(57)【要約】【課題】  本発明の課題は糖タンパク質，糖ペプチド，糖アミノ酸にＥｎｄｏ−Ｍを作用させ，Ｎ−結合型糖鎖を傷つけることなく遊離させ，遊離した糖鎖の受容体として機能し，しかも強い蛍光を有する糖誘導体を提供することにある。【解決手段】  糖受容体として機能する２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル，高い感度で蛍光検出することができる蛍光団の両者をアスパラギンを介して結合させ，上記課題を解決した。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造式
【化１】
2006321775.tif 000005
（式中，Ｒ１，Ｒ２のいずれか一方が蛍光団で，他方が水素原子の場合，あるいはＲ１とＲ２が連結した蛍光団の場合，Ｒ３は水酸基，アルキルオキシ基から選択され，Ｒ３が蛍光団の場合，Ｒ１，Ｒ２はそれぞれ独立に水素原子，アルキル基，アシル基，ｔ−ブトキシカルボニル基から選択される）で示される新規糖誘導体。
【請求項２】
Ｒ１，Ｒ２のいずれか一方が７−（ジメチルアミノスルホニル）−２，１，３−ベンゾオキサジアゾール−４−イル，７−ニトロ−２，１，３−ベンゾオキサジアゾール−４−イル，１−ピレニルスルホニル，フルオレッセン−５−アミノチオカルボニル，３，４−ジヒドロ−６，７−ジメトキシ−３−オキソキノキサリン−２−カルボニルから選択される請求項１記載の新規糖誘導体。
【請求項３】
Ｒ３が４−［７−（ジメチルアミノスルホニル）−２，１，３−ベンゾオキサジアゾール−４−イル］−１−ピペリジニル基である請求項１記載の新規糖誘導体。
【請求項４】
Ｒ１，Ｒ２が連結し，下記構造式
【化２】
2006321775.tif 000006
（式中，Ｒ４はシアノ，２−ヒドロキシエチルチオ，アルキルチオから選択される）で示される請求項１記載の新規糖誘導体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は糖鎖誘導体に関するもので，簡便なＮ−結合型糖鎖の検出に供されるものである。
【背景技術】
【０００２】  糖鎖は核酸，タンパク質に次ぐ第３の鎖と言われ，生体内で重要な役割を演じていることが明らかになりつつある。これら糖鎖の多くは，タンパク質，脂質と結合し，糖タンパク質，糖脂質などの複合糖質として生体内に広く存在している。ことに，糖タンパク質は重要な生理機能を有しており，多方面で研究されている。この糖タンパク質の糖鎖は多種多用であるが，糖鎖と結合しているタンパク質のアミノ酸はＬ−アスパラギン，Ｌ−セリン，Ｌ−トレオニンに限られている。Ｌ−セリンあるいはＬ−トレオニンが結合した糖鎖はムチン型糖鎖と呼ばれ，Ｌ−セリン，Ｌ−トレオニンの水酸基とガラクトサミンの１位との間でα−グリコシド結合を形成しており，Ｏ−結合型糖鎖とも呼ばれている。Ｌ−アスパラギンが結合した糖鎖はアスパラギン型糖鎖と呼ばれており，Ｌ−アスパラギンのペプチド結合にあずかっていないγ位のアミドと糖鎖の還元末端にあるグルコサミンの１位との間でβ−グリコシド結合を形成している。そのため，Ｎ−結合型糖鎖とも呼ばれている。Ｎ−結合型糖鎖は細胞表層に存在し，細胞の癌化や転移，造血機能などに深く関わっていると言われており，Ｎ−結合型糖鎖の機能解明のための研究が活発に行われている。この糖鎖の機能解明のため，Ｎ−結合型糖鎖の簡便な検出，分析法の開発が強く求めれらている。【０００３】  糖鎖の分析法としては蛍光ＨＰＬＣを用いるピリジルアミノ化法が広く用いられている。ピリジルアミノ化法は，まず，糖タンパク質から糖鎖を遊離させ，次いで，糖鎖の還元末端と２−アミノピリジンを反応させ，シッフ塩を形成させ，そして，このシッフ塩をボラン還元し，ピリジルアミノ化糖鎖を得る。これを蛍光ＨＰＬＣで分析する方法である。糖タンパク質から糖鎖を遊離させる方法として，ヒドラジン法と酵素法がある。ヒドラジン法は糖タンパク質にヒドラジンを作用させ，次いで，アセチル化して糖鎖を得る方法で，酵素法は糖タンパク質にＮ−グリコペプチダーゼを作用させ，糖鎖を得る方法である［Ｓ．Ｈａｓｅ，Ｔ．Ｉｋｅｎａｋａ，Ｙ．Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，９０，４０７（１９８１）：生物化学実験法２３，糖蛋白質糖研究法］。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】  このピリジルアミノ化法は高感度で，ピコモルレベルの糖鎮の検出が可能で，優れた方法として最も広く用いられている糖鎖の検出法である。しかしながら，ヒドラジン法においては，糖鎖のＮ−置換基は還元されてアミノ基となる。その後，アセチル化し，Ｎ−アセチル体として検出される。一方，糖鎖の機能において，非還元末端が重要な役割を演じていることが知られている。ことにシアル酸は赤血球，活性タンパク質の新陳代謝の調節や，分解酵素に対する抵抗性を与えるなど糖鎖の構成成分として極めて重要な機能を果たしている。また，インフルエンザウィルスが動物に感染する際にその動物種の持つシアル酸の違いを認識して種特異的に感染することが知られている。通常，ヒトのシアル酸はＮ−アセチルノイラミン酸であるが，癌化が起こるとＮ−グリコリルノイラミン酸に変わることが知られている。そのため，Ｎ−アセチル体とＮ−グリコリル体を明確に識別することが望まれており，ヒドラジン法による糖鎖の切り出しでは両者を識別することができず，到底満足できるものではない。【０００５】  酵素法による糖鎖の切り出しでは非還元末端を傷つけることなく糖鎖を得ることができる。しかしながら，この糖鎖の切り出しは酵素反応を利用しているため，水溶液中で行われる。次いで行われる２−アミノピリジンとの反応は脱水反応で，効率よく脱水反応を進行させるためには得られた糖鎖を十分に乾燥させる必要がある。そして，得られたシッフ塩のボラン還元は速やかに行う必要があり，簡便な方法とは言えない。また，ピリジルアミノ化法では，タンパク質，ペプチド，あるいはアミノ酸とβ−グリコシド結合を形成しているグルコサミンは，１−位のホルミル基が２−アミノピリジンのアミノ基との反応に供されるため，その構造は傷つけられており，到底満足できるものではない。【０００６】  以上のようにピリジルアミノ化法は，糖鎖の切り出し，２−アミノピリジンとの反応，ボラン還元と複数の工程を必要とし，簡便な方法と言い難い。これらの工程はヒドラジン分解を用いた場合は１０日前後要し，酵素を用いた場合は４，５日を必要とする。また，これらの工程において，Ｎ−結合型糖鎖の構造が傷つけられている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】  ２−アミノピリジンに替わり，簡便な操作で糖タンパク質から傷つけることなく糖鎖を検出することができる蛍光標識試薬が強く求められている。【０００８】  一方，近年，糖タンパク質から糖鎖を傷つけることなく遊離させ，遊離させた糖鎖を受容体に転移させる酵素（以下，Ｅｎｄｏ−Ｍと言う）が報告されている。このＥｎｄｏ−Ｍは糖タンパク質のＮ−結合型糖鎖のジアセチルキトビオース結合に作用し，タンパク質側にアセチルキトビオース１残基を残し，糖鎖を遊離させる。この際，適当な受容体が存在すれば，遊離した糖鎖を転移させることができる。発明者らは鋭意研究を重ね，Ｅｎｄｏ−Ｍの転移活性を利用する蛍光標識法に最適な蛍光標識試薬を見出し，本発明を完成するに至った。本発明は新規糖誘導体に関するもので，生化学，分析化学の分野で求められている簡便な糖鎖の検出に供するものである。【０００９】  すなわち，本発明は下記構造式１【００１０】
【化１】
2006321775.tif 000002
【００１１】（式中，Ａｃはアセチル基，Ｒ１，Ｒ２のいずれかは水素原子で，他方が蛍光団の場合，Ｒ３は水酸基，アルキルオキシ，ｔ−ブトキシから選択され，Ｒ３が蛍光団の場合，Ｒ１，Ｒ２はそれぞれ独立に水素原子，アルキルオキシ，ｔ−ブトキシから選択される）で示され，文献未載の新規化合物である。以下に本発明化合物の代表的な例として下記構造式２【００１２】
【化２】
2006321775.tif 000003
【００１３】（式中，Ａｃはアセチル基を表す）で示されるＮω−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎα−［７−（ジメチルアミノスルホニル）−２，１，３−ベンゾオキサジアゾール−４−イル］−Ｌ−アスパラギン（以下，ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＢＤという）を取り上げ，その有用性を明らかにする。これは例示であり，有用性はこれに限定されるものではない。ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＢＤは下記反応式に従って容易に合成できる。【００１４】
【化３】
2006321775.tif 000004
【００１５】  Ｎω−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−アスパラギンと４−フルオロ−７−ジメチルアミノスルホニル−２，１，３−ベンゾオキサジアゾールを混合，反応させることで生成する。反応溶媒は水，メタノール，エタノール，ＴＨＦ，アセトン，あるいはこれらの混合溶媒，もしくは水と非プロトン性有機溶媒の二層系から滴宜選択されるが，好ましくは水−アセトニトリルの系である。反応温度は−２０℃から溶媒の還流温度の間で選択されるが，好ましくは室温である。反応時間は，反応溶媒，反応温度により異なるが１分から２４時間の間で適宜選択される。反応混合物からＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＢＤの精製はカラム精製等が利用できる。【００１６】  本発明に係るＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＢＤは，Ｅｎｄｏ−Ｍを転移酵素として用いた場合に受容体として機能する２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル，高い感度で蛍光検出することができる２，１，３−ベンゾオキサジアゾールがアスパラギンを介して結合している。そのため，Ｅｎｄｏ−Ｍを用いて糖タンパク質から糖鎖をＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＢＤに転移させると，糖タンパク質の元の糖鎖に蛍光標識されたアスパラギン残基がβ−グリコシド結合した形をとる。言い換えれば，糖タンパク質をプロテアーゼで分解して得られる糖鎖アスパラギンのアミノ基を蛍光標識した形の生成物が得られる。【００１７】  本発叨に係るＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＢＤを用いる糖鎖の検出は極めて簡便である。Ｎ−結合型糖鎖を有する糖タンパク質，糖ペプチドあるいは糖鎖アミノ酸の水溶液にＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＢＤを加え，３７℃付近でＥｎｄｏ−Ｍを作用させることでＮ−結合型糖鎖の蛍光標識体が得られ，これを蛍光ＨＰＬＣにて分析することで，高感度で糖鎖を検出，分取することができる。【００１８】  以下に参考例を用いて本発明に係る糖誘導体の有用性を明らかにする。これは例示であり，変形可能である。
参考例１ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＢＤによる蛍光標識【００１９】  鶏卵卵黄をプロナーゼ処理し，アスパラギンを１残基有するシアルオリゴ糖鎖を得る。このシアルオリゴ糖鎖アスパラギンを水に溶解させ，２．５ｍＭ水溶液を調製した。４．１ｍＭＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＢＤ水溶液を調製した。Ｅｎｄｏ−ＭをｐＨ６．０の緩衝液に溶解させ，力価が２００ｍＵ／ｍｌとなるよう調製した。２．５ｍＭシアルオリゴ糖鎖アスパラギンシ水溶液１０μｌ，４．１ｍＭ  ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＢＤ水溶液１０μｌを容器に取り，凍結乾燥した。この凍結乾燥品を５本用意し，これらにリン酸緩衝液５μｌを加えて溶解させ，次いて，これらにＥｎｄｏ−Ｍ緩衝液溶液５μｌを加え，それぞれ３７℃で１０，３０，６０，１２０，１８０分間反応させた。反応終了後，直ちに−８０℃で凍結して反応を停止させ，次いで精製水で２００倍に希釈してＨＰＬＣで分析し，シアルオリゴ糖鎖アスパラギンのＤＢＤ標識体（以下，ＳＧ−Ａｓｎ−ＤＢＤという）ピーク強度から最適反応時間を検討した。【００２０】  ＨＰＬＣ条件は以下の通りである。カラム：Ｋａｓｅｉｓｏｒｂ  ＬＣ  ＯＤＳ２０００（４．６ｍｍＩＤ  ×１５０ｍｍ），カラム温度：４０℃，流量：１．０ｍｌ／ｍｉｎ，移動層：０．１％トリフルオロ酢酸水溶液−０．１％トリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液（９５：５）３０分後（４０：６０），蛍光検出：励起波長４５０ｎｍ，蛍光波長５７０ｎｍ【００２１】  反応時間と得られたピークの積分値の関係は以下の通りで，Ｅｎｄｏ−Ｍの反応時間は３０分で最大に達した。
反応時間      積分値
１５分      １１，０００
３０分      ２４，０００
６０分      １６，０００
１２０分        ８，０００【００２２】  以上のようにＥｎｄｏ−Ｍを用いて，シアルオリゴ糖鎖アスパラギンシからアセチルキトビオース１残基を残して糖鎖をＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＢＤに転移させる反応の効率は３０分程度で最大となる。また，転移生成物は安定で，ＨＰＬＣを用いて蛍光検出することができる。さらにＨＰＬＣで分離，蛍光検出した後，ＭＳに導入して質量スペクトルを得ることができる。得られる質量スペクトルは糖鎖がまったく傷ついておらず，糖鎖構造の解明に極めて有用である。【００２３】  以下に本発明の好ましい実施例を記載するが，これは例示であり，これに限定されるものでないことは当業者には明らかである。【００２４】実施例１ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＢＤの合成
Ｎω−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−アスパラギン０．１５ｍｍｏｌを１００ｍＭホウ酸水溶液１０ｍｌに溶解させ，この溶液に４−フルオロ−７−ジメチルアミノスルホニル−２，１，３−ベンゾオキサジアゾール０．３８ｍｍｏｌをアセトニトリル１０ｍｌに溶解させた溶液を加え，６０℃で３時間反応させた。その後，減圧下，反応混合物からアセトニトリルを留去した。次いで，酢酸エチル２０ｍｌで３回洗浄，濃縮し，凍結乾燥した。黄色の残渣を得た。残渣を逆相カラム，次いで，ゲルろ過にて精製し，収率４０％でＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＢＤの黄色針状結晶３３．６１ｍｇを得た。【００２５】  得られたＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＢＤの物性を示す。融点：２４５−２５０℃；ＵＶ−ＶＩＳ［λｍａｘ，（Ｈ２Ｏ）］：４３０ｎｍ，２５５ｎｍ，２３０ｎｍ；ＦＬ［λｍａｘ（Ｈ２Ｏ）］：ｅｘ．４５０ｎｍ，ｅｍ．５７０ｎｍ；ＨＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ［ｍ／ｚ］：５６１．０［Ｍ＋１］＋【００２６】実施例２Ｎω−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎα−（７−ニトロ−２，１，３−オキサジアゾール−４−イル）−Ｌ−アスパラギン（以下，ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＮＢＤという）の合成
４−フルオロ−７−ジメチルアミノスルホニル−２，１，３−ベンゾオキサジアゾールに代えて４−フルオロ−７−ニトロ−２，１，３−ベンゾオキサジアゾールを用いて実施例１の操作を行い，ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＮＢＤの黄色針状結晶４１．０８ｍｇを得た。収率は５５％であった。【００２７】  得られたＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＮＢＤの物性を示す。融点：１６８−１７０℃；ＵＶ−ＶＩＳ［λｍａｘ，（Ｈ２Ｏ）］：４７５ｎｍ，３３８ｎｍ，２６８ｎｍ；ＦＬ［λｍａｘ（Ｈ２Ｏ）］：ｅｘ．４９０ｎｍ，ｅｍ．５４０ｎｍ；ＨＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ［ｍ／ｚ］：４９９．０［Ｍ＋１］＋【００２８】実施例３Ｎ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−２−（２−シアノベンゾ［ｆ］イソインドール）−４−アミノ−３−オキソ酪酸（以下，ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＮＤＡという）の合成
Ｎω−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−アスパラギン０．１５ｍｍｏｌを１００ｍＭホウ酸水溶液１０ｍｌに溶解させ，青酸ナトリウム８０ｍＭのホウ砂溶液６．７ｍｌにナフタレン−２，３−ジアルデヒド０．３ｍｍｏｌをアセトニトリル２０ｍｌに溶解させた溶液を加え，室温で２分間反応させた。その後，減圧下，反応混合物からアセトニトリルを留去した。次いで，酢酸エチル２０ｍｌで３回洗浄，濃縮し，凍結乾燥した。淡黄色の残渣を得た。残渣を逆相カラム，次いで，ゲルろ過にて精製し，収率６５％でＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＮＤＡの淡黄色針状結晶４９．７５ｍｇを得た。【００２９】  得られたＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＮＤＡの物性を示す。融点：２２７−２３０℃；ＵＶ−ＶＩＳ［λｍａｘ，（Ｈ２Ｏ）］：４４４ｎｍ，４２２ｎｍ，２５２ｎｍ；ＦＬ［λｍａｘ（Ｈ２Ｏ）］：ｅｘ．４２４ｎｍ，ｅｍ．４８５ｎｍ；ＨＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ［ｍ／ｚ］：５１１．０［Ｍ＋１］＋【００３０】実施例４Ｎω−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎα−（１−ピレニルスルホニル）−Ｌ−アスパラギン（以下，ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＰＳという）の合成
Ｎω−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−アスパラギン０．１５ｍｍｏｌを１００ｍＭ  トリエチルアミン水溶液１０ｍｌに溶解させ，１−ピレニルスルホニルクロリド０．３ｍｍｏｌをアセトニトリル２０ｍｌに溶解させた溶液を加え，室温で１時間反応させた。その後，減圧下，反応混合物からアセトニトリルを留去した。次いで，酢酸エチル２０ｍｌで３回洗浄，濃縮し，凍結乾燥した。白色の残渣を得た。残渣を逆相カラム，次いで，ゲルろ過にて精製し，収率４２％でＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＰＳの白色結晶３７．７５ｍｇを得た。【００３１】  得られたＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＰＳの物性を示す。融点：１４５−１４８℃；ＵＶ−ＶＩＳ［λｍａｘ，（Ｈ２Ｏ）］：３７８ｎｍ，３５１ｎｍ，２７９ｎｍ，２４２ｎｍ（ε＝１１５８６）；ＦＬ［λｍａｘ（Ｈ２Ｏ）］：ｅｘ．３３５ｎｍ，ｅｍ．３８０ｎｍ；ＨＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ［ｍ／ｚ］：６００．０［Ｍ＋１］＋【００３２】実施例５Ｎω−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎα−［（フルオレッセイン−５−イル）アミノチオカルボニル］−Ｌ−アスパラギン（以下，ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＦＩＴＣという）の合成
Ｎω−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−アスパラギン０．１５ｍｍｏｌを１００ｍＭトリエチルアミン水溶液１０ｍｌに溶解させ，フルオレッセイン−５−イソチオシアナート０．３ｍｍｏｌをアセトニトリル２０ｍｌに溶解させた溶液を加え，室温で１時間反応させた。その後，減圧下，反応混合物からアセトニトリルを留去した。次いで，酢酸エチル２０ｍｌで３回洗浄，濃縮し，凍結乾燥した。褐色の残渣を得た。残渣を逆相カラム，次いで，ゲルろ過にて精製し，収率４５％でＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＦＩＴＣの褐色結晶４８．９０ｍｇを得た。【００３３】  得られたＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＦＩＴＣの物性を示す。融点：１５６−１６０℃；ＵＶ−ＶＩＳ［λｍａｘ，（Ｈ２Ｏ）］：４７６ｎｍ，４５５ｎｍ，２３２ｎｍ；ＦＬ［λｍａｘ（Ｈ２Ｏ）］：ｅｘ．４９８ｎｍ，ｅｍ．５１９ｎｍ；ＨＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ［ｍ／ｚ］：７２５．０［Ｍ＋１］＋【００３４】実施例６Ｎω−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎα−（３，４−ジヒドロ−６，７−ジメトキシ−３−オキソキノキサリン−２−カルボニル）−Ｌ−アスパラギン（以下，ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＭＥＱという）の合成
Ｎω−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−アスパラギン７０．８μｍｏｌを含むＤＭＦ溶液１０ｍｌに炭酸カルシウム３００ｍｇ加え，この溶液に３，４−ジヒドロ−６，７−ジメトキシ−３−オキソキノキサリン−２−カルボニルクロリド１４１．５μｍｏｌを含むトルエン−ＤＭＦ（４：１）混合溶液２５ｍｌを徐々に滴下し，室温で３０分間反応させた。その後，減圧下，反応混き物からトリエチルアミン，ＤＭＦを留去した。次いで，酢酸エチル２０ｍｌで３回洗浄，濃縮し，凍結乾燥した。黄色の残渣を得た。残渣を逆相カラム，次いで，ゲルろ過にて精製し，収率４０％でＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＭＥＱの黄色結晶１６．４５ｍｇを得た。【００３５】  得られたＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−ＤＭＥＱの物性を示す。融点：１９１−１９３℃；ＵＶ−ＶＩＳ［λｍａｘ，（Ｈ２Ｏ）］：４０５ｎｍ，３２５ｎｍ，２４６ｎｍ，２１８ｎｍ；ＦＬ［λｍａｘ（Ｈ２Ｏ）］：ｅｘ．４１６ｎｍ，ｅｍ．４８７ｎｍ；ＨＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ［ｍ／ｚ］：５８２．０［Ｍ＋１］＋【００３６】実施例７４−｛４−［Ｎω−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎα−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−アスパラギニル］ピペリジノ｝−７−ジメチルアミノスルホニル−２，１，３−ベンゾオキサジアゾール（以下，ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−Ｂｏｃ−Ｐｚ−ＤＢＤという）の合成
Ｎω−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎα−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−アスパラギン０．１２ｍｍｏｌを４０％ＤＭＦアセトニトリル溶液１０ｍｌに溶解させ，４−ピペリジノ−７−ジメチルアミノスルホニル−２，１，３−ベンゾオキサジアゾール０．３ｍｍｏｌをアセトニトリル１５ｍｌに溶解させた溶液を加え，次いで，トリフェニルホスフィン３１２．９ｍｇ，２，２’−ジピリジルジスルフィド２６２．８ｍｇをアセトニトリル３０ｍｌに溶解させた溶液を加え，室温で０．５時間反応させた。減圧下，反応混合物からアセトニトリルを留去した。次いで，ジクロロメタン２０ｍｌで３回洗浄，濃縮し，凍結乾燥した。黄色の残渣を得た。残渣を逆相カラム，次いで，ゲルろ過にて精製し，収率４５％でＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−Ｂｏｃ−Ｐｚ−ＤＢＤの黄色針状結晶３９．３５ｍｇを得た。【００３７】  得られたＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎ−Ｂｏｃ−Ｐｚ−ＤＢＤの物性を示す。融点：１４７−１５２℃；ＵＶ−ＶＩＳ［λｍａｘ，（Ｈ２Ｏ）］：４４０ｎｍ，２６３ｎｍ，２３２ｎｍ；ＦＬ［λｍａｘ（Ｈ２Ｏ）］：ｅｘ．４７０ｎｍ，ｅｍ．５７７ｎｍ；ＨＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ［ｍ／ｚ］：７２９．０［Ｍ＋１］＋