(57)【要約】【課題】  医薬品として有用である蛋白質などの生体物質から、不純物として含まれる核酸を選択的にかつ効率的に吸着する核酸吸着体および核酸を除去する方法を提供することにある。【解決手段】  下記の式（Ｉ）で表される構成単位を有する重合体を水不溶性担体に固定化させた核酸吸着体、およびこの核酸吸着体を用いた核酸の除去方法に関する。2006068590.tif 000012式（Ｉ）において、Ｒ１は水素、フッ素またはメチルであり、Ｒ２およびＲ３は独立して炭素数１から６のアルキルであり、Ａは−ＮＨ−または−Ｏ−であり、Ｂは炭素数２から１８のアルキレンである。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式（Ｉ）で表される構成単位を有する重合体を水不溶性担体に固定化させた核酸吸着体。
2006068590.tif 000007
式（Ｉ）において、Ｒ１は水素、フッ素またはメチルであり、Ｒ２およびＲ３は独立して炭素数１から６のアルキルであり、Ａは−ＮＨ−または−Ｏ−であり、Ｂは炭素数２から１８のアルキレンである。
【請求項２】
式（Ｉ）において、Ｒ１が水素またはメチルであり、Ｒ２およびＲ３が独立してメチル、エチルまたはプロピルであり、Ａが−ＮＨ−または−Ｏ−であり、Ｂが炭素数２から６のアルキレンである請求項１に記載の核酸吸着体。
【請求項３】
式（Ｉ）において、Ｒ１が水素またはメチルであり、Ｒ２およびＲ３が独立してメチルまたはエチルであり、Ａが−ＮＨ−または−Ｏ−であり、Ｂがプロピレンである請求項１に記載の核酸吸着体。
【請求項４】
式（Ｉ）において、Ｒ１が水素であり、Ｒ２およびＲ３がメチルであり、Ａが−ＮＨ−であり、Ｂがプロピレンである請求項１に記載の核酸吸着体。
【請求項５】
式（Ｉ）において、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２およびＲ３がメチルであり、Ａが−ＮＨ−であり、Ｂがプロピレンである請求項１に記載の核酸吸着体。
【請求項６】
下記の式（ＩＩ）で表される１つの単量体から得られた重合体を水不溶性担体に固定化させた核酸吸着体。
2006068590.tif 000008
式（ＩＩ）において、Ｒ１は水素、フッ素またはメチルであり、Ｒ２およびＲ３は独立して炭素数１から６のアルキルであり、Ａは−ＮＨ−または−Ｏ−であり、Ｂは炭素数２から１８のアルキレンである。
【請求項７】
下記の式（ＩＩ）で表される少なくとも１つの単量体を含有する混合物から得られた重合体を水不溶性担体に固定化させた核酸吸着体。
2006068590.tif 000009
式（ＩＩ）において、Ｒ１は水素、フッ素またはメチルであり、Ｒ２およびＲ３は独立して炭素数１から６のアルキルであり、Ａは−ＮＨ−または−Ｏ−であり、Ｂは炭素数２から１８のアルキレンである。
【請求項８】
式（ＩＩ）において、Ｒ１が水素またはメチルであり、Ｒ２およびＲ３が独立してメチル、エチルまたはプロピルであり、Ａが−ＮＨ−または−Ｏ−であり、Ｂが炭素数２から６のアルキレンである請求項６または７に記載の核酸吸着体。
【請求項９】
式（ＩＩ）において、Ｒ１が水素またはメチルであり、Ｒ２およびＲ３がメチルであり、Ａが−ＮＨ−または−Ｏ−であり、Ｂが炭素数２から６のアルキレンである請求項６または７に記載の核酸吸着体。
【請求項１０】
式（ＩＩ）において、Ｒ１が水素であり、Ｒ２およびＲ３がメチルであり、Ａは−ＮＨ−であり、Ｂがプロピレンである請求項６または７に記載の核酸吸着体。
【請求項１１】
式（ＩＩ）において、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２およびＲ３がメチルであり、Ａは−ＮＨ−であり、Ｂがプロピレンである請求項６または７に記載の核酸吸着体。
【請求項１２】
下記の式（ＩＩＩ）で表される少なくとも１つの単量体をさらに含有する混合物から得られた重合体を水不溶性担体に固定化させた請求項７に記載の核酸吸着体。
2006068590.tif 000010
式（ＩＩＩ）において、Ｒ４は水素またはメチルであり、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は独立して炭素数１から３のアルキルであり、Ｄは−ＮＨ−または−Ｏ−であり、Ｅは炭素数２から６のアルキレンであり、Ｘはフッ素、塩素、臭素、ヨウ素、１／２ＳＯ４、１／３ＰＯ４、１／２ＣＯ３、またはＮＯ２である。
【請求項１３】
下記の式（ＩＶ）で表される少なくとも１つの単量体をさらに含有する混合物から得られた重合体を水不溶性担体に固定化させた請求項７に記載の核酸吸着体。
2006068590.tif 000011
式（ＩＶ）において、Ｒ８は水素またはメチルであり、Ｒ９は炭素数１から３のアルキルであり、Ｇは−ＮＨ−、−ＮＲ１０−または−Ｏ−であり、Ｒ１０は炭素数１から３のアルキルである。
【請求項１４】
架橋剤によって重合体を水不溶性担体に固定化させた請求項１から１３のいずれか１項に記載の核酸吸着体。
【請求項１５】
架橋剤がエピクロロヒドリンである請求項１４に記載の核酸吸着体。
【請求項１６】
水不溶性担体が球状、中空糸状または膜状である請求項１から１５のいずれか１項に記載の核酸吸着体。
【請求項１７】
水不溶性担体がセルロースである請求項１から１５のいずれか１項に記載の核酸吸着体。
【請求項１８】
セルロースが球状粒子である請求項１７に記載の核酸吸着体。
【請求項１９】
請求項１から１８のいずれか１項に記載の核酸吸着体を、核酸を含む溶液と混合することによる、核酸の除去方法。
【請求項２０】
請求項１から１８のいずれか１項に記載の核酸吸着体を、核酸を含む溶液に添加し、そして混合したあと、核酸を吸着した核酸吸着体を分離する、核酸の除去方法。
【請求項２１】
請求項１から１８のいずれか１項に記載の核酸吸着体をカラムに充填し、これに核酸を含む溶液を通液させることによって核酸が除去された流出液を採取する、核酸の除去方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、核酸吸着体、およびこれを用いた核酸の除去方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、バイオテクノロジーを利用した医薬品の開発が盛んになり、組み替え遺伝子により有用な生体関連物質が量産されるようになった。組み替え遺伝子技術を利用して生産された医薬品が、核酸を不純物として含むことがある。この核酸が生体に及ぼす影響は十分に解明されていない。そのためＦＤＡおよびＷＨＯから、生物学的製剤に残存する核酸に関するガイドラインが発表されている。ＷＨＯのガイドラインによれば、成人一回の薬剤投与量において、残存する核酸の量は１０ｎｇ以下であることが望ましい（非特許文献１参照。）。
【０００３】
核酸を除去する方法は知られている。例えば、水溶性の核酸吸着剤を使用して核酸を凝集沈殿させ除去する方法である。核酸吸着剤は、プロタミン硫酸やストレプトマイシン（非特許文献２参照。）である。核酸吸着剤は、また、カチオン性ヒドロキシアルキルセルロース（特許文献１参照。）である。しかし、この方法は、水溶性の吸着剤を凝集処理するとき、遠心分離によって凝集物を除去する操作が必要になり、そして過剰に加えた溶解性の凝集剤を除去する操作が必要となる。
【０００４】
イオン交換、ゲルろ過、アフィニティーなどのクロマトグラフィー法も検討されている。この方法には、核酸の除去率が高くない、目的の生体関連物質の回収率が高くない、除去条件の設定が複雑である、クロマト剤の機械的強度が十分ではない、などの課題がある。これらの課題は、工業的な用途には好ましくない。例えば、キトサンによる核酸を吸着除去する方法では、核酸を含む溶液のｐＨが塩基性であるとき、核酸を除去する能力が低下する（特許文献２、特許文献３参照。）。
【０００５】
【特許文献１】特開平１−２５７９１号公報
【特許文献２】特開平３−１０９３９７号公報
【特許文献３】特開平３−１０９９４０号公報
【非特許文献１】ＷＥＥＫＬＹ  ＥＰＩＤＥＭＩＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＲＥＣＯＲＤ，Ｎｏ．２０，１６，ＭＡＹ，１９９７
【非特許文献２】生化学実験講座５、ｐ２０１、日本生化学会編、東京化学同人
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、医薬品として有用である蛋白質などの生体物質から、不純物として含まれる核酸を選択的にかつ効率的に吸着する核酸吸着体および核酸を除去する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記した課題の解決するために検討を重ねた結果、下記に示す吸着体が核酸を選択的に吸着する能力を有することを見いだし、下記の項を含む本発明を完成するに至った。
【０００８】
１．  下記の式（Ｉ）で表される構成単位を有する重合体を水不溶性担体に固定化させた核酸吸着体。
2006068590.tif 000002
式（Ｉ）において、Ｒ１は水素、フッ素またはメチルであり、Ｒ２およびＲ３は独立して炭素数１から６のアルキルであり、Ａは−ＮＨ−または−Ｏ−であり、Ｂは炭素数２から１８のアルキレンである。
【０００９】
２．式（Ｉ）において、Ｒ１が水素またはメチルであり、Ｒ２およびＲ３が独立してメチル、エチルまたはプロピルであり、Ａが−ＮＨ−または−Ｏ−であり、Ｂが炭素数２から６のアルキレンである項１に記載の核酸吸着体。
３．  式（Ｉ）において、Ｒ１が水素またはメチルであり、Ｒ２およびＲ３が独立してメチルまたはエチルであり、Ａが−ＮＨ−または−Ｏ−であり、Ｂがプロピレンである項１に記載の核酸吸着体。
４．  式（Ｉ）において、Ｒ１が水素であり、Ｒ２およびＲ３がメチルであり、Ａが−ＮＨ−であり、Ｂがプロピレンである項１に記載の核酸吸着体。
５．  式（Ｉ）において、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２およびＲ３がメチルであり、Ａが−ＮＨ−であり、Ｂがプロピレンである項１に記載の核酸吸着体。
【００１０】
６．  下記の式（ＩＩ）で表される１つの単量体から得られた重合体を水不溶性担体に固定化させた核酸吸着体。
2006068590.tif 000003
式（ＩＩ）において、Ｒ１は水素、フッ素またはメチルであり、Ｒ２およびＲ３は独立して炭素数１から６のアルキルであり、Ａは−ＮＨ−または−Ｏ−であり、Ｂは炭素数２から１８のアルキレンである。
７．  下記の式（ＩＩ）で表される少なくとも１つの単量体を含有する混合物から得られた重合体を水不溶性担体に固定化させた核酸吸着体。
2006068590.tif 000004
式（ＩＩ）において、Ｒ１は水素、フッ素またはメチルであり、Ｒ２およびＲ３は独立して炭素数１から６のアルキルであり、Ａは−ＮＨ−または−Ｏ−であり、Ｂは炭素数２から１８のアルキレンである。
【００１１】
８．  式（ＩＩ）において、Ｒ１が水素またはメチルであり、Ｒ２およびＲ３が独立してメチル、エチルまたはプロピルであり、Ａが−ＮＨ−または−Ｏ−であり、Ｂが炭素数２から６のアルキレンである項６または７に記載の核酸吸着体。
９．  式（ＩＩ）において、Ｒ１が水素またはメチルであり、Ｒ２およびＲ３がメチルであり、Ａが−ＮＨ−または−Ｏ−であり、Ｂが炭素数２から６のアルキレンである項６または７に記載の核酸吸着体。
１０．  式（ＩＩ）において、Ｒ１が水素であり、Ｒ２およびＲ３がメチルであり、Ａは−ＮＨ−であり、Ｂがプロピレンである項６または７に記載の核酸吸着体。
１１．  式（ＩＩ）において、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２およびＲ３がメチルであり、Ａは−ＮＨ−であり、Ｂがプロピレンである項６または７に記載の核酸吸着体。
【００１２】
１２．  下記の式（ＩＩＩ）で表される少なくとも１つの単量体をさらに含有する混合物から得られた重合体を水不溶性担体に固定化させた項７に記載の核酸吸着体。
2006068590.tif 000005
式（ＩＩＩ）において、Ｒ４は水素またはメチルであり、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は独立して炭素数１から３のアルキルであり、Ｄは−ＮＨ−または−Ｏ−であり、Ｅは炭素数２から６のアルキレンであり、Ｘはフッ素、塩素、臭素、ヨウ素、１／２ＳＯ４、１／３ＰＯ４、１／２ＣＯ３、またはＮＯ２である。
【００１３】
１３．  下記の式（ＩＶ）で表される少なくとも１つの単量体をさらに含有する混合物から得られた重合体を水不溶性担体に固定化させた項７に記載の核酸吸着体。
2006068590.tif 000006
式（ＩＶ）において、Ｒ８は水素またはメチルであり、Ｒ９は炭素数１から３のアルキルであり、Ｇは−ＮＨ−、−ＮＲ１０−または−Ｏ−であり、Ｒ１０は炭素数１から３のアルキルである。
【００１４】
１４．  架橋剤によって重合体を水不溶性担体に固定化させた項１から１３のいずれか１項に記載の核酸吸着体。
１５．  架橋剤がエピクロロヒドリンである項１４に記載の核酸吸着体。
１６．  水不溶性担体が球状、中空糸状または膜状である項１から１５のいずれか１項に記載の核酸吸着体。
１７．  水不溶性担体がセルロースである項１から１５のいずれか１項に記載の核酸吸着体。
１８．  セルロースが球状粒子である項１７に記載の核酸吸着体。
【００１５】
１９．  項１から１８のいずれか１項に記載の核酸吸着体を、核酸を含む溶液と混合することによる、核酸の除去方法。
２０．  項１から１８のいずれか１項に記載の核酸吸着体を、核酸を含む溶液に添加し、そして混合したあと、核酸を吸着した核酸吸着体を分離する、核酸の除去方法。
２１．  項１から１８のいずれか１項に記載の核酸吸着体をカラムに充填し、これに核酸を含む溶液を通液させることによって核酸が除去された流出液を採取する、核酸の除去方法。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の核酸吸着体は、医薬品として有用である蛋白質などの生体物質の溶液から、不純物である核酸を選択的に、かつ効率よく除去することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
「式（Ｉ）で表される構成単位を有する重合体」を「重合体（Ｉ）」と記載することがある。「式（ＩＩ）で表される単量体」などを「単量体（ＩＩ）」などのように記載することがある。（メタ）アクリルアミドは、アクリルアミドまたはメタアクリルアミドを意味する。（メタ）アクリル酸エステルなども同様な意味を有する。
【００１８】
本発明の核酸吸着体は、ジアルキルアミノを有する構成単位を含有する重合体（Ｉ）を、水に不溶な担体に固定化させた吸着体である。固定化には架橋剤などを用いる。重合体（Ｉ）は、単量体（ＩＩ）の単独重合体、単量体（ＩＩ）の共重合体、単量体（ＩＩ）と他の単量体との共重合体などである。他の単量体の例は、単量体（ＩＩＩ）、単量体（ＩＶ）などである。単独重合体の出発物は、１つの単量体（ＩＩ）である。共重合体の出発物は、複数の単量体の混合物である。単量体の重合には重合開始剤や溶媒を用いてもよい。以下に、具体的な単量体、重合体の種類、単量体の重合条件、重合開始剤、重合に用いられる溶媒、水不溶性担体、重合体の固定（架橋剤）、重合体の分子量とｐＫａ、などを順に説明する。
【００１９】
単量体（ＩＩ）は（メタ）アクリルアミドまたは（メタ）アクリル酸エステルである。これらの単量体はジアルキルアミノを有する。ジメチルアミノを有する単量体の例は、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノブチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノペンチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノヘキシル（メタ）アクリルアミドなどである。
【００２０】
ジエチルアミノを有する単量体の例は、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノプロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノブチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノペンチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノヘキシル（メタ）アクリルアミドなどである。
【００２１】
その他のアミノを有する単量体の例は、Ｎ，Ｎ−ジプロピルアミノプロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジプロピルアミノブチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジプロピルアミノペンチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジプロピルアミノヘキシル（メタ）アクリルアミドなどである。
【００２２】
（メタ）アクリル酸エステルの例は、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノブチル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノペンチル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノヘキシル（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレートなどである。好ましい単量体（ＩＩ）はＮ，Ｎ−ジメチルアミノプロピル（メタ）アクリルアミドである。
【００２３】
単量体（ＩＩＩ）は、（メタ）アクリルアミドまたは（メタ）アクリル酸エステルの４級アンモニウム塩である。アミドの塩の例は、２−（メタ）アクリルアミドエチルトリメチルアンモニウム塩化物、３−（メタ）アクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウム塩化物、４−（メタ）アクリルアミドブチルトリメチルアンモニウム塩化物、５−（メタ）アクリルアミドペンチルトリメチルアンモニウム塩化物、６−（メタ）アクリルアミドヘキシルトリメチルアンモニウム塩化物などである。
【００２４】
エステルの塩の例は、２−（メタ）アクリロイルオキシエチルトリメチルアンモニウム塩化物、３−（メタ）アクリロイルオキシプロピルトリメチルアンモニウム塩化物、４−（メタ）アクリロイルオキシブチルトリメチルアンモニウム塩化物、５−（メタ）アクリロイルオキシペンチルトリメチルアンモニウム塩化物、６−（メタ）アクリロイルオキシヘキシルトリメチルアンモニウム塩化物などである。
【００２５】
単量体（ＩＶ）は、その他の（メタ）アクリルアミドまたは（メタ）アクリル酸エステルである。このようなアミドの例は、（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−プロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−イソプロピル（メタ）アクリルアミドなどである。このようなエステルの例は、（メタ）アクリル酸メチル、（メタ）アクリル酸エチル、（メタ）アクリル酸プロピルなどである。
【００２６】
単独重合体は、１つの単量体（ＩＩ）から調製される。共重合体は、少なくとも２つの単量体（ＩＩ）の混合物から調製される。共重合体は、また、少なくとも１つの単量体（ＩＩ）の混合物から調製される。この混合物における他の単量体は、単量体（ＩＩ）とは異なる単量体である。他の単量体の例は、単量体（ＩＩＩ）、単量体（ＩＶ）などである。混合物は、単量体（ＩＩＩ）および単量体（ＩＶ）の一方または両方を含んでもよい。混合物は、単量体（ＩＩＩ）および単量体（ＩＶ）には該当しない単量体を含んでもよい。これらの混合物における単量体（ＩＩ）の好ましい割合は、１０モル％以上である。好ましくは５０モル％以上である。この混合物は複数の単量体（ＩＩ）だけであってもよい。１つの単量体（ＩＩ）またはこれを含有する混合物を重合するとき、必要に応じて重合開始剤や溶媒などを添加してもよい。
【００２７】
重合反応には、公知の水溶液重合、沈澱重合、乳化重合などがある。工業的観点から好ましい反応は水溶液重合である。好ましい反応温度は、０℃から８０℃である。さらに好ましい反応温度は１０℃から５０℃である。反応は室温（２０℃から３０℃）で通常は行なわれる。好ましい反応時間は３から１０時間程度である。
【００２８】
重合開始剤は、アゾ化合物、過酸化物などである。過酸化物と還元剤との組合せたレドツクス系の化合物を用いてもよい。アゾ化合物の例は、２，２’−アゾビスイソブチロニトリル、２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）、１，１’−アゾビス（シクロヘキサン−１−カルボニトリル）、２，２’−アゾビスイソ酪酸ジメチルなどである。過酸化物の例は、過酸化水素、ラウロイルペルオキシド、ベンゾイルペルオキシド、過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、塩素酸ソーダなどである。好ましい重合開始剤は過硫酸カリウムまたは過硫酸アンモニウムである
【００２９】
重合の溶媒は、水、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、N−メチルピロリドン、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどである。好ましい溶媒は水である。単量体の好ましい濃度は０．１重量％から５０重量％の範囲である。さらに好ましい濃度は１重量％から２０重量％の範囲である。
【００３０】
水不溶性担体の例は、セルロース、アガロース、キチン、でんぷんなどの水不溶性の多糖類である。他の例は、アクリルアミド類、メタクリルアミド類、アクリル類、メタクリル類、ビニル類、アリル類、など単量体から得られる単独重合体や共重合体である。セルロース、アガロース、キチン、キトサン、でんぷんなどの多糖類が水溶性であるときは、架橋反応などの処理によって水不溶性にしてもよい。架橋反応などの処理は、物理的強度を大きくする目的で行なってもよい。好ましい担体の例はセルロースなどである。
【００３１】
水不溶性担体の形態は、特に限定されないが、粒子、糸、膜などである。好ましい形状は球状、中空糸状、膜状などである。粒子の好ましい形状は球状である。球状粒子は製造や、取り扱いが容易である。糸の好ましい形状は中空糸状である。中空糸状は、内部に連続または不連続の空洞を持つ繊維状を意味する。空洞は、紡糸液に発泡剤を添加する、または特殊な口金などを用いることによって形成される。膜の好ましい形状は多孔状である。市販のメンブランフィルターのような多孔状の膜は、一定の範囲の排除限界分子量を持っている。これらのうち好ましい担体はセルロースの球状粒子である。この粒子は、安価であり、生体適合性が高く、強度が大きく、カラム耐圧性が良好である。
【００３２】
重合体（Ｉ）を水不溶性担体に固定化するときは、重合体（Ｉ）のジアルキルアミノの求核性が利用される。このアミノに対して反応性を有するように、水不溶性担体には前処理をする。この前処理には架橋剤などを用いる。架橋剤は、複数の反応性官能基を有する化合物などである。ニ官能性化合物は、ジハロゲン化アルキル化合物、ジエポキシ化合物、アルカンジオールジグリシジルエーテル化合物、ハロゲン化アルキルエポキシド化合物などである。三官能性化合物は、トリハロゲン化アルカン化合物、アルカントリオールトリグリシジルエーテル化合物などである。
【００３３】
ジハロゲン化アルキル化合物の例は、１，３−ジクロロプロパン、１，４−ジクロロブタン、１，５−ジクロロペンタン、１，６−ジクロロヘキサン、１，７−ジクロロヘプタン、１，８−ジクロロオクタンなどである。ジエポキシ化合物の例は、１，２，３，４−ジエポキシブタン、１，２，４，５−ジエポキシペンタン、１，２，５，６−ジエポキシヘキサン、１，２，６，７−ジエポキシヘプタン、１，２，７，８−ジエポキシオクタン、１，２，８，９−ジエポキシノナン、１，２，９，１０−ジエポキシデカンなどである。
【００３４】
アルカンジオールジグリシジルエーテル化合物の例は、エチレングリコールジグリシジルエーテル、１，３−プロパンジオールジグリシジルエーテル、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル、１，５−ペンタンジオールジグリシジルエーテル、１，６−ヘキサンジオールジグリシジルエーテルなどである。ハロゲン化アルキルエポキシド化合物の例は、エピクロロヒドロリン、１−クロロ−３，４−エポキシブタン、１−クロロ−４，５−エポキシペンタン、１−クロロ−５，６−エポキシヘキサンなどである。
【００３５】
トリハロゲン化アルカン化合物の例は、２−クロロメチル−１，３−ジクロロプロパン、２−クロロエチル−１，３−ジクロロプロパンなどである。アルカントリオールトリグリシジルエーテルの例は、グリコールトリグリシジルエーテル、トリメチロールエタントリグリシジルエーテル、トリメチロールプロパントリグリシジルエーテルなどである。
【００３６】
これらの多官能性化合物のうち好ましい架橋剤は、エチレングリコールジグリシジルエーテル、１，３−プロパンジオールジグリシジルエーテルまたはエピクロロヒドロリンである。さらに好ましい架橋剤はエピクロロヒドロリンである。この化合物は固定化を制御するのに適しているので、核酸吸着体の調製が容易になる。
【００３７】
本発明の核酸吸着体を用いることによって、核酸を選択的に吸着することができる。核酸を吸着した核酸吸着体は、系外に容易に取り出すことができる。核酸吸着体は、水不溶性担体に固定化された重合体（Ｉ）であるからである。したがって、この方法は蛋白質、酵素、生理活性物質などのような医薬品として有用な生体物質に含まれる核酸を除去するのに特に有効である。核酸吸着体は、吸着処理の前に適当な緩衝液で通常は洗浄しておく。核酸吸着体は、核酸を含む溶液と混合したとき、核酸を吸着する。バッチ法では、緩衝液で洗浄した核酸吸着体を、核酸を含む溶液中に添加して撹拌したあと、核酸吸着体を分離すればよい。この分離はろ過などの方法によって行なう。カラム法では、核酸吸着体を充填したカラムを緩衝液で洗浄したあと、核酸を含む溶液を通液させて行なう。この方法によって核酸が吸着されるので、核酸が除去された流出液を得ることができる。
【００３８】
核酸吸着体は核酸を選択的に吸着する。この高い選択性は、重合体（Ｉ）の分子量やｐＫａなどの因子に基づいている。この因子を適切に設定することにより、核酸吸着体の表面における親水性や疎水性を制御することが可能になる。この制御によって、蛋白質などの生体物質と核酸吸着体との相互作用を低下させることができる。
【００３９】
重合体（Ｉ）の分子量はＧＰＣ（ゲルパーミエーションクロマトグラフィー）によるポリエチレンオキシド換算の重量平均分子量である。重合体（Ｉ）の分子量は、通常は１０００から５００万である。好ましい分子量は５０００から３００万である。さらに好ましい分子量は１万から１００万である。さらに好ましい分子量はまた１０万から２００万でもある。
【００４０】
重合体（Ｉ）は窒素を含んでいるので塩基性である。重合体（Ｉ）のｐＫａは、通常７．２から１０．４である。好ましいｐＫａは７．４から９．５である。さらに好ましいｐＫａは７．５から９．０である。
【実施例】
【００４１】
以下、本発明について実施例及び比較例を用いて詳細に説明する。本発明はこれらの実施例に限定されない。実験に用いたリン酸緩衝液（ｐＨ７）の濃度は０．０２ｍｏｌ／Ｌである。溶液を調製するときは、イオン強度（μ）が０．２であるリン酸緩衝液を、クロマト法の目的にはイオン強度（μ）が０．４であるリン酸緩衝液を用いた。
【００４２】
実施例１
Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミドの重合体の調製
反応は窒素雰囲気下で行なった。攪拌機、温度計、窒素導入管を取り付けた１Ｌの３口フラスコに、イオン交換水（３２８ｇ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミド（１８．０ｇ）を入れて混合した。これに、５．０％過硫酸アンモニウム水溶液（１４．４ｇ）を滴下したあと、室温で１６時間撹拌して、重合体の水溶液を得た。この重合体の重量平均分子量は、ＧＰＣ（ゲルパーミエーションクロマトグラフィー；ポリエチレンオキシド換算）によって測定したところ、３００，０００であった。
【００４３】
実施例２
核酸吸着体Ａの調製
ポリエチレンオキシドを標準物質として測定した排除限界分子量が２００万の平均粒径８０μｍのセルロース微粒子（３００ｇ；水分９０重量％、乾燥重量３０．５ｇ）とイオン交換水（４１０ｇ）の混合物を３０℃に加温し、これに２０％水酸化ナトリウム水溶液（２２７ｇ）を加え、１時間撹拌した。次いでエピクロロヒドリン（１３１ｇ）を加え、２時間反応させた。反応混合物をろ過したあと、得られたエポキシ活性化セルロース粒子が中性になるまで水洗した。次に、エポキシ活性化セルロース粒子（１００ｇ；湿重量）と実施例１で調製したＮ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミドの重合体の水溶液（１５０ｇ）を混合し、４５℃で１６時間反応させた。得られた反応混合物をろ過し、吸着体が中性になるまで水洗した。こうして得られた吸着体を吸着体Ａという。
【００４４】
実施例３
バッチ法による核酸の除去
吸着体Ａ（０．５０ｇ）およびリン酸緩衝液１０ｍLの混合物を室温で１０分間攪拌した。このようにして平衡化させたあと、ろ過によって吸着体Ａを得た。この吸着体Ａ、鮭精巣由来の核酸（ＤＮＡ；５０μｇ）のリン酸緩衝液（５ｍＬ）溶液、および牛血清のアルブミン（ＢＳＡ；５０００μｇ）のリン酸緩衝液（５ｍＬ）溶液を混合し、２５℃で２時間撹拌した。撹拌したあと、上澄み液のＤＮＡの濃度を測定したところ、濃度は５０ｎｇ／ｍＬ以下であった。上澄み液のＢＳＡの濃度を測定したところ、濃度は８３０μｇ／ｍＬ（回収率８３％）であった。
【００４５】
実施例４
クロマト法による核酸の除去
吸着体Ａ（１．６７ｍＬ）を充填したカラム（直径４．６ｍｍ、長さ１００ｍｍ）に、リン酸緩衝液を通液して、平衡化させた。次いで、鮭精巣由来の核酸（ＤＮＡ；１ｍｇ）および牛血清のアルブミン（ＢＳＡ；１００ｍｇ）のリン酸緩衝液（１００ｍＬ）溶液を流し、溶出液１００ｍＬを得た。溶出液のＤＮＡ濃度は０．３μｇ／ｍＬ以下であり、ＢＡＳ濃度は９６０μｇ／ｍＬ（回収率９６％）であった。
【００４６】
実施例５
核酸吸着体Ｂの調製
ポリエチレンオキシドを標準物質として測定した排除限界分子量が１，０００の平均粒径８０μｍのセルロース微粒子（２５０ｇ；水分４６重量％、乾燥重量１３４ｇ）とイオン交換水（５０８ｇ）の混合物を３０℃に加温した。この混合物に２０％水酸化ナトリウム水溶液（２０７ｇ）を加え、１時間撹拌した。次いでエピクロロヒドリン（１３１ｇ）を加え、２時間反応させた。得られた反応混合物をろ過し、エポキシ活性化セルロース粒子が中性になるまで水洗した。次に、エポキシ活性化セルロース粒子（１００ｇ；湿重量）と実施例１で調製したＮ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミドの重合体の水溶液（１５０ｇ）を混合し、４５℃で１６時間反応させた。得られた反応混合物をろ過し、吸着体が中性になるまで水洗した。こうして得られた吸着体をＢという。
【００４７】
実施例６
バッチ法による核酸の除去
吸着体Ｂ（０．５０ｇ）およびリン酸緩衝液１０ｍLの混合物を室温で１０分間攪拌した。このようにして平衡化させたあと、ろ過によって吸着体Ａを得た。この吸着体Ａ、鮭精巣由来の核酸（ＤＮＡ；５０μｇ）のリン酸緩衝液（５ｍＬ）溶液、および牛血清のアルブミン（ＢＳＡ；５０００μｇ）のリン酸緩衝液（５ｍＬ）溶液を混合し、２５℃で２時間撹拌した。撹拌したあと、上澄み液のＤＮＡ濃度を測定したところ、濃度は０．１μｇ／ｍＬ以下であった。上澄み液のＢＳＡの濃度を測定したところ、濃度は９７０μｇ／ｍＬ（回収率９７％）であった。
【００４８】
実施例７
クロマト法による核酸除去
吸着体Ｂ（１．６７ｍＬ）を充填したカラム（直径４．６ｍｍ、長さ１００ｍｍ）に、リン酸緩衝液を通液して平衡化した。次いで核酸（ＤＮＡ；１ｍｇ）および牛血清のアルブミン（ＢＳＡ；１００ｍｇ）のリン酸緩衝液（１００ｍＬ）を流し、溶出液１００ｍＬを得た。溶出液のＤＮＡ濃度は０．１μｇ／ｍＬ以下であり、ＢＳＡ濃度は９５０μｇ／ｍＬ（回収率９５％）であった。
【００４９】
比較例１
ＤＥＡＥ−セファロース・ＣＬ−６Ｂ（アマシャム・バイオサイエンス社製のイオン交換担体）を用い、バッチ法による核酸の除去を行った。ＤＥＡＥ−セファロース・ＣＬ−６Ｂ（０．５０ｇ）はリン酸緩衝液１０ｍLと混合し、室温で１０分間攪拌した。このようにして平衡化させたあと、ろ過によって回収した。このＤＥＡＥ−セファロース・ＣＬ−６Ｂ、核酸（ＤＮＡ；５０μｇ）のリン酸緩衝液（５ｍＬ）、および牛血清のアルブミン（ＢＳＡ；２５００μｇ）のリン酸緩衝液の溶液（５ｍＬ）を混合し、２５℃で２時間撹拌した。撹拌したあと、上澄み液のＤＮＡの濃度を測定したところ、濃度は２μｇ／ｍＬであった。上澄み液のＢＳＡ濃度を測定したところ、濃度は４７０μｇ／ｍＬ（回収率９４％）であった。