【手続補正書】
【提出日】平成19年9月10日(2007.9.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
中枢神経系（CNS）ニューロンの軸索成長を刺激するための方法であって、以下の段階を含む方法：
a．CNSニューロンを有効量のNgRアンタゴニストと接触させる段階；および
b．CNSニューロンを、有効量の、CNSニューロンの成長経路を活性化する薬剤と接触させる段階。
【請求項２】
CNSニューロンが哺乳動物のものである、請求項1記載の方法。
【請求項３】
CNSニューロンを、細胞内cAMP濃度を増加させるcAMP調節物質（modulator）と接触させる段階をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項４】
cAMP調節物質がcAMP類似体、cAMPを活性化するGタンパク質共役受容体の活性化物質、アデニル酸シクラーゼ活性化物質、カルシウムイオノフォア、およびホスホジエステラーゼ阻害物質からなる群より選択される、請求項3記載の方法。
【請求項５】
CNSニューロンの成長経路を活性化する薬剤がイノシンである、請求項1記載の方法。
【請求項６】
CNSニューロンの成長経路を活性化する薬剤がオンコモジュリン（oncomodulin）である、請求項1記載の方法。
【請求項７】
CNSニューロンの成長経路を活性化する薬剤が、TGF-β、NGF、BDNF、NT-3、CNTF、IL-6、およびGDNFからなる群より選択される成長因子である、請求項1記載の方法。
【請求項８】
CNSニューロンの成長経路を活性化する薬剤がヘキソースである、請求項1記載の方法。
【請求項９】
ヘキソースが、D-マンノース、グロースおよびグルコース-6-リン酸からなる群より選択される、請求項8記載の方法。
【請求項１０】
NgRアンタゴニストが、NgRに結合することによってNgRを介したシグナル伝達を阻害する薬剤である、請求項1記載の方法。
【請求項１１】
NgRアンタゴニストが、NgRの発現を阻害する薬剤である、請求項1記載の方法。
【請求項１２】
NgRアンタゴニストが、NgRによって活性化される下流シグナル伝達分子の活性を阻害する薬剤である、請求項1記載の方法。
【請求項１３】
下流シグナル伝達分子がRhoAである、請求項12記載の方法。
【請求項１４】
薬剤がクロストリジウム・ボツリナム（clostridium botulinum）C3 ADP-リボシルトランスフェラーゼである、請求項13記載の方法。
【請求項１５】
NgRアンタゴニストが、NgRを結合する抗体である、請求項1記載の方法。
【請求項１６】
NgRアンタゴニストが、NgRリガンドを結合する抗体である、請求項1記載の方法。
【請求項１７】
NgRアンタゴニストがペプチドである、請求項1記載の方法。
【請求項１８】
ペプチドが、配列番号：1、配列番号：2、配列番号：3、配列番号：4、配列番号：5、配列番号：6、および配列番号：7からなる群より選択されるNgRに結合するペプチドを含む、請求項17記載の方法。
【請求項１９】
ペプチドが、配列番号：14に記載のヒトNogoAのアミノ酸残基を含む、請求項17記載の方法。
【請求項２０】
ペプチドが、配列番号：15に記載のヒトNogoAのアミノ酸残基を含む、請求項17記載の方法。
【請求項２１】
ペプチドが、配列番号：16に記載のNogo-66のアミノ酸配列を含む、請求項17記載の方法。
【請求項２２】
NgRアンタゴニストが可溶性NgRタンパク質である、請求項1記載の方法。
【請求項２３】
可溶性NgRタンパク質が、配列番号：8または配列番号：9に記載のアミノ酸配列を含む、請求項22記載の方法。
【請求項２４】
可溶性NgRタンパク質が、配列番号：10のアミノ酸残基26位〜344位、配列番号：11のアミノ酸残基26位〜310位、配列番号：12のアミノ酸残基26位〜344位、配列番号12のアミノ酸残基27位〜344位、および配列番号：13のアミノ酸残基27位〜310位からなる群より選択される可溶性Nogo受容体-1ポリペプチド配列である、請求項22記載の方法。
【請求項２５】
NgRアンタゴニストが、NgRに結合する核酸アプタマーである、請求項1記載の方法。
【請求項２６】
NgRアンタゴニストが、DNAによってコードされる欠陥NgRである、請求項1記載の方法。
【請求項２７】
欠陥NgRがドミナントネガティブNgRである、請求項26記載の方法。
【請求項２８】
NgRアンタゴニストが、DNAによってコードされるクロストリジウム・ボツリナムC3 ADP-リボシルトランスフェラーゼである、請求項1記載の方法。
【請求項２９】
DNAがウイルスベクターに含有され、それにより、該ベクターの投与がCNSニューロンを有効量のNgRアンタゴニストと接触させるための手段になる、請求項26または28記載の方法。
【請求項３０】
ウイルスベクターがAAVである、請求項36記載の方法。
【請求項３１】
患者の神経障害を処置するための方法であって、以下の段階を含む方法：
a．有効量のNgRアンタゴニストを該患者に投与する段階；および
b．該患者に、有効量の、CNSニューロンの成長経路を活性化する薬剤を投与する段階。
【請求項３２】
神経障害が、外傷性脳傷害、脳卒中、脳動脈瘤、脊髄傷害、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、びまん性大脳皮質萎縮、レーヴィ小体型痴呆、ピック病、中脳辺縁皮質痴呆（mesolimbocortical dementia）、視床変性、ハンチントン舞踏病、皮質-線条体-脊髄変性、皮質-基底核神経節変性、大脳小脳変性、痙性不全対麻痺を伴う家族性痴呆、ポリグルコサン小体病、シャイ・ドレーガー症候群、オリーブ橋小脳萎縮、進行性核上性麻痺、変形性筋ジストニア、ハレルフォルデン・シュパッツ病、メージュ症候群、家族性振せん、ジル・ド・ラ・ツーレット症候群、有棘赤血球舞踏病、フリードライヒ運動失調、ホームズ型家族性皮質小脳萎縮、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病、進行性脊髄性筋萎縮、進行性球麻痺、原発性側索硬化症、遺伝性筋萎縮、痙性対麻痺、腓骨筋萎縮、肥厚性間質性多発ニューロパシー、遺伝性多発神経炎性失調（heredopathia atactica polyneuritiformis）、視神経症、眼筋麻痺、および網膜または視神経損傷からなる群より選択される、請求項31記載の方法。
【請求項３３】
CNSニューロンの成長経路を活性化する薬剤がイノシンである、請求項31記載の方法。
【請求項３４】
CNSニューロンの成長経路を活性化する薬剤がオンコモジュリンである、請求項31記載の方法。
【請求項３５】
CNSニューロンの成長経路を活性化する薬剤が、TGF-β、NGF、BDNF、NT-3、CNTF、IL-6、およびGDNFからなる群より選択される成長因子である、請求項31記載の方法。
【請求項３６】
CNSニューロンの成長経路を活性化する薬剤がヘキソースである、請求項31記載の方法。
【請求項３７】
ヘキソースが、D-マンノース、グロース、およびグルコース-6-リン酸からなる群より選択される、請求項36記載の方法。
【請求項３８】
NgRアンタゴニストが、NgRに結合することによってNgRを介したシグナル伝達を阻害する薬剤である、請求項31記載の方法。
【請求項３９】
NgRアンタゴニストが、NgRの発現を阻害する薬剤である、請求項31記載の方法。
【請求項４０】
NgRアンタゴニストが、NgRによって活性化される下流シグナル伝達分子の活性を阻害する薬剤である、請求項31記載の方法。
【請求項４１】
下流シグナル伝達分子がRhoAである、請求項40記載の方法。
【請求項４２】
薬剤がクロストリジウム・ボツリナムC3 ADP-リボシルトランスフェラーゼである、請求項40記載の方法。
【請求項４３】
NgRアンタゴニストが、NgRを結合する抗体である、請求項31記載の方法。
【請求項４４】
NgRアンタゴニストが、NgRリガンドを結合する抗体である、請求項31記載の方法。
【請求項４５】
NgRアンタゴニストがペプチドである、請求項31記載の方法。
【請求項４６】
ペプチドが、配列番号：1、配列番号：2、配列番号：3、配列番号：4、配列番号：5、配列番号：6、および配列番号：7からなる群より選択されるNgRに結合するペプチドを含む、請求項45記載の方法。
【請求項４７】
ペプチドが、配列番号：14に記載のヒトNogoAのアミノ酸残基を含む、請求項45記載の方法。
【請求項４８】
ペプチドが、配列番号：15に記載のヒトNogoAのアミノ酸残基を含む、請求項45記載の方法。
【請求項４９】
ペプチドが、配列番号：16に記載のNogo-66のアミノ酸配列を含む、請求項45記載の方法。
【請求項５０】
NgRアンタゴニストが可溶性NgRタンパク質である、請求項31記載の方法。
【請求項５１】
可溶性NgRタンパク質が、配列番号：8または配列番号：9に記載のアミノ酸配列を含む、請求項50記載の方法。
【請求項５２】
可溶性NgRタンパク質が、配列番号：10のアミノ酸残基26位〜344位、配列番号：11のアミノ酸残基26位〜310位、配列番号：12のアミノ酸残基26位〜344位、配列番号12のアミノ酸残基27位〜344位、および配列番号：13のアミノ酸残基27位〜310位からなる群より選択される可溶性Nogo受容体-1ポリペプチド配列である、請求項50記載の方法。
【請求項５３】
NgRアンタゴニストが、NgRに結合する核酸アプタマーである、請求項31記載の方法。
【請求項５４】
NgRアンタゴニストが、DNAによってコードされる欠陥NgRである、請求項31記載の方法。
【請求項５５】
欠陥NgRがドミナントネガティブNgRである、請求項54記載の方法。
【請求項５６】
NgRアンタゴニストが、DNAによってコードされるクロストリジウム・ボツリナムC3 ADP-リボシルトランスフェラーゼである、請求項31記載の方法。
【請求項５７】
DNAがウイルスベクターに含有され、それにより、該ベクターの投与がCNSニューロンを有効量のNgRアンタゴニストと接触させるための手段になる、請求項54または56記載の方法。
【請求項５８】
ウイルスベクターがAAVである、請求項57記載の方法。
【請求項５９】
NgRアンタゴニストとCNSニューロンの成長経路を活性化する薬剤とを含む薬学的組成物。
【請求項６０】
NgRアンタゴニストが、抗体、NgRに結合するペプチド、および可溶性NgRタンパク質からなる群より選択される、請求項59記載の薬学的組成物。
【請求項６１】
ペプチドが、配列番号：1、配列番号：2、配列番号：3、配列番号：4、配列番号：5、配列番号：6、配列番号：7、配列番号：14、配列番号：15、および配列番号：16に記載のアミノ酸配列からなる群より選択される、請求項60記載の薬学的組成物。
【請求項６２】
可溶性NgRタンパク質が、配列番号：8に記載のアミノ酸配列、配列番号：9に記載のアミノ酸配列、配列番号：10のアミノ酸残基26位〜344位、配列番号：11のアミノ酸残基26位〜310位、配列番号：12のアミノ酸残基26位〜344位、配列番号：12のアミノ酸残基27位〜344位、および配列番号：13のアミノ酸残基27位〜310位からなる群より選択される、請求項60記載の薬学的組成物。
【請求項６３】
局所投与、肺投与、体内局所投与、皮内投与、非経口投与、皮下投与、鼻腔内投与、表皮投与、眼投与、経口投与、脳室内投与、およびクモ膜下投与からなる群より選択される投与用に製剤化される、請求項59記載の薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６１】
RhoA不活化およびマクロファージ活性化はインビボで相乗作用を持つ
トランスジェニックC3タンパク質レベルを2週間にわたってRGC中で十分に高くなるようにした後、ラットを再び麻酔し、左視神経を挫滅すると共に、水晶体を傷つけるか、または無傷のままにしておいた。2週間後にGAP-43免疫染色によって再生を評価した（Berry et al., 1996；Leon et al., 2000）。予想どおり、神経挫滅だけを施したAAV-GFPトランスフェクト動物は、手術の2週間後に傷害部位を超えて＞500μm成長している軸索を示さなかったのに対して（図3a）、水晶体傷害を持つ同様にトランスフェクトした動物は、傷害部位を超えて＞500μm伸びる軸索を平均で約400本持っていた（図3a）（Leon et al., 2000；Yin et al., 2003；Fischer et al., 2004参照）。水晶体傷害が存在しない場合でも、C3を発現させるラットは、傷害部位を通過する中程度の数の軸索を示し、これらのうち＞500μm伸び続ける割合は、この基準に達する軸索の総数こそ少なかったものの、水晶体傷害を持つGFP発現例において見られるものよりも高かった（図3a）。C3発現を水晶体傷害と組み合わせたところ、かつてないレベルの軸索再生がおこあった。この群ではどの動物でも、軸索成長があまりにも強いため、他の場合には傷害部位に見られるGAP-43免疫染色の不連続性が不明瞭になるほどだった。傷害部位を超えて＞500μm伸びる軸索の数は、水晶体傷害後またはC3発現だけの場合よりも4.5倍多く（図3a）（n＝9；p＜0.001）、2つの作用を合わせたものよりも多かった。このように、RhoAの不活化およびRGCの成長状態の活性化は、インビボで相乗作用を持つ。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６３】
成長状態および基質に対するC3発現の作用
C3発現の作用をさらに詳しく調べるために、C3またはGFPを発現させる培養中の網膜外植片の成長を調べた。許容性ラミニン-ポリ-L-リジン基質において、GFPをトランスフェクトした対照RGCは伸長をほとんど示さず、C3発現は成長をわずかに増加させただけだった（図4）（p＜0.001）。4日前にGFPトランスフェクトRGCに軸索切断だけを施したところ、対照RGCと比較して中程度の再生増加が起こり（図4）（p＜0.001）（図1と比較されたい）、RGCがこの状態にある場合、C3トランスフェクションは成長を4.6倍増加させた（p＜0.001）（図4）。軸索切断を水晶体傷害と組み合わせると、軸索切断だけを施したRGCと比較して成長が14倍増加し、C3トランスフェクションがこの成長をさらに強化することはなかった（図4）。このように、外来の阻害物質が存在しない時、RhoAの不活化は、RGCの成長プログラムが活性化されない場合には小さな作用しか持たず、成長プログラムが軸索切断のみによって弱く活性化される場合には強く作用を持つが、RGCの成長プログラムが強く活性化される場合は追加作用を持たない。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６４】
ミエリンタンパク質を含有する基質上にプレーティングした場合、軸索切断および水晶体傷害を受けたRGCは、ポリ-L-リジン-ラミニン上よりもはるかに少ない成長を示した（図4）(p＜0.001）（Fischer et al., 2004参照）。これらの条件下で、C3発現は＞50μm再生する軸索の数を2.6倍増加させ（図4）（p＜0.02）、＞0.5mm成長する軸索の数を3.8倍増加させた（p＝0.001；非掲載データ）。このように、RGCが活性成長状態にある場合は、RhoA不活化（C3発現によるもの）はミエリンの阻害作用を克服する助けになる。