(57)【要約】      （修正有）【課題】  エリプシン誘導体の中から、抗腫瘍作用を有する誘導体を探索し、該誘導体を有効成分として含有するＤＮＡ標的型の抗腫瘍剤の提供。【解決手段】  以下の一般式（１）で表される化合物を有効成分とする抗腫瘍剤。2006321724.tif 000019【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（１）〜（３）で表される化合物のうちいずれか１種以上を有効成分として含有する抗腫瘍剤。
【化１】
2006321724.tif 000013
【化２】
2006321724.tif 000014
【化３】
2006321724.tif 000015
【請求項２】
以下の一般式（１）で表される化合物。
【化４】
2006321724.tif 000016
【請求項３】
以下の一般式（２）で表される化合物。
【化５】
2006321724.tif 000017
【請求項４】
以下の一般式（３）で表される化合物。
【化６】
2006321724.tif 000018
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２位置換エリプチシン誘導体を有効成分とする抗腫瘍剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
エリプチシンは、以下に示す化学構造を有する化合物であり、
【０００３】
【化１】
2006321724.tif 000002
キョウチクトウ等の植物に含まれるアルカロイドの一種である。
エリプチシンあるいはその誘導体は、古くから抗腫瘍作用を有することが知られ、例えば、エリプチシン及び９−メトキシエリプチシンは、マウス白血病細胞Ｌ−１２１０やマウス肉腫細胞Sarcome180に対し有効であり（非特許文献１参照）、また、９−ヒドロキシエリプチシンは、上記９−メトキシエリプチシンより、マウス白血病細胞Ｌ−１２１０に対してさらに高い活性を有することも報告されている（特許文献１、２参照））。
さらに、９−ヒドロキシエリプチシンの誘導体としては、その１位にジアミノアルキルアミノカルボニル基を有するもの（特許文献３，４参照）等が知られている。また、エリプチシン２位に置換基を有するものとしては、エリプチシン誘導体の２位に、カルボキシエチル基を導入したもの（非特許文献２参照、あるいはα−Ｌ−アラビノピラノシル基を導入したもの（特許文献５参照）等を挙げることができる。
一方、エリプチシン及びその誘導体は、ＤＮＡ塩基対間にインターカレートする能力を有し、これを利用して、さらにアルキル化剤等の抗腫瘍作用を有する化合物をエリプチシンに結合せしめ、ガン細胞に対する特異性をより高めたＤＮＡ標的型の抗腫瘍剤の研究も行われている。
しかし、これらのエリプチシン誘導体の研究においては、未だ満足する抗腫瘍作用を有する誘導体は得られていない。
【０００４】
【非特許文献１】J.Medicinal Chemistry 18(7) P.755-760 (1975）
【非特許文献２】「Bull.Cancer（Paris)Vol.68,P.437-441(1981)
【特許文献１】特公昭５８−３５１９６号公報、
【特許文献２】英国特許第1436080号明細書
【特許文献３】特開平１０−１９５０７３号公報
【特許文献４】特開平６−２１１８５２号公報
【特許文献５】特開平２−１９１２９７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、上記従来技術の現状に鑑み、エリプチシン誘導体として、顕著な抗腫瘍作用を有する誘導体を見いだし、そのインターカレーターとしての能力を利用して、腫瘍細胞の増殖を効率的に抑制しうる、ＤＮＡ標的型の抗腫瘍剤を新たに提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、インターカレーターとしての機能を有するエリプチシン誘導体に着目し、これを用いてＤＮＡ塩基対周辺にアルキル化剤を運搬して、腫瘍細胞のＤＮＡの合成を阻害し、効率的にガン細胞の増殖を抑制する手段について研究してきた。このため、種々のエリプチシン誘導体を合成し、これらエリプチシン誘導体にメチルニトロソユリア等のアルキル化剤を結合せしめ、その腫瘍細胞に対する毒性を調べたが、その研究過程において、特定のエリプチシン誘導体が、極めて顕著な抗腫瘍活性を有するという知見を得て、本発明を完成させた。
【０００７】
すなわち本発明は以下のとおりである。
１．以下の一般式（１）又は（２）で表される化合物を有効成分として含有する抗腫瘍剤。
【０００８】
【化２】
2006321724.tif 000003
【０００９】
【化３】
2006321724.tif 000004
【００１０】
【化４】
2006321724.tif 000005
２．以下の一般式（１）で表される化合物。
【００１１】
【化５】
2006321724.tif 000006
３．以下の一般式（２）で表される化合物。
【００１２】
【化６】
2006321724.tif 000007
４．以下の一般式（３）で表される化合物。
【００１３】
【化７】
2006321724.tif 000008
【発明の効果】
【００１４】
本発明の一般式（１）で表されるエリプチシン誘導体は特に、Sarcoma180細胞に対して顕著な細胞毒性を有し、また、一般式（２）で表されるエリプチシン誘導体は、Sarcoma180細胞に加え、ヒト子宮頸ガン由来のHeLa S-3細胞にも顕著な細胞毒性を示す。さらに、一般式（３）で表されるエリプチシン誘導体は、一般式（２）で表されるエリプチシン誘導体よりも顕著な細胞毒性を示す(Sarcoma 180)ことに加え、水溶性が良好である。また、本発明の一般式（１）および（２）の化合物は、それ自体インターカレーターであり、ＤＮＡ標的型の抗腫瘍剤として極めて有用なものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明において抗腫瘍剤として用いる化合物は、上記一般式（１）〜（３）で表され、いずれも、エリプチシンの２位に、窒素含有置換基を有するものである。
一般式（１）の化合物は、エリプチシン５位にメトキシカルボニル基を有し、２位の窒素原子に２−アミノエチル基が置換された４級アンモニウム化合物である点に構造上の特徴を有し、該化合物は腫瘍細胞、特にSarcoma180細胞に対して顕著な細胞毒性を有する。
これに対して、２位に２−アミノエチル基が置換されたものであっても５位に置換基を有しないもの、あるいは５位に分子鎖長が長いリンカーを有するものは、細胞毒性が低下する。また、上記２−アミノエチル基のアミノ基がさらに置換されているもの、あるいはアルキル鎖がエチル鎖よりも長い場合も顕著な細胞毒性を示さず、２位の置換基がアルキル基あるいはアルケニル基である場合も活性が低下する。
一方、陰イオンのイオン種は、その活性にあまり影響を与えないことが実験により確かめられている。該イオン種を具体的に挙げれば、塩素イオンあるいは酢酸イオン等である。
また、一般式（２）の化合物は、エリプチシンの２位に２−アミノエチルカルバモイル基を有するか、あるいは該置換基の２−アミノ基をＮ−メチルウレイド基又はＮ−メチル−Ｎ−ニトロソウレイド基に変換した置換基を有するものである。
これら一般式（２）の化合物は、Sarcoma180細胞に加え、HeLaS-3細胞にも顕著な細胞毒性を有する他、Ｌ−１２１０細胞にもある程度の細胞毒性を有し、広い範囲の腫瘍細胞に対して活性を有する。
一般式（３）の化合物は、一般式（２）の化合物の９位が、水酸基で置換された化合物であり、一般式（２）で表されるエリプチシン誘導体よりも顕著な細胞毒性を示す(Sarcoma 180)ほか、良好な水溶性を有する。
本発明の上記化合物は、以下の合成法により得られる。
【００１６】
〔一般式（１）の化合物の合成〕
一般式（１）の化合物の合成法について、図１に基づき以下に説明する。
インドール(4)を出発原料として、例えば、ベンゼンスルホニルのような保護基を用いてインドールの窒素の保護を行い、その後インドールの3位をリチオ化後、熱転位により2位リチオ体とし、グリオキシレート鎖を導入することで（6）を生成させる。続いて、加水分解により（7）とした後、カルボニル基のWolff-Kishner還元、トリメチルシリルジアゾメタンによるエステル化により（9）を合成し、3-アセチルピリジンとのカップリング反応により（10）を生成させ、クロロエチルアミンの窒素原子をAc、Boc、Nsなどで保護したリンカーを用いて、ピリジンの窒素の4級化を行い、閉環反応、脱水素反応を経て（11）とする。保護基はAc基のような嵩高くないものを用いたほうが最良の結果を与える。その後、塩酸／メタノール溶液で、脱保護を行い(1a)を得る。(1a)は、例えば、酢酸銀をもちいることによりカウンターアニオンをクロライドからアセテート(1b)に変換できる。カウンターアニオンの種類は、使用する塩の種類により、適宜変更できる。
【００１７】
〔一般式（２）の化合物の合成〕
一般式（２）の化合物の合成法について、図２に基づき以下に説明する。
インドール(4)を出発原料として、酸性条件下2,5-ヘキサジオンによりcarbazole環12を構築し、Vilsmeier条件による、3位へのホルミル基の導入を行い13を生成させる。続いてイミンの生成、還元、NsCl（４−ニトロベンゼンスルホン酸クロリド）によるアルキル化を行い、14を合成後、酸性条件下での閉環反応を行う。閉環反応後、直ちにNs基が脱離し、目的のエリプチシン15が得られる。つづいてアシルクロライドによるピリジン環窒素の4級化、還元反応により1,2-ジヒドロ体16とし、エチレンジアミンによる求核置換反応により(2a)を合成する。(2a)は酸性条件で容易に脱アシル化が起きることから、アミノシリカゲルクロマトグラフィーにより単離した。その後、p-ニトロフェニル-N-メチルカルバメート、またはサクシンイミジル-N-メチルニトロソカルバメートで処理することで(2b),(2c)を得ることができる。
【００１８】
〔一般式（３）の化合物の合成〕
一般式（３）の化合物の合成法について、図３に基づき以下に説明する。
上記エリプチシン(15)を出発原料として、Vilsmeier型反応により9位にホルミル基を導入し17を合成後、ホルミル基をBaeyer-Villiger酸化によりギ酸エステルとし、これを加水分解することにより、9-ヒドロキシエリプチシン(18)を合成する。その後アルコールのTBS保護、リンカー導入反応、還元を行い20を合成する。つづいて、TBSの脱保護、エチレンジアミンによる求核置換反応により(3a)を生成させ、さらに、所定のウレイド基を導入することで(3b), (3c)とすることができる。
本発明の一般式（１）〜（３）の化合物は、細胞膜及び細胞核膜への透過性が良好であり、このことが抗腫瘍活性の向上に寄与していると考えられる。
【実施例】
【００１９】
以下に、本発明の実施例を示すが、本発明はこれら実施例により限定されるものではない。
〔実施例１〕
一般式（１）の化合物の合成（図１参照）
１）Ｎ−ベンゼンスルホニルインドール(Ｎ-benzensulfonylindole )(5)
NaOH (6.75g, 0.17mol)、tetra-n-butylammonium hydrogensulfate (0.47g, 0.0014mol)、CH2Cl2 60mlを加え0℃に冷却し、インドール（indole） (4) (6.06g, 0.051mol)を滴下した。この温度を保ったまま、Benzenesulfonyl chloride (6.08g, 0.050mol)のCH2Cl2 (40ml)溶液を20 minかけて滴下し、3 h撹拌させた。反応混合物を吸引ろ過し、ろ液を濃縮後、得られた固体をMeOHにて洗浄し、Ｎ−ベンゼンスルホニルインドール（5） (11.4g, 0.045mol)を得た（収率 ： 89 %）。
＜Ｎ−ベンゼンスルホニルインドールの物性データ＞
mp 77.8-80.5 ℃; IR (KBr) ν/ cm-1 3137(m), 1446 (s), 1376 (s), 1171 (s), 1126 (s); 1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ 6.64 (1H, d, J = 4Hz, indolyl 3-position ), 7.21-8.01 (10H, m, indolylphenyl -H); MS (FAB+) m/z 257 (M+).
【００２０】
２）Ｎ−ベンゼンスルホニル−２−メトキサリルインドール（N-benzensulfonyl-2-methoxalylindole） (6)
ジイソプロピルアミン(2.67g, 26.3mmol)、THF 50mlを加え、-75℃に冷却した後、15%n-BuLi / Hexane (8.97g, 21.0mmol)をゆっくりと加えた。その温度を保ったまま30min撹拌し、Ｎ−ベンゼンスルホニルインドール（5） (5.15g, 20.0mmol)を55mlのTHFに溶かした溶液を滴下した。さらに、-70℃で1.5 h撹拌を続けた後、1 h以上かけて15℃に暖め、再び-50℃まで冷却した。次に、あらかじめシュウ酸ジメチル (9.73g, 82.4mmol)とTHF 25mlを加えて10℃に保っていたフラスコに、1 h以上の時間をかけて前述の求核体を含む反応混合物をテフロン（登録商標）チューブを介し、Arガス圧を用いて滴下した。その後ゆっくりと室温にし、さらに2 h撹拌し、H2Oで反応をクエンチした。得られた反応混合物をEtOAcで抽出し、有機層をMgSO4上で乾燥し、ろ過、濃縮後、MeOHで結晶を洗浄して純粋なＮ−ベンゼンスルホニル−２− メトキサリルインドール（6） (4.26g, 12.4mmol)を得た（収率 ： 62%）。
＜Ｎ−ベンゼンスルホニル−２−メトキサリルインドールの物性データ＞
mp 108.5-109.4 ℃; IR (KBr) ν/ cm-1 1740 (s, ester C=O), 1686 (s, keto C=O); 1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ 3.92 (3H, s, CH3), 7.19-8.00 (10H, m, indolyl,phenyl); MS (FAB+) m/z 344 (M+1).
【００２１】
３）インドール−２−グリオキシル酸（ Indole-2-glyoxylic acid ）(7)
アリーン冷却器を取り付けた丸底フラスコにＮ−ベンゼンスルホニル−２− メトキサリルインドール（6） (2.00g, 5.83mmol)と、あらかじめ調製しておいたK2CO3 8gのMeOH 200ml、H2O 66ml溶液を加え、8h還流した。その後、減圧下濃縮して、MeOHを完全に取り除いたあと、少量の水を加え、それを10% HClaq.で中和した。(pH=2〜3でインドール−２−グリオキシル酸（7）の結晶が析出)。EtOAcで抽出をし、有機層をMgSO4上で乾燥し、濃縮後、CH2Cl2/cyclohexane混合溶媒から再結晶し、インドール−２−グリオキシル酸（7） (9.70g, 5.13mmol)を得た（収率 ： 88%）。
＜インドール−２−グリオキシル酸の物性データ＞
mp 162.1-164.0 ℃; IR (KBr) ν/ cm-1 3343 (s, NH), 3500-2899 (br, dimer OH), 1715 (s, carboxyl C=O), 1642 (s, keto C=O), 1618 (s), 1422 (m), 1281 (m), 1226 (m), 1159 (m), 1140 (m); 1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ 7.17-7.22 (3H, m, indolyl 3, 5, 6-H), 7.45 (1H, d, J = 4Hz, indolyl 4-H), 7.77 (1H, d, J = 8Hz, indolyl 7-H), 8.10 (1H, br, NH), 9.46 (1H, br, OH); MS (FAB+) m/z 190 (M+1).
【００２２】
４）（１Ｈ−インドール−２−イル）−酢酸メチルエステル（ (1H-Indol-2-yl)-acetic acid methyl ester） (9)
アリーン冷却器とリービッヒ冷却器を取り付けた3つ口フラスコ内に、インドール−２−グリオキシル酸（7） (0.30g, 1.59mmol)、80%Hydrazine hydrate 1.49ml、KOH 1.65g、EtOH 32mlを加え、5 h還流した。その後、アリーン冷却器の冷却水を止め、溶媒を蒸留して取り除いた後、反応温度を150℃にして45 min撹拌した。反応混合物を室温まで冷やした後、水にとかし、-5℃程度の低温を保ったまま、5% HClaq.で中和した(pH=2〜3で２−インドール酢酸の結晶が析出)。反応混合物をEt2Oで抽出し、MgSO4上で乾燥した後、15℃以下で濃縮し溶媒を取り除き、これを次のエステル化反応に単離することなく用いた。２−インドール酢酸の粗生成物の入った丸底フラスコに、MeOH 3.3ml、Benzene 12mlを加えた後、室温で2.0M TMSCHN2 の Hexane溶液 (1.00ml, 2.60mmol)を滴下して、30 min撹拌した。反応を酢酸を加えることでクエンチした後、Et2Oで抽出、有機層をNa2CO3aq.で洗浄後MgSO4上で乾燥し、ろ過、濃縮した。得られた反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/EtOAc:Hexane=6:4)で精製し、（１Ｈ−インドール−２−イル）−酢酸メチルエステル（9） (0.23g, 1.21mmol)を得た（合計収率(7)→(9)：76%）。
＜（１Ｈ−インドール−２−イル）−酢酸メチルエステルの物性データ＞
mp 71.0-72.2 ℃; IR (KBr) ν/ cm-1 3352 (s, NH), 2954 (m), 1720 (s, C=O), 1456(m), 1432 (m) 1429 (m), 1267 (m); 1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ 3.74 (3H, s, Me), 3.82 (2H, s, CH2), 6.34 (s, indolyl 3-H), 7.05-7.12 (2H, indolyl 5, 6-H), 7.32 (1H, d, J = 8Hz, indolyl 4-H), 7.54 (1H, d, J = 7Hz, indolyl 7-H), 8.79 (br, NH); MS (FAB+) m/z 189 (M+).
【００２３】
５）２−インドリル−３−ピリジルエテン誘導体（2-Indolyl-3-pyridyl-ethene derivative（10）
アリーン冷却器を取り付けた3つ口フラスコにH2SO4を入れ、（１Ｈ−インドール−２−イル）−酢酸メチルエステル（9） (0.60g, 3.17mmol)、MeOH 30ml、3-acetyl pyridine(1.09g, 9.00mmol)を加え撹拌した。酸性下で6.5 h還流し、室温に戻した後MeOHを除去し、Na2CO3aq.を用いて反応混合物を中和した。抽出はEt2Oで行い、有機層をMgSO4上で乾燥し、ろ過、濃縮して得られた反応混合物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/EtOAc)で精製し、２−インドリル−３−ピリジルエテン誘導体（10） (0.61g, 2.09mmol)を得た（収率 ： 66%）。
＜２−インドリル−３−ピリジルエテン誘導体の物性データ＞
mp 159.6-160.6 ℃; IR (KBr) ν/ cm-1 3138 (m, NH), 1741 (s, C=O), 1457(m), 1324 (m)1201 (m), 1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ 3.72(3H, s, CH3), 3.76 (2H, s, CH2), 5.57, 5.83 (2H, s, ethylene CH2), 7.00(1H, dd,indolyl 5-H), 7.12-7.26 (3H, m, indolyl 6-H, pyridyl 5, 6-H), 7.30 (1H, d, J = 8Hz, indolyl 4-H), 7.61 (1H, d, J = 8Hz, indolyl 7-H), 8.54 (1H, d, J = 4Hz, pyridyl 4-H), 8.70 (1H, s, pyridyl 2-H), 9.02 (1H, br, NH); MS (FAB+) m/z 293 (M+1).
【００２４】
６）２−（２−アセチルアミノエチル）−５−メトキシカルボニル−１１−メチル−６Ｈ−ピリド［４，３ｂ］カルバゾール−２−イウムクロライド（2-(2-Acetylaminoethyl)-5-methoxycarbonyl-11-methyl-6H-pyrido[4,3-b]carbazol-2-ium chloride） (11)
アリーン冷却器を取り付けた3つ口フラスコに、インドールピリジルエテン誘導体（10） (0.100g, 0.342mmol) 、DMF 1ml、N-アセチルクロロエチルアミン (0.410g, 3.42mmol)を加え、110℃で5時間撹拌後、得られたピリジニウム塩をMeOH 5mlに溶かし、さらにCH3ONa (0.028g, 0.513mmol) /MeOH (5ml)溶液を滴下し、室温で1 h撹拌した。次に、3-エトキシカルボニル-1-メチルピリジニウムクロリド(0.103g,0.513mmol)/MeOH (5ml)溶液を滴下し、さらに室温で24 h撹拌した。得られた反応混合物を、ODSカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/MeOH:H2O=20:80)で精製し、２−（２−アセチルアミノエチル）−５−メトキシカルボニル−１１−メチル−６Ｈ−ピリド［４，３ｂ］カルバゾール−２−イウムクロライド（11） (0.100g, 0.243mmol)を得た（（７）からの合計収率 ： 71 %）。
＜２−（２−アセチルアミノエチル）−５−メトキシカルボニル−１１−メチル−６Ｈ−ピリド［４，３ｂ］カルバゾール−２−イウムクロライドの物性データ＞
decomp. 220 ℃; 1H-NMR (500 MHz, D2O) δ 1.78 (3H, s, COMe), 1.97 (3H, s, Me), 3.56 (2H, t, J = 5.5 Hz, N+CH2CH2), 3.63 (3H, s, OMe), 4.28 (2H, t, J = 5.5 Hz, N+CH2CH2), 6.55 (1H, d, J = 7 Hz, 10-H), 6.72 (1H, t, J = 7 Hz, 9-H), 6.97 (1H, t, J = 7 Hz, 8-H), 7.10 (1H, d, J = 7 Hz, 7-H), 7.81 (1H, d, J = 7 Hz, 4-H), 8.37 (1H, d, J = 7 Hz, 3-H), 9.51 (1H, d, J = 7 Hz, 1-H); MS (FAB+) m/z 376 (M+ - Cl-); HRMS calcd for M+ - Cl- (C22H22N3O3) 376.1661 found 376.1665
【００２５】
７）２−（２−アミノエチル）−５−メトキシカルボニル−１１−メチル−６Ｈ−ピリド［４，３ｂ］カルバゾール−２−イウムクロライド（2-(2-Aminoethyl)-5-methoxycarbonyl-11-methyl-6H-pyrido[4,3-b]carbazol-2-ium chloride） (1a)
アリーン冷却管をつけた丸底フラスコに２−（２−アセチルアミノエチル）−５−メトキシカルボニル−１１−メチル−６Ｈ−ピリド［４，３ｂ］カルバゾール−２−イウムクロライド（11） (20.0mg, 0.053mmol) 、1.2M HCl / MeOH(10ml)を加え、72時間還流した。得られた反応混合物を濃縮し、ODSカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/MeOH:H2O=10: 90)で精製し２−（２−アミノエチル）−５−メトキシカルボニル−１１−メチル−６Ｈ−ピリド［４，３ｂ］カルバゾール−２−イウムクロライド(1a) (18.5mg, 0.050mmol)を得た（収率 ： 95 %）。
＜２−（２−アミノエチル）−５−メトキシカルボニル−１１−メチル−６Ｈ−ピリド［４，３ｂ］カルバゾール−２−イウムクロライドの物性データ＞
decomp. 210 ℃; 1H-NMR (500 MHz, D2O) δ 1.91 (3H, s, CH3), 3.50 (2H, t, J = 5.2 Hz, N+CH2CH2), 3.61 (3H, s, OCH3), 4.54 (2H, t, J = 7.5 Hz, N+CH2CH2), 6.39 (1H, t, J = 7.5 Hz, H9), 6.55 (1H, t, J = 7.5 Hz, H8), 7.85 (1H, d, J = 7.5 Hz, H10), 7.85 (1H, d, J = 7.5 Hz, H7), 8.30 (1H, d, J = 7.5 Hz, H4), 8.30 (1H, d, J = 7.5 Hz, H3), 8.70 (1H, s, H1); MS (FAB+) m/z 334 (M+ - Cl-); HRMS calcd for M+-Cl- (C20H20N3O2) 334.1556, found 334.1546.
【００２６】
８）２−（２−アミノエチル）−５−メトキシカルボニル−１１−メチル−６Ｈ−ピリド［４，３ｂ］カルバゾール−２−イウムアセテート（2-(2-Aminoethyl)-5-methoxycarbonyl-11-methyl-6H-pyrido[4,3-b]carbazol-2-ium acetate） (1b)
丸底フラスコに、２−（２−アミノエチル）−５−メトキシカルボニル−１１−メチル−６Ｈ−ピリド［４，３ｂ］カルバゾール−２−イウムクロライド(1a) (35.8mg, 0.098mmol) 、酢酸銀(33.72mg, 2.02mmol)、H2O (3ml)を入れ5分還流した。得られた反応混合物セライトを用いて脱塩し、ODSカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/MeOH:H2O=5:95)で精製し、２−（２−アミノエチル）−５−メトキシカルボニル−１１−メチル−６Ｈ−ピリド［４，３ｂ］カルバゾール−２−イウムアセテート(1b) (130mg, 0.076mmol)を得た（収率 ： 78 %）。
＜２−（２−アミノエチル）−５−メトキシカルボニル−１１−メチル−６Ｈ−ピリド［４，３ｂ］カルバゾール−２−イウムアセテートの物性データ＞
1H-NMR (500 MHz, D2O) δ 1.76 (3H, s, MeCO), 2.26 (3H, s, Me), 3.12 (2H, t, J = 5.3 Hz, N+CH2CH2), 3.75 (3H, s, OMe), 4.32 (2H, t, J = 5.3 Hz, N+CH2CH2), 6.77 (1H, dd, J = 7.6, 7.9 Hz, 9-H), 6.92 (1H, dd, J = 7.6, 8.1 Hz, 8-H), 7.15 (1H, d, J = 7.9 Hz, 10-H), 7.41 (1H, d, J = 8.1 Hz, 7-H), 7.92 (1H, d, J = 7.7 Hz, 4-H), 8.54 (1H, d, J = 7.7 Hz, 3-H), 8.79 (1H, s, 1-H); MS (FAB+) m/z 334 (M+ - AcO-); HRMS calcd for M+ - Cl- (C20H20N3O2) 334.1556, found 334.1546.
【００２７】
〔実施例２〕
一般式（２）の化合物の合成（図２参照）
１）１，４−ジメチル−９Ｈ−カルバゾール（1,4-Dimethyl-9H-carbazole） (12)
反応容器内に、インドール (4) (0.50g, 4.27mmol)、p-トルエンスルホン酸一水和物(0.45g, 2.61mmol)、2,5-ヘキサジオン(0.49g, 4.30mmol)、EtOH (30ml)を加えた後、1.5 h 還流させた。反応混合物を濃縮後、Et2Oにて抽出、有機層をMgSO4上で乾燥した。得られた反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/EtoAc:Hexane=2:8)で精製し、１，４−ジメチル−９Ｈ−カルバゾール（12） (0.40g, 2.09mmol)を得た（収率 ： 49 %）。
＜１，４−ジメチル−９Ｈ−カルバゾールの物性データ＞
mp 97.1-97.8 ℃; 1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ 8.10 (1H, d, J = 8.5Hz, 5-H ), 7.91 (1H, s, NH ), 7.40 (1H, d, J = 8.5Hz, 8-H ), 7.33 (1H, t, J = 8.5Hz, 7-H ), 7.17 (1H, t, J = 8.5Hz, 6-H ), 7.06 (1H, d, J = 7Hz, 2-H), 6.86 (1H, d, J = 7Hz, 3-H ), 2.78 (3H, s, 4-Me), 2.64 (3H, s, 1-Me); MS (FAB+) m/z 196 (M+1).
【００２８】
２）１，４−ジメチル−９Ｈ−カルバゾール−３−カルボアルデヒド（1,4-Dimethyl-9H-carbazole-3-carbaldehyde ）(13)
反応容器に１，４−ジメチル−９Ｈ−カルバゾール（ 12） (0.50g, 2.56mmol)、N-methylformanilide(0.48g, 3.55mmol)、POCl3(0.47g, 3.06mmol)、o-dichlorobenzene 5mlを加えた後、100℃で4 h 撹拌した。反応混合物を0℃に冷却後、H2O、benzeneを加え抽出した。有機層をMgSO4上で乾燥し、濃縮後、得られた反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/ CHCl3)で精製し１，４−ジメチル−９Ｈ−カルバゾール−３−カルボアルデヒド（13） (0.44g, 2.00mmol)を得た（収率 ： 78 %）
＜１，４−ジメチル−９Ｈ−カルバゾール−３−カルボアルデヒドの物性データ＞
mp 214-215 ℃; 1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ 10.39 (1H, s, CHO ), 8.22 (1H, s, NH ), 8.21 (1H, d, J = 7.5Hz, H5), 7.70 (1H, s, H2), 7.46 (1H, d, J = 7.5Hz, H8), 7.41 (1H, t, J = 7.5Hz, H7), 7.25 (1H, t, J = 7.5Hz, H6), 3.18 (3H, s, 1-Me), 2.51 (3H, s, 4-Me); MS (FAB+) m/z 224 (M+1).
【００２９】
３）Ｎ−（２，２−ジエトキシエチル）−Ｎ−（１，４−ジメチル−９Ｈ−カルバゾール−３−イルメチル）−４−ニトロベンゼンスルホンアミド（ N-(2,2-Diethoxyethyl)-N-(1,4-dimethyl-9H-carbazol-3-ylmethyl)-4-nitrobenzenesulfonamide） (14)
Dean-stark管を取り付けた3つ口フラスコ内に、１，４−ジメチル−９Ｈ−カルバゾール−３−カルボアルデヒド（13） (0.05g, 0.22mmol)、aminoacetaldehydediethoxyacetal (0.033g, 0.24mmol)、C6H6 (20ml)を加え、系内の水を除去しつつ、2 h還流した。系内を室温まで冷却し、濃縮後、Ar雰囲気中、反応混合物をMeOH 5mlに溶かし、NaBH4 (0.08g, 2.11mmol)をゆっくり加え、室温で2 h撹拌した。その後、濃縮し、H2O 20mlを加え、C6H6にて抽出した。得られた有機層をMgSO4上で乾燥し、ろ過、濃縮した。次に、反応混合物をCH3CNに溶かし、NsCl (0.15g, 0.677mmol)、pyridine (0.03ml)を加え、室温で終夜撹拌した。得られた反応混合物を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/ EtoAc:Hexane=3:7)で精製し、Ｎ−（２，２−ジエトキシエチル）−Ｎ−（１，４−ジメチル−９Ｈ−カルバゾール−３−イルメチル）−４−ニトロベンゼンスルホンアミド（14） (0.10g, 0.19mmol)を得た（収率 ： 85 %）。
＜Ｎ−（２，２−ジエトキシエチル）−Ｎ−（１，４−ジメチル−９Ｈ−カルバゾール−３−イルメチル）−４−ニトロベンゼンスルホンアミドの物性データ＞
decomp. 175.0-177.1 ℃; 1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ 8.08-6.99 (9H, m, PhH), 8.00 (1H, s, NH), 4.80 (2H, s, ArCH2N), 4.49 (1H, t, J = 5.5Hz, CH(OEt)2), 3.55 (2H, d, J = 5.5Hz, CH2CH(OEt)2), 3.38 (4H, q, J = 7Hz, O(CH2CH3)2), 2.66 (3H, s, 1-Me), 2.33 (3H, s, 4-Me), 1.07 (6H, t, J = 7Hz, O(CH2CH3)2); MS (FAB+) m/z 525 (M+); HRMS calcd for M+ (C27H31N3O6S) 525.1933 found 525.1921.
【００３０】
４）エリプチシン（Ellipticine） (15)
丸底フラスコに、Ｎ−（２，２−ジエトキシエチル）−Ｎ−（１，４−ジメチル−９Ｈ−カルバゾール−３−イルメチル）−４−ニトロベンゼンスルホンアミド（14） (100mg, 0.19mmol)、6M HCl / dioxane (1:4) (20ml)を入れ、3 h還流した。室温まで冷却、NaHCO3.にて中和した後、CHCl3で抽出、有機層をNa2SO4上で乾燥し、ろ過、濃縮した。得られた反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/ CHCl3)で精製し、エリプチシン（15 ）(42,6mg, 0.17mmol)を得た（収率 ： 91%）。
＜エリプチシンの物性データ＞
decomp. 309-311 ℃; 1H-NMR (500MHz, CD3OD) δ 9.41 (1H, s, H1), 8.19-8.18 (2H, m), 7.84 (1H, d, J = 6.5Hz), 7.41 (2H, m), 7.15 (1H, d, J = 6.5Hz), 3.06 (3H, s, 11-Me), 2.62 (3H, s, 5-Me); MS (FAB+) m/z 247 (M+1).
【００３１】
５）２−（ｐ−ニトロフェノキシカルボニル）−１，２−デヒドロエリプチシン（2-(p-nitrophenoxycarbonyl)-1,2-dihydroellipticine) (16)
エリプチシン（15）(50.0mg, 0.203mmol)、THF (30ml)を入れ-80℃まで冷却した。p-nitrophenylchloroformate(120.0mg, 0.60mmol)のTHF溶液をゆっくり滴下し、30 min撹拌した。次にNaBH3CN (60.0mg, 0.95mmol)のTHF溶液をゆっくり滴下し、30 min撹拌した。その後H2O 10mlを入れ、系内を室温にもどした。反応混合物にCHCl3を100ml加え、有機層を1M HCl、Na2CO3aq.、H2Oで洗浄、有機層をNa2SO4上で乾燥し、ろ過、濃縮した。得られた反応混合物をMeOHにて再結晶し、２−（ｐ−ニトロフェノキシカルボニル）−１，２−デヒドロエリプチシン（16） (75.5mg, 0.183mmol)を得た（収率： 90%）。
＜２−（ｐ−ニトロフェノキシカルボニル）−１，２−デヒドロエリプチシンの物性データ＞
dec. 234-235 ℃; 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.9 (1H, s, NH), 8.33 (2H, d, J = 9 Hz, p-NO2Ph-H), 8.14 (1H, dd, J = 7.5 Hz, H10), 7.63, 7.58 (2H, d, J = 9 Hz, p-NO2Ph-H), 7.51 (1H, d, J = 7.5 Hz, H7), 7.37 (1H, dd, J = 7.5 Hz, H9), 7.15 (1H, dd, J = 7.5 Hz, H8), 6.95 (1H, d, J = 9 Hz, H3), 6.36 (1H, d, J = 9 Hz, H4), 5.22, 5.02 (2H, s, H1), 2.71 (3H, s, 11-Me), 2.51 (3H, s, 5-Me); MS (FAB+) m/z 413 (M+); HRMS calcd for M+ (C24H19N3O4) 413.1376 found 413.1371
【００３２】
６）２−（２−アミノエチル）カルバモイル−１，２−デヒドロエリプチシン（2-(2-aminoethyl)carbamoyl-1,2-dihydroellipticine) (2a)
Ar置換した丸底フラスコに、２−（ｐ−ニトロフェノキシカルボニル）−１，２−デヒドロエリプチシン16 (30.0mg, 0.073mmol)、DMF (1ml)を入れ、EDA (20.0mg, 0.33mmol)をゆっくり滴下し、3 h撹拌した。その後反応混合物をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/ CHCl3 : MeOH = 9 : 1)にて精製し２−（２−アミノエチル）カルバモイル−１，２−デヒドロエリプチシン(2a) (13.2mg, 0.04mmol)を得た（収率 ： 53%）。
＜２−（２−アミノエチル）カルバモイル−１，２−デヒドロエリプチシンの物性データ＞
decomp. 192-194 ℃; 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 8.05 (1H, d, J = 8 Hz, H10), 7.43 (1H, d, J = 8 Hz, H7), 7.30 (1H, t, J = 8 Hz, H9), 7.10 (1H, t, J = 8 Hz, H8), 6.91 (1H, d, J = 7.5 Hz, H3), 6.12 (1H, d, J = 7.5 Hz, H4), 4.91 (2H, s, H1), 3.35 (3H, t, J = 6 Hz, NHCH2), 2.80 (3H, t, J = 6 Hz, NH2CH2), 2.72 (3H, s, 11-Me), 2.45 (3H, s, 5-Me); MS (FAB+) m/z 335 (M+1); HRMS calcd for M+H (C20H23N4O) 335.1872, found 335.1877.
【００３３】
７）１，２−ジヒドロエリプチシン−メチルウレア（1,2-dihydroellipticine-methylurea ）(2b)
Ar置換した丸底フラスコに、２−（２−アミノエチル）カルバモイル−１，２−デヒドロエリプチシン(2a) (10.0mg, 0.030mmol)、DMF (1ml)を入れ、 p-Nitrophenyl-N-methylcarbamate (7.0mg, 0.036mmol)のDMF溶液をゆっくり滴下し、室温で1 h撹拌した。その後反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/ CHCl3 : MeOH = 20 : 1)にて精製後、MeOH、Et2Oより再結晶し、１，２−ジヒドロエリプチシン−メチルウレア(2b) (6.0mg, 0.015mmol)を得た（収率: 50%）。
＜１，２−ジヒドロエリプチシン−メチルウレアの物性データ＞
decomp. 148-150 ℃; 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.04 (1H, s, NH), 8.10 (1H, d, J = 7.5 Hz, H10), 7.45 (1H, d, J = 7.5 Hz, H7), 7.33 (1H, s, NH), 7.31 (1H, t, J = 7.5 Hz, H9), 7.10 (1H, t, J = 7.5 Hz, H8), 7.02 (1H, d, J = 7.5 Hz, H3), 6.08 (1H, s, NH), 5.95 (1H, d, J = 7.5 Hz, H4), 5.82 (1H, s, NH), 4.88 (2H, s, H1), 3.15 (4H, m, CH2CH2), 2.70 (3H, s, 11-Me), 2.55 (3H, s, 5-Me), 2.49 (3H, s, NHMe); MS (FAB+) m/z 392 (M+1); HRMS calcd for M+H (C22H26N5O2) 392.2086, found 392.2099.
【００３４】
８）１，２−ジヒドロエリプチシン−メチルニトロソウレア（1,2-dihydroellipticine-methylnitrosourea (2c)
Ar置換した丸底フラスコに、２−（２−アミノエチル）アミド−１，２−デヒドロエリプチシン(2a) (10.0mg, 0.030mmol)、DMF (1ml)を入れ、Succinimidyl-N-methylnitrsocarbamate (7.0mg, 0.035mmol)のDMF溶液をゆっくり滴下し、室温で1 h撹拌した。その後反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/ CHCl3 : MeOH = 10 : 1)にて精製後、MeOH、Et2Oより再結晶し、１，２−ジヒドロエリプチシン−メチルニトロソウレア(2c) (6.3mg, 0.015mmol)を得た（収率： 50%）。
＜１，２−ジヒドロエリプチシン−メチルニトロソウレアの物性データ＞
decomp. 148-150 ℃; 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 8.11 (1H, d, J = 7.5 Hz, H10), 7.44 (1H, d, J = 7.5 Hz, H7), 7.30 (1H, t, J = 7.5 Hz, H9), 7.11 (1H, t, J = 7.5 Hz, H8), 6.90 (1H, d, J = 7.5 Hz, H3), 6.14 (1H, d, J = 7.5 Hz, H4), 4.92 (2H, s, H1), 3.58 (2H, t, CH2CH2), 3.51 (2H, t, CH2CH2), 3.11 (3H, s, 11-Me), 2.75 (3H, s, 5-Me), 2.45 (3H, s, NHMe); MS (FAB+) m/z 421 (M+1); HRMS calcd for M+H (C22H25N6O3) 421.1989, found 421.2013.
【００３５】
〔実施例３〕
一般式（３）の化合物の合成（図３参照）
１） 9-ホルミルエリプチシン (17)
エリプチシン（15） (30.0mg, 0.0122mmol)、ヘキサメチレンテトラミン(200mg, 1.42mmol)、トリフルオロ酢酸 (5ml)を入れ懸濁液を20 min還流した。その後、反応液を約4分の1まで濃縮し、少量の水を加え、NaHCO3を用いて中和した。反応混合物をCHCl3/ MeOH 9:1で抽出し有機層を飽和Na2CO3水溶液、飽和食塩水で洗浄、有機層をNa2SO4上で乾燥し、ろ過、濃縮した。得られた反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/ CHCl3 : MeOH = 9 : 1)にて精製後、MeOHにて再結晶し、9-ホルミルエリプチシン（17） (30.7mg, 0.0112mmol)を得た（収率 ： 92 %）。
＜9-ホルミルエリプチシンの物性データ＞
decomp. 360 ℃; 1H-NMR (500 MHz, CD3CD) δ 10.6 (1H, s, CHO), 9.66 (1H, s, H1), 8.89 (1H, s, H10), 8.40 (1H, d, J = 8.4 Hz, H3), 8.06 (2H, dd, H4, H8), 7.65 (1H, d, J = 8.4 Hz, H7), 2.85 (3H, s, Me); MS (FAB+) m/z 275 (M+1).
【００３６】
２） 9-ヒドロキシエリプチシン (18)
9−ホルミルエリプチシン（17） (100.0mg, 0.365mmol)、mCPBA(190mg, 1.09mmol)、TsOH(180mg, 1.09mmol)、THF (30ml)を入れその懸濁液を48 h撹拌した。反応混合物を濃縮し、飽和Na2CO3水溶液を10ml加え、CHCl3で抽出、Na2SO4上で乾燥後、ろ過、濃縮した。得られた反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/ CHCl3 : MeOH = 8 : 2)にて精製し、 9-ヒドロキシエリプチシン（18） (61.2mg, 0.234mmol)を得た（収率 ： 64 %）。
＜9-ヒドロキシエリプチシンの物性データ＞
decomp. 355 ℃; 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.04 (1H, s, NH), 9.64 (1H, s, H1), 9.09 (1H, s, OH), 8.37 (1H, d, J = 6.0 Hz, H3), 7.86 (1H, d, J = 6.0 Hz, H4), 7.75 (1H, s, H10), 7.36 (1H, d, J = 8.5 Hz, H7), 7.00 (1H, d, J = 8.5 Hz, H8), 3.19 (3H, s, 11-Me), 2.73 (3H, s, 5-Me); MS (FAB+) m/z 263 (M+1).
【００３７】
３）９−（tert−ブチルジメチルシラニルオキシ）エリプチシン（9-(tert-butyldimethylsilanyloxy)ellipticine） （19）
9-ヒドロキシエリプチシン(18) (30.0mg, 0.114mmol)、TBSCl(50.0mg, 0.342mmol)、イミダゾール(15mg, 0.228mmol)、DMF 1.5ml入れ3 h撹拌した。飽和NaHCO3水溶液を5ml加え、CHCl3で抽出、Na2SO4上で乾燥後、ろ過、濃縮した。得られた反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/ CHCl3 : MeOH = 9 : 1)にて精製し９−（tert−ブチルジメチルシラニルオキシ）エリプチシン（19） (40.6mg, 0.108mmol)を得た（収率: 95 %）。
＜９−（tert−ブチルジメチルシラニルオキシ）エリプチシンの物性データ＞
decomp. 245 ℃; 1H-NMR (500 MHz, CDCl3)δ 9.42 (1H, s, NH), 8.22 (1H, d, J = 5.0 Hz, H3), 7.88 (1H, s, H1), 7.55 (2H, m, H10, H4), 7.06 (1H, d, J = 8.5 Hz, H7), 6.79 (1H, d, J = 8.5 Hz, H8), 2.97 (3H, s, 11-Me), 2.46 (3H, s, 5-Me), 0.78 (9H, s, t-Bu), 0.01 (6H, s, (CH3)2); MS (FAB+) m/z 377 (M+1); HRMS calcd for M+H (C23H29N2OSi) 377.2049, found 377.2048.
【００３８】
４）９−（tert−ブチルジメチルシラニルオキシ）−２−（ｐ−ニトロフェノキシカルボニル）−１，２−ジヒドロエリプチシン（9-(tert-butyldimethylsilanyloxy)-2-(p-nitrophenoxycarbonyl)-1,2-dihydroellipticine） （20）
９−（tert−ブチルジメチルシラニルオキシ）エリプチシン（19） (50.0mg, 0.132mmol)、THF 30mlを入れ-80℃まで冷却した。p-nitrophenylchloroformate(110.0mg, 0.526mmol)のTHF溶液をゆっくり滴下し、2 h撹拌した。次にNaBH3CN (40.0mg, 0.660mmol)のTHF溶液をゆっくり滴下し、2 h撹拌した。その後NaHCO3aq. 10mlを入れ、系内を室温にもどした。反応混合物にCHCl3を100ml加え、有機層を1M HCl、Na2CO3aq.、H2Oで洗浄、有機層をNa2SO4上で乾燥し、ろ過、濃縮した。得られた反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/ CHCl3 : MeOH = 9 : 1)で精製後、Et2Oにて洗浄し９−（tert−ブチルジメチルシラニルオキシ）−２−（ｐ−ニトロフェノキシカルボニル）−１，２−ジヒドロエリプチシン（20）(68.1mg, 0.125mmol)を得た（収率 : 95 %）。
＜９−（tert−ブチルジメチルシラニルオキシ）−２−（ｐ−ニトロフェノキシカルボニル）−１，２−ジヒドロエリプチシンの物性データ＞
decomp. 235 ℃; 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.79 (1H, s, NH), 8.10 (2H, d, J = 8 Hz, p-NO2Ph-H), 7.40, 7.36 (2H, d, J = 8 Hz, p-NO2Ph-H), 7.32 (1H, s, H10), 7.15 (1H, d, J = 8 Hz, H7), 6.94 (1H, d, J = 8 Hz, H8), 6.71 (1H, d, J = 9 Hz, H3), 6.12 (1H, d, J = 9 Hz, H4), 4.98, 4.78 (2H, s, H1), 3.11 (3H, s, 11-Me), 2.43 (3H, s, 5-Me), 0.77 (9H, s, t-Bu), 0.00 (6H, s, (CH3)2); MS (FAB+) m/z 543 (M+); HRMS calcd for M+ (C30H33N3O5Si) 543.2189, found 543.2189.
【００３９】
５）９−ヒドロキシ−２−（ｐ−ニトロフェノキシカルボニル）−１，２−ジヒドロエリプチシン（9-hydroxy-2-(p-nitrophenoxycarbonyl)- 1,2-dihydroellipticine） （21）
９−（tert−ブチルジメチルシラニルオキシ）−２−（ｐ−ニトロフェノキシカルボニル）−１，２−ジヒドロエリプチシン（20）(20.0mg, 0.036mmol)、THF 5mlを入れ、AcOH(11.0mg, 0.183mmol)、滴下後、 TBAF (48.0mg, 0.183mmol)のTHF溶液をゆっくり滴下し、2 h撹拌した。。得られた反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/ CHCl3 : MeOH = 9 : 1)で精製後、CHCl3、Et2Oで再結晶し、９−ヒドロキシ−２−（ｐ−ニトロフェノキシカルボニル）−１，２−ジヒドロエリプチシン（21） (11.7mg, 0.027mmol)を得た（収率： 76%）。
＜９−ヒドロキシ−２−（ｐ−ニトロフェノキシカルボニル）−１，２−ジヒドロエリプチシンの物性データ＞
decomp. 210 ℃; 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.82 (1H, s, NH), 8.88 (1H, s, OH), 8.30 (2H, d, J = 8 Hz, p-NO2Ph-H), 7.60, 7.55 (2H, d, J = 8 Hz, p-NO2Ph-H), 7.52 (1H, s, H10), 7.29 (1H, d, J = 8.5 Hz, H7), 7.12 (1H, d, J = 8.5 Hz, H8), 6.86 (1H, d, J = 8 Hz, H3), 6.32 (1H, d, J = 8 Hz, H4), 5.17, 4.98 (2H, s, H1), 2.65 (3H, s, 11-Me), 2.46 (3H, s, 5-Me); MS (FAB+) m/z 429 (M+); HRMS calcd for M+ (C24H19N3O5) 429.1325, found 429.1332.
【００４０】
６）２−（２−アミノエチル）カルバモイル−９−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロエリプチシン（2-(2-aminoethyl)carbamoyl-9-hydroxy-1,2-dihydroellipticine） （3a）
９−ヒドロキシ−２−（ｐ−ニトロフェノキシカルボニル）−１，２−ジヒドロエリプチシン（21） (10.0mg, 0.023mmol)、DMF 1mlを入れ、EDA (7.0mg, 0.116mmol)をゆっくり滴下し、3 h撹拌した。その後反応混合物をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/ CHCl3 : MeOH = 8 : 2)にて精製し２−（２−アミノエチル）アミド−９−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロエリプチシン(3a) (5.6mg, 0.016mmol)を得た（収率: 70%）。
＜２−（２−アミノエチル）カルバモイル−９−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロエリプチシンの物性データ＞
decomp. 192-194 ℃; 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.55 (1H, d, J = 2 Hz, H10), 7.27 (1H, d, J = 9 Hz, H7), 6.90 (1H, d, J = 8 Hz, H3), 6.87 (1H, dd, J = 9,2 Hz, H8), 6.13 (1H, d, J = 8 Hz, H4), 4.90 (2H, s, H1), 3.38 (3H, t, J = 6 Hz, NHCH2), 2.86 (3H, t, J = 6 Hz, NH2CH2), 2.70 (3H, s, 11-Me), 2.43 (3H, s, 5-Me); MS (FAB+) m/z 351 (M+H); HRMS calcd for M+H (C20H23N4O2) 351.1821, found 351.1742.
【００４１】
７）９−ヒドロキシ−２−（２−（Ｎ’−メチルウレイド）エチル）カルバモイル−１，２−ジヒドロエリプチシン（9-hydroxy-2-(2-(N'-methylureido)ethyl)carbamoyl-1,2-dihydroellipticine） (3b)
２−（２−アミノエチル）アミド−９−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロエリプチシン(3a) (10.0mg, 0.028mmol)、DMF (1ml)を入れ、p-Nitrophenyl-N-methylnitrosocarbamate (7.0mg, 0.035mmol)のDMF溶液をゆっくり滴下し、室温で1 h撹拌した。その後反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/ CHCl3 : MeOH = 7 : 3)にて精製後、MeOH、Et2Oより再結晶し、９−ヒドロキシ−２−（２−（Ｎ’−メチルウレイド）エチル）カルバモイル−１，２−ジヒドロエリプチシン(3b) (6.3mg, 0.015mmol)を得た（収率： 55%）。
＜９−ヒドロキシ−２−（２−（Ｎ’−メチルウレイド）エチル）カルバモイル−１，２−ジヒドロエリプチシンの物性データ＞
decomp. 165 ℃; 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6 ) δ 10.68 (1H, s, NH), 8.80 (1H, s, OH), 7.48 (1H, s, H10), 7.26 (1H, d, J = 8.5 Hz, H7), 7.00 (1H, d, J = 8 Hz, H3), 6.82 (1H, d, J = 8.5 Hz, H8), 6.08 (1H, s, NH), 5.93 (1H, d, J = 8 Hz, H4), 5.81 (1H, s, NH), 4.84 (2H, s, H1), 3.14 (4H, m, CH2CH2), 2.65 (3H, s, 11-Me), 2.55 (3H, s, 5-Me), 2.39 (3H, s, NHMe); MS (FAB+) m/z 407 (M+); HRMS calcd for M+ (C22H25N3O5) 407.1957, found 407.1951.
【００４２】
８）９−ヒドロキシ−２−（２−（Ｎ’−メチル−Ｎ’−ニトロソウレイド）エチル）カルバモイル−１，２−ジヒドロエリプチシン（9-hydroxy-2-(2-(N'-methyl-N'-nitrosoureido)ethyl)carbamoyl-1,2-dihydroellipticine） (3c)
２−（２−アミノエチル）カルバモイル−９−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロエリプチシン(3a) (10.0mg, 0.028mmol)、DMF 0.3mlを入れ、Succinimidyl-N-methylnitrsocarbamate (7.0mg, 0.034mmol)のDMF溶液をゆっくり滴下し、室温で1 h撹拌した。その後反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒/ CHCl3 : MeOH = 10 : 1)にて精製後、H2Oより再結晶し、９−ヒドロキシ−２−（２−（Ｎ’−メチル−Ｎ’−ニトロソウレイド）エチル）カルバモイル−１，２−ジヒドロエリプチシン(3c) (6.6mg, 0.015mmol)を得た（ 収率； 54 %）。
＜９−ヒドロキシ−２−（２−（Ｎ’−メチル−Ｎ’−ニトロソウレイド）エチル）カルバモイル−１，２−ジヒドロエリプチシンの物性データ＞
decomp. 200 ℃; 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.46 (1H, s, H10), 7.18 (1H, d, J = 9 Hz, H7), 6.78 (1H, d, J = 9 Hz, H3), 6.76 (1H, d, J =9 Hz, H8), 6.03 (1H, d, J =9 Hz, H4), 4.80 (2H, s, H1), 3.48 (2H, t, J = 5.5 Hz, CH2CH2), 3.41 (2H, t, J = 5.5 Hz, CH2CH2), 3.03 (3H, s, 11-Me), 2.60 (3H, s, 5-Me), 2.34 (3H, s, NHMe); MS (FAB+) m/z 436 (M+); HRMS calcd for M+ (C22H24N6O4) 436.1859, found 436.1867.
【００４３】
〔実施例３〕
細胞毒性試験
Sarcoma-180（マウス肉腫細胞）、HelaＳ-3（ヒト子宮頸癌細胞）、L1210（マウス白血病細胞）がそれぞれ培養されている培養容器から、培地を除去後、PBS (-) で細胞を洗浄し、Trypsin-EDTAで細胞を剥離した。次いで、培地を加えてTrypsinの作用を止め、遠心分離した。上清を除去後、新しい培地を加えてから、色素排除法により細胞数をカウントした。細胞濃度を調製 ( sarcoma-180, HeLa S-3 : 2.0 x 104cells / ml, L1210 : 4.0 x 104cells / ml) し、37℃のCO2インキュベーター内で3時間インキュベートした。次いで、以下の表２に示す抗腫瘍剤 (処理濃度 : 12.5 ~ 100μg/ml)を各々添加し、37℃のCO2インキュベーター内で72時間インキュベートした。細胞死の定量にはMTT法を用いた。
この後、培養液中にMTT(0.2μg/μl)を加え、さらに、37℃のCO2インキュベーター内で4時間インキュベートした。反応を停止させる為にDMSOを培養液と等量加えた。マイクロプレートリーダー (580nmのfilter使用) でMTT formazanの生成量を測定することにより抗腫瘍剤毎に各細胞の生存率を求め、IC50を算出した。
本発明のエリプチシン誘導体（化合物Ｎｏ．１〜５，２３〜２５）、エリプチシン、及び他のエリプチシン誘導体のSarcoma-180（マウス肉腫細胞）、HelaＳ-3（ヒト子宮頸癌細胞）、L1210（マウス白血病細胞）に対するＩＣ５０を以下の表１に示す。
【００４４】
【表１−１】
2006321724.tif 000009
【００４５】
【表１−２】
2006321724.tif 000010
【００４６】
【表１−３】
2006321724.tif 000011
【００４７】
【表１−４】
2006321724.tif 000012
これによれば、本発明の一般式（１）あるいは（２）の化合物は、いずれも腫瘍細胞に対して良好な活性を有することが明らかである。
【００４８】
〔実施例４〕
蛍光顕微鏡による観察
Hela Ｓ-3（ヒト子宮頸癌細胞）が培養されている培養容器から、培地を除去後、PBS (-) で細胞を洗浄し、Trypsin-EDTAで細胞を剥離した。培地を加えてTrypsinの作用を止め、遠心分離した。上清を除去後、新しい培地を加えてから、色素排除法により細胞数をカウントした。細胞濃度を調製 ( 1.5x 106cells / ml) 後、上記表中Ｎｏ．３の化合物及び同Ｎｏ．１の化合物及び比較として同Ｎｏ．１９の化合物剤をそれぞれ最終濃度150μMになるように添加し、37℃のCO2インキュベーター内で24時間インキュベートした。蛍光顕微鏡U領域で観察した。結果を図４に示す。なお、図中、上段は透過光を撮影したものであり、下段は蛍光を撮影したものである。これによれば、ＩＣ５０が小さい値を示すものほど、核内蛍光強度が強く、これは、使用化合物の膜透過性の違いが活性発現に大きく貢献していることを示す。また、５位の置換基は長いと膜透過性を阻害する。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】本発明の一般式（１）の化合物の合成過程の概略を示す図である。
【図２】本発明の一般式（２）の化合物の合成過程の概略を示す図である。
【図３】本発明の一般式（３）の化合物の合成過程の概略を示す図である。
【図４】実施例４における化合物添加後のHelaＳ-3を蛍光顕微鏡で撮影した写真である。
【図１】
2006321724.tif 000020
【図２】
2006321724.tif 000021
【図３】
2006321724.tif 000022
【図４】
2006321724.tif 000023