(57)【要約】本明細書において、イソキノリジノベンゾジアゼピン（IQB）-1(クロロメチル)-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e]インドール（CBI）二量体、それらを含む抗体-薬物結合体、ならびに細胞殺滅および疾患処置のための使用法が提供される。2019530707.tif 000153
2019530707.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式I：
2019530707.tif 000123
の化合物：
式中、
・-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に示される点線の結合は独立して一重結合または二重結合であり；
○二重結合が-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に存在する場合、-C(Ra)-はオレフィン性でありかつ置換基Raを有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在せず；
○一重結合が-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に存在する場合、-C(Ra)-は飽和でありかつRa置換基の他に水素置換基を有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在し；
・Raは独立してHまたはOHであり；
・存在する場合、RbはH、L-Rx、または-L-Scであり；
・-L-Rxは反応性部分Rxに結合しているリンカーLであり、かつ-L-Scは物質Scに結合しているリンカーLであり；ここで、Lは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつ任意で、エーテル部分、オキソ部分、カルボキサミジル部分、ウレタニル部分、複素環式部分、芳香族部分、またはヘテロ芳香族部分を組み込み；Rxは反応性部分であり；Scはタンパク質、タンパク質の一部、ペプチド、または核酸より選択される標的結合物質であり；
・R2は、H、OH、C1〜C10アルキル、C2〜C10アルケニル、またはC2〜C10アルキニルより選択され；
・R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6は、それぞれ独立してH、OH、C1〜C10アルキル、C2〜C10アルケニル、もしくはC2〜C10アルキニルより選択されるか、または、YがNである場合には存在せず；
・R5またはR5'のそれぞれは、独立してNH2、CO2H、H、OH、C1〜C10アルキル、C2〜C10アルケニル、C2〜C10アルキニル、-L-Rx、もしくは-L-Scであるか、または、YがNである場合には存在せず；
・R7はHであり；
・G'-Rb'は、OH、O-L、O-L-Rx、O-L-Sc、NH2、NH-L、NH-L-Rx、またはNH-L-Scであり；
・各Yは独立してNまたはCであり；
・各Dは独立してn＝0〜4である(CH2)nであり、ただし、少なくとも1つのDはn＝1〜4である(CH2)nであり；
・X1は、
2019530707.tif 000124
からなる群より選択されるスペーサーである。
【請求項２】
式Iの化合物がS,S立体化学を有する、請求項1に記載の化合物。
【請求項３】
Rbが-L-Rxまたは-L-Scである、請求項1に記載の化合物。
【請求項４】
G'-Rb'が、O-L、O-L-Rx、O-L-Sc、NH-L、NH-L-Rx、またはNH-L-Scである、請求項1に記載の化合物。
【請求項５】
・R2、R3、R3'、R4、R4'、R5、R5'、R6、およびR6'がそれぞれHである、
請求項1に記載の化合物。
【請求項６】
以下の化学構造：
2019530707.tif 000125
2019530707.tif 000126
2019530707.tif 000127
2019530707.tif 000128
2019530707.tif 000129
2019530707.tif 000130
2019530707.tif 000131
2019530707.tif 000132
2019530707.tif 000133
2019530707.tif 000134
のいずれかを有する、請求項1に記載の化合物。
【請求項７】
式IV：
2019530707.tif 000135
の化学構造を有する、請求項1に記載の化合物。
【請求項８】
2019530707.tif 000136
より選択される化学構造式を有する、請求項7に記載の化合物。
【請求項９】
式V：
2019530707.tif 000137
の化学構造を有する、請求項1に記載の化合物。
【請求項１０】
2019530707.tif 000138
より選択される化学構造式を有する、請求項9に記載の化合物。
【請求項１１】
以下の化学構造：
2019530707.tif 000139
より選択される、請求項1に記載の化合物。
【請求項１２】
Lが、構造：
-YL-XAA-PEG-
を有するリンカーであり、
ここで、
YLが、XAAのアミノ酸単位をIQB単位に連結するスペーサー分子であり；
XAAが、1〜12個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり；かつ
PEGが、構造：
-(CH2CH2O)x-
を有するポリエチレングリコール部分であり、ここでxが1〜50である、請求項1に記載の化合物。
【請求項１３】
YLが、
2019530707.tif 000140
からなる群より選択されるスペーサー分子である、請求項12に記載の化合物。
【請求項１４】
YLが、以下の構造：
2019530707.tif 000141
を有する、請求項13に記載の化合物。
【請求項１５】
XAAが、ジペプチド配列、トリペプチド配列、テトラペプチド配列、ペンタペプチド配列、ヘキサペプチド配列、ヘプタペプチド配列、オクタペプチド配列、ノナペプチド配列、デカペプチド配列、ウンデカペプチド配列、またはドデカペプチド配列である、請求項12に記載の化合物。
【請求項１６】
XAAがジペプチドである、請求項15に記載の化合物。
【請求項１７】
XAA単位中の各アミノ酸が独立して、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セレノシステイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、またはシトルリン（Cit）からなる群より選択される、請求項12に記載の化合物。
【請求項１８】
XAAが、Ala-Val、Val-Ala、およびVal-Citからなる群より選択される、請求項12に記載の化合物。
【請求項１９】
PEGが、-(CH2CH2O)x-、-HN-(CH2CH2O)x-C(O)-、または-HN-(CH2CH2O)x-CH2CH2-C(O)-からなる群より選択される構造を有するポリエチレングリコール部分であり、ここでxが1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、または15である、請求項12に記載の化合物。
【請求項２０】
PEGが、-(CH2CH2O)x-、-HN-(CH2CH2O)x-C(O)-、または-HN-(CH2CH2O)x-CH2CH2-C(O)-からなる群より選択される構造を有するポリエチレングリコール部分であり、ここでxが8である、請求項12に記載の化合物。
【請求項２１】
以下の化学構造：
2019530707.tif 000142
2019530707.tif 000143
より選択される、請求項1に記載の化合物。
【請求項２２】
G'-Rb'が、
2019530707.tif 000144
より選択される、請求項1に記載の化合物。
【請求項２３】
式II：
2019530707.tif 000145
の構造を有する抗体-薬物結合体：
式中、
2019530707.tif 000146
は抗体または抗体断片であり；
W-RMがジスルフィド部分、チオール化スクシンイミジル部分、アミノ置換スクシンイミジル部分、(シクロオクチル)-1,4トリアゾリル部分、オキシム置換N-グリカン部分、オキシム部分、置換ビス-スルホプロピル部分、スルホンアミジル部分、アミド部分、またはチオカルバメート部分であるように、W-RMはWおよびRxによって形成される連結部分であり、ここで、Wは該抗体/該抗体断片の天然または非天然アミノ酸残基に結合している部分であり、かつRxは、スクシンイミジル部分、マレイミジル部分、シクロオクチニル部分、アミノオキシ部分、ビスルホニル部分、スルホニル部分、またはイソチオシアネート部分であり；
Lは、リンカーLであり、ここで、リンカーLは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつ任意で、エーテル部分、オキソ部分、カルボキサミジル部分、ウレタニル部分、アミノ酸部分、複素環式部分、芳香族部分、またはヘテロ芳香族部分を組み込み；
IQB-CBIは、式I：
2019530707.tif 000147
の構造を有する化合物であり、
式I中、
・-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に示される点線の結合は独立して一重結合または二重結合であり；
○二重結合が-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に存在する場合、-C(Ra)-はオレフィン性でありかつ置換基Raを有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在せず；
○一重結合が-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に存在する場合、-C(Ra)-は飽和でありかつRa置換基の他に水素置換基を有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在し；
・Raは独立してHまたはOHであり；
・存在する場合、Rbは、Hであるか、またはリンカーLとの結合であり；
・R2は、H、OH、C1〜C10アルキル、C2〜C10アルケニル、またはC2〜C10アルキニルより選択され；
・R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6は、それぞれ独立してH、OH、C1〜C10アルキル、C2〜C10アルケニル、もしくはC2〜C10アルキニルより選択されるか、または、YがNである場合には存在せず；
・R5またはR5'のそれぞれは、独立してNH2、CO2H、H、OH、C1〜C10アルキル、C2〜C10アルケニル、C2〜C10アルキニルであるか、リンカーLとの結合であるか、または、YがNである場合には存在せず；
・R7はHであり；
・G'-Rb'はOH、O-L、NH2、またはNH-Lより選択され、ここでLはリンカーLであり；
・各Yは独立してNまたはCであり；
・各Dは独立してn＝0〜4である(CH2)nであり、ただし、少なくとも1つのDはn＝1〜4である(CH2)nであり；
・X1は、
2019530707.tif 000148
からなる群より選択されるスペーサーであり、ここで、Rb、R5、R5'、およびG-Rb'の少なくとも1つは、リンカーLに連結された結合であるか、またはリンカーLを含む。
【請求項２４】
前記抗体がシステイン置換抗体である、請求項23に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項２５】
前記抗体ががんマーカーに特異的に結合する、請求項23に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項２６】
前記がんマーカーが、GPR114、CLL-1、IL1RAP、TIM-3、CD19、CD20、CD22、ROR1、メソテリン、CD33、CD123/IL3Ra、c-Met、PSMA、前立腺酸性ホスファターゼ（PAP）、CEA、CA-125、Muc-1、AFP、糖脂質F77、EGFRvIII、GD-2、NY-ESO-1 TCR、チロシナーゼ、TRPI/gp75、gp100/pmel-17、Melan-A/MART-1、Her2/neu、WT1、EphA3、テロメラーゼ、HPV E6、HPV E7、EBNA1、BAGE、GAGEおよびMAGE A3 TCRSLITRK6、ENPP3、ネクチン-4、CD27、SLC44A4、CAIX、Cripto、CD30、MUC16、GPNMB、BCMA、Trop-2、組織因子（TF）、CanAg、EGFR、αv-インテグリン、CD37、葉酸受容体、CD138、CEACAM5、CD56、CD70、CD74、GCC、5T4、CD79b、Steap1、Napi2b、ルイスY抗原、LIV c-RET、DLL3、EFNA4またはエンドシアリン/CD248、Ly6e (RIG-e)、CD79a、CD274 (PD-L1)、CD38、DLL4、CD319 (SLAM7)である、請求項25に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項２７】
前記がんマーカーがIL1RAPまたはCLL-1である、請求項26に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項２８】
前記抗体または抗体断片が抗IL1RAPまたは抗CLL1である、請求項23に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項２９】
前記IQB-CBI化合物がS,S立体化学を有する、請求項23に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項３０】
Lが、構造：
-YL-XAA-PEG-
を有するリンカーであり、
ここで、
YLが、XAAのアミノ酸単位をIQB単位に連結するスペーサー分子であり；
XAAが、1〜12個のアミノ酸を有するアミノ酸配列であり；
PEGが、構造：
-(CH2CH2O)x-
を有するポリエチレングリコール部分であり、ここでxが1〜50である、請求項23に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項３１】
YLが、
2019530707.tif 000149
からなる群より選択されるスペーサー分子である、請求項30に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項３２】
YLが、以下の構造：
2019530707.tif 000150
を有する、請求項31に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項３３】
XAAが、ジペプチド配列、トリペプチド配列、テトラペプチド配列、ペンタペプチド配列、ヘキサペプチド配列、ヘプタペプチド配列、オクタペプチド配列、ノナペプチド配列、デカペプチド配列、ウンデカペプチド配列、またはドデカペプチド配列である、請求項30に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項３４】
XAAがジペプチドである、請求項33に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項３５】
XAA単位中の各アミノ酸が独立して、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セレノシステイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、またはシトルリン（Cit）からなる群より選択される、請求項30に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項３６】
XAAが、Ala-Val、Val-Ala、およびVal-Citからなる群より選択される、請求項30に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項３７】
PEGが、構造-(CH2CH2O)x-を有するポリエチレングリコール部分であり、ここでxが1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、または15である、請求項30に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項３８】
PEGが、-HN-(CH2CH2O)x-C(O)-または-HN-(CH2CH2O)x-CH2CH2-C(O)-からなる群より選択される構造を有するポリエチレングリコール部分であり、ここでxが1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、または15である、請求項30に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項３９】
PEGが、構造-HN-(CH2CH2O)x-C(O)-を有するポリエチレングリコール部分であり、ここでxが8である、請求項38に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項４０】
RMが、構造：
2019530707.tif 000151
を有する連結基であり、ここで、Zが、-C1〜C10アルキレン-、-C3〜C8シクロアルキル-、-O-(C1〜C8アルキル)-、-(CH2CH2O)r-、および-(CH2CH2O)r-CH2-からなる群より選択され；かつrが1〜10の範囲の整数である、請求項23に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項４１】
RMが、
2019530707.tif 000152
からなる群より選択される構造を有する、請求項23に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項４２】
Lが、ポリエチレングリコールと1〜10個のアミノ酸とを含むリンカーである、請求項23に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項４３】
・W-RMがチオール化スクシンイミジルである、
請求項23に記載の抗体-薬物結合体。
【請求項４４】
請求項1に記載の化合物または請求項23に記載の結合体と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む、薬学的組成物。
【請求項４５】
医薬の製造における請求項1に記載の化合物または請求項23に記載の結合体の使用。
【請求項４６】
がんを有する対象に請求項1に記載の化合物または請求項23に記載の結合体の治療的有効量を投与する段階を含む、がんを処置する方法。
【請求項４７】
処置する前記がんが白血病、リンパ腫、または固形腫瘍である、請求項46に記載の方法。
【請求項４８】
処置する前記がんが骨髄増殖性がんである、請求項46に記載の方法。
【請求項４９】
前記骨髄増殖性がんが、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、多発性骨髄腫、形質細胞腫、および骨髄線維症からなる群より選択される、請求項48に記載の方法。
【請求項５０】
前記結合体が、腫瘍関連抗原にまたはがん幹細胞関連抗原に特異的に結合する抗体を含む、請求項46に記載の方法。
【請求項５１】
前記処置するがんが黒色腫である、請求項46に記載の方法。
【請求項５２】
細胞を請求項1に記載の化合物または請求項23に記載の結合体と接触させる段階を含む、細胞分裂を阻害する方法。
【請求項５３】
複数の第二の容器を含む第一の容器を含み、各第二の容器が請求項23に記載の組成物の単位用量を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
連邦政府が支援する研究に関しての言明
なし。
【０００２】
関連出願の参照
本出願は、全内容があらゆる目的のために参照により本明細書に組み入れられる、2016年10月10日提出の「イソキノリジノ-デュオカルマイシン二量体」なる表題の米国特許仮出願第62/406,077号、および2017年1月27日提出の「イソキノリジノベンゾジアゼピン（IQB）-1(クロロメチル)-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[E]インドール（CBI）二量体」なる表題の米国特許仮出願第62/451,658号の提出日の恩典を主張する国際出願である。
【背景技術】
【０００３】
背景
ベンゾジアザピンは治療薬として用いられている。ベンゾジアゼピン誘導体には、ピロロベンゾジアゼピンが含まれる。ピロロベンゾジアゼピン二量体は、例えば、DNA分子の副溝において結合することにより、DNA架橋剤として機能する。これらの中のいくつかはがんの処置において抗増殖剤として提唱されている。
【０００４】
デュオカルマイシンも治療薬として用いられている。デュオカルマイシンはDNAの副溝に結合する。これらはアデニンをN3位でアルキル化する。デュオカルマイシンの一般構造は、2つの重要な構成要素、すなわち1-(クロロメチル)-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e]インドール（CBI）などのDNAアルキル化単位、およびDNAに非共有結合するインドール-2カルボニル単位を有する。
【発明の概要】
【０００５】
概要
本発明は、イソキノリジノベンゾジアゼピン-1(クロロメチル)-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e]インドール（「IQB-CBI」）化合物およびその使用法を提供する。1つの局面において、式I：
2019530707.tif 000003
を有する化合物が本明細書で提供され、
式中、
・-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に示される点線の結合は独立して一重結合または二重結合であり；
○二重結合が-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に存在する場合、-C(Ra)-はオレフィン性でありかつ置換基Raを有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在せず；
○一重結合が-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に存在する場合、-C(Ra)-は飽和でありかつRa置換基の他に水素置換基を有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在し；
・Raは独立してHまたはOHであり；
・存在する場合、RbはH、L-Rxまたは-L-Scであり；
・-L-Rxは反応性部分Rxに結合しているリンカーLであり、かつ-L-Scは物質Scに結合しているリンカーLであり；ここで、単独での場合またはRxもしくはScとの組み合わせでの場合のLは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつ任意で、エーテル部分、オキソ部分、カルボキサミジル部分、ウレタニル部分、分枝部分、環式部分、不飽和部分、複素環式部分、芳香族部分、またはヘテロ芳香族部分を組み込み；Rxは反応性部分であり；Scは、タンパク質、タンパク質の一部、ペプチド、または核酸より選択される標的結合物質であり；
・R2は、H、OH、C1〜C10アルキル、C2〜C10アルケニル、またはC2〜C10アルキニルより選択され；
・R3、R3'、R4、R4'、R6、およびR6'は、それぞれ独立してH、OH、C1〜C10アルキル、C2〜C10アルケニル、もしくはC2〜C10アルキニルより選択されるか、または、YがNである場合には存在せず；
・R5またはR5'のそれぞれは、独立してNH2、CO2H、H、OH、C1〜C10アルキル、C2〜C10アルケニル、C2〜C10アルキニル、-L-Rx、もしくは-L-Scであるか、または、YがNである場合には存在せず；
・R7はHであり；
・G'-Rb'は、OH、O-L、O-L-Rx、O-L-Sc、NH2、NH-L、NH-L-Rx、またはNH-L-Scより選択され；
・各Yは独立してNまたはCであり；
・各Dは独立してn＝0〜4である(CH2)nであり、ただし、少なくとも1つのDはn＝1〜4である(CH2)nであり；
・X1は表Iに列挙した式のいずれかである。
【０００６】
【表Ｉ】
2019530707.tif 000004
【０００７】
式I中のCおよびClに結合された炭素のC-C結合は、RもしくはS型で存在し得、または組成物はラセミ混合物の一部であり得る。好ましい態様において、IQB-CBI化合物はS,S配置を有し、好ましくは立体異性的に純粋である。
【０００８】
別の局面において、式II：
2019530707.tif 000005
を有する抗体-薬物結合体が本明細書で提供され、
式中、
2019530707.tif 000006
は抗体または抗体断片であり；
W-RMがジスルフィド部分、チオール化スクシンイミジル部分、アミノ置換スクシンイミジル部分、(シクロオクチル)-1,4トリアゾリル部分、オキシム置換N-グリカン部分、オキシム部分、置換ビス-スルホプロピル部分、スルホンアミジル部分、アミド部分、またはチオカルバメート部分であるように、W-RMはWおよびRxによって形成される連結部分であり、ここで、Wは抗体/抗体断片の天然または非天然アミノ酸残基に結合している部分であり、かつRxは、スクシンイミジル部分、マレイミジル部分、シクロオクチニル部分、アミノオキシ部分、ビスルホニル部分、スルホニル部分、またはイソチオシアネート部分であり；
Lはリンカーであり；
IQB-CBIは、式I：
2019530707.tif 000007
の構造を有する化合物であり、
式I中、
・-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に示される点線の結合は独立して一重結合または二重結合であり；
○二重結合が-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に存在する場合、-C(Ra)-はオレフィン性でありかつ置換基Raを有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在せず；
○一重結合が-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に存在する場合、-C(Ra)-は飽和でありかつRa置換基の他に水素置換基を有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在し；
・Raは独立してHまたはOHであり；
・存在する場合、RbはHまたは-L-であり；
・-L-はリンカーLであり、ここで、Lは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつ任意で、エーテル部分、オキソ部分、カルボキサミジル部分、ウレタニル部分、分枝部分、環式部分、複素環式部分、芳香族部分、またはヘテロ芳香族部分を組み込み；
・R2は、H、OH、C1〜C10アルキル、C2〜C10アルケニル、またはC2〜C10アルキニルより選択され；
・R3、R3'、R4、R4'、R6、およびR6'は、それぞれ独立してH、OH、C1〜C10アルキル、C2〜C10アルケニル、もしくはC2〜C10アルキニルより選択されるか、または、YがNである場合には存在せず；
・R5またはR5'のそれぞれは、独立してNH2、CO2H、H、OH、C1〜C10アルキル、C2〜C10アルケニル、C2〜C10アルキニル、-L-、-L-Rx、もしくは-L-Scであるか、または、YがNである場合には存在せず；
・R7はHであり；
・G'-Rb'は、OH、O-L、O-L-Rx、O-L-Sc、NH2、NH-L、NH-L-Rx、またはNH-L-Scより選択され；
・各Yは独立してNまたはCであり；
・各Dは独立してn＝0〜4である(CH2)nであり、ただし、少なくとも1つのDはn＝1〜4である(CH2)nであり；
・X1は、以下の式：
2019530707.tif 000008
より選択されるスペーサー基であり、
Rb、R5、R5'、およびG'-Rb'の少なくとも1つは-L-を含む。
【０００９】
好ましい態様において、式IIの抗体-薬物結合体は、以下の構造：
2019530707.tif 000009
を有し、
ここで、
2019530707.tif 000010
は抗体または抗体断片であり；
W-RMがジスルフィド部分、チオール化スクシンイミジル部分、アミノ置換スクシンイミジル部分、(シクロオクチル)-1,4トリアゾリル部分、オキシム置換N-グリカン部分、オキシム部分、置換ビス-スルホプロピル部分、スルホンアミジル部分、アミド部分、またはチオカルバメート部分であるように、W-RMはWおよびRxによって形成される連結部分であり、ここで、Wは抗体/抗体断片の天然または非天然アミノ酸残基に結合している部分であり、かつRxは、スクシンイミジル部分、マレイミジル部分、シクロオクチニル部分、アミノオキシ部分、ビスルホニル部分、スルホニル部分、またはイソチオシアネート部分であり；
LはリンカーLであり、ここで、リンカーLは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつ任意で、エーテル部分、オキソ部分、カルボキサミジル部分、ウレタニル部分、アミノ酸部分、複素環式部分、芳香族部分、またはヘテロ芳香族部分を組み込み；
IQB-CBIは、式I：
2019530707.tif 000011
の構造を有する化合物であり、
式I中、
・-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に示される点線の結合は独立して一重結合または二重結合であり；
○二重結合が-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に存在する場合、-C(Ra)-はオレフィン性でありかつ置換基Raを有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在せず；
○一重結合が-C(Ra)-と-N(Rb)-との間に存在する場合、-C(Ra)-は飽和でありかつRa置換基の他に水素置換基を有し、かつ-N(Rb)-のRbは存在し；
・Raは独立してHまたはOHであり；
・存在する場合、Rbは、Hであるか、またはリンカーLとの結合であり；
・R2はH、OH、C1〜C10アルキル、C2〜C10アルケニル、またはC2〜C10アルキニルより選択され；
・R3、R3'、R4、R4'、R6'、およびR6は、それぞれ独立してH、OH、C1〜C10アルキル、C2〜C10アルケニル、もしくはC2〜C10アルキニルより選択されるか、または、YがNである場合には存在せず；
・R5またはR5'のそれぞれは、独立してNH2、CO2H、H、OH、C1〜C10アルキル、C2〜C10アルケニル、C2〜C10アルキニルであり、リンカーLとの結合であるか、または、YがNである場合には存在せず；
・R7はHであり；
・G'-Rb'はOH、O-L、NH2、またはNH-Lより選択され、ここでLはリンカーLであり；
・各Yは独立してNまたはCであり；
・各Dは独立してn＝0〜4である(CH2)nであり、ただし、少なくとも1つのDはn＝1〜4である(CH2)nであり；
・X1は、
2019530707.tif 000012
からなる群より選択されるスペーサーであり、ここで、Rb、R5、R5'、およびG-Rb'の少なくとも1つは、リンカーLに連結された結合であるか、またはリンカーLを含む。
【００１０】
好ましい態様において、式IのIQB-CBI化合物は、以下のとおりのS,S立体化学：
2019530707.tif 000013
を有し、ここで、該IQB-CBI化合物の置換基はすべて前述の定義のとおりである。同様に、好ましい態様において、式IIの抗体-薬物結合体のIQB-CBI部分もS,S立体化学を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】IQB酸11a〜eの合成を示す。
【図２】アミノCBI部分の合成およびIQB-アミノCBI二量体の最終構築を示す。
【図３】ヒドロキシCBI部分の合成ならびにD811、D813、D815、およびD817の最終構築を示す。
【図４−１】IQB-アミノ二量体化合物およびヒドロキシ-CBI二量体化合物の構造を示す。
【図４−２】IQB-アミノ二量体化合物およびヒドロキシ-CBI二量体化合物の構造を示す。
【図５】スペーサー基X1が、例えば、表Iにおいて開示するX1スペーサーより選択される、IQB酸11の合成を示す。
【図６−１】CBI部分の合成およびX1スペーサーが、例えば、表Iにおいて開示するX1スペーサーより選択される、IQB-CBI二量体バリアントの構築を示す。
【図６−２】CBI部分の合成およびX1スペーサーが、例えば、表Iにおいて開示するX1スペーサーより選択される、IQB-CBI二量体バリアントの構築を示す。
【図７】リンカーLの合成を示す。
【図８】カーボネートD816の合成を示す。
【図９−１】カルバメートD818の合成を示す。
【図９−２】カルバメートD818の合成を示す。
【図１０−１】エーテル誘導体（D820およびD820bの合成を示す。
【図１０−２】エーテル誘導体（D820およびD820bの合成を示す。
【図１１】リンカーLの合成を示す。
【図１２】CBI部分の合成を示す。
【図１３−１】IQB部分の合成および最終構築（パート1）を示す。
【図１３−２】IQB部分の合成および最終構築（パート1）を示す。
【図１４】IQB部分の合成および最終構築（パート2）を示す。
【図１５】IL1RAP-IQB-CBI二量体(D816〜D820)-ADCの結合アッセイ法の結果を示す。
【図１６】IL1RAP-IQB-CBI二量体(D822、D824、D826、D828)-ADCの結合アッセイ法の結果を示す。
【図１７】抗IL1RAP-D816 ADCによる標的依存性細胞殺滅を示す。
【図１８】抗IL1RAP-D818 ADCによる標的依存性細胞殺滅を示す。
【図１９】抗IL1RAP-D820 ADCによる標的依存性細胞殺滅を示す。
【図２０】抗IL1RAP-D822 ADCによる標的依存性細胞殺滅を示す。
【図２１】抗IL1RAP-D824 ADCによる標的依存性細胞殺滅を示す。
【図２２】抗IL1RAP-D826 ADCによる標的依存性細胞殺滅を示す。
【図２３】抗IL1RAP-D828 ADCによる標的依存性細胞殺滅を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
発明の詳細な説明
I.  化合物
本開示は、式Iのイソキノリジノベンゾジアゼピン-1(クロロメチル)-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e]インドール（「IQB-CBI」）化合物、式IIの抗体-薬物結合体、ならびに式Iの化合物および式IIの抗体-薬物結合体の使用法を提供する。1つの局面において、式IのIQB-CBI化合物は、本明細書に記載の以下の構造：
2019530707.tif 000014
を有する。別の局面において、式IIの抗体-薬物結合体は、本明細書に記載の以下の構造：
2019530707.tif 000015
を有する。
【００１３】
II.  定義
本明細書において言及される「アルキル」と、親アルカンの1つの炭素原子から1つの水素原子を除去することにより誘導される、示された数の炭素原子を有する（すなわち、C1〜C6は1〜6つの炭素原子を意味する）飽和、分枝もしくは直鎖または環式、一価炭化水素基を意味する。典型的アルキル基には、メチル；エチル；プロパン-1-イル、プロパン-2-イル、シクロプロパン-1-イルなどのプロピル；ブタン-1-イル、ブタン-2-イル、2-メチル-プロパン-1-イル、2-メチル-プロパン-2-イル、シクロブタン-1-イルなどのブチルなどが含まれるが、それらに限定されない。いくつかの態様において、「アルキル」は、親アルカンの1つの炭素原子から1つの水素原子を除去することにより誘導される、示された数の炭素原子を有する（すなわち、C1〜C6は1〜6つの炭素原子を意味する）飽和、分枝または直鎖、一価炭化水素基を意味する。典型的アルキル基には、メチル；エチル；プロパン-1-イル、プロパン-2-イルなどのプロピル；ブタン-1-イル、ブタン-2-イル、2-メチル-プロパン-1-イル、2-メチル-プロパン-2-イルなどのブチルなどが含まれるが、それらに限定されない。
【００１４】
本明細書において言及される「アルケニル」は、親アルケンの1つの炭素原子から1つの水素原子を除去することにより誘導される、少なくとも1つの炭素-炭素二重結合を有する不飽和分枝、直鎖または環式アルキルを意味する。基は二重結合の周りでシスまたはトランス配座のいずれであってもよい。典型的アルケニル基には、エテニル；プロパ-1-エン-1-イル、プロパ-1-エン-2-イル、プロパ-2-エン-1-イル、プロパ-2-エン-2-イル、シクロプロパ-1-エン-1-イル；シクロプロパ-2-エン-1-イルなどのプロペニル；ブタ-1-エン-1-イル、ブタ-1-エン-2-イル、2-メチル-プロパ-1-エン-1-イル、ブタ-2-エン-1-イル、ブタ-2-エン-2-イル、ブタ-1,3-ジエン-1-イル、ブタ-1,3-ジエン-2-イル、シクロブタ-1-エン-1-イル、シクロブタ-1-エン-3-イル、シクロブタ-1,3-ジエン-1-イルなどのブテニルなどが含まれるが、それらに限定されない。本明細書において用いられる「低級アルケニル」は、(C2〜C8)アルケニルを意味する。いくつかの態様において、「アルケニル」は、親アルケンの1つの炭素原子から1つの水素原子を除去することにより誘導される、少なくとも1つの炭素-炭素二重結合を有する不飽和分枝、直鎖アルキルを意味する。基は二重結合の周りでシスまたはトランス配座のいずれであってもよい。典型的アルケニル基には、エテニル；プロパ-1-エン-1-イル、プロパ-1-エン-2-イル、プロパ-2-エン-1-イル、プロパ-2-エン-2-イルなどのプロペニル；ブタ-1-エン-1-イル、ブタ-1-エン-2-イル、2-メチル-プロパ-1-エン-1-イル、ブタ-2-エン-1-イル、ブタ-2-エン-2-イル、ブタ-1,3-ジエン-1-イル、ブタ-1,3-ジエン-2-イルなどのブテニルなどが含まれるが、それらに限定されない。本明細書において用いられる「低級アルケニル」は、(C2〜C8)アルケニルを意味する。
【００１５】
本明細書において言及される「アルキニル」は、親アルキンの1つの炭素原子から1つの水素原子を除去することにより誘導される、少なくとも1つの炭素-炭素三重結合を有する不飽和分枝、直鎖または環式アルキルを意味する。典型的アルキニル基には、エチニル；プロパ-1-イン-1-イル、プロパ-2-イン-1-イルなどのプロピニル；ブタ-1-イン-1-イル、ブタ-1-イン-3-イル、ブタ-3-イン-1-イルなどのブチニルなどが含まれるが、それらに限定されない。本明細書において用いられる「低級アルキニル」は、(C2〜C8)アルキニルを意味する。いくつかの態様において、「アルキニル」は、親アルキンの1つの炭素原子から1つの水素原子を除去することにより誘導される、少なくとも1つの炭素-炭素三重結合を有する不飽和分枝、直鎖アルキルを意味する。典型的アルキニル基には、エチニル；プロパ-1-イン-1-イル、プロパ-2-イン-1-イルなどのプロピニル；ブタ-1-イン-1-イル、ブタ-1-イン-3-イル、ブタ-3-イン-1-イルなどのブチニルなどが含まれるが、それらに限定されない。本明細書において用いられる「低級アルキニル」は、(C2〜C8)アルキニルを意味する。
【００１６】
環式アルキル、アルケニル、およびアルキニル基は、「シクロアルキル」なる用語によっても定義され、これは3〜12個の環原子、または示された数の原子を含む飽和または部分不飽和、単環式、縮合二環式、または架橋多環式環構築体を意味する。シクロアルキルは、C3〜6、C4〜6、C5〜6、C3〜8、C4〜8、C5〜8、C6〜8、C3〜9、C3〜10、C3〜11、およびC3〜12などの任意の数の炭素を含み得る。飽和単環式シクロアルキル環には、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロオクチルが含まれる。飽和二環式および多環式シクロアルキル環には、例えば、ノルボルナン、[2.2.2]ビシクロオクタン、デカヒドロナフタレン、およびアダマンタンが含まれる。シクロアルキル基は、環内に1つまたは複数の二重または三重結合を有する、部分不飽和でもあり得る。部分不飽和である代表的シクロアルキル基には、シクロブテン、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘキサジエン（1,3-および1,4-異性体）、シクロヘプテン、シクロヘプタジエン、シクロオクテン、シクロオクタジエン（1,3-、1,4-および1,5-異性体）、ノルボルネン、およびノルボルナジエンが含まれるが、それらに限定されない。シクロアルキルが飽和単環式C3〜8シクロアルキルである場合、例示的な基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルが含まれるが、それらに限定されない。シクロアルキルが飽和単環式C3〜6シクロアルキルである場合、例示的な基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが含まれるが、それらに限定されない。シクロアルキル基は置換されていても、無置換でもよい。
【００１７】
本明細書において言及される「アルキレン」は、二価アルキル部分を意味する。
【００１８】
本明細書において言及される「アルコキシ」は、アルキル基を結合点に接続する酸素原子を有するアルキル基：アルキル-O-を意味する。アルキル基に関して、アルコキシ基はC1-6などの任意の適切な数の炭素原子を有し得る。アルコキシ基には、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、2-ブトキシ、イソブトキシ、sec-ブトキシ、tert-ブトキシ、ペントキシ、ヘキソキシなどが含まれる。アルコキシ基は、本明細書に記載の様々な置換基でさらに置換され得る。アルコキシ基は置換されていても、無置換でもよい。
【００１９】
本明細書において言及される「ハロゲン化物」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを意味する。
【００２０】
本明細書において言及される「カルボキサミド」は、式-C(=O)NH2を有する一価部分を意味する。いくつかの態様において、アミド水素の1つまたは両方は、水素以外の置換基で置き換えられてもよい。
【００２１】
本明細書において言及される「カルボキシアミジル」は、式-C(=O)N(H)-を有する二価部分を意味する。いくつかの態様において、アミド水素は他の置換基で置き換えられてもよい。
【００２２】
本明細書において言及される「オキソ」は、炭素に結合されている式：
2019530707.tif 000016
を有する部分を意味する。
【００２３】
本明細書において言及される「カルボキシル」は、式-C(O)OHまたは-C(O)O-を有する部分を意味する。
【００２４】
本明細書において言及される「ヘテロアルキル」は、任意の適切な長さの、かつ、1〜3つのN、O、およびSなどのヘテロ原子を有する、アルキル基を意味する。B、Al、SiおよびPを含むが、それらに限定されない、さらなるヘテロ原子も有用であり得る。ヘテロ原子は、-S(O)-および-S(O)2-などであるが、それらに限定されない、酸化型でもあり得る。例えば、ヘテロアルキルにはエーテル、チオエーテルおよびアルキル-アミンが含まれ得る。ヘテロアルキルのヘテロ原子部分は、アルキル基の水素に置き換わって、ヒドロキシ、チオまたはアミノ基を形成し得る。または、ヘテロ原子部分は接続原子であり得、または2つの炭素原子の間に挿入され得る。
【００２５】
本明細書において言及される「複素環式」または「ヘテロシクリル」は、環炭素に置き換わるヘテロ原子置換を有する、飽和または部分不飽和、非芳香族単環式または多環式アルキル環式部分である部分を意味する。本発明の複素環式環は、環原子の1〜5つまたはそれ以上がN、O、またはSなどのヘテロ原子である、3〜20個の環原子を含み得る。B、Al、Si、およびPを含むが、それらに限定されない、さらなるヘテロ原子も有用であり得る。ヘテロ原子は、-S(O)-および-S(O)2-などであるが、それらに限定されない、酸化型でもあり得る。複素環式基は、3〜6、4〜6、5〜6、3〜8、4〜8、5〜8、6〜8、3〜9、3〜10、3〜11、または3〜12個の環構成員などの、任意の数の環原子を含み得る。1、2、3、4、もしくは5つ、または1〜2、1〜3、1〜4、1〜5、2〜3、2〜4、2〜5、3〜4、もしくは3〜5つなどの、任意の適切な数のヘテロ原子が複素環式基に含まれ得る。複素環式基は、3〜8つの環構成員および1〜4つのヘテロ原子、または3〜8つの環構成員および1〜3つのヘテロ原子、または3〜6つの環構成員および1〜4つのヘテロ原子、または3〜6つの環構成員および1〜3つのヘテロ原子を有し得る。多環式複素環式部分は縮合環を有してもよい。典型的複素環式基には、テトラヒドロフラニル（例えば、テトラヒドロフラン-2-イル、テトラヒドロフラン-3-イルなど）、ピペリジニル（例えば、ピペリジン-1-イル、ピペリジン-2-イルなど）、モルホリニル（例えば、モルホリン-3-イル、モルホリン-4-イルなど）、ピペラジニル（例えば、ピペラジン-1-イル、ピペラジン-2-イルなど）などが含まれるが、それらに限定されない。
【００２６】
本明細書において言及される「芳香族」または「アリール」は、親芳香環系の1つの炭素原子から1つの水素原子を除去することにより誘導される、示された数の炭素原子を有する（すなわち、C6〜C14は6〜14個の炭素原子を意味する）一価芳香族炭化水素基を意味する。典型的アリール基には、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、コロネン、フルオランテン、フルオレン、ヘキサセン、ヘキサフェン、ヘキシレン、as-インダセン、s-インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、オクタセン、オクタフェン、オクタレン、オバレン、ペンタセン、ペンタレン、ペンタフェン、ペリレン、フェナレン、フェナントレン、ピセン、プレイアデン、ピレン、ピラントレン、ルビセン、トリフェニレン、トリナフタレンなどから誘導される基、ならびにその様々なヒドロ異性体が含まれるが、それらに限定されない。具体的な例示的アリールにはフェニルおよびナフチルが含まれる。
【００２７】
本明細書において言及される「ヘテロ芳香族」または「ヘテロアリール」は、環原子の1〜5つがN、O、またはSなどのヘテロ原子である、5〜16個の環原子を含む単環式または縮合二環式もしくは三環式芳香環構築体を意味する。B、Al、Si、およびPを含むが、それらに限定されない、さらなるヘテロ原子も有用であり得る。ヘテロ原子は、-S(O)-および-S(O)2-などであるが、それらに限定されない、酸化型でもあり得る。ヘテロアリール基は、5〜6、5〜8、6〜8、5〜9、5〜10、5〜11、または5〜12個の環構成員などの、任意の数の環原子を含み得る。1、2、3、4、もしくは5つ、または1〜2、1〜3、1〜4、1〜5、2〜3、2〜4、2〜5、3〜4、もしくは3〜5つなどの、任意の適切な数のヘテロ原子がヘテロアリール基に含まれ得る。ヘテロアリール基は、5〜8つの環構成員および1〜4つのヘテロ原子、または5〜8つの環構成員および1〜3つのヘテロ原子、または5〜6つの環構成員および1〜4つのヘテロ原子、または5〜6つの環構成員および1〜3つのヘテロ原子を有し得る。ヘテロアリール基は、ピロール、ピリジン、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、テトラゾール、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、トリアジン（1,2,3-、1,2,4-および1,3,5-異性体）、チオフェン、フラン、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、およびイソキサゾールなどの基を含み得る。ヘテロアリール基は、フェニル環などの芳香環系に縮合して、インドールおよびイソインドールなどのベンゾピロール、キノリンおよびイソキノリンなどのベンゾピリジン、ベンゾピラジン（キノキサリン）、ベンゾピリミジン（キナゾリン）、フタラジンおよびシンノリンなどのベンゾピリダジン、ベンゾチオフェン、ならびにベンゾフランを含むが、それらに限定されない、メンバーを形成し得る。他のヘテロアリール基には、ビピリジンなどの、結合によって連結されたヘテロアリール環が含まれる。ヘテロアリール基は置換されていても、無置換でもよい。
【００２８】
本明細書において言及される「C1〜C12」は、記載する基に含まれる炭素原子の数の範囲を意味する。例えば、C1〜C12アルキルは、1つの炭素から12個の炭素原子を有し、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、または12個の炭素の任意の1つであり得る。C1アルキルはメチルであり、C2アルキルはエチルであり、他も同様である。C1〜C10についての言及は1〜10個の炭素を意味し、C1〜C6は1〜6つの炭素を意味し、C1〜C3は1〜3つの炭素を意味し、他も同様である。
【００２９】
本明細書において言及される「置換」は、水素基が除去され、別の非水素置換基がそれに置き換わっている部分を意味する。化学的結合価の規則が遵守されている限り、任意の部分に複数の置換基が組み込まれてもよい。アルキル、アルケニル、アルキニル、芳香族またはヘテロ環式基における使用に適した置換基には、RがC1〜C6アルキルである以下の置換基：-OH、-OR、-NH2、-NHR、-NR2、-CO2H、-CO2R、-C(O)NH2、-C(O)NHR、-C(O)NR2、ハロゲン化物、オキソ、およびRが含まれるが、それらに限定されない。
【００３０】
本明細書において言及される波線の結合
2019530707.tif 000017
は、本発明の化合物の立体中心を示す。当業者であれば、その結合が分子のキラル立体配置（RまたはSおよび最終的には右旋性または左旋性効果）を決定することを理解するであろう。破線状のくさび形結合は、具体的なキラル配置を示すために用いられる。本発明のIQB-CBI化合物、ならびにそのようなIQB-CBI化合物を組み込む抗体-薬物結合体は、例えば、以下の立体化学：S,S；R,R；S,R；およびR,Sを有し得る。式IのIQB-CBI化合物、ならびに式IIのIQB-CBI化合物を組み込む抗体-薬物結合体において、S,S立体化学が好ましく、式IのIQB-CBI化合物は立体化学的または鏡像異性的に純粋（少なくとも80％の鏡像異性的純度、少なくとも85％の鏡像異性的純度、少なくとも90％の鏡像異性的純度、少なくとも95％の鏡像異性的純度、少なくとも97％の鏡像異性的純度、少なくとも100％の鏡像異性的純度）であることがさらに好ましい。
【００３１】
本明細書において言及される「核酸」なる用語は、ヌクレオシド間連結によって結合されたヌクレオシド（デオキシリボヌクレオシド、リボヌクレオシド，またはその類縁体を含む）の直鎖ポリマーを意味する。核酸は、「ポリヌクレオチド」ならびに「オリゴヌクレオチド」なる用語を包含し得る。直鎖ポリマーは、「ATGCCTG」などの、文字の配列によって表してもよく、ここで、特に記載がない限り、ヌクレオチドは左から右へ5'から3'の順であること、および「A」はデオキシアデノシンを示し、「C」はデオキシシチジンを示し、「G」はデオキシグアノシンを示し、かつ「T」はデオキシチミジンを示すことが理解されるであろう。別の天然ヌクレオチドは、ウリジンを示す「U」である。A、C、G、T、およびUなる文字は、当技術分野において標準的なものであるように、塩基自体を指すため、ヌクレオシドを指すため、または塩基を含むヌクレオチドを指すために用いることができる。天然核酸において、ヌクレオシド間連結は典型的にはホスホジエステル結合であり、サブユニットは「ヌクレオチド」と呼ぶ。核酸は、ホスホロチオエート連結などの、他のヌクレオシド間連結を含んでもよい。リン酸基を含まない、そのようなヌクレオチドの類縁体も、本明細書において用いられる「ヌクレオチド」なる用語の範囲内に入ると考えられ、ホスホジエステル連結ではない1つまたは複数のヌクレオシド間連結を含む核酸もまだ、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」などと呼ぶ。
【００３２】
「アミノ酸」なる用語は、20個の「標準」または「天然」アミノ酸と、天然アミノ酸と同様に機能する、改変または合成アミノ酸ならびにアミノ酸類縁体およびアミノ酸様物質などの、「非天然」アミノ酸とも呼ぶ「非標準」アミノ酸との両方を意味する。天然アミノ酸は、遺伝暗号によってコードされるものである。改変アミノ酸には、例えば、ヒドロキシプロリン、γ-カルボキシグルタミン酸、およびO-ホスホセリンが含まれる。アミノ酸類縁体は、天然アミノ酸と同じ基本化学構造、例えば、水素に結合したα炭素、カルボキシル基、アミノ基、およびR基を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホキシドを意味する。そのような類縁体は改変されたR基（例えば、ノルロイシン）または改変されたペプチド骨格を有し得るが、天然アミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。アミノ酸様物質は、アミノ酸の一般的化学構造とは異なる構造を有するが、天然アミノ酸と同様に機能する、化学化合物を意味する。
【００３３】
リンカーLは、結合であるか、またはC、N、O、S、もしくはハロゲンより選択される1〜200個の非水素原子を有する部分であり、かつ任意で、エーテル部分、オキソ部分、カルボキシル部分、カルボキサミド部分、カルボキシアミジル部分、ウレタニル部分、分枝部分、環式部分、不飽和部分、アミノ酸部分、ヘテロ環式部分、芳香族部分、またはヘテロ芳香族部分を組み込んでいる。リンカーLは、非分枝または分枝、可撓性または剛性、短鎖または長鎖であってもよく、有用と思われる部分の任意の組み合わせを組み込んでもよい。いくつかの態様において、リンカーLの少なくとも一部はポリアルキレンオキシドポリマー領域を有してもよく、これは式IまたはIIの化合物の溶解性を増強し得る。いくつかの態様において、リンカーLは、エチレングリコールの反復単位を有してもよく、約1〜約25個の数、またはその間の任意の数の反復エチレングリコール単位を有してもよい。いくつかの態様において、Lは、約3〜約20個、約4〜約15個、約5〜約12個、または約6〜約10個のエチレングリコール単位を含んでもよい。いくつかの態様において、リンカーLの少なくとも一部は、式IもしくはIIの化合物の溶解性増強を提供し得る、または標的結合を増強するため、標的結合物質との適合性を増強するため、もしくは標的結合認識を増強するためのアミノ酸配列を提供し得る、1つまたは複数のアミノ酸部分を含んでもよい。他の態様において、リンカーLは、プロテアーゼの適切な基質モティーフを提供する1つまたは複数のアミノ酸部分を含んでもよい。選択されたプロテアーゼに特異的な基質モティーフを提供するひと組のアミノ酸部分がリンカーLに組み込まれている場合、式IまたはIIの細胞障害性薬物化合物は、標的に結合した結合体から遊離されて局在的細胞障害性効果を提供し得る。そのような基質モティーフは、当技術分野において公知であり、望まれるリンカーLに組み込まれて標的に結合した結合体からの選択的遊離を提供し得る。この選択性は、結合体薬物の局在的送達領域内で公知の所望のプロテアーゼの存在に基づき得る。ポリ酸、多糖、またはポリアミンなどの、他のポリマー型の部分をリンカーLに組み込んでもよい。置換芳香族部分またはヘテロ芳香族部分などの、他の部分を用いて、剛性を増強してもよいか、あるいは反応性部分にまたは式IもしくはIIの化合物に連結するために、その中の置換基における合成的に利用可能な部位を提供してもよい。
【００３４】
リンカーLは様々な基または部分を含むことができる。例えば、リンカーLは、スペーサー（-YL-）、アミノ酸配列（XAA）、およびポリエチレングリコール（PEGまたは-CH2CH2O-）部分を含むことができる。代表的リンカーLは以下の構造：
-YL-XAA-PEG-
を有することができる。
【００３５】
アミノ酸単位（-XAA-）は、存在する場合、PEG単位が存在する場合にはPEG単位を、または反応性部分を、スペーサー単位が存在する場合にはスペーサー単位に連結する。XAAは、ジペプチド単位、トリペプチド単位、テトラペプチド単位、ペンタペプチド単位、ヘキサペプチド単位、ヘプタペプチド単位、オクタペプチド単位、ノナペプチド単位、デカペプチド単位、ウンデカペプチド単位、またはドデカペプチド単位である。XAA基の各アミノ酸は、アルギニン、ヒスチジン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セレノシステイン、グリシン、プロリン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、またはシトルリン（Cit）であり得る。本発明の化合物のXAA単位は、腫瘍関連プロテーゼを含む1つまたは複数の酵素により酵素的に切断されて、IQB-CBI単位を遊離し得る。好ましいXAA単位には、Ala-Val、Val-Ala、およびVal-Citが含まれるが、それらに限定されない。
【００３６】
スペーサー-YL-は、存在する場合、アミノ酸単位が存在する場合にはアミノ酸単位をIQB単位に連結する。スペーサー単位は、2つの一般的な型、すなわち自壊性（self-immolative）および非自壊性（non-self-immolative）のものである。非自壊性スペーサー単位は、抗体-薬物結合体（ADC）からのアミノ酸単位の切断、特に酵素的切断後に、スペーサー単位の一部または全部がIQB単位に結合したままのものである。非自壊性スペーサー単位の例には、(グリシン-グリシン)スペーサー単位およびグリシンスペーサー単位が含まれるが、それらに限定されない。グリシン-グリシンスペーサー単位またはグリシンスペーサー単位を含む本発明の化合物が、腫瘍細胞関連プロテアーゼ、がん細胞関連プロテアーゼまたはリンパ球関連プロテアーゼによる酵素的切断を受けると、グリシン-グリシン-薬物部分またはグリシン-薬物部分がL-Aa-Ww-から切断される。1つの態様において、独立した加水分解反応が標的細胞内で起こり、グリシン-薬物単位結合を切断して薬物を遊離する。
【００３７】
好ましい態様において、-YL-は、p-アミノベンジルアルコール（PAB）単位：
2019530707.tif 000018
である。
【００３８】
1つの態様において、非自壊性スペーサー単位（-YL-）は-Gly-Gly-である。
【００３９】
別の態様において、非自壊性スペーサー単位（-YL-）は-Gly-である。
【００４０】
1つの態様において、本発明は、スペーサー単位が存在しない化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。
【００４１】
または、自壊性スペーサー単位を含む本発明の化合物は、別の加水分解段階の必要なしに、IQBまたはCBI単位を遊離することができる。この態様において、-YL-は、PAB基のアミノ窒素原子を介して-XAA-に連結され、かつカーボネート、カルバメートまたはエーテル基を介してIQBまたはCBI単位のいずれかに直接接続されている、PAB基である。
【００４２】
いくつかの態様において、-L-Rxは、構造：
2019530707.tif 000019
を有し、
ここで、
Tは、前述のものならびにp-アミノベンジルオキシカルボニル基またはp-アミノベンジルアルコール（PAB）単位などの、自壊性基であり；
tは0または1であり；
Aaおよび各Abは独立して、アラニン、β-アラニン、γ-アミノ酪酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、γ-カルボキシグルタミン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンからなる群より選択され；
pは1、2、3、または4であり；
qは1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、または12であり；
nは1、2、3、4、または5であり；
sは0または1であり；
Rxは、
2019530707.tif 000020
であり、波線は、結合の位置、すなわち点を示す。
【００４３】
自壊性スペーサーの他の例には、2-アミノイミダゾル-5-メタノール誘導体（Hay et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1999, 9, 2237参照）およびオルトまたはパラ-アミノベンジルアセタールなどのPAB基に電子的に類似の芳香族化合物が含まれるが、それらに限定されない。置換および無置換4-アミノ酪酸アミド（Rodrigues et al., Chemistry Biology, 1995, 2, 223）、適切に置換されたビシクロ[2.2.1]およびビシクロ[2.2.2]環系（Storm, et al., J. Amer. Chem. Soc., 1972, 94, 5815）ならびに2-アミノフェニルプロピオン酸アミド（Amsberry, et al., J. Org. Chem., 1990, 55, 5867）などの、アミド結合の加水分解後に環化を起こす、スペーサーを用いることができる。グリシンのa位で置換されているアミン含有薬物の脱離（Kingsbury, et al., J. Med. Chem., 1984, 27, 1447）も、本発明の化合物において有用な自壊性スペーサーの例である。
【００４４】
好ましいスペーサー単位（-YL-）は、
2019530707.tif 000021
であり得る。
【００４５】
例えば、リンカーLはエチレングリコール反復単位、およびアミノ酸配列を含むことができる。いくつかの態様において、リンカーLは、XAAがアミノ酸配列である式：
-(CH2CH2O)1〜50-XAA-
を含む。
【００４６】
本発明のリンカーLにおいて、任意の適切な数のエチレングリコール単位を用いることができる。例えば、リンカーLは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、15、16、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、および50個またはそれ以上のエチレングリコール単位（上下限を含む、1〜40個のエチレングリコール単位の範囲内のすべての範囲を含む）を含むことができる。例えば、リンカーLは1〜25個のエチレングリコール単位、好ましくは2〜20個のエチレングリコール単位、より好ましくは2〜15個、さらにより好ましくは5〜15個のエチレングリコール単位を含むことができる。いくつかの態様において、リンカーLは8つのエチレングリコール単位を含むことができる。8つのエチレングリコール反復単位を有する離散的（「d」）ポリエチレングリコールを有する、H2N-dPEG(登録商標)8-C(O)OHなどの、いくつかの市販のエチレングリコール基（ポリエチレングリコール、PEG）がリンカーLにおいて適切である。Advanced ChemTechなどによる他の離散的PEG単位が市販されており、当業者には公知である。当業者であれば、H2N-dPEG(登録商標)8-C(O)OHは、以下の式：
2019530707.tif 000022
を有することを理解する。したがって、H2N-dPEG(登録商標)8-C(O)OHが本発明のリンカーLに組み込まれる場合、これは-HN-dPEG8-C(O)-または-HN-dPEG8-CH2CH2-C(O)-と書き表すことができる。
【００４７】
いくつかの態様において、リンカーLは、式：
-HN-PEG-C(O)-XAA-
を含み、式中、PEGは1〜50個のエチレングリコール単位を有し、かつXAAはアミノ酸配列である。
【００４８】
いくつかの態様において、リンカーLは、式：
-HN-PEG-CH2CH2-C(O)-XAA-
を含み、式中、PEGは1〜50個のエチレングリコール単位を有し、かつXAAはアミノ酸配列である。
【００４９】
リンカーLのアミノ酸部分は、前述のとおり、任意の適切な数のアミノ酸部分を含むことができる。例えば、アミノ酸配列XAAは、1〜100個のアミノ酸部分、または1〜10個のアミノ酸部分、または1〜5つのアミノ酸部分を含むことができる。リンカーLは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個、またはそれ以上のアミノ酸部分を含むことができる。いくつかの態様において、リンカーLは2つのアミノ酸部分を含む。いくつかの態様において、リンカーLはアミノ酸配列Val-Alaを含む。いくつかの態様において、リンカーLは、PEG8が8つのエチレングリコール単位を有する式：
-HN-PEG8-C(O)-Val-Ala-
を含む。
【００５０】
いくつかの態様において、リンカーLは、PEG8が8つのエチレングリコール単位を有する式：
-HN-PEG8-CH2CH2-C(O)-Val-Ala-
を含む。
【００５１】
リンカーLは、エチレングリコール部分をアミノ酸配列に接続する、またはエチレングリコールもしくはアミノ酸配列を反応性部分Rx、物質Sc、もしくは式IおよびIIの化合物に接続する、様々な他の接続基も含むことができる。例えば、アミノ酸配列を式IおよびIIの化合物に、4-アミノベンジルカルボキシレート基を介して接続することができる。いくつかの態様において、エチレングリコール部分を反応性部分Rxまたは物質Scに直接連結することもできる。いくつかの態様において、リンカーLは、式：
2019530707.tif 000023
を有する。
【００５２】
リンカーLは、エチレングリコール部分をアミノ酸配列に接続する、またはエチレングリコールもしくはアミノ酸配列を反応性部分Rx、物質Sc、もしくは式IおよびIIの化合物に接続する、様々な他の接続基も含むことができる。例えば、アミノ酸配列を式IおよびIIの化合物に、4-アミノベンジルカルボキシレート基を介して接続することができる。いくつかの態様において、エチレングリコール部分を反応性部分Rxまたは物質Scに直接連結することもできる。いくつかの態様において、リンカーLは、式：
2019530707.tif 000024
を有する。
【００５３】
Rxは反応性部分である。Rxは、本明細書に記載の標的結合物質であり得る物質Scにおいて存在する対応する反応性部分と反応することができる限り、任意の適切な反応性部分であってもよい。様々な態様において、Scはタンパク質またはタンパク質の一部であり、下記などの利用可能な結合可能部分を有する。
【００５４】
チオール/ジスルフィド。チオールまたはジスルフィドと反応し得る反応性部分Rxには、マレイミド、ヨードアセトアミド、アジド、チアゾール、およびピリドピリダジンが含まれる。ジスルフィドはビスルホン反応性部分を用いて標識してもよい。さらに、マレイミド反応性部分は改変セレノシステイン部分と反応することもできる。
【００５５】
アミン。IQB-CBI化合物のIQBまたはCBI単位を標的結合物質Scに結合するために用い得る反応性部分Rxには、イソチオシアネート、スクシンイミジルエステル、ハロゲン化スルホニル、カルボン酸（カルボジイミドカップリング試薬存在下）、スルホスクシンイミジルエステル、4-スルホテトラフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、およびスルホジクロロフェノールエステルが含まれる。このリストは決して限定的ではなく、標的結合物質Scのアミンと反応することができる他の反応性部分Rxを用いてもよい。
【００５６】
アルデヒド/ケトン。これらの部分を標的結合物質Sc中に導入し、続いて-L-Rxを有する式IおよびIIの化合物と反応させてもよく、ここで反応性部分Rxは、ヒドラジン、セミヒドラジド、カルボヒドラジド、またはヒドロキシルアミンである。このリストは決して限定的ではなく、標的結合物質Scのアルデヒドと反応することができる他の反応性部分Rxを用いてもよい。
【００５７】
式IおよびIIの化合物において有用な他の反応性部分Rxには、抗体およびそれらの断片を含むタンパク質を選択的に標識するための、シュタウディンガー反応、ピクテ・スペングラ−反応、および/またはクリック型ケミストリー（銅を含有する、またはしない）において用いることができる、アジド、ホスフィン、またはアルキンが含まれる。これは、標的結合物質Scにおける改変部位と反応するために有用な反応性部分Rxの非限定的なリストである。
【００５８】
いくつかの態様において、Rxは、マレイミド、ビス-スルホン、ヨードアセトアミド、アジド、イソチオシアネート、スクシンイミジルエステル、ハロゲン化スルホニル、カルボン酸、セミヒドラジド、カルボヒドラジド、ヒドロキシルアミン、ホスフィン、またはアルキンであってもよい。
【００５９】
-L-Rxは反応性部分Rxに結合しているリンカーLである。-L-Rxを式IまたはIIの化合物において用いて、本明細書に記載の標的結合物質であり得る物質Scに結合することができるIQB-CBI化合物を有する試薬を生成してもよい。本明細書に記載のリンカーLおよび反応性部分Rxの任意の組み合わせを式IまたはIIの化合物において用いてもよい。いくつかの例示的-L-Rxについては図7を参照されたい。
【００６０】
抗体への化合物の結合のために、いくつかの他の化学が公知である。米国特許第7,595,292号（Brocchini et al.）は、抗体のジスルフィド結合における硫黄とチオエステルを形成するリンカーに言及している。米国特許第7,985,783号（Carico et al.）は、化合物を抗体に結合するために使用されるアルデヒド残基の抗体中への導入に言及している。
【００６１】
Scは、タンパク質、タンパク質の一部、ペプチド、または核酸より選択される、標的結合物質剤である。いくつかの態様において、タンパク質である標的結合物質には抗体、抗体断片、または単鎖可変断片抗体（「scFV」）が含まれ得る。標的結合物質は腫瘍関連抗原、がん幹細胞関連抗原、またはウイルス抗原に結合してもよい。
【００６２】
様々な態様において、標的結合物質Scは、急性骨髄性白血病（AML M4）細胞、急性前骨髄球性白血病細胞、急性リンパ芽球性白血病細胞、急性リンパ球性白血病細胞、慢性リンパ球性白血病細胞、慢性骨髄性白血病細胞、慢性T細胞リンパ球性白血病、骨髄異形成症候群細胞、多発性骨髄腫細胞、前立腺がん細胞、腎細胞腺がん細胞、膵臓腺がん細胞、肺がん細胞または胃腺がん細胞、胃腺がん細胞、乳がん細胞、結腸がん細胞、黒色腫細胞、甲状腺がん細胞、卵巣がん細胞、膀胱がん細胞、肝臓がん細胞、頭頸部がん細胞、食道がん細胞、ホジキンリンパ腫細胞、非ホジキンリンパ腫細胞、中皮腫細胞、神経芽細胞腫細胞、神経内分泌腫瘍細胞、神経線維腫症1型（NF1）細胞、神経線維腫症2型（NF2）または骨肉腫細胞より選択される標的に結合してもよい。
【００６３】
いくつかの他の態様において、標的結合物質Scは、CLL-1、IL1RAP、TIM-3、CD19、CD20、CD22、ROR1、メソテリン、CD33、CD123/IL3Ra、GPR114、c-Met、PSMA、前立腺酸性ホスファターゼ（PAP）、CEA、CA-125、Muc-1、AFP、糖脂質F77、EGFRvIII、GD-2、NY-ESO-1 TCR、チロシナーゼ、TRPI/gp75、gp100/pmel-17、Melan-A/MART-1、Her2/neu、WT1、EphA3、テロメラーゼ、HPV E6、HPV E7、EBNA1、BAGE、GAGEおよびMAGE A3 TCRSLITRK6、ENPP3、ネクチン-4、CD27、SLC44A4、CAIX、Cripto、CD30、MUC16、GPNMB、BCMA、Trop-2、組織因子（TF）、CanAg、EGFR、αv-インテグリン、CD37、葉酸受容体-α、CD138、CEACAM5、CD56、CD70、CD74、GCC、5T4、CD79b、Steap1、Napi2b、ルイスY抗原、LIV、c-RET、DLL3、EFNA4、エンドシアリン/CD248より選択される標的に結合してもよい。
【００６４】
さらに他の態様において、標的結合物質Scは二重特異性抗体/抗体断片であってもよい。いくつかの態様において、二重特異性抗体/抗体断片は、CLL-1、IL1RAP、TIM-3、CD19、CD20、CD22、ROR1、メソテリン、CD33、CD123/IL3Ra、GPR114、c-Met、PSMA、前立腺酸性ホスファターゼ（PAP）、CEA、CA-125、Muc-1、AFP、糖脂質F77、EGFRvIII、GD-2、NY-ESO-1 TCR、チロシナーゼ、TRPI/gp75、gp100/pmel-17、Melan-A/MART-1、Her2/neu、WT1、EphA3、テロメラーゼ、HPV E6、HPV E7、EBNA1、BAGE、GAGEおよびMAGE A3 TCRSLITRK6、ENPP3、ネクチン-4、CD27、SLC44A4、CAIX、Cripto、CD30、MUC16、GPNMB、BCMA、Trop-2、組織因子（TF）、CanAg、EGFR、αv-インテグリン、CD37、葉酸受容体、CD138、CEACAM5、CD56、CD70、CD74、GCC、5T4、CD79b、Steap1、Napi2b、ルイスY抗原、LIV、c-RET、DLL3、EFNA4、エンドシアリン/CD248、Ly6e (RIG-e)、CD79a、CD274 (PD-L1)、CD38、DLL4、CD319 (SLAM7)より選択される1つまたは2つの標的に結合する。
【００６５】
III.  結合体
標的結合部分を本開示のIQB-CBI化合物に、様々な公知の架橋剤を用いて結合することができる。部分のポリペプチドへの共有または非共有結合のための方法は当技術分野において周知である。そのような方法には、化学架橋剤、光活性化架橋剤および/または二官能性架橋試薬の使用が含まれ得るが、それらに限定されない。分子を架橋する例示的方法は、米国特許第5,603,872号および米国特許第5,401,511号に開示されている。架橋試薬の非限定的な例には、グルタルアルデヒド、二官能性オキシラン、エチレングリコールジグリシジルエーテル、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミドまたはジシクロヘキシルカルボジイミドなどのカルボジイミド、ビスイミデート、ジニトロベンゼン、スベリン酸のN-ヒドロキシスクシンイミドエステル、酒石酸ジスクシンイミジル、ジメチル-3,3'-ジチオ-ビスプロピオンイミデート、アジドグリオキサール、3-(2-ピリジルジチオ)プロピオン酸N-スクシンイミジル、および4-(ブロモアドミノエチル)-2-ニトロフェニルアジドが含まれる。
【００６６】
いくつかの態様において、標的結合部分は抗体を含む。「抗体」なる用語は、免疫グロブリン遺伝子由来のフレームワーク領域を含むポリペプチド、または抗原に特異的に結合して認識するその断片（「抗体断片」）を意味する。典型的には、「可変領域」は抗体の抗原結合領域（またはその機能的等価物）を含み、結合の特異性および親和性において最も重要である。例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は四量体を含む。各四量体はポリペプチド鎖の2つの同じ対からなり、各対は1つの「軽」鎖（約25kD）および1つの「重」鎖（約50〜70kD）を有する。
【００６７】
「アイソタイプ」は、重鎖定常領域が特徴である抗体のクラスである。軽鎖はκまたはλのいずれかとして分類される。重鎖はγ、μ、α、δ、またはεとして分類され、これらはそれぞれアイソタイプクラス、IgG、IgM、IgA、IgD、およびIgEの特徴である。抗体は、完全な免疫グロブリンとして、または特異的抗体結合活性を含む、任意のいくつかの詳細に特徴決定された断片、例えば、F(ab)'2、またはFab'単量体として存在し得る。
【００６８】
「モノクローナル抗体」は、抗原における所与のエピトープに対する単一結合特異性および親和性を有する、抗体のクローン調製物を意味する。「ポリクローナル抗体」は、単一の抗原に対して産生されるが、異なる結合特異性および親和性を有する、抗体の調製物を意味する。「キメラ抗体」は、（a）抗原結合部位（可変領域、CDR、またはその一部）が、異なるもしくは改変されたクラス、エフェクター機能、および/もしくは種の定常領域に連結するように、またはキメラ抗体に新しい特性を付与する完全に異なる分子（例えば、酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物など）に連結するように、定常領域、またはその一部が改変されている、置き換えられている、または交換されているか；あるいは（b）可変領域、またはその一部が、異なるもしくは改変された抗原特異性を有する可変領域（例えば、異なる種からのCDRおよびフレームワーク領域）で改変されている、置き換えられている、または交換されている、抗体分子である。
【００６９】
「ヒト化抗体」は、非ヒト抗体のVHおよびVL領域から得られた、抗原結合ループ、すなわちCDRが、ヒトフレームワーク配列に移植されている、免疫グロブリン分子抗体を意味する。ヒト化、すなわち、非ヒトCDR配列の対応するヒト抗体の配列との置換は、例えば、米国特許第5,545,806号；同第5,569,825号；同第5,633,425号；同第5,661,016号；Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988)；Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992)；Morrison, Nature 368:812-13 (1994)；Fishwild et al., Nature Biotechnology 14:845-51 (1996)に記載の方法に従って行うことができる。米国特許第6,673,986に開示されているとおり、トランスジェニックマウス、または他の哺乳動物などの他の生物を用いて、ヒト化またはヒト抗体を発現してもよい。
【００７０】
本明細書において用いられる「システイン置換抗体」なる用語は、システインで置換された、少なくとも1つの非天然定常領域免疫グロブリンアミノ酸残基を含む抗体を意味する。非天然の置換は、アイソタイプではないものである。1つの態様において、置換残基は重鎖定常領域である。システイン置換抗体の非限定的な例には、置換S156CおよびS239Cが含まれる。
【００７１】
「抗原」、「抗体標的」などの用語は、抗体によって認識される、すなわち、抗体によって特異的に結合され得る、分子、化合物、または複合体を意味する。抗体は抗原における「エピトープ」に結合する。
【００７２】
「特異的である」、「特異的に結合する」などの用語は、非標的化合物よりも少なくとも2倍高い親和性で、例えば、少なくとも4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、25倍、50倍、または100倍高い親和性のいずれかで、標的に結合する分子（例えば、抗体または抗体断片）を意味する。例えば、一次抗体に特異的に結合する抗体は、典型的には、非一次抗体標的（例えば、異なる種由来の抗体、もしくは異なるアイソタイプの抗体、または非抗体標的）よりも少なくとも2倍高い親和性で、一次抗体に結合する。
【００７３】
抗体標的（例えば、抗原、分析物、免疫複合体）に関する「捕捉」なる用語は、典型的には抗体が純粋な集団中の抗体標的の大多数に結合することを示す（適切なモル比と仮定する）。例えば、所与の抗体標的に結合する抗体は、典型的には溶液中の抗体標的の少なくとも2/3（例えば、少なくとも75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、または100％のいずれか）に結合する。当業者であれば、結合を判定する方法および/または閾値に依存して、いくらかの変動性が生じることを理解するであろう。
【００７４】
抗体またはその断片は、前述の-L-Rxを有する式IまたはIIの化合物による結合のために魅力的な標的であり得る官能基を有してもよい。マレイミドが反応性部分である、-L-Rxを組み込んでいる化合物は、抗体またはその断片において利用可能である場合、システイン残基のチオールまたは2つのシステイン側鎖から生成されるジスルフィドと反応してもよい。または、式IまたはIIの化合物のリンカーに結合しているアジドまたはヨードアセトアミジル反応性部分も、システイン残基のチオールとまたは分子内で生成されるジスルフィドと結合体を生成することができる。ジスルフィドは、反応性部分が両方の側鎖に同度に結合しうるビス-スルホンである、-L-Rxを有する式IまたはIIの化合物を用いることにより、特異的に標的とすることができる。
【００７５】
抗体またはその断片のリジン側鎖を、反応性部分がイソチオシアネート、スクシンイミジルエステル、ハロゲン化スルホニル、カルボン酸、スルホスクシンイミジルエステル、4-スルホテトラフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、およびスルホジクロロフェノールエステルより選択されるが、それらに限定されない、-L-Rxを有する式IまたはIIの化合物と結合させることができる。カルボン酸が反応性部分である場合、リジン側鎖アミノ部分への結合反応は、カルボン酸をインサイチューで活性化する、カルボジイミドなどのカップリング試薬存在下で実施する。
【００７６】
グルタミン側鎖は、反応性部分がアミノアルキル部分である、-L-Rxを有するIQB-CBIによって標的とされてもよい。アミノ部分は、グルタミニル結合IQB-CBIを提供するための改変トランスグルタミナーゼの基質であり得る。
【００７７】
アルデヒドまたはケトンを、抗体またはその断片などの標的結合物質において、多くの場合、抗体のグリカン部分の酸化処理により生成してもよい。過ヨウ素酸塩または他の酸化剤を用いて、反応性部分がヒドラジン、セミヒドラジド、カルボヒドラジド、またはヒドロキシルアミンである、-L-Rxを有する式IのIQB-CBI化合物によって標的とされ得る、これらのカルボニル含有部位を生成することができる。
【００７８】
抗体またはその断片などの、標的結合物質における改変された官能部分も、-L-Rxを有する式IまたはIIの化合物によって結合され得る。セレノシステインを改変抗体断片にリボソーム性に組み込んでもよく、これはマレイミド反応性部分を有するIQBまたはCBI単位のいずれかとの識別性の高い結合反応を提供し得る。
【００７９】
アジドまたはシクロオクチン部分を標的結合物質に改変し、これは次いで銅フリークリックケミストリーを用いて、-L-Rxを有するIQBの反対の反応性部分、シクロオクチニルまたはアジジル反応性基を可能にし得る。
【００８０】
リボソーム性組み込みを介した非天然アミノ酸の導入は、パラアセチルフェニルアラニンを標的結合物質中に導入することができる。アセチル基を、反応性部分がアミノオキシ反応性基である、-L-Rxを有するIQBまたはCBIと結合させて、標的結合物質のオキシム結合生成物を提供することができる。このプロセスにより導入される別の非天然アミノ酸は、リジンのアジジル誘導体を提供することができ、これは反応性部分がシクロオクチンである、-L-Rxを有するIQBまたはCBIと反応することができ、銅フリークリックケミストリーを用いる。
【００８１】
これらの例は決して限定的ではなく；-L-Scを有する式の結合体を生成するために、-L-Rxを有する式IのIQB-CBI化合物を用いて、抗体またはその断片などの標的結合物質の定義された結合への多くの他のアプローチが構想される。
【００８２】
いくつかの態様において、抗体-薬物結合体は、本明細書の定義の式IIの構造を有してもよい。
【００８３】
IV.  薬学的組成物
活性成分として本発明の化合物を含む剤形を有利に用いて、増殖性疾患を処置または予防することができる。剤形を単独でまたは他の作用物質との組み合わせで投与または適用することができる。製剤は、本発明の化合物を、別の化合物を含む別の薬学的活性作用物質との組み合わせで対象に送達することができる。
【００８４】
ヒトの医学的使用のための本開示の製剤は、活性成分をそのための薬学的に許容される担体および任意で他の治療成分と共に含む。担体は、製剤の他の成分と適合性であり、その受容者に対して有害でないとの意味で「許容され」なければならない。
【００８５】
「有効量」、「有効用量」、「治療的有効量」などの用語は、前述の障害を改善するのに十分な、治療用物質の量を意味する。例えば、所与のパラメーターについて、治療的有効量は少なくとも5％、10％、15％、20％、25％、40％、50％、60％、75％、80％、90％、または少なくとも100％の治療効果の増大または低減を示す。治療的有効性は「〜倍」の増大または低減で表すこともできる。例えば、治療的有効量は、対照よりも少なくとも1.2倍、1.5倍、2倍、5倍、またはそれ以上の効果を有し得る。
【００８６】
剤形は、対象への粘膜（例えば、鼻、舌下、膣、口腔、または直腸）、非経口（例えば、ボーラスまたは注入のいずれかでの、皮下、静脈内、筋肉内、または動脈内注射）、経口、または経皮投与のために調製することができる。剤形の例には、分散剤；坐剤；軟膏；パップ剤（湿布）；ペースト；散剤；包帯；クリーム；硬膏剤；液剤；パッチ；エアロゾル（例えば、鼻噴霧剤または吸入剤）；ゲル；懸濁剤（例えば、水性もしくは非水性液体懸濁剤、水中油乳剤、または油中水液体乳剤）、液剤、およびエリキシル剤を含む、対象への経口または粘膜投与に適した液体剤形；対象への非経口投与に適した液体剤形；ならびに、再構成して、対象への非経口投与に適した液体剤形を提供することができる、無菌固体（例えば、結晶または非晶質固体）が含まれるが、それらに限定されない。
【００８７】
注射用（例えば、静脈内）組成物は、水性担体中などの許容される担体中に懸濁された、本発明のIQB-CBI化合物または抗体-薬物結合体の溶液を含むことができる。任意の様々な水性担体、例えば、水、緩衝水、0.4％食塩水、0.9％等張食塩水、0.3％グリシン、5％デキストロースなどを用いることができ、安定性の増強のために、アルブミン、リポタンパク質、グロブリンなどの糖タンパク質を含んでもよい。多くの場合、生理緩衝食塩水（135〜150mM NaCl）を用いる。組成物は、生理的条件に近づけるために、pH調節および緩衝化剤、張性調節剤、湿潤剤、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンなどの、薬学的に許容される補助物質を含むことができる。いくつかの態様において、組成物は、静脈内投与のために、キットに製剤化することもできる。
【００８８】
例えば、関節内（関節中）経路、静脈内経路、筋肉内経路、腫瘍内経路、皮内経路、腹腔内経路、および皮下経路などによる、非経口投与に適した製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および製剤を所期の受容者の血液と等張にする溶質を含み得る、水性および非水性、等張無菌注射液剤、ならびに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、および保存剤を含み得る、水性および非水性無菌懸濁剤が含まれる。注射液剤および懸濁剤は、無菌散剤、顆粒剤、および錠剤から調製することもできる。本発明の実施において、組成物を、例えば、静脈内注入により、局所、腹腔内、膀胱内、またはくも膜下腔内投与することができる。非経口投与および静脈内投与が好ましい投与法である。本発明のIQB-CBI化合物または抗体-薬物結合体の製剤は、単位用量または多用量の、アンプルおよびバイアルなどの密封容器で提供することができる。
【００８９】
本開示の薬理活性化合物は、その有効量を腸内または非経口適用のいずれかに適した賦形剤または担体と共に、または混合して含む、薬学的組成物の製造において有用である。活性成分を以下の1つまたは複数と共に含む、錠剤およびゼラチンカプセル剤が好ましい：（a）希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、グリシンなど；（b）滑沢剤、例えば、シリカ、滑石、ステアリン酸、そのマグネシウムまたはカルシウム塩、ポリエチレングリコールなど；さらに錠剤のための（c）結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプンのり、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、またはポリビニルピロリドンなど；および、望まれる場合には、（d）崩壊剤、例えば、発泡剤混合物など；ならびに（e）吸収剤、着色剤、着香剤、および甘味料など。
【００９０】
前記製剤は、単位剤形で都合よく提示してもよく、薬学の技術分野において周知の任意の方法によって調製してもよい。すべての方法は、活性成分を、1つまたは複数の補助的成分を構成する担体と混合する段階を含む。一般に、製剤は、活性成分を液体担体もしくは微粉化固体担体またはそれらの両方と、均質かつ密接に混合し、次いで、必要があれば、生成物を所望の製剤に成形することにより調製する。
【００９１】
前記薬学的組成物は、滅菌されていてもよく、かつ/あるいは保存剤、安定化剤、湿潤剤もしくは乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調節するための塩、および/または緩衝剤などの、補助剤を含んでもよい。加えて、それらは他の治療的に有用な物質を含んでもよい。該組成物は、それぞれ通常の混合、造粒、またはコーティング法に従って調製し、約0.1〜75％、好ましくは約1〜50％の活性成分を含む。
【００９２】
前記製剤中の活性物質の濃度は、かなり大きく変動し得、かつ、処置する疾患または状態、活性物質の性質および活性、所望の効果、可能な有害反応、活性物質がその所期の標的に達する能力および速さ、ならびに対象および医師の特定の知識の範囲内の他の因子を含む、様々な因子に依存する。製剤は、典型的には、およそ約0.5重量％〜50重量％の活性物質、好ましくは約0.5重量％〜5重量％の活性物質、最適には約5重量％〜20重量％の活性物質を含む。
【００９３】
本発明のIQB-CBI化合物またはIQB-CBI抗体-薬物結合体は、複数の活性化合物、例えば、追加の化学療法剤もしくは細胞障害性剤、サイトカイン、または成長阻害剤を提供するように製剤化することもできる。活性成分は、持続放出製剤（例えば、固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックス（例えば、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ(2-ヒドロキシエチル-メタクリレート)、もしくはポリ(ビニルアルコール)）、またはポリラクチド）として調製してもよい。抗体および免疫結合体は、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）中またはマクロエマルション中で、例えば、コアセルベーション技術によりまたは界面重合により調製したナノ粒子、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロース中またはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ(メチルメタクリレート)マイクロカプセル中に捕捉することもできる。
【００９４】
本開示のIQB-CBIまたはIQB-CBI抗体-薬物結合体は、薬学的に許容される塩、例えば、薬学的に許容され、かつ親化合物の所望の薬理活性を有する化合物の塩の形をとってもよい。そのような塩には、（1）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸を伴って形成された酸付加塩；または酢酸、酪酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、吉草酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、3-(4-ヒドロキシベンゾイル)安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、1,2-エタン-ジスルホン酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、4-クロロベンゼンスルホン酸、2-ナフタレンスルホン酸、4-トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、4-メチルビシクロ[2.2.2]-オクタ-2-エン-1-カルボン酸、グルコヘプトン酸、3-フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、tert-ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸などの有機酸と形成される、通常の化学的手段によって作製された酸付加塩；または（2）親化合物中に存在する酸性プロトンが、金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、もしくはアルミニウムイオンによって置き換えられる場合；またはエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、N-メチルグルカミンなどの有機塩基と配位する場合に形成される、通常の化学的手段によって作製された塩が含まれる。
【００９５】
V.  使用法
A.  増殖性疾患の処置
本開示の化合物は、細胞成長（増殖）を阻害し、したがって対象、例えば、脊椎動物、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトを処置するための薬学的組成物において有用である。IQB-CBIは、単独で、またはそれらが抗体などの細胞を標的とする作用物質に結合されている抗体-薬物結合体として、投与することができる。
【００９６】
「対象」、「患者」、「個体」などの用語は、交換可能に用いられ、示されている場合を除き、ヒトおよび非ヒト霊長類、ならびにウサギ、ラット、マウス、ヤギ、ブタ、および他の哺乳動物種などの、哺乳動物を意味する。用語は必ずしも対象が特定の疾患と診断されていることを示すものではなく、典型的には「患者」は医学的監督下にある個体を意味する。患者は、処置、モニタリング、既存の治療法の調節または改変などを求めている個体であり得る。「がん患者」は、がんと診断されている個体、現在治療法に従っている個体、または、例えば、腫瘍を除去する手術後の再発のリスクが高い個体を意味し得る。いくつかの態様において、がん患者は、がんと診断されており、治療の候補である。がん患者には、処置を受けたことがない個体、現在処置を受けている個体、手術を受けた個体、および処置を中止した個体が含まれ得る。
【００９７】
「治療」、「処置」、および「改善」なる用語は、症状の重症度の任意の低減を意味する。がんを処置する場合、処置は、例えば、腫瘍サイズ、がん細胞の数、成長速度、転移活性を低減すること、非がん細胞の細胞死を低減すること、悪心の低減および他の化学療法または放射線療法の副作用の低減などを意味し得る。炎症状態を処置する場合、処置は、例えば、炎症性サイトカインの血中レベル、疼痛、腫脹、免疫細胞の動員などを低減することを意味し得る。本明細書において用いられる「処置する」および「予防する」なる用語は、絶対的用語であることを意図するものではない。処置および予防は、発症の任意の遅延、症状の改善、患者生存の改善、生存時間または生存率の増大などを意味し得る。処置および予防は、完全（検出不可能なレベルの新生物細胞）であってもよいか、または本発明なしの場合よりも少ない新生物細胞が患者で見出されるように部分的であってもよい。処置の効果は、処置を受けていない個体もしくは個体群、または処置前もしくは処置中の異なる時点の同じ患者と比較することができる。いくつかの局面において、疾患の重症度は、例えば、投与前の個体または処置を受けていない対照個体と比べて、少なくとも10％低減される。いくつかの局面において、疾患の重症度は、少なくとも25％、50％、75％、80％、もしくは90％低減されるか、またはいくつかの場合には、標準の診断技術を用いてもはや検出不可能である。
【００９８】
本開示の組成物は、がんなどの増殖性疾患の処置において有用である。「がん」、「腫瘍」、「形質転換」などの用語は、前がん性、新生物、形質転換、およびがん性細胞を含み、固形腫瘍、または非固形がんを意味し得る（例えば、Edge et al. AJCC Cancer Staging Manual (7th ed. 2009)；Cibas and Ducatman Cytology: Diagnostic principles and clinical correlates (3rd ed. 2009)参照）。がんには、良性および悪性新生物（異常成長）の両方が含まれる。「形質転換」は、自発性または誘導性表現型変化、例えば、細胞の不死化、形態変化、異常細胞成長、接触阻止および接着の低減、ならびに/または悪性病変を意味する（Freshney, Culture of Animal Cells a Manual of Basic Technique (3rd ed. 1994)参照）。形質転換は、形質転換ウイルスによる感染から、および新しいゲノムDNAの組み込みから生じ得る、または外来性DNAの取り込みから生じ得るが、自発的に、または発がん物質への曝露後にも生じ得る。
【００９９】
「がん」なる用語は、がん腫、肉腫、腺がん、リンパ腫、白血病、固形およびリンパがんなどを意味し得る。異なる型のがんの例には、肺がん（例えば、非小細胞肺がんすなわちNSCLC）、卵巣がん、前立腺がん、結腸直腸がん、肝がん（すなわち、肝細胞がん）、腎がん（すなわち、腎細胞がん）、膀胱がん、乳がん、甲状腺がん、胸膜がん、膵がん、子宮がん、子宮頚がん、精巣がん、肛門がん、膵がん、胆管がん、消化管カルチノイド腫瘍、食道がん、胆嚢がん、虫垂がん、小腸がん、胃（胃の）がん、中枢神経系のがん、皮膚がん、絨毛がん；頭頸部がん、血液がん、骨肉腫、線維肉腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、黒色腫、B細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、小細胞型リンパ腫、大細胞型リンパ腫、骨髄異形成症候群（MDS）、単球性白血病、骨髄性白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病（AML）、慢性骨髄性白血病（CML）、および多発性骨髄腫が含まれるが、それらに限定されない。いくつかの態様において、本発明の組成物および方法は、がんを処置するために有用である。
【０１００】
標的とされ得るがんには、例えば、白血病（例えば、急性リンパ芽球性白血病（ALL）、急性骨髄性白血病（AML）、慢性リンパ球性白血病（CLL）および慢性骨髄性白血病（CML））、乳がん、前立腺がん、結腸直腸がん、脳がん、食道がん、頭頚部がん、膀胱がん、婦人科がん、脂肪肉腫、および多発性骨髄腫が含まれる。いくつかの態様において、開示する開示のCAR内の標的結合ドメインは、GPR114、CLL-1、IL1RAP、TIM-3、CD19、CD20、CD22、ROR1、メソテリン、CD33、CD123/IL3Ra、c-Met、PSMA、前立腺酸性ホスファターゼ（PAP）、CEA、CA-125、Muc-1、AFP、糖脂質F77、EGFRvIII、GD-2、NY-ESO-1 TCR、チロシナーゼ、TRPI/gp75、gp100/pmel-17、Melan-A/MART-1、Her2/neu、WT1、EphA3、テロメラーゼ、HPV E6、HPV E7、EBNA1、BAGE、GAGEおよびMAGE A3 TCRSLITRK6、ENPP3、ネクチン-4、CD27、SLC44A4、CAIX、Cripto、CD30、MUC16、GPNMB、BCMA、Trop-2、組織因子（TF）、CanAg、EGFR、αv-インテグリン、CD37、葉酸受容体、CD138、CEACAM5、CD56、CD70、CD74、GCC、5T4、CD79b、Steap1、Napi2b、ルイスY抗原、LIV、c-RET、DLL3、EFNA4、エンドシアリン/CD248、Ly6e（RIG-e）、CD79a、CD274（PD-L1）、CD38、DLL4、CD319（SLAM7）ならびに当業者には公知の他の標的を含むが、それらに限定されない、任意の広範な標的群に結合することができる。いくつかの態様において、がんマーカーはCLL-1である。
【０１０１】
「がん標的」または「がんマーカー」は、がん、例えば、がん細胞上にまたはがん環境において、差次的に発現または処理される分子である。例示的ながん標的は、IL1RAPなどの細胞表面タンパク質（また細胞接着分子および受容体なども）、細胞内受容体、ホルモン、および細胞によってがん環境中に分泌されるプロテアーゼなどの分子である。具体的ながんのマーカーは、当技術分野において公知であり、例えば、結腸および結腸直腸がんにおけるMUC1発現、肺がんにおけるボンベシン受容体、ならびに前立腺がんにおける前立腺特異的膜抗原（PSMA）である。
【０１０２】
「過剰発現した」または「上方制御された」なる用語は、交換可能に、対照レベルよりも検出可能に高いレベルで転写または翻訳される、タンパク質または核酸、一般にはバイオマーカーを意味する。この用語は、転写、転写後プロセシング、翻訳、翻訳後プロセシング、細胞局在（例えば、小器官、細胞質、核、細胞表面）、ならびにRNAおよびタンパク質安定性による過剰発現を含む。過剰発現は、mRNA（すなわち、RT-PCR、ハイブリダイゼーション）またはタンパク質（すなわち、フローサイトメトリー、画像法、ELISA、免疫組織化学的技術）のいずれであろうと、通常のバイオマーカー検出技術を用いて検出することができる。過剰発現は、正常細胞と比べて、少なくとも10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、またはそれ以上のいずれかであり得る。
【０１０３】
いくつかの態様において、がん標的は、ある特定の型のがん細胞、例えば、白血病、骨髄腫、リンパ腫、AML、CML、非小細胞肺がん細胞、前立腺がん、結腸直腸がん、乳がん、または卵巣がんと関連し得る。細胞型特異的標的は、典型的にはその細胞型において参照細胞集団よりも少なくとも2倍高いレベルで発現する。いくつかの態様において、細胞型特異的マーカーは、参照集団におけるその平均発現よりも少なくとも3、4、5、6、7、8、9、10 20、50、100、または1000倍高いレベルで存在する。したがって、標的を検出または測定して、関心対象の細胞型を他の細胞から区別することができる。いくつかの態様において、処置するがんは白血病、リンパ腫または固形腫瘍である。
【０１０４】
いくつかの態様において、処置するがんは、骨髄起源のがん、すなわち骨髄細胞に由来するがんである。慢性骨髄増殖性障害は、成熟および未熟顆粒球、赤血球、ならびに血小板の数の増大を特徴とする一連の状態である。慢性骨髄増殖性障害は、この分類内で他の形態に移行し得、最終的に急性骨髄性白血病となる傾向がある。この分類内の具体的疾患には、AML（急性骨髄性または骨髄増殖性白血病）、MDS（骨髄異形成症候群）、骨髄線維症、CMML（慢性骨髄単球性白血病）、多発性骨髄腫、形質細胞種、およびCML（慢性骨髄性または骨髄増殖性白血病）などの、骨髄起源のがんが含まれる。他の骨髄増殖性障害には、真性多血症、特発性骨髄性白血病、本態性血小板血症、慢性骨髄性白血病、および慢性好中球白血病が含まれる。いくつかの態様において、処置するがんは骨髄増殖性がんである。いくつかの態様において、骨髄増殖性がんは、急性骨髄増殖性白血病、骨髄異形成症候群、慢性骨髄増殖性白血病、慢性骨髄単球性白血病、多発性骨髄腫、形質細胞腫、および骨髄線維症からなる群より選択される。いくつかの態様において、いくつかの態様において、処置するがんは骨髄細胞起源のがんである。いくつかの態様において、骨髄細胞起源のがんは、急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、多発性骨髄腫、形質細胞腫、および骨髄線維症からなる群より選択される。
【０１０５】
この分類内の具体的疾患には、AML（急性骨髄性または骨髄増殖性白血病）、MDS（骨髄異形成症候群）、骨髄線維症、CMML（慢性骨髄単球性白血病）、多発性骨髄腫、形質細胞種、およびCML（慢性骨髄性または骨髄増殖性白血病）などの、骨髄起源のがんが含まれる。他の骨髄増殖性障害には、真性多血症、特発性骨髄性白血病、本態性血小板血症、慢性骨髄性白血病、および慢性好中球白血病が含まれる。いくつかの態様において、骨髄増殖性がんは、AML、CML、CMML、多発性骨髄腫、形質細胞腫、および骨髄線維症からなる群より選択される。
【０１０６】
CLL-1レベル上昇は、がん、特に造血CSC（例えば、LSC）、ならびにAML（急性骨髄性または骨髄増殖性白血病）、MDS（骨髄異形成症候群）、骨髄線維症、CMML（慢性骨髄単球性白血病）、多発性骨髄腫、形質細胞種、およびCML（慢性骨髄性または骨髄増殖性白血病）などの白血病を含む、骨髄増殖性障害に関連している。Bakker et al. (2004) Cancer Res. 64:8443；Van Rhenen et al. (2007) Blood 110:2659-66；Zhao et al. (2010) Haematologica (2010) 95:71；Van Rhenen et al. (2007) Leukemia 21:1700；およびHerrmann et al. (2012) Haematologica 97:219参照。
【０１０７】
がん幹細胞（CSC）は、がんの大部分を構成する細胞を生じ得る、腫瘍中または血液がん中に見出される細胞である。CSCは、正常な（非がん）幹細胞に類似して、自己再生性でもあり得る。CSCは、したがって、個体における非腫瘍組織に移動して「新しい」腫瘍を生じさせることにより、転移を媒介することができる。CSCは、がんが検出される病期に依存して、任意の所与のがんの非常にわずかなパーセンテージを構成する。例えば、AML細胞の試料中のCSCの平均出現頻度は約1：10,000と考えられる。造血CSCは、正常な造血幹細胞（HSC）に類似の、CD34+として同定することができる。他のCSC関連マーカーには、CD44（乳房）、CD133（神経膠がん）、およびNotch（例えば、骨髄腫および神経芽細胞腫）が含まれる。
【０１０８】
本明細書に記載のIQB-CBIをがん標的のために抗体-薬物結合体内に組み込むことができる、がん標的の1つの非限定的な例は、C型レクチン様分子1（「CLL-1」）である。CLL-1は、AML芽細胞上およびLSC上で発現するが、正常な造血幹細胞上では発現しない。CLL-1は、骨髄および血液区画の両方における白血病細胞上で発現する。標的抗原は、すべてのAML French American British（FAB）分類および細胞遺伝学的リスクカテゴリーの全体に存在し、FLT-3状態と無関係に発現する。標的は、新規におよび再発疾患状態で発現する。多剤耐性（MDR）と組み合わせたCLL-1抗原の発現は、不良な疾患予後および再発の高い確率と関連する。
【０１０９】
AMLにおいて発現することに加えて、CLL-1はMDSおよび他の骨髄増殖性障害（例えば、真性多血症、本態性血小板血症および多発性骨髄線維症）において発現する。
【０１１０】
C型レクチン様分子1（CLL-1）は、CLEC12A、DCAL-2、およびMICLとしても公知であり、II型膜タンパク質（ITIMドメイン-TMドメイン-ストークドメイン-レクチン様ドメイン）である。CLL-1の細胞外ドメインは、高度にグリコシル化され、骨髄系統の細胞でのみ発現する。
【０１１１】
CLL-1のヌクレオチドおよびタンパク質の配列は多くの種について公知である。例えば、ヒト配列はGenbankアクセッション番号AF247788.1およびUniprotアクセッション番号Q5QGZ9で見出すことができる。ヒトCLL-1タンパク質について、細胞外ドメインはおよそアミノ酸65〜265を含み、膜貫通ドメインはおよそアミノ酸44〜64を含み、かつ細胞質ドメインはおよそアミノ酸1〜43を含む。ヒトCLL-1のストークドメインはアミノ酸65〜139にわたり、Cレクチンドメインはアミノ酸140〜249にわたる。当業者であれば、CLL-1多様体（例えば、種同族体、対立遺伝子多様体など）は、例えば、保存残基およびドメインの同定のために、最適にアラインされ得ることを理解するであろう。
【０１１２】
「CLL-1特異抗体」、「抗CLL-1抗体」、「CLL-1抗体」、「CLL-1 ADC」、および「抗CLL-1」なる用語は本明細書において同義語として用いられ、CLL-1の様々にグリコシル化された形を含む、CLL-1に特異的に結合する抗体（または文脈に応じて、抗体結合体）を意味する。本明細書に記載のCLL-1抗体は、例えば、ある特定のがん細胞の表面上で発現するが、HSCでは発現しない、CLL-1ポリペプチドに特異的に結合する。以下により詳細に記載するとおり、本発明の抗CLL-1抗体は、CLL-1発現細胞に結合し、他のAMLを標的とする抗体に比べて高いパーセンテージのAML細胞に結合し、AML細胞増殖を阻害し、かつそれらの破壊を媒介することができる。
【０１１３】
「CLL-1関連障害」（またはCLL-1に関する障害、CLL-1障害、CLL-1に関する状態もしくは疾患など）は、標準の対照（例えば、正常、非疾患、非がん細胞）におけるCLL-1発現に比べて、高いまたは低いCLL-1の細胞表面発現に相関する状態および疾患を意味する。CLL-1レベル上昇は、がん細胞、特にAML（急性骨髄性白血病）、MDS（骨髄異形成症候群）、およびCML（慢性骨髄性白血病）などの白血病、ならびに造血CSC（例えば、LSC）に関連している。
【０１１４】
AMLおよび関与する系統のがん幹細胞を標的とするのに有用であり得る抗体の1つの非限定的な例は、抗CLL-1抗体、より具体的にはヒト化抗CLL1抗体である。そのような抗体は、例えば、いずれも参照により本明細書に組み入れられる米国特許出願公開第2013/0295118号およびPCT国際公報番号WO 2017/091615A1に記載されている。いくつかの態様において、抗CLL-1抗体は任意で、「C6」と呼ばれるキメラ（例えば、ヒト化）抗体であり、かつ抗CLL-1抗体は、軽鎖可変領域：
2019530707.tif 000025
および重鎖可変領域：
2019530707.tif 000026
をそれぞれ含む。
【０１１５】
AMLおよび関与する系統のがん幹細胞を標的とするのに有用であり得る抗体の別の非限定的な例は、抗IL1RAP抗体、より具体的にはヒト化抗IL1RAP抗体である。本明細書において用いられる「IL1-RAP」とは、ヒトインターロイキン1受容体アクセサリータンパク質を意味する。IL1-RAPの配列はUniprotアクセッション番号Q9NPH3-1（アイソフォーム1）において示されるとおりであり得る。IL1RAP発現は、がん細胞（例えば、B細胞リンパ腫、AML細胞、および本明細書に記載の固形腫瘍）；CSC（例えば、骨髄CSC）；および本明細書において提供するIL1RAP関連障害に関連する細胞上で高い。IL1RAPは正常な造血幹細胞（HSC）上ではあまり発現しない。IL1RAP抗体は、例えば、いずれも参照により本明細書に組み入れられる米国特許仮出願第62/425,970号および米国特許出願公開第2015/0315279号において記載されている。
【０１１６】
いくつかの態様において、抗IL1RAP抗体は「3G7」と呼ばれる。キメラ抗体において、3G7は、以下のとおりの軽鎖可変配列および重鎖可変配列を有し得る（CDRは太字で強調表示している）。
3G7軽鎖可変配列：
2019530707.tif 000027
、および
3G7重鎖可変領域配列：
2019530707.tif 000028
。
【０１１７】
いくつかの態様において、3G7抗IL1RAP抗体は、ヒト化抗体であり、かつ
2019530707.tif 000029
を含む。ペイロードリンカーの結合のためのCDRおよびシステイン置換を太字および下線で示す。
【０１１８】
ある特定の態様において、抗体は別の残基に代わるシステイン残基の置換を含み得る。本開示の組成物は、システイン残基を介して抗体に結合することができる。1つの例において、156位のセリン残基はシステインで置換されている（S156C）。別の例において、239位のセリン残基はシステインで置換されている（S239C）。複数のIQB-CBI化合物をそのように改変された抗体中に組み込んでもよい。いくつかの態様において、抗体に結合しているIQB-CBI化合物の数は、1〜約10個の範囲の任意の数、または分数を含む中間の任意の数であってもよい。いくつかの態様において、抗体に結合しているIQB-CBI化合物の数は、1〜約3個の範囲である。本明細書に記載のIQB-CBIを組み込んでいるそのような抗体は、以下に記載するインビトロおよびインビボ適用において有効であることが判明している。
【０１１９】
B.  用量
対象の増殖性障害の処置または予防において有効であると考えられる化合物の量は、状態の特定の性質に依存し、当技術分野において公知の標準の臨床技術によって決定することができる。加えて、最適な用量範囲を特定する助けになるように、インビトロアッセイ法またはインビボアッセイ法は任意で用いられてもよい。任意の特定の個体に対する具体的用量レベルは、化合物の相対的活性、年齢、体重、一般的な身体および精神の健康、遺伝的因子、環境の影響、性別、食事、投与の時間、投与経路、排出速度、ならびに処置中の特定の病気の重症度を含む、様々な因子に依存する。
【０１２０】
「用量」および「投与量」なる用語は、本明細書において交換可能に用いられる。用量は、各投与時に個体に与えられる活性成分の量を意味する。本発明に関して、用量は、抗体または関連する構成要素の濃度を意味し得る。用量は、投与の頻度；個体のサイズおよび耐容性；状態の重症度；副作用のリスク；投与経路；ならびに検出可能な部分（存在する場合）の撮像様式を含む、いくつかの因子に応じて変動する。当業者であれば、用量は前述の因子に依存して、または治療の経過に基づいて、改変され得ることを理解するであろう。「剤形」なる用語は、薬剤の特定の形式を意味し、投与経路に依存する。例えば、剤形は液体、例えば、注射用食塩溶液であり得る。
【０１２１】
「対照」試料または値は、試験試料との比較のための参照、通常は公知の参照として役立つ試料を意味する。例えば、試験試料を、例えば、試験化合物存在下の試験状態から採取し、例えば、試験化合物非存在下（陰性対照）、または公知の化合物存在下（陽性対照）の公知の状態からの試料と比較することができる。対照は、いくつかの試験または結果から収集した平均値を表すこともある。当業者であれば、対照は任意の数のパラメーターの評価のために設計し得ることを理解するであろう。例えば、対照は、薬理学的データ（例えば、半減期）または治療尺度（例えば、利益および/または副作用の比較）に基づいて治療利益を比較するために考案することができる。対照は、インビトロ適用のために設計することができる。当業者であれば、所与の状況においてどの対照が役立つかを理解し、対照値との比較に基づいてデータを分析することができるであろう。対照は、データの有意性を判定するためにも役立つ。例えば、所与のパラメーターの値が対照において大きくばらつく場合、試験試料の変動は有意とは考えられない。
【０１２２】
ある特定の態様において、本開示の化合物は、抗体などの標的結合部分に結合する。標的結合部分は、そのような細胞の存在によって引き起こされる状態を患っている対象を処置するために、除去するよう標的とされる細胞上の標的に特異的であり得る。標的は、標的細胞上の任意の生体分子であり得る。標的細胞はがん細胞を含み得る。したがって、標的は、例えば、がん細胞上で発現するポリペプチド、例えば、腫瘍関連抗原を含み得る。別の態様において、標的結合部分は、腫瘍関連抗原、ウイルス抗原もしくはウイルス関連抗原、またはそのようなポリペプチドの断片の細胞外ドメイン内のアミノ酸を含む抗原決定基に結合し得る、キメラ抗原受容体（「CAR」）であり得る。
【０１２３】
経口投与に適した用量範囲は、特定の化合物または化合物抗体結合体の有効性に依存するが、一般には体重1kgあたり約0.001mg〜約500mgの薬物、好ましくは体重1kgあたり約0.1mg〜約200mgの薬物、より好ましくは約1〜約100mg/kg体重/日である。用量範囲は当業者には公知の方法によって容易に決定し得る。例えば、担体材料と組み合わせて単一の剤形を生成し得る活性成分の量は、処置する対象および特定の投与様式に応じて変動する。用量単位剤形は一般には約1mg〜約500mgの活性成分を含む。
【０１２４】
投与は定期的であり得る。投与経路に応じて、用量を、例えば、1、3、5、7、10、14、21、もしくは28日またはそれよりも長い期間に1回（例えば、2、3、4、または6ヶ月に1回）投与することができる。いくつかの場合には、投与はより頻繁、例えば、1日に2または3回である。当業者には理解されるとおり、対象をモニターして、治療の経過および任意の有害副作用に応じて投与の用量および頻度を調節することができる。
【０１２５】
したがって、いくつかの態様において、追加の投与は対象の経過に依存し、例えば、対象を投与間にモニターする。例えば、最初の投与または一連の投与の後に、対象を腫瘍成長の速度、再発（例えば、術後の対象の場合）、または虚弱、疼痛、悪心などの一般的な疾患関連症状についてモニターすることができる。
【０１２６】
C.  投与法
IQB-CBI化合物またはIQB-CBI抗体結合体を含む組成物を、任意の好都合な経路により、例えば、注入もしくはボーラス注射により、または上皮もしくは粘膜皮膚内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）を通った吸収により投与してもよい。投与は、全身または局所であり得る。抗体結合体組成物を投与するために用い得る、様々な送達システムが公知である（例えば、リポソーム、微小粒子、マイクロカプセル、カプセルなどへの封入）。投与法には、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻内、硬膜外、鼻内、および脳内が含まれるが、それらに限定されない。
【０１２７】
対象の増殖性障害の処置または予防において有効であると考えられる化合物抗体結合体の量は、状態の特定の性質に依存し、当技術分野において公知の標準の臨床技術によって決定することができる。加えて、最適な用量範囲を特定する助けとなるように、インビトロアッセイ法またはインビボアッセイ法は任意に用いられてもよい。任意の特定の個体に対する具体的用量レベルは、化合物抗体結合体の相対的活性、年齢、体重、一般的な身体および精神の健康、遺伝的因子、環境の影響、性別、食事、投与の時間、投与経路、排出速度、ならびに処置中の特定の病気の重症度を含む、様々な因子に依存する。
【０１２８】
IQB-CBI結合体またはIQB-CBI抗体結合体は、静脈内、皮下、筋肉内、または腹腔内経路を含むが、それらに限定されない、任意の適切な経路を通して注射または注入により投与することができる。薬学的組成物の投与の例は、組成物を4℃で注射用無菌等張食塩水溶液中の10mg/mlで貯蔵すること、およびそれを100mlまたは200mlいずれかの注射用0.9％塩化ナトリウム中で希釈した後、対象に投与することを含む。組成物を、0.2〜10mg/kgの間の用量で、1時間の静脈内注入により投与する。他の態様において、組成物を、15分間〜2時間の期間で静脈内注入により投与する。さらに他の態様において、投与手法は皮下ボーラス注射による。
【０１２９】
したがって、いくつかの態様において、追加の投与は、対象の経過に依存し、例えば、対象を投与間にモニターする。
【０１３０】
D.  キット
本明細書において提供する組成物を含む容器を含むキットもまた本明細書において提供される。ある特定の態様において、容器は単位用量の組成物を含む。キットは、組成物を含む容器を複数含む箱を含み得る。他の態様において、キットは、例えば、容器内の組成物の導管の役割を果たすチューブを通して、針などの挿入装置に接続された、本開示の組成物を含む袋または瓶などの容器を含む。
【０１３１】
以下の実施例を例示のために提供するが限定のためには提供しない。
【実施例】
【０１３２】
実施例1： IQB-CBI二量体の合成のための実験プロトコール
一般法：
1H NMRスペクトルはVarian Inova 300または500 MHz NMR機器で記録した。クロマトグラフィによる純度をAgilent 1200 Seriesまたは1100 Series LC/MS装置で、Merck Chromolith RP-18e分析用HPLCカラム（一体式、50×2mm）および以下のHPLC分析法を用いて判定した：注入量5μL；流速1mL/分；5％→95％アセトニトリル/水＋0.05％AcOH/5分間；Agilentダイオードアレイ検出器、λ＝254、220、または195nm；室温。
【０１３３】
IQB酸11a〜eの合成（スキーム1）（図1参照）
4-ベンジルオキシ-5-メトキシ-2-ニトロ-安息香酸メチルエステル（2）
4-ベンジルオキシ-5-メトキシ-安息香酸メチルエステル1（13.6g、50mmol）を無水酢酸（130mL）に溶解した。硝酸銅三水和物（15.1g、62.5mmol）を少しずつ30分かけて加えた。1時間撹拌した後、反応混合物を氷上に加え、1時間撹拌した。沈澱をろ過し、水で洗浄し、十分に乾燥した。材料を酢酸エチルから再結晶して、9.1gの2を得た（収率57％）。
2019530707.tif 000030
2019530707.tif 000031
【０１３４】
4-ベンジルオキシ-5-メトキシ-2-ニトロ-安息香酸（3）
4-ベンジルオキシ-5-メトキシ-安息香酸メチルエステル（9.1g、29mmol）をメタノール（145mL）に溶解し、水酸化ナトリウム（6M溶液、24mL）を一度に加えた。反応混合物を50℃で1時間撹拌し、メタノールを蒸発させた。濃塩酸（12mL）を残渣に撹拌しながらゆっくり加えた。生成した沈澱をろ過し、水で洗浄し、乾燥して、8.1gの3を得た（収率92％）。
2019530707.tif 000032
【０１３５】
(S)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボン酸メチルエステル（5）
(S)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボン酸4（10.6g、60mmol）を無水メタノール（86mL）に溶解した。塩化チオニル（6.5mL、90mmol）を滴加し、反応混合物を5時間還流した。メタノールを蒸発させ、残渣をクロロホルムおよび飽和炭酸水素ナトリウム溶液に分配した。水相をさらにクロロホルムで抽出し、合わせた有機物を無水MgSO4で乾燥し、ろ過し、濃縮乾固して、9.2gの5を得た（収率81％）。
2019530707.tif 000033
【０１３６】
(S)-2-(4-ベンジルオキシ-5-メトキシ-2-ニトロ-ベンゾイル)-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-3-カルボン酸メチルエステル（6）
酸3（3.03g、10mmol）をジクロロメタン（33mL）に溶解し、DIEA（2.6mL、15mmol）と、続いてHATU（4.93g、13mmol）を加えた。混合物を30分間撹拌し、アミン5（2.29g、12mmol）を一度に加えた。反応混合物を終夜撹拌し、次いで0.5M HCl、飽和NaHCO3で洗浄し、濃縮乾固した。残渣を110gのシリカTeledyne Iscoカラム（0％→35％EtOAc/ヘキサン）で精製した。生成物含有分画を蒸発させて、2.73gの6を得た（収率57％）。
2019530707.tif 000034
【０１３７】
2-ベンジルオキシ-3-メトキシ-11,11a-ジヒドロ-6H,13H-5a,13-ジアザ-ベンゾ[4,5]シクロヘプタ[1,2-b]ナフタレン-5,12-ジオン（7）
ニトロ誘導体6（2.71g、5.7mmol）、亜鉛（7.41g、114mmol）およびNH4Cl（12.2g、228mmol）を、撹拌子を入れたフラスコに加え、アセトン/水（125mL、v/v 1：4）を加えた。反応混合物を終夜撹拌し、次いでセライトを通してろ過し、濃縮した。残渣をメタノール（100mL）に溶解し、室温で24時間貯蔵した。生成した沈澱をろ過し、水で十分に洗浄し、乾燥して、2.18gの7を得た（収率92％）。
2019530707.tif 000035
【０１３８】
2-ベンジルオキシ-3-メトキシ-13-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-11,11a-ジヒドロ-6H,13H-5a,13-ジアザ-ベンゾ[4,5]シクロヘプタ[1,2-b]ナフタレン-5,12-ジオン（8）
THF-DMF（40mL、v/v 3：1）中のアミド7（2.20g、5.3mmol）の懸濁液に、鉱油中の水素化ナトリウム（424mg、10.6mmol）を少しずつ加えた。30分間撹拌した後、反応混合物を-78℃まで冷却し、SEMCl（2.34mL、13.3mmol）を滴加した。溶液を室温まで加温し、終夜撹拌した。THFを減圧下で除去し、残渣をクロロホルム-水に分配した。水相をさらにクロロホルムで抽出し、合わせた有機物を無水MgSO4で乾燥し、ろ過し、濃縮乾固した。残渣を40gのシリカTeledyne Iscoカラム（0％→50％EtOAc/ヘキサン）で精製した。生成物含有分画を蒸発させて、2.55gの8を得た（収率88％）。
2019530707.tif 000036
【０１３９】
2-ヒドロキシ-3-メトキシ-13-(2-トリメチルシラニル-エトキシメチル)-11,11a-ジヒドロ-6H,13H-5a,13-ジアザ-ベンゾ[4,5]シクロヘプタ[1,2-b]ナフタレン-5,12-ジオン（9）
メタノール（47mL）中の8（2.55g、4.7mmol）の溶液にArを流し、10％Pd/C（375mg）を加えた。水素（風船）を溶液に2時間通気し、次いで反応混合物をセライトを通してろ過し、濃縮し、24gのシリカTeledyne Iscoカラム（0％→60％EtOAc/ヘキサン）で精製した。生成物含有分画を蒸発させて、2.13gの9を得た（収率99％）。
2019530707.tif 000037
【０１４０】
SEM保護IQB酸（10a）
DMF（0.8mL）中のフェノール9（90mg、0.2mmol）、2-ブロモ酢酸（83mg、0.6mmol）の溶液に、炭酸セシウム（197mg、0.6mmol）を加え、混合物を終夜撹拌した。生成物は生じず、MeOH（0.5mL）を加え、混合物をさらに24時間撹拌し、その後、LC/MSは100％の変換を示した。反応混合物を水（10mL）で希釈し、固体NH4Clで飽和させた。DCM：MeOH（15mL、v/v 10：1）で抽出した後、有機物を濃縮乾固し、12gのシリカTeledyne Iscoカラム（0％→15％MeOH＋0.1％AcOH/DCM）で精製した。生成物含有分画を蒸発させて、120mgの10aを得た（収率＞99％）。
2019530707.tif 000038
【０１４１】
SEM保護IQB酸（10b）
DMF（0.6mL）中のフェノール9（136mg、0.3mmol）、2-(2-ブロモエチル)-1,3-ジオキソラン（108mg、0.6mmol）の溶液に、炭酸セシウム（295mg、0.9mmol）を加え、混合物を2時間撹拌した。LC/MSは100％の変換を示した。反応混合物を水（10mL）で希釈し、EtOAc（2×15mL）で抽出し、有機物を濃縮乾固し、THF（8mL）に溶解した。6M HCl（1mL）を加え、反応混合物を室温で24時間撹拌し、最後に濃縮乾固して、粗製アルデヒドを得た。
【０１４２】
粗製アルデヒドをtBuOH/2-メチル-2-ブテン/水（v/v/v 3/1/1；10mL）、リン酸二水素ナトリウム（420mg、2.1mmol）と、続いて次亜塩素酸ナトリウム（244mg、2.7mmol）に溶解した。反応混合物を30分間激しく撹拌し、LC/MSは反応が完了したことを示した。有機層を分離し；水をEtOAc（2×20mL）で抽出した。合わせた有機物を濃縮乾固し、分取TLCプレート（ヘキサン：EtOAc：AcOH、1：1：0.05）で精製した。生成物を含むシリカゲルを削り取り、DCM：MeOH（v/v 15：1）で洗浄し、有機溶液を蒸発させて、78mgの10bを得た（収率49％）。
2019530707.tif 000039
【０１４３】
SEM保護IQB酸（10c）
DMF（0.4mL）中のフェノール9（90mg、0.2mmol）、4-ブロモブタン酸エチル（117mg、0.6mmol）の溶液に、炭酸セシウム（197mg、0.6mmol）を加え、混合物を2時間撹拌した。LC/MSは100％の変換を示した。反応混合物を水（10mL）で希釈し、EtOAc（2×15mL）で抽出し、有機分画を濃縮乾固し、THF-MeOH-H2O（v/v/v 3-1-1、2mL）に溶解した。LiOH（32mg、1.3mmol）を加え、反応混合物を3時間撹拌し、次いで濃縮乾固した。残渣をDMSO（1mL）に溶解し、15.5gのC18 Aq Iscoカラムに直接ロードして精製した（5％→95％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）。所望の分画を凍結乾燥して、88mgの10cを得た（収率81％）。
2019530707.tif 000040
【０１４４】
SEM保護IQB酸（10d）
DMF（0.4mL）中のフェノール9（100mg、0.22mmol）、5-ブロモ吉草酸メチル（129mg、0.66mmol）の溶液に、炭酸セシウム（215mg、0.66mmol）を加え、混合物を16時間撹拌した。LC/MSは100％の変換を示した。反応混合物を水（10mL）で希釈し、EtOAc（2×15mL）で抽出し、有機分画を濃縮乾固し、THF-MeOH-H2O（v/v/v 3-1-1、2mL）に溶解した。LiOH（17mg、0.69mmol）を加え、反応混合物を1時間撹拌し、次いで濃縮乾固した。残渣をDMSO（1mL）に溶解し、50gのC18 Aq Iscoカラムに直接ロードして精製した（5％→95％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）。所望の分画を凍結乾燥して、107mgの10dを得た（収率83％）。
2019530707.tif 000041
【０１４５】
SEM保護IQB酸（10e）
DMF（1mL）中のフェノール9（227mg、0.5mmol）、6-ブロモヘキサン酸メチル（313mg、1.5mmol）の溶液に、炭酸セシウム（313mg、1.5mmol）を加え、混合物を2時間撹拌した。LC/MSは100％の変換を示した。反応混合物を水（10mL）で希釈し、ジエチルエーテル（2×15mL）で抽出し、有機分画を濃縮乾固し、THF-MeOH-H2O（v/v/v 3-1-1、4mL）に溶解した。LiOH（64mg、2.6mmol）を加え、反応混合物を3時間撹拌し、次いで濃縮乾固した。残渣をACN-H2O（v/v 1-1、2mL）に溶解し、50gのC18 Aq Iscoカラムに直接ロードして精製した（5％→95％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）。所望の分画を凍結乾燥して、260mgの10eを得た（収率92％）。
2019530707.tif 000042
【０１４６】
IQB酸（11a）
SEM保護IQB酸10a（102mg、0.2mmol）を無水THF（4mL）に溶解し、混合物を-78℃まで冷却し、スーパーヒドリド溶液（0.5mL、1M/THF、0.5mmol）を滴加した。溶液をその温度で90分間維持し、次いで室温まで加温した後、MeOH（1mL）で反応停止した。すべての揮発性物質をロトバップ（rotovap）で除去し、残渣をDMSOに溶解し、15.5gのC18 Aq Iscoカラムに直接ロードして精製した（5％→95％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）。所望の分画を凍結乾燥して、51mgの11aを得た（収率70％）。
2019530707.tif 000043
【０１４７】
IQB酸（11b）
手法は11aについて記載したとおり。51mgの11bを得た（収率60％）。
2019530707.tif 000044
【０１４８】
IQB酸（11c）
手法は11aについて記載したとおり。51mgの11cを得た（収率61％）。
2019530707.tif 000045
【０１４９】
IQB酸（11d）
手法は11aについて記載したとおり。56mgの11dを得た（収率49％）。
2019530707.tif 000046
【０１５０】
IQB酸（11e）
手法は11aについて記載したとおり。140mgの11eを得た（収率72％）。
2019530707.tif 000047
【０１５１】
IQB-アミノCBI二量体 − 20a〜eの合成（スキーム2、図2参照）
(3-tert-ブトキシカルボニルアミノ-ナフタレン-1-イル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル（13）
メタノール（400mL）中の1,3-ジニトロ-ナフタレン 412）（20.0g、92.0mmol）のArパージした溶液に、10％Pd/C（2.0g）を加えた。混合物を脱気し、H2（3×）をパージした。得られた反応混合物を1atmのH2ガス下で16時間撹拌し、この時点でLC/MSにより反応は完了と判断された。触媒を反応混合物からセライトを通したろ過により除去した。反応混合物を減圧下で濃縮し、粗生成物をそれ以上精製せずに用いた。
【０１５２】
Boc2O（116g、535mmol）を、THF（400mL）中の粗製1,3-ジアミノ-ナフタリンの溶液に加えた。得られた混合物を60℃、Ar下で、TLCおよびLC/MSにより反応が完了したと判断されるまで撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0％→30％EtOAc/Hex）で精製し、20.0gの13を得た（収率61％）。
2019530707.tif 000048
【０１５３】
(4-tert-ブトキシカルボニルアミノ-1-ヨード-ナフタレン-2-イル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル（14）
Ar下、1：1 THF/MeOH（150mL）溶液中の(3-tert-ブトキシカルボニルアミノ-ナフタレン-1-イル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル（13）（20.0g、56.0mmol）の脱気溶液を-78℃まで冷却した。THF（50mL）中のNIS（14.4g、64.2mmol）の溶液と、続いてMeOH（50mL）中のp-TsOH（21.3g、112mmol）の溶液を加えた。混合物を-78℃で、LC/MSにより反応が完了したと判断されるまで撹拌した。混合物を次いで室温まで加温し、EtOAc（200mL）で抽出し、H2O（2×100mL）と、次いで食塩水（2×100mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0％→50％EtOAc/Hex）で精製し、17.8gの12を得た（収率66％）。
2019530707.tif 000049
【０１５４】
アリル-[3-(アリル-tert-ブトキシカルボニル-アミノ)-4-ヨード-ナフタレン-1-イル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル（15）
Ar下、0℃に冷却した、DMF（100mL）中の(4-tert-ブトキシカルボニルアミノ-1-ヨード-ナフタレン-2-イル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル（14）（13.5g、27.9mmol）の溶液に、NaH（鉱油中60％）（3.34g、83.6mmol）を加えた。混合物を0℃で30分間撹拌し、続いて臭化アリル（24.0mL、279mmol）を5分かけて加えた。得られた混合物を2時間かけて室温まで加温し、この時点で反応は完了したと判断された。次いで、反応混合物をEtOAc（500mL）で希釈し、NaHCO3（飽和水溶液）（2×100mL）、H2O（2×100mL）、次いで食塩水（2×100mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0％→50％EtOAc/Hex）で精製し、11.9gの15を得た（収率76％）。
2019530707.tif 000050
【０１５５】
5-(アリル-tert-ブトキシカルボニル-アミノ)-1-(2,2,6,6-テトラメチル-ピペリジン-1-イルオキシメチル)-1,2-ジヒドロ-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸tert-ブチルエステル（16）
Ar下、ベンゼン（400mL）中の(アリル-[3-(アリル-tert-ブトキシカルボニル-アミノ)-4-ヨード-ナフタレン-1-イル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル（15）（11.0g、19.5mmol）の溶液に、TEMPO（9.0g、58mmol）およびBu3SnH（5.3mL、19.5mmol）を加えた。混合物を60℃で30分間撹拌し、次いでさらに等量のBu3SnH（5.3mL、19.5mmol）を加えた。さらに30分後、TEMPO（6.1g、39mmol）およびBu3SnH（5.3mL、19.5mmol）を加え、混合物をさらに30分間撹拌し、この時点でさらにTEMPO（6.1 g 39mmol）を加えた。さらに20分後、最終分のBu3SnH（5.3mL、19.5mmol）を加えた。得られた混合物を60℃で45分間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、減圧下で濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0％→10％EtOAc/Hex、非常にゆっくりの勾配）で精製し、10.5gの16を得た（収率91％）。
2019530707.tif 000051
【０１５６】
5-(アリル(tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-1-(ヒドロキシメチル)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸tert-ブチル（17）
THF（45mL）、HOAc（15mL）およびH2O（15mL）中の5-(アリル-tert-ブトキシカルボニル-アミノ)-1-(2,2,6,6-テトラメチル-ピペリジン-1-イルオキシメチル)-1,2-ジヒドロ-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸tert-ブチルエステル（16）（1.0g、1.68mmol）の溶液に、Zn末（8.81g、134.7mmol）を加えた。得られた混合物を70℃で16時間撹拌し、この時点でLC/MSおよびTLCにより反応は完了したと判断された。次いで、反応混合物を室温まで冷却し、反応混合物をセライトのパッドを通してろ過し、固体残渣をDCMで洗浄した。合わせたろ液を減圧下で濃縮した。残存水をCHCl3（3×50mL）との共沸により除去した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0％→50％EtOAc/Hex）で精製し、636mgの17を得た（収率83％）。
2019530707.tif 000052
【０１５７】
5-(アリル(tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-1-(クロロメチル)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸tert-ブチル（18）
Ar下、DCM（5.6mL）中の5-(アリル(tert-ブトキシカルボニル)アミノ)-1-(ヒドロキシメチル)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸tert-ブチル（17）（1.0g、1.40mmol）の溶液に、PPh3（1.10g、4.20mmol）と、続いてCCl4（1.22mL、12.6mmol）を加えた。得られた混合物を22℃で2時間撹拌し、この時点でLC/MSおよびTLCにより反応は完了したと判断された。次いで、反応混合物を減圧下で濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0％→50％EtOAc/Hex）で精製し、592mgの18を得た（収率89％）。
2019530707.tif 000053
【０１５８】
アリル保護IQB-CBI（19a）
TFA（5mL）をあらかじめ0℃まで冷却し、次いでBoc保護CBI（29mg、0.06mmol）に加えた。溶液を0℃で終夜維持し、次いで濃縮乾固した。残渣を無水クロロホルムに再溶解し、再度蒸発させ、飽和NaHCO3とDCMとの間で分配した。有機相をMgSO4で乾燥し、濃縮して、アニリンの粗製塩を得た。これをDMF（1.2mL）に溶解し、酸11a（25mg、0.068mmol）と、続いてEDC-HCl（30mg、0.16mmol）を加えた。反応混合物を3時間撹拌し、次いで15.5gのC18 Aq Iscoカラムに直接ロードして精製した（5％→95％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）。所望の分画を凍結乾燥して、22mgの19aを得た（収率58％）。
2019530707.tif 000054
【０１５９】
アリル保護IQB-CBI（19b）
手法は19aについて記載したとおりであり、21mgの19bを得た（収率45％）。
2019530707.tif 000055
【０１６０】
アリル保護IQB-CBI（19c）
手法は19aについて記載したとおりであり、20mgの19cを得た（収率31％）。
2019530707.tif 000056
【０１６１】
アリル保護IQB-CBI（19d）
手法は19aについて記載したとおりであり、14mgの19dを得た（収率15％）。
2019530707.tif 000057
【０１６２】
アリル保護IQB-CBI（19e）
手法は19aについて記載したとおりであり、6mgの19eを得た（収率12％）。
2019530707.tif 000058
【０１６３】
D801（20a）の合成
19a（22mg、0.04mmol）を無水DCM（0.8mL）に溶解した。カンファースルホン酸（6.4mg、0.12mmol）およびベンゼンスルホン酸ナトリウム塩（16.4mg、0.1mmol） を加えた。バイアルにArを流した後、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（4.6mg、0.004mmol）を加えた。反応混合物を30分間撹拌し、濃縮乾固した。残渣をDMSO（0.5mL）に溶解し、15.5gのC18 Aq Iscoカラムに直接ロードして精製した（5％→95％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）。所望の分画を凍結乾燥して、9mgの20aを得た（収率39％）。
2019530707.tif 000059
【０１６４】
D807（20b）の合成
手法は20aについて記載したとおりであり、2.1mgの20bを得た（収率11％）。
2019530707.tif 000060
【０１６５】
D803（20c）の合成
手法は20aについて記載したとおりであり、5.0mgの20cを得た（収率26％）。
2019530707.tif 000061
【０１６６】
D809（20d）の合成
手法は20aについて記載したとおりであり、2.0mgの20dを得た（収率15％）。
2019530707.tif 000062
【０１６７】
D805（20e）の合成
手法は20aについて記載したとおりであり、1.7mgの20eを得た（収率30％）。
2019530707.tif 000063
【０１６８】
IQB-ヒドロキシCBI二量体 - 33c；33c-S,S；33eおよび33e-S,Sの合成（スキーム3、図3参照）
(4-((tert-ブトキシカルボニル)オキシ)ナフタレン-2-イル)カルバミン酸Tert-ブチル（22）
4-メトキシナフタレン-2-アミン（5.7g、33mmol）をAcOHおよび水中48％HBrの混合物（v/v 2-3、330mL）に溶解した。混合物をAr雰囲気下、100℃で24時間加熱し、次いで濃縮乾固した。残渣をEtOAcと飽和NaHCO3との間で分配した。有機層を分離し、濃縮乾固した。残渣をジオキサン（66mL）に溶解し、Boc2O（8.6g、40mmol）を加えた。混合物をAr雰囲気下、100℃で2時間加熱し、さらにBoc2O（4.3g、20mmol）を加えた。さらに2時間後、反応混合物を濃縮乾固し、少量のDCMに溶解し、120gのシリカTeledyne Iscoカラム（0％→50％EtOAc/ヘキサン）で精製した。生成物含有分画を蒸発させて、6.5gの22を得た（収率55％）。
2019530707.tif 000064
【０１６９】
(4-ヒドロキシナフタレン-2-イル)カルバミン酸tert-ブチル（23）
ジboc誘導体22（6.5g、18mmol）をTHF-MeOH-H2O（v/v/v 3-1-1、180mL）に溶解した。LiOH（650mg、27mmol）を加え、反応混合物を3時間撹拌し、次いで濃縮乾固した。飽和NH4Clで希釈した後、生成物をEtOAc（2×100mL）で抽出した。有機層を濃縮乾固し、少量のDCMに溶解し、80gのシリカTeledyne Iscoカラム（0％→20％EtOAc/ヘキサン）で精製した。生成物含有分画を蒸発させて、3.2gの23を得た（収率67％）。
2019530707.tif 000065
【０１７０】
(4-(ベンジルオキシ)ナフタレン-2-イル)カルバミン酸tert-ブチル（24）
DMF（25mL）中のフェノール23（3.2g、12mmol）、BnBr（1.75mL、15mmol）の溶液に、炭酸セシウム（8.1g、25mmol）を加え、混合物を30分間撹拌した。反応混合物を水（100mL）で希釈し、ジエチルエーテル（3×50mL）で抽出し、合わせた有機物を濃縮乾固し、80gのシリカTeledyne Iscoカラム（0％→10％EtOAc/ヘキサン）で精製した。生成物含有分画を蒸発させて、3.2gの24を得た（収率77％）。
2019530707.tif 000066
【０１７１】
(4-(ベンジルオキシ)-1-ヨードナフタレン-2-イル)カルバミン酸tert-ブチル（25）
THF-MeOH（v/v 1-1、150mL）中の24（3.2g、9.2mmol）およびTsOH-H2O（50mg）に、THF（5mL）中のNIS（2.23g、10mmol）を-78℃（ドライアイス/アセトン冷却浴）で滴加した。混合物をその温度で1時間撹拌し、次いでロータリーエバポレーターで濃縮乾固した。残渣を120gのシリカTeledyne Iscoカラム（0％→10％EtOAc/ヘキサン）で精製した。生成物含有分画を蒸発させて、3.2gの25を得た（収率73％）。
2019530707.tif 000067
【０１７２】
アリル(4-(ベンジルオキシ)-1-ヨードナフタレン-2-イル)カルバミン酸tert-ブチル（26）
DMF（13mL）中の25（3.2g、6.7mmol）の溶液に、鉱油中の水素化ナトリウム（536mg、13.4mmol）を少しずつ加えた。5分間撹拌した後、アリルBr（2.9mL、33mmol）を滴加した。30分間撹拌した後、反応混合物を水（100mL）で希釈し、ジエチルエーテル（3×50mL）で抽出し、合わせた有機物を濃縮乾固し、80gのシリカTeledyne Iscoカラム（0％→10％EtOAc/ヘキサン）で精製した。生成物含有分画を蒸発させて、3.4gの26を得た（収率98％）。
2019530707.tif 000068
【０１７３】
5-(ベンジルオキシ)-1-(((2,2,6,6-テトラメチルピペリジン-1-イル)オキシ)メチル)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸tert-ブチル（27）
ベンゼン（220mL）中の26（3.4g、6.6mmol）の溶液に、Ar下、TEMPO（3.1g、20mmol）およびBu3SnH（1.8mL、6.6mmol）を加えた。混合物を70℃で15分間撹拌し、次いでさらにBu3SnH（1mL）およびTEMPO（1g）を加えた。さらに15分後、TEMPO（1g）およびBu3SnH（1mL）を加え、混合物をさらに15分間撹拌し、この時点でさらにTEMPO（1g 39mmol）およびBu3SnH（1mL）を加えた。さらに15分後、最終分のBu3SnH（1mL、19.5mmol）およびTEMPO（1g）を加えた。得られた混合物を70℃でさらに30分間撹拌し、濃縮乾固した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（0％→10％EtOAc/Hex）で精製して、不純物としてTEMPOを含む5gの粗製27を得た。次の段階でそのまま用いた。
2019530707.tif 000069
【０１７４】
5-(ベンジルオキシ)-1-(ヒドロキシメチル)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸tert-ブチル（28）
AcOH-THF-H2O（v/v/v 3-1-1、120mL）中の粗製27（5g、6mmol）の溶液に、Zn末（4.7g、72mmol）を少しずつ加えた。混合物を80℃で3時間撹拌し、次いで濃縮乾固した。残渣を飽和NaHCO3で注意深く反応停止し、ジエチルエーテル（2×100mL）で抽出した。有機溶液を濃縮乾固し、80gのシリカTeledyne Iscoカラム（0％→60％EtOAc/ヘキサン）で精製した。生成物含有分画を蒸発させて、1.69gの28を得た（2段階の収率63％）。
2019530707.tif 000070
【０１７５】
5-(ベンジルオキシ)-1-(クロロメチル)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸tert-ブチル（29）
アルコール28（406mg、1mmol）を無水DCM（10mL）に溶解し、Ph3PCl2（500mg、1.5mmol）を一度に加えた。1時間撹拌した後、反応混合物を飽和NaHCO3で反応停止し、クロロホルムで抽出した。合わせた有機物をMgSO4で乾燥し、濃縮した。残渣を12gのシリカTeledyne Iscoカラム（0％→50％EtOAc/ヘキサン）で精製した。生成物含有分画を蒸発させて、230gの29を得た（収率54％）。
2019530707.tif 000071
【０１７６】
1-(クロロメチル)-5-ヒドロキシ-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸tert-ブチル（30）および（30-(S)）へのキラル分離
EtOAc（6mL）中の29（232mg、0.55mmol）の溶液を含むフラスコにArを流し、Pd(OH)2/C（10重量％、50mg）を加えた。水素（風船）を溶液に24時間通気し、次いで反応混合物をセライトを通してろ過し、濃縮し、12gのシリカTeledyne Iscoカラム（0％→50％EtOAc/ヘキサン）で精製した。生成物含有分画を蒸発させて、145mgの30を得た（収率78％）。
【０１７７】
ラセミ体30を5mLのヘキサン-IPA（v/v 9-1、5mL）に溶解し、1mL分をキラルHPLCに注入した：OD-Hカラム（20×250mm、5μm）、25mL/分、0％→5％IPA/ヘキサン/20分。tr(30-(R))＝12分；tr(30-(S))＝14分（J. Am. Chem. Soc. 1994, 116, 7996-8006）。所望の鏡像異性体を含む分画を合わせ、濃縮乾固して、51mgの30-(S)を得た。
2019530707.tif 000072
【０１７８】
D811（32c）の合成
(6aS)-3-(4-(1-(クロロメチル)-5-ヒドロキシ-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-イル)-4-オキソブトキシ)-2-メトキシ-7,12-ジヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-14(6aH)-オン（32c/D811）
ジオキサン中4M HCl（1mL）をBoc保護CBIラセミ体30（15mg、0.03mmol）に加えた。溶液を室温で2時間維持し、次いで濃縮乾固して、31の塩酸塩を得た。残渣を無水クロロホルム（2mL）に再溶解し、再度蒸発させ、手法を2回繰り返した。次いで、これをDMF（0.8mL）に溶解し、酸11c（15mg、0.039mmol）と、続いてEDC-HCl（16mg、0.09mmol）を加えた。反応混合物を1時間撹拌し、次いで15.5gのC18 Aq Iscoカラムに直接ロードして精製した（5％→95％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）。所望の分画を凍結乾燥して、2.5mgの32cを得た（収率12％）。
2019530707.tif 000073
【０１７９】
D813（32e）の合成
(6aS)-3-((6-(1-(クロロメチル)-5-ヒドロキシ-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-イル)-6-オキソヘキシル)オキシ)-2-メトキシ-7,12-ジヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-14(6aH)-オン（32e/D813）
手法は32cについて記載したとおりであるが、11eから出発。3.0mgの32eを得た（収率14％）。
2019530707.tif 000074
【０１８０】
D815（32c-S,S）の合成
(S)-3-(4-((S)-1-(クロロメチル)-5-ヒドロキシ-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-イル)-4-オキソブトキシ)-2-メトキシ-7,12-ジヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-14(6aH)-オン（32c-(S,S)）
手法は32cについて記載したとおりであるが、11cおよび30-(S)から出発。3.3mgを得た（収率16％）。
2019530707.tif 000075
【０１８１】
D817（32e-S,S）の合成
(S)-3-((6-((S)-1-(クロロメチル)-5-ヒドロキシ-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-イル)-6-オキソヘキシル)オキシ)-2-メトキシ-7,12-ジヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-14(6aH)-オン（32e-(S,S)）
手法は32cについて記載したとおりであるが、11eおよび30-(S)から出発。2.5mgを得た（収率12％）。
2019530707.tif 000076
【０１８２】
実施例2： 様々な連結基を有するIQB-CBIの合成の実験プロトコール（スキーム5および6、図5および6参照）
CLT-D801を生成するために用いた合成プロトコールを、IQB部分とCBI部分との間の様々なスペーサー基を導入するために改変することができる。図5および6を参照し、プロトコールは、化合物9と10との間の段階で改変を導入して、同じ様式で続行することができる。より具体的には、2-ブロモ酢酸ではなく、本明細書に記載の部分X1を組み込んだカルボン酸を用いる。
【０１８３】
実施例3： IQB-アミノCBI二量体およびIQB-ヒドロキシCBI二量体の細胞障害性
D801、D803、D05、D807、D809、D811、D813、D815、およびD817の細胞障害性を、AML2およびHL60細胞株に対して試験した。結果を表1に示す。様々なIQB-CBI二量体と3日間インキュベートした後に、細胞殺滅アッセイ法を実施した。
【０１８４】
【表１】
2019530707.tif 000077
【０１８５】
一般法：
1H NMRスペクトルはVarian Inova 300または500 MHz NMR機器で記録した。クロマトグラフィによる純度をAgilent 1200 Series、1100 Seriesまたは6130 Series LC/MS装置で、Merck Chromolith RP-18e分析用HPLCカラム（一体式、50×2mm）および以下のHPLC分析法を用いて判定した：注入量5μL；流速1mL/分；5％→95％アセトニトリル/水＋0.05％AcOH/5分；Agilentダイオードアレイ検出器、λ＝254、220または195nm；室温。
【０１８６】
1.0  リンカーの合成（スキーム7）（図7参照）
1.1  t-boc-N-アミド-dPEG(登録商標)8-Val-Ala-4-アミノベンジル-ペンタフルオロフェニルカーボネート（3）
DMF（2.1mL）中のt-boc-N-アミド-dPEG(登録商標)8-Val-Ala-4-アミノベンジル-アルコール（1）（350mg、0.428mmol）のArパージ溶液に、DIEA（149μL、0.856mmol）と、続いてビス-(ペンタフルオロフェニル)-カーボネート（253mg、0.643mmol）を加えた。次いで、反応混合物を22℃で45分間撹拌した。得られた反応混合物を、次いで、逆相カラムクロマトグラフィに直接ロードして精製し（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）、所望の分画を凍結乾燥して、（3）を黄色泡状物で得た（347mg、収率79％、0.338mmol）。
2019530707.tif 000078
【０１８７】
1.2  t-boc-N-アミド-dPEG(登録商標)8-Val-Ala-4-アミノベンジル-N1,N2-ジメチルエタン-1,2-ジアミンカルバメート（5）。
Ar下、DMF（0.33mL）中のN,N2-ジメチルエタン-1,2-ジアミン（4）（142μL、1.32mmol）の溶液に、0.33mLのDMF中（5）の反応混合物（前記）（0.0661mmol）の粗製溶液を滴加した。さらに100μLのDMFを用いて移行フラスコを洗浄し、反応混合物に加えて、（3）を反応混合物に完全に移行させた。得られた混合物を、次いで、22℃で1時間撹拌した。反応混合物を0.5mLのH2Oで希釈し、次いで、逆相カラムクロマトグラフィに直接ロードして精製し（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）、所望の分画を凍結乾燥して、（5）をオフホワイト泡状物で得た（37.1mg、収率60％、0.0398mmol）。
2019530707.tif 000079
【０１８８】
2.0  カーボネートD816の合成（スキーム8）（図8参照）
2.1  オキソカルマイシン-IQB-3Cスペーサーのt-boc-N-アミド-dPEG(登録商標)8-Val-Ala-4-アミノベンジルカーボネート（7）
Ar下、DMF（1.1mL）中の(6aS)-3-(4-(1-(クロロメチル)-5-ヒドロキシ-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-イル)-4-オキソブトキシ)-2-メトキシ-7,12-ジヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-14(6aH)-オン（6）（20.3mg、0.333mmol）の溶液に、t-boc-N-アミド-dPEG(登録商標)8-Val-Ala-4-アミノベンジル-ペンタフルオロフェニルカーボネート（3）（34.2mg、0.0333mmol）およびDMAP（10.2mg、0.0833mmol）を加えた。得られた混合物を22℃で1時間撹拌した。得られた反応混合物を、次いで、逆相カラムクロマトグラフィに直接ロードして精製し（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）、所望の分画を凍結乾燥して、（7）を白色固体で得た（29.6mg、収率61％、0.0204mmol）。
2019530707.tif 000080
【０１８９】
2.2  オキソデュオカルマイシン-IQB-3Cスペーサーのアミノ-dPEG(登録商標)8-Val-Ala-4-アミノベンジルカーボネート（8）
Ar下、オキソデュオカルマイシン-IQB-3Cスペーサーのt-boc-N-アミド-dPEG(登録商標)8-Val-Ala-4-アミノベンジルカーボネート（7）（29.6mg、0.0204mmol）に、10：1のDCM/TFA溶液（1.0mL）を加えた。得られた混合物を22℃で30分間撹拌した。得られた反応混合物を、次いで、逆相カラムクロマトグラフィに直接ロードして精製し（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）、所望の分画を凍結乾燥して、（8）を白色固体で得た（11.8mg、収率44％、0.00872mmol）。
2019530707.tif 000081
【０１９０】
2.3  オキソデュオカルマイシン-IQB-3Cスペーサーのマレイミドプロピオネート-アミド-dPEG(登録商標)8-Val-Ala-4-アミノベンジルカーボネート（D816）（10）
Ar下、DCM（0.5mL）中のオキソデュオカルマイシン-IQB-3Cスペーサーのアミノ-dPEG(登録商標)8-Val-Ala-4-アミノベンジルカーボネート（8）（11.8mg、0.00872mmol）の溶液に、TEA（12.2μL、0.0872mmol）、およびマレイミドプロピオネートNHSエステル（8）を加えた。得られた混合物を22℃で1時間撹拌した。反応混合物を、次いで、濃縮し、DMSOに溶解し、逆相カラムクロマトグラフィに直接ロードして精製し（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）、所望の分画を凍結乾燥して、（10）を白色固体で得た（6.8mg、収率52％、0.00452mmol）。
2019530707.tif 000082
【０１９１】
3.0  カルバメートD818の合成（スキーム9）（図9参照）
3.1  ジメチルジアミンおよびオキソデュオカルマイシン-IQB-3Cスペーサーのt-boc-N-アミド-dPEG(登録商標)8-Val-Ala-4-アミノベンジルジカルバメート（12）
Ar下、ACN（1.3mL）中の(S)-1-(クロロメチル)-5-ヒドロキシ-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸tert-ブチル（11）（83mg、0.25mmol）の溶液に、p-ニトロフェノキシクロロホルメート（55mg、0.28mmol）およびDIEA（0.112mL、0.65mmol）を加えた。得られた混合物を22℃で1時間撹拌し、5（200mg、0.21mmol）を加えた。反応混合物を30分間撹拌し、次いで逆相カラムクロマトグラフィに直接ロードして精製し（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）、所望の分画を凍結乾燥して、（12）を白色固体で得た（161mg、収率58％）。
2019530707.tif 000083
【０１９２】
3.2  ジメチルジアミンおよびオキソデュオカルマイシン-IQB-3Cスペーサーのマレイミドプロピオネート-アミド-dPEG(登録商標)8-Val-Ala-4-アミノベンジルジカルバメート（13）
Ar下、12（161mg、0.125mmol）に10：1のDCM/TFA溶液（1.0mL）を加えた。得られた混合物を22℃で30分間撹拌した。得られた反応混合物を、次いで、逆相カラムクロマトグラフィに直接ロードして精製し（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）、所望の分画を凍結乾燥して、遊離アミン中間体を得た。
【０１９３】
Ar下、DCM（1.5mL）中の脱保護アミン（42mg、0.0382mmol）の溶液に、DIEA（13μL、0.076mmol）、およびマレイミドプロピオネートNHSエステル（15mg、0.057mmol）を加えた。得られた混合物を22℃で1時間撹拌した。反応混合物を、次いで、濃縮し、DMSOに溶解し、逆相カラムクロマトグラフィに直接ロードして精製し（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）、所望の分画を凍結乾燥して、（13）を白色固体で得た（38mg、収率81％）。
2019530707.tif 000084
【０１９４】
3.3  (S)-1-(クロロメチル)-3-(4-(((S)-2-メトキシ-14-オキソ-6a,7,12,14-テトラヒドロベンゾ[5,6]-[1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-3-イル)オキシ)ブタノイル)-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e]インドール-5-イル(4-((2S,5S)-37-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロル-1-イル)-5-イソプロピル-2-メチル-4,7,35-トリオキソ-10,13,16,19,22,25,28,31-オクタオキサ-3,6,34-トリアザヘプタトリアコンタンアミド)ベンジル)エタン-1,2-ジイルビス(メチルカルバメート)（D818）（15）
無水DMF（0.1mL）中の13（11mg、0.009mmol）に、IQB酸（14）（4.3mg、0.011mmol）、pTsOH（1mg、0.005mmol）およびEDC・HCl（6.2mg、0.032mmol）を反応に加えた。得られた混合物を22℃で10分間撹拌し、次いで逆相カラムクロマトグラフィに直接ロードして精製し（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）、生成物含有分画を凍結乾燥し、次いでEZ Prep（Gemini 30×150mmカラム）（5％→95％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）で再精製して、（15）を白色固体で得た（1.6mg、収率11％）。
2019530707.tif 000085
【０１９５】
4.0  エーテル連結誘導体の合成（スキーム10）（図10参照）
4.1a  (S)-1-(クロロメチル)-5-((4-ニトロベンジル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸t-ブチル（16a）
Ar下、無水DMF（1.20mL）中の(S)-1-(クロロメチル)-5-ヒドロキシ-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸t-ブチル（11）（200mg、0.599mmol）の溶液に、臭化4-ニトロベンジル（518mg、2.40mmol）およびK2CO3（585mg、1.80mmol）を加えた。得られた混合物を22℃で2時間撹拌した。反応混合物を、次いで、EtOAcとH2Oとの間で分配し、EtOAc（3×20mL）で抽出した。合わせた有機物をH2O（4×20mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、濃縮した。粗製残渣をカラムクロマトグラフィ（0％→10％EtOAc/ヘキサン）で精製して、所望の生成物（16a）を黄色固体で得た（208mg、収率74％、0.443mmol）。
2019530707.tif 000086
【０１９６】
4.1b  (S)-1-(クロロメチル)-5-((3-メトキシ-4-ニトロベンジル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸t-ブチル（16b）
オキソデュオカルマイシン16bを、16aと同じ手法に従い、しかし臭化3-メトキシ-4-ニトロベンジルから出発して合成した。
2019530707.tif 000087
【０１９７】
4.2a  (S)-1-(クロロメチル)-5-((4-アミノベンジル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸t-ブチル（17a）
Ar下、THF/アセトン（それぞれ11.1mL/8.9mL）中の(S)-1-(クロロメチル)-5-((4-ニトロベンジル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸t-ブチル（16a）（208mg、0.443mmol）の溶液に、H2O（4.5mL）、Zn末（868mg、13.3mmol）およびNH4Cl（1.42mg、26.6mmol）を加えた。得られた混合物を22℃で45分間撹拌した。反応混合物を、次いで、セライト(登録商標)のパッドを通してろ過し、DCM（20mL）で洗浄した。ろ液を濃縮し、次いでDCMとH2Oとの間で分配した。有機物を、次いで、MgSO4で乾燥し、ろ過し、濃縮した。単離した粗製残渣は黄色泡状物として純粋な所望の生成物（17a）と考えた（191mg、収率98％、0.435mmol）。
2019530707.tif 000088
【０１９８】
4.2b  (S)-1-(クロロメチル)-5-((3-メトキシ-4-アミノベンジル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸t-ブチル（17b）
オキソデュオカルマイシン17bを、17aと同じ手法に従い、しかし(S)-1-(クロロメチル)-5-((3-メトキシ-4-ニトロベンジル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸t-ブチル17aから出発して合成した。
2019530707.tif 000089
【０１９９】
4.3a  (S)-1-(クロロメチル)-5-((4-((34S,37S)-34-イソプロピル-2,2,37-トリメチル-4,32,35-トリオキソ-3,8,11,14,17,20,23,26,29-ノナオキサ-5,33,36-トリアザオクタトリアコンタン-38-アミド)ベンジル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸t-ブチル（18a）
Ar下、10：1のDCM/MeOH（550μL）中の(S)-1-(クロロメチル)-5-((4-アミノベンジル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸t-ブチル（17a）（51.5mg、0.117mmol）およびHOAlaValPeg8NHBoc（91.9mg、0.129mmol）の溶液に、EEDQ（55.0mg、0.222mmol）を加えた。得られた混合物を22℃で3.5時間撹拌した。反応混合物を、次いで、濃縮し、DMSOに溶解し、逆相カラムクロマトグラフィに直接ロードして精製し（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）、所望の分画を凍結乾燥して、（18a）を白色固体で得た（49.2mg、収率38％、0.00439mmol）。
2019530707.tif 000090
【０２００】
4.3b  (S)-1-(クロロメチル)-5-((4-((34S,37S)-34-イソプロピル-2,2,37-トリメチル-4,32,35-トリオキソ-3,8,11,14,17,20,23,26,29-ノナオキサ-5,33,36-トリアザオクタトリアコンタン-38-アミド)-3-メトキシベンジル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸t-ブチル（18b）
オキソデュオカルマイシン18bを、18aと同じ手法に従い、しかし(S)-1-(クロロメチル)-5-((3-メトキシ-4-アミノベンジル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸t-ブチル17bから出発して合成した。
2019530707.tif 000091
【０２０１】
4.4a  N-((S)-1-(((S)-1-((4-((((S)-1-(クロロメチル)-3-(4-(((S)-2-メトキシ-14-オキソ-6a,7,12,14-テトラヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-3-イル)オキシ)ブタノイル)-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e]インドール-5-イル)オキシ)メチル)フェニル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)アミノ)-3-メチル-1-オキソブタン-2-イル)-1-(3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロル-1-イル)プロパンアミド)-3,6,9,12,15,18,21,24-オクタオキサヘプタコサン-27-アミド（19a）（D820b）
0℃に冷却した、20mLバイアル中の(S)-1-(クロロメチル)-5-((4-((34S,37S)-34-イソプロピル-2,2,37-トリメチル-4,32,35-トリオキソ-3,8,11,14,17,20,23,26,29-ノナオキサ-5,33,36-トリアザオクタトリアコンタン-38-アミド)ベンジル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸t-ブチル（18a）に、2：1のDCM/TFA（0.75mL、あらかじめ-20℃に冷却）を加えた。反応混合物を0℃で30分間撹拌し、この時点でLC/MSにより反応は完了したと判断された。反応混合物を減圧下で濃縮し、次いでCHCl3（4×5mL）と共沸させ、高減圧下に16時間放置した。残渣を、次いでDCM（1mL）に溶解し、TEA（6μL、0.0422mmol）を次いで加えた。さらに2μLのTEAを加えて、反応混合物をpH約8に塩基性化し、次いでマレイミンNHSエステル（9）（9.8mg、0.0369mmol）を加え、得られた混合物を22℃で15分間撹拌し、この時点でLC/MSにより反応は完了したと判断された。反応混合物を、次いで、濃縮し、CHCl3（3×5mL）と共沸させ、高減圧下に1時間放置した。残渣を次いで無水DMF（1mL）に溶解し、IQB酸（14）（20.8mg、0.0528mmol）、pTsOH（10mg、0.053mmol）およびEDC・HCl（30.3mg、0.158mmol）を反応混合物に加えた。得られた混合物を22℃で10分間撹拌し、次いで逆相カラムクロマトグラフィに直接ロードして精製し（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）、生成物含有分画を凍結乾燥し、次いでEZ Prep（Gemini 30×150mmカラム）（5％→95％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）で再精製して、（19a）を白色固体で得た（1.7mg、3段階の収率5.5％、0.00116mmol）。
2019530707.tif 000092
【０２０２】
4.4b  N-((S)-1-(((S)-1-((4-((((S)-1-(クロロメチル)-3-(4-(((S)-2-メトキシ-14-オキソ-6a,7,12,14-テトラヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-3-イル)オキシ)ブタノイル)-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e]インドール-5-イル)オキシ)メチル)-2-メトキシフェニル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)アミノ)-3-メチル-1-オキソブタン-2-イル)-1-(3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロル-1-イル)プロパンアミド)-3,6,9,12,15,18,21,24-オクタオキサヘプタコサン-27-アミド（19b）（D820）
オキソデュオカルマイシン19bを、19aと同じ手法に従い、しかし(S)-1-(クロロメチル)-5-((4-((34S,37S)-34-イソプロピル-2,2,37-トリメチル-4,32,35-トリオキソ-3,8,11,14,17,20,23,26,29-ノナオキサ-5,33,36-トリアザオクタトリアコンタン-38-アミド)-3-メトキシベンジル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸t-ブチル18bから出発して合成した。
2019530707.tif 000093
【０２０３】
実施例4： IQB-オキソデュオカルマイシン類縁体：D822、D824、D826、およびD828の合成のための一般実験プロトコール
一般法：
1H NMRスペクトルはVarian Inova 300または500 MHz NMR機器で記録した。クロマトグラフィによる純度をAgilent 1200 Series、1100 Series、または6130 Series LC/MS装置で、Merck Chromolith RP-18e分析用HPLCカラム（一体式、50×2mm）および以下のHPLC分析法を用いて判定した：注入量5μL；流速1mL/分；5％→95％アセトニトリル/水＋0.05％AcOH/5分；Agilentダイオードアレイ検出器、λ＝254、220または195nm；室温。
【０２０４】
1.0  リンカーの合成（スキーム11）（図11参照）。
1.1  ((アリルオキシ)カルボニル)-L-バリル-L-アラニン（2）
DMF（10mL）中のNH2-Val-Ala-OH（941mg、5mmol）の溶液に、DIEA（1.73mL、10mmol）およびN-(アリルオキシカルボニルオキシ)スクシンイミド（1.15mL、7.5mmol）を加えた。反応混合物を3時間撹拌し、水（3mL）で反応停止し、終夜撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をHCl水溶液（40mL、0.25M）で希釈した。超音波処理した後、沈澱をろ過し、十分に乾燥して、2を得た（600mg、収率44％）。
2019530707.tif 000094
【０２０５】
1.2  ((S)-1-(((S)-1-((4-(ヒドロキシメチル)フェニル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)アミノ)-3-メチル-1-オキソブタン-2-イル)カルバミン酸アリル（3）
Ar下、DCM（110mL）およびMeOH（55mL）中の((アリルオキシ)カルボニル)-L-バリル-L-アラニン（2）（3.00g、11.0mmol）およびp-アミノベンジルアルコール（1.56g、12.7mmol）の溶液に、EEDQ（5.12g、20.7mmol）を加えた。反応混合物を22℃で19時間撹拌し、次いで濃縮し、カラムクロマトグラフィ（0％→10％MeOH/DCM）で精製して、3を得た（2.48g、収率60％）。
2019530707.tif 000095
【０２０６】
1.3  ((S)-3-メチル-1-オキソ-1-(((S)-1-オキソ-1-((4-((((ペルフルオロフェノキシ)カルボニル)-オキシ)-メチル)-フェニル)-アミノ)-プロパン-2-イル)-アミノ)-ブタン-2-イル)カルバミン酸アリル（4）
Ar下、DMF（5.5mL）中の((S)-1-(((S)-1-((4-(ヒドロキシメチル)フェニル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)アミノ)-3-メチル-1-オキソブタン-2-イル)カルバミン酸アリル（3）（417mg、1.10mmol）の溶液に、DIEA（383μL、2.20mmol）およびビス(ペンタフルオロフェニル)カーボネート（653mg、1.66mmol）を加えた。反応混合物を22℃で1時間撹拌し、次いでさらにDIEA（190 ml、1.10mmol）およびビス(ペンタフルオロフェニル)カーボネート（433mg、1.10mmol）を加え、混合物をさらに1時間撹拌した。混合物を、次いで、逆相カラムクロマトグラフィに直接ロードして精製し（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）、所望の分画を凍結乾燥して、4を得た（442mg、収率68％）。
2019530707.tif 000096
【０２０７】
2.0  CBI部分の合成（スキーム12）（図12参照）。
2.1  (S)-5-((ビスアリルオキシ)ホスホリル)オキシ)-1-(クロロメチル)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸tert-ブチル（6a）
Ar下、THF（1mL）中の5（67mg、0.2mmol）の溶液に、テトラジン（0.9mL、ACN中0.45M溶液）およびジアリルオキシホスホラミド（0.11mL、0.4mmol）を加えた。得られた混合物を22℃で2時間撹拌し、次いで過酸化水素（0.045mL、50％水溶液）を一度に加えた。45分間撹拌した後、混合物を濃縮乾固し、1mLのDMSOに溶解し、逆相カラムクロマトグラフィ（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）で精製し、所望の分画を凍結乾燥して、6aを得た（72mg、収率73％）。
2019530707.tif 000097
【０２０８】
2.2  (S)-1-(クロロメチル)-5-((メトキシカルボニル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸tert-ブチル（6b）
Ar下、DCM（2mL）中の5（67mg、0.2mmol）の溶液に、ピリジン（0.081mL、1mmol）およびクロロギ酸メチル（0.046mL、0.6mmol）の溶液を加えた。30分後、反応混合物を濃縮乾固し、少量のDCMに溶解し、12gのシリカIscoカラム（0％→50％EtOAc/ヘキサン）にロードした。所望の分画を濃縮して、6bを得た（71mg、収率91％）。
2019530707.tif 000098
【０２０９】
2.3  (S)-1-(クロロメチル)-5-((4-メチルピペラジン-1-カルボニル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-カルボン酸tert-ブチル（6c）
Ar下、DCM（2mL）中の5（100mg、0.3mmol）の溶液に、ピリジン（0.073mL、0.90mmol）および塩化4-メチルピペラジン-1-カルボニル（0.061mL、0.45mmol）を加えた。16時間後、反応混合物を濃縮乾固し、1mLのDMSOに溶解し、逆相カラムクロマトグラフィ（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）で精製し、所望の分画を凍結乾燥して、6cを得た（133mg、収率97％）。
2019530707.tif 000099
【０２１０】
2.4  Boc基除去のための一般手法（7a〜c）
6a、6b、または6c（0.05mmol）を無水DCM（1.6mL）に溶解し、三フッ化ホウ素エーテラート（0.031mL、0.25mmol）を一度に加えた。40分間撹拌した後、反応混合物を濃縮乾固し、高減圧下で十分に乾燥した後、次の段階に進めた。精製はせず、材料をそのまま続く段階で用いた。
【０２１１】
3.0  IQB部分の合成および最終構築（スキーム13）（図13および14参照）。
3.1  4-(ベンジルオキシ)-5-メトキシ-2-ニトロ安息香酸（9）
4-ベンジルオキシ-5-メトキシ-安息香酸メチルエステル（9.1g、29mmol）をメタノール（145mL）に溶解し、水酸化ナトリウム（6M溶液、24mL）を一度に加えた。反応混合物を50℃で1時間撹拌し、次いでメタノールを蒸発させた。濃塩酸（12mL）を残渣に撹拌しながらゆっくり加えた。生成した沈澱をろ過し、水で洗浄し、乾燥して、8.1gの3を得た（収率92％）。
2019530707.tif 000100
【０２１２】
3.2  (S)-(4-(ベンジルオキシ)-5-メトキシ-2-ニトロフェニル)(3-(ヒドロキシメチル)-3,4-ジヒドロイソキノリン-2(1H)-イル)メタノン（10）
DCM（100mL）中の4-(ベンジルオキシ)-5-メトキシ-2-ニトロ安息香酸（9）（10.0g、33.0mmol）の溶液に、HATU（16.3g、42.9mmol）およびDIEA（8.61mL、49.5mmol）を加えた。混合物を22℃で15分間撹拌し、次いで(S)-(1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-3-イル)メタノール（6.46g、39.6mmol）を加えた。得られた混合物をAr下、22℃で2時間撹拌し、次いでMeOH（50mL）を加え、生じた沈澱をろ過し、DCM（100mL）で洗浄した。得られたろ液を濃縮し、カラムクロマトグラフィ（25％→85％EtOAc/ヘキサン）で精製して、不純物の混じった10を黄色泡状物で得た（15.3g 34.1mmol）。
2019530707.tif 000101
【０２１３】
3.3  (S)-(4-(ベンジルオキシ)-5-メトキシ-2-ニトロフェニル)(3-(((tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-3,4-ジヒドロイソキノリン-2(1H)-イル)メタノン（11）
Ar下、DCM（155mL）中の(S)-(4-(ベンジルオキシ)-5-メトキシ-2-ニトロフェニル)(3-(ヒドロキシメチル)-3,4-ジヒドロイソキノリン-2(1H)-イル)メタノン（10）（15.3g、34.1mmol）の溶液に、イミダゾール（4.64g、68.2mmol）と、次いでTBSCl（7.71g、51.2mmol）を加えた。得られた混合物を22℃で15分間撹拌し、次いでH2O（100mL）で反応停止し、DCM（3×150mL）で抽出し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィ（0％→50％EtOAc/ヘキサン）で精製して、11を黄色泡状物で得た（14.0g、収率76％）。
2019530707.tif 000102
【０２１４】
3.4  (S)-(3-(((Tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-3,4-ジヒドロイソキノリン-2(1H)-イル)(4-ヒドロキシ-5-メトキシ-2-ニトロフェニル)メタノン（12）
Arで真空パージ（×3）した、EtOAc（500mL）中の(S)-(4-(ベンジルオキシ)-5-メトキシ-2-ニトロフェニル)(3-(((tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-3,4-ジヒドロイソキノリン-2(1H)-イル)メタノン（11）（14.0g、24.9mmol）の溶液に、Pd(OH)2/C（710mg）を加えた。反応混合物を、次いで、Ar（×3）と、続いてH2（3×）で真空パージした。混合物をH2下、22℃で2.5時間、激しく撹拌した。混合物を、次いで、Arで真空パージし、セライト(登録商標)を通してろ過し、EtOAcで洗浄し、ろ液を濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィ（10％→100％EtOAc/ヘキサン）で精製して、12を、約6％の過剰還元（アニリン）不純物を含む、黄色泡状物で得た（11.3g、収率97％）。
2019530707.tif 000103
【０２１５】
3.5  (S)-4-(4-(3-(((tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシ-5-ニトロフェノキシ)ブタン酸エチル（13）
DMF（27mL）中の(S)-(3-(((tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-3,4-ジヒドロイソキノリン-2(1H)-イル)(4-ヒドロキシ-5-メトキシ-2-ニトロフェニル)メタノン（12）（2.57g、5.44mmol）およびCs2CO3（5.32g、16.3mmol）の溶液に、4-ブロモブタン酸エチル（2.34 mL 16.3mmol）を加えた。反応混合物を22℃で2.5時間撹拌し、次いでH2O（100mL）で反応停止し、EtOAc（3×100mL）で抽出した。合わせた有機物をH2O（3×50mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィ（0％→50％EtOAc/ヘキサン）で精製して、13を得た（2.68g、収率84％）。
2019530707.tif 000104
【０２１６】
3.6  (S)-4-(5-アミノ-4-(3-(((tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシフェノキシ)ブタン酸エチル（14）
THF（91mL）およびH2O（9.1mL）中の(S)-4-(4-(3-(((tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシ-5-ニトロフェノキシ)ブタン酸エチル（13）（2.68g、4.57mmol）の溶液に、NH4Cl（4.89g、91.4mmol）およびZn末（2.99g、45.7mmol）を加えた。得られた混合物を22℃で2.5時間撹拌し、次いでセライト(登録商標)を通してろ過し、EtOAcで洗浄し、ろ液を濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィ（0％→75％EtOAc/ヘキサン）で精製して、14を得た（2.14g、収率84％）。
2019530707.tif 000105
【０２１７】
3.7  4-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((アリルオキシ)カルボニル)アミノ)-3-メチルブタンアミド)-プロパンアミド)-ベンジル)-オキシ)-カルボニル)-アミノ)-4-((S)-3-(((tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシフェノキシ)ブタン酸エチル（15）
THF（1.5mL）中の(S)-4-(5-アミノ-4-(3-(((tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシフェノキシ)ブタン酸エチル（14）（545mg、0.978mmol）の溶液に、THF（0.5mL）中の((S)-3-メチル-1-オキソ-1-(((S)-1-オキソ-1-((4-((((ペルフルオロフェノキシ)カルボニル)-オキシ)-メチル)-フェニル)-アミノ)-プロパン-2-イル)-アミノ)-ブタン-2-イル)カルバミン酸アリル（4）（442mg、0.752mmol）の溶液を加えた。反応容器をArでパージし、密封し、反応混合物を22℃で4日間撹拌した。混合物を、次いで、濃縮し、残渣を逆相カラムクロマトグラフィ（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のAcOH含有）で精製した。所望の分画を凍結乾燥し、不純の混じった生成物をカラムクロマトグラフィ（0％→100％EtOAc/ヘキサン）で精製して、15を得た（520mg、収率72％）。
2019530707.tif 000106
【０２１８】
3.8  4-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((アリルオキシ)カルボニル)アミノ)-3-メチルブタンアミド)-プロパンアミド)-ベンジル)-オキシ)-カルボニル)-アミノ)-4-((S)-3-(ヒドロキシメチル)-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシフェノキシ)ブタン酸エチル（16）
Ar下、無水THF（4.2mL）中の4-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((アリルオキシ)カルボニル)アミノ)-3-メチルブタンアミド)-プロパンアミド)-ベンジル)-オキシ)-カルボニル)-アミノ)-4-((S)-3-(((tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシフェノキシ)ブタン酸エチル（15）（457mg、0.476mmol）の溶液に、AcOH（55μL、0.952mmol）と、次いでTBAF（THF中の1.0M溶液0.83mL、0.83mmol）を加え、反応混合物を22℃で22時間撹拌した。反応混合物をEtOAc（10mL）で希釈し、有機物をH2O、NaHCO3（飽和）、および食塩水（それぞれ、1×5mL）で洗浄し、次いでMgSO4で乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィ（20％→100％EtOAc/ヘキサン）で精製して、16を得た（385mg、収率96％）。
2019530707.tif 000107
【０２１９】
3.10  (6aS)-3-(4-エトキシ-4-オキソブトキシ)-6-ヒドロキシ-2-メトキシ-14-オキソ-6,6a,7,12-テトラヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-5(14H)-カルボン酸4-((S)-2-((S)-2-(((アリルオキシ)カルボニル)アミノ)-3-メチルブタンアミド)プロパンアミド)ベンジル（17）
Ar下、DCM（3.0mL）中の4-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((アリルオキシ)カルボニル)アミノ)-3-メチルブタンアミド)-プロパンアミド)-ベンジル)-オキシ)-カルボニル)-アミノ)-4-((S)-3-(ヒドロキシメチル)-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-2-カルボニル)-2-メトキシフェノキシ)ブタン酸エチル（16）（253mg、0.299mmol）の溶液に、デス・マーチンペルヨージナン（190mg、0.449mmol）を加えた。得られた混合物を22℃で3時間撹拌し、次いで3mLの0.5M Na2S2O3で反応停止し、DCM（5mL）で希釈した。混合物を5分間撹拌し、次いで3mLのNaHCO3（飽和）水溶液を加え、さらに5分間撹拌した後、DCM（3×5mL）で抽出した。合わせた有機物をMgSO4で乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィ（0％→10％MeOH/DCM）で精製して、17を得た（222mg、収率88％）。
2019530707.tif 000108
【０２２０】
3.11  4-(((6aS)-5-(((4-((S)-2-((S)-2-(((アリルオキシ)カルボニル)アミノ)-3-メチルブタンアミド)-プロパンアミド)-ベンジル)-オキシ)-カルボニル)-6-ヒドロキシ-2-メトキシ-14-オキソ-5,6,6a,7,12,14-ヘキサヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-3-イル)オキシ)ブタン酸（18）
3：1：1のTHF/MeOH/H2O（2.2mL）中の(6aS)-3-(4-エトキシ-4-オキソブトキシ)6-ヒドロキシ-2-メトキシ-14-オキソ-6,6a,7,12-テトラヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-5(14H)-カルボン酸4-((S)-2-((S)-2-(((アリルオキシ)カルボニル)アミノ)-3-メチルブタンアミド)プロパンアミド)ベンジル（17）（222mg、0.263mmol）の溶液に、LiOH（31.6mg、1.32mmol）を加えた。得られた混合物を22℃で1時間撹拌し、次いで5％クエン酸水溶液（5mL）で反応停止し、2-MeTHF（3×5mL）で抽出した。合わせた有機物を濃縮し、カラムクロマトグラフィ（0％→10％MeOH/DCM、0.1％HOAc含有）で精製して、18を得た（162mg、収率76％）。
2019530707.tif 000109
【０２２１】
3.12  (6aS)-3-(4-((S)-5-((ビス(アリルオキシ)ホスホリル)オキシ)-1-(クロロメチル)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-イル)-4-オキソブトキシ)-6-ヒドロキシ-2-メトキシ-14-オキソ-6,6a,7,12-テトラヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-5(14H)-カルボン酸4-((S)-2-((S)-2-(((アリルオキシ)カルボニル)アミノ)-3-メチルブタンアミド)プロパンアミド)ベンジル（19a）
粗製7a（0.05mmol）、18（0.02mmol）およびDIEA（0.035mL、0.1mmol）を無水DMF（0.2mL）に溶解した。HATU（30mg、0.08mmol）を加え、混合物を終夜撹拌した。反応混合物を後処理せず、次の段階でそのまま用いた。
【０２２２】
3.13  (6aS)-3-(4-((S)-1-(クロロメチル)-5-(ホスホノオキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-イル)-4-オキソブトキシ)-6-ヒドロキシ-2-メトキシ-14-オキソ-6,6a,7,12-テトラヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-5(14H)-カルボン酸4-((S)-2-((S)-2-アミノ-3-メチルブタンアミド)プロパンアミド)ベンジル（20a）
19aの反応混合物をDMF（1mL）で希釈し、ピロリジン（0.008mL、0.1mmol）と、続いてテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（5.6mg、0.005mmol）を加えた。30分後、反応混合物をEZ Prep（Gemini 30×150mmカラム）（5％→95％ACN/H2O、それぞれ0.05％のTFA含有）で精製して、20aを得（20.5mg、収率99％）、不明の不純物を含む。次の段階でそのまま用いた。
2019530707.tif 000110
【０２２３】
3.14  (6aR)-3-(4-((S)-1-(クロロメチル)-5-(ホスホノオキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-イル)-4-オキソブトキシ)-6-ヒドロキシ-2-メトキシ-13-オキソ-6,6a,7,12,12a,13-ヘキサヒドロ-5H-ベンゾ[b]ナフト[2,3-e]アゼピン-5-カルボン酸4-((2S,5S)-37-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロル-1-イル)-5-イソプロピル-2-メチル-4,7,35-トリオキソ-10,13,16,19,22,25,28,31-オクタオキサ-3,6,34-トリアザヘプタトリアコンタンアミド)ベンジル（21a/D826）
粗製20a（20.5mg、0.02mmol）をDMF（0.4mL）に溶解し、DIEA（0.01mL、0.06mmol）と、続いてMAL-dPEG(登録商標)8-NHSエステル（20.7mg、0.03mmol）を加えた。2時間後、反応混合物をEZ Prep（Gemini 30×150mmカラム）に直接ロードして精製し（5％→95％ACN/H2O、それぞれ0.05％のTFA含有）、21aを得た（3.9mg、収率12％）。
2019530707.tif 000111
【０２２４】
3.15  (6aS)-3-(4-((S)-1-(クロロメチル)-5-((メトキシカルボニル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-イル)-4-オキソブトキシ)-6-ヒドロキシ-2-メトキシ-14-オキソ-6,6a,7,12-テトラヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-5(14H)-カルボン酸4-((S)-2-((S)-2-(((アリルオキシ)カルボニル)アミノ)-3-メチルブタンアミド)プロパンアミド)ベンジル（19b）
粗製7b（0.04mmol）、18（0.03mmol）およびDIEA（0.027mL、0.16mmol）を無水DMF（0.2mL）に溶解した。HATU（60mg、0.16mmol）を加え、混合物を終夜撹拌した。反応混合物を逆相クロマトグラフィに直接ロードして精製し（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のHOAc含有）、19bを得た（16.4mg、収率48％）。
2019530707.tif 000112
【０２２５】
3.16  (6aS)-3-(4-((S)-1-(クロロメチル)-5-((メトキシカルボニル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-イル)-4-オキソブトキシ)-6-ヒドロキシ-2-メトキシ-14-オキソ-6,6a,7,12-テトラヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-5(14H)-カルボン酸4-((S)-2-((S)-2-アミノ-3-メチルブタンアミド)プロパンアミド)ベンジル（20b）
Ar下、DCM（2mL）中の19bの溶液に、Bu3SnH（0.005mL、0.02mmol）と、続いてテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（8mg、0.007mmol）を加えた。30分後、反応混合物を濃縮し、DMSO（1mL）に溶解し、逆相クロマトグラフィ（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のHOAc含有）で精製して、20bを得た（7.7mg、収率52％）。
2019530707.tif 000113
【０２２６】
3.17  (6aS)-6-ヒドロキシ-3-(4-((S)-5-ヒドロキシ-1-(ヒドロキシメチル)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-イル)-4-オキソブトキシ)-2-メトキシ-14-オキソ-6,6a,7,12-テトラヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-5(14H)-カルボン酸4-((2S,5S)-37-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロル-1-イル)-5-イソプロピル-2-メチル-4,7,35-トリオキソ-10,13,16,19,22,25,28,31-オクタオキサ-3,6,34-トリアザヘプタトリアコンタンアミド)ベンジル（21b/D824）
DMF（0.1mL）中の20b（7.2mg、0.007mmol）の溶液に、DIEA（0.003mL、0.02mmol）と、次いでMAL-dPEG(登録商標)8-NHSエステル（9.9mg、0.014mmol）を加えた。3時間後、反応混合物を逆相クロマトグラフィに直接ロードして精製し（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のHOAc含有）、21b（1.6mg、収率14％）を、純度の低い21bの追加の分画（1％の20b含有）（2.3mg、収率20％）と共に得た。
2019530707.tif 000114
【０２２７】
3.18  (6aS)-3-(4-((S)-1-(クロロメチル)-5-((4-メチルピペラジン-1-カルボニル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-イル)-4-オキソブトキシ)-6-ヒドロキシ-2-メトキシ-14-オキソ-6,6a,7,12-テトラヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-5(14H)-カルボン酸4-((S)-2-((S)-2-(((アリルオキシ)カルボニル)アミノ)-3-メチルブタンアミド)プロパンアミド)ベンジル（19c）
粗製7c（0.04mmol）、18（0.03mmol）およびDIEA（0.028mL、0.16mmol）を無水DMF（0.2mL）に溶解した。HATU（61mg、0.16mmol）を加え、混合物を終夜撹拌した。反応混合物を逆相クロマトグラフィに直接ロードして精製し（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のHOAc含有）、酸18が混入している19cを得た（16.0mg、収率40％）。
2019530707.tif 000115
【０２２８】
3.19  (6aS)-3-(4-((S)-1-(クロロメチル)-5-((4-メチルピペラジン-1-カルボニル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-イル)-4-オキソブトキシ)-6-ヒドロキシ-2-メトキシ-14-オキソ-6,6a,7,12-テトラヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-5(14H)-カルボン酸4-((S)-2-((S)-2-アミノ-3-メチルブタンアミド)プロパンアミド)ベンジル（20c）
ジオキサン/THF/H2O（0.4mL）中の不純物の混じった19c（16mg、0.15mmol）の溶液に、Et3N（0.014mL、0.096mmol）、ギ酸（0.014mL、0.36mmol）、PPh3（1.3mg、0.0048mmo）およびテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（1.3mg、0.001mmol）を逐次加えた。16時間後、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（2mg、0.002mmol）を追加し、さらに3時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、DMSO（1mL）に溶解し、EZ Prep（Gemini 30×150mmカラム）（5％→95％ACN/H2O、それぞれ0.05％のHOAc含有）で精製して、不明の量の不純物を含む20cを得た（16mg）。
2019530707.tif 000116
【０２２９】
3.20  (6aS)-3-(4-((S)-1-(クロロメチル)-5-((4-メチルピペラジン-1-カルボニル)オキシ)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-イル)-4-オキソブトキシ)-6-ヒドロキシ-2-メトキシ-14-オキソ-6,6a,7,12-テトラヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-5(14H)-カルボン酸4-((2S,5S)-37-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロル-1-イル)-5-イソプロピル-2-メチル-4,7,35-トリオキソ-10,13,16,19,22,25,28,31-オクタオキサ-3,6,34-トリアザヘプタトリアコンタンアミド)ベンジル（21c/D828）
粗製20c（16mg、0.015mmol）をDMF（0.2mL）に溶解し、ピリジン（0.003mL、0.04mmol）と、続いてDMF（0.05mL）中のMAL-dPEG(登録商標)8-NHSエステル（20.5mg、0.03mmol）の溶液を加えた。45分後、反応混合物を冷凍庫内で18時間貯蔵し、次いでEZ Prep（Gemini 30×150mmカラム）に直接ロードして精製し（30％→60％ACN/H2O、それぞれ0.05％のHOAc含有）、21cを得た（4.8mg、収率20％）。
2019530707.tif 000117
【０２３０】
3.21  (6aS)-3-(4-((S)-1-(クロロメチル)-5-ヒドロキシ-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-イル)-4-オキソブトキシ)-6-ヒドロキシ-2-メトキシ-14-オキソ-6,6a,7,12-テトラヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-5(14H)-カルボン酸4-((S)-2-((S)-2-アミノ-3-メチルブタンアミド)プロパンアミド)ベンジル（20d）
Ar下、DCM（0.5mL）中の19b（10.3mg、0.0095mmol）の溶液に、ピロリジン（0.001mL、0.014mmol）と、続いてテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（0.6mg、0.0005mmol）を加えた。30分後、反応混合物を濃縮し、DMSO（0.5mL）に溶解し、逆相クロマトグラフィ（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のHOAc含有）で精製した。所望の分画を凍結乾燥して、20dを得た（5.8mg、収率65％）。
2019530707.tif 000118
【０２３１】
3.22  (6aS)-6-ヒドロキシ-3-(4-((S)-5-ヒドロキシ-1-(ヒドロキシメチル)-1,2-ジヒドロ-3H-ベンゾ[e]インドール-3-イル)-4-オキソブトキシ)-2-メトキシ-14-オキソ-6,6a,7,12-テトラヒドロベンゾ[5,6][1,4]ジアゼピノ[1,2-b]イソキノリン-5(14H)-カルボン酸4-((2S,5S)-37-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロル-1-イル)-5-イソプロピル-2-メチル-4,7,35-トリオキソ-10,13,16,19,22,25,28,31-オクタオキサ-3,6,34-トリアザヘプタトリアコンタンアミド)ベンジル（21d/D822）
DMF（0.1mL）中の20d（5.4mg、0.006mmol）の溶液に、ピリジン（0.0012mL、0.014mmol）と、次いでMAL-dPEG(登録商標)8-NHSエステル（7.9mg、0.011mmol）を加えた。3時間後、反応混合物を逆相クロマトグラフィに直接ロードして精製し（0％→100％ACN/H2O、それぞれ0.05％のHOAc含有）、21d（0.5mg、収率6％、純度93％@254nm）を、純度の低い21dの追加の分画（1.6mg、収率18％、純度89％@254nm）と共に得た。
2019530707.tif 000119
【０２３２】
実施例5 − 3G7-(IQB-CBI)（抗体-薬物結合体）の調製
2019530707.tif 000120
キメラおよびヒト化のcys置換（S156C）された抗IL1RAP抗体（「Chi3G7/hu3G7-IQB-CBI」）（5.0mg、1.68mg/mL、PBS）をホウ酸緩衝液（50mM、pH8.5、1mMジエチレントリアミンペンタ酢酸（DTPA））中に、Millipore、15mL、30kDa装置を用いて分子量分画ろ過（MWCO）を2サイクル行うことにより交換した。3G7-S156C-CYSMAB抗体の新しい溶液（5.0mg/mL、ホウ酸緩衝液（50mM、pH8.5、1mM DTPA））に、ジチオスレイトール（DTT）の溶液（33μL、50.0当量、50mM）を加え、得られた溶液を終夜緩やかに振盪した。抗体3G7は本明細書に記載のアミノ酸配列を有する。
【０２３３】
鎖間ジスルフィド架橋の完全な還元およびS156Cシステイン/グルタチオン付加物の除去を、以前に記載されたとおりにrp-LCMSにより確認した（Junutula et al., 2008, Nature Biotech, 26, 925-932）。次いで、DTTを溶液から、Millipore、15mL、30kDa装置を用い、交換緩衝液としてPBSを用いて分子量分画ろ過（MWCO）を3サイクル行うことにより除去した。完全に還元した3G7-S156C -CYSMAB抗体の5mg/ml溶液に、デヒドロアスコルビン酸（dhAA）の溶液（33μL、50.0当量、50mM）を加えた。得られた溶液を3時間緩やかに振盪した。再酸化をrp-LCMSでモニターした。再酸化が完了したと判断されたら、反応混合物をプロピレングリコールで50 v/v％まで希釈し、IQB-CBIをDMSO溶液（10.0当量、10mM/DMSO）として加えた。反応混合物を周囲温度で1時間撹拌した。次いで、混合物を活性炭により周囲温度で1時間処理した。次いで、活性炭をろ去した。次いで、結合体をPBS中に、Millipore、15mL、30kDa装置を用いて分子量分画ろ過（MWCO）を複数サイクル行うことにより交換した。次いで、溶液を滅菌ろ過にかけて、所望の結合体（0.974mL、2.16mg/mL）を得た。容量：0.974mL。濃度：2.16mg/mL（A280＝0.145、20倍希釈）。薬物抗体比（DAR）は1.7〜2.0の範囲である（rp-LCMSで判定）。ADCの単量体型はサイズ排除クロマトグラフィ（SEC）で確認する：96％。特徴決定データを以下の表IIに示す。
【０２３４】
【表ＩＩ】
2019530707.tif 000121
【０２３５】
実施例6 − 3G7-(細胞へのIQB-CBI ADCの結合：D816、D818、D820、D822、D826、D824、D828
図15および16は、ヒト化（hu3G7）またはキメラ（Chi3G7）抗IL1RAP抗体の様々な細胞株への結合を、平均蛍光強度の関数として示す。HL-60細胞（ヒト前骨髄球性白血病細胞）、EOL1細胞（ヒト好酸球性白血病細胞）およびSK-MEL-5細胞（ヒト黒色腫細胞株）はIL1RAPを発現し、EOL1細胞は高度に発現する。C0抗体は非結合性の対照IgG1である。D212は、式：
2019530707.tif 000122
を有する組成物である。
【０２３６】
細胞を、5％NHS（正常ヒト血清）を含む結合緩衝液（PBS、2％FBS）中に、2×106細胞/mLまで再懸濁した。50μLの細胞に、50μLの一次抗体/ADCを加え、4°で30分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を結合緩衝液で2回洗浄し、次いで再懸濁し、二次抗体（抗ヒトAPC、結合緩衝液中1：400）と共に4°で30分間インキュベートした。細胞を結合緩衝液で洗浄し、ヨウ化プロピジウムを含む結合緩衝液200μLに再懸濁した。細胞を分析のためただちにフローサイトメトリーに適用した。染色した試料の平均蛍光強度（MFI）を測定した。
【０２３７】
実施例7 − Chi3G7-(IQB-CBI) ADCの選択的細胞障害性：D816、D818、D820、D822、D826、D824、D828
Chi3G7抗IL1RAPキメラ抗体（ヒト定常ドメイン、マウス可変ドメイン）および様々なIQB-CBI二量体リンカー-ペイロード（D816、D818、D820、D822、D826、D824、D828）を含むADCの選択性を図17〜23に示す。HL-60細胞、EOL1細胞、およびSK-MEL-5細胞（ヒト黒色腫細胞株）を、様々な濃度のIL1RAP選択的細胞障害性の抗体-薬物結合体、Chi3G7-(IQB-CBI) ADCおよび対照抗体-薬物結合体、C0-(IQB-CBI) ADCまたはC0-D212 ADCにより、37℃で5日間処理した。
【０２３８】
図17は、対照C0-D212およびC6-D212 ADCと比較して、Chi3G7-D816 ADC、hu3G7-D816（ヒト化）による標的依存性細胞殺滅を示す。
【０２３９】
図18は、C0-D212およびC6-D212と比較して、Chi3G7-D818 ADCおよびhu3G7-D818（ヒト化3G7）による標的依存性細胞殺滅を示す。
【０２４０】
図19は、C0-D212およびChi3G7-D212と比較して、Chi3G7-D820 ADCによる標的依存性細胞殺滅を示す。
【０２４１】
実施例8 − Chi3G7-CLT-(IQB-CBI) ADCまたはHu3G7-CLT-(IQB-CBI) ADCの標的依存性細胞障害性
Chi3G7-CLT-(IQB-CBI) ADCまたはHu3G7-CLT-(IQB-CBI) ADCおよび非結合性の対照ADCの細胞障害性を、IL1RAPを発現するかまたは発現しない細胞株で試験した。結果を図17〜23に示す。EOL1細胞は高いコピー数のIL1RAPを発現するが、HL60およびSK-MEL-5細胞は低いコピー数のIL1RAPを発現する。図17〜23は、Chi3G7-CLT-(IQB-CBI)またはHu3G7-CLT-(IQB-CBI) ADCが、非結合性のC0-D212またはC0-CLT-(IQB-CBI) 対照ADCと比較して、標的依存性殺滅を示したことを示す。
【０２４２】
本明細書において言及するすべての出版物および特許出願は、それぞれ個々の出版物または特許出願が具体的かつ個別に参照により本明細書に組み入れられると示されるのと同じ程度に、参照により本明細書に組み入れられる。
【０２４３】
本発明のある特定の態様を本明細書に示し、記載してきたが、当業者には、そのような態様が例示のために提供されるにすぎないことが明らかであろう。本発明から逸脱することなく、当業者には多くの変動、変更、および置換が想到されるであろう。本発明の実施において、本明細書に記載の本発明の態様の様々な代替物を用い得ることが理解されるべきである。添付の特許請求の範囲は本発明の範囲を定義すること、ならびにこれらの特許請求の範囲内の方法および構造と、それらの等価物はそれらに含まれることが意図される。
【図１】
2019530707.tif 000154
【図２】
2019530707.tif 000155
【図３】
2019530707.tif 000156
【図４−１】
2019530707.tif 000157
【図４−２】
2019530707.tif 000158
【図５】
2019530707.tif 000159
【図６−１】
2019530707.tif 000160
【図６−２】
2019530707.tif 000161
【図７】
2019530707.tif 000162
【図８】
2019530707.tif 000163
【図９−１】
2019530707.tif 000164
【図９−２】
2019530707.tif 000165
【図１０−１】
2019530707.tif 000166
【図１０−２】
2019530707.tif 000167
【図１１】
2019530707.tif 000168
【図１２】
2019530707.tif 000169
【図１３−１】
2019530707.tif 000170
【図１３−２】
2019530707.tif 000171
【図１４】
2019530707.tif 000172
【図１５】
2019530707.tif 000173
【図１６】
2019530707.tif 000174
【図１７】
2019530707.tif 000175
【図１８】
2019530707.tif 000176
【図１９】
2019530707.tif 000177
【図２０】
2019530707.tif 000178
【図２１】
2019530707.tif 000179
【図２２】
2019530707.tif 000180
【図２３】
2019530707.tif 000181
【手続補正書】
【提出日】令和1年6月28日(2019.6.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2019530707000001.app
【国際調査報告】
2019530707.tif 000182