【手続補正書】
【提出日】平成19年10月25日(2007.10.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  体液の試料をアクチベーター試薬と反応させること、必要であれば、１種以上の凝固促進剤の添加により凝固を誘導すること、及び凝固能の指標となる値を確定することにより、全体の又はクエン酸塩加（もしくは同等に安定化された）血液又は血漿より選択される体液の血液凝固能が評価される血液学的アッセイであって、該試薬が、
（ａ）既定量のＸａ因子又は血液学的に等価なその変異体と、
（ｂ）既定量のＶａ因子、血液学的に等価なその変異体、又は内因性Ｖ因子を活性化する酵素とを組み合わせて含む、血液学的アッセイ。
【請求項２】  Ｖ因子活性化成分を含有し、かつＸ因子活性化成分は枯渇しているヘビ毒が、内因性Ｖ因子を活性化する酵素の源として利用される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項３】  源が、精製されたラッセルクサリヘビ毒に由来するＶ因子アクチベーター（ＲＶＶ−Ｖ）である、請求項１又は２に記載のアッセイ。
【請求項４】  既定量の試料の凝固能が、１個以上の標準の凝固能と比較される、請求項１〜３のいずれかに記載のアッセイ。
【請求項５】  値の確定が、
（ｉ）添加から凝血の開始までの時間、
（ii）添加から遊離トロンビン活性の検出までの時間、
（iii）トロンビン活性、
（iv）Ｘａ因子活性：のうちの一つを検出することを含む、請求項１〜４のいずれかに記載のアッセイ。
【請求項６】  アクチベーター試薬が、既定量の天然もしくは合成のリン脂質又は血小板を含み、かつ方法が、既定量のカルシウムイオン（又は、機能的に等価なイオン）を含む凝固促進剤の反応系への添加を含む、請求項１〜５のいずれかに記載のアッセイ。
【請求項７】  試料が、光学的凝固計を使用して検出される凝血の開始に達するまでの時間の測定により、値が確定される、請求項１〜６のいずれかに記載のアッセイ。
【請求項８】  検出可能な値を提供する分析補助剤の、処理された試料への添加により、値が確定される、請求項１〜７のいずれかに記載のアッセイ。
【請求項９】  トロンビン活性の測定に特異的な、又はＸａ因子活性の測定に特異的な合成基質を分析補助剤として反応系へ添加すること、及び適切な活性を検出することにより、値が確定される、請求項８に記載のアッセイ。
【請求項１０】  基質が色素原性、蛍光原性、電流原性、又は発光性を有する、請求項９に記載のアッセイ。
【請求項１１】  凝固中に機械的、磁気的、又は電気的な挙動を示す粒子を分析補助剤として反応系へ添加すること、及び適切な挙動を検出することにより、値が確定される、請求項９に記載のアッセイ。
【請求項１２】  既定量のヒト体液を含む試料の中の血液凝固成分又は処置添加剤の決定が、凝固能を、正常ヒト体液の比較可能な試料の凝固能、及び／又は該成分（又は添加剤）を欠いているか、もしくは既知の過剰量の該成分（もしくは添加剤）を含有するヒト体液の比較可能な試料の凝固能と比較することにより実施される、請求項１〜１１のいずれかに記載のアッセイ。
【請求項１３】  １種以上の血液凝固成分の欠損又は過多が疑われる患者の血液凝固能を評価するために利用される、請求項１２に記載のアッセイ。
【請求項１４】  成分が、凝固因子、又は抗凝固性の酵素もしくはプロ酵素である、請求項１２又は１３に記載のアッセイ。
【請求項１５】  １種以上の血液凝固成分に対する抗体の存在が疑われる完全な体液の血液凝固能を評価するために利用される、請求項１２〜１４のいずれかに記載のアッセイ。
【請求項１６】  完全な体液の試料の中のループス性抗凝固因子の存在を評価するために利用される、請求項１５に記載のアッセイ。
【請求項１７】  体液の試料をある量のアクチベーター試薬と混合する工程、
混合物をインキュベートする工程、
促進剤（及び、場合により、分析補助剤）を添加する工程、及び
凝固能の指標となる値を確定する工程を含む、請求項１〜１６のいずれかに記載のアッセイ。
【請求項１８】  ｉ．１０〜２００mMのトリス／ＨＣｌと、０．６〜１．２％w／vのＮａＣｌと、０．０１〜１．０％w／vのアルブミンとを含有する水性緩衝溶液中の、０．０１〜１０nkat／mlの既定量のＸａ因子と、０．０５〜１０U／mlの既定量のＲＶＶ−Ｖと、（場合により）１〜２００μg／mlの既定量のリン脂質とを含有するアクチベーター試薬を調製する工程、
ii．１〜１００μlの既定量のクエン酸塩加（又はＣａ−結合）の血小板欠乏血漿を、１〜１００μlの既定量のアクチベーター試薬と混合する工程、
iii．混合物をインキュベートする工程、
iv．１０〜１００μlの既定量の２〜２００mMのＣａＣｌ２を添加する工程、
ｖ．場合により、検出可能な値を提供する分析補助剤を添加する工程、及び
vi．値を確定する工程を含む、請求項１７に記載のアッセイ。
【請求項１９】  ｉ．５０mMのトリス／ＨＣｌと、０．９％w／vのＮａＣｌと、０．５％w／vのアルブミンとを含有するpH７．４の水性緩衝溶液中の、０．４nkat／mlのＸａ因子と、４U／mlのＲＶＶ−Ｖと、５０μg／mlのウサギ脳セファリン由来リン脂質とを含有するアクチベーター試薬を調製する工程、
ii．クエン酸塩加の血小板欠乏血漿５０μlをアクチベーター試薬５０μlと混合する工程、
iii．混合物を３７℃で３分間インキュベートする工程、
iv．２５mMのＣａＣｌ２  ５０μlを添加する工程、及び
ｖ．場合により、検出可能な値を提供する分析補助剤を添加する工程、及び
vi．値を確定する工程を含む、請求項１８に記載のアッセイ。
【請求項２０】  アッセイがインキュベーションの非存在下で実施される、高い抗凝固剤濃度を評価するために有用な、請求項１８又は１９に記載のアッセイの変法。
【請求項２１】  ｉ．２５mMのトリス／ＨＣｌと、０．４５％w／vのＮａＣｌと、０．２５％w／vのアルブミンと、１２．５mMのＣａＣｌ2とを含有するpH７．４の水性緩衝溶液中の、０．２nkat／mlのＸａ因子と、２U／mlのＲＶＶ−Ｖと、２５μg／mlのウサギ脳セファリン由来リン脂質とを含有するアクチベーター試薬を調製する工程、
ii．クエン酸塩加の血小板欠乏血漿５０μlを、アクチベーター試薬１００μlと混合する工程、
iii．場合により、検出可能な値を提供する分析補助剤を添加する工程、
iv．値を確定する工程を含む、請求項２０に記載のアッセイ。
【請求項２２】  光学的凝固計を使用して、ＣａＣｌ2の添加から凝血の開始までの時間を測定することにより、値が確定される、請求項１８〜２１のいずれかに記載のアッセイ。
【請求項２３】  試料が、推測される凝固剤又は抗凝固剤のみが枯渇している血漿で希釈され、確定された値が、枯渇血漿及び／又は正常血漿で見出された値と比較される、血漿又は全血の試料の中の推測される凝固性又は抗凝固性の成分の存在及び／又は濃度を評価するために利用される、請求項１〜２２のいずれかに記載のアッセイ。
【請求項２４】  マトリックス効果の影響を減少させるため、血漿試料が、正常血漿、血漿画分、又は１種以上の単一凝固因子で希釈される、請求項１〜２３のいずれかに記載のアッセイ。
【請求項２５】  血漿試料が、非ヘパリン抗凝固剤に対する特異性を増強するため、ヘパリン又はヘパリン様物質を不活化する物質で処理される、請求項１〜２４のいずれかに記載のアッセイ。
【請求項２６】  １種以上の凝固因子を活性化又は不活化する物質で処理された血漿試料に対して実施される、請求項１〜２５のいずれかに記載のアッセイ。
【請求項２７】  ポイントオブケア系において実施される、請求項１に記載のアッセイ。
【請求項２８】  試料をアクチベーター試薬と反応させること、
必要であれば、１種以上の凝固促進剤の添加により凝固を誘導すること、及び
凝固能の指標となる値を確定することにより、患者由来の既知の量の体液の試料の血液凝固能が評価される、凝固性又は抗凝固性の効果を有するか、又は有する可能性が高い薬剤で処置された患者の状態のモニタリングのための請求項１〜２７のいずれかに記載の方法であって、該試薬が、
（ａ）既定量のＸａ因子又は血液学的に等価なその変異体と、
（ｂ）既定量のＶａ因子、血液学的に等価なその変異体、又は内因性Ｖ因子を活性化する酵素とを組み合わせて含む、方法。
【請求項２９】  抗凝固剤が、Ｘａ因子及び／又はトロンビンの天然又は合成の阻害剤より選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】  抗凝固剤が、未分画ヘパリン（ＵＦＨ）、低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）、ヘパリノイド、デルマタン硫酸、アルガトロバン、修飾型ヒルジン、及びヒルジンより選択される、請求項２８又は２９に記載の方法。
【請求項３１】  １種以上の血液凝固成分に対する抗体の投与量の、患者の血液凝固に対する効果のモニタリングのために利用される、請求項２８〜３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】  アクチベーター試薬の試料が、試験装置内の１つ以上の反応位置に置かれ、アッセイすべき体液の試料が、該装置の入口位置に適用され、アクチベーター試薬と接触し反応するよう配置され、そして凝固能の指標となる値が確定される、請求項１〜３１のいずれかに記載のポイントオブケア血液学的アッセイであって、該試薬が、
（ａ）既定量のＸａ因子又は血液学的に等価なその変異体と、
（ｂ）既定量のＶａ因子、血液学的に等価なその変異体、又は内因性Ｖ因子を活性化する酵素とを組み合わせて含む、ポイントオブケアアッセイ。
【請求項３３】  アクチベーター試薬が、乾燥状態で存在し、体液により溶解して水性溶液を形成する、請求項３２に記載のポイントオブケアアッセイ。
【請求項３４】  アクチベーター試薬が、１つ以上の反応位置に凍結乾燥状態で存在する、請求項３３に記載のポイントオブケアアッセイ。
【請求項３５】  反応位置が、予定された容量の反応チャンバーにより画定され、アクチベーター試薬の試料が、体液と共に予定された濃度の水性溶液を形成するよう予定された重量を有する、請求項３２〜３４のいずれかに記載のポイントオブケアアッセイ。
【請求項３６】  試験装置が、２個以上の相互接続された反応チャンバーを含み、体液が各チャンバー内で試薬と連続的に反応するよう配置される、請求項３２〜３５のいずれかに記載のポイントオブケアアッセイ。
【請求項３７】  体液が、第一反応チャンバーにおいてＦＸａ及びＲＶＶ−Ｖと反応し、第二反応チャンバーにおいてＣａＣｌ2（又は等価な塩）と反応する、請求項３６に記載のポイントオブケアアッセイ。
【請求項３８】  体液が全血を含む、請求項３２〜３７のいずれかに記載のポイントオブケアアッセイ。
【請求項３９】  （ｉ）請求項１〜３のいずれかで定義されたアクチベーター試薬もしくは分離したその成分、
（ii）対照及び／もしくは較正のための試料、並びに
（iii）指定の濃度のカルシウム塩（もしくは等価な塩）の水性溶液、分析補助剤、正常血漿、１種以上の血漿画分、１種以上の凝固因子、水、及び／もしくは１種以上の緩衝溶液より選択される１つ以上の場合により使用される補助剤、又は等価な凍結乾燥調製物を、請求項１〜３８のいずれかに記載のアッセイを実施するための説明書と共に組み合わせて含む、血液凝固アッセイにおいて使用するためのキット。
【請求項４０】  分析補助剤が、トロンビン及び／又はＸａ因子の決定のための合成基質の１種以上の溶液又は凍結乾燥調製物を含む、請求項３９に記載のキット。