【手続補正書】
【提出日】平成19年7月26日(2007.7.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  改良されたラフィネート耐性のアミノ酸産生細菌株Ｂを産生するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）親細菌株Ａを変異誘発に供する工程；
（ｂ）該変異誘発された親株Ａを、硫酸アンモニウム含有量に基づいて少なくとも約１％のラフィネートを含有する培地と接触させる工程；
（ｃ）ラフィネート耐性細菌株Ｂを選択する工程；および
（ｄ）該ラフィネート耐性細菌株Ｂのアミノ酸産生を決定する工程、
を包含する、方法。
【請求項２】  前記親細菌株が、ランダムな化学変異誘発に供される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】  前記親細菌株が、以下：
（ａ）Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．；
（ｂ）Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．；
（ｃ）Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ；および
（ｄ）Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．、
からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】  前記細菌株Ｂが、
（ａ）グリシン；
（ｂ）アラニン；
（ｃ）メチオニン；
（ｄ）フェニルアラニン；
（ｅ）トリプトファン；
（ｆ）プロリン；
（ｇ）セリン；
（ｈ）スレオニン；
（ｉ）システイン；
（ｊ）チロシン；
（ｋ）アスパラギン
（ｌ）グルタミン；
（ｍ）アスパラギン酸；
（ｎ）グルタミン酸；
（ｏ）リジン；
（ｐ）アルギニン；
（ｑ）ヒスチジン；
（ｒ）イソロイシン；
（ｓ）ロイシン；および
（ｔ）バリン、
からなる群から選択されるアミノ酸を産生する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】  前記親細菌株が、Ｌ−リジンを産生するＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】  あるプロセスにより産生されるアミノ酸を産生する細菌株Ｂであって、該プロセスにおいて、
（ａ）親細菌株Ａが、変異誘発に供され；
（ｂ）該変異誘発された親株が、硫酸アンモニウム含有量に基づいて少なくとも約１％のラフィネートを含有する培地と接触され；
（ｃ）ラフィネート耐性細菌株Ｂが、該変異誘発された親株から選択され；そして
（ｄ）該細菌株Ｂのアミノ酸産生が決定される、
細菌株。
【請求項７】  前記親細菌株Ａが、以下：
（ａ）Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．；
（ｂ）Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．；
（ｃ）Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ；および
（ｄ）Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．、
からなる群から選択される、請求項６に記載の細菌株。
【請求項８】  前記細菌株Ｂが、
（ａ）グリシン；
（ｂ）アラニン；
（ｃ）メチオニン；
（ｄ）フェニルアラニン；
（ｅ）トリプトファン；
（ｆ）プロリン；
（ｇ）セリン；
（ｈ）スレオニン；
（ｉ）システイン；
（ｊ）チロシン；
（ｋ）アスパラギン
（ｌ）グルタミン；
（ｍ）アスパラギン酸；
（ｎ）グルタミン酸；
（ｏ）リジン；
（ｐ）アルギニン；
（ｑ）ヒスチジン；
（ｒ）イソロイシン；
（ｓ）ロイシン；および
（ｔ）バリン、
からなる群から選択されるアミノ酸を産生する、請求項７に記載の細菌株。
【請求項９】  少なくとも約１％のラフィネートを含有する培地中で増殖される場合、２４時間で少なくとも約１０ｇ／ｌのＬ−リジンを産生する、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．株。
【請求項１０】  少なくとも約１％のラフィネートを含有する培地中で増殖された場合、２４時間で少なくとも約１０ｇ／ｌのＬ−リジンを産生する、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ株。
【請求項１１】  Ｌ−リジン産生細菌株であって、ここで該株が、
（ａ）ＮＲＲＬ  Ｂ−３００５９；
（ｂ）ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６０；
（ｃ）ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６１；
（ｄ）ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６２；
（ｅ）ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６３；および
（ｆ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、または（ｅ）の変異体、
からなる群から選択される、Ｌ−リジン産生細菌株。
【請求項１２】  前記株が、ＮＲＲＬ  Ｂ−３００５９である、請求項１１に記載の株。
【請求項１３】  前記株が、ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６０である、請求項１１に記載の株。
【請求項１４】  前記株が、ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６１である、請求項１１に記載の株。
【請求項１５】  前記株が、ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６２である、請求項１１に記載の株。
【請求項１６】  前記株が、ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６３である、請求項１１に記載の株。
【請求項１７】  アミノ酸を産生するためのプロセスであって、以下：
（ａ）ラフィネートを含有する培地中で細菌Ｂを培養する工程であって、該株が、以下の方法：
（ｉ）アミノ酸を産生する親細菌株Ａを選択する工程；
（ｉｉ）該親株を変異誘発に供する工程；
（ｉｉｉ）該変異誘発された親株から、改良されたラフィネート耐性細菌株Ｂを選択する工程、により得られる、工程；ならびに
（ｂ）該培地から該アミノ酸を回収する工程、を包含する、
プロセス。
【請求項１８】  ラフィネートの培地濃度が、硫酸アンモニウム含有量に基づいて少なくとも約１％である、請求項１７に記載のプロセス。
【請求項１９】  産生されるＬ−リジンの量が、２４時間で少なくとも約１０ｇ／ｌのＬ−リジンである、請求項１７に記載のプロセス。
【請求項２０】  ラフィネートの培地濃度が、硫酸アンモニウム含有量に基づいて少なくとも約１％であり、そして産生されるＬ−リジンの量が、２４時間で、少なくとも約１０ｇ／ｌのＬ−リジンである、請求項１７に記載のプロセス。
【請求項２１】  前記ラフィネートの濃度が、硫酸アンモニウム含有量に基づいて約５％であり、そして産生されるＬ−リジンの量が、２４時間で少なくとも約１０ｇ／ｌのＬ−リジンである、請求項１７に記載のプロセス。
【請求項２２】  細菌Ｂが、以下：
（ａ）Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．；
（ｂ）Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．；
（ｃ）Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ；および
（ｄ）Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．、
からなる群から選択される、請求項１７に記載のプロセス。
【請求項２３】  前記細菌Ｂが、以下：
（ａ）ＮＲＲＬ  Ｂ−３００５９；
（ｂ）ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６０；
（ｃ）ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６１；
（ｄ）ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６２；
（ｅ）ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６３；および
（ｆ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、または（ｅ）の変異体、
からなる群から選択される、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．である、請求項２２に記載のプロセス。
【請求項２４】  親細菌株と比較して多量のＬ−リジンを産生するラフィネート耐性細菌株Ｂを産生するための方法であって、該方法は、
（ａ）Ｌ−リジンを産生する親細菌株Ａを選択する工程；
（ｂ）該親細菌株Ａを変異誘発に供して、変異誘発された親細菌株Ａを産生する工程；
（ｃ）該変異誘発された親細菌株Ａを、硫酸アンモニウム含有量に基づいて少なくとも約１％のラフィネートを含有する細菌選択培地中で培養する工程であって、該ラフィネートは、Ｌ−リジンのイオン交換クロマトグラフィー精製の間に産生されたブロス流出物廃流産物である、工程；
（ｄ）該変異誘発された親細菌株Ａを含む該細菌選択培地からラフィネート耐性細菌株Ｂを選択する工程であって、該ラフィネート耐性細菌株Ｂは、該親細菌株Ａと比較して高い、波長６６０ｎｍにおける光学密度まで増殖し、かつ該親細菌株Ａと比較して多量のＬ−リジンを産生する、工程；
を包含する、方法。
【請求項２５】  請求項２４に記載の方法であって、前記親細菌株Ａの変異誘発は、ランダムな化学変異誘発による、方法。
【請求項２６】  請求項２４に記載の方法であって、前記化学変異誘発は、前記親細菌株Ａを、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンと混合することによって行われる、方法。
【請求項２７】  請求項１に記載の方法であって、前記親細菌株Ａは、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．である、方法。
【請求項２８】  請求項１に記載の方法であって、前記細菌発酵培地は、硫酸アンモニウム含有量に基づいて少なくとも４％のラフィネートを含有し、該ラフィネートは、Ｌ−リジンのイオン交換クロマトグラフィー精製の間に産生されたブロス流出物廃流産物である、方法。
【請求項２９】  単離されたＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ株であって、該株は、少なくとも約１％のラフィネートを含有する細菌培地において増殖された場合に、２４時間で少なくとも約１０ｇ／ｌのＬ−リジンを産生する、株。
【請求項３０】  ＮＲＲＬ  Ｂ−３００５９である、単離されたＬ−リジン産生Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ株。
【請求項３１】  ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６０である、単離されたＬ−リジン産生Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ株。
【請求項３２】  ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６１である、単離されたＬ−リジン産生Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ株。
【請求項３３】  ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６２である、単離されたＬ−リジン産生Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ株。
【請求項３４】  ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６３である、単離されたＬ−リジン産生Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ株。
【請求項３５】  Ｌ−リジンの産生のためのプロセスであって、該プロセスは、
硫酸アンモニウム含有量に基づいて少なくとも約２％のラフィネートを含有する細菌発酵培地においてラフィネート耐性細菌株Ｂを培養する工程；
を包含し、該ラフィネートは、Ｌ−リジンのイオン交換クロマトグラフィー精製の間に産生されたブロス流出物廃流産物であり、該ラフィネート耐性細菌株Ｂは、
（ｉ）Ｌ−リジンを産生する親細菌株Ａを選択する工程；
（ｉｉ）該親細菌株Ａを変異誘発に供する工程；
（ｉｉｉ）該変異誘発された親細菌株Ａを、硫酸アンモニウム含有量に基づいて少なくとも約１％のラフィネートを含有する細菌選択培地中で培養する工程であって、該ラフィネートは、Ｌ−リジンのイオン交換クロマトグラフィー精製の間に産生されたブロス流出物廃流産物である、工程；
（ｉｖ）工程（ｉｉｉ）の変異誘発された親細菌株Ａを含む該細菌選択培地から該ラフィネート耐性細菌株Ｂを選択する工程であって、該ラフィネート耐性細菌株Ｂは、該親細菌株Ａと比較して高い、波長６６０ｎｍにおける光学密度まで増殖可能である、工程；
（ｖ）該ラフィネート耐性細菌株Ｂを、硫酸アンモニウム含有量に基づいて少なくとも約２％のラフィネートを含有する細菌発酵培地中で培養する工程であって、該ラフィネートは、Ｌ−リジンのイオン交換クロマトグラフィー精製の間に産生されたブロス流出物廃流産物であり、該細菌株Ｂは、該親細菌株Ａと比較して多量のＬ−リジンを産生する、工程；および
（ｖｉ）該Ｌ−リジンを該細菌発酵培地から回収する工程；
によって取得される、プロセス。
【請求項３６】  請求項３５に記載のプロセスであって、前記細菌発酵培地は、硫酸アンモニウム含有量に基づいて少なくとも約４％のラフィネートを含有し、前記ラフィネートは、Ｌ−リジンのイオン交換クロマトグラフィー精製の間に産生されたブロス流出物廃流産物である、プロセス。
【請求項３７】  請求項３５に記載のプロセスであって、前記産生されるＬ−リジンの量は、２４時間で、前記発酵培地１リットル当たり少なくとも約１０ｇのＬ−リジンである、プロセス。
【請求項３８】  請求項３６に記載のプロセスであって、前記産生されるＬ−リジンの量は、２４時間で、前記発酵培地１リットル当たり少なくとも約１０ｇのＬ−リジンである、プロセス。
【請求項３９】  請求項３５に記載のプロセスであって、前記親細菌株Ａおよび前記ラフィネート耐性細菌株Ｂは、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．である、プロセス。
【請求項４０】  請求項３９に記載のプロセスであって、前記ラフィネート耐性細菌株Ｂは、ＮＲＲＬ  Ｂ−３００５９、ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６０、ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６１、ＮＲＲＬ  Ｂ−３００６２、およびＮＲＲＬ  Ｂ−３００６３からなる群より選択されるＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ株である、プロセス。