(57)【要約】  本開示は、カチオン性脂質、およびポリリボヌクレオチド分子、例えば、免疫原（例えば、標的タンパク質またはその断片）をコードするｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド分子を含む組成物を使用する免疫化の方法および抗体作製の方法に関する。
2019528312.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的タンパク質に対するモノクローナル抗体を作製するための方法であって、（ａ）少なくとも１つのカチオン性脂質を、前記標的タンパク質またはその断片をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）などのポリリボヌクレオチドと混合し、それにより、カチオン性脂質−ポリリボヌクレオチド複合体を形成するステップと；（ｂ）前記脂質−ポリリボヌクレオチド複合体を非ヒト動物に投与するステップと；（ｃ）前記標的タンパク質に特異的に結合する抗体を前記動物から得るステップとを含む、方法。
【請求項２】
標的タンパク質に対するモノクローナル抗体を作製するための方法であって、（ａ）脂質−ポリリボヌクレオチド複合体を非ヒト動物に投与し、それにより、前記標的タンパク質に対する免疫応答を誘導するステップであって、前記複合体が、前記標的タンパク質またはその断片をコードするｍＲＮＡなどのポリリボヌクレオチドを有する少なくとも１つのカチオン性脂質を含むステップと；（ｂ）前記標的タンパク質に特異的に結合する抗体を前記動物から得るステップとを含む、方法。
【請求項３】
非ヒト動物において標的タンパク質に対する免疫応答を誘発するための方法であって、脂質−ポリヌクレオチド複合体を前記動物に投与するステップを含み、前記脂質−ポリヌクレオチド複合体がカチオン性脂質および標的タンパク質をコードするｍＲＮＡを含み、前記標的タンパク質が前記動物と異なる種のタンパク質である、方法。
【請求項４】
前記標的タンパク質が膜貫通タンパク質である、請求項１、２または３に記載の方法。
【請求項５】
前記膜貫通タンパク質が、次の：
（ｉ）Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）；
（ｉｉ）１回膜貫通型タンパク質受容体；
（ｉｉｉ）腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）メンバー；
（ｉｖ）インターロイキン（ＩＬ）受容体；
（ｖ）イオンチャネル；
（ｖｉ）溶質輸送体；
（ｖｉｉ）免疫受容体；および
（ｖｉｉｉ）複数回膜貫通タンパク質
から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記膜貫通タンパク質が、Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）である、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
前記ＧＰＣＲが、ＲＸＦＰ１、ＴＳＨＲ、ＡＰＪ、ＧＰＲ４０、ＧＰＲ６４、ＧＰＲ４、またはＧＰＲ１５である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記膜貫通タンパク質が、ＧＰ１３０などの１回膜貫通型タンパク質受容体である、請求項４または５に記載の方法。
【請求項９】
前記膜貫通タンパク質が、ＳＬＣ５２Ａ２などの複数回膜貫通タンパク質である、請求項４または５に記載の方法。
【請求項１０】
前記膜貫通タンパク質が、ＩＬ−１受容体、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−３受容体、ＩＬ−４受容体、ＩＬ−５受容体、ＩＬ−６受容体、ＩＬ−７受容体、ＩＬ−８受容体、ＩＬ−９受容体、ＩＬ−１０受容体、ＩＬ−１１受容体、ＩＬ−１２受容体、ＩＬ−１３受容体、ＩＬ−１４受容体、ＩＬ−１５受容体、ＩＬ−１６受容体、ＩＬ−１７受容体、ＩＬ−１８受容体、ＩＬ−１９受容体、ＩＬ−２０受容体、ＩＬ−２１受容体、ＩＬ−２２受容体、ＩＬ−２３受容体、ＩＬ−２４受容体、ＩＬ−２５受容体、ＩＬ−２６受容体、ＩＬ−２７受容体、ＩＬ−２８受容体、ＩＬ−２９受容体、ＩＬ−３０受容体、ＩＬ−３１受容体、ＩＬ−３２受容体、ＩＬ−３３受容体、ＩＬ−３５受容体、またはＩＬ−３６受容体などのインターロイキン（ＩＬ）受容体である、請求項４または５に記載の方法。
【請求項１１】
前記膜貫通タンパク質が、次の：ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ３、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１４、ＴＮＦＲＳＦ１６、ＴＮＦＲＳＦ１７、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＴＮＦＲＳＦ１９、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＲＳＦ２５、およびＴＮＦＲＳＦ２７からなる群から選択される腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）メンバーである、請求項４または５に記載の方法。
【請求項１２】
前記膜貫通タンパク質が、ＴＭＥＭ１６Ａなどのイオンチャネルである、請求項４または５に記載の方法。
【請求項１３】
前記膜貫通タンパク質が、溶質輸送体である、請求項４または５に記載の方法。
【請求項１４】
前記標的タンパク質が、次の：ＡＣＫＲ１、ＡＣＫＲ２、ＡＣＫＲ３、ＡＣＫＲ４、ＡＤＣＹＡＰ１Ｒ１、ＡＤＧＲＡ１、ＡＤＧＲＡ２、ＡＤＧＲＡ３、ＡＤＧＲＢ１、ＡＤＧＲＢ２、ＡＤＧＲＢ３、ＡＤＧＲＤ１、ＡＤＧＲＤ２、ＡＤＧＲＥ１、ＡＤＧＲＥ２、ＡＤＧＲＥ３、ＡＤＧＲＥ４Ｐ、ＡＤＧＲＥ５、ＡＤＧＲＦ１、ＡＤＧＲＦ２、ＡＤＧＲＦ３、ＡＤＧＲＦ４、ＡＤＧＲＦ５、ＡＤＧＲＧ１、ＡＤＧＲＧ２、ＡＤＧＲＧ３、ＡＤＧＲＧ４、ＡＤＧＲＧ５、ＡＤＧＲＧ６、ＡＤＧＲＧ７、ＡＤＧＲＬ１、ＡＤＧＲＬ２、ＡＤＧＲＬ３、ＡＤＧＲＬ４、ＡＤＧＲＶ１、ＡＤＯＲＡ１、ＡＤＯＲＡ２Ａ、ＡＤＯＲＡ２Ｂ、ＡＤＯＲＡ３、ＡＤＲＡ１Ａ、ＡＤＲＡ１Ｂ、ＡＤＲＡ１Ｄ、ＡＤＲＡ２Ａ、ＡＤＲＡ２Ｂ、ＡＤＲＡ２Ｃ、ＡＤＲＢ１、ＡＤＲＢ２、ＡＤＲＢ３、ＡＧＴＲ１、ＡＧＴＲ２、ＡＰＬＮＲ／ＡＰＪ、ＡＳＧＲ１、ＡＳＧＲ２、ＡＶＰＲ１Ａ、ＡＶＰＲ１Ｂ、ＡＶＰＲ２、ＢＤＫＲＢ１、ＢＤＫＲＢ２、ＢＲＳ３、ＢＲＳ３、Ｃ３ＡＲ１、Ｃ５ＡＲ１、Ｃ５ＡＲ２、ＣＡＬＣＲ、ＣＡＬＣＲＬ、ＣＡＳＲ、ＣＣＫＡＲ、ＣＣＫＢＲ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲＬ２、ＣＥＬＳＲ１、ＣＥＬＳＲ２、ＣＥＬＳＲ３、ＣＨＲＭ１、ＣＨＲＭ２、ＣＨＲＭ３、ＣＨＲＭ４、ＣＨＲＭ５、ＣＭＫＬＲ１、ＣＮＲ１、ＣＮＲ２、ＣＲＨＲ１、ＣＲＨＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＹＳＬＴＲ１、ＣＹＳＬＴＲ２、ＤＲＤ１、ＤＲＤ２、ＤＲＤ３、ＤＲＤ４、ＤＲＤ５、ＥＤＮＲＡ、ＥＤＮＲＢ、Ｆ２Ｒ、Ｆ２ＲＬ１、Ｆ２ＲＬ２、Ｆ２ＲＬ３、ＦＦＡＲ１、ＦＦＡＲ２、ＦＦＡＲ３、ＦＦＡＲ４、ＦＰＲ１、ＦＰＲ２、ＦＰＲ２、ＦＰＲ３、ＦＳＨＲ、ＦＺＤ１、ＦＺＤ１０、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ６、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＧＡＢＢＲ１、ＧＡＢＢＲ２、ＧＡＬＲ１、ＧＡＬＲ２、ＧＡＬＲ３、ＧＣＧＲ、ＧＨＲＨＲ、ＧＨＳＲ、ＧＩＰＲ、ＧＬＰ１Ｒ、ＧＬＰ２Ｒ、ＧＮＲＨＲ、ＧＮＲＨＲ２、ＧＰＢＡＲ１、ＧＰＥＲ１、ＧＰＲ１、ＧＰＲ４、ＧＰＲ１２、ＧＰＲ１５、ＧＰＲ１７、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１９、ＧＰＲ２０、ＧＰＲ２１、ＧＰＲ２２、ＧＰＲ２５、ＧＰＲ２６、ＧＰＲ２７、ＧＰＲ３、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ３２、ＧＰＲ３３、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ３５、ＧＰＲ３７、ＧＰＲ３７Ｌ１、ＧＰＲ３９、ＧＰＲ４０、ＧＰＲ４２、ＧＰＲ４２、ＧＰＲ４５、ＧＰＲ５０、ＧＰＲ５２、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ６、ＧＰＲ６１、ＧＰＲ６２、ＧＰＲ６３、ＧＰＲ６５、ＧＰＲ６８、ＧＰＲ７５、ＧＰＲ７８、ＧＰＲ７９、ＧＰＲ８２、ＧＰＲ８３、ＧＰＲ８４、ＧＰＲ８５、ＧＰＲ８７、ＧＰＲ８８、ＧＰＲ１０１、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１３２、ＧＰＲ１３５、ＧＰＲ１３７、ＧＰＲ１３９、ＧＰＲ１４１、ＧＰＲ１４２、ＧＰＲ１４３、ＧＰＲ１４６、ＧＰＲ１４８、ＧＰＲ１４９、ＧＰＲ１５、ＧＰＲ１５０、ＧＰＲ１５１、ＧＰＲ１５２、ＧＰＲ１５３、ＧＰＲ１５６、ＧＰＲ１５７、ＧＰＲ１５８、ＧＰＲ１６０、ＧＰＲ１６１、ＧＰＲ１６２、ＧＰＲ１７１、ＧＰＲ１７３、ＧＰＲ１７４、ＧＰＲ１７６、ＧＰＲ１７９、ＧＰＲ１８２、ＧＰＲ１８３、ＧＰＲＣ５Ａ、ＧＰＲＣ５Ｂ、ＧＰＲＣ５Ｃ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＰＲＣ６Ａ、ＧＲＭ１、ＧＲＭ２、ＧＲＭ３、ＧＲＭ４、ＧＲＭ５、ＧＲＭ６、ＧＲＭ７、ＧＲＭ８、ＧＲＰＲ、ＨＣＡＲ１、ＨＣＡＲ２、ＨＣＡＲ３、ＨＣＲＴＲ１、ＨＣＲＴＲ２、ＨＲＨ１、ＨＲＨ２、ＨＲＨ３、ＨＲＨ４、ＨＴＲ１Ａ、ＨＴＲ１Ｂ、ＨＴＲ１Ｄ、ＨＴＲ１Ｅ、ＨＴＲ１Ｆ、ＨＴＲ２Ａ、ＨＴＲ２Ｂ、ＨＴＲ２Ｃ、ＨＴＲ４、ＨＴＲ５Ａ、ＨＴＲ５ＢＰ、ＨＴＲ６、ＨＴＲ７、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＬＧＲ３、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、ＬＧＲ６、ＬＨＣＧＲ、ＬＰＡＲ１、ＬＰＡＲ２、ＬＰＡＲ３、ＬＰＡＲ４、ＬＰＡＲ５、ＬＰＡＲ６、ＬＴＢ４Ｒ、ＬＴＢ４Ｒ２、ＭＡＳ１、ＭＡＳ１Ｌ、ＭＣ１Ｒ、ＭＣ２Ｒ、ＭＣ３Ｒ、ＭＣ４Ｒ、ＭＣ５Ｒ、ＭＣＨＲ１、ＭＣＨＲ２、ＭＬＮＲ、ＭＲＧＰＲＤ、ＭＲＧＰＲＥ、ＭＲＧＰＲＦ、ＭＲＧＰＲＧ、ＭＲＧＰＲＸ１、ＭＲＧＰＲＸ２、ＭＲＧＰＲＸ３、ＭＲＧＰＲＸ４、ＭＴＮＲ１Ａ、ＭＴＮＲ１Ｂ、ＮＭＢＲ、ＮＭＵＲ１、ＮＭＵＲ２、ＮＰＢＷＲ１、ＮＰＢＷＲ２、ＮＰＦＦＲ１、ＮＰＦＦＲ２、ＮＰＳＲ１、ＮＰＹ１Ｒ、ＮＰＹ２Ｒ、ＮＰＹ４Ｒ、ＮＰＹ５Ｒ、ＮＰＹ６Ｒ、ＮＴＳＲ１、ＮＴＳＲ２、ＯＰＮ３、ＯＰＮ４、ＯＰＮ５、ＯＰＲＤ１、ＯＰＲＫ１、ＯＰＲＬ１、ＯＰＲＭ１、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＸＥＲ１、ＯＸＧＲ１、ＯＸＴＲ、Ｐ２ＲＹ１、Ｐ２ＲＹ１０、Ｐ２ＲＹ１１、Ｐ２ＲＹ１２、Ｐ２ＲＹ１３、Ｐ２ＲＹ１４、Ｐ２ＲＹ２、Ｐ２ＲＹ４、Ｐ２ＲＹ６、Ｐ２ＲＹ８、ＰＲＬＨＲ、ＰＲＯＫＲ１、ＰＲＯＫＲ２、ＰＴＡＦＲ、ＰＴＧＤＲ、ＰＴＧＤＲ２、ＰＴＧＥＲ１、ＰＴＧＥＲ２、ＰＴＧＥＲ３、ＰＴＧＥＲ４、ＰＴＧＦＲ、ＰＴＧＩＲ、ＰＴＨ１Ｒ、ＰＴＨ２Ｒ、ＱＲＦＰＲ、ＲＸＦＰ１、ＲＸＦＰ２、ＲＸＦＰ３、ＲＸＦＰ４、Ｓ１ＰＲ１、Ｓ１ＰＲ２、Ｓ１ＰＲ３、Ｓ１ＰＲ４、Ｓ１ＰＲ５、ＳＣＴＲ、ＳＭＯ、ＳＳＴＲ１、ＳＳＴＲ２、ＳＳＴＲ３、ＳＳＴＲ４、ＳＳＴＲ５、ＳＵＣＮＲ１、ＴＡＡＲ１、ＴＡＡＲ２、ＴＡＡＲ３、ＴＡＡＲ４Ｐ、ＴＡＡＲ５、ＴＡＡＲ６、ＴＡＡＲ８、ＴＡＡＲ９、ＴＡＣＲ１、ＴＡＣＲ２、ＴＡＣＲ３、ＴＡＳ１Ｒ１、ＴＡＳ１Ｒ２、ＴＡＳ１Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ１９、ＴＡＳ２Ｒ２０、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ３０、ＴＡＳ２Ｒ３１、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４２、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ６０、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＢＸＡ２Ｒ、ＴＰＲＡ１、ＴＲＨＲ、ＴＳＨＲ、ＵＴＳ２Ｒ、ＶＩＰＲ１、ＶＩＰＲ２、ＸＣＲ１、ＴＣＲ−α、ＴＣＲ−β、ＣＤ３、ζ−鎖アクセサリー、ＣＤ４、ＣＤ８、ＳＩＧＩＲＲ、マンノース受容体（ＭＲ）、アシアロ糖タンパク質受容体ファミリー（例えば、アシアロ糖タンパク質受容体マクロファージガラクトース型レクチン（ＭＧＬ））、ＤＣ−ＳＩＧＮ（ＣＬＥＣ４Ｌ）、ランゲリン（ＣＬＥＣ４Ｋ）、骨髄系ＤＡＰ１２会合レクチン（ＭＤＬ）−１（ＣＬＥＣ５Ａ）、デクチン１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＧＲ１／ＣＬＥＣ９Ａ、骨髄系Ｃ型レクチン様受容体（ＭＩＣＬ）（ＣＬＥＣ１２Ａ）、ＣＬＥＣ２（ＣＬＥＣ１Ｂとも呼ばれる）、ＣＬＥＣ１２Ｂ、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、デクチン２／ＣＬＥＣ６Ａ、血液ＤＣ抗原２（ＢＤＣＡ２）（ＣＬＥＣ４Ｃ）、マクロファージ誘導性Ｃ型レクチン（ＣＬＥＣ４Ｅ）、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２、ＴＬＲ１３，ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ１（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）、ＦｃαＲ１（ＣＤ８９）、Ｆｃα／μＲ、ＦｃＲｎ、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＧＩＴ、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ３）、Ｔ細胞活性化のＶ−ドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、ＩＣＯＳ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ３）、ＦＡＭ１５９Ｂ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＡ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ｇｐ１３０、ＩＬ−１受容体、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−３受容体、ＩＬ−４受容体、ＩＬ−５受容体、ＩＬ−６受容体、ＩＬ−７受容体、ＩＬ−８受容体、ＩＬ−９受容体、ＩＬ−１０受容体、ＩＬ−１１受容体、ＩＬ−１２受容体、ＩＬ−１３受容体、ＩＬ−１４受容体、ＩＬ−１５受容体、ＩＬ−１６受容体、ＩＬ−１７受容体、ＩＬ−１８受容体、ＩＬ−１９受容体、ＩＬ−２０受容体、ＩＬ−２１受容体、ＩＬ−２２受容体、ＩＬ−２３受容体、ＩＬ−２４受容体、ＩＬ−２５受容体、ＩＬ−２６受容体、ＩＬ−２７受容体、ＩＬ−２８受容体、ＩＬ−２９受容体、ＩＬ−３０受容体、ＩＬ−３１受容体、ＩＬ−３２受容体、ＩＬ−３３受容体、ＩＬ−３５受容体、ＩＬ−３６受容体、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ３、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１４、ＴＮＦＲＳＦ１６、ＴＮＦＲＳＦ１７、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＴＮＦＲＳＦ１９、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＲＳＦ２５、ＴＮＦＲＳＦ２７、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ２Ａ、ＳＣＮ２Ｂ、ＳＣＮ３Ａ、ＳＣＮ３Ｂ、ＳＣＮ４Ａ、ＳＣＮ５Ａ、ＳＣＮ７Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ１０Ａ、ＳＣＮ１１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｂ、ＣＡＣＮＡ１Ｃ、ＣＡＣＮＡ１Ｄ、ＣＡＣＮＡ１Ｅ、ＣＡ��ＮＡ１Ｆ、ＣＡＣＮＡ１Ｇ、ＣＡＣＮＡ１Ｈ、ＣＡＣＮＡ１Ｉ、ＣＡＣＮＡ１Ｓ、ＴＲＰＡ１、ＴＲＰＣ１、ＴＲＰＣ２、ＴＲＰＣ３、ＴＲＰＣ４、ＴＲＰＣ５、ＴＲＰＣ６、ＴＲＰＣ７、ＴＲＰＭ１、ＴＲＰＭ２、ＴＲＰＭ３、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ５、ＴＲＰＭ６、ＴＲＰＭ７、ＴＲＰＭ８、ＭＣＯＬＮ１、ＭＣＯＬＮ２、ＭＣＯＬＮ３、ＰＫＤ１、ＰＫＤ２、ＰＫＤ２Ｌ１、ＰＫＤ２Ｌ２、ＴＲＰＶ１、ＴＲＰＶ２、ＴＲＰＶ３、ＴＲＰＶ４、ＴＲＰＶ５、ＴＲＰＶ６、ＣＡＴＳＰＥＲ１、ＣＡＴＳＰＥＲ２、ＣＡＴＳＰＥＲ３、ＣＡＴＳＰＥＲ４、ＴＰＣＮ１、ＴＰＣＮ２、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＡ２、ＣＮＧＡ３、ＣＮＧＡ４、ＣＮＧＢ１、ＣＮＧＢ３、ＨＣＮ１、ＨＣＮ２、ＨＣＮ３、ＨＣＮ４、ＫＣＮＭＡ１、ＫＣＮＮ１、ＫＣＮＮ２、ＫＣＮＮ３、ＫＣＮＮ４、ＫＣＮＴ１、ＫＣＮＴ２、ＫＣＮＵ１、ＫＣＮＡ１、ＫＣＮＡ２、ＫＣＮＡ３、ＫＣＮＡ４、ＫＣＮＡ５、ＫＣＮＡ６、ＫＣＮＡ７、ＫＣＮＡ１０、ＫＣＮＢ１、ＫＣＮＢ２、ＫＣＮＣ１、ＫＣＮＣ２、ＫＣＮＣ３、ＫＣＮＣ４、ＫＣＮＤ１、ＫＣＮＤ２、ＫＣＮＤ３、ＫＣＮＦ１、ＫＣＮＧ１、ＫＣＮＧ２、ＫＣＮＧ３、ＫＣＮＧ４、ＫＣＮＨ１、ＫＣＮＨ２、ＫＣＮＨ３、ＫＣＮＨ４、ＫＣＮＨ５、ＫＣＮＨ６、ＫＣＮＨ７、ＫＣＮＨ８、ＫＣＮＱ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＱ４、ＫＣＮＱ５、ＫＣＮＳ１、ＫＣＮＳ２、ＫＣＮＳ３、ＫＣＮＶ１、ＫＣＮＶ２、ＫＣＮＪ１、ＫＣＮＪ２、ＫＣＮＪ３、ＫＣＮＪ４、ＫＣＮＪ５、ＫＣＮＪ６、ＫＣＮＪ８、ＫＣＮＪ９、ＫＣＮＪ１０、ＫＣＮＪ１１、ＫＣＮＪ１２、ＫＣＮＪ１３、ＫＣＮＪ１４、ＫＣＮＪ１５、ＫＣＮＪ１６、ＫＣＮＪ１８、ＫＣＮＫ１、ＫＣＮＫ２、ＫＣＮＫ３、ＫＣＮＫ４、ＫＣＮＫ５、ＫＣＮＫ６、ＫＣＮＫ７、ＫＣＮＫ９、ＫＣＮＫ１０、ＫＣＮＫ１２、ＫＣＮＫ１３、ＫＣＮＫ１５、ＫＣＮＫ１６、ＫＣＮＫ１７、ＫＣＮＫ１８、ＨＶＣＮ１、ＨＴＲ３Ａ、ＨＴＲ３Ｂ、ＨＴＲ３Ｃ、ＨＴＲ３Ｄ、ＨＴＲ３Ｅ、ＣＨＲＮＡ１、ＣＨＲＮＡ２、ＣＨＲＮＡ３、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＡ５、ＣＨＲＮＡ６、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＡ９、ＣＨＲＮＡ１０、ＣＨＲＮＢ１、ＣＨＲＮＢ２、ＣＨＲＮＢ３、ＣＨＲＮＢ４、ＣＨＲＮＤ、ＣＨＲＮＥ、ＣＨＲＮＧ、ＧＡＢＲＡ１、ＧＡＢＲＡ２、ＧＡＢＲＡ３、ＧＡＢＲＡ４、ＧＡＢＲＡ５、ＧＡＢＲＡ６、ＧＡＢＲＢ１、ＧＡＢＲＢ２、ＧＡＢＲＢ３、ＧＡ
ＢＲＤ、ＧＡＢＲＥ、ＧＡＢＲＧ１、ＧＡＢＲＧ２、ＧＡＢＲＧ３、ＧＡＢＲＰ、ＧＡＢＲＱ、ＧＡＢＲＲ１、ＧＡＢＲＲ２、ＧＡＢＲＲ３、ＧＲＩＡ１、ＧＲＩＡ２、ＧＲＩＡ３、ＧＲＩＡ４、ＧＲＩＤ１、ＧＲＩＤ２、ＧＲＩＫ１、ＧＲＩＫ２、ＧＲＩＫ３、ＧＲＩＫ４、ＧＲＩＫ５、ＧＲＩＮ１、ＧＲＩＮ２Ａ、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＧＲＩＮ２Ｃ、ＧＲＩＮ２Ｄ、ＧＲＩＮ３Ａ、ＧＲＩＮ３Ｂ、ＧＬＲＡ１、ＧＬＲＡ２、ＧＬＲＡ３、ＧＬＲＡ４、Ｐ２ＲＸ１、Ｐ２ＲＸ２、Ｐ２ＲＸ３、Ｐ２ＲＸ４、Ｐ２ＲＸ５、Ｐ２ＲＸ６、Ｐ２ＲＸ７、ＺＡＣＮ、ＡＳＩＣ１、ＡＳＩＣ２、ＡＳＩＣ３、ＡＳＩＣ４、ＡＱＰ１、ＡＱＰ２、ＡＱＰ３、ＡＱＰ４、ＡＱＰ５、ＡＱＰ６、ＡＱＰ７、ＡＱＰ８、ＡＱＰ９、ＡＱＰ１０、ＡＱＰ１１、ＡＱＰ１２Ａ、ＡＱＰ１２Ｂ、ＭＩＰ、ＣＬＣＮ１、ＣＬＣＮ２、ＣＬＣＮ３、ＣＬＣＮ４、ＣＬＣＮ５、ＣＬＣＮ６、ＣＬＣＮ７、ＣＬＣＮＫＡ、ＣＬＣＮＫＢ、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）、ＡＮＯ１、ＡＮＯ２、ＡＮＯ３、ＡＮＯ４、ＡＮＯ５、ＡＮＯ６、ＡＮＯ７、ＡＮＯ８、ＡＮＯ９、ＡＮＯ１０、ＢＥＳＴ１、ＢＥＳＴ２、ＢＥＳＴ３、ＢＥＳＴ４、ＣＬＩＣ１、ＣＬＩＣ２、ＣＬＩＣ３、ＣＬＩＣ４、ＣＬＩＣ５、ＣＬＩＣ６、ＧＪＡ１、ＧＪＡ３、ＧＪＡ４、ＧＪＡ５、ＧＪＡ６Ｐ、ＧＪＡ８、ＧＪＡ９、ＧＪＡ１０、ＧＪＢ１、ＧＪＢ２、ＧＪＢ３、ＧＪＢ４、ＧＪＢ５、ＧＪＢ６、ＧＪＢ７、ＧＪＣ１、ＧＪＣ２、ＧＪＣ３、ＧＪＤ２、ＧＪＤ３、ＧＪＤ４、ＧＪＥ１、ＩＴＰＲ１、ＩＴＰＲ２、ＩＴＰＲ３、ＰＡＮＸ１、ＰＡＮＸ２、ＰＡＮＸ３、ＲＹＲ１、ＲＹＲ２、ＲＹＲ３、ＮＡＬＣＮ、ＳＣＮＮ１Ａ、ＳＣＮＮ１Ｂ、ＳＣＮＮ１Ｄ、ＳＣＮＮ１Ｇ、ＴＥＭ１６Ａ、ＡＤＡＭＴＳ７、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＧＰＴＬ８、ＬＰＬ、ＧＤＦ１５、ガレクチン−１、ガレクチン−２、ガレクチン−３、ガレクチン−４、ガレクチン−７、ガレクチン−８、ガレクチン−９、ガレクチン−１０、ガレクチン−１２、ガレクチン−１３、マトリックスｇｌａタンパク質（ＭＧＰ）、ＰＲＮＰ、ＤＧＡＴ１、ＧＰＡＴ３、ＤＭＣ１、ＢＬＭ、ＢＲＣＡ２、ヒト内在性レトロウイルスタイプＫ（ＨＥＲＶ−Ｋ）ファミリーのメンバー、エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１（ＥＮＴＰＤ１）、エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ２（ＥＮＴＰＤ２）、ＳＬＣ１Ａ１、ＳＬＣ１Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ１Ａ４、ＳＬＣ１Ａ５、ＳＬＣ１Ａ６、ＳＬＣ１Ａ７、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ２Ａ３、ＳＬＣ２Ａ４、ＳＬＣ２Ａ５、ＳＬＣ２Ａ６、ＳＬＣ２Ａ７、ＳＬＣ２Ａ８、ＳＬＣ２Ａ９、ＳＬＣ２Ａ１０、ＳＬＣ２Ａ１１、ＳＬＣ２Ａ１２、ＳＬＣ２Ａ１３、ＳＬＣ２Ａ１４、ＳＬＣ３Ａ１、ＳＬＣ３Ａ２、ＳＬＣ４Ａ１、ＳＬＣ４Ａ２、ＳＬＣ４Ａ３、ＳＬＣ４Ａ４、ＳＬＣ４Ａ５、ＳＬＣ４Ａ６、ＳＬＣ４Ａ７、ＳＬＣ４Ａ８、ＳＬＣ４Ａ９、ＳＬＣ４Ａ１０、ＳＬＣ４Ａ１１、ＳＬＣ５Ａ１、ＳＬＣ５Ａ２、ＳＬＣ５Ａ３、ＳＬＣ５Ａ４、ＳＬＣ５Ａ５、ＳＬＣ５Ａ６、ＳＬＣ５Ａ７、ＳＬＣ５Ａ８、ＳＬＣ５Ａ９、ＳＬＣ５Ａ１０、ＳＬＣ５Ａ１１、ＳＬＣ５Ａ１２、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＬＣ６Ａ２、ＳＬＣ６Ａ３、ＳＬＣ６Ａ４、ＳＬＣ６Ａ５、ＳＬＣ６Ａ６、ＳＬＣ６Ａ７、ＳＬＣ６Ａ８、ＳＬＣ６Ａ９、ＳＬＣ６Ａ１０、ＳＬＣ６Ａ１１、ＳＬＣ６Ａ１２、ＳＬＣ６Ａ１３、ＳＬＣ６Ａ１４、ＳＬＣ６Ａ１５、ＳＬＣ６Ａ１６、ＳＬＣ６Ａ１７、ＳＬＣ６Ａ１８、ＳＬＣ６Ａ１９、ＳＬＣ６Ａ２０、ＳＬＣ７Ａ５、ＳＬＣ７Ａ６、ＳＬＣ７Ａ７、ＳＬＣ７Ａ８、ＳＬＣ７Ａ９、ＳＬＣ７Ａ１０、ＳＬＣ７Ａ１１、ＳＬＣ７Ａ１３、ＳＬＣ７Ａ１４、ＳＬＣ８Ａ１、ＳＬＣ８Ａ２、ＳＬＣ８Ａ３、ＳＬＣ９Ａ１、ＳＬＣ９Ａ２、ＳＬＣ９Ａ３、ＳＬＣ９Ａ４、ＳＬＣ９Ａ５、ＳＬＣ９Ａ６、ＳＬＣ９Ａ７、ＳＬＣ９Ａ８、ＳＬＣ９Ａ９、ＳＬＣ９Ａ１０、ＳＬＣ９Ａ１１、ＳＬＣ９Ｂ１、ＳＬＣ９Ｂ２、ＳＬＣ１０Ａ１、ＳＬＣ１０Ａ２、ＳＬＣ１０Ａ３、ＳＬＣ１０Ａ４、ＳＬＣ１０Ａ５、ＳＬＣ１０Ａ６、ＳＬＣ１０Ａ７、ＳＬＣ１１Ａ１、ＳＬＣ１１Ａ２、ＳＬＣ１２Ａ１、ＳＬＣ１２Ａ２、ＳＬＣ１２Ａ３、ＳＬＣ１２Ａ４、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ１２Ａ６、ＳＬＣ１２Ａ７、ＳＬＣ１２Ａ８、ＳＬＣ１２Ａ９、ＳＬＣ１３Ａ１、ＳＬＣ１３Ａ２、ＳＬＣ１３Ａ３、ＳＬＣ１３Ａ４、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ１４Ａ１、ＳＬＣ１４Ａ２、ＳＬＣ１５Ａ１、ＳＬＣ１５Ａ２、ＳＬＣ１５Ａ３、ＳＬＣ１５Ａ４、ＳＬＣ１６Ａ１、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１６Ａ３、ＳＬＣ１６Ａ４、ＳＬＣ１６Ａ５、ＳＬＣ１６Ａ６、ＳＬＣ１６Ａ７、ＳＬＣ１６Ａ８、ＳＬＣ１６Ａ９、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ１１、ＳＬＣ１６Ａ１２、ＳＬＣ１６Ａ１３、ＳＬＣ１６Ａ１４、ＳＬＣ１７Ａ１、ＳＬＣ１７Ａ２、ＳＬＣ１７Ａ３、ＳＬＣ１７Ａ４、ＳＬＣ１７Ａ５、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＬＣ１７Ａ７、ＳＬＣ１７Ａ８、ＳＬＣ１７Ａ９、ＳＬＣ１８Ａ１、ＳＬＣ１８Ａ２、ＳＬＣ１８Ａ３、ＳＬＣ１９Ａ１、ＳＬＣ１９Ａ２、ＳＬＣ１９Ａ３、ＳＬＣ２０Ａ１、ＳＬＣ２０Ａ２、ＳＬＣＯ１Ａ２、ＳＬＣＯ１Ｂ１、ＳＬＣＯ１Ｂ３、ＳＬＣＯ１Ｃ１、ＳＬＣＯ２Ａ１、ＳＬＣＯ２Ｂ１、ＳＬＣＯ３Ａ１、ＳＬＣＯ４Ａ１、ＳＬＣＯ４Ｃ１、ＳＬＣＯ５Ａ１、ＳＬＣＯ６Ａ１、ＳＬＣ２２Ａ１、ＳＬＣ２２Ａ２、ＳＬＣ２２Ａ３、ＳＬＣ２２Ａ４、ＳＬＣ２２Ａ５、ＳＬＣ２２Ａ６、ＳＬＣ２２Ａ７、ＳＬＣ２２Ａ８、ＳＬＣ２２Ａ９、ＳＬＣ２２Ａ１０、ＳＬＣ２２Ａ１１、ＳＬＣ２２Ａ１２、ＳＬＣ２２Ａ１３、ＳＬＣ２２Ａ１４、ＳＬＣ２２Ａ１５、ＳＬＣ２２Ａ１６、ＳＬＣ２２Ａ１７、ＳＬＣ２２Ａ１８、ＳＬＣ２２Ａ１８ＡＳ，ＳＬＣ２２Ａ１９、ＳＬＣ２２Ａ２０、ＳＬＣ２２Ａ２３、ＳＬＣ２２Ａ２４、ＳＬＣ２２Ａ２５、ＳＬＣ２２Ａ３１、ＳＬＣ２３Ａ１、ＳＬＣ２３Ａ２、ＳＬＣ２３Ａ３、ＳＬＣ２３Ａ４、ＳＬＣ２４Ａ１、ＳＬＣ２４Ａ２、ＳＬＣ２４Ａ３、ＳＬＣ２４Ａ４、ＳＬＣ２４Ａ５、ＳＬＣ２４Ａ６、ＳＬＣ２５Ａ１、ＳＬＣ２５Ａ２、ＳＬＣ２５Ａ３、ＳＬＣ２５Ａ４、ＳＬＣ２５Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ６、ＳＬＣ２５Ａ７、ＳＬＣ２５Ａ８、ＳＬＣ２５Ａ９、ＳＬＣ２５Ａ１０、ＳＬＣ２５Ａ１１、ＳＬＣ２５Ａ１２、ＳＬＣ２５Ａ１３、ＳＬＣ２５Ａ１４、ＳＬＣ２５Ａ１５、ＳＬＣ２５Ａ１６、ＳＬＣ２５Ａ１７、ＳＬＣ２５Ａ１８、ＳＬＣ２５Ａ１９，ＳＬＣ２５Ａ２０、ＳＬＣ２５Ａ２１、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＳＬＣ２５Ａ２３、ＳＬＣ２５Ａ２４、ＳＬＣ２５Ａ２５、ＳＬＣ２５Ａ２６、ＳＬＣ２５Ａ２７、ＳＬＣ２５Ａ２８、ＳＬＣ２５Ａ２９、ＳＬＣ２５Ａ３０、ＳＬＣ２５Ａ３１、ＳＬＣ２５Ａ３２、ＳＬＣ２５Ａ３３、ＳＬＣ２５Ａ３４、ＳＬＣ２５Ａ３５、ＳＬＣ２５Ａ３６、ＳＬＣ２５Ａ３７，ＳＬＣ２５Ａ３８、ＳＬＣ２５Ａ３９、ＳＬＣ２５Ａ４０、ＳＬＣ２５Ａ４１、ＳＬＣ２５Ａ４２、ＳＬＣ２５Ａ４３、ＳＬＣ２５Ａ４４、ＳＬＣ２５Ａ４５、ＳＬＣ２５Ａ４６、ＳＬＣ２６Ａ１、ＳＬＣ２６Ａ２、ＳＬＣ２６Ａ３、ＳＬＣ２６Ａ４、ＳＬＣ２６Ａ５、ＳＬＣ２６Ａ６、ＳＬＣ２６Ａ７、ＳＬＣ２６Ａ８、ＳＬＣ２６Ａ９、ＳＬＣ２６Ａ１０、ＳＬＣ２６Ａ１１、ＳＬＣ２７Ａ１、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＬＣ２７Ａ３、ＳＬＣ２７Ａ４、ＳＬＣ２７Ａ５、ＳＬＣ２７Ａ６、ＳＬＣ２８Ａ１、ＳＬＣ２８Ａ２、ＳＬＣ２８Ａ３、ＳＬＣ２９Ａ１、ＳＬＣ２９Ａ２、ＳＬＣ２９Ａ３、ＳＬＣ２９Ａ４、ＳＬＣ３０Ａ１、ＳＬＣ３０Ａ２、ＳＬＣ３０Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＣ３０Ａ５、ＳＬＣ３０Ａ６、ＳＬＣ３０Ａ７、ＳＬＣ３０Ａ８、ＳＬＣ３０Ａ９、ＳＬＣ３０Ａ１０、ＳＬＣ３１Ａ１、ＳＬＣ３１Ａ２、ＳＬＣ３２Ａ１、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ３４Ａ１、ＳＬＣ３４Ａ２、ＳＬＣ３４Ａ３、ＳＬＣ３５Ａ１、ＳＬＣ３５Ａ２、ＳＬＣ３５Ａ３、ＳＬＣ３５Ａ４、ＳＬＣ３５Ａ５、ＳＬＣ３５Ｂ１、ＳＬＣ３５Ｂ２、ＳＬＣ３５Ｂ３、ＳＬＣ３５Ｂ４、ＳＬＣ３５Ｃ１、ＳＬＣ３５Ｃ２、ＳＬＣ３５Ｄ１、ＳＬＣ３５Ｄ２、ＳＬＣ３５Ｄ３、ＳＬＣ３５Ｅ１、ＳＬＣ３５Ｅ２、ＳＬＣ３５Ｅ３、ＳＬＣ３５Ｅ４、ＳＬＣ３５Ｆ１、ＳＬＣ３５Ｆ２、ＳＬＣ３５Ｆ３、ＳＬＣ３５Ｆ４、ＳＬＣ３５Ｆ５、ＳＬＣ３５Ｇ１、ＳＬＣ３５Ｇ３、ＳＬＣ３５Ｇ４、ＳＬＣ３５Ｇ５、ＳＬＣ３５Ｇ６、ＳＬＣ３６Ａ１、ＳＬＣ３６Ａ２、ＳＬＣ３６Ａ３、ＳＬＣ３６Ａ４、ＳＬＣ３７Ａ１、ＳＬＣ３７Ａ２、ＳＬＣ３７Ａ３、ＳＬＣ３７Ａ４、ＳＬＣ３８Ａ１、ＳＬＣ３８Ａ２、ＳＬＣ３８Ａ３、ＳＬＣ３８Ａ４、ＳＬＣ３８Ａ５、ＳＬＣ３８Ａ６、ＳＬＣ３８Ａ７、ＳＬＣ３８Ａ８、ＳＬＣ３８Ａ９、ＳＬＣ３８Ａ１０、ＳＬＣ３８Ａ１１、ＳＬＣ３９Ａ１、ＳＬＣ３９Ａ２、ＳＬＣ３９Ａ３、ＳＬＣ３９Ａ４、ＳＬＣ３９Ａ５、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＬＣ３９Ａ７、ＳＬＣ３９Ａ８、ＳＬＣ３９Ａ９、ＳＬＣ３９Ａ１０、ＳＬＣ３９Ａ１１、ＳＬＣ３９Ａ１２、ＳＬＣ３９Ａ１３、ＳＬＣ３９Ａ１４、ＳＬＣ４０Ａ１、ＳＬＣ４１Ａ１、ＳＬＣ４１Ａ２、ＳＬＣ４１Ａ３、ＲｈＡＧ、ＲｈＢＧ、ＲｈＣＧ、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ２、ＳＬＣ４３Ａ３、ＳＬＣ４４Ａ１、ＳＬＣ４４Ａ２、ＳＬＣ４４Ａ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＬＣ４４Ａ５、ＳＬＣ４５Ａ１、ＳＬＣ４５Ａ２、ＳＬＣ４５Ａ３、ＳＬＣ４５Ａ４、ＳＬＣ４６Ａ１、ＳＬＣ４６Ａ２、ＳＬＣ４６Ａ３、ＳＬＣ４７Ａ１、ＳＬＣ４７Ａ２、ＨＣＰ−１、ＭＦＳＤ５、ＭＦＳＤ１０、ＳＬＣ５０Ａ１、ＯＳＴα、ＯＳＴβ、ＳＬＣ５２Ａ１、ＳＬＣ５２Ａ２、ならびにＳＬＣ５２Ａ３から選択される、請求項１、２または３に記載の方法。
【請求項１５】
前記標的抗原が、発現させることが困難であるか、またはそれに対する抗体を産生させることが困難である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記標的タンパク質の発現が、宿主産生細胞において細胞毒性をもたらす、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記標的タンパク質が、組換えにより発現されかつ／または精製される場合、不十分な収率、安定性、溶解性、および／または機能活性を示す、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記複合体の前記ポリヌクレオチドまたはｍＲＮＡが、次の：コンセンサスコザック配列；前記ｍＲＮＡの５’末端上の７−メチルグアノシンキャップ；前記ｍＲＮＡ転写物の３’終端で見られるポリアデノシン（ポリＡ）テール；ならびに５’−および３’−非翻訳領域（ＵＴＲ）の１つ以上を含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記投与が、非経口、静脈内、筋肉内、鼻腔内、または皮下である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記標的タンパク質がＲＸＦＰ１である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記複合体が、配列番号４、または配列番号２、４および３７のいずれか１つの核酸配列を含むポリリボヌクレオチドまたはｍＲＮＡを含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記標的タンパク質がＳＬＣ５２Ａ２である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記複合体が、配列番号７、または配列番号５、７および４０のいずれか１つの核酸配列を含むポリリボヌクレオチドまたはｍＲＮＡを含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記標的タンパク質がＡＮＧＰＴＬ８である、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記複合体が、配列番号１０、または配列番号８、１０および４３のいずれか１つの核酸配列を含むポリリボヌクレオチドまたはｍＲＮＡを含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記標的タンパク質がＴＳＨＲである、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記複合体が、配列番号１６、または配列番号１４、１６および４６のいずれか１つの核酸配列を含むポリリボヌクレオチドまたはｍＲＮＡを含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記標的タンパク質がＡＰＪである、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記複合体が、配列番号１９、または配列番号１７、１９および４９のいずれか１つの核酸配列を含むポリリボヌクレオチドまたはｍＲＮＡを含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記標的タンパク質がｇｐ１３０である、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記複合体が、配列番号２２、または配列番号２０、２２および５２のいずれか１つの核酸配列を含むポリリボヌクレオチドまたはｍＲＮＡを含む、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記標的タンパク質がガレクチン３である、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記複合体が、配列番号５５、または配列番号２６、５５および５６のいずれか１つの核酸配列を含むポリリボヌクレオチドまたはｍＲＮＡを含む、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記複合体が、約３０〜１５０ｎｍの直径を有する、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記複合体がヘルパー脂質を含む、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記複合体が、（ｉ）カチオン性脂質、（ｉｉ）ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、（ｉｉｉ）中性脂質、例えば、ＤＳＰＣ、および（ｉｖ）ステルス脂質、例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１またはＳ０３３の任意の組み合わせを含む、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記動物が、１０μｇ、１２．５μｇ、２０μｇ、２５μｇ、３０μｇ、４０μｇ、５０μｇ、６０μｇ、７０μｇ、８０μｇ、９０μｇ、１００μｇ、１１０μｇ、１２０μｇ、１３０μｇ、１４０μｇ、または１５０μｇのポリリボヌクレオチドを投与される、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記カチオン性脂質が、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジオレオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＤＡＰ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ジオレオイルカルバミル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＣＤＡＰ）、１，２−ジリネオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＬＩＮＤＡＰ）、ジラウリル（Ｃ１２：０）トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＬＴＡＰ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ＤＣ−Ｃｈｏｌ、ジオレオイルオキシ−Ｎ−［２−スペルミンカルボキサミド）エチル｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、３−ジメチルアミノ−２−（コレスト−５−エン−３−β−オキシブタン−４−オキシ）−１−（シス，シス−９，１２−オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣＬｉｎＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ジオレイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）、２−［５’−（コレスト−５−エン−３β−オキシ）−３’−オキサペントキシ）−３−ジメチル−１−（シス，シス−９’，１２’−オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣｐＬｉｎＤＭＡ）およびＮ，Ｎ−ジメチル−３，４−ジオレイルオキシベンジルアミン（ＤＭＯＢＡ）、ならびに１，２−Ｎ，Ｎ’−ジオレイルカルバミル−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＯｃａｒｂＤＡＰ）からなる群から選択される、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記カチオン性脂質がＤＯＴＡＰまたはＤＬＴＡＰである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記標的タンパク質に特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマを作製するステップをさらに含む、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記標的タンパク質に特異的に結合する抗体を精製するステップをさらに含む、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記標的タンパク質に特異的に結合する精製された抗体に由来するキメラまたはヒト化抗体を作製するステップをさらに含む、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記方法が、ｃＤＮＡ、タンパク質もしくはペプチド、ウイルス粒子、または細胞全体による免疫化を含む方法と比較して、１回目の採血または２回目の採血由来の血清中においてより高い抗体力価を生じる、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記方法が、ｃＤＮＡ、タンパク質もしくはペプチド、ウイルス粒子、または細胞全体による免疫化を含む方法よりも、標的タンパク質に特異的な抗体を産生するハイブリドーマをより多く生じる、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記標的タンパク質がヒト標的タンパク質であり、非ヒト動物が、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ラクダ科動物、サメ、サル、ブタ、またはウマである、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記標的タンパク質に特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマであって、前記ハイブリドーマが請求項１〜４５のいずれか１つの方法によって得られた、ハイブリドーマ。
【請求項４７】
前記標的タンパク質に特異的に結合するポリクローナル抗体の混合物であって、前記混合物が請求項１〜４５のいずれか１つの方法によって得られた、混合物。
【請求項４８】
前記標的タンパク質に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体であって、前記モノクローナル抗体が請求項１〜４５のいずれか１つの方法によって得られた、単離されたモノクローナル抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１６年８月７日出願の米国仮出願第６２／３７１，８３４号、２０１６年９月２６日出願の米国仮出願第６２／３９９，５４４号の利益を主張するものであり、各々は、参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的手段により提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０１７年８月３日に作成された前記配列表のＡＳＣＩＩ複製は、ＰＡＴ０５７１６９−ＷＯ−ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、サイズは１４６，９９２バイトである。
【０００３】
本開示は、免疫学の分野である。具体的には、本開示は、カチオン性脂質、およびポリリボヌクレオチド分子、例えば、免疫原（例えば、標的タンパク質またはその断片）をコードするｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド分子を含む組成物を使用する免疫化の方法に関する。本開示はまた、治療用抗体の作製の目的で免疫化された動物（例えば、非ヒト動物）から抗体（例えば、モノクローナル抗体）を作製する方法、および抗体それら自体に関する。
【背景技術】
【０００４】
インビボにおける治療用モノクローナル抗体の開発は、多くの場合、免疫化のために使用することができる高品質な抗原を作製する能力に制限される。理想的には、抗原は、完全な構造上のコンフォメーションを有して高度に精製されたタンパク質であるべきであり、かつ免疫寛容を破り、ロバストな体液性応答を誘導するために動物宿主株と十分な配列の差異を有するべきである。しかし、抗原としての使用が意図される多くの標的タンパク質については、これらの要求を満たすことは、過剰発現／精製をさせないタンパク質の本質的に不十分な生物物理学的特性、宿主産生細胞における細胞毒性、および標的タンパク質のアミノ酸配列の不十分な免疫原性などの問題のために、不可能である。
【０００５】
従来の動物免疫化の方法では、抗体の産生について２つの一般的な戦略を採用してきた。第１の戦略は、免疫応答を増強するための、アジュバントの存在下で精製された形態における全長タンパク質抗原の反復的な注射を含む。小さなサイズから中程度のサイズの可溶性タンパク質については、この処置は、その天然のコンフォメーションの抗原に対するモノクローナル抗体の産生に関して、奏功する方法となる場合がある。極めて大きいタンパク質、膜貫通タンパク質、特有な翻訳後修飾を有するタンパク質、または溶解性の低いタンパク質については、この方法は実用性に非常に制約があり、とゆうのも、免疫化のために必要な量の純粋な天然の全長タンパク質を得ることが難しいためである。第２の戦略は、目的の抗原をコードするＤＮＡコンストラクトを有する動物の免疫化を必要とする。この戦略により、天然状態において精製の困難なタンパク質を、その場で発現させることが可能になる。しかし、抗体力価の産生が相対的に低いことを欠点として持ち、これが結局のところモノクローナルハイブリドーマによる産生の産生量の低さと相関する（Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｍａｋｉｎｇ  ａｎｄ  ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，２０１３）。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本開示は、動物（例えば、非ヒト動物）において免疫応答を誘発するための方法であって：（ａ）少なくとも１つのカチオン性脂質を、抗原決定基をコードするポリリボヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）などのポリヌクレオチドと混合し、それによりカチオン性脂質−ポリヌクレオチド複合体を形成するステップと；（ｂ）その脂質−ポリヌクレオチド複合体を動物に投与するステップとを含む、方法に関する。本発明はさらに、遺伝的免疫化方法であって、ポリヌクレオチドが、免疫原（例えば、標的タンパク質またはその断片）をコードするｍＲＮＡ分子などのポリリボヌクレオチド分子である方法に関する。本発明はさらに、本明細書に記載の遺伝的免疫化方法の使用と、免疫化された動物から抗体を単離するステップとをさらに含む、抗体（例えば、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体）を作製するための方法に関する。
【０００７】
本発明はまた、モノクローナル抗体を作製するための方法であって、（ａ）少なくとも１つのカチオン性脂質を、ポリリボヌクレオチドと混合し、それにより脂質−ポリヌクレオチド複合体を形成するステップであって、ポリヌクレオチドが免疫原をコードするｍＲＮＡ配列を含むステップと；（ｂ）脂質−ポリヌクレオチド複合体を少なくとも１匹のマウスに投与するステップと；（ｃ）リンパ球（例えば、Ｂリンパ球）または脾細胞などの抗体産生細胞を免疫化されたマウスから取り出すステップと；（ｄ）免疫化されたマウス由来のＢリンパ球を骨髄腫細胞と融合して、それによりハイブリドーマを作製するステップと；（ｅ）ハイブリドーマをクローニングするステップと；（ｆ）抗免疫原抗体を産生する陽性クローンを選択するステップと；（ｇ）抗免疫原抗体産生クローンを培養するステップと；（ｈ）抗免疫原抗体を培養液から単離するステップとを含む方法に関する。ある種の態様では、抗体を作製するために本明細書で提供される方法はさらに、そのような抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列、ならびに対応するコード化核酸配列を決定するステップを含む。特定の態様では、抗体を作製するために本明細書で提供される方法はさらに、その抗免疫原抗体のキメラ抗体またはヒト化抗体を作製するステップを含む。
【０００８】
本開示はまた、免疫組織を、カチオン性脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含有するｍＲＮＡで免疫化された動物から回収し、Ｂ細胞を選択的に単離する方法に関する。Ｂ細胞は、所望の特性を有する抗体の産生のために直接的にスクリーニングされ、抗体は、組換えによって直接的にクローン化され、かつ発現されて、ハイブリドーマの作製の必要を回避する。
【０００９】
本開示のｍＲＮＡ被包性ＬＮＰはまた、免疫化された宿主動物（例えば、齧歯動物（例えば、マウスおよびラット）、ウサギ、ニワトリ、雌ウシ、ラクダ科動物、ブタ、ヒツジ、ヤギ、サメ、および非ヒト霊長類など）の免疫組織から組換え体抗体ライブラリを作製する目的のために使用してもよい。続いて、このライブラリを、ファージまたは酵母ディスプレイなどの異種宿主系において、所望の特性についてスクリーニングすることができる。
【００１０】
ポリヌクレオチドに基づく、例えばｍＲＮＡに基づく、本開示の免疫化の方法は、抗原の作製および／または抗体産生に固有の上述の障害と関連する問題の多くに対処した。とりわけ、前記方法は、標的タンパク質抗原を直接発現し精製する必要性を不要にする。動物宿主自体の細胞機構を使用して、標的タンパク質を作り出し、それを免疫系に提示する。真核生物の標的タンパク質に関して、このことは、真核生物特異的な翻訳後修飾およびタンパク質プロセシングの追加を許容する付加的な利点を有する。特に、免疫化に使用される精製されていないｍＲＮＡは、調製物中の二重鎖ＲＮＡ要素の存在に一部起因して、高い炎症性の性質を有する。二重鎖ＲＮＡは、トール様受容体をはじめとした自然免疫系を含む受容体により認識される病原体関連分子パターンを提示することができる。いずれかの特定の理論に束縛されるわけではないが、このことが標的タンパク質に対する体液性応答をブーストするためのアジュバントとして機能し、高い力価の抗体産生をもたらすと考えられている。
【００１１】
免疫原、例えば、標的タンパク質またはその断片に対するモノクローナル抗体の発生は、特に、前記標的タンパク質またはその断片をコードするｍＲＮＡによる動物の免疫化を介して促進され得る。この方法は、標的タンパク質を異種で生成し、かつ精製する必要がないため、膜貫通タンパク質（例えば、複数回膜貫通タンパク質）、例えば、Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）などの、特異的な抗体を開発するために技術的な課題を歴史的に有してきたタンパク質に対して多大な利点を提供する。いずれかの特定の理論に束縛されるわけではないが、ｍＲＮＡのアジュバント様特性により誘発される宿主防御機構は、血清力価の迅速な発達をもたらし、かつＤＮＡ免疫化または他の従来の免疫化の方法（例えば、組換え体タンパク質による免疫化）よりも優れた選択になると考えられている。
【００１２】
本開示の非限定的実施形態は、以下の態様において説明される。
【００１３】
態様１．標的タンパク質に対する抗体（例えば、モノクローナル抗体）を作製するための方法であって、（ａ）少なくとも１つのカチオン性脂質を、標的タンパク質またはその断片をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）などのポリリボヌクレオチドと混合し、それにより、カチオン性脂質−ポリリボヌクレオチド複合体（例えば、ｍＲＮＡ−ＬＮＰ複合体）を形成するステップと；（ｂ）脂質−ポリリボヌクレオチド複合体を非ヒト動物に投与するステップと；（ｃ）標的タンパク質に特異的に結合する抗体を動物から得るステップとを含む、方法。
【００１４】
態様２．標的タンパク質に対する抗体（例えば、モノクローナル抗体）を作製するための方法であって、（ａ）脂質−ポリリボヌクレオチド複合体（例えば、ｍＲＮＡ−ＬＮＰ複合体）を非ヒト動物に投与し、それにより、標的タンパク質に対する免疫応答を誘導するステップであって、複合体が、標的タンパク質またはその断片をコードするｍＲＮＡなどのポリリボヌクレオチドを有する少なくとも１つのカチオン性脂質を含むステップと；（ｂ）動物によって産生される標的タンパク質に特異的に結合する抗体を得るステップとを含む、方法。
【００１５】
態様３．標的タンパク質が膜貫通タンパク質である、態様１または２の方法。
【００１６】
態様４．膜貫通タンパク質が、次の：
（ｉ）Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）；
（ｉｉ）１回膜貫通型タンパク質受容体；
（ｉｉｉ）腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）メンバー；
（ｉｖ）インターロイキン（ＩＬ）受容体；
（ｖ）イオンチャネル；
（ｖｉ）溶質輸送体；
（ｖｉｉ）免疫受容体；および
（ｖｉｉｉ）複数回膜貫通タンパク質
から選択される、態様３の方法。
【００１７】
態様５．膜貫通タンパク質が、Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）などの複数回膜貫通タンパク質である、態様３または４の方法。
【００１８】
態様６．ＧＰＣＲが、ＲＸＦＰ１、ＴＳＨＲ、ＡＰＪ、ＧＰＲ４０、ＧＰＲ６４、ＧＰＲ４、またはＧＰＲ１５である、態様５の方法。
【００１９】
態様７．膜貫通タンパク質が、ＧＰ１３０などの１回膜貫通型タンパク質受容体タンパク質受容体、またはＳＬＣ５２Ａ２などの複数回膜貫通タンパク質である、態様３または４の方法。
【００２０】
態様８．膜貫通タンパク質が、ＩＬ−１受容体、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−３受容体、ＩＬ−４受容体、ＩＬ−５受容体、ＩＬ−６受容体、ＩＬ−７受容体、ＩＬ−８受容体、ＩＬ−９受容体、ＩＬ−１０受容体、ＩＬ−１１受容体、ＩＬ−１２受容体、ＩＬ−１３受容体、ＩＬ−１４受容体、ＩＬ−１５受容体、ＩＬ−１６受容体、ＩＬ−１７受容体、ＩＬ−１８受容体、ＩＬ−１９受容体、ＩＬ−２０受容体、ＩＬ−２１受容体、ＩＬ−２２受容体、ＩＬ−２３受容体、ＩＬ−２４受容体、ＩＬ−２５受容体、ＩＬ−２６受容体、ＩＬ−２７受容体、ＩＬ−２８受容体、ＩＬ−２９受容体、ＩＬ−３０受容体、ＩＬ−３１受容体、ＩＬ−３２受容体、ＩＬ−３３受容体、ＩＬ−３５受容体、またはＩＬ−３６受容体などのインターロイキン（ＩＬ）受容体である、態様３または４の方法。
【００２１】
態様９．膜貫通タンパク質が、次の：ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ３、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１４、ＴＮＦＲＳＦ１６、ＴＮＦＲＳＦ１７、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＴＮＦＲＳＦ１９、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＲＳＦ２５、およびＴＮＦＲＳＦ２７からなる群から選択される腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）メンバーである、態様３または４の方法。
【００２２】
態様１０．膜貫通タンパク質が、ＴＭＥＭ１６Ａなどのイオンチャネルである、態様３または４の方法。
【００２３】
態様１１．膜貫通タンパク質が、溶質輸送体である、態様３または４の方法。
【００２４】
態様１２．標的タンパク質が、次の：ＡＣＫＲ１、ＡＣＫＲ２、ＡＣＫＲ３、ＡＣＫＲ４、ＡＤＣＹＡＰ１Ｒ１、ＡＤＧＲＡ１、ＡＤＧＲＡ２、ＡＤＧＲＡ３、ＡＤＧＲＢ１、ＡＤＧＲＢ２、ＡＤＧＲＢ３、ＡＤＧＲＤ１、ＡＤＧＲＤ２、ＡＤＧＲＥ１、ＡＤＧＲＥ２、ＡＤＧＲＥ３、ＡＤＧＲＥ４Ｐ、ＡＤＧＲＥ５、ＡＤＧＲＦ１、ＡＤＧＲＦ２、ＡＤＧＲＦ３、ＡＤＧＲＦ４、ＡＤＧＲＦ５、ＡＤＧＲＧ１、ＡＤＧＲＧ２、ＡＤＧＲＧ３、ＡＤＧＲＧ４、ＡＤＧＲＧ５、ＡＤＧＲＧ６、ＡＤＧＲＧ７、ＡＤＧＲＬ１、ＡＤＧＲＬ２、ＡＤＧＲＬ３、ＡＤＧＲＬ４、ＡＤＧＲＶ１、ＡＤＯＲＡ１、ＡＤＯＲＡ２Ａ、ＡＤＯＲＡ２Ｂ、ＡＤＯＲＡ３、ＡＤＲＡ１Ａ、ＡＤＲＡ１Ｂ、ＡＤＲＡ１Ｄ、ＡＤＲＡ２Ａ、ＡＤＲＡ２Ｂ、ＡＤＲＡ２Ｃ、ＡＤＲＢ１、ＡＤＲＢ２、ＡＤＲＢ３、ＡＧＴＲ１、ＡＧＴＲ２、ＡＰＬＮＲ／ＡＰＪ、ＡＳＧＲ１、ＡＳＧＲ２、ＡＶＰＲ１Ａ、ＡＶＰＲ１Ｂ、ＡＶＰＲ２、ＢＤＫＲＢ１、ＢＤＫＲＢ２、ＢＲＳ３、ＢＲＳ３、Ｃ３ＡＲ１、Ｃ５ＡＲ１、Ｃ５ＡＲ２、ＣＡＬＣＲ、ＣＡＬＣＲＬ、ＣＡＳＲ、ＣＣＫＡＲ、ＣＣＫＢＲ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲＬ２、ＣＥＬＳＲ１、ＣＥＬＳＲ２、ＣＥＬＳＲ３、ＣＨＲＭ１、ＣＨＲＭ２、ＣＨＲＭ３、ＣＨＲＭ４、ＣＨＲＭ５、ＣＭＫＬＲ１、ＣＮＲ１、ＣＮＲ２、ＣＲＨＲ１、ＣＲＨＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＹＳＬＴＲ１、ＣＹＳＬＴＲ２、ＤＲＤ１、ＤＲＤ２、ＤＲＤ３、ＤＲＤ４、ＤＲＤ５、ＥＤＮＲＡ、ＥＤＮＲＢ、Ｆ２Ｒ、Ｆ２ＲＬ１、Ｆ２ＲＬ２、Ｆ２ＲＬ３、ＦＦＡＲ１、ＦＦＡＲ２、ＦＦＡＲ３、ＦＦＡＲ４、ＦＰＲ１、ＦＰＲ２、ＦＰＲ２、ＦＰＲ３、ＦＳＨＲ、ＦＺＤ１、ＦＺＤ１０、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ６、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＧＡＢＢＲ１、ＧＡＢＢＲ２、ＧＡＬＲ１、ＧＡＬＲ２、ＧＡＬＲ３、ＧＣＧＲ、ＧＨＲＨＲ、ＧＨＳＲ、ＧＩＰＲ、ＧＬＰ１Ｒ、ＧＬＰ２Ｒ、ＧＮＲＨＲ、ＧＮＲＨＲ２、ＧＰＢＡＲ１、ＧＰＥＲ１、ＧＰＲ１、ＧＰＲ４、ＧＰＲ１２、ＧＰＲ１５、ＧＰＲ１７、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１９、ＧＰＲ２０、ＧＰＲ２１、ＧＰＲ２２、ＧＰＲ２５、ＧＰＲ２６、ＧＰＲ２７、ＧＰＲ３、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ３２、ＧＰＲ３３、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ３５、ＧＰＲ３７、ＧＰＲ３７Ｌ１、ＧＰＲ３９、ＧＰＲ４０、ＧＰＲ４２、ＧＰＲ４２、ＧＰＲ４５、ＧＰＲ５０、ＧＰＲ５２、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ６、ＧＰＲ６１、ＧＰＲ６２、ＧＰＲ６３、ＧＰＲ６５、ＧＰＲ６８、ＧＰＲ７５、ＧＰＲ７８、ＧＰＲ７９、ＧＰＲ８２、ＧＰＲ８３、ＧＰＲ８４、ＧＰＲ８５、ＧＰＲ８７、ＧＰＲ８８、ＧＰＲ１０１、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１３２、ＧＰＲ１３５、ＧＰＲ１３７、ＧＰＲ１３９、ＧＰＲ１４１、ＧＰＲ１４２、ＧＰＲ１４３、ＧＰＲ１４６、ＧＰＲ１４８、ＧＰＲ１４９、ＧＰＲ１５、ＧＰＲ１５０、ＧＰＲ１５１、ＧＰＲ１５２、ＧＰＲ１５３、ＧＰＲ１５６、ＧＰＲ１５７、ＧＰＲ１５８、ＧＰＲ１６０、ＧＰＲ１６１、ＧＰＲ１６２、ＧＰＲ１７１、ＧＰＲ１７３、ＧＰＲ１７４、ＧＰＲ１７６、ＧＰＲ１７９、ＧＰＲ１８２、ＧＰＲ１８３、ＧＰＲＣ５Ａ、ＧＰＲＣ５Ｂ、ＧＰＲＣ５Ｃ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＰＲＣ６Ａ、ＧＲＭ１、ＧＲＭ２、ＧＲＭ３、ＧＲＭ４、ＧＲＭ５、ＧＲＭ６、ＧＲＭ７、ＧＲＭ８、ＧＲＰＲ、ＨＣＡＲ１、ＨＣＡＲ２、ＨＣＡＲ３、ＨＣＲＴＲ１、ＨＣＲＴＲ２、ＨＲＨ１、ＨＲＨ２、ＨＲＨ３、ＨＲＨ４、ＨＴＲ１Ａ、ＨＴＲ１Ｂ、ＨＴＲ１Ｄ、ＨＴＲ１Ｅ、ＨＴＲ１Ｆ、ＨＴＲ２Ａ、ＨＴＲ２Ｂ、ＨＴＲ２Ｃ、ＨＴＲ４、ＨＴＲ５Ａ、ＨＴＲ５ＢＰ、ＨＴＲ６、ＨＴＲ７、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＬＧＲ３、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、ＬＧＲ６、ＬＨＣＧＲ、ＬＰＡＲ１、ＬＰＡＲ２、ＬＰＡＲ３、ＬＰＡＲ４、ＬＰＡＲ５、ＬＰＡＲ６、ＬＴＢ４Ｒ、ＬＴＢ４Ｒ２、ＭＡＳ１、ＭＡＳ１Ｌ、ＭＣ１Ｒ、ＭＣ２Ｒ、ＭＣ３Ｒ、ＭＣ４Ｒ、ＭＣ５Ｒ、ＭＣＨＲ１、ＭＣＨＲ２、ＭＬＮＲ、ＭＲＧＰＲＤ、ＭＲＧＰＲＥ、ＭＲＧＰＲＦ、ＭＲＧＰＲＧ、ＭＲＧＰＲＸ１、ＭＲＧＰＲＸ２、ＭＲＧＰＲＸ３、ＭＲＧＰＲＸ４、ＭＴＮＲ１Ａ、ＭＴＮＲ１Ｂ、ＮＭＢＲ、ＮＭＵＲ１、ＮＭＵＲ２、ＮＰＢＷＲ１、ＮＰＢＷＲ２、ＮＰＦＦＲ１、ＮＰＦＦＲ２、ＮＰＳＲ１、ＮＰＹ１Ｒ、ＮＰＹ２Ｒ、ＮＰＹ４Ｒ、ＮＰＹ５Ｒ、ＮＰＹ６Ｒ、ＮＴＳＲ１、ＮＴＳＲ２、ＯＰＮ３、ＯＰＮ４、ＯＰＮ５、ＯＰＲＤ１、ＯＰＲＫ１、ＯＰＲＬ１、ＯＰＲＭ１、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＸＥＲ１、ＯＸＧＲ１、ＯＸＴＲ、Ｐ２ＲＹ１、Ｐ２ＲＹ１０、Ｐ２ＲＹ１１、Ｐ２ＲＹ１２、Ｐ２ＲＹ１３、Ｐ２ＲＹ１４、Ｐ２ＲＹ２、Ｐ２ＲＹ４、Ｐ２ＲＹ６、Ｐ２ＲＹ８、ＰＲＬＨＲ、ＰＲＯＫＲ１、ＰＲＯＫＲ２、ＰＴＡＦＲ、ＰＴＧＤＲ、ＰＴＧＤＲ２、ＰＴＧＥＲ１、ＰＴＧＥＲ２、ＰＴＧＥＲ３、ＰＴＧＥＲ４、ＰＴＧＦＲ、ＰＴＧＩＲ、ＰＴＨ１Ｒ、ＰＴＨ２Ｒ、ＱＲＦＰＲ、ＲＸＦＰ１、ＲＸＦＰ２、ＲＸＦＰ３、ＲＸＦＰ４、Ｓ１ＰＲ１、Ｓ１ＰＲ２、Ｓ１ＰＲ３、Ｓ１ＰＲ４、Ｓ１ＰＲ５、ＳＣＴＲ、ＳＭＯ、ＳＳＴＲ１、ＳＳＴＲ２、ＳＳＴＲ３、ＳＳＴＲ４、ＳＳＴＲ５、ＳＵＣＮＲ１、ＴＡＡＲ１、ＴＡＡＲ２、ＴＡＡＲ３、ＴＡＡＲ４Ｐ、ＴＡＡＲ５、ＴＡＡＲ６、ＴＡＡＲ８、ＴＡＡＲ９、ＴＡＣＲ１、ＴＡＣＲ２、ＴＡＣＲ３、ＴＡＳ１Ｒ１、ＴＡＳ１Ｒ２、ＴＡＳ１Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ１９、ＴＡＳ２Ｒ２０、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ３０、ＴＡＳ２Ｒ３１、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４２、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ６０、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＢＸＡ２Ｒ、ＴＰＲＡ１、ＴＲＨＲ、ＴＳＨＲ、ＵＴＳ２Ｒ、ＶＩＰＲ１、ＶＩＰＲ２、ＸＣＲ１、ＴＣＲ−α、ＴＣＲ−β、ＣＤ３、ζ−鎖アクセサリー、ＣＤ４、ＣＤ８、ＳＩＧＩＲＲ（単一のＩｇおよびＴＩＲドメイン含有）、マンノース受容体（ＭＲ）、アシアロ糖タンパク質受容体ファミリー（例えば、アシアロ糖タンパク質受容体マクロファージガラクトース型レクチン（ＭＧＬ））、ＤＣ−ＳＩＧＮ（ＣＬＥＣ４Ｌ）、ランゲリン（ＣＬＥＣ４Ｋ）、骨髄系ＤＡＰ１２会合レクチン（ＭＤＬ）−１（ＣＬＥＣ５Ａ）、デクチン１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＧＲ１／ＣＬＥＣ９Ａ、骨髄系Ｃ型レクチン様受容体（ＭＩＣＬ）（ＣＬＥＣ１２Ａ）、ＣＬＥＣ２（ＣＬＥＣ１Ｂとも呼ばれる）、ＣＬＥＣ１２Ｂ、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、デクチン２／ＣＬＥＣ６Ａ、血液ＤＣ抗原２（ＢＤＣＡ２）（ＣＬＥＣ４Ｃ）、マクロファージ誘導性Ｃ型レクチン（ＣＬＥＣ４Ｅ）、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２、ＴＬＲ１３，ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ１（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）、ＦｃαＲ１（ＣＤ８９）、Ｆｃα／μＲ、ＦｃＲｎ、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＧＩＴ、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ３）、Ｔ細胞活性化のＶ−ドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、ＩＣＯＳ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ３）、ＦＡＭ１５９Ｂ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＡ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ｇｐ１３０、ＩＬ−１受容体、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−３受容体、ＩＬ−４受容体、ＩＬ−５受容体、ＩＬ−６受容体、ＩＬ−７受容体、ＩＬ−８受容体、ＩＬ−９受容体、ＩＬ−１０受容体、ＩＬ−１１受容体、ＩＬ−１２受容体、ＩＬ−１３受容体、ＩＬ−１４受容体、ＩＬ−１５受容体、ＩＬ−１６受容体、ＩＬ−１７受容体、ＩＬ−１８受容体、ＩＬ−１９受容体、ＩＬ−２０受容体、ＩＬ−２１受容体、ＩＬ−２２受容体、ＩＬ−２３受容体、ＩＬ−２４受容体、ＩＬ−２５受容体、ＩＬ−２６受容体、ＩＬ−２７受容体、ＩＬ−２８受容体、ＩＬ−２９受容体、ＩＬ−３０受容体、ＩＬ−３１受容体、ＩＬ−３２受容体、ＩＬ−３３受容体、ＩＬ−３５受容体、ＩＬ−３６受容体、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ３、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１４、ＴＮＦＲＳＦ１６、ＴＮＦＲＳＦ１７、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＴＮＦＲＳＦ１９、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＲＳＦ２５、ＴＮＦＲＳＦ２７、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ２Ａ、ＳＣＮ２Ｂ、ＳＣＮ３Ａ、ＳＣＮ３Ｂ、ＳＣＮ４Ａ、ＳＣＮ５Ａ、ＳＣＮ７Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ１０Ａ、ＳＣＮ１１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｂ、ＣＡＣＮ��１Ｃ、ＣＡＣＮＡ１Ｄ、ＣＡＣＮＡ１Ｅ、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＣＡＣＮＡ１Ｇ、ＣＡＣＮＡ１Ｈ、ＣＡＣＮＡ１Ｉ、ＣＡＣＮＡ１Ｓ、ＴＲＰＡ１、ＴＲＰＣ１、ＴＲＰＣ２、ＴＲＰＣ３、ＴＲＰＣ４、ＴＲＰＣ５、ＴＲＰＣ６、ＴＲＰＣ７、ＴＲＰＭ１、ＴＲＰＭ２、ＴＲＰＭ３、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ５、ＴＲＰＭ６、ＴＲＰＭ７、ＴＲＰＭ８、ＭＣＯＬＮ１、ＭＣＯＬＮ２、ＭＣＯＬＮ３、ＰＫＤ１、ＰＫＤ２、ＰＫＤ２Ｌ１、ＰＫＤ２Ｌ２、ＴＲＰＶ１、ＴＲＰＶ２、ＴＲＰＶ３、ＴＲＰＶ４、ＴＲＰＶ５、ＴＲＰＶ６、ＣＡＴＳＰＥＲ１、ＣＡＴＳＰＥＲ２、ＣＡＴＳＰＥＲ３、ＣＡＴＳＰＥＲ４、ＴＰＣＮ１、ＴＰＣＮ２、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＡ２、ＣＮＧＡ３、ＣＮＧＡ４、ＣＮＧＢ１、ＣＮＧＢ３、ＨＣＮ１、ＨＣＮ２、ＨＣＮ３、ＨＣＮ４、ＫＣＮＭＡ１、ＫＣＮＮ１、ＫＣＮＮ２、ＫＣＮＮ３、ＫＣＮＮ４、ＫＣＮＴ１、ＫＣＮＴ２、ＫＣＮＵ１、ＫＣＮＡ１、ＫＣＮＡ２、ＫＣＮＡ３、ＫＣＮＡ４、ＫＣＮＡ５、ＫＣＮＡ６、ＫＣＮＡ７、ＫＣＮＡ１０、ＫＣＮＢ１、ＫＣＮＢ２、ＫＣＮＣ１、ＫＣＮＣ２、ＫＣＮＣ３、ＫＣＮＣ４、ＫＣＮＤ１、ＫＣＮＤ２、ＫＣＮＤ３、ＫＣＮＦ１、ＫＣＮＧ１、ＫＣＮＧ２、ＫＣＮＧ３、ＫＣＮＧ４、ＫＣＮＨ１、ＫＣＮＨ２、ＫＣＮＨ３、ＫＣＮＨ４、ＫＣＮＨ５、ＫＣＮＨ６、ＫＣＮＨ７、ＫＣＮＨ８、ＫＣＮＱ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＱ４、ＫＣＮＱ５、ＫＣＮＳ１、ＫＣＮＳ２、ＫＣＮＳ３、ＫＣＮＶ１、ＫＣＮＶ２、ＫＣＮＪ１、ＫＣＮＪ２、ＫＣＮＪ３、ＫＣＮＪ４、ＫＣＮＪ５、ＫＣＮＪ６、ＫＣＮＪ８、ＫＣＮＪ９、ＫＣＮＪ１０、ＫＣＮＪ１１、ＫＣＮＪ１２、ＫＣＮＪ１３、ＫＣＮＪ１４、ＫＣＮＪ１５、ＫＣＮＪ１６、ＫＣＮＪ１８、ＫＣＮＫ１、ＫＣＮＫ２、ＫＣＮＫ３、ＫＣＮＫ４、ＫＣＮＫ５、ＫＣＮＫ６、ＫＣＮＫ７、ＫＣＮＫ９、ＫＣＮＫ１０、ＫＣＮＫ１２、ＫＣＮＫ１３、ＫＣＮＫ１５、ＫＣＮＫ１６、ＫＣＮＫ１７、ＫＣＮＫ１８、ＨＶＣＮ１、ＨＴＲ３Ａ、ＨＴＲ３Ｂ、ＨＴＲ３Ｃ、ＨＴＲ３Ｄ、ＨＴＲ３Ｅ、ＣＨＲＮＡ１、ＣＨＲＮＡ２、ＣＨＲＮＡ３、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＡ５、ＣＨＲＮＡ６、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＡ９、ＣＨＲＮＡ１０、ＣＨＲＮＢ１、ＣＨＲＮＢ２、ＣＨＲＮＢ３、ＣＨＲＮＢ４、ＣＨＲＮＤ、ＣＨＲＮＥ、ＣＨＲＮＧ、ＧＡＢＲＡ１、ＧＡＢＲＡ２、ＧＡＢＲＡ３、ＧＡＢＲＡ４、ＧＡＢＲＡ５、ＧＡＢＲＡ６、Ｇ
ＡＢＲＢ１、ＧＡＢＲＢ２、ＧＡＢＲＢ３、ＧＡＢＲＤ、ＧＡＢＲＥ、ＧＡＢＲＧ１、ＧＡＢＲＧ２、ＧＡＢＲＧ３、ＧＡＢＲＰ、ＧＡＢＲＱ、ＧＡＢＲＲ１、ＧＡＢＲＲ２、ＧＡＢＲＲ３、ＧＲＩＡ１、ＧＲＩＡ２、ＧＲＩＡ３、ＧＲＩＡ４、ＧＲＩＤ１、ＧＲＩＤ２、ＧＲＩＫ１、ＧＲＩＫ２、ＧＲＩＫ３、ＧＲＩＫ４、ＧＲＩＫ５、ＧＲＩＮ１、ＧＲＩＮ２Ａ、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＧＲＩＮ２Ｃ、ＧＲＩＮ２Ｄ、ＧＲＩＮ３Ａ、ＧＲＩＮ３Ｂ、ＧＬＲＡ１、ＧＬＲＡ２、ＧＬＲＡ３、ＧＬＲＡ４、Ｐ２ＲＸ１、Ｐ２ＲＸ２、Ｐ２ＲＸ３、Ｐ２ＲＸ４、Ｐ２ＲＸ５、Ｐ２ＲＸ６、Ｐ２ＲＸ７、ＺＡＣＮ、ＡＳＩＣ１、ＡＳＩＣ２、ＡＳＩＣ３、ＡＳＩＣ４、ＡＱＰ１、ＡＱＰ２、ＡＱＰ３、ＡＱＰ４、ＡＱＰ５、ＡＱＰ６、ＡＱＰ７、ＡＱＰ８、ＡＱＰ９、ＡＱＰ１０、ＡＱＰ１１、ＡＱＰ１２Ａ、ＡＱＰ１２Ｂ、ＭＩＰ、ＣＬＣＮ１、ＣＬＣＮ２、ＣＬＣＮ３、ＣＬＣＮ４、ＣＬＣＮ５、ＣＬＣＮ６、ＣＬＣＮ７、ＣＬＣＮＫＡ、ＣＬＣＮＫＢ、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）、ＡＮＯ１、ＡＮＯ２、ＡＮＯ３、ＡＮＯ４、ＡＮＯ５、ＡＮＯ６、ＡＮＯ７、ＡＮＯ８、ＡＮＯ９、ＡＮＯ１０、ＢＥＳＴ１、ＢＥＳＴ２、ＢＥＳＴ３、ＢＥＳＴ４、ＣＬＩＣ１、ＣＬＩＣ２、ＣＬＩＣ３、ＣＬＩＣ４、ＣＬＩＣ５、ＣＬＩＣ６、ＧＪＡ１、ＧＪＡ３、ＧＪＡ４、ＧＪＡ５、ＧＪＡ６Ｐ、ＧＪＡ８、ＧＪＡ９、ＧＪＡ１０、ＧＪＢ１、ＧＪＢ２、ＧＪＢ３、ＧＪＢ４、ＧＪＢ５、ＧＪＢ６、ＧＪＢ７、ＧＪＣ１、ＧＪＣ２、ＧＪＣ３、ＧＪＤ２、ＧＪＤ３、ＧＪＤ４、ＧＪＥ１、ＩＴＰＲ１、ＩＴＰＲ２、ＩＴＰＲ３、ＰＡＮＸ１、ＰＡＮＸ２、ＰＡＮＸ３、ＲＹＲ１、ＲＹＲ２、ＲＹＲ３、ＮＡＬＣＮ、ＳＣＮＮ１Ａ、ＳＣＮＮ１Ｂ、ＳＣＮＮ１Ｄ、ＳＣＮＮ１Ｇ、ＴＥＭ１６Ａ、ＡＤＡＭＴＳ７、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＧＰＴＬ８、ＬＰＬ、ＧＤＦ１５、ガレクチン−１、ガレクチン−２、ガレクチン−３、ガレクチン−４、ガレクチン−７、ガレクチン−８、ガレクチン−９、ガレクチン−１０、ガレクチン−１２、ガレクチン−１３、マトリックスｇｌａタンパク質（ＭＧＰ）、ＰＲＮＰ、ＤＧＡＴ１、ＧＰＡＴ３、ＤＭＣ１、ＢＬＭ、ＢＲＣＡ２、ヒト内在性レトロウイルスタイプＫ（ＨＥＲＶ−Ｋ）ファミリーのメンバー、エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１（ＥＮＴＰＤ１）、エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ２（ＥＮＴＰＤ２）、ＳＬＣ１Ａ１、ＳＬＣ１Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ１Ａ４、ＳＬＣ１Ａ５、ＳＬＣ１Ａ６、ＳＬＣ１Ａ７、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ２Ａ３、ＳＬＣ２Ａ４、ＳＬＣ２Ａ５、ＳＬＣ２Ａ６、ＳＬＣ２Ａ７、ＳＬＣ２Ａ８、ＳＬＣ２Ａ９、ＳＬＣ２Ａ１０、ＳＬＣ２Ａ１１、ＳＬＣ２Ａ１２、ＳＬＣ２Ａ１３、ＳＬＣ２Ａ１４、ＳＬＣ３Ａ１、ＳＬＣ３Ａ２、ＳＬＣ４Ａ１、ＳＬＣ４Ａ２、ＳＬＣ４Ａ３、ＳＬＣ４Ａ４、ＳＬＣ４Ａ５、ＳＬＣ４Ａ６、ＳＬＣ４Ａ７、ＳＬＣ４Ａ８、ＳＬＣ４Ａ９、ＳＬＣ４Ａ１０、ＳＬＣ４Ａ１１、ＳＬＣ５Ａ１、ＳＬＣ５Ａ２、ＳＬＣ５Ａ３、ＳＬＣ５Ａ４、ＳＬＣ５Ａ５、ＳＬＣ５Ａ６、ＳＬＣ５Ａ７、ＳＬＣ５Ａ８、ＳＬＣ５Ａ９、ＳＬＣ５Ａ１０、ＳＬＣ５Ａ１１、ＳＬＣ５Ａ１２、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＬＣ６Ａ２、ＳＬＣ６Ａ３、ＳＬＣ６Ａ４、ＳＬＣ６Ａ５、ＳＬＣ６Ａ６、ＳＬＣ６Ａ７、ＳＬＣ６Ａ８、ＳＬＣ６Ａ９、ＳＬＣ６Ａ１０、ＳＬＣ６Ａ１１、ＳＬＣ６Ａ１２、ＳＬＣ６Ａ１３、ＳＬＣ６Ａ１４、ＳＬＣ６Ａ１５、ＳＬＣ６Ａ１６、ＳＬＣ６Ａ１７、ＳＬＣ６Ａ１８、ＳＬＣ６Ａ１９、ＳＬＣ６Ａ２０、ＳＬＣ７Ａ５、ＳＬＣ７Ａ６、ＳＬＣ７Ａ７、ＳＬＣ７Ａ８、ＳＬＣ７Ａ９、ＳＬＣ７Ａ１０、ＳＬＣ７Ａ１１、ＳＬＣ７Ａ１３、ＳＬＣ７Ａ１４、ＳＬＣ８Ａ１、ＳＬＣ８Ａ２、ＳＬＣ８Ａ３、ＳＬＣ９Ａ１、ＳＬＣ９Ａ２、ＳＬＣ９Ａ３、ＳＬＣ９Ａ４、ＳＬＣ９Ａ５、ＳＬＣ９Ａ６、ＳＬＣ９Ａ７、ＳＬＣ９Ａ８、ＳＬＣ９Ａ９、ＳＬＣ９Ａ１０、ＳＬＣ９Ａ１１、ＳＬＣ９Ｂ１、ＳＬＣ９Ｂ２、ＳＬＣ１０Ａ１、ＳＬＣ１０Ａ２、ＳＬＣ１０Ａ３、ＳＬＣ１０Ａ４、ＳＬＣ１０Ａ５、ＳＬＣ１０Ａ６、ＳＬＣ１０Ａ７、ＳＬＣ１１Ａ１、ＳＬＣ１１Ａ２、ＳＬＣ１２Ａ１、ＳＬＣ１２Ａ２、ＳＬＣ１２Ａ３、ＳＬＣ１２Ａ４、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ１２Ａ６、ＳＬＣ１２Ａ７、ＳＬＣ１２Ａ８、ＳＬＣ１２Ａ９、ＳＬＣ１３Ａ１、ＳＬＣ１３Ａ２、ＳＬＣ１３Ａ３、ＳＬＣ１３Ａ４、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ１４Ａ１、ＳＬＣ１４Ａ２、ＳＬＣ１５Ａ１、ＳＬＣ１５Ａ２、ＳＬＣ１５Ａ３、ＳＬＣ１５Ａ４、ＳＬＣ１６Ａ１、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１６Ａ３、ＳＬＣ１６Ａ４、ＳＬＣ１６Ａ５、ＳＬＣ１６Ａ６、ＳＬＣ１６Ａ７、ＳＬＣ１６Ａ８、ＳＬＣ１６Ａ９、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ１１、ＳＬＣ１６Ａ１２、ＳＬＣ１６Ａ１３、ＳＬＣ１６Ａ１４、ＳＬＣ１７Ａ１、ＳＬＣ１７Ａ２、ＳＬＣ１７Ａ３、ＳＬＣ１７Ａ４、ＳＬＣ１７Ａ５、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＬＣ１７Ａ７、ＳＬＣ１７Ａ８、ＳＬＣ１７Ａ９、ＳＬＣ１８Ａ１、ＳＬＣ１８Ａ２、ＳＬＣ１８Ａ３、ＳＬＣ１９Ａ１、ＳＬＣ１９Ａ２、ＳＬＣ１９Ａ３、ＳＬＣ２０Ａ１、ＳＬＣ２０Ａ２、ＳＬＣＯ１Ａ２、ＳＬＣＯ１Ｂ１、ＳＬＣＯ１Ｂ３、ＳＬＣＯ１Ｃ１、ＳＬＣＯ２Ａ１、ＳＬＣＯ２Ｂ１、ＳＬＣＯ３Ａ１、ＳＬＣＯ４Ａ１、ＳＬＣＯ４Ｃ１、ＳＬＣＯ５Ａ１、ＳＬＣＯ６Ａ１、ＳＬＣ２２Ａ１、ＳＬＣ２２Ａ２、ＳＬＣ２２Ａ３、ＳＬＣ２２Ａ４、ＳＬＣ２２Ａ５、ＳＬＣ２２Ａ６、ＳＬＣ２２Ａ７、ＳＬＣ２２Ａ８、ＳＬＣ２２Ａ９、ＳＬＣ２２Ａ１０、ＳＬＣ２２Ａ１１、ＳＬＣ２２Ａ１２、ＳＬＣ２２Ａ１３、ＳＬＣ２２Ａ１４、ＳＬＣ２２Ａ１５、ＳＬＣ２２Ａ１６、ＳＬＣ２２Ａ１７、ＳＬＣ２２Ａ１８、ＳＬＣ２２Ａ１８ＡＳ，ＳＬＣ２２Ａ１９、ＳＬＣ２２Ａ２０、ＳＬＣ２２Ａ２３、ＳＬＣ２２Ａ２４、ＳＬＣ２２Ａ２５、ＳＬＣ２２Ａ３１、ＳＬＣ２３Ａ１、ＳＬＣ２３Ａ２、ＳＬＣ２３Ａ３、ＳＬＣ２３Ａ４、ＳＬＣ２４Ａ１、ＳＬＣ２４Ａ２、ＳＬＣ２４Ａ３、ＳＬＣ２４Ａ４、ＳＬＣ２４Ａ５、ＳＬＣ２４Ａ６、ＳＬＣ２５Ａ１、ＳＬＣ２５Ａ２、ＳＬＣ２５Ａ３、ＳＬＣ２５Ａ４、ＳＬＣ２５Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ６、ＳＬＣ２５Ａ７、ＳＬＣ２５Ａ８、ＳＬＣ２５Ａ９、ＳＬＣ２５Ａ１０、ＳＬＣ２５Ａ１１、ＳＬＣ２５Ａ１２、ＳＬＣ２５Ａ１３、ＳＬＣ２５Ａ１４、ＳＬＣ２５Ａ１５、ＳＬＣ２５Ａ１６、ＳＬＣ２５Ａ１７、ＳＬＣ２５Ａ１８、ＳＬＣ２５Ａ１９，ＳＬＣ２５Ａ２０、ＳＬＣ２５Ａ２１、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＳＬＣ２５Ａ２３、ＳＬＣ２５Ａ２４、ＳＬＣ２５Ａ２５、ＳＬＣ２５Ａ２６、ＳＬＣ２５Ａ２７、ＳＬＣ２５Ａ２８、ＳＬＣ２５Ａ２９、ＳＬＣ２５Ａ３０、ＳＬＣ２５Ａ３１、ＳＬＣ２５Ａ３２、ＳＬＣ２５Ａ３３、ＳＬＣ２５Ａ３４、ＳＬＣ２５Ａ３５、ＳＬＣ２５Ａ３６、ＳＬＣ２５Ａ３７，ＳＬＣ２５Ａ３８、ＳＬＣ２５Ａ３９、ＳＬＣ２５Ａ４０、ＳＬＣ２５Ａ４１、ＳＬＣ２５Ａ４２、ＳＬＣ２５Ａ４３、ＳＬＣ２５Ａ４４、ＳＬＣ２５Ａ４５、ＳＬＣ２５Ａ４６、ＳＬＣ２６Ａ１、ＳＬＣ２６Ａ２、ＳＬＣ２６Ａ３、ＳＬＣ２６Ａ４、ＳＬＣ２６Ａ５、ＳＬＣ２６Ａ６、ＳＬＣ２６Ａ７、ＳＬＣ２６Ａ８、ＳＬＣ２６Ａ９、ＳＬＣ２６Ａ１０、ＳＬＣ２６Ａ１１、ＳＬＣ２７Ａ１、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＬＣ２７Ａ３、ＳＬＣ２７Ａ４、ＳＬＣ２７Ａ５、ＳＬＣ２７Ａ６、ＳＬＣ２８Ａ１、ＳＬＣ２８Ａ２、ＳＬＣ２８Ａ３、ＳＬＣ２９Ａ１、ＳＬＣ２９Ａ２、ＳＬＣ２９Ａ３、ＳＬＣ２９Ａ４、ＳＬＣ３０Ａ１、ＳＬＣ３０Ａ２、ＳＬＣ３０Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＣ３０Ａ５、ＳＬＣ３０Ａ６、ＳＬＣ３０Ａ７、ＳＬＣ３０Ａ８、ＳＬＣ３０Ａ９、ＳＬＣ３０Ａ１０、ＳＬＣ３１Ａ１、ＳＬＣ３１Ａ２、ＳＬＣ３２Ａ１、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ３４Ａ１、ＳＬＣ３４Ａ２、ＳＬＣ３４Ａ３、ＳＬＣ３５Ａ１、ＳＬＣ３５Ａ２、ＳＬＣ３５Ａ３、ＳＬＣ３５Ａ４、ＳＬＣ３５Ａ５、ＳＬＣ３５Ｂ１、ＳＬＣ３５Ｂ２、ＳＬＣ３５Ｂ３、ＳＬＣ３５Ｂ４、ＳＬＣ３５Ｃ１、ＳＬＣ３５Ｃ２、ＳＬＣ３５Ｄ１、ＳＬＣ３５Ｄ２、ＳＬＣ３５Ｄ３、ＳＬＣ３５Ｅ１、ＳＬＣ３５Ｅ２、ＳＬＣ３５Ｅ３、ＳＬＣ３５Ｅ４、ＳＬＣ３５Ｆ１、ＳＬＣ３５Ｆ２、ＳＬＣ３５Ｆ３、ＳＬＣ３５Ｆ４、ＳＬＣ３５Ｆ５、ＳＬＣ３５Ｇ１、ＳＬＣ３５Ｇ３、ＳＬＣ３５Ｇ４、ＳＬＣ３５Ｇ５、ＳＬＣ３５Ｇ６、ＳＬＣ３６Ａ１、ＳＬＣ３６Ａ２、ＳＬＣ３６Ａ３、ＳＬＣ３６Ａ４、ＳＬＣ３７Ａ１、ＳＬＣ３７Ａ２、ＳＬＣ３７Ａ３、ＳＬＣ３７Ａ４、ＳＬＣ３８Ａ１、ＳＬＣ３８Ａ２、ＳＬＣ３８Ａ３、ＳＬＣ３８Ａ４、ＳＬＣ３８Ａ５、ＳＬＣ３８Ａ６、ＳＬＣ３８Ａ７、ＳＬＣ３８Ａ８、ＳＬＣ３８Ａ９、ＳＬＣ３８Ａ１０、ＳＬＣ３８Ａ１１、ＳＬＣ３９Ａ１、ＳＬＣ３９Ａ２、ＳＬＣ３９Ａ３、ＳＬＣ３９Ａ４、ＳＬＣ３９Ａ５、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＬＣ３９Ａ７、ＳＬＣ３９Ａ８、ＳＬＣ３９Ａ９、ＳＬＣ３９Ａ１０、ＳＬＣ３９Ａ１１、ＳＬＣ３９Ａ１２、ＳＬＣ３９Ａ１３、ＳＬＣ３９Ａ１４、ＳＬＣ４０Ａ１、ＳＬＣ４１Ａ１、ＳＬＣ４１Ａ２、ＳＬＣ４１Ａ３、ＲｈＡＧ、ＲｈＢＧ、ＲｈＣＧ、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ２、ＳＬＣ４３Ａ３、ＳＬＣ４４Ａ１、ＳＬＣ４４Ａ２、ＳＬＣ４４Ａ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＬＣ４４Ａ５、ＳＬＣ４５Ａ１、ＳＬＣ４５Ａ２、ＳＬＣ４５Ａ３、ＳＬＣ４５Ａ４、ＳＬＣ４６Ａ１、ＳＬＣ４６Ａ２、ＳＬＣ４６Ａ３、ＳＬＣ４７Ａ１、ＳＬＣ４７Ａ２、ＨＣＰ−１、ＭＦＳＤ５、ＭＦＳＤ１０、ＳＬＣ５０Ａ１、ＯＳＴα、ＯＳＴβ、ＳＬＣ５２Ａ１、ＳＬＣ５２Ａ２、ならびにＳＬＣ５２Ａ３から選択される、態様１または２の方法。
【００２５】
態様１３．標的抗原が、発現させることが困難であるか、またはそれに対する抗体を産生させることが困難である、態様１または２の方法。
【００２６】
態様１４．標的タンパク質の発現が、宿主産生細胞において、細胞毒性をもたらすか、または細胞毒性の増大をもたらす、態様１３の方法。
【００２７】
態様１５．標的タンパク質が、組換えにより発現されかつ／または精製される場合、不十分な収率、安定性、溶解性、および／または機能活性を示す、態様１３の方法。
【００２８】
態様１６．複合体の前記ポリヌクレオチドが、次の：コンセンサスコザック配列；ｍＲＮＡの５’末端上の７−メチルグアノシンキャップ；ｍＲＮＡ転写物の３’終端で見られるポリアデノシン（ポリＡ）テール；ならびに５’−および３’−非翻訳領域（ＵＴＲ）の１つ以上を含む、態様１〜１５のいずれか１つの方法。
【００２９】
態様１７．前記投与が非経口である、態様１〜１６のいずれか１つの方法。
【００３０】
態様１８．前記投与が静脈内である、態様１〜１７のいずれか１つの方法。
【００３１】
態様１９．前記投与が筋肉内である、態様１〜１８のいずれか１つの方法。
【００３２】
態様２０．前記投与が皮下である、態様１〜１９のいずれか１つの方法。
【００３３】
態様２１．前記投与が鼻腔内である、態様１〜２０のいずれか１つの方法。
【００３４】
態様２２．前記標的タンパク質がＲＸＦＰ１またはその断片である、態様１〜２１のいずれか１つの方法。
【００３５】
態様２３．前記複合体が、配列番号４、または配列番号２、４および３７のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むポリリボヌクレオチドを含む、態様１〜２２のいずれか１つの方法。
【００３６】
態様２４．前記標的タンパク質がＳＬＣ５２Ａ２またはその断片である、態様１〜２３のいずれか１つの方法。
【００３７】
態様２５．前記複合体が、配列番号７、または配列番号５、７および４０のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むポリリボヌクレオチドを含む、態様１〜２４のいずれか１つの方法。
【００３８】
態様２６．前記標的タンパク質がＡＮＧＰＴＬ８またはその断片である、態様１〜２５のいずれか１つの方法。
【００３９】
態様２７．前記複合体が、配列番号１０、または配列番号８、１０および４３のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むポリリボヌクレオチドを含む、態様１〜２６のいずれか１つの方法。
【００４０】
態様２８．前記標的タンパク質がＴＳＨＲまたはその断片である、態様１〜２７のいずれか１つの方法。
【００４１】
態様２９．前記複合体が、配列番号１６、または配列番号１４、１６および４６のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むポリリボヌクレオチドを含む、態様１〜２８のいずれか１つの方法。
【００４２】
態様３０．前記標的タンパク質がＡＰＪまたはその断片である、態様１〜２９のいずれか１つの方法。
【００４３】
態様３１．前記複合体が、配列番号１９、または配列番号１７、１９および４９のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むポリリボヌクレオチドを含む、態様１〜３０のいずれか１つの方法。
【００４４】
態様３２．前記標的タンパク質がｇｐ１３０またはその断片である、態様１〜３１のいずれか１つの方法。
【００４５】
態様３３．前記複合体が、配列番号２２、または配列番号２０、２２および５２のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むポリリボヌクレオチドを含む、態様１〜３２のいずれか１つの方法。
【００４６】
態様３４．前記標的タンパク質がガレクチン３またはその断片である、態様１〜３３のいずれか１つの方法。
【００４７】
態様３５．前記複合体が、配列番号５５、または配列番号２６、５５および５６のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むポリリボヌクレオチドを含む、態様１〜３４のいずれか１つの方法。
【００４８】
態様３６．前記複合体が、約３０〜１５０ｎｍの直径を有する、態様１〜３５のいずれか１つの方法。
【００４９】
態様３７．複合体がヘルパー脂質を含む、態様１〜３５のいずれか１つの方法。
【００５０】
態様３８．複合体が、（ｉ）カチオン性脂質、（ｉｉ）ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、（ｉｉｉ）中性脂質、例えば、ＤＳＰＣ、および（ｉｖ）ステルス脂質、例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１またはＳ０３３の任意の組み合わせを含む、態様１〜３５のいずれか１つの方法。
【００５１】
態様３９．動物が、５μｇ、１０μｇ、１２．５μｇ、２０μｇ、２５μｇ、３０μｇ、４０μｇ、５０μｇ、６０μｇ、７０μｇ、８０μｇ、９０μｇ、１００μｇ、１１０μｇ、１２０μｇ、１３０μｇ、１４０μｇ、または１５０μｇのポリリボヌクレオチドを投与される、態様１〜３８のいずれか１つの方法。
【００５２】
態様４０．カチオン性脂質が、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジオレオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＤＡＰ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ジオレオイルカルバミル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＣＤＡＰ）、１，２−ジリネオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＬＩＮＤＡＰ）、ジラウリル（Ｃ１２：０）トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＬＴＡＰ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ＤＣ−Ｃｈｏｌ、ジオレオイルオキシ−Ｎ−［２−スペルミンカルボキサミド）エチル｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、３−ジメチルアミノ−２−（コレスト−５−エン−３−β−オキシブタン−４−オキシ）−１−（シス，シス−９，１２−オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣＬｉｎＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ジオレイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）、２−［５’−（コレスト−５−エン−３β−オキシ）−３’−オキサペントキシ）−３−ジメチル−１−（シス，シス−９’，１２’−オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣｐＬｉｎＤＭＡ）およびＮ，Ｎ−ジメチル−３，４−ジオレイルオキシベンジルアミン（ＤＭＯＢＡ）、ならびに１，２−Ｎ，Ｎ’−ジオレイルカルバミル−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＯｃａｒｂＤＡＰ）からなる群から選択される、態様１〜３９のいずれか１つの方法。
【００５３】
態様４１．カチオン性脂質がＤＯＴＡＰまたはＤＬＴＡＰである、態様４０の方法。
【００５４】
態様４２．標的タンパク質に特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマを作製するステップをさらに含む、態様１〜４１のいずれか１つの方法。
【００５５】
態様４３．標的タンパク質に特異的に結合する抗体を精製するステップをさらに含む、態様１〜４２のいずれか１つの方法。
【００５６】
態様４４．標的タンパク質に特異的に結合する精製された抗体に由来するキメラまたはヒト化抗体を作製するステップをさらに含む、態様１〜４３のいずれか１つの方法。
【００５７】
態様４５．前記方法が、ｃＤＮＡ、タンパク質もしくはペプチド、ウイルス粒子、または細胞全体による免疫化を含む方法と比較して、１回目の採血または２回目の採血由来の血清中においてより高い抗体力価を生じる、態様１〜４４のいずれか１つの方法。
【００５８】
態様４６．前記方法が、ｃＤＮＡ、タンパク質もしくはペプチド、ウイルス粒子、または細胞全体による免疫化を含む方法よりも、標的タンパク質に特異的な抗体を産生するハイブリドーマをより多く生じる、態様１〜４４のいずれか１つの方法。
【００５９】
態様４７．標的タンパク質がヒト標的タンパク質であり、非ヒト動物が、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ラクダ科動物、サメ、サル、ブタ、またはウマである、態様１〜４６のいずれか１つの方法。
【００６０】
態様４８．標的タンパク質に特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマであって、ハイブリドーマが態様１〜４７のいずれか１つの方法によって得られる、ハイブリドーマ。
【００６１】
態様４９．標的タンパク質に特異的に結合するポリクローナル抗体の混合物であって、混合物が態様１〜４７のいずれか１つの方法によって得られる、混合物。
【００６２】
態様５０．標的タンパク質に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体であって、モノクローナル抗体が態様１〜４７のいずれか１つの方法によって得られる、単離されたモノクローナル抗体。
【００６３】
態様５１．非ヒト動物において標的タンパク質に対する免疫応答を誘発するための方法であって、脂質−ポリヌクレオチド複合体をその動物に投与するステップを含み、脂質−ポリヌクレオチド複合体がカチオン性脂質および標的タンパク質をコードするｍＲＮＡを含み、標的タンパク質がその動物と異なる種のタンパク質である、方法。
【００６４】
態様５２．前記複合体が、次の：コンセンサスコザック配列；ｍＲＮＡの５’末端上の７−メチルグアノシンキャップ；ｍＲＮＡ転写物の３’終端で見られるポリアデノシン（ポリＡ）テール；ならびに５’−および３’−非翻訳領域（ＵＴＲ）の１つ以上を含む、態様５１の方法。
【００６５】
態様５３．前記投与が非経口である、態様５１の方法。
【００６６】
態様５４．前記投与が静脈内である、態様５１の方法。
【００６７】
態様５５．前記投与が筋肉内である、態様５１の方法。
【００６８】
態様５６．前記投与が皮下である、態様５１の方法。
【００６９】
態様５７．前記投与が鼻腔内である、態様５１の方法。
【００７０】
態様５８．前記標的タンパク質がＲＸＦＰ１である、態様５１〜５７のいずれか１つの方法。
【００７１】
態様５９．前記複合体が、配列番号４、または配列番号２、４および３７のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むポリリボヌクレオチドを含む、態様５１〜５７のいずれか１つの方法。
【００７２】
態様６０．前記標的タンパク質がＳＬＣ５２Ａ２である、態様５１〜５７のいずれか１つの方法。
【００７３】
態様６１．前記複合体が、配列番号７、または配列番号５、７および４０のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むポリリボヌクレオチドを含む、態様５１〜５７のいずれか１つの方法。
【００７４】
態様６２．前記標的タンパク質がＡＮＧＰＴＬ８である、態様５１〜５７のいずれか１つの方法。
【００７５】
態様６３．前記複合体が、配列番号１０、または配列番号８、１０および４３のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むポリリボヌクレオチドを含む、態様５１〜５７のいずれか１つの方法。
【００７６】
態様６４．前記標的タンパク質がＴＳＨＲである、態様５１〜５７のいずれか１つの方法。
【００７７】
態様６５．前記複合体が、配列番号１６、または配列番号１４、１６および４６のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むポリリボヌクレオチドを含む、態様５１〜５７のいずれか１つの方法。
【００７８】
態様６６．前記標的タンパク質がＡＰＪである、態様５１〜５７のいずれか１つの方法。
【００７９】
態様６７．前記複合体が、配列番号１９、または配列番号１７、１９および４９のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むポリリボヌクレオチドを含む、態様５１〜５７のいずれか１つの方法。
【００８０】
態様６８．前記標的タンパク質がＧＰ１３０である、態様５１〜５７のいずれか１つの方法。
【００８１】
態様６９．前記複合体が、配列番号２２、または配列番号２０、２２および５２のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むポリリボヌクレオチドを含む、態様５１〜５７のいずれか１つの方法。
【００８２】
態様７０．前記標的タンパク質がガレクチン３である、態様５１の方法。
【００８３】
態様７１．前記複合体が、配列番号５５、または配列番号２６、５５および５６のいずれか１つを含む、態様５１の方法。
【００８４】
態様７２．標的タンパク質に特異的に結合する抗体または抗体産生細胞を動物から得るステップをさらに含む、態様５１〜７１のいずれか１つの方法。
【００８５】
態様７３．標的タンパク質がヒト標的タンパク質であり、非ヒト動物が、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ラクダ科動物、サメ、サル、ブタ、またはウマである、態様５１〜７２のいずれか１つの方法。
【００８６】
態様７４．複合体が、（ｉ）カチオン性脂質、（ｉｉ）ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、（ｉｉｉ）中性脂質、例えば、ＤＳＰＣ、および（ｉｖ）ステルス脂質、例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１またはＳ０３３の任意の組み合わせを含む、態様５１〜７３のいずれか１つの方法。
【００８７】
態様７５．動物が、５μｇ、１０μｇ、１２．５μｇ、２０μｇ、２５μｇ、３０μｇ、４０μｇ、５０μｇ、６０μｇ、７０μｇ、８０μｇ、９０μｇ、１００μｇ、１１０μｇ、１２０μｇ、１３０μｇ、１４０μｇ、または１５０μｇのポリリボヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を投与される、態様５１〜７４のいずれか１つの方法。
【００８８】
態様７６．カチオン性脂質が、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジオレオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＤＡＰ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ジオレオイルカルバミル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＣＤＡＰ）、１，２−ジリネオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＬＩＮＤＡＰ）、ジラウリル（Ｃ１２：０）トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＬＴＡＰ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ＤＣ−Ｃｈｏｌ、ジオレオイルオキシ−Ｎ−［２−スペルミンカルボキサミド）エチル｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、３−ジメチルアミノ−２−（コレスト−５−エン−３−β−オキシブタン−４−オキシ）−１−（シス，シス−９，１２−オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣＬｉｎＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ジオレイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）、２−［５’−（コレスト−５−エン−３β−オキシ）−３’−オキサペントキシ）−３−ジメチル−１−（シス，シス−９’，１２’−オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣｐＬｉｎＤＭＡ）およびＮ，Ｎ−ジメチル−３，４−ジオレイルオキシベンジルアミン（ＤＭＯＢＡ）、ならびに１，２−Ｎ，Ｎ’−ジオレイルカルバミル−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＯｃａｒｂＤＡＰ）からなる群から選択される、態様５１〜７５のいずれか１つの方法。
【００８９】
態様７７．カチオン性脂質がＤＯＴＡＰまたはＤＬＴＡＰである、態様７６の方法。
【００９０】
態様７８．標的タンパク質が、次の：ＡＣＫＲ１、ＡＣＫＲ２、ＡＣＫＲ３、ＡＣＫＲ４、ＡＤＣＹＡＰ１Ｒ１、ＡＤＧＲＡ１、ＡＤＧＲＡ２、ＡＤＧＲＡ３、ＡＤＧＲＢ１、ＡＤＧＲＢ２、ＡＤＧＲＢ３、ＡＤＧＲＤ１、ＡＤＧＲＤ２、ＡＤＧＲＥ１、ＡＤＧＲＥ２、ＡＤＧＲＥ３、ＡＤＧＲＥ４Ｐ、ＡＤＧＲＥ５、ＡＤＧＲＦ１、ＡＤＧＲＦ２、ＡＤＧＲＦ３、ＡＤＧＲＦ４、ＡＤＧＲＦ５、ＡＤＧＲＧ１、ＡＤＧＲＧ２、ＡＤＧＲＧ３、ＡＤＧＲＧ４、ＡＤＧＲＧ５、ＡＤＧＲＧ６、ＡＤＧＲＧ７、ＡＤＧＲＬ１、ＡＤＧＲＬ２、ＡＤＧＲＬ３、ＡＤＧＲＬ４、ＡＤＧＲＶ１、ＡＤＯＲＡ１、ＡＤＯＲＡ２Ａ、ＡＤＯＲＡ２Ｂ、ＡＤＯＲＡ３、ＡＤＲＡ１Ａ、ＡＤＲＡ１Ｂ、ＡＤＲＡ１Ｄ、ＡＤＲＡ２Ａ、ＡＤＲＡ２Ｂ、ＡＤＲＡ２Ｃ、ＡＤＲＢ１、ＡＤＲＢ２、ＡＤＲＢ３、ＡＧＴＲ１、ＡＧＴＲ２、ＡＰＬＮＲ／ＡＰＪ、ＡＳＧＲ１、ＡＳＧＲ２、ＡＶＰＲ１Ａ、ＡＶＰＲ１Ｂ、ＡＶＰＲ２、ＢＤＫＲＢ１、ＢＤＫＲＢ２、ＢＲＳ３、ＢＲＳ３、Ｃ３ＡＲ１、Ｃ５ＡＲ１、Ｃ５ＡＲ２、ＣＡＬＣＲ、ＣＡＬＣＲＬ、ＣＡＳＲ、ＣＣＫＡＲ、ＣＣＫＢＲ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲＬ２、ＣＥＬＳＲ１、ＣＥＬＳＲ２、ＣＥＬＳＲ３、ＣＨＲＭ１、ＣＨＲＭ２、ＣＨＲＭ３、ＣＨＲＭ４、ＣＨＲＭ５、ＣＭＫＬＲ１、ＣＮＲ１、ＣＮＲ２、ＣＲＨＲ１、ＣＲＨＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＹＳＬＴＲ１、ＣＹＳＬＴＲ２、ＤＲＤ１、ＤＲＤ２、ＤＲＤ３、ＤＲＤ４、ＤＲＤ５、ＥＤＮＲＡ、ＥＤＮＲＢ、Ｆ２Ｒ、Ｆ２ＲＬ１、Ｆ２ＲＬ２、Ｆ２ＲＬ３、ＦＦＡＲ１、ＦＦＡＲ２、ＦＦＡＲ３、ＦＦＡＲ４、ＦＰＲ１、ＦＰＲ２、ＦＰＲ２、ＦＰＲ３、ＦＳＨＲ、ＦＺＤ１、ＦＺＤ１０、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ６、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＧＡＢＢＲ１、ＧＡＢＢＲ２、ＧＡＬＲ１、ＧＡＬＲ２、ＧＡＬＲ３、ＧＣＧＲ、ＧＨＲＨＲ、ＧＨＳＲ、ＧＩＰＲ、ＧＬＰ１Ｒ、ＧＬＰ２Ｒ、ＧＮＲＨＲ、ＧＮＲＨＲ２、ＧＰＢＡＲ１、ＧＰＥＲ１、ＧＰＲ１、ＧＰＲ４、ＧＰＲ１２、ＧＰＲ１５、ＧＰＲ１７、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１９、ＧＰＲ２０、ＧＰＲ２１、ＧＰＲ２２、ＧＰＲ２５、ＧＰＲ２６、ＧＰＲ２７、ＧＰＲ３、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ３２、ＧＰＲ３３、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ３５、ＧＰＲ３７、ＧＰＲ３７Ｌ１、ＧＰＲ３９、ＧＰＲ４０、ＧＰＲ４２、ＧＰＲ４２、ＧＰＲ４５、ＧＰＲ５０、ＧＰＲ５２、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ６、ＧＰＲ６１、ＧＰＲ６２、ＧＰＲ６３、ＧＰＲ６５、ＧＰＲ６８、ＧＰＲ７５、ＧＰＲ７８、ＧＰＲ７９、ＧＰＲ８２、ＧＰＲ８３、ＧＰＲ８４、ＧＰＲ８５、ＧＰＲ８７、ＧＰＲ８８、ＧＰＲ１０１、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１３２、ＧＰＲ１３５、ＧＰＲ１３７、ＧＰＲ１３９、ＧＰＲ１４１、ＧＰＲ１４２、ＧＰＲ１４３、ＧＰＲ１４６、ＧＰＲ１４８、ＧＰＲ１４９、ＧＰＲ１５、ＧＰＲ１５０、ＧＰＲ１５１、ＧＰＲ１５２、ＧＰＲ１５３、ＧＰＲ１５６、ＧＰＲ１５７、ＧＰＲ１５８、ＧＰＲ１６０、ＧＰＲ１６１、ＧＰＲ１６２、ＧＰＲ１７１、ＧＰＲ１７３、ＧＰＲ１７４、ＧＰＲ１７６、ＧＰＲ１７９、ＧＰＲ１８２、ＧＰＲ１８３、ＧＰＲＣ５Ａ、ＧＰＲＣ５Ｂ、ＧＰＲＣ５Ｃ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＰＲＣ６Ａ、ＧＲＭ１、ＧＲＭ２、ＧＲＭ３、ＧＲＭ４、ＧＲＭ５、ＧＲＭ６、ＧＲＭ７、ＧＲＭ８、ＧＲＰＲ、ＨＣＡＲ１、ＨＣＡＲ２、ＨＣＡＲ３、ＨＣＲＴＲ１、ＨＣＲＴＲ２、ＨＲＨ１、ＨＲＨ２、ＨＲＨ３、ＨＲＨ４、ＨＴＲ１Ａ、ＨＴＲ１Ｂ、ＨＴＲ１Ｄ、ＨＴＲ１Ｅ、ＨＴＲ１Ｆ、ＨＴＲ２Ａ、ＨＴＲ２Ｂ、ＨＴＲ２Ｃ、ＨＴＲ４、ＨＴＲ５Ａ、ＨＴＲ５ＢＰ、ＨＴＲ６、ＨＴＲ７、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＬＧＲ３、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、ＬＧＲ６、ＬＨＣＧＲ、ＬＰＡＲ１、ＬＰＡＲ２、ＬＰＡＲ３、ＬＰＡＲ４、ＬＰＡＲ５、ＬＰＡＲ６、ＬＴＢ４Ｒ、ＬＴＢ４Ｒ２、ＭＡＳ１、ＭＡＳ１Ｌ、ＭＣ１Ｒ、ＭＣ２Ｒ、ＭＣ３Ｒ、ＭＣ４Ｒ、ＭＣ５Ｒ、ＭＣＨＲ１、ＭＣＨＲ２、ＭＬＮＲ、ＭＲＧＰＲＤ、ＭＲＧＰＲＥ、ＭＲＧＰＲＦ、ＭＲＧＰＲＧ、ＭＲＧＰＲＸ１、ＭＲＧＰＲＸ２、ＭＲＧＰＲＸ３、ＭＲＧＰＲＸ４、ＭＴＮＲ１Ａ、ＭＴＮＲ１Ｂ、ＮＭＢＲ、ＮＭＵＲ１、ＮＭＵＲ２、ＮＰＢＷＲ１、ＮＰＢＷＲ２、ＮＰＦＦＲ１、ＮＰＦＦＲ２、ＮＰＳＲ１、ＮＰＹ１Ｒ、ＮＰＹ２Ｒ、ＮＰＹ４Ｒ、ＮＰＹ５Ｒ、ＮＰＹ６Ｒ、ＮＴＳＲ１、ＮＴＳＲ２、ＯＰＮ３、ＯＰＮ４、ＯＰＮ５、ＯＰＲＤ１、ＯＰＲＫ１、ＯＰＲＬ１、ＯＰＲＭ１、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＸＥＲ１、ＯＸＧＲ１、ＯＸＴＲ、Ｐ２ＲＹ１、Ｐ２ＲＹ１０、Ｐ２ＲＹ１１、Ｐ２ＲＹ１２、Ｐ２ＲＹ１３、Ｐ２ＲＹ１４、Ｐ２ＲＹ２、Ｐ２ＲＹ４、Ｐ２ＲＹ６、Ｐ２ＲＹ８、ＰＲＬＨＲ、ＰＲＯＫＲ１、ＰＲＯＫＲ２、ＰＴＡＦＲ、ＰＴＧＤＲ、ＰＴＧＤＲ２、ＰＴＧＥＲ１、ＰＴＧＥＲ２、ＰＴＧＥＲ３、ＰＴＧＥＲ４、ＰＴＧＦＲ、ＰＴＧＩＲ、ＰＴＨ１Ｒ、ＰＴＨ２Ｒ、ＱＲＦＰＲ、ＲＸＦＰ１、ＲＸＦＰ２、ＲＸＦＰ３、ＲＸＦＰ４、Ｓ１ＰＲ１、Ｓ１ＰＲ２、Ｓ１ＰＲ３、Ｓ１ＰＲ４、Ｓ１ＰＲ５、ＳＣＴＲ、ＳＭＯ、ＳＳＴＲ１、ＳＳＴＲ２、ＳＳＴＲ３、ＳＳＴＲ４、ＳＳＴＲ５、ＳＵＣＮＲ１、ＴＡＡＲ１、ＴＡＡＲ２、ＴＡＡＲ３、ＴＡＡＲ４Ｐ、ＴＡＡＲ５、ＴＡＡＲ６、ＴＡＡＲ８、ＴＡＡＲ９、ＴＡＣＲ１、ＴＡＣＲ２、ＴＡＣＲ３、ＴＡＳ１Ｒ１、ＴＡＳ１Ｒ２、ＴＡＳ１Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ１９、ＴＡＳ２Ｒ２０、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ３０、ＴＡＳ２Ｒ３１、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４２、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ６０、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＢＸＡ２Ｒ、ＴＰＲＡ１、ＴＲＨＲ、ＴＳＨＲ、ＵＴＳ２Ｒ、ＶＩＰＲ１、ＶＩＰＲ２、ＸＣＲ１、ＴＣＲ−α、ＴＣＲ−β、ＣＤ３、ζ−鎖アクセサリー、ＣＤ４、ＣＤ８、ＳＩＧＩＲＲ（単一のＩｇおよびＴＩＲドメイン含有）、マンノース受容体（ＭＲ）、アシアロ糖タンパク質受容体ファミリー（例えば、アシアロ糖タンパク質受容体マクロファージガラクトース型レクチン（ＭＧＬ））、ＤＣ−ＳＩＧＮ（ＣＬＥＣ４Ｌ）、ランゲリン（ＣＬＥＣ４Ｋ）、骨髄系ＤＡＰ１２会合レクチン（ＭＤＬ）−１（ＣＬＥＣ５Ａ）、デクチン１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＧＲ１／ＣＬＥＣ９Ａ、骨髄系Ｃ型レクチン様受容体（ＭＩＣＬ）（ＣＬＥＣ１２Ａ）、ＣＬＥＣ２（ＣＬＥＣ１Ｂとも呼ばれる）、ＣＬＥＣ１２Ｂ、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、デクチン２／ＣＬＥＣ６Ａ、血液ＤＣ抗原２（ＢＤＣＡ２）（ＣＬＥＣ４Ｃ）、マクロファージ誘導性Ｃ型レクチン（ＣＬＥＣ４Ｅ）、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２、ＴＬＲ１３，ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ１（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）、ＦｃαＲ１（ＣＤ８９）、Ｆｃα／μＲ、ＦｃＲｎ、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＧＩＴ、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ３）、Ｔ細胞活性化のＶ−ドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、ＩＣＯＳ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ３）、ＦＡＭ１５９Ｂ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＡ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ｇｐ１３０、ＩＬ−１受容体、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−３受容体、ＩＬ−４受容体、ＩＬ−５受容体、ＩＬ−６受容体、ＩＬ−７受容体、ＩＬ−８受容体、ＩＬ−９受容体、ＩＬ−１０受容体、ＩＬ−１１受容体、ＩＬ−１２受容体、ＩＬ−１３受容体、ＩＬ−１４受容体、ＩＬ−１５受容体、ＩＬ−１６受容体、ＩＬ−１７受容体、ＩＬ−１８受容体、ＩＬ−１９受容体、ＩＬ−２０受容体、ＩＬ−２１受容体、ＩＬ−２２受容体、ＩＬ−２３受容体、ＩＬ−２４受容体、ＩＬ−２５受容体、ＩＬ−２６受容体、ＩＬ−２７受容体、ＩＬ−２８受容体、ＩＬ−２９受容体、ＩＬ−３０受容体、ＩＬ−３１受容体、ＩＬ−３２受容体、ＩＬ−３３受容体、ＩＬ−３５受容体、ＩＬ−３６受容体、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ３、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１４、ＴＮＦＲＳＦ１６、ＴＮＦＲＳＦ１７、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＴＮＦＲＳＦ１９、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＲＳＦ２５、ＴＮＦＲＳＦ２７、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ２Ａ、ＳＣＮ２Ｂ、ＳＣＮ３Ａ、ＳＣＮ３Ｂ、ＳＣＮ４Ａ、ＳＣＮ５Ａ、ＳＣＮ７Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ１０Ａ、ＳＣＮ１１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｂ、ＣＡＣＮ��１Ｃ、ＣＡＣＮＡ１Ｄ、ＣＡＣＮＡ１Ｅ、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＣＡＣＮＡ１Ｇ、ＣＡＣＮＡ１Ｈ、ＣＡＣＮＡ１Ｉ、ＣＡＣＮＡ１Ｓ、ＴＲＰＡ１、ＴＲＰＣ１、ＴＲＰＣ２、ＴＲＰＣ３、ＴＲＰＣ４、ＴＲＰＣ５、ＴＲＰＣ６、ＴＲＰＣ７、ＴＲＰＭ１、ＴＲＰＭ２、ＴＲＰＭ３、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ５、ＴＲＰＭ６、ＴＲＰＭ７、ＴＲＰＭ８、ＭＣＯＬＮ１、ＭＣＯＬＮ２、ＭＣＯＬＮ３、ＰＫＤ１、ＰＫＤ２、ＰＫＤ２Ｌ１、ＰＫＤ２Ｌ２、ＴＲＰＶ１、ＴＲＰＶ２、ＴＲＰＶ３、ＴＲＰＶ４、ＴＲＰＶ５、ＴＲＰＶ６、ＣＡＴＳＰＥＲ１、ＣＡＴＳＰＥＲ２、ＣＡＴＳＰＥＲ３、ＣＡＴＳＰＥＲ４、ＴＰＣＮ１、ＴＰＣＮ２、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＡ２、ＣＮＧＡ３、ＣＮＧＡ４、ＣＮＧＢ１、ＣＮＧＢ３、ＨＣＮ１、ＨＣＮ２、ＨＣＮ３、ＨＣＮ４、ＫＣＮＭＡ１、ＫＣＮＮ１、ＫＣＮＮ２、ＫＣＮＮ３、ＫＣＮＮ４、ＫＣＮＴ１、ＫＣＮＴ２、ＫＣＮＵ１、ＫＣＮＡ１、ＫＣＮＡ２、ＫＣＮＡ３、ＫＣＮＡ４、ＫＣＮＡ５、ＫＣＮＡ６、ＫＣＮＡ７、ＫＣＮＡ１０、ＫＣＮＢ１、ＫＣＮＢ２、ＫＣＮＣ１、ＫＣＮＣ２、ＫＣＮＣ３、ＫＣＮＣ４、ＫＣＮＤ１、ＫＣＮＤ２、ＫＣＮＤ３、ＫＣＮＦ１、ＫＣＮＧ１、ＫＣＮＧ２、ＫＣＮＧ３、ＫＣＮＧ４、ＫＣＮＨ１、ＫＣＮＨ２、ＫＣＮＨ３、ＫＣＮＨ４、ＫＣＮＨ５、ＫＣＮＨ６、ＫＣＮＨ７、ＫＣＮＨ８、ＫＣＮＱ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＱ４、ＫＣＮＱ５、ＫＣＮＳ１、ＫＣＮＳ２、ＫＣＮＳ３、ＫＣＮＶ１、ＫＣＮＶ２、ＫＣＮＪ１、ＫＣＮＪ２、ＫＣＮＪ３、ＫＣＮＪ４、ＫＣＮＪ５、ＫＣＮＪ６、ＫＣＮＪ８、ＫＣＮＪ９、ＫＣＮＪ１０、ＫＣＮＪ１１、ＫＣＮＪ１２、ＫＣＮＪ１３、ＫＣＮＪ１４、ＫＣＮＪ１５、ＫＣＮＪ１６、ＫＣＮＪ１８、ＫＣＮＫ１、ＫＣＮＫ２、ＫＣＮＫ３、ＫＣＮＫ４、ＫＣＮＫ５、ＫＣＮＫ６、ＫＣＮＫ７、ＫＣＮＫ９、ＫＣＮＫ１０、ＫＣＮＫ１２、ＫＣＮＫ１３、ＫＣＮＫ１５、ＫＣＮＫ１６、ＫＣＮＫ１７、ＫＣＮＫ１８、ＨＶＣＮ１、ＨＴＲ３Ａ、ＨＴＲ３Ｂ、ＨＴＲ３Ｃ、ＨＴＲ３Ｄ、ＨＴＲ３Ｅ、ＣＨＲＮＡ１、ＣＨＲＮＡ２、ＣＨＲＮＡ３、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＡ５、ＣＨＲＮＡ６、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＡ９、ＣＨＲＮＡ１０、ＣＨＲＮＢ１、ＣＨＲＮＢ２、ＣＨＲＮＢ３、ＣＨＲＮＢ４、ＣＨＲＮＤ、ＣＨＲＮＥ、ＣＨＲＮＧ、ＧＡＢＲＡ１、ＧＡＢＲＡ２、ＧＡＢＲＡ３、ＧＡＢＲＡ４、ＧＡＢＲＡ５、ＧＡＢＲＡ６、Ｇ
ＡＢＲＢ１、ＧＡＢＲＢ２、ＧＡＢＲＢ３、ＧＡＢＲＤ、ＧＡＢＲＥ、ＧＡＢＲＧ１、ＧＡＢＲＧ２、ＧＡＢＲＧ３、ＧＡＢＲＰ、ＧＡＢＲＱ、ＧＡＢＲＲ１、ＧＡＢＲＲ２、ＧＡＢＲＲ３、ＧＲＩＡ１、ＧＲＩＡ２、ＧＲＩＡ３、ＧＲＩＡ４、ＧＲＩＤ１、ＧＲＩＤ２、ＧＲＩＫ１、ＧＲＩＫ２、ＧＲＩＫ３、ＧＲＩＫ４、ＧＲＩＫ５、ＧＲＩＮ１、ＧＲＩＮ２Ａ、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＧＲＩＮ２Ｃ、ＧＲＩＮ２Ｄ、ＧＲＩＮ３Ａ、ＧＲＩＮ３Ｂ、ＧＬＲＡ１、ＧＬＲＡ２、ＧＬＲＡ３、ＧＬＲＡ４、Ｐ２ＲＸ１、Ｐ２ＲＸ２、Ｐ２ＲＸ３、Ｐ２ＲＸ４、Ｐ２ＲＸ５、Ｐ２ＲＸ６、Ｐ２ＲＸ７、ＺＡＣＮ、ＡＳＩＣ１、ＡＳＩＣ２、ＡＳＩＣ３、ＡＳＩＣ４、ＡＱＰ１、ＡＱＰ２、ＡＱＰ３、ＡＱＰ４、ＡＱＰ５、ＡＱＰ６、ＡＱＰ７、ＡＱＰ８、ＡＱＰ９、ＡＱＰ１０、ＡＱＰ１１、ＡＱＰ１２Ａ、ＡＱＰ１２Ｂ、ＭＩＰ、ＣＬＣＮ１、ＣＬＣＮ２、ＣＬＣＮ３、ＣＬＣＮ４、ＣＬＣＮ５、ＣＬＣＮ６、ＣＬＣＮ７、ＣＬＣＮＫＡ、ＣＬＣＮＫＢ、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）、ＡＮＯ１、ＡＮＯ２、ＡＮＯ３、ＡＮＯ４、ＡＮＯ５、ＡＮＯ６、ＡＮＯ７、ＡＮＯ８、ＡＮＯ９、ＡＮＯ１０、ＢＥＳＴ１、ＢＥＳＴ２、ＢＥＳＴ３、ＢＥＳＴ４、ＣＬＩＣ１、ＣＬＩＣ２、ＣＬＩＣ３、ＣＬＩＣ４、ＣＬＩＣ５、ＣＬＩＣ６、ＧＪＡ１、ＧＪＡ３、ＧＪＡ４、ＧＪＡ５、ＧＪＡ６Ｐ、ＧＪＡ８、ＧＪＡ９、ＧＪＡ１０、ＧＪＢ１、ＧＪＢ２、ＧＪＢ３、ＧＪＢ４、ＧＪＢ５、ＧＪＢ６、ＧＪＢ７、ＧＪＣ１、ＧＪＣ２、ＧＪＣ３、ＧＪＤ２、ＧＪＤ３、ＧＪＤ４、ＧＪＥ１、ＩＴＰＲ１、ＩＴＰＲ２、ＩＴＰＲ３、ＰＡＮＸ１、ＰＡＮＸ２、ＰＡＮＸ３、ＲＹＲ１、ＲＹＲ２、ＲＹＲ３、ＮＡＬＣＮ、ＳＣＮＮ１Ａ、ＳＣＮＮ１Ｂ、ＳＣＮＮ１Ｄ、ＳＣＮＮ１Ｇ、ＴＥＭ１６Ａ、ＡＤＡＭＴＳ７、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＧＰＴＬ８、ＬＰＬ、ＧＤＦ１５、ガレクチン−１、ガレクチン−２、ガレクチン−３、ガレクチン−４、ガレクチン−７、ガレクチン−８、ガレクチン−９、ガレクチン−１０、ガレクチン−１２、ガレクチン−１３、マトリックスｇｌａタンパク質（ＭＧＰ）、ＰＲＮＰ、ＤＧＡＴ１、ＧＰＡＴ３、ＤＭＣ１、ＢＬＭ、ＢＲＣＡ２、ヒト内在性レトロウイルスタイプＫ（ＨＥＲＶ−Ｋ）ファミリーのメンバー、エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１（ＥＮＴＰＤ１）、エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ２（ＥＮＴＰＤ２）、ＳＬＣ１Ａ１、ＳＬＣ１Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ１Ａ４、ＳＬＣ１Ａ５、ＳＬＣ１Ａ６、ＳＬＣ１Ａ７、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ２Ａ３、ＳＬＣ２Ａ４、ＳＬＣ２Ａ５、ＳＬＣ２Ａ６、ＳＬＣ２Ａ７、ＳＬＣ２Ａ８、ＳＬＣ２Ａ９、ＳＬＣ２Ａ１０、ＳＬＣ２Ａ１１、ＳＬＣ２Ａ１２、ＳＬＣ２Ａ１３、ＳＬＣ２Ａ１４、ＳＬＣ３Ａ１、ＳＬＣ３Ａ２、ＳＬＣ４Ａ１、ＳＬＣ４Ａ２、ＳＬＣ４Ａ３、ＳＬＣ４Ａ４、ＳＬＣ４Ａ５、ＳＬＣ４Ａ６、ＳＬＣ４Ａ７、ＳＬＣ４Ａ８、ＳＬＣ４Ａ９、ＳＬＣ４Ａ１０、ＳＬＣ４Ａ１１、ＳＬＣ５Ａ１、ＳＬＣ５Ａ２、ＳＬＣ５Ａ３、ＳＬＣ５Ａ４、ＳＬＣ５Ａ５、ＳＬＣ５Ａ６、ＳＬＣ５Ａ７、ＳＬＣ５Ａ８、ＳＬＣ５Ａ９、ＳＬＣ５Ａ１０、ＳＬＣ５Ａ１１、ＳＬＣ５Ａ１２、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＬＣ６Ａ２、ＳＬＣ６Ａ３、ＳＬＣ６Ａ４、ＳＬＣ６Ａ５、ＳＬＣ６Ａ６、ＳＬＣ６Ａ７、ＳＬＣ６Ａ８、ＳＬＣ６Ａ９、ＳＬＣ６Ａ１０、ＳＬＣ６Ａ１１、ＳＬＣ６Ａ１２、ＳＬＣ６Ａ１３、ＳＬＣ６Ａ１４、ＳＬＣ６Ａ１５、ＳＬＣ６Ａ１６、ＳＬＣ６Ａ１７、ＳＬＣ６Ａ１８、ＳＬＣ６Ａ１９、ＳＬＣ６Ａ２０、ＳＬＣ７Ａ５、ＳＬＣ７Ａ６、ＳＬＣ７Ａ７、ＳＬＣ７Ａ８、ＳＬＣ７Ａ９、ＳＬＣ７Ａ１０、ＳＬＣ７Ａ１１、ＳＬＣ７Ａ１３、ＳＬＣ７Ａ１４、ＳＬＣ８Ａ１、ＳＬＣ８Ａ２、ＳＬＣ８Ａ３、ＳＬＣ９Ａ１、ＳＬＣ９Ａ２、ＳＬＣ９Ａ３、ＳＬＣ９Ａ４、ＳＬＣ９Ａ５、ＳＬＣ９Ａ６、ＳＬＣ９Ａ７、ＳＬＣ９Ａ８、ＳＬＣ９Ａ９、ＳＬＣ９Ａ１０、ＳＬＣ９Ａ１１、ＳＬＣ９Ｂ１、ＳＬＣ９Ｂ２、ＳＬＣ１０Ａ１、ＳＬＣ１０Ａ２、ＳＬＣ１０Ａ３、ＳＬＣ１０Ａ４、ＳＬＣ１０Ａ５、ＳＬＣ１０Ａ６、ＳＬＣ１０Ａ７、ＳＬＣ１１Ａ１、ＳＬＣ１１Ａ２、ＳＬＣ１２Ａ１、ＳＬＣ１２Ａ２、ＳＬＣ１２Ａ３、ＳＬＣ１２Ａ４、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ１２Ａ６、ＳＬＣ１２Ａ７、ＳＬＣ１２Ａ８、ＳＬＣ１２Ａ９、ＳＬＣ１３Ａ１、ＳＬＣ１３Ａ２、ＳＬＣ１３Ａ３、ＳＬＣ１３Ａ４、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ１４Ａ１、ＳＬＣ１４Ａ２、ＳＬＣ１５Ａ１、ＳＬＣ１５Ａ２、ＳＬＣ１５Ａ３、ＳＬＣ１５Ａ４、ＳＬＣ１６Ａ１、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１６Ａ３、ＳＬＣ１６Ａ４、ＳＬＣ１６Ａ５、ＳＬＣ１６Ａ６、ＳＬＣ１６Ａ７、ＳＬＣ１６Ａ８、ＳＬＣ１６Ａ９、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ１１、ＳＬＣ１６Ａ１２、ＳＬＣ１６Ａ１３、ＳＬＣ１６Ａ１４、ＳＬＣ１７Ａ１、ＳＬＣ１７Ａ２、ＳＬＣ１７Ａ３、ＳＬＣ１７Ａ４、ＳＬＣ１７Ａ５、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＬＣ１７Ａ７、ＳＬＣ１７Ａ８、ＳＬＣ１７Ａ９、ＳＬＣ１８Ａ１、ＳＬＣ１８Ａ２、ＳＬＣ１８Ａ３、ＳＬＣ１９Ａ１、ＳＬＣ１９Ａ２、ＳＬＣ１９Ａ３、ＳＬＣ２０Ａ１、ＳＬＣ２０Ａ２、ＳＬＣＯ１Ａ２、ＳＬＣＯ１Ｂ１、ＳＬＣＯ１Ｂ３、ＳＬＣＯ１Ｃ１、ＳＬＣＯ２Ａ１、ＳＬＣＯ２Ｂ１、ＳＬＣＯ３Ａ１、ＳＬＣＯ４Ａ１、ＳＬＣＯ４Ｃ１、ＳＬＣＯ５Ａ１、ＳＬＣＯ６Ａ１、ＳＬＣ２２Ａ１、ＳＬＣ２２Ａ２、ＳＬＣ２２Ａ３、ＳＬＣ２２Ａ４、ＳＬＣ２２Ａ５、ＳＬＣ２２Ａ６、ＳＬＣ２２Ａ７、ＳＬＣ２２Ａ８、ＳＬＣ２２Ａ９、ＳＬＣ２２Ａ１０、ＳＬＣ２２Ａ１１、ＳＬＣ２２Ａ１２、ＳＬＣ２２Ａ１３、ＳＬＣ２２Ａ１４、ＳＬＣ２２Ａ１５、ＳＬＣ２２Ａ１６、ＳＬＣ２２Ａ１７、ＳＬＣ２２Ａ１８、ＳＬＣ２２Ａ１８ＡＳ，ＳＬＣ２２Ａ１９、ＳＬＣ２２Ａ２０、ＳＬＣ２２Ａ２３、ＳＬＣ２２Ａ２４、ＳＬＣ２２Ａ２５、ＳＬＣ２２Ａ３１、ＳＬＣ２３Ａ１、ＳＬＣ２３Ａ２、ＳＬＣ２３Ａ３、ＳＬＣ２３Ａ４、ＳＬＣ２４Ａ１、ＳＬＣ２４Ａ２、ＳＬＣ２４Ａ３、ＳＬＣ２４Ａ４、ＳＬＣ２４Ａ５、ＳＬＣ２４Ａ６、ＳＬＣ２５Ａ１、ＳＬＣ２５Ａ２、ＳＬＣ２５Ａ３、ＳＬＣ２５Ａ４、ＳＬＣ２５Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ６、ＳＬＣ２５Ａ７、ＳＬＣ２５Ａ８、ＳＬＣ２５Ａ９、ＳＬＣ２５Ａ１０、ＳＬＣ２５Ａ１１、ＳＬＣ２５Ａ１２、ＳＬＣ２５Ａ１３、ＳＬＣ２５Ａ１４、ＳＬＣ２５Ａ１５、ＳＬＣ２５Ａ１６、ＳＬＣ２５Ａ１７、ＳＬＣ２５Ａ１８、ＳＬＣ２５Ａ１９，ＳＬＣ２５Ａ２０、ＳＬＣ２５Ａ２１、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＳＬＣ２５Ａ２３、ＳＬＣ２５Ａ２４、ＳＬＣ２５Ａ２５、ＳＬＣ２５Ａ２６、ＳＬＣ２５Ａ２７、ＳＬＣ２５Ａ２８、ＳＬＣ２５Ａ２９、ＳＬＣ２５Ａ３０、ＳＬＣ２５Ａ３１、ＳＬＣ２５Ａ３２、ＳＬＣ２５Ａ３３、ＳＬＣ２５Ａ３４、ＳＬＣ２５Ａ３５、ＳＬＣ２５Ａ３６、ＳＬＣ２５Ａ３７，ＳＬＣ２５Ａ３８、ＳＬＣ２５Ａ３９、ＳＬＣ２５Ａ４０、ＳＬＣ２５Ａ４１、ＳＬＣ２５Ａ４２、ＳＬＣ２５Ａ４３、ＳＬＣ２５Ａ４４、ＳＬＣ２５Ａ４５、ＳＬＣ２５Ａ４６、ＳＬＣ２６Ａ１、ＳＬＣ２６Ａ２、ＳＬＣ２６Ａ３、ＳＬＣ２６Ａ４、ＳＬＣ２６Ａ５、ＳＬＣ２６Ａ６、ＳＬＣ２６Ａ７、ＳＬＣ２６Ａ８、ＳＬＣ２６Ａ９、ＳＬＣ２６Ａ１０、ＳＬＣ２６Ａ１１、ＳＬＣ２７Ａ１、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＬＣ２７Ａ３、ＳＬＣ２７Ａ４、ＳＬＣ２７Ａ５、ＳＬＣ２７Ａ６、ＳＬＣ２８Ａ１、ＳＬＣ２８Ａ２、ＳＬＣ２８Ａ３、ＳＬＣ２９Ａ１、ＳＬＣ２９Ａ２、ＳＬＣ２９Ａ３、ＳＬＣ２９Ａ４、ＳＬＣ３０Ａ１、ＳＬＣ３０Ａ２、ＳＬＣ３０Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＣ３０Ａ５、ＳＬＣ３０Ａ６、ＳＬＣ３０Ａ７、ＳＬＣ３０Ａ８、ＳＬＣ３０Ａ９、ＳＬＣ３０Ａ１０、ＳＬＣ３１Ａ１、ＳＬＣ３１Ａ２、ＳＬＣ３２Ａ１、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ３４Ａ１、ＳＬＣ３４Ａ２、ＳＬＣ３４Ａ３、ＳＬＣ３５Ａ１、ＳＬＣ３５Ａ２、ＳＬＣ３５Ａ３、ＳＬＣ３５Ａ４、ＳＬＣ３５Ａ５、ＳＬＣ３５Ｂ１、ＳＬＣ３５Ｂ２、ＳＬＣ３５Ｂ３、ＳＬＣ３５Ｂ４、ＳＬＣ３５Ｃ１、ＳＬＣ３５Ｃ２、ＳＬＣ３５Ｄ１、ＳＬＣ３５Ｄ２、ＳＬＣ３５Ｄ３、ＳＬＣ３５Ｅ１、ＳＬＣ３５Ｅ２、ＳＬＣ３５Ｅ３、ＳＬＣ３５Ｅ４、ＳＬＣ３５Ｆ１、ＳＬＣ３５Ｆ２、ＳＬＣ３５Ｆ３、ＳＬＣ３５Ｆ４、ＳＬＣ３５Ｆ５、ＳＬＣ３５Ｇ１、ＳＬＣ３５Ｇ３、ＳＬＣ３５Ｇ４、ＳＬＣ３５Ｇ５、ＳＬＣ３５Ｇ６、ＳＬＣ３６Ａ１、ＳＬＣ３６Ａ２、ＳＬＣ３６Ａ３、ＳＬＣ３６Ａ４、ＳＬＣ３７Ａ１、ＳＬＣ３７Ａ２、ＳＬＣ３７Ａ３、ＳＬＣ３７Ａ４、ＳＬＣ３８Ａ１、ＳＬＣ３８Ａ２、ＳＬＣ３８Ａ３、ＳＬＣ３８Ａ４、ＳＬＣ３８Ａ５、ＳＬＣ３８Ａ６、ＳＬＣ３８Ａ７、ＳＬＣ３８Ａ８、ＳＬＣ３８Ａ９、ＳＬＣ３８Ａ１０、ＳＬＣ３８Ａ１１、ＳＬＣ３９Ａ１、ＳＬＣ３９Ａ２、ＳＬＣ３９Ａ３、ＳＬＣ３９Ａ４、ＳＬＣ３９Ａ５、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＬＣ３９Ａ７、ＳＬＣ３９Ａ８、ＳＬＣ３９Ａ９、ＳＬＣ３９Ａ１０、ＳＬＣ３９Ａ１１、ＳＬＣ３９Ａ１２、ＳＬＣ３９Ａ１３、ＳＬＣ３９Ａ１４、ＳＬＣ４０Ａ１、ＳＬＣ４１Ａ１、ＳＬＣ４１Ａ２、ＳＬＣ４１Ａ３、ＲｈＡＧ、ＲｈＢＧ、ＲｈＣＧ、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ２、ＳＬＣ４３Ａ３、ＳＬＣ４４Ａ１、ＳＬＣ４４Ａ２、ＳＬＣ４４Ａ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＬＣ４４Ａ５、ＳＬＣ４５Ａ１、ＳＬＣ４５Ａ２、ＳＬＣ４５Ａ３、ＳＬＣ４５Ａ４、ＳＬＣ４６Ａ１、ＳＬＣ４６Ａ２、ＳＬＣ４６Ａ３、ＳＬＣ４７Ａ１、ＳＬＣ４７Ａ２、ＨＣＰ−１、ＭＦＳＤ５、ＭＦＳＤ１０、ＳＬＣ５０Ａ１、ＯＳＴα、ＯＳＴβ、ＳＬＣ５２Ａ１、ＳＬＣ５２Ａ２、ならびにＳＬＣ５２Ａ３から選択される、態様５１〜７７のいずれか１つの方法。
【００９１】
態様７９．標的タンパク質に特異的に結合する抗体を得るステップが、動物から抗体産生細胞を得るステップと、抗体産生細胞を有するハイブリドーマを作製するステップと、標的タンパク質に特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマを選択するステップと、ハイブリドーマによって産生される抗体を単離するステップとを含む、態様１〜７８のいずれか１つの方法。
【００９２】
態様８０．標的タンパク質に特異的に結合する抗体をコードする核酸配列を決定するステップをさらに含む、態様７９の方法。
【００９３】
態様８１．抗体産生細胞が、リンパ球、脾細胞、または末梢血単核球（ＰＢＭＣ）である、態様７２、７９、または８０の方法。
【００９４】
態様８２．標的タンパク質に特異的に結合する抗体に基づくキメラ抗体またはヒト化抗体を作製するステップであって、キメラ抗体またはヒト化抗体が同等の親和性で標的タンパク質と結合することができる、ステップをさらに含む、態様１〜８１のいずれか１つの方法。
【００９５】
態様８３．動物が、ヒト抗体を産生するように遺伝的に改変された、態様１〜８２のいずれか１つの方法。
【００９６】
態様８４．複合体のポリリボヌクレオチドがプソイドウリジンである、態様１〜８３のいずれか１つの方法。
【００９７】
態様８５．複合体のポリリボヌクレオチドが、
（ａ）次のシチジンについての修飾ヌクレオチド：５−ホルミルシチジン、５−メチルシチジン、５−メトキシシチジン、５−ヒドロキシシチジン、および５−ヒドロキシメチルシチジンの１つ以上；
（ｂ）次のウリジンについての修飾ヌクレオチド：５−ホルミルウリジン、５−メチルウリジン、５−メトキシウリジン、５−カルボキシメチルエステルウリジン、プソイドウリジン、およびＮ１−メチルプソイドウリジンの１つ以上；
（ｃ）アデノシンについての修飾ヌクレオチドとしてＮ６−メチルアデノシン：および／または
（ｄ）グアノシンについての修飾ヌクレオチドとしてチエノグアノシンを含む、態様１〜８４のいずれか１つの方法。
【００９８】
態様８６．複合体が、互いに結合することができる２つ以上の異なる標的タンパク質をコードするｍＲＮＡなどの２つ以上の異なるポリリボヌクレオチドを含む、態様１〜８５のいずれか１つの方法。
【００９９】
態様８７．前記複合体が、表１〜７の配列、例えば、配列番号、２、４、３７、５、７、４０、８、１０、４３、１４、１６、４６、１７、１９、４９、２０、２２、５２、２６、５５、または５６のいずれか１つと、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である配列を含むポリリボヌクレオチドを含む、態様１〜８６のいずれか１つの方法。
【図面の簡単な説明】
【０１００】
【図１Ａ】図１：図１Ａ〜１Ｄは、例示的なＲＸＦＰ１による免疫化戦略および結果として得られたＦＡＣＳに基づく血清応答を示す。図１ＡはヒトＲＸＦＰ１についての例示的な免疫化戦略の模式図である。図１Ｂはプライミング免疫化の１０日後の動物由来のＦＡＣＳに基づく血清応答を示し、より従来型の免疫化形態である細胞全体での過剰発現ヒトＲＸＦＰ１（ＢａＦ／３）またはウイルス様粒子による過剰発現ヒトＲＸＦＰ１（ＶＬＰ−３００．１９）と比較して、ｍＲＮＡ免疫化による標的特異的な力価の迅速な誘導を説明している。図１Ｃは最終ブーストおよびハイブリドーマ融合の開始前の免疫化されたマウスの最終血清応答を示す。８匹のマウスが融合のために選択され、１００μｇの示された免疫原でブーストした。図１Ｄは集団免疫化から得られた３つの抗ヒトＲＸＦＰ１ハイブリドーマクローンのサンプルとなるＦＡＣＳプロファイルを示す。全体で２０７個のＲＸＦＰ１特異的クローンを得た。
【図１Ｂ】（上記の通り。）
【図１Ｃ】（上記の通り。）
【図１Ｄ】（上記の通り。）
【図２】例示的なＳＬＣ５２Ａ２による免疫化戦略および結果として得られたＦＡＣＳに基づく血清応答を示す。抗ＳＬＣ５２Ａ抗体および対応する血清力価の産生のために採用された免疫化戦略を示す。過剰発現細胞、ウイルス様粒子および細胞外ループ（ＥＣ２）をコードするペプチドなどの従来の免疫原は、有意な標的特異的な力価を誘発できなかった。ＳＬＣ５２Ａ２に特異的な抗体を産生することができる合計２２８個のハイブリドーマを８匹の融合マウスから作製した。
【図３】例示的なガレクチン−３による免疫化戦略および結果として得られたＥＬＩＳＡの血清応答を示す。
【図４】精製されたヒトＲＸＦＰ１のｍＲＮＡに対するｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒトレースを示す。ウェル毎にロードされたｍＲＮＡの総量を示す。プソイドウリジンを用いて合成された試料は、ウリジンで合成された転写物よりも予測されたサイズ（２６８７塩基）に近い分子量を示す。
【図５】ヒトＲＸＦＰ１のｍＲＮＡの濃度を増加させながら一過的にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞から調製された細胞膜画分のウエスタンブロッティングを示す。対照試料として、トランスフェクトしていない細胞およびヒトＲＸＦＰ１をコードするＤＮＡプラスミドをトランスフェクトした細胞もロードした。トランスフェクトした６個のウェル毎に使用された核酸の量を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１０１】
本開示は、カチオン性脂質、およびポリリボヌクレオチド分子、例えば、免疫原（例えば、標的タンパク質またはその断片）をコードするｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド分子を含む組成物を使用する免疫化の方法に関する。本開示はまた、遺伝的に免疫化された動物からポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を作製するための方法、ならびにそのような抗体のキメラ変異体およびヒト化変異体を含む、本明細書で提供される免疫化方法によって作製される抗体に関する。本開示はまた、本明細書で提供される免疫化方法（例えば、ｍＲＮＡ−ＬＮＰによる免疫化方法）によって得られるハイブリドーマに関する。
【０１０２】
本開示は、動物（例えば、マウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト動物）において免疫応答を誘発するための方法であって：（ａ）少なくとも１つのカチオン性脂質を、抗原決定基をコードするポリヌクレオチドと混合し、それによりカチオン性脂質−ポリヌクレオチド複合体（例えば、ｍＲＮＡ−ＬＮＰ複合体）を形成するステップと；（ｂ）脂質−ポリヌクレオチド複合体を動物に投与するステップとを含む方法に関する。本開示はさらに、ポリヌクレオチドがＧＰＣＲなどの免疫原（例えば、膜貫通タンパク質（例えば、複数回膜貫通タンパク質）をコードするｍＲＮＡ分子である、遺伝的免疫化方法に関する。ｍＲＮＡは、チャレンジおよび複合体タンパク質標的（例えば、ＧＰＣＲなどの複数回膜貫通タンパク質）に対して抗体を迅速に産生させるための優れたポリヌクレオチドであることが見出されている。
【０１０３】
本開示はさらに、上述の遺伝的免疫化方法の使用と、免疫化された動物からポリクローナル抗体を単離するステップとをさらに含む、ポリクローナル抗体を作製するための方法に関する。
【０１０４】
本開示はまた、モノクローナル抗体を作製するための方法であって、（ａ）非ヒト動物（例えば、マウス）に、少なくとも１つのカチオン性脂質およびポリヌクレオチド（例えば、ポリリボヌクレオチド）を含む組成物を投与するステップであって、ポリヌクレオチドが免疫原をコードするｍＲＮＡ配列を含むステップと；（ｂ）免疫原に特異的に結合する抗体を得るステップとを含む方法に関する。特定の態様では、免疫原に特異的に結合する抗体を得るステップは、次のステップ：（ａ）リンパ球（例えば、Ｂリンパ球）または脾細胞などの抗体産生細胞を免疫化された動物から得るステップと；（ｂ）骨髄腫細胞を有する免疫化された動物由来の抗体産生細胞を融合し、それによりハイブリドーマを作製するステップと；（ｃ）ハイブリドーマをクローニングするステップと；（ｄ）抗免疫原抗体（すなわち、免疫原に特異的に結合する抗体）を産生する陽性クローンを選択するステップと；（ｅ）抗免疫原抗体産生クローンを培養するステップと；（ｆ）抗免疫原抗体を培養液から単離するステップの１つ以上を含む。
【０１０５】
本開示はまた、モノクローナル抗体を作製するための方法であって、（ａ）少なくとも１つのカチオン性脂質を、ポリリボヌクレオチド（例えば、ポリリボヌクレオチド）と混合し、それにより脂質−ポリヌクレオチド複合体を形成するステップであって、ポリヌクレオチドが免疫原をコードするｍＲＮＡ配列を含むステップと；（ｂ）脂質−ポリヌクレオチド複合体を少なくとも１匹のマウスに投与するステップと；（ｃ）リンパ球（例えば、Ｂリンパ球）または脾細胞などの抗体産生細胞を免疫化されたマウスから取り出すステップと；（ｄ）免疫化されたマウス由来のＢリンパ球を骨髄腫細胞と使用して、それによりハイブリドーマを作製するステップと；（ｅ）ハイブリドーマをクローニングするステップと；（ｆ）抗免疫原抗体を産生する陽性クローンを選択するステップと；（ｇ）抗免疫原抗体産生クローンを培養するステップと；（ｈ）抗免疫原抗体を培養液から単離するステップとを含む方法に関する。
【０１０６】
カチオン性脂質の種々の製剤が、インビトロで細胞にトランスフェクトするために使用されてきた（例えば、国際公開第９１／１７４２４号パンフレット；国際公開第９１／１６０２４号パンフレット；米国特許第４，８９７，３５５号明細書；米国特許第４，９４６，７８７号明細書；米国特許第５，０４９，３８６号明細書；および米国特許第５，２０８，０３６号明細書）。カチオン性脂質はまた、インビボでカエルおよびラット細胞に外来性のポリヌクレオチドを導入するために使用されてきた（例えば、Ｈｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ  ４：２０３−２１４（１９９０）；Ｈａｚｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４：２０６−２０９（１９９１）を参照のこと）。本明細書で提供される特定の実施形態では、カチオン性脂質は、一般に、生物学的に活性な物質を送達するか、または導入するために使用される（例えば、国際公開第９１／１７４２４号パンフレット；国際公開第９１／１６０２４号パンフレット；および国際公開第９３／０３７０９号パンフレットを参照のこと）。本明細書で記載される特定の態様では、カチオン性リポソームは、ポリリボヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）などの外来性のポリヌクレオチドを、遺伝的免疫化のために宿主細胞に導入するための効率的な担体を提供することができる。
【０１０７】
従来技術でよく知られている種々のカチオン性脂質を、本明細書で提供される組成物および方法において使用することができる。よく知られているカチオン性脂質の１つは、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）である。ＤＯＴＭＡ単独で、またはジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）との１：１の配合において、標準的な手法を用いてリポソームに製剤化することができる。全体が参照により本明細書中に組み込まれるＦｅｌｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４：７４１３−７４１７（１９８７））は、このようなリポソームが、核酸の培養細胞への効率的な送達をもたらすことを示した。ＤＯＴＭＡ：ＤＯＰＥ（１：１）製剤は、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）（ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ：Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍｄ．）の名称で販売されている。別の市販されているカチオン性脂質は、１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−３−（トリメチルアンモニア）プロパン（ＤＯＴＡＰ）であり、これは、オレオイル部分がプロピルアミンにエーテル結合ではなくエステル結合を介して結合しているという点でＤＯＴＭＡとは異なる。ＤＯＴＡＰは、標的細胞によって、より容易に分解されると考えられている。
【０１０８】
既知化合物の関連する基は、トリメチルアンモニウム基のメチル基の１つがヒドロキシエチル基によって置換されているという点でＤＯＴＭＡおよびＤＯＴＡＰと異なる。この種の化合物は、ホスホリパーゼＡのＲｏｓｅｎｔｈａｌ阻害剤（Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２３５：２２０２−２２０６（１９６０）に類似しており、これは、プロピルアミンコアに結合したステアロイルエステルを有する。Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ阻害剤（ＲＩ）のジオレオイル類似体は、脂肪酸部分のプロピルアミンコアへの結合に依存して、ＤＯＲＩエーテルおよびＤＯＲＩエステルと、一般に略記される。ヒドロキシ基が、さらなる官能基化のための部位として、例えば、カルボキシスペルミンへのエステル化によって、使用され得る。
【０１０９】
既知化合物の別のクラスは、Ｂｅｈｒら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：６９８２−６９８６（１９８９）；ＥＰＯ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ０  ３９４  １１１）によって記載されており、この中で、カルボキシスペルミンは２種の脂質に結合されており、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン５−カルボキシスペルミルアミド（ＤＤＰＥＳ）をもたらす。
【０１１０】
ＤＯＧＳとＤＰＰＥＳの両方を使用してプラスミドを覆って、効率的なトランスフェクションをもたらす脂質凝集体複合体を形成する。これらの化合物は、ある種の細胞株のトランスフェクションに関してＤＯＴＭＡよりもより効率的であり、かつより低い毒性であると主張される。ＤＯＧＳは、ＴＲＡＮＳＦＥＣＴＡＭ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）として商業的に利用可能である。
【０１１１】
カチオン性コレステロール誘導体（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）が合成されており、ＤＯＰＥと組み合わせてリポソームに製剤化されている（Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１７９：２８０−２８５（１９９１））。ＤＣ−Ｃｈｏｌにより製剤化されたリポソームは、ある種の細胞株に関して、ＤＯＴＭＡ含有リポソームよりもより効率的なトランスフェクションおよびより低い毒性を提供する。
【０１１２】
リポポリリジンは、ポリリジンをＤＯＰＥに結合することによって形成される。この化合物は、血清存在下でのトランスフェクションに関して特に効率的であると報告されている（Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１６５：８−１４（１９９１））。したがって、リポポリリジンは免疫化のための効率的な担体であり得る。
【０１１３】
本明細書で提供される方法および組成物において使用することができる脂質（例えば、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、およびステルス脂質）の他の非限定的な例としては、国際公開第２０１５／０９５３４６号パンフレット、国際公開第２０１５／０９５３４０号パンフレット、国際公開第２０１６／０３７０５３号パンフレット、国際公開第２０１４／１３６０８６号パンフレット、および国際公開第２０１１／０７６８０７号パンフレットに記載のものを含み、各々は、参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる。
【０１１４】
ある種の態様では、本明細書に記載の組成物および方法のためのカチオン性脂質としては、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジオレオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＤＡＰ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ジオレオイルカルバミル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＣＤＡＰ）、１，２−ジリネオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＬＩＮＤＡＰ）、ジラウリル（Ｃ１２：０）トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＬＴＡＰ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ＤＣ−Ｃｈｏｌ、ジオレオイルオキシ−Ｎ−［２−スペルミンカルボキサミド）エチル｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、３−ジメチルアミノ−２−（コレスト−５−エン−３−β−オキシブタン−４−オキシ）−１−（シス，シス−９，１２−オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣＬｉｎＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ジオレイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）、２−［５’−（コレスト−５−エン−３β−オキシ）−３’−オキサペントキシ）−３−ジメチル−１−（シス，シス−９’，１２’−オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣｐＬｉｎＤＭＡ）およびＮ，Ｎ−ジメチル−３，４−ジオレイルオキシベンジルアミン（ＤＭＯＢＡ）、ならびに１，２−Ｎ，Ｎ’−ジオレイルカルバミル−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＯｃａｒｂＤＡＰ）が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、本明細書で提供される組成物および方法のためのカチオン性脂質は、ＤＯＴＡＰまたはＤＬＴＡＰである。これらの化合物は、単独で、または他の脂質凝集体形成成分（ＤＯＰＥまたはコレステロールなど）との組み合わせのいずれかにおいて、リポソームまたは他の脂質凝集体への製剤化のために有用である。このような凝集体はカチオン性であり、ＤＮＡまたはＲＮＡなどのアニオン性高分子と複合体を形成することができる。
【０１１５】
本明細書で提供されるｍＲＮＡに基づく免疫化の方法は、抗原の作製および／または抗体産生に固有の上述の障害と関連する問題の多くに対処した。とりわけ、前記方法は、標的タンパク質抗原を直接発現し精製する必要性を不要にする。動物宿主自体の細胞機構を使用して、標的タンパク質を作り出し、それを免疫系に提示する。真核生物の標的タンパク質に関して、このことは、真核生物特異的な翻訳後修飾およびタンパク質プロセシングの追加を許容する付加的な利点を有する。いずれかの特定の理論に束縛されるわけではないが、免疫化に使用される精製されていないｍＲＮＡは、調製物中の二重鎖ＲＮＡ要素の存在に一部起因して、高い炎症性の性質を有する。特定の態様では、これは、アジュバントとして機能して、標的タンパク質に対する体液性応答をブーストする。
【０１１６】
本明細書で提供される特定の態様では、標的タンパク質のためのモノクローナル抗体の開発を、前記標的タンパク質をコードするｍＲＮＡによる動物の免疫化を介して促進することができる。この方法は、標的タンパク質を異種で生成し、かつ精製する必要がないため、Ｇタンパク質共役型受容体などの、特異的な抗体を開発するために技術的な課題を歴史的に有してきたタンパク質に対して多大な利点を提供する。ｍＲＮＡのアジュバント様特性によって誘発される宿主防御機構は、血清力価の迅速な発達をもたらす。
【０１１７】
ある種の態様では、本明細書で提供される被包性ｍＲＮＡに基づく免疫化方法により免疫化された動物から得られる抗体産生細胞を使用したハイブリドーマ融合物は、高度に増殖性である。被包性ｍＲＮＡは強力かつ高度に免疫原性であり、これにより、免疫化の日程を短縮することができ、より少ない動物を必要とすることができる。本方法により、全ての様式のタンパク質を、例えば、溶解性、膜結合性、複合型／ヘテロマー型など、複雑度に関係なく、抗原として産生することができる。発現により、抗原の天然のコンフォメーションになるはずである。
【０１１８】
本明細書で提供される本方法はまた、複合型タンパク質（例えば、ＩｇＧ、受容体複合体）のために複数鎖の共発現をもたらすことができる。本明細書で提供されるｍＲＮＡに基づく免疫化方法の特定の態様では、発現した抗原は、それらが合成物質であるため、免疫原性的に汚染されておらず、すなわち、体液性応答または感染性病原体の特異性を変化させ得る夾雑物を有しない。
【０１１９】
特定の態様では、本方法は、抗原産生および試薬保管の安定的な方法を説明し、というのも、本発明の脂質被包性ｍＲＮＡは、４℃で数ヶ月間安定であり続けることができるためである。さらに、ｍＲＮＡが全て合成物であるため、必要とされるＩＭＰＡＣＴ（感染性微生物ＰＣＲ増幅試験）病原体試験がない。
【０１２０】
用語
「クローニングベクター」は、プラスミドもしくはファージＤＮＡまたはその他のＤＮＡ配列を意味し、これは、宿主細胞において自律的に複製が可能であり、かつ１つまたは少数の制限エンドヌクレアーゼ認識部位により特徴づけられ、そこでは、そのようなＤＮＡ配列をベクターの必須の生物学的機能を失うことなく確定的に切断し得、その複製およびクローニングをもたらすためにそこにＤＮＡがスプライスされ得る。クローニングベクターはさらに、クローニングベクターによりトランスフェクトされた細胞の同定における使用に適したマーカーを含有してもよい。マーカーは、例えば、テトラサイクリン抵抗性またはアンピシリン抵抗性をもたらす。
【０１２１】
「発現ベクター」は、クローニングベクターに類似したベクターであるが、宿主への形質転換後に、発現ベクターにクローン化された遺伝子の発現を亢進する能力がある。クローン化された遺伝子は通常、プロモーター配列などの一定の制御配列の制御下に置かれる（すなわち、操作可能に連結される）。プロモーター配列は構成的または誘導性のいずれかであり得る。
【０１２２】
「発現」は、ポリペプチドが構造遺伝子から生成される細胞プロセスである。このプロセスは、遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）への転写およびそのようなｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳を含む。「発現」はまた、該当する場合、例えば、転写、翻訳、フォールディング、修飾、およびプロセシングを含むことができるが、これらに限定されない。「発現産物」は、遺伝子から転写されたＲＮＡ、および遺伝子から転写されたｍＲＮＡの翻訳により得られるポリペプチドを含む。特定の態様では、核酸配列の「発現」は、次の事象：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型の生成（例えば、転写による）；（２）ＲＮＡ転写物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、および／または３’末端プロセシングによる）；（３）ＲＮＡのポリペプチドまたはタンパク質への翻訳；ならびに（４）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾の１つ以上を指す。
【０１２３】
「外因性」核酸は、細胞または生物体などの生物システムに人為的介入を伴うプロセスによって導入された、その中に通常見出されないか、またはより少量見出される核酸（例えば、本明細書に記載の修飾合成ｍＲＮＡ）である。因子（例えば、本明細書に記載の修飾合成ｍＲＮＡ）は、その物質を継承する直属の前駆細胞または子孫細胞にそれが導入される場合、外因性である。対照的に、「内因性」は、生物システムまたは細胞にとって天然である因子または発現産物である（例えば、遺伝子の内因性発現）。
【０１２４】
「単離された」は、核酸またはポリペプチドの場合、その天然の供給源において見られるように核酸もしくはポリペプチドとともに存在する、および／または細胞で発現させた場合には核酸もしくはポリペプチドとともに存在すると考えられる、または分泌ポリペプチドの場合には分泌される、少なくとも１種の他の成分（例えば、核酸またはポリペプチド）から分離された、核酸またはポリペプチドを意味する。化学合成された核酸もしくはポリペプチドまたはインビトロ転写／翻訳を用いて合成されたものは、「単離された」と考えられる。
【０１２５】
「単離された細胞」は、それが本来見出される生物体から取り出された細胞またはそのような細胞の子孫である。任意選択により、細胞は、インビトロで、例えば他の細胞の存在下で、培養されている。任意選択により、細胞は後に第２の生物体に導入されるか、またはそれ（またはそれが由来する細胞または細胞の集団）が単離された生物体に再導入される。
【０１２６】
「修飾された」は、本明細書に記載の分子の変化した状態または構造を意味する。分子は、化学的、構造的、および機能的な方法を含む様々な方法で修飾されてもよい。一実施形態では、本明細書に記載のｍＲＮＡは、天然および非天然のヌクレオシドおよび／またはヌクレオチドの導入によって修飾される。修飾はまた、野生型と異なる任意の変化を意味する。「修飾された」ＲＮＡは、インビトロで作製されたＲＮＡ分子であり、少なくとも１つの修飾されたヌクレオシドを含む。
【０１２７】
「修飾されたヌクレオシド」は、標準のグアニン（Ｇ）、アデニン（Ａ）、シチジン（Ｃ）およびウリジン（Ｕ）ヌクレオシドに対する修飾を包含するリボヌクレオシドである。このような修飾としては、当業者に知られているように、例えば、通常転写後に哺乳動物細胞のｍＲＮＡに導入される修飾、および人工的な化学的修飾を挙げることができる。一態様では、以下が、修飾されたヌクレオチドの非限定的な例である：５−ホルミルシチジン、５−メチルシチジン、５−メトキシシチジン、５−ヒドロキシシチジン、５−ヒドロキシメチルシチジン、５−ホルミルウリジン、５−メチルウリジン、５−メトキシウリジン、５−カルボキシメチルエステルウリジン、プソイドウリジン、Ｎ１−メチルプソイドウリジン、Ｎ６−メチルアデノシン、およびチエノグアノシン。
【０１２８】
「転写と共役して付加された」は、ＲＮＡ分子の転写中の、本発明の修飾合成ｍＲＮＡへの特徴、例えば５’メチルグアノシンキャップまたは他の修飾されたヌクレオシドの付加を意味する（すなわち、修飾ＲＮＡは５’キャップの付加の前に完全には転写されていない）。
【０１２９】
細胞を「接触させる」とは、因子（例えば、本明細書に記載の修飾合成ｍＲＮＡ）と接触させることを意味し、任意選択により、細胞をトランスフェクション系に晒すことを含む。そのような細胞がインビボにある場合、細胞を本明細書に記載の修飾合成ｍＲＮＡと接触させることは、化合物がインビボで細胞と接触するように、医薬組成物などの製剤中の本明細書に記載の修飾合成ｍＲＮＡを適切な投与経路によって対象に投与することを含む。
【０１３０】
一般に、「組換え体宿主」は、発現ベクターまたはクローニングベクター中に所望のクローン化された遺伝子を含有する任意の原核もしくは真核の微生物または細胞であり得る。この用語はまた、染色体または生物体のゲノム中に所望の遺伝子を含有するために遺伝子操作されたそれらの微生物を含むことを意味する。
【０１３１】
「組換え体ベクター」は、所望のクローン化された遺伝子を含有する任意のクローニングベクターまたは発現ベクターである。
【０１３２】
「宿主」は、複製可能な発現ベクターまたはクローニングベクターのレシピエントである、任意の原核もしくは真核の微生物または細胞を意味する。宿主はまた、その染色体またはゲノム上に所望の遺伝子を含有するためによく知られた手法によって遺伝子操作することができる、原核もしくは真核の微生物または細胞を含む。そのような宿主の例としては、Ｍａｎｉａｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８２）を参照されたい。
【０１３３】
「プロモーター」は、開始コドンに隣接して位置する、遺伝子の５’領域として一般に説明されるＤＮＡ配列である。隣接遺伝子の転写は、プロモーター領域から開始される。プロモーターが誘導性プロモーターである場合、転写速度は、誘導剤に対応して増大する。対照的に、プロモーターが構成的プロモーターである場合、転写速度は、誘導剤によって調節されない。
【０１３４】
「遺伝子」は、ポリペプチドまたはタンパク質を発現するために必要な情報を含有するＤＮＡ配列である。
【０１３５】
「構造遺伝子」は、ヌクレオチド、例えば、後に特定のポリペプチドに特有のアミノ酸配列に翻訳されるメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）へと転写されるＤＮＡ配列である。
【０１３６】
「トランスフェクション」は、ポリヌクレオチド、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡによる宿主細胞の形質転換を指す。組換え体宿主細胞は、トランスフェクトされたポリヌクレオチド、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡによってコードされるタンパク質を発現する。特定の態様では、「トランスフェクション」は、本明細書に記載の修飾合成ｍＲＮＡなどの外因性核酸を、真核細胞などの宿主細胞に導入する化学的方法などの方法の使用を意味する。本明細書で用いる場合、用語「トランスフェクション」は、外因性核酸を細胞に導入する、ウイルスに基づく方法を包含しない。トランスフェクションの非限定的な方法は、物理的処理（例えば、エレクトロポレーション、ナノ粒子、マグネトフェクション）、および化学物質に基づくトランスフェクションの方法を含む。化学物質に基づくトランスフェクションの方法としては、シクロデキストリン、ポリマー、リポソーム、およびナノ粒子が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３７】
「エピトープ」は、抗体の可変領域が結合する非免疫グロブリン抗原の部分である。「抗原決定基」は、１つ以上のエピトープを含有するタンパク質またはペプチドである。「免疫原」は、１つ以上のエピトープの存在のために免疫応答を誘発することができるタンパク質またはペプチドである。用語「抗原」、「抗原決定基」、および「免疫原」は、本明細書では同義として用いる。特定の態様では、エピトープは通常、アミノ酸または糖側鎖などの、分子の化学的に活性な表面群からなり、かつ特定の三次元構造特性および特定の電荷特性を有し得る。特定の態様では、立体構造的なエピトープおよび非立体構造的なエピトープは、後者ではなく前者への結合が変性溶媒の存在下において失われるという点で区別される。ある種の態様では、エピトープは、抗原の断片または部分の連続的なアミノ酸配列を含む直鎖状のエピトープであってもよい。ある種の態様では、エピトープは、抗原の非連続的なアミノ酸配列を含む立体構造的なエピトープであってもよい。
【０１３８】
「トランスフェクション試薬」は、ＤＮＡまたはＲＮＡなどのポリヌクレオチドの宿主細胞への取り込みを誘導する試薬である。特定の態様では、そのような試薬の不存在下で処理された本明細書に記載の修飾合成ｍＲＮＡと比べて、例えば、少なくとも５０〜９０％、取り込みを亢進させる試薬も包含される。一実施形態では、医薬組成物の調製、もしくは本明細書に記載の修飾合成ｍＲＮＡの同時投与に有用なカチオン性または非カチオン性脂質分子が、トランスフェクション試薬として使用される。他の実施形態では、本明細書に記載の修飾合成ｍＲＮＡは、例えば、リガンド、ペプチド基、親油性基、標的部分などに結合する化学的結合を含む。他の実施形態では、トランスフェクション試薬は、当技術分野で知られているかまたは本明細書に記載の荷電脂質、エマルション、リポソーム、カチオン性もしくは非カチオン性脂質、アニオン性脂質、または浸透促進剤を含む。
【０１３９】
「自然免疫応答」または「インターフェロン応答」は、外来生物体、例えばウイルスもしくは細菌、またはそのような生物体の生成物、例えば対象細胞で生成されるＲＮＡに特徴的な修飾を欠くＲＮＡによる感染の認識に応答した細胞によって惹起される、細胞防御応答を意味する。自然免疫応答は、外因性核酸を検出する細胞の死を誘導することによって、ウイルスおよび細菌感染から保護する。
【０１４０】
「治療有効量」または「有効量」は、研究者、獣医、医師または他の臨床医によって求められている組織、系、動物もしくはヒトの生物学的または医学的応答を誘発することになる対象化合物または配合の量である。
【０１４１】
「プライマー」はまた、核酸配列である。ＰＣＲプライマーは通常、ポリメラーゼ連鎖反応において使用される、かなり短い長さ（例えば、８〜３０ヌクレオチド）のオリゴヌクレオチドである。ＰＣＲプライマーおよびハイブリダイゼーションプローブは、標的配列からの配列情報を用いて、当業者によって容易に開発され、かつ作製され得る。Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｓ  Ｐｒｅｓｓ）を参照されたい。
【０１４２】
「選択的に結合する」または「特異的に結合する」は、一方のタンパク質のもう一方のタンパク質（例えば、標的タンパク質に対する抗体、その断片、または結合パートナー）への特異的な結合を意味し、結合のレベルは、任意の標準アッセイ（例えば、イムノアッセイ）によって測定した際に、アッセイに対するバックグラウンド対照よりも統計的に有意に高い。
【０１４３】
「保存された」ヌクレオチドまたはアミノ酸は、比較される２つ以上の配列の同じ位置に変動なく出現する、それぞれポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列の残基である。比較的保存されているヌクレオチドまたはアミノ酸は、配列の他の箇所に出現するヌクレオチドまたはアミノ酸よりも関係のある配列の間で保存されているものである。それらが相互に１００％同一である場合、２つ以上の配列は「完全に保存されている」。いくつかの実施形態では、それらが相互に少なくとも９０％同一である場合、２つ以上の配列は「高度に保存されている」。いくつかの実施形態では、それらが相互に同一である場合、２つ以上の配列は「保存されている」。配列の保存は、オリゴヌクレオチドもしくはポリペプチドの全長に適用してもよく、またはその部分、領域もしくは特徴に適用してもよい。ポリペプチドに関しては、次の８つの群が、互いに保存的置換となるアミノ酸を含有する：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；および８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４）を参照のこと）。
【０１４４】
「送達」は、化合物、物質、実体、部分、カーゴまたはペイロードを送達する作用または様式を意味する。
【０１４５】
「送達剤」は、標的細胞への核酸分子のインビボ送達を少なくとも一部促進する任意の物質である。
【０１４６】
「製剤」は、少なくとも修飾された核酸分子および送達剤を含む。
【０１４７】
「相同性」は、ポリマー分子の間、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子および／もしくはＲＮＡ分子）の間ならびに／またはポリペプチド分子の間の全体的な関連性を意味する。いくつかの実施形態では、ポリマー分子は、それらの配列が少なくとも２５％同一である場合、相互に「相同」であるとみなされる。用語「相同」は必ず、少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列）間の比較に関連する。２つのポリヌクレオチド配列は、それらがコードするポリペプチドが少なくとも約２０アミノ酸の少なくとも１つの連続配列について少なくとも約５０％同一である場合、相同であるとみなされる。いくつかの実施形態では、相同なポリヌクレオチド配列は、少なくとも４〜５個の一意に特定されるアミノ酸の連続配列をコードする能力によって特徴づけられる。６０ヌクレオチド長未満のポリヌクレオチド配列については、相同性は、少なくとも４〜５個の一意に特定されるアミノ酸の連続配列をコードする能力によって決定される。本発明に基づくと、２つのタンパク質配列は、それらのタンパク質が少なくとも約２０アミノ酸の少なくとも１つの連続配列について少なくとも約５０％同一、少なくとも約６０％同一である場合、相同であるとみなされる。
【０１４８】
「同一性」は、ポリマー分子の間、例えば、オリゴヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子および／もしくはＲＮＡ分子）の間またはポリペプチド分子の間の全体的な関連性を意味する。例えば２つのポリヌクレオチド配列の同一性パーセントの計算は、最適な比較目的のために２つの配列を整列させることによって実施することができる（例えば、最適なアラインメントのために第１および第２の核酸配列の一方または両方にギャップを導入することができ、非同一配列は比較目的のために無視することができる）。続いて、対応するヌクレオチド位置のヌクレオチドが比較される。第１の配列中の位置が第２の配列中の対応する位置と同じヌクレオチドによって占められる場合、これらの分子はその位置で同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮する、これらの配列によって共有される同一位置の数の関数である。配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの判定は、数学的アルゴリズムを用いて達成することができる。パーセント配列同一性および配列類似性を判定するのに適したアルゴリズムの２つの非限定的な例は、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、これらは、それぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２，１９７７；およびＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０，１９９０において記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを通して公的に入手可能である。
【０１４９】
用語「カチオン性リポソーム」または「カチオン性脂質」は、正に荷電した脂質から作られる構築物であり、負に荷電したＤＮＡおよび細胞膜と相互作用することができる。
【０１５０】
用語「脂質ナノ粒子」または「ＬＮＰ」は、分子間力によって互いに物理的に会合した複数の（すなわち、１つより多い）脂質分子を含む粒子を指す。脂質ナノ粒子は、例えば、ミクロスフィア（単層および多層の小胞、例えば、リポソームを含む）、エマルション中で分散した相、ミセル、または懸濁液中の内相であってもよい。
【０１５１】
本明細書では、用語「核酸」が、用語「ポリヌクレオチド」と互換的に使用され、デオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）もしくはリボヌクレオチド（ＲＮＡ）、またはメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含むポリリボヌクレオチド、および単鎖もしくは二重鎖形態のいずれかのそのポリマーを指す。この用語は、既知のヌクレオチド類似体または修飾された主鎖残基もしくは結合を含有する核酸であって、合成の核酸、天然に存在する核酸、および天然に存在しない核酸であり、基準の核酸と同様の特性を有し、基準のヌクレオチドと同様の様式で代謝される核酸を包含する。このような類似体の例は、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラル−メチルホスホネート、２−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）を含むが、これらに限定されない。
【０１５２】
別段の指示がない限り、特定の核酸配列はまた、明示的に示される配列だけでなく、保存的に改変されたその変異体（例えば、縮重コドン置換）および相補的配列も暗示的に包含する。とりわけ、下記で詳述される通り、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（または全ての）コドンの第３位が、混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を作製することにより達成してもよい（Ｂａｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１９：５０８１，１９９１；Ｏｈｔｓｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５−２６０８，１９８５；およびＲｏｓｓｏｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ  ８：９１−９８，１９９４）。
【０１５３】
語句「薬学的に許容される」は、本明細書において、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答または他の問題もしくは合併症なしでヒトおよび動物の組織と接触させて用いるのに適し、合理的な利益／危険比で釣り合った、化合物、材料、組成物、および／または剤形を指すために採用される。
【０１５４】
「試料」は、その組織、細胞または成分部分（例えば、体液）のサブセットである。試料は、全生物体またはその組織、細胞もしくは成分部分のサブセット、またはその画分もしくは部分、例えば、限定するものではないが、血漿、血清、脊髄液、リンパ液、皮膚の外部、呼吸、腸および尿生殖器の管、涙、唾液、乳、血球細胞、腫瘍、器官、から調製されるホモジネート、溶解物または抽出物をさらに含んでもよい。試料はさらに、タンパク質または核酸分子などの細胞成分を含有し得る、栄養ブロスまたはゲルなどの培地を指す。
【０１５５】
「合成」は、人為的介入によって生成、調製および／または製造されることを意味する。本明細書に記載のポリヌクレオチドもしくはポリペプチドまたは他の分子の合成は、化学的であるか、または酵素的であってもよい。
【０１５６】
本明細書で使用する場合、「プソイドウリジン」は、ヌクレオシドであるウリジンのＣ−グリコシド異性体を指す。
【０１５７】
本明細書で使用する場合、「精製する」、「精製された」、「精製」は、実質的に純粋にするか、または不要な成分、材料汚染、混合物もしくは不純物を取り除くことを意味する。
【０１５８】
本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、全長抗体および任意の抗原結合断片（すなわち、「抗原結合部分」）またはその単鎖を意味する。全長抗体は、ジスルフィド結合により相互連結された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は重鎖可変領域（本明細書中でＶＨと略記される）および重鎖定常領域で構成されている。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３という３つのドメインで構成されている。各軽鎖は軽鎖可変領域（本明細書中でＶＬと略記される）および軽鎖定常領域で構成されている。軽鎖定常領域はＣＬという１つのドメインで構成されている。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より保存されている領域が挿入された相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される、超可変領域にさらに細分することができる。ＶＨおよびＶＬはそれぞれ、次の順でアミノ末端からカルボキシ末端に整列した、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を含む宿主組織または宿主因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【０１５９】
本明細書で使用する場合、抗体の「抗原結合部分」または「抗原結合断片」という用語は、所与の抗原に特異的に結合するための能力を保持する、完全抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全抗体の断片により果たされ得る。抗体の抗原結合部分または抗原結合断片という用語内に包含される結合断片の例は、Ｆａｂ断片、ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメイン、およびＣＨ１ドメインからなる一価断片；ヒンジ領域においてジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ）２断片；ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；抗体の単一のアームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；ＶＨドメインまたはＶＬドメインからなる単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）；ならびに単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ある種の態様では、抗体のＣＤＲは、（ｉ）Ｋａｂａｔナンバリングシステム（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）；または（ｉｉ）Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキーム（例えば、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７−９４８；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：７９９−８１７；Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５（１）：１７５−８２；および米国特許第７，７０９，２２６号明細書を参照のこと）；または（ｉｉｉ）例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．，１９９９，Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７：１３２−１３６およびＬｅｆｒａｎｃ，Ｍ．−Ｐ．  ｅｔ  ａｌ，１９９９，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２７：２０９−２１２（“ＩＭＧＴ  ＣＤＲｓ”）に記載のＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）ナンバリングシステム；または（ｉｖ）ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２−７４５に従って決定することができる。また、例えば、Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．，“Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ，”ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｉｉｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  ３１，ｐｐ．４２２−４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）を参照されたい。
【０１６０】
さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、それらをＶＬおよびＶＨ領域が対になって一価分子を形成する単一のタンパク質鎖として作製することを可能にする人工ペプチドリンカーによって、組換え法を使用して連結させることができる（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：５８７９−５８８３を参照のこと）。そのような単鎖抗体は、１つ以上の抗原結合部分または抗体の断片を含む。これらの抗体断片は、当業者に知られている従来の技術を使用して得られ、断片は、完全抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。
【０１６１】
抗原結合断片はまた、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ、およびビス−ｓｃＦｖに組み込むことができる（例えば、ＨｏｌｌｉｎｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ，２００５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２３，９，１１２６−１１３６を参照のこと）。抗体の抗原結合部分は、ＩＩＩ型フィブロネクチン（Ｆｎ３）などのポリペプチドに基づく足場に移植することができる（フィブロネクチンポリペプチドモノボディについて記載する米国特許第６，７０３，１９９号明細書を参照のこと）。
【０１６２】
抗原結合断片は、相補的な軽鎖ポリペプチドとともに抗原結合領域の対を形成する、タンデムＦｖセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）の対を含む単鎖分子に組み込むことができる（Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２；および米国特許第５，６４１，８７０号明細書）。
【０１６３】
本明細書で使用する場合、用語「親和性」は、単一の抗原性部位における抗体と抗原との間の相互作用の強度を指す。各抗原性部位内では、抗体「アーム」の可変領域は、多数の部位において、弱い非共有結合性の力を介して抗原と相互作用し、相互作用が大きいほど、親和性は強くなる。本明細書で使用する場合、抗体またはその抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ断片）についての用語「高親和性」は通常、ＫＤが１０−９Ｍ以下の抗体または抗原結合断片を指す。
【０１６４】
本明細書で使用する場合、用語「ヒト抗体」は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域の両方がヒト起源の配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことを意図する。さらに、抗体が定常領域を含有する場合、定常領域もまた、このようなヒト配列、例えば、ヒト生殖細胞系列配列またはヒト生殖細胞系列配列の変異した型に由来する。ある種の態様では、ヒトモノクローナル抗体などのヒト抗体は、ヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニックの非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウスから得られるＢ細胞に融合した不死化細胞を含むハイブリドーマによって作製されてもよい。
【０１６５】
「ヒト化」抗体は、ヒトにおける免疫原性は小さいが、非ヒト抗体の反応性を保持する抗体である。これは、例えば、非ヒトＣＤＲ領域を保持し、抗体の残りの部分を、それらのヒト対応物（すなわち、定常領域および可変領域のフレームワーク部分）で置換することにより達成することができる。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５，１９８４；ＭｏｒｒｉｓｏｎおよびＯｉ，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４４：６５−９２，１９８８；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６，１９８８；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．，２８：４８９−４９８，１９９１；ならびにＰａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．，３１：１６９−２１７，１９９４を参照されたい。ヒト操作技術の他の例は、米国特許第５，７６６，８８６号明細書において開示されているＸＯＭＡ技術を含むが、これに限定されない。
【０１６６】
用語「ハイブリドーマ」は、Ｂリンパ芽球などの抗体産生細胞の、骨髄腫細胞などの融合パートナーとの融合に由来する不死化細胞を指す。特定の態様では、ハイブリドーマを作製するために使用される抗体産生細胞は、抗原によって免疫化された、例えば、本明細書に記載のｍＲＮＡに基づく免疫化方法に従って免疫化された動物から得られる。
【０１６７】
用語「単離抗体」は、異なる抗原特異性および／または異なるアミノ酸配列を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す。特定の態様では、しかしながら、抗原に特異的に結合する単離抗体は、他の抗原に対する交差反応性を有し得る。特定の態様では、単離抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まない場合がある。
【０１６８】
用語「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によって提供される抗体クラス（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４などのＩｇＧ）を指す。アイソタイプはまた、これらのクラスのうちの１つの改変された型を含み、改変により、例えば、エフェクター機能またはＦｃ受容体への結合を亢進するか、または低減させるといったＦｃ機能が変化させられてきた。用語「モノクローナル抗体」は、特定のエピトープについて結合特異性および親和性を示す均質または実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指す、よく知られている技術用語である。用語「モノクローナル」は、抗体を作製するための任意の特定の方法に限定されない。一般に、モノクローナル抗体の集団を、細胞、細胞の集団、または細胞株によって作製することができる。特定の態様では、モノクローナル抗体は、キメラ抗体またはヒト化抗体であり得る。特定の態様では、モノクローナル抗体は、一価抗体または多価（例えば、二価）抗体である。
【０１６９】
本明細書で使用する場合、用語「ポリクローナル抗体」は、特定の抗原に対して反応する種々の異なる抗体を含む異種抗体の集団を指すが、異なる抗体は抗原中の異なるエピトープを認識する。
【０１７０】
本明細書で使用する場合、用語「組換えヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてのトランスジェニックもしくは染色体を導入した動物（例えば、マウス）から単離される抗体またはそれから作製されるハイブリドーマから単離される抗体、ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えばトランスフェクトーマから単離される抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離される抗体、およびヒト免疫グロブリン遺伝子の全てまたは一部の配列を他のＤＮＡ配列にスプライスすることを含む任意の他の手段によって作製されるか、発現されるか、作り出されるか、または単離される抗体など、組換え手段によって作製されるか、発現されるか、作り出されるか、または単離されるヒト抗体を全て含む。そのような組換えヒト抗体は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域がヒト生殖細胞系列の免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかしながら、ある種の実施形態では、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ変異誘発（またはヒトＩｇ配列についてトランスジェニックな動物が使用される場合、インビボ体細胞変異誘発）にかけることができ、したがって、組換え抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ配列およびＶＬ配列に由来し、それらと関係するが、インビボにおいてヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在し得ない配列である。
【０１７１】
本明細書で使用する場合、用語「最適化された」は、ヌクレオチド配列が、産生細胞または生物体、通常真核細胞において好ましいコドンを使用するアミノ酸配列をコードするように改変されていることを意味する。ある種の態様では、最適化されたヌクレオチド配列は、「親」配列としても知られている出発ヌクレオチド配列によって元来コードされるアミノ酸配列を完全に、またはできるだけ多く保持するように操作される。特定の態様では、本明細書に記載の最適化された配列は、マウス細胞などの哺乳動物細胞において好ましいコドンを有するように操作されている。他の態様では、他の真核細胞または原核細胞における配列の最適化された発現もまた、本明細書において想定される。
【０１７２】
Ｉ．標的タンパク質／抗原決定基
本明細書で提供されるのは、動物（例えば、非ヒト動物）における標的タンパク質（例えば、ヒト膜貫通タンパク質、例えば、ヒトＧＰＣＲなどのヒトタンパク質）またはその断片に対する免疫応答を誘導するための方法であって、その動物に、脂質および標的タンパク質またはその断片をコードするポリリボヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）などのポリヌクレオチドを含む複合体を含む組成物を投与する方法と、そのような標的タンパク質に対する抗体を作製する関連した方法である。本明細書で提供される方法は、目的の任意の標的タンパク質（例えば、膜貫通タンパク質）に対する抗体（例えば、モノクローナル抗体）を作製するか、またはそれに対する免疫応答を誘導するために有用である。特定の態様では、標的タンパク質は、ヒト標的タンパク質であり、本明細書に記載の方法において使用される免疫化された動物は、非ヒト動物である。
【０１７３】
特定の態様では、本明細書で提供されるのは、動物（例えば、非ヒト動物）における標的タンパク質（例えば、ヒト膜貫通タンパク質、例えば、ヒトＧＰＣＲなどのヒトタンパク質）またはその断片に対する抗体を、脂質および標的タンパク質またはその断片をコードするｍＲＮＡなどのポリリボヌクレオチドを含む複合体を含む組成物を使用して作製するための方法であって、標的タンパク質は、（ｉ）Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）；（ｉｉ）１回膜貫通型タンパク質受容体；（ｉｉｉ）腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）メンバー；（ｉｖ）インターロイキン（ＩＬ）受容体；（ｖ）イオンチャネル；（ｖｉ）溶質輸送体；（ｖｉｉ）免疫受容体；または（ｖｉｉｉ）複数回膜貫通タンパク質である。
【０１７４】
特定の態様では、本明細書で提供されるのは、動物（例えば、非ヒト動物）における標的タンパク質（例えば、ヒト膜貫通タンパク質、例えば、ヒトＧＰＣＲなどのヒトタンパク質）またはその断片に対する抗体を、脂質および標的タンパク質またはその断片をコードするｍＲＮＡなどのポリリボヌクレオチドを含む複合体を含む組成物を使用して作製するための方法であって、標的タンパク質は、次の：ＡＣＫＲ１、ＡＣＫＲ２、ＡＣＫＲ３、ＡＣＫＲ４、ＡＤＣＹＡＰ１Ｒ１、ＡＤＧＲＡ１、ＡＤＧＲＡ２、ＡＤＧＲＡ３、ＡＤＧＲＢ１、ＡＤＧＲＢ２、ＡＤＧＲＢ３、ＡＤＧＲＤ１、ＡＤＧＲＤ２、ＡＤＧＲＥ１、ＡＤＧＲＥ２、ＡＤＧＲＥ３、ＡＤＧＲＥ４Ｐ、ＡＤＧＲＥ５、ＡＤＧＲＦ１、ＡＤＧＲＦ２、ＡＤＧＲＦ３、ＡＤＧＲＦ４、ＡＤＧＲＦ５、ＡＤＧＲＧ１、ＡＤＧＲＧ２、ＡＤＧＲＧ３、ＡＤＧＲＧ４、ＡＤＧＲＧ５、ＡＤＧＲＧ６、ＡＤＧＲＧ７、ＡＤＧＲＬ１、ＡＤＧＲＬ２、ＡＤＧＲＬ３、ＡＤＧＲＬ４、ＡＤＧＲＶ１、ＡＤＯＲＡ１、ＡＤＯＲＡ２Ａ、ＡＤＯＲＡ２Ｂ、ＡＤＯＲＡ３、ＡＤＲＡ１Ａ、ＡＤＲＡ１Ｂ、ＡＤＲＡ１Ｄ、ＡＤＲＡ２Ａ、ＡＤＲＡ２Ｂ、ＡＤＲＡ２Ｃ、ＡＤＲＢ１、ＡＤＲＢ２、ＡＤＲＢ３、ＡＧＴＲ１、ＡＧＴＲ２、ＡＰＬＮＲ／ＡＰＪ、ＡＳＧＲ１、ＡＳＧＲ２、ＡＶＰＲ１Ａ、ＡＶＰＲ１Ｂ、ＡＶＰＲ２、ＢＤＫＲＢ１、ＢＤＫＲＢ２、ＢＲＳ３、ＢＲＳ３、Ｃ３ＡＲ１、Ｃ５ＡＲ１、Ｃ５ＡＲ２、ＣＡＬＣＲ、ＣＡＬＣＲＬ、ＣＡＳＲ、ＣＣＫＡＲ、ＣＣＫＢＲ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲＬ２、ＣＥＬＳＲ１、ＣＥＬＳＲ２、ＣＥＬＳＲ３、ＣＨＲＭ１、ＣＨＲＭ２、ＣＨＲＭ３、ＣＨＲＭ４、ＣＨＲＭ５、ＣＭＫＬＲ１、ＣＮＲ１、ＣＮＲ２、ＣＲＨＲ１、ＣＲＨＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＹＳＬＴＲ１、ＣＹＳＬＴＲ２、ＤＲＤ１、ＤＲＤ２、ＤＲＤ３、ＤＲＤ４、ＤＲＤ５、ＥＤＮＲＡ、ＥＤＮＲＢ、Ｆ２Ｒ、Ｆ２ＲＬ１、Ｆ２ＲＬ２、Ｆ２ＲＬ３、ＦＦＡＲ１、ＦＦＡＲ２、ＦＦＡＲ３、ＦＦＡＲ４、ＦＰＲ１、ＦＰＲ２、ＦＰＲ２、ＦＰＲ３、ＦＳＨＲ、ＦＺＤ１、ＦＺＤ１０、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ６、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＧＡＢＢＲ１、ＧＡＢＢＲ２、ＧＡＬＲ１、ＧＡＬＲ２、ＧＡＬＲ３、ＧＣＧＲ、ＧＨＲＨＲ、ＧＨＳＲ、ＧＩＰＲ、ＧＬＰ１Ｒ、ＧＬＰ２Ｒ、ＧＮＲＨＲ、ＧＮＲＨＲ２、ＧＰＢＡＲ１、ＧＰＥＲ１、ＧＰＲ１、ＧＰＲ４、ＧＰＲ１２、ＧＰＲ１５、ＧＰＲ１７、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１９、ＧＰＲ２０、ＧＰＲ２１、ＧＰＲ２２、ＧＰＲ２５、ＧＰＲ２６、ＧＰＲ２７、ＧＰＲ３、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ３２、ＧＰＲ３３、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ３５、ＧＰＲ３７、ＧＰＲ３７Ｌ１、ＧＰＲ３９、ＧＰＲ４０、ＧＰＲ４２、ＧＰＲ４２、ＧＰＲ４５、ＧＰＲ５０、ＧＰＲ５２、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ６、ＧＰＲ６１、ＧＰＲ６２、ＧＰＲ６３、ＧＰＲ６５、ＧＰＲ６８、ＧＰＲ７５、ＧＰＲ７８、ＧＰＲ７９、ＧＰＲ８２、ＧＰＲ８３、ＧＰＲ８４、ＧＰＲ８５、ＧＰＲ８７、ＧＰＲ８８、ＧＰＲ１０１、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１３２、ＧＰＲ１３５、ＧＰＲ１３７、ＧＰＲ１３９、ＧＰＲ１４１、ＧＰＲ１４２、ＧＰＲ１４３、ＧＰＲ１４６、ＧＰＲ１４８、ＧＰＲ１４９、ＧＰＲ１５、ＧＰＲ１５０、ＧＰＲ１５１、ＧＰＲ１５２、ＧＰＲ１５３、ＧＰＲ１５６、ＧＰＲ１５７、ＧＰＲ１５８、ＧＰＲ１６０、ＧＰＲ１６１、ＧＰＲ１６２、ＧＰＲ１７１、ＧＰＲ１７３、ＧＰＲ１７４、ＧＰＲ１７６、ＧＰＲ１７９、ＧＰＲ１８２、ＧＰＲ１８３、ＧＰＲＣ５Ａ、ＧＰＲＣ５Ｂ、ＧＰＲＣ５Ｃ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＰＲＣ６Ａ、ＧＲＭ１、ＧＲＭ２、ＧＲＭ３、ＧＲＭ４、ＧＲＭ５、ＧＲＭ６、ＧＲＭ７、ＧＲＭ８、ＧＲＰＲ、ＨＣＡＲ１、ＨＣＡＲ２、ＨＣＡＲ３、ＨＣＲＴＲ１、ＨＣＲＴＲ２、ＨＲＨ１、ＨＲＨ２、ＨＲＨ３、ＨＲＨ４、ＨＴＲ１Ａ、ＨＴＲ１Ｂ、ＨＴＲ１Ｄ、ＨＴＲ１Ｅ、ＨＴＲ１Ｆ、ＨＴＲ２Ａ、ＨＴＲ２Ｂ、ＨＴＲ２Ｃ、ＨＴＲ４、ＨＴＲ５Ａ、ＨＴＲ５ＢＰ、ＨＴＲ６、ＨＴＲ７、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＬＧＲ３、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、ＬＧＲ６、ＬＨＣＧＲ、ＬＰＡＲ１、ＬＰＡＲ２、ＬＰＡＲ３、ＬＰＡＲ４、ＬＰＡＲ５、ＬＰＡＲ６、ＬＴＢ４Ｒ、ＬＴＢ４Ｒ２、ＭＡＳ１、ＭＡＳ１Ｌ、ＭＣ１Ｒ、ＭＣ２Ｒ、ＭＣ３Ｒ、ＭＣ４Ｒ、ＭＣ５Ｒ、ＭＣＨＲ１、ＭＣＨＲ２、ＭＬＮＲ、ＭＲＧＰＲＤ、ＭＲＧＰＲＥ、ＭＲＧＰＲＦ、ＭＲＧＰＲＧ、ＭＲＧＰＲＸ１、ＭＲＧＰＲＸ２、ＭＲＧＰＲＸ３、ＭＲＧＰＲＸ４、ＭＴＮＲ１Ａ、ＭＴＮＲ１Ｂ、ＮＭＢＲ、ＮＭＵＲ１、ＮＭＵＲ２、ＮＰＢＷＲ１、ＮＰＢＷＲ２、ＮＰＦＦＲ１、ＮＰＦＦＲ２、ＮＰＳＲ１、ＮＰＹ１Ｒ、ＮＰＹ２Ｒ、ＮＰＹ４Ｒ、ＮＰＹ５Ｒ、ＮＰＹ６Ｒ、ＮＴＳＲ１、ＮＴＳＲ２、ＯＰＮ３、ＯＰＮ４、ＯＰＮ５、ＯＰＲＤ１、ＯＰＲＫ１、ＯＰＲＬ１、ＯＰＲＭ１、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＸＥＲ１、ＯＸＧＲ１、ＯＸＴＲ、Ｐ２ＲＹ１、Ｐ２ＲＹ１０、Ｐ２ＲＹ１１、Ｐ２ＲＹ１２、Ｐ２ＲＹ１３、Ｐ２ＲＹ１４、Ｐ２ＲＹ２、Ｐ２ＲＹ４、Ｐ２ＲＹ６、Ｐ２ＲＹ８、ＰＲＬＨＲ、ＰＲＯＫＲ１、ＰＲＯＫＲ２、ＰＴＡＦＲ、ＰＴＧＤＲ、ＰＴＧＤＲ２、ＰＴＧＥＲ１、ＰＴＧＥＲ２、ＰＴＧＥＲ３、ＰＴＧＥＲ４、ＰＴＧＦＲ、ＰＴＧＩＲ、ＰＴＨ１Ｒ、ＰＴＨ２Ｒ、ＱＲＦＰＲ、ＲＸＦＰ１、ＲＸＦＰ２、ＲＸＦＰ３、ＲＸＦＰ４、Ｓ１ＰＲ１、Ｓ１ＰＲ２、Ｓ１ＰＲ３、Ｓ１ＰＲ４、Ｓ１ＰＲ５、ＳＣＴＲ、ＳＭＯ、ＳＳＴＲ１、ＳＳＴＲ２、ＳＳＴＲ３、ＳＳＴＲ４、ＳＳＴＲ５、ＳＵＣＮＲ１、ＴＡＡＲ１、ＴＡＡＲ２、ＴＡＡＲ３、ＴＡＡＲ４Ｐ、ＴＡＡＲ５、ＴＡＡＲ６、ＴＡＡＲ８、ＴＡＡＲ９、ＴＡＣＲ１、ＴＡＣＲ２、ＴＡＣＲ３、ＴＡＳ１Ｒ１、ＴＡＳ１Ｒ２、ＴＡＳ１Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ１９、ＴＡＳ２Ｒ２０、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ３０、ＴＡＳ２Ｒ３１、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４２、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ６０、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＢＸＡ２Ｒ、ＴＰＲＡ１、ＴＲＨＲ、ＴＳＨＲ、ＵＴＳ２Ｒ、ＶＩＰＲ１、ＶＩＰＲ２、ＸＣＲ１、ＴＣＲ−α、ＴＣＲ−β、ＣＤ３、ζ−鎖アクセサリー、ＣＤ４およびＣＤ８、マンノース受容体（ＭＲ）、アシアロ糖タンパク質受容体ファミリー（例えば、アシアロ糖タンパク質受容体マクロファージガラクトース型レクチン（ＭＧＬ））、ＤＣ−ＳＩＧＮ（ＣＬＥＣ４Ｌ）、ランゲリン（ＣＬＥＣ４Ｋ）、骨髄系ＤＡＰ１２会合レクチン（ＭＤＬ）−１（ＣＬＥＣ５Ａ）、デクチン１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＧＲ１／ＣＬＥＣ９Ａ、骨髄系Ｃ型レクチン様受容体（ＭＩＣＬ）（ＣＬＥＣ１２Ａ）、ＣＬＥＣ２（ＣＬＥＣ１Ｂとも呼ばれる）、ＣＬＥＣ１２Ｂ、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、デクチン２／ＣＬＥＣ６Ａ、血液ＤＣ抗原２（ＢＤＣＡ２）（ＣＬＥＣ４Ｃ）、マクロファージ誘導性Ｃ型レクチン（ＣＬＥＣ４Ｅ）、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２、ＴＬＲ１３，ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ１（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）、ＦｃαＲ１（ＣＤ８９）、Ｆｃα／μＲ、ＦｃＲｎ、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＧＩＴ、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ３）、Ｔ細胞活性化のＶ−ドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、ＩＣＯＳ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ３）、ＦＡＭ１５９Ｂ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＡ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ｇｐ１３０、ＩＬ−１受容体、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−３受容体、ＩＬ−４受容体、ＩＬ−５受容体、ＩＬ−６受容体、ＩＬ−７受容体、ＩＬ−８受容体、ＩＬ−９受容体、ＩＬ−１０受容体、ＩＬ−１１受容体、ＩＬ−１２受容体、ＩＬ−１３受容体、ＩＬ−１４受容体、ＩＬ−１５受容体、ＩＬ−１６受容体、ＩＬ−１７受容体、ＩＬ−１８受容体、ＩＬ−１９受容体、ＩＬ−２０受容体、ＩＬ−２１受容体、ＩＬ−２２受容体、ＩＬ−２３受容体、ＩＬ−２４受容体、ＩＬ−２５受容体、ＩＬ−２６受容体、ＩＬ−２７受容体、ＩＬ−２８受容体、ＩＬ−２９受容体、ＩＬ−３０受容体、ＩＬ−３１受容体、ＩＬ−３２受容体、ＩＬ−３３受容体、ＩＬ−３５受容体、ＩＬ−３６受容体、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ３、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１４、ＴＮＦＲＳＦ１６、ＴＮＦＲＳＦ１��、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＴＮＦＲＳＦ１９、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＲＳＦ２５、ＴＮＦＲＳＦ２７、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ２Ａ、ＳＣＮ２Ｂ、ＳＣＮ３Ａ、ＳＣＮ３Ｂ、ＳＣＮ４Ａ、ＳＣＮ５Ａ、ＳＣＮ７Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ１０Ａ、ＳＣＮ１１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｂ、ＣＡＣＮＡ１Ｃ、ＣＡＣＮＡ１Ｄ、ＣＡＣＮＡ１Ｅ、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＣＡＣＮＡ１Ｇ、ＣＡＣＮＡ１Ｈ、ＣＡＣＮＡ１Ｉ、ＣＡＣＮＡ１Ｓ、ＴＲＰＡ１、ＴＲＰＣ１、ＴＲＰＣ２、ＴＲＰＣ３、ＴＲＰＣ４、ＴＲＰＣ５、ＴＲＰＣ６、ＴＲＰＣ７、ＴＲＰＭ１、ＴＲＰＭ２、ＴＲＰＭ３、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ５、ＴＲＰＭ６、ＴＲＰＭ７、ＴＲＰＭ８、ＭＣＯＬＮ１、ＭＣＯＬＮ２、ＭＣＯＬＮ３、ＰＫＤ１、ＰＫＤ２、ＰＫＤ２Ｌ１、ＰＫＤ２Ｌ２、ＴＲＰＶ１、ＴＲＰＶ２、ＴＲＰＶ３、ＴＲＰＶ４、ＴＲＰＶ５、ＴＲＰＶ６、ＣＡＴＳＰＥＲ１、ＣＡＴＳＰＥＲ２、ＣＡＴＳＰＥＲ３、ＣＡＴＳＰＥＲ４、ＴＰＣＮ１、ＴＰＣＮ２、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＡ２、ＣＮＧＡ３、ＣＮＧＡ４、ＣＮＧＢ１、ＣＮＧＢ３、ＨＣＮ１、ＨＣＮ２、ＨＣＮ３、ＨＣＮ４、ＫＣＮＭＡ１、ＫＣＮＮ１、ＫＣＮＮ２、ＫＣＮＮ３、ＫＣＮＮ４、ＫＣＮＴ１、ＫＣＮＴ２、ＫＣＮＵ１、ＫＣＮＡ１、ＫＣＮＡ２、ＫＣＮＡ３、ＫＣＮＡ４、ＫＣＮＡ５、ＫＣＮＡ６、ＫＣＮＡ７、ＫＣＮＡ１０、ＫＣＮＢ１、ＫＣＮＢ２、ＫＣＮＣ１、ＫＣＮＣ２、ＫＣＮＣ３、ＫＣＮＣ４、ＫＣＮＤ１、ＫＣＮＤ２、ＫＣＮＤ３、ＫＣＮＦ１、ＫＣＮＧ１、ＫＣＮＧ２、ＫＣＮＧ３、ＫＣＮＧ４、ＫＣＮＨ１、ＫＣＮＨ２、ＫＣＮＨ３、ＫＣＮＨ４、ＫＣＮＨ５、ＫＣＮＨ６、ＫＣＮＨ７、ＫＣＮＨ８、ＫＣＮＱ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＱ４、ＫＣＮＱ５、ＫＣＮＳ１、ＫＣＮＳ２、ＫＣＮＳ３、ＫＣＮＶ１、ＫＣＮＶ２、ＫＣＮＪ１、ＫＣＮＪ２、ＫＣＮＪ３、ＫＣＮＪ４、ＫＣＮＪ５、ＫＣＮＪ６、ＫＣＮＪ８、ＫＣＮＪ９、ＫＣＮＪ１０、ＫＣＮＪ１１、ＫＣＮＪ１２、ＫＣＮＪ１３、ＫＣＮＪ１４、ＫＣＮＪ１５、ＫＣＮＪ１６、ＫＣＮＪ１８、ＫＣＮＫ１、ＫＣＮＫ２、ＫＣＮＫ３、ＫＣＮＫ４、ＫＣＮＫ５、ＫＣＮＫ６、ＫＣＮＫ７、ＫＣＮＫ９、ＫＣＮＫ１０、ＫＣＮＫ１２、ＫＣＮＫ１３、ＫＣＮＫ１５、ＫＣＮＫ１６、ＫＣＮＫ１７、ＫＣＮＫ１８、ＨＶＣＮ１、ＨＴＲ３Ａ、ＨＴＲ３Ｂ、ＨＴＲ３Ｃ、ＨＴＲ３Ｄ、ＨＴＲ３Ｅ、ＣＨＲＮＡ１
、ＣＨＲＮＡ２、ＣＨＲＮＡ３、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＡ５、ＣＨＲＮＡ６、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＡ９、ＣＨＲＮＡ１０、ＣＨＲＮＢ１、ＣＨＲＮＢ２、ＣＨＲＮＢ３、ＣＨＲＮＢ４、ＣＨＲＮＤ、ＣＨＲＮＥ、ＣＨＲＮＧ、ＧＡＢＲＡ１、ＧＡＢＲＡ２、ＧＡＢＲＡ３、ＧＡＢＲＡ４、ＧＡＢＲＡ５、ＧＡＢＲＡ６、ＧＡＢＲＢ１、ＧＡＢＲＢ２、ＧＡＢＲＢ３、ＧＡＢＲＤ、ＧＡＢＲＥ、ＧＡＢＲＧ１、ＧＡＢＲＧ２、ＧＡＢＲＧ３、ＧＡＢＲＰ、ＧＡＢＲＱ、ＧＡＢＲＲ１、ＧＡＢＲＲ２、ＧＡＢＲＲ３、ＧＲＩＡ１、ＧＲＩＡ２、ＧＲＩＡ３、ＧＲＩＡ４、ＧＲＩＤ１、ＧＲＩＤ２、ＧＲＩＫ１、ＧＲＩＫ２、ＧＲＩＫ３、ＧＲＩＫ４、ＧＲＩＫ５、ＧＲＩＮ１、ＧＲＩＮ２Ａ、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＧＲＩＮ２Ｃ、ＧＲＩＮ２Ｄ、ＧＲＩＮ３Ａ、ＧＲＩＮ３Ｂ、ＧＬＲＡ１、ＧＬＲＡ２、ＧＬＲＡ３、ＧＬＲＡ４、Ｐ２ＲＸ１、Ｐ２ＲＸ２、Ｐ２ＲＸ３、Ｐ２ＲＸ４、Ｐ２ＲＸ５、Ｐ２ＲＸ６、Ｐ２ＲＸ７、ＺＡＣＮ、ＡＳＩＣ１、ＡＳＩＣ２、ＡＳＩＣ３、ＡＳＩＣ４、ＡＱＰ１、ＡＱＰ２、ＡＱＰ３、ＡＱＰ４、ＡＱＰ５、ＡＱＰ６、ＡＱＰ７、ＡＱＰ８、ＡＱＰ９、ＡＱＰ１０、ＡＱＰ１１、ＡＱＰ１２Ａ、ＡＱＰ１２Ｂ、ＭＩＰ、ＣＬＣＮ１、ＣＬＣＮ２、ＣＬＣＮ３、ＣＬＣＮ４、ＣＬＣＮ５、ＣＬＣＮ６、ＣＬＣＮ７、ＣＬＣＮＫＡ、ＣＬＣＮＫＢ、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）、ＡＮＯ１／ＴＭＥＭ１６ａ、ＡＮＯ２、ＡＮＯ３、ＡＮＯ４、ＡＮＯ５、ＡＮＯ６、ＡＮＯ７、ＡＮＯ８、ＡＮＯ９、ＡＮＯ１０、ＢＥＳＴ１、ＢＥＳＴ２、ＢＥＳＴ３、ＢＥＳＴ４、ＣＬＩＣ１、ＣＬＩＣ２、ＣＬＩＣ３、ＣＬＩＣ４、ＣＬＩＣ５、ＣＬＩＣ６、ＧＪＡ１、ＧＪＡ３、ＧＪＡ４、ＧＪＡ５、ＧＪＡ６Ｐ、ＧＪＡ８、ＧＪＡ９、ＧＪＡ１０、ＧＪＢ１、ＧＪＢ２、ＧＪＢ３、ＧＪＢ４、ＧＪＢ５、ＧＪＢ６、ＧＪＢ７、ＧＪＣ１、ＧＪＣ２、ＧＪＣ３、ＧＪＤ２、ＧＪＤ３、ＧＪＤ４、ＧＪＥ１、ＩＴＰＲ１、ＩＴＰＲ２、ＩＴＰＲ３、ＰＡＮＸ１、ＰＡＮＸ２、ＰＡＮＸ３、ＲＹＲ１、ＲＹＲ２、ＲＹＲ３、ＮＡＬＣＮ、ＳＣＮＮ１Ａ、ＳＣＮＮ１Ｂ、ＳＣＮＮ１Ｄ、ＳＣＮＮ１Ｇ、ＡＤＡＭＴＳ７、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＧＰＴＬ８、ＬＰＬ、ＧＤＦ１５、ガレクチン−１、ガレクチン−２、ガレクチン−３、ガレクチン−４、ガレクチン−７、ガレクチン−８、ガレクチン−９、ガレクチン−１０、ガレクチン−１２、ガレクチン−１３、マトリックスｇｌａタンパク質（ＭＧＰ）、ＰＲＮＰ、ＤＧＡＴ１、ＧＰＡＴ３、ＤＭＣ１、ＢＬＭ、ＢＲＣＡ２、ヒト内在性レトロウイルスタイプＫ（ＨＥＲＶ−Ｋ）ファミリーのメンバー、エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１（ＥＮＴＰＤ１）、エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ２（ＥＮＴＰＤ２）、ＳＬＣ１Ａ１、ＳＬＣ１Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ１Ａ４、ＳＬＣ１Ａ５、ＳＬＣ１Ａ６、ＳＬＣ１Ａ７、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ２Ａ３、ＳＬＣ２Ａ４、ＳＬＣ２Ａ５、ＳＬＣ２Ａ６、ＳＬＣ２Ａ７、ＳＬＣ２Ａ８、ＳＬＣ２Ａ９、ＳＬＣ２Ａ１０、ＳＬＣ２Ａ１１、ＳＬＣ２Ａ１２、ＳＬＣ２Ａ１３、ＳＬＣ２Ａ１４、ＳＬＣ３Ａ１、ＳＬＣ３Ａ２、ＳＬＣ４Ａ１、ＳＬＣ４Ａ２、ＳＬＣ４Ａ３、ＳＬＣ４Ａ４、ＳＬＣ４Ａ５、ＳＬＣ４Ａ６、ＳＬＣ４Ａ７、ＳＬＣ４Ａ８、ＳＬＣ４Ａ９、ＳＬＣ４Ａ１０、ＳＬＣ４Ａ１１、ＳＬＣ５Ａ１、ＳＬＣ５Ａ２、ＳＬＣ５Ａ３、ＳＬＣ５Ａ４、ＳＬＣ５Ａ５、ＳＬＣ５Ａ６、ＳＬＣ５Ａ７、ＳＬＣ５Ａ８、ＳＬＣ５Ａ９、ＳＬＣ５Ａ１０、ＳＬＣ５Ａ１１、ＳＬＣ５Ａ１２、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＬＣ６Ａ２、ＳＬＣ６Ａ３、ＳＬＣ６Ａ４、ＳＬＣ６Ａ５、ＳＬＣ６Ａ６、ＳＬＣ６Ａ７、ＳＬＣ６Ａ８、ＳＬＣ６Ａ９、ＳＬＣ６Ａ１０、ＳＬＣ６Ａ１１、ＳＬＣ６Ａ１２、ＳＬＣ６Ａ１３、ＳＬＣ６Ａ１４、ＳＬＣ６Ａ１５、ＳＬＣ６Ａ１６、ＳＬＣ６Ａ１７、ＳＬＣ６Ａ１８、ＳＬＣ６Ａ１９、ＳＬＣ６Ａ２０、ＳＬＣ７Ａ５、ＳＬＣ７Ａ６、ＳＬＣ７Ａ７、ＳＬＣ７Ａ８、ＳＬＣ７Ａ９、ＳＬＣ７Ａ１０、ＳＬＣ７Ａ１１、ＳＬＣ７Ａ１３、ＳＬＣ７Ａ１４、ＳＬＣ８Ａ１、ＳＬＣ８Ａ２、ＳＬＣ８Ａ３、ＳＬＣ９Ａ１、ＳＬＣ９Ａ２、ＳＬＣ９Ａ３、ＳＬＣ９Ａ４、ＳＬＣ９Ａ５、ＳＬＣ９Ａ６、ＳＬＣ９Ａ７、ＳＬＣ９Ａ８、ＳＬＣ９Ａ９、ＳＬＣ９Ａ１０、ＳＬＣ９Ａ１１、ＳＬＣ９Ｂ１、ＳＬＣ９Ｂ２、ＳＬＣ１０Ａ１、ＳＬＣ１０Ａ２、ＳＬＣ１０Ａ３、ＳＬＣ１０Ａ４、ＳＬＣ１０Ａ５、ＳＬＣ１０Ａ６、ＳＬＣ１０Ａ７、ＳＬＣ１１Ａ１、ＳＬＣ１１Ａ２、ＳＬＣ１２Ａ１、ＳＬＣ１２Ａ２、ＳＬＣ１２Ａ３、ＳＬＣ１２Ａ４、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ１２Ａ６、ＳＬＣ１２Ａ７、ＳＬＣ１２Ａ８、ＳＬＣ１２Ａ９、ＳＬＣ１３Ａ１、ＳＬＣ１３Ａ２、ＳＬＣ１３Ａ３、ＳＬＣ１３Ａ４、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ１４Ａ１、ＳＬＣ１４Ａ２、ＳＬＣ１５Ａ１、ＳＬＣ１５Ａ２、ＳＬＣ１５Ａ３、ＳＬＣ１５Ａ４、ＳＬＣ１６Ａ１、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１６Ａ３、ＳＬＣ１６Ａ４、ＳＬＣ１６Ａ５、ＳＬＣ１６Ａ６、ＳＬＣ１６Ａ７、ＳＬＣ１６Ａ８、ＳＬＣ１６Ａ９、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ１１、ＳＬＣ１６Ａ１２、ＳＬＣ１６Ａ１３、ＳＬＣ１６Ａ１４、ＳＬＣ１７Ａ１、ＳＬＣ１７Ａ２、ＳＬＣ１７Ａ３、ＳＬＣ１７Ａ４、ＳＬＣ１７Ａ５、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＬＣ１７Ａ７、ＳＬＣ１７Ａ８、ＳＬＣ１７Ａ９、ＳＬＣ１８Ａ１、ＳＬＣ１８Ａ２、ＳＬＣ１８Ａ３、ＳＬＣ１９Ａ１、ＳＬＣ１９Ａ２、ＳＬＣ１９Ａ３、ＳＬＣ２０Ａ１、ＳＬＣ２０Ａ２、ＳＬＣＯ１Ａ２、ＳＬＣＯ１Ｂ１、ＳＬＣＯ１Ｂ３、ＳＬＣＯ１Ｃ１、ＳＬＣＯ２Ａ１、ＳＬＣＯ２Ｂ１、ＳＬＣＯ３Ａ１、ＳＬＣＯ４Ａ１、ＳＬＣＯ４Ｃ１、ＳＬＣＯ５Ａ１、ＳＬＣＯ６Ａ１、ＳＬＣ２２Ａ１、ＳＬＣ２２Ａ２、ＳＬＣ２２Ａ３、ＳＬＣ２２Ａ４、ＳＬＣ２２Ａ５、ＳＬＣ２２Ａ６、ＳＬＣ２２Ａ７、ＳＬＣ２２Ａ８、ＳＬＣ２２Ａ９、ＳＬＣ２２Ａ１０、ＳＬＣ２２Ａ１１、ＳＬＣ２２Ａ１２、ＳＬＣ２２Ａ１３、ＳＬＣ２２Ａ１４、ＳＬＣ２２Ａ１５、ＳＬＣ２２Ａ１６、ＳＬＣ２２Ａ１７、ＳＬＣ２２Ａ１８、ＳＬＣ２２Ａ１８ＡＳ，ＳＬＣ２２Ａ１９、ＳＬＣ２２Ａ２０、ＳＬＣ２２Ａ２３、ＳＬＣ２２Ａ２４、ＳＬＣ２２Ａ２５、ＳＬＣ２２Ａ３１、ＳＬＣ２３Ａ１、ＳＬＣ２３Ａ２、ＳＬＣ２３Ａ３、ＳＬＣ２３Ａ４、ＳＬＣ２４Ａ１、ＳＬＣ２４Ａ２、ＳＬＣ２４Ａ３、ＳＬＣ２４Ａ４、ＳＬＣ２４Ａ５、ＳＬＣ２４Ａ６、ＳＬＣ２５Ａ１、ＳＬＣ２５Ａ２、ＳＬＣ２５Ａ３、ＳＬＣ２５Ａ４、ＳＬＣ２５Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ６、ＳＬＣ２５Ａ７、ＳＬＣ２５Ａ８、ＳＬＣ２５Ａ９、ＳＬＣ２５Ａ１０、ＳＬＣ２５Ａ１１、ＳＬＣ２５Ａ１２、ＳＬＣ２５Ａ１３、ＳＬＣ２５Ａ１４、ＳＬＣ２５Ａ１５、ＳＬＣ２５Ａ１６、ＳＬＣ２５Ａ１７、ＳＬＣ２５Ａ１８、ＳＬＣ２５Ａ１９，ＳＬＣ２５Ａ２０、ＳＬＣ２５Ａ２１、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＳＬＣ２５Ａ２３、ＳＬＣ２５Ａ２４、ＳＬＣ２５Ａ２５、ＳＬＣ２５Ａ２６、ＳＬＣ２５Ａ２７、ＳＬＣ２５Ａ２８、ＳＬＣ２５Ａ２９、ＳＬＣ２５Ａ３０、ＳＬＣ２５Ａ３１、ＳＬＣ２５Ａ３２、ＳＬＣ２５Ａ３３、ＳＬＣ２５Ａ３４、ＳＬＣ２５Ａ３５、ＳＬＣ２５Ａ３６、ＳＬＣ２５Ａ３７，ＳＬＣ２５Ａ３８、ＳＬＣ２５Ａ３９、ＳＬＣ２５Ａ４０、ＳＬＣ２５Ａ４１、ＳＬＣ２５Ａ４２、ＳＬＣ２５Ａ４３、ＳＬＣ２５Ａ４４、ＳＬＣ２５Ａ４５、ＳＬＣ２５Ａ４６、ＳＬＣ２６Ａ１、ＳＬＣ２６Ａ２、ＳＬＣ２６Ａ３、ＳＬＣ２６Ａ４、ＳＬＣ２６Ａ５、ＳＬＣ２６Ａ６、ＳＬＣ２６Ａ７、ＳＬＣ２６Ａ８、ＳＬＣ２６Ａ９、ＳＬＣ２６Ａ１０、ＳＬＣ２６Ａ１１、ＳＬＣ２７Ａ１、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＬＣ２７Ａ３、ＳＬＣ２７Ａ４、ＳＬＣ２７Ａ５、ＳＬＣ２７Ａ６、ＳＬＣ２８Ａ１、ＳＬＣ２８Ａ２、ＳＬＣ２８Ａ３、ＳＬＣ２９Ａ１、ＳＬＣ２９Ａ２、ＳＬＣ２９Ａ３、ＳＬＣ２９Ａ４、ＳＬＣ３０Ａ１、ＳＬＣ３０Ａ２、ＳＬＣ３０Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＣ３０Ａ５、ＳＬＣ３０Ａ６、ＳＬＣ３０Ａ７、ＳＬＣ３０Ａ８、ＳＬＣ３０Ａ９、ＳＬＣ３０Ａ１０、ＳＬＣ３１Ａ１、ＳＬＣ３１Ａ２、ＳＬＣ３２Ａ１、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ３４Ａ１、ＳＬＣ３４Ａ２、ＳＬＣ３４Ａ３、ＳＬＣ３５Ａ１、ＳＬＣ３５Ａ２、ＳＬＣ３５Ａ３、ＳＬＣ３５Ａ４、ＳＬＣ３５Ａ５、ＳＬＣ３５Ｂ１、ＳＬＣ３５Ｂ２、ＳＬＣ３５Ｂ３、ＳＬＣ３５Ｂ４、ＳＬＣ３５Ｃ１、ＳＬＣ３５Ｃ２、ＳＬＣ３５Ｄ１、ＳＬＣ３５Ｄ２、ＳＬＣ３５Ｄ３、ＳＬＣ３５Ｅ１、ＳＬＣ３５Ｅ２、ＳＬＣ３５Ｅ３、ＳＬＣ３５Ｅ４、ＳＬＣ３５Ｆ１、ＳＬＣ３５Ｆ２、ＳＬＣ３５Ｆ３、ＳＬＣ３５Ｆ４、ＳＬＣ３５Ｆ５、ＳＬＣ３５Ｇ１、ＳＬＣ３５Ｇ３、ＳＬＣ３５Ｇ４、ＳＬＣ３５Ｇ５、ＳＬＣ３５Ｇ６、ＳＬＣ３６Ａ１、ＳＬＣ３６Ａ２、ＳＬＣ３６Ａ３、ＳＬＣ３６Ａ４、ＳＬＣ３７Ａ１、ＳＬＣ３７Ａ２、ＳＬＣ３７Ａ３、ＳＬＣ３７Ａ４、ＳＬＣ３８Ａ１、ＳＬＣ３８Ａ２、ＳＬＣ３８Ａ３、ＳＬＣ３８Ａ４、ＳＬＣ３８Ａ５、ＳＬＣ３８Ａ６、ＳＬＣ３８Ａ７、ＳＬＣ３８Ａ８、ＳＬＣ３８Ａ９、ＳＬＣ３８Ａ１０、ＳＬＣ３８Ａ１１、ＳＬＣ３９Ａ１、ＳＬＣ３９Ａ２、ＳＬＣ３９Ａ３、ＳＬＣ３９Ａ４、ＳＬＣ３９Ａ５、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＬＣ３９Ａ７、ＳＬＣ３９Ａ８、ＳＬＣ３９Ａ９、ＳＬＣ３９Ａ１０、ＳＬＣ３９Ａ１１、ＳＬＣ３９Ａ１２、ＳＬＣ３９Ａ１３、ＳＬＣ３９Ａ１４、ＳＬＣ４０Ａ１、ＳＬＣ４１Ａ１、ＳＬＣ４１Ａ２、ＳＬＣ４１Ａ３、ＲｈＡＧ、ＲｈＢＧ、ＲｈＣＧ、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ２、ＳＬＣ４３Ａ３、ＳＬＣ４４Ａ１、ＳＬＣ４４Ａ２、ＳＬＣ４４Ａ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＳＬＣ４４Ａ５、ＳＬＣ４５Ａ１、ＳＬＣ４５Ａ２、ＳＬＣ４５Ａ３、ＳＬＣ４５Ａ４、ＳＬＣ４６Ａ１、ＳＬＣ４６Ａ２、ＳＬＣ４６Ａ３、ＳＬＣ４７Ａ１、ＳＬＣ４７Ａ２、ＨＣＰ−１、ＭＦＳＤ５、ＭＦＳＤ１０、ＳＬＣ５０Ａ１、ＯＳＴα、ＯＳＴβ、ＳＬＣ５２Ａ１、ＳＬＣ５２Ａ２、ならびにＳＬＣ５２Ａ３から選択される。
【０１７５】
特定の態様では、本明細書で提供される方法は、膜貫通受容体などの膜貫通タンパク質である標的タンパク質、ならびに抗体を産生させにくい標的タンパク質または発現しにくい標的タンパク質、例えば、細胞毒性、収率、溶解性、凝集、および／もしくは安定性の問題のために難しい標的タンパク質に対する抗体の作製に有効である。
【０１７６】
ある種の態様では、本明細書に記載の標的タンパク質（例えば、ヒト標的タンパク質）は、Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩ型単一アンカー、Ｃ末端アンカー、およびポリトピック型（例えば、ＯｔｔおよびＬｉｎｇａｐｐａ，２００２，Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．，１１５（Ｐｔ１０）：２００３−２００９を参照のこと）として分類される膜内在性タンパク質（ＩＭＰ）を含む。特定の態様では、本明細書に記載の標的タンパク質（例えば、ヒト標的タンパク質）は、１回膜貫通型タンパク質である。特定の態様では、本明細書に記載の標的タンパク質（例えば、ヒト標的タンパク質）は、複数回膜貫通タンパク質である。
【０１７７】
Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）
特定の態様では、本明細書で提供される方法における使用のための複合体は、脂質および標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、標的タンパク質（例えば、ヒト標的タンパク質）は、ＧＰＣＲ（例えば、ヒトＧＰＣＲ）である。７回膜貫通（７ＴＭ）ドメイン受容体およびＧタンパク質結合受容体（ＧＰＬＲ）としても知られるＧＰＣＲ。ＧＰＣＲに関係する２つの主要なシグナル伝達経路は、ｃＡＭＰシグナル経路およびホスファチジルイノシトールシグナル経路である。
【０１７８】
ＧＰＣＲのクラスとしては、クラスＡ（ロドプシン様）、クラスＢ（セクレチン受容体ファミリー）、クラスＣ（代謝型グルタミン酸／フェロモン）、クラスＤ（真菌の接合フェロモン受容体）、クラスＥ（サイクリックＡＭＰ受容体）、およびクラスＦ（Ｆｒｉｚｚｌｅｄ／Ｓｍｏｏｔｈｅｎｅｄ）が含まれる。
【０１７９】
ＧＰＣＲ（クラスＡ、Ｂ、Ｃ、クラスＦｒｉｚｚｌｅｄ、および他の７回膜貫通タンパク質）である標的タンパク質の非限定的な例は、ＡＣＫＲ１、ＡＣＫＲ２、ＡＣＫＲ３、ＡＣＫＲ４、ＡＤＣＹＡＰ１Ｒ１、ＡＤＧＲＡ１、ＡＤＧＲＡ２、ＡＤＧＲＡ３、ＡＤＧＲＢ１、ＡＤＧＲＢ２、ＡＤＧＲＢ３、ＡＤＧＲＤ１、ＡＤＧＲＤ２、ＡＤＧＲＥ１、ＡＤＧＲＥ２、ＡＤＧＲＥ３、ＡＤＧＲＥ４Ｐ、ＡＤＧＲＥ５、ＡＤＧＲＦ１、ＡＤＧＲＦ２、ＡＤＧＲＦ３、ＡＤＧＲＦ４、ＡＤＧＲＦ５、ＡＤＧＲＧ１、ＡＤＧＲＧ２、ＡＤＧＲＧ３、ＡＤＧＲＧ４、ＡＤＧＲＧ５、ＡＤＧＲＧ６、ＡＤＧＲＧ７、ＡＤＧＲＬ１、ＡＤＧＲＬ２、ＡＤＧＲＬ３、ＡＤＧＲＬ４、ＡＤＧＲＶ１、ＡＤＯＲＡ１、ＡＤＯＲＡ２Ａ、ＡＤＯＲＡ２Ｂ、ＡＤＯＲＡ３、ＡＤＲＡ１Ａ、ＡＤＲＡ１Ｂ、ＡＤＲＡ１Ｄ、ＡＤＲＡ２Ａ、ＡＤＲＡ２Ｂ、ＡＤＲＡ２Ｃ、ＡＤＲＢ１、ＡＤＲＢ２、ＡＤＲＢ３、ＡＧＴＲ１、ＡＧＴＲ２、ＡＰＬＮＲ／ＡＰＪ、ＡＶＰＲ１Ａ、ＡＶＰＲ１Ｂ、ＡＶＰＲ２、ＢＤＫＲＢ１、ＢＤＫＲＢ２、ＢＲＳ３、ＢＲＳ３、Ｃ３ＡＲ１、Ｃ５ＡＲ１、Ｃ５ＡＲ２、ＣＡＬＣＲ、ＣＡＬＣＲＬ、ＣＡＳＲ、ＣＣＫＡＲ、ＣＣＫＢＲ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲＬ２、ＣＥＬＳＲ１、ＣＥＬＳＲ２、ＣＥＬＳＲ３、ＣＨＲＭ１、ＣＨＲＭ２、ＣＨＲＭ３、ＣＨＲＭ４、ＣＨＲＭ５、ＣＭＫＬＲ１、ＣＮＲ１、ＣＮＲ２、ＣＲＨＲ１、ＣＲＨＲ２、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＹＳＬＴＲ１、ＣＹＳＬＴＲ２、ＤＲＤ１、ＤＲＤ２、ＤＲＤ３、ＤＲＤ４、ＤＲＤ５、ＥＤＮＲＡ、ＥＤＮＲＢ、Ｆ２Ｒ、Ｆ２ＲＬ１、Ｆ２ＲＬ２、Ｆ２ＲＬ３、ＦＦＡＲ１、ＦＦＡＲ２、ＦＦＡＲ３、ＦＦＡＲ４、ＦＰＲ１、ＦＰＲ２、ＦＰＲ２、ＦＰＲ３、ＦＳＨＲ、ＦＺＤ１、ＦＺＤ１０、ＦＺＤ２、ＦＺＤ３、ＦＺＤ４、ＦＺＤ５、ＦＺＤ６、ＦＺＤ７、ＦＺＤ８、ＦＺＤ９、ＧＡＢＢＲ１、ＧＡＢＢＲ２、ＧＡＬＲ１、ＧＡＬＲ２、ＧＡＬＲ３、ＧＣＧＲ、ＧＨＲＨＲ、ＧＨＳＲ、ＧＩＰＲ、ＧＬＰ１Ｒ、ＧＬＰ２Ｒ、ＧＮＲＨＲ、ＧＮＲＨＲ２、ＧＰＢＡＲ１、ＧＰＥＲ１、ＧＰＲ１、ＧＰＲ４、ＧＰＲ１２、ＧＰＲ１５、ＧＰＲ１７、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ１９、ＧＰＲ２０、ＧＰＲ２１、ＧＰＲ２２、ＧＰＲ２５、ＧＰＲ２６、ＧＰＲ２７、ＧＰＲ３、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ３２、ＧＰＲ３３、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ３５、ＧＰＲ３７、ＧＰＲ３７Ｌ１、ＧＰＲ３９、ＧＰＲ４０、ＧＰＲ４２、ＧＰＲ４２、ＧＰＲ４５、ＧＰＲ５０、ＧＰＲ５２、ＧＰＲ５５、ＧＰＲ６、ＧＰＲ６１、ＧＰＲ６２、ＧＰＲ６３、ＧＰＲ６５、ＧＰＲ６８、ＧＰＲ７５、ＧＰＲ７８、ＧＰＲ７９、ＧＰＲ８２、ＧＰＲ８３、ＧＰＲ８４、ＧＰＲ８５、ＧＰＲ８７、ＧＰＲ８８、ＧＰＲ１０１、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１３２、ＧＰＲ１３５、ＧＰＲ１３７、ＧＰＲ１３９、ＧＰＲ１４１、ＧＰＲ１４２、ＧＰＲ１４３、ＧＰＲ１４６、ＧＰＲ１４８、ＧＰＲ１４９、ＧＰＲ１５、ＧＰＲ１５０、ＧＰＲ１５１、ＧＰＲ１５２、ＧＰＲ１５３、ＧＰＲ１５６、ＧＰＲ１５７、ＧＰＲ１５８、ＧＰＲ１６０、ＧＰＲ１６１、ＧＰＲ１６２、ＧＰＲ１７１、ＧＰＲ１７３、ＧＰＲ１７４、ＧＰＲ１７６、ＧＰＲ１７９、ＧＰＲ１８２、ＧＰＲ１８３、ＧＰＲＣ５Ａ、ＧＰＲＣ５Ｂ、ＧＰＲＣ５Ｃ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＧＰＲＣ６Ａ、ＧＲＭ１、ＧＲＭ２、ＧＲＭ３、ＧＲＭ４、ＧＲＭ５、ＧＲＭ６、ＧＲＭ７、ＧＲＭ８、ＧＲＰＲ、ＨＣＡＲ１、ＨＣＡＲ２、ＨＣＡＲ３、ＨＣＲＴＲ１、ＨＣＲＴＲ２、ＨＲＨ１、ＨＲＨ２、ＨＲＨ３、ＨＲＨ４、ＨＴＲ１Ａ、ＨＴＲ１Ｂ、ＨＴＲ１Ｄ、ＨＴＲ１Ｅ、ＨＴＲ１Ｆ、ＨＴＲ２Ａ、ＨＴＲ２Ｂ、ＨＴＲ２Ｃ、ＨＴＲ４、ＨＴＲ５Ａ、ＨＴＲ５ＢＰ、ＨＴＲ６、ＨＴＲ７、ＫＩＳＳ１Ｒ、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５、ＬＧＲ６、ＬＨＣＧＲ、ＬＰＡＲ１、ＬＰＡＲ２、ＬＰＡＲ３、ＬＰＡＲ４、ＬＰＡＲ５、ＬＰＡＲ６、ＬＴＢ４Ｒ、ＬＴＢ４Ｒ２、ＭＡＳ１、ＭＡＳ１Ｌ、ＭＣ１Ｒ、ＭＣ２Ｒ、ＭＣ３Ｒ、ＭＣ４Ｒ、ＭＣ５Ｒ、ＭＣＨＲ１、ＭＣＨＲ２、ＭＬＮＲ、ＭＲＧＰＲＤ、ＭＲＧＰＲＥ、ＭＲＧＰＲＦ、ＭＲＧＰＲＧ、ＭＲＧＰＲＸ１、ＭＲＧＰＲＸ２、ＭＲＧＰＲＸ３、ＭＲＧＰＲＸ４、ＭＴＮＲ１Ａ、ＭＴＮＲ１Ｂ、ＮＭＢＲ、ＮＭＵＲ１、ＮＭＵＲ２、ＮＰＢＷＲ１、ＮＰＢＷＲ２、ＮＰＦＦＲ１、ＮＰＦＦＲ２、ＮＰＳＲ１、ＮＰＹ１Ｒ、ＮＰＹ２Ｒ、ＮＰＹ４Ｒ、ＮＰＹ５Ｒ、ＮＰＹ６Ｒ、ＮＴＳＲ１、ＮＴＳＲ２、ＯＰＮ３、ＯＰＮ４、ＯＰＮ５、ＯＰＲＤ１、ＯＰＲＫ１、ＯＰＲＬ１、ＯＰＲＭ１、ＯＲ５１Ｅ１、ＯＸＥＲ１、ＯＸＧＲ１、ＯＸＴＲ、Ｐ２ＲＹ１、Ｐ２ＲＹ１０、Ｐ２ＲＹ１１、Ｐ２ＲＹ１２、Ｐ２ＲＹ１３、Ｐ２ＲＹ１４、Ｐ２ＲＹ２、Ｐ２ＲＹ４、Ｐ２ＲＹ６、Ｐ２ＲＹ８、ＰＲＬＨＲ、ＰＲＯＫＲ１、ＰＲＯＫＲ２、ＰＴＡＦＲ、ＰＴＧＤＲ、ＰＴＧＤＲ２、ＰＴＧＥＲ１、ＰＴＧＥＲ２、ＰＴＧＥＲ３、ＰＴＧＥＲ４、ＰＴＧＦＲ、ＰＴＧＩＲ、ＰＴＨ１Ｒ、ＰＴＨ２Ｒ、ＱＲＦＰＲ、ＲＸＦＰ１、ＲＸＦＰ２、ＲＸＦＰ３、ＲＸＦＰ４、Ｓ１ＰＲ１、Ｓ１ＰＲ２、Ｓ１ＰＲ３、Ｓ１ＰＲ４、Ｓ１ＰＲ５、ＳＣＴＲ、ＳＭＯ、ＳＳＴＲ１、ＳＳＴＲ２、ＳＳＴＲ３、ＳＳＴＲ４、ＳＳＴＲ５、ＳＵＣＮＲ１、ＴＡＡＲ１、ＴＡＡＲ２、ＴＡＡＲ３、ＴＡＡＲ４Ｐ、ＴＡＡＲ５、ＴＡＡＲ６、ＴＡＡＲ８、ＴＡＡＲ９、ＴＡＣＲ１、ＴＡＣＲ２、ＴＡＣＲ３、ＴＡＳ１Ｒ１、ＴＡＳ１Ｒ２、ＴＡＳ１Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ１、ＴＡＳ２Ｒ１０、ＴＡＳ２Ｒ１３、ＴＡＳ２Ｒ１４、ＴＡＳ２Ｒ１６、ＴＡＳ２Ｒ１９、ＴＡＳ２Ｒ２０、ＴＡＳ２Ｒ３、ＴＡＳ２Ｒ３０、ＴＡＳ２Ｒ３１、ＴＡＳ２Ｒ３８、ＴＡＳ２Ｒ３９、ＴＡＳ２Ｒ４、ＴＡＳ２Ｒ４０、ＴＡＳ２Ｒ４１、ＴＡＳ２Ｒ４２、ＴＡＳ２Ｒ４３、ＴＡＳ２Ｒ４５、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＡＳ２Ｒ５、ＴＡＳ２Ｒ５０、ＴＡＳ２Ｒ６０、ＴＡＳ２Ｒ７、ＴＡＳ２Ｒ８、ＴＡＳ２Ｒ９、ＴＢＸＡ２Ｒ、ＴＰＲＡ１、ＴＲＨＲ、ＴＳＨＲ、ＵＴＳ２Ｒ、ＶＩＰＲ１、ＶＩＰＲ２、およびＸＣＲ１を含む。
【０１８０】
膜貫通および膜結合性の免疫受容体：
特定の態様では、本明細書で提供される方法における使用のための複合体は、脂質および標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、標的タンパク質は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）、トール様受容体（ＴＬＲ）、キラー活性化およびキラー抑制受容体（ＫＡＲおよびＫＩＲ）、補体受容体、Ｆｃ受容体、Ｂ細胞受容体、およびＴ細胞受容体（例えば、ＴＣＲ−α、ＴＣＲ−β、ＣＤ３、ζ−鎖アクセサリー、ＣＤ４、およびＣＤ８）ならびに主要組織適合複合体を含む。
【０１８１】
パターン認識受容体（ＰＲＲ）の非限定的な例は、マンノース受容体（ＭＲ）、アシアロ糖タンパク質受容体ファミリー（例えば、アシアロ糖タンパク質受容体マクロファージガラクトース型レクチン（ＭＧＬ））、ＤＣ−ＳＩＧＮ（ＣＬＥＣ４Ｌ）、ランゲリン（ＣＬＥＣ４Ｋ）、骨髄系ＤＡＰ１２会合レクチン（ＭＤＬ）−１（ＣＬＥＣ５Ａ）、デクチン１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＧＲ１／ＣＬＥＣ９Ａ、骨髄系Ｃ型レクチン様受容体（ＭＩＣＬ）（ＣＬＥＣ１２Ａ）、ＣＬＥＣ２（ＣＬＥＣ１Ｂとも称される）、ＣＬＥＣ１２Ｂ、およびＤＣ免疫受容体（ＤＣＩＲ）サブファミリー（例えば、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、デクチン２／ＣＬＥＣ６Ａ、血液ＤＣ抗原２（ＢＤＣＡ２）（ＣＬＥＣ４Ｃ）、およびマクロファージ誘導性Ｃ型レクチン（ＣＬＥＣ４Ｅ））を含む。
【０１８２】
特定の態様では、本明細書で提供される方法における使用のための複合体は、脂質および標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、標的タンパク質は、トール様受容体（ＴＬＲ）である。ＴＬＲは、自然免疫系において重要な役割を果たすタンパク質のクラスである。それらは、微生物由来の保存された分子を構造的に認識し、免疫応答を活性化するマクロファージおよび樹状細胞などの細胞において通常発現される、１回膜貫通非触媒性受容体である。ＴＬＲの非限定的な例は、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２、およびＴＬＲ１３を含む。
【０１８３】
Ｆｃ受容体（例えば、Ｆｃγ受容体、Ｆｃα受容体、およびＦｃε受容体）の非限定的な例は、多量体免疫グロブリン受容体（ｐｌｇＲ）、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ１（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）、ＦｃαＲ１（ＣＤ８９）、Ｆｃα／μＲ、およびＦｃＲｎを含む。
【０１８４】
特定の態様では、本明細書で提供される方法における使用のための複合体は、脂質および標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、標的タンパク質は、次の：ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＧＩＴ、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ３）、Ｔ細胞活性化のＶ−ドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、ＩＣＯＳ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ３）から選択される免疫受容体である。
【０１８５】
特定の態様では、本明細書で提供される方法における使用のための複合体は、脂質および標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、標的タンパク質は、主要組織適合複合体ＩもしくはＩＩ（ＭＨＣ  ＩもしくはＭＨＣ  ＩＩ）、またはペプチド断片を有する複合体中のＭＨＣの一部である。ＭＨＣタンパク質は獲得免疫系の一部であり、加工されたペプチド断片のＴ細胞への提示および体液性免疫系活性化の誘発において重要な役割を果たす。ＭＨＣタンパク質の非限定的な例は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＡ、およびＨＬＡ−ＤＲＢ１を含む。
【０１８６】
サイトカイン受容体：
特定の態様では、本明細書で提供される方法における使用のための複合体は、脂質および標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、標的タンパク質は、サイトカイン受容体（例えば、インターロイキン（ＩＬ）受容体または線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）受容体）である。サイトカイン受容体の非限定的な例は、神経成長因子（ＮＧＦ）、ミオスタチン（ＧＤＦ−８）、増殖分化因子（ＧＤＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、トロンボポチエン（ＴＰＯ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、組織メタロプロテアーゼ阻害物質（ＴＩＭＰ）、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、マクロファージ刺激因子（ＭＳＦ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、カルジオトロフィン、オンコスタチンＭ、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、形質転換増殖因子（ＴＧＦ）−αおよび−β、インターフェロン（ＩＦＮ）−βおよび−γ、ならびに腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）αに対する受容体を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される方法における使用のための複合体は、脂質および標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、標的タンパク質はｇｐ１３０であり、これは、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＩＬ−２７、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、カルジオトロフィン１（ＣＴ−１）、およびカルジオトロフィン様サイトカイン（ＣＬＣ）を含むいくつかの関連するサイトカインによって利用される共有のレセプターである。
【０１８７】
特定の態様では、本明細書で提供される方法における使用のための複合体は、脂質および標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、標的タンパク質は、インターロイキン（ＩＬ）受容体である。ＩＬ受容体の非限定的な例は、ＩＬ−１受容体、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−３受容体、ＩＬ−４受容体、ＩＬ−５受容体、ＩＬ−６受容体、ＩＬ−７受容体、ＩＬ−８受容体、ＩＬ−９受容体、ＩＬ−１０受容体、ＩＬ−１１受容体、ＩＬ−１２受容体、ＩＬ−１３受容体、ＩＬ−１４受容体、ＩＬ−１５受容体、ＩＬ−１６受容体、ＩＬ−１７受容体、ＩＬ−１８受容体、ＩＬ−１９受容体、ＩＬ−２０受容体、ＩＬ−２１受容体、ＩＬ−２２受容体、ＩＬ−２３受容体、ＩＬ−２４受容体、ＩＬ−２５受容体、ＩＬ−２６受容体，ＩＬ−２７受容体、ＩＬ−２８受容体、ＩＬ−２９受容体、ＩＬ−３０受容体、ＩＬ−３１受容体、ＩＬ−３２受容体、ＩＬ−３３受容体、ＩＬ−３５受容体、およびＩＬ−３６受容体を含む。
【０１８８】
特定の態様では、本明細書で提供される方法における使用のための複合体は、脂質および標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、標的タンパク質は、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）受容体（ＦＧＦＲ）である。ＦＧＦ受容体の非限定的な例は、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、およびＦＧＦＲ４を含む。
【０１８９】
特定の態様では、本明細書で提供される方法における使用のための複合体は、脂質および標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、標的タンパク質は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）メンバーである。ＴＮＦＲＳＦメンバーの非限定的な例は、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ３、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１２Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１４、ＴＮＦＲＳＦ１６、ＴＮＦＲＳＦ１７、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＴＮＦＲＳＦ１９、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＲＳＦ２５、およびＴＮＦＲＳＦ２７を含む。
【０１９０】
イオンチャネル；
特定の態様では、本明細書で提供される方法における使用のための複合体は、脂質および標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、標的タンパク質は、イオンチャネルである。
【０１９１】
イオンチャネルには３００種を超える型があり、それらは、ゲーティングの性質、それらのゲートを通過するイオン種、ゲート（孔）の数、およびタンパク質の局在によって分類することができる。例えば、電位依存性イオンチャネルは、電位依存性ナトリウムチャネル、電位依存性カルシウムチャネル、電位依存性カリウムチャネル（Ｋｖ）、過分極活性化環状ヌクレオチド依存性チャネル、電位依存性プロトンチャネルを含むが、これらに限定されない。リガンド依存性イオンチャネルは、カチオン透過性「ニコチン性」アセチルコリン受容体、イオンチャネル型グルタミン酸依存性受容体およびＡＴＰ依存性Ｐ２Ｘ受容体、ならびにアニオン透過性γ−アミノ酪酸依存性ＧＡＢＡ受容体を含むが、これらに限定されない。イオン種によるイオンチャネルの分類は、クロライドチャネル、カリウムチャネル（例えば、ＡＴＰ感受性カリウムイオンチャネル）、ナトリウムチャネル（例えば、ＮａＶｓ、ＥＮａＣｓ、ＣａＶｓ）、カルシウムチャネル、プロトンチャネル、および非選択的カチオンチャネルを含むが、これらに限定されない。
【０１９２】
電位依存性ナトリウムチャネルの非限定的な例は、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ１Ｂ、ＳＣＮ２Ａ、ＳＣＮ２Ｂ、ＳＣＮ３Ａ、ＳＣＮ３Ｂ、ＳＣＮ４Ａ、ＳＣＮ５Ａ、ＳＣＮ７Ａ、ＳＣＮ８Ａ、ＳＣＮ９Ａ、ＳＣＮ１０Ａ、およびＳＣＮ１１Ａを含む。
【０１９３】
電位依存性カルシウムチャネルの非限定的な例は、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｂ、ＣＡＣＮＡ１Ｃ、ＣＡＣＮＡ１Ｄ、ＣＡＣＮＡ１Ｅ、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＣＡＣＮＡ１Ｇ、ＣＡＣＮＡ１Ｈ、ＣＡＣＮＡ１Ｉ、およびＣＡＣＮＡ１Ｓを含む。
【０１９４】
一過性受容器電位カチオンチャネルの非限定的な例は、ＴＲＰＡ１、ＴＲＰＣ１、ＴＲＰＣ２、ＴＲＰＣ３、ＴＲＰＣ４、ＴＲＰＣ５、ＴＲＰＣ６、ＴＲＰＣ７、ＴＲＰＭ１、ＴＲＰＭ２、ＴＲＰＭ３、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ５、ＴＲＰＭ６、ＴＲＰＭ７、ＴＲＰＭ８、ＭＣＯＬＮ１、ＭＣＯＬＮ２、ＭＣＯＬＮ３、ＰＫＤ１、ＰＫＤ２、ＰＫＤ２Ｌ１、ＰＫＤ２Ｌ２、ＴＲＰＶ１、ＴＲＰＶ２、ＴＲＰＶ３、ＴＲＰＶ４、ＴＲＰＶ５、およびＴＲＰＶ６を含む。
【０１９５】
ＣａｔＳｐｅｒチャネルの非限定的な例は、ＣＡＴＳＰＥＲ１、ＣＡＴＳＰＥＲ２、ＣＡＴＳＰＥＲ３、およびＣＡＴＳＰＥＲ４を含む。
【０１９６】
二孔チャネルの非限定的な例は、ＴＰＣＮ１およびＴＰＣＮ２を含む。
【０１９７】
環状ヌクレオチド依存性チャネルの非限定的な例は、ＣＮＧＡ１、ＣＮＧＡ２、ＣＮＧＡ３、ＣＮＧＡ４、ＣＮＧＢ１、ＣＮＧＢ３、ＨＣＮ１、ＨＣＮ２、ＨＣＮ３、およびＨＣＮ４を含む。
【０１９８】
カルシウム活性化カリウムチャネルの非限定的な例は、ＫＣＮＭＡ１、ＫＣＮＮ１、ＫＣＮＮ２、ＫＣＮＮ３、ＫＣＮＮ４、ＫＣＮＴ１、ＫＣＮＴ２、およびＫＣＮＵ１を含む。
【０１９９】
電位依存性カリウムチャネルの非限定的な例は、ＫＣＮＡ１、ＫＣＮＡ２、ＫＣＮＡ３、ＫＣＮＡ４、ＫＣＮＡ５、ＫＣＮＡ６、ＫＣＮＡ７、ＫＣＮＡ１０、ＫＣＮＢ１、ＫＣＮＢ２、ＫＣＮＣ１、ＫＣＮＣ２、ＫＣＮＣ３、ＫＣＮＣ４、ＫＣＮＤ１、ＫＣＮＤ２、ＫＣＮＤ３、ＫＣＮＦ１、ＫＣＮＧ１、ＫＣＮＧ２、ＫＣＮＧ３、ＫＣＮＧ４、ＫＣＮＨ１、ＫＣＮＨ２、ＫＣＮＨ３、ＫＣＮＨ４、ＫＣＮＨ５、ＫＣＮＨ６、ＫＣＮＨ７、ＫＣＮＨ８、ＫＣＮＱ１、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＱ３、ＫＣＮＱ４、ＫＣＮＱ５、ＫＣＮＳ１、ＫＣＮＳ２、ＫＣＮＳ３、ＫＣＮＶ１、およびＫＣＮＶ２を含む。
【０２００】
内向き整流性カリウムチャネルの非限定的な例は、ＫＣＮＪ１、ＫＣＮＪ２、ＫＣＮＪ３、ＫＣＮＪ４、ＫＣＮＪ５、ＫＣＮＪ６、ＫＣＮＪ８、ＫＣＮＪ９、ＫＣＮＪ１０、ＫＣＮＪ１１、ＫＣＮＪ１２、ＫＣＮＪ１３、ＫＣＮＪ１４、ＫＣＮＪ１５、ＫＣＮＪ１６、およびＫＣＮＪ１８を含む。
【０２０１】
２Ｐカリウムチャネルの非限定的な例は、ＫＣＮＫ１、ＫＣＮＫ２、ＫＣＮＫ３、ＫＣＮＫ４、ＫＣＮＫ５、ＫＣＮＫ６、ＫＣＮＫ７、ＫＣＮＫ９、ＫＣＮＫ１０、ＫＣＮＫ１２、ＫＣＮＫ１３、ＫＣＮＫ１５、ＫＣＮＫ１６、ＫＣＮＫ１７、およびＫＣＮＫ１８を含む。
【０２０２】
水素電位依存性イオンチャネルの非限定的な例は、ＨＶＣＮ１を含む。
【０２０３】
イオンチャネル型５−ＨＴ（セロトニン）受容体の非限定的な例は、ＨＴＲ３Ａ、ＨＴＲ３Ｂ、ＨＴＲ３Ｃ、ＨＴＲ３Ｄ、およびＨＴＲ３Ｅを含む。
【０２０４】
ニコチン性アセチルコリン受容体の非限定的な例は、ＣＨＲＮＡ１、ＣＨＲＮＡ２、ＣＨＲＮＡ３、ＣＨＲＮＡ４、ＣＨＲＮＡ５、ＣＨＲＮＡ６、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＡ９、ＣＨＲＮＡ１０、ＣＨＲＮＢ１、ＣＨＲＮＢ２、ＣＨＲＮＢ３、ＣＨＲＮＢ４、ＣＨＲＮＤ、ＣＨＲＮＥ、およびＣＨＲＮＧを含む。
【０２０５】
ＧＡＢＡ（Ａ）受容体の非限定的な例は、ＧＡＢＲＡ１、ＧＡＢＲＡ２、ＧＡＢＲＡ３、ＧＡＢＲＡ４、ＧＡＢＲＡ５、ＧＡＢＲＡ６、ＧＡＢＲＢ１、ＧＡＢＲＢ２、ＧＡＢＲＢ３、ＧＡＢＲＤ、ＧＡＢＲＥ、ＧＡＢＲＧ１、ＧＡＢＲＧ２、ＧＡＢＲＧ３、ＧＡＢＲＰ、ＧＡＢＲＱ、ＧＡＢＲＲ１、ＧＡＢＲＲ２、およびＧＡＢＲＲ３を含む。
【０２０６】
イオンチャネル型グルタミン酸受容体の非限定的な例は、ＧＲＩＡ１、ＧＲＩＡ２、ＧＲＩＡ３、ＧＲＩＡ４、ＧＲＩＤ１、ＧＲＩＤ２、ＧＲＩＫ１、ＧＲＩＫ２、ＧＲＩＫ３、ＧＲＩＫ４、ＧＲＩＫ５、ＧＲＩＮ１、ＧＲＩＮ２Ａ、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＧＲＩＮ２Ｃ、ＧＲＩＮ２Ｄ、ＧＲＩＮ３Ａ、およびＧＲＩＮ３Ｂを含む。
【０２０７】
グリシン受容体の非限定的な例は、ＧＬＲＡ１、ＧＬＲＡ２、ＧＬＲＡ３、およびＧＬＲＡ４を含む。
【０２０８】
イオンチャネル型プリン受容体の非限定的な例は、Ｐ２ＲＸ１、Ｐ２ＲＸ２、Ｐ２ＲＸ３、Ｐ２ＲＸ４、Ｐ２ＲＸ５、Ｐ２ＲＸ６、およびＰ２ＲＸ７を含む。
【０２０９】
亜鉛活性化チャネルの非限定的な例は、ＺＡＣＮを含む。
【０２１０】
酸感受性（プロトン依存性）イオンチャネルの非限定的な例は、ＡＳＩＣ１、ＡＳＩＣ２、ＡＳＩＣ３、ＡＳＩＣ４を含む。
【０２１１】
アクアポリンの非限定的な例は、ＡＱＰ１、ＡＱＰ２、ＡＱＰ３、ＡＱＰ４、ＡＱＰ５、ＡＱＰ６、ＡＱＰ７、ＡＱＰ８、ＡＱＰ９、ＡＱＰ１０、ＡＱＰ１１、ＡＱＰ１２Ａ、ＡＱＰ１２Ｂ、およびＭＩＰを含む。
【０２１２】
電位感受性クロライドチャネルの非限定的な例は、ＣＬＣＮ１、ＣＬＣＮ２、ＣＬＣＮ３、ＣＬＣＮ４、ＣＬＣＮ５、ＣＬＣＮ６、ＣＬＣＮ７、ＣＬＣＮＫＡ、およびＣＬＣＮＫＢを含む。
【０２１３】
嚢胞性線維症膜貫通型コンダクタンス制御因子の非限定的な例は、ＣＦＴＲを含む。
【０２１４】
カルシウム活性化クロライドチャネル（ＣａＣＣ）の非限定的な例は、ＡＮＯ１、ＡＮＯ２、ＡＮＯ３、ＡＮＯ４、ＡＮＯ５、ＡＮＯ６、ＡＮＯ７、ＡＮＯ８、ＡＮＯ９、ＡＮＯ１０、ＢＥＳＴ１、ＢＥＳＴ２、ＢＥＳＴ３、およびＢＥＳＴ４を含む。
【０２１５】
クロライド細胞内チャネルの非限定的な例は、ＣＬＩＣ１、ＣＬＩＣ２、ＣＬＩＣ３、ＣＬＩＣ４、ＣＬＩＣ５、およびＣＬＩＣ６を含む。
【０２１６】
ギャップ結合タンパク質（コネキシン）の非限定的な例は、ＧＪＡ１、ＧＪＡ３、ＧＪＡ４、ＧＪＡ５、ＧＪＡ６Ｐ、ＧＪＡ８、ＧＪＡ９、ＧＪＡ１０、ＧＪＢ１、ＧＪＢ２、ＧＪＢ３、ＧＪＢ４、ＧＪＢ５、ＧＪＢ６、ＧＪＢ７、ＧＪＣ１、ＧＪＣ２、ＧＪＣ３、ＧＪＤ２、ＧＪＤ３、ＧＪＤ４、およびＧＪＥ１を含む。
【０２１７】
ＩＰ３受容体の非限定的な例は、ＩＴＰＲ１、ＩＴＰＲ２、およびＩＴＰＲ３を含む。
【０２１８】
パネキシンの非限定的な例は、ＰＡＮＸ１、ＰＡＮＸ２、およびＰＡＮＸ３を含む。
【０２１９】
リアノジン受容体の非限定的な例は、ＲＹＲ１、ＲＹＲ２、およびＲＹＲ３を含む。
【０２２０】
非選択的ナトリウム漏洩チャネルの非限定的な例は、ＮＡＬＣＮを含む。
【０２２１】
非電位依存性ナトリウムチャネルの非限定的な例は、ＳＣＮＮ１Ａ、ＳＣＮＮ１Ｂ、ＳＣＮＮ１Ｄ、およびＳＣＮＮ１Ｇを含む。
【０２２２】
溶質輸送体タンパク質：
特定の態様では、本明細書で提供される方法における使用のための複合体は、脂質および標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、標的タンパク質は、溶質輸送体である。溶質輸送体タンパク質は、脂質膜の一方から他方に溶質を輸送する能力によって特徴づけられる膜内在性タンパク質である。このタンパク質の群は、溶質を電気化学的勾配に逆らって移動させる二次性能動輸送体、および溶質をそれらの電気化学的勾配の方向に移動させる促進性輸送体を含む。溶質輸送体は、３００種を超えるタンパク質を包含する５２種のファミリーにまとめられる。５２種のファミリーおよびその非限定的な例となるメンバーを以下に示す：
（１）高親和性グルタミン酸および中性アミノ酸輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ１Ａ１、ＳＬＣ１Ａ２、ＳＬＣ１Ａ３、ＳＬＣ１Ａ４、ＳＬＣ１Ａ５、ＳＬＣ１Ａ６、およびＳＬＣ１Ａ７を含み；
（２）促進性グルコース（ＧＬＵＴ）輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ２Ａ１、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ２Ａ３、ＳＬＣ２Ａ４、ＳＬＣ２Ａ５、ＳＬＣ２Ａ６、ＳＬＣ２Ａ７、ＳＬＣ２Ａ８、ＳＬＣ２Ａ９、ＳＬＣ２Ａ１０、ＳＬＣ２Ａ１１、ＳＬＣ２Ａ１２、ＳＬＣ２Ａ１３、およびＳＬＣ２Ａ１４を含み；
（３）ヘテロ二量体アミノ酸ファミリーの大サブユニットであって、非限定的な例は、ＳＬＣ３Ａ１およびＳＬＣ３Ａ２を含み；
（４）重炭酸塩ファミリーであって、例は、ＳＬＣ４Ａ１、ＳＬＣ４Ａ２、ＳＬＣ４Ａ３、ＳＬＣ４Ａ４、ＳＬＣ４Ａ５、ＳＬＣ４Ａ６、ＳＬＣ４Ａ７、ＳＬＣ４Ａ８、ＳＬＣ４Ａ９、ＳＬＣ４Ａ１０、およびＳＬＣ４Ａ１１を含み；
（５）ナトリウム・グルコース共輸送体ファミリーであって、例は、ＳＬＣ５Ａ１、ＳＬＣ５Ａ２、ＳＬＣ５Ａ３、ＳＬＣ５Ａ４、ＳＬＣ５Ａ５、ＳＬＣ５Ａ６、ＳＬＣ５Ａ７、ＳＬＣ５Ａ８、ＳＬＣ５Ａ９、ＳＬＣ５Ａ１０、ＳＬＣ５Ａ１１、およびＳＬＣ５Ａ１２を含み；
（６）ナトリウムおよびクロライド依存性ナトリウム：神経伝達物質共輸送体ファミリーであって、例は、ＳＬＣ６Ａ１、ＳＬＣ６Ａ２、ＳＬＣ６Ａ３、ＳＬＣ６Ａ４、ＳＬＣ６Ａ５、ＳＬＣ６Ａ６、ＳＬＣ６Ａ７、ＳＬＣ６Ａ８、ＳＬＣ６Ａ９、ＳＬＣ６Ａ１０、ＳＬＣ６Ａ１１、ＳＬＣ６Ａ１２、ＳＬＣ６Ａ１３、ＳＬＣ６Ａ１４、ＳＬＣ６Ａ１５、ＳＬＣ６Ａ１６、ＳＬＣ６Ａ１７、ＳＬＣ６Ａ１８、ＳＬＣ６Ａ１９、およびＳＬＣ６Ａ２０を含み；
（７）カチオン性アミノ酸輸送体／糖タンパク質関連ファミリーであって、非限定的な例は、（ｉ）カチオン性アミノ酸輸送体（ＳＬＣ７Ａ１、ＳＬＣ７Ａ２、ＳＬＣ７Ａ３、ＳＬＣ７Ａ４）および（ｉｉ）ヘテロ二量体アミノ酸輸送体の糖タンパク質関連／小または触媒サブユニット（ＳＬＣ７Ａ５、ＳＬＣ７Ａ６、ＳＬＣ７Ａ７、ＳＬＣ７Ａ８、ＳＬＣ７Ａ９、ＳＬＣ７Ａ１０、ＳＬＣ７Ａ１１、ＳＬＣ７Ａ１３、ＳＬＣ７Ａ１４）を含み；
（８）Ｎａ＋／Ｃａ２＋交換輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ８Ａ１、ＳＬＣ８Ａ２、およびＳＬＣ８Ａ３を含み；
（９）Ｎａ＋／Ｈ＋交換輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ９Ａ１、ＳＬＣ９Ａ２、ＳＬＣ９Ａ３、ＳＬＣ９Ａ４、ＳＬＣ９Ａ５、ＳＬＣ９Ａ６、ＳＬＣ９Ａ７、ＳＬＣ９Ａ８、ＳＬＣ９Ａ９、ＳＬＣ９Ａ１０、ＳＬＣ９Ａ１１、ＳＬＣ９Ｂ１、およびＳＬＣ９Ｂ２を含み；
（１０）ナトリウム胆汁酸塩共輸送ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ１０Ａ１、ＳＬＣ１０Ａ２、ＳＬＣ１０Ａ３、ＳＬＣ１０Ａ４、ＳＬＣ１０Ａ５、ＳＬＣ１０Ａ６、およびＳＬＣ１０Ａ７を含み；
（１１）プロトン共役型金属イオン輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ１１Ａ１およびＳＬＣ１１Ａ２を含み；
（１２）電気的中性カチオン−Ｃｌ共輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ１２Ａ１、ＳＬＣ１２Ａ１、ＳＬＣ１２Ａ２、ＳＬＣ１２Ａ３、ＳＬＣ１２Ａ４、ＳＬＣ１２Ａ５、ＳＬＣ１２Ａ６、ＳＬＣ１２Ａ７、ＳＬＣ１２Ａ８、およびＳＬＣ１２Ａ９を含み；
（１３）Ｎａ＋−ＳＯ４２−／カルボン酸共輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ１３Ａ１、ＳＬＣ１３Ａ２、ＳＬＣ１３Ａ３、ＳＬＣ１３Ａ４、およびＳＬＣ１３Ａ５を含み；
（１４）尿素輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ１４Ａ１およびＳＬＣ１４Ａ２を含み；
（１５）プロトンオリゴペプチド共輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ１５Ａ１、ＳＬＣ１５Ａ２、ＳＬＣ１５Ａ３、およびＳＬＣ１５Ａ４を含み；
（１６）モノカルボン酸輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ１６Ａ１、ＳＬＣ１６Ａ２、ＳＬＣ１６Ａ３、ＳＬＣ１６Ａ４、ＳＬＣ１６Ａ５、ＳＬＣ１６Ａ６、ＳＬＣ１６Ａ７、ＳＬＣ１６Ａ８、ＳＬＣ１６Ａ９、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＳＬＣ１６Ａ１１、ＳＬＣ１６Ａ１２、ＳＬＣ１６Ａ１３、およびＳＬＣ１６Ａ１４を含み；
（１７）小胞グルタミン酸輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ１７Ａ１、ＳＬＣ１７Ａ２、ＳＬＣ１７Ａ３、ＳＬＣ１７Ａ４、ＳＬＣ１７Ａ５、ＳＬＣ１７Ａ６、ＳＬＣ１７Ａ７、ＳＬＣ１７Ａ８、およびＳＬＣ１７Ａ９を含み；
（１８）小胞アミン輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ１８Ａ１、ＳＬＣ１８Ａ２、およびＳＬＣ１８Ａ３を含み；
（１９）葉酸／チアミン輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ１９Ａ１、ＳＬＣ１９Ａ２、およびＳＬＣ１９Ａ３を含み；
（２０）ＩＩＩ型Ｎａ＋−リン酸共輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ２０Ａ１およびＳＬＣ２０Ａ２を含み；
（２１）有機アニオン輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、（ｉ）サブファミリー１  ＳＬＣＯ１Ａ２、ＳＬＣＯ１Ｂ１、ＳＬＣＯ１Ｂ３、およびＳＬＣＯ１Ｃ１；（ｉｉ）サブファミリー２、ＳＬＣＯ２Ａ１およびＳＬＣＯ２Ｂ１を含み；（ｉｉｉ）サブファミリー３、ＳＬＣＯ３Ａ１；（ｉｖ）サブファミリー４、ＳＬＣＯ４Ａ１、ＳＬＣＯ４Ｃ１；（ｖ）サブファミリー５、ＳＬＣＯ５Ａ１；ならびに（ｖｉ）サブファミリー６、ＳＬＣＯ６Ａ１を含み；
（２２）有機カチオン／アニオン／双性イオン輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ２２Ａ１、ＳＬＣ２２Ａ２、ＳＬＣ２２Ａ３、ＳＬＣ２２Ａ４、ＳＬＣ２２Ａ５、ＳＬＣ２２Ａ６、ＳＬＣ２２Ａ７、ＳＬＣ２２Ａ８、ＳＬＣ２２Ａ９、ＳＬＣ２２Ａ１０、ＳＬＣ２２Ａ１１、ＳＬＣ２２Ａ１２、ＳＬＣ２２Ａ１３、ＳＬＣ２２Ａ１４、ＳＬＣ２２Ａ１５、ＳＬＣ２２Ａ１６、ＳＬＣ２２Ａ１７、ＳＬＣ２２Ａ１８、ＳＬＣ２２Ａ１８ＡＳ，ＳＬＣ２２Ａ１９、ＳＬＣ２２Ａ２０、ＳＬＣ２２Ａ２３、ＳＬＣ２２Ａ２４、ＳＬＣ２２Ａ２５、およびＳＬＣ２２Ａ３１を含み；
（２３）Ｎａ＋依存性アスコルビン酸輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ２３Ａ１、ＳＬＣ２３Ａ２、ＳＬＣ２３Ａ３、およびＳＬＣ２３Ａ４を含み；
（２４）Ｎａ＋／（Ｃａ２＋−Ｋ＋）交換輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ２４Ａ１、ＳＬＣ２４Ａ２、ＳＬＣ２４Ａ３、ＳＬＣ２４Ａ４、ＳＬＣ２４Ａ５、およびＳＬＣ２４Ａ６を含み；
（２５）ミトコンドリアキャリアファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ２５Ａ１、ＳＬＣ２５Ａ２、ＳＬＣ２５Ａ３、ＳＬＣ２５Ａ４、ＳＬＣ２５Ａ５、ＳＬＣ２５Ａ６、ＳＬＣ２５Ａ７、ＳＬＣ２５Ａ８、ＳＬＣ２５Ａ９、ＳＬＣ２５Ａ１０、ＳＬＣ２５Ａ１１、ＳＬＣ２５Ａ１２、ＳＬＣ２５Ａ１３、ＳＬＣ２５Ａ１４、ＳＬＣ２５Ａ１５、ＳＬＣ２５Ａ１６、ＳＬＣ２５Ａ１７、ＳＬＣ２５Ａ１８、ＳＬＣ２５Ａ１９，ＳＬＣ２５Ａ２０、ＳＬＣ２５Ａ２１、ＳＬＣ２５Ａ２２、ＳＬＣ２５Ａ２３、ＳＬＣ２５Ａ２４、ＳＬＣ２５Ａ２５、ＳＬＣ２５Ａ２６、ＳＬＣ２５Ａ２７、ＳＬＣ２５Ａ２８、ＳＬＣ２５Ａ２９、ＳＬＣ２５Ａ３０、ＳＬＣ２５Ａ３１、ＳＬＣ２５Ａ３２、ＳＬＣ２５Ａ３３、ＳＬＣ２５Ａ３４、ＳＬＣ２５Ａ３５、ＳＬＣ２５Ａ３６、ＳＬＣ２５Ａ３７，ＳＬＣ２５Ａ３８、ＳＬＣ２５Ａ３９、ＳＬＣ２５Ａ４０、ＳＬＣ２５Ａ４１、ＳＬＣ２５Ａ４２、ＳＬＣ２５Ａ４３、ＳＬＣ２５Ａ４４、ＳＬＣ２５Ａ４５、およびＳＬＣ２５Ａ４６を含み；
（２６）多機能性アニオン交換輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ２６Ａ１、ＳＬＣ２６Ａ２、ＳＬＣ２６Ａ３、ＳＬＣ２６Ａ４、ＳＬＣ２６Ａ５、ＳＬＣ２６Ａ６、ＳＬＣ２６Ａ７、ＳＬＣ２６Ａ８、ＳＬＣ２６Ａ９、ＳＬＣ２６Ａ１０、およびＳＬＣ２６Ａ１１を含み；
（２７）脂肪酸輸送タンパク質ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ２７Ａ１、ＳＬＣ２７Ａ２、ＳＬＣ２７Ａ３、ＳＬＣ２７Ａ４、ＳＬＣ２７Ａ５、およびＳＬＣ２７Ａ６を含み；
（２８）Ｎａ＋共役型ヌクレオシド輸送ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ２８Ａ１、ＳＬＣ２８Ａ２、およびＳＬＣ２８Ａ３を含み；
（２９）促進性ヌクレオシド輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ２９Ａ１、ＳＬＣ２９Ａ２、ＳＬＣ２９Ａ３、およびＳＬＣ２９Ａ４を含み；
（３０）亜鉛排出ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ３０Ａ１、ＳＬＣ３０Ａ２、ＳＬＣ３０Ａ３、ＳＬＣ３０Ａ４、ＳＬＣ３０Ａ５、ＳＬＣ３０Ａ６、ＳＬＣ３０Ａ７、ＳＬＣ３０Ａ８、ＳＬＣ３０Ａ９、およびＳＬＣ３０Ａ１０を含み；
（３１）銅輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ３１Ａ１およびＳＬＣ３１Ａ２を含み；
（３２）小胞抑制性アミノ酸輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ３２Ａ１を含み；
（３３）アセチル−ＣｏＡ輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ３３Ａ１を含み；
（３４）ＩＩ型Ｎａ＋−リン酸共輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ３４Ａ１、ＳＬＣ３４Ａ２、およびＳＬＣ３４Ａ３を含み；
（３５）ヌクレオシド−糖輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、（ｉ）サブファミリーＡ、ＳＬＣ３５Ａ１、ＳＬＣ３５Ａ２、ＳＬＣ３５Ａ３、ＳＬＣ３５Ａ４、ＳＬＣ３５Ａ５；（ｉｉ）サブファミリーＢ、ＳＬＣ３５Ｂ１、ＳＬＣ３５Ｂ２、ＳＬＣ３５Ｂ３、ＳＬＣ３５Ｂ４；（ｉｉｉ）サブファミリーＣ、ＳＬＣ３５Ｃ１、ＳＬＣ３５Ｃ２；（ｉｖ）サブファミリーＤ、ＳＬＣ３５Ｄ１、ＳＬＣ３５Ｄ２、ＳＬＣ３５Ｄ３；（ｖ）サブファミリーＥ、ＳＬＣ３５Ｅ１、ＳＬＣ３５Ｅ２、ＳＬＣ３５Ｅ３、ＳＬＣ３５Ｅ４；（ｖｉ）サブファミリーＦ、ＳＬＣ３５Ｆ１、ＳＬＣ３５Ｆ２、ＳＬＣ３５Ｆ３、ＳＬＣ３５Ｆ４、ＳＬＣ３５Ｆ５；（ｖｉｉ）サブファミリーＧ、ＳＬＣ３５Ｇ１、ＳＬＣ３５Ｇ３、ＳＬＣ３５Ｇ４、ＳＬＣ３５Ｇ５、ＳＬＣ３５Ｇ６を含み；
（３６）プロトン共役型アミノ酸輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ３６Ａ１、ＳＬＣ３６Ａ２、ＳＬＣ３６Ａ３、およびＳＬＣ３６Ａ４を含み；
（３７）糖−リン酸／リン酸交換輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ３７Ａ１、ＳＬＣ３７Ａ２、ＳＬＣ３７Ａ３、およびＳＬＣ３７Ａ４を含み；
（３８）システムＡおよびＮナトリウム共役型中性アミノ酸輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ３８Ａ１、ＳＬＣ３８Ａ２、ＳＬＣ３８Ａ３、ＳＬＣ３８Ａ４、ＳＬＣ３８Ａ５、ＳＬＣ３８Ａ６、ＳＬＣ３８Ａ７、ＳＬＣ３８Ａ８、ＳＬＣ３８Ａ９、ＳＬＣ３８Ａ１０、およびＳＬＣ３８Ａ１１を含み；
（３９）金属イオン輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ３９Ａ１、ＳＬＣ３９Ａ２、ＳＬＣ３９Ａ３、ＳＬＣ３９Ａ４、ＳＬＣ３９Ａ５、ＳＬＣ３９Ａ６、ＳＬＣ３９Ａ７、ＳＬＣ３９Ａ８、ＳＬＣ３９Ａ９、ＳＬＣ３９Ａ１０、ＳＬＣ３９Ａ１１、ＳＬＣ３９Ａ１２、ＳＬＣ３９Ａ１３、およびＳＬＣ３９Ａ１４を含み；
（４０）側底側鉄輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ４０Ａ１を含み；
（４１）ＭｇｔＥ様マグネシウム輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ４１Ａ１、ＳＬＣ４１Ａ２、およびＳＬＣ４１Ａ３を含み；
（４２）アンモニア輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＲｈＡＧ、ＲｈＢＧおよびＲｈＣＧを含み；
（４３）Ｎａ＋依存性システムＬ様アミノ酸輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ２、およびＳＬＣ４３Ａ３を含み；
（４４）コリン様輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ４４Ａ１、ＳＬＣ４４Ａ２、ＳＬＣ４４Ａ３、ＳＬＣ４４Ａ４、およびＳＬＣ４４Ａ５を含み；
（４５）推定上の糖輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ４５Ａ１、ＳＬＣ４５Ａ２、ＳＬＣ４５Ａ３、およびＳＬＣ４５Ａ４を含み；
（４６）葉酸輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ４６Ａ１、ＳＬＣ４６Ａ２、およびＳＬＣ４６Ａ３を含み；
（４７）多剤および毒素排出ファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ４７Ａ１およびＳＬＣ４７Ａ２を含み；
（４８）ヘム輸送体ファミリーであって、非限定的な例は、ＨＣＰ−１を含み；
（４９）主要促進因子の輸送体スーパーファミリーであって、非限定的な例は、ＭＦＳＤ５およびＭＦＳＤ１０を含み；
（５０）糖排出輸送体のＳＷＥＥＴファミリーであって、非限定的な例は、ＳＬＣ５０Ａ１を含み；
（５１）ステロイド由来の分子の輸送体であって、非限定的な例は、ＯＳＴαおよびＯＳＴβを含み；
（５２）リボフラビン輸送体ファミリーＲＦＶＴ／ＳＬＣ５２であって、非限定的な例は、ＳＬＣ５２Ａ１、ＳＬＣ５２Ａ２、およびＳＬＣ５２Ａ３を含む。
【０２２３】
発現が困難な標的タンパク質：
特定の態様では、抗体を作製するための従来の方法、例えば、精製された組換え体タンパク質により動物を免疫化することは、発現が困難な標的タンパク質について効果的ではない場合がある。多くの要因が、過剰発現／精製をさせないタンパク質の宿主産生細胞における細胞毒性、本質的に不十分な生物物理学的特性（例えば、サイズ、溶解性、コンフォメーション、翻訳後修飾（糖鎖付加など）などの、発現の問題に寄与し得る。発現が困難なタンパク質の特徴の非限定的な例は、大きなタンパク質（例えば、分子量≧１５０ｋＤａを有するタンパク質）、膜貫通タンパク質、特有な翻訳後修飾を有するタンパク質または溶解性の低いタンパク質、不安定なタンパク質、シグナルペプチドを含有しない分泌タンパク質、膜結合タンパク質、天然変性タンパク質、および半減期の短いタンパク質を含むが、これらに限定されない。
【０２２４】
本明細書で提供される方法における使用のための、発現が困難な場合のある、可溶性標的タンパク質などの標的タンパク質の非限定的な例は、ＡＤＡＭＴＳ７、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＧＰＴＬ８、ＬＰＬ、ＧＤＦ１５、ガレクチン−１、ガレクチン−２、ガレクチン−３、マトリックスｇｌａタンパク質（ＭＧＰ）、ＰＲＮＰ、ＤＧＡＴ１、ＧＰＡＴ３、ＤＭＣ１、ＢＬＭ、およびＢＲＣＡ２を含む。
【０２２５】
発現が困難なタンパク質の特徴は、当技術分野で記述されている方法、例えば、溶解性評価法（例えば、動的光散乱法、液体クロマトグラフィー質量分析法）、安定性評価法（例えば、示差走査蛍光定量法、示差走査熱量測定法、円偏光二色性）、ＮＭＲ、およびクロマトグラフィーを用いて評価することができる。ある種の態様では、発現が困難なタンパク質は、例えば、室温または４℃の溶液において１週間超、数週間超、１ヶ月超、数ヶ月超（例えば、３ヶ月、４ヶ月もしくは５ヶ月）、もしくは６ヶ月超または１年の期間保存される場合に、より凝集（例えば、少なくとも５％の凝集、少なくとも１０％の凝集、少なくとも２０％の凝集、少なくとも３０％の凝集、少なくとも４０％の凝集、少なくとも５０％の凝集、または少なくとも６０％の凝集）しやすくなり得る。
【０２２６】
特定の態様では、発現が困難なタンパク質は正電荷を有する。ある種の態様では、発現が困難なタンパク質は負電荷を有する。ある種の態様では、発現が困難なタンパク質は疎水性である。
【０２２７】
ある種の態様では、発現が困難なタンパク質は、短い半減期、例えば、２４時間未満、２０時間未満、１５時間未満、１２時間未満、１０時間未満、８時間未満、６時間未満、４時間未満、２時間未満、または１時間未満の半減期を有する。
【０２２８】
ある種の実施形態では、本明細書に記載の標的タンパク質は、正に荷電したタンパク質、負に荷電したタンパク質、疎水性タンパク質、および糖タンパク質を含む。
【０２２９】
ある種の実施形態では、本明細書に記載の標的タンパク質は、分泌性酵素および膜結合酵素などの酵素を含む。
【０２３０】
ＩＩ．カチオン性リポソーム
従来技術において知られるカチオン性脂質のいずれかを、特許請求された発明の実施に際して採用してもよい。例えば、Ｆｅｌｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８４：７４１３−７４１７（１９８７））；Ｆｅｌｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｆｏｃｕｓ  １１：２１−２５（１９８９））；Ｆｅｌｇｎｅｒ（“Ｃａｔｉｏｎｉｃ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標）  Ｒｅａｇｅｎｔ，”ｉｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｖｏｌ．７，Ｍｕｒｒａｙ，Ｅ．Ｊ．，Ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，ｐｐ．８１−８９（１９９１））；国際公開第９１／１７４２４号パンフレット；国際公開第９１／１６０２４号パンフレット；米国特許第４，８９７，３５５号明細書；米国特許第４，９４６，７８７号明細書；米国特許第５，０４９，３８６号明細書；米国特許第５，２０８，０３６号明細書；Ｂｅｈｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：６９８２−６９８６（１９８９）；ＥＰＯ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ０  ３９４  １１１）；Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１７９：２８０−２８５（１９９１））；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１６５：８−１４（１９９１））；およびＧｅｂｅｙｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．（共有の米国特許出願第０７／９３７，５０８号明細書；１９９２年８月２８日出願）を参照されたい。これらの内容は参照により全面的に組み込まれる。
【０２３１】
本明細書で提供される方法および組成物において使用することができる脂質（例えば、カチオン性脂質、中性脂質、ヘルパー脂質、およびステルス脂質）の非限定的な例としては、国際公開第２０１６／０３７０５３号パンフレット、国際公開第２０１６／０１０８４０号パンフレット、国際公開第２０１５／０９５３４６号パンフレット、国際公開第２０１５／０９５３４０号パンフレット、国際公開第２０１６／０３７０５３号パンフレット、国際公開第２０１４／１３６０８６号パンフレット、および国際公開第２０１１／０７６８０７号パンフレットに記載のものを含み、各々は、参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる。ある特定の態様では、本明細書に記載の方法に適したカチオン性脂質は、以下の化学構造を有するリピドＡ、リピドＢおよびリピドＣを含む（これらは、国際公開第２０１５／０９５３４６号パンフレットおよび国際公開第２０１５／０９５３４０号パンフレットにおいてさらに詳細に記載されている）。
【化１】
2019528312.tif 000003
【０２３２】
ある種の態様では、本明細書に記載の組成物および方法のためのカチオン性脂質としては、Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）、１，２−ジオレオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＤＡＰ）、Ｎ−（１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ジオレオイルカルバミル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＯＣＤＡＰ）、１，２−ジリネオイル−３−ジメチルアンモニウム−プロパン（ＤＬＩＮＤＡＰ）、ジラウリル（Ｃ１２：０）トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＬＴＡＰ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ＤＣ−Ｃｈｏｌ、ジオレオイルオキシ−Ｎ−［２−スペルミンカルボキサミド）エチル｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、３−ジメチルアミノ−２−（コレスト−５−エン−３−β−オキシブタン−４−オキシ）−１−（シス，シス−９，１２−オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣＬｉｎＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ジオレイルオキシ）プロピルアミン（ＤＯＤＭＡ）、２−［５’−（コレスト−５−エン−３［β］−オキシ）−３’−オキサペントキシ）−３−ジメチル−１−（シス，シス−９’，１２’−オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣｐＬｉｎＤＭＡ）およびＮ，Ｎ−ジメチル−３，４−ジオレイルオキシベンジルアミン（ＤＭＯＢＡ）、ならびに１，２−Ｎ，Ｎ’−ジオレイルカルバミル−３−ジメチルアミノプロパン（ＤＯｃａｒｂＤＡＰ）が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、本明細書で提供される組成物および方法のためのカチオン性脂質は、ＤＯＴＡＰまたはＤＬＴＡＰである。
【０２３３】
特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物および方法のためのカチオン性脂質は、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）を含む。ＤＯＴＭＡ単独で、またはジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）との１：１の配合において、標準的な手法を用いてリポソームに製剤化することができる。ＤＯＴＭＡ：ＤＯＰＥ（１：１）製剤は、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）（ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ：Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍｄ．）の名称で販売されている。特定の実施形態では、市販されているカチオン性脂質は、１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−３−（トリメチルアンモニア）プロパン（ＤＯＴＡＰ）であり、これは、オレオイル部分がプロピルアミンにエーテル結合ではなくエステル結合を介して結合しているという点でＤＯＴＭＡとは異なる。
【０２３４】
特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物および方法のためのカチオン性脂質の関連する基は、トリメチルアンモニウム基のメチル基の１つがヒドロキシエチル基によって置換されているという点でＤＯＴＭＡおよびＤＯＴＡＰと異なる。この種の化合物は、ホスホリパーゼＡのＲｏｓｅｎｔｈａｌ阻害剤（Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ  ｅｔ  ａｌ．上記）に類似しており、これは、プロピルアミンコアに結合したステアロイルエステルを有する。Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ阻害剤（ＲＩ）のジオレオイル類似体は、脂肪酸部分のプロピルアミンコアへの結合に依存して、ＤＯＲＩエーテルおよびＤＯＲＩエステルと、一般に略記される。ヒドロキシ基が、さらなる官能基化のための部位として、例えば、カルボキシスペルミンへのエステル化によって、使用され得る。
【０２３５】
ある種の実施形態では、本明細書に記載の組成物および方法のためのカチオン性脂質の別のクラスは、２種の脂質に結合したカルボキシスペルミンを含み、５−カルボキシルスペルミルグリシンオクタデシルアミド（ＤＯＧＳ）をもたらす。ＤＯＧＳは、ＴＲＡＮＳＦＥＣＴＡＭ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）として商業的に利用可能である。
【０２３６】
既知化合物の別のクラスは、Ｂｅｈｒら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：６９８２−６９８６（１９８９）；ＥＰＯ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ０  ３９４  １１１）によって記載されており、この中で、カルボキシスペルミンは２種の脂質に結合されており、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン５−カルボキシスペルミルアミド（ＤＤＰＥＳ）をもたらす。
【０２３７】
特定の態様では、本明細書に記載の組成物および方法のための別のカチオン性脂質は、ＤＯＰＥと組み合わされて合成され、リポソームに製剤化されたコレステロール誘導体（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）である。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物および方法のためのカチオン性脂質は、リポポリリジンであり、これはポリリジンをＤＯＰＥに結合することにより形成される。
【０２３８】
本明細書で提供される組成物および方法のためのカチオン性脂質のさらなる非限定的な例は、以下および国際公開第２０１５／０９５３４６号パンフレットに記載のものを含む：
２−（１０−ドデシル−３−エチル−８，１４−ジオキソ−７，９，１３−トリオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（９−ドデシル−２−メチル−７，１３−ジオキソ−６，８，１２−トリオキサ−２−アザヘプタデカン−１７−イル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（９−ドデシル−２−メチル−７，１３−ジオキソ−６，８，１２−トリオキサ−２−アザペンタデカン−１５−イル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（１０−ドデシル−３−エチル−８，１４−ジオキソ−７，９，１３−トリオキサ−３−アザヘキサデカン−１６−イル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（８−ドデシル−２−メチル−６，１２−ジオキソ−５，７，１１−トリオキサ−２−アザヘプタデカン−１７−イル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（１０−ドデシル−３−エチル−８，１４−ジオキソ−７，９，１３−トリオキサ−３−アザノナデカン−１９−イル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（９−ドデシル−２−メチル−７，１３−ジオキソ−６，８，１２−トリオキサ−２−アザオクタデカン−１８−イル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（８−ドデシル−２−メチル−６，１２−ジオキソ−５，７，１１−トリオキサ−２−アザオクタデカン−１８−イル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（１０−ドデシル−３−エチル−８，１４−ジオキソ−７，９，１３−トリオキサ−３−アザイコサン−２０−イル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（９−ドデシル−２−メチル−７，１３−ジオキソ−６，８，１２−トリオキサ−２−アザノナデカン−１９−イル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル４，４−ビス（オクチルオキシ）ブタノアート；
３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル４，４−ビス（（２−エチルヘキシル）オキシ）ブタノアート；
３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル４，４−ビス（（２−プロピルペンチル）オキシ）ブタノアート；
３−（（（３−（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル４，４−ビス（（２−プロピルペンチル）オキシ）ブタノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル４，４−ビス（（２−プロピルペンチル）オキシ）ブタノアート；
３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノアート；
３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６−ビス（ヘキシルオキシ）ヘキサノアート；
３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６−ビス（（２−エチルヘキシル）オキシ）ヘキサノアート；
３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル８，８−ビス（ヘキシルオキシ）オクタノアート；
３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル８，８−ジブトキシオクタノアート；
３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル８，８−ビス（（２−プロピルペンチル）オキシ）オクタノアート；
３−（（（３−（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル８，８−ビス（（２−プロピルペンチル）オキシ）オクタノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル８，８−ビス（（２−プロピルペンチル）オキシ）オクタノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル３−オクチルウンデカノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル３−オクチルウンデカ−２−エノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル７−ヘキシルトリデカ−６−エノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル９−ペンチルテトラデカノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル９−ペンチルテトラデカ−８−エノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル５−ヘプチルドデカノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）トリデシル５−ヘプチルドデカノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ウンデシル５−ヘプチルドデカノアート；
１，３−ビス（オクタノイルオキシ）プロパン−２−イル（３−（（（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル）サクシナート；
１，３−ビス（オクタノイルオキシ）プロパン−２−イル（３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル）サクシナート；
１−（３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル）１０−オクチルデカンジオアート；
１−（３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル）１０−オクチルデカンジオアート；
１−（３−（（（３−（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル）１０−オクチルデカンジオアート；
１−（３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル）１０−（２−エチルヘキシル）デカンジオアート；
１−（３−（（（３−（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル）１０−（２−エチルヘキシル）デカンジオアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル１０−（オクタノイルオキシ）デカノアート；
８−ドデシル−２−メチル−６，１２−ジオキソ−５，７，１１−トリオキサ−２−アザノナデカン−１９−イルデカノアート；
３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル１０−（オクタノイルオキシ）デカノアート；
３−（（（３−（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル１０−（オクタノイルオキシ）デカノアート；
（９Ｚ，１２Ｚ）−３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシルオクタデカ−９，１２−ジエノアート；
（９Ｚ，１２Ｚ）−３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシルオクタデカ−９，１２−ジエノアート；
（９Ｚ，１２Ｚ）−３−（（（３−（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシルオクタデカ−９，１２−ジエノアート；
（９Ｚ，１２Ｚ）−３−（（（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシルオクタデカ−９，１２−ジエノアート；
１−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエノイルオキシ）ペンタデカン−３−イル１，４−ジメチルピペリジン−４−カルボキシラート；
２−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）テトラデシル４，４−ビス（（２−エチルヘキシル）オキシ）ブタノアート；
（９Ｚ，１２Ｚ）−（１２Ｚ，１５Ｚ）−３−（（３−（ジメチルアミノ）プロパノイル）オキシ）ヘンイコサ−１２，１５−ジエン−１−イルオクタデカ−９，１２−ジエノアート；
（１２Ｚ，１５Ｚ）−３−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘンイコサ−１２，１５−ジエン−１−イル３−オクチルウンデカノアート；
（１２Ｚ，１５Ｚ）−３−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘンイコサ−１２，１５−ジエン−１−イル５−ヘプチルドデカノアート；
（１２Ｚ，１５Ｚ）−３−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘンイコサ−１２，１５−ジエン−１−イル７−ヘキシルトリデカノアート；
（１２Ｚ，１５Ｚ）−３−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘンイコサ−１２，１５−ジエン−１−イル９−ペンチルテトラデカノアート；
（１２Ｚ，１５Ｚ）−１−（（（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ）カルボニル）オキシ）ヘンイコサ−１２，１５−ジエン−３−イル３−（ジメチルアミノ）プロパノアート；
（１３Ｚ，１６Ｚ）−４−（（（２−（ジメチルアミノ）エトキシ）カルボニル）オキシ）ドコサ−１３，１６−ジエン−１−イル２，２−ビス（ヘプチルオキシ）アセタート；
（１３Ｚ，１６Ｚ）−４−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ドコサ−１３，１６−ジエン−１−イル２，２−ビス（ヘプチルオキシ）アセタート；
２，２−ビス（ヘプチルオキシ）エチル３−（（３−エチル−１０−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イル）−８，１５−ジオキソ−７，９，１４−トリオキサ−３−アザヘプタデカン−１７−イル）ジスルファニル）プロパノアート；
（１３Ｚ，１６Ｚ）−４−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ドコサ−１３，１６−ジエン−１−イルヘプタデカン−９−イルサクシナート；
（９Ｚ，１２Ｚ）−２−（（（１１Ｚ，１４Ｚ）−２−（（３−（ジメチルアミノ）プロパノイル）オキシ）イコサ−１１，１４−ジエン−１−イル）オキシ）エチルオクタデカ−９，１２−ジエノアート；
（９Ｚ，１２Ｚ）−３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）−１３−（オクタノイルオキシ）トリデシルオクタデカ−９，１２−ジエノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）−１３−（オクタノイルオキシ）トリデシル３−オクチルウンデカノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）−１３−ヒドロキシトリデシル５−ヘプチルドデカノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）−１３−（オクタノイルオキシ）トリデシル５−ヘプチルドデカノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）−１３−（オクタノイルオキシ）トリデシル７−ヘキシルトリデカノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）−１３−ヒドロキシトリデシル９−ペンチルテトラデカノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）−１３−（オクタノイルオキシ）トリデシル９−ペンチルテトラデカノアート；
１−（３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）−１３−（オクタノイルオキシ）トリデシル）１０−オクチルデカンジオアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）−１３−（オクタノイルオキシ）トリデシル１０−（オクタノイルオキシ）デカノアート；
（９Ｚ，１２Ｚ）−３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）−５−オクチルトリデシルオクタデカ−９，１２−ジエノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）−５−オクチルトリデシルデカノアート；
５−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）−７−オクチルペンタデシルオクタノアート；
（９Ｚ，１２Ｚ）−５−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）−７−オクチルペンタデシルオクタデカ−９，１２−ジエノアート；
９−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）−１１−オクチルノナデシルオクタノアート；
９−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）−１１−オクチルノナデシルデカノアート；
（９Ｚ，１２Ｚ）−９−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ノナデシルオクタデカ−９，１２−ジエノアート；９−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ノナデシルヘキサノアート；
９−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ノナデシル３−オクチルウンデカノアート；
９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ノナデシルヘキサノアート；
９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ノナデシル３−オクチルウンデカノアート；
（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）−２−（（４−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルビス（オクタデカ−９，１２−ジエノアート）；
（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）−２−（（４−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルビス（オクタデカ−９，１２−ジエノアート）；
（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ，１５Ｚ，１５’Ｚ）−２−（（４−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルビス（オクタデカ−９，１２，１５−トリエノアート）；
（Ｚ）−２−（（４−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルジオレアート；
２−（（４−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルジテトラデカノアート；
２−（（４−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルジテトラデカノアート；
２−（（４−（（（３−（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルジテトラデカノアート；
２−（（４−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルジドデカノアート；
２−（（４−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルジドデカノアート；
２−（（４−（（（３−（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルジドデカノアート；
２−（（４−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルビス（デカノアート）；
２−（（４−（（（３−（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルビス（デカノアート）；
２−（（４−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（（４−（（（３−（エチル（メチル）アミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（（（１３Ｚ，１６Ｚ）−４−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ドコサ−１３，１６−ジエノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（（（１３Ｚ，１６Ｚ）−４−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ドコサ−１３，１６−ジエノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）−２−（（２−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）テトラデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルビス（オクタデカ−９，１２−ジエノアート）；
（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）−２−（（２−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ドデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルビス（オクタデカ−９，１２−ジエノアート）；
（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）−２−（（２−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）テトラデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルビス（オクタデカ−９，１２−ジエノアート）；
（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）−２−（（２−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ドデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルビス（オクタデカ−９，１２−ジエノアート）；
２−（（２−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）テトラデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
４．４−ビス（オクチルオキシ）ブチル４−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデカノアート；
４，４−ビス（オクチルオキシ）ブチル２−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ドデカノアート；
（９Ｚ，１２Ｚ）−１０−ドデシル−３−エチル−１４−（２−（（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエノイルオキシ）エチル）−８，１３−ジオキソ−７，９−ジオキサ−３，１４−ジアザヘキサデカン−１６−イルオクタデカ−９，１２−ジエノアート；
２−（（４−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）−１１−（オクタノイルオキシ）ウンデカノイル）オキシ）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）−２−（９−ドデシル−２−メチル−７，１２−ジオキソ−６，８，１３−トリオキサ−２−アザテトラデカン−１４−イル）プロパン−１，３−ジイルビス（オクタデカ−９，１２−ジエノアート）；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル４，４−ビス（オクチルオキシ）ブタノアート；
３−（（（３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノアート；
３−（（（３−（ピペラジン−１−イル）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノアート；
３−（（（４−（ジエチルアミノ）ブトキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノアート；
３−（（（３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノアート；
３−（（（（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノアート；
３−（（（３−モルホリノポロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノアート；
３−（（（２−（ジエチルアミノ）エトキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノアート；
３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６−ビス（（２−プロピルペンチル）オキシ）ヘキサノアート；
３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６−ビス（（２−プロピルペンチル）オキシ）ヘキサノアート  ＬＸＲ４２０：３−（（（３−（ジメチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル６，６−ビス（（３−エチルペンチル）オキシ）ヘキサノアート；
（２Ｒ）−１−（（６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノイル）オキシ）ペンタデカン−３−イル１−メチルピロリジン−２−カルボキシラート；
（２Ｓ）−１−（（６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノイル）オキシ）ペンタデカン−３−イル１−メチルピロリジン−２−カルボキシラート；
（２Ｒ）−１−（（６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノイル）オキシ）ペンタデカン−３−イルピロリジン−２−カルボキシラート；
１−（（６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノイル）オキシ）ペンタデカン−３−イル１，３−ジメチルピロリジン−３−カルボキシラート；
３−（（３−（１−メチルピペリジン−４−イル）プロパノイル）オキシ）ペンタデシル６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノアート；
１−（（６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノイル）オキシ）ペンタデカン−３−イル１，４−ジメチルピペリジン−４−カルボキシラート；
３−（（５−（ジエチルアミノ）ペンタノイル）オキシ）ペンタデシル６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノアート；
３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル５−（４，６−ジヘプチル−１，３−ジオキサン−２−イル）ペンタノアート；
３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ウンデシル６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノアート；
３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）トリデシル６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノアート；
（１２Ｚ，１５Ｚ）−３−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘンイコサ−１２，１５−ジエン−１−イル６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノアート；
６−（（６，６−ビス（オクチルオキシ）ヘキサノイル）オキシ）−４−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘキシルオクタノアート；
４，４−ビス（オクチルオキシ）ブチル５−（（（３−（ジエチルアミノ）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ヘプタデカノアート；
４，４−ビス（オクチルオキシ）ブチル（３−（ジエチルアミノ）プロピル）ペンタデカン−１，３−ジイルジカルボナート；
２−（５−（（４−（（１，４−ジメチルピペリジン−４−カルボニル）オキシ）ヘキサデシル）オキシ）−５−オキソペンチル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（５−（（４−（（１，３−ジメチルピロリジン−３−カルボニル）オキシ）ヘキサデシル）オキシ）−５−オキソペンチル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（５−オキソ−５−（（４−（（（Ｓ）−ピロリジン−２−カルボニル）オキシ）ヘキサデシル）オキシ）ペンチル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（５−（（４−（（（（（Ｓ）−１−メチルピロリジン−３−イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデシル）オキシ）−５−オキソペンチル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（５−（（４−（（（（（Ｒ）−１−メチルピロリジン−３−イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデシル）オキシ）−５−オキソペンチル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（５−（（４−（（（（１−エチルピペリジン−３−イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデシル）オキシ）−５−オキソペンチル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（５−（（４−（（（（１−メチルピペリジン−４−イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ヘキサデシル）オキシ）−５−オキソペンチル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（１０−ドデシル−３−エチル−８，１５−ジオキソ−７，９，１４−トリオキサ−３−アザノナデカン−１９−イル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（１１−ドデシル−３−エチル−９，１５−ジオキソ−８，１０，１４−トリオキサ−３−アザノナデカン−１９−イル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（５−（（３−（（（３−（１Ｈ−イミダゾール−イル）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル）オキシ）−５−オキソペンチル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；
２−（５−オキソ−５−（（３−（（（３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ）カルボニル）オキシ）ペンタデシル）オキシ）ペンチル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート；および２−（１２−ドデシル−３−エチル−８，１４−ジオキソ−７，９，１３−トリオキサ−３−アザオクタデカン−１８−イル）プロパン−１，３−ジイルジオクタノアート。
【０２３９】
特定の態様では、これらのカチオン性脂質化合物は、単独で、または他の脂質凝集体形成成分（ＤＯＰＥまたはコレステロールなど）との組み合わせのいずれかにおいて、リポソームまたは他の脂質凝集体への製剤化のために有用である。このような凝集体はカチオン性であり、ＤＮＡまたはＲＮＡなどのアニオン性高分子と複合体を形成することができる。
【０２４０】
本明細書に記載の脂質組成物および方法における使用に適した「中性脂質」は、例えば、種々の中性脂質、無電荷の脂質または双性イオン脂質を含む。本発明における使用に適した中性リン脂質の例は、５−ヘプタデシルベンゼン−１，３−ジオール（レゾルシノール）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＬＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＡＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、ジラウロイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、１−ミリストイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＭＰＰＣ）、１−パルミトイル−２−ミリストイルホスファチジルコリン（ＰＭＰＣ）、１−パルミトイル−２−ステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）、１，２−ジアラキドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＢＰＣ）、１−ステアロイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン（ＳＰＰＣ）、１，２−ジエイコセノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＥＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、リゾホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジリノレオイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、リゾホスファチジルエタノールアミン、およびその組み合わせを含むが、これらに限定されない。一実施形態では、中性リン脂質は、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）およびジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）からなる群から選択される。
【０２４１】
「ヘルパー脂質」は、ある程度トランスフェクション（例えば、生物学的に活性な薬剤を含むナノ粒子のトランスフェクション）を亢進する脂質である。ヘルパー脂質がトランスフェクションを亢進する機構は、例えば、粒子安定性を高めることおよび／または膜融合性を高めることを含み得る。ヘルパー脂質は、ステロイドおよびアルキルレゾルシノールを含む。本明細書に記載の組成物および方法に適したヘルパー脂質は、コレステロール、５−ヘプタデシルレゾルシノール、およびコレステロールヘミコハク酸を含むが、これらに限定されない。本明細書に記載の組成物および方法のためのヘルパー脂質の非限定的な例としては、国際公開第２０１５／０９５３４６号パンフレット、国際公開第２０１５／０９５３４０号パンフレット、国際公開第２０１６／０３７０５３号パンフレット、国際公開第２０１４／１３６０８６号パンフレット、および国際公開第２０１１／０７６８０７号パンフレットに記載のものを含み、各々は、参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる。
【０２４２】
ステルス脂質は、ナノ粒子がインビボ（例えば、血液中）に存在することができる時間を増大させる脂質である。本明細書に記載の組成物および方法に適したステルス脂質は、脂質部分に連結される疎水性頭部を有するステルス脂質を含むが、これらに限定されない。本明細書に記載の組成物および方法のためのステルス脂質の非限定的な例としては、国際公開第２０１５／０９５３４６号パンフレット、国際公開第２０１５／０９５３４０号パンフレット、国際公開第２０１６／０３７０５３号パンフレット、国際公開第２０１４／１３６０８６号パンフレット、および国際公開第２０１１／０７６８０７号パンフレットに記載のものを含み、各々は、参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる。ある種の態様では、ステルス脂質の例は、国際公開第２０１１／０７６８０７号パンフレットに記載の式（ＸＩ）化合物、および国際公開第２０１６／０１０８４０号パンフレットの表１に列記される化合物を含む。特定の態様では、本明細書に記載の脂質組成物における使用に適した他のステルス脂質、およびそのような脂質の生化学についての情報は、Ｒｏｍｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．１，２００８，ｐ．５５−７１およびＨｏｅｋｓｔｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １６６０（２００４）４１−５２において見出すことができる。
【０２４３】
一態様では、好適なステルス脂質は、ＰＥＧ（ポリ（エチレンオキシド）と称される場合もある）、ならびにポリ（オキサゾリン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（グリセロール）、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリアミノ酸およびポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］に基づくポリマー、ならびに、例えば、国際公開第２００６／００７７１２号パンフレットに開示されるさらなる好適なＰＥＧ脂質から選択される群を含む。
【０２４４】
特定の態様では、好適なステルス脂質の非限定的な例は、約Ｃ４〜約Ｃ４０飽和もしくは不飽和炭素原子を含むアルキル鎖長を独立して有するジアルキルグリセロールまたはジアルキルグリカミド基を含むものを含む、ポリエチレングリコール−ジアシルグリセロールまたはポリエチレングリコール−ジアシルグリカミド（ＰＥＧ−ＤＡＧ）コンジュゲートを含む。さらなる態様では、ジアルキルグリセロールまたはジアルキルグリカミド基はさらに、１つ以上の置換アルキル基を含むことができる。本明細書に記載のさらなる態様では、ＰＥＧコンジュゲートは、ＰＥＧ−ジラウリルグリセロール、ＰＥＧ−ジミリスチルグリセロール（ＰＥＧ−ＤＭＧ）（ＮＯＦのカタログ番号ＧＭ−０２０、東京、日本）、ＰＥＧ−ジパルミトイルグリセロール、ＰＥＧ−ジステアリルグリセロール、ＰＥＧ−ジラウリルグリカミド、ＰＥＧ−ジミリスチルグリカミド、ＰＥＧ−ジパルミトイルグリカミド、およびＰＥＧ−ジステリルグリカミド、ＰＥＧ−コレステロール（１−［８’−（コレスト−５−エン−３［β］−オキシ）カルボキサミド−３’，６’−ジオキサオクタニル］カルバモイル−［ω］−メチル−ポリ（エチレングリコール）、ＰＥＧ−ＤＭＢ（３，４−ジテトラデコキシルベンジル−［ω］−メチル−ポリ（エチレングリコール）エーテル）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓのカタログ番号８８０１５０Ｐ、Ａｌａｂａｓｔｅｒ、Ａｌａｂａｍａ、ＵＳＡ）から選択することができる。一態様では、ステルス脂質は、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１、またはＳ０３３（国際公開第２０１６／０３７０５３号パンフレット、例えば、表１に記載）である。別の態様では、ステルス脂質は、Ｓ０２４（国際公開第２０１６／０３７０５３号パンフレット、例えば、表１に記載）である。
【０２４５】
ＩＩＩ．ｍＲＮＡ分子の組成物
ある特定の実施形態では、本発明の免疫化方法のために使用されるポリヌクレオチドは、ポリリボヌクレオチドをベースにした、例えば、ｍＲＮＡをベースにしたものである。このｍＲＮＡ分子は、抗体応答が望まれる標的タンパク質の翻訳を直接にコードし、かつ促進することができなければならない。そのため、その分子はいくつかの成分を含有しなければならない。特定の態様では、第１の成分は、タンパク質、例えば、ヒト標的タンパク質またはその断片のアミノ酸配列に対応するオープンリーディングフレームである。天然のコドン配列を使用してもよく、あるいは、翻訳効率および根本的に標的のタンパク質発現レベルを上昇させるために、宿主種（マウスまたはウサギなど）に関してコドン最適化を実施してもよい。さらなる改変をオープンリーディングフレームに対して行い、タンパク質発現／輸送を亢進してもよい。分泌タンパク質または膜タンパク質については、このことは、インターロイキン２（ＩＬ−２）からの分泌シグナルなどの異種のシグナルペプチドの使用を含み得る。分泌タンパク質についての特定の例では、ｍＲＮＡ分子は、ヒトＩＬ−２またはＩｇＧカッパのシグナルペプチドなどの異種のシグナルペプチドを含んでもよい。
【０２４６】
特定の態様では、第２の成分は、コンセンサスコザック配列である。例示的なコザックＤＮＡ配列としては、ＧＣＣＡＣＣＡＴＧ（配列番号１）が提供され、ヌクレオチドＡＴＧは開始メチオニンを表す。例示的なコザックＲＮＡ配列としては、ＧＣＣＡＣＣＡＵＧ（配列番号１１）が提供され、ヌクレオチドＡＵＧは開始メチオニンを表す。コザック配列の他の非限定的な例は、ＲＮＡまたはＤＮＡのいずれかによってコードされるような：（ＧＣＣ）ＧＣＣＲＣＣＡＵＧＧ（配列番号１２）、ＡＧＮＮＡＵＧＮ（配列番号１３）、ＡＮＮＡＵＧＧ（配列番号２３）、ＡＣＣＡＵＧＧ（配列番号２４）、ＧＡＣＡＣＣＡＵＧＧ（配列番号２５）、ＧＣＣＲＣＣＡＴＧＧ（配列番号５７）、ＣＡＡＡＣＡＴＧ（配列番号５８）、ＡＡＡＡＡＡＴＧＴＣＴ（配列番号２８）、ＡＡＡＡＡＡＡＴＧＲＮＡ（配列番号２９）、ＮＴＡＡＡＡＡＴＧＲＣＴ（配列番号３０）、ＴＡＡＡＡＡＡＴＧＡＡＮ（配列番号３１）、ＧＮＣＡＡＡＡＴＧＧ（配列番号３２）、ＮＮＮＡＮＮＡＴＧＮＣ（配列番号３３）、およびＡＡＣＡＡＴＧＧＣ（配列番号３４）を含み、ここで、「Ｎ」は、任意のヌクレオチド（例えば、ＤＮＡとの関係においてはＡ、Ｇ、ＣまたはＴ、およびＲＮＡとの関係においてはＡ、Ｇ、ＣまたはＵ）を意味し、「Ｒ」は、ＡまたはＧを意味する。オープンリーディングフレームのコザック配列５’を含めることにより、真核生物宿主における翻訳が亢進されることが広く知られている。
【０２４７】
特定の態様では、第３の成分は、ｍＲＮＡの５’末端上の７−メチルグアノシンキャップである。このキャップは、真核生物の開始因子ｅｌＦ４Ｅの動員および成熟リボソームの会合に必須である。ｍＲＮＡ転写物の生成に続いて、酵素的にまたは化学的にメチルグアノシンキャップを付加することができる。
【０２４８】
特定の態様では、第４の成分は、ｍＲＮＡ転写物の３’終端上で見られるポリアデノシン（ポリＡ）テールである。ポリＡトラクトは、細胞内におけるｍＲＮＡの半減期を延ばし、効率的なリボソームの会合およびタンパク質翻訳を促進することが知られている。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物および方法のためのｍＲＮＡは、１２０ヌクレオチド（配列番号５９）のポリＡテールを含む。ある種の実施形態では、本明細書に記載の組成物および方法のためのｍＲＮＡは、６０〜１２０ヌクレオチドを有するポリＡテールを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物および方法のためのｍＲＮＡは、６０ヌクレオチド、７０ヌクレオチド、８０ヌクレオチド、９０ヌクレオチド、１００ヌクレオチド、１１０ヌクレオチド、または１２０ヌクレオチドのポリＡテールを含む。ポリＡトラクトの包含は、インビトロ転写を介して、またはポリ（Ａ）ポリメラーゼを用いた酵素的ポリアデニル化によってなされ得る。
【０２４９】
特定の態様では、ｍＲＮＡ分子の第５の成分は、５’−および３’−非翻訳領域（ＵＴＲ）の包含である。特定の実施形態では、５’ＵＴＲはタバコエッチ病ウイルス（Ｔｏｂａｃｃｏ  ｅｔｃｈ  ｖｉｒｕｓ）に由来し、３’ＵＴＲはヒトβ−グロビンで見られる３’ＵＴＲのタンデムリピートである。ＵＴＲの存在により、ｍＲＮＡの翻訳を亢進し、かつ細胞内でその半減期を増大させることができることは広く受け入れられている（例えば、Ｒ．Ｌ．ＴａｎｇｕａｙおよびＤ．Ｒ．  Ｇａｌｌｉｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １９９６  ｖｏｌ  １６  ｎｏ１  ｐｐ  １４６−１５６を参照のこと）。
【０２５０】
十分な量のそのようなＲＮＡ分子は、インビトロ転写と、それに続くＲＮＡの精製により得てもよい。ＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを用いてクローン化されたＤＮＡ配列をインビトロで転写する手法は、当技術分野でよく知られている（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９を参照のこと）。ウラシル、グアニン、シトシン、アデニン、プソイドウラシルなどの天然に存在するリボヌクレオチド、または修飾されたリボヌクレオチドのいずれも、それらがなおも適切なコドン認識およびタンパク質翻訳に対応する限り、ｍＲＮＡ合成に使用してもよい。本発明では、ｍＲＮＡ合成のためにグアニン、シトシン、アデニン、およびプソイドウラシルを使用した。特定の態様では、ウラシルの代わりにプソイドウラシルを使用することにより、ＢｉｏＡｎａｌｙｚｅｒ（後述される）上での品質管理評価中にｍＲＮＡサイズのより正確な見積もりが可能になる。
【０２５１】
ＩＶ．脂質／ポリヌクレオチド複合体の使用
本開示によれば、特定の態様では、脂質／ポリヌクレオチド複合体を使用して、インビボトランスフェクションを行う。トランスフェクトされた細胞は、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡなどのポリリボヌクレオチド）によってコードされたタンパク質を発現し、外来タンパク質を、例えば、細胞表面上に発現または提示し得る。その結果、宿主動物（例えば、非ヒト宿主動物）は、外来タンパク質、すなわち免疫原に対する免疫応答を開始する。
【０２５２】
合成ｍＲＮＡは、プラスミドＤＮＡ鋳型、ｒＮＴＰおよびＴ７  ＲＮＡポリメラーゼを用いてインビトロで転写される。７−メチルグアノシンキャップ構造（Ｃａｐ１）がｍＲＮＡの５’末端に酵素的に付加されて、効率的な翻訳を促進する。キャップされたｍＲＮＡは、カチオン性脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に製剤化されて、分解からｍＲＮＡを保護し、細胞質送達を亢進する。ｍＲＮＡ  ＬＮＰは、４℃で３〜４ヶ月安定であり、免疫化のための使用に対して準備が整っている。特定の態様では、カチオン性脂質−ポリヌクレオチド複合体は、カチオン性脂質溶液を同量のポリヌクレオチド溶液と混合することによって形成される。カチオン性脂質およびポリヌクレオチドは、無菌の生理学的に適合性のある任意の水性担体中に溶解することができる。特定の実施形態では、カチオン性脂質およびポリヌクレオチドは、無菌の生理食塩水（１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）中に溶解される。溶液は、周囲温度で混合される。ある種の実施形態では、溶液は２５℃で混合される。混合後、カチオン性脂質−ポリヌクレオチド複合体は、例えば、１５〜４５分間、室温でインキュベートされる。
【０２５３】
本明細書記載の方法の脂質／ポリヌクレオチド複合体の投与は、非経口、静脈内、筋肉内、皮下、鼻腔内、または任意の他の好適な手段によるものであり得る。マウスでは、ｍＲＮＡ  ＬＮＰの静脈内投与は、皮下送達よりも優位であることが判明した（図１Ｂを参照のこと）。投与される具体的な用量は、年齢、体重、もしあれば、目下の治療の種類、および発現されることになる免疫原の性質に依存し得る。初回用量は、ブースター用量を後に伴って、免疫原性応答を亢進し得る。ｍＲＮＡ  ＬＮＰによる免疫化はまた、他の免疫原形態により交替され得る（図１Ｃを参照のこと）。
【０２５４】
免疫化は、宿主において免疫原特異的な抗体の産生を引き起こすため、本開示はまた、免疫原特異的な抗体を作製する方法に関する。ポリクローナル抗体は、当技術分野においてよく知られた方法を用いて宿主動物から単離され、かつ精製され得る（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８を参照のこと）。
【０２５５】
本開示はまた、モノクローナル抗体を作製するためのｍＲＮＡ  ＬＮＰに基づく免疫化の使用に関する。本方法によれば、非ヒト動物（例えば、マウス）が脂質／ｍＲＮＡ複合体を注射され、抗体産生細胞（例えば、Ｂリンパ球または脾細胞）が、免疫化した動物（例えば、マウス）から単離される。モノクローナル抗体は、当技術分野で知られている任意の方法、例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７（１９７５）（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，上記）を参照のこと）の方法に従って作製される。要約すると、モノクローナル抗体は、動物（例えば、マウス）をカチオン性脂質−ｍＲＮＡ複合体で免疫化し、血清試料を取り出すことによって抗体産生の存在を確認し、脾臓を取り出してＢリンパ球を入手し、Ｂリンパ球を骨髄腫細胞と融合してハイブリドーマを作製し、ハイブリドーマをクローニングし、抗免疫原抗体を産生する陽性クローンを選択し、抗免疫原抗体産生クローンを培養し、そして、抗免疫原抗体をハイブリドーマ培養液から単離することによって作製することができる。
【０２５６】
Ｖ．ＲＮＡの修飾
本明細書に記載の組成物および方法のためのｍＲＮＡなどのポリリボヌクレオチドは、エンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼによる迅速な分解を予防し、かつＲＮＡに対する細胞の自然免疫またはインターフェロン応答を回避または低減するための修飾を含むことができる。修飾には、例えば、（ａ）末端の修飾、例えば、５’末端修飾（リン酸化、脱リン酸化、コンジュゲーション、逆方向結合など）、３’末端修飾（コンジュゲーション、ＤＮＡヌクレオチド、逆方向結合など）、（ｂ）塩基修飾、例えば、修飾された塩基、安定化塩基、不安定化塩基、もしくはパートナーの広範なレパートリーと塩基対合する塩基による置換、またはコンジュゲートされた塩基、（ｃ）糖の修飾（例えば、２’位もしくは４’位での）または糖の置換、および（ｄ）ホスホジエステル結合の修飾または置換を含むヌクレオシド間の結合の修飾を含むが、これらに限定されない。
【０２５７】
特定の態様では、本明細書に記載のｍＲＮＡなどのポリリボヌクレオチドはさらに、５’キャップを含むことができる。本明細書に記載の態様のいくつかの実施形態では、修飾合成ｍＲＮＡは、５’−５’三リン酸結合を用いてＲＮＡ分子の５’末端に結合される修飾されたグアニンヌクレオチドを含む５’キャップを含む。用語「５’キャップ」はまた、例えば、５’ジグアノシンキャップ、メチレン−ビス（ホスホナート）部分を有する四リン酸キャップアナログ（例えば、Ｒｙｄｚｉｋ，ＡＭ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）  Ｏｒｇ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｃｈｅｍ  ７（２２）：４７６３−７６を参照のこと）、ホスホロチオアート修飾を有するジヌクレオチドキャップアナログ（例えば、Ｋｏｗａｌｓｋａ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）ＲＮＡ  １４（６）：１１１９−１１３１を参照のこと）、非架橋酸素についての硫黄置換を有するキャップアナログ（例えば、Ｇｒｕｄｚｉｅｎ−Ｎｏｇａｌｓｋａ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，（２００７）ＲＮＡ  １３（１０）：１７４５−１７５５を参照のこと）、Ｎ７−ベンジル化ジヌクレシド四リン酸アナログ（例えば、Ｇｒｕｄｚｉｅｎ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）ＲＮＡ  １０（９）：１４７９−１４８７を参照のこと）、またはアンチリバースキャップアナログ（例えば、Ｊｅｍｉｅｌｉｔｙ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，（２００３）ＲＮＡ  ９（９）：１１０８−１１２２およびＳｔｅｐｉｎｓｋｉ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）ＲＮＡ  ７（１０）：１４８６−１４９５を参照のこと）を含む他の５’キャップアナログを包含することが意図される。１つのそのような実施形態では、５’キャップアナログは、５’ジグアノシンキャップである。いくつかの実施形態では、本発明の修飾合成ｍＲＮＡは、５’三リン酸を含まない。
【０２５８】
５’キャップは、翻訳を開始するためのｍＲＮＡのリボソームへの認識および結合に重要である。５’キャップはまた、本明細書に記載の修飾合成ｍＲＮＡを５’エキソヌクレアーゼ媒介性の分解から保護する。
【０２５９】
本明細書に記載のｍＲＮＡなどのポリリボヌクレオチドはさらに、５’および／または３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含むことができる。非翻訳領域は、開始コドン（５’）の上流、および終止コドン（３’）の下流にあるＲＮＡの領域であり、したがって、翻訳装置によって翻訳されない。非翻訳領域は、リボヌクレアーゼおよびＲＮＡ分解に関与する他のタンパク質を妨害することができるため、１つ以上の非翻訳領域によるＲＮＡ分子の修飾により、ｍＲＮＡの安定性を向上させることができる。加えて、５’および／または３’非翻訳領域によるＲＮＡの修飾は、ｍＲＮＡに対するリボソームの結合を変化させる結合タンパク質による翻訳効率を亢進させることができる。３’ＵＴＲによるＲＮＡの修飾を用いて、ＲＮＡの細胞質局在を維持することができ、それにより、細胞の細胞質において翻訳が生じることを可能にする。一実施形態では、本発明の修飾合成ｍＲＮＡは、５’または３’ＵＴＲを含まない。別の実施形態では、本発明の修飾合成ｍＲＮＡは、５’または３’ＵＴＲのいずれかを含む。別の実施形態では、本発明の修飾合成ｍＲＮＡは、５’および３’ＵＴＲの両方を含む。一実施形態では、５’および／または３’ＵＴＲは、細胞において高い安定性を有すると知られているｍＲＮＡ（例えば、マウスのα−グロビンの３’ＵＴＲ）から選択される。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、または両方は、１つ以上の修飾されたヌクレオシドを含む。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍＲＮＡなどのポリリボヌクレオチドはさらに、コザック配列を含む。「コザック配列」は、コンセンサス（ｇｃｃ）ｇｃｃＲｃｃＡＵＧＧ（配列番号１２）を有する真核生物のｍＲＮＡ上の配列を指し、ここで、Ｒは、開始コドン（ＡＵＧ）の３塩基上流のプリン（アデニンまたはグアニン）であり、開始コドンにさらなる「Ｇ」が続く。コザックコンセンサス配列がリボソームによって認識されて、ポリペプチドの翻訳が開始される。通常、開始は、転写物の５’末端の近位にある翻訳装置が直面する最初のＡＵＧコドンにおいて起こる。しかし、場合によって、このＡＵＧコドンは、リーキースキャニングと称されるプロセスにおいて迂回される場合がある。ＡＵＧコドンの近傍のコザック配列の存在は、翻訳の開始部位としてそのコドンを増強することになり、その結果、適切なポリペプチドの翻訳が起こる。さらに、開始コドンに関して曖昧さがない場合でさえ、本明細書に記載の修飾合成ｍＲＮＡへのコザック配列の付加により、より効率的な翻訳を促進することができる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の修飾合成ＲＮＡはさらに、適切な長さのポリペプチドを産生する翻訳の開始のために、所望の部位においてコザックコンセンサス配列を含む。いくつかのこのような実施形態では、コザック配列は、１つ以上の修飾されたヌクレオシドを含む。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の修飾合成ｍＲＮＡはさらに「ポリ（Ａ）テール」を含み、これは、アデニンヌクレオチドの３’ホモポリマーテールを指し、長さは変動する場合があり（例えば、少なくとも５個のアデニンヌクレオチド）、数百個のアデニンヌクレオチドに達する場合がある）。３’ポリ（Ａ）テールを含むことにより、本発明の修飾合成ｍＲＮＡを細胞中での分解から保護することができ、核外局在も促進して、翻訳効率を亢進する。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）テールは、１〜５００個のアデニンヌクレオチドを含み（配列番号６０）；他の実施形態では、ポリ（Ａ）テールは、少なくとも５個以上のアデニンヌクレオチドを含む。一実施形態では、ポリ（Ａ）テールは、１〜１５０個のアデニンヌクレオチドを含む。一実施形態では、ポリ（Ａ）テールは、６０〜１２０個のアデニンヌクレオチドを含む。別の実施形態では、ポリ（Ａ）テールは、９０〜１２０個のアデニンヌクレオチドを含む。いくつかのこのような実施形態では、ポリ（Ａ）テールは、１つ以上の修飾されたヌクレオシドを含む。
【０２６２】
以下は、本明細書で提供されるｍＲＮＡによる免疫化方法に従う産生および発現に適用できる標的タンパク質抗原の代表的な例である。ｍＲＮＡの生成およびこれによる宿主動物の免疫化は、本明細書に記載のように前記方法の概念実証を示す。
【０２６３】
Ｉ．ＲＸＦＰ１
ＲＸＦＰ１、すなわちリラキシン／インスリン様ファミリーペプチド受容体１は、ロイシンリッチ反復Ｎ末端細胞外ドメインを含有する７５７アミノ酸のクラスＡ  Ｇタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）である。系統学的に、卵胞刺激ホルモン受容体、黄体形成ホルモン受容体、および甲状腺刺激ホルモン受容体を含む同一の受容体サブファミリーの一部である。ＲＸＦＰ１の内因性のリガンドは、タンパク質ホルモンのリラキシンである。ＲＸＦＰ１およびそのリガンドは、月経ならびに妊娠および分娩と関係した生理学的応答の一部の制御において意味づけられてきた。急性非代償性心不全に罹患した患者において、第ＩＩＩ相臨床試験（ＲＥＬＡＸ−ＡＨＦ）は、入院期間中の４８時間の組換え体リラキシン注射により６ヶ月後の死亡率を有意に低減したことを示している。
【０２６４】
高レベルのＲＸＦＰ１発現を有する細胞株の確立は、細胞毒性のために困難である。多くのＧＰＣＲのように、精製された全長の組換え体タンパク質の発現もまた、技術的に手が出せない。
【０２６５】
ヒトＲＸＦＰ１のｍＲＮＡの生成のために、ＲＸＦＰ１のオープンリーディングフレームに関する天然のヒトヌクレオチド配列（例えば、アクセッション番号ＮＭ＿０２１６３４．３／ＮＰ＿０６７６４７．２）は、ＧｅｎｅＡｒｔ（登録商標）のマウス用コドン最適化アルゴリズムを用いてコドン最適化が施された（表１を参照のこと）。マウスの片寄りを基準にしたコドン配列の変更に加えて、配列は、これらが後に続くサブクローニングおよびｍＲＮＡの合成のために用いられるであろうことから、ＢａｍＨＩ、ＲｓｒＩＩおよびＢｓｐＱＩ制限酵素部位を除去するために変更された。
【０２６６】
【表１】
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【０２６７】
【表２】
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【０２６８】
【表３】
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【０２６９】
【表４】
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【０２７０】
【表５】
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【０２７１】
【表６】
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【０２７２】
【表７】
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【０２７３】
【表８】
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【０２７４】
ＩＩ．ＳＬＣ５２Ａ２
ＳＬＣ５２Ａ２（ＧＰＲ１７２Ａ）は、１０個または１１個の推定上の膜貫通ヘリックスを有すると予測される４４５アミノ酸の複数回膜貫通タンパク質である。それは、リボフラビンの細胞内取り込みを媒介することが示されており、ブタ内在性レトロウイルスサブグループＡに対する受容体であることが報告されている。ＳＬＣ５２Ａ２のある種の遺伝的変異体は、運動、感覚、および頭部ニューロン症と関連がある。
【０２７５】
ヒトＳＬＣ５２Ａ２のｍＲＮＡの生成のために、このタンパク質のオープンリーディングフレームに関する天然のヒトヌクレオチド配列（例えば、アクセッション番号ＮＭ＿００１２５３８１６．１／ＮＰ＿００１２４０７４５）は、ＧｅｎｅＡｒｔ（登録商標）のマウス用コドン最適化アルゴリズムを用いてコドン最適化が施された（表２を参照のこと）。マウスの片寄りを基準にしたコドン配列の変更に加えて、配列は、これらが後に続くサブクローニングおよびｍＲＮＡの合成のために用いられるであろうことから、ＢａｍＨＩ、ＲｓｒＩＩおよびＢｓｐＱＩ制限酵素部位を除去するために変更された。
【０２７６】
【表９】
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【０２７７】
【表１０】
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【０２７８】
【表１１】
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【０２７９】
【表１２】
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【０２８０】
【表１３】
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【０２８１】
ＩＩＩ．ＡＮＧＰＴＬ８
ＡＮＧＰＴＬ８は、脂質代謝に関与する分泌タンパク質であり、ヒト血漿においてｎｇ／ｍｌの低い濃度で見出すことができる。しかし、このタンパク質は、異種系統において、その天然の可溶性形態での発現は困難である。さらに、このタンパク質の生化学的機能は記述されておらず、したがって、組換え技術によって生成されたタンパク質の活性を測定するために使用され得るインビトロ機能アッセイがない。作製の難しさ、および抗原として使用するための組換え体ＡＮＧＰＴＬ８の品質を検証する難しさを考慮すると、このタンパク質は、モノクローナル抗体を作製するｍＲＮＡ媒介性の免疫化のための良好な候補であった。
【０２８２】
ヒトＡＮＧＰＴＬ８の全長コード配列（例えば、アクセッション番号ＮＰ＿０６１１５７）を、ヒト細胞での発現のためにコドン最適化し、ならびにＴ７ポリメラーゼによるｍＲＮＡ転写を維持することができ、かつｍＲＮＡの安定性および翻訳可能性を助ける３および５’非翻訳領域の両方を含有するベクターにクローン化した（配列については表３を参照のこと）。ｍＲＮＡを、上述のようにインビトロで転写し、脂質ナノ粒子に被包した。
【０２８３】
【表１４】
2019528312.tif 000017
【０２８４】
【表１５】
2019528312.tif 000018
【０２８５】
【表１６】
2019528312.tif 000019
【０２８６】
【表１７】
2019528312.tif 000020
【０２８７】
ＩＶ．ＴＳＨＲ
甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）は、甲状腺の発育および甲状腺ホルモン産生に必須のＧタンパク質共役型受容体である。それはまた、グレーブス病における自己抗原でもある。ＴＳＨＲに特異的な抗体によるＴＳＨＲの遷延性の活性化は、グレーブス病の根底にある主要な原因の１つである（Ｄａｖｉｅｓ  ＴＦ（２０１５）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ；１９：８３５−４７）。
【０２８８】
ＴＳＨＲは、大きな細胞外ドメイン（ＥＣＤ）および膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）を有する。ＥＣＤは、ＴＳＨおよび多くの自己抗体の結合部位を含有する１１個のロイシンリッチ反復ドメイン（ＬＲＤ）を有する。ＴＳＨＲは、広範な翻訳後修飾を経て、ホモ二量体および多量体を形成することができる。ＴＳＨＲは、低いベースラインの構成的活性を有する。そのシグナル伝達は、Ｇｓ、Ｇｉ／ｏ、Ｇｑ／１１またはＧ１２／１３によって媒介され、乱雑である。ＴＳＨＲは、黄体形成ホルモンおよび絨毛性ゴナドトロピン受容体（ＬＨＣＧＲ）と５１％同一であり、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）と４８％同一である。
【０２８９】
正常な甲状腺では、ＴＳＨはＴＳＨＲを活性化し、甲状腺細胞の増殖および甲状腺ホルモンの放出を調節している。グレーブス病では、患者においてアゴニストの自己抗体が産生される。それらがＴＳＨに取って代わり、調節されていない様式で受容体を過剰に活性化する。すなわち、甲状腺が肥大し、Ｔ３およびＴ４のレベルが上昇する。
【０２９０】
ヒトＴＳＨＲの全長コード配列（例えば、タンパク質アクセッション番号ＮＰ＿０００３６０．２）を、ヒト細胞での発現のためにコドン最適化し、ならびにＴ７ポリメラーゼによるｍＲＮＡ転写を維持することができ、かつｍＲＮＡの安定性および翻訳可能性を助ける３および５’非翻訳領域の両方を含有するベクターにクローン化した（配列については表４を参照のこと）。ｍＲＮＡを、上述のようにインビトロで転写し、脂質ナノ粒子に被包した。
【０２９１】
【表１８】
2019528312.tif 000021
【０２９２】
【表１９】
2019528312.tif 000022
【０２９３】
【表２０】
2019528312.tif 000023
【０２９４】
【表２１】
2019528312.tif 000024
【０２９５】
【表２２】
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【０２９６】
【表２３】
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【０２９７】
【表２４】
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【０２９８】
Ｖ．ＡＰＪ
ＡＰＪ、アンジオテンシン様１受容体、アンジオテンシンＩＩ様１受容体などとも称されるアペリン受容体は、内因性リガンドのアペリンに対して同族である以前はオーファンであったＧタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）である。アペリン／ＡＰＪ経路は、心血管系において広範にわたって発現され、アペリンは、前臨床モデルにおいて、有益な主要な心血管効果を示している。ヒトにおける急性アペリン投与は、末梢および冠動脈の血管拡張を引き起こし、心拍出量を増加させる（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２０１０；１２１：１８１８−１８２７）。その結果、ＡＰＪのアゴニズムは、心不全患者にとっての重要な治療標的として台頭している。アペリン受容体ＡＰＪの活性化は、現行の療法の傾向を伴わずに、心収縮性を増大させ、心臓保護をもたらすと考えられている。
【０２９９】
ＡＰＪは、心臓だけでなく血管、腎臓、肝臓、脂肪組織および脳を含む他の臓器ならびに組織において広範に分布している。
【０３００】
ヒトＡＰＪの全長コード配列（例えば、タンパク質アクセッション番号ＮＰ＿００５１５２．１）を、ヒト細胞での発現のためにコドン最適化し、ならびにＴ７ポリメラーゼによるｍＲＮＡ転写を維持することができ、かつｍＲＮＡの安定性および翻訳可能性を助ける３および５’非翻訳領域の両方を含有するベクターにクローン化した（配列については表５を参照のこと）。ｍＲＮＡを、上述のようにインビトロで転写し、脂質ナノ粒子に被包した。
【０３０１】
【表２５】
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【０３０２】
【表２６】
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【０３０３】
【表２７】
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【０３０４】
【表２８】
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【０３０５】
【表２９】
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【０３０６】
【表３０】
2019528312.tif 000033
【０３０７】
ＶＩ．ＧＰ１３０
糖タンパク質１３０（ＧＰ１３０）は、９１８アミノ酸を含有するタンパク質であり、Ｉ型１回膜貫通型タンパク質受容体ファミリーのメンバーである。それは、インターロイキン６、インターロイキン１１、毛様体神経栄養因子、白血病抑制因子、およびオンコスタチンＭを含む多くのサイトカインによって用いられるシグナル伝達複合体の中心的な成分である。インターロイキン６（ＩＬ６）の場合、ＧＰ１３０はＩＬ６／ＩＬ６Ｒ（α鎖）複合体に結合して、高親和性ＩＬ６結合部位の形成およびシグナル伝達の開始を引き起こす。ＧＰ１３０は、５つのＩＩＩ型フィブロネクチンドメインおよび１つのＩｇ様Ｃ２タイプドメインを含有する。
【０３０８】
ヒトＧＰ１３０の全長コード配列（例えば、タンパク質アクセッション番号ＮＰ＿００２１７５．２またはＡＡＩ１７４０５）を、ヒト細胞での発現のためにコドン最適化し、ならびにＴ７ポリメラーゼによるｍＲＮＡ転写を維持することができ、かつｍＲＮＡの安定性および翻訳可能性を助ける３および５’非翻訳領域の両方を含有するベクターにクローン化した（配列については表６を参照のこと）。ｍＲＮＡを、上述のようにインビトロで転写し、脂質ナノ粒子に被包した。
【０３０９】
【表３１】
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【０３１０】
【表３２】
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【０３１１】
【表３３】
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【０３１２】
【表３４】
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【０３１３】
【表３５】
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【０３１４】
【表３６】
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【０３１５】
【表３７】
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【０３１６】
【表３８】
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【０３１７】
ＶＩＩ．ガレクチン−３
ガレクチン−３は、２６ｋＤａのタンパク質であり、β−ガラクトシド−結合レクチンファミリーのメンバーである。それは、コラーゲン様Ｎ末端ドメイン、およびガレクチン−３の糖を結びつける能力を与えるＣ末端糖認識ドメインを含有する。そのＮ末端ドメインを介して、ガレクチン−３はより高次のオリゴマーを形成することができる。ガレクチン−３は、細胞接着、分化、転移、胚形成、炎症、および線維形成において役割を果たすことが示唆されている。
【０３１８】
ヒトガレクチン−３の全長コード配列（例えば、タンパク質アクセッション番号ＮＰ＿００２２９７）を、ヒト細胞での発現のためにコドン最適化し、ならびにＴ７ポリメラーゼによるｍＲＮＡ転写を維持することができ、かつｍＲＮＡの安定性および翻訳可能性を助ける３および５’非翻訳領域の両方を含有するベクターにクローン化した（配列については表７を参照のこと）。ｍＲＮＡを、上述のようにインビトロで転写し、脂質ナノ粒子に被包した。
【０３１９】
【表３９】
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【０３２０】
【表４０】
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【０３２１】
【表４１】
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【０３２２】
【表４２】
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【０３２３】
Ｖ．被包性核酸ナノ粒子
用語「脂質ナノ粒子」または「ＬＮＰ」もしくは「ＬＮＰｓ」は、分子間力によって互いに物理的に会合（例えば、共有結合的にまたは非共有結合的に）した複数の（すなわち、２つ以上の）脂質分子を含む粒子を指す。脂質ナノ粒子は、例えば、ミクロスフィア（単層および多層の小胞を含む、例えば、リポソーム）、エマルション中で分散した相、ミセル、または懸濁液中の内相であってもよい。
【０３２４】
用語「脂質ナノ粒子ホスト」は、分子間力／静電相互作用によって互いに物理的に会合して、ｍＲＮＡなどの１つ以上の核酸分子を被包する複数の脂質分子を指す。
【０３２５】
ある種の実施形態は、薬学的に許容される担体および被包性核酸ナノ粒子を含む、被包性核酸ナノ粒子組成物を提供する。被包性核酸ナノ粒子は、脂質ナノ粒子ホスト、および核酸、例えば、脂質ナノ粒子ホスト内に被包されるｍＲＮＡなどのポリリボヌクレオチドを含む。
【０３２６】
用語「薬学的に許容される担体」は、本明細書で使用する場合、非毒性の不活性希釈剤を意味する。薬学的に許容される担体として機能することができる材料は、パイロジェンフリー水、脱イオン水、等張生理食塩水、リンガー液、リン酸緩衝液を含むが、これらに限定されない。好ましい実施態様では、被包性核酸ナノ粒子は、約４０〜約７０ｎｍの平均サイズ、および動的光散乱法、例えば、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳを使用して決定される約０．１未満の多分散指数を有する。脂質ナノ粒子ホストは、本明細書の他の箇所に記載の分解性のカチオン性脂質、脂質付加されたポリエチレングリコール、コレステロール、および１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン成分を含む。
【０３２７】
本明細書で提供されるのは、カチオン性脂質および別の脂質成分を含む、被包性核酸ナノ粒子組成物を作製する方法である。別の実施形態は、カチオン性脂質およびヘルパー脂質、例えば、コレステロールを用いる方法を提供する。別の実施形態は、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、および中性脂質、例えば、ＤＳＰＣを用いる方法を提供する。本発明の別の実施形態は、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、中性脂質、例えば、ＤＳＰＣ、およびステルス脂質、例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１またはＳ０３３を用いる方法を提供する。本発明の別の実施形態は、脂質ナノ粒子ホスト中に核酸を被包する方法を提供し、ナノ粒子は、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、中性脂質、例えば、ＤＳＰＣ、ステルス脂質、例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１またはＳ０３３を含み、核酸は、例えば、ＲＮＡまたはＤＮＡである。本発明の別の実施形態は、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、中性脂質、例えば、ＤＳＰＣ、およびステルス脂質、例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１またはＳ０３３を用いる方法を提供し、核酸は、例えば、ｍＲＮＡ、ｍＲＮＡまたはＤＮＡである。
【０３２８】
いくつかの実施形態では、脂質溶液／流は、カチオン性脂質化合物、ヘルパー脂質（コレステロール）、任意選択の中性脂質（ＤＳＰＣ）、およびステルス脂質（例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、またはＳ０３１）を含有する。製剤が４種の脂質成分を含有する場合、脂質のモル比は、カチオン性脂質について４０〜６０を目標にして２０〜７０モルパーセントの範囲であってもよく、ヘルパー脂質のモルパーセントは３０〜５０を目標にして２０〜７０の範囲にわたり、中性脂質のモルパーセントは１０〜３０の範囲にわたり、ＰＥＧ脂質のモルパーセントは２〜５を目標にして１〜６の範囲を有する。
【０３２９】
いくつかの実施形態では、脂質溶液／流は、３０〜６０％の式（ＩＩＩ）の化合物、３０〜６０％のコレステロール／５〜１０％のＤＳＰＣ、および１〜５％のＰＥＧ−ＤＭＧ、Ｓ０１０、Ｓ０１１またはＳ０２４を含有する。
【０３３０】
本開示の別の実施形態は、約４０〜５５のカチオン性脂質／約４０〜５５のヘルパー脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質およびヘルパー脂質、例えば、コレステロールを用いて、脂質ナノ粒子ホスト中に核酸を被包する方法を提供する。別の実施形態は、約４０〜５５のカチオン性脂質／約４０〜５５のヘルパー脂質／約５〜１５の中性脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、および中性脂質、例えば、ＤＳＰＣを使用する方法を提供する。別の実施形態は、約４０〜５５のカチオン性脂質／約４０〜５５のヘルパー脂質／約５〜１５の中性脂質／約１〜１０のステルス脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、中性脂質、例えば、ＤＳＰＣ、およびステルス脂質、例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１またはＳ０３３を使用する方法を提供する。
【０３３１】
本開示の別の実施形態は、約４０〜５０のカチオン性脂質／約４０〜５０のヘルパー脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質およびヘルパー脂質、例えば、コレステロールを用いて、脂質ナノ粒子ホスト中に核酸を被包する方法を提供する。別の実施形態は、約４０〜５０のカチオン性脂質／約４０〜５０のヘルパー脂質／約５〜１５の中性脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、および中性脂質、例えば、ＤＳＰＣを使用する方法を提供する。別の実施形態は、約４０〜５０のカチオン性脂質／約４０〜５０のヘルパー脂質／約５〜１５の中性脂質／約１〜５のステルス脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、中性脂質、例えば、ＤＳＰＣ、およびステルス脂質、例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１またはＳ０３３を使用する方法を提供する。
【０３３２】
本開示の別の実施形態は、約４３〜４７のカチオン性脂質／約４３〜４７のヘルパー脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質およびヘルパー脂質、例えば、コレステロールを用いて、脂質ナノ粒子ホスト中に核酸を被包する方法を提供する。別の実施形態は、約４３〜４７のカチオン性脂質／約４３〜４７のヘルパー脂質／約７〜１２の中性脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、および中性脂質、例えば、ＤＳＰＣを使用する方法を提供する。別の実施形態は、約４３〜４７のカチオン性脂質／約４３〜４７のヘルパー脂質／約７〜１２の中性脂質／約１〜４のステルス脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、中性脂質、例えば、ＤＳＰＣ、およびステルス脂質、例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１またはＳ０３３を使用する方法を提供する。
【０３３３】
本開示の別の実施形態は、約４５％のカチオン性脂質および約４４％のヘルパー脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質およびヘルパー脂質、例えば、コレステロールを用いて、脂質ナノ粒子ホスト中に核酸を被包する方法を提供する。別の実施形態は、約４５％のカチオン性脂質、約４４％のヘルパー脂質、および約９％の中性脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、および中性脂質、例えば、ＤＳＰＣを使用する方法を提供する。別の実施形態は、約４５％のカチオン性脂質、約４４％のヘルパー脂質、約９％の中性脂質、および約２％のステルス脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、中性脂質、例えば、ＤＳＰＣ、およびステルス脂質、例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１またはＳ０３３を使用する方法を提供する。
【０３３４】
本開示の一実施形態は、カチオン性脂質および別の脂質成分を含む、被包性核酸ナノ粒子組成物を作製する方法を提供する。別の実施形態は、式（Ｉ）の化合物およびヘルパー脂質、例えば、コレステロールを用いる方法を提供する。別の実施形態は、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、および中性脂質、例えば、ＤＳＰＣを用いる方法を提供する。本開示の別の実施形態は、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、中性脂質、例えば、ＤＳＰＣ、およびステルス脂質、例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１またはＳ０３３を用いる方法を提供する。本開示の別の実施形態は、脂質ナノ粒子ホスト中に核酸を被包する方法を提供し、ナノ粒子は、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、中性脂質、例えば、ＤＳＰＣ、ステルス脂質、例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１またはＳ０３３を含み、核酸は、例えば、ＲＮＡまたはＤＮＡである。本開示の別の実施形態は、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、中性脂質、例えば、ＤＳＰＣ、およびステルス脂質、例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１またはＳ０３３を用いる方法を提供し、核酸は、例えば、ｍＲＮＡ、ｍＲＮＡまたはＤＮＡである。
【０３３５】
本開示の別の実施形態は、約４０〜５５の式（Ｉ）の化合物／約４０〜５５のヘルパー脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質およびヘルパー脂質、例えば、コレステロールを用いて、脂質ナノ粒子ホスト中に核酸を被包する方法を提供する。別の実施形態は、約４０〜５５のカチオン性脂質／約４０〜５５のヘルパー脂質／約５〜１５の中性脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、および中性脂質、例えば、ＤＳＰＣを使用する方法を提供する。別の実施形態は、約４０〜５５の式（Ｉ）の化合物／約４０〜５５のヘルパー脂質／約５〜１５の中性脂質／約１〜１０のステルス脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、中性脂質、例えば、ＤＳＰＣ、およびステルス脂質、例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１またはＳ０３３を使用する方法を提供する。
【０３３６】
本開示の別の実施形態は、約４０〜５０のカチオン性脂質／約４０〜５０のヘルパー脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質およびヘルパー脂質、例えば、コレステロールを用いて、脂質ナノ粒子ホスト中に核酸を被包する方法を提供する。別の実施形態は、約４０〜５０のカチオン性脂質／約４０〜５０のヘルパー脂質／約５〜１５の中性脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、および中性脂質、例えば、ＤＳＰＣを使用する方法を提供する。別の実施形態は、約４０〜５０のカチオン性脂質／約４０〜５０のヘルパー脂質／約５〜１５の中性脂質／約１〜５のステルス脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、中性脂質、例えば、ＤＳＰＣ、およびステルス脂質、例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１またはＳ０３３を使用する方法を提供する。
【０３３７】
本開示の別の実施形態は、約４３〜４７のカチオン性脂質／約４３〜４７のヘルパー脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質およびヘルパー脂質、例えば、コレステロールを用いて、脂質ナノ粒子ホスト中に核酸を被包する方法を提供する。別の実施形態は、約４３〜４７のカチオン性脂質／約４３〜４７のヘルパー脂質／約７〜１２の中性脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、および中性脂質、例えば、ＤＳＰＣを使用する方法を提供する。別の実施形態は、約４３〜４７のカチオン性脂質／約４３〜４７のヘルパー脂質／約７〜１２の中性脂質／約１〜４のステルス脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、中性脂質、例えば、ＤＳＰＣ、およびステルス脂質、例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１またはＳ０３３を使用する方法を提供する。
【０３３８】
本開示の別の実施形態は、約４５％のカチオン性脂質および約４４％のヘルパー脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質およびヘルパー脂質、例えば、コレステロールを用いて、脂質ナノ粒子ホスト中に核酸を被包する方法を提供する。別の実施形態は、約４５％のカチオン性脂質、約４４％のヘルパー脂質、および約９％の中性脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、および中性脂質、例えば、ＤＳＰＣを使用する方法を提供する。別の実施形態は、約４５％のカチオン性脂質、約４４％のヘルパー脂質、約９％の中性脂質、および約２％のステルス脂質の脂質モル比において、カチオン性脂質、ヘルパー脂質、例えば、コレステロール、中性脂質、例えば、ＤＳＰＣ、およびステルス脂質、例えば、Ｓ０１０、Ｓ０２４、Ｓ０２７、Ｓ０３１またはＳ０３３を使用する方法を提供する。
【０３３９】
本開示のプロセスにおける脂質：核酸（例えば、ｍＲＮＡなどのポリリボヌクレオチド）の比は、約１５〜２０：１（ｗｔ／ｗｔ）であってもよい。ある種の実施形態では、脂質：核酸の比は、約１７〜１９：１である。他の実施形態では、脂質：核酸の比は、約１８．５：１である。他の実施形態では、脂質：核酸の比は、少なくとも約３０：１、２５：１、２４：１、２３：１、２２：１、２１：１、２０：１、１９：１、１８：１、１７：１、１６：１、１５：１、１４：１、１３：１、１２：１、１１：１、または１０：１（ｗｔ／ｗｔ）である。
【０３４０】
ある種の態様では、本開示のプロセスによって作製されるナノ粒子は、平均（ａｖｅｒａｇｅ／ｍｅａｎ）直径および平均値付近のサイズ分布を有する。より狭い範囲の粒径が、より一様な分布の粒径に対応する。粒径は、インキュベーション時間の後、またはナノ粒子製剤を十分に処理（例えば、希釈、濾過、透析など）した後、ナノ粒子の回収時に測定され得る。例えば、粒径測定は通常、６０分間のインキュベーション期間後および／または十分な試料処理後になされる。平均粒径は、Ｚ平均または数平均のいずれかとして報告される。Ｚ平均は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ上での動的光散乱法により測定される。ナノ粒子試料は、計数速度が約２００〜４００ｋｃｔｓとなるようリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で希釈される。データは、強度測度の加重平均として示される。動的光散乱法はまた、粒径分布の幅を数量化する多分散指数（ＰＤＩ）を提供する。ＰＤＩの増大は、粒径分布の増大と相関し、逆の場合も同様である。他方では、数平均は、顕微鏡下での測定によって決定することができる。
【０３４１】
いくつかの実施形態では、本開示のプロセスによって作製される被包性核酸ナノ粒子は、約３０〜約１５０ｎｍの平均粒径を有する。他の実施形態では、粒子は、約３０〜約４０ｎｍの平均粒径を有する。他の実施形態では、粒子は、約４０〜約７０ｎｍの平均粒径を有する。他の実施形態では、粒子は、約６５〜約８０ｎｍの平均粒径を有する。他の実施形態では、粒子は、約５０〜約８０ｎｍのＺ平均、および／または約４０〜約８０ｎｍの数平均を有する。さらに他の実施形態では、粒子は、約５０〜約７０ｎｍのＺ平均、および／または約４０〜約６５ｎｍの数平均を有する。さらに他の実施形態では、粒子は、約７０〜約８０ｎｍのＺ平均、および／または約６０〜約８０ｎｍの数平均を有する。得られる粒子の粒径は、核酸および脂質流の線速度、任意選択の希釈ステップの使用、および使用される特定の核酸または脂質に依存し得る。線速度の増大および第１の出口溶液の有機溶媒濃度を３３％未満に維持することにより、より小さな粒径を生成しやすくなる。
【０３４２】
いくつかの実施形態では、本開示のプロセスによって作製される被包性ｍＲＮＡナノ粒子は、約３０〜約１５０ｎｍの平均粒径を有する。他の実施形態では、粒子は、約３０〜約４０ｎｍの平均粒径を有する。他の実施形態では、粒子は、約４０〜約７０ｎｍの平均粒径を有する。他の実施形態では、粒子は、約６５〜約８０ｎｍの平均粒径を有する。他の実施形態では、粒子は、約５０〜約８０ｎｍのＺ平均、および／または約４０〜約８０ｎｍの数平均を有する。さらに他の実施形態では、粒子は、約５０〜約７０ｎｍのＺ平均、および／または約４０〜約６５ｎｍの数平均を有する。さらに他の実施形態では、粒子は、約７０〜約８０ｎｍのＺ平均、および／または約６０〜約８０ｎｍの数平均を有する。さらに他の実施形態では、本開示のプロセスによって作製される被包性ｍＲＮＡナノ粒子は、約３０ｎｍ、約３５ｎｍ、約４０ｎｍ、約４５ｎｍ、約５０ｎｍ、約５５ｎｍ、約６０ｎｍ、約６５ｎｍ、約７０ｎｍ、約７５ｎｍ、または約８０ｎｍの平均粒径を有し得る。さらに他の実施形態では、本開示のプロセスによって作製される被包性ｍＲＮＡナノ粒子は、少なくとも約３０ｎｍ、約３５ｎｍ、約４０ｎｍ、約４５ｎｍ、約５０ｎｍ、約５５ｎｍ、約６０ｎｍ、約６５ｎｍ、約７０ｎｍ、約７５ｎｍ、または約８０ｎｍの平均粒径を有し得る。さらに他の実施形態では、本開示のプロセスによって作製される被包性ｍＲＮＡナノ粒子は、約３０ｎｍ未満、約３５ｎｍ、約４０ｎｍ、約４５ｎｍ、約５０ｎｍ、約５５ｎｍ、約６０ｎｍ、約６５ｎｍ、約７０ｎｍ、約７５ｎｍ、または約８０ｎｍの平均粒径を有し得る。
【０３４３】
動的光散乱法（例えば、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  ＮａｎｏＺＳ）を使用して、多分散指数（ＰＤＩ）は、０〜１．０の範囲であり得る。ある種の実施形態では、ＰＤＩは約０．２未満である。他の実施形態では、ＰＤＩは約０．１未満である。いくつかの実施形態では、ＰＤＩは、１．５未満、１．４未満、１．３未満、１．２未満、１．１未満、１．０未満、０．９未満、０．８未満、０．７未満、０．６未満、０．５未満、０．４未満、０．３未満、０．２未満、または０．１未満である。
【０３４４】
本開示のプロセスは、カチオン性脂質を、所望のｐＫａ範囲、ステルス脂質、ヘルパー脂質、および中性脂質と組み合わせて、インビボでの特定の細胞および組織への送達のために、例えば、リポソーム製剤、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤などを含む製剤へと当業者によってさらに最適化されてもよい。一実施形態では、さらなる最適化は、これらの様々な種類の脂質間の脂質モル比を調節することにより得られる。一実施形態では、さらなる最適化は、所望の粒径、Ｎ／Ｐ比、および／またはプロセスパラメーターの１つ以上を調節することにより得られる。上記で列挙する実施形態に関する当業者に知られる様々な最適化手法は、本発明の一部とみなされる。
【０３４５】
脂質ナノ粒子ホスト中に核酸を被包するプロセス
下記方法を使用して、本明細書で提供される脂質ナノ粒子を作製することができる。脂質ナノ粒子を作製する非限定的な例が記載されており、例えば、ＰＣＴ国際特許出願公開番号の国際公開第２０１６／０１０８４０号パンフレット、国際公開第２０１６／０３７０５３号パンフレット、国際公開第２０１５／０９５３４６号パンフレット、国際公開第２０１５／０９５３４０号パンフレット、国際公開第２０１４／１３６０８６号パンフレット、および国際公開第２０１１／０７６８０７号パンフレットを参照されたく、各々は、参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる。粒子のサイズ縮小を達成するために、および／または粒子のサイズの一様性を増大させるために、当業者は、以下に提示する方法ステップを使用して、様々な組み合わせを実験してもよい。加えて、当業者は、リポソーム製剤で使用される超音波処理、濾過または他のサイジング手法を採用することができる。
【０３４６】
本明細書で提供される組成物を作製するプロセスは通常、第１のリザーバー中に核酸を含む、クエン酸緩衝液などの水溶液を用意することと、有機アルコール、例えばエタノールなどの脂質の有機溶液を含む第２のリザーバーを用意することと、続いて水溶液を有機脂質溶液と混合することとを含む。第１のリザーバーは、任意選択により、第２のリザーバーと流体連通している。混合ステップに続いて、任意選択で、インキュベーションステップ、濾過または透析ステップ、ならびに希釈および／または濃縮ステップが行われる。インキュベーションステップは、混合ステップからの溶液を、ほぼ室温にて約０〜約２４時間（好ましくは、約１時間）容器中で、および任意選択で光から保護して静置させることを含む。一実施形態では、希釈ステップがインキュベーションステップに続いて行われる。希釈ステップは、例えば、ポンピング装置（例えば、蠕動ポンプ）を使用した、水性緩衝液（例えば、クエン酸緩衝液または純水）による希釈を含み得る。濾過ステップは、限外濾過または透析であってもよい。限外濾過は、好適な限外濾過膜（例えば、ＧＥのＨｏｌｌｏｗ  ｆｉｂｅｒ  ｃａｒｔｒｉｄｇｅまたは均等物）とともに好適なポンピングシステム（例えば、蠕動ポンプなどのポンピング装置またはその均等物）を使用した、希釈した溶液の濃縮、続くダイアフィルトレーションを含む。透析は、好適な膜（例えば、１０，０００ｍｗｃ  ｓｎａｋｅｓｋｉｎ膜）に通した溶媒（緩衝液）交換を含む。
【０３４７】
一実施形態では、混合ステップは、透明な単相をもたらす。一実施形態では、混合ステップの後、有機溶媒を除去して、粒子の懸濁液をもたらし、核酸は脂質により被包される。
【０３４８】
有機溶媒の選択には、通常、溶媒の極性および粒子形成の後の段階で溶媒を除去することができる容易さを考慮することが必要になる。可溶化剤としても用いられる有機溶媒は、好ましくは核酸および脂質の透明な単相混合物を得るのに十分な量である。好適な有機溶媒として、注射用製剤のための共溶媒としての使用に関して、Ｓｔｒｉｃｋｌｅｙ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓ．（２００４），２１，２０１−２３０により記載されるものを含む。例えば、有機溶媒は、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール３００、ポリエチレングリコール４００、グリセリン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）のうちの１つ以上（例えば、２つ）から選択され得る。一実施形態では、有機溶媒はエタノールである。
【０３４９】
本開示の組成物を作製するための装置が、本明細書中に開示される。装置は通常、核酸を含む水溶液を保持するための少なくとも１つのリザーバー、および有機脂質溶液を保持するための別の１つ以上のリザーバーを含む。装置はまた通常、水性および有機脂質溶液を混合領域または混合チャンバー内に汲み出すように構成されたポンプ機構を含む。いくつかの実施形態では、混合領域または混合チャンバーは、水性および有機液体流が十字型コネクターへの流入物として混合することを可能にし、得られた混合水性および有機溶液が十字型コネクターから出て、回収リザーバーまたはその均等物に流入することを可能にする、十字型継手またはその均等物を含む。他の実施形態では、混合領域または混合チャンバーは、水性および有機液体流がＴ字型コネクターへの流入物として混合することを可能にし、得られた混合水性および有機溶液がＴ字型コネクターから出て、回収リザーバーまたはその均等物に流入することを可能にする、Ｔ字型継手またはその均等物を含む。
【０３５０】
ある種の実施形態では、１つ以上の核酸流中の核酸の濃度は、約０．１〜約１．５ｍｇ／ｍＬであり、１つ以上の脂質流中の脂質の濃度は、約１０〜約２５ｍｇ／ｍＬである。他の実施形態では、１つ以上の核酸流中の核酸の濃度は、約０．２〜約０．９ｍｇ／ｍＬであり、１つ以上の脂質流中の脂質の濃度は、約１５〜約２０ｍｇ／ｍＬである。他の実施形態では、１つ以上の核酸流中の核酸の濃度は、約０．２２５、０．３、０．３３、または０．４５〜約０．６７５ｍｇ／ｍＬであり、１つ以上の脂質流中の脂質の濃度は、約１６〜１８ｍｇ／ｍＬである。他の実施形態では、１つ以上の核酸流中の核酸の濃度は、約０．２２５、０．３、０．３３、０．４５、または０．６７５ｍｇ／ｍＬであり、１つ以上の脂質流中の脂質の濃度は、約１６．７ｍｇ／ｍＬである。
【０３５１】
脂質流は、有機溶媒中に１つ以上の脂質の混合物を含む。１つ以上の脂質は、カチオン性脂質、中性脂質、ヘルパー脂質、およびステルス脂質の混合物であってもよく、それらの各々は、最終的な被包性核酸ナノ粒子に関して本明細書の上記の他の箇所で記載されるものとほぼ同じ相対量で存在し得る。脂質流に使用される有機溶媒は、脂質を可溶化させることが可能であり、かつ水性媒体と混和性でもあるものである。好適な有機溶媒は、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール３００、ポリエチレングリコール４００、グリセリン、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む。一態様では、有機溶媒は、約８０％以上のエタノールを含む。ある特定の態様では、有機溶媒は、約９０％以上のエタノールを含む。ある特定の態様では、有機溶媒はエタノールである。ある種の実施形態では、脂質流は、クエン酸ナトリウムの緩衝溶液（例えば、２５ｍＭ）などの任意選択の緩衝溶液を含む。
【０３５２】
核酸流は、第１の水溶液中に好適な核酸の混合物を含む。第１の水溶液は、塩を含まなくてもよく、または少なくとも１つの塩を含んでもよい。例えば、第１の水溶液は、添加塩を伴わずに、脱イオン水または蒸留水中に好適な核酸を含んでもよい。ある種の実施形態では、第１の水溶液は、例えば、塩化ナトリウムおよび／またはクエン酸ナトリウムなどの少なくとも１つの塩を含む第１の緩衝溶液である。第１の水溶液において、塩化ナトリウムは、約０〜約３００ｍＭの範囲の濃度で存在し得る。ある種の実施形態では、塩化ナトリウムの濃度は、約５０、６６、７５、１００、または１５０ｍＭである。第１の水溶液は、約０ｍＭ〜約１００ｍＭの濃度でクエン酸ナトリウムを含み得る。第１の緩衝溶液は、好ましくは、ｐＨ約４〜約６．５、より好ましくは、約４．５〜５．５を有する。いくつかの実施形態では、第１の緩衝溶液のｐＨは、約５であり、クエン酸ナトリウム濃度は、約２５ｍＭである。他の実施形態では、第１の緩衝溶液のｐＨは、約６であり、クエン酸ナトリウムの濃度は、約１００ｍＭである。特定の実施形態では、第１の緩衝溶液は、カチオン性脂質のｐＫａ未満のｐＨを有する。水溶液中に塩を含まない本開示の実施形態に関して、脂質流は、任意選択の緩衝溶液を含む。核酸流または脂質流のいずれかにおける塩（例えば、クエン酸ナトリウム）の不存在下では、被包は生じない。
【０３５３】
他の可能な緩衝液として、酢酸ナトリウム／酢酸、Ｎａ２ＨＰＯ４／クエン酸、フタル酸水素カリウム／水酸化ナトリウム、フタル酸水素二ナトリウム／オルトリン酸二水素ナトリウム、フタル酸水素二カリウム／オルトリン酸二水素カリウム、オルトリン酸二水素カリウム／水酸化ナトリウムを含むが、これらに限定されない。
【０３５４】
ある種の実施形態では、有機溶媒はエタノールを含み、第１の出口溶液は、約２０〜２５％のエタノール、約０．１５〜０．２５ｍｇ／ｍＬの核酸、および約３〜４．５ｍｇ／ｍＬの脂質を含む。他の実施形態では、有機溶媒はエタノールを含み、第１の出口溶液は、約２０％のエタノール、約０．１５〜０．２ｍｇ／ｍＬの核酸、および約３〜３．５ｍｇ／ｍＬの脂質を含む。さらに他の実施形態では、有機溶媒はエタノールを含み、第１の出口溶液は、約２０％のエタノール、約０．１８ｍｇ／ｍＬの核酸、および約３．３ｍｇ／ｍＬの脂質を含む。他の実施形態では、有機溶媒はエタノールを含み、第１の出口溶液は、約２５％のエタノール、約０．２〜０．２５ｍｇ／ｍＬの核酸、および約４〜４．５ｍｇ／ｍＬの脂質を含む。さらに他の実施形態では、有機溶媒はエタノールを含み、第１の出口溶液は、約２５％のエタノール、約０．２３ｍｇ／ｍＬの核酸、および約４．２ｍｇ／ｍＬの脂質を含む。
【０３５５】
本開示のいくつかの実施形態では、核酸および脂質の濃度は、両方ともに低下または上昇され得る。例えば、より効率的なプロセスのために可能な限り高い濃度を保持することが一般的に望ましいが、核酸の濃度を約０．０４５ｍｇ／ｍＬに、および脂質の濃度を約１．６７ｍｇ／ｍＬに低下させることが可能である。しかしながら、さらに低い濃度では、粒子凝集が増加する傾向にある。
【０３５６】
ある種の実施形態では、１つ以上の核酸流中の核酸の濃度は、約０．１〜約１．５ｍｇ／ｍＬであり、１つ以上の脂質流中の脂質の濃度は、約１０〜約２５ｍｇ／ｍＬである。他の実施形態では、１つ以上の核酸流中の核酸の濃度は、約０．２〜約０．９ｍｇ／ｍＬであり、１つ以上の脂質流中の脂質の濃度は、約１５〜約２０ｍｇ／ｍＬである。他の実施形態では、１つ以上の核酸流中の核酸の濃度は、約０．２２５、０．３、０．３３、または０．４５〜約０．６７５ｍｇ／ｍＬであり、１つ以上の脂質流中の脂質の濃度は、約１６〜１８ｍｇ／ｍＬである。他の実施形態では、１つ以上の核酸流中の核酸の濃度は、約０．２２５、０．３、０．３３、０．４５、または０．６７５ｍｇ／ｍＬであり、１つ以上の脂質流中の脂質の濃度は、約１６．７ｍｇ／ｍＬである。一般に、より高い核酸濃度は、好ましい範囲（例えば、約０．１５〜０．２５ｍｇ／ｍＬ）で第１の出口流６０中の核酸濃度を維持するために、それに対応して希釈流５０からの希釈のレベルを増大させることが必要になる。
【０３５７】
特定の実施形態では、脂質：核酸の質量比は、約１５〜２０：１または約１７〜１９：１であり、出口溶液中の有機溶媒の濃度は、約２０〜２５％である。他の特定の実施形態では、脂質：核酸の質量比は、約１８．５：１であり、出口溶液中の有機溶媒の濃度は、約２５％である。
【０３５８】
特定の実施形態では、脂質：核酸の質量比は、約１７〜１９：１である。他の特定の実施形態では、脂質：核酸の質量比は、約１８．５：１である。
【０３５９】
特定の実施形態では、脂質：核酸の質量比は、約１５〜２０：１または約１７〜１９：１であり、出口溶液中の有機溶媒の濃度は、約２０〜２５％である。他の特定の実施形態では、脂質：核酸の質量比は、約１８．５：１であり、出口溶液中の有機溶媒の濃度は、約２０％または２５％である。
【０３６０】
特定の実施形態では、脂質：核酸の質量比は、約１７〜１９：１である。他の特定の実施形態では、脂質：核酸の質量比は、約１８．５：１である。特定の実施形態では、脂質：核酸の質量比は、約１５〜２０：１または約１７〜１９：１であり、出口溶液中の有機溶媒の濃度は、約２０〜２５％である。他の特定の実施形態では、脂質：核酸の質量比は、約１８．５：１であり、出口溶液中の有機溶媒の濃度は、約２０％である。
【０３６１】
特定の実施形態では、脂質：核酸の質量比は、約１７〜１９：１である。他の特定の実施形態では、脂質：核酸の質量比は、約１８．５：１である。
【０３６２】
ある種の態様では、被包率は６０％を超える。ある種の態様では、被包率は６５％を超える。ある種の態様では、被包率は７０％を超える。本開示のいくつかの実施形態では、７５％以上の核酸が被包される。他の実施形態では、８０％または８５％の核酸が被包される。さらに他の実施形態では、９０％以上の核酸が被包される。他の実施形態では、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％の核酸が被包される。
【０３６３】
ある種の態様では、本明細書に記載の被包性核酸ナノ粒子の形成後に、第１の出口溶液は、室温で約６０分間インキュベートされ得る。インキュベーション後、溶液を第２の希釈溶媒と混合して、第１の出口溶液を約２倍希釈して、第２の出口溶液を用意してもよい。第２の希釈溶媒は、第３の緩衝溶液または水であり得る。希釈ステップは、例えば、Ｔ字型コネクター中で、インキュベートした第１の出口溶液を第２の希釈溶媒（水）と混合することにより実施され得る。インキュベートした第１の出口溶液および第２の希釈溶媒は、例えば、約０．５〜１メートル／秒などの任意の好適な流速または速度で、Ｔ字型コネクターに供給され得る。希釈ステップ後に、第２の出口溶液中の有機溶媒の濃度は、第１の出口溶液に対して、半減する。したがって、いくつかの実施形態では、第２の出口溶液中の有機溶媒（例えば、エタノール）の濃度は、１６．５％未満である。他の実施形態では、第２の出口溶液中の有機溶媒（例えば、エタノール）の濃度は、約１０〜１５％、約１０〜１２．５％、約１２．５％、または約１０％である。第２の出口溶液を、タンジェンシャルフロー濾過により濃縮し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いた１５Ｘダイアフィルトレーションに付して、出発緩衝液およびエタノールを除去してもよく、出発緩衝液およびエタノールは、ＰＢＳで置き換えられる。タンジェンシャルフロー濾過後、ＰＢＳ中の濃縮された被包性核酸ナノ粒子のプールを回収して、滅菌濾過してもよい。上述のさらなるプロセスステップにより作製される製剤中に存在する被包性核酸ナノ粒子は、４℃で６カ月を超過して安定に保存され得る。
【０３６４】
本明細書に開示される実施形態の各々によれば、核酸がｍＲＮＡなどのポリリボヌクレオチドであるさらなる実施形態が存在する。例えば、本明細書に記載の実施形態によれば、核酸流が、緩衝溶液中に１つ以上のｍＲＮＡ分子の混合物を含み、かつ本明細書に開示される線速度を有するｍＲＮＡ流であるさらなる実施形態が存在する。
【０３６５】
ＶＩ．動物の免疫化
免疫化に使用される宿主動物は、体液性（抗体）媒介性免疫応答を起こすことができる任意の種を包含する。免疫化に使用される非ヒト動物などの宿主動物の非限定的な例は、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ラクダ科動物、ウマ、ニワトリ、イヌ、ネコ、ブタ、ロバ、雌ウシ、サル、およびサメを含む。
【０３６６】
標的タンパク質に対するヒト抗体を作製するための本開示の特定の態様では、マウスの免疫系ではなく、ヒト免疫系の一部を保有する、トランスジェニックマウスまたはトランスクロモソミックマウスを、本明細書に記載のｍＲＮＡ−ＬＮＰ複合体により免疫化される宿主動物として使用してもよい。これらのトランスジェニックマウスおよび／またはトランスクロモソミックマウスの非限定的な例は、本明細書中でそれぞれＨｕＭＡｂマウスおよびＫＭマウスと称されるマウスを含み、本明細書中では「ヒトＩｇマウス」と総称される。
【０３６７】
ＨｕＭＡｂマウス（登録商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．）は、内在性μおよびκ鎖遺伝子座を不活性化する標的化された変異とともに、再編成されていないヒト重鎖（μおよびγ）ならびにκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリンの小さな遺伝子座を含む（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ，ｅｔ  ａｌ．，１９９４  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−８５９を参照のこと）。したがって、マウスは、マウスＩｇＭまたはκの発現の低下を示し、免疫に応答して、導入されたヒト重鎖および軽鎖導入遺伝子がクラススイッチおよび体細胞変異を経て、高親和性のヒトＩｇＧκモノクローナルを産生する（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，１９９４上記；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．，１９９４  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３：４９−１０１において概説される；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．およびＨｕｓｚａｒ，Ｄ．，１９９５  Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３、ならびにＨａｒｄｉｎｇ，Ｆ．およびＬｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．，１９９５  Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６４：５３６−５４６）。ＨｕＭＡｂマウスの作製および使用ならびにこのようなマウスにより保有されるゲノム改変は、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，１９９２  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０：６２８７−６２９５；Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ  ａｔ．，１９９３  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５：６４７−６５６；Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：３７２０−３７２４；Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４：１１７−１２３；Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，１９９３  ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：８２１−８３０；Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：２９１２−２９２０；Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，１９９４  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５７９−５９１；およびＦｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，１９９６  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−８５１においてさらに記載されており、それらの全ての内容が、参照によりそれらの全体において本明細書に具体的に組み込まれる。さらに、全てがＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙによる、米国特許第５，５４５，８０６号明細書；同第５，５６９，８２５号明細書；同第５，６２５，１２６号明細書；同第５，６３３，４２５号明細書；同第５，７８９，６５０号明細書；同第５，８７７，３９７号明細書；同第５，６６１，０１６号明細書；同第５，８１４，３１８号明細書；同第５，８７４，２９９号明細書；および同第５，７７０，４２９号明細書、Ｓｕｒａｎｉらによる、米国特許第５，５４５，８０７号明細書；全てがＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙによる、ＰＣＴ公開番号国際公開第９２１０３９１８号パンフレット、同第９３／１２２２７号パンフレット、同第９４／２５５８５号パンフレット、同第９７１１３８５２号パンフレット、同第９８／２４８８４号パンフレット、および同第９９／４５９６２号パンフレット；ならびにＫｏｒｍａｎらによるＰ��Ｔ公開番号国際公開第０１／１４４２４号パンフレットも参照されたい。
【０３６８】
別の実施形態では、ヒト抗体は、ヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖トランスクロモソームを保有するマウスなどの、導入遺伝子およびトランスクロモソーム上にヒト免疫グロブリン配列を保有するマウスを用いて、本明細書で提供されるｍＲＮＡ−免疫化方法によって産生させることができる。本明細書中で「ＫＭマウス」と称されるこのようなマウスは、石田らによるＰＣＴ公開国際公開第０２／４３４７８号パンフレットに詳述されている。さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替のトランスジェニック動物系は、当技術分野で利用可能であり、本明細書で提供されるｍＲＮＡ−免疫化方法のための宿主動物として使用することができる。例えば、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．）と呼ばれる代替のトランスジェニック系を使用することができる。このようなマウスは、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによる、米国特許第５，９３９，５９８号明細書；同第６，０７５，１８１号明細書；同第６，１１４，５９８号明細書；同第６，１５０，５８４号明細書、および同第６，１６２，９６３号明細書に記載されている。
【０３６９】
さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替のトランスクロモソミック動物系は、当技術分野で利用可能であり、本明細書で提供されるｍＲＮＡ−免疫化方法のための宿主動物として使用することができる。例えば、「ＴＣマウス」と呼ばれる、ヒト重鎖トランスクロモソームおよびヒト軽鎖トランスクロモソームの両方を保有するマウスを使用することができ、このようなマウスは、Ｔｏｍｉｚｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９７：７２２−７２７に記載されている。さらに、当技術分野では、ヒト重鎖および軽鎖トランスクロモソームを保有する雌ウシも記載されており（Ｋｕｒｏｉｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２００２  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２０：８８９−８９４）、本明細書で提供されるｍＲＮＡ−免疫化方法のための宿主動物として使用することができる。
【０３７０】
被包性ｍＲＮＡ媒介性の免疫化の後、宿主動物由来の抗体分泌細胞（例えば、リンパ球、骨髄細胞、形質細胞、または脾細胞など）を回収し、所望の特性を含有するタンパク質標的に対して産生された抗体についてスクリーニングしてもよい。これは、ハイブリドーマに基づく手法の使用、抗体産生Ｂ細胞の直接的なスクリーニング、その後のクローニングおよび組換え体抗体産生、またはＢ細胞からの組換え体抗体ライブラリの生成、その後の発現およびファージディスプレイもしくは酵母ディスプレイなどの異種発現系におけるスクリーニングを介してなされてもよい。
【０３７１】
ある特定の態様では、宿主動物由来の抗体分泌細胞（例えば、リンパ球、骨髄細胞、形質細胞、または脾細胞など）を、Ｆ０細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）、ＣＲＬ−１６４６）およびＳＰ２／０骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）、ＣＲＬ−１５８１）などの融合パートナー細胞（例えば、不死化Ｂ細胞癌細胞、例えば、不死化骨髄腫細胞）と融合する。細胞融合は、電気融合または例えば、ポリエチレングリコールを使用する化学的プロトコルなどの様々な方法によって実施することができる。
【０３７２】
マウスが宿主動物である免疫化の場合、ハイブリドーマに基づく抗体産生に続くＦＡＣＳまたはＥＬＩＳＡに基づくスクリーニングが、効率的な抗体発現およびスクリーニングプラットフォームを提供する。標的特異的抗体の循環レベル（すなわち、血清力価）を、ハイブリドーマに基づく集団免疫化にわたってモニターして、体液性応答の有効性を評価することができる。ｍＲＮＡに基づく免疫化と関連する標的特異性の程度が高いことを考慮すると、内在性または膜タンパク質に関する血清力価を、標的タンパク質を過剰発現する細胞を用いるＦＡＣＳによって効率的にモニターすることができる。可溶性タンパク質に関する力価はまた、ＥＬＩＳＡによって評価され得る。血清力価に応じて、投与を調整して、Ｂ細胞単離および骨髄腫融合の開始に好適であると見なされるレベルに達することができる。ｍＲＮＡ投与の経路（例えば、静脈内、皮下、筋肉内など）を変更して、免疫応答の程度およびおそらくは多様性を変えることもできる。被包性ｍＲＮＡの静脈内投与は、迅速な標的特異的力価を発生させるための特に効果的な経路であることが判明した。
【０３７３】
１つの一般化できる免疫化のスケジュールを、一例として下に概説する：
０日目：免疫学的に無感作のマウスにおいてベースライン力価を規定するために採血する。
１日目（１回目の免疫化）：５〜１００μｇ、例えば、２５〜５０μｇの被包性ｍＲＮＡを、４匹のマウスの皮下および４匹のマウスの静脈内に注射する。
１０日目：血清力価をモニターするために採血する。
２１日目（２回目の免疫化）：５〜１００μｇ、例えば、２５〜５０μｇの被包性ｍＲＮＡを、４匹のマウスの皮下および４匹のマウスの静脈内に注射する。
３１日目：血清力価をモニターするために採血する。
４２日目（最後の免疫化）：５〜１００μｇ、例えば、２５〜５０μｇの被包性ｍＲＮＡを、マウスの静脈内に注射する。
４５日目：脾細胞の単離およびハイブリドーマ融合のために脾臓を回収する。
【０３７４】
ある種の態様では、一般化できる免疫化のスケジュールは、被包性ｍＲＮＡによる免疫化と、組換え体タンパク質による免疫化または細胞全体／細胞全体の抽出物による免疫化などの従来の免疫化方法との併用を含んでもよい。例えば、１回目の免疫化は、被包性ｍＲＮＡによる免疫化を含み、続いて、組換え体タンパク質による免疫化または細胞全体／細胞全体の抽出物による免疫化などの従来の免疫化方法による２回目の免疫化が行われる。特定の態様では、免疫化、血清力価をモニターするための採血、および後に続く免疫化のラウンドの間の日数は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日で変動してもよい。
【０３７５】
ＶＩＩＩ．抗体の作製
モノクローナル抗体の生成
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、従来のモノクローナル抗体の方法論、例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，１９７５  Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５の標準的な体細胞ハイブリダイゼーション技術を含む種々の手法により作製可能である。例えば、Ｂリンパ球のウイルス性形質転換または癌発生の形質転換など、モノクローナル抗体を作製するための多くの手法を採用することができる。
【０３７６】
ハイブリドーマを作製するための動物系は、マウス系、ラット系、およびウサギ系を含む。マウスにおけるハイブリドーマ作製は、十分に確立された方法である。免疫化プロトコルは本明細書で記載されており、融合のために免疫化された脾臓細胞を単離するための手法は、当技術分野において知られている。融合パートナー（例えば、マウス骨髄腫細胞）および融合手順もまた知られており、記載されている。
【０３７７】
本開示のキメラまたはヒト化抗体は、本明細書で記載のように作製される、非ヒト、例えば、マウスモノクローナル抗体の配列に基づいて作製することができる。重鎖および軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡは、目的のハイブリドーマから入手することができ、標準的な分子生物学的手法を用いて非マウス（例えばヒト）免疫グロブリン配列を含有するように操作することができる。例えば、キメラ抗体を創出するために、当技術分野で知られる方法を用いてマウス可変領域をヒト定常領域に連結することができる（例えば、Ｃａｂｉｌｌｙらの米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照のこと）。ヒト化抗体を創出するために、当技術分野で知られる方法を使用して、マウスＣＤＲ領域を、ヒトフレームワークへと挿入することができる。例えば、Ｗｉｎｔｅｒによる米国特許第５２２５５３９号明細書；ならびにＱｕｅｅｎらによる米国特許第５５３０１０１号明細書；同第５５８５０８９号明細書；同第５６９３７６２号明細書；および同第６１８０３７０号明細書を参照されたい。
【０３７８】
キメラ抗体は、抗体の様々な部分が異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。例えば、キメラ抗体は、ヒト抗体の定常領域と融合したマウスまたはラットモノクローナル抗体の可変領域を含有することができる。キメラ抗体を作製する方法は、当技術分野において知られている。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２；Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４；Ｇｉｌｌｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌを参照されたい。
【０３７９】
ある種の態様では、本開示の抗体はヒトモノクローナル抗体である。このようなヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の一部を保有するトランスジェニックマウスまたはトランスクロモソミックマウスを用いて作製することができる。これらのトランスジェニックマウスおよび／またはトランスクロモソミックマウスは、本明細書中でそれぞれＨｕＭＡｂマウスおよびＫＭマウスと称されるマウスを含み、本明細書中では「ヒトＩｇマウス」と総称される。
【０３８０】
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５７９−５９１；およびＦｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，１９９６  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−８５１は、それらの全ての内容が、参照によりそれらの全体において本明細書に具体的に組み込まれる。さらに、全てがＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙによる、米国特許第５，５４５，８０６号明細書；同第５，５６９，８２５号明細書；同第５，６２５，１２６号明細書；同第５，６３３，４２５号明細書；同第５，７８９，６５０号明細書；同第５，８７７，３９７号明細書；同第５，６６１，０１６号明細書；同第５，８１４，３１８号明細書；同第５，８７４，２９９号明細書；および同第５，７７０，４２９号明細書、Ｓｕｒａｎｉらによる、米国特許第５，５４５，８０７号明細書；全てがＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙによる、ＰＣＴ公開番号国際公開第９２１０３９１８号パンフレット、同第９３／１２２２７号パンフレット、同第９４／２５５８５号パンフレット、同第９７１１３８５２号パンフレット、同第９８／２４８８４号パンフレット、および同第９９／４５９６２号パンフレット；ならびにＫｏｒｍａｎらによるＰＣＴ公開番号国際公開第０１／１４４２４号パンフレットも参照されたい。
【０３８１】
本明細書に記載のものなどの手法を使用して作製される抗体または抗原結合断片は、標準的なよく知られた手法を使用して単離することができる。例えば、抗体または抗原結合断片は、例えば、培養液、腹水、血清、細胞可溶化物、合成反応材料などから、例えば、プロテインＡ−セファロース、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、または親和性クロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製方法によって、好適に単離され得る。
【実施例】
【０３８２】
以下の実施例は例示として提供されるものであり、特に明記されない限り、本発明の限定を意図しない。
【０３８３】
実施例１
被包性ｍＲＮＡ作製のワークフロー
ステップ１：ｃＤＮＡの設計およびインビトロ転写ベクターへのクローニング
ｃＤＮＡコンストラクトの設計
天然のｃＤＮＡ配列は、それが、サブクローニング計画において、または転写前の最終コンストラクトの線状化において使用される制限酵素のための任意のコンセンサス部位を含有しない場合に、サブクローニングの目的で使用され得る。この特定の例では、サブクローニングに使用される制限酵素はＢａｍＨＩおよびＲｓｒＩＩであり、線状化に使用される制限酵素はＢｓｐＱＩである。しかし、任意の好適な制限酵素および対応する制限酵素部位を使用することができる。例えば、目的の標的タンパク質をコードする特定のｃＤＮＡ中に存在しないある種の制限酵素部位を、サブクローニング計画および線状化のために選択することができる。
【０３８４】
天然のｃＤＮＡ配列はまた、マウスまたはウサギなどの非ヒト動物における発現のために、例えば、ＧｅｎｅＯｐｔｉｍｉｚｅｒ（登録商標）ソフトウェア（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．）を使用する従来の方法を用いてコドン最適化され得る。コドン最適化のプロセスは、以下：（ｉ）ＲＮＡの安定性を増大させるための、潜在性のスプライス部位およびＲＮＡ不安定化配列エレメントの除去；（ｉｉ）ＲＮＡ安定化配列エレメントの付加；（ｉｉｉ）特定の発現系のためのコドン最適化およびＧ／Ｃ含量調節；（ｉｖ）イントロン除去；ならびに（ｖ）安定的なＲＮＡ２次構造の回避の１つ以上を含む。ＧｅｎｅＯｐｔｉｍｉｚｅｒ（登録商標）ソフトウェアを使用する特定の態様では、コドン最適化の設定は、５’／３’の制限を保護し、分子の残部からそれらを排除するように調節された。ＢｓｐＱ１コンセンサス配列（フォワード［ＧＣＴＣＴＴＣ］およびリバース［ＧＡＡＧＡＧＣ］の両方、ＢｓｐＱ１は回文構造の配列の制限酵素ではないため）もまた、排除されなければならない。
【０３８５】
【表４３】
2019528312.tif 000046
【０３８６】
ベクターの説明
標的タンパク質をコードするｃＤＮＡ（例えば、表１〜７を参照のこと）を、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼプロモーターからのＲＮＡポリメラーゼ媒介性の転写を駆動するように設計されたベクターにクローン化した。Ｔ７プロモーターのすぐ下流は、タバコエッチ病ウイルス（Ｔｏｂａｃｃｏ  ｅｔｃｈ  ｖｉｒｕｓ）（ＴＥＶ）の５’非翻訳領域（ＵＴＲ）をコードする配列である。このＵＴＲは、真核細胞における翻訳効率を向上させることが示されている。ＴＥＶのＵＴＲの下流に、標的タンパク質のｃＤＮＡが配置される。コザックコンセンサス配列（ｃｃｇｃｃａｃｃ）を、翻訳を亢進するためにイニシエータメチオニン／開始コドンの上流に挿入した。２つの終止コドンを、ＲｓｒＩＩ制限酵素部位を後に伴うｃＤＮＡの末端に配置した。２つの直列のヒトβグロビン３’ＵＴＲが、そのｃＤＮＡ配列に続く。このエレメントは、細胞内でのｍＲＮＡの安定性を高めることが示されている。ベクターの転写に関連する成分のＣ末端エレメントは、ポリＡテールである。特定の実施形態では、標的タンパク質またはその断片をコードするｍＲＮＡのポリＡテールは、約５０ｂｐｓ〜１２０ｂｐｓまたは６０ｂｐｓ〜１２０ｂｐｓである。特定の実施形態では、標的タンパク質またはその断片をコードするｍＲＮＡのポリＡテールは、約６０ｂｐｓまたは１２０ｂｐｓである。ある種の実施形態では、標的タンパク質またはその断片をコードするｍＲＮＡのポリＡテールは、約７０ｂｐｓ、８０ｂｐｓ、９０ｂｐｓ、１００ｂｐｓ、または１１０ｂｐｓである。
【０３８７】
ｃＤＮＡのインビトロ転写ベクターへのクローニング
制限酵素ＢａｍＨＩ／ＲｓｒＩＩによりベクターとともにｃＤＮＡコンストラクトを消化することにより、アガロースゲル電気泳動によって精製された適合性の断片を生成し、続いて、精製されたｃＤＮＡを消化されたベクターに連結して、所望の転写ベクターコンストラクトを得た。
【０３８８】
ライゲーション混合物を、ｓｔｂｌ３コンピテント細菌細胞に形質転換し、アンピシリンプレートに蒔いた。プレートを３７℃で一晩インキュベートした。シークエンシングの前に、サブクローニング制限酵素を用いて消化することによりコロニーを選別して、適切にサイズ分類された挿入断片およびバックボーンを検証した。コロニーはまた、並行してＲｓｒＩＩおよびＳａｐＩ（３７℃で効率的に切断するＢｓｐＱ１のアイソシゾマー）を用いて消化されて、ポリＡテールの完全性を確立した。配列を検証したクローン由来のプラスミドを増やし、ｍＲＮＡ生成のために使用した。
【０３８９】
ステップ２：転写物線状化、インビトロ転写およびキャッピング
環状プラスミドＤＮＡを、従来の方法に従って調製した。精製されたプラスミドＤＮＡを、ＢｓｐＱＩ制限エンドヌクレアーゼにより消化した。プラスミドＤＮＡを、適切な反応緩衝液（緩衝液４、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ、１０×原液）およびＢｓｐＱＩ酵素（ＤＮＡ１ｍｇあたり１，２５０Ｕ）と混ぜ合わせた。反応を５０℃で２時間インキュベートし、続いて氷上または４℃に置いた。少量の反応試料を、標準的なアガロース電気泳動上に流して、環状プラスミドＤＮＡの完全な線状化を確認した。線状化ＤＮＡ鋳型をエタノール沈殿により精製した。エタノール沈殿ステップのＤＮＡペレットを、ヌクレアーゼフリー水を用いて溶解して、０．５ｍｇ／ｍｌを超える濃度にした。
【０３９０】
修飾合成ｍＲＮＡのインビトロ転写およびキャッピング
本実施例の修飾合成ｍＲＮＡは、インビトロ転写（ＩＶＴ）により作製され、塩化リチウム（ＬｉＣｌ）精製により精製され、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ（登録商標）（Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ  ＵＳＡ）の市販のキットを使用してキャップされた。材料および試薬を表９に示す。
【０３９１】
【表４４】
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【０３９２】
転写反応を、例えば、表１０に列記されるように構築し、ＲＮＡ分解酵素フリーのチューブ、チップおよび実施の使用に注意を払った。
【０３９３】
【表４５】
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【０３９４】
修飾合成ｍＲＮＡを作製するための本実施例における手順は以下のように実施された：
１．上記の材料を３０℃で２時間、温度をモニタリングしながらインキュベートした。ＤＮＡ鋳型を、０．０４Ｕ／μＬのＤＮＡ分解酵素の添加により消化し、この反応混合物を３７℃で３０分間インキュベートした。
２．ＬｉＣｌを最終濃度２．８１Ｍとなるように添加し、反応混合物を十分に混合し、−２０℃で１時間を超えてインキュベートした。次に、混合物を４℃で１５分間、約２０，０００×ｇ（最大速度）の最大速度で遠心分離した。上清を除去し、ペレットを１ｍＬの７０％エタノールで洗浄した。調製物を、すぐ上に記載したように１０分間遠心分離した。次に、上清を除去し、残留ペレットを上記のように１分未満の間再び遠心分離した。
３．残留エタノールを除去し、ペレットをヌクレアーゼフリー水中に再懸濁した。濃度を測定し、約１μｇ／μＬに調整した。
４．調製物に、１０％容量のｐＨ５．５の３Ｍ酢酸ナトリウムを添加し、調製物を十分に混合した。次に、１容量の室温イソプロパノールを調製物に加え、よく混合した。調製物を−２０℃で一晩インキュベートした。その後、調製物を４℃で１５分間、約２０，０００×ｇ（最大速度）の最大速度で遠心分離し、上清を除去し、残留ペレットを１ｍＬの７０％エタノールで洗浄した。再度、調製物をすぐ上に記載したように１０分間遠心分離し、続いて上清を除去し、遠心分離ステップを、上記のように１分未満の間再び実施した。
５．残留エタノールを除去し、ペレットをヌクレアーゼフリー水中に再懸濁した。調製物の濃度を測定し、約４μｇ／μＬに調整した。
【０３９５】
修飾合成ｍＲＮＡは、その後キャッピングまで−８０℃で保存することができ、解凍時に濃度を再び測定する。
【０３９６】
キャッピングについては、使用した手順は、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓのものであった。合成ｍＲＮＡおよび水の混合物を６５℃で１０分間熱変性させ、次に冷たいブロックに移して５分間クエンチした。使用直前にＳ−アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）（３２ｍＭ）の原液を水で１：８に希釈して４ｍＭにし、次に残りの反応成分を表１１に指定の順序で加えた。
【０３９７】
【表４６】
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【０３９８】
次に、混合物を３７℃で１時間インキュベートした。試料を上記のようにＬｉＣｌ沈殿によって精製し、次に−８０℃で保存した。
【０３９９】
ステップ３：ｍＲＮＡの品質および機能性の決定
最初のインビトロ転写反応の後および／またはキャッピング反応の後、Ａｇｉｌｅｎｔ  ２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒを使用して、合成ｍＲＮＡを、品質および完全性について分析した。Ａｇｉｌｅｎｔ  ２１００  ＢｉｏＡｎａｌｙｚｅｒは、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質の少量試料のサイズ分画および定量を実施するナノ流体デバイスである。Ａｇｉｌｅｎｔ  ＲＮＡ  ６０００  Ｎａｎｏ  Ｋｉｔ（カタログ番号５０６７−１５１１）を使用して、分析を実施した。
【０４００】
キット試薬の全てを、使用前に３０分間室温に平衡化した。合成ｍＲＮＡ試料およびキットのラダーを氷上で保存した。
【０４０１】
ゲル、ゲル／色素混合物、および試料の調製
ゲルマトリクス（５５０μＬ）をスピンフィルターにピペットで移し、室温にて１０分間、１，５００ｇで遠心分離し、続いて４℃で保存した（１ヶ月以内の使用用）。色素原液（１μｌ）を、濾過したゲルマトリクスの６５μｌアリコートに添加した。色素およびゲルマトリクスの混合物をボルテックスし、続いて室温にて１０分間、１３，０００ｇで遠心分離した（１日以内の使用用）。ｍＲＮＡ試料ならびにラダーおよびキット標準を７０℃で３〜５分間加熱変性させて、あらゆる高次構造を壊し、続いて分析前に氷上でクエンチした。
【０４０２】
Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒの電極の浄化
Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒの電極を、３５０μｌのＲＮａｓｅＺａｐ電極洗浄剤およびヌクレアーゼフリー水で浄化した。
【０４０３】
ゲル／色素混合物のチップへのロード
新しいチップをＢｉｏａｎａｌｙｚｅｒのプライミングステーション（ポジションＣでのプラットフォーム、トップポジションでのクリップ）に配置し、９μｌのゲル／色素混合物をウェルに添加した。
【０４０４】
試料のチップへのロード
５μｌ容量のマーカーをラダーウェルおよび試料ウェルに添加し、１μｌ容量のｍＲＮＡ試料（＜１μｇ）を試料ウェルに添加した。ＩＫＡ  Ｖｏｒｔｅｘｅｒを使用して、２４００ｒｐｍで１分間ボルテックスした。次に、試料を、ｍＲＮＡアッセイ法を用いてＡｇｉｌｅｎｔ  ２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ上で測定した。アデニン、グアニン、シチジン、およびウリジンまたはプソイドウリジンのいずれかを用いて合成されたヒトＲＸＦＰ１（コドン最適化およびコドン非最適化の両方）について調製されたｍＲＮＡの試料Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒトレースについては、図４を参照されたい。
【０４０５】
ｍＲＮＡの培養哺乳動物細胞へのトランスフェクションおよびコード化タンパク質の発現を確認するためのウェスタンブロット
Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００試薬を使用したｍＲＮＡの培養哺乳動物細胞へのインビトロトランスフェクションによって、翻訳可能性を評価した。次に、トランスフェクトされた細胞を２４〜４８時間後に溶解し、溶解物中のタンパク質を、ポリアクリルアミドゲル電気泳動を用いて分離し、続いてｍＲＮＡによってコードされるタンパク質に特異的な抗体による免疫ブロットを行った（ｍＲＮＡ由来のヒトＲＸＦＰ１発現の確証を示す試料のウェスタンブロットについては図５を参照のこと）。
【０４０６】
ステップ４．送達ビヒクルへの修飾合成ｍＲＮＡのパッケージング
本実施例で用いた材料は、以下の通りであった：
【０４０７】
【表４７】
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【０４０８】
【化２】
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１．カチオン性脂質アミン基対ｍＲＮＡリン酸基（Ｎ：Ｐ）モル比が４：１で標的タンパク質をコードする修飾合成ｍＲＮＡ（例えば、表１〜７を参照のこと）を脂質ナノ粒子にパッケージし、透析し、濃縮した。一例として、０．４ｍｇ／ｍＬを超える濃度のｍＲＮＡの約２ｍｇのパッケージ化された修飾合成ｍＲＮＡを生じるプロトコルについての量を示す。
２．ＲＮＡ分解酵素フリーの試薬、チューブ、チップおよび実施を用いて、表１３に記載のように脂質ナノ粒子混合物試薬を計量し、バイアル中に混合した。
【０４０９】
【表４８】
2019528312.tif 000052
【０４１０】
３．処理を容易にするために、エタノールを脂質に添加して、必要量の１．１×比となった。混合物を短時間超音波処理して、３７℃で５分間緩やかに撹拌した。その後、使用の準備ができるまで、混合物を撹拌せずに３７℃でインキュベートした。
４．Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心分離デバイスにｍＲＮＡ溶液を充填し、４℃にて４，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離することによって、修飾合成ｍＲＮＡを水からｐＨ６．０緩衝液に交換した。濃縮したｍＲＮＡをｐＨ６．０クエン酸緩衝液に再懸濁し、ｍＲＮＡ濃度を測定した。
５．ｐＨ６．０のクエン酸緩衝液中における修飾合成ｍＲＮＡの０．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度を、すすがれたシンチレーションバイアルにおいて調製し（８ｍＬに４ｍｇのｍＲＮＡ）、ｍＲＮＡ溶液の最終濃度を測定した。使用の準備ができるまで、ｍＲＮＡ希釈溶液を３７℃でインキュベートした。
６．（ａ）脂質混合物；（ｂ）ｍＲＮＡ溶液；（ｃ）クエン酸緩衝液の各８ｍＬにより、３つの１０ｍｌシリンジを調製した。シリンジ（ａ）および（ｂ）を、Ｔ字型接合部のルアー嵌合部に取り付けた。要約すると、０．５ｍｍ内径のＰ７２７  Ｔ−混合機が、Ｐ６５２アダプタ（ＩＤＥＸ、Ｏａｋ  Ｈａｒｂｏｒ  ＷＡ  ＵＳＡ）に取り付けられた。シリンジ（ａ）および（ｂ）は、Ｐ６５８ルアー嵌合部（ＩＤＥＸ）に取り付けた。シリンジ（ａ）および（ｂ）を、Ｐ９３８ｘナットおよびフェルール（ＩＤＥＸ）を用いて、ＰＴＦＥ０．８ｍｍ内径チューブ（＃３２０００６８、Ｄｏｌｏｍｉｔｅ、Ｒｏｙｓｔｏｎ、ＵＫ）によって、Ｔ−混合機に接続した。シリンジ（ｃ）は、Ｐ９３８ｘナットおよびフェルールによって最終の単一チューブに接続されたルアー嵌合部に取り付けた。チューブの末端は、撹拌棒入りの事前にすすいだビーカーの上に合わせて固定し、緩やかに撹拌した。
７．シリンジポンプ設定を、適切なシリンジ製造業者およびサイズにセットし、容量（８ｍＬ）および１．０ｍＬ／分の流速が入力された。ポンプを起動し、得られた材料を撹拌棒入りのＲＮＡ分解酵素フリーの５０ｍＬプラスチックビーカーに回収した。ｍＲＮＡを含有する脂質ナノ粒子の懸濁液を、１バッグにつき２〜３ｍＬで透析チューブに移し、４℃で一晩、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に透析した。
８．分割した材料を、１本の１５ｍＬコニカルチューブにプールした。タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）を用いて、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）懸濁液を濃縮した。新しいチューブを使用して新しい５００Ｋの分子量カットオフカプセルをＭｉｎｉｍａｔｅシステムに接続して、１５０ｒｐｍの流速により５００ｍＬのＲＮＡフリー水ですすぐことによってＴＦＦシステムを準備した。
９．脂質ナノ粒子／修飾合成ｍＲＮＡ懸濁液をＴＦＦユニットリザーバーに充填し、７５ｍＬ／分の流速で２〜３ｍｌの最終容量に濃縮した。
１０．修飾合成ｍＲＮＡの被包パーセントは、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ  ＮＹ  ＵＳＡ）のＱｕａｎｔ−ｉＴ  Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎ  ＲＮＡアッセイキットを用いて決定した。脂質ナノ粒子／修飾合成ｍＲＮＡ懸濁液を、緩衝液（粒子外のｍＲＮＡ）および界面活性剤を加えた緩衝液（全ｍＲＮＡ）での蛍光測定によって分析した。提供されたリボソームＲＮＡから１０００ｎｇ／ｍＬ原液を調製し、これを使用してＲｉｂｏｇｒｅｅｎアッセイのための標準曲線を作成した。アッセイのために、ＴＥ緩衝液またはＴｒｉｔｏｎを加えたＴＥ中に試料を調製し、蛍光試薬を各々に添加する。計算される差は、粒子内部のｍＲＮＡである。
【０４１１】
【表４９】
2019528312.tif 000053
【０４１２】
１１．測定値が標準曲線内（４００〜６００倍）にあるように、試料をＴＥ緩衝液およびＴＥ緩衝液＋０．７５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００により適切な希釈で調製した。９６ウェルプレートの各ウェルに１００μＬの標準／試料を添加した。Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎ試薬をＴＥ緩衝液中に１：２００で希釈し、１００μＬを各ウェルに添加した。
１２．試料蛍光を、蛍光マイクロプレートリーダーを用いて、４８０ｎｍの励起、５２０ｎｍの発光で測定した。各ＲＮＡ試料の蛍光値から試薬ブランクの蛍光値を差し引いて、蛍光対ＲＮＡ濃度の標準曲線を作成した。各試料の蛍光値から試薬ブランクの蛍光値を差し引き、標準曲線から試料のＲＮＡ濃度を決定した。試料の被包パーセントは、Ｔｒｉｔｏｎを加えた試料と試料だけの間の濃度の差を、Ｔｒｉｔｏｎを加えた試料の濃度によって割り算することによって決定した。脂質ナノ粒子／修飾合成懸濁液の６倍希釈溶液を作製し、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ機器（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｌｔｄ、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ、ＵＫ）を用いて直径および多分散指数を決定した。
【０４１３】
【表５０】
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【０４１４】
実施例２−ＲＸＦＰ１に対する免疫化戦略
ヒトＲＸＦＰ１などのＧＰＣＲ標的タンパク質に対する免疫化戦略の概観を表１６に示す。
【０４１５】
【表５１】
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【０４１６】
雌ＢＡＬＢ／ｃマウスを、皮下（ｓ．ｃ．）または静脈内（ｉ．ｖ．）経路を介して、１００μｇのパッケージ化されたヒトＲＸＦＰ１のｍＲＮＡ（例えば、表１を参照のこと）、１０６細胞／ｍｌのｈＲＸＦＰ１を過剰発現するＢａ／Ｆ３細胞、または３００．１９もしくはＨＥＫ２９３細胞のいずれかに由来するヒトＲＸＦＰ１を過剰発現する５０μｇのウイルス様粒子（ＶＬＰ）のいずれかを用いて、免疫化した。力価をプライミング免疫化の１０日後に確認した（図１Ａで見られるように）。ブースティング免疫化を、前回の免疫化の２１日後に行った。
【０４１７】
ＲＸＦＰ１に特異的な抗体を産生する合計２０７個のハイブリドーマが得られ、さらにスクリーニングして、ｐＭおよびｎＭの範囲にあった高親和性を有する１０個の抗ＲＸＦＰ１モノクローナル抗体を同定した。
【０４１８】
図１Ｂは、免疫化後１０日目において、ウイルス様粒子またはＲＸＦＰ１（例示的な標的タンパク質免疫原）を過剰発現する細胞による免疫化が、有意な抗体力価を誘発できなかったことを示す。対照的に、ｍＲＮＡ−ＬＮＰによる免疫化は、バックグラウンドより２〜１２倍高い力価をもたらした。このデータは、ｍＲＮＡ−ＬＮＰによる免疫化が、ウイルス様粒子または標的遺伝子の免疫原を過剰発現する細胞を用いるなどの従来の方法よりも、標的タンパク質免疫原に対してよりロバストな免疫応答（例えば、血清中でより高い抗体力価）を与えることを示唆している。
【０４１９】
図１Ｃは、ブースティング免疫化ステップ（例えば、免疫原の２回目の投与）後の動物（図１Ｂ）の抗体力価を示す。１回目および２回目の両方の免疫化に関してｍＲＮＡで免疫化（ｓ．ｃ．）されたマウスは、２回の免疫化（プライミング免疫化およびブースティング免疫化）のうち１回のみに関してｍＲＮＡで免疫化（ｓ．ｃ．）されたマウス、ならびに残りの免疫化のうち１回に関してＶＬＰまたはＲＸＦＰ１を過剰発現する細胞で免疫化（ｓ．ｃ．）されたマウスよりも、高い抗体力価を示した。ｉ．ｖ．投与を介した免疫化については、プライミングおよびブースティング免疫化の両方に関してｍＲＮＡを用いる免疫化戦略と、２回の免疫化のうち１回のみに関してｍＲＮＡを用いる免疫化戦略について、抗体力価の差はより少なかった。全てのｉ．ｖ．免疫化の力価の平均は、ｓ．ｃ．免疫化よりも高かった。
【０４２０】
図１Ｄは、ｍＲＮＡに基づく免疫化から得られるＲＸＦＰ１に特異的な３つのモノクローナルハイブリドーマ培養液試料のＦＡＣＳプロットを示す。クローンは、非ＲＸＦＰ１発現細胞（３００．１９親）に対して最小の交差反応性を示し、ヒトＲＸＦＰ１を過剰発現する細胞（３００．１９ｈＲＸＦＰ１およびＢａ／Ｆ３ｈＲＸＦＰ１）に対して有意な結合を示す。
【０４２１】
図２は、複数回膜貫通タンパク質のＳＬＣ５２Ａ２に対する免疫化戦略、および得られたＦＡＣＳに基づく血清応答を示す。ＳＬＣ５２Ａ２（例えば、表２）をコードするｍＲＮＡでの２回のラウンドのみの免疫化が、標的特異的な抗体力価を誘発することができる唯一の抗原であり；過剰発現細胞、ＶＬＰおよび細胞外ループ（ＥＣ２）をコードするペプチドなどの従来の抗原による２回〜４回のラウンドの様々な組み合わせでの免疫化は、標的特異的な力価を誘発できなかった。これらの免疫原形態で免疫化されたマウス由来の血清において、標的特異的なＩｇＧが検出されなかったため、ハイブリドーマ融合を開始しなかった。これらの従来型の抗原で免疫化された動物由来の血漿において標的特異的なＩｇＧを検出できないことは、ＳＬＣ５２Ａ２が不十分な免疫原性タンパク質であることを示唆している。しかしながら、ｍＲＮＡ−ＬＮＰで免疫化されたマウスでは、ハイブリドーマ融合を開始した。ＳＬＣ５２Ａ２特異的な抗体を産生することができる合計２２８個のハイブリドーマを、１２，８８０個のハイブリドーマウェルのプールから同定したが、一般に、これらのウェルの約３分の１（１／３）のウェルがハイブリドーマを含有する（約４，２９０個を超えるハイブリドーマ）。したがって、図２で示されるデータは、本明細書に記載のｍＲＮＡによる免疫化方法が、例えば、複数回膜貫通タンパク質、例えば、ＳＬＣ５２Ａ２などの膜貫通タンパク質のための従来の抗原形態よりも驚くほど優れていることを示唆しており、それは、標的特異的な血清力価をもたらすことができた唯一の手段であったためである。
【０４２２】
実施例３−ＡＮＧＰＴＬ８に対する免疫化戦略
ヒトＡＮＧＰＴＬ８などの発現が困難な標的タンパク質に対する免疫化戦略の概観を表１７に示す。特異的な抗体を産生させるためのＡＮＧＰＴＬ８の組換え体発現に関連する問題の例としては、低収率、不十分な分泌、および凝集が挙げられる。例えば、標準的な発現プロトコルを使用すると、得られるタンパク質は、９０％超が凝集しているように見えた。
【０４２３】
【表５２】
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【０４２４】
雌ＢＡＬＢ／ｃマウスを、５０μｇのパッケージ化されたヒトＡＮＧＰＴＬ８  ｍＲＮＡ（例えば、表３を参照のこと）または５０μｇのＨＳＡ−ＡＮＧＰＴＬ８融合タンパク質のいずれかで免疫化した。力価をプライミング免疫化の１０日後および１回目のブースト後に確認した。１回目のブースティング免疫化をプライミング免疫化の２１日後に与え、最終ブーストを１回目のブーストの２５日後に与えた。ヒトＡＮＧＰＴＬ８をコードするｍＲＮＡまたは精製された組換え体ヒトＡＮＧＰＴＬ８タンパク質を投与したマウスは、マウスにおいて、ヒトＡＮＧＰＴＬ８に対しておおむね同等に強い免疫応答をもたらした。ＡＮＧＰＴＬ８特異的な抗体を産生するハイブリドーマが作製され、さらなる選別から高親和性ＡＮＧＰＴＬ８抗体が得られた。これらの結果は、本明細書で提供されるｍＲＮＡ−ＬＮＰによる免疫化方法が、ヒトＡＮＧＰＴＬ８などの発現が困難な標的タンパク質に対する抗体を作製するのに効果的な戦略であることを裏付けている。
【０４２５】
実施例４−ガレクチン−３に対する免疫化戦略
ガレクチン−３などのレクチン結合タンパク質に対する免疫化戦略の概観を表１８に示す。
【０４２６】
ＢＡＬＢ／ｃマウスを、表１８に記載のように、ＬＮＰと組み合わされた２ｍｇ／ｋｇのｍＲＮＡ、または２０μｇの組換え体タンパク質で免疫化した。血漿の抗ガレクチン−３ＩｇＧ力価を、５５日目に与えられた最終ブーストの７日後に評価した。
【０４２７】
図３は、最終ブースティング剤としてのガレクチン−３ｍＲＮＡの使用が、精製された組換え体タンパク質（従来の免疫原）を使用した際よりも、有意に高い標的特異的なＩｇＧ力価をもたらしたことを示す。この作用は、抗原が皮下または静脈内に与えられるかどうかにかかわらず観測された。
【０４２８】
ガレクチン−３特異的な抗体を産生するハイブリドーマが作製され、さらなる選別から高親和性のモノクローナル抗ガレクチン−３抗体が得られた。
【０４２９】
【表５３】
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【０４３０】
ｍＲＮＡ媒介性の免疫化によって達成可能な適合率の概要
表１９は、選別された合計のハイブリドーマウェル（一般にこれらのウェルのうち約３分の１（１／３）がハイブリドーマを含有する）の標的タンパク質ごとの概要、および免疫原としての脂質に被包されたｍＲＮＡの使用後にそれらのハイブリドーマウェルから得られる確認された標的特異的な抗体の数を提供する。
【０４３１】
表２０は、ｍＲＮＡ−ＬＮＰによる免疫化方法と他の従来の免疫化方法の、標的特異的な抗体を産生するハイブリドーマの数による比較を提供する。概して、これらのデータは、ｍＲＮＡ−ＬＮＰによる免疫化が、標的タンパク質抗原に対して免疫応答を誘導し、かつ標的タンパク質に特異的な抗体をより多い数／率で得るための効果的な方法であることを示唆している。特に、これらの結果は、ｍＲＮＡ−ＬＮＰによる免疫化が、抗体を産生させることが困難な、膜貫通タンパク質、例えば、ＧＰＣＲなどの複数回膜貫通タンパク質、および不十分な免疫原性タンパク質（例えば、従来の抗原で免疫化された動物の血漿中において標的特異的なＩｇＧを少量もたらすか、またはまったく検出されないタンパク質）に対して特異的な抗体を得ることに関して、従来の免疫化方法よりも驚くほど効果的であることを裏付けている。
【０４３２】
【表５４】
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【０４３３】
【表５５】
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【０４３４】
概して、抗原特異的な抗体を産生するハイブリドーマの順調な生成は、本明細書に例示するように、ｍＲＮＡ−ＬＮＰによる免疫化方法を利用する少なくとも１５種の異なる標的に対して達成された。これらの結果は、本明細書に記載のｍＲＮＡによる免疫化方法が、宿主動物において様々な抗原（例えば、膜貫通タンパク質、例えば、ＧＰＣＲなどの複数回膜貫通タンパク質）に対する免疫応答を誘発することができ、かつキメラ変異体、ヒト化変異体、および親和性成熟変異体の生成のための親として機能できる、高親和性のモノクローナル抗体を作製するための効果的な方法であることを示す。
【０４３５】
参照による組み込み
特許、特許出願、論文、教科書などを含む、本明細書に引用される全ての参考文献およびそれらに引用される参考文献は、それらが既に引用されていない限り、本明細書に参照によりその全体が組み込まれる。
【０４３６】
均等物
上述した明細書で、当業者は本発明を十分に実施可能であると考えられる。上述の説明および実施例は、本発明のある種の実施形態を詳述している。しかし、上述の説明がどんなに詳細に本文中に記載されているとしても、本発明は様々な様式で実施することができ、本発明は添付の特許請求の範囲およびその任意の均等物に従い解釈されるべきであると理解されよう。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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