(57)【要約】  本発明は、インフルエンザ感染の治療または予防のために使用することができる、式（Ｉ）【化１】2019505518.tif 000029の構造を有する化合物に関する。
2019505518.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2019505518.tif 000026
（式中、
ＹはＮであり、ＸはＣであり、Ｒ１はハロゲンであり、Ｒ２はＣＮであり、Ｒ３はＨｅｔもしくはＣ２〜６アルケンであるか；
または、
ＹはＮであり、ＸはＮであり、Ｒ１はハロゲンであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はＨｅｔであるか；
または、
ＹはＮであり、ＸはＣもしくはＮであり、ＺはＣもしくはＮであり、Ｒ１はハロゲンもしくはＨであり、Ｒ２はＨもしくはＣＮであり、Ｒ３はＨｅｔ、ＯＣＨ３もしくはＣＨ３である）
の化合物、その立体異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物または多形体。
【請求項２】
Ｒ１がクロロもしくはフルオロであり、Ｒ３が、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を含む複素環であり、前記複素環が、４、５、６もしくは７個の環原子を有してもよく、任意選択的にＣ１〜６アルキルで置換されていてもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
構造式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）
【化２】
2019505518.tif 000027
を有する、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）の化合物またはその立体異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体を、１種以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体と一緒に含む医薬組成物。
【請求項５】
薬剤として使用するための、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその立体異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体、または請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
インフルエンザの治療に使用するための、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその立体異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体、または請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項７】
生物試料または患者におけるインフルエンザウイルスの複製を阻害するための、次の構造式（Ｉ）
【化３】
2019505518.tif 000028
（式中、
ＹはＮであり、ＸはＣであり、Ｒ１はハロゲンであり、Ｒ２はＣＮであり、Ｒ３はＨｅｔもしくはＣ２〜６アルケンであるか；
または、
ＹはＮであり、ＸはＮであり、Ｒ１はハロゲンであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はＨｅｔであるか；
または、
ＹはＮであり、ＸはＣもしくはＮであり、ＺはＣもしくはＮであり、Ｒ１はハロゲンもしくはＨであり、Ｒ２はＨもしくはＣＮであり、Ｒ３はＨｅｔ、ＯＣＨ３もしくはＣＨ３である）
によって示される化合物、その立体異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物または多形体の使用。
【請求項８】
追加の治療薬の同時投与をさらに含む、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
前記追加の治療薬が、抗ウイルス薬もしくはインフルエンザワクチン、またはその両方から選択される、請求項８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
インフルエンザは、ヒト集団で高い発生率を有する公衆の健康上の深刻な問題であり、定期的な大規模の罹患率および死亡率をもたらす。それは、急性の発熱性疾患を引き起こす伝染性の高い空気感染性疾患である。全身性症状の程度は、軽度の倦怠感から呼吸不全および死まで変化する。ＷＨＯによれば、毎年の流行の平均世界的負担は、毎年、約１０億の症例、重症疾患の３百〜５百万の症例および３００，０００〜５００，０００人の死亡であり得る。毎年、インフルエンザウイルスはヒトに拡がり、典型的にはあらゆる年齢群で人口の５〜２０％に影響を及ぼし、この数字は大流行期中には３０％まで上昇する。重い病気および死亡の率は、６５歳超の人々、２歳未満の子供、および慢性の心臓、肺、腎臓、肝臓血液疾患もしくは代謝病、または免疫系の働き低下などの、インフルエンザによる合併症のリスク増加に彼らをさらす病状を有する任意の年齢の人々の間で最も高い。死亡は、子供の間ではめったに起こらないが、入院の率は、併発状態の存在または不在に依存して、５歳未満の子供について１０，０００人当たりおおよそ１００〜５００人の範囲である。２４ヶ月未満の月齢の幼児の入院率は、６５歳超の人々の間で報告されている率に匹敵する。
【背景技術】
【０００２】
米国では、毎年のインフルエンザ流行により、おおよそ３，０００万人が外来患者となり、医療費は年間１００億ドルに達する。病気および死亡による収入の損失は、年間、１５０億ドルを超える経費に相当し、毎年のインフルエンザ流行による米国の経済的負担は合計で８５０億ドル超に達する。
【０００３】
インフルエンザを引き起こす病原体は、オルソミクソウイルス（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）科に属する、マイナス鎖の一本鎖ＲＮＡウイルスである。インフルエンザウイルスには３つの型：Ａ型、Ｂ型およびＣ型がある。インフルエンザＡ型ウイルスは、最も一般的な型で、哺乳類および鳥類に広がり得る。インフルエンザＡ型の亜型は、表面タンパク質のヘマグルチニン（Ｈ）およびノイラミニダーゼ（Ｎ）の型によって名付けられている。１８種の異なるヘマグルチニンおよび１１種の公知のノイラミニダーゼがある。ヒトで見出されている今日の季節性インフルエンザウイルスは、主にＨ１Ｎ１亜型およびＨ３Ｎ２亜型である。インフルエンザＢ型ウイルスは通常、ヒトにおいてのみ、見出されている。それらは亜型に分類されていないが、異なる株にさらに分類することができる。循環インフルエンザウイルスは毎年大きく変化し、インフルエンザＡ型およびＢ型は両方とも世界中で季節的流行を引き起こしている。インフルエンザＣ型ウイルスは、症状が非常に穏やかで、流行を引き起こすことはない。
【０００４】
全ての３つの型のウイルスは、似たゲノム構造を有している。ゲノムは、型に応じて、９〜１１種のタンパク質をエンコードする８個のセグメントを含んでいる。インフルエンザＡは、表面タンパク質（ヘマグルチニン（ＨＡ）およびノイラミニダーゼ（ＮＡ）、ポリメラーゼ複合体（ＰＡ、ＰＢ１およびＰＢ２）、核タンパク質（ＮＰ）、膜タンパク質（Ｍ１およびＭ２）、ならびに他のタンパク質（ＮＳ１、ＮＳ２、ＮＥＰ）を含む、１１種のタンパク質をエンコードする。３つのインフルエンザウイルスの型の中で、インフルエンザＡ型が最も高い率で変異する。インフルエンザＢは、Ａよりも遅いが、Ｃよりも速く進化する。分節ゲノムは、遺伝子が異なるウイルス株間で交換することを可能にし、それは、インフルエンザウイルスの新たな変異株を生み出す。
【０００５】
インフルエンザウイルスは、感染した個体またはウイルスに汚染された物質と直接接触することによって、ヒトの間で感染し得る。人はまた、空気中に浮遊するウイルスの飛沫を吸入することによって感染し得る。それらの飛沫は、感染した個体が咳、くしゃみ、または話をすることによって生じる。季節性インフルエンザは、急激な高熱、（通常、乾いた）咳、頭痛、筋肉および関節痛、重度の倦怠感（気分が悪い感じ）、喉の痛み、ならびに鼻水を特徴としている。咳はひどく、２週間以上続き得る。殆どの人は、治療せずに１週間以内に、熱および他の症状から回復する。しかし、インフルエンザは、上述したような高いリスクを有する人には、重度の病気または死を引き起こし得る。感染から発病するまでの時間は、潜伏期間として知られ、約２日である。
【０００６】
疾患および／または病気がもたらす重度の結果を防止する最も有効な方法は、ワクチンの摂取である。安全で有効なワクチンが入手可能であり、６０年を超えて使用されている。健康な成人の間では、インフルエンザワクチンは妥当な保護を提供し得る。しかしながら、ワクチン接種にはいくつかの制限がある。第１に、インフルエンザワクチンは高齢者の病気の予防に効果が少なく、疾患の重症度ならびに合併症および死亡の発生率を低下させ得るのみである。さらに、インフルエンザワクチン接種は、循環ウイルスがワクチンウイルスとうまくマッチする場合に最も有効であり、ワクチン接種の成功は、その季節の最も蔓延するウイルス型の良好な予測に大きく依存している。抗原連続変異によるインフルエンザウイルス株の急速で継続的な進化は、現在のインフルエンザワクチンに対するワクチン誘発免疫応答が短いという性質と相まって、季節的に適切な株のワクチンの接種が、予防のために毎年必要であることを意味する。
【０００７】
インフルエンザの現在の治療は、直接的な抗ウイルス薬か、インフルエンザが誘発する症状を除く医薬かのどちらかを使用する。市場で入手可能なインフルエンザ抗ウイルス薬には２つの種類、ノイラミニダーゼ阻害剤およびＭ２チャネル阻害剤がある。ノイラミニダーゼ阻害剤オセルタミビルまたはザナミビルは、インフルエンザの予防および治療のために推奨される第一の抗ウイルス薬である。これらは、インフルエンザウイルスのＡ型およびＢ型の両方に有効である。これらの抗ウイルス薬に対する耐性の発現が、季節性インフルエンザの治療期間中に、散発的なオセルタミビル耐性２００９Ｈ１Ｎ１ウイルスにおいて特定されているが、今のところ、公衆の健康への影響は限られている。アマンタジンおよびリマンタジン（アマンタダン）などの、Ｍ２チャネル阻害剤は、インフルエンザＡ型株に対して有効であるが、インフルエンザＢ型株には有効ではない。循環インフルエンザＡウイルスの間でのアダマンタン耐性は、２００３年〜２００４年中に始まって世界中に急速に増加した。それ故、アマンタジンおよびリマンタジンは、現在循環しているインフルエンザＡウイルス株の抗ウイルス治療または化学的予防のために推奨されない。
【０００８】
２００９年に、新規なブタＨ１Ｎ１株が、ヒト、ブタおよび鳥のＨ１Ｎ１ウイルスの遺伝子の再集合の結果として、予期されないインフルエンザの流行を引き起こした。この過去の流行は、高病原性鳥Ｈ５Ｎ１株の継続している循環、ならびに中国で単離され、ヒトからヒトへの感染に潜在的に適合し得た、死亡率４０％の深刻な呼吸器系疾患を伴う、鳥起源の新しい再集合体である、Ｈ７Ｎ９ウイルスの最近の出現とともに、新しいインフルエンザ株に対する世界の人口の脆弱性を強調した。ワクチン接種は、今もインフルエンザ感染の制御に向けての主要な予防戦略であるが、新しいワクチンが入手可能になる前の期間を埋め、重度のインフルエンザ症例を治療し、ならびにウイルス耐性の問題に立ち向かうために、抗インフルエンザ薬の幅広い選択が求められている。新規な抗インフルエンザウイルス薬の開発がそれ故再び、高い優先度を持ち、未だ達成されていない医学的要求になっている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、インフルエンザウイルス感染の治療、または予防に使用することができる式（Ｉ）：
【化１】
2019505518.tif 000003
（式中、
ＹはＮであり、ＸはＣであり、Ｒ１はハロゲンであり、Ｒ２はＣＮであり、Ｒ３はＨｅｔもしくはＣ２〜６アルケンであるか；
または、
ＹはＮであり、ＸはＮであり、Ｒ１はハロゲンであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はＨｅｔであるか；
または、
ＹはＮであり、ＸはＣもしくはＮであり、ＺはＣもしくはＮであり、Ｒ１はハロゲンもしくはＨであり、Ｒ２はＨもしくはＣＮであり、Ｒ３はＨｅｔ、ＯＣＨ３もしくはＣＨ３である）
の化合物、その立体異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物または多形体に関する。
【００１０】
好ましくは、本発明に係る化合物は、式（Ｉ）（式中、Ｒ１はクロロまたはフルオロであり、Ｒ３は、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を含む複素環であり、前記複素環は、４、５、６または７個の環原子を有してもよく、任意選択的にＣ１〜６アルキルで置換されていてもよい）の化合物である。
【００１１】
本発明に係る最も好ましい化合物の１つは、構造式（ＩＩ）：
【化２】
2019505518.tif 000004
を有する。
【００１２】
本発明に係る最も好ましい化合物は、次の構造（ＩＩＩ）：
【化３】
2019505518.tif 000005
を有する。
【００１３】
本発明の一部はまた、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体とともに式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）の化合物またはその立体異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体を含む医薬組成物である。
【００１４】
医薬組成物はまた、別の抗ウイルス薬もしくはインフルエンザワクチン、または両方のような追加の治療薬を含んでもよい。
【００１５】
本発明にはまた、薬剤として使用するための式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）の化合物、その立体異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体、または医薬組成物が属する。
【００１６】
さらに、本発明は、インフルエンザの治療に使用するための、式（Ｉ）、（ＩＩ）もしくは（ＩＩＩ）の化合物、その立体異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体、または医薬組成物に関する。
【００１７】
だから、本発明の一部は、生物試料または患者におけるインフルエンザウイルスの複製を阻害するための、次の構造式（Ｉ）
【化４】
2019505518.tif 000006
（式中、
ＹはＮであり、ＸはＣであり、Ｒ１はハロゲンであり、Ｒ２はＣＮであり、Ｒ３はＨｅｔもしくはＣ２〜６アルケンであるか；
または、
ＹはＮであり、ＸはＮであり、Ｒ１はハロゲンであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はＨｅｔであるか；
または、
ＹはＮであり、ＸはＣもしくはＮであり、ＺはＣもしくはＮであり、Ｒ１はハロゲンもしくはＨであり、Ｒ２はＨもしくはＣＮであり、Ｒ３はＨｅｔ、ＯＣＨ３もしくはＣＨ３である）
で示される化合物、その立体異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物または多形体の使用である。
【００１８】
前記使用はまた、追加の治療薬の同時投与を含んでもよく、ここで、前記追加の治療薬は、抗ウイルス薬もしくはインフルエンザワクチン、または両方から選択される。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
「複素環」（Ｈｅｔ）という用語は、Ｎ、ＯまたはＳから、特にＮおよびＯから選択される１つ以上のヘテロ原子を含む、飽和しているもしくは部分的に飽和している分子を指す。前記複素環は４、５、６または７個の環原子を有してもよい。特に、前記複素環は、５または６個の環原子を有してもよい。
【００２０】
式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩としては、その酸付加塩および塩基塩が挙げられる。好適な酸付加塩は、非毒性塩を形成する酸から形成される。好適な塩基塩は、非毒性塩を形成する塩基から形成される。
【００２１】
本発明の化合物はまた、非溶媒和形態および溶媒和形態で存在してもよい。「溶媒和物」という用語は、本発明の化合物と、１種以上の薬学的に許容される溶媒分子、例えば、エタノールとを含む分子複合体を表すために本明細書では用いられる。
【００２２】
「多形体」という用語は、本発明の化合物が２つ以上の形態または結晶構造で存在できることを指す。
【００２３】
本発明の化合物は、結晶質または非晶質製品として投与されてもよい。それらは、沈澱、結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥、または蒸発乾燥などの方法によって、例えば、固体プラグ、粉末、またはフィルムとして得ることができる。それらは、単独で、または本発明の１種以上の他の化合物と組み合わせて、または１種以上の他の薬物と組み合わせて投与されてもよい。一般に、それらは、１種以上の薬学的に許容される賦形剤を伴って製剤として投与されるであろう。「賦形剤」という用語は、本発明の化合物以外の任意の成分を表すために本明細書では用いられる。賦形剤の選択は、特定の投与形態、溶解性および安定性への賦形剤の影響、ならびに剤形の性質などの要因に大きく左右される。
【００２４】
本発明の化合物またはそれらの任意のサブグループは、投与目的のために様々な医薬品形態へと製剤化され得る。適切な組成物として、全身投与薬物用に通常用いられる全ての組成物が挙げられ得る。本発明の医薬組成物を調製するために、活性成分としての、有効量の特定の化合物は、任意選択的に付加塩形態で、薬学的に許容される担体と組み合わせられて均質混合物になり、その担体は、投与に所望される製剤の形態に応じて、多種多様な形態をとり得る。これらの医薬組成物は、例えば、経口、直腸内、または経皮投与に好適な単一の剤形であることが望ましい。例えば、経口剤形の組成物を調製する際に、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤および液剤などの経口液体製剤の場合には、例えば、水、グリコール、オイル、アルコールなど；または散剤、丸剤、カプセル剤および錠剤の場合には、デンプン、糖、カオリン、希釈剤、滑剤、結合剤、崩壊剤などの固体担体などの通常の医薬媒体のいずれも用いられ得る。それらの投与の容易さのために、錠剤およびカプセルが最も有利な経口単位剤形を表し、その場合には固体医薬担体が明らかに用いられる。使用の直前に、液体形態に変換することができる固形製剤もまた含まれる。経皮投与に好適な組成物においては、担体は、少ない割合の任意の性質の好適な添加剤と任意選択的に組み合わせて、浸透促進剤および／または好適な湿潤剤を任意選択的に含み、これらの添加剤は、有意な有害作用を皮膚に及ぼすものではない。前記添加剤は、皮膚への投与を容易にし得るおよび／または所望の組成物を調製するのに役立ち得る。これらの組成物は、様々な方法で、例えば、経皮的パッチとして、スポット−オンとして、軟膏として投与され得る。本発明の化合物はまた、吸入または吹送による投与のために当該技術分野において用いられる方法および製剤を用いて、吸入または吹送によって投与され得る。したがって、一般に、本発明の化合物は、溶液、懸濁液または乾燥粉末の形態で肺に投与され得る。
【００２５】
投与を容易にし、投与量を均一にするために、前述した医薬組成物を単位剤形に製剤化することは特に有利である。本明細書で用いられるような単位剤形は、単位投与量として好適な物理的に個別の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と共同して所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性成分を含有する。そのような単位剤形の例は、錠剤（分割錠剤またはコーティング錠剤を含む）、カプセル剤、丸剤、粉末パケット、ウエハー、坐剤、注射液または懸濁剤など、およびそれらの分離複合剤である。
【００２６】
感染症の治療の当業者は、本明細書で以下に示される試験結果から有効量を決定することができるであろう。一般に、有効な日量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重であろうと考えられる。必要な用量を２、３、４またはそれ以上のサブ用量として、一日の間に適切な間隔を置いて投与することが適切であり得る。前記サブ用量は、例えば、単位剤形当たり１〜１０００ｍｇ、特に、５〜２００ｍｇの有効成分を含有する単位剤形として製剤化され得る。
【００２７】
正確な投与量および投与頻度は、当業者によく知られているように、使用される式（Ｉ）の特定の化合物、治療される特定の病態、治療される病態の重症度、特定の患者の年齢、体重および全身的な身体状態、ならびに個体が摂取している可能性のある他の薬剤に依存する。さらに、有効量は、治療される対象の応答に応じて、および／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて、減少または増加させ得ることは明らかである。上記の有効量の範囲はそれ故指針であるに過ぎず、本発明の範囲または使用を、いかなる程度であれ限定することを意図しない。
【００２８】
本開示はまた、本発明の化合物に存在する原子の任意の同位体を含むことを意図している。例えば、水素の同位体はトリチウムおよびジュウテリウムを含み、炭素の同位体は、Ｃ−１３およびＣ−１４を含む。
【００２９】
本発明に使用される本化合物はまた、同じ結合順序で結合している同じ原子から構成されるが、異なる三次元構造を有し、交換可能ではない全ての可能な化合物を定義する、それらの立体化学的異性体で存在してもよい。特に言及しないまたは示さない限り、化合物の化学名は、前記化合物が所有し得る全ての可能な立体化学的異性体の混合物を包含する。
【００３０】
前記混合物は、前記化合物の基本分子構造の全てのジアステレオマーおよび／またはエナンチオマーを含有し得る。純粋な形態でまたは互いに混合されているかのどちらかで本発明において使用される化合物の全ての立体化学的異性体は、任意のラセミ混合物またはラセミ化合物を含めて、本発明の範囲内に包含されることを意図している。
【００３１】
本明細書に記載されるような化合物および中間体の純粋な立体異性体は、前記化合物または中間体と同じ基本分子構造の他のエナンチオマーまたはジアステレオマーを実質的に含まない異性体と定義される。特に、「立体異性として純粋な」という用語は、少なくとも８０％（すなわち最小９０％の１種の異性体および最大１０％の他の可能な異性体）の立体異性体過剰率から１００％（すなわち１００％の１種の異性体で他種の異性体を全く含まない）の立体異性体過剰率までを有する化合物または中間体、より特に、９０％から１００％までの立体異性体過剰率を有する、さらにより特に９４％から１００％までの立体異性体過剰率を有する、最も特に、９７％から１００％までの立体異性体過剰率を有する化合物または中間体に関する。「エナンチオマーとして純粋な」および「ジアステレオマーとして純粋な」という用語も同様に理解されるべきであるが、その場合、それらはそれぞれ、当該混合物のエナンチオマー過剰率、ジアステレオマー過剰率に関するものとする。
【００３２】
本発明において使用される化合物および中間体の純粋な立体異性体は、この分野で知られている手順を適用することにより得られ得る。例えば、エナンチオマーは、光学的に活性な酸または塩基を用いてそれらのジアステレオマー塩を選択的に結晶化することによって互いに分離され得る。光学活性酸の例は、酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジトルオイル酒石酸およびカンファースルホン酸である。あるいは、エナンチオマーは、キラル固定相を用いるクロマトグラフ法により分離され得る。前記純粋な立体化学的異性体はまた、反応が立体特異的に起こるという条件で、適切な出発原料の対応する純粋な立体化学的異性体から誘導され得る。好ましくは、特異的な立体異性体が望ましい場合、前記化合物は立体特異的な製造方法により合成されるであろう。これらの方法は有利には、エナンチオマーとして純粋な出発物質を用いるであろう。
【実施例】
【００３３】
本発明に係る化合物の調製
【化５】
2019505518.tif 000007
【００３４】
中間体Ａ１の調製
メタンスルホン酸（１．３ｍＬ、２０．４ミリモル）を、室温でＴＨＦ（１５０ｍＬ）の中の活性亜鉛（１７．４ｇ、２６７ミリモル）の懸濁液に添加した。反応混合物を１５分間還流で攪拌し、ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の２−メチル−２−（２−ピリジル）プロパンニトリル［ＣＡ−８１０３９−１８−１］（７．８ｇ、５５．３ミリモル）の溶液を添加した。次に、ＴＨＦ（５０ｍＬ）中のブロモ酢酸エチル（１７．８ｍＬ、１６０ミリモル）の溶液を、還流で４５分にわたって滴加した。反応混合物を１時間還流で攪拌した。ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液を添加し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。組み合わせた有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物を、シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃグラジエントを用いる分取ＬＣ（無定形ＳｉＯＨ、１５〜４０μｍ、ＧｒａｃｅＲｅｓｏｌｖ、移動相）によって精製した。純粋な画分を集め、蒸発させて１２．８ｇの中間体Ａ１を無色液体として得た（定量的）。
【００３５】
中間体Ａ２の調製
ＮａＢＨ３ＣＮ（１．９ｇ；３０．７ミリモル）を、ＥｔＯＨ（３００ｍＬ）およびＡｃＯＨ（２８ｍＬ）中の中間体Ａ１（６ｇ；２５．６ミリモル）の溶液に添加した。結果として生じた混合物を３時間６０℃で加熱した。ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液、次に、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。組み合わせた有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、３．６ｇの中間体Ａ２（５９％）を黄色オイルとして得た。
【００３６】
化合物Ａ３の調製
中間体Ａ２（１．８ｇ、７．６２ミリモル）、２，４−ジクロロ−５−フルオロ−ピリミジン（３１．１５ｇ、６．９ミリモル）およびジイソプロピルアミン（７．６ｍＬ、４１．５５ミリモル）の溶液を、１７時間７０℃で攪拌し、加熱した。水を反応混合物に添加し、次に水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層を集め、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発させて粗生成物を得た。未精製品を、ヘプタン／ＥｔＯＡｃグラジエントを用いる、シリカゲルクロマトグラフィー（無定形ＳｉＯＨ、１５〜４０μｍ、８０ｇ  ＧｒａｖｅＲＥｓｏｌｖ）によって精製した。画分をプールし、溶媒を除去して無色オイルのＡ３、２．０８ｇ、６５％を得た。
【００３７】
化合物Ａ５の調製
ＤＭＥ（３ｍＬ）中の中間体Ａ４［ＣＡＳ−９３４１７８−９７−９］（２７３ｍｇ、０．７ミリモル）、中間体Ａ３（２７５．９ｍｇ、０．８ミリモル）およびＫ２ＣＯ３（１ｍＬ、２Ｍ、２．１ミリモル）の溶液を、５分間Ｎ２流れでパージし、次にＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（５６ｍｇ、０．０７ミリモル）を添加した。結果として生じた混合物を４０分間、０〜４００Ｗの出力範囲の単一モードのマイクロ波（Ｂｉｏｔａｇｅ  ｉｎｉｔｉａｔｏｒ６０）を用いて１２０℃で攪拌し、加熱した。混合物を水およびＤＣＭに注ぎ込み、有機層を疎水性フリットで分離し、蒸発乾固した。精製を、シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（無定形ＳｉＯＨ、１５〜３５μｍ、４０ｇ、１００／０〜８０／２０のヘプタン／ＥｔＯＡｃ）によって実施した。純粋な画分を集め、無色オイル、０．２７０ｇ、６５％として中間体Ａ５へと蒸発させた。
【００３８】
化合物Ａ６の調製
ＫＯＨ（２４８．４ｍｇ、４．４ミリモル）を、ＭｅＯＨ／水の混合物（［２：１］、０．７５ｍＬ）中のＡ５（２７０ｍｇ、０．４ミリモル）の溶液に添加した。結果として生じた溶液を１７時間５０℃で攪拌し、加熱した。溶液を室温にまで冷却した。ＤＣＭ（２ｍＬ）を添加し、混合物をＨＣｌ  ３Ｎで中和した。層を疎水性フリットを通して分離した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。精製は、分取逆相（固定相：Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ−Ｃ１８  ５μｍ  ３０＊１５０ｍｍ、移動相：９０％ＮＨ４ＨＣＯ３  ０．５％、１０％ＣＡＮ〜５０％ＮＨ４ＨＣＯ３  ０．５％、５０％ＡＣＮのグラジエント）にょって行った。純粋な画分を集め、蒸発させた。結果として生じた固体を、５時間４０℃で減圧下に乾燥させて化合汚物Ａ６、０．１１ｇ、４．６％を得た。ｍｐ℃：１５８。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．３０（ｓ，３Ｈ）１．３８（ｓ，３Ｈ）２．０１（ｄｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ，２．８Ｈｚ，１Ｈ）２．３８（ｍ，２Ｈ）５．６５（ｍ，１Ｈ）７．２３（ｄｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，５．０Ｈｚ，１Ｈ）７．４４（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）７．７３（ｔｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ１．９Ｈｚ，１Ｈ）８．０４（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）８．１３（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ）８．１６（ｓ，１Ｈ）８．７６（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，１Ｈ）８．８５（ｓ，１Ｈ）１０．２（ｓ，１Ｈ）
【化６】
2019505518.tif 000008
【００３９】
中間体Ｂ２の調製
窒素下に、ＴＥＡ（０．８７ｍＬ、６．３ミリモル）を、乾燥ＤＣＭ（２７ｍＬ）中のＢ１［１１２３７８７−６４−３］（７１０ｍｇ、４．２ミリモル）とＮ−ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩（０．８７ｇ、５．４ミリモル）との混合物に添加し、一晩室温で攪拌した。混合物を濃縮して残留物を得、それを、分取ＬＣ（固定相：Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、３０μｍ、２４ｇ、移動相グラジエント：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ９０／１０〜６０／４０）によって精製して５６１ｍｇ（４６％）のＢ２を無色オイルとして得た。
【００４０】
中間体Ｂ３の調製
ステンレスボンベ中で、ＥｔＯＨ（２２ｍＬ）中のＢ２（５６１ｍｇ、１．９ミリモル）およびＰｅａｒｌｍａｎ（パールマン）触媒（５３７ｍｇ；３８μモル）の溶液を、一晩Ｈ２の雰囲気（５バール）下に攪拌した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを通して濾過した。溶媒を真空で除去してＢ３（３１１ｍｇ、無色オイル、８７％）を得た。
【００４１】
中間体Ｂ４の調製
ＴＨＦ（２．１ｍＬ）およびＥｔＯＨ（２．１ｍＬ）中の２，４−ジクロロ−５フルオロピリミジン（０．１３８ｇ；０．８２８ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（０．７１ｍＬ；４．１ミリモル）、Ｂ３（０．１５５ｇ；０．８２８ミリモル）を封管中１８時間９０℃で加熱した。ＥｔＯＡｃを添加し、塩水で２回洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で蒸発させて無色オイルを得、それを、分取ＬＣ（定形ＳｉＯＨ  ３０μｍ、２４ｇ  Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、移動相グラジエント：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ８０／２０〜５０／５０）によって精製して１７０ｍｇのＢ４を白色固体として得た（６５％）。
【００４２】
中間体Ｂ５の調製
Ｎ２下に、封管中、１，４ジオキサン（２．３ｍＬ）および水（０．７２ｍＬ）中の化合物Ｘ（１４１ｍｇ；０．２９ミリモル、９０％純度）と、Ｂ４（８５ｍｇ；０．２７ミリモル）とＣｓ２ＣＯ３（０．３１ｇ；０．９４ミリモル）との混合物を５分間Ｎ２で脱気した。ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（１９ｍｇ；２７μモル）を添加し、反応混合物を２分間Ｎ２で再び脱気した。反応混合物を１時間３０分９０℃で加熱した。反応混合物を室温にまで冷却した。ＤＣＭおよび塩水を反応混合物に添加した。水層をＤＣＭで抽出した。組み合わせた有機層を洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾別し、濃縮乾固して残留物を得、それを、分取ＬＣ（定形ＳｉＯＨ  ３０μｍ、１２ｇ、Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、移動相グラジエント：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ８５／１５〜６０／４０）によって精製して８９ｍｇのＢ５を白色固体として得た（５７％）。
【００４３】
化合物Ｂ６の調製
ＬｉＯＨ一水和物（１２８ｍｇ、３．１ミリモル）を、水（０．２９ｍＬ）およびＴＨＦ（０．８４ｍＬ）中のＢ５（９０ｍｇ、０．１５ミリモル）の混合物に添加した。混合物を６０℃で１８時間攪拌した。溶液をＨＣｌ  ３Ｎで中和し（注意：好ましくは塩基性ｐＨ、せいぜい約７〜８にとどまること）、溶媒を真空で蒸発させて２５０ｍｇの残留物を得、それを、逆相（固定相：Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ−Ｃ１８  ５μｍ  ３０＊１５０ｍｍ、移動相：９０％（水性ＮＨ４ＨＣＯ３  ０．５％）、１０％ＭｅＣＮ〜５０％（水性ＮＨ４ＨＣＯ３  ０．５％）、５０％ＭｅＣＮのグラジエント）によって精製した。純粋な化合物を含有する画分を蒸発させ、得られた固体をＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ中で凍結乾燥させてＢ６（１８ｍｇ、白色固体、２９％）を得た。ＬＣ−ＭＳ質量  実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝４０６．１．Ｒｔ（分）＝１．７８（方法Ａ）
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．３９（ｓ，３Ｈ），２．４５−２．５５（ｍ，１Ｈ），２．５８（ｄｄ，Ｊ＝１５．８，１０．４Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），４．１９（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．５１（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１８−５．３０（ｍ，１Ｈ），７．７７（ｂｒｓ，１Ｈ），８．１８（ｄＪ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１９（ｓ，１Ｈ），８．２８（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），８．８１（ｄ，２．２Ｈｚ，１Ｈ），１２．３５（ｂｒｓ，２Ｈ）
【化７】
2019505518.tif 000009
【００４４】
中間体Ｃ２の調製
メタンスルホン酸（０．６７５ｍＬ、１０．４ミリモル）を、室温でＴＨＦ（６０ｍＬ）中の活性Ｚｎ（８．９４ｇ、１３７ミリモル）の懸濁液に添加した。反応混合物を１５分間還流で攪拌し、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の化合物Ｃ１［Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１３，７８，７６２−７６９］（４．００ｇ、２７．４ミリモル）の溶液を添加した。次に、ＴＨＦ（４０ｍＬ）中のブロモ酢酸エチル（９．１４ｍＬ、８２．１ミリモル）の溶液を還流で滴加した。反応混合物を１時間還流で攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ３の水溶液を添加し、混合物をセライト（ｃｅｌｔｅ）上で濾過した。濾液を酢酸エチル（２×１５ｍＬ）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下に濃縮した。残留物を分取ＬＣ（無定形ＳｉＯＨ、４０〜６３μｍ、Ｆｌｕｋａ、液体負荷（ＤＣＭ）、移動相：ＤＣＭ１００％）によって精製して３．６ｇの中間体Ｃ２を黄色液体として得た（５６％）。
【００４５】
中間体Ｃ３の調製
ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）中の中間体Ｃ２（２．３ｇ；５．６７ミリモル）の混合物に、ＮＨ４ＯＡｃ（２．１９ｇ；２８．３ミリモル）を添加した。反応混合物を１８時間８０℃で攪拌した。混合物を室温に冷却し、ＡｃＯＨ（６．１７ｍＬ；１０８ミリモル）およびＴＨＦ中のＮａＢＨ３ＣＮ  １Ｍの市販溶液（８５ｍＬ；８５．０ミリモル）を添加し、反応混合物を４時間６０℃で加熱した。ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液およびＥｔＯＡｃを添加した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した（２回）。組み合わせた有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で蒸発させた。残留物を分取ＬＣ（無定形ＳｉＯＨ  １５〜４０μｍ、８０ｇ  ＧｒａｃｅＲｅｓｏｌｖ、移動相グラジエント：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／水性ＮＨ３  １００／０／０〜９０／１０／１）によって精製して１．６３ｇの中間体Ｃ３を得た（定量的）。
【００４６】
中間体Ｃ４の調製
ＴＨＦ（５０ｍＬ）およびＥｔＯＨ（５０ｍＬ）中の中間体Ｃ３（１．８０ｇ；７．６２ミリモル）、２，６−ジクロロ−３シアノ−５フルオロピリジン（１．４６ｇ；７６２ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（６．６５ｍＬ；３８．１ミリモル）を１８時間９０℃で加熱した。
【００４７】
追加量の２，６−ジクロロ−３シアノ−５フルオロピリジン（０．１４５ｇ；０．７６２ミリモル）を添加し、反応混合物を４時間９０℃で攪拌した。水および塩水を添加した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した（２回）。組み合わせた有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で蒸発させ、分取ＬＣ（無定形ＳｉＯＨ  １５〜４０μｍ、１２０ｇ  ＧｒａｃｅＲｅｓｏｌｖ、液体負荷（ＤＣＭ）、移動相グラジエント：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ：９０／１０〜６０／４０）によって精製して１．７６ｇの中間体Ｃ４を得た（５９％）。
【００４８】
化合物Ｃ５の調製
Ｎ２下に、封管中、ジオキサン（１５ｍＬ）およびＨ２Ｏ（６ｍＬ）中の化合物Ｘ［ＣＡ−８６６５４６−１１−４］（１．２２ｇ；２．８３ミリモル）と、中間体Ｃ４（０．８５０ｇ；２．１８ミリモル）とＣｓ２ＣＯ３（２．４８ｇ；７．６１ミリモル）との混合物を５分間Ｎ２で脱気した。ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（１５３ｍｇ、０．２１７ミリモル）を添加し、反応混合物を２分間Ｎ２で再び脱気した。反応混合物を２時間９０℃で加熱した。
【００４９】
反応混合物を室温にまで冷却した。ＥｔＯＡｃおよび塩水を反応混合物に添加した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。組み合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾別し、真空で蒸発させ、分取ＬＣ（無定形ＳｉＯＨ  １５〜４０μｍ、４０ｇ  Ｇｒａｃｅｒｅｓｏｌｖ、ＳｉＯＨ上での乾燥負荷、移動相グラジエント：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ９０／１０〜５０／５０）によって精製して２３０ｍｇの化合物Ｃ５を固体として得た（１４％）。
【００５０】
化合物Ｃ６の調製
封管中、ＴＨＦ（２ｍＬ）およびＨ２Ｏ（０．７ｍＬ）中の化合物Ｘ（３００ｍｇ；０．２２７ミリモル）の溶液に、ＬｉＯＨ一水和物（６８ｍｇ；１．５９ミリモル）を添加した。反応混合物を一晩２５℃で撹拌した。
【００５１】
反応混合物を蒸発させ、分取ＬＣ（無定形ＳｉＯＨ  １５〜４０μｍ、４０ｇ  ＧｒａｃｅＲｅｓｏｌｖ、乾燥負荷（ＳｉＯＨ上での）、移動相グラジエント：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １００／０〜８０／２０）によって精製して８０ｍｇの不純な化合物。ＤＣＭを不純な化合物に添加し、固体を濾過し、ＤＣＭ、次にアセトンでリンスした。固体を、分取ＬＣ（無定形ＳｉＯＨ  １５〜４０μｍ、２４ｇ  ＧｒａｃｅＲｅｓｏｌｖ、ＳｉＯＨ上での乾燥負荷、移動相グラジエント：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １００／０〜９３／７）によって再び精製して７５ｍｇのＣ６を得た（６９％）、ｍｐ＝２５６．４６℃。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．３４（ｓ，３Ｈ）１．３７（ｓ，３Ｈ）２．１７（ｂｒｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，１Ｈ）２．５０（ｍ，１Ｈ）５．５８（ｂｒｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ）７．１８（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ）７．３９（ｂｒｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）７．６７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）７．６４−７．８１（ｂｒｓ，１Ｈ）７．８５（ｂｒｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ）８．３２（ｓ，１Ｈ）８．３７（ｓ，１Ｈ）８．４７（ｂｒｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，１Ｈ）９．１３（ｂｒｓ，１Ｈ）１２．０８（ｂｒｓ，１Ｈ）１２．４７（ｓ，１Ｈ）
ＬＣ−ＭＳ質量  実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７９．０．Ｒｔ（分）＝２．３９分（方法Ａ）
【００５２】
Ｃ６の純粋異性体の分離
化合物Ｃ６を、キラルＳＦＣ（固定相：ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ  ＡＤ（５．０ｃｍＩ．Ｄ×２５ｃｍＬ）、移動相：７０％ＣＯ２、３０％ＥｔＯＨによって精製した。次に、各異性体を、キラルＨＰＬＣ（固定相：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ、移動相：７０％ヘキサン、３０％ＥｔＯＨ、０．１％ＡｃＯＨによって再精製して３０ｍｇの［（−）−Ｃ６］と呼ばれるエナンチオマー１；ｍｐ℃＝２３１．５２、［α］２５℃５８９ｎｍ＝−３７．１および３５ｍｇの［（＋）−Ｃ６］と呼ばれるエナンチオマー２、ｍ＝３５ｍｇ；ｍｐ℃＝２２９．２８、［α］２５℃５８９ｎｍ＝４１．０を得た。
【化８】
2019505518.tif 000010
【００５３】
化合物Ｄ５
【化９】
2019505518.tif 000011
【００５４】
中間体Ｄ２の調製
乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の活性Ｚｎ（１３ｇ；１９８ミリモル）の懸濁液を還流下に加熱し、次に１，２−ジブロモエタン（８５５μＬ；９．９２ミリモル）および数滴のブロモ酢酸エチルを添加した。還流で２０分後に、乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の化合物Ｄ１（５ｇ；３３．１ミリモル）を一度に添加した。ブロモ酢酸エチル（１５ｍＬ；１３２ミリモル）を５０分にわたって滴加した。混合物を２０分間７０℃で攪拌し、次に室温にまで冷却し、次にＮａＨＣＯ３の水溶液で処理し、セライトのパッドを通して濾過した。濾液をＥｔＯＡｃで抽出した（２回）。組み合わせた有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して１０ｇの粗Ｄ２を得た。
【００５５】
未精製品を、分取ＬＣ（定形ＳｉＯＨ  ３０μｍ、２００ｇ  Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、液体負荷（ＤＣＭ）、移動相グラジエント：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  １００：０〜８０／２０）によって精製した。生成物を含有する画分を組み合わせ、溶媒を真空で除去して５．７ｇの中間体Ｄ２（７２％）を無色オイルとして得た。
【００５６】
中間体Ｄ３の調製
ＮａＢＨ３ＣＮ（１．５ｇ；２３．９ミリモル）を、ＭｅＯＨ（１１８ｍＬ）およびＡｃＯＨ（１２ｍＬ）中の中間体Ｄ２（４．７ｇ；１９．６ミリモル）の溶液に添加した。結果として生じた混合物を一晩室温で撹拌した。混合物を水の添加によってクエンチし、溶媒を真空で蒸発させた。結果として生じた混合物を、ｐＨ＝１０〜１４  ＮａＯＨの溶液（１Ｎ）の添加によって塩基性化し、次にＤＣＭで抽出した（２回）。組み合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して４．６ｇの中間体Ｄ３（９７％）を無色オイルとして得た。
【００５７】
中間体Ｄ４の調製
ＴＨＦ（１０ｍＬ）およびＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中の２，６−ジクロロ−３シアノ−５フルオロピリジン（３９６ｍｇ；２．０７ミリモル）と、中間体Ｄ３（５００ｍｇ；２．０７ミリモル）とＤＩＰＥＡ（５４３μＬ；３．１１ミリモル）との混合物を２時間９０℃で攪拌した。混合物を封管に移し、２，６−ジクロロ−３シアノ−５フルオロピリジン（３９６ｍｇ；２．０７ミリモル）を添加し、結果として生じた混合物を１６時間９０℃で攪拌した。２，６−ジクロロ−３シアノ−５フルオロピリジン（３９６ｍｇ；２．０７ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（５４３μＬ；３．１１ミリモル）を添加し、混合物を６時間９０℃で攪拌した。混合物を濃縮乾固し、分取ＬＣ（無定形ＳｉＯＨ  １５〜４０μｍ、５０ｇ  Ｍｅｒｃｋ、移動相グラジエント：ヘプタン／ＤＣＭ  ８０：２０〜０：１００）によって精製した。生成物を含有する画分を組み合わせ、溶媒を真空で除去して２２４ｍｇの中間体Ｄ４を黄色固体として得た（４０％）。
【００５８】
化合物Ｄ５を、化合物Ｘおよび中間体Ｄ４から出発してラセミ化合物Ｃ６と同じ方法で調製した。
【化１０】
2019505518.tif 000012
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．１８（ｓ，３Ｈ）１．３７（ｓ，３Ｈ）２．２６（ｂｒｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，１Ｈ）２．５７−２．６７（ｍ，１Ｈ）５．３５（ｂｒｔ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ）６．９０−６．９５（ｍ，２Ｈ）７．３４（ｄｄ，Ｊ＝４．９，１．４Ｈｚ，１Ｈ）７．６７−７．８６（ｂｒｓ，１Ｈ）７．８８（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ）８．３１（ｓ，１Ｈ）８．３６（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ）９．０３（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ）１２．１７（ｂｒｓ，１Ｈ）１２．４８（ｂｒｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ質量  実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝４８４．１．Ｒｔ（分）＝２．５５（方法Ａ）、ｍｐ℃＝２８０．５９．
【００５９】
化合物Ｅ６
【化１１】
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【００６０】
中間体Ｅ２の調製
ｔＢｕＯＫ（１４．５ｇ；１３０ミリモル）を、０℃でＴＨＦ（２００ｍＬ）中の化合物Ｅ１［１１４２９２７−９７−６］（６．２８ｇ；５１．８ミリモル）および１８−クラウン−６（２．１ｇ；７．８ミリモル）の溶液に分割添加した。混合物を１５分間０℃で攪拌し、その後、ヨードメタン（９．７ｍＬ；１５６ミリモル）をゆっくり添加した。混合物を１５分間０℃で、次に１６時間室温で攪拌した。反応混合物をＮＨ４Ｃｌの水溶液でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した（２回）。組み合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で蒸発させて８ｇの粗Ｅ２を得た。
【００６１】
未精製品を分取ＬＣ（定形ＳｉＯＨ  ３０μｍ、３００ｇ  Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、乾燥負荷（シリカ上での）、移動相グラジエント：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ８０／２０〜０／１００）によって精製して６ｇの中間体Ｅ２を無色オイルとして得た（７８％）。
【００６２】
中間体Ｅ３の調製
ＴＨＦ（６５ｍＬ）中の活性Ｚｎ（１０．５ｇ；１６１ミリモル）およびメタンスルホン酸（８００μＬ、１２．３ミリモル）の懸濁液を１５分間還流下に加熱し、次にＴＨＦ（１５ｍＬ）中の中間体Ｅ２（４．８ｇ；３２．２ミリモル）を添加した。次にＴＨＦ（５０ｍＬ）中のブロモ酢酸エチル（１０．７ｍＬ、９６．７ミリモル）を４５分にわたって滴加した。混合物を１時間還流で攪拌し、次に室温にまで冷却し、次にＮａＨＣＯ３の飽和水溶液で処理し、セライトのパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。層を分離した。有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、分取ＬＣ（定形ＳｉＯＨ  ３０μｍ、３００ｇ、Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、乾燥負荷（シリカ上での）、移動相グラジエント：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ８０／２０〜５０／５０）によって精製して６．３７ｇの中間体Ｅ３を無色オイルとして得た（８３％）。
【００６３】
中間体Ｅ４の調製
ＮａＢＨ３ＣＮ（１．８６ｇ；２９．６ミリモル）を、ＭｅＯＨ（８０ｍＬ）およびＡｃＯＨ（１５ｍＬ）中の中間体Ｅ３（２．９４ｇ；１２．４ミリモル）の溶液に添加した。結果として生じた混合物を５６時間室温で攪拌した。混合物を水の添加によってクエンチし、溶媒を真空で蒸発させた。結果として生じた混合物を、ｐＨ＝１０〜１４までＮａＯＨの溶液（１Ｎ）の添加によって塩基性化し、次にＤＣＭで抽出した（２回）。組み合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して２．９ｇの粗Ｅ４を得た。
【００６４】
未精製品を、分取ＬＣ（定形ＳｉＯＨ  １５〜３０μｍ、８０ｇ  Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、移動相グラジエント：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：１００／０〜９０／１０）によって精製して２．０９ｇの中間体Ｅ４を無色オイルとして得た（７０％）。
【００６５】
中間体Ｅ５の調製
ＴＨＦ（１０ｍＬ）およびＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中の２，６−ジクロロ−３シアノ−５フルオロピリジン（８５１ｍｇ；４．４６ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（３．９ｍＬ；２２．３ミリモル）、中間体Ｅ４（１ｇ；４．１８ミリモル）を封管中１６時間９０℃で加熱した。溶媒を蒸発させた。水を添加した。水層をＤＣＭで抽出した（３回）。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で蒸発させ、分取ＬＣ（無定形ＳｉＯＨ  １５〜４０μｍ、５０ｇ  Ｍｅｒｃｋ、乾燥負荷（ＳｉＯＨ上での）、移動相グラジエント：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ：９０／１０〜５０／５０）によって精製して８４３ｍｇの中間体Ｅ５をガムとして得た（４８％）。
【００６６】
化合物Ｅ６
化合物Ｅ６を、化合物Ｘおよび中間体Ｅ５から出発してラセミ化合物Ｃ６と同じ方法で調製した。
【化１２】
2019505518.tif 000014
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．１６（ｓ，３Ｈ）１．２６（ｓ，３Ｈ）２．３５−２．５６（ｍ，２Ｈ）３．７３（ｓ，３Ｈ）５．２４（ｂｒｔ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ）６．０６（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）７．４６−７．６０（ｍ，１Ｈ）７．５３（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ）７．８５（ｄ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ）８．３１（ｂｒｓ，１Ｈ）８．３４（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ）９．０３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ）１２．０７（ｂｒｓ，１Ｈ）１２．４５（ｂｒｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ質量  実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝４８４．１．Ｒｔ（分）＝２．５５（方法Ａ）、ｍｐ℃＝２８８．０９．
【００６７】
化合物Ｆ６
【化１３】
2019505518.tif 000015
【００６８】
中間体Ｆ２の調製
乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の活性Ｚｎ（１．４１ｇ；２１．６ミリモル）およびメタンスルホン酸（１０７μＬ、１．６５ミリモル）の懸濁液を１５分間還流下に加熱し、次に乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）中の化合物Ｆ１［８５６６５９−６３−７］（９３０ｍｇ；４．３２ミリモル）を添加した。次に乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）中のブロモ酢酸エチル（１．４ｍＬ、１３．０ミリモル）を１０分にわたって滴加した。混合物を１時間還流で攪拌し、次に室温にまで冷却し、次にＮａＨＣＯ３の飽和水溶液で処理し、セライトのパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。層を分離した。有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、分取ＬＣ（無定形ＳｉＯＨ  １５〜４０μｍ、４０ｇ、Ｇｒａｃｅ、乾燥負荷（ＳｉＯＨ上での）、移動相グラジエント：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ９０／１０〜５０／５０）によって精製して６７２ｍｇの中間体Ｆ２を無色オイルとして得た（５１％）。
【００６９】
中間体Ｆ３／Ｆ３’の調製
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の中間体Ｆ２（６７０ｍｇ；２．２１ミリモル）とＣＰＭＥ中のＨＣｌ［３Ｍ］（２．２ｍＬ、６．６２ミリモル）との混合物を５６時間室温で攪拌した。混合物を蒸発乾固して残留物を得、それをＥｔ２Ｏおよびペンタンで取り上げ、溶媒を蒸発させて５１０ｍｇの中間体Ｆ３とＦ３’との混合物（７０／３０）を無色オイルとして得た（９８％）。
【００７０】
中間体Ｆ４／Ｆ４’の調製
ＴＨＦ（６．４ｍＬ）およびＥｔＯＨ（６．４ｍＬ）中の２，６−ジクロロ−３シアノ−５フルオロピリジン（４５７ｍｇ、２．３９ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（２．１ｍＬ；１２．０ミリモル）、中間体Ｆ３／Ｆ３’（５１０ｍｇ、２．５６ミリモル）を封管中２時間９０℃で加熱した。溶媒を蒸発させた。ＥｔＯＡｃを添加し、結果として生じた溶液を水で２回洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、蒸発させ、分取シリカＬＣ（定形ＳｉＯＨ  ３０μｍ、２５ｇ  Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、移動相グラジエント：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ９０／１０〜５０／５０）によって精製して３０４ｍｇの中間体Ｆ４を黄色固体として（３６％）、および７６ｍｇの中間体Ｆ４’を黄色オイルとして（９％）得た。
【００７１】
化合物Ｆ５
化合物Ｆ５を、化合物Ｘおよび中間体Ｆ４／Ｆ４’の混合物から出発してラセミ化合物Ｃ６と同じ方法で調製した。
【化１４】
2019505518.tif 000016
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．８４（ｓ，３Ｈ）０．８９（ｓ，３Ｈ）２．０５（ｂｒｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）２．５６−２．７４（ｍ，２Ｈ）４．８８−４．９９（ｍ，３Ｈ）５．８２（ｍ，１Ｈ）７．５２（ｂｒｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）７．８４（ｄ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ）８．３２（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ）８．３３（ｔ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ）８．９７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）１２．０９（ｂｒｓ，１Ｈ）１２．４５（ｂｒｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ質量  実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝４４２．１．Ｒｔ（分）＝２．６０（方法Ａ）、ｍｐ℃＝２５７．３および２６３．６２．
【００７２】
化合物Ｇ６
【化１５】
2019505518.tif 000017
【００７３】
中間体Ｇ２の調製
ｔ−ＢｕＯＫ（４．７４ｇ、４２．３ミリモル）を、０℃で、ＴＨＦ（６５ｍＬ）中の化合物Ｇ１［１０１０１０−７４−６］（２．１０ｇ、１６．９ミリモル）の溶液に添加した。１８−クラウン−６（０．６７０ｇ、２．５０ミリモル）を混合物に添加した。混合物を１５分間０℃で攪拌し、ヨードメタン（２．５７ｍＬ、５０．７ミリモル）を０℃で滴加した。反応混合物を１５分間０℃で、次に一晩室温で攪拌した。ＮＨ４Ｃｌの飽和水溶液を添加した。反応混合物を酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下に濃縮した。残留物を、分取ＬＣ（無定形ＳｉＯＨ、４０〜６３μｍ、Ｆｌｕｋａ、液体負荷（ＤＣＭ）、移動相：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃグラジエント：９０／１０〜７０／３０）によって精製して１．６４ｇの中間体Ｇ２を黄色液体として得た（６４％）。
【００７４】
中間体Ｇ３の調製
メタンスルホン酸（０．２６０ｍＬ、４．００ミリモル）を、室温でＴＨＦ（２４ｍＬ）中の活性Ｚｎ（３．４３ｇ、５２．５ミリモル）の懸濁液に添加した。反応混合物を１５分間還流で攪拌し、ＴＨＦ（８ｍＬ）中の中間体Ｇ２（１．６０ｇ、１０．５ミリモル）の溶液を添加した。次に、ＴＨＦ（１６ｍＬ）中のブロモ酢酸エチル（３．５０ｍＬ、３１．５ミリモル）の溶液を還流で滴加した。反応混合物を１時間還流で攪拌した。ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液を添加し、混合物をセライト上で濾過した。濾液を酢酸エチル（２×１５ｍＬ）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下に濃縮し、残留物を、分取ＬＣ（無定形ＳｉＯＨ、４０〜６３μｍ、Ｆｌｕｋａ、液体負荷（ＤＣＭ）、移動相：シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ８／２）によって精製して１．９０ｇの中間体Ｇ３を無色液体として得た（７５％）。
【００７５】
中間体Ｇ４の調製
ＭｅＯＨ（７３ｍＬ）およびＡｃＯＨ（２０．５ｍＬ）中の中間体Ｇ３（１．８９ｇ；７．８６ミリモル）の溶液に、室温でＴＨＦ中のＮａＢＨ３ＣＮ  １Ｍの市販溶液（１８．９ｍＬ；１８．９ミリモル）を滴加した。反応混合物を１６時間室温で攪拌した。混合物を蒸発乾固し、残留物をトルエンで共蒸発させて白色ガムを得た。次に、残留物を水に取り上げ、ＮａＯＨの水溶液（１Ｍ）を添加し、水層をＤＣＭ（３×）で抽出した。組み合わせた有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濃縮して１．７ｇの粗Ｇ４を得た。
【００７６】
このオイルを、分取ＬＣ（無定形ＳｉＯＨ  １５〜４０μｍ、５０ｇ  Ｍｅｒｃｋ、移動相グラジエント：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：１００／０〜９０／１０）によって精製して５８３ｇの中間体Ｇ４を無色オイルとして得た（３１％）。
【００７７】
中間体Ｇ５の調製
ＴＨＦ（６ｍＬ）およびＥｔＯＨ（６ｍＬ）中の２，６−ジクロロ−３シアノ−５フルオロピリジン（４２９ｍｇ；２．２４ミリモル）、ＤＩＰＥＡ（２ｍＬ；１１．４ミリモル）、中間体Ｇ４（５８２ｍｇ；２．４０ミリモル）を封管中２時間９０℃で加熱した。溶媒を蒸発させた。ＥｔＯＡｃを添加し、結果として生じた溶液を水で２回洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で蒸発させ、分取ＬＣ（定形ＳｉＯＨ  ３０μｍ、４０ｇ  Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、移動相グラジエント：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ：９０／１０〜５０／５０）によって精製して５００ｍｇの中間体Ｇ５をベージュ色固体として得た（５６％）。
【００７８】
化合物Ｇ６
化合物Ｇ６を、化合物Ｘおよび中間体Ｇ５から出発してラセミ化合物Ｃ６と同じ方法で調製した。
【化１６】
2019505518.tif 000018
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．３３（ｓ，３Ｈ）１．４５（ｓ，３Ｈ）２．４２  （ｂｒｄ，Ｊ＝１４．７Ｈｚ，１Ｈ）２．６２（ｄｄ，Ｊ＝１５．７，  １１．１Ｈｚ，１Ｈ）５．４５（ｂｒｔ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ）７．５８（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ）７．６０−７．７１（ｍ，１Ｈ）７．６７（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ）７．８８（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ）８．３１（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ）８．３４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）９．０２（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ）１２．１１（ｂｒｓ，１Ｈ）１２．４５（ｂｒｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ質量  実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝４８５．Ｒｔ（分）＝２．２４（方法Ａ）、ｍｐ℃＝２６３．９．
【００７９】
化合物Ｈ２
【化１７】
2019505518.tif 000019
【００８０】
中間体Ｈ１の調製
封管中、ＴＨＦ（１０ｍＬ）およびＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中の２，４−ジクロロ−５−フルオロ−ピリミジン（３１８ｍｇ；１．９１ミリモル）、中間体Ｄ３（４６０ｍｇ；１．９１ミリモル）およびＤＩＰＥＡ（１．６ｍＬ；９．５３ミリモル）の溶液を一晩８０℃で攪拌した。混合物を蒸発乾固し、残留物をＥｔＯＡｃ中で可溶化し、次に水を添加し、層を分離した。有機層を塩水で洗浄し（１回）、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、分取ＬＣ（無定形ＳｉＯＨ  １５〜４０μｍ、３０ｇ  Ｍｅｒｃｋ、液体負荷、移動相グラジエント：ヘプタン／ＤＣＭ  ５０：５０〜８０：２０）によって精製した。生成物を含有する画分を組み合わせ、溶媒を真空で除去して３３８ｍｇの中間体Ｈ１を黄色固体として得た（４８％）。
【００８１】
化合物Ｈ２
化合物Ｈ２を、最終鹸化を室温でＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏの混合物中のＫＯＨ（１０当量）で行ったことを除いて、化合物Ｘおよび中間体Ｈ１から出発してラセミ化合物Ｃ６と同じ方法で調製した。
【化１８】
2019505518.tif 000020
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．３１（ｓ，３Ｈ）１．４１（ｓ，３Ｈ）２．２５（ｂｒｄ，Ｊ＝１６．７Ｈｚ，１Ｈ）２．５０（ｍ，１Ｈ）５．１２−５．３２（ｍ，１Ｈ）６．９７（ｍ，１Ｈ）７．０４（ｍ，１Ｈ）７．３０−７．９６（ｍ，１Ｈ）７．３９（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ）８．１６（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ１Ｈ）８．１９（ｓ，１Ｈ）８．３０（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ）８．９３（ｓ，１Ｈ）１２．０４（ｂｒｓ，１Ｈ）１２．３１（ｂｒｓ，１Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ質量  実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝４６０．Ｒｔ（分）＝２．３６（方法Ａ）、ｍｐ℃＝１７５．６および２２８．７４．
【００８２】
化合物Ｉ３の合成
【化１９】
2019505518.tif 000021
【００８３】
中間体Ｉ１の調製
ＴＨＦ（３．０ｍＬ）およびＥｔＯＨ（３．０ｍＬ）中の２，６−ジクロロ−３シアノ−５フルオロピリジン（０．２３ｇ；１．２ミリモル）、ジイソプロピルエチルアミン（１．１ｍＬ；６．１ミリモル）、３−アミノ−４−メトキシ−４−メチルペンタン酸エチル（ＣＡＳ［１８７８２０９−６６−５］、０．２３ｇ；１．２ミリモル）を封管中１８時間９０℃で加熱した。ＥｔＯＡｃを添加し、塩水で２回洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で蒸発させて無色オイルを得た。
【００８４】
それを、分取ＬＣ（定形ＳｉＯＨ  ３０μｍ、２４ｇ、移動相グラジエント：ヘプタン／ＡｃＯＥｔ  ８０／２０〜７０／３０）によって精製して０．１９５ｇの中間体Ｉ１を白色固体として得た（４７％）。
【００８５】
中間体Ｉ２の調製
Ｎ２下に、封管中、１，４−ジオキサン（２．４ｍＬ）および水（０．７５ｍＬ）中のＸ（１４４ｍｇ；０．３３ミリモル）と、Ｉ１（９５ｍｇ；０．２８ミリモル）と炭酸セシウム（０．３２ｇ；０．９７ミリモル）との混合物を５分間Ｎ２で脱気した。ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（１９ｍｇ；２８μモル）を添加し、反応混合物を２分間Ｎ２で再び脱気した。反応混合物を２時間９０℃で加熱した。反応混合液を室温にまで冷却した。ＤＣＭおよび塩水を反応混合物に添加した。水層をＤＣＭで抽出した。組み合わせた有機層を洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾別し、濃縮乾固して粗化合物を得た。それを、分取ＬＣ（定形ＳｉＯＨ  ３０μｍ、１２ｇ、乾燥負荷、移動相グラジエント：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ９０／１０〜７０／３０）によって精製して８１ｍｇの中間体Ｉ２を白色固体として得た（４８％）。
【００８６】
化合物Ｉ３の調製
水（０．２５ｍＬ）中の水酸化リチウム一水和物（２８ｍｇ、０．６６ミリモル）の溶液を、ＴＨＦ（０．７３ｍＬ）中のＩ２（８１ｍｇ；０．１３ミリモル）の混合物に添加した。混合物を６０℃で１８時間撹拌した。
【００８７】
溶液を真空で蒸発させ、分取ＬＣ（定形ＳｉＯＨ  ３０μｍ、１２ｇ、移動相グラジエント：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／酢酸９９／１／０．１〜９５／５／０．５）によって精製し、蒸発後に画分を得、それをＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ中で凍結乾燥させて３７ｍｇの化合物Ｉ３を白色固体として得た（６５％、ｍ．ｐ．＝２７５℃）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．０７（ｓ，３Ｈ）１．１２（ｓ，３Ｈ）２．６１−２．７２（ｍ，２Ｈ）３．１５（ｓ，３Ｈ）５．１４（ｄｔ，Ｊ＝９．６；２．０Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｂｒｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）７．８６（ｄ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ）８．３１（ｓ，１Ｈ）８．３２（ｓ，１Ｈ）８．９７（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）１１．７−１２．４（ｍ，１Ｈ）１２．４５（ｂｒｓ，１Ｈ）
【００８８】
化合物Ｊ３の合成
【化２０】
2019505518.tif 000022
【００８９】
中間体Ｊ１の調製
ＴＨＦ（１３ｍＬ）およびＥｔＯＨ（１３ｍＬ）中の２，６−ジクロロ−３シアノ−５フルオロピリジン（１ｇ；５．２４ミリモル）、ジイソプロピルエチルアミン（４．５ｍＬ；２６．２ミリモル）、３−アミノ−４，４−ジメチルペンタン酸エチル（ＣＡＳ［１９７９０４−０９−９］、１．０９ｇ；６．２８ミリモル）を封管中１８時間９０℃で加熱した。ＥｔＯＡｃを添加し、塩水で２回洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空で蒸発させて２．４ｇを黄色オイルとして得た。それを、分取ＬＣ（無定形ＳｉＯＨ  １５〜４０μｍ、８０ｇ  Ｇｒａｃｅ、乾燥負荷（ＳｉＯＨ上での）、移動相グラジエント：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ９５／５〜５０／５０）によって精製して１．３３ｇの中間体Ｊ１を黄色固体として得た（７７％）。
【００９０】
中間体Ｊ２の調製
Ｎ２下に、封管中、１，４−ジオキサン（１１ｍＬ）および水（３ｍＬ）中のＸ（２５０ｍｇ；０．５７８ミリモル）と、Ｊ１（２４６ｍｇ；０．７５１ミリモル）と炭酸セシウム（０．６５９ｇ；２．０２ミリモル）との混合物を５分間Ｎ２で脱気し、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（４１ｍｇ；５８μモル）を添加し、反応混合物を２分間Ｎ２で再び脱気した。反応混合物を１時間９０℃で加熱した。反応混合液を室温にまで冷却した。ＤＣＭおよび塩水を反応混合物に添加した。水層をＤＣＭで抽出した。組み合わせた有機層を洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾別し、濃縮乾固して粗化合物を得た。それを、分取ＬＣ（無定形ＳｉＯＨ  １５〜４０μｍ、１０ｇ、乾燥負荷（ＳｉＯＨ上での）、移動相グラジエント：ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  ９５／５〜７０／３０）によって精製して１４２ｍｇの中間体Ｊ２を淡緑色固体として得た（４１％）。
【００９１】
化合物Ｊ３の調製
水（３．７ｍＬ）中のＪ２（１４２ｍｇ；２３７μモル）の溶液に、Ｈ２Ｏ中の水酸化ナトリウム３Ｍ（４７５μＬ；１．４２ミリモル）を添加した。反応混合物を１６時間室温で撹拌した。溶媒を真空で蒸発させ、残留物を水に取り上げた。ＨＣｌの水溶液（１Ｎ）をｐＨ＝１まで添加した。生じた沈澱物を濾別し、水で洗浄し、真空下に乾燥させて６９ｍｇのベージュ色固体を得た。
それをＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ／ＤＭＳＯ（５／２／３ｍＬ）中へ粉末化し、．超音波処理した。沈澱物を濾過して４３ｍｇの化合物Ｊ３を得た（４４％，）。
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．９３（ｓ，９Ｈ）２．５３−２．７１（ｍ，２Ｈ）４．８４（ｂｒｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ）７．５９（ｂｒｓ，１Ｈ）７．８３（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ）８．３３（ｓ，１Ｈ）８．３６（ｓ，１Ｈ）８．９９（ｓ，１Ｈ）１２．０７（ｂｒｓ，１Ｈ）１２．４７（ｂｒｓ，１Ｈ）
【００９２】
一般的手順
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）測定は、それぞれの方法に明記されるようなＬＣポンプ、ダイオードアレイ（ＤＡＤ）検出器またはＵＶ検出器、およびカラムを用いて行った。必要ならば、追加の検出器を含めた（下の方法の表を参照されたい）。
【００９３】
カラムからの流れを、大気圧イオン源を装備した質量分析計（ＭＳ）に導入した。化合物の公称モノアイソトピック分子量（ＭＷ）の特定を可能にするイオンを得るために、調整パラメータ（例えば、走査範囲、データ取込時間など）を設定することは当業者の知識の範囲内である。データ取得は、適切なソフトウェアを用いて行った。
【００９４】
化合物は、それらの実測保持時間（Ｒｔ）およびイオンで表される。データの表に別に明記されていなければ、報告される分子イオンは、［Ｍ＋Ｈ］＋（プロトン化分子）および／または［Ｍ−Ｈ］−（脱プロトン化分子）に相当する。化合物が直接イオン化できなかった場合、付加体の種類を明記する（すなわち、［Ｍ＋ＮＨ４］＋、［Ｍ＋ＨＣＯＯ］−など）。複数の同位体パターンを持った分子（Ｂｒ、Ｃｌなど）については、報告される値は、最も低い同位体質量について得られた値である。全ての結果は、用いられた方法に通常付随する実験的不確実性を伴って得られた。
【００９５】
本明細書では以下、「ＳＱＤ」は、シングル四重極検出器を意味し、「ＲＴ」は室温を意味し、「ＢＥＨ」は架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッドを意味し、「ＨＳＳ」は、高強度シリカを意味し、「ＤＡＤ」はダイオードアレイ検出器を意味する。
【００９６】
【表１】
2019505518.tif 000023
【００９７】
式（Ｉ）の化合物の生物学的活性
化合物のインビトロ抗ウイルス活性は、細胞ベースの抗ウイルスアッセイを用いて測定した。このアッセイでは、インフルエンザウイルスＡ／Ｔａｉｗａｎ／１／８６（Ｈ１Ｎ１）に感染したＭａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞における細胞変性効果（ＣＰＥ）を化合物の存在または不在下で監視した。白色３８４ウェルマイクロタイターアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）に、ｅｃｈｏ  ｌｉｑｕｉｄ  ｈａｎｄｌｅｒ（Ｌａｂｃｙｔｅ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を用いるアコースティック液滴吐出によって満たした。２００ナノリットルの化合物原液（１００％ＤＭＳＯ）をアッセイプレートに移した。ＭＤＣＫ細胞を、２５，０００個または６，０００個の細胞／ウェルの最終密度でプレートに分注した。次に、インフルエンザＡ／Ｔａｉｗａｎ／１／８６（Ｈ１Ｎ１）ウイルスを、それぞれ、０．００１または０．０１の感染多重度で添加した。ウェルは、１体積当たり０．５％のＤＭＳＯを含有する。ウイルス感染および偽感染の対照が、各試験に含まれた。プレートを、５％のＣＯ２中３７℃で培養した。ウイルス暴露の３日後に、細胞変性効果を、ＡＴＰｌｉｔｅＴＭキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｚａｖｅｎｔｅｍ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を製造業者の使用説明書に従って用いて、ＡＴＰレベルの低下を測定することによって定量化した。ＩＣ５０は、５０％阻害濃度と定義した。並行して、化合物を、白色３８４ウェルのマイクロタイタープレート中で３日間インキュベートし、ＭＤＣＫ細胞における化合物のインビトロ細胞毒性を、ＡＴＰｌｉｔｅＴＭキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，ｖｅｎｔｅｍ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を製造業者の使用説明書に従って用いて細胞のＡＴＰ含量を測定することによって求めた。細胞毒性は、ＣＣ５０、すなわち、細胞生存度の５０％低下を引き起こす濃度として報告した。
【００９８】
【表２】
2019505518.tif 000024
【００９９】
【表３】
2019505518.tif 000025
【国際調査報告】
2019505518.tif 000030
2019505518.tif 000031
2019505518.tif 000032
2019505518.tif 000033
2019505518.tif 000034