【手続補正書】
【提出日】平成19年2月7日(2007.2.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  
配列番号２のβセクレターゼ酵素タンパク質の単離されたフラグメントであって、該フラグメントは、膜貫通ドメインを欠き、かつ、βセクレターゼ活性を示す、フラグメント。
【請求項２】  
配列番号２の位置４５２またはそれより数個後のアミノ酸のＣ末端位置において短縮されている、請求項１に記載のフラグメント。
【請求項３】 
配列番号５８[４６−４５２]のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む、請求項１または２のいずれか１項に記載のフラグメント。
【請求項４】 
配列番号５８[４６−４５２]のアミノ酸配列を有するポリペプチドからなる、請求項３に記載のフラグメント。
【請求項５】 
配列番号６５の配列を含む、単離されたタンパク質。
【請求項６】  
請求項１〜５のいずれか１項に記載のフラグメントまたはタンパク質から形成される、クリスタリンタンパク質組成物。
【請求項７】  
前記タンパク質が、脱グリコシル化される、請求項６に記載のクリスタリンタンパク質組成物。
【請求項８】  
請求項１〜５のいずれか１項に記載のフラグメントまたはタンパク質をコードする、単離された核酸。
【請求項９】  
請求項８に記載の単離された核酸、および
該核酸に作動可能に連結された、選択された宿主細胞内で該核酸の発現のために有効な調節配列、
を含む、発現ベクター。
【請求項１０】  
組換えβセクレターゼ酵素を産生する方法であって、該方法は、
前記細胞の増殖を促進する条件下で請求項９に従って細胞を培養する工程、および
該細胞に由来する抽出物または培養培地をアフィニティーマトリックスに供する工程、
を包含する、方法。
【請求項１１】  
Ａβ産生を阻害する化合物をスクリーニングする方法であって、該方法は、
請求項１〜５のいずれか１項に記載の単離されたβセクレターゼフラグメントまたはβセクレターゼタンパク質と、（ｉ）試験化合物および（ｉｉ）βセクレターゼ基質とを接触させる工程、ならびに
該βセクレターゼポリペプチドが、該化合物の非存在下においてよりも、該化合物の存在下においてより低いβセクレターゼ活性を示す場合、Ａβ産生を阻害し得る化合物として該試験化合物を選択する工程、
を包含する、方法。
【請求項１２】  
前記βセクレターゼ切断可能フラグメントが、以下：
【化１】
2003524393.tif 000001
からなる群より選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】  
Ａβ産生を阻害する化合物をスクリーニングする方法であって、該方法は、
試験化合物の存在下で、請求項１〜５のいずれか１項に記載の精製されたβセクレターゼフラグメントまたはβセクレターゼタンパク質とβセクレターゼインヒビター化合物との結合を測定する工程、ならびに
該試験化合物の存在下における該インヒビターの結合が、該試験化合物の非存在下における該インヒビターの結合よりも弱い場合、βセクレターゼ活性部位結合化合物として該試験化合物を選択する工程、
を包含する、方法。
【請求項１４】  
βセクレターゼインヒビターであって、該インヒビターは、配列番号７８の配列および、その保存的置換を含むペプチドを含み、ここで配列番号７８は、ＶＭ[Ｘ]ＶＡＥＦであり、Ｘは、ヒドロキシエチレンまたはスタチンである、βセクレターゼインヒビター。
【請求項１５】  
内在性βセクレターゼ遺伝子の不活性化または欠失によって特徴付けられる、ノックアウトマウスであって、該βセクレターゼ遺伝子が、配列番号６５の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するタンパク質をコードする、ノックアウトマウス。
【請求項１６】  
アルツハイマー病またはＡβ沈着によって特徴付けられる他の脳血管性アミロイド症の処置において有効な薬物をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
β−ＡＰＰの過剰発現および／またはＡβの沈着によって特徴付けられる非ヒト哺乳動物被験体に、請求項１〜５のいずれかに記載のβセクレターゼフラグメントまたはβセクレターゼタンパクのβセクレターゼ活性を阻害する能力について選択された試験化合物を投与する工程；および
該化合物が、該被験体におけるＡβ沈着の量を減少させるか、または潜在的な治療薬物化合物が、該被験体の認知能力を維持するか、もしくは改善する場合、潜在的な治療薬物化合物として該化合物を選択する工程、
を包含する、方法。
【請求項１７】  
βセクレターゼタンパク質酵素分子を精製する方法であって、該方法は、βセクレターゼ酵素活性を含む不純サンプルと、βセクレターゼインヒビターを含むアフィニティーマトリックスとを接触させる工程を包含する、方法。
【請求項１８】  
前記βセクレターゼインヒビターは、配列番号７８の配列および、その保存的置換を含むペプチドを含み、ここで配列番号７８は、ＶＭ[Ｘ]ＶＡＥＦであり、Ｘは、ヒドロキシエチレンまたはスタチンである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】  
異種細胞であって、以下：
（ｉ）配列番号２のβセクレターゼ酵素、またはβセクレターゼ活性を有するそのフラグメントをコードする第一の異種核酸分子；
（ｉｉ）βセクレターゼ基質分子をコードする第二の異種核酸分子；および
（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）の各々に作動可能に連結された、該細胞内における該核酸分子の発現のために有効な調節配列、
を含む、異種細胞。
【請求項２０】  
Ａβ産生を阻害する化合物をスクリーニングする方法であって、該方法は、
配列番号２のβセクレターゼ酵素、またはβセクレターゼ活性を有するそのフラグメントと、（ｉ）試験化合物および（ｉｉ）βセクレターゼ基質とを接触させる工程、ならびに
該酵素またはそのフラグメントが、該化合物の非存在下においてよりも、該化合物の存在下においてより低いβセクレターゼ活性を示す場合、Ａβ産生を阻害し得る化合物として該試験化合物を選択する工程を包含し、
ここで、該βセクレターゼまたはそのフラグメントは、天然で関連する成分のうちの少なくとも９０％を含まないように単離されるか、または宿主細胞内で組換え発現される、方法。
【請求項２１】  
請求項２０に記載の方法であって、該方法は、
前記試験化合物を、アルツハイマー病またはアルツハイマー病様病理学を有する非ヒト哺乳動物被験体に投与する工程、および
そのような投与後に、該被験体が、認知能力を維持もしくは改善させるか、または該被験体が、減少した斑負荷を示す場合、治療薬剤候補として該化合物を選択する工程、
をさらに包含する、方法。
【請求項２２】  
Ａβ産生を阻害する化合物をスクリーニングする方法であって、該方法は、
試験化合物の存在下で配列番号２のβセクレターゼ酵素、またはβセクレターゼ活性を有するそのフラグメントと、βセクレターゼインヒビター化合物との結合を測定する工程、ならびに
該試験化合物の存在下における該インヒビターの結合が、該試験化合物の非存在下における該インヒビターの結合よりも弱い場合、βセクレターゼ活性部位結合化合物として該試験化合物を選択する工程、を包含し、
ここで、該βセクレターゼまたはそのフラグメントは、天然で関連する成分のうちの少なくとも９０％を含まないように単離されるか、または宿主細胞内で組換え発現される、方法。
【請求項２３】  
アルツハイマー病またはＡβ沈着によって特徴付けられる他の脳血管性アミロイド症の処置において有効な薬物をスクリーニングする方法であって、該方法は、
β−ＡＰＰの過剰発現および／またはＡβの沈着によって特徴付けられる非ヒト哺乳動物被験体に、βセクレターゼタンパク質のβセクレターゼ活性を阻害する能力について選択された試験化合物を投与する工程を包含し、
ここで、該βセクレターゼタンパク質は、
（i）約４５０アミノ酸長未満であり、
（ii）配列番号７５[６３−４２３]と少なくとも９０％一致するアミノ酸配列を含み、かつ、
（iii）βアミロイド前駆体タンパク質（βＡＰＰ）の６９５アミノ酸アイソタイプからなる群より選択される基質を、そのアミノ酸５９６とアミノ酸５９７との間、すなわちＭＢＰ−Ｃ１２５ｗｔおよびＭＢＰ−Ｃ１２５ｓｗに切断する能力によって証明されるように、βセクレターゼ活性を示し、
ここで、該βセクレターゼは、天然で関連する成分のうちの少なくとも９０％を含まないように単離されるか、または宿主細胞内で組換え発現される、方法。