(57)【要約】 【課題】  ２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オンまたはその塩の新たな医薬用途を探索すること。【解決手段】  ２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オンまたはその塩は、角膜障害モデルにおいて優れた予防および改善効果を発揮するので、ドライアイ、点状表層角膜症、角膜上皮欠損、角膜びらん、角膜潰瘍、結膜上皮欠損、乾性角結膜炎、上輪部角結膜炎、糸状角結膜炎、角膜炎、結膜炎などの角結膜障害の予防または治療剤として有用である。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オンまたはその塩を有効成分として含む角結膜障害の予防または治療剤。
【請求項２】
角結膜障害が、ドライアイ、点状表層角膜症、角膜上皮欠損、角膜びらん、角膜潰瘍、結膜上皮欠損、乾性角結膜炎、上輪部角結膜炎、糸状角結膜炎、角膜炎または結膜炎である請求項１記載の予防または治療剤。
【請求項３】
投与形態が点眼投与または経口投与である請求項１記載の予防または治療剤。
【請求項４】
剤型が、点眼剤、眼軟膏、錠剤、細粒剤またはカプセル剤である請求項１記載の予防または治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オンまたはその塩を有効成分とするドライアイ、点状表層角膜症、角膜上皮欠損、角膜びらん、角膜潰瘍、結膜上皮欠損、乾性角結膜炎、上輪部角結膜炎、糸状角結膜炎、角膜炎、結膜炎などの角結膜障害の予防または治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
角膜は、直径約１ｃｍ、厚さ約１ｍｍの透明な無血管の組織であり、また、結膜は、角膜縁より後方の眼球表面と眼瞼の裏面をおおっている粘膜であるが、角膜や結膜は、視機能に重要な影響を及ぼすことが知られている。角膜潰瘍、角膜炎、結膜炎、ドライアイ等の種々の疾患により引き起こされる角結膜障害は、何らかの理由で修復が遅延したり、あるいは修復が行われずに遷延化すれば、角膜と結膜は連なった組織であるため、上皮の正常な構築に悪影響を与え、さらには、角膜実質や内皮の構造や機能まで害されることがある。近年、細胞生物学の発展に伴い、細胞の分裂・移動・接着・伸展・分化等に関与する因子が解明されており、角膜障害の修復には、これらの因子が重要な役割を担っていることが報告されている（非特許文献１、非特許文献２）。
【０００３】
一方、非特許文献３には、２−フェニル−１，２−ベンズイソセレナゾール−３（２Ｈ）−オン（一般名：エブセレン、以下「エブセレン」という）が抗酸化活性を有することが記載されており、特許文献１には、エブセレンが脳動脈硬化症および慢性脳循環不全症の治療剤として有効であることが記載されている。
【０００４】
しかしながら、これらの化合物について、角結膜障害などの眼疾患に対する薬理作用を検討した報告はない。
【特許文献１】特開２００１−２６１５５５号公報
【非特許文献１】臨眼, 46, 738-743 (1992)
【非特許文献２】眼科手術, 5, 719-727 (1992)
【非特許文献３】Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100(13), 7919-7924 (2003)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
エブセレンに関して、新たな医薬用途を探索することは興味深い課題である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者等は、上記化合物の新たな医薬用途を探索すべく鋭意研究を行ったところ、角膜障害モデルを用いた角膜障害治癒効力試験等において、上記化合物またはその塩が角膜障害に対して優れた予防および改善効果を発揮することを見出し、本発明に至った。なお、エブセレンと同様に抗酸化作用を有する公知化合物についても同様な試験を行ったが、エブセレンはそれらの公知化合物に比べてはるかに高い効果を示し、エブセレンの優れた有用性を裏付けるものであった。
【０００７】
すなわち、本発明は、エブセレンまたはその塩を有効成分として含む、ドライアイ、点状表層角膜症、角膜上皮欠損、角膜びらん、角膜潰瘍、結膜上皮欠損、乾性角結膜炎、上輪部角結膜炎、糸状角結膜炎、角膜炎、結膜炎などの角結膜障害の予防または治療剤である。
【０００８】
本発明のエブセレンは、下記の化学構造式[Ｉ]で示される縮合複素環化合物である。
【化１】
2006348025.tif 000002
【０００９】
また、上記化合物の塩としては、医薬として許容される塩であれば特に制限はなく、塩酸、硝酸、硫酸等の無機酸との塩、酢酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸等の有機酸との塩などが挙げられる。なお、上記化合物は、溶媒和物の形態をとっていてもよい。
【００１０】
本発明において、角結膜障害とは、涙液異常、代謝異常、外的傷害等といった種々の要因により角膜や結膜が障害を受けた状態にあるものをいい、例えばドライアイ、点状表層角膜症、角膜上皮欠損、角膜びらん、角膜潰瘍、結膜上皮欠損、乾性角結膜炎、上輪部角結膜炎、糸状角結膜炎、角膜炎、結膜炎などが挙げられる。また、本発明において、ドライアイとは、涙液減少症、眼乾燥症、乏涙症、シェーグレン症候群、乾性角結膜炎、スティーブンス・ジョンソン症候群、涙腺機能不全、マイボーム腺機能不全、眼瞼炎、ＶＤＴ（Ｖｉｓｕａｌ  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ｔｅｒｍｉｎａｌ）作業、手術、薬剤、外傷、コンタクトレンズ装用等に伴う角結膜障害、または当該角結膜障害を伴う症状をいう。
【００１１】
本発明の角結膜障害の予防または治療剤は、経口でも、非経口（点眼、経皮等）でも投与することができる。投与剤型としては、点眼剤、眼軟膏、皮膚軟膏、注射剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等が挙げられる。これらは汎用されている技術を用いて調製することができる。例えば、点眼剤は、塩化ナトリウム、濃グリセリン等の等張化剤、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム等の緩衝化剤、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレ−ト、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の界面活性剤、クエン酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム等の安定化剤、塩化ベンザルコニウム、パラベン等の防腐剤等を必要に応じて用い、調製することができる。ｐＨは眼科製剤に許容される範囲内にあればよいが、４〜８の範囲が好ましい。
【００１２】
眼軟膏は、白色ワセリン、流動パラフィン等の汎用される基剤を用い、調製することができる。また、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経口剤は、乳糖、結晶セルロ−ス、デンプン、植物油等の増量剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤、ヒドロキシプロピルセルロ−ス、ポリビニルピロリドン等の結合剤、カルボキシメチルセルロ−ス  カルシウム、低置換ヒドロキシプロピルメチルセルロ−ス等の崩壊剤、ヒドロキシプロピルメチルセルロ−ス、マクロゴ−ル、シリコン樹脂等のコ−ティング剤、ゼラチン皮膜等の皮膜剤などを必要に応じて加え、調製することができる。
【００１３】
上記化合物の投与量は症状、年令、剤型等によって適宜選択できるが、点眼剤では０．０００００１〜１％（ｗ／ｖ）、好ましくは０．０００１〜０．１％（ｗ／ｖ）のものを１日１〜数回点眼すればよい。また、経口剤では通常１日当り０．１〜５０００ｍｇ、好ましくは１〜１０００ｍｇを１回または数回に分けて投与すればよい。
【発明の効果】
【００１４】
後述するように、下記の薬理試験を実施したところ、エブセレンは、角膜障害モデルにおいて優れた予防および改善効果を発揮するので、ドライアイ、点状表層角膜症、角膜上皮欠損、角膜びらん、角膜潰瘍、結膜上皮欠損、乾性角結膜炎、上輪部角結膜炎、糸状角結膜炎、角膜炎、結膜炎などの角結膜障害の予防または治療剤として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下に、薬理試験および製剤例の結果を示すが、これらの例は本発明をよりよく理解するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。
【００１６】
［薬理試験］
１．眼窩外涙腺摘出ラットを用いた角膜障害の治癒効力試験
雄性SDラットを用い、Fujiharaらの方法（Invest. Ophthalmol. Vis. Sci 42(1) 96-100 (2001)）に準じ、角膜障害モデルを作製した。角膜障害モデル作成後、宮田らの方法（眼科臨床医報, 48(2), 183-188 (1994)）に修飾を加えた手法（あたらしい眼科, 21(1), 87-90 (2004)）で、角膜障害の改善率を判定した。
【００１７】
（実験方法）
雄SDラットを用い、ネンブタ−ルを投与して全身麻酔を施した。ついで眼窩外涙腺を摘出し、２ヶ月かけて角膜障害を誘発させた。
【００１８】
つぎに、エブセレンを以下のように投与した。また、比較化合物として下記式［II］で示される３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン（以下、「エダラボン」という）、および下記式［III］で示される（３Ｒ）−１，２−ジチオラン−３−ペンタン酸（以下、「αリポ酸」という）を以下のように投与した。エダラボンおよびαリポ酸は抗酸化作用を有することが知られており（J. Radiat. Res., 45, 319-323 (2004)、J. Nutr., 133, 3327-3330 (2003)）、前述のとおりエブセレンも同作用を有する点で、エブセレンはエダラボンおよびαリポ酸と共通している。
【化２】
2006348025.tif 000003
【化３】
2006348025.tif 000004
【００１９】
エブセレン点眼群：
エブセレン（２５μＭ）の生理食塩水溶液を両眼に１日６回、１４日間点眼した（一群８匹）。
【００２０】
エダラボン点眼群：
エダラボン（２００μＭ）の生理食塩水溶液を両眼に１日６回、１４日間点眼した（一群８匹）。
【００２１】
αリポ酸点眼群：
αリポ酸（２００μＭ）の生理食塩水溶液を両眼に１日６回、１４日間点眼した（一群８匹）。
【００２２】
コントロール群では、生理食塩水を両眼に１日６回、１４日間点眼した（一群８匹）。
【００２３】
点眼開始１４日後、角膜の障害部分をフルオレセインにて染色した。角膜の上部、中間部および下部のそれぞれについて、フルオレセインによる染色の程度を下記の基準に従ってスコア判定し、上記各部のスコアの合計の平均値から角膜障害の改善率を算出した。
【００２４】
（判定基準）
０：染色されていない。
【００２５】
１：染色が疎であり、各点状の染色部分は離れている。
【００２６】
２：染色が中程度であり、点状の染色部分の一部が隣接している。
【００２７】
３：染色が密であり、各点状の染色部分は隣接している。
【００２８】
なお、各スコア間に中間値として０．５を設けた。
【００２９】
（結果）
コントロ−ル群（生理食塩水）のスコア平均値を基準（改善率：０％）にして下記計算式によりエブセレン（２５μＭ）点眼群、エダラボン（２００μＭ）およびαリポ酸（２００μＭ）点眼群の改善率を算出した。これを表１に示す。なお、スコアの平均値は各群８例の平均である。
【００３０】
改善率（％）＝｛（コントロ−ル）−（投与化合物）｝/ 障害度×１００
障害度＝（コントロ−ル）−（正常眼）
【表１】
2006348025.tif 000005
【００３１】
（考察）
上記のラットを用いた薬理試験の結果から明らかなように、エブセレンは、エダラボンおよびαリポ酸と比べて顕著な改善率を示す。特に、エブセレンは、エダラボンおよびαリポ酸の１／８倍濃度で投与されているにも拘わらず、エダラボンおよびαリポ酸より２倍以上の改善率を示すことは驚くべき結果である。よって、エブセレンは角結膜障害に対して顕著な改善効果を有することが示された。
【００３２】
２．ＳＡＭＰ１０を用いた薬理試験
平井、柴垣らの方法（特願２００６−１０４９１３）に準じ、老化促進モデルマウス（Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ−Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  Ｍｏｕｓｅ）Ｐ１０（以下、ＳＡＭＰ１０という）を用いて、角膜障害に対するエブセレンの効果を評価した。なお、対照動物として、正常老化を示すＳＡＭＲ１を用いた。
【００３３】
（実験方法）
ＳＡＭＰ１０は加齢に伴って角膜障害を発症する。そこで、加齢変化を認める前の１６週齢時における雌性ＳＡＭＰ１０の角膜障害の評価を行い、その後、エブセレン溶液またはその基剤の投与を開始した。投与開始８週間後の２４週齢時に再度同評価を行った。同様に、１６週齢時における雌性ＳＡＭＲ１の角膜障害の評価を行い、その後、前記基剤の投与を開始し、投与開始後８週間後の２４週齢時に再度同評価を行った。
【００３４】
（投与方法）
１％（Ｗ／Ｖ）メチルセルロース水溶液（メチルセルロースを超純水に溶解させて調製）に０．４５ｍｇ／ｍＬおよび４．５ｍｇ／ｍＬの濃度で懸濁したエブセレン溶液をマウスの体重１ｇあたり６．６７μＬの割合で、雌性ＳＡＭＰ１０に１日１回経口投与し、それぞれ３ｍｇ／ｋｇ群および３０ｍｇ／ｋｇ群とした。投与は、週５日（月、火、水、木、金曜日）、８週間にわたって行った。コントロールとして１％（Ｗ／Ｖ）メチルセルロース水溶液をマウスの体重１ｇあたり６．６７μＬの割合でＳＡＭＰ１０に同様に経口投与した。また、対照動物である雌性ＳＡＭＲ１には、１％（Ｗ／Ｖ）メチルセルロース水溶液を同様に経口投与した。なお、ＳＡＭＰ１０の各群の例数は２２眼（１１匹）、ＳＡＭＲ１の例数は１６眼（８匹）である。
【００３５】
（評価方法）
投与開始直前および投与開始８週間後におけるＳＡＭＰ１０およびＳＡＭＲ１の角膜障害部分をフルオレセインにて染色した。角膜の上部、中間部および下部のそれぞれについて、フルオレセインによる染色の程度を「１．眼窩外涙腺摘出ラットモデルを用いた角膜障害の治癒効力試験」に記載した判定基準に基づきスコア判定し、上記各部のスコアを合計することで角膜障害の程度をスコア化（合計９点満点）した。
【００３６】
（結果）
１６および２４週齢におけるＳＡＭＰ１０およびＳＡＭＲ１のフルオレセイン染色スコアを表２に示す。なお、表中のスコアは各群における平均±標準誤差である。
【表２】
2006348025.tif 000006
【００３７】
##ｐ＜０．０１  ＳＡＭＲ１との比較（Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定）
*ｐ＜０．０５  ＳＡＭＰ１０の基剤投与群との比較（Ｄｕｎｎｅｔｔの検定）
（考察）
表２から明らかなように、１６週齢時には、ＳＡＭＲ１の基剤投与群とＳＡＭＰ１０の基剤投与群の間に有意な差は無く（Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定）、ＳＡＭＰ１０の各薬物投与群間にも有意な差は認められなかった（Ｔｕｋｅｙ検定）。２４週齢時では、ＳＡＭＰ１０の基剤投与群は、ＳＡＭＲ１の基剤投与群と比べて染色スコアが有意に上昇することが認められた。すなわち、ＳＡＭＰ１０は加齢に伴って角膜障害を発症することが確認された。この条件下、３ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇの両エブセレン投与群は、ＳＡＭＰ１０の基剤投与群と比べて染色スコアが有意に低下することが認められた。すなわち、エブセレンは角膜障害に対して予防および改善効果を有することが認められた。
【００３８】
［製剤例］
エブセレンを用いた代表的な製剤例を以下に示す。
【００３９】
処方例１  点眼剤
１００ｍｌ中
エブセレン                                          １０ｍｇ
塩化ナトリウム                                    ９００ｍｇ
滅菌精製水                                            適量
エブセレンの添加量を変えることにより、濃度０．００１％（ｗ／ｖ）、０．０３％（ｗ／ｖ）、０．１％（ｗ／ｖ）、０．３％（ｗ／ｖ）、１．０％（ｗ／ｖ）の点眼剤を調製できる。
【００４０】
処方例２  点眼剤
１００ｍｌ中
エブセレン                                        １００ｍｇ
塩化ナトリウム                                    ８００ｍｇ
リン酸水素二ナトリウム                            １００ｍｇ
リン酸二水素ナトリウム                               適量
滅菌精製水                                           適量
エブセレンの添加量を変えることにより、濃度０．０５％（ｗ／ｖ）、０．３％（ｗ／ｖ）、０．５％（ｗ／ｖ）、１％（ｗ／ｖ）の点眼剤を調製できる。
【００４１】
処方例３  眼軟膏
１００ｇ中
エブセレン                                          ０．３ｇ
流動パラフィン                                    １０．０ｇ
白色ワセリン                                          適量
エブセレンの添加量を変えることにより、濃度１％（ｗ／ｗ）、３％（ｗ／ｗ）の眼軟膏を調製できる。
【００４２】
処方例４  錠剤
１００ｍｇ中
エブセレン                                          １ｍｇ
乳糖                                          ６６．４ｍｇ
トウモロコシデンプン                              ２０ｍｇ
カルボキシメチルセルロースカルシウム                ６ｍｇ
ヒドロキシプロピルセルロース                        ６ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                        ０．６ｍｇ
エブセレン、乳糖を混合機中で混合し、ここへカルボキシメチルセルロースカルシウム及びヒドロキシプロピルセルロースを加え、この混合物を造粒し、得られた顆粒を乾燥後整粒し、その整粒顆粒にステアリン酸マグネシウムを加えて混合し、この混合物を打錠機で打錠する。また、エブセレンの添加量を変えることにより、１００ｍｇ中の含有量が０．１ｍｇ、１０ｍｇ、５０ｍｇの錠剤を調製できる。