【手続補正書】
【提出日】平成19年5月11日(2007.5.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  外因性遺伝物質を非ヒト脊椎動物のゲノム中に組み込むインビボ方法であり、該方法が：
非ヒト雄脊椎動物の細胞を減数した精巣の精細管、精巣網または精巣輸出小管に、所望する形質あるいは生成物をコードする少なくとも一つのポリヌクレオチドを含むウイルスベクターを含む遺伝子デリバリー混合物を投与し、該ポリヌクレオチドが、精巣内で精子細胞または前駆細胞に効果的に到達するような条件下で、転写ユニットを形成するように、プロモーター配列に作用性があるように連鎖され、該前駆細胞が、精原幹細胞、B型精原細胞、一次精母細胞、前細糸期精母細胞、細糸期精母細胞、合糸期精母細胞、太糸期精母細胞、第二次精母細胞、及び精細胞から成る群から選択され；
所望する形質あるいは生成物をコードする該ポリヌクレオチドを精子あるいは前駆細胞のゲノム中に組み込み、従って、遺伝的修飾を加えた雄性配偶子が非ヒト雄脊椎動物により生成され；且つ
該非ヒト雄脊椎動物をその種の非ヒト雌脊椎動物と交配して、その結果ゲノム中に該ポリヌクレオチドを保有するトランスジェニック子孫を生産すること；
を含む方法。
【請求項２】  該ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、トランスフェリン−ポリリジン増強アデノウイルスベクター、ヒト免疫不全症ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、モロニーネズミ白血病ウイルス由来ベクター、ムンプスベクター、及びポリヌクレオチドの取り込みと生殖細胞の細胞質中への放出を促進するウイルス由来DNA、から成る群から選択されるか、あるいは該グループのいずれかのメンバーから成る混合物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】  該ウイルスベクターがレトロウイルスベクターで、所望する形質あるいは生成物をコードするポリヌクレオチドが、該子孫の１またはそれ以上の細胞において発現されている、請求項１に記載の方法。
【請求項４】  該レトロウイルスベクターが、モロニーネズミ白血病ウイルス由来ベクターあるいはシュードタイプレンチウイルスベクターである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】  外因性遺伝物質を非ヒト脊椎動物のゲノム中に組み込むインビボ方法であり、該方法が：
非ヒト雄脊椎動物の精巣に、所望する形質あるいは生成物をコードする少なくとも一つのポリヌクレオチドを含むシュードタイプレンチウイルスベクター、及び任意に遺伝的選択マーカーをコードする遺伝子、を含む遺伝子デリバリー混合物を投与し、該ポリヌクレオチドが、精巣内で、精子または、精原幹細胞、B型精原細胞、一次精母細胞、前細糸期精母細胞、細糸期精母細胞、合糸期精母細胞、太糸期精母細胞、第二次精母細胞、及び精子細胞から成る群から選択される前駆細胞に効果的に到達するような条件下で、転写ユニットを形成するように、プロモーター配列に作用性があるように連鎖され；
所望する形質あるいは生成物をコードするポリヌクレオチドを該精子あるいは該前駆細胞のゲノム中に組み込み、従って、遺伝的修飾を加えた雄性配偶子が非ヒト雄脊椎動物により生成され；且つ
該非ヒト雄脊椎動物をその種の雌脊椎動物と交配して、その結果ゲノム中に該ポリヌクレオチドを保有するトランスジェニック子孫を生産すること、
を含む方法。
【請求項６】  交配が該非ヒト雄脊椎動物と非ヒト雌脊椎動物の自然交配によって達成される、請求項１または５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】  該ウイルスベクターがさらに雄性生殖細胞特異性プロモーターに作用性があるように連鎖されている遺伝的選択マーカーをコードする遺伝子を含む、請求項１または５に記載の方法。
【請求項８】  交配が、遺伝的修飾を加えた雄性配偶子を含む精液による非ヒト雌脊椎動物の人工媒精によって達成される、請求項１または５に記載の方法。
【請求項９】  交配が遺伝的修飾を加えた雄性配偶子による非ヒト雌脊椎動物の卵子のインビトロ受精によって達成される、請求項１または５に記載の方法。
【請求項１０】  交配が、細胞質内精子注入、帯下状媒精、部分的帯層離断によって達成され、その結果、遺伝的修飾を加えた雄性配偶子による雌脊椎動物の卵子の受精を起因する、請求項１または５に記載の方法。
【請求項１１】  該方法がさらにトランスジェニック子孫を性的成熟するまで育成することを含む、請求項１または５に記載の方法。
【請求項１２】  該方法がさらに、該性的に成熟したトランスジェニック子孫を、同種の異性動物と交配し、トランスジェニック子孫の第二世代あるいは後続世代を生産することを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】  該ベクターがプロモーター配列に作用性があるように連鎖された遺伝的選択マーカーを含み、第二世代あるいは後続世代のトランスジェニック子孫が、その１またはそれ以上の細胞中に存在する該遺伝的選択マーカーの発現によって同定される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】  該遺伝子デリバリー混合物が、経皮注入によって脊椎動物の精巣中に投与される、請求項１または５に記載の方法。
【請求項１５】  該遺伝子デリバリー混合物が、非ヒト脊椎動物の精巣輸出小管中に直接に投与される、請求項１または５に記載の方法。
【請求項１６】  該遺伝子デリバリー混合物が、非ヒト脊椎動物精巣の精細管中に直接に投与される、請求項１または５に記載の方法。
【請求項１７】  該遺伝子デリバリー混合物が、非ヒト脊椎動物精巣の精巣網中に直接に投与される、請求項１または５に記載の方法。
【請求項１８】  所望する形質あるいは生成物をコードするポリヌクレオチドが、構成プロモーターと作用性があるように連鎖されている、請求項１または５に記載の方法。
【請求項１９】  所望する形質あるいは生成物をコードするポリヌクレオチドが、サイトカイン誘導プロモーターと作用性があるように連鎖されている、請求項１または５に記載の方法。
【請求項２０】  所望する形質あるいは生成物をコードするポリヌクレオチドが、組織特異性プロモーターと作用性があるように連鎖されている、請求項１または５に記載の方法。
【請求項２１】  所望する形質あるいは生成物をコードする該ポリヌクレオチドが、発生上あるいは時間的に調節されるプロモーターと作用性があるように連鎖されている、請求項１または５に記載の方法。
【請求項２２】  遺伝的選択マーカーをコードする遺伝子で、該遺伝子が構成プロモーターと作用性があるように連鎖されている、請求項１または５に記載の方法。
【請求項２３】  所望する形質あるいは生成物をコードするポリヌクレオチドが、外因性誘導プロモーターと作用性があるように連鎖されている、請求項１または５に記載の方法。
【請求項２４】  該ポリヌクレオチドが、遺伝的選択マーカーをコードする遺伝子を含み、該遺伝子が組織特異性プロモーターと作用性があるように連鎖されている、請求項１または５に記載の方法。
【請求項２５】  該ポリヌクレオチドが、遺伝的選択マーカーをコードする遺伝子を含み、該遺伝子が発生上あるいは時間的に調節されるプロモーターと作用性があるように連鎖されている、請求項１または５に記載の方法。
【請求項２６】  該非ヒト脊椎動物が哺乳類あるいは鳥類である、請求項１または５に記載の方法。
【請求項２７】  該哺乳類は、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ブタ、マウス、ラット、スナネズミ、ハムスター、ウサギ、厚皮動物、ウマ、ヒツジ、ブタ、ウシ、及び海生哺乳類から成る群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】  該鳥類が、アヒル、ガチョウ、シチメンチョウ、ニワトリ、オーストリッチ、エミュ、ホロホロチョウ、ハト、及びウズラから成る群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】  請求項１または５のいずれかに記載の方法によって生産される非ヒトトランスジェニック非ヒト脊椎動物で、該非ヒト脊椎動物が、非ヒト雄脊椎動物の子孫であり、該子孫が所望する形質あるいは生成物をコードする外因性のポリヌクレオチドをそのゲノム中に保有する１またはそれ以上の細胞を含む、非ヒトトランスジェニック非ヒト脊椎動物。
【請求項３０】  該非ヒト脊椎動物が、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ブタ、マウス、ラット、スナネズミ、ハムスター、ウサギ、厚皮動物、ウマ、ヒツジ、ブタ、ウシ、及び海生哺乳類から成る群から選択される哺乳類、あるいは、アヒル、ガチョウ、シチメンチョウ、ニワトリ、オーストリッチ、エミュ、ホロホロチョウ、ハト、及びウズラから成る群から選択される鳥類である、請求項２９に記載の非ヒトトランスジェニック非ヒト脊椎動物。
【請求項３１】  該ポリヌクレオチドが異種コード配列を含む、請求項２９に記載の非ヒトトランスジェニック非ヒト脊椎動物。
【請求項３２】  該ポリヌクレオチドが少なくとも一つの生物学的機能的遺伝子を含む、請求項２９に記載の非ヒトトランスジェニック非ヒト脊椎動物。
【請求項３３】  該非ヒト脊椎動物が、遺伝的選択マーカーを発現している１またはそれ以上の細胞を含む、請求項２９に記載の非ヒトトランスジェニック非ヒト脊椎動物。
【請求項３４】  該非ヒト脊椎動物が非ヒト雄脊椎動物である、請求項２９に記載の非ヒトトランスジェニック非ヒト脊椎動物。
【請求項３５】  請求項２９に記載の非ヒト脊椎動物由来し、該細胞が体細胞である、トランスジェニック細胞。
【請求項３６】  請求項２９に記載の非ヒト脊椎動物から獲得される、トランスジェニック生殖細胞。
【請求項３７】  該細胞が卵子である、請求項３６に記載のトランスジェニック生殖細胞。
【請求項３８】  該細胞が、精子または、精原幹細胞、B型精原細胞、一次精母細胞、前細糸期精母細胞、細糸期精母細胞、合糸期精母細胞、太糸期精母細胞、第二次精母細胞、及び精子細胞から成る群から選択される前駆細胞である、請求項３６に記載のトランスジェニック生殖細胞。
【請求項３９】  請求項２４に記載の非ヒト雄脊椎動物から獲得される、トランスジェニック雄性生殖細胞。
【請求項４０】  該細胞が、精子または、精原幹細胞、B型精原細胞、一次精母細胞、前細糸期精母細胞、細糸期精母細胞、合糸期精母細胞、太糸期精母細胞、第二次精母細胞、及び精子細胞から成る群から選択される前駆細胞である、請求項３９に記載のトランスジェニック生殖細胞。
【請求項４１】  請求項４０に記載の複数のトランスジェニック生殖細胞を含む、非ヒト脊椎動物精液。
【請求項４２】  そのゲノム中に少なくとも１つの異種あるいは同種異型のポリヌクレオチドを保有する未変性生殖細胞を含む非ヒトトランスジェニック非ヒト脊椎動物系統を生産する方法で、該方法が：
請求項２９に記載の非ヒト脊椎動物を、同種の異性動物と交配し；且つ該ポリペプチドを有する子孫を選択することを含む、
非ヒトトランスジェニック非ヒト脊椎動物系統を生産する方法。
【請求項４３】  所望する形質あるいは生成物をコードするポリヌクレオチドがヒト由来である、請求項１または５のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】  該遺伝選択マーカーが蛍光タンパク質あるいは発光タンパク質である、請求項１または５のいずれかに記載の方法。