(57)【要約】  本発明は、ラクトバチルス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバチルス・ラムノサス（Lactobacillus rhamnosus）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス（Bifidobacterium animalis subsp. lactis）を含有するプロバイオティック組成物に関する。このような組成物は、経口投与によって女性における泌尿生殖器感染症を予防及び／又は処置するのに有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
−  ラクトバチルス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、
−  ラクトバチルス・ラムノサス（Lactobacillus rhamnosus）、及び
−  ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス（Bifidobacterium animalis subsp. lactis）を含む、経口投与用のプロバイオティック組成物（ただし、少なくとも１つのscFOS、短鎖フルクトオリゴ糖を含むプレバイオティック成分を含まない）。
【請求項２】
以下の株：
−  ラクトバチルス・プランタルムPBS067、
−  ラクトバチルス・ラムノサスPBS070、及び
−  ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスPBS075
を含む、請求項１記載のプロバイオティック組成物。
【請求項３】
ラクトバチルス・プランタルムが、組成物の総重量に対して、１０mg〜９０mg、好ましくは２５mg〜５０mgの範囲の量で存在し、より好ましくは３３mgである、請求項１又は２記載のプロバイオティック組成物。
【請求項４】
ラクトバチルス・ラムノサスが、組成物の総重量に対して、１０mg〜９０mg、好ましくは２５mg〜５０mgの範囲の量で存在し、より好ましくは３３mgである、請求項１又は２記載のプロバイオティック組成物。
【請求項５】
ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスが、組成物の総重量に対して、１０mg〜９０mg、好ましくは２５mg〜５０mgの範囲の量で存在し、より好ましくは３３mgである、請求項１又は２記載のプロバイオティック組成物。
【請求項６】
ラクトバチルス・プランタルム：ラクトバチルス・ラムノサス：ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスが、１：１：１の比で存在する、請求項１〜５のいずれか１項に記載のプロバイオティック組成物。
【請求項７】
−  ラクトバチルス・プランタルム、
−  ラクトバチルス・ラムノサス、及び
−  ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス
を含む、女性の泌尿生殖器感染症及びその再発の予防及び／又は処置における使用のためのプロバイオティック組成物。
【請求項８】
以下の株：
−  ラクトバチルス・プランタルムPBS067、
−  ラクトバチルス・ラムノサスPBS070、及び
−  ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスPBS075
を含む、請求項７記載の使用のためのプロバイオティック組成物。
【請求項９】
ラクトバチルス・プランタルムが、組成物の総重量に対して、１０mg〜９０mg、好ましくは２５mg〜５０mgの範囲の量で存在し、より好ましくは３３mgである、請求項７又は８記載の使用のためのプロバイオティック組成物。
【請求項１０】
ラクトバチルス・ラムノサスが、組成物の総重量に対して、１０mg〜９０mg、好ましくは２５mg〜５０mgの範囲の量で存在し、より好ましくは３３mgである、請求項７又は８記載の使用のためのプロバイオティック組成物。
【請求項１１】
ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスが、組成物の総重量に対して、１０mg〜９０mg、好ましくは２５mg〜５０mgの範囲の量で存在し、より好ましくは３３mgである、請求項７又は８記載の使用のためのプロバイオティック組成物。
【請求項１２】
ラクトバチルス・プランタルム：ラクトバチルス・ラムノサス：ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスが、１：１：１の比で存在する、請求項７〜１１のいずれか１項に記載の使用のためのプロバイオティック組成物。
【請求項１３】
女性の泌尿生殖器感染症が、細菌性膣炎である、請求項７〜１２のいずれか１項に記載の使用のためのプロバイオティック組成物。
【請求項１４】
女性の泌尿生殖器感染症が、真菌性膣炎である、請求項７〜１２のいずれか１項に記載の使用のためのプロバイオティック組成物。
【請求項１５】
女性の泌尿生殖器感染症が、膀胱炎である、請求項７〜１２のいずれか１項に記載の使用のためのプロバイオティック組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ラクトバチルス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバチルス・ラムノサス（Lactobacillus rhamnosus）、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス（Bifidobacterium animalis subsp. lactis）を含有するプロバイオティック組成物に関する。このような組成物は、経口投与によって女性における泌尿生殖器感染症を予防及び／又は処置するのに有用である。
【０００２】
発明の背景
多数の共生微生物が人体に定着し、全てが一緒になってヒトの微生物叢を形成する。膣内微生物叢は、膣粘膜に存在し、そして、閉経前及び後の女性において著しく変動し得る種で構成されている。健常閉経前女性の微生物叢は、一般的に、主にラクトバチルス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）種に属するが、ラクトバチルス属の他の種、例えば、ラクトバチルス・ファーメンタム（L. fermentum）、ラクトバチルス・バギナリス（L. vaginalis）、ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・デルブリュッキ（L. delbrueckii）、ラクトバチルス・ブレビス（L. brevis）、ラクトバチルス・ロイテリ（L. reuteri）、ラクトバチルス・カゼイ（L. casei）、ラクトバチルス・ラムノサスにも属する乳酸菌（lactobacillus）、例えば、デーデルライン乳酸菌で構成されている。
【０００３】
膣内微生物叢は、ホルモン変化（主に、妊娠又は閉経においてはエストロゲンレベル）、薬物摂取、膣内ｐＨ（抗生物質によって影響を受ける）等により影響を受ける。
【０００４】
泌尿生殖器感染症は、以下であり得る：
−  主にガードネレラ・バギナリス（Gardnerella vaginalis）、アトポビウム・バギナエ（Atopobium vaginae）、バクテロイデス（Bacteroides）（例えば、プレボテラ属（Prevotella））、及び他の病原体に関連している細菌性膣炎。これは、全ての年齢の女性が罹患し、多くの場合無症候性であり、そして、高い膣内ｐＨ値（＞４．５）及び乳酸菌の枯渇を特徴とする。
−  主にカンジダ・アルビカンス（Candida albicans）（カンジダ症）であるが、カンジダ属の他の種又はトリコモナス・バギナリス（Trichomonas vaginalis）によっても引き起こされる真菌性膣炎は、白色の分泌物、局所そう痒、及び過敏を特徴とする。
−  主に大腸菌（Escherichia coli）及び大便連鎖球菌（Enterococcus faecalis）によって引き起こされる膀胱炎は、腸に存在する病原性細菌が肛門を通って尿道に入り、そして、膀胱内で複製し始めるときに生じる。急性膀胱炎は、疼痛を伴う頻尿を引き起し、そして、多くの場合、反復性になる。
【０００５】
泌尿生殖器感染症のこれら３つの例は、慢性の病気になり得る急性炎症状態を特徴とする。
【０００６】
世界中で、毎年１０億人超の泌尿生殖器感染症例が報告されており、そのうちの２７〜４８％は反復性である。標準的な療法は、経口的に又は局所的に投与される特定の抗生物質又は抗真菌剤の使用を必要とする。しかし、これら処置は、膣領域の免疫系を弱体化させ、頻回又は反復性の療法に適応されず、そして、何よりも、薬物耐性細菌の伝播が原因でそれほど有効ではない。
【０００７】
上記の観点から、反復性症例においても、女性における泌尿生殖器感染症を予防及び／又は処置するために、有効な代替解決策を特定することが依然として必要とされている。
【０００８】
発明の概要
本発明は、ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・ラムノサス、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスを含有するプロバイオティック組成物に関する。
【０００９】
更に、本発明は、女性の泌尿生殖器感染症及びその再発の予防及び／又は処置におけるこのような組成物の使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、ブロス微量希釈法によって評価した、単一株と比較した実施例１のプロバイオティック組成物から分泌された代謝物によって媒介される無細胞上清中の大腸菌（ATCC 25922）に対する抗微生物活性を示す。
【図２】図２は、寒天重層法によって評価した、大腸菌（ATCC 25922）に対する実施例１のプロバイオティック組成物の抗微生物活性を示す。
【図３】図３は、寒天重層法によって評価した、カンジダ・アルビカンス（ATCC 10231）に対する実施例１のプロバイオティック組成物の抗微生物活性を示す。
【図４】図４は、ネガティブコントロール及びポジティブコントロールと比較した、実施例１のプロバイオティック組成物及び単一株によって媒介される抗炎症活性を評価するためにELISAによって決定された炎症促進性サイトカインTNF-αの定量を示す。ポジティブコントロール及び試験サンプルにおいて、線維芽細胞株BALB/3T3、クローンA31に対する炎症ストレスはドデシル硫酸ナトリウムによって誘導した。各処理から２４時間後及び５日間後に評価を行った。
【図５】図５は、ネガティブコントロール及びポジティブコントロールと比較した、実施例１のプロバイオティック組成物及び単一株の抗炎症活性を評価するためにELISAによって決定された抗炎症性サイトカインIL-4の定量を示す。ポジティブコントロール及び試験サンプルにおいて、線維芽細胞株BALB/3T3、クローンA31に対する炎症ストレスはドデシル硫酸ナトリウムによって誘導した。各処理から２４時間後及び５日間後に評価を行った。
【図６】図６は、線維芽細胞株BALB/3T3、クローンA31における、ネガティブコントロールと比較した、実施例１のプロバイオティック組成物及び単一株の第二鉄還元抗酸化パラメータ（FRAP）として決定された抗酸化力を示す。処理から２４時間後及び５日間後に線維芽細胞株BALB/3T3に対して評価を行った。
【図７】図７は、実施例２のプロバイオティック組成物又はプラセボによる１４日間の処理中、無作為化二重盲検プラセボ対照パイロット研究において測定された膣内ｐＨに対する、プラセボと比較した本発明の組成物の効果を示す。２１日目は、処理の終わりの７日間後を表す。
【図８】図８は、プラセボ群と比較した、実施例２のプロバイオティック組成物で処理した女性の無作為化二重盲検プラセボ対照パイロット研究における、検討した症状：そう痒の減少、灼熱感の減少、排泄物の減少、乾きの減少についての主観的知覚に関連する自己評価アンケートを通して得られた平均結果を示す。
【図９】図９は、無作為化二重盲検プラセボ対照パイロット研究における、プラセボと比較した実施例２のプロバイオティック組成物の株の膣上皮細胞（VEC）に定着する能力に関連する結果を示す。プロバイオティック株の定量は、T0、T7、T14、T21日目に回収した膣内スワブからの全DNA抽出物に対するqPCR分析によって行った。チャートは、処理中（T7、T14、及びT21）の定量と処理前（T0）の定量との間のデルタを報告する。
【００１１】
発明を実施するための形態
本発明は、３つの異なるプロバイオティック種：ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・ラムノサス、及びビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスを含有する組成物に関する。
【００１２】
驚くべきことに、ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・ラムノサス、及びビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスを含有する組成物は、女性の泌尿生殖器感染症を予防及び／又は処置するための相乗効果を示すことが見出された。
【００１３】
本発明のプロバイオティック組成物は、少なくとも１つのscFOS、短鎖フルクトオリゴ糖を含むプレバイオティック成分を含まない。
【００１４】
本発明の好ましい態様によれば、該組成物は、３つの異なるプロバイオティック種のそれぞれの好ましい株を含有し、特に、該組成物は、ラクトバチルス・プランタルムPBS067、ラクトバチルス・ラムノサスPBS070、及びビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスPBS075を含有し得る。
【００１５】
「PBS067」と呼ばれるラクトバチルス・プランタルム株は、２０１１年６月１７日にブダペスト条約の下Leibniz-Institut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbHに寄託され、アクセッション番号「DSM 24937」を得た。
【００１６】
「PBS070」又は「LRH020」と呼ばれるラクトバチルス・ラムノサス株は、２０１２年１月１７日にブダペスト条約の下Leibniz-Institut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbHに寄託され、アクセッション番号「DSM 25568」を得た。
【００１７】
「PBS075」又は「BL050」と呼ばれるビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス株は、２０１２年１月１７日にブダペスト条約の下Leibniz-Institut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbHに寄託され、アクセッション番号「DSM 25566」を得た。
【００１８】
本発明は、少なくとも１つの生理学的に許容し得る賦形剤又は担体との混合物中にラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・ラムノサス、及びビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス、好ましくは、ラクトバチルス・プランタルムPBS067、ラクトバチルス・ラムノサスPBS070、及びビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスPBS075を含有する組成物に関し；好ましい組成物は、マイクロカプセル化されない。
【００１９】
組成物は、従来の方法を通して製剤化され得る。好ましい投与形態は、固体製剤、例えば、硬カプセル剤、サシェ剤、錠剤、散剤、ソフトカプセル、又は液体製剤、例えば、点滴剤、膣洗浄剤、バイアル製剤である。
【００２０】
ラクトバチルス・プランタルム（LP）、好ましくはラクトバチルス・プランタルムPBS067株は、組成物の総重量に対して、１０mg〜９０mg、好ましくは、２５mg〜５０mg、更により好ましくは、３３mgの様々な量で該組成物中に存在し得る。
【００２１】
ラクトバチルス・ラムノサス（LRh）、好ましくはラクトバチルス・ラムノサスPBS070株は、組成物の総重量に対して、１０mg〜９０mg、好ましくは、２５mg〜５０mg、更により好ましくは、３３mgの様々な量で該組成物中に存在し得る。
【００２２】
ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス（BL）、好ましくはビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスPBS075株は、組成物の総重量に対して、１０mg〜９０mg、好ましくは、２５mg〜５０mg、更により好ましくは、３３mgの様々な量で該組成物中に存在し得る。
【００２３】
ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・ラムノサス、及びビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスの３つの種は、組成物 １００mg中に１：１：１の重量比で存在し得、好ましくは各株がそれぞれ１００ＢCFU/gの濃度で存在する。
【００２４】
好ましくは、本発明のプロバイオティック組成物は、経口投与される。
【００２５】
本発明の更なる目的は、女性における泌尿生殖器感染症及びその再発を予防及び／又は処置するための、ラクトバチルス・プランタルム、ラクトバチルス・ラムノサス、及びビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス、好ましくは、ラクトバチルス・プランタルムPBS067、ラクトバチルス・ラムノサスPBS070、及びビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスPBS075を含むプロバイオティック組成物の使用である。
【００２６】
本発明の好ましい態様によれば、本発明のプロバイオティック組成物で予防及び／又は処置される女性の泌尿生殖器感染症は、例えば、ガードネレラ・バギナリス又はアトポビウム・バギナエ又はバクテロイデス（例えば、プレボテラ属）又は他の病原体に関連している細菌性膣炎；主にカンジダ又はトリコモナス・バギナリスによって引き起こされる真菌性膣炎又はカンジダ症；主に大腸菌によって引き起こされる膀胱炎であり得る。
【００２７】
以下の実施例は、本発明を更に説明する。
【００２８】
実施例
実施例１の製剤
粉末形態の組成物は、以下を含有する：
【表１】
2019501176.tif 000002
【００２９】
実施例２の製剤
カプセル内の粉末形態の組成物は、以下を含有する：
【表２】
2019501176.tif 000003
【００３０】
実施例３の製剤
カプセル内の粉末形態の組成物は、以下を含有する：
【表３】
2019501176.tif 000004
【００３１】
実施例４の製剤
サシェ内の粉末形態の組成物は、以下を含有する：
【表４】
2019501176.tif 000005
【００３２】
実施例５の製剤
サシェ内の粉末形態の組成物は、以下を含有する：
【表５】
2019501176.tif 000006
【００３３】
以下の実験例は、泌尿生殖器病原体に対する本発明の組成物の抗微生物活性、並びに個々に投与された単一株と比較した、実施例１のプロバイオティック組成物の増強された抗炎症活性及び抗酸化力を示す。
【００３４】
抗微生物活性
ブロス微量希釈法によって２５％（v/v） 無細胞上清の存在下における液体培地中の大腸菌ATCC 25922及びカンジダ・アルビカンスATCC 10231の増殖阻害を測定することによって、本発明のプロバイオティック組成物から分泌された発酵代謝物の抗微生物活性を調べ、そして、定量した。
【００３５】
Presti et al., 2015, page 4, par. Antimicrobial activity of lactobacilli and bifidobacteria strains by using living cellsに記載の通り、重層法によって大腸菌ATCC 25922及びカンジダ・アルビカンスATCC 10231の直接阻害をアッセイした。このインビトロアッセイは、膣上皮の定着についてインビボで生じたときのプロバイオティック細菌及び病原細菌間の競合の代表的な状況を提供する。
【００３６】
実施例６−ブロス発酵代謝物の抗大腸菌活性
表１は、２５％（v/v） 無細胞培養上清の存在下における、２４時間にわたるブロス微量希釈法による大腸菌の増殖阻害の結果を報告する。単一株は、CFSを含まないコントロールと比較した場合有効であったが、実施例１のプロバイオティック組成物由来のCFS中の代謝物では、３時間以内に完全な大腸菌阻害が得られた。結果を図１にも示す。
【表６】
2019501176.tif 000007
【００３７】
実施例７及び実施例８−それぞれ大腸菌及びカンジダ・アルビカンスの直接阻害
表２は、それぞれ図２及び図３に示す通り、大腸菌及びカンジダ・アルビカンスに対する改変寒天重層法によって測定された阻害ハロのミリメートルを報告する。病原体を重層された寒天表面全体にわたって播種したが、該病原体は、横縞状にのみ播種されたプロバイオティック近傍では増殖することができなかった。阻害ハロのサイズは、抗微生物強度の指標であり、より大きなハロはより強い抗微生物活性に対応する。
【表７】
2019501176.tif 000008
【００３８】
実施例６、７、８の泌尿生殖器病原体である大腸菌ATCC 25922及びカンジダ・アルビカンスATCC 10231に対する特異的抗微生物活性に明らかに示されている通り、３つの株を合わせた本発明の組成物は、各株によって個々に示される活性と比較して、抗微生物活性を増大させることができる。
【００３９】
したがって、本発明に係る組成物を投与することによって得ることができる効果は、単一株を別々に投与することによって得ることができる個々の効果の合計よりも高い（試験で用いた本発明の組成物の総量が個々に投与された各株の総量と等しいことを考慮すると、試験した本発明の組成物中の各株の量は、各個々に試験した株の量の１／３と等しい）。
【００４０】
言い換えれば、個々の株の相互作用によって、泌尿生殖器病原体に対する明らかな相乗効果が生じる。
【００４１】
言い換えれば、本発明の組成物中の個々の株間の相互作用は明白な相乗効果につながる。
【００４２】
抗炎症活性及び抗酸化力
細菌の泌尿生殖器感染は、広範囲に及ぶ炎症性疾患である。宿主におけるサイトカインが、初期及び長期の免疫応答並びに炎症プロセスの両方において重要な役割を果たす。
【００４３】
炎症は、病原体感染の結果だけではなく、次には、このような感染の原因ともなり得る。
【００４４】
炎症と免疫系との間のホメオスタシスの不均衡は、免疫応答の有効性を低下させ、病原体感染を引き起こす。
【００４５】
宿主における保護の第１の機序は、自然免疫である。自然免疫細胞は、Toll様受容体（TLR）と呼ばれる遺伝的にコードされている受容体を発現させる。ヒト泌尿生殖器細胞は、IL-1a、IL-1b、IL-6、及びTNF-α等の炎症促進性サイトカインの転写を誘発するToll様受容体２、４、及び６を有する微生物の表面分子に応答する。
【００４６】
他方、適応免疫応答は、サイトカインによって制御されるリンパ球の活性化と関連している。これは、Ｂ細胞及びＴ細胞を増殖させ、そして、特殊なエフェクターリンパ球に分化させる。インターロイキン４（IL-4）は、ナイーブヘルパーＴ細胞の分化（Th0細胞からTh2細胞へ）を誘導するサイトカインである。IL-4は、Th2細胞を分化させるためのポジティブフィードバックサイトカインである。更に、IL-4は、Ｂ細胞を刺激して抗体を産生させる。
【００４７】
TNF-α及びIL-4は、それぞれ、炎症状態の調節におけるプロバイオティクスの有効性を示すために、炎症促進性及び抗炎症性のサイトカインの代表的なバイオマーカーとして選択された。
【００４８】
凍結乾燥プロバイオティック株の混合物（LP PBS067、LRh PBS070、及びBL PBS075）を、合計１００mg（３×１０９cfu/g）で実施例１に記載の通り調製した。該混合物を、１０８cfu/mLの濃度のDMEM（ダルベッコ変法イーグル培地） １００mLに懸濁させ、そして、使用するまで４℃で保存した。
【００４９】
線維芽細胞Balb 3T3クローン31（ATCC-CCL-163）においてインビトロ実験研究を実施した。線維芽細胞Balb 3T3クローン31は、医療機器の安全性試験のために用いられる全身細胞株を表し、そして、膣粘膜の予測にもなる。
【００５０】
０，０１％SDS（ドデシル硫酸ナトリウム）を添加することによって、炎症を誘導した。
【００５１】
１０７cfu/mLの合計濃度の混合物 １mL及びそれぞれ１０７cfu/mLの濃度の各株 １mLで細胞を処理した。
【００５２】
ポジティブコントロールCTR+は、SDSのみで処理した細胞で構成され、一方、ネガティブコントロールは、未処理細胞によって表される。
【００５３】
２４時間後（急性炎症）及び５日間後（慢性炎症）の細胞系及び組み込まれた（embedded）抗酸化力の観点におけるその変化によって、サイトカインの産生及び阻害に対する効果、特に、TNF-αの阻害及びインターロイキン４（IL-4）の産生に対する効果を評価した。
【００５４】
サイトカインの投与量は、キットELISAを用いて測定したが、抗酸化力は、FRAP試験を通じて評価した。
【００５５】
実施例９−早期に放出される炎症促進性サイトカイン（pro-I）であるTNF-α阻害に対する効果の評価
【００５６】
表３は、ネガティブコントロール及びポジティブコントロールと比較した、単一株LP PBS067、LRh PBS070、及びBL PBS075によって、並びに３つの株LP PBS067、LRh PBS070、及びBL PBS075の混合物（実施例１のプロバイオティック組成物）によって得られるTNF-α阻害の結果を報告する。結果を図４にも示す。
【表８】
2019501176.tif 000009
【００５７】
実施例１０−後期に放出される抗炎症性サイトカイン（anti-I）であるIL-4の産生に対する効果の評価
表４は、ネガティブコントロール及びポジティブコントロールと比較した、単一株LP PBS067、LRh PBS070、及びBL PBS075によって、並びに３つの株LP PBS067、LRh PBS070、及びBL PBS075の混合物（実施例１のプロバイオティック組成物）によって得られるIL-4分泌の結果を報告する。結果を図５にも示す。
【表９】
2019501176.tif 000010
【００５８】
実施例１１−細胞抗酸化力に対する効果の評価
表５は、ネガティブコントロールと比較した、単一株LP PBS067、LRh PBS070、及びBL PBS075、並びに３つの株LP PBS067、LRh PBS070、及びBL PBS075の混合物（実施例１のプロバイオティック組成物）のFRAP試験によってアッセイされた抗酸化力の結果を報告する。結果を図６にも示す。
【表１０】
2019501176.tif 000011
【００５９】
以下の実験例は、ピアレビューの対象となる研究において評価された、経口投与された株による膣内ｐＨ、感染症の症状、及び膣上皮の定着に対する、実施例２の組成物の予測有効性の評価を提供する。
【００６０】
この研究は、無作為化二重盲検プラセボ対照パイロット研究からなっていた。該研究には、１８歳〜５０歳の４０人の閉経前女性が参加した。４０人のボランティアを無作為に２つの処理群に分けた；各群をそれぞれ実施例２の製剤又はプラセボで１４日間処理した。参加した被験者には婦人科診査を行い、そして、製剤／プラセボの最初の摂取の前日、最初の摂取の７、１４、及び２１日間後（２１日目は、処理の終わりの７日間後を表す）の４回の実験時に、膣分泌物のサンプルを採取するために膣スワブを回収した。膣スワブからの全DNA抽出物に対するqPCR分析によってプロバイオティック株の定量を実施した。更に、処理の効果を評価するために、T0及びT21に自己評価アンケートを行った。
【００６１】
実施例１２−膣内ｐＨに対する効果の評価
実施例２の製剤による処理中、T0において同じベースライン値から始めたプラセボと比較して膣内ｐＨの変動を観察した。この傾向は、膣内環境の酸性化に関与する有機酸を生成するプロバイオティック株の定着に起因する。結果を図７に示す。
【００６２】
実施例１３−症状に対する効果の評価
処理に含まれていた女性の主観的知覚を自己評価アンケートを用いて評価した：プラセボと比較して本発明の組成物で処理した群ではほとんど全てで満足感が観察された。そう痒、灼熱感、膣排泄物、及び乾き等の疾患に関連していない正常症状の改善が検出された。結果を図８に示す。
【００６３】
実施例１４−膣内定着におけるプロバイオティクスの有効性の評価
膣上皮の定着における本発明の組成物の株の有効性を、膣内スワブに対するリアルタイム定量PCR技術を用いて提供する。この機器試験によって、投与された株のみの増加が同定され、そして、プラセボとの比較において該株の存在が定量された。結果を図９に示す。
【表１１】
2019501176.tif 000012
2019501176.tif 000013
【図１】
2019501176.tif 000014
【図２】
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【図３】
2019501176.tif 000016
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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