【手続補正書】
【提出日】平成19年5月10日(2007.5.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  アデノシン二リン酸グルコースα−１，４−グルカンα−４−グルコシルトランスフェラーゼ、またはデンプン合成酵素ＥＣ２．４．１．２１、または、特に一つ以上のアミノ酸の抑制、付加もしくは置換によってこの酵素から誘導されるタンパク質をコードしているヌクレオチド配列を、５′→３′の方向に含み、該酵素、または誘導されるタンパク質が、植物細胞内でのデンプン顆粒の生合成、およびデンプン顆粒への付着の部位へと移動する特性を有し、該酵素または上記タンパク質をコードしている該ヌクレオチド配列が、目的のペプチドもしくはポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列の上流に位置することを特徴とする、組換えヌクレオチド配列。
【請求項２】  デンプン合成酵素、または誘導されるタンパク質をコードしているヌクレオチド配列が、特に植物、藻類または微藻類に存在するデンプン顆粒もしくはＧＢＳＳに結合したデンプン合成酵素、より特別にはＧＢＳＳＩのイソ型、または請求項１に定義されたとおりのＧＢＳＳから誘導されるタンパク質をコードしている、請求項１記載の組換えヌクレオチド配列。
【請求項３】  デンプン合成酵素、または誘導されるタンパク質をコードしているヌクレオチド配列が、
−クラミドモナス・ラインハルティイ（Chlamydomonas reinhardtii）のＧＢＳＳＩをコードしているｃＤＮＡのヌクレオチド配列である配列番号１、または
−示されたヌクレオチド配列である配列番号１のフラグメント、たとえば、５′末端のヌクレオチドが、配列番号１の第１〜１８６位のうち一つに位置するものに相当し、３′末端のヌクレオチドが、配列番号１の第１，４９９〜３，１１７位のうち一つに位置するものに相当する配列、特に：
・７０８アミノ酸のプレタンパク質（配列番号３）の形態のクラミドモナス・ラインハルティイのＧＢＳＳＩをコードしている配列である配列番号２、
・６５１アミノ酸の成熟タンパク質（配列番号５）の形態のクラミドモナス・ラインハルティイのＧＢＳＳＩをコードしている配列である配列番号４、
・クラミドモナス・ラインハルティイのＧＢＳＳＩの４３８アミノ酸のフラグメント（配列番号７）をコードしている配列である配列番号６、
・クラミドモナス・ラインハルティイのＧＢＳＳＩの５３１アミノ酸のフラグメント（配列番号９）をコードしている配列の配列番号８、または
−上記ヌクレオチド配列の遺伝コードの縮重によって誘導され、クラミドモナス・ラインハルティイの上記ＧＢＳＳＩ、もしくは後者の上記ペプチドフラグメントをコードしているヌクレオチド配列、または
−上記のヌクレオチド配列もしくはフラグメントから、特に一つ以上のヌクレオチドの置換、抑制もしくは付加によって誘導され、クラミドモナス・ラインハルティイの上記ＧＢＳＳＩから誘導されるか、または後者の上記ペプチドフラグメントから誘導されるペプチド配列をコードしており、デンプン顆粒に付着する特性を有するヌクレオチド配列であって、該誘導されるヌクレオチド配列は、好ましくは、上記ヌクレオチド配列もしくはフラグメントと約５０％以上、好ましくは約７０％以上の相同性を有するヌクレオチド配列、または
−上記ヌクレオチド配列もしくはフラグメントの一つとハイブリダイズすることができるヌクレオチド配列
から選ばれることを特徴とする、請求項１または２に記載の組換えヌクレオチド配列。
【請求項４】  目的のペプチドまたはポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列が、
−生物学的に活性であるペプチド、特に治療目的のペプチド、もしくは農業および食品工業に用い得るペプチドをコードしているもの、または
−様々な加水分解酵素、ホスホリラーゼ、α−１，４−グルカノトランスフェラーゼ、分枝酵素、アミラーゼ、および特に４０℃を越える温度で活性である古細菌のような好極限性細菌から得られる耐熱性加水分解酵素を包含する、デンプンを形質転換できる酵素、たとえば、α−グルカンと相互作用する酵素
から選ばれることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組換えヌクレオチド配列。
【請求項５】  デンプン合成酵素、またはそれから誘導されるタンパク質をコードしているヌクレオチド配列と、目的のポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列との間に位置し、切断部位をコードしているヌクレオチド配列を含むことを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組換えヌクレオチド配列。
【請求項６】  デンプンを産生することができる、植物、藻類または微藻類の細胞から選ばれる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組換えヌクレオチド配列を、そのゲノムに組み込まれてか、またはその細胞質に安定的な方式で維持されて有するトランスジェニック植物細胞。
【請求項７】  請求項１〜５のいずれか一項に記載の組換えヌクレオチド配列を、それを構成する細胞の、ゲノムに組み込まれてか、または細胞質に安定的な方式で維持されて有するトランスジェニック植物、藻類もしくは微藻類、またはこれらの植物、藻類もしくは微藻類の部分、特に花、果実、葉、茎、根、種子、もしくは断片。
【請求項８】  Ｎ末端位に、デンプン合成酵素、または該酵素から、特に一つ以上のアミノ酸の抑制、付加もしくは置換によって誘導されるタンパク質を含み、該デンプン合成酵素、または誘導されるタンパク質が、植物細胞内でのデンプン顆粒の生合成、およびデンプン顆粒への付着の部位へと移動する特性を有し、かつ
Ｃ末端位に、目的のペプチドまたはポリペプチドを含み、そのため、該デンプン合成酵素、または誘導されるタンパク質のアミノ酸配列のＣ末端部分が、目的のペプチド配列のＮ末端部分に結合されていて、該融合ポリペプチドが、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組換えヌクレオチド配列によってコードされていることを特徴とする、融合ポリペプチド。
【請求項９】  デンプン合成酵素が、
−クラミドモナス・ラインハルティイの７０８アミノ酸のプレタンパク質の形態のＧＢＳＳＩに相当する、ペプチド配列である配列番号３、または
ペプチド配列である配列番号３のフラグメント、たとえばアミノ末端のアミノ酸が、配列番号３の第１〜５８位のうち一つに位置するものに相当し、カルボキシル末端のアミノ酸が、配列番号３の第４９５〜７０８位のうち一つに位置するものに相当する配列、特に：
・６５１アミノ酸の成熟タンパク質の形態のクラミドモナス・ラインハルティイのＧＢＳＳＩに相当する配列である配列番号５、
・クラミドモナス・ラインハルティイのＧＢＳＳＩのペプチド配列の４３８アミノ酸のフラグメントに相当する配列である配列番号７、
・クラミドモナス・ラインハルティイのＧＢＳＳＩのペプチド配列の５３１アミノ酸のフラグメントに相当する配列である配列番号９、または
−上記のペプチド配列もしくはフラグメントから、特に一つ以上のアミノ酸の置換、抑制もしくは付加によって誘導され、デンプン顆粒に付着する特性を有するペプチド配列であって、好ましくは、上記のペプチド配列もしくはフラグメントとの好ましくは約６０％以上、好都合には約８０％以上の相同性を有するペプチド配列
から選ばれることを特徴とする、請求項８記載の融合ポリペプチド。
【請求項１０】  一方ではデンプン合成酵素、またはそれから誘導されるタンパク質と、他方では目的のポリペプチドとの間に位置する切断部位を有することを特徴とする請求項８または９記載の融合ポリペプチド。
【請求項１１】  請求項８〜１０のいずれか一項に定義された１種類以上の融合ポリペプチドを含むことを特徴とするデンプン顆粒。
【請求項１２】  必要ならば、生理学的に許容され得るビヒクルと組み合わせて、請求項１１記載のデンプン顆粒を含有し、該顆粒が、請求項８〜１０のいずれか一項に定義されたとおりの１種類以上の融合ポリペプチドを含み、該融合ポリペプチド中の目的のペプチドが、定義された治療効果を保有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項１３】  非経口的に、特に静脈内に投与できる形態をなすか、または経口的に投与できる形態をなし、デンプン顆粒の直径が、約０．１〜数１０μmであり、これらの顆粒中の融合ポリペプチドの重量割合が、約０．１〜１％であることを特徴とする、請求項１２記載の医薬組成物。
【請求項１４】  必要ならば、生理学的に許容され得る担体と組み合わせて、請求項８〜１０のいずれか一項に定義されたとおりの１種類以上の融合ポリペプチドを含有し、該融合ポリペプチド中の目的のペプチドが、定義された治療効果を保有することを特徴とする、医薬組成物。
【請求項１５】  請求項１１記載のデンプン顆粒を含有し、該顆粒が、請求項８〜１０のいずれか一項に定義されたとおりの１種類以上の融合ポリペプチドを含有し、該融合ポリペプチド中の目的のペプチドが、食品加工の分野で使用可能であることを特徴とする、食品組成物。
【請求項１６】  請求項１１記載のデンプン顆粒を製造する方法であって、下記の工程：
−請求項１〜５のいずれか一項に記載の組換えヌクレオチド配列を含む組換えベクター、特にプラスミド、コスミドまたはファージ型のそれによって形質転換された、細胞性宿主、たとえばアグロバクテリウム・ツメファシエンス（Agrobacterium tumefaciens）による植物細胞の形質転換、
−そのゲノムが、請求項１〜５のいずれか一項に記載の１種類以上のヌクレオチド配列を有するようにして、上記の形質転換された宿主細胞のin vitroでの培養によって、形質転換された植物、藻類または微藻類を得ること、
−必要ならば、先行工程で得られた植物の種子の受精および回収、ならびにこれらの種子を栽培して、次世代の植物を得ること、
−植物、藻類または微藻類からか、またはその部分、特に花、果実、葉、茎、根、またはこれらの上記の形質転換された植物、藻類もしくは微藻類のフラグメントからの、特に沈降によるデンプン顆粒の抽出
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１７】  請求項８〜１０のいずれか一項に記載の融合ポリペプチドを製造する方法であって、請求項１６記載の方法の実施を包含し、該方法が、デンプン顆粒からの融合ポリペプチドの回収、および必要ならば精製の追加的工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項１８】  目的のペプチドを製造する方法であって、請求項１６または１７に記載の方法の実施を包含し、該方法が、請求項５記載のヌクレオチド配列による宿主細胞の形質転換によって実施され、得られた融合ポリペプチドの適当な試薬による切断の追加的工程、次いで必要ならば、目的のペプチドの精製の工程を包含することを特徴とする方法。
【請求項１９】  デンプン顆粒を生体形質転換する方法であって、下記の工程：すなわち
−デンプンを形質転換することができる酵素をコードしている請求項４記載の組換えヌクレオチド配列を含む組換えベクター、特にプラスミド、コスミドまたはファージ型のそれによって形質転換された、細胞性宿主、たとえばアグロバクテリウム・ツメファシエンスによる植物細胞の形質転換、
−そのゲノムが、上記の１種類以上のヌクレオチド配列を有するようにして、上記の形質転換された宿主細胞のin vitroでの培養によって、形質転換された植物、藻類または微藻類を得ること、
−必要ならば、先行工程で得られた植物の種子の受精および回収、ならびにこれらの種子を栽培して、次世代の植物を得ること、
−植物、藻類または微藻類からか、またはその部分、特に花、実、葉、茎、根、またはこれらの上記の形質転換された植物、藻類もしくは微藻類のフラグメントからの、特に沈降によるデンプン顆粒の抽出、
必要ならば、該デンプン顆粒を、融合ポリペプチドの目的のペプチドが活性になり得る温度まで加熱すること
を含むことを特徴とする方法。