(57)【要約】本発明は、療法有効量の、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）活性を増大させる薬剤を投与することを含む、肝臓の再生を向上させる必要がある哺乳類において肝臓の再生を向上させるための方法、キット、および医薬組成物を提供する。本方法は、療法有効量の、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）活性を増大させる薬剤およびサーチュイン１（Ｓｉｒｔ１）アゴニストを投与することを含むことができる。ＮＡＤ活性を増大させる薬剤はＮＡＤ前駆体であってもよい。ＮＡＤ前駆体は、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸リボシド、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）、ニコチンアミド、ＮＡＤＰ、およびＮＡＤ自体、ならびにその医薬的に許容できる塩のうち１以上を含むことができる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
肝臓の再生を向上させる必要がある哺乳類において肝臓の再生を向上させるための方法であって、療法有効量の、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）活性を増大させる薬剤を投与することを含む、上記方法。
【請求項２】
薬剤がＮＡＤ前駆体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＮＡＤ前駆体が、ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体、ＮＡＤサルベージ経路の中間体、およびニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体のうち１種類以上を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体が、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸アデニンジヌクレオチド、ニコチン酸モノヌクレオチド、キノリン酸、３−ヒドロキシアントラニレート、３−ヒドロキシキヌレニン、キヌレニン、もしくはＮ−ホルミルキヌレニン、またはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ＮＡＤサルベージ経路の中間体が、ニコチンアミドもしくはニコチンアミドモノヌクレオチド、またはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
ニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体が、ニコチンアミドリボシドもしくはニコチン酸リボシド、またはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
ＮＡＤ前駆体が、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸リボシド、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）、ニコチンアミド、ＮＡＤＰ、およびＮＡＤ自体、ならびにその医薬的に許容できる塩からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
薬剤がＮＡＤ消費の阻害薬を含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
ＮＡＤ消費の阻害薬が、ポリａｄｐ−リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害薬、ＣＤ３８阻害薬、およびその医薬的に許容できる塩からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
哺乳類が肝臓外科処置を受けようとしている、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
哺乳類が肝障害のリスクをもつ、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
哺乳類が肝障害を伴う、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
療法有効量の薬剤を肝障害の前に投与することを含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
療法有効量の薬剤を肝障害の約６か月前に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
療法有効量の薬剤を肝障害の約５か月前に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
療法有効量の薬剤を肝障害の約４か月前に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
療法有効量の薬剤を肝障害の約３か月前に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
療法有効量の薬剤を肝障害の約２か月前に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
療法有効量の薬剤を肝障害の約１か月前に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
療法有効量の薬剤を肝障害の約３週間前に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】
療法有効量の薬剤を肝障害の約２週間前に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】
療法有効量の薬剤を肝障害の約１週間前に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２３】
療法有効量の薬剤を肝障害の約６日前に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２４】
療法有効量の薬剤を肝障害の約５日前に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２５】
療法有効量の薬剤を肝障害の約４日前に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２６】
療法有効量の薬剤を肝障害の約３日前に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２７】
療法有効量の薬剤を肝障害の約２日前に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２８】
療法有効量の薬剤を肝障害の約１日前に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２９】
療法有効量の薬剤を肝障害の約１〜２３時間前に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項３０】
療法有効量の薬剤を肝障害の後に投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
療法有効量の薬剤を肝障害の約１〜２３時間後に投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
療法有効量の薬剤を肝障害の約１日後に投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
療法有効量の薬剤を肝障害の約２日後に投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
療法有効量の薬剤を肝障害の約３日後に投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
療法有効量の薬剤を肝障害の約４日後に投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
療法有効量の薬剤を肝障害の約５日後に投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
療法有効量の薬剤を肝障害の約６日後に投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
療法有効量の薬剤を肝障害の約１週間後に投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
療法有効量の薬剤を肝障害の約２週間後に投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
療法有効量の薬剤を肝障害の約３週間後に投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
療法有効量の薬剤を肝障害の約１か月後に投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
療法有効量の薬剤を肝障害の約２か月後に投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
療法有効量の薬剤を肝障害の約３か月後に投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
療法有効量の薬剤を肝障害の約４か月後に投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
療法有効量の薬剤を肝障害の約５か月後に投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
療法有効量の薬剤を肝障害の約６か月後に投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
肝障害が、外傷性肝障害、肝硬変、肝線維症、肝感染症、肝移植、肝損傷（胆管障害、外科的肝臓切除および化学物質誘発性肝障害から生じるもの）のうち１以上を含む、請求項１１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
化学物質誘発性肝障害が、アセトアミノフェン誘発性肝障害およびアルコール誘発性肝障害のうち１以上を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
療法有効量の薬剤の投与が、口腔内、歯、子宮頚管、筋肉内、吸入、頭蓋内、リンパ内、眼内、腹腔内、胸膜腔内、クモ膜下、気管内、子宮内、脈管内、静脈内、膀胱内、鼻腔内、眼、経口、耳、胆嚢潅流、心臓潅流、歯周、直腸、脊髄、皮下、舌下、局所、膣内、経皮、尿管、尿道、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される投与経路を含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
療法有効量の薬剤の投与が経口投与を含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
療法有効量の薬剤の投与が、ボーラス、エアゾール、計量エアゾール、咀嚼バー、カプセル剤、コートされたペレットを収容したカプセル剤、遅延放出ペレットを収容したカプセル剤、徐放ペレットを収容したカプセル剤、濃縮液剤、クリーム剤、強化クリーム剤、坐剤クリーム、ディスク剤、ドレッシング剤、エリキシル剤、乳剤、浣腸剤、徐放繊維、徐放フィルム、ガス剤、ゲル剤、計量ゲル剤、顆粒剤、遅延放出顆粒剤、発泡性顆粒剤、チューインガム、インプラント、吸入剤、注射剤、注射用脂質複合製剤、注射用リポソーム、挿入剤、徐放挿入剤、子宮内デバイス、ゼリー剤、液剤、徐放液剤、ローション剤、強化ローション剤、シャンプーローション剤、油剤、軟膏剤、強化軟膏剤、ペースト剤、香錠、ペレット剤、散剤、セッケン液剤、流込み用液剤、液剤／滴剤、濃縮液剤、ゲル形成液剤／滴剤、スポンジ、スプレー剤、計量スプレー剤、坐剤、懸濁液剤、懸濁液剤／滴剤、徐放懸濁液剤、スワブ、シロップ剤、錠剤、咀嚼錠、コートされた粒子を含有する錠剤、遅延放出錠、分散錠、発泡錠、徐放錠、口腔内崩壊錠、タンポン、テープ、およびトローチ／ロゼンジからなる群から選択される剤形で薬剤を投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
療法有効量の薬剤の投与がＮＡＤ前駆体をボーラスとして投与することを含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項５３】
療法有効量の薬剤の投与が１時間毎の投与を含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
療法有効量の薬剤の投与が１日１回の投与を含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
療法有効量の薬剤の投与が１日２回の投与を含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
療法有効量の薬剤の投与が１日３回の投与を含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
療法有効量の薬剤の投与が週１回の投与を含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
療法有効量の薬剤の投与が週２回の投与を含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
療法有効量の薬剤の投与が週３回の投与を含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
療法有効量の薬剤の投与が月１回の投与を含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６１】
療法有効量のサーチュイン１（Ｓｉｒｔ１）アゴニストを投与することを含む、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
Ｓｉｒｔ１アゴニストが、レスベラトロール、ＳＲＴ２１０４、ＳＲＴ１４６０、ブテイン、フィセチン、イソニコチンアミド（ＩｓｏＮＡＭ）、ピセアタンノール、ケルセチン、およびその組み合わせからなる群から選択される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
肝臓の再生を向上させる必要がある哺乳類において肝臓の再生を向上させる方法を提供するためのキットであって、療法有効量のニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）前駆体またはＮＡＤ消費の阻害薬を単位剤形で含むキット。
【請求項６４】
ＮＡＤ前駆体が、ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体、ＮＡＤサルベージ経路の中間体、およびニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体のうち１種類以上を含む、請求項６３に記載のキット。
【請求項６５】
ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体が、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸アデニンジヌクレオチド、ニコチン酸モノヌクレオチド、キノリン酸、３−ヒドロキシアントラニレート、３−ヒドロキシキヌレニン、キヌレニン、もしくはＮ−ホルミルキヌレニン、またはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項６４に記載のキット。
【請求項６６】
ＮＡＤサルベージ経路の中間体が、ニコチンアミドもしくはニコチンアミドモノヌクレオチド、またはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項６４に記載のキット。
【請求項６７】
ニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体が、ニコチンアミドリボシドもしくはニコチン酸リボシド、またはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項６４に記載のキット。
【請求項６８】
ＮＡＤ前駆体が、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸リボシド、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）、ニコチンアミド、ＮＡＤＰ、およびＮＡＤ自体、ならびにその医薬的に許容できる塩からなる群から選択される、請求項６３に記載のキット。
【請求項６９】
ＮＡＤ消費の阻害薬が、ポリａｄｐ−リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害薬、ＣＤ３８阻害薬、およびその医薬的に許容できる塩からなる群から選択される、請求項６８に記載のキット。
【請求項７０】
療法有効量のサーチュイン１（Ｓｉｒｔ１）アゴニストを含む、請求項６３に記載のキット。
【請求項７１】
Ｓｉｒｔ１アゴニストが、レスベラトロール、ＳＲＴ２１０４、ＳＲＴ１４６０、ブテイン、フィセチン、イソニコチンアミド（ＩｓｏＮＡＭ）、ピセアタンノール、ケルセチン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項７０に記載のキット。
【請求項７２】
療法有効量のニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）前駆体またはＮＡＤ消費の阻害薬、および生理的に適合するキャリヤー媒体を含む、肝臓の再生を向上させる必要がある哺乳類において肝臓の再生を向上させるための医薬組成物。
【請求項７３】
ＮＡＤ前駆体が、ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体、ＮＡＤサルベージ経路の中間体、およびニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体のうち１種類以上を含む、請求項７２に記載の医薬組成物。
【請求項７４】
ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体が、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸アデニンジヌクレオチド、ニコチン酸モノヌクレオチド、キノリン酸、３−ヒドロキシアントラニレート、３−ヒドロキシキヌレニン、キヌレニン、もしくはＮ−ホルミルキヌレニン、またはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項７３に記載の医薬組成物。
【請求項７５】
ＮＡＤサルベージ経路の中間体が、ニコチンアミドもしくはニコチンアミドモノヌクレオチド、またはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項７３に記載の医薬組成物。
【請求項７６】
ニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体が、ニコチンアミドリボシドもしくはニコチン酸リボシド、またはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項７３に記載の医薬組成物。
【請求項７７】
ＮＡＤ前駆体が、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸リボシド、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）、ニコチンアミド、ＮＡＤＰ、およびＮＡＤ自体、ならびにその医薬的に許容できる塩からなる群から選択される、請求項７２に記載の医薬組成物。
【請求項７８】
ＮＡＤ消費の阻害薬が、ポリａｄｐ−リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害薬、ＣＤ３８阻害薬、およびその医薬的に許容できる塩からなる群から選択される、請求項７２に記載の医薬組成物。
【請求項７９】
医薬組成物が単位剤形で製造される、請求項７２〜７８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８０】
単位剤形が、ボーラス、エアゾール、計量エアゾール、咀嚼バー、カプセル剤、コートされたペレットを収容したカプセル剤、遅延放出ペレットを収容したカプセル剤、徐放ペレットを収容したカプセル剤、濃縮液剤、クリーム剤、強化クリーム剤、坐剤クリーム、ディスク剤、ドレッシング剤、エリキシル剤、乳剤、浣腸剤、徐放繊維、徐放フィルム、ガス剤、ゲル剤、計量ゲル剤、顆粒剤、遅延放出顆粒剤、発泡性顆粒剤、チューインガム、インプラント、吸入剤、注射剤、注射用脂質複合製剤、注射用リポソーム、挿入剤、徐放挿入剤、子宮内デバイス、ゼリー剤、液剤、徐放液剤、ローション剤、強化ローション剤、シャンプーローション剤、油剤、軟膏剤、強化軟膏剤、ペースト剤、香錠、ペレット剤、散剤、セッケン液剤、流込み用液剤、液剤／滴剤、濃縮液剤、ゲル形成液剤／滴剤、スポンジ、スプレー剤、計量スプレー剤、坐剤、懸濁液剤、懸濁液剤／滴剤、徐放懸濁液剤、スワブ、シロップ剤、錠剤、咀嚼錠、コートされた粒子を含有する錠剤、遅延放出錠、分散錠、発泡錠、徐放錠、口腔内崩壊錠、タンポン、テープ、およびトローチ／ロゼンジからなる群から選択される、請求項７９に記載の医薬組成物。
【請求項８１】
単位剤形がボーラスである、請求項８０に記載の医薬組成物。
【請求項８１】
療法有効量のサーチュイン１（Ｓｉｒｔ１）アゴニストを含む、請求項７２に記載の医薬組成物。
【請求項８２】
Ｓｉｒｔ１アゴニストが、レスベラトロール、ＳＲＴ２１０４、ＳＲＴ１４６０、ブテイン、フィセチン、イソニコチンアミド（ＩｓｏＮＡＭ）、ピセアタンノール、ケルセチン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項８１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の引照
[0001]  本出願はU.S Provisional Application No. 62/298,139, 2016年2月22日出願に基づく優先権を主張し、その全体を本明細書に援用する。
【０００２】
政府のライセンス権
[0002]  本発明は、米国国立衛生研究所(National Institutes of Health)が与えたＲ０１  ＡＧ０４３４８３およびＲ０１  ＤＫ０９８６５６のもとに政府の支援でなされた。政府は本発明に一定の権利をもつ。
【０００３】
発明の分野
[0003]  本発明は全般的に肝臓の再生を促進および／または向上させるための方法および組成物、より具体的には、ただし限定ではなく、肝障害の前または後に肝臓の再生を促進および／または向上させるための方法、キットおよび配合物における、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）前駆体およびＮＡＤ消費の阻害薬の使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
[0004]  肝臓の再生能は、外科的切除または外傷もしくは化学物質により誘発された障害からの回復にとって必須である。肝臓の再生に際してニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）の濃度が低下し、それは少なくとも一部は前駆体に対する代謝競合によるものである。
【発明の概要】
【０００５】
[0005]  本発明は、肝臓の再生を向上および促進させるための処置としてＮＡＤ前駆体およびＮＡＤ消費の阻害薬を提供することにより、この分野におけるニーズに対処する。
[0006]  一側面において、本発明は、その必要がある哺乳類において肝臓の再生を向上させるための方法を含む。本方法は、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）活性を増大させる療法有効量の薬剤を投与することを含むことができる。
【０００６】
[0007]  ある態様において、本発明は、その必要がある哺乳類において肝臓の再生を向上させるための方法を含む。本方法は、療法有効量の、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）活性を増大させる薬剤およびサーチュイン１(sirtuin 1)（Ｓｉｒｔ１）アゴニストを投与することを含むことができる。
【０００７】
[0008]  ある態様において、ＮＡＤ活性を増大させる薬剤はＮＡＤ前駆体であってもよい。たとえば、ＮＡＤ前駆体は、ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体、ＮＡＤサルベージ経路の中間体、およびニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体のうち１種類以上を含むことができる。
【０００８】
[0009]  ある態様において、ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体は、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸アデニンジヌクレオチド、ニコチン酸モノヌクレオチド、キノリン酸、３−ヒドロキシアントラニレート、３−ヒドロキシキヌレニン、キヌレニン、Ｎ−ホルミルキヌレニン、またはその医薬的に許容できる塩を含むことができる。ある態様において、ＮＡＤサルベージ経路の中間体は、ニコチンアミド、ニコチンアミドモノヌクレオチド、またはその医薬的に許容できる塩を含むことができる。ある態様において、ニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体は、ニコチンアミドリボシド、ニコチン酸リボシド、またはその医薬的に許容できる塩を含むことができる。
【０００９】
[0010]  ある態様において、ＮＡＤ前駆体は、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸リボシド、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）、ニコチンアミド、ＮＡＤＰ、およびＮＡＤ自体、ならびにその医薬的に許容できる塩のうち１以上を含むことができる。
【００１０】
[0011]  ある態様において、ＮＡＤ活性を増大させる薬剤はＮＡＤ消費の阻害薬であってもよい。ＮＡＤ消費の阻害薬は、ポリａｄｐ−リボースポリメラーゼ(poly adp-ribose polymerase)（ＰＡＲＰ）阻害薬、ＣＤ３８阻害薬、およびその医薬的に許容できる塩のうち１以上であってもよい。
【００１１】
[0012]  他の側面において、本発明は、その必要がある哺乳類において肝臓の再生を向上させる方法を提供するためのキットを含むことができる。ある態様において、キットは療法有効量のニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）前駆体またはＮＡＤ消費の阻害薬を単位剤形で収容することができる。ある態様において、キットは、療法有効量の、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）活性を増大させる薬剤およびサーチュイン１（Ｓｉｒｔ１）アゴニストを単位剤形で収容することができる。
【００１２】
[0013]  他の側面において、本発明は、その必要がある哺乳類において肝臓の再生を向上させるための医薬組成物を含むことができる。ある態様において、組成物は、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）前駆体またはＮＡＤ消費の阻害薬、および生理的に適合するキャリヤー媒体を含むことができる。ある態様において、組成物は、療法有効量の、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）活性を増大させる薬剤およびサーチュイン１（Ｓｉｒｔ１）アゴニスト、ならびに生理的に適合するキャリヤー媒体を含むことができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
[0014]  本発明の例示態様の上記の概要および下記の詳細な記述は、添付の図面と併せて読むとさらに理解できるであろう。
【図１】[0015]  図１は、ニコチンアミドリボシドが肝臓の再生を促進することを示す。１０〜１４週齢のマウス、Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスを、約５００ｍｇ／ｋｇ／日の用量のニコチンアミドリボシド（ＮＲ）で処理した。１４日後、動物に２／３の部分肝切除を施し、４８時間後に分析した（グループ当たりｎ＝６）。（パネルＡ）再生した肝臓の顕微鏡写真。（パネルＢ）再生しつつある肝臓におけるＥｄＵ取込み。挿入図はＮＲ処理した肝臓からの拡大図を示す。（パネルＣ）ＥｄＵ陽性肝細胞の定量。（パネルＤ）肝重量体重比。（パネルＥ）ＰＨｘの前と後の肝臓のＮＡＤ含有量。（パネルＦ）Ｈ＆Ｅで染色した、有糸分裂像ならびにミクロおよびマクロのベシクル状脂肪変化を示す４０×の代表的な肝臓切片。（パネルＧ）多数の高倍率視野(high power field)にわたる有糸分裂像の定量。（パネルＨ）中性脂質を検出するためのオイルレッドＯ(Oil Red O)染色。（パネルＩ）ＮＲ処理マウスおよびプラセボ／Ｈ２Ｏ処理マウスの肝切除の前と後の肝臓トリグリセリド含有量。誤差バーはＳ．Ｅ．Ｍ．を表わす；＊，ｐ  ０．０５；＊＊，ｐ  ０．０１；＊＊＊，ｐ  ０．００１。
【図２】[0016]  図２は、肝細胞特異的なＮａｍｐｔの過剰発現が肝臓の再生を促進することを示す。Ａｌｂ−ＣｒｅのほかにＮａｍｐｔのＣｒｅ誘導性対立遺伝子を保有するマウス（Ｎ＋／Ａｌｂｃｒｅと表記する）および同腹仔対照（Ｎ＋／＋）に２／３の部分肝切除を施し、４８時間後に分析した。（パネルＡ）肝臓におけるＮａｍｐｔのタンパク質およびｍＲＮＡの発現。（パネルＢ）Ｎ＋／Ａｌｂｃｒｅマウスの門脈周囲および中心静脈周囲領域におけるＮａｍｐｔの過剰発現を示す免疫蛍光。挿入図はＮ＋／Ａｌｂｃｒｅの拡大図を示す。（パネルＣ）肝臓におけるＮＡＭＰＴのｍＲＮＡ発現。（パネルＤ）再生しつつある肝臓の顕微鏡写真。（パネルＥ）免疫蛍光法により検出したＥｄＵによって同定した増殖しつつある肝細胞（そのアッセイにおいて緑色として指示される）およびＤＡＰＩで対比染色したもの（そのアッセイにおいて青色として指示される）。挿入図はＮ＋／Ａｌｂｃｒｅの拡大図を示す。（パネルＦ）ＥｄＵ陽性肝細胞の定量（ｎ＝５／グループ）。（パネルＧ）肝重量体重比。（パネルＨ）空腹時血糖値。（パネルＩ）ＰＨｘの前と後の肝臓のＮＡＤ含有量。（パネルＪおよびＫ）Ｈ＆Ｅ染色切片において高倍率下で肝細胞における有糸分裂像を計数することにより決定した有糸分裂指数。Ｈ＆Ｅで染色した代表的な肝臓切片を示す。（パネルＬ）オイルレッドＯおよび肝臓トリグリセリドアッセイにより決定した肝臓脂質含有量。誤差バーはＳ．Ｅ．Ｍ．を表わす；＊，ｐ  ０．０５；＊＊，ｐ  ０．０１；＊＊＊，ｐ  ０．００１。
【図３】[0017]  図３は、成人発症型Ｎａｍｐｔ過剰発現が再生表現型について十分であることを示す。ＮａｍｐｔのＣｒｅ誘導性対立遺伝子を保有するマウスにＡＡＶ−Ｃｒｅを感染させたもの（ＮＡＡＶｃｒｅと表記する）および同腹仔対照（ＮＡＡＶｇｆｐまたはＷＴＡＡＶｃｒｅ）に２／３の部分肝切除を施し、３６時間後に分析した。（パネルＡ）ＮＡＡＶｃｒｅマウスの門脈周囲および中心静脈周囲領域におけるＮａｍｐｔの過剰発現を示す免疫蛍光。挿入図はＮＡＡＶｃｒｅの拡大図を示す。（パネルＢ）空腹時血糖値。（パネルＣ）再生しつつある肝臓の顕微鏡写真。（パネルＤ）免疫蛍光法により検出したＥｄＵによって同定した増殖しつつある肝細胞（そのアッセイにおいて緑色として指示される）およびＤＡＰＩで対比染色したもの（そのアッセイにおいて青色として指示される）。（パネルＥ）ＥｄＵ陽性肝細胞の定量（ｎ＝５／グループ）。（パネルＦ）肝重量体重比。（パネルＧ）肝臓トリグリセリド含有量。（パネルＨ）右パネル：Ｈ＆Ｅで染色した代表的な肝臓切片。左パネル：オイルレッドＯによる脂質蓄積。誤差バーはＳ．Ｅ．Ｍ．を表わす；＊，ｐ  ０．０５；＊＊，ｐ  ０．０１；＊＊＊，ｐ  ０．００１。
【図４】[0018]  図４は、肝細胞特異的なＮａｍｐｔ喪失が再生を損なわせ、ＮＲによって救済されることを示す。２つのｆｌｏｘｅｄ対立遺伝子を保有する動物にＡＡＶ発現Ｃｒｅリコンビナーゼ（ＡＡＶ−Ｃｒｅ）を注射することにより、肝細胞特異的Ｎａｍｐｔを欠失したマウスを作成した。ＡＡＶ−Ｇｆｐを感染させた同腹仔を対照として用いた。ＮＲ（約５００ｍｇ／ｋｇ／日）による処理を感染の５日後、ＰＨｘの２週間前に開始した。ＰＨｘの４８時間後に分析を開始した。（パネルＡおよびＢ）肝臓におけるＮａｍｐｔのタンパク質およびｍＲＮＡの発現。（パネルＣ）再生しつつある肝臓の顕微鏡写真。（パネルＤ）免疫蛍光法により検出したＥｄＵによって同定した増殖しつつある肝細胞（そのアッセイにおいて赤色として指示される）およびＤＡＰＩで対比染色したもの（そのアッセイにおいて青色として指示される）。（パネルＥ）ＥｄＵ陽性肝細胞の定量（ｎ＝５〜６／グループ）。（パネルＦ）肝重量体重比。（パネルＧ）ＰＨｘの前と後の肝臓のＮＡＤ含有量。（パネルＨ）Ｈ＆Ｅ染色切片において高倍率下で肝細胞における有糸分裂像を計数することにより決定した有糸分裂指数。Ｈ＆Ｅで染色した代表的な肝臓切片を示す（ｎ＝５〜６／グループ）。（パネルＩ）Ｈ＆Ｅ（左パネル）およびオイルレッドＯ（右パネル）で染色した代表的な肝臓切片。（パネルＪ）肝臓トリグリセリド含有量。誤差バーはＳ．Ｅ．Ｍ．を表わす；＊，ｐ  ０．０５；＊＊，ｐ  ０．０１；＊＊＊，ｐ  ０．００１。
【図５】[0019]  図５は、肝細胞増殖が肝臓ＮＡＤ濃度との強い相関性および肝臓脂質含有量との逆相関性を示すことを示す。個々の動物からのデータをプロットして、ＮＡＤ、脂質代謝および肝細胞増殖の間の相関性を調べた。（パネルＡ）ＮＡＤと肝細胞増殖の正の相関性。（パネルＢ）肝細胞増殖とトリグリセリド含有量の逆相関性。（パネルＣ）ＮＲ処理マウス（ｎ＝６／グループ）において肝切除の前または後の両方で評価した肝臓ＡＴＰ含有量。（パネルＤおよびＥ）肝臓ＡＴＰ含有量およびＮＡＤおよび肝細胞増殖の間の正の相関性。（パネルＦ）ＮＡＤ仲介による再生の提唱モデル。
【図６】[0020]  図６は、（パネルＡ）ＮＲ処理した肝臓切片についてのＳｉｒｔ１ノックアウト試験、および（パネルＢ）Ｓｉｒｔ１ノックアウトマウスからの易感染性肝臓におけるＮＲによる肝臓の再生試験に示すように、肝細胞特異的なＳｉｒｔ１欠失が再生を損なうこと、およびＮＲにより部分的に救済されることを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
[0021]  肝臓は哺乳類において実質的な再生が可能である数少ない構造体のひとつであり、元の質量の３０％未満から完全に再増殖できる。この再生能は、外傷性障害、肝臓毒素もしくは感染因子への曝露、または外科的切除などの条件下での生存にとって重要である。肝機能の回復は、肝臓の質量を回復するために必要なエネルギー産生の増大に大きく依存する。しかし、肝臓が急性および慢性の障害に応答するために重要なメカニズム、ならびに肝臓が再生する能力を支配する生体経路は、十分には分かっていない。したがって、肝障害を伴う患者において正常な肝機能に戻る再生のプロセスおよび速度を促進できる療法に実質的な関心がある。
【００１５】
[0022]  以上のことからみて、本発明は、その必要がある哺乳類において肝臓の再生を向上させ、肝臓の疾患、機能不全(disorder)、または障害(injury)を処置するための方法、キットおよび医薬組成物を提供する。ある態様において、これらの方法、キットおよび医薬組成物は、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）前駆体（単数または複数）および／またはＮＡＤ消費の阻害薬である薬剤を含むことができる。
【００１６】
[0023]  本明細書中で用いる“ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）前駆体”は、ＮＡＤの増加をもたらすいずれかの小分子である。この小分子は還元型または非還元型であってもよい。
【００１７】
[0024] 本明細書中で用いる“ＮＡＤ消費の阻害薬”は、ＮＡＤ利用能を増大させる阻害薬である。ＮＡＤ利用能には、細胞もしくは組織における総ＮＡＤの増加、または当該酵素が利用できるＮＡＤの量の増加が含まれる。
【００１８】
[0025]  本発明の方法
[0026]  一側面において、肝臓を再生する方法が包含される。ある態様において、肝臓の疾患、機能不全または障害を処置する方法が包含される。それぞれの場合、本方法はニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）を増加させることを含む。
【００１９】
[0027]  ＮＡＤの増加。本発明によれば、下記のうち１種類以上の薬剤を投与することにより、ＮＡＤの活性および／または含有量を増大させことができる：（１）ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）前駆体（単数または複数）である薬剤；および／または（２）ＮＡＤ消費の阻害薬として作用する薬剤。
【００２０】
[0028]  ある態様において、ＮＡＤもしくはＮＡＤＨを投与することにより、またはＮＡＤを合成することにより、ＮＡＤ活性を増大させることができる。ＮＡＤは３つの主要な経路を介して合成することができる；ＮＡＤがトリプトファンから合成されるデノボ経路、分解されたＮＡＤ産物、たとえばニコチンアミドを再循環させることによりＮＡＤが産生されるＮＡＤサルベージ経路、およびニコチンアミドリボシドがニコチンアミドリボシドキナーゼによりニコチンアミドモノヌクレオチドに変換されるニコチンアミドリボシドキナーゼ経路。よって、本発明のＮＡＤ前駆体は、ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体、ＮＡＤサルベージ経路の中間体、およびニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体のうち１種類以上を含むことができる。
【００２１】
[0029]  ＮＡＤ前駆体がＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体を含むある態様において、そのような中間体は、限定ではなく、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸アデニンジヌクレオチド、ニコチン酸モノヌクレオチド、キノリン酸、３−ヒドロキシアントラニレート、３−ヒドロキシキヌレニン、キヌレニン、Ｎ−ホルミルキヌレニン、またはその医薬的に許容できる塩を含むことができる。
【００２２】
[0030]  ＮＡＤ前駆体がニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体を含むある態様において、そのような中間体は、限定ではなく、ニコチンアミド、ニコチンアミドモノヌクレオチド、またはその医薬的に許容できる塩を含むことができる。
【００２３】
[0031]  ＮＡＤ前駆体がニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体を含むある態様において、そのような中間体は、限定ではなく、ニコチンアミドリボシド、ニコチン酸リボシド、またはその医薬的に許容できる塩を含むことができる。
【００２４】
[0032]  ある態様において、ＮＡＤ前駆体はトリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸リボシド、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）、ニコチンアミド、ＮＡＤＰ、およびＮＡＤ自体、ならびにその医薬的に許容できる塩からなる群から選択することができる。
【００２５】
[0033]  ある態様において、本方法は、ＮＡＤ消費の阻害薬を投与することを含むことができる。ＮＡＤ消費の阻害薬は、ポリａｄｐ−リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害薬、ＣＤ３８阻害薬、およびその医薬的に許容できる塩のうち１種類以上を含むことができる。ある態様において、ＰＡＲＰ阻害薬は下記のうち１種類以上を含むことができるが、それらに限定されない：ヨードニトロクマリン、５−ヨード−６−ニトロクマリン、３，４−ジヒドロ−５−メチル−イソキノリノン  ４−アミノ−１，８−ナフタルイミド、３−メトキシベンズアミド、８−ヒドロキシ−２−メチル−３−ヒドロ−キナゾリン−４−オン、３−（４−クロロフェニル）−キノキサリン−５−カルボキサミド、２−（３’−メトキシフェニル）ベンゾイミダゾール−４−カルボキサミド、ベンズアミド、３−アミノベンズアミド、３−アミノフタルヒドラジド、および１，５−ジヒドロキシイソキノリン、ならびにその医薬的に許容できる塩類。
【００２６】
[0034]  用語“医薬的に許容できる塩”は、当技術分野で知られている多様な有機および無機の対イオンから誘導される塩類を表わす。医薬的に許容できる酸付加塩は、無機酸および有機酸により形成できる。それから塩類を誘導できる特定の無機酸には、たとえば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸およびリン酸が含まれる。それから塩類を誘導できる特定の有機酸には、たとえば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびサリチル酸が含まれる。医薬的に許容できる塩基付加塩は、無機塩基および有機塩基により形成できる。それから塩類を誘導できる無機塩基には、たとえば、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガンおよびアルミニウムが含まれる。それから塩類を誘導できる有機塩基には、たとえば、第一級、第二級および第三級アミン、天然の置換アミンを含めた置換アミン、環状アミンおよび塩基性イオン交換樹脂が含まれる。具体例には、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、およびエタノールアミンが含まれる。医薬的に許容できる塩基付加塩は、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム、およびマグネシウム塩から選択される。
【００２７】
[0035]  Ｓｉｒｔ１活性化。肝臓の再生は、ＮＡＤ活性を増大させる薬剤とＳｉｒｔ１活性を増大させる薬剤を組み合わせることにより向上させることができる。ある態様において、本発明は、療法有効量の、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）活性を増大させる薬剤およびＳｉｒｔ１アゴニストを投与することにより、その必要がある哺乳類において肝臓の再生を向上させるための方法を含む。したがって、療法有効量の、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）活性を増大させる薬剤およびＳｉｒｔ１アゴニストを、その必要がある患者に共投与することができる。
【００２８】
[0036]  本明細書中で用いる用語“共投与(co-administration)”、“共投与する”、“と組み合わせた投与”、“と組み合わせて投与する”、“同時(simultaneous)”および“同時(concurrent)”は、２種類以上の有効医薬成分（本発明の好ましい態様において、たとえばＮＡＤ活性を増大させる少なくとも１種類の薬剤、およびＳｉｒｔ１活性を増大させる少なくとも１種類の薬剤）を、両方の有効医薬成分および／またはそれらの代謝産物がその対象に同時に存在するように対象に投与することを包含する。共投与は、別個の組成物中における同時投与、別個の組成物中における異なる時点での投与、または２種類以上の有効医薬成分が存在する組成物における投与を含む。別個の組成物中における同時投与および両方の薬剤が存在する組成物中における投与が好ましい。
【００２９】
[0037]  本明細書中で用いる用語“アゴニスト”は、タンパク質または分子の生物活性を増大させる化合物または分子薬剤を表わす。たとえば、“Ｓｉｒｔ１”アゴニストはＳｉｒｔ１の生物活性を増大させる。アゴニストはＳｉｒｔ１タンパク質の酵素活性を刺激することができ、あるいはそれは転写および／または翻訳の増大によりＳｉｒｔ１の発現の増大をもたらすことができる。Ｓｉｒｔ１アゴニストの例は既知であり、たとえば小分子、活性化作用をもつ抗体、タンパク質（たとえば、酵素系のコ−アクチベーター）、および上流エフェクターシグナルを含むことができる。アゴニストは、直接的に、または他のエフェクター分子を介して間接的に、Ｓｉｒｔ１活性を活性化することができる。Ｓｉｒｔ１アゴニスト（すなわち、Ｓｉｒｔ１活性を増大させる薬剤）の例には、たとえばレスベラトロール(resveratrol)、ＳＲＴ２１０４（ＧＳＫ２２４５８４０）、ＳＲＴ１４６０、ブテイン(butein)、フィセチン(fisetin)、イソニコチンアミド（ＩｓｏＮＡＭ）、ピセアタンノール(piceatannol)、およびケルセチン(quercetin)が含まれる。ある態様において、Ｓｉｒｔ１アゴニストはレスベラトロール、ＳＲＴ２１０４、ＳＲＴ１４６０、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。そのような化合物の構造は下記のとおりである:
【００３０】
【化１】
2019505559.tif 000003
【００３１】
[0038]  Ｓｉｒｔ１アゴニストの例は、さらにBonkowski, et al.., Nature Reviews (2016) 17: 679-690、U.S. Patent Application Publication No. 2011/0015192および2013/0338178、ならびにU.S. Patent No. 7,829,556および8,247,565に提示および記載されており、それらの全体を本明細書に援用する。
【００３２】
[0039]  肝臓の疾患、機能不全、または障害。本発明の方法は、その必要がある哺乳類において肝臓の再生を向上させる。本発明の方法は、療法有効量の本明細書に記載する薬剤または薬剤類（たとえば、ＮＡＤ活性を増大させる少なくとも１種類の薬剤および／またはＳｉｒｔ１活性を増大させる少なくとも１種類の薬剤）の投与を含むことができる。本方法は、哺乳類が肝障害を伴う場合に療法有効量の薬剤を投与することを含むことができる。本方法は、肝障害の前および／または肝障害の後に療法有効量の薬剤を投与することを含むこともできる。
【００３３】
[0040]  本明細書中で用いる“肝臓の再生”は、既存の肝細胞の複製または既存の肝細胞の機能の改善を表わす。
[0041]  本明細書中で用いる用語“肝障害(liver injury)”は、肝臓に対する損傷を表わすことができ、それは外傷性肝障害（たとえば、外傷性事象または事故により起きた肝損傷）、外科的肝臓切除（たとえば、肝臓の選択された部分を摘除するために実施された外科処置）、肝硬変、肝線維症、肝感染症、肝移植、胆管障害から生じた肝損傷、および化学物質誘発性肝障害を含むことができる。化学物質誘発性肝障害は、肝臓毒性化学物質により起きた肝臓に対する損傷、または１種類以上の化学物質による肝臓の中毒の結果を含むことができる。たとえば、化学物質誘発性肝障害はアセトアミノフェンおよびアルコールまたはその代謝副産物により起きた肝損傷を含むことができる。
【００３４】
[0042]  本発明における薬剤の投与は、当業者に既知であるいずれかの手段により達成できる。本発明の方法を実施するのに使用する薬剤は、そのレシピエントにおいて希望する療法効果を誘導するのに十分な量で投与することができる。よって、本明細書中で用いる用語“療法有効量”は、下記のために十分である薬剤または薬剤類の量を表わす：（１）そのような量の薬剤または薬剤類の非存在下の同様な状況の哺乳類と比較して、哺乳類において肝臓の再生を向上させるかまたは他の形で促進する；および／または（２）検出可能な治療効果、予防効果、または改善効果をもたらす。療法有効量は、意図する適用（インビトロまたはインビボ）、または処置される患者および疾患状態（たとえば、患者の体重、年齢および性別）、疾患状態の重症度、投与様式などに応じて変動する可能性があり、それは当業者が容易に決定できる。この用語は、標的とする細胞、組織またはタンパク質において特定の応答を誘導する用量にも適用される。具体的な用量は、選択する特定の化合物、従うべき投与計画、その化合物が他の化合物との組み合わせで投与されるかどうか、投与のタイミング、それを投与する組織、およびその化合物を運ぶ物理的送達システムに応じて変動するであろう。
【００３５】
[0043]  本明細書中で用いる用語“投与する(administer)”、“投与(administration)”、または“投与すること(administering)”は、下記を表わす：（１）本開示に従って、保険専門家または資格をもつ彼のエージェントが、または彼もしくは彼女の指示のもとに、供給すること(providing)、付与すること(giving)、投薬すること(dosing)、および／または処方すること；および／または（２）本開示に従って、哺乳類が挿入、服用または摂取すること。
【００３６】
[0044]  本明細書中で用いる用語“処置する(treat)”、“処置(treatment)”、および／または“処置すること(treating)”は、疾患、機能不全、損傷、または病的状態（たとえば、肝障害）を治癒、改善、安定化、阻止、または制御することを意図した、その疾患、機能不全、損傷、または病的状態（たとえば、肝障害）の管理を表わすことができる。処置は、哺乳類において肝障害の前または後にいずれかにおける、肝臓の再生を向上させるための本明細書に記載する介入をも含むことができる。
【００３７】
[0045]  ある態様において、本発明の方法は、肝障害の約６か月、または約５か月、または約４か月、または約３か月、または約２か月、または約１か月、または約３週間、または約２週間、または約１週間、または約６日、または約５日、または約４日、または約３日、または約２日、または約１日、または約１〜２３時間前に、療法有効量の薬剤を投与することを含むことができる。
【００３８】
[0046]  ある態様において、本発明の方法は、肝障害の約１〜２３時間、または約１日、または約２日、または約３日、または約４日、または約５日、または約６日、または約１週間、または約２週間、または約３週間、または約１か月、または約２か月、または約３か月、または約４か月、または約５か月、または約６か月後に、療法有効量の薬剤を投与することを含むことができる。
【００３９】
[0047]  ある態様において、本発明の方法は、療法有効量の薬剤を毎時間、または毎日（たとえば、１日１回、１日２回、１日３回など）、または毎週（たとえば、週１回、週２回、週３回など）、または毎月、哺乳類に投与することを含むことができる。
【００４０】
[0048]  ある態様において、本発明の方法は、療法有効量の薬剤を哺乳類に１以上の投与経路に従って投与することを含むことができる。特定の態様において、投与経路は口腔内、歯、子宮頚管、筋肉内、吸入、頭蓋内、リンパ内、眼内、腹腔内、胸膜腔内、クモ膜下、気管内、子宮内、脈管内、静脈内、膀胱内、鼻腔内、眼、経口、耳、胆嚢潅流、心臓潅流、歯周、直腸、脊髄、皮下、舌下、局所、膣内、経皮、尿管、尿道、およびそれらの組み合わせからなる群から選択できる。選択された態様において、投与経路は経口である。ある態様において、たとえば、哺乳類への療法有効量の薬剤の投与は、薬剤を哺乳類の食物および／または飲用水に入れることにより薬剤を哺乳類の食事に含有させることを含むことができる。
【００４１】
[0049]  ある態様において、本発明の方法は、療法有効量の薬剤を下記のものからなる群から選択される剤形で哺乳類に投与することを含むことができる：ボーラス、エアゾール、計量エアゾール、咀嚼バー、カプセル剤、コートされたペレットを収容したカプセル剤、遅延放出ペレットを収容したカプセル剤、徐放ペレットを収容したカプセル剤、濃縮液剤、クリーム剤、強化クリーム剤、坐剤クリーム、ディスク剤(disc)、ドレッシング剤、エリキシル剤、乳剤、浣腸剤、徐放繊維、徐放フィルム、ガス剤、ゲル剤、計量ゲル剤、顆粒剤、遅延放出顆粒剤、発泡性顆粒剤、チューインガム、インプラント、吸入剤、注射剤、注射用脂質複合製剤(injectable lipid complex)、注射用リポソーム、挿入剤(insert)、徐放挿入剤、子宮内デバイス、ゼリー剤、液剤、徐放液剤、ローション剤、強化ローション剤、シャンプーローション剤、油剤、軟膏剤、強化軟膏剤、ペースト剤、香錠(pastille)、ペレット剤、散剤、セッケン液剤、流込み用液剤(solution for slush)、液剤／滴剤、濃縮液剤、ゲル形成液剤／滴剤、スポンジ、スプレー剤、計量スプレー剤、坐剤、懸濁液剤、懸濁液剤／滴剤、徐放懸濁液剤、スワブ、シロップ剤、錠剤、咀嚼錠、コートされた粒子を含有する錠剤、遅延放出錠、分散錠、発泡錠、徐放錠、口腔内崩壊錠、タンポン、テープ、およびトローチ／ロゼンジ
[0050]  ある態様において、本発明の方法は、下記の投与量以下の療法有効量の薬剤を哺乳類に投与することを含むことができる：１０ｇ／ｋｇ、９．５ｇ／ｋｇ、９．０ｇ／ｋｇ、８．５ｇ／ｋｇ、８．０ｇ／ｋｇ、７．５ｇ／ｋｇ、７．０ｇ／ｋｇ、６．５ｇ／ｋｇ、６．０ｇ／ｋｇ、５．５ｇ／ｋｇ、５．０ｇ／ｋｇ、４．５ｇ／ｋｇ、４．０ｇ／ｋｇ、３．５ｇ／ｋｇ、３．０ｇ／ｋｇ、２．５ｇ／ｋｇ、２．０ｇ／ｋｇ、１．５ｇ／ｋｇ、１．０ｇ／ｋｇ、０．９５ｇ／ｋｇ、０．９ｇ／ｋｇ、０．８５ｇ／ｋｇ、０．８ｇ／ｋｇ、０．７５ｇ／ｋｇ、０．７ｇ／ｋｇ、０．６５ｇ／ｋｇ、０．６ｇ／ｋｇ、０．５５ｇ／ｋｇ、０．５ｇ／ｋｇ、０．４５ｇ／ｋｇ、０．４ｇ／ｋｇ、０．３５ｇ／ｋｇ、０．３ｇ／ｋｇ、０．２５ｇ／ｋｇ、０．２ｇ／ｋｇ、０．１５ｇ／ｋｇ、０．１ｇ／ｋｇ、０．０９ｇ／ｋｇ、０．０８ｇ／ｋｇ、０．０７ｇ／ｋｇ、０．０６ｇ／ｋｇ、０．０５ｇ／ｋｇ、０．０４ｇ／ｋｇ、０．０３ｇ／ｋｇ、０．０２ｇ／ｋｇ、０．０１ｇ／ｋｇ、０．００９ｇ／ｋｇ、０．００８ｇ／ｋｇ、０．００７ｇ／ｋｇ、０．００６ｇ／ｋｇ、０．００５ｇ／ｋｇ、０．００４ｇ／ｋｇ、０．００３ｇ／ｋｇ、０．００２ｇ／ｋｇ、０．００１ｇ／ｋｇ、０．０００９ｇ／ｋｇ、０．０００８ｇ／ｋｇ、０．０００７ｇ／ｋｇ、０．０００６ｇ／ｋｇ、０．０００５ｇ／ｋｇ、０．０００４ｇ／ｋｇ、０．０００３ｇ／ｋｇ、０．０００２ｇ／ｋｇ、または０．０００１ｇ／ｋｇ（重量）；ここで、“ｇ／ｋｇ”は哺乳類の体重（ｋｇ）当たりの薬剤の平均重量（ｇ）と解釈される。
【００４２】
[0051]  ある態様において、本発明の方法は、下記の投与量より多い量の療法有効量の薬剤を哺乳類に投与することを含むことができる：０．０００１ｇ／ｋｇ、０．０００２ｇ／ｋｇ、０．０００３ｇ／ｋｇ、０．０００４ｇ／ｋｇ、０．０００５ｇ／ｋｇ、０．０００６ｇ／ｋｇ、０．０００７ｇ／ｋｇ、０．０００８ｇ／ｋｇ、０．０００９ｇ／ｋｇ、０．００１ｇ／ｋｇ、０．００１５ｇ／ｋｇ、０．００２ｇ／ｋｇ、０．００２５ｇ／ｋｇ、０．００３ｇ／ｋｇ、０．００３５ｇ／ｋｇ、０．００４ｇ／ｋｇ、０．００４５ｇ／ｋｇ、０．００５ｇ／ｋｇ、０．００５５ｇ／ｋｇ、０．００６ｇ／ｋｇ、０．００６５ｇ／ｋｇ、０．００７ｇ／ｋｇ、０．００７５ｇ／ｋｇ、０．００８ｇ／ｋｇ、０．００８５ｇ／ｋｇ、０．００９ｇ／ｋｇ、０．００９５ｇ／ｋｇ、０．０１ｇ／ｋｇ、０．０１５ｇ／ｋｇ、０．０２ｇ／ｋｇ、０．０２５ｇ／ｋｇ、０．０３ｇ／ｋｇ、０．０３５ｇ／ｋｇ、０．０４ｇ／ｋｇ、０．０４５ｇ／ｋｇ、０．０５ｇ／ｋｇ、０．０５５ｇ／ｋｇ、０．０６ｇ／ｋｇ、０．０６５ｇ／ｋｇ、０．０７ｇ／ｋｇ、０．０７５ｇ／ｋｇ、０．０８ｇ／ｋｇ、０．０８５ｇ／ｋｇ、０．０９ｇ／ｋｇ、０．０９５ｇ／ｋｇ、０．１ｇ／ｋｇ、０．１５ｇ／ｋｇ、０．２ｇ／ｋｇ、０．２５ｇ／ｋｇ、０．３ｇ／ｋｇ、０．３５ｇ／ｋｇ、０．４ｇ／ｋｇ、０．４５ｇ／ｋｇ、０．５ｇ／ｋｇ、０．５５ｇ／ｋｇ、０．６ｇ／ｋｇ、０．６５ｇ／ｋｇ、０．７ｇ／ｋｇ、０．７５ｇ／ｋｇ、０．８ｇ／ｋｇ、０．８５ｇ／ｋｇ、０．９ｇ／ｋｇ、０．９５ｇ／ｋｇ、１ｇ／ｋｇ、１．５ｇ／ｋｇ、２ｇ／ｋｇ、２．５ｇ／ｋｇ、３ｇ／ｋｇ、３．５ｇ／ｋｇ、４ｇ／ｋｇ、４．５ｇ／ｋｇ、５ｇ／ｋｇ、５．５ｇ／ｋｇ、６ｇ／ｋｇ、６．５ｇ／ｋｇ、７ｇ／ｋｇ、７．５ｇ／ｋｇ、８ｇ／ｋｇ、８．５ｇ／ｋｇ、９ｇ／ｋｇ、９．５ｇ／ｋｇ、または１０ｇ／ｋｇ（重量）；ここで、“ｇ／ｋｇ”は哺乳類の体重（ｋｇ）当たりの薬剤の平均重量（ｇ）と解釈される。
【００４３】
[0052]  本発明のキット
[0053]  前記の本発明方法によれば、１種類以上の薬剤（たとえば、ＮＡＤ活性を増大させる少なくとも１種類の薬剤および／またはＳｉｒｔ１活性を増大させる少なくとも１種類の薬剤）を単位剤形で収容することができるキットを提供することができる。本発明によるキットは、本明細書に記載する方法に使用できる。ある態様において、キットはそれらの薬剤を本発明方法に従って使用するための指示を含むことができる。
【００４４】
[0054]  本発明の医薬組成物
[0055]  ある態様において、本発明は、その必要がある哺乳類において肝臓の再生を向上させるための医薬組成物を含む。特定の態様において、医薬組成物は１種類以上の薬剤（たとえば、ＮＡＤ活性を増大させる少なくとも１種類の薬剤および／またはＳｉｒｔ１活性を増大させる少なくとも１種類の薬剤）および生理的に適合するキャリヤー媒体を含むことができる。
【００４５】
[0056]  ある態様において、本発明の医薬組成物中に付与されるいずれかの薬剤の濃度は、たとえば医薬組成物の１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％または０．０００１％  ｗ／ｗ、ｗ／ｖまたはｖ／ｖ未満である。
【００４６】
[0057]  ある態様において、本発明の医薬組成物中に付与されるいずれかの薬剤の濃度は、医薬組成物の９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９．７５％、１９．５０％、１９．２５％、１９％、１８．７５％、１８．５０％、１８．２５％、１８％、１７．７５％、１７．５０％、１７．２５％、１７％、１６．７５％、１６．５０％、１６．２５％、１６％、１５．７５％、１５．５０％、１５．２５％、１５％、１４．７５％、１４．５０％、１４．２５％、１４％、１３．７５％、１３．５０％、１３．２５％、１３％、１２．７５％、１２．５０％、１２．２５％、１２％、１１．７５％、１１．５０％、１１．２５％、１１％、１０．７５％、１０．５０％、１０．２５％、１０％、９．７５％、９．５０％、９．２５％、９％、８．７５％、８．５０％、８．２５％、８％、７．７５％、７．５０％、７．２５％、７％、６．７５％、６．５０％、６．２５％、６％、５．７５％、５．５０％、５．２５％、５％、４．７５％、４．５０％、４．２５％、４％、３．７５％、３．５０％、３．２５％、３％、２．７５％、２．５０％、２．２５％、２％、１．７５％、１．５０％、１．２５％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％または０．０００１％  ｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖ以上である。
【００４７】
[0058]  ある態様において、本発明の医薬組成物中におけるいずれかの薬剤の濃度は、医薬組成物の約０．０００１％から約５０％まで、約０．００１％から約４０％まで、約０．０１％から約３０％まで、約０．０２％から約２９％まで、約０．０３％から約２８％まで、約０．０４％から約２７％まで、約０．０５％から約２６％まで、約０．０６％から約２５％まで、約０．０７％から約２４％まで、約０．０８％から約２３％まで、約０．０９％から約２２％まで、約０．１％から約２１％まで、約０．２％から約２０％まで、約０．３％から約１９％まで、約０．４％から約１８％まで、約０．５％から約１７％まで、約０．６％から約１６％まで、約０．７％から約１５％まで、約０．８％から約１４％まで、約０．９％から約１２％まで、または約１％から約１０％  ｗ／ｗ、ｗ／ｖまたはｖ／ｖまでの範囲である。
【００４８】
[0059]  ある態様において、本発明の医薬組成物中に付与されるいずれかの薬剤の濃度は、医薬組成物の約０．００１％から約１０％まで、約０．０１％から約５％まで、約０．０２％から約４．５％まで、約０．０３％から約４％まで、約０．０４％から約３．５％まで、約０．０５％から約３％まで、約０．０６％から約２．５％まで、約０．０７％から約２％まで、約０．０８％から約１．５％まで、約０．０９％から約１％まで、約０．１％から約０．９％  ｗ／ｗ、ｗ／ｖまたはｖ／ｖまでの範囲である。
【００４９】
[0060]  ある態様において、本発明の医薬組成物中に付与されるいずれかの薬剤の量は、１０ｇ、９．５ｇ、９．０ｇ、８．５ｇ、８．０ｇ、７．５ｇ、７．０ｇ、６．５ｇ、６．０ｇ、５．５ｇ、５．０ｇ、４．５ｇ、４．０ｇ、３．５ｇ、３．０ｇ、２．５ｇ、２．０ｇ、１．５ｇ、１．０ｇ、０．９５ｇ、０．９ｇ、０．８５ｇ、０．８ｇ、０．７５ｇ、０．７ｇ、０．６５ｇ、０．６ｇ、０．５５ｇ、０．５ｇ、０．４５ｇ、０．４ｇ、０．３５ｇ、０．３ｇ、０．２５ｇ、０．２ｇ、０．１５ｇ、０．１ｇ、０．０９ｇ、０．０８ｇ、０．０７ｇ、０．０６ｇ、０．０５ｇ、０．０４ｇ、０．０３ｇ、０．０２ｇ、０．０１ｇ、０．００９ｇ、０．００８ｇ、０．００７ｇ、０．００６ｇ、０．００５ｇ、０．００４ｇ、０．００３ｇ、０．００２ｇ、０．００１ｇ、０．０００９ｇ、０．０００８ｇ、０．０００７ｇ、０．０００６ｇ、０．０００５ｇ、０．０００４ｇ、０．０００３ｇ、０．０００２ｇ、または０．０００１ｇ以下である。
【００５０】
[0061]  ある態様において、本発明の医薬組成物中に付与される薬剤の量は、０．０００１ｇ、０．０００２ｇ、０．０００３ｇ、０．０００４ｇ、０．０００５ｇ、０．０００６ｇ、０．０００７ｇ、０．０００８ｇ、０．０００９ｇ、０．００１ｇ、０．００１５ｇ、０．００２ｇ、０．００２５ｇ、０．００３ｇ、０．００３５ｇ、０．００４ｇ、０．００４５ｇ、０．００５ｇ、０．００５５ｇ、０．００６ｇ、０．００６５ｇ、０．００７ｇ、０．００７５ｇ、０．００８ｇ、０．００８５ｇ、０．００９ｇ、０．００９５ｇ、０．０１ｇ、０．０１５ｇ、０．０２ｇ、０．０２５ｇ、０．０３ｇ、０．０３５ｇ、０．０４ｇ、０．０４５ｇ、０．０５ｇ、０．０５５ｇ、０．０６ｇ、０．０６５ｇ、０．０７ｇ、０．０７５ｇ、０．０８ｇ、０．０８５ｇ、０．０９ｇ、０．０９５ｇ、０．１ｇ、０．１５ｇ、０．２ｇ、０．２５ｇ、０．３ｇ、０．３５ｇ、０．４ｇ、０．４５ｇ、０．５ｇ、０．５５ｇ、０．６ｇ、０．６５ｇ、０．７ｇ、０．７５ｇ、０．８ｇ、０．８５ｇ、０．９ｇ、０．９５ｇ、１ｇ、１．５ｇ、２ｇ、２．５、３ｇ、３．５、４ｇ、４．５ｇ、５ｇ、５．５ｇ、６ｇ、６．５ｇ、７ｇ、７．５ｇ、８ｇ、８．５ｇ、９ｇ、９．５ｇ、または１０ｇより多い。
【００５１】
[0062]  本発明による薬剤は、広い投与範囲にわたって有効である。たとえば、ある哺乳類の処置において、独立して１日当たり０．００１から１００ｇまで、０．０１から７５ｇまで、０．１から５０ｇまで、および１から５０ｇまでの範囲の投与量が使用できる投与量の例である。あるいは、ある哺乳類の処置において、独立して１日当たり０．０１から１０００ｍｇまで、０．５から５００ｍｇまで、および１から５０ｍｇまでの範囲の投与量が使用できる投与量の例である。厳密な投与量は、投与経路、その薬剤を投与する剤形、処置すべき哺乳類の性別および年齢、処置すべき対象の体重、ならびに担当医の好みおよび経験に依存するであろう。
【００５２】
[0063]  本明細書中で用いる用語“生理的に適合するキャリヤー媒体”には、希望する特定の剤形に適したあらゆる溶媒、希釈剤、または他の液状ビヒクル、分散助剤または懸濁助剤、界面活性剤、等張化剤、増粘剤または乳化剤、保存剤、固体結合剤、滑沢剤、増量剤などが含まれる。Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th edition, A.R. Genaro et al., Part 5, Pharmaceutical Manufacturing, pp. 669-1015 (Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD/Philadelphia, PA) (2000)に、医薬組成物の配合に用いられる種々のキャリヤー、およびその調製のための既知の手法が示されている。いずれかの一般的な医薬用キャリヤー媒体が、たとえば望ましくない生物学的作用を生じるかあるいはそのような化合物または薬剤を含めた他のいずれかの配合物成分（単数または複数）と有害な様式で相互作用することにより、本発明に用いられる薬剤と不適合である場合を除いて、それの使用は本発明の範囲に含まれるものとする。特定の態様において、生理的に適合するキャリヤー媒体は水であってもよい。
【００５３】
[0064]  ある態様において、医薬組成物を単位剤形で製造することができる。特定の態様において、単位剤形は生理的に適合するキャリヤー媒体を含有することができ、下記のものからなる群から選択できる：ボーラス、エアゾール、計量エアゾール、咀嚼バー、カプセル剤、コートされたペレットを収容したカプセル剤、遅延放出ペレットを収容したカプセル剤、徐放ペレットを収容したカプセル剤、濃縮液剤、クリーム剤、強化クリーム剤、坐剤クリーム、ディスク剤、ドレッシング剤、エリキシル剤、乳剤、浣腸剤、徐放繊維、徐放フィルム、ガス剤、ゲル剤、計量ゲル剤、顆粒剤、遅延放出顆粒剤、発泡性顆粒剤、チューインガム、インプラント、吸入剤、注射剤、注射用脂質複合製剤、注射用リポソーム、挿入剤、徐放挿入剤、子宮内デバイス、ゼリー剤、液剤、徐放液剤、ローション剤、強化ローション剤、シャンプーローション剤、油剤、軟膏剤、強化軟膏剤、ペースト剤、香錠、ペレット剤、散剤、セッケン液剤、流込み用液剤、液剤／滴剤、濃縮液剤、ゲル形成液剤／滴剤、スポンジ、スプレー剤、計量スプレー剤、坐剤、懸濁液剤、懸濁液剤／滴剤、徐放懸濁液剤、スワブ、シロップ剤、錠剤、咀嚼錠、コートされた粒子を含有する錠剤、遅延放出錠、分散錠、発泡錠、徐放錠、口腔内崩壊錠、タンポン、テープ、およびトローチ／ロゼンジ。
【００５４】
[0065]  本発明の方法、キットおよび医薬組成物は、哺乳類を処置するのに有用である。そのような哺乳類には、ヒトおよび非ヒト哺乳類が含まれる。非ヒト哺乳類には、たとえば愛玩動物、たとえばイヌおよびネコ、農業用動物、たとえばウシ、ウマなどを含めた家畜、ならびに外来動物、たとえば動物園の動物が含まれる。しかし、特定の態様において哺乳類はヒトである。
【００５５】
[0066]  本発明は、ＮＡＤ前駆体の補充が肝障害の実験モデルにおいて転帰を改善できることを立証する。しかし、部分肝切除からの回復も肝細胞におけるＮａｍｐｔの発現レベルによって影響される可能性があり、Ｎａｍｐｔを欠如するある哺乳類における再生不良がニコチンアミドリボシドによって完全に救済される。
【００５６】
[0067]  一過性肝臓脂肪症は、肝臓再生の特徴的な特色である。他の実験設定において、ＮａｍｐｔはＮＡＤ合成を介して肝臓脂肪症に対する抵抗性を及ぼすことが示唆された。これらの所見は、ＮＲを投与したマウスまたは肝細胞にＮａｍｐｔを過剰発現しているマウスにおいてＰＨｘ後４８時間目には脂肪症がほぼ完全に存在しないという本発明の所見と良く一致する。ＮＲ処理したマウスにおいてＰＨｘ後３６時間目には若干の脂肪症がみられ、それはＮＡＤ合成が増大した状態での再生に際して脂質がなお蓄積するが、より速やかに排除されるという可能性を示唆する。これは、再生しつつある肝臓により脂質がＮＡＤ感受性様式で処理されてエネルギー源を提供し、一方で血流中への排出または代謝前駆体としての使用のためのグルコースを節約するモデルと一致するであろう。十分なＮＡＤ濃度が存在しない状態では、脂質酸化および結果的にＡＴＰレベルが低下して、細胞増殖を停止させるであろう。
【００５７】
[0068]  本発明のいずれか１つの理論に限定されるわけではないが、ＮＡＤ利用能の増大が、ＡＴＰ産生に直接関与する酵素の補因子としてのそれの役割のみによって、および／または核酸合成のための前駆体の節約によって再生を改善する一方で、それはサーチュインを含めたシグナル伝達酵素に対する共基質としてのそれの役割を介して作用する可能性もある。これに関して、Ｎａｍｐｔはサーチュイン１（Ｓｉｒｔ１）のデアシラーゼ活性に影響を及ぼすことが知られている。最近の研究は、肝臓脂質代謝および肝臓再生の両方においてＳｉｒｔ１についての役割を示唆している。肝臓再生が損なわれた高齢のマウスは肝臓Ｓｉｒｔ１の発現が低く、高齢のマウスにおける部分肝切除に応答して異所性発現するＳｉｒｔ１は肝細胞増殖を再建し、これに対し若いマウスにおいてＳｉｒｔ１のノックダウンは再生に障害を及ぼす。これと対照的に、Ｓｉｒｔ１を過剰発現している若いマウスは、胆汁酸調節の欠陥のため部分肝切除後の死亡率が高い。Ｎａｍｐｔ発現は障害のない肝臓において肝細胞トリグリセリドレベルを低下させ、その作用はＳｉｒｔ１活性増大と相関し、かつ過剰発現しているＳｉｒｔ１により表現型模写される(phenocopied)。したがって、本発明のいずれか１つの理論に限定されるわけではないが、ＮＡＤ再生の増大に伴って本発明者らが観察している脂肪症の低減は脂質代謝に対するＳｉｒｔ１依存性の作用を反映している可能性がある。さらに、Ｓｉｒｔ１を活性化する小分子ポリフェノールであるレスベラトロールは損傷モデルにおいて肝細胞生存率を改善するが、複製速度を低下させることも示された。
【００５８】
[0069]  全体として、本発明はＮＡＤ代謝を調節して肝障害からの回復を促進できることを立証する。
[0070]  以下の例により本発明をさらに詳細に記載する。これらの例は説明のために提示されるにすぎず、決して本発明を限定すると解釈すべきではない。
【実施例】
【００５９】
[0071]  ＮＡＤ利用能が肝臓の再生を制限するかどうかを直接試験するために、ＮＡＤ前駆体ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）を飲用水中に投与したマウスにおいて、肝障害についての十分に確立されたモデルである部分肝切除を実施した。ＮＡＤ代謝の役割を肝細胞においてより具体的に証明するために、ＮＡＤ生合成の律速酵素であるニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ(Nicotinamide phosphoribosyltransferase)（Ｎａｍｐｔ）を過剰発現または欠失させる遺伝子戦略を採用した。その結果は、ＮＡＤ利用能が実際に肝臓の再生を制限することを立証し、肝臓ＮＡＤ含有量を増大させる戦略が肝障害または毒性傷害に対する防御となる可能性があることを示唆する。
【００６０】
[0072]  動物、ハウジングおよび薬物処理：ｆｌｏｘｅｄ  ｓｔｏｐカセットによりＣＡＧＧＳプロモーターから分離されたＮａｍｐｔ  ｃＤＮＡの外因性コピーを保有する動物をＣ５７ＢＬ／６Ｊバックグラウンド（先に記載７）に戻し交雑したものを、アルブミン−Ｃｒｅを保有するマウス（ＪＡＸ系統Ｂ６．Ｃｇ−Ｔｇ（Ａｌｂ−ｃｒｅ）２１Ｍｇｎ／Ｊ，ストック番号００３５７４）と交配することにより、Ｎａｍｐｔを肝細胞に発現しているマウスを得た。アルブミン  Ｃｒｅを欠如する同腹仔を対照として用いた。成人発症型のＮａｍｐｔ過剰発現に関する試験のために、８〜９週齢のマウスＮａｍｐｔｆｌ／ｆｌおよびＮａｍｐｔｗｔ／ｗｔマウスの眼窩後叢(retroorbital plexus)内に、チロキシン結合グロブリン(thyroxine-binding globulin)（Ｔｂｇ）プロモーター（ＡＡＶ−Ｃｒｅ）の制御下でＣｒｅリコンビナーゼを発現するアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ−Ｃｒｅ）または増強された緑色蛍光タンパク質を発現するアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ−Ｇｆｐ）を注射した。ＡＡＶ−Ｇｆｐを注射したＮａｍｐｔｆｌ／ｆｌマウスおよびＡＡＶ−Ｃｒｅを注射したＮａｍｐｔｗｔ／ｗｔマウスを対照として用いた。Ｎａｍｐｔの誘導欠失のために、リエージェ大学(Universite de Liege)のOberdan Leoが独自に作成してＣ５７／ＢＬ６バックグラウンドに戻し交雑したマウスを使用し、これはワシントン大学(Washington University)のシンイチロー・イマイ(Shin-Ichiro Imai)によって寛大に提供された。前記のように、２つのｆｌｏｘｅｄ対立遺伝子を保有する８〜９週齢のマウスの眼窩後叢に、チロキシン結合グロブリン(thyroxine-binding globulin)(Ｔｂｇ)プロモーター（ＡＡＶ−Ｃｒｅ）の制御下でＣｒｅリコンビナーゼを発現しているアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ−Ｃｒｅ）または増強された緑色蛍光タンパク質を発現しているアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ−Ｇｆｐ）を注射した。空腹時血糖を測定し、成人発症型過剰発現および肝臓特異的ノックアウトの両コホートにおいて、ＡＡＶ感染後１４日目以降に部分肝切除を実施した。動物を無病原体バリヤー施設内にマウス４〜５匹／ケージのグループで１２時間の明暗サイクルで飼料と水を自由に摂取できる状態で収容した。野生型動物のみを含む実験のために、雄Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスをＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓから直接注文した。ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）（Ｃｈｒｏｍａｄｅｘ  Ｉｎｃ．）補充実験のために、遮光ボトル内の飲用水にＮＲを３．０ｍｇ／ｍｌで溶解し、３日毎に交換した。絶食および再給餌実験のために、Ａｌｐｈａ−ｄｒｉ床敷きを入れたケージ内において水を任意摂取できる状態で動物を１６時間絶食させた。すべての動物作業を、U.S. Department of Health and Human Services Guide for the Care and Use of Laboratory Animals（米国保健福祉省、実験動物の管理と使用に関する指針）に従って、University of Pennsylvania Institutional Animal Care and Use Committee（ペンシルベニア大学、動物の管理と使用に関する委員会）の承認を得て実施した。
【００６１】
[0073]  部分肝切除：１０〜１４週齢の雄トランスジェニックマウスに、Mitchell and Willenbringのプロトコルに従って午前８時と正午の間に部分肝切除（ＰＨｘ）を行なった。要約すると、イソフルオラン（isofluorane）麻酔後に、腹側正中線切開を行なった。次いで、肝臓の７０％を構成する中葉および左側葉を椎弓根ライゲーション(pedicle ligation)により切除した。ＥｄＵ（５−エチニル−２’−デオキシウリジン）標識化（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐｒｏｂｅｓ）のために、マウスに標識試薬を１６ｍｇ／ｋｇの用量で、と殺の５時間前に腹腔内注射した。指示に従って、動物をＰＨｘの３６時間または４８時間後にと殺した。切除して再生しつつある肝臓を液体窒素中で瞬間凍結し、４％パラホルムアルデヒド中に固定し、ＮＡＤおよびＡＴＰアッセイのためにＯＣＴ媒体（Ｔｉｓｓｕｅ−ＴＥＫ  Ｏ．Ｃ．Ｔコンパウンド，Ｓａｋｕｒａ）に包埋するか、あるいは液体窒素中で予冷した金属クランプ内で急速凍結させた。マウスに関するすべての外科処置がInstitutional Animal Care and Use Committee protocols of the University of Pennsylvania（ペンシルベニア大学、動物の管理と使用に関する委員会のプロトコル）により承認された。
【００６２】
[0074]  組織検査、免疫組織化学、および免疫蛍光：ヘマトキシリンおよびエオシン染色したスライドにおいて有糸分裂像を計数した。パラフィン包埋した５μｍ厚の肝臓切片をキシレン中で脱パラフィン処理し、続いて勾配エタノール系列を通して再水和し、Ｇｉｌｌ  ３ヘマトキシリン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）およびエオシン（Ｓｉｇｍａ）で染色した。有糸分裂活性領域をまず低倍率でスクリーニングした。定量には、大部分の有糸分裂活性領域の１０の高倍率視野（４０×）における総有糸分裂カウントを考慮に入れた。ディジタルイメージ捕捉システムと連結した光学顕微鏡を用いて、４００×の倍率で代表的な顕微鏡写真を取得した。パラフィン切片におけるＮａｍｐｔ発現の免疫蛍光検出のために、抗原をＲ−ｂｕｆｆｅｒ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃｔ  ＃  ６２７０６−１０）中に回収し、続いてＣａｓ−Ｂｌｏｃｋ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ００−８１２０）中で２０分間、ケンチングおよびブロッキングした。次いでスライドを４℃で加湿チャンバー内において一次ウサギポリクローナル抗ＮＡＭＰＴ抗体（Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，希釈率１：１０００）と共に一夜インキュベートした。ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８）を二次抗体として１：６００の希釈率で用い、スライドをＤＡＰＩ（Ｖｅｃｔｏｒ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で対比染色した。定量のために、Ｚｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｐｌａｎ  ２イメージングシステムを用いて、中心静脈および門脈の両方の領域を撮影する２０×対物レンズ下で細胞を検査およびイメージングした。
【００６３】
[0075]  ＥｄＵ染色：パラフィン包埋した肝臓切片を、Ｃｌｉｃｋ−ｉＴ  ＥｄＵ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８またはＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５９４  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｋｉｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）のいずれかを用い、製造業者のプロトコルに従って、ＥｄＵ染色し、それぞれの肝臓の５〜６つのランダム領域をイメージングした。手動で２００×において中心静脈および門脈三つ組(portal triad)の両方の領域を計数し、ＤＡＰＩ対比染色を正規化することにより、ＥｄＵ陽性肝細胞の画分を判定した。
【００６４】
[0076]  オイルレッドＯ染色：ＯＣＴ中に凍結した肝臓試料を５μｍの厚さに切断し、１０％中性緩衝ホルマリン中に固定した。スライドをプロピレングリコール（Ｓｉｇｍａ）中に２分間入れておき、次いでオイルレッドＯ（Ｓｉｇｍａ）中で１０分間、６０℃でインキュベートした。スライドを次いで８５％プロピレングリコール溶液に１分間移し、ヘマトキシリン（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で対比染色した。ディジタルイメージ捕捉システムと連結したＮｉｋｏｎ  Ｅ６００明視野顕微鏡を用いて２００×の倍率で、代表的なイメージを取得した。
【００６５】
[0077]  イムノブロッティング：ウェスタンブロット分析のために、瞬間凍結した肝臓片を、Ｈａｌｔホスファターゼ阻害薬（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）および完全プロテアーゼ阻害薬（Ｒｏｃｈｅ）を補充したＲＩＰＡ緩衝液中で、ｔｉｓｓｕｅ  ｌｙｚｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ）内において溶解した。組織溶解物を１５，０００ｇで１５分間、４℃での遠心により予備澄明化した。変性した後、試料を４〜１５％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに溶解し、湿式転写装置（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）でＰＶＤＦメンブレン（Ｍｉｌｉｐｏｒｅ）へ転写し、抗ＮＡＭＰＴ（Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＰＢＥＦ（Ａ３００−３７２Ａ），希釈率１：５０００）およびＨＲＰコンジュゲートしたβ−アクチン（Ａｂｃａｍ，ａｂ４９９００）抗体を用いて検査した。免疫反応性タンパク質を化学発光により検出した。Ｓｕｐｅｒ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｆｅｍｔｏ基質（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いてＢｉｏ−Ｒａｄイメージングステーションにイメージを捕捉した。
【００６６】
[0078]  遺伝子発現分析：凍結した肝臓からＴｒｉｚｏｌ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で総ＲＮＡを抽出した。Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（高性能ｃＤＮＡ逆転写キット）（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で製造業者の推奨に従って１μｇのＲＮＡを逆転写した。Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ７９００ＨＴシステムでＳＹＢＲ緑色マスターミックス（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてリアルタイムＰＣＲを実施した。各試料について３つのテクニカルレプリケートを取得し、遺伝子特異的プライマーを用いて得られた結果を定量するために相対標準曲線法を用いた。ＴＡＴＡボックス結合タンパク質(TATA box binding protein)遺伝子（ＴＢＰ）およびβ−アクチンをハウスキーピング遺伝子として用いた。
【００６７】
[0079]  肝臓からのＮＡＤ代謝産物抽出：５０ｍｇの予冷したクランプ凍結(clamp frozen)肝臓から、０．６Ｍ過塩素酸中、４℃で、金属ビーズセットを備えたｔｉｓｓｕｅ  ｌｙｚｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて２０Ｈｚで２分間、ＮＡＤを抽出した。不溶性物質を１５，０００ｇで１０分間、４℃においてペレット化し、透明な上清を氷冷１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ８）中に１：１００希釈した。前記７に従ってＧｒａｅｆｆ  ａｎｄ  Ｌｅｅ  １１の方法から改変した９６ウェルフォーマットでの酵素サイクリングアッセイにより、ＮＡＤを測定した。要約すると、使用前に新たにサイクリングミックスを調製した；５ｕｌのＮＡＤ標準品または希釈組織抽出物を、下記を含むサイクリング混合物９５μｌと混合した（２％エタノール，１００ｇ／ｍｌ  アルコールデヒドロゲナーゼ，１０ｇ／ｍｌ  ジアホラーゼ(diaphorase)，２０Ｍレサズリン(resazurin)，１０Ｍフラビンモノヌクレオチド，１０ｍＭニコチンアミド，０．１％  ＢＳＡ；１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）中）。サイクリング反応を室温で３０分間進行させ、５４４ｎｍにおける励起および５９０ｎｍにおける発光の蛍光として測定したレゾルフィン(resorufin)蓄積率に基づいてＮＡＤの濃度を決定した。
【００６８】
[0080]  肝臓トリグリセリドアッセイ：２５ｍｇの瞬間凍結した肝臓組織を、ｔｉｓｓｕｅ  ｌｙｓｅｒを用いて細胞溶解緩衝液（１４０ｍＭ  ＮａＣｌ，５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．４，０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ）中に抽出した。試料を１４，０００ｒｐｍで１５分間遠心し、Ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｓｔａｎｂｉｏ）でグリセロールを標準品として用いてトリグリセリドをアッセイした。
【００６９】
[0081]  ＡＴＰ測定：瞬間凍結した肝臓の中和した酸抽出物約５０ｍｇ中のＡＴＰを、ＡＴＰ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて製造業者のプロトコルに従って測定した。
【００７０】
[0082]  グルコース測定：一夜（１６時間）絶食後、ＯｎｅＴｏｕｃｈ  Ｕｌｔｒａグルコース分析計を用いて尾静脈から血糖値を測定した。
[0083]  統計解析：すべての結果を平均±ＳＥＭとして表わす。２グループ間の比較は、独立両側スチューデントのｔ検定(unpaired 2-tailed Student’s t test)を用いて解析された。３以上のグループの比較は、Ｐｒｉｓｍ  ６（ＧｒａｐｈＰａｄ）における一元配置分散分析(one-way ANOVA)、続いてスチューデントのｔ検定による事後解析(post-hoc analysis)を用いて解析された。相関行列については、ピアソン相関係数
(Pearson correlation coefficient)を用いてデータを解析した。平均間の差はＰ＜０．０５を有意と判定した。
【００７１】
[0084]  実施例１：ニコチンアミドリボシドは肝臓の再生を促進する
[0085]  ＮＡＤ利用能が肝臓再生の速度を制限するかどうかを調べるために、２／３の部分肝切除（ＰＨｘ）の１４日前に開始して、野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスの飲用水にＮＲ（３ｍｇ／ｍＬ，約５００ｍｇ／ｋｇ）を補充した。対照マウスからの再生しつつある肝臓はＰＨｘ後４８時間までは特徴的なまだらのパターンをもつ淡色であったが、ＮＲ処理したマウスからのものはより均一に着色し（図１，パネルＡ）、ＤＮＡへのＥｄＵの取込みにより査定して著しく向上した肝細胞増殖を示した（図１，パネルＢおよびＣ）。これは肝臓質量の有意の改善に反映された（図１，パネルＤ）。明らかに、ＮＲを投与した対照マウスにおける肝臓のサイズの変化はみられず、２グループ間に切除した肝葉の重量の差はなかった（データを示していない）。予想どおり、ＮＲ処理マウスにおいては肝切除の前（約３５％）と後（約５８％）の両方で肝臓のＮＡＤ含有量が増大した（図１，パネルＥ）。Ｈ＆Ｅ染色切片の分析により、ＮＲの存在下での有糸分裂活性の４８％増大が明らかになった（図１，パネルＦおよびＧ）。さらに、肝臓再生の初期に特徴的な脂肪変化は、対照においては容易に認められたが、ＮＲ処理マウスにおいては顕著ではなかった。これらには、ミクロおよびマクロ両方のベシクル状脂肪滴の存在（図１，パネルＦおよびＨ）ならびに肝臓トリグリセリドの蓄積（図１，パネルＩ）を特徴とする肝臓脂肪症が含まれる。よって、ＮＲ処理は肝臓ＮＡＤ含有量を増大させて肝臓の再生を有意に促進し、一方で脂肪の変化を改善するのに十分である。
【００７２】
[0086]  実施例２：肝細胞特異的Ｎａｍｐｔ過剰発現は肝臓の再生に対する全身ＮＲの影響を再現する
[0087]  経口ＮＲは肝臓再生速度に影響を及ぼす全身作用を伴う可能性があるので、特に肝細胞におけるＮＡＤ合成が以上の所見を再現するのに十分であるかどうかを判定するための試験を実施した。ニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｎａｍｐｔ）を過剰発現するマウスの系統をＣｒｅ誘導様式で用い、アルブミンプロモーターの制御下でＣｒｅを発現するマウスに交配した（図２，パネルＡ〜Ｃ）。Ｎａｍｐｔ過剰発現は均一ではなく（図２，パネルＢ）、門脈および中心静脈の周囲領域で著しく顕著であった。ＰＨｘ後、４８時間目までに、Ｎａｍｐｔ過剰発現肝臓はより濃くかつより均一な色に見え（図２，パネルＤ）、ＮＲ処理についてみられたように、劇的に増大したＥｄＵ取込みがあった（図２，パネルＥおよびＦ）。これらの変化は再生した肝臓のサイズの増大と相関していた（図２，パネルＧ）。明らかに、肝細胞特異的なＮａｍｐｔ過剰発現は外科処置前の体重または肝臓重量に影響を及ぼさなかったが、空腹時血糖値のわずかな上昇が認められた（図２，パネルＨ）。肝臓のＮＡＤ含有量は、ＰＨｘの前と後の両方で有意に増大した（図２，パネルＩ）。有糸分裂指数が増大し、脂肪滴の蓄積およびトリグリセリドの含有量は劇的に低減した（図２，パネルＪ〜Ｌ）。したがって、肝臓特異的なＮＡＤ生合成増強は肝臓の再生に対する全身ＮＲ処理の鍵効果を再現する。
【００７３】
[0088]  実施例３：成人発症型過剰発現はＮａｍｐｔの有益な効果に十分である
[0089]  Ｎａｍｐｔ過剰発現マウスにおける再生改善が若齢期における代謝適応に対する二次的なものである可能性を除外するために、Ｃｒｅをアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）により成体マウスに送達する第２セットの実験を実施した。この実験からのＮａｍｐｔ過剰発現マウスを異なる２セットの同腹仔対照と比較した：ｆｌｏｘｅｄ対立遺伝子を保有し、ＧＦＰをコードするＡＡＶを感染させたもの、およびＡＡＶ−Ｃｒｅを感染させた野生型マウス。成体期にのみ肝臓にＮａｍｐｔを過剰発現するマウスは、軽度に上昇した空腹時血糖値（図３，パネルＡおよびＢ）、および増大した肝細胞増殖を示した；これは生涯過剰発現を伴うマウスにおいて得られた結果と類似する（図３，パネルＣ〜Ｆ）。前者のグループのマウスは有糸分裂像を定量できるように、ＰＨｘ後、４８時間目にと殺されたのに対し、成人発症型グループはＤＮＡ合成のピークを捕えるために３６時間目にと殺された。先の実験の場合のように、Ｎａｍｐｔ過剰発現は急性肝臓脂肪症および肝臓トリグリセリド蓄積を減弱させた（図３，パネルＧおよびＨ）。
【００７４】
[0090]  実施例４：肝細胞特異的なＮａｍｐｔ欠失は肝臓の再生を損ない、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）によって完全に救済される
[0091]  Ｎａｍｐｔは脂肪組織および免疫細胞から分泌され、細胞外形態（ｅＮａｍｐｔ／ＰＢＥＦ／ビスファチン(Visfatin))は触媒活性を維持する。初代肝細胞からのＮａｍｐｔ分泌も観察されており、したがってトランスジェニックマウスからの肝細胞におけるＮａｍｐｔの過剰発現が循環中への漏出をもたらし、それが他の細胞タイプにおいてＮＡＤ依存性作用をもつことは形式上は依然として可能性がある。さらに、ｅＮａｍｐｔはそれの触媒活性とは別の機能をもつ可能性があり、その結果、ＮＲとＮａｍｐｔ過剰発現が独立した経路を介して作動して肝臓の再生に影響を及ぼすという可能性が生じる。これらの点に対処するために、Ｎａｍｐｔに対する２つのｆｌｏｘｅｄ対立遺伝子を保有する成体動物にＡＡＶ−Ｃｒｅを注射することにより、肝細胞特異的Ｎａｍｐｔ欠失マウスを作成した（図４，パネルＡおよびＢ）。ＡＡＶ−ＧＦＰを感染させたｆｌｏｘｅｄ対立遺伝子を保有する同腹仔を対照として用いた。感染後５日目に、各グループの半数のマウスにＮＲを含有する飲用水を与え、ＰＨｘ前にさらに２週間処理した。肉眼的には、Ｎａｍｐｔｆｌ／ｆｌＡＡＶ−Ｃｒｅマウスの再生肝臓は点状出血を伴う淡色であり、それがＮＲ処理により阻止された（図４，パネルＣ）。ＰＨｘ後の最初の４８時間における肝臓再生は、Ｎａｍｐｔ  ＫＯマウスにおいては顕著に損なわれ、ＮＲ処理により回復し（図４，パネルＤ〜Ｆ）、それによって両遺伝子型において効果的にＮＡＤ含有量が増大した（図４，パネルＧ）。一貫してＮＲ処理はＮａｍｐｔ  ＫＯマウスにおいて有糸分裂指数を大幅に回復させ（図４，パネルＨおよびＩ）、この場合も切除した肝葉の重量に変化がなく、それはすべての肝臓が損傷前には正常サイズであったことを示す。
【００７５】
[0092]  組織学的検査により、ミクロおよびマクロ両方のベシクル状脂肪滴を含む劇的な肝臓脂肪症がＮａｍｐｔｆｌ／ｆｌＡＡＶ−Ｃｒｅマウスに明らかになった（図４，パネルＩ，上の図）。対照的に、ＮＲは再生しつつある野生型肝臓における肝臓脂質蓄積を消失させ、ＮＡＭＰＴ欠失した再生しつつある肝臓における肝臓脂肪変化をほぼ正常化した（図４，パネルＩ，下の図）。肝臓トリグリセリドも、ＮＲ処理でＮａｍｐｔｆｌ／ｆｌＡＡＶ−Ｇｆｐマウスにおいて約７５％、Ｎａｍｐｔｆｌ／ｆｌＡＡＶ−Ｃｒｅマウスにおいて約３５％、減少した（図４，パネルＪ）。これらの結果は、肝細胞における内因性Ｎａｍｐｔ発現の損失は肝臓の再生を損ない、脂質代謝を劣化させること、およびＮＡＤ前駆体の補充がこれらの変化を改善するのに十分であることを立証する。
【００７６】
[0093]  実施例５：肝臓ＮＡＤ含有量はエネルギー状態、トリグリセリド蓄積、および肝細胞増殖と強く相関する
[0094]  ＮＡＤ、脂質代謝および肝細胞増殖の間の関係をさらに洞察するために、これらの相関関係が個々の動物のレベルでも正しいかどうかを判定するための試験を準備した。肝細胞増殖は、肝臓ＮＡＤ含有量との著しい正の相関性、および肝臓トリグリセリドとの逆相関性を示す（図５，パネルＡおよびＢ）。いずれか１つの理論に限定されるわけではないが、これは細胞の増殖および分裂のためのエネルギーを供給するには脂質を酸化できる最適ＮＡＤレベルが必要であることを反映している可能性がある；それは、ＮＡＤが脂肪酸酸化の３−ヒドロキシアシル−ＣｏＡ  デヒドロゲナーゼ（ＨＡＤＨ）触媒工程およびトリカルボン酸サイクル（ＴＣＡ）に直接必要であること、あるいはシグナル伝達酵素、たとえばサーチュインの共基質としてのそれの役割によるものである。この仮説と一致して、再生しつつある肝臓においてＡＴＰレベルが有意に低下し、ＮＲ処理によって増大した（図５，パネルＣ）。さらに、ＡＴＰ含有量はＮＡＤおよび肝細胞増殖の両方と正の相関性があり（図５，パネルＤおよびＥ）、これは肝臓における再生によって課されるエネルギーストレスをＮＲが軽減できることを示唆する。
【００７７】
[0095]  提唱した肝臓再生のモデルを図５に示す（パネルＦ）。本発明のいずれか１つの理論に拘束されるわけではないが、肝臓ＮＡＤは脂肪酸酸化を促進し、それにより肝細胞の増殖および再生に必要なＡＴＰを産生する。ＮＡＤは脂肪酸酸化の３−ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ（ＨＡＤＨ）触媒工程およびトリカルボン酸サイクル（ＴＣＡ）に直接必要であるが、間接的には、たとえばＮＡＤを共基質として用いるＳＩＲＴ１などのシグナル伝達酵素を介して作用する可能性もある。ＮＡＤ濃度は、ニコチンアミドおよびホスホリボシルピロホスフェートからのニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）の形成を触媒するＮａｍｐｔの発現に基づいて調節される可能性がある。あるいは、ＮＭＮはＮＲからＮＲキナーゼの作用によって産生される可能性がある。
【００７８】
[0096]  実施例６：肝細胞特異的なサーチュイン１欠失は再生を損ない、ＮＲによって部分的に救済される
[0097]  ＮＲが肝臓の再生を改善する能力を判定するための試験を、このプロセスを損なうＳｉｒｔ１欠失に関して実施した。
【００７９】
[0098]  Ｓｉｒｔ１ノックアウトおよび同腹仔対照を部分肝切除（ＰＨｘ）の前にＮＲ（５００ｍｇ／Ｋｇ／日）で２週間処理した。ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した代表的な肝臓切片は、Ｓｉｒｔ１欠失マウスにおいてミクロおよびマクロ両方のベシクル状脂肪滴をもつ急性肝臓脂肪症を明らかにした（図６，パネルＡ）。ＮＲ処理はこの表現型を部分的に救済し、肝臓の脂肪変化を減弱した。
【００８０】
[0099]  他のアッセイにおいて、Ｓｉｒｔ１ノックアウトマウスにおいてＰＨｘ後の最初の３６時間における肝臓の再生が損なわれ、ＮＲ処理によって回復した。ＮＲ仲介による肝臓組織再生は、野生型およびＳｉｒｔ１ノックアウトマウスの両方の非処理肝臓と比較した再生肝臓のサイズの増大として現われる（図６，パネルＢ）。
【００８１】
[00100]  本発明が関係する技術の水準を記載するために多数の特許および非特許刊行物を本明細書に引用することができる。これらの刊行物それぞれの開示内容全体を本明細書に援用する。
【００８２】
[00101]  本発明の特定の態様を前記に記載および／または例示したが、以上の開示内容から他の種々の態様が当業者に明らかであろう。したがって、本発明は記載および／または例示した特定の態様に限定されず、特許請求の範囲に記載の範囲および精神から逸脱することなく変更および改変が可能である。
【００８３】
[00102]  さらに、本明細書中で用いる用語“約”は、寸法、サイズ、配合、パラメーター、形状、ならびに他の量および特徴は厳密ではなく、その必要もなく、おおよそであり、および／または希望に従ってより大きいかまたはより小さく、許容度、換算因子、四捨五入、測定誤差など、および当業者に既知である他の因子を反映することを意味する。一般に寸法、サイズ、配合、パラメーター、形状、ならびに他の量および特徴は、そうであると明確に述べているか否かにかかわらず“約”または“おおよそ”である。著しく異なるサイズ、形状および寸法の態様に前記のアレンジメントを採用できることを明記する。
【００８４】
[00103]  さらに、接続語(transitional term)“を含む(comprising)”、“本質的に・・・からなる(consisting essentially of)”および“からなる(consisting of)”は、元の形または補正した形の特許請求の範囲において用いる場合、引用されていない追加の請求要素または工程（あるとすれば）がその請求項（単数または複数）の範囲から除外されるものに関して、その請求項の範囲を規定する。用語“を含む”は、包括的(inclusive)または無制限(open-ended)であって追加の引用されていない要素、方法、工程または物質をいずれも除外しないものとする。用語“からなる”は、その請求項に特定されたもの以外の要素、方法、工程または物質（後者の場合は特定されたその物質（単数または複数）に通常付随する不純物）を除外する。用語“本質的に・・・からなる”は、請求項の範囲を、特定された要素、方法、工程または物質（単数または複数）、およびその請求項に記載された発明の基本的な新規特徴（単数または複数）に実質的に影響を及ぼさないものに限定する。本明細書に記載された、本発明を具体的に示したすべての組成物、配合物、キットおよび方法は、別の態様においては“を含む”、“本質的に・・・からなる”および“からなる”によってより詳細に規定することができる。
【００８５】
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【図１】
2019505559.tif 000004
【図２】
2019505559.tif 000005
【図３】
2019505559.tif 000006
【図４】
2019505559.tif 000007
【図５】
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【図６】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年11月16日(2018.11.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
療法有効量の、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）活性を増大させる薬剤を含む、肝臓の再生を向上させる必要がある哺乳類において肝臓の再生を向上させるための医薬組成物。
【請求項２】
薬剤がＮＡＤ前駆体を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
ＮＡＤ前駆体が、ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体、ＮＡＤサルベージ経路の中間体、およびニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体のうち１種類以上を含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体が、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸アデニンジヌクレオチド、ニコチン酸モノヌクレオチド、キノリン酸、３−ヒドロキシアントラニレート、３−ヒドロキシキヌレニン、キヌレニン、もしくはＮ−ホルミルキヌレニン、またはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ＮＡＤサルベージ経路の中間体が、ニコチンアミドもしくはニコチンアミドモノヌクレオチド、またはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体が、ニコチンアミドリボシドもしくはニコチン酸リボシド、またはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ＮＡＤ前駆体が、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸リボシド、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）、ニコチンアミド、ＮＡＤＰ、およびＮＡＤ自体、ならびにその医薬的に許容できる塩からなる群から選択される、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項８】
薬剤がＮＡＤ消費の阻害薬を含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ＮＡＤ消費の阻害薬が、ポリａｄｐ−リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害薬、ＣＤ３８阻害薬、およびその医薬的に許容できる塩からなる群から選択される、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
哺乳類が肝臓外科処置を受けようとしている、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
哺乳類が肝障害のリスクをもつ、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
哺乳類が肝障害を伴う、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
療法有効量の薬剤が肝障害の前に投与される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
療法有効量の薬剤が肝障害の約６か月前、約５か月前、約４か月前、約３か月前、約２か月前、約１か月前、約３週間前、約２週間前、約１週間前、約６日前、約５日前、約４日前、約３日前、約２日前、約１日前、又は約１〜２３時間前に投与される、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
療法有効量の薬剤が肝障害の後に投与される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
療法有効量の薬剤が肝障害の約１〜２３時間後、約１日後、約２日後、約３日後、約４日後、約５日後、約６日後、約１週間後、約２週間後、約３週間後、約１か月後、約２か月後、約３か月後、約４か月後、約５か月後、又は約６か月後に投与される、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
肝障害が、外傷性肝障害、肝硬変、肝線維症、肝感染症、肝移植、肝損傷（胆管障害、外科的肝臓切除および化学物質誘発性肝障害から生じるもの）のうち１以上を含む、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
化学物質誘発性肝障害が、アセトアミノフェン誘発性肝障害およびアルコール誘発性肝障害のうち１以上を含む、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
療法有効量の薬剤の投与が、口腔内、歯、子宮頚管、筋肉内、吸入、頭蓋内、リンパ内、眼内、腹腔内、胸膜腔内、クモ膜下、気管内、子宮内、脈管内、静脈内、膀胱内、鼻腔内、眼、経口、耳、胆嚢潅流、心臓潅流、歯周、直腸、脊髄、皮下、舌下、局所、膣内、経皮、尿管、尿道、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される投与経路を含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
療法有効量の薬剤の投与が経口投与を含む、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
療法有効量の薬剤の投与が、ボーラス、エアゾール、計量エアゾール、咀嚼バー、カプセル剤、コートされたペレットを収容したカプセル剤、遅延放出ペレットを収容したカプセル剤、徐放ペレットを収容したカプセル剤、濃縮液剤、クリーム剤、強化クリーム剤、坐剤クリーム、ディスク剤、ドレッシング剤、エリキシル剤、乳剤、浣腸剤、徐放繊維、徐放フィルム、ガス剤、ゲル剤、計量ゲル剤、顆粒剤、遅延放出顆粒剤、発泡性顆粒剤、チューインガム、インプラント、吸入剤、注射剤、注射用脂質複合製剤、注射用リポソーム、挿入剤、徐放挿入剤、子宮内デバイス、ゼリー剤、液剤、徐放液剤、ローション剤、強化ローション剤、シャンプーローション剤、油剤、軟膏剤、強化軟膏剤、ペースト剤、香錠、ペレット剤、散剤、セッケン液剤、流込み用液剤、液剤／滴剤、濃縮液剤、ゲル形成液剤／滴剤、スポンジ、スプレー剤、計量スプレー剤、坐剤、懸濁液剤、懸濁液剤／滴剤、徐放懸濁液剤、スワブ、シロップ剤、錠剤、咀嚼錠、コートされた粒子を含有する錠剤、遅延放出錠、分散錠、発泡錠、徐放錠、口腔内崩壊錠、タンポン、テープ、およびトローチ／ロゼンジからなる群から選択される剤形で薬剤を投与することを含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
療法有効量の薬剤の投与がＮＡＤ前駆体をボーラスとして投与することを含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
療法有効量の薬剤の投与が１時間毎、１日１回、１日２回、１日３回、週１回、週２回、週３回、又は月１回の投与を含む、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
療法有効量のサーチュイン１（Ｓｉｒｔ１）アゴニストを含む、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
Ｓｉｒｔ１アゴニストが、レスベラトロール、ＳＲＴ２１０４、ＳＲＴ１４６０、ブテイン、フィセチン、イソニコチンアミド（ＩｓｏＮＡＭ）、ピセアタンノール、ケルセチン、およびその組み合わせからなる群から選択される、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
肝臓の再生を向上させる必要がある哺乳類において肝臓の再生を向上させる方法を提供するためのキットであって、療法有効量のニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）前駆体またはＮＡＤ消費の阻害薬を単位剤形で含むキット。
【請求項２７】
ＮＡＤ前駆体が、ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体、ＮＡＤサルベージ経路の中間体、およびニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体のうち１種類以上を含む、請求項２６に記載のキット。
【請求項２８】
ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体が、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸アデニンジヌクレオチド、ニコチン酸モノヌクレオチド、キノリン酸、３−ヒドロキシアントラニレート、３−ヒドロキシキヌレニン、キヌレニン、もしくはＮ−ホルミルキヌレニン、またはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項２７に記載のキット。
【請求項２９】
ＮＡＤサルベージ経路の中間体が、ニコチンアミドもしくはニコチンアミドモノヌクレオチド、またはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項２７に記載のキット。
【請求項３０】
ニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体が、ニコチンアミドリボシドもしくはニコチン酸リボシド、またはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項２７に記載のキット。
【請求項３１】
ＮＡＤ前駆体が、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸リボシド、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）、ニコチンアミド、ＮＡＤＰ、およびＮＡＤ自体、ならびにその医薬的に許容できる塩からなる群から選択される、請求項２６に記載のキット。
【請求項３２】
ＮＡＤ消費の阻害薬が、ポリａｄｐ−リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害薬、ＣＤ３８阻害薬、およびその医薬的に許容できる塩からなる群から選択される、請求項３１に記載のキット。
【請求項３３】
療法有効量のサーチュイン１（Ｓｉｒｔ１）アゴニストを含む、請求項２６に記載のキット。
【請求項３４】
Ｓｉｒｔ１アゴニストが、レスベラトロール、ＳＲＴ２１０４、ＳＲＴ１４６０、ブテイン、フィセチン、イソニコチンアミド（ＩｓｏＮＡＭ）、ピセアタンノール、ケルセチン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３３に記載のキット。
【請求項３５】
生理的に適合するキャリヤー媒体を含む、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
医薬組成物が単位剤形で製造される、請求項３５に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
単位剤形が、ボーラス、エアゾール、計量エアゾール、咀嚼バー、カプセル剤、コートされたペレットを収容したカプセル剤、遅延放出ペレットを収容したカプセル剤、徐放ペレットを収容したカプセル剤、濃縮液剤、クリーム剤、強化クリーム剤、坐剤クリーム、ディスク剤、ドレッシング剤、エリキシル剤、乳剤、浣腸剤、徐放繊維、徐放フィルム、ガス剤、ゲル剤、計量ゲル剤、顆粒剤、遅延放出顆粒剤、発泡性顆粒剤、チューインガム、インプラント、吸入剤、注射剤、注射用脂質複合製剤、注射用リポソーム、挿入剤、徐放挿入剤、子宮内デバイス、ゼリー剤、液剤、徐放液剤、ローション剤、強化ローション剤、シャンプーローション剤、油剤、軟膏剤、強化軟膏剤、ペースト剤、香錠、ペレット剤、散剤、セッケン液剤、流込み用液剤、液剤／滴剤、濃縮液剤、ゲル形成液剤／滴剤、スポンジ、スプレー剤、計量スプレー剤、坐剤、懸濁液剤、懸濁液剤／滴剤、徐放懸濁液剤、スワブ、シロップ剤、錠剤、咀嚼錠、コートされた粒子を含有する錠剤、遅延放出錠、分散錠、発泡錠、徐放錠、口腔内崩壊錠、タンポン、テープ、およびトローチ／ロゼンジからなる群から選択される、請求項３６に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
単位剤形がボーラスである、請求項３７に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８４】
[00103]  さらに、接続語(transitional term)“を含む(comprising)”、“本質的に・・・からなる(consisting essentially of)”および“からなる(consisting of)”は、元の形または補正した形の特許請求の範囲において用いる場合、引用されていない追加の請求要素または工程（あるとすれば）がその請求項（単数または複数）の範囲から除外されるものに関して、その請求項の範囲を規定する。用語“を含む”は、包括的(inclusive)または無制限(open-ended)であって追加の引用されていない要素、方法、工程または物質をいずれも除外しないものとする。用語“からなる”は、その請求項に特定されたもの以外の要素、方法、工程または物質（後者の場合は特定されたその物質（単数または複数）に通常付随する不純物）を除外する。用語“本質的に・・・からなる”は、請求項の範囲を、特定された要素、方法、工程または物質（単数または複数）、およびその請求項に記載された発明の基本的な新規特徴（単数または複数）に実質的に影響を及ぼさないものに限定する。本明細書に記載された、本発明を具体的に示したすべての組成物、配合物、キットおよび方法は、別の態様においては“を含む”、“本質的に・・・からなる”および“からなる”によってより詳細に規定することができる。
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］肝臓の再生を向上させる必要がある哺乳類において肝臓の再生を向上させるための方法であって、療法有効量の、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）活性を増大させる薬剤を投与することを含む、上記方法。
［態様２］薬剤がＮＡＤ前駆体を含む、態様１に記載の方法。
［態様３］ＮＡＤ前駆体が、ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体、ＮＡＤサルベージ経路の中間体、およびニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体のうち１種類以上を含む、態様２に記載の方法。
［態様４］ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体が、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸アデニンジヌクレオチド、ニコチン酸モノヌクレオチド、キノリン酸、３−ヒドロキシアントラニレート、３−ヒドロキシキヌレニン、キヌレニン、もしくはＮ−ホルミルキヌレニン、またはその医薬的に許容できる塩を含む、態様３に記載の方法。
［態様５］ＮＡＤサルベージ経路の中間体が、ニコチンアミドもしくはニコチンアミドモノヌクレオチド、またはその医薬的に許容できる塩を含む、態様３に記載の方法。
［態様６］ニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体が、ニコチンアミドリボシドもしくはニコチン酸リボシド、またはその医薬的に許容できる塩を含む、態様３に記載の方法。
［態様７］ＮＡＤ前駆体が、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸リボシド、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）、ニコチンアミド、ＮＡＤＰ、およびＮＡＤ自体、ならびにその医薬的に許容できる塩からなる群から選択される、態様２に記載の方法。
［態様８］薬剤がＮＡＤ消費の阻害薬を含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様９］ＮＡＤ消費の阻害薬が、ポリａｄｐ−リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害薬、ＣＤ３８阻害薬、およびその医薬的に許容できる塩からなる群から選択される、態様８に記載の方法。
［態様１０］哺乳類が肝臓外科処置を受けようとしている、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様１１］哺乳類が肝障害のリスクをもつ、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様１２］哺乳類が肝障害を伴う、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様１３］療法有効量の薬剤を肝障害の前に投与することを含む、態様１〜１１のいずれか１に記載の方法。
［態様１４］療法有効量の薬剤を肝障害の約６か月前に投与することを含む、態様１３に記載の方法。
［態様１５］療法有効量の薬剤を肝障害の約５か月前に投与することを含む、態様１３に記載の方法。
［態様１６］療法有効量の薬剤を肝障害の約４か月前に投与することを含む、態様１３に記載の方法。
［態様１７］療法有効量の薬剤を肝障害の約３か月前に投与することを含む、態様１３に記載の方法。
［態様１８］療法有効量の薬剤を肝障害の約２か月前に投与することを含む、態様１３に記載の方法。
［態様１９］療法有効量の薬剤を肝障害の約１か月前に投与することを含む、態様１３に記載の方法。
［態様２０］療法有効量の薬剤を肝障害の約３週間前に投与することを含む、態様１３に記載の方法。
［態様２１］療法有効量の薬剤を肝障害の約２週間前に投与することを含む、態様１３に記載の方法。
［態様２２］療法有効量の薬剤を肝障害の約１週間前に投与することを含む、態様１３に記載の方法。
［態様２３］療法有効量の薬剤を肝障害の約６日前に投与することを含む、態様１３に記載の方法。
［態様２４］療法有効量の薬剤を肝障害の約５日前に投与することを含む、態様１３に記載の方法。
［態様２５］療法有効量の薬剤を肝障害の約４日前に投与することを含む、態様１３に記載の方法。
［態様２６］療法有効量の薬剤を肝障害の約３日前に投与することを含む、態様１３に記載の方法。
［態様２７］療法有効量の薬剤を肝障害の約２日前に投与することを含む、態様１３に記載の方法。
［態様２８］療法有効量の薬剤を肝障害の約１日前に投与することを含む、態様１３に記載の方法。
［態様２９］療法有効量の薬剤を肝障害の約１〜２３時間前に投与することを含む、態様１３に記載の方法。
［態様３０］療法有効量の薬剤を肝障害の後に投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様３１］療法有効量の薬剤を肝障害の約１〜２３時間後に投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様３２］療法有効量の薬剤を肝障害の約１日後に投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様３３］療法有効量の薬剤を肝障害の約２日後に投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様３４］療法有効量の薬剤を肝障害の約３日後に投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様３５］療法有効量の薬剤を肝障害の約４日後に投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様３６］療法有効量の薬剤を肝障害の約５日後に投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様３７］療法有効量の薬剤を肝障害の約６日後に投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様３８］療法有効量の薬剤を肝障害の約１週間後に投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様３９］療法有効量の薬剤を肝障害の約２週間後に投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様４０］療法有効量の薬剤を肝障害の約３週間後に投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様４１］療法有効量の薬剤を肝障害の約１か月後に投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様４２］療法有効量の薬剤を肝障害の約２か月後に投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様４３］療法有効量の薬剤を肝障害の約３か月後に投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様４４］療法有効量の薬剤を肝障害の約４か月後に投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様４５］療法有効量の薬剤を肝障害の約５か月後に投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様４６］療法有効量の薬剤を肝障害の約６か月後に投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様４７］肝障害が、外傷性肝障害、肝硬変、肝線維症、肝感染症、肝移植、肝損傷（胆管障害、外科的肝臓切除および化学物質誘発性肝障害から生じるもの）のうち１以上を含む、態様１１〜４６のいずれか１に記載の方法。
［態様４８］化学物質誘発性肝障害が、アセトアミノフェン誘発性肝障害およびアルコール誘発性肝障害のうち１以上を含む、態様４７に記載の方法。
［態様４９］療法有効量の薬剤の投与が、口腔内、歯、子宮頚管、筋肉内、吸入、頭蓋内、リンパ内、眼内、腹腔内、胸膜腔内、クモ膜下、気管内、子宮内、脈管内、静脈内、膀胱内、鼻腔内、眼、経口、耳、胆嚢潅流、心臓潅流、歯周、直腸、脊髄、皮下、舌下、局所、膣内、経皮、尿管、尿道、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される投与経路を含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様５０］療法有効量の薬剤の投与が経口投与を含む、態様４９に記載の方法。
［態様５１］療法有効量の薬剤の投与が、ボーラス、エアゾール、計量エアゾール、咀嚼バー、カプセル剤、コートされたペレットを収容したカプセル剤、遅延放出ペレットを収容したカプセル剤、徐放ペレットを収容したカプセル剤、濃縮液剤、クリーム剤、強化クリーム剤、坐剤クリーム、ディスク剤、ドレッシング剤、エリキシル剤、乳剤、浣腸剤、徐放繊維、徐放フィルム、ガス剤、ゲル剤、計量ゲル剤、顆粒剤、遅延放出顆粒剤、発泡性顆粒剤、チューインガム、インプラント、吸入剤、注射剤、注射用脂質複合製剤、注射用リポソーム、挿入剤、徐放挿入剤、子宮内デバイス、ゼリー剤、液剤、徐放液剤、ローション剤、強化ローション剤、シャンプーローション剤、油剤、軟膏剤、強化軟膏剤、ペースト剤、香錠、ペレット剤、散剤、セッケン液剤、流込み用液剤、液剤／滴剤、濃縮液剤、ゲル形成液剤／滴剤、スポンジ、スプレー剤、計量スプレー剤、坐剤、懸濁液剤、懸濁液剤／滴剤、徐放懸濁液剤、スワブ、シロップ剤、錠剤、咀嚼錠、コートされた粒子を含有する錠剤、遅延放出錠、分散錠、発泡錠、徐放錠、口腔内崩壊錠、タンポン、テープ、およびトローチ／ロゼンジからなる群から選択される剤形で薬剤を投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様５２］療法有効量の薬剤の投与がＮＡＤ前駆体をボーラスとして投与することを含む、態様４２に記載の方法。
［態様５３］療法有効量の薬剤の投与が１時間毎の投与を含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様５４］療法有効量の薬剤の投与が１日１回の投与を含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様５５］療法有効量の薬剤の投与が１日２回の投与を含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様５６］療法有効量の薬剤の投与が１日３回の投与を含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様５７］療法有効量の薬剤の投与が週１回の投与を含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様５８］療法有効量の薬剤の投与が週２回の投与を含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様５９］療法有効量の薬剤の投与が週３回の投与を含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様６０］療法有効量の薬剤の投与が月１回の投与を含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様６１］療法有効量のサーチュイン１（Ｓｉｒｔ１）アゴニストを投与することを含む、前記態様のいずれか１に記載の方法。
［態様６２］Ｓｉｒｔ１アゴニストが、レスベラトロール、ＳＲＴ２１０４、ＳＲＴ１４６０、ブテイン、フィセチン、イソニコチンアミド（ＩｓｏＮＡＭ）、ピセアタンノール、ケルセチン、およびその組み合わせからなる群から選択される、態様６１に記載の方法。
［態様６３］肝臓の再生を向上させる必要がある哺乳類において肝臓の再生を向上させる方法を提供するためのキットであって、療法有効量のニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）前駆体またはＮＡＤ消費の阻害薬を単位剤形で含むキット。
［態様６４］ＮＡＤ前駆体が、ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体、ＮＡＤサルベージ経路の中間体、およびニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体のうち１種類以上を含む、態様６３に記載のキット。
［態様６５］ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体が、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸アデニンジヌクレオチド、ニコチン酸モノヌクレオチド、キノリン酸、３−ヒドロキシアントラニレート、３−ヒドロキシキヌレニン、キヌレニン、もしくはＮ−ホルミルキヌレニン、またはその医薬的に許容できる塩を含む、態様６４に記載のキット。
［態様６６］ＮＡＤサルベージ経路の中間体が、ニコチンアミドもしくはニコチンアミドモノヌクレオチド、またはその医薬的に許容できる塩を含む、態様６４に記載のキット。
［態様６７］ニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体が、ニコチンアミドリボシドもしくはニコチン酸リボシド、またはその医薬的に許容できる塩を含む、態様６４に記載のキット。
［態様６８］ＮＡＤ前駆体が、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸リボシド、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）、ニコチンアミド、ＮＡＤＰ、およびＮＡＤ自体、ならびにその医薬的に許容できる塩からなる群から選択される、態様６３に記載のキット。
［態様６９］ＮＡＤ消費の阻害薬が、ポリａｄｐ−リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害薬、ＣＤ３８阻害薬、およびその医薬的に許容できる塩からなる群から選択される、態様６８に記載のキット。
［態様７０］療法有効量のサーチュイン１（Ｓｉｒｔ１）アゴニストを含む、態様６３に記載のキット。
［態様７１］Ｓｉｒｔ１アゴニストが、レスベラトロール、ＳＲＴ２１０４、ＳＲＴ１４６０、ブテイン、フィセチン、イソニコチンアミド（ＩｓｏＮＡＭ）、ピセアタンノール、ケルセチン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、態様７０に記載のキット。
［態様７２］療法有効量のニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）前駆体またはＮＡＤ消費の阻害薬、および生理的に適合するキャリヤー媒体を含む、肝臓の再生を向上させる必要がある哺乳類において肝臓の再生を向上させるための医薬組成物。
［態様７３］ＮＡＤ前駆体が、ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体、ＮＡＤサルベージ経路の中間体、およびニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体のうち１種類以上を含む、態様７２に記載の医薬組成物。
［態様７４］ＮＡＤ合成のためのデノボ経路の中間体が、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸アデニンジヌクレオチド、ニコチン酸モノヌクレオチド、キノリン酸、３−ヒドロキシアントラニレート、３−ヒドロキシキヌレニン、キヌレニン、もしくはＮ−ホルミルキヌレニン、またはその医薬的に許容できる塩を含む、態様７３に記載の医薬組成物。
［態様７５］ＮＡＤサルベージ経路の中間体が、ニコチンアミドもしくはニコチンアミドモノヌクレオチド、またはその医薬的に許容できる塩を含む、態様７３に記載の医薬組成物。
［態様７６］ニコチンアミドリボシドキナーゼ経路の中間体が、ニコチンアミドリボシドもしくはニコチン酸リボシド、またはその医薬的に許容できる塩を含む、態様７３に記載の医薬組成物。
［態様７７］ＮＡＤ前駆体が、トリプトファン、ニコチン酸、ニコチン酸リボシド、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）、ニコチンアミド、ＮＡＤＰ、およびＮＡＤ自体、ならびにその医薬的に許容できる塩からなる群から選択される、態様７２に記載の医薬組成物。
［態様７８］ＮＡＤ消費の阻害薬が、ポリａｄｐ−リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害薬、ＣＤ３８阻害薬、およびその医薬的に許容できる塩からなる群から選択される、態様７２に記載の医薬組成物。
［態様７９］医薬組成物が単位剤形で製造される、態様７２〜７８のいずれか１に記載の医薬組成物。
［態様８０］単位剤形が、ボーラス、エアゾール、計量エアゾール、咀嚼バー、カプセル剤、コートされたペレットを収容したカプセル剤、遅延放出ペレットを収容したカプセル剤、徐放ペレットを収容したカプセル剤、濃縮液剤、クリーム剤、強化クリーム剤、坐剤クリーム、ディスク剤、ドレッシング剤、エリキシル剤、乳剤、浣腸剤、徐放繊維、徐放フィルム、ガス剤、ゲル剤、計量ゲル剤、顆粒剤、遅延放出顆粒剤、発泡性顆粒剤、チューインガム、インプラント、吸入剤、注射剤、注射用脂質複合製剤、注射用リポソーム、挿入剤、徐放挿入剤、子宮内デバイス、ゼリー剤、液剤、徐放液剤、ローション剤、強化ローション剤、シャンプーローション剤、油剤、軟膏剤、強化軟膏剤、ペースト剤、香錠、ペレット剤、散剤、セッケン液剤、流込み用液剤、液剤／滴剤、濃縮液剤、ゲル形成液剤／滴剤、スポンジ、スプレー剤、計量スプレー剤、坐剤、懸濁液剤、懸濁液剤／滴剤、徐放懸濁液剤、スワブ、シロップ剤、錠剤、咀嚼錠、コートされた粒子を含有する錠剤、遅延放出錠、分散錠、発泡錠、徐放錠、口腔内崩壊錠、タンポン、テープ、およびトローチ／ロゼンジからなる群から選択される、態様７９に記載の医薬組成物。
［態様８１］単位剤形がボーラスである、態様８０に記載の医薬組成物。
［態様８１］療法有効量のサーチュイン１（Ｓｉｒｔ１）アゴニストを含む、態様７２に記載の医薬組成物。
［態様８２］Ｓｉｒｔ１アゴニストが、レスベラトロール、ＳＲＴ２１０４、ＳＲＴ１４６０、ブテイン、フィセチン、イソニコチンアミド（ＩｓｏＮＡＭ）、ピセアタンノール、ケルセチン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、態様８１に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
2019505559.tif 000010
2019505559.tif 000011