(57)【要約】【課題】  酵素反応によって容易に合成することができる新規な双頭型配糖体、及び該双頭型配糖体の製造方法を提供する。【解決手段】  リンカー部になる化合物と、キチンオリゴ糖又はその誘導体を用い、これらの反応基質にキチナーゼ及び／又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させることにより、前記リンカー部となる化合物分子の末端にＮ−アセチルグルコサミンを転移させることにより、下記一般式（１）又は（２）で表される化学構造を有する双頭型配糖体を得る。ただし下記式中、Ｒ及びＲ１は還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜８糖からなる糖鎖を表し、Ｒ、Ｒ１は同じでも異なっていてもよい。また、ｎは２〜９の整数を表す。Ｒ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒ１  …（１）Ｒ−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒ１  …（２）【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
両末端に単糖又は糖鎖を有する化合物であって、下記一般式（１）又は（２）で表される化学構造を有することを特徴とする双頭型配糖体。
Ｒ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒ１  …（１）
Ｒ−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒ１  …（２）
（上記式中、Ｒ及びＲ１は還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜８糖からなる糖鎖を表し、Ｒ、Ｒ１は同じでも異なっていてもよい。ｎは２〜９の整数を表す。）
【請求項２】
前記Ｒが、Ｎ−アセチルグルコサミンを還元末端とする糖鎖からなり、下記一般式（３）又は（４）で表される化学構造を有する請求項１記載の双頭型配糖体。
Ｒ２−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒ１  …（３）
Ｒ２−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｏ−Ｒ１  …（４）
（上記式中、Ｒ１は還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜８糖からなる糖鎖を表し、Ｒ２は還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜７糖からなる糖鎖を表し、Ｒ１、Ｒ２は同じでも異なっていてもよい。ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表す。ｎは２〜９の整数を表す。）
【請求項３】
前記一般式（１）〜（４）におけるＲ、Ｒ１、Ｒ２が、還元末端１位水酸基のないラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルラクトサミン、Ｎ−アセチルキトビオースから選ばれた１種である請求項１又は２記載の双頭型配糖体。
【請求項４】
アルカンジオール（炭素数２〜９）と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させ、得られた生成物から下記式（５）で示される化合物を採取することを特徴とする双頭型配糖体の製造方法。
ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ  …（５）
（上記式中、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表し、ｎは２〜９の整数を表す。）
【請求項５】
アルカンジオールの片側に１〜８糖の糖鎖が結合したアルカノール誘導体と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させ、得られた生成物から下記一般式（６）で示される化合物を採取することを特徴とする双頭型配糖体の製造方法。
Ｒ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ  …（６）
（上記式中、Ｒは還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜８糖からなる糖鎖を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表し、ｎは２〜９の整数を表す。）
【請求項６】
前記一般式（６）におけるＲは、Ｎ−アセチルグルコサミンを還元末端とする糖鎖からなり、該還元末端において前記アルカンジオールの片側に結合している請求項５記載の双頭型配糖体の製造方法。
【請求項７】
オリゴエチレングリコール（エチレン数２〜９）と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ及び／又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させ、得られた生成物から下記式（７）で示される化合物を採取することを特徴とする双頭型配糖体の製造方法。
ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＧｌｃＮＡｃ  …（７）
（上記式中、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表し、ｎは２〜９の整数を表す。）
【請求項８】
オリゴエチレングリコールの片側に１〜８糖の糖鎖が結合したオリゴエチレングルコール誘導体と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ及び／又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させ、得られた生成物から下記一般式（８）で示される化合物を採取することを特徴とする双頭型配糖体の製造方法。
Ｒ−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＧｌｃＮＡｃ  …（８）
（上記式中、Ｒは還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜８糖からなる糖鎖を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表し、ｎは２〜９の整数を表す。）
【請求項９】
前記一般式（８）におけるＲは、Ｎ−アセチルグルコサミンを還元末端とする糖鎖からなり、該還元末端において前記オリゴエチレングリコールの片側に結合している請求項８記載の双頭型配糖体の製造方法。
【請求項１０】
アルカンジオール（炭素数２〜９）と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させ、得られた生成物から下記式（９）で示される化合物を採取し、この化合物に糖転移によって他の糖又は糖鎖を結合させることにより、前記一般式（６）で示される化合物を得ることを特徴とする双頭型配糖体の製造方法。
ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ  …（９）
（上記式中、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表し、ｎは２〜９の整数を表す。）
【請求項１１】
オリゴエチレングリコール（エチレン数２〜９）と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ及び／又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させ、得られた生成物から下記式（１２）で示される化合物を採取し、この化合物に糖転移によって他の糖又は糖鎖を結合させることにより、前記一般式（８）で示される化合物を得ることを特徴とする双頭型配糖体の製造方法。
ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＯＨ  …（１２）
（上記式中、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表し、ｎは２〜９の整数を表す。）
【請求項１２】
前記請求項４〜１１のいずれかの方法により得られた双頭型配糖体に結合した糖又は糖鎖を、糖転移によって他の糖又は糖鎖と置換することにより、前記一般式（１）〜（４）で示される化合物を生成させることを特徴とする双頭型配糖体の製造方法。
【請求項１３】
前記キチナーゼ及び／又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼとして、アミコラトプシス・オリエンタリス（Amycolatopsis orientalis）の培養上清、又は該培養上清から調製された粗酵素若しくは精製酵素を用いる請求項４〜１２のいずれか１つに記載の双頭型配糖体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、両末端に糖又は糖鎖を有する新規な双頭型配糖体、及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖質は、タンパク質や核酸等とともに、微生物から高等植物、高等動物に至る生物にとって生命活動に欠くことのできない構成要素の一つであり、単なるエネルギー源として利用されるだけではなく、生体内において糖タンパク質、糖脂質、プロテオグリカン等として多種多様な形で存在している。
【０００３】
例えば、糖タンパク質には、タンパク質ペプチド上のアスパラギン残基のγアミノ基にＮ−アセチルグルコサミンが結合したＮ−グリコシド結合糖鎖や、セリン、スレオニン残基の水酸基にＮ−アセチルガラクトサミンが結合したＯ−グリコシド結合糖鎖があり、これらの糖を原点として非還元末端方向に、糖が伸長と分岐を繰り返すことにより、一方向に拡散した扇形構造を形成している。
【０００４】
また、糖脂質には、スフィンゴ糖脂質とグリセロ糖脂質があり、これらの糖鎖は比較的短く単純で、１〜１５残基程度の糖鎖部位とセラミドやグリセロールからなる脂質部位が結合した構造を形成している。
【０００５】
また、コンドロイチン硫酸やヒアルロン酸のように２糖単位の繰り返しからなるグリコサミノグリカン、あるいは構造多糖であるセルロース、キチン、キトサン等のように非常に長い一本鎖構造の糖鎖も存在している。
【０００６】
上記のような糖鎖は、細胞内外の情報を司り、細胞接着、細胞認識、炎症、感染、免疫、分化、癌等といった我々の生命現象に複雑かつ奥深く関わっていることが知られており、糖や糖鎖を利用した新規な機能性素材や医薬品等の開発も期待されている。
【０００７】
例えば、Lehmannらは、糖タンパク質の糖鎖モデルとして双頭型の糖鎖を合成し、それらがガラクトース転移酵素のよい基質になることを報告している（下記非特許文献１、２）。
【０００８】
Hansenらは、１,３−ジヒドロキシメチルベンゼンや１,３−ジメルカプトメチルベンゼンに、二つのガラクトースがα１−４結合したガラクトビオース鎖を２本結合させた化合物の合成を報告している（下記非特許文献３）。
【０００９】
Leeらは、糖タンパク糖鎖を模倣した１〜４価の糖鎖化合物を合成し、価数が増えるほど肝レクチンの結合阻害活性が増大することを報告している（下記非特許文献４）。
【００１０】
下記非特許文献５には、２価の糖質による凝集効果で、格子様ネットワークが形成されることについて触れられている。
【００１１】
下記特許文献１、２には、重合性官能基を有する双頭型の糖脂質、またその重合体及びその製造方法について開示されており、それらが安定な微細繊維状凝集体を形成することが記載されている。
【００１２】
下記特許文献３には、自己集積性を有し、機能性材料として有用な双頭型脂質及びその製造方法が開示されている。
【非特許文献１】Carbohydrate Research, 204 (1990) 141
【非特許文献２】Carbohydrate Research, 252 (1994) 325
【非特許文献３】Carbohydrate Research, 307 (1998) 243
【非特許文献４】The Journal of Biological Chemistry vol.258,No.1 Issue of January 10, pp199 (1983)
【非特許文献５】Trends in Glycoscience and Glycotechnology, vol.16, No.90 (July 2004), p243
【特許文献１】特開平１１−２５５７９１号公報
【特許文献２】特開平１１−２５５８０４号公報
【特許文献３】特開平９−１４３１９２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
しかしながら、上記のような非天然型の配糖体は、水酸基の保護、脱保護、アノマーの活性化等の多段階の工程が必要な有機合成的手法により合成されており、工業的に合成するには問題があった。
【００１４】
したがって、本発明の目的は、酵素反応によって容易に合成することができる新規な双頭型配糖体を提供するとともに、該双頭型配糖体の製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、アミコラトプシス・オリエンタリス（Amycolatopsis orientalis）のキチン培養上清中に見出される粗酵素を用いることにより、温和な条件下で、一段階の反応により、Ｎ−アセチルグルコサミンをアルカンジオールやオリゴエチレングリコールに転移でき、Ｎ−アセチルグルコサミンを含む双頭型配糖体を合成できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１６】
すなわち、本発明による双頭型配糖体は、両末端に単糖又は糖鎖を有する化合物であって、下記一般式（１）又は（２）で表される化学構造を有することを特徴とする。
Ｒ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒ１  …（１）
Ｒ−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒ１  …（２）
（上記式中、Ｒ及びＲ１は還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜８糖からなる糖鎖を表し、Ｒ、Ｒ１は同じでも異なっていてもよい。ｎは２〜９の整数を表す。）
【００１７】
上記双頭型配糖体は、前記Ｒが、Ｎ−アセチルグルコサミンを還元末端とする糖鎖からなり、下記一般式（３）又は（４）で表される化学構造を有することが好ましい。
Ｒ２−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒ１  …（３）
Ｒ２−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｏ−Ｒ１  …（４）
（上記式中、Ｒ１は還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜８糖からなる糖鎖を表し、Ｒ２は還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜７糖からなる糖鎖を表し、Ｒ１、Ｒ２は同じでも異なっていてもよい。ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表す。ｎは２〜９の整数を表す。）
【００１８】
また、前記一般式（１）〜（４）におけるＲ、Ｒ１、Ｒ２が、還元末端１位水酸基のないラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルラクトサミン、Ｎ−アセチルキトビオースから選ばれた１種であることが好ましい。
【００１９】
本発明の双頭型配糖体は、アルカンジオール又はオリゴエチレングリコールからなるリンカー部を介して、還元末端を結合点として双方向に糖、あるいは糖鎖が結合しており、一つの分子内において双方向に非還元末端糖鎖部分が露出する構造をとっている。そのため、従来の糖鎖とは異なる相互作用や反応性を示す可能性が考えられ、全く新しい機構による薬剤や生理活性物質としての利用が期待できる。
【００２０】
一方、本発明による双頭型配糖体の製造方法の一つは、アルカンジオール（炭素数２〜９）と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させ、得られた生成物から下記式（５）で示される化合物を採取することを特徴とする。
ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ  …（５）
（上記式中、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表し、ｎは２〜９の整数を表す。）
【００２１】
本発明による双頭型配糖体の製造方法のもう一つは、アルカンジオールの片側に１〜８糖の糖鎖が結合したアルカノール誘導体と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させ、得られた生成物から下記一般式（６）で示される化合物を採取することを特徴とする。
Ｒ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ  …（６）
（上記式中、Ｒは還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜８糖からなる糖鎖を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表し、ｎは２〜９の整数を表す。）
【００２２】
上記一般式（６）におけるＲは、Ｎ−アセチルグルコサミンを還元末端とする糖鎖からなり、該還元末端において前記アルカンジオールの片側に結合していることが好ましい。
【００２３】
本発明による双頭型配糖体の製造方法の更にもう一つは、オリゴエチレングリコール（エチレン数２〜９）と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ及び／又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させ、得られた生成物から下記式（７）で示される化合物を採取することを特徴とする。
ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＧｌｃＮＡｃ…（７）
（上記式中、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表し、ｎは２〜９の整数を表す。）
【００２４】
本発明による双頭型配糖体の製造方法の更にもう一つは、オリゴエチレングリコールの片側に１〜８糖の糖鎖が結合したオリゴエチレングルコール誘導体と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ及び／又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させ、得られた生成物から下記一般式（８）で示される化合物を採取することを特徴とする。
Ｒ−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＧｌｃＮＡｃ…（８）
（上記式中、Ｒは還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜８糖からなる糖鎖を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表し、ｎは２〜９の整数を表す。）
【００２５】
上記一般式（８）におけるＲは、Ｎ−アセチルグルコサミンを還元末端とする糖鎖からなり、該還元末端において前記オリゴエチレングリコールの片側に結合していることが好ましい。
【００２６】
本発明による双頭型配糖体の製造方法の更にもう一つは、アルカンジオール（炭素数２〜９）と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させ、得られた生成物から下記式（９）で示される化合物を採取し、この化合物に糖転移によって他の糖又は糖鎖を結合させることにより、前記一般式（６）で示される化合物を得ることを特徴とする。
ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ  …（９）
（上記式中、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表し、ｎは２〜９の整数を表す。）
【００２７】
本発明による双頭型配糖体の製造方法の更にもう一つは、オリゴエチレングリコール（エチレン数２〜９）と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ及び／又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させ、得られた生成物から下記式（１２）で示される化合物を採取し、この化合物に糖転移によって他の糖又は糖鎖を結合させることにより、前記一般式（８）で示される化合物を得ることを特徴とする。
ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＯＨ  …（１２）
（上記式中、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表し、ｎは２〜９の整数を表す。）
【００２８】
本発明による双頭型配糖体の製造方法においては、前記いずれかの方法により得られた双頭型配糖体に結合した糖又は糖鎖を、糖転移によって他の糖又は糖鎖と置換することにより、前記一般式（１）〜（４）で示される化合物を生成させることもできる。
【００２９】
また、本発明による双頭型配糖体の製造方法においては、前記キチナーゼ及び／又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼとしては、アミコラトプシス・オリエンタリス（Amycolatopsis orientalis）の培養上清、又は該培養上清から調製された粗酵素若しくは精製酵素を用いることが好ましい。
【００３０】
本発明の双頭型配糖体の製造方法によれば、機能性素材や医薬品等への利用が期待できる新規な非天然型の双頭型配糖体を酵素反応により容易に得ることができる。
【発明の効果】
【００３１】
本発明によれば、機能性素材や医薬品等への利用が期待できる新規な非天然型の双頭型配糖体、及びその製造方法を提供することができる。本双頭型配糖体は、双方向に糖鎖部位を有するため、そのまま、あるいは該双頭型配糖体を基本骨格として酵素反応等により糖鎖を伸張することにより、タンパク質、受容体、レクチン、細胞、白血球、リンパ球、ホルモン、微生物、ウイルス等を１分子で両方向につなぎとめたり、異種のものをつなぎとめることも可能であるので、凝集剤や阻害剤、接着剤、ＤＤＳの輸送体等への利用が期待できる。また、その分子構造の特性上、保湿効果、安定化効果、界面活性効果、自己凝集効果等も期待でき、化粧品、医薬品、食品、農薬、電子等の様々な分野で応用できる可能性がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】
本発明の双頭型配糖体は、両末端に単糖又は糖鎖を有する化合物であって、下記一般式（１）又は（２）で表される化学構造を有するものである。
Ｒ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒ１  …（１）
Ｒ−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒ１  …（２）
（上記式中、Ｒ及びＲ１は還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜８糖からなる糖鎖を表し、Ｒ、Ｒ１は同じでも異なっていてもよい。ｎは２〜９の整数を表す。）
【００３３】
また、上記双頭型配糖体は、前記Ｒが、Ｎ−アセチルグルコサミンを還元末端とする糖鎖からなり、下記一般式（３）又は（４）で表される化学構造を有することが好ましい。
Ｒ２−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒ１  …（３）
Ｒ２−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｏ−Ｒ１  …（４）
（上記式中、Ｒ１は還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜８糖からなる糖鎖を表し、Ｒ２は還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜７糖からなる糖鎖を表し、Ｒ１、Ｒ２は同じでも異なっていてもよい。ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表す。ｎは２〜９の整数を表す。）
【００３４】
また、前記一般式（１）〜（４）におけるＲ、Ｒ１、Ｒ２が、還元末端１位水酸基のないラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルラクトサミン、Ｎ−アセチルキトビオースから選ばれた１種であることが好ましい。
【００３５】
ラクトースは、ガラクトースとグルコースがβ１−４結合した二糖であり、Ｎ−アセチルラクトサミンは、ガラクトースとＮ−アセチルグルコサミンがβ１−４結合した二糖であり、Ｎ−アセチルキトビオースは、Ｎ−アセチルグルコサミンとＮ−アセチルグルコサミンがβ１−４結合した二糖である。
【００３６】
本発明の双頭型配糖体の好ましい具体例としては、上記の他、例えば、ｉ）創傷作用や免疫作用が期待されるキチンオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、ｉｉ）細菌毒素の中和作用が期待されるミルクオリゴ糖、ｉｉｉ）インフルエンザ阻害作用が期待されるシアル酸、ｉｖ）抗炎症作用が期待されるシアリルルイスＸ、ｖ）保湿作用が期待されるヒアルロン酸オリゴ糖等の糖鎖が結合した双頭型配糖体が挙げられる。
【００３７】
次に、本発明の双頭型配糖体の製造方法について説明する。
【００３８】
本発明の双頭型配糖体の製造方法は、リンカー部になる化合物（受容体基質）と、キチンオリゴ糖又はその誘導体（供与体基質）を用い、これらの反応基質にキチナーゼ及び／又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させることにより、前記リンカー部となる化合物分子の末端にＮ−アセチルグルコサミンを転移させるものである。
【００３９】
上記キチナーゼ及び／又はＮ−アセチルへキソサミニダーゼは、例えば、アミコラトプシス・オリエンタリス（Amycolatopsis orientalis）（ＩＦＯ１２８０６、ＡＴＣＣ１９７９５）、バチルス・サーキュランス（Bacillus circulans）（ＩＦＯ１３６２６、ＡＴＣＣ２４）、トリコデルマ・リーセイ（Trichoderma reesei）、卵白リゾチーム等に由来するものを用いることができる。本発明においては、アミコラトプシス・オリエンタリス（Amycolatopsis orientalis）由来のものを用いることが好ましい。アミコラトプシス・オリエンタリス（Amycolatopsis orientalis）をコロイダルキチンとともに培養して得られる培養上清には、キチナーゼとＮ−アセチルへキソサミニダーゼが分泌され、これらの酵素が強い転移活性を持っていることが知られている（Biochimica et Biophysica Acta923, 302 (1987)、Agric. Biol. Chem., 54 (4), 899 (1990)、Agric. Biol. Chem., 53 (8), 2189 (1989)）。本発明においては、上記の培養上清をそのまま用いてもよく、該培養上清から硫安分画等により粗精製してから用いてもよい。また、カラムクロマトグラフィーや高速液体クロマトグラフィー等により精製してから用いることもできる。
【００４０】
受容体基質として用いられる上記リンカー部になる化合物としては、アルカンジオール（好ましくは炭素数２〜９）やオリゴエチレングリコール（好ましくはエチレン数２〜９）が例示でき、更には、アルカンジオールの片側に１〜８糖の糖鎖が結合したアルカノール誘導体やオリゴエチレングリコールの片側に１〜８糖の糖鎖が結合したオリゴエチレングリコール誘導体等が例示できる。
【００４１】
アルカンジオール又はオリゴエチレングリコールの片側に結合させる上記１〜８糖の糖鎖としては、例えば、グルコース、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、グルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトサミン、マンノース、フコース、キシロース、シアル酸、ウロン酸を構成糖とするものが好ましく、具体的には、キチンオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、ポリラクトサミンオリゴ糖、ミルクオリゴ糖、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸オリゴ糖、マンノースをコアとした糖タンパク、シアリルルイスＸ、ＨＮＫ−１抗原糖鎖、α−Ｇａｌ抗原糖鎖等が挙げられる。
【００４２】
上記アルカンジオールやオリゴエチレングリコールは、市販のものを用いることができる。また、上記アルカノール誘導体やオリゴエチレングルコール誘導体の製造方法については、例えば、トリコデルマ・リーセイ（Trichoderma reesei）由来の市販セルラーゼを用いたラクトース、若しくはＮ−アセチルラクトサミンの結合した誘導体の製造方法が知られている（Archires of Biochemistry and Biophysics, vol.385, No.1, January 1, pp70-77 (2001)）。
【００４３】
一方、供与体基質として用いられる上記キチンオリゴ糖又はその誘導体としては、好ましくはキチンオリゴ糖（重合度２〜６）や、キチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）を用いることができる。
【００４４】
上記キチンオリゴ糖は、公知の方法により、キチンを加水分解することにより調製することもできるが、例えば、商品名「ＮＡＣＯＳ−Ｙ」（焼津水産化学工業株式会社製）等の市販のものを用いることもできる。また、キチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体は、例えば、文献［J Biochem, 104, 255 (1988)］に記載された方法により調製することができる。
【００４５】
以下、本発明の双頭型配糖体の製造方法について、より具体的に説明する。
【００４６】
リンカー部となる化合物と、キチンオリゴ糖又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体との配合比（リンカー部となる化合物：キチンオリゴ糖又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体）は、モル比で０．０５〜２：０．０５〜２となるようにすることが好ましい。
【００４７】
これらの化合物を、例えば、酢酸、リン酸、フタル酸緩衝液等の緩衝液に溶解し、アミコラトプシス・オリエンタリス（Amycolatopsis orientalis）の培養上清、あるいは該培養上清から調製された粗酵素若しくは精製酵素を加えて酵素反応を行う。
【００４８】
酵素の添加量は、反応基質の量によって適宜設定すればよいが、反応基質の質量（受容体基質と供与体基質の合計）１ｇに対して、０．０２〜１０Ｕ添加することが好ましい。なお、本発明でいう「１Ｕ」とは、パラニトロフェニル−Ｎ−アセチルグルコサミンを基質として１分間に１μｍｏｌのパラニトロフェノールを遊離する酵素量を意味する。
【００４９】
酵素反応の条件は、ｐＨ３〜７、好ましくはｐＨ４〜６で、２０〜７０℃、好ましくは３０〜５０℃である。なお、反応の状態はＨＰＬＣ等で経時的に分析して、反応が平衡状態に達したことを確認してから、反応液を加熱するなどして反応を停止させればよい。
【００５０】
反応液は、そのまま、あるいは濃縮して、活性炭カラムクロマトグラフィー、シリカゲルカラムクロマトグラフィーの順に二段階のカラム操作を行うことにより、生成した双頭型配糖体を分離精製することができる。
【００５１】
例えば、活性炭クロマトグラフィーは、移動相として０〜６０％のエタノール又はイソプロピルアルコールを用い、グラジエント溶出することが好ましい。また、シリカゲルカラムクロマトグラフィーは、移動相としてクロロホルム／メタノール／水（容量）＝６／４／１や、７／３／０．５の混合溶媒を用いることができる。
【００５２】
上記クロマトグラフィーにおいて、生成した双頭型配糖体の検出は、ＧｌｃＮＡｃのＮ−アセチル基に由来する２１０ｎｍでの吸収を観察したり、オルシノール硫酸法によって行うことができる。また、分離精製した双頭型配糖体は、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＦＡＢ−ＭＳ等により構造解析することができる。
【００５３】
上記製造方法においては、アルカンジオール（炭素数２〜９）と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させた場合には、下記式（５）及び下記式（９）で示される化合物が生成されるので、この生成物から下記式（５）で示される化合物を分離生成することができる。
ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ  …（５）
ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ  …（９）
（上記式（５）、（９）中、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表し、ｎは２〜９の整数を表す。）
【００５４】
また、アルカンジオールの片側に１〜８糖の糖鎖が結合したアルカノール誘導体と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させることにより、下記一般式（６）で示される化合物が生成されるので、この生成物から下記式（６）で示される化合物を分離精製することができる。
Ｒ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ  …（６）
（上記式中、Ｒは還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜８糖からなる糖鎖を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表し、ｎは２〜９の整数を表す。）
【００５５】
この場合、上記一般式（６）におけるＲは、Ｎ−アセチルグルコサミンを還元末端とする糖鎖からなり、該還元末端において前記アルカンジオールの片側に結合していることが好ましく、それによって下記一般式（１０）で示される化合物を生成することができる。
Ｒ２−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ  …（１０）
（上記式中、Ｒ２は還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜７糖からなる糖鎖を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表す。ｎは２〜９の整数を表す。
【００５６】
更に、オリゴエチレングリコール（エチレン数２〜９）と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ及び／又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させることにより、下記式（７）、（１２）で示される化合物が生成されるので、これらの生成物から下記式（７）で示される化合物を分離精製することができる。
ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＧｌｃＮＡｃ  …（７）
ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＯＨ  …（１２）
（上記式中、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表し、ｎは２〜９の整数を表す。）
【００５７】
更にまた、オリゴエチレングリコールの片側に１〜８糖の糖鎖が結合したオリゴエチレングルコール誘導体と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ及び／又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させことにより、下記式（８）で示される化合物が生成されるので、この生成物から下記式（８）で示される化合物を分離生成することができる。
Ｒ−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−ＧｌｃＮＡｃ…（８）
（上記式中、Ｒは還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜８糖からなる糖鎖を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表し、ｎは２〜９の整数を表す。）
【００５８】
この場合、上記一般式（８）におけるＲは、Ｎ−アセチルグルコサミンを還元末端とする糖鎖からなり、該還元末端において前記オリゴエチレングリコールの片側に結合していることが好ましく、それによって下記一般式（１１）で示される化合物を生成することができる。
Ｒ２−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ  …（１１）
（上記式中、Ｒ２は還元末端１位水酸基を有さない単糖又は２〜７糖からなる糖鎖を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンを表す。ｎは２〜９の整数を表す。）
【００５９】
また、アルカンジオール（炭素数２〜９）と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させて得られる前記式（９）で示される化合物を採取し、この化合物に糖転移によって他の糖又は糖鎖を結合させることにより、前記一般式（６）で示される化合物を得ることもできる。
【００６０】
更に、オリゴエチレングリコール（エチレン数２〜９）と、キチンオリゴ糖（重合度２〜６）又はキチンオリゴ糖のパラニトロフェニル誘導体（重合度１〜６）に、キチナーゼ及び／又はＮ−アセチルヘキソサミニダーゼを作用させて得られる前記式（１２）で示される化合物を採取し、この化合物に糖転移によって他の糖又は糖鎖を結合させることにより、前記一般式（８）で示される化合物を得ることもできる。
【００６１】
上記糖転移反応は、α−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、Ｎ−アセチルヘキソサミニダーゼ、マンノシダーゼ、フコシダーゼ、ガラクトシルトランスフェラーゼ、Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、フコシルトランスフェラーゼ等の加水分解酵素や糖転移酵素を用いることにより行うことができる。
【００６２】
また、上記で得られた式（５）〜（８）及び（１０）、（１１）で示される双頭型配糖体の片側あるいは両末端に、上記と同様な加水分解酵素や糖転移酵素を用いて、糖、オリゴ糖、糖鎖等を転移させることにより、前記一般式（１）〜（４）で示される化合物であって、前記式（５）〜（８）及び（１０）、（１１）で示される双頭型配糖体に該当しないものも、製造することができる。
【００６３】
上記各反応において、糖転移させる糖、オリゴ糖、糖鎖としては、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、キシロース、シアル酸、グルクロン酸、イズロン酸、ガラクツロン酸、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、グルコサミン、ガラクトサミン及びこれらの硫酸化物、リン酸化物、硝酸化物等、天然に存在する糖鎖であるアミロース、セルロース、キチン、キトサン等、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸等のグリコサミノグリカンやβ−グルカン、ポリラクトサミン、フコイダン、キシログルカンのような糖鎖構造を有するオリゴ糖が例示できる。
【実施例１】
【００６４】
（１）アミコラトプシス・オリエンタリス（Amycolatopsis orientalis）培養液の調製
アミコラトプシス・オリエンタリス（Amycolatopsis orientalis）（ＩＦＯ１２８０６）株を、３０℃で３０時間培養した前培養液を用い、下記組成の培地により、３０℃で４８時間培養した。
【００６５】
培地                  （ｇ／Ｌ）
コロイダルキチン       ５．０
ＧｌｃＮＡｃ           ５．０
ペプトン               ２．０
酵母エキス             ０．１
Ｋ２ＨＰＯ４             ０．７
ＫＨ２ＰＯ４             ０．３
Ｍｇ２ＳＯ４・７Ｈ２Ｏ    ０．５
【００６６】
培養終了後、培養液を遠心分離して菌体を除去し、固形硫安８０％飽和となるように加えて４℃で一夜放置してタンパク質を塩析させた。これを遠心分離により上清を回収し、純水中で一昼夜透析した後、凍結乾燥して粗酵素乾燥粉末１６０ｍｇを得た。以下の製造にはこの粗酵素を用いた。
【００６７】
（２）ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）６−ＯＨ及びＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）６−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃの製造例
供与体基質として（ＧｌｃＮＡｃ）４（１．７ｇ）、受容体基質として１,６−へキサンジオール（４．７ｇ）をモル比０．１：２となるように１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）２５ｍｌに溶解した後、上記（１）で得られた粗酵素（２５６ｍＵ）を添加し、４０℃で４０時間振とう反応を行った。反応の経時変化はＨＰＬＣにより分析し、反応が平衡状態に達したことを確認後、反応液を１０分間煮沸して反応を停止した。
【００６８】
この反応液を、予め水で平衡化した活性炭セライトカラム（φ４．５×８５ｃｍ）に供し、エタノール濃度０−５０％直線濃度勾配法により溶出させた。転移生成物の検出は、ＧｌｃＮＡｃのＮ−アセチル基に由来する２１０ｎｍでの吸収を観察することにより行った。
【００６９】
転移生成物のフラクション（４８ｍｌ／ｔｕｂｅ）を回収して濃縮乾固し、これをさらにシリカゲル６０Ｎカラム（φ１．５×２５ｃｍ）に供した。移動相としてクロロホルム：メタノール：水（容量）＝７：３：０．５を用いてフラクションを分取し、各フラクション（１０ｍｌ／ｔｕｂｅ）についてオルシノール硫酸法によって生成物を検出後、各目的物のフラクションをそれぞれ回収、濃縮し、凍結乾燥することにより、ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）６−ＯＨ（６−ヒドロキシヘキシル−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド）、及びＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）６−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ（β−Ｄ−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−１,６−ジオキシヘキシル−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド）の乾燥粉末をそれぞれ３１４ｍｇ（収率４９％）、２３ｍｇ（収率２．２％）を得た。
【００７０】
そして、ＦＡＢ−ＭＳ、１Ｈ及び１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルにより、得られた各化合物の構造を確認した。図１に、ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）６−ＯＨの１３Ｃ−ＮＭＲの測定スペクトルデータ、図２にＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）６−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃの１３Ｃ−ＮＭＲの測定スペクトルデータを示す。
【００７１】
（３）ＬａｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）６−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃの製造例
供与体基質としてＬａｃＮＡｃ（１．３ｇ）、受容体基質として１,６−へキサンジオール（３．４ｇ）をモル比０．５：４．０となるように５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）７．１ｍｌ溶解した後、トリコデルマ・リーサイ（Trichoderma reesei）由来セルラーゼ製剤（商品名「セルラーゼＸＬ−５２２」、ナガセケムテック社製）（２１６Ｕ）を添加し、４０℃で７５時間振とう反応を行った。反応の経時変化はＨＰＬＣにより分析し、反応の転移生成物が飽和に達したことを確認後、反応液を１０分間煮沸して反応を停止した。
【００７２】
これを、予め純水で平衡化した活性炭セライトカラム（φ４．５×６５ｃｍ）に供し、充分にカラムを洗浄後、吸着物をエタノール濃度０−５０％直線濃度勾配法により溶出させた。転移生成物の検出は、ＧｌｃＮＡｃのＮ−アセチル基に由来する２１０ｎｍの吸収を観察することにより行い、転移生成物のピークを全て回収し濃縮乾固した。
【００７３】
次に、得られた転移生成物をシリカゲル６０Ｎカラム（φ１．５×２５ｃｍ）に供し、移動相クロロホルム：メタノール：水（容量）＝７：３：０．５によりフラクション（１０ｍｌ／ｔｕｂｅ）を分取した。各フラクションについてオルシノール硫酸法による生成物の検出を行った後、目的物が含まれる画分を回収、濃縮し、凍結乾燥することにより６−ヒドロキシヘキシル−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１−４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドの乾燥粉末１００ｍｇ（収率６％）を得た。そして、ＦＡＢ−ＭＳ、１Ｈ及び１３Ｃ−ＮＭＲにより、得られた化合物の構造を確認した。
【００７４】
得られた６−ヒドロキシヘキシル−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１−４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを次の反応に用いた。
【００７５】
供与体基質として（ＧｌｃＮＡｃ）４（１４１ｍｇ）、受容体基質として６−ヒドロキシヘキシル−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１−４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（９０ｍｇ）をモル比１：１となるように１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）２．１ｍｌに溶解した後、上記（１）で得られた粗酵素（３５ｍＵ）を添加し、４０℃で２４時間振とう反応を行った。反応の経時変化はＨＰＬＣにより分析し、反応の転移生成物が平衡に達したことを確認後、反応液を１０分間煮沸して反応を停止した。
【００７６】
これを、予め水で平衡化した活性炭セライトカラム（φ２．５×６５ｃｍ）に供し、充分にカラムを水で洗浄後、吸着物をエタノール濃度０−５０％直線濃度勾配法により溶出させた。転移生成物の検出は、ＧｌｃＮＡｃのＮ−アセチル基に由来する２１０ｎｍの吸収と、オルシノール硫酸法により行った。転移生成物のピークを全て回収し濃縮乾固した。
【００７７】
次に、これをシリカゲル６０Ｎカラム（φ１．５×２５ｃｍ）に供し、移動相クロロホルム：メタノール：水（容量）＝６：４：１により各フラクション（１０ｍｌ／ｔｕｂｅ）を分取した。各フラクションについてオルシノール硫酸法による生成物の検出を行った後、目的物が含まれる画分を回収し濃縮し、凍結乾燥することにより、ＬａｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）６−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ（β−Ｄ−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−１,６−ジオキシヘキシル−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１−４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド）の乾燥粉末３４ｍｇ（収率２７％）を得た。
【００７８】
そして、ＦＡＢ−ＭＳ、１Ｈ及び１３Ｃ−ＮＭＲにより、得られた化合物の構造を確認した。図３に、ＬａｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）６−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃの１３Ｃ−ＮＭＲの測定スペクトルデータを示す。
【００７９】
（４）ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４−ＧｌｃＮＡｃの製造例
供与体基質として（ＧｌｃＮＡｃ）４（８７９ｍｇ）、受容体基質としてテトラエチレングリコール（１９４μｌ）をモル比１：１となるように１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）８．８ｍｌに溶解した後、上記（１）で得られた粗酵素（２３９ｍＵ）を添加し、４０℃で４８時間振とう反応を行った。反応の経時変化はＨＰＬＣにより分析し、反応が平衡状態に達したことを確認後、反応液を１０分間煮沸して反応を停止した。
【００８０】
この反応液を予め水で平衡化した活性炭セライトカラム（φ５．０×４５ｃｍ）に供し、エタノール濃度１０−５０％直線濃度勾配法により溶出させた。転移生成物の検出は、ＧｌｃＮＡｃのＮ−アセチル基に由来する２１０ｎｍでの吸収を観察することにより行った。
【００８１】
転移生成物のフラクション（５０ｍｌ／ｔｕｂｅ）を回収、濃縮乾固し、これをさらにシリカゲル６０Ｎカラム（φ１．５×２７ｃｍ）に供した。移動相としてクロロホルム：メタノール：水（容量）＝６：４：１を用いてフラクションを分取し、各フラクション（１０ｍｌ／ｔｕｂｅ）についてオルシノール硫酸法による生成物を検出後、目的物のフラクションを回収、濃縮し、凍結乾燥することによりＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４−ＧｌｃＮＡｃ（ビス−Ｏ−１，８−テトラエチレングリコール−２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド）の乾燥粉末を１２．５ｍｇ（収率２．１％)を得た。
【００８２】
そして、ＦＡＢ−ＭＳ、１Ｈ及び１３Ｃ−ＮＭＲにより、得られた化合物の構造を確認した。図４に該化合物の１３Ｃ−ＮＭＲの測定スペクトルデータを示す。
【産業上の利用可能性】
【００８３】
本発明の双頭型配糖体は、凝集剤や阻害剤、接着剤、ＤＤＳの輸送体等への利用が期待できるほか、保湿効果、安定化効果、界面活性効果、自己凝集効果等も期待でき、化粧品、医薬品、食品、農薬、電子等の様々な分野で応用できる可能性がある。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）６−ＯＨの１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルデータを示す図である。
【図２】ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）６−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃの１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルデータを示す図である。
【図３】ＬａｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２）６−Ｏ−ＧｌｃＮＡｃの１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルデータを示す図である。
【図４】ＧｌｃＮＡｃ−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４−ＧｌｃＮＡｃの１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルデータを示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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