【手続補正書】
【提出日】平成19年9月12日(2007.9.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  不溶性コラーゲン・フィブリルを含むマトリックス物質体を含む組成物であって、該マトリックス物質体内に、
（ａ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された培養脊椎動物細胞の集団と；
（ｂ）複数のマイクロキャリヤーと；
（ｃ）マトリックス物質体中に埋封された固体基質に結合した作用物質であって、血管新生を促進する因子、サイトカイン、増殖因子及びアスコルビン酸から成る群から選択された前記作用物質と
が埋封されている前記組成物。
【請求項２】  固体基質が（ａ）ヘパリン又は（ｂ）ヘパラン硫酸プロテオグリカンを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３】  固体基質がアガロースを、これと結合したヘパリン又はヘパラン硫酸プロテオグリカンと共に含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４】  固体基質がさらにアルギン酸カルシウムを含む、請求項３記載の組成物。
【請求項５】  固体基質がさらにアルギン酸カルシウムを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項６】  固体基質がコラーゲン、ゼラチン、エチレン−酢酸ビニル、ポリラクチド／グリコール酸コポリマー、フィブリン、スクロース八硫酸、デキストラン、ポリエチレングリコール、アルギネート、ポリアクリルアミド、セルロース、ラテックス及びポリヒドロキシエチルメタクリレートから成る群から選択された物質を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項７】  ヘパリン又はヘパラン硫酸プロテオグリカンが基質に結合している、請求項６記載の組成物。
【請求項８】  組成物が、血管新生を促進する因子、サイトカイン及び増殖因子から成る群から選択された第２作用物質を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項９】  固体基質がビーズの形状である、請求項１記載の組成物。
【請求項１０】  固体基質が糸の形状である、請求項１記載の組成物。
【請求項１１】  作用物質が塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）である、請求項１記載の組成物。
【請求項１２】  作用物質が酸性線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦ）、内皮細胞増殖因子、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、内皮細胞刺激血管新生因子（ＥＳＡＦ）、ロイコトリエンＣ4、プロスタグランジン、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、アンギオゲニン、トランスフォーミング増殖因子−α（ＴＧＦ−α）、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）、アスコルビン酸、上皮増殖因子（ＥＧＦ）及びオンコスタチンＭから成る群から選択される、請求項１記載の組成物。
【請求項１３】  作用物質が血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ及びＶＥＧＦ−Ｄから成る群から選択される、請求項１記載の組成物。
【請求項１４】  作用物質がアンギオポイエチン１、２、３又は４である、請求項１記載の組成物。
【請求項１５】  作用物質を分泌する細胞をさらに含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１６】  培養脊椎動物細胞が、脂肪細胞、星状膠細胞、心筋細胞、軟骨細胞、内皮細胞、上皮細胞、線維芽細胞、神経節細胞、腺細胞、グリア細胞、造血細胞、肝細胞、角化細胞、筋原細胞、神経細胞、造骨細胞、膵臓β細胞、腎細胞、平滑筋細胞、横紋筋細胞、及び上記のいずれかの前駆体から成る群から選択される、請求項１記載の組成物。
【請求項１７】  培養脊椎動物細胞がヒト細胞である、請求項１記載の組成物。
【請求項１８】  ポリペプチドが、酵素、ホルモン、サイトカイン、コロニー刺激因子、ワクチン抗原、抗体、凝固因子、調節タンパク質、転写因子、受容体及び構造タンパク質から成る群から選択される、請求項１記載の組成物。
【請求項１９】  ポリペプチドがＶＩＩＩ因子である、請求項１記載の組成物。
【請求項２０】  ポリペプチドがヒト成長ホルモンである、請求項１記載の組成物。
【請求項２１】  ポリペプチドがＩＸ因子である、請求項１記載の組成物。
【請求項２２】  ポリペプチドがエリトロポエチンである、請求項１記載の組成物。
【請求項２３】  ポリペプチドがＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ及びＶＥＧＦ−Ｄから成る群から選択される、請求項１記載の組成物。
【請求項２４】  ポリペプチドがインスリノトロピンである、請求項１記載の組成物。
【請求項２５】  ポリペプチドがα−１アンチトリプシン、カルシトニン、グルコセレブロシダーゼ、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体、ＩＬ−２受容体、グロビン、免疫グロブリン、触媒抗体、インターロイキン、インスリン、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、レプチン、神経成長因子、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、酸性ＦＧＦ（ａＦＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、内皮細胞増殖因子、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子、内皮細胞刺激血管新生因子（ＥＳＡＦ）、アンギオゲニン、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、及び顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）から成る群から選択される、請求項１記載の組成物。
【請求項２６】  マイクロキャリヤーがＩ型コラーゲンのビーズである、請求項１記載の組成物。
【請求項２７】  マイクロキャリヤーが多孔質である、請求項２６記載の組成物。
【請求項２８】  マイクロキャリヤーが多孔質ゼラチンである、請求項１記載の組成物。
【請求項２９】  マイクロキャリヤーの大部分がほぼ球形を有し、約０．１〜約２ｍｍの直径を有する、請求項１記載の組成物。
【請求項３０】  マトリックス物質がさらに、第２型のコラーゲン、アガロース、アルギネート、フィブロネクチン、ラミニン、ヒアルロン酸、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸、硫酸化プロテオグリカン、フィブリン、エラスチン及びテネイシンから成る群から選択された基質を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３１】  マトリックス物質体内に分散された非コラーゲンファイバーをさらに含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３２】  非コラーゲンファイバーがナイロン、ダクロン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリグリコール酸、ポリ乳酸／ポリグリコール酸コポリマー、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、腸線、コットン、リネン、ポリエステル及びシルクから成る群から選択された物質を含む、請求項３１記載の組成物。
【請求項３３】  患者に移植されるように形作られた、請求項１記載の組成物。
【請求項３４】  培養脊椎動物細胞が患者から取り出された１種類以上の細胞に由来する、請求項３３記載の組成物。
【請求項３５】  培養脊椎動物細胞がクローン集団から成る、請求項３４記載の組成物。
【請求項３６】  複数のマイクロキャリヤーの各々が、コラーゲン、ポリスチレン、デキストラン、ポリアクリルアミド、セルロース、アルギン酸カルシウム、ラテックス、ポリスルホン及びガラスから成る群から選択された１種類以上の物質から主として成る、請求項１記載の組成物。
【請求項３７】  培養脊椎動物細胞が線維芽細胞である、請求項１記載の組成物。
【請求項３８】  マイクロキャリヤーがほぼ球形を有する、請求項１記載の組成物。
【請求項３９】  角化細胞をさらに含む、請求項３７記載の組成物。
【請求項４０】  角化細胞と線維芽細胞とが同じ個体から得られる、請求項３９記載の組成物。
【請求項４１】  １つ以上の角化細胞分化因子をさらに含む、請求項３９記載の組成物。
【請求項４２】  角化細胞分化因子が１．５〜２ｍＭの濃度でカルシウムイオンを含む、請求項４１記載の組成物。
【請求項４３】  内皮細胞をさらに含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４４】  内皮細胞をさらに含む、請求項３７記載の組成物。
【請求項４５】  内皮細胞と線維芽細胞とが同じ個体から得られる、請求項４４記載の組成物。
【請求項４６】  ポリペプチドが、インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）、インターフェロン−β（ＩＦＮ−β）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、α−ガラクトシダーゼ、β−グルセラミダーゼ、α−イズロニダーゼ、イズロン酸２−スルファターゼ、グルコサミン−Ｎ−スルファターゼ、α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、アセチル補酵素Ａ：α−グルコサミニド−Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−スルファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、Ｎ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ、及びβ−グルクロニダーゼから成る群から選択される、請求項１記載の組成物。
【請求項４７】  マトリックス物質がさらに、ヘパリン、セルロース、澱粉及びデキストランから成る群から選択された物質を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４８】  （ａ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された複数の培養脊椎動物細胞と；（ｂ）複数のマイクロキャリヤーと；（ｃ）可溶性コラーゲンを含む溶液と；（ｄ）固体基質に結合した作用物質であって、血管新生を促進する因子、サイトカイン、増殖因子及びアスコルビン酸から成る群から選択される前記作用物質とを含む混合物を形成する工程と；
混合物中の可溶性コラーゲンをゲル形成に有効な条件にさらす工程と；
該ゲルを収縮させる培養条件に該ゲルを暴露させて、それによって組成物体を形成する工程とを含む、組成物の製造方法。
【請求項４９】  該溶液が可溶性コラーゲンの酸性水溶液であり、この溶液のｐＨを高めることによって、該ゲル化が達成される、請求項４８記載の方法。
【請求項５０】  収縮工程の前に、該ゲルが型の形状になるように、ゲル化が型の中で行なわれる、請求項４８記載の方法。
【請求項５１】  培養脊椎動物細胞をマイクロキャリヤーの存在下で培養してから、該溶液と混合する、請求項４８記載の方法。
【請求項５２】  移植が患者の皮下部位において行なわれる、請求項３３または３４記載の組成物。
【請求項５３】  移植が、患者の腹腔内、腎臓下嚢、鼠径、筋肉内、脳室内、大網内又はくも膜下部位において行なわれる、請求項３３または３４記載の組成物。
【請求項５４】  ポリペプチドが、創傷治癒を促進するポリペプチドであり、移植が患者の既存創傷部位において行なわれる、請求項３３または３４記載の組成物。
【請求項５５】  約０．１８ｍｍの深さまで該混合物を充填した平底型において、ゲルが形成される、請求項４８記載の方法。
【請求項５６】  請求項５５記載の方法によって製造された組成物。
【請求項５７】  該ゲルが内径（ｒ）を有する平底円筒型において形成され；該混合物が体積（Ｖ）を有し；ｒがｃｍで表現され、Ｖがｍｌで表現されるときに、ｒ2／Ｖが約１．８である、請求項４８記載の方法。
【請求項５８】  （ａ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された複数の培養脊椎動物細胞と；（ｂ）複数のマイクロキャリヤーと；（ｃ）可溶性コラーゲンを含む溶液とを含む混合物を形成する工程と；
混合物中の可溶性コラーゲンをゲル形成に有効な条件にさらす工程と；
該ゲルを収縮させる培養条件に該ゲルを暴露させて、それによって組成物体を形成する工程と；
該ゲルが収縮した後に該組成物体に角化細胞を添加する工程と
を含む、請求項３９記載の組成物の製造方法。
【請求項５９】  不溶性コラーゲン・フィブリルを含むマトリックス物質体を含む組成物であって、該マトリックス物質体中に（ａ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された培養脊椎動物細胞の第１集団と；（ｂ）血管新生を促進する因子と、サイトカインと、増殖因子とから成る群から選択された作用物質を分泌する培養脊椎動物細胞の第２集団と；（ｃ）複数のマイクロキャリヤーとが埋封されている前記組成物。
【請求項６０】  第２集団の培養脊椎動物細胞が作用物質を発現するように遺伝子操作されている、請求項５９記載の組成物。
【請求項６１】  血管新生を促進する因子と、サイトカインと、増殖因子とから成る群から選択された第２作用物質を発現し、分泌する培養脊椎動物の第３集団をさらに含む、請求項５９記載の組成物。
【請求項６２】  患者中に移植されるような形状である、請求項５９記載の組成物。
【請求項６３】  （ａ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された培養脊椎動物細胞の第１集団と；（ｂ）血管新生を促進する因子と、サイトカインと、増殖因子とから成る群から選択された作用物質を発現し、分泌する培養脊椎動物細胞の第２集団と；（ｃ）複数のマイクロキャリヤーと；（ｄ）可溶性コラーゲンを含む溶液とを含む混合物を形成する工程と；
混合物中の可溶性コラーゲンをゲル形成に有効な条件にさらす工程と；
該ゲルを収縮させる培養条件に該ゲルを暴露させて、それによって組成物体を形成する工程と
を含む、請求項５９記載の組成物の製造方法。
【請求項６４】  （ａ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された複数の培養脊椎動物細胞と；（ｂ）複数のマイクロキャリヤーと；（ｃ）可溶性コラーゲンを含む溶液とを含む混合物を形成する工程と；
該混合物中の該可溶性コラーゲンをゲル形成に有効な条件にさらす工程と；
該ゲルを収縮させる培養条件に該ゲルを暴露させて、それによって組成物体を形成する工程であって、約０．１８ｃｍの深さまで混合物が充填された平底型において該ゲルが形成される前記工程と
を含む、組成物の製造方法。
【請求項６５】  請求項６４記載の方法によって製造された組成物。
【請求項６６】  （ａ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された複数の培養脊椎動物細胞と；（ｂ）複数のマイクロキャリヤーと；（ｃ）可溶性コラーゲンを含む溶液とを含む混合物を形成する工程と；
該混合物中の該可溶性コラーゲンをゲル形成に有効な条件にさらす工程と；
該ゲルを収縮させる培養条件に該ゲルを暴露させて、それによって組成物体を形成する工程を含む、組成物の製造方法であって、
該ゲルが内径（ｒ）を有する平底円筒型において形成され；該混合物が体積（Ｖ）を有し；ｒがｃｍで表現され、Ｖがｍｌで表現されるときに、ｒ2／Ｖが約１．８である前記方法。
【請求項６７】  不溶性コラーゲン・フィブリルを含むマトリックス物質体を含む組成物であって、該マトリックス物質体中に（ａ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された複数の培養線維芽細胞と；（ｂ）複数の角化細胞と；（ｃ）複数のマイクロキャリヤーとが埋封されている前記組成物。
【請求項６８】  角化細胞と線維芽細胞とが同じ個体から得られる、請求項６７記載の組成物。
【請求項６９】  （ａ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された複数の培養線維芽細胞と；（ｂ）複数の角化細胞と；（ｃ）複数のマイクロキャリヤーと；（ｄ）可溶性コラーゲンを含む溶液とを含む混合物を形成する工程と；
該混合物中の該可溶性コラーゲンをゲル形成に有効な条件にさらす工程と；
該ゲルを収縮させる培養条件に該ゲルを暴露させて、それによって組成物体を形成する工程と
を含む、請求項６７記載の組成物の製造方法。
【請求項７０】  不溶性コラーゲン・フィブリルを含むマトリックス物質体を含む組成物であって、該マトリックス物質体中に（ａ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された複数の培養線維芽細胞と；（ｂ）複数の内皮細胞と；（ｃ）複数のマイクロキャリヤーとが埋封されている前記組成物。
【請求項７１】  内皮細胞と線維芽細胞とが同じ個体から得られる、請求項７０記載の組成物。
【請求項７２】  （ａ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された複数の培養脊椎動物細胞と；（ｂ）複数のマイクロキャリヤーと；（ｃ）血管新生を促進する因子とサイトカインと増殖因子とアスコルビン酸とから成る群から選択された少なくとも１種類の作用物質とをコラーゲン水溶液中に懸濁させて含む混合物であって、該少なくとも１種類の作用物質が該コラーゲン溶液中に懸濁した固体基質に結合しており、該混合物を５を超えるｐＨにおいてゲル化させるために充分なコラーゲンが該混合物中に存在する前記混合物。
【請求項７３】  （ａ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された複数の培養脊椎動物細胞と；（ｂ）複数のマイクロキャリヤーと；（ｃ）血管新生を促進する因子とサイトカインと増殖因子とアスコルビン酸とから成る群から選択された少なくとも１種類の作用物質と；（ｄ）可溶性コラーゲンを含む溶液とを一緒にすることを含む、混合物の製造方法であって、該混合物を５を超えるｐＨにおいてゲル化させるために充分なコラーゲンが該混合物中に存在する前記方法。
【請求項７４】  （ａ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された培養脊椎動物細胞の第１集団と、（ｂ）血管新生を促進する因子とサイトカインと増殖因子とから成る群から選択された作用物質を分泌する培養脊椎動物細胞の第２集団と、（ｃ）複数のマイクロキャリヤーとをコラーゲン水溶液中に懸濁させて含む混合物であって、該混合物を５を超えるｐＨにおいてゲル化させるために充分なコラーゲンが該混合物中に存在する前記混合物。
【請求項７５】  （ａ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された培養脊椎動物細胞の第１集団と；（ｂ）血管新生を促進する因子と、サイトカインと、増殖因子とから成る群から選択された作用物質を発現し、分泌する培養脊椎動物細胞の第２集団と；（ｃ）複数のマイクロキャリヤーと；（ｄ）可溶性コラーゲンを含む溶液とを一緒にすることを含む、請求項７４記載の混合物の製造方法であって、該混合物を５を超えるｐＨにおいてゲル化させるために充分なコラーゲンが該混合物中に存在する前記方法。
【請求項７６】  該作用物質に結合する物質を含む固体基質を該混合物中に含めることをさらに含む、請求項７５記載の方法。
【請求項７７】  （ａ）（ｉ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された培養脊椎動物細胞の集団と、（ｉｉ）複数のマイクロキャリヤーとを含む第１容器と；（ｂ）コラーゲン溶液を含む第２容器と；（ｃ）培地を含む第３容器とを含有する輸送用コンテナを含むキット。
【請求項７８】  該コラーゲン溶液が酸性ｐＨであり、該培地がアルカリ性ｐＨである、請求項７７記載のキット。
【請求項７９】  該コラーゲン溶液が８℃未満の温度である、請求項７７記載のキット。
【請求項８０】  請求項７７記載のキットを用いて混合物を製造する方法であって、
（ａ）第２容器と第３容器との中身を一緒にして、希薄なコラーゲン溶液を形成する工程と；
（ｂ）該希薄なコラーゲン溶液を第１容器の中身と一緒にして、混合物を形成する工程と
を含む前記方法。
【請求項８１】  （ａ）（ｉ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された培養脊椎動物細胞の集団と、（ｉｉ）複数のマイクロキャリヤーとを含む第１容器と；（ｂ）コラーゲン溶液を含む第２容器とを含有する輸送用コンテナを含むキット。
【請求項８２】  該コラーゲン溶液が酸性ｐＨである、請求項８１記載のキット。
【請求項８３】  該コラーゲン溶液が約８℃未満の温度である、請求項８１記載のキット。
【請求項８４】  アルカリ性ｐＨの溶液を含む第３容器をさらに含む、請求項８１記載のキット。
【請求項８５】    請求項８１記載のキットを用いて混合物を製造する方法であって、第１容器と第２容器との中身を一緒にして、混合物を形成する工程を含む前記方法。
【請求項８６】  コラーゲンの水溶液と、該水溶液中に懸濁した、（ａ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された培養脊椎動物細胞の集団と、（ｂ）複数のマイクロキャリヤーとを含む容器を含有する輸送用コンテナを含むキットであって、該水溶液が約８℃未満の温度である前記キット。
【請求項８７】  少なくとも２つの容器を含み、該容器の各々がデリバリー手段と流体連通する出口を有する、患者に混合物を導入するための装置であって、（ａ）コラーゲン水溶液と、（ｂ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された培養脊椎動物細胞の集団と、（ｃ）複数のマイクロキャリヤーとを含む前記装置。
【請求項８８】  各容器が（ａ），（ｂ）及び（ｃ）の１つ以上を含有する、請求項８７記載の装置。
【請求項８９】  １つ以上の容器がそれと関連してピストンを有し、該ピストンが２端部、該容器の内部中に挿入されるのに適合した第１端部と、該容器の内部から伸びるのに適合した第２端部とを有する、請求項８７記載の装置。
【請求項９０】  該デリバリー手段が注射針であり、該注射針が（ａ）該容器の出口と流体連通するのに適合した１つ以上の入口と、（ｂ）出口とを有する、請求項８７記載の装置。
【請求項９１】  該デリバリー手段が、該容器の各々の出口と流体連絡したコネクターと、混合室と、注射針と流体連通した出口とを有するアダプター・ピースを含む、請求項８７記載の装置。
【請求項９２】  該コネクターが少なくとも２つの入口を有し、該少なくとも２つの入口の各々が該容器の１つのみの出口と流体連通する、請求項９１記載の装置。
【請求項９３】  該少なくとも２つの容器を物理的に接合させる１つ以上のコネクションをさらに含む、請求項８７記載の装置。
【請求項９４】  各ピストンの第２端部がプレッシャー・プレートに連結している、請求項８９記載の装置。
【請求項９５】  コラーゲン水溶液中に懸濁した、（ａ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された培養脊椎動物細胞の集団と；（ｂ）複数のマイクロキャリヤーと；（ｃ）固体基質に結合した作用物質であって、血管新生を促進する因子とサイトカインと増殖因子とアスコルビン酸とから成る群から選択された前記作用物質とを含む混合物を含む容器であって、５を超えるｐＨにおいて該混合物をゲル化させるために充分なコラーゲンが混合物中に存在する前記容器。
【請求項９６】  コラーゲン水溶液中に懸濁した、（ａ）ポリペプチドを発現するように遺伝子操作された培養脊椎動物細胞の第１集団と；（ｂ）血管新生を促進する因子とサイトカインと増殖因子とから成る群から選択された作用物質を分泌する培養脊椎動物細胞の第２集団と；（ｃ）複数のマイクロキャリヤーとを含む混合物を含む容器であって、５を超えるｐＨにおいて該混合物をゲル化させるために充分なコラーゲンが混合物中に存在する前記容器。