【手続補正書】
【提出日】平成19年1月11日(2007.1.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料中に存在する鋳型核酸の定量方法であって、下記工程：
i)核酸増幅反応に必要なすべての構成成分、および核酸増幅に関する生物発光アッセイに必要なすべての構成成分を試料と混合し、該構成成分は：
a)核酸ポリメラーゼ、
b)核酸ポリメラーゼの基質、
c)少なくとも２つのプライマー、
d)熱安定性ルシフェラーゼ、
e)ルシフェリン、
f)所望によりＡＴＰスルフリラーゼ(ATP sulphurylase)、および
g)所望によりアデノシン５’ホスホスルフェート(adenosine 5' phosphosulphate)を含み、
その後：
ii)１つ以上の増幅サイクルを含む標的核酸の核酸増幅反応を行い；
iii)生物発光反応の光出力強度をモニターし、次いで
iv)試料中に存在する鋳型核酸量を決定する
を含む方法。
【請求項２】
少なくとも工程ii)およびiii)を密封容器内で行う、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
工程iii)において、光出力強度を核酸増幅反応中にモニターする、請求項１或いは請求項２に記載の方法。
【請求項４】
さらに工程iii)が時間の関数として光出力強度のデータセットを作り出すことを含む、請求項１ないし３いずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
データセットから、光出力強度の変化率が有意に変化するポイントに到達するまでにかかる時間を測定することにより、存在する鋳型核酸量を決定する、請求項４ないし６いずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
工程ii)の核酸増幅反応の初めに試料中に存在する鋳型核酸量を決定するための、請求項１ないし４いずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
工程ii)の核酸増幅反応の結果として試料中に存在する鋳型核酸量を決定するための、請求項１ないし４いずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
データセットから、光出力強度が増大しはじめるポイントに到達するまでにかかる時間を測定することにより、存在する鋳型核酸量を決定する、請求項５ないし７いずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
データセットから、光出力強度が最大であるポイントに到達するまでにかかる時間を測定することにより、存在する鋳型核酸量を決定する、請求項５ないし７いずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
データセットから、光出力強度の減少率が増大するポイントに到達するまでにかかる時間を測定することにより、存在する鋳型核酸量を決定する、請求項５ないし７いずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
データセットから、光出力強度の減少率が減少するポイントに到達するまでにかかる時間を測定することにより、存在する鋳型核酸量を決定する、請求項５ないし７いずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
データセットから、光出力強度が規定レベルに到達する或いは超えるポイントに到達するまでにかかる時間を測定することにより、存在する鋳型核酸量を決定する、請求項５ないし７いずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
工程i)において試料と混合される熱安定性ルシフェラーゼが可逆的阻害ルシフェラーゼ（reversibly-inhibited luciferase)である、請求項８ないし１２いずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
工程iv)がさらに光出力強度をコントロールの光出力強度と比較することを含み、該工程において試料が既知量の鋳型核酸を含む、前記請求項いずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
鋳型核酸が試料中に存在するかどうかを決定するための、請求項１ないし１４いずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
データセットから、光出力強度が規定レベルに到達する或いは超えるかどうかを測定することにより、鋳型核酸が試料中に存在するかどうかを決定する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
規定レベルに対する光出力強度の増大が試料中の鋳型核酸の存在を示す、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
規定レベルに対する光出力強度の減少が試料中の鋳型核酸の存在を示す、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
データセットから、工程ii)の増幅反応の開始後の規定時間区間内に、光出力強度が規定レベルに到達する或いは超えるかどうかを測定することにより、鋳型核酸が試料中に存在するかどうかを決定する、請求項１６ないし１８いずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
工程iv)がさらに光出力強度を、全く増幅が起こっていないコントロールからの光出力強度と比較することを含む、前記請求項いずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
増幅が全く起こっていないコントロール反応に対する光出力強度の減少が、試料中の鋳型核酸の存在を示す、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
工程ii)の核酸増幅反応が、サイクリング温度範囲が７５℃を超えない低温度サーモサイクリング増幅法である、請求項１ないし２１いずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
工程ii)の核酸増幅反応が等温で行われる、請求項１ないし２１いずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
工程ii)の核酸増幅反応が７５℃を超えない温度範囲内で行われる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
工程ii)の核酸増幅反応が、増幅反応および生物発光アッセイの構成成分が安定である等温で行われる、請求項２３或いは請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
工程ii)の核酸増幅反応が、増幅反応および生物発光アッセイの構成成分が安定である温度範囲内の１つ以上の温度で行われる、請求項２３或いは請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
工程ii)の核酸増幅反応を高い温度で開始し、引き続いて低い温度に下げる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
医療診断で用いるための、前記請求項いずれかに記載の方法。
【請求項２９】
病原体が試料中に存在するかどうかを決定する場合に用いるための、前記請求項いずれかに記載の方法。
【請求項３０】
特定の核酸配列が生物の遺伝コード中に存在するかどうかを決定するための、前記請求項いずれかに記載の方法。
【請求項３１】
鋳型核酸を生成させる核酸が遺伝的に修飾されているかどうかを決定するための、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
生物が試料中に存在するかどうかを決定するための、請求項１ないし２７いずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
免疫−核酸増幅技法(immuno-nucleic acid amplification technology)で用いるための、請求項１ないし２７いずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記請求項いずれか１項に記載の方法で用いるためのキットであって、核酸ポリメラーゼ、核酸ポリメラーゼの基質、少なくとも２つのプライマー、熱安定性ルシフェラーゼ、ルシフェリン、および所望によりＡＴＰスルフリラーゼおよびアデノシン５’ホスホスルフェートを含むキット。
【請求項３５】
請求項１ないし３３いずれか１項に記載の方法で用いるためのキットであって、各々：
ａ）核酸ポリメラーゼ、マグネシウム源およびｄＮＴＰｓのバッファー混合物；および
ｂ）ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびＡＴＰスルフリラーゼ
を含む容器を含むキット。
【請求項３６】
キットの構成成分の少なくとも１つがキット中での貯蔵に適当な形態である、請求項３４或いは請求項３５に記載のキット。
【請求項３７】
請求項１ないし３２いずれか１項に記載の方法を行うための装置であって、請求項３４ないし３６いずれか１項に記載のキット中に存在する構成成分を混合する装置。