【手続補正書】
【提出日】平成19年10月9日(2007.10.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルスによって不死化された肝細胞であって、
（ａ）正常肝臓細胞に由来し、
（ｂ）非腫瘍形成性であり、且つ
（ｃ）内因性治療用血漿タンパク質（ＴＰＰ）を自然に産生する
肝細胞。
【請求項２】
ヒト肝臓細胞に由来する、請求項１に記載の肝細胞。
【請求項３】
凍結保存された初代ヒト肝細胞に由来する、請求項１に記載の肝細胞。
【請求項４】
実質上純粋なシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）のＤＮＡを含む、請求項１に記載の肝細胞。
【請求項５】
前記ＤＮＡが野生型ＳＶ４０ラージＴ抗原及びスモールｔ抗原（ＴＡｇ）をコードしている、請求項４に記載の肝細胞。
【請求項６】
前記ＳＶ４０  ＴＡｇが癌抑制因子と相互作用する、請求項５に記載の肝細胞。
【請求項７】
前記癌抑制因子がヒトＲｂ及びヒトｐ５３からなる群から選択される、遺伝子を含む、請求項６に記載の肝細胞。
【請求項８】
無血清培地中で維持することができる、請求項１に記載の肝細胞。
【請求項９】
前記無血清培地が、ＭＣＴ社製無血清培地である、請求項８に記載の肝細胞。
【請求項１０】
前記ＭＣＴ社製無血清培地が、ＭＦＥ（Ｍｕｌｔｉ−Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ多機能増強）培地である、請求項９に記載の肝細胞。
【請求項１１】
肝機能を保持する、請求項１に記載の肝細胞。
【請求項１２】
前記肝機能が、肝酵素活性を発現し続ける能力である、請求項１１に記載の肝細胞。
【請求項１３】
前記肝酵素活性がチトクロムＰ４５０（ＣＹＰ）酵素活性である、請求項１２に記載の肝細胞。
【請求項１４】
前記肝細胞の前記肝酵素活性を使用して肝臓に対する化合物の作用を評価する、請求項１２に記載の肝細胞。
【請求項１５】
前記肝細胞の前記肝酵素活性を使用して肝臓に対する薬物候補の作用を評価する、請求項１４に記載の肝細胞。
【請求項１６】
前記肝細胞の前記肝酵素活性を使用して酵素誘導を評価する、請求項１２に記載の肝細胞。
【請求項１７】
前記肝細胞の前記肝酵素活性を使用して細胞毒性を評価する、請求項１３に記載の肝細胞。
【請求項１８】
前記肝細胞の前記肝酵素活性を使用して化合物に対する肝臓の作用を評価する、請求項１２に記載の肝細胞。
【請求項１９】
前記肝細胞を使用して薬物代謝を評価する、請求項１２に記載の肝細胞。
【請求項２０】
前記肝細胞を使用して種間比較を評価する、請求項１２に記載の肝細胞。
【請求項２１】
前記肝機能が、アセトアミノフェン抱合物を形成する能力である、請求項１１に記載の肝細胞。
【請求項２２】
前記ＴＰＰが、アルブミン、α１アンチトリプシン、血液凝固因子、トランスフェリン、及びインターαタンパク質性インヒビター（ＩαＩＰ）からなる群から選択される、請求項１に記載の肝細胞。
【請求項２３】
前記ＴＰＰが、少なくとも有効な量のアルブミンからなる、請求項２２に記載の肝細胞。
【請求項２４】
前記ＴＰＰが、少なくとも有効な量のα１アンチトリプシンからなる、請求項２２に記載の肝細胞。
【請求項２５】
前記ＴＰＰが、少なくとも有効な量の血液凝固因子からなる、請求項２２に記載の肝細胞。
【請求項２６】
前記血液凝固因子が第ＶＩＩＩ因子又は第ＩＸ因子である、請求項２５に記載の肝細胞。
【請求項２７】
前記ＴＰＰが、有効な量のトランスフェリンからなる、請求項２２に記載の肝細胞。
【請求項２８】
前記ＴＰＰが、少なくとも有効な量のインターαタンパク質性インヒビター（ＩαＩＰ）からなる、請求項２２に記載の肝細胞。
【請求項２９】
前記肝細胞を使用して、
（１）化学的、物理的、及びウイルス性の作用物質、並びに癌遺伝子、及び腫瘍からの高分子量ゲノムＤＮＡを含めた導入遺伝子による悪性転換の研究、
（２）潜在的な化学療法剤をスクリーニングするための、癌遺伝子の導入によって改変された細胞の使用、
（３）細胞増殖と外因性因子の作用と相互に関係付けた、細胞内のｐＨ及びカルシウムレベルからなる群から選択される変化の測定を含む細胞生化学の研究、
（４）増殖因子に対する細胞応答及び増殖因子の産生の研究、
（５）細胞内情報伝達の研究、
（６）細胞表面抗原の特徴付け、
（７）癌抑制活性を同定するための細胞間雑種の研究、
（８）新規遺伝子の同定、
（９）肝炎ウイルス及び他の肝臓親和性のウイルスからなる群から選択される複製ウイルスの増殖であって、該肝炎ウイルスは、ＨＡＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ及び非Ａ非Ｂ型からなる群から選択され、他の肝臓親和性のウイルスはＣＭＶである、該ウイルスの増殖、
（１０）Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染を治療するための新たな薬物の同定、
（１１）移植の、また体外の肝移植片及び肝機能補助装置のための細胞の増殖、
（１２）肝臓寄生虫の研究、
（１３）肝疾患の研究、
（１４）潜在的治療用薬物の同定、
（１５）新たな薬物標的の同定、
（１６）最終分化を誘導する生物学的薬剤及び化学的薬剤の同定、
（１７）発癌物質及び他の生体異物の代謝の研究、
（１８）ＤＮＡ変異誘発の研究、
（１９）染色体損傷作用物質の研究、
（２０）薬物、化合物、発癌物質、及び生体異物の細胞毒性の研究、
（２１）肝細胞由来のタンパク質の産生、並びに
（２２）対象のタンパク質を産生するための組換えＤＮＡ発現ベクターの使用
からなる群から選択される手順を実施するために使用することができる、請求項１に記載の肝細胞。
【請求項３０】
Ｆａ２Ｎ−４（ＡＴＣＣ受託番号５５６６）である、請求項１に記載の肝細胞。
【請求項３１】
Ｅａ１Ｃ−３５（ＡＴＣＣ受託番号５５６５）である、請求項１に記載の肝細胞。
【請求項３２】
肝臓に対する化合物の作用、酵素誘導、細胞毒性及び化合物に対する肝臓の作用からなる群から選択される、代謝作用を評価するために、請求項１に記載の不死化肝細胞を使用する方法。
【請求項３３】
前記代謝作用が肝臓に対する化合物の作用であり、前記化合物が薬物候補である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記肝細胞が肝機能を保持する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記肝機能が肝酵素活性を発現する能力を含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記肝酵素活性がチトクロムＰ４５０（ＣＹＰ）酵素活性を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記不死化肝細胞が、Ｅａ１Ｃ−３５細胞系（ＡＴＣＣ受託番号５５６５）及びＦａ２Ｎ−４細胞系（ＡＴＣＣ受託番号５５６６）からなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記代謝作用が化合物に対する肝臓の作用であり、前記化合物に対する肝臓の作用が薬物代謝を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３９】
前記薬物代謝をアセトアミノフェン抱合物の形成によって測定する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
（１）化学的、物理的、且つウイルス性の作用物質、並びに癌遺伝子、及び腫瘍からの高分子量ゲノムＤＮＡを含めた導入遺伝子による悪性転換の研究、
（２）潜在的な化学療法剤をスクリーニングするための、癌遺伝子の導入によって改変された細胞の使用、
（３）細胞増殖と外因性因子の作用と相互に関係付けた、細胞内のｐＨ及びカルシウムレベルからなる群から選択される変化の測定を含む細胞生化学の研究、
（４）増殖因子に対する細胞応答及び増殖因子の産生の研究、
（５）細胞内情報伝達の研究、
（６）細胞表面抗原の特徴付け、
（７）癌抑制活性を同定するための細胞間雑種の研究、
（８）新規遺伝子の同定、
（９）肝炎ウイルス及び他の肝臓親和性のウイルスからなる群から選択される、複製ウイルスの増殖であって、該肝炎ウイルスは、ＨＡＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ及び非Ａ非Ｂ型からなる群から選択され、該他の肝臓親和性のウイルスがＣＭＶである、該ウイルスの増殖、
（１０）Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染を治療するための新たな薬物の同定、
（１１）移植の、また体外の肝移植片及び肝機能補助装置のための細胞の増殖、
（１２）肝臓寄生虫の研究、
（１３）肝疾患の研究、
（１４）潜在的治療用薬物の同定、
（１５）新たな薬物標的の同定、
（１６）最終分化を誘導する生物学的薬剤及び化学的薬剤の同定、
（１７）発癌物質及び他の生体異物の代謝の研究、
（１８）ＤＮＡ変異誘発の研究、
（１９）染色体損傷作用物質の研究、
（２０）薬物、化合物、発癌物質、及び生体異物の細胞毒性の研究、
（２１）肝細胞由来のタンパク質の産生、並びに
（２２）対象のタンパク質を産生するための組換えＤＮＡ発現ベクターの使用
からなる群から選択される手順を実施するために、請求項１に記載の不死化肝細胞を使用する方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７１】
（５）染色体損傷作用物質の研究：ＤＮＡ又は染色体の損傷を引き起こすことが既知の、又は疑わしい物質を、こうした細胞系の培地に添加することができ、次いで、姉妹染色分体交換の頻度の測定など、当技術分野で周知の技法により染色体損傷の程度を測定することができる（Ｌａｔｔら、Ｉｎ：Ｔｉｃｅ，Ｒ．Ｒ．ａｎｄ  Ｈｏｌｌａｅｎｄｅｒ，Ａ．，Ｓｉｓｔｅｒ  Ｃｈｒｏｍａｔｉｄ  Ｅｘｃｈａｎｇｅｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ，１１  ｆｆ．（１９８４））。姉妹染色分体を識別する方法は多数あるが、簡単な技法がほんのいくつかあればほとんどの研究に間に合う。代表的な技法である、ヘキスト（Ｈｏｅｃｈｓｔ）３３２５８による蛍光（Ｓ．Ａ．Ｌａｔｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７０：３３９５（１９７３）；Ｓ．Ａ．Ｌａｔｔら、Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．２５：９１３（１９７７））を使用する技法、或いはヘキスト３３２５８を使用し、続いて順次、照射、ＳＳＣでのインキュベート、及びギムザ染色（出典Ｐ．Ｐｅｒｒｙ及びＳ．Ｗｏｌｆｆ、Ｎａｔｕｒｅ  ２６１：１５６（１９７４）；Ｓ．Ｗｏｌｆｆ（１９８１）、「哺乳動物における姉妹染色分体交換の測定（Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｉｓｔｅｒ  ｃｈｒｏｍａｔｉｄ  ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ）」，Ｉｎ  ＤＮＡ  Ｒｅｐａｉｒ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ，Ｖｏｌ．１，Ｐａｒｔ  Ｂ（Ｅ．Ｃ．Ｆｒｉｅｄｂｅｒｇ及びＰ．Ｃ．Ｈａｎａｗａｌｔ編），Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎ．Ｙ．）を行う技法は、使用することができるこのような技法のほんの２つの例である。