(57)【要約】  式（Ｉ）の化合物：2019501134.tif 000047またはその薬学的に許容し得る塩（式中：Ｑは、５−メチルピリダジン−３−イル、５−クロロピリダジン−３−イル、６−メチルピリダジン−３−イル、または６−フルオロピリダジン−３−イルであり得；Ｒは、水素、フルオロ、またはメトキシであり得；Ｒ１は、水素、メトキシ、ジフルオロメトキシ、またはトリフルオロメトキシであり得；Ｒ２は、メチルまたはエチルであり得る）。式（Ｉ）の化合物は、グルタミナーゼ、例えばＧＬＳ１を阻害することができる。
2019501134.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2019501134.tif 000046
またはその薬学的に許容し得る塩（式中：
Ｑは、５−メチルピリダジン−３−イル、５−クロロピリダジン−３−イル、６−メチルピリダジン−３−イル、または６−フルオロピリダジン−３−イルであり；
Ｒは、水素、フルオロ、またはメトキシであり；
Ｒ１は、水素、メトキシ、ジフルオロメトキシ、またはトリフルオロメトキシであり；
Ｒ２は、メチルまたはエチルである）。
【請求項２】
Ｑが、６−メチルピリダジン−３−イルまたは６−フルオロピリダジン−３−イルである、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩。
【請求項３】
Ｒが、水素またはフルオロである、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容し得る塩。
【請求項４】
Ｒが、水素である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容し得る塩。
【請求項５】
Ｒ１が、メトキシ、ジフルオロメトキシ、またはトリフルオロメトキシである、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容し得る塩。
【請求項６】
Ｒ２が、メチルである、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容し得る塩。
【請求項７】
化合物が、
（２Ｓ）−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−フェニル−アセトアミド；
（２Ｓ）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）アセトアミド；
（２Ｓ）−２−エトキシ−２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−２−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］アセトアミド；
（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）アセトアミド；
（２Ｓ）−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；および
（２Ｓ）−２−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−アセトアミド
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容し得る塩。
【請求項８】
化合物が、
（２Ｓ）−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）アセトアミド；
（２Ｓ）−２−エトキシ−２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−２−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］アセトアミド；
（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；および
（２Ｓ）−２−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−アセトアミド
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容し得る塩。
【請求項９】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容し得る塩と、少なくとも１種の薬学的に許容し得る希釈剤または担体とを含む医薬組成物。
【請求項１０】
治療法における使用のための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１１】
癌の治療における使用のための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１２】
癌の治療のための医薬品の製造のための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１３】
かかる治療を必要とする温血動物において癌を治療するための方法であって、治療有効量の請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容し得る塩を、温血動物に投与することを含む方法。
【請求項１４】
癌が、乳癌、肺癌、膵臓癌、腎癌、または肝細胞癌である、請求項１１、１２、または１３に記載の化合物、使用、または方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書は、概して、置換された１，３，４−チアジアゾール化合物およびその薬学的に許容し得る塩に関する。これらの化合物は、グルタミナーゼ１酵素（「ＧＬＳ１」）に対して作用するので、本明細書はまた、癌を含めたＧＬＳ１介在疾患を治療または予防するための、こうした化合物およびその塩の使用にも関する。本明細書はさらに、こうした化合物および塩を含む医薬組成物；こうした化合物および塩を含むキット；こうした化合物および塩の製造の方法；こうした化合物および塩の製造において有用な中間体に；また、こうした化合物および塩を使用して、癌を含めたＧＬＳ１介在疾患を治療するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
グルタミンは、最も豊富な血漿アミノ酸であり、多くの成長促進経路に関与する。具体的には、グルタミンは、ＴＣＡサイクルにおける酸化に、また、細胞の酸化還元平衡を維持するのに関与し、また、ヌクレオチドおよびアミノ酸合成のための窒素を提供する（非特許文献１；非特許文献２、これらをそれぞれ、その全体を参照によって組み込む）。多くの癌細胞は、ワールブルク効果（ここでは、糖分解によるピルビン酸が、使用されてアセチルＣｏＡを作り出すのではなく、乳酸に転換される）を含めた細胞の代謝変化の結果としてのグルタミン代謝に依存している（非特許文献３、その全体を参照によって組み込む）。こうした癌細胞は、このグルタミン代謝への依存の結果として、外来性グルタミンレベルの変化に敏感である。さらに、現在ある証拠は、グルタミノリシスが、ある種の癌型において重要な役割を果たし（非特許文献４、その全体を参照によって組み込む）、また、Ｍｙｃなどの公知の発癌ドライバー（ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ  ｄｒｉｖｅｒ）と関連性がある（非特許文献５、その全体を参照によって組み込む）ことを示唆している。
【０００３】
グルタミン酸へのグルタミン異化という第１のステップは、グルタミナーゼ（これは、それぞれ腎臓および肝臓において発現されると元々確認されていた２つのアイソフォーム、ＧＬＳ１およびＧＬＳ２として存在する）によって触媒される。腎臓グルタミナーゼ（ＧＬＳ１）は、肝臓グルタミナーゼ（ＧＬＳ２）よりも遍在的に発現されることが公知であり、２つのスプライスバリアント、ＫＧＡおよびより短いＧＡＣアイソフォーム（これらはどちらも、ミトコンドリアに位置する）を有する。（非特許文献６；非特許文献７、これらをそれぞれ、その全体を参照によって組み込む）。ＧＬＳ１発現は、腫瘍成長、およびいくつかの疾患型における悪性度と関連性がある（非特許文献８；非特許文献９、これらをそれぞれ、その全体を参照によって組み込む）。したがって、ＧＬＳ１の阻害剤が、単独療法として、または他の抗癌剤と組み合わせて、癌の治療において有用であることが期待される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｃｕｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．．２００７，１２，３４４−５７
【非特許文献２】ＤｅＢｅｒａｒｄｉｎｉｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｎｇ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２０１０，３１３−３２４
【非特許文献３】Ｋｏｐｐｅｎｏｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２０１１，１１，３２５−３３７
【非特許文献４】Ｈｅｎｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２０１３，１２３，３６７８−３６８４
【非特許文献５】Ｄａｎｇ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１０，７０，８５９−８６３
【非特許文献６】Ｅｌｇａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １９９９，１，５１−６２
【非特許文献７】Ｃａｓｓａｇｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．２０１２，１０９，１０９２−１０９７
【非特許文献８】Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２０１０，１８，２０７−２１９
【非特許文献９】ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｈｅｕｖａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏ．Ｔｈｅｒ．２０１２，１３，１１８５−１１９４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
一態様では、式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2019501134.tif 000003
またはその薬学的に許容し得る塩（式中：
Ｑは、５−メチルピリダジン−３−イル、５−クロロピリダジン−３−イル、６−メチルピリダジン−３−イル、または６−フルオロピリダジン−３−イルであり；
Ｒは、水素、フルオロ、またはメトキシであり；
Ｒ１は、水素、メトキシ、ジフルオロメトキシ、またはトリフルオロメトキシであり；
Ｒ２は、メチルまたはエチルである）。
【０００６】
別の態様では、医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩と、少なくとも１種の薬学的に許容し得る希釈剤または担体とを含む。
【０００７】
別の態様では、治療法における使用のための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩。
【０００８】
別の態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩。
【０００９】
別の態様では、癌の治療のための医薬品の製造のための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩。
【００１０】
別の態様では、かかる治療を必要とする温血動物において癌を治療するための方法は、治療有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩を、温血動物に投与することを含む。
【００１１】
他の態様は、本明細書および特許請求の範囲から明らかであろう。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本明細書全体を通して、多くの実施態様が詳述され、これらは、当業者には明らかであろう。本発明は、そのいずれかの特定の実施態様に限定されると解釈されるべきではない。
【００１３】
式（Ｉ）の化合物：
【化２】
2019501134.tif 000004
またはその薬学的に許容し得る塩（式中：
Ｑは、５−メチルピリダジン−３−イル、５−クロロピリダジン−３−イル、６−メチルピリダジン−３−イル、または６−フルオロピリダジン−３−イルであり；
Ｒは、水素、フルオロ、またはメトキシであり；
Ｒ１は、水素、メトキシ、ジフルオロメトキシ、またはトリフルオロメトキシであり；
Ｒ２は、メチルまたはエチルである）が提供される。
【００１４】
５−メチルピリダジン−３−イル、５−クロロピリダジン−３−イル、６−メチルピリダジン−３−イル、または６−フルオロピリダジン−３−イル環は、次の構造を有する：
【化３】
2019501134.tif 000005
【００１５】
いくつかの実施態様では、式（Ｉ）の化合物は、次の式（Ｉａ）を有する：
【化４】
2019501134.tif 000006
（式中、Ｑ、Ｒ、Ｒ１、およびＲ２は、上で定義した通りである）。
【００１６】
用語「薬学的に許容し得る」は、ある物体（例えば塩、剤形、希釈剤、または担体）が、患者における使用に適していることを明記するために使用される。薬学的に許容し得る塩の例の例示的リストは、参照によってその全体が組み込まれるＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ，Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ  ａｎｄ  Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ，ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ／Ｚｕｅｒｉｃｈ：Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ／ＶＨＣＡ，２００２において参照することができる。式（Ｉ）の化合物の適切な薬学的に許容し得る塩は、例えば、酸付加塩である。式（Ｉ）の化合物の酸付加塩は、式（Ｉ）の化合物を、当業者に公知の条件下で、適切な無機または有機酸と接触させることによって形成することができる。酸付加塩は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、およびリン酸などの無機酸を使用して形成することができる。酸付加塩はまた、例えば、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、またはベンゼンスルホン酸などの有機酸を使用して形成することもできる。
【００１７】
したがって、一実施態様では、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩が提供され、ここでは、薬学的に許容し得る塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、またはベンゼンスルホン酸塩である。
【００１８】
一実施態様では、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩が提供され、ここでは、薬学的に許容し得る塩は、塩酸または臭化水素酸塩である。
【００１９】
式（Ｉ）の化合物の、さらに適切な薬学的に許容し得る塩は、塩基付加塩である。式（Ｉ）の化合物の塩基付加塩は、式（Ｉ）の化合物を、当業者に公知の条件下で、適切な無機または有機塩基と接触させることによって形成することができる。塩基付加塩は例えば、例えばアルカリ金属水酸化物（水酸化ナトリウム、カリウム、もしくはリチウムなど）またはアルカリ土類金属水酸化物（水酸化カルシウム化または水酸化マグネシウムなど）などの無機塩基を使用して形成することができる。塩基付加塩はまた、例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピペリジン、モルホリン、またはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミンなどの有機塩基を使用して形成することもできる。
【００２０】
したがって、一実施態様では、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩が提供され、ここでは、薬学的に許容し得る塩は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム物、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピペリジン、モルホリン、またはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン塩である。
【００２１】
一実施態様では、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩が提供され、ここでは、薬学的に許容し得る塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピペリジン、モルホリン、またはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン塩である。
【００２２】
さらなる実施態様は、実施例１（ａ）、１（ｂ）、２、３、４（ａ）、４（ｂ）、５（ａ）、５（ｂ）、６（ａ）、６（ｂ）、７（ａ）、７（ｂ）、８（ａ）、８（ｂ）、９（ａ）、９（ｂ）、１０（ａ）、１０（ｂ）、１１（ａ）、１１（ｂ）、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６  ２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３（ａ）、および３３（ｂ）からなる群から選択される１以上の特定の実施例（例えば１つ、２つ、もしくは３つの特定の実施例、または１つの特定の実施例）が、個々に放棄されるという条件で、本明細書で定義する実施態様のいずれか（例えば請求項１の実施態様）を提供する。
【００２３】
式（Ｉ）中の可変の基の何らかの値は、次の通りである。こうした値は、さらなる実施態様を提供するために本明細書で定義する定義、特許請求の範囲（例えば請求項１）、または実施態様のいずれかと組み合わせて使用することができる。
【００２４】
Ｑは、６−メチルピリダジン−３−イルまたは６−フルオロピリダジン−３−イルであり得る。
【００２５】
Ｑは、５−メチルピリダジン−３−イルまたは５−クロロピリダジン−３−イルであり得る。
【００２６】
Ｑは、５−メチルピリダジン−３−イルであり得る。
【００２７】
Ｑは、５−クロロピリダジン−３−イルであり得る。
【００２８】
Ｑは、６−メチルピリダジン−３−イルであり得る。
【００２９】
Ｑは、６−フルオロピリダジン−３−イルであり得る。
【００３０】
Ｒは、水素またはフルオロであり得る。
【００３１】
Ｒは、水素であり得る。
【００３２】
Ｒ１は、メトキシ、ジフルオロメトキシ、またはトリフルオロメトキシであり得る。
【００３３】
Ｒ２は、メチルであり得る。
【００３４】
一実施態様では、
Ｑが、６−メチルピリダジン−３−イルまたは６−フルオロピリダジン−３−イルであり；
Ｒ１が、メトキシまたはトリフルオロメトキシである、
式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩が提供される。
【００３５】
一実施態様では、
Ｑが、６−メチルピリダジン−３−イルまたは６−フルオロピリダジン−３−イルであり；
Ｒが、水素であり；
Ｒ１が、メトキシまたはトリフルオロメトキシである、
式（Ｉ）の化合物、その薬学的に許容し得る塩が提供される。
【００３６】
一実施態様では、
Ｑが、６−メチルピリダジン−３−イルまたは６−フルオロピリダジン−３−イルであり；
Ｒが、水素であり；
Ｒ１が、メトキシまたはトリフルオロメトキシであり；
Ｒ２が、メチルである、
式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩が提供される。
【００３７】
一実施態様では、
Ｑが、６−メチルピリダジン−３−イルまたは６−フルオロピリダジン−３−イルであり；
Ｒが、フルオロである、
式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩が提供される。
【００３８】
一実施態様では、以下からなる群から選択される式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩が提供される：
（２Ｓ）−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾールチアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−フェニル−アセトアミド；
（２Ｓ）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）アセトアミド；
（２Ｓ）−２−エトキシ−２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−２−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］アセトアミド；
（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）アセトアミド；
（２Ｓ）−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；および
（２Ｓ）−２−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−アセトアミド。
【００３９】
一実施態様では、以下からなる群から選択される式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩が提供される：
（２Ｓ）−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）アセトアミド；
（２Ｓ）−２−エトキシ−２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−２−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］アセトアミド；
（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；
（２Ｓ）−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド；および
（２Ｓ）−２−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−アセトアミド。
【００４０】
本明細書に記載した化合物および塩は、溶媒和形態および非溶媒和形態で存在することができる。例えば、溶媒和形態は、半水和物、一水和物、二水和物、三水和物、またはその他の量などの水和物形態であり得る。本発明は、式（Ｉ）の化合物のすべてのこうした溶媒和および非溶媒和形態を包含する。
【００４１】
本明細書に記載した化合物および塩の原子は、様々な同位体形で存在することができる。本発明は、１１Ｃまたは１３Ｃ炭素、および１Ｈ、２Ｈ（重水素）、または３Ｈ（三重水素）水素を含めた、式（Ｉ）の化合物のすべての同位体形を包含する。
【００４２】
本明細書に記載した化合物および塩は、互変異性体の混合物として存在することができる。「互変異性体」は、水素原子の転位に起因する、平衡状態で存在する構造異性体である。本発明には、式（Ｉ）の化合物のすべての互変異性体が含まれる。
【００４３】
式（Ｉ）の化合物は、様々なジアステレオマー形で調製することができる。本発明には、式（Ｉ）の化合物のすべてのジアステレオマー形が含まれる。
【００４４】
一実施態様では、≧９５％、≧９８％、または≧９９％のジアステレオマー過剰率（％ｄｅ）である単一ジアステレオマーである、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩が提供される。一実施態様では、単一ジアステレオマーは、≧９９％のジアステレオマー過剰率（％ｄｅ）で存在する。
【００４５】
ＧＬＳ１を阻害すると考えられる化合物、すなわち、式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容し得る塩は、治療法において、例えば、癌を含めた、ＧＬＳ１によって少なくともある程度介在される疾患または医学的状態の治療において有用であることが期待される。
【００４６】
「癌」が言及される場合、これには、非転移性癌と転移性癌との両方が含まれ、その結果、癌を治療することは、原発腫瘍と腫瘍転移との両方の治療を含む。
【００４７】
一実施態様では、癌は、転移性癌である。
【００４８】
一実施態様では、癌は、非転移性癌である。
【００４９】
「ＧＬＳ１阻害活性」は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩の存在に対する直接的または間接的応答としての、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩の非存在下でのＧＬＳ１の活性に対するＧＬＳ１の活性の低下を指す。こうした活性の低下は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩とＧＬＳ１との直接的相互作用に起因する可能性もあるし、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩と、ひいてはＧＬＳ１活性に影響を与える１以上の他の因子との相互作用に起因する可能性もある。例えば、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩は、ＧＬＳ１に直接的に結合することによって；別の因子に（直接的にまたは間接的に）ＧＬＳ１活性を低下させることによって；または、細胞または生物内に存在するＧＬＳ１の量を（直接的にまたは間接的に）低下させることによってＧＬＳ１を低下させることができる。
【００５０】
用語「治療法」は、疾患を治療するまたは根底にある病的状態を治すもしくは相殺するという、その通常の意味を有するものとする。用語「治療法」には、それに反する特定の指示が存在しない限り、「予防法」も含まれる。用語「治療的」および「治療的に」は、それに対応する方式で解釈されるべきである。
【００５１】
用語「治療有効量」は、対象において「治療法」を提供するのに有効である、本明細書の実施態様のいずれかに記載した通りの式（Ｉ）の化合物の量を指す。癌の場合では、治療有効量は、上の「治療法」、「治療」、および「予防法」の定義において記載した通りの、対象における観察可能または測定可能な変化のいずれかを引き起こすことができる。例えば、有効量は、癌もしくは腫瘍細胞の数を減少させる；腫瘍全体の大きさを低下させる；例えば軟部組織および骨を含めた末梢器官への腫瘍細胞浸潤を抑制または停止させる；腫瘍転移を抑制または停止させる；腫瘍成長を抑制または停止させる；癌に伴われる１以上の症状をある程度緩和する；罹患率および死亡率を低下させる；生活の質を向上させることができる；またはこうした効果の組み合わせである。有効量は、ＧＬＳ１活性の阻害に応答して、疾患の症状を軽減するのに十分な量であり得る。癌治療法については、インビボの有効性は、例えば、生存期間、無増悪期間（ｔｉｍｅ  ｔｏ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）（ＴＴＰ）、奏効率（ＲＲ）、奏効期間、および／または生活の質を評価することによって測定することができる。当業者によって認識される通り、有効量は、投与経路、賦形剤使用量、および他の薬剤との同時使用量に応じて変動し得る。例えば、組み合わせ治療法が使用される場合、本明細書に記載した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容し得る塩の量と、薬学的に活性な他の薬剤の量は、合わせられた場合に、動物の患者における標的とされる障害を治療するのに協働的に有効である。この状況では、合わせられた量は、これらが、合わせられた場合に、上に記載した通りにＧＬＳ１活性の阻害に応答して疾患の症状を軽減するのに十分であるならば、「治療有効量」である。一般的に、こうした量は、例えば、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容し得るその塩について本明細書に記載した投薬量範囲、および薬学的に活性な他の化合物の認可されたまたは他に公表された投薬量範囲から開始することによって、当業者によって決定することができる。
【００５２】
用語「予防法」は、その通常の意味を有するものとし、疾患の発症を予防するための一次予防法、および、疾患が既に発症しており、患者が疾患の増悪もしくは悪化から、それによって一時的または永続的に保護される二次予防法が含まれる。
【００５３】
用語「治療」は、「治療法」と同義的に使用される。同様に、用語「治療する」は、治療法（ここでは、「治療法」は、本明細書で定義した通りである）を適用することとみなすことができる。
【００５４】
一実施態様では、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩と、少なくとも１種の薬学的に許容し得る希釈剤または担体とを含む医薬組成物が提供される。一実施態様では、医薬組成物は、遊離の塩基としての式（Ｉ）の化合物を含む。別の実施態様では、医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容し得る塩を含む。
【００５５】
一実施態様では、治療法における使用のための式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩が提供される。
【００５６】
一実施態様では、癌の治療における使用のための式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩が提供される。
【００５７】
一実施態様では、癌の治療のための医薬品の製造のための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩の使用が提供される。
【００５８】
一実施態様では、ＧＬＳ１によって介在される疾患の治療における使用のための式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩が提供される。一実施態様では、ＧＬＳ１によって介在される疾患は、癌である。いくつかの実施態様では、癌は、乳癌（例えばトリプルネガティブ乳癌）、肺癌（例えば非小細胞肺癌）、膵臓癌、腎癌、または肝細胞癌であり得る。
【００５９】
「トリプルネガティブ乳癌」は、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、およびＨｅｒ２／ｎｅｕに関する遺伝子を発現しない、または過小発現する、あらゆる乳癌である。
【００６０】
一実施態様では、ＧＬＳ１によって介在される疾患の治療のための医薬品の製造のための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩の使用が提供される。一実施態様では、ＧＬＳ１によって介在される疾患は、癌である。いくつかの実施態様では、癌は、乳癌（例えばトリプルネガティブ乳癌）、肺癌（例えば非小細胞肺癌）、膵臓癌、腎癌、または肝細胞癌であり得る。
【００６１】
一実施態様では、癌の治療のための医薬品の製造のための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩の使用が提供される。
【００６２】
一実施態様では、ＧＬＳ１を阻害する方法であって、式（Ｉ）の化合物を投与することを含む方法が提供される。
【００６３】
一実施態様では、かかる治療を必要とする温血動物において、ＧＬＳ１の阻害が有益である疾患を治療するための方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩を温血動物に投与することを含む方法が提供される。
【００６４】
「温血動物」には、例えばヒトが含まれる。
【００６５】
一実施態様では、かかる治療を必要とする温血動物において、癌を治療するための方法であって、治療有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩を温血動物に投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施態様では、癌は、乳癌（例えばトリプルネガティブ乳癌）、肺癌（例えば非小細胞肺癌）、膵臓癌、腎癌、または肝細胞癌であり得る。
【００６６】
本明細書に記載した癌の治療は、唯一の治療法として適用することもできるし、従来の手術、放射線療法、もしくは化学療法；またはこうした追加の治療法の組み合わせを、式（Ｉ）の化合物の投与に加えて含むこともできる。こうした従来の手術、放射線療法、または化学療法は、式（Ｉ）の化合物を用いる治療と同時に、連続して、または別に施与することができる。
【００６７】
したがって、一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩と、少なくとも１種の追加の抗腫瘍物質とが提供される。
【００６８】
一実施態様では、癌の同時、個別（ｓｅｐａｒａｔｅ）、または連続治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩と、少なくとも１種の追加の抗腫瘍物質とが提供される。
【００６９】
一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩（ここでは、式（Ｉ）の化合物は、少なくとも１種の追加の抗腫瘍物質と同時に、別に、または連続して投与される）が提供される。
【００７０】
一実施態様では、かかる治療を必要とする温血動物において、癌を治療する方法であって、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩と、少なくとも１種の追加の抗腫瘍物質とを、温血動物に投与すること（ここでは、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩と追加の抗腫瘍物質の量は、抗癌効果をもたらすのに協働的に有効である）を含む方法が提供される。
【００７１】
一実施態様では、かかる治療を必要とする温血動物において、癌を治療する方法であって、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩を温血動物に投与することと、前記温血動物に、少なくとも１種の追加の抗腫瘍物質を、同時に、別に、または連続して、温血動物に投与すること（ここでは、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩と追加の抗腫瘍物質の量は、抗癌効果をもたらすのに協働的に有効である）とを含む方法が提供される。
【００７２】
いずれかの実施態様では、追加の抗腫瘍物質は、タキサンである。一実施態様では、タキサンは、パクリタキセルである。一実施態様では、タキサンは、ドセタキセルである。
【００７３】
いずれかの実施態様では、追加の抗腫瘍物質は、白金療法である。一実施態様では、白金療法は、シスプラチン、オキサリプラチン、またはカルボプラチンである。
【００７４】
さらなる実施態様によれば、以下を含むキットが提供される：
ａ）第１の単位剤形中の、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩；
ｂ）第２の単位剤形中の、第２の抗腫瘍物質；
ｃ）第１のおよび第２の単位剤形を含有する容器；および任意選択で
ｄ）使用のための説明書。
【００７５】
式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容し得る塩は、１以上の薬学的に許容し得る希釈剤または担体を含む医薬組成物として投与することができる。したがって、一実施態様では、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩と、少なくとも１種の薬学的に許容し得る希釈剤または担体とを含む医薬組成物が提供される。
【００７６】
前記組成物は、経口使用のために（例えば、錠剤、ロゼンジ、硬または軟カプセル、水性もしくは油性の懸濁剤、乳剤、分散性の散剤もしくは顆粒剤、シロップ、またはエリキシルとして）、局所使用のために（例えば、クリーム、軟膏、ゲル、または水性もしくは油性の液剤もしくは懸濁剤として）、吸入による投与のために（例えば、微粉化された粉末または液体のエアロゾルとして）、吸入による投与のために（例えば、微粉化された粉末として）、または非経口投与のために（例えば、静脈内、皮下、筋肉内投与のための無菌の水性もしくは油性の液剤として）、または座剤として、適した形態であり得る。前記組成物は、従来の医薬用賦形剤を使用する従来の手順によって得ることができる。したがって、経口使用を目的とする組成物は、例えば、１以上の着色料、甘味料、着香料、および／または保存剤を含有することができる。
【００７７】
一実施態様では、治療法における使用のための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩と、少なくとも１種の薬学的に許容し得る希釈剤または担体とを含む医薬組成物が提供される。
【００７８】
一実施態様では、癌の治療における使用のための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容し得る塩と、少なくとも１種の薬学的に許容し得る希釈剤または担体とを含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施態様では、癌は、乳癌（例えばトリプルネガティブ乳癌）、肺癌（例えば非小細胞肺癌）、膵臓癌、腎癌、または肝細胞癌であり得る。
【００７９】
式（Ｉ）の化合物は、通常、５〜５０００ｍｇ／ｍ２（動物の体面積）、すなわちおよそ０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲内の単位用量で、温血動物に投与されることとなり、これは、通常、治療有効用量を提供する。錠剤またはカプセル剤などの単位剤形は、通常、例えば１〜２５０ｍｇの活性成分を含有することとなる。１日量は、必然的に、治療される受容者、個々の投与経路、同時に施されているいずれかの治療法、および治療されている病気の重症度に応じて変動することとなる。したがって、いずれかの特定の患者を治療している医師は、最適な投薬量を決定することができる。
【実施例】
【００８０】
種々の実施態様を、以下の実施例によって例示する。本発明は、これらの実施例に限定されるとみなされるべきではない。
【００８１】
実施例の調製中、概して：
ａ）操作は、他に記述がない限り、周囲温度で、すなわち約１７から３０℃の範囲内で、かつ、窒素などの不活性気体の雰囲気中で実施し；
ｂ）蒸発は、真空中で、回転蒸発によって、またはＧｅｎｅｖａｃ装置を利用して実施し、濾過による残留固体の除去後に精製手順を実施し；
ｃ）フラッシュクロマトグラフィー精製は、Ｇｒａｃｅ  Ｒｅｓｏｌｖｅプレパックシリカカラムを使用する自動化されたＩｓｃｏ  Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ、およびＲｅｄｉＳｅｐ  Ｇｏｌｄ  Ｃ１８カラムを使用する（逆相フラッシュ）Ｉｓｃｏ  Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  Ｒｆで実施し；
ｄ）収率は、存在する場合、必ずしも、達成可能な最大値ではなく；
ｅ）式（Ｉ）の最終生成物の構造は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法によって確認され、ＮＭＲ化学シフト値は、δスケールで測定した。プロトン磁気共鳴スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｄｖａｎｃｅ  ７００（７００ＭＨｚ）、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ５００（５００ＭＨｚ）、Ｂｒｕｋｅｒ  ４００（４００ＭＨｚ）、またはＢｒｕｋｅｒ  ３００（３００ＭＨｚ）装置を使用して決定し；１９Ｆ  ＮＭＲは、２８２ＭＨｚまたは３７６ＭＨｚで決定し；１３Ｃ  ＮＭＲは、７５ＭＨｚまたは１００ＭＨｚで決定し；測定は、他に指定がない限り、およそ２０〜３０℃で行い；次の略語を使用し：ｓ、一重線；ｄ、二重線；ｔ、三重線；ｑ、四重線；ｍ、多重線；ｄｄ、二重線の二重線；ｄｄｄ、二重線の二重線の二重線；ｄｔ、三重線の二重線；ｂｓ、広域シグナル（ｂｒｏａｄ  ｓｉｇｎａｌ）；
ｆ）式（Ｉ）の最終生成物はまた、２９９６  ＰＤＡおよび２０００  ａｍｕ  ＺＱシングル四重極質量分析計を備えたＷａｔｅｒｓ  ２７９０／９５  ＬＣシステムに基づくＨＰＬＣシステムを使用する、液体クロマトグラフィー（ＬＣＭＳ）後の質量分析によって特徴付けた。使用した溶媒は、Ａ＝水、Ｂ＝アセトニトリル、Ｃ＝５０：５０のアセトニトリル：水（０．１％ギ酸）、およびＤ＝５０：５０のアセトニトリル：水（０．１％水酸化アンモニウム）であった。１．１ｍＬ／分の流速で、５μＬの試料を、５０×２．１  ５μｍ  Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  ＮＸカラムに注入した。グラジエントは、Ｃ（酸分析のための）（Ｄは塩基分析のために使用される）の一定の５％注入をしながら、４．０分間、９５％  Ａから９５％  Ｂまで実行した。流動は、０．５分間９５％  Ｂに保持し、その後、出発条件に戻した。データは、質量分析計上でポジティブモードとネガティブモードの両方で、１５０から８５０ａｍｕまで、また、ＰＤＡ上で２２０〜３２０ｎｍで獲得した。ＬＣＭＳはまた、試料マネージャ、Ａｃｑｕｉｔｙ  ＰＤＡ、およびＳＱＤ質量分析計を備えたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｂｉｎａｒｙポンプを利用して、ＵＰＬＣシステム上でも実施した。使用した溶媒は、Ａ１＝０．１％ギ酸（水溶液）、Ｂ１  ０．１％ギ酸（アセトニトリル中）、Ａ２＝０．１％水酸化アンモニウム（水溶液）、およびＢ２  ０．１％水酸化アンモニウム（アセトニトリル中）であった。１ｍＬ／分の流速で、１μＬの試料を、（４０℃で）５０×２．１  １．７μｍ  Ｗａｔｅｒｓ  ＢＥＨカラムに注入した。グラジエントは、１．３０分かけて、９７％  Ａ１から９７％  Ｂ１まで実行し、その後、０．２分間保持し、出発条件に戻した（塩基分析のためにＡ２およびＢ２をＡ１およびＢ１で置換する）。データは、質量分析計上でポジティブイオンモードとネガティブイオンモードの両方で、１５０〜１０００ａｍｕで、また、ＰＤＡ上で２４５〜３２０ａｍｕで獲得し；
ｇ）中間体は、概して、十分には特徴付けせず、純度を、薄層クロマトグラフィー、質量スペクトル、ＨＰＬＣ、および／またはＮＭＲ分析によって評価し；
ｈ）次の略語を使用している：ｈ＝時間；ｒ．ｔ．＝室温（約１７〜３０℃）；ｃｏｎｃ．＝濃縮された；ＦＣＣ＝シリカを使用するフラッシュカラムクロマトグラフィー；ＡＩＢＮ＝アゾビスイソブチロニトリル；ＤＣＭ＝ジクロロメタン；ＤＩＰＥＡ＝ジ−イソプロピルエチルアミン；ＤＭＡ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド；ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド；ＥＤＣ＝１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド；Ｅｔ２Ｏ＝ジエチルエーテル；ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル；ＥｔＯＨ＝エタノール；ＨＡＴＵ＝ヘキサフルオロリン酸１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシド；ＨＯＢＴ＝ヒドロキシベンゾトリアゾール；Ｋ２ＣＯ３＝炭酸カリウム；ＭｅＯＨ＝メタノール；ＭｅＣＮ＝アセトニトリル；ＭｇＳＯ４＝無水硫酸マグネシウム；Ｎａ２ＳＯ４＝無水硫酸ナトリウム；ＮＢＳ＝Ｎ−ブロモスクシンイミド；ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸；ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン；ｓａｔ．＝飽和水溶液。
【００８２】
下のいくつかの実施例では、化合物のジアステレオマー対が記載される。例えば、実施例１（ａ）および実施例１（ｂ）の化合物は、単一の反応の生成物における混合物として形成され、その後分離される、化合物のジアステレオマー対を表す。こうした実施例では、立体化学のいかなる割り当ても、絶対ではない。例示の目的で、実施例１（ａ）および１（ｂ）を、名付けられた化合物の（２Ｓ，３Ｒ）および（２Ｒ，３Ｒ）ジアステレオマーと結びつける；しかし、実施例１（ａ）が明確に（２Ｓ，３Ｒ）ジアステレオマーに割り当てられ、実施例１（ｂ）が（２Ｒ，３Ｒ）ジアステレオマーに割り当てられることを示唆することを意図しない。
【００８３】
実施例１（ａ）および１（ｂ）
（２Ｓ）−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミドおよび（２Ｒ）−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド
【化５】
2019501134.tif 000007
２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）酢酸（中間体１４、１４１ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）、Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン（中間体１、２００ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．２５ｍＬ、１．４４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（６ｍＬ）に入れたものに、ＨＡＴＵ（３２９ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）を、窒素下で２１℃で添加した。得られた溶液を、２１℃で２時間撹拌した。この未精製の混合物を、ＳＣＸカラムを使用するイオン交換クロマトグラフィーによって精製した。所望される生成物を、１Ｍ  ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）を使用してカラムから溶出し、純粋な分画を蒸発乾固させて、未精製生成物をもたらし、これを、ＦＣＣ（ＳｉＯ２、０から１２％  ＭｅＯＨ（ＤＣＭ中））によってさらに精製した。純粋な分画を蒸発乾固させて、淡黄色の粘性物質（ｇｕｍ）（９５ｍｇ）としてジアステレオ異性体の混合物をもたらした。分取ＨＰＬＣ（Ｌｕｘ  Ｃ２カラム、２０μｍ、５０ｍｍ×２５０ｍｍ、２００ｍＬ／分の１００％  ＭｅＯＨ）によってジアステレオ異性体を分離して、以下を与えた：
【００８４】
第１の溶出された異性体・実施例１（ａ）２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド（５８ｍｇ、１８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，３０℃）δ  ２．０５（１Ｈ，ｔｄ），２．２１−２．３５（１Ｈ，ｍ），２．４１（３Ｈ，ｓ），３．４０−３．４７（１Ｈ，ｍ），３．５５（２Ｈ，ｄｄｄ），３．６９−３．７５（４Ｈ，ｍ），４．３１−４．４６（１Ｈ，ｍ），４．９３（１Ｈ，ｓ），６．８２（１Ｈ，ｄ），６．８７−６．９４（１Ｈ，ｍ），６．９９−７．０７（２Ｈ，ｍ），７．２２（１Ｈ，ｄ），７．２９（１Ｈ，ｔ），７．６１（１Ｈ，ｄ），１２．１３（１Ｈ，ｓ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４５６．
【００８５】
第２の溶出された異性体・実施例１（ｂ）２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド（５５ｍｇ、１７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，３０℃）δ  ２．０５（１Ｈ，ｔｄ），２．２１−２．３５（１Ｈ，ｍ），２．４１（３Ｈ，ｓ），３．４−３．４７（１Ｈ，ｍ），３．５５（２Ｈ，ｄｄｄ），３．６９−３．７５（４Ｈ，ｍ），４．３１−４．４６（１Ｈ，ｍ），４．９３（１Ｈ，ｓ），６．８２（１Ｈ，ｄ），６．８７−６．９４（１Ｈ，ｍ），６．９９−７．０７（２Ｈ，ｍ），７．２２（１Ｈ，ｄ），７．２９（１Ｈ，ｔ），７．６１（１Ｈ，ｄ），１２．１３（１Ｈ，ｓ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４５６．
【００８６】
実施例２
（２Ｓ）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−フェニル−アセトアミド
【化６】
2019501134.tif 000008
Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン（中間体４、２２０ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）、（２Ｓ）−２−メトキシ−２−フェニル−酢酸（１３０ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）、およびＥＤＣ（３００ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（３ｍＬ）に入れたものに、２５℃で、ＨＯＢＴ（１２０ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を、２５℃で３時間撹拌した。この未精製生成物を、分取ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ＯＢＤカラム、５μｍ、５０ｍｍ×１５０ｍｍ）によって精製した。移動相として、水（０．０５％ギ酸を含有）とＭｅＣＮとの、極性を徐々に低下させる混合物を使用した。所望の化合物を含有する分画を蒸発乾固させて、実施例２の（２Ｓ）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−フェニル−アセトアミド（９５ｍｇ、２７．８％）を、白色固体としてもたらした。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ，２２℃）δ  ２．１６−２．２３（ｍ，１Ｈ），２．３６−２．４４（ｍ，１Ｈ），３．４４（ｓ，３Ｈ），３．５５−３．６９（ｍ，３Ｈ），３．８２−３．８６（ｍ，１Ｈ），４．４６−４．５１（ｍ，１Ｈ），４．９３（ｓ，１Ｈ），７．１５−７．１９（ｍ，１Ｈ），７．２４  −７．２７（ｍ，１Ｈ），７．３５−７．４３（ｍ，３Ｈ），７．４７−７．４９（ｍ，２Ｈ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４３０．
【００８７】
実施例３
（２Ｓ）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）アセトアミド
【化７】
2019501134.tif 000009
（２Ｓ）−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）酢酸（中間体１２、１７４ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）、Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン（中間体４、２５０ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．１５５ｍＬ、０．８９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（８ｍＬ）に入れたものに、Ｎ２下で２１℃で、ＨＡＴＵ（４０５ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を、０℃で４５分間撹拌した。この未精製生成物を、ＳＣＸカラムを使用するイオン交換クロマトグラフィーによって精製した。所望される生成物を、１Ｍ  ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）を使用してカラムから溶出し、純粋な分画を蒸発乾固させて、粘性物質をもたらした。この未精製生成物を、ＦＣＣ（ＳｉＯ２、０から９％  ＭｅＯＨ（ＤＣＭ中））によって精製した。純粋な分画を蒸発乾固させて、エーテル／ＤＣＭで粉末化させ、濾過して、実施例３の（２Ｓ）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）アセトアミド（１８５ｍｇ、４５％）を、クリーム色の固体としてもたらした。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，３０℃）δ  ２．１２（１Ｈ，ｔｄ），２．３−２．４６（１Ｈ，ｍ），３．３７（３Ｈ，ｓ），３．５２（１Ｈ，ｄｄ），３．５９−３．６７（２Ｈ，ｍ），３．８１（４Ｈ，ｍ），４．３４−４．５６（１Ｈ，ｍ），５．００（１Ｈ，ｓ），６．９７（１Ｈ，ｄｄｄ），７．０３−７．１４（２Ｈ，ｍ），７．２２（１Ｈ，ｄｄ），７．３２−７．５１（２Ｈ，ｍ），７．７３（１Ｈ，ｄ），１２．２０（１Ｈ，ｓ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４８６．
【００８８】
実施例４（ａ）および４（ｂ）
（２Ｓ）−２−エトキシ−２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミドおよび（２Ｒ）−２−エトキシ−２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド
【化８】
2019501134.tif 000010
２−エトキシ−２−（３−メトキシフェニル）酢酸（中間体１５、０．１１ｇ、０．５４ｍｍｏｌ）およびＮ２−［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン（中間体１、０．１５ｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を、丸底フラスコに入れて秤量し、続いてＤＩＰＥＡ（０．１ｍＬ、０．５４ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（５ｍＬ）を入れた。次いで、生じた溶液を、ＨＡＴＵ（０．２１ｇ、０．５４ｍｍｏｌ）で処理し、Ｎ２下で室温で２４時間撹拌させた。溶媒を減圧下で除去し、残留している粘性物質をＤＣＭに溶解し、シリカに吸着させ、ＦＣＣ（ＳｉＯ２  ０〜１０％  ＭｅＯＨ（ＤＣＭ中））によって精製した。減圧下での純粋な分画の蒸発によって、淡黄色の泡として表題化合物がもたらされた。この泡を、メタノールに溶解し、ＳＣＸイオン交換カラムに添加し、ＤＣＭ、次いでメタノールで洗浄し、２Ｍ  ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）で溶出した。溶媒を減圧下で除去し、分取ＨＰＬＣ（ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８カラム、５μｍ、５０ｍｍ×１９ｍｍ、流速２５ｍＬ／分）によってさらに精製した。極性を徐々に低下させた比率の水とＭｅＣＮ（０．１％ギ酸を含有）を、移動相として使用した。純粋な分画を蒸発乾固させて、白色固体（６７ｍｇ）として、ジアステレオ異性体の混合物としての生成物をもたらした。ジアステレオ異性体を、分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｘ  Ｃ４カラム、２０μｍ、５０ｍｍ×２５０ｍｍ、１２０ｍＬ／分のＭｅＯＨ）によって分離して、以下を与えた：
【００８９】
第１の溶出された異性体・実施例４（ａ）２−エトキシ−２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド（２５ｍｇ、３７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，３０℃）δ  １．１７（３Ｈ，ｔ），１．９９−２．０９（１Ｈ，ｍ），２．２２−２．３２（１Ｈ，ｍ），２．４０（３Ｈ，ｓ），３．４０−３．５６（５Ｈ，ｍ），３．６９−３．７３（１Ｈ，ｍ），３．７４（３Ｈ，ｓ），４．３２−４．４０（１Ｈ，ｍ），５．０４（１Ｈ，ｓ），６．８３（１Ｈ，ｄ），６．８９（１Ｈ，ｄｄ），７．００−７．０５（２Ｈ，ｍ），７．２２（１Ｈ，ｄ），７．２８（１Ｈ，ｔ），７．６５（１Ｈ，ｄ），１２．１０（１Ｈ，ｓ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４７０．
【００９０】
第２の溶出された異性体・実施例４（ｂ）２−エトキシ−２−（３−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド（２５ｍｇ、３７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，３０℃）δ  １．１７（３Ｈ，ｔ），１．９７−２．０９（１Ｈ，ｍ），２．２１−２．３１（１Ｈ，ｍ），２．４０（３Ｈ，ｓ），３．３９−３．５６（５Ｈ，ｍ），３．７０−３．７３（１Ｈ，ｍ），３．７４（３Ｈ，ｓ），４．３３−４．４０（１Ｈ，ｍ），５．０４（１Ｈ，ｓ），６．８４（１Ｈ，ｄ），６．８７−６．９２（１Ｈ，ｍ），７．０１−７．０５（２Ｈ，ｍ），７．２３（１Ｈ，ｄ），７．２８（１Ｈ，ｔ），７．６５（１Ｈ，ｄ），１２．１１（１Ｈ，ｓ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４７０．
【００９１】
実施例５（ａ）および５（ｂ）
（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミドおよび（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド
【化９】
2019501134.tif 000011
Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン（中間体１、０．１５ｇ、０．５４１ｍｍｏｌ）および２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ酢酸（中間体１６、０．１ｇ、０．５４１ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下でｒ．ｔで、ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。この混合物を、５分間撹拌した後ＤＩＰＥＡ（０．３４ｍＬ、１．９４３ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（０．２１ｇ、０．５４１ｍｍｏｌ）を添加し、次いで室温で２ｈ撹拌した。次いで、この未精製混合物を、５ｇ  ＳＣＸカラムに通過させ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、２Ｎ  ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）で溶出した。塩基性分画を、減圧下で蒸発させて、オレンジ色の粘性物質を与え、これを、分取ＨＰＬＣ（ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８カラム、５μｍ、５０ｍｍ×１９ｍｍ、流速２５ｍＬ／分）によって精製した。極性を徐々に低下させた比率の水とＭｅＣＮ（０．１％ギ酸を含有）を、移動相として使用した。純粋な分画を合わせ、減圧下で蒸発させ、２ｇ  ＳＣＸカラムに通過させ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、２Ｍ  ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）で溶出した。塩基性分画を蒸発乾固させて、オフホワイトの泡としてジアステレオ異性体の混合物をもたらした。ジアステレオ異性体を、分取ＨＰＬＣ（Ａｍｙ−Ｃカラム、５μｍ、２０ｍｍ×２５０ｍｍ、２１ｍＬ／分の２：３ヘプタン：ＥｔＯＨ（０．１％ｖ／ｖ  ＮＨ３モディファイヤーを含有））によって分離して、以下を与えた：
【００９２】
第１の溶出された異性体・実施例５（ａ）２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド（５５．３ｍｇ、２３．０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，２１℃）δ  ２．０４（１Ｈ，ｄｑ），２．２６（１Ｈ，ｄｔ），２．４１（３Ｈ，ｓ），３．３０（３Ｈ，ｓ），３．５７−３．４１（３Ｈ，ｍ），３．７２（１Ｈ，ｄｄ），４．３６（１Ｈ，ｑ），４．９８（１Ｈ，ｓ），６．８３（１Ｈ，ｄ），７．２２（３Ｈ，ｄｄｄ），７．５５−７．４４（２Ｈ，ｍ），７．６６（１Ｈ，ｄ），１２．２８（ｓ，１Ｈ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４４４．
【００９３】
第２の溶出された異性体・実施例５（ｂ）２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド（５９．２ｍｇ、２４．７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，２１℃）δ  ２．０４（１Ｈ，ｄｑ），２．３１−２．２３（１Ｈ，ｍ），２．４１（３Ｈ，ｓ），３．３０（３Ｈ，ｓ），３．４４（１Ｈ，ｄｄ），３．５９−３．４９（２Ｈ，ｍ），３．７１（１Ｈ，ｄｄ），４．３６（１Ｈ，ｑ），４．９７（１Ｈ，ｓ），６．８２（１Ｈ，ｄ），７．２２（３Ｈ，ｄｄｄ），７．５３−７．４６（２Ｈ，ｍ），７．６４（１Ｈ，ｄ），１２．２８（１Ｈ，ｓ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４４４．
【００９４】
実施例６（ａ）および６（ｂ）
（２Ｓ）−２−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミドおよび（２Ｒ）−２−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド
【化１０】
2019501134.tif 000012
Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン（中間体１、２００ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）および２−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−２−メトキシ−酢酸（中間体１８、１５０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を、窒素下でｒ．ｔで、ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。この混合物を、５分間撹拌した後、ＤＩＰＥＡ（０．３４ｍＬ、１．９４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（０．２７ｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を添加し、次いで室温で一晩撹拌した。この未精製混合物を、５ｇ  ＳＣＸカラムに通過させ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、２Ｎ  ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）で溶出した。塩基性分画を蒸発させて、オレンジ色の粘性物質として未精製生成物を与え、これを、分取ＨＰＬＣ（ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８カラム、５μｍ、５０ｍｍ×１９ｍｍ、流速２５ｍＬ／分）によって精製した。極性を徐々に低下させた比率の水とＭｅＣＮ（０．１％ギ酸を含有）を、移動相として使用した。純粋な分画を合わせ、蒸発させ、２ｇ  ＳＣＸカラムに通過させ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、２Ｍ  ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）で溶出した。塩基性分画を蒸発させて、オフホワイトの固体としてジアステレオ異性体の混合物をもたらした。次いで、ジアステレオ異性体を、ＳＦＣ（Ｌｕｘ  Ｃ３カラム、５μｍ、２１．２ｍｍ×２５０ｍｍ、ＭｅＯＨ／ＣＯ２  ３５％（ＮＨ３モディファイヤーを含有）、５０ｍＬ／分）によって分離して、以下を与えた：
【００９５】
第１の溶出された異性体・実施例６（ａ）２−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド（３４ｍｇ、１０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，２１  ℃）δ  １．９８−２．１２（１Ｈ，ｍ），２．２１−２．３３（１Ｈ，ｍ），２．４１（３Ｈ，ｓ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．４０−３．５８（３Ｈ，ｍ），３．６９−３．７９（１Ｈ，ｍ），３．８４（３Ｈ，ｓ），４．３２−４．４１（１Ｈ，ｍ），４．９５（ｓ，１Ｈ），６．８３（１Ｈ，ｄ），６．９８−７．０５（１Ｈ，ｍ），７．１９−７．２８（３Ｈ，ｍ），７．６８（１Ｈ，ｄ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４７４．
【００９６】
第２の溶出された異性体・実施例６（ｂ）２−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド（４４ｍｇ、１３％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，２１  ℃）δ  １．９９−２．１０（１Ｈ，ｍ），２．２３−２．３４（１Ｈ，ｍ），２．４１（３Ｈ，ｓ），３．３１（３Ｈ，ｓ），３．４１−３．４８（１Ｈ，ｍ），３．５０−３．５６（２Ｈ，ｍ），３．６７−３．７８（１Ｈ，ｍ），３．８４（３Ｈ，ｓ），４．３２−４．３９（１Ｈ，ｍ），４．９４（１Ｈ，ｓ），６．８２（１Ｈ，ｄ），６．９８−７．０４（１Ｈ，ｍ），７．１７−７．３０（３Ｈ，ｍ），７．６５（１Ｈ，ｄ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４７４．
【００９７】
実施例７（ａ）および７（ｂ）
（２Ｓ）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］アセトアミドおよび（２Ｒ）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］アセトアミド
【化１１】
2019501134.tif 000013
ＤＩＰＥＡ（０．１４ｍＬ、０．８１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２４７ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および２−メトキシ−２−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］酢酸（中間体１９、１６０ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を、Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン（中間体１、１５０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）溶液に添加した。この混合物を、室温で１８ｈ撹拌した。次いで、これを水（５ｍＬ）で希釈し、次いでＤＣＭ（１０ｍＬ）に抽出し、蒸発させ、分取ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ  ＯＢＤ  Ｃ１８カラム、５μｍ、５０ｍｍ×１９ｍｍ、流速は２５ｍＬ／分であった）によって精製した。極性を徐々に低下させた比率の水とＭｅＣＮ（０．３ｍＬ／Ｌ  ＮＨ４ＯＨを含有）を、移動相として使用した。次いで、純粋な分画を蒸発させて、ジアステレオ異性体の混合物を与えた。ジアステレオ異性体を、分取ＨＰＬＣ（Ａｍｙ−Ｃカラム、５μｍ、４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、ヘプタン／ＥｔＯＨ  ７／３（ＮＨ３モディファイヤーを含有）、２１ｍＬ／分）によって分離して、以下を与えた：
【００９８】
第１の溶出された異性体・実施例７（ａ）２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］アセトアミド（５０ｍｇ、１８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，２１℃）δ  １．９６−２．１１（１Ｈ，ｍ），２．２０−２．３７（１Ｈ，ｍ），２．４１（３Ｈ，ｓ），３．３４（３Ｈ，ｓ），３．４２−３．６０（３Ｈ，ｍ），３．６６−３．７８（１Ｈ，ｍ），４．３７（１Ｈ，ｑ），５．０７（１Ｈ，ｓ），６．８４（１Ｈ，ｄ），７．２３（１Ｈ，ｄ），７．３７（１Ｈ，ｄ），７．４１−７．５８（３Ｈ，ｍ），７．７２（１Ｈ，ｄ），１２．３７（１Ｈ，ｓ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋５１０．
【００９９】
第２の溶出された異性体・実施例７（ｂ）２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］アセトアミド（３４ｍｇ、１２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，２１℃）δ  １．９７−２．１３（１Ｈ，ｍ），２．２０−２．３４（１Ｈ，ｍ），２．４１（３Ｈ，ｓ），３．３４（３Ｈ，ｓ），３．３９−３．６０（３Ｈ，ｍ），３．６６−３．７７（１Ｈ，ｍ），４．３６（１Ｈ，ｄ），５．０７（１Ｈ，ｓ），６．８３（１Ｈ，ｄ），７．２３（１Ｈ，ｄ），７．３７（１Ｈ，ｄ），７．４３−７．６０（３Ｈ，ｍ），７．７２（１Ｈ，ｄ），１２．３６（１Ｈ，ｓ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋５１０．
【０１００】
実施例８（ａ）および８（ｂ）
（２Ｓ）−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミドおよび（２Ｒ）−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド
【化１２】
2019501134.tif 000014
２−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２−メトキシ−酢酸（中間体２０、０．１１ｇ、０．４６９ｍｍｏｌ）およびＮ２−［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン（中間体１、０．１３ｇ、０．４６９ｍｍｏｌ）を、丸底フラスコに入れて秤量した。ＤＭＦ（３ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（０．１５ｇ、１．１７２ｍｍｏｌ）、それに続いてＨＡＴＵ（０．１８ｇ、０．４６９ｍｍｏｌ）を添加し、生じた溶液を、窒素下でｒ．ｔで１５ｈ撹拌させた。溶媒を減圧下で除去し、残留している粘性物質をＤＣＭに溶解し、シリカに吸収させ、ＦＣＣ（ＳｉＯ２、０．１％  ＮＨ３を含有する１〜１０％  ＭｅＯＨ（ＤＣＭ中））によって精製した。減圧下での純粋な分画の蒸発は、淡黄色の粘性物質を与え、これを、分取キラルＳＦＣ（Ｌｕｘ  Ｃ３カラム、５μｍ、２１．２ｍｍ×２５０ｍｍ、流速５０ｍＬ／分、波２１０ｎｍの波長で、溶出剤として４０：６０  ＭｅＯＨ：ＣＯ２＋０．１％  ＮＨ３を用いる）によって分離して、以下を与えた：
【０１０１】
第１の溶出された異性体・実施例８（ａ）［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド（４８ｍｇ、２０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，３０℃）δ  ２．０７−２．００（１Ｈ，ｍ），２．３１−２．２２（１Ｈ，ｍ），２．４０（３Ｈ，ｓ），３．３４（３Ｈ，ｓ），３．５８−３．４１（３Ｈ，ｍ），３．７１（１Ｈ，ｄｄ），４．３８−４．３４（１Ｈ，ｍ），５．０１（１Ｈ，ｓ），６．８３（１Ｈ，ｄ），７．４９−７．０４（６Ｈ，ｍ），７．７１（１Ｈ，ｄ），１２．３１（１Ｈ，ｓ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４９２．
【０１０２】
第２の溶出された異性体・実施例８（ｂ）［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド（４５ｍｇ、１９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，３０℃）δ  ２．０８−２．００（１Ｈ，ｍ），２．３４−２．２１（１Ｈ，ｍ），２．４０（３Ｈ，ｓ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．５７−３．４２（３Ｈ，ｍ），３．７１（１Ｈ，ｄｄ），４．３６（１Ｈ，ｍ），５．０１（１Ｈ，ｓ），６．８２（１Ｈ，ｄ），７．４９−７．０４（６Ｈ，ｍ），７．６９（１Ｈ，ｄ），１２．２６（１Ｈ，ｓ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４９２．
【０１０３】
実施例９（ａ）および９（ｂ）
（２Ｓ）−２−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−アセトアミドおよび（２Ｒ）−２−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−アセトアミド
【化１３】
2019501134.tif 000015
２−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２−メトキシ−酢酸（中間体２０、４５４ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）、Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン（中間体４、５００ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．３１ｍＬ、１．７８ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１２ｍＬ）に入れたものに、ＨＡＴＵ（８１１ｍｇ、２．１３ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下で２１℃で添加した。得られた溶液を、２１℃で４５分間撹拌した。この未精製生成物を、ＳＣＸカラムを使用するイオン交換クロマトグラフィーによって精製した。所望される生成物を、１Ｍ  ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）を使用してカラムから溶出し、分画を蒸発させて、粘性物質とした。この未精製生成物を、ＦＣＣ（ＳｉＯ２、０〜８％  ＭｅＯＨ（ＤＣＭ中））によって精製した。分画を蒸発乾固させて、粘性の（ｇｕｍｍｙ）固体を与えた。この未精製生成物を、ＦＣＣ（ＳｉＯ２、０〜９％  ＭｅＯＨ（ＥｔＯＡｃ中））によってさらに精製した。純粋な分画を蒸発乾固させて、ＤＣＭ／エーテルで粉末化させ、濾過して、黄色固体（２１０ｍｇ）としてジアステレオ異性体の混合物をもたらした。ジアステレオ異性体を、分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｘ  Ｃ２カラム、２０μｍ、５０ｍｍ×２５０ｍｍ、溶出剤として１２０ｍＬ／分のＥｔＯＨを使用）によって分離して、以下を与えた：
【０１０４】
第１の溶出された異性体・実施例９（ａ）（２Ｓ）−２−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−アセトアミド（７２ｍｇ、８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ，３０℃）δ  ２．０２（１Ｈ，ｄｄ），２．２５（１Ｈ，ｄｑ），３．２９（３Ｈ，ｓ），３．３９−３．５７（３Ｈ，ｍ），３．７０（１Ｈ，ｄｄ），４．３４（１Ｈ，ｄ），４．９８（１Ｈ，ｓ），６．９７−７．２５（３Ｈ，ｍ），７．２７−７．３５（２Ｈ，ｍ），７．３８−７．４８（１Ｈ，ｍ），７．６４（１Ｈ，ｄ），１２．１９（１Ｈ，ｓ）．ｍ／ｚ：ＥＳ−［Ｍ−Ｈ］−４９４．
【０１０５】
第２の溶出された異性体・実施例９（ｂ）（２Ｒ）−２−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−アセトアミド（９５ｍｇ、１１％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ，３０℃）δ  ２．０２（１Ｈ，ｄｄ），２．２５（１Ｈ，ｄｑ），３．２９（３Ｈ，ｓ），３．３９−３．５７（３Ｈ，ｍ），３．７０（１Ｈ，ｄｄ），４．３４（１Ｈ，ｄ），４．９８（１Ｈ，ｓ），６．９７−７．２５（３Ｈ，ｍ），７．２７−７．３５（２Ｈ，ｍ），７．３８−７．４８（１Ｈ，ｍ），７．６４（１Ｈ，ｄ），１２．１９（１Ｈ，ｓ）．ｍ／ｚ：ＥＳ−［Ｍ−Ｈ］−４９４．
【０１０６】
実施例１０（ａ）および１０（ｂ）
（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミドおよび（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド
【化１４】
2019501134.tif 000016
Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン（中間体７、１００ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）および２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ酢酸（中間体１６、６６ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下でｒ．ｔで、ＤＭＦ（２．０ｍＬ）に溶解した。この混合物を、５分間撹拌した後、ＤＩＰＥＡ（０．０９ｍＬ、０．５４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１６５ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を添加し、次いで室温で一晩撹拌した。この未精製混合物を、５ｇ  ＳＣＸカラムに通過させ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、２Ｎ  ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）で溶出した。塩基性分画を蒸発させて、オレンジ色の粘性物質を与えた。この未精製生成物を、分取ＨＰＬＣ（ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８カラム、５μｍ、５０ｍｍ×１９ｍｍ、流速２５ｍＬ／分）によって精製した。極性を徐々に低下させた比率の水とＭｅＣＮ（０．１％ギ酸を含有）を、移動相として使用した。所望される塊を含有する分画を合わせ、蒸発させ、５ｇ  ＳＣＸカラムに通過させ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、２Ｍ  ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）で溶出した。塩基性分画を蒸発させて、オフホワイトの固体（７０ｍｇ）としてジアステレオ異性体の混合物を与えた。次いで、ジアステレオ異性体を、分取ＨＰＬＣ（Ｌｕｘ  Ｃ４カラム、２０μｍ、５０ｍｍ×２５０ｍｍ、１２０ｍＬ／分の１００％  ＭｅＯＨ）によって分離して、以下を与えた：
【０１０７】
第１の溶出された異性体・実施例１０（ａ）２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド（２５ｍｇ、１６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ，３０℃）２．０１−２．１１（１Ｈ，ｍ），２．２０（３Ｈ，ｓ），２．２８（１Ｈ，ｄｔ），３．３１（３Ｈ，ｓ），３．４８（１Ｈ，ｄｄ），３．５２−３．６１（２Ｈ，ｍ），３．７４（１Ｈ，ｄｄ），４．３３−４．４１（１Ｈ，ｍ），４．９８（１Ｈ，ｓ），６．６９（１Ｈ，ｓ），７．２１（２Ｈ，ｔ），７．４７−７．５３（２Ｈ，ｍ），７．６３（１Ｈ，ｄ），８．３６（１Ｈ，ｓ），１２．２０（１Ｈ，ｓ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４４４．
【０１０８】
第２の溶出された異性体・実施例１０（ｂ）２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド（２６ｍｇ、１７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ，３０℃）２．００−２．１（１Ｈ，ｍ），２．２１（３Ｈ，ｓ），２．２７（１Ｈ，ｄｔ），３．３１（３Ｈ，ｓ），３．４５−３．６０（３Ｈ，ｍ），３．７４（１Ｈ，ｄｄ），４．３２−４．４０（１Ｈ，ｍ），４．９７（１Ｈ，ｓ），６．６９（１Ｈ，ｄ），７．１７−７．２５（２Ｈ，ｍ），７．４７−７．５３（２Ｈ，ｍ），７．５９（１Ｈ，ｄ），８．３６（１Ｈ，ｄ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４４４．
【０１０９】
実施例１１（ａ）および１１（ｂ）
（２Ｓ）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）アセトアミドおよび（２Ｒ）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）アセトアミド
【化１５】
2019501134.tif 000017
Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン（中間体９、１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）および２−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）酢酸（中間体２１、７０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２．０ｍＬ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（０．１５ｍＬ、０．８４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１９０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）で処理し、次いで、室温で一晩撹拌した。この未精製混合物を、水（１０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（１０ｍＬ）に抽出した。次いで、ＤＣＭを蒸発させ、未精製生成物を、分取ＨＰＬＣ（ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８カラム、５μｍ、５０ｍｍ×１９ｍｍ、２５ｍＬ／分）によって精製した。極性を徐々に低下させた比率の水とＭｅＣＮ（０．１％ギ酸を含有）を、移動相として使用した。所望される塊を含有する分画を合わせ、蒸発させ、ＳＣＸカラムに通過させ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、２Ｍ  ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）で溶出した。塩基性分画を蒸発させて、オフホワイトの固体（３５ｍｇ）としてジアステレオ異性体の混合物を与えた。ジアステレオ異性体を、分取ＨＰＬＣ（Ｌｕｘ  Ｃ４カラム、２０μｍ、５０ｍｍ×２５０ｍｍ、１２０ｍＬ／分の１００％  ＭｅＯＨ）によって分離して、以下を与えた：
【０１１０】
第１の溶出された異性体・実施例１１（ａ）Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）アセトアミド（１２ｍｇ、７．５％）１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ，３０℃）２．０３−２．１３（１Ｈ，ｍ），２．２３−２．３３（１Ｈ，ｍ），３．４９−３．６３（３Ｈ，ｍ），３．７５（３Ｈ，ｓ），３．７６−３．８０（１Ｈ，ｍ），４．３３−４．４２（１Ｈ，ｍ），４．８９（１Ｈ，ｓ），６．９０−６．９６（２Ｈ，ｍ），７．１０（１Ｈ，ｄ），７．３４−７．４１（２Ｈ，ｍ），７．６０（１Ｈ，ｄ），８．５５（１Ｈ，ｄ），１２．１０（１Ｈ，ｓ）；ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４７６．プラス３Ｈは３．３ｐｐｍで水ピークにより不明瞭
【０１１１】
第２の溶出された異性体・実施例１１（ｂ）Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）アセトアミド（１５ｍｇ、９．４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ，３０℃）２．０１−２．１２（１Ｈ，ｍ），２．２２−２．３１（１Ｈ，ｍ），３．２７（３Ｈ，ｓ），３．４７−３．６２（３Ｈ，ｍ），３．７５（３Ｈ，ｓ），３．７６−３．７９（１Ｈ，ｍ），４．３３−４．４２（１Ｈ，ｍ），４．８６（１Ｈ，ｓ），６．８９−６．９６（２Ｈ，ｍ），７．１０（１Ｈ，ｄ），７．３４−７．４１（２Ｈ，ｍ），７．５１（１Ｈ，ｄ），８．５５（１Ｈ，ｄ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４７６．
【０１１２】
実施例１２
（２Ｓ）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−フェニル−アセトアミド
【化１６】
2019501134.tif 000018
ＤＩＰＥＡ（０．０４ｍＬ、０．２０ｍｍｏｌ）、Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン（中間体９、４０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、および（２Ｓ）−２−メトキシ−２−フェニル酢酸（２０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を、ＨＡＴＵ（６１ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液に添加した。この混合物を、２５℃で１８時間撹拌した。次いで、これを水（５ｍＬ）で希釈し、次いでＤＣＭ（１０ｍＬ）に抽出し、減圧下で蒸発させた。未精製生成物を、分取ＨＰＬＣ（ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８カラム、５μｍ、５０ｍｍ×１９ｍｍ、２５ｍＬ／分）によって精製した。極性を徐々に低下させた比率の水とＭｅＣＮ（０．１％ギ酸を含有）を、移動相として使用した。次いで、適切な分画を蒸発させ、基本の分取クロマトグラフィーによって再精製した。ＸＢｒｉｄｇｅカラム（５ミクロン、Ｃ１８、５０×１９ｍｍ）を使用した。極性を徐々に低下させた比率の、水と、０．１％水酸化アンモニウムおよびアセトニトリルを含有する水を、移動相として使用した。次いで、純粋な分画を蒸発させ、真空オーブン中で乾燥させて、以下をもたらした：
【０１１３】
白色固体としての（２Ｓ）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−メトキシ−２−フェニル−アセトアミド（１５ｍｇ、２５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，２５℃）δ  １．９８−２．１４（１Ｈ，ｍ），２．１７−２．３６（１Ｈ，ｍ），３．３０（３Ｈ，ｓ），３．４４−３．６４（３Ｈ，ｍ），３．６９−３．８１（１Ｈ，ｍ），４．２８−４．４２（１Ｈ，ｍ），４．９６（１Ｈ，ｓ），７．１１（１Ｈ，ｄ），７．３０−７．４７（５Ｈ，ｍ），７．６９（１Ｈ，ｄ），８．５５（１Ｈ，ｄ），１２．２４（１Ｈ，ｓ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４４６，４４８．
【０１１４】
実施例１３
（２Ｓ）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−フェニル−アセトアミド
【化１７】
2019501134.tif 000019
ＤＩＰＥＡ（０．０９ｍＬ、０．５４ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１６４ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）、および（２Ｓ）−２−メトキシ−２−フェニル酢酸（６０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を、Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン（中間体７、１００ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液に添加した。この混合物を、室温で２時間撹拌した。次いで、これを水（５ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（１０ｍＬ）に抽出し、減圧下で蒸発させた。未精製生成物を、分取ＨＰＬＣ（ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８カラム、５μｍ、５０ｍｍ×１９ｍｍ、２５ｍＬ／分）によって精製した。極性を徐々に低下させた比率の水とＭｅＣＮ（０．１％ギ酸を含有）を、移動相として使用した。次いで、収集した分画をＳＣＸカートリッジに通過させ、メタノールで洗浄した後、２Ｍアンモニア（メタノール溶液）で溶出した。このアンモニア（メタノール溶液）を蒸発させ、残渣を真空オーブン中で乾燥させて、以下をもたらした：
【０１１５】
白色固体としての（２Ｓ）−２−メトキシ−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］−２−フェニル−アセトアミド（２８ｍｇ、１８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，２５℃）δ  ２．０１−２．１０（１Ｈ，ｍ），２．１９（３Ｈ，ｓ），２．２２−２．３４（１Ｈ，ｍ），３．３１（３Ｈ，ｓ），３．４２−３．６０（３Ｈ，ｍ），３．７０−３．７４  （１Ｈ，ｍ），４．３０−４．４２（１Ｈ，ｍ），４．９８（１Ｈ，ｓ），６．７０（１Ｈ，ｓ），７．３０−７．４２（３Ｈ，ｍ），７．４３−７．４９（２Ｈ，ｍ），７．７０（１Ｈ，ｄ），８．３５（１Ｈ，ｓ），１２．２６（１Ｈ，ｓ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４２６
【０１１６】
追加の実施例
次の実施例の化合物を、上の実施例と類似の様式で調製した。
【０１１７】
【表１】
2019501134.tif 000020
【０１１８】
【表２】
2019501134.tif 000021
【０１１９】
実施例３３（ａ）および３３（ｂ）
（２Ｒ）−２−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミドおよび（２Ｓ）−２−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド
【化１８】
2019501134.tif 000022
Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン（中間体７、０．０５ｇ、０．１７３ｍｍｏｌ）およびヘキサフルオロリン酸Ｎ−［（ジメチルアミノ）（３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イルオキシ）メチリデン］−Ｎ−メチルメチルアミニウム、ＨＡＴＵ（０．０８ｇ、０．２０８ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下でｒ．ｔで、ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。この混合物を、５分間撹拌した後、２−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）酢酸（中間体２１、０．０４ｇ、０．１７３ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０５ｍＬ、０．２６ｍｍｏｌ）を添加した。この反応物を、Ｎ２下で一晩、ｒ．ｔで撹拌した。この未精製混合物を、５ｇ  ＳＣＸカラムに通過させ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、２Ｎ  ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）で溶出した。塩基性分画を減圧下で蒸発させて、オレンジ色の粘性物質として不純な生成物を与えた。この未精製生成物を、分取ＨＰＬＣ（ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｃ１８カラム、５μｍ、５０ｍｍ×１９ｍｍ、２５ｍＬ／分）によって精製した。極性を徐々に低下させた比率の水とＭｅＣＮ（０．１％ギ酸を含有）を、移動相として使用した。所望される塊を含有する分画を合わせ、減圧下で蒸発させ、５ｇ  ＳＣＸカラムに通過させ、ＭｅＯＨで洗浄し、次いで、２Ｍ  ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）で溶出した。塩基性分画を減圧下で蒸発させて、オフホワイトの固体としてジアステレオ異性体の混合物を与えた。ジアステレオ異性体を、分取キラルＳＦＣ（Ｌｕｘ  Ｃ１カラム、５μｍ、２１．２ｍｍ×２５０ｍｍ、流速５０ｍＬ／分、２１０ｎｍの波長で、溶出剤として４０：６０  ＭｅＯＨ：ＣＯ２＋０．１％  ＮＨ３を用いる）によって分離して、以下を与えた：
【０１２０】
第１の溶出された異性体・実施例３３（ａ）２−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド（６．６ｍｇ、８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １２．１８（１Ｈ，ｓ），８．３６（１Ｈ，ｄ），７．６８（１Ｈ，ｄ），７．４１−７．３４（２Ｈ，ｍ），６．９９−６．９０（２Ｈ，ｍ），６．７１（１Ｈ，ｓ），４．９０（１Ｈ，ｓ），４．４５−４．３０（１Ｈ，ｍ），３．７４（３Ｈ，ｓ），３．６４−３．３７（４Ｈ，ｍ），３．２７（３Ｈ，ｓ），２．３５−２．２３（１Ｈ，ｍ），２．２０（３Ｈ，ｓ），２．０９−１．９８（１Ｈ，ｍ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４５６．
【０１２１】
第２の溶出された実施例３３（ｂ）２−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−Ｎ−［５−［［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］アミノ］−１，３，４−チアジアゾール−２−イル］アセトアミド（５．７ｍｇ、６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  １２．１８（１Ｈ，ｓ），８．３５（１Ｈ，ｄ），７．６６（１Ｈ，ｄ），７．３７（２Ｈ，ｄ），６．９４（２Ｈ，ｄ），６．７０（１Ｈ，ｄ），４．８９（１Ｈ，ｓ），４．４３−４．２９（１Ｈ，ｍ），３．７４（３Ｈ，ｓ），３．７３−３．６９（１Ｈ，ｍ），３．６０−３．４５（３Ｈ，ｍ），３．２７（３Ｈ，ｓ），２．３４−２．２３（１Ｈ，ｍ），２．２０（３Ｈ，ｓ），２．１０−２．０１（１Ｈ，ｍ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋４５６．
【０１２２】
中間体１
Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン
【化１９】
2019501134.tif 000023
５−ブロモ−１，３，４−チアジアゾール−２−アミン（９１２ｍｇ、５．０７ｍｍｏｌ）、（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−アミン（中間体２、８６０ｍｇ、４．８３ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（０．９２４ｍＬ、５．３１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解した。この反応物を、１ｈの間、１００℃に加熱し、次いで、一晩、室温で静置した。この未精製生成物を、ＳＣＸカラムを使用するイオン交換クロマトグラフィーによって精製した。所望される生成物を、１Ｍ  ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）を使用してカラムから溶出し、純粋な分画を蒸発乾固させて、未精製生成物をもたらした。これを、ＤＣＭ／ＭｅＯＨに溶解し、シリカに吸着させ、ＦＣＣ（ＳｉＯ２、０から２０％  ＭｅＯＨ（ＤＣＭ中））によって精製した。純粋な分画を蒸発乾固させて、茶色の粘性物質として、Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン（３５０ｍｇ、２６％）をもたらした。ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋２７８．
【０１２３】
中間体２
（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−アミン
【化２０】
2019501134.tif 000024
Ｎ−［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（中間体３、２．１ｇ、７．５４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（６０ｍＬ）に入れたものに、窒素下で２１℃で、トリフルオロ酢酸（１２ｍＬ）を添加した。得られた溶液を、２１℃で２ｈ撹拌した。この未精製生成物を、ＳＣＸカラムを使用するイオン交換クロマトグラフィーによって精製した。所望される生成物を、７Ｍ  ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）を使用してカラムから溶出し、純粋な分画を蒸発乾固させて、黄色の油として（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−アミン（１．６ｇ、１１９％）をもたらし、これを静止状態で凝固させた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，２７℃）δ  １．５６−１．８（１Ｈ，ｍ），２．０４（１Ｈ，ｍ），２．３９（３Ｈ，ｓ），３．０７（１Ｈ，ｍ），３．３７−３．４３（１Ｈ，ｍ），３．４７−３．６６（３Ｈ，ｍ），４．０８（１Ｈ，ｓ），６．７３（１Ｈ，ｄ），７．１９（１Ｈ，ｄ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋１７９．
【０１２４】
中間体３
Ｎ−［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化２１】
2019501134.tif 000025
ＤＩＰＥＡ（８．４９ｍＬ、４８．６２ｍｍｏｌ）と、Ｎ−［（３Ｒ）−ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．６２ｇ、１９．４５ｍｍｏｌ）と、３−クロロ−６−メチルピリダジン（２．５ｇ、１９．４５ｍｍｏｌ）と、ｎ−ブタノール（３０ｍＬ）との混合物を、１３０℃で１２ｈ、撹拌し、次いで、週末の間冷却させておいた。この反応混合物を蒸発させ、未精製生成物を、ＦＣＣ（ＳｉＯ２、０から１０％  １Ｍ  ＮＨ３（ＭｅＯＨのＥｔＯＡｃ溶液中）によって精製した。純粋な分画を、蒸発乾固させて、黄色の固体としてＮ−［（３Ｒ）−１−（６−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．１ｇ、３８．８％）をもたらした。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，２７℃）δ  １．３９（９Ｈ，ｓ），１．８８（１Ｈ，ｍ），２．１４（１Ｈ，ｍ），２．４０（３Ｈ，ｓ），３．２３（１Ｈ，ｍ），３．３７−３．４５（１Ｈ，ｍ），３．４７−３．５８（１Ｈ，ｍ），３．６１（１Ｈ，ｍ），３．９９−４．２（１Ｈ，ｍ），６．７７（１Ｈ，ｄ），７．２０（２Ｈ，ｍ）；ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋２７９．
【０１２５】
中間体４
Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン
【化２２】
2019501134.tif 000026
５−ブロモ−１，３，４−チアジアゾール−２−アミン（１．７９７ｇ、９．９８ｍｍｏｌ）および（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−アミン（中間体５、２ｇ、１０．９８ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（４０ｍＬ）に入れたものに、室温で、ＤＩＰＥＡ（３．４８ｍＬ、１９．９６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を、８０℃で４ｈ撹拌した。この未精製生成物を、ＳＣＸカラムを使用するイオン交換クロマトグラフィーによって精製した。所望される生成物を、１Ｍ  ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）を使用してカラムから溶出し、純粋な分画を蒸発乾固させて、茶色の固体としてＮ２−［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン（２．９ｇ、１０３％）をもたらし、これを静止状態で凝固させた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，３０℃）δ  １．９０−２．１２（１Ｈ，ｍ），２．２３（１Ｈ，ｄｔｄ），３．４２（１Ｈ，ｄｄ），３．４７−３．６１（２Ｈ，ｍ），３．６９（１Ｈ，ｄｄ），４．２５（１Ｈ，ｄｑ），６．２５（２Ｈ，ｓ），７．０４（１Ｈ，ｄ），７．１４（１Ｈ，ｄｄ），７．３３（１Ｈ，ｄｄ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋２８２．
【０１２６】
中間体５
（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−アミン
【化２３】
2019501134.tif 000027
Ｎ−［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（中間体６、６ｇ、２１．２５ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（７０ｍＬ）およびＴＦＡ（１４．００ｍＬ）に、２５℃で添加した。得られた溶液を、２５℃で４ｈ撹拌した。この未精製生成物を、ＳＣＸカラムを使用する、イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。所望される生成物を、１Ｍ  ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）を使用してカラムから溶出し、純粋な分画を蒸発乾固させて、淡黄色の粘性の固体として（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−アミン（２．０ｇ、５２％）をもたらした。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，３０℃）δ  １．５５−１．８３（１Ｈ，ｍ），１．９８−２．１３（１Ｈ，ｍ），２．８９−３．１４（１Ｈ，ｍ），３．２９−３．４３（１Ｈ，ｍ），３．５４（３Ｈ，ｄｄｔ），７．０６（１Ｈ，ｄｄ），７．３０（１Ｈ，ｄｄ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋１８３．
【０１２７】
中間体６
Ｎ−［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化２４】
2019501134.tif 000028
３，６−ジフルオロピリダジン（６．０６ｇ、５２．２１ｍｍｏｌ）と、Ｎ−［（３Ｒ）−ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（９．７２ｇ、５２．２１ｍｍｏｌ）と、ＤＩＰＥＡ（２２．８０ｍＬ、１３０．５３ｍｍｏｌ）と、ｎ−ブタノール（１４０ｍＬ）との混合物を、１３０℃で１０ｈ撹拌した。この反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）で希釈し、水（１５０ｍＬ）で２回洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、未精製生成物をもたらした。次いで、これを、ＤＣＭに溶解し、未精製生成物を、ＦＣＣ（ＳｉＯ２、３０〜６５％  ＥｔＯＡｃ（ヘプタン中））によって精製した。純粋な分画を蒸発乾固させて、クリーム色の固体としてＮ−［（３Ｒ）−１−（６−フルオロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１５ｇ、１０２％）をもたらした。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，３０℃）δ  １．４６（９Ｈ，ｓ），１．９１−２．１３（１Ｈ，ｍ），２．３２（１Ｈ，ｄｑ），３．４０（１Ｈ，ｄｄ），３．５６−３．７２（２Ｈ，ｍ），３．７８（１Ｈ，ｄｄ），４．３７（１Ｈ，ｓ），４．７０（１Ｈ，ｓ），６．７８（１Ｈ，ｄｄ），６．９８（１Ｈ，ｄｄ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋２８３．
【０１２８】
中間体７
Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン
【化２５】
2019501134.tif 000029
（３Ｒ）−３−［（５−メチルピリダジン−３−イル）アミノ］ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（中間体８、２００ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解し、ＴＦＡ（５ｍＬ）で処理した。これを、室温で２時間撹拌させておき、次いで蒸発乾固させて、黄色の油を与えた。次いで、これを、アセトニトリル（５ｍＬ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（０．３８ｍＬ、２．１５ｍｍｏｌ）、それに続いて５−ブロモ−１，３，４−チアジアゾール−２−イルアミン（１３０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）で処理し、次いで８０℃に３ｈ加熱した。反応混合物を蒸発させ、ＦＣＣ（ＳｉＯ２、０〜１０％  ２Ｍ  ＮＨ３（ＭｅＯＨのＤＣＭ溶液中）によって精製した。生成物を含有する分画を合わせ、蒸発させて、Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン（１００ｍｇ、５０％）を与えた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，２５℃）δ  １．９９−２．０５（１Ｈ，ｍ），２．１８−２．３１（４Ｈ，ｍ），３．３８−３．５８（３Ｈ，ｍ），３．６７−３．７１（１Ｈ，ｍ），４．１９−４．３０（１Ｈ，ｍ），６．３１（２Ｈ，ｓ），６．７０（１Ｈ，ｓ），７．０９（１Ｈ，ｄ），８．３６（１Ｈ，ｓ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋２７８．
【０１２９】
中間体８
（３Ｒ）−３−［（６−クロロピリダジン−３−イル）アミノ］ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化２６】
2019501134.tif 000030
Ｎ−［（３Ｒ）−ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２５０ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）を、１−ブタノール（２ｍＬ）に溶解し、３−クロロ−５−メチルピリダジン（０．２５Ｍ（ＤＣＭ中）、２．６８ｍＬ、１．３４ｍｍｏｌ）、それに続いてＤＩＰＥＡ（０．４８ｍＬ、２．６８ｍｍｏｌ）で処理した。この混合物を、１４０℃に２時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、水（１０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（１０ｍＬ）に抽出した。溶媒を蒸発させ、残渣をＦＣＣ（ＳｉＯ２、０〜１０％メタノール（ＤＣＭ中））によって精製した。生成物を含有する分画を合わせ、蒸発させて、Ｎ−［（３Ｒ）−１−（５−メチルピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２００ｍｇ、５３％）を与えた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，２５℃）δ  １．４０（９Ｈ，ｓ），１．８５−１．９３（１Ｈ，ｍ），２．０７−２．１８（１Ｈ，ｍ），２．２０（３Ｈ，ｓ），３．２４−３．２８（１Ｈ，ｍ），３．３８−３．４８（１Ｈ，ｍ），３．４８−３．５９（１Ｈ，ｍ），３．６０−３．６５（１Ｈ，ｍ），４．１０−４．１５（１Ｈ，ｍ），６．６７（１Ｈ，ｓ），７．２４（１Ｈ，ｄ），８．３５（１Ｈ，ｄ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋２７９．
【０１３０】
中間体９
Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミン
【化２７】
2019501134.tif 000031
（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−アミン（中間体１０、５０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（５ｍＬ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（０．０７ｍＬ、０．３８ｍｍｏｌ）、それに続いて５−ブロモ−１，３，４−チアジアゾール−２−イルアミン（５０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）で処理し、８０℃に３ｈ加熱した。この反応混合物を、次いで、蒸発させ、ＦＣＣ（ＳｉＯ２、０〜１０％  ２Ｍ  ＮＨ３（ＭｅＯＨのＤＣＭ溶液中）によって精製した。生成物を含有する分画を合わせ、蒸発させて、Ｎ２−［（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］−１，３，４−チアジアゾール−２，５−ジアミンを与え、これを、次のステップで直接使用した（５０ｍｇ、６６％）。ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋２９８，３００．
【０１３１】
中間体１０
（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−アミン
【化２８】
2019501134.tif 000032
Ｎ−［（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（中間体１１、７７ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１ｍＬ）に溶解し、ＴＦＡ（１ｍＬ）で処理し、室温で２ｈ撹拌させておいた。次いで、これを、蒸発乾固させ、ＳＣＸカートリッジに通過させ、メタノールで洗浄し、２Ｍアンモニア（メタノール溶液）で溶出した。塩基性分画を蒸発させて、（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−アミンを与え、これを、次のステップで直接使用した（５０ｍｇ、９９％）。ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋１９９，２０１．
【０１３２】
中間体１１
Ｎ−［（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【化２９】
2019501134.tif 000033
５−クロロピリダジン−３−オール（０．２ｇ、１．５３ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２ｍＬ）およびトリエチルアミン（０．４７ｍＬ、３．３７ｍｍｏｌ）に溶解し、−２０℃に冷却した。次いで、これを、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（１Ｍ（ＤＣＭ中）、３．２２ｍＬ、３．２２ｍｍｏｌ）を液滴として用いて処理した。次いで、反応混合物を、室温にゆっくりと戻させた。これを、水（１０ｍＬ）の添加によって反応停止させ、ＤＣＭ（１０ｍＬ）に抽出した。有機物を、１Ｍ  ＨＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、蒸発させて、トリフルオロメタンスルホン酸（５−クロロピリダジン−３−イル）を与えた。次いで、これを、ＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した後、トリエチルアミン（０．２１ｍＬ、１．５３ｍｍｏｌ）およびＮ−［（３Ｒ）−ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２９０ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）で処理した。次いで、これを、室温に戻させ、水（２０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２０ｍＬ）に抽出した。有機物を、蒸発し、ＦＣＣ（ＳｉＯ２、０〜１０％  ＭｅＯＨ（ＤＣＭ中））によって精製した。生成物を含有する分画を合わせ、蒸発させて、Ｎ−［（３Ｒ）−１−（５−クロロピリダジン−３−イル）ピロリジン−３−イル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル、（７７ｍｇ、１７％）を与えた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，２５℃）δ  １．４０（９Ｈ，ｓ），１．８４−１．９９  （１Ｈ，ｍ），２．０５−２．２０（１Ｈ，ｍ），３．３２−３．３４（１Ｈ，ｍ），３．４２−３．６０（２Ｈ，ｍ），３．６０−３．７３（１Ｈ，ｍ），４．００−４．２８（１Ｈ，ｍ），７．０８（１Ｈ，ｄ），７．２６（１Ｈ，ｄ），８．５５（１Ｈ，ｄ）．ｍ／ｚ：ＥＳ＋［Ｍ＋Ｈ］＋２９９，３０１．
【０１３３】
中間体１２
（２Ｓ）−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）酢酸
【化３０】
2019501134.tif 000034
（２Ｓ）−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）酢酸ベンジル（中間体１３（ａ）、７．８５ｇ、２７．４２ｍｍｏｌ）および１０％  Ｐｄ担持Ｃ（１ｇ、２７．４２ｍｍｏｌ）をエタノール（２５０ｍＬ）に入れたものを、周囲温度で４時間、水素の雰囲気中で撹拌した。反応混合物を、セライトを通して濾過し、これを、ＭｅＯＨで洗浄した。次いで、有機物を蒸発させて、透明な油として（２Ｓ）−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）酢酸を与えた（６．０ｇ、１１２％、いくらかのＭｅＯＨを含有）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，３０℃）δ  ３．２９（３Ｈ，ｓ），３．７４（３Ｈ，ｓ），４．７２（１Ｈ，ｓ），６．７７−７．０６（３Ｈ，ｍ），７．２８（１Ｈ，ｔ），１２．７７（１Ｈ，ｓ）．
【０１３４】
中間体１３（ａ）
（２Ｓ）−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）酢酸ベンジル
【化３１】
2019501134.tif 000035
臭化ベンジル（７．８１ｍＬ、６５．７５ｍｍｏｌ）を、２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）酢酸（中間体１４、１０．７５ｇ、５４．７９ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１１．３６ｇ、８２．１９ｍｍｏｌ）（ＤＭＦ（２００ｍＬ）中）に、窒素下で２１℃で滴下した。得られた混合物を、８５℃で４時間撹拌し、次いで、周囲温度で週末の間撹拌させておいた。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）で希釈し、水（２００ｍＬ）で２回洗浄した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、未精製生成物をもたらし、これを、ＦＣＣ（ＳｉＯ２  １０〜２５％  ＥｔＯＡｃ（ヘプタン中））によって精製した。純粋な分画を蒸発乾固させて、無色の油をもたらした（１０．５ｇ）。
【０１３５】
臭化ベンジル（５．５９ｍＬ、４７．０９ｍｍｏｌ）を、２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）酢酸（中間体１４、７．７ｇ、３９．２５ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（８．１４ｇ、５８．８７ｍｍｏｌ）（ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中）に、窒素下で２１℃で滴下した。得られた混合物を、８５℃で４時間撹拌し、次いで、周囲温度で週末の間撹拌させておいた。
【０１３６】
次いで、反応物を、８５℃でさらに４時間加熱した後、ＲＴに冷却した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈し、水（２００ｍＬ）で２回洗浄した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、未精製生成物をもたらした。この未精製生成物を、ＦＣＣ（ＳｉＯ２  １０〜２５％  ＥｔＯＡｃ（ヘプタン中））によって精製した。純粋な分画を、蒸発乾固させて、淡黄色の油（６ｇ）をもたらした。２つの反応からの生成物を合わせ、鏡像異性体を、キラルＨＰＬＣによって分離した。（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＯＤカラム、２０μｍ、１００ｍｍ×２５０ｍｍ、溶出剤として２５０ｍＬ／分のヘプタン：ＥｔＯＨの９５／５混合物を使用）。所望される化合物を含有する分画を蒸発乾固させて、以下をもたらした：
【０１３７】
第１の溶出された異性体・中間体１３（ａ）（２Ｓ）−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）酢酸ベンジル（７．８６ｇ、３９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，２７℃）δ  ３．３７（３Ｈ，ｓ），３．７８（３Ｈ，ｓ），５．０２（１Ｈ，ｓ），５．２０（２Ｈ，ｓ），６．７５−７．１０（３Ｈ，ｍ），７．２０−７．５２（６Ｈ，ｍ）．
【０１３８】
第２の溶出された異性体・中間体１３（ｂ）（２Ｒ）−２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）酢酸ベンジル（７．９ｇ、３９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，２７℃）δ  ３．３７（３Ｈ，ｓ），３．７８（３Ｈ，ｓ），５．０２（１Ｈ，ｓ），５．２０（２Ｈ，ｓ），６．７５−７．１０（３Ｈ，ｍ），７．２０−７．５２（６Ｈ，ｍ）．
【０１３９】
中間体１４
２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）酢酸
【化３２】
2019501134.tif 000036
水酸化カリウム（２．２６７ｇ、４０．４０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液を、３−メトキシベンズアルデヒド（１ｇ、７．３４ｍｍｏｌ）とブロモホルム（０．７７１ｍＬ、８．８１ｍｍｏｌ）とをＭｅＯＨ（５．００ｍＬ）に入れた撹拌混合物に、０℃で、少量に分けて２ｈかけて添加した。次いで、この混合物を、室温に温めさせ、一晩撹拌させておいた。固体を減圧下で濾過し、この固体をＭｅＯＨ（１５ｍＬ）ですすいだ。濾液を蒸発させて、濃厚な白色ペーストとし、次いで水（５０ｍＬ）に再溶解した。次いで、これを、Ｅｔ２Ｏ（５０ｍＬ）で洗浄し、次いで、水性部分を酸性化させてｐＨ２にした（約５ｍＬ  ２Ｍ  ＨＣｌ溶液）。次いで、水相を、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、次いで、溶媒を減圧下で蒸発させて、黄色の油として２−メトキシ−２−（３−メトキシフェニル）酢酸を与えた（１．４ｇ、９７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，３０℃）δ  ３．１８（３Ｈ，ｓ），３．７５（３Ｈ，ｓ），４．７４（１Ｈ，ｓ），６．８２−７．０５（３Ｈ，ｍ），７．２９（１Ｈ，ｍ），１２．７８（１Ｈ，ｓ）．
【０１４０】
中間体１５
２−エトキシ−２−（３−メトキシフェニル）酢酸
【化３３】
2019501134.tif 000037
３−メトキシベンズアルデヒド（５．０ｇ、３６．７２ｍｍｏｌ）とブロモホルム（３．８５ｍＬ、４４．０６ｍｍｏｌ）とをエタノール（４０ｍＬ）に入れた０℃の撹拌混合物に、水酸化カリウム（１１．３３ｇ、２０１．９８ｍｍｏｌ）のエタノール（６０ｍＬ）溶液を、１時間かけて滴下した。添加が完了した後、この混合物を、室温で一晩、撹拌させておいた。沈殿が形成し、これを、濾過によって除去し、濾液を蒸発させて、ペーストを与え、これを水（１００ｍＬ）に溶解し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。次いで、水相を２Ｍ  ＨＣｌで酸性化させてｐＨ＝２にし、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、蒸発させて、薄茶色の油を与えた。これを、シリカに吸収させ、ＦＣＣ（ＳｉＯ２、５％  ＭｅＯＨ（ＤＣＭ中））によって精製して、薄茶色の油として２−エトキシ−２−（３−メトキシフェニル）酢酸（３．１ｇ、４０％）を与えた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２１  ℃）δ  １．２８（３Ｈ，ｔ），２．０９（１Ｈ，ｓ），３．６４−３．５２（２Ｈ，ｍ），３．８１（３Ｈ，ｓ）４．８６（１Ｈ，ｓ），６．８９（１Ｈ，ｄｄｄ），６．９９（１Ｈ，ｍ），７．０３（１Ｈ，ｍ），７．２９（１Ｈ，ｔ）．ｍ／ｚ：ＥＳ−［Ｍ−Ｈ］−２０９．
【０１４１】
中間体１６
２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−酢酸
【化３４】
2019501134.tif 000038
２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−酢酸メチル（中間体１７、１．３２ｇ、６．６６ｍｍｏｌ）を、メタノール（２４ｍＬ）に溶解し、室温で撹拌した。水酸化カリウム（０．４５ｇ、７．９９２ｍｍｏｌ）のメタノール（１２ｍＬ）溶液を添加し、混合物を、ｒ．ｔで５ｈ撹拌した。混合物を、蒸発乾固させて、水とＥｔＯＡｃ（それぞれ７０ｍＬ）に分配させた。水性部をＥｔＯＡｃ（７０ｍＬ）で洗浄し、次いで、２Ｎ塩酸で酸性化させてｐＨ２にした。次いで、これを、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機物を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて、透明な粘性物質として２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ−酢酸を与えた（１．１６ｇ、９４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）３．４２（３Ｈ，ｓ）４．７７（１Ｈ，ｓ），７．１０−７．０４（２Ｈ，ｍ），７．４４−７．４０（２Ｈ，ｍ）．
【０１４２】
中間体１７
２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ酢酸メチル
【化３５】
2019501134.tif 000039
炭酸セシウム（７．６４ｇ、２３．４５ｍｍｏｌ）を、室温でＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解し、ヨードメタン（２．４ｍＬ、３８．５５ｍｍｏｌ）、それに続いて２−（４−フルオロフェニル）−２−ヒドロキシ酢酸（２．０ｇ、１１．７５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を、室温で４８ｈ撹拌した。ＤＭＦを、減圧下で蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃと水（それぞれ７５ｍＬ）に分配させた。有機物を、水（７５ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、減圧下で蒸発させ、ＦＣＣ（ＳｉＯ２、３：１のシクロヘキサン：ＥｔＯＡｃ）によって精製した。純粋な分画を蒸発乾固させて、無色の油として２−（４−フルオロフェニル）−２−メトキシ酢酸メチル（１．６８ｇ、７２％）をもたらした。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２０℃）δ  ３．４０（３Ｈ，ｓ），３．７２（３Ｈ，ｓ），４．７６（１Ｈ，ｓ），７．０９−７．０３（２Ｈ，ｍ），７．４４−７．４０（２Ｈ，ｍ）．
【０１４３】
中間体１８
２−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−２−メトキシ−酢酸
【化３６】
2019501134.tif 000040
４−フルオロ−３−メトキシ−ベンズアルデヒド（１．０ｇ、６．４８ｍｍｏｌ）とブロモホルム（０．６８ｍＬ、７．７８５ｍｍｏｌ）とをＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に入れた０℃の撹拌混合物に、水酸化カリウム（２．０ｇ、３５．６８２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）溶液を、１ｈかけて滴下した。添加後、混合物を撹拌し、室温に一晩温めた。得られた沈殿を、濾過によって除去した。濾液を蒸発させて、ペーストを与え、これを水（１００ｍＬ）に溶解し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。次いで、水相を２Ｎ  ＨＣｌで酸性化させてｐＨ＝２にした。これを、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、減圧下で蒸発させて、未精製生成物をもたらした。この未精製生成物を、ＦＣＣ（ＳｉＯ２、０〜５％  ＭｅＯＨ（ＤＣＭ中））によってさらに精製して、無色の油として２−（４−フルオロ−３−メトキシ−フェニル）−２−メトキシ−酢酸（０．６６ｇ、４７％）を与えた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，３０℃）δ  ３．４３（３Ｈ，ｓ），３．９０（３Ｈ，ｓ），４．７５（１Ｈ，ｓ），６．９５−７．００（１Ｈ，ｍ），７．１０−７．０４（２Ｈ，ｍ）．ｍ／ｚ：ＥＳ−［Ｍ−Ｈ］−２１３．
【０１４４】
中間体１９
２−メトキシ−２−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］酢酸
【化３７】
2019501134.tif 000041
水酸化カリウム（１．８５１ｇ、３３．００ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液を、３−（トリフルオロメトキシ）ベンズアルデヒド（１．１４１ｇ、６ｍｍｏｌ）とブロモホルム（０．６３０ｍＬ、７．２０ｍｍｏｌ）とをＭｅＯＨ（５．００ｍＬ）に入れた撹拌混合物に、０℃で、少量に分けて２ｈかけて添加した。次いで、この混合物を、室温に温めさせ、一晩撹拌させておいた。反応混合物中に白色沈殿が形成した。固体を減圧下で濾過して取り除き、濾過ケークをＭｅＯＨ（１５ｍＬ）ですすいだ。濾液を蒸発させて濃厚な白色ペーストとし、次いで、水（５０ｍＬ）に再溶解した。次いで、これをＥｔ２Ｏ（５０ｍＬ）で洗浄した。水相を、酸性化させて（約５ｍＬの２Ｍ  ＨＣｌ溶液）、ｐＨ＝２にし、次いで、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）に抽出した。合わせた有機物を、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、減圧下で蒸発させて、透明な油を与えた。未精製生成物を、ＦＣＣ（ＳｉＯ２、１０〜５０％  ＥｔＯＡｃ（ヘプタン中））によって精製した。純粋な分画を、蒸発乾固させて、無色の油として２−メトキシ−２−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］酢酸（０．８３２ｇ、５５％）をもたらした。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，３０℃）δ  ３．４７（３Ｈ，ｓ），４．８１（１Ｈ，ｓ），７．２０−７．２４（１Ｈ，ｍ），７．３３（１Ｈ，ｓ），７．３７−７．４６（２Ｈ，ｍ）．ｍ／ｚ：ＥＳ−［Ｍ−Ｈ］−２４９．４．
【０１４５】
中間体２０
２−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２−メトキシ−酢酸
【化３８】
2019501134.tif 000042
３−（ジフルオロメトキシ）ベンズアルデヒド（２．０ｇ、１１．６１ｍｍｏｌ）とブロモホルム（１．２２ｍＬ、１３．９４ｍｍｏｌ）とをＭｅＯＨ（４０ｍＬ）に入れた０℃の撹拌混合物に、水酸化カリウム（３．５９ｇ、６３．９０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６０ｍＬ）溶液を、１時間かけて滴下した。添加後、室温に一晩温めながら、混合物を撹拌させておいた。沈殿を、濾過によって除去し、濾液を蒸発させて、ペーストを与え、これを水（１００ｍＬ）に溶解し、ＥｔＯＡｃ（２×７５ｍＬ）で抽出した。次いで、水相を２Ｍ  ＨＣｌで酸性化させてｐＨ＝１にし、ＥｔＯＡｃ（２×７５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、蒸発させて、薄茶色の油を与えた。これを、ＦＣＣ（ＳｉＯ２、９５：５のシクロヘキサン：ＥｔＯＡｃ＋０．１％ギ酸から８：２のＥｔＯＡｃ：シクロヘキサン＋０．１％ギ酸に上昇させる）によって精製した。適切な分画を減圧下で蒸発させて、無色の油として２−［３−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−２−メトキシ−酢酸を提供した（１．３ｇ  ４８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２１℃）δ  ３．４６（３Ｈ，ｓ），４．８０（１Ｈ，ｓ），６．５３（１Ｈ，ｔ），７．１０−７．１５（１Ｈ，ｍ），７．２２−７．２３（１Ｈ，ｍ），７．２９−７．３２（１Ｈ，ｍ），７．３９（１Ｈ，ｔ）．ｍ／ｚ：ＥＳ−［Ｍ−Ｈ］−２３１．
【０１４６】
中間体２１
２−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）酢酸
【化３９】
2019501134.tif 000043
ｐ−アニスアルデヒド（３．５８ｇ、２６．２９ｍｍｏｌ）とブロモホルム（２．７６ｍＬ、３１．５５ｍｍｏｌ）とをＭｅＯＨ（３０ｍＬ）に入れた０℃の撹拌混合物に、水酸化カリウム（８．１２ｇ、１４４．６５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６０ｍＬ）溶液を、３０分かけて滴下した。添加後、室温に一晩温めながら、混合物を撹拌させておいた。翌朝、沈殿を濾過によって除去した。濾液を蒸発させて、ペーストを与え、これを水（１００ｍＬ）に溶解し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出して、いくらかの残存する未反応の出発アルデヒドを除去した。次いで、水相を２Ｎ  ＨＣｌで酸性化させてｐＨ＝２にした。これを、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、蒸発させて、オレンジ色の粘性物質として２−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）酢酸を与えた（３．１ｇ、６０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ，ＤＭＳＯ，３０℃）３．２７（３Ｈ，ｓ），３．７５（３Ｈ，ｓ），４．６９（１Ｈ，ｓ），６．９３（２Ｈ，ｄ），７．３０（２Ｈ，ｄ），１２．４５（１Ｈ，ｂｒｓ）．ｍ／ｚ：ＥＳ−［Ｍ−Ｈ］−１９５．
【０１４７】
生物アッセイ
次のアッセイを使用して、本明細書に記載した化合物の効果を測定した：ａ）ＧＬＳ酵素効力アッセイ；ｂ）ＧＬＳ細胞効力アッセイ；ｃ）ＧＬＳ細胞増殖アッセイ。アッセイの説明を通して、概して：
ｉ．次の略語を使用している：ＣＯ２＝二酸化炭素；ＤＭＥＭ＝ダルベッコ変法イーグル培地；ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド；ＥＤＴＡ＝エチレンジアミン四酢酸；ＥＧＴＡ＝エチレングリコール四酢酸；ＦＣＳ＝ウシ胎児血清；ｈ＝時間；ＮＢＳ＝ノンバインディングサーフェイス（Ｎｏｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｕｒｆａｃｅ）；ＳＤＳ＝ドデシル硫酸ナトリウム；ＴＲＩＳ＝トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン。
ｉｉ．ＩＣ５０値は、Ｇｅｎｅｄａｔａのスマートフィッティングモデル（ｓｍａｒｔ  ｆｉｔｔｉｎｇ  ｍｏｄｅｌ）を使用して算出した。ＩＣ５０値は、生物活性の５０％を抑制する試験化合物の濃度であった。
【０１４８】
アッセイａ）：ＧＬＳ酵素効力アッセイ
グルタミン酸オキシダーゼ／ＡｍｐｌｅｘＲｅｄ結合アッセイを使用して、インビトロで、化合物がＧＬＳ１に結合し、ＧＬＳ１の活性を阻害する能力を測定した。Ｅ．Ｃｏｌｉにおいて発現される６Ｈｉｓタグ付けされたＧＬＳタンパク質（アミノ酸６３〜６６９）を精製し、一定分量で、−８０℃で保管した。ＧＬＳ１を、２×作業濃度に希釈し、室温でインキュベートして、四量体／二量体形を安定状態に到達させた。アッセイ測定は、５０ｍＭ  ＴＲＩＳ  ｐＨ７．８、１００ｍＭ  ＮａＰＯ４、ｐＨ７．８、０．００１％ｖ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ２０を含む緩衝液中で実施した。精製された組換えＧＬＳ１タンパク質を、アッセイ緩衝液で１２ｎＭに希釈し、室温で３０分間、予備インキュベートした。１００％  ＤＭＳＯへの希釈によって試験化合物を調製して、１２点の濃度反応のための正確な用量範囲を与え、適切な体積（２．５〜６０ｎｌ）を、Ｌａｂｃｙｔｅ  Ｅｃｈｏ  ５５５超音波ディスペンサーを使用して３８４ウェルマイクロアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ製品コード７８４９００）に分注した。ＤＭＳＯ濃度は、ＤＭＳＯ溶液で埋め戻すことによって、２％に維持した。次いで、３μＬの希釈したＧＬＳ１タンパク質（１２ｎＭ）を、ＢｉｏＲａｐｔｒ自動ディスペンサー（Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して各ウェルに分注し、室温で１５分間インキュベートした。次いで、アッセイ緩衝液で希釈した３μＬの１００ｍＭグルタミンを添加し、反応物を、室温で６０分間インキュベートした。次いで、４５μＭの６−（２−ブロモエチニル）−２，３−ジメチル−キナゾリン−４−オン、７５μＭのＡｍｐｌｅｘ  Ｒｅｄ、０．３７５単位／ｍＬの西洋ワサビペルオキシダーゼ、０．１２単位／ｍＬのグルタミン酸オキシダーゼ（１００ｍＭ  ＴＲＩＳ  ｐＨ７．５中）の添加によって、反応を停止させた。暗所での室温での３０分後、プレートを、５３５／５９０ｎｍ光学フィルターを使用するＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎ上で読み取り、生データを、Ｇｅｎｅｄａｔａを使用して解析して、ＩＣ５０値をもたらした。アッセイ成分に対する非特異的効果を排除するために、６Ｈｉｓタグ付けされたＧＬＳタンパク質とグルタミンがアッセイ緩衝液で置き換えられた、アッセイの人工産物バージョンも使用した。
【０１４９】
アッセイｂ）：ＧＬＳ細胞効力アッセイ
細胞のグルタミン酸欠乏を測定するＰＣ３結合アッセイの使用によって、化合物を、細胞のＧＬＳ活性を阻害する可能性について評価した。１００％  ＤＭＳＯへの希釈によって試験化合物を調製して、１２点の濃度反応のための正確な用量範囲を与え、適切な体積（５〜１２０ｎｌ）を、Ｌａｂｃｙｔｅ  Ｅｃｈｏ  ５５５超音波ディスペンサーを使用して３８４ウェルマイクロアッセイプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ製品コード３７１２）に分注した。ＤＭＳＯ濃度は、ＤＭＳＯ溶液で埋め戻すことによって、０．３％に維持した。ＰＣ３細胞を、フェノール不含ＤＭＥＭ（１０％透析ＦＣＳ、２ｍＭグルタミン）で増殖させ、トリプシン処理による分散の後、分注された化合物を含有する３８４ウェルアッセイプレートに直接的に、４０μＬの増殖培地中、ウェルあたり５．６×１０３細胞でプレーティングした。３７℃、５％  ＣＯ２での６ｈのインキュベーション後、増殖培地を吸引し、細胞を、１０ｍＭ  ＴＲＩＳ  ｐＨ７．４、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、１ｍＭ  ＮａＦ、２０ｍＭ  Ｎａ４Ｐ２Ｏ７、２ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１０％グリセロール、０．１％  ＳＤＳ、および０．５％デオキシコール酸を含有する、１５μＬの緩衝液に溶解した。次いで、４μＬの細胞溶解物を、３８４ウェルＮＢＳプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ製品コード３５７５）に移し、３５μＬの２７．５μＭ  Ａｍｐｌｅｘ  Ｒｅｄ、０．１３７５Ｕ／ｍＬ西洋ワサビペルオキシダーゼ、０．０４４Ｕ／ｍＬグルタミン酸オキシダーゼ、１００ｍＭ  ＴＲＩＳ  ｐＨ７．５を添加した。暗所での室温での３０分後、プレートを、５３５／５９０ｎｍ光学フィルターを使用するＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎ上で読み取り、生データを、プロプライエタリ・ソフトウェアを使用して解析して、ＩＣ５０値をもたらした。
【０１５０】
アッセイｃ）：ＧＬＳ細胞増殖アッセイ
３８４ウェルプレートＮＣＩ−Ｈ１７０３細胞増殖アッセイを使用して、化合物が細胞増殖を阻害する能力を測定した。ＮＣＩ−Ｈ１７０３細胞を、フェノールレッド不含ＲＰＭＩ１６４０（１０％  ＦＣＳ、２ｍＭグルタミン）で増殖させ、透明底３８４ウェルアッセイプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ製品コード３７１２）に、４０μＬの増殖培地中、ウェルあたり７５０細胞の密度で播種し、３７℃、５％  ＣＯ２で２４ｈインキュベートした。１００％  ＤＭＳＯでの希釈によって試験化合物を調製して、１２点の濃度反応のための正確な用量範囲を与え、適切な体積（５〜１２０ｎｌ）を、プレーティングした細胞を含有するアッセイプレートに直接分注した。ＤＭＳＯ濃度は、ＤＭＳＯ溶液で埋め戻すことによって、０．３％に維持した。プレートを、３７℃、５％  ＣＯ２で５日間インキュベートし、Ｓｙｔｏｘ  Ｇｒｅｅｎおよびサポニンを添加して、それぞれ２μＭおよび０．２５％の最終濃度とし、６ｈインキュベートした後に分析を行った。プレートを、４８８ｎｍ励起、および発光のためのＦＩＴＣフィルターセット（５００〜５３０ｎｍ）を使用するＡｃｕｍｅｎ  ｅＸ３（ＴＴＰ  Ｌａｂｔｅｃｈ）上で読み取った。ＩＣ５０値は、Ｇｅｎｅｄａｔａソフトウェア分析を使用して、第０日（ｄａｙ  ｚｅｒｏ）増殖の最大阻害に対するカーブフィッティングによって算出した。
【０１５１】
アッセイａ）〜ｃ）による結果を、表１に示す。
【０１５２】
【表３】
2019501134.tif 000044
【０１５３】
【表４】
2019501134.tif 000045
【国際調査報告】
2019501134.tif 000048
2019501134.tif 000049
2019501134.tif 000050