【手続補正書】
【提出日】平成18年11月22日(2006.11.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  以下を含む、キメラのネズミ科動物宿主にヒトC型肝炎ウイルス（HCV）を接種することにより得られた、HCVが感染したキメラのネズミ科動物(murine)宿主：
機能的に同系のBリンパ球およびTリンパ球を欠く免疫不全のネズミ科動物宿主；
宿主ネズミ科動物肝臓細胞においてウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーターのポリペプチドの発現を提供する、ゲノムに組み込まれた導入遺伝子；および
ネズミ科動物宿主肝臓に移植されたヒト肝細胞を含むキメラ肝。
【請求項２】  ヒト肝細胞がキメラ肝の少なくとも約20%の肝細胞を構成する、請求項1記載のキメラのネズミ科動物宿主。
【請求項３】  ヒト肝細胞が少なくとも約15週間機能する、請求項1記載のキメラのネズミ科動物宿主。
【請求項４】  ヒトC型肝炎ウイルスに感染する、請求項1記載のキメラのネズミ科動物宿主。
【請求項５】  感染宿主が血清1 mLあたり少なくとも約103個のウイルス粒子を産生することを特徴とする、請求項4記載のキメラのネズミ科動物宿主。
【請求項６】  感染宿主が一貫して検出可能なHCV感染を少なくとも15週間にわたって維持する、請求項4記載のキメラのネズミ科動物宿主。
【請求項７】  導入遺伝子についてホモ接合である、請求項1記載のキメラのネズミ科動物宿主。
【請求項８】  導入遺伝子が、ネズミ科動物ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーターに機能的に連結されたネズミ科動物アルブミンプロモーターをコードするヌクレオチド配列を含む、請求項1記載のキメラのネズミ科動物宿主。
【請求項９】  Bリンパ球およびTリンパ球の欠如が、免疫グロブリン遺伝子およびT細胞受容体遺伝子の再編成における遺伝的欠損の結果である、請求項1記載のキメラのネズミ科動物宿主。
【請求項１０】  宿主の免疫不全がscid変異によって引き起される、請求項1記載のキメラのネズミ科動物宿主。
【請求項１１】  以下の段階を含む、ヒト-ネズミ科動物のキメラ肝を含み、ヒトHCV感染を有する、ヒトC型肝炎ウイルス（HCV）が感染したキメラのネズミ科動物宿主を作製する方法：
免疫無防備状態のトランスジェニックのネズミ科動物宿主に、ヒト肝細胞を移植する段階であって、該ネズミ科動物宿主が免疫グロブリン遺伝子およびT細胞受容体遺伝子の再編成における遺伝的欠損の結果として機能的に同系のBリンパ球およびTリンパ球を欠くために免疫不全であって、かつ該ネズミ科動物宿主が、ゲノムに組み込まれた、宿主ネズミ科動物肝臓細胞においてウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーターのポリペプチドの発現をもたらす導入遺伝子についてホモ接合である、段階；および
ヒトHCVを宿主に接種する段階。
【請求項１２】  請求項11記載の方法で作製されるキメラのネズミ科動物宿主。
【請求項１３】  以下の段階を含む、ヒトC型肝炎ウイルス（HCV）を培養する方法：
ヒトHCVを請求項1または12に記載のキメラのネズミ科動物宿主に投与する段階；および
宿主内でヒトHCVの複製が起こる十分な期間をおいた後にヒトHCVを感染宿主から単離する段階。
【請求項１４】  以下の段階を含む、向肝性病原体に対する活性について候補薬剤をスクリーニングする方法：
請求項1または12に記載のキメラのネズミ科動物宿主に候補薬剤を投与する段階、および
候補薬剤がHCV感染に及ぼす作用を分析する段階であって、未投与のキメラのネズミ科動物宿主に対する、または候補薬剤投与前のキメラのネズミ科動物宿主における感染量に対するヒトHCVの感染量の低下が、該薬剤の抗HCV活性を意味する段階。
【請求項１５】  候補薬剤をヒトHCVの感染前に投与する、請求項14記載の方法。
【請求項１６】  キメラ宿主が再構成された免疫系をさらに含み、候補薬剤が能動免疫療法に用いる候補ワクチンである、請求項15記載の方法。
【請求項１７】  免疫療法用の薬剤が抗HCV抗体またはそのHCV結合性断片である、請求項15記載の方法。
【請求項１８】  キメラ宿主が再構成された免疫系をさらに含み、候補薬剤が治療用ワクチン接種用の候補ワクチンである、請求項14記載の方法。
【請求項１９】  キメラ宿主が再構成された免疫系をさらに含み、候補薬剤が免疫療法用の薬剤である、請求項14記載の方法。
【請求項２０】  以下の段階を含む、血中脂質の低下を達成する活性について候補薬剤をスクリーニングする方法：
請求項1または12に記載のキメラのネズミ科動物宿主に候補薬剤を投与する段階；および
候補薬剤が血清中のapoB100リポタンパク質に及ぼす作用を分析する段階であって、候補薬剤投与前のapoB100値に対して、候補薬剤投与後のapoB100値の低下の検出が、候補薬剤が血中脂質の低下に活性をもつことを意味する段階。
【請求項２１】  以下の段階を含む、薬剤による肝毒性を評価する方法：
キメラの免疫不全のトランスジェニックのネズミ科動物宿主に候補薬剤を投与する段階であって、宿主が（a）機能的に同系のBリンパ球およびTリンパ球を欠く宿主、（b）ゲノムに組み込まれた、宿主ネズミ科動物肝臓細胞においてウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーターのポリペプチドの発現をもたらす導入遺伝子を有する宿主、および（c）宿主の肝臓に移植されたヒト肝細胞を有する宿主である段階；および
候補薬剤が、肝機能または肝臓の組織学的所見に及ぼす作用を分析する段階であって、未投与のキメラのネズミ科動物宿主に対して、または候補薬剤投与前の肝機能もしくは組織学的所見に対して、投与を行った宿主における肝機能の低下もしくは肝臓の組織病理学的所見の有害な変化が、対象薬剤が該肝臓細胞に毒性をもつことを示す段階。
【請求項２２】  以下を含む、キメラのトランスジェニックマウス：
ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーターのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むゲノムを有する免疫不全のトランスジェニックマウスであって、ポリペプチドが宿主マウス肝臓細胞において発現するようにポリヌクレオチドがプロモーターに機能的に連結され、かつ該宿主がポリヌクレオチドについてホモ接合である免疫不全のトランスジェニックマウス；および
マウス宿主肝臓に移植されたヒト肝細胞を含むキメラ肝であって、ヒト肝細胞が該キメラ肝の少なくとも約20%の肝細胞を構成するキメラ肝。
【請求項２３】  ヒト肝細胞がキメラ肝の少なくとも約50%の肝細胞を構成する、請求項22記載のキメラのマウス宿主。
【請求項２４】  ヒト肝細胞がキメラ肝の少なくとも約40%〜約60%の肝細胞を構成する、請求項22記載のキメラのマウス宿主。
【請求項２５】  ヒト肝細胞がキメラ肝の少なくとも約90%の肝細胞を構成する、請求項22記載のキメラのマウス宿主。
【請求項２６】  ヒト肝細胞が少なくとも約8週間機能する、請求項22記載のキメラのマウス宿主。
【請求項２７】  ヒト肝細胞が少なくとも約15週間機能する、請求項22記載のキメラのマウス宿主。
【請求項２８】  プロモーターがマウスアルブミンプロモーターである、請求項22記載のキメラのマウス宿主。
【請求項２９】  宿主の免疫不全がscid変異によって引き起される、請求項22記載のキメラのマウス宿主。
【請求項３０】  宿主がベージュ変異をさらに含む、請求項28記載のキメラのマウス宿主。
【請求項３１】  以下の段階を含む、薬剤による肝毒性を評価する方法：
ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーターのポリペプチドをコードし、ポリペプチドがマウス肝臓細胞において発現するようにプロモーターに機能的に連結されるポリヌクレオチドを含む導入遺伝子を含むゲノムを有するキメラのトランスジェニック免疫不全マウスに候補薬剤を投与する段階であって、マウスが導入遺伝子についてホモ接合であり、かつこのマウスがヒト肝細胞を含むキメラ肝をさらに含み、ヒト肝細胞がキメラ肝の少なくとも約20%の肝細胞を構成する段階；および
候補薬剤がヒトの肝機能またはヒトの肝臓の組織学的所見に及ぼす作用を分析する段階であって、薬剤の非存在下に対する、薬剤の存在下における肝機能の低下または肝臓の組織病理学的所見の有害な変化が、薬剤がヒト肝臓細胞に毒性をもつことを示す段階。
【請求項３２】  ヒト肝細胞がキメラ肝の少なくとも約20%の肝細胞を構成する、請求項31記載の方法。
【請求項３３】  ヒト肝細胞がキメラ肝の少なくとも約50%の肝細胞を構成する、請求項31記載の方法。
【請求項３４】  ヒト肝細胞がキメラ肝の少なくとも約40%〜約60%の肝細胞を構成する、請求項31記載の方法。
【請求項３５】  ヒト肝細胞がキメラ肝の少なくとも約90%の肝細胞を構成する、請求項31記載の方法。
【請求項３６】  マウスへの移植後、ヒト肝細胞が少なくとも約8週間機能する、請求項31記載の方法。
【請求項３７】  マウスへの移植後、ヒト肝細胞が少なくとも約15週間機能する、請求項31記載の方法。
【請求項３８】  導入遺伝子が、ネズミ科動物ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーターに機能的に連結されたネズミ科動物アルブミンプロモーターをコードするヌクレオチド配列を含む、請求項31記載の方法。
【請求項３９】  トランスジェニック免疫不全マウスの免疫不全がscid変異によって引き起される、請求項31記載の方法。
【請求項４０】  分析する段階が、候補薬剤がヒトの肝機能に及ぼす作用を分析することを含む、請求項31記載の方法。
【請求項４１】  分析する段階が、候補薬剤がヒトの肝臓の組織学的所見に及ぼす作用を分析することを含む、請求項31記載の方法。
【請求項４２】  ヒトの肝機能が、α-1アンチトリプシンの量を評価することにより分析される、請求項40記載の方法。