(57)【要約】本明細書では、重度のインスリン抵抗性を有する患者を処置する方法が提供される。方法は、それを必要とする患者に治療量のＧＣＧ／ＧＣＧＲシグナル伝達経路阻害剤を投与することを含み、これにより、血中グルコースもしくはベータ−ヒドロキシブチレートレベルが低下するか、または重度のインスリン抵抗性が媒介されるか、または重度のインスリン抵抗性によって特徴付けられる状態もしくは疾患が媒介されるか、または状態もしくは疾患と関連付けられる少なくとも１つの症状もしくは合併症が緩和されるか、もしくはその重症度が低減する。ＧＣＧ／ＧＣＧＲシグナル伝達経路阻害剤は、シグナル伝達経路の小分子阻害剤、シグナル伝達経路のアンチセンス阻害剤、ＧＣＧ中和モノクローナル抗体、ＧＣＧＲアンタゴニスト、シグナル伝達経路のペプチド阻害剤、ＤＡＲＰｉｎ、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ、アプタマー、操作されたＦｎ  ＩＩＩ型ドメインなどであってよい。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
血中グルコースレベルおよび／またはケトン体のレベルを低下させるため、あるいは、高い血中グルコースもしくはケトン体増加と関連付けられるかまたはそれらによって部分的に特徴付けられる状態もしくは疾患、または前記状態もしくは前記疾患と関連付けられる少なくとも１つの症状もしくは合併症を処置するための方法であって、重度のインスリン抵抗性を有する患者に、治療有効量の、グルカゴン（ＧＣＧ）阻害剤またはグルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）アンタゴニストを含む組成物を投与することを含み、これにより、血中グルコースレベルもしくはケトン体のレベルが低下するか、または前記状態もしくは前記疾患が媒介されるか、または前記状態もしくは前記疾患と関連付けられる少なくとも１つの症状もしくは合併症が緩和されるか、もしくはその重症度が低減する、方法。
【請求項２】
重度のインスリン抵抗性を有する前記患者が、ドナヒュー氏症候群、Ｒａｂｓｏｎ−Ｍｅｎｄｅｎｈａｌｌ症候群、Ａ型インスリン抵抗性、Ｂ型インスリン抵抗性、ＨＡＩＲ−ＡＮ（アンドロゲン過剰症、インスリン抵抗性、および黒色表皮腫）症候群、偽末端肥大症、アルストレーム症候群、筋緊張性ジストロフィー、ヴェルナー症候群、リポジストロフィー、硬変、単一遺伝子性病的肥満、高プロインスリン血症、カルボキシペプチダーゼＥ欠損症、アルギニン代謝障害、バルデー−ビードル症候群、および重度のインスリン抵抗性をもたらすことが報告されている遺伝的変異体の存在と関連付けられる状態または疾患からなる群より選択される状態または疾患を患っている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記患者の血清中でインスリン分解プロテアーゼ活性が検出される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記患者の血清中で中和性抗インスリン抗体または抗インスリン受容体抗体が検出される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記インスリン抵抗性が、ＩＮＳＲ、ＰＳＭＤ６、ＡＤＲＡ２Ａ、ＡＧＰＡＴ２、ＡＫＴ２、ＡＰＰＬ１、ＢＢＳ１、ＢＳＣＬ２、ＣＩＤＥＣ、ＧＲＢ１０、ＩＲＳ２、ＫＬＦ１４、ＬＥＰ、ＬＥＰＲ、ＬＭＮＡ、ＭＣ４Ｒ、ＰＣＮＴ、ＰＩＫ２ＣＡ、ＰＯＬＤ１、ＰＰＡＲＧ、ＰＴＰＲＤ、ＰＴＲＦ、ＲＡＳＧＲＰ１、ＴＢＣ１Ｄ４、およびＴＣＦ７Ｌ２からなる群より選択される１つまたは複数の遺伝子の遺伝的変異体と関連付けられる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ＧＣＧ阻害剤または前記ＧＣＧＲアンタゴニストがインスリンと併用投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記組成物が、少なくとも１種のさらなる治療剤と組み合わせて前記患者に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも１種のさらなる治療剤が、インスリン、ビグアナイド、ｈＩＧＦ１、レプチン、ピオグリタゾン、ビルダグリプチン、アカルボース、アルファ−グリコシダーゼ阻害剤、Ｌ−アルギニン、ジペプチジル−ペプチダーゼ−４阻害剤、インスリン分泌促進物質、アミリン受容体アゴニスト、インスリン感作物質、ＦＧＦ２１、ＳＧＬＴ２阻害剤、ＳＧＬＴ１阻害剤、ＧＬＰ−１アゴニスト、ＧＬＰ−１受容体活性化剤、β３アドレナリン作動性アゴニスト、ＮＰＲ１アゴニスト、ＮＰＲ３アンタゴニスト、トリヨードチロニン、第２のＧＣＧ阻害剤、および第２のＧＣＧＲアンタゴニストからなる群より選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ＧＣＧ阻害剤または前記ＧＣＧＲアンタゴニストが、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＧＣＧＲアンタゴニストが、配列番号２、１８、３４、５０、６６、７０、８６、９０、１０６、１１０、１２６、１３０、および１４６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに配列番号１０、２６、４２、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、および１４８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、７０、８６、９０、１０６、１１０、１２６、１３０、および１４６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに／または（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、および１４８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／６８、７０／７８、８６／８８、９０／９８、１０６／１０８、１１０／１１８、１２６／１２８、１３０／１３８、および１４６／１４８からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列ペアを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号８６／８８に記載のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＧＣＧ阻害剤が、（ａ）配列番号１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、および２９４からなる群より選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列中に含有された３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、ならびに（ｂ）配列番号１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、および３０２からなる群より選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列中に含有された３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、および２９４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに／または配列番号１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、および３０２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１５０／１５８、１６６／１７４、１８２／１９０、１９８／２０６、２１４／２２２、２３０／２３８、２４６／２５４、２６２／２７０、２７８／２８６、および２９４／３０２からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６６／１７４または配列番号１８２／１９０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記インスリン分泌促進物質が、スルホニル尿素、ＡＴＰ感受性Ｋチャネルアンタゴニスト、およびメグリチニドからなる群より選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１９】
前記インスリン感作物質が、チアゾリジンジオンおよびロシグリタゾンからなる群より選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ケトン体がベータ−ヒドロキシブチレートである、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
重度のインスリン抵抗性を有する患者を処置する方法であって、前記患者は上昇した血中グルコースレベルを呈し、前記方法は、治療有効量の、ＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニストを含む組成物を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項２２】
重度のインスリン抵抗性を有する前記患者が、ドナヒュー氏症候群、Ｒａｂｓｏｎ−Ｍｅｎｄｅｎｈａｌｌ症候群、Ａ型インスリン抵抗性、Ｂ型インスリン抵抗性、ＨＡＩＲ−ＡＮ（アンドロゲン過剰症、インスリン抵抗性、および黒色表皮腫）症候群、偽末端肥大症、アルストレーム症候群、筋緊張性ジストロフィー、ヴェルナー症候群、リポジストロフィー、硬変、単一遺伝子性病的肥満、高プロインスリン血症、カルボキシペプチダーゼＥ欠損症、アルギニン代謝障害、バルデー−ビードル症候群、および重度のインスリン抵抗性をもたらすことが報告されている遺伝的変異体の存在と関連付けられる状態または疾患からなる群より選択される状態または疾患を患っている、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記患者の血清中でインスリン分解プロテアーゼ活性が検出される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記患者の血清中で中和性抗インスリン抗体または抗インスリン受容体抗体が検出される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記インスリン抵抗性が、ＩＮＳＲ、ＰＳＭＤ６、ＡＤＲＡ２Ａ、ＡＧＰＡＴ２、ＡＫＴ２、ＡＰＰＬ１、ＢＢＳ１、ＢＳＣＬ２、ＣＩＤＥＣ、ＧＲＢ１０、ＩＲＳ２、ＫＬＦ１４、ＬＥＰ、ＬＥＰＲ、ＬＭＮＡ、ＭＣ４Ｒ、ＰＣＮＴ、ＰＩＫ２ＣＡ、ＰＯＬＤ１、ＰＰＡＲＧ、ＰＴＰＲＤ、ＰＴＲＦ、ＲＡＳＧＲＰ１、ＴＢＣ１Ｄ４、およびＴＣＦ７Ｌ２からなる群より選択される１つまたは複数の遺伝子の遺伝的変異体と関連付けられる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＧＣＧ阻害剤または前記ＧＣＧＲアンタゴニストがインスリンと併用投与される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
前記組成物が、少なくとも１種のさらなる治療剤と組み合わせて前記患者に投与される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
前記少なくとも１種のさらなる治療剤が、インスリン、ビグアナイド、ｈＩＧＦ１、レプチン、ピオグリタゾン、ビルダグリプチン、アカルボース、アルファ−グリコシダーゼ阻害剤、Ｌ−アルギニン、ジペプチジル−ペプチダーゼ−４阻害剤、インスリン分泌促進物質、アミリン受容体アゴニスト、インスリン感作物質、ＦＧＦ２１、ＳＧＬＴ２阻害剤、ＳＧＬＴ１阻害剤、ＧＬＰ−１アゴニスト、ＧＬＰ−１受容体活性化剤、β３アドレナリン作動性アゴニスト、ＮＰＲ１アゴニスト、ＮＰＲ３アンタゴニスト、トリヨードチロニン、第２のＧＣＧ阻害剤、および第２のＧＣＧＲアンタゴニストからなる群より選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＧＣＧ阻害剤または前記ＧＣＧＲアンタゴニストが、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である、請求項２１に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＧＣＧＲアンタゴニストが、配列番号２、１８、３４、５０、６６、７０、８６、９０、１０６、１１０、１２６、１３０、および１４６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲのＣＤＲ、ならびに配列番号１０、２６、４２、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、および１４８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲのＣＤＲを含む単離されたヒトモノクローナル抗体である、請求項２１に記載の方法。
【請求項３１】
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、７０、８６、９０、１０６、１１０、１２６、１３０、および１４６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに／または（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、および１４８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記単離された抗体または抗原結合性断片が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／６８、７０／７８、８６／８８、９０／９８、１０６／１０８、１１０／１１８、１２６／１２８、１３０／１３８、および１４６／１４８からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列ペアを含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記単離されたヒトモノクローナル抗体が、配列番号８６／８８に記載のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＧＣＧ阻害剤が、（ａ）配列番号１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、および２９４からなる群より選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列中に含有された３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、ならびに（ｂ）配列番号１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、および３０２からなる群より選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列中に含有された３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である、請求項２１に記載の方法。
【請求項３５】
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、および２９４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに／または配列番号１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、および３０２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１５０／１５８、１６６／１７４、１８２／１９０、１９８／２０６、２１４／２２２、２３０／２３８、２４６／２５４、２６２／２７０、２７８／２８６、および２９４／３０２からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６６／１７４または配列番号１８２／１９０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
前記インスリン分泌促進物質が、スルホニル尿素、ＡＴＰ感受性Ｋチャネルアンタゴニスト、およびメグリチニドからなる群より選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３９】
前記インスリン感作物質が、チアゾリジンジオンおよびロシグリタゾンからなる群より選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項４０】
重度のインスリン抵抗性を有する患者を処置するために必要なインスリンの量および／または投与量を低減させる方法であって、前記患者は、重度のインスリン抵抗性および上昇した血中グルコースレベルを呈し、前記方法は、治療有効量の、ＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニストを含む組成物を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項４１】
前記ＧＣＧ阻害剤または前記ＧＣＧＲアンタゴニストがインスリンと併用投与される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記インスリンの量および／または投与量が、ＧＣＧＲアンタゴニストと併用投与したとき、約３０％〜約９５％低減する場合があり、前記ＧＣＧＲアンタゴニストが、ＧＣＧＲに特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記インスリンの量および／または投与量が、ＧＣＧＲアンタゴニストと併用投与したとき、約９０％低減する場合があり、前記アンタゴニストが、ＧＣＧＲに特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
重度のインスリン抵抗性を有する前記患者が、ドナヒュー氏症候群、Ｒａｂｓｏｎ−Ｍｅｎｄｅｎｈａｌｌ症候群、Ａ型インスリン抵抗性、Ｂ型インスリン抵抗性、ＨＡＩＲ−ＡＮ（アンドロゲン過剰症、インスリン抵抗性、および黒色表皮腫）症候群、偽末端肥大症、アルストレーム症候群、筋緊張性ジストロフィー、ヴェルナー症候群、リポジストロフィー、硬変、単一遺伝子性病的肥満、高プロインスリン血症、カルボキシペプチダーゼＥ欠損症、アルギニン代謝障害、バルデー−ビードル症候群、および重度のインスリン抵抗性をもたらすことが報告されている遺伝的変異体の存在と関連付けられる状態または疾患からなる群より選択される状態または疾患を患っている、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
前記患者の血清中でインスリン分解プロテアーゼ活性が検出される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４６】
前記患者の血清中で中和性抗インスリン抗体または抗インスリン受容体抗体が検出される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４７】
前記インスリン抵抗性が、ＩＮＳＲ、ＰＳＭＤ６、ＡＤＲＡ２Ａ、ＡＧＰＡＴ２、ＡＫＴ２、ＡＰＰＬ１、ＢＢＳ１、ＢＳＣＬ２、ＣＩＤＥＣ、ＧＲＢ１０、ＩＲＳ２、ＫＬＦ１４、ＬＥＰ、ＬＥＰＲ、ＬＭＮＡ、ＭＣ４Ｒ、ＰＣＮＴ、ＰＩＫ２ＣＡ、ＰＯＬＤ１、ＰＰＡＲＧ、ＰＴＰＲＤ、ＰＴＲＦ、ＲＡＳＧＲＰ１、ＴＢＣ１Ｄ４、およびＴＣＦ７Ｌ２からなる群より選択される１つまたは複数の遺伝子の遺伝的変異体と関連付けられる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４８】
前記組成物が、少なくとも１種のさらなる治療剤と組み合わせて前記患者に投与される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４９】
前記少なくとも１種のさらなる治療剤が、ビグアナイド、ｈＩＧＦ１、レプチン、ピオグリタゾン、ビルダグリプチン、アカルボース、アルファ−グリコシダーゼ阻害剤、Ｌ−アルギニン、ジペプチジル−ペプチダーゼ−４阻害剤、インスリン分泌促進物質、アミリン受容体アゴニスト、インスリン感作物質、ＦＧＦ２１、ＳＧＬＴ２阻害剤、ＳＧＬＴ１阻害剤、ＧＬＰ−１アゴニスト、ＧＬＰ−１受容体活性化剤、β３アドレナリン作動性アゴニスト、ＮＰＲ１アゴニスト、ＮＰＲ３アンタゴニスト、トリヨードチロニン、第２のＧＣＧ阻害剤、および第２のＧＣＧＲアンタゴニストからなる群より選択される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記ＧＣＧ阻害剤または前記ＧＣＧＲアンタゴニストが、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である、請求項４０に記載の方法。
【請求項５１】
前記ＧＣＧＲアンタゴニストが、配列番号２、１８、３４、５０、６６、７０、８６、９０、１０６、１１０、１２６、１３０、および１４６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲのＣＤＲ、ならびに配列番号１０、２６、４２、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、および１４８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲのＣＤＲを含む単離されたヒトモノクローナル抗体である、請求項４０に記載の方法。
【請求項５２】
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、７０、８６、９０、１０６、１１０、１２６、１３０、および１４６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに／または（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、および１４８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記単離された抗体または抗原結合性断片が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／６８、７０／７８、８６／８８、９０／９８、１０６／１０８、１１０／１１８、１２６／１２８、１３０／１３８、および１４６／１４８からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列ペアを含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
前記単離された抗体が、配列番号８６／８８に記載のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
前記ＧＣＧ阻害剤が、（ａ）配列番号１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、および２９４からなる群より選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列中に含有された３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、ならびに（ｂ）配列番号１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、および３０２からなる群より選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列中に含有された３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片である、請求項４０に記載の方法。
【請求項５６】
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、および２９４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに／または配列番号１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、および３０２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１５０／１５８、１６６／１７４、１８２／１９０、１９８／２０６、２１４／２２２、２３０／２３８、２４６／２５４、２６２／２７０、２７８／２８６、および２９４／３０２からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６６／１７４または配列番号１８２／１９０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５９】
前記インスリン分泌促進物質が、スルホニル尿素、ＡＴＰ感受性Ｋチャネルアンタゴニスト、およびメグリチニドからなる群より選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項６０】
前記インスリン感作物質が、チアゾリジンジオンおよびロシグリタゾンからなる群より選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項６１】
血中グルコースレベルおよび／またはベータ−ヒドロキシブチレートレベルを低下させるため、あるいは、高い血中グルコースもしくは高いレベルのケトン体と関連付けられるかまたはそれらによって部分的に特徴付けられる状態もしくは疾患、または前記状態もしくは前記疾患と関連付けられる少なくとも１つの症状もしくは合併症を処置するための方法であって、重度のインスリン抵抗性を有する患者に、治療有効量の、ＧＣＧＲシグナル伝達の阻害剤を含む組成物を投与することを含み、これにより、血中グルコースレベルもしくはベータ−ヒドロキシブチレートレベルが低下するか、または前記状態もしくは前記疾患が媒介されるか、または前記状態もしくは前記疾患と関連付けられる少なくとも１つの症状もしくは合併症が緩和されるか、もしくはその重症度が低減する、方法。
【請求項６２】
前記ＧＣＧＲシグナル伝達の阻害剤が、アンチセンス分子、ＧＣＧＲ抗体、小分子阻害剤、ペプチド阻害剤、ＤＡＲＰｉｎ、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ、アプタマー、操作されたＦｎ  ＩＩＩ型ドメイン、ＧＣＧ抗体、およびそれらの誘導体からなる群より選択される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
肝臓におけるグルコース生産を抑制する方法であって、重度のインスリン抵抗性を有する患者に、治療有効量の、ＧＣＧＲシグナル伝達の阻害剤を含む組成物を投与することを含み、これにより、肝臓におけるグルコース生産が抑制される、方法。
【請求項６４】
重度のインスリン抵抗性を有する患者のβ細胞質量を増加させる方法であって、治療有効量の、ＧＣＧＲシグナル伝達の阻害剤を含む組成物を前記患者に投与することを含み、これにより、処置前のβ細胞質量と比べてβ細胞質量が増加する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グルカゴン（ＧＣＧ）阻害剤またはグルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）アンタゴニストを使用して重度のインスリン抵抗性を処置するか、もしくはその進行を減速させ、かつ／またはそれを必要とする患者におけるインスリンの治療用量を低減させる方法に関する。
【０００２】
配列表
本明細書と同時に、配列表の正式なコピーが、ファイル名１０２８２ＷＯ０１＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴ＿ＳＴ２５、作成日２０１７年８月２５日、およびサイズ約１１６キロバイトのＡＳＣＩＩフォーマットの配列表として、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子提出される。このＡＳＣＩＩフォーマットの文書に含有される配列表は本明細書の一部であり、その全体は参照により本明細書に組み込まれている。
【背景技術】
【０００３】
グルカゴンは２９残基のポリペプチドホルモンであり、インスリンと協働して血液中のグルコース量の恒常性制御を媒介する。グルカゴンは主に、血中グルコースレベルが下がると、ある特定の細胞、例えば肝臓細胞を刺激してグルコースを放出させることにより、正常な血中グルコースレベルを維持するように作用する。グルカゴンの作用は、血中グルコースレベルが上がる度にグルコースを取り込み、貯蔵するように細胞を刺激するインスリンの作用と反対である。グルカゴンは膵臓のアルファ細胞において産生され、一方でインスリンは、付近のベータ細胞から分泌される。
【０００４】
真性糖尿病および糖尿病性ケトアシドーシスなどのいくつかの疾患において重要な役割を果たし得るのは、グルカゴンおよびインスリンの不均衡である。特に、より高い基底グルカゴンレベル、および食後グルカゴン分泌の抑制の欠如は、ヒトの糖尿病状態に寄与することが研究により示されている（Ｍｕｌｌｅｒら（１９７０年）、Ｎ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄ、２８３巻：１０９〜１１５頁）。
【０００５】
血中グルコースレベルの上昇に対するグルカゴンの効果は、グルカゴン（ＧＣＧ）がその受容体（ＧＣＧＲと呼ばれる）に結合した後、ある特定の細胞経路が活性化することよって部分的に媒介されると考えられている。ＧＣＧＲは、Ｇタンパク質共役受容体のセクレチンサブファミリー（ファミリーＢ）のメンバーであり、主として肝臓において発現する。グルカゴンがその受容体に結合すると、Ｇタンパク質シグナルトランスダクションカスケードが引き起こされ、細胞内サイクリックＡＭＰが活性化し、ｄｅ  ｎｏｖｏ合成によるグルコース生産（糖新生）およびグリコーゲン分解（糖原分解）の増加がもたらされる（Ｗａｋｅｌａｍら（１９８６年）、Ｎａｔｕｒｅ、３２３巻：６８〜７１頁；Ｕｎｓｏｎら（１９８９年）、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、１０巻：１１７１〜１１７７頁；ならびにＰｉｔｔｎｅｒおよびＦａｉｎ（１９９１年）、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｊ．、２７７巻：３７１〜３７８頁）。
【０００６】
グルカゴンの作用は、本明細書に記載されるように、小分子阻害剤、ＧＣＧ抗体、またはＧＣＧＲ抗体などのアンタゴニストを提供することにより抑制され得る。抗ＧＣＧ抗体は、例えば、米国特許第４，２０６，１９９号、同第４，２２１，７７７号、同第４，４２３，０３４号、同第４，２７２，４３３号、同第４，４０７，９６５号、同第５，７１２，１０５号、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ２００７／１２４４６３号および同第ＷＯ２０１３／０８１９９３号において言及されている。抗ＧＣＧＲ抗体については、米国特許第５，７７０，４４５号、同第７，９４７，８０９号、および同第８，５４５，８４７号、欧州特許出願第ＥＰ２０７４１４９（Ａ２）号、欧州特許第ＥＰ０６５８２００（Ｂ１）号、米国特許公開第２００９／００４１７８４号、同第２００９／０２５２７２７号、および同第２０１１／０２２３１６０号、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ２００８／０３６３４１号に記載されている。ＧＣＧまたはＧＣＧＲの小分子阻害剤は、例えば、ＷＯ０７／４７６７６、ＷＯ０６／８６４８８、ＷＯ０５／１２３６８８、ＷＯ０５／１２１０９７、ＷＯ０６／１４６１８、ＷＯ０８／４２２２３、ＷＯ０８／９８２４４、ＷＯ２０１０／９８９４８、ＵＳ２０１１０３０６６２４、ＷＯ２０１０／９８９９４、ＷＯ２０１０／８８０６１、ＷＯ２０１０／７１７５０、ＷＯ２０１０／３０７２２、ＷＯ０６／１０４８２６、ＷＯ０５／６５６８０、ＷＯ０６／１０２０６７、ＷＯ０６／１７０５５、ＷＯ２０１１／０７７２２、またはＷＯ０９／１４０３４２において言及されている。
重度インスリン抵抗性症候群は、患者がインスリンに対して良好に応答しない稀な代謝障害である。重度インスリン抵抗性症候群のために利用可能な現在の処置には、適切な血糖コントロールを行うことを目的とする規則的な摂食および非常に高い用量のインスリンが含まれる。ＩＧＦ−Ｉの投与は短期では有効であるが、重度のインスリン抵抗性を有する患者の血糖コントロールを長期で行うことには失敗した。Ｖｅｓｔｅｒｇａａｒｄら（１９９７年）、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１３６巻：４７５〜４８２頁。組換えレプチンの投与は、Ｒａｂｓｏｎ−Ｍｅｎｄｅｎｈａｌｌ症候群（ＲＭＳ）患者において数か月にわたって血中グルコースレベルを低下させたことにより、ある程度の成功を示した。Ｃｏｃｈｒａｎら（２００４年）、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、８９巻：１５４８〜１５５４頁。
重度インスリン抵抗性疾患の処置またはその進行の減速、すなわち重度のインスリン抵抗性を有する患者の延命および／または生活の質の向上のための有効な療法が存在しないことを考えると、本明細書に記載されるＧＣＧ／ＧＣＧＲシグナル伝達経路阻害剤およびアンタゴニストなど、これらの疾患を処置するための他の薬剤を同定し、その使用を探る必要がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第４，２０６，１９９号明細書
【特許文献２】米国特許第４，２２１，７７７号明細書
【特許文献３】米国特許第５，７７０，４４５号明細書
【特許文献４】米国特許第７，９４７，８０９号明細書
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｖｅｓｔｅｒｇａａｒｄら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ（１９９７年）１３６巻：４７５〜４８２頁
【非特許文献２】Ｃｏｃｈｒａｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ（２００４年）８９巻：１５４８〜１５５４頁
【非特許文献３】Ｗａｋｅｌａｍら（１９８６年）、Ｎａｔｕｒｅ、３２３巻：６８〜７１頁
【非特許文献４】Ｕｎｓｏｎら（１９８９年）、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、１０巻：１１７１〜１１７７頁
【非特許文献５】ＰｉｔｔｎｅｒおよびＦａｉｎ（１９９１年）、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｊ．、２７７巻：３７１〜３７８頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本明細書では、ＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニスト、例えばＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニストを含む医薬組成物を投与することにより、重度のインスリン抵抗性によって特徴付けられる状態または疾患を有する患者を処置するための方法が提供される。ＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニストは、グルカゴン受容体シグナル伝達経路を遮断または阻害することができる化合物である。アンタゴニストは、小分子阻害剤、ペプチド阻害剤、ＣＲＩＳＰＲ技術（クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート；ＣＲＩＳＰＲ技術は、ＧＣＧＲノックダウンまたはＧＣＧＲ活性に影響する制御配列の欠失を生成することができる）、アンチセンス阻害剤、ＤＡＲＰｉｎ、およびＧＣＧまたはＧＣＧＲ中和モノクローナル抗体の形態をとることができる。ＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニストは、単独で、医薬組成物において、あるいは、重度のインスリン抵抗性と関連付けられる状態もしくは疾患を処置すること、または状態もしくは疾患と関連付けられる１つもしくは複数の症状を処置すること、または重度のインスリン抵抗性と関連付けられる状態もしくは疾患を有する患者の血中グルコースおよび／もしくはケトンを低下させることにおいて有用な、１種または複数の治療剤と併せて投与されてもよい。
【００１０】
一部の実施形態では、血中グルコースレベルおよび／またはベータ−ヒドロキシブチレートレベルを低下させるための、あるいはケトン血症および／またはケトアシドーシスを減少させるための、あるいは、高い血中グルコースおよび／もしくはケトン血症および／もしくはケトアシドーシスと関連付けられるかまたはそれらによって部分的に特徴付けられる状態もしくは疾患、または状態もしくは疾患と関連付けられる少なくとも１つの症状もしくは合併症を処置するための方法が提供される。一部の態様では、方法は、重度のインスリン抵抗性を有する患者に、治療有効量の、ＧＣＧ／ＧＣＧＲシグナル伝達の阻害剤を含む組成物を投与することを含み、これにより、血中グルコースもしくはベータ−ヒドロキシブチレートレベルが低下するか、または状態もしくは疾患が媒介されるか、または状態もしくは疾患と関連付けられる少なくとも１つの症状もしくは合併症が緩和されるか、もしくはその重症度が低減する。一部の実施形態では、ＧＣＧＲシグナル伝達の阻害剤は、抗ＧＣＧＲ抗体などのＧＣＧＲアンタゴニストである。一部の実施形態では、抗ＧＣＧＲ抗体は、配列番号８６／８８のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列ペアを有する。一部の実施形態では、ＧＣＧＲシグナル伝達の阻害剤は、抗ＧＣＧ抗体などのＧＣＧ阻害剤である。一部の実施形態では、抗ＧＣＧ抗体は、配列番号１８２／１９０のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列ペアを有する。一部の実施形態では、抗ＧＣＧ抗体は、配列番号１６６／１７４のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列ペアを有する。
【００１１】
一部の態様では、重度のインスリン抵抗性を有する患者を処置するための方法であって、患者が上昇した血中グルコースレベルを呈する、方法が提供される。方法は、治療有効量の、ＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニストを含む組成物を患者に投与することを含む。
【００１２】
一部の態様では、重度のインスリン抵抗性を有する患者を処置するための方法であって、患者が上昇した血中グルコースレベルを呈さない、方法が提供される。方法は、治療有効量の、ＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニストを含む組成物を患者に投与することを含む。
【００１３】
一部の実施形態では、重度のインスリン抵抗性を有する患者を処置するために必要なインスリンの量および／または投与量を低減させるための方法であって、患者が、重度のインスリン抵抗性および／または上昇した血中グルコースレベルを呈する、方法が提供される。一部の態様では、方法は、治療有効量の、ＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニストを含む組成物を患者に投与することを含む。一部の態様では、ＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニストは、インスリンと併用投与される。インスリンの量および／または投与量は、ＧＣＧＲに特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体と併用投与したとき、約３０％〜約９５％、または約９０％低減される場合がある。
【００１４】
一部の態様では、ＧＣＧＲアンタゴニストは、抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。抗ＧＣＧＲ抗体は、ＧＣＧＲを阻害またはアンタゴナイズし得る。抗ＧＣＧＲ抗体は、ＧＣＧＲシグナル伝達経路を阻害または遮断し得る。一部の態様では、ＧＣＧ阻害剤は、抗ＧＣＧ抗体であり得る。抗ＧＣＧ抗体は、ＧＣＧがＧＣＧＲに結合するのを阻害し得る。
【００１５】
ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ｈＧＣＧＲに特異的に結合し、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／６８、７０／７８、８６／８８、９０／９８、１０６／１０８、１１０／１１８、１２６／１２８、１３０／１３８、および１４６／１４８からなる群より選択される重鎖および軽鎖の配列ペア中に含有された重鎖および軽鎖のＣＤＲドメインを含む。
【００１６】
ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、配列番号８６／８８のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペア中に含有された重鎖および軽鎖のＣＤＲドメインを含む。
【００１７】
ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、配列番号８６／８８のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
【００１８】
一実施形態では、ｈＧＣＧＲに結合するヒト抗体またはヒト抗体の抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、７０、８６、９０、１０６、１１０、１２６、１３０、および１４６からなる群より選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有する、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む。
【００１９】
一実施形態では、ｈＧＣＧＲに結合するヒト抗体またはヒト抗体の抗原結合性断片は、配列番号１０、２６、４２、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、および１４８からなる群より選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有する、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。
【００２０】
ある特定の実施形態では、ｈＧＣＧＲに結合するヒト抗体またはその断片は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／６８、７０／７８、８６／８８、９０／９８、１０６／１０８、１１０／１１８、１２６／１２８、１３０／１３８、および１４６／１４８からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。ある特定の実施形態では、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアは、配列番号３４／４２、７０／７８、８６／８８、１１０／１１８、および１２６／１２８からなる群より選択される。
【００２１】
ある特定の実施形態では、ｈＧＣＧＲに特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、７０、８６、９０、１０６、１１０、１２６、１３０、および１４６からなる群より選択されるＨＣＶＲ配列中に含有された３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）を含むＨＣＶＲ、ならびに／または配列番号１０、２６、４２、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、および１４８からなる群より選択されるＬＣＶＲ配列中に含有された３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含むＬＣＶＲを含む。
【００２２】
ある特定の実施形態では、本明細書において提供される方法は、配列番号８、２４、４０、５６、７６、９６、１１６、および１３６からなる群より選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、ならびに／あるいは配列番号１６、３２、４８、６４、８４、１０４、１２４、および１４４からなる群より選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む、ｈＧＣＧＲに結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片の使用を企図する。
【００２３】
一実施形態では、本明細書において提供される方法は、配列番号４、２０、３６、５２、７２、９２、１１２、および１３２からなる群より選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有するＨＣＤＲ１ドメインと、配列番号６、２２、３８、５４、７４、９４、１１４、および１３４からなる群より選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有するＨＣＤＲ２ドメインと、配列番号１２、２８、４４、６０、８０、１００、１２０、および１４０からなる群より選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有するＬＣＤＲ１ドメインと、配列番号１４、３０、４６、６２、８２、１０２、１２２、および１４２からなる群より選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に同様の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインとをさらに含む、抗体またはその断片の使用を企図する。
【００２４】
一実施形態では、抗体または抗体の抗原結合性断片は、
（ａ）配列番号８、２４、４０、５６、７６、９６、１１６、および１３６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメインと、
（ｂ）配列番号１６、３２、４８、６４、８４、１０４、１２４、および１４４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインと
を含む。
【００２５】
関連する実施形態では、抗体または抗体の抗原結合性断片は、
（ｃ）配列番号４、２０、３６、５２、７２、９２、１１２、および１３２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメインと、
（ｄ）配列番号６、２２、３８、５４、７４、９４、１１４、および１３４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメインと、
（ｅ）配列番号１２、２８、４４、６０、８０、１００、１２０、および１４０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメインと、
（ｆ）配列番号１４、３０、４６、６２、８２、１０２、１２２、および１４２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメインと
をさらに含む。
【００２６】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４、２０、３６、５２、７２、９２、１１２、および１３２のうちの１つから選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメインと、配列番号６、２２、３８、５４、７４、９４、１１４、および１３４のうちの１つから選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメインと、配列番号８、２４、４０、５６、７６、９６、１１６、および１３６のうちの１つから選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメインとを含むＨＣＶＲ、ならびに配列番号１２、２８、４４、６０、８０、１００、１２０、および１４０のうちの１つから選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメインと、配列番号１４、３０、４６、６２、８２、１０２、１２２、および１４２のうちの１つから選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメインと、配列番号１６、３２、４８、６４、８４、１０４、１２４、および１４４のうちの１つから選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインとを含むＬＣＶＲを含む。
【００２７】
ある特定の実施形態では、ヒトＧＣＧＲに結合するヒト抗体またはヒト抗体の抗原結合性断片は、配列番号８／１６、２４／３２、４０／４８、５６／６４、７６／８４、８６／８８、９６／１０４、１１６／１２４、および１３６／１４４からなる群より選択されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列ペアを含む。これらのＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３ペアを有する抗ＧＣＧＲ抗体の非限定的な例は、それぞれ、Ｈ４Ｈ１３４５Ｎ、Ｈ４Ｈ１６１７Ｎ、Ｈ４Ｈ１７６５Ｎ、Ｈ４Ｈ１３２１ＢおよびＨ４Ｈ１３２１Ｐ、Ｈ４Ｈ１３２７ＢおよびＨ４Ｈ１３２７Ｐ、Ｈ４Ｈ１３２８ＢおよびＨ４Ｈ１３２８Ｐ、Ｈ４Ｈ１３３１ＢおよびＨ４Ｈ１３３１Ｐ、Ｈ４Ｈ１３３９ＢおよびＨ４Ｈ１３３９Ｐと呼ばれる抗体である。
【００２８】
一実施形態では、本明細書において提供される方法に従って有用な、ＧＣＧに特異的に結合し、かつＧＣＧと関連付けられる少なくとも１つの活性を中和する、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、および２９４からなる群より選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列中に含有された３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、ならびに（ｂ）配列番号１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、および３０２からなる群より選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列中に含有された３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）を含む。
【００２９】
一部の実施形態では、ＧＣＧに特異的に結合し、かつＧＣＧと関連付けられる少なくとも１つの活性を中和する、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、および２９４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに配列番号１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、および３０２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。
【００３０】
一部の実施形態では、ＧＣＧに特異的に結合し、かつＧＣＧと関連付けられる少なくとも１つの活性を中和する、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１５０／１５８、１６６／１７４、１８２／１９０、１９８／２０６、２１４／２２２、２３０／２３８、２４６／２５４、２６２／２７０、２７８／２８６、および２９４／３０２からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
【００３１】
一部の実施形態では、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアは、配列番号１６６／１７４を含む。
【００３２】
一部の実施形態では、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアは、配列番号１８２／１９０を含む。
【００３３】
一実施形態では、本明細書において提供される方法に従って有用な、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、
（ａ）配列番号１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、および２９６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメインと、
（ｂ）配列番号１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、および２９８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメインと、
（ｃ）配列番号１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、および３００からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメインと、
（ｄ）配列番号１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、および３０４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメインと、
（ｅ）配列番号１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、および３０６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメインと、
（ｆ）配列番号１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、および３０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインと
を含む。
【００３４】
一実施形態では、本明細書において提供される方法に従って有用な、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、
（ａ）配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１ドメインと、
（ｂ）配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２ドメインと、
（ｃ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３ドメインと、
（ｄ）配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１ドメインと、
（ｅ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２ドメインと、
（ｆ）配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３ドメインと
を含む。
【００３５】
一実施形態では、本明細書において提供される方法に従って有用な、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、
（ａ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１ドメインと、
（ｂ）配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２ドメインと、
（ｃ）配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３ドメインと、
（ｄ）配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１ドメインと、
（ｅ）配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２ドメインと、
（ｆ）配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３ドメインと
を含む。
【００３６】
また、本明細書において提供される方法によれば、本明細書において提供されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に同様の配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）を含む、ＧＣＧに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も有用である。
【００３７】
また、本明細書において提供される方法によれば、本明細書において提供されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に同様の配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）を含む、ＧＣＧに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も有用である。
【００３８】
また、本明細書において提供される方法によれば、本明細書において提供されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に同様の配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む、ＧＣＧに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も有用である。
【００３９】
また、本明細書において提供される方法によれば、本明細書において提供されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に同様の配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）を含む、ＧＣＧに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も有用である。
【００４０】
また、本明細書において提供される方法によれば、本明細書において提供されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に同様の配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）を含む、ＧＣＧに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も有用である。
【００４１】
また、本明細書において提供される方法によれば、本明細書に列挙されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に同様の配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む、ＧＣＧに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も有用である。
【００４２】
また、本明細書において提供される方法によれば、本明細書において提供されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のうちのいずれかとペアになった、本明細書において提供されるＨＣＤＲ３アミノ酸のうちのいずれかを含む、ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列ペア（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む、ＧＣＧに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も有用である。ある特定の実施形態によれば、抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書において提供される例示的な抗ＧＣＧ抗体のうちのいずれか中に含有されたＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列ペアを含む。ある特定の実施形態では、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列ペアは、配列番号１７２／１８０を含む。
【００４３】
また、本明細書において提供される方法によれば、本明細書において提供される例示的な抗ＧＣＧ抗体のうちのいずれか中に含有された６つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）を含む、ＧＣＧに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片も有用である。ある特定の実施形態では、ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列セットは、配列番号１６８／１７０／１７２／１７６／１７８／１８０を含む。ある特定の実施形態では、ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列セットは、配列番号１８４／１８６／１８８／１９２／１９４／１９６を含む。
【００４４】
関連する実施形態では、ＧＣＧに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書において提供される例示的な抗ＧＣＧ抗体のうちのいずれかによって定義されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペア中に含有された６つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３）を含む。例えば、ＧＣＧに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、１６６／１７４、１８２／１９０、１９８／２０６、２１４／２２２、２３０／２３８、２４６／２５４、２６２／２７０、２７８／２８６、および２９４／３０２からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペア中に含有された、ＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列セットを含む。
【００４５】
ＧＣＧに特異的に結合し、かつ上に提供されるＣＤＲ配列を含む抗体の非限定的な例としては、ＨＩＨ０５９Ｐ、Ｈ４Ｈ１０２２３Ｐ、Ｈ４Ｈ１０２３１Ｐ、Ｈ４Ｈ１０２３２Ｐ、Ｈ４Ｈ１０２３６Ｐ、Ｈ４Ｈ１０２３７Ｐ、Ｈ４Ｈ１０２３８Ｐ、Ｈ４Ｈ１０２５０Ｐ、Ｈ４Ｈ１０２５６Ｐ、およびＨ４Ｈ１０２７０Ｐが挙げられる。
【００４６】
ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列中のＣＤＲを特定するための方法および技術は当技術分野において周知であり、本明細書において開示される特定のＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲアミノ酸配列中のＣＤＲを特定するために使用され得る。ＣＤＲの境界を特定するために使用することができる例示的な慣例としては、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、およびＡｂＭ定義が挙げられる。一般論として、Ｋａｂａｔ定義は配列多様性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は構造上のループ領域の位置に基づき、ＡｂＭ定義はＫａｂａｔ法とＣｈｏｔｈｉａ法との折衷案である。例えば、Ｋａｂａｔ（１９９１年）「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら（１９９７年）、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２７３巻：９２７〜９４８頁；およびＭａｒｔｉｎら（１９８９年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８６巻：９２６８〜９２７２頁を参照されたい。抗体中のＣＤＲ配列を特定するために、公開データベースも利用可能である。
【００４７】
一部の実施形態では、重度のインスリン抵抗性を有する患者は、以下：ドナヒュー氏症候群、Ｒａｂｓｏｎ−Ｍｅｎｄｅｎｈａｌｌ症候群、Ａ型インスリン抵抗性、Ｂ型インスリン抵抗性、ＨＡＩＲ−ＡＮ（アンドロゲン過剰症、インスリン抵抗性、および黒色表皮腫）症候群、偽末端肥大症（ｐｓｅｕｄｏａｃｒｏｍｅｇａｌｙ）、アルストレーム症候群、筋緊張性ジストロフィー、ヴェルナー症候群、リポジストロフィー、硬変、単一遺伝子性病的肥満、高プロインスリン血症、カルボキシペプチダーゼＥ欠損症、アルギニン代謝障害、バルデー−ビードル症候群、および重度のインスリン抵抗性をもたらすことが報告されている１つまたは複数の遺伝子変異体の存在と関連付けられる状態または疾患から選択される状態または疾患のうちの１つを患っている場合がある。一部の実施形態では、患者の血清中でインスリン分解プロテアーゼ活性が検出される。一部の実施形態では、患者の血清中で中和性抗インスリン抗体または抗インスリン受容体抗体が検出される。一部の患者では、重度のインスリン抵抗性は、リポジストロフィーをもたらす脂肪細胞の自己免疫破壊との関連において生じる。
【００４８】
一部の態様では、重度のインスリン抵抗性と関連付けられる遺伝子変異体は、以下：ＩＮＳＲ、ＰＳＭＤ６、ＡＤＲＡ２Ａ、ＡＧＰＡＴ２（リポジストロフィーおよびインスリン抵抗性と関連付けられる）、ＡＫＴ２、ＡＰＰＬ１、ＢＢＳ１（バルデー−ビードル症候群１と関連付けられる）、ＢＳＣＬ２、ＣＩＤＥＣ、ＧＲＢ１０、ＩＲＳ２、ＫＬＦ１４、ＬＥＰ、ＬＥＰＲ、ＬＭＮＡ（リポジストロフィーと関連付けられる）、ＭＣ４Ｒ、ＰＣＮＴ、ＰＩＫ２ＣＡ、ＰＯＬＤ１（リポジストロフィーと関連付けられる）、ＰＰＡＲＧ、ＰＴＰＲＤ、ＰＴＲＦ（リポジストロフィーと関連付けられる）、ＲＡＳＧＲＰ１、ＴＢＣ１Ｄ４、およびＴＣＦ７Ｌ２から選択される。
【００４９】
一部の態様では、グルカゴン／ＧＣＧＲアンタゴニストを含む組成物は、少なくとも１種のさらなる治療剤と組み合わせて患者に投与される。さらなる治療剤は、重度のインスリン抵抗性と関連付けられる症状および徴候を緩和または低減させる任意の薬剤であり得る。一部の実施形態では、少なくとも１種のさらなる治療剤は、以下：インスリン、ビグアナイド、ｈＩＧＦ１、レプチン、メトレレプチン（ｍｅｔｒａｌｅｐｔｉｎ）、ピオグリタゾン、ビルダグリプチン、アカルボース、アルファ−グリコシダーゼ阻害剤、Ｌ−アルギニン、ジペプチジル−ペプチダーゼ−４阻害剤、インスリン分泌促進物質、アミリン受容体アゴニスト、インスリン感作物質、ＦＧＦ２１、ＳＧＬＴ２阻害剤、ＳＧＬＴ１阻害剤、ＧＬＰ−１受容体アゴニスト、ＧＬＰ−１受容体活性化剤、第２のＧＣＧ阻害剤、および第２のＧＣＧＲアンタゴニストから選択される。一部の態様では、インスリン分泌促進物質は、スルホニル尿素、ＡＴＰ感受性Ｋチャネルアンタゴニスト、およびメグリチニドから選択される。一部の態様では、インスリン感作物質は、チアゾリジンジオンおよびロシグリタゾンから選択される。一部の態様では、さらなる治療剤は、エネルギー消費および／または褐色脂肪の活性を増加させる薬剤、例えば、β３アドレナリン作動性アゴニスト（例えばミグリトール）、ＮＰＲ１アゴニスト、ＮＰＲ３アンタゴニスト、トリヨードチロニン、チアゾリジンジオン、ＶＥＧＦ、イリシン、メテオリン様、ナトリウム利尿ペプチド、オレキシン、ノルエピネフリン、Ｔ４、胆汁酸、ＦＧＦ−２１、メントール、ｓｌｉｔ２−Ｃ  ＢＭＰ７、ＢＭＰ８β、およびＦｎＩＩＩドメイン様／Ｔｎ３スキャフォールド（ヒトテネイシンＣの第３のフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインに基づく結合分子）などであり得る。
【００５０】
他の目的および利点は、続く詳細な説明を精査すれば明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１Ａ】図１Ａ〜１Ｅは、重度のインスリン抵抗性のマウスモデルにおける血中グルコースレベル、インスリンレベル、グルカゴンレベル、およびＢ−ヒドロキシブチレートレベル、ならびに体重を示す。図１Ａでは、インスリン受容体アンタゴニストであるＳ９６１、およびＧＣＧＲに対する抗体であるＨ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白三角）は、インスリン受容体アンタゴニストおよびアイソタイプ対照抗体で処置されたマウス（黒四角）における血中グルコースレベルと比べて、血中グルコースレベルの上昇を呈した。図１Ｂでは、Ｓ９６１でのマウスの処置は、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐの存在下（白三角）でさえ、時間をわたってインスリンレベルの上昇を実証した（黒四角）。図１Ｃでは、Ｓ９６１の非存在下（白丸）または存在下（白三角）において、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウスは、アイソタイプ対照処置マウス（黒丸）またはＳ９６１処置マウス（黒四角）よりも高いグルカゴンレベルを呈した。図１Ｄでは、Ｓ９６１およびＨ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白三角）は、アイソタイプ対照処置（黒丸）および抗体単独の対照（白丸）と同様のベータ−ヒドロキシブチレートレベルを維持した。ＧＣＧＲ抗体の非存在下においてインスリン受容体アンタゴニストで処置されたマウスは、他の処置群と比べてより高いベータ−ヒドロキシブチレートレベル（黒四角）を呈した。４つの処置群間で体重は変化しなかった。図１Ｅを参照されたい。
【図１Ｂ】図１Ａ〜１Ｅは、重度のインスリン抵抗性のマウスモデルにおける血中グルコースレベル、インスリンレベル、グルカゴンレベル、およびＢ−ヒドロキシブチレートレベル、ならびに体重を示す。図１Ａでは、インスリン受容体アンタゴニストであるＳ９６１、およびＧＣＧＲに対する抗体であるＨ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白三角）は、インスリン受容体アンタゴニストおよびアイソタイプ対照抗体で処置されたマウス（黒四角）における血中グルコースレベルと比べて、血中グルコースレベルの上昇を呈した。図１Ｂでは、Ｓ９６１でのマウスの処置は、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐの存在下（白三角）でさえ、時間をわたってインスリンレベルの上昇を実証した（黒四角）。図１Ｃでは、Ｓ９６１の非存在下（白丸）または存在下（白三角）において、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウスは、アイソタイプ対照処置マウス（黒丸）またはＳ９６１処置マウス（黒四角）よりも高いグルカゴンレベルを呈した。図１Ｄでは、Ｓ９６１およびＨ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白三角）は、アイソタイプ対照処置（黒丸）および抗体単独の対照（白丸）と同様のベータ−ヒドロキシブチレートレベルを維持した。ＧＣＧＲ抗体の非存在下においてインスリン受容体アンタゴニストで処置されたマウスは、他の処置群と比べてより高いベータ−ヒドロキシブチレートレベル（黒四角）を呈した。４つの処置群間で体重は変化しなかった。図１Ｅを参照されたい。
【図１Ｃ】図１Ａ〜１Ｅは、重度のインスリン抵抗性のマウスモデルにおける血中グルコースレベル、インスリンレベル、グルカゴンレベル、およびＢ−ヒドロキシブチレートレベル、ならびに体重を示す。図１Ａでは、インスリン受容体アンタゴニストであるＳ９６１、およびＧＣＧＲに対する抗体であるＨ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白三角）は、インスリン受容体アンタゴニストおよびアイソタイプ対照抗体で処置されたマウス（黒四角）における血中グルコースレベルと比べて、血中グルコースレベルの上昇を呈した。図１Ｂでは、Ｓ９６１でのマウスの処置は、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐの存在下（白三角）でさえ、時間をわたってインスリンレベルの上昇を実証した（黒四角）。図１Ｃでは、Ｓ９６１の非存在下（白丸）または存在下（白三角）において、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウスは、アイソタイプ対照処置マウス（黒丸）またはＳ９６１処置マウス（黒四角）よりも高いグルカゴンレベルを呈した。図１Ｄでは、Ｓ９６１およびＨ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白三角）は、アイソタイプ対照処置（黒丸）および抗体単独の対照（白丸）と同様のベータ−ヒドロキシブチレートレベルを維持した。ＧＣＧＲ抗体の非存在下においてインスリン受容体アンタゴニストで処置されたマウスは、他の処置群と比べてより高いベータ−ヒドロキシブチレートレベル（黒四角）を呈した。４つの処置群間で体重は変化しなかった。図１Ｅを参照されたい。
【図１Ｄ】図１Ａ〜１Ｅは、重度のインスリン抵抗性のマウスモデルにおける血中グルコースレベル、インスリンレベル、グルカゴンレベル、およびＢ−ヒドロキシブチレートレベル、ならびに体重を示す。図１Ａでは、インスリン受容体アンタゴニストであるＳ９６１、およびＧＣＧＲに対する抗体であるＨ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白三角）は、インスリン受容体アンタゴニストおよびアイソタイプ対照抗体で処置されたマウス（黒四角）における血中グルコースレベルと比べて、血中グルコースレベルの上昇を呈した。図１Ｂでは、Ｓ９６１でのマウスの処置は、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐの存在下（白三角）でさえ、時間をわたってインスリンレベルの上昇を実証した（黒四角）。図１Ｃでは、Ｓ９６１の非存在下（白丸）または存在下（白三角）において、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウスは、アイソタイプ対照処置マウス（黒丸）またはＳ９６１処置マウス（黒四角）よりも高いグルカゴンレベルを呈した。図１Ｄでは、Ｓ９６１およびＨ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白三角）は、アイソタイプ対照処置（黒丸）および抗体単独の対照（白丸）と同様のベータ−ヒドロキシブチレートレベルを維持した。ＧＣＧＲ抗体の非存在下においてインスリン受容体アンタゴニストで処置されたマウスは、他の処置群と比べてより高いベータ−ヒドロキシブチレートレベル（黒四角）を呈した。４つの処置群間で体重は変化しなかった。図１Ｅを参照されたい。
【図１Ｅ】図１Ａ〜１Ｅは、重度のインスリン抵抗性のマウスモデルにおける血中グルコースレベル、インスリンレベル、グルカゴンレベル、およびＢ−ヒドロキシブチレートレベル、ならびに体重を示す。図１Ａでは、インスリン受容体アンタゴニストであるＳ９６１、およびＧＣＧＲに対する抗体であるＨ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白三角）は、インスリン受容体アンタゴニストおよびアイソタイプ対照抗体で処置されたマウス（黒四角）における血中グルコースレベルと比べて、血中グルコースレベルの上昇を呈した。図１Ｂでは、Ｓ９６１でのマウスの処置は、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐの存在下（白三角）でさえ、時間をわたってインスリンレベルの上昇を実証した（黒四角）。図１Ｃでは、Ｓ９６１の非存在下（白丸）または存在下（白三角）において、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウスは、アイソタイプ対照処置マウス（黒丸）またはＳ９６１処置マウス（黒四角）よりも高いグルカゴンレベルを呈した。図１Ｄでは、Ｓ９６１およびＨ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白三角）は、アイソタイプ対照処置（黒丸）および抗体単独の対照（白丸）と同様のベータ−ヒドロキシブチレートレベルを維持した。ＧＣＧＲ抗体の非存在下においてインスリン受容体アンタゴニストで処置されたマウスは、他の処置群と比べてより高いベータ−ヒドロキシブチレートレベル（黒四角）を呈した。４つの処置群間で体重は変化しなかった。図１Ｅを参照されたい。
【００５２】
【図２Ａ】図２Ａ〜２Ｆは、重度のインスリン抵抗性のマウスモデルにおける血中グルコースレベル、インスリンレベル、グルカゴンレベル、Ｂ−ヒドロキシブチレートレベル、およびアミノ酸レベル、ならびに体重を示す。抗体であるＨ４Ｈ１３２７Ｐによる処置の前にインスリン受容体アンタゴニスト（Ｓ９６１）による処置により、血中グルコースレベルが上昇し、血中グルコースレベルを低下させる抗体の能力が抗体処置の開始から数日以内に実証された（白三角）。図２Ａを参照されたい。図２Ｂでは、Ｓ９６１での処置によりインスリンレベルが上がり（黒四角）、ＧＣＧＲ抗体であるＨ４Ｈ１３２７Ｐを用いた後続処置はインスリンレベルを低下させなかった（白三角）。図２Ｃに示されるように、グルカゴンレベルは、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白丸）においてより高く、抗体およびＳ９６１両方で処置されたマウス（白三角）ではさらに高かった。図２Ｄは、血漿ベータ−ヒドロキシブチレートレベルがＳ９６１による処置に応答して上昇した（黒四角）が、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐでの処置から数日以内にレベルが未処置対照および抗体単独の対照（白三角）のレベルに下がったことを示す。図２Ｅは、アミノ酸レベルが、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白丸）においてより高く、抗体およびＳ９６１両方で処置されたマウス（白三角）ではさらに高かったことを示す。体重の変化は観察されなかった。図２Ｆを参照されたい。
【図２Ｂ】図２Ａ〜２Ｆは、重度のインスリン抵抗性のマウスモデルにおける血中グルコースレベル、インスリンレベル、グルカゴンレベル、Ｂ−ヒドロキシブチレートレベル、およびアミノ酸レベル、ならびに体重を示す。抗体であるＨ４Ｈ１３２７Ｐによる処置の前にインスリン受容体アンタゴニスト（Ｓ９６１）による処置により、血中グルコースレベルが上昇し、血中グルコースレベルを低下させる抗体の能力が抗体処置の開始から数日以内に実証された（白三角）。図２Ａを参照されたい。図２Ｂでは、Ｓ９６１での処置によりインスリンレベルが上がり（黒四角）、ＧＣＧＲ抗体であるＨ４Ｈ１３２７Ｐを用いた後続処置はインスリンレベルを低下させなかった（白三角）。図２Ｃに示されるように、グルカゴンレベルは、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白丸）においてより高く、抗体およびＳ９６１両方で処置されたマウス（白三角）ではさらに高かった。図２Ｄは、血漿ベータ−ヒドロキシブチレートレベルがＳ９６１による処置に応答して上昇した（黒四角）が、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐでの処置から数日以内にレベルが未処置対照および抗体単独の対照（白三角）のレベルに下がったことを示す。図２Ｅは、アミノ酸レベルが、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白丸）においてより高く、抗体およびＳ９６１両方で処置されたマウス（白三角）ではさらに高かったことを示す。体重の変化は観察されなかった。図２Ｆを参照されたい。
【図２Ｃ】図２Ａ〜２Ｆは、重度のインスリン抵抗性のマウスモデルにおける血中グルコースレベル、インスリンレベル、グルカゴンレベル、Ｂ−ヒドロキシブチレートレベル、およびアミノ酸レベル、ならびに体重を示す。抗体であるＨ４Ｈ１３２７Ｐによる処置の前にインスリン受容体アンタゴニスト（Ｓ９６１）による処置により、血中グルコースレベルが上昇し、血中グルコースレベルを低下させる抗体の能力が抗体処置の開始から数日以内に実証された（白三角）。図２Ａを参照されたい。図２Ｂでは、Ｓ９６１での処置によりインスリンレベルが上がり（黒四角）、ＧＣＧＲ抗体であるＨ４Ｈ１３２７Ｐを用いた後続処置はインスリンレベルを低下させなかった（白三角）。図２Ｃに示されるように、グルカゴンレベルは、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白丸）においてより高く、抗体およびＳ９６１両方で処置されたマウス（白三角）ではさらに高かった。図２Ｄは、血漿ベータ−ヒドロキシブチレートレベルがＳ９６１による処置に応答して上昇した（黒四角）が、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐでの処置から数日以内にレベルが未処置対照および抗体単独の対照（白三角）のレベルに下がったことを示す。図２Ｅは、アミノ酸レベルが、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白丸）においてより高く、抗体およびＳ９６１両方で処置されたマウス（白三角）ではさらに高かったことを示す。体重の変化は観察されなかった。図２Ｆを参照されたい。
【図２Ｄ】図２Ａ〜２Ｆは、重度のインスリン抵抗性のマウスモデルにおける血中グルコースレベル、インスリンレベル、グルカゴンレベル、Ｂ−ヒドロキシブチレートレベル、およびアミノ酸レベル、ならびに体重を示す。抗体であるＨ４Ｈ１３２７Ｐによる処置の前にインスリン受容体アンタゴニスト（Ｓ９６１）による処置により、血中グルコースレベルが上昇し、血中グルコースレベルを低下させる抗体の能力が抗体処置の開始から数日以内に実証された（白三角）。図２Ａを参照されたい。図２Ｂでは、Ｓ９６１での処置によりインスリンレベルが上がり（黒四角）、ＧＣＧＲ抗体であるＨ４Ｈ１３２７Ｐを用いた後続処置はインスリンレベルを低下させなかった（白三角）。図２Ｃに示されるように、グルカゴンレベルは、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白丸）においてより高く、抗体およびＳ９６１両方で処置されたマウス（白三角）ではさらに高かった。図２Ｄは、血漿ベータ−ヒドロキシブチレートレベルがＳ９６１による処置に応答して上昇した（黒四角）が、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐでの処置から数日以内にレベルが未処置対照および抗体単独の対照（白三角）のレベルに下がったことを示す。図２Ｅは、アミノ酸レベルが、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白丸）においてより高く、抗体およびＳ９６１両方で処置されたマウス（白三角）ではさらに高かったことを示す。体重の変化は観察されなかった。図２Ｆを参照されたい。
【図２Ｅ】図２Ａ〜２Ｆは、重度のインスリン抵抗性のマウスモデルにおける血中グルコースレベル、インスリンレベル、グルカゴンレベル、Ｂ−ヒドロキシブチレートレベル、およびアミノ酸レベル、ならびに体重を示す。抗体であるＨ４Ｈ１３２７Ｐによる処置の前にインスリン受容体アンタゴニスト（Ｓ９６１）による処置により、血中グルコースレベルが上昇し、血中グルコースレベルを低下させる抗体の能力が抗体処置の開始から数日以内に実証された（白三角）。図２Ａを参照されたい。図２Ｂでは、Ｓ９６１での処置によりインスリンレベルが上がり（黒四角）、ＧＣＧＲ抗体であるＨ４Ｈ１３２７Ｐを用いた後続処置はインスリンレベルを低下させなかった（白三角）。図２Ｃに示されるように、グルカゴンレベルは、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白丸）においてより高く、抗体およびＳ９６１両方で処置されたマウス（白三角）ではさらに高かった。図２Ｄは、血漿ベータ−ヒドロキシブチレートレベルがＳ９６１による処置に応答して上昇した（黒四角）が、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐでの処置から数日以内にレベルが未処置対照および抗体単独の対照（白三角）のレベルに下がったことを示す。図２Ｅは、アミノ酸レベルが、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白丸）においてより高く、抗体およびＳ９６１両方で処置されたマウス（白三角）ではさらに高かったことを示す。体重の変化は観察されなかった。図２Ｆを参照されたい。
【図２Ｆ】図２Ａ〜２Ｆは、重度のインスリン抵抗性のマウスモデルにおける血中グルコースレベル、インスリンレベル、グルカゴンレベル、Ｂ−ヒドロキシブチレートレベル、およびアミノ酸レベル、ならびに体重を示す。抗体であるＨ４Ｈ１３２７Ｐによる処置の前にインスリン受容体アンタゴニスト（Ｓ９６１）による処置により、血中グルコースレベルが上昇し、血中グルコースレベルを低下させる抗体の能力が抗体処置の開始から数日以内に実証された（白三角）。図２Ａを参照されたい。図２Ｂでは、Ｓ９６１での処置によりインスリンレベルが上がり（黒四角）、ＧＣＧＲ抗体であるＨ４Ｈ１３２７Ｐを用いた後続処置はインスリンレベルを低下させなかった（白三角）。図２Ｃに示されるように、グルカゴンレベルは、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白丸）においてより高く、抗体およびＳ９６１両方で処置されたマウス（白三角）ではさらに高かった。図２Ｄは、血漿ベータ−ヒドロキシブチレートレベルがＳ９６１による処置に応答して上昇した（黒四角）が、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐでの処置から数日以内にレベルが未処置対照および抗体単独の対照（白三角）のレベルに下がったことを示す。図２Ｅは、アミノ酸レベルが、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウス（白丸）においてより高く、抗体およびＳ９６１両方で処置されたマウス（白三角）ではさらに高かったことを示す。体重の変化は観察されなかった。図２Ｆを参照されたい。
【００５３】
【図３】図３Ａおよび３Ｂは、Ｓ９６１およびＨ４Ｈ１３２７Ｐの一方または両方で処置されたマウスから得られたマウス肝臓試料に対するウェスタンブロット解析の結果を提供する。Ｈ４Ｈ１３２７Ｐでの処置により、マウス肝臓内のホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（Ｐｅｐｃｋ）がアイソタイプ処置対照群と比べて７０％低減し、Ｓ９６１での処置により、Ｐｅｐｃｋレベルが２．３倍上昇した。Ｈ４Ｈ１３２７Ｐでの処置は、Ｓ９６１によりもたらされたレベルの上昇をベースラインの３０％未満に逆転させた。図３Ａおよび３Ｂを参照されたい。
【００５４】
【図４Ａ】図４Ａ〜４Ｄは、膵臓組織に対する４つの処置の効果を示す。膵臓重量、図４Ａ；膵臓α細胞質量（ｃｅｌｌ  ｍａｓｓ）、図４Ｂ；膵臓β細胞質量、図４Ｃ；および全膵臓面積に対する膵島数、図４Ｄ。β細胞質量は、Ｓ９６１単独と比較した場合、Ｓ９６１およびＨ４Ｈ１３２７Ｐの存在下で２倍になり、対照マウスと比べると５．８倍増加した。図４Ｃを参照されたい。
【図４Ｂ】図４Ａ〜４Ｄは、膵臓組織に対する４つの処置の効果を示す。膵臓重量、図４Ａ；膵臓α細胞質量（ｃｅｌｌ  ｍａｓｓ）、図４Ｂ；膵臓β細胞質量、図４Ｃ；および全膵臓面積に対する膵島数、図４Ｄ。β細胞質量は、Ｓ９６１単独と比較した場合、Ｓ９６１およびＨ４Ｈ１３２７Ｐの存在下で２倍になり、対照マウスと比べると５．８倍増加した。図４Ｃを参照されたい。
【図４Ｃ】図４Ａ〜４Ｄは、膵臓組織に対する４つの処置の効果を示す。膵臓重量、図４Ａ；膵臓α細胞質量（ｃｅｌｌ  ｍａｓｓ）、図４Ｂ；膵臓β細胞質量、図４Ｃ；および全膵臓面積に対する膵島数、図４Ｄ。β細胞質量は、Ｓ９６１単独と比較した場合、Ｓ９６１およびＨ４Ｈ１３２７Ｐの存在下で２倍になり、対照マウスと比べると５．８倍増加した。図４Ｃを参照されたい。
【図４Ｄ】図４Ａ〜４Ｄは、膵臓組織に対する４つの処置の効果を示す。膵臓重量、図４Ａ；膵臓α細胞質量（ｃｅｌｌ  ｍａｓｓ）、図４Ｂ；膵臓β細胞質量、図４Ｃ；および全膵臓面積に対する膵島数、図４Ｄ。β細胞質量は、Ｓ９６１単独と比較した場合、Ｓ９６１およびＨ４Ｈ１３２７Ｐの存在下で２倍になり、対照マウスと比べると５．８倍増加した。図４Ｃを参照されたい。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
本方法について記載する前に、かかる方法および条件は様々であり得るため、記載される特定の方法および実験条件に本発明が限定されないことを理解されたい。また、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書において使用される専門用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的とするものであり、限定を意図するものではないことも理解されたい。
【００５６】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」という単数形には、文脈上他の意味を示すことが明らかでない限り、複数の参照物が含まれる。よって、例えば、「方法（ａ  ｍｅｔｈｏｄ）」への言及は、１つまたは複数の方法、および／または本明細書に記載される種類のステップ、および／または本開示を読めば当業者には明らかになるものを含む、などである。
【００５７】
別途定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有する。本発明の実践または試験においては、本明細書に記載されるものと同様または同等の任意の方法および材料を使用することができるが、好ましい方法および材料についてこれより記載する。本明細書において言及されるすべての特許、出願、および非特許公開文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。
【００５８】
概説
重度のインスリン抵抗性は、様々な生理学的および病態生理学的な状況と関連して生じる。臨床的所見としては、高インスリン血症、黒色表皮腫、卵巣アンドロゲン過剰症、多嚢胞性卵巣、および最終的な高血糖症が挙げられ、稀な事例では、患者はケトアシドーシスを発症する場合がある。重度のインスリン抵抗性をより一般的なインスリン抵抗性と区別するための合意の得られた定義はないが、症候性のインスリン抵抗性は、原発性インスリンシグナル伝達欠損（インスリン受容体疾患（ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｏｐａｔｈｙ）またはインスリンシグナル伝達経路の部分的な破壊）、または脂肪組織異常（重度の肥満またはリポジストロフィー）に続発するインスリン抵抗性のいずれかとして分類されてきた。Ｓｅｍｐｌｅら（２０１１年）、Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ  ｏｆ  Ｓｅｖｅｒｅ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、３２巻（４号）：４９８〜５１４頁を参照されたい。
【００５９】
重度のインスリン抵抗性の証拠は、１日当たり１００〜２００単位を超える用量の外因性インスリンを必要とする患者、または内因性インスリンの循環血中レベルが慢性的に上昇している患者において見られる。ＭｏｌｌｅｒおよびＦｌｉｅｒ（１９９１年）、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３２５巻：９３８〜９４８頁。５０〜７０μＵ／ｍＬを超える空腹時インスリンレベル、または３５０μＵ／ｍＬを超えるピーク（経口グルコース負荷試験後）インスリンレベルは、重度のインスリン抵抗性を示唆する。２×１０４μＵ／ｍＬ・分未満のインスリン感受性指数値は、典型的には、重度のインスリン抵抗性の存在下で生じる。重度のインスリン抵抗性を有する患者は、２ｍｇ／ｋｇ・分未満のグルコース処理速度も呈する。ＴｒｉｔｏｓおよびＭａｎｔｚｏｒｏｓ（１９９８年）、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、８３巻：３０２５〜３０３０頁を参照されたい。
【００６０】
インスリンは、標的細胞の形質膜にあるインスリン受容体と相互作用する。インスリン受容体は、膜貫通チロシンキナーゼ受容体であり、グルコース恒常性を制御するように機能する。インスリン受容体は、インスリンが結合するための部位を含有する２つのαサブユニットと、チロシンキナーゼドメインを含有する２つのβサブユニットとからなり、サブユニットは、ジスルフィド架橋によって接続されて３５０ｋＤａのβ−α−α−β四量体を形成する。受容体には、エクソン１１を有するアイソフォーム（ＩＲ−Ｂ）およびエクソン１１を有しないアイソフォーム（ＩＲ−Ａ）という２種のアイソフォームが存在し、アイソフォームの発現レベルは種々の組織において異なる。ＩＲ−Ｂアイソフォームは、ＩＲ−Ａアイソフォームよりも高く効率的なシグナル伝達活性を呈し、ＩＲ−Ｂアイソフォームは、主として肝臓、脂肪組織、および筋組織において発現する。ＩＲ−ＡアイソフォームはＣＮＳ細胞および造血細胞において発現し、わずかに高いインスリン結合親和性を有する。
【００６１】
活性化されたインスリン受容体のチロシンキナーゼ活性は、グルコース輸送の膜貫通シグナル伝達およびグルコース恒常性の制御に関与している。
【００６２】
重度のインスリン抵抗性は典型的に、細胞表面における発現または受容体のシグナル伝達能の低下をもたらすインスリン受容体突然変異と関連付けられる。他の突然変異としては、受容体結合親和性の欠損、またはインスリンシグナルトランスダクション経路、例えばインスリン受容体のチロシンキナーゼドメインの保存領域に関与するタンパク質の突然変異が挙げられる。
【００６３】
重度のインスリン抵抗性を有する患者は、以下：ドナヒュー氏症候群、Ｒａｂｓｏｎ−Ｍｅｎｄｅｎｈａｌｌ症候群、Ａ型インスリン抵抗性、Ｂ型インスリン抵抗性、ＨＡＩＲ−ＡＮ（アンドロゲン過剰症、インスリン抵抗性、および黒色表皮腫）症候群、偽末端肥大症、アルストレーム症候群、筋緊張性ジストロフィー、ヴェルナー症候群、リポジストロフィー、硬変、単一遺伝子性病的肥満、高プロインスリン血症、カルボキシペプチダーゼＥ欠損症、アルギニン代謝障害、またはバルデー−ビードル症候群から選択される状態または疾患を患っている場合がある。
【００６４】
遺伝的および後天的な重度のインスリン抵抗性の状況は、身体の組織および臓器がインスリンに対して適切に応答しない稀な障害である。重度のインスリン抵抗性と関連付けられる臨床的所見としては、成長遅滞、臓器肥大、骨格および脂肪組織の発達障害、軟部組織異常増殖、糖尿病、脂肪肝（ｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅａｔｏｓｉｓ）、黒色表皮腫、卵巣アンドロゲン過剰症、および多毛症が挙げられる。検査所見としては、高インスリン血症、インスリンクリアランスの低減、高血糖症、脂質異常症、およびアンドロゲンの上昇が挙げられる。重度のインスリン抵抗性と関連付けられる種々の症候群はそれぞれ、一般的な臨床および検査上の特色の一部またはすべてに加え、独特の特色を有する。
【００６５】
ドナヒュー氏症候群（ＤＳ、妖精症ともいう）およびＲａｂｓｏｎ−Ｍｅｎｄｅｎｈａｌｌ症候群（ＲＭＳ）は、インスリン受容体の両方の対立遺伝子が異常であり、患者が内因性および外因性のインスリンに応答することができない稀な常染色体劣性状態である。ＤＳおよびＲＭＳを有する個体は出生前から未発達であり、乳児として発育することができない。患者は、最高で正常レベルの１０００倍という極めて高い循環血中インスリンのレベルを示す。ＤＳの一次的な代謝結果は空腹時低血糖であり、二次的には食後高血糖症である。ＤＳと診断された個体は通常１歳未満で死亡し、糖尿病性ケトアシドーシスを発症しない。ＲＭＳを有する個体も空腹時低血糖を経験し、典型的に乳児期を生き抜くが、やがて重度かつ難治性の糖尿病性ケトアシドーシスを発症し、インスリンレベルが低下する。
【００６６】
ケトン血症は、脂肪酸の破壊およびアミノ酸の脱アミノ化によってケトン体が形成され、血液中に蓄積した場合に生じる。これが未処置のままであれば、次いで患者は糖尿病性ケトアシドーシスへと進み続け得る。ベータ−ヒドロキシブチレートおよびアセト酢酸は、より一般的なケトンのうちの２つであり、上昇したレベルは、ケトン血症の重症度およびケトアシドーシスの指標を計測するために使用され得る。
【００６７】
Ａ型インスリン抵抗性症候群は、重度のインスリン抵抗性によって特徴付けられる別の稀な障害であり、症状は典型的に、女性では思春期、または男性では成人期に現れる。女性は、原発性無月経または希発月経、卵巣嚢胞、多毛症、および黒色表皮腫を示すが、典型的には体重過多ではない。罹患した男性は真性糖尿病を発症するときに症状を示す。ＤＳおよびＲＭＳの場合と同様に、インスリン受容体遺伝子突然変異がＡ型インスリン抵抗性症候群の一因である。
【００６８】
リポジストロフィーは、インスリン受容体自体またはインスリンシグナル伝達カスケードの下流構成成分における欠損に起因する異常な脂肪の分布、利用、および代謝によって特徴付けられる障害の一群を指す。リポジストロフィーの患者は、脂肪組織の全身性または部分的な欠如、インスリン抵抗性（糖尿病の有無にかかわらない）、著しい脂質異常症、および脂肪肝（ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ）を示す。Ｂｅｒａｒｄｉｎｅｌｌｉ−Ｓｅｉｐ症候群のような一部のリポジストロフィー症候群は遺伝性であり、Ｌａｗｒｅｎｃｅ症候群を含む他は後天的で、時には感染性の前駆症状の後に得られる。さらなるリポジストロフィー症候群としては、Ｋｏｂｂｅｒｌｉｎｇ−Ｄｕｎｎｉｇａｎ症候群、他の異形症の特色を伴うリポジストロフィー、および頭胸部のリポジストロフィーが挙げられる。
【００６９】
Ｂ型インスリン抵抗性症候群は、インスリン受容体に対する血清自己抗体の存在と関連付けられ、自己免疫疾患との関連において起こり得るという点で、ＤＳ、ＲＭＳ、およびＡ型インスリン抵抗性症候群とは異なる。症状は他のインスリン抵抗性症候群と同様であり、時折の奇異性低血糖（ｐａｒａｄｏｘａｌ  ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉａ）に加えて、非ケトン性および重度インスリン抵抗性糖尿病、黒色表皮腫、ならびに多毛症を含む。
【００７０】
ＨＡＩＲ−ＡＮ（アンドロゲン過剰症、インスリン抵抗性、および黒色表皮腫）症候群は、様々な形態をとるインスリン抵抗性を有する典型的には肥満の若年女性において現れる。一部の個体は高いインスリン濃度を有するが正常なグルコースレベルを有し、一方、他は糖尿病症状を示す。他の重度のインスリン抵抗性の症候群が稀であることとは異なり、ＨＡＩＲ−ＡＮ症候群は、全世界で思春期の少女の約５％に影響すると推測されている。症候群は、インスリン受容体遺伝子のチロシンキナーゼドメインの突然変異と関連付けられている。
【００７１】
偽末端肥大症は類肢端巨人症との関連において重度のインスリン抵抗性を示し、インスリンシグナル伝達経路の欠損、またはＩＧＦ−１受容体を通じてシグナル伝達する高いインスリンレベルに起因すると思われる。
【００７２】
他の重度インスリン抵抗性症候群には、いくつか例を挙げると、アルストレーム症候群、筋緊張性ジストロフィー、およびヴェルナー症候群が含まれる。
【００７３】
一部の患者では、状態または疾患は、重度のインスリン抵抗性をもたらすことが報告されている遺伝子変異体の存在と関連付けられる。例示的な遺伝子変異体としては、ＩＮＳＲ、ＰＳＭＤ６、ＡＤＲＡ２Ａ、ＡＧＰＡＴ２（リポジストロフィーおよびインスリン抵抗性と関連付けられる）、ＡＫＴ２、ＡＰＰＬ１、ＢＢＳ１（バルデー−ビードル症候群１と関連付けられる）、ＢＳＣＬ２、ＣＩＤＥＣ、ＧＲＢ１０、ＩＲＳ２、ＫＬＦ１４、ＬＥＰ、ＬＥＰＲ、ＬＭＮＡ（リポジストロフィーと関連付けられる）、ＭＣ４Ｒ、ＰＣＮＴ、ＰＩＫ２ＣＡ、ＰＯＬＤ１（リポジストロフィーと関連付けられる）、ＰＰＡＲＧ、ＰＴＰＲＤ、ＰＴＲＦ（リポジストロフィーと関連付けられる）、ＲＡＳＧＲＰ１、ＴＢＣ１Ｄ４、およびＴＣＦ７Ｌ２が挙げられる。
【００７４】
一部の患者では、患者の血清中でインスリン分解プロテアーゼ活性が検出される。一部の患者では、患者の血清中で中和性抗インスリン抗体または抗インスリン受容体抗体が検出される。一部の患者では、重度のインスリン抵抗性は、リポジストロフィーをもたらす脂肪細胞の自己免疫破壊との関連において生じる。
【００７５】
重度のインスリン抵抗性を有する患者は最終的に高血糖症を、一部の症候群ではケトアシドーシスを発症する。例えば、ＲＭＳの患者では、インスリンレベルは、幼少期、さらには奇異性空腹時低血糖の期間中にも、非常に高い状態から始まる。疾患が進行するにつれ、インスリンレベルは高いままであるが低下する。加えて、部分的に酸化された脂肪酸のレベルが上昇する。これは、インスリンが脂肪細胞からの脂肪酸の放出を抑制することができず、最終的に恒常的なケトアシドーシスをもたらすことを示す。同様に、恒常的な高血糖症の結果として、インスリンレベルが、肝臓におけるグルコースの産生および放出を抑制することができなくなる。しかしながら、極度に高い濃度のインスリン（９．５Ｕ／ｋｇ・時間）の持続注入により、増加した脂肪酸の酸化を逆転させ、ケトン尿症を阻止することができる。Ｌｏｎｇｏら（１９９１年）、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ＆  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、８４巻：２６２３〜２６２９頁。加えて、高トリグリセリド血症および低い高密度リポタンパク質コレステロールレベルが、重度のインスリン抵抗性と関連付けられている。
【００７６】
重度インスリン抵抗性症候群の患者は、高血糖症にもかかわらず、正常またはさらにはわずかに上昇した血漿グルカゴンレベルを有する。Ｗｅｓｔら（１９７５年）、Ａｒｃｈ．  Ｄｉｓ．  Ｃｈｉｌｄ．、５０巻（９号）：７０３〜７０８頁；Ｄｅｓｂｏｉｓ−Ｍｏｕｔｈｏｎら（１９９７年）、Ｐｅｄｉａｔｒ．  Ｒｅｓ．、４２巻（１号）：７２〜７７頁。高血糖症は、インスリン抑制の不足および異常に高いグルカゴンシグナル伝達に起因する肝臓におけるグルコース生産の増強から結果として生じる。
【００７７】
今日まで、ＧＣＧ／ＧＣＧＲシグナル伝達経路をアンタゴナイズすることの、重度のインスリン抵抗性状態または疾患に対する効果を調査した研究は存在しない。実施例に記載される研究では、重度のインスリン抵抗性のマウスモデルにおいて、ＧＣＧ／ＧＣＧＲシグナル伝達経路の例示的な阻害剤としてＧＣＧＲのアンタゴニストを使用して、数週間の処置にわたり、血中グルコースレベル、および血漿ベータ−ヒドロキシブチレートレベルによって測定されるケトン血症に対する効果を実証する。
【００７８】
定義
本明細書では「ＧＣＧＲ」とも呼ばれる「グルカゴン受容体」は、Ｇタンパク質共役受容体クラス２ファミリーに属し、長いアミノ末端細胞外ドメイン、７つの膜貫通セグメント、および細胞内Ｃ末端ドメインからなる。グルカゴン受容体は、とりわけ肝実質細胞の表面で発現し、ここでグルカゴンに結合し、それによりもたらされたシグナルを細胞内に伝達する。したがって、「グルカゴン受容体」という用語は、グルカゴンと特異的に相互作用して、結果として生物学的シグナルを生じる１つまたは複数の受容体も指す。当技術分野では、ラットおよびヒト起源のグルカゴン受容体をコードするＤＮＡ配列が単離され、開示されている（ＥＰ０６５８２００Ｂ１）。マウスおよびカニクイザルのホモログも単離され、シーケンシングされている（Ｂｕｒｃｅｌｉｎら（１９９５年）、Ｇｅｎｅ、１６４巻：３０５〜３１０号；ＭｃＮａｌｌｙら（２００４年）、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、２５巻：１１７１〜１１７８頁）。本明細書で使用される場合、「グルカゴン受容体」および「ＧＣＧＲ」は交換可能に使用される。「ＧＣＧＲ」、「ｈＧＣＧＲ」、またはその断片という表現は、本明細書で使用される場合、非ヒト種に由来するもの、例えば「マウスＧＣＧＲ」、「ラットＧＣＧＲ」、または「サルＧＣＧＲ」であることが特定されている場合を除き、ヒトＧＣＧＲタンパク質またはその断片を指す。
【００７９】
「ＧＣＧＲアンタゴニスト」という語句は、ＧＣＧＲシグナル伝達経路の阻害剤、アンタゴニスト、またはインバースアゴニストを指す。「ＧＣＧ阻害剤」は、受容体へのグルカゴンの結合を防止し得る。ＧＣＧＲ阻害剤も、受容体へのグルカゴンの結合を防止し得る。しかしながら、いずれも受容体の活性化を有効に遮断もしくは減弱するか、またはＧＣＧＲ活性化下流のシグナル伝達カスケードと干渉し得る。
【００８０】
ＧＣＧＲアンタゴニストは、グルカゴン受容体に結合し、それによって、ＧＣＧＲにより媒介されるＧＣＧの活性をアンタゴナイズすることができる。ＧＣＧＲにおけるＧＣＧの結合および活性をアンタゴナイズすることによりＧＣＧの活性を阻害することによって、糖新生および糖原分解の速度、ならびに血漿中のグルコースの濃度が低下する。推定されるアンタゴニストのグルカゴン受容体との結合を決定するための方法は当技術分野では公知であり、グルカゴン受容体におけるグルカゴン活性との干渉を決定するための手段は公開されている。例えば、Ｓ．  Ｅ．  ｄｅ  Ｌａｓｚｌｏら（１９９９年）、Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔ．、９巻：６４１〜６４６頁を参照されたい。本明細書において有用と企図されるものは、小分子化合物、または言い換えれば低分子量の有機化合物をその機能的構成成分として有する、ＧＣＧＲアンタゴニストまたはＧＣＧ阻害剤である。小分子は、典型的には８００ダルトン未満である。さらに、ＣＲＩＳＰＲ技術を使用して、ＧＣＧまたはＧＣＧＲの発現をノックダウンすることができる。
【００８１】
「阻害剤」または「アンタゴニスト」という用語には、化学的もしくは生理学的な反応もしくは応答を遅滞させるか、または防止する物質が含まれる。一般的な阻害剤またはアンタゴニストとしては、アンチセンス分子、抗体、小分子阻害剤、ペプチド阻害剤、ＤＡＲＰｉｎ、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ、アプタマー、操作されたＦｎ  ＩＩＩ型ドメイン、およびそれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８２】
ＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲシグナル伝達経路アンタゴニストの例としては、ＧＣＧＲシグナル伝達経路の結合を遮断する、またはその活性を阻害する、ＧＣＧまたはＧＣＧＲに対する抗体（ヒト抗体またはヒト化抗体）、またはその抗原結合性部分が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載される方法において使用され得る例示的なＧＣＧＲアンタゴニストとしては、（ａ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、７０、８６、９０、１０６、１１０、１２６、１３０、および１４６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに／または（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、および１４８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が挙げられる。本明細書に記載される方法において使用され得る例示的なＧＣＧ阻害剤としては、（ａ）配列番号１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、および２９４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに／または（ｂ）配列番号１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、および３０２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が挙げられる。
【００８３】
「治療有効用量」とは、投与に関して所望の効果をもたらす用量である。正確な用量は処置の目的に左右され、当業者が公知の技術（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９年）、Ｔｈｅ  Ａｒｔ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照されたい）を使用することで確認可能である。
【００８４】
「実質的に同一な」という語句は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、７０、８６、９０、１０６、１１０、１２６、１３０、および１４６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに／または（ｂ）配列番号１０、２６、４２、５８、６８、７８、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、および１４８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲに対して、少なくとも９５％の同一性を有し、ＧＣＧＲに結合しＧＣＧＲの生物学的活性を阻害することができる、タンパク質配列を意味する。「実質的に同一な」という語句は、アミノ酸配列である配列番号１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、および２９４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに／または（ｂ）配列番号１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、および３０２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲに対して、少なくとも９５％の同一性を有し、ＧＣＧに結合し、ＧＣＧの生物学的活性を阻害することができるタンパク質配列も意味する。
【００８５】
「同一性」または「相同性」という用語は、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮せずに、配列全体で最大の同一性パーセントが達成されるように必要に応じて、配列をアラインメントし、ギャップを導入した後に、対応する配列の残基と比較して同一である候補配列のアミノ酸残基の百分率を意味すると解釈される。Ｎ末端またはＣ末端の伸張も挿入も、同一性または相同性を低減させるものとは解釈されない。アラインメントのための方法およびコンピュータプログラムは当技術分野において周知である。配列同一性は、配列解析ソフトウェア（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｅｎｔｅｒ、１７１０  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ａｖｅ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．５３７０５）を使用して測定することができる。このソフトウェアは、種々の置換、欠失、および他の修飾に相同性の程度を割り当てることにより、同様の配列をマッチングさせる。
【００８６】
「処置すること」（または「処置する」または「処置」）という用語は、本明細書に記載されるＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニストの使用による、既存の症状、障害、状態、もしくは疾患の進行、持続期間、または重症度を減速させる、妨害する、阻害する、抑止する、コントロールする、停止する、低減させる、好転させる（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）、または逆転させることを伴うが、疾患に関連する症状、状態、または障害のすべての完全な消失を必ずしも伴うとは限らないプロセスを指す。さらに、「処置すること」、「処置」、または「処置する」とは、臨床結果を含む有益または所望の結果を得るための手法を指し、これらの結果には、限定されるものではないが、以下：重度のインスリン抵抗性の進行を阻害する、遅延する、もしくは防止すること；重度のインスリン抵抗性と関連付けられるか、または血漿インスリンレベルの上昇、血中グルコースレベルの上昇、および／もしくはケトン血症もしくはケトアシドーシス（ベータ−ヒドロキシブチレートレベルの上昇によって測定される）によって特徴付けられる疾患、例えばドナヒュー氏症候群、Ｒａｂｓｏｎ−Ｍｅｎｄｅｎｈａｌｌ症候群、Ａ型インスリン抵抗性、Ｂ型インスリン抵抗性、ＨＡＩＲ−ＡＮ（アンドロゲン過剰症、インスリン抵抗性、および黒色表皮腫）症候群、偽末端肥大症、アルストレーム症候群、筋緊張性ジストロフィー、ヴェルナー症候群、リポジストロフィー、硬変、単一遺伝子性病的肥満、高プロインスリン血症、カルボキシペプチダーゼＥ欠損症、アルギニン代謝障害、バルデー−ビードル症候群、または重度のインスリン抵抗性をもたらすことが報告されている遺伝子変異体の存在と関連付けられる状態もしくは疾患の進行を阻害する、遅延する、または防止すること；あるいは、重度のインスリン抵抗性と関連付けられる疾患と関連付けられる少なくとも１つの症状を阻害する、防止する、または好転させること；あるいは、血中グルコースレベルおよび／またはベータ−ヒドロキシブチレートレベルを低下させること（ケトアシドーシスの指標として）により、高い血中グルコースレベルおよびケトン血症と関連付けられる状態もしくは疾患が媒介されるるか、または状態もしくは疾患と関連付けられる少なくとも１つの症状もしくは合併症が緩和されるか、またはその重症度が低減することのうちの１つまたは複数が含まれる。「処置」または「処置すること」とは、本明細書で使用される場合、疾患を患っているものの生活の質を高めること、疾患を処置するために必要とされる他の薬の用量を減少させること、および／または患者の生存を延長させることも指す。例えば、「処置」または「処置すること」は、重度のインスリン抵抗性を有する患者を処置するために必要なインスリンの量および／または投与量を低減させることを含み得る。
【００８７】
「インスリン抵抗性」という語句は、定量的に正常な応答を誘起するために正常を超える量のインスリンが必要とされる状況である。「重度のインスリン抵抗性」という語句は、概して、内因性インスリン分泌および／またはインスリンの血漿レベルの著しい上昇にもかかわらず正常に近いかまたは上昇した血中グルコースレベルを典型的に示す臨床的実体を指す。重度のインスリン抵抗性の証拠は、１日当たり１００〜２００単位を超える用量の外因性インスリンを必要とする患者、または内因性インスリンの循環血中レベルが慢性的に上昇している患者において見られる。ＭｏｌｌｅｒおよびＦｌｉｅｒ（１９９１年）、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３２５巻：９３８〜９４８頁。５０〜７０μＵ／ｍＬを超える空腹時インスリンレベル、または３５０μＵ／ｍＬを超えるピーク（経口グルコース負荷試験後）インスリンレベルは、重度のインスリン抵抗性を示唆する。２×１０４μＵ／ｍＬ・分未満のインスリン感受性指数値は、典型的には、重度のインスリン抵抗性の存在下で生じる。重度のインスリン抵抗性を有する患者は、２ｍｇ／ｋｇ・分未満のグルコース処理速度も呈する。ＴｒｉｔｏｓおよびＭａｎｔｚｏｒｏｓ（１９９８年）、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、８３巻：３０２５〜３０３０頁を参照されたい。
【００８８】
ＧＣＧ／ＧＣＧＲシグナル伝達経路阻害剤
本明細書では、重度のインスリン抵抗性によって特徴付けられる状態または疾患を処置するためのＧＣＧ阻害剤およびＧＣＧＲアンタゴニストが提供される。一部の実施形態では、アンタゴニストは、グルカゴンの阻害剤である。一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＧＣＧＲの阻害剤である。一部の実施形態では、ＧＣＧＲアンタゴニストは、ＭＫ−０８９３、ＰＦ−０６２９１８７４、ＬＧＤ−６９７２、またはＬＹ２４０９０２１である。
【００８９】
一部の実施形態では、アンタゴニストは、ＧＣＧもしくはＧＣＧＲに結合することができる抗体、またはその断片を含む。一部の実施形態では、例えばＣＲＩＳＰＲ技術またはアンチセンスを使用することによる、ＧＣＧまたはＧＣＧＲの発現の妨害によって、シグナル伝達経路が阻害される。
【００９０】
一部の実施形態では、ＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニストは、アンチセンス分子、抗体、小分子阻害剤、ペプチド阻害剤、ＤＡＲＰｉｎ、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ、アプタマー、操作されたＦｎ  ＩＩＩ型ドメイン、またはそれらの誘導体である。
【００９１】
抗ＧＣＧＲ抗体、抗ＧＣＧ抗体、および抗体断片
一部の実施形態では、ＧＣＧＲアンタゴニストは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている米国特許第８，５４５，８４７号に開示されている抗体または抗体断片である。この文献において開示されている抗体を表１に提示する。
【表１】
2019528306.tif 000003
【００９２】
本明細書において有用と企図されるさらなるＧＣＧＲ抗体または抗体断片としては、米国特許第５，７７０，４４５号および同第７，９４７，８０９号、欧州特許出願第ＥＰ２０７４１４９（Ａ２）号、欧州特許第ＥＰ０６５８２００（Ｂ１）号、米国特許公開第２００９／００４１７８４号、同第２００９／０２５２７２７号、および同第２０１１／０２２３１６０号、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ２００８／０３６３４１号に開示されているものが挙げられる。これらの特許および公開文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。
【００９３】
一部の実施形態では、ＧＣＧ阻害剤は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれているＵ．Ｓ．２０１６／００７５７７８に開示されている抗体またはその抗体断片である。この文献において開示されている抗体を表２に提示する。
【表２】
2019528306.tif 000004
【００９４】
本明細書において有用と企図されるさらなるＧＣＧ抗体または抗体断片としては、米国特許第４，２０６，１９９号、同第４，２２１，７７７号、同第４，４２３，０３４号、同第４，２７２，４３３号、同第４，４０７，９６５号、同第５，７１２，１０５号、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ２００７／１２４４６３号および同第ＷＯ２０１３／０８１９９３号に開示されているものが挙げられる。
【００９５】
抗体断片としては、必要な標的特異性を有する任意の断片、例えば、抗体全体の修飾（例えば酵素消化）によって産生される抗体断片、あるいは組換えＤＮＡ法を使用してｄｅ  ｎｏｖｏ合成されたもの（ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ（二重可変ドメイン免疫グロブリン）、またはｄＡｂ（単一可変ドメイン抗体））、あるいはヒトファージディスプレイライブラリーまたは酵母ディスプレイライブラリーを使用して同定されたものが挙げられる（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（１９９０年）、Ｎａｔｕｒｅ、３４８巻：５５２〜５５４頁を参照されたい）。あるいは、ハイブリドーマの作製、またはＳＬＡＭなどのＢ細胞スクリーニング技術の使用を含むがこれらに限定されない、標準的な免疫化および抗体単離方法を使用して、ヒト、ヒト−マウス、ヒト−ラット、およびヒト−ウサギキメラ抗体を産生するマウスから抗体を単離してもよい。免疫グロブリン結合ドメインには、免疫グロブリンの重鎖（ＶＨ）または軽鎖（ＶＬ）の可変領域も含まれるが、これらに限定されない。あるいは、人々を免疫化し、抗原陽性Ｂ細胞を単離し、重鎖および軽鎖をコードしそれらをＣＨＯなどの細胞内で共発現するｃＤＮＡをクローニングすることによる。
【００９６】
本明細書において使用される「抗体」という用語は、抗原に特異的に結合しこれを認識する、免疫グロブリン遺伝子またはその断片に由来するフレームワーク領域を含むポリペプチドを指す。認識される免疫グロブリン遺伝子としては、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン、およびミューの定常領域、ならびに多種多様な免疫グロブリン可変領域遺伝子が挙げられる。軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかに分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンに分類され、これにより、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥの免疫グロブリンクラスが定義される。各ＩｇＧクラス中、異なるアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）が存在する。典型的には、抗体の抗原結合性領域が、結合の特異性および親和性の決定において最も重要である。
【００９７】
例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含む。各四量体は２つの同一のポリペプチド鎖ペアから構成され、各ペアが１つの軽鎖（約２５ｋＤ）および１つの重鎖（約５０〜７０ｋＤ）を有する。各鎖のＮ末端は、抗原認識に主に関与する約１００〜１１０またはそれよりも多くのアミノ酸の可変領域を定義する。「可変軽鎖」（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）という用語は、それぞれ、これらの軽鎖および重鎖を指す。
【００９８】
抗体は、インタクトな免疫グロブリンとして、または種々のペプチダーゼによる消化により産生されるいくつかの十分に特徴付けられた断片として存在する。例えば、ペプシンは、ヒンジ領域内のジスルフィド連結の下の抗体を消化して、Ｆａｂの二量体であるＦ（ａｂ）’２を産生し、これ自体、ジスルフィド結合によりＶＨ−ＣＨ１に接合した軽鎖である。Ｆ（ａｂ）’２は、ヒンジ領域内のジスルフィド連結を破壊する穏やかな条件下で還元することができ、これにより、Ｆ（ａｂ）’２二量体がＦａｂ’単量体に変換される。Ｆａｂ’単量体は本質的に、ヒンジ領域の一部を有するＦａｂである。種々の抗体断片はインタクトな抗体の消化という点から定義されるが、当業者であれば、かかる断片が化学的に、あるいは組換えＤＮＡ法を使用することによりｄｅ  ｎｏｖｏ合成され得ることを察知するであろう。
【００９９】
本明細書における方法に従って有用な抗体を調製するための方法は、当技術分野で公知である。例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５年）、Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５〜４９７頁；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８年）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂ．、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．を参照されたい。目的の抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子は、細胞からクローニングすることができる。例えば、モノクローナル抗体をコードする遺伝子をハイブリドーマからクローニングし、組換えモノクローナル抗体を産生するために使用することができる。モノクローナル抗体は、ヒトスキャフォールドへのＣＤＲ領域の標準的なクローニングを使用してヒト化することができる。モノクローナル抗体のヒト重鎖および軽鎖をコードする遺伝子ライブラリーをハイブリドーマまたはプラズマ細胞から作製することもできる。重鎖および軽鎖遺伝子産物のランダムな組み合わせにより、異なる抗原特異性を有する抗体の大きなプールが生成される。本明細書において開示される方法で使用される抗体を産生するために、一本鎖抗体または組換え抗体の産生のための技術（米国特許第４，９４６，７７８号、米国特許第４，８１６，５６７号）を適合させてもよい。また、トランスジェニックマウス、または他の哺乳動物などの他の生物を使用して、ヒト、ヒト−マウスキメラ、ヒト−ラットキメラ、ヒト−ウサギキメラ、またはヒト化抗体を発現させてもよい。あるいは、ファージディスプレイまたは酵母ディスプレイ技術を使用して、選択された抗原に特異的に結合するヒト抗体およびヘテロマーのＦａｂ断片を同定することができる。
【０１００】
イムノコンジュゲート
本開示は、血中グルコースレベルを低下させることまたは重度のインスリン抵抗性の別の症状に対処することができる薬剤などの治療的部分にコンジュゲートされたヒト抗ＧＣＧＲモノクローナル抗体（「イムノコンジュゲート」）を用いた、重度のインスリン抵抗性の処置を包含する。抗ＧＣＧＲ抗体にコンジュゲートされ得る治療的部分の種類は、処置すべき状態および達成すべき所望の治療効果を考慮に入れる。例えば、血中グルコースを低下させ、かつ／または正常な血中グルコースレベルを維持する取り組みにおいて、ビグアナイド（例えばメトホルミン）、スルホニル尿素（例えばグリブリド、グリピジド）、ＰＰＡＲガンマアゴニスト（例えばピオグリタゾン、ロシグリタゾン）、アルファグルコシダーゼ阻害剤（例えばアカルボース、ボグリボース）、最終糖化産物形成の阻害剤（例えばアミノグアニジン）、または第２のＧＣＧＲ阻害剤またはＧＣＧ阻害剤などの薬剤が、ＧＣＧＲ抗体にコンジュゲートされ得る。あるいは、所望の治療効果がケトン血症または重度のインスリン抵抗性と関連付けられる任意の他の症状もしくは状態を処置することである場合、適切な薬剤を抗ＧＣＧＲ抗体にコンジュゲートすることが有利である場合がある。イムノコンジュゲートを形成するための好適な薬剤の例は当技術分野で公知である。例えば、ＷＯ０５／１０３０８１を参照されたい。
【０１０１】
多特異性抗体
本明細書において提供される方法に従って有用な抗体は、単一特異性、二重特異性、または多特異性であり得る。多特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であってもよいし、または、１つより多い標的ポリペプチドに対して特異的な抗原結合性ドメインを含有してもよい。例えば、Ｔｕｔｔら（１９９１年）、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７巻：６０〜６９頁；Ｋｕｆｅｒら（２００４年）、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２２巻：２３８〜２４４頁を参照されたい。抗ＧＣＧＲ抗体は、別の機能分子、例えば別のペプチドもしくはタンパク質に連結されていてもよいし、またはそれらと共発現されてもよい。例えば、抗体またはその断片は、第２の結合特異性を有する二重特異性または多特異性の抗体を産生するように、１つまたは複数の他の分子実体、例えば別の抗体または抗体断片に（例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合性会合、または別のものによって）機能的に連結されていてもよい。例えば、免疫グロブリンの一方のアームがヒトＧＣＧＲまたはその断片に対して特異的であり、免疫グロブリンの他方のアームが第２の治療標的に対して特異的であるか、または治療的部分にコンジュゲートされている、二重特異性抗体が企図される。ある特定の実施形態では、免疫グロブリンの一方のアームは、ｈＧＣＧＲのＮ末端ドメインにあるエピトープまたはその断片に対して特異的であり、免疫グロブリンの他方のアームは、ｈＧＣＧＲのＥＣループのうちの１つにあるエピトープまたはその断片に対して特異的である。ある特定の実施形態では、免疫グロブリンの一方のアームは、１つのＥＣループまたはその断片に対して特異的であり、第２のアームは、第２のＥＣループまたはその断片に対して特異的である。ある特定の実施形態では、免疫グロブリンの一方のアームは、ｈＧＣＧＲの１つのＥＣループにある１つのエピトープに対して特異的であり、他方のアームは、ｈＧＣＧＲの同じＥＣループにある第２のエピトープに対して特異的である。
【０１０２】
本明細書に記載される方法に従って使用され得る例示的な二重特異性抗体フォーマットは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）のＣＨ３ドメインおよび第２のＩｇのＣＨ３ドメインの使用を伴い、ここで第１および第２のＩｇのＣＨ３ドメインは、少なくとも１つのアミノ酸によって互いと異なり、少なくとも１つのアミノ酸の差により、プロテインＡへの二重特異性抗体の結合が、アミノ酸の差が欠如している二重特異性抗体と比較して低減する。一実施形態では、第１のＩｇのＣＨ３ドメインは、プロテインＡに結合し、第２のＩｇのＣＨ３ドメインは、プロテインＡ結合を低減または消失させる突然変異、例えばＨ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴエクソン付番による。ＥＵ付番による場合はＨ４３５Ｒ）を含有する。第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによる。ＥＵによる場合はＹ４３６Ｆ）をさらに含み得る。第２のＣＨ３中で見出され得るさらなる修飾としては、ＩｇＧ１抗体の場合はＤ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる。ＥＵによる場合はＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、およびＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２抗体の場合はＮ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、およびＶ８２１（ＩＭＧＴ。ＥＵによる場合はＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、およびＶ４２２Ｉ）；ならびにＩｇＧ４抗体の場合はＱ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる。ＥＵによる場合はＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、およびＶ４２２Ｉ）が挙げられる。上述の二重特異性抗体フォーマットにおけるバリエーションは、本開示の範囲内で企図されている。
【０１０３】
抗体のスクリーニングおよび選択
本明細書において提供される方法に従って有用な好ましい抗体のスクリーニングおよび選択は、当技術分野で公知の様々な方法によって行うことができる。標的抗原に対して特異的なモノクローナル抗体の存在に関する初回スクリーニングは、例えばＥＬＩＳＡベースの方法を使用することにより行うことができる。抗体−薬物コンジュゲートの構築に使用するために所望のモノクローナル抗体を同定し選択するために、二次的なスクリーニングが行われることが好ましい。二次的なスクリーニングは、当技術分野で公知の任意の好適な方法を用いて行ってよい。参照によりその全体が本明細書に明確に組み込まれている米国特許公開第２００４／０１０１９２０号には、「バイオセンサー改変支援プロファイリング（Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ−Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ）」（「ＢｉａＭＡＰ」）と呼ばれる１つの好ましい方法が記載されている。ＢｉａＭＡＰにより、所望の特徴を有するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマクローンの迅速な同定が可能になる。より具体的には、抗体：抗原相互作用の評価に基づいて、モノクローナル抗体が別個のエピトープ関連群に選別される。リガンドまたは受容体のいずれかを遮断することができる抗体が、ＮＦκＢ駆動プロモーターまたはｃＡＭＰ応答駆動プロモーターのコントロール下にあるルシフェラーゼ遺伝子を利用するルシフェラーゼアッセイなどの細胞ベースのアッセイによって同定され得る。グルカゴンによるＧＣＧＲの刺激は、ＮＦκＢ／ｃＡＭＰ／ＣＲＥＢによるシグナルをもたらし、したがって細胞内のルシフェラーゼレベルを上昇させる。ルシフェラーゼ活性のグルカゴンによる誘導を遮断した抗体として、遮断抗体が同定される。
【０１０４】
処置集団
本明細書において提供される治療方法は、重度のインスリン抵抗性または重度のインスリン抵抗性と関連付けられる状態もしくは疾患を有する個体を処置するために有用である。例示的な状態または疾患としては、ドナヒュー氏症候群、Ｒａｂｓｏｎ−Ｍｅｎｄｅｎｈａｌｌ症候群、Ａ型インスリン抵抗性、Ｂ型インスリン抵抗性、ＨＡＩＲ−ＡＮ（アンドロゲン過剰症、インスリン抵抗性、および黒色表皮腫）症候群、偽末端肥大症、アルストレーム症候群、筋緊張性ジストロフィー、ヴェルナー症候群、リポジストロフィー、硬変、単一遺伝子性病的肥満、高プロインスリン血症、カルボキシペプチダーゼＥ欠損症、アルギニン代謝障害、バルデー−ビードル症候群、および重度のインスリン抵抗性をもたらすことが報告されている遺伝子変異体の存在と関連付けられる状態または疾患が挙げられる。一部の実施形態では、患者の血清中でインスリン分解プロテアーゼ活性が検出される。一部の実施形態では、患者の血清中で中和性抗インスリン抗体が検出される。一部の患者では、重度のインスリン抵抗性は、リポジストロフィーをもたらす脂肪細胞の自己免疫破壊との関連において生じる。
【０１０５】
治療的な投与および製剤
本明細書において提供される方法によれば、例えば抗ＧＣＧＲ抗体などのグルカゴン／ＧＣＧＲアンタゴニストを含む治療用組成物が有用である。本明細書に記載される方法に従う治療用組成物の投与は、好適な担体、賦形剤、および移入、送達、耐容能（ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）などを向上させるために製剤に組み込まれる他の薬剤とともに、静脈内、皮下、筋肉内、髄腔内、脳内、心室内（ｉｎｔｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｌｙ）、鼻腔内、または経口を含むがこれらに限定されない好適な経路により施される。すべての薬剤師に公知の処方集である、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａには、数多くの適切な製剤を見出すことができる。これらの製剤としては、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有小胞（例えばＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標））、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型の乳剤、乳剤カーボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、およびカーボワックスを含有する半固体混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌら、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」ＰＤＡ（１９９８年）、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ、５２巻：２３８〜３１１頁も参照されたい。
【０１０６】
抗体の用量は、投与される被験体の年齢およびサイズ、標的の疾患、状態、投与経路などに応じて様々であり得る。抗体が、血中グルコースレベルを低下させるため、かつ／または、患者の種々の状態および疾患、例えばＡ型インスリン抵抗性症候群、ＲＭＳ、またはＤＳにおいて、重度のインスリン抵抗性と関連付けられるケトン血症（例えばベータ−ヒドロキシブチレートレベルによって測定される）を減少させるために使用される場合、通常約０．０１〜約３０ｍｇ／体重１ｋｇ、より好ましくは約０．０２〜約７、約０．０３〜約５、または約０．０５〜約３ｍｇ／体重１ｋｇの用量で抗体を静脈内投与することが有利である。状態の重症度および処置への応答に応じて、処置の頻度および持続期間を調節してよい。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、少なくとも約０．１ｍｇから約８００ｍｇまで、約１から約５００ｍｇまで、約５から約３００ｍｇまで、または約１０から約２００ｍｇまで、約１００ｍｇまで、もしくは約５０ｍｇまでの初回用量として投与してよい。
【０１０７】
ある特定の実施形態では、初回用量の後に、初回用量とほぼ同じであっても初回用量未満であってもよい量での、第２のまたは複数の後続用量の抗体またはその抗原結合性断片を投与してもよく、ここで後続用量は、少なくとも１日〜３日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、少なくとも１２週間、または少なくとも１４週間の間をあけて投与される。
【０１０８】
種々の送達系、例えば、リポソーム内封入、微粒子、マイクロカプセル、突然変異体ウイルスを発現することができる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシスが公知であり、抗体を含む医薬組成物を投与するために使用することができる（例えば、Ｗｕら（１９８７年）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２６２巻：４４２９〜４４３２頁を参照されたい）。導入の方法としては、デポ製剤、エアロゾル、真皮内、経皮、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、髄腔内、心室内、および経口経路が挙げられるが、これらに限定されない。組成物は、任意の簡便な経路によって、例えば注入またはボーラス注射によって、上皮または皮膚粘膜の内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸管粘膜など）を通じた吸収によって投与してよく、他の生物学的活性剤と一緒に投与してもよい。投与は、全身性であっても局所性であってもよい。
【０１０９】
医薬組成物は、小胞、特にリポソームにおいて送達することもできる（例えば、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９巻：１５２７〜１５３３頁を参照されたい）。
【０１１０】
ある特定の状況では、医薬組成物は、制御放出系において送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用してよい。別の実施形態では、ポリマー材料を使用してよい。さらに別の実施形態では、制御放出系は、組成物の標的の近くに配置してよく、したがって全身用量の一部分しか必要とされない。
【０１１１】
注射可能な調製物は、静脈内、皮下、皮内および筋肉内注射、点滴注入などのための剤形を含み得る。これらの注射可能な調製物は、公然知られている方法によって調製することができる。例えば、注射可能な調製物は、例えば、注射のために従来使用されている無菌の水性媒体または油性媒体において、上述の抗体またはその塩を溶解、懸濁、または乳化させることにより調製され得る。注射のための水性溶媒としては、例えば、生理食塩水、グルコースおよび他の助剤を含有する等張性溶液などがあり、これらは、適切な可溶化剤、例えばアルコール（例えばエタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］などと組み合わせて使用され得る。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、これらは、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と組み合わせて使用され得る。このように調製される注射剤は、好ましくは、適切なアンプルに充填される。
【０１１２】
本明細書において有用な医薬組成物は、標準的な針およびシリンジを用いて皮下または静脈内に送達され得る。加えて、皮下送達に関しては、本明細書に記載される方法において有用な医薬組成物の送達において、ペン型送達デバイスが容易に適用される。かかるペン型送達デバイスは、再使用可能であっても、使い捨てであってもよい。再使用可能なペン型送達デバイスは、概して、医薬組成物を含有する交換式カートリッジを利用する。カートリッジ内の医薬組成物がすべて投与され、カートリッジが空になったら、空のカートリッジを容易に廃棄し、医薬組成物を含有する新しいカートリッジと交換することができる。その後、ペン型送達デバイスを再使用することができる。使い捨てのペン型送達デバイスにおいては、交換式カートリッジはない。むしろ、使い捨てのペン型送達デバイスは、デバイス内のリザーバーに保持された医薬組成物が予め充填されている。リザーバー内の医薬組成物がなくなったら、デバイス全体が廃棄される。
【０１１３】
多数の再使用可能なペンおよびオートインジェクター送達デバイスが、本明細書に記載される方法に従って有用な医薬組成物の皮下送達に適用される。例としては、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ  Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｕｒｇｈｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ  ＭＩＸ  ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ  ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｎ．）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ  ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、Ｎ．Ｊ．）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられるが、これらはほんの数例に過ぎず、もちろんこれらに限定されるものではない。本明細書に記載される方法に従って有用な医薬組成物の皮下送達に適用される使い捨てのペン型送達デバイスの例としては、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）オートインジェクター（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ、Ｃａｌｉｆ．）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、Ｌ．Ｐ．）、およびＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、Ｉｌｌ．）が挙げられるが、これらはほんの数例に過ぎず、もちろんこれらに限定されるものではない。
【０１１４】
有利なことには、上述の経口または非経口使用のための医薬組成物は、活性成分の用量を含めるのに適した単位用量の剤形に調製される。かかる単位用量の剤形としては、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが挙げられる。含有される前述の抗体の量は、概して、単位用量の剤形当たり約５〜約７５０ｍｇである。前述の抗体は、とりわけ注射剤の形態においては約５〜約１００ｍｇで、他の剤形の場合は約１０〜約２５０ｍｇで含有されることが好ましい。
【０１１５】
併用療法
多数の実施形態では、本明細書で有用なＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニストは、１つまたは複数のさらなる化合物もしくは療法と組み合わせて投与され得る。併用療法は、同時であっても逐次であってもよい。
【０１１６】
一部の実施形態では、ＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニストは、以下：インスリン、ビグアナイド、ｈＩＧＦ１、レプチン、ピオグリタゾン、ビルダグリプチン、アカルボース、アルファ−グリコシダーゼ阻害剤、Ｌ−アルギニン、ジペプチジル−ペプチダーゼ−４阻害剤、インスリン分泌促進物質、アミリン受容体アゴニスト、インスリン感作物質、ＳＧＬＴ２阻害剤、ＳＧＬＴ１阻害剤、ＧＬＰ−１類似体、ＧＬＰ−１受容体活性化剤、第２のＧＣＧ阻害剤、および第２のＧＣＧＲアンタゴニストから選択される少なくとも１種のさらなる治療剤とともに投与される。一部の実施形態では、ＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニストは、以下：バナジン酸塩またはバナジウム塩、フェニトイン、ベンザフィブレートから選択される少なくとも１種のさらなる治療剤とともに投与される。一部の実施形態では、ＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニストは、ω−３脂肪酸が豊富な魚油などの栄養補助食品とともに投与される。
【０１１７】
一部の実施形態では、インスリン感作物質は、チアゾリジンジオン、例えばトログリタゾンである。一部の実施形態では、インスリン感作物質は、ロシグリタゾンである。
【０１１８】
一部の実施形態では、インスリン分泌促進物質は、スルホニル尿素、ＡＴＰ感受性Ｋチャネルアンタゴニスト、またはメグリチニドである。
【０１１９】
ＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニストの投与の前、それと同時、またはその後に、さらなる治療活性構成成分を投与してもよい。本開示の目的では、かかる投与レジメンは、第２の治療活性構成成分「と組み合わせた」ＧＣＧ阻害剤またはＧＣＧＲアンタゴニストの投与とみなされる。
【０１２０】
投与レジメン
本明細書に記載されるある特定の実施形態によれば、既定の時間経過にわたって複数用量のグルカゴン／ＧＣＧＲアンタゴニストを被験体に投与してよい。方法は、複数用量のグルカゴン／ＧＣＧＲアンタゴニストを被験体に逐次投与することを含む。本明細書で使用される場合、「逐次投与すること」とは、アンタゴニストの各用量が、異なる時点で、例えば、所定の間隔（例えば、数時間、数日間、数週間、または数か月）だけ隔てた異なる日に、被験体に投与されることを意味する。本明細書に記載される方法は、単一の初回用量のグルカゴン／ＧＣＧＲアンタゴニスト、その後に１回または複数の二次用量のグルカゴン／ＧＣＧＲアンタゴニスト、任意選択でその後に１回または複数の三次用量のグルカゴン／ＧＣＧＲアンタゴニストを、患者に逐次投与することを含む。
【０１２１】
「初回用量」、「二次用量」、および「三次用量」という用語は、本明細書において有用なグルカゴン／ＧＣＧＲアンタゴニストの投与の時間上のシークエンスを指す。よって、「初回用量」とは、処置レジメンの開始時に投与される用量（「ベースライン用量」とも称する）であり、「二次用量」とは、初回用量の後に投与される用量であり、「三次用量」とは、二次用量の後に投与される用量である。初回用量、二次用量、および三次用量は、すべて同じ量のグルカゴン／ＧＣＧＲアンタゴニストを含有してよいが、投与の頻度という点では概して互いと異なり得る。しかしながら、ある特定の実施形態では、初回用量、二次用量、および／または三次用量に含有されるグルカゴン／ＧＣＧＲアンタゴニストの量は、処置の過程において互いと異なる（例えば、必要に応じて上方または下方に調節される）。ある特定の実施形態では、２回またはそれよりも多くの（例えば、２回、３回、４回、または５回の）用量が、処置レジメンの開始時に「負荷用量」として投与された後に、より低い頻度で投与される後続用量（例えば「維持用量」）が続く。
【０１２２】
医薬組成物
本明細書において開示される方法では、重度のインスリン抵抗性の処置において有用な少なくとも治療有効量の活性剤、例えばグルカゴン／ＧＣＧＲアンタゴニスト、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物の使用が企図される。「薬学的に許容される」という用語は、動物、より特定するとヒトにおける使用のために、連邦政府もしくは州政府の規制機関によって認可されていること、または米国薬局方もしくは他の一般に認知されている薬局方に収載されていることを意味する。「担体」という用語は、治療薬がともに投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。かかる薬学的担体は、無菌の液体、例えば水、および石油、動物、植物、または合成起源のものを含む油類、例えばピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などであり得る。好適な薬学的賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物は、所望の場合、微量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤も含有してもよい。これらの組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、持続放出製剤などの形態をとることができる。組成物は、従来の結合剤および担体、例えばトリグリセリドとともに、坐剤として製剤化されていてよい。経口製剤は、標準的な担体、例えば薬学的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどを含み得る。好適な薬学的担体の例は、Ｅ．  Ｗ．  Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。
【０１２３】
一実施形態では、組成物は、日常的手順に従い、ヒトへの静脈内投与のために適合された医薬組成物として製剤化される。必要な場合、組成物は、可溶化剤、および注射部位における痛みを軽減させるためのリドカインなどの局所麻酔薬も含んでもよい。組成物が注入により投与される場合、無菌の薬学的グレードの水または食塩水を含有する注入ボトルを用いて組成物を分注してもよい。組成物が注射により投与される場合、投与前に成分が混合され得るように無菌の注射用水または食塩水のアンプルを提供してもよい。
【０１２４】
本明細書に記載される方法に従って有用な活性剤は、中性または塩形態として製剤化することができる。薬学的に許容される塩としては、遊離アミノ基とともに形成されたもの、例えば塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するもの、および遊離カルボキシル基とともに形成されたもの、例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものが挙げられる。
【０１２５】
重度のインスリン抵抗性の処置において有効となる活性剤の量は、本明細書に基づき、標準的な臨床技術によって決定することができる。加えて、最適な投与量範囲の特定に役立てるために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを任意選択で用いてもよい。製剤中に用いられる正確な用量は、投与経路、および状態の深刻さにも左右され、医師の判断および各被験体の状況に応じて決定されるべきである。しかしながら、静脈内投与に好適な投与量範囲は、概して、体重１キログラム当たり活性化合物約２０マイクログラム〜２グラムである。鼻腔内投与に好適な投与量範囲は、概して、約０．０１ｐｇ／体重１ｋｇ〜１ｍｇ／体重１ｋｇである。有効用量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系に由来する用量−応答曲線から外挿され得る。
【０１２６】
全身投与の場合、治療有効用量は、最初にｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイから推測することができる。例えば、細胞培養において決定されるＩＣ５０を含む循環血中濃度範囲を達成するように、動物モデルにおいて用量を処方することができる。このような情報を使用して、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定することができる。初回投与量は、当技術分野で周知である技術を使用し、ｉｎ  ｖｉｖｏデータ、例えば動物モデルから推測することもできる。当業者であれば、動物データに基づいてヒトに対する投与を容易に最適化することができる。
【０１２７】
投与量および間隔は、治療効果を維持するのに十分な化合物の血漿レベルをもたらすように個別に調節してよい。局所投与または選択的取り込みの場合、化合物の有効な局所濃度は、血漿中濃度に関連しない場合がある。当業者であれば、過度の実験を行うことなく、治療上有効な局所投与量を最適化することができよう。
【０１２８】
投与される化合物の量は、当然ながら、処置される被験体、被験体の体重、病気の重症度、投与様式、および処方医師の判断に左右される。療法は、症状が検出可能である間、またはさらには症状が検出可能でないときにも、断続的に繰り返されてよい。療法は、単独で、または他の薬物と組み合わせて提供されてもよい。
【０１２９】
キット
本明細書では、パッケージング材料とパッケージング材料内に含有された医薬品とを含む製造品であって、医薬品が、本明細書において開示される方法に従って有用な少なくとも１種のＧＣＧ／ＧＣＧＲアンタゴニストを含み、パッケージング材料が、重度のインスリン抵抗性によって特徴付けられる状態または疾患を処置するためにＧＣＧ／ＧＣＧＲアンタゴニストが使用され得ることを示すラベルまたは添付文書を含む、製造品も提供される。
【０１３０】
いくつかの実施形態を参照しながら本発明を具体的に示し、記載したが、本発明の趣旨および範囲を逸脱することなく、本明細書において開示される種々の実施形態に対して形態および詳細の変更を行ってよいこと、ならびに、本明細書において開示される種々の実施形態が、特許請求の範囲に対する限定となることを意図するものではないことは、当業者には理解されよう。
【実施例】
【０１３１】
以下の実施例は、本明細書において開示される方法がどのように実行されるかに関する完全な開示および説明を当業者が有するように提供される。使用される数（例えば量、温度など）に関して正確さを保証するよう努力を払ったが、ある程度の実験誤差および偏差が考慮されるべきである。別段の指示がない限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度はセ氏温度であり、圧力は大気圧またはその付近である。
【０１３２】
（実施例１：極度のインスリン抵抗性のマウスモデルでの高血糖症の防止におけるＧＣＧＲアンタゴニストの評価）
インスリン受容体アンタゴニストであるＳ９６１を浸透圧ミニポンプによってマウスに投与すると、重度のインスリン抵抗性および高血糖症がもたらされる（Ｇｕｓａｒｏｖａ  Ｖら（２０１４年）、Ｃｅｌｌ、１５９巻：６９１〜６９６頁；Ｙｉ  Ｐら（２０１３年）、Ｃｅｌｌ、１５３巻：７４７〜７５８頁；Ｓｃｈａｆｆｅｒ  Ｌ．（２００８年）、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．、３７６巻：３８０〜３８３頁）。この重度のインスリン抵抗性のモデルを使用して、抗ＧＣＧＲ抗体の高血糖症防止における効果、ならびに重度のインスリン抵抗性に起因する血中グルコースレベルおよび血漿ベータ−ヒドロキシブチレートレベル（ケトン血症の尺度として）に対する効果を決定した。
材料：
・  ｈＩｇＧ４アイソタイプ対照
・  Ｈ４Ｈ１３２７Ｐ、抗ｈＧＣＧＲ  ｈＩｇＧ４
・  Ｓ９６１、インスリン受容体アンタゴニスト（公開されている配列（Ｓｃｈａｆｆｅｒ  Ｌ．（２００８年）、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．、３７６巻：３８０〜３８３頁）を使用し、Ｃｅｌｔｅｋ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓによってカスタム合成されたもの）
【０１３３】
動物および注射：
２９匹のマウスを、マウス６〜８匹の４つの群に分けた。第１の群には、０日目、６日目、および１４日目に１０ｍｇ／ｋｇのｈＩｇＧ４アイソタイプ対照を皮下注射し、７日目からは浸透圧ミニポンプ（Ａｌｚｅｔ  ２００２）によってＰＢＳを皮下注入した。第２の群には、０日目、６日目、および１４日目に１０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１３２７Ｐを皮下注射し、７日目からは浸透圧ミニポンプ（Ａｌｚｅｔ  ２００２）によってＰＢＳを皮下注入した。第３の群には、０日目、６日目、および１４日目に１０ｍｇ／ｋｇのｈＩｇＧ４アイソタイプ対照を皮下注射し、７日目からは浸透圧ミニポンプ（Ａｌｚｅｔ  ２００２）によって２０ｎｍｏｌ／週のＳ９６１を皮下注入した。第４の群には、０日目、６日目、および１４日目に１０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１３２７Ｐを皮下注射し、７日目からは浸透圧ミニポンプ（Ａｌｚｅｔ  ２００２）によって２０ｎｍｏｌ／週のＳ９６１を皮下注入した。血中グルコース測定のため、０日目、３日目、６日目、１０日目、１４日目、１７日目、および２１日目にマウスの採血を行った。各時点における血中グルコースレベルの平均±ＳＥＭを各群で計算し、表３に示した。インスリンおよびベータ−ヒドロキシブチレートレベルを決定するため、ベースライン、ならびに６日目、１４日目、および２１日目に血漿を収集した。各時点における血漿ベータ−ヒドロキシブチレートおよびインスリンレベルの平均±ＳＥＭを各群で計算し、表４および５に示した。
【表３】
2019528306.tif 000005
【表４】
2019528306.tif 000006
【表５】
2019528306.tif 000007
【０１３４】
結果：
Ｐｒｉｓｍソフトウェア（バージョン６）を用いて統計解析を行った。対照群（群１）に対する有意性を評価するために、ボンフェローニの多重比較検定とともに二元配置ＡＮＯＶＡを使用した。ａ：ｐ＜０．０５、ｂ：ｐ＜０．０１、ｃ：ｐ＜０．００１、ｄ：ｐ＜０．０００１。
【０１３５】
Ｈ４Ｈ１３２７Ｐ処置およびＰＢＳ注入を受けた動物（群２）は、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐ投与後（３日目〜２１日目の間）に、アイソタイプ対照投与およびＰＢＳ注入を受けた動物（群１）と比較して血中グルコースの低減を示し、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐがグルコースを低下させる効力が確認された。アイソタイプ対照投与およびＳ９６１注入を受けた動物（群３）は、Ｓ９６１の注入後（１０日目〜２１日目の間）に、アイソタイプ対照投与およびＰＢＳ注入を受けた動物（群１）と比較して血中グルコースの増加を示し、Ｓ９６１の高血糖性効果が確認された。Ｈ４Ｈ１３２７Ｐ処置およびＳ９６１注入を受けた動物（群４）では、Ｓ９６１注入後の１０〜２１日の間の血中グルコースレベルが群１のマウスのものに匹敵していた。図１Ａを参照されたい。
【０１３６】
アイソタイプ対照投与およびＳ９６１注入を受けた動物（群３）では、１４日目および２１日目における血漿インスリンレベルが、アイソタイプ対照投与およびＰＢＳ注入を受けた動物（群１）と比較して上昇しており、研究期間中のインスリン受容体を阻害するＳ９６１の作用が確認された。インスリンレベルは、アイソタイプ対照投与およびＳ９６１注入を受けた動物（群３）と比較して、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐ処置およびＳ９６１注入を受けた動物（群４）において同じく上昇した。図１Ｂを参照されたい。
【０１３７】
以前の研究（Ｏｋａｍｏｔｏら（２０１５年）、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１５６巻（８号）：２７８１〜２７９４頁）と一致して、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐは、Ｓ９６１投与とは無関係の効果である血漿グルカゴンレベルの上昇を実証した（図１Ｃを参照されたい）。
【０１３８】
アイソタイプ対照投与およびＳ９６１注入を受けた動物（群３）では、１４日目および２１日目における血漿ベータ−ヒドロキシブチレートのレベルが、アイソタイプ対照投与およびＰＢＳ注入を受けた動物（群１）と比較して上昇していたが、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐ処置およびＳ９６１注入を受けた動物（群４）では、そのレベルに変化はなかった。図１Ｄを参照されたい。加えて、処置群間の体重差は観察されなかった（図１Ｅを参照されたい）。
【０１３９】
これらのデータは、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐが、インスリン受容体アンタゴニストにより誘導される高血糖症およびケトン血症を防止し、重度の高インスリン血症の存在下であっても血中グルコースを低下させることを示す。
【０１４０】
（実施例２：極度のインスリン抵抗性のマウスモデルでの高血糖症の逆転におけるＧＣＧＲアンタゴニストの評価）
抗ＧＣＧＲ抗体を注射する４日前にインスリン受容体アンタゴニストを投与したことを除いては実施例１において言及したものと同じ動物モデルおよび同じ材料を使用して、重度のインスリン抵抗性により誘導された、確立された高血糖症を逆転させる抗ＧＣＧＲ抗体の効果を決定した。血中グルコースおよび血漿ベータ−ヒドロキシブチレートレベルに対する効果も決定した。
【０１４１】
動物および注射：
３２匹のマウスを、マウス８匹の４つの群に分けた。第１の群には、０日目から浸透圧ミニポンプ（Ａｌｚｅｔ  ２００２）によってＰＢＳを皮下注入し、４日目、１１日目、および１８日目に１０ｍｇ／ｋｇのｈＩｇＧ４アイソタイプ対照を皮下注射した。第２の群には、０日目からＰＢＳを皮下注入し、４日目、１１日目、および１８日目に１０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１３２７Ｐを皮下注射した。第３の群には、０日目から２０ｎｍｏｌ／週のＳ９６１を皮下注入し、４日目、１１日目、および１８日目に１０ｍｇ／ｋｇのｈＩｇＧ４アイソタイプ対照を皮下注射した。第４の群には、０日目から２０ｎｍｏｌ／週のＳ９６１を皮下注入し、４日目、１１日目、および１８日目に１０ｍｇ／ｋｇのＨ４Ｈ１３２７Ｐを皮下注射した。血中グルコース測定のため、０日目、４日目、７日目、１１日目、１４日目、１８日目、および２１日目にマウスの採血を行った。各時点における血中グルコースレベルの平均±ＳＥＭを各群で計算し、表６に示した。インスリンおよびベータ−ヒドロキシブチレートレベルを決定するため、ベースライン、ならびに４日目、１１日目、および２１日目に血漿を収集した。各時点における血漿ベータ−ヒドロキシブチレートおよびインスリンレベルの平均±ＳＥＭを各群で計算し、表７および８に示した。
【表６】
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【表７】
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【表８】
2019528306.tif 000010
【０１４２】
結果：
Ｐｒｉｓｍソフトウェア（バージョン６）を用いて統計解析を行った。対照群（群１）に対する有意性を評価するために、ボンフェローニの多重比較検定とともに二元配置ＡＮＯＶＡを使用した。ａ：ｐ＜０．０５、ｂ：ｐ＜０．０１、ｃ：ｐ＜０．００１、ｄ：ｐ＜０．０００１。
【０１４３】
Ｓ９６１注入およびアイソタイプ対照投与を受けた動物（群３）は、Ｓ９６１注入後（４日目〜２１日目の間）に、ＰＢＳ注入およびアイソタイプ対照投与を受けた動物（群１）と比較して血中グルコースの増加を示し、Ｓ９６１の高血糖性効果が確認された。Ｓ９６１注入およびＨ４Ｈ１３２７Ｐ処置を受けた動物（群４）は、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐ投与後、ＰＢＳ注入およびアイソタイプ対照投与を受けた動物（群１）のものとほぼ同一の血中グルコースレベルを示した。ＰＢＳ注入およびＨ４Ｈ１３２７Ｐ処置を受けた動物（群２）は、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐ投与後（４日目〜２１日目の間）に、アイソタイプ対照投与およびＰＢＳ注入を受けた動物（群１）と比較して低下した血中グルコースレベルを維持し、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐがグルコースを低下させる効力が確認された。図２Ａを参照されたい。
【０１４４】
Ｓ９６１注入およびアイソタイプ対照投与を受けた動物（群３）では、４日目、１１日目、および２１日目における血漿インスリンレベルが、ＰＢＳ注入およびアイソタイプ対照投与を受けた動物（群１）と比較して上昇しており、研究期間中のインスリン受容体を阻害するＳ９６１の作用が確認された。図２Ｂを参照されたい。高インスリン血症（表８および図２Ｂ）および高グルカゴン血症（図２Ｃを参照されたい）は、両方の受容体アンタゴニストを受けたマウスにおいてより顕著であった。
【０１４５】
Ｓ９６１注入およびアイソタイプ対照投与を受けた動物（群３）では、１１日目および２１日目の血漿ベータ−ヒドロキシブチレートのレベルが、ＰＢＳ注入およびアイソタイプ対照投与を受けた動物（群１）と比較して上昇していたが、群１の動物に対し、Ｓ９６１注入およびＨ４Ｈ１３２７Ｐ処置を受けた動物（群４）では、これらの同じ時点におけるそのレベルに変化はなかった。図２Ｄを参照されたい。
【０１４６】
以前の所見（Ｏｋａｍｏｔｏら、２０１５年）と一致して、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐは循環血中アミノ酸レベルを上昇させた。Ｓ９６１も同じく循環血中アミノ酸レベルを上昇させたが、その程度は、抗体によるものよりも低かった（図２Ｅを参照されたい）。インスリンとグルカゴン受容体との両方の阻害は、血漿アミノ酸レベルのさらなる上昇をもたらした（図２Ｅを参照されたい）。体重の変化は観察されなかった（図２Ｆを参照されたい）。
【０１４７】
これらのデータは、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐが、インスリン受容体アンタゴニストにより誘導される高血糖症およびケトン血症を逆転させ、重度の高インスリン血症の存在下であっても血中グルコースを低下させることを示す。
【０１４８】
（実施例３：インスリン受容体アンタゴニストにより誘導される肝臓でのＰｅｐｃｋ発現の逆転におけるＧＣＧＲアンタゴニストの評価）
実施例１の４つの群のそれぞれに従って処置されたマウスから得た肝臓試料を、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤カクテル（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ）、１ｍＭ  ＤＴＴ、および２ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４の存在下で、氷冷ＲＩＰＡバッファー（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、５０ｍＭ  ＮａＦ、１０ｍＭ  β−グリセロホスフェート、５ｍＭ二塩基性ピロリン酸ナトリウム、および１％  ＮＰ−４０）で溶解させた。全試料ライセートを６×ＳＤＳローディングバッファー（Ａｌｆａ−Ａｅｓａｒ）と混合し、５分間煮沸した。タンパク質試料（１０〜１００μｇ）を４−２０％勾配ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）にロードし、分離し、二フッ化ポリビニリデン膜に転写した。０．１％  Ｔｗｅｅｎ２０（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を補充した１×ＴＢＳ中の５％ウシ血清アルブミンを用いて１時間膜をブロックし、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）に対する抗体（１：２５０、Ａｂｃａｍ）とともにインキュベートした。西洋ワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートされた抗ウサギまたは抗マウス二次抗体（１：１０，０００、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）、および増強化学発光試薬（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ）を使用し、結合した抗体を検出した。Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェアにおいてバンド強度を定量化した。
【０１４９】
ウェスタンブロット解析により、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐで処置されたマウスの肝臓において、律速糖新生酵素であるホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（Ｐｅｐｃｋ）のレベルが７０％低下したことが明らかになった（図３ＡおよびＢを参照されたい）。それとは逆に、Ｓ９６１を注入したマウスの肝臓におけるＰｅｐｃｋレベルは２．３倍上昇したが、この効果は、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐによってベースラインより３０％下まで逆転した。したがって、相対レベルのグルカゴンおよびインスリンシグナル伝達は、以前に実証されているように（Ｌｙｎｅｄｊｉａｎら（１９９５年）、Ｒｕｃｋｔａｅｓｃｈｅｌら（２０００年）、Ｃｈａｋｒａｖａｒｔｙら（２００５年））、Ｐｅｐｃｋ発現を制御する。これらのデータは、マウスのＧＣＧＲをＨ４Ｈ１３２７Ｐで遮断すると、肝臓におけるグルコース生産が抑制されることによって、重度のインスリン抵抗性により誘導される高血糖症が防止されることを示す。
【０１５０】
（実施例４：αおよびβ細胞質量におけるＧＣＧＲおよびインスリン受容体のアンタゴニズムの評価）
実施例２の４つの群のそれぞれに従って処置されたマウスから得た膵臓を、１０％中性緩衝ホルマリン溶液中で４８時間固定し、パラフィンに包埋し、スライド上で切片にした。膵臓の組織および細胞を透過処理し、製造元（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）の指示に従い、マウスＧｃｇおよびＩｎｓ２に対するｍＲＮＡプローブの組み合わせとハイブリダイズさせた。ｍＲＮＡシグナルを増幅させるために発色キットを使用した（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）。Ｈａｌｏデジタル画像化解析ソフトウェア（Ｉｎｄｉｃａ  Ｌａｂｓ）を使用し、グルカゴンおよびインスリン陽性細胞の面積を測定した。グルカゴンおよびインスリン陽性の面積パーセントを全膵臓面積に対する割合として計算した。各動物のαおよびβ細胞の面積に対応する膵臓重量を乗じることにより、αおよびβ細胞質量を計算した。Ｈａｌｏデジタル画像化解析ソフトウェアを使用して切片上のインスリン陽性膵島の数を計数することにより膵島数を測定し、切片の膵臓面積全体によって正規化した。
【０１５１】
Ｈ４Ｈ１３２７Ｐは膵臓重量を１９％増加させ、効果はＨ４Ｈ１３２７ＰおよびＳ９６１両方の存在下ではより大きかった（３３％）（図４Ａを参照されたい）。ＧｃｇおよびＩｎｓ２に対するプローブを使用したＲＮＡ  ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＲＮＡ  ＩＳＨ）を、膵臓切片の形態計測解析のために使用した。Ｈ４Ｈ１３２７Ｐはα細胞質量を５．７倍増加させ（図４Ｂを参照されたい）、Ｓ９６１投与はβ細胞質量を３倍増加させた（図４Ｃを参照されたい）。Ｈ４Ｈ１３２７Ｐ単独ではβ細胞質量に影響はなかったが、予想外なことに、Ｓ９６１単独と比較した場合、Ｓ９６１およびＨ４Ｈ１３２７Ｐの同時存在下ではβ細胞質量は２倍になり、対照マウスと比べると５．８倍増加した（図４Ｃを参照されたい）。正常な血中グルコースレベルの環境ではβ細胞質量のさらなる拡大増殖が起こったことに留意することが重要である（表３）。α細胞質量は、Ｓ９６１処置により（１．６倍）、Ｈ４Ｈ１３２７Ｐの同時存在下では（Ｈ４Ｈ１３２７Ｐ単独と比べて１．４倍）わずかに増加した（図４Ｂを参照されたい）。Ｓ９６１は全膵臓面積当たりの膵島数を４９％増加させたが、Ｓ９６１およびＨ４Ｈ１３２７Ｐの併用処置は、面積当たりの膵島数を８２％増加させた（図４Ｄを参照されたい）。まとめると、グルカゴンおよびインスリンシグナル伝達が阻害されたとき、αおよびβ細胞質量の代償的な増加がもたらされた。新規の所見は、インスリン抵抗性マウスにおいてグルカゴンシグナル伝達が遮断されたときβ細胞質量が２倍になったこと、およびこの効果が正常な血中グルコースレベルにおいて生じたことである。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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