【手続補正書】
【提出日】平成19年6月15日(2007.6.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2006527704.tif 000001
［式中、
Ｒ1は、水素；ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、シアノおよびＣ1-3アルコキシからなる群から選択される置換基で適宜置換されたＣ1-6アルキル；またはＣ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、Ｃ1-6アルコキシ、Ｃ1-6アルキルチオ、Ｃ1-6アルキルカルボニル、非置換または置換されたＣ3-10シクロアルキル基、非置換または置換されたＣ3-10シクロアルキルカルボニル基、非置換または置換されたＣ5-10シクロアルケニル基、非置換または置換されたＣ3-7ヘテロシクロアルキル基、非置換または置換されたＣ1-6アルキルアリール基、非置換または置換されたＣ2-6アルケニルアリール基、非置換または置換されたＣ1-6アルキルヘテロアリール基、非置換または置換されたアリール基、非置換または置換されたヘテロアリール基、非置換または置換されたアロイル基、非置換または置換されたアリールチオ基、非置換または置換されたアリールオキシ基、非置換または置換されたアリールスルホニル基、非置換または置換されたアリールアミノ基、非置換または置換されたヘテロアロイル基、非置換または置換されたヘテロアリールオキシ基、非置換または置換されたヘテロアリールスルホニル基、非置換または置換されたヘテロアリールアミノ基、非置換または置換されたＣ1-5アルキルＣ3-7シクロアルキル基、もしくは非置換または置換されたＣ1-5アルキルＣ3-7ヘテロシクロアルキル基であり；
Ｒ2は、水素またはＣ1-6アルキルであり；または、
Ｒ1およびＲ2は、一緒になって非置換または置換されたＣ3-10シクロアルキル基、もしくは非置換または置換されたＣ3-7ヘテロシクロアルキル基を形成し；
Ｒ3は、水素またはＣ1-6アルキルであり；または、
Ｒ1およびＲ3は、一緒になって非置換または置換されたＣ3-7ヘテロシクロアルキル基を形成し；
Ｒ4は、水素、Ｃ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、Ｃ1-6アルコキシ、Ｃ1-6アルキルチオ、Ｃ1-6アルキルカルボニル、Ｃ1-6アルキルスルホニル、非置換または置換されたＣ3-10シクロアルキル基、非置換または置換されたＣ3-10シクロアルキルカルボニル基、非置換または置換されたＣ5-10シクロアルケニル基、非置換または置換されたＣ3-7ヘテロシクロアルキル基、非置換または置換されたＣ1-6アルキルアリール基、非置換または置換されたＣ2-6アルケニルアリール基、非置換または置換されたＣ1-6アルキルヘテロアリール基、非置換または置換されたアリール基、非置換または置換されたヘテロアリール基、非置換または置換されたアロイル基、非置換または置換されたアリールチオ基、非置換または置換されたアリールオキシ基、非置換または置換されたアリールスルホニル基、非置換または置換されたアリールアミノ基、非置換または置換されたヘテロアロイル基、非置換または置換されたヘテロアリールオキシ基、非置換または置換されたヘテロアリールスルホニル基、非置換または置換されたヘテロアリールアミノ基、非置換または置換されたＣ1-5アルキルＣ3-7シクロアルキル基、もしくは非置換、置換されたＣ1-5アルキルＣ3-7ヘテロシクロアルキル基または式：
【化２】
2006527704.tif 000002
で表される基であり；式中、
Ａは、１またはそれ以上の置換基Ｘを有する環構造であって、Ａは、Ｃ5-7シクロアルキル、Ｃ5-7ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから選択され；
Ｘは、同一または異なって、水素、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルキルチオまたはＣ1-6アルコキシから選択され；
Ｂは、１またはそれ以上の置換基Ｙを有する環構造であって、Ｂは、Ｃ5-7シクロアルキル、Ｃ5-7ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから選択され；
Ｙは、同一または異なって、水素、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルキルチオまたはＣ1-6アルコキシから選択され；
−Ｌ−は、リンカーであり、Ｃ1-6アルキルもしくはＣ2-6アルケニル、または
【化３】
2006527704.tif 000003
からなる群から選択される部分であって；
該リンカー−Ｌ−は、該環Ａの二つの自由結合のうちどちらかを経由して結合されてもよく；
ｎは、０、１、２および３から選択される同一または異なった整数であり；
Ｒ5は、水素またはＣ1-6アルキルであり；または、
Ｒ4およびＲ5は、一緒になって非置換または置換されたＣ3-10シクロアルキル基、もしくは非置換または置換されたＣ3-7ヘテロシクロアルキル基を形成し；
上記置換された基は、独立してＣ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、Ｃ1-6アルキルチオ、Ｃ1-6アルキルカルボニル、Ｃ1-6−Ｎ−アルキルアミド、ジアルキルアミノ−Ｃ1-6アルキル、アミド、ヒドロキシ、カルボキシ、アミノ、ニトロ、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチルチオおよびシアノからなる群から選択される１、２または３個の置換基で置換される］
で示される化合物またはその医薬的に許容される塩、もしくはプロドラッグ。
【請求項２】
Ｒ1が、水素、Ｃ1-6アルキル、非置換または置換されたアリール、非置換または置換されたＣ1-6アルキルアリール基、非置換または置換されたＣ1-6アルキルヘテロアリール基、あるいは非置換または置換されたＣ3-10−シクロアルキル基からなる群から選択される、請求項１の化合物。
【請求項３】
Ｒ1が、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、フェニル、ベンジルまたはシクロヘキシルである、請求項１または２の化合物。
【請求項４】
Ｒ1が、水素、メチルまたはエチルである、請求項１〜３のいずれかの化合物。
【請求項５】
Ｒ1およびＲ2が、一緒になって非置換または置換されたＣ3-10シクロアルキル基、あるいは非置換または置換されたＣ3-7ヘテロシクロアルキル基を形成する、請求項１の化合物。
【請求項６】
Ｒ1およびＲ2が、一緒になって非置換または置換されたシクロヘキシル基を形成する、請求項１または５の化合物。
【請求項７】
Ｒ1およびＲ3が、一緒になって非置換または置換されたＣ3-7ヘテロシクロアルキル基を形成する、請求項１の化合物。
【請求項８】
Ｒ1およびＲ3が、一緒になってピロリドニルまたはピペリドニルを形成する、請求項１または７の化合物。
【請求項９】
Ｒ2が水素である、請求項１〜４、７〜８のいずれかの化合物。
【請求項１０】
Ｒ3が水素またはメチルである、請求項１の化合物。
【請求項１１】
Ｒ4が、水素、Ｃ1-6アルキル、非置換または置換されたＣ1-6アルキルアリール基、非置換または置換されたＣ1-6アルケニルアリール基、および非置換または置換されたＣ1-6アルキルヘテロアリール基からなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれかの化合物。
【請求項１２】
Ｒ4が、水素、非置換または置換されたベンジル、２−フェニルエチル、３−フェニル−２−プロペン、［１，１’−ビフェニル−４−イル］メチル、または［１，１’−ビフェニル−２−イル］メチルである、請求項１〜１１のいずれかの化合物。
【請求項１３】
Ｒ5が水素である、請求項１〜１２のいずれかの化合物。
【請求項１４】
Ｒ4およびＲ5が、一緒になって非置換または置換されたＣ3-10シクロアルキル基、あるいは非置換または置換されたＣ3-7ヘテロシクロアルキル基を形成する、請求項１〜１０のいずれかの化合物。
【請求項１５】
Ｒ4およびＲ5の少なくとも一つが水素である、請求項１〜１３のいずれかの化合物。
【請求項１６】
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、Ａ、Ｂ、Ｘ、Ｙ、およびＬが、請求項１で定義され、以下の構造を有する、請求項１〜１０、１３、１５のいずれかの化合物。
【化４】
2006527704.tif 000004
【請求項１７】
Ｒ4が、［１，１’−ビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−メチルビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−メチルビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−ヒドロキシビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−ヒドロキシビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−メトキシビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−メトキシビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−メチルチオビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−メチルチオビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−シアノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−シアノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−アミノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−アミノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−クロロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−クロロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−ブロモビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−ブロモビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２’−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３’−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２’−クロロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３’−クロロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−クロロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２’−ブロモビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３’−ブロモビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−ブロモビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２’−シアノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３’−シアノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−シアノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−ヒドロキシビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−アミノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−メトキシビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−メチルチオビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−メチル−４’−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−クロロ−４’−シアノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−メトキシ−３’−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−ヒドロキシ−２’−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−アミノ−３’−メトキシビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−フルオロ−４’−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、
［２−フェニル−１，３−チアゾール−４−イル］メチル、［５−フェニルピリジン−３−イル］メチル、［３−ピリミジン−５−イルフェニル］メチル、［３−ピリジン−２−イルフェニル］メチル、［３−ピリジン−４−イルフェニル］メチル、［３−（１Ｈ−インドール−６−イル）フェニル］メチル、［１−（２−フルオロフェニル）ピペリジン−４−イル］メチル、［３−フルオロ−４−（１−ピペリジニル）フェニル］メチル、［１，１’−ビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−メチルビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−メチルビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−ヒドロキシビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−ヒドロキシビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−メトキシビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−メトキシビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−メチルチオビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−メチルチオビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−シアノビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−シアノビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−アミノビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−アミノビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−フルオロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−フルオロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−クロロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−クロロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−ブロモビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−ブロモビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２’−フルオロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３’−フルオロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，４’−フルオロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２’−クロロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３’−クロロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，４’−クロロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２’−ブロモビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３’−ブロモビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，４’−ブロモビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２’−シアノビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３’−シアノビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，４’−シアノビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−メチル−４’−フルオロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−クロロ−４’−シアノビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−メトキシ−３’−フルオロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−ヒドロキシ−２’−フルオロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−アミノ−３’−メトキシビフェニル−４−イル］エチル、［２−フェニル−１，３−チアゾール−４−イル］エチル、［５−フェニルピリジン−３−イル］エチル、［３−ピリミジン−５−イルフェニル］エチル、［３−ピリジン−２−イルフェニル］エチル、［３−ピリジン−４−イルフェニル］エチル、［３−（１Ｈ−インドール−６−イル）フェニル］エチル、［１−（２−フルオロフェニル）ピペリジン−４−イル］エチル、［３−フルオロ−４−（１−ピペリジニル）フェニル］エチル、［１，１’−ビフェニル−４−イル］メチルオキシメチル、［１，１’，４’−フルオロビフェニル−４−イル］メチルオキシメチル、［１，１’−ビフェニル−４−イル］メチルチオメチル、［１，１’，４’−フルオロビフェニル−４−イル］メチルチオメチル、［１，１’−ビフェニル−４−イル］エチレニル、または［１，１’，４’−フルオロビフェニル−４−イル］エチレニルである、請求項１〜１０、１３、１５、１６のいずれかの化合物。
【請求項１８】
Ｎ−（２Ｓ−２−アミノ−３−フェニルプロピオニル）−アミノアセトニトリル；
（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−３−フェニルプロピオニトリル；
（２Ｓ）−Ｎ−メチル−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−３−フェニルプロピオニトリル；
（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−３−（ｐ−クロロフェニル）プロピオニトリル；
（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−３−（１，１’−ビフェニル−４−イル）プロピオニトリル；
（２Ｓ）−（４Ｚ）−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−５−フェニル−（４−ペンテン）−ニトリル；
（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−４−フェニルブチロニトリル、および
（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｓ）−３−フェニルアミノプロパノイル］−２−アミノ−３−フェニルプロピオニトリルからなる群から選択される、請求項１の化合物。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩、もしくはプロドラッグを含む、プロテアーゼ阻害剤。
【請求項２０】
該プロテアーゼ阻害剤がシステインプロテアーゼ阻害剤である、請求項１９のプロテアーゼ阻害剤。
【請求項２１】
５００μＭまたはそれ以下、例えば、１００μＭまたはそれ以下、５０μＭまたはそれ以下、１μＭまたはそれ以下、５００ｎＭまたはそれ以下、１００ｎＭまたはそれ以下、７５ｎＭまたはそれ以下、５０ｎＭまたはそれ以下、もしくは２５ｎＭまたはそれ以下のＩＣ50値を示す、請求項１９〜２０のいずれかのプロテアーゼ阻害剤。
【請求項２２】
請求項１〜１８のいずれかの化合物またはその医薬的に許容される塩、もしくはプロドラッグを含む、炎症、２型糖尿病、喘息、重度のインフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルス感染、ＣＤ８ Ｔ細胞阻害、炎症性腸疾患、乾癬、アトピー性皮膚炎、パピヨン−ルフェーベル症候群、ハイム−ムンク症候群、歯周病、歯周炎、関節リウマチ、ハンチントン氏病、シャーガス病、アルツハイマー病、敗血症または標的細胞のアポトーシスにおける適用のための治療、予防および／または診断の薬物。
【請求項２３】
単位投与形態中、活性物質の約１μｇ〜約１０００ｍｇ、例えば、約１０μｇ〜約５００ｍｇ、約０．０５〜約１００ｍｇまたは約０．１〜約５０ｍｇを含む、請求項２２の薬物。
【請求項２４】
経口、経鼻、経皮、肺または非経口投与のための請求項２２または２３の薬物。
【請求項２５】
該化合物が、１日当たり約１μｇ〜約１０００ｍｇの範囲、例えば、約１０μｇ〜約５００ｍｇ、約０．０５〜約１００ｍｇ、または約０．１〜約５０ｍｇで投与されることを特徴とする、請求項２２または２３の薬物。
【請求項２６】
医薬的に許容される担体または希釈剤と共に、活性物質として請求項２２に定義される化合物またはその医薬的に許容される塩、もしくはプロドラッグを含む、医薬組成物。
【請求項２７】
請求項１〜１８のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩、もしくはプロドラッグを含む、ＤＰＰ−Ｉレベルの調節剤。
【請求項２８】
該ＤＰＰ−Ｉが阻害される、請求項２７の調節剤。
【請求項２９】
ＤＰＰ−Ｉが、ＩＣ50（カテプシンＢ）／ＩＣ50（ＤＰＰ−Ｉアッセイ）値で、２５またはそれ以上、例えば、５０またはそれ以上、７５またはそれ以上、１００またはそれ以上、２５０またはそれ以上、５００またはそれ以上、もしくは７５０またはそれ以上と決定されるように選択的に阻害される、請求項２８の調節剤。
【請求項３０】
ＤＰＰ−Ｉが、ＩＣ50（カテプシンＨ）／ＩＣ50（ＤＰＰ−Ｉアッセイ）値で、２５またはそれ以上、例えば、５０またはそれ以上、７５またはそれ以上、１００またはそれ以上、２５０またはそれ以上、５００またはそれ以上、もしくは７５０またはそれ以上と決定されるように選択的に阻害される、請求項２８または２９の調節剤。
【請求項３１】
ＤＰＰ−Ｉが、ＩＣ50（カテプシンＬ）／ＩＣ50（ＤＰＰ−Ｉアッセイ）値で、２５またはそれ以上、例えば、５０またはそれ以上、７５またはそれ以上、１００またはそれ以上、２５０またはそれ以上、５００またはそれ以上、もしくは７５０またはそれ以上と決定されるように選択的に阻害される、請求項２８〜３０のいずれかの調節剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【発明の名称】プロテアーゼ阻害剤
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、新規なプロテアーゼ阻害剤、より具体的には、プロテアーゼが関係する炎症、糖尿病および同様の疾病、特に、肥満細胞の炎症介在疾患の治療／予防に有用であるシステインおよび／またはセリンプロテアーゼの阻害剤に関する。より具体的には、本発明は、ジペプチジル−ペプチダーゼＩ（ＤＰＰＩ）を選択的に阻害することができ、ポリペプチド鎖のＮ末端からジペプチドを開裂する酵素で、カテプシンＣとしても知られるペプチジルニトリルに関する。
【０００２】
（技術背景）
カテプシンＣとしても公知である、ジペプチジルペプチダーゼ−Ｉ（ＤＰＰ−Ｉ；ＥＣ３．４．１４．１）は、パパインファミリーに属するリソソームシステインプロテアーゼである。該酵素は、肺、腎臓、肝臓および脾臓において、高レベルで多くの組織において構成的に発現される。ラット、ヒトおよびマウスのＤＰＰ−Ｉをコードする該ｃＤＮＡは、クローン化されて、配列を決定し、該酵素が高度に保存されることを示した。ＤＰＰ−Ｉは、不活性前駆体（酵素前駆体）として合成されて、Ｎ−末端プロペプチド内の内部活性化ペプチドの非自動触媒切除によって活性化される。いったん活性化されると、ＤＰＰ−Ｉは、広範な特異性を持ってポリペプチド基質のＮ−末端からジペプチドの除去を触媒する。最適な該ｐＨは、ヒトＤＰＰ−Ｉを用いて、５〜７の範囲にある。さらに、ＤＰＰ−Ｉは、モノマーであることに加えて、エキソペプチダーゼであるカテプシンＢ、Ｈ、Ｌ、ＯおよびＳと比較するとアミノ酸配列の相同性をほとんど有しないオリゴマーである。最近のデータでは、リソソーム蛋白質分解において重要な酵素であることに加えて、ＤＰＰ−Ｉが、細胞毒性Ｔリンパ球およびナチュラルキラー細胞（グランザイムＡおよびＢ）、肥満細胞（チマーゼおよびトリプターゼ）、および好中球（カテプシンＧおよびエラスターゼ）において、顆粒セリンペプチダーゼの活性化に重要な酵素としても機能することを示唆している。
【０００３】
肥満細胞は、多くの組織で見出されるが、皮膚、呼吸器および消化管のような体の上皮内膜に沿って多数存在する。肥満細胞は、小血管を取り囲む血管周囲組織内にも存在する。ヒトにおいて、肥満細胞における二つのタイプが同定されてきた。Ｔ−タイプは、トリプターゼのみを発現して、ＭＣ−タイプは、トリプターゼおよびチマーゼの両方を発現する。ヒトにおいて、該Ｔ−タイプの肥満細胞は、主として、肺胞組織および腸粘液に存在し、一方、ＴＣ−タイプ細胞は、主に皮膚および結膜に存在する。肥満細胞は、サイトカイン、ロイコトリエン、プロスタグランジン、ヒスタミン、およびプロテオグリカンを含む、強力な炎症性メディエーターの範囲で放出することができるが、肥満細胞の活性化における最も多い生成物には、キモトリプシンファミリーのセリンプロテアーゼ；トリプターゼおよびチマーゼがある。これらのプロテアーゼは、充分に活性な酵素として、肥満細胞リソソーム中にある。酵素前駆体からのトリプターゼおよびチマーゼの活性化の正確な部位は、知られていないが、該ゴルジ体は、それに関連する役割を有しうる。特に、肥満細胞内に豊富にあるＤＰＰ−Ｉは、チマーゼおよびトリプターゼの活性化に関与する重要な酵素であるように思われる。さらに、トリプターゼおよびチマーゼは、アレルギー性疾患の重要なメディエーターとして明らかとなってきている。活性な肥満細胞からの分泌後、これらのプロテアーゼは、炎症の過程、組織再構築、気管支収縮および粘液分泌に非常に多く関わっており、治療行為において、これらのプロテアーゼを誘引的にさせる証拠がある。肥満細胞は、これらの細胞が多くの血管新生依存状態において蓄積するので、血管新生における役割も果たしているように思われる。さらに、いくつかの肥満細胞メディエーター（例えば、ヒスタミン、チマーゼ、ＶＥＧＦおよびｂＦＧＦ）は、血管新生的であり、内皮細胞増殖および機能の調節することが見出されている。
【０００４】
好中球は、多くの病理学的症状において、多大な損傷を引き起こす。活性化するとき、好中球は、エラスターゼおよびカテプシンＧを含む、破壊的な顆粒酵素を分泌し、酸化的な破裂により活性酸素中間体の放出をもたらす。多くの研究は、分離して、これらの活性化剤の各々について実施されてきている。肺気腫、嚢胞性線維症および関節リウマチは、正に強力な酵素であるエラスターゼおよびカテプシンＧに関連する病理学的症状の例である。
【０００５】
トリプターゼおよびチマーゼと、肥満細胞が介在する多くのアレルギー性疾患、免疫疾患および炎症性疾患とを結びつける強い証拠、およびカテプシンＧおよびエラスターゼも、これらのタイプの疾病に重要な役割も果たしているように思われるという事実は、これらのプロテアーゼの活性化における中心的な役割のために、上述の疾病に対する治療行為のための誘引的な標的酵素として、ＤＰＰ−Ｉを示す。
【０００６】
ノバルティスＡＧによるＷＯ９９２４４６０は、システインカテプシンのジペプチドニトリル阻害剤を開示する。
【０００７】
ノバルティスＡＧによるＷＯ０１８７８２８Ａ１は、システインカテプシン阻害剤であるＮ置換ペプチジルニトリルを開示する。
【０００８】
アクシズファーマシューティカルズ社によるＷＯ００５５１２６は、システインプロテアーゼ阻害剤である、Ｎ−シアノメチルアミドを開示する。
【０００９】
テキサス大学による米国特許第５６０２１０２号は、ジペプチジルペプチダーゼＩの阻害剤を開示する。
【００１０】
プロビオドラッグによるＷＯ０３／０２２８７１Ａ２は、ジペプチジルペプチダーゼＩの阻害剤を開示する。
【００１１】
（発明の概要）
本発明は、一般式（Ｉ）：
【化１】
2006527704.tif 000005
［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5は、詳細な説明の部分で定義される。］
の化合物に関する。
【００１２】
該発明化合物が、炎症または２型糖尿病の治療のため、とりわけ、喘息、重度のインフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルス感染、ＣＤ８ Ｔ細胞阻害、炎症性腸疾患、乾癬、アトピー性皮膚炎、パピヨン−ルフェーベル症候群、ハイム−ムンク症候群、歯周病、歯周炎、関節リウマチ、ハンチントン氏病、シャーガス病、アルツハイマー病および敗血症のような肥満細胞の炎症が介在する疾病の予防における治療のために有用であることを意図する。本発明化合物は、とりわけ標的細胞のアポトーシスにおいて、適用可能である。
【００１３】
本発明に関して、化合物を提供し、インビトロおよびインビボでの診断ツールとして有用であることを意図する。
【００１４】
セリンおよび／またはシステインプロテアーゼのようなプロテアーゼの阻害剤として、薬理活性を有する新規な化合物を提供するための発明を目的とする。具体的な態様として、該発明化合物は、システインプロテアーゼ阻害剤であり、とりわけ、選択的なシステインプロテアーゼ阻害剤が良い。より具体的には、該発明化合物は、ジペプチジルペプチダーゼＩのようなパパインスーパーファミリーのシステインプロテアーゼの阻害剤である。
【００１５】
さらなる目的は、以下の記述から明らかとなるだろう。
【００１６】
（発明の詳細な説明）
定義
本明細書において、該用語「ＤＰＰ−Ｉ」または「ＤＰＰＩ」は、カテプシンＣ、カテプシンＪ、ジペプチジルアミノペプチダーゼＩおよびジペプチジルトランスフェラーゼとしても公知であるジペプチジル−ペプチダーゼＩ（ＥＣ ３．４．１４．１）を意味する。ＤＰＰＩは、Ｘａａが、ＡｒｇまたはＬｙｓであるとき、またはＸｂｂまたはＸｃｃがＰｒｏであるときを除いて、ポリペプチド鎖Ｘａａ−Ｘｂｂ−Ｘｃｃ−［Ｘｘｘ］nのＮ−末端から、ジペプチドＸａａ−Ｘｂｂを開裂する。
【００１７】
該用語「治療」は、疾病、症状、または障害に効くことを目的とするための患者の管理および治癒として定義され、該症状または合併症の発症を予防するため、もしくは該症状または合併症を軽減するため、または疾病、症状、または障害を除去するための本発明化合物の投与を含む。
【００１８】
単独または組み合わせて本明細書において、該用語「Ｃ1-6アルキル」は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素鎖を意味する。Ｃ1-6アルキル基は、これらに限らないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｉｓｏ−ペンチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、ｎ−ヘキシル、ｉｓｏ−ヘキシル、４−メチルペンチル、ネオペンチル、２，２−ジメチルプロピル等を含む。
【００１９】
単独または組み合わせて本明細書において、該用語「Ｃ2-6アルケニル」は、２〜６個の炭素原子および少なくとも１つの二重結合を有する直鎖または分枝鎖の不飽和炭化水素鎖を意味する。Ｃ2-6アルケニル基は、これらに限らないが、ビニル、１−プロペニル、アリール、ｉｓｏ−プロペニル、ｎ−ブテニル、ｎ−ペンテニル、ｎ−ヘキセニル等を含む。
【００２０】
単独または組み合わせて本明細書において、該用語「Ｃ2-6アルキニル」は、２〜６個の炭素原子および少なくとも１つの三重結合を有する直鎖または分枝鎖の不飽和炭化水素鎖を意味する。Ｃ2-6アルキニル基は、これらに限らないが、−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡ＣＣＨ3、−ＣＨ2Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ2−ＣＨ2Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ（ＣＨ3）Ｃ≡ＣＨ等を含む。
【００２１】
該発明内容において、該用語「Ｃ1-6アルコキシ」は、Ｃ1-6アルキルが上と同義である、単独または組み合わせて使用されるＯ−Ｃ1-6アルキル基を示す。直鎖アルコキシ基の具体例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシ、およびヘキソキシである。分枝鎖アルコキシの具体例は、ｉｓｏ−プロポキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｉｓｏ−ペントキシ、およびｉｓｏ−ヘキソキシである。環状アルコキシの具体例は、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、およびシクロヘキシルオキシである。
【００２２】
該発明内容において、該用語「Ｃ1-6アルキルチオ」は、Ｃ1-6アルキルが上と同義である−Ｓ−Ｃ1-6アルキル基を示す。具体例は、これらに限らないが、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチオ、イソブチルチオ、ｓｅｃ−ブチルチオ、ｔｅｒｔ−ブチルチオ、ｎ−ペンチルチオ、イソペンチルチオ、ネオペンチルチオ、ｔｅｒｔ−ペンチルチオ、ｎ−ヘキシルチオ、イソヘキシルチオ等を含む。
【００２３】
該発明内容において、該用語「Ｃ1-6アルキルカルボニル」は、Ｃ1-6アルキルが上と同義である、−（ＣＯ）−Ｃ1-6アルキル基を示す。具体例は、これらに限らないが、メチルカルボニル、エチルカルボニル、ｎ−プロピルカルボニル、イソプロピルカルボニル、ブチルカルボニル、イソブチルカルボニル、ｓｅｃ−ブチルカルボニル、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニル、ｎ−ペンチルカルボニル、イソペンチルカルボニル、ネオペンチルカルボニル、ｔｅｒｔ−ペンチルカルボニル、ｎ−ヘキシルカルボニル、イソヘキシルカルボニル等を含む。
【００２４】
該発明内容において、該用語「Ｃ1-6アルキルスルホニル」は、Ｃ1-6−アルキルが上と同義である、−（ＳＯ）2−Ｃ1-6−アルキル基を示す。具体例は、これらに限らないが、メチルスルホニル、エチルスルホニル、ｎ−プロピルスルホニル、イソプロピルスルホニル、ブチルスルホニル、イソブチルスルホニル、ｓｅｃ−ブチルスルホニル、ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル、ｎ−ペンチルスルホニル、イソペンチルスルホニル、ネオペンチルスルホニル、ｔｅｒｔ−ペンチルスルホニル、ｎ−ヘキシルスルホニル、イソヘキシルスルホニル等を含む。
【００２５】
該発明内容において、該用語「Ｃ1-6Ｎ−アルキルアミド」は、Ｃ1-6アルキルが上と同義である、−（ＣＯ）ＮＨ−Ｃ1-6アルキル基を示す。具体例は、これらに限らないが、Ｎ−メチルアミド、Ｎ−エチルアミド、Ｎ−プロピルアミド、Ｎ−ブチルアミド、Ｎ−ペンチルアミドおよびＮ−ヘキシルアミドを含む。
【００２６】
本明細書において該用語「ジアルキルアミノＣ1-6アルキル」は、Ｃ1-6アルキルが上と同義である、ジ−Ｃ1-4アルキル−Ｎ−Ｃ1-6アルキルを示す。具体例は、これらに限らないが、ジメチルアミノメチルを含む。
【００２７】
本明細書において、該用語「Ｃ3-10シクロアルキル」は、３〜１０個の炭素原子を有する１またはそれ以上の飽和モノ−、ビ−、トリ−、またはスピロ環状炭化水素基を意味する。具体例は、これらに限らないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、ビシクロ［３．２．１］オクチル、スピロ［４．５］デシル、ノルピニル、ノルボルニル、ノルカリル、アダマンチル等を含む。
【００２８】
本明細書において、該用語「Ｃ3-10−シクロアルキルカルボニル」は、Ｃ3-10−シクロアルキルが上と同義である、−（ＣＯ）−Ｃ3-10−シクロアルキル基を意味する。
【００２９】
本明細書において、該用語「Ｃ5-10シクロアルケニル」は、５〜１０個の炭素原子および少なくとも１つの二重結合を有する１またはそれ以上の飽和環状炭化水素基を意味する。具体例は、これらに限らないが、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニル等を含む。
【００３０】
本明細書において、該用語「Ｃ3-7ヘテロシクロアルキル」は、環内に独立して、窒素、酸素および硫黄から選択される１またはそれ以上のヘテロ原子を含む、環状炭化水素のような全体的に飽和ヘテロ環基を意味する。ヘテロ環の具体例は、これらに限らないが、ピロリジン（１−ピロリジン、２−ピロリジン、３−ピロリジン、４−ピロリジン、５−ピロリジン）、ピラゾリジン（１−ピラゾリジン、２−ピラゾリジン、３−ピラゾリジン、４−ピラゾリジン、５−ピラゾリジン）、イミダゾリジン（１−イミダゾリジン、２−イミダゾリジン、３−イミダゾリジン、４−イミダゾリジン、５−イミダゾリジン）、チアゾリジン（２−チアゾリジン、３−チアゾリジン、４−チアゾリジン、５−チアゾリジン）、ピペリジン（１−ピペリジン、２−ピペリジン、３−ピペリジン、４−ピペリジン、５−ピペリジン、６−ピペリジン）、ピペラジン（１−ピペラジン、２−ピペラジン、３−ピペラジン、４−ピペラジン、５−ピペラジン、６−ピペラジン）、モルホリン（２−モルホリン、３−モルホリン、４−モルホリン、５−モルホリン、６−モルホリン）、チオモルホリン（２−チオモルホリン、３−チオモルホリン、４−チオモルホリン、５−チオモルホリン、６−チオモルホリン）、１，２−オキサチオラン（３−（１，２−オキサチオラン）、４−（１，２−オキサチオラン）、５−（１，２−オキサチオラン））、１，３−ジオキソラン（２−（１，３−ジオキソラン）、３−（１，３−ジオキソラン）、４−（１，３−ジオキソラン））、テトラヒドロピラン（２−テトラヒドロピラン、３−テトラヒドロピラン、４−テトラヒドロピラン、５−テトラヒドロピラン、６−テトラヒドロピラン）、ヘキサヒドロピラジジン、（１−（ヘキサヒドロピラジジン）、２−（ヘキサヒドロピラジジン）、３−（ヘキサヒドロピラジジン）、４−（ヘキサヒドロピラジジン）、５−（ヘキサヒドロピラジジン）、６−（ヘキサヒドロピラジジン））を含む。
【００３１】
本明細書において、該用語「アリール」は、炭素環状芳香環構造を含むことを意味する。アリールは、以下に列挙される炭素環構造の部分的に水素化された誘導体を含むことも意味する。
【００３２】
本明細書において、該用語「ヘテロアリール」は、フリル、チエニル、ピロリルのような窒素、酸素および硫黄から選択される１またはそれ以上のヘテロ原子を含む、ヘテロ環芳香環構造を含み、以下に列挙されるヘテロ環構造における部分的に水素化された誘導体を含むことを意味する。
【００３３】
「アリール」および「ヘテロアリール」の具体例は、これらに限らないが、フェニル、ビフェニル、インデニル、ナフチル（１−ナフチル、２−ナフチル）、Ｎ−ヒドロキシテトラゾリル、Ｎ−ヒドロキシトリアゾリル、Ｎ−ヒドロキシイミダゾリル、アントラセニル（１−アントラセニル、２−アントラセニル、３−アントラセニル）、フェナントレニル、フルオレニル、ペンタレニル、アズレニル、ビフェニレニル、チオフェニル（１−チエニル、２−チエニル）、フリル（１−フリル、２−フリル）、フラニル、チオフェニル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、ピラニル、ピリダジニル、ピラジニル、１，２，３−トリアジニル、１，２，４−トリアジニル、１，３，５−トリアジニル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，２，５−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、テトラゾリル、チアジアジニル、インドリル、イソインドリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル（チアナフテニル）、インドリル、オキサジアゾリル、イソキサゾリル、キナゾリニル、フルオレニル、キサンテニル、イソインダニル、ベンズヒドリル、アクリジニル、ベンズイソキサゾリル、プリニル、キナゾリニル、キノリジニル、キノリニル、イソキノリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、フテリジニル、アゼピニル、ジアゼピニル、ピロリル（２−ピロリル）、ピラゾリル（３−ピラゾリル）、イミダゾリル（１−イミダゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、５−イミダゾリル）、トリアゾリル（１，２，３−トリアゾール−１−イル、１，２，３−トリアゾール−２−イル、１，２，３−トリアゾール−４−イル、１，２，４−トリアゾール−３−イル）、オキサゾリル（２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、５−オキサゾリル）、チアゾリル（２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル）、ピリジル（２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル）、ピリミジニル（２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、６−ピリミジニル）、ピラジニル、ピリダジニル（３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル）、イソキノリル（１−イソキノリル、３−イソキノリル、４−イソキノリル、５−イソキノリル、６−イソキノリル、７−イソキノリル、８−イソキノリル）、キノリル（２−キノリル、３−キノリル、４−キノリル、５−キノリル、６−キノリル、７−キノリル、８−キノリル）、ベンゾ［ｂ］フラニル（２−ベンゾ［ｂ］フラニル、３−ベンゾ［ｂ］フラニル、４−ベンゾ［ｂ］フラニル、５−ベンゾ［ｂ］フラニル、６−ベンゾ［ｂ］フラニル、７−ベンゾ［ｂ］フラニル）、２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル（２−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル）、３−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル）、４−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル）、５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル）、６−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル）、７−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］フラニル））、ベンゾ［ｂ］チオフェニル（２−ベンゾ［ｂ］チオフェニル、３−ベンゾ［ｂ］チオフェニル、４−ベンゾ［ｂ］チオフェニル、５−ベンゾ［ｂ］チオフェニル、６−ベンゾ［ｂ］チオフェニル、７−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル（２−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、３−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、４−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、６−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル）、７−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェニル））、インドリル（１−インドリル、２−インドリル、３−インドリル、４−インドリル、５−インドリル、６−インドリル、７−インドリル）、インダゾリル（１−インダゾリル、２−インダゾリル、３−インダゾリル、４−インダゾリル、５−インダゾリル、６−インダゾリル、７−インダゾリル）、ベンズイミダゾリル、（１−ベンズイミダゾリル、２−ベンズイミダゾリル、４−ベンズイミダゾリル、５−ベンズイミダゾリル、６−ベンズイミダゾリル、７−ベンズイミダゾリル、８−ベンズイミダゾリル）、ベンズオキサゾリル（１−ベンズオキサゾリル、２−ベンズオキサゾリル）、ベンゾチアゾリル（１−ベンゾチアゾリル、２−ベンゾチアゾリル、４−ベンゾチアゾリル、５−ベンゾチアゾリル、６−ベンゾチアゾリル、７−ベンゾチアゾリル）、カルバゾリル（１−カルバゾリル、２−カルバゾリル、３−カルバゾリル、４−カルバゾリル）を含む。部分的に水素化された誘導体の限定されない例は、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、１，４−ジヒドロナフチル、ピロリニル、ピラゾリニル、インドリニル、オキサゾリジニル、オキサゾリニル、オキサゼピニル等がある。
【００３４】
本明細書において、該用語「Ｃ1-6−アルキルアリール」は、１、２、３、４、５または６個の炭素原子を有する、上と同義であるＣ1-6アルキル基を介して結合される、上と同義であるアリール基を意味する。
【００３５】
本明細書において、該用語「Ｃ1-6−アルキルヘテロアリール」は、１、２、３、４、５または６個の炭素原子を有する上と同義であるＣ1-6アルキル基を介して結合される、上と同義であるヘテロアリール基を意味する。
【００３６】
本明細書において、該用語「アロイル」は、アリールが上と同義である−（ＣＯ）−アリール基を意味する。
【００３７】
本明細書において、該用語「アリールチオ」は、アリールが上と同義である−Ｓ−アリール基を意味する。
【００３８】
本明細書において、該用語「アリールオキシ」は、アリールが上と同義である−Ｏ−アリール基を意味する。
【００３９】
本明細書において、該用語「アリールスルホニル」は、アリールが上と同義である−（ＳＯ）2−アリール基を意味する。
【００４０】
本明細書において、該用語「アリールアミノ」は、アリールが上と同義である−ＮＨ−アリール基を意味する。
【００４１】
本明細書において、該用語「ヘテロアリール」は、ヘテロアリールが上と同義である−（ＣＯ）−ヘテロアリール基を意味する。
【００４２】
本明細書において、該用語「ヘテロアリールオキシ」は、ヘテロアリールが上と同義である−Ｏ−ヘテロアリール基を意味する。
【００４３】
本明細書において、該用語「ヘテロアリールスルホニル」は、ヘテロアリールが上と同義である−（ＳＯ）2−ヘテロアリール基を意味する。
【００４４】
本明細書において、該用語「ヘテロアリールアミノ」は、ヘテロアリールが上と同義である−ＮＨ−ヘテロアリール基を意味する。
【００４５】
本明細書において、該用語「Ｃ1-5アルキルＣ3-7シクロアルキル」は、指示された数の炭素原子を有する、上と同義であるアルキル基を介して結合する、上と同義であるシクロアルキル基を意味する。
【００４６】
本明細書において、該用語「Ｃ1-5アルキルＣ3-7ヘテロシクロアルキル」は、指示された数の炭素原子を有する、上と同義であるアルキル基を介して結合する、上と同義であるヘテロシクロアルキル基を意味する。
【００４７】
「ハロゲン」は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群から選択される原子を示す。
【００４８】
以下の該構造Ａは、Ｘの可能な数が、環構造の大きさおよびタイプに依存する１またはそれ以上の置換基Ｘを有する環構造を示す。Ａは、上と同義であるアリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、およびヘテロシクロアルキルである。
【化２】
2006527704.tif 000006
【００４９】
以下の該構造Ｂは、Ｙの可能な数が、環構造の大きさおよびタイプに依存する１またはそれ以上の置換基Ｙを有する環構造を意味する。Ｂは、上と同義であるアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルである。
【化３】
2006527704.tif 000007
【００５０】
−Ｌ−は、二つの自由結合を有するリンカーであり；Ｌは、Ｃ1-6アルキルまたはＣ2-6アルケニル、もしくは
【化４】
2006527704.tif 000008
からなる群から選択される（ｎは同一または異なる、０〜３の整数）部分である。
【００５１】
本明細書において、該用語「非置換」または「置換された」は、問題となる該基は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、Ｃ1-6アルキルチオ、Ｃ1-6アルキルカルボニル、Ｃ1-6−Ｎ−アルキルアミド、ジアルキルアミノ−Ｃ1-6アルキル、アミド、ヒドロキシ、カルボキシ、アミノ、ニトロ、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチルチオおよびシアノからなる群から選択される、他の独立した１、２、または３個の置換基で、適宜非置換または置換されることを意味する。問題となる該基が、１以上の置換基で置換されるとき、該置換基は、同一または異なりうる。
【００５２】
本明細書において該用語「アミノ酸」、「アミノ酸残基」、「天然アミノ酸」および「天然アミノ酸残基」はすべて、２０個の標準アミノ酸残基：アラニン（Ａｌａ）、アルギニン（Ａｒｇ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、システイン（Ｃｙｓ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、リジン（Ｌｙｓ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）およびバリン（Ｖａｌ）のＤ−またはＬ−異性体を意味する。
【００５３】
本明細書において、該用語「非天然アミノ酸」および「非天然アミノ酸残基」は、非標準または修飾された、または非天然アミノ酸残基を意味する。非標準アミノ酸残基の具体例は、４−ヒドロキシプロリン、６−Ｎ−メチルリジン、２−アミノイソ酪酸、イソバリン、およびα−メチルセリンがある。非天然アミノ酸残基の具体例は、ピペコリン酸、チアゾリジンカルボン酸、デヒドロプロリン、３−および４−メチルプロリン、および３，３−ジメチルプロリンがある。
【００５４】
上で定義される用語のいくつかは、該構造式内で１以上起こり得て、該発生における各用語は、各々独立して定義されるものとする。
【００５５】
本明細書において、該語句「生体内で水素に変換される官能基」は、酵素的に、または胃内の酸性条件によって水素へと変換され得る、それが必要な該患者に本化合物を投与するいずれかの基を含むことを意味する。該基の具体例は、限定されないが、例えば、Ｃ1-6−アルキルカルボニル、アロイル、Ｃ1-6−アルキルカルバモイル（Ｃ1-6−Ｎ−アルキルアミド）、ジ−Ｃ1-6アルキル−アルキルカルバモイル、Ｃ1-6−アルコキシカルボニルおよびＣ1-6−アルコキシ−Ｃ1-6−アルキルのようなアシル、カルバモイル、モノアルキル化カルバモイル、ジアルキル化カルバモイル、アルコキシカルボニル、アルコキシアルキル基などである。
【００５６】
本明細書において、該語句「ジペプチジル−ペプチダーゼＩに関連する疾病および障害」は、ジペプチジル−ペプチダーゼＩ酵素に有益な効果、好ましくは阻害する効果を有する、いずれかの疾病または障害を含むことを意味する。
【００５７】
本明細書において、該用語「ＩＣ50」は、結合アッセイにおいて、ＤＰＰ−Ｉを５０％阻害するのに必要な濃度を意味する。
【００５８】
該ペプチドおよび化学技術分野において、一般的に使用される略語および記号は、本発明化合物に記載するために本明細書で使用される。一般的に、該アミノ酸の略語は、文献：Eur. J. Biochem., 158, 9 (1984) に記載される、生化学命名法におけるＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ合同委員会に従う。
【００５９】
本明細書で特定の基のグループが、省略される。ｔ−Ｂｕは、三級ブチル基を意味し、Ｂｏｃは、ｔ−ブチルオキシカルボニル基を意味し、Ｆｍｏｃは、該フルオレニルメトキシカルボニル基を意味し、Ｐｈは、該フェニル基を意味し、Ｃｂｚは、ベンジルオキシカルボニル基を意味する。
【００６０】
（化合物）
本発明は、一般式（Ｉ）：
【化５】
2006527704.tif 000009
［式中、
Ｒ1は、水素；ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、シアノおよびＣ1-3アルコキシからなる群から選択される置換基で適宜置換されたＣ1-6アルキル；またはＣ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、Ｃ1-6アルコキシ、Ｃ1-6アルキルチオ、Ｃ1-6アルキルカルボニル、非置換または置換されたＣ3-10シクロアルキル基、非置換または置換されたＣ3-10シクロアルキルカルボニル基、非置換または置換されたＣ5-10シクロアルケニル基、非置換または置換されたＣ3-7ヘテロシクロアルキル基、非置換または置換されたＣ1-6アルキルアリール基、非置換または置換されたＣ2-6アルケニルアリール基、非置換または置換されたＣ1-6アルキルヘテロアリール基、非置換または置換されたアリール基、非置換または置換されたヘテロアリール基、非置換または置換されたアロイル基、非置換または置換されたアリールチオ基、非置換または置換されたアリールオキシ基、非置換または置換されたアリールスルホニル基、非置換または置換されたアリールアミノ基、非置換または置換されたヘテロアロイル基、非置換または置換されたヘテロアリールオキシ基、非置換または置換されたヘテロアリールスルホニル基、非置換または置換されたヘテロアリールアミノ基、非置換または置換されたＣ1-5アルキルＣ3-7シクロアルキル基、もしくは非置換または置換されたＣ1-5アルキルＣ3-7ヘテロシクロアルキル基であり；
Ｒ2は、水素またはＣ1-6アルキルであり；または、
Ｒ1およびＲ2が、一緒になって非置換または置換されたＣ3-10シクロアルキル基、もしくは非置換または置換されたＣ3-7ヘテロシクロアルキル基を形成し；
Ｒ3は、水素またはＣ1-6アルキルであり；または、
Ｒ1およびＲ3が、一緒になって非置換または置換されたＣ3-7ヘテロシクロアルキル基を形成し；
Ｒ4は、水素、Ｃ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、Ｃ1-6アルコキシ、Ｃ1-6アルキルチオ、Ｃ1-6アルキルカルボニル、Ｃ1-6アルキルスルホニル、非置換または置換されたＣ3-10シクロアルキル基、非置換または置換されたＣ3-10シクロアルキルカルボニル基、非置換または置換されたＣ5-10シクロアルケニル基、非置換または置換されたＣ3-7ヘテロシクロアルキル基、非置換または置換されたＣ1-6アルキルアリール基、非置換または置換されたＣ2-6アルケニルアリール基、非置換または置換されたＣ1-6アルキルヘテロアリール基、非置換または置換されたアリール基、非置換または置換されたヘテロアリール基、非置換または置換されたアロイル基、非置換または置換されたアリールチオ基、非置換または置換されたアリールオキシ基、非置換または置換されたアリールスルホニル基、非置換または置換されたアリールアミノ基、非置換または置換されたヘテロアロイル基、非置換または置換されたヘテロアリールオキシ基、非置換または置換されたヘテロアリールスルホニル基、非置換または置換されたヘテロアリールアミノ基、非置換または置換されたＣ1-5アルキルＣ3-7シクロアルキル基、または非置換、置換されたＣ1-5アルキルＣ3-7ヘテロシクロアルキル基または該式：
【化６】
2006527704.tif 000010
のグループであり；
Ａは、１またはそれ以上の置換基Ｘを有する環であって、Ａは、Ｃ5-7シクロアルキル、Ｃ5-7ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから選択され；
Ｘは、同一または異なって、水素、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルキルチオまたはＣ1-6アルコキシから選択され；
Ｂは、１またはそれ以上の置換基Ｙを有する環構造であって、Ｂは、Ｃ5-7シクロアルキル、Ｃ5-7ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから選択され；
Ｙは、同一または異なって、水素、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、トリフルオロメチル、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルキルチオ、またはＣ1-6アルコキシから選択され；
−Ｌ−は、Ｃ1-6アルキルまたはＣ2-6アルケニル、もしくは
【化７】
2006527704.tif 000011
からなる群から選択される部分であるリンカーであって、該リンカー−Ｌ−は、該二つの自由結合のうちどちらかによって、該環Ａと結合され得て；
ｎは、０、１、２および３から選択される同一または異なった整数であり；
Ｒ5は、水素またはＣ1-6アルキルであり；またはＲ4およびＲ5が、一緒になって非置換または置換されたＣ3-10シクロアルキル基、もしくは非置換または置換されたＣ3-7ヘテロシクロアルキル基を形成し；
上記置換された基が、独立して、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、Ｃ1-6アルキルチオ、Ｃ1-6アルキルカルボニル、Ｃ1-6−Ｎ−アルキルアミド、ジアルキルアミノ−Ｃ1-6アルキル、アミド、ヒドロキシ、カルボキシ、アミノ、ニトロ、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチルチオおよびシアノからなる群から選択される１、２または３個の置換基で置換される］
で示される化合物またはその医薬的に許容される塩、もしくはプロドラッグに関する。
【００６１】
Ｒ1は、具体的には、水素、Ｃ1-6アルキル、非置換または置換されたアリール、非置換または置換されたＣ1-6アルキルアリール基、非置換または置換されたＣ1-6アルキルヘテロアリール基、もしくは非置換または置換されたＣ3-10−シクロアルキル基からなる群から選択される。
【００６２】
具体的な態様として、Ｒ1は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、フェニル、ベンジルまたはシクロヘキシルである。とりわけ興味があるのは、Ｒ1が、水素、メチルまたはエチルである化合物である。
【００６３】
Ｒ1およびＲ2は、一緒になって非置換または置換されたシクロヘキシル基のような非置換または置換されたＣ3-10シクロアルキル基、もしくは非置換または置換されたＣ3-7ヘテロシクロアルキル基を形成しうる。
【００６４】
Ｒ1およびＲ3は、一緒になってピロリドニルまたはピペリドニルのような非置換または置換されたＣ3-7ヘテロシクロアルキル基を形成しうる。
【００６５】
具体的な態様として、Ｒ2が、水素および／またはＲ3が水素またはメチルである。
【００６６】
Ｒ4は、水素、Ｃ1-6アルキル、非置換または置換されたＣ1-6アルキルアリール基、非置換または置換されたＣ1-6アルケニルアリール基、および非置換または置換されたＣ1-6アルキルヘテロアリール基からなる群から選択されうる。
【００６７】
該発明による興味のある化合物は、Ｒ4が、水素、非置換または置換されたベンジル、２−フェニルエチル、３−フェニル−２−プロペン、［１，１’−ビフェニル−４−イル］メチルまたは［１，１’−ビフェニル−２−イル］メチルである。
【００６８】
具体的な態様として、Ｒ5が水素、またはＲ4およびＲ5が一緒になって非置換または置換されたＣ3-10シクロアルキル基または非置換または置換されたＣ3-7ヘテロシクロアルキル基を形成する。
【００６９】
好ましい態様として、Ｒ4およびＲ5のうち少なくとも一つは水素である。
【００７０】
より具体的には、該発明の化合物は、以下の構造：
【化８】
2006527704.tif 000012
［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、Ａ、Ｂ、Ｘ、ＹおよびＬが、上と同義である］
を有しうる。
【００７１】
他の興味のあるＲ4基は、
［１，１’−ビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−メチルビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−メチルビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−ヒドロキシビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−ヒドロキシビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−メトキシビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−メトキシビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−メチルチオビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−メチルチオビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−シアノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−シアノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−アミノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−アミノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−クロロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−クロロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−ブロモビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−ブロモビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２’−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３’−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２’−クロロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３’−クロロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−クロロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２’−ブロモビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３’−ブロモビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−ブロモビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２’−シアノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３’−シアノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−シアノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−ヒドロキシビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−アミノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−メトキシビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−メチルチオビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−メチル−４’−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−クロロ−４’−シアノビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−メトキシ−３’−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−ヒドロキシ−２’−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，３−アミノ−３’−メトキシビフェニル−４−イル］メチル、［１，１’，２−フルオロ−４’−フルオロビフェニル−４−イル］メチル、
［２−フェニル−１，３−チアゾール−４−イル］メチル、［５−フェニルピリジン−３−イル］メチル、［３−ピリミジン−５−イルフェニル］メチル、［３−ピリジン−２−イルフェニル］メチル、［３−ピリジン−４−イルフェニル］メチル、［３−（１Ｈ−インドール−６−イル）フェニル］メチル、［１−（２−フルオロフェニル）ピペリジン−４−イル］メチル、［３−フルオロ−４−（１−ピペリジル）フェニル］メチル、［１，１’−ビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−メチルビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−メチルビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−ヒドロキシビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−ヒドロキシビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−メトキシビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−メトキシビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−メチルチオビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−メチルチオビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−シアノビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−シアノビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−アミノビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−アミノビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−フルオロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−フルオロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−クロロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−クロロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−ブロモビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−ブロモビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２’−フルオロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３’−フルオロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，４’−フルオロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２’−クロロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３’−クロロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，４’−クロロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２’−ブロモビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３’−ブロモビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，４’−ブロモビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２’−シアノビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３’−シアノビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，４’−シアノビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，４’−トリフルオロメチルビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−メチル−４’−フルオロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−クロロ−４’−シアノビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−メトキシ−３’−フルオロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，２−ヒドロキシ−２’−フルオロビフェニル−４−イル］エチル、［１，１’，３−アミノ−３’−メトキシビフェニル−４−イル］エチル、［２−フェニル−１，３−チアゾール−４−イル］エチル、［５−フェニルピリジン−３−イル］エチル、［３−ピリミジン−５−イルフェニル］エチル、［３−ピリジン−２−イルフェニル］エチル、［３−ピリジン−４−イルフェニル］エチル、［３−（１Ｈ−インドール−６−イル）フェニル］エチル、［１−（２−フルオロフェニル）ピペリジン−４−イル］エチル、［３−フルオロ−４−（１−ピペリジニル）フェニル］エチル、［１，１’−ビフェニル−４−イル］メチルオキシメチル、［１，１’，４’−フルオロビフェニル−４−イル］メチルオキシメチル、［１，１’−ビフェニル−４−イル］メチルチオメチル、［１，１’，４’−フルオロビフェニル−４−イル］メチルチオメチル、［１，１’−ビフェニル−４−イル］エチレニル、または［１，１’，４’−フルオロビフェニル−４−イル］エチレニルである。
【００７２】
該発明の好ましい化合物は：
Ｎ−（２Ｓ−２−アミノ−３−フェニルプロピオニル）−アミノアセトニトリル；
（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−３−フェニルプロピオニトリル；（２Ｓ）−Ｎ−メチル−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−３−フェニルプロピオニトリル；
（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−３−（ｐ−クロロフェニル）プロピオニトリル；
（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−３−（１，１’−ビフェニル−４−イル）プロピオニトリル；
（２Ｓ）−（４Ｚ）−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−５−フェニル−（４−ペンテン）−ニトリル；
（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−４−フェニルブチロニトリル；および
（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｓ）−３−フェニルアミノプロパノイル］−２−アミノ−３−フェニルプロピオニトリルである。
【００７３】
該発明化合物は、位置異性体または光学異性体もしくは立体異性体ならびに互変異性体として存在しうる。従って、該発明は、これらの混合物およびラセミ混合物、ならびにその医薬的に許容される塩、とりわけ、すべてのＲ−およびＳ−異性体を含む、すべての位置異性体および互変異性体を含む。
【００７４】
本発明は、本化合物における医薬的に許容される塩も含む。該塩は、医薬的に許容される酸付加塩、医薬的に許容される金属塩、アンモニウムおよびアルキル化されたアンモニウム塩を含む。酸付加塩は、無機酸および有機酸塩を含む。適当な無機酸の具体例は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リン酸、硫酸、硝酸などを含む。適当な有機酸の具体例は、ギ酸、酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、安息香酸、桂皮酸、クエン酸、フマル酸、グリコール酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、シュウ酸、ピクリン酸、ピルビン酸、サリチル酸、コハク酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、酒石酸、アスコルビン酸、パモイン酸、ビスメチレンサリチル酸、エタンジスルホン酸、グルコン酸、シトラコン酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、ＥＤＴＡ、グリコール酸、ｐ−アミノ安息香酸、グルタミン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などを含む。さらに、医薬的に許容される無機または有機酸付加塩の具体例は、文献：J. Pharm. Sci. 1977, 66, 2 に挙げられる該医薬的に許容される塩を含み、参照によって本明細書に引用する。金属塩の具体例は、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム塩などを含む。アンモニウムおよびアルキル化されたアンモニウム塩の具体例は、アンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、エチルアンモニウム、ヒドロキシエチルアンモニウム、ジエチルアンモニウム、ブチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム塩などを含む。
【００７５】
また、医薬的に許容される酸付加塩は、本化合物が形成することができる該水和物も意味する。
【００７６】
該酸付加塩は、化合物合成の直接的な生成物として得られうる。別法として、該遊離塩基は、適当な酸を含む、適する溶媒に溶解され得て、該塩は、該溶媒をエバポレートするか、または別法で該塩および溶媒を分離することによって単離される。
【００７７】
本発明化合物は、当業者に周知の方法を用いる標準的な低分子量の溶媒を用いて溶媒和物を形成しうる。該溶媒和物も、本発明の範囲内であることを意味する。
【００７８】
該発明は、活性薬物となる前の代謝過程によって化学変換を受ける投与で生じる、例えば、本化合物のアミド、カーバメート等のような適当な輸送基を有する該Ｎ末端における反応によって形成する生体で可逆的な誘導体のようなプロドラッグも含む。一般に、該プロドラッグは、本化合物の機能的な誘導体であり、式Ｉの必須化合物に生体内で、すぐに変換可能である。プロドラッグは、共有結合した化合物のいずれかであり、生体内で式Ｉの活性な親薬物を放出する。キラル中心または異性体の中心における他の形態が、本発明化合物に存在するなら、エナンチオマーおよびジアステレオマーを含む、該異性体または異性体のすべての形態を本明細書の範囲内にあることを意味する。キラル中心を含む発明化合物は、ラセミ混合物、エナンチオリッチな混合物として使用され得るか、または該ラセミ混合物は周知技術を用いて分離され得て、個別のエナンチオマーは、単独で使用され得る。化合物が不飽和炭素−炭素二重結合を有する場合において、該シス（Ｚ）およびトランス（Ｅ）異性体の両方が、本発明の範囲内である。化合物が、ケト−エノール互変異性体のような互変異性体が存在しうる場合において、各互変異性体は、平衡または大部分が一つの形態に存在するかどうかを本発明内に含まれることを意味する。適当なプロドラッグ誘導体の選択および調製における従来の手段は、例えば、バンガード等の書籍「プロドラッグの設計」，エルゼビア，１９８５ に記載される。
【００７９】
該発明は、本化合物の活性代謝物も含む。
【００８０】
本発明は、本発明化合物のすべての複合体を含む。
【００８１】
式Ｉまたはその他の式のいずれかにおいて、いずれか一つに存在するいずれかの置換基の意味は、特に定めない限り、他のいずれかの場合において、独立した意味であるか、または他のいずれかの置換基を意味する。
【００８２】
本発明の好ましい態様として、式Ｉの該化合物は、本明細書で開示される該アッセイのようなヒトジペプチジルジペプチダーゼ−Ｉのアッセイに付されるとき、ＩＣ50の値は、５００μＭ以下、好ましくは１００μＭ以下、より好ましくは５０μＭ以下、さらにより好ましくは１μＭ以下、とりわけ５００ｎＭ以下、特に１００ｎＭ以下を示す。
【００８３】
（製造法）
本発明化合物は、以下のスキーム１〜３で説明される方法によって製造され得る。使用される略語のリストは、材料および方法より以下で与えられる。
スキーム１
【化９】
2006527704.tif 000013
試薬および条件：ａ）ＣＤＩ，ＴＨＦ；ｂ）Ｒ3ＮＨＣＨＲ4Ｒ5ＣＮ，ＴＨＦ；ｃ）ＴＦＡ。
該適当なＢｏｃ−保護アミノ酸誘導体は、ＴＨＦのような溶媒中、ＣＤＩで反応することによって活性化した。続いて、該適当なアミノ酸ニトリル誘導体の遊離塩基の付加によって、該Ｂｏｃ保護されたジペプチジルニトリル体を与え、ＴＦＡで脱保護した。次いで、該粗生成物は、ＨＰＬＣによって精製した。
【００８４】
スキーム２：
【化１０】
2006527704.tif 000014
試薬および条件：ａ）ＣＤＩ，ＴＨＦ；次いで、Ｒ3ＨＮＣ（Ｒ4Ｒ5）ＣＯＯＨ、塩基またはＲ3ＨＮＣ（Ｒ4Ｒ5）ＣＯＮＨ2・ＨＣｌ、塩基；ｂ）ＰＯＣｌ3、イミダゾール、ピリジン、−４０℃→室温；ｃ）ＴＦＡ；ｄ）ＣＤＩ，ＴＨＦ；次いで、２−プロパノール中、ＮＨ3。
【００８５】
スキーム３：
【化１１】
2006527704.tif 000015
試薬および条件：ａ）Ｆｍｏｃ（Ｒ3）ＮＣ（Ｒ4Ｒ5）ＣＯＯＨ，ＴＢＴＵ，ＮＥＭ，ＤＭＦ；ｂ）２０％ピペリジン、ＤＭＦ；ｃ）ＢｏｃＮＨＣ（Ｒ1Ｒ2）ＣＯＯＨ，ＴＢＴＵ，ＮＥＭ，ＤＭＦ；ｄ）ＴＦＡ；ｅ）Ｂｏｃ2Ｏ，ＮＥＭ；ｆ）ＰＯＣｌ3、イミダゾール、ピリジン、−４０℃→室温。
【００８６】
該発明化合物は、スキーム２によって製造され、該ニトリル体は、ピリジン中、ＰＯＣｌ3／イミダゾールのような適当な脱水剤を用いて、該保護されたジペプチドアミド体の脱水により最終段階で形成される。別法として、該ジペプチドニトリル体をスキーム３により、リンク(Rink)アミドリンカーのような酸に不安定なリンカーを用いて、固相上で該保護されたジペプチドアミド前駆体の集合体を経由して、製造することができる。
【００８７】
本明細書で使用される出発原料は、市販品として入手可能なアミノ酸であるか、または当該技術分野において、通常の知識を有する者に周知の慣用方法によって製造され、COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHETIC METHODS, Vol. I-VI（ワイリーインターサイエンス発行）のような標準的な参考書籍によって見出され得る。
【００８８】
本明細書でアミド結合を形成するためのカップリング方法は、当該技術分野において、一般的に周知である。ボダンスキーらの書籍：THE PRACTICE OF PEPTYDE SYNTHESIS, Springer-Verlag, Berlin, 1984；Ｅ．グロスおよびＪ．マイエンホーファーの書籍：THE PEPTIDES, Vol. 1, 1-284 (1979)；およびＪ．Ｍ．スチュワートおよびＪ．Ｄ．ヤングの書籍：Solid PHASE PEPTIDE SYNTHESIS, 2d Ed., Pierce Chemical Co., Rockford, Ill., 1984 によって、一般的に説明されるペプチド合成法は、一般的な技術例であり、参照によって本明細書に引用する。
【００８９】
本発明化合物を製造するための合成法は、反応性のある官能基をマスクするため、または望まない副反応を最小限にするために、頻繁に保護基を用いる。該保護基は、一般的に、グリーンの書籍：PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS, John Wiley & Sons, New York (1981) に記載される。該用語「アミノ保護基」は、一般的にＢｏｃ、アセチル、ベンゾイル、ＦｍｏｃおよびＣｂｚ基および当該技術分野で公知のその誘導体を意味する。保護および脱保護のための方法、および他の部分でアミノ保護基の置換は、周知である。
【００９０】
式Ｉの該化合物における酸付加塩は、該親化合物および例えば、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、コハク酸またはメタンスルホン酸のような過剰量の酸から適当な溶媒中で標準的な方法にて製造される。いくつかの化合物は、許容されうる内塩または両性イオンを形成する。陽イオン性塩は、該親化合物と適当な陽イオンを含む水酸化物、炭酸塩、またはアルコキシドのような過剰量のアルカリ性試薬、または適当な有機アミンと処理することによって調製する。Ｌｉ+、Ｎａ+、Ｋ+、Ｃａ++、Ｍｇ++およびＮＨ4+のような陽イオンは、医薬的に許容される塩として存在する陽イオンの具体例である。ハロゲン化物、硫酸塩、リン酸塩、アルカノエート（例えば、アセテートおよびトリフルオロアセテートなど）、ベンゾエート、およびスルホネート（例えば、メシレートなど）は、医薬的に許容される塩で存在する陰イオンの具体例である。
【００９１】
医薬組成物
本発明の一態様として、活性成分である本発明化合物と医薬的に許容される担体または希釈剤を含む、医薬組成物を提供する。本組成物は、単位投与形態であって、該発明化合物またはその医薬的に許容される塩もしくはエステルの約０．０５〜約１００ｍｇ、好ましくは約０．１〜約５０ｍｇを含む。該発明組成物は、経口、経鼻、経皮、経肺または非経口投与のために使用され得る。該発明の医薬組成物が、炎症、２型糖尿病、喘息、重度のインフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルス感染、ＣＤ８ Ｔ細胞阻害、炎症性腸疾患、乾癬、アトピー性皮膚炎、パピヨン−ルフェーベル症候群、ハイム−ムンク症候群、歯周病、歯周炎、関節リウマチ、ハンチントン氏病、シャーガス病、アルツハイマー病の治療、および／または標的細胞のアポトーシスの適用のために有用であることを意図する。
【００９２】
該発明化合物は、単剤または多剤投与のどちらかで、医薬的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を単独または組み合わせて投与され得る。従って、式Ｉの化合物は、医薬品製造に使用され得る。該発明の医薬組成物は、レミントンの書籍：The Science and Practice of Pharmacy, 19.sup.th Edition, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1995 で開示されるような従来技術を用いて、医薬的に許容される担体または希釈剤および他の公知の補助剤および賦形剤のいずれかで製剤化されうる。
【００９３】
該医薬組成物は、経口、経腸、経鼻、経肺、局所（口腔および舌下を含む）、経皮、嚢内、腹腔内、経膣および非経口（皮下、筋肉内、髄腔内、静脈内および皮内を含む）経路のような適当な経路のいずれかによる投与のために具体的に製剤化され、好ましくは経口経路が良い。該好適な経路は、一般状態および治療するための患者の年齢、治療される症状の性質および該活性成分の選択に依存することを理解するだろう。
【００９４】
経口投与のための医薬組成物は、カプセル、錠剤、糖衣錠、丸薬、トローチ剤、粉剤および顆粒剤のような固体の投与形態を含む。必要に応じて、それらは、腸溶性コーティングのようなコーティングを施し調製されるか、または当該技術分野で周知の方法による持続または長期放出のような該活性成分の放出制御を提供するために製剤化され得る。
【００９５】
経口投与のための液体投与様式は、溶液、乳液、懸濁液、シロップおよびエリキシルを含む。
【００９６】
非経口投与のための医薬組成物は、滅菌した水性および非水注射溶液、分散液、懸濁液または乳液および滅菌注射溶液を再構成または使用前に分散するための滅菌粉末を含む。持続性注射製剤は、本発明の範囲内であることも意図する。他の適当な投与形態は、坐薬、噴霧剤、軟膏、クリーム、ゲル、吸入、皮膚パッチ、移植片などを含む。
【００９７】
具体的な経口投与量は、１日当たり約０．００１〜約１００ｍｇ／体重ｋｇの範囲であり、好ましくは１日あたり約０．０１〜約５０ｍｇ／体重ｋｇであり、より好ましくは、１日当たり約０．０５〜約１０ｍｇ／体重ｋｇを１〜３回の投薬のような１またはそれ以上の投薬において、投与される。該正確な投与量は、頻度および投与形態、性別、年齢、体重および治療される患者の一般的な症状、治療される症状の性質および重症度、および治療される合併症のいずれか、ならびに当業者に明らかな他の要因に依存する。
【００９８】
該製剤は、当業者に公知の方法によって、簡便に単位投与形態として提供されうる。１日当たり１〜３回のような１またはそれ以上の経口投与のための具体的な単位投与形態は、活性成分が、例えば、約１０μｇ〜約５００ｍｇ、約０．０５〜約１００ｍｇ、または約０．１〜約５０ｍｇのような約１μｇ〜約１０００ｍｇを含む。
【００９９】
静脈内、髄腔内、筋肉内のような非経口経路および同様の投与において、具体的な投与量は、経口投与に用いる該投与量の約半分の量である。
【０１００】
本発明化合物は、一般的に該遊離基質またはその医薬的に許容される塩として、有用である。一例は、遊離塩基の有用性を有する化合物の酸付加塩である。式（Ｉ）の化合物が、遊離塩基を含むとき、該塩は、式（Ｉ）の遊離塩基の溶液または懸濁液と、例えば、無機および有機酸のような医薬的に許容される酸の化学等価体を処理することによって、従来法で調製される。具体例は、上述される。ヒドロキシ基を有する化合物の生理的に許容される塩は、該化合物のアニオンとナトリウムまたはアンモニウムイオンのような適当な陽イオンを組み合わせて用いることを含む。
【０１０１】
非経口投与のために、滅菌水溶液、水溶性プロピレングリコールまたはゴマもしくはピーナッツ油中の式（Ｉ）の新規化合物の溶液を用いてもよい。該水溶液は、必要なら適当に緩衝させて、該希釈液を最初に充分な量の生理食塩水またはグルコースで等張にさせる。該水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下および腹腔内投与に、特に適している。用いられる該滅菌水溶性媒体は、すべて当業者に公知の標準的な技術によって、すぐに入手可能である。
【０１０２】
適当な医薬担体は、不活性な固体の希釈剤または増量剤、滅菌水溶液および種々の有機溶媒を含む。固体担体の具体例は、ラクトース、石膏、ショ糖、シクロデキストリン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはセルロースの低級アルキルエーテルである。液体担体の具体例は、シロップ、ピーナッツ油、オリーブ油、リン脂質、脂肪酸、脂肪酸アミン、ポリオキシエチレンまたは水である。同様に、該担体または希釈剤は、モノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリン、ワックス単独または混合させるような当該技術分野で公知の持続放出材料のいずれかを含みうる。式（Ｉ）の新規化合物および該医薬的に許容される担体を組み合わせることにより形成される該医薬組成物は、次いで、開示された投与経路のために適する多様な投与形態ですぐに投与される。該製剤は、薬学の技術分野で公知の方法によって、単位投与形態で簡便に提供されうる。
【０１０３】
経口投与に適する本発明における製剤は、各々活性成分の所定量を含み、適当な賦形剤を含みうるカプセルまたは錠剤のような個別の単位として提供されうる。これらの製剤は、水溶性または非水溶性液体、または油水または水油液体乳液中の溶液または懸濁液として、粉末または顆粒の形態であってもよい。
【０１０４】
固体担体が、経口投与のために使用されるなら、該調製は、錠剤化、ハードゼラチンカプセルに入れる粉末またはペレットの形態であり得るか、またはトローチ剤またはドロップの形態であってもよい。固体担体の量は、広範囲で変化するが、通常約２５ｍｇ〜約１ｇである。液体担体が使用されるなら、該調製は、水溶性または非水溶性の液体懸濁液または溶液のようなシロップ、乳液、ソフトゼラチンカプセルまたは滅菌注射液体の形態であり得る。
【０１０５】
従来の錠剤技術によって調製され得る具体的な錠剤は：
2006527704.tif 000016
を含みうる。
【０１０６】
望むなら、該発明の医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物と上述に記載のような薬理活性のある基質をさらに組み合わせて用いることを含む。
【０１０７】
該発明の使用
式Ｉの化合物は、プロテアーゼ阻害剤、好ましくはシステインおよびセリンプロテアーゼの阻害剤として、より好ましくはシステインプロテアーゼ阻害剤、さらにより好ましくは、パパインスーパーファミリーのシステインプロテアーゼ阻害剤、その上より好ましくは、ＤＰＰ−Ｉの阻害剤として有用である。本発明は、該化合物の医薬組成物および製剤を含む、有用な該化合物における組成物および製剤を提供する。
【０１０８】
本発明化合物は、プロテアーゼが関与する、炎症、２型糖尿病および同様の疾病のような疾病の治療または予防のためにとりわけ有用であり得る。本化合物は、システインプロテアーゼが関係する疾病を治療するために特に有用であって、とりわけジペプチジルペプチダーゼ−Ｉに関係する疾病、最も好ましいのは、肥満細胞の炎症介在疾患である。ジペプチジルペプチダーゼ−Ｉが関係する疾病の具体例は：炎症、２型糖尿病、喘息、重度のインフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルス感染、ＣＤ８ Ｔ細胞阻害、炎症性腸疾患、乾癬、アトピー性皮膚炎、パピヨン−ルフェーベル症候群、ハイム−ムンク症候群、歯周病、歯周炎、関節リウマチ、ハンチントン氏病、シャーガス病、アルツハイマー病、敗血症、および標的細胞のアポトーシスである。
【０１０９】
従って、本発明の一態様として、病気の治療方法、本発明化合物または組成物における有効量をその必要な患者に投与することからなる方法に関する。本発明化合物または組成物、すなわち、活性化合物またはその医薬的に許容される塩もしくはエステル体の有効量が、１日当たり約１μｇ〜約１０００ｍｇ、例えば、約１０μｇ〜約５００ｍｇ、約０．０５〜約１００ｍｇ、または約０．１〜約５０ｍｇのような範囲内で、活性成分の量に対応することを意図する。
【０１１０】
さらに他の態様として、本発明は、医薬品、好ましくは、炎症、２型糖尿病、喘息、炎症性腸疾患、乾癬、アトピー性皮膚炎、パピヨン−ルフェーベル症候群、ハイム−ムンク症候群、歯周病、歯周炎、関節炎、ハンチントン氏病、シャーガス病、アルツハイマー病、敗血症の治療、または標的細胞のアポトーシスへの適用のための医薬品製造における本発明化合物の使用に関する。
【０１１１】
救急治療において、式Ｉの化合物は、非経口投与が好ましい。筋骨内注射も有用であるが、水または通常の生理食塩水中、５％デキストロースを含んだ該化合物の静脈内注射、または適当な賦形剤を用いる同様の製剤が、最も有効である。具体的には、該非経口投与量は、ジペプチジルジペプチダーゼ−Ｉ（カテプシンＣ）を阻害するための有効な濃度において、血漿中の薬品濃度を維持する方法で、約０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇであり；好ましくは、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇの間が良い。該化合物は、１日に１〜４回、約０．４〜約４００ｍｇ／ｋｇ／日の全１日投与量に達するレベルで投与され得る。治療に有効である発明化合物の正確な量、および該化合物が最適に投与される経路は、治療効果がある必要な濃度まで該薬剤の血液レベルを比較することにより、当業者によってすぐに決定される。
【０１１２】
本発明化合物は、該薬剤濃度が骨吸収を阻害するか、または本明細書内で開示される他の治療適用のいずれかに達するために充分であるような形態において、該患者に経口で投与され得る。具体的には、該化合物を含む医薬組成物は、患者の症状と一致する様式で、約０．１〜約５０ｍｇ／ｋｇの経口投与量で投与される。好ましくは、該経口投与量は、約０．５〜約２０ｍｇ／ｋｇが良い。
【０１１３】
本発明化合物が、本発明によって投与されるとき、許容されない毒性効果は期待されない。
【０１１４】
本発明化合物は、ジペプチジル−ペプチダーゼＩを全体的または部分的に阻害して、それ故、ＤＰＰ−Ｉの阻害が有益であり、とりわけＤＰＰ−Ｉの選択的な阻害に有利である多種多様な症状および障害の治療および／または予防のために有用である。
【０１１５】
従って、別の態様として、本発明は、医薬組成物として使用するためのこれらの混合物またはその医薬的に許容される塩を含む、一般式（Ｉ）の化合物またはその光学または位置異性体もしくは互変異性体のいずれかに関する。
【０１１６】
該発明は、活性成分として、１またはそれ以上の医薬的に許容される担体または希釈剤と一緒に用いるこれらの混合物またはその医薬的に許容される塩を含む、少なくとも一つの式（Ｉ）の化合物、またはその光学または位置異性体もしくは互変異性体を含む医薬組成物にも関する。
【０１１７】
さらに、該発明は、ＤＰＰ−Ｉレベルを調節するための有効量において、その必要な患者（例えば、ヒト）のＤＰＰ−Ｉレベルを調節するための本発明化合物および組成物の使用にも関する。好ましい態様として、該化合物または組成物は、ＤＰＰ−Ｉを阻害する。
【０１１８】
以下の合成実施例において、該出発原料のすべては、特に指示しない限り、市販品から入手した。さらに詳述することなく、当業者が前記の記載を用いて、その充分な内容について本発明を利用することができると信じている。これらの実施例は、その範囲内に限らず、該発明を説明するために提供する。
【０１１９】
（実施例）
材料および方法
温度は、摂氏温度（℃）である。実験は、特に記載しない限り、室温（２０℃）で実施した。すべての溶媒は、ＨＰＬＣグレードであった。無水溶媒は、４Åの活性化したモレキュラーシーブズで貯蔵することによって得た。特に記載しない限り、出発原料は、市販品業者から購入し、さらなる精製はしなかった。
【０１２０】
ＮＭＲデータは、ブルカーアドバンスＤＲＸ２５０により得た。ＣＤＣｌ3は、重クロロホルムであり、ＤＭＳＯ−ｄ6は、ヘキサ重ジメチルスルホキシドであり、Ｄ2Ｏは、重水であって、ＣＤ3ＯＤは、テトラ重メタノールである。ＮＭＲデータの略語は、以下の通りである：ｓ＝シングレット、ｄ＝ダブレット、ｔ＝トリプレット、ｑ＝カルテット、ｍ＝マルチプレット、ｄｄ＝ダブレットオブダブレット、ｄｔ＝ダブレットオブトリプレット、ｔｄ＝トリプレットオブダブレット、ａｐｐ＝明白、ｂｒ＝ブロード。化学シフトは、内部の溶媒ピーク（ＤＭＳＯ−ｄ6については２．４９、ＣＤＣｌ3については７．２５、Ｄ2Ｏについては４．７５、ＣＤ3ＯＤについては３．３５）との比較によって、ｐｐｍで示される。カップリング定数 Ｊは、Ｈｚで示される。ＥＳ−ＭＳスペクトルは、特に記載しない限り、マイクロマス クアトロ マイクロ（登録商標）機を用いて陽イオン形式で得た。分析用ＨＰＬＣは、ギルソンシステム（２１５および２５４ｎｍでＵＶ／ＶＩＳ−１５５検出器、４０２シリンジポンプ、８１９注射モジュール、バルブメート（valvemate）３５、８６４脱気装置、２３３ＸＬオンラインカラムスイッチモジュール、および３２２ポンプを備えたゾルバックス（Zorbax）３００ＳＢ ＲＰ−１８カラム、４．６×５０ｍｍ）で実施した。希釈液Ａ（０．１％ＴＦＡ水）およびＢ（１％のＴＦＡアセトニトリル）は、直線的グラジエント（０％のＢ→１００％のＢ、７分）を用いた。純度測定（括弧内で与えられる）は、２１５ｎｍで行った。分取用ＨＰＬＣは、ゾルバックス３００ＳＢ ＲＰ−１８、２１．２ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いて、流速１５ｍＬ／分で同一のギルソンシステムで実施した。
【０１２１】
略語
ＡＦＣ：７−アミノ−トリフルオロメチルクマリン
ＣＤＩ：１，１’−カルボニルジイミダゾール
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＥ：ジエチルエーテル
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＡ：酢酸エチル
ＥＤＴＡ：エチレンジアミンテトラ酢酸
ＮＥＭ：Ｎ−エチルモルホリン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＩＰＳ：トリイソプロピルシラン
【０１２２】
実施例１
Ｎ−（２Ｓ−２−アミノ−３−フェニルプロピオニル）−アミノアセトニトリル
【化１２】
2006527704.tif 000017
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ（５０ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）およびＣＤＩ（３３．５ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（２ｍＬ）で溶解した。３０分後、硫酸水素アミノアセトニトリル（２９ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（６６μＬ，０．３８ｍｍｏｌ）を加えた。該生じた溶液を室温で１８時間攪拌し、次いで、１０％クエン酸水溶液（２５ｍＬ）に注ぎ、ＥＡ（×２）で抽出した。該有機層を併せて、飽和食塩水（×１）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、エバポレートして澄明油状物を得た。該Ｂｏｃ基は、次いで、９５％ＴＦＡ水溶液（２ｍＬ）で１時間処理して除去し、続いて、該粗生成物をＨＰＬＣで精製した。該標記化合物を白色固体として得た。収率：３３ｍｇ（８６％）；ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝２．５９分（＞９９％）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，２５０ＭＨｚ）δ9.31-9.27 (t, J = 5.5, 1H), 8.39 (br, 2H), 7.39-7.21 (m, 5H), 4.21-4.19 (d, J = 5.5, 2H), 4.09-3.97 (m, 1H), 3.13-3.04 (m, 2H)；ＥＳ−ＭＳ：calcd for C11H14N3O 204.1 (MH+). Found m/z 204.1.
【０１２３】
実施例２
（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−３−フェニルプロピオニトリル
【化１３】
2006527704.tif 000018
Ｎα−Ｂｏｃ−Ｌ−アミノ酪酸（２５４ｍｇ，１．２５ｍｍｏｌ）およびＣＤＩ（２２４ｍｇ，１．３８ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）で３０分間攪拌した。次いで、Ｈ−Ｐｈｅ−ＮＨ2*ＨＣｌ（２５０ｍｇ，１．２５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２１４μＬ，１．２５ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液を加えて、該生じた懸濁液を室温で終夜攪拌した。該容量を半分に減らして、該懸濁液をさらに１８時間攪拌した後、乾燥した。該残渣をＥＡで懸濁し、１０％クエン酸水溶液（×１）、飽和ＮａＨＣＯ3（×１）および飽和食塩水（×１）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧濃縮して４４０ｍｇの固体を得た。ＨＰＬＣで＞９５％に精製した該粗アミド体（３９６ｍｇ，１．１２ｍｍｏｌ）をイミダゾール（９９ｍｇ，１．４６ｍｍｏｌ）と一緒に、無水ピリジン（５ｍＬ）で溶解した。該溶液を−４５℃に冷却して、ＰＯＣｌ3（１６５μＬ，１．８ｍｍｏｌ）を加えた。該生じた黄橙色の溶液を−４５℃で１時間攪拌し、次いで、室温にして１時間攪拌した。上と同様の後処理をして、該粗ニトリル体を浅黒い残渣（２６０ｍｇ）として得て、ＨＰＬＣで＞９５％の純度であった。該Ｂｏｃ基をＴＦＡ：ＴＩＰＳ＝９５：５で３０分間処理して除去し、続いて、エバポレートして茶色の油状物を得た。ＨＰＬＣで精製して、該標記化合物を白色固体として得た。収率：１２４ｍｇ（４８％）；ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝３．１９分（＞９９％）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，２５０ＭＨｚ）δ（異性体の比は、３：１；異性体のシグナルは、括弧内に示す）9.36-9.33 (d, J = 7.3, 1H, Ｄ2Ｏ中では現れない), 8.21 (br, 2H, Ｄ2Ｏ中では現れない), 7.36-7.26 (m, 5H), 5.13-4.97 (m, 1H), 3.79-3.72 (m, 1H), 3.26-3.05 (m, 2H), 1.83-1.70 (m, 2H)(異性体:1.59-1.53), 0.91-0.85 (t, J = 7.4, 3H)(異性体: 0.59-0.53); 13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，２５０ＭＨｚ）δ9.0(8.6), 24.6(24.4), 37.1(37.6), 42.4(41.6), 53.3(53.3), 118.9(119.3), 127.6, 128.8, 129.7, 135.6, 169.3(168.9);ＥＳ−ＭＳ：mass calcd for C13H18N3O 232.1 (MH+). Found m/z 232.2.
【０１２４】
実施例３
（２Ｓ）−Ｎ−メチル−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−３−フェニルプロピオニトリル
【化１４】
2006527704.tif 000019
Ｆｍｏｃ−リンク−ＰＥＧＡ８００レジン（０．８ｇ，Ｌ＝０．４ｍｍｏｌ／ｇ，０．３２ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃを脱保護し、ＤＭＦ（×５）で洗浄した。Ｆｍｏｃ−Ｎ−Ｍｅ−Ｐｈｅ−ＯＨ（３８５ｍｇ，０．９６ｍｍｏｌ）をＴＢＴＵ（２９５ｍｇ，０．９２ｍｍｏｌ）とＮＥＭ（３６５μＬ，１．２８ｍｍｏｌ）を用いて、無水ＤＭＦでカップリングした。該レジンをＤＭＦ（×５）で洗浄し、Ｆｍｏｃを脱保護して、ＤＭＦ（×５）で洗浄した。次いで、Ｎα−Ｂｏｃ−Ｌ−アミノ酪酸（１９５ｍｇ，０．９６ｍｍｏｌ）を、同様にＴＢＴＵを用いてカップリングした。ＤＭＦ（×５）、ＤＣＭ（×２）およびＣＨ3ＣＮ（×２）で洗浄し、凍結乾燥を行った。該ジペプチドアミド体をＴＦＡ：ＴＩＰＳ＝９５：５で、３０分間処理して該レジンから開裂した。該フラクションを併せて、減圧濃縮して、該生じた油状物を凍結乾燥した。該アミノ基をＢｏｃ2Ｏ（１３９ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（５３μＬ，０．３８ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ3ＣＮ（２ｍＬ）溶液で室温にて終夜反応し、Ｂｏｃで再保護した。ＨＰＬＣで精製し、該Ｂｏｃ−保護ジペプチドアミド体を白色残渣（１８ｍｇ，１５％）として得た。該アミド体をＰＯＣｌ3／ピリジン／イミダゾール（１５μＬ／１．２ｍＬ／４．７ｍｇ）で脱水し、連続的に実施例２で記載したとおりＢｏｃを脱保護した。ＨＰＬＣで精製し、該標記化合物を白色固体として得た。収率：６ｍｇ（８％）；ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝３．５０分（＞９９％）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ，２５０ＭＨｚ）δ（異性体比は、５：１；異性体のシグナルは、括弧内に示した）7.41-7.32 (m, 5H), 5.62-5.54 (m, 1H), 4.41-4.32 (m, 1H), 3.32-3.15 (m, 2H), 3.14 (br s, 3H), 1.93-1.83 (m, 2H), 1.11-1.04 (t, J = 7.3, 3H)(異性体: 0.72-0.65); ＥＳ−ＭＳ：mass calcd for C14H20N3O 246.2 (MH+). Found m/z 246.2.
【０１２５】
実施例４
（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−３−（ｐ−クロロフェニル）プロピオニトリル
【化１５】
2006527704.tif 000020
Ｆｍｏｃ−リンク−ＰＥＧＡ８００レジン（１ｇ，Ｌ＝０．４８ｍｍｏｌ／ｇ，０．４８ｍｍｏｌ）から出発し、実施例３の手順を用いて、以下の変更を適用した：Ｆｍｏｃ−ｐ−Ｃｌ−Ｐｈｅ−ＯＨ（６０８ｍｇ，１．４４ｍｍｏｌ）をＦｍｏｃ−Ｎ−Ｍｅ−Ｐｈｅ−ＯＨの代わりに使用し、Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酪酸（４６９ｍｇ，１．４４ｍｍｏｌ）をＮα−Ｂｏｃ−Ｌ−アミノ酪酸の代わりに使用した。該Ｆｍｏｃ基を該レジンから開裂する前に除去し、白色固体を得た。収率：１１ｍｇ（９％）；ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝３．７９分（＞９９％）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ，２５０ＭＨｚ）δ（異性体の比は、６：１であった；異性体シグナルは括弧内に示した）7.52-7.41 (m, 4H), 5.25-5.18 (m, 1H), 3.96-3.88 (m, 1H), 3.36-3.28 (m, 2H), 2.09-1.98 (m, 2H), 1.20-1.13 (t, J = 7.5, 3H)(異性体:0.93-0.85); ＥＳ−ＭＳ: mass calcd for C13H17ClN3O 266.1 (MH+). Found m/z 266.3
【０１２６】
実施例５
（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−３−（１，１’−ビフェニル−４−イル）プロピオニトリル
【化１６】
2006527704.tif 000021
Ｆｍｏｃ−リンク−ＰＥＧＡ８００レジン（１ｇ，Ｌ＝０．３９ｍｍｏｌ／ｇ，０．３９ｍｍｏｌ）から出発して、実施例３の手順を用いて、以下の変更を適用した：Ｆｍｏｃ−ｐ−Ｐｈ−Ｐｈｅ−ＯＨ（５４２ｍｇ，１．１７ｍｍｏｌ）をＦｍｏｃ−Ｎ−Ｍｅ−Ｐｈｅ−ＯＨの代わりに用い、白色固体を得た。収率：１１ｍｇ（９％）；ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝４．５８分（＞９９％）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ，２５０ＭＨｚ）δ（異性体の比は、１１：１であり；異性体のシグナルは、括弧内に示した）7.75-7.45 (m, 9H), 5.25-5.19 (m, 1H), 3.93-3.86 (t, J = 6.3, 1H), 3.37-3.31 (m, 2H, ＣＤ3ＯＤシグナルの下に部分的に隠れた）, 2.08-1.97 (m, 2H), 1.17-1.11 (t, J = 7.3, 3H)(異性体:0.94-0.91)；ＥＳ−ＭＳ：mass calcd for C19H22N3O 308.2 (MH+). Found m/z 308.2.
【０１２７】
実施例６
（２Ｓ）−（４Ｚ）−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−５−フェニル−（４−ペンテン）−ニトリル
【化１７】
2006527704.tif 000022
Ｆｍｏｃ−リンク−ＰＥＧＡ８００レジン（１ｇ，Ｌ＝０．３０ｍｍｏｌ／ｇ，０．３０ｍｍｏｌ）から出発して、実施例３の手順を用いて、以下の変更を適用した：Ｆｍｏｃ−スチリルアラニン（３７２ｍｇ，０．９ｍｍｏｌ）をＦｍｏｃ−Ｎ−Ｍｅ−Ｐｈｅ−ＯＨの代わりに用い、白色固体を得た。収率：１６ｍｇ（２１％）；ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝４．１３分（＞９９％）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ，２５０ＭＨｚ）δ（異性体の比は、７：１であり；異性体シグナルは括弧内に示した）7.61-7.25 (m, 5H), 6.81-6.72 (m, 1H), 6.46-6.20 (m, 1H), 5.13-5.08 (t, J = 7.2, 1H), 4.03-3.92 (t, J = 6.3, 1H), 3.00-2.84 (t, J = 7.2 2H), 2.15-1.94 (m, 2H), 1.20-1.14 (t, J = 7.4, 3H)(異性体: 1.08-1.02); ＥＳ−ＭＳ： mass calcd for C15H20N3O 258.2 (MH+). Found m/z 258.1.
【０１２８】
実施例７
（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｓ）−２−アミノブタノイル］−２−アミノ−４−フェニルブチロニトリル
【化１８】
2006527704.tif 000023
Ｆｍｏｃ−リンク−ＰＥＧＡ８００レジン（０．８ｇ，Ｌ＝０．４０ｍｍｏｌ／ｇ，０．３２ｍｍｏｌ）から出発して、実施例３の手順を用いて、以下の変更を適用した：Ｆｍｏｃ−ホモフェニルアラニン（３８５ｍｇ，０．９６ｍｍｏｌ）をＦｍｏｃ−Ｎ−Ｍｅ−Ｐｈｅ−ＯＨの代わりに用い、Ｎα−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酪酸（３１２ｍｇ，０．９６ｍｍｏｌ）をＮα−Ｂｏｃ−Ｌ−アミノ酪酸を用いた。該Ｆｍｏｃ基をピペリジン（３４０μＬ，２０ｅｑ．）のＤＣＭ（１ｍＬ）溶液を用いて、該ニトリル体を形成後、除去した。ＨＰＬＣで精製し、白色固体を得た。収量：１１ｍｇ（１４％）；ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝３．５９分（＞９９％）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ，２５０ＭＨｚ）δ7.45-7.29 (m, 5H), 4.90-4.84 (t, J = 7.6, 1H), 3.98-3.93 (t, J = 6.3, 1H), 2.95-2.77 (m, 2H), 2.36-1.95 (m, 4H), 1.19-1.13 (t, J = 7.5, 3H);ＥＳ−ＭＳ：mass calcd for C14H20N3O 246.2 (MH+). Found m/z 246.2.
【０１２９】
実施例８
（２Ｓ）−Ｎ−［（２Ｓ）−３−フェニルアミノプロパノイル］−２−アミノ−３−フェニルプロピオニトリル
【化１９】
2006527704.tif 000024
実施例２の手順に従い、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ（３３２ｍｇ，１．２５ｍｍｏｌ）をＮα−Ｂｏｃ−Ｌ−アミノ酪酸の代わりに用いて、該標記生成物（主異性体）を白色固体として得た：収率：８７ｍｇ（２４％）；ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝３．８２分（＞９８％）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ，２５０ＭＨｚ）δ7.43-7.23 (m, 10H), 5.06-4.96 (t, J = 7.7, 1H), 4.09-4.03 (t, J = 6.7, 1H), 3.25-3.12 (m, 4H)；ＥＳ−ＭＳ：mass calcd for C18H20N3O 294.2 (MH+). Found m/z 294.2.
【０１３０】
生物学的アッセイ
本発明化合物は、該所望の薬理学的効果を示すのに必要な化合物の濃度を決定するためにいくつかの生物学的アッセイのうち一つにおいて試験されうる。
【０１３１】
ヒトジペプチジルペプチダーゼＩ（ＤＰＰ−Ｉ）アッセイ
本アッセイを用いて、ＤＰＰ−Ｉ阻害剤としての該発明化合物のＩＣ50値を、ＡＦＣ基質を用いて決定した。
【０１３２】
アッセイ緩衝液（ｐＨ６．０）：
１００ｍＭのリン酸ナトリウム（８．９ｇのＮａ2ＨＰＯ4；Ｍ＝１７７．９９）、１５０ｍＭのＫＣｌ（５．６ｇのＫＣｌ；Ｍ＝７４．６）および１．５ｍＭのＥＤＴＡ（２７９ｍｇのＥＤＴＡ；Ｍ＝３７２．２）を５００ｍＬのＨ2Ｏで溶解し、ｐＨを６．０に調整した。６ｍＭに相当するシステイン*ＨＣｌ（シグマＣ−１２７６；Ｍ＝１５７．６）、１ｍｇ／ｍＬのアッセイ緩衝液を該ＤＰＰ−Ｉ酵素の活性化のため該溶液に加えた。
【０１３３】
基質
Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＡＦＣ*ＴＦＡ（エンザイムシステムプロダクツ ＡＦＣ−０３３）をＩＣ50値の決定のために該基質として使用した。Ｋmは、２７０μＭであった。該基質をＤＭＳＯに溶解し、７．５ｍＭの貯蔵溶液（基質２．２ｍｇを０．５ｍＬのＤＭＳＯに加えた）を得た。
【０１３４】
ＤＰＰ−Ｉ：
ヒトＤＰＰ−Ｉ（ｈＤＤＰ−Ｉ；ユニザイムＡ／Ｓ、ＤＫ−２９７０ ヘールショルム社、デンマークから入手）を２．５ｍＭのリン酸Ｎａ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのシステアミン、５０％のグリセロール、ｐＨ７．０を含む緩衝液中で、２．５ｍｇ／ｍＬの濃度において−２０℃で保存した。本貯蔵溶液を該アッセイ緩衝液で２００倍に希釈した。
【０１３５】
アッセイ条件：
該アッセイは、９６ウェルプレートで実施した。アッセイ緩衝液（２３０μＬ）を該ウェルに加え、続いて、該アッセイの９．１ｎＭに相当する１０μＬの希釈したＤＰＰ−Ｉを加えた。次いで、各種濃度において、５μＬのＤＭＳＯ（コントロール）または試験基質のどちらかを加えて、該溶液を混合した。該プレートを３７℃で１０分間インキュベートし、続いて、５μＬの７．５ｍＭの基質（該アッセイで１５０μＭに相当する）を加えた。該励起波長は、４００ｎｍであり、該発光は、５０５ｎｍで３７℃にて、１０分間測定した。各測定は、２回行った。該ソフトウェア（ソフトマックス プロ）において、蛍光光度計（モレキュラーデバイス：ジェミニＸＳ）を用いてデータ収集に使用し、該測定勾配は、直線であること（Ｒ2＞０．９９）を確認した。データは、グラフパッドプリズム（GraphPad Prism）に書き出し、非線形回帰は、オプションのシグモイド用量応答（Sigmoidal dose-response）（勾配変化のある法面）を用いて実施した。
【０１３６】
ヒト肝臓カテプシンＢアッセイ
本アッセイを用いて、蛍光性基質を用いて、ヒトカテプシンＢによりｈＤＰＰ−Ｉにおける該発明化合物の選択性を決定した。
【０１３７】
アッセイ緩衝液（ｐＨ６．１）：
０．１ＭのＭＥＳ緩衝液（１．９５ｇ；Ｍ＝１９５．２）および１ｍＭのＥＤＴＡ（３７ｍｇ；Ｍ＝３７２．２）を１００ｍＬのＨ2Ｏに混合し、ｐＨを６．１に調整した。ＤＴＴ（１０μＬ，０．５Ｍ）を該酵素の活性化のために加えた（５ｍＭに相当）。
【０１３８】
カテプシンＢ：
ヒト肝臓カテプシンＢ（エンザイムシステムプロダクツ、ＣＡＴ−Ｂ；貯蔵２５μｇ／５４μＬ＝４６３ｎｇ／μＬ）。一つのアリコートは、５３μＬのアッセイ緩衝液（ＤＴＴを含まない）を加えて、４０ｎｇ／μＬの濃度に希釈した。実験前にのみ、２以上の希釈段階を実施した:
４ｎｇ／μＬ：５μＬ（４０ｎｇ／μＬ）＋４５μＬの緩衝液（ＤＴＴを含まない）
０．１ｎｇ／μＬ：５μＬ（４ｎｇ／μＬ）＋２８５μＬの緩衝液（ＤＴＴを含まない）
【０１３９】
基質：
Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＡＦＣ・２ＴＦＡ（エンザイムシステムプロダクツ ＡＦＣ１１３）。貯蔵溶液（２０ｍＭ；１５．１ｍｇを１ｍｌのＤＭＳＯに溶解した）を調製した。さらに、Ｈ2Ｏで１０ｍＭまで希釈した。この基質におけるＫmは、６００μＭであると決定した。
【０１４０】
アッセイ条件：
該アッセイは、９６ウェルプレートで行った。８４μＬのアッセイ緩衝液を該ウェルに加え、続いて、１０μＬの１％ＤＭＳＯのアッセイ緩衝液（コントロール）、または該発明化合物（該アッセイにおいて、１０μＭ）を加えた。次いで、１０μＬ（０．１ｎｇ／μＬ，アッセイにおいて、１ｎｇに相当）の酵素を加えて、５分後、６μＬの基質（１０ｍＭ、該アッセイでの６００μＭに相当）を加えた。該励起波長は、４００ｎｍであって、該発光は、５０５ｎｍで１０〜２０分間、３７℃において測定した。各測定は、２回行った。該ソフトウェア（ソフトマックス プロ）は、該蛍光光度計（モレキュラーデバイス：ジェミニＸＳ）からのデータ収集に使用し、該測定勾配は、直線（Ｒ2＞０．９９）であることを確認した。データは、グラフパッドプリズムに書き出し、非線形回帰は、オプションのシグモイド用量応答（勾配変化のある法面）を用いて行った。
【０１４１】
ヒト肝臓カテプシンＨアッセイ
本アッセイを用いて、ｈＤＰＰ−Ｉにおける該発明化合物の選択性は、蛍光性基質を用いて、ヒトカテプシンＨにより決定した。
【０１４２】
アッセイ緩衝液（ｐＨ６．０）：
５０ｍＭのリン酸ナトリウム（０．８９ｇのＮａ2ＨＰＯ4；Ｍ＝１７７．９９）、２．０ｍＭのＥＤＴＡ（７４ｍｇのＥＤＴＡ；Ｍ＝３７２．２）、０．０１２％のトリトン−Ｘ（３９０μＬ、３％）を１００ｍＬのＨ2Ｏに溶解して、ｐＨを６．０に調整した。
【０１４３】
カテプシンＨ：
ヒト肝臓カテプシンＨ（エンザイムシステムプロダクツ、Ｃａｔｈ−１；２５μg）を６０μＬの酵素緩衝液（４１７ｎｇ／μＬの濃度で貯蔵）に溶解した。酵素貯蔵液（５μＬ）を１２４５μＬの酵素緩衝液で希釈した。実験の進行前に、１μＬの０．５ＭのＤＴＴ／１００μＬの酵素溶液を加えた。氷冷中で５分間インキュベートし、次いで、反応混合物に加えた。
【０１４４】
基質：
ＡＲＧ−ＡＦＣ*２ＨＢＲ（エンザイムシステムプロダクツ ＡＦ００２；１０．６ｍｇ）を１ｍＬのＤＭＳＯで溶解し、２０ｍＭ溶液を得た。この基質におけるＫmは、２７μＭであると決定した。
【０１４５】
アッセイ条件：
該アッセイは、９６−ウェルプレートで行った。５０μＬのアッセイ緩衝液を該ウェルに加え、続いて、２５μＬの参照阻害剤（シスタチン；貯蔵１ｍｇ／ｍＬ、アッセイ緩衝液で希釈して、アッセイでの１０ｎＭを得た）または該発明化合物（アッセイ緩衝液で希釈して、アッセイでの１０μＭを得た）を加えた。次いで、２５μＬ（４０ｎｇ）の酵素を加えて、１分後、３７℃で１００μＬのＡＲＧ−ＡＦＣ基質（該アッセイにおいて、１５μＭ）を加えた。該励起波長は、４００ｎｍであって、該発光は、５０５ｎｍ、３７℃で１０〜２０分間測定した。各測定は２回行った。ソフトウェア（ソフトマックス プロ）は、蛍光光度計（モレキュラーデバイス：ジェミニＸＳ）からのデータ収集のために使用し、該測定勾配は、直線（Ｒ2＞０．９９）であることを確認した。データは、グラフパッドプリズムに書き出し、非線形回帰は、オプションのシグモイド用量応答（勾配変化のある法面）を用いて行った。
【０１４６】
ヒト肝臓カテプシンＬアッセイ
本アッセイを用いて、ｈＤＰＰ−Ｉにおける該発明化合物の選択性は、蛍光基質を用いて、ヒトカテプシンＬにより決定した。
【０１４７】
アッセイ緩衝液（ｐＨ５．５）：
２０ｍＭの酢酸ナトリウム（Ｍ＝８２．０４；１６４ｍｇ）、４．０ｍＭのＥＤＴＡ（Ｍ＝３７２．２；１４９ｍｇ）、０．０１２％のトリトン−Ｘ（３９０μＬ、３％）を１００ｍＬのＨ2Ｏに溶解し、ｐＨを５．５に調整した。
【０１４８】
カテプシンＬ：
ヒト肝臓カテプシンＬ（エンザイムシステムプロダクツ、Ｃａｔｌ−１；５μＬの１．６１μＵ／μＬの貯蔵液）を２５００μＬの酵素緩衝液に溶解した。実験の進行前に、１μＬの０．５ＭのＤＴＴ／１００μＬの酵素溶液を加えた。氷冷で、５分間インキュベートし、次いで反応混合物に加えた。
【０１４９】
基質：
Ｚ−Ｐｈｅ−ＡＲＧ−ＡＦＣ*ＴＦＡ（エンザイムシステムプロダクツ ＡＦ０５２；１５．６ｍｇ）を１ｍＬのＤＭＳＯで溶解し、２０ｍＭ溶液を得た。
【０１５０】
アッセイ条件：
該アッセイは、９６ウェルプレートで行った。５０μＬのアッセイ緩衝液を該ウェルに加え、続いて、２５μＬの参照阻害剤（シスタチン、貯蔵液１ｍｇ／ｍＬをアッセイ緩衝液で希釈し、アッセイにおいて、２５ｎＭにした）または該発明化合物（アッセイ緩衝液で希釈して、該アッセイにおいて、１０μＭにした）を加えた。次いで、２５μＬ（８０ｎＵ）の酵素を加えて、１分後３７℃で、１００μＬの基質（該アッセイでの１０μＭ）を加えた。該励起波長は、４００ｎｍであって、該発光は５０５ｎｍにおいて、３７℃１０〜２０分間測定した。各測定は２回行った。ソフトウェア（ソフトマックス プロ）において、蛍光光度計（モレキュラーデバイス：ジェミニＸＳ）からのデータ収集のために使用し、該測定勾配は、直線（Ｒ2＞０．９９）であることを確認した。データは、グラフパッドプリズムに書き出し、非線形回帰は、オプションのシグモイド用量応答（勾配変化のある法面）を用いて行った。
【０１５１】
ヒトＣＹＰ１Ａ２アッセイ
本アッセイは、ＣＹＰ１Ａ２肝臓代謝酵素での該発明化合物の効果を決定するために使用した。
【０１５２】
パンベラ（PanVera）からのビビッド（Vivid)（登録商標）ＣＹＰ１Ａ２青色スクリーングキットを用いた。
【０１５３】
キット成分：
ビビッド（登録商標）ＣＹＰ４５０反応緩衝液Ｉ：ｐＨ８の２００ｍＭのリン酸カリウム緩衝液。
ＣＹＰ１Ａ２バクロソーム（baculosomes）（登録商標）試薬：ＣＹＰ１Ａ２およびＮＡＤＨ−Ｐ４５０還元酵素（Ｐ４５０−実質容量：１．１μＭ）。ミクロソームは、ヒトＣＹＰ１Ａ２およびウサギチトクロームＰ４５０還元酵素についてのｃＤＮＡを含むバクロウイルスで感染された昆虫細胞から調製した。
再生系：ｐＨ８の１００ｍＭのリン酸カリウム緩衝液中、３３３ｍＭのグルコース−６−ホスフェートおよび４０Ｕ／ｍＬのグルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ。
ビビッド（登録商標）ＣＹＰ１Ａ２青色基質。
ビビッド（登録商標）青色標準品：３−シアノ−７−ヒドロキシクマリン。
ｐＨ８の１００ｍＭのリン酸カリウム緩衝液中、１０ｍＭのＮＡＤＰ+。
【０１５４】
手順：
チューブを氷で解凍する。２つの反応緩衝液を２つのエッペンドルフチューブ（Ｍｉｘ ＡおよびＭｉｘ Ｂ）に室温で分配した。
コントロールまたは該発明化合物：５０μＭの濃度まで希釈した。正のコントロール化合物：α−ナフトフラボン。
負のコントロール：ＤＭＳＯおよびＨ2Ｏ。
Ｍｉｘ Ａ：４８５μＬ反応緩衝液、１０μＬ再生系、５μＬのバクロソーム試薬。ゆっくり混合し、氷上に置いた。
Ｍｉｘ Ｂ：８８．５μＬ反応緩衝液、１．５μＬ基質、１０μＬの１０ｍＭのＮＡＤＰ+。
【０１５５】
９６ウェルプレート（コスター ｃ−３９０４）中、４０μＬの５０μＭに施したサンプル。５０μＬのＭｉｘ Ａを加えた。２０分間室温でインキュベートした。次いで、１０μＬのＭｉｘ Ｂを加えた。蛍光は、（モレキュラーデバイス、スペクトラマックス ジェミニＥＭ）：Ｅｘ：４０９ｎｍ、Ｅｍ：４６０ｎｍ、３７℃で２０分間にて測定した。（自動混合：５秒、トップリード）。
以下の適当なキットを用いて、ＣＹＰ１Ａ２における該手順に従い、他のＣＹＰ酵素における該発明化合物の効果を測定した：
パンベラ社のビビッド（登録商標）ＣＹＰ２Ｃ９赤色スクリーニングキット
パンベラ社のビビッド（登録商標）ＣＹＰ２Ｃ１９赤色スクリーニングキット
パンベラ社のビビッド（登録商標）ＣＹＰ２Ｄ６シアンスクリーニングキット
パンベラ社のビビッド（登録商標）ＣＹＰ３Ａ４赤色スクリーニングキット
【０１５６】
結果：
2006527704.tif 000025
該結果は、試験された該化合物がＤＰＰ−１の選択的な阻害剤であることを示す。該上記明細書および実施例は、本発明化合物の製造および使用法を充分に開示する。しかし、本発明は、上述の明細書に記載された具体的な態様に限らないが、その改良のすべては、請求項の範囲内に含む。文献、特許および他の刊行物の種々の参照は、当該技術の状態を含んでおり、本明細書に引用し、充分に説明されているとして参照によって本明細書に引用する。