(57)【要約】【要約書】  本明細書は、後発酵茶から分離した新規なクエルセチン系化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物に関するものであり、後発酵茶関連産業及び前記化合物が利用できる各分野において広く活用され得る。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物。
【化１】
2019530710.tif 000018
前記式１中、Ｒ１はＣ１５Ｈ９Ｏ７であり、Ｒ２はＨ又はＣ６Ｈ１１Ｏ５であり、Ｒ３はＣ９Ｈ７Ｏ２である。
【請求項２】
前記Ｒ１は下記の化学式２で表される化合物である、請求項１に記載の化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物。
【化２】
2019530710.tif 000019
【請求項３】
前記Ｒ２は下記の化学式３で表される化合物である、請求項１に記載の化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物。
【化３】
2019530710.tif 000020
【請求項４】
前記Ｒ３は下記の化学式４で表される化合物である、請求項１に記載の化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物。
【化４】
2019530710.tif 000021
【請求項５】
前記化合物は、クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−p−ｃｏｕｍａｒｏｙｌ］［β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］）である、請求項１に記載の化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物。
【請求項６】
前記化合物は、クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−p−ｃｏｕｍａｒｏｙｌ］［α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］）である、請求項１に記載の化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物又はその溶媒和物の製造方法。
【請求項８】
当該製造方法は緑茶を醗酵させた後に分離することである、請求項７に記載の製造方法。
【請求項９】
前記醗酵は後発酵方式によるものである、請求項８に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書は、新規なクエルセチン系化合物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
緑茶は、葉状の葉茶形態、又はより深い香りを感じるために醗酵状態の茶で飲用する。醗酵緑茶は、緑茶葉に酸化処理を施したものを意味し、茶葉に存在する酸化酵素によって酸化させた醗酵茶、茶葉に存在する酵素ではない他の微生物によって醗酵させた後発酵茶を含む。醗酵の度合に応じて、弱発酵茶、半発酵茶、全醗酵茶などに分けられる。例えば、醗酵緑茶は、醗酵の形態や度合に応じて、緑茶、ウーロン茶、紅茶、プーアル茶などといった多様な名称で呼ばれる。
【０００３】
グローバルな後発酵茶の製造技術保有国家は中国、日本である。中国の好気的醗酵茶はカビ類（Ｆｕｎｇｉ）を醗酵菌株として用い、主要山地は雲南省の西双版納である。日本の好気的醗酵茶としては、カビ類（Ｆｕｎｇｉ）を醗酵菌株として用い、富山が主要山地である黒茶があり、嫌気的醗酵茶としては、嫌気性ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  Ａｎａｅｒｏｂｅ）を醗酵菌株として用い、主要山地が阿波である番茶がある。また、嫌気性カビ類（Ｆｕｎｇｉ  Ａｎａｅｒｏｂｅ）を醗酵菌株として用い、主要山地が石鎚である黒茶がある。中国のプーアル縣から由来した伝統のプーアル茶は、緑茶葉を採取するときに故意に傷つけ、加熱して煎った後に適量の水分を加え、空気中の微生物を用いて自然醗酵させる。韓国では、智異山、保寧などで間欠的に家内制手工業の形態で醗酵茶を製造し飲用している。
【０００４】
醗酵状態の茶は、葉茶と比べて、香臭において違いを示すだけでなく、具体的醗酵工程や微生物の種類などに応じて、有効成分の種類や含量において大きな違いを示すことがある。このように多様な化合物が生成、分離され得るという点のため、緑茶を用いた未知の新規化合物の分離及び同定のための多様な努力が続けられてきている。
【０００５】
一方、クエルセチン系化合物は、フラボノイドの一種であって、自然界でその大部分は配糖体として存在する。糖の種類によってクエルシトリン、イソクエルシトリン、クエルシメリトリン、アビクラリン、ヒペリン、レイノウトリン、クエルシツロン、ルチンなどの配糖体がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】韓国登録特許第１０−０９７５１９９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、一側面において、後発酵茶から新規なクエルセチン系化合物を見出し、これを産業的に用いることを目的とする。
【０００８】
本発明は、他の側面において、前記新規なクエルセチン系化合物の製造方法を提供して、産業的利用可能性を高めることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
前記課題を解決するために本発明は、一側面において、下記の化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物を提供する。
【００１０】
【化１】
2019530710.tif 000003
【００１１】
前記式１中、Ｒ１はＣ１５Ｈ９Ｏ６７であってよく、Ｒ２はＨ又はＣ６Ｈ１１Ｏ５であってよく、Ｒ３はＣ９Ｈ７Ｏ２であってよい。
【００１２】
また、本発明は、他の側面において、前記化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物の製造方法を提供する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明は、一側面において、後発酵茶から新規な特定の化合物を分離した後、これを産業的に利用できるようにすることで、後発酵茶関連産業及び前記化合物が利用され得る各分野において広く活用でき、且つ関連消費者の需要を満たすことができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］のＭＳスペクトルを示した図である。
【図２】クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］の１Ｈ−ＮＭＲ（核磁気共鳴）スペクトルを示した図である。
【図３】クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示した図である。
【図４】クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］の１Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）スペクトルを示した図である。
【図５】クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］の１Ｈ−１３Ｃ  ＨＭＢＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ−Ｂｏｎｄ  Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）スペクトルを示した図である。
【図６】クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］のＭＳスペクトルを示す図である。
【図７】クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示した図である。
【図８】クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示した図である。
【図９】クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］の１Ｈ−１３Ｃ  ＨＳＱＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）スペクトルを示した図である。
【図１０】クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］の１Ｈ−１３Ｃ  ＨＭＢＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ−Ｂｏｎｄ  Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）スペクトルを示した図である。
【図１１】本発明の一側面に係る化合物がベータアミロイドの凝集に及ぼす影響を確認した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本明細書におて「後発酵」は、茶葉に存在する酵素ではない他の微生物又は物質によって醗酵させることを含む。後発酵茶は前記方式によって緑茶を醗酵させたものを含む。
【００１６】
本明細書において「分画物」は、ある溶媒を用いて特定の物質や抽出物を分画して得たもの又は分画して残ったもの、そしてこれらを特定の溶媒で再び抽出して得たものを含む。分画方法や抽出方法は当業界における通常の技術者に知られたものであればいずれも用いてよい。
【００１７】
本明細書において「異性体」は、特に光学異性体（ｏｐｔｉｃａｌ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（例えば、本質的に純粋なエナンチオマー（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ  ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ）、本質的に純粋なジアステレオマー（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ  ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒｓ）又はそれらの混合物）だけでなく、配座異性体（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（すなわち、１つ以上の化学結合のその角度のみ異なる異性体）、位置異性体（ｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（特に、互変異性体（ｔａｕｔｏｍｅｒｓ））、又は幾何異性体（ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（例えば、シス−トランス異性体）を含む。
【００１８】
本明細書において「本質的に純粋な（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ）」とは、例えば、エナンチオマー又はジアステレオマーと関連して用いた場合、エナンチオマー又はジアステレオマーを例として挙げることのできる具体的な化合物が約９０％以上、好ましくは約９５％以上、より好ましくは約９７％以上、又は約９８％以上、さらに好ましくは約９９％以上、最も好ましくは約９９．５％以上（ｗ／ｗ）存在することを意味する。
【００１９】
本明細書において「薬学的に許容可能」とは、通常の医薬的服用量（Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｄｏｓａｇｅ）で利用する際に相当な毒性を避けることにより、動物、より具体的には、ヒトに使用することができるという政府又はこれに準ずる規制機構の承認を受けることができ、又は承認を受け、又は一般的な薬局方に列挙され、又はその他一般的な薬局方に記載されたものと認定されることを意味する。
【００２０】
本明細書において「薬学的に許容可能な塩」とは、薬学的に許容可能であり、親化合物（ｐａｒｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）の好ましい活性を有する本発明の一側面に係る塩を意味する。前記塩は、（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等といった無機酸から形成されるか；又は、酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンテンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４−メチルビシクロ［２，２，２］−ｏｃｔ−２−エン−１-カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔｅｒｔ−ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸といった有機酸から形成される酸付加塩（ａｃｉｄ  ａｄｄｉｔｉｏｎ  ｓａｌｔ）；又は、（２）親化合物に存在する酸性プロトンが置換されるときに形成される塩を含んでよい。
【００２１】
本明細書において「水和物（ｈｙｄｒａｔｅ）」とは、水が結合している化合物を意味し、水と混合物との間に化学的な結合力のない内包化合物を含む広範囲な概念である。
【００２２】
本明細書において「溶媒和物」とは、溶質の分子やイオンと溶媒の分子やイオンとの間に生じた高次の化合物を意味する。
【００２３】
本発明は、一側面において、下記の化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物を提供する。
【００２４】
【化２】
2019530710.tif 000004
【００２５】
前記式１中、Ｒ１はＣ１５Ｈ９Ｏ６７であってよく、Ｒ２はＨ又はＣ６Ｈ１１Ｏ５であってよく、Ｒ３はＣ９Ｈ７Ｏ２であってよい。
一具現例によると、前記Ｒ１は、下記の化学式２で表される化合物であってよい。
【００２６】
【化３】
2019530710.tif 000005
【００２７】
他の具現例によると、前記Ｒ２は、下記の化学式３で表される化合物であってよい。
【００２８】
【化４】
2019530710.tif 000006
【００２９】
前記Ｒ３は、下記の化学式４で表される化合物であってよい。
【００３０】
【化５】
2019530710.tif 000007
【００３１】
他の具現例によると、前記化合物は、クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−ｃｏｕｍａｒｏｙｌ］［β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］）であってよい。前記クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、下記の化学式のように表し得る。
【００３２】
【化６】
2019530710.tif 000008
【００３３】
また他の具現例によると、前記化合物は、クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−ｃｏｕｍａｒｏｙｌ］［α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］）であってよい。前記クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］は、下記の化学式のように表し得る。
【００３４】
【化７】
2019530710.tif 000009
【００３５】
本発明は、一側面において、前記化合物は、これまで知られていない新規な物質であって、本発明者らが後発酵茶に対する持続的な研究の末に見出したものである。本発明の一側面に係る前記化合物は、ベータアミロイド凝集を抑制するなどの有用性を発揮し（図１１参照）、ベータアミロイド凝集などは医薬及び関連分野において臨床的に応用できる特性であるため、前記化合物を産業的に用い得ることが明確に分かる。前記化合物に関する有用性について更なる研究を進めていくと、多様な産業分野において活用できるものと予想される。
【００３６】
一具現例によると、前記化合物の含量は、これを含む組成物の総質量を基準に、０．０１質量％以上、０．０５質量％以上、０．１質量％以上、０．２質量％以上、０．３質量％以上、０．４質量％以上、０．５質量％以上、０．７質量％以上、０．９質量％以上、１．０質量％以上、１．３質量％以上、１．５質量％以上、１．７質量％以上、２．０質量％以上、２．２質量％以上、２．５質量％以上、２．８質量％以上、３．０質量％以上、３．３質量％以上、３．５質量％以上、３．８質量％以上、４．０質量％以上、４．５質量％以上、５．０質量％以上、５．５質量％以上、６．０質量％以上、８．０質量％以上、１０質量％以上、１２質量％以上、１５質量％以上、又は２０質量％以上であってよい。また、１８質量％以下、１５質量％以下、１２質量％以下、１０質量％以下、８．０質量％以下、６．０質量％以下、５．５質量％以下、５．０質量％以下、４．５質量％以下、４．０質量％以下、３．８質量％以下、３．５質量％以下、３．３質量％以下、３．０質量％以下、２．８質量％以下、２．５質量％以下、２．２質量％以下、２．０質量％以下、１．７質量％以下、１．５質量％以下、１．３質量％以下、１．０質量％以下、０．９質量％以下、０．８質量％以下、０．７質量％以下、０．５質量％以下、０．４質量％以下、０．３質量％以下、０．２質量％以下、０．１質量％以下、０．０５質量％以下、又は０．０３質量％以下であってよい。
【００３７】
本発明は、他の側面において、前記化合物、その異性体、これらの薬学的に許容可能な塩、これらの水和物又はこれらの溶媒和物の製造方法を提供する。前記製造方法は、合成、天然物からの分離などを含んでいてよい。
【００３８】
一具現例によると、前記製造方法は、緑茶を醗酵させた後に分離するものであってよい。前記製造方法は、緑茶葉に醗酵菌を接種し醗酵させた後に熱風で乾燥させてから熟成させる過程を含んでいてよく、熟成の後に抽出及び分画を経て前記化合物を分離する過程を含んでいてよい。
【００３９】
前記抽出及び分画は、水、有機溶媒などを用いて行ってよく、当業者に周知のいずれの方法も適用可能である。
【００４０】
他の側面によると、前記分画は前記抽出の後に行なってよく、ケトンで分画してよく、ケトンで分画したものを更にアルコール（例えば、エタノール）で抽出してもよい。前記ケトンは、アセトン、カルボン（ｃａｒｖｏｎ）、プレゴン（ｐｕｌｅｇｏｎｅ）、イソロンギホラノン（ｉｓｏｌｏｎｇｉｆｏｌａｎｏｎｅ）、２−ヘプタノン、２−ペンタノン、３−ヘキサノン、３−ヘプタノン、４−ヘプタノン、２−オクタノン、３−オクタノン、２−ノナノン、３−ノナノン、２−ウンデカノン、２−トリデカノン、メチルイソプロピルケトン、エチルイソアミルケトン、ブチリデンアセトン、メチルヘプテノン、ジメチルオクテノン、ゲラニルアセトン、ファルネシルアセトン、２,３−ペンタジオン、２,３−ヘキサジオン、３,４−ヘキサジオン、２,３−ヘプタジオン、アミルシクロペンタノン、アミルシクロペンテノン、２−シクロペンチルシクロペンタノン、ヘキシルシクロペンタノン、２−ｎ−ヘプチルシクロペンタノン、ｃｉｓ−ジャスモン、ジヒドロジャスモン、メチルコリロン、２−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキサノン、ｐ−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキサノン、２−ｓｅｃ−ブチルシクロヘキサノン、セロリーケトン、クリプトン、ｐ−ｔｅｒｔ−ペンチルシクロヘキサノン、メチルシクロシトロン、ネロン、４−シクロヘキシル−４−メチル−２−ペンタノン、オキサイドケトン、エモキシフロン、メチルナフチルケトン、α−メチルアニサルアセトン、アニシルアセトン、ｐ−メトキシフェニルアセトン、ベンジリデンアセトン、ｐ−メトキシアセトンフェノン、ｐ−メチルアセトフェノン、プロピオフェノン、アセトフェノン、α−ダイナスコン（Ｄｙｎａｓｃｏｎｅ）、イリトーン（ｌｒｉｔｏｎｅ）、イオノン（ｉｏｎｏｎｅ）、プソイドイオノン（Ｐｓｅｕｄｏｉｏｎｏｎｅ）、メチルイオノン、メチルイリトーン、２,４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキサノン、アリルイオノン、２−アセチル−３,３−ジメチルノルボルナン、ベルベノン、フェンコン（ｆｅｎｃｈｏｎ）、シクロペンタデカノン、シクロヘキサデセノンなどを含んでいてよく、当業界において一般的に用いられ得る溶媒としてのケトン類及びこれらの混合物をいずれも含んでいてよく、好ましくは、アセトンであってよい。
【００４１】
他の具現例によると、前記発酵は後発酵方式によるものであってよい。前記後発酵は菌株接種によるものであってよく、前記菌株は、サッカロマイセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）及びロイコノストック属（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｐ．）から選ばれる菌株であってよく、好ましくは、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｌｉｓ）、ラクトバチルス・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｕｓ）及びロイコノストック・メッセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）から選ばれるものであってよい。
【００４２】
以下、下記実施例、及び実験例を挙げて本明細書の構成及び効果についてより具体的に説明する。なお、これらの例は、本明細書についての理解を助けるための目的から例示したものに過ぎず、本明細書の範疇及び範囲が下記例に限定されるものではない。
【００４３】
［実施例１］後発酵茶試料の製造
緑茶（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ  ｖａｒ. Ｙａｂｕｋｉｔａ）葉で作った緑茶に水を添加して水分含量を４０質量％に調整した。これにバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）５×１０６ｃｆｕ／ｇを接種し、５０℃で３日間醗酵させた後に８０℃で４日間醗酵させた。
【００４４】
前記熟成された茶の試料を１５秒間粉砕し、メッシュサイズ１ｍｍのステンレス篩で篩いわけした。次いで、粉砕された５０ｍｇを１．５ｍｌのエッペンドルフ・チューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ｔｕｂｅ）に入れ、１ｍｌの脱イオン水を添加し、６０℃の恒温槽で３０分間一定の速度で撹拌した後、２５℃、１３,０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。乾燥させた醗酵緑茶抽出物から水に溶けない部分だけを分離した。
【００４５】
［実施例２］分画物の収得及び化合物の分離
前記後発酵茶試料１５０ｇをアセトンで分画してカテキン誘導体及びカフェインを除去し、他の化合物が濃縮された可溶物を収得した。前記アセトン可溶物４０ｇに対し一次的にシリカゲルコラムクロマトグラフィーを利用して、クロロホルム：メタノールの５：１（ｖ／ｖ）混合物を溶媒として分画物を得た。
【００４６】
カフェインが除去されたクロロホルム：メタノール５：１（ｖ／ｖ）分画物８．９ｇを大容量の高性能向流クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｃｏｕｎｔｅｒｃｕｒｒｅｎｔ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＨＰＣＣＣ、Ｄｙｎａｍｉｃ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ、ＵＫ）を利用して分画した。このときに用いた溶媒はｎ−ｈｅｘａｎｅ−ＴＢＭＥ（Ｍｅｔｈｙｌ  ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ  ｅｔｈｅｒ）−ＢｕＯＨ−ＭｅＣＮ−Ｗａｔｅｒ（０．２５：３：１：１：５、ｖ／ｖ）とし、流速は２５ｍｌ／ｍｉｎとした。前記条件を用いて計１０個の下位分画を分け、各分画に対し、再び小容量のＨＰＣＣＣ（Ｄｙｎａｍｉｃ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ  Ｌｔｄ、ＵＫ）、ＨＰＬＣ（Ｈｉｇｈ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、セファデックス（ｓｅｐｈａｄｅｘ）ＬＨ−２０コラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓｗｅｄｅｎ）などを使用して、各分画に含有された成分を分離した。
【００４７】
その結果、前記分画物からこれまで知られていない化合物である、クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−ｃｏｕｍａｒｏｙｌ］［β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］）と、クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−ｃｏｕｍａｒｏｙｌ］［α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］）を分離することができ、１Ｈ、１３Ｃ−ＮＭＲ（ｎｕｃｌｅａｒ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｃｅ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）、ＵＶ（ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）、ＥＳＩ−ＭＳ（Ｅｌｅｃｔｒｏ  Ｓｐｒａｙ  Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｒｏｓｃｏｐｙ）を用いて構造を同定して、各化合物の構造を究明した。１Ｈ及び１３Ｃ核磁気共鳴（ｎｕｃｌｅａｒ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ、ＮＭＲ）の場合、溶媒（ｓｏｌｖｅｎｔ）としてｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ３を用い、機器はＢｒｕｋｅｒ  Ａｄｖａｎｃｅ  ＤＰＸ−５００（ＢＲＵＫＥＲ社、ＵＳＡ）を使用した。各化合物のＭＳスペクトルは、６２００  Ｓｅｒｉｅｓ  Ａｃｃｕｒａｔｅ−Ｍａｓｓ  Ｔｉｍｅ−ｏｆ−Ｆｌｉｇｈｔ（ＴＯＦ）ＬＣ／ＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ、ＵＳ）を用いて分析した。
【００４８】
分析の結果、前記各化合物は、これまで知られていない新規な化合物であって、Ｃ４２Ｈ４６Ｏ２３の分子量９１８．２４３０であるクエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］と、Ｃ３６Ｈ３６Ｏ１８の分子量７５６．１９０２であるクエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］であると確認された。
【００４９】
クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］の化学式及びＮＭＲデータは以下のとおりである。
【００５０】
【化８】
2019530710.tif 000010
【００５１】
【表１Ａ】
2019530710.tif 000011
【００５２】
【表１Ｂ】
2019530710.tif 000012
【００５３】
クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］のＭＳスペクトルは図１のように示され、１Ｈ−ＮＭＲスペクトル及び１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルはそれぞれ図２及び図３のように示され、ＨＳＱＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）スペクトルは図４のように示され、ＨＭＢＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ−Ｂｏｎｄ  Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）スペクトルは図５のように示された。
【００５４】
一方、クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］の化学式及びＮＭＲデータは以下のとおりである。
【００５５】
【化９】
2019530710.tif 000013
【００５６】
【表２Ａ】
2019530710.tif 000014
【００５７】
【表２Ｂ】
2019530710.tif 000015
【００５８】
クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］のＭＳスペクトルは図６のように示され、１Ｈ−ＮＭＲスペクトル及び１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルはそれぞれ図７及び図８のように示され、ＨＳＱＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）スペクトルは図９のように示され、ＨＭＢＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ−Ｂｏｎｄ  Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）スペクトルは図１０のように示された。
【００５９】
［実験例１］ベータアミロイド凝集抑制効能の確認
前記クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］とクエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］のベータ−アミロイド凝集阻害効果を蛍光分析法（Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ  Ｔ  ａｓｓａｙ）で確認した。
【００６０】
具体的に、ベータ−アミロイド（Ａβ１−４２、ＡｎａＳｐｅｃ  Ｉｎｃ、ＵＳＡ）を入手して０．１ｍｇ／ｍｌの濃度で使用し、使用の前に−８０℃で保管した。ＤＭＳＯにモリン（Ｍｏｒｉｎ、２０μＭ）、フェノールレッド（Ｐｈｅｎｏｌ  Ｒｅｄ、２０μＭ）、クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］（１ｍｇ／ｍｌ）、クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］（１ｍｇ／ｍｌ）のそれぞれを希釈して前記濃度に調節した。
【００６１】
Ａβ１−４２凝集抑制度合いを特定するために、０．０１Ｍリン酸ソーダ緩衝溶液５０μｌに前記濃度で用意したそれぞれの化合物を１０μＭになるように希釈した後、０．１ｍｇ／ｍｌのＡβ１−４２を４０μｌ加えた後、２ｍＭチオフラビンＴ（Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ  Ｔ）１０μｌを加え、３７℃で５分間隔で１５０分間分光蛍光光度計（ＲＦ−５３００ＰＣ、ＳＨＩＭＡＤＺＵ  ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ、Ｊａｐａｎ）で蛍光を測定した。
【００６２】
その結果は、下の表及び図１１のように示された。
【００６３】
【表３】
2019530710.tif 000016
【００６４】
前記表中のＲＦＵは、ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｕｎｉｔであり、「Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ＲＦＵ」は凝集したベータアミルロイドの量を表し、「Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ＲＦＵ（％  ｏｆ  Ｐｏｓ.Ｃｏｎｔ.）」は凝集したベータアミルロイドの量の陽性対照群に対する百分率の値を表す。「新規物質３１」はクエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］を表し、新規物質３２」はクエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］を表す。
【００６５】
すなわち、陽性対照群（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ、「Ｐｏｓ.Ｃｏｎｔ.」と表し、化合物の処理なしにベータアミルロイドだけを凝集させたもの）の凝集を１００％としたとき、クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］とクエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］はそれぞれ陽性対照群に比べ１１．２％、１６．８％程度凝集を抑制する効果を示した。この結果は、前記物質がこれまで知られた抑制剤であるＭｏｒｉｎ（２１．４％）、Ｐｈｅｎｏｌ  ｒｅｄ（６．４％）ほどの優れたベータアミルロイド凝集抑制効能があることを示す。したがって、前記二つの化合物は、前記のような有用性を持っているところ、関連産業分野において多様に活用され得る。
【００６６】
［実験例２］皮膚累積刺激の実験
前記クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］とクエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］の皮膚累積刺激性の有無を確認し、皮膚に使用できる濃度範囲を算出するために、ＨＲＩＰＴ（Ｈｕｍａｎ  ｒｅｐｅａｔｅｄ  ｉｎｓｕｌｔ  ｐａｔｃｈ  ｔｅｓｔｓ）を実施した。
【００６７】
具体的に、健康な成人被験者１５人を無作為に選定し、前記化合物がそれぞれ０．５質量％、１質量％、３質量％ずつ含まれた試験用組成物（前記化合物の他、乳化剤、安定化剤、精製水などを含む皮膚用組成物）をチャンバ（ＩＱ  ｃｈａｍｂｅｒ、Ｅｐｉｔｅｓｔ  Ｌｔｄ、フィンランド）当り２０μｌずつ滴下し、被験者の背中の右上側部位に貼布してから２４時間経過したときに新しい貼布に取り替えた。このような方法で、１週間に３回ずつ計３週間９回の貼布を行いながら毎回貼布の前後の皮膚反応を検査し、最終の貼布を除去してから４８時間までの間の皮膚反応を確認し、その平均反応度を求めた。
【００６８】
その結果は、下の表のとおりである。
【００６９】
【表４】
2019530710.tif 000017
【００７０】
前記皮膚反応は、国際接触皮膚炎研究班（ＩＣＤＲＧ；Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｔａｃｔ  Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ  ＲＥＳＥＡＲＣＨ  Ｇｒｏｕｐ）の基準に従って判定した。前記表において「新規物質３１」は、クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］を示し、「新規物質３２」は、クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］を示す。すなわち、前記二つの物質ともに、前記含量範囲でいずれも（−）反応度を示し（±、＋、＋＋、又は＋＋＋反応度を示した被験者なし）、これより、前記物質は皮膚累積刺激がなく、皮膚に安全に使用できることが分かった。
【００７１】
以上、本明細書の特定の実施例などを詳しく記述したが、当業界の通常の知識を有する者にとってこのような具体的な記述は単に好適な具現例であるに過ぎず、これによって本明細書の範囲が制限されるものではないことは明白であろう。したがって、本明細書の実質的な範囲は添付の請求項とその等価物によって定義されるといえよう。
【図１】
2019530710.tif 000022
【図２】
2019530710.tif 000023
【図３】
2019530710.tif 000024
【図４】
2019530710.tif 000025
【図５】
2019530710.tif 000026
【図６】
2019530710.tif 000027
【図７】
2019530710.tif 000028
【図８】
2019530710.tif 000029
【図９】
2019530710.tif 000030
【図１０】
2019530710.tif 000031
【図１１】
2019530710.tif 000032
【手続補正書】
【提出日】平成31年4月19日(2019.4.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式１で表される化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物。
【化１】
2019530710.tif 000033
前記式１中、Ｒ１はＣ１５Ｈ９Ｏ７であり、Ｒ２はＨ又はＣ６Ｈ１１Ｏ５であり、Ｒ３はＣ９Ｈ７Ｏ２である。
【請求項２】
前記Ｒ１は下記の化学式２で表される化合物である、請求項１に記載の化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物。
【化２】
2019530710.tif 000034
【請求項３】
前記Ｒ２は下記の化学式３で表される化合物である、請求項１又は２に記載の化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物。
【化３】
2019530710.tif 000035
【請求項４】
前記Ｒ３は下記の化学式４で表される化合物である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物。
【化４】
2019530710.tif 000036
【請求項５】
前記化合物は、クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−p−ｃｏｕｍａｒｏｙｌ］［β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→３）−Ｏ−α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］）である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物。
【請求項６】
前記化合物は、クエルセチン３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−ｐ−クマロイル］［α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド］（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ３−Ｏ−［３−Ｏ’’−（Ｅ）−p−ｃｏｕｍａｒｏｙｌ］［α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→６）−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ］）である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物、又はその溶媒和物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物又はその溶媒和物の製造方法。
【請求項８】
当該製造方法は緑茶を醗酵させた後に分離することである、請求項７に記載の製造方法。
【請求項９】
前記醗酵は後発酵方式によるものである、請求項８に記載の製造方法。
【国際調査報告】
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2019530710.tif 000039
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