【手続補正書】
【提出日】平成19年4月24日(2007.4.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼによる複製が可能な形の核酸標的を用意すること、
ｂ）前記核酸標的を、前記ポリメラーゼをコードしているＲＮＡウイルスまたは他のＲＮＡレプリコン中に組み込むこと、ここで前記核酸標的は前記ＲＮＡウイルスまたは他のＲＮＡレプリコンによりコードされるＲＮＡポリメラーゼにより、生細胞中で鋳型特異的ＲＮＡ合成を行うのに十分な条件下で複製され、反応産物の1つが必ず二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡである、および
ｃ）十分純粋な形で前記ｄｓＲＮＡ産物を回収すること、を特徴とするｄｓＲＮＡを大量産生するための方法。
【請求項２】
前記核酸標的がポリペプチドをコードしているか、あるいは所望の生物のゲノム中の非コード領域に対応するものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記核酸標的が、ポリメラーゼによる検出可能な複製に必要不可欠な決定因子と動作可能に連結されている、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ポリメラーゼが遺伝学的に改変されているか、または野生型ポリメラーゼである、前項までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
ＲＮＡウイルスまたは他のＲＮＡレプリコンが遺伝学的に改変されているか、または野生型である、前項までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記ＲＮＡレプリコンが、ＲＮＡウイルス様粒子、ウイロイドまたはＲＮＡに基づく自律複製遺伝エレメントである、前項までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
ポリメラーゼをコードしている前記核酸と前記核酸標的が別個の核酸である、前項までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記ポリメラーゼがＲＮＡバクテリオファージである、前項までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記ポリメラーゼがシストウイルス科のメンバー、好ましくはφ６、φ７、φ８、φ９、φ１０、φ１１、φ１２、φ１３およびφ１４を含む群から選択されるバクテリオファージ、最も好ましくはバクテリオファージφ６に由来するものである、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
前記複製可能な形の核酸標的が原核細胞中、好ましくはグラム陰性菌細胞中、より好ましくはシュードモナス属、大腸菌属、およびサルモネラ属を含む群から選択される細菌細胞中、最も好ましくはシュードモナス・シリンゲの細胞中で複製される、前項までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記複製可能な形の核酸標的が哺乳動物、昆虫、植物または酵母細胞などの真核細胞中で複製される、請求項１乃至１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記核酸標的を自殺ベクター、好ましくはＤＮＡベクター、最も好ましくはＤＮＡプラスミドを使用して生細胞中に送達する、前項までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
ウイルス複製機構による検出可能な複製に必要十分な配列と動作可能に連結した標的核酸を含む自殺ベクターを使用して、前記核酸標的を前記ＲＮＡウイルスのゲノム中に取り込む、前項までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
ＲＮＡウイルスまたは他のＲＮＡレプリコンのＲＮＡ合成装置による複製に必要不可欠な決定因子と動作可能に連結した標的核酸配列と、
ＲＮＡウイルスまたは他のＲＮＡレプリコンの複製を支持することができる生細胞と、
十分純粋な形でｄｓＲＮＡ産物を回収するための回収手段を含むことを特徴とする、ｄｓＲＮＡを大量産生するためのシステム。
【請求項１５】
前記生細胞がキャリア状態の細胞であるか、あるいはキャリア状態に形質転換することができる細胞である、請求項１４に記載のシステム。
【請求項１６】
前記核酸標的が自殺ベクター中におかれる、請求項１４または１５に記載のシステム。
【請求項１７】
ＲＮＡ合成装置中のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼがｄｓＲＮＡウイルスまたはｄｓＲＮＡレプリコンに由来するものである、請求項１４乃至１６のいずれか１項に記載のシステム。
【請求項１８】
ＲＮＡ合成装置中のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼがシストウイルス科、好ましくはφ６、φ７、φ８、φ９、φ１０、φ１１、φ１２、φ１３、φ１４を含む群から選択されるバクテリオファージ、最も好ましくはバクテリオファージφ６に由来するものである、請求項１４乃至１７のいずれか１項に記載のシステム。
【請求項１９】
前記生細胞が原核細胞、好ましくはグラム陰性菌細胞であり、より好ましくは前記細菌細胞がシュードモナス属、大腸菌属、およびサルモネラ属を含む群から選択され、最も好ましくは前記細菌がシュードモナス・シリンゲである、請求項１４乃至１８のいずれか１項に記載のシステム。
【請求項２０】
ａ）キャリア状態であるかあるいはキャリア状態に形質転換することができる予め選択した細胞中で、標的核酸を一過性に発現するためのベクターおよび／または
ｂ）前記標的核酸を導入することができる遺伝的に修飾されたウイルスおよび／または
ｃ）キャリア状態であるかあるいはキャリア状態に形質転換することができる細胞を含むことを特徴とする、ｄｓＲＮＡを大量産生するためのキット。
【請求項２１】
ａ）ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼによって複製可能な形の核酸標的を用意することと、
ｂ）前記核酸標的を、前記ポリメラーゼをコードしているＲＮＡウイルスのゲノムまたは他のＲＮＡレプリコン中に組み込むこと、ここで前記核酸標的は前記ＲＮＡウイルスまたは他のＲＮＡレプリコンによりコードされるＲＮＡポリメラーゼにより、生細胞中で鋳型特異的ＲＮＡ合成を行うのに十分な条件下で複製され、反応産物の1つが必ず二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡである、
ｃ）前記ｄｓＲＮＡ産物を十分純粋な形で回収し、任意選択で性能を最適にするため前記産物を改変することと、
ｄ）前記純粋な、任意選択で改変されたｄｓＲＮＡ産物を使用して、生物、細胞または無細胞抽出物などの真核生物系中で配列特異的な遺伝子サイレンシング効果を誘導することを特徴とする、真核生物系中で配列特異的な遺伝子サイレンシング効果を誘導するための方法。
【請求項２２】
前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼがｄｓＲＮＡウイルスまたはｄｓＲＮＡレプリコンに由来する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼがシストウイルス科、好ましくはφ６、φ７、φ８、φ９、φ１０、φ１１、φ１２、φ１３、φ１４を含む群から選択されるバクテリオファージ、最も好ましくはバクテリオファージφ６に由来する、請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記生細胞が原核細胞、好ましくはグラム陰性菌細胞であり、より好ましくは前記細菌細胞がシュードモナス属、大腸菌属、およびサルモネラ属を含む群から選択され、最も好ましくは前記細菌がシュードモナス・シリンゲである、請求項２１乃至２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
性能を最適にするための前記任意選択の操作が、ｄｓＲＮＡ特異的リボヌクレアーゼ、好ましくはＲＮａｓｅＩＩＩ、Ｄｉｃｅｒ、またはこれらの誘導体を用いてｄｓＲＮＡを断片化することである、請求項２１乃至２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記核酸標的が自殺ベクター中におかれる、請求項２１−２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
前記ｄｓＲＮＡ産物を使用して、好ましくは昆虫または線虫起源、最も好ましくはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ（キイロショウジョウバエ）またはＣａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ（シノラブディス・エレガンス）起源の無脊椎動物系中で配列特異的な遺伝子サイレンシング効果を誘導するものである請求項２１乃至２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ｄｓＲＮＡ産物を使用して、好ましくは哺乳動物起源、最も好ましくはヒトまたはマウス起源である、脊椎動物系中で配列特異的な遺伝子サイレンシング効果を誘導するものである、請求項２１乃至２７のいずれか１項に記載の方法。