【手続補正書】
【提出日】平成19年3月20日(2007.3.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】    FXRの活性化を調節することを含む、細胞においてコレステロール異化作用を修飾するための方法。
【請求項２】    Cyp7aをコードする遺伝子の発現を調節することを含む、細胞においてコレステロール異化作用を修飾するための方法。
【請求項３】    コレステロール異化作用が、Cyp7aをコードする遺伝子の発現を、前記細胞で天然に起こるものを越える発現レベルに上方制御することにより、増加される、請求項2の方法。
【請求項４】    Cyp7aをコードする遺伝子の発現の上方制御が、FXR受容体の活性化を阻害することにより、達成される、請求項3の方法。
【請求項５】    有効量のFXR受容体アンタゴニストを前記細胞に投与し、Cyp7aをコードする遺伝子の発現の上方制御を達成する、請求項4の方法。
【請求項６】    有効量のFXR受容体アンタゴニストを含む、哺乳動物における高コレステロール血症の治療または予防のため薬剤組成物。
【請求項７】    化合物が、FXR受容体を活性化するかまたは該受容体の活性化を阻害するか決定することを含む、薬理学的に活性である化合物に関しスクリーニングするための方法。
【請求項８】    コレステロール異化作用を調節することが可能である化合物をスクリーニングするための方法である、請求項7の方法。
【請求項９】    化合物がFXR活性化を阻害し、それによりコレステロール異化作用を増加させるかどうか決定することを含む、請求項8の方法。
【請求項１０】    FXRおよびRXRの混合物を、化合物と接触させ、そして前記化合物がFXR-RXRヘテロ二量体形成を促進するかどうか決定することを含む、FXR仲介遺伝子転写を調節するのに有用な化合物に関し、スクリーニングする方法。
【請求項１１】    FXRおよびRXRの混合物を、化合物と接触させ、そして前記化合物がFXR-RXRヘテロ二量体のアゴニスト促進形成を阻害するかどうか決定することを含む、FXRアンタゴニスト活性に関し、化合物をスクリーニングする方法。
【請求項１２】    混合物が既知のFXRアゴニストをさらに含む、請求項11の方法。
【請求項１３】    RXRが、RXR突然変異体（RXRm）であり、該変異体が、機能するDNA結合ドメインを含み、そしてRXRリガンドによる実質的な活性化を妨げる以外は、RXR突然変異受容体がFXRとヘテロ二量体を形成する能力に実質的に影響を与えない、リガンド結合ドメイン中の突然変異を有する、請求項10、11または12の方法。
【請求項１４】    コレステロール異化作用調節活性に関する化合物をスクリーニングするための方法であって：
（1）（i）FXR受容体、
（ii）RXR受容体、
（iii）リガンド-FXR-RXR複合体のDNA結合ドメインが特異的に結合するヌクレオチド配列を含む、標識DNAプローブ
を含む第一の混合物を提供し；
（2）（i）FXR受容体、
（ii）機能するDNA結合ドメインを含み、そしてRXRリガンドによる実質的な活性化を妨げる以外は、RXR突然変異受容体がFXRとヘテロ二量体を形成し、またはこうしたヘテロ二量体が活性化補助因子を補充する能力に実質的に影響を与えない、リガンド結合ドメイン中の突然変異を有する、RXR突然変異受容体（「RXRm」）、
（iii）リガンド-FXR-RXR複合体のDNA結合ドメインが特異的に結合するヌクレオチド配列を含む、標識DNAプローブ
を含む第二の混合物を提供し；
（3）前記の第一および第二の混合物を、スクリーニングしようとする化合物と接触させ；
（4）該化合物が、DNAプローブに対するFXR-RXRヘテロ二量体の結合を引き起こすかどうか決定し；そして
（5）スクリーニングしようとする化合物が、DNAプローブに対するFXR-RXRmヘテロ二量体の結合を引き起こすかどうか決定する
ことを含む、前記方法。
【請求項１５】    第一および第二の混合物を、既知のFXRリガンドと接触させ、そして前記の既知のFXRリガンドがFXR-RXRヘテロ二量体のDNAプローブに対する結合を引き起こす能力を阻害する化合物を選択することをさらに含む、請求項14の方法。
【請求項１６】    DNAプローブに対するFXR-RXRmへテロ二量体の実質的な結合を引き起こさない化合物を選択することをさらに含む、請求項15の方法。
【請求項１７】    FXR仲介遺伝子転写を調節するのに有用な化合物をスクリーニングする方法であって、FXR、RXRおよびFXR／RXR活性化補助因子の混合物を、化合物と接触させ、そして前記化合物がFXR-RXRヘテロ二量体による活性化補助因子補充を促進するかどうか決定することを含む、前記方法。
【請求項１８】    FXRアンタゴニスト活性に関し、化合物をスクリーニングする方法であって、FXR、RXR、FXR／RXR活性化補助因子および既知のFXRアゴニストの混合物を、化合物と接触させ、そして前記化合物がFXR-RXRヘテロ二量体によるアゴニスト促進活性化補助因子補充を阻害するかどうか決定することを含む、前記方法。
【請求項１９】    RXRが、RXR突然変異受容体（「RXRm」）であり、該変異体が、機能するDNA結合ドメインを含み、そしてRXRリガンドによる実質的な活性化を妨げる以外は、RXR突然変異受容体がFXRとヘテロ二量体を形成し、またはこうしたヘテロ二量体が活性化補助因子を補充する能力に実質的に影響を与えない、リガンド結合ドメイン中の突然変異を有する、請求項17または18の方法。
【請求項２０】    RXRmが、ヒトRXRαのAsp332→Pro突然変異体である、請求項13、14、15、16または19の方法。
【請求項２１】    活性化補助因子が、FXR-RXRヘテロ二量体と、リガンド依存的方式で相互作用するペプチドモチーフを含む、ポリペプチドまたはその活性断片である、請求項17、18または19の方法。
【請求項２２】    活性化補助因子が、CBP、SRC-1およびPDB／DRIP205／TRAP220より選択される、請求項17、18、または19の方法。
【請求項２３】    活性化補助因子がGRIP1である、請求項17、18、または19の方法。
【請求項２４】    DNAプローブが、SEQ ID NO: 3またはSEQ ID NO: 4のヌクレオチド配列を含む、請求項14、15、または16の方法。
【請求項２５】    FXR仲介遺伝子転写を調節するのに有用な化合物をスクリーニングする方法であって：
（a）哺乳動物細胞を、機能可能なプロモーターの調節下にあるFXRをコードする遺伝子でトランスフェクションし；
（b）前記細胞を、DNA配列に連結されたプロモーターの調節下にある機能可能なレポーター遺伝子でトランスフェクションし、ここで該DNA配列は、リガンド活性化FXRまたはFXR複合体が結合し、前記レポーター遺伝子の転写を開始する機能可能な応答配列をコードする；
（c）前記細胞を、スクリーニングしようとする化合物の存在下で培養し；そして
（d）FXR活性化の指標として、レポーター遺伝子の転写または発現に関し、前記細胞をモニターする
ことを含む、前記方法。
【請求項２６】    前記細胞が、機能可能なプロモーターの調節下にあるRXRまたはRXRmをコードする遺伝子でトランスフェクションされる、請求項25の方法。
【請求項２７】    前記細胞が、機能可能なプロモーターの調節下にある胆汁酸輸送分子をコードする遺伝子でトランスフェクションされる、請求項25の方法。
【請求項２８】    前記細胞が、機能可能なプロモーターの調節下にある胆汁酸輸送分子をコードする遺伝子でトランスフェクションされる、請求項27の方法。
【請求項２９】    前記細胞が、既知のFXRリガンドの存在下で培養され、そしてレポーター遺伝子の転写または発現の減少が、スクリーニングしようとする化合物がFXRアンタゴニストであることの指標である、請求項25、26、27または28の方法。
【請求項３０】    該方法を用い、コレステロール異化作用を増加させるのに有用な化合物を同定する、請求項29の方法。
【請求項３１】    請求項10、11、13、14、15、16、17、25、26、27または28の方法により選択される、非天然化合物。
【請求項３２】    治療または予防に有効な量の請求項31の化合物を、薬学的に許容しうるキャリアーと組み合わせて含む、薬剤組成物。
【請求項３３】  高コレステロール血症の哺乳動物を治療するための、請求項32の薬剤組成物。