(57)【要約】ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列、あるいはその断片を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が開示される。そのようなＣＡＲを含む組成物、ならびにその使用および使用方法も開示される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列、あるいはその断片を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項２】
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する前記共刺激配列、あるいはその断片が、配列番号１６、５８または５９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、請求項１に記載のＣＡＲ。
【請求項３】
ＣＤ２８の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる共刺激配列をさらに含む、請求項１または２に記載のＣＡＲ。
【請求項４】
４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる共刺激配列をさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項５】
配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる共刺激配列を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項６】
配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる共刺激配列を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項７】
二量体形成ドメインをさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項８】
前記二量体形成ドメインが、誘導性二量体形成ドメインである、請求項７に記載のＣＡＲ。
【請求項９】
前記二量体形成ドメインが、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、請求項７または８に記載のＣＡＲ。
【請求項１０】
ＣＤ２８、ＣＤ８α若しくはＣＤ２２６の膜貫通ドメインであるかまたはそれらに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる膜貫通ドメインを含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項１１】
配列番号１１、１０若しくは５７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる膜貫通ドメインを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項１２】
ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域であるかまたはそれに由来するヒンジ領域をさらに含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項１３】
前記ヒンジ領域が、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、請求項１２に記載のＣＡＲ。
【請求項１４】
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含む抗原結合ドメインを含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項１５】
配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含む抗原結合ドメインを含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【請求項１６】
表１に示されるＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ若しくはＨ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌ若しくはＭ、または表３に示されるＶ、Ｗ、Ｘ、Ｚ、ＡＡ、ＢＢ、ＣＣ、ＤＤ、ＥＥ、ＦＦ、ＧＧ、ＨＨ、ＩＩ、ＪＪ、ＫＫ、ＬＬ若しくはＭＭのうちのいずれか１つに従う、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項１７】
配列番号２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３８、３９、４０、４１、４２、８１、８３、８４、８５、８６、８８、８９、９０、９２、９３、９４、９５、９６、９７または９８のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項１８】
配列番号３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、４３、４４、４５、４６、４７、６２、６４、６５、６６、６７、６９、７０、７１、７３、７４、７５、７６、７７、７８または７９のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸。
【請求項２０】
請求項１９に記載の核酸を含むベクター。
【請求項２１】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、請求項１９に記載の核酸、または請求項２０に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項２２】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞を産生する方法であって、請求項１９に記載の核酸または請求項２０に記載のベクターを細胞に導入するステップと、前記細胞による前記核酸またはベクターの発現に好適な条件下で前記細胞を培養するステップとを含む方法。
【請求項２３】
請求項２２に記載の方法により得られる、または得ることができる細胞。
【請求項２４】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、請求項１９に記載の核酸、請求項２０に記載のベクター、または請求項２１若しくは２３に記載の細胞と、薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤または希釈剤とを含む、医薬組成物。
【請求項２５】
疾患または障害を処置または予防する方法において使用するための、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、請求項１９に記載の核酸、請求項２０に記載のベクター、請求項２１若しくは２３に記載の細胞、または請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
疾患または障害を処置または予防するための医薬の製造における、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、請求項１９に記載の核酸、請求項２０に記載のベクター、請求項２１若しくは２３に記載の細胞、または請求項２４に記載の医薬組成物の使用。
【請求項２７】
疾患または障害を処置または予防する方法であって、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、請求項１９に記載の核酸、請求項２０に記載のベクター、請求項２１若しくは２３に記載の細胞または請求項２４に記載の医薬組成物の治療または予防有効量を対象に投与するステップを含む方法。
【請求項２８】
対象における疾患または障害を処置または予防する方法であって、
（ａ）少なくとも１つのＴ細胞を対象から単離するステップと、
（ｂ）前記少なくとも１つのＴ細胞を、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、請求項１９に記載の核酸または請求項２０に記載のベクターを発現するかまたは含むように修飾するステップと、
（ｃ）前記修飾された少なくとも１つのＴ細胞を対象に投与するステップと
を含む方法。
【請求項２９】
対象における疾患または障害を処置または予防する方法であって、
（ａ）少なくとも１つのＴ細胞を対象から単離するステップと、
（ｂ）前記少なくとも１つのＴ細胞を、請求項１９に記載の核酸または請求項２０に記載のベクターを前記少なくとも１つのＴ細胞に導入することによって修飾するステップと、
（ｃ）前記修飾された少なくとも１つのＴ細胞を対象に投与するステップと
を含む方法。
【請求項３０】
前記疾患または障害が、がんである、請求項２５に記載の使用のためのＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞若しくは医薬組成物、請求項２６に記載の使用、または請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記がんが、ＧＰＣ３発現がんまたはＥｐＣＡＭ発現がんである、請求項３０に記載の使用のためのＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞若しくは医薬組成物、使用または方法。
【請求項３２】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、請求項１９に記載の核酸、請求項２０に記載のベクター、請求項２１若しくは２３に記載の細胞または請求項２４に記載の医薬組成物の所定量を含む、部品キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キメラ抗原受容体群（ＣＡＲｓ）、ＣＡＲをコードする核酸およびＣＡＲを発現する細胞、ならびにそれらの医学的使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
遺伝子修飾Ｔ細胞での免疫療法は、血液悪性腫瘍の処置に大いに期待できる。キメラ抗原受容体群（ＣＡＲｓ）の付加は、腫瘍特異的Ｔ細胞を生成するための特に有用な手法であることが証明されている。
【０００３】
基本的なＣＡＲは、一本鎖可変断片（ｓｃＦＶ）または組換え親和性リガンドのいずれかに由来するエクトドメインと、構造ヒンジ領域と、膜貫通ドメインと、ＣＤ３ζに由来するシグナル伝達ドメインを有し、追加の共刺激分子を有するまたは有さない、細胞質ドメインとで構成される。
【０００４】
ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ１９陽性血液悪性腫瘍を処置する初期臨床研究には成功したが、固形腫瘍におけるＣＡＲの成功は、固有の腫瘍関連抗原の欠如、腫瘍部位へのＴ細胞の不十分なホーミング、および固形腫瘍の免疫抑制微小環境を克服することができないことにより、大きく阻まれてきた。
【０００５】
ＧＰＣ３（グリピカン３、これはＤＧＳＸ、ＧＴＲ２−２、ＭＸＲ７、ＯＣＩ−５、ＳＤＹＳ、ＳＧＢ、ＳＧＢＳおよびＳＧＢＳ１としても公知）は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのグリピカンファミリーの細胞表面タンパク質である。ＧＰＣ３は、正常な成人の肝臓組織では発現されないが、肝細胞癌では発現される（Ｓｈｉｒａｋａｗａら、２００９  Ｉｎｔｌ  Ｊ  Ｏｎｃｏｌ  ３４：６４９〜６５６；Ｈｏら、２０１１  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ４７（３）：３３３〜３３８）。ＧＰＣ３発現は、他のがん、例えば、メラノーマ、卵巣明細胞癌、卵黄嚢腫瘍、神経芽腫、肝芽腫およびウィルムス腫瘍細胞においても観察されている（Ｈｏら、２０１１  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ４７（３）：３３３〜３３８）。したがって、ＧＰＣ３は、がん治療の標的候補である。
【０００６】
欧州特許第２９９５６８２号Ａ１、Ｇａｏら、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０（２４）：６４１８〜６４２８、およびＷＯ２０１６／０４９４５９Ａ１には、ＧＰＣ３結合ドメインを含むＣＡＲ、および前記ＣＡＲを含む細胞が開示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、望ましいまたは改善された特性を有するキメラ抗原受容体群（ＣＡＲｓ）、およびそのようなＣＡＲを発現する細胞を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列、あるいはその断片を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。一部の実施形態では、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列、あるいはその断片は、配列番号１６、５８または５９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０００９】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる共刺激配列をさらに含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる共刺激配列をさらに含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる共刺激配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる共刺激配列を含む。
【００１０】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、二量体形成ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、二量体形成ドメインは、誘導性二量体形成ドメインである。一部の実施形態では、二量体形成ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【００１１】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８、ＣＤ８α若しくはＣＤ２２６の膜貫通ドメインであるかまたはそれらに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１１、１０若しくは５７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる膜貫通ドメインを含む。
【００１２】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、ヒンジ領域をさらに含む。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域であるか、またはヒトＩｇＧ１ヒンジ領域に由来する。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【００１３】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含む抗原結合ドメインを含む。
【００１４】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、
配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含む抗原結合ドメインを含む。
【００１５】
別の態様では、本発明は、表１に示されるＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌ若しくはＭ、または表３に示されるＶ、Ｗ、Ｘ、Ｚ、ＡＡ、ＢＢ、ＣＣ、ＤＤ、ＥＥ、ＦＦ、ＧＧ、ＨＨ、ＩＩ、ＪＪ、ＫＫ、ＬＬ若しくはＭＭのうちのいずれか１つに従う、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
【００１６】
一部の態様では、本発明は、配列番号２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３８、３９、４０、４１、４２、８１、８３、８４、８５、８６、８８、８９、９０、９２、９３、９４、９５、９６、９７または９８のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
【００１７】
一部の態様では、本発明は、配列番号３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、４３、４４、４５、４６、４７、６２、６４、６５、６６、６７、６９、７０、７１、７３、７４、７５、７６、７７、７８または７９のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
【００１８】
別の態様では、本発明は、ＧＰＣ３と結合することができるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、ＧＰＣ３結合ドメインと、ヒンジ領域と、膜貫通ドメインと、シグナル伝達ドメインとを含み、前記ヒンジ領域が、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域であるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８αの膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＣＡＲを提供する。
【００１９】
一部の実施形態では、ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、前記膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【００２０】
別の態様では、本発明は、ＧＰＣ３と結合することができるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、ＧＰＣ３結合ドメインと、膜貫通ドメインと、シグナル伝達ドメインと、誘導性二量体形成ドメインとを含む、ＣＡＲを提供する。
【００２１】
一部の実施形態では、二量体形成ドメインは、Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰのアミノ酸配列であるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
一部の実施形態では、本発明に係るＣＡＲは、二量体形成ドメインを含み、前記二量体形成ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【００２２】
別の態様では、本発明は、ＧＰＣ３と結合することができるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、ＧＰＣ３結合ドメインと、膜貫通ドメインと、シグナル伝達ドメインとを含み、前記シグナル伝達ドメインが共刺激配列を含み、前記共刺激配列が、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＣＡＲを提供する。
【００２３】
一部の実施形態では、本発明に係るＣＡＲは、共刺激配列を含むシグナル伝達ドメインを含み、前記共刺激ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【００２４】
一部の実施形態では、本発明に係るＣＡＲは、共刺激配列を含むシグナル伝達ドメインを含み、前記共刺激配列は、ＣＤ２８Ｂの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。一部の実施形態では、本発明に係るＣＡＲは、共刺激配列を含むシグナル伝達ドメインを含み、前記共刺激配列は、４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【００２５】
一部の実施形態では、本発明に係るＣＡＲは、共刺激配列を含むシグナル伝達ドメインを含み、前記共刺激配列は、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【００２６】
一部の実施形態では、本発明に係るＣＡＲは、共刺激配列を含むシグナル伝達ドメインを含み、前記共刺激配列は、配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【００２７】
別の態様では、本発明は、ＧＰＣ３と結合することができるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、本明細書中の表１に示されるＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、ＬまたはＭのいずれか１つに従うＣＡＲを提供する。
【００２８】
別の態様では、本発明は、ＧＰＣ３と結合することができるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、配列番号３８、３９、４０、２２、２３、４１、４２、２４、２５、２６、２７、２８または２９のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＣＡＲを提供する。
【００２９】
別の態様では、本発明は、ＧＰＣ３と結合することができるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、配列番号４３、４４、４５、３０、３１、４６、４７、３２、３３、３４、３５、３６または３７のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＣＡＲを提供する。
【００３０】
別の態様では、本発明は、本発明に係るキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸を提供する。
別の態様では、本発明は、本発明に係る核酸を含むベクターを提供する。
【００３１】
別の態様では、本発明は、本発明に係るキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、核酸またはベクターを含む、細胞を提供する。
別の態様では、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞を産生する方法であって、本発明に係る核酸またはベクターを細胞に導入するステップと、前記細胞による前記核酸またはベクターの発現に好適な条件下で前記細胞を培養するステップとを含む方法を提供する。
【００３２】
別の態様では、本発明は、本発明に係る方法により得られる、または得ることができる細胞を提供する。
別の態様では、本発明は、本発明に係るキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、核酸または細胞と、薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤または希釈剤とを含む、医薬組成物を提供する。
【００３３】
別の態様では、本発明は、疾患または障害を処置または予防する方法における使用のための、本発明に係るキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、核酸、ベクター、細胞または医薬組成物を提供する。
【００３４】
別の態様では、本発明は、疾患または障害を処置または予防するための医薬の製造における、本発明に係るキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、核酸、ベクター、細胞または医薬組成物の使用を提供する。
【００３５】
別の態様では、本発明は、疾患または障害を処置または予防する方法であって、本発明に係るキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、核酸、ベクター、細胞または医薬組成物の治療または予防有効量を対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００３６】
別の態様では、本発明は、対象における疾患または障害を処置または予防する方法であって、
（ａ）少なくとも１つのＴ細胞を対象から単離するステップと、
（ｂ）前記少なくとも１つのＴ細胞を、本発明に係るキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、核酸またはベクターを、発現するかまたは含むように修飾するステップと、
（ｃ）前記修飾された少なくとも１つのＴ細胞を対象に投与するステップと
を含む方法を提供する。
【００３７】
別の態様では、本発明は、対象における疾患または障害を処置または予防する方法であって、
（ａ）少なくとも１つのＴ細胞を対象から単離するステップと、
（ｂ）前記少なくとも１つのＴ細胞を、本発明に係る核酸またはベクターを前記少なくとも１つのＴ細胞に導入することによって修飾するステップと、
（ｃ）前記修飾された少なくとも１つのＴ細胞を対象に投与するステップと
を含む方法を提供する。
【００３８】
本発明に係る、使用のためのＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞若しくは医薬組成物、使用または方法の一部の実施形態では、疾患または障害は、がんである。一部の実施形態では、がんは、ＧＰＣ３発現がんまたはＥｐＣＡＭ発現がんである。一部の実施形態では、ＧＰＣ３発現がんまたはＥｐＣＡＭ発現がんは、肝細胞癌である。
【００３９】
別の態様では、本発明は、本発明に係るキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、核酸、ベクター、細胞または医薬組成物の所定量を含む、部品キットを提供する。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
ＣＤ２２６
ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ−１、ＰＴＡ１、ＴＬｉＳＡ１としても公知）は、ヒトにおいてＣＤ２２６遺伝子によりコードされるタンパク質である。ＣＤ２２６は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、血小板、単球（樹状細胞およびマクロファージ）およびＴ細胞などの様々な細胞型の細胞表面で発現される、約６５ＫＤａの膜貫通糖タンパク質である。
【００４１】
ＣＤ２２６のリガンドは、ＣＤ１１２（ネクチン−２としても公知）およびＣＤ１５５（ポリオウイルス受容体、ＰＶＲ、としても公知）である。
研究は、ＣＤ２２６は、ＣＤ１５５およびＣＤ１１２を発現する腫瘍細胞のＮＫ細胞媒介殺滅を誘発することを明らかにした（Ｂｏｔｔｉｎｏら、２００３  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９８：１８２９〜１８３９）。ＣＤ２２６は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の共刺激も促進し、非プロフェッショナル抗原提示細胞によるＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を促進することができる（Ｇｉｌｆｉｌｌａｎら、２００８  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０５：２９６５〜２９７３）。
【００４２】
ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）は、ＣＤ１１２およびＣＤ１５５への結合についてＣＤ２２６と競合する共抑制性免疫受容体である（Ｌｏｚａｎｏら、２０１２  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８８（８）：３８６９〜３８７５）。ＴＩＧＩＴが抗腫瘍性のおよび他のＣＤ８＋Ｔ細胞依存性慢性免疫応答を阻害することも明らかにされており、これは、ＴＩＧＩＴがＣＤ２２６ホモ二量体形成を減じることを含みうる（Ｊｏｈｎｓｔｏｎら、２０１４  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２６：９２３〜９３７）。
【００４３】
キメラ抗原受容体群
本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。ＧＰＣ３と結合することができるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も提供される。
【００４４】
キメラ抗原受容体群（ＣＡＲｓ）は、抗原結合機能とＴ細胞活性化機能の両方を提供する、一群の組換え受容体分子である。ＣＡＲ構造および工学技術は、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される、Ｄｏｔｔｉら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ（２０１４）２５７（１）において概説されている。
【００４５】
ＣＡＲは、膜貫通ドメインに連結された抗原結合ドメインとシグナル伝達ドメインとを含む。任意選択のヒンジドメインは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間の離隔をもたらすことができ、可動性リンカーとしての機能を果すことができる。
【００４６】
ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＣＡＲが標的化される抗原に特異的な抗体の抗原結合領域に基づきうる。例えば、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、標的タンパク質と特異的に結合する抗体の相溶性決定領域（ＣＤＲ）についてのアミノ酸配列を含みうる。ＣＡＲの抗原結合ドメインは、標的タンパク質と特異的に結合する抗体の軽鎖および重鎖可変領域アミノ酸配列を含んでいてもよいし、またはそれからなっていてもよい。抗原結合ドメインは、抗体の軽鎖および重鎖可変領域アミノ酸配列の配列を含む一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）として提供されていてもよい。ＣＡＲの抗原結合ドメインは、リガンド：受容体結合などの他のタンパク質：タンパク質相互作用に基づいて抗原を標的とすることができ、例えば、ＩＬ−１３Ｒα２を標的とするＣＡＲが、ＩＬ−１３に基づく抗原結合ドメインを使用して開発された（例えば、Ｋａｈｌｏｎら、２００４  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６４（２４）：９１６０〜９１６６を参照されたい）。
【００４７】
膜貫通ドメインは、ＣＡＲの抗原結合ドメインとシグナル伝達ドメイン間に提供される。膜貫通ドメインは、ＣＡＲを発現する細胞の細胞膜へのＣＡＲの固定化をもたらし、抗原結合ドメインは細胞外空間内にあり、シグナル伝達ドメインはその細胞の内部にある。ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ３−ζ、ＣＤ４、ＣＤ８またはＣＤ２８の膜貫通領域配列に由来することもある。
【００４８】
シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞の活性化を可能にする。ＣＡＲシグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ発現Ｔ細胞のリン酸化および活性化のための免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を提供する、ＣＤ３−ζの細胞内ドメインのアミノ酸配列を含んでいてもよい。ＦｃγＲＩのＩＴＡＭ含有領域を含むドメインなどの、他のＩＴＡＭ含有タンパク質の配列を含むシグナル伝達ドメインも、ＣＡＲｓに用いられてきた（Ｈａｙｎｅｓら、２００１  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６（１）：１８２〜１８７）。ＣＤ３−ζの細胞内ドメインに由来するシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲは、第一世代ＣＡＲｓと呼ばれることが多い。
【００４９】
ＣＡＲｓのシグナル伝達ドメインは、標的タンパク質との結合時にＣＡＲ発現Ｔ細胞の活性化を助長するための、共刺激分子のシグナル伝達ドメインに由来する共刺激配列も含んでいてもよい。好適な共刺激分子としては、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳおよびＣＤ２７が挙げられる。追加の共刺激配列を含むシグナル伝達ドメインを有するＣＡＲは、第二世代ＣＡＲｓと呼ばれることが多い。
【００５０】
一部の事例では、ＣＡＲｓは、異なる細胞内シグナル伝達経路の共刺激をもたらすように改変される。例えば、ＣＤ２８共刺激に関連するシグナル伝達は、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（Ｐ１３Ｋ）経路を優先的に活性化し、これに対して４−１ＢＢ媒介シグナル伝達は、ＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦ）アダプタータンパク質を介する。したがって、ＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、１つより多くの共刺激分子のシグナル伝達ドメインに由来する共刺激配列を含有する。複数の共刺激配列を有するシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲは、第三世代ＣＡＲｓと呼ばれることが多い。
【００５１】
任意選択のヒンジ領域は、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間の離隔をもたらすことができ、可動性リンカーとしての機能を果すことができる。ヒンジ領域は、結合部分を異なる方向に配向させる可動性ドメインであることがある。ヒンジ領域は、ＩｇＧ１に由来することもあり、または免疫グロブリンのＣＨ２ＣＨ３領域に由来することもある。
【００５２】
抗原結合ドメイン
本発明のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、抗原結合ドメインを含む。
本発明のＣＡＲの抗原結合ドメインは、好ましくは、標的分子、例えば標的タンパク質、への特異的結合を提示する。「特異的結合」は、非特異的でない相互作用である。特異的結合は、ファンデルワールス力、静電相互作用、水素結合および疎水性相互作用などの、非共有結合性相互作用により媒介される。本発明のＣＡＲの抗原結合ドメインは、標的分子に対する抗体に由来することもあり、または他の標的分子結合剤、例えば、標的分子結合ペプチド若しくは核酸アプタマー、リガンド若しくは他の分子に由来することもある
抗原結合ドメインは、任意の標的分子に指向されうる。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、その発現がまたは発現の上方調節が疾患または障害と正の関連を示す、抗原タンパク質と結合することができる。すなわち、標的タンパク質は、疾患または障害のマーカーでありうる。
【００５３】
標的タンパク質は、好ましくは、標的タンパク質を発現する細胞の表面で発現される。
一部の実施形態では、標的タンパク質は、免疫応答、例えば、細胞媒介免疫応答、例えば細胞傷害性免疫応答を指向させることが所望される、細胞、または組織の細胞により発現される。
【００５４】
一部の実施形態では、標的タンパク質は、感染性疾患、自己免疫疾患、またはがんと関連する。一部の実施形態では、標的タンパク質は、感染病原体に感染した細胞、自己免疫エフェクター細胞（すなわち、自己免疫病態のエフェクター）、またはがん細胞により発現される。一部の実施形態では、標的タンパク質は、感染病原体（例えば、ウイルス性または細胞内病原体）による感染に応答して、細胞により発現されるか、または細胞において発現が上方調節される。一部の実施形態では、標的タンパク質は、自己免疫エフェクター細胞（例えば、自己反応性Ｔ細胞）により発現されるか、またはそのような細胞において発現が上方調節される。一部の実施形態では、標的タンパク質は、がん細胞、例えば、腫瘍の細胞により発現されるか、またはそのような細胞において発現が上方調節される。
【００５５】
一部の実施形態では、本発明に係るＣＡＲの抗原結合ドメインは、その全体が参照により本明細書に援用される、Ｓａｄｅｌａｉｎら、２０１３、Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ  ３（４）：３８８〜３９８の表１に開示されている標的分子：α−葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３  ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＥＡ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４０、ＥｐｈＡ２、ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ  ２、３、４、ＦＢＰ、胎児アセチルコリンｅ受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｈｅｒ−２、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＬ−１３Ｒ−α２、ＫＤＲ、κ−軽鎖、ルイスＹ、Ｌ１−細胞接着分子、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソセリン、マウスＣＭＶ感染細胞、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、癌胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ｍＡｂによりＩｇＥを標的とするもの、ＴＡＧ−７２、ＶＥＧＦ−Ｒ２、およびビオチン化分子、から選択される標的分子に指向されうる。
【００５６】
抗原結合ドメインは、標的分子に対して向けられた抗体の重鎖および軽鎖可変領域配列を含んでいてもよい。重鎖および軽鎖可変領域配列は、いずれの好適な形式で提供されていてもよいが、抗原結合ドメインをＣＡＲの他のドメインと連結させることができることを条件とする。本発明の抗原結合ドメインに関連して企図される形式は、Ｃａｒｔｅｒ、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００６、６：３４３〜３５７に記載されているもの、例えば、ｓｃＦｖ、ｄｓＦＶ、（ｓｃＦｖ）２、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、Ｆａｂ、ミニボディ、およびＦ（ａｂ）２形式を含む。
【００５７】
一部の実施形態では、重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列は、ＣＡＲ内に特定の相対的配向で提供されていてもよい。一部の実施形態では、重鎖可変領域配列は、軽鎖可変領域配列のＮ末端側にあることがある。一部の実施形態では、軽鎖可変領域配列は、重鎖可変領域配列のＮ末端側にあることがある。
【００５８】
一部の実施形態では、標的分子結合ドメインは、重鎖可変領域配列と軽鎖可変領域配列とを含む一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含むこともあり、またはそのようなｓｃＦｖからなることもある。一部の実施形態では、重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列は、可動性リンカー配列により連結されている。可動性リンカー配列は、当業者には公知であり、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される、Ｃｈｅｎら、Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ（２０１３）６５（１０）：１３５７〜１３６９に記載されている。一部の実施形態では、可動性リンカー配列は、セリンおよびグリシン残基を含む。一部の実施形態では、可動性リンカー配列は、１〜１００、５〜５０、１０〜３０、または１２〜２０個のアミノ酸残基を含む。
【００５９】
一部の実施形態では、標的タンパク質は、ＧＰＣ３である。すなわち、一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、ＧＰＣ３結合ドメインである。
ＧＰＣ３（グリピカン３、これはＤＧＳＸ、ＧＴＲ２−２、ＭＸＲ７、ＯＣＩ−５、ＳＤＹＳ、ＳＧＢ、ＳＧＢＳおよびＳＧＢＳ１としても公知）は、ヘパラン硫酸プロテオグリカンのグリピカンファミリーの細胞表面タンパク質である。ＧＰＣ３は、正常な成人の肝臓組織では発現されないが、肝細胞癌では発現される（Ｓｈｉｒａｋａｗａら、２００９  Ｉｎｔｌ  Ｊ  Ｏｎｃｏｌ  ３４：６４９〜６５６；Ｈｏら、２０１１  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ４７（３）：３３３〜３３８）。ＧＰＣ３発現は、他のがん、例えば、メラノーマ、卵巣明細胞癌、卵黄嚢腫瘍、神経芽腫、肝芽腫およびウィルムス腫瘍細胞においても観察されている（Ｈｏら、２０１１  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ４７（３）：３３３〜３３８）。したがって、ＧＰＣ３は、がん治療の標的候補である。
【００６０】
ＧＰＣ３結合ドメインは、ＧＰＣ３ポリペプチドと結合することができる。ＧＰＣ３結合ドメインが結合することができるＧＰＣ３ポリペプチドは、ヒトＧＰＣ３遺伝子によりまたは非ヒト動物におけるその相同遺伝子によりコードされるアミノ酸配列を含んでいてもよいし、またはそれからなっていてもよい。非ヒト動物は、非ヒト哺乳動物（例えば、ウサギ、モルモット、ラット、マウスまたは他の齧歯類動物（齧歯目のあらゆる動物を含む）、ネコ、イヌ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ（雌牛、例えば乳牛、またはウシ目のあらゆる動物を含む）、ウマ（ウマ目のあらゆる動物を含む）、ロバ、および非ヒト霊長類）であってもよい。
【００６１】
本発明のＣＡＲのＧＰＣ３結合ドメインは、好ましくは、ＧＰＣ３ポリペプチドへの特異的結合を提示する。ＧＰＣ３結合ドメインは、抗ＧＰＣ３抗体に由来することもあり、または他のＧＰＣ３結合剤、例えば、ＧＰＣ３結合ペプチド若しくはＧＰＣ３結合小分子、例えばＷＯ２０１３／１７４７８３Ａ１に開示されているようなＧＰＣ３結合リポカリンムテインに由来することもある。
【００６２】
ＧＰＣ３結合ドメインは、抗ＧＰＣ３抗体の抗原結合領域に由来することもある。抗ＧＰＣ３抗体は、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される、ＦｅｎｇおよびＨｏ、２０１４  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ５８８（２）：３７７〜３８２に記載されている。抗ＧＰＣ３抗体は、ヒトモノクローナル抗ＧＰＣ３抗体ＭＤＸ−１４１４（Ｍｅｄａｒｅｘ）、ＨＮ３（例えば、ＷＯ２０１２／１４５４６９Ａ１に開示されている）、ヒト化マウスモノクローナル抗ＧＰＣ３抗体ＧＣ３３（ＲＯ５１３７３８２、ＲＧ７６８６としても公知であり、例えば、ＷＯ２００６／０４６７５１Ａ１に記載されている）およびＹＰ７（例えば、ＷＯ２０１３／１８１５４３Ａ１に記載されている）、ならびにＷＯ２００９／０１２３９４Ａ１、ＷＯ２００６／０４６７５１Ａ１、ＷＯ２０１３／１８１５４３Ａ１、ＷＯ２０１２／１４５４６９Ａ１、ＷＯ２０１６／０３６９７３Ａ１、ＷＯ２００６／００６６９３Ａ１、ＷＯ２０１３／０７０４６８、ＷＯ２００７／０４７２９１に開示されている抗ＧＰＣ３抗体を含み、前記参照文献の各々は、それら全体が参照により本明細書に援用される。
【００６３】
本発明に係るＧＰＣ３結合ドメインは、好ましくは、抗ＧＰＣ３抗体の重鎖および軽鎖可変領域配列を含むか、または抗ＧＰＣ３抗体の重鎖および軽鎖可変領域配列に由来する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む。
【００６４】
重鎖および軽鎖可変領域配列は、いずれの好適な形式で提供されていてもよいが、ＧＰＣ３結合ドメインをＣＡＲの他のドメインと連結させることができることを条件とする。
一部の実施形態では、ＧＰＣ３結合ドメインは、本明細書に記載の抗ＧＰＣ３抗体のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＧＰＣ３結合ドメインは、本明細書に記載の抗ＧＰＣ３抗体の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、抗ＧＰＣ３抗体ＧＣ３３のＣＤＲを含む。抗体ＧＣ３３についての、重鎖および軽鎖可変領域配列、ならびにカバット番号付けシステム（Ｋａｂａｔら、（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）に従って定義された、重鎖および軽鎖ＣＤＲ１〜３が、下に示される：
ＧＣ３３重鎖可変領域配列：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＥＭＨＷＶＫＱＴＰＶＨＧＬＫＷＩＧＡＬＤＰＫＴＧＤＴＡＹＳＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＴＲＦＹＳＹＴＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１）
ＨＣ−ＣＤＲ１：ＤＹＥＭＨ                        （配列番号２）
ＨＣ−ＣＤＲ２：ＡＬＤＰＫＴＧＤＴＡＹＳＱＫＦＫＧ（配列番号３）
ＨＣ−ＣＤＲ３：ＦＹＳＹＴＹ                      （配列番号４）
ＧＣ３３軽鎖可変領域配列：
ＤＶＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＦＣＳＱＮＴＨＶＰＰＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号５）
ＬＣ−ＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ（配列番号６）
ＬＣ−ＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＳ                  （配列番号７）
ＬＣ−ＣＤＲ３：ＳＱＮＴＨＶＰＰＴ              （配列番号８）
一部の実施形態では、ＧＰＣ３結合ドメインは、下記のアミノ酸配列ｉ）〜ｖｉ）：
ｉ）ＨＣ−ＣＤＲ１：ＤＹＥＭＨ                          （配列番号２）
ｉｉ）ＨＣ−ＣＤＲ２：ＡＬＤＰＫＴＧＤＴＡＹＳＱＫＦＫＧ（配列番号３）
ｉｉｉ）ＨＣ−ＣＤＲ３：ＦＹＳＹＴＹ                    （配列番号４）
ｉｖ）ＬＣ−ＣＤＲ１：ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＧＮＴＹＬＨ  （配列番号６）
ｖ）ＬＣ−ＣＤＲ２：ＫＶＳＮＲＦＳ                      （配列番号７）
ｖｉ）ＬＣ−ＣＤＲ３：ＳＱＮＴＨＶＰＰＴ                （配列番号８）
または前記配列ｉ）〜ｖｉ）のうちの１つまたは複数における１または２または３個のアミノ酸が別のアミノ酸で置換されている、前記アミノ酸配列のバリアントを含む。
【００６５】
一部の実施形態では、ＧＰＣ３結合ドメインは、重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含み、
前記重鎖配列は、配列番号１の重鎖配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有し、
前記軽鎖配列は、配列番号５の軽鎖配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【００６６】
アミノ酸またはヌクレオチド配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当業者に公知の様々な方法で、例えば、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｏｍｅｇａ、Ｔ−ｃｏｆｆｅｅまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公開されているコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。そのようなソフトウェアを使用する場合、デフォルトパラメータ、例えば、ギャップペナルティおよび伸長ペナルティのデフォルトパラメータが、好ましくは使用される。
【００６７】
一部の実施形態では、ＧＰＣ３結合ドメインは、本明細書に記載の重鎖可変領域配列と軽鎖可変領域配列とを含む一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含むこともあり、またはそのようなｓｃＦｖからなることもある。重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列は、共有結合により連結されていることもある。一部の実施形態では、重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列は、可動性リンカー配列により、好ましくは、重鎖可変領域配列の末端および軽鎖可変領域配列の末端に共有結合された可動性リンカー配列により、連結されている。
【００６８】
一部の実施形態では、ＧＰＣ３結合ドメインは、配列番号９：
【００６９】
【化１】
2019530431.tif 000003
【００７０】
のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【００７１】
本明細書に記載の軽鎖および重鎖ＣＤＲはまた、多数の異なるフレームワーク領域との連結に特に有用でありうる。したがって、ＬＣ−ＣＤＲ１〜３および／またはＨＣ−ＣＤＲ１〜３を含む軽鎖および／または重鎖可変領域配列は、それぞれ配列番号１および５で示されるものの代わりのフレームワーク領域を有することができる。好適なフレームワーク領域は、当技術分野において周知であり、例えば、参照により本明細書に援用される、Ｍ．ＬｅｆｒａｎｃおよびＧ．Ｌｅｆｒａｎｃ（２００１）「Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ＦａｃｔｓＢｏｏｋ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓに記載されている。
【００７２】
ＧＰＣ３結合ドメインを含むＣＡＲ、またはそのようなＣＡＲを発現する細胞は、ＧＣＰ３と結合することができる。一部の実施形態では、前記ＣＡＲ／細胞は、ＧＰＣ３のＣ末端ドメインと結合することができる。一部の実施形態では、前記ＣＡＲ／細胞は、抗体ＧＣ３３により結合されるＧＰＣ３のエピトープ、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔに従って番号付けされたヒトＧＣＰ３ポリペプチド：Ｐ５１６５４（ＧＰＣ３＿ＨＵＭＡＮ）のアミノ酸位置５２４〜５６３の領域内のエピトープと、結合することができる（その全体が参照により本明細書に援用される、Ｈｏ  ２０１１  ＢｉｏＤｒｕｇｓ  ２５（５）：２７５〜２８４）。
【００７３】
ＧＰＣ３への結合は、当業者に周知の技術により、例えば、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降法、ＳＰＲ、バイオレイヤー干渉法、フローサイトメトリーまたはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により、分析することができる。
【００７４】
一部の実施形態では、標的タンパク質は、ＥｐＣＡＭである。すなわち、一部の実施形態では、本発明のＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＥｐＣＡＭ結合ドメインである。
ＥｐＣＡＭ（上皮細胞接着分子、これはＤＩＡＲ５、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ３１４、ＥＧＰ４０、ＥＳＡ、ＨＮＰＣＣ８、ＫＳ１／４、ＫＳＡ、Ｍ４Ｓ１、ＭＩＣ１８、ＭＫ−１、ＴＡＣＳＴＤ１およびＴＲＯＰ１としても公知）は、上皮および上皮由来の新生物（すなわち癌腫）において排他的に発現される膜貫通糖タンパク質である。ＥｐＣＡＭ構造、機能および生物学は、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される、Ｓｃｈｎｅｌｌら、Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．２０１３；１８２８（８）：１９８９〜２００１において概説されている。ＥｐＣＡＭは、癌腫の腫瘍形成および転移性進行に関与すると考えられ、高度のＥｐＣＡＭ発現は、例えば、乳がん、卵巣がん、膵癌、尿路上皮癌および胆嚢癌において、生存不良と相関関係がある。
【００７５】
ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、ＥｐＣＡＭポリペプチドと結合することができる。ＥｐＣＡＭ結合ドメインが結合することができるＥｐＣＡＭポリペプチドは、ヒトＥＰＣＡＭ遺伝子によりまたは非ヒト動物におけるその相同遺伝子によりコードされるアミノ酸配列を含んでいてもよいし、またはそれからなっていてもよい。非ヒト動物は、非ヒト哺乳動物（例えば、ウサギ、モルモット、ラット、マウスまたは他の齧歯動物（齧歯目（Ｒｏｄｅｎｔｉａ）のあらゆる動物を含む）、ネコ、イヌ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ（雌牛、例えば乳牛、またはウシ目（ｔｈｅ  ｏｒｄｅｒ  Ｂｏｓ）のあらゆる動物を含む）、ウマ（ウマ目（ｔｈｅ  ｏｒｄｅｒ  Ｅｑｕｉｄａｅ）のあらゆる動物を含む）、ロバ、および非ヒト霊長類）であってもよい。
【００７６】
本発明のＣＡＲのＥｐＣＡＭ結合ドメインは、好ましくは、ＥｐＣＡＭポリペプチドへの特異的結合を提示する。ＧＰＣ３結合ドメインは、抗ＥｐＣＡＭ抗体に由来することもあり、または他のＥｐＣＡＭ結合剤、例えば、ＥｐＣＡＭ結合ペプチド若しくは核酸アプタマー、またはＥｐＣＡＭ結合小分子に由来することもある。
【００７７】
ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、抗ＥｐＣＡＭ抗体の抗原結合領域に由来することもある。抗ＥｐＣＡＭ抗体は、その全体が参照により本明細書に援用される、Ｍｕｎｚら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｉｎｔ．（２０１０）１０：４４に記載されている。抗ＥｐＣＡＭ抗体は、エドレコロマブ（Ｐａｎｏｒｅｘ；１７−１Ａ）、ＭＯＣ３１、３６２２Ｗ９４、ＩＮＧ−１、アデカツムマブ（ＭＴ２０１；Ｎａｕｎｄｏｒｆら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ（２００２）１００（１）：１０１〜１０）、およびＷＯ２００４１０６３８３Ａ１、ＷＯ２００５０８０４２８Ａ２、ＷＯ２００８１２２５５１Ａ２、ＷＯ２０１０１４２９９０Ａ１、ＷＯ２０１１０７９２８３Ａ１、ＷＯ２０１２１５３１８６Ａ２、ＷＯ２０１３１３１００１Ａ１、ＷＯ２０１５０４８９０１Ａ１に記載されている抗ＥｐＣＡＭ抗体を含み、前記参照文献の各々は、全体が参照により本明細書に援用される。
【００７８】
本発明に係るＥｐＣＡＭ結合ドメインは、好ましくは、抗ＥｐＣＡＭ抗体の重鎖および軽鎖可変領域配列を含むか、または抗ＥｐＣＡＭ抗体の重鎖および軽鎖可変領域配列に由来する重鎖および軽鎖可変領域配列を含む。
【００７９】
重鎖および軽鎖可変領域配列は、いずれの好適な形式で提供されていてもよいが、ＥｐＣＡＭ結合ドメインをＣＡＲの他のドメインと連結させることができることを条件とする。
【００８０】
一部の実施形態では、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、本明細書に記載の抗ＥｐＣＡＭ抗体のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、本明細書に記載の抗ＥｐＣＡＭ抗体の重鎖および軽鎖可変領域配列を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、抗ＥｐＣＡＭ抗体クローン３−１７ＩのＣＤＲを含む。抗ＥｐＣＡＭ抗体クローン３−１７Ｉについての重鎖および軽鎖可変領域配列、ならびにカバット番号付けシステム（Ｋａｂａｔら、（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）に従って定義された重鎖および軽鎖ＣＤＲ１〜３が、下に示される：
３−１７Ｉ重鎖可変領域配列：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＬＬＷＮＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶ（配列番号４８）
ＨＣ−ＣＤＲ１：ＳＹＡＩＳ                        （配列番号４９）
ＨＣ−ＣＤＲ２：ＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５０）
ＨＣ−ＣＤＲ３：ＧＬＬＷＮＹ                      （配列番号５１）
３−１７Ｉ軽鎖可変領域配列：
ＥＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＩＩＹＧＡＳＴＴＡＳＧＩＰＡＲＦＳＡＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＳＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＮＮＷＰＰＡＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号５２）
ＬＣ−ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号５３）
ＬＣ−ＣＤＲ２：ＧＡＳＴＴＡＳ        （配列番号５４）
ＬＣ−ＣＤＲ３：ＱＱＹＮＮＷＰＰＡＹＴ（配列番号５５）
一部の実施形態では、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、下記のアミノ酸配列ｉ）〜ｖｉ）：
ｉ）ＨＣ−ＣＤＲ１：                          ＳＹＡＩＳ（配列番号４９）
ｉｉ）ＨＣ−ＣＤＲ２：ＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５０）
ｉｉｉ）ＨＣ−ＣＤＲ３：ＧＬＬＷＮＹ                    （配列番号５１）
ｉｖ）ＬＣ−ＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ      （配列番号５３）
ｖ）ＬＣ−ＣＤＲ２：ＧＡＳＴＴＡＳ                （配列番号５４）
ｖｉ）ＬＣ−ＣＤＲ３：ＱＱＹＮＮＷＰＰＡＹＴ      （配列番号５５）
または前記配列ｉ）〜ｖｉ）のうちの１つまたは複数における１または２または３個のアミノ酸が別のアミノ酸で置換されている、前記アミノ酸配列のバリアントを含む。
【００８１】
一部の実施形態では、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含み、
前記重鎖配列は、配列番号４８の重鎖配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有し、
前記軽鎖配列は、配列番号５２の軽鎖配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。
【００８２】
一部の実施形態では、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、本明細書に記載の重鎖可変領域配列と軽鎖可変領域配列とを含む一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含むこともあり、またはそのようなｓｃＦｖからなることもある。重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列は、共有結合により連結されていることがある。一部の実施形態では、重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列は、可動性リンカーにより、好ましくは、重鎖可変領域配列の末端および軽鎖可変領域配列の末端に共有結合された可動性リンカーにより、連結されている。
【００８３】
一部の実施形態では、ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、配列番号５６：
【００８４】
【化２】
2019530431.tif 000004
【００８５】
のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【００８６】
本明細書に記載の軽鎖および重鎖ＣＤＲはまた、多数の異なるフレームワーク領域との併用に特に有用でありうる。したがって、ＬＣ−ＣＤＲ１〜３および／またはＨＣ−ＣＤＲ１〜３を含む軽鎖および／または重鎖可変領域配列は、それぞれ配列番号４８および５２で示されるものの代わりのフレームワーク領域を有することができる。好適なフレームワーク領域は、例えば、上文にて参照により援用されるＭ．ＬｅｆｒａｎｃおよびＧ．Ｌｅｆｒａｎｃ（２００１）「Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ＦａｃｔｓＢｏｏｋ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓに記載されている。
【００８７】
ＥｐＣＡＭ結合ドメインを含むＣＡＲ、またはそのようなＣＡＲを発現する細胞は、ＥｐＣＡＭと結合することができる。一部の実施形態では、前記ＣＡＲ／細胞は、ＥｐＣＡＭの細胞外ドメインと結合することができる。一部の実施形態では、前記ＣＡＲ／細胞は、抗ＥｐＣＡＭ抗体クローン３−１７Ｉにより結合されるＥｐＣＡＭのエピトープと結合することができる。
【００８８】
ＥｐＣＡＭへの結合は、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降法、ＳＰＲ、バイオレイヤー干渉法、フローサイトメトリーまたはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）などの技術により、分析することができる。
【００８９】
膜貫通ドメイン
本発明のキメラ抗原受容体は、膜貫通ドメインを含む。
膜貫通ドメインは、生体膜、例えば細胞膜、内で熱力学的に安定している、アミノ酸の配列により形成された任意の三次元構造を指す。本発明に関連して、膜貫通ドメインは、ＣＡＲを発現する細胞の細胞膜にまたがるアミノ酸配列でありうる。
【００９０】
膜貫通ドメインは、疎水性アルファヘリックス若しくはベータバレルを形成するアミノ酸の配列を含んでいてもよいし、またはそれからなっていてもよい。本発明のＣＡＲの膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、膜貫通ドメインを含むタンパク質の膜貫通ドメインのアミノ酸配列であることもあり、またはそのようなアミノ酸配列に由来することもある。膜貫通ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ、Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ、ＴｒＥＭＢＬ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ、ＥｎｓｅｍｂｌおよびＩｎｔｅｒＰｒｏなどの、データベースに記録されており、ならびに／または例えば、ＴＭＨＭＭ（Ｋｒｏｇｈら、２００１  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３０５：５６７〜５８０）などのアミノ酸配列分析ツールを使用して、膜貫通ドメインを同定／予測することができる。
【００９１】
一部の実施形態では、本発明のＣＡＲの膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、細胞表面で発現されるタンパク質の膜貫通ドメインのアミノ酸配列であることもあり、またはそのようなアミノ酸配列に由来することもある。一部の実施形態では、細胞表面で発現されるタンパク質は、受容体またはリガンド、例えば、免疫受容体またはリガンドである。一部の実施形態では、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＭＨＣクラスＩα、ＭＨＣクラスＩＩα、ＭＨＣクラスＩＩβ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３γ、ＣＤ３−ζ、ＴＣＲα  ＴＣＲβ、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、４−１ＢＢ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＴＩＭ−３、ガレクチン９、ＬＡＧ３、ＣＤ２７、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ−４、ＴＩＭ−１、ＩＣＡＭ１、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−３、ＣＤ２、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＩＬＲＢ４、ＬＩＬＲＢ２、ＶＴＣＮ１、ＣＤ２、ＣＤ４８、２Ｂ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＤＲ３、ＴＬ１Ａ、ＣＤ２２６、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２およびＣＤ２７６のうちのいずれか１つの膜貫通ドメインのアミノ酸配列であることもあり、またはそのようなアミノ酸配列に由来することもある。一部の実施形態では、前記膜貫通のものは、ＣＤ３−ζ、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ２８若しくはＣＤ２２６の膜貫通ドメインのアミノ酸配列であるかまたはそれらに由来する。
【００９２】
一部の実施形態では、本発明に係るＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号１０若しくは１１：
ＣＤ２８膜貫通ドメイン：
ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩ          （配列番号１０）
ＣＤ８α膜貫通ドメイン：
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮ  （配列番号１１）
のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【００９３】
一部の実施形態では、本発明に係るＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号５７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【００９４】
シグナル伝達ドメイン
本発明のキメラ抗原受容体は、シグナル伝達ドメインを含む。本発明のキメラ抗原受容体において、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列、あるいはその断片は、通常は、シグナル伝達ドメイン内に提供される。シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲを発現する細胞において細胞内シグナル伝達を開始するための配列を提供する。
【００９５】
ＩＴＡＭ含有配列
シグナル伝達ドメインは、１つまたは複数の免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含むアミノ酸配列を含む。ＩＴＡＭは、アミノ酸配列ＹＸＸＬ／Ｉ（配列番号１２）（この配列中の「Ｘ」は、任意のアミノ酸を示す）を含む。ＩＴＡＭ含有タンパク質において、配列番号１２に記載の配列は、６〜８個のアミノ酸により隔てられていることが多い；ＹＸＸＬ／Ｉ（Ｘ）６〜８ＹＸＸＬ／Ｉ（配列番号１３）。リン酸基がチロシンキナーゼによりＩＴＡＭのチロシン残基に付加されると、シグナル伝達カスケードが細胞内で開始される。
【００９６】
一部の実施形態では、本発明に係るＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、配列番号１２または配列番号１３に記載のアミノ酸配列の１個または複数のコピーを含む。一部の実施形態では、シグナル伝達ドメインは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列の少なくとも１、２、３、４、５または６個のコピーを含む。一部の実施形態において、シグナルドメインは、配列番号１３に記載のアミノ酸配列の少なくとも１、２または３個のコピーを含む。一部の実施形態では、シグナル伝達ドメインは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列の１〜１０、２〜８、３〜７、または４〜６個のコピーを含む。一部の実施形態では、シグナル伝達ドメインは、配列番号１３に記載のアミノ酸配列の少なくとも１〜６、２〜５、または３〜４個のコピーを含む。
【００９７】
一部の実施形態では、シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列を有するタンパク質のＩＴＡＭ含有配列のアミノ酸であるか、またはそのようなアミノ酸に由来する、アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３γ、ＣＤ３−ζ、ＣＤ７９α、ＣＤ７９β、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＣ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＶまたはＤＡＰ１２のうちの１つのアミノ酸配列のＩＴＡＭ含有配列（例えば、細胞内ドメイン）であるかそのようなＩＴＡＭ含有配列に由来する、アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３−ζのＩＴＡＭ含有配列（例えば、細胞内ドメイン）であるかまたはそのようなＩＴＡＭ含有配列に由来する、アミノ酸配列を含む。
【００９８】
本明細書を通して、所与のアミノ酸配列「に由来する」アミノ酸配列は、それが由来するアミノ酸配列の構造的および／または機能的特性を保持することができる。アミノ酸配列は、それが由来するアミノ酸配列に対して高い配列同一性を有することができる。例えば、所与の配列に由来するアミノ酸配列は、それが由来するアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有することができる。
【００９９】
所与のタンパク質またはそのドメインのアミノ酸配列は、当業者に公知のデータベースから検索することができ、またはそのようなデータベースから検索された核酸配列から決定することができる。そのようなデータベースとしては、ＧｅｎＢａｎｋ、ＥＭＢＬ、ＤＤＢＪ、ＵｎｉＰｒｏｔ、Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ、ＴｒＥＭＢＬ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ、ＥｎｓｅｍｂｌおよびＩｎｔｅｒＰｒｏが挙げられる。
【０１００】
例として、ＣＤ３−ζの細胞内ドメインであるかまたはＣＤ３−ζの細胞内ドメインに由来するアミノ酸配列を含むシグナル伝達ドメインを含む、本発明に係るＣＡＲは、ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ２０９６３−１（ＣＤ３Ｚ＿ＨＵＭＡＮ）のアミノ酸配列の５２〜１６４位により表されるＣＤ３−ζの細胞内ドメインに対して少なくとも８０％の配列同一性を含むアミノ酸配列を含むことができる。
【０１０１】
一部の実施形態では、本発明に係るＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列を含み、前記ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列は、配列番号１４：
ＣＤ３−ζ細胞内ドメイン：
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号１４）
のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０１０２】
共刺激配列
シグナル伝達ドメインは、１つまたは複数の共刺激配列をさらに含んでいてもよい。一部の実施形態では、本発明のキメラ抗原受容体は、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列、あるいはその断片を含む。
【０１０３】
共刺激配列は、ＣＡＲを発現する細胞の共刺激をもたらすアミノ酸配列である。共刺激は、ＣＡＲ発現細胞の増殖および生存を促進し、そしてまたサイトカイン生産、分化、細胞傷害性機能および記憶形成を促進することもある。Ｔ細胞共刺激の分子機序は、ＣｈｅｎおよびＦｌｉｅｓ  ２０１３  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３（４）：２２７〜２４２において概説されている。
【０１０４】
本発明のＣＡＲのシグナル伝達ドメインの共刺激配列は、共刺激タンパク質のアミノ酸配列であることもあり、またはそのようなアミノ酸配列に由来することもある。ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列、あるいはその断片は、ＣＤ２２６媒介シグナル伝達を開始させることができる。すなわち、本発明のＣＡＲは、ＣＤ２２６共刺激シグナルを送達することができる共刺激配列を含む。
【０１０５】
ＣＤ２２６による共刺激シグナル伝達は、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される、ＭａｒｔｉｎｅｔおよびＳｍｙｔｈ、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１５）１５：２４３〜２５４に記載されている。シグナル伝達は、ＣＤ２２６のセリン３２９およびチロシン３２２のリン酸化により開始され、リン酸化された残基は、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）の活性化およびＬＦＡ１との会合を助長し、そしてまたそれが、ＣＤ２２６のチロシン３２２のＦＹＮ媒介リン酸化および下流のシグナル伝達を助長する。
【０１０６】
所与のアミノ酸配列がＣＤ２２６媒介シグナル伝達を開始させることができるかどうかは、例えば、その活性化若しくは発現がＣＤ２２６媒介シグナル伝達の結果として上方調節または下方調節される分子の活性化または発現を分析することにより、調査することができる。例えば、所与のアミノ酸配列が、ＣＤ２２６媒介シグナル伝達を開始させることができるかどうかは、セリン３２９および／若しくはチロシン３２２のリン酸化、ＰＫＣとの会合／ＰＫＣの活性化、ＬＦＡ１との会合／ＬＦＡ１の活性化、ＦＹＮとの会合／ＦＹＮの活性化、またはその発現がＣＤ２２６媒介シグナル伝達により上方調節される任意の他の分子の発現の上方調節のうちの１つまたは複数を分析することにより、調査することができる。この分析は、例えば、前記アミノ酸配列を含むＣＡＲを発現する細胞を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで行うことができる。
【０１０７】
ＣＤ２２６は、ヒトＣＤ２２６であることもある。ヒトＣＤ２２６は、配列番号１５に記載のＵｎｉＰｒｏｔ  Ｑ１５７６２（ＣＤ２２６＿ＨＵＭＡＮ）のアミノ酸配列を有することもある。
【０１０８】
ヒトＣＤ２２６；ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｑ１５７６２（ＣＤ２２６＿ＨＵＭＡＮ）：
【０１０９】
【化３】
2019530431.tif 000005
【０１１０】
ヒトＣＤ２２６の細胞内ドメインは、配列番号１５のアミノ酸位置２７１〜３３６、すなわち、配列番号１６の配列に対応することもある。
ＣＤ２２６細胞内ドメイン：
ＩＶＩＦＬＮＲＲＲＲＲＥＲＲＤＬＦＴＥＳＷＤＴＱＫＡＰＮＮＹＲＳＰＩＳＴＳＱＰＴＮＱＳＭＤＤＴＲＥＤＩＹＶＮＹＰＴＦＳＲＲＰＫＴＲＶ（配列番号１６）
一部の実施形態では、本発明のＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる共刺激配列、あるいはその断片を含む。
【０１１１】
ヒトＣＤ２２６の細胞内ドメインは、本明細書では「ＣＤ２２６  ＩＣＤ  ｖ１」と呼ばれる、配列番号１５のアミノ酸位置２７６〜３３６、すなわち、配列番号５８に記載の配列に対応することもある。
【０１１２】
一部の実施形態では、本発明のＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる共刺激配列、あるいはその断片を含む。
【０１１３】
ヒトＣＤ２２６の細胞内ドメインは、本明細書では「ＣＤ２２６  ＩＣＤ  ｖ２」と呼ばれる、配列番号１５のアミノ酸位置２７４〜３３６、すなわち、配列番号５９に記載の配列に対応することもある。
【０１１４】
一部の実施形態では、本発明のＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、配列番号５９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる共刺激配列、あるいはその断片を含む。
【０１１５】
一部の実施形態では、本発明のＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列に加えて、さらなる共刺激配列を含む。
【０１１６】
一部の実施形態では、シグナル伝達ドメインは、１つより多くの共刺激配列を含む。一部の実施形態では、シグナル伝達ドメインは、２、３、４または５つの共刺激配列を含む。一部の実施形態では、本発明のＣＡＲのシグナル伝達ドメインの共刺激配列は、共刺激タンパク質のアミノ酸配列であることもあり、またはそのようなアミノ酸配列に由来することもある。一部の実施形態では、前記配列は、共刺激タンパク質の細胞内ドメインであることもあり、またはそのような細胞内ドメインに由来することもある。一部の実施形態では、共刺激タンパク質は、Ｂ７−ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバー（例えば、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ）であることもあり、またはＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバー（例えば、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＨＶＥＭ）であることもある。一部の実施形態では、ＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＨＶＥＭ、ＣＤ２、ＳＬＡＭ、ＴＩＭ−１、ＣＤ３０、ＧＩＴＲ、ＤＲ３、ＬＩＧＨＴおよびＣＤ２２６のうちの１つの細胞内ドメインであるかまたはそのような細胞内ドメインに由来する、共刺激配列を含む。一部の実施形態では、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８または４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれらに由来する、共刺激配列を含む。一部の実施形態では、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８若しくは４−１ＢＢおよびＣＤ２２６のうちの１つの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する、共刺激配列を含む。
【０１１７】
共刺激タンパク質は、いくつかの形質導入経路によって細胞の成長、エフェクター機能および生存を促進する遺伝子の発現を上方調節する。例えば、ＮＦ−κＢ、ｍＴＯＲ、ＮＦＡＴおよびＡＰ１／２によって細胞の成長、エフェクター機能および生存を促進する遺伝子の発現を上方調節するための、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）およびＡＫＴによるＣＤ２８およびＩＣＯＳシグナル。ＣＤ２８はまた、ＣＤＣ４２／ＲＡＣ１経由でＡＰ１／２、およびＲＡＳ経由でＥＲＫ１／２を活性化し、ＩＣＯＳは、Ｃ−ＭＡＦを活性化する。４−１ＢＢ、ＯＸ４０およびＣＤ２７は、ＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦ）を動員し、ＰＩ３ＫによってはもちろんＭＡＰＫ経路によってもシグナルを伝達する。
【０１１８】
一部の実施形態では、ＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、配列番号１７若しくは１８：
ＣＤ２８細胞内ドメイン：
ＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ（配列番号１７）
４−１ＢＢ細胞内ドメイン：
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ（配列番号１８）
のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそのような配列同一性を有するアミノ酸配列からなる、共刺激配列を含む。
【０１１９】
一部の実施形態では、ＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する共刺激配列と、（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する共刺激配列とを含む。
【０１２０】
一部の実施形態では、ＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する共刺激配列と、（ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する共刺激配列とを含む。
【０１２１】
一部の実施形態では、ＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する共刺激配列と、（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する共刺激配列と、（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する共刺激配列とを含む。
【０１２２】
ヒンジ領域
本発明のキメラ抗原受容体は、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間にヒンジ領域を含んでいてもよい。ヒンジ領域は、ＣＡＲの抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの可動性連結をもたらすアミノ酸配列である。
【０１２３】
ヒンジ領域の存在、非存在および長さがＣＡＲ機能に影響を及ぼすことは明らかにされている（例えば、上掲のＤｏｔｔｉら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ（２０１４）２５７（１）において概説されている）。
【０１２４】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域、ＩｇＧ１のＣＨ２ＣＨ３（すなわち、Ｆｃ）領域、ＩｇＧ１のＣＨ２領域、ＩｇＧ１のＣＨ３領域、ＩｇＧ４、ヒトＩｇＤのアミノ酸１８７〜１８９であるか若しくはこれらに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそのようなアミノ酸配列からなるヒンジ領域（Ｗｉｌｋｉｅら、２００８  Ｊ  ＩＭｍｕｎｏｌ  １８０（７）：４９０１〜４９０９）、例えばＷＯ２０１２／０３１７４４Ａ１に記載されているような、ＣＤ８αに由来するヒンジ領域、あるいは例えばＷＯ２０１１／０４１０９３Ａ１に記載されているような、ＣＤ２８に由来するヒンジ領域を含む。
【０１２５】
一部の実施形態では、ＣＡＲのヒンジドメインは、配列番号１９：
ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域：
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１９）
のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０１２６】
二量体形成ドメイン
本発明のキメラ抗原受容体は、二量体形成ドメインを含んでいてもよい。
本明細書で使用される「二量体形成ドメイン」は、タンパク質が別のタンパク質と会合して二量体、オリゴマーまたは多量体を形成する、アミノ酸の配列を指す。一部の実施形態では、他のタンパク質は、膜結合分子、例えば、受容体またはリガンドであってもよい。一部の実施形態では、二量体形成ドメインは、ホモ二量体を形成するようなＣＡＲの自己会合をもたらすこともあり、またはヘテロ二量体を形成するような別の、異なるタンパク質との会合をもたらすこともある。
【０１２７】
ＣＡＲ単量体は、より高次のオリゴマー／多量体、例えば、三量体、四量体、五量体、六量体、七量体、八量体などを形成することもある。一部の実施形態では、ＣＡＲ単量体は、二量体形成ドメインによる会合によってより高次のオリゴマー／多量体を形成するように会合することもある。したがって、一部の実施形態では、二量体形成ドメインは、オリゴマー形成ドメインまたは多量体形成ドメイン、例えば、三量体形成ドメイン、四量体形成ドメイン、五量体形成ドメイン、六量体形成ドメイン、七量体形成ドメイン、八量体形成ドメインなどであることもある。
【０１２８】
二量体形成ドメインは、ＣＡＲにおいてＣＡＲ活性を調節するために利用されてきた。Ｗｕら、２０１５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３５０（６２５８）（その全体が参照により本明細書に援用される）には、抗原結合ドメインおよびシグナル伝達ドメインが別個の分子に提供されており、前記分子の各々が、機能性ＣＡＲを形成するための二量体形成が小分子を使用して制御されうる、ドメインを含む、「オンスイッチＣＡＲ」が記載されている。
【０１２９】
本発明に係るＣＡＲの二量体形成ドメインは、自発的であることもあり、または誘導性であることもある。
自発的二量体形成ドメインは、二量体を形成するための前記ドメインによる会合を外部の因子／シグナルの非存在下でもたらす。自発的二量体形成ドメインは、例えば、自発的にホモ二量体またはヘテロ二量体を形成するタンパク質に見られる。
【０１３０】
誘導性二量体形成ドメインは、二量体を形成するための会合を、例えば薬剤／シグナルに応答してもたらし、その結果として二量体形成を制御することができる。
一部の実施形態では、二量体形成は、化学薬品での処置に応答して誘導可能でありうる。化学誘導性二量体形成の例としては、ＦＫ１０１２で誘導可能なＦＫＢＰ／ＦＫＢＰホモ二量体形成（Ｓｐｅｎｃｅｒら、１９９３  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６２（５１３６）：１０１９〜１０２４）；ＦＫＣｓＡで誘導可能なＦＫＢＰ／ＣｙＰ−Ｆａｓヘテロ二量体形成（Ｂｅｌｓｈａｗら、１９９６  ＰＮＡＳ  ９３（１０）：４６０４〜４６０７）；ＦＫ５０６で誘導可能なＦＫＢＰ／ＣＮＡヘテロ二量体形成（Ｈｏら、１９９６  Ｎａｔｕｒｅ  ３８２（６５９４）：８２２〜８２６）；ラパマイシンで誘導可能なｍＴＯＲヘテロ二量体形成のＦＫＢＰ／ＦＲＢドメイン（Ｒｉｖｅｒａら、１９９６  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２（９）：１０２８〜１０３２）；ジベレリンで誘導可能なＧＡＩ／ＧＩＤ１ヘテロ二量体形成（Ｍｉｙａｍｏｔｏら、２０１２  Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ８（５）：４６５〜４７０）；クーママイシンで誘導可能なＧｙｒＢ／ＧｙｒＢホモ二量体形成（Ｆａｒｒａｒら、１９９６  Ｎａｔｕｒｅ  ３８３（６５９６）：１７８〜１８１）；ＨａＸＳを使用して誘導可能なＨａｌＴａｇ／ＳＮＡＰ−タグヘテロ二量体形成（Ｅｒｈａｒｔら、２０１３  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  ２０（４）：５４９〜５５７）；およびＡＰ１９０３で誘導可能なＦ３６Ｖ−ＦＫＢＰ／Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰホモ二量体形成（Ｃｌａｃｋｓｏｎら、１９９８  ９５（１８）：１０４３７〜１０４４２）が挙げられる。
【０１３１】
誘導性二量体形成ドメインは、ＣＡＲによるシグナル伝達の選択的上方調節をもたらす。例えば、化学誘導性二量体形成ドメインを含むＣＡＲを適切な薬剤での処置により刺激して二量体を形成させ、その結果、ＣＡＲ媒介シグナル伝達の増加をもたらすことができる。このようにして、本発明に係るＣＡＲを含む細胞を選択的に刺激して、増殖（すなわち、成長および分裂）させることができる。
【０１３２】
化学誘導性二量体形成ドメインを有するＣＡＲを発現する細胞の増殖および生存は、適切な薬剤を使用して選択的に刺激することができる。例えば、配列番号１９に記載の二量体形成ドメインを有するＣＡＲを発現する細胞をＡＰ１９０３での処置により選択的に刺激して、ＣＡＲによるシグナル伝達増強の結果として、成長および分裂させることができる。重要なこととして、ＣＡＲを含まない細胞は、ＡＰ１９０３での処置により成長および分裂するように刺激されず、そのため、ＣＡＲを発現する細胞とＣＡＲを発現しない細胞とを含む不均一な集団内から、ＣＡＲを発現する細胞を拡大増殖させることができる。
【０１３３】
一部の実施形態では、本発明のＣＡＲの二量体形成ドメインのアミノ酸配列は、ホモ二量体若しくはヘテロ二量体を形成することが公知のもしく予測されるアミノ酸配列であることもあり、またはそのようなアミノ酸配列に由来することもある。本発明のＣＡＲの二量体形成ドメインのアミノ酸配列は、二量体形成ドメインを含むタンパク質の二量体形成ドメインのアミノ酸配列であることもあり、またはそのようなアミノ酸配列に由来することもある。タンパク質が二量体を形成するアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ、Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ、ＴｒＥＭＢＬ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ、ＥｎｓｅｍｂｌおよびＩｎｔｅｒＰｒｏなどの、データベースに記録されており、ならびに／または例えばｍｅｔａ−ＰＰＩＳＰ（Ｑｉｎら、２００７  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２３：３３８６〜３３８７）などのアミノ酸配列分析ツールを使用して、そのようなアミノ酸配列を同定／予測することができる。
【０１３４】
一部の実施形態では、本発明のＣＡＲの二量体形成ドメインのアミノ酸配列は、ＦＫＢＰもしくその変異体、例えばＦ３６Ｖ、Ｆ３６Ｍ、のアミノ酸配列であることもあり、またはそのようなアミノ酸配列に由来することもある。
【０１３５】
一部の実施形態では、ＣＡＲの二量体形成ドメインは、配列番号２０：
Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰ：
ＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥ（配列番号２０）
のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０１３６】
二量体形成ドメインは、ＣＡＲ内の、膜貫通ドメインのＮ末端側に位置することもあり、または膜貫通ドメインのＣ末端側に位置することもある。すなわち、ＣＡＲが細胞表面で発現される場合、二量体形成ドメインは、ＣＡＲの細胞外部分にあることもあり、またはＣＡＲの細胞内部分にあることもある。
【０１３７】
シグナル配列
一部の実施形態では、本発明のＣＡＲは、シグナル配列（シグナルペプチドまたはリーダー配列としても公知）を含んでいてもよい。シグナル配列は、単一のアルファヘリックスを形成する５〜３０疎水性アミノ酸の配列から通常はなる。分泌されたタンパク質、または細胞表面で発現されたタンパク質は、シグナル配列を含むことが多い。
【０１３８】
シグナル配列は、ＣＡＲのＮ末端に存在することもあり、新たに合成されたＣＡＲ内に存在することもある。シグナル配列は、細胞表面へのＣＡＲの効率的輸送をもたらす。シグナル配列は、多くの場合、切断により除去され、したがって、細胞表面で発現される成熟ＣＡＲには含まれない。
【０１３９】
シグナル配列は、多くのタンパク質について公知であり、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ、Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ、ＴｒＥＭＢＬ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ、ＥｎｓｅｍｂｌおよびＩｎｔｅｒＰｒｏなどの、データベースに記録されており、ならびに／または例えばＳｉｇｎａｌＰ（Ｐｅｔｅｒｓｅｎら、２０１１  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ８：７８５〜７８６）若しくはＳｉｇｎａｌ−ＢＬＡＳＴ（ＦｒａｎｋおよびＳｉｐｐｌ、２００８  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２４：２１７２〜２１７６）などのアミノ酸配列分析ツールを使用して、シグナル配列を同定／予測することができる。
【０１４０】
一部の実施形態では、本発明のＣＡＲのシグナル配列は、配列番号２１：
ヒトＩｇ重鎖シグナル配列：
ＭＤＷＩＷＲＩＬＦＬＶＧＡＡＴＧＡＨＳ（配列番号２１）
のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０１４１】
リンカー配列
一部の実施形態では、本発明のＣＡＲは、ＣＡＲの領域／ドメイン間に１つまたは複数のリンカー配列を含んでいてもよい。例えば、ＣＡＲは、次の構造を含んでいてもよい：
Ｎ末端−［・・・］−［ヒンジ領域］−｛リンカー配列｝−［膜貫通ドメイン］−［・・・］−Ｃ末端
リンカー配列は、当業者には公知であり、例えば、上文にて参照により援用のＣｈｅｎら、Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ（２０１３）６５（１０）：１３５７〜１３６９に記載されている。
【０１４２】
一部の実施形態では、リンカー配列は、硬いリンカー配列であってもよい。一部の実施形態では、リンカー配列は、可動性リンカー配列であってもよい。一部の実施形態では、リンカー配列は、切断可能なリンカー配列であってもよい。
【０１４３】
一部の実施形態では、リンカー配列は、１〜２５、１〜２０、１〜１５、１〜１０または１〜５個のアミノ酸を含んでいてもよい。一部の実施形態では、リンカー配列は、２５、２０、１５、１０または５個未満のアミノ酸を含むこともある。
【０１４４】
追加の配列
一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、さらなる機能性アミノ酸配列を含んでいてもよい。
【０１４５】
例えば、ＣＡＲは、ＣＡＲの発現、フォールディング、輸送、プロセシングまたは精製を助長するためのアミノ酸配列を含んでいてもよい。例えば、ＣＡＲは、タンパク質タグ、例えば、Ｈｉｓ（例えば、６ＸＨｉｓ）、Ｍｙｃ、ＧＳＴ、ＭＢＰ、ＦＬＡＧ、ＨＡ、Ｅまたはビオチンタグをコードする配列を、任意選択でＮ末端またはＣ末端に、含んでいてもよい。
【０１４６】
例示的なＣＡＲ
ドメインの特定の組合せおよび相対配置を有する本発明のキメラ抗原受容体を提供することができる。
【０１４７】
抗原結合、膜貫通およびシグナル伝達ドメインは、ＣＡＲが細胞表面で発現されたとき、抗原結合ドメインが細胞外空間にあり、シグナル伝達ドメインが細胞の内部にあるように、配置される。
【０１４８】
一部の実施形態では、本発明のＣＡＲのドメイン／配列は、下記のうちの１つに従う相対配置で提供されていてもよい：
Ｎ末端−［シグナル配列］−［抗原結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
Ｎ末端−［シグナル配列］−［抗原結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［二量体形成ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［二量体形成ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＥｐＣＡＭ結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＥｐＣＡＭ結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［二量体形成ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
一部の実施形態では、シグナル伝達ドメイン内にはＩＴＡＭ含有配列および共刺激配列を下記のうちの１つに従う相対配置で提供されていてもよい：
Ｎ末端−［・・・］−［共刺激配列］−［ＩＴＡＭ含有配列］−［・・・］−Ｃ末端
Ｎ末端−［・・・］−［共刺激配列１］−［共刺激配列２］−［ＩＴＡＭ含有配列］−［・・・］−Ｃ末端
Ｎ末端−［・・・］−［共刺激配列１］−［共刺激配列２］−［共刺激配列３］−［ＩＴＡＭ含有配列］−［・・・］−Ｃ末端
ＣＡＲが、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列、あるいはその断片を含む本発明の態様によれば、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列、あるいはその断片は、膜貫通ドメインに隣接していてもよい。
【０１４９】
一部の実施形態では、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列、あるいはその断片は、シグナル伝達ドメイン内の他の共刺激配列および／またはＩＴＡＭ含有配列のＮ末端側にある。
【０１５０】
一部の実施形態では、シグナル伝達ドメイン内にＩＴＡＭ含有配列および共刺激配列を下記のうちの１つに従う相対配置で提供されていてもよい：
Ｎ末端−［・・・］−［ＣＤ２２６共刺激配列］−［ＩＴＡＭ含有配列］−［・・・］−Ｃ末端
Ｎ末端−［・・・］−［ＣＤ２２６共刺激配列］−［共刺激配列２］−［ＩＴＡＭ含有配列］−［・・・］−Ｃ末端
Ｎ末端−［・・・］−［ＣＤ２２６共刺激配列］−［共刺激配列２］−［共刺激配列３］−［ＩＴＡＭ含有配列］−［・・・］−Ｃ末端
一部の実施形態では、ＣＡＲは、表１に示されるＡ〜Ｍのいずれか１つに従うドメイン／配列の組合せを含んでいてもよい：
【０１５１】
【表１】
2019530431.tif 000006
【０１５２】
表１は、ＣＡＲ  Ａ〜Ｍのドメイン／配列の組合せについての省略表示を提供することが理解されるであろう。ＣＡＲ  Ａ〜Ｍは、下記に示すドメイン／配列の組合せを含む：
（Ａ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ８αの膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０１５３】
（Ｂ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ８αの膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰのアミノ酸配列であるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、二量体形成ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０１５４】
（Ｃ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ８αの膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
ＣＤ２８の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０１５５】
（Ｄ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ８αの膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰのアミノ酸配列であるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、二量体形成ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
ＣＤ２８の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０１５６】
（Ｅ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ８αの膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０１５７】
（Ｆ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ８αの膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰのアミノ酸配列であるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、二量体形成ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０１５８】
（Ｇ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ８αの膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
ＣＤ２８の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０１５９】
（Ｈ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ８αの膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰのアミノ酸配列であるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、二量体形成ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
ＣＤ２８の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０１６０】
（Ｉ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ２８の膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰのアミノ酸配列であるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、二量体形成ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０１６１】
（Ｊ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ８αの膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０１６２】
（Ｋ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ８αの膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰのアミノ酸配列であるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、二量体形成ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０１６３】
（Ｌ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ８αの膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２８の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０１６４】
（Ｍ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ８αの膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰのアミノ酸配列であるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、二量体形成ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２８の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０１６５】
一部の実施形態では、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、ＬまたはＭのいずれか１つに従うＣＡＲは、本明細書に記載されるように抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間にヒンジ領域をさらに含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域であるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ヒンジ領域を含む。
【０１６６】
一部の実施形態では、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、ＬまたはＭのいずれか１つに従うＣＡＲは、本明細書に記載のシグナル配列をさらに含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ヒトＩｇ重鎖シグナル配列であるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、シグナル配列を含む。
【０１６７】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、下記の（１）〜（１３）のうちの１つで示されるように配置されたドメイン／配列の組合せを含んでいてもよい。任意選択で、一部の実施形態では、ＣＡＲは、シグナル配列を含まないこともある。一部の好ましい実施形態では、ドメインおよび配列は、Ｎ末端からＣ末端へ記載の順序でＣＡＲ内に存在する。
【０１６８】
（１）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［二量体形成ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記二量体形成ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０１６９】
（２）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０１７０】
（３）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［二量体形成ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記二量体形成ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０１７１】
（４）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０１７２】
（５）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［二量体形成ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記二量体形成ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０１７３】
（６）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０１７４】
（７）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［二量体形成ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記二量体形成ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０１７５】
（８）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０１７６】
（９）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［二量体形成ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記二量体形成ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０１７７】
（１０）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０１７８】
（１１）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［二量体形成ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記二量体形成ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０１７９】
（１２）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０１８０】
（１３）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［二量体形成ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記二量体形成ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０１８１】
一部の実施形態では、本発明に係るキメラ抗原受容体は、配列番号２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３８、３９、４０、４１または４２のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる：
ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／ＣＤ２２６／ＣＤ３ζ：
【０１８２】
【化４】
2019530431.tif 000007
【０１８３】
ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰ／ＣＤ２２６／ＣＤ３ζ：
【０１８４】
【化５】
2019530431.tif 000008
【０１８５】
ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／ＣＤ２２６／ＣＤ２８／ＣＤ３ζ：
【０１８６】
【化６】
2019530431.tif 000009
【０１８７】
ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰ／ＣＤ２２６／ＣＤ２８／ＣＤ３ζ：
【０１８８】
【化７】
2019530431.tif 000010
【０１８９】
ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／ＣＤ２２６／４−１ＢＢ／ＣＤ３ζ：
【０１９０】
【化８】
2019530431.tif 000011
【０１９１】
ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰ／ＣＤ２２６／４１ＢＢ／ＣＤ３ζ：
【０１９２】
【化９】
2019530431.tif 000012
【０１９３】
ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／ＣＤ２２６／ＣＤ２８／４−１ＢＢ／ＣＤ３ζ：
【０１９４】
【化１０】
2019530431.tif 000013
【０１９５】
ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰ／ＣＤ２２６／ＣＤ２８／４１ＢＢ／ＣＤ３ζ：
【０１９６】
【化１１】
2019530431.tif 000014
【０１９７】
ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ２８  ＴＭＤ／Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰ／４１ＢＢ／ＣＤ３ζ：
【０１９８】
【化１２】
2019530431.tif 000015
【０１９９】
ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／４１ＢＢ／ＣＤ３ζ：
【０２００】
【化１３】
2019530431.tif 000016
【０２０１】
ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰ／４１ＢＢ／ＣＤ３ζ：
【０２０２】
【化１４】
2019530431.tif 000017
【０２０３】
ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／ＣＤ２８／ＣＤ３ζ：
【０２０４】
【化１５】
2019530431.tif 000018
【０２０５】
ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰ／ＣＤ２８／ＣＤ３ζ：
【０２０６】
【化１６】
2019530431.tif 000019
【０２０７】
一部の実施形態では、本発明に係るキメラ抗原受容体は、配列番号３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、４３、４４、４５、４６または４７のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる：
ｈＩｇＧ重鎖シグナル配列／ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／ＣＤ２２６／ＣＤ３ζ：
【０２０８】
【化１７】
2019530431.tif 000020
【０２０９】
ｈＩｇＧ重鎖シグナル配列／ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰ／ＣＤ２２６／ＣＤ３ζ：
【０２１０】
【化１８】
2019530431.tif 000021
【０２１１】
ｈＩｇＧ重鎖シグナル配列／ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／ＣＤ２２６／ＣＤ２８／ＣＤ３ζ：
【０２１２】
【化１９】
2019530431.tif 000022
【０２１３】
ｈＩｇＧ重鎖シグナル配列／ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰ／ＣＤ２２６／ＣＤ２８／ＣＤ３ζ：
【０２１４】
【化２０】
2019530431.tif 000023
【０２１５】
ｈＩｇＧ重鎖シグナル配列／ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／ＣＤ２２６／４−１ＢＢ／ＣＤ３ζ：
【０２１６】
【化２１】
2019530431.tif 000024
【０２１７】
ｈＩｇＧ重鎖シグナル配列／ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰ／ＣＤ２２６／４１ＢＢ／ＣＤ３ζ：
【０２１８】
【化２２】
2019530431.tif 000025
【０２１９】
ｈＩｇＧ重鎖シグナル配列／ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／ＣＤ２２６／ＣＤ２８／４−１ＢＢ／ＣＤ３ζ：
【０２２０】
【化２３】
2019530431.tif 000026
【０２２１】
ｈＩｇＧ重鎖シグナル配列／ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰ／ＣＤ２２６／ＣＤ２８／４１ＢＢ／ＣＤ３ζ：
【０２２２】
【化２４】
2019530431.tif 000027
【０２２３】
ｈＩｇＧ重鎖シグナル配列／ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ２８  ＴＭＤ／Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰ／４１ＢＢ／ＣＤ３ζ：
【０２２４】
【化２５】
2019530431.tif 000028
【０２２５】
ｈＩｇＧ重鎖シグナル配列／ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／４１ＢＢ／ＣＤ３ζ：
【０２２６】
【化２６】
2019530431.tif 000029
【０２２７】
ｈＩｇＧ重鎖シグナル配列／ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰ／４１ＢＢ／ＣＤ３ζ：
【０２２８】
【化２７】
2019530431.tif 000030
【０２２９】
ｈＩｇＧ重鎖シグナル配列／ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／ＣＤ２８／ＣＤ３ζ：
【０２３０】
【化２８】
2019530431.tif 000031
【０２３１】
ｈＩｇＧ重鎖シグナル配列／ｓｃＦＶ  ＧＣ３３／ｈＩｇＧ１ヒンジ／ＣＤ８α  ＴＭＤ／Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰ／ＣＤ２８／ＣＤ３ζ：
【０２３２】
【化２９】
2019530431.tif 000032
【０２３３】
一部の実施形態では、本発明のＣＡＲは、表２に示されるＮ、Ｏ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、ＴまたはＵに従うドメイン／配列の組合せを含まない。
【０２３４】
【表２】
2019530431.tif 000033
【０２３５】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、表３に示されるＶ〜ＭＭのいずれか１つに従うドメイン／配列の組合せを含んでいてもよい：
【０２３６】
【表３】
2019530431.tif 000034
【０２３７】
表３は、ＣＡＲ  Ｖ〜ＭＭのドメイン／配列の組合せについての省略表示を提供することが理解されるであろう。ＣＡＲ  Ｖ〜ＭＭは、下記に示すドメイン／配列の組合せを含む：
（Ｖ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ２８の膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；および
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０２３８】
（Ｗ、Ｘ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ２８の膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０２３９】
（Ｙ、Ｚ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ２８の膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０２４０】
（ＡＡ、ＢＢ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ２８の膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
ＣＤ２８の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０２４１】
（ＣＣ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ２８の膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２８の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０２４２】
（ＤＤ、ＥＥ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ２８の膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
ＣＤ２８の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０２４３】
（ＦＦ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ２８の膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２８の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０２４４】
（ＧＧ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ２２６の膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０２４５】
（ＨＨ）ＥｐＣＡＭ結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＥｐＣＡＭ結合ドメイン；
ＣＤ２２６の膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；ならびに
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０２４６】
（ＩＩ）ＥｐＣＡＭ結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＥｐＣＡＭ結合ドメイン；
ＣＤ２２６の膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；ならびに
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０２４７】
（ＪＪ）ＥｐＣＡＭ結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＥｐＣＡＭ結合ドメイン；
ＣＤ２２６の膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；ならびに
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０２４８】
（ＫＫ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ２８の膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；ならびに
シグナル伝達ドメインであって、以下：
４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列、および
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０２４９】
（ＬＬ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ２８の膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；ならびに
シグナル伝達ドメインであって、以下：
４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列、および
ＣＤ３ζの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０２５０】
（ＭＭ）ＧＰＣ３結合ｓｃＦＶであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＧＰＣ３結合ドメイン；
ＣＤ２２６の膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、膜貫通ドメイン；および
シグナル伝達ドメインであって、以下：
ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列
を含むシグナル伝達ドメイン。
【０２５１】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＢＢに従うドメイン／配列の組合せを含んでいてもよい。一部の実施形態では、ＣＡＲは、Ｗに従うドメイン／配列の組合せを含んでいてもよい。一部の実施形態では、ＣＡＲは、Ｘに従うドメイン／配列の組合せを含んでいてもよい。
【０２５２】
一部の実施形態では、Ｖ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ＡＡ、ＢＢ、ＣＣ、ＤＤ、ＥＥ、ＦＦ、ＧＧ、ＨＨ、ＩＩ、ＪＪ、ＫＫ、ＬＬまたはＭＭのいずれか１つに従うＣＡＲは、本明細書に記載されるように抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間にヒンジ領域をさらに含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域であるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ヒンジ領域を含む。
【０２５３】
一部の実施形態では、Ｖ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ＡＡ、ＢＢ、ＣＣ、ＤＤ、ＥＥ、ＦＦ、ＧＧ、ＨＨ、ＩＩ、ＪＪ、ＫＫ、ＬＬまたはＭＭのいずれか１つに従うＣＡＲは、本明細書に記載されるようにシグナル配列をさらに含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、シグナル配列を含み、前記シグナル配列は、ヒトＩｇ重鎖シグナル配列であるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０２５４】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、下記の（１４）〜（３１）のうちの１つで示されるように配置されたドメイン／配列の組合せを含んでいてもよい。任意選択で、一部の実施形態では、ＣＡＲは、シグナル配列を含まないこともある。一部の好ましい実施形態では、ドメインおよび配列は、Ｎ末端からＣ末端に記載の順序でＣＡＲ内に存在する。
【０２５５】
（１４）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号５９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列
を含む）。
【０２５６】
（１５）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０２５７】
（１６）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号５９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０２５８】
（１７）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０２５９】
（１８）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号５９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０２６０】
（１９）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０２６１】
（２０）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号５９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０２６２】
（２１）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０２６３】
（２２）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０２６４】
（２３）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
前記膜貫通ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号５９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０２６５】
（２４）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０２６６】
（２５）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０２６７】
（２６）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＥｐＣＡＭ結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、
配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列
を含む）。
【０２６８】
（２７）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＥｐＣＡＭ結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、
配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列
を含む）。
【０２６９】
（２８）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＥｐＣＡＭ結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＥｐＣＡＭ結合ドメインは、
配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０２７０】
（２９）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と、
配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と
を含む）。
【０２７１】
（３０）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列と、
配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列と
を含む）。
【０２７２】
（３１）Ｎ末端−［シグナル配列］−［ＧＰＣ３結合ドメイン］−［ヒンジ領域］−［膜貫通ドメイン］−［シグナル伝達ドメイン］−Ｃ末端
（この場合、
前記シグナル配列は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記ＧＰＣ３結合ドメインは、
配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する重鎖可変領域配列と、
配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する軽鎖可変領域配列と
を含み；
前記ヒンジ領域は、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記膜貫通ドメインは、配列番号６０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり；
前記シグナル伝達ドメインは、
配列番号５８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、共刺激配列
を含む）。
【０２７３】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、上記（１５）で示されるように配置されたドメイン／配列の組合せを含んでいてもよい。一部の実施形態では、ＣＡＲは、上記（２０）で示されるように配置されたドメイン／配列の組合せを含んでいてもよい。
【０２７４】
一部の実施形態では、本発明に係るキメラ抗原受容体は、配列番号６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、１１８、１１９または１２０のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０２７５】
一部の実施形態では、本発明に係るキメラ抗原受容体は、配列番号７０のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。一部の実施形態では、本発明に係るキメラ抗原受容体は、配列番号６４のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０２７６】
一部の実施形態では、本発明に係るキメラ抗原受容体は、配列番号８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１２１、１２２または１２３のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０２７７】
一部の実施形態では、本発明に係るキメラ抗原受容体は、配列番号８９のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。一部の実施形態では、本発明に係るキメラ抗原受容体は、配列番号８３のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。一部の実施形態では、本発明に係るキメラ抗原受容体は、配列番号８４のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０２７８】
ＣＡＲをコードする核酸
本発明は、本発明に係るキメラ抗原受容体をコードする核酸を提供する。一部の実施形態では、核酸は、例えば他の核酸または天然に存在する生体物質から、精製または単離される。
【０２７９】
本発明は、本発明に係るキメラ抗原受容体をコードする核酸を含むベクターも提供する。
本明細書で使用される「ベクター」は、外来性核酸を細胞に移入するための媒体として使用される核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）である。ベクターは、細胞における核酸の発現のための発現ベクターであってもよい。そのようなベクターは、発現されることになる配列をコードする核酸に動作可能に連結されたプロモーター配列を含んでいてもよい。ベクターは、終止コドンおよび発現エンハンサーも含んでいてもよい。当技術分野において公知の任意の好適なベクター、プロモーター、エンハンサーおよび終止コドンを使用して、本発明に係るベクターから本発明に係るＣＡＲを発現させることができる。
【０２８０】
好適なベクターとしては、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される、Ｍａｕｓら、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１４）３２：１８９〜２２５に記載されているような、プラスミド、バイナリーベクター、ＤＮＡベクター、ｍＲＮＡベクター、ウイルスベクター（例えば、ガンマレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター）、トランスポゾンに基づくベクター、および人工染色体（例えば、酵母人工染色体）が挙げられる。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルス、レトロウイルスまたは単純ヘルペスウイルスベクターであってもよい。一部の実施形態では、レンチウイルスベクターは、ｐＥＬＮＳであってもよく、またはｐＥＬＮＳに由来するものであってもよい。一部の実施形態では、ベクターは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａs９をコードするベクターであってもよい。
【０２８１】
本明細書では、用語「動作可能に連結された」は、選択された核酸配列および調節核酸配列（例えばプロモーターおよび／またはエンハンサー）が、ヌクレオチド配列の発現を調節配列の影響または制御下に置くように共有結合で連結されている（それによって発現カセットを形成する）状況を含みうる。したがって、調節配列は、選択された核酸配列に、その調節配列がその核酸配列の転写を果すことができる場合、動作可能に連結されている。必要に応じて、結果として生じる転写物は、その後、所望のペプチドに翻訳されうる。
【０２８２】
一部の実施形態では、本発明に係る核酸は、配列番号９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１２４、１２５若しくは１２６に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列、またはコドン縮重の結果として配列番号９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１２４、１２５若しくは１２６のものと同じアミノ酸配列をコードする核酸配列を含むか、あるいはそのような核酸配列からなる。
【０２８３】
一部の実施形態では、本発明に係る核酸は、配列番号１０８に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列、またはコドン縮重の結果として配列番号１０８のものと同じアミノ酸配列をコードする核酸配列を含むか、あるいはそのような核酸配列からなる。一部の実施形態では、本発明に係る核酸は、配列番号１０２に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列、またはコドン縮重の結果として配列番号１０２のものと同じアミノ酸配列をコードする核酸配列を含むか、あるいはそのような核酸配列からなる。一部の実施形態では、本発明に係る核酸は、配列番号１０３に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列、またはコドン縮重の結果として配列番号１０３のものと同じアミノ酸配列をコードする核酸配列を含むか、あるいはそのような核酸配列からなる。
【０２８４】
ＣＡＲを発現する細胞
本発明は、本発明に係るＣＡＲを発現する細胞も提供する。本発明に係る核酸またはベクターを含む細胞も提供される。
【０２８５】
細胞は、真核細胞、例えば、哺乳動物細胞であってもよい。哺乳動物は、ヒトであってもよく、または非ヒト哺乳動物（例えば、ウサギ、モルモット、ラット、マウス若しくは他の齧歯動物（齧歯目のあらゆる動物を含む）、ネコ、イヌ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ（雌牛、例えば乳牛、若しくはウシ目のあらゆる動物を含む）、ウマ（ウマ目のあらゆる動物を含む）、ロバ、および非ヒト霊長類）であってもよい。
【０２８６】
一部の実施形態では、細胞は、ヒト対象からのものであってもよく、またはヒト対象から得たものであってもよい。
細胞は、造血系由来の細胞、例えば、好中球、好酸球、好塩基球、リンパ球、または単球であってもよい。リンパ球は、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞若しくはＮＫ細胞または前駆体であってもよい。細胞は、例えば、ＣＤ３ポリペプチド（例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ若しくはＣＤ３δ）、ＴＣＲポリペプチド（ＴＣＲα若しくはＴＣＲβ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４またはＣＤ８を発現しうる。
【０２８７】
一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋Ｔ細胞である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ））である。
【０２８８】
一部の実施形態では、細胞は、標的タンパク質反応性ＣＡＲ−Ｔ細胞である。本明細書における実施形態では、「標的タンパク質反応性」ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＡＲの抗原結合ドメインが特異的である、例えば細胞の表面で発現される、標的タンパク質に応答してＴ細胞のある特定の機能的特性を提示する細胞である。一部の実施形態では、前記特性は、エフェクターＴ細胞、例えば細胞傷害性Ｔ細胞に関連する機能的特性である。
【０２８９】
一部の実施形態では、標的タンパク質反応性ＣＡＲ−Ｔ細胞は、次の特性のうちの１つまたは複数を提示することができる：標的タンパク質を含むまたは発現する細胞に対する細胞傷害性；標的タンパク質に応答しての、または標的タンパク質を含む若しくは発現する細胞に応答しての、増殖、ＩＦＮγ発現増加、ＣＤ１０７ａ発現増加、ＩＬ−２発現増加、ＴＮＦα発現増加、パーフォリン発現増加、グランザイム発現増加、グラニュライシン発現増加、および／またはＦＡＳリガンド（ＦＡＳＬ）発現増加。
【０２９０】
本明細書では、ＩＦＮγ、ＣＤ１０７ａ、ＩＬ−２、ＴＮＦα、パーフォリン、グランザイムおよび／またはＦＡＳＬの「発現」は、遺伝子発現を指すこともあり、またはタンパク質発現を指すこともある。遺伝子発現は、当業者に公知の様々な手段により、例えば、定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）によるｍＲＮＡレベルの測定により、またはレポーターに基づく方法により、測定することができる。同様に、タンパク質発現は、当技術分野において周知の様々な方法により、例えば、抗体に基づく方法により、例えば、ウェスタンブロット、免疫細胞化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、またはレポーターに基づく方法により、測定することができる。「発現増加」は、標的タンパク質と接触したことがない、または標的タンパク質を含む若しくは発現する細胞と接触したことがない、Ｔ細胞による遺伝子／タンパク質の発現レベルより高い、あるいは標的タンパク質を含まないまたは発現しない細胞に応答してのＴ細胞による発現レベルより高い、発現レベルを指す。
【０２９１】
本発明は、本発明に係る核酸またはベクターを含む細胞を産生する方法であって、本発明に係る核酸またはベクターを細胞に導入するステップを含む方法も提供する。本発明は、本発明に係るＣＡＲを発現する細胞を産生する方法であって、本発明に係る核酸またはベクターを細胞に導入するステップを含む方法も提供する。一部の実施形態では、方法は、細胞による核酸またはベクターの発現に好適な条件下で細胞を培養するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる。
【０２９２】
一部の実施形態では、本発明に係る単離された核酸またはベクターを細胞に導入するステップは、形質導入、例えば、レトロウイルス形質導入を含む。したがって、一部の実施形態では、単離された核酸またはベクターは、ウイルスベクターに含まれ、ベクターは、ウイルスベクターである。一部の実施形態では、方法は、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される、Ｋｏｈら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ−Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ（２０１３）２、ｅ１１４に記載されているような、エレクトロポレーションにより、本発明に係る核酸またはベクターを導入するステップを含む。
【０２９３】
本発明は、本発明に係る細胞を産生する方法により得られる、または得ることができる細胞も提供する。
組成物
本発明は、本発明に係るキメラ抗原受容体、核酸、ベクターまたは細胞を含む組成物も提供する。
【０２９４】
本発明に係るＣＡＲ、核酸、ベクターおよび細胞は、臨床使用のために医薬組成物として製剤化されることがあり、薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含んでいてもよい。
【０２９５】
本発明に従って、薬学的に有用な組成物の生産方法も提供され、そのような生産方法は、本明細書に記載のＣＡＲ、細胞、核酸若しくはベクターを単離するステップ、および／または本明細書に記載のＣＡＲ、細胞、核酸若しくはベクターを薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤若しくは希釈剤と混合するステップから選択される１つまたは複数のステップを含みうる。
【０２９６】
例えば、本発明のさらなる態様は、がんの処置に使用するための医薬または医薬組成物を製剤化または生産する方法であって、本明細書に記載のＣＡＲ、細胞、核酸またはベクターを薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合することにより医薬組成物または医薬を製剤化するステップを含む方法に関する。
【０２９７】
ＣＡＲを発現するＣＡＲ／細胞の特性
本発明のＣＡＲは、ＣＡＲの特性を参照するによって定義することもできる。ＣＡＲを発現する細胞は、ＣＡＲを発現する細胞の特性を参照するによって定義することもできる。
【０２９８】
本発明に係るＣＡＲは、細胞において発現されるとき、別のＣＡＲ、例えば、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列を欠いたＣＡＲについての表面発現レベルと比較して、表面発現レベル増加を提示することができる。本発明に係るＣＡＲの細胞表面発現レベル増加は、本発明のＣＡＲの１つまたは複数のドメインに関連するものでもよいし、またはドメインの特定の組合せに関連するものでもよい。
【０２９９】
細胞において発現されるＣＡＲについての細胞表面発現は、例えば抗原結合ドメインの標識リガンドを使用して、例えばフローサイトメトリーまたは免疫蛍光分析などの当業者に周知の方法により、分析することができる。
【０３００】
二量体形成ドメインを含む本発明に係るＣＡＲは、二量体形成ドメインを欠いた匹敵するＣＡＲについての細胞表面での発現レベルと比較して、ＣＡＲを発現する細胞の細胞表面で発現増加を提示することができる。一部の実施形態では、細胞は、薬剤での処置後に細胞表面で発現増加を提示することができる。例えば、二量体形成ドメインが誘導性二量体形成ドメインである、実施形態では、細胞は、ＣＡＲの二量体形成、オリゴマー形成または多量体形成を誘導するための適切な薬剤での処置後、二量体形成ドメインを欠いた匹敵するＣＡＲと比較して、表面発現増加を提示することができる。
【０３０１】
本発明に係るＣＡＲを発現する細胞は、ある特定の特性を有することができ、または別のＣＡＲ、例えば、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列を欠いたＣＡＲを発現する細胞についての活性のレベルと比較して、ある特定の活性レベルの増加を提示することができる。
【０３０２】
例えば、本発明に係るＣＡＲを発現する細胞は、別のＣＡＲ、例えば、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列を欠いたＣＡＲを発現する細胞と比較して、以下の特性のうちの１つまたは複数を提示することができる：
（ａ）増殖率増加
（ｂ）１つまたは複数の成長因子（例えば、ＩＬ−２）の発現増加
（ｃ）生存の増加
（ｄ）１つまたは複数の細胞傷害性因子／エフェクター因子（例えば、ＩＦＮγ、グランザイム、パーフォリン、グラニュライシン、ＣＤ０１７ａ、ＴＮＦα、ＦＡＳＬ）の発現増加
（ｅ）細胞傷害性（例えば、標的タンパク質発現細胞に対する細胞傷害性）増加
（ｆ）１つまたは複数の免疫抑制因子、例えば、腫瘍由来免疫抑制因子（例えば、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＩＤＯ、ＶＥＧＦ、ＩＬ−６）への感受性低下
（ｇ）持続性増加（それによってより長期にわたる／持続的なＴ細胞応答をもたらす）および耐久性（ストレスに耐える能力）増加
（ｈ）腫瘍への浸潤増加
（ｉ）輸送情報への感受性増加（例えば、サイトカイン／ケモカイン勾配／環境への感受性増加）
（ｊ）標的タンパク質発現細胞に応答しての１つまたは複数の炎症誘発性因子および／またはエフェクター因子の産生レベル低下
（ｋ）標的タンパク質発現細胞に対する細胞傷害性増加、ならびに標的タンパク質発現細胞に応答しての１つまたは複数の炎症誘発性因子および／またはエフェクター因子の産生レベル低下
（ｌ）標的タンパク質発現細胞に応答しての増殖増加
（ｍ）標的タンパク質発現細胞の非存在下での増殖低減
（ｎ）標的タンパク質発現細胞の非存在下での増殖増加
これらの特性は、当業者に周知の方法により分析することができる。増殖率は、例えば、異なる時点で細胞数を測定することにより、または３Ｈ−チミジンの組込みの分析、若しくは例えばＦｕｌｃｈｅｒおよびＷｏｎｇ、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ（１９９９）７７（６）：５５９〜５６４に記載されているような、ＣＦＳＥ希釈アッセイにより、測定することができる。成長因子および細胞傷害性因子／エフェクター因子の遺伝子またはタンパク質発現は、例えば、ｍＲＮＡレベルのｑＰＣＲ分析により、ならびに／またはＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、免疫ブロットなどのような、関連タンパク質を検出する方法に基づく免疫アッセイにより、測定することができる。細胞の生存は、細胞を標識して細胞数を経時的にモニターすることにより、判定することができる。細胞傷害性は、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される、Ｚａｒｉｔｓｋａｙａら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ（２０１１）、９（６）：６０１〜６１６において概説されている方法のいずれかを使用して、例えば、５１Ｃｒ放出アッセイにより、調査することができる。免疫抑制因子への感受性は、免疫抑制因子の存在下で、ＣＡＲを発現する細胞についての増殖率／成長因子の発現／生存／細胞傷害性因子若しくはエフェクター因子の発現／細胞傷害性を分析することにより、判定することができる。
【０３０３】
細胞増殖は、細胞分裂をある期間にわたって分析することにより、判定することができる。所与の細胞または細胞集団についての細胞分裂は、例えば、３Ｈ−チミジンの組込みのｉｎ  ｖｉｔｒｏ分析により、または例えば、その全体が参照により本明細書に援用される、ＦｕｌｃｈｅｒおよびＷｏｎｇ、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ（１９９９）７７（６）：５５９〜５６４に記載されているような、ＣＦＳＥ希釈アッセイにより、分析することができる。増殖細胞もまた、例えば、Ｂｕｃｋら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、２００８年６月、４４（７）：９２７〜９、ならびにＳａｌｉおよびＭｉｔｃｈｉｓｏｎ、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ２００８年２月１９日、１０５（７）：２４１５〜２４２０（両方とも、それら全体が参照により本明細書に援用される）に記載されているような、適切なアッセイによる５−エチニル−２’−デオキシウリジン（ＥｄＵ）の組込みの分析により、同定することができる。
【０３０４】
一部の実施形態では、細胞は、ＣＡＲの活性化後に（ａ）〜（ｎ）の特性のうちの１つまたは複数を示すことができる。一部の実施形態では、細胞は、例えば標的タンパク質を発現／過剰発現する細胞の形態での、ＣＡＲの標的結合ドメインが特異的である標的分子への曝露後に、（ａ）〜（ｎ）の特性のうちの１つまたは複数を示すことができる。
【０３０５】
本発明に係るＣＡＲを発現する細胞による遺伝子若しくはタンパク質発現、生存、細胞傷害性または増殖の増加は、比較アッセイで、別のＣＡＲ、例えば、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列を欠いたＣＡＲを発現する細胞により提示される発現、生存、細胞傷害性または増殖レベルの１倍より高い、１．１倍より高い、１．２倍より高い、１．３倍より高い、１．４倍より高い、１．５倍より高い、１．６倍より高い、１．７倍より高い、１．８倍より高い、１．９倍より高い、２倍より高い、２．１倍より高い、２．２倍より高い、２．３倍より高い、２．４倍より高い、２．５倍より高い、２．６倍より高い、２．７倍より高い、２．８倍より高い、２．９倍より高い、３倍より高い、３．１倍より高い、３．２倍より高い、３．３倍より高い、３．４倍より高い、３．５倍より高い、３．６倍より高い、３．７倍より高い、３．８倍より高い、３．９倍より高い、４倍より高い、４．１倍より高い、４．２倍より高い、４．３倍より高い、４．４倍より高い、４．５倍より高い、４．６倍より高い、４．７倍より高い、４．８倍より高い、４．９倍より高い、または５倍より高い、のうちの１つでありうる。
【０３０６】
本発明に係るＣＡＲを発現する細胞による増殖低減は、比較アッセイで、別のＣＡＲ、例えば、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列を欠いたＣＡＲを発現する細胞による増殖レベルの１倍より少ない、０．９５倍より少ない、０．９倍より少ない、０．８５倍より少ない、０．８倍より少ない、０．７５倍より少ない、０．７倍より少ない、０．６５倍より少ない、０．６倍より少ない、０．５５倍より少ない、０．５倍より少ない、０．４５倍より少ない、０．４倍より少ない、０．３５倍より少ない、０．３倍より少ない、０．２５倍より少ない、０．２倍より少ない、０．１５倍より少ない、または０．１倍より少ない、のうちの１つでありうる。
【０３０７】
本発明に係るＣＡＲを発現する細胞の１つまたは複数の免疫抑制因子への感受性低下は、比較アッセイで、免疫抑制因子に応答して、増殖／成長因子の発現／生存／細胞傷害性因子またはエフェクター因子の発現／細胞傷害性について、別のＣＡＲ、例えば表１に記載のＣＡＲを発現する細胞について観察される関連特性の阻害レベルより低い阻害レベルが観察されることにより、決定されうる。一部の実施形態では、阻害レベルは、比較アッセイで、別のＣＡＲ、例えば、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列を欠いたＣＡＲを発現する細胞について観察される関連特性の阻害レベルの１倍より少ない、０．９５倍より少ない、０．９倍より少ない、０．８５倍より少ない、０．８倍より少ない、０．７５倍より少ない、０．７倍より少ない、０．６５倍より少ない、０．６倍より少ない、０．５５倍より少ない、０．５倍より少ない、０．４５倍より少ない、０．４倍より少ない、０．３５倍より少ない、０．３倍より少ない、０．２５倍より少ない、０．２倍より少ない、０．１５倍より少ない、または０．１倍より少ない、のうちの１つである。
【０３０８】
一部の実施形態では、本発明に係るＣＡＲを発現する細胞は、比較アッセイで、別のＣＡＲ、例えば、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列を欠いたＣＡＲ（例えば、表１に記載のＣＡＲ）を発現する細胞と比較して、ＴＧＦβへの感受性低下を提示することができる。エフェクター機能のＴＧＦβ媒介抑制へのＴ細胞の感受性を分析のための好適なアッセイの例は、実施例１６で説明される。
【０３０９】
本発明に係るＣＡＲを発現する細胞による炎症誘発性因子／エフェクター因子の産生レベルの低下は、比較アッセイで、別のＣＡＲ、例えば、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列を欠いたＣＡＲ（例えば、表１に記載のＣＡＲ）を発現する細胞と標的タンパク質を発現する細胞との共培養後に検出される前記因子のレベルと比較して、前記因子のレベル低下、例えば、共培養後の細胞培養上清におけるＣＡＲを発現する細胞と標的タンパク質を発現する細胞との検出により決定されうる。一部の実施形態では、産生レベル低下は、比較アッセイで、別のＣＡＲ、例えば、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列を欠いたＣＡＲ（例えば、表１に記載のＣＡＲ）を発現する細胞と標的タンパク質を発現する細胞との共培養後に検出される前記因子の産生レベルの１倍より少ない、０．９９倍より少ない、０．９８倍より少ない、０．９７倍より少ない、０．９６倍より少ない、０．９５倍より少ない、０．９倍より少ない、０．８５倍より少ない、０．８倍より少ない、０．７５倍より少ない、０．７倍より少ない、０．６５倍より少ない、０．６倍より少ない、０．５５倍より少ない、０．５倍より少ない、０．４５倍より少ない、０．４倍より少ない、０．３５倍より少ない、０．３倍より少ない、０．２５倍より少ない、０．２倍より少ない、０．１５倍より少ない、または０．１倍より少ない、のうちの１つである。
【０３１０】
本発明のＣＡＲを発現する細胞についての特定の活性または機能的特性は、本発明のＣＡＲの１つまたは複数のドメインに関連することもあり、またはドメインの特定の組合せに関連することもある。
【０３１１】
例えば、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列を含むシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する細胞は、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列を含まないＣＡＲと比較して、１つまたは複数の細胞傷害性因子の発現の増加、細胞傷害性の増加、および／または免疫抑制因子への感受性低下を提示することができる。一部の実施形態では、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来する共刺激配列を含むシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する細胞は、炎症誘発性因子またはエフェクター因子のうちの１つまたは複数の発現の低減を提示することができる。一部の実施形態では、炎症誘発性因子またはエフェクター因子は、ＩＬ−２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＩＰ−１α、ＲＡＮＴＥＳおよびＴＮＦβのうちの１つまたは複数から選択されうる。
【０３１２】
二量体形成ドメインを含むＣＡＲを発現する細胞は、二量体形成ドメインを欠いたＣＡＲを発現する細胞と比較して、増殖率増加、１つまたは複数の成長因子の発現増加および／または生存増加を提示することができる。一部の実施形態では、細胞は、薬剤での処置後にこれらの特性のうちの１つまたは複数を提示することができる。例えば、二量体形成ドメインが誘導性二量体形成ドメインである、実施形態では、細胞は、ＣＡＲの二量体形成、オリゴマー形成または多量体形成を誘導するための適切な薬剤での処置後にこれらの特性のうちの１つまたは複数を提示することができる。
【０３１３】
二量体形成ドメインを含むＣＡＲは、二量体形成ドメインを欠いたＣＡＲより、容易に二量体を形成することができ、または安定した二量体を形成することができる。
二量体形成は、ＣＡＲ媒介シグナル伝達を促進することができ、そのため、本発明に係る二量体形成ドメインを含むＣＡＲは、二量体形成ドメインを欠いたＣＡＲと比較して、ＣＡＲ媒介シグナル伝達レベルの増加を示すことができる。同様に、二量体形成ドメインを含むＣＡＲを発現する細胞は、二量体形成ドメインを欠いた匹敵するＣＡＲを発現する細胞と比較して、ＣＡＲ媒介シグナル伝達レベルの増加に関連する表現型を示すことができる。
【０３１４】
ＣＡＲ、核酸、細胞および組成物の使用および使用方法
本発明に係るＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞および医薬組成物は、治療および予防方法に使用される。
【０３１５】
本発明は、医学的処置または予防方法における使用のための、本発明に係るキメラ抗原受容体、核酸、ベクター、細胞または医薬組成物を提供する。
本発明は、疾患または障害を処置または予防するための医薬の製造における、本発明に係るキメラ抗原受容体、核酸、ベクター、細胞または医薬組成物の使用も提供する。
【０３１６】
本発明は、疾患または障害を処置または予防する方法であって、本発明に係るキメラ抗原受容体、核酸、ベクター、細胞または医薬組成物の治療または予防有効量を対象に投与するステップを含む方法も提供する。
【０３１７】
特に、本発明に係るＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞または医薬組成物は、標的タンパク質の発現／発現の上方調節に関連する疾患または障害の予防または処置に使用される。
投与
本発明に係るＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞または組成物の投与は、好ましくは、「治療有効」または「予防有効」量であり、この量は、対象に恩恵を示すのに十分なものである。投与される実際の量、ならびに投与の率および時間経過は、疾患または障害の性質および重症度に依存することになる。処置の処方、例えば、投薬量の決定などは、一般開業医および他の医師の責任の範囲内であり、通常は、処置すべき疾患／障害、個々の対象の状態、送達部位、投与方法、および開業医に公知の他の因子を考慮に入れる。上述の技術およびプロトコールの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２０版、２０００、ｐｕｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓにおいて見いだすことができる。
【０３１８】
本発明に係る態様のＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞、組成物および他の治療剤、医薬および医薬組成物は、これらに限定されないが非経口、静脈内、動脈内、筋肉内、皮下、皮内、腫瘍内および経口経路を含む、多数の経路による投与のために製剤化されうる。ＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞、組成物ならびに他の治療剤および治療剤は、流体の形態で製剤化されることもあり、または固体形態で製剤化されることもある。流体製剤は、ヒト若しくは動物の身体の選択された領域への注射による、または血液への注入による投与のために製剤化されうる。投与は、血液への注射または注入、例えば、静脈内または動脈内投与であってもよい。
【０３１９】
投与は、単独であってもよく、または処置すべき状態に依存して同時に若しくは逐次的に、他の処置と組み合わせてであってもよい。本発明に係るＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞または組成物と治療剤は、同時に投与されることもあり、または逐次的に投与されることもある。
【０３２０】
一部の実施形態では、本発明のＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞または組成物での処置は、他の治療的または予防的介入、例えば、化学療法、免疫療法、放射線療法、外科手術、ワクチン接種および／またはホルモン療法を伴うこともある。
【０３２１】
同時投与は、ＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞または組成物と治療剤とを、一緒に、例えば、両方の薬剤を含有する医薬組成物（混合製剤）として投与すること、または互いの直後に、および任意選択で同じ投与経路によって、例えば同じ動脈、静脈若しくは他の血管に、投与することを指す。逐次投与は、ＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞若しくは組成物または治療剤を投与すること、続いて、所定の時間間隔後に他の薬剤を別途投与することを指す。これは、一部の実施形態での場合であるが、２つの薬剤が同じ経路により投与される必要はない。前記時間間隔は、いずれの時間間隔であってもよい。
【０３２２】
化学療法および放射線療法は、それぞれ、薬物でのがんの処置、または電離放射線でのがんの処置（例えば、Ｘ線若しくはγ線を使用する放射線療法）を指す。
薬物は、化学物質、例えば、小分子薬、抗生物質、ＤＮＡインターカレーター、タンパク質阻害剤（例えば、キナーゼ阻害剤）、あるいは生物由来物質、例えば抗体、抗体断片、核酸若しくはペプチドアプタマー、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質でありうる。薬物は、医薬組成物として製剤化されることもあり、または医薬として製剤化されることもある。製剤は、１つまたは複数の薬物（例えば、１つまたは複数の活性薬剤）を１つまたは複数の薬学的に許容される希釈剤、賦形剤または担体と一緒に含むこともある。
【０３２３】
処置は、１つより多くの薬物の投与を含んでいてもよい。薬物は、単独で投与されることもあり、または処置すべき状態に依存して同時に若しくは逐次的に、他の処置と組み合わせて投与されることもある。例えば、化学療法は、２つの薬物の投与を含む併用療法であってもよく、前記２つの薬物のうちの１つまたは複数は、がんを処置するためのものでありうる。
【０３２４】
化学療法は、１つまたは複数の投与経路、例えば、非経口、静脈内、注射、経口、皮下、皮内または腫瘍内投与経路により投与されることもある。
化学療法は、処置レジメンに従って投与されうる。処置レジメンは、医師または医療施術者により用意されうる、および処置を必要とする患者に合うように調整されうる、化学療法投与の予め定められた予定表、計画、スキームまたはスケジュールでありうる。
【０３２５】
処置レジメンは、次のうちの１つまたは複数を指示するものでありうる：患者に投与するための化学療法のタイプ；各薬物の用量または各放射線の線量；投与間の時間間隔；各処置の長さ；もしあれば、任意の休薬期間の数および性質など。併用療法については、各薬物をどうのように投与すべきかを示す単一処置レジメンが提供されうる。
【０３２６】
化学療法薬および生物製剤は、アルキル化剤、例えば、シスプラチン、カルボプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、イホスファミド；プリンまたはピリミジン代謝拮抗薬、例えば、アザチオプリンまたはメルカプトプリン；アルカロイドおよびテルペノイド、例えば、ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン）、ポドフィロトキシン、エトポシド、テニポシド、タキサン系薬剤、例えばパクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（商標））、ドセタキセル；トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、Ｉ型トポイソメラーゼ阻害剤であるカンプトテシン、イリノテカンおよびトポテカン、またはＩＩ型トポイソメラーゼ阻害剤であるアムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、テニポシド；抗腫瘍抗生物質（例えば、アントラサイクリン抗生物質）、例えば、ダクチノマイシン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（商標））、エピルビシン、ブレオマイシン、ラパマイシン；抗体に基づく薬剤、例えば、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＣＴＬＡ−４、抗４−１ＢＢ、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ２７、抗ＢＬＴＡ、抗ＯＸ４３、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ−２、抗ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ、抗ＣＤ−５２、抗ＣＤ２０、抗ＲＳＶ、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ｅｒｂＢ２）、抗ＴＮＦ受容体、抗ＥＧＦＲ抗体、モノクローナル抗体または抗体断片（例としては、セツキシマブ、パニツムマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、アブシキシマブ、ダクリズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リツキシマブ（Ｍａｂｔｈｅｒａ（登録商標））、パリビズマブ、トラスツズマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ニモツズマブが挙げられる）；ＥＧＦＲ阻害剤、例えば、エルロチニブ、セツキシマブおよびゲフィチニブ；抗血管新生剤、例えば、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））；がんワクチン、例えば、シプロイセルＴ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標））から選択することができる。
【０３２７】
さらなる化学療法薬は、１３−シス−レチノイン酸、２−クロロデオキシアデノシン、５−アザシチジン、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アブラキサン、Ａｃｃｕｔａｎｅ（登録商標）、アクチノマイシン−Ｄ、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標）、Ａｇｒｙｌｉｎ（登録商標）、Ａｌａ−Ｃｏｒｔ（登録商標）、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリムタ、アリトレチノイン、Ａｌｋａｂａｎ−ＡＱ（登録商標）、Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標）、オールトランスレチノイン酸、アルファインターフェロン、アルトレタミン、アメトプテリン、アミフォスチン、アミノグルテチミド、アナグレリド、Ａｎａｎｄｒｏｎ（登録商標）、アナストロゾール、アラビノシルシトシン、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）、Ａｒｅｄｉａ（登録商標）、Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）、Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）、Ａｒｒａｎｏｎ（登録商標）、亜ヒ酸、アスパラギナーゼ、ＡＴＲＡ、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）、アザシチジン、ＢＣＧ、ＢＣＮＵ、ベンダムスチン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ、Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標）、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）、ロイコボリンカルシウム、Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標）、カンプトテシン−１１、カペシタビン、Ｃａｒａｃ（商標）、カルボプラチン、カルムスチン、Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標）、ＣＣ−５０１３、ＣＣＩ−７７９、ＣＣＮＵ、ＣＤＤＰ、ＣｅｅＮＵ、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標）、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、シトロボラム因子、クラドリビン、コルチゾン、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標）、ＣＰＴ−１１、シクロホスファミド、Ｃｙｔａｄｒｅｎ（登録商標）、シタラビンＣｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標）、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、ダコゲン、ダクチノマイシン、ダルベポエチンアルファ、ダサチニブ、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ダウノルビシン塩酸塩、ダウノルビシン内包リポソーム、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標）、デカドロン、デシタビン、Ｄｅｌｔａ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）、Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標）、デニロイキンジフチトクス、ＤｅｐｏＣｙｔ（商標）、デキサメタゾン、デキサメタゾン酢酸エステル、デキサメタゾンリン酸エステルナトリウム、デキサゾン、デクスラゾキサン、ＤＨＡＤ、ＤＩＣ、ジオデックス（Ｄｉｏｄｅｘ）、ドセタキセル、Ｄｏｘｉｌ（登録商標）、ドキソルビシン、ドキソルビシン内包リポソーム、Ｄｒｏｘｉａ（商標）、ＤＴＩＣ、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）、Ｄｕｒａｌｏｎｅ（登録商標）、Ｅｌｉｇａｒｄ（商標）、Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標）、Ｅｌｏｘａｔｉｎ（商標）、Ｅｌｓｐａｒ（登録商標）、Ｅｍｃｙｔ（登録商標）、エピルビシン、エポチンアルファ、アービタックス、エルロチニブ、エルウィニアＬ−アスパラギナーゼ、エストラムスチン、Ｅｔｈｙｏｌ  Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（登録商標）、エトポシド、リン酸エトポシド、Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標）、エベロリムス、Ｅｖｉｓｔａ（登録���標）、エキセメスタン、Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標）、Ｆｅｍａｒａ（登録商標）、フィルグラスチム、フロクスウリジン、Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標）、フルダラビン、Ｆｌｕｏｒｏｐｌｅｘ（登録商標）、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、フォリン酸、ＦＵＤＲ（登録商標）、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブオゾガマイシン、Ｇｌｅｅｖｅｃ（商標）、Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標）ウェファー、ゴセレリン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、ヘキサドロール、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、ヘキサメチルメラミン、ＨＭＭ、Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標）、Ｈｙｄｒｅａ（登録商標）、Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔ  Ａｃｅｔａｔｅ（登録商標）、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンリン酸エステルナトリウム、ヒドロコルチゾンコハク酸エステルナトリウム、ヒドロコルチゾンリン酸エステル、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブ、イブリツモマブチウキセタン、Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標）、イダルビシン、Ｉｆｅｘ（登録商標）、ＩＦＮ−アルファ、イホスファミド、ＩＬ−１１、ＩＬ−２、イマチニブメシル酸塩、イミダゾールカルボキサミド、インターフェロンアルファ、インターフェロンアルファ−２ｂ（ＰＥＧコンジュゲート）、インターロイキン−２、インターロイキン−１１、Ｉｎｔｒｏｎ  Ａ（登録商標）（インターフェロンアルファ−２ｂ）、Ｉｒｅｓｓａ（登録商標）、イリノテカン、イソトレチノイン、イクサベピロン、Ｉｘｅｍｐｒａ（商標）、キドロラーゼ（Ｋｉｄｒｏｌａｓｅ）、Ｌａｎａｃｏｒｔ（登録商標）、ラパチニブ、Ｌ−アスパラギナーゼ、ＬＣＲ、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリン、ロイケラン、Ｌｅｕｋｉｎｅ（商標）、ロイプロリド、ロイロクリスチン、Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（商標）、リポソームＡｒａ−Ｃ、Ｌｉｑｕｉｄ  Ｐｒｅｄ（登録商標）、ロムスチン、Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン、Ｌｕｐｒｏｎ（登録商標）、Ｌｕｐｒｏｎ  Ｄｅｐｏｔ（登録商標）、Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標）、マキシデックス、メクロレタミン、メクロレタミン塩酸塩、Ｍｅｄｒａｌｏｎｅ（登録商標）、Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）、Ｍｅｇａｃｅ（登録商標）、メゲストロール、メゲストロール酢酸エステル、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、Ｍｅｓｎｅｘ（商標）、メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム、メチルプレドニゾロン、Ｍｅｔｉｃｏｒｔｅｎ（登録商標）、マイトマイシン、マイトマイシン−Ｃ、ミトキサントロン、Ｍ−Ｐｒｅｄｎｉｓｏｌ（登録商標）、ＭＴＣ、ＭＴＸ、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標）、ムスチン、Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標）、Ｍｙｌｏｃｅｌ（商標）、Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標）、Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標）、ネララビン、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（商標）、Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標）、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）、Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標）、Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（登録商標）、ニルタミド、Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標）、ナイトロジェンマスタード、Ｎｏｖａｌｄｅｘ（登録商標）、Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ��登録商標）、オクトレオチド、オクトレオチド酢酸塩、Ｏｎｃｏｓｐａｒ（登録商標）、Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標）、Ｏｎｔａｋ（登録商標）、Ｏｎｘａｌ（商標）、オプレルベルキン（Ｏｐｒｅｖｅｌｋｉｎ）、Ｏｒａｐｒｅｄ（登録商標）、Ｏｒａｓｏｎｅ（登録商標）、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルタンパク質結合型、パミドロネート、パニツムマブ、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（登録商標）、Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標）、Ｐｅｄｉａｐｒｅｄ（登録商標）、ＰＥＧインターフェロン、ペグアスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮ（商標）、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ＰＥＭＥＴＲＥＸＥＤ、ペントスタチン、フェニルアラニンマスタード、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）、Ｐｌａｔｉｎｏｌ−ＡＱ（登録商標）、プレドニゾロン、プレドニゾン、Ｐｒｅｌｏｎｅ（登録商標）、プロカルバジン、ＰＲＯＣＲＩＴ（登録商標）、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）、カルムスチンインプラントを伴うポリフェプロザン（Ｐｒｏｌｉｆｅｐｒｏｓｐａｎ）２０、Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標）、ラロキシフェン、Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標）、Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（登録商標）、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、リツキシマブ、Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ（登録商標）（インターフェロンアルファ−２ａ）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標）、ルビドマイシン塩酸塩、Ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ（登録商標）、Ｓａｎｄｏｓｔａｔｉｎ  ＬＡＲ（登録商標）、サルグラモスチム、Ｓｏｌｕ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）、Ｓｏｌｕ−Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標）、ソラフェニブ、ＳＰＲＹＣＥＬ（商標）、ＳＴＩ−５７１、ストレプトゾシン、ＳＵ１１２４８、スニチニブ、Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）、タモキシフェン、Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）、Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標）、Ｔａｘｏｌ（登録商標）、Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）、Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標）、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、ＴＥＳＰＡ、サリドマイド、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）、ＴｈｅｒａＣｙｓ（登録商標）、チオグアニン、チオグアニンＴａｂｌｏｉｄ（登録商標）、チオホスホアミド、Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標）、チオテパ、ＴＩＣＥ（登録商標）、Ｔｏｐｏｓａｒ（登録商標）、トポテカン、トレミフェン、Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標）、トシツモマブ、トラスツズマブ、Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標）、トレチノイン、Ｔｒｅｘａｌｌ（商標）、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）、ＴＳＰＡ、ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＶＣＲ、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（商標）、Ｖｅｌｂａｎ（登録商標）、Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）、ＶｅＰｅｓｉｄ（登録商標）、Ｖｅｓａｎｏｉｄ（登録商標）、Ｖｉａｄｕｒ（商標）、Ｖｉｄａｚａ（登録商標）、ビンブラスチン、ビンブラスチン硫酸塩、Ｖｉｎｃａｓａｒ  Ｐｆｓ（登録商標）、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビノレルビン酒石酸塩、ＶＬＢ、ＶＭ−２６、ボリノスタット、ＶＰ−１６、Ｖｕｍｏｎ（登録商標）、Ｘｅｌｏｄａ（登録商標）、Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標）、Ｚｅｖａｌｉｎ（商標）、Ｚｉｎｅｃａｒｄ（登録商標）、Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標）、ゾレドロン酸、ゾリンザ、Ｚｏｍｅｔａ（登録商標）から選���することができる。
【０３２８】
ＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞または組成物の複数回投与が施されることもある。１回若しくは複数回または各回の投与は、別の治療剤の同時または逐次投与により果されることもある。
【０３２９】
複数回投与は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０若しくは３１日、または１、２、３、４、５若しくは６カ月のうちの１つであるように選択されうる所定の時間間隔、離されることがある。例として、投与は、７、１４、２１または２８日（プラスまたはマイナス３、２または１日）ごとに施されることもある。
【０３３０】
がん
一部の実施形態では、本発明に従って処置または予防されることになる疾患または障害は、がんである。ＧＰＣ３発現は、様々ながんにおいて上方調節される。したがって、処置または予防されることになる疾患または障害は、ＧＰＣ３発現が上方調節されるがんでありうる。
【０３３１】
ＥｐＣＡＭ発現は、様々ながんにおいて上方調節される。したがって、処置または予防されることになる疾患または障害は、ＥｐＣＡＭ発現が上方調節されるがんでありうる。
がんは、任意の望ましくない細胞増殖（若しくは望ましくない細胞増殖によりそれ自体が顕在化する任意の疾患）、新生物若しくは腫瘍あることもあり、または望ましくない細胞増殖、新生物若しくは腫瘍のリスク増加であることもあり、または望ましくない細胞増殖、新生物若しくは腫瘍にかかりやすい素因であることもある。がんは、良性であってもよく、または悪性であってもよく、原発性であってもよく、または続発性（転移性）であってもよい。新生物または腫瘍は、細胞のいかなる異常成長または増殖であってもよく、いずれの組織に位置してもよい。組織の例としては、副腎、副腎髄質、肛門、虫垂、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、盲腸、中枢神経系（脳を含むまたは含まない）、小脳、頸部、結腸、十二指腸、子宮内膜、上皮細胞（例えば、腎上皮）、胆嚢、食道、グリア細胞、心臓、回腸、空腸、腎臓、涙腺、喉頭、肝臓、肺、リンパ、リンパ節、リンパ芽球、上顎骨、縦隔、腸間膜、子宮筋、上咽頭、網、口腔、卵巣、膵臓、耳下腺、末梢神経系、腹膜、胸膜、前立腺、唾液腺、Ｓ状結腸、皮膚、小腸、軟部組織、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、舌、扁桃、気管、子宮、外陰部、白血球が挙げられる。
【０３３２】
処置されることになる腫瘍は、神経系腫瘍であってもよく、または非神経系腫瘍であってもよい。神経系腫瘍は、中枢神経系または末梢神経系のいずれかに起こるものでありえ、例えば、神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫、神経線維腫、上衣腫、シュワン腫、神経線維肉腫、星細胞腫および乏突起神経膠腫でありうる。非神経系がん／腫瘍は、いずれの他の非神経組織に起こるものであってもよく、例としては、メラノーマ、中皮腫、リンパ腫、骨髄腫、白血病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄系白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、ヘパトーマ、類表皮癌、前立腺癌、乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、膵がん、胸腺癌、ＮＳＣＬＣ、血液がんおよび肉腫が挙げられる。
【０３３３】
一部の実施形態では、本発明に従って処置／予防されることになるがんは、肝がん／肝臓がん（例えば、肝細胞癌、肝芽腫）でありうる。肝がんは、ＧＰＣ３を発現または過剰発現しうる。肝がんは、ＥｐＣＡＭを発現または過剰発現しうる。
【０３３４】
一部の実施形態では、本発明に従って処置／予防されることになるがんは、肺がん（例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ））でありうる。肺がんは、ＧＰＣ３を発現または過剰発現しうる。肺がんは、ＥｐＣＡＭを発現または過剰発現しうる。
【０３３５】
一部の実施形態では、がんは、ＣＡＲの抗原結合ドメインが特異的である標的タンパク質を発現するがん（例えば、ＧＰＣ３発現がん）である。当業者に周知であるいずれの好適な手段により、がんが標的タンパク質を発現することを判定してもよい。標的タンパク質を発現するがんは、標的タンパク質の検出または発現により同定することができる。一部の実施形態では、がんは、標的タンパク質を過剰発現する。標的タンパク質の過剰発現は、同等の非がん性細胞／非腫瘍組織による標的タンパク質の発現レベルより高い、標的タンパク質の発現レベルの検出により、判定することができる。
【０３３６】
発現は、遺伝子発現であることもあり、またはタンパク質発現であることもある。遺伝子発現は、例えば、関連標的タンパク質をコードするｍＲＮＡの、例えば定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）による、検出により、判定することができる。タンパク質発現は、例えば、標的タンパク質の検出により、例えば、抗体に基づく方法により、例えば、ウェスタンブロット、免疫組織化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリーまたはＥＬＩＳＡにより、判定することができる。
【０３３７】
一部の実施形態では、患者は、例えば患者から得られる試料における、標的タンパク質を発現するかまたは標的タンパク質を過剰発現するがんの検出に基づいて、本発明に係る処置に選択されうる。
【０３３８】
一部の実施形態では、標的タンパク質は、ＧＰＣ３であり、がんは、ＧＰＣ３を発現または過剰発現しうる。ＧＰＣ３を発現しうるがんとしては、メラノーマ、卵巣明細胞癌、卵黄嚢腫瘍、神経芽腫、肝芽腫およびウィルムス腫瘍細胞が挙げられる（Ｈｏら、２０１１  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ４７（３）：３３３〜３３８）。
【０３３９】
一部の実施形態では、標的タンパク質は、ＥｐＣＡＭであり、がんは、ＥｐＣＡＭを発現または過剰発現しうる。ＥｐＣＡＭを発現しうるがんとしては、上皮細胞がん、乳がん、卵巣がん、膵癌、尿路上皮癌、胃がん、食道癌、結腸直腸癌、肝細胞癌および胆嚢癌が挙げられる。
【０３４０】
養子移入
本発明の実施形態では、処置または予防方法は、免疫細胞、例えばＴ細胞、の養子移入を含んでいてもよい。養子Ｔ細胞移入は、Ｔ細胞が対象から得られるプロセスを一般に指し、これは、通常は、Ｔ細胞が単離される血液試料の採血による。次いで、Ｔ細胞は、通常は、何らかの方法で処置されるかまたは変えられ、任意選択で拡大増殖され、そしてその後、同じ対象または異なる対象のどちらかに投与される。前記処置は、ある特定の所望される特性を有するＴ細胞集団を対象に提供すること、またはそのような特性を有するＴ細胞のその対象における出現頻度を増加させることを、通常は目的とする。ＣＡＲ−Ｔ細胞の養子移入は、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される、ＫａｌｏｓおよびＪｕｎｅ  ２０１３、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３９（１）：４９〜６０に記載されている。
【０３４１】
本発明では、養子移入は、標的タンパク質反応性Ｔ細胞、特に、標的タンパク質反応性ＣＤ８＋Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋Ｔ細胞を対象に導入すること、または対象におけるそのような細胞の出現頻度を増加させることを目的として、行われる。
【０３４２】
したがって、本発明は、対象における疾患または障害を処置または予防する方法であって、
（ａ）少なくとも１つのＴ細胞を対象から単離するステップと、
（ｂ）前記少なくとも１つのＴ細胞を、本発明に係るキメラ抗原受容体または核酸を発現するかまたは含むように修飾するステップと、
（ｃ）前記修飾された少なくとも１つのＴ細胞を任意選択で拡大増殖させるステップと、
（ｄ）前記修飾された少なくとも１つのＴ細胞を対象に投与するステップと
を含む方法を提供する。
【０３４３】
一部の実施形態では、Ｔ細胞が単離される対象は、修飾されたＴ細胞が投与される対象である（すなわち、養子移入は、自己Ｔ細胞の養子移入である）。一部の実施形態では、Ｔ細胞が単離される対象は、修飾されたＴ細胞が投与される対象とは異なる対象である（すなわち、養子移入は、同種異系Ｔ細胞の養子移入である）。
【０３４４】
本発明に従って修飾される少なくとも１つのＴ細胞は、当業者に周知の方法に従って修飾されうる。修飾は、移入された核酸の永続的または一過性発現のための核酸移入を含みうる。
【０３４５】
任意の好適な遺伝子改変プラットフォームを使用して、本発明に従ってＴ細胞を修飾することができる。Ｔ細胞の好適な修飾方法は、例えば、上文にて参照により援用のＭａｕｓら、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１４）３２：１８９〜２２５に記載されているような、ガンマレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ＤＮＡトランスフェクション、トランスポゾンに基づく遺伝子送達およびＲＮＡトランスフェクションなどの、遺伝子改変プラットフォームの使用を含む。
【０３４６】
一部の実施形態では、方法は、次のステップのうちの１つまたは複数を含みうる：血液試料を対象から採取するステップ；少なくとも１つＴ細胞を、前記血液試料から単離する、および／または拡大増殖させるステップ；少なくとも１つのＴ細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ細胞培養で培養するステップ；少なくとも１つのＴ細胞を、本発明に係るＣＡＲ、核酸またはベクターに導入することによって、少なくとも１つのＴ細胞を修飾するステップ；少なくとも１つの修飾されたＴ細胞を増殖させるステップ；少なくとも１つの修飾されたＴ細胞を収集するステップ；修飾されたＴ細胞をアジュバント、希釈剤または担体と混合するステップ；修飾されたＴ細胞を対象に投与するステップ。
【０３４７】
一部の実施形態では、例えば、ＣＡＲが、化学誘導性二量体形成ドメインを含む場合、方法は、修飾されたＴ細胞を適切な二量体形成誘導剤で処置するステップをさらに含んでいてもよい。一部の実施形態では、処置は、培養中の修飾されたＴ細胞への薬剤の投与による、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏでの処置であることがある。一部の実施形態では、処置は、本発明に従って修飾されたＴ細胞が投与された対象への薬剤の投与による、ｉｎ  ｖｉｖｏでの処置であることもある。このようにして、本発明に係るＣＡＲを含む修飾されたＴ細胞は、増殖するように刺激され、それによってｉｎ  ｖｉｔｒｏ／ｅｘ  ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏで拡大増殖されうる。
【０３４８】
当業者は、例えば、その全体が参照により本明細書に援用される、Ｄａｉら、２０１６  Ｊ  Ｎａｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ  １０８（７）：ｄｊｖ４３９を参照することにより、本発明に係る標的タンパク質反応性ＣＡＲ−Ｔ細胞の養子移入に適した試薬および手順を決定することができる。
【０３４９】
関連態様では、本発明は、修飾されたＴ細胞を調製する方法であって、本発明に係るＣＡＲ、核酸またはベクターをＴ細胞に導入することによって少なくとも１つのＴ細胞を修飾するステップを含む方法を提供する。この方法は、好ましくは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで行われる。
【０３５０】
一態様では、本発明は、対象における疾患または障害を処置または予防する方法であって、
（ａ）少なくとも１つのＴ細胞を対象から単離するステップと、
（ｂ）前記少なくとも１つのＴ細胞を、本発明に係る単離された核酸またはベクターを前記少なくとも１つのＴ細胞に導入することによって修飾するステップと、
（ｃ）前記修飾された少なくとも１つのＴ細胞を対象に投与するステップと
を含む方法を提供する。
【０３５１】
本発明に係る実施形態では、対象は、好ましくは、ヒト対象である。一部の実施形態では、本明細書における本発明の治療または予防方法に従って処置されることになる対象は、標的タンパク質の発現若しくは発現の上方調節を特徴とする疾患若しくは障害を有する対象、またはそのような疾患若しくは障害を発症するリスクがある対象である。一部の実施形態では、処置されることになる対象は、がん、例えば、標的タンパク質を発現するがん、若しくは標的タンパク質の発現が上方調節されるがんを有する対象、またはそのようながんを発症するリスクがある対象である。
【０３５２】
本発明に係る実施形態では、対象は、そのような疾患／障害のある特定のマーカー、例えば、標的タンパク質発現についての特性評価に基づく方法に従って、処置に選択されうる。対象は、処置を必要とする疾患若しくは障害であると診断された者であってもよく、またはそのような疾患若しくは障害を有する疑いがある者であってもよい。
【０３５３】
一部の実施形態では、方法は、疾患または障害の処置または予防のための治療的または予防的介入、例えば、化学療法、免疫療法、放射線療法、外科手術、ワクチン接種および／またはホルモン療法をさらに含む。一部の実施形態では、方法は、肝がん、例えば肝細胞癌などの、がんの処置または予防のための、治療的または予防的介入をさらに含む。
【０３５４】
対象
本発明に従って処置されることになる対象は、任意の動物またはヒトであってもよい。対象は、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。対象は、非ヒト哺乳動物であってもよいが、より好ましくはヒトである。対象は、男性であってもよく、または女性であってもよい。対象は、患者であってもよい。対象は、処置を必要とする疾患若しくは状態であると診断された者であってもよく、そのような疾患若しくは状態を有する疑いがある者であってもよく、またはそのような疾患若しくは状態を発症するリスクがある者であってもよい。
【０３５５】
番号付きの、発明の記載
以下の番号付きの項（ｐａｒａ）は、本発明の特定の態様および実施形態を説明するものである：
１．ＧＰＣ３と結合することができるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
ＧＰＣ３結合ドメインと、ヒンジ領域と、膜貫通ドメインと、シグナル伝達ドメインとを含み、
前記ヒンジ領域が、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域であるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８αの膜貫通ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、
ＣＡＲ。
【０３５６】
２．前記ヒンジ領域が、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、前記膜貫通ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ｐａｒａ１に記載のＣＡＲ。
【０３５７】
３．ＧＰＣ３と結合することができるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、ＧＰＣ３結合ドメインと、膜貫通ドメインと、シグナル伝達ドメインと、誘導性二量体形成ドメインとを含む、ＣＡＲ。
【０３５８】
４．前記二量体形成ドメインが、Ｆ３６Ｖ−ＦＫＢＰのアミノ酸配列であるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ｐａｒａ３に記載のＣＡＲ。
５．二量体形成ドメインを含み、前記二量体形成ドメインが、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ｐａｒａ１〜４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【０３５９】
６．ＧＰＣ３と結合することができるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、ＧＰＣ３結合ドメインと、膜貫通ドメインと、シグナル伝達ドメインとを含み、前記シグナル伝達ドメインが共刺激配列を含み、前記共刺激配列が、ＣＤ２２６の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＣＡＲ。
【０３６０】
７．前記シグナル伝達ドメインが、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる共刺激配列を含む、ｐａｒａ１〜６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【０３６１】
８．前記シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８の細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる共刺激配列を含む、ｐａｒａ１〜７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【０３６２】
９．前記シグナル伝達ドメインが、４−１ＢＢの細胞内ドメインであるかまたはそれに由来するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる共刺激配列を含む、ｐａｒａ１〜８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【０３６３】
１０．前記シグナル伝達ドメインが、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる共刺激配列を含む、ｐａｒａ１〜９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【０３６４】
１１．前記シグナル伝達ドメインが、配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる共刺激配列を含む、ｐａｒａ１〜１０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
【０３６５】
１２．ＧＰＣ３と結合することができるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、表１に示されているようなＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、ＬまたはＭのいずれか１つに従う、ＣＡＲ。
【０３６６】
１３．ＧＰＣ３と結合することができるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、配列番号３８、３９、４０、２２、２３、４１、４２、２４、２５、２６、２７、２８または２９のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＣＡＲ。
【０３６７】
１４．ＧＰＣ３と結合することができるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、配列番号４３、４４、４５、３０、３１、４６、４７、３２、３３、３４、３５、３６または３７のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＣＡＲ。
【０３６８】
１５．ｐａｒａ１〜１４のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸。
１６．ｐａｒａ１５に記載の核酸を含むベクター。
【０３６９】
１７．ｐａｒａ１〜１４のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ｐａｒａ１５に記載の核酸、またはｐａｒａ１６に記載のベクターを含む、細胞。
１８．ＧＰＣ３と結合することができるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞を産生する方法であって、ｐａｒａ１５に記載の核酸またはｐａｒａ１６に記載のベクターを細胞に導入するステップと、前記細胞による前記核酸またはベクターの発現に好適な条件下で前記細胞を培養するステップとを含む方法。
【０３７０】
１９．ｐａｒａ１８に記載の方法により得られる、または得ることができる細胞。
２０．ｐａｒａ１〜１４のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ｐａｒａ１５に記載の核酸、ｐａｒａ１６に記載のベクター、またはｐａｒａ１７若しくはｐａｒａ１９に記載の細胞と、薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤または希釈剤とを含む、医薬組成物。
【０３７１】
２１．疾患または障害を処置または予防する方法において使用するための、ｐａｒａ１〜１４のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ｐａｒａ１５に記載の核酸、ｐａｒａ１６に記載のベクター、ｐａｒａ１７若しくはｐａｒａ１９に記載の細胞、またはｐａｒａ２０に記載の医薬組成物。
【０３７２】
２２．疾患または障害を処置または予防するための医薬の製造における、ｐａｒａ１〜１４のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ｐａｒａ１５に記載の核酸、ｐａｒａ１６に記載のベクター、ｐａｒａ１７若しくはｐａｒａ１９に記載の細胞、またはｐａｒａ２０に記載の医薬組成物の使用。
【０３７３】
２３．疾患または障害を処置または予防する方法であって、ｐａｒａ１〜１４のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ｐａｒａ１５に記載の核酸、ｐａｒａ１６に記載のベクター、ｐａｒａ１７若しくはｐａｒａ１９に記載の細胞またはｐａｒａ２０に記載の医薬組成物の治療または予防有効量を対象に投与するステップを含む方法。
【０３７４】
２４．対象における疾患または障害を処置または予防する方法であって、
（ａ）少なくとも１つのＴ細胞を対象から単離するステップと、
（ｂ）前記少なくとも１つのＴ細胞を、ｐａｒａ１〜１４のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ｐａｒａ１５に記載の核酸またはｐａｒａ１６に記載のベクターを発現するかまたは含むように修飾するステップと、
（ｃ）前記修飾された少なくとも１つのＴ細胞を対象に投与するステップと
を含む方法。
【０３７５】
２５．対象における疾患または障害を処置または予防する方法であって、
（ａ）少なくとも１つのＴ細胞を対象から単離するステップと、
（ｂ）前記少なくとも１つのＴ細胞を、ｐａｒａ１５に記載の核酸またはｐａｒａ１６に記載のベクターを前記少なくとも１つのＴ細胞に導入することによって修飾するステップと、
（ｃ）前記修飾された少なくとも１つのＴ細胞を対象に投与するステップと
を含む方法。
【０３７６】
２６．前記疾患または障害がＧＰＣ３発現がんである、ｐａｒａ２１に記載の使用のためのＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞若しくは医薬組成物、ｐａｒａ２２に記載の使用、またはｐａｒａ２３〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【０３７７】
２７．前記ＧＰＣ３発現がんが肝細胞癌である、ｐａｒａ２６に記載の使用のためのＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞若しくは医薬組成物、使用または方法。
２８．ｐａｒａ１〜１４のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ｐａｒａ１５に記載の核酸、ｐａｒａ１６に記載のベクター、ｐａｒａ１７若しくはｐａｒａ１９に記載の細胞またはｐａｒａ２０に記載の医薬組成物の所定量を含む、部品キット。
【０３７８】
配列
【０３７９】
【表４−１】
2019530431.tif 000035
【０３８０】
【表４−２】
2019530431.tif 000036
【０３８１】
【表４−３】
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【０３８２】
【表４−４】
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【０３８３】
【表４−５】
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【０３８４】
【表４−６】
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【０３８５】
【表４−７】
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【０３８６】
【表４−８】
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【０３８７】
【表４−９】
2019530431.tif 000043
【０３８８】
【表４−１０】
2019530431.tif 000044
【０３８９】
【表４−１１】
2019530431.tif 000045
【０３９０】
【表４−１２】
2019530431.tif 000046
【０３９１】
【表４−１３】
2019530431.tif 000047
【０３９２】
【表４−１４】
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【０３９３】
【表４−１５】
2019530431.tif 000049
【０３９４】
【表４−１６】
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【０３９５】
【表４−１７】
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【０３９６】
【表４−１８】
2019530431.tif 000052
【０３９７】
【表４−１９】
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【０３９８】
【表４−２０】
2019530431.tif 000054
【０３９９】
【表４−２１】
2019530431.tif 000055
【０４００】
【表４−２２】
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【０４０１】
【表４−２３】
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【０４０２】
【表４−２４】
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【０４０３】
【表４−２５】
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【０４０４】
【表４−２６】
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【０４０５】
【表４−２７】
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【０４０６】
【表４−２８】
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【０４０７】
【表４−２９】
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【０４０８】
【表４−３０】
2019530431.tif 000064
【０４０９】
【表４−３１】
2019530431.tif 000065
【０４１０】
【表４−３２】
2019530431.tif 000066
【０４１１】
【表４−３３】
2019530431.tif 000067
【０４１２】
【表４−３４】
2019530431.tif 000068
【０４１３】
【表４−３５】
2019530431.tif 000069
【０４１４】
【表４−３６】
2019530431.tif 000070
【０４１５】
【表４−３７】
2019530431.tif 000071
【０４１６】
【表４−３８】
2019530431.tif 000072
【０４１７】
【表４−３９】
2019530431.tif 000073
【０４１８】
【表４−４０】
2019530431.tif 000074
【０４１９】
【表４−４１】
2019530431.tif 000075
【０４２０】
本発明は、記載の態様および好ましい特徴の組合せを、そのような組合せが明らかに許容されないかまたは明確に回避される場合を除き、含む。
本明細書で使用される節の見出しは、単に構成のためのものであり、記載の主題を限定すると見なすべきでない。
【０４２１】
次に、本発明の態様および実施形態が、例として、添付の図を参照して、例証される。さらなる態様および実施形態が当業者には明らかになる。本文の中で言及されるすべての文献は、参照により本明細書に援用される。
【０４２２】
後続の特許請求の範囲を含む、本明細書を通して、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語、ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの語尾変化形は、述べられる整数若しくはステップまたは整数若しくはステップの群の包含を含意するが、いずれの他の整数若しくはステップまたは整数若しくはステップの群の除外も含意しないと解されるものとする。
【０４２３】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈による別段の明白な指図がない限り、複数の指示対象を含む。範囲は、本明細書では、「約」ある特定の値から、および／または「約」別の特定の値まで、と表されることがある。そのような範囲が表される場合、別の実施形態は、そのある特定の値から、および／またはその他の特定の値までを含む。同様に、値が、先行する「約」の使用により近似値で表される場合、その特定の値は別の実施形態になると理解されるものとする。
【０４２４】
次に、本発明の原理を例証する実施形態および実験が、添付の図面を参照して論じられる。
【図面の簡単な説明】
【０４２５】
【図１】図１Ａ及び図１Ｂ  図１は、ｐＥＬＮＳレンチウイルスベクター内の本発明のＧＰＣ３標的化ＣＡＲ構築物の模式図である。
【図２−１】図２Ａ及び図２Ｂ  図２は、フローサイトメトリーにより判定された、抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞の細胞表面での抗ＧＰＣ３の発現を示す散布図である。図２は、非形質導入Ｔ細胞（陰性対照）、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（形質導入対照）、またはＴ、ＫＫ、ＬＬ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞（図２Ａ）、示す。Ｓ、ＣＣ、ＦＦ、Ｕ、Ｚ、ＢＢ若しくはＥＥ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞（図２Ｂ）の分析結果を示す。
【図２−２】図２Ａ及び図２Ｂ  図２は、フローサイトメトリーにより判定された、抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞の細胞表面での抗ＧＰＣ３の発現を示す散布図である。図２は、非形質導入Ｔ細胞（陰性対照）、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（形質導入対照）、またはＴ、ＫＫ、ＬＬ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞（図２Ａ）、示す。Ｓ、ＣＣ、ＦＦ、Ｕ、Ｚ、ＢＢ若しくはＥＥ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞（図２Ｂ）の分析結果を示す。
【図３−１】図３Ａ−図３Ｃ  図３は、Ｄｅｌｆｉａ細胞傷害性アッセイにより判定された、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示す棒グラフである。図３Ａは、非形質導入Ｔ細胞（陰性対照）、またはＴ、ＫＫ、ＬＬ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が、１０：１の標的細胞：ＣＡＲ−Ｔ細胞比で形質導入されたＴ細胞による、ＨｅｐＧ２細胞の特異的細胞溶解を示す。図３Ｂは、非形質導入Ｔ細胞（陰性対照）、またはＴ、ＫＫ、ＬＬ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が、２０：１の標的細胞：ＣＡＲ−Ｔ細胞比で形質導入されたＴ細胞による、ＨｅｐＧ２細胞の特異的細胞溶解を示す。図３Ｃは、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＺ、Ｓ、ＢＢ、ＣＣ、Ｕ、ＥＥ、ＦＦ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が、１０：１および２０：１の標的細胞：ＣＡＲ−Ｔ細胞比で形質導入されたＴ細胞による、ＨｅｐＧ２細胞の特異的細胞溶解を示す。
【図３−２】図３Ａ−図３Ｃ  図３は、Ｄｅｌｆｉａ細胞傷害性アッセイにより判定された、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示す棒グラフである。図３Ａは、非形質導入Ｔ細胞（陰性対照）、またはＴ、ＫＫ、ＬＬ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が、１０：１の標的細胞：ＣＡＲ−Ｔ細胞比で形質導入されたＴ細胞による、ＨｅｐＧ２細胞の特異的細胞溶解を示す。図３Ｂは、非形質導入Ｔ細胞（陰性対照）、またはＴ、ＫＫ、ＬＬ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が、２０：１の標的細胞：ＣＡＲ−Ｔ細胞比で形質導入されたＴ細胞による、ＨｅｐＧ２細胞の特異的細胞溶解を示す。図３Ｃは、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＺ、Ｓ、ＢＢ、ＣＣ、Ｕ、ＥＥ、ＦＦ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が、１０：１および２０：１の標的細胞：ＣＡＲ−Ｔ細胞比で形質導入されたＴ細胞による、ＨｅｐＧ２細胞の特異的細胞溶解を示す。
【図４】図４  図４は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示す棒グラフである。ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、Ｔ細胞の非存在下での、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００の存在下での（陽性対照）、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）による、またはＴ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、ＨｅｐＧ２細胞の細胞溶解パーセントが、示されている。
【図５−１】図５Ａ及び図５Ｂ  図５は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフである。図５Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図５Ｂは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、非形質導入Ｔ細胞（陰性対照）またはＴ、ＫＫ、ＬＬ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、Ｔ細胞の非存在下でのＨｅｐＧ２細胞の細胞溶解パーセントを示す。
【図５−２】図５Ａ及び図５Ｂ  図５は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフである。図５Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図５Ｂは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、非形質導入Ｔ細胞（陰性対照）またはＴ、ＫＫ、ＬＬ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、Ｔ細胞の非存在下でのＨｅｐＧ２細胞の細胞溶解パーセントを示す。
【図６−１】図６Ａ及び図６Ｂ  図６は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフである。図６Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図６Ｂは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、Ｔ細胞の非存在下での、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＴ、ＫＫ、ＬＬ、Ｗ、Ｘ、ＧＧ若しくはＭＭ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、ＨｅｐＧ２細胞の細胞溶解パーセントを示す。
【図６−２】図６Ａ及び図６Ｂ  図６は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフである。図６Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図６Ｂは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、Ｔ細胞の非存在下での、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＴ、ＫＫ、ＬＬ、Ｗ、Ｘ、ＧＧ若しくはＭＭ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、ＨｅｐＧ２細胞の細胞溶解パーセントを示す。
【図７−１】図７Ａ及び図７Ｂ  図７は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフである。図７Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図７Ｂは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＴ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、ＨｅｐＧ２細胞の細胞溶解パーセントを示す。
【図７−２】図７Ａ及び図７Ｂ  図７は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフである。図７Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図７Ｂは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＴ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、ＨｅｐＧ２細胞の細胞溶解パーセントを示す。
【図８−１】図８Ａ−図８Ｄ  図８は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフである。図８Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図８Ｂ−図８Ｄは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＺ、Ｓ、ＢＢ、ＣＣ、Ｔ、ＥＥ若しくはＦＦ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、４時間の時点での（図８Ｂ）、１２時間の時点での（図８Ｃ）、そして、３６時間の時点での（図８Ｄ）、ＨｅｐＧ２細胞の特異的細胞溶解を示す。
【図８−２】図８Ａ−図８Ｄ  図８は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフである。図８Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図８Ｂ−図８Ｄは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＺ、Ｓ、ＢＢ、ＣＣ、Ｔ、ＥＥ若しくはＦＦ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、４時間の時点での（図８Ｂ）、１２時間の時点での（図８Ｃ）、そして、３６時間の時点での（図８Ｄ）、ＨｅｐＧ２細胞の特異的細胞溶解を示す。
【図８−３】図８Ａ−図８Ｄ  図８は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフである。図８Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図８Ｂ−図８Ｄは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＺ、Ｓ、ＢＢ、ＣＣ、Ｔ、ＥＥ若しくはＦＦ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、４時間の時点での（図８Ｂ）、１２時間の時点での（図８Ｃ）、そして、３６時間の時点での（図８Ｄ）、ＨｅｐＧ２細胞の特異的細胞溶解を示す。
【図９−１】図９Ａ−図９Ｄ  図９は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフ及び棒グラフである。図９Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図９Ｂ−図９Ｄは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＺ、Ｓ、ＢＢ、ＣＣ、Ｔ、ＥＥ若しくはＦＦ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、４時間の時点での（図９Ｂ）、１２時間の時点での（図９Ｃ）、及び、２４時間の時点での（図９Ｄ）、ＨｅｐＧ２細胞の特異的細胞溶解を示す。
【図９−２】図９Ａ−図９Ｄ  図９は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフ及び棒グラフである。図９Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図９Ｂ−図９Ｄは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＺ、Ｓ、ＢＢ、ＣＣ、Ｔ、ＥＥ若しくはＦＦ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、４時間の時点での（図９Ｂ）、１２時間の時点での（図９Ｃ）、及び、２４時間の時点での（図９Ｄ）、ＨｅｐＧ２細胞の特異的細胞溶解を示す。
【図９−３】図９Ａ−図９Ｄ  図９は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフ及び棒グラフである。図９Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図９Ｂ−図９Ｄは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＺ、Ｓ、ＢＢ、ＣＣ、Ｔ、ＥＥ若しくはＦＦ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、４時間の時点での（図９Ｂ）、１２時間の時点での（図９Ｃ）、及び、２４時間の時点での（図９Ｄ）、ＨｅｐＧ２細胞の特異的細胞溶解を示す。
【図１０−１】図１０Ａ−図１０Ｄ  図１０は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフ及び棒グラフである。図１０Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図１０Ｂ−図１０Ｄは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＺ、Ｓ、ＢＢ、ＣＣ、Ｔ、ＥＥ若しくはＦＦ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、４時間の時点での（図１０Ｂ）、８時間の時点での（図１０Ｃ）、及び、１６時間の時点での（図１０Ｄ）ＨｅｐＧ２細胞の特異的細胞溶解を示す。
【図１０−２】図１０Ａ−図１０Ｄ  図１０は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフ及び棒グラフである。図１０Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図１０Ｂ−図１０Ｄは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＺ、Ｓ、ＢＢ、ＣＣ、Ｔ、ＥＥ若しくはＦＦ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、４時間の時点での（図１０Ｂ）、８時間の時点での（図１０Ｃ）、及び、１６時間の時点での（図１０Ｄ）ＨｅｐＧ２細胞の特異的細胞溶解を示す。
【図１０−３】図１０Ａ−図１０Ｄ  図１０は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフ及び棒グラフである。図１０Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図１０Ｂ−図１０Ｄは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＺ、Ｓ、ＢＢ、ＣＣ、Ｔ、ＥＥ若しくはＦＦ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、４時間の時点での（図１０Ｂ）、８時間の時点での（図１０Ｃ）、及び、１６時間の時点での（図１０Ｄ）ＨｅｐＧ２細胞の特異的細胞溶解を示す。
【図１１−１】図１１Ａ及び図１１Ｂ  図１１は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフ及び棒グラフである。図１１Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図１１Ｂは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＳ若しくはＢＢ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、ＨｅｐＧ２細胞の細胞溶解パーセントを示す。
【図１１−２】図１１Ａ及び図１１Ｂ  図１１は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフ及び棒グラフである。図１１Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図１１Ｂは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＳ若しくはＢＢ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、ＨｅｐＧ２細胞の細胞溶解パーセントを示す。
【図１２−１】図１２Ａ及び図１２Ｂ  図１２は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフ及び棒グラフである。図１２Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図１２Ｂは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＳ若しくはＢＢ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、ＨｅｐＧ２細胞の細胞溶解パーセントを示す。
【図１２−２】図１２Ａ及び図１２Ｂ  図１２は、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフ及び棒グラフである。図１２Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図１２Ｂは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＳ若しくはＢＢ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、ＨｅｐＧ２細胞の細胞溶解パーセントを示す。
【図１３−１】図１３Ａ−図１３Ｈ  図１３は、ＧＰＣ３発現細胞と、抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞との共培養物中のサイトカインレベルを示す棒グラフである。棒グラフは、ＨｅｐＧ２細胞と、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＴ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞との共培養物の細胞培養上清中の、１６時間の共培養後の、ＩＬ−２のレベル（図１３Ａ）、ＩＦＮｇのレベル（図１３Ｂ）、ＴＮＦａのレベル（図１３Ｃ）、ＧＭ−ＣＳＦのレベル（図１３Ｄ）、ＭＩＰ−１ａのレベル（図１３Ｅ）、、ＭＩＰ−１ｂのレベル（図１３Ｆ）、ＲＡＮＴＥＳのレベル（図１３Ｇ）、及び、ＴＮＦｂのレベル（図１３Ｈ）を示す。
【図１３−２】図１３Ａ−図１３Ｈ  図１３は、ＧＰＣ３発現細胞と、抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞との共培養物中のサイトカインレベルを示す棒グラフである。棒グラフは、ＨｅｐＧ２細胞と、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＴ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞との共培養物の細胞培養上清中の、１６時間の共培養後の、ＩＬ−２のレベル（図１３Ａ）、ＩＦＮｇのレベル（図１３Ｂ）、ＴＮＦａのレベル（図１３Ｃ）、ＧＭ−ＣＳＦのレベル（図１３Ｄ）、ＭＩＰ−１ａのレベル（図１３Ｅ）、、ＭＩＰ−１ｂのレベル（図１３Ｆ）、ＲＡＮＴＥＳのレベル（図１３Ｇ）、及び、ＴＮＦｂのレベル（図１３Ｈ）を示す。
【図１３−３】図１３Ａ−図１３Ｈ  図１３は、ＧＰＣ３発現細胞と、抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞との共培養物中のサイトカインレベルを示す棒グラフである。棒グラフは、ＨｅｐＧ２細胞と、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＴ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞との共培養物の細胞培養上清中の、１６時間の共培養後の、ＩＬ−２のレベル（図１３Ａ）、ＩＦＮｇのレベル（図１３Ｂ）、ＴＮＦａのレベル（図１３Ｃ）、ＧＭ−ＣＳＦのレベル（図１３Ｄ）、ＭＩＰ−１ａのレベル（図１３Ｅ）、、ＭＩＰ−１ｂのレベル（図１３Ｆ）、ＲＡＮＴＥＳのレベル（図１３Ｇ）、及び、ＴＮＦｂのレベル（図１３Ｈ）を示す。
【図１３−４】図１３Ａ−図１３Ｈ  図１３は、ＧＰＣ３発現細胞と、抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞との共培養物中のサイトカインレベルを示す棒グラフである。棒グラフは、ＨｅｐＧ２細胞と、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＴ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞との共培養物の細胞培養上清中の、１６時間の共培養後の、ＩＬ−２のレベル（図１３Ａ）、ＩＦＮｇのレベル（図１３Ｂ）、ＴＮＦａのレベル（図１３Ｃ）、ＧＭ−ＣＳＦのレベル（図１３Ｄ）、ＭＩＰ−１ａのレベル（図１３Ｅ）、、ＭＩＰ−１ｂのレベル（図１３Ｆ）、ＲＡＮＴＥＳのレベル（図１３Ｇ）、及び、ＴＮＦｂのレベル（図１３Ｈ）を示す。
【図１４−１】図１４Ａ−図１４Ｈ  図１４は、ＧＰＣ３発現細胞と、抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞との共培養物中のサイトカインレベルを示すグラフである。棒グラフは、ＨｅｐＧ２細胞と、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＴ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞との共培養物の細胞培養上清中の、１６時間の共培養後の、ＩＬ−２のレベル（図１４Ａ）、ＩＦＮｇのレベル（図１４Ｂ）、ＴＮＦａのレベル（図１４Ｃ）、ＧＭ−ＣＳＦのレベル（図１４Ｄ）、ＭＩＰ−１ａのレベル（図１４Ｅ）、、ＭＩＰ−１ｂのレベル（図１４Ｆ）、ＲＡＮＴＥＳのレベル（図１４Ｇ）、及び、ＴＮＦｂのレベル（図１４Ｈ）を示す。
【図１４−２】図１４Ａ−図１４Ｈ  図１４は、ＧＰＣ３発現細胞と、抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞との共培養物中のサイトカインレベルを示すグラフである。棒グラフは、ＨｅｐＧ２細胞と、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＴ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞との共培養物の細胞培養上清中の、１６時間の共培養後の、ＩＬ−２のレベル（図１４Ａ）、ＩＦＮｇのレベル（図１４Ｂ）、ＴＮＦａのレベル（図１４Ｃ）、ＧＭ−ＣＳＦのレベル（図１４Ｄ）、ＭＩＰ−１ａのレベル（図１４Ｅ）、、ＭＩＰ−１ｂのレベル（図１４Ｆ）、ＲＡＮＴＥＳのレベル（図１４Ｇ）、及び、ＴＮＦｂのレベル（図１４Ｈ）を示す。
【図１４−３】図１４Ａ−図１４Ｈ  図１４は、ＧＰＣ３発現細胞と、抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞との共培養物中のサイトカインレベルを示すグラフである。棒グラフは、ＨｅｐＧ２細胞と、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＴ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞との共培養物の細胞培養上清中の、１６時間の共培養後の、ＩＬ−２のレベル（図１４Ａ）、ＩＦＮｇのレベル（図１４Ｂ）、ＴＮＦａのレベル（図１４Ｃ）、ＧＭ−ＣＳＦのレベル（図１４Ｄ）、ＭＩＰ−１ａのレベル（図１４Ｅ）、、ＭＩＰ−１ｂのレベル（図１４Ｆ）、ＲＡＮＴＥＳのレベル（図１４Ｇ）、及び、ＴＮＦｂのレベル（図１４Ｈ）を示す。
【図１４−４】図１４Ａ−図１４Ｈ  図１４は、ＧＰＣ３発現細胞と、抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞との共培養物中のサイトカインレベルを示すグラフである。棒グラフは、ＨｅｐＧ２細胞と、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＴ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞との共培養物の細胞培養上清中の、１６時間の共培養後の、ＩＬ−２のレベル（図１４Ａ）、ＩＦＮｇのレベル（図１４Ｂ）、ＴＮＦａのレベル（図１４Ｃ）、ＧＭ−ＣＳＦのレベル（図１４Ｄ）、ＭＩＰ−１ａのレベル（図１４Ｅ）、、ＭＩＰ−１ｂのレベル（図１４Ｆ）、ＲＡＮＴＥＳのレベル（図１４Ｇ）、及び、ＴＮＦｂのレベル（図１４Ｈ）を示す。
【図１５】図１５Ａ及び図１５Ｂ  図１５は、ＧＰＣ３発現細胞との共培養後の、抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による増殖を示す棒グラフである。棒グラフは、ＨｅｐＧ２細胞との５日の共培養後の、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入された（陰性対照）、または、Ｔ、Ｗ若しくはＸ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入された、ＣＤ４＋Ｔ細胞（図１５Ａ）あるいはＣＤ８＋Ｔ細胞（図１５Ｂ）の増殖を示す。
【図１６】図１６Ａ及び図１６Ｂ  図１６は、ＧＰＣ３発現細胞との共培養後の、抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による増殖を示す棒グラフである。棒グラフは、ＨｅｐＧ２細胞との５日の共培養後の、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入された（陰性対照）、または、Ｓ、ＡＡ若しくはＢＢ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入された、ＣＤ４＋Ｔ細胞（図１６Ａ）あるいはＣＤ８＋Ｔ細胞（図１６Ｂ）の増殖を示す。
【図１７−１】図１７Ａ及び図１７Ｂ  図１７は、ＴＧＦβの存在または非存在下での、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフ及び棒グラフである。図１７Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図１７Ｂは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＳ若しくはＢＢ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、ＨｅｐＧ２細胞の細胞溶解パーセントを示す。
【図１７−２】図１７Ａ及び図１７Ｂ  図１７は、ＴＧＦβの存在または非存在下での、異なるドメインを有する抗ＧＰＣ３  ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の細胞殺滅を示すグラフ及び棒グラフである。図１７Ａは、細胞溶解を経時的に示す。図１７Ｂは、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイにより判定された、ＧＦＰをコードする構築物が形質導入されたＴ細胞（陰性対照）、またはＳ若しくはＢＢ  ＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物が形質導入されたＴ細胞による、ＨｅｐＧ２細胞の細胞溶解パーセントを示す。
【実施例】
【０４２６】
本発明者らは、以下の実施例において、ＧＰＣ３標的化ＣＡＲの構築、ＧＰＣ３標的化ＣＡＲ−Ｔ細胞を生成するためのヒトＴリンパ球への形質導入、ＧＰＣ３標的化ＣＡＲ−Ｔ細胞によるＧＰＣ３発現細胞の抗原特異的殺滅、およびｉｎ  ｖｉｖｏでのＧＰＣ３標的化ＣＡＲ−Ｔ細胞の抗がん活性、ならびにＣＤ２２６細胞内ドメインを欠いたＣＡＲを発現するＣＡＲ−Ｔ細胞と比較して、ＣＤ２２６共刺激領域を含むＣＡＲを発現するＣＡＲ−Ｔ細胞についての、免疫抑制因子への感受性低下、腫瘍標的に対する選択性向上、腫瘍細胞を根絶するためのＣＴＬプライミングの改善、輸送、腫瘍への遊走および浸潤の改善、ならびに成長因子の発現増加を説明する。
【０４２７】
実施例１：ＣＤ２２６細胞内ドメインを含むＣＡＲおよびレンチウイルスにより形質導入されたヒトＴリンパ球の生成
ＧＣ３３  ｓｃＦｖおよびＣＤ２２６細胞内ドメインのｃＤＮＡをＰＣＲにより増幅させ、ＢａｍＨＩおよびＮｈｅＩ制限部位を使用してレンチウイルスベクターｐＥＬＮに挿入して、ＣＤ２２６細胞内ドメインを有するレンチウイルスベクターｐＥＬＮ／ＧＣ３３  ＣＡＲを生成する。
【０４２８】
レンチウイルス形質導入のために、ＨＥＫ  ２９３Ｔ細胞５×１０６個を、０．００２％ポリ−Ｌ−リシンでプレコートされた１０ｃｍ２ディッシュ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）に蒔く。次いで、レンチウイルスベクターｐＥＬＮＳ−ＣＡＲに、プラスミドｐＭＤ．Ｇ、ｐＭＤＬｇ／ｐＲＲＥ、およびｐＲＳＶ−Ｒｅｖをコトランスフェクトする。ウイルス含有上清を収集し、０．４５μｍフィルターに通す。次いで、上清を２５，０００ｒｐｍでの超遠心分離により濃縮し、力価測定し、その後、使用するまで−８０℃で保管する。
【０４２９】
健常ドナーから単離された初代ヒトＴリンパ球を入手する。Ｔ細胞を完全培地（１０％不活性化ＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシン硫酸塩を補充したＲＰＭＩ  １６４０）で培養し、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８ｍＡｂ被覆ビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）での刺激により活性化する。活性化の１２時間後に、ポリブレンの存在下でＴ細胞にレンチウイルスベクターを形質導入する。ヒトＴリンパ球を拡大増殖させ、１日おきのＩＬ−２の添加により維持する。
【０４３０】
実施例２：ＧＰＣ３特異的ＣＡＲの構築およびＴリンパ球の形質導入
ＧＣ３３  ｓｃＦｖを、高い抗原結合親和性を有するＧＰＣ３特異的ＣＡＲを構築するために選択する。レンチウイルスＣＡＲベクターを使用して、異なるドメインを含むＣＡＲ構築物を、前記ドメインをコードするｃＤＮＡ配列の前記ベクターへのサブクローニングにより作製する。以下の構築物を生成する：
【０４３１】
【表５】
2019530431.tif 000076
【０４３２】
短縮されたＣＤ３ζ細胞内ドメインを含有するシグナル伝達欠損構築物を、構築物によるシグナル伝達形質導入の開始を評価するための陰性対照として調製する。
ベクターを２９３Ｔ細胞に形質転換し、溶解物をウェスタンブロットにより分析してベクターの発現成功を確認する。
【０４３３】
有効な形質導入のために、末梢血試料から単離したヒトＴリンパ球をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズでの刺激により活性化する。形質導入効率を評価するために、Ｔ細胞にＧＦＰ発現レンチウイルスベクターを形質導入し、安定した、一貫したＧＦＰ発現を形質導入の１０日後に観察する。
【０４３４】
Ｔ細胞膜でのＣＡＲ発現を分析するために、ＦＬＡＧタグをＣＡＲのＮ末端に人工的に挿入し、抗ＦＬＡＧ  ｍＡｂでの細胞の染色後にフローサイトメトリーにより発現を検出する。結果は、およそ５０％のＴ細胞が形質導入を受け、細胞表面でＣＡＲ受容体を発現することを示唆する。
【０４３５】
実施例３：ＣＤ２２６共刺激領域を含むＧＰＣ３  ＣＡＲを発現するＴ細胞とＣＤ２２６共刺激領域を欠いたＧＰＣ３  ＣＡＲを発現するＴ細胞の比較
ＣＤ２２６共刺激領域を有するＧＰＣ３  ＣＡＲＴ  Ｔ細胞は、ＣＤ２２６の共刺激配列を含まないＣＡＲと比較して、免疫抑制因子への感受性低下を提示する。Ｔ細胞におけるＧＣ３３／ＣＤ２２６  ＣＡＲの発現は、ＴＧＦ−βでの処置の強力な阻害効果からＣＡＲ  Ｔ細胞を保護するのに十分なものである。
【０４３６】
ＧＣ３３／ＣＤ２２６  ＣＡＲを発現するＴ細胞の選択性を、正常対腫瘍組織を再現する標的を使用して、ＣＤ２２６細胞内ドメインを欠いたＧＣ３３  ＣＡＲを発現するＴ細胞とｉｎ  ｖｉｔｒｏで比較する。ＧＣ３３／ＣＤ２２６  ＣＡＲを発現するＣＡＲ  Ｔ細胞は、腫瘍標的のみを選択的に排除し、「正常な」代用標的を排除しない。これらのＣＡＲ−Ｔ細胞の選択性をｉｎ  ｖｉｖｏで確認する。
【０４３７】
実施例４：腫瘍細胞を根絶するためのＣＴＬプライミングにおけるＧＰＣ３／ＣＤ２２６  ＣＡＲを発現するＴ細胞の効力
ＣＤ２６６細胞内ドメインを有するＧＰＣ３  ＣＡＲを発現するＴ細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏプライミングシステムで試験し、ＣＤ２２６細胞内ドメインを欠いたＧＣ３３  ＣＡＲを発現するＴ細胞と比較する。ヒトＣＡＲ発現Ｔ細胞を、照射された腫瘍細胞とともに、非改変Ｔ細胞および任意選択でＤＣのプールの存在下で共培養する。
【０４３８】
ＧＰＣ３／ＣＤ２２６  ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＣＤ２２６細胞内ドメインを欠いたＣＡＲと比較し、腫瘍細胞を根絶するためのＣＴＬプライミングの改善を提示する。
実施例５：注入後の細胞局在を判定する遊走アッセイ
トランスウェル遊走アッセイは、ＧＰＣ３／ＣＤ２２６  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、ＣＤ２２６細胞内ドメインを欠いたＧＰＣ３  ＣＡＲ−Ｔ細胞より効率的に腫瘍細胞株上清に向かって遊走することができることを示す。
【０４３９】
ＧＰＣ３  ＣＡＲ−Ｔ細胞をＧＦＰで標識し、２４ウェルのトランスウェルチャンバの上側のチャンバ内に配置する。培地のみまたはＬＣＬ腫瘍上清を下部のチャンバ内に配置する。次いで、プレートを３時間、３７℃でインキュベートする。次いで、下部のチャンバ内の細胞を回収し、分析して、上側のチャンバから下側のチャンバへのＴ細胞の遊走を判定する。次の式を使用して、特異的遊走を算出する：
特異的遊走（％）＝（実験［ＬＣＬ上清］−自然［培地のみ］）／（最大［細胞１．５×１０５個］−自然［培地のみ］）×１００
ＣＤ２２６細胞内ドメインを含むＣＡＲ構築物を発現するＣＡＲ−Ｔ細胞は、下側のチャンバへの輸送を示し、ＣＤ２２６細胞内ドメインを欠いたＧＰＣ３  ＣＡＲ−Ｔ細胞と比較して良好な腫瘍への遊走および浸潤を提示する。
【０４４０】
実施例６：マルチプレックスサイトカイン分析を使用するサイトカインアッセイ
ＣＤ２２６を共発現するＣＡＲ  Ｔ細胞の細胞培養上清中のインターロイキン−２（ＩＬ−２）、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−ガンマ）、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子、および腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−アルファ）のレベルを、マルチプレックス技術により分析する。細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を用いて、ＣＤ３＋細胞においてＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−１３を検出する。
【０４４１】
マルチプレックス分析は、７日目に、ピークレベルまたはピークレベルとの良好な相関関係を同定することにより、サイトカインの大多数についての代表サイトカインプロファイルを検出する。
【０４４２】
ＣＤ２２６細胞内ドメインを含むＣＡＲを発現するＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＣＤ２２６細胞内ドメインを欠いたＧＰＣ３  ＣＡＲ−Ｔ細胞と比較して、成長因子の発現増加を有する。
【０４４３】
実施例７：ＧＰ３Ｃ特異的ＣＡＲおよびレンチウイルスにより形質導入されたヒトＴリンパ球の生成
ＧＣ３３  ｓｃＦｖのｃＤＮＡをＰＣＲにより増幅させ、ＢａｍＨＩおよびＮｈｅＩ制限部位を使用してレンチウイルスベクターｐＥＬＮに挿入して、レンチウイルスベクターｐＥＬＮ／ＧＣ３３  ＣＡＲを生成する。
【０４４４】
レンチウイルス形質導入のために、ＨＥＫ  ２９３Ｔ細胞５×１０６個を、０．００２％ポリ−Ｌ−リシンでプレコートされた１０ｃｍ２ディッシュ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）に蒔く。次いで、レンチウイルスベクターｐＥＬＮＳ−ＣＡＲに、プラスミドｐＭＤ．Ｇ、ｐＭＤＬｇ／ｐＲＲＥ、およびｐＲＳＶ−Ｒｅｖをコトランスフェクトする。ウイルス含有上清を収集し、０．４５μｍフィルターに通す。次いで、上清を２５，０００ｒｐｍでの超遠心分離により濃縮し、力価測定し、その後、使用するまで−８０℃で保管する。
【０４４５】
健常ドナーから単離された初代ヒトＴリンパ球を入手する。Ｔ細胞を完全培地（１０％不活性化ＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシン硫酸塩を補充したＲＰＭＩ  １６４０）で培養し、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８ｍＡｂ被覆ビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）での刺激により活性化する。活性化の１２時間後に、ポリブレンの存在下でＴ細胞にレンチウイルスベクターを形質導入する。ヒトＴリンパ球を拡大増殖させ、１日おきのＩＬ−２の添加により維持する。
【０４４６】
実施例８：Ｔ細胞をＧ３ＰＣ発現標的細胞に指向させるＣＡＲの能力の検証
形質導入Ｔリンパ球のＧＰＣ３陽性腫瘍細胞を溶解する能力を、蛍光に基づく殺滅アッセイ、サイトカイン放出アッセイおよび高次元フローサイトメトリーによるｉｎ  ｖｉｔｒｏ分析によって確認する。
【０４４７】
実施例９：ＣＡＲ＋Ｔ細胞はｉｎ  ｖｉｔｒｏでＧＰＣ３特異的細胞傷害性を示した
改変Ｔ細胞をＧＰＣ３陽性またはＧＰＣ３陰性腫瘍細胞とともに共培養して、ＣＡＲ発現Ｔ細胞が抗原特異的細胞傷害性を提示するかどうかを判定する。
【０４４８】
Ｔ細胞にレンチウイルスベクターにより形質導入し、それらの形質導入効率をＦＡＣＳにより評定し、それらをさらに平衡させる。ＧＦＰレンチウイルスベクターで形質導入されたＴ細胞を対照として含める。標的細胞に、いくつかの樹立腫瘍細胞株を選択し、ＧＰＣ３タンパク質発現レベルをＦＡＣＳにより判定する。２つの腫瘍細胞株、ｈｓ５７８Ｔ（ＧＰＣ３陰性細胞株）およびＨｅｐＧ２．ｓｈ５７（低いＧＰＣ３発現レベルを提示する細胞株）、も選択する。
【０４４９】
結果は、ＧＰＣ３−ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞が、ＧＰＣ３を発現する標的細胞への抗原特異的細胞傷害性を提示することを示す。
実施例１０：養子移入後のＧＰＣ３−ＣＡＲ  Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ増殖および存続性の改善ならびに抗腫瘍効果の増強
ＧＰＣ３−ＣＡＲ  Ｔ細胞を、ＧＰＣ３陽性異種移植腫瘍を有する免疫不全マウスに皮下注射する。
【０４５０】
未処置対照群のマウスは、５０日後に死亡し始める。対照的に、ＧＰＣ３−ＣＡＲ  Ｔ細胞で処置したマウスは、生存し続ける。１３０日の処置後、対照群からのマウスの大部分は死亡したが、ＣＡＲ  Ｔ群からのマウスの約８０％は、生き続ける。これらのデータは、ＧＰＣ３−ＣＡＲ  Ｔ細胞が、ｉｎ  ｖｉｖｏでの存続性および増殖の改善、ならびにｉｎ  ｖｉｖｏでの長期抗腫瘍効果の増強を有することを示す。
【０４５１】
実施例１１：さらなるＣＡＲ構築物の生成
さらなるＣＡＲ構築物を、異なるＣＡＲドメインをコードするｃＤＮＡのＰＣＲ増幅およびレンチウイルスＣＡＲベクターへのサブクローニングにより生成した。以下の構築物を生成した：
【０４５２】
【表６】
2019530431.tif 000077
【０４５３】
実施例１２：形質導入Ｔ細胞上での抗ＧＰＣ３  ＣＡＲの発現
ＣＤ３＋細胞を末梢血試料から得て、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズでの刺激により活性化し、その後、実施例１１で説明した次のＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物：Ｔ、ＫＫ、ＬＬ、Ｗ若しくはＸ（図２Ａ）、Ｓ、ＣＣ、ＦＦ、Ｕ、Ｚ、ＢＢ、若しくはＥＥ（図２Ｂ）、または形質導入対照としての、ＧＦＰをコードするレンチウイルスを、それらの細胞に形質導入した。
【０４５４】
形質導入細胞の細胞表面でのＧＰＣ３−ＣＡＲの発現を、ビオチン化抗マウス−ｆａｂ’抗体および蛍光標識ストレプトアビジンを使用してフローサイトメトリーにより分析した。
【０４５５】
結果を図２Ａおよび２Ｂに示す。ＧＰＣ３−ＣＡＲ発現を形質導入細胞の細胞表面で検出した。
実施例１３：ＧＰＣ３標的化ＣＡＲ−Ｔ細胞による細胞殺滅の分析
１３．１  Ｄｅｌｆｉａ細胞傷害性アッセイによる分析
ＧＰＣ３特異的ＣＡＲ構築物を発現する形質導入Ｔ細胞を、ＧＰＣ３発現細胞を溶解するそれらの能力について分析した。
【０４５６】
ＧＰＣ３発現ＨｅｐＧ２肝細胞癌細胞にＤｅｌｆｉａ蛍光増強試薬を負荷した。ＧＰＣ３標的化ＣＡＲ−Ｔ細胞による標的細胞の溶解により、増強試薬が細胞培地に放出される。
【０４５７】
ＨｅｐＧ２細胞とＧＰＣ３−ＣＡＲ−Ｔ細胞の２時間のコインキュベーション後に培養培地を収集し、１０：１および２０：１の標的細胞：ＣＡＲ−Ｔ細胞比で実験を行った。
蛍光プレートリーダーで蛍光を測定し、自然放出された蛍光、およびＤｅｌｆｉａ負荷ＨｅｐＧ２細胞の化学的溶解により放出された蛍光と比較して、特異的細胞溶解パーセントを算出した。
【０４５８】
Ｔ、ＫＫ、ＬＬ、ＷまたはＸ構築物である構築物（実施例１１参照）を形質導入したＴ細胞を使用して行った実験の結果を、図３Ａおよび３Ｂに示す。
Ｚ、Ｓ、ＢＢ、ＣＣ、Ｕ、ＥＥまたはＦＦ構築物である構築物（実施例１１参照）を形質導入したＴ細胞を使用して行った実験の結果を、図３Ｃに示す。
【０４５９】
ＧＰＣ３−ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＧＰＣ３発現細胞を殺滅できることを示した。
１３．２  ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅアッセイによる分析
金微小電極への細胞の付着量の変化に付随する電気抵抗の変化を測定するｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ（ＡＣＥＡ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ）システムを使用して、ＧＰＣ３標的化ＣＡＲ−Ｔ細胞によるＨｅｐＧ２細胞の溶解のさらなる分析を行った。細胞と金微小電極との相互作用は、電極間の電流の流れを変化させるので、このインピーダンス値を「細胞指数」として算出する。
【０４６０】
簡単に言うと、ＨｅｐＧ２細胞をｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅプレートに播種し、成長をモニターした。ほぼコンフルエント、またはコンフルエントになったら、ＣＡＲ−Ｔ細胞を０．５：１のエフェクター：標的細胞比で培養物に添加した。ＣＡＲ−Ｔ細胞によるＨｅｐＧ２細胞の溶解をｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅマシンによりモニターし、ＸＩＭＴソフトウェアを使用して細胞溶解パーセントを算出した。
【０４６１】
ＧＰＣ３標的化構築物ＴまたはＸを形質導入したＴ細胞を使用して行った結果を図４に示す。図４は、実験の最後の時点のＨｅｐＧ２細胞の細胞溶解パーセントを示す。Ｘ構築物を形質導入したＴ細胞は、Ｔ構築物を形質導入したＴ細胞と比較して、ＧＰＣ３発現細胞に対する細胞溶解活性の増加を提示することが判明した。
【０４６２】
異なるドナーから得た血液試料から単離したＴ細胞を使用して、さらなる実験を行った。
図５Ａおよび５Ｂは、ドナーＩＤ１からのＴ細胞を使用して、構築物Ｔ、ＫＫ、ＬＬ、ＷまたはＸを形質導入した２８日後に得た結果を示す。ＷおよびＸ構築物を形質導入したＴ細胞は、Ｔ構築物を形質導入したＴ細胞と比較して、ＧＰＣ３発現細胞に対する細胞溶解活性の増加を提示することが判明した。
【０４６３】
図６Ａおよび６Ｂは、ドナーＩＤ２からのＴ細胞を使用して、構築物Ｔ、ＫＫ、ＬＬ、Ｗ、Ｘ、ＧＧまたはＭＭを形質導入した１４日後に得た結果を示す。またしても、ＷおよびＸ構築物を形質導入したＴ細胞は、Ｔ構築物を形質導入したＴ細胞と比較して、ＧＰＣ３発現細胞に対する細胞溶解活性の増加を提示することが判明した。
【０４６４】
図７Ａおよび７Ｂは、ドナーＩＤ４からのＴ細胞を使用して、構築物Ｔ、ＷまたはＸを形質導入した１９日後に得た結果を示す。またしても、ＷおよびＸ構築物を形質導入したＴ細胞は、Ｔ構築物を形質導入したＴ細胞と比較して、ＧＰＣ３発現細胞に対する細胞溶解活性の増加を提示することが判明した。
【０４６５】
図８Ａ〜８Ｄは、ドナーＩＤ３からのＴ細胞を使用して、構築物Ｚ、Ｓ、ＢＢ、ＣＣ、Ｔ、ＥＥ、ＦＦを形質導入した１０日後からのこの実験における異なる時点で得た結果を示す。
【０４６６】
図９Ａ〜９Ｄは、ドナーＩＤ３からのＴ細胞を使用して、構築物Ｚ、Ｓ、ＢＢ、ＣＣ、Ｔ、ＥＥまたはＦＦを形質導入した１２日後からのこの実験における異なる時点で得た結果を示す。
【０４６７】
図１０Ａ〜１０Ｄは、ドナーＩＤ３からのＴ細胞を使用して、構築物Ｚ、Ｓ、ＢＢ、ＣＣ、Ｔ、ＥＥまたはＦＦを形質導入した２０日後からのこの実験における異なる時点で得た結果を示す。
【０４６８】
図１１Ａおよび１１Ｂは、ドナーＩＤ４からのＴ細胞を使用して、構築物ＳまたはＢＢを形質導入した１９日後に得た結果を示す。ＢＢ構築物を形質導入したＴ細胞は、Ｓ構築物を形質導入したＴ細胞と比較して、ＧＰＣ３発現細胞に対する細胞溶解活性の増加を提示することが判明した。
【０４６９】
図１２Ａおよび１２Ｂは、ドナーＩＤ５からのＴ細胞を使用して、構築物ＳまたはＢＢを形質導入した１６日後に得た結果を示す。ＢＢ構築物を形質導入したＴ細胞は、Ｓ構築物を形質導入したＴ細胞と比較して、この場合もやはり、ＧＰＣ３発現細胞に対する細胞溶解活性の増加を提示することが判明した。
【０４７０】
実施例１４：ＧＰＣ３−ＣＡＲ発現ＣＡＲ−Ｔ細胞によるサイトカイン産生
サイトカイン産生を、ＧＰＣ３−ＣＡＲレンチウイルス構築物を形質導入したＣＡＲ−Ｔ細胞とＨｅｐＧ２細胞の１６時間の共培養において分析した。無細胞上清を収集し、分析したか、または後の分析のために−８０で凍結した。
【０４７１】
培養中の細胞により産生されたサイトカインＭＩＰ−１ａ、ＭＩＰ−１ｂ、ＲＡＮＴＥＳおよびＴＮＦｂのレベルのマルチプレックス分析を、Ｍｅｒｃｋ  Ｉｍｍｕｎｏ−ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ試薬セットおよびＬｕｍｉｎｅｘプレートリーダーシステムを使用して行った。
【０４７２】
３名の異なるドナーからのＴ細胞を使用して得た結果を図１３Ａ〜１３Ｈおよび１４Ａ〜１４Ｈに示す。全体的に見れば、示したサイトカインの高いレベルが、ＷおよびＸ構築物を形質導入したＴ細胞を含む共培養物と比較して、Ｔ構築物を形質導入したＴ細胞を含む共培養物において見いだされた。
【０４７３】
実施例１５：ＧＰＣ３−ＣＡＲ発現ＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖
異なるＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物を形質導入したＴ細胞の増殖を、ＨｅｐＧ２細胞との５日間の共培養後に、またはＨｅｐＧ２細胞の非存在下での同じ期間の培養後に分析した。
【０４７４】
簡単に言うと、標識された細胞が２つに分裂するたびに強度が半減される蛍光標識であるＣＦＳＥで、Ｔ細胞を標識した。標識した後、均一に標識されていることを保証するためにＴ細胞を分析した。ＨｅｐＧ２細胞に照射してさらなる増殖を防止し、それらのＨｅｐＧ２細胞を標識されたＴ細胞とともにコインキュベートした。５日後、Ｔ細胞をフローサイトメトリーにより分析した。元の蛍光とほぼ等しい蛍光を有する細胞を、非増殖細胞であると判定し、元の蛍光強度の半分または半分未満を有する細胞を、増殖細胞であると判定した。
【０４７５】
図１５Ａおよび１５Ｂは、Ｔ、ＷまたはＸ構築物である構築物を形質導入した８日後に行った、ドナーＩＤ４からのＴ細胞を用いて行った増殖アッセイの結果を示す。ＷおよびＸ構築物を形質導入したＴ細胞は、Ｔ構築物を形質導入したＴ細胞と比較して、ＨｅｐＧ２細胞との共培養後により多く増殖することが判明した。ＷおよびＸ構築物を形質導入したＴ細胞は、ＨｅｐＧ２細胞の非存在下では、Ｔ構築物を形質導入したＴ細胞より少なく増殖することも判明した。
【０４７６】
図１６Ａおよび１６Ｂは、構築物Ｓ、ＡＡまたはＢＢを形質導入した８日後に行った、ドナーＩＤ４からのＴ細胞を用いて行った増殖アッセイの結果を示す。ＢＢ構築物を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞は、Ｓ構築物を形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞と比較して、ＨｅｐＧ２細胞との共培養後により多く増殖することが判明した。ＢＢ構築物を形質導入したＴ細胞は、ＨｅｐＧ２細胞の非存在下で実質的増殖を提示することも判明した。
【０４７７】
実施例１６：ＴＧＦβへの感受性
異なるＧＰＣ３−ＣＡＲ構築物を形質導入したＴ細胞を、ＴＧＦβによる免疫抑制へのそれらの感受性について分析した。
【０４７８】
簡単に言うと、ＨｅｐＧ２細胞をｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅプレートに播種し、２４時間後、ＧＦＰ構築物を形質導入したＴ細胞（陰性対照）、または構築物Ｓ若しくはＢＢを形質導入したＴ細胞を、１２５ｎｇ／ｍｌのＴＧＦβの存在または非存在下のウェルに添加し、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ（ＡＣＥＡ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ）システムを使用して細胞溶解を測定した。
【０４７９】
結果を図１７Ａおよび１７Ｂに示す。ＢＢ構築物を形質導入したＴ細胞は、Ｓ構築物を形質導入したＴ細胞と比較して、細胞溶解活性のＴＧＦβ媒介抑制への感受性がより低いことが判明した（図１７Ｂの棒３および５とカラム４および６と比較されたい）。
【０４８０】
実施例１７：結論
意外にも、ＣＤ２２６細胞内ドメインを含むＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＣＤ２２６細胞内ドメインを欠いた同等のＣＡＲを発現するＴ細胞と比較して、標的抗原発現細胞に対する細胞傷害性増強を提示するが、同時に、標的抗原発現細胞との共培養では低下したレベルの炎症誘発性サイトカイン／エフェクターサイトカインを産生することが判明した。さらに、ＣＤ２２６細胞内ドメインを含むＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＣＤ２２６細胞内ドメインを欠いた同等のＣＡＲを発現するＴ細胞と比較して、標的抗原発現細胞との共培養後により多く増殖することが判明した。
【０４８１】
例えば、構築物ＷおよびＸを形質導入したＴ細胞は、構築物Ｔを発現するＴ細胞と比較して、標的抗原発現細胞に対する細胞傷害性増強、および標的抗原発現細胞との共培養後に増殖増加を提示した。
【０４８２】
構築物ＢＢを形質導入したＴ細胞は、構築物Ｓを発現するＴ細胞と比較して、標的抗原発現細胞に対する細胞傷害性増強を提示し、エフェクター機能のＴＧＦβ媒介抑制を受けにくかった。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６−１】
2019530431.tif 000086
【図６−２】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図８−３】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【図９−３】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１０−３】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１３−３】
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【図１３−４】
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【図１４−１】
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【図１４−２】
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【図１４−３】
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【図１４−４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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