(57)【要約】  本発明は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、ＰＤ−Ｌ１への特異性を有する１つのドメインを含有する二重特異性抗体、及びＩＬ−２等のサイトカインと融合した抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む免疫サイトカインに関する。本発明はまた、抗体、二重特異性抗体、及び免疫サイトカインを含む、治療方法、使用、および医薬組成物を提供する。【選択図】【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１で規定されるｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、該ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合し、モチーフＸ１ＧＳＧＸ２ＹＧＸ３Ｘ４ＦＤ (式中、Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３は独立して任意のアミノ酸であり、Ｘ４は存在するか又は存在しないかのいずれかであり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得る)を含有するＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインを含んでなる、抗体又はその断片。
【請求項２】
Ｘ１がヒドロキシル含有アミノ酸であり、任意にＴであってもよい、請求項１に記載の抗体又は断片。
【請求項３】
Ｘ２が塩基性アミノ酸であり、任意Ｋであってもよい、請求項１又は２に記載の抗体又は断片。
【請求項４】
Ｘ２がヒドロキシル含有アミノ酸であり、任意にＳ又はＴであってもよい、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体または断片。
【請求項５】
Ｘ３が芳香族アミノ酸であり、任意にＷであってもよい、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体または断片。
【請求項６】
Ｘ４が存在しない、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項７】
Ｘ４が存在する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項８】
Ｘ４が脂肪族アミノ酸であり、任意にＧであってもよい、請求項７に記載の抗体又は断片。
【請求項９】
ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、該ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合し、配列番号２９若しくは３２のＣＤＲＨ３配列、又は６以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２９若しくは３２のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含んでなる、任意に請求項１〜８のいずれか一項に記載のものであってもよい、抗体又はその断片。
【請求項１０】
ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、１２〜２０アミノ酸のＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインを含んでなり、ヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントの組換えにより誘導され、ヒトＪＨ遺伝子セグメントがＩＧＨＪ５(例えば、ＩＧＨＪ５＊０２)である、抗体又は断片。
【請求項１１】
前記ヒトＶＨ遺伝子セグメントがＩＧＨＶ３(例えば、ＩＧＨＶ３−９＊０１のようなＩＧＨＶ３−９)である、請求項１０に記載の抗体又は断片。
【請求項１２】
ヒトＶκ遺伝子セグメント及びＪκ遺伝子セグメントの組換えにより誘導されたＶＬドメインを含んでなり、前記ヒトＶκ遺伝子セグメントがＩＧκＶ１Ｄ(例えば、ＩＧκＶ１Ｄ−３９＊０１のようなＩＧκＶ１Ｄ−３９)である、請求項１０又は１１に記載の抗体又は断片。
【請求項１３】
抗体１Ｄ０５が特異的に結合するエピトープと同一のエピトープに特異的に結合する抗体又はその断片。
【請求項１４】
前記エピトープが、非関連アミノ酸スキャン又はＸ線結晶構造解析によって同定される、請求項１３に記載の抗体又は断片。
【請求項１５】
前記エピトープの接触残基が、ＳＰＲによって測定されるときに、非関連アミノ酸スキャン、例えばアラニンスキャンにおける親和性の少なくとも１/１０以下への低減によって規定される、請求項１４に記載の抗体又は断片。
【請求項１６】
ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合する抗体又はその断片。
【請求項１７】
前記ＶＨドメインが配列番号２９若しくは３２のＣＤＲＨ３配列、又は６以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２９若しくは３２のＣＤＲＨ３配列を含んでなる、請求項１０〜１６のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項１８】
前記ＶＨドメインが配列番号２７若しくは３０のＣＤＲＨ１配列、又は３、２、若しくは１つのアミノ酸置換を含有する配列番号２７若しくは３０のＣＤＲＨ１配列を含んでなる、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項１９】
前記ＶＨドメインが配列番号２８若しくは３１のＣＤＲＨ２配列、又は４以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２８若しくは３１のＣＤＲＨ２配列を含んでなる、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項２０】
前記ＶＨドメインが配列番号３３のアミノ酸配列、又は配列番号３３と少なくとも８０％(例えば、少なくとも８５％又は少なくとも９０％)同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項２１】
前記ＶＨドメインの第１及び第２のコピーを含む請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項２２】
配列番号３７若しくは４０のＣＤＲＬ１配列、又は３以下のアミノ酸置換を含有する配列番号３７若しくは４０のＣＲＤＬ１配列を含むＶＬドメインを含んでなる請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項２３】
配列番号３８若しくは４１のＣＤＲＬ２配列、又は２若しくは１つのアミノ酸置換を含有する配列番号３８若しくは４１のＣＲＤＬ２配列(例えば配列番号５０のＣＤＲＬ２配列)を含むＶＬドメインを含んでなるか、又は前記ＶＬドメインが配列番号３８若しくは４１のＣＤＲＬ２配列又は２若しくは１つのアミノ酸置換を含有する配列番号３８若しくは４１のＣＲＤＬ２配列(例えば配列番号５０のＣＤＲＬ２配列)を含んでなる、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項２４】
配列番号３９若しくは４２のＣＤＲＬ３配列、又は４以下のアミノ酸置換を含有する配列番号３９若しくは４２のＣＲＤＬ３配列を含むＶＬドメインを含んでなるか、又は前記ＶＬドメインが配列番号３９若しくは４２のＣＤＲＬ３配列又は４以下のアミノ酸置換を含有する配列番号３９若しくは４２のＣＲＤＬ３配列を含むＶＬドメインを含んでなる、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項２５】
配列番号４３のアミノ酸配列、又は配列番号４３と少なくとも８０％(例えば、少なくとも８５％又は少なくとも９０％)同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列(例えば、配列番号５０、５１、又は２９８の軽鎖配列中のＶＬドメイン配列)を含むＶＬドメインを含んでなるか、又は前記ＶＬドメインが配列番号４３のアミノ酸配列、又は配列番号４３と少なくとも８０％(例えば、少なくとも８５％又は少なくとも９０％)同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列(例えば、配列番号５０、５１、又は２９８の軽鎖配列中のＶＬドメイン配列)を含むＶＬドメインを含んでなる、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項２６】
ＶＬドメイン又は前記ＶＬドメインの第１及び第２のコピーを含む請求項１２〜２１のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項２７】
配列番号２で規定されるカニクイザルＰＤ−Ｌ１に特異的に結合す、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項２８】
カッパ軽鎖を含む請求項１〜２７のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項２９】
前記アミノ酸置換が保存的アミノ酸置換であり、任意に、前記保存的置換が、
１)アラニン(Ａ)、セリン(Ｓ)、トレオニン(Ｔ)、
２)アスパラギン酸(Ｄ)、グルタミン酸(Ｅ)、
３)アスパラギン(Ｎ)、グルタミン(Ｑ)、
４)アルギニン(Ｒ)、リシン(Ｋ)、
５)イソロイシン(Ｉ)、ロイシン(Ｌ)、メチオニン(Ｍ)、バリン(Ｖ)、及び
６)フェニルアラニン(Ｆ)、チロシン(Ｙ)、トリプトファン(Ｗ)
から選択される６群(各群は、互いに保存的置換であるアミノ酸を含む)のうちの１つからのものであってもよい、請求項９〜２８のいずれか一項に抗体又は断片。
【請求項３０】
定常領域、例えばヒト定常領域、例えばエフェクターヌルヒト定常領域、例えばＩｇＧ４定常領域又はＩｇＧ１定常領域を含んでなり、任意に、前記定常領域が、ＩｇＧ４−ＰＥ(配列番号１９９)、又は配列番号２０５に規定される欠損ＩｇＧ１であってもよい、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項３１】
前記定常領域がマウス定常領域である、請求項３０に記載の抗体又は断片。
【請求項３２】
前記定常領域がＣＤＣ及び/又はＡＤＣＣ活性を有する、請求項３０又は３１に記載の抗体又は断片。
【請求項３３】
ａ)前記ＶＨドメインが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、記ＶＬドメインが配列番号４３のアミノ酸配列を含む、
ｂ)前記ＶＨドメインが配列番号３３と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号４３と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｃ)前記ＶＨドメインが配列番号４７のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号４３のアミノ酸配列を含む、
ｄ)前記ＶＨドメインが配列番号４８のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号４３のアミノ酸配列を含む、
ｅ)前記ＶＨドメインが配列番号４９のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号４３のアミノ酸配列を含む、
ｆ)前記ＶＨドメインが配列番号３４２のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号４３のアミノ酸配列を含む、
ｇ)前記ＶＨドメインが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号５０のＶＬドメインのアミノ酸配列を含む、
ｈ)前記ＶＨドメインが配列番号４７のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号５０のＶＬドメインのアミノ酸配列を含む、
ｉ)前記ＶＨドメインが配列番号４８のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号５０のＶＬドメインのアミノ酸配列を含む、
ｊ)前記ＶＨドメインが配列番号４９のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号５０のＶＬドメインのアミノ酸配列を含む、
ｋ)前記ＶＨドメインが配列番号３４２のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号５０のＶＬドメインのアミノ酸配列を含む、
ｌ)前記ＶＨドメインが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号５１のＶＬドメインのアミノ酸配列を含む、
ｍ)前記ＶＨドメインが配列番号４７のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号５１のＶＬドメインのアミノ酸配列を含む、
ｎ)前記ＶＨドメインが配列番号４８のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号５１のＶＬドメインのアミノ酸配列を含む、
ｏ)前記ＶＨドメインが配列番号４９のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号５１のＶＬドメインのアミノ酸配列を含む、
ｐ)前記ＶＨドメインが配列番号３４２のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号５１のＶＬドメインのアミノ酸配列を含む、
ｑ)前記ＶＨドメインが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号２９８のＶＬドメインのアミノ酸配列を含む、
ｒ)前記ＶＨドメインが配列番号４７のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号２９８のＶＬドメインのアミノ酸配列を含む、
ｓ)前記ＶＨドメインが配列番号４８のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号２９８のＶＬドメインのアミノ酸配列を含む、
ｔ)前記ＶＨドメインが配列番号４９のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号２９８のＶＬドメインのアミノ酸配列を含む、
ｕ)前記ＶＨドメインが配列番号３４２のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号２９８のＶＬドメインのアミノ酸配列を含む、
ｖ)前記ＶＨドメインが配列番号５８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号６８のアミノ酸配列を含む、
ｗ)前記ＶＨドメインが配列番号５８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号６８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｘ)前記ＶＨドメインが配列番号７８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号８８のアミノ酸配列を含む、
ｙ)前記ＶＨドメインが配列番号７８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号８８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｚ)前記ＶＨドメインが配列番号９８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、
ａａ)前記ＶＨドメインが配列番号９８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号１０８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｂｂ)前記ＶＨドメインが配列番号１１８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号１２８のアミノ酸配列を含む、
ｃｃ)前記ＶＨドメインが配列番号１１８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号１２８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｄｄ)前記ＶＨドメインが配列番号１５８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号１６８のアミノ酸配列を含む、
ｅｅ)前記ＶＨドメインが配列番号１５８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号１６８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｆｆ)前記ＶＨドメインが配列番号１７８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号１８８のアミノ酸配列を含む、
ｇｇ)前記ＶＨドメインが配列番号１７８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号１８８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｈｈ)前記ＶＨドメインが配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号１４８のアミノ酸配列を含む、
ｉｉ)前記ＶＨドメインが配列番号１３８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号１４８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｊｊ)前記ＶＨドメインが配列番号２４４のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号２５４のアミノ酸配列を含む、
ｋｋ)前記ＶＨドメインが配列番号２４４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号２５４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｌｌ)前記ＶＨドメインが配列番号２６４のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号２７４のアミノ酸配列を含む、
ｍｍ)前記ＶＨドメインが配列番号２６４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号２７４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｎｎ)前記ＶＨドメインが配列番号２８４のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号２９４のアミノ酸配列を含む、
ｏｏ)前記ＶＨドメインが配列番号２８４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号２９４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｐｐ)前記ＶＨドメインが配列番号３４９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号３５９のアミノ酸配列を含む、及び、
ｑｑ)前記ＶＨドメインが配列番号３４９と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号３５９と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３４】
重鎖及び軽鎖を含んでなり、
ｒｒ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号４５のアミノ酸配列を含む、
ｓｓ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号３５と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号４５と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｔｔ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号４５のアミノ酸配列を含む、
ｕｕ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号４８のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号４５のアミノ酸配列を含む、
ｖｖ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号４５のアミノ酸配列を含む、
ｗｗ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号３４２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号４５のアミノ酸配列を含む、
ｘｘ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、
ｙｙ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、
ｚｚ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号４８のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、
ａａａ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、
ｂｂｂ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号３４２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号５０のアミノ酸配列を含む、
ｃｃｃ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号５１のアミノ酸配列を含む、
ｄｄｄ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号５１のアミノ酸配列を含む、
ｅｅｅ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号４８のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号５１のアミノ酸配列を含む、
ｆｆｆ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号５１のアミノ酸配列を含む、
ｇｇｇ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号３４２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号５１のアミノ酸配列を含む、
ｈｈｈ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号２９８のアミノ酸配列を含む、
ｉｉｉ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号２９８のアミノ酸配列を含む、
ｊｊｊ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号４８のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号２９８のアミノ酸配列を含む、
ｋｋｋ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号２９８のアミノ酸配列を含む、
ｌｌｌ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号３４２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号２９８のアミノ酸配列を含む、
ｍｍｍ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号６０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号７０のアミノ酸配列を含む、
ｎｎｎ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号６０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号７０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｏｏｏ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号８０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号９０のアミノ酸配列を含む、
ｐｐｐ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号８０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号９０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｑｑｑ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号１００のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号１１０のアミノ酸配列を含む、
ｒｒｒ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号１００と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号１１０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｓｓｓ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号１３０のアミノ酸配列を含む、
ｔｔｔ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号１２０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号１３０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｕｕｕ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号１６０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号１７０のアミノ酸配列を含む、
ｖｖｖ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号１６０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号１７０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｗｗｗ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号１８０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号１９０のアミノ酸配列を含む、
ｘｘｘ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号１８０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号１９０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｙｙｙ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号１４０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号１５０のアミノ酸配列を含む、
ｚｚｚ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号１４０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号１５０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ａａａａ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号２４６のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号２５６のアミノ酸配列を含む、
ｂｂｂｂ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号２４６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号２５６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｃｃｃｃ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号２６６のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号２７６のアミノ酸配列を含む、
ｄｄｄｄ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号２６６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号２７６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｅｅｅｅ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号２８６のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号２９６のアミノ酸配列を含む、
ｆｆｆｆ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号２８６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号２９６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｇｇｇｇ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号３５１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号３６１のアミノ酸配列を含む、及び、
ｈｈｈｈ)前記重鎖アミノ酸配列が配列番号３５１と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖アミノ酸配列が配列番号３６１と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３５】
ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合し、任意に、ｈＰＤＬ−１への結合についての前記競合はＳＰＲを使用して行われてもよい、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項３６】
ＰＤ−Ｌ１媒介性Ｔ細胞抑制を阻害することができ、任意に、前記Ｔ細胞抑制が、直接ＣＤ３/ＣＤ２８刺激若しくは超抗原刺激による同時刺激を提供するか又はＴ細胞応答を誘導することができる細胞との共インキュベーションによる同時刺激を提供するアッセイにおける、ＩＦＮγ、ＩＬ−２、ＣＤ２５、又はＴ細胞増殖の１つ以上の増加によって測定される、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項３７】
請求項１〜３６のいずれか一項に記載の抗体又はその断片を含む二重特異性抗体又は融合タンパク質。
【請求項３８】
二重特異性フォーマットが、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｍＡｂ２、ＦＩＴ−Ｉｇ、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック(ｄｏｃｋ  ａｎｄ  ｌｏｃｋ)、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｄｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｔａｎｄｅｍ  ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、ミニボディ、ノブ・イン・ホール、共通軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖及び電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、特にｍＡｂ２、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖及び電荷対を有するノブ・イン・ホール、及びＦＩＴ−Ｉｇから、例えばｍＡｂ２及びＦＩＴ−Ｉｇから選択される、請求項３７に記載の二重特異性抗体。
【請求項３９】
ｈＰＤ−Ｌ１と、免疫チェックポイント阻害剤(例えば、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、及びＶＩＳＴＡ、例えば、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、及びＬＡＧ−３)、免疫調節剤(例えば、ＢＴＬＡ、ｈＨＶＥＭ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ４、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７３、ＣＤ９６、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ２００、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＤ１５５、及びＣＤ１３７、例えば、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＲ４、ＢＴＬＡ、ｈＶＥＭ、及びＣＳＦ１Ｒ)、免疫賦活剤(例えば、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＣＸＣＲ３(例えば、アゴニスティック抗ＣＸＣＲ３抗体)、ＣＤ３、ＣＤ２７、及びＩＣＯＳ(例えば、アゴニスティック抗ＩＣＯＳ抗体)から、例えば、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、及びＯＸ４０から選択される別の標的抗原とに特異的に結合する請求項３７又は３８に記載の二重特異性抗体。
【請求項４０】
前記別の標的抗原がＴＩＧＩＴ又はＬＡＧ３である、請求項３９に記載の二重特異性抗体。
【請求項４１】
ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患又は病的状態、例えば、腫瘍性若しくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、及び悪性腫瘍、例えば黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌(扁平上皮及び非扁平上皮)、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌(例えば子宮頸癌及び上咽頭癌)、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキン及び非ホジキン病、及びびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫(例えば、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌(扁平上皮及び非扁平上皮)、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、及び中皮腫、又は例えばウイルス誘導性癌(例えば子宮頸癌及び上咽頭癌)及び軟部肉腫)から選択されるｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患又は病的状態の治療又は予防における使用のための請求項１〜４０のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
【請求項４２】
ヒトにおけるｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患又は病的状態、例えば、腫瘍性若しくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、及び悪性腫瘍、例えば黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌(扁平上皮及び非扁平上皮)、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌(例えば子宮頸癌及び上咽頭癌)、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキン及び非ホジキン病、及びびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫(例えば、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌(扁平上皮及び非扁平上皮)、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、及び中皮腫、又は例えばウイルス誘導性癌(例えば子宮頸癌及び上咽頭癌)及び軟部肉腫)から選択されるｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患又は病的状態を治療又は予防するために前記ヒトへ投与する医薬品の製造における、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の抗体又は断片の使用。
【請求項４３】
治療有効量の請求項１〜４０のいずれか一項に記載の抗体又は断片をヒトに投与することにより、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患又は病的状態を治療又は予防することを含んでなる、ヒトにおけるｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患又は病的状態、例えば、腫瘍性若しくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、及び悪性腫瘍、例えば黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌(扁平上皮及び非扁平上皮)、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌(例えば子宮頸癌及び上咽頭癌)、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキン及び非ホジキン病、及びびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫(例えば、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌(扁平上皮及び非扁平上皮)、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、及び中皮腫、又は例えばウイルス誘導性癌(例えば子宮頸癌及び上咽頭癌)及び軟部肉腫)から選択されるｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患又は病的状態を治療又は予防する方法。
【請求項４４】
前記ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患又は病的状態が癌である、請求項４１に記載の抗体若しくは断片、請求項４２に記載の使用、又は請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記癌が黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌(扁平上皮及び非扁平上皮)、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、及び中皮腫から選択されるか、又はウイルス誘導性癌(例えば子宮頸癌及び上咽頭癌)及び軟部肉腫から選択される、請求項４４に記載の抗体若しくは断片、使用、又は方法。
【請求項４６】
前記ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患又は病的状態が、例えば、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、一次性進行型多発性硬化症、二次性進行型多発性硬化症、大脳皮質基底核変性症、レット症候群、加齢黄斑変性及び網膜色素変性症から選択される網膜変性障害、前部虚血性視神経症、緑内障、ブドウ膜炎、うつ病、外傷関連ストレス又は心的外傷後ストレス障害、前頭側頭型認知症、レビー小体型認知症、軽度認知障害、後皮質萎縮、原発性進行性失語及び進行性核上性麻痺又は加齢認知症から選択される神経変性疾患、障害、又は病的状態であり、特に、アルツハイマー病、筋委縮性側索硬化症、パーキンソン病、及びハンチントン病から選択され、例えば、アルツハイマー病である、請求項４１に記載の抗体若しくは断片、請求項４２に記載の使用、又は請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
さらなる療法を前記ヒトに施術すること、例えば治療剤を前記ヒトに投与することをさらに含んでなり、任意に、前記さらなる治療剤は、
ａ)他の免疫チェックポイント阻害剤(例えば、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、及び抗ＬＡＧ−３抗体)、
ｂ)免疫刺激剤(例えば、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、及び抗ＣＤ４０抗体)、
ｃ)ケモカイン受容体アンタゴニスト(例えば、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ４、及びＣＸＣＲ２)、
ｄ)標的化キナーゼ阻害剤(例えば、ＣＳＦ−１Ｒ若しくはＶＥＧＦＲ阻害剤)、
ｅ)血管新生阻害剤(例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ若しくはデルタ様リガンド４)、
ｆ)免疫刺激ペプチド若しくはケモカイン(例えば、ＣＸＣＬ９若しくはＣＸＣＬ１０)、
ｇ)サイトカイン(例えば、ＩＬ−１５及びＩＬ−２１)、
ｈ)ＣＤ３に対して少なくとも１つの特異性を有する二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー(ＢｉＴＥ)(例えば、ＣＤ３/ＣＤ１９  ＢｉＴＥ)、
ｉ)他の二重特異性分子(例えば、腫瘍関連抗原を標的とするＩＬ−１５含有分子、例えば、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ−２、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｃａｎｃｅｒ−１(ＮＹ−ＥＳＯ−１)、ＧＤ２、ＥｐＣＡＭ、若しくは黒色腫関連抗原−３(ＭＡＧＥ−Ａ３)などの上皮成長因子受容体)、
ｊ)腫瘍溶解性ウイルス(例えば、ＨＳＶウイルス(任意選択でＧＭＣＳＦを分泌する)、ニューカッスル病ウイルス、及びワクシニアウイルス)、
ｋ)腫瘍関連抗原(例えば、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｃａｎｃｅｒ−１［ＮＹ−ＥＳＯ−１］、黒色腫関連抗原−３(ＭＡＧＥ−３))によるワクチン接種、
ｌ)細胞療法(例えば、抗ＣＤ１９、抗ＥｐＣａｍ、若しくは抗メソテリンを発現するキメラ抗原受容体Ｔ細胞(ＣＡＲ−Ｔ)など)、
ｍ)活性化ＭＫ受容体(例えば、ＮＫＧ２Ｄ若しくはＣＤ１６ａ)に対する特異性を有する二重特異性ＮＫ細胞エンゲージャー、並びに
ｎ)腫瘍特異的Ｔ細胞又はＬＡＫ細胞の養子移入、
からなる群から独立して選択されてもよく、
又は任意に、前記さらなる療法が化学療法、放射線療法、及び腫瘍の外科的切除であってもよい、請求項４１〜４６のいずれか一項に記載の抗体若しくは断片、使用、又は方法。
【請求項４８】
請求項１〜４０のいずれか一項に記載の抗体又は断片と、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、又は担体とを含んでなり、任意に、
Ａ)他の免疫チェックポイント阻害剤(例えば、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、及び抗ＬＡＧ−３抗体)、
Ｂ)免疫刺激剤(例えば、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、及び抗ＣＤ４０抗体)、
Ｃ)ケモカイン受容体アンタゴニスト(例えば、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ４、及びＣＸＣＲ２)、
Ｄ)標的化キナーゼ阻害剤(例えば、ＣＳＦ−１Ｒ若しくはＶＥＧＦＲ阻害剤)、
Ｅ)血管新生阻害剤(例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａ若しくはデルタ様リガンド４)、
Ｆ)免疫刺激ペプチド若しくはケモカイン(例えば、ＣＸＣＬ９若しくはＣＸＣＬ１０)、
Ｇ)サイトカイン(例えば、ＩＬ−１５及びＩＬ−２１)、
Ｈ)ＣＤ３に対して少なくとも１つの特異性を有する二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー(ＢｉＴＥ)(例えば、ＣＤ３/ＣＤ１９  ＢｉＴＥ)、
Ｉ)他の二重特異性分子(例えば、腫瘍関連抗原を標的するＩＬ−１５含有分子、例えば、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ−２、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｃａｎｃｅｒ−１(ＮＹ−ＥＳＯ−１)、ＧＤ２、ＥｐＣＡＭ、若しくは黒色腫関連抗原−３(ＭＡＧＥ−Ａ３)などの上皮成長因子受容体)、
Ｊ)腫瘍溶解性ウイルス(例えば、ＨＳＶウイルス(任意に、ＧＭＣＳＦを分泌するＨＳＶウイルス)、ニューカッスル病ウイルス、及びワクシニアウイルス)、
Ｋ)腫瘍関連抗原(例えば、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｃａｎｃｅｒ−１［ＮＹ−ＥＳＯ−１］、黒色腫関連抗原−３(ＭＡＧＥ−３))によるワクチン接種、
Ｌ)細胞療法(例えば、抗ＣＤ１９、抗ＥｐＣａｍ、若しくは抗メソテリンを発現するキメラ抗原受容体Ｔ細胞(ＣＡＲ−Ｔ)など)、
Ｍ)活性化ＭＫ受容体(例えば、ＮＫＧ２Ｄ若しくはＣＤ１６ａ)に対する特異性を有する二重特異性ＮＫ細胞エンゲージャー、並びに
Ｎ)腫瘍特異的Ｔ細胞又はＬＡＫ細胞の養子移入、からなる群から独立して選択されるさらなる治療剤をさらに含んでいてもよい医薬組成物。
【請求項４９】
前記組成物が、ｈＰＤ−ＬＩ媒介性病的状態又は疾患、例えば、腫瘍性若しくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、及び悪性腫瘍、例えば黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌(扁平上皮及び非扁平上皮)、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌(例えば子宮頸癌及び上咽頭癌)、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキン及び非ホジキン病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫から選択されるｈＰＤ−ＬＩ媒介性病的状態又は疾患を治療及び/又は予防するためのものである、請求項４８に記載の医薬組成物、又は請求項４８に記載の医薬組成物を含むキット。
【請求項５０】
前記組成物が、神経変性疾患、障害、又は病的状態、例えば、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、一次性進行型多発性硬化症、二次性進行型多発性硬化症、大脳皮質基底核変性症、レット症候群、加齢黄斑変性及び網膜色素変性症から選択される網膜変性障害、前部虚血性視神経症、緑内障、ブドウ膜炎、うつ病、外傷関連ストレス又は心的外傷後ストレス障害、前頭側頭型認知症、レビー小体型認知症、軽度認知障害、後皮質萎縮、原発性進行性失語及び進行性核上性麻痺又は加齢認知症から選択される神経変性疾患、障害、又は病的状態、特に、アルツハイマー病、筋委縮性側索硬化症、パーキンソン病、及びハンチントン病から選択される神経変性疾患、障害、又は病的状態、例えば、アルツハイマー病を治療及び/又は予防するためのものである、請求項４８に記載の医薬組成物、又は請求項４８に記載の医薬組成物を含むキット。
【請求項５１】
ヒトにおける前記疾患又は病的状態の治療及び/若しくは予防に使用するためのラベル若しくは説明書と組み合わされ、任意に、該ラベル又は説明書は販売承認番号(例えば、ＦＤＡ又はＥＭＡ承認番号)を含んでいてもよい、請求項４８、４９若しくは５０に記載の医薬組成物、又は、ヒトにおける前記疾患又は病的状態の治療及び/若しくは予防に使用するためのラベル若しくは説明書を含んでなり、任意に、前記抗体又は断片を含むＩＶ又は注射用デバイスを含んでなってもよい請求項４９若しくは５０に記載のキット。
【請求項５２】
有効量の請求項１〜４０のいずれか一項に記載の抗体又は断片を患者に投与することを含んでなる、患者におけるＰＤ−１/ＰＤ−Ｌ１相互作用を調節する方法。
【請求項５３】
有効量の請求項１〜４０のいずれか一項に記載の抗体又は断片を患者に投与することを含んでなる、患者におけるＰＤ−Ｌ１活性を阻害する方法。
【請求項５４】
有効量の請求項１〜４０のいずれか一項に記載の抗体又は断片を患者に投与することを含んでなる、動物(例えば、ヒト)における増殖性疾患を治療する方法。
【請求項５５】
請求項１〜４０のいずれか一項に記載の抗体又は断片のＣＤＲＨ３をコードする核酸。
【請求項５６】
請求項１〜４０のいずれか一項に記載の抗体又は断片のＶＨドメイン及び/又はＶＬドメインをコードする核酸。
【請求項５７】
配列番号３６及び/又は配列番号４６と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む請求項５６に記載の核酸。
【請求項５８】
請求項１〜４０のいずれか一項に記載の抗体の重鎖又は軽鎖をコードする核酸。
【請求項５９】
請求項５５〜５８のいずれか一項に記載の核酸を含んでなり、任意に、ＣＨＯ又はＨＥＫ２９３ベクターであってもよいベクター。
【請求項６０】
請求項５５〜５８のいずれか一項に記載の核酸又は請求項５９に記載のベクターを含んでなる宿主。
【請求項６１】
免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖を含み、モチーフＸ１ＧＳＧＸ２ＹＧＸ３Ｘ４ＦＤ (式中、Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３は独立して任意のアミノ酸であり、Ｘ４は存在するか又は存在しないかのいずれかであり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得る)を含有するＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインを含んでなり、前記重鎖が、Ｎ末端→Ｃ末端方向に、
ｏ)ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインと、
ｐ)重鎖定常領域と
を含み、前記軽鎖が、Ｎ末端→Ｃ末端方向に、
ｑ)ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含むＶＬドメインと、
ｒ)軽鎖定常領域(ＣＬ)と、
ｓ)任意に、リンカー(Ｌ)と、
ｔ)ＩＬ−２サイトカインと
を含み、前記ＶＨドメイン及びＶＬドメインが、配列番号１で規定されるｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、該ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合する抗原結合部位により構成される、免疫サイトカイン。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
抗体およびその抗体を使用する方法が記載される。特に、ヒトＰＤ−Ｌ１抗原に特異的に結合する抗体、および様々な疾患の治療におけるそれらの使用が記載される。
【背景技術】
【０００２】
免疫サイトカイン（抗体−サイトカイン融合タンパク質）は、１９９０年代初期の文献において最初に報告され、リンホトキシン（ＴＮＦ−α）またはインターロイキン２（ＩＬ−２）等のサイトカインとの全抗体融合からなっていた。マウスにおけるＧＤ２発現腫瘍モデルの後続の研究は、ｃｈ１４．１８抗体およびｃｈ１４．１８−ＩＬ２免疫サイトカインの両方が抗腫瘍活性を有したが、遊離ＩＬ−２と組み合わせたときでさえも免疫サイトカインが抗体よりもはるかに強力であることを示した（Ｓａｂｚｅｖａｒｉ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９４，９１：９６２６−３０、Ｐａｎｃｏｏｋ  ＪＤ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，１９９６，４２：８８−９２、Ｂｅｃｋｅｒ  ＪＣ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９６，９３：２７０２−７を参照されたい）。さらに、免疫サイトカインで処置されたが抗体およびＩＬ−２では処置されていない免疫応答性マウスは、ＣＤ８＋  Ｔ細胞に依存する適応免疫応答を発達させ、これはその後の腫瘍負荷を防止した（Ｂｅｃｋｅｒ  ＪＣ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９６，１８３：２３６１−６、Ｂｅｃｋｅｒ  ＪＣ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９６，９３：７８２６−３１）。このように、腫瘍微小環境へのＩＬ−２の標的化は、単独で、または遊離サイトカインと一緒に、抗体では不可能である抗腫瘍ワクチン効果を誘導する。関連するヒト化免疫サイトカインｈｕ  １４．１８−ＩＬ２は、単独療法として再発性の非巨大神経芽腫における臨床的な概念証明を果たし、他の治療選択のない患者において有意な数の完全奏功を誘導した（Ｓｈｕｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１０，２８（３３），４９６９−４９７５）。いくつかの刊行物は、この分子が免疫系のいくつかの成分を活性化させて腫瘍細胞（特に、ＮＫ細胞およびＣＤ８＋  Ｔ細胞）を殺滅し、その後の腫瘍負荷に抵抗するためにＴ細胞メモリーを発達させる能力について記載している（Ｙａｍａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．２００９；Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉ，Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ，１８（７）：９９１−１０００、Ｎｅａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１０１０，４８３９−４８４７）。
【０００３】
ＩＬ−２に基づく免疫サイトカインは著しい副作用を有し得るため、近年は効能を維持しながら毒性を低減させることに努力の焦点が当てられている。一例はセレクチン（ＥＭＤ  ５２１８７３）であり、これは、ＩＬ−２Ｒβの結合における重要な残基であるＩＬ−２の２０位のトレオニンについてアスパラギン酸の置換を有する（Ｇｉｌｌｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１１，１７（１１），３６７３−３６８５）。壊死組織に結合するセレクチンは、第Ｉ相試験における、中間ＩＬ−２Ｒを上回る高親和性ＩＬ−２Ｒに対するその選択性、および良好な忍容性にもかかわらず、良好な抗腫瘍活性を有することが示されている（Ｌａｕｒｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１３，１１（１），５．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８６／１４７９−５８７６−１１−５）。
【０００４】
ＷＯ２０１２／１７８１３７（Ｇｉｌｌｉｅｓ）および関連する雑誌論文（Ｇｉｌｌｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，２０１３，２６（１０），５６１−５６９）は、腫瘍標的化抗体との軽鎖免疫サイトカイン融合について、およびＩＬ−２Ｒβγを通したシグナル伝達を減少させるサイトカインのＮ末端部分におけるトランケーションの導入によるＩＬ−２活性の調節について記載している。ＩＬ−２Ｒβγを特異的に標的とするＩＬ−２融合タンパク質は、野生型（Ｖａｓｑｕｅｚ−Ｌｏｍｂａｒｄｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｃｏｍｍ，２０１７，ＤＯＩ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ１５３７３）と比較して増加した毒性を有することが示されており、これは、ＩＬ−２Ｒβγ結合を減少させることが副作用の点で有益であり得るという概念を支持する。
【０００５】
適応免疫応答は、Ｔ細胞およびＢ細胞と呼ばれる２つの主要クラスのリンパ球の活性化、選択、およびクローン増殖を含む。抗原に遭遇した後、Ｔ細胞は増殖し、抗原特異的エフェクター細胞に分化する一方、Ｂ細胞は増殖し、抗体分泌細胞に分化する。Ｔ細胞活性化は、Ｔ細胞と抗原提示細胞（ＡＰＣ）との間のいくつかのシグナル伝達事象を必要とする多段階プロセスである。Ｔ細胞活性化が起こるためには、休止Ｔ細胞に２種類のシグナルを送達しなければならない。第１の種類は、抗原特異的Ｔ細胞受容体（ＴｃＲ）によって媒介され、免疫応答に対する特異性を付与する。第２のシグナルである共刺激型シグナルは、応答の大きさを制御し、Ｔ細胞上のアクセサリー受容体を介して送達される。
【０００６】
一次共刺激シグナルは、そのリガンドＢ７−１またはＢ７−２の関与の際に、活性化ＣＤ２８受容体を介して送達される。対照的に、同じＢ７−１またはＢ７−２リガンドによる抑制性ＣＴＬＡ−４受容体の関与は、Ｔ細胞応答の減弱をもたらす。したがって、ＣＴＬＡ−４シグナルはＣＤ２８によって媒介される共刺激に拮抗する。高抗原濃度では、ＣＤ２８の共刺激は、ＣＴＬＡ−４の阻害効果を無効にする。ＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４発現の一次的な制御は、自己免疫の発達を保護しながら、活性化シグナルと阻害シグナルとの間のバランスを維持し、有効な免疫応答の発達を確実にする。
【０００７】
プログラム死１（ＰＤ−１）は、ＣＤ２８ファミリーのメンバーである５０〜５５ｋＤａのＩ型膜貫通受容体である。ＰＤ−１は、Ｔ細胞活性化の制御に関与し、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および骨髄細胞上に発現される。ＰＤ−１に対する２つのリガンドであるＰＤリガンド１（ＰＤ−Ｌ１）およびリガンド２（ＰＤ−Ｌ２）が同定されており、これらは共刺激特性を有する。
【０００８】
分化のクラスター（ＣＤ２７４）またはＢ７ホモログ１（Ｂ７−Ｈ１）としても知られているプログラム細胞死１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）は、ＰＤ−１受容体の活性化または阻害を調節するＢ７ファミリーのメンバーである。ＰＤ−Ｌ１のオープンリーディングフレームは、２つの細胞外Ｉｇドメイン（Ｎ末端Ｖ様ドメインおよびＩｇ  Ｃ様ドメイン）と、疎水性膜貫通ドメインと、３０アミノ酸の細胞質側末端とを含む、２９０アミノ酸の推定１型膜貫通タンパク質をコードする。３０アミノ酸の細胞内（細胞質）ドメインは、明らかなシグナル伝達モチーフを含まないが、タンパク質キナーゼＣリン酸化の潜在的部位を有する。
【０００９】
ＰＤ−Ｌ１の完全なアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ参照配列ＮＰ＿０５４８６２．１（配列番号１）に見出すことができ、これは、例えば、Ｄｏｎｇ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９９），「ＰＤ−Ｌ１，ａ  ｔｈｉｒｄ  ｍｅｍｂｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂ７  ｆａｍｉｌｙ，ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ」  Ｎａｔ．「Ｍｅｄ．」５（１２），１３６５−１３６９を含む多くの雑誌論文に言及する。ＰＤ−Ｌ１遺伝子は、チンパンジー、アカゲザル、イヌ、ウシ、マウス、ラット、ニワトリ、およびゼブラフィッシュにおいて保存されている。ＰＤ−Ｌ１のマウス形態は、ＰＤ−Ｌ１のヒト形態と６９％のアミノ酸同一性を有し、また保存構造も共有する。
【００１０】
ヒトにおいて、ＰＤ−Ｌ１は、活性化およびアネルギー性／枯渇Ｔ細胞を含むいくつかの免疫細胞型上、ナイーブおよび活性化Ｂ細胞上、ならびに骨髄樹状細胞（ＤＣ）、単球、およびマスト細胞上に発現される。ＰＤ−Ｌ１はまた、膵島、肝臓のクッパー細胞、血管内皮および選択された上皮、例えば気道上皮および尿細管上皮を含む非免疫細胞上で発現され、その発現は炎症エピソード中に増強される。ＰＤ−Ｌ１発現はまた、乳癌（トリプルネガティブ乳癌および炎症性乳癌を含むがこれらに限定されない）、卵巣癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌を含む肺癌、腎細胞癌腫を含む腎癌、胃癌、食道癌、膀胱癌、肝細胞癌、頭頸部の扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、ならびに膵臓癌、黒色腫、およびブドウ膜黒色腫を含むいくつかの腫瘍上で増加したレベルで見出された。
【００１１】
ＰＤ−１  ／  ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達は、Ｔ細胞応答を負に制御することによって、免疫系内で重大な非重複機能を果たすと考えられている。この制御は、胸腺におけるＴ細胞の発生、慢性炎症反応の制御、ならびに末梢寛容および免疫特権の両方の維持に関与する。ＰＤ−Ｌ１の上方制御は、癌が宿主免疫系を回避することを可能にし得、多くの癌において、ＰＤ−Ｌ１の発現は、生存率の低下および予後不良に関連付けられる。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路を遮断することができる治療用モノクローナル抗体は、癌患者の抗腫瘍免疫応答を増強し得る。公開された臨床データは、臨床応答とＰＤ−Ｌ１の腫瘍膜性発現との間の相関関係（Ｂｒａｈｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１０，Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＮＥＪＭ，２０１２）、および臨床応答の欠如と、膜に局在化したＰＤ−Ｌ１タンパク質の欠如との間のより強い相関関係（Ｂｒａｈｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１０，Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＮＥＪＭ，２０１２）を示している。したがって、腫瘍または腫瘍浸潤白血球におけるＰＤ−Ｌ１発現（Ｈｅｒｂｓｔ  ＲＳ，ｅｔ  ａｌ．，「Ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｏｆ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ＰＤ−Ｌ１  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＭＰＤＬ３２８０Ａ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ」，Ｎａｔｕｒｅ，２０１４，Ｎｏｖ  ２７，５１５（７５２８）：５６３−７，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１４０１１）は、免疫療法、例えば抗ＰＤ−Ｌ１抗体を使用する免疫療法のための患者の選択に使用するための候補分子マーカーである。ＰＤ−Ｌ１の表面発現に基づく患者の濃縮は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路を標的とする薬物による治療の臨床的成功を有意に高めることができる。腫瘍浸潤ＣＤ８＋  Ｔ細胞等の進行中の免疫応答、またはＩＦＮγ等のサイトカイン活性化の兆候の存在の証拠もまた存在する。
【００１２】
ＰＤ−Ｌ１発現のさらなる証拠および疾患との相関は、多数の進行中の臨床試験から明らかになるであろう。アテゾリズマブは最も進歩したものであり、第ＩＩ相試験からの最近のデータは、転移性尿路上皮癌およびＮＳＣＬＣ、特に腫瘍微小環境におけるＰＤ−Ｌ１＋免疫細胞による治療効果を示す（Ｆｅｈｒｅｎｂａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６，Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ，ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／Ｓ０１４０−６７３６（１６）００５８７−０、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６，Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ，ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／Ｓ０１４０−６７３６（１６）００５６１−４を参照されたい）。１２２５人のＮＳＣＬＣ患者の第ＩＩＩ相試験の最近の結果は、ＰＤ−Ｌ１の腫瘍発現にかかわらず、化学療法と比較して、アゼリジズマブを服用している患者における生存率の改善を示した（Ｒｉｔｔｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７，Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ，３８９（１００６６），２５５−２６５）。
【発明の概要】
【００１３】
抗体
ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体およびその抗原結合断片が本明細書に開示される。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、表面発現ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する。
【００１４】
第１の構成では、配列番号１によって定義されるｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合する抗体またはその断片であって、当該抗体または断片が、モチーフＸ１ＧＳＧＸ２ＹＧＸ３Ｘ４ＦＤを含むＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３が独立して任意のアミノ酸であり、Ｘ４が存在するかまたは存在しないかのいずれかであり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得る、抗体またはその断片が提供される。
【００１５】
第２の構成では、ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合する抗体またはその断片であって、当該抗体または断片が、配列番号２９もしくは３２のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２９もしくは３２のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む、抗体またはその断片が提供される。
【００１６】
第３の構成では、抗体１Ｄ０５が特異的に結合するエピトープと同一であるエピトープに特異的に結合する、抗体またはその断片が提供される。
【００１７】
第４の構成では、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合する、抗体またはその断片が提供される。
【００１８】
第５の構成では、任意の他の構成、実施形態、または概念に記載の抗体またはその断片を含む、二重特異性抗体または融合タンパク質が提供される。
【００１９】
第６の構成では、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態の治療または予防における使用のための、他の任意の構成、実施形態、または概念に記載の抗体または断片が提供される。
【００２０】
第７の構成では、ヒトにおけるｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態を治療または予防するためにヒトに投与するための医薬品の製造における、任意の他の構成、実施形態、または概念に記載の抗体または断片が提供される。
【００２１】
第８の構成では、ヒトにおけるｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態を治療または予防する方法であって、治療有効量の、任意の他の構成、実施形態、または概念に記載の抗体または断片を当該ヒトに投与することを含み、当該ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態が、それにより治療または予防される、方法が提供される。
【００２２】
第９の構成では、任意の他の構成、実施形態、または概念に記載の断片の抗体と、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体と、を含む、医薬組成物が提供される。
【００２３】
第１０の構成では、任意の他の構成、実施形態、または概念に記載の断片の抗体と、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体と、を含む、医薬組成物を含むキットが提供される。
【００２４】
第１１の構成では、患者におけるＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を調節する方法であって、有効量の、任意の他の構成、実施形態、または概念に記載の抗体または断片を当該患者に投与することを含む、方法が提供される。
【００２５】
第１２の構成では、患者におけるＰＤ−Ｌ１活性を阻害する方法であって、有効量の、任意の他の構成、実施形態、または概念に記載の抗体または断片を当該患者に投与することを含む、方法が提供される。
【００２６】
第１３の構成では、動物（例えば、ヒト）における増殖性疾患を治療する方法であって、有効量の、任意の他の構成、実施形態、または概念に記載の抗体または断片を当該患者に投与することを含む、方法が提供される。
【００２７】
第１４の構成では、試料中のＰＤ−Ｌ１発現を検出する方法であって、試料を、任意の他の構成、実施形態、または概念に記載の抗体または断片と接触させることを含む、方法が提供される。
【００２８】
第１５の構成では、生体試料を、任意の他の構成、実施形態、または概念に記載の抗体または断片と接触させて、試料中に存在するＰＤ−Ｌ１との複合体を形成することと、生体試料中の複合体の存在、不在、またはレベルを測定することと、を含む、方法が提供される。
【００２９】
第１６の構成では、試料中のＰＤ−Ｌ１発現を検出する方法であって、試料を、任意の他の構成、実施形態、または概念に記載の抗体または断片と接触させることを含む、方法が提供される。
【００３０】
第１７の構成では、生体試料を、任意の他の構成、実施形態、または概念に記載の抗体または断片と接触させて、試料中に存在するＰＤ−Ｌ１との複合体を形成することと、生体試料中の複合体の存在、不在、またはレベルを測定することと、を含む、方法が提供される。
【００３１】
第１８の構成では、ＰＤ−Ｌ１のための結合パートナーを同定するための方法であって、当該方法は、任意の他の構成、実施形態、または概念に記載の抗体または断片を使用して、ＰＤ−Ｌ１を含む無傷のタンパク質複合体を免疫沈降することを含む、方法が提供される。
【００３２】
第１９の構成では、変化したＰＤ−Ｌ１発現に関連するヒト対象における疾患を診断する方法であって、当該ヒト対象からの生体試料を、他の構成、実施形態、または概念に記載の抗体と接触させて、抗体と試料中に存在するＰＤ−Ｌ１との複合体を形成するステップと、複合体の量を検出するステップと、を含む、方法が提供される。
【００３３】
第２０の構成では、任意の他の構成、実施形態、または概念に記載の抗体または断片のＣＤＲＨ３をコードする核酸が提供される。
【００３４】
第２１の構成では、任意の他の構成、実施形態、または概念に記載の抗体または断片のＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインをコードする核酸が提供される。
【００３５】
第２２の構成では、任意の他の構成、実施形態、または概念に記載の核酸を含むベクターであって、任意に、当該ベクターはＣＨＯまたはＨＥＫ２９３ベクターであってもよい、ベクターが提供される。
【００３６】
第２３の構成では、任意の他の構成、実施形態、または概念に記載の核酸、または任意の他の構成、実施形態、または概念に記載のベクターを含む宿主が提供される。
【００３７】
免疫サイトカイン
第１の構成では、免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む免疫サイトカインであって、重鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ａ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインと、
ｂ）重鎖定常領域と、を含み、
軽鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ｃ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含むＶＬドメインと、
ｄ）軽鎖定常領域（ＣＬ）と、
ｅ）任意に、リンカー（Ｌ）と、
ｆ）ＩＬ−２サイトカインと、を含み、
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、配列番号１によって定義されるｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗原結合部位によって構成され、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合し、
免疫サイトカインが、モチーフＸ１ＧＳＧＸ２ＹＧＸ３Ｘ４ＦＤを含むＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３が独立して任意のアミノ酸であり、Ｘ４が存在するかまたは存在しないかのいずれかであり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得る、免疫サイトカインが提供される。
【００３８】
第２の構成では、免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む免疫サイトカインであって、重鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ａ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインと、
ｂ）重鎖定常領域と、を含み、
軽鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ｃ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含むＶＬドメインと、
ｄ）軽鎖定常領域（ＣＬ）と、
ｅ）任意に、リンカー（Ｌ）と、
ｆ）ＩＬ−２サイトカインと、を含み、
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合する抗原結合部位によって構成され、当該抗体または断片が、配列番号２９もしくは３２のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２９もしくは３２のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む、抗体またはその断片が提供される。
【００３９】
第３の構成では、免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む免疫サイトカインであって、重鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ａ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインと、
ｂ）重鎖定常領域と、を含み、
軽鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ｃ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含むＶＬドメインと、
ｄ）軽鎖定常領域（ＣＬ）と、
ｅ）任意に、リンカー（Ｌ）と、
ｆ）ＩＬ−２サイトカインと、を含み、
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗原結合部位によって構成され、
ＶＨドメインが、１２〜２０個のアミノ酸のＣＤＲＨ３を含み、ヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤ遺伝子セグメント、およびヒトＪＨ遺伝子セグメントの組換えに由来し、当該ヒトＪＨ遺伝子セグメントが、ＩＧＨＪ５（例えば、ＩＧＨＪ５＊０２）である、免疫サイトカインが提供される。
【００４０】
第４の構成では、免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む免疫サイトカインであって、重鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ａ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインと、
ｂ）重鎖定常領域と、を含み、
軽鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ｃ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含むＶＬドメインと、
ｄ）軽鎖定常領域（ＣＬ）と、
ｅ）任意に、リンカー（Ｌ）と、
ｆ）ＩＬ−２サイトカインと、を含み、
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、抗体１Ｄ０５が特異的に結合するエピトープと同一であるエピトープに特異的に結合する抗原結合部位によって構成されている、免疫サイトカインが提供される。
【００４１】
第５の構成では、免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む免疫サイトカインであって、重鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ａ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインと、
ｂ）重鎖定常領域と、を含み、
軽鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ｃ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含むＶＬドメインと、
ｄ）軽鎖定常領域（ＣＬ）と、
ｅ）任意に、リンカー（Ｌ）と、
ｆ）ＩＬ−２サイトカインと、を含み、
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合する抗原結合部位によって構成されている、免疫サイトカインが提供される。
【００４２】
第６の構成では、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態の治療または予防における使用のための、他の任意の構成、実施形態、または態様に記載の免疫サイトカインが提供される。
【００４３】
第７の構成では、ヒトにおけるｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態を治療または予防するためにヒトに投与するための医薬品の製造における、任意の他の構成、実施形態、または態様に記載の免疫サイトカインが提供される。
【００４４】
第８の構成では、ヒトにおけるｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態を治療または予防する方法であって、治療有効量の、任意の他の構成、実施形態、または態様に記載の免疫サイトカインを当該ヒトに投与することを含み、当該ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態が、それにより治療または予防される、方法が提供される。
【００４５】
第９の構成では、任意の他の構成、実施形態、または態様に記載の免疫サイトカインと、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体と、を含む、医薬組成物が提供される。
【００４６】
第１０の構成では、任意の他の構成、実施形態、または態様に記載の免疫サイトカインと、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体と、を含む、医薬組成物を含むキットが提供される。
【００４７】
第１１の構成では、任意の他の構成、実施形態、または態様に記載の免疫サイトカインの重鎖および／または軽鎖をコードする核酸が提供される。
【００４８】
第１２の構成では、任意の他の構成、実施形態、または態様に記載の免疫サイトカインの重鎖および／または軽鎖をコードする核酸を含むベクターが提供される。
【００４９】
第１３の構成では、任意の他の構成、実施形態、または態様に記載の核酸、または任意の他の構成、実施形態、または態様に記載のベクターを含む宿主が提供される。
【００５０】
抗ＩＣＯＳ二重特異性抗体
第１の構成では、ＩＣＯＳ（例えば、ヒトＩＣＯＳ）と別の標的抗原とを結合させる（任意に、それらに対する特異性を有していてもよい）多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体または二重結合抗体）が提供される。
【００５１】
第２の構成では、本明細書に記載される多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体と、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体と、を含む組成物が提供される。
【００５２】
第３の構成では、神経疾患、腫瘍性もしくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、および悪性腫瘍、例えば黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキン病、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（例えば、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、および中皮腫、または例えばウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）および軟部肉腫）から選択される、疾患または病的状態の治療または予防における使用のための、本明細書に記載される多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体が提供される。
【００５３】
第４の構成では、神経疾患、腫瘍性もしくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、および悪性腫瘍、例えば黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキン病、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（例えば、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、および中皮腫、または例えばウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）および軟部肉腫）から選択される、ヒトにおける疾患または病的状態の治療または予防のための当該ヒトへの投与のための医薬品の製造における、本明細書に記載される多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体の使用が提供される。
【００５４】
第５の構成では、神経疾患、腫瘍性もしくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、および悪性腫瘍、例えば黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキン病、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（例えば、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、および中皮腫、または例えばウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）および軟部肉腫）から選択される、ヒトにおける疾患または病的状態を治療または予防する方法であって、治療有効量の、本明細書に記載される多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体を当該ヒトに投与することを含み、当該疾患または病的状態が、それにより治療または予防される、方法が提供される。
【００５５】
第６の構成では、本明細書に記載される多重特異性抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸が提供される。
【００５６】
第７の構成では、本明細書に記載される多重特異性抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸を含むベクターが提供される。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】樹状細胞−Ｔ細胞混合リンパ球反応における選択された抗体の分析。同種異系の精製されたＣＤ３＋  Ｔ細胞の添加および抗体の滴定の前に、単球をＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４と共に７日間培養した。ＩＦＮγ産生の分析のために５日目に上清を採取した。１回の実験からのデータを示す。８４Ｇ０９について、１つの複製が失敗したため、濃度当たり単一の点が存在することに留意されたい。
【図２】ＰＤ−１受容体を用いたＰＤ−Ｌ１の直接中和ＥＬＩＳＡ。ベンチマーク抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびアイソタイプ対照と比較した、１Ｄ０５および８４Ｇ０９の中和プロファイル。データは、３つの独立した実験を代表する
【図３】ＰＤ−１受容体によるヒトＰＤ−Ｌ１  ＣＨＯ−Ｓ  ＦＡＣＳの中和。ベンチマーク抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびアイソタイプ対照と比較した、１Ｄ０５および８４Ｇ０９の中和プロファイル。データは、３つの独立した実験を代表する
【図４】ＣＤ８０受容体によるヒトＰＤ−Ｌ１  ＣＨＯ  ＦＡＣＳの中和。ベンチマーク抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびアイソタイプ対照と比較した、１Ｄ０５および８４Ｇ０９の中和プロファイル。データは、３つの独立した実験を代表する
【図５】ＰＤ−Ｌ１に結合するが、ＰＤ−Ｌ２に結合しない鉛抗体。鉛抗体は、プレートに結合したＰＤ−Ｌ１に結合する（図５ａ）が、ＰＤ−Ｌ２には結合しない（図５ｂ）。抗ＰＤ−Ｌ２抗体を対照として使用した。データは、６１５ｎｍでの時間分解蛍光単位として表される。データは、２つの独立した実験を代表する
【図６】鉛抗体は、樹状細胞−Ｔ細胞混合リンパ球反応においてＩＦＮγ産生を誘導する。未成熟樹状細胞を、抗体の存在下で同種異系ＣＤ４＋  Ｔ細胞と共に５日間共培養した。ＩＦＮγをＥＬＩＳＡによって上清中で測定した。データは、３つの独立した実験を代表する。Ｂ１は、ベンチマーク抗体を指す
【図７】鉛抗体は、樹状細胞上の天然に発現されたＰＤ−Ｌ１に結合する。樹状細胞は、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４を有する単球前駆体から生成され、鉛抗体（ａ）１Ｄ０５および（ｂ）８４Ｇ０９で染色され、アイソタイプ対照は、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７で直接標識された。示されたデータは、４人のドナーを代表する１人のドナーからのデータである
【図８ａ】ＰＤ−１受容体を用いたＰＤ−Ｌ１の直接中和ＥＬＩＳＡ。ベンチマーク抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびアイソタイプ対照と比較した、ＫＭ１２１ヒットの中和プロファイル。データは、３つの独立した実験を代表する
【図８ｂ】ＰＤ−１受容体を用いたＰＤ−Ｌ１の直接中和ＥＬＩＳＡ。ベンチマーク抗ＰＤ−Ｌ１抗体と比較した、ＫＭ１２２鉛候補分子の中和プロファイル。データは、単一の実験からのものである
【図８ｃ】ＰＤ−１受容体を用いたＰＤ−Ｌ１の直接中和ＥＬＩＳＡ。ベンチマーク抗ＰＤ−Ｌ１抗体と比較した、ＫＭ１２２鉛候補分子４１６Ｅ０１の中和プロファイル。データは、単一の実験からのものである
【図９ａ】ＣＤ８０受容体を用いたＰＤ−Ｌ１の直接中和ＥＬＩＳＡ。ベンチマーク抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびアイソタイプ対照と比較した、ＫＭ１２１ヒットの中和プロファイル。データは、３つの独立した実験を代表する
【図９ｂ】ＣＤ８０受容体を用いたＰＤ−Ｌ１の直接中和ＥＬＩＳＡ。ベンチマーク抗ＰＤ−Ｌ１抗体と比較した、ＫＭ１２２鉛候補分子の中和プロファイル。データは、単一の実験からのものである
【図９ｃ】ＣＤ８０受容体を用いたＰＤ−Ｌ１の直接中和ＥＬＩＳＡ。ベンチマーク抗ＰＤ−Ｌ１抗体と比較した、ＫＭ１２２鉛候補分子４１６Ｅ０１の中和プロファイル。データは、単一の実験からのものである
【図１０】第１の抗原としてＰＤ−Ｌ１、および第２の抗原としてＴＩＧＩＴを用いた、ＳＰＲによる二重特異性結合。Ａ）二重特異性１、Ｂ）二重特異性２、Ｃ）二重特異性３、Ｄ）二重特異性４。各二重特異性構築物の詳細な構築情報については、表６を参照されたい。
【図１１】第１の抗原としてＴＩＧＩＴ、および第２の抗原としてＰＤ−Ｌ１を用いた、ＳＰＲによる二重特異性結合。Ａ）二重特異性１、Ｂ）二重特異性２、Ｃ）二重特異性３、Ｄ）二重特異性４。各二重特異性構築物の詳細な構築情報については、表６を参照されたい。
【図１２（ａ）】遊離ＩＬ−２の等モル濃度と比較した、ＩＬ−２Ｒαβγ発現ＴＦ−１細胞の増殖を誘導する免疫サイトカイン構築物の能力。示されたデータは、３つの実験を代表する単一の実験からのものである
【図１２（ｂ）】遊離ＩＬ−２の等モル濃度と比較した、ＩＬ−２Ｒβγ発現ＴＦ−１細胞の増殖を誘導する免疫サイトカイン構築物の能力。示されたデータは、４つの実験を代表する単一の実験からのものである
【図１３（ａ）】中和ＥＬＩＳＡで測定した場合、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を中和する１Ｄ０５抗体の能力は、ＩＬ−２の抗体への融合による影響を受けない。示されたデータは、３つの実験を代表する単一の実験からのものである
【図１３（ｂ）】中和ＥＬＩＳＡで測定した場合、ＣＤ８０とＰＤ−Ｌ１との間の相互作用を中和する１Ｄ０５抗体の能力は、ＩＬ−２の抗体への融合による影響を受けない。示されたデータは、３つの実験を代表する単一の実験からのものである
【図１４】ＮＯＤ／ＳＣＩＤ：Ｘｅｎｏｇｒａｆｔのインビボ有効性研究についての、平均群および個々の動物の成長曲線
【図１４（ａ）】群平均（ｎ＝８／９）腫瘍成長曲線を示し、このグラフでは、動物が腫瘍サイズのために研究から除外された場合、最後の読み取りが残りの研究に用いられる。斜線部分は、最後の読み取りが使用されている領域を示している
【図１４（ｂ）−（ｅ）】は、各群の個々の動物の腫瘍成長曲線を示す。（ｂ）Ａ３７５腫瘍のみ、（ｃ）６：１の比率でＣＤ４＋／８＋  Ｔ細胞と同時注射されたＡ３７５腫瘍。パネル（ｄ）および（ｅ）について、Ａ３７５腫瘍細胞は、６：１の比率でＣＤ４＋／８＋  Ｔ細胞と同時注射された。（ｄ）１０ｍｇ／ｋｇでのアイソタイプ対照抗体、および（ｅ）１０ｍｇ／ｋｇでの抗ＰＤ−Ｌ１抗体１Ｄ０５。投薬は、腫瘍／Ｔ細胞移植の１時間後、ならびにグラフ上に点線で示される３、６、８、および１０日目に行われた。
【図１５】未だに研究中である動物の数を示す、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ：Ｘｅｎｏｇｒａｆｔのインビボ有効性研究のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒプロット。このプロットは、腫瘍細胞単独のＡ３７５群（ｎ＝９）と比較した、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋  Ｔ細胞が腫瘍細胞（Ｔ細胞／Ａ３７５）と同時注入した場合（ｎ＝９）の研究時間のわずかな増加を示す。アイソタイプ対照（Ｔ細胞／Ａ３７５−アイソタイプ（ｎ＝８））による治療は、抗体を伴わずに腫瘍細胞と同時注射されたＴ細胞と比較した場合、生存期間に影響を及ぼさなかった。１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−Ｌ１抗体１Ｄ０５（Ｔ細胞／Ａ３７５−抗ＰＤ−Ｌ１）（ｎ＝８）での治療は、アイソタイプ対照群と比較した場合、研究時間を有意に増加させた。投薬は、Ｔ細胞／腫瘍細胞の注射の１時間後、ならびにグラフ上に点線で示される３、６、８、および１０日目に行われた。
【図１６】免疫サイトカインでの投薬に応答したリンパ球の増殖。空腹時血液試料を、治療前（０）、ならびに治療後２、５、および７日目にＥＤＴＡ処置管に採取した。細胞数をＢａｙｅｒ  Ａｄｖｉａ  １２０によって測定した。結果は、リンパ球数の倍数変化として表される
【図１７】免疫サイトカインでの投薬に応答した標準的な血液学的パラメータの分析。空腹時血液試料を、治療前および治療後７日目にＥＤＴＡ処置管に採取した。ヘモグロビン、ヘマトクリット、赤血球数、および血小板数の分析は、Ｂａｙｅｒ  Ａｄｖｉａ  １２０を使用して行った。結果は、投薬後７日目のパラメータにおけるパーセント変化として表される
【図１８】免疫サイトカイン分子を投薬したカニクイザルの血漿中のサイトカインレベル。血漿試料を、治療前（ＰＴ）および投薬後３日目（Ｄ３）に得て、ａ）ＴＮＦ−α、ｂ）ＩＬ−８、ｃ）ＩＬ−６、ｄ）ＩＦＮγ、ｅ）Ｇ−ＣＳＦ、およびｆ）ＩＬ−２のレベルについてＭＳＤによって分析した。棒が含まれていない場合、サイトカインレベルはアッセイの定量限界以下であった。いずれの時点でも、ＩＬ４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１βはいずれの試料においても検出されなかったため、グラフに含まれていない
【図１９】免疫サイトカイン分子を投薬したカニクイザルの血漿中の可溶性ＣＤ２５のレベル。血漿試料を、治療前（ＰＴ）および投薬後３日目（Ｄ３）に得て、市販のＥＬＩＳＡキットを使用して分析した。＊は、定量限界（２０，０００ｐｇ／ｍＬ）を超えるレベルを示す
【図２０】ＰＢＭＣサブセットのフローサイトメトリー解析。赤血球溶解および固定の前に、ａ）Ｔ細胞、ならびにｂ）Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、および単球のマーカーについて全血を染色した。データは、投薬後５日目の細胞数の倍数変化として表される。使用不可能な試料のために、１Ｄ０５  ＬＣ  Ｄ９−７  ＩＣＫのデータが欠落している
【図２１】免疫サイトカインの薬物動態（ＰＫ）解析。９６時間にわたる様々な時点で採取した血液試料から血清を調製した。パネルａ）およびｂ）では、血清を、ＰＤ−Ｌ１でコーティングしたプレート上でインキュベートし、ビオチン化抗ヒトＦｃ検出抗体およびストレプトアビジン標識ユーロピウムで検出した免疫サイトカインを検出した。パネルｃ）およびｄ）では、血清を、ＰＤ−Ｌ１でコーティングしたプレート上でインキュベートし、ビオチン化抗ヒトＩＬ−２抗体およびストレプトアビジン標識ユーロピウムで検出した免疫サイトカインを検出した。結果は、ｎｇ／ｍＬとして表される
【図２２ａ】ヒトＩｇＧ１フォーマットの抗ＰＤ−Ｌ１抗体による単球−Ｔ細胞共培養アッセイにおけるＩＦＮγ産生の誘導。各データ点は、少なくとも３つの独立した実験からの平均倍数誘導±標準誤差を表す
【図２２ｂ】ヒトＩｇＧ４（ＰＥ）フォーマットの抗ＰＤ−Ｌ１抗体による単球−Ｔ細胞共培養アッセイにおけるＩＦＮγ産生の誘導。各データ点は、２つの独立した実験からの平均倍数誘導±標準偏差を表す
【図２３（ａ）】マウスＴ細胞ハイブリドーマアッセイにおけるＩＬ−２の誘導。上清の回収およびＩＬ−２放出の分析の前に、ヒトＰＤ−Ｌ１でトランスフェクトされたＬＫ３５．２細胞にオボアルブミンペプチドを添加し、抗ＰＤ−Ｌ１抗体または対照の存在下でＤＯ−１１−１０  Ｔ細胞ハイブリドーマ細胞と一晩共培養した。各データ点は、３つの独立した実験からの、バックグラウンド補正された平均ＩＬ−２放出±標準偏差を示す
【図２３（ｂ）】マウスＴ細胞ハイブリドーマアッセイにおけるＩＬ−２の誘導。上清の回収およびＩＬ−２放出の分析の前に、ヒトＰＤ−Ｌ１でトランスフェクトされたＬＫ３５．２細胞にオボアルブミンペプチドを添加し、ＩＣＯＳ／ＰＤ−Ｌ１二重特異性分子または個々の抗体の存在下でＤＯ−１１−１０  Ｔ細胞ハイブリドーマ細胞と一晩共培養した。各データ点は、３つの独立した実験からの、バックグラウンド補正された平均ＩＬ−２放出±標準偏差を示す
【図２４（ａ）】ＤＣ−Ｔ細胞ＭＬＲアッセイにおけるＩＦＮγの誘導。単球由来樹状細胞（ＤＣ）を大腸菌ＬＰＳで活性化し、同種異系ＣＤ３＋  Ｔ細胞と１：１の比率で共培養した。５日間の共培養後、ＩＦＮγをＤＥＬＦＩＡアッセイによって測定した。データは、単一の実験からのものである
【図２４（ｂ）】ＤＣ−Ｔ細胞ＭＬＲアッセイにおけるＩＬ−２の誘導。単球由来樹状細胞（ＤＣ）を大腸菌ＬＰＳで活性化し、同種異系ＣＤ３＋  Ｔ細胞と１：１の比率で共培養した。３日間の共培養後、ＩＬ−２をＤＥＬＦＩＡアッセイによって測定した。データは、単一の実験からのものである
【図２５】方法１を使用したＰＤ−Ｌ１／ＴＩＧＩＴ  ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）結合アッセイにおけるＦＩＴ−Ｉｇ分子、親単一特異性抗体、および対照抗体の滴定。抗体をＰＤ−Ｌ１およびＴＩＧＩＴタンパク質と共に１時間インキュベートした後に、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）アクセプタービーズを１時間添加し、続いて蛍光検出の前にＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）ドナービーズをさらに１時間添加した。Ａ）ＦＩＴ−Ｉｇ分子の滴定、Ｂ）単一特異性抗体の滴定。示されたデータは、唯一の実験の代表である
【図２６】方法２を使用したＰＤ−Ｌ１／ＴＩＧＩＴ  ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）結合アッセイにおけるＦＩＴ−Ｉｇ分子、親単一特異性抗体、および対照抗体の滴定。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）ドナーおよびアクセプタービーズを、ＰＤ−Ｌ１およびＴＩＧＩＴタンパク質でそれぞれ１時間コーティングした後、抗体を１時間添加し、続いて蛍光を検出した。Ａ）ＦＩＴ−Ｉｇ分子の滴定、Ｂ）単一特異性抗体の滴定。示されたデータは、唯一の実験の代表である
【図２７】フローサイトメトリーによるＰＤ−Ｌ１  ／  ＴＩＧＩＴ細胞動員アッセイにおけるＦＩＴ−Ｉｇ分子および対照抗体の滴定。ＣＨＯヒトＰＤ−Ｌ１およびＨＥＫヒトＴＩＧＩＴをそれぞれＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｆａｒ  ＲｅｄおよびＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔで染色し、蛍光検出および二重陽性集団の同定の前に抗体の存在下で共培養した。示されたデータは、唯一の実験の代表である
【図２８】免疫サイトカインでの投薬に応答したリンパ球の増殖。空腹時血液試料を、治療前（０）、ならびに治療後２、５、および７、１０、１４、および２３日目にＥＤＴＡ処置管に採取した。細胞数をＢａｙｅｒ  Ａｄｖｉａ  １２０によって測定した。結果は、リンパ球数の倍数変化として表される
【図２９】免疫サイトカイン分子を投薬したカニクイザルの血漿中の可溶性ＣＤ２５のレベル。血漿試料を、治療前（０）、ならびに投薬後３、７、および１０日目に得て、市販のＥＬＩＳＡキットを使用して分析した。
【図３０】免疫サイトカインでの投薬に応答した標準的な血液学的パラメータの分析。空腹時血液試料を、治療前（０）、ならびに治療後２、５、７、１０、１４、および２３日目にＥＤＴＡ処置管に採取した。Ａ）ヘモグロビン、Ｂ）ヘマトクリット、Ｃ）赤血球数、およびＤ）血小板数の分析は、Ｂａｙｅｒ  Ａｄｖｉａ  １２０を使用して行った。結果は、各時点のパラメータにおける倍数変化として表される
【図３１】免疫サイトカイン分子を投薬したカニクイザルの血漿中のサイトカインレベル。血漿試料を、治療前（０）、ならびに投薬後１、３、７、１０、１４、および２３日目に得て、ａ）ＴＮＦ−α、ｂ）ＩＬ−８、ｃ）ＩＬ−６、ｄ）ＩＦＮγ、ｅ）Ｇ−ＣＳＦ、ｆ）ＩＬ−２、ｇ）ＩＬ−４、およびｈ）ＩＬ−５のレベルについてＭＳＤによって分析した。棒が含まれていない場合、サイトカインレベルはアッセイの定量限界以下であった。ＩＬ−１βはいずれの試料においても検出されなかったため、グラフに含まれていない
【図３２】免疫サイトカインの薬物動態（ＰＫ）解析。９６時間にわたる様々な時点で採取した血液試料から血清を調製した。血清を、ＰＤ−Ｌ１でコーティングしたプレート上でインキュベートし、ビオチン化抗ヒトＦｃ検出抗体およびストレプトアビジン標識ユーロピウムで検出した免疫サイトカインを検出した。結果は、ピーク濃度％として表される
【図３３】ＩＣＫ分子による特異的Ｔ細胞サブセットの増殖。全血を染色のための抗体と共にインキュベートした後に、赤血球溶解、固定、およびフローサイトメトリーによる分析を行った。結果は、各時点での（ａ）ＣＤ４＋  Ｔ細胞および（ｂ）ＣＤ８＋  Ｔ細胞の絶対数における倍数変化として表される。
【図３４】レポーター細胞アッセイにおける鉛抗体のエフェクター機能。ＰＤ−Ｌ１抗体の存在下で、ＮＦＡＴ誘導ルシフェラーゼおよびＦｃγＲＩＩＩａを発現するように操作されたＪｕｒｋａｔ細胞と共にＰＤ−Ｌ１発現標的細胞（ＥＳ２）を一晩共培養した。各データ点は、相対発光量（ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｌｉｇｈｔ  ｕｎｉｔｓ）の平均倍数誘導±標準偏差を示す。データは、３つの独立した実験のうちの１つの代表的な実験からのものである
【図３５】細胞発現カニクイザルＰＤ−Ｌ１への鉛抗体の結合。抗体を、カニクイザルＰＤ−Ｌ１を発現するＣＨＯ細胞上で滴定し、結合した抗体を抗ヒトＩｇＧ  ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ６４７で検出した。データは、単一の実験からのものである
【図３６（ａ）】ＰＤ−１受容体によるヒトＰＤ−Ｌ１  ＣＨＯ−Ｓ  ＦＡＣＳの中和。ベンチマーク抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびアイソタイプ対照と比較した、鉛抗体の中和プロファイル。２つの独立した実験を表すデータ
【図３６（ｂ）】ＣＤ８０受容体によるヒトＰＤ−Ｌ１  ＣＨＯ−Ｓ  ＦＡＣＳの中和。ベンチマーク抗ＰＤ−Ｌ１抗体およびアイソタイプ対照と比較した、鉛抗体の中和プロファイル。２つの独立した実験を表すデータ
【図３７】ヒトＩｇＧ１フォーマットの抗ＰＤ−Ｌ１抗体による単球−Ｔ細胞共培養アッセイにおけるＩＦＮγ産生の誘導。各データ点は、少なくとも３つの独立した実験からのＩＦＮγの平均倍数誘導±標準誤差を表す
【発明を実施するための形態】
【００５８】
１．定義
本明細書において別途定義されない限り、科学的および技術的用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈によって別途要求されない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。
【００５９】
単数形の用語「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が別途明確に示さない限り、複数の指示対象を含む。同様に、「または」という語は、文脈が別途明確に示さない限り、「および」を含むことが意図される。本明細書に記載されるものと同様または等価である方法および材料が本開示の実践または試験において使用され得るものの、好適な方法および材料が以下に記載される。略語「例えば（ｅ．ｇ．）」は、ラテン語のｅｘｅｍｐｌｉ  ｇｒａｔｉａに由来し、本明細書において非限定的な例を示すために使用される。したがって、略語「ｅ．ｇ．」は、「例えば（ｆｏｒ  ｅｘａｍｐｌｅ）」という用語と同義である。
【００６０】
明細書および特許請求の範囲において、「約」という用語は、例えば、本開示の実施形態を記載する際に使用される組成物中の成分の量、濃度、容積、処理温度、処理時間、収率、流速、圧力、および同様の値、ならびにそれらの範囲を修飾するために使用される。「約」という用語は、例えば、化合物、組成物、濃縮物、または使用製剤を作製するための典型的な測定および取り扱い手順を通して、これらの手順における偶発的なエラーを通して、製造、供給源、または当該方法を実施するために使用される開始材料または成分中の純度の違い、および同様の直接的な検討事項を通して生じ得る数量の変化を指す。「約」という用語はまた、特定の初期濃度または混合物を有する製剤の老化によって異なる量、および特定の初期濃度または混合物を有する製剤を混合または処理することによって異なる量も包含する。「約」という用語によって修飾されている場合、添付の特許請求の範囲は、これらの量と等価のものを含む。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「投与する」または「投与」は、粘膜送達、皮内送達、静脈内送達、筋肉内送達、および／または本明細書に記載されるかもしくは当該技術分野で既知である任意の他の方法によって、体外に存在する物質（例えば、本明細書に提供される抗ｈｐＤ−Ｌ１抗体）を患者に注射するか、または別様に物理的に送達する行為を指す。疾患またはその症状が治療される場合、物質の投与は、典型的には、疾患またはその症状の発症後に起こる。疾患またはその症状が予防される場合、物質の投与は、典型的には、疾患またはその症状の発症前に起こる。
【００６２】
「抗体」、「免疫グロブリン」、または「Ｉｇ」という用語は、本明細書において交換可能に使用されてもよく、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または前述んものの組み合わせ等の標的を認識し、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位でそれに特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、無傷のポリクローナル抗体、無傷のモノクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）変異体、二重特異性抗体（二重結合抗体を含む）等の多重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原決定部分を含む融合タンパク質、ならびに所望の生物活性を呈する限り、抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。「抗体」という用語はまた、４つのポリペプチド鎖（２つの軽（Ｌ）鎖および２つの重（Ｈ）鎖）からなる約１５０ｋＤａの分子量を有するＹ字形の糖タンパク質も指すことができる。アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、およびミュー（μ）のギリシャ文字で表される、５種類の哺乳動物Ｉｇ重鎖アイソタイプが存在する。重鎖のタイプは、抗体のクラス、すなわち、それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭを定義する。γおよびαクラスは、定常ドメイン配列および機能の違いに基づき、サブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ｈＩｇＧ２、ｍＩｇＧ２Ａ、ｍＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分けられる。哺乳動物では、λとκの２種類の免疫グロブリン軽鎖が存在する。抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「ＶＨ」および「ＶＬ」と表すことができる。これらのドメインは、一般に、抗体の最も可変性の部分であり（同じクラスの他の抗体と比較して）、抗原結合部位を含有する。
【００６３】
本明細書に記載される抗体は、オリゴクローナル抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｓｅｄ）抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体（二重結合抗体を含む）、触媒抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、抗イディオタイプ抗体であり得、これらには、可溶性形態もしくは結合形態で標識され得る抗体、ならびにそれらの断片、変異型、または誘導体が、単独かまたは既知の技術によって提供される他のアミノ酸配列と組み合わせるかのいずれかで含まれ得る。抗体は、任意の種由来であってもよい。本明細書に記載される抗体は、裸であってもよく、または他の分子、例えば毒素、放射性同位体等にコンジュゲートされてもよい。
【００６４】
「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」、「抗原結合断片」という用語、および同様の用語は、抗原と相互作用し、抗原に対するその特異性および親和性を結合剤に付与するアミノ酸残基を含む抗体の部分（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））を指す。抗原結合領域は、例えば、げっ歯類（例えば、ウサギ、ラット、またはハムスター）およびヒト等の任意の動物種に由来し得る。好ましくは、抗原結合領域は、ヒト起源のものである。
【００６５】
本明細書に記載される抗原結合断片には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ドメイン抗体、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、所望の生物活性を呈する抗体断片、ジスルフィド安定化可変領域（ｄｓＦｖ）、二量体可変領域（ダイアボディ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗体に対する抗Ｉｄ抗体）、細胞内抗体、直鎖抗体、一本鎖抗体分子、ならびに上記のいずれかの抗体断片およびエピトープ結合断片から形成された多重特異性抗体が含まれ得る。特に、本明細書に記載される抗体および抗体断片には、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な断片、すなわち抗原結合部位を含有する分子が含まれ得る。酵素パパインによる抗体の消化は、抗原結合活性を有さないが結晶化する能力を有する、「Ｆａｂ」断片としても知られる２つの同一の抗原結合断片をもたらす。本明細書で使用される場合、「Ｆａｂ」は、重鎖および軽鎖の各々の１つの定常ドメインおよび１つの可変ドメインを含む抗体の断片をいう。本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義し、天然配列Ｆｃ領域および可変Ｆｃ領域を含む。「Ｆｃ断片」とは、ジスルフィドによって共に保持された両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を指す。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域中の配列によって決定され、この領域はまた、特定の種類の細胞上に見出されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される。酵素ペプシンによる抗体の消化は、抗体分子の２つのアームが結合したままであり、２つの抗原結合部位を含む、Ｆ（ａｂ’）２断片をもたらす。Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗原を架橋する能力を有する。
【００６６】
本明細書で使用される場合、「Ｆｖ」とは、抗原認識および抗原結合部位の両方を保持する抗体の最小断片を指す。この領域は、密に非共有または共有会合した、１つの重鎖および１つの軽鎖可変ドメインのダイマーからなる。この構成において、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を定義する。集合的に、６つのＣＤＲは、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえも、結合部位全体よりも低い親和性ではあるものの、抗原を認識し、結合する能力を有する。
【００６７】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る天然型の変異および／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）の可能性を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原決定基またはエピトープに向けられている。対照的に、ポリクローナル抗体調製物は、典型的に、異なる抗原決定基（またはエピトープ）に向けられた異なる抗体を含む。本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、無傷および全長のモノクローナル抗体の両方、ならびに抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、一本鎖（ｓｃＦｖ）変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、および抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。さらに、「モノクローナル抗体」とは、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、およびトランスジェニック動物を含むがこれらに限定されない任意の数の方法で作成された抗体を指す。
【００６８】
本明細書におけるモノクローナル抗体には、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する特定の種に由来する抗体中の対応する配列と同一または相同である一方で、残りの鎖（複数可）は、別の抗体クラスまたはサブクラスに属する別の種に由来する抗体中の対応する配列と同一または相同である、「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、ならびに所望の生物活性を呈するかかる抗体の断片が含まれ得る。
【００６９】
「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト免疫グロブリン（ドナー抗体）由来の「超可変領域」が、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）における超可変領域由来の残基に取って代わる、キメラ抗体のサブセットを指す。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変領域のうちの実質的に全てを含み、超可変ループのうちの全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリン配列のものに対応し、フレームワーク領域の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のものであるが、ただし、フレームワーク領域は、抗体性能、例えば結合親和性、異性化、免疫原性等を改善する１つ以上の置換を含み得る。
【００７０】
「二重特異性抗体」という用語は、２つの標的分子に対する特異性を含む抗体を意味し、ＤＶＤ−Ｉｇ（ＤｉＧｉａｍｍａｒｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＤＶＤ−Ｉｇ（商標）  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｆｏｒ  ｄｕａｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ」，Ｍｅｔｈ．Ｍｏ．Ｂｉｏｌ．，２０１２，８８９，１４５−１５６を参照されたい）、ｍＡｂ２（ＷＯ２００８／００３１０３を参照されたい、ｍＡｂ２型の記載が本明細書に参照により組み込まれる）、ＦＩＴ−Ｉｇ（ＷＯ２０１５／１０３０７２、ＦＩＴ−Ｉｇ骨格の記載が本明細書に参照により組み込まれる）、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、Ｆａｂ−アーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、Ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ−Ｙ、Ｆｃａｂ、κλ−ｂｏｄｙ、直交Ｆａｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｄｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｔａｎｄｅｍ  ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、トリプルボディ（Ｔｒｉｐｌｅ  ｂｏｄｙ）、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３  ＫＩＨ、ｓｃＦｖ−ＣＨ−ＣＬ−ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、４価のＨＣａｂ、ＩｍｍＴＡＣ、ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂｓ−ｉｎ−ｈｏｌｅｓ）、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、ＤＴ−ＩｇＧ、ＤｕｔａＭａｂ、ＩｇＧ（Ｈ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）−Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）−Ｖ、Ｖ（Ｈ）−ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−Ｖ、Ｖ（Ｌ）−ＩｇＧ、ＫＩＨ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＩｇＧ−２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ならびにｚｙｂｏｄｙ等のフォーマットが含まれるが、これらに限定されない。二重特異性のフォーマットの概説については、Ｓｐｉｅｓｓ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１５）を参照されたい。別の実施形態では、二重特異性分子は、別の非Ｉｇフォーマット、例えば、Ｔ細胞受容体結合ドメイン、免疫グロブリンスーパーファミリードメイン、無顎類可変リンパ球受容体、フィブロネクチンドメイン（例えば、Ａｄｎｅｃｔｉｎ（商標））、抗体定常ドメイン（例えば、ＣＨ３ドメイン、例えば、Ｆｃａｂ（商標）のＣＨ２および／またはＣＨ３）（当該定常ドメインは、機能的ＣＨ１ドメインではない）、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｓｃ−ｄｉａｂｏｄｙ、ｓｃＦａｂ、ＣＴＬＡ−４から選択される骨格に由来するセンチリン（ｃｅｎｔｙｒｉｎ）およびエピトープ結合ドメイン（Ｅｖｉｂｏｄｙ（商標））、リポカリンドメイン、タンパク質ＡのＺドメイン等のタンパク質Ａ（例えば、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（商標）またはＳｐＡ）、Ａドメイン（例えば、Ａｖｉｍｅｒ（商標）またはＭａｘｉｂｏｄｙ（商標））、熱ショックタンパク質（ＧｒｏＥＩおよびＧｒｏＥＳに由来するエピトープ結合ドメイン等）、トランスフェリンドメイン（��えば、トランスボディ）、アンキリンリピートタンパク質（例えば、ＤＡＲＰｉｎ（商標））、ペプチドアプタマー、Ｃ型レクチンドメイン（例えば、Ｔｅｔｒａｎｅｃｔｉｎ（商標））、ヒトγ−クリスタリンまたはヒトユビキチン（アフィリン）、ＰＤＺドメイン、サソリ毒、ならびにヒトプロテアーゼ阻害剤のクーニッツ型ドメインに融合した抗体を含む。
【００７１】
一実施形態では、二重特異性抗体は、ｍＡｂ２である。ｍＡｂ２は、修飾された定常領域に融合した、無傷抗体由来のＶＨおよびＶＬドメインを含み、これは、「Ｆｃａｂ」として知られる抗原結合部位を形成するように操作されている。Ｆｃａｂ／ｍＡｂ２フォーマットの背景にある技術は、ＷＯ２００８／００３１０３により詳細に記載され、ｍＡｂ２フォーマットの記載は、本明細書に参照により組み込まれている。
【００７２】
一実施形態では、「二重特異性抗体」は、ＦＩＴ−Ｉｇフォーマットを含まない。一実施形態では、「二重特異性抗体」は、ｍＡｂ２フォーマットを含まない。一実施形態では、「二重特異性抗体」は、ＦＩＴ−ＩｇフォーマットまたはｍＡｂ２フォーマットのいずれも含まない。
【００７３】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、「二重結合抗体」である。本明細書で使用される場合、「二重結合抗体」とは、両方の抗原結合ドメインがＶＨ／ＶＬ対によって形成されている二重特異性抗体であり、これには、ＦＩＴ−Ｉｇ（本明細書に参照により組み込まれるＷＯ２０１５／１０３０７２を参照されたい）、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、Ｆａｂ−アーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、Ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ−Ｙ、Ｆｃａｂ、κλ−ｂｏｄｙ、直交Ｆａｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｄｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｔａｎｄｅｍ  ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、トリプルボディ（Ｔｒｉｐｌｅ  ｂｏｄｙ）、ミニ抗体、ミニボディ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３  ＫＩＨ、ｓｃＦｖ−ＣＨ−ＣＬ−ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、４価のＨＣａｂ、ＩｍｍＴＡＣ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、ＤＴ−ＩｇＧ、ＤｕｔａＭａｂ、ＩｇＧ（Ｈ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）−Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）−Ｖ、Ｖ（Ｈ）−ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−Ｖ、Ｖ（Ｌ）−ＩｇＧ、ＫＩＨ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＩｇＧ−２ｓｃＦｖ、ならびにｓｃＦｖ４−Ｉｇ等が含まれるが、これらに限定されない。
【００７４】
「超可変領域」、「ＣＤＲ領域」、または「ＣＤＲ」という用語は、配列が超可変性であり、及び／又は構造的に画定されたループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体の抗原結合部位は、６つの超可変領域（ＶＨにおいて３つ（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３）およびＶＬにおいて３つ（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３））を含む。抗体の重鎖および軽鎖のこれらの領域は、抗原結合特異性を抗体に付与する。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔシステムに従って定義され得る（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，１９９１，「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」，５ｔｈ  ｅｄｉｔ．，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓを参照されたい）。Ｃｈｏｔｈｉａらによって考案されたシステム（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．＆Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，１９８７，「Ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６，９０１−９１７を参照されたい）およびＩＭＧＴシステム（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．Ｐ．，１９９７，「Ｕｎｉｑｕｅ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ」，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１８，５０を参照されたい）等の他のシステムを使用してＣＤＲを定義してもよい。抗体は、典型的には、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含む。ＣＤＲ（複数可）という用語は、これらの領域の１つまたはいくつかを示すためにここで使用される。当業者は、命名法の異なるシステムを容易に比較し、特定の配列がＣＤＲとして定義され得るかどうかを判定することができる。
【００７５】
「ヒト抗体」は、ヒトによって産生された抗体のものに対応するアミノ酸配列を保有し、及び／又はヒト抗体を作製するための技術のいずれかを使用して作製された抗体であり、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外する。「特異的に結合する」という用語は、生物学的分子を含む分子の均質な集団の存在下で標的の存在を決定する、標的と抗体との間の結合等の測定可能および再現可能な相互作用を指す。例えば、標的（エピトープであり得る）に特異的に結合する抗体は、それが他の標的に結合するよりも大きい親和性、結合力で、より容易に、及び／又はより長くこの標的に結合する抗体である。一実施形態では、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）によって測定した場合、無関係の標的に対する抗体の結合の程度は、標的に対する抗体の結合の約１０％未満である。
【００７６】
ｈＰＤ−Ｌ１抗原に特異的に結合する抗体またはその断片は、関連する抗原と交差反応性であり得る。好ましくは、ｈＰＤ−Ｌ１抗原に特異的に結合する抗体またはその断片は、他の抗原と交差反応しない（しかし、任意に、異なる種、例えばアカゲザルまたはマウスのＰＤ−Ｌ１と交差反応し得てもよい）。ｈＰＤ−Ｌ１抗原に特異的に結合する抗体またはその断片は、例えば、免疫アッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）、または当該技術分野で既知の他の技術によって同定され得る。抗体またはその断片は、放射免疫測定法（ＲＩＡ）および酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）等の実験技術を使用して判定した場合、それが任意の交差反応性抗原に対するよりも高い親和性でｈＰＤ−Ｌ１抗原に結合するときに、ＰＤ−Ｌ１抗原に特異的に結合する。典型的には、特異的または選択的反応は、少なくとも２倍のバックグラインドシグナルまたはノイズ、より典型的には１０倍超（例えば、１５倍超、２０倍超、５０倍超、または１００倍超）のバックグラウンドである。抗体特異性に関する考察については、例えば、Ｐａｕｌ，ｅｄ．，１９８９，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋの３３２〜３３６頁を参照されたい。
【００７７】
「脂肪族アミノ酸」という用語は、アミノ酸Ｒ基が非極性および疎水性であることを意味する。疎水性は、炭化水素鎖中のＣ原子の数が増加するにつれて増加する。グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンは、脂肪族アミノ酸である。
【００７８】
「芳香族アミノ酸」という用語は、アミノ酸Ｒ基が芳香族環系を含有することを意味する。フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンは、芳香族アミノ酸である。
【００７９】
「ヒドロキシル含有アミノ酸」という用語は、アミノ酸Ｒ基がヒドロキシル基を含有し、親水性であることを意味する。セリン、システイン、トレオニン、およびメチオニンは、ヒドロキシル含有アミノ酸である。
【００８０】
「塩基性アミノ酸」という用語は、アミノ酸Ｒ基が窒素を含有し、中性ｐＨで塩基性であることを意味する。ヒスチジン、リジン、およびアルギニンは、塩基性アミノ酸である。
【００８１】
「環状アミノ酸」という用語は、アミノ酸Ｒ基が脂肪族環状構造を有することを意味する。プロリンは、唯一の環状脂肪族アミノ酸である。
【００８２】
「酸性アミノ酸」という用語は、アミノ酸Ｒ基が極性であり、生理学的ｐＨで負に帯電していることを意味する。アスパラギン酸およびグルタミン酸は、酸性アミノ酸である。
【００８３】
「アミドアミノ酸」という用語は、アミノ酸Ｒ基がアミド基を含有することを意味する。アスパラギンおよびグルタミンは、アミドアミノ酸である。
【００８４】
本明細書で使用される場合、「承認番号」および「販売承認番号」とは、特定の医療用製品および／または組成物が機関の管轄エリアにおいて販売および／または発売されてもよいとその機関が判定した際に、規制機関によって発行された番号を指す。本明細書で使用される場合、「規制機関」とは、例えば、医療用製品および／または組成物の安全性および有効性の評価、ならびに所与のエリアにおけるかかる製品および／または組成物の発売／販売の制御を担う機関のうちの１つを指す。米国における食品医薬品局（ＦＤＡ）および欧州における欧州医薬品庁（ＥＰＡ）は、かかる規制機関のほんの２つの例に過ぎない。他の非限定的な例としては、ＳＤＡ、ＭＰＡ、ＭＨＰＲＡ、ＩＭＡ、ＡＮＭＡＴ、Ｈｏｎｇ  Ｋｏｎｇ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ−Ｄｒｕｇ  Ｏｆｆｉｃｅ、ＣＤＳＣＯ、Ｍｅｄｓａｆｅ、およびＫＦＤＡが挙げられ得る。
【００８５】
本明細書で使用される場合、「バイオマーカー」という用語は、目的の疾患を有する個体において差次的に発現される遺伝子、例えば、癌を有する個体において差次的に発現される遺伝子を指す。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１は、腫瘍中のその発現が、患者が特定の種類の治療に応答するかどうか、具体的には、患者がＰＤ−Ｌ１を標的とする治療、例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を使用した免疫療法に応答するかどうかを示し得るバイオマーカーである。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１は、腫瘍中のその発現が、患者が特定の種類の治療に応答するかどうか、具体的には、患者がＰＤ−１を標的とする治療、例えば、抗ＰＤ−１抗体を使用した免疫療法に応答するかどうかを示し得るバイオマーカーである。別の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１は、遊離であってもよく、膜結合していてもよい。別の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１は、固定されていても固定されていなくてもよい。
【００８６】
本明細書で使用される場合、「緩衝液」とは、ｐＨの強い変動を経ることなく、ある特定の量の酸または塩基を吸収することができる化学薬剤を指す。
【００８７】
本明細書で使用される場合、「担体」という用語は、治療剤と共に投与される、希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全および不完全））、賦形剤、またはビヒクルを指す。かかる薬学的担体は、滅菌液、例えば、石油、動物、植物、または合成起源のものを含む、水および油、例えばピーナツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油等であり得る。水は、医薬組成物が静脈内投与される場合の好ましい担体である。生理食塩水、ならびにデキストロースおよびグリセロール水溶液も、特に注射液用の液体担体として使用することができる。
【００８８】
「化学療法剤」または「化学療法」という用語は、典型的には、腫瘍細胞が成長または増殖する能力を妨げることによって、癌細胞を破壊することを主な目的とする治療剤を指す。多くの異なる種類の化学療法剤が存在し、５０種類を超える承認された化学療法剤が利用可能である。化学療法薬は、それらがどのように作用するかに基づいて分類され得る。アルキル化剤は、遺伝子の遺伝物質であるＤＮＡを直接攻撃することによって癌細胞を殺滅する。シクロホスファミドは、アルキル化剤である。代謝拮抗剤は、ＤＮＡの産生を妨げ、細胞の成長および増殖を抑制する。代謝拮抗物質の例は、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）である。抗腫瘍抗生物質は、土壌中の真菌等の天然物質から作られる。それらは、ＤＮＡおよび細胞タンパク質の産生を含む重要な細胞機能を妨げる。ドキソルビシンおよびブレオマイシンは、化学療法剤のこの群に属する。植物アルカロイドは、細胞が正常に分裂することを防ぐ。ビンブラスチンおよびビンクリスチンは、ツルニチニチソウの植物から得られる植物アルカロイドである。ステロイドホルモンは、ホルモンに依存するいくつかの癌の成長を遅らせる。例えば、タモキシフェンは、成長のためにホルモンエストロゲンに依存する乳癌を治療するために使用される。ＰＡＲＰ阻害剤等のＤＮＡ損傷応答（ＤＤＲ）阻害剤は、一本鎖または二本鎖切断後のＤＮＡ修復機構を遮断する。
【００８９】
化学療法剤の例としては、アドリアマイシン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソテール（ドセタキセル）、ブスルファン、シトキシン（Ｃｙｔｏｘｉｎ）、タキソール、メトトレキサート、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクレイスチン（Ｖｉｎｃｒｅｉｓｔｉｎｅ）、ビノレルビンカルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、エスペラミシン（米国特許第４，６７５，１８７号を参照されたい）、メルファラン、および他の関連するナイトロジェンマスタードが挙げられる。好適な毒素および化学療法剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ  Ｅｄ．（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．１９９５）およびＧｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，７ｔｈ  Ｅｄ．（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．１９８５）に記載されている。化学療法剤の別の例は、抗体とコンジュゲートされた毒素のクラスであり、ピロロベンゾジアゼピン、マイタンサノイド（ｍａｙｔａｎｓａｎｏｉｄ）、カリケアマイシン等が含まれるがこれらに限定されない。他の好適な毒素および／または化学療法剤は、当業者に既知である。
【００９０】
本明細書で使用される場合、「組成物」という用語は、任意にで指定の量であってもよい指定の成分（例えば、本発明の抗体）を含有する生成物、および任意に指定の量であってもよい指定の成分の組み合わせから直接または間接的にもたらされる任意の生成物を包含することが意図される。
【００９１】
本明細書中で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」という用語は、方法または組成物に不可欠である抗体、断片、使用、組成物、方法、およびそのそれぞれの成分（複数可）に関して使用されるが、不可欠であるかどうかを問わず未指定の要素を含む余地がある。
【００９２】
「からなる」という用語は、その実施形態の記載に引用されていない任意の要素を一切含まない、本明細書に記載される抗体、断片、使用、組成物、方法、およびそのそれぞれの成分を指す。
【００９３】
本明細書で使用される場合、「から本質的になる」という用語は、所与の実施形態に必要とされる要素を指す。この用語は、その実施形態の基本的で新規または機能的な特徴（複数可）に重大な影響を与えない要素の存在を許容する。
【００９４】
本明細書で使用される場合、ポリペプチドの文脈において、「誘導体」という用語は、ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチド、ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの断片、またはアミノ酸残基の置換、欠失、もしくは付加の導入によって改変された、ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体を指す。本明細書で使用される場合、「誘導体」という用語はまた、ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの断片、または例えば、ポリペプチドへの任意の種類の分子の共有結合によって化学修飾された、ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体を指す。例えば、限定することなく、ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの断片、またはｈＰＤ−Ｌ１抗体は、例えば、糖鎖付加、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への結合等によって化学修飾され得る。誘導体は、結合した分子の種類または位置のいずれかが天然のまたは開始ペプチドまたはポリペプチドとは異なっている様式で修飾される。誘導体は、ペプチドまたはポリペプチド上に天然に存在する１つ以上の化学基の欠失をさらに含む。ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの断片、またはｈＰＤ−Ｌ１抗体の誘導体は、特異的化学切断、アセチル化、製剤化、ツニカマイシンの代謝合成等を含むがこれらに限定されない、当業者に既知の技術を使用した化学修飾によって化学修飾され得る。さらに、ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの断片、またはｈＰＤ−Ｌ１抗体の誘導体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含有し得る。ポリペプチド誘導体は、本明細書に記載されるｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチド、ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの断片、またはｈＰＤ−Ｌ１抗体と同様または同一の機能を保有する。
【００９５】
本明細書で使用される場合、「エフェクター機能」という用語は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）媒介性応答、Ｆｃ媒介性食作用または抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、およびＦｃＲｎ受容体を介して再循環する抗体のうちの１つ以上を指すように意図される。
【００９６】
「有効量」とは、治療効果または予防効果を含む所望の効果を達成するために必要な投与量および期間で有効な量を指す。「治療有効量」とは、特定の障害の測定可能な改善または予防を達成するために必要な最小濃度を指す。本明細書における治療有効量は、患者の病期、年齢、性別、および体重、ならびに抗体が個体において所望の応答を引き出す能力等の要因に応じて変動し得る。治療有効量はまた、治療に有益な効果が抗体の毒作用または有害作用に勝るものである。「予防有効量」とは、所望の予防効果を達成するために必要な投与量および期間で有効な量を指す。いくつかの実施形態では、本発明の抗体の有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ（対象の体重１ｋｇ当たりの抗体のｍｇ）〜約１００ｍｇ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体の有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、または約１００ｍｇ／ｋｇ（またはこの中の範囲）である。いくつかの実施形態では、本明細書で使用される場合、「有効量」はまた、指定の結果（例えば、細胞のｈＰＤ−Ｌ１生物活性の阻害）を達成するための、本発明の抗体の量を指す。
【００９７】
本発明で使用される場合、「エピトープ」という用語は、抗体の１つ以上の抗原結合領域に結合することができ、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトにおいて抗原性または免疫原性活性を有し、そして免疫応答を引き出すことができる、ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチドまたはｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチド断片等の抗原の表面上の局在化した領域を指す。免疫原性活性を有するエピトープは、動物において抗体応答を引き出すポリペプチドの一部である。抗原性活性を有するエピトープは、当該技術分野で周知の任意の方法によって、例えば本明細書に記載される免疫アッセイによって判定されるように、抗体が特異的に結合するポリペプチドの一部である。抗原性エピトープは、必ずしも免疫原性でなくてもよい。エピトープは、通常、アミノ酸または糖側鎖等の分子の化学的に活性な表面基からなり、特異的な三次元構造特性、ならびに特異的な電荷特性を有する。エピトープに気よするポリペプチドの領域は、ポリペプチドの連続したアミノ酸であってもよく、またはエピトープは、ポリペプチドの２つ以上の連続していない領域から集合してもよい。エピトープは、抗原の三次元表面特徴であってもなくてもよい。ある特定の実施形態では、ｈＰＤ−Ｌ１エピトープは、ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの三次元表面特徴である（例えば、三量体形態のｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチドにおいて）。他の実施形態では、ｈＰＤ−Ｌ１エピトープは、ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの線状特徴である（例えば、三量体形態または単量体形態のｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチドにおいて）。本明細書に提供される抗体は、単量体（変性）形態のｈＰＤ−Ｌ１のエピトープ、三量体（天然）形態のｈＰＤ−Ｌ１のエピトープ、または単量体（変性）形態および三量体（天然）形態の両方のｈＰＤ−Ｌ１のエピトープに特異的に結合し得る。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、三量体形態のｈＰＤ−Ｌ１のエピトープに特異的に結合するが、単量体形態のｈＰＤ−Ｌ１には特異的に結合しない。
【００９８】
本明細書で使用される場合、「賦形剤」という用語は、一般に、薬物のための希釈剤、ビヒクル、保存剤、結合剤、または安定剤として使用される不活性物質を指し、これには、タンパク質（例えば、血清アルブミン等）、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、グリシン、ヒスチジン等）、脂肪酸およびリン脂質（例えば、アルキルスルホン酸塩、カプリル酸塩等）、界面活性剤（例えば、ＳＤＳ、ポリソルベート、非イオン性界面活性剤等）、糖類（例えば、スクロース、マルトース、トレハロース等）、ならびにポリオール（例えば、マンニトール、ソルビトール等）が含まれるが、これらに限定されない。また、本明細書に参照によりその全体が組み込まれている、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．も参照されたい。
【００９９】
本明細書で使用される場合、「固定された」または「固定」という用語は、自己融解または腐敗を防止するために、生物学的組織が防腐される化学プロセスを指す。一般に、固定は、組織を化学的化合物、例えばアルコールまたはホルムアルデヒド等のアルデヒドに晒して、進行中の生化学反応を停止させることを含む。いくつかの例では、固定はまた、処置された組織の力学的強度および安定性を増加させることもできる。「固定されていない」という用語は、組織の腐敗を防止するための化学プロセスに供されていない組織を指す。本明細書で使用される場合、「表面発現」とは、タンパク質が細胞膜中に包埋されているかもしくは細胞膜を貫通しているか、または細胞膜中に包埋されているかもしくは細胞膜を貫通するタンパク質と結合している（すなわち、膜結合タンパク質）ことを意味する。一実施形態では、表面発現タンパク質は、１つ以上の膜貫通ドメインを含む。別の実施形態では、タンパク質は、別の膜貫通タンパク質との結合を介して間接的に細胞膜の外表面または内表面に結合している（すなわち、表面発現タンパク質は、細胞膜自体を貫通していない）。一般に、細胞膜内に組み込まれたか細胞内で内因的に発現された表面発現タンパク質は、同じタンパク質の組換え生成された遊離形態よりも正しい構造で折り畳む可能性が高い。
【０１００】
本明細書で使用される場合、ペプチドまたはポリペプチドの文脈において、「断片」という用語は、全長未満のアミノ酸配列を含むペプチドまたはポリペプチドを指す。かかる断片は、例えば、アミノ末端でのトランケーション、カルボキシ末端でのトランケーション、および／またはアミノ酸配列からの残基（複数可）の内部欠失から生じ得る。断片は、例えば、代替的なＲＮＡスプライシングから、またはインビボプロテアーゼ活性からもたらされる場合がある。ある特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１断片は、ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチドまたはｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチドに特異的に結合する抗体のアミノ酸配列の、少なくとも５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも４０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも５０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも６０個の個の連続したアミノ酸残基、少なくとも７０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも８０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも９０個の連続したアミノ酸残基、連続した少なくとも１００個のアミノ酸残基、少なくとも１２５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１５０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１７５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２００個の連続したアミノ酸残基、または少なくとも２５０個の連続したアミノ酸残基アミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。特定の実施形態では、ｈＰＤ−Ｌ１ポリペプチドまたはｈＰＤ−Ｌ１抗原に特異的に結合する抗体の断片は、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つの機能を保持する。
【０１０１】
「遊離」という用語は、緩衝液と組み合わされた、ポリペプチド、例えばＰＤ−Ｌ１、またはその断片および変異型を指し、ポリペプチドは、細胞表面または細胞膜に結合していない。したがって、「遊離」という用語は、表面発現が可能である（すなわち、１つ以上の膜貫通ドメインまたは膜結合ドメインを含む）が、その現在の状態では細胞の表面上に発現されていないか、または細胞の表面上に発現されたタンパク質に結合していない、ポリペプチドを指すことができる。遊離ポリペプチドはまた、遊離の組換えまたは天然または非結合ポリペプチドを指すことができる。ファージ提示の文脈において、遊離抗原は、溶液中で選択され得る（本明細書において「可溶性選択」と称される）か、または表面に吸着され得、例えば、９６ウェルプレートの表面に吸着され得る（本明細書において「バイオパニング選択」と称される）。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、「融合タンパク質」という用語は、抗体のアミノ酸配列および異種のポリペプチドまたはタンパク質（すなわち、通常は抗体の一部ではないポリペプチドまたはタンパク質（例えば、非抗ｈＰＤ−Ｌ１抗原抗体））のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。「融合」という用語は、ｈＰＤ−Ｌ１または抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体に関連して使用される場合、ペプチドもしくはポリペプチド、またはその断片、変異型、および／もしくは誘導体の、異種のペプチドまたはポリペプチドとの接合を指す。好ましくは、融合タンパク質は、ｈＰＤ−Ｌ１または抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体の生物活性を保持する。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、ｈＰＤ−Ｌ１抗体のＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨ  ＣＤＲ（１つ、２つ、または３つのＶＨ  ＣＤＲ）、および／またはＶＬ  ＣＤＲ（１つ、２つ、または３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、融合タンパク質は、ｈＰＤ−Ｌ１エピトープに特異的に結合する。
【０１０３】
「重鎖」という用語は、抗体に関連して使用される場合、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、およびミュー（μ）と呼ばれる、５つの異なる種類を指す。これらの異なる種類の重鎖は周知であり、そこから５つのクラスの抗体、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがそれぞれ生じ、ＩｇＧの４つのサブクラス、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４が含まれる。好ましくは、重鎖は、ヒト重鎖である。ヒト集団において、各免疫グロブリンまたは免疫グロブリンサブクラスの複数の重鎖定常領域対立遺伝子が存在する。これらの対立遺伝子変異型のヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、ＩＭＧＴ、ＥＮＳＥＭＢＬ  Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ、およびＵｎｉｐｒｏｔ等の公的に利用可能なデータベース上でアクセス可能である。対立遺伝子変異型はまた、様々なゲノム配列決定プロジェクトにおいて同定され得る。一実施形態では、本明細書に開示される抗体および抗体断片は、ヒトＩＧＨＧ１＊０１（配列番号３４０、３４１、および５３７）、ＩＧＨＧ１＊０２（配列番号３４０、３４１、および５３７）、ＩＧＨＧ１＊０３（配列番号５２３および５２４）、ＩＧＨＧ１＊０４（配列番号５２５および５２６）、ならびにＩＧＨＧ１＊０５（配列番号３４０、３４１、および５３７）を含むがこれらに限定されないＩｇＧ１定常領域対立遺伝子によってコードされる重鎖を含む。一実施形態では、本明細書に開示される抗体および抗体断片は、ヒトＩＧＨＧ２＊０１（配列番号５２７および５２８）、ＩＧＨＧ２＊０２（配列番号５２９および５３０）、ＩＧＨＧ２＊０３（配列番号５２７および５２８）、ＩＧＨＧ２＊０４（配列番号５３１および５３２）、ＩＧＨＧ２＊０５（配列番号５２７および５２８）、ならびにＩＧＨＧ２＊０６（配列番号５３３および５３４）を含むがこれらに限定されないＩｇＧ２定常領域対立遺伝子によってコードされるタンパク質を含む。一実施形態では、本明細書に開示される抗体および抗体断片は、ヒトＩＧＨＧ３＊０１、ＩＧＨＧ３＊０２、ＩＧＨＧ３＊０３、ＩＧＨＧ３＊０４、ＩＧＨＧ３＊０５、ＩＧＨＧ３＊０６、ＩＧＨＧ３＊０７、ＩＧＨＧ３＊０８、ＩＧＨＧ３＊０９、ＩＧＨＧ３＊１０、ＩＧＨＧ３＊１１、ＩＧＨＧ３＊１２、ＩＧＨＧ３＊１３、ＩＧＨＧ３＊１４、ＩＧＨＧ３＊１５、ＩＧＨＧ３＊１６、ＩＧＨＧ３＊１７、ＩＧＨＧ３＊１８、およびＩＧＨＧ３＊１９を含むがこれらに限定されないＩｇＧ３定常領域対立遺伝子によってコードされるタンパク質を含む。一実施形態では、本明細書に開示される抗体および抗体断片は、ヒトＩＧＨＧ４＊０１（配列番号１９２および１９３）、ＩＧＨＧ４＊０２（配列番号１９４および１９５）、ＩＧＨＧ４＊０３（配列番号１９６および１９７）、ならびにＩＧＨＧ４＊０４（配列番号１９２  ＆  １９３）を含むがこれらに限定されないＩｇＧ４定常領域対立遺伝子によってコードされるタンパク質を含む。別の例では、重鎖は、欠損したＩｇＧアイソタイプ、例えば、欠損したＩｇＧ４である。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、ヒトガンマ４定常領域を含む。別の実施形態では、重鎖定常領域は��Ｆｃ−γ受容体に結合せず、例えば、Ｌｅｕ２３５Ｇｌｕ変異を含む。別の実施形態では、重鎖定常領域は、安定性を増加させるために、Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ変異を含む。別の実施形態では、重鎖定常領域は、ＩｇＧ４−ＰＥ（配列番号１９９である。別の実施形態では、本明細書に開示される抗体および抗体断片は、マウスＩＧＨＧ１＊０１またはＩＧＨＧ１＊０２を含むがこれらに限定されないマウスＩｇＧ１定常領域対立遺伝子によってコードされた重鎖定常領域を含む。一実施形態では、本明細書に開示される抗体および抗体断片は、マウスＩＧＨＧ２Ａ＊０１、ＩＧＨＧ２Ａ＊０２、ＩＧＨＧ２Ｂ＊０１、ＩＧＨＧ２Ｂ＊０２、ＩＧＨＧ２Ｃ＊０１、ＩＧＨＧ２Ｃ＊０２、またはＩＧＨＧ２Ｃ＊０３を含むがこれらに限定されないマウスＩｇＧ２定常領域対立遺伝子によってコードされた重鎖定常領域を含む。一実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗体断片は、マウスＩＧＨＧ３＊０１を含むがこれに限定されないマウスＩｇＧ３定常領域対立遺伝子によってコードされたタンパク質を含む。
【０１０４】
本明細書で使用される場合、「宿主」という用語は、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。
【０１０５】
本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、核酸分子でトランスフェクトされた特定の対象細胞、およびかかる細胞の子孫または潜在的な子孫を指す。かかる細胞の子孫は、その後の世代で生じ得る変異もしくは環境的影響、または宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込みに起因して、核酸分子でトランスフェクトされた親細胞と同一ではない場合がある。
【０１０６】
本明細書で使用される場合、「ＩＬ−２サイトカイン」という用語は、野生型ＩＬ−２と同様の活性を有するサイトカイン様分子を指す。それは、高（αβγ）親和性のＩＬ−２受容体および／または中親和性（αβ）ＩＬ−２受容体で活性を有し得る。サイトカインは、１つ以上のアミノ酸欠失、置換、または付加を有する変異型ＩＬ−２サイトカインであり得る。変異型サイトカインは、本明細書において以下により詳細に記載される。
【０１０７】
本明細書で使用される場合、「免疫調節剤」および免疫調節剤を含むがこれに限定されないその変形は、宿主の免疫系を調節する薬剤を指す。ある特定の実施形態では、免疫調節剤は、免疫抑制剤である。ある特定の他の実施形態では、免疫調節剤は、免疫刺激剤である。本発明によれば、本発明の併用療法において使用される免疫調節剤は、抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体または抗原結合断片を含まない。免疫調節剤には、小分子、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、融合タンパク質、抗体、無機分子、模倣剤、および有機分子が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０８】
他の療法剤の投与の文約における「組み合わせて」という用語は、２つ以上の療法剤の使用を指す。「組み合わせて」という用語の使用は、疾患を有する対象に療法剤が投与される順序を制限しない。第１の療法剤は、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患を有したか、有するか、またはそれに罹患しやすい対象への第２の療法剤の投与前（例えば、１分、４５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、もしくは１２週間）、それと同時に、またはその後（例えば、１分、４５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間）に投与され得る。任意の追加の療法剤は、他の追加の療法剤と共に任意の順序で投与され得る。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、１つ以上の療法剤（例えば、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患を予防、治療、管理、および／または改善するために現在投与されている本発明の抗体ではない療法剤）と組み合わせて投与され得る。本発明の抗体と組み合わせて投与され得る療法剤の非限定的な例としては、鎮痛剤、麻酔剤、抗生物質、もしくは免疫調節剤、または米国薬局方および／もしくは医師用添付文書集に列挙される任意の他の薬剤が挙げられる。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、「免疫サイトカイン」という用語は、サイトカイン分子に融合した抗体フォーマットを指す。抗体フォーマットは、本明細書に記載されるもののいずれかであり得、サイトカインは、直接、または抗体フォーマットの重鎖もしくは軽鎖のＮ末端もしくはＣ末端へのリンカーもしくは化学的コンジュゲーションを介して融合され得る。
【０１１０】
本明細書で使用される場合、「注射デバイス」とは、注射を実施するために設計されているデバイスを指し、注射は、注射デバイスを人物の組織、典型的には非組織に、一時的に流体的に繋ぐステップを含む。注射は、ある量の液体薬物を組織内に投与し、注射デバイスを組織から分離させるかまたは取り外すことをさらに含む。いくつかの実施形態では、注射デバイスは、標的組織が循環系内の血液、例えば、静脈の血管であるときに使用される注射デバイスの種類である、静脈内デバイスまたはＩＶデバイスであり得る。注射装置の一般的であるが非限定的な例は、針および注射器である。
【０１１１】
本明細書で使用される場合、「説明書」とは、物品の直接容器上の文書、印刷物、または図形物、例えば、薬学的活性剤を含有するバイアル上に表示された文書、または目的の組成物を含有するキットに含まれる目的の製品の組成および使用についての詳細の表示を指す。説明書は、投与または実施されることが企図される治療の方法を記載する。
【０１１２】
「単離された」または「精製された」抗体またはタンパク質は、その産生環境の成分（例えば、天然または組換え）から同定、分離、および／または回収されたものである。例えば、抗体またはタンパク質は、抗体が由来する細胞もしくは組織源からの細胞物質もしくは他の汚染タンパク質を実質的に含まないか、または化学的に合成されている場合には化学的前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まない。「細胞物質を実質的に含まない」という表現は、抗体が、単離または組換え生成された細胞の細胞成分とは分離されている、抗体の調製物を含む。したがって、細胞物質を実質的に含まない抗体は、約３０％、２０％、１０％、または５％（乾燥重量による）未満の異種タンパク質（本明細書において「汚染タンパク質」とも呼ばれる）を含む。抗体が組換え生成されている場合、抗体はまた、好ましくは培養培地も実質的に含まず、すなわち、培養培地は、タンパク質調製物の体積の２０％、１０％、または５％未満を占める。抗体が化学合成によって産生される場合、抗体は、好ましくは化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まず、すなわち、抗体は、タンパク質の合成に関与する化学的前駆体または他の化学物質から分離されている。したがって、抗体のかかる調製物は、約３０％、２０％、１０％、５％（乾燥重量による）未満の、目的の抗体以外の化学的前駆体または化合物を有する。好ましい実施形態では、本発明の抗体は、単離または精製されている。
【０１１３】
「Ｋａｂａｔ付番」という用語および同様の用語は、当該技術分野で認識されており、抗体の重鎖可変領域またはその抗原結合部分において他のアミノ酸残基よりも可変である（すなわち、超可変）アミノ酸残基を付番するシステムを指す（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９０：３８２−３９１およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）。重鎖可変領域の場合、超可変領域は、典型的には、ＣＤＲ１についてアミノ酸３１〜３５位、ＣＤＲ２についてアミノ酸５０〜６５位、およびＣＤＲ３についてアミノ酸９５〜１０２位の範囲である。
【０１１４】
本明細書で使用される場合、「標識」または「標識された」とは、ポリペプチドへの検出可能な部分、例えば、放射標識、蛍光標識、酵素標識、化学発光標識、またはビオチニル基もしくは金の付加を指す。評者性同位体または放射性核種には、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１５Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉが含まれ得、蛍光標識には、ローダミン、ランタニド蛍光体、またはＦＩＴＣが含まれ得、構想標識には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリフォスファターゼが含まれ得る。さらなる標識には、制限的ではなく例示目的で、グルコース−６−リン酸脱水酵素（「Ｇ６ＰＤＨ」）、アルファ−Ｄ−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコースアミラーゼ、炭酸脱水酵素、アセチルコリンエステラーゼ、リゾチーム、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、およびペルオキシダーゼ等の酵素；色素（例えば、シアニン色素、例えば、Ｃｙ５（商標）、Ｃｙ５．５（商標）、またはＣｙ７（商標））；フルオレセインおよびその誘導体、蛍光色素、ＧＦＰ（「緑色蛍光タンパク質」のＧＦＰ）、他の蛍光タンパク質（例えば、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｍＴｏｍａｔｏ）、ダンシル、ウンベリフェロン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタアルデヒド（ｐｈｔｈａｌｄｅｈｙｄｅ）、およびフルオレスカミン等の追加の蛍光標識または蛍光体；ランタニドクリプテートおよびキレート等のフルオロフォア、例えば、ユーロピウム等（パーキンエルマーおよびシスビオ（Ｃｉｓｂｉｏ）アッセイ）；イソルミノール、ルミノール、およびジオキセタン等の化学蛍光標識または化学蛍光体；増感剤；補酵素；酵素基質；ラテックスまたは炭素粒子等の粒子；金属ゾル；微結晶；リポソーム；細胞等が含まれ、これらは、色素、触媒、または他の検出可能な基；ビオチン、ジゴキシゲニン、または５−ブロモデオキシウリジン等の分子；例えば、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ菌外毒素（ＰＥまたはその細胞毒性断片もしくは変異体）、Ｄｉｐｔｈｅｒｉａ毒素またはその細胞毒性断片もしくは変異体、ボツリヌス毒素Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、またはＦ、リシンまたはその細胞毒性断片、例えば、リシンＡ、アブリンまたはその細胞毒性断片、サポリンまたはその細胞毒性断片、ヤマゴボウ抗ウイルス毒素またはその細胞毒性断片、およびブリオジン（ｂｒｙｏｄｉｎ）１またはその細胞毒性断片からなる群から選択される毒素部分等の毒素部分でさらに標識され得る。
【０１１５】
抗体に関連して使用される場合、「軽鎖」という用語は、免疫グロブリン軽鎖を指し、これには、哺乳動物においてラムダ（λ）およびカッパ（κ）の２種類が存在する。好ましくは、軽鎖は、ヒト軽鎖である。好ましくは、軽鎖定常領域は、ヒト定常領域である。ヒト集団において、複数の軽鎖定常領域対立遺伝子が存在する。これらの対立遺伝子変異型のヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、ＩＭＧＴ、ＥＮＳＥＭＢＬ  Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ、およびＵｎｉｐｒｏｔ等の公的に利用可能なデータベース上でアクセス可能である。一実施形態では、本明細書に開示される抗体および抗体断片は、ＩＧＫＣ＊０１（配列番号２０６および２０７）、ＩＧＫＣ＊０２（配列番号２０８および２０９）、ＩＧＫＣ＊０３（配列番号２１０および２１１）、ＩＧＫＣ＊０４（配列番号２１２および２１３）、ならびにＩＧＫＣ＊０５（配列番号２１４および２１５）を含むがこれらに限定されないヒトκ定常領域対立遺伝子によってコードされるタンパク質を含む。一実施形態では、本明細書に開示される抗体および抗体断片は、ＩＧＬＣ１＊０１（配列番号２１６および２１７）、ＩＧＬＣ１＊０２（配列番号２１８、２１９、および２２０）、ＩＧＬＣ２＊０１（配列番号２２１、２２２、および５３８）、ＩＧＬＣ２＊０２（配列番号２２４および２２５）、ＩＧＬＣ２＊０３（配列番号２２４および２２５）、ＩＧＬＣ３＊０１（配列番号２２６および２２７）、ＩＧＬＣ３＊０２（配列番号２２および２２９）、ＩＧＬＣ３＊０３（配列番号２３０および２３１）、ＩＧＬＣ３＊０４（配列番号２３２および２３３）、ＩＧＬＣ６＊０１（配列番号２３４および２３５）、ＩＧＬＣ７＊０１（配列番号２３６および２３７）、ＩＧＬＣ７＊０２（配列番号２３６および２３７）、ＩＧＬＣ７＊０３（配列番号５３５および５３６）を含むがこれらに限定されないヒトλ定常領域対立遺伝子によってコードされるタンパク質を含む。別の実施形態では、本明細書に開示される抗体および抗体断片は、ＩＧＫＣ＊０１、ＩＧＫＣ＊０３、またはＩＧＫＣ＊０３を含むがこれらに限定されないマウスκ定常領域対立遺伝子によってコードされた軽鎖定常領域を含む。別の実施形態では、本明細書に開示される抗体および抗体断片は、ＩＧＬＣ１＊０１、ＩＧＬＣ２＊０１、またはＩＧＬＣ３＊０１を含むがこれらに限定されないマウスλ定常領域対立遺伝子によってコードされた軽鎖定常領域を含む。
【０１１６】
ペプチド、ポリペプチド、または抗体配列に関連する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」および「相同性」は、最大の配列同一パーセントを達成するために配列を整列させ、必要であればギャップを導入した後に、そしていかなる保存的置換も配列同一性の一部と見なさずに、特定のペプチドまたはポリペプチド配列と同一である、候補配列中のアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを判定する目的のための整列は、当該技術分野の範囲内である様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭＥＧ  ＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。一実施形態では、相同性％は、約７０％である。一実施形態では、相同性％は、約７５％である。一実施形態では、相同性％は、約８０％である。一実施形態では、相同性％は、約８５％である。一実施形態では、相同性％は、約９０％である。一実施形態では、相同性％は、約９２％である。一実施形態では、相同性％は、約９５％である。一実施形態では、相同性％は、約９７％である。一実施形態では、相同性％は、約９８％である。一実施形態では、相同性％は、約９９％である。一実施形態では、相同性％は、１００％である。
【０１１７】
生体物質、例えば核酸分子、ポリペプチド、宿主細胞に関連して使用される場合、「天然型の」または「天然」という用語は、天然に見出され、人間によって操作されていないものを指す。
【０１１８】
本明細書で使用される場合、「包装」とは、構成要素が分配および／または使用のために適したユニット内にまとめられ、及び／又は抑制される方法を指す。包装には、例えば、滅菌、ラベル付け等を維持するための、箱、袋、注射器、アンプル、バイアル、チューブ、クラムシェル包装、バリア、及び／又は容器が含まれ得る。
【０１１９】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、動物、より具体的にはヒトにおける使用について、連邦政府もしくは州政府の規制機関によって承認されているか、または米国薬局方、欧州薬局方、もしくは他の一般的に認識された薬局方に列挙されていることを意味する。
【０１２０】
本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド」、「核酸」」、「核酸分子」という用語、および他の同様の用語は交換可能に使用され、これにはＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ等が含まれる。
【０１２１】
本明細書で使用される場合、「予防する」、「予防すること」、および「予防」という用語は、本明細書に提供される療法剤または療法剤の組み合わせ（例えば、本発明の抗体等の予防剤または治療剤の組み合わせ）の投与によってもたらされる、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患よび／またはそれに関連する症状の発症、再発、または蔓延の完全または部分的な阻害を指す。
【０１２２】
「可溶性」という用語は、ＰＤ−Ｌ１およびその変異型または断片等のポリペプチドを指す。天然形態または膜結合性形態において見出される１つ以上の膜貫通ドメインまたは細胞質ドメインを欠いている、一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の「可溶性」形態は、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインの両方を欠いている。
【０１２３】
「対象」または「患者」という用語は、哺乳動物を含むがこれに限定されない任意の動物を指す。本明細書で使用される場合、「哺乳動物」という用語は、それらの子に授乳し、そして生きた子を産むか（真獣類または有胎盤哺乳動物）、産卵するか（後獣類または非胎盤哺乳動物）のいずれかである、任意の脊椎動物を指す。哺乳動物種の例としては、ヒトおよび他の霊長類（チンパンジーおよび他の類人猿およびサル種等の非ヒト霊長類を含む）；ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、およびウマ等の家畜動物；イヌおよびネコ等の飼育哺乳動物；マウス、ラット（コットンラットを含む）、およびモルモット等のげっ歯類を含む実験動物；家禽、野禽、および猟鳥を含む、ニワトリ、シチメンチョウおよび他のキジ類のトリ、カモ、ガチョウ等のトリが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２４】
本明細書で使用される場合、「実質的に全て」とは、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％を指す。
【０１２５】
本明細書で使用される場合、「界面活性剤を実質的に含まない」という用語は、ｈＰＤ−Ｌ１抗原に特異的に結合する抗体の製剤であって、０．０００５％未満、０．０００３％未満、もしくは０．０００１％未満の界面活性剤、および／または０．０００５％未満、０．０００３％未満、もしくは０．０００１％未満の界面活性剤を含有する製剤を指す。
【０１２６】
本明細書で使用される場合、「塩を実質的に含まない」という用語は、ｈＰＤ−Ｌ１抗原に特異的に結合する抗体の製剤であって、０．０００５％未満、０．０００３％未満、または０．０００１％未満の無機塩を含有する製剤を指す。
【０１２７】
本明細書で使用される場合、「界面活性剤」という用語は、両親媒性構造を有する有機物質を指し、すなわち、それらは反対の可溶性傾向の基、典型的には油溶性の炭化水素鎖および水溶性のイオン性基で構成瀬あれている。界面活性剤は、界面活性部分の家電に応じて、アニオン性、カチオン性、および非イオン性界面活性剤に分類され得る。界面活性剤は、多くの場合、様々な医薬組成物および生物学的物質の調製物のための湿潤剤、乳化剤、可溶化剤、および分散剤として使用される。
【０１２８】
本明細書で使用される場合、「タグ」という用語は、例えば、ｈＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの抗原結合断片をコードするポリぺプチドおよび／またはポリヌクレオチドに結合した任意の種類の部分を指す。例えば、ｈＰＤ−Ｌ１、ｈＰＤ−Ｌ１抗体またはそれらの抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドは、例えば、検出可能な部分または親和性精製を補助する部分をコードする１つ以上の追加のタグコード化ヌクレオチド配列を含有し得る。翻訳されると、タグおよび抗体は、融合タンパク質の形態であり得る。タグに関する「検出可能な」または「検出」という用語は、可視化され得るか、またはタグの存在が別様に判定および／もしくは測定され得る（例えば、定量化によって）任意のタグを指す。検出可能なタグの非限定的な例は、蛍光タグである。
【０１２９】
本明細書で使用される場合、「治療剤」という用語は、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患よび／またはそれに関連する症状の治療、管理、または改善に使用され得る任意の薬剤を指す。ある特定の実施形態では、「治療剤」という用語は、本発明の抗体を指す。ある特定の他の実施形態では、「治療剤」という用語は、本発明の抗体以外の薬剤を指す。好ましくは、治療剤は、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患よび／またはそれに関連する症状の治療、管理、または改善のために有用であることが知られているか、またはそれらのために使用されてきたか、もしくは現在使用されている薬剤である。特定の実施形態では、治療剤は、完全ヒト抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体、例えば、完全ヒト抗ｈＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体である。
【０１３０】
本明細書で使用される場合、「療法」という用語は、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患（例えば、癌）の予防、管理、治療、および／または改善に使用され得る任意のプロトコル、方法、および／または薬剤を指す。ある特定の実施形態では、「療法（複数可）」という用語は、医療関係者等の当業者に知られている、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患の予防、管理、治療、および／または改善に有用な生物学的療法、支持療法、および／または他の療法を指す。
【０１３１】
「治療する」、「治療」、および「治療すること」という用語は、１つ以上の療法剤の投与（本発明の抗体等の１つ以上の予防剤または治療剤の投与を含むがこれに限定されない）によってもたらされる、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患（例えば、癌）の進行、重度、および／または期間の低減または改善を指す。特定の実施形態では、かかる用語は、ＰＤ−１に対するｈＰＤ−Ｌ１の結合の低減もしくは阻害、ＣＤ８０に対するｈＰＤ−Ｌ１の結合の低減もしくは阻害、および／または癌等のｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患に関連する１つ以上の症状の阻害もしくは低減を指す。特定の実施形態では、かかる用語は、ＰＤ−１および／もしくはＣＤ８０に対するｈＰＤ−Ｌ１の結合の低減もしくは阻害、ならびに／または癌等のｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患に関連する１つ以上の症状の阻害もしくは低減を指す。一例では、細胞は、ヒト細胞である。特定の実施形態では、予防剤は、完全ヒト抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体、例えば、完全ヒト抗ｈＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体である。
【０１３２】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、軽鎖および重鎖の部分、典型的には、重鎖におけるアミノ末端側の約１２０〜１３０個のアミノ酸、および軽鎖における約１００〜１１０個のアミノ酸を指し、これらは、抗体間で配列が広く異なり、各特定の抗体のそれらの特定の抗原に対する結合性および特異性において使用される。抗体の可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中し、可変ドメイン中のより高度に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。ＰＤ−Ｌ１および重鎖のＣＤＲは、抗体と抗原との相互作用を主に担う。本明細書において使用されるアミノ酸位置の付番は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ．（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）５ｔｈ  ｅｄ．（「Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．」）にあるように、ＥＵ付番に従う。好ましい実施形態では、可変領域は、ヒト可変領域である。
【０１３３】
細胞生物学および分子生物学における一般用語の定義は、「Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ」，１９ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍｅｒｃｋ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，２００６により出版））（ＩＳＢＮ  ０−９１１９１０−１９−０）、Ｒｏｂｅｒｔ  Ｓ．Ｐｏｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｔｈｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｔｄ．，１９９４により出版）（ＩＳＢＮ  ０−６３２−０２１８２−９）、Ｂｅｎｊａｍｉｎ  Ｌｅｗｉｎ，Ｇｅｎｅｓ  Ｘ（Ｊｏｎｅｓ＆Ｂａｒｔｌｅｔｔ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，２００９により出版）（ＩＳＢＮ−１０：０７６３７６６３２１）、Ｋｅｎｄｒｅｗ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ａ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，１９９５により出版）（ＩＳＢＮ  １−５６０８１−５６９−８）、およびＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２００９，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．に見出すことができる。
【０１３４】
別途記載されない限り、本発明は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（４  ｅｄ．），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，ＵＳＡ（２０１２）、Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ（１９９５）、またはＭｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ：Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｖｏｌ．１５２，Ｓ．Ｌ．Ｂｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ａ．Ｒ．Ｋｉｍｍｅｌ  Ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ（１９８７）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＣＰＰＳ）（Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＣＰＣＢ）（Ｊｕａｎ  Ｓ．Ｂｏｎｉｆａｃｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）、およびＣｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ  ｂｙ  Ｒ．Ｉａｎ  Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ；５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５），Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．５７，Ｊｅｎｎｉｅ  Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｂａｒｎｅｓ  ｅｄｉｔｏｒｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１ｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９８）に記載されるように、標準的な手順を使用して実施され、これらは全てそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３５】
他の用語は、本発明の様々な態様の説明の中で本明細書において定義される。
【０１３６】
２．ＰＤ−Ｌ１抗体
多くの腫瘍細胞は、癌に特異的であり、診断用および／または治療用抗体標的として機能し得る表面分子を発現する。バイオマーカーとして有用であり得る腫瘍分子によって発現される細胞表面タンパク質の例としては、タンパク質のＢ７ファミリーのメンバー、主要組織適合性複合体分子（ＭＨＣ）、サイトカイン、および成長因子受容体、例えば、上皮成長因子（ＥＧＦＲ）が挙げられる。Ｂ７ファミリーは、免疫応答を制御するためにリンパ球上で受容体に結合する細胞表面タンパク質の免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのメンバーであるタンパク質の群である。このファミリーは、細胞外Ｉｇ様ドメイン（免疫グロブリンの可変および定常ドメインに関連するＩｇＶおよびＩｇＣドメイン）を特徴とする膜貫通またはグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）結合性タンパク質を含む。全てのメンバーは、短い細胞質ドメインを有する。Ｂ７ファミリーには、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、およびＢ７−Ｈ４の７つの既知のメンバーが存在する。
【０１３７】
ＰＤ−Ｌ１の完全なアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０５４８６２．１（配列番号１）に見出すことができ、これは、例えば、その開示全体が参照により本明細書に組み込まれているＤｏｎｇ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９９），「ＰＤ−Ｌ１，ａ  ｔｈｉｒｄ  ｍｅｍｂｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂ７  ｆａｍｉｌｙ，ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  Ｔ−  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ」，Ｎａｔ．「Ｍｅｄ．」５（１２），１３６５−１３６９を含む多くの雑誌論文に言及する。ＰＤ−Ｌ１のアミノ酸配列は、ＰＤ−Ｌ１特有の３０アミノ酸長の細胞質ドメインを含み、これは、他のＢ７ファミリーメンバーを含め、他の分子とほとんど相同性を示さない。
【０１３８】
一実施形態では、抗体は、ポリクローナル抗体である。ポリクローナル抗体を生成するための方法は既知であり、例えば、好適な哺乳動物に抗原を接種して、動物の免疫系が注射された抗原に特異的に結合する免疫グロブリン（ＩｇＧ）を産生することを誘導することを含む。好適な哺乳動物の例としては、例えば、マウス、モルモット、ハムスター、ラット、ウサギ、ヒツジ、またはヤギが挙げられる。その後、ポリクローナルＩｇＧは、典型的には、哺乳動物の血清から精製される。一実施形態では、抗体は、表面発現タンパク質に結合するポリクローナル抗体である。別の実施形態では、抗体は、タンパク質のＢ７ファミリーのメンバーに特異的に結合するポリクローナル抗体である。より具体的な実施形態では、抗体は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するポリクローナル抗体である。別の実施形態では、抗体は、表面発現ＰＤ−ＬＩに特異的に結合するポリクローナル抗体である。より特定の実施形態では、ポリクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する。別の実施形態では、抗体は、可溶性ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するポリクローナル抗体である。「可溶性」という用語はまた、１つ以上の膜貫通ドメインまたは細胞質ドメインを欠くＰＤ−Ｌ１等のタンパク質を指す。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の「可溶性」形態は、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインの両方を欠いている。一実施形態では、抗体は、「遊離」ＰＤ−Ｌ１（すなわち、細胞膜または表面と直接または間接的に会合していないＰＤ−Ｌ１）に結合するポリクローナル抗体である。
【０１３９】
別の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体であり得る。モノクローナル抗体を作製する方法は既知であり、例えば、骨髄腫細胞を所望の抗原で免疫化された動物由来の細胞と融合させることを含む。他の実施形態では、モノクローナル抗体は、組換えＤＮＡ技術を使用して生成され得る。一実施形態では、抗体は、表面発現タンパク質に特異的に結合するモノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体である。別の実施形態では、抗体は、タンパク質のＢ７ファミリーのメンバーに特異的に結合するモノクローナル抗体である。より具体的な実施形態では、抗体は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するモノクローナル抗体である。別の実施形態では、抗体は、表面発現ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するモノクローナル抗体である。より特定の実施形態では、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する。別の実施形態では、抗体は、可溶性ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するモノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体は、１つ以上の細胞膜ドメインまたは細胞質ドメインを欠く可溶性ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するモノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体は、細胞膜ドメインおよび細胞質ドメインの両方を欠く可溶性ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合するモノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体は、「遊離」ＰＤ−Ｌ１（すなわち、細胞膜または表面と直接または間接的に会合していないＰＤ−Ｌ１）に結合するモノクローナル抗体である。
【０１４０】
一例では、抗体または断片の結合部位（複数可）は、複数の結合部位（例えば、ライブラリ）から選択される。例えば、複数の結合部位は、複数の４鎖抗体またはその断片、例えば、ｄＡｂｓ、Ｆａｂ、またはｓｃＦｖを含むか、またはそれらからなる。スクリーニングのための複数の結合部位を産生するための好適な方法には、ファージディスプレイ（抗体結合部位のファージディスプレイライブラリの生成）、リボソームディスプレイ（抗体結合部位のリボソームディスプレイライブラリの生成）、酵母ディスプレイ（抗体結合部位の酵母ディスプレイライブラリの生成）、またはｈＰＤ−Ｌ１もしくはｈＰＤ−Ｌ１エピトープでの非ヒト脊椎動物（例えば月氏動物、例えばマウスまたはラット、例えば、Ｖｅｌｏｃｉｍｏｕｓｅ（商標）、Ｋｙｍｏｕｓｅ（商標）、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）、Ａｌｉｖａ  Ｍｏｕｓｅ（商標）、ＨｕＭａｂ  Ｍｏｕｓｅ（商標）、Ｏｍｎｉｍｏｕｓｅ（商標）、Ｏｍｎｉｒａｔ（商標）、またはＭｅＭｏ  Ｍｏｕｓｅ（商標））の免疫化、ならびに抗体産生細胞のレパートリー（例えば、Ｂ細胞、血漿細胞、もしくは形質芽球レパートリー）、および／または単離された抗体、断片、もしくは結合部位のレパートリーの単離が含まれる。
【０１４１】
ＰＤ−Ｌ１結合能力、特異性、および親和性（Ｋｄ、Ｋｏｆｆ、および／またはＫｏｎ）は、当該技術分野の任意の定型法によって、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって判定することができる。本明細書で使用される場合、「Ｋｄ」または「ＫＤ」という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指すことが意図される。かかる結合測定は、当該技術分野で既知の様々な結合アッセイを使用して、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）によって、またはＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６（商標）（Ｂｉｏ−Ｒａｄ（登録商標））を使用して、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ）を使用して、またはＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ（Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｃｏｒｐ．）を使用して行われ得る。
【０１４２】
一実施形態では、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）は、２５℃で実施される。別の実施形態において、ＳＰＲは、３７℃で実施される。
【０１４３】
一実施形態では、ＳＰＲは、生理学的ｐＨ、例えば約ｐＨ７またはｐＨ７．６で（例えば、ｐＨ７．６のＨｅｐｅｓ緩衝食塩水（ＨＢＳ−ＥＰとも呼ばれる））で実施される。
【０１４４】
一実施形態では、ＳＰＲは、生理的塩レベル、例えば１５０ｍのＮａＣｌで実施される。
【０１４５】
一実施形態では、ＳＰＲは、０．０５容積％以下の洗剤レベル、例えば、０．０５％のＰ２０（ポリソルベート２０、例えば、Ｔｗｅｅｎ  ２０（商標））および３ｍＭのＥＤＴＡの存在下で実施される。
【０１４６】
一例では、ＳＰＲは、ｐＨ７．６の緩衝液、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％の洗剤（例えば、Ｐ２０）、および３ｍＭのＥＤＴＡ中、２５℃または３７℃で実施される。緩衝液は、１０ｍＭのＨｅｐｅｓを含有し得る。一例では、ＳＰＲは、ＨＢＳ−ＥＰ中、２５℃または３７℃で実施される。ＨＢＳ−ＥＰは、Ｔｅｋｎｏｖａ  Ｉｎｃ．（Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、カタログ番号Ｈ８０２２）から入手可能である。
【０１４７】
一例では、抗体または断片の親和性は、
１．一級アミン結合等によって、抗マウス（または種が一致した他の関連するヒト、ラット、または非ヒト脊椎動物抗体の定常領域）ＩｇＧ（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）ＢＲ−１００８−３８）をバイオセンサチップ（例えば、ＧＬＭチップ）に結合させることと、
２．抗マウスＩｇＧ（または他の一致した種の抗体）を試験ＩｇＧ抗体に曝露して、チップ上で試験抗体を捕捉することと、
３．０ｎＭ（すなわち、緩衝液のみ）と共に、１０２４ｎＭ、２５６ｎＭ、６４ｎＭ、１６ｎＭ、４ｎＭでチップの捕捉表面上に試験抗原を通過させることと、
４．例えば上述のＳＰＲ条件（例えば、生理学的緩衝液中２５℃）下で表面プラズモン共鳴を使用して、試験抗原に対する試験抗体の結合の親和性を判定することと、によって、ＳＰＲを使用して判定される。ＳＰＲは、任意のＳＰＲ器具を使用して、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）によって、またはＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６（商標）（Ｂｉｏ−Ｒａｄ（登録商標  ））を使用して実施され得る。
【０１４８】
捕捉表面の再生は、ｐＨ１．７の１０ｍＭグリシンを用いて実施され得る。これにより、捕捉された抗体が除去され、表面を別の相互作用に使用することが可能となる。結合データは、標準的な技法を使用して、例えば、ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６（商標）分析ソフトウェアに固有のモデルを使用して、１：１の固有モデルに適合させることができる。
【０１４９】
本発明者らは、既存の抗体よりも多くの潜在的有用性および利点を有する、ｈＰＤ−Ｌ１に対する特異性を有するいくつかの抗体を同定した。例えば、本明細書に記載される抗体は、以下の特性のうちの１つ以上を有し得る：
ａ．ＰＤ−Ｌ１のリガンドのうちの１つのみを遮断する特異性（例えば、ＣＤ８０／ＰＤ−Ｌ１相互作用を遮断するが、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用は遮断しない）
ｂ．免疫原性／副作用の欠如
ｃ．可溶性
ｄ．安定性
ｅ．製剤化の容易さ
ｆ．既存の抗ＰＤＬ１抗体よりも改善された半減期による、投与頻度および／または投与経路
ｇ．製造性（例えば、発現、精製の容易さ、アイソフォーム）
【０１５０】
１Ｄ０５は、配列番号２７（ＩＭＧＴ）または配列番号３０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２８（ＩＭＧＴ）または配列番号３１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号２９（ＩＭＧＴ）または配列番号３２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３３の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号３４である。１Ｄ０５は、配列番号３７（ＩＭＧＴ）または配列番号４０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３８（ＩＭＧＴ）または配列番号４１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号３９（ＩＭＧＴ）または配列番号４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４３の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４４である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号３５（重鎖核酸配列配列番号３６）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４５（軽鎖核酸配列配列番号４６）である。
【０１５１】
８４Ｇ０９は、配列番号７（ＩＭＧＴ）または配列番号１０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号８（ＩＭＧＴ）または配列番号１１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号９（ＩＭＧＴ）または配列番号１２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号１３の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号１４である。８４Ｇ０９は、配列番号１７（ＩＭＧＴ）または配列番号２０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１８（ＩＭＧＴ）または配列番号２１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１９（ＩＭＧＴ）または配列番号２２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号２３の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号２４である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号１５（重鎖核酸配列配列番号１６）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号２５（軽鎖核酸配列配列番号２６）である。
【０１５２】
１Ｄ０５  ＨＣ変異体１は、配列番号２７（ＩＭＧＴ）または配列番号３０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２８（ＩＭＧＴ）または配列番号３１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号２９（ＩＭＧＴ）または配列番号３２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４７の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。１Ｄ０５  ＨＣ変異体１は、配列番号３７（ＩＭＧＴ）または配列番号４０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３８（ＩＭＧＴ）または配列番号４１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号３９（ＩＭＧＴ）または配列番号４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４３の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４４である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４５（軽鎖核酸配列配列番号４６）である。
【０１５３】
１Ｄ０５  ＨＣ変異体２は、配列番号２７（ＩＭＧＴ）または配列番号３０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２８（ＩＭＧＴ）または配列番号３１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号２９（ＩＭＧＴ）または配列番号３２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４８の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。１Ｄ０５  ＨＣ変異体２は、配列番号３７（ＩＭＧＴ）または配列番号４０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３８（ＩＭＧＴ）または配列番号４１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号３９（ＩＭＧＴ）または配列番号４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４３の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４４である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４５（軽鎖核酸配列配列番号４６）である。
【０１５４】
１Ｄ０５  ＨＣ変異体３は、配列番号２７（ＩＭＧＴ）または配列番号３０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２８（ＩＭＧＴ）または配列番号３１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号２９（ＩＭＧＴ）または配列番号３２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４９の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。１Ｄ０５  ＨＣ変異体３は、配列番号３７（ＩＭＧＴ）または配列番号４０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３８（ＩＭＧＴ）または配列番号４１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号３９（ＩＭＧＴ）または配列番号４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４３の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４４である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４５（軽鎖核酸配列配列番号４６）である。
【０１５５】
１Ｄ０５  ＨＣ変異体４は、配列番号２７（ＩＭＧＴ）または配列番号３０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２８（ＩＭＧＴ）または配列番号３１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号２９（ＩＭＧＴ）または配列番号３２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３４２の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。１Ｄ０５  ＨＣ変異体４は、配列番号３７（ＩＭＧＴ）または配列番号４０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３８（ＩＭＧＴ）または配列番号４１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号３９（ＩＭＧＴ）または配列番号４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４３の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４４である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４５（軽鎖核酸配列配列番号４６）である。
【０１５６】
１Ｄ０５  ＬＣ変異体１は、配列番号２７（ＩＭＧＴ）または配列番号３０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２８（ＩＭＧＴ）または配列番号３１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号２９（ＩＭＧＴ）または配列番号３２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３３の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号３４である。１Ｄ０５  ＬＣ変異体１は、配列番号３７（ＩＭＧＴ）または配列番号４０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、および配列番号３９（ＩＭＧＴ）または配列番号４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号５０の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。１Ｄ０５  ＬＣ変異体１のＣＤＲＬ２配列は、配列番号５０のＶＬ配列からＫａｂａｔまたはＩＭＧＴシステムによって定義される通りである。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号３５（重鎖核酸配列配列番号３６）である。
【０１５７】
１Ｄ０５  ＬＣ変異体２は、配列番号２７（ＩＭＧＴ）または配列番号３０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２８（ＩＭＧＴ）または配列番号３１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号２９（ＩＭＧＴ）または配列番号３２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３３の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号３４である。１Ｄ０５  ＬＣ変異体２は、配列番号３７（ＩＭＧＴ）または配列番号４０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３８（ＩＭＧＴ）または配列番号４１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号３９（ＩＭＧＴ）または配列番号４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号５１の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号３５（重鎖核酸配列配列番号３６）である。
【０１５８】
１Ｄ０５  ＬＣ変異体３は、配列番号２７（ＩＭＧＴ）または配列番号３０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２８（ＩＭＧＴ）または配列番号３１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号２９（ＩＭＧＴ）または配列番号３２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３３の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号３４である。１Ｄ０５  ＬＣ変異体３は、配列番号３７（ＩＭＧＴ）または配列番号４０（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、および配列番号３９（ＩＭＧＴ）または配列番号４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号２９８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。１Ｄ０５  ＬＣ変異体３のＣＤＲＬ２配列は、配列番号２９８のＶＬ配列からＫａｂａｔまたはＩＭＧＴシステムによって定義される通りである。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４４である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号３５（重鎖核酸配列配列番号３６）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４５（軽鎖核酸配列配列番号４６）である。
【０１５９】
４１１Ｂ０８は、配列番号５２（ＩＭＧＴ）または配列番号５５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号５３（ＩＭＧＴ）または配列番号５６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号５４（ＩＭＧＴ）または配列番号５７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号５８の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号５９である。４１１Ｂ０８は、配列番号６２（ＩＭＧＴ）または配列番号６５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号６３（ＩＭＧＴ）または配列番号６６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号６４（ＩＭＧＴ）または配列番号６７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号６８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号６９である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号６０（重鎖核酸配列配列番号６１）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号７０（軽鎖核酸配列配列番号７１）である。
【０１６０】
４１１Ｃ０４は、配列番号７２（ＩＭＧＴ）または配列番号７５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号７３（ＩＭＧＴ）または配列番号７６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７４（ＩＭＧＴ）または配列番号７７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号７８の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号７９である。４１１Ｃ０４は、配列番号８２（ＩＭＧＴ）または配列番号８５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号８３（ＩＭＧＴ）または配列番号８６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号８４（ＩＭＧＴ）または配列番号８７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号８８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号８９である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号８０（重鎖核酸配列配列番号８１）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号９０（軽鎖核酸配列配列番号９１）である。
【０１６１】
４１１Ｄ０７は、配列番号９２（ＩＭＧＴ）または配列番号９５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号９３（ＩＭＧＴ）または配列番号９６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号９４（ＩＭＧＴ）または配列番号９７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号９８の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号９９である。４１１Ｄ０７は、配列番号１０２（ＩＭＧＴ）または配列番号１０５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１０３（ＩＭＧＴ）または配列番号１０６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０４（ＩＭＧＴ）または配列番号１０７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号１０８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号１０９である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号１００（重鎖核酸配列配列番号１０１）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号１１０（軽鎖核酸配列配列番号１１１）である。
【０１６２】
３８５Ｆ０１は、配列番号１１２（ＩＭＧＴ）または配列番号１１５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１１３（ＩＭＧＴ）または配列番号１１６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号１１４（ＩＭＧＴ）または配列番号１１７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号１１８の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号１１９である。３８５Ｆ０１は、配列番号１２２（ＩＭＧＴ）または配列番号１２５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１２３（ＩＭＧＴ）または配列番号１２６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１２４（ＩＭＧＴ）または配列番号１２７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号１２８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号１２９である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号１２０（重鎖核酸配列配列番号１２１）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号１３０（軽鎖核酸配列配列番号１３１）である。
【０１６３】
３８６Ｈ０３は、配列番号１５２（ＩＭＧＴ）または配列番号１５５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１５３（ＩＭＧＴ）または配列番号１５６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号１５４（ＩＭＧＴ）または配列番号１５７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号１５８の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号１５９である。３８６Ｈ０３は、配列番号１６２（ＩＭＧＴ）または配列番号１６５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１６３（ＩＭＧＴ）または配列番号１６６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１６４（ＩＭＧＴ）または配列番号１６７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号１６８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号１６９である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号１６０（重鎖核酸配列配列番号１６１）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号１７０（軽鎖核酸配列配列番号１７１）である。
【０１６４】
３８９Ａ０３は、配列番号１７２（ＩＭＧＴ）または配列番号１７５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１７３（ＩＭＧＴ）または配列番号１７６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号１７４（ＩＭＧＴ）または配列番号１７７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号１７８の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号１７９である。３８９Ａ０３は、配列番号１８２（ＩＭＧＴ）または配列番号１８５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１８３（ＩＭＧＴ）または配列番号１８６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１８４（ＩＭＧＴ）または配列番号１８７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号１８８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号１８９である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号１８０（重鎖核酸配列配列番号１８１）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号１９０（軽鎖核酸配列配列番号１９１）である。
【０１６５】
４１３Ｄ０８は、配列番号１３２（ＩＭＧＴ）または配列番号１３５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号１３３（ＩＭＧＴ）または配列番号１３６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号１３４（ＩＭＧＴ）または配列番号１３７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号１３８の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号１３９である。４１３Ｄ０８は、配列番号１４２（ＩＭＧＴ）または配列番号１４５（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号１４３（ＩＭＧＴ）または配列番号１４６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１４４（ＩＭＧＴ）または配列番号１４７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号１４８の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号１４９である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号１４０（重鎖核酸配列配列番号１４１）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号１５０（軽鎖核酸配列配列番号１５１）である。
【０１６６】
４１３Ｇ０５は、配列番号２３８（ＩＭＧＴ）または配列番号２４１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２３９（ＩＭＧＴ）または配列番号２４２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号２４０（ＩＭＧＴ）または配列番号２４３（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号２４４の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号２４５である。４１３Ｇ０５は、配列番号２４８（ＩＭＧＴ）または配列番号２５１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号２４９（ＩＭＧＴ）または配列番号２５２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号２５０（ＩＭＧＴ）または配列番号２５３（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号２５４の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号２５５である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号２４６（重鎖核酸配列配列番号２４７）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号２５６（軽鎖核酸配列配列番号２５７）である。
【０１６７】
４１３Ｆ０９は、配列番号２５８（ＩＭＧＴ）または配列番号２６１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２５９（ＩＭＧＴ）または配列番号２６２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号２６０（ＩＭＧＴ）または配列番号２６３（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号２６４の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号２６５である。４１３Ｆ０９は、配列番号２６８（ＩＭＧＴ）または配列番号２７１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号２６９（ＩＭＧＴ）または配列番号２７２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号２７０（ＩＭＧＴ）または配列番号２７３（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号２７４の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号２７５である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号２６６（重鎖核酸配列配列番号２６７）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号２７６（軽鎖核酸配列配列番号２７７）である。
【０１６８】
４１４Ｂ０６は、配列番号２７８（ＩＭＧＴ）または配列番号２８１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号２７９（ＩＭＧＴ）または配列番号２８２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号２８０（ＩＭＧＴ）または配列番号２８３（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号２８４の重鎖可変（ＶＨ）領域アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号２８５である。４１４Ｂ０６は、配列番号２８８（ＩＭＧＴ）または配列番号２９１（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号２８９（ＩＭＧＴ）または配列番号２９２（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号２９０（ＩＭＧＴ）または配列番号２９３（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号２９４の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号２９５である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号２８６（重鎖核酸配列配列番号２８７）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号２９６（軽鎖核酸配列配列番号２９７）である。
【０１６９】
４１６Ｅ０１は、配列番号３４３（ＩＭＧＴ）または配列番号３４６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号３４４（ＩＭＧＴ）または配列番号３４７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号３４５（ＩＭＧＴ）または配列番号３４８（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３４９の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号３５０である。４１６Ｅ０１は、配列番号３５３（ＩＭＧＴ）または配列番号３５６（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３５４（ＩＭＧＴ）または配列番号３５７（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号３５５（ＩＭＧＴ）または配列番号３５８（Ｋａｂａｔ）のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号３５９の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号３６０である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号３５１（重鎖核酸配列配列番号３５２）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号３６１（軽鎖核酸配列配列番号３６２）である。
【０１７０】
本発明の抗体は、以下の概念、態様、文、構成、および実施形態に関して記載される。別途記載されない限り、全ての概念、実施形態、文、構成、および態様は、他の概念、態様、文、構成、または実施形態と組み合わせることができるものとして読まれるべきである。
【０１７１】
概念１．配列番号１によって定義されるｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合する抗体またはその断片であって、当該抗体または断片が、モチーフＸ１ＧＳＧＸ２ＹＧＸ３Ｘ４ＦＤを含むＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３が独立して任意のアミノ酸であり、Ｘ４が存在するかまたは存在しないかのいずれかであり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得る、抗体またはその断片。
【０１７２】
これらの概念において、抗体または断片は、二重特異性抗体を含んでもよく、または含まなくてもよい。一実施形態では、これらの概念において、抗体または断片は、二重特異性抗体を含む。一実施形態では、二重特異性抗体は、ＦＩＴ−Ｉｇフォーマットを含まない。一実施形態では、二重特異性抗体は、ｍＡｂ２フォーマットを含まない。一実施形態では、二重特異性抗体は、ＦＩＴ−ＩｇフォーマットまたはｍＡｂ２フォーマットのいずれも含まない。一実施形態では、これらの概念における抗体または断片は、二重特異性抗体を含むが、ＦＩＴ−Ｉｇフォーマットを有する二重特異性抗体を含まない。一実施形態では、これらの概念における抗体または断片は、二重特異性抗体を含むが、ｍＡｂ２フォーマットを有する二重特異性抗体を含まない。一実施形態では、これらの概念における抗体または断片は、二重特異性抗体を含むが、ＦＩＴ−ＩｇフォーマットまたはｍＡｂ２フォーマットを有する二重特異性抗体を含まない。別の実施形態では、これらの概念において、抗体または断片は、二重結合抗体を含む。
【０１７３】
好ましくは、ｈＰＤ−Ｌ１抗原に特異的に結合する抗体またはその断片は、他の抗原と交差反応しない（しかし、任意に、異なる種、例えばアカゲザル、カニクイザル、またはマウスのＰＤ−Ｌ１と交差反応し得てもよい）。ｈＰＤ−Ｌ１抗原に特異的に結合する抗体またはその断片は、例えば、免疫アッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）、または当該技術分野で既知の他の技術によって同定され得る。抗体またはその断片は、放射免疫測定法（ＲＩＡ）および酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）等の実験技術を使用して判定した場合、それが任意の交差反応性抗原に対するよりも高い親和性でｈＰＤ−Ｌ１抗原に結合するときに、ｈＰＤ−Ｌ１抗原に特異的に結合する。典型的には、特異的または選択的反応は、少なくとも２倍のバックグラインドシグナルまたはノイズ、より典型的には１０倍超のバックグラウンドである。抗体特異性に関する考察については、例えば、Ｐａｕｌ，ｅｄ．，１９８９，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋの３３２〜３３６頁を参照されたい。
【０１７４】
一実施形態では、抗体または断片は、ヒト抗体である。一実施形態では、抗体または断片は、ヒト抗体または断片である。一実施形態では、抗体または断片は、完全ヒト抗体または断片である。一実施形態では、抗体または断片は、完全ヒトモノクローナル抗体または断片である。
【０１７５】
概念１ａ：配列番号１によって定義されるｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１１Ｂ０８と競合する抗体またはその断片であって、当該抗体または断片が、モチーフＡＲＸ１ＲＸ２Ｘ３ＳＤＸ４Ｘ５Ｄを含むＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５が独立して任意のアミノ酸である、抗体またはその断片もまた提供される。
【０１７６】
概念１ｂ：配列番号１によって定義されるｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１１Ｂ０８と競合する抗体またはその断片であって、当該抗体または断片が、モチーフＸ１ＲＤＧＳＧＳＹを含むＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインを含み、式中、Ｘ１が任意のアミノ酸である、抗体またはその断片もまた提供される。
【０１７７】
本明細書における概念または態様に提供されるように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体または免疫サイトカインは、表面プラズモン共鳴によって判定された５０ｎＭ未満、４０ｎＭ未満、３０ｎＭ未満のＫＤを有するＰＤ−Ｌ１、例えばヒトＰＤ−Ｌ１に結合し得る。別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体または免疫サイトカインは、表面プラズモン共鳴によって判定された２０ｎＭ未満、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満のＫＤを有するＰＤ−Ｌ１、例えばヒトＰＤ−Ｌ１に結合し得る。抗ＰＤ−Ｌ１または免疫サイトカインは、表面プラズモン共鳴によって判定された８ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ、または１ｎＭ未満ＫＤを有するＰＤ−Ｌ１、例えばヒトＰＤ−Ｌ１に結合し得る。ＫＤは、０．９ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下、または０．１ｎＭ以下であり得る。
【０１７８】
別の実施形態では、ＫＤは、０．０１〜１ｎＭの範囲内、または０．０５〜２ｎＭの範囲内、または０．０５〜１ｎＭの範囲内である。ＫＤは、ｈＰＤ−Ｌ１、ｃｙｎｏＰＤ−Ｌ１、および／またはマウスＰＤ−Ｌ１に関するものであり得る。
【０１７９】
別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、約０．５〜１０μＭ、例えば、約１〜８μＭまたは約１〜７μＭのＫＯＮ速度（例えば、２５℃または３７℃でＳＰＲによって測定される）を有する。別の実施形態では、ＫＯＮ速度は、約１〜５μＭ、例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、約２μＭ、約２．５μＭ、または約３μＭである。別の実施形態では、ＫＯＮ速度は、約３．５μＭ、約４μＭ、約４．５、約５μＭ、または約５．５μＭである。
【０１８０】
別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、約０．０１〜１００ｍＭ、例えば約０．１〜５０ｍＭまたは約０．５〜５０ｍＭのＫＯＦＦ速度（例えば２５℃または３７℃でＳＰＲによって測定）を有する。別の実施形態では、ＫＯＦＦ速度は、約０．５〜１０ｍＭまたは約０．５〜１０ｍＭ、例えば、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、または約５ｍＭである。別の実施形態では、ＫＯＦＦ速度は、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、または約０．９ｍＭである。
【０１８１】
別の実施形態では、本明細書における概念および態様に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体（および免疫サイトカイン）は、他の抗ＰＤ−Ｌ１抗体および免疫サイトカインよりも改善された一過性発現レベルを提供する。したがって、一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（または免疫サイトカイン）は、約１００μｇ／ｍＬ、または約１００〜３５０μｇ／ｍＬの範囲内の発現レベルで、ＨＥＫ２９３細胞、例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞中で発現される。別の実施形態では、発現レベルは、約３５０μｇ／ｍＬを超える。
【０１８２】
別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（または免疫サイトカイン）は、約１００μｇ／ｍＬ、または約１００〜３５０μｇ／ｍＬの範囲内の発現レベルで、ＣＨＯ細胞、例えば、Ｅｘｐｉ−ＣＨＯ細胞中で発現される。別の実施形態では、発現レベルは、約３５０μｇ／ｍＬを超える。
【０１８３】
別の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（または免疫サイトカイン）は、約１００μｇ／ｍＬ、または約１００〜３５０μｇ／ｍＬの範囲内の発現レベルで、ＣＨＯ細胞、例えば、Ｅｘｐｉ−ＣＨＯ細胞またはＣＨＯ−Ｅ７  ＥＢＮＡ細胞中で発現される。別の実施形態では、発現レベルは、約３５０μｇ／ｍＬを超える。１Ｄ０５として本明細書に記載され、ＣＨＯ−Ｅ７  ＥＢＮＡ細胞中、２Ｌの容積でヒトＩｇＧ１（配列番号３４０としてフォーマット化された抗体は、約１１５μｇ／ｍＬの発現レベルを有する。４１６Ｅ０１として本明細書に記載され、ＣＨＯ−Ｅ７  ＥＢＮＡ細胞中、２Ｌの容積でヒトＩｇＧ１（配列番号３４０）としてフォーマット化された抗体は、約１６０μｇ／ｍＬの発現レベルを有する。１４１４Ｂ０６として本明細書に記載され、ＣＨＯ−Ｅ７  ＥＢＮＡ細胞中、２Ｌの容積でヒトＩｇＧ１（配列番号３４０）としてフォーマット化された抗体は、約７８３μｇ／ｍＬの発現レベルを有する。４１３Ｇ０５として本明細書に記載され、ＣＨＯ−Ｅ７  ＥＢＮＡ細胞中、２Ｌの容積でヒトＩｇＧ１（配列番号３４０）としてフォーマット化された抗体は、約３８３μｇ／ｍＬの発現レベルを有する。
【０１８４】
これらの発現系のいずれにおいても、発現は、約０．５ｍＬ〜３  ｍＬ、例えば約０．５ｍＬ〜２ｍＬの程度で実施される。これらの発現系のいずれにおいても、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（または免疫サイトカイン）は、ｐＴＴ５ベクターから発現され得る。これらの発現系のいずれにおいても、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（または免疫サイトカイン）は、脂質トランスフェクション試薬と併せて発現され得、任意に、ＣＨＯ細胞、例えばＥｘｐｉ−ＣＨＯ細胞中で発現されてもよい。これらの発現系のいずれにおいても、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（または免疫サイトカイン）は、ＰＥＩトランスフェクション試薬と併せて発現され得、任意に、ＣＨＯ細胞、例えばＣＨＯ−Ｅ７  ＥＢＮＡ細胞中で発現されてもよい。これらの発現系のいずれにおいても、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（または免疫サイトカイン）は、ヘルパープラスミド（例えば、ＡＫＴヘルパープラスミド）と併せて発現され得、任意に、ＣＨＯ細胞、例えばＣＨＯ−Ｅ７  ＥＢＮＡ細胞中で発現されてもよい。
【０１８５】
これらの発現系のいずれにおいても、発現レベルは、約１００μｇ／ｍＬ〜約１５００μｇ／ｍＬ、例えば、約１００μｇ／ｍＬ〜約１０００μｇ／ｍＬ、または約２００μｇ／ｍＬ〜約１０００  μｇ／ｍＬ、または約３５０μｇ／ｍＬ〜約１０００μｇ／ｍＬである。これらの発現系のいずれにおいても、発現の下限は、約１００μｇ／ｍＬ、約２００μｇ／ｍＬ、約３００μｇ／ｍＬ、または約４００μｇ／ｍＬであり得る。別の実施形態では、発現の下限は、約５００μｇ／ｍＬ、約６００μｇ／ｍＬ、約７００μｇ／ｍＬ、または約８００μｇ／ｍＬであり得る。これらの発現系のいずれにおいても、発現の上限は、約２０００μｇ／ｍＬ、約１８００μｇ／ｍＬ、約１６００μｇ／ｍＬ、または約１５００μｇ／ｍＬであり得る。別の実施形態では、発現の上限は、約１２５０μｇ／ｍＬ、約１０００μｇ／ｍＬ、約９００μｇ／ｍＬ、または約８００μｇ／ｍＬであり得る。
【０１８６】
別の実施形態では、発現系は、Ｌｏｎｚａ発現系、例えばＬｏｎｚａ  Ｘ−Ｃｅｅｄ（登録商標）である。Ｌｏｎｚａ発現系において、発現は、約３０ｍＬ〜２Ｌ、例えば５０ｍＬ〜１Ｌまたは１Ｌ〜２Ｌの程度で実施され得る。Ｌｏｎｚａ発現系において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（または免疫サイトカイン）は、電気穿孔と併せて、そして任意に、いかなるヘルパープラスミドも伴わずに発現され得てもよい。Ｌｏｎｚａ発現系において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（または免疫サイトカイン）は、約１ｇ／Ｌ、または約９００ｍｇ／Ｌ、または約８００ｍｇ／Ｌ、または約７００ｍｇ／Ｌのレベルで発現され得る。別の実施形態では、Ｌｏｎｚａ発現系において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（または免疫サイトカイン）は、約６００ｍｇ／Ｌ、または約５００ｍｇ／Ｌ、または約４００ｍｇ／Ｌのレベルで発現され得る。Ｌｏｎｚａ発現系において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（または免疫サイトカイン）は、約４００ｍｇ／Ｌ〜約２ｇ／Ｌ、例えば、約５００ｍｇ／Ｌ〜約１．５ｇ／Ｌ、または約５００ｍｇ／Ｌ〜約１ｇ／Ｌのレベルで発現され得る。別の実施形態では、発現レベルは、１ｇ／Ｌを超える。別の実施形態では、本概念に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書において以下の態様１にさらに記載されるように、他の抗ＰＤ−Ｌ１抗体よりも改善された半減期を提供する。
【０１８７】
概念２．Ｘ１が、ヒドロキシル含有アミノ酸であり、任意にＴであってもよい、概念１に記載の抗体または断片。
【０１８８】
一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、セリンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、システインである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、トレオニンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、メチオニンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、セリンまたはシステインである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、セリンまたはトレオニンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、セリンまたはメチオニンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、システインまたはトレオニンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、システインまたはメチオニンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、トレオニンまたはメチオニンである。
【０１８９】
一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、セリン、システイン、トレオニン、およびメチオニンから選択される。
【０１９０】
概念２ａ．Ｘ１が、脂肪族アミノ酸またはアミドアミノ酸である、概念１ａに記載の抗体または断片。
【０１９１】
一実施形態では、Ｘ１は、アスパラギン（Ｎ）およびバリン（Ｖ）から選択される。一実施形態では、Ｘ１は、バリンである。一実施形態では、Ｘ１は、アスパラギンである。
【０１９２】
概念２ｂ．Ｘ１が、脂肪族アミノ酸である、概念１ｂに記載の抗体または断片。
【０１９３】
一実施形態では、Ｘ１は、アラニン（Ａ）またはバリン（Ｖ）から選択される。一実施形態では、Ｘ１は、バリンである。一実施形態では、Ｘ１は、アラニンである。
【０１９４】
概念３．Ｘ２が、塩基性アミノ酸であり、任意にＫであってもよい、概念１または概念２に記載の抗体または断片。
【０１９５】
一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、ヒスチジンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、リジンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、アルギニンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、ヒスチジンまたはリジンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、ヒスチジンまたはアルギニンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、リジンまたはアルギニンである。
【０１９６】
一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、ヒスチジン、リジン、およびアルギニンから選択される。
【０１９７】
概念３ａ．Ｘ２が、脂肪族アミノ酸またはアミドアミノ酸である、概念１ａまたは概念２ａに記載の抗体または断片。
【０１９８】
一実施形態では、Ｘ２は、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、アスパラギン（Ｎ）、およびグルタミン（Ｑ）から選択される。一実施形態では、Ｘ２は、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、およびバリン（Ｖ）から選択される。一実施形態では、Ｘ２は、アスパラギン（Ｎ）およびグルタミン（Ｑ）から選択される。一実施形態では、Ｘ２は、ロイシン（Ｌ）およびグルタミン（Ｑ）から選択される。一実施形態では、Ｘ２は、ロイシン（Ｌ）である。一実施形態では、Ｘ２は、グルタミン（Ｑ）である。
【０１９９】
概念４．Ｘ２が、ヒドロキシル含有アミノ酸、任意選択でＳまたはＴである、概念１〜３のいずれか一項に記載の抗体または断片。
【０２００】
一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、セリンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、システインである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、トレオニンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、メチオニンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、セリンまたはシステインである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、セリンまたはトレオニンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、セリンまたはメチオニンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、システインまたはトレオニンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、システインまたはメチオニンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、トレオニンまたはメチオニンである。
【０２０１】
一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、セリン、システイン、トレオニン、およびメチオニンから選択される。
【０２０２】
概念４ａ．Ｘ３が、芳香族アミノ酸である、概念１ａ、２ａ、または３ａのいずれか一項に記載の抗体または断片。
【０２０３】
一実施形態では、Ｘ３は、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、およびトリプトファン（Ｗ）から選択される。一実施形態では、Ｘ３は、チロシン（Ｙ）およびトリプトファン（Ｗ）から選択される。一実施形態では、Ｘ３は、チロシン（Ｙ）である。一実施形態では、Ｘ３は、トリプトファン（Ｗ）である。
【０２０４】
概念５．Ｘ３が、芳香族アミノ酸であり、任意にＷであってもよい、概念１〜４のいずれか一項に記載の抗体または断片。
【０２０５】
一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、フェニルアラニンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、チロシンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、トリプトファンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、フェニルアラニンまたはチロシンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、フェニルアラニンまたはトリプトファンである。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、チロシンまたはトリプトファンである。
【０２０６】
一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンから選択される。
【０２０７】
概念５ａ．Ｘ４が、芳香族アミノ酸である、概念１ａ、２ａ、３ａ、または４ａのいずれか一項に記載の抗体または断片。
【０２０８】
一実施形態では、Ｘ４は、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、およびトリプトファン（Ｗ）から選択される。一実施形態では、Ｘ４は、チロシン（Ｙ）およびフェニルアラニン（Ｆ）から選択される。一実施形態では、Ｘ４は、チロシン（Ｙ）である。一実施形態では、Ｘ４は、フェニルアラニン（Ｆ）である。
【０２０９】
概念６．Ｘ４が、存在しない、概念１〜５のいずれか一項に記載の抗体または断片。
【０２１０】
概念６ａ．Ｘ５が、脂肪族アミノ酸またはヒドロキシル含有アミノ酸である、概念１ａ、２ａ、３ａ、４ａ、または５ａに記載の抗体または断片。
【０２１１】
一実施形態では、Ｘ５は、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、セリン（Ｓ）、システイン（Ｃ）、およびトレオニン（Ｔ）から選択される。一実施形態では、Ｘ５は、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、およびバリン（Ｖ）から選択される。一実施形態では、Ｘ５は、セリン（Ｓ）、システイン（Ｃ）、およびトレオニン（Ｔ）から選択される。一実施形態では、Ｘ５は、ロイシン（Ｌ）およびセリン（Ｓ）から選択される。一実施形態では、Ｘ５は、セリン（Ｓ）である。一実施形態では、Ｘ５は、ロイシン（Ｌ）である。
【０２１２】
概念７．Ｘ４が、存在する、概念１〜５のいずれか一項に記載の抗体または断片。
【０２１３】
概念８．Ｘ４が、脂肪族アミノ酸であり、任意にＧであってもよい、概念７に記載の抗体または断片。
【０２１４】
一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンから選択される。
【０２１５】
一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、グリシンおよびアラニンから選択される。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、グリシンおよびバリンから選択される。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、グリシンおよびロイシンから選択される。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、グリシンおよびイソロイシンから選択される。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、アラニンおよびバリンから選択される。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、アラニンおよびロイシンから選択される。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、アラニンおよびイソロイシンから選択される。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、バリンおよびロイシンから選択される。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、バリンおよびイソロイシンから選択される。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、ロイシンおよびイソロイシンから選択される。
【０２１６】
一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンのそれぞれのうちの３つから選択される。一実施形態では、ヒドロキシル含有アミノ酸は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンのそれぞれのうちの４つから選択される。
【０２１７】
概念９．ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合し、配列番号２９もしくは３２のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２９もしくは３２のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む、任意に概念１〜８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片であってもよい、抗体またはその断片。
【０２１８】
概念９ａ：ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体８４Ｇ０９と競合し、配列番号９もしくは１２のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号９もしくは１２のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む、任意に概念１〜８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片であってもよい、抗体またはその断片。
【０２１９】
概念９ｂ：ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１１Ｂ０８と競合し、配列番号５４もしくは５７のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号５４もしくは５７のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む、任意に概念１〜８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片であってもよい、抗体またはその断片。
【０２２０】
概念９ｃ：ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１１Ｃ０４と競合し、配列番号７４もしくは７７のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号７４もしくは７７のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む、任意に概念１〜８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片であってもよい、抗体またはその断片。
【０２２１】
概念９ｄ：ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１１Ｄ０７と競合し、配列番号９４もしくは９７のＣＤＲＨ３配列、または３個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号９４もしくは９７のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む、任意に概念１〜８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片であってもよい、抗体またはその断片。
【０２２２】
概念９ｅ：ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体３８５Ｆ０１と競合し、配列番号１１４もしくは１１７のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１１４もしくは１１７のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む、任意に概念１〜８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片であってもよい、抗体またはその断片。
【０２２３】
概念９ｆ：ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体３８６Ｈ０３と競合し、配列番号１４４もしくは１４７のＣＤＲＨ３配列、または３個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１４４もしくは１４７のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む、任意に概念１〜８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片であってもよい、抗体またはその断片。
【０２２４】
概念９ｇ：ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体３８９Ａ０３と競合し、配列番号１７４もしくは１７７のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１７４もしくは１７７のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む、任意に概念１〜８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片であってもよい、抗体またはその断片。
【０２２５】
概念９ｈ：ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１３Ｄ０８と競合し、配列番号１３４もしくは１３７のＣＤＲＨ３配列、または５個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１３４もしくは１３７のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む、任意に概念１〜８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片であってもよい、抗体またはその断片。
【０２２６】
概念９ｉ：ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１３Ｇ０５と競合し、配列番号２４０もしくは２４３のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２４０もしくは２４３のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む、任意に概念１〜８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片であってもよい、抗体またはその断片。
【０２２７】
概念９ｊ：ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１３Ｆ０９と競合し、配列番号２６０もしくは２６３のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２６０もしくは２６３のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む、任意に概念１〜８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片であってもよい、抗体またはその断片。
【０２２８】
概念９ｋ：ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１４Ｂ０６と競合し、配列番号２８０もしくは２８３のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２８０もしくは２８３のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む、任意に概念１〜８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片であってもよい、抗体またはその断片。
【０２２９】
概念９ｌ：ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１６Ｅ０１と競合し、配列番号３４５もしくは３４８のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号３４５もしくは３４８のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む、任意に概念１〜８のいずれか一項に記載の抗体またはその断片であってもよい、抗体またはその断片。
【０２３０】
概念９、９ａ〜ｌ、１７、１７ａ〜ｌ、１８、１８ａ〜ｌ、１９、１９ａ〜ｌ、２２、２２ａ〜ｌ、２３、２３ａ〜ｌ、２４、および２４ａ〜ｌの全てにおいて、一実施形態では、ＣＤＲは、１つのアミノ酸置換を含み、これは保存的アミノ酸置換であり得る。概念９、９ａ〜ｌ、１７、１７ａ〜ｌ、１８、１８ａ〜ｌ、１９、１９ａ〜ｌ、２２、２２ａ〜ｌ、２３、２３ａ〜ｌ、２４、および２４ａ〜ｌの全てにおいて、一実施形態では、ＣＤＲは、２つのアミノ酸置換を含み、これは保存的アミノ酸置換であり得る。概念９、９ａ〜ｌ、１７、１７ａ〜ｌ、１８、１８ａ〜ｌ、１９、１９ａ〜ｌ、２２、２２ａ、２２ｂ、２２ｄ、２２ｆ、２２ｇ、２４、および２４ａ〜ｌの全てにおいて、一実施形態では、ＣＤＲは、３つのアミノ酸置換を含み、これは保存的アミノ酸置換であり得る。概念９、９ａ〜ｃ、９ｅ、９ｇ〜ｌ、１７、１７ａ〜ｃ、１７ｅ、１７ｇ〜ｌ、１９、１９ａ、２２、２２ｄ、２２ｆ、２２ｇ、２４、および２４ａ〜ｌの全てにおいて、一実施形態では、ＣＤＲは、４つのアミノ酸置換を含み、これは保存的アミノ酸置換であり得る。概念９、９ａ〜ｃ、９ｅ、９ｇ〜ｌ、１７、１７ａ〜ｃ、１７ｅ、１７ｇ〜ｌ、２２ｄ、２２ｆ、および２２ｇの全てにおいて、一実施形態では、ＣＤＲは、５つのアミノ酸置換を含み、これは保存的アミノ酸置換であり得る。概念９、９ａ〜ｃ、９ｅ、９ｇ、９ｉ〜ｌ、１７、１７ａ〜ｃ、１７ｅ、１７ｇ、および１７ｉ〜ｌの全てにおいて、一実施形態では、ＣＤＲは、６つのアミノ酸置換を含み、これは保存的アミノ酸置換であり得る。
【０２３１】
アミノ酸置換には、アミノ酸が異なる天然型アミノ酸残基で置き換えられる改変が含まれる。かかる置換は、「保存的」として分類され得、この場合、ポリペプチド中に含有されるアミノ酸残基は、極性、側鎖官能性、またはサイズのいずれかについて類似の特徴を有する別の天然型アミノ酸で置き換えられる。かかる保存的置換は、当該技術分野で周知である。本発明によって包含される置換はまた、「非保存的」であってもよく、この場合、ペプチド中に存在するアミノ酸残基が、異なる群由来の天然型アミノ酸等の異なる特性を有するアミノ酸で置換される（例えば、家電または疎水性のアミノ酸をアラニンで置換する）か、または代替的には、天然型アミノ酸が特殊なアミノ酸で置換される。
【０２３２】
一実施形態では、保存的アミノ酸置換は、本明細書に記載される通りである。例えば、置換は、ＦによるＹの置換、ＳまたはＫによるＴの置換、ＡによるＰの置換、ＤまたはＱによるＥの置換、ＤまたはＧによるＮの置換、ＫによるＲの置換、ＮまたはＡによるＧの置換、ＳまたはＫによるＴの置換、ＮまたはＥによるＤの置換、ＬまたはＶによるＩの置換、ＹによるＦの置換、ＴまたはＡによるＳの置換、ＫによるＲの置換、ＮまたはＡによるＧの置換、ＲによるＫの置換、Ｓ、Ｋ、またはＰによるＡの置換であり得る。別の実施形態では、保存的アミノ酸置換は、ＹがＦによって置換され、ＴがＡまたはＳによって置換され、ＩがＬまたはＶによって置換され、ＷがＹによって置換され、ＭがＬによって置換され、ＮがＤによって置換され、ＧがＡによって置換され、ＴがＡまたはＳによって置換され、ＤがＮによって置換され、ＩがＬまたはＶによって置換され、ＦがＹまたはＬによって置換され、ＳがＡまたはＴによって置換され、ＡがＳ、Ｇ、Ｔ、またはＶによって置換されるものであり得る。
【０２３３】
概念１０．ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、１２〜２０個のアミノ酸のＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインを含み、ヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤ遺伝子セグメント、およびヒトＪＨ遺伝子セグメントの組換えに由来し、ヒトＪＨ遺伝子セグメントが、ＩＧＨＪ５（例えば、ＩＧＨＪ５＊０２）である、抗体または断片。
【０２３４】
一実施形態では、ＣＤＲＨ３は、１４〜１７個のアミノ酸であり、ヒトＪＨ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＪ５（例えば、ＩＧＨＪ５＊０２）である。
【０２３５】
概念１０ａ  ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、８〜１６個のアミノ酸のＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインを含み、ヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤ遺伝子セグメント、およびヒトＪＨ遺伝子セグメントの組換えに由来し、ヒトＪＨ遺伝子セグメントが、ＩＧＨＪ４（例えば、ＩＧＨＪ４＊０２）、ＩＧＨＪ５（例えば、ＩＧＨＪ５＊０２）、およびＩＧＨＪ６（例えば、ＩＧＨＪ６＊０２）から選択される、抗体または断片。
【０２３６】
別の実施形態では、ヒトＪＨ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＪ６（例えば、ＩＧＨＪ６＊０２）である。別の実施形態では、ＣＤＲＨ３は、１０〜１７個のアミノ酸であり、ヒトＪＨ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＪ６（例えば、ＩＧＨＪ６＊０２）である。
【０２３７】
別の実施形態では、ヒトＪＨ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＪ４（例えば、ＩＧＨＪ４＊０２）である。別の実施形態では、ＣＤＲＨ３は、７〜１７個のアミノ酸であり、ヒトＪＨ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＪ４（例えば、ＩＧＨＪ４＊０２）である。
【０２３８】
任意に、概念１０または１０ａの抗体は、結合親和性、ＫｏｎおよびＫｏｆｆ速度、発現レベル、半減期等を含む、概念１〜９の特性のいずれかを有してもよい。
【０２３９】
概念１１．ヒトＶＨ遺伝子セグメントが、ＩＧＨＶ３（例えば、ＩＧＨＶ３−９＊０１等のＩＧＨＶ３−９）である、概念１０または１０ａに記載の抗体または断片。
【０２４０】
概念１１ａ  ヒトＶＨ遺伝子セグメントが、ＩＧＨＶ３（例えば、ＩＧＨＶ３−９＊０１等のＩＧＨＶ３−９、もしくは例えば、ＩＧＨＶ３−７＊０１等のＩＧＨＶ３−７、もしくは例えば、ＩＧＨＶ３−３３＊０１等のＩＧＨＶ３−３３、もしくは例えば、ＩＧＨＶ３−１１＊０１等のＩＧＨＶ３−１１、もしくは例えば、ＩＧＨＶ３−２３＊０４等のＩＧＨＶ３−２３）またはＩＧＨＶ４（例えば、ＩＧＨＶ４−４＊０２等のＩＧＨＶ４−４、もしくは例えば、ＩＧＨＶ４−３９＊０１等のＩＧＨＶ４−３９）から選択される、概念１０または１０ａに記載の抗体または断片もまた提供される。
【０２４１】
一実施形態では、ヒトＶＨ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＶ３（例えば、ＩＧＨＶ３−７＊０１等のＩＧＨＶ３−７）である。一実施形態では、ヒトＶＨ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＶ３（例えば、ＩＧＨＶ３−３３＊０１等のＩＧＨＶ３−３３）である。一実施形態では、ヒトＶＨ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＶ３（例えば、ＩＧＨＶ３−１１＊０１等のＩＧＨＶ３−１１）である。一実施形態では、ヒトＶＨ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＶ３（例えば、ＩＧＨＶ３−２３＊０４等のＩＧＨＶ３−２３）である。
【０２４２】
一実施形態では、ヒトＶＨ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＶ４（例えば、例えば、ＩＧＨＶ４−４＊０２等のＩＧＨＶ４−４）である。一実施形態では、ヒトＶＨ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＶ４（例えば、ＩＧＨＶ４−３９＊０１等のＩＧＨＶ４−３９）である。
【０２４３】
概念１１ｂ  ヒトＤ遺伝子セグメントが、ＩＧＨＤ１（例えば、ＩＧＨＤ１−２０＊０１等のＩＧＨＤ１−２０）、ＩＧＨＤ３（例えば、ＩＧＨＤ３−１０＊０１等のＩＧＨＤ３−１０）、ＩＧＨＤ４（例えば、ＩＧＨＤ４−１１＊０１等のＩＧＨＤ４−１１）、ＩＧＨＤ５（例えば、ＩＧＨＤ５−１８＊０１等のＩＧＨＤ５−７）、およびＩＧＨＤ６（例えば、ＩＧＨＤ６−１３＊０１等のＩＧＨＤ６−１３）から選択される、概念１０、１０ａ、１１、または１１ａに記載の抗体または断片もまた提供される。
【０２４４】
一実施形態では、ヒトＤ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＤ１（例えば、ＩＧＨＤ１−２０＊０１等のＩＧＨＤ１−２０）である。一実施形態では、ヒトＤ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＤ３（例えば、ＩＧＨＤ３−１０＊０１等のＩＧＨＤ３−１０）である。一実施形態では、ヒトＤ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＤ４（例えば、ＩＧＨＤ４−１１＊０１等のＩＧＨＤ４−１１）である。一実施形態では、ヒトＤ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＤ５（例えば、ＩＧＨＤ５−１９＊０１等のＩＧＨＤ５−１８）である。一実施形態では、ヒトＤ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＤ６（例えば、ＩＧＨＤ６−１３＊０１等のＩＧＨＤ６−１３）である。
【０２４５】
概念１０、１１、および１１ａのいずれにおいても、ＶＨ、ＤＨ、およびＪＨ遺伝子セグメントは、本明細書において以下の表５中の抗体の組み合わせで記載される通りである。一実施形態では、抗体の重鎖は、ＩＧＨＶ３（例えば、ＩＧＨＶ３−７＊０１等のＩＧＨＶ３−７）、ＩＧＨＤ４（例えば、ＩＧＨＤ４−１１＊０１等のＩＧＨＤ４−１１）、およびＩＧＨＪ４（例えば、ＩＧＨＪ４＊０２）の組み合わせに由来する。一実施形態では、抗体の重鎖は、ＩＧＨＶ４（例えば、ＩＧＨＶ４−４＊０２等のＩＧＨＶ４−４）、ＩＧＨＤ３（例えば、ＩＧＨＤ３−１０＊０１等のＩＧＨＤ３−１０）、およびＩＧＨＪ４（例えば、ＩＧＨＪ４＊０２）の組み合わせに由来する。一実施形態では、抗体の重鎖は、ＩＧＨＶ４（例えば、ＩＧＨＶ４−３９＊０１等のＩＧＨＶ４−３９）、ＩＧＨＤ６（例えば、ＩＧＨＤ６−１３＊０１等のＩＧＨＤ６−１３）、およびＩＧＨＪ１（例えば、ＩＧＨＪ１＊０１）の組み合わせに由来する。一実施形態では、抗体の重鎖は、ＩＧＨＶ３（例えば、ＩＧＨＶ３−３３＊０１等のＩＧＨＶ３−３３）、ＩＧＨＤ５（例えば、ＩＧＨＤ５−１８＊０１等のＩＧＨＤ５−１８）、およびＩＧＨＪ６（例えば、ＩＧＨＪ６＊０２）の組み合わせに由来する。一実施形態では、抗体の重鎖は、ＩＧＨＶ３（例えば、ＩＧＨＶ３−１１＊０１等のＩＧＨＶ３−１１）、ＩＧＨＤ１（例えば、ＩＧＨＤ１−２０＊０１等のＩＧＨＤ１−２０）、およびＩＧＨＪ６（例えば、ＩＧＨＪ６＊０２）の組み合わせに由来する。一実施形態では、抗体の重鎖は、ＩＧＨＶ３（例えば、ＩＧＨＶ３−２３＊０４等のＩＧＨＶ３−２３）、ＩＧＨＤ５（例えば、ＩＧＨＤ５−１８＊０１等のＩＧＨＤ５−１８）、およびＩＧＨＪ４（例えば、ＩＧＨＪ４＊０２）の組み合わせに由来する。一実施形態では、抗体の重鎖は、ＩＧＨＶ３（例えば、ＩＧＨＶ３−７＊０１等のＩＧＨＶ３−７）、ＩＧＨＤ５（例えば、ＩＧＨＤ５−２４＊０１等のＩＧＨＤ５−２４）、およびＩＧＨＪ４（例えば、ＩＧＨＪ４＊０２）の組み合わせに由来する。一実施形態では、抗体の重鎖は、ＩＧＨＶ３（例えば、ＩＧＨＶ３−２３＊０４等のＩＧＨＶ３−２３）、ＩＧＨＤ６（例えば、ＩＧＨＤ６−１３＊０１等のＩＧＨＤ６−１３）、およびＩＧＨＪ４（例えば、ＩＧＨＪ４＊０２）の組み合わせに由来する。
【０２４６】
概念１２．当該抗体または断片が、ヒトＶκ遺伝子セグメントおよびＪκ遺伝子セグメントの組換えに由来するＶＬドメインを含み、ヒトＶκ遺伝子セグメントが、ＩＧκＶ１Ｄ（例えば、ＩＧκＶ１Ｄ−３９＊０１等のＩＧκＶ１Ｄ−３９）である、概念１０、１０ａ、１１、１１ａ、または１１ｂに記載の抗体または断片。
【０２４７】
概念１２ａ  ヒトＶκ遺伝子セグメントが、ＩＧκＶ１（例えば、ＩＧκＶ１−１７＊０１等のＩＧκＶ１−１７、または例えば、ＩＧκＶ１−９＊ｄ０１等のＩＧκＶ１−９、または例えば、ＩＧκＶ１Ｄ−１２＊０２等のＩＧκＶ１Ｄ−１２、または例えば、ＩＧκＶ１Ｄ−３９＊０１等のＩＧκＶ１Ｄ−３９）およびＩＧκＶ４（例えば、ＩＧκＶ４−１＊０１等のＩＧκＶ４−１）から選択される、概念１０、１０ａ、１１、１１ａ、または１１ｂのいずれかに記載の抗体または断片もまた提供される。
【０２４８】
一実施形態では、ヒトＶκ遺伝子セグメントは、ＩＧκＶ１（例えば、ＩＧκＶ１−１７＊０１等のＩＧκＶ１−１７）である。一実施形態では、ヒトＶκ遺伝子セグメントは、ＩＧκＶ１（例えば、ＩＧκＶ１−９＊ｄ０１等のＩＧκＶ１−９）である。一実施形態では、ヒトＶκ遺伝子セグメントは、ＩＧκＶ１（例えば、ＩＧκＶ１Ｄ−１２＊０２等のＩＧκＶ１Ｄ−１２）である。一実施形態では、ヒトＶκ遺伝子セグメントは、ＩＧκＶ１（例えば、ＩＧκＶ１Ｄ−３９＊０１等のＩＧκＶ１Ｄ−３９）である。
【０２４９】
一実施形態では、ヒトＶκ遺伝子セグメントは、ＩＧκＶ１  ＩＧκＶ４（例えば、ＩＧκＶ４−１＊０１等のＩＧκＶ４−１）である。
【０２５０】
概念１２ｂ  ヒトＪκ遺伝子セグメントが、ＩＧκＪ１（例えば、ＩＧκＪ１＊０１）、ＩＧκＪ２（例えば、ＩＧκＪ２＊０４）、ＩＧκＪ３（例えば、ＩＧκＪ３＊０１）、ＩＧκＪ４（例えば、ＩＧκＪ４＊０１）、またはＩＧκＪ５（例えば、ＩＧκＪ５＊０１）から選択される、概念１０、１０ａ、１１、または１１ａに記載の抗体または断片もまた提供される。
【０２５１】
一実施形態では、ヒトＪκ遺伝子セグメントは、ＩＧκＪ１（例えば、ＩＧκＪ１＊０１）である。一実施形態では、ヒトＪκ遺伝子セグメントは、ＩＧκＪ２（例えば、ＩＧκＪ２＊０４）である。一実施形態では、ヒトＪκ遺伝子セグメントは、ＩＧκＪ３（例えば、ＩＧκＪ３＊０１）である。一実施形態では、ヒトＪκ遺伝子セグメントは、ＩＧκＪ４（例えば、ＩＧκＪ４＊０１）である。一実施形態では、ヒトＪκ遺伝子セグメントは、ＩＧκＪ５（例えば、ＩＧκＪ５＊０１）である。
【０２５２】
概念１２および１２ａのいずれにおいても、ＶκおよびＪκ遺伝子セグメントは、本明細書において以下の表５中の抗体の組み合わせで記載される通りである。一実施形態では、抗体の軽鎖は、ＩＧＫＶ１Ｄ（例えば、ＩＧＫＶ１Ｄ−１２＊０２等のＩＧＫＶ１Ｄ−１２）およびＩＧＫＪ３（例えば、ＩＧＫＪ３＊０１）の組み合わせに由来する。一実施形態では、抗体の軽鎖は、ＩＧＫＶ４（例えば、ＩＧＫＶ１４−１＊０１等のＩＧＫＶ４−１）およびＩＧＫＪ２（例えば、ＩＧＫＪ２＊０４）の組み合わせに由来する。一実施形態では、抗体の軽鎖は、ＩＧＫＶ１（例えば、ＩＧＫＶ１−１７＊０１等のＩＧＫＶ１−１７）およびＩＧＫＪ１（例えば、ＩＧＫＪ１＊０１）の組み合わせに由来する。一実施形態では、抗体の軽鎖は、ＩＧＫＶ１Ｄ（例えば、ＩＧＫＶ１Ｄ−１２＊０２等のＩＧＫＶ１Ｄ−１２）およびＩＧＫＪ４（例えば、ＩＧＫＪ４＊０１）の組み合わせに由来する。一実施形態では、抗体の軽鎖は、ＩＧＫＶ１（例えば、ＩＧＫＶ１−９＊ｄ０１等のＩＧＫＶ１−９）およびＩＧＫＪ５（例えば、ＩＧＫＪ５＊０１）の組み合わせに由来する。一実施形態では、抗体の軽鎖は、ＩＧＫＶ１Ｄ（例えば、ＩＧＫＶ１Ｄ−１２＊０２等のＩＧＫＶ１Ｄ−１２）およびＩＧＫＪ５（例えば、ＩＧＫＪ５＊０１）の組み合わせに由来する。
【０２５３】
概念１３．抗体１Ｄ０５が特異的に結合するエピトープと同一であるエピトープに特異的に結合する、抗体またはその断片。
【０２５４】
概念１３ａ．抗体８４Ｇ０９が特異的に結合するエピトープと同一であるエピトープに特異的に結合する、抗体またはその断片。
【０２５５】
概念１３ｂ．抗体４１１Ｂ０８が特異的に結合するエピトープと同一であるエピトープに特異的に結合する、抗体またはその断片。
【０２５６】
概念１３ｃ．抗体４１１Ｃ０４が特異的に結合するエピトープと同一であるエピトープに特異的に結合する、抗体またはその断片。
【０２５７】
概念１３ｄ．抗体４１１Ｄ０７が特異的に結合するエピトープと同一であるエピトープに特異的に結合する、抗体またはその断片。
【０２５８】
概念１３ｅ．抗体３８５Ｆ０１が特異的に結合するエピトープと同一であるエピトープに特異的に結合する、抗体またはその断片。
【０２５９】
概念１３ｆ．抗体３８６Ｈ０３が特異的に結合するエピトープと同一であるエピトープに特異的に結合する、抗体またはその断片。
【０２６０】
概念１３ｇ．抗体３８９Ａ０３が特異的に結合するエピトープと同一であるエピトープに特異的に結合する、抗体またはその断片。
【０２６１】
概念１３ｈ．抗体４１３Ｄ０８が特異的に結合するエピトープと同一であるエピトープに特異的に結合する、抗体またはその断片。
【０２６２】
概念１３ｉ．抗体４１３Ｇ０５が特異的に結合するエピトープと同一であるエピトープに特異的に結合する、抗体またはその断片。
【０２６３】
概念１３ｊ．抗体４１３Ｆ０９が特異的に結合するエピトープと同一であるエピトープに特異的に結合する、抗体またはその断片。
【０２６４】
概念１３ｋ．抗体４１４Ｂ０６が特異的に結合するエピトープと同一であるエピトープに特異的に結合する、抗体またはその断片。
【０２６５】
概念１３ｌ．抗体４１６Ｅ０１が特異的に結合するエピトープと同一であるエピトープに特異的に結合する、抗体またはその断片。
【０２６６】
これらの概念に記載される抗体は、本明細書における上記の配列を有する。
【０２６７】
一実施形態では、概念１３、１３ａ〜１３ｌにおける抗体が結合するエピトープと実質的に同様であるエピトープに特異的に結合する抗体が提供される。
【０２６８】
抗体と抗原との相互作用に関与する接触アミノ酸残基は、当該技術分野で既知の様々な方法によって判定され得る。
【０２６９】
一実施形態では、抗原配列のアミノ酸の連続的置換（抗原のコード配列のＤＮＡを変異させるために標準的な分子生物学技術を使用する）、この場合、アラニン（別名、アラニンスキャン）またはまたは別の無関係のアミノ酸によるｈＰＤ−Ｌ１の置換は、その変異により抗体が目的の抗原を認識する能力を低減させるかまたは取り除かれることになる残基を提供し得る。結合は、限定されるものではないが、ＳＰＲ、ＨＴＲＦ、ＥＬＩＳＡ（本明細書の他の箇所に記載されている）等の標準的な技術を使用して評価され得る。抗原配列アミノ酸の側鎖の電化を変える（例えば、リシンをグルタミン酸に変える）、極性および非極性残基を交換する（例えば、セリンをロイシンに変える）等のように、結合の途絶を高めるために他の置換を行ってもよい。アラニンスキャンまたは他のアミノ置換法は、組換え型可溶性抗原を用いて、または標的が細胞膜標的である場合には、変異したバージョンの一過性もしくは安定性発現を使用して細胞上に直接的に実施することができる。
【０２７０】
一実施形態では、抗体と抗原との間の接触残基を判定する（すなわち、抗体が結合するエピトープを判定する）ために、タンパク質結晶構造解析が使用され得、結晶構造解析は、抗体−抗原相互作用に関与する接触残基の直接視覚化を可能にする。標準的なＸ線結晶構造解析と並んで、抗体とＨＩＶカプシドタンパク質との間の接触残基を判定するために低温電子顕微鏡法が使用されてきた（Ｌｅｅ，Ｊｅｏｎｇ  Ｈｙｕｎ，ｅｔ  ａｌ．「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  ａ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｏｎ  ｇｐ４１  ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ  ＨＩＶ−１  ｂｙ  ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｅｎｖ  ｓｐｉｋｅ．」，Ｎａｔｕｒｅ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，６，（２０１５）を参照されたい）。
【０２７１】
一実施形態では、抗体が直鎖状エピトープを認識した場合、抗原配列に基づいて短鎖ペプチドが産生され得、これらのペプチドに対する抗体の結合は、これらに限定されないが、ＳＰＲ、ＨＴＲＦ、ＥＬＩＳＡ（これらは本明細書の他の箇所に記載されている）等の標準的な技術を使用して評価され得る。エピトープのさらなる調査は、結合を示す任意のペプチド上でアラニンスキャンを実施することによって提供され得る。直鎖状ペプチドの代わりに、骨格上へのペプチドの化学結合を使用するＰｅｐｓｃａｎ技術（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｅｐｓｃａｎ．ｃｏｍ／）を使用して配座スキャンが実施され得、これは、ＣＤ２０標的化抗体上の不連続のエピトープを判定するために使用されている（Ｎｉｅｄｅｒｆｅｌｌｎｅｒ，Ｇｅｒｈａｒｄ，ｅｔ  ａｌ．「Ｅｐｉｔｏｐｅ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ＧＡ１０１  ｐｒｏｖｉｄｅ  ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｔｙｐｅ  Ｉ／ＩＩ  ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ２０  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．」，Ｂｌｏｏｄ，１１８．２，（２０１１），３５８−３６７．）。
【０２７２】
一実施形態では、結合エピトープを同定するために、限定タンパク質消化および質量分光光度測定が使用され得る。抗体−抗原複合体は、これに限定されないが、トリプシン等のプロテアーゼによって消化される。消化された複合体ペプチドを抗体単独および抗原単独の消化質量分光光度測定を比較して、特定のエピトープが複合体形成によって保護されているかどうかを判定する。相互作用に関与する個々のアミノ酸残基を絞るために、アミノ酸置換を伴うさらなる作用である競合結合が用いられ得る（例えば、Ｓｕｃｋａｕ，Ｄｅｔｌｅｖ，ｅｔ  ａｌ．「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ａｎ  ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ−ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ａｎｄ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍａｐｐｉｎｇ．」，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，８７．２４，（１９９０），９８４８−９８５２を参照されたい）。
【０２７３】
したがって、一実施形態では、エピトープの接触残基は、無関係のアミノ酸スキャン（例えば、アラニンスキャン）を用いて同定される。別の実施形態では、無関係のアミノ酸スキャン（例えば、アラニンスキャン）は、ＳＰＲ、ＨＴＲＦ、ＥＬＩＳＡ、Ｘ線結晶構造解析、低温電子顕微鏡法、および限定タンパク質消化と質量分析法との組み合わせから選択される技術を使用して実施される。一実施形態では、無関係のアミノ酸スキャン（例えば、アラニンスキャン）は、ＨＴＲＦを使用して実施される。一実施形態では、無関係のアミノ酸スキャン（例えば、アラニンスキャン）は、ＥＬＩＳＡを使用して実施される。
【０２７４】
アラニンスキャンがＥＬＩＳＡまたはＨＴＲＦのいずれかを用いて実施されるとき、シグナルの低減が少なくとも２５％である場合に、アミノ酸残基はエピトープに寄与するものとして同定される。一実施形態では、シグナルの低減は、少なくとも３０％である。一実施形態では、シグナルの減少は、少なくとも３５％である。一実施形態では、シグナルの減少は、少なくとも４０％である。一実施形態では、シグナルの減少は、少なくとも４５％である。一実施形態では、シグナルの減少は、少なくとも５０％である。一実施形態では、シグナルの減少は、少なくとも５５％である。一実施形態では、シグナルの減少は、少なくとも６０％である。一実施形態では、シグナルの減少は、少なくとも７０％である。一実施形態では、シグナルの減少は、少なくとも７５％である。一実施形態では、シグナルの減少は、少なくとも８０％である。一実施形態では、シグナルの減少は、少なくとも８５％である。一実施形態では、シグナルの減少は、少なくとも９０％である。
【０２７５】
アラニンスキャンがＳＰＲを用いて実施されるとき、親和性の少なくとも１０倍の低減が存在する場合に、アミノ酸残基はエピトープに寄与するものとして同定される。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも１５倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも２０倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも３０倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも４０倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも５０倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも１００倍である。
【０２７６】
したがって、一実施形態では、エピトープの接触残基は、Ｘ線結晶構造解析によって同定される。したがって、一実施形態では、エピトープの接触残基は、低温電子顕微鏡法によって同定される。したがって、一実施形態では、エピトープの接触残基は、限定タンパク質消化と質量分析法との組み合わせによって同定される。
【０２７７】
概念１４．エピトープが、無関係のアミノ酸スキャンまたはＸ線結晶構造解析によって同定される、概念１３に記載の抗体または断片。
【０２７８】
概念１５．エピトープの接触残基が、ＳＰＲによって判定される、無関係のアミノ酸スキャン、例えばアラニンスキャンにおける親和性の少なくとも１０倍の低減によって定義される、概念１４に記載の抗体または断片。
【０２７９】
一実施形態では、親和性の減少は、少なくとも１５倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも２０倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも３０倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも４０倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも５０倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも１００倍である。
【０２８０】
ＳＰＲは、上記のように実施され得る。
【０２８１】
概念１６．ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合する、抗体またはその断片。
【０２８２】
競合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって判定され得、かかる技術は、当業者には容易に明らかである。ＳＰＲは、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）、Ｐｒｏｔｅｏｎ（商標）、または別の標準的なＳＰＲ技術を使用して実施され得る。かかる競合は、例えば、ｈＰＤ−Ｌ１の同一のまたは重複したエピトープに結合する抗体または断片に起因し得る。一実施形態では、競合は、ＥＬＩＳＡによって判定され得、かかる技術は、当業者には容易に明らかである。一実施形態では、競合は、均一性時間分解蛍光法（ＨＴＲＦ）によって判定され得、かかる技術は、当業者には容易に明らかである。一実施形態では、競合は、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）によって判定され得、かかる技術は、当業者には容易に明らかである。一実施形態では、競合は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ（登録商標）バイオレイヤーインターフェロメトリー（ＢＬＩ）によって判定され得、かかる技術は、当業者には容易に明らかである。
【０２８３】
一実施形態では、抗体または断片は、細胞表面発現ｈＰＤ−Ｌ１への結合についてｈＰＤ−１（またはその融合タンパク質）と競合する（例えば、用量依存的様式で）。一実施形態では、抗体または断片は、可溶性ｈＰＤＬ−１への結合についてｈＰＤ−１（またはその融合タンパク質）と競合する（例えば、用量依存的様式で）。
【０２８４】
一実施形態では、抗体または断片は、ｈＰＤ−Ｌ１等の細胞表面発現ＰＤ−Ｌ１へのＰＤ−１および／またはＣＤ８０の結合を部分的または完全に阻害する。別の実施形態では、抗体または断片は、可溶性ｈＰＤ−Ｌ１へのｈＰＤ−１および／またはＣＤ８０の結合を部分的または完全に阻害する。いくつかの実施形態では、抗体または断片は、細胞表面発現ＰＤ−１を有する細胞からのＩＦＮγ、ＣＤ２５、およびＩＬ−２の分泌を部分的または完全に増加させる。一実施形態では、抗体または断片は、可溶性ｈＰＤ−Ｌ１へのＣＤ８０の結合を部分的または完全に阻害するが、細胞表面発現ＰＤ−Ｌ１へのＰＤ−１の結合の検出可能な阻害を一切示さない。一実施形態では、抗体または断片は、可溶性ｈＰＤ−Ｌ１へのＣＤ８０の結合を部分的または完全に阻害するが、可溶性ＰＤ−Ｌ１へのＰＤ−１の結合の検出可能な阻害を一切示さない。
【０２８５】
本明細書で使用される場合、「阻害する」、「阻害」、「阻害すること」等は、本明細書で使用される場合、アンタゴニスト（例えば、抗体またはその断片）が、リガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１）への受容体（例えば、ＣＤ８０またはＰＤ−１）の結合を部分的または完全に妨げるエピトープに結合する能力を指す。アンタゴニストが結合するエピトープが、リガンドの結合部位を完全に遮断すると、リガンド結合は完全に妨げられ（これは、重複エピトープの場合には物理的遮断、またはアンタゴニストがその固有のエピトープへのリガンド結合を妨げる程大きい場合には立体遮断であり得る）、リガンドは、循環から除去されない。したがって、循環するリガンドの濃度が増加したように見える場合がある。アンタゴニストが結合するエピトープがリガンドの結合部位を部分的に遮断する場合、リガンドは、結合することができる場合があるが、弱く結合するのみである（部分的阻害の場合）か、または天然結合相互作用とは異なる配向で結合する。この場合、リガンドのうちのいくつかは、循環から除去され得るが、リガンド結合部位が完全に遊離し、結合に利用可能である場合ほど多くは除去されない。したがって、阻害とは、リガンドと受容体との物理的相互作用を指す。阻害は、ＨＴＲＦによって測定することができ、これは、本明細書における他の箇所、およびＭａｔｈｉｓ（１９９５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４１（９），１３９１−１３９７においてより詳細に記載される。阻害はまた、受容体が細胞上で発現されるフローサイトメトリー、または受容体がプレートに吸着されるＥＬＩＳＡによって測定され得る。
【０２８６】
概念１６ａ．ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体８４Ｇ０９と競合する、抗体またはその断片。
【０２８７】
概念１６ｂ．ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１１Ｂ０８と競合する、抗体またはその断片。
【０２８８】
概念１６ｃ．ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１１Ｃ０４と競合する、抗体またはその断片。
【０２８９】
概念１６ｄ．ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１１Ｄ０７と競合する、抗体またはその断片。
【０２９０】
概念１６ｅ．ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体３８５Ｆ０１と競合する、抗体またはその断片。
【０２９１】
概念１６ｆ．ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体３８６Ｈ０３と競合する、抗体またはその断片。
【０２９２】
概念１６ｇ．ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体３８９Ａ０３と競合する、抗体またはその断片。
【０２９３】
概念１６ｈ．ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１３Ｄ０８と競合する、抗体またはその断片。
【０２９４】
概念１６ｉ．ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１３Ｇ０５と競合する、抗体またはその断片。
【０２９５】
概念１６ｊ．ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１３Ｆ０９と競合する、抗体またはその断片。
【０２９６】
概念１６ｋ．ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１４Ｂ０６と競合する、抗体またはその断片。
【０２９７】
概念１６ｌ．ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体４１６Ｅ０１と競合する、抗体またはその断片。
【０２９８】
抗体は、本明細書において上記の配列を有する。
【０２９９】
概念１７．ＶＨドメインが、配列番号２９もしくは３２のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２９もしくは３２のＣＤＲＨ３配列を含む、概念１０〜１６のいずれか一項に記載の抗体または断片。
【０３００】
概念１７ａ：ＶＨドメインが、配列番号９もしくは１２のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号９もしくは１２のＣＤＲＨ３配列を含む、概念１０〜１６のいずれか一項（但し、概念１３に従属する場合には概念１３ａに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ａに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３０１】
概念１７ｂ：ＶＨドメインが、配列番号５４もしくは５７のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号５４もしくは５７のＣＤＲＨ３配列を含む、概念１０〜１６のいずれか一項（但し、概念１３に従属する場合には概念１３ｂに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｂに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３０２】
概念１７ｃ：ＶＨドメインが、配列番号７４もしくは７７のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号７４もしくは７７のＣＤＲＨ３配列を含む、概念１０〜１６のいずれか一項（但し、概念１３に従属する場合には概念１３ｃに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｃに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３０３】
概念１７ｄ：ＶＨドメインが、配列番号９４もしくは９７のＣＤＲＨ３配列、または３個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号９４もしくは９７のＣＤＲＨ３配列を含む、概念１０〜１６のいずれか一項（但し、概念１３に従属する場合には概念１３ｄに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｄに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３０４】
概念１７ｅ：ＶＨドメインが、配列番号１１４もしくは１１７のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１１４もしくは１１７のＣＤＲＨ３配列を含む、概念１０〜１６のいずれか一項（但し、概念１３に従属する場合には概念１３ｅに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｅに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３０５】
概念１７ｆ：ＶＨドメインが、配列番号１４４もしくは１４７のＣＤＲＨ３配列、または３個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１４４もしくは１４７のＣＤＲＨ３配列を含む、概念１０〜１６のいずれか一項（但し、概念１３に従属する場合には概念１３ｆに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｆに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３０６】
概念１７ｇ：ＶＨドメインが、配列番号１７４もしくは１７７のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１７４もしくは１７７のＣＤＲＨ３配列を含む、概念１０〜１６のいずれか一項（但し、概念１３に従属する場合には概念１３ｇに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｇに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３０７】
概念１７ｈ：ＶＨドメインが、配列番号１３４もしくは１３７のＣＤＲＨ３配列、または５個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１３４もしくは１３７のＣＤＲＨ３配列を含む、概念１０〜１６のいずれか一項（但し、概念１３に従属する場合には概念１３ｈに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｈに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３０８】
概念１７ｉ：ＶＨドメインが、配列番号２４０もしくは２４３のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２４０もしくは２４３のＣＤＲＨ３配列を含む、概念１０〜１６のいずれか一項（但し、概念１３に従属する場合には概念１３ｉに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｉに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３０９】
概念１７ｊ：ＶＨドメインが、配列番号２６０もしくは２６３のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２６０もしくは２６３のＣＤＲＨ３配列を含む、概念１０〜１６のいずれか一項（但し、概念１３に従属する場合には概念１３ｊに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｊに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３１０】
概念１７ｋ：ＶＨドメインが、配列番号２８０もしくは２８３のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２８０もしくは２８３のＣＤＲＨ３配列を含む、概念１０〜１６のいずれか一項（但し、概念１３に従属する場合には概念１３ｋに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｋに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３１１】
概念１７ｌ：ＶＨドメインが、配列番号３４５もしくは３４８のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号３４５もしくは３４８のＣＤＲＨ３配列を含む、概念１０〜１６のいずれか一項（但し、概念１３に従属する場合には概念１３ｌに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｌに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３１２】
概念１８．ＶＨドメインが、配列番号２７もしくは３０のＣＤＲＨ１配列、または３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号２７もしくは３０のＣＤＲＨ１配列を含む、概念１〜１７のいずれかに記載の抗体または断片。
【０３１３】
概念１８ａ：ＶＨドメインが、配列番号７もしくは１０のＣＤＲＨ１配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号７もしくは１０のＣＤＲＨ１配列を含む、概念１〜１７のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ａに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ａに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ａに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ａに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３１４】
概念１８ｂ：ＶＨドメインが、配列番号５２もしくは５５のＣＤＲＨ１配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号５２もしくは５５のＣＤＲＨ１配列を含む、概念１〜１７のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｂに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｂに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｂに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｂに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３１５】
概念１８ｃ：ＶＨドメインが、配列番号７２もしくは７５のＣＤＲＨ１配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号７２もしくは７５のＣＤＲＨ１配列を含む、概念１〜１７のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｃに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｃに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｃに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｃに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３１６】
概念１８ｄ：ＶＨドメインが、配列番号９２もしくは９５のＣＤＲＨ１配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号９２もしくは９５のＣＤＲＨ１配列を含む、概念１〜１７のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｄに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｄに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｄに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｄに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３１７】
概念１８ｅ：ＶＨドメインが、配列番号１１２もしくは１１５のＣＤＲＨ１配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号１１２もしくは１１５のＣＤＲＨ１配列を含む、概念１〜１７のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｅに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｅに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｅに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｅに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３１８】
概念１８ｆ：ＶＨドメインが、配列番号１４２もしくは１４５のＣＤＲＨ１配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号１４２もしくは１４５のＣＤＲＨ１配列を含む、概念１〜１７のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｆに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｆに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｆに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｆに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３１９】
概念１８ｇ：ＶＨドメインが、配列番号１７２もしくは１７５のＣＤＲＨ１配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号１７２もしくは１７５のＣＤＲＨ１配列を含む、概念１〜１７のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｇに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｇに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｇに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｇに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３２０】
概念１８ｈ：ＶＨドメインが、配列番号１３２もしくは１３５のＣＤＲＨ１配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号１３２もしくは１３５のＣＤＲＨ１配列を含む、概念１〜１７のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｈに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｈに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｈに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｈに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３２１】
概念１８ｉ：ＶＨドメインが、配列番号２３８もしくは２４１のＣＤＲＨ１配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号２３８もしくは２４１のＣＤＲＨ１配列を含む、概念１〜１７のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｉに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｉに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｉに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｉに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３２２】
概念１８ｊ：ＶＨドメインが、配列番号２５８もしくは２６１のＣＤＲＨ１配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号２５８もしくは２６１のＣＤＲＨ１配列を含む、概念１〜１７のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｊに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｊに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｊに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｊに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３２３】
概念１８ｋ：ＶＨドメインが、配列番号２７８もしくは２８１のＣＤＲＨ１配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号２７８もしくは２８１のＣＤＲＨ１配列を含む、概念１〜１７のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｋに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｋに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｋに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｋに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３２４】
概念１８ｌ：ＶＨドメインが、配列番号３４３もしくは３４６のＣＤＲＨ１配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号３４３もしくは３４６のＣＤＲＨ１配列を含む、概念１〜１７のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｌに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｌに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｌに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｌに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３２５】
概念１９．ＶＨドメインが、配列番号２８もしくは３１のＣＤＲＨ２配列、または４個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２８もしくは３１のＣＤＲＨ２配列を含む、概念１〜１８のいずれかに記載の抗体または断片。
【０３２６】
概念１９ａ：ＶＨドメインが、配列番号８もしくは１１のＣＤＲＨ２配列、または４個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号８もしくは１１のＣＤＲＨ２配列を含む、概念１〜１８のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ａに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ａに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ａに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ａに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ａに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３２７】
概念１９ｂ：ＶＨドメインが、配列番号５３もしくは５６のＣＤＲＨ２配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号５３もしくは５６のＣＤＲＨ２配列を含む、概念１〜１８のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｂに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｂに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｂに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｂに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｂに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３２８】
概念１９ｃ：ＶＨドメインが、配列番号７３もしくは７６のＣＤＲＨ２配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号７３もしくは７６のＣＤＲＨ２配列を含む、概念１〜１８のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｃに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｃに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｃに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｃに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｃに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３２９】
概念１９ｄ：ＶＨドメインが、配列番号９３もしくは９６のＣＤＲＨ２配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号９３もしくは９６のＣＤＲＨ２配列を含む、概念１〜１８のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｄに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｄに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｄに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｄに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｄに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３３０】
概念１９ｅ：ＶＨドメインが、配列番号１１３もしくは１１６のＣＤＲＨ２配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号１１３もしくは１１６のＣＤＲＨ２配列を含む、概念１〜１８のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｅに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｅに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｅに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｅに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｅに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３３１】
概念１９ｆ：ＶＨドメインが、配列番号１４３もしくは１４６のＣＤＲＨ２配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号１４３もしくは１４６のＣＤＲＨ２配列を含む、概念１〜１８のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｆに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｆに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｆに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｆに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｆに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３３２】
概念１９ｇ：ＶＨドメインが、配列番号１７３もしくは１７６のＣＤＲＨ２配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号１７３もしくは１７６のＣＤＲＨ２配列を含む、概念１〜１８のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｇに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｇに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｇに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｇに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｇに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３３３】
概念１９ｈ：ＶＨドメインが、配列番号１３３もしくは１３６のＣＤＲＨ２配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号１３３もしくは１３６のＣＤＲＨ２配列を含む、概念１〜１８のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｈに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｈに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｈに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｈに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｈに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３３４】
概念１９ｉ：ＶＨドメインが、配列番号２３９もしくは２４２のＣＤＲＨ２配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号２３９もしくは２４２のＣＤＲＨ２配列を含む、概念１〜１８のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｉに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｉに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｉに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｉに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｉに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３３５】
概念１９ｊ：ＶＨドメインが、配列番号２５９もしくは２６２のＣＤＲＨ２配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号２５９もしくは２６２のＣＤＲＨ２配列を含む、概念１〜１８のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｊに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｊに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｊに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｊに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｊに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３３６】
概念１９ｋ：ＶＨドメインが、配列番号２７９もしくは２８２のＣＤＲＨ２配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号２７９もしくは２８２のＣＤＲＨ２配列を含む、概念１〜１８のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｋに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｋに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｋに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｋに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｋに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３３７】
概念１９ｌ：ＶＨドメインが、配列番号３４４もしくは３４７のＣＤＲＨ２配列、または３、２、または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号３４４もしくは３４７のＣＤＲＨ２配列を含む、概念１〜１８のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｌに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｌに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｌに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｌに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｌに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３３８】
概念２０．ＶＨドメインが、配列番号３３のアミノ酸配列、または配列番号３３と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜１９のいずれかに記載の抗体または断片。
【０３３９】
概念２０ａ：ＶＨドメインが、配列番号１３のアミノ酸配列、または配列番号１３と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜１９のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ａに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ａに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ａに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ａに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ａに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ａに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３４０】
概念２０ｂ：ＶＨドメインが、配列番号５８のアミノ酸配列、または配列番号５８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜１９のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｂに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｂに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｂに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｂに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｂに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｂに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３４１】
概念２０ｃ：ＶＨドメインが、配列番号７８のアミノ酸配列、または配列番号７８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜１９のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｃに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｃに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｃに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｃに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｃに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｃに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３４２】
概念２０ｄ：ＶＨドメインが、配列番号９８のアミノ酸配列、または配列番号９８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜１９のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｄに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｄに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｄに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｄに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｄに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｄに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３４３】
概念２０ｅ：ＶＨドメインが、配列番号１１８のアミノ酸配列、または配列番号１１８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜１９のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｅに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｅに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｅに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｅに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｅに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｅに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３４４】
概念２０ｆ：ＶＨドメインが、配列番号１５８のアミノ酸配列、または配列番号１５８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜１９のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｆに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｆに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｆに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｆに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｆに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｆに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３４５】
概念２０ｇ：ＶＨドメインが、配列番号１７８のアミノ酸配列、または配列番号１７８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜１９のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｇに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｇに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｇに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｇに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｇに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｇに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３４６】
概念２０ｈ：ＶＨドメインが、配列番号１３８のアミノ酸配列、または配列番号１３８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜１９のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｈに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｈに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｈに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｈに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｈに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｈに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３４７】
概念２０ｉ：ＶＨドメインが、配列番号２４４のアミノ酸配列、または配列番号２４４と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜１９のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｉに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｉに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｉに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｉに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｉに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｉに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３４８】
概念２０ｊ：ＶＨドメインが、配列番号２６４のアミノ酸配列、または配列番号２６４と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜１９のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｊに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｊに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｊに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｊに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｊに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｊに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３４９】
概念２０ｋ：ＶＨドメインが、配列番号２８４のアミノ酸配列、または配列番号２８４と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜１９のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｋに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｋに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｋに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｋに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｋに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｋに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３５０】
概念２０ｌ：ＶＨドメインが、配列番号３４９のアミノ酸配列、または配列番号３４９と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜１９のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｌに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｌに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｌに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｌに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｌに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｌに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３５１】
一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも７０％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも７５％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９５％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９６％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９７％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９８％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９９％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９９．５％同一である。
【０３５２】
概念２１．ＶＨドメインの第１および第２のコピーを含む、概念１〜２０のいずれかに記載の抗体または断片。
【０３５３】
概念２２．配列番号３７もしくは４０のＣＤＲＬ１配列、または３個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号３７もしくは４０のＣＲＤＬ１配列を含むＶＬドメインを含む、概念１〜２１のいずれかに記載の抗体または断片。
【０３５４】
概念２２ａ：配列番号１７もしくは２０のＣＤＲＬ１配列、または３個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１７もしくは２０のＣＤＲＬ１配列を含むＶＬドメインを含む、概念１〜２１のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ａに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ａに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ａに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ａに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ａに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ａに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ａに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３５５】
概念２２ｂ：配列番号６２もしくは６５のＣＤＲＬ１配列、または３個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号６２もしくは６５のＣＤＲＬ１配列を含むＶＬドメインを含む、概念１〜２１のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｂに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｂに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｂに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｂに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｂに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｂに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｂに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３５６】
概念２２ｃ：配列番号８２もしくは８５のＣＤＲＬ１配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号８２もしくは８５のＣＤＲＬ１配列を含むＶＬドメインを含む、概念１〜２１のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｃに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｃに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｃに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｃに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｃに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｃに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｃに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３５７】
概念２２ｄ：配列番号１０２もしくは１０５のＣＤＲＬ１配列、または５個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１０２もしくは１０５のＣＤＲＬ１配列を含むＶＬドメインを含む、概念１〜２１のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｄに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｄに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｄに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｄに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｄに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｄに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｄに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３５８】
概念２２ｅ：配列番号１２２もしくは１２５のＣＤＲＬ１配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号１２２もしくは１２５のＣＤＲＬ１配列を含むＶＬドメインを含む、概念１〜２１のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｅに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｅに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｅに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｅに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｅに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｅに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｅに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３５９】
概念２２ｆ：配列番号１６２もしくは１６５のＣＤＲＬ１配列、または５個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１６２もしくは１６５のＣＤＲＬ１配列を含むＶＬドメインを含む、概念１〜２１のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｆに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｆに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｆに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｆに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｆに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｆに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｆに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３６０】
概念２２ｇ：配列番号１８２もしくは１８５のＣＤＲＬ１配列、または５個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１８２もしくは１８５のＣＤＲＬ１配列を含むＶＬドメインを含む、概念１〜２１のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｇに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｇに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｇに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｇに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｇに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｇに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｇに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３６１】
概念２２ｈ：配列番号１４２もしくは１４５のＣＤＲＬ１配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号１４２もしくは１４５のＣＤＲＬ１配列を含むＶＬドメインを含む、概念１〜２１のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｈに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｈに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｈに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｈに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｈに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｈに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｈに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３６２】
概念２２ｉ：配列番号２４８もしくは２５１のＣＤＲＬ１配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号２４８もしくは２５１のＣＤＲＬ１配列を含むＶＬドメインを含む、概念１〜２１のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｉに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｉに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｉに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｉに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｉに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｉに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｉに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３６３】
概念２２ｊ：配列番号２６８もしくは２７１のＣＤＲＬ１配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号２６８もしくは２７１のＣＤＲＬ１配列を含むＶＬドメインを含む、概念１〜２１のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｊに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｊに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｊに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｊに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｊに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｊに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｊに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３６４】
概念２２ｋ：配列番号２８８もしくは２９１のＣＤＲＬ１配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号２８８もしくは２９１のＣＤＲＬ１配列を含むＶＬドメインを含む、概念１〜２１のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｋに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｋに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｋに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｋに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｋに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｋに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｋに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３６５】
概念２２ｌ：配列番号３５３もしくは３５６のＣＤＲＬ１配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号３５３もしくは３５６のＣＤＲＬ１配列を含むＶＬドメインを含む、概念１〜２１のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｌに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｌに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｌに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｌに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｌに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｌに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｌに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３６６】
概念２３．配列番号３８もしくは４１のＣＤＲＬ２配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号３８もしくは４１のＣＲＤＬ２配列、例えば配列番号５０のＣＤＲＬ２配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２２に記載の抗体または断片。
【０３６７】
概念２３ａ：配列番号１８もしくは２１のＣＤＲＬ２配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号１８もしくは２１のＣＤＲＬ２配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２２のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ａに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ａに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ａに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ａに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ａに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ａに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ａに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ａに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３６８】
概念２３ｂ：配列番号６３もしくは６６のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号６３もしくは６６のＣＤＲＬ２配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２２のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｂに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｂに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｂに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｂに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｂに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｂに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｂに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｂに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３６９】
概念２３ｃ：配列番号８３もしくは８６のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号８３もしくは８６のＣＤＲＬ２配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２２のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｃに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｃに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｃに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｃに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｃに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｃに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｃに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｃに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３７０】
概念２３ｄ：配列番号１０３もしくは１０６のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号１０３もしくは１０６のＣＤＲＬ２配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２２のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｄに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｄに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｄに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｄに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｄに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｄに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｄに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｄに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３７１】
概念２３ｅ：配列番号１２３もしくは１２６のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号１２３もしくは１２６のＣＤＲＬ２配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２２のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｅに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｅに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｅに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｅに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｅに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｅに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｅに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｅに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３７２】
概念２３ｆ：配列番号１５３もしくは１５６のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号１５３もしくは１５６のＣＤＲＬ２配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２２のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｆに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｆに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｆに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｆに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｆに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｆに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｆに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｆに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３７３】
概念２３ｇ：配列番号１８３もしくは１８６のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号１８３もしくは１８６のＣＤＲＬ２配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２２のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｇに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｇに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｇに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｇに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｇに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｇに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｇに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｇに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３７４】
概念２３ｈ：配列番号１４３もしくは１４６のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号１４３もしくは１４６のＣＤＲＬ２配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２２のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｈに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｈに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｈに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｈに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｈに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｈに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｈに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｈに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３７５】
概念２３ｉ：配列番号２４９もしくは２５２のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号２４９もしくは２５２のＣＤＲＬ２配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２２のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｉに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｉに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｉに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｉに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｉに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｉに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｉに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｉに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３７６】
概念２３ｊ：配列番号２６９もしくは２７２のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号２６９もしくは２７２のＣＤＲＬ２配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２２のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｊに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｊに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｊに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｊに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｊに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｊに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｊに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｊに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３７７】
概念２３ｋ：配列番号２８９もしくは２９２のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号２８９もしくは２９２のＣＤＲＬ２配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２２のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｋに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｋに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｋに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｋに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｋに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｋに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｋに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｋに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３７８】
概念２３ｌ：配列番号３５４もしくは３５７のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号３５４もしくは３５７のＣＤＲＬ２配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２２のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｌに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｌに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｌに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｌに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｌに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｌに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｌに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｌに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３７９】
概念２４．配列番号３９もしくは４２のＣＤＲＬ３配列、または４個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号３９もしくは４２のＣＲＤＬ３配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２３のいずれかに記載の抗体または断片。
【０３８０】
概念２４ａ：配列番号１９もしくは２２のＣＤＲＬ３配列、または４個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１９もしくは２２のＣＤＲＬ３配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２３のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ａに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ａに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ａに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ａに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ａに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ａに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ａに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ａに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ａに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３８１】
概念２４ｂ：配列番号６４もしくは６７のＣＤＲＬ３配列、または４個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号６４もしくは６７のＣＤＲＬ３配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２３のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｂに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｂに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｂに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｂに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｂに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｂに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｂに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｂに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｂに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３８２】
概念２４ｃ：配列番号８４もしくは８７のＣＤＲＬ３配列、または４個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号８４もしくは８７のＣＤＲＬ３配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２３のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｃに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｃに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｃに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｃに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｃに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｃに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｃに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｃに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｃに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３８３】
概念２４ｄ：配列番号１０４もしくは１０７のＣＤＲＬ３配列、または４個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１０４もしくは１０７のＣＤＲＬ３配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２３のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｄに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｄに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｄに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｄに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｄに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｄに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｄに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｄに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｄに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３８４】
概念２４ｅ：配列番号１２４もしくは１２７のＣＤＲＬ３配列、または４個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１２４もしくは１２７のＣＤＲＬ３配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２３のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｅに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｅに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｅに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｅに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｅに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｅに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｅに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｅに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｅに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３８５】
概念２４ｆ：配列番号１６４もしくは１６７のＣＤＲＬ３配列、または４個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１６４もしくは１６７のＣＤＲＬ３配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２３のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｆに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｆに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｆに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｆに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｆに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｆに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｆに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｆに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｆに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３８６】
概念２４ｇ：配列番号１８４もしくは１８７のＣＤＲＬ３配列、または４個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１８４もしくは１８７のＣＤＲＬ３配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２３のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｇに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｇに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｇに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｇに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｇに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｇに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｇに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｇに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｇに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３８７】
概念２４ｈ：配列番号１４４もしくは１４７のＣＤＲＬ３配列、または４個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号１４４もしくは１４７のＣＤＲＬ３配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２３のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｈに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｈに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｈに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｈに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｈに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｈに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｈに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｈに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｈに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３８８】
概念２４ｉ：配列番号２５０もしくは２５３のＣＤＲＬ３配列、または４個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２５０もしくは２５３のＣＤＲＬ３配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２３のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｉに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｉに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｉに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｉに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｉに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｉに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｉに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｉに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｉに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３８９】
概念２４ｊ：配列番号２７０もしくは２７３のＣＤＲＬ３配列、または４個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２７０もしくは２７３のＣＤＲＬ３配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２３のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｊに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｊに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｊに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｊに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｊに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｊに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｊに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｊに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｊに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３９０】
概念２４ｋ：配列番号２９０もしくは２９３のＣＤＲＬ３配列、または４個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２９０もしくは２９３のＣＤＲＬ３配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２３のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｋに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｋに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｋに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｋに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｋに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｋに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｋに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｋに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｋに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３９１】
概念２４ｌ：配列番号３５５もしくは３５８のＣＤＲＬ３配列、または４個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号３５５もしくは３５８のＣＤＲＬ３配列を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２３のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｌに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｌに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｌに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｌに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｌに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｌに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｌに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｌに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｌに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３９２】
概念２５．配列番号４３のアミノ酸配列、または配列番号４３と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列（例えば、配列番号５０、５１、または２９８の軽鎖配列中のＶＬドメイン配列）を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、概念１〜２４のいずれかに記載の抗体または断片。
【０３９３】
概念２５ａ：ＶＬドメインが、配列番号２３のアミノ酸配列、または配列番号２３と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜２４のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ａに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ａに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ａに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ａに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ａに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ａに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ａに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ａに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ａに従属し、概念２４に従属する場合には概念２４ａに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３９４】
概念２５ｂ：ＶＬドメインが、配列番号６８のアミノ酸配列、または配列番号６８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜２４のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｂに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｂに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｂに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｂに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｂに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｂに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｂに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ａに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｂに従属し、概念２４に従属する場合には概念２４ｂに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３９５】
概念２５ｃ：ＶＬドメインが、配列番号８８のアミノ酸配列、または配列番号８８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜２４のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｃに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｃに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｃに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｃに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｃに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｃに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｃに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｃに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｃに従属し、概念２４に従属する場合には概念２４ｃに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３９６】
概念２５ｄ：ＶＬドメインが、配列番号１０８のアミノ酸配列、または配列番号１０８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜２４のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｄに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｄに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｄに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｄに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｄに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｄに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｄに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｄに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｄに従属し、概念２４に従属する場合には概念２４ｄに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３９７】
概念２５ｅ：ＶＬドメインが、配列番号１２８のアミノ酸配列、または配列番号１２８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜２４のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｅに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｅに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｅに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｅに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｅに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｅに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｅに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｅに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｅに従属し、概念２４に従属する場合には概念２４ｅに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３９８】
概念２５ｆ：ＶＬドメインが、配列番号１６８のアミノ酸配列、または配列番号１６８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜２４のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｆに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｆに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｆに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｆに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｆに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｆに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｆに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｆに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｆに従属し、概念２４に従属する場合には概念２４ｆに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０３９９】
概念２５ｇ：ＶＬドメインが、配列番号１８８のアミノ酸配列、または配列番号１８８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜２４のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｇに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｇに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｇに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｇに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｇに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｇに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｇに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｇに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｇに従属し、概念２４に従属する場合には概念２４ｇに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０４００】
概念２５ｈ：ＶＬドメインが、配列番号１４８のアミノ酸配列、または配列番号１４８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％または少なくとも９０％）同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜２４のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｈに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｈに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｈに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｈに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｈに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｈに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｈに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｈに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｈに従属し、概念２４に従属する場合には概念２４ｈに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０４０１】
概念２５ｉ：ＶＬドメインが、配列番号２５４のアミノ酸配列、または配列番号２５４と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜２４のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｉに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｉに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｉに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｉに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｉに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｉに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｉに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｉに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｉに従属し、概念２４に従属する場合には概念２４ｉに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０４０２】
概念２５ｊ：ＶＬドメインが、配列番号２７４のアミノ酸配列、または配列番号２７４と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜２４のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｊに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｊに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｊに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｊに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｊに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｊに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｊに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｊに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｊに従属し、概念２４に従属する場合には概念２４ｊに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０４０３】
概念２５ｋ：ＶＬドメインが、配列番号２９４のアミノ酸配列、または配列番号２９４と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜２４のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｋに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｋに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｋに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｋに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｋに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｋに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｋに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｋに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｋに従属し、概念２４に従属する場合には概念２４ｋに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０４０４】
概念２５ｌ：ＶＬドメインが、配列番号３５９のアミノ酸配列、または配列番号３５９と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、概念１〜２４のいずれか一項（但し、概念９に従属する場合には概念９ｌに従属し、概念１３に従属する場合には概念１３ｌに従属し、概念１６に従属する場合には概念１６ｌに従属し、概念１７に従属する場合には概念１７ｌに従属し、概念１８に従属する場合には概念１８ｌに従属し、概念１９に従属する場合には概念１９ｌに従属し、概念２０に従属する場合には概念２０ｌに従属し、概念２２に従属する場合には概念２２ｌに従属し、概念２３に従属する場合には概念２３ｌに従属し、概念２４に従属する場合には概念２４ｌに従属する）に記載の抗体またはその断片。
【０４０５】
一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも７０％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも７５％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９５％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９６％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９７％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９８％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９９％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９９．５％同一である。
【０４０６】
概念２６．ＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインの第１および第２のコピーを含む、概念１２〜２１のいずれか一項に記載の抗体または断片。
【０４０７】
概念２７．配列番号２によって定義されるようにカニクイザルＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する、概念１〜２６のいずれかに記載の抗体または断片。
【０４０８】
一実施形態では、抗体または断片は、１ｎＭ未満（例えば、１ｎＭ〜０．０１ｐＭ、または１ｎＭ〜０．１ｐＭ、または１ｎＭ〜１ｐＭ）の親和性でカニクイザルＰＤ−Ｌ１に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、１０ｎＭ未満（例えば、１０ｎＭ〜０．０１ｐＭ、または１０ｎＭ〜０．１ｐＭ、または１０ｎＭ〜１ｐＭ）の親和性でカニクイザルＰＤ−Ｌ１に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、０．１ｎＭ未満（例えば、０．１ｎＭ〜０．０１ｐＭ、または０．１ｎＭ〜０．１ｐＭ、または０．１ｎＭ〜１ｐＭ）の親和性でカニクイザルＰＤ−Ｌ１に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、０．０１ｎＭ未満（例えば、０．０１１ｎＭ〜０．０１ｐＭまたは０．０１ｎＭ〜０．１ｐＭ）の親和性でカニクイザルＰＤ−Ｌ１に結合する。
【０４０９】
一実施形態では、抗体または断片は、ｈＰＤ−Ｌ１に対する親和性の２倍以内の親和性でカニクイザルＰＤ−Ｌ１に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、ｈＰＤ−Ｌ１に対する親和性の４倍以内の親和性でカニクイザルＰＤ−Ｌ１に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、ｈＰＤ−Ｌ１に対する親和性の５倍以内の親和性でカニクイザルＰＤ−Ｌ１に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、ｈＰＤ−Ｌ１に対する親和性の６倍以内の親和性でカニクイザルＰＤ−Ｌ１に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、ｈＰＤ−Ｌ１に対する親和性の８倍以内の親和性でカニクイザルＰＤ−Ｌ１に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、ｈＰＤ−Ｌ１に対する親和性の１０倍以内の親和性でカニクイザルＰＤ−Ｌ１に結合する。
【０４１０】
一実施形態では、抗体または断片は、カニクイザルＰＤ−Ｌ１に検出可能に結合しない。一実施形態では、抗体または断片は、ネズミＰＤ−Ｌ１に検出可能に結合しない。
【０４１１】
一実施形態では、抗体または断片は、１ｎＭ未満（例えば、１ｎＭ〜０．０１ｐＭ、または１ｎＭ〜０．１ｐＭ、または１ｎＭ〜１ｐＭ）の親和性でマウスＰＤ−Ｌ１に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、１０ｎＭ未満（例えば、１０ｎＭ〜０．０１ｐＭ、または１０ｎＭ〜０．１ｐＭ、または１０ｎＭ〜１ｐＭ）の親和性でマウスＰＤ−Ｌ１に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、０．１ｎＭ未満（例えば、０．１ｎＭ〜０．０１ｐＭ、または０．１ｎＭ〜０．１ｐＭ、または０．１ｎＭ〜１ｐＭ）の親和性でマウスＰＤ−Ｌ１に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、０．０１ｎＭ未満（例えば、０．０１１ｎＭ〜０．０１ｐＭまたは０．０１ｎＭ〜０．１ｐＭ）の親和性でマウスＰＤ−Ｌ１に結合する。
【０４１２】
概念２８．抗体または断片が、カッパ軽鎖を含む、概念１〜２７に記載の抗体または断片。
【０４１３】
カッパ軽鎖定常領域アミノ酸およびヌクレオチド配列は、配列番号２０６および２１５に見出され得る。
【０４１４】
一実施形態では、軽鎖は、ラムダ軽鎖であり得る。ラムダ軽鎖定常領域アミノ酸およびヌクレオチド配列は、配列番号２１６〜２３７、ならびに配列番号５３５、配列番号５３６、および配列番号５３８に見出され得る。
【０４１５】
概念２９．アミノ酸置換が、保存的アミノ酸置換であり、任意に、当該保存的置換は、
１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、
２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、
３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、
４）アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）、
５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、および
６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）から選択される６つの群（各群は、互いについて保存的置換であるアミノ酸を含有する）のうちの１つからのものであってもよい、概念９〜２８のいずれか一項に記載の抗体または断片。
保存的置換は、概念９で上記した通りであり得る。
【０４１６】
概念３０．抗体または断片が、定常領域、例えばヒト定常領域、例えばエフェクターヌルヒト定常領域、例えばＩｇＧ４定常領域またはＩｇＧ１定常領域を含み、任意に、定常領域がＩｇＧ４−ＰＥ（配列番号１９９）、または配列番号２０５で規定される欠損したＩｇＧ１であってもよい、概念１〜２９のいずれかに記載の抗体または断片。
【０４１７】
他の実施形態では、抗体または断片は、本明細書において上記に定義されたアイソタイプまたは定常領域のいずれかである。一実施形態では、定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ１（配列番号３４０）である。例えば、定常領域は、任意にＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を有するエフェクター可能化ＩｇＧ１定常領域であってもよい。一実施形態では、定常領域は、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣおよび／またはＡＤＣＰの増強のために操作されている。別の実施形態では、定常領域は、エフェクター機能の増強のために操作されている。
【０４１８】
ＩｇＧ４定常領域は、ＩｇＧ４定常領域アミノ酸配列のいずれかであってもよく、または配列番号１９２〜２０３の核酸配列のいずれかによってコードされてもよい。重鎖定常領域は、Ｌｅｕ２３５Ｇｌｕ変異およびＳｅｒ２２８Ｐｒｏ変異の両方を含むＩｇＧ４であり得る。この「ＩｇＧ４−ＰＥ」重鎖定常領域（配列番号１９８、配列番号１９９、２００、および２０１によってコードされる）は、エフェクターヌルである。
【０４１９】
代替的なエフェクターヌルヒト定常領域は、Ｌ２３５Ａおよび／またはＧ２３７Ａ変異を含むＩｇＧ１＊０１対立遺伝子（例えば、ＬＡＧＡ、配列番号２０４、配列番号２０５によってコードされる）である、欠損したＩｇＧ１である。一実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗体断片は、ＩｇＧ１重鎖定常領域を含み、配列は、２３５位および／または２３７位（ＥＵインデックス付番）でアラニンを含有する。
【０４２０】
抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）機構は、Ｇｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ：Ａ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ」，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，７５（２３），Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １，２０１５において考察されている。
【０４２１】
効能、有効性Ｆｃ媒介効果の効力は、様々な確立された技術によってＦｃドメインを操作することによって増強され得る。かかる方法は、ある特定のＦｃ受容体に対する親和性を増加させ、それにより、活性化増強の潜在的な多様なプロファイルを作成する。これは、１つまたはいくつかのアミノ酸残基の修飾によって達成され得る（例えば、Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，Ｍａｒ  １４；１０３（１１）：４００５−１０に記載される通りである；その中に開示される修飾は、参照により本明細書に組み込まれる）。Ａｓｎ２９７上に特定の変異または改変した糖鎖付加（例えば、Ｎ２９７Ｑ、ＥＵインデックス付番）を含有するＩｇＧ１定常領域は、Ｆｃ受容体に対する結合を増強することが示されている。一実施形態では、かかる変異は、ヒトＩｇＧ１定常領域について２３９、３３２、および３３０（または、他のＩｇＧアイソタイプにおける同等の位置）から選択される残基のうちの１つ以上である。一実施形態では、抗体または断片は、Ｎ２９７Ｑ、Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、およびＡ３３０Ｌ（ＥＵインデックス付番）から独立して選択される１つ以上の変異を有するヒトＩｇＧ１定常領域を含む。
【０４２２】
別の実施形態では、Ｆｃ受容体に対する親和性の増加は、例えば、フコシル化不足または脱フコシル化変異型を生成することによって、Ｆｃドメインの天然糖鎖付加プロファイルを改変することによって達成される（Ｎａｔｓｕｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．Ｄｅｖｅｌ．Ｔｈｅｒ．，３：７−１６またはＺｈｏｕ  Ｑ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００８，Ｆｅｂ  １５，９９（３）：６５２−６５に記載される通り、それらの中に記載される修飾は、参照により本明細書に組み込まれる）。非フコシル化抗体は、フコース残基を含まないＦｃの複合型Ｎ−グリカンのトリ−マンノシルコア構造を有する。Ｆｃ  Ｎ−グリカンからのコアフコース残基を欠くこれらの糖鎖を操作された抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ結合能力の増強のためにフコシル化された等価物よりも強いＡＤＣＣを呈し得る。例えば、ＡＤＣＣを増加させるために、Ｆｃ−γＲＩＩＩへの結合を増加させるようにヒンジ領域中の残基を改変することができる（例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｍａｒ  ２；２７６（９）：６５９１−６０４を参照されたい；その中に記載される修飾は、参照により本明細書に組み込まれる）。したがって、一実施形態では、抗体または断片は、野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域の変異型であるヒトＩｇＧ重鎖定常領域を含み、変異型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域がヒトＦｃγ受容体に結合するよりも高い親和性で、ＦｃｙＲＩＩＢおよびＦｃｙＲＩＩＡからなる群から選択されるヒトＦｃγ受容体に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域の変異型であるヒトＩｇＧ重鎖定常領域を含み、変異型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域がヒトＦｃγＲＩＩＢに結合するよりも高い親和性でヒトＦｃγＲＩＩＢに結合する。一実施形態では、変異型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、変異型ヒトＩｇＧ１、変異型ヒトＩｇＧ２、または変異型ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域である。一実施形態では、変異型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、Ｇ２３６Ｄ、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、およびＬ３２８Ｅ（ＥＵインデックス付番システム）から選択される１つ以上のアミノ酸変異を含む。別の実施形態では、変異型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、Ｓ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆ；Ｐ２３８ＤおよびＬ３２８Ｅ；Ｐ２３８Ｄ、ならびにＥ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、およびＡ３３０Ｒからなる群から選択される１つ以上の置換；Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、およびＡ３３０Ｒ；Ｇ２３６ＤおよびＳ２６７Ｅ；Ｓ２３９ＤおよびＳ２６７Ｅ；Ｖ２６２Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、およびＬ３２８Ｆ；ならびにＶ２６４Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、およびＬ３２８Ｆ（ＥＵインデックス付番システム）からなる群から選択されるアミノ酸変異のセットを含む。別の実施形態では、変異型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ、ヒトＦｃγＲＩＩＡまたはヒトＦｃγＲＩに対するＩｇＧの親和性を低減する１つ以上のアミノ酸変異をさらに含む。一実施形態では、ＦｃγＲＩＩＢは、マクロファージ、単球、Ｂ細胞、樹状細胞、���皮細胞、および活性化Ｔ細胞からなる群から選択される細胞上で発現される。一実施形態では、変異型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、以下のアミノ酸変異、Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ｆ２４３Ｌ、Ｔ２５６Ａ、Ｋ２９０Ａ、Ｒ２９２Ｐ、Ｓ２９８Ａ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ａ３３９Ｔ、およびＰ３９６Ｌ（ＥＵインデックス付番システム）のうちの１つ以上を含む。一実施形態では、変異型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、Ｓ２３９Ｄ；Ｔ２５６Ａ；Ｋ２９０Ａ；Ｓ２９８Ａ；Ｉ３３２Ｅ；Ｅ３３３Ａ；Ｋ３３４Ａ；Ａ３３９Ｔ；Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅ；Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、およびＩ３３２Ｅ；Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、およびＫ３３４Ａ；Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、およびＩ３３２Ｅ；ならびにＦ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、およびＰ３９６Ｌ（ＥＵインデックス付番システム）からなる群から選択されるアミノ酸変異のセットを含む。一実施形態では、変異型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、Ｓ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、またはＩ３３２Ｅアミノ酸変異（ＥＵインデックス付番システム）を含む。一実施形態では、変異型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅアミノ酸変異（ＥＵインデックス付番システム）を含む。一実施形態では、変異型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、Ｓ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅアミノ酸変異（ＥＵインデックス付番システム）を含む変異型ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域である。一実施形態では、抗体または断片は、フコシル化されていないＦｃ領域を含む。別の実施形態では、抗体またはその断片は、脱フコシル化されている。別の実施形態では、抗体または断片は、フコシル化が不足している。
【０４２３】
別の実施形態では、本明細書に開示される抗体および断片は、ＦｃＲｎへの結合を増強させる三重変異（Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）を含み得る。表２における変異影響ＦｃＲｎ結合の考察について、Ｄａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００２；１６９：５１７１−５１８０を参照されたい（その中に記載される変異は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０４２４】
同様に、ＣＤＣの増強は、古典的な補体活性化カスケードの第１の構成要素であるＣ１ｑに対する親和性を増加させるアミノ酸変化によって達成され得る（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００１，１６６：２５７１−２５７５を参照されたい；記載される修飾は、参照により本明細書に組み込まれる）。別のアプローチは、Ｃ１ｑに対するＩｇＧ３のより高い親和性を活用する、ヒトＩｇＧ１およびヒトＩｇＧ３セグメントから作製されたキメラＦｃドメインを作製することである（Ｎａｔｓｕｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，６８：３８６３−３８７２；修飾は、参照により本明細書に組み込まれる）。別の実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗体断片は、Ｃ１ｑ結合および／または低減もしくは焼失したＣＤＣ活性を改変するために、残基３２９、３３１、および／または３２２において変異したアミノ酸を含み得る。別の実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗体断片は、残基２３１および２３９において修飾を有し、それにより抗体が補体を修復する能力を改変するためにアミノ酸が置き換えられている、Ｆｃ領域を含有し得る。一実施形態では、抗体または断片は、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ４３０Ｇ、Ｒ３４４Ｄ、およびＤ３５６Ｒから選択される１つ以上の変異、とりわけ、Ｒ３４４ＤおよびＤ３５６Ｒを含む二重変異（ＥＵインデックス付番システム）を含む定常領域を有する。
【０４２５】
抗体は、１つ以上の型のＦｃ受容体に結合するが、細胞エフェクター機能を誘導しない、すなわち、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、またはＡＤＣＰ活性を媒介しない、重鎖定常領域を有し得る。かかる定常領域は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、またはＡＤＣＰ活性の誘導を担う特定のＦｃ受容体（複数可）に結合することができない場合がある。抗体は、Ｆｃγ受容体に結合しない重鎖定常領域を有し得る。したがって、一実施形態では、定常領域は、Ｌｅｕ２３５Ｇｌｕ変異（ＥＵインデックス付番システム）を含み得る。
【０４２６】
別の実施形態では、本明細書に開示される抗体および断片は、血清半減期を増加または減少させるように修飾される。一実施形態では、以下の変異、Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、またはＴ２５６Ｆのうちの１つ以上が、抗体の生物学的半減期を増加させるために導入される。生物学的半減期はまた、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから取られたサルベージ受容体結合エピトープを含有するように、重鎖定常領域ＣＨ１ドメインまたはＣＬ領域を改変することによって増加させることもでき、これは米国特許第５，８６９，０４６号および同第６，１２１，０２２号に記載される通りであり、その中に記載される修飾は、参照により本明細書に組み込まれる。別の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合断片のＦｃヒンジ領域は、抗体または断片の生物学的半減期を減少させるように変異されている。抗体または断片が、天然ＦｃヒンジドメインのＳｐＡ結合と比べて損なわれたＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｙｌタンパク質Ａ（ＳｐＡ）結合を有するように、１つ以上のアミノ酸変異がＦｃヒンジ断片のＣＨ２−ＣＨ３ドメイン界面領域内に導入される。血清半減期を増加させる他の方法は、当業者に既知である。したがって、一実施形態では、抗体または断片は、ＰＥＧ化されている。別の実施形態では、抗体または断片は、アルブミン結合ドメイン、例えば、アルブミン結合単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）に融合されている。別の実施形態では、抗体または断片は、ＰＡＳ化（すなわち、大きい流体力学的容積を有する無電荷のランダムコイル構造を形成するＰＡＳ（ＸＬ−タンパク質ＧｍｂＨ）で構成されたポリペプチド配列の遺伝子的融合）されている。別の実施形態では、抗体または断片は、ＸＴＥＮ化（登録商標）／ｒＰＥＧ化（すなわち、正確ではない反復ペプチド配列（Ａｍｕｎｉｘ，Ｖｅｒｓａｒｔｉｓ）の治療用ペプチドへの遺伝子的融合）されている。別の実施形態では、抗体または断片は、ＥＬＰ化（すなわち、ＥＬＰ反復配列（ＰｈａｓｅＢｉｏ）への遺伝子的融合）されている。半減期を延長させるこれらの様々な融合は、Ｓｔｒｏｈｌ，ＢｉｏＤｒｕｇｓ（２０１５）２９：２１５−２３９により詳細に記載され、例えば、表２および６おけるその融合は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０４２７】
抗体は、安定性を増加させる修飾された定常領域を有し得る。したがって、一実施形態では、重鎖定常領域は、Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ変異を含む。別の実施形態では、本明細書に開示される抗体および断片は、システイン残基の数を改変するように修飾された重鎖ヒンジ領域を含む。この修飾は、軽鎖および重鎖の集合を容易にするため、または抗体の安定性を増加もしくは減少させるために使用され得る。
【０４２８】
概念３１．定常領域が、マウス定常領域である、概念３０に記載の抗体または断片。
【０４２９】
別の実施形態では、定常領域は、任意の非ヒト哺乳動物起源、例えば、ラット、マウス、ハムスター、モルモット、イヌ、ネコ、ウマ、ニワトリ、ラマ、ヒトコブラクダ等のものであってもよい。一実施形態では、定常領域は、ラット定常領域である。別の実施形態では、定常領域は、ラマ定常領域である。マウス定常領域は、本明細書において上記のアイソタイプまたは対立遺伝子のいずれかであり得る。
【０４３０】
概念３２．定常領域が、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性を有する、概念３０または概念３１に記載の抗体または断片。
【０４３１】
概念３３．
ａ）ＶＨドメインが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、
ｂ）ＶＨドメインが配列番号３３と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号４３と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｃ）ＶＨドメインが配列番号４７のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、
ｄ）ＶＨドメインが配列番号４８のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、
ｅ）ＶＨドメインが配列番号４９のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、
ｆ）ＶＨドメインが配列番号３４２のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、
ｇ）ＶＨドメインが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５０のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
ｈ）ＶＨドメインが配列番号４７のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５０のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
ｉ）ＶＨドメインが配列番号４８のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５０のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
ｊ）ＶＨドメインが配列番号４９のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５０のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
ｋ）ＶＨドメインが配列番号３４２のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５０のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
ｌ）ＶＨドメインが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５１のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
ｍ）ＶＨドメインが配列番号４７のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５１のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
ｎ）ＶＨドメインが配列番号４８のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５１のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
ｏ）ＶＨドメインが配列番号４９のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５１のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
ｐ）ＶＨドメインが配列番号３４２のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５１のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
ｑ）ＶＨドメインが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２９８のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
ｒ）ＶＨドメインが配列番号４７のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２９８のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
ｓ）ＶＨドメインが配列番号４８のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２９８のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
ｔ）ＶＨドメインが配列番号４９のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２９８のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
ｕ）ＶＨドメインが配列番号３４２のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２９８のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
ｖ）ＶＨドメインが配列番号５８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号６８のアミノ酸配列を含み、
ｗ）ＶＨドメインが配列番号５８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号６８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｘ）ＶＨドメインが配列番号７８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号８８のアミノ酸配列を含み、
ｙ）ＶＨドメインが配列番号７８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号８８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｚ）ＶＨドメインが配列番号９８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１０８のアミノ酸配列を含み、
ａａ）ＶＨドメインが配列番号９８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１０８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｂｂ）ＶＨドメインが配列番号１１８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、
ｃｃ）ＶＨドメインが配列番号１１８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１２８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｄｄ）ＶＨドメインが配列番号１５８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１６８のアミノ酸配列を含み、
ｅｅ）ＶＨドメインが配列番号１５８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１６８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｆｆ）ＶＨドメインが配列番号１７８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１８８のアミノ酸配列を含み、
ｇｇ）ＶＨドメインが配列番号１７８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１８８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｈｈ）ＶＨドメインが配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１４８のアミノ酸配列を含み、
ｉｉ）ＶＨドメインが配列番号１３８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１４８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｊｊ）ＶＨドメインが配列番号２４４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２５４のアミノ酸配列を含み、
ｋｋ）ＶＨドメインが配列番号２４４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２５４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｌｌ）ＶＨドメインが配列番号２６４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２７４のアミノ酸配列を含み、
ｍｍ）ＶＨドメインが配列番号２６４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２７４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｎｎ）ＶＨドメインが配列番号２８４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２９４のアミノ酸配列を含み、
ｏｏ）ＶＨドメインが配列番号２８４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２９４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｐｐ）ＶＨドメインが配列番号３４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号３５９のアミノ酸配列を含み、
ｑｑ）ＶＨドメインが配列番号３４９と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号３５９と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、概念１〜３２のいずれか一項に記載の抗体。
【０４３２】
一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも７０％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも７５％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９５％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９６％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９７％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９８％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９９％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９９．５％同一である。
【０４３３】
概念３４．抗体が、重鎖および軽鎖を含み、
ａ）重鎖アミノ酸配列が配列番号３５のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号４５のアミノ酸配列を含み、
ｂ）重鎖アミノ酸配列が配列番号３５と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号４５と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｃ）重鎖アミノ酸配列が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号４５のアミノ酸配列を含み、
ｄ）重鎖アミノ酸配列が配列番号４８のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号４５のアミノ酸配列を含み、
ｅ）重鎖アミノ酸配列が配列番号４９のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号４５のアミノ酸配列を含み、
ｆ）重鎖アミノ酸配列が配列番号３４２のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号４５のアミノ酸配列を含み、
ｇ）重鎖アミノ酸配列が配列番号３５のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号５０のアミノ酸配列を含み、
ｈ）重鎖アミノ酸配列が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号５０のアミノ酸配列を含み、
ｉ）重鎖アミノ酸配列が配列番号４８のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号５０のアミノ酸配列を含み、
ｊ）重鎖アミノ酸配列が配列番号４９のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号５０のアミノ酸配列を含み、
ｋ）重鎖アミノ酸配列が配列番号３４２のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号５０のアミノ酸配列を含み、
ｌ）重鎖アミノ酸配列が配列番号３５のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号５１のアミノ酸配列を含み、
ｍ）重鎖アミノ酸配列が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号５１のアミノ酸配列を含み、
ｎ）重鎖アミノ酸配列が配列番号４８のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号５１のアミノ酸配列を含み、
ｏ）重鎖アミノ酸配列が配列番号４９のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号５１のアミノ酸配列を含み、
ｐ）重鎖アミノ酸配列が配列番号３４２のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号５１のアミノ酸配列を含み、
ｑ）重鎖アミノ酸配列が配列番号３５のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号２９８のアミノ酸配列を含み、
ｒ）重鎖アミノ酸配列が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号２９８のアミノ酸配列を含み、
ｓ）重鎖アミノ酸配列が配列番号４８のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号２９８のアミノ酸配列を含み、
ｔ）重鎖アミノ酸配列が配列番号４９のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号２９８のアミノ酸配列を含み、
ｕ）重鎖アミノ酸配列が配列番号３４２のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号２９８のアミノ酸配列を含み、
ｖ）重鎖アミノ酸配列が配列番号６０のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号７０のアミノ酸配列を含み、
ｗ）重鎖アミノ酸配列が配列番号６０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号７０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｘ）重鎖アミノ酸配列が配列番号８０のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号９０のアミノ酸配列を含み、
ｙ）重鎖アミノ酸配列が配列番号８０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号９０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｚ）重鎖アミノ酸配列が配列番号１００のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号１１０のアミノ酸配列を含み、
ａａ）重鎖アミノ酸配列が配列番号１００と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号１１０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｂｂ）重鎖アミノ酸配列が配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、
ｃｃ）重鎖アミノ酸配列が配列番号１２０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号１３０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｄｄ）重鎖アミノ酸配列が配列番号１６０のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号１７０のアミノ酸配列を含み、
ｅｅ）重鎖アミノ酸配列が配列番号１６０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号１７０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｆｆ）重鎖アミノ酸配列が配列番号１８０のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号１９０のアミノ酸配列を含み、
ｇｇ）重鎖アミノ酸配列が配列番号１８０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号１９０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｈｈ）重鎖アミノ酸配列が配列番号１４０のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号１５０のアミノ酸配列を含み、
ｉｉ）重鎖アミノ酸配列が配列番号１４０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号１５０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｊｊ）重鎖アミノ酸配列が配列番号２４６のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号２５６のアミノ酸配列を含み、
ｋｋ）重鎖アミノ酸配列が配列番号２４６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号２５６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｌｌ）重鎖アミノ酸配列が配列番号２６６のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号２７６のアミノ酸配列を含み、
ｍｍ）重鎖アミノ酸配列が配列番号２６６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号２７６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｎｎ）重鎖アミノ酸配列が配列番号２８６のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号２９６のアミノ酸配列を含み、
ｏｏ）重鎖アミノ酸配列が配列番号２８６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号２９６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ｐｐ）重鎖アミノ酸配列が配列番号３５１のアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号３６１のアミノ酸配列を含み、
ｑｑ）重鎖アミノ酸配列が配列番号３５１と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、軽鎖アミノ酸配列が配列番号３６１と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、概念１〜３３のいずれか一項に記載の抗体。
【０４３４】
一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも７０％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも７５％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９５％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９６％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９７％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９８％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９９％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９９．５％同一である。
【０４３５】
概念３５．ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合し、任意に、ｈＰＤ−Ｌ１への結合についての競合は、ＳＰＲを使用して実施されてもよい、概念１〜３４のいずれかに記載の抗体または断片。
【０４３６】
ＳＰＲは、上記のように、または概念１６に記載されるように実施され得る。
【０４３７】
概念３６．抗体または断片が、ＰＤ−Ｌ１媒介性のＴ細胞抑制を阻害することができ、任意に、直接ＣＤ３／ＣＤ２８刺激、超抗原刺激のいずれかによって同時刺激を提供するか、またはＴ細胞応答を誘導することができる細胞との共インキュベーションによって同時刺激を提供するアッセイにおける、ＩＦＮγ、ＩＬ−２、ＣＤ２５、またはＴ細胞の増殖のうちの１つ以上の増加によってＴ細胞の抑制が測定されてもよい、概念１〜３５のいずれかに記載の抗体または断片。
【０４３８】
測定は、任意の好適な技術を用いて実施され得る。例えば、ＥＬＩＳＡ、ＨＴＲＦ、ＢＲＤＵ取り込み（増殖）、電気化学発光（ＥＣＬ）、またはフローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）を用いて測定を行うことができる。これらの技術は、当業者に周知であり、本明細書において他の箇所に記載されている。一実施形態では、アッセイは、フローサイトメトリーである。一実施形態では、アッセイは、ＥＬＩＳＡである。一実施形態では、アッセイは、ＨＴＲＦである。
【０４３９】
一実施形態において、Ｔ細胞の抑制は、ＩＦＮγの増加によって測定される。一実施形態において、Ｔ細胞の抑制は、ＩＬ−２の増加によって測定される。一実施形態において、Ｔ細胞の抑制は、ＣＤ２５の増加によって測定される。一実施形態において、Ｔ細胞の抑制は、ＩＦＮγおよびＩＬ−２の増加によって測定される。一実施形態において、Ｔ細胞の抑制は、ＩＦＮγおよびＣＤ２５の増加によって測定される。一実施形態において、Ｔ細胞の抑制は、ＣＤ２５およびＩＬ−２の増加によって測定される。一実施形態において、Ｔ細胞の抑制は、ＩＦＮγ、ＩＬ−２、およびＣＤ２５の増加によって測定される。
【０４４０】
一実施形態では、同時刺激は、直接ＣＤ３／ＣＤ２８刺激によって提供される。
【０４４１】
一実施形態では、同時刺激は、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌエンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）等のスーパー抗原によって提供される。
【０４４２】
一実施形態では、アッセイは、Ｔ細胞応答を誘導することができる細胞との共インキュベーションによって同時刺激を提供する。かかる細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、例えば、単球、Ｂ細胞、または樹状細胞であり得る。一実施形態では、アッセイは、ＡＰＣとの共インキュベーションによって同時刺激を提供する。一実施形態では、アッセイは、単球との共インキュベーションによって同時刺激を提供する。一実施形態において、アッセイは、Ｂ細胞との共インキュベーションによって共刺激を提供する。一実施形態において、アッセイは、樹状細胞との共インキュベーションによって共刺激を提供する。
【０４４３】
概念３７．概念１〜３６のいずれかに記載の抗体またはその断片を含む、二重特異性抗体または融合タンパク質。
【０４４４】
概念３７ａ．概念１〜３６のいずれかに記載の抗体またはその断片を含む、二重結合抗体または融合タンパク質。
【０４４５】
二重結合抗体は、上記の意味を有する。
【０４４６】
概念３８．二重特異性フォーマットが、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｍＡｂ２、ＦＩＴ−Ｉｇ、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック（ｄｏｃｋ  ａｎｄ  ｌｏｃｋ）、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｄｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｔａｎｄｅｍ  ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、ミニボディ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、特にｍＡｂ２、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、およびＦＩＴ−Ｉｇから、例えばｍＡｂ２およびＦＩＴ−Ｉｇから選択される、概念３７に記載の二重特異性抗体。
【０４４７】
一実施形態では、二重特異性フォーマットは、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｍＡｂ２、ＦＩＴ−Ｉｇ、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、Ｆａｂ−アーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、Ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ−Ｙ、Ｆｃａｂ、κλ−ｂｏｄｙ、直交Ｆａｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｄｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｔａｎｄｅｍ  ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、トリプルボディ（Ｔｒｉｐｌｅ  ｂｏｄｙ）、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３  ＫＩＨ、ｓｃＦｖ−ＣＨ−ＣＬ−ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、４価のＨＣａｂ、ＩｍｍＴＡＣ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、ＤＴ−ＩｇＧ、ＤｕｔａＭａｂ、ＩｇＧ（Ｈ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）−Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）−Ｖ、Ｖ（Ｈ）−ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−Ｖ、Ｖ（Ｌ）−ＩｇＧ、ＫＩＨ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＩｇＧ−２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ならびにｚｙｂｏｄｙから選択される。
【０４４８】
一実施形態では、二重特異性フォーマットは、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＦＩＴ−Ｉｇ、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、Ｆａｂ−アーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、Ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ−Ｙ、Ｆｃａｂ、κλ−ｂｏｄｙ、直交Ｆａｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｄｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｔａｎｄｅｍ  ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３  ＫＩＨ、ｓｃＦｖ−ＣＨ−ＣＬ−ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、４価のＨＣａｂ、ＩｍｍＴＡＣ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、ＤＴ−ＩｇＧ、ＤｕｔａＭａｂ、ＩｇＧ（Ｈ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）−Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）−Ｖ、Ｖ（Ｈ）−ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−Ｖ、Ｖ（Ｌ）−ＩｇＧ、ＫＩＨ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＩｇＧ−２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ならびにｚｙｂｏｄｙ、例えば、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＦＩＴ−Ｉｇ、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｄｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｔａｎｄｅｍ  ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、ミニボディ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、とりわけ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、ならびにＦＩＴ−Ｉｇから、例えばＦＩＴ−Ｉｇから選択される。
【０４４９】
一実施形態では、二重特異性フォーマットは、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｍＡｂ２、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、Ｆａｂ−アーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、Ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ−Ｙ、Ｆｃａｂ、κλ−ｂｏｄｙ、直交Ｆａｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｄｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｔａｎｄｅｍ  ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３  ＫＩＨ、ｓｃＦｖ−ＣＨ−ＣＬ−ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、４価のＨＣａｂ、ＩｍｍＴＡＣ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、ＤＴ−ＩｇＧ、ＤｕｔａＭａｂ、ＩｇＧ（Ｈ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）−Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）−Ｖ、Ｖ（Ｈ）−ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−Ｖ、Ｖ（Ｌ）−ＩｇＧ、ＫＩＨ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＩｇＧ−２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ならびにｚｙｂｏｄｙ、例えば、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｍＡｂ２、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｄｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｔａｎｄｅｍ  ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、ミニボディ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、とりわけ、ｍＡｂ２、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、ならびに共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホールから、例えばｍＡｂ２から選択される。
【０４５０】
一実施形態では、二重特異性フォーマットは、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、Ｆａｂ−アーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、Ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ−Ｙ、Ｆｃａｂ、κλ−ｂｏｄｙ、直交Ｆａｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｄｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｔａｎｄｅｍ  ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３  ＫＩＨ、ｓｃＦｖ−ＣＨ−ＣＬ−ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、４価のＨＣａｂ、ＩｍｍＴＡＣ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、ＤＴ−ＩｇＧ、ＤｕｔａＭａｂ、ＩｇＧ（Ｈ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）−Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）−Ｖ、Ｖ（Ｈ）−ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−Ｖ、Ｖ（Ｌ）−ＩｇＧ、ＫＩＨ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＩｇＧ−２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ならびにｚｙｂｏｄｙ、例えば、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｄｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｔａｎｄｅｍ  ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、ミニボディ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、とりわけ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、ならびに共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホールから選択される。
【０４５１】
概念３９．二重特異性抗体が、ｈＰＤ−Ｌ１と、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ３、およびＶＩＳＴＡ、例えば、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、およびＬＡＧ−３）、免疫調節剤（例えば、ＢＴＬＡ、ｈＨＶＥＭ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ４、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７３、ＣＤ９６、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ２００、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、およびＣＤ１５５、例えば、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＲ４、ＢＴＬＡ、ｈＶＥＭ、およびＣＳＦ１Ｒ）、免疫賦活剤（例えば、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＣＸＣＲ３（例えば、アゴニスティック抗ＣＸＣＲ３抗体）、ＣＤ２７、ＣＤ３、ＩＣＯＳ（例えば、アゴニスティック抗ＩＣＯＳ抗体）、例えば、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、およびＯＸ４０）から選択される別の標的抗原と、に特異的に結合する、概念３７または概念３８に記載の二重特異性抗体。
【０４５２】
概念３９ａ．二重特異性抗体が、ＣＤＲのうちの１つ以上（例えば、ＣＤＲＨ３およびＣＤＲＬ３）または本明細書の以下の態様１ａに記載される抗体のいずれかの可変領域配列を含むＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対を有するｈＰＤ−Ｌ１と、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ３、およびＶＩＳＴＡ、例えば、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、およびＬＡＧ−３）、免疫調節剤（例えば、ＢＴＬＡ、ｈＨＶＥＭ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ４、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７３、ＣＤ９６、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ２００、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、およびＣＤ１５５、例えば、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＲ４、ＢＴＬＡ、ｈＶＥＭ、およびＣＳＦ１Ｒ）、免疫賦活剤（例えば、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＣＸＣＲ３（例えば、アゴニスティック抗ＣＸＣＲ３抗体）、ＣＤ２７、ＣＤ３、ＩＣＯＳ（例えば、アゴニスティック抗ＩＣＯＳ抗体）、例えば、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、およびＯＸ４０）から選択される別の標的抗原と、に結合する、二重特異性抗体。
【０４５３】
概念３９ｂ．二重特異性抗体が、ｈＰＤ−Ｌ１と、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ３、およびＶＩＳＴＡ、例えば、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、およびＬＡＧ−３）、免疫調節剤（例えば、ＢＴＬＡ、ｈＨＶＥＭ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ４、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７３、ＣＤ９６、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ２００、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、およびＣＤ１５５、例えば、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＲ４、ＢＴＬＡ、ｈＶＥＭ、およびＣＳＦ１Ｒ）、免疫賦活剤（例えば、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＣＸＣＲ３（例えば、アゴニスティック抗ＣＸＣＲ３抗体）、ＣＤ３、ＩＣＯＳ（例えば、アゴニスティック抗ＩＣＯＳ抗体）、例えば、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、およびＯＸ４０）から選択される別の標的抗原と、に特異的に結合する、概念３７または概念３８に記載の二重特異性抗体。
【０４５４】
一実施形態では、別の標的抗原は、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、およびＶＩＳＴＡ、例えば、ＴＩＧＩＴ、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、およびＬＡＧ−３等の免疫チェックポイント阻害剤である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＢＴＬＡ、ｈＨＶＥＭ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ４、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７３、ＣＤ９６、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ２００、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、およびＣＤ１５５、またはＢＴＬＡ、ｈＨＶＥＭ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ４、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７３、ＣＤ９６、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ２００、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、およびＣＤ１５５、例えば、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＲ４、ＢＴＬＡ、ｈＶＥＭ、およびＣＳＦ１Ｒ等の免疫調節剤である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＣＸＣＲ３（例えば、アゴニスティック抗ＣＸＣＲ３抗体）、ＣＤ２７、ＣＤ３、およびＩＣＯＳ（例えば、アゴニスティック抗ＩＣＯＳ抗体）、またはＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＣＸＣＲ３（例えば、アゴニスティック抗ＣＸＣＲ３抗体）、ＣＤ３およびＩＣＯＳ（例えば、アゴニスティック抗ＩＣＯＳ抗体）、例えば、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、およびＯＸ４０）等の免疫賦活剤である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＣＴＬＡ−４である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＴＩＧＩＴである。一実施形態では、別の標的抗原は、ＴＩＭ−３である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＬＡＧ−３である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＧＩＴＲである。一実施形態では、別の標的抗原は、ＶＩＳＴＡである。一実施形態では、別の標的抗原は、ＣＤ１３７である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＳＩＲＰαである。一実施形態では、別の標的抗原は、ＣＸＣＬ１０である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＣＤ１５５である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＣＤ４０である。
【０４５５】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＰＤ−１である別の標的抗原に結合し、ＰＤ−１への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４５６】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＴＬＡ４である別の標的抗原に結合し、ＣＴＬＡ４への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４５７】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＴＩＧＩＴである別の標的抗原に結合し、ＴＩＧＩＴへの結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４５８】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＴＩＭ−３である別の標的抗原に結合し、ＴＩＭ−３への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４５９】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＬＡＧ３である別の標的抗原に結合し、ＬＡＧ３への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４６０】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＶＩＳＴＡである別の標的抗原に結合し、ＶＩＳＴＡへの結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４６１】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＢＴＬＡである別の標的抗原に結合し、ＢＴＬＡへの結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４６２】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ｈＨＶＥＭである別の標的抗原に結合し、ｈＨＶＥＭへの結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４６３】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＳＦ１Ｒである別の標的抗原に結合し、ＣＳＦ１Ｒへの結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４６４】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＣＲ４である別の標的抗原に結合し、ＣＣＲ４への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４６５】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ３９である別の標的抗原に結合し、ＣＤ３９への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４６６】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ４０である別の標的抗原に結合し、ＣＤ４０への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４６７】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ７３である別の標的抗原に結合し、ＣＤ７３への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４６８】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ９６である別の標的抗原に結合し、ＣＤ９６への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４６９】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＸＣＲ２である別の標的抗原に結合し、ＣＸＣＲ２への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４７０】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＸＣＲ４である別の標的抗原に結合し、ＣＸＣＲ４への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４７１】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ２００である別の標的抗原に結合し、ＣＤ２００への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４７２】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＧＡＲＰである別の標的抗原に結合し、ＧＡＲＰへの結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４７３】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＳＩＲＰαである別の標的抗原に結合し、ＳＩＲＰαへの結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４７４】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＸＣＬ９である別の標的抗原に結合し、ＣＸＣＬ９への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４７５】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＸＣＬ１０である別の標的抗原に結合し、ＣＸＣＬ１０への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４７６】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＸＣＬ１１である別の標的抗原に結合し、ＣＸＣＬ１１への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４７７】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ１５５である別の標的抗原に結合し、ＣＤ１５５への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４７８】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ１３７である別の標的抗原に結合し、ＣＤ１３７への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４７９】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＧＩＴＲである別の標的抗原に結合し、ＧＩＴＲへの結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４８０】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＯＸ４０である別の標的抗原に結合し、ＯＸ４０への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４８１】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ４０である別の標的抗原に結合し、ＣＤ４０への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４８２】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＸＣＲ３である別の標的抗原に結合し、ＣＸＣＲ３への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４８３】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ２７である別の標的抗原に結合し、ＣＤ２７への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４８４】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ３である別の標的抗原に結合し、ＣＤ３への結合は、本明細書の以下の態様１Ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）によって提供される。
【０４８５】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ＩＣＯＳである別の標的抗原に結合し、ＩＣＯＳへの結合は、本明細書の以下の構成５および構成５ａに記載されるようなＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲＨ３および／もしくはＣＤＲＬ３）または可変領域配列を含む配列のいずれかを有する抗原結合ドメイン（例えば、ＶＨ、ＶＬ、またはＶＨおよびＶＬの対）、ならびに文１〜１０２および文１ａ〜２１ａに記載される抗ＩＣＯＳ抗体のいずれかによって提供される。
【０４８６】
一実施形態では、二重特異性抗体は、ｈＰＤ−Ｌ１に結合する完全抗体（例えば、ＶＬおよびＣＬを含む軽鎖と、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む重鎖とを含む抗体）（任意に、抗体は、概念１〜４０のいずれか１つに定義される構造を有するか、または抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、ＧＩＴＲに結合するＦａｂ（任意に、ＧＩＴＲ  Ｆａｂは、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）とを含むＦＩＴ−Ｉｇフォーマットを有する。一実施形態では、二重特異性抗体は、ＧＩＴＲに結合する完全抗体（例えば、ＶＬおよびＣＬを含む軽鎖と、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む重鎖とを含む抗体）（任意に、ＧＩＴＲ抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、ｈＰＤ−Ｌ１に結合するＦａｂ（任意に、抗体は、態様１〜４０のいずれか１つに定義される構造を有するか、または抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、を含むＦＩＴ−Ｉｇフォーマットを有する。一実施形態では、ＦＩＴ−Ｉｇは、エフェクター可能化されている（例えば、概念３０〜３２のいずれかに記載される通り）。別の実施形態では、ＦＩＴ−Ｉｇは、エフェクター可能化されていない（例えば、ＩｇＧ４フォーマットであるか、または概念３０〜３１のいずれかに記載される通りである）。
【０４８７】
一実施形態では、二重特異性抗体は、ｈＰＤ−Ｌ１に結合する完全抗体（例えば、ＶＬおよびＣＬを含む軽鎖と、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む重鎖とを含む抗体）（任意に、抗体は、態様１〜４０のいずれか１つに定義される構造を有するか、または抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、ＩＣＯＳに結合するＦａｂ（例えば、アゴニスト活性により結合し、任意に、ＩＣＯＳ  Ｆａｂは、本明細書の以下の構成５、または構成５ａ、または文１〜１０２、または文１ａ〜２１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、を含むＦＩＴ−Ｉｇフォーマットを有する。一実施形態では、ＩＣＯＳ  Ｆａｂは、文１〜１０２または文１ａ〜２１ａにおいて本明細書に記載されるＩＣＯＳ抗体のいずれかの配列を有する）  一実施形態では、二重特異性抗体は、ＩＣＯＳに結合する完全抗体（例えば、ＶＬおよびＣＬを含む軽鎖と、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む重鎖とを含む抗体）（例えば、アゴニスト活性により結合するか、または任意に、ＩＣＯＳ抗体は、本明細書の以下の構成５、または構成５ａ、または文１〜１０２、または文１ａ〜２１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、ＩＣＯＳに結合するＦａｂ（任意に、ＩＣＯＳ  Ｆａｂは、本明細書の以下の構成５、または構成５ａ、または文１〜１０２、または文１ａ〜２１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、ｈＰＤ−Ｌ１に結合するＦａｂ（任意に、抗体は、概念１〜４０のいずれか１つに定義される構造を有するか、または抗体は、本明細書の以下の態様１Ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、を含むＦＩＴ−Ｉｇフォーマットを有する。一実施形態では、ＦＩＴ−Ｉｇは、エフェクター可能化されている（例えば、概念３０〜３２のいずれかに記載されるように）。別の実施形態では、ＦＩＴ−Ｉｇは、エフェクター可能化されていない（例えば、ＩｇＧ４フォーマットであるか、または概念３０もしくは３１のいずれかに記載される通りである）。
【０４８８】
一実施形態では、二重特異性抗体は、ｈＰＤ−Ｌ１に結合する完全抗体（例えば、ＶＬおよびＣＬを含む軽鎖と、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む重鎖とを含む抗体）（任意に、抗体は、概念１〜４０のいずれか１つに定義される構造を有するか、または抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、ＴＩＭ−３に結合するＦａｂ（任意に、ＴＩＭ−３  Ｆａｂは、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、を含むＦＩＴ−Ｉｇフォーマットを有する。一実施形態では、二重特異性抗体は、ＴＩＭ−３に結合する完全抗体（例えば、ＶＬおよびＣＬを含む軽鎖と、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む重鎖とを含む抗体）（任意に、ＴＩＭ−３抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、ｈＰＤ−Ｌ１に結合するＦａｂ（任意に、抗体は、態様１〜４０のいずれか１つに定義される構造を有するか、または抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、を含むＦＩＴ−Ｉｇフォーマットを有する。一実施形態では、ＦＩＴ−Ｉｇは、エフェクター可能化されている（例えば、概念３０〜３２のいずれかに記載されるように）。別の実施形態では、ＦＩＴ−Ｉｇは、エフェクター可能化されていない（例えば、ＩｇＧ４フォーマットであるか、または概念３０または３１のいずれかに記載される通りである）。
【０４８９】
一実施形態では、二重特異性抗体は、ｈＰＤ−Ｌ１に結合する完全抗体（例えば、ＶＬおよびＣＬを含む軽鎖と、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む重鎖とを含む抗体）（任意に、抗体は、概念１〜４０のいずれか１つに定義される構造を有するか、または抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、ＣＤ１３７に結合するＦａｂ（任意に、ＣＤ１３７  Ｆａｂは、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、を含むＦＩＴ−Ｉｇフォーマットを有する。一実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ１３７に結合する完全抗体（例えば、ＶＬおよびＣＬを含む軽鎖と、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む重鎖とを含む抗体）（任意に、ＣＤ１３７抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、ｈＰＤ−Ｌ１に結合するＦａｂ（任意に、抗体は、態様１〜４０のいずれか１つに定義される構造を有するか、または抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、を含むＦＩＴ−Ｉｇフォーマットを有する。一実施形態では、ＦＩＴ−Ｉｇは、エフェクター可能化されている（例えば、概念３０〜３２のいずれかに記載されるように）。別の実施形態では、ＦＩＴ−Ｉｇは、エフェクター可能化されていない（例えば、ＩｇＧ４フォーマットであるか、または概念３０または３１のいずれかに記載される通りである）。
【０４９０】
一実施形態では、二重特異性抗体は、ｈＰＤ−Ｌ１に結合する完全抗体（例えば、ＶＬおよびＣＬを含む軽鎖と、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む重鎖とを含む抗体）（任意に、抗体は、概念１〜４０のいずれか１つに定義される構造を有するか、または抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、ＣＤ３に結合するＦａｂ（任意に、ＣＤ３  Ｆａｂは、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、を含むＦＩＴ−Ｉｇフォーマットを有する。一実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ３に結合する完全抗体（例えば、ＶＬおよびＣＬを含む軽鎖と、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む重鎖とを含む抗体）（任意に、ＣＤ３抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、ｈＰＤ−Ｌ１に結合するＦａｂ（任意に、抗体は、態様１〜４０のいずれか１つに定義される構造を有するか、または抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、を含むＦＩＴ−Ｉｇフォーマットを有する。一実施形態では、ＦＩＴ−Ｉｇは、エフェクター可能化されている（例えば、概念３０〜３２のいずれかに記載されるように）。別の実施形態では、ＦＩＴ−Ｉｇは、エフェクター可能化されていない（例えば、ＩｇＧ４フォーマットであるか、または概念３０または３１のいずれかに記載される通りである）。
【０４９１】
上に列挙された標的のいずれか（ならびに態様１Ａにより詳細に記載されるＦａｂおよび／または完全抗体）は、ＦＩＴ−Ｉｇ構造に適用され得る。
【０４９２】
概念４０．別の標的抗原が、ＴＩＧＩＴまたはＬＡＧ３である、概念３９に記載の二重特異性抗体。
【０４９３】
概念３７〜４０のいずれにおいても、抗体またはその断片が８４Ｇ０９の重鎖および軽鎖可変領域配列を有する場合、二重特異性抗体は、ＦｃａｂがＬＡＧ３に対する結合親和性を有するｍＡｂ２フォーマットを含まないものとして解釈されるものとする。
【０４９４】
一実施形態では、二重特異性抗体は、ｈＰＤ−Ｌ１に結合する完全抗体（例えば、ＶＬおよびＣＬを含む軽鎖と、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む重鎖とを含む抗体）（任意に、抗体は、概念１〜４０のいずれか１つに定義される構造を有するか、または抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、ＴＩＧＩＴに結合するＦａｂ（任意に、ＴＩＧＩＴ  Ｆａｂは、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、を含むＦＩＴ−Ｉｇフォーマットを有する。一実施形態では、二重特異性抗体は、ＴＩＧＩＴに結合する完全抗体（例えば、ＶＬおよびＣＬを含む軽鎖と、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む重鎖とを含む抗体）（任意に、ＴＩＧＩＴ抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、ｈＰＤ−Ｌ１に結合するＦａｂ（任意に、抗体は、概念１〜４０のいずれか１つに定義される構造を有するか、または抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、を含むＦＩＴ−Ｉｇフォーマットを有する。一実施形態では、ＦＩＴ−Ｉｇは、エフェクター可能化されている（例えば、概念３０〜３２のいずれかに記載されるように）。別の実施形態では、ＦＩＴ−Ｉｇは、エフェクター可能化されていない（例えば、ＩｇＧ４フォーマットであるか、または概念３０または３１のいずれかに記載される通りである）。
【０４９５】
一実施形態では、二重特異性抗体は、ｈＰＤ−Ｌ１に結合する完全抗体（例えば、ＶＬおよびＣＬを含む軽鎖と、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む重鎖とを含む抗体）（任意に、抗体は、概念１〜４０のいずれか１つに定義される構造を有するか、または抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、ＬＡＧ３に結合するＦａｂ（任意に、ＬＡＧ３  Ｆａｂは、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、を含むＦＩＴ−Ｉｇフォーマットを有する。一実施形態では、二重特異性抗体は、ＬＡＧ３に結合する完全抗体（例えば、ＶＬおよびＣＬを含む軽鎖と、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む重鎖とを含む抗体）（任意に、ＬＡＧ３抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、ｈＰＤ−Ｌ１に結合するＦａｂ（任意に、抗体は、態様１〜４０のいずれか１つに定義される構造を有するか、または抗体は、本明細書の以下の態様１ａに定義されるＣＤＲおよび可変領域を含む配列を有してもよい）と、を含むＦＩＴ−Ｉｇフォーマットを有する。一実施形態では、ＦＩＴ−Ｉｇは、エフェクター可能化されている（例えば、概念３０〜３２のいずれかに記載されるように）。別の実施形態では、ＦＩＴ−Ｉｇは、エフェクター可能化されていない（例えば、ＩｇＧ４フォーマットであるか、または概念３０または３１のいずれかに記載される通りである）。
【０４９６】
概念４１．例えば、腫瘍性もしくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、および悪性腫瘍、例えば黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキン病、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫から選択される、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態の治療または予防における使用のための、概念１〜４０のいずれかに記載の抗体または断片。（例えば、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、および中皮腫、または例えばウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）および軟部肉腫）。
【０４９７】
概念４２．例えば、腫瘍性もしくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、および悪性腫瘍、例えば黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキン病、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（例えば、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、および中皮腫、または例えばウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）および軟部肉腫）から選択される、ヒトにおけるｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態の治療または予防のためのヒトへの投与のための医薬品の製造における、概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体または断片の使用。
【０４９８】
概念４３．ヒトにおける、例えば、腫瘍性もしくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、および悪性腫瘍、例えば黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキン病、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（例えば、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、および中皮腫、または例えばウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）および軟部肉腫）から選択される、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態を治療または予防する方法であって、治療有効量の概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体または断片をヒトに投与することを含み、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態が、それにより治療または予防される、方法。
【０４９９】
概念４１〜４３のいずれにおいても、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患は、本明細書に記載されるもののいずれかであり得る。一実施形態では、概念４１〜４３のいずれにおいても、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患は、子宮頸癌および上咽頭癌、例えば、ＨＰＶ感染によって引き起こされた子宮頸癌等のウイルス誘導性癌である。一実施形態では、概念４１〜４３のいずれにおいても、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患は、慢性ウイルス感染症である。一実施形態では、概念４１〜４３のいずれにおいても、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患は、腫瘍性疾患である。一実施形態では、概念４１〜４３のいずれにおいても、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患は、非腫瘍性疾患である。一実施形態では、概念４１〜４３のいずれにおいても、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患は、悪性腫瘍である。一実施形態では、概念４１〜４３のいずれにおいても、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患は、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、暴行癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫等の、ＰＤ−Ｌ１療法に対して応答性であることが知られている癌である。一実施形態では、概念４１〜４３のいずれにおいても、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患は、軟部肉腫である癌である。
【０５００】
概念４４．ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態が癌である、概念４１に記載の抗体もしくは断片、概念４２に記載の使用、または概念４３に記載の方法。
【０５０１】
概念４４ａ．ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態が、神経変性疾患、障害、または病的状態であり、任意に、当該神経変性疾患、障害、または病的状態は、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、一次性進行型多発性硬化症、二次性進行型多発性硬化症、大脳皮質基底核変性症、レット症候群、加齢黄斑変性および網膜色素変性症、網膜変性障害、前部虚血性視神経症、緑内障、ブドウ膜炎、うつ病、外傷関連ストレスまたは心的外傷後ストレス障害、前頭側頭型認知症、レビー小体型認知症、軽度認知障害、後皮質萎縮、原発性進行性失語および進行性核上性麻痺または加齢認知症から選択され、特に、アルツハイマー病、筋委縮性側索硬化症、パーキンソン病、およびハンチントン病から選択され、例えば、アルツハイマー病から選択される、概念４１に記載の抗体もしくは断片、概念４２に記載の使用、または概念４３に記載の方法。
【０５０２】
概念４４ａにおいて、治療有効量の抗体または断片は、ＰＤ−Ｌ１、例えばｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗原結合部位を含み得る。
【０５０３】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＰＤ−Ｌ１、例えばｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１抗原結合部位は、アテゾリズマブ（Ｒｏｃｈｅ）、アベルマブ（Ｍｅｒｃｋ）、ＢＭＳ−９３６５５９／ＭＤＸ−１１０５（ＢＭＳ）、デュルバルマブ／Ｍｅｄｉ４７３６（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＫＮ−０３５、ＣＡ−１７０、ＦＡＺ−０５３  Ｍ７８２４、ＡＢＢＶ−３６８、ＬＹ−３３０００５４、ＧＮＳ−１４８０、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＲＥＧＮ３５０４、およびＷＯ２０１７／０３４９１６、ＷＯ２０１７／０２０２９１、ＷＯ２０１７／０２０８５８、ＷＯ２０１７／０２０８０１、ＷＯ２０１６／１１１６４５、ＷＯ２０１６／１９７３６７、ＷＯ２０１６／０６１１４２、ＷＯ２０１６／１４９２０１、ＷＯ２０１６／０００６１９、ＷＯ２０１６／１６０７９２、ＷＯ２０１６／０２２６３０、ＷＯ２０１６／００７２３５、ＷＯ２０１５／１７９６５４、ＷＯ２０１５／１７３２６７、ＷＯ２０１５／１８１３４２、ＷＯ２０１５／１０９１２４、ＷＯ２０１５／１１２８０５、ＷＯ２０１５／０６１６６８、ＷＯ２０１４／１５９５６２、ＷＯ２０１４／１６５０８２、ＷＯ２０１４／１０００７９、ＷＯ２０１４／０５５８９７、ＷＯ２０１３／１８１６３４、ＷＯ２０１３／１７３２２３、ＷＯ２０１３／０７９１７４、ＷＯ２０１２／１４５４９３、ＷＯ２０１１／０６６３８９、ＷＯ２０１０／０７７６３４、ＷＯ２０１０／０３６９５９、ＷＯ２０１０／０８９４１１、またはＷＯ２００７／００５８７４に開示されるＰＤ−Ｌ１抗体（これらの抗体および配列は、参照により本明細書に組み込まれる）のいずれかから選択される抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含む。
【０５０４】
概念４４ａの別の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１抗原結合部位は、本明細書に開示される抗ＰＤ−Ｌ１抗体から選択される抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれか１つ、具体的には、概念１６ａ〜１６ｌに開示される抗ＰＤ−Ｌ１抗体クローン、およびより具体的には、抗ＰＤ−Ｌ１抗体クローン８４Ｇ０９からの、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含む。
【０５０５】
概念４４ａの別の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１抗原結合部位は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体クローン８４Ｇ０９からのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態は、アルツハイマー病である。
【０５０６】
概念４５．癌が、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、および中皮腫から選択されるか、またはウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）および軟部肉腫から選択される、概念４４に記載の抗体もしくは断片、使用、または方法。
【０５０７】
概念４６．さらなる療法をヒトに施術すること、例えば治療剤をヒトに投与することをさらに含み、任意に、さらなる治療剤は、
ａ．他の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、および抗ＬＡＧ−３抗体）、
ｂ．免疫刺激剤（例えば、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、および抗ＣＤ４０抗体）、
ｃ．ケモカイン受容体アンタゴニスト（例えば、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ４、およびＣＸＣＲ２）、
ｄ．標的化キナーゼ阻害剤（例えば、ＣＳＦ−１ＲもしくはＶＥＧＦＲ阻害剤）、
ｅ．血管新生阻害剤（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａもしくはデルタ様リガンド４）、
ｆ．免疫刺激ペプチドもしくはケモカイン（例えば、ＣＸＣＬ９もしくはＣＸＣＬ１０）、
ｇ．サイトカイン（例えば、ＩＬ−１５およびＩＬ−２１）、
ｈ．ＣＤ３に対して少なくとも１つの特異性を有する二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー(engager)（ＢｉＴＥ）（例えば、ＣＤ３／ＣＤ１９  ＢｉＴＥ）、
ｉ．他の二重特異性分子（例えば、腫瘍関連抗原を標的とするＩＬ−１５含有分子、例えば、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ−２、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｃａｎｃｅｒ−１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）、ＧＤ２、ＥｐＣＡＭ、もしくは黒色腫関連抗原−３（ＭＡＧＥ−Ａ３）などの上皮成長因子受容体）、
ｊ．腫瘍溶解性ウイルス（例えば、ＨＳＶウイルス（任意選択でＧＭＣＳＦを分泌する）、ニューカッスル病ウイルス、およびワクシニアウイルス）、
ｋ．腫瘍関連抗原（例えば、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｃａｎｃｅｒ−１［ＮＹ−ＥＳＯ−１］、黒色腫関連抗原−３（ＭＡＧＥ−３））によるワクチン接種、
ｌ．細胞療法（例えば、抗ＣＤ１９、抗ＥｐＣａｍ、もしくは抗メソテリンを発現するキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）等）、
ｍ．ＮＫＧ２ＤもしくはＣＤ１６ａ等の、活性化ＭＫ受容体に対する特異性を有する二重特異性ＮＫ細胞エンゲージャー、ならびに
ｎ．腫瘍特異的Ｔ細胞またはＬＡＫ細胞の養子移入、からなる群から独立して選択されてもよいし、
または任意に、さらなる療法が、化学療法、放射線療法、および腫瘍の外科的切除であってもよい、概念４１〜４５のいずれか一項に記載の抗体もしくは断片、使用、または方法。
【０５０８】
放射線療法は、患部組織に直接、または全身のいずれかに送達される、単回線量または分割線量であり得る。
【０５０９】
化学療法剤は、本明細書において上記のいずれか、特に、免疫原性細胞死を誘導する薬剤、例えば、オキサリプラチン等の白金療法であり得る。一実施形態では、化学療法では、治療される癌のための標準治療細胞毒性化学療法である。
【０５１０】
この態様では、二重特異性分子には、「二重特異性抗体」および抗体融合タンパク質が含まれ、概念３７〜４０に記載されるフォーマットおよび分子が含まれる。
【０５１１】
抗体は、構成５、５ａに記載されるか、または態様１ａに詳述される配列または抗体のいずれかであり得る。
【０５１２】
この概念のさらなる治療剤は、任意の方法によって送達され得、これらの方法は、当業者に周知である。例えば、さらなる治療剤は、経口的、全身的、または（腫瘍環境へ）局所的に送達され得る一実施形態では、さらなる治療剤は、経口的に送達される。一実施形態では、さらなる治療剤は、全身的に送達される（例えば、静脈内）。一実施形態では、さらなる治療剤は、腫瘍環境へ局所的に送達される。
【０５１３】
組成および投与経路は、本明細書において以下により詳細に記載される。
【０５１４】
概念４７．さらなる治療剤が、抗ｈＰＤ−Ｌ１抗体または断片と連続的または同時に投与される、概念４６に記載の抗体もしくは断片、使用、または方法。
【０５１５】
概念４８．概念１〜４０のいずれか一項に記載の断片の抗体と、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体と、を含み、任意に、
ａ）他の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、および抗ＬＡＧ−３抗体）、
ｂ）免疫刺激剤（例えば、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、および抗ＣＤ４０抗体）、
ｃ）ケモカイン受容体アンタゴニスト（例えば、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ４、およびＣＸＣＲ２）、
ｄ）標的化キナーゼ阻害剤（例えば、ＣＳＦ−１ＲもしくはＶＥＧＦＲ阻害剤）、
ｅ）血管新生阻害剤（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａもしくはデルタ様リガンド４）、
ｆ）免疫刺激ペプチドもしくはケモカイン（例えば、ＣＸＣＬ９もしくはＣＸＣＬ１０）、
ｇ）サイトカイン（例えば、ＩＬ−１５およびＩＬ−２１）、
ｈ）ＣＤ３に対して少なくとも１つの特異性を有する二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）（例えば、ＣＤ３／ＣＤ１９  ＢｉＴＥ）、
ｉ）他の二重特異性分子（例えば、腫瘍関連抗原を標的とするＩＬ−１５含有分子、例えば、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ−２、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｃａｎｃｅｒ−１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）、ＧＤ２、ＥｐＣＡＭ、もしくは黒色腫関連抗原−３（ＭＡＧＥ−Ａ３）などの上皮成長因子受容体）、
ｊ）腫瘍溶解性ウイルス（例えば、ＨＳＶウイルス（任意選択でＧＭＣＳＦを分泌する）、ニューカッスル病ウイルス、およびワクシニアウイルス）、
ｋ）腫瘍関連抗原（例えば、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｃａｎｃｅｒ−１［ＮＹ−ＥＳＯ−１］、黒色腫関連抗原−３（ＭＡＧＥ−３））によるワクチン接種、
ｌ）細胞療法（例えば、抗ＣＤ１９、抗ＥｐＣａｍ、もしくは抗メソテリンを発現するキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）等）、
ｍ）ＮＫＧ２ＤもしくはＣＤ１６ａ等の、活性化ＭＫ受容体に対する特異性を有する二重特異性ＮＫ細胞エンゲージャー、ならびに
ｎ）腫瘍特異的Ｔ細胞またはＬＡＫ細胞の養子移入、からなる群から独立して選択されるさらなる治療剤をさらに含んでもよい、医薬組成物。
【０５１６】
薬学的製剤は、当業者に周知である。一実施形態では、抗体または断片は、静脈内に投与される。一実施形態では、抗体または断片は、皮下投与される。
【０５１７】
位置れでは、本明細書に開示される抗体または断片は、医療用容器、例えば、バイアル、注射器、ＩＶ容器、または注射デバイス（例えば、眼内もしくは硝子体内注射デバイス）内に収容される。一例では、抗体または断片は、インビトロであり、例えば、滅菌容器中にある。
【０５１８】
一実施形態では、組成物は、ヒトへの静脈内投与のために適合された医薬組成物として常法に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与のための組成物は、滅菌等張水性緩衝液中の溶液である。必要に応じて、組成物はまた、注射部位の痛みを和らげるために、可溶化剤および局所麻酔、例えば、リグノカムネ（ｌｉｇｎｏｃａｍｎｅ）を含んでもよい。しかしながら、かかる組成物は、静脈内以外の経路によって投与されてもよい。
【０５１９】
一般に、組成物の成分は、例えば、活性剤の量を示すアンプルまたはサシェ等の密封容器中の乾燥した凍結乾燥粉末または無水濃縮物として、別々に、または単位剤形中で一緒に混合されて供給される。組成物が注入によって投与される場合、組成物は、滅菌された医薬品グレードの水または生理食塩水を収容した注入ボトルで分注され得る。組成物が注射によって投与される場合、投与前に成分が混合され得るように、注射用の滅菌水または生理食塩水のアンプルが提供され得る。
【０５２０】
この態様では、二重特異性分子には、「二重特異性抗体」および抗体融合タンパク質が含まれ、概念３７〜４０に記載されるフォーマットおよび分子が含まれる。
【０５２１】
この概念のさらなる治療剤は、任意の方法によって送達され得、これらの方法は、当業者に周知である。例えば、さらなる治療剤は、経口、全身、または局所的に（腫瘍環境へ）送達され得る一実施形態では、さらなる治療剤は、経口で送達される。一実施形態では、さらなる治療剤は、全身に送達される（例えば、静脈内）。一実施形態では、さらなる治療剤は、局所的に送達される。
【０５２２】
抗体は、構成５、５ａに記載されるか、または態様１ａに詳述される配列のいずれかを有し得るか、またはそれらの抗体のいずれかであり得る。
【０５２３】
概念４９．組成物が、例えば、腫瘍性もしくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、および悪性腫瘍、例えば黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキン病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫から選択されるｈＰＤ−ＬＩ媒介性病的状態または疾患を治療および／または予防するためのものである、概念４８に記載の医薬組成物、または概念４８に記載の医薬組成物を含むキット。
【０５２４】
概念５０．ヒトにおける疾患または病的状態を治療および／もしくは予防に使用するためのラベルもしくは説明書と組み合わせた概念４８もしくは概念４９に記載の医薬組成物、またはそれを含む概念４９に記載のキットであって、任意に、ラベルまたは説明書は販売承認番号（例えば、ＦＤＡまたはＥＭＡ承認番号）を含んでもよく、任意に、キットは抗体または断片を含むＩＶまたは注射用デバイスを含んでもよい、概念４８もしくは概念４９に記載の医薬組成物、または概念４９に記載のキット。
【０５２５】
概念５１．患者におけるＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を調節する方法であって、有効量の概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体または断片を患者に投与することを含む、方法。
【０５２６】
別の実施形態では、患者におけるＣＤ８０／ＰＤ−Ｌ１相互作用を調節する方法であって、有効量の概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体または断片を当該患者に投与することを含む、方法が提供される。別の実施形態では、抗体または断片は、ＣＤ８０／ＰＤ−Ｌ１相互作用を調節するが、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を調節しない。別の実施形態では、抗体または断片は、ＣＤ８０／ＰＤ−Ｌ１相互作用を遮断するが、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を遮断しない。別の実施形態では、抗体または断片は、ＣＤ８０／ＰＤ−Ｌ１相互作用を阻害するが、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を阻害しない。
【０５２７】
概念５２．患者におけるＰＤ−Ｌ１活性を阻害する方法であって、有効量の概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体または断片を当該患者に投与することを含む、方法。
【０５２８】
一実施形態では、抗体または断片は、ＰＤ−Ｌ１に対するＰＤ−１の結合を遮断または阻害する。一実施形態では、抗体または断片は、ＰＤ−Ｌ１に対するＣＤ８０の結合を遮断または阻害する。
【０５２９】
概念５３．動物（例えば、ヒト）における増殖性疾患を治療する方法であって、有効量の概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体または断片を当該患者に投与することを含む、方法。
【０５３０】
増殖性疾患は、本明細書の他の箇所に記載されるいずれかであり得る。
【０５３１】
概念５４．試料中のＰＤ−Ｌ１発現を検出する方法であって、試料を、概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体または断片と接触させることを含む、方法。
【０５３２】
概念５５．生体試料を、概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体または断片と接触させて、試料中に存在するＰＤ−Ｌ１との複合体を形成することと、生体試料中の複合体の存在、不在、またはレベルを測定することと、を含む、方法。
【０５３３】
概念５６．ＰＤ−Ｌ１発現の存在、不在、および／またはレベルが治療前に検出され、高レベルの表面発現ＰＤ−Ｌ１は、治療の成功を示す、概念５５に記載の方法。
【０５３４】
概念５７．ＰＤ−Ｌ１発現の存在、不在、および／またはレベルが、初期応答バイオマーカーとして治療中に検出される、概念５５に記載の方法。
【０５３５】
概念５８．ＰＤ−Ｌ１発現の存在、不在、および／またはレベルが、治療が成功したかどうか、治療を継続すべきかどうか、および／または治療を変更すべきかどうかのうちの１つ以上の判定を助けるために、治療中または治療後に検出される、概念５５または概念５７に記載の方法。
【０５３６】
概念５９．療法が、任意に概念１〜４０のいずれか一項に記載されるものであってもよい、抗ＰＤ−Ｌ１抗体での治療を含む、概念５５〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【０５３７】
概念６０．療法の有効性を監視するための方法であって、療法前、療法中、および療法後の患者における表面発現ＰＤ−Ｌ１の発現を検出することを含み、表面発現ＰＤ−Ｌ１の発現を検出するために、概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体または断片が使用される、方法。
【０５３８】
概念６１．表面発現ＰＤ−Ｌ１の発現が、インビボで検出される、概念６０に記載の方法。
【０５３９】
概念６２．表面発現ＰＤ−Ｌ１の発現が、インビトロで組織試料中で検出される、概念６０に記載の方法。
【０５４０】
概念６３．ＰＤ−Ｌ１のための結合パートナーを同定するための方法であって、概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体または断片を使用して、ＰＤ−Ｌ１を含む無傷のタンパク質複合体を免疫沈降することを含む、方法。
【０５４１】
概念６４．変化したＰＤ−Ｌ１発現に関連するヒト対象における疾患を診断する方法であって、当該ヒト対象からの生体試料を、概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体と接触させて、抗体と試料中に存在するＰＤ−Ｌ１との複合体を形成するステップと、複合体の量を検出するステップと、を含む、方法。
【０５４２】
概念６５．概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体または断片のＣＤＲＨ３をコードする核酸。
【０５４３】
概念６５ａ．概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体または断片のＣＤＲＨ２をコードする核酸もまた提供される。
【０５４４】
概念６５ｂ．概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体または断片のＣＤＲＨ１をコードする核酸もまた提供される。
【０５４５】
概念６５ｃ．概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体または断片のＣＤＲＬ１をコードする核酸もまた提供される。
【０５４６】
概念６５ｄ．概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体または断片のＣＤＲＬ２をコードする核酸もまた提供される。
【０５４７】
概念６５ｅ．概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体または断片のＣＤＲＬ３をコードする核酸もまた提供される。
【０５４８】
一実施形態では、核酸は、単離および精製された核酸である。
【０５４９】
概念６６．概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体または断片のＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインをコードする核酸。
【０５５０】
本発明のＶＨおよびＶＬドメイン核酸配列は、配列表に提供される。一実施形態では、核酸配列は、指定の配列と少なくとも７０％同一である。一実施形態では、核酸配列は、指定の配列と少なくとも７５％同一である。一実施形態では、核酸配列は、指定の配列と少なくとも９５％同一である。一実施形態では、核酸配列は、指定の配列と少なくとも９６％同一である。一実施形態では、核酸配列は、指定の配列と少なくとも９７％同一である。一実施形態では、核酸配列は、指定の配列と少なくとも９８％同一である。一実施形態では、核酸配列は、指定の配列と少なくとも９９％同一である。一実施形態では、核酸配列は、指定の配列と少なくとも９９．５％同一である。
【０５５１】
概念６７．配列番号３６および／または配列番号４６と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む、概念６６に記載の核酸。
【０５５２】
概念６７ａ．配列番号１６および／または配列番号２６と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む、概念６６に記載の核酸。
【０５５３】
概念６７ｂ．配列番号６１および／または配列番号７１と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む、概念６６に記載の核酸。
【０５５４】
概念６７ｃ．配列番号８１および／または配列番号９１と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む、概念６６に記載の核酸。
【０５５５】
概念６７ｄ．配列番号１０１および／または配列番号１１１と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む、概念６６に記載の核酸。
【０５５６】
概念６７ｅ．配列番号１２１および／または配列番号１３１と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む、概念６６に記載の核酸。
【０５５７】
概念６７ｆ．配列番号１６１および／または配列番号１７１と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む、概念６６に記載の核酸。
【０５５８】
概念６７ｇ．配列番号１８１および／または配列番号１９１と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む、概念６６に記載の核酸。
【０５５９】
概念６７ｈ．配列番号１４１および／または配列番号１５１と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む、概念６６に記載の核酸。
【０５６０】
概念６７ｉ．配列番号２４７および／または配列番号２５７と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む、概念６６に記載の核酸。
【０５６１】
概念６７ｊ．配列番号２６７および／または配列番号２７７と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む、概念６６に記載の核酸。
【０５６２】
概念６７ｋ．配列番号２８７および／または配列番号２９７と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む、概念６６に記載の核酸。
【０５６３】
概念６７ｌ．配列番号３５２および／または配列番号３６２と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む、概念６６に記載の核酸。
【０５６４】
一実施形態では、核酸配列は、指定の配列と少なくとも７０％同一である。一実施形態では、核酸配列は、指定の配列と少なくとも７５％同一である。一実施形態では、核酸配列は、指定の配列と少なくとも９５％同一である。一実施形態では、核酸配列は、指定の配列と少なくとも９６％同一である。一実施形態では、核酸配列は、指定の配列と少なくとも９７％同一である。一実施形態では、核酸配列は、指定の配列と少なくとも９８％同一である。一実施形態では、核酸配列は、指定の配列と少なくとも９９％同一である。一実施形態では、核酸配列は、指定の配列と少なくとも９９．５％同一である。
【０５６５】
概念６８．概念１〜４０のいずれか一項に記載の抗体の重鎖または軽鎖をコードする核酸。
【０５６６】
概念６９．概念６５〜６８のいずれか一項に記載の核酸を含むベクターであって、任意に、ベクターはＣＨＯまたはＨＥＫ２９３ベクターであってもよい、ベクター。
【０５６７】
概念７０．概念６５〜６８のいずれか一項に記載の核酸または概念６９に記載のベクターを含む、宿主。
【０５６８】
３．免疫サイトカイン
本発明者らは、重鎖または軽鎖のＮ末端またはＣ末端のいずれか（例えば、重鎖または軽鎖、特に軽鎖のＣ末端）に融合したＰＤ−Ｌ１等の、免疫チェックポイント阻害剤に結合する抗体を含む免疫サイトカインを記載している免疫サイトカインは、ＩＬ−２またはその変異型（Ｎ末端において１〜１０個のアミノ酸欠失を有する変異型を含む）であり得るサイトカイン分子を含む。本明細書の上記の抗体は、本明細書の上記の免疫サイトカインのいずれにおいても使用され得る。
【０５６９】
理論に拘束されることなく、本発明の免疫サイトカインは、以下の有利な特性のうちの１つ以上を提供し得る：
●相乗的活性（サイトカインと組み合わせた抗体Ｆａｂ部分の治療活性による）
●腫瘍標的化の改善
●ＣＤＣ、ＡＤＣＣ、および／またはＡＤＣＰ等のエフェクター機能を保持する能力
●オフターゲット効果の低減
●毒性の低下（例えば、遊離サイトカイン、または免疫サイトカインの重鎖に融合したときのサイトカインと比較して）
●免疫原性の低減
●重鎖融合等価物と比較した軽鎖サイトカイン融合物の半減期の改善に特に起因する、投与量／投薬頻度の低下
●ＰＤ−Ｌ１のリガンドのうちの１つのみを遮断する特異性（例えば、ＣＤ８０／ＰＤ−Ｌ１相互作用を遮断するが、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用は遮断しない）
●可溶性
●安定性
●製剤化の容易さ
●投薬頻度および／または投与経路
●製造性（例えば、発現、精製の容易さ、アイソフォーム）
【０５７０】
１Ｄ０５  ＩＣＫは、配列番号２９９の重鎖アミノ酸配列および配列番号３００の軽鎖アミノ酸配列を含む。軽鎖は、重鎖において全長の野生型ヒトＩＬ−２サイトカインに融合した、本明細書の上記の抗体１Ｄ０５のＣＤＲおよびＶＬ配列を含むＶＬドメインを含む。それは、リンカーペプチドを含有しない。重鎖は、欠損したＩｇＧ定常領域（配列番号２０５）に融合した、本明細書の上記の抗体１Ｄ０５のＣＤＲおよびＶＨ配列を含むＶＨドメインを含む。
【０５７１】
１Ｄ０５  Ｄ５−９  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ５−９（配列番号３０３）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５７２】
１Ｄ０５  Ｄ１−９  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ１−９（配列番号３０４）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５７３】
１Ｄ０５  Ｄ５−７  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ５−７（配列番号３０５）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５７４】
１Ｄ０５  Ｄ１  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ１（配列番号３０６）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５７５】
１Ｄ０５  Ｄ１−２  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ１−２（配列番号３０７）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５７６】
１Ｄ０５  Ｄ１−３  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ１−３（配列番号３０８）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５７７】
１Ｄ０５  Ｄ１−４  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ１−４（配列番号３０９）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５７８】
１Ｄ０５  Ｄ１−５  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ１−５（配列番号３１０）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５７９】
１Ｄ０５  Ｄ１−６  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ１−６（配列番号３１１）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５８０】
１Ｄ０５  Ｄ１−７  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ１−７（配列番号３１２）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５８１】
１Ｄ０５  Ｄ１−８  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ１−８（配列番号３１３）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５８２】
１Ｄ０５  Ｄ９  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ９（配列番号３１４）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５８３】
１Ｄ０５  Ｄ９−８  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ９−８（配列番号３１５）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５８４】
１Ｄ０５  Ｄ９−７  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ９−７（配列番号３１６）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５８５】
１Ｄ０５  Ｄ９−６  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ９−６（配列番号３１７）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５８６】
１Ｄ０５  Ｄ９−４  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ９−４（配列番号３１８）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５８７】
１Ｄ０５  Ｄ９−３  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ９−３（配列番号３１９）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５８８】
１Ｄ０５  Ｄ９−２  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ９−２（配列番号３２０）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５８９】
１Ｄ０５  Ｄ２−６  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ２−６（配列番号３２１）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５９０】
１Ｄ０５  Ｄ３−７  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ３−７（配列番号３２２）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５９１】
１Ｄ０５  Ｄ４−８  ＩＣＫは、配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３３のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ４−８（配列番号３２３）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５９２】
上記のＩＣＫ構築物のいずれにおいても、ＩＬ−２結合部分は、変異型ＩＬ−２、特に、Ｒ３８Ａ変異（配列番号５１７として記載される変異型ＩＬ−２のアミノ酸２１〜１３３に記載される）またはＲ３８Ｑ変異（配列番号５１８として記載される変異型ＩＬ−２のアミノ酸２１〜１３３に記載される）を有するＩＬ−２であり得る。
【０５９３】
上記のＩＣＫ構築物のいずれにおいても、１Ｄ０５抗体のＶＨ領域は、変異１Ｄ０５−重鎖変異体１（配列番号４７）、変異１Ｄ０５−重鎖変異体２（配列番号４８）、変異１Ｄ０５−重鎖変異体３（配列番号４９）、または変異１Ｄ０５−重鎖変異体４（配列番号３４２）のＶＨ領域と交換され得る１Ｄ０５の好ましい変異重鎖ＶＨ領域は、変異１Ｄ０５−重鎖変異体４（配列番号３４２）である。
【０５９４】
したがって、ある特定のＩＣＫ構築物には、以下が含まれる。
配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３４２のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書に記載される変異１Ｄ０５−重鎖変異体４のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む、変異１Ｄ０５−重鎖変異体４  Ｄ５−９  ＩＣＫ。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ５−９（配列番号３０３）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５９５】
配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３４２のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書に記載される変異１Ｄ０５−重鎖変異体４のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む、変異１Ｄ０５−重鎖変異体４  Ｄ１−９  ＩＣＫ。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ１−９（配列番号３０４）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５９６】
配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３４２のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書に記載される変異１Ｄ０５−重鎖変異体４のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む、変異１Ｄ０５−重鎖変異体４  Ｄ１−８  ＩＣＫ。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ１−８（配列番号３１３）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５９７】
配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３４２のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書に記載される変異１Ｄ０５−重鎖変異体４のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む、変異１Ｄ０５−重鎖変異体４  Ｄ９−７  ＩＣＫ。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ９−７（配列番号３１６）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５９８】
配列番号２０５のアミノ酸配列を有する欠損したＩｇＧ１定常領域に融合した、配列番号３４２のＶＨ領域アミノ酸配列（本明細書に記載される変異１Ｄ０５−重鎖変異体４のＣＤＲを含む）を含む重鎖を含む、変異１Ｄ０５−重鎖変異体４  Ｄ９−２  ＩＣＫ。軽鎖は、Ｃ末端において、ｈＩＬ−２（配列番号３２４）のアミノ酸２１〜１３３に直接融合しているＩＬ−２  Ｄ９−２（配列番号３２０）に直接融合した、配列番号４３のＶＬアミノ酸配列（本明細書の上記の１Ｄ０５のＣＤＲを含む）を含む。
【０５９９】
上記のＩＣＫ構築物のいずれにおいても、１Ｄ０５抗体のＶＬ領域は、変異１Ｄ０５−軽鎖変異体１（配列番号５０）、変異１Ｄ０５−軽鎖変異体２（配列番号５１）、または変異１Ｄ０５−軽鎖変異体３（配列番号２９８）のＶＬ領域と交換され得る。
【０６００】
上記のＩＣＫ構築物のいずれにおいても、１Ｄ０５抗体のＶＨおよびＶＬ領域の両方は、本明細書に記載される他の抗体、すなわち、８４Ｇ０９、４１１Ｂ０８、４１１Ｃ０４、４１１Ｄ０７、３８５Ｆ０１、４１３Ｄ０８、３８６Ｈ０３、３８９Ａ０３、４１３Ｇ０５、４１３Ｆ０９、４１４Ｂ０６のいずれかのＶＨおよびＶＬ領域の両方と交換され得る。
【０６０１】
上記のＩＣＫ構築物のいずれにおいても、配列番号２０５の重鎖定常領域は、配列番号１９３、１９５、１９７、１９９、２０３、２０５、３４０、５２４、５２６、５２８、５３０、５３２、または５３４の重鎖定常領域のいずれかと交換され得る。
【０６０２】
目ね基サイトカインは、以下の文または態様に記載され得る。別途明白でない限り、本明細書の上記の概念のいずれかの特徴は、以下の態様のいずれかについて準用する。
【０６０３】
態様１．免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む免疫サイトカインであって、重鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ａ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインと、
ｂ）重鎖定常領域と、を含み、
軽鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ｃ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含むＶＬドメインと、
ｄ）軽鎖定常領域（ＣＬ）と、
ｅ）任意に、リンカー（Ｌ）と、
ｆ）ＩＬ−２サイトカインと、を含み、
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、配列番号１によって定義されるｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗原結合部位によって構成され、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合し、
免疫サイトカインが、モチーフＸ１ＧＳＧＸ２ＹＧＸ３Ｘ４ＦＤを含むＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３が独立して任意のアミノ酸であり、Ｘ４が存在するかまたは存在しないかのいずれかであり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得る、免疫サイトカイン。
【０６０４】
本明細書に記載される態様において、ＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔ法、ＩＭＧＴ法、またはＣｈｏｔｈｉａ法を使用する等、当業者に既知の任意の方法に従って判定され得、これらは各々、本明細書により詳細に記載される。一実施形態では、ＣＤＲ領域は、ヒトＣＤＲ領域である。
【０６０５】
ＣＤＲ領域に加えて、ＶＨおよび／またはＶＬドメインは、ＦＷ１、ＦＷ２、およびＦＷ３等のフレームワーク領域をさらに含み得る。ＶＨおよび／またはＶＬドメインは、本明細書に記載される任意の起源のものであってもよく、例えば、完全ヒト、ヒト化、マウス、またはラクダであってもよい。一実施形態では、ＶＨおよび／またはＶＬドメインは、ヒトＶＨおよび／またはＶＬドメインである。ＣＤＲは、非ヒト起源（例えば、マウス起源）のものであってもよく、ヒトフレームワーク領域上に移植されてもよく。別の実施形態では、ＣＤＲは、合成である。
【０６０６】
別の実施形態では、ＶＨ領域は、抗体可変ドメイン（例えば、ＶＬもしくはＶＨ、抗体単一可変ドメイン（ドメイン抗体もしくはｄＡｂ）、ラクダＶＨＨ抗体単一可変ドメイン、サメ免疫グロブリン単一可変ドメイン（ＮＡＲＶ）、Ｎａｎｏｂｏｄｙ（商標）、またはラクダ化ＶＨ単一可変ドメイン）、Ｔ細胞受容体結合ドメイン、免疫グロブリンスーパーファミリードメイン、無顎類可変リンパ球受容体、フィブロネクチンドメイン（例えば、Ａｄｎｅｃｔｉｎ（商標））、抗体定常ドメイン（例えば、ＣＨ３ドメイン、例えば、Ｆｃａｂ（商標）のＣＨ２および／またはＣＨ３）（当該定常ドメインは、機能的ＣＨ１ドメインではない）、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｓｃ−ｄｉａｂｏｄｙ、ｓｃＦａｂ、ＣＴＬＡ−４から選択される骨格に由来するセンチリン（ｃｅｎｔｙｒｉｎ）およびエピトープ結合ドメイン（Ｅｖｉｂｏｄｙ（商標））、リポカリンドメイン、タンパク質ＡのＺドメイン等のタンパク質Ａ（例えば、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（商標）またはＳｐＡ）、Ａドメイン（例えば、Ａｖｉｍｅｒ（商標）またはＭａｘｉｂｏｄｙ（商標））、熱ショックタンパク質（ＧｒｏＥＩおよびＧｒｏＥＳに由来するエピトープ結合ドメイン等）、トランスフェリンドメイン（例えば、トランスボディ）、アンキリンリピートタンパク質（例えば、ＤＡＲＰｉｎ（商標））、ペプチドアプタマー、Ｃ型レクチンドメイン（例えば、Ｔｅｔｒａｎｅｃｔｉｎ（商標））、ヒトγ−クリスタリンまたはヒトユビキチン（アフィリン）、ＰＤＺドメイン、サソリ毒、ならびにヒトプロテアーゼ阻害剤のクーニッツ型ドメインからなる群から選択され得る。
【０６０７】
定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４から選択される少なくとも２つの重鎖定常領域を含む。一実施形態では、定常領域は、ＣＨ１ドメインおよびＣＨ２ドメインを含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、定常領域は、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、およびＣＨ２ドメインを含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、定常領域は、ＣＨ１ドメインおよびＣＨ３ドメイン、ならびに任意選択のヒンジ領域を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、定常領域は、ＣＨ１ドメインおよびＣＨ４ドメイン、ならびに任意選択のヒンジ領域を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、定常領域は、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン、ならびに任意選択のヒンジ領域を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、定常領域は、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ４ドメイン、ならびに任意選択のヒンジ領域を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、定常領域は、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ３ドメイン、およびＣＨ４ドメイン、ならびに任意選択のヒンジ領域を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、定常領域は、完全定常領域を含む（またはそれからなる）。
【０６０８】
定常領域は、本明細書に記載される任意のアイソタイプ、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭのものであり得る。一実施形態では、定常領域は、本明細書に記載される任意の起源のものであってもよく、例えば、ヒト、マウス、またはラクダであってもよい。一実施形態では、定常領域は、（完全）ヒト定常領域である。一実施形態では、定常領域は、ヒトＩｇＧ定常領域である。一実施形態では、定常領域は、（完全）ヒトＩｇＧ１定常領域である。一実施形態では、定常領域は、エフェクターヌル（完全）ヒトＩｇＧ１定常領域である。一実施形態では、定常領域は、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰ活性を有する。一実施形態では、定常領域は、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰ活性を増強するように操作されている。定常領域は、本明細書の上記の概念３０〜３２に記載される定常領域のいずれかであり得る。
【０６０９】
軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダ軽鎖定常領域であり得る。軽鎖定常領域は、本明細書の上記の概念２８に記載される通りであり得る。
【０６１０】
ＩＬ−２サイトカインは、中親和性ＩＬ−２受容体（αβ）および高親和性ＩＬ−２受容体（αβγ）の一方または両方にＩＬ−２活性を付与するサイトカイン分子である。ＩＬ−２サイトカインは、変異型ＩＬ−２サイトカインを含む。ＩＬ−２サイトカインは、ヒト起源のもの、または非ヒト起源、例えば、霊長類（例えば、アカゲザルまたはカニクイザル）、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、およびモルモット）、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウマ、ニワトリ、シチメンチョウ、カモ、およびガチョウ）、ならびに飼育哺乳動物（例えば、イヌおよびネコ）を含むがこれらに限定されない非ヒト哺乳動物のものであってもよい。一実施形態では、ＩＬ−２サイトカインは、ヒトＩＬ−２サイトカインである。
【０６１１】
本明細書で使用される場合、「変異型ＩＬ−２サイトカイン」とは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で５個のアミノ酸置換、欠失、または付加と組み合わせて、Ｎ末端配列から最大で１０個のアミノ酸が欠失しているサイトカインである。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で５個（例えば、１、２、３、４、または５個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で１０個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で５個（例えば、１、２、３、４、または５個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の１５個のアミノ酸の中で）からの最大で１０個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で５個（例えば、１、２、３、４、または５個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で１０個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で４個（例えば、１、２、３、または４個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で１０個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で３個（例えば、１、２、または３個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で１０個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で２個（例えば、１または２個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で１０個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における１個のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で１０個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。
【０６１２】
一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で４個（例えば、１、２、３、または４個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で９個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、または９個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で３個（例えば、１、２、または３個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で９個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、または９個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で２個（例えば、１または２個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で９個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、または９個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における１個のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で９個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、または９個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。
【０６１３】
一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で４個（例えば、１、２、３、または４個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で８個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で３個（例えば、１、２、または３個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で８個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で２個（例えば、１または２個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で８個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における１個のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で８個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。
【０６１４】
一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で４個（例えば、１、２、３、または４個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で７個（例えば、１、２、３、４、５、６、または７個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で３個（例えば、１、２、または３個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で７個（例えば、１、２、３、４、５、６、または７個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で２個（例えば、１または２個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で７個（例えば、１、２、３、４、５、６、または７個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における１個のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で７個（例えば、１、２、３、４、５、６、または７個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。
【０６１５】
一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で４個（例えば、１、２、３、または４個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で６個（例えば、１、２、３、４、５、または６個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で３個（例えば、１、２、または３個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で６個（例えば、１、２、３、４、５、または６個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で２個（例えば、１または２個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で６個（例えば、１、２、３、４、５、または６個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。
【０６１６】
一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で４個（例えば、１、２、３、または４個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で５個（例えば、１、２、３、４、または５個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で４個（例えば、１、２、３、または４個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で５個（例えば、１、２、３、４、または５個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で４個（例えば、１、２、３、または４個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で５個（例えば、１、２、３、４、または５個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における１個のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で６個（例えば、１、２、３、４、５、または６個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。
【０６１７】
一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で４個（例えば、１、２、３、または４個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で４個（例えば、１、２、３、または４個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で３個（例えば、１、２、または３個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で４個（例えば、１、２、３、または４個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で２個（例えば、１または２個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で４個（例えば、１、２、３、または４個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における１個のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で４個（例えば、１、２、３、または４個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。
【０６１８】
一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で４個（例えば、１、２、３、または４個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で３個（例えば、１、２、または３個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で３個（例えば、１、２、または３個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で３個（例えば、１、２、または３個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で２個（例えば、１または２個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で３個（例えば、１、２、または３個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における１個のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの最大で３個（例えば、１、２、または３個）のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。
【０６１９】
一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で４個（例えば、１、２、３、または４個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの１または２個のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で３個（例えば、１、２、または３個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの１または２個のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における最大で２個（例えば、１または２個）のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの１または２個のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ＩＬ−２サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における１個のアミノ酸置換と組み合わせて、Ｎ末端配列（例えば、目的の野生型ＩＬ−２配列の最初の２０個、または最初の１５個、または最初の１０個のアミノ酸の中で）からの１または２個のアミノ酸欠失を含む（またはそれらからなる）。
【０６２０】
ＩＬ−２サイトカイン中の他の箇所における置換は、本明細書の以下の態様４４にさらに定義される。
【０６２１】
特定のＩＬ−２サイトカインおよび変異型ＩＬ−２サイトカインは、本明細書の以下の態様４０〜４５にさらに定義される。
【０６２２】
ヒトＩＬ−２のα鎖のアミノ酸配列は、配列番号３２７に提供される。ヒトＩＬ−２のβ鎖のアミノ酸配列は、配列番号３２８に提供される。ヒトＩＬ−２のγ鎖のアミノ酸配列は、配列番号２３９に提供される。
【０６２３】
本明細書の態様または概念のいずれにおいても、免疫サイトカインまたは抗ＰＤＬ１抗体もしくは断片は、少なくとも４時間、５時間、６時間、７時間、または８時間の半減期を有し得る。別の実施形態では、本明細書に提供される免疫サイトカインまたは抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくは断片の半減期は、少なくとも９時間、または少なくとも１０時間、または少なくとも１１時間、または少なくとも１２時間である。別の実施形態では、本明細書に提供される免疫サイトカインまたは抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくは断片の半減期は、少なくとも１３時間、または少なくとも１４時間、または少なくとも１５時間、または少なくとも１６時間である。別の実施形態では、本明細書に提供される免疫サイトカインまたは抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくは断片の半減期は、少なくとも１７時間、または少なくとも１８時間、または少なくとも１９時間、または少なくとも２０時間である。別の実施形態では、本明細書に提供される免疫サイトカインまたは抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくは断片の半減期は、少なくとも２１時間、または少なくとも２２時間、または少なくとも２３時間、または少なくとも２４時間である。別の実施形態では、本明細書に提供される免疫サイトカインまたは抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくは断片の半減期は、少なくとも２５時間、または少なくとも２６時間、または少なくとも２７時間、または少なくとも３０時間である。別の実施形態では、本明細書に提供される免疫サイトカインまたは抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくは断片の半減期は、少なくとも３２時間、または少なくとも３４時間、または少なくとも３６時間、または少なくとも４０時間である。一実施形態では、半減期は、マウスモデル（例えば、ヒトＰＤ−Ｌ１ノックインマウス、例えば、本明細書の以下の実施例２２に記載される通り、またはヒトＴ細胞を異種移植した免疫無防備マウス）において判定される。別の実施形態では、半減期は、カニクイザルにおける単回用量研究で判定される（例えば、本明細書の以下の実施例１８または実施例２３に記載される通り）。別の実施形態では、半減期は、カニクイザルにおける拡張単回用量研究で判定される（例えば、本明細書の以下の実施例１９または実施例２６に記載される通り）。
【０６２４】
態様１ａ．免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む免疫サイトカインであって、重鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ａ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインと、
ｂ）重鎖定常領域と、を含み、
軽鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ｃ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含むＶＬドメインと、
ｄ）軽鎖定常領域（ＣＬ）と、
ｅ）任意に、リンカー（Ｌ）と、
ｆ）ＩＬ−２サイトカインと、を含み、
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、およびＶＩＳＴＡ、例えば、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、およびＬＡＧ−３）、免疫調節剤（例えば、ＢＴＬＡ、ｈＨＶＥＭ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ４、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７３、ＣＤ９６、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ２００、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、およびＣＤ１５５、例えば、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＲ４、ＢＴＬＡ、ｈＶＥＭ、およびＣＳＦ１Ｒ）、ならびに免疫賦活剤（例えば、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＣＸＣＲ３（例えば、ＣＸＣＲ３に対するアゴニスティック活性）、ＣＤ２７、ＣＤ３、およびＩＣＯＳ（例えば、ＩＣＯＳに対するアゴニスティック活性）、例えば、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、およびＯＸ４０）から選択される抗原に特異的に結合する抗原結合部位によって構成されている、免疫サイトカイン。
【０６２５】
別の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、およびＶＩＳＴＡ、例えば、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、およびＬＡＧ−３）、免疫調節剤（例えば、ＢＴＬＡ、ｈＨＶＥＭ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ４、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７３、ＣＤ９６、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ２００、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、およびＣＤ１５５、例えば、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＲ４、ＢＴＬＡ、ｈＶＥＭ、およびＣＳＦ１Ｒ）、ならびに免疫賦活剤（例えば、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＣＸＣＲ３（例えば、ＣＸＣＲ３に対するアゴニスティック活性）、ＣＤ３、およびＩＣＯＳ（例えば、ＩＣＯＳに対するアゴニスティック活性）、例えば、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、およびＯＸ４０）から選択される抗原に特異的に結合する抗原結合部位。
【０６２６】
態様１の実施形態はいずれも、態様１ａについて準用する。態様２〜５４の特徴または実施形態はいずれも、態様１ａについて準用する。抗体の特徴または概念１〜７０の他の実施形態もしくは特徴はいずれも、態様１ａについて準用する。
【０６２７】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＰＤ−Ｌ１、例えばｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１抗原結合部位は、アテゾリズマブ／ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ）、アベルマブ／ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）、ＢＭＳ−９３６５５９／ＭＤＸ−１１０５（ＢＭＳ）、デュルバルマブ／Ｍｅｄｉ４７３６（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＫＮ−０３５、ＣＡ−１７０、ＦＡＺ−０５３  Ｍ７８２４、ＡＢＢＶ−３６８、ＬＹ−３３０００５４、ＧＮＳ−１４８０、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＲＥＧＮ３５０４、およびＷＯ２０１７／０３４９１６、ＷＯ２０１７／０２０２９１、ＷＯ２０１７／０２０８５８、ＷＯ２０１７／０２０８０１、ＷＯ２０１６／１１１６４５、ＷＯ２０１６／０５０７２１、ＷＯ２０１６／１９７３６７、ＷＯ２０１６／０６１１４２、ＷＯ２０１６／１４９２０１、ＷＯ２０１６／０００６１９、ＷＯ２０１６／１６０７９２、ＷＯ２０１６／０２２６３０、ＷＯ２０１６／００７２３５、ＷＯ２０１５／１７９６５４、ＷＯ２０１５／１７３２６７、ＷＯ２０１５／１８１３４２、ＷＯ２０１５／１０９１２４、ＷＯ２０１５／１９５１６３、ＷＯ２０１５／１１２８０５、ＷＯ２０１５／０６１６６８、ＷＯ２０１４／１５９５６２、ＷＯ２０１４／１６５０８２、ＷＯ２０１４／１０００７９、ＷＯ２０１４／０５５８９７、ＷＯ２０１３／１８１６３４、ＷＯ２０１３／１７３２２３、ＷＯ２０１３／０７９１７４、ＷＯ２０１２／１４５４９３、ＷＯ２０１１／０６６３８９、ＷＯ２０１０／０７７６３４、ＷＯ２０１０／０３６９５９、ＷＯ２０１０／０８９４１１、またはＷＯ２００７／００５８７４に開示されるＰＤ−Ｌ１抗体（これらの抗体および配列は、参照により本明細書に組み込まれる）のいずれかから選択される抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含む。
【０６２８】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＩＣＯＳ、例えばｈＩＣＯＳに特異的に結合する。一実施形態では、抗原結合部位は、ＩＣＯＳ、例えばｈＩＣＯＳに特異的に結合し、ＩＣＯＳ、例えばｈＩＣＯＳに対するアゴニストである。一実施形態では、抗原結合部位は、ＩＣＯＳ、例えばｈＩＣＯＳに特異的に結合し、ＩＣＯＳ、例えばｈＩＣＯＳに対するアンタゴニストである。一実施形態では、ＩＣＯＳ抗原結合部位は、本明細書の以下の構成５および構成５ａに記載される抗ＩＣＯＳ抗体のうちのいずれか１つ、ならびに文１〜１０２および文１ａ〜２１ａに記載される抗ＩＣＯＳ抗体のいずれかからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含む。
【０６２９】
以下の実施形態のいずれにおいても、特定の抗原結合部位は、ヒト標的に特異的に結合する。一実施形態では、抗原結合部位は、免疫チェックポイント阻害剤に特異的に結合する。一実施形態では、抗原結合部位は、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、およびＶＩＳＴＡから選択される免疫チェックポイント阻害剤に特異的に結合する。一実施形態では、抗原結合部位は、ＴＩＧＩＴ、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、およびＬＡＧ−３から選択される免疫チェックポイント阻害剤に特異的に結合する。
【０６３０】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＰＤ−１、例えばヒトＰＤ−１に特異的に結合する。一実施形態では、ＰＤ−１抗原結合部位は、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）／ＭＫ−３４７５）、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）／ＢＭＳ−９３６５５８／ＭＤＸ−１１０６）、ＭＥＤＩ−０６８０／ＡＭＰ５１４、ＰＤＲ００１、ランブロリズマブ、ＢＭＳ−９３６５５８、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ−Ａ３１７、ＢＧＢ−１０８、ＰＤＲ−００１、ＳＨＲ−１２１０、ＪＳ−００１、ＪＮＪ−６３７２３２８３、ＡＧＥＮ−２０３４、ＰＦ−０６８０１５９１、ゲノリムズマブ（ｇｅｎｏｌｉｍｚｕｍａｂ）、ＭＧＡ−０１２、ＩＢＩ−３０８、ＢＣＤ−１００、ＴＳＲ−０４２  ＡＮＡ０１１、ＡＵＮＰ−１２、ＫＤ０３３、ＭＣＬＡ−１３４、ｍＤＸ４００、ｍｕＤＸ４００、ＳＴＩ−Ａ１１１０、ＡＢ０１１、２４４Ｃ８、３８８Ｄ４、ＸＣＥ８５３、もしくはピディリズマブ／ＣＴ−０１１、またはＷＯ２０１５／１１２８００およびＵＳ２０１５／０２０３５７９（表１〜３中の抗体を含む）、ＵＳ９，３９４，３６５、ＵＳ５，８９７，８６２、およびＵＳ７，４８８，８０２、ＷＯ２０１７／０８７５９９（抗体ＳＳＩ−３６１およびＳＨＢ−６１７を含む）、ＷＯ２０１７／０７９１１２、ＷＯ２０１７／０７１６２５（寄託Ｃ２０１５１３２、ハイブリドーマＬＴ００４、および抗体６Ｆ５／６  Ｆ５（Ｒｅ）、６Ｆ５Ｈ１  Ｌ１および６Ｆ５  Ｈ２Ｌ２を含む）、ＷＯ２０１７／０５８８５９（ＰＤ１ＡＢ−１〜ＰＤ１ＡＢ−６を含む）、ＷＯ２０１７／０５８１１５（６７Ｄ９、ｃ６７Ｄ９、およびｈｕ６７Ｄ９を含む）、ＷＯ２０１７／０５５５４７（１２８１９．１５３８４、１２７４８．１５３８１、１２７４８．１６１２４、１２８６５．１５３７７、１２８９２．１５３７８、１２７９６．１５３７６、１２７７７．１５３８２、１２７６０．１５３７５、および１３１１２．１５３８０を含む）、ＷＯ２０１７／０４０７９０（ＡＧＥＮ２０３３ｗ、ＡＧＥＮ２０３４ｗ、ＡＧＥＮ２０４６ｗ、ＡＧＥＮ２０４７ｗ、ＡＧＥＮ２００１ｗ、およびＡＧＥＮ２００２ｗを含む）、ＷＯ２０１７／０２５０５１およびＷＯ２０１７／０２４５１５（１．７．３  ｈＡｂ、１．４９．９  ｈＡｂ、１．１０３．１１  ｈＡｂ、１．１０３．１１−ｖ２  ｈＡｂ、１．１３９．１５  ｈＡｂ、および１．１５３．７  ｈＡｂを含む）、ＷＯ２０１７／０２５０１６およびＷＯ２０１７／０２４４６５（抗体Ａ〜抗体Ｉを含む）、ＷＯ２０１７／０２０８５８およびＷＯ２０１７／０２０２９１（１．４．１、１．１４．４、１．２０．１５、および１．４６．１１を含む）、ＷＯ２０１７／０１９８９６、およびＷＯ２０１５／１１２９００、およびＵＳ２０１５／０２１０７６９（ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１〜ＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６およびＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ａ〜ＢＡＰ０４９−Ｃｌｏｎｅ−Ｅを含む）、ＷＯ２０１７／０１９８４６（ＰＤ−１  ｍＡｂ  １〜ＰＤ−１  ｍＡｂ  １５を含む）、ＷＯ２０１７／０１６４９７（ＭＨＣ７２３、ＭＨＣ７２４、ＭＨＣ７２５、ＭＨＣ７２８、ＭＨＣ７２９、ｍ１３６−Ｍ１３、ｍ１３６−Ｍ１９、ｍ２４５−Ｍ３、ｍ２４５−Ｍ��、およびｍ１３６−Ｍ１４を含む）、ＷＯ２０１６／２０１０５１（抗体ＥＨ１２．２Ｈ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ２、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ７、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ９、抗体ｈＰＤ−１  ｍＡｂ１５、または表１から選択される抗ＰＤ−１抗体を含む）、ＷＯ２０１６／１９７４９７（ＤＦＰＤ１−１〜ＤＦＰＤ１−１３を含む）、ＷＯ２０１６／１９７３６７（２．７４．１５および２．７４．１５．ｈＡｂ４〜２．７４．１５．ｈＡｂ８を含む）、ＷＯ２０１６／１９６１７３（表５および図１〜５中の抗体を含む）、ＷＯ２０１６／１２７１７９（Ｒ３Ａ１、Ｒ３Ａ２、Ｒ４Ｂ３、およびＲ３Ｄ６を含む）、ＷＯ２０１６／０７７３９７（実施例９の表１に記載される抗体を含む）、ＷＯ２０１６／１０６１５９（実施例２の表３中のマウス抗体、および実施例３の表７、８、および９中のヒト化抗体を含む）、ＷＯ２０１６／０９２４１９（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、ＥＨ１２．１、ｍＡｂ７−Ｇ４、ｍＡｂ１５−Ｇ４、ｍＡｂ−ＡＡＡ、ｍＡｂ１５−ＡＡＡを含む）、ＷＯ２０１６／０６８８０１（クローンＡ３およびその変異型、ならびに図１〜４に記載される他の抗体を含む）、ＷＯ２０１６／０１４６８８（１０Ｄ１、４Ｃ１０、７Ｄ３、１３Ｆ１、１５Ｈ５、１４Ａ６、２２Ａ５、６Ｅ１、５Ａ８、７Ａ４、および７Ａ４Ｄ、ならびに施例９／１０のヒト化抗体を含む）、ＷＯ２０１６／０１５６８５（１０Ｆ８、ＢＡ０８−１、ＢＡ−０８−２、および１５Ｈ６を含む）、ＷＯ２０１５／０９１９１１およびＷＯ２０１５／０９１９１０（実施例２、３、および４中の抗イヌＰＤ−１抗体を含む）、ＷＯ２０１５／０９１９１４（表３中の抗イヌＰＤ−１抗体を含む）、ＷＯ２０１５／０８５８４７（ｍＡｂ００５、Ｈ００５−１〜Ｈ００５−４を含む）、ＷＯ２０１５／０５８５７３（ｃＡＢ７を含む）、ＷＯ２０１５／０３６３９４（ＬＯＰＤ１８０を含む）、ＷＯ２０１５／０３５６０６（実施例２の表１、実施例７の表１４、１５、および１６、ならびに実施例１１の表２０、２１、および２２の抗体を含む）、ＷＯ２０１４／１９４３０２（ＧＡ２、ＲＧ１Ｂ３、ＲＧ１Ｈ１０、ＲＧ２Ａ７、ＲＧ２Ｈ１０、ＳＨ−Ａ４、ＲＧ４Ａ６、ＧＡ１、ＧＢ１、ＧＢ６、ＧＨ１、Ａ２、Ｃ７、Ｈ７、ＳＨ−Ａ４、ＳＨ−Ａ９、ＲＧ１Ｈ１１、およびＲＧ６Ｂを含む）、ＷＯ２０１４／１７９６６４（９Ａ２、１０Ｂ１１、６Ｅ９、ＡＰＥ１９２２、ＡＰＥ１９２３、ＡＰＥ１９２４、ＡＰＥ１９５０、ＡＰＥ１９６３、およびＡＰＥ２０５８を含む）、ＷＯ２０１４／２０６１０７（クローン１、１０、１１、５５、６４、３８、３９、４１、および４８を含む）、ＷＯ２０１２／１３５４０８（ｈ４０９Ａ１１、ｈ４０９Ａ１６、およびｈ４０９Ａ１７を含む）、ＷＯ２０１２／１４５４９３（抗体１Ｅ３、１Ｅ８、１Ｈ３、およびｈ１Ｈ３  Ｖａｒ  １〜ｈ１Ｈ３  Ｖａｒ  １４を含む）、ＷＯ２０１１／１１０６２１（抗体９４９および図１〜１１に開示される修飾バージョンを含む）、ＷＯ２０１１／１１０６０４（抗体９４８および図３〜１１に開示される修飾バージョンを含む）、ＷＯ２０１０／０８９４１１（ＣＮＣＭ寄託番号１−４１２２、１−４０８０、または１−４０８１を含む）、ＷＯ���０１０／０３６９５９（実施例１の表１中の抗体を含む）、ＷＯ２０１０／０２９４３５およびＷＯ２０１０／０２９４３４（クローン２、１０、および１９を含む）、ＷＯ２００８／１５６７１２（ｈＰＤ−１．０８Ａ、ｈＰＤ−１．０９Ａ、ｈ４０９Ａ１１、ｈ４０９Ａ１６、およびｈ４０９Ａ１７、ならびに実施例２、表Ｈ、実施例４、および表ＩＶに記載される抗体を含む）、ＷＯ２００６／１２１１６８（クローン１７Ｄ８、４Ｈ１、５Ｃ４、４Ａ１１、７Ｄ３、５Ｆ４、および２Ｄ３を含む）、ＷＯ２００４／００４７７１またはＷＯ２００４／０５６８７５（ＰＤ１−１７、ＰＤ１−２８、ＰＤ１−３３、ＰＤ１−３５、ＰＤ１−Ｆ２、および表１に記載されるＡｂを含む）に記載される抗ＰＤ−１抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＰＤ−１抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６３１】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＣＴＬＡ−４、例えば、ｈＣＴＬＡ−４に特異的に結合する。一実施形態では、ＣＴＬＡ−４抗原結合部位は、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０、ＣＡＳ番号４７７２０２−００−９）、トレメリムマブ（チシリムマブ／ＣＰ−６７５，２０６）、抗体クローン２Ｆ１、クローン１Ｆ４（Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン９Ｈ１０（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、クローンＢＮＵ３（ＧｅｎｅＴｅｘ）、クローン１  Ｅ２、クローンＡＳ３２（Ｌｉｆｅｓｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、クローンＡ３．４Ｈ２．Ｈ１２（Ａｃｒｉｓ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローン０６０（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローンＢＵ５Ｇ３（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、クローンＭＩＨ８（ＭＢＬ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、クローンＡ３．６Ｂ１０．Ｇ１、もしくはクローンＬ３Ｄ１０（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、またはＷＯ２０１７／０８７５８８（図２に開示されるＩＳＶ）、ＷＯ２０１７／０８４０７８（クローンＣ２、Ｃ４、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、およびＣ１３、ならびに図４〜７）、ＷＯ２０１６／１９６２３７（ＡＧＥＮ１８８４ｗ、ＡＧＥＮ２０４１ｗ、図１９Ａ、１９Ｂ、および表１〜６中の配列を含む）、ＷＯ２０１６／１３０９８６およびＷＯ２０１６／１３０８９８（Ｅ８、Ｆ７、および表４に記載されるＡｂを含む）、ＷＯ２０１６／０１５６７５（ハイブリドーマＬＴ００１、ならびに抗体８Ｄ２、８Ｄ２Ｈ１Ｌ１、８Ｄ２Ｈ２Ｌ２、８Ｄ２Ｈ３Ｌ３、８Ｄ２Ｈ２Ｌ１５、および８Ｄ２Ｈ２Ｌ１７を含む）、ＷＯ２０１２／１２０１２５（３Ｂ１０、８Ｈ５、および実施例１、２、３、および５において同定されるＡｂを含む）、ＷＯ２０１０／０９７５９７（ＪＭＷ−３Ｂ３、ならびに開示される変異型および断片を含む）、ＷＯ２００９／１００１４０（１０Ｄ１、１Ｈ５、３Ａ４、６Ｃ１０、および図１〜６に記載される抗体を含む）、ＷＯ２００７／００８４６３およびＷＯ２００６／１０１６９２およびＷＯ２００６／１０１６９１およびＷＯ２００６／０４８７４９およびＷＯ２００５／０９２３８（４．１．１、４．８．１、４．１０．２、４．１３．１、４．１４．３、６．１．１、１１．２．１、１１．６．１、１１．７．１、１２．３．１．１、１２．９．１．１、および１０Ｄ１を含む）、ＷＯ２００６／０９６４９１（ＡＴＣＣ寄託番号１１．２．１  １１．２．１．４  ＰＴＡ−５１６９および４．１．１  ４．１．１．１  ＰＴＡ−５１６６を含む）、ＷＯ２００６／０６６５６８（ＴＧＮ２１２２．Ｃ、ＴＧＮ２４２２．Ｃ、４．８Ｈ１０Ｈ５、および４．３Ｆ６Ｂ５、ならびに表３〜１４に記載される抗体を含む）、ＷＯ２００６／０２９２１９（Ｌ３Ｄ１０、Ｌ１Ｂ１１、Ｋ４Ｇ４、ＫＭ１０、およびＹＬ２を含む）、ＷＯ２００４／０２９０６９（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−４５３７を含む）、ＷＯ０１／５４７３２（抗体２５、２６、２７、２９、３３、３４、３５、３６、および３８を含む）、ＷＯ０１／１４４２４（３Ａ４、９Ａ５、２Ｅ２、２Ｅ７、４Ｂ６、４Ｅ１０、５Ｃ４、５Ｇ１、１１Ｅ８、および１１Ｇ１、ならびに実施例３および４および表３において同定される抗体を含む）、ならびにＷＯ００／３７５０４（３．１．１、４．１．１、４．８．１、４．１０．２、４．１３．１、４．１４．３、６．１．１、１１．２．１、１１．６．１、１１．７．１、１２．３．１．１、および１２．９．１．１を含む）に記載される抗ＣＴＬＡ−４抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＣＴＬＡ−４抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６３２】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＴＩＧＩＴ、例えば、ヒトＴＩＧＩＴに特異的に結合する。一実施形態では、ＴＩＧＩＴ抗原結合部位は、ＲＧ−６０５８（ＭＴＩＧ−７１９２Ａ）、またはＷＯ２０１７／０５３７４８（１Ａ４、１Ｄ３、４Ａ３、１０Ａ７、４．１Ｄ３．Ｑ１Ｅ、ｈ１０Ａ７．Ｋ４Ｇ３、４．１Ｄ３、ならびに実施例１および２に開示される他の抗体を含む）、ＷＯ２０１７／０３７７０７（ＶＳＩＧ９＃１および２５８−ｃｓｌ＃４を含む）、ＷＯ２０１７／０３０８２３（１４Ｄ７、２６Ｂ１０、および実施例３中のヒト化バージョンを含む）、ＷＯ２０１６／１９１６４３（３１３Ｒ１１、３１３Ｒ１２、３１３Ｒ１４、３１３Ｒ１９、３１３Ｒ２０、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１２２１８０、およびＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１２２１８１を含む）、ＷＯ２０１６／１０６３０２（１４Ｂ２、１３Ｅ６、６Ｆ９、１１Ｇ１１、１０Ｃ９、１６Ｆ６、１１Ｃ９、２７Ａ９、１０Ｄ７、２０Ｇ６、２４Ｅ８、２４Ｇ１、２７Ｆ１、１５Ａ６、４Ｅ４、１３Ｄ１、９Ｂ１１、１０Ｂ８、２２Ｇ２、１９Ｈ２、８Ｃ８、１７Ｇ４、２５Ｅ７、２６Ｄ８、および１６Ａ８を含む）、ＷＯ２０１６／０２８６５６（１４Ａ６、２８Ｈ５、または３１Ｃ６、および実施例６からのヒト化バージョンを含む）、およびＷＯ２００９／１２６６８８（ＵＳ２０１３／０２５１７２０、１０Ａ７および１Ｆ４を含む）に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＴＩＧＩＴ抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６３３】
一実施形態では、抗原結合部位はＴＩＭ−３、例えばヒトＴＩＭ−３に特異的に結合する。一実施形態では、ＴＩＭ−３抗原結合部位は、Ｆ３８−２Ｅ２（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、クローン２Ｅ２（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、クローン６Ｂ６Ｅ２、クローン０２４（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、クローン３４４８０１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローンＥ−１８、クローンＨ−１９１（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、もしくはクローン１３Ａ２２４（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、ＴＳＲ−０２２（Ｔｅｓａｒｏ）から、またはＷＯ２０１７／０７９１１５（表３０〜３８に列挙される抗ＴＩＭ３抗体を含む）、ＷＯ２０１７／０５５４０４（ＰＤ１ＴＩＭ３−０３８９、ＰＤ１ＴＩＭ３−０１６８、ＰＤ１ＴＩＭ３−０１６６、ＴＩＭ３−００３８、ＴＩＭ３−００１８、ＴＩＭ３−００２８、ＴＩＭ３−０４３８を含む−表Ｃ）、ＷＯ２０１７／０３１２４２（表１０）、ＷＯ２０１６／１７９１９４（ｍＡｂ  Ｆ３８−２Ｅ２および２Ｅ２を含む、図１ｂ中の抗体を含む）、ＷＯ２０１６／１７１７２２（３４４８２３、ならびにハイブリドーマ７Ｄ１１、１０Ｇ１２、１１Ｇ８、８Ｂ．２Ｃ１２、および２５Ｆ．１Ｄ６からの抗体を含む）、ＷＯ２０１６／１６１２７０（ＡＰＥ５１３７およびΑΡΕ５１２１を含む）、ＷＯ２０１６／１１１９４７（ｍＡｂ５、ｍＡｂ１３、ｍＡｂ１５、ｍＡｂ１７、ｍＡｂ２１、ｍＡｂ２２、ｍＡｂ２６、ｍＡｂ２７、ｍＡｂ４８、ｍＡｂ５８、およびｍＡｂ９１を含む）、ＷＯ２０１６／０７１４４８（ＴＩＭ３−００１６、ＴＩＭ３−００１８、ＴＩＭ３−００２１、ＴＩＭ３−００２２、ＴＩＭ３−００２６、ＴＩＭ３−００２８、ＴＩＭ３−００３０、ＴＩＭ３−００３３、ＴＩＭ３−００３８、ＴＩＭ３−０４３３、ＴＩＭ３−０４３４、ＴＩＭ３−０４３８、およびＴＩＭ３−０４４３を含む）、ＷＯ２０１６／０６８８０２（１Ｂ９、１Ｈ９、１Ｈ１０、２Ｃ７、２Ｆ４、２Ｇ６、１Ｄ９、１Ｆ４、および２Ｃ８を含む−図１、２、および３）、ＷＯ２０１６／０６８８０３（Ａ３、Ｂ１０、Ｇ６、Ｇ７、Ｇ９、Ａ１１、およびＡ１１＿ｇｌを含む−図１、２、および３）、ＷＯ２０１５／１１７００２（ＡＢＴＩＭ３、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０２、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０５、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０６、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０９、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１０、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１２、ＡＢＴＩＭ−ｈｕｍ０１、ＡＢＴＩＭ−ｈｕｍ０４、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０７、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０８、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０４、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２１、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ０３、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ１１、および表９に列挙される抗体を含む）、ＷＯ２０１５／０４８３１２（５Ｄ１２を含む）、ＷＯ２０１４／０２２３３２（２Ｃ１２を含む）、ＷＯ２０１３／００６４９０（表１中の抗体を含む）、ＷＯ２０１１／１５５６０７（５１２、６４４、４５４５、４１７７、８２１３、３４４８２３、および３４８２３を含む）、ＷＯ２００３／０６３７９２（抗体８Ｂ．２Ｃ１２および２５Ｆ．１Ｄ６を含む）、ＷＯ２０１７／０１９８９７（ＡＢＴＩＭ３、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２��、ＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２２、およびＡＢＴＩＭ３−ｈｕｍ２３を含む、表１〜４に開示される抗体分子を含む）、ＷＯ２０１６／０７９０５０およびＷＯ２０１６／０７９０５０（Ｔｉｍ３＿００２２、Ｔｉｍ３＿００１６、Ｔｉｍ３＿００１８、Ｔｉｍ３＿００１２２、Ｔｉｍ３＿００２２、Ｔｉｍ３＿００２１、Ｔｉｍ３＿００２８、Ｔｉｍ３＿００２６、Ｔｉｍ３＿００３３、Ｔｉｍ３＿００３８、Ｔｉｍ３＿００３０、１．７．Ｅ１０、Ｆ３８−２ＥＬ、および２７−１２Ｅ１２表１〜４に開示される抗体分子を含む）に記載される抗ＴＩＭ−３抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＴＩＭ−３抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６３４】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＬＡＧ−３、例えば、ヒトＬＡＧ−３に特異的に結合する。一実施形態では、ＬＡＧ−３抗原結合部位は、抗体クローン１７Ｂ４（Ｅｎｚｏ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、もしくはクローン３３３２１０（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、もしくはクローン１４Ｌ６７６（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、もしくはＣ９Ｂ７Ｗ（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）、もしくは１１Ｅ、もしくはＩＭＯ３２１、もしくはｍＡｂ  Ｃ９Ｂ７Ｗ（ＢｉｏＸｃｅｌｌ）から、またはＷＯ９５／３０７５０、ＷＯ２００４／０７８９２８、ＷＯ２００８／１３２６０１（ＩＭＰ７３１  Ｌａｇ−３  Ａｂ、ＩＭＰ３２１、Ａ９Ｈ１２  Ｌａｇ−３  ｍＡｂ、および３１Ｇ１１を含む）、ＷＯ２０１０／０１９５７０（２５Ｆ７、２６Ｈ１０、２５Ｅ３、８Ｂ７、１１Ｆ２、および１７Ｅ５を含む）、ＷＯ２０１４／１４０１８０（Ｈ５Ｌ７、Ｈ５Ｌ７ＢＷ、ＩＭＰ７３１、ならびに表３および表７中の抗体を含む）、ＷＯ２０１４／１７９６６４（ＡＰＥ０３１０９を含む）、ＷＯ２０１４／００８２１８（Ｌａｇ３．１、Ｌａｇ３．５、Ｌａｇ３．６、Ｌａｇ３．７、およびＬａｇ３．８を含む）、ＷＯ２０１５／０４２２４６、ＷＯ２０１５／１１６５３９（ＢＭＳ−９８６０１６を含む）、ＷＯ２０１５／１３８９２０（ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０１〜ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ２０、ｈｕＢＡＰ０５０（Ｓｅｒ）、ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ０１−Ｓｅｒ〜ＢＡＰ０５０−ｈｕｍ２０−Ｓｅｒ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｆ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｇ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｈ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−  Ｉ、ＢＡＰ０５０−Ｃｌｏｎｅ−Ｊ、ＢＡＰ０５０、およびＢＡＰ０５０−ｃｈｉを含む）、ＷＯ２０１５／１９８３１２、ＷＯ２０１６／０２８６７２（Ａｂ１、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ４、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ８、およびＡｂ９を含む）、ＷＯ２０１６／１２６８５８、ＷＯ２０１６／２００７８２（ＬＡＧ−３  ｍＡｂ１〜ＬＡＧ−３  ｍＡｂ６を含む）、ＷＯ２０１７／０１５５６０（Ｌ３２Ｄ１０、Ｌ３Ｅ３、Ｌ３Ｃ５、Ｌ３５Ｄ４、Ｌ３５Ｇ６、Ｌ３３Ｈ１１、Ｌ３２Ａ９、Ｌ３２Ａ４、Ｌ３Ａ１、および表３に列挙される抗体を含む）、ＷＯ２０１７／０６２８８８（ｍＡｂ１、Ｈ４Ｈ１５４７７Ｐ、Ｈ４Ｈ１５４８３Ｐ、Ｈ４Ｈ１５４８４Ｐ、Ｈ４Ｈ１５４９１、Ｈ４Ｈ１７８２３Ｐ、Ｈ４Ｈ１７８２６Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７８２８Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５４６０Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４６２Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４６３Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４６４Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４６６Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４６７Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４７０Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４７５Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４７９Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４８０Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４８８Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４９６Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５４９８Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５０５Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５１８Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５２３Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５３０Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５５５Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５５８Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５６７Ｐ２、およびＨ４Ｈ１７８１９Ｐを含む）、ＷＯ２０１７／０１９８９４、ＷＯ２０１７／０３７２０３（８Ｅ２、１３Ｅ２、３４Ｆ４、１７Ｂ４、およびＩＭＰ７６１を含む）、ＷＯ２０１７／���８７５８９（１１Ｂ０９を含む）、もしくはＷＯ２０１７／０８７９０１に記載される抗ＬＡＧ−３抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＬＡＧ−３抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６３５】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＶＩＳＴＡ、例えば、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合する。一実施形態では、ＶＩＳＴＡ抗原結合部位は、ＷＯ２０１６／２０７７１７およびＷＯ２０１５／０９７５３６（ＶＳＴＢ５０、ＶＳＴＢ５３、ＶＳＴＢ６０、ＶＳＴＢ９５、ＶＳＴＢ１１２、ＶＳＴＢ１１６、ＶＳＴＢ１７４、ＶＳＴＢ１７５、ＶＳＴＢ１４９、ＶＳＴＢ１４０、ならびに表１Ａ  および実施例７および８における抗体を含む）、ならびにＷＯ２０１４／１９０３５６（クローン２Ｄ３および１８Ｃ３を含む）に記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＶＩＳＴＡ抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６３６】
一実施形態では、抗原結合部位は、免疫チェックポイント調節剤に特異的に結合する。一実施形態では、抗原結合部位は、ＢＴＬＡ、ｈＨＶＥＭ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ４、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７３、ＣＤ９６、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ２００、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、およびＣＤ１５５から、またはＢＴＬＡ、ｈＨＶＥＭ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ４、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７３、ＣＤ９６、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ２００、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、およびＣＤ１５５から選択される免疫調節剤に特異的に結合する。一実施形態では、抗原結合部位は、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＲ４、ＢＴＬＡ、ｈＶＥＭ、およびＣＳＦ１Ｒから選択される免疫調節剤に特異的に結合する。
【０６３７】
一実施形態において、抗原結合部位は、ＧＡＲＰ、例えば、ヒトＧＡＲＰに特異的に結合する。一実施形態では、抗原結合部位は、Ｇ１４Ｄ９、Ｐｌａｔｏ−１、２７２、Ｇ６、５０  Ｇ１０、もしくは７Ｂ１１から、またはＷＯ２００７／１１３３０１およびＷＯ２０１５／０１５００３（ＭＨＧＡＲＰ８、ＬＨＧ−１０、ＬＨＧ−１０−Ｄ、ＬＨＧ−１０．３−Ｄ、ＬＨＧ−１０．４−Ｄ、ＬＨＧ−１０．５−Ｄ、ＬＨＧ−１０．６−Ｄ、ＬＨＧ−１０．３、ＬＨＧ−１０．４、ＬＨＧ−１０．５、ＬＨＧ−１０．６、２７Ε１０、ＭＨＧＡＲＰ１、ＭＨＧＡＲＰ２、ＭＨＧＡＲＰ３、ＭＨＧＡＲＰ４、ＭＨＧＡＲＰ５、ＭＨＧＡＲＰ６、ＭＨＧＡＲＰ７、およびＭＨＧＡＲＰ９を含む）、ＷＯ２０１７／０５１８８８（１１０Ｆ、１０５Ｆ、ｃ１５１Ｄ、ｃ１９８Ｄ、ｈ１９８Ｄ、ｈ１５１Ｄ、ｈ１５１Ｄ−Ｈ１Ｌ１、およびｈ１９８Ｄ−Ｈ３Ｌ４を含む）に記載される抗ＧＡＲＰ抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＧＡＲＰ抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６３８】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＳＩＲＰα、例えば、ヒトＳＩＲＰαに特異的に結合する。一実施形態では、抗原結合部位は、ＥＤ９（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）もしくは６０２４１１（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）から、またはＷＯ９７／４８７２３、ＷＯ００／２４８６９（１０Ｃ４を含む）、ＷＯ００／６６１５９（ＥＤ９およびＥＤ１７を含む）、ＷＯ０１／４０３０７、ＷＯ０２／０９２７８４（ＳＥ５Ａ５、ＳＥ７Ｃ２、およびＳＥ１２Ｃ３を含む）、ＷＯ２００４／１０８９２３（ＳＥ１２Ｃ３および２Ｆ３４を含む）、ＷＯ２００９／０４６５４１（Ｐ８４を含む）、ＷＯ２０１１／０７６７８１、ＷＯ２０１２／１７２５２１、ＷＯ２０１２／０４０２０７（ＳＥ５Ａ５およびマウスＰ８４を含む）、ＷＯ２０１３／０５６３５２（２９−ＡＭ４−５、Ａｂ  ＡＭ４−５、ＡＭ５−１、ＡＭ５−３、ＡＭ５−５、ＡＭ５−６、ＳＩＲＰａｌｐｈａ−ＡＭ３−３５、ＡＭ４−１、ＳＩＲＰ２９−ＡＭ３−３５、ＳＩＲＰ２９−ＡＭ４−５、ＳＩＲＰ２９−ＡＭ４−１、２９−ＡＭ２−２、２９−ＡＭ４−４、２９−ＡＭ４−１、２９−ＡＭ４−５、２９−ＡＭ３−３５、およびＳＩＲＰ２９−ＡＭ３−６３を含む）、ＷＯ２０１６／０６３２３３、ＷＯ２０１６／２０５０４２（Ｐ３６２を含む）、もしくはＷＯ２０１５／１３８６００（ＫＷＡＲ２３を含む）に記載される抗ＳＩＲＰα抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＳＩＲＰα抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６３９】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＣＸＣＲ４、例えば、ヒトＣＸＣＲ４に特異的に結合する。一実施形態では、抗原結合部位は、ウロクプルマブ（ｕｌｏｃｕｐｌｕｍａｂ）／ＢＭＳ−９３６５６４、クローン４４７１７．１１１もしくはＰＦ−０６７４７１４３、またはＷＯ９７／４９４２４（ＭＡＢ１２Ｇ５を含む）、ＷＯ９９／５０４６１、ＷＯ０１／４２３０８、ＷＯ０３／０６６８３０およびＷＯ２００３／０６６８３０（Ａｂ１２４およびＡｂ１２５を含む）、ＷＯ２００４／０５９２８５（ＡＬＸ４０−４Ｃを含む）、ＷＯ２００６／０８９１４１（ｍＡｂ  ２Ｎ、６Ｒ、１８、１９、２０、３３、および４８を含む）、ＷＯ２００７／００５６０５、ＷＯ２００８／１４２３０３（ＭＡＢ１７０、ＭＡＢ１７１、ＭＡＢ１７３、およびＭＡＢ１７２を含む）、ＷＯ２００８／０６０３６７およびＷＯ２０１３／０７１０６８およびＷＯ２０１５／０１５４０１（ＢＭＳ−９３６５６４／ＭＤＸ−１３３８を含む）、ＷＯ２００９／１４０１２４（抗体Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶを含む）、ＷＯ２００９／１１７７０６（７０１、７０８、７１６、７１７、７１８、および４Ｇ１０を含む）、ＷＯ２０１１／１６１２６６（４ＣＸＣＲ１００、４ＣＸＣＲ１０３、４ＣＸＣＲ１０４、４ＣＸＣＲ１０１、４ＣＸＣＲ２３８Ｄ２、および４ＣＸＣＲ２３８Ｄ４を含む）、ＷＯ２０１１／０９８７６２（Ｃ−９Ｐ２１（表１）、Ｂ−１Ｍ２２（表２）、Ｃ１１２４（表３）、Ｄ−１Ｋ２１（表４）、および９Ｎ１０（表５）を含む）、ＷＯ２０１２／１７５５７６、ＷＯ２０１３／０１３０２５（２Ａ４、６Ｃ７、４Ｃ１、７Ｃ８、５Ｃ９、および５Ｅ１を含む）、ＷＯ２０１３／０１７５６６（Ｍａｂ  ４２７ａＢ１および５１５Ｈ７を含む）、ＷＯ２０１３／０１７５６２（１−３８５９  Ｍａｂおよび５１５Ｈ７を含む）、ＷＯ２０１５／０６９８７４（配列番号２５および２９に対応する抗体を含む）、ＷＯ２０１５／０１５４０１（１２Ａ１１、６Ｂ６、３Ｇ１０、ｍ３Ｇ１０．ｈｌｇＧ１、ｍ３Ｇ１０．ｈｌｇＧ４、ｈ３Ｇ１０．Ａ５７．ｈｌｇＧ１、ｈ３Ｇ１０．Ａ５７．Ａ５８Ａ．ｈｌｇＧ１、ｈ３Ｇ１０．１．９１．Ａ５８Ａ．ｈｌｇＧ１、ｈ３Ｇ１０．１．９１．Ａ５８Ｂ．ｈｌｇＧ１、およびｈ３Ｇ１０．２．３７．２．７２．ｈｌｇＧ１）、ＷＯ２０１６／１５６５７０（２８１Ｆ１２、２８１Ａ６、および２８１Ｄ４）、ＷＯ２０１６／１０９８７２（表１、２、９、および１２に列挙される抗体、Μ３−１１４−６Η、ΑΜ４−２７２−６Η、ΑΜ３−５２３−６Η、ＡＭ４−２７２、ΑΜ３−１１４、ΑΜ３−５２３、ΑΜ４−７４６、およびΑΜ４−１１２１を含む）、ＷＯ２０１７／０７１６２５、ＷＯ２０１２／１７５５７６、ＷＯ２０１０／１２５１６２およびＷＯ２０１２／０５５９８０およびＷＯ２０１１／１２１０４０およびＷＯ２０１０／０３７８３１（ｃ４１４Ｈ５（４１４Ｈ５）、ｃ５１５Ｈ７（５１５Ｈ７）、および３０１ａＥ５を含む）、ＷＯ２００９／１３８５１９（ＡＬＸ４０−４Ｃ、２３８Ｄ２、２３８Ｄ４、２３７Ｂ５抗体、ならびに表１、表１．１、表Ａ−Ｉ、表Ｂ−１．１およびＢ−５に列挙される配列を含む）、ＷＯ２０１１／０４２３９８（２３８���２および２３８Ｄ４を含む）、ＷＯ２０１１／０８３１４０（表Ｃ−２、Ｃ−３、Ｃ−４、およびＣ−５、図２に開示されるもの、ならびにＡＬＸ−０６５１、１５Ｈ３、１０Ｅ１２、１０Ｇ１０、２３８Ｂ６、１０Ｅ９、２８１Ｅ１０、１０Ａ１０、１４Ａ２、および１５Ａ１を含む）、もしくはＷＯ２０１１／０８３１４１に記載される抗ＣＸＣＲ４抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＣＸＣＲ４抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６４０】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＢＴＬＡ、例えば、ｈＢＴＬＡに特異的に結合する。一実施形態では、ＢＴＬＡ抗原結合部位は、抗体クローン１Ｂ７、クローン２Ｇ８、クローン４Ｃ５（Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン４Ｂ８（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−ｏｎｌｉｎｅ）、クローンＭＩＨ２６（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｉｅｒｃｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、クローンＵＭＡＢ６１（ＯｒｉＧｅｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、クローン３３０１０４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローン１Ｂ４（Ｌｉｆｅｓｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、クローン４４０２０５、クローン５Ｅ７（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、またはＷＯ２０１６／１７６５８３（クローン６Ｆ４を含む）、ＷＯ２０１１／０１４４３８（８Ｄ５、８Ａ３、２０Ｈ４、２１Ｈ６、１５Ｃ５、１９Ａ７、および４Ｃ７を含む）、ＷＯ２０１０／１０６０５１（ＣＮＣＭ寄託番号１−４１２３を含む）、ならびにＷＯ２００８／０７６５６０（実施例に２に詳述される１Ｂ４、Ｅ４Ｈ９、３Ｃ２、３Ｃ２ａ、６Ａ５、１１Ｅ２、Ｅ８Ｄ９、１０Ｈ６、および４Ｃ９を含む）に記載される抗ＢＴＬＡ抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＢＴＬＡ抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６４１】
一実施形態では、抗原結合部位は、ｈＶＥＭ、例えばヒトｈＶＥＭに特異的に結合する。一実施形態では、ＨＶＥＭ抗原結合部位は、ＷＯ２００８／０８３１６９（ＬＢＨ１を含む）に記載される抗ＨＶＥＭ抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＨＶＥＭ抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６４２】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＣＳＦ１Ｒに特異的に結合する。一実施形態では、ＣＳＦ１Ｒ抗原結合部位は、ＷＯ２００９／０２６３０３（１．２、１．１０９、２．３６０、および１．２．ＳＭ、ならびに図１および２中の抗体を含む）、ＷＯ２００９／１１２２４５（ＣＸＩＩＧ６を含む）、ＷＯ２０１１／０７００２４（Ｍａｂ  ２Ｆ１１、２Ｅ１０、２Ｈ７、および１Ｇ１０、ならびにそれらの誘導体を含む）、ＷＯ２０１１／１０７５５３（７Ｈ５．２Ｇ１０／ＤＳＭ  ＡＣＣ２９２２を含む）、ＷＯ２０１１／１２３３８１（抗体１および抗体２を含む）、ＷＯ２０１１／１３１４０７（７Ｇ５．３Ｂ６／ＤＳＭ  ＡＣＣ２９２１を含む）、ＷＯ２０１１／１４０２４９（０３０１、０３０２、および０３１１、それらの誘導体、ならびに表２、３、および５中の抗体を含む）、ＷＯ２０１３／１６９２６４およびＷＯ２０１４／０３６３５７およびＷＯ２０１６／１０６１８０およびＷＯ２０１６／１６８１４９（ｈｕＡｂ１〜ｈｕＡｂ１６を含む）、ＷＯ２０１２／１１０３６０およびＷＯ２０１３／０５７２８１（ＣＸＩＩＧ６、Ｈ１９Ｋ１２、Ｈ２７Ｋ５、およびＨ２７Ｋ１５、ならびに表１および２のヒト化抗体を含む）、ＷＯ２０１３／０８７６９９（９Ｄ１１．２Ｅ８および１０Ｈ２．２Ｆ１２を含む）、ＷＯ２０１４／０７２４４１（Ｈ２７Ｋ１５を含む）、ＷＯ２０１４／１７３８１４およびＷＯ２０１３／１３２０４４（Ｍａｂ  ２Ｆ１１、Ｍａｂ  ２Ｅ１０、Ｍａｂ  ２Ｈ７、Ｍａｂ  １Ｇ１０、およびｓｃ２−４Ａ５、ならびに表３および３ｂ中の抗体を含む）、ＷＯ２０１５／０２８４５５およびＷＯ２０１５／０２８４５４（Ａｂ５３５、Ａｂ９６９、および誘導体、例えばＡｂ９６９．ｇ２を含む）、ＷＯ２０１５／０３６５１１およびＷＯ２０１６／２０７３１２（２Ｆ１１、２Ｅ１０、および実施例３３に記載される誘導体を含む）、ならびにＷＯ２０１７／０４９０３８（ＡＬＭ−４２３および表２に列挙される抗体を含む）に記載される抗ＣＳＦ１Ｒ抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６４３】
一実施形態では、抗原結合部位はＣＤ３９、例えば、ヒトＣＤ３９に特異的に結合する。一実施形態では、ＣＤ３９抗原結合部位は、ＢＹ４０、ＢＹ１２、ＢＡ５４ｇ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＢＵ６１（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ａ１（Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＡＣ２（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ）、２２Ａ９（Ａｂｃａｍ）、２４ＤＭＳ１から、またはＷＯ９６／３２４７１、ＷＯ００／０４０４１、ＷＯ０１／１０２０５（ＣＤ３９Ｌ４を含む）、ＷＯ２００９／０９５４７（ＣＮＣＭ−Ｉ−３８８９／ＢＹ４０を含む）、ＷＯ２０１４／１６９２５５、ＷＯ２０１２／０８５１３２（抗体ＶＹ１２、ＢＹ４０、およびＢＡ５４ｇを含む）、ＷＯ２０１６／０７３８４５（Ｒ２９−５−１３Ａ、Ｒ２９−５−７１Ａ、Ｒ２９−５−１６５Ｃ、およびＲ２９−９−８Ｂを含む）、ＷＯ２０１７／０８９３３４（１−３９１、１−３９２、およびハイブリドーマＩ−３８８９およびＣＮＣＭ  Ｉ−４１１７１から産生された抗体を含む）、ならびにＷＯ２００９／０９５４７８に記載される抗ＣＤ３９抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＣＤ３９抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６４４】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＣＤ４０、例えばヒトＣＤ４０に特異的に結合する。一実施形態では、ＣＤ４０抗原結合部位は、ＢＭＳ３ｈ−５６−２６９、ＣＰ−８７０，８９３、ダセツズマブ、ＳＥＡ−ＣＤ４０、ＡＤＣ−１０１３、ＲＯ７００９７８９、およびＣｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４から、またはＷＯ２０１７／０５９２４３、ＷＯ２０１７／０５９１９６、ＷＯ２０１７／０４０９３２、ＷＯ２０１７／０４０５６６、ＷＯ２０１７／００４０１６、ＷＯ２０１７／００４００６、ＷＯ２０１６／１９６３１４、ＷＯ２０１６／０２８８１０、ＷＯ２０１６／０２３９６０、ＷＯ２０１６／０２３８７５、ＷＯ２０１５／１３４９８８、ＷＯ２０１５／０９１８５３、ＷＯ２０１４／０７０９３４、ＷＯ２０１４／０６５４０３、ＷＯ２０１４／０６５４０２、ＷＯ２０１４／０４２９８、ＷＯ２０１３／１６４７８９、ＷＯ２０１３／０３４９０４、ＷＯ２０１２／１４９３５６、ＷＯ２０１２／１４５６７３、ＷＯ２０１２／１２５５６９、ＷＯ２０１２／１１１７６２、ＷＯ２０１２／０７５１１１、ＷＯ２０１２／０６５９５０、ＷＯ２０１２／０４１６３５、ＷＯ２０１１／１２３４８９、ＷＯ２０１０／１２３０１２、ＷＯ２０１０／１０４７６１、ＷＯ２０１０／１２１２３１、ＷＯ２００９／０６２１２５、ＷＯ２０１０／１０４７４７、ＷＯ２０１０／１０４７４８、ＷＯ２０１０／１０４７４９、ＷＯ２０１０／０２４６７６、ＷＯ２００９／０９４３９１、ＷＯ２００９／０６２０５４、ＷＯ２００８／０９１９５４、ＷＯ２００７／１３０４９３、ＷＯ２００７／１２９８９５、ＷＯ２００７／１２４２９９、ＷＯ２００７／０５３７６７、ＷＯ２００７／０５３６６１、ＷＯ２００６／１２８１０３、ＷＯ２００６／０７３４４３、ＷＯ２００５／０６３９８１、ＷＯ２００５／０６３２８９（ＵＳ２０１２／０２６３７３２）、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４２９４、ＷＯ２００５／０４４３０７、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ０３／０４０１７０（ＵＳ７，５６３，４４２Ｂ、ＵＳ７，６１８，６３３Ｂ、ＵＳ７，３３８，６６０Ｂ、ＵＳ７，２８８，２５１Ｂ、ＵＳ７，６２６，０１２Ｂ、ＵＳ８，３８８，９７１Ｂ、ＵＳ２０１３／００２４９５６）、ＷＯ０３／０２９２９６、ＷＯ０２／０８８１８６、ＷＯ０１／８３７５５、ＷＯ０２／２８９０５、ＷＯ０２／２８４８０、ＷＯ０２／２８４８１、ＷＯ０２／２８９０４、ＷＯ０１／３７８７０、ＷＯ０１／１６１８０、ＷＯ００／７５３４８  ＷＯ９９／６１０５７、ＷＯ９９／４２０７５、ＷＯ９７／３１０２５、ＷＯ９５／１７２０２、およびＷＯ９５／０９６５３に記載される抗ＣＤ４０抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＣＤ４０抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６４５】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＣＤ７３、例えばヒトＣＤ７３に特異的に結合する。一実施形態では、ＣＤ７３抗原結合部位は、１Ｅ９（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ＡＤ２、７Ｇ２、４Ｇ４から、またはＷＯ２０１７／０６４０４３（７Ｈ１０、１２Ｆ９、１５Ｄ７、４Ｂ１１、１１Ｄ９、および９Ｄ２を含む）、ＷＯ２０１６／０８１７４８（４Ｃ３、７Ａ１１、６Ｅ１１、５Ｆ８、４Ｃ３、１１Ｆ１１、１１Ａ６、ＣＤ７３．４−１、ＣＤ７３．４−２、ＣＤ７３．３、１１Ｆ１１−１、１１Ｆ１１−２、１１Ｆ１１、４Ｃ３−１、４Ｃ３−２、４Ｃ３−３、４Ｄ４、１０Ｄ２−１、１０Ｄ２−２、１１Ａ６、２４Ｈ２、５Ｆ８−１、５Ｆ８−２、および５Ｆ８−３を含む）、ＷＯ２０１６／１３１９５０（１１Ｅ１、８Ｃ７、３Ｃ１２、および６Ｅ１を含む）、ＷＯ２０１６／０７５１７６（ＭＥＤＩ９４４７、クローン１０．３、およびクローン２Ｃ５を含む）およびＷＯ２０１６／０７５０９９（ＣＤ７３０００４、ＣＤ７３０００８、ＣＤ７３０００１１、ＣＤ７３００２１、ＣＤ７３００４２、ＣＤ７３００４６、ＣＤ７３００４７、ＣＤ７３００６８、およびＣＤ７３００６９を含む）、ＷＯ２０１６／０５５６０９（１１Ｅ１、６Ｅ１、３Ｃ１２、および８Ｃ７を含む）に記載される抗ＣＤ７３抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＣＤ７３抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６４６】
一実施形態では、抗原結合部位はＣＤ９６、例えばヒトＣＤ９６に特異的に結合する。一実施形態では、ＣＤ９６抗原結合部位は、６Ａ６、もしくはＮＫ９２．３９（Ｅ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、１Ｃ８、３Ｈ８、ＭＡＡ６３５９の、またはＷＯ２００８／０７３３１６、ＷＯ２００９／００７１２４、ＷＯ２０１３／１８４９１２、ＷＯ２０１４／０８９１６９、ＷＯ２０１４／１４９３１０（抗体３．３を含む）、ＷＯ２０１５／０２４０６０、もしくはＷＯ２０１５／０２４０４２、ＷＯ２０１５／０２４０６０（ｍＡｂ  ３．３を含む）に記載される抗ＣＤ９６抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＣＤ９６抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６４７】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＣＸＣＲ２、例えばヒトＣＸＣＲ２に特異的に結合する。一実施形態では、ＣＸＣＲ２抗原結合部位は、ＷＯ２０１５／１６９８１１（ＨＹ２９およびＨＹ２９ＧＬを含む）、ＷＯ２０１４／１７０３１７（ＣＸ２−Ｍａｂ＃１〜＃１９を含む）、ＷＯ２０１２／０６２７１３、ＷＯ２０１３／１６８１０８（１６３Ｄ２−１２７Ｄ１、１６３Ｅ３−１２７Ｄ１、１６３Ｅ３−５４Ｂ１２、１６３Ｄ２−５４Ｂ１２、２Ｂ２−１６３Ｅ３、２Ｂ２−１６３Ｄ２、９７Ａ９−２Ｂ２、９７Ａ９−５４Ｂ１２、１２７Ｄ１−１６３Ｄ２、１２７Ｄ１−１６３Ｅ３、２Ｂ２−９７Ａ９、５４Ｂ１２−１６３Ｄ２、５４Ｂ１２−１６３Ｅ３、１６３Ｄ２−２Ｂ２、１６３Ｅ３−２Ｂ２、１２７Ｄ１−９７Ａ９、５４Ｂ１２−９７Ａ９、９７Ａ９−１２７Ｄ１、およびそれらの誘導体を含む）、ＷＯ２００９／１１７７０６（４８３１１．２１１、５Ｅ８／ＣＸＣＲ２、クローン１９、およびそれらの誘導体を含む）、ＷＯ２００９／１２０１８６（ＲＩＩ１１５、４８３１１、およびそれらの誘導体を含む）、ならびにＷＯ２００２／２６２４９に記載される抗ＣＸＣＲ２抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＣＸＣＲ２抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６４８】
一実施形態では、抗原結合部位はＣＤ２００、例えばヒトＣＤ２００に特異的に結合する。一実施形態では、ＣＤ２００抗原結合部位は、ＤＸ−１０９、サマリズマブ／ＡＬＸＮ−６０００、ＴＴＩ−２００．７、またはＷＯ９９／２４５６５（Ｍ３Ｂ５、ならびに実施例４および５における抗体を含む）、ＷＯ０２／１１７６２（３Ｂ６および実施例における抗体を含む）、ＷＯ２００４／０６０２９５（ＵＳ２００４／０２１３７８３）、ＷＯ２００４／０７８９３８（ｓｃＦｖ−９を含む）、ＷＯ２００６／０２０２６６（ＵＳ８，８４０，８８５Ｂ２、ＣＧ１Ｒ３Ａ１０、ｃＧ２ａＲ３Ａ１０、ｃＧ２ａＲ３Ｂ７、ｄＧｌＲ３Ａ５、ｄＧｌＲ３Ｂ５、およびｄＧｌＲ３Ｂ１０、ならびに図９Ａ〜９Ｃ、図２１Ａ、および２１Ｂに記載される抗体を含む）、ＷＯ２００７／０８４３２１（ＵＳ８，７０９，４１５Ｂ２、ＡＬＸＮ５２００、ｈＢ７ＶＨ３ＶＬ２、Ｃ２ａＢ７Ｇ１、Ｃ２ａＢ７Ｇ２／Ｇ４、Ｖ３Ｖ２−Ｇ１、およびＶ３Ｖ２−Ｇ２／Ｇ４を含む）、ＷＯ２００９／０１４７４５（ＯＸ９０ｍＧ２ａ（図１０）、ＯＸ９０ＮＥ、およびＯＸ９０ＮＥ−ＡＧを含む）、ならびにＷＯ２０１１／１００５３８およびＵＳ２０１３／０１８９２５８（抗体１および抗体２を含む）に記載される抗ＣＤ２００抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＣＤ２００抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６４９】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＣＣＲ４、例えばヒトＣＣＲ４に特異的に結合する。一実施形態では、ＣＣＲ４抗原結合部位は、モガムリズマブ、ＫＭ３０６０（Ｎｉｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６４，２１２７−２１３３を参照されたい）、およびＫＷ−０７６１（Ｉｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２００８，ｖｏｌ  １９，ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ４，５１３を参照されたい）から、またはＷＯ２０１６／１７８７７９およびＷＯ２０１６／０５７４８８（ｍＡｂ２−３、１−４４、１−４９、２−１、および２−２を含む）、ＷＯ２０１５／１７９２３６（ＫＷ−０７６１を含む）、ＷＯ２０１３／１６６５００（ｍＡｂ１５６７、ｃ１５６７、ｈ１５６７、ｍＡｂ  １−４および２−３、ならびに実施例６および１３における抗体を含む）、ＷＯ２０１２／０７６８８３（抗体２０８、３０６、３０８、４０６、５０１、５０３、６０１、６０３、および８０３を含む−表１〜９）、ＷＯ２０１０／１４２９５２（１７Ｇ、９Ｅ、１１Ｆ、９Ｅ１０、９Ｅ１０Ｊ、および９Ｅ１Ｄを含む−表１〜１６を参照されたい）、ＷＯ２００９／０８６５１４（ｍＡｂ１５６７および実施例１４におけるヒト化ｍＡｂを含む）、ＷＯ２００５／０３５５８２（ＤＧ４４／ＣＣＲ４抗体およびＭｓ７０５／ＣＣＲ４抗体（ＦＥＲＭ  ＢＰ−８４６７）を含む）、ＷＯ２００５／０５３７４１およびＷＯ０１／６４７５４（ＵＳ６，９８９，１４５Ｂ、ＵＳ７，６６６，４１８Ｂ、ＵＳ８，１９７，８１４Ｂ、ＵＳ８，６３２，９９６Ｂ、ＫＭ２１６０（ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００９０）、ＫＭ２７６０（ＦＥＲＭ寄託ＢＰ−７０５４）を含む）、ＷＯ２００３／０１８６３５（ＫＭ２１６０、ＫＭ８７５９（ＦＥＲＭ  ＢＰ−８１２９）、およびＫＭ８７６０（ＦＥＲＭ  ＢＰ−８１３０）を含む、ＷＯ００／４２０７４（ＵＳ６，４８８，９３０Ｂ、ＵＳ７，１３８，１１７Ｂ、２Ｂ１０、１０Ｅ４、１Ｇ１、およびＡＴＣＣ受託番号ＨＢ−１２６２４およびＨＢ−１２６２５として寄託された抗体を含む）、ならびにＷＯ００／４１７２４（ＵＳ６，８８１，４０６Ｂ、ＵＳ６，２４５，３３２Ｂ、１Ｇ１およびＡＴＣＣ受託番号ＨＢ−１２６２４下で寄託された抗体を含む）に記載される抗ＣＣＲ４抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＣＣＲ４抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６５０】
一実施形態において、抗原結合部位は、ＣＸＣＬ９、例えばヒトＣＸＣＬ９に特異的に結合する。一実施形態では、ＣＸＣＬ９抗原結合部位は、ｍＡｂ  ３９２−１００またはＡＦ３９２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）からのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含む。
【０６５１】
一実施形態において、抗原結合部位は、ＣＸＣＬ１０、例えばヒトＣＸＣＬ１０に特異的に結合する。一実施形態では、ＣＸＣＬ１０抗原結合部位は、ｍＡｂ２６６（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）の、またはＷＯ０１７／８７０８（ＣＲ．Ｇ（ＩＰ−１０）（ＩｇＧ１）（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）およびＩＰ−１０（ＩｇＧ）（Ａ．Ｌｕｓｔｅｒ）を含む、ＷＯ０２／１５９３２、ＷＯ０３／００６０４５、ＷＯ２００４／０８２７１４、ＷＯ２００４／０４５５２５、ＷＯ２００４／０４５５２６、ＷＯ２００４／１０１５１１（表１中の抗体、ならびにＡＩＰ１２、ＨｕＡＩＰ１２、ＭｕＡＩＰ１２、ＡＩＰ１３、ＨｕＡＩＰ１３、ＭｕＡＩＰ１３、ＡＩＰ６、ＡＩＰ８、ＡＩＰ１４、ＡＩＰ１８、ＡＩＰ２１、ＡＩＰ２２、ＡＩＰ５、およびＡＩＰ１７）、ＷＯ２００５／０６０４５７（ＡＩＰ５、ＡＩＰ６、ＡＩＰ８、ＡＩＰ１０、ＡＩＰ１２、ＡＩＰ１３、ＡＩＰ１４、ＡＩＰ１７、ＡＩＰ１８、ＡＩＰ２１、ＡＩＰ２２、ＡＩＰ３２、およびＡＩＰ３６を含む）、ＷＯ２００５／０１１６０５、ＷＯ２００５／０２３２０１、ＷＯ２００５／０５８８１５（１Ｄ４、１Ｅ１、２Ｇ１、３Ｃ４、６Ａ５、６Ａ８、６Ｂ１０、７Ｃ１０、８Ｆ６、１０Ａ１２、および１０Ａ１２Ｓ１３Ｃ４を含む）、ＷＯ２００５／０８４７０８、ＷＯ２００６／０３９８１９、ＷＯ２００６／１１８０８５、ＷＯ２００８／０４７４８６、ＷＯ２００８／０４４８２４（抗体＃１２４、＃３１、＃２８、＃４３、および＃１３７を含む）、ＷＯ２００８／１０６２００、ＷＯ２００９／０２３５６６、ＷＯ２０１２／１４９３２０（ＭＳＸ−１１００および６Ａ５を含む）、ＷＯ２０１４／００３７４２（実施例１４の抗体を含む）、ＷＯ２０１３／１７０７３５、ＷＯ２０１４／１８９３０６、ＷＯ２０１５／０６３１８７に記載される抗ＣＸＣＬ１０抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＣＸＣＬ１０抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６５２】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＣＤ１５５、例えばヒトＣＤ１５５に特異的に結合する。一実施形態では、ＣＤ１５５抗原結合部位は、クローンＳＫＩＩ．４（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）からのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含む。
【０６５３】
一実施形態では、抗原結合部位は、免疫賦活剤に特異的に結合する。一実施形態では、抗原結合部位は、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＣＸＣＲ３（例えば、ＣＸＣＲ３に対するアゴニスト活性）、ＣＤ３、およびＩＣＯＳ（例えば、ＩＣＯＳに対するアゴニスト活性）から選択される免疫活性化因子に特異的に結合する。一実施形態では、抗原結合部位は、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、およびＯＸ４０免疫賦活剤に特異的に結合する。
【０６５４】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＣＤ１３７、例えばｈＣＤ１３７に特異的に結合する。一実施形態では、ＣＤ１３７抗原結合部位は、ウレルマブ、ＢＭＳ−６６３５１３、ＰＦ−０５０８２５６６（Ｐｆｉｚｅｒ）、１Ｄ８および３Ｅ１、４Ｂ４（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ  ３０９８０９）、Ｈ４−１ＢＢ−Ｍ１２７（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  ５５２５３２）、ＢＢＫ．２（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｍ  Ｓ６２１ＰＡＢＸ）、１４５５０１（Ｌｅｉｎｃｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｂ５９１）、ＡＴＣＣ番号ＨＢ−１１２４８として寄託された細胞株によって産生された抗体（米国特許第６９７４８６３号）、もしくはＸｍＡｂ−５５９２から、またはＷＯ２０１７／０４９４５、ＷＯ２０１６／１３４３５８、ＷＯ２０１５／１７９２３６、ＷＯ２０１２／１７７７８８、ＷＯ２０１２／１４５１８３、ＷＯ２０１２／０３２４３３、ＷＯ２００９／１３５０１９、ＷＯ２００５／０３５５８４、米国特許第６９７４８６３号、ＷＯ２００４／０５５５１３、およびＷＯ２００４／０１０９４７に記載される抗ＣＤ１３７抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＣＤ１３７抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６５５】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＧＩＴＲ、例えばｈＧＩＴＲに特異的に結合する。一実施形態では、ＧＩＴＲ抗原結合部位は、ＭＫ４１６６、ＴＲＸ５１８、ＴＲＸ３８５、ＭＡＢ６８９（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ＹＧＩＴＲ７６５（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、もしくは１Ｄ８（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、またはＷＯ２０１５／１８７８３５（２８Ｆ３、３Ｃ３−１、３Ｃ３−２、２Ｇ６、８Α６、９Ｇ７−１、９Ｇ７−２、１４Ε３、１９Η８−１、１９Η８−２、１９Ｄ３、１８Ε１０、および６Ｇ１０を含む）、ＷＯ２０１５／１８４０９９（１０４２−７、３２−１５、１０３９−４５、１３３３−２１、２３１−１０３９−４５、２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｍ６Ｃ８、ｐａｂ１９６４〜ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５〜ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９〜ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、ｐａｂ２１６１、ならびに表１および２中の抗体を含む）、ＷＯ２０１５／０３１６６７（表１中のＡｂ１〜Ａｂ５９）、ＷＯ２０１５／０２６６８４（配列番号１〜６６のＣＤＲ配列を有する抗体を含む）、ＷＯ２０１３／０３９９５４（２１５５、１７１８、１６４９、１３６２、９５４、８２７、６９８、７０６、ならびに表１および３に列挙される抗体を含む）、ＷＯ２０１１／０５１７２６（１７頁に列挙されるＣＤＲ  ａ〜ｆを含有する抗体を含む）、ＷＯ２０１１／０２８６８３（抗体３６Ｅ５、６１Ｆ６、６１Ｇ６、３Ｄ６、６Ｈ６、１Ｄ８、１７Ｆ１０、３５Ｄ８、４９Ａ１、９Ｅ５、３１Ｈ６、ならびにハイブリドーマＰＴＡ−９８８９、ＰＴＡ−９８９０、ＰＴＡ−９８９１、ＰＴＡ−９８９２、ＰＴＡ−９８９３、ＰＴＡ−１０２８６、ＰＴＡ−１０２８７、ＰＴＡ−１０２８８、ＰＴＡ−１０２８９、ＰＴＡ−１０２９０、およびＰＴＡ−１０２９１からの抗体Ｒを含有する抗体を含む）、ＷＯ２００９／００９１１６（抗体２Ｆ８を含む）、ＷＯ２００７／１３３８２２（表１に列挙される抗体を含む）、ＷＯ２００６／１０５０２１（６Ｃ８、２Ｆ８、ＨｕＮ６Ｃ８−Ａｇｌｙ、ＨｕＱ６Ｃ８−Ｇｌｙ、およびＨｕＱ６Ｃ８−Ａｇｌｙを含む）、ＷＯ２００６／０５０１７２およびＷＯ２００４／０８４９４２（ＤＴＡ−１を含む）、ＷＯ０３／００６０５８（抗ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８＃ＡＦ５２４を含む）、ＷＯ２０１６／０５４６３８（ｍＡｂ  ＃１−８１、＃３−１６７、＃５−１３９、＃７−１９２、＃１０−１１６、＃１１−１２６、＃１２−４６、＃１３−１６９、＃１４−１８２、＃１５−６８、および＃１７−６０を含む）、ＷＯ２０１６／１９６７９２（６Ｇ１０、２８Ｆ３、１９Ｄ３、１８Ｅ１０、３Ｃ３、２Ｇ６、８Ａ６、９Ｇ７、１４Ｅ３、および１９Ｈ８を含む）、ＷＯ２０１７／０８７６７８（２８Ｆ３、１９Ｄ３、１８Ｅ１０、３Ｃ３−１、３Ｃ３−２、２Ｇ６、８Ａ６、９Ｇ７−１、９Ｇ７−２、１４Ｅ３、１９Ｈ８−１、１９Ｈ８−２、および６Ｇ１０を含む）に記載される抗ＧＩＴＲ抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶ���領域を含み、抗ＧＩＴＲ抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６５６】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＯＸ４０、例えばｈＯＸ４０に特異的に結合する。一実施形態では、ＯＸ４０抗原結合部位は、ＧＳＫ３１７４９９８、Ｌ１０６  ＢＤ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製品＃３４０４２０）、ＡＣＴ３５（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ＃２００７３）、ＭＯＸＲ０９１６、ＭＥＤＩ−０５６２、９Ｂ１２（Ｗｅｉｎｂｅｒｇ、Ａ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２９，５７５−５８５（２００６））、Ｍｏｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍａｙ  ２００７；４４（１２）：３１１２−３１２１に記載されるヒト化抗ＯＸ４０  Ａｂから、またはＷＯ２０１７／０７７０８５（ＳＡＰ９、ＳＡＰ２８．２、ＳＡＰ１５．３、ＳＡＰ２９−５０、ＳＡＰ２５−２９、およびＳＡＰ２９−２３、ならびに実施例４および５に記載されるヒト化バージョンを含む）、ＷＯ２０１７／０６３１６２（Ｏ３、Ｏ１９、Ｏ２１、および実施例５−表２における親和性成熟バージョンを含む、２１＃Ｈ２８Ｈ３３、２１＃Ｈ６５、２１＃Ｈ９６、２１＃ＶＨｎｅｗ−Ｌ８０、２１＃Ｈ９６−Ｌ８０を含む）、ＷＯ２０１７／０５０７２９（ＳＰ１９７を含む）、ＷＯ２０１７／０２１９１２およびＷＯ２０１７／０２１９１０（抗体１０６−２２２、ＯＸ８６、ならびにず６および７に記載される抗体を含む）、ＷＯ２０１６／２００８３６およびＷＯ２０１６／２００８３５（ＭＯＸＲ０９１６／１Ａ７．ｇｒ１  ＩｇＧ１を含む）、ＷＯ２０１６／１９６２２８（３Ｆ４、１４Ｂ６−１、１４Ｂ６−２、２３Ｈ３、１８Ｅ９、８Ｂ１１、２０Ｂ３、２０Ｃ１、６Ｅ１−１、６Ｅ１−２、１４Ａ２、１４Ａ２−１、１４Ａ２−２、Ｌ１０６、ＯＸ４０．１、ＯＸ４０．５、ＯＸ４０．８、ＯＸ４０．６、ならびにＯＸ４０．１６およびＯＸ４０．２１を含む−図１〜１０）、ＷＯ２０１６／１７９５１７（１１Ｄ４、ｐａｂ１９４９、ｐａｂ１９４９−１、ｐａｂ２０４４、ｐａｂ２１９３−１を含む、表１〜４）、ＷＯ２０１６／０５７６６７（９Ｂ１２およびＯＸ４０ｍＡｂ２４を含む）、ＷＯ２０１５／１５３５１３（３Ｃ８、１Ｄ２、１Ａ７、および配列表に記載されるそれらの変異型を含む、Ａ１Ａ７．ｇｒ１および３Ｃ８．ｇｒ．５、ならびに図１に記載される抗体を含む）、ＷＯ２０１４／１４８８９５（ＡＣＴ３５、１２Ｈ３、１２Ｈ３（図２５）、ならびにヒト化バージョンＶＬ１Ｈ１、ＶＬ１ＶＨ２、ＶＬ１ＶＨ３、ＶＬ２Ｈ１、ＶＬ２ＶＨ２、およびＶＬ２ＶＨ３（図４３および４４）、および２０Ｅ５（図２４）を含む）、ＷＯ２０１３／０６８５６３（Ａ２６［図２］を含む）、ＷＯ２０１３／０３８１９１（ＡＣＴ３５、１２Ｈ３、および１２Ｈ３を含む）、ＷＯ２０１３／０２８２３１（１１９−１２２、１１９−４３−１、１０６−２２２、および表１中の抗体を含む）、ＷＯ２０１３／００８１７１（２Ｆ８、１Ｄ４、およびＶＨ６／ＶＬ９を含むそれらの誘導体、ならびに図４および５および表６および７中の抗体を含む）、ＷＯ２０１２／０２７３２８（１１９−１２２、１１９−４３−１、Ｈｕ１０６、およびＨｕ１０６−２２２を含む）、ＷＯ２０１０／０９６４１８（Ａ２６を含む）、ＷＯ２００８／１０６１１６（表１および２中の抗体、ならびにＡ１０（ｉｎｃ  Ａ１０Ａ−Ｆ）、Ｂ６６（図１４）、Ｂ２、Ｂ２４、Ｂ３６、Ｂ３７、およびＢ３９を含む）、ならびにＷＯ２００７／０６２２４５（１１２Ｖ８（ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−７２１９）、１１２Ｙ５５（ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−７２２０）、１１２Ｙ１３１（ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−７２１８）、１１２Ｆ３２（ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−７２１７）、および１１２Ｚ５（ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−７２１６）に記載される抗ＯＸ４０抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＯＸ４０抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６５７】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＣＸＣＲ３、例えばＣＸＣＲ３に特異的に結合する。一実施形態では、ＣＸＣＲ３抗原結合部位は、ＧＳＫ３１７４９９８、またはＷＯ２０１６／２００８３６、ＷＯ２０１６／２００８３５、ＷＯ２０１６／１９６２２８、ＷＯ２０１６／１７９５１７、ＷＯ２０１６／０５７６６７、ＷＯ２０１５／１５３５１３、ＷＯ２０１４／１４８８９５、ＷＯ２０１３／０６８５６３、ＷＯ２０１３／０３８１９１、ＷＯ２０１３／０２８２３１、ＷＯ２０１３／００８１７１、ＷＯ２０１２／０２７３２８、ＷＯ２０１０／０９６４１８、ＷＯ２０１１／０７３１８０、ＷＯ２００８／１０６１１６、およびＷＯ２００７／０６２２４５に記載される抗ＣＸＣＲ３抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＣＸＣＲ３抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６５８】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＣＤ２７、例えばｈＣＤ２７に特異的に結合する。一実施形態では、ＣＤ２７抗原結合部位は、ＷＯ２０１６／１４５０８５（１Ｆ５を含む）、ＷＯ２０１５／０１６７１８（ｈＣＤ２７．１５および１Ｆ５を含む）、ＷＯ２０１４／１４０３７４（２Ｆ２、５Ｆ２４、５Ｆ３２、１０Ｆ１３、１０Ｆ３１、１１Ｆ２６、１０５２〜０１５、Ｆ２Ａ４Ｂ２、ならびにｈｚ５Ｆ２４ＶＨ＋Ｖ５Ｑ、ｈｚ５Ｆ２４ＶＬ＋Ｋ４５Ｑを含むそれらの誘導体を含む）、ＷＯ２０１３／１３８５８６（Ｃ２１７７、Ｃ２１８６、Ｃ２１９１、およびＣ２１９２、ならびに実施例８〜１２および表７〜４２における誘導体を含む）、ＷＯ２０１２／００４３６７（ｈＣＤ２７．１５／ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−１１００８を含む）、ＷＯ２０１１／１３０４３４（１Ｇ５、１Ｈ８、３Ｈ１２、３Ｈ８、２Ｇ９、１Ｆ５、３Ａ１０、２Ｃ２、ｍｓ  １Ａ４、ｍｓ  ９Ｆ４、およびｍｓ  Ｍ−Ｔ２７１を含む）、ＷＯ２０１１／０８１１６４およびＷＯ２０１０／００１９０８（ＫＭ４０２７、ＫＭ４０２８、ＫＭ４０２６、ＫＭ４０３０、ＫＭ４０３２、およびそれらの誘導体を含む）、ＷＯ２００８／０５１４２４（ＬＧ３Ａ１０およびＡＴ１２４−１を含む）に記載される抗ＣＤ２７抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＣＤ２７抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６５９】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＣＤ３、例えばｈＣＤ３に特異的に結合する。一実施形態では、ＣＤ３抗原結合部位は、ＯＫＴ３抗体、オテリキシズマブ、テプリズマブ、もしくはビジリズマブから、またはＷＯ２０１７／０１０８７４、ＷＯ２０１７／００９４４２、ＷＯ２０１６／２０４９６６、ＷＯ２０１６／１８０７２１、ＷＯ２０１６／１７９００３、ＷＯ２０１６／１１６６２６、ＷＯ２０１６／０１４９７４、ＷＯ２０１５／１０４３４６、ＷＯ２０１５／０９５３９２、ＷＯ２０１５／００１０８５、ＷＯ２０１４／０４７２３１、ＷＯ２０１３／１８８６９３、ＷＯ２０１３／１８６６１３、ＷＯ２０１３／１５８８５６、ＷＯ２０１２／１７３８１９、ＷＯ２０１２／１６２０６７、ＷＯ２００５／１１８６３５、ＷＯ２００４／１０８１５８、ＷＯ２００４／０５２３９７、ＷＯ２００４／０２４７７１、ＷＯ０１／５１６４４、ＷＯ００／０５２６８、ＷＯ９７／４４３６２、ＷＯ９３／１９１９６、ＷＯ９２／０６１９３、およびＷＯ９１／０９９６８に記載される抗ＣＤ３抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含み、抗ＣＤ３抗体の配列および特徴は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０６６０】
態様１ｂ．免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む免疫サイトカインであって、重鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ａ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインと、
ｂ）重鎖定常領域と、
ｃ）任意に、リンカー（Ｌ）と、
ｄ）ＩＬ−２サイトカインと、を含み、
軽鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ｅ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含むＶＬドメインと、
ｆ）軽鎖定常領域（ＣＬ）と、を含み、
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、およびＶＩＳＴＡ、例えば、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、およびＬＡＧ−３）、免疫調節剤（例えば、ＢＴＬＡ、ｈＨＶＥＭ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ４、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７３、ＣＤ９６、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ２００、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、およびＣＤ１５５、例えば、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＲ４、ＢＴＬＡ、ｈＶＥＭ、およびＣＳＦ１Ｒ）、ならびに免疫賦活剤（例えば、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＣＸＣＲ３（例えば、アゴニスティック抗ＣＸＣＲ３抗体）、ＣＤ２７、ＣＤ３、およびＩＣＯＳ（例えば、アゴニスティック抗ＩＣＯＳ抗体）、例えば、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、およびＯＸ４０）から選択される抗原に特異的に結合する抗原結合部位によって構成されている、免疫サイトカイン。
【０６６１】
別の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、およびＶＩＳＴＡ、例えば、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、およびＬＡＧ−３）、免疫調節剤（例えば、ＢＴＬＡ、ｈＨＶＥＭ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ４、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７３、ＣＤ９６、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ２００、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、およびＣＤ１５５、例えば、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＲ４、ＢＴＬＡ、ｈＶＥＭ、およびＣＳＦ１Ｒ）、ならびに免疫賦活剤（例えば、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＣＸＣＲ３（例えば、アゴニスティック抗ＣＸＣＲ３抗体）、ＣＤ３、およびＩＣＯＳ（例えば、アゴニスティック抗ＩＣＯＳ抗体）、例えば、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、およびＯＸ４０）から選択される抗原に特異的に結合する抗原結合部位。
【０６６２】
態様１および／または態様１ａの実施形態はいずれも、態様１ｂについて準用する。態様２〜５４の特徴または実施形態はいずれも、態様１ｂについて準用する。抗体の特徴または概念１〜７０の他の実施形態もしくは特徴はいずれも、態様１ｂについて準用する。
【０６６３】
一実施形態では、抗原結合部位は、態様１ａに記載される抗原のいずれかに特異的に結合する。
【０６６４】
一実施形態では、抗原結合部位は、配列番号１によって定義されるｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、当該ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合し、免疫サイトカインは、モチーフＸ１ＧＳＧＸ２ＹＧＸ３Ｘ４ＦＤを含むＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインを含み、式中、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３が独立して任意のアミノ酸であり、Ｘ４が存在するかまたは存在しないかのいずれかであり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得る。
【０６６５】
態様１または１ａのいずれにおいても、部分ｆ）の言い回しは、「ｆ）例えば、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＴＧＦβ、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、およびインターフェロン−αから選択されるサイトカイン」と読み取られるように置き換えられてもよい。１ｂにおいて、部分ｄ）の言い回しは、「ｄ）例えば、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＴＧＦβ、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、およびインターフェロン−αから選択されるサイトカイン」と読み取られるように置き換えられてもよい。したがって、本明細書に開示される免疫サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン活性を有するサイトカイン以外のサイトカインを含み得る。一実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−７（配列番号３３０）である。一実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−１５（配列番号３３１）である。一実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−２１（配列番号３３２）である。一実施形態では、サイトカインは、α鎖（配列番号３３６）およびβ鎖（配列番号３３７）を含むＩＬ−１２である。一実施形態では、サイトカインは、ＧＭ−ＣＳＦ（配列番号３３３）である。一実施形態では、サイトカインは、ＴＮＦα（配列番号３３５）である。一実施形態では、サイトカインは、ＴＧＦβである。一実施形態では、サイトカインは、ＣＸＣＬ９（配列番号３３８）である。一実施形態では、サイトカインは、ＣＸＣＬ１０（配列番号３３９）である。一実施形態では、サイトカインは、インターフェロン−α（配列番号３３４）である。
【０６６６】
別の実施形態では、サイトカインは、免疫刺激性サイトカインである。別の実施形態では、サイトカインは、Ｔ細胞刺激性サイトカインである。
【０６６７】
態様２．Ｘ１が、ヒドロキシル含有アミノ酸、任意選択でＴである、態様１に記載の免疫サイトカイン。
【０６６８】
態様３．Ｘ２が、塩基性アミノ酸、任意選択でＫである、態様１または態様２に記載の免疫サイトカイン。
【０６６９】
態様４．Ｘ２が、ヒドロキシル含有アミノ酸、任意選択でＳまたはＴである、態様１〜３のいずれか一項に記載の免疫サイトカイン。
【０６７０】
態様５．Ｘ３が、芳香族アミノ酸、任意選択でＷである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の免疫サイトカイン。
【０６７１】
態様６．Ｘ４が、存在しない、態様１〜５のいずれか一項に記載の免疫サイトカイン。
【０６７２】
態様７．Ｘ４が、存在する、態様１〜５のいずれか一項に記載の免疫サイトカイン。
【０６７３】
態様８．Ｘ４が、脂肪族アミノ酸、任意選択でＧである、態様７に記載の免疫サイトカイン。
【０６７４】
態様２〜７の特徴は、本明細書の上記の概念２〜７のいずれかに定義される通りであり得る。
【０６７５】
態様９．免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む免疫サイトカインであって、重鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ａ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインと、
ｂ）重鎖定常領域と、を含み、
軽鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ｃ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含むＶＬドメインと、
ｄ）軽鎖定常領域（ＣＬ）と、
ｅ）任意選択で、リンカー（Ｌ）と、
ｆ）ＩＬ−２サイトカインと、を含み、
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合する抗原結合部位によって構成され、当該抗体または断片が、配列番号２９もしくは３２のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２９もしくは３２のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含み、任意選択で、免疫サイトカインは、態様２〜８のいずれか一項に記載されるものである、免疫サイトカイン。
【０６７６】
この態様では、概念９および９ａ〜ｌ、ならびに概念９の実施形態のいずれかに記載されるＣＤＲＨ３の特徴がいずれも準用される。
【０６７７】
態様１０．免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む免疫サイトカインであって、重鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ａ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインと、
ｂ）重鎖定常領域と、を含み、
軽鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ｃ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含むＶＬドメインと、
ｄ）軽鎖定常領域（ＣＬ）と、
ｅ）任意選択で、リンカー（Ｌ）と、
ｆ）ＩＬ−２サイトカインと、を含み、
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、ｈＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗原結合部位によって構成され、
ＶＨドメインが、１２〜２０個のアミノ酸のＣＤＲＨ３を含み、ヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤ遺伝子セグメント、およびヒトＪＨ遺伝子セグメントの組換えに由来し、当該ヒトＪＨ遺伝子セグメントが、ＩＧＨＪ５（例えば、ＩＧＨＪ５＊０２）である、免疫サイトカイン。
【０６７８】
この態様では、概念１０および１０ａに記載されるＣＤＲＨ３の特徴がいずれも準用される。
【０６７９】
態様１１．ヒトＶＨ遺伝子セグメントが、ＩＧＨＶ３（例えば、ＩＧＨＶ３−９＊０１等のＩＧＨＶ３−９）である、態様１０に記載の免疫サイトカイン。
【０６８０】
この態様では、概念１１、１１ａ、および１１ｂに記載される遺伝子セグメントの特徴がいずれも準用される。
【０６８１】
態様１２．抗体または断片が、ヒトＶκ遺伝子セグメントおよびＪκ遺伝子セグメントの組換えに由来するＶＬドメインを含み、ヒトＶκ遺伝子セグメントが、ＩＧκＶ１Ｄ（例えば、ＩＧκＶ１Ｄ−３９＊０１等のＩＧκＶ１Ｄ−３９）である、態様１０または態様１１に記載の免疫サイトカイン。
【０６８２】
この態様では、概念１２、１２ａ、および１２ｂに記載される遺伝子セグメントの特徴がいずれも準用される。
【０６８３】
態様１３．免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む免疫サイトカインであって、重鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ａ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインと、
ｂ）重鎖定常領域と、を含み、
軽鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ｃ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含むＶＬドメインと、
ｄ）軽鎖定常領域（ＣＬ）と、
ｅ）任意選択で、リンカー（Ｌ）と、
ｆ）ＩＬ−２サイトカインと、を含み、
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、抗体１Ｄ０５が特異的に結合するエピトープと同一であるエピトープに特異的に結合する抗原結合部位によって構成されている、免疫サイトカインが提供される。
【０６８４】
この態様では、概念１３および１３ａ〜１３ｌのいずれかに記載されるエピトープ、アッセイ、および他の実施形態の特徴がいずれも準用される。
【０６８５】
態様１４．エピトープが、無関係のアミノ酸スキャンまたはＸ線結晶構造解析によって同定される、態様１３に記載の免疫サイトカイン。
【０６８６】
態様１５．エピトープの接触残基が、ＳＰＲによって判定される、無関係のアミノ酸スキャン、例えばアラニンスキャンにおける親和性の少なくとも１０倍の低減によって定義される、態様１４に記載の免疫サイトカイン。
【０６８７】
この態様では、概念１５の特徴がいずれも準用される。
【０６８８】
態様１６．免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む免疫サイトカインであって、重鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ａ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインと、
ｂ）重鎖定常領域と、を含み、
軽鎖が、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ｃ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含むＶＬドメインと、
ｄ）軽鎖定常領域（ＣＬ）と、
ｅ）任意選択で、リンカー（Ｌ）と、
ｆ）ＩＬ−２サイトカインと、を含み、
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、ｈＰＤ−Ｌ１への結合について抗体１Ｄ０５と競合する抗原結合部位によって構成されている、免疫サイトカイン。
【０６８９】
この態様では、概念１６ａ〜１６ｌの抗体もしくは概念１６に記載される競合アッセイおよび他の実施形態のいずれかの特徴、または概念３５の特徴がいずれも準用される。
【０６９０】
態様１７．ＶＨドメインが、配列番号２９もしくは３２のＣＤＲＨ３配列、または６個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２９もしくは３２のＣＤＲＨ３配列を含む、態様１０〜１６のいずれか一項に記載の免疫サイトカイン。
【０６９１】
この態様では、概念１７ａ〜１７ｌの抗体の特徴がいずれも準用される。
【０６９２】
態様１８．ＶＨドメインが、配列番号２７もしくは３０のＣＤＲＨ１配列、または３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号２７もしくは３０のＣＤＲＨ１配列を含む、態様１〜１７のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０６９３】
この態様では、概念１８ａ〜１８ｌの抗体の特徴がいずれも準用される。
【０６９４】
態様１９．ＶＨドメインが、配列番号２８もしくは３１のＣＤＲＨ２配列、または４個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号２８もしくは３１のＣＤＲＨ２配列を含む、態様１〜１８のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０６９５】
この態様では、概念１９ａ〜１９ｌの抗体の特徴がいずれも準用される。
【０６９６】
態様２０．ＶＨドメインが、配列番号３３のアミノ酸配列、または配列番号３３と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む（例えば、配列番号４７〜４９の重鎖配列のいずれかのＶＨドメイン配列）、態様１〜１９のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０６９７】
この態様では、概念２０ａ〜２０ｌの抗体または概念２０の実施形態のいずれかの特徴がいずれも準用される。
【０６９８】
態様２１．重鎖の第１および第２のコピーを含む、態様１〜２０のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０６９９】
態様２２．配列番号３７もしくは４０のＣＤＲＬ１配列、または３個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号３７もしくは４０のＣＲＤＬ１配列を含むＶＬドメインを含む、態様１〜２１のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０７００】
この態様では、概念２２ａ〜２２ｌの抗体の特徴がいずれも準用される。
【０７０１】
態様２３．配列番号３８もしくは４１のＣＤＲＬ２配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号３８もしくは４１のＣＲＤＬ２配列、例えば配列番号５０のＣＤＲＬ２配列を含むＶＬドメインを含む、態様１〜２２に記載の免疫サイトカイン。
【０７０２】
この態様では、概念２３ａ〜２３ｌの抗体の特徴がいずれも準用される。
【０７０３】
態様２４．配列番号３９もしくは４２のＣＤＲＬ３配列、または４個以下のアミノ酸置換を含有する配列番号３９もしくは４２のＣＲＤＬ３配列を含むＶＬドメインを含む、態様１〜２３のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０７０４】
この態様では、概念２４ａ〜２４ｌの抗体の特徴がいずれも準用される。
【０７０５】
態様２５．配列番号４３のアミノ酸配列、または配列番号４３と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％または少なくとも９０％）同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列（例えば、配列番号５０または５１の軽鎖配列中のＶＬドメイン配列）を含むＶＬドメインを含む、態様１〜２４のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０７０６】
この態様では、概念２５ａ〜２５ｌの抗体または概念２５の実施形態のいずれかの特徴がいずれも準用される。
【０７０７】
態様２６．軽鎖の第１および第２のコピーを含む、態様１〜２５のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０７０８】
態様２７．配列番号２によって定義されるようにカニクイザルＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する、態様１〜２６のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０７０９】
この態様では、概念２７の実施形態がいずれも準用される。
【０７１０】
態様２８．抗体または断片が、カッパ軽鎖を含む、態様１〜２７に記載の免疫サイトカイン。
【０７１１】
この態様では、概念２８の実施形態がいずれも準用される。
【０７１２】
態様２９．アミノ酸置換が、保存的アミノ酸置換であり、任意選択で、当該保存的置換が、
１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、
２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、
３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、
４）アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）、
５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、および
６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）から選択される６つの群（各群は、互いについて保存的置換であるアミノ酸を含有する）のうちの１つからのものである、態様９〜２８のいずれか一項に免疫サイトカイン。
【０７１３】
この態様では、概念９の実施形態がいずれも準用される。
【０７１４】
態様３０．抗体または断片が、定常領域、例えば、ＩｇＧ１定常領域を含み、任意選択で、定常領域が、配列番号２０５において定義される欠損したＩｇＧ１である、態様１〜２９のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０７１５】
この態様では、概念３０、３１、または３２の特徴または実施形態がいずれも準用される。
【０７１６】
態様３１．
Ａ）ＶＨドメインが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、
Ｂ）ＶＨドメインが配列番号３３と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号４３と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
Ｃ）ＶＨドメインが配列番号４７のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、
Ｄ）ＶＨドメインが配列番号４８のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、
Ｅ）ＶＨドメインが配列番号４９のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、
Ｆ）ＶＨドメインが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５０のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
Ｇ）ＶＨドメインが配列番号４７のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５０のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
Ｈ）ＶＨドメインが配列番号４８のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５０のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
Ｉ）ＶＨドメインが配列番号４９のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５０のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
Ｊ）ＶＨドメインが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５１のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
Ｋ）ＶＨドメインが配列番号４７のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５１のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
Ｌ）ＶＨドメインが配列番号４８のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５１のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
Ｍ）ＶＨドメインが配列番号４９のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号５１のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
Ｎ）ＶＨドメインが配列番号３３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２９８のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
Ｏ）ＶＨドメインが配列番号４７のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２９８のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
Ｐ）ＶＨドメインが配列番号４８のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２９８のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
Ｑ）ＶＨドメインが配列番号４９のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２９８のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み、
Ｒ）ＶＨドメインが配列番号５８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号６８のアミノ酸配列を含み、
Ｓ）ＶＨドメインが配列番号５８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号６８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
Ｔ）ＶＨドメインが配列番号７８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号８８のアミノ酸配列を含み、
Ｕ）ＶＨドメインが配列番号７８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号８８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
Ｖ）ＶＨドメインが配列番号９８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１０８のアミノ酸配列を含み、
Ｗ）ＶＨドメインが配列番号９８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１０８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
Ｘ）ＶＨドメインが配列番号１１８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、
Ｙ）ＶＨドメインが配列番号１１８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１２８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
Ｚ）ＶＨドメインが配列番号１５８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１６８のアミノ酸配列を含み、
ＡＡ）ＶＨドメインが配列番号１５８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１６８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ＢＢ）ＶＨドメインが配列番号１７８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１８８のアミノ酸配列を含み、
ＣＣ）ＶＨドメインが配列番号１７８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１８８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ＤＤ）ＶＨドメインが配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１４８のアミノ酸配列を含み、
ＥＥ）ＶＨドメインが配列番号１３８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１４８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ＦＦ）ＶＨドメインが配列番号２４４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２５４のアミノ酸配列を含み、
ＧＧ）ＶＨドメインが配列番号２４４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２５４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ＨＨ）ＶＨドメインが配列番号２６４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２７４のアミノ酸配列を含み、
ＩＩ）ＶＨドメインが配列番号２６４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２７４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ＪＪ）ＶＨドメインが配列番号２８４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２９４のアミノ酸配列を含み、
ＫＫ）ＶＨドメインが配列番号２８４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２９４と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ＬＬ）ＶＨドメインが配列番号２６４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号２７４のアミノ酸配列を含み、
ＭＭ）ＶＨドメインが配列番号１３８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号１４８と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ＮＮ）ＶＨドメインが配列番号３４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号３５９のアミノ酸配列を含み、
ＯＯ）ＶＨドメインが配列番号３４９と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号３５９と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、態様１〜３０のいずれか一項に記載の免疫サイトカイン。
【０７１７】
一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも７０％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも７５％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９５％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９６％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９７％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９８％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９９％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９９．５％同一である。
【０７１８】
態様３２．
Ａ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号２９９のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、
Ｂ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号２９９と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号４５と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
Ｃ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号４７のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、
Ｄ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、
Ｅ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、
Ｆ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号３４２のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、
Ｇ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号２３８のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号５０のアミノ酸配列を含み、
Ｈ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号４７のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号５０のアミノ酸配列を含み、
Ｉ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号５０のアミノ酸配列を含み、
Ｊ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号５０のアミノ酸配列を含み、
Ｋ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号３４２のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号５０のアミノ酸配列を含み、
Ｌ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号２９９のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号５０のアミノ酸配列を含み、
Ｍ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号４７のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、
Ｎ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、
Ｏ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、
Ｐ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号３４２のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、
Ｑ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号２９９のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号２９８のアミノ酸配列を含み、
Ｒ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号４７のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号２９８のアミノ酸配列を含み、
Ｓ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号２９８のアミノ酸配列を含み、
Ｔ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号２９８のアミノ酸配列を含み、
Ｕ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号３４２のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号２９８のアミノ酸配列を含み、
Ｖ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、
Ｗ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号６０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号７０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
Ｘ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号８０のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号９０のアミノ酸配列を含み、
Ｙ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号８０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号９０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
Ｚ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号１００のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号１１０のアミノ酸配列を含み、
ＡＡ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号１００と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号１１０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ＢＢ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、
ＣＣ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号１２０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号１３０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ＤＤ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号１６０のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号１７０のアミノ酸配列を含み、
ＥＥ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号１６０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号１７０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ＦＦ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号１８０のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号１９０のアミノ酸配列を含み、
ＧＧ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号１８０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号１９０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ＨＨ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号１４０のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号１５０のアミノ酸配列を含み、
ＩＩ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号１４０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号１５０と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ＪＪ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号２４６のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号２５６のアミノ酸配列を含み、
ＫＫ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号２４６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号２５６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ＬＬ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号２６６のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号２７６のアミノ酸配列を含み、
ＭＭ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号２６６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号２７６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ＮＮ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号２８６のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号２９６のアミノ酸配列を含み、
ＯＯ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号２８６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号２９６と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ＰＰ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、
ＱＱ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号１５と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号２５と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、
ＲＲ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号３５１のアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号３６１のアミノ酸配列を含み、
ＳＳ）ＶＨおよび定常領域が、配列番号３５１と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬおよびＣＬが、配列番号３６１と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む、態様１〜３１のいずれか一項に記載の免疫サイトカイン。
【０７１９】
一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも７０％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも７５％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９５％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９６％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９７％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９８％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９９％同一である。一実施形態では、アミノ酸配列は、指定の配列と少なくとも９９．５％同一である。
【０７２０】
態様３３．抗原結合部位が、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ＩＬ−２サイトカインが、高親和性（αβγ）ＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）に結合する、態様１〜３２のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０７２１】
一実施形態では、抗原結合部位は、ＩＬ−２サイトカインがαβγ  ＩＬ−２Ｒに結合するのと同時にＰＤ−Ｌ１に結合する。一実施形態では、抗原結合部位は、ＩＬ−２サイトカインがαβγ  ＩＬ−２Ｒに結合するのと連続してＰＤ−Ｌ１に結合する。一実施形態では、ＩＬ−２サイトカインはさらに、中間体（βγ）ＩＬ−２Ｒに結合する。
【０７２２】
態様３４．免疫サイトカインが、Ｔ細胞のＰＤ−Ｌ１媒介性抑制を阻害することができる、態様１〜３３のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０７２３】
一実施形態では、免疫サイトカインは、Ｔ細胞のＰＤ−Ｌ１媒介性抑制を阻害する。一実施形態では、免疫サイトカインは、インビトロアッセイにおいてＴ細胞のＰＤ−Ｌ１媒介性抑制を阻害する。別の実施形態では、抗原結合部位は、概念５１または５２の特徴または実施形態のいずれかを有する。
【０７２４】
別の実施形態では、抗原結合部位は、ＰＤ−Ｌ１に対するＰＤ−１の結合を遮断または阻害する。一実施形態では、抗原結合部位は、ＰＤ−Ｌ１に対するＣＤ８０の結合を遮断または阻害する。
【０７２５】
態様３５．免疫サイトカインが、ＩＬ−２Ｒ媒介性Ｔ細胞活性化を増加させることができる、態様１〜３４のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０７２６】
一実施形態では、免疫サイトカインは、ＩＬ−２Ｒ媒介性Ｔ細胞活性化を増加させる。一実施形態では、免疫サイトカインは、インビトロアッセイにおけるＩＬ−２Ｒ媒介性Ｔ細胞活性化を増加させる。
【０７２７】
態様３６．Ｔ細胞の抑制またはＩＬ−２Ｒ媒介性Ｔ細胞活性化の増加が、直接ＣＤ３／ＣＤ２８刺激、超抗原刺激のいずれかによって同時刺激を提供するか、またはＴ細胞応答を誘導することができる細胞との共インキュベーションによって同時刺激を提供するアッセイにおける、ＩＦＮγ、ＩＬ−２、ＣＤ２５、またはＴ細胞の増殖のうちの１つ以上の増加によって測定される、態様３４または態様３５に記載の免疫サイトカイン。
【０７２８】
測定は、任意の好適な技術を用いて実施され得る。例えば、ＥＬＩＳＡ、ＨＴＲＦ、ＢＲＤＵ取り込み（増殖）、電気化学発光（ＥＣＬ）、またはフローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）を用いて測定を行うことができる。これらの技術は、当業者に周知であり、本明細書において他の箇所に記載されている。一実施形態では、アッセイは、フローサイトメトリーである。一実施形態では、アッセイは、ＥＬＩＳＡである。一実施形態では、アッセイは、ＨＴＲＦである。
【０７２９】
この態様において、態様３６が態様３４に従属する場合に、態様３６の特徴または実施形態がいずれも準用される。
【０７３０】
態様３６が態様３５に従属する場合に、一実施形態では、ＩＬ−２Ｒ媒介性Ｔ細胞活性化の増加は、ＩＦＮγおよびＣＤ２５のうちの一方または両方の増加によって測定される。
【０７３１】
態様３６が態様３５に従属する場合、一実施形態では、同時刺激は、直接ＣＤ３／ＣＤ２８刺激によって提供される。
【０７３２】
態様３６が態様３５に従属する場合、一実施形態では、同時刺激は、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌエンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）等のスーパー抗原によって提供される。
【０７３３】
態様３６が態様３５に従属する場合、一実施形態では、アッセイは、Ｔ細胞応答を誘導することができる細胞との共インキュベーションによって同時刺激を提供する。かかる細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、例えば、単球、Ｂ細胞、または樹状細胞であり得る。一実施形態では、アッセイは、ＡＰＣとの共インキュベーションによって同時刺激を提供する。一実施形態では、アッセイは、単球との共インキュベーションによる同時刺激を提供する。一実施形態において、アッセイは、Ｂ細胞との共インキュベーションによって共刺激を提供する。一実施形態において、アッセイは、樹状細胞との共インキュベーションによって共刺激を提供する。
【０７３４】
態様３７．リンカー（Ｌ）を含まない、態様１〜３６のいずれかに記載の免疫サイトカイン、またはｄ）のＣＬが、ｆ）のサイトカインに直接融合している、請求項１〜３６のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０７３５】
一実施形態では、軽鎖または重鎖のＣＬは、サイトカインに直接融合している。
【０７３６】
態様１ｂの一実施形態では、ｂ）のＣＬは、ｄ）のサイトカインに直接融合している。
【０７３７】
態様３８．リンカーが、１〜２０アミノ酸長のペプチドリンカーである、態様１〜３７のいずれか一項に記載の免疫サイトカイン。
【０７３８】
一実施形態では、リンカーは、１〜１５アミノ酸長のペプチドリンカーである。一実施形態では、リンカーは、１〜１０アミノ酸長のペプチドリンカーである。一実施形態では、リンカーは、１〜５アミノ酸長のペプチドリンカーである。
【０７３９】
一実施形態では、リンカーは、化学リンカーであってもよい。組換え融合タンパク質の場合、リンカーは、異なる免疫サイトカイン部分のためのコード領域間でのフレーム中に位置する核酸配列によってコードされる。合成タンパク質の場合、リンカーペプチドは、合成中に導入される。
【０７４０】
リンカーは、当業者に周知である。例えば、Ｄｅｎａｒｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，４（１０）：２４８３−９０、Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１０（４）：５５３−７、およびＺｉｍｍｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｎｕｃｌ．「Ｍｅｄ．」Ｂｉｏｌ．，２６（８）：９４３−５０中の記載を参照されたい（その中に記載される修飾は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０７４１】
態様３９．リンカーペプチドが、ポリ−Ｇまたは（Ｇ４Ｓ）Ｘから選択され、式中、Ｘが、１、２、３、または４である、態様３８に記載の免疫サイトカイン。
【０７４２】
他の実施形態では、リンカーは、ＳＴＧ、ＧＳＴＧ、ＲＳ、ＴＶＡＡＰＳ、ＧＧＧＧＳ、ＧＳＴＶＡＡＰＳ、ＴＶＡＡＰＳＧＳ、またはＧＳＴＶＡＡＰＳＧＳから選択され得る。別の実施形態では、リンカーは、Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ａｓｐ（イヌのカッパ定常領域のＮ末端に由来する）である。別の実施形態では、リンカーは、ＧＧＮＧＴまたはＹＧＮＧＴである。
【０７４３】
態様４０．ＩＬ−２サイトカインが、ヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）またはその変異型である、態様１〜３９のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０７４４】
ＩＬ−２変異型は、態様１に記載される通りである。
【０７４５】
本明細書に記載される非ＩＬ−２サイトカイン（態様１に記載される非ＩＬ−２サイトカイン、例えば、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、およびインターフェロン−αから選択されるものを含む）のいずれかであり得る変異型サイトカインもまた提供される。変異型ＩＬ−２サイトカインの定義は、例えば、態様１においてＩＬ−２について記載されるＮ末端欠失のいずれかを含む、本明細書に記載される他のサイトカイン（免疫刺激性サイトカインおよびＴ細胞刺激性サイトカインを含む）について準用される。
【０７４６】
態様４１．ｈＩＬ−２が、配列番号３０１のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、態様４０に記載の免疫サイトカイン。
【０７４７】
態様４２．ｈＩＬ−２が、Ｎ末端における修飾、任意選択で１〜１０個のアミノ酸の欠失を含むＩＬ−２を含む、態様４０に記載の免疫サイトカイン。
【０７４８】
本態様で使用される場合、本明細書に記載されるサイトカイン（態様１に記載される非ＩＬ−２サイトカイン、例えば、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、およびインターフェロン−αから選択されるものを含む）のいずれかのＮ末端における修飾は、１つ以上（例えば、１〜１０、例えば、１〜５）のアミノ酸置換、欠失、または付加を指す。
【０７４９】
一実施形態では、修飾は、サイトカインのＮ末端における１つ以上（例えば、１〜１０、例えば、１〜５）のアミノ酸置換である。置換は、例えば、概念９、概念２９、または態様２９において定義されるような保存的置換であり得る。一実施形態では、修飾は、欠失である。別の実施形態では、修飾は、Ｎ末端欠失、例えば、概念９および態様１に記載される欠失のいずれかである。一実施形態では、修飾（例えば、１〜１０個のアミノ酸の欠失）は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２サイトカインの最後の５０個のアミノ酸の中である。一実施形態では、修飾（例えば、１〜１０個のアミノ酸の欠失）は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２サイトカインの最後の３０個のアミノ酸の中である。一実施形態では、修飾（例えば、１〜１０個のアミノ酸の欠失）は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２サイトカインの最後の２５個のアミノ酸の中である。一実施形態では、修飾（例えば、１〜１０個のアミノ酸の欠失）は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２サイトカインの最後の２０個のアミノ酸の中である。一実施形態では、修飾（例えば、１〜１０個のアミノ酸の欠失）は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２サイトカインの最後の１５個のアミノ酸の中である。一実施形態では、修飾（例えば、１〜１０個のアミノ酸の欠失）は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２サイトカインの最後の１０個のアミノ酸の中である。
【０７５０】
一実施形態では、修飾は、サイトカインのＮ末端の最後の１０個のアミノ酸の中からの１〜９個のアミノ酸の欠失、例えば、サイトカインのＮ末端の最後の１〜９個のアミノ酸欠失である。一実施形態では、修飾は、サイトカインのＮ末端の最後の１０個のアミノ酸の中からの１〜８個のアミノ酸の欠失、例えば、サイトカインのＮ末端の最後の１〜８個のアミノ酸欠失である。一実施形態では、修飾は、サイトカインのＮ末端の最後の１０個のアミノ酸の中からの１〜７個のアミノ酸の欠失、例えば、サイトカインのＮ末端の最後の１〜７個のアミノ酸欠失である。一実施形態では、修飾は、サイトカインのＮ末端の最後の１０個のアミノ酸の中からの１〜６個のアミノ酸の欠失、例えば、サイトカインのＮ末端の最後の１〜６個のアミノ酸欠失である。一実施形態では、修飾は、サイトカインのＮ末端の最後の１０個のアミノ酸の中からの１〜５個のアミノ酸の欠失、例えば、サイトカインのＮ末端の最後の１〜５個のアミノ酸欠失である。一実施形態では、修飾は、サイトカインのＮ末端の最後の１０個のアミノ酸の中からの１〜４個のアミノ酸の欠失、例えば、サイトカインのＮ末端の最後の１〜４個のアミノ酸欠失である。一実施形態では、修飾は、サイトカインのＮ末端の最後の１０個のアミノ酸の中からの１〜３個のアミノ酸の欠失、例えば、サイトカインのＮ末端の最後の１〜３個のアミノ酸欠失である。一実施形態では、修飾は、サイトカインのＮ末端の最後の１０個のアミノ酸の中からの１または２個のアミノ酸の欠失、例えば、サイトカインのＮ末端の最後の１または２個のアミノ酸欠失である。一実施形態では、修飾は、サイトカインのＮ末端の最後の１０個のアミノ酸の中からの１個のアミノ酸の欠失、例えば、サイトカインのＮ末端の最後の１個のアミノ酸欠失である。特定の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ−２サイトカイン、例えば、ヒトＩＬ−２サイトカインである。
【０７５１】
一実施形態では、欠失は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２サイトカイン、例えば、ヒトＩＬ−２サイトカインのＮ末端から９個目のアミノ酸のものである。一実施形態では、欠失は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２サイトカイン、例えば、ヒトＩＬ−２サイトカインのＮ末端から８および９個目のアミノ酸のものである。一実施形態では、欠失は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２サイトカイン、例えば、ヒトＩＬ−２サイトカインのＮ末端から７、８、および９個目のアミノ酸のものである。一実施形態では、欠失は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２サイトカイン、例えば、ヒトＩＬ−２サイトカインのＮ末端から６〜９個目のアミノ酸のものである。一実施形態では、欠失は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２サイトカイン、例えば、ヒトＩＬ−２サイトカインのＮ末端から４〜９個目のアミノ酸のものである。一実施形態では、欠失は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２サイトカイン、例えば、ヒトＩＬ−２サイトカインのＮ末端から３〜９個目のアミノ酸のものである。一実施形態では、欠失は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２サイトカイン、例えば、ヒトＩＬ−２サイトカインのＮ末端から２〜９個目のアミノ酸のものである。一実施形態では、欠失は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２サイトカイン、例えば、ヒトＩＬ−２サイトカインのＮ末端から２〜６個目のアミノ酸のものである。一実施形態では、欠失は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２サイトカイン、例えば、ヒトＩＬ−２サイトカインのＮ末端から３〜７個目のアミノ酸のものである。一実施形態では、欠失は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−２サイトカイン、例えば、ヒトＩＬ−２サイトカインのＮ末端から４〜８個目のアミノ酸のものである。本明細書の上記の態様１に記載される欠失はいずれも、本態様の非ＩＬ−２サイトカインについて準用され得る。
【０７５２】
態様４２ａ．態様４２の態様または特徴のいずれかのＮ末端修飾を含む、変異型ｈＩＬ−２。態様４２ａの一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、精製された変異型ｈＩＬ−２である。態様４２ａの別の実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、単離および精製された変異型ｈＩＬ−２である。
【０７５３】
態様４２ｂ．態様４２の態様または特徴のいずれかのＮ末端修飾を含む、ＩＬ−７、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、およびインターフェロン−αから選択される、変異型サイトカイン。態様４２ａの一実施形態では、変異型サイトカインは、精製された変異型サイトカインである。態様４２ａの別の実施形態では、変異型サイトカインは、単離および精製された変異型サイトカインである。
【０７５４】
態様４３．ｈＩＬ−２が、配列番号３０３〜３２３から選択されるＮ末端配列を含む変異型ＩＬ−２を含む、態様４０または態様４２に記載の免疫サイトカイン。
【０７５５】
態様４３ａ．配列番号３０３〜３２３から選択されるＮ末端配列を含む、変異型ｈＩＬ−２。
【０７５６】
態様４３ａの一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、精製された変異型ｈＩＬ−２である。態様４３ａの別の実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、単離および精製された変異型ｈＩＬ−２である。一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、配列番号３２４、５１７、および５１８から選択されるＩＬ−２配列に直接融合した、配列番号３０３〜３２３から選択されるＮ末端配列を含む（またはそれからなる）。
【０７５７】
態様４４．ｈＩＬ−２変異型が、
１）Ｄ２０（例えば、Ｄ２０Ｔ）、
２）Ｒ３８（例えば、Ｒ３８Ｗ、Ｒ３８Ａ、またはＲ３８Ｑ）、
３）Ｆ４２（例えば、Ｆ４２ＡまたはＦ４２Ｋ）、
４）Ｙ４５（例えば、Ｙ４５Ａ）、
５）Ｅ６２（例えば、Ｅ６２Ａ）、
６）Ｎ８８（例えば、Ｎ８８Ｒ）、
７）Ｃ１２５（例えば、Ｃ１２５Ｓ）、
８）Ｑ１２６（例えば、Ｑ１２６Ｗ）、または
９）Ｒ３８およびＦ４２（例えば、Ｒ３８ＷおよびＦ４２ＫもしくはＲ３８ＡおよびＦ４２Ａ）、から独立して選択される１つ以上（例えば、１〜５、例えば、１または２）の変異を含み、
残基の付番は、ヒト野生型ＩＬ−２配列、配列番号３０１を参照して定義される、態様４０、４２、または４３のいずれか一項に記載の免疫サイトカイン。
【０７５８】
態様４４ａ．ｈＩＬ−２変異型が、
１）Ｄ２０（例えば、Ｄ２０Ｔ）、
２）Ｒ３８（例えば、Ｒ３８Ｗ、Ｒ３８Ａ、またはＲ３８Ｑ）、
３）Ｆ４２（例えば、Ｆ４２ＡまたはＦ４２Ｋ）、
４）Ｙ４５（例えば、Ｙ４５Ａ）、
５）Ｅ６２（例えば、Ｅ６２Ａ）、
６）Ｎ８８（例えば、Ｎ８８Ｒ）、
７）Ｃ１２５（例えば、Ｃ１２５Ｓ）、
８）Ｑ１２６（例えば、Ｑ１２６Ｗ）、または
９）Ｒ３８およびＦ４２（例えば、Ｒ３８ＷおよびＦ４２ＫもしくはＲ３８ＡおよびＦ４２Ａ）、から独立して選択される１つ以上（例えば、１〜５、例えば、１または２）の変異を含み、
残基の付番は、ヒト野生型ＩＬ−２配列、配列番号３０１を参照して定義される、態様４２ａまたは４３ａのいずれか一項に記載の免疫サイトカイン。
【０７５９】
一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、Ｒ３８（例えば、Ｒ３８Ｗ、Ｒ３８Ａ、またはＲ３８Ｑ、例えば、Ｒ３８Ａ）変異を含む（またはそれからなる）。一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、Ｆ４２（例えば、Ｆ４２ＡまたはＦ４２Ｋ、例えば、Ｆ４２Ａ）変異を含む（またはそれからなる）。一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、Ｙ４５（例えば、Ｙ４５Ａ）変異を含む（またはそれからなる）。一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、Ｅ６２（例えば、Ｅ６２Ａ）変異を含む（またはそれからなる）。
【０７６０】
一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、Ｒ３８（例えば、Ｒ３８Ｗ、Ｒ３８Ａ、またはＲ３８Ｑ、例えば、Ｒ３８Ａ）変異、およびＦ４２（例えば、Ｆ４２ＡまたはＦ４２Ｋ、例えば、Ｆ４２Ａ）変異を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、Ｒ３８（例えば、Ｒ３８Ｗ、Ｒ３８Ａ、またはＲ３８Ｑ、例えば、Ｒ３８Ａ）変異、およびＹ４５（例えば、Ｙ４５Ａ）変異を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、Ｒ３８（例えば、Ｒ３８Ｗ、Ｒ３８Ａ、またはＲ３８Ｑ、例えば、Ｒ３８Ａ）変異、およびＥ６２（例えば、Ｅ６２Ａ）を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、Ｙ４５（例えば、Ｙ４５Ａ）変異およびＥ６２（例えば、Ｅ６２Ａ）を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、Ｆ４２（例えば、Ｆ４２ＡまたはＦ４２Ｋ、例えば、Ｆ４２Ａ）変異、およびＥ６２（例えば、Ｅ６２Ａ）変異を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、Ｆ４２（例えば、Ｆ４２ＡまたはＦ４２Ｋ、例えば、Ｆ４２Ａ）変異、およびＹ４５（例えば、Ｙ４５Ａ）変異を含む（またはそれらからなる）。
【０７６１】
一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、Ｒ３８（例えば、Ｒ３８Ｗ、Ｒ３８Ａ、またはＲ３８Ｑ、例えば、Ｒ３８Ａ）変異、Ｆ４２（例えば、Ｆ４２ＡまたはＦ４２Ｋ、例えば、Ｆ４２Ａ）変異、およびＹ４５（例えば、Ｙ４５Ａ）変異を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、Ｒ３８（例えば、Ｒ３８Ｗ、Ｒ３８Ａ、またはＲ３８Ｑ、例えば、Ｒ３８Ａ）変異、Ｆ４２（例えば、Ｆ４２ＡまたはＦ４２Ｋ、例えば、Ｆ４２Ａ）変異、およびＥ６２（例えば、Ｅ６２Ａ）変異を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、Ｒ３８（例えば、Ｒ３８Ｗ、Ｒ３８Ａ、またはＲ３８Ｑ、例えば、Ｒ３８Ａ）変異、Ｙ４５（例えば、Ｙ４５Ａ）変異、およびＥ６２（例えば、Ｅ６２Ａ）変異を含む（またはそれらからなる）。
【０７６２】
一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、Ｒ３８（例えば、Ｒ３８Ｗ、Ｒ３８Ａ、またはＲ３８Ｑ、例えば、Ｒ３８Ａ）変異、Ｆ４２（例えば、Ｆ４２ＡまたはＦ４２Ｋ、例えば、Ｆ４２Ａ）変異、Ｙ４５（例えば、Ｙ４５Ａ）変異、およびＥ６２（例えば、Ｅ６２Ａ）変異を含む（またはそれらからなる）。一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ、およびＥ６２Ａ変異を含む（またはそれらからなる）。
【０７６３】
他のｈＩＬ−２変異は、当業者に既知である。一実施形態では、ｈＩＬ−２変異は、ＷＯ２０１２／０６２２２８（請求項２〜７を参照されたい、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものである。一実施形態では、ｈＩＬ−２変異は、ＷＯ１９９９／６０１２８（請求項６、７、８、１０、１１、および１２を参照されたい、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものである。一実施形態では、ｈＩＬ−２変異は、ＷＯ１９９３／２０８４９（請求項４および５を参照されたい、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものである。一実施形態では、ｈＩＬ−２変異は、ＷＯ２００３／０１５６９７（請求項７および１０を参照されたい、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものである。一実施形態では、ｈＩＬ−２変異は、ＷＯ２００５／００７１２１（請求項９〜１４を参照されたい、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものである。一実施形態では、ｈＩＬ−２変異は、ＷＯ２００５／０８６７９８（請求項５〜１０を参照されたい、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものである。一実施形態では、ｈＩＬ−２変異は、ＷＯ２００５／０８６７５１（請求項５〜９を参照されたい、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものである。一実施形態では、ｈＩＬ−２変異は、ＷＯ２００９／０６１８５３（請求項５を参照されたい、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものである。一実施形態では、ｈＩＬ−２変異は、ＷＯ２０１２／０８８４４６（請求項３〜８および１１〜１３を参照されたい、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものである。一実施形態では、ｈＩＬ−２変異は、ＷＯ２０１２／１０７４１７（請求項２、４、６、および９を参照されたい、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものである。一実施形態では、ｈＩＬ−１変異は、ＷＯ２０１２／１１９０９３（請求項１〜７を参照されたい、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものである。一実施形態では、ｈＩＬ−３変異は、ＷＯ２０１５／１６４８１５（請求項３〜１９を参照されたい、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものである。
【０７６４】
これらの態様では、残基付番が、ヒト野生型ＩＬ−２配列を参照して定義される場合、例えば、サイトカインのＮ末端からの単一のアミノ酸欠失があり、請求項がＮ８８アミノ酸変異を記載する場合には、単一のアミノ酸欠失を有する変異型ＩＬ−２について、Ｎは事実上、８７位におけるものであることになる。サイトカインのＮ末端から３個のアミノ酸が欠失しており、変異がＦ４２Ａである場合、変異される位置は事実上、変異型配列中のＦ３９であることになる。
【０７６５】
態様４５．ｈＩＬ−２が、配列番号３２４のアミノ酸配列に融合した、配列番号２４２〜２６２から選択されるＮ末端配列からなる変異型ＩＬ−２を含む、態様４０に記載の免疫サイトカイン。
【０７６６】
一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、配列番号３２４、５１７、および５１８から選択されるアミノ酸配列に融合した、配列番号３０３〜３２３から選択されるＮ末端配列を含む（またはそれからなる）。
【０７６７】
一実施形態では、免疫サイトカインは、１Ｄ０５  Ｄ１−９  ＩＣＫである。一実施形態では、免疫サイトカインは、１Ｄ０５  Ｄ１−９である。一実施形態では、免疫サイトカインは、１Ｄ０５  Ｄ９−２  ＩＣＫである。一実施形態では、免疫サイトカインは、１Ｄ０５  Ｄ９−７  ＩＣＫである。
【０７６８】
態様４５ａ．配列番号３２４のアミノ酸配列に融合した、配列番号３０３〜３２３から選択されるＮ末端配列を含む、変異型ｈＩＬ−２。
【０７６９】
態様４５ａの一実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、精製された変異型ｈＩＬ−２である。態様４４ａの別の実施形態では、変異型ｈＩＬ−２は、単離および精製された変異型ｈＩＬ−２である。
【０７７０】
態様４６．ＩＬ−２サイトカインが、遊離ＩＬ−２よりも小さい効力で、例えば、細胞増殖アッセイにおいて測定した場合、例えば、２０ｐＭ超、５０ｐＭ超、または１００ｐＭ超のＥＣ５０で、高親和性（αβγ）ＩＬ−２受容体に結合する、態様１〜４５のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０７７１】
遊離ＩＬ−２は、細胞増殖アッセイにおいてαβγ（高親和性）受容体に対して約１０ｐＭの効力を有する。本明細書で使用される場合、ＥＣ５０は、ＩＬ２Ｒの最大限の活性化の５０％をもたらすための有効濃度を指す。ＥＣ５０が高くなるほど、物質の効力は低くなり、したがって、１ｐＭのＥＣ５０を有する物質は、１ｎＭのＥＣ５０を有する物質よりも強力である。α鎖、β鎖、およびγ鎖の配列は、それぞれ配列番号３２７、３２８、および３２９に提供される。
【０７７２】
一実施形態では、ＩＬ−２サイトカインは、５ｐＭ〜２０ｐＭの範囲のＥＣ５０を有する。一実施形態では、ＥＣ５０は、５ｐＭ〜１ｎＭの範囲内である。一実施形態では、ＥＣ５０は、５ｐＭ〜７５０ｐＭ、５ｐＭ〜５００ｐＭ、５ｐＭ〜２５０ｐＭ、または５ｐｍ〜１００ｐＭ、例えば、５ｐＭ〜５０ｐＭの範囲内である。
【０７７３】
一実施形態では、ＥＣ５０は、１０ｐＭ〜１ｎＭの範囲内である。一実施形態では、ＥＣ５０は、１０ｐＭ〜７５０ｐＭ、１０ｐＭ〜５００ｐＭ、１０ｐＭ〜２５０ｐＭ、または１０ｐｍ〜１００ｐＭ、例えば、１０ｐＭ〜５０ｐＭまたは１０ｐＭ〜３０ｐＭの範囲内である。
【０７７４】
一実施形態では、ＥＣ５０は、２０ｐＭ〜１ｎＭの範囲内である。一実施形態では、ＥＣ５０は、２０ｐＭ〜７５０ｐＭ、２０ｐＭ〜５００ｐＭ、２０ｐＭ〜２５０ｐＭ、または２０ｐｍ〜１００ｐＭ、例えば、２０ｐＭ〜５０ｐＭの範囲内である。
【０７７５】
別の実施形態では、ＩＬ−２サイトカインは、５０ｐＭ〜１ｎＭの範囲のＥＣ５０を有する。一実施形態では、ＥＣ５０は、５０ｐＭ〜７５０ｐＭ、５０ｐＭ〜５００ｐＭ、５０ｐＭ〜２５０ｐＭ、または５０ｐｍ〜１００ｐＭ、例えば、５０ｐＭ〜７５ｐＭの範囲内である。別の実施形態では、ＩＬ−２サイトカインは、１００ｐＭ〜１ｎＭの範囲のＥＣ５０を有する。一実施形態では、ＥＣ５０は、１００ｐＭ〜８００ｐＭ、１００ｐＭ〜７００ｐＭ、１００ｐＭ〜６００ｐＭ、または１００ｐｍ〜５００ｐＭ、例えば、１００ｐＭ〜４００ｐＭの範囲内である。別の実施形態では、ＩＬ−２サイトカインは、１００ｐｍ〜３００ｐＭの範囲のＥＣ５０を有する。別の実施形態では、ＩＬ−２サイトカインは、１００ｐｍ〜２００ｐＭの範囲のＥＣ５０を有する。
【０７７６】
別の実施形態では、ＥＣ５０は、５ｐＭ超である。別の実施形態では、ＥＣ５０は、１０ｐＭ超である。別の実施形態では、ＥＣ５０は、２０ｐＭ超である。別の実施形態では、ＥＣ５０は、３０ｐＭ超、４０ｐＭ超、５０ｐＭ超、６０ｐＭ超、または７０ｐＭ超である。別の実施形態では、ＥＣ５０は、１００ｐＭ超、１２５ｐＭ超、１５０ｐＭ超、１７５ｐＭ超、または２００ｐＭ超である。別の実施形態では、ＥＣ５０は、２５０ｐＭ超、３００ｐＭ超、３５０ｐＭ超、４００ｐＭ超である。別の実施形態では、ＥＣ５０は、５００ｐＭ超、６００ｐＭ超、７００ｐＭ超、または８００ｐＭ超である。
【０７７７】
一実施形態では、ＥＣ５０は、５ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、１ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、８００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、７００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、６００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、５００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、４００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、３００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、２００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、１００ｐＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、５０ｐＭ未満である。
【０７７８】
αβγ  ＩＬ−２Ｒに対する免疫サイトカインの効力は、細胞増殖アッセイにおいて測定され得、これは当業者には周知であり、本明細書の以下の実施例においてさらに詳述される（実施例１３および図１２を参照されたい）。
【０７７９】
態様４７．ＩＬ−２サイトカインが、遊離ＩＬ−２よりも小さい効力で、例えば、細胞増殖アッセイにおいて測定した場合、例えば、１ｎＭ超、５ｎＭ超、または１０ｎＭ超のＥＣ５０で、中親和性（βγ）ＩＬ−２受容体に結合する、態様１〜４６のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０７８０】
遊離ＩＬ−２は、細胞増殖アッセイにおいてβγ（中親和性）受容体に対して約１００ｐＭの効力を有する。本明細書で使用される場合、ＥＣ５０は、ＩＬ−２Ｒの最大限の活性化の５０％をもたらすための有効濃度を指す。ＥＣ５０が高くなるほど、物質の効力は低くなり、したがって、１ｐＭのＥＣ５０を有する物質は、１ｎＭのＥＣ５０を有する物質よりも強力である。α鎖、β鎖、およびγ鎖の配列は、それぞれ配列番号３２７、３２８、および３２９に提供される。
【０７８１】
一実施形態では、ＥＣ５０は、１〜１００ｎＭの範囲内である。一実施形態では、ＥＣ５０は、１０ｎＭ〜１００ｎＭの範囲内である。一実施形態では、ＥＣ５０は、２０ｎＭ〜１００ｎＭの範囲内である。別の実施形態では、ＩＬ−２サイトカインは、３０ｎＭ〜１００ｎＭ、４０ｎＭ〜１００ｎＭ、５０ｎＭ〜１００ｎＭの範囲のＥＣ５０を有する。一実施形態では、ＥＣ５０は、５０ｎＭ〜１００ｎＭ、６０ｎＭ〜１００ｎＭ、７０ｎＭ〜１００ｎＭの範囲内である。
【０７８２】
一実施形態では、ＥＣ５０は、１〜５０ｎＭの範囲内である。一実施形態では、ＥＣ５０は、１０ｎＭ〜５０ｎＭの範囲内である。一実施形態では、ＥＣ５０は、２０ｎＭ〜５０ｎＭの範囲内である。別の実施形態では、ＩＬ−２サイトカインは、３０ｎＭ〜５０ｎＭまたは４０ｎＭ〜５０ｎＭの範囲のＥＣ５０を有する。
【０７８３】
一実施形態では、ＥＣ５０は、１〜１０ｎＭの範囲内である。一実施形態では、ＥＣ５０は、１〜２０ｎＭの範囲内である。一実施形態では、ＥＣ５０は、１〜３０ｎＭの範囲内である。一実施形態では、ＥＣ５０は、１ｎＭ〜９ｎＭの範囲内である。一実施形態では、ＥＣ５０は、１ｎＭ〜８ｎＭの範囲内である。別の実施形態では、ＩＬ−２サイトカインは、１ｎＭ〜７ｎＭ、１ｎＭ〜６ｎＭ、または１ｎＭ〜５ｎＭの範囲のＥＣ５０を有する。
【０７８４】
別の実施形態では、ＥＣ５０は、０．５ｎＭ超、０．６ｎＭ超、０．７ｎＭ超、０．８ｎＭ超、または０．９ｎＭ超である。別の実施形態では、ＥＣ５０は、１ｎＭ超、１．２５ｎＭ超、１．５ｎＭ超、１．７５ｎＭ超、または２ｎＭ超である。別の実施形態では、ＥＣ５０は、２．５ｎＭ超、３ｎＭ超、３．５ｎＭ超、４ｎＭ超である。別の実施形態では、ＥＣ５０は、５ｎＭ超、６ｎＭ超、７ｎＭ超、または８ｎＭ超である。別の実施形態では、ＥＣ５０は、１ｎＭ超である。
【０７８５】
一実施形態では、ＥＣ５０は、１０ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、２０ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、３０ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、４０ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、５０ｎＭ未満である。
【０７８６】
一実施形態では、ＥＣ５０は、１００ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、２００ｎＭ未満である。一実施形態では、ＥＣ５０は、３００ｎＭ未満である。
【０７８７】
別の実施形態では、ＥＣ５０は、７５ｎＭ未満または５０ｎＭ未満である。
【０７８８】
一実施形態では、ＩＬ−２は、細胞増殖アッセイにおいてβγ  ＩＬ−２Ｒに対する検出可能な効力を示さない。
【０７８９】
βγ  ＩＬ−２Ｒに対する免疫サイトカインの効力は、細胞増殖アッセイにおいて測定され得、これは当業者には周知であり、本明細書の以下の実施例においてさらに詳述される（実施例１３および図１２を参照されたい）。
【０７９０】
態様４８．ＩＬ−２が、中親和性（βγ）ＩＬ−２受容体よりも高親和性（αβγ）ＩＬ−２受容体に優先的に結合する、態様１〜４７のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０７９１】
態様４９．高親和性（αβγ）ＩＬ−２受容体に対するＩＬ−２の効力：中親和性（βγ）ＩＬ−２受容体に対するＩＬ−２の効力の比が、少なくとも２：１である、態様４８に記載の免疫サイトカイン。
【０７９２】
一実施形態では、この比は、少なくとも３：１である。一実施形態では、この比は、少なくとも４：１である。一実施形態では、この比は、少なくとも５：１である。一実施形態では、この比は、少なくとも７．５：１である。一実施形態では、この比は、少なくとも１０：１である。一実施形態では、この比は、少なくとも１２．５：１である。一実施形態では、この比は、少なくとも１５：１である。一実施形態では、この比は、少なくとも１７．５：１である。一実施形態では、この比は、少なくとも２０：１である。
【０７９３】
別の実施形態では、この比は、少なくとも５０：１である。別の実施形態では、この比は、少なくとも７５：１である。別の実施形態では、この比は、少なくとも１００：１である。別の実施形態では、この比は、少なくとも２５０：１である。別の実施形態では、この比は、少なくとも５００：１である。別の実施形態では、この比は、少なくとも７５０：１である。別の実施形態では、この比は、少なくとも１０００：１である。
【０７９４】
別の実施形態では、この比は、少なくとも１２５０：１である。別の実施形態では、この比は、少なくとも１５００：１である。別の実施形態では、この比は、少なくとも１７５０：１である。別の実施形態では、この比は、少なくとも２０００：１である。
【０７９５】
態様５０．抗原結合部位が、５００ｐＭ未満（例えば、３００ｐＭ未満または２００ｐＭ未満）の親和性でｈＰＤ−Ｌ１に結合し、任意選択で、免疫サイトカインが、少なくとも２：１の、高親和性（αβγ）受容体に対するＩＬ−２サイトカインの効力：ｈＰＤ−Ｌ１に対する抗ＰＤ−Ｌ１抗原結合部位の親和性の比を提供する、態様１〜４９のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０７９６】
一実施形態では、抗原結合部位は、２００ｐＭ未満の親和性でｈＰＤ−Ｌ１に結合する。一実施形態では、抗原結合部位は、１００ｐＭ未満または５０ｐＭ未満の親和性でｈＰＤ−Ｌ１に結合する。
【０７９７】
一実施形態では、抗原結合部位は、５０ｐＭ〜５００ｐＭ、または７５ｐＭ〜５００ｐＭ、または１００ｐＭ〜５００ｐＭ、または２００ｐＭ〜５００ｐＭの親和性でｈＰＤ−Ｌ１  に結合する。
【０７９８】
一実施形態では、抗原結合部位は、５０ｐＭ〜４００ｐＭ、または５０ｐＭ〜３００ｐＭ、または５０ｐＭ〜２００ｐＭ、または５０ｐＭ〜１００ｐＭの親和性でｈＰＤ−Ｌ１  に結合する。
【０７９９】
一実施形態では、抗原結合部位は、１００ｐＭ〜５００ｐＭ、または１００ｐＭ〜４００ｐＭ、または１００ｐＭ〜３００ｐＭの親和性でｈＰＤ−Ｌ１  に結合する。
【０８００】
一実施形態では、高親和性（αβγ）受容体に対するＩＬ−２サイトカインの効力：ｈＰＤ−Ｌ１に対する抗ＰＤ−Ｌ１抗原結合部位の親和性の比は、少なくとも３：１である。一実施形態では、高親和性（αβγ）受容体に対するＩＬ−２サイトカインの効力：ｈＰＤ−Ｌ１に対する抗ＰＤ−Ｌ１抗原結合部位の親和性の比は、少なくとも４：１である。一実施形態では、高親和性（αβγ）受容体に対するＩＬ−２サイトカインの効力：ｈＰＤ−Ｌ１に対する抗ＰＤ−Ｌ１抗原結合部位の親和性の比は、少なくとも５：１である。一実施形態では、高親和性（αβγ）受容体に対するＩＬ−２サイトカインの効力：ｈＰＤ−Ｌ１に対する抗ＰＤ−Ｌ１抗原結合部位の親和性の比は、少なくとも７：１である。一実施形態では、高親和性（αβγ）受容体に対するＩＬ−２サイトカインの効力：ｈＰＤ−Ｌ１に対する抗ＰＤ−Ｌ１抗原結合部位の親和性の比は、少なくとも１０：１である。
【０８０１】
概念１〜４０における抗ＰＤ−Ｌ１抗体の半減期、ＫＯＮ速度、ＫＯＦＦ速度、または結合特性がいずれも、本明細書に開示される免疫サイトカインについて準用される。
【０８０２】
態様５０ａ．抗原結合部位は、５００ｎＭ未満（例えば、１００ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、または１ｎｍ未満）の親和性でｍＰＤ−Ｌ１（配列番号３２５）に結合する、態様１〜５０のいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０８０３】
一実施形態では、抗原結合部位は、１ｎＭ〜５００ｎＭ、または１ｎＭ〜２５０ｎＭ、または１ｎＭ〜１００ｎＭ、または１ｎＭ〜５０ｎＭの親和性でｈＰＤ−Ｌ１  に結合する。
【０８０４】
一実施形態では、抗原結合部位は、１０ｎＭ〜５００ｎＭ、または１０ｎＭ〜２５０ｎＭ、または１０ｎＭ〜１００ｎＭ、または１ｎＭ〜５０ｎＭ、とりわけ、１０ｎＭ〜１００ｎＭの親和性でｈＰＤ−Ｌ１  に結合する。
【０８０５】
一実施形態では、抗原結合部位は、１００ｎＭ〜５００ｎＭ、または１００ｎＭ〜４００ｎＭ、または１００ｎＭ〜３００ｎＭ、または１００ｎＭ〜２００ｎＭの親和性でｈＰＤ−Ｌ１  に結合する。
【０８０６】
ｈＰＤ−Ｌ１またはｍＰＤ−Ｌ１に対する抗原結合部位の親和性は、当業者に周知である任意の技術によって測定され得る。一実施形態では、親和性は、ＳＰＲを使用して測定され、その詳細は上記に提供される。
【０８０７】
態様５１．例えば、腫瘍性もしくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、および悪性腫瘍、例えば黒色腫、乳癌、卵巣癌、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、結腸直腸癌（ＭＳＩまたはマイクロサテライト不安定性を伴わない）、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキン病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（例えば、黒色腫、乳癌、卵巣癌、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、結腸直腸癌（ＭＳＩまたはマイクロサテライト不安定性を伴わない）、頭頚部扁平上皮癌、および中皮腫、または例えばウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）および軟部肉腫）から選択される、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態の治療または予防における使用のための、態様１〜５０ａのいずれかに記載の免疫サイトカイン。
【０８０８】
態様５２．ヒトにおけるｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態を治療または予防するためのヒトへの投与のための医薬品の製造における、態様１〜５０のいずれか一項に記載の免疫サイトカインの使用であって、例えば、当該ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態が、腫瘍性もしくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、および悪性腫瘍、例えば黒色腫、乳癌、卵巣癌、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、結腸直腸癌（ＭＳＩまたはマイクロサテライト不安定性を伴わない）、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキン病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（例えば、黒色腫、乳癌、卵巣癌、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、結腸直腸癌（ＭＳＩまたはマイクロサテライト不安定性を伴わない）、頭頚部扁平上皮癌、および中皮腫、または例えばウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）および軟部肉腫）から選択される、使用。
【０８０９】
態様５３．ヒトにおける、例えば、腫瘍性もしくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、および悪性腫瘍、例えば黒色腫、乳癌、卵巣癌、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、結腸直腸癌（ＭＳＩまたはマイクロサテライト不安定性を伴わない）、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキン病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（例えば、黒色腫、乳癌、卵巣癌、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、結腸直腸癌（ＭＳＩまたはマイクロサテライト不安定性を伴わない）、頭頚部扁平上皮癌、および中皮腫、または例えばウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）および軟部肉腫）から選択される、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態を治療または予防する方法であって、治療有効量の概念１〜５０のいずれか一項に記載の免疫サイトカインをヒトに投与することを含み、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態が、それにより治療または予防される、方法。
【０８１０】
態様５１〜５３のいずれにおいても、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患は、本明細書に記載されるもののいずれかであり得る。一実施形態では、態様５１〜５３のいずれにおいても、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患は、子宮頸癌および上咽頭癌、例えば、ＨＰＶ感染によって引き起こされた子宮頸癌等のウイルス誘導性癌である。一実施形態では、態様５１〜５３のいずれにおいても、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患は、慢性ウイルス感染症である。一実施形態では、態様５１〜５３のいずれにおいても、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患は、腫瘍性疾患である。一実施形態では、態様５１〜５３のいずれにおいても、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患は、非腫瘍性疾患である。一実施形態では、態様５１〜５３のいずれにおいても、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患は、悪性腫瘍である。一実施形態では、態様５１〜５３のいずれにおいても、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患は、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、暴行癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫等の、ＰＤ−Ｌ１療法に対して応答性であることが知られている癌である。一実施形態では、態様５１〜５３のいずれにおいても、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患は、軟部肉腫である癌である。一実施形態では、態様５１〜５３のいずれにおいても、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患は、神経変性疾患、障害、または病的状態であり、任意選択で、当該神経変性疾患、障害、または病的状態が、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、一次性進行型多発性硬化症、二次性進行型多発性硬化症、大脳皮質基底核変性症、レット症候群、加齢黄斑変性および網膜色素変性症から選択される網膜変性障害、前部虚血性視神経症、緑内障、ブドウ膜炎、うつ病、外傷関連ストレスまたは心的外傷後ストレス障害、前頭側頭型認知症、レビー小体型認知症、軽度認知障害、後皮質萎縮、原発性進行性失語および進行性核上性麻痺または加齢認知症、特に、アルツハイマー病、筋委縮性側索硬化症、パーキンソン病、およびハンチントン病から選択され、例えば、アルツハイマー病から選択される。
【０８１１】
態様５４．ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態が、癌である、態様５１に記載の免疫サイトカイン、態様５２に記載の使用、または態様５３に記載の方法。
【０８１２】
態様５５．癌が、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、非ホジキンリンパ腫、マイクロサテライト不安定性を伴う結腸直腸癌、または乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌（ＭＳＩもしくはマイクロサテライト不安定性を伴わない）から選択される癌、特に、黒色腫および腎細胞癌である、態様５４に記載の免疫サイトカイン、使用、または方法。
【０８１３】
一実施形態では、癌は、黒色腫および腎細胞癌等の、ＩＬ−２療法およびＰＤ−Ｌ１療法の両方に応答性であることが知られている癌である。
【０８１４】
一実施形態では、癌は、マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）を伴う結腸直腸癌である。一実施形態では、癌は、乳癌である。一実施形態では、癌は、卵巣癌である。
【０８１５】
態様５６．さらなる療法、例えば治療剤をヒトに投与することをさらに含み、任意選択で、さらなる治療剤が、
Ａ）他の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、および抗ＬＡＧ−３抗体）、
Ｂ）免疫刺激剤（例えば、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、および抗ＣＤ４０抗体）、
Ｃ）ケモカイン受容体アンタゴニスト（例えば、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ４、およびＣＸＣＲ２）、
Ｄ）標的化キナーゼ阻害剤（例えば、ＣＳＦ−１ＲもしくはＶＥＧＦＲ阻害剤）、
Ｅ）血管新生阻害剤（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａもしくはデルタ様リガンド４）、
Ｆ）免疫刺激ペプチドもしくはケモカイン（例えば、ＣＸＣＬ９もしくはＣＸＣＬ１０）、
Ｇ）サイトカイン（例えば、ＩＬ−１５およびＩＬ−２１）、
Ｈ）ＣＤ３に対して少なくとも１つの特異性を有する二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）（例えば、ＣＤ３／ＣＤ１９  ＢｉＴＥ）、
Ｉ）他の二重特異性分子（例えば、腫瘍関連抗原を標的とするＩＬ−１５含有分子、例えば、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ−２、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｃａｎｃｅｒ−１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）、ＧＤ２、ＥｐＣＡＭ、もしくは黒色腫関連抗原−３（ＭＡＧＥ−Ａ３）などの上皮成長因子受容体）、
Ｊ）腫瘍溶解性ウイルス（例えば、ＨＳＶウイルス（任意選択でＧＭＣＳＦを分泌する）、ニューカッスル病ウイルス、およびワクシニアウイルス）、
Ｋ）腫瘍関連抗原（例えば、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｃａｎｃｅｒ−１［ＮＹ−ＥＳＯ−１］、黒色腫関連抗原−３（ＭＡＧＥ−３））によるワクチン接種、
Ｌ）細胞療法（例えば、抗ＣＤ１９、抗ＥｐＣａｍ、もしくは抗メソテリンを発現するキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）等）、
Ｍ）ＮＫＧ２ＤもしくはＣＤ１６ａ等の、活性化ＭＫ受容体に対する特異性を有する二重特異性ＮＫ細胞エンゲージャー、ならびに
ｎ）腫瘍特異的Ｔ細胞またはＬＡＫ細胞の養子移入、からなる群から独立して選択されるか、
または任意選択で、さらなる療法が、化学療法、放射線療法、および腫瘍の外科的切除である、態様５１〜５５のいずれか一項に記載の免疫サイトカイン、使用、または方法。
【０８１６】
放射線療法は、患部組織に直接、または全身のいずれかに送達される、単回線量または分割線量であり得る。
【０８１７】
この態様では、概念４６の特徴および実施形態がいずれも準用される。
【０８１８】
この態様では、二重特異性分子には、「二重特異性抗体」および抗体融合タンパク質が含まれ、概念３７〜４０に記載されるフォーマットおよび分子が含まれる。
【０８１９】
抗体は、構成５、５ａに記載されるか、または態様１ａに詳述される配列または抗体のいずれかであり得る。
【０８２０】
態様５７．態様１〜５０のいずれか一項に記載の免疫サイトカインと、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体と、を含み、任意選択で、
Ａ）他の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、および抗ＬＡＧ−３抗体）、
Ｂ）免疫刺激剤（例えば、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、および抗ＣＤ４０抗体）、
Ｃ）ケモカイン受容体アンタゴニスト（例えば、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ４、およびＣＸＣＲ２）、
Ｄ）標的化キナーゼ阻害剤（例えば、ＣＳＦ−１ＲもしくはＶＥＧＦＲ阻害剤）、
Ｅ）血管新生阻害剤（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａもしくはデルタ様リガンド４）、
Ｆ）免疫刺激ペプチドもしくはケモカイン（例えば、ＣＸＣＬ９もしくはＣＸＣＬ１０）、
Ｇ）サイトカイン（例えば、ＩＬ−１５およびＩＬ−２１）、
Ｈ）ＣＤ３に対して少なくとも１つの特異性を有する二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）（例えば、ＣＤ３／ＣＤ１９  ＢｉＴＥ）、
Ｉ）他の二重特異性分子（例えば、腫瘍関連抗原を標的とするＩＬ−１５含有分子、例えば、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ−２、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｃａｎｃｅｒ−１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）、ＧＤ２、ＥｐＣＡＭ、もしくは黒色腫関連抗原−３（ＭＡＧＥ−Ａ３）などの上皮成長因子受容体）、
Ｊ）腫瘍溶解性ウイルス（例えば、ＨＳＶウイルス（任意選択でＧＭＣＳＦを分泌する）、ニューカッスル病ウイルス、およびワクシニアウイルス）、
Ｋ）腫瘍関連抗原（例えば、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｃａｎｃｅｒ−１［ＮＹ−ＥＳＯ−１］、黒色腫関連抗原−３（ＭＡＧＥ−３））によるワクチン接種、
Ｌ）細胞療法（例えば、抗ＣＤ１９、抗ＥｐＣａｍ、もしくは抗メソテリンを発現するキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）等）、
Ｍ）ＮＫＧ２ＤもしくはＣＤ１６ａ等の、活性化ＭＫ受容体に対する特異性を有する二重特異性ＮＫ細胞エンゲージャー、ならびに
Ｎ）腫瘍特異的Ｔ細胞またはＬＡＫ細胞の養子移入、からなる群から独立して選択されるさらなる治療剤をさらに含む、医薬組成物。
【０８２１】
一実施形態では、さらなる治療剤は、免疫サイトカインと連続的または同時に投与される。
【０８２２】
この態様では、概念４８の特徴および実施形態がいずれも準用される。
【０８２３】
この態様では、二重特異性分子には、「二重特異性抗体」および抗体融合タンパク質が含まれ、概念３７〜４０に記載されるフォーマットおよび分子が含まれる。
【０８２４】
抗体は、構成５、５ａに記載されるか、または態様１ａに詳述される配列または抗体のいずれかであり得る。
【０８２５】
態様５８．態様５７に記載の医薬組成物、または態様５７に記載の医薬組成物を含むキットであって、当該組成物が、例えば、腫瘍性もしくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、および悪性腫瘍、例えば黒色腫、乳癌、卵巣癌、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、結腸直腸癌（ＭＳＩまたはマイクロサテライト不安定性を伴わない）、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキン病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（例えば、黒色腫、乳癌、卵巣癌、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、結腸直腸癌（ＭＳＩまたはマイクロサテライト不安定性を伴わない）、頭頚部扁平上皮癌、および中皮腫、または例えばウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）および軟部肉腫）から選択される、ｈＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態を治療または予防するためのものである、医薬組成物またはキット。
【０８２６】
態様５９．ヒトにおける疾患または病的状態を治療および／もしくは予防に使用するためのラベルもしくは説明書と組み合わせた態様５７もしくは態様５８に記載の医薬組成物、またはそれを含む態様５８に記載のキットであって、任意選択で、ラベルまたは説明書が、販売承認番号（例えば、ＦＤＡまたはＥＭＡ承認番号）を含み、任意選択で、キットが、免疫サイトカインを含むＩＶまたは注射デバイスを含む、態様５７もしくは態様５８に記載の医薬組成物、または態様５８に記載のキット。
【０８２７】
態様６０．動物（例えば、ヒト）における増殖性疾患を治療する方法であって、有効量の態様１〜５０のいずれか一項に記載の免疫サイトカインを当該患者に投与することを含む、方法。
【０８２８】
増殖性疾患は、本明細書の他の箇所に記載されるいずれかであり得る。
【０８２９】
態様６１．態様１〜５０のいずれか一項に記載の免疫サイトカインの重鎖および／または軽鎖をコードする核酸。
【０８３０】
一実施形態では、核酸は、態様１〜５０のいずれか一項に記載の免疫サイトカインの軽鎖をコードする。
【０８３１】
態様６２．態様６１に記載の核酸を含むベクターであって、任意選択で、ベクターが、ＣＨＯまたはＨＥＫ２９３ベクターである、ベクター。
【０８３２】
態様６３．態様６１に記載の核酸または態様６２に記載のベクターを含む宿主。
【０８３３】
４．ＩＣＯＳ抗体
ＩＣＯＳ抗体が本明細書に提供される。ＩＣＯＳ抗体は、英国特許出願第１６２０４１４．１号（２０１６年１２月１日出願）に記載されるもののいずれかであり得、その中に開示される抗ＩＣＯＳ抗体の配列は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０８３４】
ＳＴＩＭ００１は、配列番号３６３のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号３６４のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号３６５のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３６６の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号３６７である。ＳＴＩＭ００１は、配列番号３７０のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３７１のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号３７２のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号３７３の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号３７４である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号３６８（重鎖核酸配列配列番号３６９）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号３７５（軽鎖核酸配列配列番号３７６）である。
【０８３５】
ＳＴＩＭ００２は、配列番号３７７のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号３７８のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号３７９のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３８０の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号３８１である。ＳＴＩＭ００２は、配列番号３８４のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３８５のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号３８６のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号３８７の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号３８８または配列番号５１９である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号３８２（重鎖核酸配列配列番号３８３）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号３８９（軽鎖核酸配列配列番号３９０または配列番号５２０）である。
【０８３６】
ＳＴＩＭ００２−Ｂは、配列番号３９１のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号３９２のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号３９３のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号３９４の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号３９５である。ＳＴＩＭ００２−Ｂは、配列番号３９８のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号３９９のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号４００のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４０１の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４０２である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号３９６（重鎖核酸配列配列番号３９７）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４０３（軽鎖核酸配列配列番号４０４）である。
【０８３７】
ＳＴＩＭ００３は、配列番号４０５のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号４０６のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号４０７のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４０８の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号４０９または配列番号５２１である。ＳＴＩＭ００３は、配列番号４１２のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４１３のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号４１４のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４１５の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４４１６である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号４１０（重鎖核酸配列配列番号４１１または配列番号５２２）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４１７（軽鎖核酸配列配列番号４１８）である。
【０８３８】
ＳＴＩＭ００４は、配列番号４１９のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号４２０のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号４２１のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４２２の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号４２３である。ＳＴＩＭ００４は、配列番号４２６のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４２７のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号４２８のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４２９の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４３０または配列番号４３１である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号４２４（重鎖核酸配列配列番号４２５）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４３２（軽鎖核酸配列配列番号４３３または配列番号４３４）である。
【０８３９】
ＳＴＩＭ００５は、配列番号４３５のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号４３６のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号４３７のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４３８の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号４３９である。ＳＴＩＭ００５は、配列番号４４２のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４４３のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号４４４のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４４５の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４４６である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号４４０（重鎖核酸配列配列番号４４１）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４４７（軽鎖核酸配列配列番号４４８）である。
【０８４０】
ＳＴＩＭ００６は、配列番号４４９のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号４５０のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号４５１のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４５２の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号４５３である。ＳＴＩＭ００６は、配列番号４５６のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４５７のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号４５８のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４５９の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４６０である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号４５４（重鎖核酸配列配列番号４５５）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４６１（軽鎖核酸配列配列番号４６２）である。
【０８４１】
ＳＴＩＭ００７は、配列番号４６３のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号４６４のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号４６５のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４６６の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号４６７である。ＳＴＩＭ００７は、配列番号４７０のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４７１のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号４７２のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４７３の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４７４である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号４６８（重鎖核酸配列配列番号４６９）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４７５（軽鎖核酸配列配列番号４７６）である。
【０８４２】
ＳＴＩＭ００８は、配列番号４７７のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号４７８のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号４７９のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４８０の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号４８１である。ＳＴＩＭ００８は、配列番号４８４のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４８５のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号４８６のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号４８７の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号４８８である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号４８２（重鎖核酸配列配列番号４８３）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号４８９（軽鎖核酸配列配列番号４９０）である。
【０８４３】
ＳＴＩＭ００９は、配列番号４９１のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号４９２のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号４９３のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む、配列番号４９４の重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を有する。ＶＨドメインの重鎖核酸配列は、配列番号４９５である。ＳＴＩＭ００９は、配列番号４９８のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４９９のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号５００のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む、配列番号５０１の軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。ＶＬドメインの軽鎖核酸配列は、配列番号５０２である。ＶＨドメインは、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号１９３、配列番号１９５、配列番号１９７、配列番号１９９、配列番号２０１、配列番号２０３、配列番号２０５、配列番号３４０、配列番号５２４、配列番号５２６、配列番号５２８、配列番号５３０、配列番号５３２、または配列番号５３４と組み合わされ得る。ＶＬドメインは、本明細書に記載される軽鎖定常領域配列のうちのいずれか、例えば、配列番号２０７、２０９、２１１、２１３、２１５、２１７、２１９、２２１、２２３、２２５、２２７、２２９、２３１、２３３、２３５、２３７、５３６、および５３８と組み合わされ得る。全長重鎖アミノ酸配列は、配列番号４９６（重鎖核酸配列配列番号４９７）である。全長軽鎖アミノ酸配列は、配列番号５０３（軽鎖核酸配列配列番号５０４）である。
【０８４４】
抗体ＳＴＩＭ００１−００９は、英国特許出願第１６２０４１４．１号（２０１６年１２月１日出願）により詳細に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。ＩＣＯＳ抗体はまた、以下の番号付けされた文に記載される通りであり得る。
文１．ヒトおよび／またはマウスＩＣＯＳの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、
相補性決定領域（ＣＤＲ）、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む抗体ＶＨドメインと、
相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む抗体ＶＬドメインと、を含み、
ＨＣＤＲ１が、ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８、もしくはＳＴＩＭ００９のＨＣＤＲ１であるか、または１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸改変を有するそのＨＣＤＲ１を含み、
ＨＣＤＲ２が、ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８、もしくはＳＴＩＭ００９のＨＣＤＲ２であるか、または１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸改変を有するそのＨＣＤＲ２を含み、／または
ＨＣＤＲ３が、ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８、もしくはＳＴＩＭ００９のＨＣＤＲ３であるか、または１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸改変を有するそのＨＣＤＲ３を含む、単離された抗体。
【０８４５】
文２．抗体重鎖ＣＤＲが、ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８、もしくはＳＴＩＭ００９のものであるか、または１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸改変を有するＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８、もしくはＳＴＩＭ００９重鎖ＣＤＲを含む、文１に記載の抗体。
【０８４６】
文３．抗体ＶＨドメインが、ＳＴＩＭ００３の重鎖ＣＤＲを有する、文２に記載の抗体。
【０８４７】
文４．ヒトおよび／またはマウスＩＣＯＳの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、
相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む抗体ＶＨドメインと、
相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む抗体ＶＬドメインと、を含み、
ＬＣＤＲ１が、ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８、もしくはＳＴＩＭ００９のＬＣＤＲ１であるか、または１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸改変を有するそのＬＣＤＲ１を含み、
ＬＣＤＲ２が、ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８、もしくはＳＴＩＭ００９のＬＣＤＲ２であるか、または１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸改変を有するそのＬＣＤＲ２を含み、／または
ＬＣＤＲ３が、ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８、もしくはＳＴＩＭ００９のＬＣＤＲ３であるか、または１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸改変を有するそのＬＣＤＲ３を含む、単離された抗体。
【０８４８】
文５．抗体軽鎖ＣＤＲが、ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８、もしくはＳＴＩＭ００９のものであるか、または１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸改変を有するＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８、もしくはＳＴＩＭ００９軽鎖ＣＤＲを含む、文１〜４のいずれかに記載の抗体。
【０８４９】
文６．抗体ＶＬドメインが、ＳＴＩＭ００３の軽鎖ＣＤＲを有する、文５に記載の抗体。
【０８５０】
文７．ヒト生殖細胞系遺伝子セグメント配列のＶＨおよび／またはＶＬドメインフレームワーク領域を含む、文１〜６のいずれかに記載の抗体。
【０８５１】
文８．
（ｉ）ヒト重鎖Ｖ遺伝子セグメント、ヒト重鎖Ｄ遺伝子セグメント、およびヒト重鎖Ｊ遺伝子セグメントの組換えに由来するＶＨドメインであって、
Ｖセグメントが、ＩＧＨＶ１−１８（例えば、Ｖ１−１８＊０１）、ＩＧＶＨ３−２０（例えば、Ｖ３−２０＊ｄ０１）、ＩＧＶＨ３−１１（例えば、Ｖ３−１１＊０１）、もしくはＩＧＶＨ２−５（例えば、Ｖ２−５＊１０）であり、
Ｄ遺伝子セグメントが、ＩＧＨＤ６−１９（例えば、ＩＧＨＤ６−１９＊０１）、ＩＧＨＤ３−１０（例えば、ＩＧＨＤ３−１０＊０１）、もしくはＩＧＨＤ３−９（例えば、ＩＧＨＤ３−９＊０１）であり、及び／又は
Ｊ遺伝子セグメントが、ＩＧＨＪ６（例えば、ＩＧＨＪ６＊０２）、ＩＧＨＪ４（例えば、ＩＧＨＪ４＊０２）、もしくはＩＧＨＪ３（例えば、ＩＧＨＪ３＊０２）である、ＶＨドメイン、あるいは
（ｉｉ）フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４を含むＶＨドメインであって、
ＦＲ１が、任意選択で、１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸改変を有するヒト生殖細胞系Ｖ遺伝子セグメントＩＧＨＶ１−１８（例えば、Ｖ１−１８＊０１）、ＩＧＶＨ３−２０（例えば、Ｖ３−２０＊ｄ０１）、ＩＧＶＨ３−１１（例えば、Ｖ３−１１＊０１）、もしくはＩＧＶＨ２−５（例えば、Ｖ２−５＊１０）と整列し、
ＦＲ２が、任意選択で、１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸改変を有するヒト生殖細胞系Ｖ遺伝子セグメントＩＧＨＶ１−１８（例えば、Ｖ１−１８＊０１）、ＩＧＶＨ３−２０（例えば、Ｖ３−２０＊ｄ０１）、ＩＧＶＨ３−１１（例えば、Ｖ３−１１＊０１）、もしくはＩＧＶＨ２−５（例えば、Ｖ２−５＊１０）と整列し、
ＦＲ３が、任意選択で、１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸改変を有するヒト生殖細胞系Ｖ遺伝子セグメントＩＧＨＶ１−１８（例えば、Ｖ１−１８＊０１）、ＩＧＶＨ３−２０（例えば、Ｖ３−２０＊ｄ０１）、ＩＧＶＨ３−１１（例えば、Ｖ３−１１＊０１）、もしくはＩＧＶＨ２−５（例えば、Ｖ２−５＊１０）と整列し、及び／又は
ＦＲ４が、任意選択で、１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸改変を有するヒト生殖細胞系Ｖ遺伝子セグメントＩＧＪＨ６（例えば、ＪＨ６＊０２）、ＩＧＪＨ４（例えば、ＪＨ４＊０２）、もしくはＩＧＪＨ３（例えば、ＪＨ３＊０２）と整列する、ＶＨドメインを含む、文１〜７のいずれかに記載の抗体。
【０８５２】
文９．
（ｉ）ヒト軽鎖Ｖ遺伝子セグメントおよびヒト軽鎖Ｊ遺伝子セグメントの組換えに由来する抗体ＶＬドメインであって、
Ｖセグメントが、ＩＧＫＶ２−２８（例えば、ＩＧＫＶ２−２８＊０１）、ＩＧＫＶ３−２０（例えば、ＩＧＫＶ３−２０＊０１）、ＩＧＫＶ１Ｄ−３９（例えば、ＩＧＫＶ１Ｄ−３９＊０１）、もしくはＩＧＫＶ３−１１（例えば、ＩＧＫＶ３−１１＊０１）であり、及び／又は
Ｊ遺伝子セグメントが、ＩＧＫＪ４（例えば、ＩＧＫＪ４＊０１）、ＩＧＫＪ２（例えば、ＩＧＫＪ２＊０４）、ＩＧＬＪ３（例えば、ＩＧＫＪ３＊０１）、もしくはＩＧＫＪ１（例えば、ＩＧＫＪ１＊０１）である、抗体ＶＬドメイン、あるいは
（ｉｉ）フレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４を含む抗体ＶＬドメインであって、
ＦＲ１が、任意選択で、１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸改変を有するヒト生殖細胞系Ｖ遺伝子セグメントＩＧＫＶ２−２８（例えば、ＩＧＫＶ２−２８＊０１）、ＩＧＫＶ３−２０（例えば、ＩＧＫＶ３−２０＊０１）、ＩＧＫＶ１Ｄ−３９（例えば、ＩＧＫＶ１Ｄ−３９＊０１）、もしくはＩＧＫＶ３−１１（例えば、ＩＧＫＶ３−１１＊０１）と整列し、
ＦＲ２が、任意選択で、１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸改変を有するヒト生殖細胞系Ｖ遺伝子セグメントＩＧＫＶ２−２８（例えば、ＩＧＫＶ２−２８＊０１）、ＩＧＫＶ３−２０（例えば、ＩＧＫＶ３−２０＊０１）、ＩＧＫＶ１Ｄ−３９（例えば、ＩＧＫＶ１Ｄ−３９＊０１）、もしくはＩＧＫＶ３−１１（例えば、ＩＧＫＶ３−１１＊０１）と整列し、
ＦＲ３が、任意選択で、１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸改変を有するヒト生殖細胞系Ｖ遺伝子セグメントＩＧＫＶ２−２８（例えば、ＩＧＫＶ２−２８＊０１）、ＩＧＫＶ３−２０（例えば、ＩＧＫＶ３−２０＊０１）、ＩＧＫＶ１Ｄ−３９（例えば、ＩＧＫＶ１Ｄ−３９＊０１）、もしくはＩＧＫＶ３−１１（例えば、ＩＧＫＶ３−１１＊０１）と整列し、及び／又は
ＦＲ４が、任意選択で、１、２、３、４、もしくは５個のアミノ酸改変を有するヒト生殖細胞系Ｖ遺伝子セグメントＩＧＫＪ４（例えば、ＩＧＫＪ４＊０１）、ＩＧＫＪ２（例えば、ＩＧＫＪ２＊０４）、ＩＧＫＪ３（例えば、ＩＧＫＪ３＊０１）、もしくはＩＧＫＪ１（例えば、ＩＧＫＪ１＊０１）と整列する、抗体ＶＬドメインを含む、文１〜８のいずれかに記載の抗体。
【０８５３】
文１０．ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８、もしくはＳＴＩＭ００９のＶＨドメインであるか、またはＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８、もしくはＳＴＩＭ００９の抗体ＶＨドメイン配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、抗体ＶＨドメインを含む、文１〜９のいずれかに記載の抗体。
【０８５４】
文１１．ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８、もしくはＳＴＩＭ００９のＶＬドメインであるか、またはＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８、もしくはＳＴＩＭ００９の抗体ＶＬドメイン配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、抗体ＶＬドメインを含む、文１〜１０のいずれかに記載の抗体。
【０８５５】
文１２．
ＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８、もしくはＳＴＩＭ００９のＶＨドメインから選択されるか、またはＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８、もしくはＳＴＩＭ００９の抗体ＶＨドメイン配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、抗体ＶＨドメインと、
当該選択された抗体のＶＬドメインであるか、または当該選択された抗体の抗体ＶＬドメインと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する、抗体ＶＬドメインと、を含む、文１１に記載の抗体。
【０８５６】
文１３．ＳＴＩＭ００３  ＶＨドメインおよびＳＴＩＭ００３  ＶＬドメインを含む、文１２に記載の抗体。
【０８５７】
文１４．抗体定常領域を含む、文１〜１３のいずれかに記載の抗体。
【０８５８】
文１５．定常領域が、ヒト重鎖および／または軽鎖定常領域を含む、文１４に記載の抗体。
【０８５９】
文１６．定常領域が、Ｆｃエフェクター陽性である、文１４または文１５に記載の抗体。
【０８６０】
文１７．天然ヒトＦｃ領域と比較して増強したＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、および／またはＣＤＣ機能を有するＦｃ領域を含む、文１６に記載の抗体。
【０８６１】
文１８．抗体が、ＩｇＧ１である、文１４〜１７のいずれかに記載の抗体。
【０８６２】
文１９．抗体が、フコシル化されていない、文１７または文１８に記載の抗体。
【０８６３】
文２０．細胞傷害性薬物またはプロドラッグとコンジュゲートされている、文１〜１９のいずれかに記載の抗体。
【０８６４】
文２１．多重特異性抗体である、文１〜２０のいずれかに記載の抗体。
【０８６５】
文２２．ヒトＩＣＯＳへの結合についてＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００４、ＳＴＩＭ００５、ＳＴＩＭ００６、ＳＴＩＭ００７、ＳＴＩＭ００８、またはＳＴＩＭ００９の重鎖および軽鎖相補性決定領域を含むヒトＩｇＧ１抗体と競合する、単離された抗体。
【０８６６】
文２３．表面プラズモン共鳴によって判定した場合、５０ｎＭ未満の親和性（ＫＤ）でヒトおよびマウスＩＣＯＳの細胞外ドメインに結合する、単離された抗体。
【０８６７】
文２４．抗体が、表面プラズモン共鳴によって判定した場合、５ｎＭ未満の親和性（ＫＤ）でヒトおよびマウスＩＣＯＳの細胞外ドメインに結合する、文２３に記載の抗体。
【０８６８】
文２５．ヒトＩＣＯＳの細胞外ドメインに結合するＫＤが、マウスＩＣＯＳの細胞外ドメインに結合するＫＤの１０倍以内である、文２３または文２４に記載の抗体。
【０８６９】
文２６．文１〜２５のいずれかに記載の単離された抗体と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、組成物。
【０８７０】
文２７．文１〜２５のいずれかに記載の抗体をコードする単離された核酸と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、組成物。
【０８７１】
文２８．患者において制御性Ｔ細胞を枯渇させ、及び／又はエフェクターＴ細胞応答を増加させる方法であって、文２６に記載の組成物を患者に投与することを含む、方法。
【０８７２】
文２９．患者において制御性Ｔ細胞を枯渇させ、及び／又はエフェクターＴ細胞応答を増加させることによって療法を受けることができる疾患または病的状態を治療する方法であって、文２６に記載の組成物を患者に投与することを含む、方法。
【０８７３】
文３０．療法によるヒトの身体の治療方法における使用のための、文２６に記載の組成物。
【０８７４】
文３１．患者における制御性Ｔ細胞の枯渇および／またはエフェクターＴ細胞応答の増加における使用のための、文３０に記載の使用のための組成物。
【０８７５】
文３２．患者における制御性Ｔ細胞の枯渇および／またはエフェクターＴ細胞応答の増加による療法を受けることができる疾患または病的状態の治療における使用のための、文３０に記載の使用のための組成物。
【０８７６】
文３３．疾患が、癌または固形腫瘍である、文２９に記載の方法、または文３２に記載の使用のための組成物。
【０８７７】
文３４．当該方法が、抗体および別の療法剤を患者に投与することを含む、文２９〜３３のいずれかに記載の方法、または使用のための組成物。
【０８７８】
文３５．療法剤が、抗ＰＤＬ１抗体である、文３４に記載の方法、または使用のための組成物。
【０８７９】
文３６．抗ＩＣＯＳ抗体および抗ＰＤＬ１抗体が、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、および／またはＣＤＣを各々媒介することができる、文３５に記載の方法、または使用のための組成物。
【０８８０】
文３７．抗ＩＣＯＳ抗体が、ヒトＩｇＧ１抗体であり、抗ＰＤＬ１抗体が、ヒトＩｇＧ１抗体である、文３５に記載の方法、または使用のための組成物。
【０８８１】
文３８．他の療法剤が、ＩＬ−２である、文３４に記載の方法、または使用のための組成物。
【０８８２】
文３９．当該方法が、他の療法剤を投与した後に抗ＩＣＯＳ抗体を投与することを含む、文３４〜３８のいずれかに記載の方法、または使用のための組成物。
【０８８３】
文４０．
抗ＩＣＯＳ抗体が、プロドラッグとコンジュゲートされ、
当該方法または使用が、
抗ＩＣＯＳ抗体を患者に投与することと、
標的組織部位でプロドラッグを選択的に活性化させることと、を含む、文２８〜３９のいずれかに記載の方法、または使用のための組成物。
【０８８４】
文４１．患者が、固形腫瘍を有し、当該方法が、腫瘍においてプロドラッグを選択的に活性化させることを含む、文４０に記載の方法、または使用のための組成物。
【０８８５】
文４２．光活性化によってプロドラッグを選択的に活性化させることを含む、文４０または文４１に記載の方法、または使用のための組成物。
【０８８６】
文４３．癌を治療する方法における使用のための、抗ＩＣＯＳヒトＩｇＧ１抗体と抗ＰＤＬ１ヒトＩｇＧ１抗体との組み合わせ。
【０８８７】
文４４．抗ＩＣＯＳ抗体および抗ＰＤＬ１抗体が、投与のために別々の組成物で提供される、文４３に記載の組み合わせ。
【０８８８】
文４５．ヒトＩｇＧ１定常領域が、添付の配列表に示される野生型アミノ酸配列を有する、文３７に記載の使用のための方法もしくは組成物、または文４３もしくは文４４に記載の組み合わせ。
【０８８９】
文４６．患者におけるＩＣＯＳ陽性制御性Ｔ細胞の急上昇を低減または逆転させる方法における使用のための抗ＩＣＯＳ抗体であって、当該急上昇が、別の療法剤での患者の治療から生じる、抗ＩＣＯＳ抗体。
【０８９０】
文４７．患者を治療する方法であって、当該方法が、患者におけるＩＣＯＳ陽性制御性Ｔ細胞の急上昇を低減または逆転させることを含み、当該急上昇が、別の療法剤での患者の治療から生じる、方法。
【０８９１】
文４８．患者を治療する方法における使用のための抗ＩＣＯＳ抗体であって、当該方法が、抗ＩＣＯＳ抗体を、別の療法剤での治療後に増加したレベルＩＣＯＳ陽性制御性Ｔ細胞を有する患者に投与することを含む、抗ＩＣＯＳ抗体。
【０８９２】
文４９．患者を治療する方法であって、抗ＩＣＯＳ抗体を、別の療法剤での治療後に増加したレベルのＩＣＯＳ陽性制御性Ｔ細胞を有する患者に投与することを含む、方法。
【０８９３】
文５０．当該方法は、療法剤を患者に投与することと、当該患者が当該薬剤での治療後に増加したレベルのＩＣＯＳ陽性制御性Ｔ細胞を有すると判定することと、抗ＩＣＯＳ抗体を患者に投与して制御性Ｔ細胞のレベルを低減させることと、を含む、文４６もしくは文４８に記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体、または文４７もしくは文４９に記載の方法。
【０８９４】
文５１．療法剤が、ＩＬ−２または免疫調節抗体（例えば、抗ＰＤＬ−１、抗ＰＤ−１、または抗ＣＴＬＡ−４）である、文４６〜５０のいずれかに使用または方法のための抗ＩＣＯＳ抗体。
【０８９５】
文５２．当該方法が、腫瘍、例えば、転移性黒色腫等の黒色腫を治療することを含む、文４６〜５１のいずれかに記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体または方法。
【０８９６】
文５３．患者における癌を、患者に自身の癌細胞に対するインビボのワクチン接種を行うことによって治療する方法における使用のための抗ＩＣＯＳ抗体であって、当該方法が、
抗原特異的エフェクターＴ細胞に対する抗原の提示をもたらす、癌細胞の免疫学的細胞死を引き起こす療法によって患者を治療することと、
抗ＩＣＯＳ抗体を患者に投与することであって、抗ＩＣＯＳ抗体が、抗原特異的エフェクターＴ細胞応答を増強する、投与することと、を含む、抗ＩＣＯＳ抗体。
【０８９７】
文５４．患者における癌を、患者に自身の癌細胞に対するインビボのワクチン接種を行うことによって治療する方法であって、当該方法が、
抗原特異的エフェクターＴ細胞に対する抗原の提示をもたらす、癌細胞の免疫学的細胞死を引き起こす療法によって患者を治療することと、
抗ＩＣＯＳ抗体を患者に投与することであって、抗ＩＣＯＳ抗体が、抗原特異的エフェクターＴ細胞応答を増強する、投与することと、を含む、方法。
【０８９８】
文５５．患者における癌を、患者に自身の癌細胞に対するインビボのワクチン接種を行うことによって治療する方法であって、当該方法が、抗ＩＣＯＳ抗体を患者に投与することを含み、
患者が、抗原特異的エフェクターＴ細胞に対する抗原の提示をもたらす、癌細胞の免疫学的細胞死を引き起こす療法によって以前に治療されている患者であり、
抗ＩＣＯＳ抗体が、抗原特異的エフェクターＴ細胞応答を増強する、方法。
【０８９９】
文５６．免疫学的細胞死を引き起こす療法が、癌細胞の放射線照射、化学療法剤の投与、および／または腫瘍関連抗原に対する抗体の投与である、文５３〜５５のいずれかに記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体または方法。
【０９００】
文５７．化学療法剤が、オキサリプラチンである、文５６に記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体または方法。
【０９０１】
文５８．腫瘍関連抗原が、ＨＥＲ２またはＣＤ２０である、文５６に記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体または方法。
【０９０２】
文５９．当該方法が、抗体およびワクチン組成物を患者に投与することを含む、患者にワクチン接種する方法における使用のための抗ＩＣＯＳ抗体。
【０９０３】
文６０．抗ＩＣＯＳ抗体およびワクチン組成物を患者に投与することを含む、患者にワクチン接種する方法。
【０９０４】
文６１．ワクチン組成物が、Ｂ型肝炎、マラリア、またはＨＩＶに対するワクチンである、文５９に記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体、または文６０に記載の方法。
【０９０５】
文６２．癌が、ＩＣＯＳリガンドおよび／またはＦＯＸＰ３の発現について陽性であると特徴付けられるか、または特徴付けられている、患者の癌を治療する方法における使用のための抗ＩＣＯＳ抗体。
【０９０６】
文６３．癌が、ＩＣＯＳリガンドおよび／またはＦＯＸＰ３の発現について陽性であると特徴付けられるか、または特徴付けられており、当該方法が、抗ＩＣＯＳ抗体を患者に投与することを含む、患者の癌を治療する方法。
【０９０７】
文６４．当該方法が、
患者からの試料を試験して、癌が、ＩＣＯＳリガンドおよび／またはＦＯＸＰ３を発現することを判定することと、
患者を抗ＩＣＯＳ抗体による治療のために選択することと、
抗ＩＣＯＳ抗体を患者に投与することと、を含む、文６２に記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体、または文６３に記載の方法。
【０９０８】
文６５．当該方法が、抗ＩＣＯＳ抗体を、癌がＩＣＯＳリガンドおよび／またはＦＯＸＰ３の発現について陽性であることを示した試験試料の患者に投与することを含む、文６２に記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体、または文６３に記載の方法。
【０９０９】
文６６．試料が、固形腫瘍の生検試料である、文６４または文６５に記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体または方法。
【０９１０】
文６７．癌が、免疫腫瘍学的薬物、例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＤ１３７抗体、または抗ＧＩＴＲ抗体での治療に対して難治性であると特徴付けられるか、または特徴付けられている、患者の癌を治療する方法における使用のための抗ＩＣＯＳ抗体。
【０９１１】
文６８．患者の癌を治療する方法であって、癌が、免疫腫瘍学的薬物、例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＤ１３７抗体、または抗ＧＩＴＲ抗体での治療に対して難治性であると特徴付けられるか、または特徴付けられており、当該方法が、抗ＩＣＯＳ抗体を患者に投与することを含む、方法。
【０９１２】
文６９．当該方法が、
患者を免疫腫瘍学的薬物で治療することと、
癌がその薬物に応答しないことを判定することと、
患者を抗ＩＣＯＳ抗体による治療のために選択すること、
抗ＩＣＯＳ抗体を患者に投与することと、を含む、文６７に記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体、または文６８に記載の方法。
【０９１３】
文７０．当該方法が、抗ＩＣＯＳ抗体を、癌が免疫腫瘍学的薬物での前治療に応答しなかった患者に投与することを含む、文６７に記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体、または文６８に記載の方法。
【０９１４】
文７１．癌が、ＩＣＯＳリガンドを発現する能力を獲得した細胞に由来する腫瘍である、文６２〜７０のいずれかに記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体または方法。
【０９１５】
文７２．癌が、黒色腫である、文７１に記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体または方法。
【０９１６】
文７３．癌が、Ｂリンパ球（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫等のＢ細胞リンパ腫）またはＴリンパ球等の抗原提示細胞に由来する、文６２〜７０のいずれかに記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体または方法。
【０９１７】
文７４．癌が、抗ＣＤ２０抗体による治療に耐性である、文６２〜７０のいずれかに記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体または方法。
【０９１８】
文７５．癌が、Ｂ細胞リンパ腫である、文７４に記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体または方法。
【０９１９】
文７６．抗ＣＤ２０抗体が、リツキシマブである、文７５に記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体または方法。
【０９２０】
文７７．当該方法が、抗ＣＤ２０抗体で患者を治療することと、
癌が抗ＣＤ２０抗体に応答しないことを判定することと、
患者からの試料を試験して、癌が、ＩＣＯＳリガンドを発現することを判定することと、
患者を抗ＩＣＯＳ抗体による治療のために選択することと、
抗ＩＣＯＳ抗体を患者に投与することと、を含む、文７４〜７６のいずれかに記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体または方法。
【０９２１】
文７８．当該方法が、抗ＩＣＯＳ抗体を、癌が抗ＣＤ−２０抗体での前治療に応答しなかった患者に投与することを含む、文７４〜７６のいずれかに記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体または方法。
【０９２２】
文７９．癌が、固形腫瘍である、文５２〜７８のいずれかに記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体または方法。
【０９２３】
文８０．癌が、血液学的液体腫瘍である、文５２〜７８のいずれかに記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体または方法。
【０９２４】
文８１．腫瘍が、制御性Ｔ細胞に富む、文７９または８０に記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体または方法。
【０９２５】
文８２．抗ＩＣＯＳ抗体が、文１〜２５のいずれかに記載される通りであるか、または文２６に記載される組成物中に提供される、文４３〜８１のいずれかに記載の使用のための抗ＩＣＯＳ抗体または方法。
【０９２６】
文８３．ヒト可変領域遺伝子セグメントをコードするヒトまたはヒト化免疫グロブリン遺伝子座を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト哺乳動物であって、当該哺乳動物が、ＩＣＯＳを発現しない、トランスジェニック非ヒト哺乳動物。
【０９２７】
文８４．ヒトおよび非ヒトＩＣＯＳの細胞外ドメインに結合する抗体を産生する方法であって、
（ａ）文８３に記載の哺乳動物をヒトＩＣＯＳ抗原で免疫付与することと、
（ｂ）哺乳動物によって生成された抗体を単離することと、
（ｃ）ヒトＩＣＯＳおよび非ヒトＩＣＯＳに結合する能力について抗体を試験することと、
（ｄ）ヒトおよび非ヒトＩＣＯＳの両方に結合する１つ以上の抗体を選択することと、を含む、方法。
【０９２８】
文８５．哺乳動物を、ヒトＩＣＯＳを発現する細胞で免疫付与することを含む、文８４に記載の方法。
【０９２９】
文８６．
（ｃ）表面プラズモン共鳴を使用してヒトＩＣＯＳおよび非ヒトＩＣＯＳに結合する能力について抗体を試験し、結合親和性を判定することと、
（ｄ）ヒトＩＣＯＳに対する結合のＫＤが５０ｎＭ未満であり、非ヒトＩＣＯＳに対する結合のＫＤが５００ｎＭ未満である１つ以上の抗体を選択することと、を含む、文８４または文８５に記載の方法。
【０９３０】
文８７．
（ｄ）ヒトＩＣＯＳに対する結合のＫＤが１０ｎＭ未満であり、非ヒトＩＣＯＳに対する結合のＫＤが１００ｎＭ未満である１つ以上の抗体を選択することと、を含む、文８６に記載の方法。
【０９３１】
文８８．
（ｃ）表面プラズモン共鳴を使用してヒトＩＣＯＳおよび非ヒトＩＣＯＳに結合する能力について抗体を試験し、結合親和性を判定することと、
（ｄ）ヒトＩＣＯＳに対する結合のＫＤが、非ヒトＩＣＯＳに対する結合のＫＤの１０倍以内である１つ以上の抗体を選択することと、を含む、文８４〜８７のいずれかに記載の方法。
【０９３２】
文８９．
（ｄ）ヒトＩＣＯＳに対する結合のＫＤが、非ヒトＩＣＯＳに対する結合のＫＤの５倍以内である１つ以上の抗体を選択することと、を含む、文８８に記載の方法。
【０９３３】
文９０．哺乳動物と同じ種からの非ヒトＩＣＯＳに結合する能力について抗体を試験することを含む、文８４〜８９のいずれかに記載の方法。
【０９３４】
文９１．哺乳動物とは異なる種からの非ヒトＩＣＯＳに結合する能力について抗体を試験することを含む、文８４〜９０のいずれかに記載の方法。
【０９３５】
文９２．哺乳動物が、マウスまたはラットである、文８４〜９１のいずれかに記載の方法。
【０９３６】
文９３．非ヒトＩＣＯＳが、マウスＩＣＯＳまたはラットＩＣＯＳである、文８４〜９２のいずれかに記載の方法。
【０９３７】
文９４．ヒトまたはヒト化免疫グロブリン遺伝子座が、内因性定常領域の上流にヒト可変領域遺伝子セグメントを含む、文８４〜９３のいずれかに記載の方法。
【０９３８】
文９５．
（ａ）文８３に記載の哺乳動物をヒトＩＣＯＳ抗原で免疫付与することであって、当該哺乳動物が、マウスである、免疫付与することと、
（ｂ）マウスによって生成された抗体を単離することと、
（ｃ）ヒトＩＣＯＳおよびマウスＩＣＯＳに結合する能力について抗体を試験することと、
（ｄ）ヒトおよびマウスＩＣＯＳの両方に結合する１つ以上の抗体を選択することと、を含む、文９４に記載の方法。
【０９３９】
文９６．抗体重鎖可変ドメインおよび／または抗体軽鎖可変ドメインをコードする核酸を単離することを含む、文８４〜９５のいずれかに記載の方法。
【０９４０】
文９７．哺乳動物が、ヒト可変領域遺伝子セグメントおよび内因性定常領域の組換えによって抗体を生成する、文８４〜９６のいずれかに記載の方法。
【０９４１】
文９８．重鎖および／または軽鎖可変ドメインをコードする核酸を、ヒト重鎖定常領域および／またはヒト軽鎖定常領域とそれぞれコンジュゲートすることを含む、文９６または文９７に記載の方法。
【０９４２】
文９９．核酸を宿主細胞に導入することを含む、文９６〜９８のいずれかに記載の方法。
【０９４３】
文１００．抗体、または抗体重鎖および／もしくは軽鎖可変ドメインの発現のための条件下で宿主細胞を培養することを含む、文９９に記載の方法。
【０９４４】
文１０１．文８４〜１００のいずれかに記載の方法によって産生された、抗体、または抗体重鎖および／もしくは軽鎖可変ドメイン。
【０９４５】
文１０２．任意選択で、ＩＣＯＳアゴニスト抗体を選択するために、ＩＣＯＳに結合する抗体を選択する方法であって、アッセイが、
試験ウェル中で基質に固定化（結合または接着）された抗体のアレイを提供することと、
試験ウェルに、ＩＣＯＳ発現細胞（例えば、活性化初代Ｔ細胞またはＭＪ細胞）を添加することと、
細胞の形態を観察することと、
ウェル内での、丸い形状から基質に対して平坦化された形状への形状変化を検出することであって、形状変化は、抗体が、ＩＣＯＳに結合する抗体、任意選択でＩＣＯＳアゴニスト抗体であることを示す、検出することと、
試験ウェルから抗体を選択することと、
選択された抗体のＣＤＲをコードする核酸を発現することと、
抗体を、１つ以上の追加の成分を含む組成物中に製剤化することと、を含む、方法。
【０９４６】
抗ＩＣＯＳ抗体を説明する代替的な文がいかに記載される。
文１ａ．ヒトＩＣＯＳ（ｈＩＣＯＳ）（配列番号５０８、５０７、および／または５０６）に特異的に結合し、
ａ）当該ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００１と競合し、抗体または断片が、配列番号３６５のＣＤＲＨ３配列、または３、２、もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号３６５のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含み、
ｂ）当該ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００２と競合し、抗体または断片が、配列番号３７９のＣＤＲＨ３配列、または３、２、もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号３７９のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含み、
ｃ）当該ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００２−Ｂと競合し、抗体または断片が、配列番号３９３のＣＤＲＨ３配列、または３、２、もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号３９３のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含み、
ｄ）当該ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００３と競合し、抗体または断片が、配列番号４０７のＣＤＲＨ３配列、または３、２、もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号４０７のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含み、
ｅ）当該ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００４と競合し、抗体または断片が、配列番号４２１のＣＤＲＨ３配列、または３、２、もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号４２１のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含み、
ｆ）当該ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００５と競合し、抗体または断片が、配列番号４３７のＣＤＲＨ３配列、または３、２、もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号４３７のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含み、
ｇ）当該ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００６と競合し、抗体または断片が、配列番号４５１のＣＤＲＨ３配列、または３、２、もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号４５１のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含み、
ｈ）当該ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００７と競合し、抗体または断片が、配列番号４６５のＣＤＲＨ３配列、または３、２、もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号４６５のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含み、
ｉ）当該ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００８と競合し、抗体または断片が、配列番号４７９のＣＤＲＨ３配列、または３、２、もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号４７９のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含むか、または
ｊ）当該ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００９と競合し、抗体または断片が、配列番号４９３のＣＤＲＨ３配列、または３、２、もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む配列番号４９３のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む、抗体またはその断片。
【０９４７】
文２ａ．ＶＨドメインが、
ａ）配列番号３６３のＣＤＲＨ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号３６３のＣＤＲＨ１配列、
ｂ）配列番号３７７のＣＤＲＨ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号３７７のＣＤＲＨ１配列、
ｃ）配列番号３９１のＣＤＲＨ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号３９１のＣＤＲＨ１配列、
ｄ）配列番号４０５のＣＤＲＨ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４０５のＣＤＲＨ１配列、
ｅ）配列番号４１９のＣＤＲＨ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４１９のＣＤＲＨ１配列、
ｆ）配列番号４３５のＣＤＲＨ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４３５のＣＤＲＨ１配列、
ｇ）配列番号４４９のＣＤＲＨ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４４９のＣＤＲＨ１配列、
ｈ）配列番号４６３のＣＤＲＨ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４６３のＣＤＲＨ１配列、または
ｉ）配列番号４７７のＣＤＲＨ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４７７のＣＤＲＨ１配列、
ｊ）配列番号４９１のＣＤＲＨ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４９１のＣＤＲＨ１配列、を含む、文１ａに記載の抗体またはその断片。
【０９４８】
文３ａ．ＶＨドメインが、
ａ）配列番号３６４のＣＤＲＨ２配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号３６４のＣＤＲＨ２配列、
ｂ）配列番号３７８のＣＤＲＨ２配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号３７８のＣＤＲＨ２配列、
ｃ）配列番号３９２のＣＤＲＨ２配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号３９２のＣＤＲＨ２配列、
ｄ）配列番号４０６のＣＤＲＨ２配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４０６のＣＤＲＨ２配列、
ｅ）配列番号４２０のＣＤＲＨ２配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４２０のＣＤＲＨ２配列、
ｆ）配列番号４３６のＣＤＲＨ２配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４３６のＣＤＲＨ２配列、
ｇ）配列番号４５０のＣＤＲＨ２配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４５０のＣＤＲＨ２配列、
ｈ）配列番号４６４のＣＤＲＨ２配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４６４のＣＤＲＨ２配列、
ｉ）配列番号４７８のＣＤＲＨ２配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４７８のＣＤＲＨ２配列、または
ｊ）配列番号４９２のＣＤＲＨ２配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４９２のＣＤＲＨ２配列を含む、文１ａまたは文２ａに記載の抗体またはその断片。
【０９４９】
文４ａ．ＶＨドメインが、
ａ）配列番号３６６のアミノ酸配列、もしくは配列番号３６６と少なくとも９８％同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列、
ｂ）配列番号３８０のアミノ酸配列、もしくは配列番号３８０と少なくとも９８％同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列、
ｃ）配列番号３９４のアミノ酸配列、もしくは配列番号３９４と少なくとも９８％同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列、
ｄ）配列番号４０８のアミノ酸配列、もしくは配列番号４０８と少なくとも９８％同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列、
ｅ）配列番号４２２のアミノ酸配列、もしくは配列番号４２２と少なくとも９８％同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列、
ｆ）配列番号４３８のアミノ酸配列、もしくは配列番号４３８と少なくとも９８％同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列、
ｇ）配列番号４５２のアミノ酸配列、もしくは配列番号４５２と少なくとも９８％同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列、
ｈ）配列番号４６６のアミノ酸配列、もしくは配列番号４６６と少なくとも９８％同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列、
ｉ）配列番号４８０のアミノ酸配列、もしくは配列番号４８０と少なくとも９８％同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列、または
ｊ）配列番号４９４のアミノ酸配列、もしくは配列番号４９４と少なくとも９８％同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、文１ａ〜３ａのいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
【０９５０】
文５ａ．ＶＨドメインの第１および第２のコピーを含む、文１ａ〜４ａのいずれかに記載の抗体または断片。
【０９５１】
文６ａ．
ａ）配列番号３７０のＣＤＲＬ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号３７０のＣＤＲＬ１配列、
ｂ）配列番号３８４のＣＤＲＬ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号３８４のＣＤＲＬ１配列、
ｃ）配列番号３９８のＣＤＲＬ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号３９８のＣＤＲＬ１配列、
ｄ）配列番号４１２のＣＤＲＬ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４１２のＣＤＲＬ１配列、
ｅ）配列番号４２６のＣＤＲＬ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４２６のＣＤＲＬ１配列、
ｆ）配列番号４４２のＣＤＲＬ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４４２のＣＤＲＬ１配列、
ｇ）配列番号４５６のＣＤＲＬ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４５６のＣＤＲＬ１配列、
ｈ）配列番号４７０のＣＤＲＬ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４７０のＣＤＲＬ１配列、または
ｉ）配列番号４８４のＣＤＲＬ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４８４のＣＤＲＬ１配列、
ｊ）配列番号４９８のＣＤＲＬ１配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４９８のＣＤＲＬ１配列、を含むＶＬドメインを含む、文１ａ〜５ａのいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
【０９５２】
文７ａ．
ａ）配列番号３７１のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号３７１のＣＤＲＬ２配列、
ｂ）配列番号３８５のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号３８５のＣＤＲＬ２配列、
ｃ）配列番号３９９のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号３９９のＣＤＲＬ２配列、
ｄ）配列番号４１３のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４１３のＣＤＲＬ２配列、
ｅ）配列番号４２７のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４２７のＣＤＲＬ２配列、
ｆ）配列番号４４３のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４４３のＣＤＲＬ２配列、
ｇ）配列番号４５７のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４５７のＣＤＲＬ２配列、
ｈ）配列番号４７１のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４７１のＣＤＲＬ２配列、
ｉ）配列番号４８５のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４８５のＣＤＲＬ２配列、または
ｊ）配列番号４９９のＣＤＲＬ２配列、または１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４９９のＣＤＲＬ２配列、を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、文１ａ〜文６ａのいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
【０９５３】
文８ａ．
ａ）配列番号３７２のＣＤＲＬ３配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号３７２のＣＤＲＬ３配列、
ｂ）配列番号３８６のＣＤＲＬ３配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号３８６のＣＤＲＬ３配列、
ｃ）配列番号４００のＣＤＲＬ３配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４００のＣＤＲＬ３配列、
ｄ）配列番号４１４のＣＤＲＬ３配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４１４のＣＤＲＬ３配列、
ｅ）配列番号４２８のＣＤＲＬ３配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４２８のＣＤＲＬ３配列、
ｆ）配列番号４４４のＣＤＲＬ３配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４４４のＣＤＲＬ３配列、
ｇ）配列番号４５８のＣＤＲＬ３配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４５８のＣＤＲＬ３配列、
ｈ）配列番号４７２のＣＤＲＬ３配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４７２のＣＤＲＬ３配列、
ｉ）配列番号４８６のＣＤＲＬ３配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号４８６のＣＤＲＬ３配列、または
ｊ）配列番号５００のＣＤＲＬ３配列、または２もしくは１個のアミノ酸置換を含有する配列番号５００のＣＤＲＬ３配列、を含むＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含む、文１ａ〜文７ａのいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
【０９５４】
文９ａ．ＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインを含み、ＶＬドメインが、
ａ）配列番号３７３のアミノ酸配列、または配列番号３７３のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列、
ｂ）配列番号３８７のアミノ酸配列、または配列番号３８７のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列、
ｃ）配列番号４０１のアミノ酸配列、または配列番号４０１のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列、
ｄ）配列番号４１５のアミノ酸配列、または配列番号４１５のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列、
ｅ）配列番号４２９のアミノ酸配列、または配列番号４２９のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列、
ｆ）配列番号４４５のアミノ酸配列、または配列番号４４５のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列、
ｇ）配列番号４５９のアミノ酸配列、または配列番号４５９のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列、
ｈ）配列番号４７３のアミノ酸配列、または配列番号４７３のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列、
ｉ）配列番号４８７のアミノ酸配列、または配列番号４８７のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列、または
ｊ）配列番号５０１のアミノ酸配列、または配列番号５０１のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一である軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む、文１ａ〜８ａのいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
【０９５５】
文１０ａ．ＶＬドメインまたは当該ＶＬドメインの第１および第２のコピーを含む、文６ａ〜９ａのいずれか一項に記載の抗体または断片。
【０９５６】
文１１．アミノ酸置換が、保存的アミノ酸置換であり、任意選択で、当該保存的置換が、
１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、
２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、
３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、
４）アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）、
５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、および
６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）から選択される６つの群（各群は、互いについて保存的置換であるアミノ酸を含有する）のうちの１つからのものである、文１ａ〜１０ａのいずれか一項に抗体またはその断片。
【０９５７】
文１２ａ．
ａ）抗体ＳＴＩＭ００１が特異的に結合するエピトープと同一であり、
ｂ）抗体ＳＴＩＭ００２が特異的に結合するエピトープと同一であり、
ｃ）抗体ＳＴＩＭ００２−Ｂが特異的に結合するエピトープと同一であり、
ｄ）抗体ＳＴＩＭ００３が特異的に結合するエピトープと同一であり、
ｅ）抗体ＳＴＩＭ００４が特異的に結合するエピトープと同一であり、
ｆ）抗体ＳＴＩＭ００５が特異的に結合するエピトープと同一であり、
ｇ）抗体ＳＴＩＭ００６が特異的に結合するエピトープと同一であり、
ｈ）抗体ＳＴＩＭ００７が特異的に結合するエピトープと同一であり、
ｉ）抗体ＳＴＩＭ００８が特異的に結合するエピトープと同一であり、または
ｊ）抗体ＳＴＩＭ００９が特異的に結合するエピトープと同一である、エピトープに特異的に結合する、抗体またはその断片。
【０９５８】
文１３ａ．エピトープが、無関係のアミノ酸スキャンまたはＸ線結晶構造解析によって同定される、文１２ａに記載の抗体または断片。
【０９５９】
文１４ａ．エピトープの接触残基が、ＳＰＲによって判定される、無関係のアミノ酸スキャン、例えばアラニンスキャンにおける親和性の少なくとも１０倍の低減によって定義される、文１３ａに記載の抗体または断片。
【０９６０】
文１５ａ．
ａ）ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００１と競合し、
ｂ）ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００２と競合し、
ｃ）ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００２−Ｂと競合し、
ｄ）ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００３と競合し、
ｅ）ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００４と競合し、
ｆ）ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００５と競合し、
ｇ）ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００６と競合し、
ｈ）ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００７と競合し、
ｉ）ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００８と競合し、または
ｊ）ｈＩＣＯＳへの結合について抗体ＳＴＩＭ００９と競合する、抗体またはその断片。
【０９６１】
文１６ａ．カニクイザルＩＣＯＳ（配列番号５１３、配列番号５１３、もしくは配列番号５１４）および／またはマウスＩＣＯＳ（配列番号５１０、配列番号５１１、もしくは配列番号５１２）に特異的に結合する、文１ａ〜１５ａのいずれかに記載の抗体または断片。
【０９６２】
文１７ａ．ｈＩＣＯＳアイソフォームもしくは天然変異型、マウスＩＣＯＳアイソフォームもしくは天然変異型、および／またはカニクイザルＩＣＯＳアイソフォームもしくは天然変異型に特異的に結合する、文１ａ〜１６ａのいずれかに記載の抗体または断片。
【０９６３】
文１８ａ．ｈＩＣＯＳアイソフォームが、配列番号５０９によって定義されるアミノ酸配列を含む、文１７ａに記載の抗体または断片。
【０９６４】
文１９ａ．抗体または断片が、定常領域、例えばヒト定常領域、例えばエフェクターヌルヒト定常領域、例えばＩｇＧ４定常領域またはＩｇＧ１定常領域を含み、任意選択で、定常領域が、ＩｇＧ４−ＰＥ（配列番号１９９）、または欠損したＩｇＧ１（配列番号２０５）である、文１ａ〜１８ａのいずれかに記載の抗体または断片。
【０９６５】
文２０ａ．定常領域が、マウス定常領域である、文１９ａに記載の抗体または断片。
【０９６６】
文２１ａ．定常領域が、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性を有する、文１９ａまたは文２０ａに記載の抗体または断片。
【０９６７】
５．抗ＩＣＯＳ二重特異性抗体
上述のように、本明細書に提供されるＰＤ−Ｌ１抗体は、概念３７〜４０において本明細書の上記に開示されるように、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体としてフォーマット化され得る。その中に開示される一実施形態では、本明細書に開示されるＰＤ−Ｌ１抗体は、ＰＤ−Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ−Ｌ１）およびＩＣＯＳ（例えば、ヒトＩＣＯＳ等のＩＣＯＳに対するアゴニスト）の両方に対して特異性を有する二重特異性抗体中でフォーマット化され得る。
【０９６８】
したがって、ＰＤ−Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ−Ｌ１）およびＩＣＯＳ（例えば、ヒトＩＣＯＳ）に対して特異性を有する多重特異性（例えば、二重特異性抗体または二重結合抗体）が提供される。一実施形態では、多重特異性（例えば、二重特異性または二重結合）抗体は、ＩＣＯＳ（例えば、ヒトＩＣＯＳ）に対するアゴニスト活性を有する。
【０９６９】
様々なＩＣＯＳ含有多重特異性抗体は、以下の構成で記載される。
構成１．ＩＣＯＳ（例えば、ヒトＩＣＯＳ）と別の標的抗原とを結合させる（任意に、それらに対する特異性を有していてもよい）多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体または二重結合抗体）。
【０９７０】
一実施形態では、ＩＣＯＳ（例えば、ヒトＩＣＯＳ）および別の標的抗原に結合する二重特異性抗体または二重結合抗体が提供される。一実施形態では、ＩＣＯＳ（例えば、ヒトＩＣＯＳ）および別の標的抗原に対する特異性を有する二重特異性抗体または二重結合抗体が提供される。一実施形態では、ＩＣＯＳ（例えば、ヒトＩＣＯＳ）および別の標的抗原に結合する二重特異性抗体または二重結合抗体であって、二重特異性抗体フォーマットが、ｍＡｂ２である、二重特異性抗体または二重結合抗体が提供される。一実施形態では、ＩＣＯＳ（例えば、ヒトＩＣＯＳ）および別の標的抗原に結合する二重特異性抗体または二重結合抗体であって、二重特異性抗体フォーマットが、ｍＡｂ２であり、別の標的抗原に対する結合が、修飾された定常領域（すなわち、Ｆｃａｂ）によって提供される、二重特異性抗体または二重結合抗体が提供される。一実施形態では、ＩＣＯＳ（例えば、ヒトＩＣＯＳ）、およびＰＤ−Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ−Ｌ１）である別の標的抗原に結合する二重特異性抗体または二重結合抗体であって、二重特異性抗体フォーマットが、ｍＡｂ２であり、ＩＣＯＳに対する結合が、修飾された定常領域（すなわち、Ｆｃａｂ）によって提供される、二重特異性抗体または二重結合抗体が提供される。一実施形態では、ＩＣＯＳ（例えば、ヒトＩＣＯＳ）、およびＰＤ−Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ−Ｌ１）である別の標的抗原に結合する二重特異性抗体または二重結合抗体であって、二重特異性抗体フォーマットが、ｍＡｂ２であり、ＩＣＯＳに対する結合が、修飾された定常領域（すなわち、Ｆｃａｂ）によって提供され、ＰＤ−Ｌ１に対する結合が、概念１〜７０に記載される抗体のいずれかによって、または以下の構成５もしくは５ａに記載されるＰＤ−Ｌ１抗体のいずれかによって提供される、二重特異性抗体または二重結合抗体が提供される。一実施形態では、ＩＣＯＳ（例えば、ヒトＩＣＯＳ）、およびＰＤ−Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ−Ｌ１）である別の標的抗原に結合する二重特異性抗体または二重結合抗体であって、二重特異性抗体フォーマットが、ｍＡｂ２であり、ＰＤ−Ｌ１に対する結合が、修飾された定常領域（すなわち、Ｆｃａｂ）によって提供される、二重特異性抗体または二重結合抗体が提供される。一実施形態では、ＩＣＯＳ（例えば、ヒトＩＣＯＳ）、およびＰＤ−Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ−Ｌ１）である別の標的抗原に結合する二重特異性抗体または二重結合抗体であって、二重特異性抗体フォーマットが、ｍＡｂ２であり、ＰＤ−Ｌ１に対する結合が、修飾された定常領域（すなわち、Ｆｃａｂ）によって提供され、ＩＣＯＳに対する結合が、文１〜１０２に記載される抗体のいずれかによって提供される、二重特異性抗体または二重結合抗体が提供される。
【０９７１】
一実施形態では、多重特異性（例えば、二重特異性または二重結合）抗体は、ＩＣＯＳ（例えば、ヒトＩＣＯＳ）に対するアゴニスト活性を有する。別の標的抗原は、概念３９に指定される標的抗原のいずれかであり得る。一実施形態では、別の標的抗原は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、およびＶＩＳＴＡ、例えば、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＧＩＴ、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、およびＬＡＧ−３等の免疫チェックポイント阻害剤である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＢＴＬＡ、ｈＨＶＥＭ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ４、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７３、ＣＤ９６、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ２００、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、およびＣＤ１５５、例えば、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＲ４、ＢＴＬＡ、ｈＶＥＭ、およびＣＳＦ１Ｒ等の免疫調節剤である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＣＸＣＲ３（例えば、アゴニスティック抗ＣＸＣＲ３抗体）、ＣＤ２７、およびＣＤ３、またはＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＣＸＣＲ３（例えば、アゴニスティック抗ＣＸＣＲ３抗体）、およびＣＤ３、例えば、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、およびＯＸ４０）等の免疫賦活剤である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＰＤ−Ｌ１である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＣＴＬＡ−４である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＴＩＧＩＴである。一実施形態では、別の標的抗原は、ＴＩＭ−３である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＬＡＧ−３である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＧＩＴＲである。一実施形態では、別の標的抗原は、ＶＩＳＴＡである。一実施形態では、別の標的抗原は、ＣＤ１３７である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＳＩＲＰαである。一実施形態では、別の標的抗原は、ＣＸＣＬ１０である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＣＤ１５５である。一実施形態では、別の標的抗原は、ＣＤ４０である。これらの別の標的抗原に対する抗体は、本明細書の上記の態様１ａに記載されるもののいずれかであり得る。
【０９７２】
多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体のフォーマットは、本明細書に開示されるフォーマット、例えば、概念３７〜４０に記載されるフォーマットのいずれかであり得る。特に、ＩＣＯＳに対する結合および／または特異性は、非免疫グロブリンフォーマット、例えば、Ｔ細胞受容体結合ドメイン、免疫グロブリンスーパーファミリードメイン、無顎類可変リンパ球受容体、フィブロネクチンドメイン（例えば、Ａｄｎｅｃｔｉｎ（商標））、抗体定常ドメイン（例えば、ＣＨ３ドメイン、例えば、Ｆｃａｂ（商標）のＣＨ２および／またはＣＨ３）（当該定常ドメインは、機能的ＣＨ１ドメインではない）、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｓｃ−ｄｉａｂｏｄｙ、ｓｃＦａｂ、ＣＴＬＡ−４から選択される骨格に由来するセンチリン（ｃｅｎｔｙｒｉｎ）およびエピトープ結合ドメイン（Ｅｖｉｂｏｄｙ（商標））、リポカリンドメイン、タンパク質ＡのＺドメイン等のタンパク質Ａ（例えば、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（商標）またはＳｐＡ）、Ａドメイン（例えば、Ａｖｉｍｅｒ（商標）またはＭａｘｉｂｏｄｙ（商標））、熱ショックタンパク質（ＧｒｏＥＩおよびＧｒｏＥＳに由来するエピトープ結合ドメイン等）、トランスフェリンドメイン（例えば、トランスボディ）、アンキリンリピートタンパク質（例えば、ＤＡＲＰｉｎ（商標））、ペプチドアプタマー、Ｃ型レクチンドメイン（例えば、Ｔｅｔｒａｎｅｃｔｉｎ（商標））、ヒトγ−クリスタリンまたはヒトユビキチン（アフィリン）、ＰＤＺドメイン、サソリ毒、ならびにヒトプロテアーゼ阻害剤のクーニッツ型ドメインによって提供され得る。別の標的抗原に対する結合および／または特異性は、免疫グロブリン由来の抗原結合タンパク質によって提供され得る。
【０９７３】
「特異的に結合する」は、本明細書の上記に提供される意味を有する。結合定数、例えば、ＫＤは、本明細書の他の箇所に記載されるように判定され得、目的の特定のＫＤは、以下の構成２、および本明細書の上記の概念１に記載される（ＰＤ−Ｌ１結合について指定されているものの、ＫＤの値は、抗ＩＣＯＳ結合にも同等に適用され得る）。
【０９７４】
構成２．ＩＣＯＳが、ヒトＩＣＯＳである、構成１に記載の多重特異性抗体。
【０９７５】
ヒトＩＣＯＳの配列は、配列番号５０６、５０７、および５０８に提供される。一実施形態では、多重特異性抗体は、野生型ヒトＩＣＯＳに対して特異的である。別の実施形態では、多重特異性抗体は、ｈＩＣＯＳのアイソフォームまたは天然変異型、例えば、配列番号５０９のアイソフォームに対して交差反応性である。他のアイソフォームおよび天然変異型は、当業者に周知である。別の実施形態では、多重特異性抗体は、野生型ｈＩＣＯＳよりもアイソフォームまたは天然変異型（例えば、配列番号５０９のアミノ酸配列を有するＩＣＯＳアイソフォーム）に対して特異的である。
【０９７６】
抗体、例えば、多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体の種交差反応性の程度を定量化する１つの方法は、異なる抗原と比較した、抗原へのその親和性の倍数変化（例えば、マウスＩＣＯＳに対するヒトＩＣＯＳへの親和性の倍数変化、またはｈＩＣＯＳのアイソフォームに対する野生型ｈＩＣＯＳへの親和性の倍数変化）としてである。親和性は、ＫＤとして定量化され得、これは、ＳＰＲ（任意選択で、本明細書の他の箇所に記載されるＦａｂフォーマットの抗体を用いる）によって判定される抗体−抗原反応の平衡解離定数を指す。種またはアイソフォーム交差反応性抗ＩＣＯＳ抗体は、３０倍以下、２５倍以下、２０倍以下、１５倍以下、１０倍以下、または５倍以下の、ヒトおよびマウスＩＣＯＳへの結合の倍数変化を有し得る。言い換えると、ｈＩＣＯＳの細胞外ドメインへの結合のＫＤは、マウスＩＣＯＳの細胞外ドメインへの結合のＫＤの３０倍、２５倍、２０倍、１５倍、１０倍、または５倍以内であり得る。抗体はまた、両方の種の抗原への結合のＫＤが、閾値を満たす場合、例えば、ｈＩＣＯＳへの結合のＫＤおよびマウスＩＣＯＳへの結合のＫＤがいずれも１０ｍＭ以下、好ましくは５ｍＭ以下、より好ましくは１ｍＭ以下である場合に、交差反応性であると見なされ得る。ＫＤは、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、２ｎＭ以下、または１ｎＭ以下であり得る。ＫＤは、０．９ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下、または０．１ｎＭ以下であり得る。
【０９７７】
ｈＩＣＯＳおよびマウスＩＣＯＳ、またはＷＴ  ｈＩＣＯＳおよびｈＩＣＯＳのアイソフォームの結合の交差反応性の代替的な尺度は、例えば、ＨＴＲＦアッセイ（本明細書の他の箇所に記載される）における、ＩＣＯＳ受容体へのＩＣＯＳリガンドの結合を中和させる抗体の能力である。種交差反応性抗体の例は、本明細書に提供され、これにはＳＴＩＭ００１、ＳＴＩＭ００２、ＳＴＩＭ００２−Ｂ、ＳＴＩＭ００３、ＳＴＩＭ００５、およびＳＴＩＭ００６が含まれ、これらの各々は、ＨＴＲＦアッセイにおいて、ｈＩＣＯＳへのヒトＢ７−Ｈ２（ＩＣＯＳリガンド）の結合を中和させ、マウスＩＣＯＳへのマウスＢ７−Ｈ２の結合を結合を中和させることが確認された。これらの抗体またはそれらの変異型はいずれも、ヒトおよびマウスＩＣＯＳに対する抗体交差反応性が所望される場合に選択され得る。種交差反応性抗ＩＣＯＳ抗体は、ＨＴＲＦアッセイによって判定される、マウスＩＣＯＳ受容体へのマウスＩＣＯＳを阻害するためのＩＣ５０の２５倍、２０倍、１５倍、１０倍、または５倍以内の、ヒトＩＣＯＳ受容体へのｈＩＣＯＳの結合を阻害するためのＩＣ５０を有し得る。抗体はまた、ヒトＩＣＯＳ受容体へのｈＩＣＯＳの結合を阻害するためのＩＣ５０およびマウスＩＣＯＳ受容体へのマウスＩＣＯＳの結合を阻害するためのＩＣ５０がいずれも、１ｍＭ以下、好ましくは０．５ｍＭ以下、例えば、３０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下である場合に、交差反応性であると見なされ得る。ＩＣ５０は、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、または２ｎＭ以下であり得る。場合によっては、ＩＣ５０は、少なくとも０．１ｎＭ、少なくとも０．５ｎＭ、または少なくとも１ｎＭである。
【０９７８】
親和性はまた、本明細書の上記の概略２７に開示される通りであり得る。
【０９７９】
構成３．ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含むＶＨドメインを含み、当該ＶＨドメインが、ｈＩＣＯＳに結合する（任意に、それに対する特異性を有していてもよい）を含む、構成２に記載の多重特異性抗体。
【０９８０】
一実施形態では、多重特異性抗体は、ｈＩＣＯＳに結合する少なくとも１つのＶＨドメインを含む。例えば、多重特異性抗体は、ｈＩＣＯＳに結合する（任意に、それに対する特異性を有していてもよい）ＶＨ領域のみを含む、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、またはドメイン抗体を含み得る。
【０９８１】
構成４．ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含むＶＬドメインを含み、当該ＶＬドメインが、ｈＩＣＯＳに結合する（任意に、それに対する特異性を有していてもよい）を含む、構成２または構成３に記載の多重特異性抗体。
【０９８２】
一実施形態では、多重特異性抗体は、ｈＩＣＯＳに結合する少なくとも１つのＶＬドメインを含む。例えば、多重特異性抗体は、ｈＩＣＯＳに結合する（任意に、それに対する特異性を有していてもよい）ＶＬ領域のみを含む、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、またはドメイン抗体を含み得る。
【０９８３】
別の実施形態では、多重特異性抗体は、無傷もしくは全長抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、またはＦｖ断片を含むがこれらに限定されないＶＨおよびＶＬドメインの対を含む。
【０９８４】
構成５．ＶＨおよび／またはＶＬドメインが、
ａ．抗体７Ｆ１２、３７Ａ１０、３５Ａ９、３６Ｅ１０、１６Ｇ１０、３７Ａ１０Ｓ７１３、３７Ａ１０Ｓ７１４、３７Ａ１０Ｓ７１５、３７Ａ１０Ｓ７１６、３７Ａ１０Ｓ７１７、３７Ａ１０Ｓ７１８、１６Ｇ１０Ｓ７１、１６Ｇ１０Ｓ７２、１６Ｇ１０Ｓ７３、１６Ｇ１０Ｓ８３、３５Ａ９Ｓ７９、３５Ａ９Ｓ７１０、３５Ａ９Ｓ８９、もしくはＷＯ２０１６／１５４１７７およびＵＳ２０１６／０３０４６１０に記載される任意の他の抗体、
ｂ．抗体４２２．２、Ｈ２Ｌ５、もしくはＷＯ２０１６／１２０７８９およびＵＳ２０１６／０２１５０５９に記載される任意の他の抗体、
ｃ．抗体３１４−８、ハイブリドーマＣＮＣＭ  Ｉ−４１８０から産生された抗体、もしくはＷＯ２０１４／０３３３２７およびＵＳ２０１５／０２３９９７８に記載される任意の他の抗体、
ｄ．抗体Ｉｃｏｓ１４５−１、ハイブリドーマＣＮＣＭ  Ｉ−４１７９によって産生された抗体、もしくはＷＯ２０１２／１３１００４、ＵＳ９，３７６，４９３、およびＵＳ２０１６／０２６４６６６に記載される任意の他の抗体、
ｅ．抗体１３６、「１３６」、もしくはＷＯ２０１０／０５６８０４に記載される任意の他の抗体、
ｆ．抗体ＭＩＣ−９４４、９Ｆ３、もしくはＷＯ９９／１５５５３、ＵＳ７，２５９，２４７、ＵＳ７，１３２，０９９、ＵＳ７，１２５，５５１、ＵＳ７，３０６，８００、ＵＳ７，７２２，８７２、ＷＯ０５／１０３０８６、ＵＳ８．３１８．９０５、およびＵＳ８，９１６，１５５に記載される任意の他の抗体、
ｇ．任意のＪＭＡｂ抗体、例えば、ＪＭＡｂ−１２４、ＪＭＡｂ−１２６、ＪＭＡｂ−１２７、ＪＭＡｂ−１２８、ＪＭＡｂ−１３５、ＪＭＡｂ−１３６、ＪＭＡｂ−１３７、ＪＭＡｂ−１３８、ＪＭＡｂ−１３９、ＪＭＡｂ−１４０、ＪＭＡｂ−１４１のいずれか、例えば、ＪＭＡｂ１３６、もしくはＷＯ９８／３８２１、ＵＳ７，９３２，３５８Ｂ２、ＵＳ２００２／１５６２４２、ＵＳ７，０３０，２２５、ＵＳ７，０４５，６１５、ＵＳ７，２７９，５６０、ＵＳ７，２２６，９０９、ＵＳ７，１９６，１７５、ＵＳ７，９３２，３５８、ＵＳ８，３８９，６９０、ＷＯ０２／０７００１０、ＵＳ７，４３８，９０５、ＵＳ７，４３８，９０５、ＷＯ０１／８７９８１、ＵＳ６，８０３，０３９、ＵＳ７，１６６，２８３、ＵＳ７，９８８，９６５、ＷＯ０１／１５７３２、ＵＳ７，４６５，４４５、およびＵＳ７，９９８，４７８に記載される任意の他の抗体、
ｈ．抗体１７Ｇ９、もしくはＷＯ２０１４／０８９１１に記載される任意の他の抗体、
ｉ．ＷＯ２０１２／１７４３３８に記載される任意の抗体、
ｊ．ＵＳ２０１６／０１４５３４４に記載される任意の抗体、
ｋ．ＷＯ２０１１／０２００２４、ＵＳ２０１６／００２３３６、ＵＳ２０１６／０２４２１１、およびＵＳ８，８４０，８８９に記載される任意の抗体、
ｌ．ＵＳ８，４９７，２４４に記載される任意の抗体、
ｍ．ＧＳＫ３３５９６０９として知られる抗体、
ｎ．ＪＴＸ−２０１１として知られる抗体、または
ｏ．抗体クローンＩＳＡ−３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローンＳＰ９８（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、クローン１  Ｇ１、クローン３Ｇ４（Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン６６９２２２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローンＴＱ０９（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、もしくはクローンＣ３９８．４Ａ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、のＶＨおよび／またはＶＬドメインである、構成３または４に記載の多重特異性抗体。
【０９８５】
構成５ａ．
ａ．抗体７Ｆ１２、３７Ａ１０、３５Ａ９、３６Ｅ１０、１６Ｇ１０、３７Ａ１０Ｓ７１３、３７Ａ１０Ｓ７１４、３７Ａ１０Ｓ７１５、３７Ａ１０Ｓ７１６、３７Ａ１０Ｓ７１７、３７Ａ１０Ｓ７１８、１６Ｇ１０Ｓ７１、１６Ｇ１０Ｓ７２、１６Ｇ１０Ｓ７３、１６Ｇ１０Ｓ８３、３５Ａ９Ｓ７９、３５Ａ９Ｓ７１０、３５Ａ９Ｓ８９、もしくはＷＯ２０１６／１５４１７７およびＵＳ２０１６／０３０４６１０に記載される任意の他の抗体、
ｂ．抗体４２２．２、Ｈ２Ｌ５、もしくはＷＯ２０１６／１２０７８９およびＵＳ２０１６／０２１５０５９に記載される任意の他の抗体、
ｃ．抗体３１４−８、ハイブリドーマＣＮＣＭ  Ｉ−４１８０から産生された抗体、もしくはＷＯ２０１４／０３３３２７およびＵＳ２０１５／０２３９９７８に記載される任意の他の抗体、
ｄ．抗体Ｉｃｏｓ１４５−１、ハイブリドーマＣＮＣＭ  Ｉ−４１７９によって産生された抗体、もしくはＷＯ２０１２／１３１００４、ＵＳ９，３７６，４９３、およびＵＳ２０１６／０２６４６６６に記載される任意の他の抗体、
ｅ．抗体１３６、「１３６」、もしくはＷＯ２０１０／０５６８０４に記載される任意の他の抗体、
ｆ．抗体ＭＩＣ−９４４、９Ｆ３、もしくはＷＯ９９／１５５５３、ＵＳ７，２５９，２４７、ＵＳ７，１３２，０９９、ＵＳ７，１２５，５５１、ＵＳ７，３０６，８００、ＵＳ７，７２２，８７２、ＷＯ０５／１０３０８６、ＵＳ８．３１８．９０５、およびＵＳ８，９１６，１５５に記載される任意の他の抗体、
ｇ．任意のＪＭＡｂ抗体、例えば、ＪＭＡｂ−１２４、ＪＭＡｂ−１２６、ＪＭＡｂ−１２７、ＪＭＡｂ−１２８、ＪＭＡｂ−１３５、ＪＭＡｂ−１３６、ＪＭＡｂ−１３７、ＪＭＡｂ−１３８、ＪＭＡｂ−１３９、ＪＭＡｂ−１４０、ＪＭＡｂ−１４１のいずれか、例えば、ＪＭＡｂ１３６、もしくはＷＯ９８／３８２１、ＵＳ７，９３２，３５８Ｂ２、ＵＳ２００２／１５６２４２、ＵＳ７，０３０，２２５、ＵＳ７，０４５，６１５、ＵＳ７，２７９，５６０、ＵＳ７，２２６，９０９、ＵＳ７，１９６，１７５、ＵＳ７，９３２，３５８、ＵＳ８，３８９，６９０、ＷＯ０２／０７００１０、ＵＳ７，４３８，９０５、ＵＳ７，４３８，９０５、ＷＯ０１／８７９８１、ＵＳ６，８０３，０３９、ＵＳ７，１６６，２８３、ＵＳ７，９８８，９６５、ＷＯ０１／１５７３２、ＵＳ７，４６５，４４５、およびＵＳ７，９９８，４７８に記載される任意の他の抗体、
ｈ．抗体１７Ｇ９、もしくはＷＯ２０１４／０８９１１に記載される任意の他の抗体、
ｉ．ＷＯ２０１２／１７４３３８に記載される任意の他の抗体、
ｊ．ＵＳ２０１６／０１４５３４４に記載される任意の他の抗体、
ｋ．ＷＯ２０１１／０２００２４、ＵＳ２０１６／００２３３６、ＵＳ２０１６／０２４２１１、およびＵＳ８，８４０，８８９に記載される任意の抗体、
ｌ．ＵＳ８，４９７，２４４に記載される任意の抗体、
ｍ．ＧＳＫ３３５９６０９として知られる抗体、
ｎ．ＪＴＸ−２０１１として知られる抗体、または
ｏ．抗体クローンＩＳＡ−３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、クローンＳＰ９８（Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、クローン１  Ｇ１、クローン３Ｇ４（Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、クローン６６９２２２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、クローンＴＱ０９（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、もしくはクローンＣ３９８．４Ａ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３、またはＶＨ、もしくはＶＬ、もしくはＶＨおよびＶＬ領域を含む、構成１〜５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
【０９８６】
構成６．ＶＨおよび／またはＶＬドメインが、文１〜１０２または文１ａ〜２１ａに記載のＶＨおよび／またはＶＬドメインのいずれかである、構成３または４に記載の多重特異性抗体。
【０９８７】
一実施形態では、抗ＩＣＯＳのＶＨおよび／またはＶＬは、英国特許出願第１６２０４１４．１号（２０１６年１２月１日出願）に記載される通りであり、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０９８８】
構成７．ＩＣＯＳに対するアゴニスト活性を有する、構成１〜６のいずれかに記載の多重特異性抗体。
【０９８９】
アゴニズムは、架橋剤を含むかまたはそれを排除して可溶性形態（例えば、免疫グロブリンフォーマットまたは２つの空間的に離間した抗原結合部位、例えば、２つのＶＨ−ＶＬ対））の抗体を使用して、または繋がれた抗原結合部位のアレイを提供するために固体表面に結合した抗体（例えば、多重特異性抗体）を使用して、インビトロＴ細胞活性化アッセイにおいて試験され得る。アゴニズムアッセイは、ＭＪ細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−８２９４）等のｈＩＣＯＳ陽性Ｔリンパ球細胞株をかかるアッセイにおける活性化のための標的Ｔ細胞として使用し得る。試験抗体についてＴ細胞活性化の１つ以上の尺度を判定することができ、参照分子または陰性対照と比較して、試験抗体（例えば、多重特異性抗体）によってもたらされたＴ細胞活性化に、参照分子または対照と比較した統計学的に有意な（ｐ＜０．０５）差異が存在するかどうかを判定することができる。Ｔ細胞活性化の１つの好適な尺度は、サイトカイン、例えば、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、またはＩＬ−２の産生である。当業者は、適宜、好適な対照を含め、試験抗体と対照との間のアッセイ条件を標準化するであろう。好適な陰性対照は、ＩＣＯＳに結合しない同じフォーマットの抗体（例えば、アイソタイプ対照）、例えば、アッセイ系に存在しない抗原について特異的である抗体（例えば、多重特異性抗体）である。アッセイのダイナミックレンジ内で同起源のアイソタイプ対照と比較して試験対象について認められる有意差は、そのアッセイにおいて、抗体が、ＩＣＯＳ受容体のアゴニストとして作用することを示す。
【０９９０】
アゴニスト抗体は、Ｔ細胞活性化アッセイにおいて試験された場合に、
対照抗体と比較して、ＩＦＮγ産生の誘導について有意に低いＥＣ５０を有し、
対照抗体と比較して、有意に高い最大ＩＦＮγ産生を誘導し、
ＩＣＯＳＬ−Ｆｃと比較して、ＩＦＮγ産生の誘導について有意に低いＥＣ５０を有し、
ＩＣＯＳＬ−Ｆｃと比較して、有意に高い最大ＩＦＮγ産生を誘導し、
参照抗体Ｃ３９８．４Ａと比較して、ＩＦＮγ産生の誘導について有意に低いＥＣ５０を有し、及び／又は
参照抗体Ｃ３９８．４Ａと比較して、有意に高い最大ＩＦＮγ産生を誘導するものとして定義され得る。
【０９９１】
有意に低いまたは有意に高い値は、例えば、参照または対照値と比較して、最大で０．５倍異なる、最大で０．７５倍異なる、最大で２倍異なる、最大で３倍異なる、最大で４倍異なる、または最大で５倍異なることであり得る。
【０９９２】
したがって、一例では、ビーズ結合フォーマットの抗体を使用するＭＪ細胞活性化アッセイにおいて、本明細書に提供される抗体（例えば、多重特異性抗体）は、ＩＦＮγの誘導について、対照と比較して有意に低い、例えば少なくとも２倍低いＥＣ５０を有する。
【０９９３】
ビーズ結合アッセイは、ビーズの表面に結合した抗体（例えば、多重特異性抗体）（および、対照または参照実験について、対照抗体、参照抗体、またはＩＣＯＳＬ−Ｆｃ）を使用する。磁気ビーズを使用してもよく、様々な種類、例えば、トシル活性化ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ  Ｍ−４５０（ＤＹＮＡＬ  Ｉｎｃ，５  Ｄｅｌａｗａｒｅ  Ｄｒｉｖｅ，Ｌａｋｅ  Ｓｕｃｃｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．１１０４２  Ｐｒｏｄ  Ｎｏ．１４０．０３，１４０．０４）が市販されている。ビーズは、一般に、炭酸緩衝液（ｐＨ９．６、０．２Ｍ）中にコーティング材を溶解することによって、または当該技術分野で既知の他の方法によって、コーティングされてもよい（コーティング方法は、当業者に周知である）。ビーズの使用は、ビーズ表面に結合したタンパク質の量を良好な程度の精度で判定することを好都合に可能にする。標準的なＦｃタンパク質定量化方法は、ビーズ上に結合したタンパク質の定量化のために使用され得る。アッセイのダイナミックレンジ内の妥当な標準に関して、任意の好適な方法が使用され得る。ＤＥＬＦＩＡ、ＥＬＩＳＡ、または他の方法を使用することができる。
【０９９４】
抗体のアゴニズム活性はまた、初代ヒトＴリンパ球においてエクスビボで測定することもできる。かかるＴ細胞中でＩＦＮγの発現を誘導する抗体（例えば、多重特異性抗体）の能力は、ＩＣＯＳアゴニズムを示す。好ましくは、抗体は、Ｔ細胞活性化アッセイにおいて、対照抗体と比較して、５μｇ／ｍＬのＩＦＮγの有意な（ｐ＜０．０５）誘導を示す。抗ＩＣＯＳ抗体は、かかるアッセイにおいて、ＩＣＯＳ−ＬまたはＣ３９８．４よりも大きい程度までＴ細胞活性化を刺激し得る。したがって、抗体は、Ｔ細胞活性化アッセイにおいて、対照または参照抗体と比較して、５μｇ／ｍＬの有意に（ｐ＜０．０５）大きいＩＦＮγの誘導を示し得る。ＴＮＦαまたはＩＬ−２誘導は、代替的なアッセイ読み出し値として測定され得る。
【０９９５】
抗ＩＣＯＳ抗体のアゴニズムは、例えば、腫瘍微小環境等の病理部位において、ＴＥｆｆ細胞のために、インビボでＴＲｅｇおよびＴＥｆｆ細胞の集団のバランスを変えるその能力に貢献し得る。本明細書の他の箇所に考察されるように、活性化されたＩＣＯＳ陽性エフェクターＴ細胞による腫瘍細胞殺滅を増強する抗体の能力が判定され得る。
【０９９６】
構成８．マウスＩＣＯＳおよび／またはカニクイザルＩＣＯＳに結合する（任意に、それに対する特異性を有していてもよい）、構成１〜７のいずれかに記載の多重特異性抗体。
【０９９７】
本明細書に記載される多重特異性抗体は、交差反応性であり得、例えば、マウスＩＣＯＳおよびヒトＩＣＯＳの細胞外ドメインに結合し得る。多重特異性抗体は、カニクイザル等の霊長類のＩＣＯＳを含む、他の非ヒトＩＣＯＳに結合し得る。ヒトにおける治療用の使用が意図される抗ＩＣＯＳ多重特異性抗体は、ヒトＩＣＯＳに結合しなければならない一方、他の種のＩＣＯＳへの結合は、ヒトの臨床的文脈において直接的な治療的な関連性を有しない。しかしながら、根底にある理論にかかわらず、交差反応性抗体は、価値の高いものであり、前臨床および臨床研究のための治療用分子として優れた候補である。交差反応性は、本明細書の上記の構成２に記載されるように判定され得る。
【０９９８】
構成９．二重特異性抗体である、構成１〜８のいずれかに記載の多重特異性抗体。
【０９９９】
二重特異性抗体は、本明細書の上記の意味のいずれかを有する。
【１０００】
構成１０．二重特異性抗体フォーマットが、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｍＡｂ２、ＦＩＴ−Ｉｇ、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｄｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ｔａｎｄｅｍ  ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、ミニボディ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、特にｍＡｂ２、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、およびＦＩＴ−Ｉｇから、例えばｍＡｂ２およびＦＩＴ−Ｉｇから選択される、構成９に記載の二重特異性抗体。
【１００１】
一実施形態では、二重特異性抗体フォーマットは、本明細書の上記の概念３７〜４０に記載される通りであるか、または定義の節に記載される通りである。一実施形態では、二重特異性抗体フォーマットは、ｍＡｂ２であり、ＩＣＯＳ結合は、二重特異性抗体のＦｃａｂ部分によって提供される。別の実施形態では、二重特異性抗体フォーマットは、ｍＡｂ２であり、ＩＣＯＳ結合は、二重特異性抗体のＦａｂ部分によって提供される。
【１００２】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、ｍＡｂ２二重特異性抗体ではない。
【１００３】
構成１１．二重結合抗体である、構成１〜８のいずれか一項に記載の多重特異性抗体。
【１００４】
二重結合抗体は、本明細書の上記の意味のいずれかを有する。
【１００５】
構成１２．別の標的抗原が、免疫チェックポイント阻害剤、免疫調節剤、および免疫賦活剤から選択される、構成１〜１１のいずれか一項に記載の多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体。
【１００６】
構成１３．別の標的抗原が、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ４、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７３、ＣＤ９６、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ２００、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＤ１５５、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＸＣＲ３、ＣＤ２７、およびＣＤ３から選択される、構成１２に記載の多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体。
【１００７】
構成１３ａ．別の標的抗原が、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＣＲ４、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７３、ＣＤ９６、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＤ２００、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＤ１５５、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＸＣＲ３、およびＣＤ３から選択される、構成１２に記載の多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体。
【１００８】
一実施形態では、別の標的抗原に結合する抗原結合部位は、本明細書の上記の態様１ａにより詳細に記載される、構成１３に列挙される標的に対する抗体のいずれか１つからのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３によって提供される。
【１００９】
構成１４．別の標的抗原が、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＧＡＲＰ、ＳＩＲＰα、ＣＸＣＲ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＣＳＦ１Ｒ、アゴニスティック抗ＣＸＣＲ３抗体）、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、およびＯＸ４０から選択される、構成１３に記載の多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体。
【１０１０】
構成１５．別の標的抗原が、ＰＤ−Ｌ１（例えば、ヒトＰＤ−Ｌ１）である、構成１４に記載の多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体。
【１０１１】
構成１６．ＰＤ−Ｌ１の結合（および任意選択で、それに対する特異性）が、概念１〜７０に記載の抗体または断片のいずれかによって提供される、構成１５に記載の多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体。
【１０１２】
構成１７．ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含むＶＨを含み、当該ＶＨドメインが、ヒトＰＤ−Ｌ１に対する特異性を有する、構成１５または構成１６に記載の多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体。
【１０１３】
構成１８．ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含むＶＬを含み、当該ＶＬドメインが、ヒトＰＤ−Ｌ１に対する特異性を有する、構成１５〜１７のいずれか一項に記載の多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体。
【１０１４】
構成１９．ＶＨおよび／またはＶＬドメインが、アテゾリズマブ（Ｒｏｃｈｅ）、アベルマブ（Ｍｅｒｃｋ）、ＢＭＳ−９３６５５９（ＢＭＳ）、デュルバルマブ（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）から、またはＷＯ２０１６／０６１１４２、ＷＯ２０１６／０２２６３０、ＷＯ２０１６／００７２３５、ＷＯ２０１５／１７３２６７、ＷＯ２０１５／１８１３４２、ＷＯ２０１５／１０９１２４、ＷＯ２０１５／１１２８０５、ＷＯ２０１５／０６１６６８、ＷＯ２０１４／１５９５６２、ＷＯ２０１４／１６５０８２、ＷＯ２０１４／１０００７９、ＷＯ２０１４／０５５８９７、ＷＯ２０１３／１８１６３４、ＷＯ２０１３／１７３２２３、ＷＯ２０１３／０７９１７４、ＷＯ２０１２／１４５４９３、ＷＯ２０１１／０６６３８９、ＷＯ２０１０／０７７６３４、ＷＯ２０１０／０３６９５９、もしくはＷＯ２００７／００５８７４に開示されるＰＤ−Ｌ１抗体からのＶＨおよび／またはＶＬドメインのいずれかである、構成１７または構成１８に記載の多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体。
【１０１５】
構成２０．ＶＨおよび／またはＶＬドメインが、概念１〜７０に記載されるＶＨおよび／またはＶＬドメインのいずれかである、構成１７または構成１８に記載の多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体。
【１０１６】
構成２１．マウスＰＤ−Ｌ１および／またはカニクイザルＰＤ−Ｌ１に結合する（任意に、それに対する特異性を有していてもよい）、構成１５〜２０のいずれか一項に記載の多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体。
【１０１７】
交差反応性は、構成２または概念２７について、本明細書の上記の通りであり得る。
【１０１８】
構成２２．構成１〜２１のいずれかに記載の多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体と、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体と、を含み、任意選択で、
ａ）他の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、および抗ＬＡＧ−３抗体）、
ｂ）免疫刺激剤（例えば、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、および抗ＣＤ４０抗体）、
ｃ）ケモカイン受容体アンタゴニスト（例えば、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ４、およびＣＸＣＲ２）、
ｄ）標的化キナーゼ阻害剤（例えば、ＣＳＦ−１ＲもしくはＶＥＧＦＲ阻害剤）、
ｅ）血管新生阻害剤（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａもしくはデルタ様リガンド４）、
ｆ）免疫刺激ペプチドもしくはケモカイン（例えば、ＣＸＣＬ９もしくはＣＸＣＬ１０）、
ｇ）サイトカイン（例えば、ＩＬ−１５およびＩＬ−２１）、
ｈ）ＣＤ３に対して少なくとも１つの特異性を有する二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）（例えば、ＣＤ３／ＣＤ１９  ＢｉＴＥ）、
ｉ）他の二重特異性分子（例えば、腫瘍関連抗原を標的とするＩＬ−１５含有分子、例えば、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ−２、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｃａｎｃｅｒ−１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）、ＧＤ２、ＥｐＣＡＭ、もしくは黒色腫関連抗原−３（ＭＡＧＥ−Ａ３））、
ｊ）腫瘍溶解性ウイルス（例えば、ＨＳＶウイルス（任意選択でＧＭＣＳＦを分泌する）、ニューカッスル病ウイルス、およびワクシニアウイルス）、
ｋ）腫瘍関連抗原（例えば、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｃａｎｃｅｒ−１［ＮＹ−ＥＳＯ−１］、黒色腫関連抗原−３（ＭＡＧＥ−３））によるワクチン接種、
ｌ）細胞療法（例えば、抗ＣＤ１９、抗ＥｐＣａｍ、もしくは抗メソテリンを発現するキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）等）、
ｍ）ＮＫＧ２ＤもしくはＣＤ１６ａ等の、活性化ＭＫ受容体に対する特異性を有する二重特異性ＮＫ細胞エンゲージャー、ならびに
ｎ）腫瘍特異的Ｔ細胞またはＬＡＫ細胞の養子移入、からなる群から独立して選択されるさらなる治療剤をさらに含む、組成物。
【１０１９】
抗体は、構成５に記載されるか、または態様１ａに詳述される配列または抗体のいずれかであり得る。この構成の他の特徴は、概念４９に記載される通りであり得る。
【１０２０】
構成２２ａ．組成物が、腫瘍性もしくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、および悪性腫瘍、例えば黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキン病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫から選択される病的状態または疾患を治療および／または予防するためのものである、構成２２に記載の医薬組成物、または構成２２に記載の医薬組成物を含むキット。
【１０２１】
構成２２ｂ．ヒトにおける疾患または病的状態を治療および／もしくは予防に使用するためのラベルもしくは説明書と組み合わせた態様５７もしくは態様５８に記載の医薬組成物、またはそれを含む態様５８に記載のキットであって、任意選択で、ラベルまたは説明書が、販売承認番号（例えば、ＦＤＡまたはＥＭＡ承認番号）を含み、任意選択で、キットが、多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体を含むＩＶまたは注射デバイスを含む、構成２２または構成２２ａに記載の医薬組成物、または構成２２ａに記載のキット。
【１０２２】
構成２３．神経疾患、腫瘍性もしくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、および悪性腫瘍、例えば黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキン病、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（例えば、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、および中皮腫、または例えばウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）および軟部肉腫）から選択される、疾患または病的状態の治療または予防における使用のための、構成１〜２１のいずれか一項に記載の多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体。
【１０２３】
構成２４．神経疾患、腫瘍性もしくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、および悪性腫瘍、例えば黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキン病、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（例えば、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、および中皮腫、または例えばウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）および軟部肉腫）から選択される、ヒトにおける疾患または病的状態の治療または予防のための当該ヒトへの投与のための医薬品の製造における、構成１〜２１のいずれか一項に記載の多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体の使用。
【１０２４】
構成２５．神経疾患、腫瘍性もしくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、および悪性腫瘍、例えば黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキン病、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（例えば、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、および中皮腫、または例えばウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）および軟部肉腫）から選択される、ヒトにおける疾患または病的状態を治療または予防する方法であって、治療有効量の、構成１〜２１のいずれか一項に記載の多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体を当該ヒトに投与することを含み、当該疾患または病的状態が、それにより治療または予防される、方法。
【１０２５】
これらの構成において提供される多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体によって治療または予防され得る疾患および病的状態は、例えば、概念４１〜４５、態様５１〜５５、または本明細書に記載される文のいずれかにおいて提供される疾患のいずれかであり得る。
【１０２６】
構成２６．神経疾患が、神経変性疾患、障害、または病的状態であり、任意選択で、当該神経変性疾患、障害、または病的状態が、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、一次性進行型多発性硬化症、二次性進行型多発性硬化症、大脳皮質基底核変性症、レット症候群、加齢黄斑変性および網膜色素変性症から選択される網膜変性障害、前部虚血性視神経症、緑内障、ブドウ膜炎、うつ病、外傷関連ストレスまたは心的外傷後ストレス障害、前頭側頭型認知症、レビー小体型認知症、軽度認知障害、後皮質萎縮、原発性進行性失語および進行性核上性麻痺または加齢認知症、特に、アルツハイマー病、筋委縮性側索硬化症、パーキンソン病、およびハンチントン病から選択され、例えば、アルツハイマー病から選択される、構成２３に記載の多重特異性、二重特異性、もしくは二重結合抗体、構成２４に記載の使用、または構成２５に記載の方法。
【１０２７】
構成２７．癌が、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、および中皮腫から選択されるか、またはウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）および軟部肉腫から選択される、構成３に記載の多重特異性、二重特異性、もしくは二重結合抗体、構成２４に記載の使用、または構成２５に記載の方法。。
【１０２８】
構成２８．さらなる療法、例えば治療剤をヒトに投与することをさらに含み、任意選択で、さらなる治療剤が、
ａ．他の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、および抗ＬＡＧ−３抗体）、
ｂ．免疫刺激剤（例えば、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、および抗ＣＤ４０抗体）、
ｃ．ケモカイン受容体アンタゴニスト（例えば、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ４、およびＣＸＣＲ２）、
ｄ．標的化キナーゼ阻害剤（例えば、ＣＳＦ−１ＲもしくはＶＥＧＦＲ阻害剤）、
ｅ．血管新生阻害剤（例えば、抗ＶＥＧＦ−Ａもしくはデルタ様リガンド４）、
ｆ．免疫刺激ペプチドもしくはケモカイン（例えば、ＣＸＣＬ９もしくはＣＸＣＬ１０）、
ｇ．サイトカイン（例えば、ＩＬ−１５およびＩＬ−２１）、
ｈ．ＣＤ３に対して少なくとも１つの特異性を有する二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）（例えば、ＣＤ３／ＣＤ１９  ＢｉＴＥ）、
ｉ．他の二重特異性分子（例えば、腫瘍関連抗原を標的とするＩＬ−１５含有分子、例えば、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ−２、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｃａｎｃｅｒ−１（ＮＹ−ＥＳＯ−１）、ＧＤ２、ＥｐＣＡＭ、もしくは黒色腫関連抗原−３（ＭＡＧＥ−Ａ３））、
ｊ．腫瘍溶解性ウイルス（例えば、ＨＳＶウイルス（任意選択でＧＭＣＳＦを分泌する）、ニューカッスル病ウイルス、およびワクシニアウイルス）、
ｋ．腫瘍関連抗原（例えば、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｃａｎｃｅｒ−１［ＮＹ−ＥＳＯ−１］、黒色腫関連抗原−３（ＭＡＧＥ−３））によるワクチン接種、
ｌ．細胞療法（例えば、抗ＣＤ１９、抗ＥｐＣａｍ、もしくは抗メソテリンを発現するキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ）等）、
ｍ．ＮＫＧ２ＤもしくはＣＤ１６ａ等の、活性化ＭＫ受容体に対する特異性を有する二重特異性ＮＫ細胞エンゲージャー、ならびに
ｎ．腫瘍特異的Ｔ細胞またはＬＡＫ細胞の養子移入、からなる群から独立して選択されるか、
または任意選択で、さらなる療法が、化学療法、放射線療法、および腫瘍の外科的切除である、構成２３〜２７のいずれか一項に記載の多重特異性、二重特異性、もしくは二重結合抗体、使用、または方法。
【１０２９】
放射線療法は、患部組織に直接、または全身のいずれかに送達される、単回線量または分割線量であり得る。
【１０３０】
この構成では、概念４６の特徴および実施形態がいずれも準用される。
【１０３１】
この態様では、二重特異性分子には、「二重特異性抗体」および抗体融合タンパク質が含まれ、概念３７〜４０に記載される形式および分子が含まれる。
【１０３２】
構成２９．構成１〜２１のいずれか一項に記載の多重特異性、二重特異性、または二重結合抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸。
【１０３３】
構成３０．構成２９に記載の核酸を含むベクターであって、任意選択で、ベクターが、ＣＨＯまたはＨＥＫ２９３ベクターである、ベクター。
【１０３４】
構成３１．構成２９に記載の核酸または構成３０に記載のベクターを含む宿主。
【１０３５】
６．抗体および免疫サイトカインの使用
文脈から別途明らかでない限り、抗体または断片の使用は、本発明の免疫サイトカインおよび多重特異性（例えば、二重特異性または二重結合抗体）について準用される。
【１０３６】
治療薬
一実施形態では、本明細書に記載されるＰＤ−Ｌ１特異的抗体およびその抗原結合断片は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路の治療的調節のために使用され得る。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１特異的抗体またはその断片は、本明細書の任意の概念、態様、または実施形態に記載される通りである。
【１０３７】
一実施形態では、抗体または抗体結合断片は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、それによりＰＤ−Ｌ１活性を阻害する。別の実施形態では、抗体または抗体結合断片は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、それによりＰＤ−１に対するＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する。別の実施形態では、抗体または抗体結合断片は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、それによりＢ７−１に対するＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する。なお別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−Ｌ１誘導性Ｔ細胞抑制を遮断し、それにより抗腫瘍免疫を増強する。
【１０３８】
なお別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、リンパ球反応において以下の活性、Ｔ細胞増殖、ＩＦＮ−γ、ＣＤ２５、および／またはＩＬ−２の分泌のうちの１つ以上を刺激することができる。
【１０３９】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ−Ｌ１誘導性細胞増殖、例えば腫瘍細胞増殖を阻害し、及び／又は腫瘍細胞生存を阻害する。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、それにより、腫瘍反応性Ｔ細を含むがこれに限定されないＴ細胞のＰＤ−Ｌ１媒介性抑制を阻害し、それにより抗腫瘍細胞溶解性Ｔ細胞活性を増強する。他の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、腫瘍細胞接着、運動性、浸潤、および細胞転移を阻害し、腫瘍成長を低減させる。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、腫瘍および非腫瘍細胞を含む、ＰＤ−Ｌ１を発現する細胞に結合し、抗体のＦｃ部分との相互作用を用いて、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を含むがこれらに限定されない機構によって標的細胞に対する細胞エフェクター機能を動員することができる。
【１０４０】
なおさらなる実施形態は、治療有効用量の抗体またはその抗原結合断片を動物に投与することによって、哺乳動物における増殖性または浸潤関連疾患を治療する方法を含む。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、腫瘍性または非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、および悪性腫瘍から選択される疾患を患う哺乳動物を治療するための方法において使用され得、当該方法は、治療有効用量の抗体またはその抗原結合断片を哺乳動物に投与することを含む。
【１０４１】
なおさらなる実施形態は、治療有効用量の、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片を動物に投与することによって、哺乳動物における免疫機能低下の疾患を治療する方法を含む。ヒトにおける例示的な免疫機能低下には、アルツハイマー病等の神経障害の疾患が含まれる。
【１０４２】
免疫応答、とりわけＩＦＮγ依存性全身性免疫応答が、神経炎症性の構成要素を共有するアルツハイマー病および他のＣＮＳの病理学について有益であり得ることがさらに提唱されている。ＷＯ２０１５／１３６５４１（参照により本明細書に組み込まれる）は、抗ＰＤ−１抗体を使用したアルツハイマー病の治療を提唱している（また、Ｂａｒｕｃｈ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，ＰＤ−１  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｍｅｍｏｒｙ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１６，２２（２）：１３７−１３７も参照されたい）。
【１０４３】
したがって、一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１免疫チェックポイント経路によって免疫系にかけられた抑制を解除することによって、個体における全身性免疫抑制のレベルを低減させる。一態様では、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害性免疫チェックポイント経路遮断は、全身適合性免疫活性の抑制からの一次的な解除をもたらし、これは、ＩＦＮ−γ産生細胞によるＩＦＮ−γ分泌の上昇によって主に顕在化される、末梢における免疫応答の一次的な増大をもたらす。ＩＦＮ−γ活性の増加は、脳の脈絡叢が、選択的な白血球移動、ならびに損傷したＣＮＳ内へのＴ細胞および単球の浸潤、神経変性病理および神経炎症の部位への免疫細胞のホーミングを行うことを可能にさせ得、毒性薬剤のクリアランス、神経のレスキュー、再生、および修復のために、より毒性が低く、より許容的になるように環境を調節し得る。
【１０４４】
したがって、ＰＤ−Ｌ１媒介性疾患または病的状態は、神経変性疾患、障害、または病的状態である。一実施形態では、神経変性疾患、障害、または病的状態は、アルツハイマー病である。別の実施形態では、神経変性疾患、障害、または病的状態は、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、一次性進行型多発性硬化症、二次性進行型多発性硬化症、大脳皮質基底核変性症、レット症候群、加齢黄斑変性および網膜色素変性症から選択される網膜変性障害、前部虚血性視神経症、緑内障、ブドウ膜炎、うつ病、外傷関連ストレスまたは心的外傷後ストレス障害、前頭側頭型認知症、レビー小体型認知症、軽度認知障害、後皮質萎縮、原発性進行性失語および進行性核上性麻痺または加齢認知症選択される。別の実施形態では、神経変性疾患、障害、または病的状態は、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、およびハンチントン病から選択される。
【１０４５】
本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、任意選択で、１つ以上の他の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、および抗ＬＡＧ−３抗体）または１つ以上の他の免疫刺激剤（例えば、本明細書において態様１ａに具体的に記載されるものを含む、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、および抗ＣＤ４０抗体）と組み合わせて、アルツハイマー病または他の神経変性疾患の治療において使用され得る。他の組み合わせのパートには、ＷＯ２０１５／１３６５４１の請求項１０に列挙される活性薬剤のいずれかが含まれ得、これは、参照により本明細書に組み込まれる。
【１０４６】
本明細書に記載されるＰＤ−Ｌ１抗体（少なくとも概念１〜４０のいずれかに記載される抗体および態様１ａに記載されるＰＤ−Ｌ１抗体を含む）はいずれも、上記の神経変性疾患、障害、または病的状態の治療のために使用され得る。
【１０４７】
ヒトにおける例示的な癌には、メルケル細胞癌、乳癌、前立腺癌、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳およびＣＮＳの癌（例えば、神経膠芽腫）、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸の癌、結合組織の癌、消化器系の癌；子宮内膜癌、食道癌；眼癌；頭頚部癌；上咽頭癌；胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）；上皮内腫瘍；腎臓癌；咽頭癌；白血病；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞および非小細胞）；ＤＬＢＣＬを含むがこれに限定されない、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫；慢性リンパ球性白血病、黒色腫；ブドウ膜黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌（例えば、唇、舌、口、および咽頭）；卵巣癌；膵臓癌、網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫；直腸癌、腎癌（腎細胞癌種（ＲＣＣ））、呼吸器系の癌；肉腫、皮膚癌、；胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、精巣癌、甲状腺癌；子宮癌、泌尿器系の癌、ならびに他の癌種および肉腫が含まれる。ウイルス誘導性癌のさらなる例としては、上咽頭癌、ある特定の種類のＮＨＬ（例えば、限定されないが、ＥＢＶ＋  ＣＮＳリンパ腫、ＤＬＢＣＬ、およびＢＬ、ホジキンリンパ腫（ＥＢＶ誘導性と考えられる）、ＨＰＶ関連子宮頸癌および頭頚部扁平上皮癌）；ＨＢＶ幹細胞癌が挙げらえる。
【１０４８】
ヒトにおける例示的な慢性感染症には、ＨＩＶ、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）が含まれる。
【１０４９】
本明細書に記載される抗体または抗原結合断片で治療することができる増殖性または浸潤関連疾患には、腫瘍性疾患、およびかかる腫瘍性疾患と関連する転移、例えば、黒色腫、ブドウ膜黒色腫、皮膚癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、唾液腺、神経膠腫、肝細胞（肝臓）癌、胆嚢癌、甲状腺腫瘍、骨癌、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（ｓｔｏｍａｃｈ））癌、前立腺癌、乳癌（トリプルネガティブ乳癌を含む）、卵巣癌、子宮頸癌、子宮癌、外陰部癌、子宮内膜癌、精巣癌、膀胱癌、肺癌、膠芽腫、向上せん癌、子宮内膜癌、腎臓癌、結腸癌、結腸直腸癌、膵臓癌、食道癌、脳／ＣＮＳの癌、神経細胞の癌、頭頚部癌（頭頚部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）を含むがこれに限定されない）、中皮腫、肉腫、胆道（ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ胆管癌）、小腸の腺癌、小児性悪性腫瘍、類表皮癌、肉腫、側膜／腹膜の癌、ならびに急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、および多発性骨髄腫を含む白血病が含まれる。治療可能な慢性ウイルス感染症には、ヒトにおけるＨＩＶ、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、サルにおけるサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ならびにマウスにおけるリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）が含まれる。
【１０５０】
抗体またはその抗原結合断片は、単独で、または他の抗体もしくは化学療法薬、放射線療法、もしくは治療用ワクチンと組み合わせて投与され得る。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、抗体またはその抗原結合断片が細胞傷害性薬剤または細胞増殖抑制剤等の薬物部分と結合している、抗体−薬物コンジュゲートとして投与される。コンジュゲートされていない薬物の投与は、許容できないレベルの毒性をもたらし得る一方で、癌の治療における細胞傷害性薬剤または細胞増殖抑制剤の局所送達のための抗体−薬物コンジュゲートの使用は、腫瘍への薬物部分の標的化送達を可能にする。抗体薬物コンジュゲート中の薬物には、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトトレキサート、およびビンデシンが含まれ得るが、これらに限定されない。毒素もまた抗体−毒素コンジュゲートに使用され得、これには、ジフテリア毒素等の細菌毒素、リシン等の植物毒素、ゲルダナマイシン等の小分子毒素が含まれる。毒素は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合、またはトポイソメラーゼを含む機構によってそれらの細胞傷害性または細胞増殖抑制効果をもたらし得る。
【１０５１】
検出
別の実施形態では、抗体または抗原結合断片を使用して、試料中の表面発現されたＰＤ−Ｌ１発現の存在、不在、および／またはレベルを検出することができる。ＰＤ−Ｌ１表面発現は、インビボおよび／またはインビトロで検出され得、ＰＤ−Ｌ１の発現および／または過剰発現を伴う疾患または病的状態の診断の補助において有用である。
【１０５２】
インビトロ診断
別の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１特異的抗体またはその抗原結合断片は、患者からの生体試料の発現および局在化の評価のために使用され得る。一実施形態では、生体試料は、組織試料であり、ＰＤ−Ｌ１発現は、フローサイトメトリー、新鮮な組織におけるＩＨＣ、ＦＦＰＥ組織におけるＩＨＣ、および／または凍結した組織におけるＩＨＣ等の既知の方法を使用して検出される。他の実施形態では、生体試料は、血液、血漿、または血清である。
【１０５３】
一実施形態では、本明細書に記載される抗体または抗体断片は、検出可能な部分、例えば、放射標識、蛍光標識、酵素標識、化学発光標識、またはビオチニル基で標識されている。評者性同位体または放射性核種には、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１５Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉが含まれ得、蛍光標識には、ローダミン、ランタニド蛍光体、またはＦＩＴＣが含まれ得、構想標識には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリフォスファターゼが含まれ得る。さらなる標識には、制限的ではなく例示目的で、グルコース−６−リン酸脱水酵素（「Ｇ６ＰＤＨ」）、アルファ−Ｄ−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコースアミラーゼ、炭酸脱水酵素、アセチルコリンエステラーゼ、リゾチーム、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、およびペルオキシダーゼ等の酵素；色素；フルオレセインおよびその誘導体、蛍光色素、ＧＦＰ（「緑色蛍光タンパク質」のＧＦＰ）、ダンシル、ウンベリフェロン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタアルデヒド（ｐｈｔｈａｌｄｅｈｙｄｅ）、およびフルオレスカミン等の追加の蛍光標識または蛍光体；ランタニドクリプテートおよびキレート等のフルオロフォア、例えば、ユーロピウム等（パーキンエルマーおよびシスビオ（Ｃｉｓｂｉｏ）アッセイ）；イソルミノール、ルミノール、およびジオキセタン等の化学蛍光標識または化学蛍光体；増感剤；補酵素；酵素基質；ラテックスまたは炭素粒子等の粒子；金属ゾル；微結晶；リポソーム；細胞等が含まれ、これらは、色素、触媒、または他の検出可能な基；ビオチン、ジゴキシゲニン、または５−ブロモデオキシウリジン等の分子；例えば、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ菌外毒素（ＰＥまたはその細胞毒性断片もしくは変異体）、Ｄｉｐｔｈｅｒｉａ毒素またはその細胞毒性断片もしくは変異体、ボツリヌス毒素Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、またはＦ、リシンまたはその細胞毒性断片、例えば、リシンＡ、アブリンまたはその細胞毒性断片、サポリンまたはその細胞毒性断片、ヤマゴボウ抗ウイルス毒素またはその細胞毒性断片、およびブリオジン（ｂｒｙｏｄｉｎ）１またはその細胞毒性断片からなる群から選択される毒素部分等の毒素部分でさらに標識され得る。
【１０５４】
インビボ診断
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、患者に投与され得、抗体または抗原結合断片は、標識とコンジュゲートされている。患者における標識の存在が測定または観察され得、比較的多い量の標識は、疾患の高リスクを示し得、比較的少ない量の標識は、疾患の低リスクを示し得る。一実施形態では、標識は、造影剤、同位体タグ、または緑色蛍光タンパク質等の蛍光マーカーであり得る。
【１０５５】
一実施形態では、抗体または抗原結合断片は、他の治療剤、例えば、化学療法剤またはＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する他の抗体の使用を伴う療法を監視するために使用される。一実施形態では、抗体は、治療用ＰＤ−Ｌ１抗体と競合しない。
【１０５６】
患者選択のガイド
一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１発現の検出を使用して、患者選択をガイドすることができる。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片を使用して、ＷＯ２０１１／０６６３８９、表題「Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｂ７−Ｈ１」（その抗体および配列は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示される抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含むがこれに限定されない、抗ＰＤ−Ｌ１抗体での治療用抗体のための患者選択を補助することができる。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片を使用して、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＣＴＬＡ４、抗ＯＸ４０、抗ＰＤ−１、ワクチン等の免疫療法での治療のための患者選択を補助することができる。場合によって、高レベルのＰＤ−Ｌ１は、療法の成功を示し得、より低いレベルは、成功の可能性の低減を示し得る。スプライス変異型および／またはタンパク質プロセシングの優先的発現は、固有の混合プロファイルを産生し得、これは、治療に対する患者の応答に影響を及ぼし得るか、または後の治療を変化させ得る。これらのプロファイルは、患者を同定し、治療を受けるか、治療を受け続けるべきか、または代替的な治療を受けるべき患者のサブセットを定義することを補助し得る。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−Ｌ１アイソフォームの検出のために使用され得る。患者試料には、例えば、血液、血漿、血清、痰、唾液、尿、ＣＳＦ、涙液、吐き出された外来性粒子試料、細胞上清、細胞もしくは組織可溶化物、または組織試料が含まれ得る。
【１０５７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片を使用して、ベースライン、すなわち治療前のＰＤ−Ｌ１発現の存在、不在、および／またはレベルを特定することができる。
【１０５８】
別の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１特異的抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ−Ｌ１を標的としない療法での治療を示すための排除マーカーとして使用され得る。別の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１特異的抗体またはその抗原結合断片は、平均余命のための予後診断マーカーとして使用され得る。とりわけ、腫瘍上のＰＤ−Ｌ１発現は、予後不良に関連し、腫瘍型内での過去のデータに基づいて平均余命を推測することができる。
【１０５９】
タンパク質の検出のための方法は既知であり、これには例えば、ＩＨＣ、フローサイトメトリー、ウェスタンブロッティング、および質量分析法、免疫沈降法、アプタマー、免疫ＰＣＲ、ならびにタンパク質アレイが含まれる。
【１０６０】
療法のガイド
抗体を使用して、療法をガイドすることができる。例えば、、抗体またはその抗原結合断片を使用して、治療中または治療後にＰＤ−Ｌ１発現の存在、不在、および／またはレベルを特定することができる。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、患者管理、薬物承認、および償還において補助するための初期応答バイオマーカーとして使用され得る。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片を使用して、療法のガイドを補助するためにＰＤ−Ｌ１発現の存在、不在、および／またはレベルを特定することができる。例えば、ＰＤ−Ｌ１発現は、治療が有効であるかどうか、したがって、治療が継続されるべきかどうか、または用量が調節（増加または減少）されるべきかどうか、および併用レジメンが変更されるべきかどうかの判定を補助することができる。例えば、一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１特異的抗体またはその抗原結合断片は、投与量設定（ＰＫ／ＰＤ）のために、ＰＤ−Ｌ１療法で治療された患者における細胞上のＰＤ−Ｌ１の受容体占有を判定するために使用され得る。とりわけ、受容体占有は、標的関与または標的網羅範囲の尺度として使用され得る。生物学的または臨床的応答を引き出すために必要な標的関与の量または時間の推測は、患者が十分に投薬されているかどうかを判定するために使用され得る。とりわけ、抗体は、用量、曝露、受容体占有、薬力学的応答、および臨床的有用性の間の関係の評価を補助するために使用され得る。
【１０６１】
治療の有効性の監視
別の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１特異的抗体またはその抗原結合断片は、治療の経過が有効であるかどうか、および治療が継続されるべきかどうかの評価を補助するために、患者の監視に使用され得る。例えば、一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、患者がＰＤ−Ｌ１を標的とする療法的治療を受ける前に発現を検出するために使用され得る。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、療法中、または療法的抗ＰＤ−Ｌ１治療を受けた後に発現を検出するために使用され得る。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、療法の経過が有効であるかどうか、および継続されるべきかまたは中断されるべきかの判定を補助するために、初期応答マーカーとして使用され得る。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の発現は、洗い出し後に検出され、「洗い出し」という用語は、その後に、投与された薬物が身体から除去される時間を指す。とりわけ、ＰＤ−Ｌ１の発現は、患者が検出抗体と競合する抗ＰＤ−Ｌ１療法で治療された場合に、洗い出しの後に検出され得る。しかしながら、患者が、抗ＣＴＬＡ−４または抗ＰＤ−１等の抗ＰＤ−Ｌ１抗体と競合しない抗体で治療された場合、検出は、洗い出しを待つことなく実施されてもよい。別の実施形態では、検出抗体は、ＰＤ−Ｌ１に結合するが、ＰＤ−Ｌ１に結合する治療用抗体と競合しない場合がある。この状況では、洗い出しは必要ない場合がある。洗い出し期間は、多くの要因によって変動し得るが、一般に、直近の化学療法または免疫療法での治療から、少なくとも約１、２、３、４、５、または６週間、および最大で約１、２、３、４、５、または６カ月の期間である。抗体またはその抗原結合断片を使用して、生検試料または循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）上のＰＤ−Ｌ１の発現を判定することができる。
【１０６２】
一実施形態では、標識された抗体またはその抗原結合断片を使用して、治療前、治療中、および治療後の腫瘍ステータスの非侵襲的評価を可能にするために末梢相関を特定することができる。
【１０６３】
タンパク質の検出のための方法は既知であり、これには例えば、ＩＨＣ、フローサイトメトリー、ウェスタンブロッティング、および質量分析法、免疫沈降法、アプタマー、免疫ＰＣＲ、ならびにタンパク質アレイが含まれる。
【１０６４】
ＰＤ−Ｌ１のタンパク質結合パートナーの同定
別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、タンパク質「プルダウン」の文脈において、ＰＤ−Ｌ１タンパク質種のタンパク質結合パートナーの検査のための捕捉試薬または検出試薬として使用され得る。タンパク質「プルダウン」とは、無傷タンパク質複合体、例えば、抗体、ならびに任意のタンパク質またはそれに結合したリガンドの免疫沈降を指し、免疫共沈降（Ｃｏ−ＩＰ）としても知られる。Ｃｏ−ＩＰは、タンパク質のより大きい複合体のメンバーであると考えられている既知のタンパク質を標的とする抗体を選択することによって機能する。抗体を用いて既知のメンバーを標的化することによって、タンパク質複合体全体を溶液外に引き出し、それにより複合体の未知のメンバーを同定することが可能となり得る。ＰＤ−１軸対ＣＴＬＡ−４等を通して免疫認識の制御の完全な理解は、完全には理解されていない。このように、抗体および抗原結合断片は、特定の両方または免疫療法残飯に応答する患者の傾向を判定し得る、アクセサリータンパク質と因子との間の相互作用の知識を改善することができる。
【１０６５】
７．医薬組成物
文脈から別途明らかでない限り、抗体または断片の組成物は、本発明の免疫サイトカインおよび多重特異性（例えば、二重特異性または二重結合抗体）について準用される。
【１０６６】
一実施形態では、有効量の抗体または抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物が提供される。治療用に用いられる抗体の有効量は、例えば、治療目的、投与経路、および患者の状態に依拠することになる。一実施形態では、組成物は、他の賦形剤または安定化剤を含む。
【１０６７】
薬学的に許容される担体は既知であり、用いられる投薬量および濃度で、それに曝される細胞または哺乳動物に対して無毒である担体、賦形剤、または安定化剤が含まれる。しばしば、生理学的に許容される担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理学的に許容される担体の例としては、リン酸、クエン酸、および他の有機酸等の緩衝液；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０個未満の残基）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリジン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；  エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等のキレート剤；マンニトールもしくはソルビトール等の糖アルコール；ナトリウム等の塩形成対イオン；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【１０６８】
抗体または抗原結合断片は、例えば、液体または粉末エアゾール（凍結乾燥した）として、静脈内に、または鼻、肺を通して投与され得る。組成物はまた、非経口的または皮下に投与されてもよい。全身に投与される場合、組成物は、滅菌され、パイロジェンを含まず、ｐＨ、等張性、および安定性を鑑みた生理学的に許容される溶液中になければならない。これらの条件は、当業者に既知である。
【１０６９】
予防剤もしくは治療剤（例えば、本明細書に開示される抗体）、または医薬組成物を投与する方法には、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、および皮下）、硬膜外、ならびに粘膜（例えば、鼻腔内および経口経路）が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、予防剤もしくは治療剤（例えば、本明細書に開示される抗体）、または医薬組成物は、鼻腔内、筋肉内、静脈内、または皮下に投与される。予防剤もしくは治療剤、または医薬組成物は、任意の好都合な経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮内層または粘膜皮膚内層（例えば、口腔粘膜、鼻腔内粘膜、直腸および腸管粘膜等）からの吸収によって投与されてもよく、他の生物学的に活性な薬剤と共に投与されてもよい。投与は、全身または局所であり得る。各用量は、同一の投与経路によって投与されてもされなくてもよい。一実施形態では、本明細書に開示される抗ＰＤ−Ｌ１抗体または断片は、本明細書に開示される、同じまたは異なる抗ＰＤ−Ｌ１抗体または断片の他の用量と同時または連続的に、複数の投与経路を介して投与され得る。
【１０７０】
様々な送達系が既知であり、予防剤または治療剤（例えば、本明細書に開示される抗体または断片）を投与するために使用され得、これには、リポソーム中のカプセル化、微小粒子、マイクロカプセル、抗体を発現することができる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２（１９８７）を参照されたい）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構築等が含まれるが、これらに限定されない。さらに、例えば、吸入器またはネブライザーの使用およびエアゾール化剤での製剤化によって肺内投与もまた用いられ得る。例えば、米国特許第６，０１９，９６８号、同第５，９８５，３２０号、同第５，９８５，３０９号、同第５，９３４，２７２号、同第５，８７４，０６４号、同第５，８５５，９１３号、同第５，２９０，５４０号、および同第４，８８０，０７８号、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ９２／１９２４４号、同第ＷＯ９７／３２５７２号、同第ＷＯ９７／４４０１３号、同第ＷＯ９８／３１３４６号、および同第ＷＯ９９／６６９０３号を参照されたい（各々、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【１０７１】
特定の実施形態では、本明細書に記載される予防剤もしくは治療剤、または医薬組成物を、治療を必要とする領域に局所的に投与することが望ましい場合がある。これは、例えば、局所注入、局所投与（例えば、鼻腔内スプレーによる）、注射、または移植によって達成され得、当該移植は、シアラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜等の膜または繊維を含む、多孔材料、非多孔材料、またはゲル状材料のものである。抗ＰＤ−Ｌ１抗体または断片を投与する場合、抗体が吸収されない材料を使用するように注意を払う必要がある。
【１０７２】
８．キットおよび製品
文脈から別途明らかでない限り、抗体または断片のキットおよび製品は、本発明の免疫サイトカインおよび多重特異性（例えば、二重特異性または二重結合抗体）について準用される。
【１０７３】
一実施形態では、本発明は、生体試料においてＰＤ−Ｌ１を検出するためのキットを提供する。キットを使用して、ＰＤ−Ｌ１関連疾患についてスクリーニングすることができる。一実施形態では、キットは、抗体または抗原結合断片と、抗体または抗原結合断片が試料中でＰＤ−Ｌ１に結合しているかどうかを判定するための手段とを含む。一実施形態では、抗体または抗原結合断片は、標識されている。別の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、未標識の一次抗体であり、キットは、一次抗体を検出するための手段を含む。一実施形態では、検出するための手段は、抗免疫グロブリン抗体である、標識された二次抗体を含む。抗体は、例えば、蛍光色素、酵素、放射性核種、および放射線不透過性材料を含む、任意の好適なマーカーで標識され得る。好適な抗体および抗原結合断片は、上記に詳細に記載される。
【１０７４】
一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１を検出するためのキットが提供され、当該キットは、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片を含む。一実施形態では、キットはまた、説明書と、ＰＤ−Ｌ１を検出するための１つ以上の試薬とを含み得る。一実施形態では、キットは、ＩＨＣのためのホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織試料を調製するための説明書および／またはＩＨＣのための１つ以上の試薬と共に、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片を含む。一実施形態では、キットは、一次抗体として本明細書に記載される抗体または抗原結合断片と、それに特異的に結合する二次抗体とを含む。一実施形態では、キットは、本明細書に記載される標識された抗原また抗原結合断片を含み、標識は、フルオレセインもしくはローダミン等の蛍光標識、または西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）もしくはアルカリホスファターゼ（ＡＰ）等の酵素レポーターを含む。一実施形態では、キットは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）等の緩衝液中、少なくとも約１％で最大で約５％、または約２％〜３％、または約２％の冷水魚皮ゼラチンタンパク質（ＣＷＦ）を含む遮断試薬を含む。一実施形態では、キットは、少なくとも１、２、５、または１０ｍＭ、および最大で１０、１５、または２０ｍＭの濃度で、約５．５〜９のｐＨまたは約６のｐＨで、クエン酸緩衝液、例えばクエン酸ナトリウム等の、抗原回収のための緩衝液を含む。
【１０７５】
別の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の発現を伴う疾患を治療するためのキットが提供され、当該キットは、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片と、抗体または抗原結合断片を、治療を必要とする対象に投与するための説明書とを含む。本明細書に開示される医薬組成物の成分のうちの１つ以上、例えば本明細書に提供される１つ以上の抗ＰＤ−Ｌ１抗体または断片を充填した１つ以上の容器を含む薬学的または診断用パックまたはキットもまた提供される。任意選択で、かかる容器（複数可）には、薬学的または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する政府機関によって指定された形式の通知が関連付けられてもよく、この通知は、ヒトの投与のための製造、使用、または販売の期間による認可、例えば、承認番号を表す。
【１０７６】
別の実施形態では、その中に、本明細書に記載される抗体または抗原結合断片を含有する組成物、および組成物がＰＤ−Ｌ１の発現または過剰発現を特徴とする疾患を治療するために使用され得ることを示す添付文書またはラベルが提供される容器を含む製品。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１媒介性病的状態または疾患を治療および／または予防するためのキットが提供され、キットは、任意選択でヒトにおける当該疾患または病的状態を治療および／または予防するための使用のためのラベルまたは説明書と組み合わせて、任意の実施形態または実施形態（および任意選択で、本明細書の他の箇所に記載されるさらなる治療剤）の組み合わせで本明細書に開示される抗体または断片を含み、任意選択でラベルまたは説明書は、販売承認番号（例えば、ＦＤＡまたはＥＭＡ承認番号）を含み、任意選択でキットは、抗体または断片を含むＩＶまたは注射デバイスを含む。別の実施形態では、キットは、容器またはＩＶバッグ内に収容された抗体またはその抗原結合断片を含む。別の実施形態では、容器またはＩＶバッグは、滅菌容器または滅菌ＩＶバッグである。別の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、したがって、（滅菌）容器内に収容されたか、または（滅菌）ＩＶバッグ内に収容された医薬組成物に製剤化される。さらなる実施形態では、キットは、使用のための説明書をさらに含む。
【実施例】
【１０７７】
実施例１−抗原調製、免疫付与手順、およびハイブリドーマ生成
以下の実施例は、ＫｙＭｏｕｓｅ（商標）系を使用する、抗ヒトＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体のパネルの生成および同定の詳細な説明を提供する。（例えば、ＷＯ２０１１／００４１９２、ＷＯ２０１１／１５８００９、およびＷＯ２０１３／０６１０９８を参照されたい）。この目的で、多数のヒト免疫グロブリン遺伝子を含有する遺伝子組換えマウスに、マウス胎仔線維芽細胞（ＭＥＦ）細胞上に提示された、可溶性組換えヒトＰＤ−Ｌ１または表面発現されたヒトＰＤ−Ｌ１で免疫付与した。従来の腹腔内注射および複数の部位での拘束免疫付与（ＲＩＭＭＳ）レジメンを含む様々な免疫付与レジメンを設定し、数週間にわたって動物をブーストした（以下の詳細な方法を参照されたい）。各レジメンの終わりに、脾臓、および場合によってはリンパ節等の二次リンパ組織を除去した。組織を単一細胞懸濁液に調製し、ＳＰ２／０細胞と融合させて、安定したハイブリドーマ細胞株を生成した。
【１０７８】
材料および方法
ａ）ヒトＰＤ−Ｌ１を発現する、安定的にトランスフェクトされたＭＥＦおよびＣＨＯ−Ｓ細胞の生成：
全長ヒトＰＤ−Ｌ１配列（配列番号１、Ｂ７−Ｈ１としても知られる）を、哺乳動物発現についてコドン最適化し、３’および５’  ｐｉｇｇｙＢａｃ特異的末端反復配列に隣接したＣＭＶプロモーター下で発現ベクターにクローニングし、細胞ゲノム内への安定した組込みを容易にした（「Ａ  ｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｅ  ｐｉｇｇｙＢａｃ  ｔｒａｎｓｐｏｓａｓｅ  ｆｏｒ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」；Ｙｕｓａ  Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ  Ｓ  Ａ．，１０８（４）：１５３１−６，２０１１  Ｊａｎ  ２５を参照されたい）。さらに、発現ベクターは、安定した細胞株生成を容易にするために、ピューロマイシン選択カセットを含有した。製造業者の指示に従ってＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  Ｍａｘトランスフェクション試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、ヒトＰＤ−Ｌ１発現プラスミドを、自家由来のマウス胎仔線維芽（ＭＥＦ）細胞株（この株を生成するために使用した胚は、Ｃ５７／ＢＬ６雌マウスと交配した１２９Ｓ５から得た）およびＣＨＯ−Ｓ細胞に、ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼをコードするプラスミドと共に同時トランスフェクトした。トランスフェクションの２４時間後に、培地にピューロマイシンを補充し、完全培地を３〜４日ごとに交換しながら少なくとも２週間成長させて、安定した細胞株を選択した。抗ヒトＰＤ−Ｌ１−ＰＥにコンジュゲートされた抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用してフローサイトメトリーによってｈＰＤ−Ｌ１の発現を評価した。完全ＭＥＦ培地は、１０％ｖ／ｖのウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ）を補充したダルベッコ変法イーグル培地（Ｇｉｂｃｏ）で構成された。完全ＣＨＯ−Ｓ培地は、８ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）で補充したＣＤ−ＣＨＯ培地（Ｇｉｂｃｏ）で構成された。トランスフェクトされたＣＨＯ細胞をスクリーニング目的に使用した（実施例２を参照されたい）。
【１０７９】
ｂ）マウス免疫付与のためのＭＥＦ細胞の調製：
細胞培養培地を除去し、細胞を１×ＰＢＳで１回洗浄した。細胞をトリプシンで５分間処理して、組織培養表面から細胞を離した。細胞を回収し、完全ＭＥＦ培地の添加によってトリプシン中和した。次いで、細胞を１０分間、３００ｇで遠心分離させ、２５ｍＬの１×ＰＢＳで洗浄した。細胞を計数し、１×ＰＢＳ中、適切な濃度で再懸濁した。
【１０８０】
ｃ）ＰＤ−Ｌ１での免疫付与
ヒトカッパ（ＨＫ）軽鎖抗体を産生するヒト免疫グロブリン遺伝子を含有する遺伝子組換えＫｙｍｏｕｓｅ（商標）ＨＫ株（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３２，６−３６３，２０１４）に、ヒト抗ＰＤ−Ｌ１抗体の生成のための様々な免疫付与レジメンによって免疫付与した。
【１０８１】
修正皮下免疫付与手順（ＲＩＭＭＳ、Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｒａｐｉｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｍａｔｕｒｅｄ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ＲＩＭＭＳ」；Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ．１９９７  Ａｕｇ；１６（４）：３８１−９の後に修正され、本明細書において以下、ＫＭ０３１と称する）を使用して可溶性組換えｈＰＤ−Ｌ１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、１５６−Ｂ７、Ｆｃキメラ）で、またはプライム・レスト・ブースト（ｐｒｉｍｅ−ｒｅｓｔ−ｂｏｏｓｔ）レジームにおける可溶性組換えｈＰＤ−Ｌ１を使用することによって、または腹腔内に投与された、可溶性組換えｈＰＤ−Ｌ１と、ｈＰＤ−Ｌ１を発現する安定してトランスフェクトされたＭＥＦ細胞との組み合わせ（本明細書において以下、ＫＭ０３３と称する）によって、のいずれかで、マウスに免疫付与した。全ての免疫付与についてＳｉｇｍａ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍを使用し、安静間隔は通常、２〜３週間であった。免疫原としてタンパク質を使用した場合、ＣｐＧ（Ｈｏｋｋａｉｄｏ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）も投与した。ＥＬＩＳＡおよびフローサイトメトリーによって特異的抗体の存在について連続血液試料または末端血液試料からの血清を分析し、力価のデータを使用して（可能な場合）、ハイブリドーマ融合に使用するマウスを選択した。プライム・レスト・ブースト設定においてＭＥＦ−ＰＤ−Ｌ１細胞単独、またはタンパク質単独でのＫＭ０４２免疫付与であるさらなるレジメンも実施したが、ｈＰＤ−Ｌ１への結合が確認された６個の抗体のうち、中和抗体は同定されなかった。
【１０８２】
ｄ）組換えタンパク質のクローニングおよび発現
ＰＤ−Ｌ１をコードするＤＮＡ配列を合成ＤＮＡ列として購入し、Ｅｘｐｉ２９３およびＣＨＯ細胞中の一時的発現のために適切な哺乳動物発現ベクター内にクローニングした。配列表は、利用可能な場合、抗原の配列、および精製／標識のための親和性タグ（太字および下線で示されている）を示す（配列番号３〜６を参照されたい）。
【１０８３】
ｅ）逆ＰＤ−Ｌ１  ＥＬＩＳＡプロトコルによる血清力価の判定
逆ＰＤ−Ｌ１  ＥＬＩＳＡプロトコルを使用してマウス血清試料中の力価を判定した。抗マウスＩｇＧ捕捉抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）（ＰＢＳ中で希釈した４μｇ／ｍＬ、５０μＬ／ウェル）を９６ウェル低自家蛍光の高タンパク質結合プレート（Ｃｏｓｔａｒ）に４℃で一晩吸着させた。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で３回洗浄することによって過剰なＩｇＧを除去し、ＰＢＳ中、室温で１時間、ウェルを１％ｗ／ｖウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａ）でブロックし、その後、プレートをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で３回洗浄した。試薬希釈剤（０．１％ｗ／ｖのＢＳＡ／ＰＢＳ）試料を希釈し、マウス血清の段階１０倍希釈を調製した。次いで、この滴定の５０μＬ／ウェルを、ＥＬＩＳＡプレートに添加した。免疫付与に起因する活性レベルの変化を判定するために、免疫付与前の各動物からの血清を試薬希釈剤中で１／１００に希釈し、５０μＬ／ウェルをＥＬＩＳＡプレートに添加した。インキュベーション後、前と同様にプレートを洗浄して、未結合のタンパク質を除去した。ビオチニル化ｈＰＤ−Ｌ１−ｈｉｓ（自家生成されたタンパク質、配列番号３、Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＬＣ−Ｂｉｏｔｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ）を使用して自家標識されている、試薬希釈剤中１００ｎｇ／ｍＬで使用される、５０μＬ／ウェル）をプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で洗浄することによって未結合のビオチニル化ｈＰＤ−Ｌ１を除去し、試薬希釈剤中で１／１０，０００に希釈されたストレプトアビジン−ＨＲＰ（Ｓｉｇｍａ）の添加によって、残りのビオチニル化ｈＰＤ−Ｌ１を検出した。室温で１時間のインキュベーション後に、前述のようにプレートを洗浄し、５０μＬのＴＭＢ（Ｓｉｇｍａ）をプレートに添加した。５０μＬの１Ｍ硫酸（Ｆｌｕｋａ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ）を添加することによって反応を停止した。４５０ｎｍでのＯＤをＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）上で測定した。１匹のマウスのみが免疫付与されたため、ＫＭ０３２について滴定を実施しなかった。ＫＭ０３１について、末端血液のみにおいて滴定を実施した。
【１０８４】
ｆ）ＣＨＯ−Ｓ発現ｈＰＤ−Ｌ１を使用したフローサイトメトリーによる血清力価の判定
ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋１％ｗ／ｖ  ＢＳＡ＋０．１％ｗ／ｖアジ化ナトリウム）中に懸濁させた、ｈＰＤ−Ｌ１を発現するＣＨＯ−Ｓ細胞を、ウェル当たり１０５細胞の密度で９６ウェル、Ｖ字底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）に分配した。ＦＡＣ緩衝液中で試料を希釈して、マウス血清の滴定を調製した。次いで、この滴定の２５μＬ／ウェルを、細胞プレートに添加した。免疫付与に起因する活性レベルの変化を判定するために、免疫付与前の各動物からの血清をＦＡＣＳ緩衝液中で１／１００に希釈し、２５μＬ／ウェルを細胞に添加した。細胞を４℃で１時間インキュベートした。細胞を１５０μＬのＰＢＳで２回洗浄し、各洗浄ステップ後に遠心分離させて上清を吸引した（３００×ｇで３分間遠心分離させた）。抗体結合を検出するために、ＰＥヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を、ＦＡＣＳ緩衝液中で１／５００に希釈し、５０μＬを細胞に添加した。細胞を４℃の暗所で１時間インキュベートし、次いで、上記のように１５０μＬのＰＢＳで２回洗浄した。細胞を固定するために、１００μＬの２％ｖ／ｖパラホルムアルデヒドを添加し、細胞を４℃で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を３００×ｇでの遠心分離によってペレット化し、プレートを１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させた。ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ａｒｒａｙ器具を使用したフローサイトメトリーによってＰＥシグナル強度（幾何平均）を測定した。滴定は、ＫＭ０３３のみについてこの方法で実施した。
【１０８５】
ｇ）マウス組織単離および調製
最終ブースト後に、マウスを選別し、免疫付与したマウスから脾臓を切除し、１×ＰＢＳ中で洗浄し、さらなる処理まで氷上で保存した。１×ＰＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）および３％の熱失活したＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有する緩衝液中で組織を調製した。４５μｍのストレーナー（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ）を通して組織をすり潰し、３０ｍＬの３％  ＦＢＳ／ＰＢＳ緩衝液ですすいだ後に、４℃で１０分間、７００ｇで遠心分離させることによって、脾臓細胞を分散させた。赤血球を除去するために、ペレット化した脾臓細胞を４ｍＬの赤血球溶解緩衝液（Ｓｉｇｍａ）中に再懸濁させた。４分間のインキュベーション後、３％のＦＢＳ／１×ＰＢＳ緩衝液の添加によって溶解反応を停止した。細胞集塊を４５μｍのストレーナーで濾過して除去した。残りの脾臓細胞を、さらなる手順のためにペレット化した。ＫＭ０３１およびＫＭ０３２について、腋窩、鼠径、および腸間膜リンパ節も除去し、さらなる処理まで氷上で滅菌１×ＰＢＳ中に置いた。リンパ節を、脾臓細胞とは別々に処理した。リンパ節細胞を上記のように調製したが、赤血球溶解は受けなかった。残りのリンパ節細胞を、さらなる手順のためにペレット化した。
【１０８６】
ｈ）ハイブリドーマ融合
脾臓およびリンパ節細胞をＫＭ０３１およびＫＭ０３２からプールされ、ＭＡＣＳ（登録商標）分離システムを使用して負の選択法に供した。簡潔には、リンパ節を使用した場合、それらの細胞を、赤血球溶解後に対応するマウスからの脾臓細胞と共にプールし、総細胞数を決定した。細胞を、１０７細胞当たり１００μＬの３％  ＦＢＳ／ＰＢＳ緩衝液中に再懸濁させた後、１０７総細胞当たり１０μＬのＰａｎ  Ｂ細胞ビオチン−抗体カクテル（Ｃａｔ＃１３０−０９５−８１３）および１０μＬの抗ＩｇＤ−ビオチン抗体（Ｃａｔ＃１３０−０９６−９７９）を添加し、４℃で１０分間インキュベートした。２ｍＬのＦＢＳ／ＰＢＳ緩衝液を添加し、細胞を７００ｇで１０分間遠心沈殿させた。上清を完全に吸引し、１００ｕＬの新鮮な緩衝液を添加し、次いで、１０７細胞当たり３０ｕＬの抗ビオチンマイクロビーズ（Ｃａｔ＃１３０−０４７−３０２）を、７μＬの抗マウスＩｇＭマイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）と共に添加した。細胞を冷蔵庫中で１５分間インキュベートした。次いで、細胞／マイクロビーズ混合物を、磁気ＭＡＣＳ分離機に配置した、事前に湿らせたＬＤカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）に適用し、３％のＦＢＳ／ＰＢＳ緩衝液で洗浄した。カラムを通って流れる未標識の細胞を３％のＦＢＳ／ＰＢＳ緩衝液中で回収した。
【１０８７】
ＫＭ０３３細胞を、ＭＡＣＳ（登録商標）分離システムを使用して正の選択法に供した。赤血球溶解後、１０７細胞当たり８０μＬの３％  ＦＢＳ／ＰＢＳ緩衝液中に脾臓細胞を再懸濁させた後に、抗マウスＩｇＧ１（Ｃａｔ＃１３０−０４７−１０１）および抗マウスＩｇＧ２ａ＋ｂマイクロビーズ（Ｃａｔ＃１３０−０４７−２０１）を添加し、４℃で１５分間インキュベートした。次いで、細胞／マイクロビーズ混合物を、磁気ＭＡＣＳ分離機に配置した、事前に湿らせたＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）に適用し、３％のＦＢＳ／ＰＢＳ緩衝液で洗浄した。３％のＦＢＳ／ＰＢＳ緩衝液中で、標識したカラム結合画分中のＩｇＧ陽性細胞を回収した。
【１０８８】
濃縮したＢ細胞をＣｐＧ（Ｈｏｋｋａｉｄｏ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）で一晩処理し（最終濃度２５μＭ）、翌日に、ＢＳＡ融合緩衝液（０．３Ｍ  Ｄ−ソルビトール、０．１１ｍＭ酢酸カルシウム水和物、０．５ｍＭ酢酸マグネシウム四水和物、および０．１％  ＢＳＡ（ｖ／ｗ）、ｐＨ７．２に調節）中で１回洗浄した。洗浄した細胞を、２００μＬのＢＳＡ融合緩衝液中に再懸濁させ、細胞数を決定した。ＳＰ２／０細胞を同じように処理したが、ＢＳＡ融合緩衝液で１回洗浄する代わりに２回洗浄した。ＢＴＸ  ＥＣＭ  ２００１  Ｅｌｅｃｔｒｏ  Ｃｅｌｌ  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｏｒ（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ）を使用して電気融合によって３：１の比でＢ細胞をＳＰ２／０骨髄腫細胞に融合させた。核融合は、回収培地（ＯＰＩ（Ｓｉｇｍａ）、１×Ｌ−Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）、２０％  ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、ハイブリドーマについてバッチ試験済み）、および０．０５ｍＭの２−メルカプトエタノールを補充したダルベッコ変法イーグル培地（高グルコース、フェノールレッド不含））中に一晩置いた後、回収培地１部および半固体培地９部（ＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹハイブリドーマ選択培地Ｄ、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に再懸濁させ、１０ｃｍのペトリ皿に播種した。１２日後に可視のコロニーを９６ウェルプレートに採取し、スクリーニング前にさらに２〜３日間培養した。
【１０８９】
実施例２  −ハイブリドーマ上清スクリーニング
ハイブリドーマクローンの生成後、連続的な一次および二次スクリーンにおいてハイブリドーマ上清を評価し、ヒトＰＤ−Ｌ１への抗体結合および受容体中和活性の基準に基づいて適切なハイブリドーマクローンを選択した。記載されるスクリーニングカスケードにおいて、９３１７個のハイブリドーマクローンを試験し、１２０個を一次ヒットとして同定した。その後、二次スクリーニング基準を使用することによって３６個のハイブリドーマクローンを確認した（材料および方法、ならびに表１において詳細を参照されたい）。二次スクリーンによって同定したクローンの中で、所望の選択条件によって、４個のクローンが抗体の候補の一部として発明者らによって選択された（実施例３において詳細を参照されたい）。
【１０９０】
材料および方法
ａ）一次スクリーン−細胞発現ヒトＰＤ−Ｌ１への結合
分泌抗体の、ＣＨＯ−Ｓ細胞の表面上に発現されたｈＰＤ−Ｌ１に結合する能力について、ハイブリドーマ細胞から回収した上清をスクリーニングした。ＣＨＯ−Ｓ  ｈＰＤ−Ｌ１結合を判定するために、１０％のＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を補充した８０μＬのＦ１２培地（Ｇｉｂｃｏ）中で、組織培養処理した、黒壁の透明底３８４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）に１×１０４／ウェルで細胞をプレーティングし、２７℃、５％  ＣＯ２で一晩培養した。培養培地を３８４ウェルアッセイプレートから除去した。２μｇ／ｍＬでハイブリドーマ維持培地（ＨＭＭ）中の少なくとも５μＬのハイブリドーマ上清もしくは５μＬのＭＩＨ１、またはＨＭＭ中に希釈したアイソタイプＩｇＧ１対照抗体（場合によってはＣｍ７と呼ばれ、Ｓｉｇｍａ  Ｍ９２６９、１μｇ／ｍＬの最終濃度）を各ウェルに添加した。ＨＭＭは、１×Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）、２０％ｖ／ｖのＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）、０．０５ｍＭのβ−メルカプトエタノール、１×ＨＴ補助剤（Ｇｉｂｃｏ）、および１×ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）を補充したＡｄｖａｎｃｅｄ  ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）で構成された。５００ｎｇ／ｍＬのＩＲＤｙｅ  ８００ＣＷ抗マウスＡｂ（ＬＩＣＯＲ）および０．２μＭのＤＲＡＱ５（Ｂｉｏｓｔａｔｕｓ）を含有する４５μＬのＦＡＣＳ緩衝液を各ウェルに添加した。ＤＲＡＱ５は、バックグラウンドウェルには添加しなかった。プレートを４℃で１時間インキュベートした。上清を吸引し、２５μＬの４％ｖ／ｖパラホルムアルデヒドを添加し、プレートを室温で１５分間インキュベートした。プレートを１００μＬのＰＢＳで２回洗浄し、次いで、洗浄緩衝液を完全に除去した。Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｉｎｆｒａｒｅｄ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＬＩ−ＣＯＲ（登録商標））を使用してプレートをスキャニングすることによって蛍光強度を読み取った。ＬＩ−ＣＯＲ（登録商標）推奨アルゴリズムに従って、抗マウス結合（８００ｎｍチャネル）を、細胞数（７００ｎｍチャネル）に対して正規化した。効果パーセントは、以下に詳述されるように計算した（方程式１）。０．２μｇ／ｍＬの最終アッセイ濃度で参照抗体を使用して全結合を定義した。０．２μｇ／ｍＬの最終アッセイ濃度でマウスＩｇＧ１アイソタイプ対照（Ｓｉｇｍａ）を使用して非特異的結合を定義した。ヒット選択のための基準は、アッセイシグナルおよびスキャニングしたプレートの目視検査に基づいた。
方程式１：一次スクリーン（ＬＩ−ＣＯＲ）およびＨＴＲＦからの効果パーセンテージの計算
８００％の応答値（ＬＩ−ＣＯＲ）または６６５／６２０ｎｍ比（方程式２を参照されたい）（ＨＴＲＦ）を使用
【数１】
2019528083.tif 000002
【１０９１】
ｂ）一次スクリーン：組換えＰＤ−Ｌ１への結合
ＣＨＯ−Ｓ発現ＰＤ−Ｌ１への結合のスクリーニングと並行して、分泌抗体の、組換えタンパク質（自家で産生された）として発現されたｈＰＤ−Ｌ１に結合する能力について、ハイブリドーマウェルから回収した上清をスクリーニングした。ビオチニル化ｈＰＤ−Ｌ１を使用してＨＴＲＦ（登録商標）（均一時間分解蛍光法、Ｃｉｓｂｉｏ）アッセイフォーマットによって組換えＰＤ−Ｌ１への分泌抗体の結合を同定した。１０μＬのハイブリドーマ上清を白色の３８４ウェルの低容量非結合表面ポリスチレンプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）に移した。ＨＴＲＦアッセイ緩衝液（ＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ）＋０．５３Ｍ  ＫＦ（Ｓｉｇｍａ）＋０．１％ｗ／ｖ  ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ））中に希釈した５μＬの２３０ｎＭビオチニル化ｈＰＤ−Ｌ１を、１０μＬのハイブリドーマ上清または３．３ｎＭの使用濃度に希釈した１０μＬの参照抗体と共に、室温で１時間、事前にインキュベートした。陰性対照ウェルについて、１０μＬのＨＭＭを添加した。ストレプトアビジンＤ２（Ｃｉｓｂｉｏ）、およびユーロピウムクリプテート（Ｃｉｓｂｉｏ）で標識したヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を、いずれもＨＴＲＦアッセイ緩衝液中で１／１００に希釈し、５μＬのこの混合物を全てのウェルに添加した。ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して６２０ｎｍおよび６６５ｎｍの発光波長で時間分解蛍光を読み取る前に、プレートを暗所で２時間インキュベートさせた。ＨＴＲＦ（登録商標）アッセイ技術のさらなる詳細は、Ｍａｔｈｉｓ（１９９５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４１（９），１３９１−１３９７に見出すことができる。
【１０９２】
各試料について、それぞれ方程式２および方程式１に従って６６５／６２０比および効果パーセントを計算することによってデータを分析した。
【数２】
2019528083.tif 000003
【１０９３】
一般に、ヒット選択のための基準は、１０％以上の効果に基づいた。場合によっては、ヒット選択は、２０％以上の効果に基づいた。
【１０９４】
二次スクリーンへの進行は、組換えＰＤ−Ｌ１結合ヒットおよびＣＨＯ細胞上に発現されたヒトＰＤ−Ｌ１への結合からのデータの組み合わせに基づいた。
【１０９５】
ｃ）二次スクリーニング：細胞発現組換えヒトＰＤ−Ｌ１または天然に発現されたｈＰＤ−Ｌ１への結合、および結合親和性
一次スクリーン選択基準を使用して選択されたウェルが、発明者らが設定した必要な特徴を有したかどうかを判定するために、いくつかのアッセイを実施した。一次スクリーニングからヒットとして選択したハイブリドーマクローンを、３日間培養し、ハイブリドーマ細胞から回収した上清を試験して、分泌抗体が、場合によってＣＨＯ−Ｓ発現ｈＰＤ−Ｌ１、または場合によってＥＳ２細胞に結合するかどうかを評価した。さらに、組換えｈＰＤ−１  Ｆｃを中和させる能力、ＣＨＯ−Ｓ  ｈＰＤ−Ｌ１またはＥＳ２細胞への結合もまた評価した。ＳＰＲによるヒトＰＤ−Ｌ１への抗体の結合もまた試験した。
【１０９６】
ｄ）細胞発現ｈＰＤ−Ｌ１への結合、および中和、およびＰＤ−１へのｈＰＤ−Ｌ１結合
ｈＰＤ−Ｌ１を発現するＣＨＯ−Ｓ細胞またはＥＳ２細胞のいずれかに結合する能力について、ハイブリドーマ上清の結合を試験した。ｈＰＤ−Ｌ１を発現するＣＨＯ−Ｓ細胞（自家生成された）、またはｈＰＤ−Ｌ１を天然に発現するＥＳ２細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１９７８）をＦＡＣＳ緩衝液中で希釈し、ウェル当たり０．５〜１×１０５細胞の密度で９６ウェルのＶ字底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）に分配した。細胞を１５０μＬのＰＢＳで洗浄し、３００ｇで３分間遠心分離させた。上清を吸引し、１５０μＬのＰＢＳを添加した。この洗浄ステップを繰り返した。
【１０９７】
５０μＬのハイブリドーマ上清または精製したハイブリドーマ材料を洗浄した細胞に添加し、そこに５００ｎｇ／ｍＬのヒトＰＤ−１  Ｆｃ（自家、配列番号６）を添加した。参照抗体を２μｇ／ｍＬで培地に添加した。精製した材料を使用した場合、細胞への添加の前に、６００ｎＭの最大濃度から滴定を調製した。上清を使用した場合、未希釈の上清、および３つの段階２倍希釈物を細胞に添加した。細胞を４℃で３０分間インキュベートした。細胞を１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、各洗浄ステップ後に３００×ｇで３分間遠心分離させて上清を吸引した。
【１０９８】
抗体および受容体結合を検出するために、ＦＡＣＳ緩衝液中で１／５００に希釈した５０μＬのヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）およびＡＰＣ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を細胞に添加した。細胞を４℃で１５分間、暗所でインキュベートした。細胞を上記のように２回洗浄し、分析のためにＦＡＣＳ緩衝液中で再懸濁させた。ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ａｒｒａｙ器具を使用したフローサイトメトリーによってＰＥおよびＡＰＣシグナル強度（幾何平均）を測定した。さらなる計算を伴わずに幾何平均値としてデータをプロットした。
【１０９９】
ｅ）表面プラズモン共鳴による親和性の判定
ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６（ＢｉｏＲａｄ）アレイＳＰＲマシンでラベルフリー表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析を実施した。ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅの抗マウスＩｇＧのアミン結合を使用して、抗マウスＩｇＧ捕捉表面をＧＬＣバイオセンサチップ上に作製した。試験抗体をこの表面上に捕捉し、２５６ｎＭ、６４ｎＭ、１６ｎＭ、４ｎＭ、および１ｎＭでヒトＰＤ−Ｌ１（自家）を分析物として使用した。ＨＢＳ−ＥＰ（Ｔｅｋｎｏｖａ  Ｈ８０２２）を使用してアッセイを２５℃で実施した。結合センサグラムを参照するために緩衝液のみを使用した。ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６分析ソフトウェアに固有の１：１モデルを使用してデータを分析した。場合によっては、ハイブリドーマ上清を抗体源として使用し、他の場合では、分析前にハイブリドーマ上清から抗体を精製した（以下を参照されたい）。場合によっては、タンパク質Ａ／Ｇ捕捉表面を使用した。これは、Ｂｉｏｒｂｙｔのタンパク質Ａ／Ｇのアミン結合をしよしてＧＬＭバイオセンサ上に作製した。
【１１００】
ｆ）ハイブリドーマ上清からの抗体の精製
重力流カラム中のタンパク質Ｇ樹脂を最初に水で、次いで５０ｍＭの水酸化ナトリウムまたはＩｇＧ溶出液（Ｐｉｅｒｃｅ）で洗浄し、次いで、組織培養グレードＰＢＳで平衡させた。１０％ｖ／ｖの１０×組織培養グレードＰＢＳを含有する、浄化されたハイブリドーマ上清を、平衡タンパク質Ｇカラムに数回適用した。樹脂を組織培養グレードＰＢＳで洗浄して、未結合の材料を除去した。次いで、抗体をＩｇＧ溶出液（Ｐｉｅｒｃｅ）で溶出し、次いで、溶出画分を１００ｍＭの最終ＴＲＩＳ（ｐＨ８．０）で中和させた。次いで、１０ｋＤａカットオフ遠心濾過ユニットにおける遠心分離により＜１．５ｍＬまで溶出画分を濃縮した。次いで、組織培養グレードＰＢＳを添加し、試料を再び＜１．５  ｍＬまで濃縮した。ＩｇＧのナノドロップに固有のモル吸光係数を使用してタンパク質濃度をＯＤ２８０で定量化した。最後に、試料をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析して純度を評価した。
【表１】
2019528083.tif 000004
【１１０１】
実施例３−抗体候補選択基準
ＥＳ２細胞上で天然に発現されたｈＰＤ−Ｌ１への結合、およびＥＳ２細胞への組換えヒトＰＤ−１結合の中和を、二次スクリーンヒット選択のための基準として使用した。ヒトＰＤ−Ｌ１に対する高い親和性および中和能力の組み合わせによって、精製およびさらなる特性評価に進めるためのヒットを判定した。
【１１０２】
候補となった抗体の選択および特性評価の後、順方向プライマーおよび逆方向プライマーの混合物を使用するＲＴ−ＰＣＲを使用してそれらの完全ヒト可変ドメインを回収した。抗体をヒトＩｇＧ１骨格に再フォーマット化し、ＣＨＯ−Ｓ細胞中の一過性発現系を使用して発現させた。
【１１０３】
材料および方法
ａ）ハイブリドーマ細胞からのＲＮＡ単離
ＴＲＩｚｏｌ（商標）試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して全ＲＮＡをハイブリドーマ細胞から抽出した。単離したＲＮＡの量および質を分光測定で分析した。
【１１０４】
ｂ）ＲＴ−ＰＣＲによる抗体可変ドメイン回収
選択したクローンを使用して全ＲＮＡを調製し、これをＲＴ−ＰＣＲ反応において使用して、重鎖および軽鎖Ｖ領域を回収した。マウスＩｇＧ特異的逆方向プライマーおよびヒトＩｇリーダー配列特異的順方向プライマーのセットを重鎖に使用した。マウスカッパ定常領域特異的逆方向プライマーおよびヒトカッパリーダー配列特異的順方向プライマーのセットをカッパ軽鎖に使用した。アガロースゲル電気泳動によってＲＴ−ＰＣＲ産物を分離し、予測サイズのＤＮＡがゲル精製され、順方向および逆方向に配列決定される。代替的には、ＲＴ−ＰＣＲ産物をクローニングベクターにサブクローニングし、個々のコロニーのＤＮＡを配列決定のために提出した。
【１１０５】
実施例４−最終リードパネルの選択
組換え発現された抗体をＳＰＲによって分析して、カニクイザルＰＤ−Ｌ１およびヒトＰＤ−Ｌ１への結合を確認した。また、樹状細胞−Ｔ細胞混合リンパ球反応（ＭＬＲ）において、ＩＦＮγ産生を増強する能力について抗体を試験した（図１）。一貫した免疫刺激性効果、ならびにヒトおよびカニクイザルＰＤ−Ｌ１の両方への結合を有する抗体を最終リードパネルとして選択し、これらは、クローン８４Ｇ０９およびクローン１Ｄ０５と呼ばれた。図１のデータは、単一の実験からのものである。さらに５回の実験を実施し、同様の結果を示した（８４Ｇ０９は、５回中３回の実験で活性を示し、１Ｄ０５は、４回中３回の実験で活性を示し、１Ａ０１は、３回中１回の実験で活性を示し、８Ｂ０９は、３回中０回の実験で活性を示した）。１回のさらなる実験は失敗した（陽性対照を含む）。
【１１０６】
材料および方法
ａ）ヒト定常領域を有する抗体の分析のための表面プラズモン共鳴
ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６（ＢｉｏＲａｄ）アレイＳＰＲマシンでラベルフリー表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析を実施した。アミン結合によって抗ヒトＦｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ  ０９−００５−００８、１０９−００６−００８、および３０９−００６−００８）の組み合わせを使用して、抗ヒトＩｇＧ捕捉表面をＧＬＣバイオセンサチップ上に作製した。試験抗体をこの表面上に捕捉し、１２８ｎＭ、３２ｎＭ、８ｎＭ、２ｎＭ、０．５ｎＭ、および０ｎＭでヒトＰＤ−Ｌ１−ｈｉｓおよびカニクイザルＰＤ−Ｌ１−ＦＬＡＧ（自家、配列番号５）を分析物として使用した。ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６分析ソフトウェアに固有の１：１モデルを使用してデータを分析した。
【１１０７】
ｂ）樹状細胞−Ｔ細胞ＭＬＲ（混合リンパ球反応）
樹状細胞を単球前駆体から生成した。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ｐｌｕｓ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）密度勾配遠心分離を使用して白血球除去系チャンバ（ＮＨＳＢＴ）から単離した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単球前駆体を単離した。負の選択磁気分離ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して単球をＰＢＭＣから単離した。単球を９６ウェルの平底ＴＣプレートに５×１０４／ウェルおよび１×１０４／ウェルでプレーティングし、サイトカインＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４（いずれもＰｅｐｒｏｔｅｃｈ）と共に１００ｎｇ／ｍＬで７日間、培養培地（１０％ｖ／ｖのＦＢＳおよび２ｎＭのグルタミン（培養培地）を補充したＡｄｖａｎｃｅｄ  ＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）中で培養した。
【１１０８】
７日後に、負の選択磁気分離ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して同種ＰＢＭＣからＴ細胞を精製した。精製後、遠心分離および吸引によって単離緩衝液を除去した。細胞を１×１０６細胞／ｍＬで培養培地中に再懸濁させ、ＤＣのみのウェルを除いた全てのウェルに１００μＬのＴ細胞を添加した。さらに１００μＬの培養培地をＤＣのみ、およびＴ細胞のみのウェルに添加した。抗体の段階３倍希釈物を培養培地中で調製した（最大濃度６０ｎＭ最終）。１０μＬの各希釈物を細胞に添加した。
【１１０９】
細胞を３７℃で５日間インキュベートした。この期間の後、製造業者の指示に従い、Ｄｕｏｓｅｔ  ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によってＩＦＮ−γを測定した。
【１１１０】
実施例５−鉛抗体の詳細な特性評価
鉛抗体８４Ｇ０９および１Ｄ０５を、３７℃でのＳＰＲ、中和アッセイにおける抗体の完全滴定、およびＰＤ−Ｌ１に結合するがＰＤ−Ｌ２に結合しないことの確認を含む、詳細な特性評価に供した。抗体はまた、混合リンパ球反応による分析のためにヒトＩｇＧ４（ＰＥ）定常領域（配列番号１９９）で発現された。鉛抗体は、３７℃でサブナノモル親和性を保持し、ＰＤ−１およびＣＤ８０の両方に対するＰＤ−Ｌ１結合の強力な中和を示す。抗体は、ＰＤ−Ｌ２と交差反応せず、樹状細胞上で天然に発現されたＰＤ−Ｌ１に結合し、ＭＬＲにおけるＩＦＮγ産生の強力な刺激因子である。
【１１１１】
ａ）ヒトＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１中和アッセイ（ＥＬＩＳＡ）
１μｇ／ｍＬに希釈したＰＤ−１  Ｆｃ（自家、配列番号６）を９６ウェル低自家蛍光の高タンパク質結合プレート（Ｃｏｓｔａｒ）に４℃で一晩吸着させた。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で洗浄することによって過剰なタンパク質を除去し、ＰＢＳ中、室温で１時間、ウェルを１％ｗ／ｖウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａ）でブロックし、その後、プレートを前述のように洗浄した。抗体の３０μＬ滴定（１／３希釈）を、ＥＬＩＳＡアッセイ緩衝液（ＰＢＳ＋０．１％  ＢＳＡ）中で希釈した９６ウェルの非結合プレートに添加した。５０ｎＭの使用濃度（２５ｎＭ最終アッセイ濃度［ＦＡＣ］）の３０μＬのビオチニル化ＰＤ−Ｌ１  ｈｉｓ（自家、配列番号３）を、３０μＬのＥＬＩＳＡアッセイ緩衝液を添加した対照ウェルを除いて、プレートに添加した。プレートを３０分間インキュベートした後に、コーティングしたプレートに５０μＬを移した。コーティングしたプレートを室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で洗浄することによって過剰なタンパク質を除去した。ＤＥＬＦＩＡアッセイ緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）中で１／１０００に希釈した、ストレプトアビジンで標識したユーロピウム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して、ＰＤ−Ｌ１結合を検出した。プレートをＴＢＳ（トリス緩衝生理食塩水）−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で洗浄し、５０μＬ／ウェルのＤＥＬＦＩＡ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ溶液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）をプレートに添加した。Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）上で、時間分解蛍光を６１５ｎｍで測定した。方程式３を使用して特異的結合のパーセンテージを計算した。４パラメータロジスティック方程式（方程式４）を使用する曲線適合によって、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してＩＣ５０値を判定した。結果は図２に示され、表２に要約される。
【数３】
2019528083.tif 000005
【数４】
2019528083.tif 000006
【１１１２】
Ｘと同じ単位のＬｏｇ  ＩＣ５０。Ｙは下位で開始し、Ｓ字状に上位に進む。特異的結合は、Ｘが増加するにつれて減少する。
【１１１３】
ｃ）ＣＨＯヒトＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１またはＣＤ８０中和アッセイ（フローサイトメトリー）
トランスフェクトされていない（ＷＴと呼ばれる）かまたはｈＰＤ−Ｌ１でトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｓを、ＦＡＣＳ緩衝液中で希釈し、５０μＬ中、ウェル当たり１×１０５細胞の密度で９６ウェルのＶ字底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）に分配した。１μＭ最終アッセイ濃度（ＦＡＣ）の、ＦＡＣＳ緩衝液中の１／２希釈系列からの滴定としてビオチニル化ヒトＰＤ−１−Ｆｃ（自家発現、配列番号６）またはＣＤ８０−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を調製した。３００ｎＭ使用濃度（１５０ｎＭ  ＦＡＣ）から、ＦＡＣＳ緩衝液中の１／３希釈系列として抗体滴定を調製した。ビオチニル化ＰＤ−１またはＣＤ８０をＦＡＣＳ緩衝液中で６０ｎＭ使用濃度（３０ｎＭ  ＦＡＣ）まで希釈した。プレートを３００×ｇで３分間遠心分離して上清を吸引した。２５μＬのリガンドおよび２５μＬの抗体溶液（または５０μＬのリガンド滴定）を細胞に添加し、４℃で１時間インキュベートした。細胞を１５０μＬのＰＢＳで洗浄し、３００ｇで３分間遠心分離させた。上清を吸引し、１５０μＬのＰＢＳを添加した。この洗浄ステップを繰り返した。ＦＡＣＳ緩衝液中で１／５００に希釈した５０μＬのストレプトアビジン−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ６４７（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）の添加によって、結合したＣＤ８０またはＰＤ−１の存在を検出した。細胞を４℃で１５分間、暗所でインキュベートした。細胞を上記のように洗浄した。細胞を固定するために、１００μＬの２％ｖ／ｖパラホルムアルデヒドを添加し、細胞を４℃で３０分間インキュベートし、細胞を３００×ｇで遠心分離させることによってペレット化し、プレートを１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中で再懸濁させた。ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ａｒｒａｙ器具を使用したフローサイトメトリーによってＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ６４７シグナル強度（幾何平均）を測定した。結果は図３および４に示され、表２に要約される。
【数５】
2019528083.tif 000007
【表２】
2019528083.tif 000008
【１１１４】
ｄ）ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２結合
ＰＤ−Ｌ１−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）およびＰＤ−Ｌ２−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を２μｇ／ｍＬに希釈し、９６ウェルの高タンパク質結合プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）に４℃で一晩、５０μＬ／ウェルで別々に吸着させた。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で洗浄することによって過剰なタンパク質を除去し、ウェルを２５０μＬ／ウェルのＰｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｆｒｅｅ  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ、３７５７２）で１時間ブロックし、その後、プレートを前述のように洗浄した。ビオチニル化抗ＰＤ−Ｌ１抗体（自家）または抗ＰＤ−Ｌ２対照抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）をブロッキング緩衝液中で希釈し、１０μｇ／ｍＬから３倍段階希釈を実施した。１００μＬの各抗体希釈物を二連でプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした後に、上記のように洗浄した。ＤＥＬＦＩＡアッセイ緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）中で１／１０００に希釈した、ストレプトアビジンで標識したユーロピウム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して、抗体結合を検出した。プレートをＴＢＳ（トリス緩衝生理食塩水）−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で洗浄し、５０μＬ／ウェルのＤＥＬＦＩＡ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ溶液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）をプレートに添加した。Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）上で、時間分解蛍光を６１５ｎｍで測定した。結果は図５に示される。
【１１１５】
ｅ）ＳＰＲ分析
アッセイを３７℃で実施したことを除いて、実施例４の通りにラベルフリー表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析を実施した。さらに、３７℃でアッセイを行う人為的結果に起因して、結合センサグラムの最良の参照は、ヒトＰＤ−Ｌ１と同じ濃度を使用した陰性対照抗体からのセンサグラムを使用することであることが見出された。結果は、表２に示される。
【１１１６】
ｆ）混合リンパ球反応
増殖したＣＤ４＋  Ｔ細胞を解凍し、アッセイ日の前にＡＩＭ  Ｖ（著作権）培地（Ｇｉｂｃｏ）中で３７℃、５％  ＣＯ２で一晩静止させた。抗ヒトＰＤ−Ｌ１  ｍＡｂの段階希釈をＡＩＭ培地中で、４×最終濃度で調製した。５０μＬの希釈したｍＡｂを９６ウェルのＵ字底プレートに添加した。５０μＬのＡＩＭ培地中の１×１０４個の未成熟樹状細胞（ｉＤＣ）、および１００μＬのＡＩＭ培地中の１×１０５個の増殖したＣＤ４＋  Ｔ細胞（製造業者の指示に従ってＬｉｆｅ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＤｙｎａｂｅａｄｓ  Ｈｕｍａｎ  Ｔ−Ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ＣＤ３／ＣＤ２８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｃａｔ  Ｎｏ：１１１３１Ｄ）を使用して増殖させた）を、各ウェル中の抗体希釈物に添加した。対照ウェルは、２００μＬのＡＩＭ培地中、ＣＤ４＋  Ｔ細胞単独、ｉＤＣ単独、ＣＤ４＋  Ｔ細胞およびｉＤＣ（ＩｇＧアイソタイプアイソタイプ対照抗体を含むかまたは含まない）を含む。反応プレートを、加湿インキュベーター中で５日間インキュベートした（５％のＣＯ２中、３７℃）。アッセイの終わりに、プレートを遠心沈殿させ（５２８×ｇで３分間）、軽いピペッティングによりウェルから１００μＬの上清を回収した。製造業者の指示に従ってヒトＩＦＮγ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して上清を分析した。結果は図６に示される。
【１１１７】
ｇ）１Ｄ０５および８４Ｇ０９の遺伝子セグメント使用の配列決定および特性評価
Ｓｏｕｒｃｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅによって抗体を配列決定し、Ｖ遺伝子を生殖細胞系配列と比較した。
【表３】
2019528083.tif 000009
【１１１８】
ｈ）天然に発現されたＰＤ−Ｌ１への鉛抗体の結合
８４Ｇ０９および１Ｄ０５ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７で標識し、単球前駆体に由来する樹状細胞を染色するために使用した。これは、鉛抗体が、ヒト樹状細胞上に天然に発現されるＰＤ−Ｌ１を示す。データは、図７に示される。
【１１１９】
材料および方法
添加物を含まないＲＰＭＩ  １６４０培地中にＰＢＭＣを懸濁させ、３７℃で２時間、組織培養フラスコに接着させた。非付着細胞を除去し、フラスコをＰＢＳで３回洗浄した。ＰＢＳを除去し、１００ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４（いずれもＰｅｐｒｏｔｅｃｈ）を含有するＲＰＭＩ  １０％  ｈｉＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）と交換した。細胞を３７℃で７日間培養し、その後、細胞スクレーパーを使用してフラスコから除去した。
【１１２０】
細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ  １％ｗ／ｖ  ＢＳＡ  ０．１％ｗ／ｖアジ化ナトリウム）中で再懸濁させ、１０５細胞／ウェルでプレーティングし、ＦｃγＲへの抗体結合を防止するためにＴｒｕｓｔａｉｎ  ＦｃＸ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）と共に１０分間インキュベートした。ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７標識抗体を５μｇ／ｍＬの最終濃度で添加し、４℃で１時間インキュベートした。次いで、ＦＡＣＳ緩衝液中で細胞を３回洗浄し、４％のパラホルムアルデヒド（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）中で２０分間固定させた。固定後、細胞を以前のように３回洗浄し、フローサイトメトリーによる分析のためにＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させた。ＭＡＣＳＱｕａｎｔフローサイトメトリー（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用してデータを取得し、ＦｌｏｗＪｏ  ｖ１０で分析した。
【１１２１】
実施例６−抗原調製、免疫付与手順、ならびに抗原特異的Ｂ細胞選別およびＶ領域回収
前述のＫｙＭｏｕｓｅ（商標）系を使用してさらなる抗ヒトＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体を生成した。遺伝子組換えＨＫマウスに、マウス胎仔線維芽細胞（ＭＥＦ）細胞上に提示された、可溶性組換えヒトおよびマウスＰＤ−Ｌ１、または表面発現されたヒトおよびマウスＰＤ−Ｌ１で免疫付与した。逆ＥＬＩＳＡによって血清滴定を実施し、最も高い力価を有するマウスを処理用に選択した。各レジームの終わりに、脾臓およびリンパ節を除去した。組織を単一細胞懸濁液に調製し、ＦＡＣＳによって抗原特異的Ｂ細胞を選別するために染色した。
【１１２２】
材料および方法
ａ）マウスの免疫付与
ＫＭ０３２（本明細書において以降、ＫＭ１２１と記載する）について実施例１に記載したスケジュールに従って、マウスに、可溶性組換えヒトＰＤ−Ｌ１、またはヒトおよびマウスＰＤ−Ｌ１タンパク質（自家）の組み合わせで免疫付与した。また、ＫＭ０３３（本明細書において以降、ＫＭ１２２と記載する）について実施例１に記載したスケジュールに従って、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質、およびヒトまたはマウスＰＤ−Ｌ１を発現するＭＥＦ細胞で免疫付与した。実施例１に従うが、マウスＰＤ−Ｌ１配列をヒトＰＤ−Ｌ１配列と交換し、抗マウスＰＤ−Ｌ１検出抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を抗ヒトＰＤ−Ｌ１検出抗体と交換して、マウスＰＤ−Ｌ１を発現するＭＥＦ細胞を生成した。
【１１２３】
ｂ）逆ＰＤ−Ｌ１  ＥＬＩＳＡプロトコルによる血清力価の判定
以下の変更を伴って、実施例１に従い逆ＰＤ−Ｌ１  ＥＬＩＳＡプロトコルを使用してマウス血清試料中の力価を判定した。自家生成されたｈＰＤ−Ｌ１−ｈｉｓを、Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ  Ｌｉｎｋキット（Ｉｎｎｏｖａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して自家標識し、試薬希釈剤中１μｇ／ｍＬ、５０μＬ／ウェルで使用した。ＤＥＬＦＩＡアッセイ緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）中で１／１０００に希釈した、ストレプトアビジン−ユーロピウム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）の添加によって、結合したｈＰＤ−Ｌ１を検出した。室温で１時間の暗所でのインキュベーション後、ＴＢＳ（トリス緩衝生理食塩水）−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）を使用してプレートを洗浄し、５０μＬ／ウェルのＤＥＬＦＩＡ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ溶液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）をプレートに添加した。Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）上で、時間分解蛍光を６１５ｎｍで測定した。蛍光データをユーロピウム数としてプロットした。
【１１２４】
ｃ）抗原特異的Ｂ細胞の選別およびＶ領域の回収
使用した方法は、実質的にＰＣＴ出願第ＷＯ２０１５／０４０４０１号の実施例に記載される通りであり、これは、参照により本明細書に組み込まれる。簡潔には、ＫＭ１２１およびＫＭ１２２免疫付与レジームから単離した脾臓細胞およびリンパ節細胞を、目的の細胞（ＣＤ１９）の選択のためのマーカーを含有する抗体カクテルで染色し、一方で不要な細胞を最終選別集団から排除した（ＩｇＭ、ＩｇＤ、７ＡＡＤ）。ＣＤ１９＋  Ｂ細胞を、ヒトＰＤ−Ｌ１（配列番号１）およびマウスＰＤ−Ｌ１（配列番号３２５、Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ  Ｌｉｎｋキットを使用してＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７およびＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８でそれぞれ自家染色されている）でさらに標識して、特異的抗体を産生するＢ細胞を検出し、ヒトＰＤ−Ｌ１、またはヒトおよびマウスＰＤ−Ｌ１の両方に結合する細胞を選択した。これらの細胞をＦＡＣＳによって融解緩衝液内に単一細胞選別した。ＲＴ−ＰＣＲ、およびさらに２ラウンドのＰＣＲを使用してＶ領域配列を回収し、次いで、マウスＩｇＧ１定常領域に架橋し、ＨＥＫ２９３細胞において発現させた。ＰＤ−Ｌ１結合抗体の存在について、ＨＥＫ２９３細胞からの上清をスクリーニングした。この方法を、本明細書において以降、ＢＣＴと呼ぶ。
【１１２５】
実施例７−上清スクリーニング
ＢＣＴ上清をＨＴＲＦによってスクリーニングし、選択した一次ヒットを、細胞発現組換えｈＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１結合の中和について、ならびにヒト、カニクイザル、およびマウスＰＤ−Ｌ１組換えタンパク質への結合の親和性について、この実施例に記載されるように、ＳＰＲによってさらにスクリーニングした。ヒトに対して、および場合によってはカニクイザルＰＤ−Ｌ１に対しても、１ｎＭまたはそれよりも良好な親和性を有するＫＭ１２１抗体をさらなる特性評価のために進めた。ＫＭ１２２については、ヒトおよびカニクイザルＰＤ−Ｌ１の両方に対する高親和性（＜１ｎＭ）の結合と共に、細胞発現ＰＤ−Ｌ１に対するＰＤ−１結合を中和させる能力を有する抗体を進めた。抗体は、マウスＰＤ−Ｌ１には結合しなかった。
【１１２６】
ａ）一次スクリーン−組換えヒトＰＤ−Ｌ１への結合（ＢＣＴ上清）
分泌抗体の、組換えタンパク質（自家で産生された）として発現されたｈＰＤ−Ｌ１に結合する能力について、ＢＣＴ発現から回収した上清をスクリーニングした。ＦｌｕｏＰｒｏｂｅｓ（登録商標）６４７Ｈ（Ｉｎｎｏｖａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で標識したＰＤ−Ｌ１（本明細書において、それぞれＦｌｕｏＰｒｏｂｅｓ（登録商標）６４７Ｈで標識したヒトＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ１について６４７  ｈＰＤ−Ｌ１または６４７  ｍＰＤ−Ｌ１と呼ばれる）を使用して、ＨＴＲＦ（登録商標）（均一時間分解蛍光、Ｃｉｓｂｉｏ）アッセイフォーマットによって組換えヒトおよびマウスＰＤ−Ｌ１に対する分泌抗体の結合を同定した。５μＬのＢＣＴ上清を白色の３８４ウェルの低容量非結合表面ポリスチレンプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）に移した。ＨＴＲＦアッセイ緩衝液中で希釈した５μＬの２５ｎＭ  ６４７  ｈＰＤ−Ｌ１または６４７  ｍＰＤ−Ｌ１を全てのウェルに添加した。参照抗体をＢＣＴ培地（Ｇｉｂｃｏ＃Ａ１４３５１−０１）中で４０ｎＭまで希釈し、５μＬをプレートに添加した。陰性対照のウェルについては、ＢＣＴ培地中で４０ｎＭまで希釈した５μＬのマウスＩｇＧ１（Ｓｉｇｍａ  Ｍ９２６９、場合によってはＣＭ７と呼ばれる）を添加した。ＨＴＲＦアッセイ緩衝液中で１／２０００に希釈したユーロピウムクリプテート（Ｃｉｓｂｉｏ）で直接標識した１０μＬのヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）の添加によってＰＤ−Ｌ１に対する分泌抗体の結合を検出した。ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して６２０ｎｍおよび６６５ｎｍの発光波長で時間分解蛍光を読み取る前に、プレートを暗所で２時間インキュベートさせた。
【１１２７】
各試料について、それぞれ方程式２および方程式１に従って６６５／６２０比および効果パーセントを計算することによってデータを分析した。
【１１２８】
ＫＭ１２１については、３０パーセント以上の効果に基づいて一次ヒットを選択し、一方でＫＭ１２２については、４０パーセント以上の効果に基づいて一次ヒットを選択した。
【１１２９】
二次スクリーンへの進行は、組換えＰＤ−Ｌ１結合からのデータに基づいた。
【１１３０】
ｂ）二次スクリーン−細胞発現ｈＰＤ−Ｌ１への結合、およびＰＤ−１へのｈＰＤ−Ｌ１結合の中和（ＢＣＴ上清）
ｈＰＤ−Ｌ１を発現するＣＨＯ−Ｓ細胞に結合する能力について、ＢＣＴ上清の結合を試験した。ｈＰＤ−Ｌ１を発現するＣＨＯ−Ｓ細胞（自家生成された）をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ  １％  ＢＳＡ  ０．１％アジ化ナトリウム）中で希釈し、ウェル当たり０．５〜１×１０５細胞の密度で９６ウェルのＶ字底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）に分配した。細胞を１５０μＬのＰＢＳで洗浄し、３００ｇで３分間遠心分離させた。上清を吸引し、１５０μＬのＰＢＳを添加した。この洗浄ステップを繰り返した。
【１１３１】
ＢＣＴ培地中で３００ｎＭまで希釈した、２５μＬのＢＣＴ未希釈上清、参照抗体、または対照抗体を、洗浄した細胞に添加した。２５μＬの３０ｎＭビオチニル化ヒトＰＤ−１（自家）を添加し、細胞を４℃で６０分間インキュベートした。１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液を添加し、細胞を上記のように洗浄した。ビオチニル化ＰＤ−１および抗ＰＤ−Ｌ１抗体の結合を検出するために、ストレプトアビジン６４７（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）および抗マウスＰＥ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）をＦＡＣＳ緩衝液中で１／５００に各々希釈し、５０μＬのこの混合物を細胞に添加した。細胞を４℃で６０分間インキュベートした。細胞を１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、各洗浄ステップ後に３００×ｇで３分間遠心分離させて上清を吸引した。５０μＬの４％パラホルムアルデヒドの添加によって細胞を一晩固定した。細胞を上記のように１回洗浄し、分析のためにＦＡＣＳ緩衝液中で再懸濁させた。ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ａｒｒａｙ器具を使用したフローサイトメトリーによってＰＥおよびＡＰＣシグナル強度（幾何平均）を測定した。さらなる計算を伴わずに幾何平均値としてデータをプロットした。
【１１３２】
ＫＭ１２１については、ヒトＰＤ−Ｌ１への高親和性（＜１ｎＭ）結合に基づいて二次ヒットを選択した。ＫＭ１２２については、ヒトおよびカニクイザルＰＤ−Ｌ１への同等の高親和性（＜１ｎＭ）結合、ならびに細胞発現ＰＤ−Ｌ１へのＰＤ−１結合を中和させる能力に基づいて二次ヒットを選択した。結果を表４に要約する。
【表４】
2019528083.tif 000010
【１１３３】
ｃ）表面プラズモン共鳴による結合の分析
ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６  ＡｒｒａｙシステムでＳＰＲ分析を実施した。一級アミン結合によって抗マウスＩｇＧ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＢＲ−１００８−３８）をＧＬＭチップ上に固定化した。抗体をＢＣＴ上清から直接捕捉した。ヒト、マウス、およびカニクイザルＰＤ−Ｌ１を分析物として使用し、単一濃度で捕捉抗体上を通過させた。．結合センサグラムを０ｎＭ（すなわち、緩衝液単独）注入と二重参照し、ＰｒｏｔｅＯｎ分析ソフトウェアに固有の１：１モデルを称してデータを分析した。アッセイを２５℃で実施し、ＨＢＳ−ＥＰを泳動用緩衝液として使用した。
【１１３４】
実施例８−選択した抗体の特性評価
選択したヒットをヒトＩｇＧ１定常領域で再発現させ、Ｓｏｕｒｃｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅでの配列決定に送った。Ｖ領域使用は、表５に列挙される。次いで、ＥＬＩＳＡでヒットを分析して、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１相互作用およびＰＤ−Ｌ１／ＣＤ８０相互作用を中和させるそれらの能力を判定した。７つ全てのＫＭ１２１ヒットは、ＰＤ−Ｌ１／ＣＤ８０相互作用を中和させたが、４つの抗体は、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１を中和させなかった。５つ中４つののＫＭ１２２ヒットは、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１／ＣＤ８０相互作用の両方を中和させた。結果は、図８および９に示される。ＰＤ−１およびＣＤ８０相互作用の両方を中和させることを示した抗体を、自己単球−Ｔ細胞共培養アッセイにおいてＩＦＮγを増加させるそれらの能力について、さらにスクリーニングした。
【１１３５】
材料および方法
ａ）ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１／ＣＤ８０中和ＥＬＩＳＡ
２．５μｇ／ｍＬに希釈したＣＤ８０（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）またはＰＤ−１（自家）を９６ウェル低自家蛍光の高タンパク質結合プレート（Ｃｏｓｔａｒ）に４℃で一晩吸着させた。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で洗浄することによって過剰なタンパク質を除去し、ＰＢＳ中、室温で１位時間、ウェルを１％ｗ／ｖウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａ）でブロックし、その後、上記のようにＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎでプレートを洗浄した。抗体の滴定（３倍段階希釈）のうちの６０μＬを、ＥＬＩＳＡアッセイ緩衝液（ＰＢＳ＋０．１％  ＢＳＡ）中で希釈した９６ウェルの非結合プレートに添加した。１６ｎＭ使用濃度（８ｎＭ  ＦＡＣ）の６０μＬのビオチン標識したＰＤ−Ｌ１を、６０μＬのＥＬＩＳＡアッセイ緩衝液を添加した対照ウェルを除いて、プレートに添加した。プレートを３０分間インキュベートした後に、コーティングしたプレートに５０μＬを移した。コーティングしたプレートを室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で洗浄することによって過剰なタンパク質を除去した。ＤＥＬＦＩＡアッセイ緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）中で１／１０００に希釈した、ストレプトアビジンで標識したユーロピウム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して、ＰＤ−Ｌ１結合を検出した。プレートをＴＢＳ（トリス緩衝生理食塩水）−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で洗浄し、５０μＬ／ウェルのＤＥＬＦＩＡ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ溶液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）をプレートに添加した。Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）上で、時間分解蛍光を６１５ｎｍで測定した。方程式３に定義されるように特異的結合のパーセンテージを計算した。４パラメータロジスティック方程式（方程式４）を使用する曲線適合によって、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してＩＣ５０値を判定した。結果は、以下の表４ａに示される。ＫＭ１２１抗体の値は、３つの独立した実験の平均である。ＫＭ１２２の値は、単一の実験からのものである。ＮＤとは、完全な曲線が生成されなかったため、ＩＣ５０値が判定されなかったことを示す。
【表４ａ】
2019528083.tif 000011
【１１３６】
単球−Ｔ細胞共培養アッセイ（実施例９を参照されたい）において活性な選択された鉛抗体を、２５および３７℃でＳＰＲによって分析した。鉛抗体は、３７℃であっても、ＰＤ−Ｌ１に対するサブナノモル親和性結合を保持した。抗体は、マウスＰＤ−Ｌ１に結合しなかった。結果は、表４ｂに示される。
【１１３７】
材料および方法
以下の修正を除いて、実施例４の通りにＳＰＲ分析を実施した：アッセイのストリンジェンシーを高めるために、３７℃および２５℃で分析を行った。ヒト、カニクイザル、およびマウスＰＤ−Ｌ１（ｈｉｓタグ付き）を自家生成した（それぞれ、配列番号３、５、および３２６）。
【表４ｂ】
2019528083.tif 000012
【１１３８】
実施例９−自己共培養アッセイにおける鉛抗ＰＤ−Ｌ１抗体の試験
同じドナーからの、精製した末梢血単およびＣＤ４５ＲＯ＋メモリーＴ細胞の共培養アッセイにおいて、ＩＦＮγ産生への抗ＰＤ−Ｌ１抗体の効果を分析する。簡潔には、磁気分離ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用する負の選択によって単球を単離する。ＣＤ３＋  Ｔ細胞についての第１ラウンドの負の選択、およびＣＤ４５ＲＯ＋細胞（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）についての１ラウンドの正の選択によって、ＣＤ４５ＲＯ＋  Ｔ細胞を単離する。抗ＣＤ３（ＵＣＨＴ１、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の存在下で、ＲＰＭＩ  １０％  ｈｉＦＢＳ中、１：１の比で細胞サブセットを共培養して、ＴＣＲ刺激、および調査中の抗体を提供した。ＭＳＤ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によるＩＦＮγの分析のために、４日後に上清を採取した。
【１１３９】
ＤＥＬＦＩＡ（登録商標）Ｅｕ−Ｎ１ストレプトアビジン検出を使用してＲ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ（商標）Ｈｕｍａｎ  ＩＦＮγ  Ｄｕｏｓｅｔ（登録商標）ＥＬＩＳＡでＩＦＮγ産生を測定したことを除き、記載された通りに実験を実施した。
【１１４０】
６１５ｎＭでの相対蛍光応答に対するＩＦＮγ標準（ｐｇ／ｍＬ）の応答をプロッティングした。方程式４によって定義される４パラメータロジスティック適合を使用して、標準曲線からＩＦＮγ濃度をｐｇ／ｍＬで内挿した。抗体誘導性ＩＦＮγは、方程式６に定義される応答のバックグラウンドレベルを示すウェルのアッセイシグナルと比較した倍数誘導として表される。各プロットは、個々のドナーについての平均倍数誘導を表し、少なくとも２人の異なるドナーが抗体濃度Ｌｏｇ（Ｍ）に対して表されている。結果は、図２２および３７に示される。
【１１４１】
方程式６
倍数誘導＝アッセイ応答（ｐｇ／ｍＬ）／バックグラウンド応答（ｐｇ／ｍＬ）
バックグラウンドＩＦＮγ応答＝抗体を含まず、抗ＣＤ３刺激を含む単球−Ｔ細胞共培養を含有するウェルからのＩＦＮγ濃度（ｐｇ／ｍＬ）。
【１１４２】
ヒトＩｇＧ１フォーマットの５つ全ての抗体は、自己単球および抗ＣＤ３との共培養の４日後に、Ｔ細胞によるＩＦＮγ産生の特異的な用量依存性の増加を誘導した（図２２ａおよび２２ｂを参照されたい）。サイトカイン産生の最も高い増加を誘導した２つの抗体は４１３Ｇ０５および４１４Ｂ０６を、ＳＰＲによる反復特性評価のために選択した（実施例８を参照されたい）。ヒトＩｇＧ４（ＰＥ）フォーマット（配列番号１９９）の抗体４１６Ｅ０１も、共培養アッセイにおいてＩＦＮγ産生の特異的な用量依存性の増加を誘導した。この抗体もまた、反復ＳＰＲ分析のために選択した。
【１１４３】
実施例４において選択された２つの鉛抗体（１Ｄ０５および８４Ｇ０９）および市販のエフェクター可能化ベンチマーク抗体と共に、３つの選択された抗体も分析した。抗体をヒトＩｇＧ１としてフォーマット化した。全ての抗体は、このアッセイにおいて用量依存性のＩＦＮγ産生を誘導した（図３７および表２２）。
【表５】
2019528083.tif 000013
【表２２】
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【１１４４】
実施例１０−ＰＤ−Ｌ１およびＴＩＧＩＴを標的とする二重特異性ＦＩＴ−Ｉｇ分子
二重特異性ＦＩＴ−Ｉｇ構築物を、実質的に国際出願第ＷＯ２０１５／１０３０７２号（ＥｐｉＭａｂ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ名義、参照により本明細書に組み込まれる）の実施例１に記載される通りに構築した。
【１１４５】
ＷＯ２０１５／１０３０７２の図１に記載されるようなＦＩＴ−Ｉｇ構造を有する二重特異性構築物を、一過性トランスフェクション中の全ＤＮＡの、構築物１  ＤＮＡ：５０％、構築物２：ＤＮＡ  ２５％：構築物３ＤＮＡ  ２５％ののベクター比でＣＨＯ細胞において発現させた。標準タンパク質Ａおよびサイズ排除クロマトグラフィーによって、二重特異性抗体を精製した。この際、構築物１は、ＷＯ２０１５／１０３０７２の図１中のＶＬＡ−ＣＬ−ＶＨＢ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３で構成されたポリペプチド鎖である。構築物２は、ＷＯ２０１５／１０３０７２の図１中のＶＨＡ−ＣＨ１で構成されたポリペプチド鎖であり、構築物３は、ＷＯ２０１５／１０３０７２の図１中のＶＬＢ−ＣＬで構成されたポリペプチド鎖である。
【１１４６】
ＳＰＲ分析を使用して、二重特異性の様々なアームの親和性を判定し、親単一特異性抗体を使用して、二重特異性分子において親和性が改変されたかどうかを判定した。抗原の逐次的結合を使用して、二重特異的構築物が二重特異性の両方のアームに結合することができるかどうかを試験した。
【表６】
2019528083.tif 000015
【１１４７】
ａ）動態分析
一級アミン結合によってＧＬＣチップ上に固定化された３つの抗ヒトＦｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ  １０９−００５−００８、１０９−００６−００８、および３０９−００６−００８）のミックスによって、抗ヒトＩｇＧ捕捉表面を作製した。対照単一特異性抗体または二重特異性抗体構築物をこの表面上に捕捉し、５１２ｎＭ、１２８ｎＭ、３２ｎＭ、８ｎＭ、および２ｎＭでヒトＰＤ−Ｌ１またはＴＩＧＩＴを分析物として使用し、結合センサグラムを二重参照するために０ｎＭ（すなわち、緩衝液単独）を使用した。ＨＢＳ−ＥＰを泳動用緩衝液として使用し、アッセイを２５℃で行った。センサグラムをＰｒｏｔｅＯｎ分析ソフトウェアに固有の１：１モデルに適合させた。
【表７】
2019528083.tif 000016
【表８】
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【１１４８】
ｂ）二重特異性結合
動態分析のために作製したものと同じ抗ヒトＩｇＧ捕捉表面を使用して、二重特異性抗体構築物をこの表面上に捕捉し、５１２ｎＭ、１２８ｎＭ、３２ｎＭ、８ｎＭ、および２ｎＭでＰＤ−Ｌ１またはＴＩＧＩＴを分析物として使用し、結合センサグラムを二重参照するために０ｎＭ（すなわち、緩衝液単独）を使用した。分析物注入の間に再生なしに、ＰＤ−Ｌ１、続いてＴＩＧＩＴによる注入、またＴＩＧＩＴ、続いてＰＤ−Ｌ１による注入によってアッセイを実施した。二重参照した５１２ｎＭのセンサグラムは、図１０および１１に示される。
【１１４９】
ｃ）ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）によるＰＤ−Ｌ１およびＴＩＧＩＴへの二重特異性ＦＩＴ−Ｉｇ分子結合
ＰＤ−Ｌ１／ＴＩＧＩＴ  ＦＩＴ−Ｉｇ分子の二重特異性結合を評価するためにＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）結合アッセイが開発された。ストレプトアビジンドナービーズおよび抗ＦＬＡＧアクセプタービーズ（いずれもＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、６７６０６１３）でそれぞれ検出されたビオチニル化Ｈｉｓ−ＰＤ−Ｌ１（配列番号３）およびＨｉｓ−ＦＬＡＧ−ＴＩＧＩＴ（配列番号５３９）を使用してアッセイを設定した。抗Ｈｉｓ抗体（Ｑｉａｇｅｎ  ３４６６０）を正の対照として使用した一方、ヒトＩｇＧ１（Ｓｉｇｍａ  Ｉ５１５４）および親単一特異性抗体を単独または組み合わせで陰性対照として使用した。
【１１５０】
２つのプロトコルを作製して、ＦＩＴ−Ｉｇ分子の、別個のストリンジェンシーを有するＴＩＧＩＴおよびＰＤ−Ｌ１でコーティングされたビーズの接近を促進する能力を調査した。抗体を、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）検出ビーズを添加する前にＰＤ−Ｌ１およびＴＩＧＩＴタンパク質と共にインキュベートするか（方法１）、またはそれらのそれぞれのＴＩＧＩＴおよびＰＤ−Ｌ１タンパク質で事前にコーティングされた検出ビーズと共にインキュベートした（方法２）。方法２は、二重特異性抗体による細胞動員を模倣するように設計した。
【１１５１】
ｉ）方法１
二重特異性抗体、親単一特異性抗体、および対照抗体を、１５０ｎＭの緩衝液（ＰＢＳ  ｐＨ７．４（Ｇｉｂｃｏ）および０．１％ｗ／ｖ  ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ））中で調製し、１：３系列、８ポイントに従って希釈した。５μＬの抗体の各段階希釈物を、３８４ウェルのＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）アッセイプレート（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ６００５３５０）において、緩衝液中、５０ｎＭで５μＬのビオチニル化Ｈｉｓ−ＰＤ−Ｌ１および５μＬのＨｉｓ−ＦＬＡＧ−ＴＩＧＩＴに混合した。親単一特異性抗体も、組み合わせて試験されるように、３００ｎＭから開始して上記のように調製した。２．５μＬの第１の抗体を、同じ量の第２の抗体に添加し、次いで、５μＬの親単一特異性抗体の各組み合わせを、アッセイプレートにおいて、緩衝液中、５０ｎＭで５μＬのビオチニル化Ｈｉｓ−ＰＤ−Ｌ１および５μＬのＨｉｓ−ＦＬＡＧ−ＴＩＧＩＴに混合した。アッセイプレートを室温で１時間インキュベートした後、５μＬの抗ＦＬＡＧアクセプタービーズを室温でさらに１時間、暗所で０．１ｇ／Ｌ添加した。最後に、５μＬのストレプトアビジンドナービーズをアッセイプレートに０．１ｇ／Ｌで２時間３０分かけて添加した。６８０／６１５ｎｍの励起／発光波長で、ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用してアッセイプレートを読み取った。測定した蛍光数（アルファシグナル）を、抗体滴定に対してＰｒｉｓｍにおいてプロッティングした。結果は、図２５に示される。ＦＩＴ−Ｉｇ分子の、ＰＤ−Ｌ１およびＴＩＧＩＴ変結合は、最大で１０ｎＭの抗体の濃度と共に増加する。単一特異性抗体およびアイソタイプ対象について、結合は認められない。
【１１５２】
ｉｉ）方法２
緩衝液（ＰＢＳ  ｐＨ７．４（Ｇｉｂｃｏ  １４１９０１６９）および０．１％ｗ／ｖ  ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ））中、０．０５ｇ／Ｌで調製したストレプトアビジンドナービーズを、２５ｎＭのビオチニル化Ｈｉｓ−ＰＤ−Ｌ１（配列番号３）でコーティングし、一方で２５ｎＭのＨｉｓ−ＦＬＡＧ−ＴＩＧＩＴ（配列番号５３９）を使用して、緩衝液中、０．０５ｇ／Ｌの抗ＦＬＡＧアクセプタービーズを標識した。アクセプターおよびドナービーズの両方を暗所において、室温で１時間インキュベートした。
【１１５３】
二重特異性抗体、親単一特異性抗体、および対照抗体を、単独および組み合わせで３００ｎＭの緩衝液中で調製し、１：３系列、８ポイントに従って希釈した。５μＬの抗体の各段階希釈物を、３８４ウェルのＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）アッセイプレート（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ６００５３５０）において、１０μＬの事前にコーティングされたドナービーズおよび１０μＬの事前にコーティングされたアクセプタービーズに混合した。暗所においてアッセイプレートを室温で４時間インキュベートし、次いで、方法１に記載されるように読み取った。測定した蛍光数（アルファシグナル）を、抗体滴定に対してＰｒｉｓｍにおいてプロッティングした。結果は、図２６に示される。ＦＩＴ−Ｉｇ分子の、ＰＤ−Ｌ１およびＴＩＧＩＴ変結合は、最大で２０ｎＭの抗体の濃度と共に増加する。単一特異性抗体およびアイソタイプ対象について、結合は認められない。
【１１５４】
ｄ）フローサイトメトリーによるＰＤ−Ｌ１およびＴＩＧＩＴへの二重特異性ＦＩＴ−Ｉｇ分子結合
ＦＩＴ−Ｉｇ分子の、ＴＩＧＩＴおよびＰＤ−Ｌ１を発現する細胞の動員を促進する能力を評価するために、フローサイトメトリープロトコルが開発された。この目的のために、ヒトＰＤ−Ｌ１でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞を、６６１ｎｍで最大限に発光するＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｆａｒ  Ｒｅｄ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃ３４５７２）で染色し、ヒトＴＩＧＩＴでトランスフェクトされたＨＥＫ細胞を、４５０ｎｍで最大限に発光するＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃ３４５７１）で染色した。
【１１５５】
ＣＨＯヒトＰＤ−Ｌ１およびＨＥＫヒトＴＩＧＩＴ細胞を採取、計数、洗浄し、ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ  １４１９０１６９）中で、１ｍＬ当たり１００万個の細胞で再懸濁させた。製造業者の推奨に従って、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｆａｒ  ＲｅｄおよびＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ染料を１：２０００に希釈し、暗所において細胞と共に３７℃で２０分間インキュベートした。次いで、緩衝液（ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ  １４１９０１６９）、１％  ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）０．１％アジ化ナトリウム（Ｓｅｖｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ４０−２０１０−０１））を、さらに５分間のインキュベーションステップのために過剰に添加した。細胞を遠心沈殿させ、１ｍＬ当たり５０万個の細胞で緩衝液中に再懸濁させ、３７℃で少なくとも１０分間インキュベートした後に、結合プロトコルに進んだ。未染色の細胞を保存し、ゲーティング戦略を設定するために使用した。
【１１５６】
二重特異性抗体およびヒトＩｇＧ１を、１５０ｎＭの緩衝液中で調製し、１：３系列、８ポイントに従って希釈した。５０μＬの抗体の各段階希釈物、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｆａｒ  Ｒｅｄで標識した５０μＬのＣＨＯヒトＰＤ−Ｌ１細胞、およびＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔで標識した５０μＬのＨＥＫヒトＴＩＧＩＴを、９６ウェルのＶ字底ＰＳプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ６５１９０１）に添加した。アッセイプレートを軽く撹拌（４５０ｒｐｍ）しながら室温で１時間インキュベートした後に、Ａｔｔｕｎｅ  ＮｘＴフローサイトメーター（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して読み取った。Ｖｉｏｌｅｔレーザを使用してＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔを励起させ、４４０／５０バンドパスフィルタによってＶＬ１チャネル中で検出した。Ｒｅｄレーザを使用してＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｆａｒ  Ｒｅｄを励起させ、６７０／１４バンドパスフィルタによってＲＬ１チャネル中で検出した。試料をボルテックスせずに試料採集を行った。ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェアでＦＣＳファイルを分析した。前方および側方散乱光のドットプロットに基づいて単一の細胞および電子対をゲーティングした。
【１１５７】
データ分析は、４つの異なるゲートの同定をもたらした：未染色のＣＨＯヒトＰＤ−Ｌ１および未染色のＨＥＫヒトＴＩＧＩＴに対応する二重陰性四分円；単一の染色について陽性である２つの四分円（ＶＬ１またはＲＬ１チャネルにおいて）；ならびにＦＩＴ−Ｉｇ分子によって動員された、染色されたＣＨＯヒトＰＤ−Ｌ１および染色されたＨＥＫヒトＴＩＧＩＴで構成される、二重染色について陽性である四分円（ＶＬ１およびＲＬ１チャネルの両方において）。二重陽性細胞のパーセンテージを、抗体滴定に対してＰｒｉｓｍにプロットした。結果は、図２７に示される。二重陽性細胞のパーセンテージは、最大で１ｎＭのＦＩＴ−Ｉｇの濃度と共に増加する。
【１１５８】
５９０ｎｍで最大限に発光するＲ−フィコエリトリン（ＰＥ）で標識した単一特異性抗体を使用して、標的への試験分子の単一特異的結合を染色された細胞上で確認した。ＰＥ標識抗体１、抗体２、およびヒトＩｇＧ１を、１５０ｎＭの緩衝液中で希釈した。５０μＬの各抗体を、９６ウェルのＶ字底ＰＳプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ６５１９０１）中で、５０μＬの染色されたＣＨＯヒトＰＤ−Ｌ１細胞および５０μＬの染色されたＨＥＫヒトＴＩＧＩＴと混合した。室温で１時間インキュベートした後に、細胞を２００μＬ／ウェルのＰＢＳで３回洗浄し、１５０μＬ／ウェルの緩衝液中で再懸濁させた。Ａｔｔｕｎｅ  ＮｘＴフローサイトメーター（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を使用してアッセイプレートを読み取って、蛍光を記録した。上記のように、Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｅ（商標）ＶｉｏｌｅｔおよびＦａｒ  Ｒｅｄを検出した。Ｙｅｌｌｏｗレーザを使用してＰＥを励起させ、５８５／１６バンドパスフィルタによってＹＬ１チャネル中で検出した。ＹＬ１チャネル中のＧｅｏＭｅａｎ値を使用して、染色されたＣＨＯヒトＰＤ−Ｌ１または染色されたＨＥＫヒトＴＩＧＩＴへの単一特異的結合を判定した。
【１１５９】
実施例１１−抗ＰＤ−Ｌ１−ＩＬ−２免疫サイトカイン構築物の生成および発現
野生型ＩＬ−２（配列番号３０１）、または最初の９個のアミノ酸における欠失を含有するＩＬ−２（配列番号３２４に融合した配列番号３０３〜３２３を参照されたい）を、抗ＰＤ−Ｌ１抗体１Ｄ０５（配列番号４５を参照されたい）の軽鎖に融合させることによって、免疫サイトカインを生成した。これらを、１Ｄ０５重鎖（配列番号２０５）のＩｇＧ１エフェクター欠損変異型と対形成させた。１Ｄ０５の重鎖に融合した野生型ＩＬ−２を対照（配列番号３０２）として使用するために生成し、１Ｄ０５の未修飾軽鎖（配列番号４５）と対形成させた。２２個の免疫サイトカインの発現に成功し、さらに特性評価した。１個の軽鎖構築物、１Ｄ０５  Ｄ１は、うまく発現しなかった。
【１１６０】
材料および方法
抗ＰＤ−Ｌ１（抗体１Ｄ０５）免疫サイトカイン（軽鎖へのＣ末端ＩＬ−２融合）をコードするＤＮＡ配列を合成ＤＮＡ列として購入し、Ｇｏｌｄｅｎ  Ｇａｔｅクローニング戦略を使用してｐＴＴ５発現ベクターにクローニングした。１Ｄ０５の重鎖配列は、太字で示される野生型からの変化を含む欠損ＩｇＧ１変異型である定常領域を含む（配列番号２９９）。抗体１Ｄ０５の軽鎖は、カッパ定常領域（配列番号３００）のＣ末端に融合した全長野生型ＩＬ−２配列（下線）を有する。適切なオリゴヌクレオチドプライマーを使用する重複ＰＣＲを使用して、ＩＬ−２のＮ末端の変異型を生成した（配列ＩＬ−２に下線が引かれ、変化する領域が太字で示されている配列番号３００を参照されたい）。Ｇｏｌｄｅｎ  Ｇａｔｅ法を使用して、変異型配列をｐＴＴ５発現ベクターにクローニングした。野生型および変異型構築物を、発現のためにＥｘｐｉ２９３（商標）細胞にトランスフェクトした。
【１１６１】
実施例１２−スクリーニングのためのＩＬ−２Ｒトランスフェクタント細胞の生成
高親和性（αβγ）および中親和性（βγ）ＩＬ−２受容体上の免疫サイトカイン間で区別するために、ＩＬ−２Ｒトランスフェクタントを生成した。内因性共通γ鎖を発現するＴＦ−１細胞を、β、またはαおよびβ受容体サブユニットでトランスフェクトして、ＩＬ−２に対する応答性を付与した。次いで、これらの細胞を使用して、免疫サイトカインに対する増殖応答を分析した（実施例１３を参照されたい）。
【１１６２】
材料および方法
高親和性（αβγ）および中親和性（βγ）ＩＬ−２Ｒを通したシグナル伝達を区別するために、２つの組換え細胞株を生成した。赤白血病細胞株ＴＦ−１（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ）は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）またはインターロイキン−３（ＩＬ−３）への完全な増殖依存を示す。生成した第１の細胞株を、全長ヒトＩＬ−２Ｒβ（ＣＤ１２２）のみでトランスフェクトした。第１の細胞株の中に全長ヒトＩＬ−２Ｒα（ＣＤ２５）をトランスフェクトすることによって第２の細胞株を生成した。
【１１６３】
トランスフェクトした配列を、哺乳動物発現についてコドン最適化し、３’および５’  ｐｉｇｇｙＢａｃ特異的末端反復配列に隣接したＣＭＶプロモーター下で発現ベクターにクローニングし、細胞ゲノム内への安定した組込みを容易にした（「Ａ  ｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｅ  ｐｉｇｇｙＢａｃ  ｔｒａｎｓｐｏｓａｓｅ  ｆｏｒ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」；Ｙｕｓａ  Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ  Ｓ  Ａ．，１０８（４）：１５３１−６，２０１１  Ｊａｎ  ２５を参照されたい）。さらに、各サブユニットの発現ベクターは、安定した細胞株生成を容易にするために、異なる選択カセットを含有した。ピューロマイシン（Ｓｉｇｍａ）を使用してβサブユニットを選択し、ジェネテシン（Ｇｉｂｃｏ）を使用してαサブユニットを選択した。βサブユニットを既に発現している細胞の中にαサブユニットをトランスフェクトした。
【１１６４】
製造業者の指示に従いＬｏｎｚａ  ４−Ｄ核酸遺伝子注入トランスフェクションＸキットシステムを使用した電気穿孔法によって、発現プラスミドを、ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポザーゼをコードするプラスミドと共に、ＴＦ１細胞に同時トランスフェクトした。トランスフェクションの２４時間後に、培地に適切な選択を補充し、培地を３〜４日ごとに交換しながら細胞を少なくとも３週間成長させて、安定した細胞株を選択した。抗ヒトＣＤ１２２（ＩＬ−２Ｒβ）、ＡＰＣにコンジュゲートされた抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、および抗ヒトＣＤ２５（ＩＬ−２Ｒα）ＰＥにコンジュゲートされた抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して、フローサイトメトリーによって組換えヒトサブユニットの発現を評価した。内因性共通γ鎖の発現を、抗ヒトＣＤ１３２（共通γ鎖）ＰＥコンジュゲートされた抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で確認した。発現が低かったため、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）でＣＤ１２２＋細胞を分取し、選択下でさらに培養した。トランスフェクション後に鎖の均一な発現があり、したがって、これらの細胞は、分取されなかった。
【１１６５】
完全なＴＦ１培地は、ＲＰＭＩ培地１６４０（Ｇｉｂｃｏ）およびＧＭ−ＣＳＦ（２ｎｇ／ｍＬ）で構成され、１０％ｖ／ｖの熱不活性化ウシ胎仔血清（ｈｉＦＢＳ、Ｇｉｂｃｏ）で補充した。ＩＬ−２に対する応答性を確認したら、トランスフェクトされた細胞株を、ＲＰＭＩ  １６４０、１０％  ｈｉＦＢＳ、およびジェネテシンを含む（αβ）かまたは含まない（β）、５ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ−２  中に維持した。
【１１６６】
実施例１３−ＩＬ−２Ｒを通ってシグナル伝達する免疫サイトカイン構築物の能力の評価
ＩＬ−２Ｒのβサブユニット、またはαおよびβサブユニットの両方でトランスフェクトされたＴＦ１細胞株の増殖を誘導する能力について免疫サイトカインを評価した。細胞を一晩サイトカインに欠乏させ、次いで、各免疫サイトカインの滴定により刺激した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用して、３日後に、存在するＡＴＰの定量化に基づいて培養中の生細胞の数を判定した。ＩＬ−２Ｒβγ上の免疫サイトカインの幅広い活性が存在し、最も大きいＩＬ−２欠失は、等モル量のＩＬ−２と比較して、増殖の最大の低減を有した。αβγ活性への影響はそれほど明白ではないが、ここでも最大のＩＬ−２欠失で増殖の最大の低減が見られる。ＩＬ−２の最初のいくつかのＮ末端アミノ酸の欠失は、サイトカイン活性の微調整を可能にする。代表的な実験は、図１２（ａ）および（ｂ）に示される。
【１１６７】
材料および方法
βトランスフェクト細胞株についてはＩＬ−２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を５ｎｇ／ｍＬ添加し、αβトランスフェクト細胞株についてはＩＬ−２を５ｎｇ／ｍＬ、およびジェネテシン（Ｇｉｂｃｏ）を３５０μｇ／ｍＬで添加して、ＲＰＭＩ＋１０％ウシ胎仔血清（培養培地）中でＩＬ−２ＲトランスフェクトＴＦ１細胞を定期的に培養する。免疫サイトカイン構築物の試験の前に、細胞を遠心分離によって採取し、上清を除去するために吸引した。細胞をＰＢＳで洗浄して、サイトカインおよび抗生物質を除去した。補助剤を伴わずに細胞を１０５細胞／ｍＬで新鮮な培養培地中に再懸濁させ、インキュベーターに一晩戻した。
【１１６８】
細胞を遠心分離によって採取し、上清を除去するために吸引した。完全培地中で細胞を再懸濁させ、３０μＬの細胞溶液をプレート（白壁の組織培養処理３８４ウェルプレート）のウェルに添加して、１２５０細胞／ウェルの初期細胞濃度を達成した。
【１１６９】
培養培地中で、ＩＬ−２リガンドを、３００ｎｇ／ｍＬ最終アッセイ濃度（ＦＡＣ）（６００ｎｇ／ｍＬ使用）から段階４倍希釈物として調製した。免疫サイトカイン構築物を、αβγ細胞株上での試験のために０．１μｇ／ｍＬ（３倍希釈）から滴定し、βγ細胞株について１０μｇ／ｍＬ（３倍希釈）から滴定した。３０μＬの滴定を細胞プレートに添加した。ウェルを制御するために、ＩＬ−２を含まない培地３０μＬを添加した。蒸発効果を低減させるために、プレートの最も外側の列／段に８０μＬの培養培地を充填した。次いで、プレートを３７℃、５％  ＣＯ２で３日間インキュベートした。培養期間の後に、全てのウェルへの３０μＬのＣｅｌｌ  Ｔｉｔｒｅ  Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）の添加によってＴＦ−１細胞の増殖を評価した。プレートを室温で１０分間インキュベートし、次いで、超高感度発光フィルタを使用して読み取った。
【数７】
2019528083.tif 000018
データは、バックグラウンドの倍数として表される。バックグラウンドは、細胞を含有するがサイトカインは含まないウェルとして定義した
【１１７０】
実施例１４−ＰＤ−Ｌ１への免疫サイトカインの結合
表面プラズモン共鳴を使用して、ＰＤ−Ｌ１に結合する免疫サイトカイン構築物の能力を確認した。軽鎖上のＩＬ−２の存在は、結合に有害な影響を及ぼさない（表９）。幅広いＩＬ−２活性を有する４つの構築物がさらなる特性評価のための候補となった。これらは、１Ｄ０５  Ｄ１−９  ＩＣＫ、１Ｄ０５  Ｄ１−８  ＩＣＫ、１Ｄ０５  Ｄ９−２  ＩＣＫ、および１Ｄ０５  Ｄ９−７  ＩＣＫであった。
【表９】
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【１１７１】
材料および方法
表面プラズモン共鳴による免疫サイトカインの分析
ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６（ＢｉｏＲａｄ）アレイＳＰＲマシンでラベルフリー表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析を実施した。ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅの抗ヒトＩｇＧのアミン結合を使用して、抗ヒトＩｇＧ捕捉表面をＧＬＣバイオセンサチップ上に作製した。試験抗体をこの表面上に捕捉し、６４ｎＭ、１６ｎＭ、４ｎＭ、１ｎＭ、および０．２５ｎＭでヒトＰＤ−Ｌ１（自家）を分析物として使用した。ＨＢＳ−ＥＰ（Ｔｅｋｎｏｖａ  Ｈ８０２２）を使用してアッセイを２５℃で実施した。結合センサグラムを参照するために緩衝液のみを使用した。ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６分析ソフトウェアに固有の１：１モデルを使用してデータを分析した。
【１１７２】
実施例１５−ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−１／ＣＤ８０の相互作用を中和させる免疫サイトカインの能力の評価
抗体へのＩＬ−２分子の融合がその中和能力を妨げないことを確実にするために、候補免疫サイトカインを中和ＥＬＩＳＡで試験した。試験した候補免疫サイトカインは、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１との間、およびＰＤ−Ｌ１とＣＤ８０との間の相互作用を中和させるそれらの能力が、野生型抗体と異ならなかった。結果は、図１３および表１０に示される。表の値は、３つの独立した実験の平均である。
【表１０】
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【１１７３】
材料および方法
ａ）ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１／ＣＤ８０中和ＥＬＩＳＡ
２．５μｇ／ｍＬに希釈したＣＤ８０（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）またはＰＤ−１（自家）を９６ウェル低自家蛍光の高タンパク質結合プレート（Ｃｏｓｔａｒ）に４℃で一晩吸着させた。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で洗浄することによって過剰なタンパク質を除去し、ＰＢＳ中、室温で１時間、ウェルを１％ｗ／ｖウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａ）でブロックし、その後、プレートを前述のように洗浄した。抗体の滴定（１００ｎＭからの３倍希釈）のうちの６０μＬを、ＥＬＩＳＡアッセイ緩衝液（ＰＢＳ＋０．１％  ＢＳＡ）中で希釈した９６ウェルの非結合プレートに添加した。１６ｎＭ使用濃度（８ｎＭ  ＦＡＣ）の６０μＬのビオチニル化ＰＤ−Ｌ１（自家、Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ  Ｌｉｎｋ  Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎキットで標識した）を、６０μＬのＥＬＩＳＡアッセイ緩衝液を添加した対照ウェルを除いて、プレートに添加した。プレートを３０分間インキュベートした後に、コーティングしたプレートに５０μＬを移した。
【１１７４】
コーティングしたプレートを室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で洗浄することによって過剰なタンパク質を除去した。ＤＥＬＦＩＡアッセイ緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）中で１／１０００に希釈した、ストレプトアビジンで標識したユーロピウム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して、ＰＤ−Ｌ１結合を検出した。プレートをＴＢＳ（トリス緩衝生理食塩水）−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で洗浄し、５０μＬ／ウェルのＤＥＬＦＩＡ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ溶液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）をプレートに添加した。Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）上で、時間分解蛍光を６１５ｎｍで測定した。方程式３に定義されるように特異的結合のパーセンテージを計算した。
【１１７５】
特異的結合パーセンテージ（方程式３）から、４パラメータロジスティック方程式（方程式４）を使用する曲線適合によって、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してＩＣ５０値を判定した。
【１１７６】
実施例１６−抗ＰＤ−Ｌ１応対の脱免疫化
抗ＰＤ−Ｌ１免疫サイトカインの周辺での有害な免疫学的反応の可能性を低減するために、Ｔ細胞エピトープ分析ソフトバンクによって判定した場合により低い免疫原性の潜在性が予想される一連の１Ｄ０５抗体変異体（配列番号４７〜５１）を作製した。変異は、単一、または組み合わせであってもよい。野生型分子と同じ親和性でＰＤ−Ｌ１に結合するそれらの能力について、２５６ｎＭでのヒトＰＤ−Ｌ１分析物を加えて、実施例１４に記載されるようにＳＰＲによって変異体を評価した。調査中の変異体は、配列番号４７〜５１として含まれ、これらは下線および太字で示されている。ＶＨフレームワーク変異（配列番号４７および４８）は、結合に有害な影響を及ぼさない。ＣＤＲＨ２（配列番号５０）におけるＶからＡへの変異は結合に有害な影響を及ぼしたため、代替的な変異を分析する（ＶからＹ、配列番号２９８）。結果は、表１１に示される。
【１１７７】
実施例１７−ＮＯＤ／ＳＣＩＤ：移植Ｔ細胞モデルにおける抗ＰＤ−Ｌ１抗体による腫瘍成長の阻害
ＮＯＤ／ＳＣＩＤ：移植Ｔ細胞モデルにおいて、ｈＩｇＧ１  ＬＡＧＡ（配列番号２０５）フォーマットの鉛抗体１Ｄ０５による黒色腫腫瘍成長の阻害が実証された。ＩＬ−２およびＩＬ−７の存在下で、Ｔ細胞をＡ３７５（黒色腫細胞株）の存在下で２０日間増殖させた。Ｔ細胞を新鮮なＡ３７５細胞と共に皮下に同時移植し、次いで、抗体を１時間後に腹腔内投与した。腫瘍の大きさおよび動物の生存を監視した。抗体１Ｄ０５で治療したマウスの腫瘍は、アイソタイプ対照で治療した動物のものよりも小さかった。１Ｄ０５で治療したマウスの生存時間も増加した。
【１１７８】
材料および方法
Ｓｔｅｗａｒｔ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．，２０１５  Ｓｅｐ；３（９）：１０５２−６２）に概説される方法の改良法を用いて、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおけるＴ細胞／移植モデルを使用して有効性研究を実施した。ＮＨＳＢＴから白血球除去系チャンバを得た。ＰＥ標識抗ヒトＨＬＡ−Ａ２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、クローン：ＢＢ７．２）を使用して未画分血液を染色することによってＨＬＡ−Ａ２陽性ドナーを選択し、次いで、赤血球を溶解し、続いて、４％  ＰＦＡで固定した後に、Ａｔｔｕｎｅフローサイトメーター上で獲得した。
【表１１】
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Ｆｉｃｏｌｌ上の密度勾配遠心分離によってＰＢＭＣを単離した。次いで、ＥａｓｙＳｅｐヒトＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞濃縮キット（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ  １９０５２および１９０５３）を使用して一次ヒトＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞を単離した。次いで、組換えヒトＩＬ−２およびＩＬ−７（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）の存在下で、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞を２０日間、マイトマイシンＣ処置Ａ３７５細胞の単層（１０日目に、新鮮なＡ３７５単層上にＴ細胞を再プレーティングした）上で別々に培養した。２０日目に、「Ｍｒ  Ｆｒｏｓｔｙ」（Ｎａｌｇｅｎｅ）中、−８０℃の９０％  ｈｉＦＢＳ／１０％  ＤＭＳＯ中で細胞を凍結し、必要となるまで液体窒素中に保管した。インビボ実験を開始する前日に細胞を解凍し、培養中に配置した。
【１１７９】
移植の日に、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞を計数し、１：１比で一緒に混合した。次いで、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋混合物をＡ３７５腫瘍細胞に添加し、マウスの後部右脇腹に皮下注射した。処置群は、細胞の移植の１時間後に、抗体またはアイソタイプ対照の第１の用量を受けた（全て、１０ｍｇ／ｋｇで腹腔内に投与した）。動物は、移植後３、６、８、および１０日目にさらなる用量を受けた。研究の終了まで、二次元で測定するデジタルキャリパを使用して、腫瘍発達を週に３回監視した。標準式（Ｌ×Ｗ２）／２（Ｌは、腫瘍のより大きい直径であり、Ｗが、腫瘍のより小さい直径である）を使用して、腫瘍体積（ｍｍ３）を推測した。マウスの腫瘍が１２ｍｍの平均直径まで発達するか、またはそれらが研究プロトコルに概説された人道的エンドポイントのうちの１つに達するまで、マウスを研究下に置き続けた。人道的エンドポイント生存統計は、Ｐｒｉｓｍを用いるＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ法を使用して計算した。このアプローチを使用して、ＰＤ−Ｌ１治療が生存の改善に関連付けられるかどうかを判定した。
【表１２】
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【１１８０】
アイソタイプ対照による治療は、ＣＤ４＋／８＋  Ｔ細胞が腫瘍細胞と同時注射された群と比較した場合、腫瘍発達に影響を及ぼさなかった。一方で、抗ＰＤＬ１抗体１Ｄ０５での治療は、アイソタイプ対照と比較した場合、腫瘍発達を遅らせた。これは、図１４に示される。
【１１８１】
腫瘍と共にＴ細胞を同時注射した全ての群は、腫瘍単独の群と比較した場合、研究時間の増加を示した。アイソタイプ対照での治療は、研究時間に影響を及ぼさなかった一方、抗ＰＤＬ１抗体１Ｄ０５での治療は、アイソタイプ対照群を含む全ての他の群と比較した場合、研究時間を増加させた。結果は、図１５に示される。
【１１８２】
実施例１８：カニクイザルにおける免疫サイトカインの単一用量研究
最も関連性のある動物モデルにおける薬力学および薬物動態（ＰＫ）パラメータを評価するために、雄カニクイザルは、単一用量の免疫サイトカイン（ＩＣＫ）を１ｍｇ／ｋｇで受けた。毒性の臨床的顕在化について動物を観察し、ＰＫ、サイトカインの産生、および白血球サブセットの特性評価の分析のために７日間にわたって血液試料を採取した。研究の存命フェーズ、ならびに血液学、フローサイトメトリー、およびサイトカイン分析をＥｎｖｉｇｏ  ＵＫ（研究番号ＧＦ１３ＹＣ）で実施した。薬物動態分析を自家で実施した。
【１１８３】
材料および方法
少なくとも２歳の雄カニクイザルを研究に使用し、研究の開始の７日前および４日前に体重を記録した。免疫サイトカイン構築物を５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５）中、１ｍｇ／ｍＬで製剤化し、５ｍＬ／ｋｇ／時での静脈内注入のために生理食塩水中で０．２ｍｇ／ｍＬに希釈した。治療前、投与終了の１時間後、および４時間後に血圧および体温を監視した。体調不良の兆候について動物を１日に２回観察した。研究を２相で実施し、用量レベルおよびＰＫ時点が好適であることを確かめるための１Ｄ０５  ＨＣ  ＩＬ−２  ＩＣＫおよび１Ｄ０５  ＬＣ  Ｄ９−７  ＩＣＫの初期用量、その後、４つのさらなる構築物（表１を参照されたい）と共に１Ｄ０５  ＬＣ  Ｄ９−７  ＩＣＫの投薬を繰り返した。１Ｄ０５  ＬＣ  Ｄ９−７  ＩＣＫの第２相投薬は、構築物の名称の隣の（２）によって示される。
【表１３】
2019528083.tif 000023
【１１８４】
血液学的分析のために、空腹時血液試料を、治療前、ならびに治療後２、５、および７日目にＥＤＴＡ処置管に採取した。敵的な血液学的パラメータをＢａｙｅｒ  Ａｄｖｉａ  １２０によって測定した。結果は、図１６および１７に示される。
【１１８５】
サイトカインおよび可溶性ＣＤ２５の分析のために、空腹時血液試料を、治療前および治療後３日目にＥＤＴＡ処置管に採取し、２０００ｇでの１０分間の遠心分離により血漿を抽出した。多重ＭＳＤ（サイトカイン）または市販のＥＬＩＳＡ（可溶性ＣＤ２５）による分析まで試料を凍結させた。結果は、図１８および１９に示される。
【１１８６】
免疫表現型検査のために、血液試料を、治療前および治療後５日目にＥＤＴＡ処置管に採取した。血液試料を、直接コンジュゲートされたモノクローナル抗体のカクテルで染色し、次いで、赤血球を溶解し、分析前に１％のホルムアルデヒドを含有するリン酸緩衝生理食塩水中での再懸濁によって試料を固定した。結果は、図２０に示される。
【１１８７】
ＰＫ分析のために、治療前、注入終了時（ＥＯＩ）、ＥＯＩの２、４、８、１６、２４、３２、４０、および４８時間、第２相の場合は７２時間および９６時間に延長）に血液試料を未処置の管に採取し、血液を凝固させ、次いで２０００ｇで１０分間の遠心分離によって血清を調製した。Ｋｙｍａｂへの輸送のために血清試料をドライアイス上で凍結させた。結果は、図２１に示される。
【１１８８】
血清試料の薬物動態分析
ａ）抗ＰＤ−Ｌ１抗体の検出のためのＰＫアッセイ
ＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ、Ｐ３８１３−１０ＰＡＫ）中で２μｇ／ｍＬに希釈した５０μＬ／ウェルのヒトＰＤ−Ｌ１  Ｆｌａｇ  Ｈｉｓ（配列番号５０５、自家）を、９６ウェルの高タンパク質結合蛍光プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）に４℃で一晩吸着させた。３００μＬ／ウェルのＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で３回洗浄することによって過剰なタンパク質を除去し、ＰＢＳ中、室温で１時間、ウェルを１％ｗ／ｖウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａ）でブロックし、その後、プレートを前述のように洗浄した。プールしたカニクイザル血清（Ｓｅｒａｌａｂ、ＣＹＮＳＲＭ）中で抗体を１０，０００ｎｇ／ｍＬから９．７７ｎｇ／ｍＬに希釈して（１／２希釈）、ブランクを含む１２個の標準を得た。標準、品質対照、および試料を、ＥＬＩＳＡアッセイ緩衝液（ＰＢＳ＋０．１％  ＢＳＡ）中で５０分の１ＭＲＤ（必要最小希釈）に希釈し、コーティングされた９６ウェルの高結合プレートに５０μＬ／ウェルで添加した。プレートを室温で１時間インキュベートし、その後、プレートをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。５０μＬのビオチニル化ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を１μｇ／ｍＬでプレートに添加した。プレートを室温で１時間インキュベートし、その後、プレートをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。ＤＥＬＦＩＡアッセイ緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）中で１／１０００に希釈した、ストレプトアビジンで標識したユーロピウム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して、ＰＤ−Ｌ１結合を検出した。プレートをＴＢＳ（トリス緩衝生理食塩水）−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で洗浄し、５０μＬ／ウェルのＤＥＬＦＩＡ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ溶液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）をプレートに添加した。Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）上で、時間分解蛍光を６１５ｎｍで測定した。４パラメータロジスティック方程式（方程式４）を使用して適合された標準曲線から内挿することによって、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して濃度を判定した。結果は、図２１ａおよび２１ｂに示される。
【１１８９】
ｂ）無傷の免疫サイトカイン（ＩＬ−２に融合した抗体）の検出のためのＰＫアッセイ
ＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ、Ｐ３８１３−１０ＰＡＫ）中で３μｇ／ｍＬに希釈した５０μＬ／ウェルのヒトＰＤ−Ｌ１  Ｆｌａｇ  Ｈｉｓ（配列番号５０５、自家）を、９６ウェルの低自己蛍光高タンパク質結合蛍光プレート（Ｃｏｓｔａｒ）に４℃で一晩吸着させた。３００μＬ／ウェルのＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で３回洗浄することによって過剰なタンパク質を除去し、ＰＢＳ中、室温で１時間、ウェルを１％ｗ／ｖウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａ）でブロックし、その後、プレートをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。プールしたカニクイザル血清（Ｓｅｒａｌａｂ、ＣＹＮＳＲＭ）中で抗体を５０，０００ｎｇ／ｍＬから６１７．３ｎｇ／ｍＬに希釈して、ブランクを含む１０個の標準を得た。標準、品質対照、および試料を、ＥＬＩＳＡアッセイ緩衝液（ＰＢＳ＋０．１％  ＢＳＡ）中で２０分の１ＭＲＤに希釈し、コーティングされた９６ウェルの高結合プレートに５０μＬ／ウェルで添加した。プレートを室温で１時間インキュベートし、その後、プレートをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した。５０μＬのビオチニル化抗ヒトＩｇＧ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を２μｇ／ｍＬでプレートに添加した。プレートを室温で１時間インキュベートし、その後、プレートを前述のように洗浄した。ＤＥＬＦＩＡアッセイ緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）中で１／１０００に希釈した、ストレプトアビジンで標識したユーロピウム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して、結合を検出した。プレートをＴＢＳ（トリス緩衝生理食塩水）−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で洗浄し、５０μＬ／ウェルのＤＥＬＦＩＡ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ溶液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）をプレートに添加した。Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）上で、時間分解蛍光を６１５ｎｍで測定した。４パラメータロジスティック方程式を使用して適合された標準曲線から内挿することによって、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して濃度を判定した。結果は、図２１ｃおよび２１ｄに示される。
【１１９０】
結果の要約
投薬後に、明白なＩＬ−２媒介性毒性の兆候（発熱、血管漏出、下痢）は認められなかった。リンパ球数は、異なる免疫サイトカイン構築物による研究の期間中に増加した。最大のトランケーションを有する構築物は、最も低いレベルのリンパ球増殖を誘導し、１Ｄ０５  ＬＣ  Ｄ１−９  ＩＣＫまたは１Ｄ０５  ＬＣ  Ｄ１−８  ＩＣＫでは７日間の間に増殖はほとんど認められなかった一方、１Ｄ０５  ＬＣ  Ｄ９−７  ＩＣＫおよび全長ＩＬ−２は、顕著な増殖を誘導した。いくつかの構築物において２日目に認められたリンパ球減少症は、循環外でのリンパ球の辺縁趨向を示す。５日目に見られる反跳性リンパ球増加がこれに続く（図１６）。
【１１９１】
免疫サイトカイン構築物の投与は、顕著な貧血を引き起こさなかった（図１７）。７日目に、最も活性な構築物（１Ｄ０５  ＨＣ  ＩＬ−２  ＩＣＫ、１Ｄ０５  ＬＣ  ＩＬ２  ＩＣＫ、および１Ｄ０５  ＬＣ  Ｄ９−７  ＩＣＫ）においてヘモグロビン、ヘマトクリット、および赤血球レベルの約２０％の減少が認められ、他の構築物において約１０％の低減が認められた。これは、ＩＬ−２重鎖免疫サイトカインでの研究からの事例証拠と一致する。血小板減少（血小板数の減少）は認められなかった。
【１１９２】
ＩＬ−２は、投薬の３日後に激しく増加し、これは、活性かＴ細胞による産生を示す。しかしながら、アッセイがヒトＩＬ−２に対して交差反応性であり、そのため免疫サイトカインも検出することができる可能性がある。ＩＬ−８レベルの下方制御の傾向があったものの、投薬後に他のサイトカインのいずれにおいても明白な上方または下方制御はなかった（図１８）。Ｔ細胞活性化のバイオマーカーである可溶性ＣＤ２５のレベルは、免疫サイトカインを投薬した３日後に激しく増加した（図１９）。可溶性ＣＤ２５のレベルは、実施例１３に記載される免疫サイトカインのインビトロ刺激活性と相関した。
【１１９３】
免疫サイトカインの投薬は、血液中の活性化Ｔ細胞の数を増加させる（図２０）。１Ｄ０５  ＬＣ  ＩＬ−２  ＩＣＫを投薬した場合、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞の総数は増加するが、ＣＤ６９＋（初期活性）およびＣＤ２５＋（後の活性）サブセットは、治療前のレベルと比較して大きく増加する。トランケートされた構築物では、細胞数の増加はより際立たない。Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または好中球数の顕著な変化は認められず、単球数の中程度の増加が認められた。試料の凝固により、１Ｄ０５  ＬＣ  Ｄ９−７  ＩＣＫを投薬した動物のデータは利用不可能である。
【１１９４】
軽鎖（ＬＣ）融合は、重鎖（ＨＣ）融合よりも長い半減期を有し、これはマウスにおける以前のデータと一致する（Ｇｉｌｌｉｅｓ  ＳＤ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，２６：１０：５６１−５６９，２０１３）。１Ｄ０５  ＬＣ  ＩＬ−２  ＩＣＫの半減期は約８時間であり、トランケートされたＩＬ−２構築物の半減期は、約２倍長かった（図２１ａおよび２１ｂ）。全長ＩＬ−２と比較した、トランケートされたＩＬ−２を有する免疫サイトカインの半減期の増加は、ＩＬ−２受容体への結合の低減を反映し得る。
【１１９５】
修正したアッセイを使用して、無傷の免疫サイトカイン、すなわち、ＩＬ−２に融合した抗体を検出した（図２１ｃおよび２１ｄ）。この結果は、分子のＩＬ−２部分はインビボで融合されたままであり、切断されないことを示す。
【１１９６】
実施例１９−カニクイザルにおける拡張単一用量研究
リンパ球増加の期間を判定し、Ｔ細胞サブセットのより詳細な分析を取得するために、拡張単一用量研究（研究番号ＨＱ５２ＰＶ）を実施する。雌のカニクイザルに、実施例１８に従って１ｍｇ／ｋｇの免疫サイトカインを投与し、少なくとも１４日間にわたって監視する。サイトカインは、１、３、７、１０、および１４日目、ならびに治療前に分析する。血液学的測定は、２、５、７、１０、および１４日目、ならびに治療前に実施する。可溶性ＣＤ２５の検出は、３、７、および１０日目、ならびに治療前に実施する。ＣＤ１２７を免疫表現型検査パネルに添加して、制御性Ｔ細胞Ｔ（ＣＤ３＋  ＣＤ４＋  ＣＤ２５ｈｉ  ＣＤ１２７ｌｏ）の検出を可能にし、１、５、７、１０、および１４日目、ならびに治療前に分析を実施する。ＰＫ分析を前と同じように実施する。処置群は、表１４に示される。
【表１４】
2019528083.tif 000024
【１１９７】
投薬後に、明白なＩＬ−２媒介性毒性の兆候（発熱、血管漏出、下痢）は認められなかった。全ての免疫サイトカイン構築物において、リンパ球数は、７日目にピークに達した。最大のトランケーションを有する構築物は、最も低いレベルのリンパ球増殖を誘導し、１Ｄ０５  ＬＣ  Ｄ１−８  ＩＣＫで最も少ない増殖が認められた一方、１Ｄ０５  ＬＣ  Ｄ９−７  ＩＣＫおよび全長ＩＬ−２は、最大の増殖を誘導した。いくつかの構築物において２日目に認められたリンパ球減少症は、循環外でのリンパ球の辺縁趨向を示す。反跳性リンパ球増加がこれに続く（図２８）。Ｔ細胞活性化のバイオマーカーである可溶性ＣＤ２５のレベルは、免疫サイトカインを投薬した３日後にピークに達した（図２９）。可溶性ＣＤ２５のレベルは、実施例１３に記載される免疫サイトカインのインビトロ刺激活性と相関した。
【１１９８】
免疫サイトカイン構築物の投与は、顕著な貧血を引き起こさなかった（図３０）。免疫サイトカイン構築物において、ヘモグロビン、ヘマトクリット、および赤血球レベルの１０〜２０％の低減が認められた。１Ｄ０５  ＬＣ  Ｄ１−８  ＩＣＫを投与された動物において、経過時間全体にわたってヘモグロビンレベルはより低いままであった。２つの最も活性な構築物において５日目に軽度の血小板減少が認められたが、この時点の後にレベルが回復した。ＩＬ−２は、投薬の３日後に激しく増加し、これは、活性かＴ細胞による産生を示す。しかしながら、アッセイがヒトＩＬ−２に対して交差反応性であり、そのためこれらのレベルが免疫サイトカインの存在を反映する可能性がある。投薬後に他のサイトカインのいずれにおいても明白な上方または下方制御はなかった（図３１）。
【１１９９】
実施例１８において前に認められたように、１Ｄ０５  ＬＣ  ＩＬ−２  ＩＣＫの半減期は約８時間であり、トランケートされたＩＬ−２構築物の半減期は、トランケーションの大きさと相関した（図３２）。最も長いトランケーションを含有する免疫サイトカインであるＤ１−８は、約２４時間の最長の半減期を有した。全長ＩＬ−２と比較した、トランケートされたＩＬ−２を有する免疫サイトカインの半減期の増加は、ＩＬ−２受容体への結合の低減を反映し得る。
【１２００】
ＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞の増殖は、図３３に示される。自動化された細胞数について認められるように、増殖の程度は、ＩＬ−２トランケーションのサイズとよく相関し、両方のＴ細胞サブセットの最大の増殖は、１Ｄ０５  ＬＣ  ＩＣＫ  Ｄ９−７を投与した動物において認められた。
【１２０１】
実施例２０−細胞内因的発現ｈＰＤ−Ｌ１への結合、ならびにＰＤ−１およびＣＤ８０へのｈＰＤ−Ｌ１結合の中和
ｈＰＤ−Ｌ１を内因的に発現するＥＳ２細胞に結合する能力、ならびにＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１相互作用およびＰＤ−Ｌ１／ＣＤ８０相互作用の中和について、鉛抗体を試験する。ｈＰＤ−Ｌ１を内因的に発現するＥＳ２細胞（ＡＴＣＣ）をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ  １％  ＢＳＡ  ０．１％アジ化ナトリウム）中で希釈し、ウェル当たり０．５〜１×１０５細胞の密度で３つの９６ウェルのＶ字底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）に分配する。細胞を１５０μＬのＰＢＳで洗浄し、３００ｇで３分間遠心分離させる。上清を吸引し、１５０μＬのＰＢＳを添加する。この洗浄ステップを繰り返す。
【１２０２】
プレート１（ＰＤ−Ｌ１結合）に、ＦＡＣＳ緩衝液中で希釈した、２５μＬの鉛抗体、参照抗体、または対照抗体を、洗浄した細胞に添加する。２５μＬのＦＡＣＳ緩衝液を添加し、細胞を４℃で６０分間インキュベートする。１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液を添加し、細胞を上記のように洗浄する。抗ＰＤ−Ｌ１抗体結合を検出するために、抗ヒトＰＥ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）をＦＡＣＳ緩衝液中で１／５００に希釈し、５０μＬのこの混合物を細胞に添加する。細胞を４℃で６０分間インキュベートする。細胞を１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、各洗浄ステップ後に３００×ｇで３分間遠心分離させて上清を吸引する。５０μＬの４％パラホルムアルデヒドの添加によって細胞を固定し、４℃で一晩インキュベートする。細胞を上記のように１回洗浄し、分析のためにＦＡＣＳ緩衝液中で再懸濁させる。Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｃｙｔｏｆｌｅｘ器具を使用したフローサイトメトリーによってＰＥシグナル強度（幾何平均）を測定する。さらなる計算を伴わずに幾何平均値としてデータをプロットする。
【１２０３】
プレート２（ＰＤ−１中和）に、ＦＡＣＳ緩衝液中で希釈した、２５μＬの鉛抗体、参照抗体、または対照抗体を、洗浄した細胞に添加する。２５μＬのビオチニル化ヒトＰＤ−１（自家、Ｆｃタグ、配列番号６）を添加し、細胞を４℃で６０分間インキュベートする。製造業者の指示に従ってＬｉｇｈｔｎｉｎｇ  Ｌｉｎｋコンジュゲーションキット（Ｉｎｎｏｖａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ビオチニル化を自家で実施する。１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液を添加し、細胞を上記のように洗浄する。ビオチニル化ＰＤ−１を検出するために、ストレプトアビジン−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７（ＡＦ６４７、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）をＦＡＣＳ緩衝液中で１／５００に希釈し、５０μＬのこの混合物を細胞に添加する。細胞を４℃で６０分間インキュベートする。細胞を１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、各洗浄ステップ後に３００×ｇで３分間遠心分離させて上清を吸引する。細胞を、上記のように分析のために固定、洗浄、および再懸濁させる。フローサイトメトリーによってＡＰＣシグナル強度（幾何平均）を測定する。さらなる計算を伴わずに幾何平均値としてデータをプロットする。
【１２０４】
プレート３（ＣＤ８０中和）に、ＦＡＣＳ緩衝液中で希釈した、２５μＬの鉛抗体、参照抗体、または対照抗体を、洗浄した細胞に添加する。２５μＬのビオチニル化ヒトＣＤ８０（Ｆｃタグ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、１４０−Ｂ１）を添加し、細胞を４℃で６０分間インキュベートする。全ての他のステップを、プレート２と同様に実施する。
【１２０５】
代替的には、結合および中和を同時に検出するために、ｈＰＤ−Ｌ１を発現するＥＳ２細胞をＦＡＣＳ緩衝液中で希釈し、ウェル当たり０．５〜１×１０５細胞の密度で２つの９６ウェルのＶ字底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）に分配する。細胞を１５０μＬのＰＢＳで洗浄し、３００ｇで３分間遠心分離させる。上清を吸引し、１５０μＬのＰＢＳを添加する。この洗浄ステップを繰り返す。
【１２０６】
ＦＡＣＳ緩衝液中で希釈した、２５μＬの鉛抗体、参照抗体、または対照抗体を、洗浄した細胞に添加する。２５μＬのビオチニル化ヒトＰＤ−１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、８９８６−ＰＤ−１００、ｈｉｓタグ）またはＣＤ８０（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、９０５０−Ｂ１−１００、ｈｉｓタグ）を添加し、細胞を４℃で６０分間インキュベートする。１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液を添加し、細胞を上記のように洗浄する。ビオチニル化ＰＤ−１またはＣＤ８０および抗ＰＤ−Ｌ１抗体の結合を検出するために、ストレプトアビジン−ＡＦ６４７および抗ヒトＰＥをＦＡＣＳ緩衝液中で１：５００に各々希釈し、５０μＬのこの混合物を細胞に添加する。細胞を４℃で６０分間インキュベートする。細胞を１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、各洗浄ステップ後に３００×ｇで３分間遠心分離させて上清を吸引する。細胞を、上記のように分析のために固定、洗浄、および再懸濁させる。フローサイトメトリーによってＰＥおよびＡＰＣシグナル強度（幾何平均）を測定する。さらなる計算を伴わずに幾何平均値としてデータをプロットする。代替的には、ＡＰＣ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）にコンジュゲートされた抗ｈｉｓタグ抗体を使用して、ＰＤ−１もしくはＣＤ８０を検出してもよく、またはＰＤ−１およびＣＤ８０をＡＦ６４７で直接標識してもよい。
【１２０７】
実施例２１−レポーター細胞バイオアッセイにおける鉛抗ＰＤ−Ｌ１抗体の試験
生物発光細胞アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））を使用して、細胞上のＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１相互作用を中和する抗ＰＤＬ１抗体の能力を判定する。ＰＤ−Ｌ１、およびＴＣＲ活性化を促進するように設計された細胞表面タンパク質をトランスフェクトしたＰＤ−Ｌ１  ａＡＰＣ／ＣＨＯ−Ｋ１細胞を、ＰＤ−１発現Ｊｕｒｋａｔ細胞と共培養した。これらの細胞はまた、ＮＦＡＴ誘導性ルシフェラーゼ応答配列を提示する。ＰＤ−１−ＰＤ−Ｌ１相互作用をブロックすることができる抗体の存在下での２つの細胞型の共培養は、ＴＣＲシグナル伝達およびＮＦＡＴ媒介性ルシフェラーゼ活性を活性化する。
【１２０８】
アッセイは、製造業者の推奨に従って実行される。簡潔には、ＰＤ−Ｌ１  ａＡＰＣ／ＣＨＯ−Ｋ１細胞を、１０％のｈｉＦＢＳを補充したＨａｍｓ  Ｆ１２培地中で一晩培養する。翌日に、培地を除去し、エフェクターＰＤ−１  Ｊｕｒｋａｔ細胞および抗ＰＤ−Ｌ１抗体を、１％のｈｉＦＢＳを補充したＲＰＭＩ  １６４０中、３７℃で６時間アッセイプレートに添加する。１０分間のインキュベーションの後に、発光設定を使用したＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー上で、Ｂｉｏ−Ｇｌｏ（商標）を用いてプレートを読み取る。抗体誘導性ルシフェラーゼ活性は、方程式８によって定義される応答のバックグラウンドレベルを示すウェルのアッセイシグナルと比較した倍数誘導として表される。４パラメータロジスティック適合（方程式４）を使用してＥＣ５０値を計算する。
【１２０９】
【数８】
2019528083.tif 000025
【１２１０】
実施例２２−ｈＰＤ−Ｌ１発現マウスにおける鉛抗体の薬物動態研究
抗体当たり８匹のマウスに、ヒトＩｇＧ１エフェクター可能化フォーマット（すなわち、野生型ＩｇＧ１の定常領域、配列番号３４１を有する）の鉛抗体を、ヒトＰＤ−Ｌ１を発現するマウスに１０ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与する。血液試料を、治療前、ならびに２、４、８、１２、２４、４８、７２、９６、１９２、３３６、５０８、および６７２時間目に採取する。血清を調製し、分析まで試料を凍結させる。標準曲線およびブランクを調製するためのビヒクルとしてＣ５７ＢＬ／６マウスからの血清を使用することを除いて、実施例１８において抗体の検出について記載される方法に従って試料を分析する。より多い投与量に起因して、必要最小希釈は実施例１８とは異なる、これは経験的に判定される。
【１２１１】
実施例２３−非ヒト霊長類における鉛抗体の薬物動態研究
抗体当たり３匹の動物に、ヒトＩｇＧ１エフェクター可能化フォーマット（すなわち、野生型ＩｇＧ１の定常領域、配列番号３４１を有する）の鉛抗体を、雄カニクイザルに１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与する。血液試料を、治療前、ならびに２、４、８、１２、２４、４８、７２、９６、１９２、３３６、５０８、および６７２時間目に採取する。血清を調製し、分析まで試料を凍結させる。実施例１８において抗体の検出について記載される方法に従って試料を分析する。より多い投与量に起因して、必要最小希釈は実施例１８とは異なる、これは経験的に判定される。
【１２１２】
実施例２４：マウスＢ細胞：Ｔ細胞ハイブリドーマアッセイにおける鉛抗体活性
マウスＢ細胞：Ｔ細胞ハイブリドーマ共培養アッセイにおいて抗体を試験して、ＩＬ−２の誘導を評価した。１％のウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ）で補充したＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）中で調製した５０μＬのヒトＰＤ−Ｌ１（配列番号１）トランスフェクトＬＫ３５．２マウスＢリンパ球ハイブリドーマ細胞（ＡＴＣＣ）を、１０μＭのオボアルブミン３２３−３２９ペプチド（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で治療し、９６ウェルの組織培養処理プレート（Ｃｏｓｔａｒ）に２×１０４細胞／ウェルで分配した。次いで、オボアルブミンペプチド担持細胞を、１％のウシ胎仔血清で補充したＤＭＥＭ中で、９つの濃度点について３０ｎＭから、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはｍＡｂ２（商標）フォーマットの抗ＩＣＯＳ／ＰＤ−Ｌ１二重特異性抗体の５０μＬの１：３滴定系列と混合した。
【１２１３】
３７℃、５％  ＣＯ２での１時間のインキュベーション後、１％のウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ）で補充したＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）中で一晩培養した１００μＬのマウスＴヘルパーハイブリドーマ細胞株ＤＯ−１１−１０（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｅｗｉｓｈ  Ｈｅａｌｔｈ）を、２×１０４細胞／ウェルでアッセイプレートに添加した。ＬＫ３５．２／ＤＯ−１１−１０共培養を３７℃、５％  ＣＯ２で一晩インキュベートした後、上清を採集して、マウスＩＬ−２の産生を評価した。細胞刺激カクテル（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の１または０．１×の使用ストック（ｗｏｒｋｉｎｇ  ｓｔｏｃｋ）をマウスＩＬ−２産生についての正の対照として使用した。
【１２１４】
ストレプトアビジン−ユーロピウムを検出試薬（ＤＥＬＦＩＡ（登録商標））として含むように修正したマウスＩＬ−２  Ｄｕｏｓｅｔ  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を製造業者のプロトコルに従って使用して、マウスＩＬ−２定量化を実施した。簡潔には、ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬで調製した、提供された捕捉抗体でアッセイプレートを４℃で一晩コーティングした。プレートをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で３回洗浄した後、ＰＢＳ中で２００μＬの１％ｗ／ｖウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａ）を室温で１時間添加した。前述のように洗浄ステップを実施した後、５０μＬの細胞上清をアッセイプレートに添加した。１時間のインキュベーション後、ＰＢＳ中０．１％ｗ／ｖ  ＢＳＡ中で調製した、５０μＬの提供された検出抗体を２００μｇ／ｍＬで添加し、プレートをさらに１時間インキュベートした。プレートを上記のように洗浄し、ＤＥＬＦＩＡ（登録商標）アッセイ緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）中でストック溶液から１：５００に希釈した、５０μＬのＤＥＬＦＩＡ（登録商標）Ｅｕ−Ｎ１ストレプトアビジンを全てのウェルに１時間添加した。ＤＥＬＦＩＡ洗浄緩衝液（０．５Ｍ  Ｔｒｉｓ  ＨＣＬ（Ｇｉｂｃｏ）、１％  Ｔｗｅｅｎ  ｖ／ｖ（Ｓｉｇｍａ））を使用してさらなる洗浄ステップを実施した後、５０μＬのＤＥＬＦＩＡ（登録商標）Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を添加した。プレートを室温で遮光して５分間インキュベートし、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）上でＤＥＬＦＩＡ（登録商標）時間分解蛍光のの適切な設定を使用して６１５ｎｍで読み取った。マウスＩＬ−２の濃度を、試験試料に伴って実行した標準曲線から内挿した。方程式９を使用して最終プロット値を計算し、５０μＬの培地のみで処理した共培養細胞のアッセイシグナルを使用してバックグラウンドシグナルを計算した。結果は、図２３に示される。全ての抗体は、この共培養系においてＩＬ−２の産生を強力に増強する。
【数９】
2019528083.tif 000026
【表１５】
2019528083.tif 000027
【表１６】
2019528083.tif 000028
【１２１５】
実施例２５−活性化ＤＣ−Ｔ細胞混合リンパ球反応における鉛抗体の試験
Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ＫｉｔおよびＭＡＣＳ（商標）磁気分離システム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して負の選択法によって凍結保存したＰＢＭＣから単球を単離した。１０％のｈｉＦＢＳならびに１００ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４（いずれもＰｅｐｒｏｔｅｃｈ）を含有するＲＰＭＩ  １６４０培地中で単球を再懸濁させた。非ＴＣ処理６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）中で細胞を５日間培養して、ＤＣの分化を誘導した後、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｏ５５：Ｂ５（Ｓｉｇｍａ）からの１００ｎｇ／ｍＬのリポ多糖を添加して、ＤＣを活性化させた。活性化の２４時間後に細胞を採取し、ＰＢＳで１回洗浄してＬＰＳを除去し、ＲＰＭＩ  １０％  ｈｉＦＢＳ中、１０６／ｍＬで再懸濁させた。上記のようにＰａｎ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  ＩｓｏｌａｔｉｏｎキットおよびＭＡＣＳシステムを使用して凍結保存したＰＢＭＣから同種ＣＤ３＋  Ｔ細胞を単離し、ＲＰＭＩ  １０％  ｈｉＦＢＳ中、２×１０６／ｍＬで再懸濁させた。選択された抗体の１０ｎＭからの連続希釈（１：３）をＲＰＭＩ  １０％  ｈｉＦＢＳ中で調製し、５０μＬを９６ウェルの平底ＴＣプレートプレートに三連で添加した。ＤＣ（１００μＬ）およびＴ細胞（５０μＬ）をプレートに添加し、３７℃、５％  ＣＯ２で５日間インキュベートした。ＩＬ−２の測定のために３日後に、およびＩＦＮγの測定のために５日後に、上清を除去した。使用まで−２０℃で上清を保管した。ＤＥＬＦＩＡ（登録商標）Ｅｕ−Ｎ１ストレプトアビジン検出を使用して、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｈｕｍａｎ  ＩＦＮγ  ａｎｄ  ＩＬ−２  Ｄｕｏｓｅｔ（登録商標）ＥＬＩＳＡでサイトカイン産生を測定した。結果は、図２４に示される。
【１２１６】
実施例２６：カニクイザルにおける免疫サイトカインの多回用量研究
２つの免疫サイトカイン１Ｄ０５  Ｄ９−７  ＩＣＫおよび１Ｄ０５  Ｄ１−８  ＩＣＫ（実施例１４に記載される）の薬理学および毒性をカニクイザルにおける多回用量研究で評価する。雄の幼若サルに、２つの異なるレジメンで１ｍｇ／ｋｇ／用量を投与する：レジメン１−０日目および１４日目に動物に投与する；レジメン２−０、２、１４、および１６日目に動物に投与する。群当たり２匹の動物に投与し、２８日間監視する。処置群は、表１７に示される。
【表１７】
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【１２１７】
心拍数、体温、呼吸数、および血圧を、投与の１時間後および４時間後に測定する。体重は毎日監視する。サイトカインを、２、５、７、１０、１４、１６、１９、２１、２４、および２８日目、ならびに治療前に分析する。血液学的測定は、２、５、７、１０、１４、１６、１９、２１、２４、および２８日目、ならびに治療前に実施する。可溶性ＣＤ２５の検出は、３、７、および１０、１７、２１、２４日目、ならびに治療前に実施する。実施例１９に記載されるパネルに従い、免疫表現型検査は、７、１０、１４、２４、および２８日目、ならびに治療前に実施する。薬物動態（ＰＫ）分析のための試料は、各注入における以下の時点で採取する：治療前、注入終了時、８、１６、２４、３２、４０、４８、７２、および９６時間。
【１２１８】
実施例２７：同系腫瘍モデルにおける免疫サイトカイン有効性研究
ＣＴ−２６マウス腫瘍モデルを使用して有効性研究を実施して、代替免疫サイトカイン活性を未修飾抗体と比較し、エフェクター機能の役割を評価する。移植の日に、ＢＡＬＢ／ｃマウスを、１×１０５  ＣＴ−２６細胞／動物でマウスの後部右脇腹に皮下注射する。処置群は、腫瘍細胞の移植の６日後に、抗体または関連する対照の第１の用量を受け（全て、１０ｍｇ／ｋｇで腹腔内に投与した）、合わせて２週間にわたって週に３回投与される。研究の終了まで、二次元で測定するデジタルキャリパを使用して、腫瘍発達を週に３回監視する。標準式（Ｌ×Ｗ２）／２（Ｌは、腫瘍のより大きい直径であり、Ｗが、腫瘍のより小さい直径である）を使用して、腫瘍体積（ｍｍ３）を推測する。マウスの腫瘍が１２ｍｍの平均直径まで発達するか、またはそれらが研究プロトコルに概説された１つの人道的エンドポイントに達するまで、マウスを研究下に置き続ける。人道的エンドポイント生存統計は、Ｐｒｉｓｍを用いるＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ法を使用して計算する。
【表１８】
2019528083.tif 000030
【１２１９】
実施例２８：Ｔ細胞：黒色腫細胞株移植モデルにおける免疫サイトカイン有効性研究
Ｒ  Ｓｔｅｗａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．に概説される方法の改良法を用いて、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおけるＴ細胞：Ａ３７５細胞株移植モデルを使用して有効性研究を実施する。簡潔には、ＰＥ標識抗ヒトＨＬＡ−Ａ２抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用して全血を染色することによってＨＬＡ−Ａ２陽性ドナーを選択し、続いて、赤血球溶解およびフローサイトメトリーによる分析を行った。次いで、ＥａｓｙＳｅｐヒトＣＤ４＋およびＣＤ８＋  Ｔ細胞濃縮キット（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ  １９０５２／３）を使用して一次ヒトＣＤ４＋またはＣＤ８＋  Ｔ細胞を単離する。次いで、ＩＬ−２およびＩＬ−７の存在下で、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞を２０日間、マイトマイシンＣ処置Ａ３７５細胞の単層上で別々に培養する。１０日目に、Ｔ細胞をＡ３７５の新鮮な支持細胞層上にプレーティングする。２０日目に、細胞を凍結保存し、必要となるまで液体窒素中で保管した。移植の前日に、Ｔ細胞を解凍し、培地およびサイトカイン中で一晩培養する。移植の日に、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞を計数し、１：１比で一緒に混合する。次いで、Ｔ細胞を新鮮なＡ３７５腫瘍細胞と１：６比で混合し、マウスの後部右脇腹に皮下注射する。処置群は、Ｔ細胞および腫瘍細胞の移植の１時間後に、抗体、免疫サイトカイン、または関連する対照の用量を受ける（全て、１０ｍｇ／ｋｇで腹腔内に投与した）。研究の終了まで、二次元で測定するデジタルキャリパを使用して、腫瘍発達を週に３回監視する。標準式（Ｌ×Ｗ２）／２（Ｌは、腫瘍のより大きい直径であり、Ｗが、腫瘍のより小さい直径である）を使用して、腫瘍体積（ｍｍ３）を推測する。マウスの腫瘍が１２ｍｍの平均直径まで発達するか、またはそれらが研究プロトコルに概説された１つの人道的エンドポイントに達するまで、マウスを研究下に置き続ける。人道的エンドポイント生存統計は、Ｐｒｉｓｍを用いるＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ法を使用して計算する。このアプローチを使用して、どの治療が生存の改善に関連付けられるかを判定する。その後の研究で、異なるＩＬ−２活性を有する免疫サイトカイン構築物を比較する。
【表１９】
2019528083.tif 000031
【１２２０】
実施例２９：エフェクター機能のレポーターアッセイにおける鉛抗体の活性
ＡＤＣＣ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ｂｉｏａｓｓａｙを使用して、選択された抗体の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を評価した。ヒトＰＤ−Ｌ１を内因的に発現するＥＳ２細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１９７８）を、ＡＤＣＣ可能化抗体の存在下で、濃度依存的な様式でルシフェラーゼを産生するエフェクター細胞（ヒトＦｃγＲＩＩＩａ受容体を安定的に発現する、操作されたＪｕｒｋａｔ細胞−Ｖ１５８、Ｐｒｏｍｅｇａ）と共培養した。ルシフェラーゼが発光原基質を発光産物に変換させた際の発光を測定することによって、可溶性ルシフェラーゼ活性を評価する。
【１２２１】
アッセイの直前に、標的細胞（ＥＳ２）を遠心分離させ、ＲＰＭＩ  １６４０＋１０％Ｕｌｔｒａ  ｌｏｗ  ＩｇＧ  ＦＢＳ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で再懸濁させ、３０，０００細胞／ウェル（１０μＬ／ウェル）で３８４ウェルの白色底面プレートにプレーティングした。Ｊｕｒｋａｔ  ＮＦＡＴルシフェラーゼレポーター（エフェクター）細胞をＲＰＭＩ  １６４０＋１０％  Ｕｌｔｒａ  ｌｏｗ  ＩｇＧ  ＦＢＳ中で再懸濁させ、ウェル当たり１０，０００細胞（１０μＬ／ウェル）で標的細胞に添加した。抗体の１１個の３倍連続希釈をＲＰＭＩ  １６４０＋１０％  Ｕｌｔｒａ  ｌｏｗ  ＩｇＧ  ＦＢＳ中で２．２ｎＭから調製し、標的細胞に添加した（１０μＬ／ウェル）。プレートを３７℃、５％  ＣＯ２で一晩インキュベートした後、発光原ＢｉｏＧｌｏ基質をウェルの直接添加し（３０μＬ／ウェル）、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）プレートリーダー上で発光を定量化した。
【１２２２】
生データ（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ読み取り）からの相対発光量（ＲＬＵ）の値を、以下の方程式を使用して誘導の倍位数に対して正規化した。
【数１０】
2019528083.tif 000032
【１２２３】
４パラメータロジスティック適合を使用してデータをＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍにプロットし、代表的な実験は、図３４に示される。結果は、表２０に要約される。試験した全ての抗体が発光を誘導し、これは、全てがＡＤＣＣによる標的細胞の殺滅を誘導する能力を有することを示す。ＥＣ５０値は概して同様であるものの、４１６Ｅ０１は、最も高い最大レベルの発光を誘発する。
【表２０】
2019528083.tif 000033
【１２２４】
実施例３０：細胞発現カニクイザルＰＤ−Ｌ１への鉛抗体の結合。
カニクイザルＰＤ−Ｌ１でトランスフェクトしたＣＨＯ−Ｓ細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋１％ｗ／ｖ  ＢＳＡ＋０．１％ｗ／ｖアジ化ナトリウム）中で希釈し、ウェル当たり１×１０５細胞の密度で９６ウェル、Ｖ字底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）に分配した。１３３ｎＭ使用濃度から、ＦＡＣＳ緩衝液中の１／３希釈系列として抗体滴定を調製した。プレートを３００×ｇで３分間遠心分離し、上清を吸引した。１ウェル当たり５０μＬの抗体滴定を細胞に添加し、４℃で１時間インキュベートした。細胞を１５０μＬのＰＢＳで洗浄し、３００ｇで３分間遠心分離させた。上清を吸引し、１ウェル当たり１５０μＬのＰＢＳを添加した。この洗浄ステップを繰り返した。ＦＡＣＳ緩衝液中で１／５００に希釈した、１ウェル当たり５０μＬの抗ヒトＩｇＧ  ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ６４７（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）の添加によって、結合した抗体の存在を検出した。細胞を４℃で１時間、暗所でインキュベートした。細胞を前述のように洗浄した。細胞を固定するために、１ウェル当たり５０μＬの４％ｖ／ｖパラホルムアルデヒドを添加し、細胞を４℃で２０分間インキュベートし、細胞を３００×ｇで遠心分離させることによってペレット化し、プレートを７５μＬのＰＢＳ中で再懸濁させた。Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＣｙｔｏＦＬＥＸ器具を使用したフローサイトメトリーによって幾何平均を測定した。６３７ｎｍレーザを使用してＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７を励起させ、６６０／２０バンドパスフィルタによってＲｅｄチャネル中で検出した。データは、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析され、図３５に示される。全ての抗体は、細胞上に発現されたカニクイザルＰＤ−Ｌ１に結合する。
【１２２５】
実施例３１：ＣＨＯ発現ｈＰＤ−Ｌ１への結合、ならびにＰＤ−１およびＣＤ８０へのｈＰＤ−Ｌ１結合の中和
トランスフェクトされていない（ＷＴと呼ばれる）か、または組換えヒトＰＤ−Ｌ１を発現するｈＰＤ−Ｌ１でトランスフェクトされたＣＨＯを、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ  １％  ＢＳＡ  ０．１％アジ化ナトリウム）中で希釈し、ウェル当たり１×１０５細胞の密度で３つの９６ウェルのＶ字底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）に分配した。細胞を１５０μＬのＰＢＳで洗浄し、３００ｇで３分間遠心分離させる。上清を吸引し、１５０μＬのＰＢＳを添加する。この洗浄ステップを繰り返す。
【１２２６】
プレート１（ＰＤ−Ｌ１結合）に、１５０ｎＭ使用濃度から、ＦＡＣＳ緩衝液中の１／３希釈系列として、鉛抗体、参照抗体、または対照抗体滴定を調製した。ＦＡＣＳ緩衝液中で希釈した５０μＬの抗体を、洗浄した細胞に添加し、４℃で６０分間インキュベートする。１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液を添加し、細胞を上記のように洗浄する。抗ＰＤ−Ｌ１抗体結合を検出するために、抗ヒトＰＥ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）をＦＡＣＳ緩衝液中で１／５００に希釈し、５０μＬのこの混合物を細胞に添加する。細胞を４℃で６０分間インキュベートする。細胞を１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、各洗浄ステップ後に３００×ｇで３分間遠心分離させて上清を吸引する。１００μＬの４％パラホルムアルデヒドの添加によって細胞を固定し、４℃で３０分間。細胞を上記のように１回洗浄し、分析のために１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中で再懸濁させる。Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｃｙｔｏｆｌｅｘ器具を使用したフローサイトメトリーによってＰＥシグナル強度（幾何平均）を測定する。さらなる計算を伴わずに幾何平均値としてデータをプロットする。
【１２２７】
プレート２（ＰＤ−１中和）に、１μＭ最終アッセイ濃度（ＦＡＣ）の、ＦＡＣＳ緩衝液中の１／２希釈系列からの滴定としてビオチニル化ヒトＰＤ−１−Ｆｃ（自家発現、配列番号６）を調製した。３００ｎＭ使用濃度（１５０ｎＭ  ＦＡＣ）から、ＦＡＣＳ緩衝液中の１／３希釈系列として、鉛抗体、参照抗体、または対照抗体滴定を調製した。ビオチニル化ＰＤ−１をＦＡＣＳ緩衝液中で６０ｎＭ使用濃度（３０ｎＭ  ＦＡＣ）まで希釈した。２５μＬのＰＤ−１および２５μＬの抗体溶液（または５０μＬのＰＤ１滴定）を細胞に添加し、４℃で１時間インキュベートした。製造業者の指示に従ってＬｉｇｈｔｎｉｎｇ  Ｌｉｎｋコンジュゲーションキット（Ｉｎｎｏｖａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ビオチニル化を自家で実施する。１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液を添加し、細胞を上記のように洗浄する。ビオチニル化ＰＤ−１を検出するために、ストレプトアビジン−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７（ＡＦ６４７、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）をＦＡＣＳ緩衝液中で１／５００に希釈し、５０μＬのこの混合物を細胞に添加する。細胞を４℃で６０分間インキュベートする。細胞を１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、各洗浄ステップ後に３００×ｇで３分間遠心分離させて上清を吸引する。細胞を、上記のように分析のために固定、洗浄、および再懸濁させる。Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＣＹＴＯＦＬＥＸ器具を使用したフローサイトメトリーによってＡＰＣシグナル強度（幾何平均）を測定する。データを、受容体結合のパーセンテージとしてプロットする。
【１２２８】
プレート３（ＣＤ８０中和）に、１μＭ最終アッセイ濃度（ＦＡＣ）の、ＦＡＣＳ緩衝液中の１／２希釈系列からの滴定としてビオチニル化ヒトＣＤ８０（Ｆｃタグ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、１４０−Ｂ１）を調製した。３００ｎＭ使用濃度（１５０ｎＭ  ＦＡＣ）から、ＦＡＣＳ緩衝液中の１／３希釈系列として、鉛抗体、参照抗体、または対照抗体滴定を調製した。ビオチニル化ＣＤ８０をＦＡＣＳ緩衝液中で６０ｎＭ使用濃度（３０ｎＭ  ＦＡＣ）まで希釈した。２５μＬのＣＤ８０および２５μＬの抗体溶液（または５０μＬのＣＤ８０滴定）を細胞に添加し、４℃で１時間インキュベートした。全ての他のステップを、プレート２と同様に実施する。
【数１１】
2019528083.tif 000034
【１２２９】
結果は、図３６および表２１に示される。全ての鉛抗体は、ＰＤ−１およびＣＤ８０の両方とのＰＤ−Ｌ１の相互作用を中和させる。
【表２１】
2019528083.tif 000035
【１２３０】
実施例３２：初代ＮＫ細胞ＡＤＣＣアッセイにおける鉛抗体のエフェクター機能
ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害性）を介して標的細胞を発現するＰＤ−Ｌ１を殺滅する抗体の活性を、ヒト初代ＮＫ細胞をエフェクターとして、およびＥＳ２をＰＤ−Ｌ１＋標的細胞として使用して、ＤＥＬＦＩＡ細胞傷害性アッセイ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）によって測定する。
【１２３１】
この方法は、細胞膜を急速に貫通する蛍光増強リガンド（ＢＡＴＤＡ）のアセトキシメチルエステルを標的細胞に装填することに基づく。細胞内で、エステル結合は加水分解されて、親水性リガンド（ＴＤＡ）を形成し、これはもはや膜を通過しない。細胞溶解後、リガンドは放出され、ＢＡＴＤＡと共に高度蛍光で安定なキレート（ＥｕＴＤＡ）を形成するユーロピウムの添加によって検出され得る。測定されたシグナルは、細胞溶解の程度と直接相関する。
【１２３２】
ＥＳ２細胞を１０６／ｍＬでアッセイ培地（ＲＰＭＩ＋１０％超低ＩｇＧ  ＦＢＳ、Ｇｉｂｃｏ）中で再懸濁させ、５μＬ／ｍＬのＢＡＴＤＡ試薬（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を３７℃で３０分間装填する。次いで、細胞を５０ｍＬのＰＢＳ（３００×ｇで５分）で３回洗浄し、２ｍＭのプロベネシド（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で補充したアッセイ培地中で８ｘ１０５／ｍＬで再懸濁させて、細胞からのＢＡＴＤＡの自然放出を低減させた。アッセイ培地中の最終再懸濁の直後のＥＳ２細胞からの上清をバックグラウンド対照として使用する。
【１２３３】
ＰＤ−Ｌ１抗体およびアイソタイプ対照の７つの連続３倍希釈を、アッセイ培地＋２ｍＭのプロベネシド中で、４μｇ／ｍＬ（４×最終濃度）から調製する。製造業者の指示に従ってＨｕｍａｎ  ＮＫ  Ｃｅｌｌ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、ＮＫ細胞を新鮮なＰＢＭＣから負に単離し、アッセイ培地＋２  ｍＭプロベネシド中に４ｘ１０６／ｍＬで再懸濁させる。５０μＬの希釈したＡｂ、５０μＬのＢＡＴＤＡ担持標的細胞、５０μＬのＮＫ細胞、および５０μＬのアッセイ培地＋２ｍＭプロベネシド（２００μＬ／ウェルの最終体積）を各ウェルに添加して、５：１のエフェクター：標的比を得る。ＥＳ細胞のみ、またはＥＳ２細胞＋ＤＥＬＦＩＡ溶解緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を含有するウェルを使用して、自然放出および最大放出をそれぞれ判定する。
【１２３４】
細胞を３７℃、５％  ＣＯ２で４時間インキュベートした後、プレートを５００×ｇで５分間遠心分離させ、５０μＬの細胞不含上清をＤＥＬＦＩＡ微量滴定プレート（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）に移した。２００μＬのＤＥＬＦＩＡユーロピウム溶液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を上清に添加し、室温で１５分間インキュベートした。次いで、蛍光シグナルをＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で定量化した。
【１２３５】
バックグラウンド数を全ての実験数から減算した。特異的放出は、以下の方程式に従って計算する。
【数１２】
2019528083.tif 000036
【１２３６】
参照による組み込み
特許、特許出願、論文、テキストブック等を含む、本明細書に引用される全ての参考文献およびその中で引用される参照文献は、それらが既に組み込まれていない限り、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【１２３７】
等価物
前述の明細書は、当業者が本発明を実践するために十分であると考えらえる。前述の説明および実施例は、本発明のある特定の好ましい実施形態を詳述する。しかしながら、本発明が、多くの方法で実践され得ることが理解され、本発明は、添付の特許請求の範囲およびその任意の等価物に従って解釈されるべきである。
【１２３８】
本明細書に記載される特定の構成、態様、実施例、節、および実施形態は、本発明の限定としてではなく、例示目的で示されることが理解される。別途文脈から明らかでない限り、本開示のいかなる部分も、本開示の任意の他の部分と組み合わせて読むことができる。
配列表
【表２３】
2019528083.tif 000037
【表２４】
2019528083.tif 000038
【表２５】
2019528083.tif 000039
【表２６】
2019528083.tif 000040
【表２７】
2019528083.tif 000041
【表２８】
2019528083.tif 000042
【表２９】
2019528083.tif 000043
【表３０】
2019528083.tif 000044
【表３１】
2019528083.tif 000045
【表３２】
2019528083.tif 000046
【表３３】
2019528083.tif 000047
【表３４】
2019528083.tif 000048
【表３５】
2019528083.tif 000049
【表３６】
2019528083.tif 000050
【表３７】
2019528083.tif 000051
【表３８】
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【表３９】
2019528083.tif 000053
【表４０】
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【表４１】
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【表４２】
2019528083.tif 000056
【表４３】
2019528083.tif 000057
【表４４】
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【表４５】
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【表４６】
2019528083.tif 000060
【表４７】
2019528083.tif 000061
【表４８】
2019528083.tif 000062
【表４９】
2019528083.tif 000063
【表５０】
2019528083.tif 000064
【表５１】
2019528083.tif 000065
【表５２】
2019528083.tif 000066
【表５３】
2019528083.tif 000067
【表５４】
2019528083.tif 000068
【表５５】
2019528083.tif 000069
【表５６】
2019528083.tif 000070
【表５７】
2019528083.tif 000071
【表５８】
2019528083.tif 000072
【表５９】
2019528083.tif 000073
【表６０】
2019528083.tif 000074
【表６１】
2019528083.tif 000075
【表６２】
2019528083.tif 000076
【表６３】
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【表６４】
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【表６５】
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【表６６】
2019528083.tif 000080
【表６７】
2019528083.tif 000081
【表６８】
2019528083.tif 000082
【表６９】
2019528083.tif 000083
【表７０】
2019528083.tif 000084
【表７１】
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【表７２】
2019528083.tif 000086
【表７３】
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【表７４】
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【表７５】
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【表７６】
2019528083.tif 000090
【表７７】
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【表７８】
2019528083.tif 000092
【表７９】
2019528083.tif 000093
【表８０】
2019528083.tif 000094
【表８１】
2019528083.tif 000095
【表８２】
2019528083.tif 000096
【表８３】
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【表８４】
2019528083.tif 000098
【表８５】
2019528083.tif 000099
【表８６】
2019528083.tif 000100
【表８７】
2019528083.tif 000101
【表８８】
2019528083.tif 000102
【表８９】
2019528083.tif 000103
【表９０】
2019528083.tif 000104
【表９１】
2019528083.tif 000105
【表９２】
2019528083.tif 000106
【表９３】
2019528083.tif 000107
【表９４】
2019528083.tif 000108
【表９５】
2019528083.tif 000109
【表９６】
2019528083.tif 000110
【表９７】
2019528083.tif 000111
【表９８】
2019528083.tif 000112
【表９９】
2019528083.tif 000113
【表１００】
2019528083.tif 000114
【表１０１】
2019528083.tif 000115
【図１】
2019528083.tif 000116
【図２】
2019528083.tif 000117
【図３】
2019528083.tif 000118
【図４】
2019528083.tif 000119
【図５ａ】
2019528083.tif 000120
【図５ｂ】
2019528083.tif 000121
【図６】
2019528083.tif 000122
【図７ａ】
2019528083.tif 000123
【図７ｂ】
2019528083.tif 000124
【図８ａ】
2019528083.tif 000125
【図８ｂ】
2019528083.tif 000126
【図８ｃ】
2019528083.tif 000127
【図９ａ】
2019528083.tif 000128
【図９ｂ】
2019528083.tif 000129
【図９ｃ】
2019528083.tif 000130
【図１０】
2019528083.tif 000131
【図１１】
2019528083.tif 000132
【図１２（ａ）−１】
2019528083.tif 000133
【図１２（ａ）−２】
2019528083.tif 000134
【図１２（ｂ）−１】
2019528083.tif 000135
【図１２（ｂ）−２】
2019528083.tif 000136
【図１３（ａ）】
2019528083.tif 000137
【図１３（ｂ）】
2019528083.tif 000138
【図１４−１】
2019528083.tif 000139
【図１４−２】
2019528083.tif 000140
【図１４−３】
2019528083.tif 000141
【図１５】
2019528083.tif 000142
【図１６】
2019528083.tif 000143
【図１７】
2019528083.tif 000144
【図１８−１】
2019528083.tif 000145
【図１８−２】
2019528083.tif 000146
【図１８−３】
2019528083.tif 000147
【図１９】
2019528083.tif 000148
【図２０ａ】
2019528083.tif 000149
【図２０ｂ】
2019528083.tif 000150
【図２１ａ】
2019528083.tif 000151
【図２１ｂ】
2019528083.tif 000152
【図２１ｃ】
2019528083.tif 000153
【図２１ｄ】
2019528083.tif 000154
【図２２ａ】
2019528083.tif 000155
【図２２ｂ】
2019528083.tif 000156
【図２３（ａ）胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㤱㈵〸㌸琮晩㸢〲㤱㈵〸㌸琮晩ꃂ〰㄰㜵⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯鎼볯芽볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㔱㰸愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥銼볯袼뷯覼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㤱㈵〸㌸琮晩㸢〲㤱㈵〸㌸琮晩ꃂ〰㄰㤵⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯钼볯芽볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㘱㰰愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥銼볯袼뷯覼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㤱㈵〸㌸琮晩㸢〲㤱㈵〸㌸琮晩ꃂ〰㄰ㄶ⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯閼볯芽볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㘱㰲愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥銼볯袼뷯覼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㤱㈵〸㌸琮晩㸢〲㤱㈵〸㌸琮晩ꃂ〰㄰㌶⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯隼볯芽볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㘱㰴愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥銼볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㘱㰵愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥銼볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㘱㰶愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥銼볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㘱㰷愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥鎼볯袼뷯覼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㤱㈵〸㌸琮晩㸢〲㤱㈵〸㌸琮晩ꃂ〰㄰㠶⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯邼볯芽볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㘱㰹愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥鎼볯袼뷯覼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㤱㈵〸㌸琮晩㸢〲㤱㈵〸㌸琮晩ꃂ〰㄰〷⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯邼볯蒽볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㜱㰱愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥鎼볯袼뷯覼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㤱㈵〸㌸琮晩㸢〲㤱㈵〸㌸琮晩ꃂ〰㄰㈷⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯醼볯芽볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㜱㰳愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥鎼볯袼뷯覼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㤱㈵〸㌸琮晩㸢〲㤱㈵〸㌸琮晩ꃂ〰㄰㐷⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯醼볯蒽볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㜱㰵愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥鎼볯袼뷯覼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㤱㈵〸㌸琮晩㸢〲㤱㈵〸㌸琮晩ꃂ〰㄰㘷⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯醼볯蚽볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㜱㰷愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥鎼볯袼뷯覼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㤱㈵〸㌸琮晩㸢〲㤱㈵〸㌸琮晩ꃂ〰㄰㠷⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯醼볯袽볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㜱㰹愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥鎼볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㠱㰰愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥鎼볯袼뷯覼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㤱㈵〸㌸琮晩㸢〲㤱㈵〸㌸琮晩ꃂ〰㄰ㄸ⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯鎼볯芽볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㠱㰲愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥鎼볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㠱㰳愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥鎼볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㠱㰴愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥鎼볯袼뷯覼胣㲑䐯噉ਾ††††††䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㤱㈵〸㌸琮晩㸢〲㤱㈵〸㌸琮晩ꃂ〰㄰㔸⼼㹡⼼䥄㹖 †††㰠䥄㹖胣뎛볯隼볯芽볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㠱㰶愯㰾䐯噉ਾ††††䐼噉邀鯥鎼볯醀⼼䥄㹖 †††††㰠䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㠱㰷愯㰾䐯噉ਾ††††⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀藩鞈ꇨ醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦⸢㈯㄰㔹㠲㠰⼳⸲㄰㔹㠲㠰䔳〫㔱㈯㄰㔹㠲㠰〳〰〰⸱灡≰㈾㄰㔹㠲㠰〳〰〰⸱灡㱰愯㰾䐯噉ਾ⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣붛髩뾪鿦놠釥醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㠱㰸愯㰾䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㤱㈵〸㌸琮晩㸢〲㤱㈵〸㌸琮晩ꃂ〰㄰㤸⼼㹡⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔹㠲㠰⸳楴≦㈾㄰㔹㠲㠰⸳楴쉦゠〰㤱㰰愯㰾䐯噉ਾ䐼噉㰾⁡牨晥∽〲㤱㈵〸㌸琮晩㸢〲㤱㈵〸㌸琮晩ꃂ〰㄰ㄹ⼼㹡⼼䥄㹖㰊戯摯㹹㰊栯浴㹬