【手続補正書】
【提出日】平成19年5月25日(2007.5.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【発明の名称】植物の病原体の処理のためのフェネグリークすなわち学名トリゴネラフォエナムグラエカム（Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａｆｏｅｎｕｍ−ｇｒａｅｃｕｍ）の抽出物由来の誘導物質、前記物質の使用ならびに製造方法
【技術分野】
【０００１】
本発明は植物の処理剤、前記物質の使用、ならびに前記物質の製造方法に関する。
本発明は、特に、植物の自然防御の新規促進剤すなわち誘導物質を用いた病原体およびあらゆる種類の植物寄生体（菌類、バクテリア、ウィルス、昆虫等）からの保護に関する。
新しい組成の物質は予防としても治癒としても有効であり、液相抽出なしでのフェネグリーク抽出物すなわち学名トリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)の抽出物の利用を含む。
【背景技術】
【０００２】
植物は、ウィルス、バクテリア、菌類、虫のような多くの病原体から常に寄生体圧力を受けている。
ある病原体に対する植物の抵抗性は、植物による病原の認識（遺伝子体遺伝子の関係）によって生じるか、寄生体によって生じる障害の作用による防御の刺激によって生じる。
【０００３】
前者の場合、対応する「抵抗性遺伝子」を有する植物が、「非病原性遺伝子」と呼ばれる特別な遺伝子をもつ病原体を認識することにより抵抗性が生じる。
この場合、植物と寄生体の間に、遺伝的にプログラムされた真の相互作用関係が存在する。
２つの主作用因が認識された後、植物により特殊な機構（一連の代謝現象、抵抗性伝達信号の合成）が生成され、植物に抵抗性特性が付与される一方、宿主組織への病原体の侵襲は極めて局所的なままである。
【０００４】
後者の場合、防御メカニズムは、たとえば菌類の攻撃の際、宿主の加水分解酵素の作用による菌類の内壁面の分解および菌類の酵素によって加水分解された細胞の壁面から発生するオリゴ糖によって誘導される。
これらの破片もまた抵抗性のメッセンジャーとなる。
【０００５】
植物は、抵抗性メカニズムの初回の発現をうけて、植物のうちの特に感染していない部分における寄生体の新しい攻撃に対し、より高い抵抗性を発揮することができるが、これもまたいくつかの「天然化学メッセンジャー」の恩恵によるものである。
このメカニズムは「全身獲得抵抗性」と呼ばれている。
【０００６】
植物がある病原体に感受する時、その植物は、その遺伝子対遺伝関係または「障害」の作用のため、侵襲するものを認識することができない。
したがって、この植物は自身の防御遺伝子を効果的に発現させることができない。
また、いくつかの病原体に対しては発生することができないこれらの「天然化学信号」を外因的に植物に供給することにより、植物の自然防御を刺激することが可能である。
【０００７】
植物と病原体との間に認識がある時は、植物によって特別なメカニズムが生成される。
植物は、病原体から攻撃された部位における細胞壊死の発現により感受することが多く、このようにしてその攻撃を阻止する。
この防御反応はほとんど必ず、フィトアレキシン（抗真菌分子）の生合成などのメカニズム、キチナーゼまたはβ−１、４−エンドグルカナーゼ等の病原体（ＰＲタンパク質）と結合したペルオキシダーゼまたはタンパク質などの防御酵素をともなう。
これらの酵素は真菌またはバクテリアの壁を溶解させることができる。
抵抗性があると植物は細胞壁を補強し（リグニン合成）、病原菌をその侵入部位で阻止することができる。
【０００８】
植物に触れて、植物内の物質の塗布部位に防御遺伝子の活性化および全身獲得抵抗性を実現することが可能な誘導物質または感受剤を前記植物に適用する農学的に有用な植物の自然防御を刺激するための方法が知られている。
そのような方法は、ＧＯＥＭＡＲ研究所によって１９９７年７月１８日に出願されたフランス特許第２７６６０５９号においてより詳細に記述されている。
この方法は、有効な量のオリゴβ１−３−グルカンを使用する。
これは、オリゴβ１−３−グルカンに加水分解される様々な複製基点のβ１−３−グルカンから調製される。
β１−３−グルカンは、バクテリア、特にアルカリゲネス フェカリス(Alcaligenes faecalis)、菌類、特にスエヒロタケ(Schizophyllum)およびスクレロチウム グルカニウム(Sclerotium glucanium)、酵母菌、特にサッカロマイセス セレビシエ(Saccharomyces cerevisae)、海草、および穀物に由来する。
【０００９】
しかしながらこれらの方法では、同じ植物の抵抗性を複数回連続して発生させることができない。
噴霧は一回しかできない。したがってこの方法は基本的に予防法であり時間的に制限される。
【００１０】
１９９９年１１月２日、ＵＳＰ５９７７０６０号にてＥＤＥＮ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅに交付されたアメリカ合衆国特許は、植物上の害虫の防止方法について記述している。
この特許においては、害虫に対する植物の防御システムのための誘導物質に関し参照できる多数の参考文献の引用がある。
この方法は、害虫防止に対し効果的な条件で、植物または種子にポリペプチドまたはプロテイン誘導物質を塗布することを内容とする害虫防止方法である。
きわめて高い感受性を引き起こす誘導物質（ポリペプチドまたはプロテイン）は、エルビニア、シュードモナス、キサントモナス、フイトフソラ、あるいはこれらの混合物で構成される群の中から選択された病原体から得られる。
一実施例では、ポリペプチドまたはプロテインを分泌または輸出することができる遺伝子を含むバクテリアを塗布することにより、誘導物質を植物に適用することができる。
バクテリアは疾病を生じさせずに、きわめて高い感受性の誘導物質であるポリペプチドまたはプロテインをコード化する遺伝子により（再構成的に）変質されてしまっている。
したがってこの書類は害虫の防止方法について記述しているが、一般的な病原体の防止方法には触れていない。
またこの書類は、一般の人からの認知がきわめて悪い遺伝子操作を引き合いに出している。
【００１１】
また、スパイスのように食糧農業産業や医薬産業で使われているフェネグリークの種子が知られている。
フェネグリーク、すなわちトリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)、また別名コロハ(Senegre)は胡蝶形(papilionacee)科の豆科植物である。
フェネグリークは４０種の異なる成分から成る精油を含み、そのうち３−ヒドロキシ−４，５−ジメチル−オキソラン−２−オネが最も重要な芳香成分であると思われる。
フェネグリークが含む不揮発性成分のうち、フロスタノールグリコシド、ステロールおよびステロイドサポニンは、医薬産業にとって潜在的利益を有するものと確認された。
【００１２】
１９９９年１２月７日、ＵＳＰ５９９７８７７号にてＥｍｅｒａｌｄ Ｓｅｅｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｌｔｄ．社に交付されたアメリカ合衆国特許においては、フェネグリークの種子から商業的に有効な部分を抽出する方法について記述している。
フェネグリークの種子は黄色の芯を含むが、これは、子葉と、白色半透明胚乳および外被に覆われた胚芽である。
この胚乳はガラクトマンナンゴムを含み、濃褐色の皮で覆われている。
ゴムすなわちオレオレジンの回収方法は、フェネグリークの種子を１４％から２０％の範囲内の水分で湿潤させ、フェネグリークの種子を粉砕し、粉砕した種子を、種子のうちのいくつかの成分が溶媒によって吸収されるよう、接触時間中ある温度で溶媒と混合し、溶媒から抽出物を分離することを内容とする。
この方法の欠点は、極性アルコールである溶媒を使用することである。
このアメリカ合衆国特許第５９９７８７７号には、水溶性繊維を回収することを内容とする別の方法についての記述もある。
これを行うために、種子を粉砕し、選別し、外皮および粘液（膜）から成る重量部分を回収する。
次にこの重量部分は熱湯処理され、それにより水溶性繊維を回収することができる。
次に溶媒を使用して軽量部分内にあるゴムが回収される。
【００１３】
上で示した先行技術は、トリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)から得られる物質が、最終物質に対して中性ではなく植物に対し毒的な影響を及ぼすことがあるアルコール溶媒を用いる抽出により行われるという欠点を有する。
特に、公報ＤＥ１９７２６６、ＥＰ０４９３６７０、ＤＡＴＡＢＡＳＥ第１９９４−８４１２１号またはＸＰ００２１９４３７６号またはＣｈｅｍｉｃａｌＡｂｓｔｒａｃｔ１１９巻第１１号（１９９３−９−１３）Ｋｒａｔａで構成される先行技術の場合、そのことが言える。
【００１４】
同じ出願人の特許ＦＲ０１０７８９８により構成される技術的進歩は、種子の粉砕、子葉および胚乳部分の保護部分の分離、ろ過作業中に水によりこの胚乳および子葉部分からの誘導物質成分の抽出により抽出物が得られるトリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)の種子を使用することを内容とする。
【特許文献１】フランス特許第２７６６０５９号
【特許文献２】アメリカ特許第５９７７０６０号
【特許文献３】アメリカ特許第５９９７８７７号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明は、防止効果も治癒効果も可能な新しい誘導物質（病原体に対する植物の防御の促進剤）を使用して、病原体およびあらゆる種類の植物寄生体（菌類、ウィルス、バクテリア、害虫等）を防止することを目的とする。
【００１６】
発明の別の目的は、誘導物質の使用であって、誘導機能を含む植物検疫物質を得ることが可能な使用を提供することである。
【００１７】
本発明のさらに別の目的は、新規誘導物質の調製方法であって、処理される植物および環境に対し害を与えない方法を提供することである。
【００１８】
発明者は試験、研究の結果、フェネグリークの処理によって生じる乾燥抽出物が、病原体およびあらゆる種類の植物寄生体（菌類、バクテリア、ウィルス、害虫等）に対する植物の防御メカニズムに関わる様々な酵素活性を強く刺激する特性を有していることを発見した。
【００１９】
発明者は試験、研究の結果、前記種子の子葉および胚乳部分を粉末に粉砕し、水と混合して植物に噴霧すれば同じ効果が得られるであろうことを発見した。
この方法は、液体物質という段階を経ないので、製品の発酵を防止することができるとともに、物質の使用時または包装時になって初めて溶液化され、溶液化の際に主成分の抽出が行われる粉末を販売することができるという長所を有する。
粉末は植物に直接噴霧すること（粉末噴霧）も、植物検疫の製造の際に含ませることも可能である。
【００２０】
本発明は別の長所を有する。
すなわち、水分による抽出を経ない種子を粉砕することにより、たとえば胚乳および子葉部分ならびに得られた粉末内に含まれるサポニンおよびデキストリンのように、フェネグリークに含まれる全ての分子をそのまま保存することが可能である。
サポニンは植物の葉に対し湿潤効果があるため誘導物質の効果が増加し、デキストリンは、溶液およびその有効成分を農業における通常の植物に固定する接着効果を有する。
植物は誘導物質による処理の反復に耐え、植物の防御メカニズムは処理毎に刺激される。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
好ましくは、学名トリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)、即ち、フェネグリークの種子の乾燥抽出物は、種子を粉砕し、外皮および粘液部分から子葉および胚乳部分を分離することから成る方法により得られる。
子葉および胚乳部分は、好ましくは２００ミクロン未満の粒度を得るよう粉砕される。粉砕および選別または微粉化により得られる粒子は５ミクロンから５００ミクロンとすることができる。
【００２２】
第１の態様によれば、本発明は、無液抽出によりトリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)（フェネグリーク）から得られる乾燥物質を含むことを特徴とする、植物処理剤を対象とする。
【００２３】
個別の特徴によれば、トリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)（フェネグリーク）から得られる物質は、使用前の液状担体に混合されるのに適している。
【００２４】
個別の特徴によれば、上で簡潔に述べたような植物処理剤内で、トリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)から得られた乾燥物質はフェネグリーク由来の少なくとも２つの活性分子を含む。
【００２５】
個別の特徴によれば、上で簡潔に述べたような植物処理剤内で、トリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)（フェネグリーク）から得られた乾燥物質は、３００００ドルトンより高い少なくとも１つの活性分子と、３００００ドルトン未満の少なくとも１つの活性分子とを含む。
【００２６】
個別の特徴によれば、上で簡潔に述べたような植物処理剤内で、トリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)（フェネグリーク）から得られた乾燥物質は、少なくとも部分的にフェネグリーク植物の種子から得られる。
【００２７】
個別の特徴によれば、上で簡潔に述べたような植物処理剤内で、トリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)（フェネグリーク）から得られた乾燥物質は、少なくとも部分的にフェネグリーク植物の空中部分から得られる。
【００２８】
個別の特徴によれば、上で簡潔に述べたような植物処理剤内で、トリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)（フェネグリーク）から得られた乾燥物質は、少なくとも部分的にフェネグリーク植物の根から得られる。
【００２９】
個別の特徴によれば、トリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)から得られる乾燥物質は、粉末のみ、顆粒のみ、あるいは他の製剤との組み合せのうちの任意の形態である。
【００３０】
個別の特徴によれば、トリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)から得られる乾燥物質は、湿潤剤、分散剤および／または接着剤と組み合わされる。
【００３１】
個別の特徴によれば、トリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)から得られる乾燥物質は、殺菌剤、バクテリア殺菌剤、抗ウィルス剤、殺虫剤、その他の防御促進剤および／または肥料のうちから選択された他の処理剤と組み合わされる。
【００３２】
個別の特徴によれば、上で簡潔に述べたような植物処理剤は、植物の発育の早熟性に作用させるのに適する。
【００３３】
個別の特徴によれば、上で簡潔に述べたような植物処理剤は、収穫した植物内のマイコトキシンの発達を抑えるのに適する。
【００３４】
第２の態様によれば、本発明は、植物の防御を促進するのに適した植物検疫組成の製造のための、上で簡潔に述べたような植物処理剤の使用を対象にする。
【００３５】
第３の態様によれば、本発明は、発育の早熟性に作用させるのに適した植物検疫組成の製造のための、上で簡潔に述べたような植物処理剤の使用を対象とする。
【００３６】
第４の態様によれば、本発明は、収穫した植物内のマイコトキシンの発達を抑えるのに適した植物検疫組成の製造のための、上で簡潔に述べたような植物処理剤の使用を対象とする。
【００３７】
第５の態様によれば、本発明は、トリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)（フェネグリーク）から乾燥物質を無液分離抽出するステップを含むことを特徴とする、上で簡潔に述べたような植物処理剤の取得方法を対象とする。
【００３８】
個別の特徴によれば、上で簡潔に述べたような植物処理剤の取得方法は、基剤を粉末化するステップを含む。
【００３９】
個別の特徴によれば、上で簡潔に述べたような植物処理剤の取得方法は、
フェネグリークの種子を粉砕するステップと、
テグメントおよび粘液部分から胚および子葉部分を分離するステップと、
安定して保存可能な所定の粒度の粉末を得るために胚および子葉部分を再粉砕するステップと、
前記粉末を水可溶化するステップと
を含む。
【００４０】
個別の特徴によれば、上で簡潔に述べたような植物処理剤の取得方法は、５ミクロンから５００ミクロンの間に含まれる粒子を得るために胚および子葉部分を選別するステップを含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４１】
以下、本発明の対象となる方法の個別の実施形態における植物処理剤の一連の製造ステップを示す図１により、本発明をより詳細に記述する。
なお、上記実施形態は本発明の範囲を何ら限定するものではない。
【実施例１】
【００４２】
新規誘導物質の抽出方法
粉末が得られるよう粉砕した（ステップ１０）フェネグリークの種子を使用する。
デンシトメトリー法により外皮および粘液部分から子葉および胚乳部分を分離する（ステップ１５）。
子葉および胚乳部分は、５ミクロンから５００ミクロンの間に含まれる粒子を得るために場合によっては選別され（ステップ２０）、好ましくは２００Ｐｍ未満の粒度の粉末を得るために再粉砕される（ステップ２５）。
【００４３】
図１に示す実施形態においては、１グラムから１００グラムの間、好ましくは５グラムのこの粉末を１リットルの水と混合し（ステップ３０）、この溶液を植物に散布する（ステップ３５）。
【００４４】
変形形態においては、商品の包装の際にステップ３０が行われ、その結果商品は液状となる。
別の変形形態においては、商品は粉末状であり、この商品のユーザーによってステップ３０が行われる。
【００４５】
別の変形形態においては、ステップ３０が行われず、ステップ２５により得られた粉末を植物に直接散布する。
【００４６】
別の変形形態においては、ステップ２５により得られた粉末が、誘導物質の機能とは別の機能、すなわち殺菌剤、バクテリア殺菌剤、抗ウィルス剤、殺虫剤、その他の防御促進剤および／または肥料の機能のうちの１つの機能を使用する植物検疫物質の製剤に組み込まれる。
【００４７】
ステップ２５の終了時に得られる粉末は、少なくとも１つの活性分子を含むトリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)（フェネグリーク）から得られた乾燥物質を含む植物処理剤を形成する。
好ましくは、この物質は使用前の少なくとも１つの液状担体に混合されるのに適する。
【００４８】
したがって本発明は、粉末または液体の形態を有する植物処理剤に限定されるものではなく、反対に、無液分離または抽出によりトリゴネラフォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)から得られた乾燥物質から得られるあらゆる植物処理剤に適用され、次にこの物質は、植物検疫物質に組み込まれ、包装前に水溶化されるか、包装後、使用前に水溶化されるか、あるいは粉末のままの状態に保たれ、植物に散布される。
【００４９】
その製造にトリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)から得られた乾燥物質が用いられる植物検疫剤は、たとえば、植物の防御を促進するのに適する、発育の早熟性に作用させるのに適するおよび／または収穫した植物内のマイコトキシンの発達を抑えるのに適するようにすることができる。
【００５０】
したがって変形形態によれば、乾燥物質は、粉末、顆粒のみ、あるいは湿潤剤、分散剤および／または接着剤等、他の製剤および／またはたとえば殺菌剤、バクテリア殺菌剤、抗ウィルス剤、殺虫剤、その他の防御促進剤および／または肥料など他の処理剤と組み合せた顆粒の形態である。
【００５１】
好ましくは、上で簡潔に述べたような植物処理剤内で、トリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)（フェネグリーク）から得られた乾燥物質は、フェネグリークの活性分子のうち少なくとも２つの活性分子を含む。
好ましくは、少なくとも１つの活性分子が３００００ドルトンより高く、少なくとも１つの活性分子が３００００ドルトン未満である。
【００５２】
このようにして得られた植物処理剤は、誘導物質機能により植物の防御を促進するのに適する。
【００５３】
好ましくは、このようにして得られた植物処理剤は、発育および収穫の早熟性に作用させるのに適する。
【００５４】
好ましくは、このようにして得られた植物処理剤は、収穫後の植物内のマイコトキシンの発達を抑えるのに適する。
【００５５】
上で記述した個別の実施形態によれば、トリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)（フェネグリーク）から得られる乾燥物質は、少なくとも部分的にフェネグリークの種子から得られる。
【００５６】
変形形態では、トリゴネラ フォエナムグラエカム(Trigonella foenum-graecum)（フェネグリーク）から得られる乾燥物質は、少なくとも部分的にフェネグリーク植物の空中部分および／またはフェネグリーク植物の根から得られる。
【実施例２】
【００５７】
フェネグリーク抽出物による野菜植物および装飾用植物の処理
上の例１で調製した抽出物を以下の植物に散布し、様々な寄生体に対する様々な植物の抵抗性を試験する。
たとえば以下の植物／寄生体の対についての予防的および治癒的処理の際には、きわめて有意な効果がえられた：メロン／オイディウム、メロン／バクテリア菌、メロン／アザミウマ、メロン／ミカンコナジラミ、ブドウ／オイディウム、ブドウ／べと病、ブドウ／エクスコリオズ(excoriose)、バラの木／さび菌類、バラの木／オイディウム、小麦／包頴斑点病、小麦／オイディウム等。
【００５８】
これらの処理済の植物を未処理の植物と比較する。
予防処理の場合、定期的に再処理を行えば、（未処理の植物とは反対で）処理済の植物は寄生体による攻撃をほとんどまたは全く受けない。
治癒処理の場合、処理済の植物は、フェネグリークの抽出物による初回の処理から数日後には感染の兆候が減少した。
本処理は、若い植物でも、切花でも、あるは成熟植物でも、すなわち植物のどの発育段階でも行うことができる。
【００５９】
発明者は研究開発の結果、以下の発見に基づき本発明を完成した。
発明者はフェネグリークの粉末が植物の防御に対し強い促進作用を有すること、すなわちフェネグリークの粉末により、ほぼすべての寄生体からほとんど全ての植物を保護することが可能であることを発見した。
発明者は、果実の収穫の早熟性（早期収穫）および処理済のあらゆる植物の生産の早熟性（早期生産）に関する興味深い二次的作用、すなわちフェネグリークの粉末により、植物の生育を加速させることが可能であることを発見した。
発明者はまた、マイコトキシンの発達に関する別の興味深い二次的作用（オクラトキシンＡの例）、すなわちフェネグリークの粉末により、処理済植物を収穫した後に得られる物質中のマイコトキシンの割合を減少させることが可能である（たとえばフェネグリークの粉末によりぶどうの木を処理した後はオクラトキシンＡがすくなくなる）ことを発見した。
発明者は更なる開発の結果、以下の本発明を完成するにいたった。
フェネグリークの種子の粉末は、あらゆる形態の粉末、顆粒（ＷＤＧ等）、湿潤剤、分散剤または接着剤あるいはその他の任意の製剤を添加してもしなくてもよい任意の製剤とすることができる。
フェネグリークの粉末は、その作用を向上または拡大するために、殺菌剤、バクテリア殺菌剤、抗ウィルス剤、殺虫剤、植物の防御促進剤および／または肥料等他の処理剤と混合することができる。
有効成分は、フェネグリークの葉、同植物の全空中部分、ならびに根から抽出することができる。
フェネグリークの粉末は植物への散布時に溶液化することができるが、その他にも、使用するのよりはるか前に溶液化し、ユーザーに液体で提供されるようにすることもできる。
本発明は、乾燥抽出物の取得方法およびこの有効成分の取得に至るまでの抽出方法の如何に関わらず、たとえば粉末等、乾燥抽出物の形態のフェネグリークの使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】本発明の法の個別の実施形態における植物処理剤の一連の製造ステップを示す図である。
【符号の説明】
【００６１】
１０ フェネグリークの種子の粉砕
１５ 子葉および胚乳の分離
２０ 選別
２５ 再粉砕
３０ 水との混合
３５ 植物への散布