(57)【要約】単細胞シアノバクテリアシアノセイス種CCY 0110から放出された多糖は低い細胞毒性を示し、高分子の送達に適していることが証明されている。本主題に開示されるシアノバクテリア細胞外ポリマー、すなわち多糖、より具体的にはヘテロ多糖は、タンパク質と共に集合してゲル様挙動の新しい相になり、放出動態は二価カチオンを加えることによって調節（すなわち遅延）でき、ならびに／または生物乳化剤もしくは生物凝集剤に典型的な物理的および化学的特性も示す。【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬、獣医学または化粧品に使用するための、シアノセイス種CCY 0110から放出された多糖。
【請求項２】
以下の残基：マンノース、グルコース、ガラクトース、キシロース、アラビノース、ラムノース、フコース、ガラクツロン酸およびグルクロン酸ならびにペプチドを含む、請求項１に記載の使用のための多糖。
【請求項３】
薬物送達担体、特にタンパク質送達担体として使用するための、請求項１または２に記載の多糖。
【請求項４】
以下のリスト：Ba2+、Fe2+、Ca2+、Cu2+、Zn2+、およびそれらの混合物から選択される二価カチオン、好ましくはCa2+、をさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のための多糖。
【請求項５】
創傷、粘膜もしくは皮膚感染症、炎症性もしくはアレルギー性疾患、脂肪性皮膚硬化症、皮膚損傷、皮膚老化疾患もしくは機能不全、骨もしくは軟骨組織損傷の治療または予防における使用のための、請求項１〜４のいずれか一項に記載の多糖。
【請求項６】
前記創傷が、開放創傷、急性創傷、慢性創傷、感染創傷または外科的創傷である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のための多糖。
【請求項７】
前記多糖の重量が1500〜5000KDaの間で変動する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用のための多糖。
【請求項８】
前記慢性創傷が以下のリスト：静脈潰瘍、動脈性病因、混合性病因、褥瘡性潰瘍、糖尿病性潰瘍、およびそれらの組み合わせから選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用のための多糖。
【請求項９】
前記粘膜および皮膚感染症が以下のリスト：粘膜炎、歯肉炎、歯周炎、膣炎、肛門裂傷、皮膚潰瘍、耳炎、皮膚病、およびそれらの組み合わせから選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用のための多糖。
【請求項１０】
以下のリスト：しわ、表情しわ、ストレッチマーク、皮膚の光老化、およびそれらの組み合わせから選択される皮膚老化の治療または予防に使用するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の多糖。
【請求項１１】
前記炎症性もしくはアレルギー性状態の治療または予防が、以下のリスト：皮膚炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、およびそれらの組み合わせから選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用のための多糖。
【請求項１２】
前記多糖が、1日1回、1日2回、または1日3回、被験体に局所投与される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用のための多糖。
【請求項１３】
前記多糖が、1日1回、1日2回、または1日3回、被験体に非経口投与される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用のための多糖。
【請求項１４】
前記多糖が、1日1回、1日2回、または1日3回、被験体に経口投与される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用のための多糖。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の医薬、獣医学または化粧品に使用するための多糖および／または活性成分および／または細胞および／または賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１６】
0.01〜2%（w/v）の多糖；好ましくは0.05〜1%（w/v）の多糖；より好ましくは0.1〜0.5%（w/v）の多糖を含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
さらなる多糖を含む、請求項１４〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記多糖が、以下のリスト：セルロース；アルギン酸塩；キトサン、ジェランガム、アラビアゴム、デキストリン、デキストラン、コラーゲン、グアーガム、カラギーナン、キサンタンガム、ヒアルロン酸、それらの混合物から選択される、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記活性成分が、タンパク質、薬物、抗炎症剤、防腐剤、解熱剤、麻酔剤、抗がん剤、治療剤、またはそれらの混合物である、請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物が、局所形態、または注射形態、または経口形態である、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
局所形態が、ゲル、クリーム、ローションである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
ヒドロゲルまたは複数のヒドロゲルをさらに含む、請求項１４〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記ヒドロゲルが、カーボポール、マトリゲル、ヒアルロン酸、デキストラン、アルギン酸塩、コラーゲン、ジェランガム、またはそれらの混合物からなるリストより選択される、請求項１４〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
請求項１〜２３のいずれか一項に記載の多糖を含む医薬に使用するための足場。
【請求項２５】
請求項１〜２４のいずれか一項に記載の多糖を含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の医薬に使用するための増粘剤。
【請求項２６】
請求項１〜２５のいずれか一項に記載の多糖の、乳化剤、または皮膚軟化剤、またはゲル化剤、または潤滑剤、または非経口組成物用の増粘剤、または凝集剤、またはカプセル化剤、または眼科用薬剤、またはしわ防止剤、またはスキンケア剤またはヒドロゲルとしての使用。
【請求項２７】
請求項１〜２６のいずれか一項に記載の多糖の、土壌改良剤としての使用。
【請求項２８】
前記スキンケア剤が、硬膜剤、抗ストレッチマーク剤、コンディショナー、皮膚弛緩剤である、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の多糖の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
単細胞シアノバクテリアシアノセイス種CCY 0110から放出された多糖は低い細胞毒性を示し、高分子の送達に適していることが証明されている。
【０００２】
本主題に開示されるシアノバクテリア細胞外ポリマー、すなわち多糖、より具体的にはヘテロ多糖は、タンパク質と共に集合してゲル様挙動の新しい相になり、放出動態は二価カチオンを加えることによって調節（すなわち遅延）され、ならびに／または生物乳化剤もしくは生物凝集剤に典型的な物理的および化学的特性も示す。
【背景技術】
【０００３】
天然ポリマーは、それらの生分解性、生体適合性および明らかな毒性の欠如のために、化学合成起源のものを上回る利点を示す。
【０００４】
水結合容量、レオロジー、高分子量、複雑な分子構造、および化学修飾される可能性などのポリマーの物理的ならびに化学的特性は、増粘、テクスチャー化、ゲル化、エマルジョン安定化、凝集、およびナノ／マイクロ構造生産能力などの多様な機能特性を示すことを可能にする。高分子量を有するポリマーは、一般に、高い粘度、引張強度および剪断抵抗を示し、これは、産業用途、特に食品業界において、例えば、ケーキミックス、サラダドレッシング、ソース、プディングおよび乳製品の製造で良好な官能品質、風味放出および懸濁特性を提供するため、ならびに化粧品産業において、ローション、クリームおよびゲルの製造にとって重要な特徴である。
【０００５】
臨床治療において、化学合成された小分子薬は依然として、処方治療薬の主要なクラスである。しかしながら、タンパク質は、小分子薬よりも実用的で経済的な利点があるため、多くの注目を集めてきた。それらは生物学的プロセスに対して高い特異性を有し、重篤な有害作用の危険性が低く（前述の高い特異性の結果）、ならびに、ほとんどの場合において免疫応答を誘発する危険性が低い。さらに、それらはFDAなどの当局によってより迅速に承認され、より容易に特許が取得可能であるため、研究開発への多額の投資としてはるかに魅力的になっている。これら全てにもかかわらず、治療用タンパク質の使用は十分に確立されていない。それらの安定性および溶解性、投与経路および排出経路、自由循環プロテアーゼに対する大きな感受性（それらの半減期を減少させる）、ならびに、場合によっては、免疫応答の誘発（例えば、抗体を使用するとき)は全て、小分子薬がまだ主に使用されている理由を正当化する潜在的な障害である。この点に関して、タンパク質と併せて足場を使用することは、全てではないにしても、前述の警告のほとんどを解決する。従来から、ヒドロゲルは、高い含水量、生体適合性、および合成の容易さのために、薬物送達用途に非常に魅力的である[1]。それらの多孔質構造は、ゲルマトリックス中の架橋密度を制御することによって、広いサイズ範囲の分子の送達に合わせて調整することができる[1]。
【０００６】
天然に存在する多糖は、ヒドロゲルの調製に最も使用されているポリマーのうちの1つである。キトサンは、自然界で2番目に豊富にある多糖であり、小分子薬または高分子の薬物送達において最も広く研究されている天然由来のポリマーである[2]。藻類由来アルギン酸塩などの他のものは、増粘、ゲル形成、および安定化特性に応じて、DNA、タンパク質、ビタミン、および細胞などの生体分子の捕捉および／または送達用のマトリックスとして使用されてきた。しかしながら、長期ばく露毒性、活性成分の生物学的利用能の低さ（すなわち、低い放出速度）、および潜在的な免疫原性などのいくつかの欠点のために、臨床でのそれらの使用は普及していない。その点に関して、他の代替物、例えば微生物によって産生および分泌される細胞外ポリマー物質（EPS）が出現している。これらのポリマーは、より容易かつ手頃な価格で入手可能であり、デキストランは、製薬業界において血漿増量剤として使用されているEPSの象徴である。硫酸化微生物ポリマーは、それらの固有の生体適合性および潜在的な低コストのために、部位特異的薬物担体として研究されてきた。他の微生物ポリマーは、改善された部位特異性を提供し、結腸疾患[13]または肝臓特異的疾患に対する所望の治療上の必要性を満たすことが示された。
【０００７】
微生物EPSの中で、シアノバクテリア由来のポリマーは、高い硫酸基含有量、およびそれらの強いアニオン性に寄与する1つまたは2つのウロン酸の存在など、際立った特定の特徴を持つ[3]。シアノセイス種 CCY 0110は、最も効率的な生産地の1つであるザンジバルの沿岸水から分離された海洋N2固定単細胞シアノバクテリアであり、そのポリマーの大部分を培地に放出して（RPS）その回収を容易にする。このポリマーの広範な特性評価は、他のシアノバクテリアポリマーについて以前から説明されていることと一致して、シアノセイスのRPSは、2つのウロン酸、ペプチド、および硫酸基を含む9つの異なる単糖から構成される複雑な高分子であることを示した。さらに、それらは著しく熱安定性であり、主に非晶質性である。これらのポリマーの全体的なアニオン性、疎水性、および異なる可能な立体配座は、廃水からの金属イオンの除去などのバイオテクノロジー用途にとって非常に魅力的である。さらに、シアノセイスのRPSの多糖含有量によって引き起こされる可能性のある低い細胞毒性は、治療薬物のin vivo送達担体としてのその使用を促進する。本開示は、薬物送達のためのシアノバクテリア由来ポリマーの使用の最初の報告を提示する。この研究では、シアノセイス細胞外ポリマーからの小分子薬およびタンパク質の放出動態を調べた。放出数学モデルが提案され、シアノセイス由来のRPSの生体適合性を、ヒト皮膚新生児線維芽細胞を用いてin vitroで評価した。
【０００８】
これらの事実は、本開示によって対処される技術的問題を説明するために開示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
単細胞シアノバクテリアシアノセイス種 CCY 0110は、細胞外ポリマー物質の非常に効率的な生産者であり、最大75%のポリマーを培地に放出する。培地に放出された炭水化物ポリマー（RPS）は、以前に単離され特性評価された；それは、2つのウロン酸を含み、ペプチドおよび硫酸基も含む9つの異なる単糖からなる。
【００１０】
本開示は、RPSがタンパク質と高濃度に自発的に集合して相転移をもたらすことを示す。タンパク質は、主にポリマー―タンパク質マトリックスの膨潤を通して、生理学的条件付近で漸次的におよび構造的に損なわれずに放出される。タンパク質の放出動態は、カルシウムなどの二価カチオンの添加によって調節することができる。特に、ポリマーは、in vitroでヒト皮膚新生児線維芽細胞に対して、0.1mg/mL未満のRPS濃度で毒性がない。結果は、このポリマーが治療用高分子の送達の優れた候補であることを示している。
【００１１】
非特異的薬物を投与するという従来の臨床診療の代替法として、より指向性の高い治療へ移行することへの関心が高まっている。その点で、タンパク質は、輸送および触媒作用などの複数の機能を持つ非常に特殊化された薬剤であるため、優れた候補である。しかしながら、ヒトへの適用について論じる場合、それらの機能のいくつかは欠点に変わる；例えば、低い循環安定性および／または溶解性、ならびに潜在的な免疫応答の誘発。これらの問題を回避するために、足場は、広範かつ天然由来のヒドロゲルベースの多糖であるキトサンおよびアルギン酸塩として優れた選択肢である。それにもかかわらず、それらは免疫反応を誘発し、長期ばく露毒性の問題を引き起こす可能性がある。
【００１２】
本開示は、単細胞シアノバクテリアシアノセイス種CCY 0110によって産生される放出多糖ポリマー（RPS）の、現在利用可能な足場の代替としての使用に関する。このシアノバクテリア株は、培養維持に対する通常の必要条件が低いだけでなく、抽出および回収が容易な多量のポリマーも生産する。これらの全ての機能により、特に経済的観点から、このRPSは非常に魅力的である。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本開示の一態様は、シアノセイス種CCY 0110から放出された多糖の、医薬、製薬、化粧品または食品業界での使用に関する。
【００１４】
シアノセイス種CCY 0110は、ジアゾ栄養性単細胞シアノバクテリアである。細胞は楕円形または円筒形であり得、群で見出され得る。シアノセイス種CCY 0110は、オランダ、イアーセーケのCulture Collectionで注文できる。（Chwaka、Zanzibarから単離。試料の種類：堆積物。インキュベーション温度：23℃。SSU RRNA配列：最大同一性99%シアノセイス種ATCC 51142、1326 bp）。
【００１５】
一実施形態では、本主題に開示される多糖は、マンノース、グルコース、ガラクトース、キシロース、アラビノース、ラムノース、フコース、ガラクツロン酸およびグルクロン酸ならびにペプチドを含む。
【００１６】
一実施形態において、本主題に開示される多糖は、薬物送達担体、特にタンパク質送達担体として使用され得る。
【００１７】
一実施形態では、本主題に開示される多糖は、以下のリスト：Ba2+、Fe2+、Ca2+、Cu2+、Zn2+、およびそれらの混合物から選択される二価カチオン、好ましくはCa2+を含み得る。
【００１８】
一実施形態では、本主題に開示される多糖は、創傷、粘膜もしくは皮膚感染症、炎症性もしくはアレルギー性疾患、脂肪性皮膚硬化症、皮膚損傷、皮膚老化疾患もしくは機能不全、骨もしくは軟骨組織損傷の治療または予防に使用され得る。
【００１９】
一実施形態では、本主題に開示されている多糖は、創傷の治療または予防に使用され得る。すなわち、創傷は、開放創傷、急性創傷、慢性創傷、感染創傷または外科的創傷であり；好ましくは静脈潰瘍、動脈性病因、混合性病因、褥瘡性潰瘍、糖尿病性潰瘍、およびそれらの組み合わせである。
【００２０】
一実施形態では、本主題に開示される多糖は、1500〜5000KDaの間で変動する多糖の重量を有し得る。
【００２１】
一実施形態では、本主題に開示されている多糖は、粘膜および皮膚感染症の治療または予防に使用され得る。すなわち、粘膜および皮膚感染症は、以下のリスト：粘膜炎、歯肉炎、歯周炎、膣炎、肛門裂傷、皮膚潰瘍、耳炎、皮膚病、およびそれらの組み合わせから選択され；皮膚老化は、以下のリスト：しわ、表情しわ、ストレッチマーク、皮膚の光老化、およびそれらの組み合わせから選択される。
【００２２】
一実施形態では、本主題に開示される多糖は、炎症性またはアレルギー性状態の治療または予防に使用され得、以下のリスト：皮膚炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、およびそれらの組み合わせから選択することができる。
【００２３】
一実施形態では、本主題に開示されている多糖は、1日1回、1日2回、または1日3回、被験体に局所投与され得る。
【００２４】
一実施形態では、本主題に開示される多糖は、1日1回、1日2回、または1日3回、被験体に非経口投与され得る。
【００２５】
一実施形態では、本主題に開示されている多糖は、1日1回、1日2回、または1日3回、被験体に経口投与され得る。
【００２６】
本発明の別の態様は、医薬または化粧品に使用するための、本主題に開示されている多糖を含む医薬組成物に関する。
【００２７】
一実施形態では、組成物は、0.01〜2%（w/v）の多糖；好ましくは0.05〜1%（w/v）の多糖；より好ましくは0.1〜0.5%（w/v）の多糖を含み得る。
【００２８】
一実施形態では、組成物はさらなる多糖を含んでもよく、好ましくは追加の多糖は、以下のリスト：セルロース；アルギン酸塩；キトサン、ジェランガム、アラビアゴム、デキストリン、デキストラン、コラーゲン、グアーガム、カラギーナン、キサンタンガム、ヒアルロン酸、それらの混合物から選択され得る。
【００２９】
一実施形態では、活性成分は、タンパク質、薬物、抗炎症剤、防腐剤、解熱剤、麻酔剤、抗がん剤、治療剤、またはそれらの混合物である。
【００３０】
一実施形態では、組成物は、局所形態、または注射形態、または経口形態であり得る。
【００３１】
一実施形態では、局所組成物は、ゲル、またはクリーム、またはローションであり得る。
【００３２】
本開示の組成物は、ヒドロゲルまたは複数のヒドロゲルをさらに含み得る。
【００３３】
一実施形態では、組成物は、カーボポール、マトリゲル、ヒアルロン酸、デキストラン、アルギン酸塩、コラーゲン、ジェランガム、またはそれらの混合物からなるリストより選択されるヒドロゲルを有し得る。
【００３４】
本発明の別の態様は、本主題に開示されている多糖を含む医薬に用いるための足場に関する。
【００３５】
本発明の別の態様は、本主題に開示されている多糖を含む医薬に使用するための増粘剤に関する。
【００３６】
本発明の別の態様は、多糖の、乳化剤、または皮膚軟化剤、またはゲル化剤、または潤滑剤、または非経口組成物用の増粘剤、または凝集剤、またはカプセル化剤、または眼科用薬剤、またはしわ防止剤、またはスキンケア剤またはヒドロゲルとしての使用に関する。
【００３７】
本発明の別の態様は、多糖の、硬膜剤、抗ストレッチマーク剤、コンディショナー、皮膚弛緩剤を含むスキンケア剤としての使用に関する。
【００３８】
創傷は、皮膚が引き裂かれ、切断され、または穿刺されるという比較的迅速に起こるタイプの損傷（開放創傷）であるか、または鈍器損傷が挫傷を引き起こすタイプの損傷（閉鎖創）である。病理学では、それは具体的には皮膚の真皮を損傷する鋭器損傷を指す。
【００３９】
本開示の多糖は、以下の特徴を有する：9つの異なる単糖（マンノース、グルコース、ガラクトース、キシロース、アラビノース、ラムノース、フコース、ガラクツロン酸およびグルクロン酸）、ペプチドおよび硫酸基からなる：非晶質であり、高分子量および高い熱安定性を有する。
【００４０】
本開示は、カルシウムをポリマー―高分子複合体に添加することによって、高分子放出動態を遅らせる。ポリマー足場は不活性であることが証明されており、活性成分（すなわちタンパク質）を妨害しなかった。最後に、リゾチームまたはウシ血清アルブミンなどのタンパク質と接触したときに、ポリマーはソフトゲル構造を形成すると評価された。この特徴は、薬物送達のための三成分系またはin vitro細胞培養用マトリックスなどのさらなる用途さえももたらし得る。
【００４１】
説明および特許請求の範囲を通して、「含む」という語およびその語の変形は、他の技術的特徴、添加物、構成要素、または工程を排除することを意図していない。解決策のさらなる目的、利点、および特徴は、説明の検討により当業者には明らかとなるか、または解決策の実施によって習得され得る。
【００４２】
以下の図は、説明を例示するための好ましい実施形態を提供し、開示の範囲を限定するものとして見なされるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】シェル進行型イオン交換モデルのスキーム。RPS鎖は、正に帯電したタンパク質と集合して柔らかい固相になる（左）。カチオン誘発放出機構は、カチオンがポリマー鎖中のタンパク質分子を置換することによって、移動境界（黄色の層）として生じる。放出されたタンパク質分子は急速にバルク培地に拡散する（右）。
【図２】異なるポリマー濃度でのシアノセイス種CCY 0110 RPSからのプロカインアミド放出プロファイル：3.5（下黒三角）、1.9（上黒三角）、1.1（黒四角）、および0.4(●）mg/mL。
【図３】シアノセイス種RPSからのBSA（黒四角）、リゾチーム（●）、およびIgG（上黒三角）の放出プロファイル。
【図４．１】RPSヒドロゲルから放出された（実線）タンパク質溶液および対応する新たに調製されたタンパク質試料（破線）の遠紫外CDスペクトル。
【図４．２】RPSヒドロゲルから放出された（実線）タンパク質溶液および対応する新たに調製されたタンパク質試料（破線）の遠紫外CDスペクトル。
【図４．３】RPSヒドロゲルから放出された（実線）タンパク質溶液および対応する新たに調製されたタンパク質試料（破線）の遠紫外CDスペクトル。
【図５】0.1M CaCl2の存在下での会合相調製後のRPSからのリゾチームの放出プロファイル。挿入図：0.1M CaCl2の非存在下（黒四角）および存在下（□）におけるRPSに装填されたリゾチームの初期放出プロファイル。
【図６】図６Ａ〜Ｂは、RPSからのリゾチーム放出：Ａ）CaCl2なし、Ｂ）0.1M CaCl2あり、無次元時間の平方根の関数としてプロット（式(7)）。線は、シミュレートされた曲線を表す（式(6)、（Ａ）Ns=8、Da=9、およびSh→∞ならびに（Ｂ）Ns=120、Da=9、およびSh→∞）。
【図７】図７Ａ〜Ｃは、RPS/BSA（Ａ）およびRPS／リゾチーム（Ｂ）溶液の振動レオメトリー測定（周波数掃引）；粘弾性データ（G'、G''、およびδ）の平均値、灰色で強調表示されている領域内（0.1〜1Hz）（Ｃ）。
【図８】レサズリンアッセイにより1、2および5日目に評価した、細胞培地中のRPS濃度の関数としての線維芽細胞の代謝活性（*p値≦0.05；**p値≦0.01；***p値≦0.001；****p値≦0.0001）。
【図９】生理学的pH7.4（黒四角）および腫瘍模倣pH6.0（□）での、RPSからのリゾチームの放出プロファイル。
【図１０】CaCl2 0.1Mの非存在下（●）および存在下（○）での会合相調製後のRPSからのBSAの放出プロファイル。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
シアノセイス種CCY 0110 RPSからの治療用分子の放出。小分子薬は最も一般的な治療剤であり、したがって、単離されたシアノバクテリア細胞外ポリマー（RPS）の制御薬物送達システムとしての可能性を、小さな正電荷を持つ抗不整脈薬、プロカインアミドを用いて評価した。
【００４５】
おそらく薬物とポリマーとの間の静電相互作用のために、著しい薬物装填（1mgのRPSあたり約0.4mgのプロカインアミド）にもかかわらず、プロカインアミドは数分で容易に放出される（図２）。さらに、ポリマー濃度の増加は、薬物放出の遅延にほとんど影響を及ぼさない。
【００４６】
続いて、RPSからの高分子の装填および放出を調べた。用いた3つのタンパク質（リゾチーム、BSA、およびIgG）の特性を表１に要約する。等電点（pI）によれば、1×PBSを用いた放出実験を行った生理学的模倣pH値のpH7.4において、BSAは負に帯電している。一方、リゾチームは正味の正電荷を帯びているが、IgGは全体的には電荷を帯びていない。3つのタンパク質の放出プロファイルを図３に示す。IgGは、ポリマーマトリックスへの取り込みが最も少なく、BSAおよびIgGについて観察可能なかなりのバースト放出効果がある。BSA（負）およびIgG（中性）の表面正味電荷は、負に帯電したポリマーとの強い静電相互作用の形成には有利ではなく、したがってBSAおよびIgG分子は、ポリマー骨格中でほぼ確実に可動性のままであり、バルク溶液に向かって急速に拡散する。一方、正に帯電しているリゾチームは、RPSと正味の電荷相互作用を確立し、徐々に放出されると考えられる（図３）。リゾチームを用いたさらなる実験を、腫瘍模倣pH6.0で行った。このpHでは、リゾチーム装填はより小さく、放出動態はより速い。より低いpH（生理学的pH7.4と比較して）は、ポリマーの全体的なアニオン電荷の減少に寄与し、リゾチームなどの正電荷を帯びた分子に対する親和性の低下を説明する。
【００４７】
タンパク質がポリマー相を通って拡散する能力は、タンパク質の分子サイズおよび形状に依存する。より小さなタンパク質はより速く拡散し、その意味で、リゾチーム、BSA、およびIgGはこの順序で放出されるはずである。しかしながら、実験結果は、RPSからのタンパク質の放出動態は、タンパク質分子サイズよりもむしろタンパク質の表面正味電荷に主に依存し、正に帯電した高分子の漸次的送達にさらに適したポリマーであることを示す。
【００４８】
治療用タンパク質については、RPS送達の際にそれらの本来の立体配座を維持することが重要である。非常に強いタンパク質―ポリマー相互作用はタンパク質変性につながり、放出時にタンパク質を不活性にする。タンパク質の構造的完全性を、遠紫外CDスペクトルによって確認した。図４は、3つのタンパク質がRPSとの接触時に本来の折り畳みを維持したことを示す。
【００４９】
一実施形態では、カルシウムなどの二価カチオンの添加によるRPSからのタンパク質放出の制御は、負に帯電したRPSポリマー鎖を架橋し、ヒドロゲルメッシュを縮小し、その結果ゲスト分子の有効拡散を遅らせる能力を有する。例えば、キトサン―アルギン酸塩粒子中のカルシウムイオンの存在は、BSAの放出を遅らせ、ペクチン酸ゲルビーズ中では、それは濃度に応じて薬物放出を数時間まで遅らせた。正のカルシウムイオンが負に荷電したRPS鎖と相互作用するとき、同様の効果が生じる。タンパク質放出動態がCaCl2によって調節され得ることを確認するために、リゾチームを0.1MのCaCl2の存在下でRPSに装填した。対応する放出プロファイル（図５）は確かにかなり遅い；タンパク質の半減期は約7時間であり、対して等価物のカルシウムなしで得られたのは0.6時間であった。CaCl2の添加によるヒドロゲルメッシュの縮小において考えられる欠点は、サイズ排除、または少なくともタンパク質最大装填量の減少である。リゾチームについては、使用した実験条件では、この減少はほぼ20%であった。同様のカルシウム調節放出プロファイルを、リゾチームよりもかなり大きい分子サイズを有するBSAについて得て、この場合、タンパク質アップロードの減少は劇的であった。
【００５０】
提案された放出数学モデルの線上で、RPSからのリゾチーム放出プロファイルを、理論的分析のタンパク質放出θ対√τ（式(7)により与えられるτ）の割合として図６に再プロットした。2つの曲線（CaCl2ありおよびなし）は、シグモイド形状を想定した直線から分岐しており（図６）、これは、前述のプロセスの少なくとも1つ―外部界面抵抗および境界イオン交換―が無視できないことを示す。放出実験は軌道撹拌を用いて行った；タンパク質放出プロファイルが落ち着くまで、予備実験における撹拌の頻度を増加させた。
【００５１】
したがって、外部界面抵抗は無視できるほど小さく、Sh→∞であるはずである。式(6)の最良の適合は、ヒドロゲルの形成中にCaCl2を添加しなかった場合はNs=8およびDa=9で、0.1MのCaCl2の存在下ではNs=120およびDa=9で得られた。無次元放出時間τは、0.1MのCaCl2の添加により1/13超減少した。したがって、RPSを通る高分子の拡散速度は、二価カチオンの存在に非常に敏感であり、ポリマーネットワーク形成の条件を調節することによって調節することができる。
【００５２】
一実施形態における、RPS／タンパク質会合相のレオロジー特性。タンパク質が多糖と接触すると、偏析相分離または会合相分離をもたらす可能性がある。薬物装填および放出実験中の混合物の挙動の観察から、RPSがBSAまたはリゾチームと接触すると会合相が形成される（図３に見られるように、IgGは、その低い取り込みおよびその後のRPS放出を考慮して、試験しなかった）。混合物は異なる構造を示した；RPS/BSA混合物はより均質であるが、RPS／リゾチームは明らかな相分離を示した。RPS／タンパク質溶液の粘弾性特性を評価し、それらがゾル―ゲル転移（δ<45°）を受けたかどうかを、言及した溶液の振動レオロジー測定により検証した（図７）。低い剪断率値にもかかわらず、RPS/BSAおよびRPS／リゾチーム混合物の両方に対する剪断率の弾性成分の平均値（G'RPS/BSA≒31.4±8.8Pa；G'RPS／リゾチーム≒182.2±74.8Pa）（0.1〜1Hzの線形領域）は、剪断率の粘性成分（G”RPS/BSA≒4.8±1.2Pa；G”RPS／リゾチーム≒49.5±19.7Pa）よりも高く、ゲル様の挙動が優勢であることを示す。さらに、位相角（δRPS/BSA≒8.9±0.9°;δRPS／リゾチーム≒15.3±0.6°）によって表されるそれらの間の関係は、溶液がゲル様挙動を示すことだけでなく、それらがむしろ固体様材料として、剪断応力に反応することを証明する（δ≒≦10°）。BSA／多糖混合物のこの優勢な弾性挙動は、BSA／ペクチン（G'≒104〜105Pa）またはBSA/κ―カラギーナン（G'≒104〜105Pa）について以前から報告されており、タンパク質と多糖鎖との間の静電的相互作用に主に起因し得る。しかしながら、これらの系の粘弾性特性は、タンパク質／ポリマー対の特定の特性、およびそれらの異なる構造のために、直接比較することはできない。RPS/BSAおよびRPS／リゾチーム混合物は、他のソフトゲル、例えばMatrigel（マウス肉腫の細胞外マトリックスから抽出されたタンパク質に富む調製物、G'≒80Pa）、PuraMatrix（アルギニン―アラニン―アスパラギン酸―アラニンの反復アミノ酸配列からなる自己組織化ヒドロゲル、G'≒5Pa）、SM―A87 EPS（深海中温細菌によって分泌される菌体外多糖、G'≒1Pa）、ポリアクリルアミド（G'≒10Pa）、[30]またはPluronic F127―g―ポリ(アクリル酸)（10Pa<G'<100Pa）と同様の剪断率値を示す。
【００５３】
一実施形態では、RPSの細胞毒性評価を実施した。生体高分子であり、したがって生体適合性である可能性が高くても、細胞毒性アッセイは常に極めて重要である。RPSの1つの可能な用途は、治療薬の局所適用である。この場合、ポリマーの大部分はその粘稠性および完全性を維持すると予想される。しかしながら、残留ポリマー分子のいくらかの分解および最終的な吸収が皮膚を通して起こる。最大0.23mg/mLにまで増加した濃度のRPSでの線維芽細胞の代謝活性を、レサズリンアッセイにより異なる時点（1、2および5日目）で評価した。結果を図８に示す。5日後、培地中の0.23mg/mLのRPSが線維芽細胞の代謝活性を低下させることが観察される。しかしながら、より低い濃度では、RPSは線維芽細胞に対して毒性がなく、実際には、わずかであるが統計的に有意な代謝活性の増加に寄与した。
【００５４】
一実施形態では、海洋シアノバクテリア、シアノセイス種CCY 0110からのポリマーを、薬物送達用担体として試験した。ポリマーは、タンパク質と共に集合してゲル様挙動の新しい相になり（レオロジー測定により確認されるように）、正に帯電したタンパク質はポリマーネットワークから円滑に放出される。RPSからのタンパク質の放出動態は、放出を遅らせる二価カチオンの添加によって調節することができる。RPSからのリゾチーム放出プロファイルは、θ対t0.5としてプロットしたときにシグモイド形を呈する。シェル進行型膨張モデルを仮定して一般数学方程式を提案する。方程式は本発明者らの実験曲線を効果的にシミュレートし、他の多くの薬物送達システムに用途を見出す可能性がある。さらに、このポリマーは、ヒト皮膚新生児線維芽細胞に対して、最高試験濃度で無視できる細胞毒性を示す。
【００５５】
つまり、このポリマーは、ニワトリ卵白由来のリゾチーム、ウシ血清アルブミン（BSA）、およびヒト血清由来の免疫グロブリンG（IgG）のモデルを用いた治療用高分子の局所投与用担体である。
【００５６】
一実施形態では、RPSの産生および単離を、以下のように実施した：単細胞シアノバクテリアシアノセイス種CCY 0110（オランダ、イアーセーケのCulture Collection）を、ASNIII培地を含む1Lの三角フラスコ中、25℃で16時間の光（30μE／m2／秒）／8時間の暗条件下で、通気（1.2L／分）しながら培養した。
【００５７】
一実施形態では、730nmで約2.0〜3.0の光学密度が得られるまで、シアノセイス培養物を増殖させた。培養物を透析膜（12〜14kDaの分子量カットオフ；Medicell International Ltd.、ロンドン、イギリス）中に置き、連続的に撹拌しながら最低10容量の脱イオン水に対して48時間透析した。細胞を、20000×gで15分間の遠心分離により除去し、上清を2容量の96%冷エタノールで沈殿させた。RPSを滅菌金属鉗子で集め、脱イオン水に溶解し、もう一度沈殿させた。集めたRPSを凍結乾燥した。
【００５８】
一実施形態では、小／高分子放出実験を行った。プロカインアミドならびに3つのタンパク質（リゾチーム、ウシ血清アルブミン、および免疫グロブリンG）をモデル分子として用い、RPSからの放出を調べた。ゲスト分子をRPSと、室温の超純水中で以下の通りで混合した：プロカインアミド1mg/mLおよびポリマー0.4〜3.5mg/mL；ポリマーと1:1w/w比のタンパク質。放出プロファイルを決定するために、装填したRPSを3000×gで10分間遠心分離することにより単離し、上清を慎重に除去した。放出誘発のために、1×PBS（リン酸緩衝食塩水）pH7.4またはリン酸ナトリウム0.1M pH6.0を最終容量10mLになるまで添加し、試料を室温で軌道振盪しながらインキュベートした。NanoDrop紫外可視分光光度計（ND―1000、NanoDrop、アメリカ）を用いた紫外分光法による定量のために、（新鮮な緩衝液に置き換えられた）時点試料を除去した。プロカインアミド濃度は、278nmでの吸収および280nmでのタンパク質濃度によって決定した。
【００５９】
一実施形態では、円二色性（CD）実験を行った。RPSから放出されたタンパク質の二次構造をCDによって評価した。CDスペクトルは、20℃に設定したペルチェ温度制御システムを備えたJ―815分光計（Jasco、日本）によって記録した。0.1×PBS pH7.4に希釈した0.08〜0.1 mg/mLのタンパク質試料を使用した。スペクトルを、1mm路長石英セル（Hellma Analytics、ドイツ）の中で、260〜190nmで、50nm／分、データ積分時間2秒、データピッチ0.2nm、および測定当たり16回の累積で記録した。Savitzky―Golayアルゴリズムを使用してスペクトルを平滑化し、ブランク試料を補正した。
【００６０】
一実施形態では、レオロジー研究を行った。RPSを、特に5.6mg/mLの濃度で、室温で1週間撹拌しながら、超純水中の同濃度のBSAまたはリゾチームの溶液に溶解した。その後、アッセイ前に混合物を慎重にホモジナイズした。レオメーター（Kinexus Pro、Malvern Instruments、イギリス）を使用して混合物の粘弾性特性を評価し、レオメーター温度制御フード（20℃）内で平行板（φ20mm、0.5mmの高さギャップ）を使用して振動測定を行った。最初に、ゲルの線形粘弾性領域（LVR）を、ひずみ振幅および周波数掃引および周波数を繰り返し実行することによって決定した。次に、周波数掃引（0.01〜10Hz）を、LVR内で1%の一定剪断ひずみを使用して、参照のRPS/BSA混合物（n=12）とRPS／リゾチーム（n=4）に対して実行し、それらの粘弾性特性―剪断率弾性（G'）および粘性（G''）成分、ならびに位相角（δ）を評価した。
【００６１】
一実施形態では、生体適合性試験を実施した。ヒト皮膚新生児線維芽細胞（ZenBio、Inc、アメリカ）を、37℃の5%CO2制御雰囲気の組織培養フラスコ中、10%（v/v）ウシ胎児血清（FBS、Gibco）を補充したダルベッコ改変イーグル培地（DMEM、Gibco/BRL、Gaithersburg、MD、アメリカ）で増殖させた。継代培養は、0.25%トリプシン（Sigma Aldrich）および0.05%EDTA（Sigma Aldrich）で培養物をトリプシン処理することによって行った。継代9代目の細胞を用いて実験を行った。線維芽細胞を24ウェル培養プレートに1ウェルあたり2.5×104細胞で播種し、37℃および5%CO2で一晩インキュベートして細胞接着させた。予めオートクレーブ処理により滅菌したRPSのストック溶液を、10%FBSを含むDMEM中で0.23mg/mLの濃度で調製した。細胞培養培地を異なる濃度（0、0.01、0.03、0.06、0.12、および0.23mg/mL）の新しいRPS溶液と交換し、代謝活性をレサズリンアッセイにより異なる時点（1、2および5日目）で評価した。レサズリンアッセイを実施するために、細胞培養上清を各ウェルから除去し、細胞単層を予め温めた（37℃）0.1×PBS pH7.4で洗浄し、続いてレサズリン溶液（0.02mg/mL）を加えて37℃で2時間インキュベートした。蛍光を、マイクロプレートリーダー（Synergy MX、Biotek、アメリカ、Ex:530nm/Em:590nm）で三連で測定した。
【００６２】
一実施形態では、タンパク質がポリマーマトリックス中の捕捉状態から、分子が急速に拡散する溶液中の遊離状態へのイオン交換駆動転移を受ける相転移によって、タンパク質放出動態を制御する。このモデルは、拡散が主にタンパク質表面の正味電荷に依存していることを示す実験的証拠に基づいている。
【００６３】
一実施形態では、ゲスト分子の拡散がヒドロゲル分解より速いときに相転移制御放出が起こる。カチオンは移動境界として拡散し、タンパク質分子をポリマーマトリックスとのイオン相互作用により置き換える（図１）。カチオンの全物質移動抵抗は、次の一連の工程からなる：外部界面抵抗、ポリマーマトリックスを通した拡散、および境界イオン交換。
【００６４】
球状粒子を仮定した場合のカチオン析出速度の数学的平衡は、以下の通りである：
【数１】
2019530663.tif 000002
式中、Rは粒子の半径、ρsは粒子の密度、rcは表面境界の半径、Cl、Cs、およびCcは、それぞれバルク流体濃度、粒子表面濃度、およびコア境界濃度である。C∞は飽和時の粒子濃度、klは外部界面物質移動係数、ksはイオン交換のコア表面速度、Deはカチオンの有効拡散係数である。
【００６５】
プロセスが上記のシェル進行型形態で起こる粒子の膨潤によって制御されると仮定した場合の、タンパク質放出の割合θは、次式で与えられる：
【数２】
2019530663.tif 000003
【００６６】
式(1)〜(4)を組み合わせて、次式を得ることができる：
【数３】
2019530663.tif 000004
式中、無次元群は、以下の通りである：
【数４】
2019530663.tif 000005
式中、trおよびClrは、参照時間および濃度値である。シャーウッド数は、粒子内拡散速度に対する外部界面物質移動速度を表す。ダムケラー数は、イオン交換時間スケールと粒子内拡散速度とを関連付ける。式(5)は、一定のバルク流体濃度Clの場合について解くことができ、θについての陰解を与える。
【数５】
2019530663.tif 000006
【００６７】
式(6)を用いて、タンパク質放出プロファイルをシミュレートすることができる。文献に見られる、動態パラメーターを得るための最も一般的なアプローチは、初期データ（θ<0.6）のθ対t0.5）5に適合する直線の傾きからである。しかしながら、RPSからのタンパク質の放出は、θ対t0.5としてプロットしたときにシグモイド形状を有し得ることが注目された。式(6)はより一般的である；それは、タンパク質放出プロファイルのシグモイド形状に寄与するさらなる物質移動抵抗を含む。
【００６８】
一実施形態では、シアノセイス種CCY 0110によって産生されたRPSは、ビタミンB12のマイクロカプセル化およびその制御放出に使用され得る。ビタミンは、人体の多くの生化学的機能に関与しているが、内因的には産生されない重要な微量栄養化合物であり、食事を通じて供給される必要がある。ビタミンB 12は、ビタミンの中で最も化学的に複雑で最も大きく、細胞代謝（DNAの合成および調節）、脳および神経系の正常な働き、血液の形成に関わっている。マイクロカプセル化は、ビタミンの安定性を妨げる要因を最小限に抑え、制御放出を可能にし、食品および製薬プロセスにおけるそれらの適用性を高めることができる。
【００６９】
一実施形態では、シアノセイス種CCY 0110によって産生されたRPSの見かけの粘度を、一連の異なる剪断速度にわたって測定した。0.1%、0.5%および1.0%（w/v）の水溶液は、水溶液中で擬塑性挙動または剪断減粘性を有する非ニュートン流体に典型的な流動学的挙動を示した。
【００７０】
一実施形態では、シアノセイス種CCY 0110によって産生されたRPSの乳化性を調べた。0.1%、0.5%および1.0%（w/v）の水溶液は、nヘキサン、流動パラフィンおよび植物油の存在下で検出可能なエマルジョンを形成することができ、乳化指数は50%以上であり、一ヶ月にわたって安定であった。
【００７１】
一実施形態では、RPSを、市販のキサンタンガムと粘度および乳化特性に関して比較したところ、優れた生物乳化剤に典型的な同様の挙動が明らかになった。この知見は、食品業界では、優れた官能的品質、風味放出および懸濁特性を提供するために、化粧品業界では、ローション、クリームおよびゲルの製造にとって重要である。
【００７２】
本明細書で使用される用語「含む」は、記載の特徴、整数、工程、構成要素の存在を示すが、1つ以上の他の特徴、整数、工程、構成要素またはそれらの群の存在または追加を排除するものではない。
【００７３】
本明細書で別段の指示がない限り、記載された工程の特定の順序は例示にすぎず、本開示から逸脱することなく変更することができることが当業者には理解されよう。したがって、特に明記しない限り、記載された工程は順序付けされておらず、可能であれば、工程は任意の都合のよいまたは望ましい順序で実施することができることを意味する。
【００７４】
本開示は、記載された実施形態に限定されると見なされるべきではなく、当業者はそれらの修正に対する多くの可能性を予測するであろう。
【００７５】
上述の実施形態は、組み合わせ可能である。
【００７６】
以下の特許請求の範囲は、本開示の特定の実施形態をさらに説明する。
【００７７】
以下の参考文献は、その全体が本明細書に組み込まれていると見なされるべきである：
・  Appel EA, Loh XJ, Jones ST, Dreiss CA, Scherman OA. 2012. Sustained release of proteins from high water content supramolecular polymer hydrogels. Biomaterials 33(18):4646―52.
・  Ahmed TA, Aljaeid BM. 2016. Preparation, characterization, and potential application of chitosan, chitosan derivatives, and chitosan metal nanoparticles in pharmaceutical drug delivery. Drug Desing, Development and Therapy 10:483―507.
・  Pereira S, Zille A, Micheletti E, Moradas―Ferreira P, De Philippis R, Tamagnini P. 2009. Complexity of cyanobacterial exopolysaccharides: Composition, structures, inducing factors and putative genes involved in their biosynthesis and assembly. FEMS Microbiology Reviews 33(5):917―941.
・  Mota R, Guimaraes R, Buttel Z, Rossi F, Colica G, Silva CJ, Santos C, Gales L, Zille A, De Philippis R and others. 2013. Production and characterization of extracellular carbohydrate polymer from Cyanothecesp. CCY 0110. Carbohydrate Polymers 92(2):1408―1415.
・  Koutsopoulos S, Unsworth LD, Nagai Y, Zhang S. 2009. Controlled release of functional proteins through designer self―assembling peptide nanofiber hydrogel scaffold. Proceedings of the National Academy of Sciences 106(12):4623―4628.
【図１】
2019530663.tif 000007
【図２】
2019530663.tif 000008
【図３】
2019530663.tif 000009
【図４．１】
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【図４．２】
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【図４．３】
2019530663.tif 000012
【図５】
2019530663.tif 000013
【図６−Ａ】
2019530663.tif 000014
【図６−Ｂ】
2019530663.tif 000015
【図７Ａ】
2019530663.tif 000016
【図７Ｂ】
2019530663.tif 000017
【図７Ｃ】
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【図８】
2019530663.tif 000019
【図９】
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【図１０】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年5月13日(2019.5.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬に使用するための、以下の残基：マンノース、グルコース、ガラクトース、キシロース、アラビノース、ラムノース、フコース、ガラクツロン酸およびグルクロン酸ならびにペプチドを含む、シアノセイス種CCY 0110から放出された多糖。
【請求項２】
創傷、粘膜もしくは皮膚感染症、炎症性もしくはアレルギー性疾患、脂肪性皮膚硬化症、皮膚損傷、皮膚老化疾患もしくは機能不全、骨もしくは軟骨組織損傷の治療または予防における使用のための、請求項１に記載の多糖。
【請求項３】
前記創傷が、開放創傷、急性創傷、慢性創傷、感染創傷または外科的創傷であり；
前記慢性創傷が以下のリスト：静脈潰瘍、動脈性病因、混合性病因、褥瘡性潰瘍、糖尿病性潰瘍、およびそれらの組み合わせから選択され；
前記粘膜および皮膚感染症が以下のリスト：粘膜炎、歯肉炎、歯周炎、膣炎、肛門裂傷、皮膚潰瘍、耳炎、皮膚病、およびそれらの組み合わせから選択され；
前記炎症性もしくはアレルギー性状態の治療または予防が、以下のリスト：皮膚炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、およびそれらの組み合わせから選択される、
請求項１又は２に記載の使用のための多糖。
【請求項４】
薬物送達担体、特にタンパク質送達担体として使用するための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の多糖。
【請求項５】
前記多糖の重量が1500〜5000KDaの間で変動する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための多糖。
【請求項６】
前記多糖が、1日1回、1日2回、または1日3回、被験体に局所／非経口／経口投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のための多糖。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬に使用するための多糖および／または活性成分および／または細胞および／または賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項８】
0.01〜2%（w/v）の多糖；好ましくは0.05〜1%（w/v）の多糖；より好ましくは0.1〜0.5%（w/v）の多糖を含む、請求項７に記載の使用のための組成物。
【請求項９】
さらなる多糖を含み、
好ましくは、前記多糖が、以下のリスト：セルロース；アルギン酸塩；キトサン、ジェランガム、アラビアゴム、デキストリン、デキストラン、コラーゲン、グアーガム、カラギーナン、キサンタンガム、ヒアルロン酸、それらの混合物から選択される、
請求項７又は８に記載の使用のための組成物。
【請求項１０】
前記活性成分が、タンパク質、薬物、抗炎症剤、防腐剤、解熱剤、麻酔剤、抗がん剤、治療剤、またはそれらの混合物である、請求項７〜９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、局所形態、または注射形態、または経口形態であり、
好ましくは、前記局所形態が、ゲル、クリーム、ローションである、
請求項７〜１０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
ヒドロゲルまたは複数のヒドロゲルをさらに含み、
好ましくは、前記ヒドロゲルが、カーボポール、マトリゲル、またはそれらの混合物からなるリストより選択される、
請求項７〜１１のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の多糖を含む医薬に使用するための足場。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の多糖を含む医薬に使用するための増粘剤。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の多糖の、乳化剤、または皮膚軟化剤、またはゲル化剤、または潤滑剤、または増粘剤、または凝集剤、またはカプセル化剤、または眼科用薬剤、またはしわ防止剤、またはスキンケア剤またはヒドロゲルとしての使用。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の多糖の、化粧品剤としての使用。
【請求項１７】
前記スキンケア剤が、硬膜剤、抗ストレッチマーク剤、コンディショナー、皮膚弛緩剤である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の多糖の使用。
【国際調査報告】
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