【手続補正書】
【提出日】平成19年3月1日(2007.3.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  遺伝子ターゲッティング事象により体細胞の遺伝物質を改変することを含む、核移植のためのための体細胞を調製する方法。
【請求項２】  遺伝子ターゲッティング事象が相同組換えによって媒介される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】  改変が、遺伝子の不活性化、除去または改変、遺伝子のアップレギュレーション、遺伝子置換または導入遺伝子を配置することである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】  遺伝子ターゲッティング事象が、遺伝子ターゲッティングされた細胞：ランダムにターゲッティングされた細胞の比が1:100以上である結果を生じさせる、請求項１〜３のいずれか1項に記載の方法。
【請求項５】  遺伝子ターゲッティング事象が、宿主体細胞において多量に発現されている遺伝子座において行われる、請求項１〜４のいずれか1項に記載の方法。
【請求項６】  構造遺伝子が内在性プロモーターに隣接して置かれる、請求項１〜５のいずれか1項に記載の方法。
【請求項７】  内在性プロモーターがコラーゲン遺伝子のプロモーターである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】  内在性プロモーターが乳タンパク質遺伝子のプロモーターである、請求項６に記載の方法。
【請求項９】  内在性プロモーターが線維芽細胞において多量の発現を指令するものである、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】  内在性プロモーターが内皮細胞における多量の発現を指令するものである、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】  遺伝子ターゲッティング事象がリポフェクチンによって媒介される、請求項１〜１０のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１２】  遺伝子ターゲッティング事象が標的遺伝子座に相同な長い領域を含む遺伝子ターゲッティングベクターの使用を含む、請求項１〜１１のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１３】  遺伝子ターゲッティング事象が閉環形態の遺伝子ターゲッティングベクターの使用を含む、請求項１〜１２のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１４】  遺伝子ターゲッティング事象が細胞内における遺伝子発現の人工的誘導またはクロマチン変化を含む、請求項１〜１３のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１５】  遺伝子ターゲッティング事象がヒストンの脱アセチルを阻害する物質または細胞内における標的遺伝子座の転写を刺激する因子の発現によって容易化される、請求項１〜１４のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１６】  体細胞が初代体細胞である、請求項１〜１５のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１７】  体細胞が、上皮細胞、または線維芽細胞、または内皮細胞または筋肉細胞である、請求項１〜１６のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１８】  請求項１〜１７のいずれか1項に記載の方法を含む核移植方法および体細胞からレシピエント細胞へ遺伝物質を移植することを含む方法。
【請求項１９】  体細胞からレシピエント細胞への遺伝物質の移植が非ヒト動物胚を生じさせる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】  さらに、全能性または多能性細胞クローン集団を生じさせることを含む請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】  請求項１〜１７のいずれか1項に記載の方法によって得ることができる核移植に適したトランスジェニック細胞。
【請求項２２】  請求項１９に記載の方法によって得ることのできる非ヒトトランスジェニック胚またはトランスジェニック胎仔。
【請求項２３】  請求項２２記載の胚から分娩まで動物を発生させ、場合によりその動物を飼育することを含む、非ヒトトランスジェニック動物の調製方法。
【請求項２４】  請求項２３に記載の方法によって得られる非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項２５】  ヒツジ、雌ウシ、雄ウシ、ヤギ、ブタ、ウマ、ラクダ、ウサギまたはげっ歯動物である請求項２４に記載のトランスジェニック動物。
【請求項２６】  請求項２４または２５に記載の動物から育てられた非ヒトトランスジェニック動物。
【請求項２７】  請求項２２に記載のトランスジェニック胚またはトランスジェニック胎仔からの細胞株を培養することを含む、多能性または全能性クローン細胞集団を得る方法。
【請求項２８】  請求項２７に記載の方法によって得ることができる、多能性または全能性クローン細胞集団。
【請求項２９】  遺伝子ターゲッティング事象を含む、細胞の全能性を維持しつつ体細胞の遺伝物質を改変する方法。
【請求項３０】  遺伝子ターゲッティング事象が相同組換えによって媒介される請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】  改変が遺伝子の不活性化、除去または改変、遺伝子のアップレギュレーション、遺伝子置換または導入遺伝子を配置することである、請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３２】  遺伝子ターゲッティング事象が、遺伝子ターゲッティングされた細胞：ランダムにターゲッティングされた細胞の比が1:100以上である結果を生じさせる、請求項２９〜３１のいずれか1項に記載の方法。
【請求項３３】  遺伝子ターゲッティング事象が、宿主体細胞において多量に発現されている遺伝子座において行われる、請求項２９〜３２のいずれか1項に記載の方法。
【請求項３４】  構造遺伝子が内在性プロモーターに隣接して置かれる、請求項２９〜３３のいずれか1項に記載の方法。
【請求項３５】  内在性プロモーターがコラーゲン遺伝子のプロモーターである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】  内在性プロモーターが乳タンパク質遺伝子のプロモーターである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】  内在性プロモーターが線維芽細胞における多量発現を指令するものである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】  内在性プロモーターが内皮細胞における多量発現を指令するものである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】  遺伝子ターゲッティング事象がリポフェクチンによって媒介される、請求項２９〜３８のいずれか1項に記載の方法。
【請求項４０】  遺伝子ターゲッティング事象が標的遺伝子座に相同な長い領域を含む遺伝子ターゲッティングベクターの使用を含む、請求項２９〜３９のいずれか1項に記載の方法。
【請求項４１】  遺伝子ターゲッティング事象が閉環形態の遺伝子ターゲッティングベクターの使用を含む、請求項２９〜４０のいずれか1項に記載の方法。
【請求項４２】  体細胞が初代体細胞である、請求項２９〜４１に記載の方法。
【請求項４３】  遺伝子ターゲッティング事象が細胞内における遺伝子発現の人工的誘導またはクロマチン変化を含む、請求項２９〜４２のいずれか1項に記載の方法。
【請求項４４】  遺伝子ターゲッティング事象がヒストンの脱アセチルを阻害する物質または細胞内における標的遺伝子座の転写を刺激する因子の発現によって容易化される、請求項２９〜４３のいずれか1項に記載の方法。
【請求項４５】  体細胞からレシピエント細胞へ遺伝物質を移植することを含む方法と組み合わせた請求項２９〜４４のいずれか1項に記載の方法。
【請求項４６】  細胞の遺伝子ターゲッティングにおける遺伝子発現の人工的誘導またはクロマチン変化の使用。
【請求項４７】  遺伝子ターゲッティング事象による細胞の遺伝物質の改変における閉環状遺伝子ターゲッティングベクターの使用。
【請求項４８】  細胞が体細胞または非体細胞である請求項４６または４７に記載の使用。
【請求項４９】  遺伝子ターゲッティング事象がヒストンの脱アセチルを阻害する物質または細胞内における標的遺伝子座の転写を刺激する因子の発現によって容易化される、請求項４６〜４８のいずれか1項に記載の使用。
【請求項５０】  細胞の遺伝物質を適切なレシピエント細胞に移植する核移植と組み合わせた請求項４６〜４９のいずれか1項に記載の使用。
【請求項５１】  遺伝子ターゲッティング事象を受けた細胞から得られる非ヒト動物の、前記遺伝子ターゲッティングの位置による遺伝的変化を試験するための使用。
【請求項５２】  細胞が体細胞であり非ヒト動物の作製が核移植を含む、請求項５１に記載の使用。
【請求項５３】  体細胞が初代体細胞である請求項５１または５２に記載の使用。
【請求項５４】  細胞が線維芽細胞である、請求項５２または５３に記載の使用。
【請求項５５】  遺伝子ターゲッティング事象が請求項２〜１３に記載したものである、請求項５１〜５４のいずれか1項に記載の使用。
【請求項５６】  以下を含む、ターゲッティング遺伝子治療のための遺伝子座を確認するための方法：
−  選択した型の細胞を得ること；
−  選択した遺伝子座に所望の遺伝的改変を導入すること；
−  ターゲッティングした細胞のクローン集団を増殖させること；および、
−  前記遺伝的改変が許容できるものであることを非ヒト動物の作製によって証明すること。
【請求項５７】  非ヒト動物の作製が核移植を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】  細胞が線維芽細胞である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】  細胞が胚性幹(ES)細胞または胚性生殖(EG)細胞である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】  非ヒト動物がキメラ動物である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】  請求項５６〜６０のいずれか1項に記載の方法によって得られる確認された遺伝子座。