【手続補正書】
【提出日】平成19年3月13日(2007.3.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  原発性心筋症および続発性心筋症からなる群由来の心疾患の処置用医薬であって、１以上のS100タンパク質、それらの１以上の変異体、またはそれらの数種の疎水性断片をコードする核酸配列を含有し、該核酸が医薬的に適合し得る助剤および／または支持体とともに製剤化されていることもあることを特徴とする医薬。
【請求項２】  原発性心筋症および続発性心筋症からなる群由来の心疾患の処置用医薬であって、１以上のS100タンパク質、それらの１以上の変異体、またはそれらの数種の疎水性断片をコードする核酸配列を含有する遺伝子導入ベクターを含有し、該ベクターが医薬的に適合し得る助剤および／または支持体とともに製剤化されていることもあることを特徴とする医薬。
【請求項３】  原発性心筋症が遺伝性心筋症および自然突然変異による心筋症を包含するものである、請求項１または２に記載の医薬。
【請求項４】  続発性心筋症が動脈硬化による虚血性心筋症、心筋の感染症または中毒症による膨張性心筋症、肺動脈性および／または動脈性高血圧症による高血圧性心疾患、律動障害および心臓弁の障害による構造的心疾患を包含するものである、請求項１または２に記載の医薬。
【請求項５】  １以上のS100タンパク質、それらの１以上の変異体、またはそれらの数種の疎水性断片をコードする核酸配列を含有し、該核酸配列が医薬的に適合し得る助剤および／または支持体とともに製剤化されていることもあることを特徴とする、心不全処置用医薬。
【請求項６】  １以上のS100タンパク質、それらの１以上の変異体、またはそれらの数種の疎水性断片をコードする核酸配列を含有する遺伝子導入ベクターを含有し、該ベクターが医薬的に適合し得る助剤および／または支持体とともに製剤化されていることもあることを特徴とする、心不全処置用医薬。
【請求項７】  S100タンパク質が、S100β、S100A1、S100A2、S100A4およびS100A6からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１ないし６のいずれかに記載の医薬。
【請求項８】  S100A1が、配列番号2で示されるアミノ酸配列を含有することを特徴とする、請求項７に記載の医薬。
【請求項９】  該断片が、配列番号32、34または36で示されるアミノ酸配列からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１ないし６のいずれかに記載の医薬。
【請求項１０】  配列番号32、34、36、37、38および39で示される断片の少なくとも２種の組合せを含有することを特徴とする、請求項１ないし６のいずれかに記載の医薬。
【請求項１１】  配列番号1のS100A1をコードする核酸配列、またはこの配列を含有する遺伝子導入ベクターを含有することを特徴とする、請求項１ないし７のいずれかに記載の医薬。
【請求項１２】  断片をコードする核酸配列が、配列番号31、33、35からなる群および配列番号37、38または39の断片をコードする核酸配列から選択されるものであるか、またはこれらの配列を含有する遺伝子導入ベクターの形態で含有されることを特徴とする、請求項１ないし６のいずれかに記載の医薬。
【請求項１３】  配列番号32、34、36、37、38および39をコードする核酸配列の少なくとも２種、好ましくは配列番号31、33、35で示される核酸配列および配列番号37、38および39をコードする配列の少なくとも２種の組合せ、あるいはこの組合せを含有する１以上の遺伝子導入ベクターを含有することを特徴とする、請求項１ないし７のいずれかに記載の医薬。
【請求項１４】  経口、静脈、動脈または冠動脈適用用に製剤化されていることを特徴とする、請求項１ないし１３のいずれかに記載の医薬。
【請求項１５】  原発性心筋症および続発性心筋症からなる群由来の心疾患の処置用医薬の製造のための、１以上のS100タンパク質、それらの１以上の変異体、またはそれらの数種の疎水性断片の使用。
【請求項１６】  原発性心筋症および続発性心筋症からなる群由来の心疾患の処置用医薬製剤の製造のための、１以上のS100タンパク質、それらの１以上の変異体、またはそれらの数種の疎水性断片をコードする１以上の核酸配列の使用であって、該核酸が医薬的に適合し得る助剤および／または支持体とともに製剤化されていることもある、使用。
【請求項１７】  原発性心筋症および続発性心筋症からなる群由来の心疾患の処置用医薬製剤の製造のための、１以上のS100タンパク質、それらの１以上の変異体、またはそれらの数種の疎水性断片をコードする核酸配列を含有する遺伝子導入ベクターの使用であって、該ベクターが医薬的に適合し得る助剤および／または支持体とともに製剤化されていることもある、使用。
【請求項１８】  原発性心筋症が遺伝性心筋症および自然突然変異による心筋症を包含することを特徴とする、請求項１５ないし１７のいずれかに記載の使用。
【請求項１９】  続発性心筋症が動脈硬化による虚血性心筋症、心筋の感染症または中毒症による膨張性心筋症、肺動脈性および／または動脈性高血圧症による高血圧性心疾患、律動障害および心臓弁の障害による構造的心疾患を包含することを特徴とする、請求項１５ないし１７のいずれかに記載の使用。
【請求項２０】  心不全処置用医薬製剤の製造のための、１以上のS100タンパク質、それらの１以上の変異体、またはそれらの数種の疎水性断片の使用。
【請求項２１】  心不全処置用医薬製剤の製造のための、１以上のS100タンパク質、それらの１以上の変異体、またはそれらの数種の疎水性断片をコードする１以上の核酸配列の使用であって、該核酸が医薬的に適合し得る助剤および／または支持体とともに製剤化されていることもある、使用。
【請求項２２】  心不全処置用医薬製剤の製造のための、１以上のS100タンパク質、それらの１以上の変異体、またはそれらの数種の疎水性断片をコードする核酸配列を含有する遺伝子導入ベクターの使用であって、該ベクターが医薬的に適合し得る助剤および／または支持体とともに製剤化されていることもある、使用。
【請求項２３】  S100タンパク質が、S100β、S100A1、S100A2、S100A4およびS100A6からなる群から選択されることを特徴とする、請求項２０ないし２２のいずれかに記載の使用。
【請求項２４】  S100A1が、配列番号2で示されるアミノ酸配列を含有することを特徴とする、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】  該断片が配列番号32、34または36で示されるアミノ酸配列から選択されることを特徴とする、請求項２３に記載の使用。
【請求項２６】  配列番号32、34、36、37、38および39で示される少なくとも２種の断片の組合せを用いることを特徴とする、請求項１５ないし２３のいずれかに記載の使用。
【請求項２７】  配列番号1のS100A1をコードする核酸配列またはこの配列を含有する遺伝子導入ベクターを用いることを特徴とする、請求項１６ないし２３のいずれかに記載の使用。
【請求項２８】  該断片をコードする核酸配列が配列番号31、33もしくは35、またはこれらの配列を含有する遺伝子導入ベクターから選択されることを特徴とする、請求項１７ないし２３のいずれかに記載の使用。
【請求項２９】  配列番号32、34、36、37、38および39をコードする核酸配列の少なくとも２種、好ましくは配列番号31、33、35で示される核酸配列および配列番号37、38および39をコードする配列の少なくとも２種の組合せ、あるいはこれらの組合せを含有する１以上の遺伝子導入ベクターを用いることを特徴とする、請求項１６ないし２３のいずれかに記載の使用。
【請求項３０】  医薬が、経口、静脈、動脈または冠動脈適用用に製剤化されていることを特徴とする、請求項１５ないし２９のいずれかに記載の使用。
【請求項３１】  配列番号32、34、36、37、38または39で示される配列を含有することを特徴とする、ペプチド。
【請求項３２】  DSM 12755の遺伝子導入ベクター。
【請求項３３】  １以上のS100タンパク質、それらの１以上の変異体、またはそれらの数種の疎水性断片をコードする遺伝子導入ベクターの調製方法であって、該タンパク質、該変異体または該断片をコードする核酸配列を、遺伝子療法に適する１以上のベクター中にクローニングすることを特徴とする、方法。
【請求項３４】  該コード核酸配列が配列番号1ないし30で示される核酸配列から選択されることを特徴とする、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】  配列番号1で示されるcDNAをシャトルベクターpAD TRACKのマルチクローニングサイト中にクローニングし、PME1で直鎖状にし、大腸菌BJ 5183中でpEASYに再結合させることを特徴とする、請求項３２に記載の遺伝子導入ベクターの調製方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、治療的に有効量の１以上のS100タンパク質類、それらの１以上の変異体もしくは断片、またはこれらのアミノ酸配列をコードし、場合により１以上の遺伝子導入ベクター中に集積されている核酸配列を含有する心不全治療用医薬に関する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
これまでに行われたさらなる方法論は、同じCa2+濃度に対して収縮器官の増強を可能にするCa2+増感剤で収縮器官を増感することで、心収縮期のCa2+供給の低下をより効果的に用いることからなる。しかしながらピモベンダンを用いてこれまでに行われた臨床試験は、プラシーボに比べて心機能が有意に向上するとは言えなかったので、十分なものではなかった(7)。不均一群についての新規Ca2+増感剤による臨床データはまだ得られていない。しかし、いくつかのCa2+増感剤を用いたこの療法アプローチでは、収縮器官のCa2+感受性の上昇によって弛緩が悪くなるので、心収縮期に強度が増すという治療上の利点が、心拡張の阻害という点で疑問になる(8)。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
心不全の枠組み内でSRの機能を制限するさらなる分子レベルの原因が探索されたが、不全心臓の粗膜調製物(未精製膜)でCa2+ATPアーゼ活性が低いことが種々の動物モデル、またヒトで測定することができ、SRのタンパク質組成の変化がその原因であると思われた。しかし、SRタンパク質ホスホランバン、Ca2+ATPアーゼおよびリアノジンレセプターの遺伝子発現研究では様々な矛盾したデータが得られた。このように、種々の研究グループ(9、10、11)がホスホランバンおよびCa2+ATPアーゼをコードする遺伝子の発現、またタンパク質レベルでの有意な減少を見出したが、一方、Movsesianら(12)およびSchwingerら(13)は発現に有意な差はないと記載し、また、Araiら(14)は肥厚発達の過程で示差的発現を見出した。末期不全心臓の粗膜調製物では有意に低いCa2+ATPアーゼ活性が検出されたが(15)、この発見は筋小胞体の高度に精製された膜調製物については理解できるものではなかった(12)。これまでこれらの矛盾した結果は分析方法の違いに帰されていた(12)。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
S100タンパク質類は、カルモジュリンなどと同様に、EFハンドを有するCa2+結合タンパク質群に属し、その200以上にわたるCa2+結合モチーフが今日知られている。S100タンパク質ファミリー自体は19のメンバーからなり、それらのうち13は、染色体1q21上の狭い遺伝子クラスターにコードされている。これらのタンパク質は、機能上、細胞分化の調節、細胞周期の調節、シグナル変換、ならびにCa2+ホメオスタシスに組み入れられている(16)。遍在発現するカルモジュリンとは対照的に、S100タンパク質の発現パターンは、組織特異的である(17)。それらは従って、それらのEFハンドへCa2+を結合させた後、特異的標的タンパク質と相互作用することにより、Ca2+シグナルを翻訳して組織特異的に応答する(16)。S100タンパク質は、S100ファミリー内で高い相同性があるよく保存されたアミノ酸配列を有する。このアミノ酸配列およびcDNA配列は、配列番号1ないし30(コード番号＜210＞)として、配列プロトコールに示されている。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
従って本発明はさらに、原発性および続発性心筋症ならびに心不全の処置用医薬に関しており、該医薬は、１以上のS100タンパク質またはそれらの１以上の変異体もしくは断片をコードする核酸配列を含有するものであり、該核酸は所望により医薬的に適合し得る助剤および／または支持体とともに処方されているものである。これらの核酸配列はまた、１以上の遺伝子導入ベクター中に含有されていてもよい。本発明に従って用いるS100タンパク質をコードする核酸配列は、配列番号1ないし35に再現されており、配列番号１(S100A1 cDNA)が特に好ましい。本発明の好ましい態様によれば、配列番号32、24、36、37、38および39をコードする核酸配列(特に配列番号31、33、35の配列、ならびに配列番号37、38および39をコードする配列)の少なくとも２種の組合せ、が用いられる。遺伝子療法のアプローチにおいては、この組合せを含有する１以上の遺伝子導入ベクターが考えられ、すなわち指定の核酸配列群をいくつかのベクター中にクローニング(例えば、１種ずつ)してもよいし、それらのコード配列の組合せを単一のベクター中に含有させてもよい。
【手続補正７】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図５ａ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図５ａ】
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【手続補正８】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図５ｂ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図５ｂ】
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