【手続補正書】
【提出日】平成19年2月23日(2007.2.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  フリーラジカル重合により１相の橋かけネットワーク構造に変換され得る疎水性および親水性の成分を含む、水性ゲル形成システム。
【請求項２】  ０.０１−９９.９９重量％の（Ａ）不飽和基端末を有する疎水性マクロマー、および９９.９９−０.０１％の（Ｂ）不飽和基挿入化合物と反応する水酸基を含有するポリサッカリドである親水性ポリマーを含んでおり、(Ａ)と(Ｂ)の％の合計が１００％である、水性ゲル形成システム。
【請求項３】  疎水性マクロマーが、脂肪族ポリエステルの端末カルボン酸の水酸基をアミノエタノール基に変換することにより得られるジオールの水酸基を、不飽和基挿入化合物と反応せしめてつくられる、請求項２の水性ゲル形成システム。
【請求項４】  親水性ポリマーがデキストランであって、デキストランのグルコース単位中の１以上の水酸基が不飽和基挿入化合物と反応せしめられる、請求項２の水性ゲル形成システム。
【請求項５】  親水性ポリマーがデキストラン-マレイン酸・モノエステルである、請求項２の水性ゲル形成システム。
【請求項６】  疎水性および親水性の成分を含有する３次元橋かけポリマー・ネットワーク構造を有する請求項２の水性ゲル形成システムのフリーラジカル重合により形成された水性ゲル。
【請求項７】  ３次元橋かけポリマー・ネットワーク構造中に捕捉された平均分子量２００−１,０００の薬物を有する、請求項６の水性ゲル。
【請求項８】  ３次元橋かけポリマー・ネットワーク構造中に捕捉された薬物がインドメタシンである、請求項７の水性ゲル。
【請求項９】  ３次元橋かけポリマー・ネットワーク構造中に捕捉された平均分子量１,０００−１０,０００の水溶性マクロ分子を有する、請求項６の水性ゲル。
【請求項１０】  水溶性マクロ分子がポリペプチドである、請求項９の水性ゲル。
【請求項１１】  ポリペプチドがインスリンである、請求項１０の水性ゲル。
【請求項１２】  ３次元橋かけポリマー・ネットワーク構造中に捕捉された平均分子量１０,０００−１００,０００の合成または天然のポリマーを有する、請求項６の水性ゲル。
【請求項１３】  合成または天然のポリマーがタンパク質である、請求項１２の水性ゲル。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
出発物質のポリ乳酸は、例えば、窒素雰囲気下でテトラヒドロフランに溶解し、０℃に冷却し、ＨＯＢＴおよびＤＣＣを加え、０.５ないし２時間攪拌し、室温となし、次いで２‐アミノエタノールを加え、室温にて０.５ないし２４時間攪拌することによりジオールに変換できる。副生成物のシクロヘキシルウレア塩が沈殿する。これを濾去する。２‐アミノエタノールの量は最も意味のある可変量であり、ポリ乳酸の分子量に依存して、好ましくは２‐アミノエタノールとポリ乳酸とのモル比は１：１ないし１５：１の範囲である。２‐アミノエタノールとポリ乳酸とのモル比は、好ましくは少なくとも１.１：１である。これより小さいモル比ではカルボキシル端末基の水酸基への変換が不完全であった。ＤＣＣとポリ乳酸とのモル比は、ポリ乳酸の分子量に依存して、好ましくは１：１ないし１５：１の範囲である。また、ＨＯＴＢとポリ乳酸とのモル比は、ポリ乳酸の分子量に依存して、好ましくは１：１ないし１５：１の範囲である。これらのモル比が１：１より小さく、ポリ乳酸の重量平均分子量が６００ないし１,０００である場合は、たとえ反応時間を延長したとしても、カルボキシル鎖端末基の水酸基への変換は不完全である。初期温度が０℃である理由は穏やかな反応を起こさせ、副反応を少なくたり除くことにある。０℃での反応時間は、好ましくは０.５ないし１時間の範囲である。室温での時間は、反応の初めの内に変換が完結するので、好ましくは０.５ないし１時間の範囲である。重量平均分子量８００のポリ乳酸出発物質について、最適反応条件は以下のとおりであった。ＤＣＣとポリ乳酸とのモル比が１：１、ＨＯＴＢとポリ乳酸とのモル比が１：１、の反応は０℃で０.５時間、室温に戻した後にポリ乳酸１モル当り１.１モルの２‐アミノエタノールを添加、０.５時間反応。以上の最適条件下で、端末カルボキシルの水酸基への変換は１００％、収率は９５％より高かった。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
不飽和基挿入化合物は、例えば、アクリロイル＝クロリド、メタクリロイル＝クロリド、アクリル酸、メタアクリル酸、あるいは分子の一末端にビニル基の如き不飽和基をもつイソシアナート、例えばアリル＝イソシアナート、あるいはイソシアナトエチル＝メタクリラートである。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
ビニル基挿入化合物がアクリロイル＝クロリドである場合について述べる。反応は酸捕捉剤の存在下に溶媒中で行う。ポリ乳酸から得られるジオールについて、反応溶媒としてテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中で反応を行い、トリエチルアミンが相応しい酸捕捉剤である。好ましくは、ジオールのＴＨＦ溶液に０℃でトリエチルアミンを加え、次いでアクリロイル＝クロリドを加え、最初は０℃でさらに室温で攪拌を続ける。副生成物のジエタノールアミン塩酸塩を濾過によって除く。トリエチルアミンとジオールとのモル比は、好ましくは３：１ないし１５：１の範囲である。アクリロイル＝クロリドとジオールとのモル比は、好ましくは３：１ないし１５：１の範囲である。アクリロイル＝クロリドを添加後０℃での時間は、好ましくは２ないし４時間の範囲である。室温での時間は、好ましくは１０ないし４８時間の範囲である。アクリロイル＝クロリドとジオールとの高比率（例えば８：１）ならびにトリエチルアミンとジオールとの高比率（例えば８：１）は、ポリ乳酸の重量平均分子量が６００ないし１,０００の場合、ポリマー骨格の解裂をもたらす。反応時間を室温で３時間から２１時間への延長は変換を高めた。出発物質が８００の重量平均分子量をもつポリ乳酸である場合の最適反応条件は、ジオール１モル当りアクリロイル＝クロリド４モル、ジオール１モル当りトリエチルアミン４モルであり、０℃で３時間の反応、その後の反応は室温１８時間であることが分った。この最適反応条件で生成物の収率は約９０％であった。より高い初期の反応温度では起こるであろうが、0℃での反応期間は、アクリロイル＝クロリドとトリエチルアミンとの激しい反応を起こさなくする。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
ポリサッカリドの水酸基と不飽和基挿入化合物との反応について次ぎに述べる。
不飽和基挿入化合物は、例えば、アクリロイル＝クロリド、メタクリロイル＝クロリド、アクリル酸、メタクリル酸、あるいはビニル基のような不飽和基を分子の一端末に持つイソシアナート、例えば、アリル＝イソシアナートまたはイソシアナトエチル＝メタクリラートである。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
分子の一末端にビニル基を持つイソシアナートが不飽和基挿入化合物である場合、上述のポリサッカリド出発物質用および上述イソシアナート用の溶媒にポリサッカリド出発物質を溶解し、触媒を加え、次いでイソシアナートを加え、反応を起こすに有効な時間、有効な反応温度で攪拌することにより、親水性ポリマー（Ｂ）を得る。ポリサッカリド出発物質がデキストランであり、イソシアナートがアリル＝イソシアナートである場合、溶媒は、例えばジメチル＝スルホキシド（ＤＭＳＯ）であり、相応しい触媒はジブチル錫＝ジラウラートである。ジブチル錫＝ジラウラートとデキストランのアンヒドログルコース残基部とのモル比は、例えば０.０５：１ないし０.１：１の範囲であり、またアリル＝イソシアナートと上記残基部とのモル比は、例えば０.２５：１ないし１：１の範囲である。反応温度は例えば室温から６０℃の範囲であり、反応時間は例えば２ないし８時間の範囲である。各パラメータ（すなわち、デキストランのアンヒドログルコース残基部に対するジブチル錫＝ジラウラートのモル比、同残基部に対するアリル＝イソシアナートのモル比、反応時間および反応温度）を大きくすると、置換度、すなわちアンヒドログルコース部１００当りのアリル＝イソシアナート基の数が増加することがわかった。置換度は約１から１５の範囲であった。不飽和基挿入化合物としてアリル＝イソシアナートを用いてデキストランから親水性ポリマー（Ｂ）を合成する反応式を下記する。ｍは、例えば２６０から４３０の範囲である。
【化３】
2002541308.tif 000001
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４７】
次ぎに、代わりの例について述べる。例えば１０,０００ないし１００,０００の範囲にある重量平均分子量の合成または天然ポリマーを、水性ゲル形成システムの（Ａ）と（Ｂ）成分のフリーラジカル重合により形成された３次元ネットワークに閉じ込める場合である。合成または天然ポリマーには、例えばタンパク質、ペプチド、ポリサッカリド、ポリムコサッカリドがある。代わりのタンパク質とは、例えばリゾチーム、インターロイキン−１、塩基性線維芽細胞成長因子である。実施例IＶで用いたモデルタンパク質はウシ血清アルブミンである。この代替物は、合成または天然のポリマー薬物の制御放出投与のために良い手段を提供する。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
本発明を以下の実施例により説明する。
実施例Ｉ
重量平均分子量８００のポリ−Ｄ,Ｌ−乳酸（ＰＤＬＬＡ）５ｇを窒素気流下３つ口丸底フラスコにてテトラヒドロフラン（濃度８％（ｗ/ｗ））に溶解し、その溶液を氷浴にて０℃まで冷却した。次ぎに１,３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）１.４ｇおよび１-ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）０.９ｇ（ＤＣＣとＰＤＬＬＡとのモル比は１：１、ＨＯＢＴとＰＤＬＬＡとのモル比は１：１）を加え、連続攪拌しながら０.５時間反応を行なった。次ぎに混合物を室温に戻し、そこで２−アミノエタノール０.４５ml（２−アミノエタノールとＰＤＬＬＡとのモル比は１.１：１）をフラスコに滴下して加え、次いで０.５時間攪拌を続けた。析出した副生成物のシクロヘキシルウレア塩を濾別した。濾液を大過剰の乾燥ヘキサン中に注ぐことによりジオール生成物を得た。生成物は更にテトラヒドロフランとヘキサンをそれぞれ用いて溶解と再析出を数回行うことにより精製した。最後にジオールは１日室温で真空下に乾燥した。端末基−ＣＯＯＨの−ＯＨ基への変換は１００％、収率は９５％より高かった。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
ジオール４ｇをフラスコ中、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶解し濃度８％（ｇ/ml、ｗ/ｖ）とした。フラスコに窒素を流し、氷浴にて冷却した。次ぎにトリエチルアミン３mlを加えた。５分後アクリロイル＝クロリド１.８mlを含むＴＨＦ溶液（濃度３０％（ｖ/ｖ））をフラスコに滴下して加えた。トリエチルアミンとジオールとのモル比は４：１、アクリロイル＝クロリドとジオールとのモル比は４：１であった。混合物は氷浴上３時間攪拌し、次いで１８時間室温にて反応させた。副生成物のジエタノールアミン塩酸塩はガラスフィルターを使って除去した。ジアクリラート生成物は１０倍のヘキサンを使って析出させた。生成物は更にＴＨＦとヘキサンをそれぞれ用いて溶解と再析出を数回行なって精製した。生成物を１日真空下に室温で乾燥した。これは、マクロマー（Ａ）に使うための、ポリ−Ｄ,Ｌ‐乳酸から得られるジオールのアクリロイル誘導体を構成する。収率は約９０％であった。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６８】
このように、出発物質のＰＤＬＬＡおよびデキストランの分子量と同じく疎水性と親水性成分の％も多様に変えた。