【手続補正書】
【提出日】平成19年10月18日(2007.10.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
検出電極による検体分子の電気化学的検出のための方法であって：
(a)該検出電極上で検出されるべき該検体分子と結合することができる捕捉分子を固定し；
(b)該電極を検出されるべき該検体分子を含むことが想定される溶液と接触させ；
(c)前記溶液中に含まれる該検体分子を該電極上の捕捉分子と結合させて、それによって、捕捉分子と検体分子間に複合体を形成させ、前記複合体が該検出電極上に第一層を形成し；
(d)該検出電極を電気化学的活性剤と接触させ、前記電気化学的活性剤は、捕捉分子と検体分子の間で形成した該複合体の静電気性正味電荷に相補的なものである静電気性正味電荷を有し、それにより該電極上に第二層を形成し、該第二層及び第一層は、一緒になって電導性の二層を形成し；
(e)該検出電極を該電気化学的活性剤へ又は該電気化学的活性剤から、該電極から又は該電極へ、それぞれ電子を運搬することができる試薬と接触させ；
(f)該検出電極で電気的計測を行い、そして；
(g)該得られた電気的計測の結果をコントロール計測の結果と比較することによって検体を検出すること、
を含んで成る方法。
【請求項２】
前記電気化学的活性剤が、前記検体と前記電極間で電子を運搬することができるポリマー性酸化還元メディエーターである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記電気化学的活性剤が、金属イオンを含んで成る、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記金属イオンが、銀、金、銅、ニッケル、鉄、コバルト、オスミウム、ルテニウム、及びそれらの混合物から成る群から選定される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記電気化学的活性剤が、ポリ(ビニルフェロセン)、ポリ(ビニルフェロセン)-コ-アクリルアミド、ポリ(ビニルフェロセン)-コ-アクリル酸、及びポリ(ビニルフェロセン)コ-アクリルアミド-(CH2)n-スルホン酸、及びポリ(ビニルフェロセン)-コ-アクリルアミド-(CH2)n-ホスホン酸、ここでn＝0−12である、から成る群から選定される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記電気化学的活性剤へ、又は電気化学的活性剤から電子を運搬することができる試薬が、酵素又は酵素複合体である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記酵素が、酸化還元酵素又は酸化還元酵素の混合物である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記酸化還元酵素が、グルコースオキシダーゼ、水素ペルオキシダーゼ、ラクテートオキシダーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、グリセロールデヒドロゲナーゼ、ソルビトールデヒドロゲナーゼ、グルコースデヒドロゲナーゼ、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ガラクトースデヒドロゲナーゼ、リンゴ酸オキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、キサンチンデヒドロゲナーゼ、アルコールオキシダーゼ、コリンオキシダーゼ、キサンチンオキシダーゼ、コリンデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ、ピルビン酸オキシダーゼ、オキサレートオキシダーゼ、ビリルビンオキシダーゼ、グルタメートデヒドロゲナーゼ、グルタメートオキシダーゼ、アミンオキシダーゼ、NADPHオキシダーゼ、尿酸オキシダーゼ、シトクロムCオキシダーゼ、及びカテコールオキシダーゼから成る群から選定される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記捕捉分子が、検出されるべき検体と特異的に結合することができる、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記検出されるべき検体が、核酸、オリゴヌクレオチド、タンパク質、ペプチド、オリゴ糖、多糖及びそれらの複合体から成る群から選定される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記検出されるべき検体が、核酸分子である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記核酸分子が、予め規定された配列を有す、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記核酸分子が、少なくとも１つの一本鎖領域を含んで成る、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記捕捉分子が、検出されるべき核酸分子の一本鎖領域と相補性の配列を有する、少なくとも１つの核酸プローブである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記検出されるべき検体が、タンパク質又はペプチドである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記捕捉分子が、タンパク質又はペプチドと結合することができる少なくとも１つのリガンドである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記電極を前記検体分子が含まれていると想定される溶液に接触させる前に、遮断剤が前記電極上に固定される、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
検出電極によって検体分子を電気化学的に検出するための方法であって：
(a)検出されるべき該検体分子と結合することができる捕捉分子を、該検出電極上に固定し；
(b)該電極を検出されるべき該検体分子を含むと想定される溶液と接触させ；
(c)前記溶液中に含まれる該検体分子を該電極上の捕捉分子に結合させ、それによって捕捉分子と検体分子間に複合体を形成させ、前記複合体が該検出電極上に第一層を形成し；
(d)該検出電極を電気化学的活性剤と接触させ、前記電気化学的活性剤は、捕捉分子と検体分子の間で形成した該複合体の静電気性正味電荷に相補的なものである静電気性正味電荷を有し、それにより該電極上に第二層を形成し、該第二層及び第一層は、一緒になって電導性の二層を形成し、そして該捕捉分子は、それぞれ該電気化学的活性剤へ又は該電気化学的活性剤から、該電極から又は該電極へ、電子を運搬することを可能にし；
(e)該検出電極で電気的計測を実施し、そして；
(f)該得られた電気的計測の結果をコントロール計測の結果と比較することによって検体を検出すること、
を含んで成る方法。
【請求項１９】
請求項1で規定したような検体分子の電気化学的検出を行うために適した、検出電極を含んで成る電極配置であって：
(a)検出されるべき該検体分子と結合することができる捕捉分子と、検体分子間の複合体を含む該検出電極上の第一層；及び
(b)電気化学的活性剤を含む第二層であって、前記電気化学的活性剤が捕捉分子と検体分子間で形成される該複合体の静電気性正味電荷に相補的である静電気性正味電荷を有し、ここでの第二層及び第一層は一緒になって電導性の二層を形成すること、
を含んで成る電極配置。
【請求項２０】
前記電気化学的活性剤が、前記検体と電極間で電子を運搬することができるポリマー性酸化還元メディエーターである、請求項１９に記載の電極配置。
【請求項２１】
前記検体の電導性を増加させるための試薬が金属イオンを含む、請求項２０に記載の電極配置。
【請求項２２】
前記金属イオンが銀、金、銅、ニッケル、鉄、コバルト、オスミウム、ルテニウム及びそれらの混合物から成る群から選定される、請求項２１に記載の電極配置。
【請求項２３】
それぞれ該ポリマー性酸化還元メディエーターへ又はポリマー性酸化還元メディエーターから、該電極から又は電極へ電子を運搬することができる試薬を更に含んで成り、該試薬は電導性の二層に結合し、挿入し、又は付随する、請求項１９に記載の電極配置。
【請求項２４】
前記試薬が酵素又は酵素複合体である、請求項２３に記載の電極配置。
【請求項２５】
バイオセンサーとしての請求項１９に記載の電極配置の使用。
【請求項２６】
検体分子の電気化学的検出のためのバイオセンサーであって：
(a)検出電極；
(b)検出されるべき検体分子と結合することができる捕捉分子と検体分子間の複合体を含む検出電極上の第一層；及び
(c)電気化学的活性剤を含む第二層、ここで前記電気化学的活性剤は、捕捉分子と検体分子の間で形成した該複合体の静電気性正味電荷に相補的なものである静電気性正味電荷を有し、該第二層及び第一層は、一緒になって電導性の二層を形成する；
を含んで成るバイオセンサー。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
本発明の一つの態様では、電子を運搬することができる試薬は酵素又は酵素-複合体である。通常、任意の酵素は検出され得る電流の発生を導くために使用され得る。当該酵素は酸化還元酵素の群から選定され得る。適切な酸化還元酵素の例は、グルコースオキシダーゼ、水素ペルオキシダーゼ、ラクテートオキシダーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ、ラクティックデヒドロゲナーゼ、グリセロールデヒドロゲナーゼ、ソルビトールデヒドロゲナーゼ、グルコースデヒドロゲナーゼ、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ガラクトースデヒドロゲナーゼ、リンゴ酸オキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、キサンチンデヒドロゲナーゼ、アルコールオキシダーゼ、コリンオキシダーゼ、キサンチンオキシダーゼ、コリンデヒドロゲナーゼ、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ、ピルビン酸オキシダーゼ、シュウ酸オキシダーゼ、ビリルビンオキシダーゼ、グルタメートデヒドロゲナーゼ、グルタメートオキシダーゼ、アミンオキシダーゼ、NADPHオキシダーゼ、尿酸オキシダーゼ、シトクロムCオキシダーゼ、及びカテコールオキシダーゼである。