【手続補正書】
【提出日】平成18年12月12日(2006.12.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
幹細胞集団をｅｘ  ｖｉｖｏで拡大させかつその分化を阻害する方法であって、
（ａ）細胞増殖のための条件を細胞にｅｘ  ｖｉｖｏで与え；
（ｂ）ＰＩ３−キナーゼ活性の調節剤の有効濃度を細胞にｅｘ  ｖｉｖｏで与え、ここで前記調節剤はＰＩ３−キナーゼ活性またはＰＩ３−キナーゼをコードする遺伝子の発現をダウンレギュレートすることができるものから選択され；それにより幹細胞集団をｅｘ  ｖｉｖｏで拡大させかつその分化を阻害すること
を含む方法。
【請求項２】
ＰＩ３−キナーゼ活性またはＰＩ３−キナーゼをコードする遺伝子の発現をダウンレギュレートすることができるものから選択される前記調節剤は、
（ａ）ＰＩ３−キナーゼ触媒活性の阻害剤、
（ｂ）ＰＩ３−キナーゼをコードするｍＲＮＡ転写物と特異的にハイブリダイズすることができるアンチセンスポリヌクレオチド、
（ｃ）ＰＩ３−キナーゼ転写物、コード配列および／またはプロモーター要素を特異的に開裂するリボザイム、
（ｄ）ＰＩ３−キナーゼ転写物の分解を誘導することができるｓｉＲＮＡ分子、および
（ｅ）ＰＩ３−キナーゼ転写物またはＤＮＡを特異的に開裂するＤＮＡザイム
からなる群から選択される請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記細胞増殖のための条件を与えることは栄養素およびサイトカインを細胞に与えることによって行われる請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記サイトカインは初期活動サイトカインおよび後期活動サイトカインからなる群から選択される請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記幹細胞は初期造血および／または造血先祖細胞である請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記幹細胞は造血細胞、神経細胞、希突起膠細胞、皮膚細胞、肝細胞、胚性幹細胞、筋肉細胞、骨細胞、間葉細胞、膵細胞、軟骨細胞、および間質細胞からなる群から選択される源から由来する請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記幹細胞は骨髄または末梢血から由来する請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記幹細胞は新生児臍帯血から由来する請求項６に記載の方法。
【請求項９】
造血幹細胞について豊富にされている幹細胞集団を選択する工程をさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
拡大された未分化の幹細胞に外来遺伝子を形質導入する方法であって、前記方法は、
（ａ）幹細胞集団を得；
（ｂ）（ｉ）前記幹細胞に細胞増殖のための条件を与え、（ｉｉ）前記幹細胞にＰＩ３−キナーゼ活性の調節剤の有効濃度を与えることによって前記幹細胞を拡大させかつその分化を阻害し、ここで前記調節剤はＰＩ３−キナーゼ活性またはＰＩ３−キナーゼをコードする遺伝子の発現をダウンレギュレートすることができるものから選択され、ただし工程（ｉ）および（ｉｉ）はｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで行われ；それにより前記幹細胞を拡大しかつその分化を阻害し；そして
（ｃ）前記拡大された未分化の幹細胞に外来遺伝子を形質導入すること
を含む方法。
【請求項１１】
ＰＩ３−キナーゼ活性またはＰＩ３−キナーゼをコードする遺伝子の発現をダウンレギュレートすることができるものから選択される前記調節剤は、
（ａ）ＰＩ３−キナーゼ触媒活性の阻害剤、
（ｂ）ＰＩ３−キナーゼをコードするｍＲＮＡ転写物と特異的にハイブリダイズすることができるアンチセンスポリヌクレオチド、
（ｃ）ＰＩ３−キナーゼ転写物、コード配列および／またはプロモーター要素を特異的に開裂するリボザイム、
（ｄ）ＰＩ３−キナーゼ転写物の分解を誘導することができるｓｉＲＮＡ分子、および
（ｅ）ＰＩ３−キナーゼ転写物またはＤＮＡを特異的に開裂するＤＮＡザイム
からなる群から選択される請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞増殖のための条件を与えることは栄養素およびサイトカインを細胞に与えることによって行われる請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記サイトカインは初期活動サイトカインおよび後期活動サイトカインからなる群から選択される請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記幹細胞は初期造血および／または造血先祖細胞である請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記幹細胞は造血細胞、神経細胞、希突起膠細胞、皮膚細胞、肝細胞、胚性幹細胞、筋肉細胞、骨細胞、間葉細胞、膵細胞、軟骨細胞、および間質細胞からなる群から選択される源から由来する請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記幹細胞は骨髄または末梢血から由来する請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記幹細胞は新生児臍帯血から由来する請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
造血幹細胞について豊富にされている幹細胞集団を選択する工程をさらに含む請求項１０に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれかに記載の方法に従って拡大された未分化の造血細胞を含む治療用のｅｘ  ｖｉｖｏ培養された幹細胞集団。
【請求項２０】
ＰＩ３−キナーゼ活性の調節剤を含む培養培地中に与えられ、前記調節剤はＰＩ３−キナーゼ活性またはＰＩ３−キナーゼをコードする遺伝子の発現をダウンレギュレートすることができるものから選択される請求項１９に記載の細胞集団。
【請求項２１】
前記培地から単離される請求項１９に記載の細胞集団。
【請求項２２】
請求項２０に記載の細胞集団および薬学的に許容可能なキャリアを含む医薬組成物。
【請求項２３】
請求項２１に記載の細胞集団および薬学的に許容可能なキャリアを含む医薬組成物。
【請求項２４】
レシピエントへの移植のための、拡大された未分化の造血幹細胞の調製方法であって、前記方法は、
（ａ）（ｉ）前記造血幹細胞に細胞増殖のための条件をｅｘ  ｖｉｖｏで与え、（ｉｉ）前記造血幹細胞にＰＩ３−キナーゼ活性の調節剤の有効濃度をｅｘ  ｖｉｖｏで与えることによって前記造血幹細胞をｅｘ  ｖｉｖｏで拡大させかつその分化を阻害し、ここで前記調節剤はＰＩ３−キナーゼ活性またはＰＩ３−キナーゼをコードする遺伝子の発現をダウンレギュレートすることができるものから選択され、それにより前記造血幹細胞を拡大しかつその分化を阻害し；そして
（ｂ）前記拡大された未分化の造血幹細胞を単離すること
を含む方法。
【請求項２５】
ＰＩ３−キナーゼ活性またはＰＩ３−キナーゼをコードする遺伝子の発現をダウンレギュレートすることができるものから選択される前記調節剤は、
（ａ）ＰＩ３−キナーゼ触媒活性の阻害剤、
（ｂ）ＰＩ３−キナーゼをコードするｍＲＮＡ転写物と特異的にハイブリダイズすることができるアンチセンスポリヌクレオチド、
（ｃ）ＰＩ３−キナーゼ転写物、コード配列および／またはプロモーター要素を特異的に開裂するリボザイム、
（ｄ）ＰＩ３−キナーゼ転写物の分解を誘導することができるｓｉＲＮＡ分子、および
（ｅ）ＰＩ３−キナーゼ転写物またはＤＮＡを特異的に開裂するＤＮＡザイム
からなる群から選択される請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記細胞増殖のための条件を与えることは栄養素およびサイトカインを細胞に与えることによって行われる請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記サイトカインは初期活動サイトカインおよび後期活動サイトカインからなる群から選択される請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記造血幹細胞は初期造血および／または造血先祖細胞である請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
前記幹細胞は造血細胞、神経細胞、希突起膠細胞、皮膚細胞、肝細胞、胚性幹細胞、筋肉細胞、骨細胞、間葉細胞、膵細胞、軟骨細胞、および間質細胞からなる群から選択される源から由来する請求項２４に記載の方法。
【請求項３０】
前記幹細胞は骨髄または末梢血から由来する請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記幹細胞は新生児臍帯血から由来する請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
造血幹細胞について豊富にされている幹細胞集団を選択する工程をさらに含む請求項１４に記載の方法。
【請求項３３】
養子免疫療法のための拡大された造血細胞の調製方法であって、前記方法は、
（ａ）（ｉ）細胞増殖のための条件をｅｘ  ｖｉｖｏで前記先祖造血細胞に与え、（ｉｉ）前記先祖造血細胞にＰＩ３−キナーゼ活性の調節剤の有効濃度を与えることによって前記造血細胞をｅｘ  ｖｉｖｏで拡大させかつその分化を阻害し、ここで前記調節剤はＰＩ３−キナーゼ活性またはＰＩ３−キナーゼをコードする遺伝子の発現をダウンレギュレートすることができるものから選択され、それにより前記先祖造血細胞をｅｘ  ｖｉｖｏで拡大させかつその分化を阻害し、そして
（ｂ）前記拡大された未分化の造血細胞を単離すること
を含む方法。
【請求項３４】
ＰＩ３−キナーゼ活性またはＰＩ３−キナーゼをコードする遺伝子の発現をダウンレギュレートすることができるものから選択される前記調節剤は、
（ａ）ＰＩ３−キナーゼ触媒活性の阻害剤、
（ｂ）ＰＩ３−キナーゼをコードするｍＲＮＡ転写物と特異的にハイブリダイズすることができるアンチセンスポリヌクレオチド、
（ｃ）ＰＩ３−キナーゼ転写物、コード配列および／またはプロモーター要素を特異的に開裂するリボザイム、
（ｄ）ＰＩ３−キナーゼ転写物の分解を誘導することができるｓｉＲＮＡ分子、および
（ｅ）ＰＩ３−キナーゼ転写物またはＤＮＡを特異的に開裂するＤＮＡザイム
からなる群から選択される請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記細胞増殖のための条件を与えることは栄養素およびサイトカインを細胞に与えることによって行われる請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記サイトカインは初期活動サイトカインおよび後期活動サイトカインからなる群から選択される請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記造血幹細胞は初期造血および／または造血先祖細胞である請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
前記幹細胞は造血細胞、神経細胞、希突起膠細胞、皮膚細胞、肝細胞、胚性幹細胞、筋肉細胞、骨細胞、間葉細胞、膵細胞、軟骨細胞、および間質細胞からなる群から選択される源から由来する請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】
前記幹細胞は骨髄または末梢血から由来する請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記幹細胞は新生児臍帯血から由来する請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
造血幹細胞について豊富にされている幹細胞集団を選択する工程をさらに含む請求項３３に記載の方法。