【手続補正書】
【提出日】平成19年4月27日(2007.4.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  細胞死に対する癌細胞の感受性を誘導するｐ−Ｈｙｄｅファミリーの哺乳動物ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質をコードし、かつ配列番号１、３、５、又は７に記載されたような核酸配列を含む、単離された核酸（その異型及び変異体を含む）。
【請求項２】  配列番号：１、３、５、又は７の核酸コーディング配列との少なくとも８２％の類似性を有する核酸配列を有する、請求項１記載の単離された核酸。
【請求項３】  配列番号：１、３、５、又は７の核酸コーディング配列との少なくとも８５％の類似性を有する核酸配列を有する、請求項１記載の単離された核酸。
【請求項４】  配列番号：１、３、５、又は７の核酸コーディング配列との少なくとも９５％の類似性を有する核酸を有する、請求項１記載の単離された核酸。
【請求項５】  核酸断片が配列番号：７に記載されている、請求項１記載の単離された核酸。
【請求項６】  核酸断片が配列番号：８に記載されたようなアミノ酸断片をコードする、請求項１記載の単離された核酸。
【請求項７】  ＤＮＡ又はＲＮＡである、請求項１記載の単離された核酸。
【請求項８】  ｃＤＮＡ又はゲノミックＤＮＡである、請求項２記載の単離された核酸。
【請求項９】  配列番号：２、４、又は６に記載されたような配列を有するアミノ酸配列をコードする、請求項１記載の単離された核酸。
【請求項１０】  検出可能マーカーで標識されている、請求項１記載の単離された核酸。
【請求項１１】  検出可能マーカーが、放射性マーカー、比色マーカー、発光マーカー、蛍光マーカー、又は金標識である、請求項１０記載の単離された核酸。
【請求項１２】  請求項１のヒトｐ−Ｈｙｄｅをコードする核酸の配列と特異的にハイブリダイズすることができる少なくとも１５ヌクレオチドのオリゴヌクレオチド。
【請求項１３】  核酸がＤＮＡ又はＲＮＡである、請求項１２記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１４】  検出可能マーカーで標識されている、請求項１２記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１５】  放射性マーカー、比色マーカー、発光マーカー、蛍光マーカー、又
は金標識である、請求項１３記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１６】  請求項１の単離された核酸の配列と相補的な配列を有する核酸。
【請求項１７】  請求項１の単離された核酸と特異的にハイブリダイズすることができるアンチセンス分子。
【請求項１８】  請求項１の単離された核酸を含むベクター。
【請求項１９】  さらに、機能的にＲＮＡ転写のプロモーターを含むか、又は核酸と連結した発現因子を含む、請求項１８記載のベクター。
【請求項２０】  プロモーターが細菌、酵母、昆虫、又は哺乳動物のプロモーターを含む、請求項１８記載のベクター。
【請求項２１】  プラスミド、コスミド、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、ＢＡＣ、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、Ｐ１、バクテリオファージ、又は真核生物ウイルスＤＮＡである、請求項２０記載のベクター。
【請求項２２】  複製欠損性アデノウイルス５型発現ベクターである、請求項２１記載のアデノウイルスベクター。
【請求項２３】  ゲノムのＥ１及びＥ３領域に欠失を有し、かつｐ−Ｈｙｄｅをコードする核酸、それらの対立遺伝子、断片、又は異型の、プロモーターの調節下での挿入をその領域内に有するアデノウイルスゲノムを含む、請求項２２記載のアデノウイルスベクター。
【請求項２４】  プロモーターがラウス肉腫ウイルスプロモーターである、請求項２３記載のベクター。
【請求項２５】  適当な宿主内に請求項１８のベクターを含む、ポリペプチドの産生のための宿主ベクター系。
【請求項２６】  適当な宿主が原核細胞又は真核細胞である、請求項２５記載の宿主ベクター系。
【請求項２７】  真核細胞が、酵母、昆虫、植物、又は哺乳動物の細胞である、請求項２６記載の宿主ベクター系。
【請求項２８】  ポリペプチドの産生を許容する適当な条件下で請求項１８の宿主ベクター系を増殖させること、及びそのようにして産生されたポリペプチドを回収することを含む、ポリペプチドを作製するための方法。
【請求項２９】  （ａ）適当な宿主細胞へ請求項１８のベクターを導入すること；
（ｂ）ポリペプチドを産生させるため、得られた細胞を培養すること；
（ｃ）工程（ｂ）において産生されたポリペプチドを回収すること；及び
（ｄ）そのようにして回収されたポリペプチドを精製すること：を含む、精製された形態でポリペプチドを得る方法。
【請求項３０】  哺乳動物ｐ−Ｈｙｄｅのアミノ酸配列を含むｐ−Ｈｙｄｅファミリーポリペプチド。
【請求項３１】  アミノ酸配列が配列番号：２、４、６、又は８に記載されている、請求項３０記載のポリペプチド。
【請求項３２】  請求項３０のポリペプチドを含む融合タンパク質又はキメラ。
【請求項３３】  請求項３０のポリペプチドと特異的に結合する抗体。
【請求項３４】  モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体である、請求項３３記載の抗体。
【請求項３５】  ある量の請求項３０のポリペプチドと、薬学的に有効な担体又は希釈剤とを含む薬学的組成物。
【請求項３６】  請求項１の単離された核酸を含むトランスジェニック非ヒト哺乳動物。
【請求項３７】  （ａ）対象から適切な核酸試料を得ること；及び
（ｂ）工程（ａ）からの核酸試料が、変異型ｐ−Ｈｙｄｅをコードする核酸であるか、又はそれに由来するか否かを決定することにより、対象がｐ−Ｈｙｄｅ遺伝子の突然変異を保持するか否かを決定すること：を含む、対象がｐ−Ｈｙｄｅ遺伝子の突然変異を保持す
るか否かを決定するための方法。
【請求項３８】  工程（ａ）における核酸試料が、変異型ｐ−ＨｙｄｅをコードするＤＮＡの転写物に相当するｍＲＮＡを含み、かつ工程（ｂ）の決定が、（ｉ）ｍＲＮＡとオリゴヌクレオチドとの結合を許容する条件下で、ｍＲＮＡを請求項１２のオリゴヌクレオチドと接触させ、複合体を形成させること；
（ｉｉ）そのようにして形成した複合体を単離すること；及び
（ｉｉｉ）単離された複合体内のｍＲＮＡを同定することにより、ｍＲＮＡが変異型ｐ−Ｈｙｄｅをコードする核酸であるか、又はそれに由来するか否かを決定すること：を含む、請求項３７記載の方法。
【請求項３９】  工程（ｂ）の決定が、
（ｉ）核酸試料及び単離された核酸の、別々の区別可能な核酸片への消化を許容する条件下で、工程（ａ）の核酸試料及び請求項１の単離された核酸を、制限酵素と接触させること；
（ｉｉ）核酸片を単離すること；並びに
（ｉｉｉ）核酸試料に由来する核酸片を、単離された核酸に由来する核酸片と比較することにより、核酸試料が、変異型ｐ−Ｈｙｄｅをコードする核酸であるか、又はそれに由来するか否かを決定すること：を含む、請求項３８記載の方法。
【請求項４０】  ヒト対象由来の腫瘍試料を、該腫瘍内のｐ−Ｈｙｄｅ遺伝子の体細胞性改変についてスクリーニングするための方法であって、該腫瘍試料由来のｐ−Ｈｙｄｅ遺伝子、該腫瘍由来のｐ−Ｈｙｄｅ  ＲＮＡ、及び該腫瘍試料由来のｍＲＮＡから作成されたｐ−Ｈｙｄｅ  ｃＤＮＡからなる群より選択される第１の配列を、該対象の非腫瘍試料由来のｐ−Ｈｙｄｅ遺伝子、該非腫瘍試料由来のｐ−Ｈｙｄｅ  ＲＮＡ、及び該非腫瘍試料由来のｍＲＮＡから作成されたｐ−Ｈｙｄｅ  ｃＤＮＡからなる群より選択される第２の配列と比較し、その際、該腫瘍試料由来のｐ−Ｈｙｄｅ遺伝子、ｐ−Ｈｙｄｅ  ＲＮＡ、又はｐ−Ｈｙｄｅ  ｃＤＮＡの配列の、該非腫瘍試料由来のｐ−Ｈｙｄｅ遺伝子、ｐ−Ｈｙｄｅ  ＲＮＡ、又はｐ−Ｈｙｄｅ  ｃＤＮＡの配列との差違を、該腫瘍試料内のｐ−Ｈｙｄｅ遺伝子の体細胞性改変の指標とすることを含む方法。
【請求項４１】  ヒト対象由来の腫瘍試料を、該腫瘍内のｐ−Ｈｙｄｅ遺伝子の体細胞性改変の存在についてスクリーニングするための方法であって、ポリペプチド間の差違を分析するため、該対象由来の該腫瘍試料由来のｐ−Ｈｙｄｅポリペプチドを、該対象由来の非腫瘍試料由来のｐ−Ｈｙｄｅポリペプチドと比較し、その際、該腫瘍試料由来のｐ−Ｈｙｄｅポリペプチドの、該非腫瘍試料由来のｐ−Ｈｙｄｅポリペプチドとの差違を、該腫瘍試料内のｐ−Ｈｙｄｅ遺伝子の体細胞性改変の存在の指標とすることを含む方法であって、該比較が、（ｉ）各試料内の全長ポリペプチドもしくは短縮ポリペプチドのいずれかを検出すること、又は（ｉｉ）改変されたｐ−Ｈｙｄｅポリペプチドのエピトープもしくは野生型ｐ−Ｈｙｄｅポリペプチドのエピトープのいずれかと特異的に結合する抗体を各試料由来のｐ−Ｈｙｄｅポリペプチドと接触させ、抗体結合を検出すること、により実施される方法。
【請求項４２】  （ａ）ｐ−Ｈｙｄｅと化学的化合物との結合を許容する条件下で、ｐ−Ｈｙｄｅを化学的化合物と接触させること；
（ｂ）化学的化合物とｐ−Ｈｙｄｅとの特異的結合を検出すること；及び
（ｃ）化学的化合物がｐ−Ｈｙｄｅを阻害するか否かを決定することにより、細胞死に対する感受性を誘導することができる化学的化合物を同定すること：を含む、細胞死に対する感受性を誘導することができる化学的化合物を同定するための方法。
【請求項４３】  細胞を得る工程、並びにゲノムのＥ１及びＥ３領域に欠失を有し、かつｐ−Ｈｙｄｅをコードする核酸のラウス肉腫ウイルスプロモーターの調節下での挿入をその領域内に有するアデノウイルスゲノムを含む複製欠損性アデノウイルス５型発現ベクターと、対象の細胞を接触させることにより、癌細胞の増殖を阻害する工程を含む、癌細胞の増殖を阻害する方法。
【請求項４４】
対象から得られた前立腺細胞の試料に接触させ、細胞を対象へ導入することにより癌細胞の増殖を阻害する薬剤を製造するための、ゲノムをＥ１及びＥ３領域に欠失を有し、かつｐ−Ｈｙｄｅ  ｃＤＮＡのラウス肉腫ウイルスプロモーターの調節下での挿入をその領域内に有するアデノウイルスゲノムを含む複製欠損性アデノウイルス５型発現ベクターの、使用。
【請求項４５】
癌細胞へ導入することにより、対象における癌細胞の増殖を抑制する薬剤を製造するための、ある量の、ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質をコードする核酸、ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質の断片をコードする核酸、又は変異型ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質をコードする核酸の、使用。
【請求項４６】
対象へ投与することにより、対象における癌細胞の増殖を抑制する薬剤を製造するための、治療に有効な量の、ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質をコードする核酸、ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質の断片をコードする核酸、又は変異型ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質をコードする核酸と、薬学的に許容される担体又は希釈剤とを含む薬学的組成物の、使用。
【請求項４７】
癌細胞へ導入することにより、アポトーシスに対する感受性を誘導する薬剤を製造するための、ある量の、ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質をコードする核酸、ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質の断片をコードする核酸、又は変異型ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質をコードする核酸の、使用。
【請求項４８】
対象へ投与することにより、アポトーシスに対する感受性を誘導する薬剤を製造するための、治療に有効な量の、ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質をコードする核酸、ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質の断片をコードする核酸、又は変異型ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質をコードする核酸と、薬学的に許容される担体又は希釈剤とを含む薬学的組成物の、使用。
【請求項４９】
対象へ投与することにより、癌を有する対象を治療する薬剤を製造するための、治療的に有効な量の、ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質をコードする核酸、ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質の断片をコードする核酸、又は変異型ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質をコードする核酸と、薬学的に許容される担体又は希釈剤とを含む薬学的組成物の、使用。
【請求項５０】
放射線、化学療法、又はＵＶ模倣薬と組み合わせられ、対象へ投与することにより、癌を有する対象を治療する薬剤を製造するための、治療的に有効な量の、ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質をコードする核酸、ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質の断片をコードする核酸、又は変異型ｐ−Ｈｙｄｅタンパク質をコードする核酸と、薬学的に許容される担体又は希釈剤とを含む薬学的組成物の、使用。
【請求項５１】
対象へ投与することにより、癌を有する対象を治療する薬剤を製造するための、治療に有効な量の、ゲノムのＥ１及びＥ３領域に欠失を有し、かつ全長センスｐ−ＨｙｄｅｃＤＮＡのラウス肉腫ウイルスプロモーターの調節下での挿入をその領域内に有するアデノウイルスゲノムを含む複製欠損性アデノウイルス５型発現ベクターと、適当な担体又は希釈剤とを含む薬学的組成物の、使用。
【請求項５２】
癌が、黒色腫；リンパ腫；白血病；及び前立腺、結腸直腸、膵臓、乳房、脳、又は胃の癌腫：からなる群より選択される、請求項４３〜５１記載の使用。
【請求項５３】
薬学的組成物が、非経口、癌周囲、経粘膜、経皮、筋肉内、静脈内、皮内、皮下、腹腔内、脳室内、又は頭蓋内に投与される、請求項５０記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４３】
以下の非伝統的アミノ酸を、特定の構造モチーフ、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキシレート（Ｋａｚｍｉｅｒｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１３：２２７５−２２８３）、（２Ｓ，３Ｓ）−メチル−フェニルアラニン、（２Ｓ、３Ｒ）−メチル−フェニルアラニン、（２Ｒ、３Ｓ）−メチル−フェニルアラニンおよび（２Ｒ、３Ｒ）−メチル−フェニルアラニン（Ｋａｚｍｉｅｒｓｋｉ  ａｎｄ  Ｈｒｕｂｙ，１９９１，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．）、２−アミノテトラヒドロナフタレン−２−カルボン酸（Ｌａｎｄｉｓ．１９８９，Ｐｈ．Ｄ．Ｔｈｅｓｉｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ａｒｉｚｏｎａ）、ヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボキシレート（Ｍｉｙａｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｔａｋｅｄａ  Ｒｅｓ．Ｌａｂｓ．４３：５３−７６）、β−カルボリン（ＤおよびＬ）（Ｋａｚｍｉｅｒｓｋｉ，１９８８，Ｐｈ．Ｄ．Ｔｈｅｓｉｓ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ａｒｉｚｏｎａ）、ＨＩＣ（ヒスチジンイソキノリンカルボン酸）（Ｚｅｃｈｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐ．Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｒｅｓ．４３）、およびＨＩＣ（ヒスチジン環状ウレア）（Ｄｈａｒａｎｉｐｒａｇａｄａ）を導入するためにペプチド内に組み込んでよい。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４５】
ｃＤＮＡの特性化：シークエンシングｐ−Ｈｙｄｅ  ｃＤＮＡは、もともとλＺＡＰ  Ｕｎｉ  ＸＲクローンとして得、記述されたような（ストラタジーン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ），Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）ｉｎ  ｖｉｖｏ摘出プロトコールを介してｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＳＫ−ベクター内にさらにサブクローン化した。この二本鎖ｃＤＮＡをさらに、ＡＢＩ  ３７７自動化ＤＮＡシークエンサー  バージョン３．０を用いてダイ  ターミネーター  サイクル  シークエンシング（Ｄｙｅ  Ｔｅｒｍｉｎａａｔｏｒ  Ｃｙｃｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ：パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）にかけた。ｐ−Ｈｙｄｅの読みとり枠を、ＤＮＡストリダープログラム（パスツール  インスティテュート（Ｐａｓｔｅｕｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）を用いて決定した。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４８】
ｐ−ＨｙｄｅのｐｃＤＮＡ３．１（−）のサブクローニング：ｃＤＮＡ挿入物を、ＫｐｎＩおよびＳａｃＩによる二重消化によってｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＳＫ＋ベクターより放出させる（ＳＫ断片）。この断片は、本来のｐ−Ｈｙｄｅ配列を示しており、次いで、哺乳動物シャトルベクターｐｃＤＮＡ３．１（−）（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））の脱ホスホリル化ＫｐｎＩ−ＳａｃＩ二重消化物内にライゲーションした。ライゲーション混合液をコンピテントＤＨ５αをトランスフェクトするのに使用し、アンピシリン耐性に関して選別し、続いて標準の塩化セシウム密度勾配遠心を用いてプラスミドを調製した。次いでｐ−Ｈｙｄｅの新規構造物を、リポフェクタミン（ギブコ／ＢＲＬ（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）を用いることによってＡＴ３ラット前立腺癌亜系にトランスフェクトするのに使用し、続いてＧ４１８選別した（Ｒｉｎａｌｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８
８）。８個のクローンを得、それらのうちの２つ、ＡＴ３−Ｈ１とＡＴ３−Ｈ２を使用して、そのアポトーシスとの関係におけるｐ−Ｈｙｄｅの機能を査定した。さらに、ＡＴ３細胞株にまた、ｐｃＤＮＡ３．１（−）ベクターのみをトランスフェクトし、ＡＴ３−ｐｃと命名したその安定トランスフェクト細胞株を、ｐ−Ｈｙｄｅの機能的査定に関してＡＴ−Ｈ１およびＡＴ−Ｈ２の安定トランスフェクタントと比較する陰性対照として使用した。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５２】
ｃＤＮＡライブラリーの構築：第一段階において、ＡＴ−１およびＭＡＴ−ＬｙＬｕ細胞株から由来したｃＤＮＡライブラリーを、ストラタジーン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）のプロトコールに基づいてＵｎｉ  ＺＡＰ  ＸＲを用いて作製した。得た独立したクローンはＭＡＴ−ＬｙＬｕおよびＡＴ−１に関して、それぞれ１９０万および３４０万クローンであった。これらの非増幅ライブラリーをｃＤＮＡ挿入物集団のＰＣＲ増幅にかけた。ＸｈｏＩおよびＥｃｏＲＩクローニング部位の下流および上流であるリバースプライマー（ＲＰ）およびフォワードプライマー（ＦＰ）を、ｃＤＮＡ挿入物集団の増幅のために使用した。λＵｎｉ  ＺＡＰまたはｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ中の両方のプライマーの間の距離は２２８塩基であった。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５３】
競合的プライマーの設計：２つのＰＣＲプローブ、放射標識化ＭＡＴ−ＬｙＬｕ  ｃＤＮＡ集団プローブおよび非放射標識化ＡＴ−１  ｃＤＮＡ集団プローブ（コールドコンペティター）を増幅した。放射標識化ＭＡＴ−ＬｙＬｕ  ＰＣＲ産物をＳ４００セファクリルスピンカラムを用いて濃縮した。挿入物なしのλＤＮＡの増幅の結果である主要な非取り込み32Ｐ−ｄＣＴＰ、プライマーダイマー、および２２８ｂｐのＰＣＲ産物を、ｃＤＮＡより分離した。精製した放射標識化ｃＤＮＡを３０倍過剰な非放射標識化コールドコンペティターＡＴ−１  ＰＣＲ産物と混合し、ＭＡＴ−ＬｙＬｕ  ｃＤＮＡライブラリーを選別するための競合−プローブとして用いた。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５４】
本質的に競合プローブの放射標識化ｃＤＮＡとライブラリーの選別したｃＤＮＡ間のハイブリッド形成を干渉する可能性のある２種類の予期しない放射標識化ＰＣＲ産物は、１）ｃＤＮＡの非指数関数的増殖、２）ｃＤＮＡ挿入のないλＤＮＡから由来した２２８ｂｐ  ＰＣＲ産物であった。選別したライブラリーのベクターを持つこれらの２つの予期しないＰＣＲ産物間の可能性のある交差ハイブリッド形成を減少させるために、過剰量のＨｉｎｄＩＩＩ消化ＤＮＡ、ＰｖｕＩＩ消化ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＤＮＡ、および両方のプライマーに基づいたｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔの２２８ｂｐ  ＰＣＲ産物を競合プローブと混合した。この完全混合競合プローブの予備的な査定は、このプローブでのＭＡＴ−ＬｙＬｕ  ｃＤＮＡライブラリーのハイブリッド形成が、極度に弱く、一方で、非放射標
識化ＡＴ−１  ＰＣＲ産物なしで、同様のプローブでハイブリッド形成した二重フィルターは、きわめて陽性であったことを示唆した。このことは、ＭＡＴ−ＬｙＬｕ産物の陽性ハイブリッド形成は、ＡＴ−１  ｃＤＮＡによって競合しないＰＣＲ産物の放射標識化ＭＡＴ−ＬｙＬｕ  ｃＤＮＡによるものであったことを明らかに示唆している。