【手続補正書】
【提出日】平成19年8月1日(2007.8.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ニコチン増量トランスジェニックニコチアナ・タバカム植物の部分を含む紙巻たばこであって、
（ｉ）ＦＴＣまたはＩＳＯ法によって測定される場合、約３〜約８のタール対ニコチン量比、および
（ｉｉ）紙巻たばこ煙が約６．５以下のｐＨを有すること、
によって特徴付けられる、紙巻たばこ。
【請求項２】
前記植物が、前記トランスジェニック植物または植物部分においてニコチンの生産をアップレギュレートする少なくとも１つの異種核酸を発現する、請求項１に記載の紙巻たばこ。
【請求項３】
前記植物が、少なくともＱＰＴおよびＰＭＴのセグメントをコードする異種核酸を発現する、請求項２に記載の紙巻たばこ。
【請求項４】
ニコチン緩衝剤を製造する方法であって、該方法は、
ａ）ニコチン増量トランスジェニックニコチアナ・タバカム植物を、糖増量ニコチアナ・タバカム植物と交雑させること；
ｂ）ニコチン増量かつ糖増量ニコチアナ・タバカム子孫植物を選択すること；および
ｃ）該ニコチン増量かつ糖増量ニコチアナ・タバカム植物の部分を含む紙巻たばこを生産すること、
を包含する、方法。
【請求項５】
請求項４に記載の方法であって、前記ニコチン増量トランスジェニックニコチアナ・タバカム植物は、
ａ）ニコチン合成をアップレギュレートする酵素または転写因子をコードする異種核酸に操作可能に結合したプロモーターを、５'→３'方向で含む構築物で、ニコチアナ・タバカム植物を形質転換すること；
ｂ）該形質転換植物からトランスジェニックニコチアナ・タバカム植物を再生すること；および
ｃ）非形質転換対照植物と比較してニコチン含量が増加したトランスジェニックニコチアナ・タバカム植物を選択すること、
によって生産される、方法。
【請求項６】
ニコチン緩衝剤を製造する方法であって、該方法は、
ａ）非形質転換対照植物と比較して、上昇したニコチンおよび脂肪酸レベルを付与する異種核酸配列を発現するトランスジェニックニコチアナ・タバカム植物を提供すること；ならびに
ｂ）該植物の部分を含む紙巻たばこを製造すること、
を包含する、方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法であって、工程（ａ）は、
１）（ｉ）ニコチン合成をアップレギュレートする酵素または転写因子をコードする異種核酸に操作可能に結合したプロモーターを、５'→３'方向で含む第１の構築物、および（ｉｉ）脂肪酸合成をアップレギュレートする酵素または転写因子をコードする異種核酸に操作可能に結合したプロモーターを、５'→３'方向で含む第２の構築物で、ニコチアナ・タバカム植物を形質転換すること；
２）該形質転換植物からトランスジェニックニコチアナ・タバカム植物を再生すること；ならびに
３）非形質転換対照植物と比較して、ニコチン含量および脂肪酸含量が増加したトランスジェニックニコチアナ・タバカム植物を選択すること、
を包含する、方法。
【請求項８】
請求項６に記載の方法であって、工程（ａ）は、
ａ）ニコチン増量トランスジェニックニコチアナ・タバカム植物を、脂肪酸増量ニコチアナ・タバカムトランスジェニック植物と交雑すること；
ｂ）ニコチン増量かつ脂肪酸増量ニコチアナ・タバカム子孫植物を選択すること；およびｃ）該子孫植物の部分を含む紙巻たばこを製造すること、
を包含する、方法。
【請求項９】
ニコチアナ・タバカム植物においてニコチンおよび乾燥還元糖含量を増加させる方法であって、
ａ）上昇した乾燥還元糖含量のニコチアナ・タバカム植物を、ニコチン増量表現型を付与する核酸で形質転換すること；
ｂ）該形質転換植物からトランスジェニックニコチアナ・タバカム植物を再生すること；ならびに
ｃ）非形質転換対照植物と比較して、増加した乾燥還元糖含量およびニコチン含量を有する子孫植物を選択すること、
を包含する、方法。
【請求項１０】
ニコチアナ・タバカム植物またはその部分においてアルカロイド生合成を増加させる方法であって、該方法は、
ａ）キノラートホスホリボシル転移酵素（ＱＰＴ）およびプトレスシンＮ−メチル転移酵素（ＰＭＴ）の発現を増加させる少なくとも１つの核酸配列で、ニコチアナ・タバカム植物を形質転換すること；
ｂ）該形質転換植物からトランスジェニックニコチアナ・タバカム植物を再生させること；ならびに
ｃ）非形質転換対照植物と比較して、キノラートホスホリボシル転移酵素（ＱＰＴ）およびプトレスシンＮ−メチル転移酵素（ＰＭＴ）の発現が増加している、アルカロイド生合成が増加した植物を選択すること、
を包含する、方法。
【請求項１１】
増加したニコチンレベルおよび高乾燥還元糖含量によって特徴付けられ、少なくとも１つの導入遺伝子が増加したニコチンレベルを付与する、タバコ。
【請求項１２】
前記植物が、３．５％より大きいニコチン含量を有し、乾燥還元糖含量が約１２％〜約３０％である、請求項１１に記載のタバコ植物。
【請求項１３】
タバコ特有ニトロサミンレベルの低下したタバコ製品を製造する方法であって、
ａ）ニコチン生産をダウンレギュレートする少なくとも１つの異種核酸を発現するニコチン低減トランスジェニックニコチアナ・タバカム植物または植物部分を提供すること；
ｂ）該トランスジェニック植物または植物部分からタバコを製造すること；
ｃ）該タバコにニコチンを添加すること；および
ｄ）非形質転換対照植物または植物部分を含む対照製品と比較して、低レベルのタバコ特
有ニトロサミンを有する該タバコを含む製品を製造すること、
を包含する、方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法によって製造された紙巻たばこ用タバコ。
【請求項１５】
タバコ１ｇ当たり約０．５ｍｇ未満のレベルのタバコ特有ニトロサミンを有する充填材を含む、請求項１４に記載の紙巻たばこ用タバコ。
【請求項１６】
前記タバコ特有ニトロサミンのレベルが、タバコ１ｇ当たり約０．０５ｍｇ（５０ｐｐｂ）未満である、請求項１５に記載の紙巻たばこ用タバコ。
【請求項１７】
再生タバコを製造する方法であって、
ａ）（ｉ）ニコチン増量トランスジェニックニコチアナ・タバカム植物または植物部分であって、該植物または植物部分は、該トランスジェニック植物または植物部分においてニコチンの生産をアップレギュレートする少なくとも１つの異種核酸を発現する、植物または植物部分；
（ｉｉ）ニコチン低減トランスジェニックニコチアナ・タバカム植物または植物部分であって、該植物または植物部分は、該トランスジェニック植物または植物部分において、ニコチンの生産をダウンレギュレートする少なくとも１つの異種核酸を発現する、植物または植物部分；
（ｉｉｉ）脱タンパク質タバコ繊維またはタバコ繊維部分；および
（ｉｖ）凍結乾燥タバコまたはタバコ部分、
からなる群より選択される植物材料を提供すること；ならびに
ｂ）該植物材料の任意の組み合わせを併用および再生すること、
を包含する、方法。
【請求項１８】
対照植物から製造された紙巻たばこと比較して、減少した量の、多環式芳香族炭化水素、タバコ特有ニトロサミン、ベンゾ（ａ）ピレン、フェノール、およびカテコールからなる群より選択される化合物を有する、請求項１７に記載の方法によって得られた再生タバコを含む紙巻たばこ。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
従って、ＰＲＥＰは全ての経済的及び政治的力学を考慮した場合に公衆衛生の方策の必需品である。科学に基づくＰＲＥＰの市場開発及び調節はタバコにおけるどのような完全な公益戦略でも一部分として含まれる必要がある。理にかなったタバコ市場開発の成人への制限、子供への販売及び市場開発を禁止する法律の厳格な施行、及び喫煙の有害な影響についての教育を含む、タバコの使用を減少させる全体的なゴールは、社会に与えるタバコの全体的な損害を減少させるために、消費者のＰＲＥＰの利用可能性と同調して進むべきである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
しかしながら、紙巻たばこの煙の全ての構成成分が等しい毒性を有するのではないことが、研究者に明らかになってきた。注目すべきは、１９６４年の喫煙に関する最初の‘米国公衆衛生総監報告書が、喫煙者に対する主要な薬理学的診査料は直ちに心配することではないという意味合いを含めて、ニコチンは喫煙者により吸入されるレベルではおそらく毒性ではないという結論に達したことである(Gori, p. 3, 「実質的に安全な紙巻たばこ−一度は無惨にも否定されたチャンスの復活（Virtually Safe Cigarettes -Reviving an
Opportunity Once Tragically Rejected）」,2000)。事実、公衆衛生総監報告書は、「ニコチンへの長期曝露が客観的性質の危険な機能変化又は変性疾患のいずれかを引き起こすことの納得できる証拠はない」と示した（U. S. Surgeon General Report 1964, pg.74）。実際、米国食品医薬品局は現在、喫煙中止手段（devices）としてのニコチンパッチ及びチューインガムの販売を許可しているが、これらは箱に入った紙巻たばこよりも多くのニコチンを送達し得る。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
ＦＴＣ及びＩＳＯの喫煙法は、以下の８つの領域で異なっている。
・ＦＴＣ法は、平衡化及び検査の両方について、７５°Ｆ±１°Ｆ（２３℃±１℃）及び相対湿度６０％±２％の研究室環境条件を指定（specify)する。平衡化の時間は最短で２４時間及び最長で１４日間である。これをＩＳＯ規格と比較すると、ＩＳＯは平衡化について２２℃±１℃及び相対湿度６０％±２％、検査については２２℃±２℃及び相対湿度６０％±５％である。平衡化時間は最短で４８時間及び最長で１０日間である。
・ＦＴＣは、紙巻たばこの吸いさし長を最長で２３ｍｍ又はチップペーパー＋３ｍｍのどちらか長い方と定義する。ＩＳＯは、吸いさし長を最短で２３ｍｍ又はチップペーパー＋３ｍｍ又はフィルター＋８ｍｍと定義する。フィルターなしの紙巻たばこについては両方法が吸いさし長を２３ｍｍと指定する。
・ＩＳＯは、灰皿の位置を、喫煙機械の紙巻たばこから２０〜６０ｍｍより下と定義する。ＦＴＣは位置を指定しない。
・ＩＳＯは、再使用できるフィルターホルダーと合わせて２ピースの留め金を指定する。このフィルターホルダーは、ケンブリッジパッドを含有し、紙巻たばこの吸いさし部分を部分的に遮るための合成ゴム多孔ワッシャーを用いる。ＦＴＣ法は、ケンブリッジフィルターパッドの使用を定義するが、フィルターパッドホルダー装置を指定しない。
・ＩＳＯ法は、紙巻たばこレベルで紙巻たばこを通る気流を指定する。ＦＴＣは、気流を調整するためのモニター用紙巻たばこの使用を指定する。
・ＩＳＯの手順は、用いたフィルターホルダーから出た過剰な全粒子状物質（ＴＰＭ）を拭き取るプロセスを定義する。フィルターホルダーの内側表面は未使用の調整済みフィルターパッドの別個の１／４片２つで拭く。ＦＴＣ法はフィルターホルダーの内側表面を拭くのに裏側（捕捉されたＴＰＭと反対側）を用いる。
・ＩＳＯは、ＴＰＭ中のニコチン及び水を分析するのにケンブリッジパッド当たり２０ｍｌの抽出溶液を用いることを定義する。ＦＴＣの手順は、ケンブリッジパッド当たり１０ｍｌを指定する。
・ＩＳＯは、ニコチン及び水のガスクロマトグラフィーによる測定について内部標準を定義する。ＦＴＣの手順は、内部標準を指定しない。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
ＦＴＣ／ＩＳＯ法に由来するタールレベル及びニコチンレベルにのみ基づいてフルフレーバー紙巻たばこと軽い紙巻たばこのどちらを喫煙するかを消費者が決定することは問題がある（「低量製品を喫煙する危険性及び理由についての国民の理解（Public Understanding of Risk and Reasons for Smoking Low-Yield Products）」, Neil Weinstein, NCI
Monograph 13, Chapter 6）。なぜなら、ヒトと喫煙機械は紙巻たばこを異なるように喫
煙するからであり、タール量が少ないと報告される紙巻たばこに高い期待を持つ可能性がある（「紙巻たばこ量についての消費者の認識：メッセージは適切なのか（Consumer Perception of Cigarette Yields: Is the Message Relevant?）」, Gio Gori, Regulatory Toxicology and Pharmacology volume 12,64-68,1990）。喫煙者は、フルフレーバー紙巻たばこ（Ｍａｒｌｂｏｒｏ（登録商標）フルフレーバーは１５ｍｇのタール及び１．１ｍｇのニコチンを生成する）から軽い紙巻たばこ（Ｍａｒｌｂｏｒｏ（登録商標）ライトは、１１ｍｇのタール及び０．８ｍｇのニコチンを生じる）への切り替えが必ずしも喫煙に伴う危険性を減少させると間違って信じてはならない。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
８未満のＴＮＲを有する３つのブランドスタイルのうち２つ（Ｃａｒｌｔｏｎ（登録商標）１００フィルターソフトパック及びＮｏｗ（登録商標）キングフィルターソフトパック）は、１９９８年版FTC Reportで、１ｍｇのタール及び０．２ｍｇのニコチンを生じると報告されており、したがってＴＮＲ５を有する。しかしながら、これら２つのブランドスタイルのＴＮＲは、主に小さい数字を概数にする(rounding)ことの性質によるものである。１９９８年版FTC Reportより、「タール率及び一酸化炭素率は、最も近いミリグラム（ｍｇ）の概数にする：０．５ｍｇ又はそれより大きいものは切り上げ、０．４ｍｇ又はそれより小さいものは切り下げる。ニコチンの数字は、最も近い１／１０ミリグラムの概数にする。０．０５ｍｇ又はそれより大きいものは切り上げ、０．０４ｍｇ又はそれより小さいものは切り下げる。」したがって、１．４ｍｇのタール及び０．１５ｍｇのニコチンを送達する非常に軽い紙巻たばこは、たとえ実際のＴＮＲが９．３３に等しいとしても１ｍｇのタール及び０．２ｍｇのニコチン（ＴＮＲ５）として報告される。１ｍｇのタール及び０．１ｍｇのニコチンを送達する紙巻たばこは、煙の薄さ（風味の欠如）ゆえに消費者に受け入れられにくく、ほとんど抵抗がない。２０００年には、ＦＴＣ法に準じて１〜３ｍｇのタールを生じる紙巻たばこブランドスタイルの市場占有率は米国市場占有率の１．３％にすぎなかった。３ｍｇのタール又はそれより少ないタールを生じるブランドスタイルの９２％が、それらの包装にそれらのＦＴＣタール率及びニコチン率を印刷した。このことは、１２ｍｇ又はそれより多いタールを生じるブランドスタイルと対照的であり、これらの中では、１％の０．０１だけがその包装にそれらのＦＴＣタール率及びニコチン率を印刷した（FTC Cigarette Report for 2000, 2002, p. 15）。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７８】
本発明はまた、ニコチアナ属の種の、形質転換されていない対照植物又は植物部分と比較して、ニコチンの増加した、トランスジェニック植物又は植物部分を提供することと、このトランスジェニック植物又は植物部分からニコチンを抽出することと、ニコチアナ属の種の植物又は植物部分を提供することと、抽出したニコチンをこの種に加えてニコチン増量植物材料を形成することと、そしてニコチン増量植物材料を含む紙巻たばこを製造することとを含む、紙巻たばこを製造する方法を含む。ニコチンは、ニコチン有機酸塩（nicotine salts of organic acids)の形態であってもよい。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０５】
これらの実施形態を実行するのに用いられ得る組換え植物の例として、タバコキノレートホスホリボシル転移酵素遺伝子（ＮｔＱＰＴ１）をコードするＤＮＡ（例えば、Conkling et al.によるＰＣＴ出願第ＷＯ  ９８／５６９２３号を参照）、タバコプトレスシンＮ−メチル転移酵素（ＰＭＴ１、ＰＭＴ２、ＰＭＴ３、及びＰＭＴ４など）をコードするＤＮＡ、タバコアルギニン脱炭酸酵素（ＡＤＣ１及びＡＤＣ２など）をコードするＤＮＡ、タバコオルニチン脱炭酸酵素（ＯＤＣ）をコードするＤＮＡ、タバコＳ−アデノシルメチオニン合成酵素（ＳＡＭＳ）をコードするＤＮＡ、タバコＮＡＤＨ脱水素酵素をコードするＤＮＡ、及びタバコホスホリボシルアントラニレート異性化酵素（ＰＲＡＩ）をコードするＤＮＡで形質転換された既知の植物が挙げられるが、これらに限定されない（これらは既知であり、M.Timko et al.によるＰＣＴ出願第ＷＯ  ００／６７５５８号に記載される）。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１６】
「ニコチン緩衝剤」は、紙巻たばこの煙のｐＨを維持する助けとなる。ニコチンは紙巻たばこの煙に存在する主な揮発性塩基であるので、煙のｐＨは知覚において重要な役割を与える。糖はニコチン緩衝剤として作用し、増加したニコチンからいかなるきつさ（harshness）も低減する。それゆえ、高い糖含量は、糖がタバコ植物に天然のものであるかタバコ加工中に添加されたもの（例えば、高フルクトースコーンシロップ、スクロース、転化糖、甘草抽出物、カロブ豆及び抽出物、ならびにカカオ及びカカオ抽出物）であるかに関わらず、タバコ植物にとって有益である。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１７】
「還元糖（単数又は複数）」は、遊離の又は遊離する可能性があるアルデヒド又はケトン基を有する任意の糖（単糖類又は多糖類）である。グルコース及びフルクトースは、煙のｐＨを減少させ、「遊離した」非プロトン化ニコチンの量を効果的に低減することにより、紙巻たばこの煙中のニコチン緩衝剤として作用する。還元糖は、例えば、ニコチン及び他のタバコアルカロイドの知覚的影響を改変することにより、煙の風味の釣り合いをとる。一般に、糖含量とアルカロイド含量の間には、タバコ変種にわたって同じ変種内で、及び同じ植物系統内で、栽培条件により引き起こされる逆相関が存在する。例えば、タバコの土壌中の窒素が低いほど、ニコチンレベルは低くなるが糖レベルは高くなる。雨が多いと、ニコチンレベルの低下と糖レベルの上昇をもたらす。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１９】
バレー種（これは一般に黄色種よりも低い含量で糖を含有する）などのニコチンがより高いタバコは、一般に、より高い煙ｐＨを有する煙を生成する。アメリカブレンドの紙巻
たばこ（バレー種及びおそらくは東洋種と混合された黄色種タバコ）は、約５．５〜約６．５の煙ｐＨを有し、これは０．３〜３％の非プロトン化ニコチンを生成すると計算される(Morie, G. P., (1972), 「様々なｐＨ値でのタバコの煙中のプロトン化及び非プロトン化ニコチンの画分（Fraction of protonated and unprotonated nicotine in tobacco smoke at various pH values）」, Tob. Sci., 16,167.)。したがって、約９未満のＴＮＲを持つトランスジェニック高ニコチンタバコから製造された紙巻たばこは、通常、６．５よりも大きいｐＨを有し、充填材中に十分な糖又は他のニコチン緩衝剤が存在しない限り、喫煙者にきついと判断されるかもしれない。糖の非常に多いタバコを用いるか充填材に十分な糖を加えることにより、ｐＨが減少し、低ＴＮＲ紙巻たばこは許容可能な風味を有する。このｐＨ低減は、以下に記載されるとおり、充填材の脂肪酸含量を増加させることによっても完遂され得る。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２９】
別の実施形態において、脂肪酸をニコチン緩衝剤として用いてもよい。例えば、ミリスチン酸及びパルミチン酸をタバコ充填材に加えてニコチン緩衝剤として機能させてもよい。同様に、高乳脂肪カカオ又はココナッツ油で見いだされるものなどの脂肪酸をタバコ包装に加えてもよい。あるいは、タバコ植物は、タバコ葉組織で脂肪酸の産生を上昇させるように遺伝的に改変されてもよい。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３０】
本発明のタバコ植物が、ＤＮＡ修復又は組み換えを誘導する核酸の導入(Beetham他、 1999; Zhu et al., 2002, WO 03/013226)、又は本明細書中に記載される「ニコチン増量トランスジェニック植物」、「ニコチン低減トランスジェニック植物」、「糖増量トランスジェニック植物」、及び「脂肪酸増量トランスジェニック植物」と同様な結末をもたらし得る改変ウイルスの導入による特定の核酸配列の標的化変異誘発を通じて、植物又は植物細胞を産生することによりニコチン、糖、又は脂肪酸のレベルが改変されてもよいが、「トランスジェニック」でなくてもよい、すなわち他の生物由来の核酸配列をそのゲノムに組み込んで含有していなくてもよいことが理解される。標的種又は性的に適合性の種に由来する核酸配列のみが標的植物のゲノムに導入される「正確な品種改良（Precise Breeding）」法（米国特許公開番号第２００４０１０７４５５号）を用いて、本明細書中に記載される「ニコチン増量植物」、「ニコチン低減植物」、「糖増量植物」、及び「脂肪酸増量植物」を産生することができる。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３２】
米国特許第４，８３０，０２８号、同第４，８３６，２２４号、及び同第５，０３１，６４６号は、ニコチン有機酸塩の添加による紙巻たばこ充填材の改変を記載する。詳細には、これらは、タール対ニコチン量比を下げるための、この様式でのニコチンの添加を扱う。Journal of the American Medical Associationでの Brown and Williamson Tobacco
Company researchの総説(volume 274, No. 3, p. 228,1995)は、米国特許第３，２５８，０１５号、及び同第３，３５６，０９４号（Battelle）の包括範囲であるＰｒｏｊｅｃｔ  Ａｒｉｅｌを記載する。これらの特許は、本発明の紙巻たばこのタール対ニコチン量比を従来の紙巻たばこのものの１／４に低減し得るような様式でニコチンを添加したエーロゾルを記載する。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３９】
製造された紙巻たばこが所望の量よりも多く又は少なく生じる場合、小さな調節がなされ得る。これには、フィルター、紙巻たばこ用紙、フィルター巻取り紙(plug wrap)、チップペーパー（これは紙巻たばこロッドをフィルターに固定する）、通気孔の種類、または組合せのバリエーション（variation）を変えることにより、紙巻たばこロッドの構成成分のうち１つを変更することを含む。例えば、紙巻たばこが９ｍｇのタール及び１．３ｍｇのニコチンを生じている場合、フィルター濾過及び／又は希釈をわずかに増加させて、非常によく似た割合でタール量及びニコチン量の両方を低減する。これは、通常、所望量を達成するように通気孔の大きさ及び数ならびにフィルター巻取り紙の多孔性を指定（specify）することにより、達成される。タール量は的中しているがニコチン量が所望するより高いもしくは低い場合、添加されるニコチンのレベルがそれ相応に調節され得る。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４７】
「対照と比較して、ニコチン含量の付随する減少とともにＰＭＴ活性の著しい減少を含む形質転換根系統（root lines）が産生された」（Transformed root lines were produced that contained markedly reduced PMT activity, with a concomitant reduction in
nicotine content compared to controls）（Yupynn Chintapakorn and John D. Hamill, Plant Molecular Biology 53: 87-105, 2003, 2003 Kluwer Academic Publishers）。ノルニコチンは、タバコの品質及び紙巻たばこの風味と負の相関がある（「天然のタバコ香料（Natural Tobacco Flavor）」, Roberts, D. L., Recent Advances in Tobacco Science, 14, pg.49-81, 1988）。唯一のアルカロイドとしてのニコチンとともに製造された紙巻たばこ製品は、これにのみ基づけば非常に受け入れやすいはずである。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６６】
４．ニコチン増量トランスジェニックタバコを用いた、改善された膨脹タバコ又はパフド（puffed）タバコの製造
タバコの膨脹に関して１５０件より多い特許が発行されている（例えば、米国特許第３，９９１，７７２号）。膨脹プロセスはタバコにより大きな充填力を与えるので、紙巻たばこに用いられるタバコの重量が少なくなる。膨脹タバコを用いることの利点は、タール送達の減少である。膨脹タバコは、低タール送達紙巻たばこを作るのに特に有用である。Ｃａｒｌｔｏｎ（登録商標）紙巻たばこは、それが最も低タール且つ低ニコチン送達紙巻たばこであることを宣伝文句としてきたが、伝えられるところによれば、非常に大きな割
合の膨脹タバコで作られている。しかしながら、膨脹タバコの使用はまた、ニコチン送達の低下ももたらし、これは埋め合わせ（compensation）を引き起こす可能性がある。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６７】
膨脹ニコチン増量トランスジェニックタバコの主な有益性は、このようなタバコがニコチン送達をほぼ維持しながらタール送達の低下を提供し、タール送達の低下且つＴＮＲの低下した紙巻たばこをもたらすことである。例えば、ニコチン増量トランスジェニックタバコを組み込まれたタバコブレンドの紙巻たばこは、１６ｍｇのタール及び２．０ｍｇのニコチン（ＴＮＲ８）を送達し得る。このようなトランスジェニックタバコを１００％膨脹することで、重量が少ないが、このような紙巻たばこ中同体積を占めるタバコ充填材が得られ、それによりＴＮＲを減少させる。この紙巻たばこのＴＮＲは、フィルター通気なしで、８未満となる。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７０】
好ましくはニコチン低減トランスジェニックタバコから抽出された除タンパク質タバコを利用すること、及びこのような除タンパク質タバコから膨脹タバコを作ることが、別の実施形態である。除タンパク質膨脹タバコ及びニコチン増量トランスジェニックタバコを含有する紙巻たばこが、それにより製造される。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７１】
５．再生タバコの製造
上記の先の発明、除タンパク質タバコ繊維、及び凍結乾燥タバコを任意の組合せで、及び再生タバコと併せて利用することで、曝露低減タバコ製品（これは低ＴＮＲ紙巻たばこも含んでもよい）を製造することが本発明の別の実施形態である。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
2007502621.tif 000001
【手続補正２２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２】
2007502621.tif 000002
【手続補正２３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３】
2007502621.tif 000003
【手続補正２４】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図５】
2007502621.tif 000004