(57)【要約】      （修正有）【課題】ＧnＲＨ受容体を持つ腫瘍の診断方法および治療方法の提供。【解決手段】脳及び／又は神経系、及び／又は髄膜を起源とする腫瘍、及び／又はカポジ肉腫の治療に対する薬剤製造のためのＧｎＲＨアゴニスト又はＧｎＲＨアンタゴニストの使用。さらには、脳及び／又は神経系、及び／又は髄膜を起源とする腫瘍、及び／又はカポジ肉腫の検出方法並びに診断キット。また、メラトニン又はメラトニン類似体へのＧｎＲＨアゴニスト又はＧｎＲＨアンタゴニストの結合体。さらにはＧｎＲＨアゴニスト又はＧｎＲＨアンタゴニストが、細胞障害性物質と組み合わされての使用。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
脳及び／又は神経系、及び／又は髄膜を起源とする腫瘍の治療、及び／又はカポジ肉腫の治療に対する薬剤製造のためのＧｎＲＨアゴニスト又はＧｎＲＨアンタゴニストの使用。
【請求項２】
グリア芽腫多形、髄質芽腫、松果体腫、神経芽細胞腫、クラニオファリンジオーマ、髄膜腫、脊索腫、エウイング肉腫、悪性メラノーマ又はカポジ肉腫の治療に対する薬剤製造のためのＧｎＲＨアゴニスト又はＧｎＲＨアンタゴニストの使用。
【請求項３】
メラトニン又はメラトニン類似体へのＧｎＲＨアゴニスト又はＧｎＲＨアンタゴニストの結合体。
【請求項４】
ＧｎＲＨアゴニスト又はＧｎＲＨアンタゴニストが、細胞障害性物質と組み合わされて使用される、請求項１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍の診断および治療に関する。特に、ＧｎＲＨ受容体をもつ腫瘍の診断および治療に対する。ＧｎＲＨ受容体は、腫瘍治療におけるよく知られた標的である。
【０００２】
前立腺癌や乳癌の性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ、文献では、また黄体形成ホルモン放出ホルモン、ＬＨ−ＲＨとも呼ばれる）のアゴニストによる手術後治療は標準的な治療方法である；Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｂａｒｃｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ２４，８４−９２，Ｅｍｏｎｓ  ａｎｄ  Ｓｃｈａｌｌｙ，１９９４，Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｕｐｄａｔｅ  ９，Ｎｏ．７，１３６４−１３７９を参照されたい。
【０００３】
ところで、乳癌、前立腺癌、卵巣癌および子宮内膜癌等の種々のステロイドホルモン（性ホルモン）依存性悪性腫瘍において、ＧｎＲＨアゴニストによる治療について２つの効果が臨床研究において観察された：
１）腫瘍増殖についての正の内分泌（エストロゲン性またはアンドロゲン性）作用のアンカップリングによる間接的抗増殖活性；
２）腫瘍組織そのものにおけるＧｎＲＨ受容体を介する未知のメカニズムによる直接的抗増殖活性；Ｅｍｏｎｓ  ａｎｄ  Ｓｃｈａｌｌｙ，１９９４，Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｕｐｄａｔｅ  ９， １３６４−１３７９を参照されたい。
【０００４】
ステロイドホルモン依存性による上記間接的作用は、前立腺癌や乳癌に対して何十年前から知られている；Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｂａｒｃｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ２４，８４−９２；Ｊｏｎａｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ３１Ａ，１３７−１４２を参照されたい。
例えば前立腺癌、乳癌および卵巣癌に関するＧｎＲＨアゴニストおよびＧｎＲＨアンタゴニストの直接的抗増殖作用が、臨床研究によって確認されている。直接的抗増殖作用を有する、これらの治療において用いられたＧｎＲＨアゴニストのいくつかは、ドイツにおいて認可された医薬品で次の商標で知られている：例えばＺｏｌａｄｅｘ（登録商標）、Ｚｏｌａｄｅｘ１０，８（登録商標）、Ｚｏｌａｄｅｘ  Ｇｙｎ（登録商標）、Ｐｒｏｆａｃｔ（登録商標）−Ｄｅｐｏｔ、Ｐｒｏｆａｃｔ  ｐｒｏ  注射／点鼻、Ｓｙｎａｒｅｌａ（登録商標）、Ｅｎａｎｔｏｎｅ  Ｍｏｎａｔｓ−Ｄｅｐｏｔ（登録商標）、Ｕｎｏ− Ｅｎａｎｔｏｎｅ（登録商標）、Ｅｎａｎｔｏｎｅ  Ｇｙｎ  Ｍｏｎａｔｓ−Ｄｅｐｏｔ（登録商標）、Ｔｒｅｎａｎｔｏｎｅ（登録商標）、Ｓｕｐｒｅｃｕｒ（登録商標）、Ｃａｒｃｉｎｉｌ（登録商標）またはＤｅｃａｐｅｐｔｙｌ（登録商標）０，５ｍｇ／０．１ｍｇ、Ｄｅｃａｐｅｐｔｙｌ（登録商標） Ｄｅｐｏｔ、Ｄｅｃａｐｅｐｔｙｌ（登録商標）Ｇｙｎ並びにＤｅｃａｐｅｐｔｙｌ（登録商標）Ｄｉａｇｏｎｏｓｔｉｋである。いくつかの研究で試験されたＧｎＲＨアンタゴニストの例は、ドイツにおいて医薬品として未だ認可されていないＣｅｔｒｏｒｅｌｉｘ（登録商標）である。 Ｃｅｔｒｏｒｅｌｉｘ（登録商標）による治療は、例えば数週間にわたって活性を保つようなデポ製剤が存在しないという不都合がある。実験的に使用されたＧｎＲＨアンタゴニストの他の例は、Ａｎｔａｒｅｌｉｘ（登録商標）およびＡｎｔｉｄｅ（登録商標）であり、後者はまた、経口投与型として１つの態様で存在する（Ｒｕｓｓｅｌ−Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍ．６，３４−４２）。
【０００５】
細胞培養による研究は、ＧｎＲＨ受容体がヒト初代肝細胞癌および膵臓腺癌に存在することを明らかにしている。さらに、ラットグリオーマおよびラット神経芽細胞腫におけるチロシン５とグリシン６の分解に関する生化学代謝の開始が記載されている；Ｔａｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅｓ  ２０，１２５−１３１を参照されたい。しかし、ＧｎＲＨ受容体へのＧｎＲＨのリガンド結合およびその情報伝達が異なる経路、すなわちＧｎＲＨの８番目のアミノ酸アルギニンでおこり、そしてこれが、ＧｎＲＨ分子およびそのアミノ酸側鎖のインタクトな立体配位の場合にだけおこる（Ｎａｏｒ，Ｚ．，Ｓｃｈａｃｈａｍ，Ｓｈ．，Ｈａｒｒｉｓ，Ｄ．，Ｓｅｇｅｒ，Ｒ．，ａｎｄ  Ｒｅｉｓｓ，Ｎ．，１９９５，Ｓｉｇｎａｌ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ  Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  Ｈｏｒｍｏｎｅ（ＧｎＲＨ）Ｒｅｃｅｐｔｏｒ：Ｃｒｏｓｓ−Ｔａｌｋ  ｏｆ  Ｃａｌｃｉｕｍ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ（ＰＫＣ），ａｎｄ  Ａｒａｃｈｎｏｉｄｏｎｉｃ  Ａｃｉｄ，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ，１５，５２７−５４５）。ＧｎＲＨ受容体が存在する正常ラットの腺下垂体において、ＧｎＲＨは、増加されたｃＡＭＰ産生へと導くが、これが直接作用または間接作用であるかどうかは未だ不明確である（パラクリン相互作用）。ＬＨの分泌並びにＧｎＲＨによって刺激されるＬＨの増加した産生を含むラットにおけるＧｎＲＨ受容体の機能に対して、例えばｃＡＭＰによるＧｎＲＨの生化学的代謝は間接的な役割のみを演じる（Ａｂｄｉｌｎｏｕｒ，Ｇ．，ａｎｄ  Ｂｏｕｒｎｅ，Ｇ．Ａ．，１９９５，Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ３´，５´−ｃｙｃｌｉｃ  ｍｏｎｏ−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｓｅｌｆ−ｐｒｉｍｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１０７，１−７）。当然、ヒトのゴナドトロピン産生下垂体腺腫にＧｎＲＨ受容体が見い出された（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ，Ｊ．Ｐ．，ａｎｄ  Ｋｌｉｂａｎｓｋｉ，Ａ．，Ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  Ｈｏｒｍｏｎｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍＲＮＡ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  Ｈｕｍａｎ  Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｔｕｍｏｒｓ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ，１９９４，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，９３，２３３２−２３３９）。例えば視床下部のＧｎＲＨ産生過誤腫による適用症思春期早発症（indication Pubertas praecox)を治療するために、ＧｎＲＨアゴニストがまた、子供において、腺下垂体のゴナドトロピン産生細胞を抑えるという対照療法に用いられた（Ｍａｈａｃｈｏｋｌｅｒｔｗａｔｔａｎａ，Ｐ．，Ｋａｐｌａｎ，Ｓ．Ｌ．，Ｇｒｕｎｂａｃｈ，Ｍ．Ｍ．，Ｔｈｅ  Ｌｕｔｅｏｎｉｚｉｎｇ−Ｈｏｒｍｏｎｅ−Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  Ｈｏｒｍｏｎｅ−Ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ  Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ  Ｈａｍａｒｔｏｍａ  Ｉｓ  ａ  Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  Ｍａｌｆｏｒｍａｔｉｏｎ：Ｎａｔｕｒａｌ  Ｈｉｓｔｏｒｙ，１９９３，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，７７，１１８−１２５）。
【０００６】
グリオーマおよび悪性メラノーマ等の外胚葉起源の他の悪性腫瘍の場合、そして特に、神経系における散在的に増殖する腫瘍の場合、または転移（例えば他の器官の内転移形成）の場合において、寿命期待は楽観的ではない。同じことがカポジ肉腫に対していえる。グリオーマは、ニューログリア、即ち外胚葉に由来する神経系を包み且つ支持する組織を起源とする中枢神経系（CNS）の主として脳に局在した真性腫瘍をいう。これらのグリオーマは、種々の分化段階で存在する。グリオーマのサブタイプは、海綿芽腫、乏突起細胞腫、星芽腫、グリア芽腫および網膜芽腫である。特に、脳腫瘍のグリア芽腫多形（ＧＭＢ）タイプは、速い増殖と非常に高い再発率（即ち、外科の肉眼的切除後の脳腫瘍再発のパーセンテージ）を特徴とする。
【０００７】
原発性または転移性のＣＮＳに起きる悪性メラノーマ並びに初めは皮膚に起きる悪性メラノーマ、および／またはさらに皮膚または他の器官に散在する（転移する）悪性メラノーマが、神経系由来腫瘍に属する；Ｓｈａｍａｍｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３９，７３−８３；Ｆｌｏｒｅｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｃｈ，５４，３５４−３５６を参照されたい。悪性メラノーマは、神経外胚葉、胚性層から由来する。Ｂｕｒｇらは、１９９７，Ｄｅｕｔｓｃｈｅｓ  Ａｅｒｚｔｅｂｌａｔｔ  ９４，８９０−８９５に、タモキシフェンの悪性メラノーマに対する腫瘍増殖阻害作用を記載している。さらに、グリア芽腫および悪性メラノーマは、共通して数種の腫瘍マーカーをもつ；Ｓｈａｍａｍｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３９，７３−８３；Ｆｌｏｒｅｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｃｈ，５４，３５４−３５６を参照されたい。転移の場合、予後は非常に悪い；Ｂｕｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｄｅｕｔｓｃｈｅｓ  Aｅｒｚｔｂｅｌａｔｔ  ９４，８９０−８９５を参照されたい。
【０００８】
脳および／または神経系および／または髄膜を起源とする腫瘍はさらに、全体に所謂初期の神経外胚葉性腫瘍、ＰＮＥＴと略す、に分類されてきた神経芽細胞腫および髄質芽腫を含む。これらの腫瘍はさらに、松果体実質および／または松果体領域または中脳の始原生殖細胞を起源とする松果体腫を含む。さらに、松果体は、外胚葉性腫瘍の起源であると考えられ、そして下垂体の前面／上面に起源をもつクラニオファリンジオーマと関連する（各々、腫瘍産生β−ＨＣＧまたはＬＴ様グリコプロテインをそれぞれ産生する腫瘍；Ｔａｃｈｉｂａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ８０，７９−８４）を参照されたい。
【０００９】
クモ膜の蓋細胞を起源とし且つしばしば髄膜（硬膜）の内表面にかたく接着している良性腫瘍と考えられるクラニオファリンジオーマおよび髄膜腫の両方に対して、プロゲステロン受容体およびエストロゲン受容体が記載されている。さらに、アンドロゲン受容体がまた、髄膜腫の場合につくられていた。抗プロゲステロン薬剤を使用する臨床研究において、腫瘍退縮作用が観察された。
【００１０】
現在までに、多くの臨床研究における他の治療（化学療法、放射線療法等の異なる形態）の研究は、脳および／または神経系および／または髄膜を起源とする腫瘍の予後の本質的な改善を与えることができなかった。しばらくの間、グリア芽腫多形の場合の標準的治療は、できる限り完全な腫瘍の外科的な切除、次いで通常の放射線療法からなる。この標準的治療の下で、統計的に報告された平均生存時間は、個々の変動を含めて９−１３カ月であり、特に、より若い患者に対するいくらかよい予後が観察されている。
【００１１】
再発性グリア芽腫多形の約３０％の患者が持続的高用量の抗エストロゲン製剤であるタモキシフェン（登録商標）により手術できない残存性脳腫瘍の一定のサイズまたは縮小のどちらかを示した。グリア芽腫治療のこの腫瘍阻害作用は、抗エストロゲン作用によらず、プロテインキナーゼＣ（細胞内シグナル伝達物質）の阻害によった；Ｐｕｃｈｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｚｅｎｔｒａｌｂｌａｔｔ  ｆuｒ  Ｎｅｕｒｏｃｈｉｒｕｒｇｉｅ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １９９６，４７．Ｊａｈｒｅｓｔａｇｕｎｇ  Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ  ｆuｒ  Ｎｅｕｒｏｃｈｉｒｕｒｇｉｅ，ｐａｇｅ  ４４；Ｐｏｌｌａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ  ａｓ  ａｎ  ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  Ａｇｅｎｔ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｆｏｒ  Ｂｅｎｉｇｎ  ａｎｄ  Ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｇｌｉａｌ  Ｔｕｍｏｒｓ，Ｐｅｄｉａｔｒ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ２２，２８１−２８８）を参照されたい。さらに、タモキシフェン（登録商標）は、プラチナ含有治療剤並びに放射線療法に対する腫瘍の感受性を高めるといわれている。
【００１２】
グリア芽腫多形（ＷＨＯグレードＩＶの星芽腫）およびより低い悪性度（ＷＨＯグレードＩＩ−ＩＶの星芽腫）のグリオーマに対して、ステロイドホルモン受容体がより少ないパーセンテージの場合に観察されている（Ｐａｏｌｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｎｅｕｒｏｅｐｉｔｈｅｒｉａｌ  ｔｕｍｏｒｓ，７３，７３６−７４２を参照されたい）。現在までに、グリア芽腫多形およびグリオーマグレードＩＩ−ＩＶ の場合における間接的抗増殖作用が、腫瘍のタモキシフェン（登録商標）（抗エストロゲン製剤）に対する応答のたった約３０％のみの場合に臨床研究で観察されている。
【００１３】
最近、グリア芽腫多形治療におけるいくつかの比較的かなり新しい進展が報告されているが、グリア芽腫多形をもつ患者の予後は、かつて試みられ、試験された療法にも拘わらず非常に高い再発率および特異的治療法と初期診断の欠如のためよくない。
【００１４】
一方、本発明は、脳および／または神経系および／または髄膜を起源とする腫瘍および／または既に初期段階のカポジ肉腫を検出する診断薬を提供する目的に基づき、そして他方で、すべての患者によりよい予後となるような腫瘍の治療に対する薬剤を提供するという目的に基づく。
【００１５】
本発明は脳および／または神経系および／または髄膜を起源とする腫瘍、および／またはカポジ肉腫の悪性細胞上のＧｎＲＨ受容体の検出と測定の方法に関する。本発明はさらに、脳および／また神経系および／または髄膜を起源とする腫瘍および／またはカポジ肉腫のための診断キットを提供することに向けられる。さらに、本発明は、脳および／または神経系および／または髄膜を起源とする腫瘍および／またはカポジ肉腫の治療のための薬剤の製造におけるＧｎＲＨアゴニストおよびＧｎＲＨアンタゴニストおよびＧｎＲＨ受容体の他のリガンドの使用に関する。
【００１６】
脳由来の腫瘍、例えばグリア芽腫多形へのＧｎＲＨアゴニストの直接的抗増殖作用は、未だ報告されていない。ＧｎＲＨ受容体がグリア芽腫多形のようなヒト外胚葉性腫瘍に存在していることも知られていない。さらに、ＧｎＲＨ受容体がカポジ肉腫に存在していることも現在まで知られていない。
【００１７】
本発明は、診断及び治療のための適切な標的を提供することにより、脳および／または神経系および／または髄膜を起源とする腫瘍および／またはカポジ肉腫の診断及び治療の改良に貢献する。
【００１８】
本発明はさらに、免疫組織学的診断におけるＧｎＲＨ受容体の検出および／または例えば低いグレードのグリオーマ（ＧＩＩ−ＩＩＩ  ＷＨＯ；Ｋｌｅｉｈｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｔｙｐｉｎｇ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ−Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ−Ｔｏｋｙｏにおける中枢および末梢神経系の腫瘍の世界保健機構（ＷＨＯ）分類を参照されたい）の手術後まだ存在する残存腫瘍の追跡中の早期再発の検出のための治療、アフターケアーのモニターのＧｎＲＨ 受容体ｍＲＮＡの検出のため、またはグリア芽腫多形（ＧＩＶ）での悪性化の検出のため、または脳および／または神経系および／または髄膜を起源とするグリア芽腫多形のような腫瘍の存在のスクリーニングに対する危険グループの早期検出のための診断キットの使用に向けられる。
【００１９】
本発明に記載のキットは、細胞膜上、または血液、血漿、血清、尿または羊水、組織抽出物、組織液のような体液中、インヴィトロ細胞培養上清および細胞ライセート等でＧｎＲＨ受容体を検出するために使用できる。例えば、ＧｎＲＨ受容体は、例えば手術的に切除された腫瘍標本または組織培養について免疫組織化学的に、または例えば体液における通常のラジオイムノアッセイによって決定できる。診断キットは、ＧｎＲＨアゴニストおよび／またはＧｎＲＨアンタゴニストおよび／またはヒトＧｎＲＨ受容体に対するモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体および／または例えば逆転写酵素−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）におけるＧｎＲＨ受容体のｃＤＮＡの増幅のためのＧｎＲＨ受容体に対する１または２以上の特異的プライマーを含む。ＧｎＲＨ受容体の検出を、よく知られた免疫試験、特に固相酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）または特なる態様において、変性細胞上のＧｎＲＨ受容体の検出および測定に対して下記の方法を使用して、それ自体知られた方法で行う。
【００２０】
好ましい態様において、脳および／または神経系および／または髄膜を起源とする腫瘍の変性細胞上のＧｎＲＨ受容体の検出および測定のための本発明の方法は、以下のステップ：ａ）手術中に得られる腫瘍組織をホモジェナイズすること、ｂ）膜画分を分離すること、ｃ）ｂ）の膜画分中のタンパク質濃度の測定、ｄ） ｂ）の膜画分中のＧｎＲＨ受容体濃度の測定を含む。本方法は特に、グリア芽腫多形、髄質芽腫、松果体腫、神経芽細胞腫、クラニオファリンジオーマ、髄膜腫、脊索腫、エウイング肉腫、悪性メラノーマまたはカポジ肉腫から由来する組織中のＧｎＲＨ受容体の検出および測定に有用である。
【００２１】
特に好ましい態様において、新鮮なヒト腫瘍組織が、例えば脳腫瘍手術（手術中）に採取され、次いで液体窒素中に保存される。ＧｎＲＨ受容体測定のために、凍結組織サンプルをすり砕き、そしてホモジェナイズする。遠心分離で、サンプルを、より大きな細胞破片から分ける。上清を再度遠心分離する。生じる沈殿（ペレット）は、できるだけ均一な膜懸濁物を得るために再度ホモジェナイズされる膜画分を含有する。膜懸濁物を、ＧｎＲＨ受容体の測定のためラジオレセプターアッセイに使用する。先ず、調製させた膜画分のタンパク質濃度を、通常の知られた方法、例えばＢｉｏＲａｄタンパク質アッセイ（ ＢｉｏＲａｄ，Ｍｕｎｉｃｈ）で光度的に測定する。ＧｎＲＨ受容体濃度の測定を、調製された膜画分のＧｎＲＨ受容体に特異的に結合するＢｕｓｅｒｅｌｉｎ（登録商標）等の公知のＧｎＲＨアゴニストを使用して行う。ＧｎＲＨアゴニストは、例えば１２５Ｉによって放射標識されているので、結合した放射標識ＧｎＲＨアゴニストの濃度が、膜画分中のＧｎＲＨ受容体の濃度を反映する。結合した放射標識ＧｎＲＨアゴニストの濃度が、１分あたりの放射能カウントによって測定される。低親和性／高キャパシティそして高親和性／低キャパシティの両方のＧｎＲＨ受容体結合部位が評価される（Ｂａｕｍａｎｎ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｖｏｌ．２５，ｐａｇｅ  ３７−４６を参照されたい）。
【００２２】
本発明はさらに、脳および／または神経系および／または髄膜を起源とする腫瘍の治療のための薬剤を製造するためのＧｎＲＨアゴニストまたはＧｎＲＨアンタゴニストの使用に関する。特に、本発明は、グリア芽腫多形、髄質芽腫、松果体腫、神経芽細胞腫、クラニオファリンジオーマ、髄膜腫、脊索腫、エウイング肉腫、悪性メラノーマ、またはカポジ肉腫の治療の薬剤を製造するためのＧｎＲＨアゴニスト及びＧｎＲＨアンタゴニストの使用に向けられる。ＧｎＲＨ受容体ならびにＧｎＲＨアゴニスト／ＧｎＲＨアンタゴニスト治療は、これまでのところ、クラニオファリンジオーマについても、髄膜腫又は脊索腫又はエウイング肉腫又は悪性メラノーマについてもさらにカポジ肉腫についても報告されていない。これらの腫瘍に対して、血液−脳関門は存在しない、なぜなら、それらは元来、脳外、頭蓋内または末梢の腫瘍であるからである。従って、ＧｎＲＨアゴニストおよび／またはＧｎＲＨアンタゴニストまたはそれらの結合体をそれぞれ使用する本発明による治療は、非常に有利である。しかしながら、血液−脳関門を横切るＧｎＲＨの二方向系、二方向の能動輸送が存在するので（Ｂａｒｒｅｒａ，Ｃ．，Ｂａｎｋｓ，Ｗ．Ａ．，Ｆａｓｏｌｄ，Ｍ．Ｂ．，ａｎｄ  Ｋａｓｔｉｎ，Ａ．Ｊ．，１９９１，Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｖａｒｉｏｕｓ  Ｒｅｐｕｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  Ｈｏｒｍｏｎｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＬＨＲＨ  Ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  Ｂｌｏｏｄ−Ｂｒａｉｎ  Ｂａｒｒｉｅｒ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｅｈａｖｉｏｒ，ｖｏｌ．４１，２５５−２５７）、ＧｎＲＨについては、血液−脳関門を通過できる。従って、ＧｎＲＨアゴニスト／ＧｎＲＨアンタゴニストによる治療は、血液−脳関門が存在するタモキシフェンでの治療に比べて利点をもつ。エウイング肉腫および神経系のＰＮＥＴ外側の他の末梢形、悪性メラノーマおよびカポジ肉腫に対して、血液−脳関門は一般的に、ＧｎＲＨアゴニスト／ＧｎＲＨアンタゴニストによる治療において本質的な役割を演じない、なぜならこれらの腫瘍は多くの場合、血液−脳関門の外に現われ、そして留まるからである。
【００２３】
表Ｉ
脳および／または神経系および／または髄膜を起源とする腫瘍および／またはカポジ肉腫の治療に用いることのできるＧｎＲＨアゴニストおよびＧｎＲＨアンタゴニストのリスト
【表１】
2006342177.tif 000002
ＧｎＲＨアンタゴニストのさらなる例は：
−    米国特許第５，４８０，９６９号（ Ｂｏｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，特許日：       １９９６年１月２日）に記載のＡｎｔｉｄｅ（登録商標）と同じＬＨＲＨアンタゴニスト
−    英国特許ＧＢ２  ２４６７８２Ｂ号（Ａｌｂｅｒｔ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，１６／０９／１９９２公開された特許）に記載のＬＨＲＨペプチド誘導体
−    米国特許第５，１９８，５３３号（Ｓｃｈａｌｌｙ     ｅｔ  ａｌ．，特許日：１９９３年３月３０日）に記載のＬＨＲＨアンタゴニスト
である。
【００２４】
上記リストのＧｎＲＨアゴニストの最小治療用量は、それぞれ皮下投与または筋肉内投与の使用の他の適応症に対して各ＧｎＲＨアゴニストのＲｏｔｅ  Ｌｉｓｔｅ（登録商標）に挙げられた用量に対応する。ＧｎＲＨアゴニストの静脈内投与に対しては、最少の１日用量が用いられる。例えばＫｌｉｊｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ，１２１３−１２１６を参照されたい。
【００２５】
上記リストの皮下投与または筋肉内投与用のＧｎＲＨアゴニストＣｅｔｒｏｒｅｌｉｘ（登録商標）、Ａｎｔｒａｒｅｌｉｘ（登録商標）、Ａｎｔｉｄｅ（登録商標）およびＲａｍｏｒｅｌｉｘ（登録商標）の最少治療用量は、文献に記載され、そして他の適応症で使用される用量に対応する。例えばＣｅｔｒｏｒｅｌｉｘ（登録商標）については：Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｂａｒｃｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ２４，８４−９２を参照されたい。
【００２６】
上記リストのＧｎＲＨアゴニストＣｅｔｒｏｒｅｌｉｘ（登録商標）、Ａｎｔｒａｒｅｌｉｘ（登録商標）、Ａｎｔｉｄｅ（登録商標）およびＲａｍｏｒｅｌｉｘ（登録商標）の静脈内投与の最少治療用量は、適切な認可委員会で他の適応症に知られているか、またはドイツ薬局材料リストまたは文献に記載されていたり、例えばＡｎｔｉｄｅ（登録商標）に対して投与される用量に対応する：Ｆａｔｔｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７１（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．３４）Ｅ７７５−Ｅ７８７。同じことが、米国特許第５，４８０，９６９号、英国特許ＧＢ２  ２４６７８２Ｂ号および米国特許第５，１９８，５３３号に記載されるＧｎＲＨアンタゴニストにも言える。
【００２７】
本発明によれば、ＧｎＲＨアゴニストおよび／またはＧｎＲＨアンタゴニストは、適切な形態で用いられる。血液−脳関門内の腫瘍には、例えば循環系へ、神経系循環系へ動脈内に直接的に、または静脈内へ注入、または溶液剤の形態での注入、または手術後の腫瘍床への、肉眼的腫瘍切除後直接、手術中またはＯｍｍａｙａ（登録商標）レザバーでの局所投与、または溶液剤の形態での皮下空洞注入の他の形が好ましい。ＧｎＲＨアゴニストおよびＧｎＲＨアンタゴニストの両方は、ＧｎＲＨ受容体に結合するので、使用することが可能である。さらに、ＧｎＲＨ受容体へ特異的に向けられているリガンドが使用できる。例えば好ましくはヒト抗体またはヒト化抗体である。多くの場合、標的薬剤が先ず腫瘍細胞へ到達することを確かめることが好ましい。従って、トレーサーをもつリガンドを使用する画像化法が本発明のさらなる側面である。リガンドが腫瘍に主として局在化されれば、リガンドは、例えば放射線同位体等の細胞障害剤またはリシンＡ等の他の毒性物資と結合できる。好ましいＧｎＲＨアゴニストは、引用によりここに明白に取り込まれるＲｏｔｅ  Ｌｉｓｔｅに挙げられている（ Ｒｏｔｅ  Ｌｉｓｔｅ、１９９７、ｐａｒａｇｒａｐｈ  ５０，ｐａｒｔ  ３，ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  ｈｏｒｍｏｎｅｓ，５００３８−５００５６，ｅｄｉｔｏｒ  ＲＯＴＥ  ＬＩＳＴＥ（登録商標）  Ｓｅｒｖｉｃｅ  ＧｍｂＨ，Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ／Ｍａｉｎ）。他の治療の患者に既に臨床的に使用されている好ましいＧｎＲＨアンタゴニストは、Ａｓｔｒａ  Ｍｅｄｉｃａ  ＡＧ，Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ／Ｍａｉｎ、 ドイツからのＣｅｔｒｏｒｅｌｉｘ（登録商標）およびＡｎｔｒａｒｅｌｉｘ（登録商標）、そしてＡｒｅｓ−Ｓａｒｏｎｏ  Ｉｎｔ．ＡＧ，Ｌａｕｓａｎｎｅ、スイスからのＡｎｔｉｄｅ（登録商標）である。
【００２８】
上記ＧｎＲＨアゴニストおよびＧｎＲＨアンタゴニストは、他の治療に認可された用量で投与できる。下垂体腺腫、グリア芽腫または膵臓腺癌におけるソマトスタチン類似体等の類似物質（物質、薬剤）の使用、または他の適応症、例えば乳癌、前立腺癌または卵巣癌に対するＧｎＲＨ類似体（アゴニストまたはアンタゴニスト）を用いる第二相試験の用量を見つける研究に間に確立される用量も使用できる。
【００２９】
格別な態様では、ＧｎＲＨアゴニストおよびＧｎＲＨアンタゴニストを、例えばＧｏｓｓｙｐｏｌ（登録商標）（Ｆｌａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，Ｏｒａｌ  Ｇｏｓｓｙｐｏｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  Ａｄｒｅｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  ７６，１０１９−１０２４；Ｐｏｓｏ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ，  １９８０，８８５を参照されたい）等のそれぞれゴナドトロピンまたはＬＨの阻害剤と、またはメラトニンまたはメラトニン類似体（アゴニストまたはアンタゴニスト）（Ｌｉｓｓｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ  Ｔｉｍｅ  ｉｎ  Ｂｒａｉｎ  Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａｓ  ｂｙ  ａ  Ｒａｄｉｏｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｗｉｔｈ  Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ｐｌｕｓ  Ｍｅｌａｔｏｎｉｎ  Ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｔｏ  Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  Ａｌｏｎｅ，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ５３，４３−４６を参照されたい）と結合する。
【００３０】
以下に、好ましい治療プロトコールの例を述べる。
最初に、ヒト脳または神経系の腫瘍細胞のＧｎＲＨ受容体濃度、即ちインヴィトロで効果のある膜上のＧｎＲＨ受容体が、ラジオレセプターアッセイを用いて測定された。本発明による方法で、生物活性または特に活性なＧｎＲＨ受容体が、それぞれ測定される。この目的のため、 ＧｎＲＨアゴニストの放射能標識Ｂｕｓｅｒｅｌｉｎ（登録商標）を、ＧｎＲＨ受容体に特異的に結合するマーカーとして使用する。結合Ｂｕｓｅｒｅｌｉｎ（登録商標）の放射能カウントに基づいて、ＧｎＲＨ受容体濃度を測定できる。この検出は既に、乳癌等の他の腫瘍に使用されてきた。本発明によって使用される方法は、新鮮なヒト腫瘍組織の細胞膜上のＧｎＲＨ受容体濃度を測定する。
【００３１】
腫瘍組織の手術切除の間、一方で組織は病理解剖検査のために、他方、例えばここで記載された方法で腫瘍組織はＧｎＲＨ受容体測定のために採取し、処理される。脳および／また神経系および／また髄膜を起源とする腫瘍、および／またカポジ肉腫の組織診断の病理解剖検査および確認に続いて、予後は、存在するＧｎＲＨ受容体濃度に対するＧｎＲＨアゴニスト／ＧｎＲＨアンタゴニストの処方で治療を成功させることができる。
【００３２】
膜タンパク質あたり１０００ａｍｏｌ／ｍｇ（＝１ｆｍｏｌ／ｍｇ）より多いＧｎＲＨ受容体の濃度で、患者はＧｎＲＨ受容体ポジティブとして診断されるであろう。ＧｎＲＨアゴニスト／ＧｎＲＨアンタゴニスト治療に対して臨床的な排除指標はないので、ＧｎＲＨ受容体ポジティブではないことが治療の排除の指標とはならない。患者のＧｎＲＨ受容体ポジティブであることは、予後の腫瘍マーカーとしてＧｎＲＨ受容体が機能する古典的な標準治療下の腫瘍増殖の過程でＧｎＲＨ受容体ネガティブであることよりも再発のより早い傾向として予後的に判断される。また、ＧｎＲＨ受容体ポジティブであることは、ＧｎＲＨアゴニスト／ＧｎＲＨアンタゴニストによる治療に対して特に有利であると考えられ、そしてＧｎＲＨ受容体ポジティブまたはネガティブであることが、期待される治療の成功の予後情報を与え、そしてＧｎＲＨ受容体がその治療における予後の腫瘍マーカーである。ＧｎＲＨアゴニスト／ＧｎＲＨアンタゴニスト治療を、病理解剖検査後、例えば迅速切片病理診断の場合に術後直ちにはじめる。
【００３３】
ＧｎＲＨ受容体の存在の測定後、適当なリガンド（ ＧｎＲＨアゴニスト、 ＧｎＲＨアンタゴニストまたは結合体）を選び、そして腫瘍が出ている患者に、好ましくは診断的画像化法後に投与する。ＭＴＴ  ｔｅｓｔ  ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ：Ｈｕｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｅｕｒｏｐ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２４２−２４９を参照されたい。
【００３４】
治療は、完全な回復が起らない限り継続される。治療効果を判定する指標は：Ａ）ＭＲＴ画像および／またはＣＡＴスキャン画像上の腫瘍容積、Ｂ）再発のない生存、Ｃ）初めの適用の全体の生存並びにＤ）ＫａｒｎｏｆｓｋｙとＳｐｉｔｚｅｒインデックス。当業者に知られているすべての適切な形の投与用量は、この特許明細書中に示される。
【００３５】
腫瘍でのＧｎＲＨアゴニストまたはＧｎＲＨアンタゴニストの作用の正確なメカニズムは知られていない。乳癌、前立腺癌および卵巣癌等の活性化ＧｎＲＨ受容体をもつ今までに知られている腫瘍タイプに対して、局所調節的オートクリン−パラクリン系が文献に提案されている；Ｉｒｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｃｈ  ５５，８１７−８２２を参照されたい。述べられた腫瘍に対し、ＧｎＲＨアゴニストまたはＧｎＲＨアンタゴニストの抗増殖活性が、文献に記載されており、両方ともインヴィトロ（Ｐａｌｙｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，２０，１４６−１５２；Ｉｒｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｃｈ  ５５，８１７−８２２；Ｐａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１３６，７５−８４）そしてそれぞれインヴィヴォまたは臨床；Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｂａｒｃｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｔｈｅ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ２４，８４−９２；Ｊｏｎａｔ  ｅｔａｌ．，１９９５，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，３１Ａ，１３７−１４２；Ｅｍｏｎｓ  ａｎｄ  Ｓｃｈａｌｌｙ，１９９４，Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｕｐｄａｔｅ  ９，Ｎｏ．７，１３６４−１３７９を参照されたい；ここで、この抗増殖活性が、ＧｎＲＨアゴニストによる可逆的“化学的去勢”(chemical castration)で期待される抗増殖活性を超えている。
【００３６】
同じ様な方法でグリア芽腫およびグリオームに対して、以下の作用メカニズムが考えられる。文献（Ｃｏｎｓｔａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１４８，１４０４−１４１０）において、グリア芽腫細胞によるトランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）も産生が記載されている。増殖因子ＴＧＦ−βは、Ｍｅｌｃａｎｇｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１３６，６７９−６８６によってラットグリア細胞、即ち正常の非腫瘍細胞で、因子としてインヴィトロで視床下部細胞における天然ＧｎＲＨ産生を刺激する産生物として記載されている。グリア芽腫によって局所で産生され、分泌されるＧｎＲＨは、ＴＧＦ−βについても知られている腫瘍増殖への刺激作用をもつ。また、ヒトグリア芽腫細胞およびグリオーマ細胞はそれぞれ、循環性免疫抑制物質、主としてＴＧＦ−βを分泌することができ、従って細胞免疫反応に逆作用をおこすこともできる。ＧｎＲＨ刺激機能以外に、ＴＧＦ−βの増加は多分、腫瘍増殖が促進され且つ腫瘍サイズが増大する患者の細胞性免疫に免疫抑制（防御阻害）作用も有する。グリア芽腫多形、髄質芽腫および悪性メラノーマに対して、ＴＧＦ−βのこの免疫抑制現象が記載されている；Ｓｔｏｃｋｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ８３，６７２−６８１；Ｊｅｎｎｉｎｇｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｈｕｍ．Ｐａｔｈｏｌ． ２５，４６４−４７５；Ｂｉｚｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２，１１３−１２２；ｖａｎ  Ｂｅｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ． １４８，１８８７−１８９４を参照されたい。このオートクリン−パラクリン増殖制御系は逆にすることができ、腫瘍サイズの減少を引きおこす。この逆転（または、内分泌学で“ネガティブフィードバッグ”と言われる）は原則的に、過剰のＧｎＲＨ（競合阻害）によって影響されてもよい。この作用は、ＧｎＲＨの代りにＧｎＲＨアゴニストまたはＧｎＲＨアンタゴニストを使用して増強さえされる。この治療の結果は、ＴＧＦ−β産生の減少であり、次いでそれから生じる腫瘍サイズの減少である。また、β−ＨＣＧは免疫抑制的な役割を果たす。本発明によれば、またＬＨ−βおよびβ−ＨＣＧの産生はそれぞれ、ＧｎＲＨアゴニストまたはＧｎＲＨアンタゴニストによって阻害される。また、ＧＢＭにおいて、ＥＧＦ産生は阻害される。
【００３７】
適応の発明に属する脳および／また神経系および／または髄膜を起源とする腫瘍に対しては、１９９０年に確立された中枢神経系の腫瘍の世界保健機構（ＷＨＯ）分類（Ｋｌｅｉｈｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｔｙｐｉｎｇ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ  Ｈｅｉｄｅｒｂｅｒｇ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｔｏｋｙｏ）が参照される。上記ＷＨＯ分類に挙げられた腫瘍に加えて、また悪性メラノーマ、エウイング肉腫、およびカポジ肉腫が適応の発明に属する。適応の発明から除かれるのは、下垂体腺腫、そして、エウイング肉腫、メラノーマおよびカポジ肉腫以外の全ての転移、リンパ腫ならびに造血の腫瘍である。絨毛癌等の胚細胞は、ＧｎＲＨ受容体をもつことが知られている胎盤の悪性腫瘍に似ている。従って、中枢神経系の胚細胞腫瘍は、本適応の発明に属する。体内の多くの部位におこるカポジ肉腫は、モノクローナル起源の細胞からなる（Ｒａｂｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１４，９８８−９９３）。それは、神経系に起源をもつ腫瘍の皮膚神経線維腫と共通の特異抗原をもつ（Ｒｕｄｏｌｐｈ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ａｍ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｐａｔｈｏｌ．（ＵＳ），２１（７），７９１−８００）。
【００３８】
ホルモンに関して、カポジ肉腫は、悪性胎盤腫瘍および髄膜腫に似ており、カポジ肉腫は、これらの腫瘍のようにβ−ＨＣＧ受容体をもち、例えば髄膜腫のようにβ−ＨＣＧの投与に抗増殖的に反応する（Ｂｏｙｌｅ−Ｗａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｈｏｒｍｏｎｅｓ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ｍｅｎｉｎｇｅｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ，Ｊｏｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１４５，１５５−１６１；Ａｌｂｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｔｈｅ  ｂｅｔａ−ｃｏｒｅ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  Ｋａｐｏｓｉ  ｓａｒｃｏｍａ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ａ  ｎｅｗ  ｉｍｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ  Ｋａｐｏｓｉ  ｓａｒｃｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ，  ＡＩＤＳ（ＵＳ），１１（６），７１３−７２１；Ｇｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ  ｏｎ  ａｉｄｓ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｋａｐｏｓｉ  ｓａｒｃｏｍａ，Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３３５（１７），１２６１−１２６９）。髄膜腫との類似性により、カポジ肉腫はＧｎＲＨ受容体を有し、胎盤や胎盤腫瘍においてβ−ＨＣＧ放出ホルモンとして知られているＧｎＲＨの見い出されたオートクリン関係が役割を演じる（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｏｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８０，５８０−５８５）。β−ＨＣＧ 産生および／またはβ−ＨＣＧ受容体をもつ中枢神経系腫瘍並びに悪性メラノーマのＷＨＯ分類に上に挙げられた腫瘍はＧｎＲＨ受容体を有する。エウイング肉腫は、初期神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）に属し、これらの末梢形態である（Ｇｒｉｅｒ，Ｈ．Ｅ．，１９９７，Ｔｈｅ  Ｅｗｉｎｇ  Ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒｓ． Ｅｗｉｎｇ ｓａｒｃｏｍａ  ａｎｄ  ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ  ｎｅｕｒｏｅｃｔｏｄｅｒｍａｌ  ｔｕｍｏｒｓ．Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．（ＵＳ），４４（４），９９１−１００４）。
【００３９】
松果体（Ｇｌａｎｄｕｌａ  ｐｉｎｅａｌｉｓ）は、ＧｎＲＨアゴニスト治療中抵抗の場合に転移前立腺癌におけるＧｎＲＨ受容体発現刺激ホルモンであり（Ｌｉｓｓｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｕｒｏｌｏｇｙ  ３１，１７８−１８１を参照されたい）、そしてさらに抗血管新生活性をもつ（Ｒｅｇｅｌｓｏｎ，Ｗ．，Ｐｉｅｒｐａｏｌｉ，Ｗ．，１９８７，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｖｅｓｔ．，５，３７９−３８５）ホルモンメラトニンの産生の源である。ＧｎＲＨアゴニストおよびＧｎＲＨアンタゴニストは、上皮増殖因子等の増殖因子を阻害することによって抗分裂活性および抗増殖活性をそれぞれもつ（Ｍｏｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｓｔｅｏｉｄ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．５６，１０７−１１，１９９６）。上皮増殖因子はまた、有糸分裂促進剤として、そして従って例えばグリア芽腫多形の正の増殖因子として存在する（Ｒａｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（ＵＳ）．１７，１７９−１８１）。従って、メラトニン− ＧｎＲＨ アナログ結合体は、グリア芽腫等の腫瘍に対する抗分裂活性および抗増殖活性を結合し、そして例えばＧｎＲＨ受容体減少によるＧｎＲＨアゴニスト／ＧｎＲＨアンタゴニストに対する耐性をさけるためにグリア芽腫多形中にＧｎＲＨ受容体のさらなる発現誘導する。
【００４０】
本発明によって、脳および／また神経系および／また髄膜を起源とする腫瘍および／またカポジ肉腫の治療のための薬剤製造のためのＧｎＲＨアゴニストまたはＧｎＲＨアンタゴニストが初めて提供される。
【００４１】
本発明によって、ＧｎＲＨアゴニストまたはＧｎＲＨアンタゴニスト並びに結合されたＧｎＲＨアゴニスト又はＧｎＲＨアンタゴニストが、脳および／また神経系および／または髄膜を起源とする腫瘍、例えばグリア芽腫多形を治療するために使用される。本発明による薬剤は、特にそれぞれ皮下、筋肉内、静脈内、脊髄内または硬膜下の投与、または鼻内投与、または持続放出埋込の形で、当業者に知られているいかなる方法で製造されてもよい。本発明による薬剤はまた、脳室に連結されている皮下脳室の増殖抑制レザバーを通して投与してもよく、レザバーは皮膚を通しての注入によって補充できる。 ＧｎＲＨアゴニストは、例えば前立腺癌、乳癌または子宮内膜症の治療に使用されるのと同じ用量で投与してもよい；例えばＲｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ、１９９７、ｐａｒａｇｒａｐｈ  ５０，ｐａｒｔ  ３，ｈｙｐｏｔｈａｌｍｉｃ  ｈｏｒｍｏｎｅｓ，５００３８−５００５６，Ｅｄｉｔｏｒ  ＲＯＴＥ   ＬＩＳＴＥ（登録商標）Ｓｅｒｖｉｃｅ  ＧｍｂＨ，Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ／Ｍａｉｎを参照されたい、ここに引用して取り込まれる；付記Ａを参照されたい。最少用量は、各ＧｎＲＨアゴニストに対しＲｏｔｅ Ｌｉｓｔｅに挙げられた用量に対応する。例えば、増殖抑制レザバーを通しての脊髄内または皮下の脳室投与の場合に、最少用量は、各ＧｎＲＨアゴニストに対しＲｏｔｅ Ｌｉｓｔｅに挙げられたものより低くてもよい。最大量は、 各ＧｎＲＨアゴニストのＬＤ５０値に対応する。用量は、神経学的方法で得られるＧｎＲＨ受容体濃度の結果に従って任意に増加しても、減少してもよい。投与頻度または１日用量はそれぞれ、Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅにも見い出すことができる。好ましくは、薬剤は、神経放射線学的または臨床的に評価できる腫瘍の完全寛解（退行）まで投与される。
【００４２】
皮下投与には、例えばＣａｒｃｉｎｉｌ（登録商標）、Ｄｅｃａｐｅｐｔｙｌ（登録商標）０．５ｍｇ／０．１ｍｇまたはＵｎｏ−Ｅｎａｎｔｏｎｅを用いてもよい。持続放出埋込み剤として、例えばＰｒｏｆａｃｔ（登録商標）−Ｄｅｐｏｔ、Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標）、またはＥｎａｎｔｏｎｅ Ｍｏｎａｔｓｄｅｐｏｔが投与できる。筋肉内投与には、例えばＤｅｃａｐｅｐｔｙｌ（登録商標）− Ｄｅｐｏｔ、Ｄｅｃａｐｅｐｔｙｌ（登録商標）−Ｇｙｎ、またはＥｎａｎｔｏｎｅ−Ｇｙｎを用いてもよい。鼻内投与には、例えばＰｒｏｆａｃｔ（登録商標）−Ｎａｓａｌ、Ｓｕｐｒｅｃｕｒ（登録商標）−ＮａｓａｌまたはＳｙｎａｒｅｌａ（登録商標）− Ｎａｓａｌを用いてもよい。静脈内または鼻内投与には、それぞれ例えば、Ｐｒｏｆａｃｔ ｐｒｏ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｅ／ｎａｓａｌが、Ｋｌｉｊｎ，Ｊ．Ｇ．，ａｎｄ  ＤｅＪｏｎｇ，Ｆ．Ｈ．，ｉｎ   Ｋｌｉｊｎ，Ｊ．Ｇ．，ａｎｄ  Ｄｅ  Ｊｏｎｇ，Ｆ．Ｈ．，１９８２，Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ，１２１３−１２１６によって与えられた用量で投与できる。ＧｎＲＨアンタゴニストは、例えばＧｏｎｚａｌｅｚ−Ｂａｒｃｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ２４，８４−９２でのＣｅｔｒｏｒｅｌｉｘ（登録商標）によって与えられた用量で投与でき、または例えばＦａｔｔｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７１（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．３４：Ｅ７７５−Ｅ７８７）中のＡｎｔｉｄｅ（登録商標）に与えられた用量の最少量で投与できる。
【実施例】
【００４３】
以下の実施例は本発明を説明するためのものであり、本発明を制限するものと見なすべきではない。
実施例１：ＧｎＲＨ受容体の濃度の測定
セルラインおよび／または細胞培養物の細胞膜抽出物についてのＧｎＲＨ受容体の濃度決定の例として、Ｄｅｃａｐｅｐｔｙｌ（登録商標）ラジオレセプターアッセイが膜について用いられる（Ｅｍｏｎｓ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３，５４３９−５４４６によって記載されるように）。このプロトコールによれば、ＧｎＲＨ受容体はヒトグリア芽腫セルラインＵ−８７ＭＧまたはＵ−３７３ＭＧ等のヒトセルラインについて決定される（Ｐｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５４，５８９５−５９０１）。この試験で、低親和性／高キャパシティ並びに高親和性／低キャパシティのＧｎＲＨ受容体結合部位が評価される。Ｅｍｏｎｓ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，上記、において記載されているのと似た結果がセルラインＥＦＯ−２１およびＥＦＯ−２７に対して得られる。
【００４４】
セルラインおよび／または細胞培養物の細胞膜抽出物についてのＧｎＲＨ受容体の濃度測定の別の例として、標識化Ｔｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎ（ Ｅｍｏｎｓ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，上記）についてのＬＨＲＨラジオレセプターアッセイが、よく知られたセルラインＫＳＹ−１またはＫＳ−ＳＬＫ（Ｐａｒｋａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３３５，１７，１２６１−１２６９）等のカポジ肉腫セルラインおよびよく知られたセルラインＭＶ３およびＢＬＭ（Ｇｏｌｄｂｒｕｎｎｅｒ，Ｒ．Ｈ．， ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １６（６Ｂ），３６７９−３６８７）等のヒト悪性メラノーマセルラインについて行われ、Ｅｍｏｎｓ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，上記、に記載されているのと同様の結果をセルラインＥＦＯ−２１およびＥＦＯ−２７に対して得る。
【００４５】
実施例２：ＲＴ−ＰＣＲによるＧｎＲＨ受容体のｍＲＮＡの測定
ＲＴ−ＰＣＲによるＧｎＲＨ受容体メッセンジャーＲＮＡの測定の例として、例えばグリア芽腫セルラインＵ−８７ＭＧまたはＵ−３７３ＭＧからのＲＮＡが最初の反応でｃＤＮＡへ転写される。さらなる反応において、例えば、下垂体ＧｎＲＨ受容体（Ｋａｋａｒ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１９９２，２８９−２９５）、または胎盤ＧｎＲＨ受容体（Ｌｅｕｎｇ，Ｐ．Ｃ．Ｋ．，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｉｇｎａｌｓ，１９９６，５，６３−６９）、または胎盤ＧｎＲＨ受容体（Ｌｉｎ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，１９９５，ｖｏｌ．８０，Ｎｏ．２，５８１−５８４）の８８４ｂｐフラグメントを逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応において特異的プライマーを使用して増幅し、ここで公知ＧｎＲＨ受容体陽性セルラインのｃＤＮＡがポジティブコントロールとして役立つ。次いで、反応生成物は、ポリアクリルアミド（ＰＡＡ）ゲル中で視覚化される。ＰＡＡゲルのレーン１において、フラグメント長マーカーが見られ、レーン２において、ＭＣＦ７ポジティブコントロールの８８４ｂｐのＧｎＲＨ受容体ＰＣＲ生成物の明瞭なバンド、そしてまたグリア芽腫セルラインのレーンにおいて、８８４ｂｐの生成物または他のＧｎＲＨ受容体スプライス変異（フラグメント）シグナルを見ることができる。このｍＲＮＡ検出を、他のＧｎＲＨ受容体ｍＲＮＡに同様にして行う、例えばＩｒｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５５，８１７−８２２を参照されたい。
【００４６】
実施例３：治療的インヴィトロ試験
細胞培養での増殖アッセイ
よく知られたヒトグリア芽腫セルラインＵ−８７ＭＧまたはＵ−３７３ＭＧ（Ｐｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，上記）等のヒトセルライン、またはよく知られたカポジ肉腫セルラインＫＳＹ−１またはＫＳ−ＳＬＫ（Ｐａｒｋａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３３５，１７，１２６１−１２６９）等のヒトセルライン、またはよく知られたヒト悪性メラノーマセルラインＭＶ３又はＢＬＭ（Ｇｏｌｄｂｒｕｎｎｅｒ，Ｒ．Ｈ．， ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １６（６Ｂ），３６７９−８７）等のヒトセルラインまたは知られたセルラインＤａｏｙまたはD２８３ＭＥＤ（Ｓｔｏｃｋｈａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ，８３，６７２−６８１）等のヒト髄質芽腫セルラインまたはヒト髄膜腫細胞培養物（Ｂｏｙｌｅ−Ｗａｓｈ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１４５，１５５−１６１）が、上記セルラインに対して上記著者によって記載されているように培養され、次いでＥｍｏｎｓ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９３、上記、およびＩｒｍｅｒ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，上記、によって記載されているようにして、そこに記載されているような濃度のＧｎＲＨアゴニストのＴｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎ、ＧｎＲＨアンタゴニストのＳＢ−５７（Ｃｅｔｏｒｅｌｉｘ（登録商標））またはＧｎＲＨアンタゴニストのＲａｍｏｒｅｌｉｘ（登録商標）で培養される。Ｅｍｏｎｓ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓａｅｒｃｈ，５３，１９９３，５３９−５４４、およびＩｒｍｅｒ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，上記、によって記載されているものと同様の結果が得られた。
【００４７】
別途、上記セルラインはまた、ＧｎＲＨアゴニストのＧｏｓｅｒｅｌｉｎ（Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標）、ＢｕｓｅｒｅｌｉｎまたはＬｅｕｐｒｏｒｅｌｉｎ）またはＡｎｔｉｄｅ（登録商標）またはＡｎｔａｒｅｌｉｘ（登録商標）等のＧｎＲＨアンタゴニストのいずれかで処理された。Ｐｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．またはＩｒｍｅｒ   ｅｔ  ａｌ．，上記、によって記載されているものと同様の抗増殖作用が観察された。
また別途、そのようなセルラインを各々、ＧｎＲＨアンタゴニストのＣｅｔｏｒｅｌｉｘ（登録商標）、Ａｎｔａｒｅｌｉｘ（登録商標）、 Ａｎｔｉｄｅ（登録商標）およびＲａｍｏｒｅｌｉｘ（登録商標）の１つ、または米国特許５，４８０，９６９、米国特許第５，１９８，５３３号または英国特許ＧＢ２２４６７８２Ｂに記載されているようなＧｎＲＨアンタゴニストの１つでさらに処理し、この処理をＳＢ  ７５（ Ｃｅｔｏｒｅｌｉｘ（登録商標））に対してＥｍｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，上記、に報告されたものに同様に行われた。同様の抗増殖作用が起きる。
【００４８】
上に挙げられたセルラインはまた、Ｋａｒａｎｄｅ，Ａ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１１４（１−２）．ｐ．５１−５６によって記載されているようなＧｎＲＨ受容体抗原に対するモノクローナル抗体で別途処理された。同様の抗増殖作用が、ＯＶＣＡＲ−３セルラインに対してＡｃｋｅｒｍａｎｎ，Ｒ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，８１，１７７−１８４によって記載されているように上記セルラインについて観察される。
【００４９】
実施例４：異種移植モデルのインヴィヴォ試験
ヌードマウスを用いるインヴィヴォ試験
腫瘍移植ヌードマウス（Ｐｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，上記）各々をＧｎＲＨアゴニストのＢｕｓｅｒｅｌｉｎ、 Ｔｒｉｐｒｏｒｅｌｉｎ、ＧｏｓｅｒｅｌｉｎおよびＬｅｕｐｒｏｒｅｌｉｎの１つにより、そして各々をＧｎＲＨアンタゴニストのＣｅｔｏｒｅｌｉｘ（登録商標）（ＳＢ−７５）、Ａｎｔａｒｅｌｉｘ（登録商標）、 Ａｎｔｉｄｅ（登録商標）およびＲａｍｏｒｅｌｉｘ（登録商標）の１つによる処理の悪性グリオームＵ−８７ＭＧおよびＵ−３７３ＭＧの増殖へに作用が、Ｐｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，上記の類似ペプチドの効果の決定のために記載されているように１日用量とヌードマウスのコントロールを使用して、我々によって証明された。同様の増殖阻害作用が、我々によって述べられたＧｎＲＨアゴニストおよびＧｎＲＨアンタゴニスによる処理によって上記腫瘍で観察できた。
【００５０】
実施例５：第１相試験
マイクロサージェリー切除後および／または外からの通常の放射線療法の後および／または密封小線源療法の後の状態における切除できないグリア芽腫多形をもつ患者、または散在的で軸内に増殖する脳腫瘍、神経膠腫症のそれぞれ広がるかまたは存在する増殖性腫瘍、６５ｍｌ以上の腫瘍容積または５ｃｍ以上の最小の腫瘍直径をもつ患者が、Ｋｌｉｊｎ，Ｊ．Ｇ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ，Ｍａｙ  １９，１２１４３−１２１４に記載されているように静脈内に、そしてまたそこに記載されているように永続的投薬として鼻内投与により投与されるＧｎＲＨアゴニストのＢｕｓｅｒｅｌｉｎで治療された。治療の効果として、腫瘍容積の減少が、ＭＲＴ又はＣＴ画像でそれぞれ観察される。グリオーマのタモキシフェン療法（Ｐｏｌｌａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ２２，２８１−２８８）に対して記載されているよりも長い、再発のない生存が観察された。
【００５１】
実施例６：第１相試験
従来の放射線療法の後、手術不能で立体的に確認されたグリア芽腫多形をもつ２名の患者が、Ｒｏｔｅ  Ｌｉｓｔｅ中の転移乳癌に対して挙げられているような用量および投与形のＺｏｌａｄｅｘ（登録商標）を用いて永続的投薬として治療された。ＭＲＴコントロールは、腫瘍容積の有意な減少を示す。
【００５２】
実施例７：第２相試験
最初の手術後、組織学的に確認されたグリア芽腫多形をもつ患者が、Ｊｏｎａｔ  ｅｔ  ａｌ．１９９５，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，１３７−１４２によって記載されているようにＺｏｌａｄｅｘ（登録商標）で治療された（無作為コントロール）。放射線療法に続いて、２つのグループに割り振られる。１つのグループは、Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標）で治療され、そして１つのグループは、Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標）なし（またはＣｅｔｏｒｅｌｉｘ（登録商標）有りまたはＣｅｔｏｒｅｌｉｘ（登録商標）なし、またはＡｎｔｉｄｅ（登録商標）有りまたはＡｎｔｉｄｅ（登録商標）なし、またはＤｅｃａｐｅｐｔｙｌ（登録商標）有りまたはＤｅｃａｐｅｐｔｙｌ（登録商標）なし等）で治療される。作用は、転移した閉経期の乳癌に同様である。実際の有意な治療効果を示すパーセンテージは、腫瘍容積、再発なしの生存、最初の適用後の全体としての生存、臨床的神経学的検査におけるＫａｒｎｏｆｓｋｙとＳｐｉｔｚｅｒのインデックスの基準により、および他の検査基準（Ｓｐｏｓｔｏ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌｏｇｙ，７，１６５−１７７そしてＫｉｒｂｙ，Ｓ．， ｅｔ  ａｌ．，１９９５,  Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，８７，１８８４−１８８８，１９９５）を考慮して評価される。ＭＲＴおよび／またはＣＡＴスキャンで、 Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標）で治療されなかったコントロールグループにおけるよりも、腫瘍容積の有意により大きな減少、または有意により長い再発なしの生存、最初の適用後の有意により長い全体としての生存のそれぞれが、観察された。
当業者によく知られている遺伝子治療の方法を用いて、レトロウイルスおよびアンチセンスＧｎＲＨ受容体ベクターをグリオーマ細胞に安定的にトランスフェクトし、抗増殖作用が観察される。
【００５３】
実施例8：グリオーム組織の採取
脳腫瘍手術の間（手術中）、新鮮なヒト腫瘍組織を培養液の添加なしに小さな乾燥無菌皿に集め、直ちに無菌の標準的なプラスチックチューブへ移した。チューブを密封し、約１５分後液体窒素を含むジュアー容器（Ｕｎｉｏｎ  Ｃａｒｂｉｄｅ  Ｃｒｙｏｇｅｎｉｃ  Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ  ３５ＨＣ，ｒｅｆ．Ｎｏ．１０３−１３９−Ｔ５）でショック凍結した。組織サンプルをＧｎＲＨ受容体同定まで約２カ月間液体窒素中で保存した。
【００５４】
実施例９：組織調製
凍結組織サンプルを残存する血および脂肪からきれいにし、メスを用いて約２×２×２ｍｍの断片に切った。組織サンプルを、１分間ＤｉｓｍｅｍｂｒａｔｏｒＩＩ（Ｂ．Ｂｒａｕｎ，Ｍｅｌｓｕｎｇｅｎ）中で最大出力でホモジェナイズした。ホモジェナイズした組織を冷緩衝液１（１０ｍＭトリス−（ヒドロキシメチル）アミノメタン、ｐＨ７．４、４℃）１０００μｌに懸濁し、そしてできるだけ均一に混合した。最初の遠心分離段階（８００×ｇ、１０分間、４℃）で、サンプルをおおきな組織破片から分離した。上清を再び遠心分離（１０,０００×ｇ、４５分間、４℃）した。２度目の遠心分離段階の上清を捨て、膜画分を含むペレットを１０００μｌの冷緩衝液１に再懸濁し、できるだけ均一な膜懸濁液を得るため４秒毎に３回Ｐｏｌｙｔｏｎホモジェナイザーを使用してホモジェナイズした。この膜画分に、１０００μｌの冷緩衝液１を加えた。この懸濁液を、ラジオレセプターアッセイのＧｎＲＨ受容体の同定に使用した。
【００５５】
実施例１０：タンパク質濃度の測定
ＢｉｏＲａｄ試薬を蒸留水で１：５に希釈した。この試薬３．５ｍｌを作製された膜画分５０μｌと混合し、５分間培養した。タンパク質濃度の光度測定は、よく知られた方法で５９５ｎｍの波長で２度の測定として行われた。測定に対応して使用されるヒトアルブミンタンパク質が、タンパク質標準として役立つ。
【００５６】
実施例１１：ラジオレセプターアッセイ
ＧｎＲＨ受容体の濃度の測定を、上記のようにして作製した組織の膜画分で行った。ラジオレセプターアッセイは、２つの異なるサンプルを含み、その各々を４重に測定する：ａ）作製した膜画分を含むサンプル、およびｂ）コントロールサンプル。
ａ）３００μｌの緩衝液２（１０ｍＭトリス−（ヒドロキシメチル）アミノメタン、ｐＨ７．４、０．１％牛血清アルブミン）および１００μｌのトレサー（１２５Ｉ−Ｂｕｓｅｒｅｌｉｎ、８０.０００ｃｐｍ／１００μｌ）を膜画分１００μｌに加えた。
ｂ）コントロールには、２５０μｌの緩衝液２、トレサー１００μｌ、膜画分１００μｌおよびＧｎＲＨ類似体（１０−５ＭのＢｕｓｅｒｅｌｉｎ）５０μｌを混合する。
各サンプルをよく混合し、次いで４℃で９０分間培養した。ラジオレセプターアッセイを、牛ガンマーグロブリン溶液（０．１％牛ガンマーグロブリン、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ）５００μｌの添加によって停止した。次いで、ＰＥＧ−６０００、０．１５Ｍ  ＮａＣｌの溶液１０００μｌを加えた。
サンプルを均一になるまで再度混合し、４℃で２０分間培養した。ＰＥＧ−ホルモンレセプター複合体の分離を、遠心分離（１.６００×ｇ、３０分間、４℃）によって行い、その間それらのより高い質量の複合体がペレットを形成する。上清を注意してパスツールピペットで取り除く。ＧｎＲＨ受容体カウントの評価の基礎となる１分あたりのカウント数を、次いでガンマーカウンター（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ）で測定した。
【００５７】
実施例１２：ラジオレセプターアッセイの検討
一般的に、いくつかの組織サンプルを実験的検討において使用した。１つのアッセイにおけるすべてのサンプルのネガティブな結果の場合における系統的な誤りを除くために、牛下垂体組織の標準サンプルを、各アッセイにおいて腫瘍組織と平行して調べた。こうして、牛下垂体組織のＧｎＲＨ受容体の検出をポジティブコントロールにした。下垂体組織は、腫瘍組織と同様にして作製され、そして膜画分は同様にして精製された。
【００５８】
実施例１３：ＧｎＲＨ受容体含量の評価
ＧｎＲＨ受容体含量の評価（膜タンパク質のｆｍｏｌ／ｍｇ）を、１分あたりのカウント（ｃｐｍ）、特異的結合、使用されたタンパクの量および放射能標識リガンドの比放射能に基づいて行った。
特異的結合（Ｂｓｐｅｃ）を、全結合（ Ｂ０）の４回の測定の平均値と非特異的結合（ＮＢＳ）の４回の測定の平均値との差から計算する。
使用されるタンパクの量を、上記のように３に従って光度的に測定する。
類似体１２５Ｉ−Ｂｕsｅｒｅｌｉｎのデータ：
ＭＧ：                                       １２５３ｇ／ｍｏｌｅ
比放射能：                                   １４７０ｍＣｉ／ｍｇ
１２５Ｉ−Ｂｕｓｅｒｅｌｉｎ溶液の活性：        ２０μＣｉ／ｍｌ
−１４７０ｍＣｉ／ｍｇ１２５Ｉ−Ｂｕｓｅｒｅｌｉｎ＝５４．４×１０９Ｂｑ／ｍｇ
−１２５Ｉ−Ｂｕsｅｒｅｌｉｎ溶液１ｍｌは、７．４×１０６Ｂｑをもつ１２５Ｉ−Ｂｕｓｅｒｅｌｉｎ  １３．６１×１０−９ｇを含む、
−１３．６１×１０−９ｇ／ｍｌ１２５Ｉ−Ｂｕｓｅｒｅｌｉｎ＝１０．９×１０−１２ｍｏｌｅ１２５Ｉ−Ｂｕsｅｒｅｌｉｎ、５４．４×１０９Ｂｑ＝４４．４×１０７ｃｐｍ、
−１０．９０×１０−１２ｍｏｌｅ１２５Ｉ−Ｂｕｓｅｒｅｌｉｎ＝４４．４×１０７ｃｐｍ、
−１０００ｃｐｍは、０．２４７×１０−１５ｍｏｌｅ１２５Ｉ−Ｂｕｓｅｒｅｌｉｎに対応する。
ｃｐｍ値からＧｎＲＨ受容体濃度（膜タンパクのｆｍｏｌ／ｍｇ）の計算には、使用されるタンパクの量も測定し、そして崩壊ファクターを考慮しなければならない。従って、ＧｎＲＨ受容体含量の計算式は以下である：
【数１】
2006342177.tif 000003
【００５９】
表ＩＩ
ＧｎＲＨ受容体濃度の測定
本発明によるラジオレセプターアッセイを使用する数名の患者の組織サンプルのＧｎＲＨ受容体測定の結果を示す。
【表２】
2006342177.tif 000004
【００６０】
実施例１４：ヒト悪性メラノーマセルラインＭＶ３を使用する増殖アッセイ
ヒトメラノーマセルラインＭＶ３を培養した（１％Ｐｅｎｓｔｒｅｐおよび１０％の熱不活性化牛胎児血清を用いるＲＰＭＩ培地（Ｇｉｂｃｏ  Ｃｏ．）中での長期培養）。増殖アッセイを９６穴プレートの１穴あたり６×１０２細胞で行われた。先ず、細胞を０．０２ｍＭ溶液を用いて培養フラスコから除き、次いで標準ＰＢＳ溶液中で洗った。１０分間（１２００ｇ）の遠心分離後、上清をすて、そしてペレットを培地１ｍｌに再懸濁した。２０μｌ分量の細胞を、１：２０希釈になるようにトリパンブルーで希釈した。トリパンブルーは、壊死細胞を染める。次いで、測定をＮａｕｂａｕｅｒ計数チャンバーで行われた。評価は、ゼロ日でスタートして４つの値を毎日測定し、細胞カウントを得るために、細胞カウント×１０４×希釈ファクター２０の平均値を乗じる。５日間、測定を毎日４回Ｂｉｏｍｅｃ分光光度計で行った。
【００６１】
腫瘍細胞増殖の測定法は、Ｌｕｅ，Ｈ．Ｑ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１２２，３３５−３４２に記載されている。
【００６２】
セルラインをＬＨＲＨホルモンの（Ｇｌｙ−ＯＨ１０）−ＬＨＲＨ（図３）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｎｏ．Ｌ８００８）、ＬＨＲＨアゴニストのＴｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎ（図２）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｎｏ．Ｌ９７６１）またはＬＨＲＨアンタゴニストのＡｎｔｉｄｅ（図１）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｎｏ．Ａ８８０２）で処理した。
【００６３】
４日からネガティブコントロールとして培地を使用して、１０−４Ｍ、１０−５Ｍおよび１０−６Ｍの濃度で、以下の結果が得られた：
【００６４】
図１について： Ａｎｔｉｄｅ（ＧｎＲＨアンタゴニスト）については、増殖の明らかな阻害が、高濃度の１０−４Ｍおよび１０−５Ｍで、それぞれ１５％および３５％（Ｅｍｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，上記によって記載されているのと同じように、しかしそこで使用された卵巣癌セルラインに比較して遅い発現であり、２つのセルラインの１つにおいてアンタゴニストの抗増殖作用が１日から起きた）で見られる。１０−６Ｍでは、増殖の抑制は観察されず、４０％の増殖促進であった。ＧｎＲＨアンタゴニストのインヴィトロ作用のこの矛盾は、Ｌｉｍｏｎｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，７６，８３９−８４５で、ＧｎＲＨ受容体との前立腺癌に対して記載されているものと同様である。比較的低濃度に対する同様のインヴィトロ作用はまた、ＭＣＦ７乳癌セルラインにおけるタモキシフェンに対しても知られている（Ｚａｅｎｋｅｒ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．１９９５）。
Ｔｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎ（ ＧｎＲＨアゴニスト）（図２を参照）については、１５％の増殖阻害が４日から、述べられた濃度で観察された。Ｅｍｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，上記、において、これは両方の卵巣癌セルラインに対して１０−５ＭのＴｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎ処理下に１日からスタートして観察され、そして４０％の阻害が６日で観察された。
【００６５】
これらの結果は、悪性メラノーマについてのＡｎｔｉｄｅおよびＴｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎの直接的抗増殖作用の存在を示す。腫瘍細胞への非リガンドの結合が除外できるので、ＧｎＲＨ受容体がヒト悪性メラノーマセルラインＭＶ３に存在することがまた証明された。
図１−３のグラフは、悪性メラノーマＭＶ３がＬＨＲＨ依存性腫瘍であることを証明している。
従って、またインヴィトロにおいて、ＬＨＲＨホルモンがポジティブな増殖因子として機能する。オートクリンで産生されるＬＨＲＨホルモンの機能は、ＡｎｔｉｄｅおよびＴｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎによって阻害される。
【図面の簡単な説明】
【００６６】
【図１】ヒト悪性メラノーマセルラインＭＶ３をＬＨＲＨアンタゴニストであるＡｎｔｉｄｅで処理した場合の細胞増殖アッセイの結果を示す図である。
【図２】ヒト悪性メラノーマセルラインＭＶ３をＬＨＲＨアゴニストであるＴｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎで処理した場合の細胞増殖アッセイの結果を示す図である。
【図３】ヒト悪性メラノーマセルラインＭＶ３をＬＨＲＨホルモンである（Ｇｌｙ−ＯＨ１０）−ＬＨＲＨで処理した場合の細胞増殖アッセイの結果を示す図である。
【図１】
2006342177.tif 000005
【図２】
2006342177.tif 000006
【図３】
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