【手続補正書】
【提出日】平成19年1月19日(2007.1.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水性キャリア液体および気体と接触させると、主にリン脂質により安定化されている気体封入型微小気泡の懸濁剤に再構成される凍結乾燥マトリックスを製造する方法であって、以下：
ａ）ｉ）水を含む水性媒体、ii）実質的に水と不混和性の有機溶媒、iii）50重量％以上のリン脂質を含有する両親媒性物質の乳化組成物、およびiv）溶解保護剤を含有する水相−有機相乳液を製造すること、
ｂ）この乳化した混合物を凍結乾燥して、リン脂質を含有する凍結乾燥マトリックスを得ることを含む方法。
【請求項２】
主にリン脂質で安定化した気体封入型微小気泡の液体水性懸濁液を含有する注射用造影剤を製造する方法であって、以下：
ａ）ｉ）水を含む水性媒体、ii）実質的に水と不混和性の有機溶媒、iii）50重量％以上のリン脂質を含有する両親媒性物質の乳化組成物、およびiv）溶解保護剤を含有する水相−有機相乳液を製造すること、
ｂ）この乳液を凍結乾燥して、リン脂質を含有する凍結乾燥マトリックスを得ること、
ｃ）この凍結乾燥マトリックスを生体適合性気体と接触させること、
ｄ）生理学的に許容される水性キャリア液体に溶解することにより、この凍結乾燥マトリックスを再構成し、主にリン脂質で安定化している気体封入型微小気泡の懸濁液を得ることを含む方法。
【請求項３】
該工程ａ）の乳液の製造が以下：
ａ１）乳化組成物および溶解保護剤を水性媒体に分散させることにより懸濁液を製造すること、
ａ２）得られた懸濁液を有機溶媒と混合すること、
ａ３）混合物を制御した攪拌に供して乳液を得ることを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
該有機溶媒が水に10g／l未満の溶解性を有する、請求項１〜３のいずれか1項に記載の方法。
【請求項５】
該有機溶媒が水に1.0g／l未満の溶解性を有する、請求項１〜４のいずれか1項に記載の方法。
【請求項６】
該有機溶媒が水に0.2g／l未満の溶解性を有する、請求項１〜５のいずれか1項に記載の方法。
【請求項７】
該有機溶媒が水に0.01g／l未満の溶解性を有する、請求項１〜６のいずれか1項に記載の方法。
【請求項８】
該有機溶媒が水に0.001g／l未満の溶解性を有する、請求項１〜７のいずれか1項に記載の方法。
【請求項９】
該有機溶媒が分枝または線状アルカン、アルケン、シクロアルカン、芳香族炭化水素、アルキルエーテル、ケトン、ハロゲン化炭化水素、過フルオロ化炭化水素またはこれらの混合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
該溶媒がペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、デカン、1-ペンテン、2-ペンテン、1-オクテン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロオクタン、1-メチル-シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、エチルベンゼン、1,2-ジメチルベンゼン、1,3-ジメチルベンゼン、ジブチルエーテルおよびジイソプロピルケトン、クロロホルム、四塩化炭素、2-クロロ-1-(ジフルオロメトキシ)-1,1,2-トリフルオロエタン（エンフルラン）、2-クロロ-2-（ジフルオロメトキシ）-1,1,1-トリフルオロエタン（イソフルラン）、テトラクロロ-1,1-ジフルオロエタン、ペルフルオロペンタン、ペルフルオロヘキサン、ペルフルオロヘプタン、ペルフルオロノナン、ペルフルオロベンゼン、ペルフルオロデカリン、メチルペルフルオロブチルエーテル、メチルペルフルオロイソブチルエーテル、エチルペルフルオロブチルエーテル、エチルペルフルオロイソブチルエーテルならびにこれらの混合物から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
有機溶媒の量が、水全体に対して約１容量％〜約５０容量％である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
溶解保護薬が炭水化物、糖アルコール、ポリグリコールおよびそれらの混合物から選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
溶解保護薬がグルコース、ガラクトース、フルクトース、スクロース、トレハロース、マルトース、ラクトース、アミロース、アミロペクチン、シクロデキストリン、デキストラン、イヌリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、エリトリトール、マンニトール、ソルビトール、ポリエチレングリコールおよびこれらの混合物から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
溶解保護薬の量が水の重量に対して約１重量％〜約２５重量％である、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
リン脂質がジラウロイル-ホスファチジルコリン (DLPC)、ジミリストイル-ホスファチジルコリン (DMPC)、ジパルミトイル-ホスファチジルコリン (DPPC)、ジアラキドイル-ホスファチジルコリン (DAPC)、ジステアロイル-ホスファチジルコリン (DSPC)、ジオレオイル-ホスファチジルコリン (DOPC)、1,2ジステアロイル-sn-グリセロ-3-エチルホスホコリン(エチル-DSPC)、ジペンタデカノイル-ホスファチジルコリン (DPDPC)、1-ミリストイル-2-パルミトイル-ホスファチジルコリン (MPPC)、1-パルミトイル-2-ミリストイル-ホスファチジルコリン(PMPC), 1-パルミトイル-2-ステアロイル-ホスファチジルコリン (PSPC)、1-ステアロイル-2-パルミトイル-ホスファチジルコリン (SPPC)、1-パルミトイル-2-オレイルホスファチジルコリン (POPC)、1-オレイル-2-パルミトイル-ホスファチジルコリン(OPPC)、ジラウロイル−ホスファチジルグリセロール(DLPG)およびそのアルカリ金属塩、ジアラキドイルホスファチジルグリセロール(DAPG)およびそのアルカリ金属塩、ジミリストイルホスファチジルグリセロール(DMPG)およびそのアルカリ金属塩、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール(DPPG)およびそのアルカリ金属塩、ジステアロイルホスファチジルグリセロール(DSPG) およびそのアルカリ金属塩、ジオレイル-ホスファチジルグリセロール(DOPG) およびそのアルカリ金属塩、ジミリストイルホスファチジン酸(DMPA) およびそのアルカリ金属塩、ジパルミトイルホスファチジン酸(DPPA) およびそのアルカリ金属塩、ジステアロイルリン酸(DSPA)、ジアラキドイルホスファチジン酸(DAPA) およびそのアルカリ金属塩、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン(DMPE)、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン(DPPE)、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン(DSPE)、ジオレイルホスファチジルエタノールアミン(DOPE)、ジアラキドイルホスファチジルエタノールアミン(DAPE)、ジリノレイルホスファチジルエタノールアミン(DLPE)、ポリエチレングリコール修飾ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（DMPE-PEG）、ポリエチレングリコール修飾ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（DPPE-PEG）、ポリエチレングリコール修飾ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（DSPE-PEG）、ポリエチレングリコール修飾ジオレイルホスファチジル−エタノールアミン（DOPE-PEG）、ポリエチレングリコール修飾ジアラキドイルホスファチジルエタノールアミン（DAPE-PEG）、ポリエチレングリコール修飾ジリノレイルホスファチジルエタノールアミン（DLPE-PEG）、ジミリストイルホスファチジルセリン(DMPS)、ジアラキドイルホスファチジルセリン(DAPS)、ジパルミトイルホスファチジルセリン(DPPS)、ジステアロイルホスファチジルセリン(DSPS)、ジオレオイルホスファチジルセリン(DOPS)、ジパルミトイルスフィンゴミエリン(DPSP)、ジステアロイルスフィンゴミエリン(DSSP)ならびにこれらの混合物から選択される請求項１、２または３のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
両親媒性物質の乳化組成物が全体として正味荷電を有するリン脂質または両親媒性物質を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
リン脂質の量が乳化混合物の総重量に対して約0.005重量％〜約1.0重量％である、請求項１、２、３または１３に記載の方法。
【請求項１８】
リン脂質の量が乳化混合物の総重量に対して約0.01重量％〜約1.0重量％である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
リン脂質が、標的リガンドまたは標的リガンドと反応し得る反応性保護基を含む、請求項１、２または３に記載の方法。
【請求項２０】
乳液が、リゾ脂質；脂肪酸およびアルカリまたはアルカリ金属との塩；ポリマー保有脂質；スルホン酸化単糖、二糖、オリゴ糖または多糖類保有脂質；エーテルまたはエステル結合型脂肪酸を有する脂質；重合体化脂質；ジアセチルホスフェート；ジセチルホスフェート；ステアリルアミン；セラミド；ポリオキシエチレン脂肪酸エステル；ポリオキシエチレン脂肪アルコール；ポリオキシエチレン脂肪アルコールエーテル；ポリオキシエチル化ソルビタン脂肪酸エステル；グリセロールポリエチレングリコールリシノレエート；エトキシ化大豆ステロール；エトキシ化ヒマシ油；エチレンオキシド(EO) およびプロピレンオキシド(PO)ブロックコポリマー；糖酸のステロールエステル；糖の脂肪族酸とのエステル；グリセロールの(C12-C24)ジカルボン酸脂肪酸およびアルカリまたはアルカリ金属塩とのそれらの個々の塩のエステル；サポニン；長鎖(Cl2-C24)アルコール；6-(5-コレステン-3β-イルオキシ)-1-チオ-β-D-ガラクトピラノシド；ジガラクトシルジグリセリド；6-(5-コレステン-3β-イルオキシ)ヘキシル-6-アミノ-6-デオキシ-1-チオ-β-D-ガラクトピラノシド；6-(5-コレステン-3β-イルオキシ)ヘキシル-6-アミノ-6-デオキシ-1-チオ-β-D-マンノピラノシド；12-(((7’-ジエチルアミノクマリン-3-イル)カルボニル)メチルアミノ)オクタデカン酸；N-[12-(((7’-ジエチルアミノクマリン-3-イル)カルボニル)メチルアミノ)オクタデカノイル]-2-アミノパルミチン酸；N-スクシニル-ジオレイルホスファチジルエタノールアミン；1-ヘキサデシル-2-パルミトイルグリセロホスホエタノールアミン；パルミトイルホモシステイン；少なくとも１個の(C10-C20)アルキル鎖を含むアルキルアンモニウム塩；（C3-C6）アルキレン架橋を介してＮ原子に連結されている少なくとも１個の(C10-C20)アシル鎖を含む３級または４級アンモニウム塩、ならびにこれらの混合物または組合せから選択される両親媒性物質をさらに含有する、請求項１、２、３、１５または１６のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
工程ａ）の水相−有機相乳液を凍結乾燥工程ｂ）の前に洗浄工程にかける、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２２】
工程ａ）の水相−有機相乳液を凍結乾燥工程ｂ）の前に精密ろ過にかける、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２３】
凍結乾燥工程ｂ）の前に両親媒性化合物をさらに含有する水性懸濁液を工程ａ）から得られた水相−有機相乳液に加え、さらに両親媒性化合物を含有する第２の水相−有機相乳液を得ることを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２４】
水性懸濁液の混合物および水相−有機相乳液の混合物を加熱することをさらに含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
混合物を約40℃〜約80℃の温度で加熱する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
両親媒性化合物がPEG修飾型リン脂質、反応性部分保有PEG修飾型リン脂質または標的化リガンド保有PEG修飾型リン脂質である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
凍結乾燥工程ｂ）の前に、水相−有機相乳液を制御した加熱にかけることをさらに含む、請求項１、２または２３に記載の方法。
【請求項２８】
約60℃〜125℃の温度で制御した加熱が行われる、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
約80℃〜120℃の温度で制御した加熱が行われる、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
乳液がシールしたバイアルに含まれている、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
生体適合性気体が大気；窒素；酸素；二酸化炭素；水素；亜酸化窒素；不活性ガス；低分子量炭化水素（（C1-C7）アルカン、（C4-C7）シクロアルカン、(C2-C7)アルケンおよび(C2-C7)アルキンを含む）；エーテル；ケトン；エステル；ハロゲン化（C1-C7）炭化水素、ケトンまたはエーテル、または上記の任意の混合物から選択される、請求項２また３に記載の方法。
【請求項３２】
ハロゲン化炭化水素気体がブロモクロロジフルオロメタン、クロロジフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ブロモトリフルオロメタン、クロロトリフルオロメタン、クロロペンタンフルオロエタン、ジクロロテトラフルオロエタンおよびそれらの混合物から選択される請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
ハロゲン化炭化水素気体がペルフルオロ化炭化水素である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
ペルフルオロ化炭化水素気体がペルフルオロメタン、ペルフルオロエタン、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタン、ペルフルオロペンタン、ペルフルオロヘキサン、ペルフルオロヘプタン、ペルフルオロプロペン、ペルフルオロブテン、ペルフルオロブタジエン、ペルフルオロブタ-2-イン、ペルフルオロシクロブタン、ペルフルオロメチルシクロブタン、ペルフルオロジメチルシクロブタン、ペルフルオロトリメチルシクロブタン、ペルフルオロシクロペンタン、ペルフルオロメチルシクロペンタン、ペルフルオロジメチルシクロペンタン、ペルフルオロシクロヘキサン、ペルフルオロメチルシクロヘキサン、ペルフルオロメチルシクロヘキサン、およびそれらの混合物から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
主にリン脂質を含む安定化層を含有する、生体適合性気体を封入した微小気泡の注射用水性懸濁液であって、微小気泡が1.70μm未満の個数平均径（DN）およびDV50/DN比が約2.00以下になるような体積メジアン径 (DV50)を有している、注射用水性懸濁液。
【請求項３６】
微小気泡が1.60μm以下、好ましくは1.50μm以下、より好ましくは1.30μm以下のDN値を有する、請求項３５に記載の水性懸濁液。
【請求項３７】
微小気泡が約1.80以下、好ましくは約1.60以下、より好ましくは約1.50以下のDV50/DN比を有する、請求項３５に記載の水性懸濁液。
【請求項３８】
請求項３５〜３７のいずれか１項に記載の水性懸濁液を含む、画像診断法で用いるための造影剤。