(57)【要約】      （修正有）【課題】抗凝固作用を提供するタンパク質の提供。【解決手段】線虫由来のセリンプロテアーゼ阻害タンパク質に由来する、抗凝固作用を有するタンパク質。１または複数のＮＡＰドメインを有し、各ＮＡＰドメインが以下の配列：Cys-A1-Cys-A2-Cys-A3-Cys-A4-Cys-A5-Cys-A6-Cys-A7-Cys-A8-Cys-A9-Cys-A10（A1〜A10は、１〜複数のアミノ酸残基からなる）を含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗凝固作用を有し、１または複数のＮＡＰドメインを有し、各ＮＡＰドメインが以下の配列：
Ｃｙｓ−Ａ１−Ｃｙｓ−Ａ２−Ｃｙｓ−Ａ３−Ｃｙｓ−Ａ４−Ｃｙｓ−Ａ５−Ｃｙｓ−Ａ６−Ｃｙｓ−Ａ７−Ｃｙｓ−Ａ８−Ｃｙｓ−Ａ９−Ｃｙｓ−Ａ１０（式中、
（ａ）Ａ１は７から８アミノ酸残基のアミノ酸配列である；
（ｂ）Ａ２はアミノ酸配列である；
（ｃ）Ａ３は３アミノ酸残基のアミノ酸配列である；
（ｄ）Ａ４はアミノ酸配列である；
（ｅ）Ａ５は３から４アミノ酸残基のアミノ酸配列である；
（ｆ）Ａ６はアミノ酸配列である；
（ｇ）Ａ７は１アミノ酸残基である：
（ｈ）Ａ８は１１から１２アミノ酸残基のアミノ酸配列である；
（ｉ）Ａ９は５から７アミノ酸残基のアミノ酸配列である；および
（ｊ）Ａ１０はアミノ酸配列である；
上記Ａ２、Ａ４、Ａ６およびＡ１０の各々は、それぞれ独立して選択される数の、独立して選択されるアミノ酸残基を有し、各配列は、各ＮＡＰドメインが合計約１２０未満のアミノ酸残基を有するように選択される）
を含む、単離されたタンパク質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
【数１−１】
2006117675.tif 000002
【背景技術】
【０００２】
【数１−２】
2006117675.tif 000003
【０００３】
【数２】
2006117675.tif 000004
【０００４】
【数３】
2006117675.tif 000005
【０００５】
【数４】
2006117675.tif 000006
【０００６】
【数５】
2006117675.tif 000007
【０００７】
【数６】
2006117675.tif 000008
【０００８】
【数７Ａ−１】
2006117675.tif 000009
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明によって、以下が提供される。
【００１０】
【数７−１】
2006117675.tif 000010
【００１１】
【数７−２】
2006117675.tif 000011
【００１２】
【数７−３】
2006117675.tif 000012
【００１３】
【数７−４】
2006117675.tif 000013
【００１４】
【数７−５】
2006117675.tif 000014
【００１５】
【数７−６】
2006117675.tif 000015
【００１６】
【数７−７】
2006117675.tif 000016
【００１７】
【数７−８】
2006117675.tif 000017
【００１８】
【数７−９】
2006117675.tif 000018
【００１９】
【数７−１０】
2006117675.tif 000019
【００２０】
【数７−１１】
2006117675.tif 000020
【００２１】
【数７−１２】
2006117675.tif 000021
【００２２】
【数７−１３】
2006117675.tif 000022
【００２３】
【数７−１４】
2006117675.tif 000023
【００２４】
【数７−１５】
2006117675.tif 000024
【００２５】
【数７−１６】
2006117675.tif 000025
【００２６】
【数７−１７】
2006117675.tif 000026
【００２７】
【数７−１８】
2006117675.tif 000027
【００２８】
【数７−１９】
2006117675.tif 000028
【００２９】
【数７−２０】
2006117675.tif 000029
【００３０】
【数７−２１】
2006117675.tif 000030
【００３１】
【数７−２２】
2006117675.tif 000031
【００３２】
【数７−２３】
2006117675.tif 000032
【００３３】
【数７−２４】
2006117675.tif 000033
【００３４】
【数７−２５】
2006117675.tif 000034
【００３５】
【数７−２６】
2006117675.tif 000035
【００３６】
【数７−２７】
2006117675.tif 000036
【００３７】
【数７−２８】
2006117675.tif 000037
【００３８】
【数７−２９】
2006117675.tif 000038
【００３９】
【数７−３０】
2006117675.tif 000039
【００４０】
【数７−３１】
2006117675.tif 000040
【００４１】
【数７−３２】
2006117675.tif 000041
【００４２】
【数７−３３】
2006117675.tif 000042
【００４３】
【数７−３４】
2006117675.tif 000043
【００４４】
【数７−３５】
2006117675.tif 000044
【００４５】
【数７−３６】
2006117675.tif 000045
【００４６】
【数７−３７】
2006117675.tif 000046
【００４７】
【数７−３８】
2006117675.tif 000047
【００４８】
【数７−３９】
2006117675.tif 000048
【００４９】
【数７−４０】
2006117675.tif 000049
【００５０】
【数７−４１】
2006117675.tif 000050
【００５１】
【数７−４２】
2006117675.tif 000051
【００５２】
【数７−４３】
2006117675.tif 000052
【００５３】
【数７−４４】
2006117675.tif 000053
【００５４】
【数７−４５】
2006117675.tif 000054
【００５５】
【数７−４６】
2006117675.tif 000055
【００５６】
【数７−４７】
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【００５７】
【数７Ａ−２】
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【００５８】
【数８】
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【００５９】
【数９】
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【００６０】
【数１０】
2006117675.tif 000060
【００６１】
【数１１】
2006117675.tif 000061
【００６２】
【数１２】
2006117675.tif 000062
【００６３】
【数１３】
2006117675.tif 000063
【００６４】
【数１９−２】
2006117675.tif 000064
【００６５】
【数２０】
2006117675.tif 000065
【００６６】
【数２１】
2006117675.tif 000066
【００６７】
【数２２】
2006117675.tif 000067
【００６８】
【数２３】
2006117675.tif 000068
【００６９】
【数２４】
2006117675.tif 000069
【００７０】
【数２５】
2006117675.tif 000070
【００７１】
【数２６】
2006117675.tif 000071
【００７２】
【数２７】
2006117675.tif 000072
【００７３】
【数２８】
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【００７４】
【数２９】
2006117675.tif 000074
【００７５】
【数３０】
2006117675.tif 000075
【００７６】
【数３１】
2006117675.tif 000076
【００７７】
【数３２】
2006117675.tif 000077
【００７８】
【数３３】
2006117675.tif 000078
【００７９】
【数３４】
2006117675.tif 000079
【００８０】
【数３５】
2006117675.tif 000080
【００８１】
【数３６】
2006117675.tif 000081
【００８２】
【数３７】
2006117675.tif 000082
【００８３】
【数３８】
2006117675.tif 000083
【００８４】
【数３９】
2006117675.tif 000084
【００８５】
【数４０】
2006117675.tif 000085
【００８６】
【数４１】
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【００８７】
【数４２】
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【００８８】
【数４３】
2006117675.tif 000088
【００８９】
【数４４】
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【００９０】
【数４５】
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【００９１】
【数４６】
2006117675.tif 000091
【００９２】
【数４７】
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【００９３】
【数４８】
2006117675.tif 000093
【００９４】
【数４９】
2006117675.tif 000094
【００９５】
【数５０】
2006117675.tif 000095
【００９６】
【数５１】
2006117675.tif 000096
【００９７】
【数５２】
2006117675.tif 000097
【００９８】
【数５３】
2006117675.tif 000098
【００９９】
【数５４】
2006117675.tif 000099
【０１００】
【数５５】
2006117675.tif 000100
【０１０１】
【数５６】
2006117675.tif 000101
【０１０２】
【数５７】
2006117675.tif 000102
【０１０３】
【数５８】
2006117675.tif 000103
【０１０４】
【数５９】
2006117675.tif 000104
【０１０５】
【数６０】
2006117675.tif 000105
【０１０６】
【数６１】
2006117675.tif 000106
【０１０７】
【数６２】
2006117675.tif 000107
【０１０８】
【数６３】
2006117675.tif 000108
【０１０９】
【数６４】
2006117675.tif 000109
【０１１０】
【数６５】
2006117675.tif 000110
【０１１１】
【数６６】
2006117675.tif 000111
【０１１２】
【数６７】
2006117675.tif 000112
【０１１３】
【数６８】
2006117675.tif 000113
【０１１４】
【数６９】
2006117675.tif 000114
【０１１５】
【数７０】
2006117675.tif 000115
【０１１６】
【数７１】
2006117675.tif 000116
【０１１７】
【数７２】
2006117675.tif 000117
【０１１８】
【数７３】
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【０１１９】
【数７４】
2006117675.tif 000119
【０１２０】
【数７５】
2006117675.tif 000120
【０１２１】
【数７６】
2006117675.tif 000121
【０１２２】
【数７７】
2006117675.tif 000122
【０１２３】
【数７８】
2006117675.tif 000123
【０１２４】
【数７９】
2006117675.tif 000124
【０１２５】
【数８０】
2006117675.tif 000125
【０１２６】
【数８１】
2006117675.tif 000126
【０１２７】
【数８２】
2006117675.tif 000127
【０１２８】
【数８３】
2006117675.tif 000128
【０１２９】
【数８４】
2006117675.tif 000129
【０１３０】
【数８５】
2006117675.tif 000130
【０１３１】
【数８６】
2006117675.tif 000131
【０１３２】
【数８７】
2006117675.tif 000132
【０１３３】
【数８８】
2006117675.tif 000133
【０１３４】
【数８９】
2006117675.tif 000134
【０１３５】
【数９０】
2006117675.tif 000135
【０１３６】
【数９１】
2006117675.tif 000136
【０１３７】
【数９２】
2006117675.tif 000137
【０１３８】
【数９３】
2006117675.tif 000138
【０１３９】
【数９４】
2006117675.tif 000139
【０１４０】
【数９５】
2006117675.tif 000140
【０１４１】
【数９６】
2006117675.tif 000141
【０１４２】
【数９７】
2006117675.tif 000142
【０１４３】
【数９８】
2006117675.tif 000143
【０１４４】
【数９９】
2006117675.tif 000144
【０１４５】
【数１００】
2006117675.tif 000145
【０１４６】
【数１０１】
2006117675.tif 000146
【０１４７】
【数１０２】
2006117675.tif 000147
【０１４８】
【数１０３】
2006117675.tif 000148
【０１４９】
【数１０４】
2006117675.tif 000149
【０１５０】
【数１０５】
2006117675.tif 000150
【０１５１】
【数１０６】
2006117675.tif 000151
【０１５２】
【数１０７】
2006117675.tif 000152
【０１５３】
【数１０８】
2006117675.tif 000153
【０１５４】
【数１０９】
2006117675.tif 000154
【０１５５】
【数１１０】
2006117675.tif 000155
【０１５６】
【数１１１】
2006117675.tif 000156
【０１５７】
【数１１２】
2006117675.tif 000157
【０１５８】
【数１１３】
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【０１５９】
【数１１４】
2006117675.tif 000159
【０１６０】
【数１１５】
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【０１６１】
【数１１６】
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【０１６２】
【数１１７】
2006117675.tif 000162
【０１６３】
【数１１８】
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【０１６４】
【数１１９】
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【０１６５】
【数１２０】
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【０１６６】
【数１２１】
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【０１６７】
【数１２２】
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【０１６８】
【数１２３】
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【０１６９】
【数１２４】
2006117675.tif 000169
【０１７０】
【数１２５】
2006117675.tif 000170
【０１７１】
【数１２６】
2006117675.tif 000171
【０１７２】
【数１２７】
2006117675.tif 000172
【０１７３】
【数１２８】
2006117675.tif 000173
【０１７４】
【数１２９】
2006117675.tif 000174
【０１７５】
【数１３０】
2006117675.tif 000175
【０１７６】
【数１３１】
2006117675.tif 000176
【０１７７】
【数１３２】
2006117675.tif 000177
【０１７８】
【数１３３】
2006117675.tif 000178
【０１７９】
【数１３４】
2006117675.tif 000179
【０１８０】
【数１３５】
2006117675.tif 000180
【図面の簡単な説明】
【０１８１】
【図１】図１はＡｃａＮＡＰ５  ｃＤＮＡ［配列番号３］のヌクレオチド配列を示す。番号付はｃＤＮＡの最初のヌクレオチドから始めている。翻訳の開始は最初のＡＴＧコドン（第１４位）；第２枠内ＡＴＧは２０位に存在する。
【図２】図２は成熟ＡｃａＮＡＰ５［配列番号４］のアミノ酸配列を示す。
【図３】図３はＡｃａＮＡＰ６  ｃＤＮＡ［配列番号５］のヌクレオチド配列を示す。番号付はｃＤＮＡの最初のヌクレオチドから始めている。翻訳は最初のＡＴＧコドン（第１４位）から開始する；第２枠内ＡＴＧは２０位に存在する。
【図４】図４は成熟ＡｃａＮＡＰ６のアミノ酸配列［配列番号６］を示す。ＡｃａＮＡＰ５と異なるアミノ酸には下線を付している。かかるアミノ酸の置換に加えて、ＡｃａＮＡＰ６はＡｃａＮＡＰ５と比較した場合に２つのアミノ酸の欠失（プロ−プロ）を含む。
【図５】図５はプロ−ＡｃａＮＡＰ５のアミノ酸配列［配列番号７］を示す。
【図６】図６はプロ−ＡｃａＮＡＰ６のアミノ酸配列［配列番号８］を示す。プロ−ＡｃａＮＡＰ５と異なるアミノ酸に下線を付した。かかるアミノ酸の置換に加えて、プロ−ＡｃａＮＡＰ６はプロ−ＡｃａＮＡＰ５と比較した場合に２つのアミノ酸の欠失（プロ−プロ−）を含む。
【図７Ａ−１】図７Ａから図７Ｆはアンサイロストマ  セイラニカム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃｅｙｌａｎｉｃｕｍ）、アンサイロストマ  デュオデナール（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍ  ａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ）およびヘリグモソモイデス  ポリギルス（Ｈｅｌｉｇｍｏｓｏｍｏｉｄｅｓ  ｐｏｌｙｇｙｒｕｓ）から単離された特定のＮＡＰタンパク質ｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹されるアミノ酸配列を示す。図７Ａは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ４のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号９］を示す。図７Ｂは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ５のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１０］を示す。図７Ｃは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ６のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１１］を示す。図７Ｄは、アンサイロストマ  デュオデナールから単離されたＡｄｕＮＡＰ４のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１２］を示す。図７Ｅは、アンサイロストマデュオデナールから単離されたＡｄｕＮＡＰ７のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１３］を示す。図７Ｆは、ヘリグモソモイデスポリギルスから単離されたＨｐｏＮＡＰ５のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１４］を示す。リコンビナントｃＤＮＡ分子の５’一末端に対応するＥｃｏＲＩ部位はすべての配列において同一である（下線）。各配列の番号付けはこのＥｃｏＲＩ部位より開始している。ＡｃｅＮＡＰ４およびＡｄｕＮＡＰ７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする；この図に示した他のすべてのクローンは１個のＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする。ＡｄｕＮＡＰ４ｃＤＮＡクローンは全長ではない、というのは他のアイソフォームにはある、コード領域の５’−末端部分をこのリコンビナントｃＤＮＡは欠いている。
【図７Ａ−２】図７Ａから図７Ｆはアンサイロストマ  セイラニカム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃｅｙｌａｎｉｃｕｍ）、アンサイロストマ  デュオデナール（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍ  ａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ）およびヘリグモソモイデス  ポリギルス（Ｈｅｌｉｇｍｏｓｏｍｏｉｄｅｓ  ｐｏｌｙｇｙｒｕｓ）から単離された特定のＮＡＰタンパク質ｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹されるアミノ酸配列を示す。図７Ａは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ４のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号９］を示す。図７Ｂは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ５のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１０］を示す。図７Ｃは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ６のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１１］を示す。図７Ｄは、アンサイロストマ  デュオデナールから単離されたＡｄｕＮＡＰ４のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１２］を示す。図７Ｅは、アンサイロストマデュオデナールから単離されたＡｄｕＮＡＰ７のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１３］を示す。図７Ｆは、ヘリグモソモイデスポリギルスから単離されたＨｐｏＮＡＰ５のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１４］を示す。リコンビナントｃＤＮＡ分子の５’一末端に対応するＥｃｏＲＩ部位はすべての配列において同一である（下線）。各配列の番号付けはこのＥｃｏＲＩ部位より開始している。ＡｃｅＮＡＰ４およびＡｄｕＮＡＰ７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする；この図に示した他のすべてのクローンは１個のＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする。ＡｄｕＮＡＰ４ｃＤＮＡクローンは全長ではない、というのは他のアイソフォームにはある、コード領域の５’−末端部分をこのリコンビナントｃＤＮＡは欠いている。
【図７Ｂ】図７Ａから図７Ｆはアンサイロストマ  セイラニカム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃｅｙｌａｎｉｃｕｍ）、アンサイロストマ  デュオデナール（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍ  ａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ）およびヘリグモソモイデス  ポリギルス（Ｈｅｌｉｇｍｏｓｏｍｏｉｄｅｓ  ｐｏｌｙｇｙｒｕｓ）から単離された特定のＮＡＰタンパク質ｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹されるアミノ酸配列を示す。図７Ａは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ４のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号９］を示す。図７Ｂは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ５のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１０］を示す。図７Ｃは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ６のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１１］を示す。図７Ｄは、アンサイロストマ  デュオデナールから単離されたＡｄｕＮＡＰ４のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１２］を示す。図７Ｅは、アンサイロストマデュオデナールから単離されたＡｄｕＮＡＰ７のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１３］を示す。図７Ｆは、ヘリグモソモイデスポリギルスから単離されたＨｐｏＮＡＰ５のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１４］を示す。リコンビナントｃＤＮＡ分子の５’一末端に対応するＥｃｏＲＩ部位はすべての配列において同一である（下線）。各配列の番号付けはこのＥｃｏＲＩ部位より開始している。ＡｃｅＮＡＰ４およびＡｄｕＮＡＰ７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする；この図に示した他のすべてのクローンは１個のＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする。ＡｄｕＮＡＰ４ｃＤＮＡクローンは全長ではない、というのは他のアイソフォームにはある、コード領域の５’−末端部分をこのリコンビナントｃＤＮＡは欠いている。
【図７Ｃ】図７Ａから図７Ｆはアンサイロストマ  セイラニカム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃｅｙｌａｎｉｃｕｍ）、アンサイロストマ  デュオデナール（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍ  ａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ）およびヘリグモソモイデス  ポリギルス（Ｈｅｌｉｇｍｏｓｏｍｏｉｄｅｓ  ｐｏｌｙｇｙｒｕｓ）から単離された特定のＮＡＰタンパク質ｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹されるアミノ酸配列を示す。図７Ａは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ４のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号９］を示す。図７Ｂは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ５のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１０］を示す。図７Ｃは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ６のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１１］を示す。図７Ｄは、アンサイロストマ  デュオデナールから単離されたＡｄｕＮＡＰ４のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１２］を示す。図７Ｅは、アンサイロストマデュオデナールから単離されたＡｄｕＮＡＰ７のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１３］を示す。図７Ｆは、ヘリグモソモイデスポリギルスから単離されたＨｐｏＮＡＰ５のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１４］を示す。リコンビナントｃＤＮＡ分子の５’一末端に対応するＥｃｏＲＩ部位はすべての配列において同一である（下線）。各配列の番号付けはこのＥｃｏＲＩ部位より開始している。ＡｃｅＮＡＰ４およびＡｄｕＮＡＰ７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする；この図に示した他のすべてのクローンは１個のＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする。ＡｄｕＮＡＰ４ｃＤＮＡクローンは全長ではない、というのは他のアイソフォームにはある、コード領域の５’−末端部分をこのリコンビナントｃＤＮＡは欠いている。
【図７Ｄ】図７Ａから図７Ｆはアンサイロストマ  セイラニカム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃｅｙｌａｎｉｃｕｍ）、アンサイロストマ  デュオデナール（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍ  ａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ）およびヘリグモソモイデス  ポリギルス（Ｈｅｌｉｇｍｏｓｏｍｏｉｄｅｓ  ｐｏｌｙｇｙｒｕｓ）から単離された特定のＮＡＰタンパク質ｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹されるアミノ酸配列を示す。図７Ａは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ４のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号９］を示す。図７Ｂは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ５のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１０］を示す。図７Ｃは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ６のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１１］を示す。図７Ｄは、アンサイロストマ  デュオデナールから単離されたＡｄｕＮＡＰ４のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１２］を示す。図７Ｅは、アンサイロストマデュオデナールから単離されたＡｄｕＮＡＰ７のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１３］を示す。図７Ｆは、ヘリグモソモイデスポリギルスから単離されたＨｐｏＮＡＰ５のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１４］を示す。リコンビナントｃＤＮＡ分子の５’一末端に対応するＥｃｏＲＩ部位はすべての配列において同一である（下線）。各配列の番号付けはこのＥｃｏＲＩ部位より開始している。ＡｃｅＮＡＰ４およびＡｄｕＮＡＰ７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする；この図に示した他のすべてのクローンは１個のＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする。ＡｄｕＮＡＰ４ｃＤＮＡクローンは全長ではない、というのは他のアイソフォームにはある、コード領域の５’−末端部分をこのリコンビナントｃＤＮＡは欠いている。
【図７Ｅ−１】図７Ａから図７Ｆはアンサイロストマ  セイラニカム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃｅｙｌａｎｉｃｕｍ）、アンサイロストマ  デュオデナール（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍ  ａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ）およびヘリグモソモイデス  ポリギルス（Ｈｅｌｉｇｍｏｓｏｍｏｉｄｅｓ  ｐｏｌｙｇｙｒｕｓ）から単離された特定のＮＡＰタンパク質ｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹されるアミノ酸配列を示す。図７Ａは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ４のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号９］を示す。図７Ｂは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ５のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１０］を示す。図７Ｃは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ６のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１１］を示す。図７Ｄは、アンサイロストマ  デュオデナールから単離されたＡｄｕＮＡＰ４のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１２］を示す。図７Ｅは、アンサイロストマデュオデナールから単離されたＡｄｕＮＡＰ７のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１３］を示す。図７Ｆは、ヘリグモソモイデスポリギルスから単離されたＨｐｏＮＡＰ５のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１４］を示す。リコンビナントｃＤＮＡ分子の５’一末端に対応するＥｃｏＲＩ部位はすべての配列において同一である（下線）。各配列の番号付けはこのＥｃｏＲＩ部位より開始している。ＡｃｅＮＡＰ４およびＡｄｕＮＡＰ７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする；この図に示した他のすべてのクローンは１個のＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする。ＡｄｕＮＡＰ４ｃＤＮＡクローンは全長ではない、というのは他のアイソフォームにはある、コード領域の５’−末端部分をこのリコンビナントｃＤＮＡは欠いている。
【図７Ｅ−２】図７Ａから図７Ｆはアンサイロストマ  セイラニカム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃｅｙｌａｎｉｃｕｍ）、アンサイロストマ  デュオデナール（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍ  ａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ）およびヘリグモソモイデス  ポリギルス（Ｈｅｌｉｇｍｏｓｏｍｏｉｄｅｓ  ｐｏｌｙｇｙｒｕｓ）から単離された特定のＮＡＰタンパク質ｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹されるアミノ酸配列を示す。図７Ａは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ４のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号９］を示す。図７Ｂは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ５のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１０］を示す。図７Ｃは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ６のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１１］を示す。図７Ｄは、アンサイロストマ  デュオデナールから単離されたＡｄｕＮＡＰ４のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１２］を示す。図７Ｅは、アンサイロストマデュオデナールから単離されたＡｄｕＮＡＰ７のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１３］を示す。図７Ｆは、ヘリグモソモイデスポリギルスから単離されたＨｐｏＮＡＰ５のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１４］を示す。リコンビナントｃＤＮＡ分子の５’一末端に対応するＥｃｏＲＩ部位はすべての配列において同一である（下線）。各配列の番号付けはこのＥｃｏＲＩ部位より開始している。ＡｃｅＮＡＰ４およびＡｄｕＮＡＰ７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする；この図に示した他のすべてのクローンは１個のＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする。ＡｄｕＮＡＰ４ｃＤＮＡクローンは全長ではない、というのは他のアイソフォームにはある、コード領域の５’−末端部分をこのリコンビナントｃＤＮＡは欠いている。
【図７Ｆ】図７Ａから図７Ｆはアンサイロストマ  セイラニカム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃｅｙｌａｎｉｃｕｍ）、アンサイロストマ  デュオデナール（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍ  ａ  ｄｕｏｄｅｎａｌｅ）およびヘリグモソモイデス  ポリギルス（Ｈｅｌｉｇｍｏｓｏｍｏｉｄｅｓ  ｐｏｌｙｇｙｒｕｓ）から単離された特定のＮＡＰタンパク質ｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹されるアミノ酸配列を示す。図７Ａは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ４のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号９］を示す。図７Ｂは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ５のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１０］を示す。図７Ｃは、アンサイロストマ  セイラニカムから単離されたＡｃａＮＡＰ６のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１１］を示す。図７Ｄは、アンサイロストマ  デュオデナールから単離されたＡｄｕＮＡＰ４のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１２］を示す。図７Ｅは、アンサイロストマデュオデナールから単離されたＡｄｕＮＡＰ７のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１３］を示す。図７Ｆは、ヘリグモソモイデスポリギルスから単離されたＨｐｏＮＡＰ５のリコンビナントｃＤＮＡ分子［配列番号１４］を示す。リコンビナントｃＤＮＡ分子の５’一末端に対応するＥｃｏＲＩ部位はすべての配列において同一である（下線）。各配列の番号付けはこのＥｃｏＲＩ部位より開始している。ＡｃｅＮＡＰ４およびＡｄｕＮＡＰ７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする；この図に示した他のすべてのクローンは１個のＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする。ＡｄｕＮＡＰ４ｃＤＮＡクローンは全長ではない、というのは他のアイソフォームにはある、コード領域の５’−末端部分をこのリコンビナントｃＤＮＡは欠いている。
【図８Ａ】図８Ａから図８ＣはそれぞれベクターｐＤＯＮＧ６１（図８Ａ）［配列番号１５］、ｐＤＯＮＧ６２（図８Ｂ）［配列番号１６］、およびｐＤＯＮＧ６３（図８Ｃ）［配列番号１７］のヌクレオチド配列を示す。図示されているＨｉｎｄＩＩＩ−ＢａｍＨＩフラグメントはｐＵＣ１１９のＨｉｎｄＩＩＩ部位とＢａｍＨＩ部位の間に存在している。これらのベクターはｃＤＮＡをＳｆｉＩ−ＮｏｔＩフラグメントとして・糸状ファージ遺伝子６の下流の３つの異なるリーディングフレーム内へとクローニングすることができる。すべての関連制限部位を示している。３７３〜３７５位にあるＡＡＡのＬｙｓをコードするトリプレットが遺伝子６の最後のコドンである。遺伝子６にコードされるタンパク質にはＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ［配列番号１８］リンカー配列が続いている。
【図８Ｂ】図８Ａから図８ＣはそれぞれベクターｐＤＯＮＧ６１（図８Ａ）［配列番号１５］、ｐＤＯＮＧ６２（図８Ｂ）［配列番号１６］、およびｐＤＯＮＧ６３（図８Ｃ）［配列番号１７］のヌクレオチド配列を示す。図示されているＨｉｎｄＩＩＩ−ＢａｍＨＩフラグメントはｐＵＣ１１９のＨｉｎｄＩＩＩ部位とＢａｍＨＩ部位の間に存在している。これらのベクターはｃＤＮＡをＳｆｉＩ−ＮｏｔＩフラグメントとして・糸状ファージ遺伝子６の下流の３つの異なるリーディングフレーム内へとクローニングすることができる。すべての関連制限部位を示している。３７３〜３７５位にあるＡＡＡのＬｙｓをコードするトリプレットが遺伝子６の最後のコドンである。遺伝子６にコードされるタンパク質にはＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ［配列番号１８］リンカー配列が続いている。
【図８Ｃ】図８Ａから図８ＣはそれぞれベクターｐＤＯＮＧ６１（図８Ａ）［配列番号１５］、ｐＤＯＮＧ６２（図８Ｂ）［配列番号１６］、およびｐＤＯＮＧ６３（図８Ｃ）［配列番号１７］のヌクレオチド配列を示す。図示されているＨｉｎｄＩＩＩ−ＢａｍＨＩフラグメントはｐＵＣ１１９のＨｉｎｄＩＩＩ部位とＢａｍＨＩ部位の間に存在している。これらのベクターはｃＤＮＡをＳｆｉＩ−ＮｏｔＩフラグメントとして・糸状ファージ遺伝子６の下流の３つの異なるリーディングフレーム内へとクローニングすることができる。すべての関連制限部位を示している。３７３〜３７５位にあるＡＡＡのＬｙｓをコードするトリプレットが遺伝子６の最後のコドンである。遺伝子６にコードされるタンパク質にはＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ［配列番号１８］リンカー配列が続いている。
【図９】図９はリコンビナントｃＤＮＡのヌクレオチド配列、ＡｃａＮＡＰｃ２ｃ  ＤＮＡ［配列番号１９］を示す。ｃＤＮＡの５’−末端に対応するＥｃｏＲＩ部位を示した（下線部分）。番号付けはこのＥｃｏＲＩ部位から開始している。演繹されたアミノ酸配列もまた示した；翻訳リーディングフレームは遺伝子６融合パートナーにより決定された。ＡｃａＮＡＰｃ２  ｃＤＮＡはコーディング領域の５’末端部分を欠いている；ＡｃａＮＡＰ５およびＡｃａＮＡＰ６とのホモロジーにより最初の７つのアミノ酸残基が分泌シグナルに属することが示唆される。
【図１０】図１０Ａおよび１０Ｂは特定のＮＡＰタンパク質がクエン酸化正常ヒト血漿のプロ−トロンビン時間（ＰＴ）（図１０Ａ）および活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）（図１０Ｂ）の測定値に及ぼす影響を調べたものである。黒丸は、Ｐｒｏ−ＡｃａＮＡＰ５を；白抜き三角はＡｃａＮＡＰ５を（表２のＡｃａＮＡＰ５ａ）；白抜き丸は天然のＡｃａＮＡＰ５の値を示す。
【図１１−１】図１１は様々な線虫から単離されたＮＡＰ  ｃＤＮＡによりコードされる一連のアミノ酸配列を示す。ＡｃａＮＡＰ５［配列番号２０］、ＡｃａＮＡＰ６［配列番号２１］およびＡｃａＮＡＰｃ２［配列番号１２８］はアンサイロストマカニナム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃａｎｉｎｕｍ）から単離されたものである。ＡｃｅＮＡＰ５［配列番号２２］、ＡｃｅＮＡＰ７［配列番号２３］、およびＡｃｅＮＡＰ４（ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］およびＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］）はアンサイロトマセイラニカムから単離されたものである。ＡｄｕＮＡＰ４［配列番号２６］およびＡｄｕＮＡＰ７（ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２（配列番号２８］）はアンサイロス  トマデュオデナールから単離されたものである。ＨｐｏＮＡＰ５［配列番号２９］はヘリグモソモイデス  ポリギルスから単離されたものである。この図に示されたアミノ酸配列は、図１、３、７Ａから７Ｆおよび９に開示されたものである。成熟ＡｃａＮＡＰ５［配列番号４］およびＡｃａＮＡＰ６［配列番号６］（図２及び図４参照）は、１０個のシステイン残基（１から１０まで番号を付し、太字で記載している）によってその性質の一部が決定されている。この図のすべてのアミノ酸配列には少なくとも１のＮＡＰドメインを含有する。ＡｃｅＮＡＰ４  ｃＤＮＡは２つの隣接領域、ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］とＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］からなり、これらは第１（ｄ１）および第２（ｄ２）ＮＡＰドメインをコードする；同様に、ＡｄｕＮＡＰ  ｃＤＮＡも２つの隣接領域ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２［配列番号２８］からなり、それぞれ第１（ｄ１）および第２（ｄ２）のＮＡＰドメインをコードする。すべてのＮＡＰ−ドメインの一連のアミノ酸配列をシステインによって整理するシステインの列を保持するために特定の部位ヘダッシュ（−−−）を導入しているが・この記号は当該部位にアミノ酸が無いことを示している。ｃＤＮＡがコードするタンパク質のカルボキシ末端の残基の後に「ｅｎｄ」という語を付した。
【図１１−２】図１１は様々な線虫から単離されたＮＡＰ  ｃＤＮＡによりコードされる一連のアミノ酸配列を示す。ＡｃａＮＡＰ５［配列番号２０］、ＡｃａＮＡＰ６［配列番号２１］およびＡｃａＮＡＰｃ２［配列番号１２８］はアンサイロストマカニナム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃａｎｉｎｕｍ）から単離されたものである。ＡｃｅＮＡＰ５［配列番号２２］、ＡｃｅＮＡＰ７［配列番号２３］、およびＡｃｅＮＡＰ４（ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］およびＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］）はアンサイロトマセイラニカムから単離されたものである。ＡｄｕＮＡＰ４［配列番号２６］およびＡｄｕＮＡＰ７（ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２（配列番号２８］）はアンサイロス  トマデュオデナールから単離されたものである。ＨｐｏＮＡＰ５［配列番号２９］はヘリグモソモイデス  ポリギルスから単離されたものである。この図に示されたアミノ酸配列は、図１、３、７Ａから７Ｆおよび９に開示されたものである。成熟ＡｃａＮＡＰ５［配列番号４］およびＡｃａＮＡＰ６［配列番号６］（図２及び図４参照）は、１０個のシステイン残基（１から１０まで番号を付し、太字で記載している）によってその性質の一部が決定されている。この図のすべてのアミノ酸配列には少なくとも１のＮＡＰドメインを含有する。ＡｃｅＮＡＰ４  ｃＤＮＡは２つの隣接領域、ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］とＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］からなり、これらは第１（ｄ１）および第２（ｄ２）ＮＡＰドメインをコードする；同様に、ＡｄｕＮＡＰ  ｃＤＮＡも２つの隣接領域ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２［配列番号２８］からなり、それぞれ第１（ｄ１）および第２（ｄ２）のＮＡＰドメインをコードする。すべてのＮＡＰ−ドメインの一連のアミノ酸配列をシステインによって整理するシステインの列を保持するために特定の部位ヘダッシュ（−−−）を導入しているが・この記号は当該部位にアミノ酸が無いことを示している。ｃＤＮＡがコードするタンパク質のカルボキシ末端の残基の後に「ｅｎｄ」という語を付した。
【図１１−３】図１１は様々な線虫から単離されたＮＡＰ  ｃＤＮＡによりコードされる一連のアミノ酸配列を示す。ＡｃａＮＡＰ５［配列番号２０］、ＡｃａＮＡＰ６［配列番号２１］およびＡｃａＮＡＰｃ２［配列番号１２８］はアンサイロストマカニナム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃａｎｉｎｕｍ）から単離されたものである。ＡｃｅＮＡＰ５［配列番号２２］、ＡｃｅＮＡＰ７［配列番号２３］、およびＡｃｅＮＡＰ４（ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］およびＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］）はアンサイロトマセイラニカムから単離されたものである。ＡｄｕＮＡＰ４［配列番号２６］およびＡｄｕＮＡＰ７（ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２（配列番号２８］）はアンサイロス  トマデュオデナールから単離されたものである。ＨｐｏＮＡＰ５［配列番号２９］はヘリグモソモイデス  ポリギルスから単離されたものである。この図に示されたアミノ酸配列は、図１、３、７Ａから７Ｆおよび９に開示されたものである。成熟ＡｃａＮＡＰ５［配列番号４］およびＡｃａＮＡＰ６［配列番号６］（図２及び図４参照）は、１０個のシステイン残基（１から１０まで番号を付し、太字で記載している）によってその性質の一部が決定されている。この図のすべてのアミノ酸配列には少なくとも１のＮＡＰドメインを含有する。ＡｃｅＮＡＰ４  ｃＤＮＡは２つの隣接領域、ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］とＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］からなり、これらは第１（ｄ１）および第２（ｄ２）ＮＡＰドメインをコードする；同様に、ＡｄｕＮＡＰ  ｃＤＮＡも２つの隣接領域ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２［配列番号２８］からなり、それぞれ第１（ｄ１）および第２（ｄ２）のＮＡＰドメインをコードする。すべてのＮＡＰ−ドメインの一連のアミノ酸配列をシステインによって整理するシステインの列を保持するために特定の部位ヘダッシュ（−−−）を導入しているが・この記号は当該部位にアミノ酸が無いことを示している。ｃＤＮＡがコードするタンパク質のカルボキシ末端の残基の後に「ｅｎｄ」という語を付した。
【図１１−４】図１１は様々な線虫から単離されたＮＡＰ  ｃＤＮＡによりコードされる一連のアミノ酸配列を示す。ＡｃａＮＡＰ５［配列番号２０］、ＡｃａＮＡＰ６［配列番号２１］およびＡｃａＮＡＰｃ２［配列番号１２８］はアンサイロストマカニナム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃａｎｉｎｕｍ）から単離されたものである。ＡｃｅＮＡＰ５［配列番号２２］、ＡｃｅＮＡＰ７［配列番号２３］、およびＡｃｅＮＡＰ４（ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］およびＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］）はアンサイロトマセイラニカムから単離されたものである。ＡｄｕＮＡＰ４［配列番号２６］およびＡｄｕＮＡＰ７（ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２（配列番号２８］）はアンサイロス  トマデュオデナールから単離されたものである。ＨｐｏＮＡＰ５［配列番号２９］はヘリグモソモイデス  ポリギルスから単離されたものである。この図に示されたアミノ酸配列は、図１、３、７Ａから７Ｆおよび９に開示されたものである。成熟ＡｃａＮＡＰ５［配列番号４］およびＡｃａＮＡＰ６［配列番号６］（図２及び図４参照）は、１０個のシステイン残基（１から１０まで番号を付し、太字で記載している）によってその性質の一部が決定されている。この図のすべてのアミノ酸配列には少なくとも１のＮＡＰドメインを含有する。ＡｃｅＮＡＰ４  ｃＤＮＡは２つの隣接領域、ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］とＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］からなり、これらは第１（ｄ１）および第２（ｄ２）ＮＡＰドメインをコードする；同様に、ＡｄｕＮＡＰ  ｃＤＮＡも２つの隣接領域ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２［配列番号２８］からなり、それぞれ第１（ｄ１）および第２（ｄ２）のＮＡＰドメインをコードする。すべてのＮＡＰ−ドメインの一連のアミノ酸配列をシステインによって整理するシステインの列を保持するために特定の部位ヘダッシュ（−−−）を導入しているが・この記号は当該部位にアミノ酸が無いことを示している。ｃＤＮＡがコードするタンパク質のカルボキシ末端の残基の後に「ｅｎｄ」という語を付した。
【図１１−５】図１１は様々な線虫から単離されたＮＡＰ  ｃＤＮＡによりコードされる一連のアミノ酸配列を示す。ＡｃａＮＡＰ５［配列番号２０］、ＡｃａＮＡＰ６［配列番号２１］およびＡｃａＮＡＰｃ２［配列番号１２８］はアンサイロストマカニナム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃａｎｉｎｕｍ）から単離されたものである。ＡｃｅＮＡＰ５［配列番号２２］、ＡｃｅＮＡＰ７［配列番号２３］、およびＡｃｅＮＡＰ４（ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］およびＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］）はアンサイロトマセイラニカムから単離されたものである。ＡｄｕＮＡＰ４［配列番号２６］およびＡｄｕＮＡＰ７（ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２（配列番号２８］）はアンサイロス  トマデュオデナールから単離されたものである。ＨｐｏＮＡＰ５［配列番号２９］はヘリグモソモイデス  ポリギルスから単離されたものである。この図に示されたアミノ酸配列は、図１、３、７Ａから７Ｆおよび９に開示されたものである。成熟ＡｃａＮＡＰ５［配列番号４］およびＡｃａＮＡＰ６［配列番号６］（図２及び図４参照）は、１０個のシステイン残基（１から１０まで番号を付し、太字で記載している）によってその性質の一部が決定されている。この図のすべてのアミノ酸配列には少なくとも１のＮＡＰドメインを含有する。ＡｃｅＮＡＰ４  ｃＤＮＡは２つの隣接領域、ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］とＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］からなり、これらは第１（ｄ１）および第２（ｄ２）ＮＡＰドメインをコードする；同様に、ＡｄｕＮＡＰ  ｃＤＮＡも２つの隣接領域ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２［配列番号２８］からなり、それぞれ第１（ｄ１）および第２（ｄ２）のＮＡＰドメインをコードする。すべてのＮＡＰ−ドメインの一連のアミノ酸配列をシステインによって整理するシステインの列を保持するために特定の部位ヘダッシュ（−−−）を導入しているが・この記号は当該部位にアミノ酸が無いことを示している。ｃＤＮＡがコードするタンパク質のカルボキシ末端の残基の後に「ｅｎｄ」という語を付した。
【図１１−６】図１１は様々な線虫から単離されたＮＡＰ  ｃＤＮＡによりコードされる一連のアミノ酸配列を示す。ＡｃａＮＡＰ５［配列番号２０］、ＡｃａＮＡＰ６［配列番号２１］およびＡｃａＮＡＰｃ２［配列番号１２８］はアンサイロストマカニナム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃａｎｉｎｕｍ）から単離されたものである。ＡｃｅＮＡＰ５［配列番号２２］、ＡｃｅＮＡＰ７［配列番号２３］、およびＡｃｅＮＡＰ４（ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］およびＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］）はアンサイロトマセイラニカムから単離されたものである。ＡｄｕＮＡＰ４［配列番号２６］およびＡｄｕＮＡＰ７（ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２（配列番号２８］）はアンサイロス  トマデュオデナールから単離されたものである。ＨｐｏＮＡＰ５［配列番号２９］はヘリグモソモイデス  ポリギルスから単離されたものである。この図に示されたアミノ酸配列は、図１、３、７Ａから７Ｆおよび９に開示されたものである。成熟ＡｃａＮＡＰ５［配列番号４］およびＡｃａＮＡＰ６［配列番号６］（図２及び図４参照）は、１０個のシステイン残基（１から１０まで番号を付し、太字で記載している）によってその性質の一部が決定されている。この図のすべてのアミノ酸配列には少なくとも１のＮＡＰドメインを含有する。ＡｃｅＮＡＰ４  ｃＤＮＡは２つの隣接領域、ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］とＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］からなり、これらは第１（ｄ１）および第２（ｄ２）ＮＡＰドメインをコードする；同様に、ＡｄｕＮＡＰ  ｃＤＮＡも２つの隣接領域ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２［配列番号２８］からなり、それぞれ第１（ｄ１）および第２（ｄ２）のＮＡＰドメインをコードする。すべてのＮＡＰ−ドメインの一連のアミノ酸配列をシステインによって整理するシステインの列を保持するために特定の部位ヘダッシュ（−−−）を導入しているが・この記号は当該部位にアミノ酸が無いことを示している。ｃＤＮＡがコードするタンパク質のカルボキシ末端の残基の後に「ｅｎｄ」という語を付した。
【図１１−７】図１１は様々な線虫から単離されたＮＡＰ  ｃＤＮＡによりコードされる一連のアミノ酸配列を示す。ＡｃａＮＡＰ５［配列番号２０］、ＡｃａＮＡＰ６［配列番号２１］およびＡｃａＮＡＰｃ２［配列番号１２８］はアンサイロストマカニナム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃａｎｉｎｕｍ）から単離されたものである。ＡｃｅＮＡＰ５［配列番号２２］、ＡｃｅＮＡＰ７［配列番号２３］、およびＡｃｅＮＡＰ４（ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］およびＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］）はアンサイロトマセイラニカムから単離されたものである。ＡｄｕＮＡＰ４［配列番号２６］およびＡｄｕＮＡＰ７（ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２（配列番号２８］）はアンサイロス  トマデュオデナールから単離されたものである。ＨｐｏＮＡＰ５［配列番号２９］はヘリグモソモイデス  ポリギルスから単離されたものである。この図に示されたアミノ酸配列は、図１、３、７Ａから７Ｆおよび９に開示されたものである。成熟ＡｃａＮＡＰ５［配列番号４］およびＡｃａＮＡＰ６［配列番号６］（図２及び図４参照）は、１０個のシステイン残基（１から１０まで番号を付し、太字で記載している）によってその性質の一部が決定されている。この図のすべてのアミノ酸配列には少なくとも１のＮＡＰドメインを含有する。ＡｃｅＮＡＰ４  ｃＤＮＡは２つの隣接領域、ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］とＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］からなり、これらは第１（ｄ１）および第２（ｄ２）ＮＡＰドメインをコードする；同様に、ＡｄｕＮＡＰ  ｃＤＮＡも２つの隣接領域ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２［配列番号２８］からなり、それぞれ第１（ｄ１）および第２（ｄ２）のＮＡＰドメインをコードする。すべてのＮＡＰ−ドメインの一連のアミノ酸配列をシステインによって整理するシステインの列を保持するために特定の部位ヘダッシュ（−−−）を導入しているが・この記号は当該部位にアミノ酸が無いことを示している。ｃＤＮＡがコードするタンパク質のカルボキシ末端の残基の後に「ｅｎｄ」という語を付した。
【図１１−８】図１１は様々な線虫から単離されたＮＡＰ  ｃＤＮＡによりコードされる一連のアミノ酸配列を示す。ＡｃａＮＡＰ５［配列番号２０］、ＡｃａＮＡＰ６［配列番号２１］およびＡｃａＮＡＰｃ２［配列番号１２８］はアンサイロストマカニナム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃａｎｉｎｕｍ）から単離されたものである。ＡｃｅＮＡＰ５［配列番号２２］、ＡｃｅＮＡＰ７［配列番号２３］、およびＡｃｅＮＡＰ４（ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］およびＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］）はアンサイロトマセイラニカムから単離されたものである。ＡｄｕＮＡＰ４［配列番号２６］およびＡｄｕＮＡＰ７（ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２（配列番号２８］）はアンサイロス  トマデュオデナールから単離されたものである。ＨｐｏＮＡＰ５［配列番号２９］はヘリグモソモイデス  ポリギルスから単離されたものである。この図に示されたアミノ酸配列は、図１、３、７Ａから７Ｆおよび９に開示されたものである。成熟ＡｃａＮＡＰ５［配列番号４］およびＡｃａＮＡＰ６［配列番号６］（図２及び図４参照）は、１０個のシステイン残基（１から１０まで番号を付し、太字で記載している）によってその性質の一部が決定されている。この図のすべてのアミノ酸配列には少なくとも１のＮＡＰドメインを含有する。ＡｃｅＮＡＰ４  ｃＤＮＡは２つの隣接領域、ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］とＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］からなり、これらは第１（ｄ１）および第２（ｄ２）ＮＡＰドメインをコードする；同様に、ＡｄｕＮＡＰ  ｃＤＮＡも２つの隣接領域ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２［配列番号２８］からなり、それぞれ第１（ｄ１）および第２（ｄ２）のＮＡＰドメインをコードする。すべてのＮＡＰ−ドメインの一連のアミノ酸配列をシステインによって整理するシステインの列を保持するために特定の部位ヘダッシュ（−−−）を導入しているが・この記号は当該部位にアミノ酸が無いことを示している。ｃＤＮＡがコードするタンパク質のカルボキシ末端の残基の後に「ｅｎｄ」という語を付した。
【図１１−９】図１１は様々な線虫から単離されたＮＡＰ  ｃＤＮＡによりコードされる一連のアミノ酸配列を示す。ＡｃａＮＡＰ５［配列番号２０］、ＡｃａＮＡＰ６［配列番号２１］およびＡｃａＮＡＰｃ２［配列番号１２８］はアンサイロストマカニナム（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ  ｃａｎｉｎｕｍ）から単離されたものである。ＡｃｅＮＡＰ５［配列番号２２］、ＡｃｅＮＡＰ７［配列番号２３］、およびＡｃｅＮＡＰ４（ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］およびＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］）はアンサイロトマセイラニカムから単離されたものである。ＡｄｕＮＡＰ４［配列番号２６］およびＡｄｕＮＡＰ７（ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２（配列番号２８］）はアンサイロス  トマデュオデナールから単離されたものである。ＨｐｏＮＡＰ５［配列番号２９］はヘリグモソモイデス  ポリギルスから単離されたものである。この図に示されたアミノ酸配列は、図１、３、７Ａから７Ｆおよび９に開示されたものである。成熟ＡｃａＮＡＰ５［配列番号４］およびＡｃａＮＡＰ６［配列番号６］（図２及び図４参照）は、１０個のシステイン残基（１から１０まで番号を付し、太字で記載している）によってその性質の一部が決定されている。この図のすべてのアミノ酸配列には少なくとも１のＮＡＰドメインを含有する。ＡｃｅＮＡＰ４  ｃＤＮＡは２つの隣接領域、ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号２４］とＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号２５］からなり、これらは第１（ｄ１）および第２（ｄ２）ＮＡＰドメインをコードする；同様に、ＡｄｕＮＡＰ  ｃＤＮＡも２つの隣接領域ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号２７］およびＡｄｕＮＡＰ７ｄ２［配列番号２８］からなり、それぞれ第１（ｄ１）および第２（ｄ２）のＮＡＰドメインをコードする。すべてのＮＡＰ−ドメインの一連のアミノ酸配列をシステインによって整理するシステインの列を保持するために特定の部位ヘダッシュ（−−−）を導入しているが・この記号は当該部位にアミノ酸が無いことを示している。ｃＤＮＡがコードするタンパク質のカルボキシ末端の残基の後に「ｅｎｄ」という語を付した。
【図１２】図１２Ａおよび１２ＢはＰバストリス（Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ）ｐＹＡＭ７ＳＰ８発現／分泌ベクター（図１２Ａ）の地図およびこのベクター内に含まれる配列（図１２Ｂ）を示す［配列番号３０］。図１２Ａに示されるように、このプラスミドは以下の要素が、メタノール誘導性ＡＯＸ１プロ−モーター（５’ＡＯＸ非翻訳領域内の濃矢印）およびＡＯＸ１転写終結シグナル（３’Ｔ）の間に挿入されている：酸ホスファターゼ分泌シグナル（Ｓ）をコードする合成ＤＮＡフラグメント、Ｌｙｓ−Ａｒｇプロ−セシング部位とともにＫＥＸ２プロ−テアーゼおよびマルチクローニング部位をコードする合成１９−アミノ酸プロ−配列（Ｐ）。ＧＳ１１５形質転換において選択マーカーとなるＨＩＳ４遺伝子は部位特異的変位誘発によってＳｔｕ１認識配列（ＨＩＳ４＊）が除去されるよう、修飾されている。ｐＢＲ３２２配列にはＢｌａ遺伝子およびＥ．ｃｏｌｉ内で増幅するための起点（Ｏｒｉ）を含有しており、これは一本線として示されている。図１２ＢはｐＹＡＭ７ＳＰ８内に導入される以下の連続的なＤＮＡ配列を示している；酸ホスファターゼ（ＰＨ０１）分泌シグナル配列、プロ−配列およびマルチクローニング部位（ＭＣＳ）配列。ＰＨ０１分泌シグナルのＡＴＧ開始コドンに下線を付した。
【図１３Ａ】図１３Ａから図１３Ｈはアンサイロストマ  カニナムから単離された特定のＮＡＰタンパク質のｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹アミノ酸配列を示す。図１３ＡはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２３［配列番号３１］を示す。図１３ＢはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２４［配列番号３２］を示す。図１３ＣはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２５［配列番号３３］を示す。図１３ＤはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ３１、ＡｃａＮＡＰ４２およびＡｃａＮＡＰ４６を示し、これらのすべては同一である［配列番号３４］。図１３ＥはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４４［配列番号３５］を示す。図１３ＦはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４５［配列番号３６］を示す。図１３ＧはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４７［配列番号３７］を示す。図１３ＨはリコンビナントｃＤＮＡＡｃａＮＡＰ４８［配列番号３８］を示す。ＥｃｏＲＩ部位はリコンビナントｃＤＮＡ分子の５’−末端に対応するが、すべての配列において下線をひいて示している。各配列の番号付はこのＥｃｏＲＩ部位から始めた。ＡｃａＮＡＰ４５およびＡｃａＮＡＰ４７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを含有するタンパク質をコードする；この図における他のすべてのクローンは一個のＮＡＰドメインのみをコードする。
【図１３Ｂ】図１３Ａから図１３Ｈはアンサイロストマ  カニナムから単離された特定のＮＡＰタンパク質のｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹アミノ酸配列を示す。図１３ＡはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２３［配列番号３１］を示す。図１３ＢはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２４［配列番号３２］を示す。図１３ＣはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２５［配列番号３３］を示す。図１３ＤはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ３１、ＡｃａＮＡＰ４２およびＡｃａＮＡＰ４６を示し、これらのすべては同一である［配列番号３４］。図１３ＥはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４４［配列番号３５］を示す。図１３ＦはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４５［配列番号３６］を示す。図１３ＧはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４７［配列番号３７］を示す。図１３ＨはリコンビナントｃＤＮＡＡｃａＮＡＰ４８［配列番号３８］を示す。ＥｃｏＲＩ部位はリコンビナントｃＤＮＡ分子の５’−末端に対応するが、すべての配列において下線をひいて示している。各配列の番号付はこのＥｃｏＲＩ部位から始めた。ＡｃａＮＡＰ４５およびＡｃａＮＡＰ４７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを含有するタンパク質をコードする；この図における他のすべてのクローンは一個のＮＡＰドメインのみをコードする。
【図１３Ｃ】図１３Ａから図１３Ｈはアンサイロストマ  カニナムから単離された特定のＮＡＰタンパク質のｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹アミノ酸配列を示す。図１３ＡはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２３［配列番号３１］を示す。図１３ＢはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２４［配列番号３２］を示す。図１３ＣはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２５［配列番号３３］を示す。図１３ＤはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ３１、ＡｃａＮＡＰ４２およびＡｃａＮＡＰ４６を示し、これらのすべては同一である［配列番号３４］。図１３ＥはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４４［配列番号３５］を示す。図１３ＦはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４５［配列番号３６］を示す。図１３ＧはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４７［配列番号３７］を示す。図１３ＨはリコンビナントｃＤＮＡＡｃａＮＡＰ４８［配列番号３８］を示す。ＥｃｏＲＩ部位はリコンビナントｃＤＮＡ分子の５’−末端に対応するが、すべての配列において下線をひいて示している。各配列の番号付はこのＥｃｏＲＩ部位から始めた。ＡｃａＮＡＰ４５およびＡｃａＮＡＰ４７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを含有するタンパク質をコードする；この図における他のすべてのクローンは一個のＮＡＰドメインのみをコードする。
【図１３Ｄ】図１３Ａから図１３Ｈはアンサイロストマ  カニナムから単離された特定のＮＡＰタンパク質のｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹アミノ酸配列を示す。図１３ＡはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２３［配列番号３１］を示す。図１３ＢはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２４［配列番号３２］を示す。図１３ＣはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２５［配列番号３３］を示す。図１３ＤはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ３１、ＡｃａＮＡＰ４２およびＡｃａＮＡＰ４６を示し、これらのすべては同一である［配列番号３４］。図１３ＥはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４４［配列番号３５］を示す。図１３ＦはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４５［配列番号３６］を示す。図１３ＧはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４７［配列番号３７］を示す。図１３ＨはリコンビナントｃＤＮＡＡｃａＮＡＰ４８［配列番号３８］を示す。ＥｃｏＲＩ部位はリコンビナントｃＤＮＡ分子の５’−末端に対応するが、すべての配列において下線をひいて示している。各配列の番号付はこのＥｃｏＲＩ部位から始めた。ＡｃａＮＡＰ４５およびＡｃａＮＡＰ４７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを含有するタンパク質をコードする；この図における他のすべてのクローンは一個のＮＡＰドメインのみをコードする。
【図１３Ｅ】図１３Ａから図１３Ｈはアンサイロストマ  カニナムから単離された特定のＮＡＰタンパク質のｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹アミノ酸配列を示す。図１３ＡはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２３［配列番号３１］を示す。図１３ＢはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２４［配列番号３２］を示す。図１３ＣはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２５［配列番号３３］を示す。図１３ＤはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ３１、ＡｃａＮＡＰ４２およびＡｃａＮＡＰ４６を示し、これらのすべては同一である［配列番号３４］。図１３ＥはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４４［配列番号３５］を示す。図１３ＦはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４５［配列番号３６］を示す。図１３ＧはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４７［配列番号３７］を示す。図１３ＨはリコンビナントｃＤＮＡＡｃａＮＡＰ４８［配列番号３８］を示す。ＥｃｏＲＩ部位はリコンビナントｃＤＮＡ分子の５’−末端に対応するが、すべての配列において下線をひいて示している。各配列の番号付はこのＥｃｏＲＩ部位から始めた。ＡｃａＮＡＰ４５およびＡｃａＮＡＰ４７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを含有するタンパク質をコードする；この図における他のすべてのクローンは一個のＮＡＰドメインのみをコードする。
【図１３Ｆ−１】図１３Ａから図１３Ｈはアンサイロストマ  カニナムから単離された特定のＮＡＰタンパク質のｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹アミノ酸配列を示す。図１３ＡはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２３［配列番号３１］を示す。図１３ＢはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２４［配列番号３２］を示す。図１３ＣはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２５［配列番号３３］を示す。図１３ＤはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ３１、ＡｃａＮＡＰ４２およびＡｃａＮＡＰ４６を示し、これらのすべては同一である［配列番号３４］。図１３ＥはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４４［配列番号３５］を示す。図１３ＦはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４５［配列番号３６］を示す。図１３ＧはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４７［配列番号３７］を示す。図１３ＨはリコンビナントｃＤＮＡＡｃａＮＡＰ４８［配列番号３８］を示す。ＥｃｏＲＩ部位はリコンビナントｃＤＮＡ分子の５’−末端に対応するが、すべての配列において下線をひいて示している。各配列の番号付はこのＥｃｏＲＩ部位から始めた。ＡｃａＮＡＰ４５およびＡｃａＮＡＰ４７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを含有するタンパク質をコードする；この図における他のすべてのクローンは一個のＮＡＰドメインのみをコードする。
【図１３Ｆ−２】図１３Ａから図１３Ｈはアンサイロストマ  カニナムから単離された特定のＮＡＰタンパク質のｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹アミノ酸配列を示す。図１３ＡはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２３［配列番号３１］を示す。図１３ＢはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２４［配列番号３２］を示す。図１３ＣはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２５［配列番号３３］を示す。図１３ＤはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ３１、ＡｃａＮＡＰ４２およびＡｃａＮＡＰ４６を示し、これらのすべては同一である［配列番号３４］。図１３ＥはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４４［配列番号３５］を示す。図１３ＦはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４５［配列番号３６］を示す。図１３ＧはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４７［配列番号３７］を示す。図１３ＨはリコンビナントｃＤＮＡＡｃａＮＡＰ４８［配列番号３８］を示す。ＥｃｏＲＩ部位はリコンビナントｃＤＮＡ分子の５’−末端に対応するが、すべての配列において下線をひいて示している。各配列の番号付はこのＥｃｏＲＩ部位から始めた。ＡｃａＮＡＰ４５およびＡｃａＮＡＰ４７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを含有するタンパク質をコードする；この図における他のすべてのクローンは一個のＮＡＰドメインのみをコードする。
【図１３Ｇ−１】図１３Ａから図１３Ｈはアンサイロストマ  カニナムから単離された特定のＮＡＰタンパク質のｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹アミノ酸配列を示す。図１３ＡはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２３［配列番号３１］を示す。図１３ＢはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２４［配列番号３２］を示す。図１３ＣはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２５［配列番号３３］を示す。図１３ＤはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ３１、ＡｃａＮＡＰ４２およびＡｃａＮＡＰ４６を示し、これらのすべては同一である［配列番号３４］。図１３ＥはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４４［配列番号３５］を示す。図１３ＦはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４５［配列番号３６］を示す。図１３ＧはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４７［配列番号３７］を示す。図１３ＨはリコンビナントｃＤＮＡＡｃａＮＡＰ４８［配列番号３８］を示す。ＥｃｏＲＩ部位はリコンビナントｃＤＮＡ分子の５’−末端に対応するが、すべての配列において下線をひいて示している。各配列の番号付はこのＥｃｏＲＩ部位から始めた。ＡｃａＮＡＰ４５およびＡｃａＮＡＰ４７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを含有するタンパク質をコードする；この図における他のすべてのクローンは一個のＮＡＰドメインのみをコードする。
【図１３Ｇ−２】図１３Ａから図１３Ｈはアンサイロストマ  カニナムから単離された特定のＮＡＰタンパク質のｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹アミノ酸配列を示す。図１３ＡはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２３［配列番号３１］を示す。図１３ＢはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２４［配列番号３２］を示す。図１３ＣはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２５［配列番号３３］を示す。図１３ＤはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ３１、ＡｃａＮＡＰ４２およびＡｃａＮＡＰ４６を示し、これらのすべては同一である［配列番号３４］。図１３ＥはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４４［配列番号３５］を示す。図１３ＦはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４５［配列番号３６］を示す。図１３ＧはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４７［配列番号３７］を示す。図１３ＨはリコンビナントｃＤＮＡＡｃａＮＡＰ４８［配列番号３８］を示す。ＥｃｏＲＩ部位はリコンビナントｃＤＮＡ分子の５’−末端に対応するが、すべての配列において下線をひいて示している。各配列の番号付はこのＥｃｏＲＩ部位から始めた。ＡｃａＮＡＰ４５およびＡｃａＮＡＰ４７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを含有するタンパク質をコードする；この図における他のすべてのクローンは一個のＮＡＰドメインのみをコードする。
【図１３Ｈ】図１３Ａから図１３Ｈはアンサイロストマ  カニナムから単離された特定のＮＡＰタンパク質のｃＤＮＡのヌクレオチド配列および演繹アミノ酸配列を示す。図１３ＡはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２３［配列番号３１］を示す。図１３ＢはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２４［配列番号３２］を示す。図１３ＣはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ２５［配列番号３３］を示す。図１３ＤはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ３１、ＡｃａＮＡＰ４２およびＡｃａＮＡＰ４６を示し、これらのすべては同一である［配列番号３４］。図１３ＥはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４４［配列番号３５］を示す。図１３ＦはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４５［配列番号３６］を示す。図１３ＧはリコンビナントｃＤＮＡ分子ＡｃａＮＡＰ４７［配列番号３７］を示す。図１３ＨはリコンビナントｃＤＮＡＡｃａＮＡＰ４８［配列番号３８］を示す。ＥｃｏＲＩ部位はリコンビナントｃＤＮＡ分子の５’−末端に対応するが、すべての配列において下線をひいて示している。各配列の番号付はこのＥｃｏＲＩ部位から始めた。ＡｃａＮＡＰ４５およびＡｃａＮＡＰ４７はそれぞれ２つのＮＡＰドメインを含有するタンパク質をコードする；この図における他のすべてのクローンは一個のＮＡＰドメインのみをコードする。
【図１４】図１４はリコンビナントｃＤＮＡ分子ＮａｍＮＡＰのヌクレオチドおよび演繹アミノ酸配列を示す［配列番号３９］。
【図１５】図１５はＡｃａＮＡＰ５および低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ；エノキサパリン（登録商標））の抗血栓活性活性を、ＦｅＣｌ３人工血栓モデルによって調べた結果を示す。活性のデータは頸動脈における閉塞性血栓生成の発生率（％）によって示す（白丸）。血栓生成は被験剤の皮下投与（ｓ．ｃ．）の１５０分後から認められた。深部傷出血をＦｅＣｌ３を加える以外は同様に処理した別のグループの動物において調べた（四角）。首の深部手術傷における血液の消失は、化合物の皮下投与から２１０分の間の合計として定量した。
【図１６】図１６は以下の方法により単離された成熟ＮＡＰ一連のアミノ酸配列を示す：即ちＡｃａＮＡＰ５［配列番号４０］、ＡｃａＮＡＰ６［配列番号４１］、ＡｃａＮＡＰ４８［配列番号４２］、ＡｃａＮＡＰ２３［配列番号４３］、ＡｃａＮＡＰ２４［配列番号４４］、ＡｃａＮＡＰ２５［配列番号４５］、ＡｃａＮＡＰ４４［配列番号４６］、ＡｃａＮＡＰ３１、４２、４６［配列番号４７］、ＡｃｅＮＡＰ４ｄ１［配列番号４８］、ＡｃｅＮＡＰ４ｄ２［配列番号４９］、ＡｃｅＮＡＰ４５ｄ１〔配列番号５０］、ＡｃｅＮＡＰ４７ｄ１［配列番号５１］、ＡｄｕＮＡＰ７ｄ１［配列番号５２］、ＡｃａＮＡＰ４５ｄ２［配列番号５３］、ＡｃａＮＡＰ４７ｄ２［配列番号５４］、ＡｄｕＮＡＰ４［配列番号５５］、ＡｄｕＮＡＰ７ｄ２［配列番号５６］、ＡｃｅＮＡＰ５［配列番号５７］、Ａｃｅ−１８一ＮＡＰ７［配列番号５８］、ＡｃａＮＡＰｃ２［配列番号５９］、ＨｐｏＮＡＰ５［配列番号６０］およびＮａｍＮＡＰ［配列番号６１］である。各ＮＡＰドメインには１０個のシステイン残基を含み、これらの基準に配列を一列に並べており、そしてシステインの間のアミノ酸を規定している。Ａ１からＡ１０はシステイン残基の間のアミノ酸配列を示す。
【図１７】図１７は２つのＮＡＰドメインを有する成熟ＡｃｅＮＡＰ４［配列番号６２］のアミノ酸配列を示す。
【図１８】図１８は２つのＮＡＰドメインを有する成熟ＡｃａＮＡＰ４５［配列番号６３］のアミノ酸配列を示す。
【図１９】図１９は２つのＮＡＰドメインを有する成熟ＡｃａＮＡＰ４７［配列番号６４］のアミノ酸配列を示す。
【図２０】図２０は２つのＮＡＰドメインを有する成熟ＡｄｕＮＡＰ７［配列番号６５］のアミノ酸配列を示す。
【図１】
2006117675.tif 000181
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ−１】
2006117675.tif 000187
【図７Ａ−２】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ−１】
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【図７Ｅ−２】
2006117675.tif 000193
【図７Ｆ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９】
2006117675.tif 000198
【図１０】
2006117675.tif 000199
【図１１−１】
2006117675.tif 000200
【図１１−２】
2006117675.tif 000201
【図１１−３】
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【図１１−４】
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【図１１−５】
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【図１１−６】
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【図１１−７】
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【図１１−８】
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【図１１−９】
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【図１２】
2006117675.tif 000209
【図１３Ａ】
2006117675.tif 000210
【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
2006117675.tif 000213
【図１３Ｅ】
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【図１３Ｆ−１】
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【図１３Ｆ−２】
2006117675.tif 000216
【図１３Ｇ−１】
2006117675.tif 000217
【図１３Ｇ−２】
2006117675.tif 000218
【図１３Ｈ】
2006117675.tif 000219
【図１４】
2006117675.tif 000220
【図１５】
2006117675.tif 000221
【図１６】
2006117675.tif 000222
【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【手続補正書】
【提出日】平成18年3月9日(2006.3.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第ＶＩＩａ因子／ＴＦ阻害活性を有し、かつ、ＡｃａＮＡＰｃ２［配列番号５９］のアミノ酸配列において、１または数個のアミノ酸の欠失、置換または付加を有するＮＡＰドメインを有する、単離されたタンパク質。
【請求項２】
第ＶＩＩａ因子／ＴＦ阻害活性を有し、かつ、ＡｃｅＮＡＰ４［配列番号６２］のアミノ酸配列または該アミノ酸配列において、１または数個のアミノ酸の欠失、置換または付加を有するＮＡＰドメインを有する、単離されたタンパク質。
【請求項３】
第ＶＩＩａ因子／ＴＦ阻害活性を有し、かつ、ＡｃａＮＡＰ２ｃ［配列番号５９］のアミノ酸配列を有するＮＡＰドメインを有する、単離されたタンパク質。
【請求項４】
第ＶＩＩａ因子／ＴＦ阻害活性を有し、かつ、ＡｃｅＮＡＰ４［配列番号６２］のアミノ酸配列を有するＮＡＰドメインを有する、単離されたタンパク質。
【請求項５】
前記ＮＡＰドメインを２つ有する、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項６】
前記ＮＡＰドメインを２つ有する、請求項２に記載のタンパク質。
【請求項７】
前記ＮＡＰドメインを２つ有する、請求項３に記載のタンパク質。
【請求項８】
前記ＮＡＰドメインを２つ有する、請求項４に記載のタンパク質。
【請求項９】
第ＶＩＩａ因子／ＴＦ阻害活性を有し、かつ、ＡｃａＮＡＰｃ２［配列番号５９］のアミノ酸配列において、１または数個のアミノ酸の欠失、置換または付加を有するＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする、ｃＤＮＡ分子。
【請求項１０】
第ＶＩＩａ因子／ＴＦ阻害活性を有し、かつ、ＡｃｅＮＡＰ４［配列番号６２］のアミノ酸配列または該アミノ酸配列において、１または数個のアミノ酸の欠失、置換または付加を有するＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする、ｃＤＮＡ分子。
【請求項１１】
第ＶＩＩａ因子／ＴＦ阻害活性を有し、かつ、ＡｃａＮＡＰｃ２［配列番号５９］のアミノ酸配列を有するＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする、ｃＤＮＡ分子。
【請求項１２】
第ＶＩＩａ因子／ＴＦ阻害活性を有し、かつ、ＡｃｅＮＡＰ４［配列番号６２］のアミノ酸配列を有するＮＡＰドメインを有するタンパク質をコードする、ｃＤＮＡ分子。
【請求項１３】
請求項５に記載のタンパク質をコードする、ｃＤＮＡ分子。
【請求項１４】
請求項６に記載のタンパク質をコードする、ｃＤＮＡ分子。
【請求項１５】
請求項７に記載のタンパク質をコードする、ｃＤＮＡ分子。
【請求項１６】
請求項８に記載のタンパク質をコードする、ｃＤＮＡ分子。
【請求項１７】
請求項１〜８のいずれか１項に記載のタンパク質と、薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的組成物。
【請求項１８】
第ＶＩＩａ因子／ＴＦ阻害活性を有し、かつ、ＡｃａＮＡＰｃ２Ｐｒｏのアミノ酸配列において、１または数個のアミノ酸の欠失、置換または付加を有するＮＡＰドメインを有する、単離されたタンパク質。
【請求項１９】
第ＶＩＩａ因子／ＴＦ阻害活性を有し、かつ、ＡｃａＮＡＰｃ２Ｐｒｏのアミノ酸配列を有するＮＡＰドメインを有する、単離されたタンパク質。
【請求項２０】
ＡｃａＮＡＰｃ２Ｐｒｏのアミノ酸配列を有する、単離されたタンパク質。
【請求項２１】
前記ＮＡＰドメインを２つ有する、請求項１８に記載のタンパク質。
【請求項２２】
前記ＮＡＰドメインを２つ有する、請求項１９に記載のタンパク質。
【請求項２３】
請求項１８に記載のタンパク質をコードするｃＤＮＡ分子。
【請求項２４】
請求項１９に記載のタンパク質をコードするｃＤＮＡ分子。
【請求項２５】
請求項２０に記載のタンパク質をコードするｃＤＮＡ分子。
【請求項２６】
請求項１８に記載のタンパク質と、薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的組成物。
【請求項２７】
請求項１９に記載のタンパク質と、薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的組成物。
【請求項２８】
請求項２０に記載のタンパク質と、薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的組成物。
【請求項２９】
抗凝固作用を有し、１または複数のＮＡＰドメインを有し、各ＮＡＰドメインが以下の配列：
Ｃｙｓ−Ａ１−Ｃｙｓ−Ａ２−Ｃｙｓ−Ａ３−Ｃｙｓ−Ａ４−Ｃｙｓ−Ａ５−Ｃｙｓ−Ａ６−Ｃｙｓ−Ａ７−Ｃｙｓ−Ａ８−Ｃｙｓ−Ａ９−Ｃｙｓ−Ａ１０（式中、
（ａ）Ａ１は７から８アミノ酸残基のアミノ酸配列である；
（ｂ）Ａ２はアミノ酸配列である；
（ｃ）Ａ３は３アミノ酸残基のアミノ酸配列である；
（ｄ）Ａ４はアミノ酸配列である；
（ｅ）Ａ５は３から４アミノ酸残基のアミノ酸配列である；
（ｆ）Ａ６はアミノ酸配列である；
（ｇ）Ａ７は１アミノ酸残基である：
（ｈ）Ａ８は１１から１２アミノ酸残基のアミノ酸配列である；
（ｉ）Ａ９は５から７アミノ酸残基のアミノ酸配列である；および
（ｊ）Ａ１０はアミノ酸配列である；
上記Ａ２、Ａ４、Ａ６およびＡ１０の各々は、それぞれ独立して選択される数の、独立して選択されるアミノ酸残基を有し、各配列は、各ＮＡＰドメインが合計約１２０未満のアミノ酸残基を有するように選択される）
を含む、単離されたタンパク質。