(57)【要約】【課題】ニコチン依存度の判定には、ファーガストロームタバコ依存度テスト等のように質問に答えてその合計点数から判定するという形式のニコチン依存度テストが実施され、高得点の場合にニコチン依存度が高いと判定している。しかし、このニコチン依存度テストは個人の主観が入るので、より客観的な方法でニコチン依存度を判定する方法が望まれている。【解決手段】全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度、単位血小板中に含まれるセロトニン濃度、又は全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度を更に単位血小板当たりの濃度に換算した値を求め、その値が高いほどニコチン依存度が高いと判定する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
全血中、血清中、又は多血小板血漿中のセロトニン濃度を測定し、その値が高いほどニコチン依存度が高いと判定することを特徴とする、ニコチン依存度の判定方法。
【請求項２】
全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度を測定しその値を単位血小板当たりの濃度に換算し、又は単位血小板中に含まれるセロトニン濃度を測定し、その値が高いほどニコチン依存度が高いと判定することを特徴とする、ニコチン依存度の判定方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法において、ある人から得られた全血中、血清中、又は多血小板血漿中のセロトニン濃度を、喫煙していない人から得られた全血中、血清中、または多血小板血漿中のセロトニン濃度と比較し、その値が高いほどニコチン依存度が高いと判定することを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項２に記載の方法において、
イ）ある人の全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度を測定しその値を単位血小板当たりの濃度に換算し、又は単位血小板中に含まれるセロトニン濃度を測定し、
ロ）喫煙していない人の全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度を測定しその値を単位血小板当たりの濃度に換算し、又は単位血小板中に含まれるセロトニン濃度を測定し、
ハ）上述のロ）の値に比べてイ）の値が高いほど、そのニコチン依存度が高いと判定することを特徴とする方法。
【請求項５】
同一人から異なる時期に採取された血液に対して、請求項１又は２に記載の方法を用いてニコチン依存度の判定を行い、それらを比較することにより、ニコチン依存度の経時変化を判定することを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ニコチン依存度の判定方法に関するものである。この方法により、特に禁煙する際に、ニコチンガムなどのニコチン代替剤を用いるほうが良いか否かを確認することが出来る。
【背景技術】
【０００２】
タバコの煙には、発癌・誘発物質、粘膜障害を引き起こす物質などが多く含まれており、喫煙習慣は肺癌や冠動脈疾患の危険因子となることは、良く知られている事実である（例えば非特許文献１，２参照）。これらのことから、喫煙者がタバコをやめることにより、より健康な生活をおくることが出来る。多くの病院では喫煙者がタバコをやめることをサポートするために、禁煙外来が設置されている。禁煙外来では、まず喫煙者のニコチン依存度を確認し、依存度の高い人には禁煙補助薬であるニコチンガム、ニコチンパットを用いながら禁煙を実施する。
【０００３】
一方、血小板はセロトニンを多量に含んでいるが、自分では合成できず、血漿中に存在するセロトニンを積極的に取り込んで蓄えるものである。血漿中のセロトニンのほとんどは、腸にあるエンテロクロマフィン細胞が合成したものに由来する。タバコの煙に含まれるニコチンは、このエンテロクロマフィン細胞を刺激し、セロトニンの合成を促進させることが知られている（例えば非特許文献３参照）。そして、タバコを吸う人は、吸わない人に比べ、血小板中のセロトニン濃度が高いという報告がある（例えば非特許文献４参照）。
【０００４】
【非特許文献１】Ｇ  Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｉｇａｒｅｔｔｅ  ｓｍｏｋｉｎｇ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．  Ｔｈｅ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｒｉｓｋ  ｉｎ  ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ  （ＡＲＩＣ）  ｓｔｕｄｙ．  ＪＡＭＡ  ２７９：１１９−１２４，１９９８．
【非特許文献２】Ａ  Ｋ  Ｈａｃｋｓｈａｗ，  Ｍ  Ｒ  Ｌａｗ，  Ｎ  Ｊ  Ｗａｌｄ，  Ｔｈｅ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｅｄ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｏｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  ｔｏｂａｃｃｏ  ｓｍｏｋｅ．  ＢＭＪ  １９９７；３１５：９８０−９８８  （１８  Ｏｃｔｏｂｅｒ）
【非特許文献３】Ｋ  Ｒａｃｋｅ，  Ｈ  Ｓｃｈｗｏｒｅｒ，Ｎｉｃｏｔｉｎｅ  ａｎｄ  ｍｕｓｃａｒｉｎｉｃ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ５−ｈｙｄｒｏｘｙｔｒｙｐｔａｍｉｎｅ  （５−ＨＴ）  ｒｅｌｅａｓｅ  ｆｒｏｍ  ｐｒｏｃｉｎｅ  ａｎｄ  ｃａｎｉｎｅ  ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ．  Ｔｈｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ  ７０：１９０−２００，１９９２
【非特許文献４】Ｋ  Ｒａｃｋｅ，  Ｈ  Ｓｃｈｗｏｒｅｒ，Ｇ  Ｓｉｍｏｎ，Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｃｉｇａｒｅｔｔｅ  ｓｍｏｋｉｎｇ  ｏｒ  ｉｎｇｅｒｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｉｃｏｔｉｎｅ  ｏｎ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ５−ｈｙｄｒｏｘｙｔｒｙｐｔａｍｉｎｅ  （５−ＨＴ）  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｓｍｏｋｅｒｓ  ａｎｄｎｏｎ−ｓｍｏｋｅｒｓ．  Ｔｈｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ  ７０：２０１−２０４，１９９２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ニコチン依存度は、血中のニコチン濃度がどこまで低下した際にタバコを接種したくなるかを確認することにより判定することが理想であるが、現実には困難である。そこで現在は、質問に答えその合計点数から判定するという形式のニコチン依存度テスト（例えばファーガストロームタバコ依存度テスト等）を実施し、高得点の場合にニコチン依存度が高いと判定している。しかしながら、このニコチン依存度テストは個人の主観が入るので、より客観的な方法でニコチン依存度を判定する方法が望まれている。
【０００６】
ところでニコチン依存度が高い人は、血中の平均的なニコチン濃度も高いと考えられる。そこで、ニコチンの代謝物である血中コチニン濃度とニコチン依存度との関連を検討した。しかしながら、その関連性はみつからなかった。これは、血中コチニン値は喫煙量を反映するものの、その検査の比較的短時間前の喫煙量を反映するためと推測される。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、ニコチンが血管内皮細胞に障害を与えることから、血中のある一定の期間の平均ニコチン濃度と、血管内皮細胞の障害により値が変化する血中のセロトニン濃度が関連する可能性があると考えた。また、上述のように、ニコチンはエンテロクロマフィン細胞を刺激し、セロトニンの産生量を増加させる。我々は、セロトニンの血中濃度変化が、コチニンより緩やかであれば、比較的長い時間の喫煙量を反映し、血中のある一定の期間の平均ニコチン濃度と血中のセロトニン濃度が関連する可能性があると考えた。そして、検討を行った結果、本発明に到達した。
【０００８】
すなわち本発明は、全血中、血清中、又は多血小板血漿中のセロトニン濃度を測定し、その値が高いほどニコチン依存度が高いと判定することを特徴とする、ニコチン依存度の判定方法である。また本発明は、全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度を測定しその値を単位血小板当たりの濃度に換算し、又は単位血小板中に含まれるセロトニン濃度を測定し、その値が高いほどニコチン依存度が高いと判定することを特徴とする、ニコチン依存度の判定方法である。更に本発明は、同一人から異なる時期に採取された血液に対して、上述のいずれかの方法を用いてニコチン依存度の判定を行い、それらを比較することにより、ニコチン依存度の経時変化を判定することを特徴とする方法である。以下に本発明を更に詳細に説明する。
【０００９】
血液中に含まれる血球成分としては、赤血球、白血球、及び血小板がある。このうち赤血球および白血球は、その内部にセロトニンを含有しないが、血小板は内部に多量のセロトニンを含有している。よって、血液全体に存在するセロトニンの量とは、血小板中に存在するセロトニンの量と血小板外のいわゆる血漿中に存在するセロトニンの量とを合計したものである。血液全体に存在するセロトニン量を測定するための試料としては、例えば全血があげられる。全血は、赤血球、白血球、血小板、血漿のすべてを含んでいる。また他には、血小板中のセロトニンは血液凝固の際に血清中に放出されるため、血清を用いても良い。また、抗凝固剤入り採血管で採血した血液を４５０×ｇで５分程度遠心分離して得られた血小板を含んだ血漿、即ち多血小板血漿を用いてもよい。
【００１０】
本発明による方法では、全血中、血清中、又は多血小板血漿中のセロトニン濃度を測定することが必要であるが、その方法には特に限定はなく、例えば液体クロマトグラフィーや免疫測定法による測定などがあげられる。液体クロマトグラフィーでセロトニン濃度を測定する場合は、通常、試料中の蛋白質を除去してから測定対象とし、抗凝固剤入り採血管で採血した全血を試料として用いることが多い。免疫測定法の場合には、測定対象として血清試料を用い、試料中の蛋白質を除去する前処理操作を行わないことが多い。このようにして得られた測定値は、ファーガストロームタバコ依存度テスト等のような、質問に答えその合計点数からニコチン依存度を判定するという従来の判定方法と良好な相関関係を有するものであり、全血中、血清中、又は多血小板血漿中のセロトニン濃度が高いほどニコチン依存度が高いと判定することができる。
【００１１】
また本発明による方法では、全血中、血清中、又は多血小板血漿中のセロトニン濃度を更に単位血小板当たりの濃度に換算した値、又は単位血小板中に含まれるセロトニン濃度は、従来のニコチン依存度判定方法と良好な相関性を有することが見出された。すなわち、その値が高いほどニコチン依存度が高いと判定することができる。
【００１２】
単位血小板中に含まれるセロトニン濃度は、全血試料、血清試料、又は多血小板血漿試料中のセロトニン濃度を測定し、一方、血小板をほとんど含まない血漿（乏血小板血漿）中のセロトニン濃度を測定し、その差を求め、その値を別に測定した血小板数により割り算を行うことにより求めることができる。なお、血小板外に存在するセロトニン量は、血小板中に存在するセロトニン量に比べて１％程度と非常に少ないことから、単位血小板中に含まれるセロトニン濃度を求める代わりに、全血中、血清中、又は多血小板血漿中のセロトニン濃度を血小板数で割り、単位血小板当りの濃度に換算した値を用いることも可能である。このため実施例においては、全血中のセロトニン濃度を、別に測定した血小板数で割り、単位血小板当りの濃度に換算した値を検討に用いた。なお、血小板数の測定方法には特に限定はなく、例えば市販の測定装置を用いることができる。
【００１３】
さらに本発明によれば、全血中、血清中、又は多血小板血漿中のセロトニン濃度、単位血小板中に含まれるセロトニン濃度、および全血中、血清中、又は多血小板血漿中のセロトニン濃度を更に単位血小板当たりの濃度に換算した値については、非喫煙者（すなわちニコチン依存度が０）に比べ、ニコチン依存度の高い者ではその値が高くなる傾向を示した。これは、ある人の全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度、単位血小板中に含まれるセロトニン濃度、又は全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度を更に単位血小板当たりの濃度に換算した値を、非喫煙者の値と比較し、その値が高いほどニコチン依存度が高いと客観的に判定できることを示している。
【００１４】
さらに、禁煙外来に来た初診の患者の全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度、単位血小板中に含まれるセロトニン濃度、又は全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度を更に単位血小板当たりの濃度に換算した値に比べ、１０１日以上治療を継続した患者の値は優位に低値となった。これは、全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度、単位血小板中に含まれるセロトニン濃度、又は全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度を更に単位血小板当たりの濃度に換算した値が禁煙外来の治療経過においてニコチン依存度の低下したことを反映している結果である。また、同一患者の治療経過において、前述のように異なる時期に採取された全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度、単位血小板中に含まれるセロトニン濃度、又は全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度を更に単位血小板当たりの濃度に換算した値が低下傾向にある。治療経過に伴いニコチン依存度は低下することから、全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度、単位血小板中に含まれるセロトニン濃度、又は全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度を更に単位血小板当たりの濃度に換算した値からニコチン依存度の判定を行い、それらを比較することによりニコチン依存度の経時変化を判定することが出来る。
【発明の効果】
【００１５】
本発明は、ニコチン依存度を判定するための新たな指標を提供するものであり、全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度、単位血小板中に含まれるセロトニン濃度、又は全血中、血清中、もしくは多血小板血漿中のセロトニン濃度を更に単位血小板当たりの濃度に換算した値からニコチン依存度を判定することができる。また、従来法のように個人の主観が入る恐れが少なく、より客観的にニコチン依存度を判定することができる。
【実施例】
【００１６】
実施例１
禁煙外来患者３１名について、ニコチン依存度、全血中セロトニン、血漿中セロトニン、全血中セロトニンと血漿中セロトニンの比率、１０の７乗個の血小板あたりのセロトニン量、血中コチニン濃度、酸化ＬＤＬ、中性脂肪、コレステロール、ＨＤＬコレステロール、ＬＤＬコレステロール、血小板数を測定した。ニコチン依存度はファーガストロームタバコ依存度テストにより、全血中セロトニンおよび血漿中セロトニンは特開２００２−２７７４６１号公報と同様の方法で行った。血中コチニン濃度は、ガスクロマトグラフ／質量分析装置（ＧＣ／ＭＳ）を用いた。また脂質関連の測定には協和メディクス製の試薬（ＨＤＬコレステロール；デタミナーＬ  ＨＤＬ−Ｃ、ＬＤＬコレステロール；デタミナーＬ  ＬＤＬ−Ｃ、コレステロール；デタミナーＴＣＩＩ、中性脂肪；デタミナーＴＧＩＩ）を用いた。なお酸化ＬＤＬの測定には、Ｉｔａｂｅ  Ｈ．ら  Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．，３７，４５−５３（１９９６）に記載の方法を用いた。血小板数は、シスメックス製  自動血球分析装置Ｋ−４０００を用いた。
【００１７】
ニコチン依存度と関連性が見られたのは、全血中セロトニン濃度および１０の７乗個の血小板あたりのセロトニン濃度であった。他の項目について、関連性（すべて有意差ｐ値は０．１以上であった。）は見つからなかった。血中コチニン濃度のデータは比較として示した。
【００１８】
結果を表１および図１〜３に示す。表１および図１〜３から明らかなように、ニコチン依存度テストの点数と全血中のセロトニン濃度は正相関を示し、有意差検定（ｐ値）も０．００７９と良好であった。１０の７乗個の血小板あたりのセロトニン濃度については、やや相関が低下するものの正相関を示し、有意差検定（ｐ値）も０．０６６３であった。血中コチニン濃度については、有意差検定（ｐ値）も０．１以上であり、ニコチン依存度テストの点数との関係は確認されなかった。
【００１９】
【表１】
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実施例２
禁煙外来患者３６名について、ファーガストロームタバコ依存度テストによるニコチン依存度、及び全血中のセロトニン濃度を測定した。また比較として、非喫煙の健常者２８名について全血中のセロトニン濃度を測定した。非喫煙の健常者については、ニコチン依存度を０とした。そして、ニコチン依存度と、全血中セロトニン値との関係を調べた。結果を図４に示す。全血中のセロトニン濃度は、ニコチン依存度が増加するとともに高値を示す傾向にあった。スピアマンの順位相関により解析したところ、相関係数は０．３６５となり、Ｐ値は０．００４であり有意差（Ｐ＜０．０５）を示した。
【００２０】
一方、禁煙外来患者３５名について、ファーガストロームタバコ依存度テストによるニコチン依存度を測定した。また、全血中のセロトニン濃度および血小板数を測定し、１０７個の血小板当りのセロトニン濃度を算出した。比較として、非喫煙の健常者２８名について同様に測定を行った。なお、非喫煙の健常者については、ニコチン依存度を０とした。そして、ニコチン依存度と、１０７個の血小板当りのセロトニン濃度との関係を調べた。結果を図５に示す。１０７個の血小板当りのセロトニン濃度は、ニコチン依存度が増加するとともに高値を示す傾向にあった。スピアマンの順位相関により解析したところ、相関係数は０．２９２となり、Ｐ値は０．０２１であり有意差（Ｐ＜０．０５）を示した。
【００２１】
実施例３
禁煙外来を訪問した患者で、治療初日である１９名、禁煙を始めて治療経過１日から５０日の間の７名、治療経過５１日から１００日の間の８名、治療経過１０１日以上の７名について、全血中のセロトニン濃度について平均値を求め、それらの関係を調べた。なお、患者については、禁煙補助薬を用いた人と用いない人両方含まれる。結果を図６に示す。図６から明らかなように、治療経過１〜５０日及び５１〜１００日の群については、変化が見られないが、治療経過１０１日以上の群については、治療初日の群に比べセロトニン濃度が有意に低下していることがわかる。これは、治療経過とともに血中の平均的なニコチン濃度、そして、ニコチン依存度も低下し、それとともに全血中のセロトニン濃度も低下していることを示す。これは、全血中のセロトニン濃度の測定が、治療経過においてもニコチン依存度の判定に有用であることを示している。
【００２２】
また、禁煙外来を訪問した患者で、治療初日である１８名、禁煙を始めて治療経過１日から５０日の間の６名、治療経過５１日から１００日の間の８名、治療経過１０１日以上の６名について、１０７個の血小板当りのセロトニン濃度について平均値を求め、それらの関係を調べた。結果を図７に示す。図７からも明らかなように、治療経過とともに単位血小板あたりのセロトニン濃度が低下傾向にあり、そして、治療初日と治療経過１０１日以上の群の比較においては有意差が見られた。
【００２３】
実施例４
禁煙外来を訪問した３名の患者において、治療経過における全血中のセロトニン濃度、及び単位血小板あたりのセロトニン濃度の変化を検討した。表２に結果を示す。患者Ａでは、治療日数の経過に伴い全血中のセロトニン濃度および単位血小板当りのセロトニン濃度のどちらも低下傾向を示した。患者Ｂでは、経過日数５６日後においては、両方の数値とも低下傾向を示し、９０日後では全血中のセロトニン濃度に変化は見られなかったものの、単位血小板当りセロトニン濃度は更に低下した。患者Ｃでは、治療日数の経過に伴い両方の数値とも低下傾向を示した。
【００２４】
【表２】
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【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】ニコチン依存度テスト点数と全血中セロトニン濃度との関連を示す図である。
【図２】ニコチン依存度テスト点数と単位血小板当りのセロトニン濃度との関連を示す図である。
【図３】ニコチン依存度テスト点数と血中コチニン濃度との関連を示す図である。
【図４】ニコチン依存度テスト点数と全血中セロトニン濃度との関連を示す図である。
【図５】ニコチン依存度テスト点数と単位血小板当りのセロトニン濃度との関連を示す図である。
【図６】治療経過における全血中セロトニン濃度の変化を示す図である。
【図７】治療経過における単位血小板当りのセロトニン濃度の変化を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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