【手続補正書】
【提出日】平成19年1月19日(2007.1.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  ヒト肝前駆細胞の濃縮集団を含む混合物である、ヒト肝組織に由来する細胞の混合物を含む組成物を提供する方法であって、
（a）未熟細胞および成熟細胞を含む種々のサイズの細胞の混合物を含むヒト肝組織の［実質的に単一の］細胞懸濁液を提供する段階；
（b）成熟細胞および比較的大きなサイズの細胞の除去を許容し、同時に未熟細胞および比較的小さなサイズの細胞が保持される条件下で懸濁液のデバルキング（debulking）を行う段階；ならびに
（c）ヒト肝前駆細胞それ自体、その子孫細胞、またはそのより成熟した型がα-フェトプロテイン、アルブミン、またはその両方の発現を示す1つまたは複数のマーカーを呈する細胞を選択し、ヒト肝前駆細胞の濃縮集団を含む細胞の混合物を提供する段階、
を含む方法。
【請求項２】  肝組織が、胎児、新生児、乳児、小児、若年期、または成体から得られる、請求項1記載の方法。
【請求項３】  未熟細胞の直径が約15μ以下である、請求項1記載の方法。
【請求項４】  濃縮集団がヒト二倍体肝細胞を含む、請求項1記載の方法。
【請求項５】  肝前駆細胞が肝前駆細胞、造血前駆細胞、間葉前駆細胞またはその混合物である、請求項1記載の方法。
【請求項６】  α-フェトプロテインが完全長α-フェトプロテインである、請求項1記載の方法。
【請求項７】  デバルキングが、細胞サイズ、浮遊密度、またはその組み合わせによる分離を含む、請求項1記載の方法。
【請求項８】  デバルキングの段階が、遠心水簸、密度勾配遠心、パニング、アフィニティークロマトグラフィー、蛍光標識付加、対向液体流、連続流遠心法、ゾーン遠心法、磁気ビーズの使用、またはその組み合わせを含む、請求項1記載の方法。
【請求項９】  成熟細胞の選択的可溶化をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項１０】  請求項1記載の方法によって単離されたヒト肝前駆細胞。
【請求項１１】  ヒト肝前駆細胞の濃縮集団を含む組成物を提供する方法であって、
（a）ヒト肝組織の実質的に単一の細胞懸濁液を提供する段階、および
（b）ヒト肝前駆細胞それ自体、その子孫細胞、またはそのより成熟した型がα-フェトプロテイン、アルブミン、またはその両方の発現を示す1つまたは複数のマーカーを呈するヒト肝前駆細胞の濃縮集団を含む細胞混合液を得るように、懸濁液を陽性または陰性免疫選択にかける段階
を含む方法。
【請求項１２】  肝前駆細胞が、肝前駆細胞、造血前駆細胞、間葉前駆細胞、またはその組み合わせである、請求項12記載の方法。
【請求項１３】  免疫選択が造血細胞に関連したマーカーを発現する細胞、肝細胞に関連したマーカーを発現する細胞、間葉細胞に関連したマーカーを発現する細胞、またはその組み合わせを選択する段階を含む、請求項12記載の方法。
【請求項１４】  免疫選択が、細胞それ自体、その子孫細胞、またはそのより成熟した型がα-フェトプロテイン、アルブミン、またはその両方の発現の指標となる1つまたは複数のマーカーを呈する細胞を懸濁液から選択する段階を含む、請求項12記載の方法。
【請求項１５】  細胞それ自体、その子孫細胞、またはそのより成熟した型が完全長α-フェトプロテインmRNAを産生する細胞を選択する段階をさらに含む、請求項15記載の方法。
【請求項１６】  免疫選択が、成体肝細胞特異的マーカーを発現する細胞を懸濁液から選択する段階を含む、請求項12記載の方法。
【請求項１７】  免疫選択が、細胞それ自体、その子孫細胞、またはそのより成熟した型がCD14、CD34、CD38、ICAM、CD45、CD117、グリコホリンA、コネキシン32、オステオポンチン、骨シアロ蛋白質、コラーゲンI、コラーゲンII、コラーゲンIII、コラーゲンIV、またはその組み合わせを発現する細胞を選択することを含む、請求項12記載の方法。
【請求項１８】  免疫選択が、細胞それ自体、その子孫細胞、またはそのより成熟した型がα-フェトプロテイン様免疫反応性、アルブミン様免疫反応性、またはその組み合わせをさらに発現する細胞を選択することを含む、請求項12記載の方法。
【請求項１９】  請求項14記載の方法によって単離されたヒト肝前駆細胞。
【請求項２０】  ヒト肝臓が、α-フェトプロテイン、アルブミンまたはその両方の発現の指標となる1つまたは複数のマーカーを呈する、ヒト肝前駆細胞、その子孫細胞、またはそのより成熟した型の濃縮集団を含む組成物。
【請求項２１】  前駆細胞が、肝前駆細胞、造血前駆細胞、間葉前駆細胞、またはその組み合わせを含む、請求項21記載の組成物。
【請求項２２】  前駆細胞、その子孫細胞、またはそのより成熟した型がCD14、CD34、CD38、CD117、ICAM、またはその組み合わせを発現する、請求項21記載の組成物。
【請求項２３】  前駆細胞が外因性核酸を有する、請求項21記載の組成物。
【請求項２４】  外因性核酸が、少なくとも1つの対象となるポリペプチドをコードする、請求項24記載の組成物。
【請求項２５】  外因性核酸が少なくとも1つの対象となるポリペプチドの発現を促す、請求項24記載の組成物。
【請求項２６】  肝前駆細胞による治療に反応する肝機能不全または肝疾患を、それを必要とする被験者において治療する方法であって、薬学的に許容される担体中にある、ヒト肝前駆細胞、その子孫細胞、そのより成熟した型、またはその組み合わせの有効量を被験者に投与する段階、および肝機能不全または肝疾患を治療する段階を含む方法。
【請求項２７】  ヒト肝前駆細胞が、肝前駆細胞、造血前駆細胞、間葉前駆細胞、またはその組み合わせを含む、請求項27記載の方法。
【請求項２８】  成体ヒト肝前駆細胞、その子孫細胞、そのより成熟した型、またはその組み合わせの有効量を同時または任意の順番で連続的に投与する段階をさらに含む、請求項27記載の方法。
【請求項２９】  ヒト肝前駆細胞が非経口的に投与される、請求項27記載の方法。
【請求項３０】  肝障害または肝機能不全が、肝胆管炎、肝軟化症、肝巨大症、肝硬変、線維症、肝炎、急性肝不全、慢性肝不全、癌、血液学的障害、血液学的機能不全、または先天代謝異常を含む、請求項27記載の方法。
【請求項３１】  癌が、肝細胞癌、肝芽腫、またはその両方を含む、請求項31記載の方法。
【請求項３２】  癌が、腸、前立腺、乳房、腎臓、膵臓、皮膚、脳、および肺からなる群より選択される原発部位に由来する肝臓における転移性腫瘍を含む、請求項31記載の方法。
【請求項３３】  血液学的障害または機能不全が、貧血、白血病、または化学療法、放射線、薬剤、ウイルス、外傷、もしくはその組み合わせによって誘発されるものを含む、請求項31記載の方法。
【請求項３４】  治療を必要とする被験者における疾患を治療する方法であって、外因性核酸を有するヒト肝前駆細胞、その子孫細胞、またはそのより成熟した型である、ヒト肝前駆細胞、その子孫細胞、またはそのより成熟した型の有効量を投与する段階を含む方法。
【請求項３５】  請求項21記載の組成物、細胞外基質成分および培養液を含む、細胞培養物。
【請求項３６】  請求項21記載の組成物、および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
【請求項３７】  α-フェトプロテイン、アルブミン、またはその両方の発現の指標となる1つまたは複数のマーカーを呈する、ヒト肝前駆細胞、その子孫細胞、またはそのより成熟した型。
【請求項３８】  グリコホリンA−、CD45−、α-フェトプロテイン＋＋＋、アルブミン＋、およびICAM＋の表現型を呈する、ヒト肝前駆細胞、その子孫細胞、またはそのより成熟した型。
【請求項３９】  CD14＋、CD34＋＋、CD38＋＋、CD117＋、またはその組み合わせをさらに発現する、請求項43記載のヒト肝前駆細胞。
【請求項４０】  未熟細胞の直径が約5μよりも大きい、請求項3記載の方法。
【請求項４１】  未熟細胞の直径が約8μよりも大きい、請求項3記載の方法。