【手続補正書】
【提出日】平成19年4月26日(2007.4.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  複数のマイクロチャネルを含む微細工法装置においてＤＮＡ及び／あるいは細胞核を単離する方法であって、ＤＮＡ及び／あるいは細胞核に対するバリア（barrier）として作用する１つあるいはそれ以上のマイクロチャネル中においてメッシュを形成することを包含する、方法。
【請求項２】  該微細工法装置の１つあるいはそれ以上のマイクロチャネルにおいて形成されるメッシュが、核酸のメッシュを包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】  細胞からＤＮＡ若しくは細胞核、あるいはその混合物を単離する方法であって：
ａ）細胞質膜及び少なくとも核膜の一部を溶解するように全細胞の懸濁液を溶解剤で処理し；
ｂ）工程ａ）からの溶解物を、微細工法装置のマイクロチャネルであって、当該各マイクロチャネルが、マイクロチャネルを通じて液体を通過させながらＤＮＡ及び細胞核の通過あるいは流動を妨げるための手段を組み込むことによりＤＮＡを包含するメッシュをチャネル中に形成した、マイクロチャネル中に導入し；そして
ｃ）該ＤＮＡを包含するメッシュを洗浄することを包含する、方法。
【請求項４】  工程ａ）において、核膜の大部分が無傷なままで実施される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】  該微細工法装置が、回転可能なディスクを含み、そのディスクは、環状の試料リザーバ−と連絡してディスクの中心に向って配置し、次いでそのリザーバーが放射状に配列した複数のマイクロチャネルと連結される試料導入ポートを含み、各マイクロチャネルは、ディスクの周縁部に向って配置される入口チャネル及び出口チャネル、そしてマイクロチャネルを通じて液体を通過させながらＤＮＡ及び細胞核の通過あるいは流動を妨げるために各マイクロチャネルに組み込まれた手段を含む、請求項３あるいは４に記載の方法。
【請求項６】  該ＤＮＡ及び細胞核の通過あるいは流動を妨げるために各マイクロチャネルに組み込まれた手段が、バリアを包含する、請求項３から５に記載の方法。
【請求項７】  該バリアが、液体を通過させながらＤＮＡ及び細胞核の流動あるいは通過を妨げるビーズを包含する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】  該ビーズが、ポリスチレン、スチレンアクリレートコポリマー、ジビニルベンゼンで架橋したポリスチレン、ポリビニルトルエン、ポリメタクリレート、ポリカーボネート、ポリサッカライド、金属酸化物、ガラス、及びカーボンから選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】  該バリアが、マイクロチャネル内に配置された隆起構造を包含する、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】  該隆起構造が、マイクロチャネルの底面部に配置され、液体を通過させながらＤＮＡ及び細胞核の流動あるいは通過を妨げるような支柱を形成するよう成形されている、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】  微細工法装置のマイクロチャネルの少なくとも幾つかが、それぞれアッセイを実施したりＤＮＡをプロセシングしたりするための反応チャンバーを更に包含する、請求項３から１０に記載の方法。
【請求項１２】  工程ａ）の全細胞が植物細胞及び動物細胞から選択される、請求項３から１１に記載の方法。
【請求項１３】  工程ｃ）が、マイクロチャネル中に形成されたメッシュに洗浄溶液を通すことにより実施される、請求項３から１２に記載の方法。
【請求項１４】  メッシュに捕捉された細胞核が、ＤＮＡを遊離するために更に処理される、請求項３から１３に記載の方法。
【請求項１５】  細胞からＤＮＡ若しくは細胞核、あるいはその混合物を単離するための微細工法装置であって、回転可能なディスクを含み、そのディスクは、環状の試料リザーバ−と連絡してディスクの中心に向って配置し、次いでそのリザーバーが放射状に配列した複数のマイクロチャネルと連結される試料導入ポートを含み、各マイクロチャネルは、ディスクの周縁部に向って配置される入口チャネル及び出口チャネル、そしてマイクロチャネルを通じて液体を通過させながらＤＮＡ及び細胞核の通過あるいは流動を妨げるために各マイクロチャネルに組み込まれた手段を含む、装置。
【請求項１６】  該ＤＮＡ及び細胞核の通過あるいは流動を妨げるために各マイクロチャネルに組み込まれた手段が、バリアを包含する、請求項１５に記載の装置。
【請求項１７】  該バリアが、液体を通過させながらＤＮＡ及び細胞核の流動あるいは通過を妨げるビーズからなる、請求項１６に記載の装置。
【請求項１８】  該ビーズが、ポリスチレン、スチレンアクリレートコポリマー、ジビニルベンゼンで架橋したポリスチレン、ポリビニルトルエン、ポリメタクリレート、ポリカーボネート、ポリサッカライド、金属酸化物、ガラス、及びカーボンから選択される、請求項１７に記載の装置。
【請求項１９】  該バリアが、マイクロチャネル内に配置された隆起構造を包含する、請求項１６に記載の装置。
【請求項２０】  該隆起構造が、マイクロチャネルの底面部に配置され、支柱を形成するよう成形されている、請求項１９に記載の装置。
【請求項２１】  微細工法装置のマイクロチャネルの少なくとも幾つかが、それぞれアッセイを実施したりＤＮＡをプロセシングしたりするための反応チャンバーを更に包含する、請求項１５から２０に記載の装置。
【請求項２２】  請求項１から１４のいずれかに記載の方法により単離された、ＤＮＡ。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
本発明の１つの態様において、細胞からＤＮＡ若しくは細胞核、あるいはその混合物を単離する方法を提供し、当該方法は：
ａ）細胞質膜及び少なくとも核膜の一部を溶解するように全細胞の懸濁液を溶解剤で処理し；
ｂ）工程ａ）からの溶解物を、微細工法装置のマイクロチャネルであって、当該各マイクロチャネルが、マイクロチャネルを通じて液体を通過させながらＤＮＡ及び細胞核の通過あるいは流動を妨げるための手段を組み込むことによりＤＮＡを包含するメッシュをチャネル内に形成したマイクロチャネル中に導入し；そして
ｃ）該ＤＮＡを包含するメッシュを洗浄することを包含する。
細胞核を単離することを所望する場合、工程ａ）が、一定量の核膜が無傷なままであるのに適切なように実施されなければならない。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
本発明の１つの好ましい実施の形態においては、該バリアが、液体を通過させながらＤＮＡ及び細胞核の流動あるいは通過を妨げるビーズを包含する。本発明に係る第２の実施の形態において、該バリアはマイクロチャネル内に配置された隆起構造を包含する。該隆起構造は、例えば支柱（pillar）を形成するよう成形されているのが好ましい。本発明の特に好ましい実施の形態においては、該隆起構造がマイクロチャネルの底面部に配置され、液体を通過させながらＤＮＡ及び細胞核の流動あるいは通過を妨げるような支柱を形成するよう成形されている。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
本発明は、ディスクの中央部に向って配置し、環状の試料リザーバー（２）に連結する試料導入ポート（図示せず）を提供し、次いでそのリザーバーが放射状に配列した複数のマイクロチャネル（３）と連結するように微細細工された回転可能なディスク（１）からなる微細工法装置（図１に示す）を用いて、細胞からＤＮＡを単離する方法を提供する。各マイクロチャネル（３）は、液体及び／あるいは試料を除去するためにディスクの周縁部に向って配置する試料入口チャネル（４）及び出口チャネル（５）を含む。閉鎖したチャンバーと連結するチャネルを特定するためにカバープレート（図示せず）をディスク上に置いている。各マイクロチャネルは、一方の末端で環状の試料リザーバーに、反対側の末端で共通の廃液チャネルに連結している。