(57)【要約】【課題】  インビボでポリペプチドの半減期を増加するために使用され得る化合物を使用して、血清アルブミンに結合することにより治療用ポリペプチド（例えば、インスリン）の半減期を延長することにより、治療用ポリペプチドの薬物動態および薬力学を調節すること。【解決手段】  一般式Ｉを有する結合体化ポリペプチドであって、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、およびＲ３は、０原子〜１２原子の直鎖を独立して含み；Ｘは、１原子であるかまたは５個以上の原子であり、この５個以上の原子は、環状環構造または複素環式環構造を形成し；Ｗは、リンカーであり；そしてＺは、独立してＮＨ、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＣＨ２、ＮＨ−ＣＯ、ＳＯ２、ＣＨ−Ｒ、Ｃ（Ｒ）２、ＣＣ、ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ＝Ｎであり、Ｒは、アルキルまたはアリールであり、その結合体化ポリペプチドは、アルブミンに特異的に結合する、結合体化ポリペプチド。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉ
【化５】
2006063071.tif 000066
を有する結合体化ポリペプチドであって、
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、およびＲ３は、０原子〜１２原子の直鎖を独立して含み；
Ｘは、１原子であるかまたは５個以上の原子であり、この５個以上の原子は、環状環構造または複素環式環構造を形成し；
Ｗは、リンカーであり；そして
Ｚは、独立してＮＨ、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＣＨ２、ＮＨ−ＣＯ、ＳＯ２、ＣＨ−Ｒ、Ｃ（Ｒ）２、ＣＣ、ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ＝Ｎであり、Ｒは、アルキルまたはアリールであり、
該結合体化ポリペプチドは、アルブミンに特異的に結合する、結合体化ポリペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリペプチドに結合体化されて、そのポリペプチドの血中での循環半減期を延長し得る化合物を提供する。より詳細には、本発明は、ヒト血清アルブミンに対して高親和性を示す化合物、およびこのような化合物に結合体化されるポリペプチドを提供する。
【背景技術】
【０００２】
組換えＤＮＡ技術は、医療的に有用な量の治療用ポリペプチドの商業的製造を可能にしてきた。しかし、多くの治療用ポリペプチドの短い半減期は、歴史的に、これらの化合物の有効的な投与に対する挑戦をもたらしてきた。いくつかの商業的に重要なポリペプチドベースの薬物が現在使用されており、これは、増加した半減期から恩恵を受ける：エリトロポイエチン（ｔ１／２＝１８０分）、インスリン（ｔ１／２＝５分）、インターフェロンα−２ｂ（ｔ１／２＝１２０分）、インターフェロンβ（ｔ１／２＝６０分）、インターフェロンγ（ｔ１／２＝３０分）、顆粒球コロニー刺激因子（ｔｌ／２＝１２０分）、ヒト成長ホルモン（ｔ１／２＝３０分）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ｔ１／２＝１２０分）、レラキシン（ｔ１／２＝３０分）、ウロキナーゼ（ｔ１／２＝５０分）、ストレプトキナーゼ（ｔ１／２＝８０分）、組織プラスミノゲン賦活剤（ｔ１／２＝５５分）、および腫瘍壊死因子（ｔ１／２＝１８分）。治療用ポリペプチドの半減期を延長することは、投薬量および投薬の頻度を減少させることを可能にすることにより、現在の治療法を改善し得る。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
（要旨）
本発明は、インビボでポリペプチドの半減期を増加するために使用され得る化合物に基づく。このような化合物を使用して、血清アルブミンに結合することにより治療用ポリペプチド（例えば、インスリン）の半減期を延長することにより、治療用ポリペプチドの薬物動態および薬力学を調節し得る。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（項目１）
式
【０００５】
【化１】
2006063071.tif 000002
【０００６】
を有する化合物であって、
Ｒ１、Ｒ２ａ、およびＲ２ｂ、ならびにＲ３は、０原子〜１２原子の直鎖を独立して含み；
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、または負電荷、およびそれらの塩であり；
Ｘは、１原子であるかまたは５個以上の原子であり、この５個以上の原子は、環状環構造または複素環式環構造を形成し；
Ｗ’は、少なくとも１つの反応性部分Ｒ５を含むリンカーである、
化合物。
（項目２）
項目１に記載の化合物であって、Ｒ１は、（ＣＨ２）ｎであり、ｎは、０〜１２の整数である、化合物。
（項目３）
項目１または２に記載の化合物であって、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、独立して（ＣＨ２）ｍ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｘ、ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）ｙ、（ＣＨ２）ｚ−Ｃ（Ｏ）であるか、または存在せず、ｍ、ｘ、およびｚは、０〜１２の整数であり、そしてｙは、１〜１２の整数である、化合物。
（項目４）
項目１〜３のうちのいずれか１項に記載の化合物であって、Ｒ３は、独立してＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２であるか、または存在せず、ｐは、０〜１２の整数である、化合物。
（項目５）
項目１〜４のうちのいずれか１項に記載の化合物であって、Ｒ５は、ハロゲン、一級アミン、二級アミン、三級アミン、ヒドロキシル、チオール、カルボン酸、スルホン酸、または活性化エステルである、化合物。
（項目６）
項目１〜５のうちのいずれか１項に記載の化合物であって、Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｐ、またはトリアジンである、化合物。
（項目７）
式
【０００７】
【化２】
2006063071.tif 000003
【０００８】
を有する化合物であって、
Ｒ１、Ｒ２ａ、およびＲ２ｂ、ならびにＲ３は、０原子〜１２原子の直鎖を独立して含み；
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、または負電荷、およびそれらの塩であり；
Ｘは、１原子であるかまたは５個以上の原子であり、この５個以上の原子は、環状環構造または複素環式環構造を形成し；
Ｗ’は、少なくとも１つの反応性部分Ｒ５を含むリンカーであり；そして
Ｇは、０原子〜９原子の鎖である、
化合物。
（項目８）
項目７に記載の化合物であって、Ｒ１は、（ＣＨ２）ｎであり、ｎは、０〜１２の整数である、化合物。
（項目９）
項目７または８に記載の化合物であって、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、独立して（ＣＨ２）ｍ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｘ、ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）ｙ、（ＣＨ２）ｚ−Ｃ（Ｏ）であるか、または存在せず、ｍ、ｘ、およびｚは、０〜１２の整数であり、そしてｙは、１〜１２の整数である、化合物。
（項目１０）
項目７〜９のうちのいずれか１項に記載の化合物であって、Ｒ３は、独立してＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２であるか、または存在せず、ｐは、０〜１２の整数である、化合物。
（項目１１）
項目７〜１０のうちのいずれか１項に記載の化合物であって、Ｒ５は、ハロゲン、一級アミン、二級アミン、三級アミン、ヒドロキシル、チオール、カルボン酸、スルホン酸、または活性化エステルである、化合物。
（項目１２）
項目７〜１１のうちのいずれか１項に記載の化合物であって、Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｐ、またはトリアジンである、化合物。
（項目１３）
項目７〜１２のうちのいずれか１項に記載の化合物であって、Ｇは、（ＣＨ２）ｑ、Ｃ（Ｏ）、ＳＯ２、またはＳ（Ｏ）を含み、ｑは、０〜９の整数である、化合物。
（項目１４）
項目１または７に記載の化合物であって、Ｗ’は、１個以上の炭素原子を有する、直鎖アルキルまたは分枝鎖アルキルを含む、化合物。
（項目１５）
項目１４に記載の化合物であって、前記炭素原子のうちの１つ以上は、シクロアルカン、ヘテロ原子、置換ヘテロ原子、ＣＯ−Ｏ、ＣＯ−ＮＨ、ＣＯ−Ｓ、ＣＯ、ＳＯ２、ＳＯ２−ＮＨ、またはＳＯ２−Ｏで独立して置換されている、化合物。
（項目１６）
項目１５に記載の化合物であって、前記置換されたヘテロ原子は、Ｎ−（アルキル）、Ｎ−（アリール）、Ｎ−（アルキル−アリール）、ホスフィン、ホスフェート、チオホスフェート、ホスホジエステル、およびアミノホスフェートからなる群より選択される、化合物。
（項目１７）
項目１または７に記載の化合物であって、前記アリール部分は、独立して
【０００９】
【化３】
2006063071.tif 000004
【００１０】
であり、
Ｒは、Ｈ、ＯＣＨ３、ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＳＨ、Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＳＯ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＳＯ２（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２ＮＨ２、ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、Ｎ（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）２、ＣＯ２Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、および（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキルからなる群より選択される、化合物。
（項目１８）
項目１７に記載の化合物であって、前記アリール部分は、
【００１１】
【化４】
2006063071.tif 000005
【００１２】
からなる群より選択される、化合物。
（項目１９）
一般式Ｉ
【００１３】
【化５Ａ】
2006063071.tif 000006
【００１４】
を有する結合体化ポリペプチドであって、
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、およびＲ３は、０原子〜１２原子の直鎖を独立して含み；
Ｘは、１原子であるかまたは５個以上の原子であり、この５個以上の原子は、環状環構造または複素環式環構造を形成し；
Ｗは、リンカーであり；そして
Ｚは、独立してＮＨ、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＣＨ２、ＮＨ−ＣＯ、ＳＯ２、ＣＨ−Ｒ、Ｃ（Ｒ）２、ＣＣ、ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ＝Ｎであり、Ｒは、アルキルまたはアリールであり、
その結合体化ポリペプチドは、アルブミンに特異的に結合する、結合体化ポリペプチド。
（項目２０）
項目１９に記載の結合体化ポリペプチドであって、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、独立して（ＣＨ２）ｍ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｘ、ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）ｙ、（ＣＨ２）ｚ−Ｃ（Ｏ）であるか、または存在せず、ｍ、ｘ、およびｚは、０〜１２の整数であり、そしてｙは、１〜１２の整数である、結合体化ポリペプチド。
（項目２１）
項目１９または２０に記載の結合体化ポリペプチドであって、Ｒ３は、独立してＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２であるか、または存在せず、ｐは、０〜１２の整数である、結合体化ポリペプチド。
（項目２２）
項目１９〜２１のうちのいずれか１項に記載の結合体化ポリペプチドであって、Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｐ、またはトリアジンである、結合体化ポリペプチド。
（項目２３）
一般式ＩＩ
【００１５】
【化６】
2006063071.tif 000007
【００１６】
を有する結合体化ポリペプチドであって、
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、およびＲ３は、０原子〜１２原子の直鎖を独立して含み；
Ｘは、１原子であるかまたは５個以上の原子であり、この５個以上の原子は、環状環構造または複素環式環構造を形成し；
Ｗは、リンカーであり；そして
Ｇは、０原子〜９原子の鎖であり、
その結合体化ポリペプチドは、アルブミンに特異的に結合する、結合体化ポリペプチド。
（項目２４）
項目２３に記載の結合体化ポリペプチドであって、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、独立して（ＣＨ２）ｍ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｘ、ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）ｙ、（ＣＨ２）ｚ−Ｃ（Ｏ）であるか、または存在せず、ｍ、ｘ、およびｚは、０〜１２の整数であり、そしてｙは、１〜１２の整数である、結合体化ポリペプチド。
（項目２５）
項目２３または２４に記載の結合体化ポリペプチドであって、Ｒ３は、独立してＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２であるか、または存在せず、ｐは、０〜１２の整数である、結合体化ポリペプチド。
（項目２６）
項目２３〜２５のうちのいずれか１項に記載の結合体化ポリペプチドであって、Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｐ、またはトリアジンである、結合体化ポリペプチド。
（項目２７）
項目２３〜２６のうちのいずれか１項に記載の結合体化ポリペプチドであって、Ｇは（ＣＨ２）ｑ、Ｃ（Ｏ）、ＳＯ２、またはＳ（Ｏ）を含み、ｑは、０〜９の整数である、結合体化ポリペプチド。
（項目２８）
項目１９または２３に記載の結合体化ポリペプチドであって、その結合体は、エリスロポイエチン、インスリン、インターフェロンα−２ｂ、インターフェロンβ、インターフェロンγ、顆粒球コロニー刺激因子、ヒト成長ホルモン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、レラキシン、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、組織プラスミノゲンアクチベーター、および腫瘍壊死因子からなる群より選択される治療用ポリペプチドを含む、結合体化ポリペプチド。
（項目２９）
項目１９または２３に記載の結合体化ポリペプチドであって、その結合体は、アルブミンの部位ＩＩに特異的に結合する、結合体化ポリペプチド。
（項目３０）
項目１９または２３に記載の結合体化ポリペプチドであって、上記結合体は、対応する非結合体化ポリペプチドの血清半減期よりも大きな血清半減期を示す、結合体化ポリペプチド。
（項目３１）
項目１９または２３に記載の結合体化ポリペプチドであって、Ｗは、式
【００１７】
【化７】
2006063071.tif 000008
【００１８】
を有する構造要素を含み、
Ｒ１は（ＣＨ２）ｎであり、ｎは、０〜１２の整数であり；そして
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、または負電荷、およびそれらの塩である、
結合体化ポリペプチド。
（項目３２）
項目１９または２３に記載の結合体化ポリペプチドであって、Ｗは、式
【００１９】
【化８】
2006063071.tif 000009
【００２０】
を有する構造要素を含み、
Ｒ１は（ＣＨ２）ｎであり、ｎは、０〜１２の整数である、
結合体化ポリペプチド。
（項目３３）
項目１９または２３に記載の結合体化ポリペプチドであって、Ｗは、１個以上の炭素原子を有する、直鎖アルキルまたは分枝鎖アルキルを含む、結合体化ポリペプチド。
（項目３４）
項目３３に記載の結合体化ポリペプチドであって、上記炭素原子のうちの１つ以上は、シクロアルカン、ヘテロ原子、置換ヘテロ原子、ＣＯ−Ｏ、ＣＯ−ＮＨ、ＣＯ−Ｓ、ＣＯ、ＳＯ２、ＳＯ２−ＮＨ、またはＳＯ２−Ｏで独立して置換されている、結合体化ポリペプチド。
（項目３５）
項目３４に記載の結合体化ポリペプチドであって、上記置換されたヘテロ原子は、Ｎ−（アルキル）、Ｎ−（アリール）、Ｎ−（アルキル−アリール）、ホスフィン、ホスフェート、チオホスフェート、ホスホジエステル、およびアミノホスフェートからなる群より選択される、結合体化ポリペプチド。
（項目３６）
項目１９または２３に記載の結合体化ポリペプチドであって、上記アリール部分は、独立して
【００２１】
【化９】
2006063071.tif 000010
【００２２】
であり、
Ｒは、Ｈ、ＯＣＨ３、ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＳＨ、Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＳＯ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＳＯ２（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２ＮＨ２、ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、Ｎ（（Ｃ１〜Ｃ４））２、ＣＯ２Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、および（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキルからなる群より選択される、結合体化ポリペプチド。
（項目３７）
項目３６に記載の結合体化ポリペプチドであって、上記アリールは、
【００２３】
【化１０】
2006063071.tif 000011
【００２４】
からなる群より選択される、結合体化ポリペプチド。
（項目３８）
項目５または１１に記載の化合物であって、上記活性化エステルは、酸塩化物、酸無水物、マレイミド、アルデヒド、およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルからなる群より選択される、化合物。
（項目３９）
一般式ＩＩＩ
【００２５】
【化１１】
2006063071.tif 000012
【００２６】
を有する結合体化ポリペプチドであって、
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、または負電荷、およびそれらの塩であり；
Ｒ６は、１個以上の炭素原子を含み；そして
Ｗは、リンカーであり；
その結合体化ポリペプチドは、アルブミンに結合する、結合体化ポリペプチド。
（項目４０）
項目３９に記載の結合体化ポリペプチドであって、その結合体は、エリスロポイエチン、インスリン、インターフェロンα−２ｂ、インターフェロンβ、インターフェロンγ、顆粒球コロニー刺激因子、ヒト成長ホルモン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、レラキシン、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、組織プラスミノゲンアクチベーター、および腫瘍壊死因子からなる群より選択される治療用ポリペプチドを含む、結合体化ポリペプチド。
（項目４１）
項目３９に記載の結合体化ポリペプチドであって、Ｗは、１個以上の炭素原子を有する、直鎖アルキルまたは分枝鎖アルキルを含む、結合体化ポリペプチド。
（項目４２）
項目４１に記載の結合体化ポリペプチドであって、上記炭素原子のうちの１つ以上は、シクロアルカン、ヘテロ原子、置換ヘテロ原子、ＣＯ−Ｏ、ＣＯ−ＮＨ、ＣＯ−Ｓ、ＣＯ、ＳＯ２、ＳＯ２−ＮＨ、またはＳＯ２−Ｏで独立して置換されている、結合体化ポリペプチド。
（項目４３）
項目４２に記載の結合体化ポリペプチドであって、上記置換されたヘテロ原子は、Ｎ−（アルキル）、Ｎ−（アリール）、およびＮ−（アルキル−アリール）、ホスフィン、ホスフェート、チオホスフェート、ホスホジエステル、ならびにアミノホスフェートからなる群より選択される、結合体化ポリペプチド。
（項目４４）
項目４３に記載の結合体化ポリペプチドであって、Ｒ６は、ハロゲン、一級アミン、二級アミン、三級アミン、ヒドロキシル、チオール、カルボン酸、スルホン酸、および活性化エステルからなる群より選択される少なくとも１つの反応性部分をさらに含む、結合体化ポリペプチド。
（項目４５）
項目４４に記載の結合体化ポリペプチドであって、上記活性化エステルは、酸塩化物、酸無水物、マレイミド、アルデヒド、およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルからなる群より選択される、結合体化ポリペプチド。
（項目４６）
式
【００２７】
【化１２】
2006063071.tif 000013
【００２８】
を有する化合物であって、
Ｒ１は、（ＣＨ２）ｎであり、ｎは、０〜１２の整数であり；
Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、独立して（ＣＨ２）ｍ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｘ、ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）ｙ、（ＣＨ２）ｚ−Ｃ（Ｏ）であるか、または存在せず、ｍ、ｘ、およびｚは、０〜１２の整数であり、そしてｙは、１〜１２の整数であり；
Ｒ３は、独立してＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２であるかまたは存在せず、ｐは０〜１２の整数であり、
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、または負電荷、およびそれらの塩であり；
Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｐ、またはトリアジンであり；そして
Ｗ’は、少なくとも１つの反応性部分Ｒ５を有するリンカーであり、Ｒ５は、ハロゲン、一級アミン、二級アミン、三級アミン、ヒドロキシ、チオール、カルボン酸、スルホン酸、および活性化エステルからなる群より選択される、化合物。
（項目４７）
項目４６に記載の化合物であって、ｎは１であり、Ｒ２ａはＣＨ２−ＮＨ＝（ＣＨ２）２であり、Ｒ２ｂは存在せず、Ｒ４はＨであり、そしてＸはＣＨである、化合物。
（項目４８）
項目４７に記載の化合物であって、アリールは
【００２９】
【化１３】
2006063071.tif 000014
【００３０】
である、化合物。
（項目４９）
項目４６に記載の化合物であって、ｎは１であり、Ｒ２ａはＣ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２であり、Ｒ２ｂは存在せず、Ｒ４はＨであり、そしてＸはＣＨである、化合物。
（項目５０）
項目４９に記載の化合物であって、Ｒ３は、独立してＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２であるか、または存在せず、ｐは、０〜１２の整数である、化合物。
（項目５１）
項目５０に記載の化合物であって、アリールは、
【００３１】
【化１４】
2006063071.tif 000015
【００３２】
からなる群より選択される、化合物。
（項目５２）
項目４６に記載の化合物であって、ｎは１であり、Ｒ２ａはＣＨ２であり、Ｒ２ｂは存在せず、Ｒ４はＨであり、そしてＸはＣＨである、化合物。
（項目５３）
項目５２に記載の化合物であって、Ｒ３は、独立してＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２であるか、または存在せず、ｐは、０〜１２の整数である、化合物。
（項目５４）
項目５３に記載の化合物であって、アリールは、
【００３３】
【化１５】
2006063071.tif 000016
【００３４】
からなる群より選択される、化合物。
（項目５５）
式
【００３５】
【化１６】
2006063071.tif 000017
【００３６】
を有する化合物であって、
Ｒ１は、（ＣＨ２）ｎであり、ｎは、０〜１２の整数であり；
Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、独立して（ＣＨ２）ｍ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｘ、ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）ｙ、（ＣＨ２）ｚ−Ｃ（Ｏ）であるか、または存在せず、ｍ、ｘ、およびｚは、０〜１２の整数であり、そしてｙは、１〜１２の整数であり；
Ｒ３は、独立してＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２であるか、または存在せず、ｐは、０〜１２の整数であり；
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、または負電荷、およびそれらの塩であり；
Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｐ、またはトリアジンであり；
Ｗ’は、少なくとも１つの反応性部分Ｒ５を有するリンカーであり、Ｒ５は、ハロゲン、一級アミン、二級アミン、三級アミン、ヒドロキシ、チオール、カルボン酸、スルホン酸、および活性化エステルからなる群より選択され；そして
Ｇは、（ＣＨ２）ｑ、Ｃ（Ｏ）、ＳＯ２、またはＳ（Ｏ）であり、ｑは、０〜９の整数である；
化合物。
（項目５６）
項目１、７、または１４に記載の化合物であって、一方または両方のアリール基が、１個〜１０個の炭素原子を有する非芳香族部分で置換されている、化合物。
（項目５７）
項目５６に記載の化合物であって、上記非芳香族部分は、直鎖アルキル部分、分枝鎖アルキル部分、もしくは環状アルキル部分、直鎖アルケニル部分、分枝鎖アルケニル部分、もしくは環状アルケニル部分、または直鎖アルキニル部分、分枝鎖アルキニル部分、もしくは環状アルキニル部分を含む、化合物。
（項目５８）
項目５７に記載の化合物であって、上記環状部分は、１個以上のヘテロ原子を含む、化合物。
（項目５９）
項目５８に記載の化合物であって、上記ヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、およびＳからなる群より選択される、化合物。
（項目６０）
ポリペプチドの半減期を増加させる方法であって、その方法は、項目１〜７に記載の化合物に、治療用ポリペプチドを結合体化させる工程を包含する、方法。
【００３７】
１つの局面において、本発明は、下式：
【００３８】
【化１７】
2006063071.tif 000018
【００３９】
を有する化合物を特徴とし、
式中、Ｒ１、Ｒ２ａおよびＲ２ｂ、ならびにＲ３は、独立して、０〜１２個の原子の直鎖を含み；Ｒ４は、Ｈ、アルキルまたは負電荷およびその塩であり；Ｘは、１つの原子または５個以上の原子であり、ここでこの５個以上の原子は、環状構造または複素環式環構造を形成し；そしてＷ’は、少なくとも１つの反応性部分Ｒ５を含むリンカーである。Ｒ１は、（ＣＨ２）ｎであり得、ここでｎは、０〜１２の整数である。Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、独立して、（ＣＨ２）ｍ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｘ、ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）ｙ、（ＣＨ２）ｚ−Ｃ（Ｏ）であり得るかまたは存在せず、ここでｍ、ｘ、およびｚは、０〜１２の整数であり、そしてｙは、１〜１２の整数である。Ｒ３は、独立してＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ（ここでｐは、０〜１２の整数である）、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２であり得るか、または存在しない。Ｒ５は、ハロゲン、１級アミン、２級アミン、３級アミン、ヒドロキシル、チオール、カルボン酸、スルホン酸、または活性化エステルであり得る。Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｐ、またはトリアジンであり得る。
【００４０】
本発明はまた、下式：
【００４１】
【化１８】
2006063071.tif 000019
【００４２】
を有する化合物を特徴とし、
式中、Ｒ１、Ｒ２ａおよびＲ２ｂ、ならびにＲ３は、独立して、０〜１２個の原子の直鎖を含み；Ｒ４は、Ｈ、アルキル、または負電荷およびその塩であり；Ｘは、１個の原子または５個以上の原子であり、ここでこの５個以上の原子は、環状構造または複素環式環構造を形成し；Ｗ’は、少なくとも１つの反応性部分Ｒ５を含むリンカーであり；そしてＧは、０〜９個の原子鎖である。Ｒ１は、（ＣＨ２）ｎであり得、ここでｎは、０〜１２の整数である。Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、独立して、（ＣＨ２）ｍ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｘ、ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）ｙ、（ＣＨ２）ｚ−Ｃ（Ｏ）であるか、または存在せず、ここでｍ、ｘ、およびｚは、０〜１２の整数であり、そしてｙは、１〜１２の整数である。Ｒ３は、独立して、Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ（ここでｐは、０〜１２の整数である）、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２であり得るか、または存在しない。Ｒ５は、ハロゲン、１級アミン、２級アミン、３級アミン、ヒドロキシル、チオール、カルボン酸、スルホン酸、または活性化エステルであり得る。Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｐ、またはトリアジンであり得る。Ｇは、（ＣＨ２）ｑ（ここでｑは、０〜９の整数である）、Ｃ（Ｏ）、ＳＯ２、またはＳ（Ｏ）であり得る。Ｗ’は、１個以上の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル鎖であり得る。これらの炭素原子の１個以上は、独立して、シクロアルカン、ヘテロ原子、置換ヘテロ原子、ＣＯ、ＣＯ−ＮＨ、ＣＯ−Ｓ、ＣＯ、ＳＯ２、ＳＯ２−ＮＨ、またはＳＯ２−Ｏで置換され得る。この置換へテロ原子は、Ｎ−（アルキル）、Ｎ−（アリール）、Ｎ−（アルキル−アリール）、ホスフィン、ホスフェート、チオホスフェート、ホスホジエステル、およびアミノホスフェートからなる群から選択され得る。これらのアリール部分は、独立して
【００４３】
【化１９】
2006063071.tif 000020
【００４４】
であり得、
式中、Ｒは、Ｈ、ＯＣＨ３、ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＯＨ，Ｏ（Ｃｌ〜Ｃ４）アルキル、ＳＨ、Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＳＯ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＳＯ２（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２ＮＨ２、ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、Ｎ（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）２、ＣＯ２Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、および（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキルからなる群から選択される。このような化合物は、治療用ポリペプチドに結合体化されて、この治療用ポリペプチドの半減期を増加し得る。
【００４５】
別の局面において、本発明は、一般式Ｉ：
【００４６】
【化２０】
2006063071.tif 000021
【００４７】
を有する結合体化ポリペプチドを特徴とし、
式中、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、およびＲ３は、独立して、０〜１２個の原子の直鎖を含み；Ｘは、１個の原子または５個以上の原子であり、ここでこの５個以上の原子は、環状構造または複素環式環構造を形成し；Ｗは、リンカーであり；そしてＺは、独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＣＨ２、ＮＨ−ＣＯ、ＳＯ２、ＣＨ−Ｒ、Ｃ（Ｒ）２、ＣＣ、ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ＝Ｎであり、ここでＲは、アルキルまたはアリールであり、ここでこの結合体化したポリペプチドは、アルブミンに特異的に結合する。Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、独立して、（ＣＨ２）ｍ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｘ、ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）ｙ、（ＣＨ２）ｚ−Ｃ（Ｏ）であり得るか、または存在せず、ここでｍ、ｘ、およびｚは、０〜１２の整数であり、そしてｙは、１〜１２の整数である。Ｒ３は、独立して、Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ（ここでｐは、０〜１２の整数である）、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２であり得るか、または存在しない。Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｐ、またはトリアジンであり得る。
【００４８】
なお別の局面において、本発明は、一般式ＩＩ：
【００４９】
【化２１】
2006063071.tif 000022
【００５０】
を有する結合体化ポリペプチドを特徴とし、
式中、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、およびＲ３は、独立して、０〜１２個の原子の直鎖を含み；Ｘは、１個の原子または５個以上の原子であり、ここでこの５個以上の原子は、環状構造または複素環式環構造を形成し；Ｗは、リンカーであり；そしてＧは、０〜９個の原子鎖であり、ここでこの結合体化したポリペプチドは、アルブミンに特異的に結合する。Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３およびＸは、上で考察したとおりである。Ｇは、（ＣＨ２）ｑ（ここでｑは、０〜９の整数である）、Ｃ（Ｏ）、ＳＯ２、またはＳ（Ｏ）であり得る。
【００５１】
ポリペプチドは、エリトロポイエチン、インスリン、インターフェロンα−２ｂ、インターフェロンβ、インターフェロンγ、顆粒球コロニー刺激因子、ヒト成長因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、レラキシン、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、組織プラスミノゲン賦活剤、および腫瘍壊死因子からなる群から選択され得る。この結合体化ポリペプチドは、アルブミンのサイトＩＩに特異的に結合し得る。この結合体はまた、対応する非結合体化ポリペプチドの血清半減期と比較して、長い血清半減期を示し得る。
【００５２】
Ｗは、下式：
【００５３】
【化２２】
2006063071.tif 000023
【００５４】
を有する構造要素であり得、
ここで、Ｒ１は、（ＣＨ２）ｍであり、ここでｎは、０〜１２の整数であり；そしてＲ４は、Ｈ、アルキル、または負電荷およびその塩である。
【００５５】
Ｗは、下式：
【００５６】
【化２３】
2006063071.tif 000024
【００５７】
の構造要素を含み得、
ここで、Ｒ１は、（ＣＨ２）ｎであり、ここでｎは、０〜１２の整数である。
【００５８】
Ｗはまた、１個以上の炭素原子を有する直鎖または分枝のアルキル鎖であり得る。これらの炭素原子の１個以上は、シクロアルカン、ヘテロ原子、置換へテロ原子、ＣＯ−Ｏ、ＣＯ−ＮＨ、ＣＯ−Ｓ、ＣＯ、ＳＯ２、ＳＯ２−ＮＨ、またはＳＯ２−Ｏで、独立して置換され得る。この置換へテロ原子は、Ｎ（アルキル）、Ｎ（アリール）、およびＮ（アルキル−アリール）、ホスフィン、ホスフェート、チオホスフェート、ホスホジエステル、ならびにアミノホスフェートからなる群から選択される。アリール部分は、上で考察したとおりである。
【００５９】
別の局面において、本発明は、一般式ＩＩＩ：
【００６０】
【化２４】
2006063071.tif 000025
【００６１】
を有する結合体化ポリペプチドを特徴とし、
式中、Ｒ４は、Ｈ、アルキル、または負電荷およびその塩であり；Ｒ６は、１個以上の炭素原子を含み；そしてＷは、リンカーであり、ここで、この結合体化ポリペプチドは、アルブミンに結合する。
【００６２】
別の局面において、本発明は、下式：
【００６３】
【化２５】
2006063071.tif 000026
【００６４】
を有する化合物を特徴とし、
式中、Ｒ１は、（ＣＨ２）ｎであり、ここでｎは、０〜１２の整数であり；Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、独立して、（ＣＨ２）ｍ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｘ、ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）ｙ、（ＣＨ２）ｚ−Ｃ（Ｏ）であるか、または存在せず；ここでｍ、ｘ、およびｚは、０〜１２の整数であり、そしてｙは、１〜１２の整数であり；Ｒ３は、独立して、Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ（ｐは、０〜１２の整数である）、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２であるか、または存在せず；Ｒ４は、Ｈ、アルキル、または負電荷およびその塩であり；Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｐ、またはトリアジンであり；Ｗ’は、少なくとも１つの反応性部分Ｒ５を有するリンカーであり、ここでＲ５は、ハロゲン、１級アミン、２級アミン、３級アミン、ヒドロキシル、チオール、カルボン酸、スルホン酸、および活性化エステルからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ｎは、１であり；Ｒ２ａは、ＣＨ２−ＮＨ＝（ＣＨ２）２であり、Ｒ２ｂは存在せず、Ｒ４は、Ｈであり；そしてＸは、ＣＨである。他の実施形態において、ｎは、１であり；Ｒ２ａは、Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）２であり、Ｒ２ｂは存在せず、Ｒ４は、Ｈであり；そしてＸは、ＣＨであるか、またはｎは、１であり；Ｒ２ａは、ＣＨ２であり、Ｒ２ｂは存在せず、Ｒ４は、Ｈであり；そしてＸはＣＨである。
【００６５】
なお別の局面において、本発明は、下式：
【００６６】
【化２６】
2006063071.tif 000027
【００６７】
を有する化合物を特徴とし、
式中、Ｒ１は（ＣＨ２）ｎであり、ここでｎは、０〜１２の整数であり；Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、独立して、（ＣＨ２）ｍ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｘ、ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）ｙ、（ＣＨ２）ｚ−Ｃ（Ｏ）であるか、または存在せず；ここで、ｍ、ｘ、およびｚは、０〜１２の整数であり、そしてｙは、１〜１２の整数であり；Ｒ３は、独立して、Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ（ここでｐは、０〜１２の整数である）、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２であるか、または存在せず；Ｒ４は、Ｈ、アルキル、または負電荷およびその塩であり；Ｘは、Ｎ、ＣＨ、Ｐ、またはトリアジンであり；Ｗ’は、少なくとも１つの反応性部分Ｒ５を有するリンカーであり、ここでＲ５は、ハロゲン、１級アミン、２級アミン、３級アミン、ヒドロキシル、チオール、カルボン酸、スルホン酸、および活性化エステルからなる群から選択され；そしてＧは、（ＣＨ２）ｑ（ここでｑは、０〜９の整数である）、Ｃ（Ｏ）、ＳＯ２、またはＳ（Ｏ）である。
【００６８】
いくつかの実施形態において、一方または両方のアリール基は、１〜１０個の炭素原子を有する非芳香族部分で置き換えられる。この非芳香族部分は、直鎖、分枝、もしくは環状の、アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル部分を含み得る。この環状部分は、１つ以上のヘテロ原子であり得る（例えば、Ｎ、Ｏ、およびＳ）。
【００６９】
他に規定されない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書中に記載される方法および材料に類似するかまたは等価な方法および材料が、本発明の実施または試験において使用され得るが、適切な方法および材料は、以下に記載される。本明細書中で記述される全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、その全体が参考として援用される。抵触の場合には、定義を含めて本明細書に従う。さらに、材料、方法、および実施例は、例示のみであり、限定を意図しない。
【００７０】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明、および特許請求の範囲から明らかとなる。
【００７１】
（詳細な説明）
（定義）
本開示において明確に規定されていない一般に使用される化学略語は、Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｓｔｙｌｅ  Ｇｕｉｄｅ、第２版；Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、ＤＣ（１９９７）、「２００１  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  Ａｕｔｈｏｒｓ」Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６６（１）、２４Ａ（２００１）「Ａ  Ｓｈｏｒｔ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ａｂｂｒｅｖｉａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ  ｉｎ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ
Ｓｃｉｅｎｃｅ」Ｊ．Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ．Ｓｃｉ．５、４６５−４７１（１９９９）に見出され得る。
【００７２】
用語「ポリペプチド」とは、翻訳後修飾に関わらず、少なくとも２つのアミノ酸の鎖をいう。ポリペプチドは、天然に存在するか、化学的に合成されるか、または組換え産生される、アミノ酸のポリマーであり得る。２〜５０のアミノ酸を有するポリペプチドは、代表的にペプチドとして分類される。
【００７３】
用語「酵素」は、触媒活性を有するポリペプチドを意味する。
【００７４】
用語「インスリン」とは、本明細書中で使用される場合、哺乳動物（ヒト、ラット、モルモットおよびウサギが挙げられる）において見出される天然に存在する低血糖性ポリペプチド、および米国特許第４，６５２，５２５号、同第４，４３１，７４０号、同第５，２６８，４５３号、同第５，５０６，２０２号、同第５，５１４，６４６号、および同第５，７００，６６２号に開示される類似の低血糖性ポリペプチドをいう。
【００７５】
用語「置換（された）」は、その部分上に配置され得、そしてその分子が意図された機能を果たすことを可能にする置換を含む。
【００７６】
用語「アルキル」は、飽和脂肪族基を含み、これらとしては、直鎖アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシルなど）、分枝鎖アルキル基（イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチルなど）、シクロアルキル（脂環式）基（シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル）、アルキル置換シクロアルキル基、およびシクロアルキル置換アルキル基が挙げられる。特定の実施形態において、直鎖または分枝鎖のアルキルは、６個以下の炭素原子をその骨格に有し（例えば、直鎖についてＣ１〜Ｃ６、分枝鎖についてＣ３〜Ｃ６）、そしてより好ましくは、４個以下である。同様に、好ましいシクロアルキルは、３〜８個の炭素原子をそれらの環構造に有し、そしてより好ましくは、５または６個の炭素を環構造に有する。用語Ｃ１〜Ｃ６は、１〜６個の炭素原子を含むアルキル基を含む。
【００７７】
用語「アルケニル」としては、上記のアルキルに長さで類似しそして上記のアルキルへと置換可能である、不飽和脂肪族基が挙げられるが、これらは、少なくとも１つの二重結合を含み、かつ少なくとも２つの炭素原子を含まなければならない。例えば、用語「アルケニル」は、直鎖アルケニル基（例えば、エチレニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ヘプテニル、オクテニル、ノネニル、デセニルなど）、分枝鎖アルケニル基、シクロアルケニル（脂環式）基（シクロプロペニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、シクロオクテニル）、アルキル置換シクロアルケニル基またはアルケニル置換シクロアルケニル基、およびシクロアルキル置換アルケニル基またはシクロアルケニル置換アルケニル基が挙げられる。特定の実施形態では、直鎖または分枝鎖のアルケニル基は、骨格中に６個以下の炭素原子を有する（例えば、直鎖についてＣ２〜Ｃ６、分枝鎖についてＣ３〜Ｃ６）。同様に、シクロアルケニル基は、それらの環構造中に３〜８個の炭素原子を有し得、そして、好ましくは、環構造中に５または６個の炭素原子を有し得る。用語Ｃ２〜Ｃ６としては、２から６個の炭素原子を含むアルキル基を含む。
【００７８】
さらに、用語アルキルは、「非置換アルキル」および「置換アルキル」の両方を含み、後者は、炭化水素骨格の１つ以上の炭素上の水素を置換する置換基を有するアルキル部分をいう。このような置換基としては、例えば、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、アルコキシル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、シアノ、アミノ（アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、およびアルキルアリールアミノを含む）、アシルアミノ（アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイルおよびウレイドを含む）、アミジノ、イミノ、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシレート、スルフェート、アルキルスルフィニル、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、ニトロ、トリフルオロメチル、シアノ、アジド、ヘテロシクリル、アルキルアリール、または芳香族部分もしくは複素環式芳香族部分が挙げられ得る。シクロアルキルは、例えば、上記の置換基とさらに置換され得る。「アリールアルキル」部分は、アリールと置換されたアルキル（例えば、フェニルメチル（ベンジル））である。用語「ｎ−アルキル」は、直鎖（すなわち、非分枝）非置換アルキル基を意味する。
【００７９】
一般的に、用語「アリール」としては、０〜４個のへテロ原子を含み得る、５員環の単環芳香族基および６員環の単環芳香族基（例えば、ベンゼン、フェニル、ピロール、フラン、チオフェン、チアゾール、イソチアゾール、イミダゾール、トリアゾール、テトラゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、およびピリミジンなど）を含む基が挙げられる。さらに、用語「アリール」としては、多環式アリール基（例えば、三環式、二環式（例えば、ナフタレン、ベンゾオキサゾール、ベンゾジオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾチオフェン、メチレンジオキシフェニル、キノリン、イソキノリン、ナフチリジン（ｎａｐｈｔｈｒｉｄｉｎｅ）、インドール、ベンゾフラン、プリン、ベンゾフラン、デアザプリン、またはインドリジン））が挙げられる。環構造中にヘテロ原子を有するこれらのアリール基はまた、「アリール複素環」、「複素環」、「ヘテロアリール」、または「複素環式芳香族」と呼ばれ得る。アリール基は、１つ以上の環の位置にて置換基で置換され得る。
【００８０】
（ポリペプチド結合体）
一般的に、本発明は、インビボで延長された半減期を有するポリペプチド結合体を提供する。ポリペプチドは、代表的には、血清アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ））に対する親和性を有する結合部分に結合体化される。ＨＳＡは、内因性リガンドおよび外因性リガンドのキャリアとして機能する、５８５個のアミノ酸のポリペプチドである。ＨＳＡは、新油性部分、および生理学的ｐＨでの負電荷か、または部分的に負に荷電した酸素、イオウ、もしくはフッ素のいずれかを有する分子を結合し得る。一般的に、ＨＳＡに対する結合親和性は、結合部分の疎水性と共に増加する。広範な疎水性結合部分または両親媒性結合部分が用いられ得、これらは、例えば、任意の数の窒素置換基、酸素置換基、イオウ置換基、ハロゲン置換基、アルキル置換基、アミド置換基、エステル置換基、およびスルホンアミド置換基を含む１〜６０個の炭素を有する、脂肪族基またはアリール基を含む。混合された脂肪族−アリール基、またはアリール基は、特に有用である。あるいは、結合基は、疎水性末端基または親水性末端基を有するか、または有さない、疎水性アミノ酸残基および／または疎水性置換基を含むペプチドであり得る。アルブミンからサイロキシンを置換しない結合基は、特に有用である。なぜならば、サイロキシンの置換は、都合の悪い影響を導き得るからである。さらに、アルブミンからワーファリンまたはジゴキシンを置換しない結合基もまた、好適であり得る。
【００８１】
生理学的条件下で５０％よりも多く（例えば、６０、７０、８０、９０、または９５％よりも多く）結合される、血清アルブミンに対する親和性を有する結合基は、適切である。一般的に、より高い程度までアルブミンを結合する化合物は、血中でより長い半減期を有する。しかし、アルブミン結合特性の範囲を用いて、結合体化ポリペプチドの半減期を適切なレベルに合わせ得る。例えば、結合は、半減期を延ばすのに十分な強度であるべきであるが、有益な生理学的効果を発揮するために利用可能な結合体の遊離画分がなくなるほど強くはない。ある程度の血管外遊出が望まし場合、中程度の親和性のアルブミン結合基が選択され得る。
【００８２】
アルブミン上の特定の部位に対する強い親和性を有する結合基は、特に有用である。なぜならば、このような情報は、インビボで生じ得る薬物置換反応を予想するために用いられ得るからである。ＨＳＡは、３つの相同ドメインを含み、各ドメインは、構造モチーフを共有する２つのサブドメインから構成される。ＨＳＡが、内因性分子および外因性分子についての多くの結合部位を含む一方で、部位Ｉおよび部位ＩＩは、リガンド結合の重要な領域である。例えば、Ｓｕｄｌｏｗ，Ｇ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １９７５，１１，８２４−８３２；およびＳｕｄｌｏｗ，Ｇ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １９７６，１２，１０５２−１０６１を参照のこと。部位Ｉは、サブドメインＩＩＡ上に存在する大きな部位であり、ワーファリンおよびサリチレートを含む広範な分子を結合し得る。部位Ｉに対する結合親和性は、ワーファリンおよびサリチレートを含む異なる範囲の分子に結合し得る。部位Ｉの対する結合親和性は、ワーファリン、ダンシル−Ｌ−アスパラギン（ＤＮＳＡ）、およびｎ−ブチルｐ−アミノベンゾエート蛍光プローブを用いて評価され得る。例えば、Ｙａｍａｓａｋｉ，Ｋら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １９９６，１２９５，１４７−１５７を参照のこと。部位ＩＩは、サブドメインＩＩＩＡ上に位置付けられ、そしてジアゼパム、イブプロフェン、およびナプロキセンなどの分子を結合する。例えば、Ｐｅｔｅｒｓ，Ｔ．Ｊ．Ａｌｌ  ａｂｏｕｔ  Ａｌｂｕｍｉｎ：Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，１９９６を参照のこと。本発明の結合体化ポリペプチドは、アルブミンの部位ＩＩに特異的に結合し得る。
【００８３】
候補結合基のアルブミン親和性およびポリペプチド結合体のアルブミン親和性を決定するための方法は、当該分野で公知であり、そしてアフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、平衡透析、および蛍光プローブ置換が挙げられる。結合基単独の可溶性が制限される場合、可溶化フラグメント（例えば、Ｇｄ−ＤＴＰＡ）を用いて結合基を誘導体化することにより、相対的親和性を評価することが好適であり得る。例えば、ＨＳＡ結合は、緩衝液（ｐＨ７．４）中の４．５％重量／容量のＨＳＡを用いる平衡透析または限外ろ過により評価され得る。蛍光プローブ置換において、ＨＳＡに結合した時に蛍光を発する蛍光プローブが用いられる。親和性は、蛍光プローブが、アルブミン結合部分によりＨＳＡ上の結合部位から置換されるか否かを決定することにより評価される。蛍光の低下は、アルブミン結合部分がプローブで置換されたことを示し、そして得られたデータを適合させて、阻害平衡定数Ｋｉ（これは、所定のプローブの結合部位に対する結合基の親和性を反映する）を獲得し得る。
【００８４】
アルブミン結合部分は、任意の治療用ポリペプチドに結合体化され得る。例えば、ポリペプチドは、生理活性ペプチド（例えば、５〜５０のアミノ酸長）であり得るか、または触媒活性を有しても有さなくてもよいより長いポリペプチドであり得る。生理活性ペプチドの非制限的例としては、以下が挙げられる：コナントキンＧ（ｃｏｎａｎｔｏｋｉｎ  Ｇ）、ダイノルフィン、エンドルフィン、エンケファリン、またはニューロテンシンのような、神経伝達物質；ボンベシン、モチリン、またはガストリンのような、胃活性化因子（ｇａｓｔｒｉｃ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ）；カルシトニンのような、カルシウム調節因子；血管作用性腸ポリペプチド、コルチコトロピン、またはセクレチンのような、ホルモン；ソマトスタチンのような、ホルモンインヒビター；メラニン細胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン放出因子、セルモレリン（ｓｅｒｍｏｒｅｌｉｎ）のような、ホルモン刺激因子；グルカゴンまたはインスリン（「Ｈｕｍｕｌｉｎ」Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）のような抗糖尿病剤；アンジオスタチンＩＩのような、血管収縮薬；ブラジキニン、サブスタンスＰ、またはカリジンのような、血管拡張薬；心房性ナトリウム利尿ポリペプチドのようなナトリウム排泄増加剤；ならびにオキシトシンのような子宮収縮剤。用いられ得るポリペプチドのさらなる例としては、ヒト成長ホルモン（「Ｈｕｍａｎｔｒｏｐｅ」，Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；Ｇ−ＣＦＳ（「Ｎｅｕｐｏｇｅｎ」，Ａｍｇｅｎ）；エリスロポイエチン（「Ｅｐｏｇｅｎ」，Ａｍｇｅｎ）；インターフェロンα、インターフェロンβ、またはインターフェロンγ；プロテインＣまたはＶＩＩａ因子のような、ＶＩＩＩ因子または他の血液凝固因子；卵胞刺激ホルモン；インターロイキン（ＩＬ）（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、またはＩＬ−１２）のような、サイトカイン；ヘモグロビン；スーパーオキシドジスムターゼ；可溶性ＣＤ４またはＣＤ４レセプター；可溶性ＴＮＦレセプター（「Ｅｎｂｒｅｌ」，Ｉｍｍｕｎｅｘ）；血小板ｇｐＩＩｂ／ＩＩＩａアナログおよびそれらのレセプター（「ＲｅｏＰｒｏ」，Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｊｏｈｎｓｏｎ）；グルコセレブロシダーゼ（「Ｃｅｒｅｄａｓｅ」または「Ｃｅｒｅｚｙｍｅ」，Ｇｅｎｚｙｍｅ）；ＡＣＴＨ；ソマトトロピン；副甲状腺ホルモン、抗利尿ホルモン；プロラクチン；あるいはストレプトキナーゼ、スタフィロキナーゼ、ウロキナーゼ、または組織プラスミノーゲン活性化因子（「Ａｃｔｉｖａｓｅ」，Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）のような血栓溶解薬が挙げられる。
【００８５】
アルブミンに特異的に結合するポリペプチド結合体は、以下の一般式Ｉを有し得る：
【００８６】
【化２７】
2006063071.tif 000028
【００８７】
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、およびＲ３は、独立して、０〜１２個の原子の直鎖を含み得る。例えば、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、存在しても、存在しなくてもよい。存在する場合、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、同じであっても、異なっていてもよく、そして、例えば、（ＣＨ２）ｍ、ＮＨ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｘ、ＣＨ２−ＮＨ−（ＣＨ２）ｙ、（ＣＨ２）ｚ−Ｃ（Ｏ）を含み得、ここで、ｍ、ｘ、およびｚは、０〜１２の整数であり、そしてｙは、１〜１２の整数である。
【００８８】
Ｒ３は、例えば、Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｐ（ここで、ｐは、０〜１２の整数である）、Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２であり得る。いくつかの実施形態では、Ｒ３は存在しない。
【００８９】
Ｘは、１個の原子または５個以上の原子であり得、ここで、５以上の原子は、環構造または複素環式環構造を形成する。例えば、Ｘとしては、任意の原子、または二官能点を提供する原子の基（例えば、Ｎ、ＣＨ、Ｐ、もしくは以下のトリアジン）が挙げられる。
【００９０】
【化２８】
2006063071.tif 000029
【００９１】
Ｚは、独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＣＨ２、ＮＨ−ＣＯ、ＳＯ２、ＣＨ−Ｒ、Ｃ（Ｒ）２、ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ＝Ｎ、ＣＣであり得、ここで、Ｒは、アルキルまたはアリールである。
【００９２】
任意のアリール部分は、本発明の結合体化ポリペプチドに含まれ得る。アリール部分は、以下の構造式を有するものを含む；
【００９３】
【化２９】
2006063071.tif 000030
【００９４】
ここで、アリール部分は、１〜５個のＲ基で置換され得る。Ｒは、独立して、以下から選択され得る：Ｈ、ＯＣＨ３、ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＳＨ、Ｓ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＳＯ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＳＯ２（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２ＮＨ２、ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、Ｎ（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）２、ＣＯ２Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、および（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル。
【００９５】
例示的アリール基としては、以下の構造式を有するものが挙げられる：
【００９６】
【化３０】
2006063071.tif 000031
【００９７】
Ｗは、１つ以上の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル鎖であり得るリンカーである。１つ以上の炭素原子は、独立して、以下の基の１つ以上で置換され得る：シクロアルカン、ヘテロ原子、置換へテロ原子、ＣＯ−Ｏ、ＣＯ−ＮＨ、ＣＯ−Ｓ、ＣＯ、ＳＯ２，ＳＯ２−ＮＨ、またはＳＯ２−Ｏ。例示的置換へテロ原子としては、例えば、Ｎ−（アルキル）、Ｎ−（アリール）、Ｎ−（アルキル−アリール）、ホスフィン、ホスフェート、チオホスフェート、アミノホスフェート、およびホスホジエステルが挙げられる。
【００９８】
ホスホジエステル部分と置換された例示的クラスのリンカー（Ｗ）としては、以下の構造式を有するものが挙げらる：
【００９９】
【化３１】
2006063071.tif 000032
【０１００】
ここで、Ｒ１は、（ＣＨ２）ｎであり、ここで、ｎは、０〜１２の整数であり；そしてＲ４は、Ｈ、アルキル、または負電荷、およびその塩である。ホスホジエステル部分を有する例示的化合物としては、実施例の表１に示されるものが挙げられる。
【０１０１】
このようなリンカーを含む結合体化ポリペプチドを作製するために、以下の構造式を有する化合物を用い得る：
【０１０２】
【化３２】
2006063071.tif 000033
【０１０３】
ここで、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、上記の通りである。
【０１０４】
リンカーＷ’は、少なくとも１つの反応部分Ｒ５を含む。「反応部分」は、ポリペプチドと反応して、共有結合を形成し得る化学物質である。ポリペプチド誘導体を合成するための試薬は当該分野で周知であり、そして、Ｒｏｇｅｒ  Ｌ．Ｌｕｂｌａｄによる「Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ」（１９９４）に例示されるアプローチが挙げられるが、これに制限されない。多くの型の反応が、結合体に用いられ得、これらとしては、以下が挙げられる：活性エステルを用いるアシル化（米国特許第４，８９７，２５５号）、還元アミノ化、求核置換反応（例えば、ブロモアセトアミド（米国特許第４，６７８，６６７号））、尿素形成、チオ尿素形成、および化学選択的連結。タンパク質上のチオール残基の修飾のための好ましい試薬としては、タンパク質との混合ジスルフィド付加物を形成する、マレイミド、ハロアセトアミド、ハロアセテート、およびジチオールが挙げられる。リジンのεアミノ基のような、アミノ残基の修飾のための好ましい試薬としては、以下が挙げられる：活性エステル（例えば、無水物、ペンタフルオロフェノール、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドなど）、イソチオシアネート、アルデヒド（例えば、還元アミノ化スキームにおける、ピリドキサール−５’−ホスフェート）、ハロアセトアミド、およびハロアセテート。アルギニン残基は、２，３−ブタジオンおよびボレートを用いて修飾され得る。
【０１０５】
例示的反応部分としては、Ｈ、ハロゲン、１°アミン、２°アミン、ヒドロキシル、チオール、カルボン酸、スルホン酸、および活性エステルが挙げられる。活性エステルは、Ｍ．Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，「Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」第２版；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９３，２７６頁により詳細に記載される。特定の好ましい活性エステルの例としては、ＮＨＳエステル、カルボキシレート、酸塩化物、酸無水物、マレイミド、およびアルデヒドが挙げられる。
【０１０６】
アミド部分で置換された別のクラスのリンカー（Ｗ）は、以下の構造式を有し得る：
【０１０７】
【化３３】
2006063071.tif 000034
【０１０８】
結合体化ポリペプチドは、以下の結合体を生じるようなリンカーを用いて作製され得る：
【０１０９】
【化３４】
2006063071.tif 000035
【０１１０】
アルブミンに特異的に結合する第２のクラスのポリヌクレオチド結合体は、以下の一般構造式ＩＩを有する：
【０１１１】
【化３５】
2006063071.tif 000036
【０１１２】
ここで、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３、Ｗ、およびアリールは、上で定義した通りである。Ｇは、０〜９個の原子の鎖であり、そして５個と１２個の間の原子のサイズの環を提供する、任意の構造エレメントであり得る。例えば、Ｇは、（ＣＨ２）ｑ（ここで、ｑは０〜９の整数である）、Ｃ（Ｏ）、ＳＯ２、またはＳ（Ｏ）であり得る。
【０１１３】
このような結合体化ポリペプチドを作製するために、以下の構造式を有する化合物を用い得る：
【０１１４】
【化３６】
2006063071.tif 000037
【０１１５】
ここで、Ｒ基は、上で定義した通りである。
【０１１６】
結合体の安定性は、Ｒ２ａまたはＲ２ｂのいずれかが存在しない場合に、Ｒ１を（ＣＨ２）ｎ（ここでｎは１〜１２の整数である）に限定することにより、改善され得る。
【０１１７】
第３のクラスの結合体化ポリペプチドは、以下の一般式ＩＩＩを有する：
【０１１８】
【化３７】
2006063071.tif 000038
【０１１９】
ここで、ＷおよびＲ４は、上記の通りである。Ｒ６は、１つ以上の炭素原子を含む結合部分である。アルブミン結合部分は、特に有用である。例えば、上記および表Ｉの結合部分を参照のこと。上記の化合物および結合体におけるＷおよびＷ’の両方が、アルブミン結合に寄与し得ることが注目される。
【０１２０】
１つの実施形態では、本発明のアルブミン結合部分は、一般的に、反応性カルボン酸部分を有するホスホルアミダイト保護化合物を、遊離のヒドロキシル部分、分枝点、およびアリール基を有する化合物と反応させて、ホスホジエステル部分、末端基、および末端カルボン酸基を含む化合物を形成することにより調製され得る。ホスホルアミダイト、および分枝点を含む化合物は、標準的な合成方法を用いて合成され得、そして当業者に周知である。第２のアリール部分は、標準的な合成手順を用いて導入され、従って、分枝点、ホスホジエステル、２つのアリール部分、および遊離のカルボン酸末端を有する、アルブミン結合部分を生成する。遊離のカルボン酸末端は、活性エステル、またはポリペプチドのアミノ末端への結合体化のために適切な他の部分へと転換され得る。以下は、このような化合物の調製のための一般的な手順を示す：
【０１２１】
【化３８】
2006063071.tif 000039
【０１２２】
（薬学的組成物）
アルブミン結合部分およびポリペプチド結合体を含む、本発明の組成物は、慣用的な手順に従って薬学的組成物として処方され得る。本明細書中で用いられる場合、本発明の化合物は、その薬学的に受容可能な誘導体を含み得る。「薬学的に受容可能な」とは、化合物または組成物が、受け入れられない有害な影響なしに、動物に投与され得ることを意味する。「薬学的に受容可能な誘導体」とは、任意の薬学的に受容可能な塩、エステル、エステルの塩、あるいは、レシピエントに投与される際に、本発明の化合物または活性代謝物もしくはその残基を（直接的または間接的に）提供し得る本発明の化合物の他の誘導体を意味する。他の誘導体は、（例えば、経口投与された化合物を、血中により容易に吸収させることにより）本発明の化合物が哺乳動物に投与される場合に、このような化合物のバイオアベイラビリティーを増大する誘導体か、あるいは親化合物の生物学的区画（例えば、脳またはリンパ系）への送達を増強して、親種に対する曝露を増大させる誘導体である。本発明の化合物の薬学的に受容可能な塩は、当該分野で周知である薬学的に受容可能な無機酸および有機酸ならびに無機塩基および有機塩基から誘導される対イオンを含む。
【０１２３】
本発明の薬学的組成物は、経口投与および非経口投与の両方を含む、任意の経路により投与され得る。非経口投与としては、皮下投与、静脈内投与、動脈内投与、間質投与、鞘内投与、および腔内投与が挙げられるが、これらに限定されない。静脈内に投与される場合、薬学的組成物は、ボーラス、時間を空けた２回以上の投薬、または一定もしくは非直線流動注入として与えられ得る。従って、本発明の組成物は、任意の経路の投与のために処方され得る。
【０１２４】
代表的には、静脈内投与のための組成物は、滅菌等張水性緩衝液中の溶液である。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤、安定化剤、および注入部位の痛みを緩和するリドカインのような局部麻酔剤を含み得る。一般的に、成分は、別々に（例えば、キット中）か、または単位投薬形態（例えば、凍結乾燥粉末または無水濃縮物として）で一緒に混合されてのいずれかで供給される。組成物は、活性単位の活性薬剤の量を示すアンプルまたは小さい包み（ｓａｃｈｅｔｔｅ）のような密閉容器中で保存され得る。組成物が、注入により投与される場合、滅菌薬学グレードの「注射用の水」、生理食塩水、または他の適切な静脈内流体を含む注入ビンに分配され得る。組成物が、注入により投与される場合、注入のための滅菌水または生理食塩水のアンプルは、成分が、投与の前に混合され得るように提供され得る。本発明の薬学的組成物は、薬学的に受容可能な成分、賦形剤、キャリア、アジュバントまたはビヒクルと共に、本発明の化合物およびその薬学的に受容可能な塩を含む。
【０１２５】
本発明の薬学的組成物は、他の診断剤または治療剤に類似した様式で、ヒトを含む哺乳動物に投与され得る。投与されるべき投薬量、および投与の様式は、患者の年齢、体重、性別、状態、および遺伝的因子を含む、種々の因子に依存し、そして、最終的に、医療関係者により決定され、引き続いて、本明細書中に記載されるように、様々な投薬量の実験的決定、次いで、イメージングが行われる。一般的に、診断的感受性または治療効果のために必要とされる投薬量は、ホストの体重の約０．００１μｇ／ｋｇ〜５０，０００μｇ／ｋｇ、好ましくは、０．０１μｇ／ｋｇと２５．０μｇ／ｋｇの間の範囲である。最適な用量は、本明細書中の開示に従って実験的に決定される。
【実施例】
【０１２６】
以下の実施例は、本明細書中を例示するために提供され、本発明の限定として解釈されるべきではない。
【０１２７】
（実施例１：アルブミン結合試薬の合成および特徴付け）
（工程１：（Ｒ）−２−ヒドロキシメチル−Ｎ−トリチル−（Ｓ）−４−イソブチル−Ｎ’−メチルフェニルアセチルエチレンジアミンモノアミド）
【０１２８】
【化３９】
2006063071.tif 000040
【０１２９】
１００ｍＬ丸底フラスコ中で、（Ｒ）−ヒドロキシメチルＮ−トリチルエチレンジアミン（１．３３ｇ）、（Ｓ）−イブプロフェン［（Ｓ）−（＋）−４−イソブチル−α−メチルフェニル酢酸］（０．８３ｇ）およびＨＯＢｔ・１Ｈ２Ｏ（０．６８ｇ）を、１０ｍＬの無水塩化メチレン中に溶解した。ＥＤＣ（０．９６ｇ、５ｍｍｏｌ、１．２５当量）を、５°で添加した。この混合物を、５℃と室温との間で２４時間撹拌した。塩化メチレンを、ロータリーエバポレーションによってによってエバポレートし、そして残渣を酢酸エチル中に溶解した。酢酸エチル層をＨ２Ｏで２回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒のエバポレーションによって、２．１６ｇの粗製の所望のアミドを白色発泡固体として得た。このアミドを、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）によってによって精製した。収量１．６２ｇ（７８％）。ＭＳ：５４３．５５（Ｍ＋Ｎａ）。
【０１３０】
（工程２：（Ｒ）−２−ヒドロキシメチル−Ｎ−（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセチル−エチレンジアミンアミド）
【０１３１】
【化４０】
2006063071.tif 000041
【０１３２】
１０ｍＬの丸底フラスコ中で、トリチル化アミンを、２．５ｍＬ無水塩化メチレン中に溶解した。ＴＦＡ（２．５ｍＬ）を滴下した。５分後、溶媒をロータリーエバポレーションによってエバポレートし、そして残渣をバキュームライン上に静置して凝固させた。残渣を１Ｎ  ＨＣｌで粉砕し、そして酢酸エチルで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒のエバポレーションによって、０．９３７ｇの粗製の所望のアミドをトリフルオロ酢酸塩として得た。遊離アミンを、８Ｎ  ＮａＯＨ（ｐＨ＝９）で遊離させた。水層を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を合わせ、そしてＭｇＳＯ４で乾燥させた。溶媒のエバポレーションによって、所望のアミドを白色固体として得た。収量０．２１１ｇ（６２％）。ＭＳ：３０１．３５（Ｍ＋Ｎａ）。
【０１３３】
（工程３：（Ｒ）−２−ヒドロキシメチル−Ｎ−（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセチル−Ｎ’−（Ｓ）−ベンジルオキシカルボニルｔ−ブチルアスパルチルエチレンジアミンジアミド）
【０１３４】
【化４１】
2006063071.tif 000042
【０１３５】
（Ｓ）−ベンジルオキシカルボニル−ｔ−ブチル−アスパルテートを、対応するジクロロヘキシルアミン塩の、０．５Ｎ  ＫＨＳＯ４での処理および酢酸エチルでの抽出によって得た。遊離酸、アミンおよびＨＯＢｔ一水和物を、０℃の２０ｍＬ塩化メチレンに溶解した。ＥＤＣ（０．３９５ｇ）を添加した。反応物を、ＲＴで１６時間撹拌した。塩化メチレンを、ロータリーエバポレーションによってエバポレートし、そして残渣を酢酸エチル中に溶解した。酢酸エチル層をＨ２Ｏ（２×１００ｍＬ）でおよびブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、そしてＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒のエバポレーションによって、粗製の所望生成物を得て、この精製物を、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）によって精製した。。収量０．６１３ｇ（６３％）。ＭＳ：５８４．６５（Ｍ＋１）。
【０１３６】
（工程４：モノ−ベンジルグルタール酸）
【０１３７】
【化４２】
2006063071.tif 000043
【０１３８】
グルタール酸無水物（３．４２３ｇ）およびベンジルアルコール（３．１０ｍＬ）を、塩化メチレンに溶解した。ＤＭＡＰ（０．１８３ｇ）を添加し、そして反応混合物をＲＴで２２時間撹拌した。溶媒をエバポレートし、そして残渣を酢酸エチルに溶解した。有機層を４０ｍＬの１Ｎ  ＮａＯＨおよび４０ｍＬのＨ２Ｏで抽出した。水層を合わせ、そして酢酸エチルで抽出した。水層を６ＮのＨＣｌ溶液でｐＨ３になるまで酸性化し、そして酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、そしてＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を、ロータリーエバポレーションによって除去して、６：５の比の所望のモノエステルとグルタール酸との混合物を２．７９ｇ得た。粗製のモノエステルを、さらなる精製を行わずに次の工程において用いた。
【０１３９】
（工程５：シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル（ベンジル−５−ヒドロキシペンタノエート）ホスホルアミダイト）
【０１４０】
【化４３】
2006063071.tif 000044
【０１４１】
モノ−ベンジルグルタレートとグルタール酸との６：５混合物（２．７９ｇ、１．８８ｇのモノエステル）を、２０ｍＬの無水ＴＨＦ中に溶解させた。トリエチルアミン（１．５３ｍＬ）を０℃で添加した。イソ−ブチルクロロホルメート（１．２５ｍＬ）を滴下し、そして得られる懸濁物を、０℃で１５分間撹拌した。トリエチルアミン塩酸塩を濾過し、そして濾液を、０℃で１５分間、Ｈ２Ｏ中のＮａＢＨ４（０．９６３ｇ）溶液に滴下した。反応混合物を２０分間撹拌し、そしてＴＨＦをロータリーエバポレーションによって除去した。残渣を酢酸エチルと１ＮのＨＣｌとの間で分配した。水層を３×３０ｍＬ酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、そしてＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒のエバポレーションによって、出発モノ−ベンジルグルタレートと所望の生成物との混合物を２．８９ｇ得て、これらを、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）によって分離した。第１画分：モノベンジルグルタレート（０．７４５ｇ、４０％）、第２画分：ベンジル５−ヒドロキシ−ペンタノエート（０．８３９ｇ、４８％）。
【０１４２】
ベンジル５−ヒドロキシ−ペンタノエート（０．６５７ｇ）を、２０ｍＬの無水塩化メチレン中に溶解し、そしてこの溶液を０℃になるまで冷却した。ジイソプロピルエチルアミン（０．８２ｍＬ）、続いて２−シアノエチルジイソプロピルクロロホスホルアミダイト（０．７４ｍＬ）を０℃で添加した。反応混合物を、０℃とＲＴとの間で２時間撹拌した。反応混合物を、冷飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、そして有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥した。
【０１４３】
溶媒のエバポレーションによって、１．４８１ｇの粗製の所望ホスホルアミダイトを得て、これを、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル／トリエチルアミン）によって精製した。収量０．８３９ｇ（６５％）。
【０１４４】
（工程６：メチル３−メトキシ−２，４，６−トリヨードベンゾエート）
【０１４５】
【化４４】
2006063071.tif 000045
【０１４６】
温度計および凝縮器を取り付けた３首の２５０ｍＬ丸底フラスコ中で、３−メトキシ−２，４，６−トリヨード安息香酸（１０．３８ｇ）を、０℃の、Ｅｔ２Ｏとメタノールとの２：１混合物中に溶解した。ＴＭＳＣＨＮ２の２．０Ｍヘキサン溶液を、黄色が維持されるようになるまで滴下し、そしてＮ２バブリングを中止した。反応混合物を３０分間撹拌し、そして氷酢酸でクエンチした。溶媒および過剰のＡｃＯＨを減圧下で１８時間除去して、所望のエステルを白色固体として得て、このエステルを、さらなる精製を行わずに次の工程で用いた。収量１１．０７ｇ（約１００％の粗製物）。
【０１４７】
（工程７：３−メトキシ−２，４，６−トリヨード安息香酸）
【０１４８】
【化４５】
2006063071.tif 000046
【０１４９】
凝縮器を備えた２５０ｍＬ丸底フラスコ中で、メチル３−メトキシ２，４，６−トリヨードベンゾエート（１１．０７ｇ）を、ジオキサン／ＭｅＯＨの３：１混合物（８８ｍＬ）中に溶解した。２２ｍＬのＨ２Ｏ中に溶解した水酸化リチウム（１．７１ｇ）を添加し、そして反応混合物を６０℃で７２時間撹拌した。ジオキサンおよびメタノールをエバポレートし、そして残渣を１００ｍＬのＨ２Ｏ中で希釈した。水溶液を濾過し、そして濾液をＥｔ２Ｏ（２×１００ｍＬ）で抽出した。エーテル層を合わせ、そしてＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒のエバポレーションによって、７．６４ｇの未反応の出発物質（６９％）を得た。水層を２ＮのＨＣｌでｐＨ２になるまで酸性化し、そして酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒のエバポレーションによって、所望の酸を得た。収量３．１４ｇ（２９％）。
【０１５０】
（工程８：３−メトキシ−２，４，６−トリヨードベンゾイルクロリド）
【０１５１】
【化４６】
2006063071.tif 000047
【０１５２】
凝縮器を備えた２５ｍＬ丸底フラスコ中で、メチル３−メトキシ２，４，６−トリヨード安息香酸（０．２５０ｇ）を、３ｍＬの無水塩化メチレン中に懸濁した。塩化オキサリル（０．５８ｍＬ）および１滴のＤＭＦを添加した。反応混合物をＲＴで４時間撹拌した。溶媒および過剰の塩化オキサリルを、ロータリーエバポレーションによって除去した。所望のアシルクロリドを減圧下で乾燥して、淡黄色固体を得て、これを、さらなる精製を行わずに次の工程において用いた。収量０．２７２ｇ（粗製物約１００％）。
【０１５３】
（工程９：ベンジル５−オキシ−ペンタノエート−ホスホノ−（Ｒ）−２−オキシメチル−Ｎ−（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセチル−Ｎ’−（Ｓ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルｔ−ブチルアスパルチルエチレンジアミンジアミド）
【０１５４】
【化４７】
2006063071.tif 000048
【０１５５】
（Ｒ）−２−ヒドロキシメチル−Ｎ−（Ｓ）−（＋）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセチル−Ｎ’−（Ｓ）−ベンジルオキシカルボニルｔ−ブチルアスパルチルエチレンジアミンジアミドを懸濁し、そしてシアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル（ベンジル５−ヒドロキシペンタノエート）ホスホルアミダイトを５ｍＬ無水アセトニトリル中に溶解し、そして２ｇのモレキュラーシーブ４Å（２ｇ）を添加した。テトラゾール（０．０８８ｇ）を０℃で添加した。１時間後、９０％のｔＢｕＯＯＨ（０．１７５ｍＬ、１．５８ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加し、そして反応物を４５分間撹拌した。シーブを濾過し、そして濾液をエバポレートして乾固させた。粗製ホスホトリエステルを含む残渣を酢酸エチル中に溶解し、そしてこれをＨ２Ｏ、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３およびブラインで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒のエバポレーションによって、０．９４０ｇの粗製ホスホジエステルを得て、これを、ＭｅＯＨ中の２ＭのＮＨ３（１０ｍＬ）で処理した。混合物を０℃で１時間およびＲＴで５時間撹拌した。反応物を、ＬＣ−ＭＳによってモニタリングした。溶媒のエバポレーションによって０．７９６ｇの所望の粗製ホスホジエステルアンモニウム塩を得て、これを、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ｉ−ＰｒＯＨ／Ｅｔ３Ｎ）によって精製した。収量０．６１３ｇ（Ｅｔ３ＮＨ＋塩、６１％）。ＭＳ：８５３．９５（Ｍ＋１）。
【０１５６】
（工程１０：オキシ−ペンタン酸−ホスホノ−（Ｒ）−２−オキシメチル−Ｎ−（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセチル−Ｎ’−（Ｓ）−ｔ−ブチルアスパルチルエチレンジアミンジアミド）
【０１５７】
【化４８】
2006063071.tif 000049
【０１５８】
５００ｍＬのＰａｒｒビン中で、ベンジル５−オキシ−ペンタノエート−ホスホノ−（Ｒ）−２−オキシメチル−Ｎ−（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセチル−Ｎ’−（Ｓ）−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルｔ−ブチルアスパルチルエチレンジアミンジアミド（０．２８９ｇ、０．３０３ｍｍｏｌ）を１５ｍＬの無水ＴＨＦ中に溶解し、そしてこの溶液を脱気した。１０％炭素担持パラジウム（０．２００ｇ）をアルゴン下で添加した。混合物を４５ｐｓｉのＨ２下で１４時間振盪した。触媒を濾別し、そしてＴＨＦで数回リンスした。溶媒のエバポレーションによって、所望のアミノ酸を白色固体として得た。収量０．１９３ｇ（８７％）。ＭＳ：６３０．５５（Ｍ＋１）および１２６０．１５（２Ｍ＋１）。
【０１５９】
（工程１１：５−オキシ−ペンタン酸−ホスホノ−（Ｒ）−２−オキシメチル−Ｎ−（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセチル−Ｎ’−（Ｓ）−ｔ−ブチルＮ−（３−メトキシ−２，４，６−トリヨードベンズアミド）アスパルテートエチレンジアミンジアミド）
【０１６０】
【化４９】
2006063071.tif 000050
【０１６１】
２５ｍＬ梨型フラスコ中で、アミン（０．０７５ｇ）およびメチル３−メトキシ−２，４，６−トリヨードベンゾイルクロリド（０．０６２ｇ）を、１ｍＬの無水塩化メチレン中に懸濁した。トリエチルアミン（４３μＬ）をＲＴで添加し、そして反応混合物を均質にした。反応混合物をＲＴで６時間撹拌した。有機溶媒および水層をエバポレートして乾固して、粗製の所望のアミドを得て、これを、さらなる精製を行わずに次の工程において用いた。収量０．１５７ｇ（約１００％粗製物）。ＭＳ：１１４２．５５（Ｍ＋１）。
【０１６２】
（工程１２：（５−オキシ−ペンタン酸のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）−ホスホノ−（Ｒ）−２−オキシメチル−Ｎ−（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセチル−Ｎ’−（Ｓ）−ｔ−ブチルＮ−（３−メトキシ−２，４，６−トリヨードベンズアミド）アスパルテートエチレンジアミンジアミド）
【０１６３】
【化５０】
2006063071.tif 000051
【０１６４】
酸（０．１５７ｇ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１７．８ｍｇ）を、１ｍＬの無水塩化メチレンに溶解した。ＥＤＣ（２４．７ｍｇ）を、ＲＴで一度に添加した。さらなるＥＤＣ（２４．７ｍｇ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１７．８ｍｇ）を添加した。１６時間後、塩化メチレンをロータリーエバポレーションによってエバポレートし、そして残渣を酢酸エチル中に溶解した。酢酸エチル層をＨ２Ｏで洗浄し、そしてＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒のエバポレーションによって、粗製の所望の活性化エステルを得て、これを、無水エーテルによって不純物を抽出することによって精製した。収量０．０９６ｇ（７３％）。ＭＳ：１２３９．７５（Ｍ＋１）。
【０１６５】
（工程１３：（５−オキシ−ペンタン酸のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）−ホスホノ−（Ｒ）−２−オキシメチル−Ｎ（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセチル−Ｎ’−（Ｓ）−Ｎ−（３−メトキシ−２，４，６−トリヨードベンズアミド）アスパルテートエチレンジアミンジアミド）
【０１６６】
【化５１】
2006063071.tif 000052
【０１６７】
ｔ−ブチルエステル（０．０５０ｇ）を、０．５ｍＬの無水塩化メチレン中に溶解した。トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を０℃で添加し、そして反応物を０℃で６時間撹拌した。溶媒をエバポレートし、そして残渣をエーテルで洗浄して、所望の酸を白色固体として得た。収量０．０３３ｇ（７２％）。ＭＳ：１１８３．５５（Ｍ＋１）。
【０１６８】
（実施例２：アルブミン結合試薬の合成および特徴付け）
（５−オキシ−ペンタン酸−ホスホノ−（Ｒ）−２−オキシメチル−Ｎ−（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセチル−Ｎ’−（Ｓ）−Ｎ−（３−メトキシ−２，４，６−トリヨードベンズアミド）アスパルテートエチレンジアミンジアミド）
５−オキシ−ペンタン酸−ホスホノ−（Ｒ）−２−オキシメチル−Ｎ−（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセチル−Ｎ’−（Ｓ）−Ｎ−（３−メトキシ−２，４，６−トリヨードベンズアミド）アスパルテートエチレンジアミンジアミドの活性化エステル（５ｍｇ）を１ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３中に溶解した。反応混合物を１．５時間撹拌し、次いで二酸を６ＮのＨＣｌの添加によって沈澱させた。固体を濾過し、そして逆相分取ＨＰＬＣ（Ｃ１８、アセトニトリル／１％  ＴＦＡ）によって精製した。収量１ｍｇ（２０％、ＨＰＬＣによって９４．３％の純度）。
【０１６９】
（工程１：ベンジル７−アミノヘプタノエートｐ−トルエンスルホン酸塩）
【０１７０】
【化５２】
2006063071.tif 000053
【０１７１】
凝縮器を取り付けて４Åモレキュラーシーブを充填したＤｅａｎ  Ｓｔａｒｋトラップを備えた１００ｍＬの３首丸底フラスコ中で、７−アミノヘプタン酸（１．４５ｇ）およびｐ−ＴｓＯＨ、１Ｈ２Ｏ（２．００ｇ）を、４０ｍＬのベンゼン中に懸濁した。ベンジルアルコール（５．２ｍＬ）を添加し、そして反応混合物を２０時間還流した。溶媒をロータリーエバポレーションによって除去し、そして残渣をエーテルで粉砕して、過剰のベンジルアルコールを除去した。所望の生成物を、濾過によって白色固体として得た。収量４．０５ｇ（９７％）。
【０１７２】
（工程２：（Ｒ）−２−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−Ｎ−（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセトアミド−２，３−ジアミノプロピオン酸）
【０１７３】
【化５３】
2006063071.tif 000054
【０１７４】
（Ｓ）−イブプロフェン（１．０６ｇ）およびトリエチルアミン（０．７ｍＬ）をＴＨＦに溶解し、そしてこの溶液を−１５℃まで冷却した。イソブチルクロロホルメート（０．６７ｍＬ）を滴下し、そして白色懸濁物を２０分間撹拌した。２回目の１当量のトリエチルアミンおよびＮ−α−Ｂｏｃジアミノプロピオン酸（１．０５ｇ）を添加し、そして反応物を一晩、０℃とＲＴとの間で撹拌した。ＴＨＦを減圧下でエバポレートし、そして残渣を飽和ＮａＨＣＯ３と酢酸エチルとの間で分配した。水層を酢酸エチルで３回抽出した。水層を０．５Ｎ  ＫＨＳＯ４（ｐＨ＝３）で酸性化し、そして酢酸エチルで３回、再度抽出した。有機層を合わせ、そしてＮａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒のエバポレーションによって、粗製の所望のアミドを得て、これを、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）によって精製した。収量１．３１１ｇ（６５％）。ＭＳ：２９３．４５（Ｍ＋１−ＢＯＣ）、４１５．４５（Ｍ＋Ｎａ）。
【０１７５】
（工程３：ベンジル７−アミノヘプタノエート（Ｒ）−２−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−３−Ｎ（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセトアミド−２，３−ジアミノプロピオンアミド）
【０１７６】
【化５４】
2006063071.tif 000055
【０１７７】
酸（０．６６ｇ）およびＨＯＡｔ（０．２５ｇ）を５ｍＬの無水塩化メチレンに溶解し、そしてジイソプロピルエチルアミン（２．３ｍＬ）およびベンジル７−アミノヘプタノエートｐ−トルエンスルホン酸塩（０．７５ｇ）を０℃に添加した。ＨＡＴＵ（０．７０ｇ）を添加し、そして反応混合物を０℃とＲＴとの間で２０時間撹拌した。過剰のアミンおよび未反応酸を、超純粋シリカゲル樹脂、イソシアネート１．５４ｍｍｏｌ／ｇ（１．０ｇ）、およびジアミン１．４４ｍｍｏｌ／ｇ（０．３８ｇ）で、ＲＴで撹拌しながら３０分間スカベンジした。この樹脂を濾過し、そして溶媒をエバポレートした。残渣を酢酸エチルと０．５Ｎ  ＫＨＳＯ４との間で分配した。有機層を、ＫＨＳＯ４、飽和ＮａＨＣＯ３およびブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒のエバポレーションによって、粗製の所望のビス−アミドを得て、これを、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン）によって精製した。収量：０．０３０ｇの（Ｓ）鏡像異性体（３％）および０．７２９ｇの（Ｒ）鏡像異性体（７１％）。ＭＳ：５１０．５５（Ｍ＋１−ＢＯＣ）、６１０（Ｍ＋１）、６３２．７５（Ｍ＋Ｎａ）。
【０１７８】
（工程４：ベンジル７−アミノヘプタノエート（Ｒ）−２−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルＮ−ベンジルオキシカルボニルアスパルトイル）−３−Ｎ−（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセトアミド−２，３−ジアミノプロピオンアミド）
【０１７９】
【化５５】
2006063071.tif 000056
【０１８０】
Ｂｏｃ保護アミン（０．６８９ｇ）を、０℃の３ｍＬの無水塩化メチレン中に溶解した。ＴＦＡ（３ｍＬ）を添加し、そして反応物をＨＰＬＣによってモニタリングした。反応は、０℃で６時間の撹拌後に完了した。溶媒をロータリーエバポレーションによって除去し、そして残渣をジオキサン中の４ＭのＨＣｌ（３ｍＬ）で３回粉砕し、そしてジオキサンをエバポレートした。白色固体をエーテルで粉砕し、濾過し、そして減圧下で乾燥した。この塩酸塩を、さらなる精製を行わずに次の工程において用いた。収量０．５０４ｇ（８２％）。ＭＳ：５１０．５５（Ｍ＋１）。
【０１８１】
アミン塩酸塩（０．５０４ｇ）を、５ｍＬの無水塩化メチレンおよびジイソプロピルエチルアミン（１．２９ｍＬ）中に溶解した。ｔｅｒｔ−ブチルＮ−ベンジルオキシカルボニルアスパルテートジクロロヘキシルアンモニウム塩（０．５１４ｇ）、ＨＡＴＵ（０．３８８ｇ）およびＨＯＡｔ、１Ｈ２Ｏ（０．１３９ｇ）を０℃で添加し、そして０℃とＲＴとの間で１３．５時間撹拌した。ＲＴで２０分間撹拌した後、超純粋シリカゲル樹脂、イソシアネート１．５４ｍｍｏｌ／ｇ（１．０ｇ）およびジアミン１．４４ｍｍｏｌ／ｇ（０．３８ｇ）。樹脂を濾過し、そして溶媒をエバポレートした。残渣を酢酸エチルとＨ２Ｏとの間で分配した。有機層をＨ２Ｏおよびブラインで３回洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒のエバポレーションによって、粗製の所望の生成物を得て、これを、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２〜ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）によって精製した。収量０．６６３ｇ（８８％）。ＭＳ：８１５．９５（Ｍ＋１）、８３７．７５（Ｍ＋Ｎａ）。
【０１８２】
（工程５：７−アミノヘプタン酸（Ｒ）−２−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルアミノアスパルチル）−３−Ｎ（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセトアミド−２，３−ジアミノプロピオンアミド）
【０１８３】
【化５６】
2006063071.tif 000057
【０１８４】
５００ｍＬのＰａｒｒビン中で、保護アミノ酸（０．６５３ｇ）をＴＨＦ中に溶解し、そしてこの溶液を脱気した。１０％炭素担持パラジウム（０．５００ｇ）をアルゴン下で添加した。混合物を、４５ｐｓｉのＨ２下で１８時間振盪した。さらなるパラジウム触媒（０．３ｇ）を添加し、そして混合物を、４５ｐｓｉのＨ２下で１８時間振盪した。触媒を濾別し、そしてＭｅＯＨで数回リンスした。溶媒のエバポレーションによって、所望のアミノ酸を白色固体として得た。収量０．４９０ｇ（約１００％の粗製物（ＨＰＬＣによれば９５％の純度））。ＭＳ：５９１．５５（Ｍ＋１）および６１３．５５（Ｍ＋Ｎａ）。
【０１８５】
（工程６：７−アミノヘプタン酸（Ｒ）−２−Ｎ−（Ｎ−（３−メトキシ−２，４，６−トリヨードベンズアミド）アスパルトイン酸−オイル）−３−Ｎ−（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセトアミド−２，３−ジアミノプロピオンアミドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）
【０１８６】
【化５７】
2006063071.tif 000058
【０１８７】
アミン−酸（０．３００ｇ）を、２ｍＬの無水塩化メチレン中に懸濁した。トリエチルアミン（０．１４ｍＬ）を添加し、そして大部分が溶解するまで混合物を撹拌した。溶液を０℃になるまで冷却した。０．５ｍＬ無水塩化メチレン中に溶解した３−メトキシ−２，４，６−トリヨードベンゾイルクロリド（０．２７４ｇ）を滴下した。反応物を２２時間にわたって撹拌した。溶媒をエバポレートし、そして得られる黄色発泡固体をエーテルで４回粉砕し、そして乾燥して０．６０ｇの淡白色固体を得て、これを、シリカゲルでの２回のフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）によって精製した。収量０．２２１ｇ（５０％）。ＭＳ：１１０３（Ｍ＋１）。
【０１８８】
酸（０．１１７ｇ）を、４ｍＬの無水塩化メチレン中に懸濁した。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（０．０１８ｇ）およびＥＤＣ（０．０２５ｇ）を添加し、そして反応物をＲＴで２６時間撹拌した。反応混合物をより多くの塩化メチレンで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄し、そしてＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒をエバポレートして、所望の活性化エステルを黄色がかった固体として得た。収量０．１０１ｇ（７９％）。ＭＳ：１２００．１５（Ｍ＋１）。
【０１８９】
ｔ−ブチルエステル（０．０５０ｇ）を、０℃の１ｍＬの無水塩化メチレンと０．４ｍＬのトリフルオロ酢酸との混合物中に溶解した。反応混合物を０℃とＲＴとの間で２３時間にわたって撹拌した。溶媒をエバポレートした。残渣を減圧下で２４時間乾燥した。収量４６．２ｍｇ（９７％、ＨＰＬＣによれば７０％の純度）。ＭＳ１１４４．１５（Ｍ＋１）および１１６６．１５（Ｍ＋Ｎａ）。
【０１９０】
（工程７：７−アミノヘプタン酸（Ｒ）−２−Ｎ−（Ｎ−（３−メトキシ−２，４，６−トリヨードベンズアミド）アスパルトイル））−３−Ｎ−（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセトアミド−２，３−ジアミノプロピオンアミド）
【０１９１】
【化５８】
2006063071.tif 000059
【０１９２】
７−アミノヘプタン酸（Ｒ）−２−Ｎ−（ｔ−ブチルＮ−（３−メトキシ−２，４，６−トリヨードベンズアミド）アスパルトイル））−３−Ｎ−（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセトアミド−２，３−ジアミノプロピオンアミド［上記の７−アミノヘプタン酸（Ｒ）−２−Ｎ−（Ｎ−（３−メトキシ−２，４，６−トリヨードベンズアミド）アスパルトイル酸−オイル）−３−Ｎ−（Ｓ）−４−イソブチル−α−メチルフェニルアセトアミド−２，３−ジアミノプロピオンアミドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルの合成における中間体］（１３ｍｇ）を、２ｍＬのトリフルオロ酢酸中に溶解した。反応物を０℃で３時間撹拌した。ＴＦＡをエバポレートし、そして粗製の二酸を逆相分取ＨＰＬＣ（Ｃ１８、アセトニトリル／１％  ＴＦＡ）によって精製した。収量３ｍｇ（２５％、ＨＰＬＣによれば９９％の純度）。
【０１９３】
（実施例３）
一連の結合基の親和性を、ダンシルサルコシン蛍光プローブを用いて得た。ダンシルサルコシン蛍光プローブは、ＨＳＡに結合した場合、強力に蛍光を発する。以下の表１に示すデータを、結合基親和性の相対的なランクの順番が得られ得るように、高度に水溶性のガドリニウムキレートＧｄ−ＤＴＰＡの誘導体として決定した。可溶化フラグメントに連結した結合基を添加した際に、蛍光の減少は、アルブミン結合基による置換を示した。これらのデータを当てはめて、阻害平衡定数Ｋｉを得た。Ｋｉは、所定のプローブの結合部位に対する結合基の親和性を反映する。
【０１９４】
【表１−１】
2006063071.tif 000060
【０１９５】
【表１−２】
2006063071.tif 000061
【０１９６】
【表１−３】
2006063071.tif 000062
【０１９７】
（実施例４：インスリン結合体１〜４の調製）
【０１９８】
【化５９】
2006063071.tif 000063
【０１９９】
組換えヒトインスリン（Ｅ．Ｃｏｌｉ中で発現された（Ｓｉｇｍａ）（５６ｍｇ、９．６μｍｏｌ．，２当量））、活性化エステル（１当量）およびＮａ２ＣＯ３（１０当量）を、０℃で０．８ｍＬのＤＭＦ中に懸濁した。水（０．４ｍＬ）を添加し、そして混合物をほぼ均一にさせた。反応混合物を０℃とＲＴとの間で１８時間撹拌した。粗製反応混合物は、未反応のインスリンと、結合体２／結合体１の１：１混合物との混合物を大部分含んでいた。混合物を分取ＨＰＬＣ（Ｃ−１８、勾配：アセトニトリル／ＮＨ４ＯＡｃ  ５０ｍＭ  ３５％〜８０％）によって分離した。収量：２８．３ｍｇのインスリン（５０％）、１１ｍｇの結合体１および結合体２（３３％）。約２ｍｇの結合体１および結合体２のバッチを、複数の分取ＨＰＬＣの後に得た。
【０２００】
結合体１  ＭＳ：（ｚ＝３：２２９３．８、ｚ＝４：１７２０．６、ｚ＝５：１３７６．６）。結合体１の溶液を過剰のＤＴＴで処理し、そして混合物をＲＴで１時間インキュベートした。アリコートをＬＣ−ＭＳによって分析し、そして以下のフラグメントが観察された：フラグメント１：還元されたＢ鎖（ｚ＝２：１７１５．７５、ｚ＝３：１１４４．１５、ｚ＝４：８５８．３５）、フラグメント２：Ｇｌｙ１でアシル化された還元されたＡ鎖（ｚ＝２：１７２６．３、ｚ＝３：１１５１．１５）。
【０２０１】
結合体２  ＭＳ：（ｚ＝３：２２９３．８、ｚ＝４：１７２０．８、ｚ＝５：１３７５．９）。結合体２の溶液を、過剰のＤＴＴおよびトリプシン溶液で処理した。混合物をＲＴで１時間インキュベートした。アリコートをＬＣ−ＭＳによって分析し、そして以下のフラグメントが観察された：フラグメント１：還元されたＡ鎖（ｚ＝２：１１９３．０、ｚ＝３：７９６．０）、フラグメント２：還元されたＢ鎖のＰｈｅ１−Ａｒｇ２２フラグメント（ｚ＝２：１２４５．２、ｚ＝３：８３０．５）、フラグメント３：還元されたＢ鎖のＧｌｙ２３−Ｌｙｓ２９−εＮＨＣＯＲ−Ｔｈｒ−３０フラグメント（ｚ＝２：２０２８．３、ｚ＝３：１０１５．０）、フラグメント４：アシル化された還元された鎖Ｐｈｅ１−Ｌｙｓ２９−εＮＨＣＯＲ−Ｔｈｒ−３０（ｚ＝２：２２５０．１、ｚ＝３：１５００．６）、ここでＲはアルブミン結合基である。
【０２０２】
部位−２（イブプロフェン部位）結合（対、プローブとしてのダンシルサルコシン）について特異的な競合アッセイを実施して、結合対の親和性を評価した。結合体−１および結合体−２を試験し、そしてそれぞれ、４１μＭおよび１５μＭのＫｉ値を有した。生理学的条件下で、これらの結合体は、９８％を超えて結合していた。
【０２０３】
（インスリン結合体３およびインスリン結合体４の調製）
【０２０４】
【化６０】
2006063071.tif 000064
【０２０５】
組換えヒトインスリン（Ｅ．Ｃｏｌｉにおいて発現された（Ｓｉｇｍａ）（１５２．４ｍｇ、２６．２μｍｏｌ．、３当量））を、ＤＭＦとＨ２Ｏとの１：１混合物０．８ｍＬに溶解し、そしてＮａ２ＣＯ３（３当量）を一度に添加した。活性化エステル（１当量）を、５分間かけて少しずつ添加した。反応を６時間かけて完了させた。粗製の反応混合物は、未反応のインスリンと、結合体４／結合体３の２．６：１混合物との混合物をほとんど含んでいた。この混合物を、分取ＨＰＬＣ（Ｃ−１８、勾配：アセトニトリル／ＮＨ４ＯＡｃ  ５０ｍＭ  ３５％〜８０％）によって分離した。収量：８７ｍｇのインスリン（８６％）、６．５ｍｇの結合体３（１１％）および１８．２ｍｇの結合体４（３０％）。
【０２０６】
結合体３  ＭＳ：（ｚ＝２：１７０９．８）。結合体３の溶液を、過剰のＤＴＴおよびトリプシン溶液で処理した。混合物をＲＴで１時間インキュベートした。アリコートをＬＣ−ＭＳによって分析し、そして以下のフラグメントが観察された：フラグメント１：還元されたＢ鎖（ｚ＝４：８５９．６）、フラグメント２：Ｂ鎖のフラグメント（ｚ＝２：１２４４．８、ｚ＝３：８３０．２）、フラグメント３：Ａ鎖Ｇｌｙ１−ＣＯＲ（ｚ＝２：１７０７．０）、ここでＲはアルブミン結合基である。
【０２０７】
結合体４  ＭＳ（ｚ＝３：２２７８．７、ｚ＝４：１７０９．６）。結合体４の溶液を、過剰のＤＴＴおよびトリプシン溶液で処理した。混合物をＲＴで１時間インキュベートした。アリコートをＬＣ−ＭＳによって分析し、そして以下のフラグメントが観察された：フラグメント１：還元されたＢ鎖のＰｈｅ１−Ａｒｇ２２フラグメント（ｚ＝２：１２４５．０、ｚ＝３：８３０．４）、フラグメント２：還元されたＡ鎖（ｚ＝２：１１９２．３）、フラグメント３：還元されたＢ鎖のＧｌｙ２３−Ｌｙｓ２９−εＮＨＣＯＲ−Ｔｈｒ−３０フラグメント（ｚ＝１：１９９０．６、ｚ＝２：９９５．０）、フラグメント４：アシル化された還元された鎖Ｐｈｅ１−Ｌｙｓ２９−εＮＨＣＯＲ−Ｔｈｒ−３０（ｚ＝２：２２２９．８、ｚ＝３：１４８７．０）、ここでＲはアルブミン結合基である。
【０２０８】
（実施例５：薬物動態学的研究）
インスリンは、薬物動態学的プロファイルおよび薬理学的プロファイルに対するアルブミン結合の効果を実証するための便利なモデルである。なぜなら、インスリン活性についてのアッセイは、充分に開発されており、このポリペプチドは比較的安価であり、そして個々のアミノ酸を選択的の化学的に改変するための方法が周知であるからである。
【０２０９】
結合体−１および結合体−２、ならびにネイティブのヒトインスリンを、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒで、ラクトペルオキシダーゼおよびＮａ１２５Ｉを用いた反応によってヨウ素化して、ウサギにおける薬物動態学的研究を実施するために適切な、放射標識された誘導体（ほぼ０．０１ｍｏｌｅヨウ素／ｍｏｌｅインスリン）を得た。１２５Ｉ標識サンプルをＣ１８カラムでのＨＰＬＣによって分析し、そして以下の３つの放射能ピークが、各サンプルにおいて観察された：ｔ＝８〜１０分でのインスリン（または結合体）に対応する１つのピーク（総１２５Ｉのうちの７５〜９０％）、そしてｔ＝３分およびｔ＝１６分の未知の起源のピーク。インスリンの比活性（μＣｉ／μｇ）を計算する際に、各サンプル中でのインスリンの量を、ヨウ素化の前にアミノ酸分析によって測定し、そしてヨウ素化手順に起因した損失を補償するために９０％の収量係数を適用した。注射した溶液中のインスリンの比活性を、１２５Ｉ含有不純物の存在についてさらに補正した。この最終値を用いて、測定したｃｐｍ値から、血漿（μｇ／Ｌ）中のインスリン（または結合体）の濃度を計算した。
【０２１０】
麻酔したホワイトＮｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄウサギ（１化合物あたりｎ＝１）に、約０．８Ｕ／ｋｇに等価な用量である、１００μｇの［１２５Ｉ］−インスリンまたは［１２５Ｉ］−結合体−１もしくは［１２５Ｉ］結合体−２のいずれかを注射した。血液サンプル（１ｍＬ）を、ｔ＝１分、３分、５分、７分、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、４５分、６０分、７５分、９０分、１２０分、１５０分、１８０分、２１０分、２４０分および２７０分で得た。サンプルを遠心分離して（１５００ｇ、１０分）、血漿画分を血液収集の１５分間以内に単離し、そして凍結した。血漿のアリコートを、血液中の総化合物の最初の見積もりとしてカウントした。
【０２１１】
ＨＰＬＣ分析：インスリンまたはその結合対および他の精製物から生じた放射能の百分率を決定するために、血漿サンプルを５０％  ＭｅＯＨで処理して、アルブミンおよび他のタンパク質を沈澱させた。上清をＣ１８カラムでのクロマトグラフィー（２０分間の勾配、５〜９５％のＡＣＮ）にかけ、そして画分（１分）を収集し、そしてカウント（Ｐａｃｋａｒｄ  μ−カウンター）して、各ピーク中の放射能を決定した。インスリンに起因する血漿中のカウントを決定するために、総１２５Ｉのインスリンピーク中の百分率に、血漿中の総カウントを掛けた。
【０２１２】
血漿中の総ｃｐｍに、サンプル中で、ＨＰＬＣ分析によって決定したインスリンピーク（または結合体）中の活性の百分率を掛け、そしてμｇ／Ｌへと変換した。総１２５Ｉ血漿活性（ＨＰＬＣ種分化なし）のプロットを、ＨＰＬＣ分析から決定した因子を用いて計算したインスリン（または結合体）種の血漿レベルと比較した。インスリンデータに関して、インスリンに対して割り当てられた実際の１２５Ｉ活性のベースラインは、ゼロに向かって次第に減少し、一方、総血漿１２５Ｉデータは、最初の血漿濃度の約２０％に等しい値で同レベルになる（図１を参照のこと）。ＡＵＣおよび半減期ＰＫパラメーターの実質的過大評価は、１２５Ｉ標識インスリンを１２５Ｉ標識代謝産物と区別するＨＰＬＣ種分化（ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ）の非存在下で生じる。一方、結合体についての総血漿ｃｐｍデータおよびＨＰＬＣ種分化データは、互いに密接に類似する。なぜなら、総１２５Ｉの分数としてのこれらの化合物のレベルは、時間経過に伴って完全に一定のままであるからである。結合体−１および結合体−２は、インスリンよりもかなり長く、血漿中に存在した。これらは、約４〜５時間後に最初のレベルのほんの半分まで減少するが、一方、インスリンは、血漿中から迅速に除去され、そして１時間後にはほとんど検出不可能である。皮下注射後のウサギ中での可溶性単成分（ｍｏｎｏｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）インスリンの生物学的半減期は、５．５０±０．４９分であると報告されている［Ｔ．Ｋａｓａｍａら，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｙｎ．３，２０６−２１２（１９８０）］。
【０２１３】
データ（［インスリン］対時間）を、２区画ボーラス注射薬物動態学的モデルに割り当てた。全てのデータセットは、このモデルによく適合する。パラメーターを、コンピュータプログラム「ＰｈａｒＳｉｔｅ」を用いて計算し、２区画／ボーラス注射モデル（Ｃｔ＝Ａｅ−αｔ＋Ｂｅ−βｔ、Ｃｔ＝時間ｔでの目的の種の濃度；Ａ、Ｂ、αおよびβは、適合パラメーターである）に割り当てた。データを、用量に対して正規化した。パラメーターにおける不確定性は、１０〜２０％の範囲にわたる。この適合からの残りのプロットによって、ほぼランダムな分布が得られた。これは、選択されたモデルが適切であることをさらに示す。この適合から得られたパラメーターの値を表２に表す。
【０２１４】
【表２】
2006063071.tif 000065
【０２１５】
インスリンおよび結合体についての血漿のＰＫのプロットは、二相性であり、最初は、薬物濃度が鋭く減少し、続いて長期の持続時間の浅いスロープとなる。インスリンについて、この最初の減少は、結合体についてよりもかなり急である。このことは、ＡＵＣにおける大きな差を説明する。結合体の濃度は、時間経過を通じて高いままである。このことは、結合体−１および結合体−２について、インスリンについて測定されたよりも４４倍高いＡＵＣ値および９７倍高いＡＵＣ値をもたらす。インスリンについての分布容量（Ｖｓｓ）値は、０．６Ｌ／ｋｇである。このことは、かなりの器官取り込みを示唆する。一方、結合体についてのこの値は、０．０３〜０．０４Ｌ／ｋｇに近く、血漿画分への局在と一貫している。結合体についての、インスリンについてよりも低いクリアランス率（ＣＬ）およびより高いＣｍａｘ（最大血漿濃度）はまた、アルブミン結合基との結合体化によってインスリンに対して付与された、改善された血漿安定性を反映する。
【０２１６】
（他の実施形態）
本発明の多数の実施形態が記載された。それにもかかわらず、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、種々の改変がなされ得ることが理解される。従って、他の実施形態は、本発明の特許請求の範囲の範囲内にある。
【図面の簡単な説明】
【０２１７】
【図１】図１は、インスリン（菱形）、結合体−１（四角）および結合体−２（三角）についてのウサギ血漿薬物動態データを示すプロットである。インスリンまたはインスリン結合体の濃度を、総１２５ＩのＨＰＬＣ形態分析（ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ）に従って決定した。
【図１】
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