(57)【要約】  ａ）ニコチンアミドリボシドと、ｂ）式（Ｉ）の化合物またはその塩である、ウロリチンと、を含み、式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤが各々独立して、Ｈ及びＯＨから選択され、Ｗ、Ｘ、及びＹが各々独立して、Ｈ及びＯＨから選択され、Ｚが、Ｈ及びＯＨから選択される、組成物。この組成物は、例えば筋関連病態、神経変性疾患、及び／またはミトコンドリア疾患の治療のための薬剤として、かつ、栄養補助食品、機能性食品及び飲料、ならびに特殊栄養、または医療食品として有用である。【化１】2019505504.tif 000021
2019505504.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）ニコチンアミドリボシドと、
ｂ）式（Ｉ）の化合物またはその塩である、ウロリチンと、を含み、
【化１】
2019505504.tif 000020
式中、
Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤが各々独立して、Ｈ及びＯＨから選択され、
Ｗ、Ｘ、及びＹが各々独立して、Ｈ及びＯＨから選択され、
Ｚが、Ｈ及びＯＨから選択される、組成物。
【請求項２】
前記式（Ｉ）の化合物が、ウロリチンＡである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記式（Ｉ）の化合物が、ウロリチンＢである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
２０ｍｇ〜５ｇのニコチンアミドリボシドと１０ｍｇ〜５ｇのウロリチンとを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物が、固体（例えば、錠剤もしくはバー）、半固体（例えば、ソフトゲル、カプセル（例えば、硬質カプセル）、もしくはドラジェ）、粉末、または液体（エマルジョンを含む）の形態である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
薬剤、栄養補助食品、機能性食品、機能性飲料、特殊栄養、または医療食品としての使用のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
薬剤としての使用のための、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
筋関連病態、神経変性疾患、及び／またはミトコンドリア疾患の治療において使用される薬剤としての使用のための、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
筋関連病態、神経変性疾患、及び／またはミトコンドリア疾患の治療方法であって、それを必要とする対象に、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、方法。
【請求項１０】
前記筋関連病態が、筋骨格疾患もしくは障害；筋消耗；ミオパチー；封入体筋炎（例えば散発性封入体筋炎）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、及び他のジストロフィーのような神経筋疾患；サルコペニア、例えば、急性サルコペニア；ならびに筋萎縮及び／または悪液質、例えば、火傷、床上安静、四肢固定、または胸部、腹部、及び／もしくは整形外科の大手術に関連した筋萎縮及び／または悪液質から選択される、請求項８に記載の使用のための組成物、または請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物の有効量を対象に投与することを含む、筋肉または身体的パフォーマンスの、維持、低下の予防、または向上方法。
【請求項１２】
前記対象が、加齢性筋機能低下、サルコペニア、例えば加齢性サルコペニア、加齢性筋消耗、サルコペニック肥満、身体疲労、筋疲労、加齢関連の嚥下困難または嚥下障害を患っており、かつ／または虚弱もしくは前虚弱である、請求項１１に記載の筋肉または身体的パフォーマンスの、維持、低下の予防、または向上方法。
【請求項１３】
前記対象が、虚弱もしくは前虚弱、または座りがちである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
対象における筋関連病態、神経変性疾患、及び／もしくはミトコンドリア疾患の治療方法、または対象における筋機能の向上方法であって、前記対象に有効量のウロリチン（例えばウロリチンＡ）及び有効量のニコチンアミドリボシドを投与することを含み、前記投与が、同時であるか、またはある時間間隔により隔てられる、方法。
【請求項１５】
ウロリチン（例えばウロリチンＡ）とニコチンアミドリボシドとを含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウロリチン及びニコチンアミドリボシド、具体的には、ウロリチンＡ及びニコチンアミドリボシドの栄養及び医療製剤に関する。製剤は、最適なミトコンドリア機能を促進するために、マイトファジー及びミトコンドリア生合成を同時に増強するのに特に有用である。
【背景技術】
【０００２】
ウロリチンは、肥満、代謝率の低下、メタボリックシンドローム、糖尿病、循環器疾患、高脂血症、神経変性疾患、認知障害、気分障害、ストレス及び不安障害を含む、不十分なミトコンドリア活性に関連する様々な状態の治療として、体重管理のため、または筋性能もしくは精神的能力を向上するためものとして提案されている。特許文献１（Ａｍａｚｅｎｔｉｓ  ＳＡ）を参照。特許文献２（Ｔｈｅ  Ｒｅｇｅｎｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）において、様々な腫瘍性疾患の治療のためのウロリチンの使用が記載されている。
【０００３】
特許文献３（ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／４８３１０の出願に由来する）は、細胞において、特にマイトファジーを含むオートファジーを増加させる方法であって、細胞を有効量のウロリチンまたはその薬学的に許容可能な塩と接触させることによって、細胞において、特にマイトファジーを含むオートファジーを増加させることを含む方法を開示する。投与は、代謝ストレス、循環器疾患、内皮細胞機能障害、サルコペニア、筋変性疾患、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患、薬物性肝傷害または薬物性筋障害、α１−アンチトリプシン欠損、虚血再灌流障害、炎症、皮膚の老化、炎症性腸疾患、クローン病、肥満、メタボリックシンドローム、ＩＩ型糖尿病、高脂血症、変形性関節症、神経変性疾患、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、加齢性黄斑変性症、ミトコンドリア疾患（例えば、成長不良、筋肉調整の喪失、筋力低下、視覚障害、聴覚障害、心疾患、肝疾患、腎疾患、胃腸障害、呼吸障害、神経学的問題、しばしば学習障害である自律神経障害、ミトコンドリア疾患の結果としての認知症を含む）、筋疾患、癌、認知障害、ストレス、及び気分障害から選択される疾患または状態を有する患者に対するものであってよい。
【０００４】
具体的には、ウロリチンは、筋関連病態の治療として提案されている。筋関連病態は、ミオパチー及び神経筋疾患を含む。そのような状態の例としては、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、急性サルコペニア、例えば、火傷、床上安静、四肢固定、または胸部、腹部、頸部、及び／もしくは整形外科の大手術に関連した筋萎縮及び／または悪液質、筋萎縮性側索硬化症、ならびに多発性硬化症が挙げられる。加齢性筋力低下は、特に一般的な状態である。長期固定または他の疾患、例えば、癌による悪液質は、低筋性能を特徴とすることが多い他の状態である。
【０００５】
有効な筋機能と身体的パフォーマンスは、健康な個人、ならびに疾患を患っている個人、特に高齢者における、全ての年齢層で高品質の生活を送るために重要である。筋性能の向上は、特にアスリートにとって興味深い。例えば、筋収縮強度の増加、筋収縮の振幅の増加、または刺激と収縮との間の筋反応時間の短縮はすべて、個人、特にアスリートへの利益である。筋力低下／消耗を含む加齢性筋機能低下を患っている高齢者または、悪液質筋消耗を患っている個人にとって、筋肉または身体的パフォーマンスの向上は、補助なしで彼らが歩くことのできる歩行速度や歩行距離のような日々の機能の基本的な側面において重要である。
【０００６】
ニコチンアミドリボシドは、ビタミンＢ３の一形態であり、酵母中に天然に生じるＮＡＤ＋の前駆体である。それは、ミトコンドリア生合成を誘導し、筋性能、代謝、神経保護、健康的な老化、及び循環器系の健康に対して有益であるものとして示唆されている（例えば、非特許文献１及び非特許文献２を参照）。
【０００７】
驚くべきことに、ニコチンアミドリボシドとウロリチンの両方を含む組成物が、予測できなかった相乗効果を示すことが、ここで見出された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第２０１２／０８８５１９号
【特許文献２】国際公開第２００７／１２７２６３号
【特許文献３】国際公開第２０１４／００４９０２号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｃｈｉ  ａｎｄ  Ｓａｕｖｅ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ  Ｍｅｔａｂ  Ｃａｒｅ，２０１３，１６，６５７−６６１
【非特許文献２】Ｃａｎｔｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，２０１２，１５，８３８−８４７
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、
ａ）ニコチンアミドリボシドと、
ｂ）式（Ｉ）の化合物またはその塩と、を含む組成物を提供し、
【００１１】
【化１】
2019505504.tif 000003
【００１２】
式中、
Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤが各々独立して、Ｈ及びＯＨから選択され、
Ｗ、Ｘ、及びＹが各々独立して、Ｈ及びＯＨから選択され、
Ｚが、Ｈ及びＯＨから選択される。
【００１３】
式（Ｉ）の化合物は、ウロリチンファミリーのメンバーであり、具体的には、式（Ｉ）の化合物は、ウロリチンＡである。本発明の組成物は、不十分なミトコンドリア活性及び／または低筋肉量もしくは低筋性能に関連する疾患及び状態の治療、ならびに筋成長及び／または筋性能の向上、ならびに本明細書中以下に説明する様々な他の目的に有用である。
【００１４】
本発明の組成物は、筋肉及び／または身体的パフォーマンスの向上、筋機能の向上、筋機能の低下の予防、筋肉量の増加、及び／または筋消耗の低減に使用される。筋性能の向上、筋機能の向上、筋肉量の増加、及び／または筋消耗の低減は、医療処置の一部であり得、または個人的な嗜好（「ライフスタイル」）もしくは美容上の理由であり得る。組成物は、例えば、加齢における健康な状態を維持するのに使用できる。組成物は、栄養補助食品として、機能性食品、機能性飲料、特殊栄養製品、または医療食品もしくは医療栄養製品として使用することができる。本発明の組成物は、薬剤として使用することができる。
【００１５】
本発明は、筋関連病態の治療における使用のための本発明の組成物をさらに提供する。本発明はまた、対象における筋関連病態の治療方法であって、その対象に有効量の本発明の組成物を投与することを含む、方法を提供する。本発明は、筋性能の向上における使用のための本発明の組成物を提供する。本発明はまた、対象に有効量の本発明の組成物を投与することによる、筋性能の向上方法を提供する。
【００１６】
本発明の治療において、ウロリチン及びニコチンアミドリボシドが単一の組成物の一部として同時に投与されることは必須ではない。本発明はまた、対象における筋関連病態の治療、または対象における筋機能の向上方法であって、その対象に有効量のウロリチン（例えば、ウロリチンＡ）及び有効量のニコチンアミドリボシドを投与することを含む、方法を提供する。ウロリチン及びニコチンアミドリボシドは、同時に、またはある時間間隔を隔てて投与することができる。本発明は、こうした方法における使用のための、ウロリチン及びニコチンアミドリボシドを含むキットをさらに提供する。ウロリチン及びニコチンアミドリボシドは、異なる物理的形状であってよい。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
ニコチンアミドリボシド：
ニコチンアミドリボシドは、ビタミンＢ３のピリジン−ヌクレオシド形態であり、ＮＡＤ＋の前駆体として機能する。その構造は以下の式（ＩＩ）に示される。
【００１８】
【化２】
2019505504.tif 000004
【００１９】
ニコチンアミドリボシドは、酵母によって分泌され、いくつかの食品中に微量栄養素として存在する。それは補助食品の形態（例えば、その塩化物塩として、商品名ＮＩＡＧＥＮ（商標）でＣｈｒｏｍａｄｅｘによって流通される）で入手可能である。
ウロリチン：
ウロリチンは、ヒトを含む、哺乳類の、腸内ミクロビオータのエラジタンニン及びエラグ酸に対する作用により産生される代謝物である。エラジタンニン及びエラグ酸は、ザクロ、堅果類、及び液果類のような、食品中に一般的に見られる化合物である。エラジタンニンは、単独では消化管中で最小限に吸収される。ウロリチンは、上に示されている代表的な構造（Ｉ）を有する化合物のクラスである。いくつかの特に一般的なウロリチンの構造を、構造（Ｉ）を参照しながら、下の表に記載する。
2019505504.tif 000005
【００２０】
実際には、商業規模製品の場合、ウロリチンの合成が便利である。合成の経路については、例えば、国際公開第２０１４／００４９０２号に記載されている。
【００２１】
本発明の組成物中での使用に特に適した化合物は、自然発生ウロリチンである。よって、Ｚは、好ましくはＯＨであり、Ｗ、Ｘ、及びＹは、好ましくはすべてＨである。Ｗ、Ｘ、及びＹがすべてＨであり、Ａ及びＢの両方がＨであり、Ｃ、Ｄ、及びＺがすべてＯＨである場合、化合物はウロリチンＣである。Ｗ、Ｘ、及びＹがすべてＨであり、Ａ、Ｂ、及びＣがすべてＨであり、Ｄ及びＺの両方がＯＨである場合、化合物はウロリチンＡである。好ましくは、本発明の製剤中に使用されるウロリチンは、ウロリチンＡまたはウロリチンＢまたはウロリチンＣである。より好ましくは、本発明の製剤中に使用されるウロリチンは、ウロリチンＡまたはウロリチンＢである。最も好ましくは、本発明の製剤中に使用されるウロリチンは、ウロリチンＡである。
【００２２】
【化３】
2019505504.tif 000006
【００２３】
イロウロリチンＡ及びＢについてもまた言及されてもよい。Ｗ、Ｘ、及びＹがすべてＨであり、Ａ、Ｂ、及びＤがすべてＨであり、Ｃ及びＺの両方がＯＨである場合、化合物はイソウロリチンＡである。Ｗ、Ｘ、Ｙ、及びＺがすべてＨであり、Ａ、Ｂ、及びＤがすべてＨであり、ＣがＯＨである場合、化合物はイソウロリチンＢである。
【００２４】
好ましくは、本発明の組成物中での使用のためのウロリチンは、微粒化される。微粒化ウロリチンは、非微粒化ウロリチンより急速かつ効果的に溶解または懸濁することができることが見出された。微粒化ウロリチンは、好ましくは、１００μｍ未満のＤ５０サイズを有し、すなわち、ウロリチンの５０質量％は、１００μｍ未満の粒子サイズを有する。より好ましくは、ウロリチンは、７５μｍ未満、例えば、５０μｍ未満、例えば、２５μｍ未満、例えば、２０μｍ未満、例えば、１０μｍ未満のＤ５０サイズを有する。より好ましくは、ウロリチンは、０．５〜５０μｍ、例えば、０．５〜２０μｍ、例えば、０．５〜１０μｍ、例えば、１〜１０μｍの範囲内のＤ５０を有する。好ましくは、ウロリチンは、１００μｍ未満のＤ９０サイズを有し、すなわち、ウロリチンの９０質量％は、１００μｍ未満の粒子サイズを有する。より好ましくは、ウロリチンは、７５μｍ未満、例えば、５０μｍ未満、例えば、２５μｍ未満、例えば、２０μｍ未満、例えば、１５μｍ未満のＤ９０サイズを有する。ウロリチンは、好ましくは、５〜１００μｍ、例えば、５〜５０μｍ、例えば、５〜２０μｍの範囲内のＤ９０を有する。微粒化は、当該技術分野において構築されている方法により達成することができ、例えば圧縮力粉砕、ハンマー粉砕、ユニバーサルもしくはピン粉砕、またはジェット粉砕（例えばスパイラルジェット粉砕または流動床ジェット粉砕）を使用してもよい。ジェット粉砕が特に適している。
投薬：
摂取される組成物の有効量は、投与方法、年齢、体重、及び対象の健康状態に応じて異なるだろう。対象の病状、年齢、及び体重のような因子が重要となり得、投薬計画は、最適な応答を提供するように調節され得る。
【００２５】
従来のニコチンアミドリボシド補助食品は、一般的に１日当たり２５０ｍｇのレベルで摂取されるが、より高い用量で摂取されてもよい。本発明の組成物によって提供される１日用量のニコチンアミドリボシドは、２０〜５０００ｍｇの範囲であってよく、例えば２０〜４０００ｍｇ、例えば２００〜４０００ｍｇ、例えば２０〜３０００ｍｇ、例えば２０〜２０００ｍｇ、例えば１００〜１０００ｍｇ、例えば１００〜８００ｍｇ、例えば２００〜６００ｍｇ、例えば２００〜４００ｍｇ、例えば２００〜３００ｍｇ、例えば２５０ｍｇであってよい。ニコチンアミドリボシドの１日の摂取は、１食で提供されてもよく、複数の食事の間に分割されてもよい。
【００２６】
単位用量は、スナックバーの形態であってもよく、重量２５〜１５０ｇ、例えば、４０〜１００ｇのスナックバーは、（２００〜３００ｍｇのニコチンアミドリボシド、または上述されている別の量のような）必要量のニコチンアミドリボシドを含有してもよい。単位用量組成物は、あるいは飲料の形態であって、例えば、単一用量（例えば、５０〜５００ｍｌ、例えば、１００〜３００ｍｌ）に適した容積の容器（例えば、パウチまたはボトル）中で提供してもよい。１００〜３００ｍｌの飲料は、必要量のニコチンアミドリボシドを含有してもよい。単位用量組成物は、あるいは飲料に再構成される粉末、例えば、単一用量に適した量の粉末（例えば、２００〜３００ｍｇのニコチンアミドリボシドを含有する、５ｇ〜１０ｇの粉末）の形態であってもよい。１００〜５００ｍｌの再構成飲料は、必要量のニコチンアミドリボシドを含んでもよい。以下に述べるように、本発明における使用のための組成物は、いずれかの適切な物理形態を取り得る。それは、固体（例えば、錠剤もしくはバー）、半固体（例えば、ソフトゲル、カプセル（例えば、硬質カプセル）、もしくはドラジェ）、粉末、または液体（エマルジョンを含む）の形態であってもよい。本発明の組成物は、栄養組成物であってもよい。本発明の組成物は、薬学的組成物であってもよい。組成物は、栄養補助食品として、機能性食品、機能性飲料、または医療食品もしくは医療栄養製品の形態であることができる。ウロリチン（例えば、ウロリチンＡ）成分の１日の摂取量は、典型的には、１日当たり１０ｍｇ〜５ｇ、例えば、１日当たり２０ｍｇ〜２５００ｍｇ、例えば、１日当たり２５ｍｇ〜２５０ｍｇ、例えば、１日当たり２５ｍｇ〜５００ｍｇ、例えば、１日当たり５０ｍｇ〜１５００ｍｇ、例えば、１日当たり２５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、例えば、１日当たり２５０ｍｇ〜１５００ｍｇ、例えば、１日当たり５０ｍｇ〜１０００ｍｇ、例えば、１日当たり２０ｍｇ〜２５０ｍｇ、例えば、１日当たり２５０ｍｇ〜１０００ｍｇ、例えば、１日当たり５００ｍｇ〜１０００ｍｇ、例えば、１日当たり７５０ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲内である。１つの実施形態では、組成物は、約０．２ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日超の範囲内のウロリチンの投与量を提供する量で摂取される。例えば、ウロリチンの投与量は、０．２〜１００、０．２〜５０、０．２〜２５、０．２〜１０、０．２〜７．５、０．２〜５、０．２５〜１００、０．２５〜２５、０．２５〜２５、０．２５〜１０、０．２５〜７．５、０．２５〜５、０．５〜５０、０．５〜２５、０．５〜２０、０．５〜１５、０．５〜１０、０．５〜７．５、０．５〜５、０．７５〜５０、０．７５〜２５、０．７５〜２０、０．７５〜１５、０．７５〜１０、０．７５〜７．５、０．７５〜５、１．０〜５０、１〜２５、１〜２０、１〜１５、１〜１０、１〜７．５、１〜５、２〜５０、２〜２５、２〜２０、２〜１５、２〜１０、２〜７．５、または２〜５ｍｇ／ｋｇ／日であってもよい。
【００２７】
単位用量は、スナックバーの形態であってもよく、重量２５〜１５０ｇ（例えば、４０〜１００ｇ）のスナックバーは、必要量のウロリチンを含有してもよい。単位用量組成物は、あるいは飲料の形態であって、例えば、単一用量（例えば、１００〜３００ｍｌ）に適した容積の容器（例えば、パウチ）中で提供してもよい。５０〜５００ｍｌ（例えば、１００〜３００ｍｌ）の飲料は、必要量のウロリチンを含有してもよい。本発明の組成物を提供する飲料は、１ｍｌ当たり０．１〜５０ｍｇ、例えば、１ｍｌ当たり０．５〜１０ｍｇ、例えば、１ｍｌ当たり１〜５ｍｇの濃度のウロリチンを含有してもよい。単位用量は、あるいは、圧縮錠のような１つ以上の固体の形態であってよい。単一の圧縮錠は、例えば、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇまたは１０００ｍｇのウロリチン用量を含有してもよい。単位用量は、あるいは、ソフトゲルまたはペーストのような１つ以上の半固体用量の形態であってよい。単一のソフトゲルカプセルは、例えば、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、例えば２５０ｍｇのウロリチン用量を含有してもよい。
【００２８】
ニコチンアミドリボシド成分とウロリチンとの間の重量比は、通常は、５００：１〜１：２５０、例えば、４００：１〜１：２５０、例えば、３００：１〜１：２５０、例えば、３００：１〜１：１００、例えば、２００：１〜１：１００、例えば、２００：１〜１：７５、例えば、２００：１〜１：５０、例えば、２００：１〜１：２５、例えば、５０：１〜１：２０、例えば、２５：１〜１：１５、例えば、１０：１〜１：１０、例えば、５：１〜１：８、例えば、５：１〜１：５、例えば、３：１〜１：５、例えば、１：１〜１：８、例えば、１：１〜１：５、例えば、１：２〜１：６、例えば、１：２〜１：５、例えば、１：３〜１：４の範囲内である。比は、例えば、１：３〜５：１、例えば、１：１〜８：１、例えば、１：１〜５：１、例えば、２：１〜６：１、例えば、２：１〜５：１、例えば、３：１〜４：１であってもよい。
【００２９】
したがって、本発明の組成物は、２０〜５０００ｍｇのニコチンアミドリボシド及び１０ｍｇ〜５ｇのウロリチン、例えば、２０〜４０００ｍｇのニコチンアミドリボシド及び１０ｍｇ〜５ｇのウロリチン、例えば、２０〜３０００ｍｇのニコチンアミドリボシド及び１０ｍｇ〜５ｇのウロリチン、例えば、２０〜２０００ｍｇのニコチンアミドリボシド及び１０ｍｇ〜５ｇのウロリチン、例えば、１５０〜３０００ｍｇのニコチンアミドリボシド及び１０ｍｇ〜５ｇのウロリチン、例えば、５０ｍｇ〜５００ｍｇのニコチンアミドリボシド及び５０ｍｇ〜５００ｍｇのウロリチン、例えば、２５０〜２０００ｍｇのニコチンアミドリボシド及び１０〜３０００ｍｇのウロリチン、例えば、３００〜３０００ｍｇのニコチンアミドリボシド及び１０〜３０００ｍｇのウロリチン、例えば、２００〜６００ｍｇのニコチンアミドリボシド及び２０ｍｇ〜２５００ｍｇのウロリチン、例えば、２５０ｍｇ〜２５００ｍｇのニコチンアミドリボシド及び１００ｍｇ〜２０００ｍｇのウロリチン、例えば、２００〜４００ｍｇのニコチンアミドリボシド及び２０ｍｇ〜２５００ｍｇのウロリチン、例えば、２００〜３００ｍｇのニコチンアミドリボシド及び５０ｍｇ〜１０００ｍｇのウロリチン、２００〜３００ｍｇのニコチンアミドリボシド及び５０ｍｇ〜５００ｍｇのウロリチン、２００〜３００ｍｇのニコチンアミドリボシド及び１００ｍｇ〜５００ｍｇのウロリチンを包含してもよい。組成物は、例えば、タンパク質、炭水化物、ビタミン、及びミネラルをさらに含有してもよい。
【００３０】
化合物の用量は、本明細書において、一日用量基準で述べられる。多くの場合において、本発明の組成物の有益な効果は、組成物が長期間、例えば２週間以上、例えば４週間以上、例えば６週間以上、例えば８週間、例えば１２週間以上、例えば１６週間以上、例えば２０週間以上、例えば２４週間以上摂取されるときに最も明らかになる。
組成物の形態：
本発明の組成物は、いずれかの適切な物理形態をとることができる。それらは、固体（例えば、錠剤もしくはバー）、半固体（例えば、ソフトゲル、カプセル（例えば、硬質カプセル）、もしくはドラジェ）、粉末、または液体（エマルジョンを含む）の形態であってもよい。本発明の組成物は、栄養組成物であってもよい。本発明の組成物は、薬学的組成物であってもよい。組成物は、栄養補助食品として、機能性食品、機能性飲料、または医療食品もしくは医療栄養製品の形態であることができる。
【００３１】
錠剤形態の組成物は、いずれかの適切なタイプであってもよく、それらは、当該技術分野における従来の賦形剤を含有してもよい。賦形剤は、例えば、組成物が許容できる味、魅力的な外観、及び良好な保存安定性を有するように、所望の硬度、貯蔵期限、及びフレーバーを提供することができる。バーは、いずれかの適切なタイプであってもよく、これは、スナックバーの調製のために従来使用されている成分を含有してもよい。
【００３２】
半固体形態は、同様に、当該技術分野における従来の賦形剤を含有してもよい。賦形剤は、例えば、組成物が許容できる味、魅力的な外観、及び良好な保存安定性を有するように、所望の硬度、貯蔵期限、及びフレーバーを提供することができる。半固体形態は、経口投与のために、または局所投与のために提供してもよい。
【００３３】
栄養及び医療組成物の供給には、粉末が一般的に使用される。粉末は、複数用量を単一の容器中で提供することができ、同じ供給容器から様々なサイズの用量を使用することができるという利点を有する。粉末は、通常は良好な保存特性を有する。粉末組成物はまた、当該技術分野における従来の賦形剤を含有してもよい。賦形剤は、例えば、組成物が許容できる味、魅力的な外観、及び良好な保存安定性を有するように、貯蔵期限、フレーバー、及び耐湿性を提供することができる。本発明は、ニコチンアミドリボシド組成物に加えてウロリチンを包含する別個の組成物を含むキット、例えば、ニコチンアミドリボシドの粉末組成物に加えてウロリチンを包含する固体または液体の組成物を含むキットの形態をとってもよい。ウロリチンを含有する固体または液体組成物（例えば、錠剤もしくは飲料、または本明細書において記載されている他の形態）は、ニコチンアミドリボシド粉末と共に使用するための説明書を備えてもよい。例えば、ニコチンアミドリボシドとウロリチンの両方が、粉末形態であってよい。
【００３４】
液体組成物は、薬剤の形態、飲料の形態であってもよい。液体製剤は、溶液、エマルジョン、スラリー、または他の半液体であってよい。液体組成物中の賦形剤は、例えば、組成物が許容できる味、魅力的な外観、及び良好な保存安定性を有するように、貯蔵期限、外観、フレーバー、及び食感を提供することができる。液体組成物は、経口投与のために提供されてもよい。液体組成物は、例えば、クリーム、軟膏またはローションの形態で局所適用のために提供されてもよい。
【００３５】
いくつかの使用において、本発明の組成物は、注射または静脈内投与に適した溶液の形態であってもよい。
本発明の組成物中の追加の成分：
本発明による組成物は、ウロリチン及びニコチンアミドリボシドを超える追加の成分を含有してもよい。追加の成分は、例えば、ビタミン、ミネラル、多価不飽和脂肪酸、機能性アミノ酸、及び他の化合物から選択される、健康上の利益を提供する化合物であってもよい。
【００３６】
ビタミンの中でも、具体的には、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＢ１２、及びビタミンＫ２が挙げられ得る。本明細書において使用される場合、「ビタミンＤ」とは、ビタミンＤの既知の形態のいずれかを指し、具体的には、ビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）、ビタミンＤ３（コレカルシフェロール）、ビタミンＤ前駆体、代謝物、及び他の類似体、ならびにこれらの組み合わせ、またビタミンＤの様々な活性及び不活性形態を含む。例えば、ビタミンＤ３は、コレカルシフェロールとしてその非加水分解不活性形態で提供してもよく、またはカルシトリオールとしてその加水分解活性形態で提供してもよい。
【００３７】
クレアチンは、筋障害の治療において有益な効果を有するものとして記載されている。これは、本発明の組成物中に含めることができる。β−ヒドロキシル−β−メチルブチレート（ＨＭＢ）は、筋障害の治療において有益な効果を有するものとして記載されている。これは、本発明の組成物中に含めることができる。
【００３８】
ミネラルの中でも、具体的には、カルシウム塩（例えば、リン酸カルシウム）、セレニウム、亜鉛塩、マグネシウム塩、及び鉄塩が挙げられ得る。
【００３９】
多くの筋成長及び／または筋向上治療にとって、いくつかの特定のアミノ酸が提供されることは有益である。例えば、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン、リジン、及び分岐鎖アミノ酸が重要であると考えられている。これらのアミノ酸は時に「機能性アミノ酸」として知られている。本発明の組成物は、１つ以上の分岐鎖アミノ酸（ロイシン、イソロイシン、及びバリン）を含んでもよい。本発明の組成物は、Ｌ−アルギニン及びＬ−グルタミンの一方または両方を含んでもよい。本発明の組成物は、リジンを含んでもよい。
【００４０】
本発明の薬学的組成物は、追加の薬学的に活性な化合物を含んでもよい。例えば、スタチンが含まれてもよい。本明細書は、ウロリチンとニコチンアミドリボシドと、例えばスタチンのような薬学的に活性な化合物とを含有する組成物を含むキットとして提供してもよい。
【００４１】
本発明の組成物は、ミトコンドリア生物発生またはミトコンドリア障害の治療に有用な１つ以上のさらなる薬剤を含んでもよい。こうした化合物としては、限定なしに、レスベラトロール、ピロロキノリンキノン、ユビキノン、スルフォラファン、補酵素Ｑ１０、ゲニステイン、ヒドロキシルチロソール、ケルセチン、Ｌ−カルニチン、α−リポ酸、及びフォリン酸（例えば、ロイコボリン）が挙げられる。
【００４２】
例えば、トマチジン、ウルソール酸、クルクミン、カプサイシン、メントール、サリチル酸トロラミン、及びサリチル酸メチルを含む、追加の化合物を、本発明の組成物中にさらに（または代替的に）含めてもよい。
【００４３】
いくつかの例となる実施形態では、本開示の組成物は、ニコチンアミドリボシド及びウロリチンに加えて、１つ以上の追加の主要栄養剤、典型的には、タンパク質、脂質もしくは炭水化物、またはタンパク質、脂質及び炭水化物の２つ以上を含んでもよい。
【００４４】
食品及び医薬品の調製において一般的に使用されているタイプの脂質または油のいずれかの適切な源を、本発明の組成物に使用してもよい。本明細書において記載されている組成物中での使用に適した脂質源の非限定的な例は、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、アラキドン酸（ＡＲＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、及びこれらの組み合わせのような、多価不飽和脂肪酸も含む。
【００４５】
本明細書において記載されている組成物中での使用に適した炭水化物またはその源の非限定的な例は、マルトデキストリン、加水分解または変性デンプンまたはトウモロコシデンプン、グルコースポリマー、コーンシロップ、コーンシロップ固体、米由来の炭水化物、グルコース、フルクトース、ラクトース、トレハロース、高フルクトースコーンシロップ、タピオカデキストリン、イソマルツロース、スクロマルト、マルチトール粉末、グリセリン、フラクトオリゴ糖、大豆繊維、トウモロコシ繊維、グアーガム、コンニャク粉、ポリデキストロース、蜂蜜、糖アルコール（例えば、マルチトール、エリスリトール、ソルビトール）、及びこれらの組み合わせを含み得る。マルトデキストリン、スクロース、及びフルクトースが特に好ましい。
【００４６】
本明細書において記載される組成物中での使用に適したタンパク質またはその源の非限定的な例としては、加水分解、部分加水分解、または非加水分解タンパク質またはタンパク質源が挙げられ得る。それらは、乳（例えば、カゼイン、乳清）、動物（例えば、肉、魚）、穀物（例えば、米、トウモロコシ）、または植物（例えば、大豆、エンドウ豆）源のような、いずれかの既知の、またはその他の適切な源に由来していてもよい。タンパク質源またはタイプの組み合わせを使用してもよい。タンパク質またはその源の非限定的な例としては、インタクトなエンドウ豆タンパク質、インタクトなエンドウ豆タンパク質単離物、インタクトなエンドウ豆タンパク質濃縮物、乳タンパク質単離物、乳タンパク質濃縮物、カゼインタンパク質単離物、カゼインタンパク質濃縮物、乳清タンパク質濃縮物、乳清タンパク質単離物、カゼイン酸ナトリウムまたはカルシウム、成分無調整牛乳、部分または完全脱脂乳、ヨーグルト、大豆タンパク質単離物及び大豆タンパク質濃縮物、ならびにこれらの組み合わせが挙げられる。タンパク質源またはタイプの組み合わせを使用してもよい。例えば、ギリシャ及びアイスランドスタイルのヨーグルトは、一般的に特に高いタンパク質含有量を有することが知られ、本発明の製剤中での使用に特に適したものとなる。本発明の組成物中での使用のためのヨーグルトは、例えば、１００ｇ当たり２〜１５ｇのタンパク質を含有してもよい。特に好ましいものは、高いタンパク質含有量、例えば、１００ｇ当たり６〜１５ｇ、１００ｇ当たり７〜１５ｇ、例えば、１００ｇ当たり８〜１５ｇを有するヨーグルトである。任意で、補足のタンパク質もヨーグルト製剤に添加し、製剤のタンパク質含有量を増加してもよい。本発明のヨーグルトは、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌ．ｌａｃｔｉｓのような、生きた培養菌を含有してもよい。
【００４７】
タンパク質、脂質、炭水化物、及び他の成分の総濃度または量は、対象とする使用者の栄養必要量に応じて異なる。
【００４８】
本発明の組成物中の追加の成分は、対象に健康上の利益を提供しないが、代わりに組成物を他の方法で、例えば、上述されているようなその味、食感、または貯蔵期限を向上させる化合物であってもよい。本発明の組成物は、よって、乳化剤、着色剤、防腐剤、ガム、硬化剤、増粘剤、甘味料、及び香料から選択される１つ以上の化合物をさらに含有してもよい。
【００４９】
適切な乳化剤、着色剤、防腐剤、ガム、硬化剤、及び増粘剤は、エマルジョン及び他の半液体製造の技術分野において周知である。例えば、安息香酸、ソルビン酸、リン酸、乳酸、酢酸、塩酸、及びそれらの可溶塩のような、防腐剤を使用してもよい。
【００５０】
甘味料は、本発明の組成物において特に有益であり得る。例えば、アスパルテーム、スクロース、アセスルファムカリウム、サッカリン、サイクラメート、ステビア、ソーマチン、及びこれらの混合物から選択される、強力な非栄養性の炭水化物甘味料を使用してもよい。アスパルテームは特に適している。
【００５１】
香料は、本発明の組成物において特に有益であり得る。液体または半液体組成物において、フルーツソースまたはピューレを含めることにより、フルーツフレーバーを提供することができる。典型的な香料としては、ストロベリー、ラズベリー、ブルーベリー、アプリコット、ザクロ、ピーチ、パイナップル、レモン、オレンジ、及びアップルが挙げられる。一般に、フルーツ香料は、フルーツエキス、フルーツジャム、またはフルーツピューレを、甘味料、デンプン、安定化剤、天然及び／または人工フレーバー、着色剤、防腐剤、水、ならびにクエン酸またはｐＨを制御するのに適した他の酸のいずれかの組み合わせと共に含む。
【００５２】
経口投与のために、組成物は、単独で、または適切な添加剤と組み合わせて、例えば、ラクトース、マンニトール、トウモロコシデンプンまたはポテトデンプンのような慣用の添加剤と共に、結晶性セルロース、セルロース誘導体、アカシア、トウモロコシデンプンまたはゼラチンのような結合剤と共に、トウモロコシデンプン、ポテトデンプン、またはナトリウムカルボキシメチルセルロースのような崩壊薬と共に、滑石、またはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤と共に、ならびに必要に応じて、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、防腐剤及び香味剤と共に、錠剤、散剤、顆粒剤、またはカプセルを作製するのに使用できる。
【００５３】
組成物は、必要に応じて、可溶化剤、等張剤、懸濁化剤、乳化剤、安定剤及び防腐剤のような慣用の添加剤と共に、植物または他の類似の油、合成脂肪族グリセリド、高級脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコールのような水性または非水性の溶媒中にそれらを溶解、懸濁または乳化することによって液体製剤へと製剤化することができる。組成物は、吸入により投与されるエアロゾル製剤において使用することができる。それらは、乳化基剤または水溶性基剤のような様々な基剤と混合することによって坐剤にすることができる。
【００５４】
シロップ、エリキシル剤、懸濁剤のような経口投与のための単位剤形が提供されてもよく、例えば茶さじ１杯、大さじ１杯、錠剤またはカプセルのような各々の単位剤形が、所定の量の本発明の組成物を包含する。同様に、注射または静脈内投与のための単位剤形は、滅菌水、生理食塩水または薬学的に許容可能な担体中の溶液として、本発明の化合物を組成物中に含んでもよく、例えば、ｍＬまたはＬのような各々の投与単位が、所定の量の本発明の組成物を包含する。
【００５５】
【表１】
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【００５６】
【表２】
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【００５７】
バルク粉末は、通常は、１食分にどれぐらいの粉末を使用するかを対象に知らせる説明書と共に提供される。例えば、バルク粉末は、正しい量の粉末を計り分けるのを可能にする必要なサイズの計量スプーンが付属した容器中で供給してもよい。粉末は、そのまま摂取しても、食品と混合しても、水またはジュースに添加して飲料を作製してもよい。
【００５８】
【表３】
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【００５９】
【表４】
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【００６０】
【表５】
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【００６１】
【表６】
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【００６２】
【表７】
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【００６３】
本発明の組成物は、単一の処置または、より一般的には、一連の処置として摂取することができる。１つの例では、対象は、運動前または後に用量を摂取する。運動することができない対象について、組成物の用量は、例えば、１日に１回、２回、もしくは３回、または１週間に１回、２回、３回、４回、５回、もしくは６回摂取してもよい。化合物の有効な投与量は、特定の処置にわたって、増加または減少し得ることも理解されるだろう。
処置：
本発明の組成物は、筋性能の向上、筋機能の向上、筋機能の低下の予防、筋肉量の増加、及び／または筋消耗の低減に使用される。筋性能の向上、筋機能の向上、筋肉量の増加、及び／または筋消耗の低減は、医療処置の一部であり得、または個人的な嗜好（「ライフスタイル」）もしくは美容上の理由であり得、あるいは、栄養または生理学における健康の個人的な、規定されていない管理の一部であり得る。本発明の組成物は、薬剤として使用することができる。組成物は、栄養補助食品として、機能性食品、機能性飲料、特殊栄養または医療食品として使用することができる。
【００６４】
組成物は、疾患及び病状の両方の治療に使用される。組成物は、低い身体的パフォーマンス、持久力低下、及び筋機能障害を特徴とする状態の健康な個人において、正常な生理機能の管理に使用される。本発明の組成物は、若齢及び高齢の個人を含む、疾患を有する個人において、身体的パフォーマンスを向上させ得る。本発明の組成物は、アスリート、アスリートではない個人、座りがちな個人、及び高齢者を含む、健康な個人において、身体的パフォーマンス、例えば、短期的パフォーマンスまたは長期的パフォーマンスを向上させ得る。このパフォーマンスの向上は、特定の距離を歩くまたは走るのにかかった時間（例えば、６分間歩行テスト（ＭＷＴ）でのパフォーマンスの向上）、特定の距離を走る時間の向上、国際標準化身体活動質問票でのＩＰＡＱスコアの向上、特定の時間内での椅子立ち上がり回数の増加、または身体的パフォーマンスを測定するように設計された別のテストにより測定され得る。
【００６５】
組成物は、健康な個人において、正常な生理機能（例えば、身体的パフォーマンス、持久力、筋機能）の管理及び維持に使用される。
【００６６】
組成物はまた、改善されたミトコンドリア機能をもたらす栄養状態の管理に使用される。これは、例えば、疾患を有する人や病院に入院している人に対し、組成物を疾患を治療するためではなく、栄養補助食品として投与される場合において重要である。
【００６７】
本発明の組成物は、持久力の向上をさらに提供する。持久力とは、一定の作業負荷で、通常は８０％ＶＯ２ｍａｘ未満の強度で運動する場合の疲労までの時間を指す。本発明の組成物は、若齢及び高齢の個人を含む、疾患を有する個人において、持久力を向上させ得る。本発明の組成物は、アスリート、アスリートではない個人、座りがちな個人、及び高齢者を含む、健康な個人において、持久力を向上させ得る。本発明は、特定の活動、例えば、フィットネストレーニング、ウォーキング、ランニング、スイミング、またはサイクリングを行う際の疲労までの時間の増加方法を提供する。この持久力の向上は、客観的測定（例えば、スピード、酸素消費、または心拍数）で評価してもよく、または自己報告測定（例えば、有効な質問票の使用）であり得る。
【００６８】
本発明は、筋機能を向上、維持、またはその低下を低減するための組成物をさらに提供する。本発明の組成物は、若齢及び高齢の個人を含む、疾患を有する個人において、筋機能を向上、維持、またはその低下を低減し得る。本発明の組成物は、アスリート、アスリートではない個人、座りがちな個人、及び高齢者を含む、健康な個人において、筋機能を向上、維持、またはその低下を低減し得る。例えば、本発明の組成物は、虚弱または前虚弱な個人において、筋機能を向上、維持、またはその低下を低減し得る。例えば、本発明の組成物は、運動のような身体活動のパフォーマンスの向上、例えば、ウエイトを持ち上げる能力の増加または握力の増加により証明されるように、筋力を増加させ得る。また、本発明の組成物は、例えば、正常な筋機能、低下する筋機能、または筋機能障害の状態において、筋肉量を増加または維持することにより、筋構造を向上させ得る。
【００６９】
本発明は、個人により知覚される身体的パフォーマンスまたは持久力の向上のための組成物をさらに提供する。例えば、自己報告質問票を使用して決定される運動または活動の自覚的な労作または努力の低減による。
筋性能：
本発明の組成物は、筋肉及び／または身体的パフォーマンスの向上において有用である。本発明は、よって、筋肉及び／または身体的パフォーマンスの向上における使用のための本発明の組成物を提供する。本発明はまた、対象に有効量の本発明の組成物を投与することによる、筋肉及び／または身体的パフォーマンスの向上方法を提供する。投与は、自己投与であり得る。
【００７０】
筋性能の向上は、筋機能の向上、筋機能低下の低減、筋機能の維持、筋力の向上、筋持久力の向上、及び筋回復の向上または維持の１つ以上であり得る。
【００７１】
本発明の組成物は、よって、身体的持久力（例えば、運動、肉体労働、スポーツ活動のような肉体作業を行う能力）の向上、身体的疲労の防止または遅延、作業能力及び持久力の向上、ならびに筋疲労の低減方法において使用することができる。
【００７２】
筋機能の向上は、例えばサルコペニア及び筋消耗のような加齢性状態の結果として筋機能が低減した高齢の対象において特に有益であり得る。本発明の組成物は、本発明の組成物を座りがち、虚弱または前虚弱である対象に投与することにより、筋性能の向上に使用してもよい。
【００７３】
筋性能は、スポーツパフォーマンスであり得、すなわち、スポーツ活動に参加するアスリートの筋肉のパフォーマンス能力である。スポーツパフォーマンス、パワー、スピード、及び持久力の向上は、筋収縮力の増加、筋収縮の振幅の増加、または刺激と収縮との間の筋反応時間の短縮により測定される。アスリートとは、例えば、ボディビルダー、競輪選手、長距離走者、及び短距離走者のような、いずれかのレベルでスポーツに参加し、そのパフォーマンスにおいてパワー、スピード、または持久力のレベルの向上を達成しようとする個人を指す。スポーツパフォーマンスの向上は、筋疲労を克服する能力、より長時間活動を維持し、より効果的なトレーニングを行う能力により示される。
医療処置：
本発明の組成物は、薬剤として使用することができる。本発明の組成物は、筋関連病態の治療に使用される。したがって、本発明は、筋関連病態の治療における使用のための本発明の組成物を提供する。本発明はまた、対象における筋関連病態の治療方法であって、その対象に有効量の本発明の組成物を投与することを含む、方法を提供する。筋関連病態は、全般的に健康な個人に影響を及ぼす状態と、病態との両方を含む。健康な人々または疾患による影響を受ける人々において見られるこうした筋状態としては、筋骨格疾患または障害、悪液質、筋消耗、ミオパチー、加齢性筋機能低下、前虚弱、虚弱、デュシェンヌ型筋ジストロフィー及び他のジストロフィーのような神経筋疾患、サルコペニア、例えば、急性サルコペニア、筋萎縮及び／または悪液質、例えば、火傷、床上安静、四肢固定、または胸部、腹部、及び／もしくは整形外科の大手術に関連した筋萎縮及び／または悪液質、多発性硬化症、例えば、その再発寛解形態、ならびに筋変性疾患が挙げられる。
【００７４】
本発明の組成物で治療され得る加齢性の状態の例としては、サルコペニア、前虚弱、虚弱、嚥下困難または嚥下障害、及び筋消耗が挙げられる。一般的に、組成物は、筋機能及び／または可動性の加齢性の低下と関連するミトコンドリア機能を改善する。
【００７５】
上述されるように、本発明は、薬剤としての使用のための、ニコチンアミドリボシドと式（Ｉ）の化合物またはその塩を含有する組成物を提供する。例えば、薬剤は、メタボリックシンドローム、代謝率の低下、代謝ストレス、循環器疾患、サルコペニア、筋変性疾患、封入体筋炎（例えば散発性封入体筋炎）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬物性肝傷害、薬物誘発性渇望、貧血障害、α１−アンチトリプシン欠損、虚血再灌流障害、炎症、炎症性腸疾患、クローン病、メタボリックシンドローム、ＩＩ型糖尿病、高脂血症、変形性関節症、神経変性疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、不安障害、潰瘍、筋萎縮性側索硬化症、ミトコンドリア疾患（例えば、成長不良、筋肉調整の喪失、筋力低下、視覚障害、聴覚障害、心疾患、肝疾患、腎疾患、胃腸障害、呼吸障害、神経学的問題、しばしば学習障害である自律神経障害、ミトコンドリア疾患の結果としての認知症を含む  からなる群より選択される疾患または状態の治療における使用のためのものであり得る。ミトコンドリア機能不全に関連するさらなる疾患は以下を含む。糖尿病及び聴覚消失（ＤＡＤ）；レーベル遺伝性視神経症（ＬＨＯＮ）；リー症候群（亜急性硬化性脳症）；神経障害、運動失調、色素性網膜炎及び下垂症（ＮＡＲＰ）；筋原性胃腸脳症（ＭＮＧＩＥ）；赤色ぼろ線維（ＭＥＲＲＦ）；ミトコンドリア脳筋症、乳酸アシドーシス、脳卒中様発作症候群（ＭＥＬＡＳ）；ならびにｍｔＤＮＡ枯渇）、及び癌、認知障害、ストレス、気分障害、認知機能の改善のため、体重管理のため、または筋性能もしくは精神的能力を向上するため。本発明の組成物は、筋機能、筋力持久力、及び筋回復の改善における使用に特に適している。
【００７６】
具体的に、本発明は、メタボリックシンドローム、代謝率の低下、代謝ストレス、循環器疾患、サルコペニア、前虚弱、虚弱、筋変性疾患、封入体筋炎（例えば散発性封入体筋炎）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患、薬物性肝傷害、薬物誘発性渇望、貧血障害、α１−アンチトリプシン欠損、虚血再灌流障害、炎症、炎症性腸疾患、クローン病、メタボリックシンドローム、ＩＩ型糖尿病、高脂血症、変形性関節症、神経変性疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、不安障害、潰瘍、筋萎縮性側索硬化症、ならびに癌、認知障害、ストレス、及び不安障害からなる群より選択される疾患または状態の治療における使用のため、認知機能を改善するため、体重管理のため、または筋性能もしくは精神的能力を向上するための組成物を提供する。
【００７７】
本発明は、代謝ストレス、サルコペニア、筋変性疾患、封入体筋炎（例えば散発性封入体筋炎）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患、薬物性肝傷害、α１−アンチトリプシン欠損、虚血再灌流障害、炎症性腸疾患、クローン病、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、及び癌からなる群より選択される症状または状態の治療において使用するための本発明の組成物をさらに提供する。
【００７８】
本発明は、細胞におけるオートファジーまたはマイトファジーを増加させるための本発明の組成物をさらに提供する。例えば、オートファジーまたはマイトファジーは、胚性幹細胞、誘導多能性幹細胞、成体幹細胞、分化細胞、血液細胞、造血細胞、上皮細胞、外分泌細胞、内分泌細胞、結合組織細胞、脂肪細胞、骨細胞、平滑筋細胞、横紋筋細胞、神経細胞、感覚細胞、心臓細胞、肝細胞、胃細胞、腸細胞、肺細胞、表皮（すなわち皮膚）細胞（ケラチノサイト及び線維芽細胞を含む）、腎細胞及び生殖細胞におけるものであってよい。したがって、それは例えば、メタボリックシンドローム、代謝率の低下、代謝ストレス、循環器疾患、サルコペニア、筋変性疾患、封入体筋炎（例えば散発性封入体筋炎）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患、薬物性肝傷害、薬物誘発性渇望、貧血障害、α１−アンチトリプシン欠損、虚血再灌流障害、炎症、炎症性腸疾患、クローン病、メタボリックシンドローム、ＩＩ型糖尿病、高脂血症、変形性関節症、神経変性疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、不安障害、潰瘍、筋萎縮性側索硬化症、ならびに癌、認知障害、ストレス、及び不安障害からなる群より選択される疾患または状態の治療または予防することができるかまたは、体重管理を補助することができるかまたは、筋性能もしくは精神的能力を向上することができる。
【００７９】
神経変性疾患の中で、特にエイズ認知症複合、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、副腎白質ジストロフィー、アレキサンダー病、アルパーズ症候群、血管拡張性失調症、バッテン病、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、カナバン病、大脳皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、レビー小体型認知症、致死性家族性不眠症、前頭側頭葉変性症、ハンチントン病、ケネディ病、クラッベ病、ライム病、マシャド・ジョセフ病、多発性硬化症、多系統萎縮症、神経有棘赤血球症、ニーマン・ピック病、パーキンソン病、ピック病、原発性側索硬化症、進行性核上性麻痺、レフサム病、サンドホフ病、びまん性ミエリン破壊性硬化症、脊髄小脳失調、脊髄亜急性連合変性症、脊髄癆、テイ・サックス病、中毒性脳症、伝達性海綿状脳症、及びハリネズミふらつき症候群について述べられてよい。一実施形態において、神経変性疾患は、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、及びパーキンソン病からなる群より選択される。一実施形態において、神経変性疾患はアルツハイマー病である。
【００８０】
本発明の態様は、認知機能の改善におけるものである。一実施形態において、認知機能は、知覚、記憶、注意、スピーチ理解、スピーチ生成、読解、画像の作成、学習、及び推論からなる群より選択される。一実施形態において認知機能は、知覚、記憶、注意、及び推論からなる群より選択される。一実施形態において、認知機能は記憶である。
【００８１】
本発明の態様は、ストレス誘発性のまたはストレス関連の認知障害の治療におけるものである。本発明の態様は、気分障害の治療におけるものである。一実施形態において、気分障害は、うつ病、分娩後うつ病、気分変調症、及び双極性障害からなる群より選択される。一実施形態において、気分障害はうつ病である。一実施形態において、気分障害は気分変調症である。
【００８２】
本発明の態様は、ストレス誘発性のまたはストレス関連の気分障害、例えば気分変調症の治療におけるものである。本発明の態様は、不安障害の治療におけるものである。一実施形態において、不安障害は、全般性不安障害、パニック障害、広場恐怖を伴うパニック障害、広場恐怖症、社会不安障害、強迫性障害、及び心的外傷後ストレス障害からなる群より選択される。一実施形態において、不安障害は全般性不安障害である。一実施形態において、不安障害は心的外傷後ストレス障害である。
【００８３】
本発明の態様は、ストレス誘発性のまたはストレス関連の不安の治療におけるものである。
【００８４】
本発明の態様は、筋疾患または神経筋疾患の治療におけるものである。一実施形態において、筋疾患または神経筋疾患は、ミオパチーである。一実施形態において、筋疾患または神経筋疾患は、サルコペニアである。一実施形態において、筋疾患または神経筋疾患は、筋ジストロフィーである。一実施形態において、筋疾患または神経筋疾患は、デュシェンヌ型筋ジストロフィーである。一実施形態において、筋疾患または神経筋疾患は、例えば散発性封入体筋炎のような封入体筋炎である。
【００８５】
本発明の態様は、ミトコンドリア疾患の治療におけるものである。例えば、対象は、筋肉調整の喪失、筋力低下、視覚障害、聴覚障害、心疾患、肝疾患、腎疾患、胃腸障害、呼吸障害、神経学的問題、しばしば学習障害である自律神経障害、及びミトコンドリア疾患の結果としての認知症の治療を必要としてもよい。
【００８６】
本発明の態様は、筋性能の向上におけるものである。一実施形態において、筋性能は、パワー、スピード、持久力、及び回復からなる群より選択される。ヒトにおいて、筋機能は、一般に、年齢と共に低下し、人生の３０代から始まり、一般的に６５歳を過ぎると低下が加速する。したがって、本発明の態様は、老化過程の筋性能の維持におけるものである。筋性能の向上は、健康な老化（例えば、４５歳〜６５歳）、及び６５歳以上の筋肉低下率を遅らせること（前虚弱）において、スポーツ栄養中の化合物の使用の一部であり得る。
用途：
本発明の組成物は、特定の状態の治療のインビトロ試験においても使用される。
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】実施例６の結果、具体的に４８時間の、ＤＭＳＯ（コントロール）、ＵＡ、ＮＲまたはＵＡとＮＲの組み合わせによる処理後のＣ２Ｃ１２筋芽細胞におけるミトコンドリア呼吸サブユニットタンパク質の定量化を示す。図１Ａは、図１Ｂに示されるバンドの強度を表すヒートマップである。
【図２】実施例７の結果を示す。具体的に、図２は、ＤＭＳＯで２４時間、０．１μＭのＵＡで２４時間、１ｍＭのＮＲで６時間、または０．１μＭのＵＡで２４時間と１ｍＭのＮＲで６時間の処理後のＣ２Ｃ１２筋芽細胞におけるミトコンドリア呼吸サブユニットとオートファジーの遺伝子発現結果を示す。
【図３】実施例７の結果を示す。具体的に、図３は、ＤＭＳＯで２４時間、１μＭのＵＡで２４時間、１ｍＭのＮＲで６時間、または１μＭのＵＡで２４時間と１ｍＭのＮＲで６時間の処理後のＣ２Ｃ１２筋芽細胞におけるミトコンドリア呼吸サブユニットとオートファジーの遺伝子発現結果を示す。
【図４】実施例７の結果を示す。図４は、ＤＭＳＯで２４時間、２５μＭのＵＡで２４時間、１ｍＭのＮＲで２４時間、または２４μＭのＵＡと１ｍＭのＮＲで２４時間の処理後のＣ２Ｃ１２筋芽細胞におけるミトコンドリア呼吸サブユニットとオートファジーの遺伝子発現結果を示す。
【実施例】
【００８８】
下記の実施例は、本発明を説明する。
実施例１：化合物
ウロリチンＡを、下記のとおり調製した：
ウロリチンＡ（４）を、臭化物１及びレゾルシノール２から出発する２つのステップで調製した。純粋な化合物を淡黄色の粉末として得た。
【００８９】
【化４】
2019505504.tif 000014
【００９０】
ステップ１：
水（１２０ｍＬ）中の２−ブロモ−５−メトキシ安息香酸１（２７．６ｇ、１１９ｍｍｏｌ、１．０当量）、レゾルシノール２（２６．３ｇ、２３９ｍｍｏｌ、２．０当量）、及び水酸化ナトリウム（１０．５ｇ、２６３ｍｍｏｌ、２．２当量）の混合物を１時間還流加熱した。硫酸銅の５％水溶液（５０ｍＬの水中の３．８８ｇのＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ、１５．５ｍｍｏｌ、０．１当量）を次に添加し、混合物をさらに３０分間還流した。混合物を室温まで冷却させ、固体をブフナーフィルタ上で濾過した。残留物を冷水で洗浄して淡赤色の固体を得て、これを熱いＭｅＯＨ中で粉砕した。懸濁液を一晩４℃で放置した。得られた沈殿物を濾過し、冷たいＭｅＯＨで洗浄し、表題化合物３を淡褐色の固体として得た。
ステップ２：
乾燥ジクロロメタン（１００ｍＬ）中の３（１０．０ｇ、４１ｍｍｏｌ、１．０当量）の懸濁液に、０℃で乾燥ジクロロメタン中の三臭化ホウ素の１Ｍ溶液（１１０ｍＬの無水ジクロロメタン中の１１．９３ｍＬの純粋ＢＢｒ３、１２４ｍｍｏｌ、３．０当量）を滴加した。混合物を０℃で１時間放置した後、室温まで温めた。溶液をその温度で１７時間撹拌した。次に氷を混合物に十分に添加した。黄色の沈殿物を濾過し、冷水で洗浄して黄色の固体を得て、これを酢酸中で３時間還流加熱した。熱い溶液を迅速に濾過し、沈殿物を酢酸で、次にジエチルエーテルで洗浄し、表題化合物４を黄色の固体として得た。１Ｈ−及び１３Ｃ−ＮＭＲは、４の構造と一致した。
実施例２：高タンパク質、ニコチンアミドリボシド及びウロリチンＡを含有する、健康的な老化及び加齢性筋力低下を対象とする粉ミルク組成物
【００９１】
【表８】
2019505504.tif 000015
【００９２】
表８に示されている栄養プロファイルを有する組成物は、加齢性筋力低下に対抗するために、対象に与えられる。
実施例３：ニコチンアミドリボシド及びウロリチンＡを含有する、集中治療または入院中の寝たきりの対象向けの経腸栄養液体組成物
【００９３】
【表９】
2019505504.tif 000016
【００９４】
表９に示されている栄養プロファイルを有する飲料組成物は、集中治療または入院中の寝たきりの対象に与えられる。
実施例４：ニコチンアミドリボシド及びウロリチンＡを含有する、持久力トレーニング中の最適な筋機能のための、活動的なアスリートを対象とするシリアルバー組成物
【００９５】
【表１０】
2019505504.tif 000017
【００９６】
表１０に示されている栄養プロファイルを有するバー組成物は、持久力中の最適な筋機能のために、活動的なアスリートに与えられる。
実施例５：ヨーグルト組成物
【００９７】
【表１１】
2019505504.tif 000018
【００９８】
実施例６：筋肉細胞におけるミトコンドリア呼吸サブユニットタンパク質に対するウロリチンＡとニコチンアミドリボシドのインビトロ試験
Ｃ２Ｃ１２筋芽細胞を、４．５ｇ／Ｌのグルコース、１０％のウシ胎仔血清、及び５０μｇ／ｍＬのゲンタマイシンを含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養した。ウロリチンＡ（ＵＡ）を、ＤＭＳＯ中で５０ｍＭのストック溶液に溶解した。トリフレート塩の形態のニコチンアミドリボシド（ＮＲ）を、二重蒸留水中で、１Ｍのストック溶液中に溶解した。１０万個の細胞を、０時間で、６ウェルプレート中に播種した。条件当たり、全部で３ウェルを使用した（群当たりｎ＝３）。細胞を、４８時間の期間、２ｍｌの容量中、（ａ）ＤＭＳＯ０．１％、（ｂ）２５μＭのＵＡ、（ｃ）０．１ｍＭのＮＲ、（ｄ）１ｍＭのＮＲ、（ｅ）２５μＭのＵＡ＋０．１ｍＭのＮＲ、及び（ｆ）２５μＭのＵＡ＋１ｍＭのＮＲの最終濃度で処理した
処理の最後に、細胞を、プロテアーゼ（ｃＯｍｐｌｅｔｅ（商標）、Ｒｏｃｈｅ）、及びホスファターゼ阻害剤（ＰｈｏｓＳＴＯＰ（商標）、Ｒｏｃｈｅ）を含む細胞溶解緩衝液（＃９８０３、Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ）で溶解し、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＮｕＰａｇｅ（登録商標）Ｎｏｖｅｘ（登録商標）Ｇｅｌ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇｅｌｓ−４−１２％，Ｔｈｅｒｍｏ  ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）へと供した。ミトコンドリアにコードされたシトクロムｃオキシダーゼ（ＭＴＣＯ１）、コハク酸デヒドロゲナーゼ複合体フラビンタンパク質サブユニットＡ（ＳＤＨＡ）及びＢ（ＳＤＨＢ）、ユビキノール・チトクロムｃ還元酵素コアタンパク質ＩＩ（ＵＱＣＲＣ２）及び、ＡＴＰシンターゼ、Ｈ＋輸送、ミトコンドリアＦ１複合体、αサブユニット１（ＡＴＰ５Ａ）を含む、ミトコンドリア呼吸サブユニットについてタンパク質レベルを調べた。ハウスキーピングタンパク質であるチューブリンａをローディングのコントロールとして測定した。タンパク質の検出は、Ａｚｕｒｅ  ｃ３００（Ａｚｕｒｅ  ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ）を用いて実施した（図１Ｂ）。ウエスタンブロット画像は、３つの生物学的な重複の代表である。実験は少なくとも２回繰り返した。ＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いてバンドを定量化した。バンド強度のヒートマップをＧＥＮ−Ｅ（Ｂｒｏａｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）を用いて条件付きフォーマットで描いた。コントロールのＤＭＳＯの値を１に設定した（図１Ａ）。
【００９９】
図１に示されるように、２５μＭにおけるＵＡが単独で、ＳＤＨＡ（＋５４％）、ＳＤＨＢ（＋１０％）、ＵＱＣＲＣ２（＋２６％）及びＭＴ−ＣＯ１（＋１４％）のタンパク質レベルの増加を誘導する一方で、ＡＴＰ５Ａタンパク質レベルにおける変化を観察しなかった。ＮＲは、試験された濃度のおいて、用量依存的ではない異なった効果を有する。ＮＲの０．１と１ｍＭの両方は、ＳＤＨＡに＋≒１００％の増加をもたらし、ＳＤＨＢにおける変化をもたらさず、ＵＱＣＲＣ２における＋≒１０％の変化とＭＴ−ＣＯ１における−≒１０％の変化をもたらした。０．１ｍＭのＮＲは、ＡＴＰ５Ａに影響を有さない一方で、１ｍＭのＮＲはそれを２０％減少させた。対照的に、ＵＡとＮＲの組み合わせは、全てのタンパク質レベルを増加させ、単一の化合物によるものよりも高い度合で増加させた。ＵＡ２５μＭ＋ＮＲ０．１ｍＭが、ＳＤＨＡを１４０％、ＳＤＨＢを＋１８％、ＵＱＣＲＣ２を＋３０％、ＭＴ−ＣＯ１を３７％、及びＡＴＰ５Ａを１８％増加させる一方で、ＵＡ２５μＭ＋ＮＲ１ｍＭが、ＳＤＨＡを１２７％、ＳＤＨＢを＋３４％、ＵＱＣＲＣ２を＋６３％、ＭＴ−ＣＯ１を６６％、及びＡＴＰ５Ａを３３％増加させた。
【０１００】
これらの結果は、ＵＡとＮＲの組み合わせが、ミトコンドリア生合成に対し相乗効果を有し、この効果が、ＮＲのいくつかの濃度にわたって保存されるということを示した。興味深いことに、ＵＡと組み合わせたときに、ＮＲの用量依存的な効果が存在し、一方で、化合物単独ではそうではなかった。
実施例７：筋肉細胞におけるミトコンドリア生合成とオートファジーのマーカーに対するウロリチンＡとニコチンアミドリボシドのインビトロ試験
Ｃ２Ｃ１２筋芽細胞を、４．５ｇ／Ｌのグルコース、１０％のウシ胎仔血清、及び５０μｇ／ｍＬのゲンタマイシンを含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養した。ウロリチンを、ＤＭＳＯ中で５０ｍＭのストック溶液に溶解した。トリフレート塩の形態のニコチンアミドリボシドを、二重蒸留水中で、１Ｍのストック溶液中に溶解した。１０万個の細胞を、０時間で、６ウェルプレート中に播種した。条件当たり、全部で６ウェルを使用した（群当たりｎ＝６）。
【０１０１】
第１のバッチの実験において、細胞を、２ｍｌの容量で、（ａ）ＤＭＳＯを０．１％で２４時間、（ｂ）０．１μＭのＵＡで２４時間、（ｃ）１μＭのＵＡで２４時間、（ｄ）１ｍＭのＮＲで６時間、（ｅ）０．１μＭのＵＡで２４時間と１ｍＭのＮＲで６時間、（ｆ）１μＭで２４時間と１ｍＭのＮＲで６時間、によって処理した（図２及び３）。
【０１０２】
第２のバッチの実験において、細胞を、２ｍｌの容量で、（ａ）ＤＭＳＯを０．１％で２４時間、（ｂ）２５μＭのＵＡで２４時間、（ｄ）１ｍＭのＮＲで２４時間、及び（ｅ）２５μＭのＵＡと１ｍＭのＮＲで２４時間、によって処理した（図４）。
【０１０３】
処理の最後に、全ＲＮＡをＴＲＩｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて調製した。ｃＤＮＡを、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、取扱説明書に従って調製した。ＲＴ−ｑＰＣＲ反応を、示したプライマー（表１２）と共に、Ｌｉｇｈｔ−Ｃｙｃｌｅｒ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）及びｑＰＣＲ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて実施した。ミトコンドリア生合成経路（コハク酸デヒドロゲナーゼ複合体フラボタンパク質サブユニットＡ、ＳＤＨＡ；ミトコンドリアにコードされたシトクロムｃオキシダーゼＩＩ、ＭＴ−ＣＯ２；ＡＴＰシンターゼ、Ｈ＋輸送、ミトコンドリアＦ１複合体、αサブユニット１、ＡＴＰ５Ａ及びＮＡＤＨ：ユビキノンオキシドレダクターゼサブユニットＢ２、ＮＤＵＦＢ２）、及びオートファジー経路（オートファジー関連５、ＡＴＧ５、ＧＡＢＡタイプＡ関連タンパク質様１、ＧＡＢＡＲＡＰＬ１及びセクエストソーム１、ｐ６２）に属する遺伝子が解析され、ハウスキーピング遺伝子であるアクチンβ（ＡＣＴＢ）及びヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ１（ＨＰＲＴ１）に対して標準化された。図２が０．１μＭのＵＡで２４時間と１ｍＭのＮＲで６時間の組み合わせを示す一方で、図３が、１μＭのＵＡで２４時間と１ｍＭのＮＲで６時間の組み合わせを示す。図４は、２５μＭのＵＡと１ｍＭのＮＲの組み合わせで２４時間を示す。棒グラフは平均±ＳＥＭを表す。＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１は、一元配置ＡＮＯＶＡに続いてバートレット検定とダネットの多重比較検定を行った後のＵＡとＮＲの組み合わせと他の処理との間の統計的差異である。実験は少なくとも２回繰り返した。
【０１０４】
図２及び３に示すように、ＵＡ０．１μＭまたは１μＭで２４時間と、ＮＲ１ｍＭで６時間の組み合わせは、ＵＡ単独またはＮＲ単独と比べて、ミトコンドリア呼吸サブユニット（図２Ａ〜Ｃ及び図３Ａ〜Ｃ）及びオートファジー遺伝子（図２Ｄ〜Ｅ及び図３Ｄ〜Ｅ）の有意により高い増加をもたらした。同様に、ＵＡ２５μＭとＮＲ１ｍＭの組み合わせで２４時間は、ＵＡ単独またはＮＲ単独と比べて、有意により多くのミトコンドリア生合成（図４Ａ〜Ｃ）及びオートファジー遺伝子（図４Ｄ〜Ｅ）をもたらした。これらの結果は、ＵＡとＮＲの組み合わせが、ミトコンドリア生合成とオートファジーに対し相乗効果を有し、この効果が、ＵＡのいくつかの濃度とＮＲのいくつかの処理のタイミングにわたって保存されるということを示した。これらの結果は、ミトコンドリア生合成とオートファジーの両方の遺伝子が、ウロリチンＡとニコチンアミドリボシドの組み合わせにおいて上方制御されるために驚くべきである。
【０１０５】
ＲＴ−ｑＰＣＲ解析に用いられるプライマーは、以下の表１２に示される参考文献由来の公知の文献のプライマーである。
【０１０６】
【表１２】
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【０１０７】
実施例８ａ筋肉細胞におけるオートファジーとミトコンドリア生合成に対するウロリチンＡとニコチンアミドリボシドのインビトロ試験
Ｃ２Ｃ１２筋芽細胞を、４．５ｇ／Ｌのグルコース、２０％のウシ胎仔血清、及び５０μｇ／ｍＬのゲンタマイシンを含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養する。ウロリチンを、ＤＭＳＯ中で５０ｍＭのストック溶液に溶解する。ニコチンアミドリボシドを、ＤＭＳＯ中で５０ｍＭのストック溶液に溶解する。細胞を、５０μＭのウロリチン、１ｍＭのニコチンアミドリボシド、または５０μＭのウロリチンと１ｍＭのニコチンアミドリボシドで２４時間処理する。コントロールの細胞を、等価最終濃度のＤＭＳＯで同じ期間処理し、未処理のコントロールとしての役割を果たす。
【０１０８】
ヒト初代骨格筋細胞を、インビトロで培養し、５０μＭのウロリチン、１ｍＭのニコチンアミドリボシド、または５０μＭのウロリチンと１ｍＭのニコチンアミドリボシドの濃度に対し２４時間曝露する。ヒト初代骨格筋細胞を、２％ウマ血清を加えたＤＭＥＭで増殖させる。コントロールの細胞を、等価最終濃度のＤＭＳＯで同じ期間処理し、未処理のコントロールとしての役割を果たした。
【０１０９】
処理の終了時に、ＲＮＡを細胞から抽出し、ｑＰＣＲ解析のためにｃＤＮＡへと変換した。ＮＡＤ＋合成経路（Ｎａｍｐｔ）、ミトコンドリア生合成経路（Ｐｇｃ１ａ、Ｓｉｒｔ１、Ｎｒｆ１、Ｔｆａｍ、Ｍｒｐｓ５）、ミトコンドリア呼吸鎖サブユニット（Ｎｄｕｆｂ５、Ｓｄｈａ、ＣｙｔＣ、ＣｏｘＩＶ、Ａｔｐ５ｇ１）、オートファジー経路（ＬＣ３Ｂ、Ｐｉｋ３ｃ３、ｐ６２、Ｇａｂａｒａｐｌ１）、及びマイトファジー経路（Ｐａｒｋｉｎ、ＰＩＮＫ１）に属する遺伝子を解析し、ハウスキーピング遺伝子であるＡｃｔｂ及びＨｐｒｔ１で標準化した。結果は、ＮＡＤ＋合成経路、ミトコンドリア生合成ならびに呼吸サブユニット、オートファジー及びマイトファジーに属する遺伝子の発現に対するニコチンアミドリボシドと組み合わせたウロリチンＡの効果を示す。
【０１１０】
同様に、処理の終了時に、細胞をＲＩＰＡ緩衝液で溶解し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥへと供し、オートファジー関連タンパク質（ＬＣ３−Ｉ及びＬＣ３−ＩＩ、ｐ６２、ＡＭＰＫａ、ならびにｐ−ＡＭＰＫａ）、マイトファジー関連タンパク質（Ｐａｒｋｉｎ）ミトコンドリア呼吸サブユニット（ＭＴＣＯ１、ＮＤＵＦＳ３、ＳＤＨＡ、ＳＤＨＢ、ＵＱＣＲＣ２、ＡＴＰ５Ａ）に関するタンパク質レベルを調べた。ローディングされた全タンパク質について、ハウスキーピングタンパク質であるβアクチンをローディングのコントロールとして測定した。ミトコンドリアタンパク質ＶＤＡＣ１を、ミトコンドリアの存在量のためのハウスキーピングタンパク質として使用した。結果は、問題の細胞における、オートファジー、マイトファジー、及びミトコンドリア存在量に対する、ニコチンアミドリボシドと組み合わされたウロリチンＡの効果を示す。
実施例８ｂ：筋肉細胞における呼吸容量に対するウロリチンＡとニコチンアミドリボシドのインビトロ試験
Ｃ２Ｃ１２筋芽細胞を、４．５ｇ／Ｌのグルコース、２０％のウシ胎仔血清、及び５０μｇ／ｍＬのゲンタマイシンを含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養する。ウロリチンを、ＤＭＳＯ中で５０ｍＭのストック溶液に溶解する。ニコチンアミドリボシドを、ＤＭＳＯ中で５０ｍＭのストック溶液に溶解する。細胞を、５０μＭのウロリチン、１ｍＭのニコチンアミドリボシド、または５０μＭのウロリチンと１ｍＭのニコチンアミドリボシドで２４時間処理する。コントロールの細胞を、等価最終濃度のＤＭＳＯで同じ期間処理し、未処理のコントロールとしての役割を果たす。
【０１１１】
ヒト初代骨格筋細胞を、インビトロで培養し、５０μＭのウロリチン、１ｍＭのニコチンアミドリボシド、または５０μＭのウロリチンと１ｍＭのニコチンアミドリボシドの濃度に対し２４時間曝露する。ヒト初代骨格筋細胞を、２％ウマ血清を加えたＤＭＥＭで増殖させる。コントロールの細胞を、等価最終濃度のＤＭＳＯで同じ期間処理し、未処理のコントロールとしての役割を果たした。
【０１１２】
処理の終了時に、呼吸容量を、基底酸素消費量と脱共カルボニルシアン化物ｍ−クロロフェニルヒドラジン（ＣＣＣＰ）を最終濃度１０μＭで添加後の測定によって決定した。結果は、問題の細胞における、呼吸容量に対する、ニコチンアミドリボシドと組み合わされたウロリチンＡの効果を示す。
実施例８ｃ：筋機能に対する実験
６５歳〜７５歳の高齢のヒトに相当する２２ヶ月齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊの老齢マウスを、老化のモデルで使用する。マウスを、（ｉ）補助食品を伴わない食餌、（ｉｉ）ウロリチンを伴う食餌、（ｉｉｉ）ニコチンアミドリボシドを伴う食餌、または（ｉｖ）ウロリチンとニコチンアミドリボシドを伴う食餌で処置した。補助食品に加えて、食餌は、タンパク質、脂質、炭水化物必須栄養素、ビタミン、及びミネラルを含有する。
【０１１３】
食餌による処置の終了時に、筋肉を秤量し、収集した。ＲＮＡを細胞から抽出し、ｑＰＣＲ解析のためにｃＤＮＡへと変換した。ＮＡＤ＋合成経路（Ｎａｍｐｔ）、ミトコンドリア生合成経路（Ｐｇｃ１ａ、Ｓｉｒｔ１、Ｎｒｆ１、Ｔｆａｍ、Ｍｒｐｓ５）、ミトコンドリア呼吸鎖サブユニット（Ｎｄｕｆｂ５、Ｓｄｈａ、ＣｙｔＣ、ＣｏｘＩＶ、Ａｔｐ５ｇ１）、オートファジー経路（ＬＣ３Ｂ、Ｐｉｋ３ｃ３、ｐ６２、Ｇａｂａｒａｐｌ１）、及びマイトファジー経路（Ｐａｒｋｉｎ、ＰＩＮＫ１）に属する遺伝子を解析し、ハウスキーピング遺伝子であるＡｃｔｂ及びＨｐｒｔ１で標準化した。
【０１１４】
結果は、ＮＡＤ＋合成経路、ミトコンドリア生合成ならびに呼吸サブユニット、オートファジー及びマイトファジーに属する遺伝子の発現に対するニコチンアミドリボシドと組み合わせたウロリチンＡの効果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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2019505504.tif 000027
2019505504.tif 000028