【手続補正書】
【提出日】平成18年12月26日(2006.12.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物細胞においてＩｇＧ重鎖又は軽鎖を、大腸菌（E. coli）において重鎖又は軽鎖のＦａｂフラグメント部分を発現させるためのベクターであって、前記ベクターが、
（ａ）細菌性複製起点と、
（ｂ）哺乳動物プロモーター及び／又はエンハンサー配列と、
（ｃ）前記重鎖又は前記軽鎖をコードするヌクレオチド配列であって、
（ｉ）第１イントロンを含む哺乳動物シグナル配列であって、細菌細胞において細菌プロモーター及び細菌シグナル配列が前記重鎖又は前記軽鎖のＦａｂドメインの細胞膜周辺腔への発現及び分泌を誘導し、哺乳動物細胞において前記哺乳動物プロモーター及び前記哺乳動物シグナル配列が前記重鎖又は前記軽鎖の発現及び分泌を誘導するように、第１イントロンが前記重鎖又は前記軽鎖のＦａｂドメインをコードする配列と機能的に結合した細菌プロモーター及び細菌シグナル配列を含むものである哺乳動物シグナル配列と、
（ｉｉ）前記ベクターが前記重鎖をコードする場合、停止コドンを含む、前記重鎖配列のＣＨ１とヒンジ領域の間の第２イントロンと
を含む前記ヌクレオチド配列と、
を含み、前記哺乳動物プロモーターが、前記重鎖又は前記軽鎖をコードする前記ヌクレオチド配列と機能的に結合しているものである、前記ベクター。
【請求項２】
哺乳動物細胞において可溶性ドメインを含むポリペプチドを、大腸菌（E. coli）において該ポリペプチドの該可溶性ドメインを発現させるためのベクターであって、前記ベクターが、
（ａ）細菌性複製起点と、
（ｂ）哺乳動物プロモーター及び／又はエンハンサー配列と、
（ｃ）前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、
（ｉ）第１イントロンを含む哺乳動物シグナル配列であって、細菌細胞において細菌プロモーター及び細菌シグナル配列が前記ポリペプチドの可溶性ドメインの細胞膜周辺腔への発現及び分泌を誘導し、哺乳動物細胞において前記哺乳動物プロモーター及び前記哺乳動物シグナル配列が前記ポリペプチドの発現及び分泌を誘導するように、第１イントロンが前記ポリペプチドの可溶性ドメインをコードする配列と機能的に結合した細菌プロモーター及び細菌シグナル配列を含むものである哺乳動物シグナル配列と、
（ｉｉ）前記可溶性ドメインの停止が望まれる前記ポリペプチドの領域内に位置し、停止コドンを含む第２イントロンと
を含む前記ヌクレオチド配列と、
を含み、前記哺乳動物プロモーターが、前記ポリペプチドをコードする前記ヌクレオチド配列と機能的に結合しているものである、前記ベクター。
【請求項３】
哺乳動物複製起点をさらに含む、請求項１又は２に記載のベクター。
【請求項４】
哺乳動物細胞においてエピソームとして存在するように設計されていない、請求項１又は２に記載のベクター。
【請求項５】
前記細菌プロモーターがｌａｃＰＯ配列を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項６】
前記重鎖又は前記軽鎖が、ヒト重鎖又は軽鎖配列、或いはヒト化重鎖又は軽鎖配列である、請求項１、３、４又は５に記載のベクター。
【請求項７】
前記重鎖又は前記軽鎖が、キメラ重鎖又は軽鎖配列である、請求項１、３、４又は５に記載のベクター。
【請求項８】
前記細菌シグナル配列がｐｅｌＢシグナル配列である、請求項１〜７のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項９】
哺乳動物細胞における発現のための前記プロモーターがＣＭＶプロモーターである、請求項１〜８のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１０】
重鎖と軽鎖の両者をコードする、請求項１、３、４、５、６、７又は８に記載のベクター。
【請求項１１】
前記軽鎖配列が、エピトープタグ又はアフィニティ標識をコードする配列を含むように遺伝子改変されている、請求項１、２、４、５、６、７、８、９又は１０に記載のベクター。
【請求項１２】
前記エピトープタグが、Ｆｄ鎖のＣ末端にあるＨＳＶタグである、請求項１１に記載のベクター。
【請求項１３】
前記アフィニティ標識が、Ｆｄ鎖のＣ末端にあるヘキサヒスチジンタグである、請求項１１に記載のベクター。
【請求項１４】
前記エピトープタグが、ポリヒスチジンタグ、ｍｙｃタグ、ＦＬＡＧタグ、ヘマグルチニンタグ、Ｓｔｒｅｐタグペプチド又はブルータングウイルスＶＰ７タンパク質である、請求項１１に記載のベクター。
【請求項１５】
前記ポリペプチドが抗体ではない、請求項２、３、４、５、８又は９に記載のベクター。
【請求項１６】
前記ポリペプチドがＦｃ融合タンパク質である、請求項１５に記載のベクター。
【請求項１７】
前記ポリペプチドの可溶性ドメインが、細菌細胞で発現された場合に測定することができる活性を保持している、請求項２、３、４、５、８又は９に記載のベクター。
【請求項１８】
前記可溶性ドメインが、ＤＮＡ結合ドメイン、タンパク質−タンパク質相互作用ドメイン、キナーゼドメイン又は酵素的ドメインである、請求項２、３、４、５、８又は９に記載のベクター。
【請求項１９】
前記ポリペプチドが、細胞表面受容体、７回膜貫通クラスの受容体のメンバー、又は核転写因子である、請求項２、３、４、５、８又は９に記載のベクター。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載のベクターを含む細菌細胞。
【請求項２１】
大腸菌細胞である、請求項２０に記載の細菌細胞。
【請求項２２】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載のベクターを含む哺乳動物細胞。
【請求項２３】
ヒト細胞又はネズミ細胞である、請求項２２に記載の哺乳動物細胞。
【請求項２４】
骨髄腫細胞、ＣＨＯ細胞、又はＨＥＫ細胞である、請求項２２に記載の哺乳動物細胞。
【請求項２５】
前記ベクターが、重鎖と軽鎖の両者のヌクレオチド配列を含む、請求項２０〜２４のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項２６】
重鎖を発現し、かつ軽鎖ヌクレオチド配列を含む請求項１及び３〜１４のいずれか１項に記載のベクターを含む細胞。
【請求項２７】
軽鎖を発現し、かつ重鎖ヌクレオチド配列を含む請求項１及び３〜１０のいずれか１項に記載のベクターを含む細胞。
【請求項２８】
前記ベクターが、可溶性ドメインを含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、請求項２０〜２４のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項２９】
前記ポリペプチドがＦｃ融合タンパク質である、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３０】
前記ベクターが細菌細胞において発現する場合に、ｆｄファージ遺伝子ＶＩＩＩ融合物が産生されるように、ＩｇＧ遺伝子のＦｄ（ＶＨ  ＣＨ１）セグメントをコードする配列が、ｆｄファージ遺伝子ＶＩＩＩタンパク質のコード領域をコードする配列と機能的に連結している、請求項１及び３〜１０のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項３１】
前記ベクターが細菌細胞において発現する場合に、ｆｄファージ遺伝子ＩＩＩ融合物が産生されるように、ＩｇＧ遺伝子のＦｄ（ＶＨ  ＣＨ１）セグメントをコードする配列が、ｆｄファージ遺伝子ＩＩＩタンパク質のコード領域をコードする配列と機能的に連結している、請求項１及び３〜１０のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項３２】
治療薬として使用するＭａｂを同定する方法であって、
（ａ）対照重鎖をコードする請求項１及び３〜１０のいずれか１項に記載のベクターと、対照軽鎖をコードする請求項１及び３〜１４のいずれか１項に記載のベクターとを含む対照細菌細胞を用意するステップと、
（ｂ）試験細菌細胞のライブラリーと抗原とを接触させるステップであって、各試験細菌細胞が、対照重鎖及び軽鎖と比べて遺伝子改変された、試験重鎖をコードする請求項１及び３〜１０のいずれか１項に記載のベクター又は試験軽鎖をコードする請求項１及び３〜１４のいずれか１項に記載のベクターを発現するものである、ステップと、
（ｃ）対照細菌細胞の周辺質抽出物と前記抗原の結合アフィニティと比較して試験細胞の周辺質抽出物と前記抗原の結合アフィニティを測定するステップと
を含み、試験細胞の周辺質抽出物と前記抗原の結合アフィニティが対照細菌細胞の周辺質抽出物と前記抗原の結合アフィニティより大きい場合に、治療薬として有用なＭａｂを発現している細菌細胞が同定される、前記方法。
【請求項３３】
治療薬として使用するＭａｂを同定する方法であって、
（ａ）請求項３０又は３１に記載のＦｄ（ＶＨ  ＣＨ１）−遺伝子ＩＩＩの融合物又はＦｄ（ＶＨ  ＣＨ１）−遺伝子ＶＩＩＩの融合物をコードする対照ファージを発現する細胞を用意するステップと、
（ｂ）対照ファージと比べて改変された、Ｆｄ（ＶＨ  ＣＨ１）−遺伝子ＩＩＩの融合物又はＦｄ（ＶＨ  ＣＨ１）−遺伝子ＶＩＩＩの融合物をコードする試験ファージを産生する複数の試験細胞を含むファージライブラリーのメンバーと、抗原とを接触させるステップと、
（ｃ）対照ファージと前記抗原の結合アフィニティと比較して試験ファージと前記抗原の結合アフィニティを測定するステップと
を含み、試験ファージと前記抗原の結合アフィニティが対照ファージと前記抗原の結合アフィニティより大きい場合に、治療薬として有用なＭａｂを発現している細胞が同定される、前記方法。
【請求項３４】
ステップ（ｃ）の後に、
（ａ）哺乳動物細胞においてステップ（ｃ）の試験細胞から単離したベクターを発現させるステップと、
（ｂ）前記哺乳動物細胞と前記抗原とを接触させるステップと、
（ｃ）対照ＩｇＧの結合アフィニティと比較して、その哺乳動物細胞内で発現した遺伝子改変ＩｇＧの結合アフィニティを測定するステップと
をさらに含む、請求項３２又は３３に記載の方法。
【請求項３５】
（ａ）Ｆａｂポリペプチドを発現し、（ｂ）請求項１及び３〜１４のいずれか１項に記載のベクターを含む複数の細菌細胞を含有する組成物。
【請求項３６】
（ａ）請求項１〜１９のいずれか１項に記載のベクター、及び（ｂ）糸状ファージを含む複数の細菌細胞を含有する組成物。
【請求項３７】
前記細菌細胞が大腸菌細胞である、請求項３５又は３６に記載の組成物。
【請求項３８】
前記糸状ファージがヘルパーファージである、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３９】
前記ヘルパーファージがｆｄ及びＭ１３からなる群より選択される、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記ヘルパーファージがｆｄである、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
前記ヘルパーファージがＭ１３である、請求項３９に記載の組成物。