【手続補正書】
【提出日】平成19年5月23日(2007.5.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  細菌菌株として、
(a)Streptococcus thermophilus、それと混合した
(b)Lactobacillus brevis、Lactobacillus acidophilus、Lactobacillus plantarum、Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium longumおよびBifidobacterium breve、からなる群から選択される少なくとも１菌株、またはそれらの混合物を含む細菌複合組成物の、高シュウ酸尿症およびそれに関連する諸異常の予防および／または処置用の、食養生、医薬または獣医学用組成物を製造するための使用。
【請求項２】  Lactobacillus brevisの菌株が、DSM-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Germanyに、１９９８年２月６日付で、ブタペスト条約のもと受託番号DSM１１９８８で寄託しているLactobacillus brevis CD2株、またはその変異株および誘導体である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】  混合物中のBifidobacterium infantis, Bifidobacterium longumおよびBifidobacterium breveの濃度比が、CFU/組成物gの表記で１：１：１である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】  Streptococcus thermophilusとLactobacillus属の細菌の濃度比が、CFU/組成物gの表記で１０００：１から１：１０００までである、請求項１または請求項２に記載の使用。
【請求項５】  Streptococcus thermophilusとBifidobacterium属との濃度比が、CFU/組成物gの表記で１０００：１から１：１０００までである、請求項１に記載の使用。
【請求項６】  細菌菌株として、
(a)Streptococcus thermophilus、それと混合した 
(b)Lactobacillus brevis、Lactobacillus acidophilus、Lactobacillus plantarum、Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium longumおよびBifidobacterium breve、からなる群から選択される少なくとも１菌株、またはそれらの混合物
を含み、Lactobacillus brevisの菌株が、DSM-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Germanyに、１９９８年２月６日付で、ブタペスト条約のもと受託番号DSM１１９８８で寄託しているLactobacillus brevis CD2株、またはその変異株および誘導体である、食養用／医薬用細菌複合組成物。
【請求項７】  
(a)Streptococcus thermophilus、それと混合した 
(b)Lactobacillus brevis、Lactobacillus acidophilus、Lactobacillus plantarum、Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium longumおよびBifidobacterium breve、からなる群から選択された少なくとも１菌株、またはそれらの混合物を含む細菌の複合組成物を、０．５ないし４g／日で、それを必要としている動物に投与することを含む、高シュウ酸尿症およびそれに関連する諸異常の予防および／または処置法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
関連して、これらの組成物は、組成物に発揮させようとする補助的、または予防的、または真に治療的な作用のいかんに応じて、対象とする特定個人ごとに変わる食品の組成物、または食品添加物、または医薬品の形態をとり、それらの活性を発揮することができる。この予防的または真に治療的な作用は、高シュウ酸尿症または高シュウ酸尿症に関連する諸異常のリスクを有する対象の腸での、これらの細菌によるコロニー形成に由来し得るものである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
尿中のカルシウム排出が正常な患者においてさえ、尿中のシュウ酸塩レベルはシュウ酸カルシウム結石の形成に関する決定的な兆候になると思われる。また厳格な乏尿性の透析を受けているが、腎結石の病歴のない患者においてもシュウ酸カルシウム結石が時には形成され、この枠組み内では、最小量尿の中にさえシュウ酸塩の過飽和があり得る。
１日のシュウ酸塩排出量は、尿の容積、ビタミンCの摂取、体重指数に相関し、カルシウムの摂取量に逆相関する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
腸管性高シュウ酸尿症(EHO)と称されるシュウ酸塩の腸吸収の増加は、少なくとも２種の機構によって生じる。第一は、胆汁酸塩の欠乏および脂肪の吸収不良を引き起こす、病んだまたは手術を受けた回腸での胆汁酸塩の吸収不良に関連するものである。食物中のシュウ酸塩の大部分はカルシウムと結合しており、ほとんど吸収されないが、十分に吸収されない脂肪が腸管腔内のカルシウムを結合して、シュウ酸塩と結合する量を減少させ、シュウ酸塩吸収の増加をもたらす。EHOの第二の機構は、十分に吸収されない脂肪酸と胆汁酸塩によって引き起こされる、結腸のシュウ酸塩透過性の増大に関連するもので、これは、おそらく、腸管腔内カルシウムの減少に起因する、結腸の上皮閉塞結合部の変化により悪化する。この高シュウ酸尿症は脂肪便の程度に相関し、＜３０cmの回腸切除に伴うことは珍しい。結腸のシュウ酸塩を代謝する細菌(Oxalobacter formigenes)の数の減少や、十分に吸収されない胆汁酸塩による細菌の阻害も、同様にEHOに寄与し得る。最後に、おそらく内因性のシュウ酸塩の合成が増加するためであるが、高シュウ酸尿症は、長期にわたる非経口的栄養物摂取でも、また結腸切除し経口摂取が最小である患者でも、みられることがある。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
本発明の別の実施態様によると、Streptococcus thermophilusのある菌株を、Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium longumおよびBifidobacterium breveからなる群から選択されるBifidobacteriumの１菌株、またはこれらの混合物と組み合わせる。この場合、好ましくは、混合物中のBifidobacterium infantis、Bifidobacterium longumおよびBifidobacterium breveの濃度比は、CFU/組成物gの表記で１：１：１である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
好ましいある実施態様によると、Streptococcus thermophilusとLactobacillus属の細菌との濃度比は、CFU/組成物gの表記で１０００：１から１：１０００までであるが、一方Streptococcus thermophilusと、Bifidobacterium属の細菌またはBifidobacterium属の細菌の混合物との濃度比は、CFU/組成物gの表記で１０００：１から１：１０００までである。
細菌の総濃度は好ましくは１０６ないし１０１２CFU/組成物gである。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
培地
１０mMおよび２０mMのシュウ酸アンモニウム(BDH)を含有する培養用培地を、１０mlの基礎培地(以下のように調合：proteoses peptone No.３(DIFCO)１０g、＋酵母抽出物(DIFCO)５g、＋Tween'８０(DIFCO)１ml、＋KH2PO4(BDH)２g、＋酢酸ナトリウム(BDH)５g、＋クエン酸二水素アンモニウム(MERCK)２g、＋MgSO4・7H2O(MERCK)０．０５g、＋MnSO4(MERCK)０．０５gに、水を加えて５００mlとし、１２１℃で１５分間滅菌)に、０．４５μmのフィルターで滅菌した以下の糖およびシュウ酸アンモニウム溶液１０mlを加えて調整した。すなわち、
L. acidophilus、L. plantarumおよびL. brevis用には、
１A：２０ｍMシュウ酸アンモニウム＋４０g/lブドウ糖(BDH)
１A：４０ｍMシュウ酸アンモニウム＋４０g/lブドウ糖
S. thermophilus用には、
２A：２０ｍMシュウ酸アンモニウム＋４０g/lブドウ糖＋１０g/l乳糖(DIFCO)
２B：４０ｍMシュウ酸アンモニウム＋４０g/lブドウ糖＋１０g/l乳糖
B. infantis用には、
３A：２０ｍMシュウ酸アンモニウム＋５０g/lブドウ糖
３B：４０ｍMシュウ酸アンモニウム＋５０g/lブドウ糖
混合後、Aと標識したサンプルはシュウ酸アンモニウムを１０mM含有し、一方Bと標識したサンプルはシュウ酸アンモニウムを２０mM含有した。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
結果
下の表１からわかるように、すべての菌株は１０mMのシュウ酸アンモニウム存在下で概して増加したが、２０mMの濃度は、特にL. acidophilusおよびS. thermophilusの場合に、部分的に微生物の成育を阻害した。
しかしながら、細菌の増加とシュウ酸分解の間には相関があるようには見受けられなかった。ゆえに、L. plantarum およびL. brevisは、たとえ顕著な成育を示しても、シュウ酸塩分解はもしあるとしてもわずかしか引き起こさない。
一方、L. acidophilusおよびS. thermophilusは、２０mMのシュウ酸アンモニウム存在下では成育が抑えられるにもかかわらず、両濃度でシュウ酸塩を分解した。最後に、B. infantisは、どちらの濃度でも非常に良い分解活性を示し、シュウ酸塩によって阻害されなかった。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
(実施例２)
症例
インフォームドコンセントの後、７人の高シュウ酸尿症の患者に、３週間、１日当り６gのStreptococcus thermophilusを経口投与し、開始時と３週間後の時点で２４時間のシュウ酸塩尿を測定した。
尿中のシュウ酸塩は、臨床化学で用いられる標準的な方法で測定し、２４時間の期間中に採集された尿中のシュウ酸塩のmg数として表した。
３週間後、シュウ酸塩尿の結果は以下の通りであった：
患者      処置前      処置後
１        ５０          ７
２        ４７        ３０
３        ４１        ３１
４        ９５        ５６
５        ６２        １４
６        ５８        ３４
７        ４９        １２
尿中のシュウ酸塩レベルが高かった患者において、この処置がシュウ酸塩レベルの顕著な低下をもたらしたことが明らかである。