【手続補正書】
【提出日】平成19年8月7日(2007.8.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  ハロビニルエーテルまたはハロビニルエステルからなる保護されたアルキル化試薬からなり、その保護されたアルキル化試薬の脱保護は酵素により触媒される組成物。
【請求項２】  上記試薬はホスフェート、エステル、炭水化物、核酸および脂質からなる群より選択される保護基を包含する請求項１記載の組成物。
【請求項３】  上記酵素は、グリコシダーゼ、ヌクレアーゼ、リパーゼ、エステラーゼ、ヒドロキシラーゼおよびホスファターゼからなる群より選択される請求項１記載の試薬。
【請求項４】  上記酵素はホスファターゼである請求項３記載の試薬。
【請求項５】  上記酵素はグリコシダーゼである請求項３記載の試薬。
【請求項６】  上記試薬は４−ハロブタジエニルエーテルまたはエステルである請求項１記載の組成物。
【請求項７】  上記試薬は２−ハロビニルエーテルもしくはエステルである請求項１記載の組成物。
【請求項８】  上記２−ハロビニルエーテルまたはエステルは２−ハロビニルモノホスフェートである請求項７記載の試薬。
【請求項９】  上記ビニル基は１または２個のアルキルまたはアリール基で置換されている請求項７記載の試薬。
【請求項１０】  上記アルキルまたはアリール基は置換されているかまたは非置換である請求項９記載の試薬。
【請求項１１】  上述の保護されたアルキル化試薬は、α−ハロケトンである請求項１記載の組成物。
【請求項１２】  上述の保護されたアルキル化試薬はα−ブロモアセチル安息香酸（ＢＡＢＡ）またはα−クロロアセチル安息香酸（ＣＡＢＡ）である請求項１記載の組成物。
【請求項１３】  さらに親核性試薬を含む請求項１記載の組成物。
【請求項１４】  さらに、ジスルフィド還元剤を含む請求項１記載の組成物。
【請求項１５】  上記ジスルフィド還元剤はホスフィンである請求項１４記載の試薬。
【請求項１６】  上記ホスフィンはトリス（カルボキシエチル）ホスフィンである請求項１５記載の試薬。
【請求項１７】  パッケージされた配合物中少なくとも１回の反応を実施するのに十分な量の保護されたアルキル化試薬からなる第一の試薬を含有するカップリング反応の実施に用いられるキット。
【請求項１８】  さらに、上述の保護されたアルキル化試薬を脱保護できる触媒からなる第二の試薬を含有する請求項１７記載のキット。
【請求項１９】  サンプル中のホモシステインを検出およびその量を定量する方法に用いられるキットにおいてパッケージされた配合物中に：ホモシステインを化学的に修飾し、脱保護した場合、修飾ホモシステインを形成することができる保護されたアルキル化試薬からなる第一の試薬、上述の保護されたアルキル化試薬を脱保護できる活性化試薬からなる第二の試薬、および上記修飾ホモシステインに特異的に結合できる第三の試薬それぞれを、少なくとも１回のアッセイを実施するのに十分な量含有するキット。
【請求項２０】  上記第一の試薬はホスフェート保護基を有する保護されたハロケトンからなる請求項１９記載のキット。
【請求項２１】  上記第一の試薬はさらにホモシステインジスルフィド還元剤を含む請求項１９記載のキット。
【請求項２２】  上記第一の試薬はさらに修飾ホモシステインでコートされた固体マトリックスを含む請求項１９記載のキット。
【請求項２３】  上記固体マトリックスはラテックスまたはガラスビーズを含む請求項２２記載のキット。
【請求項２４】  上述の保護されたハロケトンはＣＡＢＡまたはＢＡＢＡである請求項２０記載のキット。
【請求項２５】  上記第二の試薬は、さらにホスファターゼを含有する請求項１９記載のキット。
【請求項２６】  上記ホスファターゼはアルカリホスファターゼである請求項２５記載のキット。
【請求項２７】  上記第二の試薬は、さらに修飾されたホモシステインに特異的に結合できる受容体でコートされた固体マトリックスを含む請求項１９記載のキット。
【請求項２８】  上記受容体は抗体または免疫学的に活性なそのフラグメントである請求項２７記載のキット。
【請求項２９】  上記マトリックスはさらにそれに結合したシグナリング物質を包含する請求項２２または２７記載のキット。
【請求項３０】  上記シグナリング物質は化学ルミネセンス物質、蛍光物質または色素原物質からなる請求項２９記載のキット。
【請求項３１】  分子接合体を製造する方法において、以下の工程：
（ａ）第一の分子を保護されたアルキル化試薬で標識し、
（ｂ）上述の標識された第一の分子を、それに結合した１または２以上の親核性基を含有する第二の分子、およびカップリング反応を開始させるための酵素と混合する
ことからなる方法。
【請求項３２】  ホモシステインの含有が疑われるサンプル中のホモシステインの量を定量する方法において、以下の工程：
（ａ） 水性メジウム中に
（１）上記サンプル
（２）活性化して、ホモシステインのスルフヒドリル基を化学的に修飾して、修飾されたホモシステインを形成できる保護されたアルキル化試薬からなる第一の試薬、および
（３）上述の修飾されたホモシステインに特異的に結合して免疫複合体を形成できるリガンドからなる第二の試薬、および
（４）上述の保護されたアルキル化試薬を活性化できる第三の試薬
を一緒に取り、
（ｂ） 上記サンプル中のホモシステインの量に相関する上記免疫複合体の量を測定することからなる方法。
【請求項３３】  上記第一の試薬はさらにジスルフィド還元剤を含む請求項３２記載の方法。
【請求項３４】  上述の保護されたアルキル化試薬はハロビニルエーテルまたはエステルである請求項３２記載の方法。
【請求項３５】  上記ハロビニルエーテルまたはエステルはα−ハロケトンエノールホスフェートである請求項３４記載の方法。
【請求項３６】  上記α−ハロケトンエノールホスフェートはＢＡＢＡエノールホスフェートおよびＣＡＢＡエノールホスフェートからなる群より選択される請求項３５記載の方法。
【請求項３７】  上記第三の試薬はホスファターゼである請求項３２記載の方法。
【請求項３８】  上記ホスファターゼはアルカリホスファターゼである請求項３７記載の方法。
【請求項３９】  上記第一の試薬はさらにｈｃｙ−ＡＢＡでコートされた固体マトリックスを含む請求項３２記載の方法。
【請求項４０】  上記第一の試薬はさらに修飾されたホモシステインに結合できる受容体でコートされた固体マトリックスを含む請求項３２記載の方法。
【請求項４１】  上記固体マトリックスはラテックスまたはガラスビーズからなる請求項３９または４０記載の方法。
【請求項４２】  上記固体マトリックスはマイクロタイタープレートからなる請求項３９または４０記載の方法。
【請求項４３】  上記受容体は抗体または抗体の免疫学的に活性なフラグメントである請求項４０記載の方法。
【請求項４４】  サンプル中のホモシステインの量を定量する方法において、上記ホモシステインの少なくとも一部はジスルフィド型であり、以下の工程:
（ａ） メジウム中、
（１）上記サンプル
（２）上記ホモシステインをジスルフィド型から放出させる放出剤、
（３）活性化して、ホモシステインのスルフヒドリル基を化学的に修飾して、修飾されたホモシステインを形成できる保護されたアルキル化試薬、および
（４）上述の修飾されたホモシステインに特異的に結合して免疫複合体を形成できる受容体、および
（５）上述の保護されたアルキル化試薬を脱保護できる活性化試薬
からなる混合物を調製し、
（ｂ） 上記メジウムを、上記サンプル中のホモシステインの量に相関する上記免疫複合体の量について調べる
ことからなる方法。
【請求項４５】  上記ハロケトンのホスホリル化によりその相当するエノールホスフェートを形成させることからなる安定な保護されたハロケトンの製造方法。
【請求項４６】  サンプル中のホモシステインの量を測定する方法において、ホモシステインは試薬によって修飾され、上記試薬に対する前駆体および上記前駆体を上記試薬に変換できる酵素を提供することからなる改良された上記方法。
【請求項４７】  アルキル化試薬を水性メジウム中に放出させる方法において、水溶液中に、α−ハロケトンのエノールエーテル、α−ハロケトンのエノールエステル、γ−ハロ−α,β−不飽和ケトンのエノールエーテルまたはγ−ハロ−α,β−不飽和ケトンのエノールエステル、および上記エノールエーテルまたはエステルを加水分解できる酵素を混合してなる方法。
【請求項４８】  上記エノールエステルはエノールホスフェートであり、上記酵素はホスファターゼである請求項４７記載の方法。
【請求項４９】  上記水溶液はさらに、上記混合工程についでアルキル化される化合物からなる請求項４７記載の方法。
【請求項５０】  水溶液中のメルカプタンをアルキル化する方法において、上記メルカプタンをα−ハロケトンのエノールエステルまたはγ−ハロ−α,β−不飽和ケトンのエノールエステル、および上記エノールエステルを加水分解できる酵素と混合することからなる方法。
【請求項５１】  以下の式：
【化１】
2003508790.tif 000001
（式中、Ｒ1およびＲ2はアルキル、アリールまたは置換されたアルキルもしくはアリールであり、ＸはＣl、Ｂr またはＩであり、Ｙは酵素によって除去できる保護基である）で表される保護されたハロケトン。
【請求項５２】  Ｒ1は−Ｃ6Ｈ4ＣＯＯＨであり、Ｒ2はＨであり、ＸはＢr であり、Ｙは−ＰＯ3Ｈ2である請求項５１記載の保護されたハロケトン。
【請求項５３】  Ｒ1は−Ｃ6Ｈ4ＣＯＮＨＺであり、Ｒ2はＨであり、ＸはＣｌであり、Ｙは−ＰＯ3Ｈ2である請求項５１記載の保護されたハロケトン。
【請求項５４】  ＺはＨまたはＮＨ2である請求項５３記載の保護されたハロケトン。
【請求項５５】  Ｚはタンパク質、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド、ポリサッカライドおよび脂質からなる群より選択される請求項５３記載の保護されたハロケトン。
【請求項５６】  上記酵素はアルカリホスファターゼである請求項５２または５３に記載の保護されたハロケトン。