【手続補正書】
【提出日】平成19年4月25日(2007.4.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の名称
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の名称】肺疾患の防止および診断のための表面活性剤タンパク質Ｄ
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  薬学的に許容可能な賦型剤との混合物としてＳＰ−Ｄタンパク質を含む、哺乳動物における肺疾患を治療するための薬理学的組成物。
【請求項２】  ＳＰ−Ｄの発現を上方調節する生物学的に活性な薬剤を含む、哺乳動物における肺疾患を治療するための薬理学的組成物。
【請求項３】  前記薬剤はＩＬ−４である、請求項２記載の薬理学的組成物。
【請求項４】  ＳＰ−Ｄを発現するベクターを含む生物学的に活性な薬剤を含む、哺乳動物における肺疾患を治療するための薬理学的組成物。
【請求項５】  前記ベクターはアデノウィルスである、請求項４記載の薬理学的組成物。
【請求項６】  前記アデノウィルスベクターはＡｄ−ｒＳＰＤである、請求項５記載の薬理学的組成物。
【請求項７】  哺乳動物のＳＰ−Ｄタンパク質、または肺疾患の兆候を減少させるかまたは肺疾患を防止するのに有効な量の哺乳動物のＳＰ−Ｄタンパク質を発現するベクターを含む、肺疾患の防止および治療のための薬理学的組成物。
【請求項８】  前記肺疾患は、肺気腫、微生物感染、ウィルス感染および真菌感染からなる群から選ばれる疾患である、請求項７記載の薬理学的組成物。
【請求項９】  前記ＳＰ−Ｄタンパク質を含む薬理学的組成物は気管内投与用である、請求項７記載の薬理学的組成物。
【請求項１０】  前記ＳＰ−Ｄタンパク質はアデノウィルスベクターにより発現される、請求項７記載の薬理学的組成物。
【請求項１１】  前記薬理学的組成物はエアロゾル投与用である、請求項１０記載の薬理学的組成物。
【請求項１２】  前記アデノウィルスベクターはＡｄ−ｒＳＰＤである、請求項１０記載の薬理学的組成物。
【請求項１３】  前記ＳＰ−Ｄタンパク質を含む薬理学的組成物はエアロゾル投与用である、請求項９記載の薬理学的組成物。
【請求項１４】  前記薬理学的組成物はさらにＩＬ−４を含む、請求項１３記載の薬理学的組成物。
【請求項１５】  前記薬理学的組成物はさらにＳＰ−Ａを含む、請求項１３記載の薬理学的組成物。
【請求項１６】  前記薬理学的組成物はさらにＳＰ−Ｂを含む、請求項１３記載の薬理学的組成物。
【請求項１７】  前記薬理学的組成物はさらにＳＰ−Ｃを含む、請求項１３記載の薬理学的組成物。
【請求項１８】  前記薬理学的組成物はさらにＩＬ−４、ＳＰ−Ａ、ＳＰ−ＢおよびＳＰ−Ｃを含む、請求項１３記載の薬理学的組成物。
【請求項１９】  哺乳動物のＳＰ−Ｄタンパク質、またはホスファチジルコリンレベルを減少させるのに有効な量の哺乳動物のＳＰ−Ｄタンパク質を発現するベクターを含む、哺乳類の肺におけるホスファチジルコリンレベルを減少させるための薬理学的組成物。
【請求項２０】  哺乳動物のＳＰ−Ｄタンパク質、またはウィルスの数を減少させるかまたは肺ウィルス疾患の兆候を減少させるのに有効な量の哺乳動物のＳＰ−Ｄタンパク質を発現するベクターを含む、肺ウィルス疾患の治療のための薬理学的組成物。
【請求項２１】  前記肺ウィルス疾患は、アデノウィルスおよび呼吸シンシチウムウィルス（ＲＳＶ）からなる群から選ばれるウィルスにより引き起こされる、請求項２０記載の薬理学的組成物。
【請求項２２】  哺乳動物のＳＰ−Ｄタンパク質、または肺ウィルスタイターを減少させるのに有効な量の哺乳動物のＳＰ−Ｄタンパク質を発現するベクターを含む、肺ウィルスタイターを減少させるための薬理学的組成物。
【請求項２３】  哺乳動物のＳＰ−Ｄタンパク質、またはメタロプロテイナーゼ活性および活性酸素種の抑制に有効な量の哺乳動物のＳＰ−Ｄタンパク質を発現するベクターを含む、肺におけるメタロプロテイナーゼ活性および活性酸素種の抑制のための薬理学的組成物。
【請求項２４】  試験検体において、ＳＰ−Ｄ遺伝子における不完全なＳＰ−Ｄを生じる突然変異を同定するための試薬を含む、肺疾患への罹病性を診断するためのキット。
【請求項２５】  前記突然変異はＰＣＲにより同定される、請求項２４記載のキット。
【請求項２６】  前記突然変異はハイブリダイゼーションにより同定される、請求項２４記載のキット。
【請求項２７】  前記突然変異はＥＬＩＳＡにより同定される、請求項２４記載のキット。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
マウスＩＩ型細胞の単離
ＩＩ型細胞は、以下の方法を用いてこの実験室において日常的に単離される。マウスを、腹腔内注射およびペントバルビタール（５０ｍｇ／ｍｌ、３．２５ｍｌ／体重１ｋｇ）により麻酔した。腹部凹部を開いた後、マウスを、動脈空洞下部を切断することにより放血した。気管を露出させ、２０ゲージのルエルスタブ(luer stub)アダプターでカニューレ挿入し、縫合により固定した。胸プレートを除去し、肺を、見かけ上血液がなくなるま
で肺動脈を通して１０〜２０ｍｌの無菌生理食塩水で潅流した。ディスペース(Dispase)(Collaborative Research, Inc., Bedford, MA)を、気管カテーテルを通して肺中に点滴し、次に１％低融点アガロースを、４５℃に加温した。肺を直ちに氷で覆い、２分間インキュベートしてアガロースを固定した。肺を切り出し、さらに１ｍｌのディスペースを含む培養管中に入れ、室温で４５分間インキュベートした。次に、肺を、７ｍｌのＤＭＥＭ(Gibco BRL, Gaithersburgh, MD)に溶解した１００Ｕ／ｍｌのＤＮＡアーゼ１(Sigma, St Louis, MO)を含む６０ｍｍの培養皿に移した。組織を丁寧に気道から引き裂き、５分間かきまぜた。次に、細胞を、しみ出されるまで氷上に置いた。細胞懸濁液を連続的に１００μｍおよび４０μｍの細胞ストレーナー、次に２５μｍのナイロンガーゼ(Tetko, Briarcliff Manor, NY)を通して濾過した。細胞を、４℃で１３０×ｇで７分間ペレット化し、１０％  ＦＢＳ(Intergen Co., Purchase, NY)を含む１０ｍｌ  ＤＭＥＭ中に再懸濁した。粗細胞懸濁液を、予めＣＤ−４５およびＣＤ−３２抗体(Pharmingen. San Diego, CA)で被覆した１００ｍｍの培養皿に加え、５％  ＣＯ2の存在下で、３７℃で１０２時間インキュベートした。プレートをインキュベーターから除去し、静かに「動か」し、ＩＩ型細胞を自由に沈降させた。細胞懸濁液を、１３０×ｇで４℃で遠心分離し、１０％  ＦＢＳ(Intergen Co., Purchase, NY)を含む１０ｍｌ  ＤＭＥＭ中に再懸濁した。粗細胞懸濁液を、予めＣＤ−４５およびＣＤ−３２抗体(Pharmingen. San Diego, CA)で被覆した１００ｍｍの培養皿に加え、５％  ＣＯ2の存在下で、３７℃で１０２時間インキュベートした。プレートをインキュベーターから除去し、静かに「動か」して、ＩＩ型細胞を自由に沈降させた。細胞懸濁液を、１３０×ｇで７分間遠心分離し、細胞を、１０％  ＦＢＳを含むＤＭＥＭ中に再懸濁した。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６８】
肺構造に対するタンパク質または薬剤の効果を測定するために、肺を膨張固定し、切片を電子顕微鏡により評価した。処理および未処理マウスからの肺を、４％のパラホルムアルデヒドを含む圧力２０ｃｍの気管カニューレにより膨張させ、胸郭から一括して除去した。肺を脱水し、パラフィン中に包埋した。組織切片（５μｍ）を、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８４】
肺構造に対するタンパク質または薬剤の効果を決定するために（実施例１１）、肺を膨張固定し、切片を電子顕微鏡により評価する。肺を、４％のパラホルムアルデヒドを含む圧力２０ｃｍの気管カニューレにより膨張させ、胸郭から一括して除去する。肺を脱水し、パラフィン中に包埋する。組織切片（５μｍ）を、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色する。
【手続補正６】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１０】
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