【手続補正書】
【提出日】平成19年2月22日(2007.2.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】１つの成分が他の成分に結合する量を判定する非分離アッセイを実施する方法であって、
溶液に第一標識成分を提供するステップと、
複数のビーズ、細胞、表面又はウェルからなるアレイを提供し、第二成分を前記複数のビーズ上、表面上、細胞内又はウェル内に配置するステップと、
前記アレイを前記溶液に浸すステップと、
前記複数のビーズ、細胞、表面又はウェルを照射する間、光が溶液を透過するように、照射光線によって前記アレイを走査するステップと、
前記照射中に少なくとも一つの波長で前記複数のビーズ、細胞、表面又はウェルの各々及び前記溶液からの受光強度を判定するステップと、
前記受光強度のピーク値、前記ピーク値のプロット下の領域、又は第二成分位置の３Ｄ強度プロット下の前記領域を用いて、前記第二成分に対する前記第一標識成分の結合量を判定するステップと、
前記第二成分の前強度値及び後強度値、前記アレイの走査中に得られた最小信号、又は前記走査中に得られた平均バックグラウンド値から、前記溶剤中の前記第一標識成分の量を判定するステップと、
ｉ）前記第一標識成分の前記第二成分への結合量の、ｉｉ）前記溶剤中の前記第一標識成分の量、に対する比率を判定するステップと、を有することを特徴とする方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、前記照射光は、レーザ光線によって生ずることを特徴とする方法。
【請求項３】
請求項１又は請求項２に記載の方法において、前記受光された光は蛍光によって生じた光であることを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の方法において、複数の波長の光を受光することを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の方法において、前記受光強度は、ｉ）各ビーズ、細胞又はウェルの直径及び容積、又はｉｉ）各表面の直径、及び前記ビーズ、細胞、表面又はウェルに結合した分子の数を判定するために用いられることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の方法において、前記照射光は、発光によって前記試料の上又は下から照射するように配置され、前記発光は、前記照射光が前記ビーズ、細胞、表面又はウェルと前記ビーズ、細胞、表面又はウェル上又は前記ビーズ、細胞、表面又はウェルに隣接した溶液の有意な容積との両方に照射されるようにして任意の組み合わせで試料の上又は下から検出されることを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載の方法において、前記照射光は、１回の走査が次の回の走査と重複部分を生ずるようにして直線上に前記溶液及び前記複数のビーズ、細胞、表面又はウェルを走査し、それによって受光強度の連続測定が可能となることを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載の方法において、前記受光強度の関連データは、処理すべきデータ量を減少させるために固定閾値又は可変閾値を用いてフィルタにかけられることを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載の方法において、閾値を用いて、前閾値信号試料及び後閾値信号試料が各ビーズ、細胞、表面又はウェルに隣接した遊離標識の基準として使用され得るようにバックグラウンド遊離標識信号から関連結合部位を有する複数のビーズ、細胞、表面又はウェルを単離するステップと、液体メニスカスの効果を補正するステップとを有することを特徴とする方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかに記載の方法において、フィンガ−プリント又はディスクリミナントを使用して、前記結合部位に関連した前記結合量及び前記溶液中の前記第一標識成分の量を判定する前に、バックグラウンド汚染粒子から、関連結合部位を有する複数のビーズ、細胞、表面又はウェルの集団を検出することを特徴とする方法。
【請求項１１】
溶液中の第一標識成分が複数のビーズ、細胞、表面又はウェルからなるアレイの第二成分と結合する量を判定する非分離アッセイを実施する装置であって、
前記複数のビーズ、細胞、表面又はウェルを照射する間、光が前記溶液を透過するように、照射光線（２）によって前記アレイを走査する走査手段（４，５，６）と、
前記照射中に少なくとも一つの波長で前記複数のビーズ、細胞、表面又はウェルの各々及び前記溶液からの受光強度を判定する手段（８，９，１０）と、
受光強度のピーク値、前記ピーク値のプロット下の領域、又は第二成分位置の３Ｄ強度プロット下の前記領域を用いて、前記第二成分に対する前記第一標識成分の結合量を判定する手段（１１）と、
前記第二成分の前強度値及び後強度値、前記アレイの走査中に得られた最小信号、又は前記走査中に得られた平均バックグラウンド値から、前記溶剤中の前記第一標識成分の量を判定する手段と、
ｉ）前記第一標識成分の前記第二成分への結合量の、ｉｉ）前記溶剤中の前記第一標識成分の量、に対する比率を判定する手段とを有することを特徴とする装置。
【請求項１２】
請求項１１記載の装置において、前記走査手段はレーザ光線を有することを特徴とする装置。
【請求項１３】
請求項１１又は請求項１２に記載の装置において、複数の波長からなる光を受光することを特徴とする装置。
【請求項１４】
請求項１１〜１３いずれかに記載の装置において、前記判定手段は、前記受光強度を用いて、ｉ）各ビーズ、細胞又はウェルの直径及び容積の少なくとも一つ、又はｉｉ）各表面の直径、及び前記ビーズ、細胞、表面又はウェルに結合した分子の数を判定することを特徴とする装置。
【請求項１５】
請求項１１〜１４のいずれかに記載の装置において、前記照射光は、発光によって前記試料の上又は下から照射するように配置され、前記発光は、前記照射光は前記ビーズ、細胞、表面又はウェルと前記ビーズ、細胞、表面又はウェル上又は前記ビーズ、細胞、表面又はウェルに隣接した溶液の有意な容積との両方に照射されるようにして任意の組み合わせで前記試料の上又は下から検出されることを特徴とする装置。
【請求項１６】
請求項１１〜１５のいずれかに記載の装置において、前記照射光は、１回の走査が次の回の走査と重複部分を生ずるようにして直線上に前記溶液及び複数のビーズ、細胞、表面又はウェルを走査し、それによって受光強度の連続測定が可能となることを特徴とする装置。
【請求項１７】
請求項１１〜１６のいずれかに記載の装置において、前記受光強度の関連データは、処理を要するデータ量を減少させるために固定閾値又は可変閾値の前記判定手段を用いてフィルタにかけられることを特徴とする装置。
【請求項１８】
請求項１１〜１７のいずれかに記載の装置において、前記受光した光は、前記遊離標識からの前記蛍光の実質的割合を検出可能とするような固定された又は調整可能なピンホールを介して集光されることを特徴とする装置。
【請求項１９】
請求項１０に記載の方法において、ガウスフィットを前記集合にかけ、その平均値を前記結合量及び前記溶剤中の前記第一標識成分の量を判定するのに利用することを特徴とする方法。
【請求項２０】
請求項１〜１０及び１９のいずれかに記載の方法において、ビーズ、細胞、表面又はウェル周辺の溶液中の第一標識成分の効果に対し、前記結合量の補償は、該ビーズ、セル、表面又はウェルに結合する第一標識成分の前記受光強度から溶液中の第一標識成分の前記受光強度を減算することにより得ることを特徴とする方法。
【請求項２１】
請求項２に記載の方法において、前記アレイは複数のビーズからなるアレイであり、前記アレイを構成するビーズは磁気ビーズであり、磁石は前記ビーズを焦点面に引き込むように設けられることを特徴とする方法。
【請求項２２】
請求項１１〜１８のいずれかに記載の装置において、更に、ビーズ、細胞、表面又はウェル周辺の溶液中の第一標識成分の効果に対し、前記判定された結合量を、該ビーズ、セル、表面又はウェルに結合する第一標識成分の前記受光強度から溶液中の第一標識成分の前記受光強度を減算することにより補償する手段を有することを特徴とする装置。
【請求項２３】
請求項１２に記載の装置において、前記アレイは複数のビーズからなるアレイであり、前記アレイを構成するビーズは磁気ビーズであり、磁石は前記ビーズをレーザービームの焦点面に引き込むように設けられることを特徴とする装置。
【請求項２４】
請求項１〜１０及び１９〜２１のいずれかに記載の方法において、前記アレイを構成するビーズ又は細胞の数を決定することを特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項１１〜１８、２２及び２３のいずれかに記載の装置において、更に、前記アレイを構成するビーズ又は細胞の数を決定する手段を有することを特徴とする装置。
【請求項２６】
請求項１〜１０、１９〜２１及び２４のいずれかに記載の方法において、前記結合の解離定数（Ｋｄ）は、ｉ）前記第一標識成分の前記第二成分への前記結合量の、ｉｉ）溶液中の第一標識成分の量に対する比率から決定されることを特徴とする方法。
【請求項２７】
請求項１１〜１８、２２、２３及び２５のいずれかに記載の装置において、更に、ｉ）前記第一標識成分の前記第二成分への前記結合量の、ｉｉ）溶液中の第一標識成分の量に対する比率から、前記結合の解離定数を決定する手段を有することを特徴とする装置。
【請求項２８】
請求項１〜１０、１９〜２１、２４及び２６のいずれかに記載の方法において、前記受光強度の関連データは固定閾値又は可変閾値を用いてフィルタにかけ、一つ以上のビーズ、細胞、表面又はウェルを検出することを特徴とする方法。
【請求項２９】
請求項１１〜１８、２２、２３、２５及び２７のいずれかに記載の装置において、前記受光強度の関連データは固定閾値又は可変閾値を用いてフィルタにかけ、一つ以上のビーズ、細胞、表面又はウェルを検出することを特徴とする装置。
【請求項３０】
請求項１〜１０、１９〜２１、２４、２６及び２８のいずれかに記載の方法において、前記アッセイに加えられた活性化合物による競合阻害は、ｉ）前記第一標識成分の前記第二成分への前記結合量の、ｉｉ）前記化合物を加えた際の溶液中の第一標識成分の量に対する比率の変化により決定されることを特徴とする方法。
【請求項３１】
請求項３０に記載の方法において、前記アッセイに加えられる前記活性化合物の解離定数は、前記決定された競合阻害により決定されることを特徴とする方法。
【請求項３２】
請求項１１〜１８、２２、２３、２５、２７及び２９のいずれかに記載の装置において、前記アッセイに加えられた活性化合物による競合阻害は、ｉ）前記第一標識成分の前記第二成分への前記結合量の、ｉｉ）前記化合物を加えた際の溶液中の第一標識成分の量に対する比率の変化により決定されることを特徴とする装置。
【請求項３３】
請求項３２に記載の装置において、前記アッセイに加えられる前記活性化合物の解離定数は、前記決定された競合阻害により決定されることを特徴とする装置。