(57)【要約】  本発明は、式Ｉで表される化合物のマレイン酸塩、該塩を調製するための方法、該塩を含む医薬組成物、及び該塩の使用に関する。本発明はまた、式Ｉで表される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃ、Ｄ及びＥ、該結晶形を調製するための方法、該結晶形を含む結晶組成物及び医薬組成物、並びにそれらの使用に関する。
2019505532.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2019505532.tif 000020
で示される化合物のマレイン酸塩。
【請求項２】
Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ＝７．６°±０．２°、９．９°±０．２°、１７．８°±０．２°、２２．８°±０．２°、２４．２°±０．２°、２６．３°±０．２°に回折ピークを有することを特徴とする、式Ｉ： 
【化２】
2019505532.tif 000021
で示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃ。
【請求項３】
以下の工程：
１）溶媒中に式Ｉで示される化合物を溶解すること；
２）マレイン酸を添加すること；及び
３）結晶化のために冷却して、濾過し、洗浄し、そして、乾燥して、結晶形Ｃを得ること
を含む、請求項２に記載の結晶形Ｃを調製するためのプロセスであって、該溶媒が、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、第３級ブタノール、アセトン、酢酸エチル及びそれらの混合溶媒からなる群より選択され、好ましくはエタノールである、プロセス。
【請求項４】
Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ＝５．１°±０．２°、９．５°±０．２°、１１．２°±０．２°、１７．６°±０．２°、２０．２°±０．２°、２３．０°±０．２°に回折ピークを有することを特徴とする、式Ｉ： 
【化３】
2019505532.tif 000022
で示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｄ。
【請求項５】
以下の工程：
１）式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃをアセトン溶媒中に入れて懸濁液を形成すること；
２）一定温度で振盪すること；及び
３）遠心分離し、洗浄し、そして、乾燥して、結晶形Ｄを得ること
を含む、請求項４に記載の結晶形Ｄを調製するためのプロセス。
【請求項６】
Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ＝４．９°±０．２°、５．３°±０．２°、９．０°±０．２°、１６．５°±０．２°、１９．３°±０．２°に回折ピークを有することを特徴とする、式Ｉ：
【化４】
2019505532.tif 000023
で示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｅ。
【請求項７】
以下の工程：
１）式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃをイソプロパノール溶媒中に入れて懸濁液を形成すること；
２）一定温度で振盪すること；及び
３）遠心分離し、洗浄し、そして、乾燥して、結晶形Ｅを得ること
を含む、請求項６に記載の結晶形Ｅを調製するためのプロセス。
【請求項８】
結晶組成物であって、
該結晶組成物の重量に基づいて、請求項２に記載の結晶形Ｃが、５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、そして、最も好ましくは９５％以上であるか；又は
該結晶組成物の重量に基づいて、請求項４に記載の結晶形Ｄが、５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、そして、最も好ましくは９５％以上であるか；又は
該結晶組成物の重量に基づいて、請求項６に記載の結晶形Ｅが、５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、そして、最も好ましくは９５％以上であること
を特徴とする、結晶組成物。
【請求項９】
有効量の、請求項１に記載の式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩、請求項２に記載の結晶形Ｃ、請求項４に記載の結晶形Ｄ、請求項６に記載の結晶形Ｅ、若しくは請求項８に記載の結晶組成物、又はそれらの任意の組合せを含むことを特徴とする、医薬組成物。
【請求項１０】
Ｔｏｌｌ様受容体７関連疾患を処置するための医薬を製造するための、請求項１に記載の式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩、請求項２に記載の結晶形Ｃ、請求項４に記載の結晶形Ｄ、請求項６に記載の結晶形Ｅ、請求項８に記載の結晶組成物又は請求項９に記載の医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬化学の分野に関し、特に、ＴＬＲ７アゴニストのマレイン酸塩、その調製プロセス、それを含む医薬組成物、及びその使用に関する。本発明はまた、該塩の結晶形Ｃ、結晶形Ｄ及び結晶形Ｅ、調製プロセス、結晶形を含む結晶組成物、結晶形又は結晶組成物を含む医薬組成物、並びにその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
Ｔｏｌｌ様受容体は、種々の免疫細胞により発現され、高度に保存された構造モチーフ：微生物病原体により発現される病原体関連分子パターン（Pathogen Associated Molecular Pattern）（ＰＡＭＰ）又は死細胞により放出される損傷関連分子パターン（Damage Associated Molecular Patterns）（ＤＡＭＰ）を認識する。ＰＡＭＰ又はＤＡＭＰは、Ｔｏｌｌ様受容体を刺激して、ＡＰ−１、ＮＦ−κＢ及びインターフェロン調節因子のような転写因子の活性化を誘導するシグナルカスケードを誘発する（パルス応答機能）。これが、インターフェロン類、炎症促進性サイトカイン類及びエフェクターサイトカイン類の産生を含む種々の細胞応答をもたらし、それにより、免疫反応が生じる。これまでに、１３種類のＴｏｌｌ様受容体が哺乳動物において発見されている。Ｔｏｌｌ様受容体１、２、４、５及び６は、主として細胞表面上で発現され、一方、Ｔｏｌｌ様受容体３、７、８及び９は、エンドソームにおいて発現される。異なるＴｏｌｌ様受容体は、異なる病原体由来のリガンドを認識する。Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）は、主として形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）により発現され、リガンドを介して認識されて、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）の分泌を誘導する。Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）及びＴｏｌｌ様受容体８（ＴＬＲ８）は、高度に相同性があり、よって、ＴＬＲ７のリガンドは、多くの場合ＴＬＲ８のリガンドでもある。ＴＬＲ８刺激は、主として腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）のようなサイトカイン類及びケモアトラクタントの産生を誘導する。インターフェロンαは、慢性Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎を処置するための医薬のうちの１つであり、一方、ＴＮＦ−αは、炎症促進性サイトカインであり、その過剰分泌は重度の副作用をもたらす。
【０００３】
イミキモド（imiquimod）（非特許文献１）、レシキモド（resiquimod）（非特許文献２）、ＧＳ−９６２０（非特許文献３）のような、幾つかのＴＬＲ７アゴニストが報告されている。それにもかかわらず、より良好な選択性、活性及び安全性を有する新規なＴＬＲ７アゴニストを手にすることが望ましい。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】British Journal of Dermatology, 2003; 149 (Suppl. 66): 5-8
【非特許文献２】Antiviral Research, 64, (2004), 79-83
【非特許文献３】Gastroenterology, (2013), 144(7), 1508-1517
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
中国特許出願第２０１４１０４０５１３６．０号明細書（その全体が参照により本明細書中に援用される）は、１つの低分子、即ち、２−ブトキシ−７−（４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン及びその調製プロセスを開示しており、これは下記の構造を有する：
【化１】
2019505532.tif 000003
【課題を解決するための手段】
【０００６】
要約
ある態様において、式Ｉ：
【化２】
2019505532.tif 000004
で示される化合物のマレイン酸塩が提供される。
【０００７】
別の態様において、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形、対応する調製プロセス、及び結晶組成物が提供される。一実施態様において、結晶形は、結晶形Ｃ、結晶形Ｄ又は結晶形Ｅである。
【０００８】
一実施態様において、結晶形Ｃは、２θ＝７．６°±０．２°、９．９°±０．２°、１７．８°±０．２°、２２．８°±０．２°、２４．２°±０．２°、２６．３°±０．２°に回折ピークを有するＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンによって特徴付けられる。
【０００９】
一実施態様において、結晶形Ｄは、２θ＝５．１°±０．２°、９．５°±０．２°、１１．２°±０．２°、１７．６°±０．２°、２０．２°±０．２°、２３．０°±０．２°に回折ピークを有するＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンによって特徴付けられる。
【００１０】
一実施態様において、結晶形Ｅは、２θ＝４．９°±０．２°、５．３°±０．２°、９．０°±０．２°、１６．５°±０．２°、１９．３°±０．２°に回折ピークを有するＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンによって特徴付けられる。
【００１１】
別の態様において、本発明による１種以上の結晶形又はその結晶組成物を含む医薬組成物が提供される。医薬組成物は、薬学的に許容し得る担体、賦形剤及び／又は媒体を場合により更に含むことができる。
【００１２】
別の態様において、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）関連疾患を処置又は予防するための方法であって、それを必要とする被験体に、有効量の本発明による結晶形若しくは結晶組成物又は医薬組成物を投与することを含む、方法が提供される。好ましくは、疾患は、ウイルス感染症である。
【００１３】
更なる態様において、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）関連疾患を処置又は予防するための医薬を製造するための、本発明による結晶形若しくは結晶組成物又は医薬組成物の使用が提供される。好ましくは、疾患は、ウイルス感染症である。
【００１４】
更に別の態様において、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）関連疾患の処置又は予防において使用するための、本発明による結晶形若しくは結晶組成物又は医薬組成物が提供される。好ましくは、疾患は、ウイルス感染症である。
【００１５】
本発明の一実施態様において、ウイルス感染症は、肝炎ウイルス感染症、特に、Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎感染症である。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形ＣのＸＲＰＤパターン。
【図２】式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形ＤのＸＲＰＤパターン。
【図３】式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形ＥのＸＲＰＤパターン。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
詳細な説明
一般的な定義及び用語
別段の記載がない限り、本明細書中に使用される用語及び語句は、以下の意味を有する。具体的な用語又は語句が明確に定義されていない場合、それを不明確又は定義されていないと考慮すべきではない。それは、一般的な意味で理解されるべきである。本明細書中に使用される商品名は、対応する製品又は活性成分を指す。
【００１８】
そうではないと具体的に定義されない限り、割合（百分率を含む）又は部分は、本明細書中の重量に基づいて計算される。
【００１９】
可変数値と共に使用される場合、「およそ」又は「約」という用語は、通常、変数の値、及び実験誤差内（例えば、平均の９５％信頼区間内）若しくは具体的な値の±１０％内の、又はそれより広い範囲の変数の全ての値を指す。
【００２０】
「含む（comprise）」又はその同義語である「含有する（contain）」、「含有する（include）」、「有する」などという表現は、非限定的（open-ended）なものであり、記載のない任意の要素、工程又は成分を除外するものではない。「〜からなる（consist of）」という表現は、記載のない任意の要素、工程又は成分を除外する。「実質的に〜からなる」という表現は、クレームされる主題の基本的かつ新規な特徴に実質的に影響を与えない、オプションの要素、工程又は構成要素と一緒になった、所与の範囲内の具体的な要素、工程又は成分を指す。当然のことながら、「含む」という表現は、「実質的に〜からなる」及び「〜からなる」という表現を包含する。
【００２１】
「オプションの」又は「場合により」という用語は、その後に記載される事象が起こってもよいし、起こらなくてもよいことを意味する。この用語は、事象が起こる場合と起こらない場合を包含する。
【００２２】
「医薬組成物」という用語は、１種以上の薬学的に許容し得る成分（例えば、限定されるものではないが、担体及び／又は賦形剤）と場合により合わせた、活性成分を指す。活性成分は、式Ｉで示される化合物若しくはそのマレイン酸塩、本発明による１種以上の結晶形、又は本発明による１種以上の結晶組成物として例示される。
【００２３】
「薬学的に許容し得る担体」という用語は、著しい刺激がなく、かつ活性化合物の生物活性及び特性を損なわないそのような担体を指す。「薬学的に許容し得る担体」とは、活性成分と一緒に投与され、かつその投与に対して有益である不活性物質を指し、そして、限定されるものではないが、ヒト又は動物（例えば、家畜）における使用のために国家食品薬品監督管理局（State Food and Drug Administration）によって承認された以下の物質：流動促進剤、甘味剤、希釈剤、保存料、色素／着色料、香味剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、崩壊剤、懸濁剤、安定剤、等張剤、溶剤又は乳化剤のいずれかを含む。担体の非限定的な例は、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖類及びデンプン類、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、並びにポリエチレングリコールなどを含む。担体に関する他の情報は、Remington：The Science and Practice of Pharmacy、21st Ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2005)に見出されるが、その内容は参照により本明細書中に援用される。「賦形剤」という用語は、一般に、有効な医薬組成物を処方するために使用される担体、希釈剤及び／又は媒体を指す。
【００２４】
「投与」又は「投与する」などの用語は、化合物又は組成物が生物学的作用の所望の部位に送達されることを可能にする方法を指す。そのような方法には、限定されるものではないが、経口の、非経口（静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、血管内注射又は注入を含む）の、局所の、直腸の投与などが含まれる。
【００２５】
薬学的又は薬理学的な活性剤について、「有効量」という用語は、毒性はないが所望の効果を達成するのに十分な、医薬又は薬剤の量を指す。本明細書中の経口処方物に関して、組成物中の活性物質についての「有効量」とは、組成物中の別の活性物質と組合せて所望の効果を達成するために必要な量を指す。有効量は、個別に決定されてもよく、そして、レセプタ（receptor）の年齢及び全身状態、並びに具体的な活性物質に依存する。特定の場合における有効量は、従来の試験を経て当業者により決定され得る。
【００２６】
「活性成分」、「治療剤」、「活性物質」又は「活性剤」という用語は、標的の障害、疾患又は症状を効果的に処置又は予防するために有用な化学的実体を指す。本明細書中の該用語は、例えば、式Ｉで示される化合物若しくはそのマレイン酸塩、本発明による１種以上の結晶形、又は本発明による１種以上の結晶組成物を指すことがある。
【００２７】
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ又はＸＲＤ）スペクトルにおいて、結晶化合物から得られる回折パターンは、一般的に、特定の結晶形について特徴的であり、バンドの相対強度（特に低角度）は、結晶化条件、粒径及び他の測定条件の差に起因する優勢な配向効果で変化し得る。したがって、回折ピークの相対強度は、所与の結晶形について特徴的ではない。結晶形が当該分野で知られているものと同じであるかどうかを決定する場合、それらの相対強度ではなく、ピークの相対位置に留意することがより重要である。更に、任意の所与の結晶形についてピークの位置に僅かな誤差が存在し得、このことは結晶学の分野でもよく知られている。例えば、ピークの位置は、試料の分析中の温度、試料移動又は機器較正の変化に起因してシフトし得；そして、２θ値の測定誤差は、時に約±０．２°に、典型的には約±０．１°になり得る。したがって、結晶構造を決定する場合、この誤差を考慮する必要がある。本発明による結晶形が実質的に図に示されるとおり記載される場合、「実質的に」という用語は、回折ピークにおけるそのような差をも包含することが意図される。
【００２８】
ＸＲＰＤパターンにおいて、ピーク位置は、通常、角度２θ又は結晶面間隔ｄで表され、ｄとθとの間の単純な変換はｄ＝λ／２ｓｉｎθ（式中、ｄは、結晶面間隔を表し、λは、入射Ｘ線の波長を表し、そして、θは、回折角である）である。同じ化合物の同じ結晶形については、ＸＲＰＤパターンのピーク位置は全体としては類似しており、相対強度誤差は大きくてもよい。また、混合物の同定においては、含量における低下等の要因に起因して幾つかの回折線が失われることがあるため、高純度試料で観察されるバンド全体を当てにする必要はなく、１つのバンドでさえも所与の結晶についての特徴になり得ることに留意すべきである。
【００２９】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）は、その結晶構造の変化又は結晶融解に起因し、結晶が熱を吸収又は放出する場合に転移温度を測定するために使用される。熱転移温度及び融点の誤差は、継続的な分析における同じ化合物の同じ結晶形の場合、典型的には約５℃以内、通常は約３℃以内である。化合物が所与のＤＳＣピーク又は融点を有すると記載されている場合、それはＤＳＣピーク又は融点が±５℃であることを意味する。異なる結晶形を同定するためのＤＳＣによる補助的方法が提供される。それらの異なる転移温度特性によって、異なる結晶形を同定してもよい。混合物のＤＳＣピーク又は融点は、広い範囲にわたって変化し得ることに留意する。更に、融解温度は、物質の融解中の分解に起因する温度上昇の速度と関連している。
【００３０】
本明細書中の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）は、以下の方法により測定される：装置：ＴＡ Ｑ２０００示差走査熱量計；方法：試料（〜１mg）をＤＳＣアルミニウムパンに入れる、方法：２５℃〜３００℃、加熱速度 １０℃／分。
【００３１】
「結晶組成物」という用語は、本発明による１種以上の結晶形（結晶形Ｃ、Ｄ及び／又はＥなど）を含む固体の形態を指す。結晶組成物に含まれる結晶形の量は、独立して、５０％以上、８０％以上、９０％以上、又は９５％以上であってもよい。本発明による結晶形に加えて、結晶組成物はまた、式Ｉで示される化合物若しくはその塩（マレイン酸塩など）の他の結晶形若しくは非晶形、又はこれらの物質以外の不純物も場合により含んでもよい。結晶組成物中の成分の含量の合計が１００％であるべきことは、当業者に理解されるべきである。
【００３２】
式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩
式Ｉ：
【化３】
2019505532.tif 000005
で示される化合物のマレイン酸塩が提供される。
【００３３】
好ましい実施態様において、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩では、式Ｉで示される化合物対マレイン酸のモル比は、１：１〜３、好ましくは１：２である。式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩は、従来のマレイン酸塩の調製プロセスにより調製することができる。
【００３４】
結晶形Ｃ
Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンにおいて、２θ＝７．６°±０．２°、９．９°±０．２°、１７．８°±０．２°、２２．８°±０．２°、２４．２°±０．２°、２６．３°±０．２°に回折ピークを有する、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃが提供される。
【００３５】
具体的な実施態様において、結晶形Ｃは、Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンにおいて、２θ＝５．６°±０．２°、７．６°±０．２°、９．９°±０．２°、１７．８°±０．２°、１９．８°±０．２°、２２．８°±０．２°、２４．２°±０．２°、２５．０°±０．２°、２６．３°±０．２°に回折ピークを有する。
【００３６】
より具体的な実施態様において、結晶形Ｃは、Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンにおいて、２θ＝５．６°±０．２°、６．０°±０．２°、７．６°±０．２°、９．９°±０．２°、１２．０°±０．２°、１５．３°±０．２°、１７．８°±０．２°、１８．５°±０．２°、１９．８°±０．２°、２０．４°±０．２°、２２．８°±０．２°、２３．１°±０．２°、２４．２°±０．２°、２４．７°±０．２°、２５．０°±０．２°、２６．３°±０．２°に回折ピークを有する。
【００３７】
特定の実施態様において、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃの回折ピークは、以下のとおり特徴付けられる：
【００３８】
【表１】
2019505532.tif 000006
【００３９】
ある実施態様において、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形ＣのＸ線粉末回折パターンは、実質的に図１に示される。
【００４０】
結晶形Ｃはまた、初期温度９７．０℃±５℃、かつピーク温度１０６．０℃±５℃のＤＳＣによって特徴付けられ得る。
【００４１】
ある実施態様において、結晶形Ｃでは、式Ｉで示される化合物対マレイン酸のモル比は１：１〜３、好ましくは１：２である。
【００４２】
また、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩を溶媒から沈殿させることを含む、本発明による結晶形Ｃを調製するためのプロセスが提供される。
【００４３】
ある実施態様において、該プロセスは、以下の工程：
１）溶媒中に式Ｉで示される化合物を溶解する（好ましくは、溶解を促進するために加熱する）こと；
２）マレイン酸を添加すること；及び
３）結晶化のために冷却して、濾過し、洗浄し、そして、乾燥して、結晶形Ｃを得ること
を含む。
【００４４】
工程１）において、溶媒は、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、第３級ブタノール、アセトン、酢酸エチル及びそれらの混合溶媒からなる群より選択され；好ましくはエタノールである。
【００４５】
工程１）において、式Ｉで示される化合物 １mol当たりに添加される溶媒の量は、０．２〜８Ｌ、好ましくは０．３〜４Ｌ、より好ましくは０．５〜２Ｌ、最も好ましくは１Ｌである。
【００４６】
工程１）において、加熱温度は４０℃〜９０℃、好ましくは５０℃〜８０℃、より好ましくは７０℃〜８０℃であり得る。
【００４７】
工程２）において、式Ｉで示される化合物 １mol当たりに添加されるマレイン酸の量は、１．０〜４．０mol、好ましくは１．６〜３．０mol、より好ましくは２．０〜２．４mol、最も好ましくは２．２molである。
【００４８】
また、結晶形Ｃを含む結晶組成物が提供される。ある実施態様において、結晶組成物の重量に基づいて、結晶形Ｃの含量は、５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、そして、最も好ましくは９５％以上である。また、結晶組成物は、結晶形Ｃに加えて、他の結晶形若しくは非晶形の式Ｉで示される化合物若しくはその塩、又はこれらの物質以外の不純物を含むこともできる。
【００４９】
結晶形Ｄ
Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンにおいて、２θ＝５．１°±０．２°、９．５°±０．２°、１１．２°±０．２°、１７．６°±０．２°、２０．２°±０．２°、２３．０°±０．２°に回折ピークを有する、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｄが提供される。
【００５０】
具体的な実施態様において、結晶形Ｄは、Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンにおいて、２θ＝５．１°±０．２°、９．５°±０．２°、１１．２°±０．２°、１７．６°±０．２°、２０．２°±０．２°、２０．７°±０．２°、２３．０°±０．２°、２３．７°±０．２°に回折ピークを有する。
【００５１】
より具体的な実施態様において、結晶形Ｄは、Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンにおいて、２θ＝５．１°±０．２°、５．６°±０．２°、９．５°±０．２°、１１．２°±０．２°、１６．９°±０．２°、１７．６°±０．２°、２０．２°±０．２°、２０．７°±０．２°、２２．６°±０．２°、２３．０°±０．２°、２３．７°±０．２°、２４．５°±０．２°に回折ピークを有する。
【００５２】
特定の実施態様において、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｄの回折ピークは、以下のとおり特徴付けられる：
【００５３】
【表２】
2019505532.tif 000007
【００５４】
ある実施態様において、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形ＤのＸ線粉末回折パターンは、実質的に図２に示される。
【００５５】
結晶形Ｄはまた、初期温度９８．３℃±５℃、かつピーク温度１１０．１℃±５℃のＤＳＣによって特徴付けられ得る。
【００５６】
ある実施態様において、結晶形Ｄでは、式Ｉで示される化合物対マレイン酸のモル比は１：１〜３、好ましくは１：２である。
【００５７】
また、以下の工程：
１）式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃをアセトン溶媒中に入れて懸濁液を形成すること；
２）一定温度で振盪すること；
３）遠心分離し、洗浄し、そして、乾燥して、結晶形Ｄを得ること
を含む、結晶形Ｄを調製するためのプロセスが提供される。
【００５８】
工程１）において、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃ １ｇ当たりに添加されるアセトンの量は、２〜３０mL、好ましくは８〜２４mL、より好ましくは１２〜２０mL、最も好ましくは１４〜１６mLである。
【００５９】
工程２）において、一定温度は２０℃〜６０℃、好ましくは３０℃〜５０℃、より好ましくは３５℃〜４５℃、最も好ましくは４０℃である。
【００６０】
また、結晶形Ｄを含む結晶組成物が提供される。ある実施態様において、結晶組成物の重量に基づいて、結晶形Ｄは、５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、そして、最も好ましくは９５％以上である。更に、結晶組成物はまた、結晶形Ｄに加えて、他の結晶形若しくは非晶形の式Ｉで示される化合物若しくはその塩、又はこれらの物質以外の不純物を含むこともできる。
【００６１】
結晶形Ｅ
Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンにおいて、２θ＝４．９°±０．２°、５．３°±０．２°、９．０°±０．２°、１６．５°±０．２°、１９．３°±０．２°に回折ピークを有する、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｅが提供される。
【００６２】
具体的な実施態様において、結晶形Ｅは、Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンにおいて、２θ＝４．９°±０．２°、５．３°±０．２°、６．７°±０．２°、９．０°±０．２°、１０．８°±０．２°、１６．５°±０．２°、１９．３°±０．２°に回折ピークを有する。
【００６３】
より具体的な実施態様において、結晶形Ｅは、Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）パターンにおいて、２θ＝４．９°±０．２°、５．３°±０．２°、６．７°±０．２°、９．０°±０．２°、１０．８°±０．２°、１６．２°±０．２°、１６．５°±０．２°、１９．３°±０．２°、２２．０°±０．２°、２２．６°±０．２°、２５．９°±０．２°に回折ピークを有する。
【００６４】
具体的な実施態様において、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｅの回折ピークは、以下のとおり特徴付けられる：
【００６５】
【表３】
2019505532.tif 000008
【００６６】
ある実施態様において、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形ＥのＸ線粉末回折パターンは、実質的に図３に示される。
【００６７】
結晶形Ｅはまた、初期温度８５．７℃±５℃、かつピーク温度９７．５℃±５℃のＤＳＣによって特徴付けられ得る。
【００６８】
ある実施態様において、結晶形Ｅでは、式Ｉで示される化合物対マレイン酸のモル比は１：１〜３、好ましくは１：２である。
【００６９】
また、以下の工程：
１）式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃをイソプロパノール溶媒中に入れて懸濁液を形成すること；
２）一定温度で振盪すること；
３）遠心分離し、洗浄し、そして、乾燥して、結晶形Ｅを得ること
を含む、結晶形Ｅを調製するためのプロセスが提供される。
【００７０】
工程１）において、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃ １ｇ当たりに添加されるイソプロパノールの量は、２〜３０mL、好ましくは８〜２４mL、より好ましくは１２〜２０mL、更に好ましくは１４〜１６mLである。
【００７１】
工程２）において、一定温度は２０℃〜６０℃、好ましくは３０℃〜５０℃、より好ましくは３５℃〜４５℃、更に好ましくは４０℃である。
【００７２】
また、結晶形Ｅを含む結晶組成物が提供される。ある実施態様において、結晶組成物の重量に基づいて、結晶形Ｅは、５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、そして、最も好ましくは９５％以上である。結晶組成物はまた、結晶形Ｅに加えて、他の結晶形若しくは非晶形の式Ｉで示される化合物若しくはその塩、又はこれらの物質以外の不純物を含むこともできる。
【００７３】
医薬組成物及び投与
有効量の、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩；結晶形Ｃ、若しくは結晶形Ｃを含む結晶組成物；結晶形Ｄ、若しくは結晶形Ｄを含む結晶組成物；又は結晶形Ｅ、若しくは結晶形Ｅを含む結晶組成物、或いはそれらの任意の組合せを含む医薬組成物が提供される。更に、医薬組成物はまた、薬学的に許容し得る担体、賦形剤及び／又は媒体を含んでもよいし、含まなくともよい。
【００７４】
本発明による化合物は、純粋な形態又は好適な医薬組成物の形態で投与され、これは、同様の用途を有する薬剤の任意の許容し得る投与様式によって実施することができる。本発明による医薬組成物は、本発明による化合物又はその塩と共に、好適な薬学的に許容し得る担体を合わせることにより調製してもよく、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、乳剤、懸濁剤、液剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、ミクロスフェア剤、エアロゾル剤などのような、固体、半固体、液体又は気体製剤に処方してもよい。
【００７５】
本発明による医薬組成物は、従来の混合、溶解、造粒、糖衣コーティング、研和、乳化、凍結乾燥などのような、当該分野において周知のプロセスにより調製してもよい。
【００７６】
本発明による化合物又はその医薬組成物の典型的な投与経路は、限定されるものではないが、経口の、直腸内の、経粘膜の、経腸の投与、又は局所の、経皮の、吸入の、非経口の、舌下の、膣内の、鼻内の、眼内の、腹腔内の、筋肉内の、皮下の、静脈内の投与を含む。
【００７７】
好ましい実施態様において、医薬組成物は、経口投与形態である。経口投与に関して、活性化合物は、当該分野において周知の薬学的に許容し得る担体、賦形剤及び／又は媒体と混合されて、医薬組成物を調製してもよい。担体、賦形剤及び媒体は、本発明による化合物を、患者への経口投与に有用な錠剤、丸剤、トローチ剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、スラリー剤、懸濁剤などへと調製するために使用され得る。
【００７８】
固体の経口組成物は、従来の混合、充填又は圧縮プロセスによって、例えば、以下のプロセス：活性化合物を固体賦形剤と混合し、得られた混合物を場合により粉砕し、必要に応じて他の適切な補助剤を添加し、次に、錠剤又は糖衣錠のコアを得るために混合物を顆粒へと加工することによって調製してもよい。適切な賦形剤は、限定されるものではないが、充填剤（乳糖、ショ糖、マンニトール又はソルビトールを含む糖；微結晶性セルロースのようなセルロース調製物、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン及びジャガイモデンプン；並びにシリカゲル、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び／又はポリビニルピロリドンのような他の物質など）；崩壊剤（カルボキシメチルスターチナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン、寒天又はアルギン酸など）を含む。また、アルギン酸ナトリウムのような塩を使用してもよい。糖衣錠のコアは、一般的な製剤実務において周知のプロセス（特に、腸溶性コーティングによって）を介して、場合によりコーティングしてもよい。
【００７９】
有益な効果
本発明による式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃ、結晶形Ｄ及び結晶形Ｅは、高純度、高結晶性及び良好な安定性という利点を有しており、これらは、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）関連疾患を予防又は処置するための医薬の製造に好適である。
【００８０】
本発明の技術的な解決は、以下の段落［１］〜［４４］により説明される：
［１］式Ｉ：
【化４】
2019505532.tif 000009
で示される化合物のマレイン酸塩。
［２］式Ｉで示される化合物対マレイン酸のモル比が１：１〜３、好ましくは１：２であることを特徴とする、段落［１］に記載の式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩。
［３］有効量の段落［１］又は［２］に記載の式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩を含む、医薬組成物。
［４］Ｔｏｌｌ様受容体７関連疾患を処置するための医薬を製造するための、段落［１］若しくは［２］に記載の式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩、又は段落［３］に記載の医薬組成物の使用。
［５］疾患が、ウイルス感染症、特に、肝炎ウイルス感染症（例えば、Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎ウイルス感染症）であることを特徴とする、段落［４］に記載の使用。
［６］Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ＝７．６°±０．２°、９．９°±０．２°、１７．８°±０．２°、２２．８°±０．２°、２４．２°±０．２°、２６．３°±０．２°に回折ピークを有することを特とする、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃ。
［７］Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ＝５．６°±０．２°、７．６°±０．２°、９．９°±０．２°、１７．８°±０．２°、１９．８°±０．２°、２２．８°±０．２°、２４．２°±０．２°、２５．０°±０．２°、２６．３°±０．２°に回折ピークを有することを特徴とする、段落［６］に記載の結晶形Ｃ。
［８］Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ＝５．６°±０．２°、６．０°±０．２°、７．６°±０．２°、９．９°±０．２°、１２．０°±０．２°、１５．３°±０．２°、１７．８°±０．２°、１８．５°±０．２°、１９．８°±０．２°、２０．４°±０．２°、２２．８°±０．２°、２３．１°±０．２°、２４．２°±０．２°、２４．７°±０．２°、２５．０°±０．２°、２６．３°±０．２°に回折ピークを有することを特徴とする、段落［７］に記載の結晶形Ｃ。
［９］実質的に図１に示されるＸ線粉末回折パターンを有することを特徴とする、段落［６］〜［８］のいずれか一つに記載の結晶形Ｃ。
［１０］ＤＳＣにより特徴付けられる場合、初期温度が９７．０℃±５℃であり、かつピーク温度が１０６．０℃±５℃であることを特徴とする、段落［６］〜［９］のいずれか一つに記載の結晶形Ｃ。
［１１］以下の工程：
１）溶媒中に式Ｉで示される化合物を溶解する（好ましくは、溶解を促進するために加熱する）こと；
２）マレイン酸を添加すること；
３）結晶化のために冷却して、濾過し、洗浄し、そして、乾燥して、結晶形Ｃを得ること
を含む、段落［６］〜［１０］のいずれか一つに記載の結晶形Ｃを調製するためのプロセス。
［１２］工程１）における溶媒が、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、第３級ブタノール、アセトン、酢酸エチル及びそれらの混合溶媒からなる群より選択されることを特徴とする、段落［１１］に記載の調製プロセス。
［１３］溶媒が、エタノールであることを特徴とする、段落［１２］に記載の調製プロセス。
［１４］工程１）において、式Ｉで示される化合物 １mol当たりに添加される溶媒の量が、０．２〜８Ｌ、好ましくは０．３〜４Ｌ、より好ましくは０．５〜２Ｌ、最も好ましくは１Ｌであることを特徴とする、段落［１１］〜［１３］のいずれか一つに記載の調製プロセス。
［１５］工程２）において、式Ｉで示される化合物 １mol当たりに添加されるマレイン酸の量が、１．０〜４．０mol、好ましくは１．６〜３．０mol、より好ましくは２．０〜２．４mol、最も好ましくは２．２molであることを特徴とする、段落［１１］〜［１４］のいずれか一つに記載の調製プロセス。
［１６］工程１）において、加熱温度が、４０℃〜９０℃、好ましくは５０℃〜８０℃、より好ましくは７０℃〜８０℃であり得ることを特徴とする、段落［１１］〜［１４］のいずれか一つに記載の調製プロセス。
［１７］結晶組成物であって、該結晶組成物の重量に基づいて、段落［６］〜［１０］のいずれか一つに記載の結晶形Ｃが、５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、そして、最も好ましくは９５％以上であることを特徴とする、結晶組成物。
［１８］有効量の段落［６］〜［１０］のいずれか一つに記載の結晶形Ｃ又は段落［１７］に記載の結晶組成物を含む、医薬組成物。
［１９］Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）関連疾患を処置するための医薬を製造するための、段落［６］〜［１０］のいずれか一つに記載の結晶形Ｃ若しくは段落［１７］に記載の結晶組成物又は段落［１８］に記載の医薬組成物の使用。
［２０］疾患が、ウイルス感染症、特に、肝炎ウイルス感染症（例えば、Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎ウイルス感染症）であることを特徴とする、段落［１９］に記載の使用。
［２１］Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ＝５．１°±０．２°、９．５°±０．２°、１１．２°±０．２°、１７．６°±０．２°、２０．２°±０．２°、２３．０°±０．２°に回折ピークを有することを特徴とする、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｄ。
［２２］Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ＝５．１°±０．２°、９．５°±０．２°、１１．２°±０．２°、１７．６°±０．２°、２０．２°±０．２°、２０．７°±０．２°、２３．０°±０．２°、２３．７°±０．２°に回折ピークを有することを特徴とする、段落［２１］に記載の結晶形Ｄ。
［２３］Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ＝５．１°±０．２°、５．６°±０．２°、９．５°±０．２°、１１．２°±０．２°、１６．９°±０．２°、１７．６°±０．２°、２０．２°±０．２°、２０．７°±０．２°、２２．６°±０．２°、２３．０°±０．２°、２３．７°±０．２°、２４．５°±０．２°に回折ピークを有することを特徴とする、段落［２２］に記載の結晶形Ｄ。
［２４］結晶形Ｄが、実質的に図２に示されるＸ線粉末回折パターンを有することを特徴とする、段落［２１］〜［２３］のいずれか一つに記載の結晶形Ｄ。
［２５］ＤＳＣにより特徴付けられる場合、初期温度が９８．３℃±５℃であり、かつピーク温度が１１０．１℃±５℃であることを特徴とする、段落［２１］〜［２４］のいずれか一つに記載の結晶形Ｄ。
［２６］以下の工程：
１）式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃをアセトン溶媒中に入れて懸濁液を形成すること；
２）一定温度で振盪すること；
３）遠心分離し、洗浄し、そして、乾燥して、結晶形Ｄを得ること
を含む、段落［２５］に記載の結晶形Ｄを調製するためのプロセス。
［２７］工程１）において、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃ １ｇ当たりに添加されるアセトンの量が、２〜３０mL、好ましくは８〜２４mL、より好ましくは１２〜２０mL、最も好ましくは１４〜１６mLであることを特徴とする、段落［２１］〜［２６］のいずれか一つに記載の調製プロセス。
［２８］工程２）において、一定温度が、２０℃〜６０℃、好ましくは３０℃〜５０℃、より好ましくは３５℃〜４５℃、最も好ましくは４０℃であることを特徴とする、段落［２１］〜［２７］のいずれか一つに記載の調製プロセス。
［２９］結晶組成物であって、該結晶組成物の重量に基づいて、段落［２１］〜［２５］のいずれか一つに記載の結晶形Ｄが、５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、そして、最も好ましくは９５％以上であることを特徴とする、結晶組成物。
［３０］有効量の段落［２１］〜［２５］のいずれか一つに記載の結晶形Ｄ又は段落［２９］に記載の結晶組成物を含む、医薬組成物。
［３１］Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）関連疾患を処置するための医薬を製造するための、段落［２１］〜［２５］のいずれか一つに記載の結晶形Ｄ若しくは段落［２９］に記載の結晶組成物又は段落［３０］に記載の医薬組成物の使用。
［３２］疾患が、ウイルス感染症、特に、肝炎ウイルス感染症（例えば、Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎ウイルス感染症）であることを特徴とする、段落［３１］に記載の使用。
［３３］Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ＝４．９°±０．２°、５．３°±０．２°、９．０°±０．２°、１６．５°±０．２°、１９．３°±０．２°に回折ピークを有することを特徴とする、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｅ。
［３４］Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ＝４．９°±０．２°、５．３°±０．２°、６．７°±０．２°、９．０°±０．２°、１０．８°±０．２°、１６．５°±０．２°、１９．３°±０．２°に回折ピークを有することを特徴とする、段落［３３］に記載の結晶形Ｅ。
［３５］Ｘ線粉末回折パターンにおいて、２θ＝４．９°±０．２°、５．３°±０．２°、６．７°±０．２°、９．０°±０．２°、１０．８°±０．２°、１６．２°±０．２°、１６．５°±０．２°、１９．３°±０．２°、２２．０°±０．２°、２２．６°±０．２°、２５．９°±０．２°に回折ピークを有することを特徴とする、段落［３４］に記載の結晶形Ｅ。
［３６］結晶形Ｅが、実質的に図３に示されるＸ線粉末回折パターンを有することを特徴とする、段落［３３］〜［３５］のいずれか一つに記載の結晶形Ｅ。
［３７］ＤＳＣにより特徴付けられる場合、初期温度が８５．７℃±５℃であり、かつピーク温度が９７．５℃±５℃であることを特徴とする、段落［３３］〜［３６］のいずれか一つに記載の結晶形Ｅ。
［３８］以下の工程：
１）式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃをイソプロパノール溶媒中に入れて懸濁液を形成すること；
２）一定温度で振盪すること；
３）遠心分離し、洗浄し、そして、乾燥して、結晶形Ｅを得ること
を含む、段落［３３］〜［３７］のいずれか一つに記載の結晶形Ｅを調整するためのプロセス。
［３９］工程１）において、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃ １ｇ当たりに添加されるイソプロパノールの量が、２〜３０mL、好ましくは８〜２４mL、より好ましくは１２〜２０mL、更に好ましくは１４〜１６mLであることを特徴とする、段落［３８］に記載の調製プロセス。
［４０］工程２）において、一定温度が、２０℃〜６０℃、好ましくは３０℃〜５０℃、より好ましくは３５℃〜４５℃、更に好ましくは４０℃であることを特徴とする、段落［３８］又は［３９］に記載の調製プロセス。
［４１］結晶組成物であって、該結晶組成物の重量に基づいて、段落［３３］〜［３７］のいずれか一つに記載の結晶形Ｅが、５０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、そして、最も好ましくは９５％以上であることを特徴とする、結晶組成物。
［４２］有効量の段落［３３］〜［３７］のいずれか一つに記載の結晶形Ｅ又は段落［４１］に記載の結晶組成物を含む、医薬組成物。
［４３］Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）関連疾患を処置するための医薬を製造するための、段落［３３］〜［３７］のいずれか一つに記載の結晶形Ｅ若しくは段落［４１］に記載の結晶組成物又は段落［４２］に記載の医薬組成物の使用。
［４４］疾患が、ウイルス感染症、特に、肝炎ウイルス感染症（例えば、Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎ウイルス感染症）であることを特徴とする、段落［４３］に記載の使用。
【実施例】
【００８１】
本明細書中で、以下の略語を使用する：ＳＥＭ−Ｃｌ：２−（トリメチルシリル）エトキシメチルクロリド；ＳＥＭ：２−（トリメチルシリル）エトキシメチル；ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；ｎ−ＢｕＯＨ：ｎ−ブタノール；ＮＨ３・Ｈ２Ｏ：アンモニア水；Ｎａ：ナトリウム；ＸＲＰＤ：Ｘ線粉末回折；ＤＳＣ：示差熱分析。
【００８２】
本発明において、Ｘ線回折パターンを以下のとおり測定した：装置：Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ ＡＤＶＡＮＣＥ Ｘ線回折装置；方法：ターゲット：Ｃｕ：Ｋ−アルファ；波長λ＝１．５４１７９Å；電圧：４０kV；電流：４０mA；走査範囲：４〜４０°；試料回転速度：１５rpm；走査速度：１０°／分。
【００８３】
本明細書中で使用される溶媒は、市販されており、更に精製することなく使用することができる。調製例における合成反応は、一般的に、不活性窒素雰囲気下、無水溶媒中で行われる。プロトン磁気共鳴のデータは、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＩＩＩ ４００（４００ＭＨｚ）分光計で記録され、化学シフトは、テトラメチルシラン低磁場で（ｐｐｍ）として示される。質量分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ １２００ ｐｌｕｓ ６１１０（＆１９５６Ａ）で決定される。ＬＣ／ＭＳ又はＳｈｉｍａｄｚｕ ＭＳには、ＤＡＤ：ＳＰＤ−Ｍ２０Ａ（ＬＣ）及びＳｈｉｍａｄｚｕ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ２０２０検出器が含まれる。質量分析計は、正又は負モードで操作されるエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）を備えている。
【００８４】
調製例１：
２−ブトキシ−７−（４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン マレイン酸塩の調製
【００８５】
式ＩＩＩ：
２，４−ジクロロ−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン
【化５】
2019505532.tif 000010
【００８６】
式ＩＩで示される化合物（２，４−ジクロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン）（４．００kg、２１．２８mol）をＤＭＦ（２０．００Ｌ）中に溶解し、ＤＩＰＥＡ（２．５８kg、２０．００mol）を室温（２５℃）で何回かに分けて添加し、続いて、３０分間撹拌した。反応液を氷浴で０℃まで冷却し、次に、ＳＥＭ−Ｃｌ（４．００kg、２４．００mol）を１秒当たり１〜２滴の滴下速度で５時間かけてゆっくり滴下した。添加後、反応液を０℃で４時間撹拌した。反応をＨＰＬＣによりモニターした。完了後、反応液をクエンチし、水（７０Ｌ）で希釈して、次に、酢酸エチル（１５Ｌ×３）で抽出した。合わせた有機相を１M 塩酸水溶液（５Ｌ×２）及びブライン（７Ｌ×２）で連続して洗浄し、溶媒を減圧下での蒸留により除去して、式ＩＩＩで示される化合物（６．４０kg、２０．１１mol、収率 ９４．５０％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.24 - 8.35 (m, 1 H), 6.70 - 6.85 (m, 1 H), 5.77 (s, 2 H), 3.45 - 3.57 (m, 2 H), 0.74 - 0.86 (m, 2 H), 0.00 (s, 9 H).
【００８７】
式ＩＶ：
２−クロロ−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【化６】
2019505532.tif 000011
【００８８】
式ＩＩＩで示される化合物（１．６０kg、５．０３mol）を１０Ｌクレーブ内のイソプロパノール（１．６０Ｌ）中に溶解した。アンモニア水（４Ｌ）を室温（２５℃）で一度に添加して、反応混合物を９５℃で７時間撹拌した。反応をＨＰＬＣによりモニターした。完了後、反応液を室温まで放冷し、ブフナーロートに通して濾過し、暗褐色の固体を得た。固体を酢酸エチル／ｎ−ヘプタン（１／１、５Ｌ×２）及び酢酸エチル（４Ｌ）で連続してスラリー化して、褐色の固体として式ＩＶで示される化合物（１．２５kg、４．１８mol、収率 ８３．１％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.61 - 7.77 (m, 1 H), 6.97 - 7.19 (m, 2 H), 6.28 - 6.38 (m, 1 H), 5.54 - 5.67 (m, 2 H), 3.43 - 3.53 (m, 2 H), 0.76 - 0.91 (m, 2 H), 0.07 (s, 9 H).
【００８９】
式Ｖ：
２−ブトキシ−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【化７】
2019505532.tif 000012
【００９０】
ｎ−ＢｕＯＨ（１７．０Ｌ）に、窒素下で金属ナトリウム（５２５．０５ｇ、２２．８４mol）を何回かに分けてゆっくり添加した。添加後、系の温度を６０℃まで上昇させ、金属ナトリウムが完全に溶解するまで該温度で撹拌を継続的に行った。次に、系を２５℃まで冷却して、式ＩＶで示される化合物（１．９５kg、６．５３mol）を何回かに分けて添加した。撹拌しながら均質に混合後、反応混合物を９０℃で８時間、継続的に撹拌した。反応をＨＰＬＣによりモニターした。完了後、反応混合物を、２５℃まで自然に放冷し、飽和塩化アンモニウム水溶液（３０Ｌ）中にゆっくり注いだ。次に、反応混合物を酢酸エチル（１５Ｌ×３）で抽出して、合わせた有機相をブライン（２０Ｌ×２）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、濾過した。溶媒を減圧下で留去後、残渣をｎ−ヘプタン（４Ｌ）中でスラリー化して、固体を濾過により分離し、酢酸エチル（５Ｌ）中でスラリー化して、黄白色の固体として式Ｖで示される化合物（１．５３kg、４．５５mol、６９．７％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.49 - 7.54 (m, 1 H), 6.54 - 6.62 (m, 2 H) , 6.15 - 6.20 (m, 1 H) , 5.54 (s, 2 H) , 4.10 - 4.22 (m, 2 H) , 3.42 - 3.55 (m, 2 H) , 1.58 - 1.73 (m, 2 H) , 1.35 - 1.47 (m, 2 H) , 0.90 - 0.96 (m, 3 H) , 0.83 - 0.89 (m, 2 H) , 0.05 (s, 9 H).
【００９１】
式ＶＩ：２−ブトキシ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【化８】
2019505532.tif 000013
【００９２】
式Ｖで示される化合物（１．１０kg、３．２７mol）をＴＦＡ（５．５０Ｌ）中に溶解して、反応液を２５℃で１６時間撹拌した。反応をＨＰＬＣによりモニターした。完了後、ＴＦＡを減圧下で蒸留により除去して、残渣をメタノール（１．２Ｌ）及び氷水（１．２Ｌ）中に溶解した。均一な撹拌下で、濃アンモニア水により系のｐＨを１２に調整した。混合物を２時間撹拌して、沈殿物を溶液から継続的に沈殿させた。濾過後、白色固体としての濾滓（filter cake）を１５％アンモニア水（１．２Ｌ×３）及び酢酸エチル（４Ｌ）で連続してスラリー化して、白色固体として式ＶＩで示される化合物（５５０．００ｇ、２．６７mol、８１．７％）を得た。
1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ 7.37 (d, J=2.89 Hz, 1 H), 6.29 (d, J=3.01 Hz, 1 H), 4.27 (t, J=6.53 Hz, 2 H), 1.75 (d, J=7.91 Hz, 2 H), 1.44 - 1.61 (m, 2 H), 1.00 (t, J=7.40 Hz, 3 H).
【００９３】
式ＶＩＩ：
４−（（４−アミノ−２−ブトキシ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−ヒドロキシメチル）ベンズアルデヒド
【化９】
2019505532.tif 000014
【００９４】
３口フラスコに、テレフタルアルデヒド（７９０．６４mg、５．８２mmol）及びイソプロパノール（１０mL）を添加し、２−ブトキシ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン（１．００ｇ、４．８５mmol）を撹拌しながら添加し、系を０℃まで冷却して、更に１０分間撹拌した。精製水（１０mL）及び炭酸カリウム（８０４．１７mg、５．８２mmol）を添加し、ＬＣＭＳによるモニターをしながら、反応物が枯渇するまで２５℃で１６時間反応させた。反応が完了した後に固体が析出した。濾過後、得られた固体を精製水（２０mL）及び（酢酸エチル／ｎ−ヘプタン＝１／２０）（３０mL）で続けてスラリー化し、濾過し、乾燥して、黄色の固体として式ＶＩＩで示される化合物（１．５０ｇ、４．４１mmol、収率 ９０．９％）を得た。
1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ 9.94 (s, 1 H), 7.86 (d, J = 8.16 Hz, 2 H), 7.72 (d, J = 8.16 Hz, 2 H), 7.12 - 7.17 (m, 1 H), 6.19 (s, 1 H), 4.28 (t, J=6.53 Hz, 2 H), 1.68 - 1.77 (m, 2 H), 1.44 - 1.54 (m, 2 H), 0.97 (t, J=7.34 Hz, 3 H).
【００９５】
式ＶＩＩＩ：
（４−アミノ−２−ブトキシ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）（４−（ピロリジン−１−イルメチル）フェニル）メタノール
【化１０】
2019505532.tif 000015
【００９６】
３０Ｌ反応器に、式ＶＩＩで示される化合物（４５０．０ｇ、１．３２mol）及びイソプロパノール（４．５Ｌ）を添加して、混合物を５分間撹拌した。次に、氷酢酸（１１９．０ｇ、１．９８mol）を添加して、撹拌しながら温度を０〜１０℃まで下げた。ピロリジン（１１２．４ｇ、１．５８mol）を１０℃未満の温度で滴下した。添加後、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（４２０．０ｇ、１．９８mol）を何回かに分けて添加して、液体クロマトグラフィーによるモニターをしながら、原料が枯渇するまで１０〜２０℃で３時間反応させた。反応完了後、精製水（５Ｌ）を添加し、溶液の温度を約−１０℃まで下げ、添加中の溶液温度を０℃未満にしながら１５％アンモニア水（１２Ｌ）を溶液に添加した。撹拌下で固体が析出した。濾過を行い、得られた濾滓を水（２Ｌ）及び酢酸エチル（２Ｌ×２）でスラリー化した。濾過を行い、減圧下、４０℃で１２時間乾燥を行い、黄色固体として式ＶＩＩＩで示される化合物（４６５．０ｇ、１．１８mol、収率 ８９．４％、水分 ０．９％）を得た。
1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ 7.46 (d, J=7.91 Hz, 1 H), 7.29 (d, J = 8.03 Hz, 1 H), 7.09 (s, 1 H), 6.12 (s, 1 H), 4.29 (t, J = 6.53 Hz, 2 H), 3.60 (s, 2 H), 2.52 (br. s., 4 H), 1.66 - 1.83 (m, 6 H), 1.49 (d, J = 7.53 Hz, 2 H), 0.98 (t, J = 7.40 Hz, 3 H).
【００９７】
式Ｉ：
２−ブトキシ−７−（４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【化１１】
2019505532.tif 000016
【００９８】
２０Ｌクレーブに、式ＶＩＩＩで示される化合物（４４０．０ｇ、１．１１mol）及びジクロロメタン（７．０Ｌ）を添加して、撹拌しながら系の温度を−１５℃未満まで下げた。系にトリエチルシラン（８８０mL、５．５５mol）を滴下後、添加中の温度を−１０℃未満に維持しながらトリフルオロ酢酸（８８０mL）を継続的に滴下した。添加後、反応を０℃で２時間行い、原料点（raw material point）が消失するまで液体クロマトグラフィーによりモニターした。反応完了後、反応液を濃縮乾固して、酢酸エチル（２．２Ｌ）を溶液に添加した。撹拌を行って温度を０℃未満まで下げた。次に、飽和炭酸ナトリウム溶液を添加してｐＨ９〜１０に溶液を調整し、その間、系の温度を１０℃未満に維持した。濾過を行い、得られた濾滓を水（２．２Ｌ）でスラリー化した。濾過を行い、減圧下で乾燥を行い、白色固体として式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩（５５０ｇ）を得た。
エタノール（１．６Ｌ）に、白色固体としての式Ｉで示される化合物のトリフルオロ酢酸塩（５２５ｇ）を添加して、撹拌しながら系の温度を約０℃まで下げた。次に、１mol/L 水酸化ナトリウム溶液（２．２Ｌ）を添加した。濾過を行い、得られた濾滓を精製水（２．５Ｌ）でスラリー化した。濾過を行い、減圧下で乾燥を行い、固体として式Ｉで示される化合物（３８０．０ｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.22 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.04 (s, 1H), 4.32 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.99 (s, 2H), 3.60 (s, 2H), 2.55 - 2.52 (m, 4H), 1.85 - 1.71 (m, 6H), 1.55-1.48 (m, 2H), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
【００９９】
実施例１：２−ブトキシ−７−（４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミンのマレイン酸塩の結晶形Ｃの調製
エタノール（１０mL）に、式Ｉで示される化合物（３．８０ｇ、１０mmol）を添加し、これを加熱して溶解した。次に、マレイン酸（２．５５ｇ、２２mmol）を溶液に添加し、溶液が透明になるまで加熱しながら撹拌を続けた。次に、溶液を室温まで放冷し、１〜２時間静置した。沈殿物を濾過し、固体を、減圧下、オイルポンプで乾燥して、固体として式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃを得た。得られたマレイン酸塩において、式Ｉで示される化合物対マレイン酸のモル比は１：２であった。
ＸＲＰＤは、以下のとおり測定された：装置：Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ ＡＤＶＡＮＣＥ Ｘ線回折装置；方法：ターゲット：Ｃｕ：Ｋ−アルファ；波長λ＝１．５４１７９Å；電圧：４０kV；電流：４０mA；走査範囲：４〜４０°；試料回転速度：１５rpm；走査速度：１０°／分。
得られた化合物の結晶は、実質的に図１に示される回折ピークを有していた。
【０１００】
実施例２：２−ブトキシ−７−（４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミンのマレイン酸塩の結晶形Ｄの調製
アセトン（０．８mL）に、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃ（５０mg）を添加して懸濁液を形成した。懸濁液試料をサーモスタット（４０℃）上で２日間（暗所で）振盪した。残留固体を遠心分離し、４０℃の減圧オーブン中で一晩乾燥して、固体として式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｄを得た。得られたマレイン酸塩において、式Ｉで示される化合物対マレイン酸のモル比は１：２であった。
ＸＲＰＤは、以下のとおり測定された：装置：Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ ＡＤＶＡＮＣＥ Ｘ線回折装置；方法：ターゲット：Ｃｕ：Ｋ−アルファ；波長λ＝１．５４１７９Å；電圧：４０kV；電流：４０mA；走査範囲：４〜４０°；試料回転速度：１５rpm；走査速度：１０°／分。
得られた化合物の結晶は、実質的に図２に示される回折ピークを有していた。
【０１０１】
実施例３：２−ブトキシ−７−（４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−アミンのマレイン酸塩の結晶形Ｅの調製
イソプロパノール（０．８mL）に、式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｃ（５０mg）を添加して懸濁液を形成した。懸濁液試料をサーモスタット（４０℃）上で２日間（暗所で）振盪した。残留固体を遠心分離し、４０℃の減圧オーブン中で一晩乾燥して、固体として式Ｉで示される化合物のマレイン酸塩の結晶形Ｅを得た。得られたマレイン酸塩において、式Ｉで示される化合物対マレイン酸のモル比は１：２であった。
ＸＲＰＤは、以下のとおり測定された：装置：Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ ＡＤＶＡＮＣＥ Ｘ線回折装置；方法：ターゲット：Ｃｕ：Ｋ−アルファ；波長λ＝１．５４１７９Å；電圧：４０kV；電流：４０mA；走査範囲：４〜４０°；試料回転速度：１５rpm；走査速度：１０°／分。
得られた化合物の結晶は、実質的に図３に示される回折ピークを有していた。
【０１０２】
実施例４：高温安定性試験
実施例１〜３で調製された結晶形を、「医薬品成分及び医薬品の安定性試験ガイドライン（Guidelines for the Stability Test of Pharmaceutical Ingredients and Pharmaceutical Preparations）」（Chinese Pharmacopoeia 2010 Appendix XIXC）により、高温条件下での加速試験において安定性について試験した。
【０１０３】
実施例１〜３で調製された結晶形Ｃ、Ｄ及びＥを、それぞれ６０℃の開口している清潔な容器に入れた。試料は、それぞれ１０日目、２０日目及び３０日目に試験のために採取した。結果を０日目の初期試験結果と比較した。
【０１０４】
実施例５：高湿度安定性試験
実施例１〜３で調製された結晶形を、「医薬品成分及び医薬品の安定性試験ガイドライン」（Chinese Pharmacopoeia 2010 Appendix XIXC）により、高湿度条件下での加速試験において、安定性について試験した。
【０１０５】
実施例１〜３で調製された結晶形Ｃ、Ｄ及びＥを、４０℃／７５％湿度（開放）の条件下、恒温恒湿槽中で加速試験に付した。試料は、それぞれ３０日目、６０日目及び９０日目に試験のために採取した。結果を０日目の初期試験結果と比較した。
【０１０６】
実施例６：光安定性
実施例１〜３で調製された結晶形を、「医薬品成分及び医薬品の安定性試験ガイドライン」（Chinese Pharmacopoeia 2010 Appendix XIXC）により、光条件下で、安定性について試験した。
【０１０７】
実施例１〜３で調製された結晶形Ｃ、Ｄ及びＥを、それぞれ５０００Lx±５００Lxの照明環境に置いた。試料を５日目、１０日目及び３０日目に採取した。試験結果を０日目の初期試験結果と比較した。
【０１０８】
薬理活性の実施例
効能実施例１：Ｔｏｌｌ様受容体７及びＴｏｌｌ様受容体８のインビトロ受容体結合活性スクリーニング
【０１０９】
試薬：
ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ７細胞及びＨＥＫ−Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ８細胞（InvivoGenから入手可能）
ＤＭＥＭ培地
熱非働化ウシ胎児血清
抗マイコプラズマ試薬 Ｎｏｒｍｏｃｉｎ（商標）
ブレオマイシン
ブラストサイジン
【０１１０】
使用されたＧＳ−９６２０及びＲ８４８の構造は以下のとおりであるが、ＧＳ−９６２０の調製は、米国特許出願公開第２０１０／０１４３３０１号明細書に開示されたプロセスを参照することができ；Ｒ８４８は、ＡＢＧＥＮＴ（ＩＭＧ−２２０８、仕様：０．５mg）から市販されていた。
【化１２】
2019505532.tif 000017
【０１１１】
スキーム：
１．９６ウェル化合物プレートの調製：
１０mmol/Lの濃度で開始して、液体ワークステーションＰＯＤを用いて化合物をＤＭＳＯで３倍に勾配希釈し、１０点希釈した（第２カラム〜第１１カラム、各点はデュプリケイト）。第１２カラムでは、５mg/mL 陽性化合物Ｒ８４８（１μL）を陽性対照として添加した；そして、第１カラムでは、ＤＭＳＯ（１μL）を陰性対照として添加した。各ウェルは、ＤＭＳＯ（１μL）を含有していた。
２．培養フラスコ中の細胞を収集し、細胞密度を２５０，０００細胞／mLに希釈した。
３．調製した化合物プレートに細胞懸濁液（５０，０００細胞／ウェル）（２００μL）を添加し、各ウェル中のＤＭＳＯの最終濃度を０．５％とした。
４．細胞及び化合物を含有する培養プレートを、ＣＯ２インキュベーター中、３７℃、５％ ＣＯ２で２４時間インキュベートした。
５．２４時間のインキュベーション後、上清（２０μL）を各ウェルから９６ウェル透明アッセイプレートへと取り出した。アッセイプレートの各ウェルにＱｕａｎｔｉ−Ｂｌｕｅ試薬（１８０μL）を添加して、プレートをインキュベーター中、３７℃、５％ ＣＯ２で１時間インキュベートした。
６．１時間後、Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ ＯＤ６５０を用いて上清（２０μL）中のアルカリホスファターゼの含量を測定した。
７．Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて各化合物のＥＣ５０を得た。
結果を表１に示した：
【０１１２】
【表４】
2019505532.tif 000018
【０１１３】
表１に示されるとおり、本発明による式Ｉで示される化合物は、対照（Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニスト ＧＳ−９６２０）よりも高いＴｏｌｌ様受容体７に対するインビトロ受容体結合活性、及び対照（Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニスト ＧＳ−９６２０）よりも低いＴｏｌｌ様受容体８に対するインビトロ受容体結合活性を示した。
本発明の化合物は、様々な受容体に関して選択性の明白な差を有しており、その効果は先行技術より優れている。
【０１１４】
効能実施例２：末梢血単核球試験スキーム
この実施例の目的は、式Ｉで示される化合物でヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を刺激した２４時間後のサイトカインの発現レベルを測定することである。
【０１１５】
細胞上清を希釈せずにアッセイし、ＩＦＮ−αのレベルを直接測定した。式Ｉで示される化合物を最初に２０mM ＤＭＳＯストック溶液中に調合して、細胞培地で１０倍に勾配希釈して総数１１の希釈点とした。９希釈点の化合物（最高濃度は２００μmol/Lであった）を各ウェルに５０μLで９６ウェルプレートに添加した。新鮮なヒト末梢血単核球を各ウェルに１５０μLで播種して４５０，０００細胞を含むようにした。細胞培養プレートをインキュベーター中、３７℃、５％ ＣＯ２で２４時間インキュベートした。インキュベーション後、培養プレートを１２００rpmで５分間遠心分離して上清を収集し、そして、測定のために−２０℃で保存した。サイトカインの測定は、フローサイトメーター上でＢＤ−ＰｈａｒｍｉｎｇｅｎのＣｙｔｏｍｅｔｒｉｃ Ｂｅａｄ Ａｒｒａｙ（ＣＢＡ）を用いて実行した。上記の測定法を用いて、３０pg/mLのＩＦＮ-αの産生を刺激する最低薬物濃度を、サイトカイン刺激試験におけるＭＥＣ値とした。結果を表２に示した。
【０１１６】
【表５】
2019505532.tif 000019
【０１１７】
結論：対照（ＧＳ−９６２０）と比較して、本発明の式Ｉで示される化合物は、より良好なＰＢＭＣのインビトロ ＩＦＮ−α誘導活性と、同等のＴＮＦ−α誘導活性を示した。
【図１】
2019505532.tif 000024
【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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2019505532.tif 000029
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