【誤訳訂正書】
【提出日】平成19年8月30日(2007.8.30)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【書類名】  明細書
【発明の名称】  ヒトＢリンパ球活性化抗原Ｂ７ファミリーのメンバーをコードするポリヌクレオチドおよびこれらによりコードされるポリペプチド
【特許請求の範囲】
【請求項１】  Ｂリンパ球活性化抗原（「ＢＬＡＡ」）をコードする単離された核酸分子または該核酸分子の相補体であって、ここで該分子は、配列番号２、配列番号４もしくは配列番号６と少なくとも９５％同一である配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項２】  請求項１に記載の核酸分子または該核酸分子の相補体であって、ここで該分子は、配列番号１、配列番号３もしくは配列番号５のヌクレオチドの配列を含む核酸分子と相補的な核酸配列に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、核酸分子。
【請求項３】  前記ヌクレオチド配列がヒトＢＬＡＡをコードする、請求項１の核酸分子。
【請求項４】  請求項１に記載の核酸分子であって、ここで、該分子は、配列番号２、配列番号４もしくは配列番号６のアミノ酸配列、または配列番号２、配列番号４もしくは配列番号６のアミノ酸配列における１以上の保存的置換を含むアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、核酸分子。
【請求項５】  請求項１に記載の核酸分子または該核酸分子の相補体であって、ここで該分子は、配列番号２、配列番号４もしくは配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、核酸分子。
【請求項６】  １００ヌクレオチド長未満のオリゴヌクレオチドであり、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１もしくは配列番号１２の少なくとも６個連続したヌクレオチドを含む、オリゴヌクレオチド、またはそれらの相補体。
【請求項７】  請求項１に記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項８】  前記ベクターが発現ベクターである、請求項７に記載のベクター。
【請求項９】  前記核酸分子に作動可能に連結された調節エレメントをさらに含む、請求項７に記載のベクター。
【請求項１０】  単離されたポリペプチドであって、該ポリペプチドは、以下：
（ａ）配列番号２、配列番号４または配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
（ｂ）配列番号２、配列番号４または配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドのフラグメントであって、ここで該フラグメントは、配列番号２、配列番号４または配列番号６の少なくとも６個連続したアミノ酸を含む、フラグメント；
（ｃ）配列番号２、配列番号４または配列番号６のアミノ酸配列を含む、ポリペプチドの誘導体；
（ｄ）配列番号２、配列番号４または配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドのアナログ；
（ｅ）配列番号２、配列番号４または配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドのホモログ；
（ｆ）配列番号２、配列番号４または配列番号６のアミノ酸配列を含むポリペプチドの、天然に存在する対立遺伝子改変体であって、ここで該ポリペプチドは、ストリンジェントな条件下で、配列番号１、配列番号３または配列番号５の核酸分子にハイブリダイズする核酸分子によりコードされる、改変体、
からなる群より選択されるポリペプチドと少なくとも８０％同一である、ポリペプチド。
【請求項１１】  請求項１０に記載のポリペプチドであって、該ポリペプチドまたはそのフラグメントは、ヒトＢリンパ球活性化抗原Ｂ７様活性を有する、ポリペプチド。
【請求項１２】  請求項１０のポリペプチドに選択的に結合する、抗体。
【請求項１３】  請求項１０に記載のポリペプチドを産生する方法であって、該方法は、前記核酸分子が発現される条件下で宿主細胞を培養する工程を包含する、方法。
【請求項１４】  サンプル中の請求項１０に記載のポリペプチドの存在を検出する方法であって、該方法は、請求項１０に記載のポリペプチドに選択的に結合する化合物と該サンプルとを接触させる工程、および請求項１０に記載のポリペプチドに結合する化合物が、該サンプル中に存在するか否かを決定する工程を包含する、方法。
【請求項１５】  サンプル中の請求項１に記載の核酸分子の存在を検出する方法であって、該方法は、請求項１に記載の核酸分子に選択的に結合する核酸プローブまたはプライマーと該サンプルとを接触させる工程、および請求項１に記載の核酸分子に結合する該核酸プローブまたはプライマーが、該サンプル中に存在するか否かを決定する工程を包含する、方法。
【請求項１６】  請求項１０に記載のポリペプチドの活性を調節するための方法であって、該方法は、請求項１０に記載のポリペプチドを含む細胞サンプルを該ポリペプチドの活性を調節するに十分な量で該ポリペプチドに結合する化合物と接触させる工程を包含する、方法。
【請求項１７】  免疫応答関連障害を処置または予防する方法であって、該方法は、以下：
（ａ）請求項１に記載の核酸；
（ｂ）請求項１０に記載のポリペプチド；および
（ｃ）請求項１２に記載の抗体、
からなる群より選択される有効量の治療剤を、このような処置または予防が所望される被検体へ投与する工程を包含し、ここで、該治療剤は、該被検体における該免疫応答関連障害を処置するに十分な量で投与される、方法。
【請求項１８】  薬学的組成物であって、該組成物は、以下：
（ａ）請求項１に記載の核酸；
（ｂ）請求項１０に記載のポリペプチド；および
（ｃ）請求項１２に記載の抗体、
からなる群より選択される治療的または予防的に有効量の治療剤、ならびに薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項１９】  １以上に容器中に、治療的または予防的に有効量の請求項１８に記載の薬学的組成物を含む、キット。
【請求項２０】  ヒト疾患に関連する症状を処置するための医薬の製造における治療剤の使用であって、該疾患は、免疫応答関連障害を含み、ここで該治療剤は、以下：
（ａ）請求項１に記載の核酸；
（ｂ）請求項１０に記載のポリペプチド；および
（ｃ）請求項１２に記載の抗体、
からなる群より選択される、使用。
【請求項２１】  免疫応答関連障害の活性もしくは潜伏のモジュレーターまたは該免疫応答関連障害に対する素因についてスクリーニングするための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）免疫応答関連障害について増加した危険性である試験動物に試験化合物を投与する工程であって、ここで，該試験動物は、ＢＬＡＡポリペプチドを組換え的に発現する、工程；
（ｂ）該試験動物における該ポリペプチドの活性の発現を測定する工程；
（ｃ）該ポリペプチドを組換え的に発現し、かつ免疫応答関連疾患について増加した危険性ではないコントロール動物における該ポリペプチドの活性を測定する工程；ならびに
（ｄ）該試験動物および該コントロール動物における該ポリペプチドの発現を比較する工程であって、ここで該コントロール動物に対する該試験動物における該ポリペプチドの活性の変化は、該試験化合物が、免疫応答関連疾患に対する活性もしくは潜伏のモジュレーターであるか、または免疫応答関連疾患に対する素因であることを示す、工程、
を包含する、方法。
【請求項２２】  請求項２１に記載の方法であって、ここで前記試験動物は、組換え試験動物であり、該組換え試験動物は、試験タンパク質導入遺伝子を発現するか、またはプロモーターの制御下で野生型試験動物に対して増加したレベルで該導入遺伝子を発現し、そしてここで該プロモーターは、該導入遺伝子のネイティブなプロモーターではない、方法。
【請求項２３】  請求項１０に記載のＢＬＡＡポリペプチドの変更されたレベルと関連する疾患の存在または該疾患に対する素因を決定するための方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）哺乳動物被検体由来のサンプルにおける該ポリペプチドの量を測定する工程：および
（ｂ）工程（ａ）における該ポリペプチドの量を、コントロールサンプル中に存在する該ポリペプチドの量と比較する工程、
を包含し、ここで、該コントロールサンプルと比較した場合の工程（ａ）における該ポリペプチドのレベルにおける変更が、疾患状態を示す、方法。
【請求項２４】  請求項１に記載のＢＬＡＡ核酸の変更されたレベルと関連する疾患の存在または該疾患に対する素因を決定するための方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）哺乳動物被検体由来のサンプルにおける該核酸の量を測定する工程；および
（ｂ）工程（ａ）における該核酸の量を、コントロールサンプル中に存在する該核酸の量と比較する工程、
を包含し、ここで、該コントロールサンプルと比較した場合の工程（ａ）における該核酸のレベルにおける変更が、疾患状態を示す、方法。
【請求項２５】  哺乳動物における病理学的状態を処置する方法であって、該方法は、請求項１０に記載のポリペプチドを該病理学的状態を緩和する量で被検体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２６】  哺乳動物における病理学的状態を処置する方法であって、該方法は、請求項１２に記載の抗体を該病理学的状態を緩和するに十分な量で被検体に投与する工程を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、一般的にポリヌクレオチドおよびそれによってコードされるポリペプチド、およびベクター、抗体ならびにこのポリペプチドおよびポリヌクレオチドを作製する組換え方法に関する。
【０００２】
（発明の背景）
脊椎動物の免疫系は、「自己」を「非自己」から識別する能力および病原体および他の潜在的に有害な因子に対する適切な選択的応答を備える能力によって特徴付けられる。免疫応答に関与する細胞型としては、Ｂ細胞およびＴ細胞として公知であるリンパ球が挙げられる。Ｂ細胞とＴ細胞との間の相互作用は、完全な免疫応答の伝達のために重要である。
【０００３】
Ｔ細胞は、免疫応答をもたらすために活性化されなければならない。Ｔ細胞の活性化には、以下の２つのシグナルが必要であると考えられる：抗原特異的シグナルおよび抗原特異的ではないシグナル。Ｔ細胞は、Ｂ細胞、特にＴ細胞自体を活性化するＢ細胞に結合することによって活性化され得る。
【０００４】
Ｔ細胞のＢ細胞媒介活性化は、少なくとも部分的にＢ７タンパク質によって媒介されると考えられる。このＢ７タンパク質は、Ｂ細胞の表面上に発現されるタンパク質である。Ｂ７タンパク質は、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。これらは、活性化されたＴリンパ球に結合し、そしてＴリンパ球細胞増殖および活性化のための調節シグナルを提供する（例えば、「Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ−Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ」、１９９７、第３版、第７章、Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．Ａ．ら編、Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと）。Ｂ７分子に結合するＴ細胞上の細胞表面分子としては、ＣＴＬＡ４およびＣＤ２８が挙げられる。
【０００５】
（発明の要旨）
本発明は、ヒトＢリンパ球活性化抗原Ｂ７ファミリー（以下「ＢＬＡＡ」とする）の新規なメンバーをコードするＢＬＡＡポリヌクレオチド配列の発見に一部基づく。
【０００６】
１つの局面において、本発明は、ＢＬＡＡをコードする単離された核酸分子を含む。この核酸分子は、配列番号２または配列番号６に対して少なくとも９５％同一である配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチドであり得る。あるいは、このような核酸分子の相補鎖であり得る。
【０００７】
別の局面において、本発明は、１００ヌクレオチド長未満であり、かつ配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１、または１２の少なくとも６個連続するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを含む。このオリゴヌクレオチドは、配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１、または１２の相補鎖の少なくとも６個連続するヌクレオチドを含む。
【０００８】
本発明の別の局面は、上記のＢＬＡＡをコードする単離された核酸分子を含むベクターに関する。１つの実施形態において、このベクターは、発現ベクターである。別の実施形態において、このベクターは、単離された核酸分子に作動可能に連結される調節エレメントを含む。
【０００９】
本発明のさらなる局面は、配列番号２、配列番号４、または配列番号６のアミノ酸配列を有するポリペプチドに少なくとも８０％同一である単離されたポリペプチドを含む。本発明のこの局面の別の実施形態において、単離されたポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、または配列番号６のアミノ酸配列を有するポリペプチドのフラグメントに少なくとも８０％相同である。この実施形態において、このフラグメントは、配列番号２、配列番号４、または配列番号６の少なくとも６個連続するアミノ酸を含む。本発明のこの局面の他の実施形態は、配列番号２、配列番号４、または配列番号６のアミノ酸配列を有するポリペプチドの誘導体、アナログ、またはホモログに少なくとも８０％相同である本発明の単離されたポリペプチドを必要とする。なお別の実施形態は、配列番号２、配列番号４、または配列番号６のアミノ酸配列を有するポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子改変体に少なくとも８０％同一である単離されたポリペプチドを含む。この実施形態は、ストリンジェントな条件下で配列番号１、配列番号３、または配列番号５の核酸分子にハイブリダイズし得る核酸分子によってコードされるポリペプチドを必要とする。
【００１０】
本発明の別の実施形態は、上記のポリペプチドに選択的に結合する抗体を含む。本発明のさらなる実施形態は、（ａ）核酸分子が発現される条件下で宿主細胞を培養することによってこのようなポリペプチドを産生する方法；（ｂ）サンプルを、本発明のポリペプチドに選択的に結合する化合物と接触させることによってサンプル中のこのポリペプチドの存在を検出する方法；ならびに（ｃ）本発明のポリペプチドを含む細胞サンプルを、このポリペプチドに結合し、その活性を調節する化合物と接触させることによってこのようなポリペプチドの活性を調節する方法を提供する。
【００１１】
さらに、本発明の核酸分子のうちの１つの存在を検出する方法が、また提供される。この方法は、サンプルを、本発明のポリペプチドに選択的に結合する化合物と接触させる工程およびこのポリペプチドに結合する化合物が、サンプル中に存在するか否かを決定する工程を包含する。
【００１２】
本発明の他の実施形態としては、免疫応答関連障害を処置または予防する方法および治療的薬学的組成物または予防的薬学的組成物が挙げられる。さらに、本発明の別の局面は、本発明において提供される、治療的または予防的有効量の薬学的組成物を含むキットを含む。
【００１３】
本発明の別の局面は、免疫応答障害と関連する疾患を処置する医薬の製造における治療剤の使用を含む。本発明の別の実施形態は、免疫応答関連障害の活性、潜伏または素因のモジュレーターをスクリーニングする方法を含む。この実施形態において、試験化合物が、免疫応答関連障害の危険性が上昇している動物に投与され、試験動物における本発明のポリペプチドの発現を測定し、コントロール動物におけるポリペプチドの発現を測定し、そして両方の動物における発現を比較する。
【００１４】
本発明の他の実施形態としては、ＢＬＡＡポリペプチドまたはＢＬＡＡ核酸のレベルの変化と関連する疾患の存在または素因を、サンプル中のＢＬＡＡポリペプチドまたは核酸の量を測定し、そしてコントロールサンプルにおける存在量と比較することによって決定する方法が挙げられる。本発明のなお他の実施形態は、哺乳動物において病理学的状態を緩和するのに十分な量でＢＬＡＡポリペプチドまたはＢＬＡＡ核酸を投与することによって病理学的状態を処置する方法を含む。  他で定義しない限り、本明細書中で使用される全ての技術単語および科学単語は、本発明に関係のある当業者によって一般的に理解されるのと同一の意味を有する。本明細書中に記載される方法および材料と同一または等価である方法および材料が、本発明の実施または試験において使用され得るが、適切な方法および物質が、以下に記載される。本明細書中に記載される全ての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、その全体が参考として援用される。矛盾する場合、定義を含む本願明細書が優先する。さらに、材料、方法、および実施例は、例示のみであり、そして限定することは意図されない。
【００１５】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および上記の特許請求の範囲から明らかである。
【００１６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、Ｂリンパ球抗原（ＢＬＡＡ）のＢ７ファミリーに類似の配列を有するポリペプチドをコードする新規のポリヌクレオチドを提供する。本発明に従うこれらのｃＤＮＡ配列は、これらのコードされるＢＬＡＡポリペプチドと共に、図１、２および３に示される。
【００１７】
ＢＬＡＡポリペプチドは、以前に記載されたＢ７ファミリーのメンバー（すなわち、Ｂ７−１およびＢ７−２）に２０〜２５％同一であり、そして４０〜４５％類似する。以下に詳細に議論されるように、これらのＢＬＡＡポリペプチドのいくつかのモチーフは、Ｂ７ポリペプチドで高度に保存されている。さらに、ヒト、マウスおよびウシのブチロフィリン（ｂｕｔｙｒｏｐｈｉｌｉｎ）およびヒトミエリン稀突起神経膠細胞糖タンパク質（ＭＯＧ）に対する匹敵する相同性が観察されている。
【００１８】
本発明のポリペプチドは、２つ（配列番号２）、３つ（配列番号４）または４つ（配列番号６）のＩｇ様ドメイン、それに続く、膜貫通ドメインおよび４４アミノ酸の細胞質ドメインを有する。これは、細胞表面に局在することが公知の、以前に記載されたＢ７タンパク質ファミリーのメンバーと一致する（例えば、Ｓｅｌｖａｋｕｍａｒら、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３６：１７５−１８１（１９９２）およびＬｉｎｓｋｅｙら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ  ３：１３４１−１３４３（１９９４）を参照のこと）。
【００１９】
本明細書中で使用される場合、用語「ヒトＢリンパ球活性化抗原Ｂ７様活性」は、活性化されたＴリンパ球への結合ならびにＴリンパ球の細胞増殖および活性化のための調節シグナルを提供することを包含する。
【００２０】
従って、本発明のポリペプチドは、Ｂ７タンパク質ファミリーの新規メンバーである。本発明の核酸分子およびポリペプチドは、免疫応答を調節するために使用され得る。よって、これらは、感染性疾患、癌、自己免疫障害、および器官移植における対宿主性移植片病に関連する合併症、ならびに／あるいは類似の免疫系の病理および障害の処置に関する、潜在的な治療適用において有用である。例えば、本発明のポリペプチドをコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得る。あるいは、ＢＬＡＡポリペプチドは、免疫障害を処置するために直接投与され得る。本発明の核酸、ポリペプチドおよび抗体は、診断適用および治療適用においてさらに有用であり得る。
【００２１】
ＢＬＡＡポリペプチドは、他の相同なＢ７タンパク質において対応する位置で保存される、多くの領域および／または単一のアミノ酸を含む。例えば、図４は、配列番号６のポリペプチドのＣｌａｓｔａｌＷアライメントを示す。保存された領域としては、例えば、アミノ酸１６、４２、４６、４８、５０、５２、５９、６０、６３、６７−６８、７５、８２、８９、９２−９３、１０７−１０９、１１６、１１８、１２２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４３、１４５、１５２、１６４−１６７、１７０、１７２−１７３、１８７、１９１、１９４、１９８、２１０、２１７、２２３、２４２および３１０が挙げられる。さらに、「保存的変異」の節において定義されるような保存的アミノ酸置換を有する領域もまた存在する。「保存的アミノ酸置換」によって、類似の側鎖を有するアミノ酸が意味される。このような置換は、例えば、アミノ酸１４、２５、３８、６５、７１、７９、８４、１０６、１１２、１１４、１１９、１２３−１２４、１２７−１２８、１４２、１４８−１４９、１６１、１６３、１７１、２０２、２１２、２１７、２２１−２２３、２６４、２６６、２７８、２８３−２８４、２９１、３０５および３３５に見い出される。
【００２２】
ＢＬＡＡポリペプチドは、親水性領域および疎水性領域を含む。図５に示されるように、配列番号６のポリペプチドは、親水性領域および疎水性領域の両方を含む。疎水性領域は、およそアミノ酸１〜およそアミノ酸７５；およそアミノ酸１１０〜およそアミノ酸１５０；およそアミノ酸２００〜およそアミノ酸２２５；およそアミノ酸２５０〜およそアミノ酸２９０；およそアミノ酸３１０〜およそアミノ酸３８０；およそアミノ酸４２０〜およそアミノ酸４４０；およびおよそアミノ酸４６０〜およそアミノ酸５００が挙げられる。反対に、親水性領域としては、およそアミノ酸７５〜およそアミノ酸１１０；およそアミノ酸１５０〜およそアミノ酸２００；およそアミノ酸２２５〜およそアミノ酸２５０；およそアミノ酸２９０〜およそアミノ酸３１０；およそアミノ酸３８０〜およそアミノ酸４２０；およそアミノ酸４４０〜およそアミノ酸５３４が挙げられる。従って、これらの領域は、エピトープの設計および抗原の選択に有用である。
【００２３】
表示を簡単にするために、本発明の新規ポリヌクレオチドおよびポリペプチドを、ＢＬＡＡ（Ｂリンパ球活性化抗原）として総称する。本発明のＢＬＡＡ核酸およびポリペプチド配列の要約を、表１に提供する。
【００２４】
【表１】
2003516719.tif 000001
本明細書中で使用される場合、「同一性」残基は、２つの配列のアライメントにおける対応するヌクレオチド塩基またはアミノ酸残基が同じ残基である、２つの配列間の比較における残基に対応する。残基は、アライメントの２つの配列間の比較が、比較される対応する位置における残基が同じかまたは保存的置換されたアミノ酸（「保存的変異」の節で以下に定義されるような）であることを示す場合には、「類似」である。
【００２５】
（核酸）
本発明の１つの局面は、ＢＬＡＡポリペプチドまたはその生物学的に活性な部分をコードする、単離されたＢＬＡＡ核酸分子に関する。ＢＬＡＡ核酸分子はまた、ＢＬＡＡコード核酸（例えば、ＢＬＡＡ  ｍＲＮＡ）を同定するためのハイブリダイゼーションプローブとしての使用に十分な核酸フラグメント、およびＢＬＡＡ核酸分子の増幅または変異のためのＰＣＲプライマーとしての使用のためのフラグメントを含む。本明細書中で使用される場合、用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ヌクレオチドアナログを使用して生成されたＤＮＡまたはＲＮＡのアナログ、ならびにこれらの誘導体、フラグメントおよびホモログを含むことが意図される。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であり得るが、好ましくは、二本鎖ＤＮＡである。
【００２６】
「プローブ」とは、可変の長さの核酸配列をいい、好ましくは、使用に依存して、少なくとも約１０ヌクレオチド（ｎｔ）、１００ｎｔ、または例えば、約６，０００ｎｔの間である。プローブは、同一、類似または相補的な核酸配列の検出において使用される。より長いプローブは、通常、天然供給源または組換え供給源から入手され、非常に特異的であり、そしてオリゴマーよりもはるかに遅くハイブリダイズする。プローブは、一本鎖または二本鎖であり得、そしてＰＣＲ、メンブレンベースのハイブリダイゼーション技術またはＥＬＩＳＡのような技術において特異性を有するように設計される。
【００２７】
「単離された」核酸分子は、この核酸の天然の供給源中に存在するその他の核酸分子から分離されているものである。好ましくは、「単離された」核酸は、この核酸が由来する生物のゲノムＤＮＡ中でこの核酸に天然に隣接する配列（すなわち、この核酸の５’末端および３’末端に位置する配列）を含まない。例えば、種々の実施形態で、単離されたＢＬＡＡ核酸分子は、約５ｋｂ、４ｋｂ、３ｋｂ、２ｋｂ、１ｋｂ、０．５ｋｂまたは０．１ｋｂ未満の、この核酸が由来する細胞のゲノムＤＮＡ中の核酸分子に天然で隣接する核酸配列を含み得る。さらに、「単離された」核酸分子、例えば、ｃＤＮＡ分子は、組換え技法により産生されるとき、その他の細胞物質または培養培地を実質的に含まないか、または化学的に合成されるとき、化学物質前駆体もしくはその他の化学物質を実質的に含まないものであり得る。
【００２８】
本発明の核酸分子、例えば、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２からなる群より選択されるヌクレオチド配列、またはこれらのヌクレオチド配列の任意の相補体を有する核酸分子は、標準的な分子生物学的技法および本明細書で提供される配列情報を用いて単離され得る。ハイブリダイゼーションプローブとして、配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１または１２の核酸配列の全てもしくは一部分を使用して、ＢＬＡＡ分子は、標準的なハイブリダイゼーションおよびクローニング技法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（編）、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＹ  ＭＡＮＵＡＬ第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８９；およびＡｕｓｕｂｅｌら、（編）、ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ、１９９３）を用いて単離され得る。
【００２９】
本発明の核酸は、標準的なＰＣＲ増幅技法に従って、テンプレートとしてｃＤＮＡ、ｍＲＮＡあるいはゲノムＤＮＡ、および適切なオリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅され得る。このように増幅された核酸は、適切なベクター中にクローン化され、そしてＤＮＡ配列分析により特徴付けられ得る。さらに、ＢＬＡＡヌクレオチド配列に対応するオリゴヌクレオチドは、標準的な合成技法、例えば、自動化ＤＮＡ合成機を用いることにより調製され得る。
【００３０】
本明細書で用いられる用語「オリゴヌクレオチド」は、一連の連結されたヌクレオチド残基をいい、このオリゴヌクレオチドは、ＰＣＲ反応で用いられ得る十分な数のヌクレオチド塩基を有する。短いオリゴヌクレオチド配列は、ゲノム配列もしくはｃＤＮＡ配列に基づき得るか、またはそれから設計され得、そして特定の細胞もしくは組織において、同一、類似もしくは相補的なＤＮＡまたはＲＮＡを増幅し、確認し、もしくはその存在を確認するために用いられる。オリゴヌクレオチドは、約１０ｎｔ、５０ｎｔ、または１００ヌクレオチドの長さ、好ましくは約１５ヌクレオチド〜３０ヌクレオチドの長さを有する核酸配列の部分を含む。１つの実施形態では、１００ヌクレオチドより少ない長さの核酸分子を含むオリゴヌクレオチドは、さらに、配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１または１２の少なくとも６個連続するヌクレオチド、またはその相補物を含み得る。オリゴヌクレオチドは、化学的に合成され得、そしてプローブとして用いられ得る。
【００３１】
別の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１、もしくは１２に示されるヌクレオチド配列またはこのヌクレオチド配列の相補体である核酸分子を含む。配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１、または１２に示されるヌクレオチド配列に相補的である核酸分子は、配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１、または１２に示されるヌクレオチド配列に十分相補的である核酸分子であり、配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１、または１２に示されるヌクレオチド配列に対しミスマッチがほとんどまたは全くなく水素結合し得、それによって安定な二本鎖を形成する。
【００３２】
本明細書で用いる用語「相補的」は、核酸分子のヌクレオチド単位間のＷａｔｓｏｎ−ＣｒｉｃｋまたはＨｏｏｇｓｔｅｅｎ塩基対形成をいい、そして用語「結合」は、２つのポリペプチドまたは化合物または関連ポリペプチドまたは化合物またはその組合せ間の物理的または化学的相互作用を意味する。結合は、イオン性、非イオン性、ファンデルワールス性、疎水性相互作用などを含む。物理的相互作用は直接的であるかまたは間接的であり得る。間接的相互作用は、別のポリペプチドまたは化合物を介するか、またはその効果に起因し得る。直接的結合は、別のポリペプチドもしくは化合物を介して、またはその効果に起因して生じない、その他の実質的な化学的中間体がない相互作用をいう。
【００３３】
さらに、本発明の核酸分子は、配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１、もしくは１２の核酸配列の一部のみ（例えば、プローブまたはプライマーとして使用され得るフラグメント、あるいはＢＬＡＡの生物学的に活性な部分をコードするフラグメント）を含み得る。
【００３４】
本明細書中に提供されるフラグメントは、少なくとも６個の（連続する）核酸配列または少なくとも４個の（連続する）アミノ酸配列（それぞれ、核酸の場合には、特異的なハイブリダイゼーションを可能にし、またはアミノ酸の場合には、エピトープの特異的な認識を可能にするに十分な長さ）として規定され、そして全長配列未満のせいぜいいくらかの部分である。フラグメントは、選択された核酸配列またはアミノ酸配列の任意の連続する部分に由来し得る。誘導体は、直接的にかまたは改変もしくは部分的置換によってかのいずれかでネイティブな化合物から形成される核酸配列またはアミノ酸配列である。アナログは、ネイティブな化合物に類似する構造を有する（しかし、同一ではない）が、特定の成分または側鎖に関してそれとは異なる核酸配列またはアミノ酸配列である。アナログは、合成物であり得るか、または進化的に異なる起源に由来し得、そして野生型と比較して、類似の代謝活性または反対の代謝活性を有し得る。相同体は、異なった種に由来する特定の遺伝子の核酸配列またはアミノ酸配列である。
【００３５】
誘導体およびアナログは、以下に記載のように、誘導体またはアナログが、修飾された核酸またはアミノ酸を含む場合、全長、または全長以外のものであり得る。本発明の核酸またはタンパク質の誘導体またはアナログは、種々の実施形態において、本発明の核酸もしくはタンパク質に、同一の大きさの核酸またはアミノ酸配列にわたって、または整列した配列に比較した場合（この整列は、当該分野で公知であるコンピューター相同性プログラムによって実施される）、少なくとも約３０％、５０％、７０％、８０％、もしくは９５％の同一性（好ましい同一性は、８０〜９５％）で実質的に相同であるか、あるいはそのコードする核酸がストリンジェントの、中程度にストリンジェントの、または低いストリンジェントの条件下で上記のタンパク質をコードする配列の相補体にハイブリダイズし得る、領域を含む分子を包含するが、これらに限定されない。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ、１９９３、および以下を参照のこと。
【００３６】
「相同な核酸配列」もしくは「相同なアミノ酸配列」、またはその改変体とは、上記で考察したように、ヌクレオチドレベルまたはアミノ酸レベルにおける相同性によって特徴付けられる配列をいう。相同なヌクレオチド配列は、ＢＬＡＡポリペプチドのアイソフォームをコードする配列をコードする。アイソフォームは、例えば、ＲＮＡの選択的スプライシングの結果として、同一の生物の異なる組織において発現され得る。あるいは、アイソフォームは、異なる遺伝子によってコードされ得る。本発明において、相同なヌクレオチド配列は、ヒト以外の種（哺乳動物が挙げられるが、これに限定されず、従って、例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマおよび他の生物が挙げられ得る）のＢＬＡＡポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。相同なヌクレオチド配列はまた、天然に存在する対立遺伝子改変体および本明細書に記載されるヌクレオチド配列の変異体が挙げられるが、これらに限定されない。しかし、相同的ヌクレオチド配列は、ヒトＢＬＡＡタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含まない。相同核酸配列は、配列番号２、配列番号４、または配列番号６の保存的アミノ酸置換（以下を参照のこと）、およびＢＬＡＡ活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含む。ＢＬＡＡタンパク質の生物学的活性は以下に記載されている。相同的アミノ酸配列は、ヒトＢＬＡＡポリペプチドのアミノ酸配列をコードしない。
【００３７】
ＢＬＡＡポリペプチドは、本明細書中に記載されるように、ＢＬＡＡ核酸のオープンリーディングフレーム（「ＯＲＦ」）によってコードされ得る。例えば、本発明は、本発明のＯＲＦを含む配列番号７、配列番号９、および配列番号１１の核酸配列のストレッチを含み、そして、配列番号２、配列番号４および配列番号６のポリペプチドをそれぞれコードする核酸配列を含む。
【００３８】
「オープンリーディングフレーム」（「ＯＲＦ」）は、ポリペプチドに潜在的に翻訳され得るヌクレオチド配列に対応する。ＯＲＦを含む核酸のストレッチは、終止コドンによって、妨げられない。全体のタンパク質についてのコード配列を示すＯＲＦは、ＡＴＧ「開始」コドンを用いて始まり、そして、３つの「終止」コドン（すなわち、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）のうちの１つで終止する。本発明の目的について、ＯＲＦは、開始コドン、終止コドン、または両方を有するかまたは有さない、コード配列の任意の部分であり得る。本物の細胞性タンパク質をコードする良好な候補として考えられるＯＲＦについては、最小のサイズの要求がしばしば設定され、例えば、５０アミノ酸以上のタンパク質をコードするＤＮＡのストレッチが、設定される。
【００３９】
１つの実施形態において、１０２０塩基対（ｂｐ）ＯＲＦ（配列番号７）は、配列番号１のヌクレオチド１１１からヌクレオチド１１３０を含む。このＯＲＦは、配列番号２に従う３４０アミノ酸ポリペプチドへ翻訳され得る。別の実施形態では、１３２３ｂｐ  ＯＲＦ（配列番号９）は、配列番号３のヌクレオチド２からヌクレオチド１３２４を含む。このＯＲＦは、配列番号４に従う４４１アミノ酸ポリペプチドへと翻訳され得る。別の実施形態では、１６０１ｂｐ  ＯＲＦ（配列番号１１）は、配列番号５のヌクレオチド６０からヌクレオチド１６６１を含む。このＯＲＦは、配列番号６に従って、５３４アミノ酸ポリペプチドへと翻訳され得る。
【００４０】
ヒトＢＬＡＡ遺伝子のクローニングから決定されたヌクレオチド配列は、他の細胞型（例えば、他の組織由来）におけるＢＬＡＡホモログ、ならびに他の哺乳動物由来のＢＬＡＡホモログを同定および／またはクローニングする際の使用のために設計されるプローブおよびプライマーの作製を可能にする。このプローブ／プライマーは、代表的には、実質的に精製されたオリゴヌクレオチドを含む。このオリゴヌクレオチドは、代表的には、配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１、もしくは１２の少なくとも約１２個、約２５個、約５０個、約１００個、約１５０個、約２００個、約２５０個、約３００個、約３５０個または約４００個以上の連続するセンス鎖ヌクレオチド配列；または配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１、もしくは１２のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列；あるいは配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１、もしくは１２の天然に存在する変異体の少なくとも約１２個、約２５個、約５０個、約１００個、約１５０個、約２００個、約２５０個、約３００個、約３５０個または約４００個以上の連続するセンス鎖ヌクレオチド配列に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列の領域を含む。
【００４１】
ヒトＢＬＡＡヌクレオチド配列に基づくプローブは、同じまたは相同なタンパク質をコードする転写物またはゲノム配列を検出するために使用され得る。種々の実施形態において、このプローブはさらに、プローブに付着した標識基を含み、例えば、この標識基は放射性同位体、蛍光化合物、酵素、または酵素補因子であり得る。このようなプローブは、ＢＬＡＡタンパク質を誤って発現する細胞または組織を同定するための診断試験キットの一部として、例えば、被験体由来の細胞のサンプル中のＢＬＡＡをコードする核酸のレベルを測定すること（例えば、ＢＬＡＡ  ｍＲＮＡレベルを検出すること、またはゲノムＢＬＡＡ遺伝子が変異しているかまたは欠失しているか否かを決定すること）によって使用され得る。
【００４２】
「ＢＬＡＡの生物学的に活性な部分を有するポリペプチド」は、本発明のポリペプチドの活性に類似するが必ずしも同一ではない活性を示すポリペプチドをいい、用量依存性の有無に関わらず、特定の生物学的アッセイにおいて測定されるような成熟形態を含む。「ＢＬＡＡの生物学的に活性な部分」をコードする核酸フラグメントは、ＢＬＡＡの生物学的活性（ＢＬＡＡタンパク質の生物学的活性は、以下に記載される）を有するポリペプチドをコードする、配列番号１、３、５、７、９、もしくは１１の一部を単離し、ＢＬＡＡポリペプチドのコードされた部分を発現させ（例えば、インビトロでの組換え発現によって）、そしてＢＬＡＡのコードされた部分の活性を評価することによって調製され得る。
【００４３】
（ＢＬＡＡの改変体）
本発明はさらに、遺伝コードの縮重に起因して、配列番号１、３、５、７、９、もしくは１１に示されるヌクレオチド配列とは異なる核酸分子を包含する。それにより、これらの核酸は、配列番号１、３、５、７、９、もしくは１１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質と同じＢＬＡＡタンパク質をコードする。別の実施形態において、本発明の単離された核酸分子は、配列番号２、配列番号４、または配列番号６に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列を有する。
【００４４】
配列番号１、３、５、７、９、もしくは１１に示されるヒトＢＬＡＡヌクレオチド配列に加えて、ＢＬＡＡのアミノ酸配列における変化を導くＤＮＡ配列多型は、集団（例えば、ヒト集団）内に存在し得ることが、当業者によって理解される。ＢＬＡＡ遺伝子中のこのような遺伝的多型は、天然の対立遺伝子のバリエーションに起因して、集団内の個体間に存在し得る。本明細書中で使用される場合、用語「遺伝子」および「組換え遺伝子」は、ＢＬＡＡポリペプチド、好ましくは哺乳動物のＢＬＡＡポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含む核酸分子をいう。このような天然の対立遺伝子のバリエーションは、代表的には、ＢＬＡＡ遺伝子のヌクレオチド配列において１〜５％の変動性を生じ得る。天然の対立遺伝子バリエーションの結果であり、そしてＢＬＡＡの機能的活性を変化させない、ＢＬＡＡ内の任意および全てのこのようなヌクレオチドのバリエーションならびに得られるアミノ酸多型は、本発明の範囲内であると意図される。
【００４５】
さらに、他の種由来のＢＬＡＡタンパク質をコードし、従って、配列番号１、３、５、７、９、もしくは１１のヒト配列とは異なるヌクレオチド配列を有する核酸分子は、本発明の範囲内にあることが意図される。本発明のＢＬＡＡのｃＤＮＡの天然の対立遺伝子改変体およびホモログに対応する核酸分子は、本明細書中に開示されるヒトＢＬＡＡ核酸に対するその相同性に基づいて、ストリンジェントハイブリダイゼーション条件下で、標準的なハイブリダイゼーション技術に従うハイブリダイゼーションプローブとしてヒトｃＤＮＡまたはその一部を用いて単離され得る。例えば、可溶性ヒトＢＬＡＡ  ｃＤＮＡは、ヒトの膜結合ＢＬＡＡに対するその相同性に基づいて単離され得る。同様に、膜結合ヒトＢＬＡＡ
ｃＤＮＡは、可溶性ヒトＢＬＡＡに対するその相同性に基づいて単離され得る。
【００４６】
従って、別の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、少なくとも６ヌクレオチド長であり、そしてストリンジェント条件下で配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１、もしくは１２のヌクレオチド配列を含む核酸分子にハイブリダイズする。別の実施形態では、この核酸は、少なくとも１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１０００、１５００、２０００、またはそれを超えるヌクレオチド長である。別の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、コード領域（例えば、配列番号１、３、５、７、９、または１１）にハイブリダイズする。本明細書中で用いられる場合、用語「ストリンジェント条件下でハイブリダイズする」は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄に関して、互いに少なくとも６０％相同なヌクレオチド配列が代表的には互いにハイブリダイズしたままである条件を記載することを意図する。
【００４７】
ホモログ（すなわち、ヒト以外の種由来のＢＬＡＡポリペプチドをコードする核酸）または他の関連配列（例えば、パラログ（ｐａｒａｌｏｇｓ））は、特定のヒト配列の全てまたは一部をプローブとし、核酸ハイブリダイゼーションおよびクローニングに関して当該分野で周知の方法を使用して、低い、中程度の、または高いストリンジェンシーのハイブリダイゼーションによって入手され得る。
【００４８】
本明細書で用いられる場合、語句「ストリンジェントハイブリダイゼーション条件」は、その条件下で、プローブ、プライマーまたはオリゴヌクレオチドが、その標的配列にハイブリダイズするが、その他の配列にはハイブリダイズしない条件をいう。ストリンジェントな条件は配列依存性であり、そして異なる状況で異なる。より長い配列は、より短い配列より高い温度で特異的にハイブリダイズする。一般に、ストリンジェントな条件は、規定されたイオン強度およびｐＨで、特定の配列の熱融解点（Ｔm）より約５℃低いように選択される。このＴｍは、標的配列に相補的なプローブの５０％が、平衡状態で標的配列にハイブリダイズする（規定されたイオン強度、ｐＨおよび核酸濃度下）温度である。標的配列は一般に過剰で存在するので、Ｔｍでは、５０％のプローブが平衡状態で占有されている。代表的には、ストリンジェントな条件は、ｐＨ７．０〜８．３で、塩濃度が約１．０Ｍナトリウムイオンより少なく、代表的には約０．０１〜１．０Ｍナトリウムイオン（またはその他の塩）、そして温度が短いプローブ、プライマーまたはオリゴヌクレオチド（例えば、１０ｎｔ〜５０ｎｔ）について少なくとも約３０℃、そしてより長いプローブ、プライマーおよびオリゴヌクレオチドについて少なくとも約６０℃であるような条件である。ストリンジェントな条件はまた、ホルムアミドのような、脱安定化剤の添加で達成され得る。
【００４９】
ストリンジェント条件は、当業者に公知であり、そしてＡｍｕｓｕｂｅｌら（編）、ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．３．１−６．３．６に見出され得る。好ましくは、この条件は、互いに少なくとも約６５％、約７０％、約７５％、約８５％、約９０％、約９５％、約９８％または約９９％相同な配列が、代表的には互いにハイブリダイズしたままであるような条件である。ストリンジェントハイブリダイゼーション条件の非限定的な例は、６×ＳＳＣ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０２％  ＰＶＰ、０．０２％  Ｆｉｃｏｌｌ、０．０２％  ＢＳＡ、および５００ｍｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡを含む高塩緩衝液中での６５℃でのハイブリダイゼーションである。このハイブリダイゼーションに、０．２×ＳＳＣ、０．０１％  ＢＳＡ中での５０℃での１回以上の洗浄が続く。ストリンジェント条件下で配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１、もしくは１２の配列にハイブリダイズする、本発明の単離された核酸分子は、天然に存在する核酸分子に対応する。本明細書中で使用される場合、「天然に存在する」核酸分子とは、天然に存在する（例えば、天然のタンパク質をコードする）ヌクレオチド配列を有する、ＲＮＡ分子またはＤＮＡ分子をいう。
【００５０】
第２の実施形態では、配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１、もしくは１２またはそれらのフラグメント、アナログもしくは誘導体のヌクレオチド配列を含む核酸分子に、中程度のストリンジェンシー条件下でハイブリダイズし得る核酸配列が提供される。中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件の非限定的な例は、５５℃での６×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％
ＳＤＳおよび１００ｍｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡ中でのハイブリダイゼーション、続いて１×ＳＳＣ、０．１％  ＳＤＳ中での３７℃での１回以上の洗浄である。用いられ得る中程度のストリンジェンシーの他の条件は、当該分野で周知である。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編），１９９３，ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹおよびＫｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，ＧＥＮＥ  ＴＲＡＮＳＦＥＲ  ＡＮＤ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ，Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹを参照のこと。
【００５１】
第３の実施形態では、配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１、もしくは１２、またはそれらのフラグメント、アナログもしくは誘導体のヌクレオチド配列を含む核酸分子に、低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズし得る核酸が提供される。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件の非限定的な例は、３５％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、５０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０２％  ＰＶＰ、０．０２％  Ｆｉｃｏｌｌ、０．２％  ＢＳＡ、１００ｍｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡ、１０％（重量／容量）デキストラン硫酸中での４０℃でのハイブリダイゼーション、続いて２×ＳＳＣ、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭ  ＥＤＴＡおよび０．１％  ＳＤＳ中での５０℃での１回以上の洗浄である。用いられ得る低ストリンジェンシーの他の条件は、当該分野で周知である（例えば、種交差ハイブリダイゼーションについて用いられるように）。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編），１９９３，ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹならびにＫｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，ＧＥＮＥ  ＴＲＡＮＳＦＥＲ  ＡＮＤ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ，Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；ＳｈｉｌｏおよびＷｅｉｎｂｅｒｇ，１９８１，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８：６７８９−６７９２を参照のこと。
【００５２】
（保存的変異）
集団中に存在し得る、ＢＬＡＡ配列の天然に存在する対立遺伝子改変体に加えて、当業者は、配列番号１、３、５、７、９、もしくは１１のヌクレオチド配列への変異によって変化が導入され得、それによって、ＢＬＡＡポリペプチドの機能的能力を変更することなく、コードされるＢＬＡＡポリペプチドのアミノ酸配列に変化がもたらされることをさらに理解する。例えば、「非必須」アミノ酸残基にてアミノ酸置換をもたらすヌクレオチド置換は、配列番号１、３、５、７、９、もしくは１１の配列において行われ得る。「非必須」アミノ酸残基は、生物学的活性を有意に変更することなく、ＢＬＡＡの野生型配列から、変更され得る残基であり、一方、「必須」アミノ酸残基は、生物学的活性に必要とされる。例えば、本発明のＢＬＡＡポリペプチドの間で保存されているアミノ酸残基は、特に変更を受け入れ難いと予測される（例えば、図４および上記考察を参照のこと）。
【００５３】
さらに、図４に示されているアライメントによって示されるように、そして、上記のように、本発明のＢＬＡＡポリペプチドのファミリーメンバーの間で保存されているアミノ酸残基はまた、特に変更を受け入れ難いと推定されている。しかし、他のアミノ酸残基（例えば、ＢＬＡＡポリペプチドのメンバーの間で、保存されていないかまたは半分のみ保存されている残基）は、活性について必須でないかもしれないし、従って、おそらく変更を受け入れ易い。
【００５４】
本発明の別の局面は、活性に必須ではないアミノ酸残基における変化を含む、ＢＬＡＡポリペプチドをコードする核酸分子に関する。このようなＢＬＡＡポリペプチドは、アミノ酸配列が、配列番号２、配列番号４、もしくは配列番号６とは異なるが、生物学的活性をなお保持する。１つの実施形態では、単離された核酸分子は、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、このポリペプチドは、それぞれ、配列番号２、配列番号４、もしくは配列番号６のアミノ酸配列に少なくとも約４５％の相同性であるアミノ酸配列を含む。好ましくは、この核酸分子によってコードされるポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、もしくは配列番号６に少なくとも約６０％相同性であり、より好ましくは配列番号２、配列番号４、もしくは配列番号６に少なくとも約７０％相同性であり、なおさらに好ましくは配列番号２、配列番号４、もしくは配列番号６に少なくとも約８０％相同性であり、なおさらに好ましくは配列番号２、配列番号４、もしくは配列番号６に少なくとも約９０％相同性であり、そして最も好ましくは配列番号２、配列番号４、もしくは配列番号６に少なくとも約９５％相同性である。
【００５５】
配列番号２、配列番号４、または配列番号６のポリペプチドに相同なＢＬＡＡタンパク質をコードする単離された核酸分子は、配列番号１、３、５、７、９、もしくは１１のヌクレオチド配列に１以上のヌクレオチドの置換、付加または欠失を導入することにより作製され得、その結果、１以上のアミノ酸の置換，付加または欠失が、コードされるタンパク質に導入される。
【００５６】
変異は、標準技術（例えば、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介変異誘発）によって配列番号１、３、５、７、９、もしくは１１のヌクレオチド配列に導入され得る。好ましくは、保存的アミノ酸置換が、１以上の推定非必須アミノ酸残基にて作製される。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換される、アミノ酸置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野で定義されている。これらのファミリーとしては、以下が挙げられる：塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アルパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分枝側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）。従って、ＢＬＡＡ中の推定された非必須アミノ酸残基は、同じ側鎖のファミリー由来の別のアミノ酸残基で置換される。あるいは、別の実施形態では、変異は、ＢＬＡＡコード配列の全てまたは一部に沿って（例えば、飽和変異誘発（ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）によって）ランダムに導入され得、そして得られる変異体は、ＢＬＡＡの生物学的活性についてスクリーニングされて、活性を維持する変異体を同定し得る。配列番号１、３、５、７、９、もしくは１１の変異誘発に続いて、コードされるポリペプチドは、当該分野で公知の任意の組換え技術によって発現され得、そしてこのポリペプチドの活性が決定され得る。
【００５７】
１つの実施形態では、変異ＢＬＡＡポリペプチドは、以下についてアッセイされ得る：（１）他のＢＬＡＡポリペプチド、他の細胞表面タンパク質、または生物学的に活性なそれらの部分と、タンパク質：タンパク質相互作用を形成する能力、（２）変異ＢＬＡＡポリペプチドと、ＢＬＡＡリガンド（例えば、ＣＴＬＡ４）との間の複合体形成；（３）変異ＢＬＡＡポリペプチドが細胞内標的タンパク質またはその生物学的に活性な部分に結合する能力（例えば、アビジンタンパク質）。
【００５８】
なお別の実施形態では、ＢＬＡＡ変異体は、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー活性を示す能力（例えば、（ｉ）ＢＬＡＡポリペプチドと活性化Ｔリンパ球との間の複合体形成；（ｉｉ）ヒトＢ細胞活性化抗原Ｂ７ファミリータンパク質に有意な相同性を有するタンパク質とのＢＬＡＡの相互作用；（ｉｉｉ）ヒトＢリンパ球活性化抗原Ｂ７ファミリータンパク質とのＢＬＡＡポリペプチドの相互作用；ならびに（ｉｖ）他のタンパク質とのＢＬＡＡポリペプチドの相互作用）についてアッセイされ得る。さらに別の実施形態では、ＢＬＡＡ活性は、少なくとも１つ以上の以下の活性を有する。（ｉ）免疫グロブリンスーパーファミリー関連タンパク質活性の調節；（ｉｉ）Ｔリンパ球増殖の調節；ならびに（ｉｉｉ）Ｔリンパ球活性化の調節。
【００５９】
（アンチセンス）
本発明の別の局面は、配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１、もしくは１２またはそのフラグメント、アナログもしくは誘導体のヌクレオチド配列を含む核酸分子にハイブリダイズし得るかまたは相補的である、単離されたアンチセンス核酸分子に関する。「アンチセンス」核酸は、タンパク質をコードする「センス」核酸に相補的である（例えば、二本鎖ｃＤＮＡ分子のコード鎖に相補的であるかまたはｍＲＮＡ配列に相補的である）ヌクレオチド配列を含む。特定の局面では、少なくとも約１０、約２５、約５０、約１００、約２５０もしくは約５００ヌクレオチドまたは全体のＢＬＡＡコード鎖、またはそれらの一部のみに相補的な配列を含む、アンチセンス核酸分子が提供される。配列番号２、配列番号４、もしくは配列番号６のＢＬＡＡポリペプチドのフラグメント、ホモログ、誘導体およびアナログをコードする核酸分子、または配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１、もしくは１２のＢＬＡＡの核酸配列に相補的なアンチセンス核酸がさらに提供される。
【００６０】
１つの実施形態では、アンチセンス核酸分子は、ＢＬＡＡをコードするヌクレオチド配列のコード鎖の「コード領域」に対してアンチセンスである。用語「コード領域」とは、アミノ酸残基に翻訳されるコドンを含む、ヌクレオチド配列の領域をいう（例えば、配列番号１のヌクレオチド１１１〜１１３０（配列番号７））、配列番号３のヌクレオチド２〜１３２４（配列番号９）、または配列番号５のヌクレオチド６０〜１６０１（配列番号１１）に対応するヒトＢＬＡＡのコード領域）。別の実施形態では、このアンチセンス核酸分子は、ＢＬＡＡをコードするヌクレオチド配列のコード鎖の「非コード領域」に対してアンチセンスである。用語「非コード領域」とは、コード領域に隣接する、アミノ酸に翻訳されない、５’配列および３’配列をいう（すなわち、５’非翻訳領域および３’非翻訳領域ともいわれる）。例、すなわち「非コード領域」としては、配列番号８、配列番号１０、および配列番号１２の非翻訳領域（「ＮＴＲ」）を含む。
【００６１】
本明細書中に開示されるＢＬＡＡをコードするコード鎖配列（例えば、配列番号５、配列番号７もしくは配列番号９）を考慮すれば、本発明のアンチセンス核酸は、ＷａｔｓｏｎおよびＣｒｉｃｋまたはＨｏｏｇｓｔｅｅｎの塩基対合の規則に従って設計され得る。アンチセンス核酸分子は、ＢＬＡＡ  ｍＲＮＡのコード領域全体に相補的であり得るが、より好ましくは、ＢＬＡＡ  ｍＲＮＡのコード領域または非コード領域の一部にのみアンチセンスであるオリゴヌクレオチドである。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＢＬＡＡ  ｍＲＮＡの翻訳開始部位を取り囲む領域に相補的であり得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、長さが約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５または約５０ヌクレオチドであり得る。本発明のアンチセンス核酸は、当該分野で公知の手順を用いて、化学的合成または酵素連結反応を用いて構築され得る。例えば、アンチセンス核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、天然に存在するヌクレオチド、またはこの分子の生物学的安定性を増大させるように、もしくはアンチセンス核酸とセンス核酸との間で形成される二重鎖の物理的安定性を増大させるように設計された種々に改変されたヌクレオチドを用いて化学的に合成され得る（例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドが用いられ得る）。
【００６２】
アンチセンス核酸を作製するために用いられ得る改変されたヌクレオチドの例としては以下が挙げられる：５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルクエオシン（ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルクエオシン（ｍａｎｎｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン、シュードウラシル、クエオシン（ｑｕｅｏｓｉｎｅ）、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）ｗ、および２，６−ジアミノプリン。あるいは、このアンチセンス核酸は、核酸がアンチセンス方向でサブクローニングされた発現ベクターを用いて生物学的に生成され得る（すなわち、挿入された核酸から転写されたＲＮＡは、以下のサブセクションにさらに記載される、目的の標的核酸に対してアンチセンス方向である）。
【００６３】
本発明のアンチセンス核酸分子は、代表的には被験体に投与されるか、またはインサイチュで生成され、その結果それらは、ＢＬＡＡポリペプチドをコードする細胞性ｍＲＮＡおよび／またはゲノムＤＮＡとハイブリダイズするか、またはそれに結合し、それによってこのタンパク質の発現を、例えば転写および／または翻訳を阻害することによって阻害する。ハイブリダイゼーションは、安定な二重鎖を形成する従来のヌクレオチド相補性によってか、または例えばＤＮＡ二重鎖に結合するアンチセンス核酸分子の場合には、二重らせんのメジャーグルーブ（ｍａｊｏｒ  ｇｒｏｏｖｅ）における特異的相互作用を介してであり得る。本発明のアンチセンス核酸分子の投与経路の例としては、組織部位での直接的注射が挙げられる。あるいは、アンチセンス核酸分子は、選択された細胞を標的化するように改変され得、次いで全身に投与される。例えば、全身投与のために、アンチセンス分子は、それらが選択された細胞表面上に発現されたレセプターまたは抗原に特異的に結合するように改変され得る。これは、例えば、そのアンチセンス核酸分子を細胞表面レセプターまたは抗原に結合するペプチドまたは抗体に連結することによる。このアンチセンス核酸分子はまた、本明細書中に記載されるベクターを用いて細胞に送達され得る。アンチセンス分子の十分な細胞内濃度を達成するために、アンチセンス核酸分子が強力なｐｏｌ  ＩＩプロモーターまたはｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターの制御下に置かれているベクター構築物が、好ましい。
【００６４】
なお別の実施形態において、本発明のアンチセンス核酸分子は、ａ−アノマー核酸分子である。ａ−アノマー核酸分子は、相補的ＲＮＡと特異的な二本鎖ハイブリッドを形成する。ここで、通常のβ−ユニットとは対照的に、鎖は、互いに平行に走行する（Ｇａｕｌｔｉｅｒら（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ  １５：６６２５〜６６４１）。このアンチセンス核酸分子はまた、２’−ｏ−メチルリボヌクレオチド（Ｉｎｏｕｅら、（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １５：６１３１〜６１４８）またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡアナログ（Ｉｎｏｕｅら（１９８７）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ２１５：３２７〜３３０）を含み得る。
【００６５】
（リボザイムおよびＰＮＡ部分）
核酸改変としては、非限定的な例として、改変塩基、およびその糖ホスフェート骨格が改変または誘導体化された核酸が挙げられる。これらの改変は、少なくともある部分、改変核酸の化学安定性を増強するために実行され、その結果、これらは、例えば、本治療適用においてアンチセンス結合核酸として使用され得る。
【００６６】
１つの実施形態において、本発明のアンチセンス核酸はリボザイムである。リボザイムは、一本鎖核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を切断し得るリボヌクレアーゼ活性を有する触媒性ＲＮＡ分子であり、これらは、その一本鎖核酸に対して相補領域を有する。従って、リボザイム（例えば、ハンマーヘッドリボザイム（ＨａｓｅｌｈｏｆｆおよびＧｅｒｌａｃｈ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５８５〜５９１に記載される））を使用して、ＢＬＡＡ  ｍＲＮＡ転写物を触媒的に切断し、それによってＢＬＡＡ  ｍＲＮＡの翻訳を阻害し得る。ＢＬＡＡをコードする核酸に特異性を有するリボザイムは、本明細書中に開示されるＢＬＡＡ  ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（すなわち、配列番号１、３、５、７、９もしくは１１）に基づいて設計され得る。例えば、活性部位のヌクレオチド配列が、ＢＬＡＡをコードするｍＲＮＡ内で切断されるヌクレオチド配列に相補的である、テトラヒメナＬ−１９  ＩＶＳ  ＲＮＡの誘導体が構築され得る。例えば、Ｃｅｃｈら、米国特許第４，９８７，０７１号；およびＣｅｃｈら、米国特許第５，１１６，７４２号を参照のこと。あるいは、ＢＬＡＡ  ｍＲＮＡを使用して、ＲＮＡ分子のプールから、特異的リボヌクレアーゼ活性を有する触媒性ＲＮＡを選択し得る。例えば、Ｂａｒｔｅｌら（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１：１４１１〜１４１８を参照のこと。
【００６７】
あるいは、ＢＬＡＡ遺伝子発現は、ＢＬＡＡの調節領域（例えば、ＢＬＡＡのプロモーターおよび／またはエンハンサー）に相補的なヌクレオチド配列を標的化し、標的細胞中でＢＬＡＡ遺伝子の転写を妨害する三重らせん構造を形成することによって阻害され得る。一般には、Ｈｅｌｅｎｅ．（１９９１）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．６：５６９〜８４；Ｈｅｌｅｎｅら（１９９２）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０：２７〜３６；およびＭａｈｅｒ（１９９２）Ｂｉｏａｓｓａｙｓ  １４：８０７〜１５を参照のこと。
【００６８】
種々の実施形態において、ＢＬＡＡの核酸は、塩基部分、糖部分またはリン酸骨格で改変され、例えば、その分子の安定性、ハイブリダイゼーションまたは可溶性を改善し得る。例えば、核酸のデオキシリボースリン酸骨格を改変して、ペプチド核酸を生成し得る（Ｈｙｒｕｐら（１９９６）Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４：５〜２３を参照のこと）。本明細書中で使用される用語「ペプチド核酸」または「ＰＮＡ」は、デオキシリボースリン酸骨格が偽ペプチド骨格によって置換され、そして４つの天然の核塩基（ｎｕｃｌｅｏｂａｓｅ）のみが保持されている核酸模倣物（例えば、ＤＮＡ模倣物）をいう。ＰＮＡの中性の骨格は、低いイオン強度の条件下でＤＮＡおよびＲＮＡに対する特異的ハイブリダイゼーションを可能にすることが示されている。ＰＮＡオリゴマーの合成は、上記のＨｙｒｕｐら（１９９６）；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら（１９９６）ＰＮＡＳ  ９３：１４６７０〜６７５において記載されるような標準的固相ペプチド合成プロトコルを用いて行われ得る。
【００６９】
ＢＬＡＡのＰＮＡは、治療的適用および診断的適用において使用され得る。例えば、ＰＮＡは、例えば転写または翻訳の停止を誘導することまたは複製を阻害することによる、遺伝子発現の配列特異的調節のためのアンチセンスまたは抗遺伝子剤として使用され得る。例えば、ＢＬＡＡのＰＮＡはまた、例えばＰＮＡ指向性ＰＣＲクランピングによる遺伝子における一塩基対変異の分析において；他の酵素（例えば、Ｓ１ヌクレアーゼ）と組み合わせて使用される場合の人工制限酵素として（Ｈｙｒｕｐ  Ｂ．（１９９６）上記）；またはＤＮＡ配列およびハイブリダイゼーションのプローブもしくはプライマーとして（Ｈｙｒｕｐら（１９９６）上記；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅ（１９９６）、上記）、使用され得る。
【００７０】
別の実施形態において、ＢＬＡＡのＰＮＡは、例えば、それらの安定性または細胞性取り込みを増強するために、ＰＮＡに親油性基または他のヘルパー基を結合することによって、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの形成によって、またはリポソームもしくは当該分野において公知の薬物送達の他の技術の使用によって改変され得る。例えば、ＰＮＡおよびＤＮＡの有利な特性を組合せ得る、ＢＬＡＡのＰＮＡ−ＤＮＡキメラが生成され得る。ＰＮＡ部分が高い結合親和性および特異性を提供する一方で、そのようなキメラは、ＤＮＡ認識酵素（例えば、ＲＮａｓｅ  ＨおよびＤＮＡポリメラーゼ）がＤＮＡ部分と相互作用するのを可能にする。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラは、塩基のスタッキング、核塩基間の結合数および方向を考慮して選択される適切な長さのリンカーを使用して連結され得る（Ｈｙｒｕｐ（１９９６）上記）。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成は、Ｈｙｒｕｐ（１９９６）上記およびＦｉｎｎら（１９９６）Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２４：３３５７〜６３において記載されるように行われ得る。例えば、ＤＮＡ鎖は、標準的なホスホラミダイトカップリング化学を用いて固体支持体上で合成され得、そして改変されたヌクレオシドアナログ（例えば、５’−（４−メトキシトリチル）アミノ−５’−デオキシ−チミジンホスホルアミダイト）が、ＰＮＡとＤＮＡの５’末端との間に使用され得る（Ｍａｇら（１９８９）Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １７：５９７３〜８８）。次いで、ＰＮＡモノマーが段階様式でカップリングされ、５’ＰＮＡセグメントおよび３’ＤＮＡセグメントを有するキメラ分子を生成する（Ｆｉｎｎら（１９９６）上記）。あるいは、５’ＤＮＡセグメントおよび３’ＰＮＡセグメントを用いてキメラ分子が合成され得る。Ｐｅｔｅｒｓｅｎら（１９７５）Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ  ５：１１１９〜１１１２４を参照のこと。
【００７１】
他の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、以下のような他の付属の基を含み得る：ペプチド（例えば、インビボで宿主細胞レセプターを標的化するため）、または細胞膜を横切る輸送を容易にする因子（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６５５３〜６５５６；Ｌｅｍａｉｔｒｅら、１９８７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：６４８〜６５２；ＰＣＴ公開番号ＷＯ８８／０９８１０を参照のこと）、または血液脳関門（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／１０１３４を参照のこと）。さらに、オリゴヌクレオチドは、ハイブリダイゼーション誘発切断剤（例えば、Ｋｒｏｌら、１９８８、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：９５８〜９７６を参照のこと）、またはインターカレーター剤（例えば、Ｚｏｎ，１９８８、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９〜５４９を参照のこと）で改変され得る。この目的のために、オリゴヌクレオチドは、別の分子（例えば、ペプチド、ハイブリダイゼーション誘発架橋剤、輸送剤、ハイブリダイゼーション誘発切断剤など）に結合され得る。
【００７２】
（ＢＬＡＡポリペプチド）
本明細書中に使用される場合、用語「タンパク質」および「ポリペプチド」は、交換可能であることが意図される。本発明の新規ポリペプチドは、配列が配列番号２、配列番号４、または配列番号６に提供されるＢＬＡＡポリペプチドが挙げられる。本発明はまた、任意の残基が、配列番号２、配列番号４、または配列番号６に示される対応する残基から変更されるがそのＢＬＡＡ活性および生理学的機能が維持されるポリペプチドまたはその機能的フラグメントはまだコードし得る、変異ポリペプチドまたは改変ポリペプチドを含む。変異タンパク質または改変タンパク質において、２０％まで、または２０％より上の残基が、このように変更され得る。
【００７３】
一般的に、ＢＬＡＡ様機能を保存するＢＬＡＡ改変体は、配列中の特定の位置における残基が他のアミノ酸によって置換された任意の改変体を含み、そしてさらに、親タンパク質の２つの残基間にさらなる残基を挿入する可能性ならびに親配列から１つ以上の残基を欠失する可能性を含む。任意のアミノ酸置換、挿入、または欠失が、本発明によって含まれる。好ましい状況において、置換は、上記に規定されるように保存的置換である。
【００７４】
本発明の１つの局面は、単離されたＢＬＡＡポリペプチドおよびその生物学的に活性な部分、あるいはその誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログに関する。抗ＢＬＡＡ抗体を惹起するための免疫原としての使用に適したポリペプチドフラグメントがまた提供される。１つの実施形態において、ネイティブなＢＬＡＡポリペプチドは、標準的なタンパク質精製技術を用いて適切な精製スキームによって、細胞または組織供給源から単離され得る。別の実施形態において、ＢＬＡＡポリペプチドは、組換えＤＮＡ技術によって産生される。組換え発現の代わりに、ＢＬＡＡタンパク質またはＢＬＡＡポリペプチドは、標準的なペプチド合成技術を用いて化学合成され得る。
【００７５】
「単離された」または「精製された」ポリペプチドまたはその生物学的に活性な部分は、ＢＬＡＡポリペプチドの由来する細胞または組織供給源由来の細胞性物質または他の夾雑タンパク質もしくは夾雑ポリペプチドを実質的に含まないか、あるいは化学合成される場合に化学物質前駆体または他の化学物質を実質的に含まない。用語「細胞性物質を実質的に含まない」は、ＢＬＡＡタンパク質が単離または組換え産生される細胞の細胞性成分から、ＢＬＡＡタンパク質が分離されている、ＢＬＡＡタンパク質の調製物を含む。１つの実施形態において、用語「細胞性物質を実質的に含まない」は、非ＢＬＡＡタンパク質（本明細書中において「夾雑タンパク質」とも呼ばれる）を約３０％未満（乾燥重量にて）、より好ましくは非ＢＬＡＡタンパク質を約２０％未満、なおより好ましくは非ＢＬＡＡタンパク質を約１０％未満、そして最も好ましくは非ＢＬＡＡタンパク質を約５％未満有する、ＢＬＡＡポリペプチドの調製物を含む。ＢＬＡＡポリペプチドまたはその生物学的に活性な部分が組換え産生される場合、これはまた、好ましくは、培養培地を実質的に含まない。すなわち、培養培地は、そのタンパク質調製物の容量の約２０％未満、より好ましくは約１０％未満、そして最も好ましくは約５％未満を示す。
【００７６】
用語「化学物質前駆体または他の化学物質を実質的に含まない」は、ＢＬＡＡポリペプチドがそのポリペプチドの合成に関与する化学物質前駆体または他の化学物質から分離されている、ＢＬＡＡポリペプチドの調製物を含む。１つの実施形態において、用語「化学物質前駆体または他の化学物質を実質的に含まない」は、化学物質前駆体または非ＢＬＡＡ化学物質を約３０％未満（乾燥重量にて）、より好ましくは化学物質前駆体または非ＢＬＡＡ化学物質を約２０％未満、なおより好ましくは化学物質前駆体または非ＢＬＡＡ化学物質を約１０％未満、そして最も好ましくは化学物質前駆体または非ＢＬＡＡ化学物質を約５％未満有する、ＢＬＡＡポリペプチドの調製物を含む。
【００７７】
ＢＬＡＡポリペプチドの生物学的に活性な部分は、全長ＢＬＡＡポリペプチドより少ないアミノ酸を含み、そしてＢＬＡＡポリペプチドの少なくとも１つの活性を示す、ＢＬＡＡポリペプチドのアミノ酸配列（例えば、配列番号２、配列番号４、または配列番号６に示されるアミノ酸配列）に十分に相同なアミノ酸配列、またはＢＬＡＡポリペプチドのアミノ酸配列に由来するアミノ酸配列を含むペプチドを含む。代表的には、生物学的に活性な部分は、ＢＬＡＡポリペプチドの少なくとも１つの活性を有するドメインまたはモチーフを含む。ＢＬＡＡタンパク質の生物学的に活性な部分は、例えば、長さが１０アミノ酸以上、２５アミノ酸以上、５０アミノ酸以上、１００アミノ酸以上であるポリペプチドであり得る。
【００７８】
配列番号２に開示されるポリペプチドは、２つのＩｇ様ドメイン、続いて膜貫通ドメインおよび４４アミノ酸の細胞質ドメインを有する。配列番号４に開示されるポリペプチドは、３つのＩｇ様ドメイン、続いて膜貫通ドメインおよび４４アミノ酸の細胞質ドメインを有する。配列番号６に開示されるポリペプチドは、４つのＩｇ様ドメイン、続いて膜貫通ドメインおよび４４アミノ酸の細胞質ドメインを有する。その疎水性プロット分析が、図５に示される。
【００７９】
１つの実施形態において、ＢＬＡＡポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、または配列番号６に示されるアミノ酸配列を有する。他の実施形態において、ＢＬＡＡポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、または配列番号６に実質的に相同であり、そして以下に詳細に議論されるように、天然の対立遺伝子改変体または変異誘発に起因してアミノ酸配列が異なるが配列番号２、配列番号４、または配列番号６のポリペプチドの機能的活性を保持する。従って、別の実施形態において、ＢＬＡＡポリペプチドは、配列番号２、配列番号４、または配列番号６のアミノ酸配列に少なくとも約４５％相同なアミノ酸配列を含み、そして、配列番号２、配列番号４、または配列番号６のＢＬＡＡポリペプチドの機能的活性を保持する、ポリペプチドである。
【００８０】
（２つ以上の配列間の相同性の決定）
２つのアミノ酸配列または２つの核酸の相同性の百分率を決定するために、配列は、至適な比較の目的のために整列される（例えば、ギャップが、第２のアミノ酸配列または核酸配列との最適な整列のために、第１のアミノ酸配列または核酸配列の配列中に導入され得る）。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第１の配列中の位置が、第２の配列中の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められる場合、分子はその位置で相同である（すなわち、本明細書中で使用される場合、アミノ酸または核酸の「相同性」は、アミノ酸または核酸の「同一性」と等価である）。
【００８１】
核酸配列の相同性は、２つの配列間の同一性の程度として決定され得る。相同性は、当該分野において公知のコンピュータープログラム（例えば、ＧＣＧプログラムパッケージにおいて提供されるＧＡＰソフトウェア）を用いて決定され得る。ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ  １９７０  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ
４８：４４３〜４５３を参照のこと。核酸配列比較のための以下の設定（ＧＡＰ作製ペナルティー、５．０、およびＧＡＰ伸長ペナルティー、０．３）を用いてＧＣＧ  ＧＡＰソフトウェアを使用すると、上記で言及される類似の核酸配列のコード領域は、配列番号１、３、５、７、９または１１に示されるＤＮＡ配列のＣＤＳ（コード）部分と、好ましくは少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性の程度を示す。
【００８２】
用語「配列同一性」は、２つのポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列が、特定の比較領域にわたって、残基毎を基準として同一である程度をいう。用語「配列同一性のパーセンテージ」は、以下により算出される：この比較領域にわたって最適に整列された２つの配列を比較すること、両方の配列において同一の核酸塩基（例えば、核酸の場合にはＡ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｕ、またはＩ）が存在する位置の数を決定して一致した位置の数を得ること、この一致した位置の数を、比較領域の内の位置の総数（すなわち、ウインドウサイズ）で除算すること、およびその結果を１００で乗算して、配列同一性のパーセンテージを得ること。用語「実質的な同一性」は、本明細書中で使用される場合、ポリヌクレオチド配列の特徴を示し、ここでこのポリヌクレオチドは、比較領域にわたり参照配列と比較して、少なくとも８０％の配列同一性、好ましくは少なくとも８５％の配列同一性、そして頻繁には９０〜９５％の配列同一性、より通常には少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。
【００８３】
（キメラタンパク質および融合タンパク質）
本発明はまた、ＢＬＡＡキメラタンパク質または融合タンパク質を提供する。本明細書中で使用される場合、ＢＬＡＡ「キメラタンパク質」またはＢＬＡＡ「融合タンパク質」は、非ＢＬＡＡポリペプチドに作動可能に連結された、ＢＬＡＡポリペプチドを含む。「ＢＬＡＡポリペプチド」は、ＢＬＡＡに対応するアミノ酸配列を有するポリペプチドをいうが、「非ＢＬＡＡポリペプチド」は、ＢＬＡＡタンパク質に対して実質的に相同ではないタンパク質（例えば、ＢＬＡＡポリペプチドとは異なり、かつ同一の生物または異なる生物に由来する、タンパク質）に対応するアミノ酸配列を有するポリペプチドをいう。ＢＬＡＡ融合タンパク質において、このＢＬＡＡポリペプチドは、ＢＬＡＡタンパク質のすべてまたは一部分に対応し得る。１つの実施形態では、ＢＬＡＡ融合タンパク質は、ＢＬＡＡタンパク質の少なくとも１つの生物学的に活性な部分を含む。別の実施形態では、ＢＬＡＡ融合タンパク質は、ＢＬＡＡポリペプチドの少なくとも２つの生物学的に活性な部分を含む。なお別の実施形態において、ＢＬＡＡ融合タンパク質は、ＢＬＡＡポリペプチドの少なくとも３つの生物学的に活性な部分を含む。融合タンパク質において、用語「作動可能に連結された」は、ＢＬＡＡポリペプチドおよび非ＢＬＡＡポリペプチドが、インフレームで互いに融合されていることを示すことが意図される。非ＢＬＡＡポリペプチドは、ＢＬＡＡポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合され得る。
【００８４】
このような融合タンパク質は、ＢＬＡＡ活性を調節する化合物についてのスクリーニングアッセイでさらに利用され得る（このようなアッセイは、以下に詳細に記載される）。
【００８５】
１つの実施形態においては、この融合タンパク質は、ＧＳＴ−ＢＬＡＡ融合タンパク質であり、この融合タンパク質では、ＢＬＡＡ配列が、ＧＳＴ（すなわち、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ）配列のＣ末端に融合されている。このような融合タンパク質は、組換えＢＬＡＡの精製を容易にし得る。
【００８６】
別の実施形態において、この融合タンパク質は、そのＮ末端に異種シグナル配列を含む、ＢＬＡＡポリペプチドである。例えば、天然のＢＬＡＡシグナル配列（例えば、配列番号２、配列番号４または配列番号６のアミノ酸およそ１〜２６）が、除去され得かつ別のタンパク質由来のシグナル配列で置換され得る。特定の宿主細胞（例えば、哺乳動物宿主細胞）において、ＢＬＡＡの発現および／または分泌は、異種シグナル配列の使用を介して増加され得る。
【００８７】
なお別の実施形態においては、この融合タンパク質は、ＢＬＡＡ−免疫グロブリン融合タンパク質であり、ここでは、ＢＬＡＡ配列が、免疫グロブリンタンパク質ファミリーのメンバーに由来する配列に融合されている。本発明のこのＢＬＡＡ−免疫グロブリン融合タンパク質は、薬学的組成物中に取り込まれ、そして被験体に投与されて、細胞の表面上でＢＬＡＡリガントとＢＬＡＡタンパク質との間の相互作用を阻害し、それによってインビボでＢＬＡＡ媒介シグナル伝達を抑制し得る。このＢＬＡＡ−免疫グロブリン融合タンパク質を用い、ＢＬＡＡ同族リガンドのバイオアベイラビリティーに影響を与え得る。ＢＬＡＡリガンド／ＢＬＡＡ相互作用の阻害は、免疫応答関連障害の両方の処置に治療的に有用であり得る。さらに、本発明のこのＢＬＡＡ−免疫グロブリン融合タンパク質は、被験体中で抗ＢＬＡＡ抗体を産生するための免疫原として、ＢＬＡＡリガンドを精製するため、そしてＢＬＡＡリガンドとのＢＬＡＡの相互作用を阻害する分子を同定するスクリーニングアッセイで、用いられ得る。
【００８８】
本発明のＢＬＡＡキメラタンパク質またはＢＬＡＡ融合タンパク質は、標準的な組換えＤＮＡ技法により産生され得る。例えば、異なるポリペプチド配列をコードするＤＮＡフラグメントを、従来の技法に従って、例えば、連結のための平滑末端または粘着（ｓｔａｇｇｅｒ）末端、適切な末端を提供するための制限酵素消化、適切なように粘着（ｃｏｈｅｓｉｖｅ）末端の充填（ｆｉｌｌ−ｉｎ）、所望しない連結を避けるためのアルカリホスファターゼ処理、および酵素的連結を使用することにより、インフレームで一緒に連結する。別の実施形態では、融合遺伝子を、自動化ＤＮＡ合成機を含む従来技法により合成し得る。あるいは、遺伝子フラグメントのＰＣＲ増幅を、キメラ遺伝子配列を生成するために次いでアニールおよび再増幅され得る、２つの連続遺伝子フラグメント間の相補的オーバハングを生じるアンカープライマーを用いて実施し得る（例えば、Ａｕｓｂｅｌら（編）ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ
ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９２を参照のこと）。さらに、融合成分（例えば、ＧＳＴポリペプチド）をすでにコードした多くの発現ベクターが市販されている。ＢＬＡＡをコードする核酸は、この融合成分がＢＬＡＡポリペプチドにインフレーム連結されるように、このような発現ベクター中にクローン化され得る。
【００８９】
（ＢＬＡＡアゴニストおよびＢＬＡＡアンタゴニスト）
本発明はまた、ＢＬＡＡアゴニスト（模倣物）またはＢＬＡＡアンタゴニストのいずれかとして機能するＢＬＡＡポリペプチドの改変体に関する。ＢＬＡＡポリペプチドの改変体は、変異誘発（例えば、ＢＬＡＡタンパク質の別個の点変異または短縮）により生成され得る。ＢＬＡＡポリペプチドのアゴニストは、ＢＬＡＡポリペプチドの天然に存在する形態と実質的に同じ生物学的活性、またはその生物学的活性のサブセットを保持し得る。ＢＬＡＡタンパク質のアンタゴニストは、ＢＬＡＡポリペプチドの天然に存在する形態の１つ以上の活性を、例えば、ＢＬＡＡポリペプチドを含む細胞シグナル伝達カスケードの下流メンバーまたは上流メンバーに競合的に結合することにより、阻害し得る。従って、特定の生物学的効果が、限られた機能の改変体を用いた処理により惹起され得る。１つの実施形態では、このポリペプチドの天然に存在する形態の生物学活性のサブセットを有する改変体を用いた被験体の処置は、ＢＬＡＡポリペプチドの天然に存在する形態を用いた処置に対して被験体におけるより少ない副作用を有する。
【００９０】
ＢＬＡＡアゴニスト（模倣物）として、またはＢＬＡＡアンタゴニストのいずれかとして機能するＢＬＡＡポリペプチドの改変体は、ＢＬＡＡポリペプチドアゴニストまたはアンタゴニスト活性のための、ＢＬＡＡポリペプチドの変異体（例えば、短縮型変異体）のコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることにより同定され得る。１つの実施形態では、ＢＬＡＡ改変体の多彩なライブラリーは、核酸レベルのコンビナトリアル変異誘発により生成され、そして多彩な遺伝子ライブラリーによりコードされる。ＢＬＡＡ改変体の多彩なライブラリーは、例えば、合成オリゴヌクレオチドの混合物を、潜在的なＢＬＡＡ配列の縮重セットが、個々のポリペプチドとして、あるいは、その中にＢＬＡＡ配列のセットを含む（例えば、ファージディスプレイのための）より大きな融合タンパク質のセットとして発現可能であるように、遺伝子配列に酵素的に連結することにより産生され得る。縮重オリゴヌクレオチド配列から潜在的なＢＬＡＡ改変体のライブラリーを産生するために用いられ得る種々の方法がある。縮重遺伝子配列の化学的合成は、自動化ＤＮＡ合成機中で実施され得、次いでこの合成遺伝子は、適切な発現ベクター中に連結される。遺伝子の縮重セットの使用は、１つの混合物において、潜在的なＢＬＡＡ配列の所望のセットをコードする配列のすべての供給を可能にする。縮重オリゴヌクレオチドを合成する方法は当該分野で公知である（例えば、Ｎａｒａｎｇ（１９８３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ３９：３；Ｉｔａｋｕｒａら（１９８４）Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ５３：３２３；Ｉｔａｋｕｒａら（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９８：１０５６；Ｉｋｅら（１９８３）Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １１：４７７を参照のこと）。
【００９１】
（ポリペプチドライブラリー）
さらに、ＢＬＡＡタンパク質コード配列のフラグメントのライブラリーを用いて、ＢＬＡＡポリペプチドの改変体のスクリーニングおよび引き続く選択のためのＢＬＡＡポリペプチドの多彩な集団を生成し得る。１つの実施形態では、コード配列フラグメントのライブラリーは、ＢＬＡＡコード配列の二本鎖ＰＣＲフラグメントを、１分子あたり約１つのみのニックが生じる条件下、ヌクレアーゼで処理すること、二本鎖ＤＮＡを変性させること、異なるニック産物からのセンス／アンチセンス対を含み得る二本鎖ＤＮＡを形成するためにこのＤＮＡを再生すること、Ｓ１ヌクレアーゼを用いた処理により再形成された二本鎖から一本鎖部分を除去すること、および得られるフラグメントライブラリーを発現ベクター中に連結することにより生成し得る。この方法により、ＢＬＡＡポリペプチドの種々のサイズのＮ末端および内部フラグメントをコードする発現ライブラリーが派生し得る。
【００９２】
点変異または短縮により作成されたコンビナトリアルライブラリーの遺伝子産物をスクリーニングするため、選択された性質を有する遺伝子産物のｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするためのいくつかの技法が当該分野で公知である。このような技法を、ＢＬＡＡポリペプチドのコンビナトリアル変異誘発により生成された遺伝子ライブラリーの迅速スクリーニングに適用可能である。大きな遺伝子ライブラリーをスクリーニングするための、高スループット分析に適した最も広く用いられる技法は、代表的には、遺伝子ライブラリーを複製可能な発現ベクター中にクローニングすること、得られるベクターのライブラリーで適切な細胞を形質転換すること、およびこのコンビナトリアル遺伝子を、所望の活性の検出が、その産物が検出された遺伝子をコードするベクターの単離を容易にする条件下で発現することを含む。ライブラリー中の機能的変異体の頻度を増大する新規技法であるリクルーシブアンサンブル（ｒｅｃｒｕｓｉｖｅ  ｅｎｓｅｍｂｌｅ）変異誘発（ＲＥＭ）を、スクリーニングアッセイと組み合わせて用い、ＢＬＡＡ改変体を同定し得る（ＡｒｋｉｎおよびＹｏｕｒｖａｎ（１９９２）ＰＮＡＳ  ８９：７８１１−７８１５；Ｄｅｌｇｒａｖｅら（１９９３）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ６：３２７−３３１）。
【００９３】
（抗ＢＬＡＡ抗体）
本発明は、抗体および抗体フラグメント（例えば、Ｆabまたは（Ｆab）2）を包含し、これは、本発明の任意のポリペプチドに免疫特異的に結合する。
【００９４】
単離されたＢＬＡＡポリペプチドまたはその一部もしくはフラグメントは、免疫原として使用され、ポリクロナール抗体およびモノクロナール抗体の調製のための標準的な技術を用いて、ＢＬＡＡを結合する抗体を生成し得る。全長ＢＬＡＡポリペプチドが使用され得るか、あるいは本発明は、免疫原として使用するためのＢＬＡＡの抗原性ペプチドフラグメントを提供する。ＢＬＡＡの抗原性ペプチドは、配列番号２、配列番号４、または配列番号６において示されるアミノ酸配列の少なくとも４個のアミノ酸残基を含み、かつＢＬＡＡのエピト−プを含み、その結果、このペプチドに対して惹起された抗体が、ＢＬＡＡと特異的免疫複合体を形成する。好ましくは、抗原性ペプチドは、少なくとも６、８、１０、１５、２０または３０アミノ酸残基、を含む。より大きい抗原性ペプチドが、使用に依存して、および当業者に周知の方法に従って、短い抗原性ペプチドよりときどき好まれる。
【００９５】
本発明の特定の実施形態では、抗原性ペプチドにより包含される少なくとも１つのエピトープは、ポリペプチドの表面上に位置するＢＬＡＡの領域（例えば、親水性領域）である。図５に示される配列番号６のヒトＢＬＡＡポリペプチド配列の疎水性分析は、親水性領域が、約アミノ酸７５〜約アミノ酸１１０；約アミノ酸１５０〜約アミノ酸２００；約アミノ酸２２５〜約アミノ酸２５０；約アミノ酸２９０〜約アミノ酸３１０；約アミノ酸３８０〜約アミノ酸４２０；約アミノ酸４４０〜約アミノ酸５３４を含むことを示す。これらの領域は、おそらく抗体産生を標的化するために有用である表面残基をコードするようである。抗体産生を標的にする手段として、親水性および疎水性の領域を示すヒドロパシープロットを、例えば、フーリエ変換とともにまたはなしのいずれかで、Ｋｙｔｅ  ＤｏｏｌｉｔｔｌｅまたはＨｏｐｐ  Ｗｏｏｄｓ法を含む、当該分野で周知の任意の方法により生成し得る。例えば、それらの全体が本明細書に参考として援用される、ＨｏｐｐおよびＷｏｏｄｓ、１９８１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：３８２４−３８２８；ＫｙｔｅおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ  １９８２、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１４２を参照のこと。
【００９６】
本願明細書において開示されるように、配列番号２、配列番号４もしくは配列番号６のＢＬＡＡポリペプチド配列、またはそれらの誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログは、これらのタンパク質成分に免疫特異的に結合する抗体の生成において、免疫原として利用され得る。本願明細書において用いられる場合、用語「抗体」は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分（すなわち、抗原に特異的に結合する（これと免疫反応する）抗原結合部位を含む分子）（例えばＢＬＡＡ）をいう。このような抗体としては、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、単鎖、ＦabおよびＦ(ab')2フラグメント、ならびにＦab発現ライブラリーが挙げられるがこれらに限定されない。特定の実施形態において、ヒトＢＬＡＡポリペプチドに対する抗体が、開示される。当該分野で公知の種々の手順が、配列番号２、配列番号４もしくは配列番号６のＢＬＡＡポリペプチド配列、あるいはそれらの誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログに対するポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体の生産のために用いられ得る。これらのタンパク質のうちのいくつかは、以下で考察される。
【００９７】
ポリクローナル抗体の生成のため、種々の適切な宿主動物（例えば、ウサギ、ヤギ、マウスまたは他の哺乳動物）がネイティブなポリペプチドもしくはそれの合成改変体、またはそれらの誘導体を用いる注射によって免疫され得る。適切な免疫原性調製物は、例えば、組換え的に発現されたＢＬＡＡポリペプチド、または化学的に合成されたＢＬＡＡポリペプチドを含み得る。調製物は、アジュバントをさらに含み得る。免疫学的応答を増加するために用いられる種々のアジュバントとしては以下が挙げられるがこれらに限定されない：フロイント（完全および不完全）アジュバント、鉱物ゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、界面活性物質（例えば、リゾレシチン、プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、オイルエマルジョン、ジニトロフェノール、など）、ヒトアジュバント（例えば、Ｂａｃｉｌｌｅ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−ＧｕｅｒｉｎおよびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ）または類似した免疫刺激因子。所望の場合、ＢＬＡＡに対する抗体分子が、哺乳動物（例えば、血液から）単離され得、そしてさらに、プロテインＡクロマトグラフィーのような周知の技術によって精製され、ＩｇＧ画分を入手し得る。
【００９８】
本願明細書において用いられる場合、用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」とは、ＢＬＡＡの特定のエピトープと免疫反応し得る抗原結合部位の１つの種のみを含む抗体分子の集団をいう。従って、モノクローナル抗体組成物は、代表的には、特に、それが免疫反応する特定のＢＬＡＡポリペプチドに対して、単一の結合親和性を示す。特にＢＬＡＡポリペプチド、またはその誘導体、フラグメント、アナログ、もしくはホモログに対するモノクローナル抗体の調製のために、連続的細胞株培養により抗体分子の生成を提供する任意の技術が利用され得る。このような技術としては以下が挙げられるがこれらに限定されない：ハイブリドーマ技術（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５〜４９７を参照のこと）；トリオーマ技術；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２を参照のこと）およびヒトモノクローナル抗体を生産するＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、１９８５  ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，７７〜９６頁を参照のこと）。ヒトモノクローナル抗体は、本発明の実行において利用され得、そしてヒトハイブリドーマを用いること（Ｃｏｔｅら、１９８３．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８０：２０２６〜２０３０を参照のこと）、またはエプスタインバーウイルスを用いるインビトロでのヒトＢ細胞の形質転換（Ｃｏｌｅら、１９８５：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，７７〜９６頁を参照のこと）によって生成され得る。上記引用の各々が、その全体において本明細書中で参考として援用される。
【００９９】
本発明に従って、ＢＬＡＡポリペプチドに特異的な単鎖抗体の生成のために、技術は適応され得る（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号を参照のこと）。さらに、方法は、Ｆab発現ライブラリーの構築に適応され（例えば、Ｈｕｓｅら、１９８９  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５〜１２８１を参照のこと）、ＢＬＡＡポリペプチド、またはその誘導体、フラグメント、アナログ、もしくはホモログに対して所望の特性を有するモノクローナルＦabフラグメントの迅速かつ効果的同定を可能にする。非ヒト抗体は、当該分野で周知の技術により「ヒト化」され得る。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号を参照のこと。ＢＬＡＡポリペプチドに対するイディオタイプを含む抗体フラグメントは、以下を含むがこれに限定されない当該分野で公知の技術により生成され得る：（ｉ）抗体分子のペプシン消化によって生産されるＦ(ab')2フラグメント；（ｉｉ）Ｆ(ab')2フラグメントのジスルフィド架橋を還元することによって生じるＦabフラグメント；（ｉｉｉ）パパインおよび還元剤での抗体分子の処理によって生じるＦabフラグメント、ならびに（ｉｖ）Ｆvフラグメント。
【０１００】
さらに、ヒトおよび非ヒト部分の両方を含むキメラ抗体およびヒト化モノクローナル抗体のような、組換え抗ＢＬＡＡ抗体（これらは、標準組換えＤＮＡ技術を用いて作製され得る）は、本発明の範囲内である。このようなキメラ抗体およびヒト化モノクローナル抗体は、当該分野で公知の組換えＤＮＡ技術により生成され得る。この技術は例えば、以下に記載の方法を用いる：ＰＣＴ国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；欧州特許出願番号１８４，１８７号；欧州特許出願番号１７１，４９６；欧州特許出願番号１７３、４９４；ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ  ８６／０１５３３；米国特許第４，８１６，５６７号；米国特許第５，２２５，５３９号；欧州特許出願番号１２５，０２３号；Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１〜１０４３；Ｌｉｕら（１９８７）ＰＮＡＳ  ８４：３４３９〜３４４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１〜３５２６；Ｓｕｎら（１９８７）ＰＮＡＳ  ８４：２１４〜２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら（１９８７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ４７：９９９〜１００５；Ｗｏｏｄら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４４６〜４４９；Ｓｈａｗら（１９８８）Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ  ８０：１５５３〜１５５９）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２〜１２０７；Ｏｉら（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４；Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５５２〜５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４；ならびにＢｅｉｄｌｅｒら（１９８８）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４１：４０５３〜４０６０。上記引用の各々は、その全体が参考として本明細書中に援用される。
【０１０１】
１つの実施形態において、所望の特異性を保有する抗体のスクリーニングのための方法論は、当該分野内で公知の酵素結合抗体免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）および他の免疫学的に媒介される技術を含むが、これに限定されない。特定の実施形態において、ＢＬＡＡポリペプチドの特定のドメインに対して特異的である抗体の選抜は、このようなドメインを所有しているＢＬＡＡポリペプチドのフラグメントに結合するハイブリドーマの生成により容易にされる。ＢＬＡＡポリペプチド、またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログ内部のＩｇ様ドメインについて特異的である抗体がまた、本願明細書において提供される。
【０１０２】
抗−ＢＬＡＡ抗体は、ＢＬＡＡポリペプチドの局在化および／または定量に関する当該分野で公知の方法において用いられ得る（例えば、適切な生理学的なサンプル内のＢＬＡＡポリペプチドのレベルを測定の際の使用のために、診断的方法における使用のために、ポリペプチドの画像化における使用のために、など）。所定の実施形態において、ＢＬＡＡポリペプチド、またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログの抗体（抗体由来の結合ドメインを含む）は、薬理学的に活性な化合物［本明細書中、以降において「治療剤」］として利用される。
【０１０３】
抗ＢＬＡＡ抗体（例えば、モノクローナル抗体）は、標準的な技術（例えば、アフィニティークロマトグラフィまたは免疫沈降）によって、ＢＬＡＡを単離するために用いられ得る。抗ＢＬＡＡ抗体は、細胞からの天然のＢＬＡＡ、そして宿主細胞において発現される組換え的に産生されたＢＬＡＡの精製を容易にし得る。さらに、抗ＢＬＡＡ抗体が、（例えば、細胞の溶解産物または細胞上清における）ＢＬＡＡタンパク質を検出するために用いられ、ＢＬＡＡポリペプチドの発現の量およびパターンを評価し得る。抗ＢＬＡＡ抗体は、例えば、所定の治療レジメンの有効性を決定するために、臨床試験の手順の一部として組織におけるタンパク質レベルをモニターするために診断的に用いられ得る。検出は、抗体を検出可能物質に結合させる（すなわち、物理的に連結する）ことにより容易にされ得る。検出可能物質の例としては、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質および放射性物質が挙げられる。適切な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが挙げられる；適切な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられる；適切な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｔｒｉａｚｉｎｙｌａｍｉｎｅ）フルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが挙げられる；発光物質例としては、ルミノールが挙げられる；生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられる；そして、適切な放射性物質の例としては125Ｉ、131Ｉ、35Ｓまたは3Ｈが挙げられる。
【０１０４】
（ＢＬＡＡ組換え発現ベクターおよび宿主細胞）
本発明の別の局面は、ＢＬＡＡのポリペプチド、またはそれらの誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログをコードする核酸を含む、ベクター、好ましくは、発現ベクターに関する。本明細書において使用される場合、用語「ベクター」は、それに連結された別の核酸を輸送し得る核酸分子をいう。１つの型のベクターは、「プラスミド」である。これはさらなるＤＮＡセグメントが連結され得る環状の二本鎖ＤＮＡループをいう。別の型のベクターは、ウイルス性ベクターであり、ここでさらなるＤＮＡセグメントが、ウイルスゲノムに連結され得る。特定のベクターは、ベクターが導入される宿主細胞中で自律複製し得る（例えば、細菌性の複製起点を有する細菌ベクター、およびエピソーム性哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入の際、宿主細胞のゲノムに組み込まれ、そして、これにより宿主ゲノムとともに複製される。さらに、特定のベクターは、それらが作動可能に連結される遺伝子の発現を指向し得る。このようなベクターは、本明細書において「発現ベクター」といわれる。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、しばしばプラスミドの形態である。本明細書において、「プラスミド」および「ベクター」は、プラスミドが最も一般的に用いられる形態のベクターであるので、交換可能に使用され得る。しかし、本発明は、等価の機能を果たす、ウイルス性ベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）のような他の形態の発現ベクターを含むことが意図される。
【０１０５】
本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞における核酸の発現に適切な形態の本発明の核酸を含む。これは、組換え発現ベクターが、発現されるべき核酸配列に作動可能に連結される、発現に用いられるべき宿主細胞に基づいて選択される、１つ以上の調節配列を含むことを意味する。組換え発現ベクター内で、「作動可能に連結する」とは、目的のヌクレオチド配列が、（例えば、インビトロの転写／翻訳系において、またはベクターが宿主細胞に導入される場合は、宿主細胞において）ヌクレオチド配列の発現を可能にする様式で調節配列に連結されるという意味を意図する。用語「調節配列」は、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことを意図する。このような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ；ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  １８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．（１９９０）に記載されている。調節配列は、多くの型の宿主細胞においてヌクレオチド配列の構成的発現を指向する配列、および特定の宿主細胞のみにおいてヌクレオチド配列の発現を指向する配列（例えば、組織特異的調節配列）を含む。発現ベクターの設計が形質転換されるべき宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現のレベルなどのような因子に依存し得ることは当業者に理解される。本発明の発現ベクターは、宿主細胞中に導入され得、それにより、本明細書に記載される核酸によりコードされるタンパク質またはペプチド（融合タンパク質または融合ペプチドを含む）（例えば、ＢＬＡＡポリペプチド、ＢＬＡＡの変異形態、融合タンパク質など）を生成し得る。
【０１０６】
本発明の組換え発現ベクターは、原核生物細胞または真核生物細胞における、ＢＬＡＡ発現のために設計され得る。例えば、ＢＬＡＡは、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、昆虫細胞（バキュロウイルス発現ベクターを用いる）、酵母細胞または哺乳動物細胞において発現され得る。適切な宿主細胞は、Ｇｏｅｄｄｅｌ；ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ
ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  １８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．（１９９０）においてさらに議論される。あるいは、組換え発現ベクターは、例えば、Ｔ７プロモーター調節配列およびＴ７ポリメラーゼを用いて、インビトロで転写および翻訳され得る。
【０１０７】
原核生物におけるタンパク質の発現は、最も頻繁には、融合タンパク質または非融合タンパク質のいずれかの発現を指向する構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターを含むベクターを有するＥ．ｃｏｌｉにおいて実行される。融合ベクターは、そこにコードされるタンパク質に、通常、組換えタンパク質のアミノ末端に、多数のアミノ酸を付加する。このような融合ベクターは、代表的には、以下の３つの目的のために役立つ：（１）組換えタンパク質の発現を増大させること；（２）組換えタンパク質の溶解度を増大させること；および（３）アフィニティー精製においてリガンドとして作用することによって、組換えタンパク質の精製を補助すること。しばしば、融合発現ベクターにおいて、タンパク質分解性切断部位が、融合部分の結合部に導入され、そしてこの組換えタンパク質により、融合タンパク質の精製の後に融合部分から組換えタンパク質を分離することが可能になる。このような酵素、およびその同族の認識配列は、第Ｘａ因子、トロンビン、およびエンテロキナーゼを含む。代表的な融合発現ベクターとしては、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合タンパク質、またはプロテインＡを、それぞれ、標的の組換えタンパク質に融合するｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．；ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎｓｏｎ（１９８８）Ｇｅｎｅ  ６７：３１−４０）、ｐＭＡＬ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，Ｍａｓｓ．）およびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）が挙げられる。
【０１０８】
適切な誘導性非融合Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターの例としては、ｐＴｒｃ（Ａｍｒａｎｎら（１９８８）Ｇｅｎｅ  ６９：３０１−３１５）およびｐＥＴ  １１ｄ（Ｓｔｕｄｉｅｒら、ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）６０−８９）が挙げられる。
【０１０９】
Ｅ．ｃｏｌｉにおける組換えタンパク質発現を最大化するための１つのストラテジーは、組換えタンパク質をタンパク質分解的に切断する能力が損なわれた宿主細菌中でタンパク質を発現することである。Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）１１９−１２８を参照のこと。別のストラテジーは、各アミノ酸についての個々のコドンが、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて優先的に利用されるコドンであるように発現ベクター中に挿入される核酸の核酸配列を変更することである（Ｗａｄａら（１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：２１１１−２１１８）。本発明の核酸配列のこのような変更は、標準的なＤＮＡ合成技術によって実行され得る。
【０１１０】
別の実施形態において、ＢＬＡＡ発現ベクターは、酵母発現ベクターである。酵母Ｓ．ｃｅｒｉｖｉｓａｅにおける発現のためのベクターの例としては、ｐＹｅｐＳｅｃ１（Ｂａｌｄａｒｉら、（１９８７）ＥＭＢＯ  Ｊ  ６：２２９−２３４）、ｐＭＦａ（ＫｕｒｊａｎおよびＨｅｒｓｋｏｗｉｔｚ、（１９８２）Ｃｅｌｌ  ３０：９３３−９４３）、ｐＪＲＹ８８（Ｓｃｈｕｌｔｚら、（１９８７）Ｇｅｎｅ  ５４：１１３−１２３）、ｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）、およびｐｉｃＺ（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）が挙げられる。
【０１１１】
あるいは、ＢＬＡＡは、バキュロウイルス発現ベクターを使用して、昆虫細胞中で発現され得る。培養昆虫細胞（例えば、ＳＦ９細胞）中でのタンパク質の発現のために利用可能なバキュロウイルスベクターとしては、ｐＡｃシリーズ（Ｓｍｉｔｈら（１９８３）Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ３：２１５６−２１６５）およびｐＶＬシリーズ（ＬｕｃｋｌｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ（１９８９）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７０：３１−３９）が挙げられる。
【０１１２】
なお別の実施形態において、本発明の核酸は、哺乳動物発現ベクターを使用して、哺乳動物細胞中で発現される。哺乳動物発現ベクターの例としては、ｐＣＤＭ８（Ｓｅｅｄ（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ  ３２９：８４０）およびｐＭＴ２ＰＣ（Ｋａｕｆｍａｎら（１９８７）ＥＭＢＯ  Ｊ  ６：１８７−１９５）が挙げられる。哺乳動物細胞中で使用される場合、発現ベクターの制御機能は、しばしば、ウイルスの調節エレメントによって提供される。例えば、一般に使用されるプロモーターは、ポリオーマ、アデノウイルス２、サイトメガロウイルス、およびシミアンウイルス４０に由来する。原核生物細胞および真核生物細胞の両方のための他の適切な発現系については、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ．第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９の第１６章および第１７章を参照のこと。
【０１１３】
別の実施形態において、組換え哺乳動物発現ベクターは、特定の細胞型（例えば、組織特異的調節エレメントを使用して核酸を発現する）中で優先的に核酸の発現を指向し得る。組織特異的調節エレメントは、当該分野で公知である。適切な組織特異的なプロモーターの非限定的な例としては、アルブミンプロモーター（肝臓特異的；Ｐｉｎｋｅｒｔら（１９８７）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ  １：２６８−２７７）、リンパ特異的プロモーター（ＣａｌａｍｅおよびＥａｔｏｎ（１９８８）Ａｄｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４３：２３５−２７５）、特に、Ｔ細胞レセプターのプロモーター（ＷｉｎｏｔｏおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（１９８９）ＥＭＢＯ  Ｊ  ８：７２９−７３３）および免疫グロブリンのプロモーター（Ｂａｎｅｒｊｉら（１９８３）Ｃｅｌｌ  ３３：７２９−７４０；ＱｕｅｅｎおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（１９８３）Ｃｅｌｌ  ３３：７４１−７４８）、ニューロン特異的プロモーター（例えば、ニューロフィラメントプロモーター；ＢｙｒｎｅおよびＲｕｄｄｌｅ（１９８９）ＰＮＡＳ  ８６：５４７３−５４７７）、膵臓特異的プロモーター（Ｅｄｌｕｎｄら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３０：９１２−９１６）、ならびに乳腺特異的プロモーター（例えば、乳清プロモーター；米国特許第４，８７３，３１６号および欧州出願公開第２６４，１６６号）が挙げられる。発生的に調節されるプロモーターもまた含まれる（例えば、マウスホックス（ｍｕｒｉｎｅ  ｈｏｘ）プロモーター（ＫｅｓｓｅｌおよびＧｒｕｓｓ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：３７４−３７９）およびα−フェトプロテインプロモーター（ＣａｍｐｅｓおよびＴｉｌｇｈｍａｎ（１９８９）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ  ３：５３７−５４６）。
【０１１４】
本発明はさらに、アンチセンス方向で発現ベクターにクローニングされた本発明のＤＮＡ分子を含む組換え発現ベクターを提供する。すなわち、そのＤＮＡ分子は、ＢＬＡＡ  ｍＲＮＡに対してアンチセンスであるＲＮＡ分子の発現を（ＤＮＡ分子の転写によって）可能にする様式で調節配列に作動可能に連結される。種々の細胞型においてアンチセンスＲＮＡ分子の連続的な発現を指向する、アンチセンス方向でクローニングされた核酸に作動可能に連結された調節配列（例えば、ウイルスプロモーターおよび／もしくはエンハンサー）が選択され得るか、あるいは、アンチセンスＲＮＡの構成的発現、組織特異的発現、または細胞特異的発現を指向する調節配列が、選択され得る。アンチセンス発現ベクターは、組換えプラスミド、ファージミド、または弱毒化されたウイルスの形態であり得、ここではアンチセンス核酸は、高効率調節領域の制御下で産生され、その活性は、ベクターが導入される細胞型によって決定され得る。アンチセンス遺伝子を使用する遺伝子発現の調節の議論については、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂら、「Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ＲＮＡ  ａｓ  ａ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｔｏｏｌ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ」、Ｒｅｖｉｅｗｓ−−Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、第１巻（１）１９８６を参照のこと。
【０１１５】
本発明の別の局面は、本発明の組換え発現べクターが導入された宿主細胞に関する。用語「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」は、本明細書中で、交換可能に使用される。このような用語は、特定の対象の細胞をいうのみでなく、そのような細胞の子孫または潜在的な子孫をいうことが理解される。変異または環境的影響のいずれかに起因して、特定の改変が次の世代において生じ得るので、このような子孫は、実際、親の細胞と同一でないかもしれないが、なお、本明細書中で使用されるような用語の範囲内に含まれる。
【０１１６】
宿主細胞は、任意の原核生物細胞または真核生物細胞であり得る。例えば、ＢＬＡＡポリペプチドは、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、昆虫細胞、酵母または哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）またはＣＯＳ細胞）で発現され得る。他の適切な宿主細胞は、当業者に公知である。
【０１１７】
ベクターＤＮＡは、従来の形質転換またはトランスフェクション技術を介して原核生物細胞または真核生物細胞中に導入され得る。本明細書中で使用される場合、用語「形質転換」および「トランスフェクション」とは、外来性の核酸（例えば、ＤＮＡ）を宿主細胞に導入するための当該分野で認識される種々の技術をいうことを意図し、これらには、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウム共沈、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、リポフェクション、またはエレクトロポレーションが含まれる。宿主細胞を形質転換またはトランスフェクションするための適切な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ．第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９）および他の実験室マニュアルに見出され得る。
【０１１８】
哺乳動物細胞の安定なトランスフェクションのために、用いられる発現ベクターおよびトランスフェクション技法に依存して、細胞の小フラクションのみが外来ＤＮＡをそれらのゲノム中に組込み得ることが知られている。これらの組込み体を同定および選択するために、一般に、選択可能なマーカー（例えば、抗生物質に対する耐性）をコードする遺伝子が、目的の遺伝子とともに宿主細胞中に導入される。種々の選択可能なマーカーは、Ｇ４１８、ヒグロマイシンおよびメトトレキセートのような薬物に対する耐性を付与するものを含む。選択可能なマーカーをコードする核酸は、ＢＬＡＡをコードするのと同じベクター上で宿主細胞中に導入され得るか、または別のベクター上で導入され得る。この導入された核酸で安定にトランスフェクトされた細胞は、薬物選択により同定され得る（例えば、取り込まれた選択可能なマーカー遺伝子をもつ細胞は生存し、その一方、その他の細胞は死滅する）。
【０１１９】
培養中の原核生物宿主細胞または真核生物宿主細胞のような、本発明の宿主細胞を用いて、ＢＬＡＡポリペプチドを産生（すなわち、発現）し得る。従って、本発明はさらに、本発明の宿主細胞を用いてＢＬＡＡポリペプチドを産生する方法を提供する。１つの実施形態では、この方法は、本発明の宿主細胞（その中にＢＬＡＡをコードする組換え発現ベクターが導入されている）を、適切な培地中で、このＢＬＡＡポリペプチドが産生されるように培養する工程を包含する。別の実施形態では、この方法は、この培地から、または宿主細胞からＢＬＡＡを単離する工程をさらに包含する。
【０１２０】
（トランスジェニック動物）
本発明の宿主細胞はまた、非ヒトトランスジェニック動物を生成するために用いられ得る。例えば、１つの実施形態では、本発明の宿主細胞は、受精卵母細胞または胚幹細胞であり、その中にＢＬＡＡをコードする配列が導入されている。次いで、このような宿主細胞を用いて、外来ＢＬＡＡ配列がそれらのゲノム中に導入された非ヒトトランスジェニック動物、または内因性ＢＬＡＡ配列が改変された相同的組換え動物を作成し得る。このような動物は、ＢＬＡＡの機能および／または活性を研究するため、ならびにＢＬＡＡ活性のモデュレーターを同定および／または評価するために有用である。本明細書で用いる用語「トランスジェニック動物」は、非ヒト動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはラットまたはマウスのようなげっ歯類であり、そこでは、動物の１つ以上の細胞が導入遺伝子を含む。トランスジェニック動物のその他の例は、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ヤギ、ニワトリ、両生類などを含む。導入遺伝子は、トランスジェニック動物が発生し、しかも成熟動物のゲノム中に残り、それによってこのトランスジェニック動物の１つ以上の細胞型または組織中でコードされた遺伝子産物の発現を指向する細胞のゲノム中に組み込まれる外来ＤＮＡである。本明細書で用いる用語「相同的組換え動物」は、非ヒト動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはマウスであり、そこでは、内因性ＢＬＡＡ遺伝子が、内因性遺伝子と、動物の細胞（例えば、動物の発生前の動物の胎児細胞）中に導入された外来ＤＮＡ分子との間の相同的組換えにより改変されている。
【０１２１】
本発明のトランスジェニック動物は、ＢＬＡＡをコードする核酸を、受精卵母細胞の雄前核中に、例えば、マイクロインジェクション、レトロウイルス感染によって導入すること、およびこの卵母細胞を偽妊娠雌養動物中で発達させることによって作成され得る。配列番号１、３、５、７、９、または１１のヒトＢＬＡＡ  ｃＤＮＡ配列は、非ヒト動物のゲノム中に導入遺伝子として導入され得る。あるいは、マウスＢＬＡＡ遺伝子のようなヒトＢＬＡＡ遺伝子の非ヒト相同体が、ヒトＢＬＡＡ  ｃＤＮＡ（上記にさらに記載される）へのハイブリダイゼーションを基に単離され、そして導入遺伝子として用いられ得る。イントロン配列およびポリアデニル化シグナルもまた、導入遺伝子中に含まれ得、導入遺伝子の発現の効率を増大し得る。組織特異的調節配列（単数または複数）が、ＢＬＡＡ導入遺伝子に作動可能に連結され、特定細胞にＢＬＡＡポリペプチドの発現をさせる。胚操作およびマイクロインジェクションによるトランスジェニック動物（特にモウスのような動物）を生成するための方法は、当該分野では従来法となり、そして、例えば、米国特許第４，７３６，８６６号；同４，８７０，００９号；および第４，８７３，１９１号；ならびにＨｏｇａｎ  １９８６、ＭＡＮＩＰＵＬＡＴＩＮＧ  ＴＨＥ  ＭＯＵＳＥ  ＥＭＢＲＹＯ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．に記載されている。類似の方法が、その他のトランスジェニック動物の生成のために用いられる。トランスジェニック初代動物は、この動物の組織または細胞中の、そのゲノムにおけるＢＬＡＡ導入遺伝子の存在、および／またはＢＬＡＡ  ｍＲＮＡの発現を基に識別されえる。次いで、トランスジェニック初代動物を用いて、この導入遺伝子を保持するさらなる動物を育種し得る。さらに、ＢＬＡＡをコードする導入遺伝子を保持するトランスジェニック動物を、その他の導入遺伝子を保持するトランスジェニック動物と交配し得る。
【０１２２】
相同的組換え動物を作成するために、少なくともＢＬＡＡ遺伝子の一部分を含むベクターが調製される。このＢＬＡＡ遺伝子の一部には、欠失、付加または置換が導入され、それによって、ＢＬＡＡ遺伝子を改変、例えば、機能的に破壊する。このＢＬＡＡ遺伝子は、ヒト遺伝子（例えば、配列番号１、３、５、７、９、または１１）であり得るが、より好ましくはヒトＢＬＡＡ遺伝子の非ヒト相同体である。例えば、配列番号１、３、５、７、９、または１１のヒトＢＬＡＡ遺伝子のマウス相同体を用いて、マウスゲノム中の内因性ＢＬＡＡ遺伝子を改変するために適切な相同的組換えベクターを構築し得る。１つの実施形態で、ベクターは、相同的組換えに際し、内因性ＢＬＡＡ遺伝子が機能的に破壊されるように設計される（すなわち、機能的タンパク質をもはやコードしない；「ノックアウト」ベクターとも呼ばれる）。
【０１２３】
あるいは、ベクターは、相同的組換えに際し、内因性ＢＬＡＡ遺伝子が変異するかまたはそうでなければ改変されるが、なお機能的タンパク質をコードするように設計され得る（例えば、上流調節領域が改変され、それによって内因性ＢＬＡＡポリペプチドの発現を改変し得る）。相同的組換えベクターにおいて、ＢＬＡＡ遺伝子の改変された部分は、ＢＬＡＡ遺伝子のさらなる核酸がその５’および３’末端に隣接し、胚幹細胞中で、ベクターにより保持される外来ＢＬＡＡ遺伝子と内因性ＢＬＡＡ遺伝子との間で相同的組換えを可能にする。このさらなる隣接ＢＬＡＡ核酸は、内因性遺伝子との成功する相同的組換えに十分な長さである。代表的には、数キロベースの隣接ＤＮＡ（５’および３’末端の両方）がベクター中に含まれる。相同的組換えベクターの記述については、例えば、Ｔｈｏｍａｓら（１９８７）Ｃｅｌｌ  ５１：５０３を参照のこと。ベクターは、胚幹細胞株中に導入され（例えば、エレクトロポーレーションにより）、そして導入されたＢＬＡＡ遺伝子が内因性ＢＬＡＡ遺伝子と相同的に組換わった細胞が選択される（例えば、Ｌｉら（１９９２）Ｃｅｌｌ  ６９：９１５を参照のこと）。
【０１２４】
次いで、選択された細胞を、動物（例えば、マウス）の胚盤胞中に注入し凝集キメラを形成する。例えば、Ｂｒａｄｌｅｙ  １９８７  ＴＥＲＡＴＯＣＡＲＣＩＮＯＭＡＳ  ＡＮＤ  ＥＭＢＲＹＯＮＩＣ  ＳＴＥＭ  ＣＥＬＬＳ：Ａ  ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ  ＡＰＰＲＯＡＣＨ、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ編、ＩＲＬ、Ｏｘｆｏｒｄ、１１３〜１５２頁を参照のこと。次いで、キメラ胚を適切な偽妊娠雌養動物中に移植し得、そしてその胚を出産させる。それらの生殖細胞中に相同的に組換えたＤＮＡを保持する子孫を用いて、動物のすべての細胞が導入遺伝子の生殖系列により相同的に組み替えたＤＮＡを含む動物を繁殖し得る。相同的組換えベクターおよび相同的組換え動物を構築するための方法は、Ｂｒａｄｌｅｙ（１９９１）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２：８２３−８２９；ＰＣＴ国際公開番号：ＷＯ９０／１１３５４；ＷＯ９１／０１１４０；ＷＯ９２／０９６８；およびＷＯ９３／０４１６９に記載されている。
【０１２５】
別の実施形態では、導入遺伝子の調節された発現を可能にする選択された系を含むトランスジェニック非ヒト動物が生成され得る。このような系の１つの例は、細菌ファージＰ１のｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系である。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系の記述については、Ｌａｋｓｏら（１９９２）ＰＮＡＳ  ８９：６２３２〜６２３６を参照のこと。リコンビナーゼ系の別の例は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＦＬＰリコンビナーゼ系である（Ｏ’Ｇｏｒｍａｎら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：１３５１〜１３５５）。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系を用いて導入遺伝子の発現を調節する場合、Ｃｒｅリコンビナーゼおよび選択されたタンパク質の両方をコードする導入遺伝子を含む動物が必要である。このような動物は、「二重」トランスジェニック動物の構築、例えば、一方が選択されたタンパク質をコードする導入遺伝子を含み、そして他方がリコンビナーゼをコードする導入遺伝子を含む２つのトランスジェニック動物を交配することにより提供され得る。
【０１２６】
本明細書で記載される非ヒトトランスジェニック動物のクローンはまた、Ｗｉｌｍｕｔら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  ３８５：８１０〜８１３に記載の方法に従って生成され得る。簡単に述べれば、トランスジェニック動物から細胞、例えば体細胞が単離され、そして成長周期を出て、Ｇ0相に入るように誘導され得る。次いで、静止細胞は、例えば、電気的パルスの使用により、この静止細胞が単離される種と同じ種の動物から除核された卵母細胞に融合され得る。次いで、再構築された卵母細胞は、それが、桑実胚または胚盤胞へ発生するように培養され、次いで偽妊娠雌養動物に移される。この雌の養動物に担われた子孫は、細胞、例えば、体細胞が単離された動物のクローンである。
【０１２７】
（薬学的組成物）
本発明のＢＬＡＡ核酸分子、ＢＬＡＡポリペプチド、および抗ＢＬＡＡ抗体（本明細書では「活性化合物」ともいう）、およびその誘導体、フラグメント、アナログ、相同体は、治療に適切な薬学的組成物中に取り込まれ得る。代表的には、このような組成物は、核酸分子、タンパク質、または抗体、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。本明細書で用いる「薬学的に受容可能なキャリア」は、薬学的投与に適合する、任意およびすべての溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌および抗真菌薬剤、等張剤および吸収遅延剤などを包含することを意図する。適切なキャリアは、当該分野における標準的な参照テキストであるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に記載されており、これは、本明細書に参考として援用される。このようなキャリアまたは希釈剤の好適な例は、制限されないで、水、フィンガー溶液、デキストロース溶液、および５％ヒト血清アルブミンを包含する。リポソームおよび動物油（ｆｉｘｅｄ  ｏｉｌ）のような非水性ビヒクルもまた用いられ得る。薬学的に活性な物質のためのそのような媒体および薬剤の使用は、当該分野で周知である。活性化合物と適合しない任意の従来の媒体または薬剤の範囲を除いて、組成物におけるそれらの使用が意図される。補助的な活性化合物もまたこの組成物中に取り込まれ得る。
【０１２８】
本発明の薬学的組成物は、その投与の意図された経路と適合するように処方される。投与の経路の例は、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（局所）、経粘膜、および直腸投与を包含する。非経口、経皮、または皮下適用のための溶液または懸濁液は以下の成分を含み得る：注射用の水、生理食塩水、動物油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたはその他の合成溶媒のような滅菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンのような抗細菌剤；アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムのような抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸のようなキレート剤；アセテート、シトレートまたはホスフェートのような緩衝剤、および塩化ナトリウムまたはデキストロースのような浸透圧調節のための薬剤。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムのような酸または塩基で調節され得る。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチックから作られる、アンプル、使い捨てシリンジまたは複数用量バイアルに収容され得る。
【０１２９】
注射用途に適切な薬学的組成物は、滅菌注射用溶液または分散液の即席調製物のための滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散物、および滅菌粉末を含む。静脈内投与には、適切なキャリアは、生理食塩水、静菌水、ＣｒｅｍｏｐｈｏｒＥＬ（登録商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ．）またはリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。すべての場合において、組成物は殺菌されなければならず、そして容易に注射できる程度の流体であるべきである。それは、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、そして細菌および真菌のような微生物の汚染作用に対して保存されなければならない。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒体であり得る。適正な流動性が、例えば、レシチンのようなコーティングの使用により、分散物の場合には必要な粒子サイズの維持により、および界面活性剤の使用により維持され得る。微生物の作用の予防は、種々の抗細菌および抗真菌薬剤により達成され得、これには、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロザールなどが含まれる。多くの場合、組成物中に、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールのようなポリアルコール、塩化ナトリウムなどの等張剤を含むことが好ましい。注射用組成物の延長された吸収は、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンのような吸収を遅延する薬物を含めることによりもたらされ得る。
【０１３０】
滅菌注射溶液は、適切な溶媒中に、必要な量の活性化合物（例えば、ＢＬＡＡポリペプチドまたは抗ＢＬＡＡ抗体）を、必要に応じて上記に列挙した成分またはその組合せとともに取り込むこと、次いで滅菌濾過することによって調製され得る。一般に、分散物は、基礎分散媒体および上記に列挙された成分のうち必要なその他の成分を含む滅菌ビヒクル中に取り込むことにより調製される。滅菌注射溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製の方法は、活性成分プラス先に滅菌濾過されたその溶液からの任意の所望の成分の粉末を生じる真空乾燥および凍結乾燥である。
【０１３１】
経口組成物は、一般に、不活性希釈剤または食用キャリアを包含する。それらは、ゼラチンカプセル中に封入され得るか、または錠剤に圧縮され得る。経口治療投与の目的には、活性化合物を賦形剤とともに取り込み得、そして錠剤、トローチ、またはカプセルの形態で用いられる得る。経口組成物はまた、マウスウォッシュとしての使用のために、流体キャリアを用いて調製され得、ここで、この流体キャリア中の化合物は、経口的に適用され、そして音をたてて動き、そして喀痰されるかまたは飲み込まれる。薬学的に適合する結合剤、および／またはアジュバント材料が組成物の一部分として含まれ得る。錠剤、ピル、カプセル、トローチなどは、以下の成分または類似の性質の化合物をいずれかを含み得る：微結晶セルロース、ガムトラガントまたはゼラチンのようなバインダー；スターチまたはラクトースのような賦形剤、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、またはコーンスターチのような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓのような滑沢剤；コロイド二酸化珪素のような滑剤；スクロースまたはサッカリンのような甘味料；またはペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ香料のような香料。
【０１３２】
吸入による投与には、化合物は、例えば，二酸化炭素のようなガスである適切な推進剤を含む、加圧コンテナまたはディスペンサ、またはネブライザーからのエアロゾルスプレーの形態で送達され得る。
【０１３３】
全身投与はまた、経粘膜または経皮手段によってであり得る。経粘膜または経皮投与には、浸透されるバリアに適切な浸透剤が処方物中に用いられる。このような浸透剤は、一般に、当該分野で公知であり、そして、例えば、経粘膜投与には、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、鼻スプレーまたは坐薬の使用により達成され得る。経皮投与には、活性化合物は、当該分野で一般に知られるように、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、軟膏（ｓａｌｖｅｓ）、ゲル、またはクリームに処方され得る。
【０１３４】
化合物はまた、（例えば、ココアバターおよびその他のグリセリドのような従来の坐薬基剤とともに）坐薬また直腸送達のための滞留浣腸剤の形態で調製され得る。
【０１３５】
１つの実施形態では、活性成分は、インプラントおよびマイクロカプセル化送達システムを含む制御された放出処方物のように、身体からの急速な排除に対して化合物を保護するキャリアとともに調製される。エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸のような、生分解性の生体適合性ポリマーが用いられ得る。このような処方物の調製のための方法は、当業者に明らかである。このような材料はまた、Ａｌｚａ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から入手可能である。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体で感染細胞に標的化されたリポソームを含む）もまた、薬学的に受容可能なキャリアとして用いられ得る。これらは、例えば、米国特許第４、５２２、８１１号に記載のように、当業者に公知の方法に従って調製され得る。
【０１３６】
投与の場合および投与量の均一性のために、用量単位形態で経口または非経口組成物を処方することが特に有利である。本明細書で用いる用量単位形態は、処置される被験体に対する単位の用量として適した物理的に別の単位をいい；各々の単位は、必要なキャリアとともに所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含む。本発明の用量単位形態の仕様は、活性化合物の特有の性質および達成されるべき特定の治療効果、ならびに個体の処置にこのような化合物を調合する当該技術分野に固有の制限によって指令され、そしてそれらに直接依存する。
【０１３７】
本発明の核酸分子はベクター中に挿入され、そして遺伝子治療ベクターとして用いられ得る。遺伝子治療ベクターは、例えば、静脈内注入、局所投与（米国特許第５，３２８，４７０号）により、または定位（ｓｔｅｒｅｏｔａｃｔｉｃ）注入（例えば、Ｃｈｅｎら（１９９４）ＰＮＡＳ  ９１：３０５４〜３０５７を参照のこと）により被験体に送達され得る。遺伝子治療ベクターの薬学的調製物は、受容可能希釈剤中の遺伝子治療ベクターを含み得るか、または遺伝子治療ベクターが包埋される緩慢放出マトリックスを包含し得る。あるいは、例えば、レトロウイルスベクターのように、完全な遺伝子送達ベクターが組換え細胞からインタクトに生成され得る場合には、この薬学的調製物は、遺伝子送達系を生成する１つ以上の細胞を含み得る。
【０１３８】
薬学的組成物は、投与の指示書とともに、容器、パック、またはディスペンサー中に含まれ得る。
【０１３９】
（発明の使用および方法）
免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーは、多くの機能を調整する多機能の分泌タンパク質および膜結合タンパク質を含む。先行技術で知られるＢ７分子は、細胞表面上に位置する（Ｓｅｌｖａｋｕｍａｒら、１９９２、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３６：１７５〜１８１およびＬｉｎｓｌｅｙら、１９９４、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃ．３：１３４１〜１３４３を参照のこと）。先行技術で公知のプログラム（例えば、ＰＳＯＲＴ）を用いる配列分析研究は、本発明のポリペプチドが、小胞体の膜に局在化する可能性が最も高いことを示す。本明細書で記載される核酸分子、タンパク質、タンパク質相同体、および抗体は、以下の方法の１つ以上において用いられ得る：（ａ）スクリーニングアッセイ；（ｂ）検出アッセイ（例えば、染色体マッピング、組織型決定、法医学生物学）；（ｃ）予測医学（例えば、診断アッセイ、予後アッセイ、モニタリング臨床試験、および薬物ゲノミクス）；および（ｄ）処置の方法（例えば、治療および予防）。本明細書で記載のように、１つの実施形態では、本発明のＢＬＡＡポリペプチドは、活性化Ｔリンパ球に結合する能力を有し、そしてＴリンパ球細胞増殖および活性化のための調節シグナルを提供する。ＢＬＡＡポリペプチドは、他の細胞タンパク質と相互作用し、そしてそれ故、免疫応答に関連するタンパク質活性を調整するために用いられ得る。このような調整は、細胞増殖の調節、細胞分化の調節、および／または細胞生存の調節に対する影響を有し得る。
【０１４０】
さらに以下に記載されるように、本発明の単離された核酸分子を用いて、ＢＬＡＡポリペプチドを発現し（例えば、遺伝子治療適用において宿主細胞中の組換え発現ベクターにより）、ＢＬＡＡ  ｍＲＮＡ（例えば、生物学的試料中）またはＢＬＡＡ遺伝子中の遺伝子損傷を検出し、ＢＬＡＡ活性を調整し得る。さらに、ＢＬＡＡポリペプチドを用いて、ＢＬＡＡ活性または発現を調整する薬物または化合物をスクリーニングし、およびＢＬＡＡポリペプチドの不十分または過剰産生、またはＢＬＡＡ野生型ポリペプチドと比較して減少または異常活性を有するＢＬＡＡポリペプチド形態の産生により特徴付けられる障害を処置し得る（例えば、感染性疾患、癌、自己免疫疾患、および移植にともなう合併症）。さらに、本発明の抗ＢＬＡＡ抗体を用いて、ＢＬＡＡポリペプチドを検出および単離し、そしてＢＬＡＡ活性を調整し得る。
【０１４１】
本発明はさらに、上記のスクリーニングアッセイにより同定される新規な薬剤、および本明細書に記載のような処置のためのそれらの使用に関する。
【０１４２】
（スクリーニングアッセイ）
本発明は、モジュレーター、すなわち、ＢＬＡＡポリペプチドに結合するか、または例えばＢＬＡＡ発現またはＢＬＡＡ活性に対して刺激もしくは阻害効果を有する、候補もしくは試験化合物もしくは薬剤（例えば、ペプチド、ペプチド模倣物，小分子またはその他の薬物）を同定するための方法を提供する（本明細書では「スクリーニングアッセイ」ともいう）。
【０１４３】
１つの実施形態で、本発明は、ＢＬＡＡタンパク質もしくはポリペプチドもしくはその生物学的に活性な一部分に結合かまたはそれらを調整する候補もしくは試験化合物をスクリーニングするためのアッセイを提供する。本発明の試験化合物は、当該分野で公知のコンビナトリアルライブラリー法における多くのアプローチのいずれかを用いて得られ得、これには；生物学的ライブラリー；空間的にアドレス可能な平行固相もしくは溶液相ライブラリー；脱旋回を必要とする合成ライブラリー法；「１ビーズ１化合物」ライブラリー法；およびアフィニティークロマトグラフィー選択を用いる合成ライブラリー法が含まれる。生物学的ライブラリーアプローチは、ペプチドライブラリーに限られるが、その他の４つのアプローチは、ペプチド、化合物の非ペプチドオリゴマーまたは小分子ライブラリーに適用可能である（Ｌａｍ（１９９７）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ  １２：１４５）。
【０１４４】
分子ライブラリーの合成方法の例は、当該分野に見出され得る。例えば、ＤｅＷｉｔｔら（１９９３）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６９０９；Ｅｒｂら（１９９４）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：１１４２２；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら（１９９４）Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ３７：２６７８；Ｃｈｏら（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１：１３０３；Ｃａｒｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  Ｅｎｇｌ  ３３：２０５９；Ｃａｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔ  Ｅｄ  Ｅｎｇｌ  ３３：２０６１；およびＧａｌｌｏｐら（１９９４）Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ３７：１２３３。
【０１４５】
化合物のライブラリーは溶液中（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ（１９９２）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １３：４１２〜４２１）、またはビーズ上（Ｌａｍ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：８２〜８４）、チップ上（Ｆｏｄｏｒ（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６４：５５５〜５５６）、細菌（Ｌａｄｎｅｒ米国特許第５，２２３，４０９号）、胞子（Ｌａｄｎｅｒ米国特許’４２９）、プラスミド（Ｃｕｌｌら（１９９２）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：１８６５〜１８６９）またはファージ上（ＳｃｏｔｔおよびＳｍｉｔｈ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：３８６〜３９０；Ｄｅｖｌｉｎ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：４０４〜４０６；Ｃｗｉｒｌａら（１９９０）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８７：６３７８〜６３８２；Ｆｅｌｉｃｉ（１９９１）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２２：３０１〜３１０；Ｌａｄｎｅｒ上記）に提示され得る。
【０１４６】
１つの実施形態で、アッセイは細胞を基礎にしたアッセイであり、そこでは、細胞表面上で、ＢＬＡＡポリペプチド、または生物学的に活性なその部分の形態を発現する細胞が、試験化合物と接触し、そして試験化合物のＢＬＡＡタンパク質に結合する能力が決定される。細胞は、例えば、哺乳動物起源であるか、または酵母細胞であり得る。試験化合物のＢＬＡＡポリペプチドに結合する能力を決定することは、例えば、試験化合物をラジオアイソトープまたは酵素標識と、試験化合物のＢＬＡＡポリペプチドまたは生物学的に活性なその部分への結合が、複合体中の標識された化合物を検出することにより決定され得るように結合することによって達成され得る。例えば、試験化合物は、125Ｉ、35Ｓ、14Ｃ、または5Ｈで、直接的または間接的に標識され得、そしてラジオアイソトープが、放射線放出の直接計測によるかシンチレーション計測により検出される。あるいは、試験化合物は、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはルシフェラーゼで酵素標識され得、この酵素標識は、適切な基質の産物への変換の測定により検出される。１つの実施形態では、このアッセイは、ＢＬＡＡポリペプチドの膜結合形態、または生物学的に活性なその部分を細胞表面上で発現する細胞を、ＢＬＡＡを結合し、アッセイ混合物を形成する既知化合物と接触する工程、このアッセイ混合物を試験化合物と接触する工程、および試験化合物がＢＬＡＡポリペプチドと相互作用する能力を決定する工程を包含し、ここで、この試験化合物がＢＬＡＡポリペプチドと相互作用する能力を決定する工程が、既知化合物と比較したとき、この試験化合物のＢＬＡＡまたは生物学的に活性なその部分に優先的に結合する能力を決定することを包含する。
【０１４７】
別の実施形態では、アッセイは、細胞を基礎にしたアッセイであり、これは、ＢＬＡＡポリペプチドの膜結合形態、または生物学的に活性なその部分を細胞表面上で発現する細胞を、試験化合物と接触させる工程、およびこのＢＬＡＡポリペプチドの膜結合形態、または生物学的に活性なその部分の活性を調整（例えば、刺激または阻害）する試験化合物の能力を決定する工程を包含する。ＢＬＡＡ、または生物学的に活性なその部分の活性を調整する試験化合物の能力を決定する工程は、例えば、ＢＬＡＡポリペプチドのＢＬＡＡ標的分子に結合またはそれと相互作用する能力を決定することにより達成され得る。本明細書で用いる用語「標的分子」は、それとＢＬＡＡポリペプチドが本来結合または相互作用する分子、例えば、ＢＬＡＡと相互作用するタンパク質を発現する細胞の表面上の分子、第２の細胞の表面上の分子、細胞外環境中の分子、細胞膜の内表面に結合する分子または細胞質分子である。ＢＬＡＡ標的分子は、本発明の非ＢＬＡＡ分子またはＢＬＡＡタンパク質もしくはポリペプチドであり得る。１つの実施形態で、ＢＬＡＡ標的分子は、細胞膜を通って細胞中に細胞外シグナル（例えば、膜結合ＢＬＡＡ分子への化合物の結合により生成されるシグナル）の伝達を容易にするシグナル伝達経路の成分である。この標的は、例えば、触媒活性を有する第２の細胞内タンパク質であるか、または下流シグナル伝達分子のＢＬＡＡとの結合を容易にするタンパク質であり得る。
【０１４８】
ＢＬＡＡポリペプチドのＢＬＡＡ標的分子と結合または相互作用する能力を決定することは、直接結合を決定するための上記の方法の１つにより達成され得る。１つの実施形態で、ＢＬＡＡポリペプチドのＢＬＡＡ標的分子と結合または相互作用する能力を決定することは、標的分子の活性を決定することにより達成され得る。例えば、標的分子の活性は、標的の細胞内第２メッセンジャー（すなわち、細胞内Ｃａ2+、ジアシルグリセロール、ＩＰ3など）の誘導を検出すること、適切な基質に対する標的の触媒／酵素活性を検出すること、レポーター遺伝子（検出可能なマーカー、例えば、ルシフェラーゼをコードする核酸に作動可能に連結されたＢＬＡＡ応答性調節エレメントを含む）の誘導を検出すること、または細胞応答、例えば、細胞生存、細胞分化、または細胞増殖を検出することにより決定され得る。
【０１４９】
なお別の実施形態では、本発明のアッセイは、細胞フリーアッセイであり、これは、ＢＬＡＡポリペプチドまたは生物学的に活性なその部分を試験化合物と接触させる工程、および試験化合物のＢＬＡＡポリペプチドまたは生物学的に活性なその部分に結合する能力を決定する工程を包含する。試験化合物のＢＬＡＡポリペプチドへの結合は、上記のように、直接的または間接的いずれかで決定され得る。１つの実施形態で、このアッセイは、ＢＬＡＡポリペプチドまたは生物学的に活性なその部分を、ＢＬＡＡを結合し、アッセイ混合物を形成する既知化合物と接触する工程、このアッセイ混合物を試験化合物と接触する工程、および試験化合物がＢＬＡＡポリペプチドと相互作用する能力を決定する工程を包含し、ここで、この試験化合物がＢＬＡＡポリペプチドと相互作用する能力を決定する工程が、既知化合物と比較したとき、この試験化合物のＢＬＡＡまたは生物学的に活性なその部分に優先的に結合する能力を決定することを包含する。
【０１５０】
別の実施形態では、アッセイは、細胞フリーアッセイであり、これは、ＢＬＡＡポリペプチドまたは生物学的に活性なその部分を試験化合物と接触させる工程、およびＢＬＡＡポリペプチドまたは生物学的に活性なその部分の活性を調整（例えば、刺激または阻害）する試験化合物の能力を決定する工程を包含する。ＢＬＡＡの活性を調整する試験化合物の能力を決定する工程は、例えば、直接結合を決定するための上記の方法の１つによる、ＢＬＡＡポリペプチドのＢＬＡＡ標的分子に結合する能力を決定することに達成され得る。代替の実施形態では、ＢＬＡＡの活性を調整する試験化合物の能力を決定する工程は、ＢＬＡＡポリペプチドのＢＬＡＡ標的分子をさらに調整する能力を決定することにより達成され得る。例えば、適切な基質に対する標的分子の触媒／酵素活性が先に記載のように決定され得る。
【０１５１】
なお別の実施形態では、この細胞フリーアッセイは、ＢＬＡＡポリペプチドまたは生物学的に活性なその部分を、ＢＬＡＡを結合し、アッセイ混合物を形成する既知化合物と接触する工程、このアッセイ混合物を試験化合物と接触する工程、および試験化合物がＢＬＡＡポリペプチドと相互作用する能力を決定する工程を包含し、ここで、この試験化合物がＢＬＡＡポリペプチドと相互作用する能力を決定する工程が、ＢＬＡＡポリペプチドの、ＢＬＡＡ標的分子に優先的に結合またはこれを調整する能力を決定することを包含する。
【０１５２】
本発明の細胞フリーアッセイは、ＢＬＡＡの可溶性形態または膜結合形態の両方の使用に適用可能である。膜結合形態のＢＬＡＡを包含する細胞フリーアッセイの場合、可溶化剤を、この膜結合形態のＢＬＡＡが溶液中に維持されるように利用することが所望され得る。このような可溶化剤の例は、ｎ−オクチルグルコシド、ｎ−ドデシルグルコシド、ｎ−ドデシルマルトシド、オクタノイル−Ｎ−メチルグルカミド、デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１１４、Ｔｈｅｓｉｔ（登録商標）、イソトリデシポリ（エチレングリコールエーテル）n、Ｎ−ドデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホネート、３−（３−コラミドプロピル）ジメチルアンミニオール−１−プロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳ）、または３−（３−コラミドプロピル）ジメチルアンミニオール−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート（ＣＨＡＰＳＯ）のような非イオン性界面活性剤を含む。
【０１５３】
本発明の上記のアッセイ方法の１つ以上の実施形態で、ＢＬＡＡまたはその標的分子のいずれかを、タンパク質の１つまたは両方の非複合体化形態からの複合体化形態の分離を容易にするため、およびアッセイの自動化に適応するために固定化することが所望され得る。試験化合物のＢＬＡＡへの結合、または候補化合物の存在下または不在下の標的分子とのＢＬＡＡの相互作用は、反応体を含むために適切な任意のベッセル中で達成され得る。このようなベッセルの例は、マイクロタイタープレート、試験管、および微小遠心管を含む。１つの実施形態では、１つまたは両方のタンパク質がマトリックスに結合することを可能にするドメインを付加する融合タンパク質が提供され得る。例えば、ＧＳＴ−ＢＬＡＡ融合タンパク質またはＧＳＴ−標的融合タンパク質が、グルタチオンセファロースビーズ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｍｉｃａｌ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）またはグルタチオン誘導体化マイクロタイタープレート上に吸着され得、次いでそれは、試験化合物と、または試験化合物と非吸着標的タンパク質もしくはＢＬＡＡポリペプチドのいずれかと組み合わせられ、そしてこの混合物は、複合体形成を行う条件下（例えば、塩およびｐＨについて生理学的条件）でインキュベートされる。インキュベーションの後、このビーズまたはマイクロタイタープレートウェルを洗浄し、任意の非結合成分を除去し、ビーズの場合固定化されたマトリックス、複合体が、例えば、上記のように直接的または間接的いずれかで測定される。あるいは、これら複合体は、マトリックスから解離され得、そしてＢＬＡＡ結合または活性のレベル標準的な技法を用いて決定される。
【０１５４】
マトリックス上にタンパク質を固定化するその他の技法もまた、本発明のスクリーニングアッセイで用いられ得る。例えば、ＢＬＡＡまたはその標的分子のいずれかをビオチンおよびストレプトアビジンの結合を利用して固定化し得る。ビオチン化ＢＬＡＡまたは標的分子は、当該分野で周知の技法（例えば、ビオチン化キット、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＩＩ）を用いてビオチン−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド）から調製され、そしてストレプトアビジンでコートされた９６ウェルプレート（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）のウェルに固定化され得る。あるいは、ＢＬＡＡまたは標的分子と反応性であるが、ＢＬＡＡタンパク質のその標的分子への結合を妨害しない抗体をプレートのウェルに誘導体化し得、そして非結合標的またはＢＬＡＡを抗体結合によりウェル中に捕捉する。ＧＳＴ固定化複合体に対する上記の方法に加え、このような複合体を検出する方法は、ＢＬＡＡまたは標的分子と反応性の抗体を用いる複合体の免疫検出、およびこのＢＬＡＡまたは標的分子にともなう酵素活性を検出することによる酵素結合アッセイを含む。
【０１５５】
別の実施形態では、ＢＬＡＡ発現のモジュレーターが、細胞を候補化合物と接触させ、そしてこの細胞中のＢＬＡＡ  ｍＲＮＡまたはポリペプチドの発現が決定される方法で同定される。候補化合物の存在下で、ＢＬＡＡ  ｍＲＮＡまたはポリペプチドの発現のレベルが、候補化合物の不在下のＢＬＡＡ  ｍＲＮＡまたはポリペプチドの発現のレベルと比較される。次いで、この候補化合物が、この比較に基づいてＢＬＡＡ発現のモジュレーターであると同定され得る。例えば、候補化合物の存在下のＢＬＡＡ  ｍＲＮＡまたはポリペプチドの発現のレベルが、その不在下より大きいとき（統計的に有意により大きい）、この候補化合物は、ＢＬＡＡ  ｍＲＮＡまたはポリペプチド発現の刺激剤であると同定される。あるいは、候補化合物の存在下のＢＬＡＡ  ｍＲＮＡまたはポリペプチドの発現のレベルが、その不在下より少ないとき（統計的に有意により少ない）、この候補化合物は、ＢＬＡＡ  ｍＲＮＡまたはポリペプチド発現の阻害剤であると同定される。細胞中のＢＬＡＡ  ｍＲＮＡまたはポリペプチド発現のレベルは、ＢＬＡＡ  ｍＲＮＡまたはタンパク質を検出するための本明細書に記載の方法により決定され得る。
【０１５６】
なお別の実施形態では、ＢＬＡＡポリペプチドを、ツーハイブリッドアッセイまたはスリーハイブリッドアッセイ（例えば、米国特許第５，２８３，３１７号；Ｚｅｒｖｏｓら（１９９３）Ｃｅｌｌ  ７２：２２３〜２３２；Ｍａｄｕｒａら（１９９３）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６８：１２０４６〜１２０５４；Ｂａｒｔｅｌら（１９９３）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １４：９２０〜９２４；Ｉｗａｂｕｃｈｉら（１９９３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ８：１６９３〜１６９６；およびＢｒｅｎｔ  ＷＯ９４／１０３００）における「餌タンパク質」として用い、ＢＬＡＡと結合または相互作用し、そしてＢＬＡＡ活性を調整するその他のタンパク質を同定し得る（「ＢＬＡＡ結合性タンパク質」または「ＢＬＡＡ−ｂｐ」）。このようなＢＬＡＡ結合性タンパク質はまた、例えば、ＢＬＡＡ経路の上流または下流エレメントとして、ＢＬＡＡポリペプチドによるシグナルの伝播に関与しているようである。
【０１５７】
ツーハイブリッド系は、分離可能なＤＮＡ結合ドメインおよび活性化ドメインからなる大部分の転写因子のモジュレーター性質を基礎にする。簡単に述べれば、このアッセイは、２つの異なる構築物を利用する。１つの構築物では、ＢＬＡＡをコードする遺伝子が、既知の転写因子（例えば、ＧＡＬ−４）のＤＮＡ結合ドメインをコードする遺伝子に融合される。他方の構築物では、未同定タンパク質（「餌食」または「試料」）をコードする、ＤＮＡ配列のライブラリーからのＤＮＡ配列が、既知転写因子の活性化ドメインをコードする遺伝子に融合される。「餌」および「餌食」タンパク質が、インビボでＢＬＡＡ−依存複合体を形成して相互作用し得るとき、この転写因子のＤＮＡ結合ドメインおよび活性化ドメインは、緊密に接近している。この接近度は、この転写因子に応答性の転写調節部位に作動可能に連結されているレポーター遺伝子（例えば、ＬａｃＺ）の転写を可能にする。このレポーター遺伝子の発現が検出され得、そして機能的転写因子を含む細胞コロニーが単離され、ＢＬＡＡと相互作用するタンパク質をコードするクローン化遺伝子を得るために用いられ得る。
【０１５８】
別の実施形態では、免疫応答性関連疾患の活性もしくは潜在性（すなわち、活性の欠如）またはそれに対する素因のモジュレーターが同定され、そこでは、免疫応答性関連疾患に対するリスクが増加している試験動物に、試験化合物が投与される。この実施形態の試験動物は、ＢＬＡＡポリペプチドを組換えにより発現する。次いで、このポリペプチドの活性を試験動物中で測定する。次に、このポリペプチドの活性を、このポリペプチドを組換えにより発現するが、免疫応答性関連疾患に対するリスクが増加していないコントロール動物中で測定する。最後に、試験動物中の発現を、コントロール動物中の発現と比較する。コントロール動物に対する試験動物中の差異は、試験化合物が免疫応答性関連疾患の活性もしくは潜在性またはそれに対する素因のモジュレーターであることを示す。例えば、試験動物における発現の増加は、試験化合物が免疫応答性疾患の刺激剤であることを示す。同様に、試験動物における発現の減少は、試験化合物が免疫応答性疾患の阻害剤であることを示す。
【０１５９】
試験動物は、上記のように、試験タンパク質導入遺伝子を発現するか、または野生型試験動物に比較して増加したレベルでこの導入遺伝子をプロモーターの制御下に発現する、組換え試験動物であり得る。この実施形態では、このプロモーターは、この導入遺伝子のネイティブなプロモーターではない。
【０１６０】
本発明はさらに、上記のスクリーニングアッセイにより同定される新規薬剤、および本明細書に記載の処置のためのその使用に関する。
【０１６１】
（検出アッセイ）
本明細書で同定されるｃＤＮＡ配列の部分またはフラグメント（および対応する完全遺伝子配列）は、ポリヌクレオチド試薬として多くの様式で用いられ得る。例えば、これらの配列は：（ｉ）それらの個々の遺伝子を染色体上にマッピングするため；そしてそれ故、遺伝子疾患に関連する遺伝子領域を位置決めするため；および（ｉｉ）微小生物学的試料から個体を識別するため（組織型決定）に用いられ得る。これらの適用は、以下のサブセクションに記載される。
【０１６２】
（染色体マッピング）
一旦遺伝子の配列（またはこの配列の部分）が単離されると、この配列を用いて染色体上のこの遺伝子の位置をマッピングし得る。このプロセスは、染色体マッピングと呼ばれる。従って、本明細書に記載のＢＬＡＡ配列の部分またはフラグメントは、染色体上の複数のＢＬＡＡ遺伝子の位置を個々にマッピングするために用いられ得る。このＢＬＡＡ配列の染色体へのマッピングは、これらの配列を疾患に関連する遺伝子と相関させることで重要な最初のステップである。
【０１６３】
簡単に述べると、ＢＬＡＡ遺伝子は、このＢＬＡＡ配列からＰＣＲプライマー（好ましくは長さが１５〜２５ｂｐ）を調製することにより染色体にマッピングされ得る。ＢＬＡＡ配列のコンピューター分析を用いて、ゲノムＤＮＡ中の１つ以上のエキソンにまたがり、それ故、増幅プロセスを複雑にするプライマーでないプライマーを迅速に選択し得る。次いで、これらのプライマーを、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングのために用い得る。このＢＬＡＡ配列に対応するヒト遺伝子を含むようなハイブリッドのみが増幅されたフラグメントを生じる。
【０１６４】
体細胞ハイブリッドは、異なる哺乳動物（例えば、ヒトおよびマウス細胞）からの体細胞を融合することにより調製される。ヒトとマウス細胞のハイブリッドが成長および分裂するにつれ、それらはランダムな順序でヒト染色体を徐々に失うが、マウス染色体は維持する。マウス細胞が特定の酵素を欠くため、それらが増殖できない培地（しかしヒト細胞は増殖し得る）を用いることにより、必要な酵素をコードする遺伝子を含む１つのヒト染色体が維持される。種々の培地を用いることにより、ハイブリッド細胞株のパネルが確立され得る。パネル中の各細胞株は、１つのヒト染色体または小数のヒト染色体のいずれか、および完全なセットのマウス染色体を含み、個々の遺伝子を特定のヒト染色体に容易にマッピングすることを可能にする（Ｄ’Ｅｕｓｔａｃｈｉｏら（１９８３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２０：９１９−９２４）。ヒト染色体のフラグメントのみを含む体細胞ハイブリッドもまた、転座および欠失をもつヒト染色体を用いることにより生成され得る。
【０１６５】
体細胞ハイブリッドのＰＣＲマッピングは、特定の配列を特定の染色体に割り当てる迅速な手法である。１つのサーマルサイクラーを用いて１日あたり３つ以上の配列が割り当てられ得る。オリゴヌクレオチドプライマーを設計するためにＢＬＡＡ配列を用い、特定染色体からのフラグメントのパネルとともにサブ局在化が達成され得る。
【０１６６】
中期染色体展着へのＤＮＡ配列の蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）をさらに用い、１ステップで正確な染色体位置を提供し得る。染色体展着は、有糸分裂紡錘体を破壊するコルセミドのような化学薬品によりその分裂が中期でブロックされる細胞を用いることにより作成され得る。染色体はトリプシンで簡単に処理され、次いでＧｉｅｍｓａで染色され得る。明暗バンドのパターンが各染色体上で現われ、その結果染色体が個々に識別され得る。このＦＩＳＨ技法は、５００または６００塩基ほどの短さのＤＮＡ配列とともに用いられ得る。しかし、１，０００塩基より大きいクローンは、単一検出のために十分なシグナル強度で特有の染色体位置に結合するより高い可能性を有する。好ましくは、１，０００塩基、そしてより好ましくは、２，０００塩基が、合理的な長さの時間で良好な結果を得るに十分である。この技法の総説には、Ｖｅｒｍａら、ＨＵＭＡＮ  ＣＨＲＯＭＯＳＯＭＥＳ：Ａ  ＭＡＮＵＡＬ  ＯＦ  ＢＡＳＩＣ  ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ（Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８８を参照のこと。
【０１６７】
染色体マッピングのための試薬を用い、単一染色体、またはその染色体上の単一部位を個々に特徴付け得るか、または試薬のパネルを用いて、複数部位および／または複数染色体を特徴付け得る。遺伝子の非コード領域に対応する試薬は、実際にマッピング目的に好適である。コード領域は、遺伝子ファミリー内で保存される傾向がより高く、染色体マッピングの間に交差ハイブリダイゼーションの機会を増加する。
【０１６８】
一旦、配列が正確な染色体位置にマップされると、この染色体上の配列の物理的位置が、遺伝子マップデータと関連付けられ得る。このようなデータは、例えば、Ｊｏｈｎｓ  Ｈｏｐｋｉｎｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｗｅｌｃｈ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙによりオンラインで利用可能な、ＭｃＫｕｓｉｃｋ、ＭＥＮＤＥＬＩＡＮ  ＩＮＨＥＲＩＴＡＮＣＥ  ＩＮ  ＭＡＮに見出される。次いで、同じ染色体領域にマップされた遺伝子と疾患との間の関係は、例えば、Ｅｇｅｌａｎｄら（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ  ３２５：７８３〜７８７に記載の連鎖分析（物理的に隣接する遺伝子の同時遺伝）により同定され得る。
【０１６９】
さらに、このＢＬＡＡ遺伝子に関連する疾患に影響され、および影響されない個体間のＤＮＡ配列における差異が決定され得る。変異が、任意の影響されない個体では観察されず、影響された個体のいくつかまたはすべてで観察される場合、この変異は、特定の疾患の原因因子である可能性が高い。影響され個体および影響されない個体の比較は、一般に、染色体展着から見えるか、またはそのＤＮＡ配列に基づくＰＣＲを用いて検出可能である欠失または転座のような、染色体における構造的改変を捜すことを最初に含む。最終的には、いくつかの個体からの遺伝子の完全配列決定が、変異の存在を確認するため、および多形から変異を区別するために実施され得る。
【０１７０】
（組織型決定）
本発明のＢＬＡＡ配列はまた、微小な生物学的試料から個体を同定するために用いられ得る。この技法では、個体のゲノムＤＮＡを１つ以上の制限酵素で消化し、そしてサザンブロット上でプローブして同定のための特有のバンドを生じる。本発明の配列は、ＲＦＬＰ（米国特許第５，２７２，０５７号に記載の「制限フラグメント長多形」）のためのさらなるＤＮＡマーカーとして有用である。
【０１７１】
さらに、本発明の配列を用い、個体のゲノムの選択された部分の実際の塩基毎のＤＮＡ配列を決定する代替の技法を提供し得る。従って、本明細書に記載のＢＬＡＡ配列は、これら配列の５’配列および３’配列末端から２つのＰＣＲプライマーを調製するために用いられ得る。次いで、これらのプライマーを用いて個々のＤＮＡを増幅し、そして次いでそれを配列決定する。
【０１７２】
このように調製された個体からの対応するＤＮＡ配列のパネルは、特有の個体の識別を提供し得る。なぜなら、各個体は、対立遺伝子の差異に起因してこのようなＤＮＡ配列の特有のセットを有するからである。本発明の配列は、個体および組織からこのような識別配列を得るために用いられ得る。本発明のＢＬＡＡ配列は、ヒトゲノムの部分を独特に表す。これら配列のコード領域では、ある程度の対立遺伝子の変動があり、そして非コード領域ではより大きな程度の変動がある。個々のヒト間の対立遺伝子の変動は、各５００塩基あたり約１つの頻度で生じると推定される。対立遺伝子の変動の多くは、単一ヌクレオチド多形（ＳＮＰ）に起因し、これは、制限フラグメント長多形（ＲＦＬＰ）を含む。
【０１７３】
本明細書に記載の配列の各々は、ある程度まで、これに対して個体からのＤＮＡが識別目的のために比較され得る標準として用いられ得る。非コード領域ではより多くの数の多形が生じるので、個体を鑑別するためにより少ない配列が必要である。配列番号１、配列番号３、および配列番号５（それぞれ、配列番号８、１０、よび１２）の非コード配列は、各々が１００塩基の非コード増幅配列を生じるおそらく１０〜１，０００プライマーのパネルでポジティブな個体識別を安楽に提供し得る。配列番号１、３、５、７、９、および１１におけるような、予測されるコード配列が用いられるとき、個体のポジティブな識別のためのプライマーのより適切な数は、５００〜２０００であり得る。
【０１７４】
（予測医学）
本発明はまた予測医学の分野に関し、ここでは、診断アッセイ、予後アッセイ、薬物ゲノミクス、およびモニタリング臨床試験が、予後（予測）目的のために用いられ、それによって個体を予防的に処置する。従って、本発明の１つの局面は、生物学的試料（例えば、血液、血清、細胞組織）に関し、ＢＬＡＡポリペプチドおよび／または核酸発現ならびにＢＬＡＡ活性を決定するための診断アッセイに関し、それによって、個体が疾患または障害に罹患しているか、異常ＢＬＡＡ発現または活性に関連する障害を発症するリスクにあるか否かを決定する。本発明はまた、個体がＢＬＡＡポリペプチドまたは核酸発現または活性と関連する障害を発症するリスクにあるか否かを決定するための予後（または予測）アッセイを提供する。例えば、ＢＬＡＡ遺伝子中の変異が、生物学的試料中でアッセイされ得る。このようなアッセイは、予後または予測目的のために用いられることができ、それによってＢＬＡＡポリペプチドまたは核酸発現または活性によって特徴付けられるか、またはそれらにともなう障害の発症前に個体を予防的に処置する。
【０１７５】
本発明の別の局面は、個体におけるＢＬＡＡポリペプチドまたは核酸発現またはＢＬＡＡ活性を決定するための方法を提供し、それによってその個体のための適切な治療薬剤または予防薬剤を選択する（本明細書では「薬物ゲノミクス（ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ）」という）。薬物ゲノミクスは、個体の遺伝子型（例えば、個体の特定の薬剤に応答する能力を決定するために調べられた遺伝子型）に基づき個体の治療的または予防的処置のための薬剤（例えば薬物）の選択を可能にする。
【０１７６】
本発明のなお別の局面は、臨床試験において、ＢＬＡＡの発現または活性に対する薬剤（例えば、薬物、化合物）の影響をモニタリングすることに関する。
【０１７７】
これらおよびその他の薬剤は、以下のセクションでより詳細に記載される。
【０１７８】
（診断アッセイ）
生物学的サンプルにおいてＢＬＡＡの存在または非存在を検出するための例示的方法は、試験被験体から生物学的サンプルを入手する工程、およびその生物学的サンプルに、ＢＬＡＡポリペプチドまたはＢＬＡＡをコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）を検出し得る化合物または因子を接触させて、ＢＬＡＡの存在を生物学的サンプルにおいて検出する工程を包含する。ＢＬＡＡ  ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡを検出するための因子は、ＢＬＡＡ  ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡにハイブリダイズし得る標識された核酸プローブである。例えば、その核酸プローブは、全長ＢＬＡＡ核酸（例えば、配列番号１、３、５、７、８、９、１０、１１、または１２の核酸、あるいはその一部）（例えば、少なくとも１５、３０、５０、１００、２５０または５００ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチド）であり得、そしてＢＬＡＡ  ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡに対してストリンジェントな条件下で特異的にハイブリダイズするに十分である。本発明の診断アッセイにおける使用のための他の適切なプローブは、本明細書において記載されている。
【０１７９】
ＢＬＡＡポリペプチドを検出するための因子は、ＢＬＡＡタンパク質に結合し得る抗体であり、好ましくは検出可能な標識を有する抗体である。抗体は、ポリクローナルであり得、またはより好ましくはモノクローナル抗体であり得る。インタクトな抗体、またはそのフラグメント（例えば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２）が使用され得る。用語「標識された」とは、プローブまたは抗体に関して、検出可能な物質をそのプローブまたは抗体に結合することによってそのプローブまたは抗体を直接標識する工程（すなわち、物理的結合）、ならびに直接標識されている別の試薬との反応性によりそのプローブまたは抗体の間接的に標識する工程を包含することを意図する。間接的な標識の例としては、蛍光標識された二次抗体を用いた一次抗体の検出、およびＤＮＡプローブが蛍光標識されたストレプトアビジンを用いて検出され得るようにビオチンを用いたＤＮＡプローブの末端標識が挙げられる。用語「生物学的サンプル」とは、被検体から単離された、組織、細胞および生物学的流体、ならびに被検体に存在する組織、細胞および流体を包含することを意図する。すなわち、本発明の検出方法を用いて、インビトロおよびインビボで生物学的サンプル中のＢＬＡＡ  ｍＲＮＡ、ポリペプチドまたはゲノムＤＮＡを検出し得る。例えば、ＢＬＡＡ  ｍＲＮＡの検出のためのインビトロ技術には、ノーザンハイブリダイゼーションおよびインサイチュハイブリダイゼーションが含まれる。ＢＬＡＡポリペプチドの検出のためのインビトロ技術は、酵素結合免疫ソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット、免疫沈降および免疫蛍光が含まれる。ＢＬＡＡゲノムＤＮＡの検出のためのインビトロ技術には、サザンハイブリダイゼーションが含まれる。さらに、ＢＬＡＡタンパク質の検出のためのインビボ技術には、被検体に標識された抗ＢＬＡＡ抗体を導入することが挙げられる。例えば、その抗体は、放射性マーカーで標識され得、被検体におけるその存在および位置は、標準的な造影技術によって検出され得る。
【０１８０】
１つの実施形態において、その生物学的サンプルは、試験被検体からのタンパク質分子を含む。あるいは、その生物学的サンプルは、試験被検体からのｍＲＮＡ分子または試験被検体からのゲノムＤＮＡ分子を含み得る。好ましい生物学的サンプルは、被検体から従来の手段によって単離された末梢血白血球サンプルである。
【０１８１】
別の実施形態において、その方法は、コントロール被検体からコントロール生物学的サンプルを入手する工程、そのコントロールサンプルにＢＬＡＡポリペプチド、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡを検出し得る化合物または因子を接触させて、ＢＬＡＡポリペプチド、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの存在がその生物学的サンプルにおいて検出される工程、およびその試験サンプルにおいてＢＬＡＡポリペプチド、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの存在と、そのコントロールにおけるＢＬＡＡポリペプチド、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの存在とを比較する工程をさらに包含する。
【０１８２】
本発明はまた、生物学的サンプルにおいてＢＬＡＡの存在を検出するためのキットを包含する。例えば、そのキットは以下を包含し得る：生物学的サンプルにおいてＢＬＡＡポリペプチドもしくはｍＲＮＡを検出し得る、標識された化合物または因子；そのサンプルにおいてＢＬＡＡの量を決定するための手段；および標準とそのサンプルにおけるＢＬＡＡの量を比較するための手段。その化合物または因子は、適切な容器中に包装され得る。そのキットは、ＢＬＡＡポリペプチドまたは核酸を検出するためのキットを用いるための指示書をさらに含み得る。
【０１８３】
（予後アッセイ）
本明細書において記載される診断方法は、異常なＢＬＡＡ発現または活性に関連する疾患または障害を有するかまたはそれを発症する危険がある被検体を同定するためにさらに利用され得る。例えば、本明細書に記載されるアッセイ（例えば、その前の診断アッセイまたはその後のアッセイ）は、ＢＬＡＡポリペプチドまたは核酸発現に関連する免疫応答関連障害（例えば、癌、感染疾患、、自己免疫障害、および移植に関連する合併症）を有するかまたはそれを発症する危険のある被検体を同定するために利用され得る。あるいは、予後アッセイは、疾患または障害を有するかまたはそれを発症する危険のある被検体を同定するために利用され得る。従って、本発明は、異常なＢＬＡＡ発現または活性に関連する疾患または障害を同定するための方法を提供する。この方法において、試験サンプルが被検体から入手され、そしてＢＬＡＡポリペプチドまたは核酸（例えば、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）が検出され、ここで、ＢＬＡＡポリペプチドまたは核酸の存在は、異常なＢＬＡＡ発現または活性に関連する疾患または障害を有するかまたはそれを発症する危険のある被検体についての診断指標である。本明細書において使用されるように「試験サンプル」は、目的の被検体から得られた生物学的サンプルをいう。例えば、試験サンプルは、生物学的流体（例えば、血清）、細胞サンプルまたは組織であり得る。
【０１８４】
さらに、本明細書において記載される予後アッセイを用いて、被検体に、因子（例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、ペプチド模倣物、タンパク質、ペプチド、核酸、低分子または他の薬物候補物）を、異常なＢＬＡＡ発現または活性に関連する疾患または障害を処置するために投与し得るかどうかを判定し得る。例えば、そのような方法を使用して、障害（例えば、癌、感染疾患、自己免疫障害および移植に関連する合併症）についての因子で被検体が有効に処置され得るかどうかを判定し得る。従って、本発明は、異常なＢＬＡＡ発現または活性に関連する障害について被検体が因子を用いて有効に処置され得るかどうかを決定するための方法を提供する。ここでは、試験サンプルが入手され、そしてＢＬＡＡポリペプチドまたは核酸が検出される（例えば、ＢＬＡＡポリペプチドまたは核酸は、その因子が投与され得る被検体にとって、異常なＢＬＡＡ発現または活性に関連する障害を処置することについての指標である）。
【０１８５】
本発明の方法はまた、ＢＬＡＡ遺伝子において遺伝子損傷を検出し、それにより、損傷を受けた遺伝子を有する被検体が、異常細胞増殖および／または分化によって特徴づけられる障害について危険にあるかどうかを判定するために使用され得る。種々の実施形態において、この方法は、その被検体からの細胞のサンプルにおいて、ＢＬＡＡポリペプチドをコードする遺伝子の統合性に影響を与える変更の少なくとも１つによって、またはそのＢＬＡＡ遺伝子の誤発現によって特徴づけられる遺伝子損傷の存在または比存在を検出する工程を包含する。例えば、そのような遺伝子損傷は、以下のうち少なくとも１つの存在を確認することによって検出され得る：（１）ＢＬＡＡ遺伝子からの１つ以上のヌクレオチドの欠失；（２）ＢＬＡＡ遺伝子に対して１つ以上のヌクレオチドの付加；（３）ＢＬＡＡ遺伝子の１つ以上のヌクレオチドの置換；（４）ＢＬＡＡ遺伝子の染色体再配置；（５）ＢＬＡＡ遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写物のレベルにおける変更；（６）ゲノムＤＮＡのメチル化パターンのような、ＢＬＡＡ遺伝子の異常な改変；（７）ＢＬＡＡ遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写物の非野生型スプライスパターンの存在；（８）ＢＬＡＡポリペプチドの非野生型レベル；（９）ＢＬＡＡ遺伝子の対立遺伝子の欠失；ならびに（１０）ＢＬＡＡポリペプチドの不適切な翻訳後修飾。本明細書において記載されるように、ＢＬＡＡ遺伝子において損傷を検出するために使用され得る、当該分野において公知の多数のアッセイ技術が存在する。好ましい生物学的サンプルは、被検体から従来の手段によって単離された末梢血白血球サンプルである。しかし、核を除いた細胞を含む任意の生物学的サンプル（例えば、頬粘膜細胞を含む）が使用され得る。
【０１８６】
特定の実施形態において、損傷の検出は、以下を包含する：ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）におけるプローブ／プライマーの使用（例えば、米国特許第４，６８３，１９５号および同第４，６８３，２０２号を参照のこと）（例えば、アンカーＰＣＲまたはＲＡＣＥ  ＰＣＲ、あるいは連結連鎖反応（ＬＣＲ）（例えば、Ｌａｎｄｅｇｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４１：１０７７−１０８０；およびＮａｋａｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）ＰＮＡＳ  ９１：３６０−３６４を参照のこと）（このうちの後者は、ＢＬＡＡ遺伝子における点変異を検出するために特に有用であり得る（Ａｂｒａｖａｙａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２３：６７５−６８２を参照のこと））。この方法は、以下を包含する：患者から細胞のサンプルを収集する工程、そのサンプルのその細胞から核酸（例えば、ゲノム、ｍＲＮＡまたはその両方）を単離する工程、その核酸サンプルに、（存在する場合）ＢＬＡＡ遺伝子のハイブリダイゼーションおよび増幅が生じるような条件下でＢＬＡＡ遺伝子に特異的にハイブリダイズする１つ以上のプライマーを接触させる工程、ならびに増幅産物の存在または非存在を検出する工程、または増幅産物のサイズを検出する工程およびコントロールサンプルに対してその長さを比較する工程。ＰＣＲおよび／またはＬＣＲが、本明細書において記載される変異を検出するために使用される技術のいずれかと組み合わせて予備的な増殖工程として使用することが所望され得ることが予期される。
【０１８７】
代替的な増幅方法としては以下が挙げられる：自己維持配列複製（ｓｅｌｆ  ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）（Ｇｕａｔｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８７：１８７４−１８７８）、転写増幅系（Ｋｗｏｈ，ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８６：１１７３−１１７７）、Ｑ−βレプリカーゼ（Ｌｉｚａｒｄｉ  ｅｔ  ａｌ，１９８８，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１１９７）、または他の任意の核酸増幅法、続いて、当業者に周知の技術用いた増幅産物の検出。これらの検出スキームは、そのような分子が非常に少数で存在する場合、核酸分子の検出について特に有用である。
【０１８８】
代替の実施形態において、サンプル細胞からＢＬＡＡ遺伝子における変異は、制限酵素切断パターンにおける変化によって同定され得る。例えば、サンプルおよびコントロールのＤＮＡが単離され、増幅（必要に応じて）され、１つ以上の制限エンドヌクレアーゼを用いて消化され、そしてフラグメント長サイズがゲル電気泳動によって決定され、そして比較される。サンプルＤＮＡとコントロールＤＮＡとの間のフラグメント長サイズにおける相違は、サンプルＤＮＡにおける変異を示す。さらに、配列特異的なリボザイム（例えば、米国特許第５，４９３，５３１号を参照のこと）は、リボザイム切断部位の発生または欠失による特定の変異の存在についてスコア付けするために使用され得る。
【０１８９】
他の実施形態において、ＢＬＡＡにおける遺伝子変異は、サンプルおよびコントロールの核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を、数百または数千のオリゴヌクレオチドプローブを含む高密度アレイに対してハイブリダイズさせることによって同定され得る（Ｃｒｏｎｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｈｕｍａｎ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  ７：２４４−２５５；Ｋｏｚａｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２：７５３−７５９）。例えば、ＢＬＡＡにおける遺伝子変異は、Ｃｒｏｎｉｎ  ｅｔ  ａｌ．前出において記載されるような光生成ＤＮＡプローブを含む二次元アレイにおいて同定され得る。手短には、プローブの第一のハイブリダイゼーションアレイを用いて、サンプルおよびコントロールにおいて長いストレッチのＤＮＡにわたり走査して、連続して重複するプローブの線形アレイを作製することによって配列の間の塩基変異を同定し得る。この工程に続き、検出された全ての改変体または変異体に対して相補的な、より小さな特異化されたプローブアレイを用いることにより特定の変異の特徴付けを可能にする第二のハイブリダイゼーションアレイを行う。各々の変異アレイは、並行プローブセットから構成され、そのうち一方は野生型遺伝子に対して相補的であり、そして他方は変異体遺伝子に対して相補的である。
【０１９０】
なお別の実施形態において、当該分野において公知の任意の種々の配列決定反応を使用して、ＢＬＡＡ遺伝子を直接配列決定し得、そしてサンプルＢＬＡＡの配列と対応する野生型（コントロール）配列とを比較することによって変異を検出し得る。配列決定反応の例としては、Ｍａｘｉｍ  ａｎｄ  Ｇｉｌｂｅｒｔ（１９７７）ＰＮＡＳ  ７４：５６０またはＳａｎｇｅｒ（１９７７）ＰＮＡＳ  ７４：５４６３によって開発された技術に基づくものが挙げられる。種々の自己配列決定手順のいずれかが、診断アッセイを行う際には利用することができることもまた企図される（Ｎａｅｖｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １９：４４８）（これには、質量分析による配列分析が含まれる（例えば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９４／１６１０１号；Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ａｄｖ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  ３６：１２７−１６２；およびＧｒｉｆｆｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ａｐｐｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ３８：１４７−１５９を参照のこと））。
【０１９１】
ＢＬＡＡ遺伝子における変異を検出するための他の方法は、切断因子からの保護がＲＮＡ／ＲＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡの異種二重鎖におけるミスマッチ塩基を検出するために用いられる方法（Ｍｙｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３０：１２４２）を包含する。一般に、当該分野における技術「ミスマッチ切断」は、組織サンプルから得られた可能な変異体ＲＮＡまたはＤＮＡを有する野生型ＢＬＡＡ配列と（標識された）ＲＮＡまたはＤＮＡとをハイブリダイズさせることによって形成される異種二重鎖を提供することによって開始する。二本鎖二重鎖を、コントロール鎖とサンプル鎖との間の塩基対ミスマッチに起因して存在するような二重鎖の一本鎖領域を切断する因子を用いて処理される。例えば、ミスマッチ領域を酵素的に消化することについて、ＲＮＡ／ＤＮＡ二重鎖は、ＲＮアーゼで処理され得、そしてＤＮＡ／ＤＮＡハイブリッドは、Ｓ１ヌクレアーゼで処理され得る。他の実施形態において、ＤＮＡ／ＤＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡのいずれかのハイブリッドは、ミスマッチ領域を消化するために、ヒドロキシルアミンまたは四酸化オスミウムで、およびピペリジンで処理され得る。次いで、ミスマッチ領域の消化後、変性ポリアクリルゲルの上で、得られた物質をサイズにより分離して変異の部位を決定する。例えば以下を参照のこと：Ｃｏｔｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ（１９８８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８５：４３９７；Ｓａｌｅｅｂａ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２１７：２８６−２９５。１つの実施形態において、そのコントロールＤＮＡまたはＲＮＡは、検出のために標識され得る。
【０１９２】
なお別の実施形態において、ミスマッチは、そのミスマッチ切断反応は、細胞のサンプルから入手されたＢＬＡＡ  ｃＤＮＡにおける点変異を検出およびマッピングするための所定の系において二本鎖ＤＮＡにおけるミスマッチの塩基対を認識する１つ以上のタンパク質（いわゆる「ＤＮＡミスマッチ修復」酵素）を使用する。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉのｍｕｔＹ酵素は、Ｇ／ＡミスマッチでＡを切断し、ＨｅＬａ細胞からのチミジンＤＮＡグリコシラーゼは、Ｇ／ＴミスマッチでＴを切断する（Ｈｓｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｃａｒｃｉｉｉｏｇｅｔｉｅｓｉｓ  １５：１６５７−１６６２）。例示的な実施形態に従って、ＢＬＡＡ配列に基づくプローブ（例えば、野生型ＢＬＡＡ配列）は、試験細胞からのｃＤＮＡまたは他のＤＮＡにハイブリダイズする。この二重鎖は、ＤＮＡミスマッチ修復酵素で処理され、そして切断産物は、存在する場合、電気泳動プロトコルなどから検出され得る。例えば、以下を参照のこと：米国特許第５，４５９，０３９号。
【０１９３】
他の実施形態において、電気泳動移動度における変更を使用して、ＢＬＡＡ遺伝子における変異を同定する。例えば、一本鎖コンフォメーション多型（ＳＳＣＰ）を使用して、変異体核酸と野性型核酸との間の電気泳動移動度における相違を検出し得る（Ｏｒｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ：８６：２７６６，ｓｅｅ  ａｌｓｏ  Ｃｏｔｔｏｎ（１９９３）Ｍｕｔａｔ  Ｒｅｓ  ２８５：１２５−１４４；Ｈａｙａｓｈｉ（１９９２）Ｇｅｎｅｔ  Ａｎａｌ  Ｔｅｃｈ  Ａｐｐｌ  ９：７３−７９）。サンプルおよびコントロールＢＬＡＡ核酸の一本鎖ＤＮＡフラグメントが変性され、そして再生させられる。一本鎖核酸の二次構造は、配列に従って変動し、電気泳動移動度における得られた変更は、一個の塩基変異でさえ検出することを可能にする。このＤＮＡフラグメントは、標識されたプローブを用いて標識および検出され得る。そのアッセイの感度は、ＲＮＡ（ＤＮＡではなく）を用いて増強され得る。ここで、この二次構造は、配列における変化により感受性である。１つの実施形態において、この方法は、電気泳動移動度における変化に基づいて、二本鎖異種二重鎖分子を分離するために異種二重鎖分析を利用する（Ｋｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ  ７：５）。
【０１９４】
さらに別の実施形態において、変性剤の勾配を含むポリアクリルアミドゲルにおける変異体または野生型フラグメントの移動は、変性勾配ゲル電気泳動（ＤＧＧＥ）を用いてアッセイされる（Ｍｙｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１３：４９５）。ＤＧＧＥが分析方法として用いられる場合、ＤＮＡは、それが完全に変性しないことを確実にするように改変される（例えば、ＰＣＲによって約４０ｂｐの高融点ＧＣリッチＤＮＡのＧＣクランプを付加することによる）。さらなる実施形態において、温度勾配を、変性勾配の代わりに用いて、コントロールＤＮＡおよびサンプルＤＮＡの移動度における相違を同定する（Ｒｏｓｅｎｂａｕｍ  ａｎｄ  Ｒｅｉｓｓｎｅｒ（１９８７）Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｃｈｅｍ  ２６５：１２７５３）。
【０１９５】
点変異を検出するための他の技術の例としては以下が挙げられるがそれらに限定されない：選択的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーション、選択的増幅または選択的プライマー伸長法。例えば、オリゴヌクレオチドプライマーが、調製され得る。ここでは、公知の変異が中心に配置され、次いで、パーフェクトマッチが見出される場合にのみハイブリダイゼーションを可能にする条件下で標的ＤＮＡにハイブリダイズされ得る（Ｓａｉｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２４：１６３；Ｓａｉｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８６：６２３０）。そのような対立遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドは、そのオリゴヌクレオチドがハイブリダイズする膜に付着し、そして標識された標的ＤＮＡとハイブリダイズしたときに、ＰＣＲ増幅された標的ＤＮＡまたは多数の異なる変異に対してハイブリダイズする。
【０１９６】
あるいは、選択的ＰＣＲ増幅に依存する対立遺伝子特異的増幅技術は、本発明と組み合わせて用いられ得る。特定の増幅のためにプライマーとして用いられるオリゴヌクレオチドは、その分子の中心に目的の変異を有し得る（その結果、増幅は、示差的ハイブリダイゼーションに依存する）（Ｇｉｂｂｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １７：２４３７−２４４８）か、または一方のプライマーの３’末端（ここでは、適切な条件下で、ミスマッチが妨害され得るかまたはポリメラーゼ伸長が妨害され得る）に目的の変異を有し得る（Ｐｒｏｓｓｎｅｒ（１９９３）Ｔｉｂｔｅｃｈ  １１：２３８）。さらに、変異の領域において新規制限部位を導入して切断ベース検出を行うことが所望され得る（Ｇａｓｐａｒｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ（１９９２）Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｂｅｓ  ６：１）。特定の実施形態において、増幅はまた、増幅のためにＴａｑリガーゼを用いて実施され得ることが予定される（Ｂａｒａｎｙ（１９９１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８：１８９）。そのような場合、連結は、パーフェクトマッチが５’配列の３’末端に存在する場合にのみ生じ、これにより、増幅も存在または非存在を検索することにより、特定の部位における公知の変異の存在を検出することが可能になる。
【０１９７】
本明細書において記載される方法は、例えば、本明細書に記載される、少なくとも１つのプローブ核酸または抗体試薬を備える予備包装された診断キットを利用することによって行われ得る。これは、例えば、ＢＬＡＡ遺伝子を含む疾患または病気の症状または家族歴を示す患者を診断するための臨床状況において簡便に使用され得る。
【０１９８】
さらに、ＢＬＡＡが発現する任意の細胞型または組織（好ましくは、末梢血白血球）が、本明細書において記載される予後アッセイにおいて利用され得る。しかし、核除去細胞を含む任意の生物学的サンプル（例えば、頬粘膜細胞）が使用され得る。
【０１９９】
（薬理ゲノム学）
本明細書に記載されるスクリーニングアッセイによって同定されるような、ＢＬＡＡ活性（例えば、ＢＬＡＡ遺伝子発現）に対して刺激または阻害の効果を有する因子またはモジュレーターを個体に投与して、異常ＢＬＡＡ活性に関連する障害（例えば、癌、感染疾患、自己免疫障害および移植に関連する合併症）を（予防的または治療的に）処置し得る。そのような処置に関連し、その個体の薬理ゲノム学（すなわち、個体の遺伝子型と、その個体の、外来化合物または薬物に対する応答との間の関連の研究）が考慮され得る。治療剤の代謝における相違によって、用量と薬理学的に活性な薬物の血液濃度との間の関係が変化することにより、重症毒性または治療の失敗を導き得る。従って、個体の薬理ゲノム学によって、個体の遺伝子型の考慮に基づいて、予防的または治療的な処置について有効な因子（例えば、薬物）を選択することが可能になる。そのような薬理ゲノム学は、適切な投薬量および治療レジメンを決定するためにさらに用いられ得る。従って、それによって、個体におけるＢＬＡＡポリペプチドの活性、ＢＬＡＡ核酸の発現、またはＢＬＡＡ遺伝子の変異含量が決定されて、それによって、その個体の医療または予防の処置のための適切な因子が選択され得る。
【０２００】
薬理ゲノム学は、罹患した患者における変更した薬物素因および異常作用に起因した薬物に対する応答において臨床的に有意な遺伝的変動を処理する。例えば、以下を参照のこと：Ｅｉｃｈｅｌｂａｕｍ，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ，１９９６，２３：９８３−９８５およびＬｉｎｄｅｒ，Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ，１９９７，４３：２５４−２６６。一般に、２つの型の薬理ゲノム学の条件が区別され得る：薬物が身体に作用する方法を変更する単一因子として遺伝する遺伝性条件（変化した薬物作用）または身体が薬物に対して作用する方法を変更する単一因子として遺伝する遺伝性条件（変化した薬物代謝）。これらの薬理ゲノム学条件は、希な欠陥としてまたは多型としてのいずれかで生じ得る。例えば、グルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ（Ｇ６ＰＤ）欠損は、酸化剤薬物（抗マラリア薬、スルホンアミド類、鎮痛剤、ニトロフラン類）およびソラマメの消費の後の、主要な臨床合併症が溶血である一般的な遺伝酵素障害である。
【０２０１】
例示的な実施形態として、薬物代謝酵素の活性は、薬物作用の強度および期間の両方の主要な決定因子である。薬物代謝酵素（例えば、Ｎアセチルトランスフェラーゼ２（ＮＡＴ２）およびシトクロムＰ４５０酵素ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９）の遺伝的多型の発見は、いくつかの患者が薬物の標準かつ安全な用量を摂取した後、期待された薬物効果が得られないか、または異常な薬物応答および重症毒性を示すことの説明となった。これらの多型は、集団において２つの表現型（広汎な代謝個体（ＥＭ）および貧弱な代謝個体（ＰＭ））で発現される。ＰＭの有病率は、異なる集団において異なる。例えば、ＣＹＰ２Ｄ６をコードする遺伝子は、高度の多型性であり、そしていくつかの変異がＰＭにおいて同定されており、これらは、すべて機能的ＣＹＰ２Ｄ６の非存在を生じる。ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９の貧弱な代謝個体は、それらが標準的な用量を受けるとき、異常な薬物応答および副作用を非常に頻繁に経験する。代謝体が活性治療部分である場合、ＰＭは治療応答を示さない。これは、そのＣＹＰ２Ｄ６形成される代謝モルヒネによって媒介されるコデインの鎮痛効果について実証されるとおりである。他の異常は、いわゆる超迅速代謝個体であり、これは、標準的な用量に応答しない。最近になって、超迅速代謝の分子ベースは、ＣＹＰ２Ｄ６遺伝子増幅に起因すると同定された。
【０２０２】
従って、個体における、ＢＬＡＡポリペプチドの活性、ＢＬＡＡ核酸の発現またはＢＬＡＡ遺伝子の変異体の含量を決定して、それによって、その個体の治療または予防的な処置について適切な因子を選択し得る。さらに、薬理遺伝学研究を使用して、個体の薬物応答表現型の正体に対して薬物代謝酵素をコードする多型対立遺伝子を遺伝子型決定することに適用し得る。この知見は、用量決定または薬物選択に適用する場合、本明細書において記載される例示的なスクリーニングアッセイの１つによって同定されるモジュレーターのような、ＢＬＡＡモジュレーターを用いて被検体を処置するときに、有害反応も治療の失敗も防ぎ得、治療または予防の効力を増強し得る。
【０２０３】
（臨床試験の間の効果のモニタリング）
ＢＬＡＡの発現または活性（例えば、異常細胞増殖および／または分化を調節する能力）に対する因子（例えば、薬物、化合物）の影響をモニターすることは、基礎的な薬物スクリーニングに適用され得るのみならず、臨床試験にもまた適用され得る。例えば、本明細書において記載されるスクリーニングアッセイによってＢＬＡＡ遺伝子発現、タンパク質レベルを増強するかまたはＢＬＡＡ活性を上方制御すると決定された因子の有効性は、ＢＬＡＡ遺伝子発現、タンパク質レベルが減少したかまたは下方制御されたＢＬＡＡ活性を示す被検体の臨床試験においてモニターされ得る。あるいは、スクリーニングアッセイによってＢＬＡＡ遺伝子発現、タンパク質レベルを減少するかまたはＢＬＡＡ活性を下方制御すると決定された因子の有効性は、ＢＬＡＡ遺伝子発現、タンパク質レベルが増加したかまたは上方制御されたＢＬＡＡ活性を示す被検体の臨床試験においてモニターされ得る。そのような臨床試験において、ＢＬＡＡ（そして好ましくは、例えば、免疫応答関連障害において相関づけられた他の遺伝子）の発現または活性は、特定の細胞の免疫応答の「読み出し」またはマーカーとして使用され得る。
【０２０４】
例えば、しかし限定ではないが、ＢＬＡＡ活性を調節する因子（例えば、化合物、薬物または低分子）（例えば、本明細書において記載されるスクリーニングアッセイにおいて同定される）で処置される細胞において調節される遺伝子（ＢＬＡＡを含む）が同定され得る。従って、例えば、臨床試験において細胞増強障害に対する因子の効果を研究するために、細胞が単離され得、そしてＲＮＡが調製され得、そしてＢＬＡＡおよびその障害に相関づけられた他の遺伝子の発現レベルについて分析され得る。遺伝子発現のレベル（すなわち、遺伝子発現パターン）は、本明細書に記載されるように、ノーザンブロット分析またはＲＴ−ＰＣＲによって定量され得るか、あるいは、本明細書において記載されるような方法の１つによって生成したタンパク質の量を測定することによって定量され得るか、またはＢＬＡＡまたは他の遺伝子の活性レベルを測定することによって定量され得る。このようにして、遺伝子発現パターンは、その因子のその細胞の生理学的応答の指標となるマーカーとして働き得る。従って、この応答状態は、その因子での個体の処置の前、およびその間の種々の点で決定され得る。
【０２０５】
１つの実施形態において、本発明は、因子（例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド模倣体、核酸、低分子または本明細書において記載されるスクリーニングアッセイにおいて同定される他の薬物候補）での被検体の処置の有効性をモニターするための方法を提供する。この方法は以下の工程を包含する：（ｉ）その因子の投与の前に被検体から投与前サンプルを入手する工程；（ｉｉ）予備投与サンプルにおいてＢＬＡＡポリペプチド、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの発現レベルを検出する工程；（ｉｉｉ）その被検体から１つ以上の投与後サンプルを入手する工程；（ｉｖ）ＢＬＡＡポリペプチドの発現または活性のレベルを検出する工程；（ｖ）投与後サンプル（単数または複数）におけるＢＬＡＡポリペプチド、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡと、投与前サンプルにおけるＢＬＡＡポリペプチド、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡの発現または活性のレベルを比較する工程；ならびに（ｖｉ）それに従ってその被検体に対してその因子の投与を変更する工程。例えば、その因子の投与の増加は、検出されたよりも高いレベルへとＢＬＡＡの発現または活性を増加させること、すなわち、その因子の有効性を増加させるために所望され得る。あるいは、その因子の投与の減少は、検出されるよりも低いレベルにＢＬＡＡの発現または活性を減少させる、すなわち、その因子の有効性を減少させるために所望され得る。
【０２０６】
（処置の方法）
本発明は、異常なＢＬＡＡ発現または活性に関連する障害の危険にある（または感受性である）あるいは障害を有する被検体を処置するための予防的方法および治療的方法の両方を提供する。
【０２０７】
（障害）
増加した（その疾患または障害を罹患していない被検体に対して）レベルまたは生物学的活性によって特徴づけられる疾患および障害が、活性と拮抗（すなわち、減少または阻害）する治療剤で処置され得る。活性と拮抗する治療剤は、治療または予防の様式で投与され得る。利用され得る治療剤としては以下が挙げられるがそれらに限定されない：（ｉ）上記のポリペプチド、そのアナログ、誘導体、フラグメントもしくはホモログ；（ｉｉ）上記のポリペプチドに対する抗体；（ｉｉｉ）上記のポリペプチドをコードする核酸；（ｉｖ）相同組換えによって上記ペプチドの内因性機能を「ノックアウト」するために利用される、アンチセンス核酸および「機能不全」（すなわち、上記のポリペプチドに対するコード配列のコード配列内の異種挿入に起因する）である核酸の投与（例えば、以下を参照のこと：Ｃａｐｅｃｃｈｉ，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１２８８−１２９２）；または（ｖ）上記ポリペプチドとその結合パートナーとの間の相互作用を変更するモジュレーター（すなわち、インヒビター、アゴニストおよびアンタゴニスト（本発明のさらなるポリペプチド模倣物および本発明のペプチドに特異的な抗体を含む）。
【０２０８】
減少した（疾患または障害に罹患しない被検体に比較して）レベルまたは生物学的活性によって特徴づけられる疾患および障害は、活性を増加する（すなわち、アゴニストである）治療剤で処置され得る。活性を上方制御する治療剤は、治療または予防の様式で投与され得る。利用され得る治療剤としては、以下が挙げられるがそれらに限定されない：上記ポリペプチド、またはそのアナログ、誘導体、フラグメントもしくはホモログ；あるいはバイオアベイラビリティーを増加させるアゴニスト。
【０２０９】
増加または減少したレベルは、ポリペプチドおよび／もしくはＲＮＡを定量すること、患者組織サンプル（例えば、生検組織）を入手すること、およびインビトロでＲＮＡまたはペプチドレベル、発現されたポリペプチド（または上記ポリペプチドのｍＲＮＡの）構造および／もしくはについてそれをアッセイすることによって容易に検出され得る。当該分野において周知の方法としては以下が挙げられるがそれらに限定されない：免疫アッセイ（例えば、ウェスタンブロット分析、免疫沈降に続きドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ポリアクリルアミドゲル電気泳動、免疫細胞化学など）および／またはｍＲＮＡの発現を検出するハイブリダイゼーションアッセイ（例えば、ノーザンアッセイ、ドットブロット、インサイチュハイブリダイゼーションなど）。
【０２１０】
（予防方法）
１つの局面において、本発明は、被検体において、異常なＢＬＡＡ発現または活性に関連する疾患または障害を予防するための方法を提供する。この方法は、その被検体に、ＢＬＡＡ発現または少なくとも１つのＢＬＡＡ活性を調節する因子を投与することによる。異常なＢＬＡＡ発現または活性によって生じるかまたはそれに帰される疾患の危険にある被検体は、例えば、本明細書において記載される診断または予後アッセイのいずれかまたはその組合せによって同定され得る。予防因子の投与は、ＢＬＡＡ異常に特徴的な症状の発症の前に行われ得、その結果、疾患または障害が予防され、あるいはその進行が遅延される。ＢＬＡＡ依存の型に依存して、例えば、ＢＬＡＡアゴニストまたはＢＬＡＡアンタゴニストの因子が、その被検体を処置するために使用され得る。適切な因子は、本明細書において記載されるスクリーニングアッセイに基づいて決定され得る。本発明の予防方法は、以下の亜節においてさらに考察される。
【０２１１】
（治療方法）
本発明の別の局面は、治療目的のためのＢＬＡＡ発現または活性を調節する方法に関する。本発明の調節方法は、その細胞に関連するＢＬＡＡポリペプチド活性の１つ以上の活性を調節する因子に細胞を接触させる工程を包含する。ＢＬＡＡポリペプチド活性を調節する因子は、本明細書に記載されるような因子であり得る（例えば、核酸またはタンパク質、ＢＬＡＡポリペプチドの天然に存在する同族リガンド、ペプチド、ＢＬＡＡペプチド模倣物あるいは他の低分子）。１つの実施形態において、その因子は、１つ以上のＢＬＡＡポリペプチド活性を刺激する。そのような刺激因子の例としては、活性ＢＬＡＡポリペプチドおよびその細胞に導入されたＢＬＡＡをコードする核酸分子が挙げられる。別の実施形態において、その因子は、１つ以上のＢＬＡＡポリペプチド活性を阻害する。そのような阻害因子の例としては、アンチセンスＢＬＡＡ核酸分子および抗ＢＬＡＡ抗体が挙げられる。これらの調節方法は、インビトロで実施され得る（例えば、その因子とともにその細胞を培養することによる）、あるいは、インビボで実施され得る（例えば、被検体にその因子を投与することによる）。よって、本発明は、ＢＬＡＡポリペプチドまたは核酸分子の異常な発現または活性によって特徴づけられる疾患または障害に罹患した個体を処置する方法を提供する。１つの実施形態において、この方法は、因子（例えば、本明細書において記載されるスクリーニングアッセイによって同定される因子）またはＢＬＡＡ発現または活性を調節する（例えば、上方制御または下方制御する）因子との組合せで投与する工程を包含する。別の実施形態において、この方法は、減少したかまたは異常なＢＬＡＡ発現または活性を補正するための治療として、ＢＬＡＡポリペプチドまたは核酸分子を投与する工程を包含する。
【０２１２】
ＢＬＡＡ活性の刺激は、異常に下方制御されるか、および／または増加したＢＬＡＡ活性が有益な効果を有するようである状況において所望される。１つのそのような状況の例は、被検体が異常な細胞増殖および／または分化（例えば、癌）によって特徴づけられる障害を有する場合である。そのような状況の別の例は、その被検体が免疫応答関連障害（例えば、自己免疫障害、感染疾患および移植に関連する合併症）を有する場合である。
【０２１３】
１つの実施形態において、本発明は、哺乳動物における病理学的状態を処置する方法を包含する。この方法は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を有するポリペプチドに対して少なくとも９５％同一であるポリペプチドまたはその生物学的に活性なフラグメントの治療量を投与する工程を包含する。代替の実施形態は、ＢＬＡＡポリペプチド、ならびにそのフラグメント、ホモログ、アナログおよび誘導体に選択的に結合する抗体を被検体に投与する工程を包含する。
【０２１４】
（治療剤の生物学的効果の決定）
本発明の種々の実施形態において、適切なインビトロまたはインビボアッセイは、特定の治療剤の効果およびその投与が罹患した組織の処置について適応されるかどうかを決定するために利用される。
【０２１５】
種々の特定の実施形態において、インビトロアッセイは、患者の疾患に関与する型の代表的な細胞を用いて行われて、その細胞型に対して所望の効果を措定の治療剤が発揮するかどうかを判定し得る。適切な動物モデル系（ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、ウサギなどを含むがそれらに限定されない）において、ヒト被検体における試験の前に、治療における使用のための化合物を試験し得る。同様に、インビボ試験のために、当該分野において公知の動物モデル系のいずれかがヒト被検体への投与の前に使用され得る。
【０２１６】
（悪性腫瘍）
上記のＢＬＡＡポリペプチドは、細胞増殖の調節に関与し得る。従って、本発明の治療剤は、細胞過剰増殖および／または細胞増殖の制御の欠失に関連する疾患または障害（例えば、癌、悪性腫瘍および腫瘍）の治療または予防的な処置において有用であり得る。そのような過剰増殖障害の概説について、例えば、以下を参照のこと：Ｆｉｓｈｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．，１９８５．ＭＥＤＩＣＩＮＥ，２ｎｄ  ｅｄ．，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ。
【０２１７】
本発明の治療剤は、悪性腫瘍および関連する障害を処置または予防するにおける効力を決定するための、当該分野において公知の任意の方法によりアッセイされ得る。そのようなアッセイとしては以下が挙げられるがそれらに限定されない：患者の腫瘍に由来する形質転換した細胞（単数または複数）を利用したインビトロアッセイ、および癌または悪性腫瘍の動物モデルを用いたインビボアッセイ。潜在的に有効な治療剤は、例えば、コントロールに比較して、培養物中の腫瘍由来または形質転換した細胞の増殖を阻害するかまたは動物モデルにおける腫瘍の退行を生じるものである。
【０２１８】
本発明の実施において、一旦悪性腫瘍または癌が活性を調節（すなわち、阻害、拮抗または活性化（アゴナイズ））することによる処置に受容可能であることが示されると、続いて癌または悪性腫瘍がポリペプチド機能を調節するように働く治療剤の投与によって処置または予防され得る。
【０２１９】
（臓器移植に関連する疾患）
ＢＬＡＡは、臓器移植に関連する障害（特に、臓器拒絶であるがそれに限定されない）と相関づけられている。本発明の治療剤（特に、活性を調節（または供給）するもの）は、臓器移植に関連する疾患または障害を処置または予防するにおいて有効であり得る。本発明の治療剤（特に、上記タンパク質のレベルまたは活性を調節する治療剤）は、臓器移植に関連するそのような疾患および障害を処置または予防するにおける効力についての、当該分野において公知の任意の方法によりアッセイされ得る。そのようなアッセイとしては、以下に記載される細胞培養モデルを用いるためのインビトロアッセイ、または臓器移植に関連した疾患および障害の動物モデルを用いたインビボアッセイ（例えば、以下に記載されるもの）が挙げられる。例えば、潜在的に有効な治療剤は限定する目的ではなく、コントロールに比較して動物モデルにおける免疫拒絶応答を減少させる。
【０２２０】
従って、一旦臓器移植に関連する疾患および障害が、活性の調節による処置に受容可能であることが示されると、そのような疾患または障害は、活性を調節する治療剤の投与によって処置または予防され得る。
【０２２１】
（Ｔリンパ球増殖および活性化細胞増殖／分化活性）
本発明において開示されたＢＬＡＡポリペプチドは、新たなＢ７ファミリーメンバーである。Ｂ７ファミリーメンバー（例えば、Ｂ７−１およびＢ７−２）は、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、そして活性化Ｔリンパ球に結合し、そして活性化よりもＴリンパ球細胞増殖について調節シグナルを提供する。
【０２２２】
（免疫刺激または抑制活性）
本発明のＢＬＡＡポリペプチドはまた、免疫刺激または免疫抑制の活性を示し得る。これには、限定ではないが、そのアッセイが本明細書において記載される活性が含まれる。タンパク質は、種々の免疫不全および障害（重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）を含む）の処置において有用であり得る（例えば、Ｔリンパ球および／またはＢリンパ球の増殖および増殖を（上方または下方）調節するにおいて、ならびにＮＫ細胞および他の細胞集団の細胞溶解活性を行うことにおいて）。これらの免疫不全は、遺伝性であり得るか、あるいはウイルス（例えば、ＨＩＶ）および細菌または真菌の感染によって生じ得るか、あるいは自己免疫疾患から生じ得る。より特定すると、ウイルス、細菌、真菌または他の感染によって生じる感染疾患は、本発明のポリペプチドを用いて処置可能であり得、これには、ＨＩＶ、肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、ミコバクテリア、リーシュマニア種、マラリア種および種々の真菌感染（例えば、カンジダ症）による感染が含まれる。当然、この点に関して、本発明のポリペプチドはまた、免疫系が概して所望され得る場合（すなわち、癌の処置において）有用であり得る。
【０２２３】
本発明のポリペプチドを用いて処置され得る自己免疫疾患は、例えば、結合組織疾患、多発性硬化症、全身エリテマトーデス、慢性関節リウマチ、自己免疫肺炎症、ギランバール症候群、自己免疫甲状腺炎、インスリン依存性糖尿病、重症筋無力症、宿主対移植片疾患および自己免疫炎症癌疾患を包含する。本発明のそのようなポリペプチドはまた、喘息（特にアレルギー性喘息）または他の呼吸器の問題のようなアレルギー性反応および状態の処置において有用であるはずであり得る。免疫抑制が所望される他の状態（例えば、臓器移植を含む）もまた、本発明のポリペプチドを用いて処置可能であり得る。
【０２２４】
本発明のポリペプチドを用いて多数の方法において免疫応答を調節する。下方制御は、すでに免疫応答を阻害もしくはブロックする形態であり得、または免疫応答の誘導を予防することを包含し得る。活性化されたＴ細胞の機能は、Ｔ細胞応答を抑制することか、またはＴ細胞における特定の寛容を誘導することによって、あるいはそれらの両方によって阻害され得る。Ｔ細胞反応の免疫抑制は、概して、活性で、非抗原特異的なプロセスであって、抑制剤に対してＴ細胞の連続的な暴露を必要とするプロセスである。Ｔ細胞における非応答またはエネルギーを誘導することを包含する寛容は、それが概して抗原特異的であり、そして寛容化因子への暴露が停止された後にも維持されるという点において免疫抑制とは識別され得る。機能的には、寛容は、寛容化因子の非存在下で特定の抗原に対して再暴露することに際しＴ細胞応答の欠如によって実証され得る。
【０２２５】
１つ以上の抗原機能（制限なしに、Ｂリンパ球抗原機能（例えば、Ｂ７など））を下方制御することまたは予防すること（例えば、活性化されたＴ細胞によって高レベルのリンホカイン合成を妨害すること）は、組織、皮膚および臓器移植ならびに宿主対移植片疾患（ＧＶＨＤ）の状況において有用である。例えば、Ｔ細胞機能の遮断は、組織移植における減少した組織破壊を生じるはずである。代表的には、組織移植において、移植片の拒絶は、それがＴ細胞によって外来と認識されることによって始まり、続いて、その移植片を破壊する免疫反応が生じる。Ｂ７リンパ球抗原と免疫細胞上のその天然のリガンドとの相互作用を阻害またはブロックする分子（例えば、可溶性で単量体形態の、Ｂ７−２活性を有するペプチド単独、または別のＢリンパ球抗原（例えば、Ｂ７−１、Ｂ７−３）の活性を有する、単量体形態のペプチドまたはブロック抗体との組合せで）の、移植前の投与は、対応する同時刺激シグナルを伝達することなしに、免疫細胞に対する天然のリガンドの分子の結合を生じ得る。この問題においてＢリンパ球抗原機能をブロックすることは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）によるサイトカイン合成を妨害し、そして従って、免疫抑制因子として作用する。さらに、同時刺激の欠如はまた、Ｔ細胞の活性化に十分であり得、それにより、被検体における寛容を誘導し得る。Ｂリンパ球抗原ブロック試薬による長期の寛容の誘導は、これらのブロック試薬の反復投与の必要性を回避し得る。被検体における十分な免疫抑制または寛容を達成するために、Ｂリンパ球抗原の機能をブロックすることもまた必要であり得る。
【０２２６】
臓器移植拒絶またはＧＶＤＨを予防するにおける特定のブロック試薬の効力は、ヒトにおける効力を予測する動物モデルを用いて評価され得る。使用され得る適切な系の例は、ラットにおける同種異系心臓移植片およびマウスにおける異種膵臓島細胞移植片を包含する。これらの両者は、以下に記載されるようなインビボでのＣＴＬＡ４Ｉｇ融合タンパク質の免疫抑制効果を試験するために使用されてきている：Ｌｅｎｓｃｈｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５７：７８９−７９２（１９９２）およびＴｕｒｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８９：１１１０２−１１１０５（１９９２）。さらに、ＧＶＤＨのマウスモデル（以下を参照のこと：Ｐａｕｌ  ｅｄ．ＦＵＮＤＡＭＥＮＴＡＬ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９，ｐｐ．８４６−８４７）を使用して、その疾患の発症におけるインビボでのＢリンパ球抗原機能の効果を決定し得る。
【０２２７】
抗原機能をブロックすることはまた、自己免疫疾患を処置するために治療上で有用であり得る。多くの自己免疫障害は、自己の組織に対して反応性であり、かつ、疾患の病理に関与するサイトカインおよび自己抗体の生成を促進するＴ細胞の不適切な活性化の結果である。自己反応性Ｔ細胞の活性化の予防は、疾患症状を減少または除去し得る。Ｂリンパ球抗原のレセプター：リガンドの相互作用を破壊することによってＴ細胞の同時刺激をブロックする試薬の投与は、Ｔ細胞活性化を阻害するために使用され得、そしてその疾患のプロセスに関与し得る自己抗体またはＴ細胞由来サイトカインの生成を予防するために使用され得る。さらに、ブロック試薬は、その疾患からの長期緩和を導き得る自己反応性Ｔ細胞の抗原特異的な寛容を誘導し得る。自己免疫障害を予防または軽減するにおけるブロック試薬の効力は、ヒト自己免疫疾患の多数の十分に特徴づけられた動物モデルを用いて判定され得る。例としては、マウス実験自己免疫脳炎、ＭＲＬ／ｌｐｒ／ｌｐｒマウスまたはＮＺＢハイブリッドマウスにおける全身エリテマトーデス、マウス自己免疫コラーゲン関節炎、ＮＯＤマウスおよびＢＢマウスにおける糖尿病、ならびにマウス実験重症筋無力症（以下を参照のこと：Ｐａｕｌ  ｅｄ．，ＦＵＮＤＡＭＥＮＴＡＬ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９，ｐｐ．８４０−８５６）。
【０２２８】
免疫応答を上方制御する手段としての、抗原機能（好ましくは、Ｂリンパ球抗原機能）の上方制御もまた、治療において有用であり得る。免疫応答の上方制御は、既存の免疫応答を増強するか、または初期免疫応答を惹起する形態であり得る。例えば、Ｂリンパ球抗原機能を刺激することにより免疫応答を惹起することは、ウイルス感染の場合において有用であり得る。さらに、全身ウイルス疾患（例えば、インフルエンザ、通常の風邪、および脳炎）は、Ｂリンパ球抗原の刺激形態の全身投与によって軽減され得る。
【０２２９】
あるいは、抗ウイルス免疫応答は、患者からＴ細胞を取り出すこと、本発明のペプチドを発現するか、本発明の可溶性ペプチドの刺激形態が一緒にあるかのいずれかのウイルス抗原パルス刺激されたＡＲＣを用いてインビトロでＴ細胞を同時刺激すること、およびその患者にインビトロで活性化されたＴ細胞を再導入することによって、感染した患者において増強され得る。抗ウイルス免疫応答を増強する別の方法は、患者から感染した細胞を単離すること、本明細書に記載されるような本発明のタンパク質をコードする核酸でそれらをトランスフェクトし、その結果その細胞がそのタンパク質のすべてまたは一部を細胞表面上に発現すること、およびトランスフェクトされた細胞をその患者に再導入することである。感染した細胞は、今度は、インビボでＴ細胞へ動じ刺激シグナルを送達し得、それゆえ活性化し得る。
【０２３０】
別の適用において、抗原機能（好ましくは、Ｂリンパ球抗原機能）の上方制御または増強は、腫瘍免疫の誘導において有用であり得る。本発明の少なくとも１つのペプチドをコードする核酸でトランスフェクトした腫瘍細胞（例えば、肉腫、黒色腫、リンパ腫、白血病、神経芽腫、癌腫）は、被検体における腫瘍特異的な寛容を克服するためにその被検体に投与され得る。所望の場合、腫瘍細胞は、ペプチドの組合せを発現するようにトランスフェクトされ得る。例えば、患者から得られた腫瘍細胞は、Ｂ７−２様活性単独を有するペプチド、またはＢ７−１様活性および／もしくはＢ７−３様活性を有するペプチドと組み合わせでの発現を指向する、発現ベクターでエキソビボでトランスフェクトされ得る。トランスフェクトされた腫瘍細胞は、患者に戻されて、トランスフェクトされた細胞の表面上にペプチドの発現を生じる。あるいは、遺伝子治療技術を用いて、インビボでトランスフェクションについて腫瘍細胞を標的化し得る。
【０２３１】
腫瘍細胞の表面上のＢリンパ球抗原の活性を有する本発明のペプチドの存在は、Ｔ細胞に対して必要な同時刺激を提供して、トランスフェクトされた腫瘍細胞に対してＴ細胞媒介免疫応答を誘導する。さらに、ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩの分子を欠如するか、またはＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩの分子の十分量を再発現しない腫瘍細胞は、ＭＨＣクラスＩα鎖タンパク質およびβ2ミクログロブリンタンパク質、もしくはＭＨＣクラスＩＩα鎖タンパク質およびＭＨＣクラスＩＩβ鎖タンパク質のすべてまたは一部（例えば、細胞質ドメイン短縮部分）をコードする核酸でトランスフェクトされ、そにより、ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩのタンパク質を細胞表面上に発現する。Ｂリンパ球抗原（例えば、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−３）と組み合わせた適切なクラスＩまたはクラスＩＩの発現は、トランスフェクトされた腫瘍細胞に対するＴ細胞媒介免疫応答を誘導する。必要に応じて、ＭＨＣクラスＩＩ関連タンパク質（不変鎖）の発現をブロックするアンチセンス構築物をコードする遺伝子はまた、Ｂリンパ球の活性を有するペプチドをコードするＤＮＡとともに同時トランスフェクトされて、腫瘍関連抗原の提示を促進し得、そして腫瘍特異的免疫を誘導し得る。従って、ヒト被検体におけるＴ細胞媒介免疫応答の誘導は、その被検体における腫瘍特異的寛容を克服するに十分であり得る。
【０２３２】
本発明のポリペプチドの活性は、とりわけ、以下の方法によって測定され得る：甲状腺細胞または脾臓細胞の細胞傷害性についての適切なアッセイとしては、以下において記載されるものが挙げられるがそれらに限定されない：ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（Ｃｈａｐｔｅｒ  ３，Ｃｈａｐｔｅｒ  ７）；Ｈｅｒｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８：２４８８−２４９２，１９８１；Ｈｅｒｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １２８：１９６８−１９７４，１９８２；Ｈａｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３５：１５６４−１５７２，１９８５；Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４０：５０８−５１２，１９８８；Ｈｅｒｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８：２４８８−２４９２，１９８１；Ｈｅｒｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １２８  ：１９６８−１９７４，１９８２；Ｈａｎｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３５：１５６４−１５７２，１９８５；Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｂｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６１：１９９２−１９９８；Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４０：５０８−５１２，１９８８；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３３：３２７−３４１，ｌ９９１；Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５３  ：３０７９−３０９２，１９９４。
【０２３３】
Ｔ細胞依存性免疫グロブリン応答およびアイソタイプスイッチングについてのアッセイ（これは、とりわけＴ細胞依存性抗体応答を調節し、そしてＴｈ１／Ｔｈ２プロファイルに影響を与えるタンパク質を同定する）としては、限定することなく、以下に記載されるものが挙げられる：Ｍａｌｉｓｚｅｗｓｋｉ，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｅ  １４４：３０２８−３０３３，１９９０；およびＭｏｎｄ  ａｎｄ
Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．）Ｖｏｌ  １  ｐｐ．３．８．１−３．８．１６，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ  １９９４。
【０２３４】
混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ（これは、とりわけ、Ｔｈ１およびＣＴＬ反応を主に生じるタンパク質を同定する）は、限定することなく、以下に記載されるものが挙げられる：ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（Ｃｈａｐｔｅｒ  ３，Ｃｈａｐｔｅｒ  ７）；Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４０：５０８−５１２，１９８８；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４９：３７７８−３７８３，１９９２。
【０２３５】
樹状細胞依存性アッセイ（これは、とりわけ、未刺激（ｎａｉｖｅ）Ｔ細胞を活性化する樹状細胞により発現されるタンパク質を同定する）としては、限定することなく、以下に記載されるものが挙げられる：Ｇｕｅｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  ｌｍｍｕｎｏｌ  １３４：５３６−５４４，１９９５；Ｉｎａｂａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７３：５４９−５５９，１９９１；Ｍａｃａｔｏｎｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  ｌｍｍｕｎｏｌ  １５４：５０７１−５０７９，１９９５；Ｐｏｒｇａｄｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８２：２５５−２６０，１９９５；Ｎａｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ６７：４０６２−４０６９，１９９３；Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４：９６１−９６５，１９９４；Ｍａｃａｔｏｎｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １６９：１２５５−１２６４，１９８９；Ｂｈａｒｄｗａｊ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  ９４：７９７−８０７，１９９４；およびＩｎａｂａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７２：６３１−６４０，１９９０。
【０２３６】
リンパ球生存／アポトーシスについてのアッセイ（これは、超抗原誘導の後のアポトーシスを妨害するタンパク質およびリンパ球恒常性を調節するタンパク質を同定する）としては、限定することなく、以下に記載されるものが挙げられる：Ｄａｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  １３：７９５−８０８，１９９２；Ｇｏｒｃｚｙｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ７：６５９−６７０，１９９３；Ｇｏｒｃｚｙｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５３：１９４５−１９５１，１９９３；Ｉｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ６６：２３３−２４３，１９９１；Ｚａｃｈａｒｃｈｕｋ，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４５：４０３７−４０４５，１９９０；Ｚａｍａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｎｚ  １４：８９１−８９７，１９９３；Ｇｏｒｃｚｙｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔ  Ｊ  Ｏｎｃｏｌ  １：６３９−６４８，１９９２。
【０２３７】
Ｔ細胞運命付けおよび発生の初期工程に影響を与えるタンパク質についてのアッセイとしては、限定することなく、以下に記載されるものが挙げられる：Ａｎｔｉｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ８４：１１１−１１７，１９９４；Ｆｉｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５５：１１１−１２２，１９９４；Ｇａｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  Ｔｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８：７５４８−７５５１，１９９１。
【０２３８】
（他の活性）
本発明のポリペプチドはまた、以下のさらなる活性または効果の１つ以上を示し得る：感染因子（これには、限定することなく、細菌、ウイルス、真菌および他の寄生生物）の増殖、感染または機能の阻害、あるいはその殺傷；身体の特徴（限定することなく、身長、体重、髪の色、目の色、皮膚、肥満対痩身比率または他の組織色素、あるいは器官または身体の部分のサイズまたは形状（例えば、豊胸または胸の縮小、骨形態または形状における変更））をもたらす（抑制または増強する）こと；バイオリズムまたは循環サイクルあるいはリズムをもたらすこと；雄性または雌性の被検体の繁殖力をもたらすこと；食餌性脂肪、脂質、タンパク質、炭水化物、ビタミン、ミネラル、補因子または他の栄養因子あるいは成分の代謝、異化、プロセシング、利用、貯蔵または除去；行動特性（限定することなく、食欲、性欲、ストレス、認知（認知障害を含む）、抑鬱（抑鬱障害を含む）および暴力行動ヲ含む）をもたらすこと；鎮痛効果または他の疼痛減少効果を提供すること；造血系統以外の系統における胚性幹細胞の分化および増殖を促進すること；ホルモン性または内分泌活性；酵素の場合、その酵素の欠損を補正し、そして欠損関連疾患を処置すること；過剰増殖障害（例えば、乾癬など）の処置；免疫グロブリン様活性（例えば、抗原または補体に結合する能力など）；ならびに、そのようなタンパク質または別の物質に対する免疫応答を惹起するワクチン組成物において抗原またはそのようなタンパク質と交叉反応性である存在物として作用する能力。
【０２３９】
本発明は、本明細書において記載される特定の実施形態によって範囲が限定されるべきではない。実際、本明細書において記載されるものに加えて本発明の種々の改変は、上記説明および付随する図から当業者に明白である。そのような改変は、添付の特許請求の範囲内にはいることが意図される。
【０２４０】
本願を通じて引用されるすべての参考文献、特許および公開された特許出願の内容は、本明細書において参考として援用される。
【０２４１】
（等価物）
本発明は、その詳細な説明に関連して記載しており、上記の説明は、本発明の範囲の例示でありそして限定を意図せず、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲の範囲によって規定されることが理解されるべきである。他の局面、利点および改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内にある。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、２６９１ヌクレオチドヒトｃＤＮＡ配列（配列番号１）、およびそのコードされるポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号２）を示す。
【図２】
図２は、２８８５ヌクレオチドヒトｃＤＮＡ配列（配列番号３）、およびそのコードされるポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号４）を示す。
【図３】
図３は、２２２９ヌクレオチドヒトｃＤＮＡ配列（配列番号５）、およびそのコードされるポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号６）を示す。
【図４】
図４は、いくつかの相同なＢ７タンパク質と比較される配列番号６のＢＬＡＡポリペプチドのＣｌｕｓｔａｌＷアライメントを示し、そして暗く強調表示することによって保存領域を、そして明るく強調表示することによって保存アミノ酸置換を示す。
【図５】
図５は、配列番号６のポリペプチドについての疎水性プロットを示す。