【手続補正書】
【提出日】平成19年7月18日(2007.7.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  ＩＩ型、ＶＩ型、ＩＸ型およびＸＩ型のコラーゲンなどのようなコラーゲンタンパク質、アグレガン類、デコリン、フィブロモジュリンおよびビグリカンなどのようなプロテオグリカン類、ならびに低温型沈降物、フィブロネクチン、ビトロネクチン、フィブリノーゲン、フィブリリン、キストリン、エキスタチン、フォン・ビルブラント因子、テネイシンおよびアンコリンＣＩＩなどのような非膠原性タンパク質からなる群から選択され、軟骨芽細胞／軟骨細胞に情報伝達を誘導する刺激分子の少なくとも一つからなる組成物を保持する表面部分の少なくとも一つを有する軟骨膜。
【請求項２】  非免疫原性、非毒性および生分解性膜である請求項１による軟骨膜。
【請求項３】  膜の材料が、多孔性であるかまたは実質的に多孔性である請求項１または２による軟骨膜。
【請求項４】  膜が、天然のまたは合成のＩ型コラーゲンの膜またはその部分である請求項３による軟骨膜。
【請求項５】  ＩＩ型、ＶＩ型、ＩＸ型およびＸＩ型のコラーゲンなどのようなコラーゲンタンパク質、アグレガン類、デコリン、フィブロモジュリンおよびビグリカンなどのようなプロテオグリカン類、ならびに低温型沈降物、フィブロネクチン、ビトロネクチン、フィブリノーゲン、フィブリリン、キストリン、エキスタチン、フォン・ビルブラント因子、テネイシンおよびアンコリンＣＩＩなどのような非膠原性タンパク質からなる群から選択され、第一表面部分と第二表面部分を有し、その両方が軟骨芽細胞／軟骨細胞および骨芽細胞／骨細胞に情報伝達を誘導する刺激分子の少なくとも一つからなる組成物を保持する界面膜。
【請求項６】  非免疫原性、非毒性および生分解性膜である請求項５による界面膜。
【請求項７】  膜の材料が、多孔性であるかまたは実質的に多孔性である請求項５または６による界面膜。
【請求項８】  膜が、天然のまたは合成のＩ型コラーゲンの膜またはその部分である請求項７による界面膜。
【請求項９】  刺激分子が、少なくとも一つのＲＧＤモチーフからなる請求項１〜８のいずれかによる膜。
【請求項１０】  刺激分子が、天然もしくは合成のタンパク質もしくはペプチドもしくは融合体またはその混合物である請求項９による膜。
【請求項１１】  刺激分子が、ＩＩ型コラーゲンおよびフィブロネクチンからなる群から選択される請求項１０による膜。
【請求項１２】  刺激分子が、支持体に取り付けられる請求項１１による膜。
【請求項１３】  ｉ）関節の軟骨自由腔（７）の上に、その軟骨自由腔（７）に対面する第一表面部分を有する軟骨膜（５）を当てがい、その軟骨膜（５）の第一表面部分は、軟骨芽細胞／軟骨細胞に情報伝達を誘導する刺激分子の少なくとも一つからなる組成物を保持し、
ｉｉ）軟骨膜（５）、軟骨（２）および界面（３）の間の軟骨自由腔（７）中に軟骨芽細胞／軟骨細胞の懸濁液（８）を導入し、
ｉｉｉ）軟骨膜（５）の第一表面部分の一部を、周囲の関節表面（１）に接合して軟骨芽細胞／軟骨細胞の懸濁液（８）を、軟骨自由腔（７）内に、密閉部分（６）を使って密閉封入して、それにより軟骨芽細胞／軟骨細胞の懸濁液（８）に、ヒアリンに特有のマトリックス成分を産生し分泌させることからなる
非ヒト哺乳類の関節の軟骨欠損の生体内修復法。
【請求項１４】  軟骨膜が請求項１〜４のいずれかによる軟骨膜であり、刺激分子が請求項１または９〜１２のいずれかによる刺激分子である請求項１３による方法。
【請求項１５】  ｉ）関節の骨自由腔（２３）の上でかつ軟骨自由腔（７０）の下に、その骨自由腔（２３）に対面する第一表面部分（２２）を有する界面膜（２１）を当てがい、その界面膜（２１）の第一表面部分（２２）は、骨芽細胞／骨細胞に情報伝達を誘導する刺激分子の少なくとも一つからなる組成物を保持し、第二表面部分（２６）は軟骨芽細胞／軟骨細胞に情報伝達を誘導する刺激分子の少なくとも一つからなる組成物を保持し、
ｉｉ）界面膜第一表面部分（２２）と骨（４０）との間の間隙に骨芽細胞／骨細胞の懸濁液（２４）を導入し、
ｉｉｉ）界面膜（２１）の第一表面部分（２２）の一部を、周囲の界面表面（３０）に接合し、骨芽細胞／骨細胞の懸濁液（２４）を骨自由腔（２３）内に、密閉部分（２５）を使用して密閉封入して、それにより骨芽細胞／骨細胞の懸濁液（２４）に、骨組織に特有のマトリックス成分を産生し分泌させ、
ｉｖ）軟骨自由腔（７０）の上に、界面膜（２１）の第二表面部分（２６）に対面する第一表面部分を有する軟骨膜（５０）を当てがい、その軟骨膜（５０）の第一表面部分は情報伝達を軟骨芽細胞／軟骨細胞に誘導して軟骨芽細胞／軟骨細胞にヒアリン軟骨を形成するマトリックス成分を産生させ分泌させる刺激分子の少なくとも一つからなる組成物を保持し、
ｖ）界面膜（２１）、軟骨膜（５０）および軟骨（２０）の間の軟骨自由腔（７０）内に、軟骨芽細胞／軟骨細胞の懸濁液（８０）を導入し、
ｖｉ）軟骨膜（５０）の一部を、周囲の関節表面（１０）と接合して、軟骨芽細胞／軟骨細胞の懸濁液（８０）を、軟骨自由腔（７０）内に密閉部分（６０）を使用して密閉封入して、それにより軟骨芽細胞／軟骨細胞の懸濁液（８０）に、ヒアリンを生成するマトリックス成分を産生させて分泌させることからなる
例えば骨関節炎の関節のような、非ヒト哺乳類の関節の骨と軟骨の欠損の生体内修復法。
【請求項１６】  ｉ）界面膜（２１）を第一密閉部分の成分で処理し、
関節の骨自由腔（２３）の上でかつ軟骨自由腔（７０）の下に、骨自由腔（２３）に対面する第一表面部分（２２）を有する界面膜（２１）を当てがい、その界面膜（２１）の第一表面部分（２２）は、情報伝達を骨芽細胞／骨細胞に誘導する刺激分子の少なくとも一つからなる組成物を保持し、そしてその第二表面部分（２６）は、情報伝達を軟骨芽細胞／軟骨細胞に誘導する刺激分子の少なくとも一つからなる組成物を保持し、
ｉｉ）界面膜第一表面部分（２２）と骨（４０）の間の間隙に、骨芽細胞／骨細胞の懸濁液（２４）を導入し、
ｉｉｉ）界面膜（２１）の第一表面部分（２２）の一部を、周囲の界面表面（３０）に接合して骨芽細胞／骨細胞の懸濁液（２４）を、骨自由腔（２３）内に、第二密閉部分の成分を使って密閉封入して、それにより、骨芽細胞／骨細胞懸濁液（２４）に、骨組織に特有の成分を産生させて分泌させ、
ｉｖ）界面膜（２１）と関節表面との間の軟骨自由腔（７０）内に、軟骨芽細胞／軟骨細胞の懸濁液（８０）を導入して、それにより、軟骨芽細胞／軟骨細胞の懸濁液（８０）に、ヒアリンに特有の成分を産生させ分泌させることからなる
例えば骨関節炎の関節のような、非ヒト哺乳類の関節の骨と軟骨の欠損の関節鏡法を使用する生体内修復方法。
【請求項１７】  膜が請求項１〜８のいずれかによる膜であり、刺激分子が請求項１、９〜１２のいずれかによる刺激分子である請求項１５または１６による方法。
【請求項１８】  軟骨芽細胞／軟骨細胞の懸濁液が、自己由来の軟骨芽細胞／軟骨細胞の懸濁液である請求項１３〜１７のいずれかによる方法。
【請求項１９】  骨芽細胞／骨細胞の懸濁液が、自己由来の骨芽細胞／骨細胞の懸濁液である請求項１５〜１８のいずれかによる方法。
【請求項２０】  請求項１〜４のいずれかによる軟骨膜の少なくとも１つと、請求項１、９〜１２のいずれかによる刺激分子の少なくとも１つとからなる軟骨修復用キット。
【請求項２１】  請求項５〜８のいずれかによる界面膜の少なくとも１つからなる請求項２０によるキット。
【請求項２２】  軟骨の欠損または骨と軟骨の欠損を有する哺乳類の治療のための請求項２０または２１によるキットの製造用の請求項１〜１２のいずれかによる少なくとも１つの膜の使用。
【請求項２３】  軟骨の欠損または骨と軟骨の欠損を有する非ヒト哺乳類の治療のための請求項１３〜１９のいずれかによる治療方法。
【請求項２４】  方法が、軟骨の損傷または骨軟骨の損傷、離断性骨軟骨炎（ＯＣＤ）、軟骨軟化および骨関節炎の治療のために用いられる請求項２３による方法。
【請求項２５】  ｉ）間葉細胞および／または間葉前駆細胞を、骨髄、軟骨膜、骨膜、血液、血管または筋肉などのような供給源から収穫し；
ｉｉ）その収穫された細胞を、少なくとも一つの増殖培地からなる細胞培養フラスコに添加し；
ｉｉｉ）その収穫された細胞を、１０〜２０，０００細胞／クローン程度の範囲の細胞数サイズで繊維芽細胞表現型のコロニー形成単位（ＣＦＵ−ｆ）が形成されるまで増殖させ；
ｉｖ）そのＣＦＵ−ｆ細胞を軟骨芽細胞／軟骨細胞、骨芽細胞／骨細胞または筋芽細胞／筋管に分化させる少なくとも一つの選択培地からなる新しい細胞培養フラスコ中に、そのＣＦＵ−ｆ細胞を移し；
ｖ）分化された細胞を収穫することからなる
軟骨芽細胞／軟骨細胞の懸濁液または骨芽細胞／骨細胞の懸濁液の製造方法。
【請求項２６】  懸濁液が、非ヒト哺乳類の軟骨および／または骨と軟骨の欠損の治療のために用いられる請求項２５による方法。
【請求項２７】  選択培地が、増殖より選択に対してより特異的である成分からなる請求項２５または２６による方法。
【請求項２８】  哺乳類から軟骨外植片を収穫し、
ｉ）収穫した軟骨外植片を、少なくとも１つの増殖培地からなる培養フラスコに添加し、
ｉｉ）培地中で軟骨外植片を増殖させて、軟骨芽細胞／軟骨細胞の単層を得、
ｉｉｉ）幾つかの単層と高い細胞数が得られるまで軟骨外植片を繁殖させ、
ｉｖ）単層培養物を、自己由来の増殖培地に移す
ことからなる酵素処理なしの軟骨芽細胞／軟骨細胞の製造のための細胞培養方法。
【請求項２９】  軟骨外植片が、非ヒト哺乳類の軟骨および／または骨と軟骨の欠損の治療に用いられる請求項２８による方法。