転写活性化因子細胞内ドメインとを有する、キメラポリペプチドを設計した。図２は、ペプチド−ＭＨＣ陰性（ＷＴ１−）または陽性（ＷＴ１＋）Ｔ２送信細胞のいずれかに接触した場合にＢＦＰレポーターを発現する受信細胞の相対レベルを実証する。図３は、標的ＷＴ１細胞内抗原発現の有無に関わらずＨＬＡ−Ａ２を発現するＴ２細胞の存在下でアッセイした受信ＣＤ８  Ｔ細胞応答の定量化を提供する。図２及び図３に見ることができるように、Ｔ細胞応答は、提示される細胞内抗原の存在に高度に特異的であり、かつそれに依存している。
【０３４４】
図４に実証されるように、受信細胞応答はまた、提示される細胞内抗原の量にも依存している。異なる量のＷＴ１ペプチド−ＭＨＣ（１０μＭ、１μＭ、及び１００ｎＭ）を発現するようにＴ２送信細胞を操作し、各集団について受信細胞応答をアッセイした。レポーター発現にはＷＴ１ペプチド−ＭＨＣ発現レベルとの相関が見られ、これは用量に依存した活性化を示した。
【０３４５】
加えて、Ｔ２細胞を発現する無関係の細胞内抗原ペプチド−ＭＨＣ（ＮＹ−ＥＳＯ１ペプチド）の存在下でアッセイした場合、レポーター活性化は陰性対照（ＤＭＳＯ）に類似しており、これは活性化が抗原特異的であることを更に示した。標的細胞内抗原ＷＴ１ペプチド−ＭＨＣまたは無関係の細胞内抗原ＮＹ−ＥＳＯ１ペプチド−ＭＨＣのいずれかの３つの異なる濃度にわたって、受信細胞内ではＷＴ１に応答して抗原濃度に依存したレポーター活性化が見られたが、ＣＤ８＋Ｔ細胞内及びＣＤ４＋Ｔ細胞内の両方ではＮＹ−ＥＳＯ１に応答してそれは見られなかった（図５）。
【０３４６】
実施例２：二重細胞内抗原に依存したＴ細胞活性化。
操作されたＴ細胞活性化が標的細胞上の２つの細胞内抗原の提示に依存するように、二重細胞内抗原ＡＮＤゲートを設計した。具体的には、図６に提示される代表例として、系を設計し、Ｔ細胞内に操作導入し、ここで、抗ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１  ＴＣＲの発現が抗ＨＬＡ−Ａ２／ＷＴ１  ｓｃＦｖ  ｓｙｎＮｏｔｃｈの解放された細胞内ドメインによって誘導される。ＮＹ−ＥＳＯ１のみを発現するＴ２標的細胞を提示した場合、抗ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１  ＴＣＲの発現は誘導されず、Ｔ細胞活性化は発生しない。しかしながら、ＮＹ−ＥＳＯ１及びＷＴ１の両方を発現するＴ２標的細胞を提示した場合、抗ＨＬＡ−Ａ２／ＷＴ１  ｓｃＦＶ  ｓｙｎＮｏｔｃｈへのＷＴ１ペプチド−ＭＨＣの結合は、Ｎｏｔｃｈポリペプチドの切断を誘導し、抗ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１  ＴＣＲの発現を推進するＵＡＳに結合するＧＡＬ４転写活性化因子を放出する。標的細胞上でのＮＹ−ＥＳＯ１ペプチド−ＭＨＣへの発現される抗ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１  ＴＣＲの結合は、例えば、ＣＤ６９及び／または細胞傷害性アッセイを使用して検出されるＴ細胞の活性化を引き起こす。
【０３４７】
そのような系におけるＴ細胞活性化を、いずれかの抗原または両方の抗原を発現するＴ２標的細胞を使用して試験した。図７に見ることができるように、操作されたＴ細胞を二重抗原（ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１及びＨＬＡ−Ａ２／ＷＴ１）Ｔ２標的細胞に接触させた場合には、ＣＤ６９発現を使用して測定される頑強な活性化が見られた。しかしながら、操作されたＴ細胞を２つの細胞内抗原のうちの一方のみ（ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１またはＨＬＡ−Ａ２／ＷＴ１）を発現するＴ２細胞に接触させた場合には、陰性対照（ＤＭＳＯ）と同様に、活性化の不在が見られた。操作されたＴ細胞にＴ２標的細胞を発現する二重抗原または単一抗原のいずれかを提示した場合には、Ｔ２細胞殺傷に対する対応する結果が見られた（図８）。これらの結果は、両方の標的細胞内抗原を発現する標的細胞のみに応答して操作されたＴ細胞を活性化する上での、二重細胞内抗原ＡＮＤゲートの機能性及びその特異性を実証する。
【０３４８】
このアプローチの万能性を更に実証するために、追加の二重抗原ＡＮＤゲートを設計し、表面標的抗原及び細胞内標的抗原の両方を発現する細胞の標的化を試験した。具体的には、図９及び図１０に提示される代表的な実施例として、系を設計し、Ｔ細胞内に操作導入し、ここで、抗ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１  ＴＣＲの発現が抗表面化発現ＧＦＰ  ｓｙｎＮｏｔｃｈの解放された細胞内ドメインによって誘導される。ＮＹ−ＥＳＯ１のみを発現するＴ２標的細胞を提示した場合、抗ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１  ＴＣＲの発現は誘導されず、Ｔ細胞活性化は発生しない。しかしながら、ＮＹ−ＥＳＯ１及びＧＦＰの両方を発現するＴ２標的細胞を提示した場合、抗ＧＦＰ  ｓｙｎＮｏｔｃｈへの表面発現ＧＦＰの結合は、Ｎｏｔｃｈポリペプチドの切断を誘導し、抗ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１  ＴＣＲの発現を推進するＵＡＳに結合するＧＡＬ４転写活性化因子を放出する。標的細胞上でのＮＹ−ＥＳＯ１ペプチド−ＭＨＣへの発現される抗ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１  ＴＣＲの結合は、Ｔ細胞の活性化を引き起こす。
【０３４９】
ＣＤ６９発現（図１１）、Ｔ細胞増殖（図１２）、Ｔ２標的細胞殺傷（図１３）、及びＡ３７５標的細胞殺傷（図１４）を使用して、二重抗原回路を発現する、操作されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化をアッセイした。各アッセイにおいて、Ｔ細胞活性化及び下流効果（標的細胞殺傷など）は、標的細胞による両方の標的抗原の発現に依存しており、これは、（例えば、図１５に一般に図示される）細胞内抗原の組み合わせを使用するか、または表面発現抗原の応答性構成要素を１つ以上の細胞内抗原認識要素と組み合わせるかに関わらず、二重抗原ｓｙｎＮｏｔｃｈ  ＡＮＤゲートの頑強な特異性を実証する。
【０３５０】
このアプローチの万能性を更に実証するために、追加の二重抗原ＡＮＤゲートを設計し、表面標的抗原、及びＮＹ−ＥＳＯ１以外の細胞内標的抗原の両方を発現する細胞の標的化を試験した。具体的には、図３９に模式的に示されるように、系を設計し、Ｔ細胞内に操作導入し、ここで、抗ＨＬＡ−Ａ２／Ｍａｒｔ１の発現が抗表面化発現ＧＦＰ  ｓｙｎＮｏｔｃｈの解放された細胞内ドメインによって誘導される。Ｍａｒｔ１のみを発現するＴ２標的細胞を提示した場合、抗ＨＬＡ−Ａ２／Ｍａｒｔ１  ＴＣＲの発現は誘導されず、Ｔ細胞活性化は発生しない。しかしながら、Ｍａｒｔ１及びＧＦＰの両方を発現するＴ２標的細胞を提示した場合、抗ＧＦＰ  ｓｙｎＮｏｔｃｈへの表面発現ＧＦＰの結合は、Ｎｏｔｃｈポリペプチドの切断を誘導し、抗ＨＬＡ−Ａ２／Ｍａｒｔ１  ＴＣＲの発現を推進するＵＡＳに結合するＧＡＬ４転写活性化因子を放出する。標的細胞上でのＭａｒｔ１ペプチド−ＭＨＣへの発現される抗ＨＬＡ−Ａ２／Ｍａｒｔ１  ＴＣＲの結合は、Ｔ細胞の活性化を引き起こす。ジャーカットＴ細胞株を、この二重抗原回路を発現するように操作し、ＣＤ６９発現を使用して、Ｔ細胞の活性化をアッセイした。図４０に提示されるように、このアッセイの結果は、ＣＤ６９上方制御によって測定されるＴ細胞活性化が、標的細胞による両方の標的抗原の発現に依存していることを示し、これは、ｐＭＨＣ抗原を標的化する二重抗原ｓｙｎＮｏｔｃｈ  ＡＮＤゲートの頑強な特異性を更に実証する。
【０３５１】
実施例３：キメラ二重特異的結合メンバーの特異的な局所送達。
代表的な２構成要素系を使用して、キメラ二重特異的結合メンバーの特異的な局所発現を誘導するためのｓｙｎＮｏｔｃｈの使用をアッセイした。具体的には、図１６に示されるように、抗ＧＦＰ  ｓｙｎＮｏｔｃｈを使用して、操作されたＴ細胞内で抗ＣＤ１９／抗ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞エンゲイジャー（ＢｉＴＥ）（ブリナツモマブ）の発現を推進した。誘導因子標的細胞の表面上に発現されるＧＦＰへの結合時、抗ＧＦＰ  ｓｙｎＮｏｔｃｈは、抗ＣＤ１９／抗ＣＤ３  ＢｉＴＥをコードする配列に作動可能に連結したＵＡＳに結合するＧＡＬ４転写活性化因子を放出する。ＢｉＴＥの発現は、標的細胞で発現されるＣＤ１９及びＴ細胞で発現されるＣＤ３の二重結合、ならびにＴ細胞活性化をもたらす。
【０３５２】
ＣＤ６９発現を使用して、ＣＤ４＋Ｔ細胞活性化をアッセイした。抗ＧＦＰ−ＧＡＬ４  ｓｙｎＮｏｔｃｈを発現し、かつＧＡＬ４応答性ＵＡＳに作動可能に連結した抗ＣＤ１９／抗ＣＤ３  ＢｉＴＥをコードする配列を有するＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＣＤ１９のみ、ＧＦＰのみ、またはＣＤ１９及びＧＦＰの両方を発現するインデューサー細胞と接触させた。ＣＤ１９及びＧＦＰの両方を発現するインデューサー細胞を使用した場合にのみ、有意なＴ細胞活性化が見られた（図１７）。これらのインビトロ結果は、ｓｙｎＮｏｔｃｈ開閉型回路を使用して、キメラ二重特異的結合メンバーの負荷量を効果的かつ特異的に発現させ、これを使用して細胞応答（例えば、Ｔ細胞活性化など）を制御することができることを実証する。
【０３５３】
代表例として、腫瘍局所化α−ＣＤ１９／α−ＣＤ３  ＢｉＴＥ産生のモデルを使用して、キメラ二重特異的結合メンバーのｓｙｎＮｏｔｃｈ開閉型発現の使用をインビボで更に調査した（図１８）。マウスの左側腹部に感作抗原陰性（ＧＦＰ−）標的抗原陽性（ＣＤ１９＋）腫瘍細胞を、右側腹部に二重陽性（ＧＦＰ＋／ＣＤ１９＋）腫瘍細胞を皮下注射した。腫瘍が確立した後、α−ＣＤ１９／α−ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞エンゲイジャー（ＢｉＴＥ）発現を制御するα−ＧＦＰ  ｓｙｎＮｏｔｃｈ  Ｔ細胞（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋）をマウスに注射した。示した時点で腫瘍を収集して、カリパス測定によって腫瘍負荷を分析した。
【０３５４】
記載のモデルにおいて、α−ＣＤ１９／α−ＣＤ３  ＢｉＴＥの腫瘍局所化産生は、感作抗原に依存した様式で腫瘍負荷を効果的に低減することが見られた（図１９）。図１８に関して上記のように、左側腹部腫瘍及び右側腹部腫瘍の腫瘍体積を測定した。治療経過にわたって、感作抗原（ＧＦＰ）及びＢｉＴＥ標的化抗原（ＣＤ１９）の両方を発現する腫瘍（ＧＦＰ＋／ＣＤ１９＋腫瘍）では腫瘍体積は低減した。比較して、ＢｉＴＥ標的化抗原は発現するが感作抗原は発現しない右側腹部腫瘍（ＣＤ１９＋腫瘍）では腫瘍体積は低減しなかった。これらの結果は、ＢｉＴＥ負荷量の空間特異的な標的化を推進して、インビボで腫瘍体積を効果的に低減するための、２抗原Ｔ細胞ＡＮＤゲートの効果的な使用を実証する。α−ＧＦＰ  ｓｙｎＮｏｔｃｈは、組織特異的、器官特異的、または細胞型特異的Ｔ細胞感作のために、内在発現または異種発現される任意の他の抗原を効果的に標的化する任意の他のＳｙｎＮｏｔｃｈで置き換えることができる。
【０３５５】
実施例４：自然免疫応答の特異的誘導。
代表的なモデル系を使用して、自然免疫応答を特異的及び／または局所的に誘導するためのｓｙｎＮｏｔｃｈの使用を調査した。具体的には、図２０に示されるように、表面発現ＧＦＰに特異的なｓｙｎＮｏｔｃｈを使用して、操作されたＴ細胞内でフラゲリン（ＦｌｉＣ）をコードする核酸配列に作動可能に連結したレポーターの発現を推進する系を考案した。Ｔ細胞からのフラゲリン負荷量の分泌は、インデューサー細胞の表面上に存在するｓｙｎＮｏｔｃｈ結合ＧＦＰに依存している。自然免疫応答誘導を検出及び測定するために、分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポーターを使用し、ここで、Ｔｏｌｌ様受容体５（ＴＬＲ５）レポーター細胞の表面上でのＴＬＲ５へのフラゲリンの結合はＳＥＡＰの発現を推進し、これは自然免疫応答活性の定量化を可能にする。
【０３５６】
上記の系で操作されたＴ細胞を、ＴＬＲ５レポーター細胞の存在下で培養した。表面発現ＧＦＰ＋インデューサー細胞を使用して、ＧＦＰ刺激の有無に関わらず６５０ｎｍでの吸光度によって、ＴＬＲレポーター細胞ＳＥＡＰ活性を測定した。図２１に提示されるこのアッセイの結果は、自然免疫応答がＧＦＰに依存した様式で特異的に活性化されることを示した。この実施例は、抗原に依存したｓｙｎＮｏｔｃｈポリペプチドを使用して自然免疫応答誘導ポリペプチドの発現を推進することにより、ｓｙｎＮｏｔｃｈを使用して、自然免疫応答を特異的及び／または局所的に誘導することができることを実証する。
【０３５７】
実施例５：不均一腫瘍の治療。
図２２に示される多構成要素戦略を開発して、不均一腫瘍を認識するようにＴ細胞をプログラミングした。（１）腫瘍に特異的であるが全ての腫瘍細胞内には存在しない腫瘍特異的抗原を使用して、不均一腫瘍内に存在する感作細胞を認識するように、（２）全ての腫瘍細胞内に存在するが腫瘍特異的ではない腫瘍関連抗原を使用して、不均一腫瘍付近の細胞を殺傷するように、Ｔ細胞をプログラミングした。
【０３５８】
代表的なモデル系を使用して、不均一腫瘍を治療するためのｓｙｎＮｏｔｃｈ系の使用を調査した。具体的には、図２３に示されるように、ＧＦＰ感作抗原に特異的な「感作」ｓｙｎＮｏｔｃｈレセプター及びＣＤ１９に特異的な「殺傷」ＣＡＲを産生するようにＴ細胞を操作した。ｓｙｎＮｏｔｃｈ感作受容体がＧＦＰ感作抗原に結合する場合、ｓｙｎＮｏｔｃｈの解放された細胞内ドメインがＣＤ１９特異的殺傷ＣＡＲの発現を推進し、ＣＤ１９の存在時に細胞殺傷をもたらすように、系を設計した。
【０３５９】
図２４に示されるように、ＣＤ１９は発現するがＧＦＰ感作抗原は発現しない標的細胞の集団を、操作されたＴ細胞で治療した場合、標的細胞の殺傷は観察されなかった。二重発現するＣＤ１９＋／ＧＦＰ＋標的細胞及びＣＤ１９＋／ＧＦＰ−標的細胞を含む細胞の不均一集団を、操作されたＴ細胞で治療した場合、ＣＤ１９＋／ＧＦＰ＋標的細胞及びＣＤ１９＋／ＧＦＰ−標的細胞の両方の殺傷が観察された。この結果は、不均一集団におけるＧＦＰ抗原の存在が一般に操作されたＴ細胞をＣＤ１９特異的殺傷に感作すること、及び操作されたＴ細胞による細胞殺傷が感作抗原を発現する細胞に限定されないことを実証した。
【０３６０】
様々な比率のＧＦＰ／ＣＤ１９＋標的細胞対ＣＤ１９＋のみ標的細胞を有する集団を使用して、不均一腫瘍細胞殺傷のこの効果を更に定量化した。抗ＧＦＰ  ｓｙｎＮｏｔｃｈ→抗ＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞または非形質導入陰性対照Ｔ細胞のいずれかで不均一集団を治療し、２４時間及び７２時間に時点を取得した（図２５）。非形質導入細胞で治療した場合、いずれの集団においても細胞殺傷は観察されなかった。しかしながら、抗ＧＦＰ  ｓｙｎＮｏｔｃｈ→抗ＣＤ１９  ＣＡＲ  Ｔ細胞で治療した後、全ての集団において２４時間の実質的な細胞殺傷が観察され、７２時間後までに全ての標的細胞が除去された。
【０３６１】
これらの結果は、腫瘍不均一性の程度または感作抗原の相対的存在量／欠乏に関わらず、そのような感作→殺傷ｓｙｎＮｏｔｃｈ開閉型系を使用して、不均一腫瘍の特異的かつ効果的な腫瘍細胞殺傷が達成されることを実証する。換言すると、不均一腫瘍が含有する感作抗原発現細胞が高パーセンテージであるか低パーセンテージであるかに関わらず、記載の系は効果的かつ特異的である。
【０３６２】
１：３の感作対標的の不均一混合物中の、感作集団及び非感作（「標的」）集団に対する系の殺傷効果がより高い時間分解能を、図２６に提示する。上記のように、治療の７２時間後までに両集団の全ての細胞が除去された。
【０３６３】
図２７に見ることができるように、感作細胞対非感作標的細胞の比率が１：１９ほど低い場合でさえ、ＣＤ１９＋非感作抗原標的細胞は、図２６に見られる時間動力学に類似した時間動力学で効果的に殺傷される。７２時間後までに、元来の標的細胞の集団の１０％未満が残っていた。合わせて、これらの結果は、腫瘍内でのｓｙｎＮｏｔｃｈ感作抗原を発現する細胞の相対的提示に関わらず、ｓｙｎＮｏｔｃｈ開閉型腫瘍細胞殺傷系が異種腫瘍の特異的な治療に効果的であることを実証する。
【０３６４】
実施例６：免疫抑制剤の制御された発現。
がん免疫療法において免疫応答を推進することに加えて、がん療法以外での有用な機能についても、タンパク質分解により切断可能なキメラポリペプチドを調査した。例示的なｓｙｎＮｏｔｃｈを使用して調査した１つの用途は、例えば、自己免疫設定における免疫抑制であった。細胞接触型阻害を推進するサイトカインＩＬ−１０及びＴ細胞阻害リガンドＰＤ−Ｌ１などのパラクリン阻害シグナルの同時産生を推進する、ＳｙｎＮｏｔｃｈ  Ｔ細胞を操作した（図２８）。
【０３６５】
ＣＤ１９刺激を使用してアッセイされるように、抗ＣＤ１９  ｓｙｎＮｏｔｃｈレセプターは、ＣＤ１９＋Ｋ５６２での刺激に応答して、両方の抑制物質（ＰＤ−Ｌ１及びＩＬ−１０）を推進することができた（図２９）。この実施例、及び非天然合成Ｔ細胞応答を制御するｓｙｎＮｏｔｃｈレセプターＴ細胞の他の実施例は、治療細胞の有効性を増強するか、または組織もしくは疾患環境を再プログラミングして、恒常性及び天然機能を回復することができる、多種多様な治療物質を産生する、ｓｙｎＮｏｔｃｈ操作された細胞の広く多様な用途を強調する。
【０３６６】
実施例７：野生型親和性ＴＣＲ及び増強親和性ＴＣＲを使用する、二重抗原開閉型サイトカイン分泌。
表面抗原開閉型ＴＣＲ発現のための追加の二重抗原ＡＮＤゲートを設計して、標的表面抗原（表面発現ＧＦＰ）及び細胞内標的抗原（ＮＹ−ＥＳＯ）の両方を発現する細胞の標的化に応答したＣＤ８  Ｔ細胞サイトカイン分泌を試験した。具体的には、図３３に模式的に提示されるように、抗ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１  ＴＣＲの発現を制御する抗ＧＦＰ  ｓｙｎＮｏｔｃｈでＣＤ８  Ｔ細胞を操作して、表面発現ＧＦＰ及びＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１の両方を発現するＴ２標的細胞に応答してサイトカインインターフェロンガンマの放出が発生するようにした。この系を、野生型親和性及び親和性増強抗ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１  ＴＣＲで試験した。
【０３６７】
図３４に示されるように、いずれかのＴＣＲの抗ＧＦＰ  ｓｙｎＮｏｔｃｈ開閉型発現を有するＣＤ８  Ｔ細胞は、二重抗原ＧＦＰ＋／ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１＋Ｔ２標的細胞の存在下でのみ活性化され、ＩＦＮγを分泌した。更に、親和性増強ＴＣＲ細胞は、標的細胞結合時に野生型親和性ＴＣＲ細胞と比較して２倍近くのＩＦＮγを産生したため、（ＩＦＮγ放出によって測定される）ＣＤ８  Ｔ細胞活性化のレベルは、ＴＣＲのその標的抗原に対する親和性に依存していた。
【０３６８】
これらの結果は、野生型親和性ＴＣＲ及び増強親和性ＴＣＲを使用する、二重抗原（表面抗原及び細胞内抗原）開閉型サイトカイン分泌を実証する。このデータはまた、それらの標的抗原に対して異なる親和性を有するＴＣＲの開閉型発現を通して、Ｔ細胞活性化及びサイトカイン分泌のレベルを調節することができることも示す。
【０３６９】
実施例８：二重抗原開閉型のＣＤ４  Ｔ細胞サイトカイン分泌。
（図３５に模式化される）抗ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１  ＴＣＲを制御する抗ＨＬＡ−Ａ２／ＷＴ１  ｓｙｎＮｏｔｃｈで操作されたＣＤ４  Ｔ細胞内で、ＣＤ４  Ｔ細胞活性化及びサイトカイン分泌を試験した。図３６に提示されるデータによって示されるように、抗ＨＬＡ−Ａ２／ＷＴ１  ｓｙｎＮｏｔｃｈ及び抗ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１  ＴＣＲ発現細胞は、ＨＬＡ−Ａ２／ＷＴ１及びＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１抗原の両方を発現するＴ２標的細胞に特異的に応答して高レベルのＩＦＮγを放出する。抗ＨＬＡ−Ａ２／ＷＴ１  ｓｙｎＮｏｔｃｈによるＨＬＡ−Ａ２単独の部分的な認識のために、ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１のみを発現するＴ２標的細胞に応答して、幾分低レベルのサイトカイン分泌が見られた。ｓｙｎＮｏｔｃｈレセプターにおける複数の異なる抗ＨＬＡ−Ａ２／ＷＴ１  ｓｃＦｖの試験は、標的化される特定のＷＴ１ペプチドに関わらず、抗ＨＬＡ−Ａ２単独の低レベルの測定可能な認識を明らかにした。しかしながら、両方の抗原を発現する標的細胞に応答した細胞活性化及びサイトカイン放出の高レベルの増加は、そのようなバックグラウンドのＨＬＡ−Ａ２の部分的な認識が、二重抗原標的化及び特異性にはっきりとは影響を与えないことを示す。
【０３７０】
実施例９：臨床的に関連する二重抗原標的化。
臨床的に関連する抗原対を使用する、記載の表面抗原／ｐＭＨＣ抗原のＡＮＤ開閉型戦略の万能性を更に実証するために、抗ＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１  ＴＣＲを制御する抗ＨＥＲ２  ｓｙｎＮｏｔｃｈでＣＤ８  Ｔ細胞及びＣＤ４  Ｔ細胞の両方を操作した。Ｈｅｒ２及びＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１の同時発現は、乳癌及び神経膠腫を含む様々ながんにおいて見出される。この開閉型／標的化戦略の模式的な形態を、図３７に提示する。
【０３７１】
図３８に提示される結果に示されるように、操作されたＣＤ８  Ｔ細胞及びＣＤ４  Ｔ細胞の両方は、両方の標的抗原（ＨＥＲ２及びＨＬＡ−Ａ２／ＮＹ−ＥＳＯ１）を発現する標的Ｔ２細胞を特異的に殺傷した。２つの抗原のうちの１つのみを発現する対照細胞には、影響がなかった。注目すべきことに、操作されたＣＤ４細胞による二重抗原標的細胞の特異的殺傷は、表面抗原／ｐＭＨＣ抗原認識回路がＣＤ８に依存しない様式で標的殺傷を誘導し得ることを実証した。
【０３７２】
合わせて、この実施例の結果は、操作された二重抗原開閉型ＣＤ８  Ｔ細胞及び／または二重抗原開閉型ＣＤ４  Ｔ細胞を使用して、少なくとも１つの細胞内抗原を標的化するものを含む臨床的に関連する抗原対を発現する細胞を、効果的に標的化し、殺傷することができることを実証する。
【０３７３】
実施例１０：ＣＡＲ発現を制御するｐＭＨＣ感知ｓｙｎＮｏｔｃｈによる二重抗原標的化。
このアプローチの万能性を更に実証するために、ＣＡＲを含有する追加の二重抗原ＡＮＤゲートを設計し、表面標的抗原及び細胞内標的抗原の両方を発現する細胞の標的化を試験した。例示的な系を図４１に示し、ここで、設計され、Ｔ細胞内に操作導入されるように、抗Ｈｅｒ２  ＣＡＲの発現は、抗ＨＬＡ−Ａ２／ＷＴ１  ｓｙｎＮｏｔｃｈの解放された細胞内ドメインによって誘導される。この回路は、表面抗原特異的ＣＡＲの発現を制御するｐＭＨＣ特異的ｓｙｎＮｏｔｃｈレセプターの一実施例として機能する。Ｈｅｒ２のみを発現するＴ２標的細胞を提示した場合、抗Ｈｅｒ２  ＣＡＲの発現は誘導されず、Ｔ細胞活性化は発生しない。しかしながら、ＷＴ１及びＨｅｒ２の両方を発現するＴ２標的細胞を提示した場合、抗ＨＬＡ−Ａ２／ＷＴ１  ｓｙｎＮｏｔｃｈへの表面−ＨＬＡ−Ａ２／ＷＴ１の結合は、Ｎｏｔｃｈポリペプチドの切断を誘導し、抗Ｈｅｒ２  ＣＡＲの発現を推進するＵＡＳに結合するＧＡＬ４転写活性化因子を放出する。標的細胞上でのＨｅｒ２への発現される抗Ｈｅｒ２  ＣＡＲの結合は、Ｔ細胞の活性化を引き起こす。この二重抗原回路を発現するように操作されたジャーカットＴ細胞株の結果として生じる活性化（ＣＤ６９発現を使用して測定される）を、図４２に提示する。このアッセイの結果は、ＣＤ６９上方制御によって測定されるＴ細胞活性化（すなわち、ＣＤ６９上方制御）が、標的細胞による両方の標的抗原の発現に依存していることを示し、これも再び、二重抗原ｓｙｎＮｏｔｃｈ  ＡＮＤゲートの頑強な特異性を更に実証する。表面抗原特異的ＣＡＲの発現を制御するｐＭＨＣ特異的ｓｙｎＮｏｔｃｈレセプターについてのこの実施例はまた、二重抗原ｓｙｎＮｏｔｃｈ  ＡＮＤゲートにおいて広い多様性の抗原の組み合わせを用いることができることも示す。
【０３７４】
本発明を、その特定の実施形態を参照して説明してきたが、当業者は、本発明の真の主旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更が行われても、同等物が置換されてもよいことを理解されたい。加えて、特定の状況、材料、物質組成、プロセス、プロセスステップ（複数可）を本発明の目的、主旨、及び範囲に適合させるために、多くの修正を行うことができる。全てのそのような修正は、本明細書に添付される特許請求の範囲内であることが意図される。
【０３７５】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年８月２３日出願の米国仮特許出願第６２／３７８，６１４号の利益を主張し、この出願の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【０３７６】
連邦政府支援の研究に関する声明文
本発明は、国立衛生研究所によって与えられる認可番号Ｒ０１  ＣＡ１９６２７７の下、政府の支援で行われた。政府は、本発明において特定の権利を有する。
【０３７７】
テキストファイルとして提供される配列表の参照による組み込み
２０１７年８月２２日作製及び３６５ＫＢのサイズのテキストファイル「ＵＣＳＦ−５４４ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」として、配列表が本明細書と共に提供される。このテキストファイルの内容の全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０−１】
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【図３０−２】
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【図３１Ａ−１】
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【図３１Ａ−２】
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【図３１Ｂ−１】
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【図３１Ｂ−２】
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【図３１Ｃ】
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【図３１Ｄ−１】
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【図３１Ｄ−２】
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【図３１Ｅ−１】
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【図３１Ｅ−２】
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【図３１Ｆ−１】
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【図３１Ｆ−２】
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【図３１Ｇ−１】
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【図３１Ｇ−２】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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