【手続補正書】
【提出日】平成19年4月2日(2007.4.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＦＥ２Ａ遺伝子発現を調節する物質を同定するための方法であって、前記方法が、
（ａ）試験化合物を、ＨＦＥ２Ａプロモーターに機能するように連結するレポーター遺伝子の発現を支持する条件下で、前記レポーター遺伝子を含む遺伝子構成体と接触させ、
（ｂ）前記接触の結果としての前記レポーター遺伝子の発現の変化を測定することを含み、
ここで発現の変化が、前記試験化合物を、ＨＦＥ２Ａ遺伝子発現を調節する物質として同定することを特徴とする方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、前記調節が前記レポーター遺伝子の発現の増加であることを特徴とする方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法において、前記調節が前記レポーター遺伝子の発現の減少であることを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法において、前記ＨＦＥ２Ａプロモーターが哺乳類ＨＦＥ２Ａプロモーターであることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項４に記載の方法において、前記哺乳類がマウス、ラットおよびヒトより成るグループから選択されたものであることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法において、前記プロモーターが配列番号１９のヌクレオチド配列を持つことを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項１に記載の方法において、前記遺伝子構成体が細胞中にあることを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法において、前記細胞が哺乳類細胞であることを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項７に記載の方法において、前記細胞が前記遺伝子を発現するように処理された組換え細胞であり、またここで前記細胞が、前記処理がなければ前記遺伝子を発現しないことを特徴とする方法。
【請求項１０】
請求項８に記載の方法において、前記哺乳類細胞が、マクロファージ、炎症細胞、肝臓細胞、肝細胞、腸細胞、造血性細胞、膵臓細胞、骨格筋細胞あるいは神経系細胞のいずれかであることを特徴とする方法。
【請求項１１】
請求項１に記載の方法において、前記試験化合物が鉄代謝の制御に有用であることを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項１に記載の方法において、前記試験化合物が、前記方法を用いてＨＦＥ２Ａ遺伝子発現を調節する物質として最初に同定されることを特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項１に記載の方法において、前記変化が酵素活性の変化を測定することにより測定されることを特徴とする方法。
【請求項１４】
ＨＦＥ２Ａ遺伝子発現を調節する物質を同定するための方法であって、前記方法が、
ａ）試験化合物を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ＨＦＥ２Ａ遺伝子を発現する細胞と接触させ、
ｂ）前記接触の結果としての前記ＨＦＥ２Ａ遺伝子の発現の変化を測定することを含み、
ここで発現の変化が、前記試験化合物を、ＨＦＥ２Ａ遺伝子発現を調節する物質として同定することを特徴とする方法。
【請求項１５】
ＨＦＥ２Ａポリペプチドの活性を調節する物質を同定するための方法であって、前記方法が、
ａ）試験化動物を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ＨＦＥ２Ａポリペプチドの活性を支持する条件下で、ＨＦＥ２Ａポリペプチドと接触させ、
ｂ）前記接触の結果としての前記ポリペプチドの前記活性の変化を測定することを含み、
ここで活性の変化が、前記試験化合物を、ＨＦＥ２Ａポリペプチドの活性を調節する物質として同定することを特徴とする方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法において、前記ＨＦＥ２Ａポリペプチドが哺乳類ＨＦＥ２Ａポリペプチドであることを特徴とする方法。
【請求項１７】
請求項１６に記載の方法において、前記哺乳類がマウス、ラットおよびヒトより成るグループから選択されたものであることを特徴とする方法。
【請求項１８】
請求項１５に記載の方法において、前記変化が前記活性の減少であることを特徴とする方法。
【請求項１９】
請求項１５に記載の方法において、前記変化が前記活性の増加であることを特徴とする方法。
【請求項２０】
請求項１５に記載の方法において、前記ポリペプチドが細胞の一部であることを特徴とする方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法において、前記細胞が哺乳類細胞であることを特徴とする方法。
【請求項２２】
請求項２０に記載の方法において、前記細胞が前記ポリペプチドを包含するように処理されていることを特徴とする方法。
【請求項２３】
請求項２２に記載の方法において、前記細胞が遺伝子操作により処理されたことを特徴とする方法。
【請求項２４】
請求項２２に記載の方法において、前記細胞が、前記処理がなければ前記ポリペプチドを包含しないことを特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項２０に記載の方法において、前記細胞が、マクロファージ、炎症細胞、肝臓細胞、肝細胞、腸細胞、造血性細胞、膵臓細胞、骨格筋細胞あるいは神経系の細胞のいずれかであることを特徴とする方法。
【請求項２６】
請求項１５に記載の方法において、前記ＨＦＥ２Ａポリペプチドが高度に精製されることを特徴とする方法。
【請求項２７】
請求項１５に記載の方法において、前記ＨＦＥ２Ａポリペプチドが半精製ポリペプチドであることを特徴とする方法。
【請求項２８】
請求項１５に記載の方法において、前記ＨＦＥ２Ａポリペプチドが固体表面に付着されることを特徴とする方法。
【請求項２９】
請求項２８に記載の方法において、前記固体表面が樹脂であることを特徴とする方法。
【請求項３０】
請求項１５に記載の方法において、前記ＨＦＥ２Ａポリペプチドが抽出物の一部であることを特徴とする方法。
【請求項３１】
請求項１５に記載の方法において、前記ポリペプチドが、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８および９より成るグループから選択された配列を持つポリヌクレオチドによりエンコードされることを特徴とする方法。
【請求項３２】
請求項１５に記載の方法において、前記ポリペプチドが、配列番号１０、１１および１２から選択されたアミノ酸配列を含むことを特徴とする方法。
【請求項３３】
哺乳類においてＨＦＥ２Ａに関連する疾患を処置あるいは予防するための組成物を調製する方法であって、
薬剤として許容される担体に、治療上効果的な量のＨＦＥ２Ａ調節因子を包含する組成物を形成することを含むことを特徴とする方法。
【請求項３４】
請求項３３に記載の方法において、前記ＨＦＥ２Ａ調節因子が、請求項１、１４あるいは１５のいずれか一項に記載の方法において調節活性を示すことを特徴とする方法。
【請求項３５】
請求項３４に記載の方法において、前記調節因子が前記方法を用いてＨＦＥ２Ａ調節因子として最初に同定されたことを特徴とする方法。
【請求項３６】
請求項３３に記載の方法において、前記ＨＦＥ２Ａ調節因子が、選択的ＨＦＥ２Ａアゴニスト、選択的ＨＦＥ２Ａアンタゴニスト、それらの薬剤として許容される塩、およびこれらの組み合わせより成るグループから選択されたものであることを特徴とする方法。
【請求項３７】
請求項３６に記載の方法において、前記選択されたものが薬剤として許容される担体中にあることを特徴とする方法。
【請求項３８】
請求項３３に記載の方法において、前記ＨＦＥ２Ａ調節因子が、抗体、アンチセンス分子、リボザイムおよび薬剤様有機小分子から選択されることを特徴とする方法。
【請求項３９】
請求項３３に記載の方法において、前記疾患が鉄代謝の疾患であることを特徴とする方法。
【請求項４０】
請求項３９に記載の方法において、前記鉄代謝の疾患が、鉄過剰疾患および鉄欠乏症より成るグループから選択されたものであることを特徴とする方法。
【請求項４１】
請求項３９に記載の方法において、前記鉄代謝の疾患が、ヘモクロマトーシス、輸血関連鉄過剰状態、サラセミア、ポルフィリン症、および若年性ヘモクロマトーシスより成るグループから選択されたものであることを特徴とする方法。
【請求項４２】
請求項３９に記載の方法において、前記鉄代謝の疾患が、貧血および慢性疾患に伴う貧血より成るグループから選択されたものであることを特徴とする方法。
【請求項４３】
請求項３９に記載の方法において、前記鉄代謝の疾患が、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、およびインスリン抵抗性から選択されたものであることを特徴とする方法。
【請求項４４】
個体からの生体サンプルのＨＦＥ２Ａ遺伝子の核酸配列における突然変異あるいは多型の存在を判断するための方法であって、
個体からＨＦＥ２Ａ含有生体サンプルを獲得し、前記核酸配列を配列番号６、７、８あるいは９の最低一つの配列と比較することを含み、
ここで前記核酸配列と配列番号６、７、８あるいは９の最低一つの配列との間の差異が、前記突然変異あるいは多型の存在を示すことを特徴とする方法。
【請求項４５】
請求項４４に記載の方法において、前記突然変異あるいは多型が、表１に示す突然変異あるいは多型であることを特徴とする方法。
【請求項４６】
個体からの生体サンプルのＨＦＥ２Ａポリペプチドのアミノ酸配列における突然変異あるいは多型の存在を判断するための方法であって、
個体からＨＦＥ２Ａ含有生体サンプルを獲得し、前記アミノ酸配列を配列番号１０、１１あるいは１２の最低一つの配列と比較することを含み、
ここで前記アミノ酸配列と配列番号１０、１１あるいは１２の最低一つの配列との間の差異が、前記突然変異あるいは多型の存在を示すことを特徴とする方法。
【請求項４７】
個体からの生体サンプルにおけるＨＦＥ２Ａポリペプチドのレベルあるいは量の変化を測定するための方法であって、
個体からの生体サンプルにおけるＨＦＥ２Ａポリペプチドの量を測定し、前記量を鉄代謝の疾患に苦しんでいないことが分かっている個体に見られる量と比較し、前記量を前記個体からの従前の生体サンプルに見られる量と比較することを含むことを特徴とする方法。
【請求項４８】
請求項４７に記載の方法において、前記鉄代謝の疾患が成人発症ヘモクロマトーシスであることを特徴とする方法。
【請求項４９】
請求項４７に記載の方法において、前記鉄代謝の疾患が若年性ヘモクロマトーシスであることを特徴とする方法。
【請求項５０】
請求項４７に記載の方法において、前記鉄代謝の疾患がＩ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、およびインスリン抵抗性から選択されることを特徴とする方法。
【請求項５１】
ＨＦＥ２Ａ活性を調節することができる化合物を同定するための方法であって、
前記方法が、（ａ）試験化合物を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ＨＦＥ２Ａを発現する細胞と接触させ、
（ｂ）前記試験化合物の、ＨＦＥ２Ａ核酸の転写あるいはＨＦＥ２Ａポリペプチドの活性を調節する能力を測定することを含み、
それによりＨＦＥ２Ａ活性を調節することができる化合物を同定することを特徴とする方法。
【請求項５２】
請求項５１に記載の方法において、前記化合物が抗ＨＦＥ２Ａポリペプチド抗体であることを特徴とする方法。
【請求項５３】
請求項５１に記載の方法において、前記化合物がアンチセンスＨＦＥ２Ａ核酸分子であることを特徴とする方法。
【請求項５４】
請求項５１に記載の方法において、前記化合物がＨＦＥ２Ａリボザイムであることを特徴とする方法。
【請求項５５】
請求項５１に記載の方法において、前記化合物が有機小分子であることを特徴とする方法。
【請求項５６】
配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１９、２０、２１および２２より成るグループから選択された配列と最低６０％のパーセント同一性を持つヌクレオチド配列を持つポリヌクレオチドを含む単離されたポリヌクレオチド。
【請求項５７】
請求項５６に記載の単離されたポリヌクレオチドにおいて、前記パーセント同一性が最低５９％であることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項５８】
請求項５６に記載の単離されたポリヌクレオチドにおいて、前記パーセント同一性が最低７８％であることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項５９】
請求項５６に記載の単離されたポリヌクレオチドにおいて、前記パーセント同一性が最低９０％であることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６０】
請求項５６に記載の単離されたポリヌクレオチドにおいて、前記パーセント同一性が最低９５％であることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６１】
請求項５６に記載の単離されたポリヌクレオチドにおいて、前記パーセント同一性が最低９８％であることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６２】
請求項５６に記載の単離されたポリヌクレオチドにおいて、前記ヌクレオチド配列が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１９、２０、２１および２２より成るグループから選択されたものであることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６３】
配列番号１０、１１、１２、２３、２４、２５、２６、２７および２８より成るグループから選択されたアミノ酸配列と最低９０％のパーセント同一性を持つアミノ酸配列を持つポリペプチドを含む単離されたポリペプチド。
【請求項６４】
請求項６３に記載の単離されたポリペプチドにおいて、前記パーセント同一性が最低９５％であることを特徴とする単離されたポリペプチド。
【請求項６５】
請求項６３に記載の単離されたポリペプチドにおいて、前記パーセント同一性が最低９８％であることを特徴とする単離されたポリペプチド。
【請求項６６】
請求項６３に記載の単離されたポリペプチドにおいて、前記アミノ酸配列が、配列番号１０、１１、１２、２３、２４、２５、２６、２７および２８より成るグループから選択されることを特徴とする単離されたポリペプチド。
【請求項６７】
請求項５６に記載のポリヌクレオチドの組換え型を含む細胞系。
【請求項６８】
請求項６３に記載のポリペプチドの組換え型を含む細胞系。
【請求項６９】
ヘモジュヴェリンの発現あるいは活性を調節する組成物を同定するための方法における、請求項６７あるいは６８に記載の細胞系の使用法。
【請求項７０】
鉄代謝の疾患を処置するための組成物であって、前記組成物が、薬剤として許容される担体中の治療上効果的な量の請求項６３に記載のポリペプチドを含むことを特徴とする組成物。
【請求項７１】
請求項７０に記載の組成物であって、前記疾患が若年性ヘモクロマトーシスであることを特徴とする方法。
【請求項７２】
単離されたポリペプチドあるいはその断片であって、前記ポリペプチドが、配列番号１０、１１および１２より成るグループから選択されたアミノ酸配列と最低９０％のパーセント同一性を持つアミノ酸配列を含み、前記断片が最低１０個のアミノ酸残基を含むことを特徴とする単離されたポリペプチド。
【請求項７３】
請求項７２に記載の単離されたポリペプチドあるいはその断片において、前記パーセント同一性が最低９５％であることを特徴とする単離されたポリペプチドあるいはその断片。
【請求項７４】
請求項７２に記載の単離されたポリペプチドあるいはその断片において、前記パーセント同一性が最低９８％であることを特徴とする単離されたポリペプチドあるいはその断片。
【請求項７５】
請求項７２に記載の単離されたポリペプチドあるいはその断片において、前記ポリペプチドが配列番号１０、１１および１２より成るグループから選択されたアミノ酸配列を含むことを特徴とする単離されたポリペプチドあるいはその断片。
【請求項７６】
請求項７２、７３、７４あるいは７５のいずれか一項に記載のポリペプチドを発現するように処理されたことを特徴とする組換え細胞系。
【請求項７７】
ヘモジュヴェリンの発現あるいは活性を調節する組成物を同定することへの、請求項７６に記載の細胞系の使用。
【請求項７８】
鉄代謝の疾患を処置するための組成物であって、前記組成物が、薬剤として許容される担体中の治療上効果的な量の請求項７２、７３、７４あるいは７５のいずれか一項に記載のポリペプチドを含むことを特徴とする組成物。
【請求項７９】
請求項７８に記載の組成物において、前記疾患が若年性ヘモクロマトーシスであることを特徴とする組成物。
【請求項８０】
請求項７８に記載の組成物において、前記疾患が成人発症ヘモクロマトーシスであることを特徴とする組成物。
【請求項８１】
請求項７８に記載の組成物において、前記疾患が慢性疾患に伴う貧血であることを特徴とする組成物。
【請求項８２】
請求項７８に記載の組成物において、前記疾患が鉄欠乏性貧血であることを特徴とする組成物。
【請求項８３】
請求項５６に記載の単離されたポリヌクレオチドにおいて、前記ヌクレオチド配列が配列番号７、８および９より成るグループから選択され、前記単離されたポリヌクレオチドが、ポリペプチドの１５ｋＤａから３０ｋＤａの分解産物をエンコードすることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項８４】
請求項５７に記載の単離されたポリヌクレオチドにおいて、前記ヌクレオチド配列が配列番号７、８および９より成るグループから選択され、前記単離されたポリヌクレオチドがＨＦＥ２Ａポリペプチドの分解産物をエンコードし、前記分解産物がおおよそ１５ｋＤａから３０ｋＤａであることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項８５】
請求項５８に記載の単離されたポリヌクレオチドにおいて、前記ヌクレオチド配列が配列番号７、８および９より成るグループから選択され、前記単離されたポリヌクレオチドがＨＦＥ２Ａポリペプチドの分解産物をエンコードし、前記分解産物がおおよそ１５ｋＤａから３０ｋＤａであることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項８６】
請求項５９に記載の単離されたポリヌクレオチドにおいて、前記ヌクレオチド配列が配列番号７、８および９より成るグループから選択され、前記単離されたポリヌクレオチドがＨＦＥ２Ａポリペプチドの分解産物をエンコードし、前記分解産物がおおよそ１５ｋＤａから３０ｋＤａであることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項８７】
請求項６０に記載の単離されたポリヌクレオチドにおいて、前記ヌクレオチド配列が配列番号７、８および９より成るグループから選択され、前記単離されたポリヌクレオチドがＨＦＥ２Ａポリペプチドの分解産物をエンコードし、前記分解産物がおおよそ１５ｋＤａから３０ｋＤａであることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項８８】
請求項６１に記載の単離されたポリヌクレオチドにおいて、前記ヌクレオチド配列が配列番号７、８および９より成るグループから選択され、前記単離されたポリヌクレオチドがＨＦＥ２Ａポリペプチドの分解産物をエンコードし、前記分解産物がおおよそ１５ｋＤａから３０ｋＤａであることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項８９】
請求項６２に記載の単離されたポリヌクレオチドにおいて、前記ヌクレオチド配列が配列番号７、８および９より成るグループから選択され、前記単離されたポリヌクレオチドがＨＦＥ２Ａポリペプチドの分解産物をエンコードし、前記分解産物がおおよそ１５ｋＤａから３０ｋＤａであることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項９０】
請求項８４、８５、８６、８７、８８、あるいは８９のいずれか一項に記載の単離されたポリヌクレオチドにおいて、前記分解産物が約２６ｋＤａのポリペプチドを含むことを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項９１】
請求項４７に記載の方法において、前記変化が減少であることを特徴とする方法。
【請求項９２】
請求項４７に記載の方法において、前記変化が増加であることを特徴とする方法。
【請求項９３】
請求項４７に記載の方法において、前記疾患が慢性疾患に伴う貧血であることを特徴とする方法。
【請求項９４】
請求項４７に記載の方法において、前記疾患が鉄欠乏性貧血であることを特徴とする方法。
【請求項９５】
請求項４７に記載の方法において、前記変化が、前記ポリペプチドの断片の存在を検出することにより測定されることを特徴とする方法。
【請求項９６】
請求項９５に記載の方法において、前記変化が、前記断片の大きさの測定に基づくものであることを特徴とする方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
他の態様において、本発明はＨＦＥ２Ａ遺伝子発現を調節する物質を同定するための方法に関し、前記方法は試験化合物を、プロモーター配列に機能するように連結するレポーター遺伝子と接触させ、試験化合物によるレポーター遺伝子の発現の変化を測定し、構成体の調節因子を同定することを含む。これは、好ましくはＨＦＥ２Ａプロモーター、最も好ましくはマウス、ラットあるいはヒトＨＦＥ２Ａプロモーター等の哺乳類ＨＦＥ２Ａに機能するように連結する前記レポーター遺伝子の転写の調節である。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７３】
他の態様において、本発明はＨＦＥ２Ａ遺伝子発現を調節する物質を同定するための方法に関し、前記方法は、
（ａ）試験化合物を、ＨＦＥ２Ａプロモーターに機能するように連結するレポーター遺伝子の発現を支持する条件下で、前記レポーター遺伝子を含む遺伝子構成体と接触させ、
（ｂ）前記接触の結果としての前記レポーター遺伝子の発現の変化を測定することを含み、
ここで発現の変化が前記試験化合物を、ＨＦＥ２Ａ遺伝子発現を調節する物質として同定あるいは確認する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４７】
前記調節は、好ましくは転写の減少あるいは増加である。好ましい実施例において、前記転写は転写産物の量を測定することにより測定される。有用な実施例において、ＨＦＥ２Ａのプロモーター領域はレポーター遺伝子、すなわちその転写が適宜測定される遺伝子（例えば、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、クロラムフェニコール、アセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）等のレポーター遺伝子）に機能するように結合する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７９】
前記にしたがって、本発明は化合物によるＨＦＥ２Ａ遺伝子発現の調節に関する試験情報を生成するための方法に関し、前記方法は、
（ａ）試験化合物を、ＨＦＥ２Ａプロモーターに機能するように結合するレポーター遺伝子の発現を支持する条件下で、前記レポーター遺伝子を含む遺伝子構成体と接触させ、
（ｂ）前記接触の結果としての前記レポーター遺伝子の発現の変化を測定し、ここで前記変化は調節を示し、
（ｃ）遺伝子調節活性を示す、測定された遺伝子の発現の変化に基づく前記試験化合物の遺伝子調節活性に関する試験情報を生成することを含む。