【手続補正書】
【提出日】平成18年12月1日(2006.12.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療を必要としている被験者におけるmiR15またはmiR16により媒介される癌の治療剤を製造するための、有効量の単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物の使用。
【請求項２】
miR15またはmiR16により媒介される癌が、慢性リンパ性白血病または前立腺癌である、請求項1記載の使用。
【請求項３】
単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物が、被験者の細胞のトランスフェクションによって投与される、請求項1記載の使用。
【請求項４】
細胞が、造血幹細胞、慢性リンパ性白血病細胞または前立腺癌細胞である、請求項3記載の使用。
【請求項５】
単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物が、被験者に対して腸管外にまたは経腸的に投与される、請求項1記載の使用。
【請求項６】
経腸投与が経口、直腸内または鼻腔内投与である、請求項5記載の使用。
【請求項７】
腸管外の投与が、血管内投与、組織周囲もしくは組織内への注射、皮下注射、または皮下注入、直接適用および吸入を含む沈着からなる群より選択される、請求項5記載の使用。
【請求項８】
血管内投与が、静脈内ボーラス注射、静脈内注入、動脈内ボーラス注射、動脈内注入、および血管系へのカテーテル点滴からなる群より選択される、請求項7記載の使用。
【請求項９】
組織周囲および組織内への注射が、腫瘍周囲および腫瘍内への注射、網膜内注射または網膜下注射からなる群より選択される、請求項7記載の使用。
【請求項１０】
皮下注射または沈着が、浸透ポンプによる注入を含む、請求項7記載の使用。
【請求項１１】
直接適用が、カテーテル、網膜ペレット、坐薬、多孔質材料を含むインプラント、非多孔質材料を含むインプラント、またはゲル状材料を含む材料による適用を含む、請求項7記載の使用。
【請求項１２】
単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物が、裸のRNAとして、送達用試薬とともに、またはmiR15遺伝子産物もしくはmiR16遺伝子産物を発現する配列を含む核酸として投与される、請求項1記載の使用。
【請求項１３】
miR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物を発現する配列を含む核酸が、組換えプラスミドまたは組換えウイルスベクターである、請求項12記載の使用。
【請求項１４】
組換えプラスミドまたは組換えウイルスベクターが、U6プロモーター、H1プロモーターまたはサイトメガロウイルスプロモーターを含む、請求項13記載の使用。
【請求項１５】
組換えウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクターまたはヘルペスウイルスベクターである、請求項13記載の使用。
【請求項１６】
レトロウイルスベクターが、レンチウイルスベクター、ラブドウイルスベクターおよびマウス白血病ウイルスベクターからなる群より選択される、請求項15記載の使用。
【請求項１７】
該治療剤が、親油性試薬、リポフェクチン、リポフェクタミン、セルフェクチン、ポリカチオンまたはリポソームを含む、請求項1記載の使用。
【請求項１８】
リポソームが、オプソニン作用抑制成分を含む、請求項17記載の使用。
【請求項１９】
リポソームが、慢性リンパ性白血病細胞または前立腺癌細胞に対してリポソームをターゲットにするリガンドを含む、請求項17記載の使用。
【請求項２０】
被験者が腫瘍を有し、かつ単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物の有効量が、少なくとも約10マイクログラム／腫瘤1グラムである、請求項1記載の使用。
【請求項２１】
単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物の有効量が、少なくとも約60マイクログラム／腫瘤1グラムである、請求項20記載の使用。
【請求項２２】
単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物の有効量が、少なくとも約100マイクログラム／腫瘤1グラムである、請求項20記載の使用。
【請求項２３】
単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物の有効量が、約10〜500マイクログラム／腫瘤1グラムの範囲である、請求項20記載の使用。
【請求項２４】
単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物の有効量が、約5〜3000マイクログラム／被験者体重1kgの範囲である、請求項1記載の使用。
【請求項２５】
単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物の有効量が、好ましくは約700〜1000マイクログラム／被験者体重1kgの範囲である、請求項24記載の使用。
【請求項２６】
単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物の有効量が、約1000マイクログラム／被験者体重1kgを上回る、請求項1記載の使用。
【請求項２７】
治療を必要としている被験者に再び移植することにより、被験者におけるmiR15またはmiR16により媒介される癌細胞の増殖を抑制するためのトランスフェクト細胞の製造方法であって、該被験者から単離された細胞に対して、有効量のmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物をコードする配列を含む核酸をトランスフェクトする段階を含む、前記方法。
【請求項２８】
miR15またはmiR16により媒介される癌が、慢性リンパ性白血病または前立腺癌である、請求項27記載の方法。
【請求項２９】
トランスフェクト細胞におけるmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物の発現を、被験者へのトランスフェクト細胞の再移植の前に確認する、請求項28記載の方法。
【請求項３０】
トランスフェクト細胞のゲノム中への、有効量のmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物をコードする配列を含む核酸の安定的な組込みを、被験者へのトランスフェクト細胞の再移植の前に確認する、請求項27記載の方法。
【請求項３１】
有効量のmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物をコードする配列を含む核酸が、組換えプラスミドまたは組換えウイルスベクターを含む、請求項27記載の方法。
【請求項３２】
組換えプラスミドまたは組換えウイルスベクターが、U6プロモーター、H1プロモーターまたはサイトメガロウイルスプロモーターを含む、請求項31記載の方法。
【請求項３３】
組換えウイルスベクターが、アデノウイルスベクター；アデノ随伴ウイルスベクター；レトロウイルスベクターまたはヘルペスウイルスベクターである、請求項32記載の方法。
【請求項３４】
レトロウイルスベクターが、レンチウイルスベクター、ラブドウイルスベクターおよびマウス白血病ウイルスベクターからなる群より選択される、請求項33記載の方法。
【請求項３５】
トランスフェクト細胞が、慢性リンパ性白血病細胞または前立腺癌細胞である、請求項27記載の方法。
【請求項３６】
トランスフェクト細胞が、造血幹細胞である、請求項27記載の方法。
【請求項３７】
被験者におけるmiR15またはmiR16により媒介される癌細胞の増殖抑制剤を製造するための、有効量の単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物の使用。
【請求項３８】
miR15またはmiR16により媒介される癌細胞が、慢性リンパ性白血病細胞または前立腺癌細胞である、請求項37記載の使用。
【請求項３９】
単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物が、miR15またはmiR16により媒介される癌細胞のトランスフェクションによって投与される、請求項37記載の使用。
【請求項４０】
単離されたmiR15またはmiR16遺伝子産物が、裸のRNAとして、送達用試薬とともに、またはmiR15遺伝子産物もしくはmiR16遺伝子産物を発現する配列を含む核酸として投与される、請求項37記載の使用。
【請求項４１】
miR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物を発現する配列を含む核酸が、組換えプラスミドまたは組換えウイルスベクターである、請求項40記載の使用。
【請求項４２】
組換えプラスミドまたは組換えウイルスベクターが、U6プロモーター、H1プロモーターまたはサイトメガロウイルスプロモーターを含む、請求項41記載の使用。
【請求項４３】
組換えウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクターまたはヘルペスウイルスベクターである、請求項41記載の使用。
【請求項４４】
レトロウイルスベクターが、レンチウイルスベクター、ラブドウイルスベクターおよびマウス白血病ウイルスベクターからなる群より選択される、請求項43記載の使用。
【請求項４５】
該抑制剤が、親油性試薬、リポフェクチン、リポフェクタミン、セルフェクチン、ポリカチオンまたはリポソームを含む、請求項37記載の使用。
【請求項４６】
リポソームが、オプソニン作用抑制成分を含む、請求項45記載の使用。
【請求項４７】
リポソームが、慢性リンパ性白血病細胞または前立腺癌細胞に対してリポソームをターゲットにするリガンドを含む、請求項45記載の使用。
【請求項４８】
単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物、および薬学的に許容されるキャリアーを含む、薬学的組成物。
【請求項４９】
単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物が、リポソーム中に封入されている、請求項48記載の薬学的組成物。
【請求項５０】
リポソームが、オプソニン作用抑制成分を含む、請求項49記載の薬学的組成物。
【請求項５１】
リポソームが、慢性リンパ性白血病細胞または前立腺癌細胞に対してリポソームをターゲットにするリガンドを含む、請求項49記載の薬学的組成物。
【請求項５２】
単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物が、ヌクレアーゼによる分解に対する抵抗性を有する、請求項48記載の薬学的組成物。
【請求項５３】
単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物が、2'位が修飾された1つまたは複数のリボヌクレオチドを含む、請求項52記載の薬学的組成物。
【請求項５４】
各リボヌクレオチドが2'修飾型リボヌクレオチドであるmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物を含む、請求項53記載の薬学的組成物。
【請求項５５】
2'位が修飾された1つまたは複数のリボヌクレオチドの2'位がフルオロ基、アミノ基、アルキル基、アルコキシ基またはO-アリル基により修飾されている、請求項53記載の薬学的組成物。
【請求項５６】
2'位が修飾された1つまたは複数のリボヌクレオチドが、式2'AR-ヌクレオチドによって表される、
[式中、Aは酸素またはハロゲン（好ましくはフッ素、塩素または臭素）であり；かつ
Rは水素または直鎖状もしくは分枝鎖C1-6アルキルであって；
前提として、AがハロゲンであればXおよびRは削除される]
請求項53記載の薬学的組成物。
【請求項５７】
2'位が修飾された1つまたは複数のリボヌクレオチドが、2'-Oメチルリボヌクレオチドである、請求項53記載の薬学的組成物。
【請求項５８】
単離されたmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物をコードする核酸、および薬学的に許容されるキャリアーを含む、薬学的組成物。
【請求項５９】
核酸が、リポソーム中に封入されている、請求項58記載の薬学的組成物。
【請求項６０】
リポソームが、オプソニン作用抑制成分を含む、請求項59記載の薬学的組成物。
【請求項６１】
リポソームが、慢性リンパ性白血病細胞または前立腺癌細胞に対してリポソームをターゲットにするリガンドを含む、請求項59記載の薬学的組成物。
【請求項６２】
被験者におけるmiR15またはmiR16により媒介される癌を検出する方法であって、被験者由来の試料中のmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物のレベルを測定する段階を含み、試料中のmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物のレベルが対照試料中のmiR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物のレベルよりも低いことによってmiR15またはmiR16により媒介される癌の存在が示される方法。
【請求項６３】
miR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物のレベルが、ノーザンブロット分析、インサイチューハイブリダイゼーションおよび定量的な逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応からなる群より選択されるアッセイにより測定される、請求項62記載の方法。
【請求項６４】
miR15遺伝子産物またはmiR16遺伝子産物が、配列SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3およびSEQ ID NO: 4を有する遺伝子産物の群より選択される、請求項62記載の方法。
【請求項６５】
miR15またはmiR16により媒介される癌が、慢性リンパ性白血病または前立腺癌である、請求項62記載の方法。
【請求項６６】
被験者におけるmiR15またはmiR16により媒介される癌を検出する方法であって、被験者由来の試料中のmiR15遺伝子またはmiR16遺伝子を分析する段階を含み、対照試料中のmiR15遺伝子またはmiR16遺伝子と比較して、被験者由来の試料中のmiR15遺伝子またはmiR16遺伝子に1つまたは複数の欠失または変異が検出されることによって、miR15またはmiR16により媒介される癌の存在が示される方法。
【請求項６７】
1つまたは複数の欠失または変異が、サザンブロットハイブリダイゼーション、配列分析および一本鎖高次構造多型からなる群より選択されるアッセイにより分析される、請求項66記載の方法。
【請求項６８】
miR15またはmiR16により媒介される癌が、慢性リンパ性白血病または前立腺癌である、請求項66記載の方法。
【請求項６９】
被験者におけるmiR15またはmiR16により媒介される癌を検出する方法であって、被験者由来の試料におけるmiR15遺伝子またはmiR16遺伝子のコピー数を測定する段階を含み、miR15遺伝子またはmiR16遺伝子のコピー数が1つまたはゼロに減少していることによってmiR15またはmiR16により媒介される癌の存在が示される方法。
【請求項７０】
遺伝子のコピー数の減少を13q14上のD13S273またはD13S272マイクロサテライトマーカーのヘテロ接合性消失を分析することによって評価し、D13S273またはD13S272マイクロサテライトマーカーのヘテロ接合性消失によってmiR15またはmiR16により媒介される癌の存在が示される、請求項69記載の方法。
【請求項７１】
ヘテロ接合性消失を、D13S1150またはD13S273マイクロサテライトマーカーのヘテロ接合性消失を分析することによって評価する、請求項70記載の方法。
【請求項７２】
ヘテロ接合性消失を、遺伝子座A1u18またはD13S273マイクロサテライトマーカーのヘテロ接合性消失を分析することによって評価する、請求項71記載の方法。
【請求項７３】
miR15遺伝子またはmiR16遺伝子のコピー数をサザンブロットハイブリダイゼーションによって測定する、請求項69記載の方法。
【請求項７４】
miR15またはmiR16により媒介される癌が、慢性リンパ性白血病または前立腺癌である、請求項69記載の方法。