【手続補正書】
【提出日】平成19年6月5日(2007.6.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非グリコシル化ヒトα-フェトプロテイン（ng.HuAFP）またはその非グリコシル化断片をコードする核酸分子。
【請求項２】
配列番号：5に記載される配列の45〜1874位のヌクレオチドを含む、請求項1記載の核酸分子。
【請求項３】
（i）ng.HuAFPをコードする核酸配列、
（ii）該ng.HuAFPコード配列に機能的に結合し、且つng.HuAFPの発現を可能にするプロモーター、および
（iii）細胞による該ng.HuAFPの分泌を可能にするタンパク質分泌シグナルをコードするリーダー配列
を含む、核酸分子。
【請求項４】
細胞が大腸菌である、請求項3記載の核酸分子。
【請求項５】
細胞が真核細胞である、請求項3記載の核酸分子。
【請求項６】
真核細胞が酵母細胞または動物細胞である、請求項5記載の核酸分子。
【請求項７】
動物細胞がトランスジェニック動物に存在する、請求項6記載の核酸分子。
【請求項８】
トランスジェニック動物が哺乳類である、請求項7記載の核酸分子。
【請求項９】
哺乳類が、ヤギ、ヒツジ、ラクダ、ウシ、ブタ、ウサギ、ウマ、またはラマである、請求項8記載の核酸分子。
【請求項１０】
細胞が、トランスジェニック動物における生体液産生細胞であり、プロモーターが、該生体液産生細胞においてng.HuAFPの発現を可能にし、かつリーダー配列が、トランスジェニック動物の生体液中への該ng.HuAFPの分泌を可能にする、請求項3記載の核酸分子。
【請求項１１】
生体液が、乳汁、尿、血液、またはリンパである、請求項10記載の核酸分子。
【請求項１２】
細胞が、トランスジェニック動物に存在し、プロモーターが、該動物の乳汁産生細胞におけるng.HuAFPの発現を可能にする乳汁特異的プロモーターであり、かつリーダー配列が、該動物の乳汁中への該ng.HuAFPの分泌を可能にする、請求項3記載の核酸分子。
【請求項１３】
細胞が、トランスジェニック動物に存在し、プロモーターが、該動物の尿産生細胞におけるng.HuAFPの発現を可能にする尿特異的プロモーターであり、かつリーダー配列が、該動物の尿中への該ng.HuAFPの分泌を可能にする、請求項3記載の核酸分子。
【請求項１４】
細胞が、トランスジェニック動物に存在し、プロモーターが、該動物の血液産生細胞におけるng.HuAFPの発現を可能にする血液特異的プロモーターであり、かつリーダー配列が、該動物の血液中への該ng.HuAFPの分泌を可能にする、請求項3記載の核酸分子。
【請求項１５】
細胞が、トランスジェニック動物に存在し、プロモーターが、該動物のリンパ産生細胞におけるng.HuAFPの発現を可能にするリンパ特異的プロモーターであり、かつリーダー配列が、該動物のリンパ中への該ng.HuAFPの分泌を可能にする、請求項3記載の核酸分子。
【請求項１６】
配列番号：4の233位でグルタミン残基を含む非グリコシル化HuAFP（ng.HuAFP）。
【請求項１７】
配列番号：6に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、251位でグルタミン残基を含むポリペプチド。
【請求項１８】
非グリコシル化ヒトα-フェトプロテインの実質的に純粋な生物活性断片断片であって、配列番号：15（ドメインII）、配列番号：16（ドメインI＋II）、または配列番号：17（ドメインII＋III）に記載のアミノ酸配列、または該アミノ酸配列の二つもしくはそれ以上を含む断片。
【請求項１９】
ng.HuAFPを発現して生体液中に分泌する非ヒトトランスジェニック真核生物。
【請求項２０】
トランスジェニック生物が哺乳類である、請求項19記載のトランスジェニック生物。
【請求項２１】
哺乳類が、ヤギ、ヒツジ、ラクダ、ウシ、ブタ、ウサギ、ウマ、またはラマである、請求項20記載のトランスジェニック生物。
【請求項２２】
生体液が、乳汁、尿、血液、またはリンパである、請求項20記載のトランスジェニック生物。
【請求項２３】
ng.HuAFPが、
（i）ng.HuAFPをコードする核酸配列、
（ii）該ng.HuAFPコード配列に機能的に結合して、かつ生体液中にタンパク質を分泌するトランスジェニック生物の細胞によるng.HuAFPの発現を可能にするプロモーター、および
（iii）該トランスジェニック生物の細胞による該生体液中への該ng.HuAFPの分泌を可能にするタンパク質分泌シグナルをコードするリーダー配列
を含むトランスジーンから発現される、請求項20記載のトランスジェニック生物。
【請求項２４】
プロモーターが、乳汁、尿、血液、またはリンパ特異的プロモーターであって、かつリーダー配列が、それぞれ、乳汁、尿、血液、またはリンパ中へのng.HuAFPの分泌を可能にする、請求項23記載のトランスジェニック生物。
【請求項２５】
プロモーターが、乳汁特異的プロモーターであって、かつリーダー配列が、乳汁中へのng.HuAFPの分泌を可能にする、請求項23記載のトランスジェニック生物。
【請求項２６】
トランスジェニック生物がヤギである、請求項25記載のトランスジェニック生物。
【請求項２７】
プロモーターが、尿特異的プロモーターであって、かつリーダー配列が、尿中へのng.HuAFPの分泌を可能にする、請求項23記載のトランスジェニック生物。
【請求項２８】
哺乳類がヤギである、請求項27記載のトランスジェニック生物。
【請求項２９】
プロモーターが、血液特異的プロモーターであって、かつリーダー配列が、血液中へのng.HuAFPの分泌を可能にする、請求項23記載のトランスジェニック生物。
【請求項３０】
哺乳類がヤギである、請求項29記載のトランスジェニック生物。
【請求項３１】
プロモーターが、リンパ特異的プロモーターであって、かつリーダー配列が、リンパ中へのng.HuAFPの分泌を可能にする、請求項23記載のトランスジェニック生物。
【請求項３２】
哺乳類がヤギである、請求項31記載のトランスジェニック生物。
【請求項３３】
ng.HuAFPを含む非ヒト哺乳類の乳汁。
【請求項３４】
ng.HuAFPが可溶性であり、かつトランスジェニック非ヒト哺乳類によって産生され、該トランスジェニック非ヒト哺乳類の乳汁産生細胞が、
（i）ng.HuAFPをコードする核酸配列、
（ii）該ng.HuAFPコード配列に機能的に結合する乳汁特異的プロモーター、および
（iii）該哺乳類の乳汁中への該乳汁産生細胞による該ng.HuAFPの分泌を可能にするタンパク質分泌シグナルをコードするリーダー配列
を含むトランスジーンを発現する、請求項33記載の乳汁。
【請求項３５】
ng.HuAFPを含む非ヒト哺乳類の尿。
【請求項３６】
ng.HuAFPが可溶性であり、かつトランスジェニック非ヒト哺乳類によって産生され、該トランスジェニック非ヒト哺乳類の尿産生細胞が、
（i）ng.HuAFPをコードする核酸配列、
（ii）該ng.HuAFPコード配列に機能的に結合する尿特異的プロモーター、および
（iii）該哺乳類の尿中への該尿産生細胞による該ng.HuAFPの分泌を可能にするタンパク質分泌シグナルをコードするリーダー配列
を含むトランスジーンを発現する、請求項35記載の尿。
【請求項３７】
ng.HuAFPを含む非ヒト哺乳類の血液。
【請求項３８】
ng.HuAFPが可溶性であり、かつトランスジェニック非ヒト哺乳類によって産生され、該トランスジェニック非ヒト哺乳類の血液産生細胞が、
（i）ng.HuAFPをコードする核酸配列、
（ii）該ng.HuAFPコード配列に機能的に結合する血液特異的プロモーター、および
（iii）該哺乳類の血液中への該血液産生細胞による該ng.HuAFPの分泌を可能にするタンパク質分泌シグナルをコードするリーダー配列
を含むトランスジーンを発現する、請求項37記載の血液。
【請求項３９】
ng.HuAFPを含む非ヒト哺乳類のリンパ。
【請求項４０】
ng.HuAFPが可溶性であり、かつトランスジェニック非ヒト哺乳類によって産生され、該トランスジェニック非ヒト哺乳類のリンパ産生細胞が、
（i）ng.HuAFPをコードする核酸配列、
（ii）該ng.HuAFPコード配列に機能的に結合するリンパ特異的プロモーター、および
（iii）該哺乳類のリンパ中への該リンパ産生細胞による該ng.HuAFPの分泌を可能にするタンパク質分泌シグナルをコードするリーダー配列
を含むトランスジーンを発現する、請求項39記載のリンパ。
【請求項４１】
以下の段階を含む、ng.HuAFPを産生する方法：
（a）（i）配列番号：5に記載の核酸配列の45〜1874位のヌクレオチドを含むng.HuAFPをコードする核酸分子、
（ii）該ng.HuAFPコード分子に機能的に結合して、かつ細胞による該ng.HuAFPの発現を可能にするプロモーター、および
（iii）該細胞による該ng.HuAFPの分泌を可能にするタンパク質分泌シグナルをコードするリーダー配列
を含むトランスジーンを形質導入された細胞を提供する段階；ならびに
（b）該ng.HuAFPを発現かつ分泌する該形質導入細胞を増殖させる段階。
【請求項４２】
細胞が大腸菌である、請求項41記載の方法。
【請求項４３】
細胞が真核細胞である、請求項41記載の方法。
【請求項４４】
真核細胞が酵母細胞または動物細胞である、請求項43記載の方法。
【請求項４５】
酵母細胞がピチア・パストリス（Pichia pastoris）である、請求項44記載の方法。
【請求項４６】
細胞がng.HuAFPを細胞培養培地中に分泌する、請求項42記載の方法。
【請求項４７】
動物細胞が、乳汁産生細胞、尿産生細胞、血液産生細胞、またはリンパ産生細胞である、請求項44記載の方法。
【請求項４８】
以下の段階を含む、ng.HuAFPを産生する方法：
（a）（i）配列番号：5に記載の核酸配列の45〜1874位のヌクレオチドを含むng.HuAFPをコードする核酸分子、
（ii）該ng.HuAFPコード分子に機能的に結合して、トランスジェニック生物の生体液産生細胞におけるng.HuAFPの発現を可能にするプロモーター、および
（iii）該生体液産生細胞による該rHuAFPの分泌を可能にするタンパク質分泌シグナルをコードするリーダー配列
を含むトランスジーンを含む、トランスジェニック生物を提供する段階；ならびに
（b）該トランスジェニック生物から該ng.HuAFPを含む生体液を回収する段階。
【請求項４９】
生体液が、乳汁、尿、血液、またはリンパである、請求項48記載の方法。
【請求項５０】
生体液が乳汁である、請求項49記載の方法。
【請求項５１】
ng.HuAFPが乳汁から精製される、請求項50記載の方法。
【請求項５２】
プロモーターが、トランスジェニック生物の乳汁産生細胞におけるng.HuAFPの発現を可能にする乳汁特異的プロモーターである、請求項48記載の方法。
【請求項５３】
生体液が尿である、請求項49記載の方法。
【請求項５４】
ng.HuAFPが尿から精製される、請求項53記載の方法。
【請求項５５】
プロモーターが、トランスジェニック生物の尿産生細胞におけるng.HuAFPの発現を可能にする尿特異的プロモーターである、請求項48記載の方法。
【請求項５６】
生体液が血液である、請求項49記載の方法。
【請求項５７】
ng.HuAFPが血液から精製される、請求項56記載の方法。
【請求項５８】
プロモーターが、トランスジェニック生物の血液産生細胞におけるng.HuAFPの発現を可能にする血液特異的プロモーターである、請求項48記載の方法。
【請求項５９】
生体液がリンパである、請求項49記載の方法。
【請求項６０】
ng.HuAFPがリンパから精製される、請求項59記載の方法。
【請求項６１】
プロモーターが、トランスジェニック生物のリンパ産生細胞におけるng.HuAFPの発現を可能にするリンパ特異的プロモーターである、請求項48記載の方法。
【請求項６２】
ng.HuAFPを含む細胞培養培地から精製されたng.HuAFPの治療的有効量を患者に投与する段階を含む、ng.HuAFPを必要とする患者を治療する方法。
【請求項６３】
ng.HuAFPを含む非ヒト哺乳類の乳汁の治療的有効量を患者に投与する段階を含む、ng.HuAFPを必要とする患者を治療する方法。
【請求項６４】
ng.HuAFPを含む非ヒト哺乳類の生体液から精製されたng.HuAFPの治療的有効量を患者に投与する段階を含む、ng.HuAFPを必要とする患者を治療する方法。
【請求項６５】
生体液が、乳汁、尿、血液、またはリンパである、請求項64記載の方法。
【請求項６６】
配列番号：8記載のアミノ酸配列を含むng.HuAFPを含む、治療的組成物。
【請求項６７】
免疫障害を治療するための医薬品の製造における、配列番号：8記載のアミノ酸配列を含むng.HuAFPの使用。
【請求項６８】
免疫障害がHIVである、請求項67記載の使用。
【請求項６９】
自己免疫障害を治療するための医薬品の製造における、配列番号：8記載のアミノ酸配列を含むng.HuAFPの使用。
【請求項７０】
自己免疫障害が、リウマチ性関節炎、筋ジストロフィー、全身性紅斑性狼瘡、重症筋無力症、多発性硬化症、インスリン依存性真性糖尿病、または乾癬である、請求項69記載の使用。
【請求項７１】
免疫抑制剤の製造における、配列番号：8記載のアミノ酸配列を含むng.HuAFPの使用。
【請求項７２】
免疫抑制剤が、自己反応性免疫細胞増殖または移植片対宿主病を阻害または治療する、請求項71記載の使用。
【請求項７３】
化学療法または放射線療法の副作用を緩和するための医薬品の製造における、配列番号：8記載のアミノ酸配列を含むng.HuAFPの使用。
【請求項７４】
細胞増殖を増強するための医薬品の製造における、配列番号：8記載のアミノ酸配列を含むng.HuAFPの使用。
【請求項７５】
細胞がng.HuAFPを細胞培養培地中に分泌する、請求項43記載の方法。