(57)【要約】本発明は、ＳＭＡＤ７の阻害によって、腸線維症を治療、予防または管理する方法に関するものである。本発明は、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて、腸線維症を治療または管理する有効性をモニタリングする方法と、トランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ−β）レベル、α−平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）レベル及び／またはリン酸化Ｍｏｔｈｅｒｓ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｄｅｃａｐｅｎｔａｐｌｅｇｉｃ  Ｈｏｍｏｌｏｇ３（ｐ−ＳＭＡＤ３）レベルの解析に基づき、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療を調節する方法に対するものでもある。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
腸線維症の治療、予防もしくは管理方法、またはコラーゲン沈着の予防方法であって、腸線維症またはコラーゲン沈着を罹患している患者において、ＳＭＡＤ７を阻害することを含む前記方法。
【請求項２】
腸線維症の治療、予防もしくは管理方法、またはコラーゲン沈着の予防方法であって、腸細胞において、ＳＭＡＤ７を阻害することを含む前記方法。
【請求項３】
患者の腸線維症の治療、予防もしくは管理方法であって、前記患者に、ＳＭＡＤ７の特異的インヒビターを有効量投与することを含む前記方法。
【請求項４】
線維症が炎症性腸疾患に続いて発症する、請求項１または３に記載の方法。
【請求項５】
前記患者が、炎症性腸疾患に罹患している、請求項１または３に記載の方法。
【請求項６】
前記炎症性腸疾患がクローン病である、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
前記炎症性腸疾患が潰瘍性大腸炎である、請求項４または５に記載の方法。
【請求項８】
線維症が大腸炎に続いて発症する、請求項１または３に記載の方法。
【請求項９】
前記患者が、大腸炎に罹患している、請求項１または３に記載の方法。
【請求項１０】
前記大腸炎が急性である、請求項８または９に記載の方法。
【請求項１１】
前記大腸炎が慢性である、請求項８または９に記載の方法。
【請求項１２】
前記インヒビターが、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号２、配列番号３及び配列番号４からなる群から選択したオリゴヌクレオチドを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号４を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを非経口投与する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを経口投与する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドと、製薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を投与することを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号２、配列番号３及び配列番号４からなる群から選択されている、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号４を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記医薬組成物を非経口投与する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記医薬組成物を経口投与する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記医薬組成物が、エチルアクリレート−メタクリル酸コポリマーを含む腸溶性コーティングを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
前記患者がヒトである、請求項１または３に記載の方法。
【請求項２４】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドを少なくとも１００μｇ投与することを含む、請求項１２または１７に記載の方法。
【請求項２５】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドを３５ｍｇ〜５００ｍｇ投与することを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、（ａ）前記患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することと、（ｂ）前記患者のＴＧＦ−β（トランスフォーミング成長因子−β）のレベルを解析することと、（ｃ）前記ＴＧＦ−βレベルが、ＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、前記初回用量以上である次の用量を投与するか、または前記ＴＧＦ−βレベルが、ＴＧＦ−βの正常レベルよりも低い場合には、前記患者に、前記初回用量以下である次の用量を投与することを含む前記方法。
【請求項２７】
腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、（ａ）前記患者のＴＧＦ−βレベルを解析することと、（ｂ）前記ＴＧＦ−βレベルが、ＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを含む前記方法。
【請求項２８】
（ｃ）前記投与工程後の前記患者のＴＧＦ−βレベルを解析することと、（ｄ）前記ＴＧＦ−βレベルが、ＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、前記初回用量以上である次の用量を投与するか、または前記ＴＧＦ−βレベルが、ＴＧＦ−βの正常レベルよりも低い場合に、前記患者に、前記初回用量以下である次の用量を投与することをさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
（ｃ）前記投与工程後の前記患者のＴＧＦ−βレベルを解析することと、（ｄ）前記ＴＧＦ−βレベルが、前記投与工程後に、前記投与工程前の前記ＴＧＦ−βレベルよりも低い場合に、前記患者に、前記初回用量と同じであるかもしくは前記初回用量よりも少ない次の用量を投与するか、または前記ＴＧＦ−βレベルが、前記投与工程後に、前記投与工程前の前記ＴＧＦ−βレベルと比べて変わらないかもしくは上昇している場合に、前記患者に、前記初回用量と同じであるかもしくは前記初回用量よりも多い次の用量を投与するか、もしくは前記治療を終了させることをさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、（ａ）前記患者に対する、ＴＧＦ−βのコントロールレベルを確立することと、（ｂ）前記患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することと、（ｃ）前記患者のＴＧＦ−βレベルを解析することと、（ｄ）前記ＴＧＦ−βレベルが、前記コントロールレベルよりも低い場合に、前記患者に、前記初回用量と同じであるかもしくは前記初回用量よりも少ない次の用量を投与するか、または前記ＴＧＦ−βレベルが、前記コントロールレベルと比べて変わらないかもしくは上昇している場合に、前記患者に、前記初回用量と同じであるかもしくは前記初回用量よりも多い次の用量を投与するか、もしくは前記治療を終了させることを含む前記方法。
【請求項３１】
前記ＴＧＦ−βレベルが、前記投与工程後に、前記投与工程前の前記ＴＧＦ−βレベルと比べて少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％または少なくとも７０％低下している場合に、前記患者に、前記初回用量と同じであるかまたは前記初回用量よりも少ない次の用量を投与する、請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記投与工程後の前記ＴＧＦ−βレベルが、前記投与工程前の前記ＴＧＦ−βレベルと比べて、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％または少なくとも７０％低下している場合に、前記腸線維症患者の腸線維症が、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも６週間または少なくとも８週間の期間で、臨床的に２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％超または１００％改善した可能性があると判断することをさらに含む、請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＴＧＦ−βレベルが、ＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、前記初回用量よりも多い次の用量を投与するか、または前記ＴＧＦ−βレベルが、ＴＧＦ−βの正常レベルよりも低い場合に、前記患者に、前記初回用量よりも少ない次の用量を投与する、請求項２６または請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
前記次の用量が、最大耐用量（ＭＴＤ）以上である場合に、前記治療を終了させる、請求項２８または３０に記載の方法。
【請求項３５】
前記投与工程の少なくとも１日後、少なくとも３日後、少なくとも５日後、少なくとも１週間後、少なくとも２週間後、少なくとも３週間後、少なくとも１カ月後、少なくとも２カ月後、少なくとも４カ月後または少なくとも６カ月後に、前記ＴＧＦ−βレベルを解析する、請求項２８または３０に記載の方法。
【請求項３６】
前記投与工程の直後に、前記ＴＧＦ−βレベルを解析する、請求項２８または３０に記載の方法。
【請求項３７】
前記投与工程の約１５日または約２８日後に、前記ＴＧＦ−βレベルを解析する、請求項２８または３０に記載の方法。
【請求項３８】
ＴＧＦ−βの前記正常レベルが、健常なコントロール群におけるＴＧＦ−βレベルの中央値である、請求項２６または請求項２７に記載の方法。
【請求項３９】
ＴＧＦ−βの前記コントロールレベルが、健常なコントロール群におけるＴＧＦ−βレベルの中央値である、請求項３０に記載の方法。
【請求項４０】
前記健常なコントロール群と、前記腸線維症患者が、年齢、性別、出身民族、喫煙習慣、食習慣、肥満度指数（ＢＭＩ）及び／または運動習慣に関して一致している、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４１】
ＴＧＦ−βの正常レベルが、約６ｐｇ／ｍｌ、約７ｐｇ／ｍｌ、約８ｐｇ／ｍｌ、約９ｐｇ／ｍｌ、約１０ｐｇ／ｍｌ、約１１ｐｇ／ｍｌまたは約１２ｐｇ／ｍｌの量である、請求項２６または請求項２７に記載の方法。
【請求項４２】
ＴＧＦ−βのコントロールレベルが、約６ｐｇ／ｍｌ、約７ｐｇ／ｍｌ、約８ｐｇ／ｍｌ、約９ｐｇ／ｍｌ、約１０ｐｇ／ｍｌ、約１１ｐｇ／ｍｌまたは約１２ｐｇ／ｍｌである、請求項３０に記載の方法。
【請求項４３】
前記初回用量が、１００ｍｇ未満／日、９０ｍｇ未満／日、８０ｍｇ未満／日、７０ｍｇ未満／日、６０ｍｇ未満／日、５０ｍｇ未満／日、４０ｍｇ未満／日または３０ｍｇ未満／日である、請求項２６、２７または３０に記載の方法。
【請求項４４】
前記初回用量が、少なくとも１０ｍｇ／日、少なくとも２０ｍｇ／日、少なくとも３０ｍｇ／日、少なくとも４０ｍｇ／日、少なくとも５０ｍｇ／日、少なくとも６０ｍｇ／日、少なくとも７０ｍｇ／日、少なくとも８０ｍｇ／日または少なくとも９０ｍｇ／日である、請求項２６、２７または３０に記載の方法。
【請求項４５】
前記初回用量が、約１０ｍｇ／日、約２０ｍｇ／日、約３０ｍｇ／日、約４０ｍｇ／日、約５０ｍｇ／日、約６０ｍｇ／日、約７０ｍｇ／日、約８０ｍｇ／日、約９０ｍｇ／日または約１００ｍｇ／日である、請求項２６、２７または３０に記載の方法。
【請求項４６】
前記初回用量が、１０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、８０ｍｇ／日または１６０ｍｇ／日である、請求項２６、２７または３０に記載の方法。
【請求項４７】
ＴＧＦ−βレベルが、正常レベルよりも高い場合に、前記次の用量が、前記初回用量よりも少なくとも約１０ｍｇ／日、少なくとも約２０ｍｇ／日、少なくとも約３０ｍｇ／日、少なくとも約４０ｍｇ／日、少なくとも約５０ｍｇ／日、少なくとも約６０ｍｇ／日、少なくとも約７０ｍｇ／日、少なくとも約８０ｍｇ／日、少なくとも約９０ｍｇ／日、少なくとも約１００ｍｇ／日、少なくとも約１１０ｍｇ／日、少なくとも約１２０ｍｇ／日、少なくとも約１３０ｍｇ／日、少なくとも約１４０ｍｇ／日、少なくとも約１５０ｍｇ／日または少なくとも約１６０ｍｇ／日多い、請求項２６または２８に記載の方法。
【請求項４８】
ＴＧＦ−βレベルが、コントロールレベルよりも高い場合に、前記次の用量が、前記初回用量よりも少なくとも約１０ｍｇ／日、少なくとも約２０ｍｇ／日、少なくとも約３０ｍｇ／日、少なくとも約４０ｍｇ／日、少なくとも約５０ｍｇ／日、少なくとも約６０ｍｇ／日、少なくとも約７０ｍｇ／日、少なくとも約８０ｍｇ／日、少なくとも約９０ｍｇ／日、少なくとも約１００ｍｇ／日、少なくとも約１１０ｍｇ／日、少なくとも約１２０ｍｇ／日、少なくとも約１３０ｍｇ／日、少なくとも約１４０ｍｇ／日、少なくとも約１５０ｍｇ／日または少なくとも約１６０ｍｇ／日多い、請求項３０に記載の方法。
【請求項４９】
ＴＧＦ−βレベルが、正常レベルよりも低い場合に、前記次の用量が、前記初回用量よりも少なくとも約１０ｍｇ／日、少なくとも約２０ｍｇ／日、少なくとも約３０ｍｇ／日、少なくとも約４０ｍｇ／日、少なくとも約５０ｍｇ／日、少なくとも約６０ｍｇ／日、少なくとも約７０ｍｇ／日または少なくとも約８０ｍｇ／日少ない、請求項２６または２８に記載の方法。
【請求項５０】
ＴＧＦ−βレベルが、コントロールレベルよりも低い場合に、前記次の用量が、前記初回用量よりも少なくとも約１０ｍｇ／日、少なくとも約２０ｍｇ／日、少なくとも約３０ｍｇ／日、少なくとも約４０ｍｇ／日、少なくとも約５０ｍｇ／日、少なくとも約６０ｍｇ／日、少なくとも約７０ｍｇ／日または少なくとも約８０ｍｇ／日よりも少ない、請求項３０に記載の方法。
【請求項５１】
前記初回用量が、約１０ｍｇ／日〜１００ｍｇ／日であり、前記次の用量が、約３０ｍｇ／日〜２００ｍｇ／日である、請求項２６、２８または３０に記載の方法。
【請求項５２】
前記腸線維症患者から採取した試料において、前記腸線維症患者の前記ＴＧＦ−βレベルを割り出す、請求項２６、２７または３０に記載の方法。
【請求項５３】
前記試料が、血液、血清、血漿または腸組織の試料である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
免疫化学法またはヌクレオチド解析によって、前記ＴＧＦ−βレベルを割り出す、請求項２６、２７または３０に記載の方法。
【請求項５５】
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって、前記ＴＧＦ−βレベルを割り出す、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記腸線維症患者の１つ以上の追加の分析対象物のレベルを割り出すことをさらに含む、請求項２６、２７または３０に記載の方法。
【請求項５７】
前記１つ以上の追加の分析対象物が、α−平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）またはリン酸化ＳＭＡＤ３（ｐ−ＳＭＡＤ３）を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを前記腸線維症患者に経口投与する、請求項２６、２７または３０に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ヒトＳＭＡＤ７（配列番号１）の１０８〜１２８位の領域を標的とする、請求項２６、２７または３０に記載の方法。
【請求項６０】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ヒトＳＭＡＤ７（配列番号１）の４０３位、２３３位、２９４位、２９５位、２９６位、２９８位、２９９位または５３３位のヌクレオチドを標的とする、請求項２６、２７または３０に記載の方法。
【請求項６１】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号２のヌクレオチド配列（５’−ＧＴＣＧＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＣＧＣＡＧＣ−３’）を含む、請求項２６、２７または３０に記載の方法。
【請求項６２】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ＳＭＡＤ７に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドホスホロチオエートであって、５’−ＧＴＸＧＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＸＧＣＡＧ−３’（配列番号３）という配列を含む前記アンチセンスオリゴヌクレオチドホスホロチオエートであり、その配列中、Ｘが、５−メチル−２’−デオキシシチジンを含むヌクレオチドであり、そのインターヌクレオチド結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項２６、２７または３０に記載の方法。
【請求項６３】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ＳＭＡＤ７に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドホスホロチオエートであって、５’−ＧＴＸＧＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＸＧＣＡＧＣ−３’（配列番号４）という配列を含む前記アンチセンスオリゴヌクレオチドホスホロチオエートであり、その配列中、Ｘが、５−メチル−２’−デオキシシチジンを含むヌクレオチドであり、そのインターヌクレオチド結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
ある用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与後に、ＴＧＦ−βレベルが正常レベルよりも高い腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、前記患者に、前記以前の用量以上であるさらなる用量の前記オリゴヌクレオチドを投与することを含む前記方法。
【請求項６５】
ある用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与後に、ＴＧＦ−βレベルが正常レベルよりも低い腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、前記患者に、前記以前の用量以下であるさらなる用量の前記オリゴヌクレオチドを投与することを含む前記方法。
【請求項６６】
ＴＧＦ−βレベルが正常レベルよりも高い腸線維症患者の腸線維症の治療、予防もしくは管理方法であって、前記患者に、ある用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを含む前記方法。
【請求項６７】
ＴＧＦ−βレベル、α−ＳＭＡレベル及び／またはｐ−ＳＭＡＤ３レベルのいずれかが正常レベルになるまで、前記投与を繰り返す、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
腸線維症患者の腸線維症の治療または管理のモニタリング方法であって、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与した後、毎回、前記患者のＴＧＦ−βレベルを解析することを含み、ＴＧＦ−βレベルが低下していないことによって、前記治療または管理が有効でないことが示される前記方法。
【請求項６９】
ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与した後、毎回、ＴＧＦ−βレベルを１回、２回、３回、４回、約５回、約１０回、約１５回、約２０回または約３０回解析する、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記ＴＧＦ−βレベルを、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与の直後、約１時間後、約３時間後、約６時間後、約１２時間後、約１日後、約３日後、約１週間後、約２週間後及び／または約１カ月後に解析する、請求項６８に記載の方法。
【請求項７１】
ＴＧＦ−βレベルが正常レベルよりも高い腸線維症患者の腸線維症の治療、予防もしくは管理方法であって、前記患者のＴＧＦ−βレベルが低下するまで、前記患者に投与するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの量を増やすことを含む前記方法。
【請求項７２】
ＴＧＦ−βを、ＴＧＦ−βの正常レベル前後またはＴＧＦ−βの正常レベル未満まで低下させる、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法で使用するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、前記方法が、前記患者のＴＧＦ−βレベルを解析して、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの適切な投与レベルを割り出すことを含む前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項７４】
前記方法が、（ａ）前記患者に、初回用量の前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程と、（ｂ）前記患者のＴＧＦ−βレベルを解析する工程と、（ｃ）前記ＴＧＦ−βレベルが、ＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、前記初回用量以上である次の用量の前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与するか、または前記ＴＧＦ−βレベルが、ＴＧＦ−βの正常レベルよりも低い場合に、前記患者に、前記初回用量以下である次の用量の前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程を含む、請求項７３に記載の用途用のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項７５】
腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法で使用するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、前記方法が、（ａ）前記患者のＴＧＦ−βレベルを解析することと、（ｂ）前記ＴＧＦ−βレベルが、ＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、初回用量の前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを含む前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項７６】
腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、（ａ）前記患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することと、（ｂ）前記患者のｐ−ＳＭＡＤ３レベルを解析することと、（ｃ）前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３の正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、前記初回用量以上である次の用量を投与するか、または前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３の正常レベルよりも低い場合に、前記患者に、前記初回用量以下である次の用量を投与することを含む前記方法。
【請求項７７】
腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、（ａ）前記患者のｐ−ＳＭＡＤ３レベルを解析することと、（ｂ）前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３の正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを含む前記方法。
【請求項７８】
（ｃ）前記投与工程後に、前記患者のｐ−ＳＭＡＤ３レベルを解析することと、（ｄ）前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３の正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、前記初回用量以上である次の用量を投与するか、または前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３の正常レベルよりも低い場合に、前記患者に、前記初回用量以下である次の用量を投与することをさらに含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
（ｃ）前記投与工程後に、前記患者のｐ−ＳＭＡＤ３レベルを解析することと、（ｄ）前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、前記投与工程後に、前記投与工程前の前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルよりも低い場合に、前記患者に、前記初回用量と同じであるかもしくは前記初回用量よりも少ない次の用量を投与するか、または前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、前記投与工程後に、前記投与工程前の前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルと比べて変わらないかもしくは上昇している場合に、前記患者に、前記初回用量と同じであるかもしくは前記初回用量よりも多い次の用量を投与するか、もしくは前記治療を終了させることをさらに含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、（ａ）前記患者に対する、ｐ−ＳＭＡＤ３のコントロールレベルを確立することと、（ｂ）前記患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することと、（ｃ）前記患者のｐ−ＳＭＡＤ３レベルを解析することと、（ｄ）前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、前記コントロールレベルよりも低い場合に、前記患者に、前記初回用量と同じであるかもしくは前記初回用量よりも少ない次の用量を投与するか、または前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、前記コントロールレベルと比べて変わらないかもしくは上昇している場合に、前記患者に、前記初回用量と同じであるかもしくは前記初回用量よりも多い次の用量を投与するか、もしくは前記治療を終了させることを含む前記方法。
【請求項８１】
前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、前記投与工程後に、前記投与工程前の前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルと比べて、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％または少なくとも７０％低下している場合に、前記患者に、前記初回用量と同じであるかまたは前記初回用量よりも少ない次の用量を投与する、請求項７９または８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記投与工程後の前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、前記投与工程前の前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルと比べて、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％または少なくとも７０％低下している場合に、前記腸線維症患者の腸線維症が、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも６週間または少なくとも８週間の期間で、臨床的に２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％超または１００％改善した可能性があると判断することをさらに含む、請求項７９または８０に記載の方法。
【請求項８３】
前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３の正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、前記初回用量よりも多い次の用量を投与するか、または前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３の正常レベルよりも低い場合に、前記患者に、前記初回用量よりも少ない次の用量を投与する、請求項７６または請求項７８に記載の方法。
【請求項８４】
前記次の用量が、最大耐用量（ＭＴＤ）以上である場合に、前記治療を終了させる、請求項７８または８０に記載の方法。
【請求項８５】
前記投与工程の少なくとも１日後、少なくとも３日後、少なくとも５日後、少なくとも１週間後、少なくとも２週間後、少なくとも３週間後、少なくとも１カ月後、少なくとも２カ月後、少なくとも４カ月後または少なくとも６カ月後に、前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルを解析する、請求項７８または８０に記載の方法。
【請求項８６】
前記投与工程の直後に、前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルを解析する、請求項７８または８０に記載の方法。
【請求項８７】
前記投与工程の約１５日または約２８日後に、前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルを解析する、請求項７８または８０に記載の方法。
【請求項８８】
ｐ−ＳＭＡＤ３の前記正常レベルが、健常なコントロール群におけるｐ−ＳＭＡＤ３レベルの中央値である、請求項７６または請求項７７に記載の方法。
【請求項８９】
ｐ−ＳＭＡＤ３の前記コントロールレベルが、健常なコントロール群におけるｐ−ＳＭＡＤ３レベルの中央値である、請求項８０に記載の方法。
【請求項９０】
前記健常なコントロール群と、前記腸線維症患者が、年齢、性別、出身民族、喫煙習慣、食習慣、肥満度指数（ＢＭＩ）及び／または運動習慣に関して一致している、請求項８８または８９に記載の方法。
【請求項９１】
ｐ−ＳＭＡＤ３の正常レベルが、約６ｐｇ／ｍｌ、約７ｐｇ／ｍｌ、約８ｐｇ／ｍｌ、約９ｐｇ／ｍｌ、約１０ｐｇ／ｍｌ、約１１ｐｇ／ｍｌまたは約１２ｐｇ／ｍｌの量である、請求項７６または請求項７７に記載の方法。
【請求項９２】
ｐ−ＳＭＡＤ３のコントロールレベルが、約６ｐｇ／ｍｌ、約７ｐｇ／ｍｌ、約８ｐｇ／ｍｌ、約９ｐｇ／ｍｌ、約１０ｐｇ／ｍｌ、約１１ｐｇ／ｍｌまたは約１２ｐｇ／ｍｌである、請求項８０に記載の方法。
【請求項９３】
前記初回用量が、１００ｍｇ未満／日、９０ｍｇ未満／日、８０ｍｇ未満／日、７０ｍｇ未満／日、６０ｍｇ未満／日、５０ｍｇ未満／日、４０ｍｇ未満／日または３０ｍｇ未満／日である、請求項７６、７７または８０に記載の方法。
【請求項９４】
前記初回用量が、少なくとも１０ｍｇ／日、少なくとも２０ｍｇ／日、少なくとも３０ｍｇ／日、少なくとも４０ｍｇ／日、少なくとも５０ｍｇ／日、少なくとも６０ｍｇ／日、少なくとも７０ｍｇ／日、少なくとも８０ｍｇ／日または少なくとも９０ｍｇ／日である、請求項７６、７７または８０に記載の方法。
【請求項９５】
前記初回用量が、約１０ｍｇ／日、約２０ｍｇ／日、約３０ｍｇ／日、約４０ｍｇ／日、約５０ｍｇ／日、約６０ｍｇ／日、約７０ｍｇ／日、約８０ｍｇ／日、約９０ｍｇ／日または約１００ｍｇ／日である、請求項７６、７７または８０に記載の方法。
【請求項９６】
前記初回用量が、１０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、８０ｍｇ／日または１６０ｍｇ／日である、請求項７６、７７または８０に記載の方法。
【請求項９７】
ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、正常レベルよりも高い場合に、前記次の用量が、前記初回用量よりも少なくとも約１０ｍｇ／日、少なくとも約２０ｍｇ／日、少なくとも約３０ｍｇ／日、少なくとも約４０ｍｇ／日、少なくとも約５０ｍｇ／日、少なくとも約６０ｍｇ／日、少なくとも約７０ｍｇ／日、少なくとも約８０ｍｇ／日、少なくとも約９０ｍｇ／日、少なくとも約１００ｍｇ／日、少なくとも約１１０ｍｇ／日、少なくとも約１２０ｍｇ／日、少なくとも約１３０ｍｇ／日、少なくとも約１４０ｍｇ／日、少なくとも約１５０ｍｇ／日または少なくとも約１６０ｍｇ／日多い、請求項７６または７８に記載の方法。
【請求項９８】
ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、コントロールレベルよりも高い場合に、前記次の用量が、前記初回用量よりも少なくとも約１０ｍｇ／日、少なくとも約２０ｍｇ／日、少なくとも約３０ｍｇ／日、少なくとも約４０ｍｇ／日、少なくとも約５０ｍｇ／日、少なくとも約６０ｍｇ／日、少なくとも約７０ｍｇ／日、少なくとも約８０ｍｇ／日、少なくとも約９０ｍｇ／日、少なくとも約１００ｍｇ／日、少なくとも約１１０ｍｇ／日、少なくとも約１２０ｍｇ／日、少なくとも約１３０ｍｇ／日、少なくとも約１４０ｍｇ／日、少なくとも約１５０ｍｇ／日または少なくとも約１６０ｍｇ／日多い、請求項８０に記載の方法。
【請求項９９】
ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、正常レベルよりも低い場合に、前記次の用量が、前記初回用量よりも少なくとも約１０ｍｇ／日、少なくとも約２０ｍｇ／日、少なくとも約３０ｍｇ／日、少なくとも約４０ｍｇ／日、少なくとも約５０ｍｇ／日、少なくとも約６０ｍｇ／日、少なくとも約７０ｍｇ／日または少なくとも約８０ｍｇ／日少ない、請求項７６または７８に記載の方法。
【請求項１００】
ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、コントロールレベルよりも低い場合に、前記次の用量が、前記初回用量よりも少なくとも約１０ｍｇ／日、少なくとも約２０ｍｇ／日、少なくとも約３０ｍｇ／日、少なくとも約４０ｍｇ／日、少なくとも約５０ｍｇ／日、少なくとも約６０ｍｇ／日、少なくとも約７０ｍｇ／日または少なくとも約８０ｍｇ／日少ない、請求項８０に記載の方法。
【請求項１０１】
前記初回用量が、約１０ｍｇ／日〜１００ｍｇ／日であり、前記次の用量が、約３０ｍｇ／日〜２００ｍｇ／日である、請求項７６、７８または８０に記載の方法。
【請求項１０２】
前記腸線維症患者から採取した試料において、前記腸線維症患者の前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルを割り出す、請求項７６、７７または８０に記載の方法。
【請求項１０３】
前記試料が、血液、血清、血漿または腸組織の試料である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
免疫化学法またはヌクレオチド解析によって、前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルを割り出す、請求項７６、７７または８０に記載の方法。
【請求項１０５】
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって、前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルを割り出す、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
前記腸線維症患者の１つ以上の追加の分析対象物のレベルを割り出すことをさらに含む、請求項７６、７７または８０に記載の方法。
【請求項１０７】
前記１つ以上の追加の分析対象物が、α−平滑ｐ−ＳＭＡＤ３またはｐ−ＳＭＡＤ３を含む、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを前記腸線維症患者に経口投与する、請求項７６、７７または８０に記載の方法。
【請求項１０９】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ヒトＳＭＡＤ７（配列番号１）の１０８〜１２８位の領域を標的とする、請求項７６、７７または８０に記載の方法。
【請求項１１０】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ヒトＳＭＡＤ７（配列番号１）の４０３位、２３３位、２９４位、２９５位、２９６位、２９８位、２９９位または５３３位のヌクレオチドを標的とする、請求項７６、７７または８０に記載の方法。
【請求項１１１】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号２のヌクレオチド配列（５’−ＧＴＣＧＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＣＧＣＡＧＣ−３’）を含む、請求項７６、７７または８０に記載の方法。
【請求項１１２】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ＳＭＡＤ７に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドホスホロチオエートであって、５’−ＧＴＸＧＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＸＧＣＡＧ−３’（配列番号３）という配列を含む前記アンチセンスオリゴヌクレオチドホスホロチオエートであり、その配列中、Ｘが、５−メチル−２’−デオキシシチジンを含むヌクレオチドであり、そのインターヌクレオチド結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項７６、７７または８０に記載の方法。
【請求項１１３】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ＳＭＡＤ７に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドホスホロチオエートであって、５’−ＧＴＸＧＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＸＧＣＡＧＣ−３’（配列番号４）という配列を含む前記アンチセンスオリゴヌクレオチドホスホロチオエートであり、その配列中、Ｘが、５−メチル−２’−デオキシシチジンを含むヌクレオチドであり、そのインターヌクレオチド結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
ある用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与後に、ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが正常レベルよりも高い腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、前記患者に、前記以前の用量以上であるさらなる用量の前記オリゴヌクレオチドを投与することを含む前記方法。
【請求項１１５】
ある用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与後に、ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが正常レベルよりも低い腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、前記患者に、前記以前の用量以下であるさらなる用量の前記オリゴヌクレオチドを投与することを含む前記方法。
【請求項１１６】
ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが正常レベルよりも高い腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、前記患者に、ある用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを含む前記方法。
【請求項１１７】
ｐ−ＳＭＡＤ３レベル、α−ＳＭＡレベル及び／またはＴＧＦ−βレベルのいずれかが正常レベルになるまで、前記投与を繰り返す、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
腸線維症患者の腸線維症の治療または管理のモニタリング方法であって、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与した後、毎回、前記患者のｐ−ＳＭＡＤ３レベルを解析することを含み、ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが低下していないことによって、前記治療または管理が有効でないことが示される前記方法。
【請求項１１９】
ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与した後、毎回、ｐ−ＳＭＡＤ３レベルを１回、２回、３回、４回、約５回、約１０回、約１５回、約２０回または約３０回解析する、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルを、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与の直後、約１時間後、約３時間後、約６時間後、約１２時間後、約１日後、約３日後、約１週間後、約２週間後及び／または約１カ月後に解析する、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２１】
ｐ−ＳＭＡＤ３が正常レベルよりも高い腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、前記患者のｐ−ＳＭＡＤ３レベルが低下するまで、前記患者に投与するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの量を増やすことを含む前記方法。
【請求項１２２】
ｐ−ＳＭＡＤ３を、ｐ−ＳＭＡＤ３の正常レベル前後またはｐ−ＳＭＡＤ３の正常レベル未満まで低下させる、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法で使用するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、前記方法が、前記患者のｐ−ＳＭＡＤ３レベルを解析して、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの適切な投与レベルを割り出すことを含む前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項１２４】
前記方法が、（ａ）前記患者に、初回用量の前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程と、（ｂ）前記患者のｐ−ＳＭＡＤ３レベルを解析する工程と、（ｃ）前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３の正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、前記初回用量以上である次の用量の前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与するか、または前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３の正常レベルよりも低い場合に、前記患者に、前記初回用量以下である次の用量の前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程を含む、請求項１２３に記載の用途用のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項１２５】
腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法で使用するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、前記方法が、（ａ）前記患者のｐ−ＳＭＡＤ３レベルを解析することと、（ｂ）前記ｐ−ＳＭＡＤ３レベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３の正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、初回用量の前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを含む前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項１２６】
腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、（ａ）前記患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することと、（ｂ）前記患者のα−ＳＭＡレベルを解析することと、（ｃ）前記α−ＳＭＡレベルが、α−ＳＭＡの正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、前記初回用量以上である次の用量を投与するか、または前記α−ＳＭＡレベルが、α−ＳＭＡの正常レベルよりも低い場合に、前記患者に、前記初回用量以下である次の用量を投与することを含む前記方法。
【請求項１２７】
腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、（ａ）前記患者のα−ＳＭＡレベルを解析することと、（ｂ）前記α−ＳＭＡレベルが、α−ＳＭＡの正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを含む前記方法。
【請求項１２８】
（ｃ）前記投与工程後の前記患者のα−ＳＭＡのレベルを解析することと、（ｄ）前記α−ＳＭＡレベルが、α−ＳＭＡの正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、前記初回用量以上である次の用量を投与するか、または前記α−ＳＭＡレベルが、α−ＳＭＡの正常レベルよりも低い場合に、前記患者に、前記初回用量以下である次の用量を投与することをさらに含む、請求項１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
（ｃ）前記投与工程後の前記患者のα−ＳＭＡレベルを解析することと、（ｄ）前記α−ＳＭＡレベルが、前記投与工程後に、前記投与工程前のα−ＳＭＡレベルよりも低い場合に、前記患者に、前記初回用量と同じであるかもしくは前記初回用量よりも少ない次の用量を投与するか、または前記α−ＳＭＡレベルが、前記投与工程後に、前記投与工程前のα−ＳＭＡレベルと比べて変わらないかもしくは上昇している場合に、前記患者に、前記初回用量と同じであるかもしくは前記初回用量よりも多い次の用量を投与するか、もしくは前記治療を終了させることをさらに含む、請求項１２７に記載の方法。
【請求項１３０】
腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、（ａ）前記患者に対する、α−ＳＭＡのコントロールレベルを確立することと、（ｂ）前記患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することと、（ｃ）前記患者のα−ＳＭＡレベルを解析することと、（ｄ）前記α−ＳＭＡレベルが、前記コントロールレベルよりも低い場合に、前記患者に、前記初回用量と同じであるかもしくは前記初回用量よりも少ない次の用量を投与するか、または前記α−ＳＭＡレベルが、前記コントロールレベルと比べて変わらないかもしくは上昇している場合に、前記患者に、前記初回用量と同じであるかもしくは前記初回用量よりも多い次の用量を投与するか、もしくは前記治療を終了させることを含む前記方法。
【請求項１３１】
前記α−ＳＭＡレベルが、前記投与工程後に、前記投与工程前の前記α−ＳＭＡレベルと比べて、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％または少なくとも７０％低下している場合に、前記患者に、前記初回用量と同じであるかまたは前記初回用量よりも少ない次の用量を投与する、請求項１２９または１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
前記投与工程後の前記α−ＳＭＡレベルが、前記投与工程前の前記α−ＳＭＡレベルと比べて、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％または少なくとも７０％低下している場合に、前記腸線維症患者の腸線維症が、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも６週間または少なくとも８週間の期間で、２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％超または１００％改善した可能性があると判断することをさらに含む、請求項１２９または１３０に記載の方法。
【請求項１３３】
前記α−ＳＭＡレベルが、α−ＳＭＡの正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、前記初回用量よりも多い次の用量を投与するか、または前記α−ＳＭＡレベルが、α−ＳＭＡの正常レベルよりも低い場合に、前記患者に、前記初回用量よりも少ない次の用量を投与する、請求項１２６または請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３４】
前記次の用量が、最大耐用量（ＭＴＤ）以上である場合に、前記治療を終了させる、請求項１２８または１３０に記載の方法。
【請求項１３５】
前記投与工程の少なくとも１日後、少なくとも３日後、少なくとも５日後、少なくとも１週間後、少なくとも２週間後、少なくとも３週間後、少なくとも１カ月後、少なくとも２カ月後、少なくとも４カ月後または少なくとも６カ月後に、前記α−ＳＭＡレベルを解析する、請求項１２８または１３０に記載の方法。
【請求項１３６】
前記投与工程の直後に、前記α−ＳＭＡレベルを解析する、請求項１２８または１３０に記載の方法。
【請求項１３７】
前記投与工程の約１５日または約２８日後に、前記α−ＳＭＡレベルを解析する、請求項１２８または１３０に記載の方法。
【請求項１３８】
α−ＳＭＡの前記正常レベルが、健常なコントロール群におけるα−ＳＭＡレベルの中央値である、請求項１２６または請求項１２７に記載の方法。
【請求項１３９】
α−ＳＭＡの前記コントロールレベルが、健常なコントロール群におけるα−ＳＭＡレベルの中央値である、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１４０】
前記健常なコントロール群と、前記腸線維症患者が、年齢、性別、出身民族、喫煙習慣、食習慣、肥満度指数（ＢＭＩ）及び／または運動習慣に関して一致している、請求項１３８または１３９に記載の方法。
【請求項１４１】
α−ＳＭＡの正常レベルが、約６ｐｇ／ｍｌ、約７ｐｇ／ｍｌ、約８ｐｇ／ｍｌ、約９ｐｇ／ｍｌ、約１０ｐｇ／ｍｌ、約１１ｐｇ／ｍｌまたは約１２ｐｇ／ｍｌの量である、請求項１２６または請求項１２７に記載の方法。
【請求項１４２】
α−ＳＭＡのコントロールレベルが、約６ｐｇ／ｍｌ、約７ｐｇ／ｍｌ、約８ｐｇ／ｍｌ、約９ｐｇ／ｍｌ、約１０ｐｇ／ｍｌ、約１１ｐｇ／ｍｌまたは約１２ｐｇ／ｍｌである、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１４３】
前記初回用量が、１００ｍｇ未満／日、９０ｍｇ未満／日、８０ｍｇ未満／日、７０ｍｇ未満／日、６０ｍｇ未満／日、５０ｍｇ未満／日、４０ｍｇ未満／日または３０ｍｇ未満／日である、請求項１２６、１２７または１３０に記載の方法。
【請求項１４４】
前記初回用量が、少なくとも１０ｍｇ／日、少なくとも２０ｍｇ／日、少なくとも３０ｍｇ／日、少なくとも４０ｍｇ／日、少なくとも５０ｍｇ／日、少なくとも６０ｍｇ／日、少なくとも７０ｍｇ／日、少なくとも８０ｍｇ／日または少なくとも９０ｍｇ／日である、請求項１２６、１２７または１３０に記載の方法。
【請求項１４５】
前記初回用量が、約１０ｍｇ／日、約２０ｍｇ／日、約３０ｍｇ／日、約４０ｍｇ／日、約５０ｍｇ／日、約６０ｍｇ／日、約７０ｍｇ／日、約８０ｍｇ／日、約９０ｍｇ／日または約１００ｍｇ／日である、請求項１２６、１２７または１３０に記載の方法。
【請求項１４６】
前記初回用量が、１０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、８０ｍｇ／日または１６０ｍｇ／日である、請求項１２６、１２７または１３０に記載の方法。
【請求項１４７】
α−ＳＭＡレベルが、正常レベルよりも高い場合に、前記次の用量が、前記初回用量よりも少なくとも約１０ｍｇ／日、少なくとも約２０ｍｇ／日、少なくとも約３０ｍｇ／日、少なくとも約４０ｍｇ／日、少なくとも約５０ｍｇ／日、少なくとも約６０ｍｇ／日、少なくとも約７０ｍｇ／日、少なくとも約８０ｍｇ／日、少なくとも約９０ｍｇ／日、少なくとも約１００ｍｇ／日、少なくとも約１１０ｍｇ／日、少なくとも約１２０ｍｇ／日、少なくとも約１３０ｍｇ／日、少なくとも約１４０ｍｇ／日、少なくとも約１５０ｍｇ／日または少なくとも約１６０ｍｇ／日多い、請求項１２６または１２８に記載の方法。
【請求項１４８】
α−ＳＭＡレベルが、コントロールレベルよりも高い場合に、前記次の用量が、前記初回用量よりも少なくとも約１０ｍｇ／日、少なくとも約２０ｍｇ／日、少なくとも約３０ｍｇ／日、少なくとも約４０ｍｇ／日、少なくとも約５０ｍｇ／日、少なくとも約６０ｍｇ／日、少なくとも約７０ｍｇ／日、少なくとも約８０ｍｇ／日、少なくとも約９０ｍｇ／日、少なくとも約１００ｍｇ／日、少なくとも約１１０ｍｇ／日、少なくとも約１２０ｍｇ／日、少なくとも約１３０ｍｇ／日、少なくとも約１４０ｍｇ／日、少なくとも約１５０ｍｇ／日または少なくとも約１６０ｍｇ／日多い、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１４９】
α−ＳＭＡレベルが、正常レベルよりも低い場合に、前記次の用量が、前記初回用量よりも少なくとも約１０ｍｇ／日、少なくとも約２０ｍｇ／日、少なくとも約３０ｍｇ／日、少なくとも約４０ｍｇ／日、少なくとも約５０ｍｇ／日、少なくとも約６０ｍｇ／日、少なくとも約７０ｍｇ／日または少なくとも約８０ｍｇ／日少ない、請求項１２６または１２８に記載の方法。
【請求項１５０】
α−ＳＭＡレベルが、コントロールレベルよりも低い場合に、前記次の用量が、前記初回用量よりも少なくとも約１０ｍｇ／日、少なくとも約２０ｍｇ／日、少なくとも約３０ｍｇ／日、少なくとも約４０ｍｇ／日、少なくとも約５０ｍｇ／日、少なくとも約６０ｍｇ／日、少なくとも約７０ｍｇ／日または少なくとも約８０ｍｇ／日少ない、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１５１】
前記初回用量が、約１０ｍｇ／日〜１００ｍｇ／日であり、前記次の用量が、約３０ｍｇ／日〜２００ｍｇ／日である、請求項１２６、１２８または１３０に記載の方法。
【請求項１５２】
前記腸線維症患者から採取した試料において、前記腸線維症患者のα−ＳＭＡレベルを割り出す、請求項１２６、１２７または１３０に記載の方法。
【請求項１５３】
前記試料が、血液、血清、血漿または腸組織の試料である、請求項１５２に記載の方法。
【請求項１５４】
免疫化学法またはヌクレオチド解析によって、前記α−ＳＭＡレベルを割り出す、請求項１２６、１２７または１３０に記載の方法。
【請求項１５５】
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって、前記α−ＳＭＡレベルを割り出す、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５６】
前記腸線維症患者の１つ以上の追加の分析対象物のレベルを割り出すことをさらに含む、請求項１２６、１２７または１３０に記載の方法。
【請求項１５７】
前記１つ以上の追加の分析対象物が、ｐ−ＳＭＡＤ３またはＴＧＦ−βを含む、請求項１５６に記載の方法。
【請求項１５８】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを前記腸線維症患者に経口投与する、請求項１２６、１２７または１３０に記載の方法。
【請求項１５９】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ヒトＳＭＡＤ７（配列番号１）の１０８〜１２８位の領域を標的とする、請求項１２６、１２７または１３０に記載の方法。
【請求項１６０】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ヒトＳＭＡＤ７（配列番号１）の４０３位、２３３位、２９４位、２９５位、２９６位、２９８位、２９９位または５３３位のヌクレオチドを標的とする、請求項１２６、１２７または１３０に記載の方法。
【請求項１６１】
前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号２のヌクレオチド配列（５’−ＧＴＣＧＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＣＧＣＡＧＣ−３’）を含む、請求項１２６、１２７または１３０に記載の方法。
【請求項１６２】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ＳＭＡＤ７に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドホスホロチオエートであって、５’−ＧＴＸＧＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＸＧＣＡＧ−３’（配列番号３）という配列を含む前記アンチセンスオリゴヌクレオチドホスホロチオエートであり、その配列中、Ｘが、５−メチル−２’−デオキシシチジンを含むヌクレオチドであり、そのインターヌクレオチド結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項１２６、１２７または１３０に記載の方法。
【請求項１６３】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ＳＭＡＤ７に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドホスホロチオエートであって、５’−ＧＴＸＧＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＸＧＣＡＧＣ−３’（配列番号４）という配列を含む前記アンチセンスオリゴヌクレオチドホスホロチオエートであり、その配列中、Ｘが、５−メチル−２’−デオキシシチジンを含むヌクレオチドであり、そのインターヌクレオチド結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項１６２に記載の方法。
【請求項１６４】
ある用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与後に、α−ＳＭＡレベルが正常レベルよりも高い腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、前記患者に、前記以前の用量以上であるさらなる用量の前記オリゴヌクレオチドを投与することを含む前記方法。
【請求項１６５】
ある用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与後に、α−ＳＭＡレベルが正常レベルよりも低い腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、前記患者に、前記以前の用量以下であるさらなる用量の前記オリゴヌクレオチドを投与することを含む前記方法。
【請求項１６６】
α−ＳＭＡレベルが正常レベルよりも高い腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、前記患者に、ある用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを含む前記方法。
【請求項１６７】
ｐ−ＳＭＡＤ３レベル、ＴＧＦ−βレベル及び／またはα−ＳＭＡレベルのいずれかが正常レベルになるまで、前記投与を繰り返す、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６８】
腸線維症患者の腸線維症の治療または管理のモニタリング方法であって、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与した後、毎回、前記患者のα−ＳＭＡレベルを解析することを含み、α−ＳＭＡレベルが低下していないことによって、前記治療または管理が有効でないことが示される前記方法。
【請求項１６９】
ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与した後、毎回、α−ＳＭＡレベルを１回、２回、３回、４回、約５回、約１０回、約１５回、約２０回または約３０回解析する、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１７０】
前記α−ＳＭＡレベルを、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与の直後、約１時間後、約３時間後、約６時間後、約１２時間後、約１日後、約３日後、約１週間後、約２週間後及び／または約１カ月後に解析する、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１７１】
α−ＳＭＡレベルが正常レベルよりも高い腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、前記患者のα−ＳＭＡレベルが低下するまで、前記患者に投与するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの量を増やすことを含む前記方法。
【請求項１７２】
α−ＳＭＡを、α−ＳＭＡの正常レベル前後またはα−ＳＭＡの正常レベル未満まで低下させる、請求項１７１に記載の方法。
【請求項１７３】
腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法で使用するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、前記方法が、前記患者のα−ＳＭＡレベルを解析して、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの適切な投与レベルを割り出すことを含む前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項１７４】
前記方法が、（ａ）前記患者に、初回用量の前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程と、（ｂ）前記患者のα−ＳＭＡレベルを解析する工程と、（ｃ）前記α−ＳＭＡレベルが、α−ＳＭＡの正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、前記初回用量以上である次の用量の前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与するか、または前記α−ＳＭＡレベルが、α−ＳＭＡの正常レベルよりも低い場合に、前記患者に、前記初回用量以下である次の用量の前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程を含む、請求項１７３に記載の用途用のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項１７５】
腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法で使用するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、前記方法が、（ａ）前記患者のα−ＳＭＡレベルを解析することと、（ｂ）前記α−ＳＭＡレベルが、α−ＳＭＡの正常レベルよりも高い場合に、前記患者に、初回用量の前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを含む前記ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１６年２月２３日に提出された米国特許仮出願第６２／２９８，９８８号（その開示内容は、参照により、その全体が本明細書に援用される）に基づく優先権の利益を主張するものである。
【０００２】
本発明は、Ｍｏｔｈｅｒｓ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｄｅｃａｐｅｎｔａｐｌｅｇｉｃ  Ｈｏｍｏｌｏｇ７（ＳＭＡＤ７）を阻害することによって、腸線維症を治療、予防または管理する方法に関するものである。本発明は、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて、腸線維症を治療または管理する有効性をモニタリングする方法と、トランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ−β）レベル、α−平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）レベル及び／またはリン酸化Ｍｏｔｈｅｒｓ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｄｅｃａｐｅｎｔａｐｌｅｇｉｃ  Ｈｏｍｏｌｏｇ３（ｐ−ＳＭＡＤ３）レベルの解析に基づき、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療を調節する方法に対するものでもある。
【背景技術】
【０００３】
線維症とは、通常は損傷または長期炎症が原因で、器官または組織において、修復または反応プロセス、例えば治癒の際に、過剰な線維性結合組織が形成されることである。線維症は、罹患組織を硬化及び／または腫脹させて、これらの組織を通る流体の流れを減少させる。その結果、線維症の組織は、適正に機能できなくなることがある。
【０００４】
腸線維症は、症候性となり得る、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の一般的な合併症であり、狭窄形成が続く場合には、外科的介入が必要になることもある。腸線維症の根底にある従来の機構と新規機構の大半は、慢性炎症と関連付けられている。
【発明の概要】
【０００５】
一態様では、本発明は、腸線維症の治療、予防もしくは管理方法、またはコラーゲン沈着の予防方法であって、腸線維症またはコラーゲン沈着を罹患している患者において、ＳＭＡＤ７を阻害することを含む方法である。本発明は、腸線維症の治療、予防もしくは管理方法、またはコラーゲン沈着の予防方法であって、細胞、例えば腸細胞において、ＳＭＡＤ７を阻害することを含む方法でもある。さらに別の態様では、本発明は、患者の腸線維症の治療、予防もしくは管理方法、またはコラーゲン沈着の予防方法であって、その患者に、ＳＭＡＤ７の特異的インヒビターを有効量投与することを含む方法である。
【０００６】
いくつかの実施形態では、腸線維症を罹患しているその患者は、以前、炎症性腸疾患に罹患したことがあるか、もしくは炎症性腸疾患に罹患しており、またはその患者において、炎症性腸疾患の後に、腸線維症に罹患した。いくつかの実施形態では、この炎症性腸疾患は、クローン病である。いくつかの実施形態では、この炎症性腸疾患は、潰瘍性大腸炎である。
【０００７】
いくつかの実施形態では、腸線維症を罹患している患者は、以前、大腸炎に罹患したことがあるか、もしくは大腸炎に罹患しており、またはその患者において、大腸炎の後に、腸線維症が発症した。いくつかの実施形態では、この大腸炎は、急性大腸炎である。いくつかの実施形態では、この大腸炎は、慢性大腸炎である。
【０００８】
本発明のいくつかの実施形態では、患者は、哺乳動物、例えば霊長類動物、例えばヒトである。
【０００９】
本発明は部分的には、腸線維症患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡ及び／またはＴＧＦ−βのレベルが、腸線維症の病態と相関するとともに、病態のモニタリングと、抗ＳＭＡＤ７療法による腸線維症の治療に対する応答性の管理手段として、これらのレベルを使用できるという事実に関するものである。本発明は、腸線維症患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡ及び／またはＴＧＦ−βのレベルのモニタリングと解析を使用して、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの適切な投与レベルを割り出すとともに、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療を調節及び調整することができることでもある。
【００１０】
腸線維症患者が、抗ＳＭＡＤ７療法、詳細には、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療に応答するかを、治療開始直後、治療停止直前または治療停止直後に判断できるのは、有益であることは明らかであろう。本明細書に記載されているように、腸線維症患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡ及び／またはＴＧＦ−βのレベルを調節することは、腸線維症の対象において、抗ＳＭＡＤ７療法による治療の効能と、その治療に対する応答性を評価するのに有用である。さらに、病態と相関するバイオマーカー、例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡ及び／またはＴＧＦ−βのレベルまたはそのレベルの変化に基づき、腸線維症患者において、抗ＳＭＡＤ７療法剤の投与を評価及び調節できるのは有用であることは明らかであろう。したがって、本発明は、抗ＳＭＡＤ７療法剤、例えばＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドで治療したか、またはその療法剤を投与した患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡ及び／またはＴＧＦ−βのレベルを解析する方法と、抗ＳＭＡＤ７療法剤の投与後、解析工程によって割り出したｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡ及び／もしくはＴＧＦ−βのレベルまたはｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡ及び／もしくはＴＧＦ−βのレベルの変化に基づき、投与量レベルを調整する方法を提供する。有益なことに、本発明の方法は最終的には、有効な療法の選択と、前記療法による治療のモニタリング及び調整の際に、医師を助けることになる。さらに、本発明の方法により、患者に対する腸線維症治療の効能が改善するとともに、患者の全体的負担が軽減されることになる。
【００１１】
第１の態様では、本発明は、腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法を提供する。一実施形態では、この方法は、（ａ）患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程と、（ｂ）患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析する工程と、（ｃ）そのｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合に、患者に、初回用量以上である次の用量を投与する工程を含む。あるいは、工程（ｃ）において、工程（ｂ）で割り出したように、そのｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも低い場合には、工程（ｃ）には、患者に、初回用量以下である次の用量を投与することが含まれる。
【００１２】
いくつかの実施形態では、本発明は、腸線維症の治療、予防または管理方法で使用するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを含んでよい。例えば、いくつかの実施形態では、本発明は、腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法で使用するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、その方法が、患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析して、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの適切な投与レベルを割り出すことを含むＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、この用法のためのＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、その方法が、（ａ）患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程と、（ｂ）患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析する工程と、（ｃ）そのｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合に、患者に、初回用量以上である次の用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与するか、またはそのｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βの正常レベルよりも低い場合に、患者に、初回用量以下である次の用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程を含むＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。
【００１３】
一実施形態では、本発明は、腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法で使用するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、その方法が、患者のＴＮＦ−α  ｍＲＮＡレベルを解析して、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの適切な投与レベルを割り出すことを含むＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。
【００１４】
本発明の別の態様では、本発明は、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与に関して、腸線維症患者の腸線維症を治療、予防または管理する方法を提供する。一実施形態では、本発明は、腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、（ａ）患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析する工程と、（ｂ）そのｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合に、患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程を含む方法を提供する。特定的な実施形態では、本発明は、腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、（ａ）患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析する工程と、（ｂ）そのｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、０．０１ｐｇ／ｍｌ、０．１ｐｇ／ｍｌ、１ｐｇ／ｍｌ、２ｐｇ／ｍｌ、３ｐｇ／ｍｌ、４ｐｇ／ｍｌ、５ｐｇ／ｍｌ、６ｐｇ／ｍｌ、７ｐｇ／ｍｌ、８ｐｇ／ｍｌ、９ｐｇ／ｍｌ、１０ｐｇ／ｍｌ、１１ｐｇ／ｍｌ、１２ｐｇ／ｍｌ、１３ｐｇ／ｍｌ、１４ｐｇ／ｍｌ、１５ｐｇ／ｍｌ、１７．５ｐｇ／ｍｌ、２０ｐｇ／ｍｌ、２２．５ｐｇ／ｍｌ、２５ｐｇ／ｍｌ、３０ｐｇ／ｍｌまたは３５ｐｇ／ｍｌよりも高い場合に、患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程を含む方法を提供する。
【００１５】
加えて、この方法は、（ｃ）前記投与工程、すなわち、工程（ｂ）の後に、患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析する工程と、（ｄ）そのｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合に、患者に、初回用量以上である次の用量を投与する工程をさらに含んでよい。あるいは、工程（ｄ）において、工程（ｃ）で割り出した場合に、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも低い場合には、工程（ｄ）には、患者に、初回用量以下である次の用量を投与することが含まれる。場合によっては、工程（ｄ）で投与する次の用量が、最大耐用量（ＭＴＤ）以上である場合には、この方法は、治療を終了させる工程を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態では、本発明は、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのコントロールレベルの確立に応じて、腸線維症を治療、予防または管理する方法を含む。例えば、特定的な実施形態では、腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法は、（ａ）患者に対する、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのコントロールレベルを確立する工程と、（ｂ）患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程と、（ｃ）患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析する工程と、（ｄ）そのｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、コントロールレベルよりも低い場合、患者に、初回用量と同じであるか、または初回用量よりも少ない次の用量を投与する工程を含む。あるいは、工程（ｃ）で割り出したｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、コントロールレベルと比べて変わらないかまたは上昇している場合、この方法は、（ｄ）患者に、初回用量と同じであるか、もしくは初回用量よりも多い次の用量を投与するか、または治療を終了させる工程を含む。
【００１７】
いくつかの実施形態では、この方法は、（ａ）患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのいずれかの第１のレベルを解析する工程と、（ｂ）患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）を投与する工程と、（ｃ）投与工程の後に、患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第２のレベルを解析する工程を含む。本発明の一実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第２のレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第１のレベル以上である場合、患者に、初回用量以上である次の用量を投与し、及び／または患者に、次の用量を初回用量時以上の頻度で投与する。あるいは、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第２のレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第１のレベルよりも低い場合には、患者に、初回用量以下である次の用量を投与し、及び／または患者に、次の用量を初回用量時以下の頻度で投与する。
【００１８】
本発明のいくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第２のレベルは、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第１のレベルよりも高い。例えば、いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第２のレベルは、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第１のレベルよりも約１０％高いか、約２０％高いか、約３０％高いか、約４０％高いか、約５０％高いか、約６０％高いか、約７０％高いか、約８０％高いか、約９０％高いか、約１００％高いか、またはそれよりも高い。いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第２のレベルは、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第１のレベルよりも約１０％〜約２０％高いか、約２０％〜約３０％高いか、約３０％〜約４０％高いか、約４０％〜約５０％高いか、約５０％〜約６０％高いか、約６０％〜約７０％高いか、約７０％〜約８０％高いか、約８０％〜約９０％高いか、または約９０％〜約１００％高い。あるいは、いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第２のレベルは、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第１のレベルよりも低い。例えば、いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第２のレベルは、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第１のレベルよりも約１０％低いか、約２０％低いか、約３０％低いか、約４０％低いか、約５０％低いか、約６０％低いか、約７０％低いか、約８０％低いか、約９０％低いか、または約１００％低い。いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第２のレベルは、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第１のレベルよりも約１０％〜約２０％低いか、約２０％〜約３０％低いか、約３０％〜約４０％低いか、約４０％〜約５０％低いか、約５０％〜約６０％低いか、約６０％〜約７０％低いか、約７０％〜約８０％低いか、約８０％〜約９０％低いか、または約９０％〜約１００％低い。
【００１９】
いくつかの実施形態では、本発明は、腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、（ａ）患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程と、（ｂ）投与工程の後に、患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析する工程を含む方法を含む。いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合、患者に、初回用量以上である次の用量を投与し、及び／または患者に、次の用量を初回用量時以上の頻度で投与する。いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも低い場合、患者に、初回用量以下である次の用量を投与し、及び／または患者に、次の用量を初回用量時以下の頻度で投与する。
【００２０】
本発明のいくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルは、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い。例えば、いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルは、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも約１０％高いか、約２０％高いか、約３０％高いか、約４０％高いか、約５０％高いか、約６０％高いか、約７０％高いか、約８０％高いか、約９０％高いか、約１００％高いか、またはそれよりも高い。いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルは、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも約１０％〜約２０％高いか、約２０％〜約３０％高いか、約３０％〜約４０％高いか、約４０％〜約５０％高いか、約５０％〜約６０％高いか、約６０％〜約７０％高いか、約７０％〜約８０％高いか、約８０％〜約９０％高いか、または約９０％〜約１００％高い。いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルは、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも低い。例えば、いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルは、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも約１０％低いか、約２０％低いか、約３０％低いか、約４０％低いか、約５０％低いか、約６０％低いか、約７０％低いか、約８０％低いか、約９０％低いか、または約１００％低い。いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの第２のレベルは、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも約１０％〜約２０％低いか、約２０％〜約３０％低いか、約３０％〜約４０％低いか、約４０％〜約５０％低いか、約５０％〜約６０％低いか、約６０％〜約７０％低いか、約７０％〜約８０％低いか、約８０％〜約９０％低いか、または約９０％〜約１００％低い。
【００２１】
いくつかの実施形態では、本発明は、腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法で使用するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドであって、その方法が、（ａ）患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析することと、（ｂ）そのｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合、患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを含むＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。
【００２２】
ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルは、投与工程（ｂ）の後の様々な時点に解析してよい。例えば、いくつかの実施形態では、投与工程（ｂ）の後、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを前記投与工程の少なくとも１日後、少なくとも３日後、少なくとも５日後、少なくとも１週間後、少なくとも２週間後、少なくとも３週間後、少なくとも１カ月後、少なくとも２カ月後、少なくとも４カ月後または少なくとも６カ月後に解析する。いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルは、前記投与工程の直後に解析する。さらに別の実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルは、前記投与工程の約７日後、約１０日後、約１５日後、約２０日後、約２５日後または約２８日後に解析する。
【００２３】
ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルまたはコントロールレベルは、参照数値に基づくか、または健常なコントロール群のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βのレベルとの関係で割り出してよい。例えば、いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのコントロールレベルまたは正常レベルは、約０．０１ｐｇ／ｍｌ、約０．１ｐｇ／ｍｌ、約１ｐｇ／ｍｌ、約２ｐｇ／ｍｌ、約３ｐｇ／ｍｌ、約４ｐｇ／ｍｌ、約５ｐｇ／ｍｌ、約６ｐｇ／ｍｌ、約７ｐｇ／ｍｌ、約８ｐｇ／ｍｌ、約９ｐｇ／ｍｌ、約１０ｐｇ／ｍｌ、約１１ｐｇ／ｍｌ、約１２ｐｇ／ｍｌ、約１３ｐｇ／ｍｌ、約１４ｐｇ／ｍｌ、約１５ｐｇ／ｍｌ、約１６ｐｇ／ｍｌ、約１７ｐｇ／ｍｌ、約１７．５ｐｇ／ｍｌ、約１８ｐｇ／ｍｌ、約１９ｐｇ／ｍｌ、約２０ｐｇ／ｍｌ、約２２．５ｐｇ／ｍｌ、約２５ｐｇ／ｍｌ、約３０ｐｇ／ｍｌまたは約３５ｐｇ／ｍｌである。本発明の別の実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのコントロールレベルまたは正常レベルは、健常なコントロール群のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルの中央値として定義されている。健常なコントロール群は、遺伝的背景、習慣及び身体的属性に関する様々な基準であって、患者における同じ基準セットに一致する様々な基準に基づき定義してよい。例えば、いくつかの実施形態では、健常なコントロール群と腸線維症患者は、年齢、性別、出身民族、喫煙習慣、食習慣、肥満度指数（ＢＭＩ）、レクリエーショナルドラッグの使用、医薬の使用、腸線維症に関連する薬物の使用及び／または運動習慣に関して一致している。患者とコントロール群との間で一致させることができるその他の要因としては、臨床的基準（例えば、腸線維症関連の症状の重症度）、代謝、腸線維症患者自身の既往歴、遺伝因子、腸線維症患者の家族の既往歴、環境因子（例えば、汚染物質、毒素、アレルゲン）への暴露、ならびにライフスタイル（例えば、職場及び／または住居が都会、郊外または地方にあること）が挙げられるが、これらに限らない。
【００２４】
本発明の様々な実施形態では、腸線維症患者に投与するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの初回用量は、様々であってよい。例えば、いくつかの実施形態では、腸線維症患者に投与するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの初回用量は、５００ｍｇ未満／日、４００ｍｇ未満／日、３００ｍｇ未満／日、２００ｍｇ未満／日、１００ｍｇ未満／日、９０ｍｇ未満／日、８０ｍｇ未満／日、７０ｍｇ未満／日、６０ｍｇ未満／日、５０ｍｇ未満／日、４０ｍｇ未満／日、３０ｍｇ未満／日、２０ｍｇ未満／日または１０ｍｇ未満／日である。あるいは、別の実施形態では、この初回用量は、少なくとも１ｍｇ／日、少なくとも５ｍｇ／日、少なくとも１０ｍｇ／日、少なくとも２０ｍｇ／日、少なくとも３０ｍｇ／日、少なくとも４０ｍｇ／日、少なくとも５０ｍｇ／日、少なくとも６０ｍｇ／日、少なくとも７０ｍｇ／日、少なくとも８０ｍｇ／日、少なくとも９０ｍｇ／日、少なくとも１００ｍｇ／日、少なくとも２００ｍｇ／日、少なくとも３００ｍｇ／日、少なくとも４００ｍｇ／日または少なくとも５００ｍｇ／日である。さらに別の実施形態では、この初回用量は、約５ｍｇ／日、約１０ｍｇ／日、約２０ｍｇ／日、約３０ｍｇ／日、約４０ｍｇ／日、約５０ｍｇ／日、約６０ｍｇ／日、約７０ｍｇ／日、約８０ｍｇ／日、約９０ｍｇ／日、約１００ｍｇ／日、約２００ｍｇ／日、約３００ｍｇ／日、約４００ｍｇ／日または約５００ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、この初回用量は、５ｍｇ／日、１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、３０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、６０ｍｇ／日、７０ｍｇ／日、８０ｍｇ／日、９０ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、１１０ｍｇ／日、１２０ｍｇ／日、１３０ｍｇ／日、１４０ｍｇ／日、１５０ｍｇ／日、１６０ｍｇ／日、１７０ｍｇ／日、１８０ｍｇ／日、１９０ｍｇ／日または２００ｍｇ／日である。
【００２５】
本発明のいくつかの実施形態では、工程（ｂ）または（ｃ）において、患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析した後、そのｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡ及び／またはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合、この方法は、患者に、初回用量よりも多い次の用量を投与する工程を含んでよい。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）または（ｃ）において、患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析した後、そのｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも低い場合、この方法は、患者に、初回用量よりも少ない次の用量を投与する工程を含んでよい。
【００２６】
本発明は、腸線維症患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルに基づき、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの初回用量を基準として、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの次の用量レベルを割り出す方法も提供する。例えば、本明細書に記載されている本発明の実施形態では、腸線維症患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、初回投与工程（ａ）または（ｂ）の後に、正常レベルまたはコントロールレベルよりも高い場合、工程（ｃ）または（ｄ）で投与する次の用量は、初回用量よりも少なくとも約５ｍｇ／日、少なくとも約１０ｍｇ／日、少なくとも約２０ｍｇ／日、少なくとも約３０ｍｇ／日、少なくとも約４０ｍｇ／日、少なくとも約５０ｍｇ／日、少なくとも約６０ｍｇ／日、少なくとも約７０ｍｇ／日、少なくとも約８０ｍｇ／日、少なくとも約９０ｍｇ／日、少なくとも約１００ｍｇ／日、少なくとも約１１０ｍｇ／日、少なくとも約１２０ｍｇ／日、少なくとも約１３０ｍｇ／日、少なくとも約１４０ｍｇ／日、少なくとも約１５０ｍｇ／日、少なくとも約１６０ｍｇ／日、少なくとも約１７０ｍｇ／日、少なくとも約１８０ｍｇ／日、少なくとも約１９０ｍｇ／日または少なくとも約２００ｍｇ／日多い。
【００２７】
あるいは、いくつかの実施形態では、腸線維症患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、初回投与工程（ａ）または（ｂ）の後に、コントロールレベルまたは正常レベルよりも低い場合、工程（ｃ）または（ｄ）で投与する次の用量は、初回用量よりも少なくとも約５ｍｇ／日、少なくとも約１０ｍｇ／日、少なくとも約２０ｍｇ／日、少なくとも約３０ｍｇ／日、少なくとも約４０ｍｇ／日、少なくとも約５０ｍｇ／日、少なくとも約６０ｍｇ／日、少なくとも約７０ｍｇ／日、少なくとも約８０ｍｇ／日、少なくとも約９０ｍｇ／日または少なくとも約１００ｍｇ／日少ない。さらに、いくつかの実施形態では、初回投与工程（ａ）または（ｂ）で投与する初回用量は、約１０ｍｇ／日〜１００ｍｇ／日、約５ｍｇ／日〜２００ｍｇ／日、約１０ｍｇ／日〜５０ｍｇ／日、約５０ｍｇ／日〜１００ｍｇ／日及び約１００ｍｇ／日〜約２００ｍｇ／日であり、工程（ｃ）または（ｄ）で投与する次の用量は、約３０ｍｇ／日〜２００ｍｇ／日、約５ｍｇ／日〜３０ｍｇ／日、約２０ｍｇ／日〜５０ｍｇ／日、約５０ｍｇ／日〜１００ｍｇ／日または約１００ｍｇ／日〜２００ｍｇ／日である。
【００２８】
本発明は、初回投与工程の前と後の患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの相対的レベルの比較に基づき、腸線維症患者において、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療を調節する方法も提供する。この方法は、（ａ）患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析する工程と、（ｂ）そのｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合、患者に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する工程と、（ｃ）前記投与工程後の患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析する工程と、（ｄ）そのｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、前記投与工程の後に、前記投与工程の前のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルよりも低い場合、患者に、初回用量と同じであるか、または初回用量よりも少ない次の用量を投与する工程を含む。あるいは、工程（ｄ）では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、前記投与工程（すなわち工程（ｂ））の後に、前記投与工程の前のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルと比べて変わらないかまたは上昇している場合、工程（ｄ）は、患者に、初回用量よりも多い次の用量を投与するか、または治療を終了させることを含む。
【００２９】
本発明の方法によれば、（ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの）初回投与工程後に、その投与工程前のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルと比較して観察する、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルの変化は、例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルの変化率（％）として比較して、腸線維症患者に投与するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの次の用量の量を割り出すことができる。例えば、いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、前記投与工程（例えば投与工程（ｂ））の後に、前記投与工程の前のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルよりも少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％低下している場合、この方法は、患者に、初回用量と同じであるか、または初回用量よりも少ない次の用量を投与する工程（例えば投与工程（ｄ））を含む。
【００３０】
いくつかの実施形態では、本発明は、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが正常レベルよりも高い患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、その患者に、ある用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを含む方法を提供する。さらに、いくつかの実施形態では、本発明は、ある用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与した後のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが正常よりも高い患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、その患者に、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを以前の用量以上の追加の用量で投与することを含む方法を提供する。同様に、いくつかの実施形態では、本発明は、ある用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与した後のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが正常よりも低い腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理方法を提供する。後者のケースでは、この方法は、患者に、以前の用量以下である追加の用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを含むことになる。いくつかの実施形態では、１つ以上のバイオマーカー、例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが正常レベルになるまで、患者へのＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与を繰り返す。
【００３１】
本発明は、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが正常レベルよりも高い患者の腸線維症の治療、予防または管理方法であって、患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが低下するまで、患者に投与するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの量を増やす方法も提供する。このような実施形態では、患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βの正常レベル前後、またはｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βの正常レベルよりも低いレベルまで低下するまで、患者に投与するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドのレベルを上昇させてよい。
【００３２】
いくつかの実施形態では、本発明は、腸線維症患者の腸線維症の治療または管理のモニタリング方法であって、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与した後、毎回、患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析することを含む方法を提供する。これらの方法を用いると、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが低下していないことによって、その治療または管理が有効でないことが示される。このような実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルは、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与した後、毎回、１回または複数回、例えば、２回、３回、４回、約５回、約１０回、約１５回、約２０回または約３０回解析してよい。さらに、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを測定するタイミングは、ＳＭＡＤ７オリゴヌクレオチドの投与から様々な時点であってよく、すなわち、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルは、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与の直後、約１時間後、約３時間後、約６時間後、約１２時間後、約１日後、約３日後、約１週間後、約２週間後及び／または約１カ月後に解析してよい。
【００３３】
本明細書に記載されている方法を用いて、腸線維症患者のバイオマーカーまたは分析対象物、例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを割り出すために、試料を患者から採取してよい。したがって、本発明のいくつかの実施形態では、腸線維症患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルは、腸線維症患者から採取した試料において割り出す。本発明の方法では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−β以外の分析対象物、またはｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βに追加する分析対象物、例えば、これらに限らないが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡ、ＴＧＦ−β、Ｉ〜ＩＩＩ型コラーゲン、結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）、Ｍｏｔｈｅｒｓ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｄｅｃａｐｅｎｔａｐｌｅｇｉｃ  Ｈｏｍｏｌｏｇ２（ＳＭＡＤ２）、Ｍｏｔｈｅｒｓ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｄｅｃａｐｅｎｔａｐｌｅｇｉｃ  Ｈｏｍｏｌｏｇ３（ＳＭＡＤ３）及び／または血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）も割り出してよい。したがって、本発明のいくつかの実施形態では、本発明の方法は、腸線維症患者の１つ以上の追加の分析対象物の１つのレベルまたは複数のレベルを割り出すことを含む。ＳＭＡＤ３の分析対象物としては、ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＣ＿００００１５．１０、ＸＭ＿０１１５２１５５９．１及びＸＭ＿０１１５２１５６０．１によって説明されているＳＭＡＤ３遺伝子のＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物、またはこのＳＭＡＤ３遺伝子に由来するＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物が挙げられる。ＳＭＡＤ２の分析対象物としては、ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＣ＿００００１８．１０、ＸＭ＿００６７２２４５１．２、ＸＭ＿００５２５８２５９．２、ＸＭ＿０１１５２５９８５．１、ＸＭ＿０１１５２５９８３．１、ＸＭ＿０１１５２５９８４．１及びＸＭ＿０１１５２５９８６．１によって説明されているＳＭＡＤ２遺伝子のＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物、またはこのＳＭＡＤ２遺伝子に由来するＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物が挙げられる。α−ＳＭＡの分析対象物としては、ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＣ＿００００１０．１１及びＸＭ＿０１１５４００１６．１によって説明されているα−ＳＭＡ遺伝子のＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物、またはこのα−ＳＭＡ遺伝子に由来するＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物が挙げられる。ＴＧＦ−βの分析対象物としては、ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＣ００００１９．１０及びＸＭ＿０１１５２７２４２．１によって説明されているＴＧＦ−β遺伝子のＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物、またはこのＴＧＦ−β遺伝子に由来するＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物が挙げられる。Ｉ型コラーゲンの分析対象物としては、ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＣ＿００００１７．１１，ＸＭ＿０１１５２４３４１．１，ＸＭ＿００５２５７０５８．３及びＸＭ＿００５２５７０５９．３によって説明されているＩ型コラーゲン遺伝子のＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物、またはこのＩ型コラーゲン遺伝子に由来するＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパ��質産物が挙げられる。ＩＩ型コラーゲンの分析対象物としては、ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＣ＿００００１２．１２、ＸＭ＿００６７１９２４２．２、ＸＭ＿０１１５３７９３２．１、ＸＭ＿０１１５３７９３１．１、ＸＭ＿０１１５３７９２９．１、ＸＭ＿０１１５３７９３０．１、ＸＭ＿０１１５３７９３４．１、ＸＭ＿０１１５３７９２８．１、ＸＭ＿０１１５３７９３３．１及びＸＭ０１１５３７９３５．１によって説明されているＩＩ型コラーゲン遺伝子のＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物、またはこのＩＩ型コラーゲン遺伝子に由来するＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物が挙げられる。ＩＩＩ型コラーゲンの分析対象物としては、ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＣ０００００２．１２によって説明されているＩＩＩ型コラーゲン遺伝子のＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物、またはこのＩＩＩ型コラーゲン遺伝子に由来するＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物が挙げられる。ＩＬ−１３の分析対象物としては、ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ＮＣ＿０００００５．１０によって説明されているＩＬ−１３遺伝子のＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物、またはこのＩＬ−１３遺伝子に由来するＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物が挙げられる。ＣＴＧＦの分析対象物としては、ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ＮＣ＿０００００６．１２によって説明されているＣＴＧＦ遺伝子のＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物、またはこのＣＴＧＦ遺伝子に由来するＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物が挙げられる。ＰＤＧＦの分析対象物としては、ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＣ＿０００００７．１４、ＸＭ＿０１１５１５４１７．１、ＸＭ＿０１１５１５４１５．１、ＸＭ＿０１１５１５４１８．１、ＸＭ＿０１１５１５４１６．１及びＸＭ＿０１１５１５４１９．１によって説明されているＰＤＧＦ遺伝子のＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物、またはこのＰＤＧＦ遺伝子に由来するＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質産物が挙げられる。
【００３４】
目的の分析対象物、例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡ、ＴＧＦ−β、Ｉ〜ＩＩＩ型コラーゲン、ＣＴＧＦ、ＩＬ−１３、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３及び／またはＰＤＧＦを含む試料であって、腸線維症患者から採取する試料としては、血液試料、血清試料、血漿試料または腸組織試料を挙げてよい。試料としては、組織試料、例えば、以下に限らないが、組織、胃腸、粘膜、粘膜下、腸、食道、回腸、直腸またはリンパ試料も挙げてよい。腸線維症患者から採取した試料中の目的の分析対象物のレベルは、様々なアッセイを用いて割り出してよい。例えば、本発明の方法では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−β、及び／または別の分析対象物のレベルは、免疫化学法、例えば酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）またはヌクレオチド解析によって割り出してよい。
【００３５】
本明細書に記載されている本発明の方法において、腸線維症患者に投与するＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドは、様々な投与経路によって投与してよいことは明らかであろう。様々な実施形態では、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドは、経口、局所、非経口、例えば、皮下注射、吸入噴霧、または直腸内を含め、１つの経路またはいくつかの経路によって投与してよい。本明細書で使用する場合、非経口という用語には、皮下注射、膵内投与、静脈内注射、静脈内注入、筋肉内注射、筋肉内注入、腹腔内注射、腹腔内注入、胸骨内注射及び胸骨内注入の技法が含まれる。好ましい実施形態では、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドは、腸線維症患者に経口投与してよい。
【００３６】
想定されている本発明は、ＳＭＡＤ７  ＲＮＡを分解の標的にしたり、ＲＮＡスプライシングを妨げたり、またはＳＭＡＤ７遺伝子の発現もしくはタンパク質の翻訳を阻止したりできるＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与を含む方法を提供する。本発明の想定されているＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＳＭＡＤ７  ｍＲＮＡの様々な領域を結合の標的にし得る。例えば、本発明のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＳＭＡＤ７  ｍＲＮＡ（配列番号１）の１０８〜１２８位のヌクレオチドを標的にし得る。いくつかの実施形態では、本発明のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＳＭＡＤ７の配列（配列番号１）の４０３位、２３３位、２９４位、２９５位、２９６位、２９８位、２９９位または５３３位のヌクレオチドを標的にし得る。ヒトＳＭＡＤ７  ｍＲＮＡの配列は、ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＭ＿００５９０４．３の配列（配列番号１）である。
【００３７】
想定されているＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの配列は、ＳＭＡＤ７  ＲＮＡを標的にできる複数の配列から選択してよい。例えば、本発明のいくつかの実施形態では、本発明のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号２（５’−ＧＴＣＧＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＣＧＣＡＧＣ−３’）のヌクレオチド配列を含む。本発明のいくつかの実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドホスホロチオエート、すなわち、インターヌクレオチド結合の少なくともいくつかが、患者の細胞に送達するのに適するホスホロチオエート結合であるオリゴヌクレオチドである。加えて、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド、例えば、修飾塩基、例えば５−メチル−２’−デオキシシチジンを含むヌクレオチドを含んでよい。例えば、いくつかの実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５’−ＧＴＸＧＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＸＧＣＡＧ−３’（配列番号３）という配列を含むＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドホスホロチオエートであり、この配列中、Ｘは、５−メチル−２’−デオキシシチジンを含むヌクレオチドであり、そのインターヌクレオチド結合は、ホスホロチオエート結合である。いくつかの実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５’−ＧＴＸＧＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＸＧＣＡＧＣ−３’（配列番号４）という配列を含むＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドホスホロチオエートであり、この配列中、Ｘは、５−メチル−２’−デオキシシチジンを含むヌクレオチドであり、そのインターヌクレオチド結合は、ホスホロチオエート結合である。特定的な実施形態では、想定されているアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号４の遊離酸形態、塩形態または対イオンを伴わない陰イオン形態を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド（本明細書では、「Ｍｏｎｇｅｒｓｅｎ」という）であり、その２０個のインターヌクレオチド結合はそれぞれ、Ｏ，Ｏ結合ホスホロチオエート結合であり、図９に示されている。いくつかの実施形態では、配列番号４のホスホロチオエート骨格を完全プロトン化または部分プロトン化して、配列番号４の酸性形態を形成できる。いくつかの実施形態では、配列番号４の想定されている塩としては、完全中和されている塩が挙げられ、例えば、各ホスホロチオエート結合は、Ｎａ＋のようなイオンと結合している。いくつかの実施形態では、配列番号４の塩は、部分中和されているに過ぎず、例えば、一部のホスホロチオエート結合が、イオンと結合している（例えば、９９％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、３％未満または１％未満が中和されている）。
【００３８】
本発明のいくつかの実施形態では、患者の腸線維症の治療、予防もしくは管理方法、または患者のコラーゲン沈着の予防方法は、医薬組成物、例えば、ＳＭＡＤ７の特異的インヒビター、例えばＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドと、製薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、非経口投与する。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、経口投与する。いくつかの実施形態では、この医薬組成物は、腸溶性コーティング、例えば、エチルアクリレート−メタクリル酸コポリマーを含む腸溶性コーティングを含む。
【００３９】
本発明の実施形態では、患者の腸線維症の治療、予防または管理方法、または患者のコラーゲン沈着の予防方法は、様々な量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、少なくとも１μｇ、少なくとも５μｇ、少なくとも１０μｇ、少なくとも２０μｇ、少なくとも３０μｇ、少なくとも４０μｇ、少なくとも５０μｇ、少なくとも６０μｇ、少なくとも７０μｇ、少なくとも８０μｇ、少なくとも９０または少なくとも１００μｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、３５ｍｇ〜５００ｍｇ、１ｍｇ〜１０ｍｇ、１０ｍｇ〜２０ｍｇ、２０ｍｇ〜３０ｍｇ、３０ｍｇ〜４０ｍｇ、４０ｍｇ〜５０ｍｇ、５０ｍｇ〜６０ｍｇ、６０ｍｇ〜７０ｍｇ、７０ｍｇ〜８０ｍｇ、８０ｍｇ〜９０ｍｇ、９０ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜１５０ｍｇ、１５０ｍｇ〜２００ｍｇ、２００ｍｇ〜２５０ｍｇ、２５０ｍｇ〜３００ｍｇ、３００ｍｇ〜３５０ｍｇ、３５０ｍｇ〜４００ｍｇ、４００ｍｇ〜４５０ｍｇ、４５０ｍｇ〜５００ｍｇ、５００ｍｇ〜６００ｍｇ、６００ｍｇ〜７００ｍｇ、７００ｍｇ〜８００ｍｇ、８００ｍｇ〜９００ｍｇ、９００ｍｇ〜１ｇ、１ｍｇ〜５０ｍｇ、２０ｍｇ〜４０ｍｇまたは１ｍｇ〜５００ｍｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】炎症性腸疾患（ＩＢＤ）におけるＴＧＦ−βシグナル伝達の、Ｓｍａｄ７によるブロックである。
【００４１】
【図２】クローン病腸狭窄症において、筋線維芽細胞は、過剰な量のコラーゲンを産生することによって、ＴＧＦ−βに応答する。
【００４２】
【図３】トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）の投与によって誘導した腸線維症のマウスモデルである。コラーゲン沈着は、３週目に観察される。
【００４３】
【図４】ＴＮＢＳ誘導性の慢性大腸炎は、高度なＴＮＦ−α及びＴＧＦ−β  ＲＮＡの発現と、ＴＧＦ−β／Ｓｍａｄ３シグナル伝達の異常と関連付けられている。
【００４４】
【図５】ＴＮＢＳ誘導性の慢性大腸炎であるマウスでは、Ｓｍａｄ７  ＲＮＡではなく、Ｓｍａｄ７タンパク質が高度に発現する。
【００４５】
【図６】ＴＮＢＳ誘導性の慢性大腸炎は、コラーゲン沈着を増強する。
【００４６】
【図７】ＴＮＢＳ誘導性の慢性大腸炎は、α−ＳＭＡの発現を増強する。
【００４７】
【図８】トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）の投与によって、腸線維症を誘導後、Ｓｍａｄ７センスオリゴヌクレオチドとＳｍａｄ７アンチ−センスオリゴヌクレオチドで治療した。
【００４８】
【図９】Ｓｍａｄ７アンチセンスオリゴヌクレオチド（Ｍｏｎｇｅｒｓｅｎ）の構造である。
【００４９】
【図１０】特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳ）でＳｍａｄ７をノックダウンすると、ＴＮＢＳ誘導性の大腸炎症が軽減される。
【００５０】
【図１１】大腸炎マウスをＳｍａｄ７アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳ）で治療すると、コラーゲン沈着が軽減される。
【００５１】
【図１２】特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳ）によるＳｍａｄ７のノックダウンは、α−ＳＭＡの発現の低下と関連がある。
【００５２】
【図１３】特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳ）によるＳｍａｄ７のノックダウンは、ＴＧＦ−βの発現と、ＴＧＦ−β／Ｓｍａｄ３のシグナル伝達の低下と関連がある。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
本発明は、腸線維症患者の腸線維症の治療、予防または管理を行うのに概して有用な方法を提供する。この方法は、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド療法剤のような抗ＳＭＡＤ７療法剤で治療する患者において、治療を管理する点で特に有用である。ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド療法剤は、ＳＭＡＤ７  ｍＲＮＡ転写物に結合して、ＳＭＡＤ７  ｍＲＮＡ転写物の分解を誘導したり、ＳＭＡＤ７  ｍＲＮＡ転写物のスプライシングを阻止したり、またはＳＭＡＤ７  ｍＲＮＡ転写物のタンパク質への翻訳を阻止したりできるオリゴヌクレオチドを含むいずれかの療法剤であってよい。
【００５４】
本発明の方法は、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療に対する腸線維症患者の応答性を予測して割り出すのに有用である。したがって、本発明の方法を用いて、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療に応答する可能性が高い患者と、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療に応答する可能性が低い患者を特定できる。本明細書に記載されている方法は、患者が、腸線維症の治療に応答するか否かを判断するのにも有用である。概して、本発明の方法を用いて、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドで治療した腸線維症患者の応答性のレベルまたは考え得るレベルを割り出すことができる。応答性のレベルまたは応答性の考え得るレベルを割り出すことに基づき、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与を開始したり、繰り返したり、維持したり、増やしたり、減らしたり、または終了させたりしてよい。応答性は、多くの要因（バイオマーカー及び／もしくはその他の分析対象物（例えば、ＴＧＦ−β、α−ＳＭＡ及びｐ−ＳＭＡＤ３）のレベルもしくはそのレベルの変化の解析、または腸線維症の症状（例えば、体重減少、組織炎症）の評価が挙げられるが、これらに限らない）を用いて割り出してよい。
【００５５】
同様に、本発明の方法は、腸線維症患者における、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療の効能と安全性を評価するのに有用である。例えば、本発明の方法は、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療が、腸線維症を部分的または完全に改善させるのに有効であるか否かを示すことのできるバイオマーカーの発現のレベル、その他の指標、または病態の発現症状の変化を割り出すことを含んでよい。バイオマーカーの発現、疾患の症状、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの組織中レベル、血中レベルもしくは全身レベル、または全身の健康状態の指標のレベルまたはレベルの変化を割り出すことによって、病態の悪化、または危険な薬物レベルを示すこともできる。治療（複数可）の前、最中、間及び／または後の複数の指標の評価を用いて、疾患の病期、進行及び重症度をモニタリングしてよい。
【００５６】
本発明は部分的には、腸線維症の病態と、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡ及びＴＧＦ−βのレベルとの関係に関する発見に基づいている。具体的には、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡ及びＴＧＦ−βのレベルはそれぞれ、患者が、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いる腸線維症治療に応答するか、応答する可能性が高いか、応答しないか、または応答しない可能性が高いかを判断する際に有用なバイオマーカーであることを本発明者は発見した。
【００５７】
さらに、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを用いて、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを使用する疾患治療を、具体的には、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与量に関して管理することができる。例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを用いて、腸線維症患者に、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを特定の投与量で、例えば、次の用量において、例えば、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの以前の投与量、例えば初回用量よりも多いかまたは少ない用量で与えるべきか判断してよい。したがって、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与は、腸線維症患者において、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βの絶対レベル、またはｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βの相対的レベルを基準にして、例えば投与量または投与頻度に関して調整してよい。例えば、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与は、腸線維症患者から採取した試料で測定したｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの絶対レベルと、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルとを比較することによって、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの絶対レベルに基づいて調整してよく、この場合、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルは、例えば、腸線維症患者に対応する健常なコントロール群のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのベンチマーク値またはレベル中央値のいずれかである。本発明のいくつかの実施形態では、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与は、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの相対的レベルに基づいて、例えば、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与の前と後、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与の直後とさらに後、またはＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与の最中と後のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルの比較に基づいて調整してよい。いくつかの実施形態では、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドは、患者の試料中のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルの比較を行うために使用される、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルの最初の検出時と、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルのそれ以降の検出時との間に複数回投与してよい。
【００５８】
本発明のいくつかの実施形態では、治療する腸線維症患者は、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが正常レベルよりも高い患者である。いくつかの実施形態では、患者は、治療前には、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡ及び／またはＴＧＦ−βのレベルが高いことが知られている。いくつかの実施形態では、腸線維症患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡ及び／またはＴＧＦ−βのレベルは、治療の前、治療の後、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する前、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与した後、次の用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する前、及び／または次の用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与した後に割り出す。
【００５９】
コントロールレベル及びコントロール試料
ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのコントロールレベルは、抗ＳＭＡＤ７療法による治療前の対象から採取した試料（例えば血液試料）中のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのタンパク質またはｍＲＮＡ転写物のレベルを割り出すことによって割り出してよい。ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのコントロールレベルによって、治療に対する対象の応答をモニタリングするためのベースラインを供給してもよい。コントロール試料は、抗ＳＭＡＤ７療法剤を初めて投与した日（例えば、治療レジメンの１日目）に、例えば、少なくとも１回の抗ＳＭＡＤ７療法剤を投与した直後に、対象から採取してよい。別の実施形態では、コントロール試料は、抗ＳＭＡＤ７療法を開始する１日前（例えば、治療レジメンの０日目）に、対象から採取してよい。あるいは、コントロール試料は、抗ＳＭＡＤ７療法を開始する２日前、３日前、４日前、５日前、６日前、７日前、またはそれよりも前に、対象から採取してよい。例えば、治療の前（例えば、コントロール試料で）、治療の最中、及び／または治療の後に、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの濃度の増減を測定して、療法、例えば抗ＳＭＡＤ７療法に対する対象の応答をモニタリングしてよい。
【００６０】
いくつかの実施形態では、コントロールレベルは、対象に対して、対象の循環血液中のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの濃度の長期モニタリングに基づいて確立してよい。このようなケースでは、対象が、抗ＳＭＡＤ７療法による治療を複数ラウンド受けることがあることが想定されている。循環血液中のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの濃度を複数ラウンドの治療後に検出したものを、その対象におけるｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの事前のコントロールレベルと比較して、その対象が、療法に応答しているか及び／または抗ＳＭＡＤ７療法によるさらなる治療に応答する可能性が高いか判断してよい。別の実施形態では、対象におけるコントロールレベルまたはベースラインレベルは、循環血液中のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの濃度の平均測定値を、経時的に採取した（例えば、数日、数週間、数カ月または数年にわたって採取した）複数のベースライン試料から割り出したものに基づいて確立してよい。したがって、本明細書に開示されているようにして行ういずれかの試験またはアッセイでは、事前または確立済みのコントロールレベルと比較してよく、例えば、対象が、抗ＳＭＡＤ７療法による治療を２ラウンド以上受けている場合に、比較目的で、対象から新たなコントロール試料を採取する必要がないことがある。
【００６１】
ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルは、参照数値に基づくか、健常なコントロール群のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを基準として割り出してよい。
【００６２】
本発明の別の実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルは、健常なコントロール群におけるｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルの中央値として定義する。
【００６３】
健常なコントロール群は、遺伝的背景、習慣及び身体的属性に関する様々な基準であって、患者における同じ基準セットに一致する様々な基準に基づき定義してよい。例えば、いくつかの実施形態では、健常なコントロール群と腸線維症患者は、年齢、性別、出身民族、喫煙習慣、食習慣、肥満度指数（ＢＭＩ）、レクリエーショナルドラッグの使用、医薬の使用、腸線維症に関連する薬物の使用及び／または運動習慣に関して一致している。患者とコントロール群との間で一致させることができるその他の要因としては、臨床的基準（例えば、腸線維症関連の症状の重症度）、代謝、腸線維症患者自身の既往歴、遺伝因子、腸線維症患者の家族の既往歴、環境因子（例えば、汚染物質、毒素、アレルゲン）への暴露、ならびにライフスタイル（例えば、職場及び／または住居が都会、郊外または地方にあること）が挙げられるが、これらに限らない。
【００６４】
いくつかの実施形態では、コントロール群は、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療を受ける患者であって、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与される前の患者である。いくつかの実施形態では、この患者は、治療未経験の患者である。
【００６５】
データ解釈
いくつかの実施形態では、抗ＳＭＡＤ７療法剤の初回投与の前に、腸線維症患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析するとともに、閾値レベルと比較する。本明細書に記載されているように、閾値レベルは、健常なコントロール群または腸線維症患者群のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルに基づき確立してよい。概して、閾値レベルは、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βの正常レベル、例えば、健常なコントロール群のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βのレベルの中央値よりも高くするか、または、コントロール群、例えば、腸線維症患者で構成されるコントロール群のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βのレベルの範囲内に収めてもよい。
【００６６】
抗ＳＭＡＤ７療法による治療に対する対象の応答性は、治療前に、その対象から採取した試料中のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのコントロールレベルを基準として解釈できる。対象から採取した試料中のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの濃度が、コントロール試料よりも低い場合、その対象は、抗ＳＭＡＤ７療法による治療に対して感受性がある（例えば、治療に応答するかまたは応答する可能性が高い）と特定してよい。いくつかの実施形態では、対象が抗ＳＭＡＤ７療法による治療を受けている最中に、試料を採取してよい。別の実施形態では、対象が治療を受けるのを停止した後、例えば、治療の停止から約１日後、約７日（すなわち、約１週間）後、約１４日（すなわち、約２週間）後、約２８日後、約５６日後、約７０日後及び／またはこれを超える日数の経過後に、試料を採取してよい。好ましい実施形態では、抗ＳＭＡＤ７療法による治療を停止してから約１日後に、試料を得てよい。
【００６７】
いくつかの実施形態では、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドのような抗ＳＭＡＤ７療法を受けている患者は、１つ以上の追加の腸線維症療法も受ける。いくつかの実施形態では、抗ＳＭＡＤ７療法と、１つ以上の追加の腸線維症療法を受けている患者は、例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルの低下によって示されるように、抗ＳＭＡＤ７療法に応答する場合、１つ以上の追加の腸線維症療法を徐々に減らすことができる。
【００６８】
あるいは、対象から採取した試料中の循環血液中のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの濃度が、コントロールレベルと比べて変化していないか、または向上している場合、その対象は、抗ＳＭＡＤ７療法による治療に対して耐性がある（例えば、応答しないか、または応答する可能性が低い）と特定してよい。一実施形態では、対象が抗ＳＭＡＤ７療法による治療を受けている最中に、試料を採取してよい。別の実施形態では、対象が治療を受けるのを停止した後、例えば、治療の停止から約１日後、約７日（すなわち、約１週間）後、約１４日（すなわち、約２週間）後、約２８日後、約５６日後、約７０日後及び／またはこれを超える日数の経過後に、試料を採取してよい。好ましい実施形態では、抗ＳＭＡＤ７療法による治療を停止してから約１日後に、試料を得てよい。
【００６９】
いくつかの実施形態では、抗ＳＭＡＤ７療法による治療の過程で、例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルの上昇（例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルの５０％超の上昇）によって示されるように、疾患が悪化した患者に、１つ以上の救済療法（例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βインヒビター及び／または免疫抑制薬のような生物学的薬剤）を投与する。
【００７０】
患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルと、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの閾値レベルとの差は、抗ＳＭＡＤ７療法に対する患者の潜在的な応答性を示している。例えば、患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの閾値レベルよりも高いことによって、患者が、抗ＳＭＡＤ７療法に応答し得ることが示される。ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの閾値レベルは、様々な基準を用いて確立することができる。いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの閾値レベルは、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベル、例えば、コントロール群におけるｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルの中央値を基準として割り出す。コントロール群は、健常／正常な対象（例えば、健常なコントロール群）または腸線維症患者群で構成されていてよい。
【００７１】
例えば、いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの閾値レベルは、正常レベルよりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも５０倍、少なくとも８０倍または少なくとも１００倍高い。別の実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの閾値レベルは、腸線維症患者群におけるｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベル、例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルの中央値に対する５０パーセンタイル値、６０パーセンタイル値、７０パーセンタイル値、８０パーセンタイル値または９０パーセンタイル値のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルである。加えて、いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの閾値レベルは、（例えば、血清中で測定した場合、）少なくとももしくは約１ｐｇ／ｍｌ、少なくとももしくは約２．５ｐｇ／ｍｌ、少なくとももしくは約５ｐｇ／ｍｌ、少なくとももしくは約７．５ｐｇ／ｍｌ、少なくとももしくは約１０ｐｇ／ｍｌ、少なくとももしくは約１２．５ｐｇ／ｍｌ、少なくとももしくは約１５ｐｇ／ｍｌ、少なくとももしくは約１７．５ｐｇ／ｍｌ、少なくとももしくは約２０ｐｇ／ｍｌ、少なくとももしくは約２５ｐｇ／ｍｌ、少なくとももしくは約３０ｐｇ／ｍｌ、少なくとももしくは約３５ｐｇ／ｍｌ、少なくとももしくは約４０．０ｍｇ／Ｌ、または少なくとももしくは約４５．０ｍｇ／Ｌである。
【００７２】
いくつかの実施形態では、コントロール群は、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与された患者からなってよい。いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βの正常レベル、またはｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βの閾値レベルは、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与前の患者で観察されるｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのベースラインレベルであってよい。そして、初回用量または次の用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを患者に投与した後、患者において、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを経時的にモニタリングできる。ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを１回以上投与した後の患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを、その患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのベースラインレベルと比較できる。患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、その患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのベースラインレベルと比べて上昇しているか、低下しているか、または一定のままであるかに応じて、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与レジメンを調整できる。
【００７３】
抗ＳＭＡＤ７療法
本開示は部分的には、ＳＭＡＤ７インヒビターを含む抗ＳＭＡＤ７療法剤によって、患者の腸線維症を治療、予防または管理する方法に対するものである。ＳＭＡＤ７インヒビターとしては、例えば、ＳＭＡＤ７に結合するか、ＳＭＡＤ７を分解するか、または別段の形でＳＭＡＤ７の安定性、産生もしくは機能を妨げる小結合分子、例えば、天然化合物、合成化合物、抗体、アプタマー、イントラマー、ＲＮＡｉ（二本鎖ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ）及びＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを挙げてよい。ＳＭＡＤ７インヒビターは、ＳＭＡＤ７の活性、結合パートナーまたは基質を妨げることによって、ＳＭＡＤ７の機能を阻害するトランケート型ＳＭＡＤ７分子及び／または変異ＳＭＡＤ７分子も含んでよい。
【００７４】
本開示は部分的には、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによって、患者の腸線維症を治療、予防または管理する方法に対するものでもある。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的タンパク質（例えばＳＭＡＤ７）をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）と相補的な短い合成オリゴヌクレオチド配列である。アンチセンスオリゴヌクレオチド配列は、ｍＲＮＡにハイブリダイズして、ＲＮａｓｅ  Ｈのようなユビキタスな触媒酵素の活性化を導くことのできる二本鎖ハイブリッドを作り、このＲＮａｓｅ  Ｈが、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド鎖を分解するので、タンパク質の翻訳が阻害される。
【００７５】
想定されているＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＳＭＡＤ７  ｍＲＮＡのいずれかの領域を標的としてよい。特定の実施形態では、抗ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトＳＭＡＤ７  ｍＲＮＡ（例えば配列番号１、ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ＮＭ＿００５９０４．３）の４０３位の部位（すなわち、４０３位のヌクレオチド）、２３３位の部位（すなわち、２３３位のヌクレオチド）、２９４位の部位（すなわち、２９４位のヌクレオチド）、２９５位の部位（すなわち、２９５位のヌクレオチド）、２９６位の部位（すなわち、２９６位のヌクレオチド）、２９８位の部位（すなわち、２９８位のヌクレオチド）、２９９位の部位（すなわち、２９９位のヌクレオチド）及び／または５３３位の部位（すなわち、５３３位のヌクレオチド）を標的としてよい。
【００７６】
特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５’−ＧＴＣＧＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＣＧＣＡＧＣ−３’（配列番号２）という抗ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドに由来してよい。
【００７７】
本発明では、ＳＭＡＤ７を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＣｐＧ対のシトシン残基が５’−メチルシトシン（Ｍｅ−ｄＣと略す）によって置き換えられている混合骨格を含んでよいことが想定されている。アンチセンスオリゴヌクレオチドの５’及び／または３’末端に、メチルホスホネート結合も配置してよい（ＭｅＰと略す）。
【００７８】
ＳＭＡＤ７を標的とする例示的なアンチセンスオリゴヌクレオチド療法剤としては、５’−ＧＴＸＹＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＸＹＣＡＧ−３’（配列番号５）であって、この配列中、Ｘが、シトシンと、５−メチルシトシンまたは２’−Ｏ−メチルシトシンヌクレオシドからなる群から選択した含窒素塩基を含むヌクレオチドであり、Ｙが、グアニンと、５−メチルグアニンまたは２’−Ｏ−メチルグアニンヌクレオシドからなる群から選択した含窒素塩基を含むヌクレオチドであり、ヌクレオチドＸまたはＹの少なくとも１つが、メチル化含窒素塩基を含むことを条件とするものと、
【００７９】
５’−ＧＴＸＧＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＸＧＣＡＧ−３’（配列番号３）であって、この配列中、Ｘが、５−メチル２’−デオキシシチジンであるもの（例えば、米国特許第７，８０７，８１８号及び同第６，１５９，６９７号（それぞれ、参照により、本明細書に援用される）を参照されたい）と、
【００８０】
５’−ＧＴＸＧＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＸＧＣＡＧＣ−３’（配列番号４）であって、この配列中、Ｘが、５−メチル２’−デオキシシチジンであるものと、
【００８１】
米国特許第８，６４８，１８６号と国際公開第２０１０／０５４８２６号（それぞれ、参照により、本明細書に援用される）に記載されているアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられるが、これらに限らない。
【００８２】
想定されているアンチセンスオリゴヌクレオチドとしては、配列番号４、すなわち５’−ＧＴＸＧＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＸＧＣＡＧＣ−３’（Ｘは、５−メチル−２’−デオキシシチジンを表している）を含むものが挙げられる。いくつかの実施形態では、想定されているアンチセンスオリゴヌクレオチドのインターヌクレオチド結合の少なくとも１つは、Ｏ，Ｏ結合ホスホロチオエートであり、例えば、配列番号４の２０個のインターヌクレオチド結合はそれぞれ、Ｏ，Ｏ結合ホスホロチオエートであってよい。特定的な実施形態では、想定されているアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号４の遊離酸形態、塩形態または対イオンを伴わない陰イオン形態を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド（本明細書では、「Ｍｏｎｇｅｒｓｅｎ」という）であり、２０個のインターヌクレオチド結合はそれぞれ、Ｏ，Ｏ結合ホスホロチオエート結合であり、図９に示されている。いくつかの実施形態では、想定されている組成物であって、本明細書に開示されている組成物は、製薬学的に許容可能な塩、例えば、配列番号４のアンチセンスオリゴヌクレオチドのナトリウム塩であって、任意に応じて１〜２０個のＯ，Ｏ結合ホスホロチオエートのインターヌクレオチド結合を含んでよい塩を含んでよい。アンチセンスオリゴヌクレオチドの想定されている塩としては、完全中和された塩が挙げられ、例えば、各ホスホロチオエート結合は、Ｎａ＋のようなイオンと結合している。いくつかの実施形態では、配列番号４のホスホロチオエート骨格を完全プロトン化または部分プロトン化して、配列番号４の酸性形態を形成できる。いくつかの実施形態では、配列番号４の想定されている塩としては、完全中和されている塩が挙げられ、例えば、各ホスホロチオエート結合は、Ｎａ＋のようなイオンと結合している。いくつかの実施形態では、配列番号４の想定されている塩は、部分中和されているに過ぎず、例えば、一部のホスホロチオエート結合が、イオンと結合している（例えば、９９％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、３％未満または１％未満が中和されている）。オリゴヌクレオチドは、天然の核酸塩基と、糖と、共有インターヌクレオチド（骨格）結合と、非天然の部分を含んでよい。様々な実施形態において、本明細書に記載されているアンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、配列番号２、配列番号３及び配列番号４のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、デオキシシチジン及び／または５−メチル２’−デオキシシチジン（５−メチル−２’−デオキシシチジン５’−モノホスフェートと、５−メチル−２’−デオキシシチジン５’モノホスホロチオエートが挙げられるが、これらに限らない）を含むヌクレオチドを含んでよい。
【００８３】
想定されているＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドとしては、ＳＭＡＤ７に対して作用するとともに、経口投与してよいオリゴヌクレオチドが挙げられる。開示されている療法剤は、腸線維症の対象に経口投与するときには、有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを患者の腸系に送達でき、例えば、有効量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを患者の回腸末端及び／または右結腸に送達できる。
【００８４】
本発明のいくつかの実施形態では、組成物によって、アンチセンス化合物を、例えば患者の回腸末端と右結腸に送達できるように、抗ＳＭＡＤ７療法剤（すなわち、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む療法剤）、例えば、腸溶性コーティング、例えば胃耐性コーティングを含む錠剤が、アンチセンスオリゴヌクレオチドの経口送達に適することがある。例えば、このような投与によって、局所作用をもたらすことができ、実質的に、アンチセンス化合物が直接、対象の腸の罹患部分に局所適用される。このような投与によって、いくつかの実施形態では、実質的に、アンチセンス化合物の、望ましくない全身性吸収を回避できる。
【００８５】
例えば、経口投与用の錠剤は、開示されているアンチセンス化合物と、製薬学的に許容可能な賦形剤とを含む顆粒を含んでよい（例えば、少なくとも部分的に顆粒から形成されている）。このような錠剤は、腸溶性コーティングでコーティングされていてよい。想定されている錠剤は、充填剤、結合剤、崩壊剤及び／または潤沢剤、ならびに着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、矯味剤（ウィンターグリーン、オレンジ、キシリトール、ソルビトール、フルクトース及びマルトデキストリンなど）、矯臭剤、保存剤及び／または抗酸化剤のような製薬学的に許容可能な賦形剤を含んでよい。
【００８６】
いくつかの実施形態では、想定されている医薬製剤は、想定されているアンチセンス化合物または製薬学的に許容可能な塩と、製薬学的に許容可能な充填剤とを含む顆粒内相を含む。例えば、Ｍｏｎｇｅｒｓｅｎと充填剤を任意の他の賦形剤と併せてブレンドして、顆粒に形成してよい。いくつかの実施形態では、顆粒内相は、湿式造粒を用いて形成してよく、例えば、アンチセンス化合物と充填剤のブレンド物に液体（例えば水）を加えてから、その組み合わせたものを乾燥、粉砕及び／または篩分して、顆粒を作製する。当業者であれば、他のプロセスを用いて、顆粒内相を得てよいことが分かるであろう。
【００８７】
いくつかの実施形態では、想定されている製剤は、顆粒外相を含んでよく、この外相は、１つ以上の製薬学的に許容可能な賦形剤を含んでよいとともに、顆粒内相と合わさって、開示されている製剤を形成してよい。
【００８８】
抗ＳＭＡＤ７療法製剤は、充填剤を含む顆粒内相を含んでよい。例示的な充填剤としては、セルロース、ゼラチン、カルシウムホスフェート、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、ソルビトール、微結晶性セルロース、ペクチン、ポリアクリレート、デキストロース、セルロースアセテート、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、部分アルファ化デンプン、カルシウムカーボネート、及びこれらを組み合わせたものを含むその他の充填剤が挙げられるが、これらに限らない。
【００８９】
いくつかの実施形態では、抗ＳＭＡＤ７療法製剤は、概して、医薬製剤の成分をつなぎ合わせる機能を果たすことのできる結合剤を含む顆粒内相及び／または顆粒外相を含んでよい。例示的な結合剤としては、デンプン、糖、セルロースまたは変性セルロース（ヒドロキシプロピルセルロースなど）、ラクトース、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、糖アルコール及びこれらを組み合わせたものを含むその他の結合剤が挙げられるが、これらに限らない。
【００９０】
例えば顆粒内相及び／または顆粒外相を含む想定されている抗ＳＭＡＤ７療法製剤は、崩壊剤（以下に限らないが、デンプン、セルロース、架橋ポリビニルピロリドン、ナトリウムデンプングリコレート、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、アルギネート、コーンスターチ、クロスカルメロースナトリウム、架橋カルボキシメチルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、アカシア及びこれらを組みわせたものを含むその他の崩壊剤など）を含んでよい。例えば、顆粒内相及び／または顆粒外相が、崩壊剤を含んでよい。
【００９１】
いくつかの実施形態では、想定されている抗ＳＭＡＤ７療法製剤は、開示されているアンチセンス化合物と、マンニトール、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びナトリウムデンプングリコレート、またはこれらを組み合わせたものから選択した賦形剤とを含む顆粒内相と、微結晶性セルロース、ナトリウムデンプングリコレート及びマグネシウムステアレートのうちの１つ以上、またはこれらの混合物を含む顆粒外相とを含む。
【００９２】
いくつかの実施形態では、想定されている抗ＳＭＡＤ７療法製剤は、潤沢剤を含んでよく、例えば、顆粒外相が、潤沢剤を含んでよい。潤沢剤としては、タルク、シリカ、脂肪、ステアリン、マグネシウムステアレート、カルシウムホスフェート、二酸化ケイ素、カルシウムシリケート、カルシウムホスフェート、コロイド状二酸化ケイ素、金属ステアレート、硬化植物油、コーンスターチ、ナトリウムベンゾエート、ポリエチレングリコール、ナトリウムアセテート、カルシウムステアレート、ナトリウムラウリルサルフェート、塩化ナトリウム、マグネシウムラウリルサルフェート、タルク及びステアリン酸が挙げられるが、これらに限らない。
【００９３】
いくつかの実施形態では、本発明の医薬製剤は、腸溶性コーティングを含む。概して、腸溶性コーティングは、経口薬に対して、消化管沿いでその経口薬が吸収される位置を制御するバリアを作る。腸溶性コーティングは、ｐＨによって異なる速度で崩壊するポリマーを含んでよい。腸溶性コーティングとしては、例えば、セルロースアセテートフタレート、メチルアクリレート−メタクリル酸コポリマー、セルロースアセテートサクシネート、ヒドロキシルプロピルメチルセルロースフタレート、メチルメタクリレート−メタクリル酸コポリマー、エチルアクリレート−メタクリル酸コポリマー、Ｃ型メタクリル酸コポリマー、ポリビニルアセテート−フタレート及びセルロースアセテートフタレートを挙げてよい。
【００９４】
いくつかの実施形態では、腸溶性コーティングは、メタクリル酸、メタクリル酸／アクリル酸エステルまたはそれらの誘導体ベースの陰イオン性、陽イオン性または中性コポリマーを含む。いくつかの実施形態では、腸溶性コーティングは、エチルアクリレート−メタクリル酸コポリマーを含む。市販の腸溶性コーティングとしては、Ｏｐａｄｒｙ（登録商標）ＡＭＢ、Ａｃｒｙｌ−ＥＺＥ（登録商標）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）グレードが挙げられる。いくつかの実施形態では、腸溶性コーティングは、想定されている錠剤の約５重量％〜約１０重量％、約５重量％〜約２０重量％、約８〜約１５重量％、約８重量％〜約１８重量％、約１０重量％〜約１２重量％または約１２重量％〜約１６重量％を占める。
【００９５】
例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはその製薬学的に許容可能な塩（例えばＭｏｎｇｅｒｓｅｎ）を約０．５重量％〜約７０重量％、例えば約０．５重量％〜約１０重量％もしくは約１重量％〜約２０重量％含むか、またはアンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはその製薬学的に許容可能な塩から本質的になる錠剤の形態の抗ＳＭＡＤ７療法剤を提供する。このような錠剤は、例えば、マンニトールを約０．５重量％〜約６０重量％、例えば、マンニトールを約３０重量％〜約５０重量％、例えば、マンニトールを約４０重量％、及び／または微結晶性セルロースを約２０重量％〜約４０重量％、もしくは微結晶性セルロースを約１０重量％〜約３０重量％含んでよい。例えば、想定されている錠剤は、Ｍｏｎｇｅｒｓｅｎを約３０重量％〜約６０重量％、例えば、約４５重量％〜約６５重量％、あるいは、約５〜約１０重量％と、マンニトールを約３０重量％〜約５０重量％、あるいは、約５重量％〜約１５重量％と、微結晶性セルロースを約５重量％〜約１５重量％と、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを約０重量％〜約４重量％または約１重量％〜約７重量％と、ナトリウムデンプングリコレートを約０重量％〜約４重量％、例えば、約２重量％〜約４重量％含む顆粒内相を含んでよい。
【００９６】
例示的な抗ＳＭＡＤ７療法製剤としては、約１０ｍｇ〜約５００ｍｇのＭｏｎｇｅｒｓｅｎを含むか、またはこれから本質的になる剤形が挙げられ、例えば、本発明では、Ｍｏｎｇｅｒｓｅｎを約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、約２００ｍｇまたは約２５０ｍｇ含む錠剤が想定されている。一実施形態では、抗ＳＭＡＤ７療法剤は、配列番号４によって表されるアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその製薬学的に許容可能な塩を約０．５重量％〜約１０重量％と、マンニトールを約３０重量％〜約５０重量％と、微結晶性セルロースを約１０重量％〜約３０重量％含む経口用錠剤であってよい。
【００９７】
本発明の例示的な実施形態では、Ｍｏｎｇｅｒｓｅｎ（またはその塩）を約５０重量％と、マンニトールを約１１．５重量％と、微結晶性セルロースを約１０重量％と、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを約３重量％と、ナトリウムデンプングリコレートを約２．５重量％含んでよい顆粒内相と、微結晶性セルロースを約２０重量％と、ナトリウムデンプングリコレートを約２．５重量％と、マグネシウムステアレートを約０．５重量％含んでよい顆粒外相とを含む経口投与用の製薬学的に許容可能な錠剤を提供する。この錠剤は、腸溶性コーティングも含んでよい。
【００９８】
別の例示的な実施形態では、Ｍｏｎｇｅｒｓｅｎ（例えば、そのインターヌクレオチド結合はそれぞれ、Ｏ，Ｏ結合ホスホロチオエート及び／またはその塩、例えばナトリウム塩である）を約５重量％〜約１０重量％、例えば約８重量％と、マンニトールを約４０重量％と、微結晶性セルロースを約８重量％と、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを約５重量％と、ナトリウムデンプングリコレートを約２重量％含んでも、これらから本質的になってもよい顆粒内相と、微結晶性セルロースを約１７重量％と、ナトリウムデンプングリコレートを約２重量％と、マグネシウムステアレートを約０．４重量％含んでよい顆粒外相とを含むか、またはこれらから本質的になる製薬学的に許容可能な経口投与用錠剤を提供する。
【００９９】
想定されている錠剤は、腸溶性コーティングも含んでよく、例えば、開示されている錠剤は、腸溶性コーティング、例えばエチルアクリレート−メタクリル酸コポリマー（例えばＡｃｒｙｌＥＺＥ（登録商標））を約１３重量％、約１４重量％、約１５重量％、約１６重量％または約１７重量％含んでよい。
【０１００】
例えば、抗ＳＭＡＤ７療法は、顆粒内相と顆粒外相とを含む製薬学的に許容可能な経口用錠剤の形態であってよく、例えば、その顆粒内相は、配列番号４によって表されるアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはその製薬学的に許容可能な塩を約５重量％〜約１０重量％（例えば約８重量％）と、マンニトールを約４０重量％と、微結晶性セルロースを約８重量％と、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを約５重量％と、ナトリウムデンプングリコレートを約２重量％含み、例えば、その顆粒外相は、微結晶性セルロースを約１７重量％と、ナトリウムデンプングリコレートを約２重量％と、マグネシウムステアレートを約０．４重量％含み、その錠剤は、腸溶性コーティングをさらに含んでよい。
【０１０１】
想定されている製剤、例えば錠剤は、いくつかの実施形態では、患者に経口投与すると、その患者のオリゴヌクレオチドの血漿中濃度を最小限にすることができる。別の実施形態では、想定されている製剤は、患者に経口投与すると、患者の回腸末端及び／または右結腸に、例えば、患者の腸の罹患部位または病変部位に局所送達される。経口投与に適する製剤は、それぞれが活性成分として本発明の組成物を所定量含むカプセル剤、カシェ剤、丸剤、錠剤、ロゼンジ剤（例えば、スクロース及びアカシアもしくはトラガカントのような香味基剤を用いたもの）、散剤、顆粒剤、または水性もしくは非水性液体中の溶液剤もしくは懸濁剤、または水中油型乳濁剤もしくは油中水型乳濁剤、またはエリキシル剤もしくはシロップ剤、または香錠（ゼラチン及びグリセリンもしくはスクロース及びアカシアのような不活性基剤を用いたもの）の形態であってよい。本発明の組成物は、ボーラス剤、舐剤またはパスタ剤として投与してもよい。
【０１０２】
炎症性腸疾患
「炎症性腸疾患」または「ＩＢＤ」とは、本明細書で使用する場合、クローン病（ＣＤ）、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球浸潤大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空回腸炎、左側大腸炎、全大腸炎、回結腸炎、回腸炎及び非定型的大腸炎を含む数多くの慢性炎症性疾患を指してよい。ＣＤとＵＣは、２つの最も一般的な形態のＩＢＤである。ＩＢＤは、消化器系の自己免疫疾患である。ＣＤは、回腸末端を含む胃腸管のいずれかの部分に局在することがあるとともに、胃腸管のすべてのタイプの細胞に影響を及ぼすことがある。ＵＣは、結腸と直腸に局在するとともに、粘膜の細胞のみに影響を及ぼす。
【０１０３】
腸線維症
腸線維症は一般に、ＩＢＤが原因の慢性炎症のような炎症に対する腸組織の反応に起因する。ＩＢＤでは、レベルの向上したＳＭＡＤ７が、ＴＧＦ−β経路の活性化とＳｍａｄ２／３のリン酸化を介して媒介される抗炎症性遺伝子の発現をブロックする（図１）。増大したＴＧＦ−βシグナル伝達に暴露された筋線維芽細胞は、コラーゲンの産生量を増加させる（図２）。クローン病の場合には、持続的炎症と慢性炎症が線維化プロセスを促進し、その結果、小腸と結腸の狭窄を含む狭窄が形成される。
【０１０４】
腸線維症は、造影エコー法のような数多くの画像化技法のうちのいずれかによって特定できる。例えば、Ｑｕａｉａ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｂｏｗｅｌ  ｗａｌｌ  ｃｏｎｔｒａｓｔ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ａｆｔｅｒ  ｓｕｌｆｕｒ  ｈｅｘａｆｌｕｏｒｉｄｅ−ｆｉｌｌｅｄ  ｍｉｃｒｏｂｕｂｂｌｅ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｆｒｏｍ  ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｓｔｒｉｃｔｕｒｅｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ  Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３８，１３２４−１３３２（２０１２）、Ｎｙｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｃｏｎｔｒａｓｔ−ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｎｄ  ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｌｅｓｉｏｎｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ  Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３９，１１９７−１２０６（２０１３）、Ｓｔｉｄｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ  ｅｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｔｓ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １４１，８１９−８２６（２０１１）を参照されたい。磁化移動ＭＲＩのようなＭＲＩ技法も用いることができる。例えば、Ｍａｃｃｉｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｖａｌｕｅ  ｏｆ  Ｔ２−ｗｅｉｇｈｔｅｄ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｗａｌｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｂｄｏｍ．Ｉｍａｇｉｎｇ  ３７，９４４−９５７（２０１２）、Ａｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｍａｇｎｅｔｉｚａｔｉｏｎ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｈｅｌｐｓ  ｄｅｔｅｃｔ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ａｎ  ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ｃｒｏｈｎ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ  ２５９，１２７−１３５（２０１１）、Ｐａｚａｈｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｍａｇｎｅｔｉｚａｔｉｏｎ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｂｏｗｅｌ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｉｎｉｔｉａｌ  ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ．Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｍａｔ．Ｐｈｙｓ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２６，２９１−３０１（２０１３）を参照されたい。
【０１０５】
治療及び管理
本明細書に記載されているような「患者」とは、腸線維症に罹患しているか、または腸線維症と診断されたいずれかの動物（哺乳動物、霊長類動物及びヒトが挙げられるが、これらに限らない）を指す。特定の実施形態では、対象は、ヒト以外の哺乳動物（例えば、ネコ、イヌまたはウマなど）であってよい。好ましい実施形態では、対象は、ヒトの対象である。
【０１０６】
「治療する」、「治療」、「治療すること」などの用語は、本明細書では、所望の薬理学的な作用及び／または生理学的な作用を得ることを概ね意味する目的で使用する。この作用は、疾患及び／または疾患に起因する有害作用を部分的または完全に治癒するという点での治療作用であってよい。「治療」という用語は、本明細書で使用する場合、哺乳動物、特にヒトの疾患のあらゆる治療を網羅し、（ａ）疾患を阻害すること、すなわち、疾患の重症度もしくは範囲が増大するのを防ぐこと、（ｂ）疾患を軽減すること、すなわち、疾患を部分的もしくは完全に改善させること、または（ｃ）疾患の再発を防ぐこと、すなわち、過去に、疾患の症状に対する治療もしくは疾患の治療が奏功した後に、疾患が活性状態に戻るのを防ぐことを含む。
【０１０７】
「管理する」、「管理」、「管理すること」などの用語は、本明細書では、疾患の症状の重症度もしくは発現症状、または疾患を治療する手段を制御することを概ね意味する目的で使用する。概して、所望の薬理学的な作用及び／または生理学的な作用を得る目的で、管理を用いる。この作用は、疾患及び／もしくは疾患に起因する有害作用を部分的もしくは完全に治癒するか、または疾患の特定の症状もしくは発現症状が、患者において現れたり、再発したりしないようにするか、患者において、望ましくないレベルもしくは耐えられないレベルまで上昇しないようにするという点での治療作用であってよい。「管理」という用語は、本明細書で使用する場合、哺乳動物、特にヒトの疾患のあらゆる管理を網羅し、（ａ）疾患を阻害すること、すなわち、疾患の重症度もしくは範囲が増大するのを防ぐこと、（ｂ）疾患を軽減すること、すなわち、疾患を部分的もしくは完全に改善させること、または（ｃ）疾患の再発を防ぐこと、すなわち、過去に、疾患の症状に対する治療もしくは疾患の治療が奏功した後に、疾患が活性状態に戻るのを防ぐことを含む。本明細書で使用する場合、「管理」は、疾患に対する特定の治療剤、例えばＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与との関連で用いてもよい。
【０１０８】
本発明のいくつかの実施形態では、腸線維症患者には、初回用量の抗ＳＭＡＤ７療法剤、例えば抗ＳＭＡＤ７オリゴヌクレオチド（例えばＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＳＭＡＤ７  ＲＮＡｉまたはＳＭＡＤ７  ｍｉＲＮＡ）を投与することになる。本明細書で使用する場合、「初回用量」とは、一連の投与において、腸線維症患者に投与する抗ＳＭＡＤ７療法剤の１回用量を指す。一連の投与には、１回以上の投与が含まれていてよい。例えば、一連の投与には、抗ＳＭＡＤ７療法剤の１回投与、または抗ＳＭＡＤ７療法剤の２回以上の投与が含まれていてよい。初回用量は、患者にそれ以降のいずれかの用量を投与する前に、患者に投与する抗ＳＭＡＤ７療法剤の用量であってよい。例えば、初回用量は、治療未経験患者に投与する抗ＳＭＡＤ７療法剤の１回目の用量であってよいが、これに限らない。初回用量は、抗ＳＭＡＤ７療法のいずれかの治療サイクルの１回目の用量であってもよい。例えば、初回用量は、１回目の治療サイクル、２回目の治療サイクル、またはそれ以降のいずれかの治療サイクルの１回目の用量であってよい。あるいは、「初回用量」は、患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−β及び／または別の１つのバイオマーカーもしくは複数のバイオマーカーのレベルを解析した後の患者に投与する１回目の用量であっても、患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−β及び／または別の１つのバイオマーカーもしくは複数のバイオマーカーのレベルを割り出す前の直近の投与量であってもよい。
【０１０９】
本発明のいくつかの実施形態では、腸線維症患者には、次の用量の抗ＳＭＡＤ７療法、例えば抗ＳＭＡＤ７オリゴヌクレオチド（例えば、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＳＭＡＤ７  ＲＮＡｉまたはＳＭＡＤ７  ｍｉＲＮＡ）を投与することになる。本明細書で使用する場合、「次の用量」とは、以前の用量、例えば初回用量を投与した後に、腸線維症患者に投与する抗ＳＭＡＤ７療法剤の用量を指す。したがって、次の用量は、２回以上の投与を含む一連の投与において、腸線維症患者に投与してよい。さらに、場合によっては、次の用量の量は、初回用量または以前の用量を基準として調整して、次の用量が、以前の用量よりも多くなるか、以前の用量と等しくなるか、または以前の用量よりも少なくなるようにしてよい。次の用量の量の調整は、腸線維症患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−β及び／または別の１つのバイオマーカーもしくは複数のバイオマーカーのレベルまたはそのレベルの変化、例えば、以前の用量、例えば初回用量の前もしくは後に解析した腸線維症患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βのレベル、または以前の用量、例えば初回用量の前と後における腸線維症患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βのレベルの変化に基づいてよい。次の用量は、腸線維症患者に１回目の用量、例えば初回用量の抗ＳＭＡＤ７療法剤を投与した後に腸線維症患者に投与する用量であってよい。次の用量は、腸線維症患者に以前の用量の抗ＳＭＡＤ７療法剤を投与した後に投与する用量、例えば、同じ治療ラウンドまたは異なる治療ラウンド、例えば以前の治療ラウンドにおける以前の用量の後に投与する用量であってよい。次の用量は、いずれかの以前の用量、例えば、その次の用量の直前である以前の用量、またはその次の用量を投与する前に投与した１回以上の用量の前の以前の用量に対する次の用量であってよい。
【０１１０】
上記の方法を用いて治療する患者では、線維症が検出可能であってもなくてもよい。いくつかの実施形態では、患者は、ＳＭＡＤ７の特異的インヒビターの投与後、例えば、１日後、２日後、１週間後、１カ月後または６カ月以上後に、その患者に存在する線維症の量が、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％またはさらには５０％以上減少していてもよい。ＳＭＡＤ７のインヒビターの投与は、例えば、少なくとも１日に１回ベースであってよい。ＳＭＡＤ７のインヒビターの投与により、患者の線維症の臨床発現症状は、ＳＭＡＤ７のインヒビターを投与しない患者よりも、少なくとも例えば６カ月、１年、１８カ月またはさらには２年以上遅延してよい。
【０１１１】
腸線維症のリスクのある患者としては、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患またはクローン病の患者を挙げてよい。リスクのある患者としては、クローン病、大腸炎、広範囲及び／もしくは重篤な結腸疾患の診断時に低年齢である患者、原発性硬化性胆管炎を持つ患者、ならびに／またはがんの家族歴を持つ患者も挙げてよい。
【０１１２】
本明細書で使用する場合、「ＳＭＡＤ７」（ＣＲＣＳ３、ＦＬＪ１６４８２、ＭＡＤＨ７、ＭＡＤＨ８、ＭＡＤ（ｍｏｔｈｅｒｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｄｅｃａｐｅｎｔａｐｌｅｇｉｃ，Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）ｈｏｍｏｌｏｇ７、ＭＡＤ  ｈｏｍｏｌｏｇ８、ＳＭＡＤ、ｍｏｔｈｅｒｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ＤＰＰ  ｈｏｍｏｌｏｇ７、ｍｏｔｈｅｒｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ＤＰＰ  ｈｏｍｏｌｏｇ８としても知られている）とは、Ｅｎｔｒｅｚ  ＧｅｎｅＩＤ番号４０９２によって特定される遺伝子及びそのアレルバリアントによってコードされるヒトタンパク質またはｍＲＮＡ転写物のいずれかを意味する。
【０１１３】
本明細書で使用する場合、「ＴＧＦ−β」（ＣＥＤ、ＬＡＰ、ＤＰＤ１、ＴＧＦＢ及びＴＧＦベータとしても知られている）とは、Ｅｎｔｒｅｚ  ＧｅｎｅＩＤ番号７０４０によって特性される遺伝子及びそのアレルバリアントによってコードされるヒトタンパク質またはｍＲＮＡ転写物のいずれかを意味する。
【０１１４】
本明細書で使用する場合、「α−ＳＭＡ」（ＡＣＴＡ、ＡＳＭＡ、ＣＦＴＤ、ＭＰＦＤ、ＮＥＭ１、ＮＥＭ２、ＮＥＭ３、ＣＦＴＤ１及びＣＦＴＤＭとしても知られている）とは、Ｅｎｔｒｅｚ  ＧｅｎｅＩＤ番号５８によって特定される遺伝子及びそのアレルバリアントによってコードされるヒトタンパク質またはｍＲＮＡ転写物のいずれかを意味する。
【０１１５】
本明細書で使用する場合、「ＳＭＡＤ３」（ＬＤＳ３、ＬＤＳ１Ｃ、ＭＡＤＨ３、ＪＶ１５−２、ＨＳＰＣ１９３及びＨｓＴ１７４３６としても知られている）とは、Ｅｎｔｒｅｚ  ＧｅｎｅＩＤ番号４０８８によって特定される遺伝子及びそのアレルバリアントによってコードされるヒトタンパク質またはｍＲＮＡ転写物のいずれかを意味する。
【０１１６】
本明細書で使用する場合、「抗ＳＭＡＤ７オリゴヌクレオチド」とは、ＳＭＡＤ７のコード領域内の核酸配列と相補的である核酸配列を含むオリゴヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態では、抗ＳＭＡＤ７オリゴヌクレオチドは、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＳＭＡＤ７  ＲＮＡｉまたはＳＭＡＤ７  ｍｉＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、抗ＳＭＡＤ７オリゴヌクレオチドが細胞（例えば、ＰＢＭＣ、ｐＤＣまたはＢ細胞のような免疫細胞）に導入されると、抗ＳＭＡＤ７オリゴヌクレオチドは、相補的な核酸配列を含む遺伝子の発現を減少させることができる。いくつかの実施形態では、抗ＳＭＡＤ７オリゴヌクレオチドは、上記の遺伝子から転写されるｍＲＮＡの発現を減少させることができる。いくつかの実施形態では、抗ＳＭＡＤ７オリゴヌクレオチドは、上記の遺伝子によってコードされるタンパク質の発現を減少させることができる。いくつかの実施形態では、抗ＳＭＡＤ７オリゴヌクレオチドは、その抗ＳＭＡＤ７オリゴヌクレオチドが導入された細胞から、上記の遺伝子によってコードされるタンパク質が分泌されるのを減少させることができる。
【０１１７】
本明細書で使用する場合、「ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド」は、ＳＭＡＤ７  ｍＲＮＡ、ＳＭＡＤ７  ｃＤＮＡまたはＳＭＡＤ７  ＤＮＡのコード鎖の核酸配列と相補的である核酸配列を含むオリゴヌクレオチドである。
【０１１８】
治療のモニタリング方法
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている方法は、腸線維症患者の治療、病態または病態と関連付けられたバイオマーカーをモニタリングすることを伴うものである。治療のモニタリングは、治療の効能と安全性を評価するとともに、治療を調整する必要性を評価する点で有用な場合がある。治療のモニタリングは、患者に投与しているかまたは患者に投与することになるＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの量を増やすべきか減らすべきかを評価するのにも有用な場合がある。さらに、治療のモニタリングは、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの用量を調整、すなわち増減すべき量または相対的な量を割り出す点で有用な場合がある。
【０１１９】
モニタリング、例えば、腸線維症患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルのモニタリングは、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの前、最中または後に開始してよい。さらに、モニタリングは、初回用量の後にも継続してもよい。例えば、モニタリングは、初回用量の投与後に行ってよい。モニタリングは、次の用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの前、最中または後にも行ってもよい。モニタリングは、連続的または不連続的にして、モニタリングを等間隔で、例えば、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの各用量を患者に投与した後、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの各用量を患者に投与する前、またはＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの各用量を患者に投与する前と後に行うようにしてよい。モニタリングは、１日に複数回（例えば、１日に２回、３回、４回、約５回もしくは約１０回）、１日に１回、１週間に複数回（例えば、１週間に２回、３回、４回、約５回もしくは約１０回）、１週間に１回、１カ月に複数回（例えば、１カ月に２回、３回、４回、約５回もしくは約１０回）、または１カ月に１回行ってよい。本発明の方法では、モニタリングは、投与工程に対して様々な時点で行ってよい。例えば、いくつかの実施形態では、モニタリングは、投与工程の直後、少なくとも１日後、少なくとも３日後、少なくとも５日後、少なくとも１週間後、少なくとも２週間後、少なくとも３週間後、少なくとも１カ月後、少なくとも２カ月後、少なくとも４カ月後または少なくとも６カ月後に行ってよい。いくつかの実施形態では、モニタリングは、投与工程の約１５日後または約２８日後に行う。
【０１２０】
上記のように、本発明は部分的には、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを用いて、腸線維症患者において、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによる管理と治療を評価及び修正できるという発見に基づいている。したがって、本発明の実施形態では、腸線維症患者または腸線維症患者から採取した試料のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを知ったり、割り出したり、解析したり、または比較したりするのが有用である。例えば、いくつかのケースでは、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドのレベルを上昇させるか、低下させるか、またはそのままにするべきかを判断する目的で、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常または異常レベルの閾値を知るのが有用となる。本明細書に記載されている方法では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルは、特定の値、例えば、０．０１ｐｇ／ｍｌ、約０．１ｐｇ／ｍｌ、約１ｐｇ／ｍｌ、約２ｐｇ／ｍｌ、約３ｐｇ／ｍｌ、約４ｐｇ／ｍｌ、約５ｐｇ／ｍｌ、約６ｐｇ／ｍｌ、約７ｐｇ／ｍｌ、約８ｐｇ／ｍｌ、約９ｐｇ／ｍｌ、約１０ｐｇ／ｍｌ、約１１ｐｇ／ｍｌ、約１２ｐｇ／ｍｌ、約１３ｐｇ／ｍｌ、約１４ｐｇ／ｍｌ、約１５ｐｇ／ｍｌ、約１７．５ｐｇ／ｍｌ、約２０ｐｇ／ｍｌ、約２２．５ｐｇ／ｍｌ、約２５ｐｇ／ｍｌ、約３０ｐｇ／ｍｌまたは約３５ｐｇ／ｍｌ、約１２．５ｐｇ／ｍｌ、約１６ｐｇ／ｍｌ、約１７ｐｇ／ｍｌ、約１８ｐｇ／ｍｌ、約１９ｐｇ／ｍｌ、約４０ｐｇ／ｍｌ、約５０ｐｇ／ｍｌ、約６０ｐｇ／ｍｌ、約７０ｐｇ／ｍｌ、約８０ｐｇ／ｍｌ、約９０ｐｇ／ｍｌまたは約１００ｐｇ／ｍｌという値に制限してよい。いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルは、様々な要因、例えば、年齢、性別、出身民族、喫煙習慣、食習慣、肥満度指数（ＢＭＩ）及び／または運動習慣に関して、患者と一致する健常なコントロール群のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルの中央値と比較することによって割り出してよい。
【０１２１】
ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡ、ＴＧＦ−β及び／またはその他の分析対象物のレベルは、患者から試料を採取することによって割り出してよい。本明細書に記載されている方法によれば、試料は、組織試料（例えば腸組織試料）または体液試料（例えば、唾液試料、便または尿試料）であってよい。試料は、患者の組織生検、例えば粘膜組織生検、例えば腸粘膜組織生検から得た試料であることができる。さらに、試料は、血液、血清または血漿試料であってよい。対象の血液試料は、当該技術分野において周知の技法を用いて採取してよい。血液試料としては、末梢血液単核球（ＰＭＢＣ）、ＲＢＣ枯渇全血または血清を挙げてよい。ＰＢＭＣは、様々な密度勾配（例えばフィコール密度勾配）遠心分離手順を用いて、全血試料から分離できる。例えば、全血（例えば抗凝固処理した全血）を分離用媒体の上に重層して、遠心分離する。遠心分離工程が終わると、上から下に向かって、血漿／血小板、ＰＢＭＣ、分離用媒体及び赤血球／顆粒球という層が、目視で観察される。
【０１２２】
治療のモニタリング方法は、その他の要因（その他の分析対象物（例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡ、ＴＧＦ−β、Ｉ〜ＩＩＩ型コラーゲン、ＣＴＧＦ、ＰＤＧＦ、ＩＬ−１３）のレベルと、腸線維症の症状の存在または重症度が挙げられるが、これらに限らない）のモニタリング方法も含んでよい。
【０１２３】
本発明の実施形態のうち、分析対象物（例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−β）のレベルを測定する実施形態では、様々な方法を用いて、その分析対象物を測定してよい。例えば、分析対象物、例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルは、免疫化学法及び／またはヌクレオチド解析によって割り出してよい。免疫化学法によって分析対象物の濃度を割り出す方法としては、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ及び免疫染色法が挙げられるが、これらに限らない。いくつかの実施形態では、免疫化学法によって分析対象物の濃度を割り出す方法は、目的の分析対象物に結合できる抗体、例えば、抗ｐ−ＳＭＡＤ３抗体、抗α−ＳＭＡ抗体または抗ＴＧＦ−β抗体を用いて行う。免疫化学法によって分析対象物の濃度を割り出す方法は、緩衝剤、ブロッキング試薬、非コンジュゲート一次抗体、ならびに抗体の検出を可能にするタグ（蛍光プローブまたは基質特異的酵素など）にコンジュゲートした一次及び／または二次抗体を用いることも伴ってよい。
【０１２４】
ヌクレオチド解析によって分析対象物の濃度を割り出す方法としては、分析対象物のｍＲＮＡ転写物レベルを解析する方法（ノーザンブロッティング及びポリメラーゼ連鎖反応法、例えば定量ポリメラーゼ連鎖反応法など）が挙げられるが、これらに限らない。ヌクレオチド解析は、分析対象物のヌクレオチド配列（例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βのヌクレオチド配列）と結合するオリゴヌクレオチドプローブ、またはポリメラーゼ連鎖反応、例えば定量ポリメラーゼ連鎖反応を介して、分析対象物のヌクレオチド配列を増幅できるオリゴヌクレオチドプライマー対を用いて行ってよい。オリゴヌクレオチドプローブとオリゴヌクレオチドプライマーは、検出可能なタグ（例えば蛍光タグ）に連結してよい。ヌクレオチド解析によって分析対象物の濃度を割り出す際には、実施者は、特定の分析対象物のｍＲＮＡ転写物の試料中濃度を評価してよい。あるいは、ヌクレオチド解析によって分析対象物の濃度を割り出す際には、実施者は、分析対象物のｍＲＮＡ転写物の存在量の測定値に基づき、分析対象物のタンパク質濃度を推定する目的で、特定の分析対象物のｍＲＮＡ転写物の存在量と、特定の分析対象物のタンパク質の存在量との相関関係を明らかにしてよい。
【０１２５】
特許請求する本発明の方法は、インビトロで行ってよい工程を含む。例えば、対象のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを測定する工程は、試料中のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを割り出すことが想定されている。例えば、試料中のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルは、試料に対して、インビトロで免疫化学法またはヌクレオチド解析を行うことによって割り出してよい。あるいは、本発明のいくつかの実施形態では、腸線維症患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βのレベルを割り出して解析するか、または試料中のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βのレベルを割り出して解析する工程は、インビボで行ってよい。
【０１２６】
酵素結合免疫吸着アッセイ
いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−β、及び／またはその他の分析対象物の濃度は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって割り出してよい。具体的には、試料、特に血液試料、例えば血清試料中のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−β、及び／またはその他の分析対象物のレベルをＥＬＩＳＡによって割り出すことができる。分析対象物の濃度をＥＬＩＳＡによってアッセイするには、その分析対象物のタンパク質に対する少なくとも１つの抗体、例えば、少なくとも１つの抗ｐ−ＳＭＡＤ３抗体、抗ＴＧＦ−β抗体もしくは抗α−ＳＭＡ抗体、及び／または少なくとも１つの二次抗体、例えば、少なくとも１つの標識二次抗体が必要になる。いくつかの実施形態では、一次抗体は、例えば蛍光標識で標識されている。特定の実施形態では、一次抗体は標識されておらず、一次抗体の種のアイソタイプと結合できる二次抗体が、例えば、特異的基質と反応することによって、検出可能なシグナルを供給できる蛍光プローブまたは酵素で標識されている。
【０１２７】
ＥＬＩＳＡを行うには、少なくとも１つの捕捉抗体、少なくとも１つの検出抗体、及び／または少なくとも１つの酵素結合抗体もしくは蛍光標識二次抗体が必要になる。例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３のレベルをＥＬＩＳＡによってアッセイするには、捕捉抗体として抗ｐ−ＳＭＡＤ３抗体が、α−ＳＭＡのレベルをＥＬＩＳＡによってアッセイするには、捕捉抗体として抗α−ＳＭＡ抗体が、ＴＧＦ−βのレベルをＥＬＩＳＡによってアッセイするには、捕捉抗体として抗ＴＧＦ−β抗体が必要になることがある。抗ｐ−ＳＭＡＤ３抗体、抗α−ＳＭＡ抗体または抗ＴＧＦ−β抗体は、ポリスチレンマイクロタイタープレートのような固体支持体に固定化する。続いて、試料、例えば血清試料を加えて、その結合抗体と複合体を形成させる。洗浄によって、未結合の血清成分を除去する。検出抗体、例えば、異なる抗ｐ−ＳＭＡＤ３抗体、例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３のタンパク質の部分のうち、捕捉抗体とは異なる部分に結合する抗ｐ−ＳＭＡＤ３抗体、異なる抗α−ＳＭＡ抗体、例えば、α−ＳＭＡのタンパク質の部分のうち、捕捉抗体とは異なる部分に結合する抗α−ＳＭＡ抗体、または異なる抗ＴＧＦ−β抗体、例えば、ＴＧＦ−βのタンパク質の部分のうち、捕捉抗体とは異なる部分に結合する抗ＴＧＦ−β抗体を加えて、捕捉されたｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βに結合させる。検出抗体は、直接または間接的に、例えば、検出抗体を特異的に認識する二次抗体を通じて、検出可能なタグ（酵素など）に連結されている。典型的には、各工程間に、タンパク質の結合したプレートを洗浄バッファー、例えば中性洗剤溶液で洗浄する。典型的なＥＬＩＳＡプロトコールは、１つ以上のブロック工程も含み、この工程は、ウシ血清アルブミンのような非特異的結合タンパク質を用いて、望ましくないことに、タンパク質試薬がプレートに非特異的に結合するのをブロックすることを伴う。最後の洗浄工程後、適切な酵素基質を加えることによって、プレートを現像して、試料中のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのタンパク質の量を示す可視シグナルを生成させる。この基質は、例えば、発色基質または蛍光基質であることができる。ＥＬＩＳＡの方法、試薬及び設備は、当該技術分野において周知であり、市販されている。
【０１２８】
ヌクレオチド解析
いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−β、及び／またはその他の分析対象物のレベルは、「ヌクレオチド解析」を行うことによって割り出してよい。「ヌクレオチド解析」としては、試料、例えば血液試料中の分析対象物のヌクレオチド転写物レベル（例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのｍＲＮＡ転写物レベル）の解析を挙げてよい。分析対象物の転写物レベルは、ノーザンブロット、例えば定量ノーザンブロット、またはポリメラーゼ連鎖反応、例えば定量ポリメラーゼ連鎖反応によって割り出してよい。ノーザンブロットを行うのに必要な試薬としては、オリゴヌクレオチドプローブ、例えば、検出可能な標識に連結したオリゴヌクレオチドプローブが挙げられる。検出可能な標識としては、特異的基質と反応できる蛍光標識または酵素を挙げてよい。ポリメラーゼ連鎖反応を行うのに必要な試薬としては、特定の分析対象物のｍＲＮＡ転写物に特異的に結合して、ポリメラーゼ連鎖反応によって、分析対象物のｍＲＮＡ転写物の数を増幅できるオリゴヌクレオチドプライマーが挙げられる。オリゴヌクレオチドプライマーは、検出可能な標識に連結して、例えば、定量ポリメラーゼ連鎖反応を可能にしてよい。定量ポリメラーゼ連鎖反応を行うのに必要なその他の試薬としては、コントロール転写物のシグナル、例えば、βチューブリン転写物のシグナルを増幅できるプライマーが挙げられるが、これらに限らない。ノーザンブロッティングとポリメラーゼ連鎖反応を行うのに必要なバッファー、試薬（オリゴヌクレオチドプライマーとプローブを含む）、技法及び設備は、容易に入手可能であるとともに、当該技術分野において周知である。
【０１２９】
患者の選択方法
本明細書に記載されている本発明は、部分的には、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド療法に応答する可能性をある程度示す患者を選択することによって、患者を治療、予防または管理する方法を提供する。抗ＳＭＡＤ７療法に応答する可能性は部分的には、腸線維症患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベル、例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βの既存レベル（すなわち、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与する前の患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βのレベル）、または初回用量もしくは１回以上の次の用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの後に割り出したｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βのレベルを割り出すことに基づいている。例えば、本発明のいくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βの絶対的もしくは相対的レベル、またはｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βのレベルの変化を検出または解析した後に、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療またはさらなる治療の対象として、患者を選択することになる。腸線維症患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルは、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βの正常レベル、例えば、適合するコントロール群におけるｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βのレベルの中央値によって定めた場合のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βの正常レベル、またはｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡもしくはＴＧＦ−βの絶対レベルと比較してよい。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、適合するコントロール群におけるｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルの代表値、中央値または平均値よりも１０％超、２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％超または１００％超高い場合に、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療またはさらなる治療の対象として、その患者を選択することになる。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、適合するコントロール群におけるｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルの代表値、中央値または平均値よりも２倍超、３倍超、４倍超、５倍超、６倍超、７倍超、８倍超、９倍超または１０倍超高い場合に、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療またはさらなる治療の対象として、その患者を選択することになる。
【０１３２】
典型的には、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルは、濃度、例えば、試料の体積、例えば、血液または組織の体積当たりのｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのタンパク質、ペプチドまたはＲＮＡの質量に関して測定することになる。したがって、初回治療または継続治療の対象患者の選択は、患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルに関連付けられており、例えば、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの初期レベルが高いことによって、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療に対して応答する可能性を示せるようになっている。さらに、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが高いこと（すなわち、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高いこと）によって、特に１回以上投与後に、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの用量を増やす必要性を示せるとともに、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βが正常レベルであるか、または正常レベルよりも低いことによって、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの用量を減らすか、または用量を変化させない必要性を示すことができる。あるいは、反復投与後に、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βが引き続き正常レベルよりも高いことによって、その患者が治療に応答しないことを示すことができる。
【０１３３】
したがって、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合、患者に、初期用量及び／または次の用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与してよい。いくつかの実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、初回用量の投与前に、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高いことがすでに分かっている。いくつかの実施形態では、初回用量の投与前に、腸線維症患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを割り出すことになる。いくつかの実施形態では、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの後に、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析して、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高いことが分かった場合、その患者に、次の用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、初回用量よりも多い用量または初回用量と等しい用量を投与することになる。あるいは、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析して、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも低いことが分かった場合、その患者に、次の用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば、初回用量以下の用量を投与してよい。
【０１３４】
さらに別の実施形態では、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを腸線維症患者において解析して割り出してよく、続いて、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドをその患者に投与してよい。さらに、いくつかの実施形態では、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの後に、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを割り出してよく、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合に、初回用量以上である次の用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを、その患者に投与してよい。あるいは、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの後に、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを割り出してよく、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも低い場合に、初回用量以下である次の用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを、その患者に投与してよい。
【０１３５】
さらに別の実施形態では、本発明は、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを腸線維症患者において解析して割り出してよく、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合に、初回用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを、その患者に投与してよく、初回投与の後に、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルを解析し、初回用量を投与した後のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、初回用量を投与する前のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルよりも低い場合に、その患者に、初回用量と同じであるか、または初回用量よりも少ない次の用量を投与する方法を提供する。あるいは、初回用量を投与した後に、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、初回用量を投与する前のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルと比べて変わらないか、または上昇している場合に、その患者に、初回用量と同じであるか、もしくは初回用量よりも多い次の用量を投与するか、または治療を終了させる。
【０１３６】
したがって、想定されている発明は、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルと、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与に対する患者の応答性を解析して割り出すことに基づき、複数の治療シナリオを考慮することによって、患者の腸線維症を治療、予防または管理する様々な方法を提供する。
【０１３７】
例えば、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与後に、患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高い場合には、同じ用量または増やした用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによって、治療を継続することができる。
【０１３８】
ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与後に、患者のｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも低い場合には、同じ用量または減らした用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドによって、治療を継続することができる。
【０１３９】
初回用量及び１回以上の次の用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの後に、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが、引き続き、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βの正常レベルよりも高いかまたは低い場合に、治療を終了させてよい。例えば、患者が、治療に応答しないか、または患者に、最大耐用量を投与したことを理由に、治療を終了させてよい。
【０１４０】
場合によっては、ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを１回以上投与した後の患者において、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが低下した場合には、それによって、患者が治療に応答することを示すことができる。これらの患者では、次の用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与してよいが、以前の用量（複数可）と同じ用量または以前の用量（複数可）よりも少ない用量である。
【０１４１】
場合によっては、初回用量または１回以上の次の用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの後に、ｐ−ＳＭＡＤ３、α−ＳＭＡまたはＴＧＦ−βのレベルが安定しているか、または上昇した場合、これによって、患者が治療に応答しないことを示すことができる。これらの患者では、次の用量のＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与してよいが、以前の用量（複数可）よりも多い用量である。あるいは、例えば、用量が最大耐用量に近づいている場合には、治療を中止できる。
【実施例】
【０１４２】
以下の実施例によって、本発明についてさらに例示する。実施例は、例示目的で示されているに過ぎず、いかなる意味においても、本発明の範囲または内容を限定するものと解釈すべきではない。
【０１４３】
実施例１：腸線維症に関する調査
慢性大腸炎におけるＳｍａｄ７の役割と、腸線維症の発現を割り出すために、調査を行った。トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）を投与することによって、腸線維症と慢性大腸炎をＢａｌｂ／ｃマウスにおいて誘導した（図３）。この調査は、群１（Ｈ２Ｏ自由摂取）、群２（３５％ＥｔＯｈ中のＴＮＢＳ）、群３（３５％ＥｔＯｈ中のＴＮＢＳ＋ＳＭＡＤ７センスオリゴヌクレオチド）及び群４（３５％ＥｔＯｈ中のＴＮＢＳ＋ＳＭＡＤ７アンチセンスオリゴヌクレオチド（Ｍｏｎｇｅｒｓｅｎ、図８））という４つのマウス試験群から構成させた。
【０１４４】
ＴＮＢＳ処置マウスにおいて、観察を多数回行った。第１に、ＴＮＢＳ処置マウスは、高レベルのＴＮＦ−α  ＲＮＡとＴＧＦ−β  ＲＮＡを発現することが分かったとともに、ＴＧＦ−β／Ｓｍａｄ３シグナル伝達に異常があることが分かった（図４）。第２に、ＴＮＢＳ誘導性の慢性大腸炎のマウスでは、Ｓｍａｄ７  ＲＮＡではなく、Ｓｍａｄ７タンパク質が、高度に発現することが分かった（図５）。ＴＮＢＳ処置マウスでは、コラーゲン沈着の増強（図６）と、α−ＳＭＡの発現の増強（図７）も観察された。
【０１４５】
ＴＮＢＳで処置後、マウスをＳｍａｄ７センスオリゴヌクレオチドまたはＳｍａｄ７アンチ−センスオリゴヌクレオチドのいずれかに暴露した。Ｓｍａｄ７アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与（図９）により、Ｓｍａｄ７の発現がノックダウンされ、ＴＮＢＳ誘導性の大腸炎症（図１０）とコラーゲン沈着（図１１）が低減された。Ｓｍａｄ７の発現のノックダウンは、α−ＳＭＡの発現（図１２）、ＴＧＦ−βの発現及びＴＧＦ−β／Ｓｍａｄ３のシグナル伝達（図１３）の低減と関係することも分かった。
【０１４６】
これらの結果から、アンチセンスオリゴヌクレオチドによるＳｍａｄ７のノックダウンによって、慢性大腸炎が改善し、腸線維症の発現が制限されることが確認される。
【０１４７】
参照による援用
本明細書に引用されている各特許文献及び各科学論文の開示内容は、あらゆる目的において、参照により、その全体が援用される。
【０１４８】
均等物
本発明は、本発明の本質的な特徴から逸脱しているその他の具体的な形態で実施することができる。したがって、上記の実施形態は、本明細書に記載されている本発明を限定するものではなく、例示的なものとみなすべきである。本発明の範囲は、上記の説明によってではなく、添付の請求項によって示されており、請求項と均等の意味及び範囲内であるいずれの変更も、本発明に含まれるように意図されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年11月28日(2018.11.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
2019505598.tif 000019
2019505598.tif 000020
2019505598.tif 000021
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