(57)【要約】【課題】  川崎病後遺症の予防および治療剤、特に冠動脈病変の発生防止効果に優れた薬剤の提供。【解決手段】ヒト冠動脈内皮細胞におけるｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｋａｐｐａ  Ｂ（ＮＦ‐κＢ）活性化抑制効果を冠動脈病変の発生防止評価として見出される物質を有効成分とする冠動脈症予防および／または治療剤。【選択図】        図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト冠動脈内皮細胞におけるｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｋａｐｐａ  Ｂ（ＮＦ‐κＢ）活性化抑制効果を冠動脈病変の発生防止評価として見出される物質を有効成分とする冠動脈症予防および／または治療剤。
【請求項２】
薬物的な冠動脈病変を減少させる作用を有する物質を有効成分とする請求項１の冠動脈症予防および／または治療剤。
【請求項３】
前記物質が、可溶性ＴＮＦ‐Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＴＮＦ‐Ｒ）である請求項１または２の冠動脈症予防および／または治療剤。
【請求項４】
前記可溶性ＴＮＦ‐Ｒが、可溶性ＴＮＦ‐ＲＩＩ製剤である請求項３の冠動脈症予防および／または治療剤。
【請求項５】
可溶性ＴＮＦ‐ＲＩＩ製剤がエタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）〔ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）〕である請求項４の冠動脈症予防および／または治療剤。
【請求項６】
重篤な川崎病後遺症としての冠動脈病変の予防および治療剤である請求項１ないし５のいずれかの冠動脈症予防および／または治療剤。
【請求項７】
ヒト免疫グロブリンと併用療法により、ヒト免疫グロブリン単独療法に比し、冠動脈病変を減少させる効果を発揮する請求項１ないし６のいずれかの冠動脈症予防および／または治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、可溶性ＴＮＦ‐ＲＩＩ製剤、好ましくはエタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）〔ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）〕を用いた冠動脈症の予防および治療に関する。本発明は、特に重篤な川崎病後遺症としての冠動脈病変の予防および治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
川崎病は、１９６７年に川崎富作によって始めて報告された４歳以下の乳幼児に好発する原因不明の急性熱性疾患である。本疾病は、長期の熱、眼球結膜充血、口唇発赤、手足の硬性浮腫や炎症の臨床的、生化学的特徴、さらに冠状動脈異常の合併症により特徴付けられる。川崎病は、全ての人種背景の子供について世界中で認識されており、日本では、年間５０００〜６０００例の発症がある。
【０００３】
その病因については世界的に注目されているがいまだ不明である。ヒト免疫グロブリン療法が導入され、重篤な合併症である冠動脈病変は減少した。しかしながら、ヒト免疫グロブリン療法不応例も存在し、現在でも約１０％に冠動脈炎による後遺症を残している。
【０００４】
これまで、川崎病の治療剤としては、エンドセリン変換酵素阻害剤による方法（特許文献１、２、３）、活性成分としてアンチトロンビンIIIを含有する治療剤による方法（特許文献４）、キサンチン誘導体を有効成分とする治療剤による方法（特許文献５）、ＴＮＦα産生抑制作用を有する微生物の産生物質による治療剤を用いる方法（特許文献６、７）、インターロイキン産生を抑制する薬剤による方法（特許文献８、９、１０）、アルドステロン遮断薬を用いる方法（特許文献１１）などが知られていた。これらは、炎症およびその他の免疫障害の一つとして川崎病を捉え、治療効果を期待するものであり、乳幼児に好発する川崎病特異の急性熱性疾患の、後遺症としての冠動脈病変の予防および治療剤ではなかった。
【０００５】
【特許文献１】特開平７‐１８８０３４号公報
【特許文献２】特開平７‐１８８０３３号公報
【特許文献３】特開平５‐１４８２７７号公報
【特許文献４】特開２０００‐２１９６３４号公報
【特許文献５】特開平５‐１２４９６２号公報
【特許文献６】特開平１１‐１２７８８２号公報
【特許文献７】特開２００１‐８１０８８号公報
【特許文献８】特開平６‐３１６５２１号公報
【特許文献９】特開２００２‐５４２７７０号公報
【特許文献１０】特開２００４‐５０００８６号公報
【特許文献１１】特表２００４‐５１８６１１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、川崎病後遺症の予防および治療剤、特に冠動脈病変の発生防止効果に優れた薬剤を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、ヒト冠動脈内皮細胞におけるｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｋａｐｐａ  Ｂ（ＮＦ‐κＢ）活性化抑制効果を冠動脈病変の発生防止評価として見出される物質を有効成分とする、好ましくは薬物的な冠動脈病変を減少させる作用の有効成分とする冠動脈症予防および／または治療剤を要旨とする。
【０００８】
前記物質が、可溶性ＴＮＦ‐Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＴＮＦ‐Ｒ）、好ましくは可溶性ＴＮＦ‐ＲＩＩ製剤、より具体的にはエタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）〔ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）〕であり、その場合本発明は、可溶性ＴＮＦ‐Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＴＮＦ‐Ｒ）、好ましくは可溶性ＴＮＦ‐ＲＩＩ製剤、より具体的にはエタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）〔ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）〕を有効成分とする、好ましくは薬物的な冠動脈病変を減少させる作用を有する物質を有効成分とする冠動脈症予防および／または治療剤を要旨とする。
【０００９】
重篤な川崎病後遺症としての冠動脈病変の予防および治療剤であり、その場合本発明は、ヒト冠動脈内皮細胞におけるｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｋａｐｐａ  Ｂ（ＮＦ‐κＢ）活性化抑制効果を冠動脈病変の発生防止評価として見出される物質、好ましくは可溶性ＴＮＦ‐Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＴＮＦ‐Ｒ）、より好ましくは可溶性ＴＮＦ‐ＲＩＩ製剤、より具体的にはエタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）〔ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）〕を有効成分とする、好ましくは薬物的な冠動脈病変を減少させる作用を有する物質を有効成分とする重篤な川崎病後遺症としての冠動脈病変の予防および／または治療剤を要旨とする。
【００１０】
ヒト免疫グロブリンと併用療法により、ヒト免疫グロブリン単独療法に比し、冠動脈病変を減少させる効果を発揮するものであり、その場合本発明は、ヒト冠動脈内皮細胞におけるｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｋａｐｐａ  Ｂ（ＮＦ‐κＢ）活性化抑制効果を冠動脈病変の発生防止評価として見出される物質、好ましくは可溶性ＴＮＦ‐Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＴＮＦ‐Ｒ）、より好ましくは可溶性ＴＮＦ‐ＲＩＩ製剤、より具体的にはエタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）〔ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）〕を有効成分とする、好ましくは薬物的な冠動脈病変を減少させる作用を有する物質を有効成分とする冠動脈症、より具体的には重篤な川崎病後遺症としての冠動脈病変の、ヒト免疫グロブリンと併用療法により、ヒト免疫グロブリン単独療法に比し、冠動脈病変を減少させる効果を発揮する予防および／または治療剤を要旨とする。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の薬剤を用いることにより、川崎病  の最大の課題である冠動脈病変の発生を防止および治療が可能になる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
川崎病の冠動脈病変の併発には血管障害作用を有するサイトカインｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  α（ＴＮＦ‐α）が関与している。生体内ではＴＮＦ‐αの産生に呼応してＴＮＦ‐αの機能を抑制する可溶性ＴＮＦ‐Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＴＮＦ‐Ｒ）が遊離し、生体のホメオスタ−シスを保っている。本発明者らは川崎病患児では可溶性ＴＮＦ‐Ｒが高値で、特に冠動脈病変併発例ではより高値を示し、ヒト免疫グロブリン療法にも反応しない事を報告している（Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  １２４（５）７２１‐７２５（１９９４））。この事は可溶性ＴＮＦ‐Ｒの上乗せが冠動脈病変併発の抑制につながる可能性を示唆している。
【００１３】
可溶性ＴＮＦ‐Ｒには、ＲＩ「ＥＮＢＲＥＬ」（ｐ５５）およびＲＩＩ（ｐ７５）が知られており、可溶性ＴＮＦ‐Ｒが、リウマチ性疾患（例えば、ライム病、若年性（リウマチ様）関節炎、骨関節炎、乾癬性関節炎、リウマチ様関節炎、およびｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ誘導（「敗血症性」）関節炎）を含むＴＮＦ媒介性疾患に有効であることが明らかにされている（特表２００２‐５１４０４８公報）。可溶性ＴＮＦ‐ＲＩＩ製剤は、小児科領域で、若年性関節リウマチの臨床治験がすすめられている。
【００１４】
可溶性ＴＮＦ‐Ｒ製剤としては、エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）〔ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）〕があげられる。
エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）〔ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）〕は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に連結したヒト７５キロダルトン（ｐ７５）腫瘍壊死因子レセプター（ＴＮＦ‐Ｒ）の細胞外リガンド結合部分から構成される二量体融合タンパク質である。エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）〔ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）〕はＴＮＦに特異的に結合し、細胞表面ＴＮＦレセプターとの相互作用をブロックする。ＥＮＢＲＥＬは、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、およびＩ型糖尿症など、炎症性および免疫性疾患の治療に有用であることが知られている（特表２００３‐５１７０２２公報）。
【００１５】
本発明は、ＴＮＦ‐ＲＩＩ製剤が、冠動脈病変の発生を防止する効果を見出したことに関する。
上記ＴＮＦ‐ＲＩＩ製剤が、エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）〔ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）〕であることに関する。
また、本発明者らは、川崎病で、転写因子ＮＦ‐κＢ（炎症惹起物質の遺伝子の発現を調節する細胞内のタンパク質）が活性化されていることを明らかにした（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９９（３）３７３‐３７７  （２００１））ことから、上記冠動脈病変の発生防止評価が、ヒト冠動脈内皮細胞におけるｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｋａｐｐａ  Ｂ（ＮＦ‐κＢ）活性化抑制効果であることに関する。
本発明の治療剤は、ヒト免疫グロブリンと併用することが可能である。この併用療法により、ヒト免疫グロブリン単独療法に比し、冠動脈病変を減少させることが予想される。
【００１６】
本発明の治療剤の投与方法としては、例えば、経口、肛門、鼻、局所（舌下を含む）、膣、注射（皮下、筋肉内、静脈内、皮内を含む）、塗布等の任意の方法をとりうる。また、有効成分を前記の投与方法に適した有機または無機の固体又は液体賦形剤のような医薬用担体と混合し、常用の医薬製剤の形で投与できる。このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等の固体、及び液剤、乳剤、懸濁剤等の液体や軟膏が含まれる。
【００１７】
さらに、投与量としては、体内において、目的とする治療効果を生ずるに充分な量あれば如何なる量でもよく、用量は、０．１〜８００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、０．４〜３００ｍｇ／ｋｇを１日１〜数回に投与するか、または持効性製剤として投与する。
【００１８】
（物質の説明）
「ＥＮＢＲＥＬ（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）」とは、１９９２年に、アムジェン社で開発された腫瘍壊死因子結合タンパク質で、組換え成熟ヒトインヒビターＴＮＦ‐ＲＩＩであり、薬学速度論的性能を改良するために、水溶性ポリマーであるポリエチレングリコールに結合した二量体融合タンパク質である。
【００１９】
「ＮＦ‐κＢ」とは、免疫細胞を含む多くの細胞において、構造的、機能的に広範囲の遺伝子の転写調節に関与するタンパク質で、ホモ二量体やヘテロ二量体を形成することで、異なる特異性を持ってターゲットＤＮＡ部位へ結合する。通常ＮＦ‐κＢは、阻害因子（ｉ‐κＢ）が結合した形で細胞質に存在し、核移行が阻止されているが、ｉ‐κＢのリン酸化や分解が起こるとＮＦ‐κＢは活性化され、核内へ移行する。核内のＮＦ‐κＢは染色体上のＮＦ‐κＢ結合部位に結合してその下流にある遺伝子の転写を促進する。ＮＦ‐κＢにより制御される遺伝子には、免疫炎症などに関与するＴＮＦ類や接着因子がある。
【００２０】
川崎病では、転写因子ＮＦ‐κＢ活性化が明らかである（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９９（３）３７３‐３７７（２００１））。ＮＦ‐κＢは炎症サイトカインをコードする重要な転写因子の１つである。また、川崎病の血管炎の場は冠動脈血管内皮細胞である。そこでヒト冠動脈血管内皮細胞を用いて、ＴＮＦ‐α刺激によるＮＦ‐κＢ活性化に対する可溶性ＴＮＦ‐ＲＩＩ製剤の抑制についての以下の試験を行った。
【実施例１】
【００２１】
［可溶性ＴＮＦ‐ＲＩＩ製剤（ＥＮＢＲＥＬ）によるヒト冠動脈内皮細胞におけるｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｋａｐｐａ  Ｂ（ＮＦ‐κＢ）活性化抑制効果］
ヒト冠動脈血管内皮細胞（三光純薬）３×１０５ｃｅｌｌｓ／２ｍｌを６ｗｅｌｌに入れ、ＥＮＢＲＥＬ（１、５、１０μｇ／ｍｌ）を添加し３７℃，３０分間培養した後、リコンビナントＴＮＦ‐α（ｒＴＮＦ‐α）（２ｎｇ／ｍｌ）で刺激し、ＮＦ‐κＢを活性化した。刺激後の細胞からＮｕｃｌｅａｒ  Ｅｘｔｒａｃｔ  Ｋｉｔ（Ｔｒａｎｓ  ＡＭ、ＡＣＴＩＶＥ  ＭＯＴＩＦ）を用いて核抽出物を得、蛋白濃度（０．０５ｍｇ／ｍｌ）一定の核抽出物中の活性化ＮＦ‐κＢをＥＬＩＳＡ（Ｔｒａｎｓ  ＡＭ  ＮＦ‐κＢＡＣＴＩＶＥ  ＭＯＴＩＦ）で測定した。陽性コントロールとしてＪｕｒｋａｔ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｅｘｔｒａｃｔを基準とした。
ＴＮＦ‐α刺激によるヒト冠動脈血管内皮細胞の活性化ＮＦ‐κＢは１４．６±８．３ｆｏｌｄで、ＥＮＢＲＥＬ添加により有意に抑制された（１μｇ／ｍｌ：１．１±０．５ｆｏｌｄ、５μｇ／ｍｌ：１．１±０．４ｆｏｌｄ、１０μｇ／ｍｌ：１．０±０．４ｆｏｌｄ、ｐ＜０．０１）（図１）。
【実施例２】
【００２２】
［川崎病の血清中可溶性ＴＮＦ‐ＲＩｉ値］
川崎病患児では可溶性ＴＮＦ‐ＲＩが高値で、特に冠動脈病変併発例ではより高値を示し、ヒト免疫グロブリン療法にも反応しない事を報告した（Ｔｈｅ  Ｊ.  ｏｆ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  １２４（５）  ７２１‐７２５（１９９４））。この事は可溶性ＴＮＦ‐Ｒの上乗せが冠動脈病変併発の抑制につながる可能性を示唆している。川崎病では血清中可溶性ＴＮＦ‐ＲＩ、ＴＮＦ‐ＲＩＩ値も類似の変動を示すと予想されるが、確認のため急性期から回復期にかけてのＴＮＦ‐ＲＩＩ値を検討した。
３ヵ月から６才（中央値１才）の川崎病１２例（男児７例）について血清中可溶性ＴＮＦ‐ＲＩＩ値をＥＬＩＳＡ（Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ社）で測定した。急性期治療前（第３‐６病日、平均５病日）、ヒト免疫グロブリン療法後（１ｇ／ｋｇ／日を２日間）（第５‐１０病日、平均８．３病日）および回復期（第１５‐３０病日、平均２１病日）にサンプリングした。正常対照は３ヵ月から３才４ヵ月（中央値１１ヵ月）の健常小児８例（男児５例）である。
急性期治療前の血清中可溶性ＴＮＦ‐ＲＩＩは５．３９±１．７ｎｇ／ｍｌ（平均±ＳＤ）、ヒト免疫グロブリン療法後は５．１４±１．７４ｎｇ／ｍｌで、いずれも正常対照（２．８６±０．７６ｎｇ／ｍｌ）に比し高値を示した（ｐ＜０．０１）（図２）。回復期は３．７８±０．９５ｎｇ／ｍｌと正常対照と同程度だった。
【産業上の利用可能性】
【００２３】
実施例の結果より、冠動脈病変に対する可溶性ＴＮＦ‐ＲＩＩ製剤の有効性が推測されたことから、ＴＮＦ‐ＲＩＩ製剤である、ＥＮＢＲＥＬ（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）が川崎病疾患児の冠動脈病変の予防および／または治療剤として期待される。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】ＥＮＢＲＥＬによるヒト冠動脈血管内皮細胞のＮＦ‐κＢ活性化抑制効果を示す図面である。
【図２】川崎病における血清中可溶性ＴＮＦ‐ＲＩＩ値を示す図面である。
【図１】
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【図２】
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