【手続補正書】
【提出日】平成18年12月14日(2006.12.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の抗原をコードしかつ発現するアルファウイルス・レプリコン粒子(ＡＲＰｓ)の製造方法であって、以下のステップ：
(ａ)  複数のアルファウイルス・レプリコン核酸を複数の細胞へ導入し、ここで該細胞は、アルファウイルス複製及びパッケージングに許容状態であり、ここで該レプリコン核酸が、少なくともウイルス・パッケージング・シグナル及び上記アルファウイルス・レプリコン核酸中で発現できる少なくとも１の異種コード配列を含み、ここで該細胞が改変細胞を生成するために少なくとも１のヘルパー機能を含み、そしてここで該複数のアルファウイルス・レプリコン核酸が複数の改変細胞を生成するために、複数の抗原をコードし；
(ｂ)  ステップ(ａ)の上記複数の改変細胞を、上記少なくとも１のヘルパー機能の発現を許容し、上記アルファウイルス・レプリコン核酸の複製及び該アルファウイルス・レプリコン核酸のパッケージングを許容する条件下で培養して、ＡＲＰｓを形成し；
(ｃ)  ステップ(ｂ)の後に上記改変細胞を０.２Ｍ〜５Ｍのイオン強度を有する水溶液と接触して、上記ＡＲＰｓを水溶液中に放出させてＡＲＰを含む溶液を生成し；そして
(ｄ)  ステップ(ｃ)の上記ＡＲＰを含む溶液からＡＲＰｓを収集する
を含む、前記方法。
【請求項２】
ステップ(ａ）の前記宿主細胞における前記少なくとも１のヘルパー機能は、該宿主細胞のゲノム中に安定して組み込まれる核酸配列によりコードされる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記細胞における前記少なくとも１のヘルパー機能は、前記アルファウイルス・レプリコン核酸を結合できるキャプシド・タンパク質、及び少なくとも１のアルファウイルス糖タンパク質をコードする少なくとも１のヘルパー核酸に基いて導入され、ここで該アルファウイルス糖タンパク質は、該アルファウイルス・レプリコン核酸及び該キャプシドタンパク質と会合し、ここで該少なくとも１のヘルパー核酸分子が、該アルファウイルス・レプリコン核酸と共に該細胞内に導入される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも１のヘルパー機能が、少なくとも２個のヘルパー核酸分子によりコードされ、ここで該２個のヘルパー核酸分子の各々が、少なくとも１のアルファウイルス・ヘルパー機能をコードする、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも１のヘルパー核酸分子及び前記アルファウイルス・レプリコンＲＮＡがＲＮＡ分子である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記少なくとも１のヘルパー核酸分子が、キャップされていない、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記少なくとも１のヘルパー核酸分子が、ＤＮＡ分子である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記レプリコン核酸が、電気穿孔により前記宿主細胞内に導入される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記電気穿孔環境において前記細胞密度が、１ｍｌあたり１０7〜５×１０8である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記電気穿孔が、電気穿孔キュベット内で行われる、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
ステップ(ｄ)の後にイオン交換クロマトグラフィー・ステップ又はヘパリン・アフィニティー・クロマトグラフィー・ステップを行う、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記アルファウイルスが、弱毒化アルファウイルスである、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記弱毒化アルファウイルスが、ベネズエラ・ウマ脳炎ウイルス(ＶＥＥ)である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記弱毒化ＶＥＥが、３０１４株である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記洗浄ステップが、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＭｇＣｌ2、ＣａＣｌ2、ＮＨ4Ｃｌ、(ＮＨ4)2ＳＯ4、酢酸アンモニウム、又は重炭酸アンモニウムである、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１に記載の方法により製造されるアルファウイルス・レプリコン粒子調製品。
【請求項１７】
前記複数のコードされた抗原が腫瘍細胞由来である、請求項１６に記載のアルファウイルス・レプリコン粒子調製品。
【請求項１８】
前記複数のコードされた抗原が、寄生生物若しくは病原体由来である、請求項１６に記載のアルファウイルス・レプリコン粒子調製品。
【請求項１９】
前記複数のコードされた抗原が、ウイルス、真菌、酵母、細菌、及び原生動物からなる群から選ばれる病原体由来である、請求項１８に記載のアルファウイルス・レプリコン粒子調製品。
【請求項２０】
ヒト又は動物を寄生生物、病原体、又は癌に対して免疫化する方法であって、該寄生生物、病原体、又は癌の少なくとも１の抗原に免疫応答を作るために有効な、請求項１６に記載のウイルス・レプリコン粒子調製品の量を投与するステップを含む、前記方法。
【請求項２１】
前記病原体が、ウイルス、細菌、酵母、真菌、又は原生動物である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ウイルスが、インフルエンザ・ウイルス、ヘルペス・ウイルス、パラインフルエンザ・ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、サイトメガロウイルス、ヒト・パピローマウイルス、又はヒト免疫不全ウイルスである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記原生動物が、プラスモジウム・ファルシパルム(Plasmodium falciparum)である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記細菌が、マイコバクテリウム・ツベルクロシス(Mycobacterium tuberculosis)である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記癌が、膵臓癌、腎臓癌、肉腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、大腸癌、メラノーマ、乳癌、卵巣癌、及び前立腺癌からなる群から選ばれる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
複数の抗原をコードしかつ発現するアルファウイルス・レプリコン粒子(ＡＲＰｓ)の製造方法であって、以下のステップ：
(ａ)  複数のアルファウイルス・レプリコン核酸を複数の細胞へ導入し、ここで該細胞は、アルファウイルス複製及びパッケージングに許容状態であり、ここで該レプリコン核酸が、少なくともウイルス・パッケージング・シグナル及び上記アルファウイルス・レプリコン核酸中で発現できる少なくとも１の異種コード配列を含み、ここで該細胞が改変細胞を生成するために少なくとも１のヘルパー機能を含み、そしてここで該複数のアルファウイルス・レプリコン核酸が複数の改変細胞を生成するために、複数の抗原をコードし、ここで核酸を導入するステップが、該細胞を電気穿孔混合液１ｍｌあたり５×１０7〜５×１０8の密度で電気穿孔することにより行われ；
(ｂ)  ステップ(ａ)の上記複数の改変細胞を、上記少なくとも１のヘルパー機能の発現を許容し、上記アルファウイルス・レプリコン核酸の複製及び該アルファウイルス・レプリコン核酸のパッケージングを許容する条件下で培養して、ＡＲＰｓを形成し；
(ｃ)  ステップ(ｂ)の後に上記改変細胞を０.２Ｍ〜５Ｍのイオン強度を有する水溶液と接触して、上記ＡＲＰｓを水溶液中に放出させてＡＲＰを含む溶液を生成し；そして
(ｄ)  ステップ(ｃ)の上記ＡＲＰを含む溶液からＡＲＰｓを収集する
を含む、前記方法。
【請求項２７】
前記複数の抗原が、ウイルス、細菌、酵母、真菌、原生動物、又は癌細胞由来である、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記ウイルスが、インフルエンザ・ウイルス、ヘルペス・ウイルス、パラインフルエンザ・ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、サイトメガロウイルス、ヒト・パピローマウイルス、又はヒト免疫不全ウイルスである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記原生動物が、プラスモジウム・ファルシパルム(Plasmodium falciparum)である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記細菌が、マイコバクテリウム・ツベルクロシス(Mycobacterium tuberculosis)である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記癌細胞が、膵臓癌細胞、腎臓癌細胞、肉腫細胞、神経芽腫細胞、神経膠腫細胞、大腸癌細胞、メラノーマ細胞、乳癌細胞、卵巣癌細胞、及び前立腺癌細胞からなる群から選ばれる、請求項２７に記載の方法。