(57)【要約】【課題】  食経験のある安全な天然素材由来であるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤、及び、これを含有することを特徴とする肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防又は処置用組成物を提供する。【解決手段】  本発明により、水溶性溶媒により抽出して得られるハクトウオウ抽出物、ソクハクヨウ抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種類を有効成分とするヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤が提供される。本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤は、肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防又は処置用組成物として有効である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハクトウオウ抽出物、およびソクハクヨウ抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種類を有効成分とするヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項２】
ハクトウオウ抽出物がハクトウオウを水溶性溶媒により抽出して得られる抽出物である、請求項１記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項３】
ソクハクヨウ抽出物がソクハクヨウを水溶性溶媒により抽出して得られる抽出物である、請求項１記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項４】
水溶性溶媒が１０容量％以上の炭素数１〜３の低級アルコールである、請求項２〜５のいずれか１項記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項５】
水溶性溶媒が１０容量％以上のエタノール水溶液である、請求項２〜４のいずれか１項記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
【請求項６】
有効成分として請求項１〜５のいずれか１項記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を含有する、生活習慣病の予防又は処置用組成物。
【請求項７】
生活習慣病が肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、および痛風からなる群より選ばれる少なくとも１つの疾患である、請求項６記載の生活習慣病の予防又は処置用組成物。
【請求項８】
生活習慣病が高体脂肪率、高血糖、高インスリン血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高血圧、および高尿酸血症からなる群より選ばれる請求項６記載の生活習慣病の予防又は処置用組成物。
【請求項９】
哺乳動物に、請求項６〜８のいずれか１項記載の組成物を投与することを特徴とする、生活習慣病を予防又は処置方法。
【請求項１０】
生活習慣病が肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症および、痛風からなる群より選ばれる少なくとも１つの疾患である、請求項９記載の生活習慣病を予防又は処置方法。
【請求項１１】
生活習慣病が高体脂肪率、高血糖、高インスリン血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高血圧、および高尿酸血症からなる群より選ばれる請求項９記載の生活習慣病を予防又は処置方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤、及び、これを含有することを特徴とする肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防又は処置用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
過食、栄養過多、運動不足などにより、肥満人口は増加の一途を辿っている。肥満者、特に内臓脂肪が蓄積した内臓脂肪型肥満の肥満者では、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病を合併しており、大きな社会問題である。また、肥満者がその体重を５〜１０％減少させると、合併している生活習慣病の症状が軽減又は改善することから、肥満の予防及び／又は改善は生活習慣病の予防及び／又は改善に繋がる。
【０００３】
アドレナリン受容体は、交感神経から遊離されるアドレナリンやノルアドレナリンなどのカテコールアミン作動薬と結合する受容体であり、カテコールアミン作動薬に対する感受性によりα受容体とβ受容体の２種類に分けられる。すなわち、αアドレナリン受容体はノルアドレナリン≧アドレナリン＞ドーパミン＞イソプレテレノールの順に感受性を示し、βアドレナリン受容体はイソプレテレノール＞アドレナリンノルアドレナリン＞ドーパミンの順に感受性を示す。
【０００４】
βアドレナリン受容体には、β１、β２、β３受容体があり、近年β４受容体の存在も示唆されている。それぞれの受容体に対するアゴニスト（作動薬）の作用として、β１アドレナリン受容体アゴニストは心拍数増加作用、β２アドレナリン受容体アゴニストは気管支平滑筋弛緩作用、β３アドレナリン受容体アゴニストは熱産生の活性化作用及び脂肪分解の促進作用があることが知られている。このことから、肥満などの生活習慣病の予防及び／又は改善には、β３アドレナリン受容体アゴニストが有効である。
【０００５】
β３アドレナリン受容体アゴニストは、１９８４年に初めて発見され、動物実験において熱産生や脂肪分解による抗肥満作用、抗糖尿病作用が認められた。しかし、これらの作用はヒトにおいて微弱であった。この効果差の原因が、１９８９年になり、マウスやラットなどの齧歯類とヒトのβ３アドレナリン受容体の化学構造上の種差であることが明確になった（非特許文献１及び２を参照）。これらのことから、β１やβ２よりもβ３アドレナリン受容体に対して選択性が高く、且つ、ヒトのβ３アドレナリン受容体に対して選択性が高いアゴニスト、すなわち選択的ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニストが、肥満、糖尿病などの生活習慣病の予防及び／又は改善に有効であり、その開発が望まれている。
【０００６】
最近、選択的ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニストとして幾つかの化合物が知られており（非特許文献１を参照）、臨床試験において抗肥満薬又は抗糖尿病薬としての効果が確認されてきている。しかし、食経験のある天然素材由来であるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニストは未だ知られていない。
【０００７】
ハクトウオウは、キンポウゲ科オキナグサ属（Pulsatilla）の植物であり、中国東北部から北部の陜西省、東部の江蘇省にかけて分布するヒロハオキナグサPulsatilla chinensis (Bunge) Regel（中）を正条品とし、そのほか４種類ほどを代用品として用い、その根は解毒作用や消炎、腹痛などに効果があり、煎じて使用されている（非特許文献３を参照）。
【０００８】
ソクハクヨウは、ヒノキ科クロベ属（Thuja）の植物であり、その若葉を含む葉は、民間では収れん、止血、止瀉などに用いられている（非特許文献４を参照）。
【０００９】
しかし、ハクトウオウことにPulsatilla chinensis 、ソクハクヨウことにThuja orientalis L.が、ヒトβ３アドレナリン受容体作用を有していること、並びに、ヒトにおいて肥満、糖尿病などの生活習慣病の予防及び／又は改善に有効であることは、未だ知られていない。
特開２００４−１６８７６６は、ソクハクヨウを含むα−グルコシダーゼ阻害剤、糖尿病の予防または改善剤、および肥満の予防または改善剤を開示する。しかし、特開２００４−１６８７６６は、ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を開示も示唆もしない。
【特許文献１】特開２００４−１６８７６６
【非特許文献１】高倉康人、吉田俊秀，日本薬理学雑誌, 118, 315〜320, 2001
【非特許文献２】C. Weyer, et al., Diabetes & Metabolism, 25, 11〜21, 1999
【非特許文献３】木村康一、木村孟淳，原色日本薬用植物図鑑，保育社
【非特許文献４】三橋博，原色牧野和漢薬草大圖鑑，北隆館
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、食経験のある安全な天然素材由来であるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤、及び、これを含有することを特徴とする肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防又は処置用組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を行った結果、ハクトウオウ、ソクハクヨウを水溶性溶媒により抽出して得られる抽出物であるハクトウオウ抽出物、ソクハクヨウ抽出物が、ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
すなわち本発明において、提供するのは、以下の通りである。
（１）
ハクトウオウ抽出物、およびソクハクヨウ抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種類を有効成分とするヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
（２）
ハクトウオウ抽出物がハクトウオウを水溶性溶媒により抽出して得られる抽出物である、（１）記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
（３）
ソクハクヨウ抽出物がソクハクヨウを水溶性溶媒により抽出して得られる抽出物である、（１）記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
（４）
水溶性溶媒が１０容量％以上の炭素数１〜３の低級アルコールである、（２）〜（５）のいずれか１つ記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
（５）
水溶性溶媒が１０容量％以上のエタノール水溶液である、（２）〜（４）のいずれか１つ記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤。
（６）
有効成分として（１）〜（５）のいずれか１つ記載のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を含有する、生活習慣病の予防又は処置用組成物。
（７）
生活習慣病が肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、および痛風からなる群より選ばれる少なくとも１つの疾患である、（６）記載の生活習慣病の予防又は処置用組成物。
（８）
生活習慣病が高体脂肪率、高血糖、高インスリン血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高血圧、および高尿酸血症からなる群より選ばれる（６）記載の生活習慣病の予防又は処置用組成物。
（９）
哺乳動物に、（６）〜（８）のいずれか１つ記載の組成物を投与することを特徴とする、生活習慣病を予防又は処置方法。
（１０）
生活習慣病が肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症および、痛風からなる群より選ばれる少なくとも１つの疾患である、（９）記載の生活習慣病を予防又は処置方法。
（１１）
生活習慣病が高体脂肪率、高血糖、高インスリン血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高血圧、および高尿酸血症からなる群より選ばれる（９）記載の生活習慣病を予防又は処置方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、食経験のある安全な天然素材由来であるヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を得ることができる。これを含有することを特徴とする組成物は、肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風などの生活習慣病の予防又は処置用組成物として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下に、本発明の実施の形態を詳しく説明する。
【００１５】
１側面にしたがって、本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤は、ハクトウオウ抽出物、およびソクハクヨウ抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種類を有効成分とするものであり、抽出物そのものでもよい。
【００１６】
本発明に使用するハクトウオウ（白頭翁）は、キンポウゲ科オキナグサ属（Pulsatilla）の植物であるヒロハオキナグサの根である。本発明においてオキナグサ属のいずれの品種も使用できるが、Pulsailla chinensis (Bge.) Regel.の根が好ましい。
【００１７】
本発明に使用するソクハクヨウ（側柏葉）は、ヒノキ科クロベ属（Thuja）の植物であるコノテガシワの葉であり、水洗後日干ししたものを使用する。本発明において、クロベ属のいずれの品種も使用できるが、Thuja  orientalis L.の葉が好ましい。
【００１８】
本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を製造するために、本発明に使用するハクトウオウ抽出物、および／またはソクハクヨウ抽出物は、上記、ハクトウオウ、ソクハクヨウから溶媒抽出などによって得ることができる。また、当該抽出物は、飲料品や医薬品として不適当な不純物を含有しない限り、抽出液のまま、又は粗抽出物あるいは半精製抽出物として本発明に使用できる。本明細書において以下、ヒトβアドレナリン受容体アゴニスト剤の量を規定する場合、特に断らない限り該量は、上記抽出物の乾物量を意味するものとする。
【００１９】
溶媒抽出を行う場合は、例えば、ハクトウオウの根、ソクハクヨウの葉を原形のまま、あるいは粉砕又は粉末にしたものを、普通１〜２０倍量の下記抽出溶媒に浸し、攪拌及び／又は放置により抽出し、濾過又は遠心分離などにより抽出液を得ることができる。次いで得られた抽出液から、所望により、濃縮及び／又は濃縮乾固などにより溶媒を除去し、当該抽出物を得ることができる。抽出溶媒は、有効成分を効率よく抽出する観点から水溶性溶媒が好ましい。また、本明細書に関する限り、水溶性溶媒とは、水、水と混和可能な溶媒、またはその水溶液をいう。水、水と混和可能な溶媒またはその水溶液は、抽出効率に悪影響を及ぼさない限り、他の成分例えば食塩、水素イオン、界面活性剤、糖類などを含有してもよい。水溶性溶媒が、水溶液である場合、該水溶液中の水溶性溶媒の濃度は、特に限定されない。有効成分を効率よく抽出する観点から、水溶性溶媒の濃度は１０容量％以上１００容量％以下の水溶液であることが好ましく、５０容量％以上１００容量％以下がより好ましく、７０容量％以上１００容量％以下がなおより好ましく、９０容量％以上１００容量％以下が特に好ましい。水溶性溶媒のうち、抽出効率の観点から炭素数１〜３の低級アルコール、例えばメタノール、エタノール、プロパノールがより好ましく、残留溶媒の安全性の点からはエタノールが特に好ましい。水溶性溶媒の抽出温度は、特に限定されず、一般に−２０〜１００℃、ないし１〜８０℃、好ましくは２０〜６０℃で好適に実施できる。抽出時間は、特に限定されず、通常０．１時間〜１ヶ月、好ましくは０．５時間〜７日間で好適に実施できる。
【００２０】
本発明においてヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト作用の評価法は、特に限定されず、例えば、ヒトβ３アドレナリン受容体を発現している細胞を用いることにより評価できる。すなわちin vitro実験系にて、ＣＨＯ（チャイニーズ・ハムスター卵巣由来の培養細胞）などの動物細胞にヒトβ３アドレナリン受容体を安定的に発現させ、その細胞に当該抽出物を添加し、細胞内サイクリックＡＭＰ濃度の上昇を測定することにより評価できる（A. A. Konkar, et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 291, 875〜883, 1999；T. Kiso, et al., Biol. Pharm. Bull., 22, 1073〜1078, 1999）。また、上記ヒトβ３アドレナリン受容体を安定的に発現している細胞に、ＣＲＥ−ＬＵＣレポーター遺伝子をトランスフェクションした後、当該抽出物を添加し、ルシフェラーゼ活性を測定することにより評価できる（W. Zheng, et al., J. Med. Chem., 42, 2287〜2994, 1999；S. S. Vansal & D. R. Feller, Biochem. Phaemacol., 58, 807〜810, 1999）。なお、ＣＲＥ−ＬＵＣはサイクリックＡＭＰレスポンス・エレメント（ＣＲＥ）にルシフェラーゼ（ＬＵＣ）遺伝子を結合したレポーター遺伝子であり、細胞内サイクリックＡＭＰ濃度の上昇によりルシフェラーゼが発現する。具体的には、実施例３に記載したアッセイにしたがって、ルシフェラーゼ比活性の上昇が有意に認められたものを、ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト作用ありとして評価した。
【００２１】
あるいは、上記の実験系において、ヒトβ３アドレナリン受容体の代わりに、ヒトβ１又はβ２アドレナリン受容体を発現している細胞を用いれば、β１、β２、β３での差を比較でき、その選択性を評価できる。
【００２２】
本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤は、生活習慣病を処置または予防することが可能である。よって、１側面では、本発明は、生活習慣病を処置または予防する組成物に関する。
【００２３】
ここにいう、生活習慣病とは、公衆衛生審議会（平成８年１２月１８日）の意見具申「生活習慣に着目した疾病対策の基本的方向性について」に基づくものである。食習慣、運動週刊、休養、喫煙、飲酒などの生活習慣がその発症・進行に関与する疾病群をいう。生活習慣病の例は、限定されないが、肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症および痛風からなる群より選ばれる少なくとも１つの疾患を含む。
【００２４】
前記生活習慣病としては、肥満、肥満症、糖尿病、高脂血症、高血圧症、痛風、高体脂肪率、高血糖、高インスリン血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高血圧、および高尿酸血症などが挙げられる。
【００２５】
ここでいう肥満及び肥満症は、日本肥満学会の肥満症診断基準に従う。すなわち、肥満は、ＢＭＩ（Body Mass Index（体格指数）：体重（ｋｇ）／身長（ｍ）2）が２５以上と定義される。肥満症は、肥満であり且つ、肥満による健康障害又は内臓肥満脂肪型肥満である、と定義される。内臓脂肪型肥満の判定は、ウエスト（臍周り径）が男性で８５ｃｍ以上、女性で９０ｃｍ以上、又は、腹部ＣＴ検査による内臓脂肪面積が１００ｃｍ2以上である。また、肥満による健康障害とは、１）２型糖尿病・耐糖能障害、２）脂質代謝異常、３）高血圧、４）高尿酸血症・痛風、５）冠動脈疾患（心筋梗塞・狭心症）、６）脳梗塞（脳血栓症・一過性脳虚血発作）、７）睡眠時無呼吸症候群・Pickwick症候群、８）脂肪肝、９）整形外科的疾患（変形性関節症・腰椎症）、１０）月経異常、からなる群より選ばれる少なくとも１つである。
【００２６】
また、上記の肥満として、体脂肪率が男性で２５％以上、女性で３０％以上である高体脂肪率の状態も含む。上記の２型糖尿病・耐糖脳障害として、例えば、高血糖、高インスリン血症などの状態も含む。上記の２型糖尿病・耐糖能障害として、例えば、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高ＬＤＬ−コレステロール血症、低ＨＤＬ−コレステロール血症などの状態も含む。
【００２７】
ここにいう、高体脂肪率とは、日本肥満学会の肥満症診断基準に従う。ＢＭＩ（Body Mass Index（体格指数）：体重（ｋｇ）／身長（ｍ）2）が２５以上をいう。
【００２８】
ここにいう、高インスリン血症とは、日本糖尿病学会の７５ｇＧＴＴ（ブドウ糖負荷試験）の判定基準に従う。空腹時血糖値が１２６ｍｇ／ｄｌ以上、且つＧＴＴ２時間値が２００ｍｇ／ｄｌ以上をいう。
【００２９】
ここにいう、高コレステロール血症とは、日本動脈硬化学会のガイドラインによる判定基準に従う。血清総コレステロール濃度が２２０ｍｇ／ｄｌ以上、且つＬＤＬ−コレステロール濃度が１４０ｍｇ／ｄｌ以上をいう。
【００３０】
ここにいう、高トリグリセリド血症とは、日本動脈硬化学会のガイドラインによる判定基準に従う。トリグリセライド（ＴＧ）値が１５０ｍｇ／ｄｌ以上をいう。
【００３１】
ここにいう、高血圧症とは、世界保健機関／国際高血圧学会（ＷＨＯ／ＩＳＨ）の高血圧の判定基準に従う。複数回測定された随時血圧で収縮期血圧が１４０ｍｍＨｇ以上、または拡張期血圧が９０ｍｍＨｇ以上をいう。
【００３２】
ここにいう、高尿酸血症とは、体内の総尿酸量（血清尿酸値で反映される）は、尿酸の産生量と排泄量とのバランスによって決定され、この収支バランスが崩れて体内の総尿酸量が増加した状態が高尿酸血症である。高尿酸血症の有害性は主として組織に析出した尿酸（塩）結晶によってもたらされるため、体液中で尿酸の溶解性から、男女を問わず血清尿酸値が７．０ｍｇ／ｄｌ以上をいう。
【００３３】
本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を含有する生活習慣病を処置または予防する組成物は、飲食用及び医薬用として利用することができる。本発明の組成物を製造するために、本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤を、薬学的に許容される他の製剤素材、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などを適宜添加して、調製することができる。その形態は限定されず、例えば、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）、健康食品、栄養補助食品、機能性食品などの飲食品、あるいはＯＴＣなどの容易に入手可能な医薬品又は医薬部外品などとして利用できる。
【００３４】
飲食品として用いる場合は、そのまま直接摂取することができ、また、公知の担体や助剤などの添加剤を使用して、カプセル剤、錠剤、顆粒剤など服用し易い形態に製剤化して摂取することができる。これらの製剤における本発明のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト剤の含有量は特に限定されないが、好ましくは０．１〜１００重量％、より好ましくは２〜９５重量％、さらに好ましくは１０〜９０重量％である。さらに、飲食物材料に混合して、チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ビスケット、クラッカーなどの菓子類；アイスクリーム、氷菓などの冷菓類；茶、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンクなどの飲料；うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類；蒲鉾、竹輪、半片などの練り製品；ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料；マーガリン、バター、サラダ油などの油脂類；パン、ハム、スープ、レトルト食品、冷凍食品など、すべての飲食物に使用することができる。飲食用として本発明予防改善剤を摂取する場合、その摂取量は当該抽出物として成人一人一日あたり、好ましくは０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ重量、より好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ重量である。
【００３５】
医薬品として用いる場合は、その剤形は特に限定されず、例えば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、注射剤、坐剤、貼付剤などが挙げられる。製剤化においては、薬剤学的に許容される他の製剤素材、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などを適宜添加して調製することができる。これら製剤の投与量としては、当該抽出物換算で成人一人一日あたり、好ましくは０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を１回ないし数回に分けて投与する。
【００３６】
医薬部外品として用いる場合は、必要に応じて他の添加剤などを添加して、例えば、軟膏、リニメント剤、エアゾール剤、クリーム、石鹸、洗顔料、全身洗浄料、化粧水、ローション、入浴剤などに使用することができ、局所的に用いることができる。
【００３７】
本発明の１側面である、哺乳動物に、上記組成物を投与することを特徴とする、生活習慣病を予防または処置する方法では、哺乳動物は、特に限定されないが、ヒトが好ましい。ここにいう投与は、特に限定されないが、経腸例えば経口、舌下投与：非経腸、例えば経皮、静脈内、腹腔内、経鼻、眼内投与を含む。経口投与が好ましい。
【実施例】
【００３８】
以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３９】
（実施例１）
（ハクトウオウ抽出物の調製方法）
ハクトウオウの根（新和物産）を細かく裁断後、粉砕器で粉砕し、その粉砕品２ｇを９９．５容量％エタノール／水  １０ｍｌにて抽出（室温（２３〜２４℃）、暗所、３日間放置）し、濾過、濃縮乾固を行い、ハクトウオウ抽出物１１３．６ｍｇを得た。
【００４０】
（実施例２）
（ソクハクヨウ抽出物の調製方法）
ソクハクヨウの葉（新和物産）の粉末品２ｇを９９．５容量％エタノール／水  １０ｍｌにて抽出（室温（２３〜２４℃）、暗所、３日間放置）し、濾過、濃縮乾固を行い、サンヤク抽出物８３．６ｍｇを得た。
【００４１】
（実施例３）
（ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト活性の測定方法）
ＣＨＯ−Ｋ１細胞（チャイニーズ・ハムスター卵巣由来の培養細胞）に、ヒトβ３アドレナリン受容体遺伝子の発現用プラスミドを遺伝子導入用試薬であるリポフェクトアミンTM２０００（Invitrogen社）を用いてトランスフェクションし、ヒトβ３アドレナリン受容体を発現している細胞（以下、β３／ＣＨＯ細胞と称す）を取得した。
【００４２】
実験１日目：  β３／ＣＨＯ細胞を９６穴培養プレートに３×１０4ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように植え込み、３７℃、５％ＣＯ2条件下で約２４時間培養した。培地には、５％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）を含むＨＤ培地を用いた。なお、ＨＤ培地は、Ｈａｍ Ｆ−１２（SIGMA社）５．３５ｇ／Ｌ、ＤＭＥＭ（GIBCO社）４．７５ｇ／Ｌ、Ｌ−グルタミン（和光純薬工業）０．５９ｇ／Ｌ、ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ（和光純薬工業）０．０４４ｇ／Ｌ、重炭酸ナトリウム（GIBCO社）１．２７ｇ／Ｌの組成で調製した。
【００４３】
実験２日目：  細胞にｐＣＲＥ−ｌｕｃ（STRATAGENE社）をリポフェクトアミンTM２０００（Invitrogen社）を用いてトランスフェクションした。その６時間後、新たな培地に交換し、一晩培養した。なお、ｐＣＲＥ−ｌｕｃはサイクリックＡＭＰレスポンス・エレメント（ＣＲＥ）にルシフェラーゼ遺伝子を結合したレポータープラスミドである。
【００４４】
実験３日目：  サンプルを含む培地に交換し、６時間培養した。サンプルはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解したものを、培地に１／１０００容量添加し、表１記載の濃度とした。無処置対照にはＤＭＳＯを、陽性対照には選択的β３アドレナリン受容体アゴニストであるＢＲＬ３７３４４（TOCRIS社）を用いた。細胞をＣａ，Ｍｇ含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ＋）で洗浄した後、ルシフェラーゼによる発光測定試薬であるルックライトTM（Perkin Elmer社）を添加し、トップカウントTMマイクロシンチレーション／ルミネッセンスカウンター（Perkin Elmer社）にてルシフェラーゼの発光強度を測定した。無処置対照のルシフェラーゼ発光強度に対する比をとり、サンプルのルシフェラーゼ比活性とした。
【００４５】
実施例１で得たハクトウオウ抽出物及び、実施例２で得たソクハクヨウ抽出物について測定した結果を表１に示す。
【００４６】
【表１】
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陽性対照のＢＲＬ３７３４４では、ルシフェラーゼ比活性の上昇が認めたれた。つまり、ＢＲＬ３７３４４はヒトβ３アドレナリン受容体を介して細胞内サイクリックＡＭＰ濃度を上昇させルシフェラーゼを発現させていることから、ＢＲＬ３７３４４のヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト作用が確認された。
【００４７】
実施例１のハクトウオウ抽出物及び、実施例２のソクハクヨウ抽出物はいずれも、陽性対照のＢＲＬ３７３４４と同様に、ルシフェラーゼ比活性の上昇が認められ、ヒトβ３アドレナリン受容体アゴニスト作用を有していることが判明した。
【００４８】
（実施例４）
実施例１と同様にして得たハクトウオウ抽出物を２５重量部、ヤシ油を１５０重量部、グレープシード油を７０重量部、ビタミンＥを５重量部の組成で混合し、ハクトウオウ抽出物を含有する飲食用ソフトカプセル剤を調製した。
【００４９】
（実施例５）
実施例２と同様にして得たソクハクヨウ抽出物を２重量部、スクワランを２０重量部、オリーブ油を１０重量部、精製蜜蝋を５重量部、グリセリンモノスレアレートを３重量部、セトステアルコールを２重量部、ポリオキシエチレン硬化ひまし油を３重量部、グリセリンを１０重量部、ビタミンＣを３重量部、精製水を４２重量部の組成で混合、乳化し、ソクハクヨウ抽出物を含有する皮膚用クリームを調製した。