(57)【要約】【課題】酸化による品質劣化を防ぐ等の優れた抗酸化能を有する抗酸化剤、それを用いた食品及び化粧品を提供する。【解決手段】栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤によって達成される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
【請求項２】
栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物が、水、親水性有機溶媒、多価アルコールの中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物である請求項１記載の抗酸化剤。
【請求項３】
栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物を含有することを特徴とする食品。
【請求項４】
抗酸化能を有することを特徴とする請求項３記載の食品。
【請求項５】
栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物が、食品全体重量中０．０１重量％以上含有することを特徴とする請求項３記載の食品。
【請求項６】
栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物を含有することを特徴とする化粧品。
【請求項７】
抗酸化能を有することを特徴とする請求項６記載の化粧品。
【請求項８】
栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物が、化粧品全体重量中０．０１〜５．０重量％含有することを特徴とする請求項６記載の化粧品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮から抽出した抽出物を含有する優れた抗酸化能を有する抗酸化剤、それを用いた食品及び化粧品に関するものである。      
【背景技術】
【０００２】
一般に、ヒトをはじめとするほとんどの生物は酸素を利用し、また、種々の食品から、生体内の恒常性や機能維持に重要な役割を果たしているリノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸等の二重結合を有する脂肪酸を摂取し、生命活動を維持していると言われている。
しかしながら、これに伴い、ヒトの生体内には活性酸素や過酸化脂質が生み出されているが、これらは強い毒性を持っており、近年の研究により発ガン、虚血性疾患、糖尿病等の成人病、細胞機能障害、老化等に深く関与していることが明らかになりつつある。
このような障害からヒトの組織を守るために、ヒトの生体内では種々の抗酸化物質が機能しているが、その抗酸化物質の多くは食品に依存している。
【０００３】
そこで、このような疾患の予防のために、生体内での活性酸素、過酸化脂質の制御の観点から、食品中の抗酸化物質の検索、作用の解明、あるいは製造方法等についての研究が進みつつある。
例えば、茶葉やカカオ豆等は、種々の抗酸化物質を含んでいることが知られている。また、栗のイガや葉を水或いは親水性有機溶媒で抽出した抽出物には、抗炎症作用や抗ヒスタミン作用等があることが知られている（特許文献１〜３参照。）。しかしながら、栗果肉や渋皮、鬼皮等の有効性や、これらの抗酸化能については検討が為されていない。
【０００４】
【特許文献１】特開平８−２１７６８２号公報
【特許文献２】特開平８−２１７６８８号公報
【特許文献３】特開平８−２１７６９０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明はこのような事情に鑑みなされたものであって、その目的とするところは、酸化による品質劣化を防ぐ等の優れた抗酸化能を有する抗酸化剤、それを用いた食品及び化粧品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記の目的は、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤によって達成される。
【０００７】
また、上記の目的は、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物を含有することを特徴とする食品によって達成される。
【０００８】
また、上記の目的は、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物を含有することを特徴とする化粧品によって達成される。
【０００９】
すなわち、本発明者らは、上記課題を解決するべく鋭意研究を重ねた結果、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つを、好適には、水、親水性有機溶媒、多価アルコールの中から選ばれた少なくとも一つ等を用いて抽出することにより、優れた抗酸化能を有する抗酸化物質が得られることを実験により初めて確認し、本発明の抗酸化
剤を見出した。
更には、これらの抗酸化剤を食品や化粧品に含有することにより、酸化による品質劣化を防ぐ等の優れた抗酸化能を有する食品及び化粧品とすることができることを見出し、本発明に到達した。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の抗酸化剤は、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物を含有しているので、優れた抗酸化能を有している。
また、本発明の抗酸化剤を食品や化粧品に含有させることにより、酸化による品質劣化を防ぐ等の優れた抗酸化能を有する食品、化粧品を得ることができる。また、ガン、動脈硬化、虚血性疾患、糖尿病等の成人病の予防、過酸化脂質の生成によって生じる各種疾病の予防の他、老化の防止、美白効果、二日酔いの軽減、スポーツ等による疲労回復、微生物増殖抑制、ビタミン・色素の安定化、消臭効果等への応用が期待される。
また、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つを抽出媒体で抽出した後、遠心分離で残渣を分離した抽出物は、食品や化粧品だけでなく、医薬品や一般工業品にも応用することが可能であり、汎用性に富んでいる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
次に、本発明を詳しく説明する。
本発明の抗酸化剤は、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物を含有する。
【００１２】
まず、本発明の抗酸化剤とは、脂質の酸化を防止したり、鉄や銅等のような金属の酸化促進作用を不活性化させたり、また、通常の酸素分子よりも反応性の高い活性酸素及びこれに伴う過酸化脂質を制御する物質である。
【００１３】
一般に、栗のイガを取り除いた種実は、果肉、それを包む栗の渋皮、最外皮の栗の鬼皮とからなり、本発明は、これらから抽出した抽出物を使用する。この中でも、特に栗の渋皮から抽出した抽出物は、より抗酸化能効果が得られる点で好適である。なお、本発明の抗酸化剤は、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮を、単独で用いても複数組合せて用いてもよい。
本発明に用いる栗の品種や大きさは、特に限定するものではく、一般に用いられているものから適宜選択して用いればよい。例えば、日本栗、欧州栗、中国栗、アメリカ栗等が挙げられ、栗に加熱、凍結、乾燥等の各種処理を適宜施したものを用いてもよい。
【００１４】
また、本発明の抗酸化剤において、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物の含有量は、特に限定するものではなく、適宜設定すればよい。
【００１５】
抗酸化剤には、本発明の目的を損なわない範囲で適宜選択した副原料を含有してもよい。副原料としては、例えば、糖質甘味料（果糖，ブドウ糖，タガトース，アラビノース等の単糖類、乳糖，オリゴ糖，麦芽糖等の少糖類、粉末水飴、デキストリン、トレハロース、糖アルコール等）、高甘味度甘味料（スクラロース、アセスルファム等）、油脂類、乳製品、安定剤、乳化剤、香料、色素、酸味料、風味原料（卵、コーヒー、茶類、ココア、果汁果肉、ヨーグルト、酒類等）、各種栄養素（蛋白質、食物繊維、ビタミン、ミネラル等）等が挙げられる。これらは、単独もしくは複数組み合わせて用いればよい。
一例を挙げると、栗の抽出物にデキストリンをバインダーとして用いると、粉体状の抗酸化剤とすることができる。
【００１６】
また、抗酸化剤の形態は、特に限定するものではなく、例えば液体状、粉体状、顆粒状
、ペースト状等種々の形態が挙げられる。
【００１７】
本発明の抗酸化剤は、例えば次のようにして製造される。
すなわち、まず、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つを、水、親水性有機溶媒、多価アルコール等の中から選ばれた少なくとも一つもしくはこれらの混合物、あるいは水溶液、分散液で抽出し、抽出物を得る。抽出方法は、抽出媒体に５〜３０分程度浸漬した後、遠心分離で液切りする方法が挙げられる。なお、このとき、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮は、細かく粉砕しておくと、効率的に抽出液が抽出できる点で好適である。
次いで、該抽出物に、必要に応じて副原料を添加し、凍結乾燥や減圧濃縮等の常法によって適宜所望の形態とすることで、抗酸化剤が得られる。
【００１８】
上記抽出工程にて、抽出媒体として水を使用する場合は、常温水でも熱水でもよい。
また、親水性有機溶媒としては、例えば、エタノール、メタノール、イソプロパノール、アセトン等が挙げられる。
また、多価アルコールとしては、例えば、グリセリン、キシリトール、マルチトール、グルコース、キシロース、ガラクトース、マルトース、蔗糖、ポリグリセリン等が挙げられる。
これらは、単独または複数組合せて用いればよい。
【００１９】
次に、本発明の食品について説明する。
本発明の食品は、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物を含有する。
【００２０】
本発明の食品は、上記抽出物を含有できるものであれば何でもよく、例えば、チューインガム、キャンディー、タブレット、チョコレート、冷菓、麺類をはじめとする澱粉系食品、粉末食品、飲料、パン、ビスケット等のベーカリー食品、スープ、油脂食品、健康飲食品等のいかなる飲食品にも用いることができる。各食品の特性、目的に応じ、製造工程の段階で適宜選択して含有させればよい。
【００２１】
また、本発明の食品における栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物の含有量は、各食品の種類や目的等に応じて異なるが、好ましくは、食品全体重量中０．０１重量％以上含有することが望ましい。すなわち、０．０１重量％未満の場合には、抗酸化能効果が得られにくい傾向にある。
なお、本発明における食品とは、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物を含有し、かつ、抗酸化能を有する食品を意味する。
【００２２】
本発明の食品には、上記栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物の他に、本来の目的を損なわない範囲で、上記副原料等を適宜選択し、含有してもよい。
【００２３】
本発明の食品の一例として、キャンディは例えば次のようにして製造される。  すなわち、まず、上述したように、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つを、水、親水性有機溶媒、多価アルコール等の中から選ばれた少なくとも一つで抽出し、抽出物を得る。一方で、グラニュー糖、水飴等のキャンディ原料を煮詰め混合し、冷却しておく。そして、上記キャンディ原料混合物に、上記抽出物及び必要に応じて副原料を添加混合し、更に冷却し、適宜成形すれば、本発明のキャンディが得られる。
【００２４】
次に、本発明の化粧品について説明する。
本発明の化粧品は、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから
抽出した抽出物を含有する。
【００２５】
化粧品としては、上記抽出物を含有できるものであれば何でもよく、例えば、皮膚化粧料、毛髪化粧料の他に、医薬部外品や入浴剤等をも含む。
形態としては、例えば、軟膏類、ローション類、乳液類、クリーム類、パック類、ジェル類、粉末類、顆粒類等の任意の形態として適宜設定して用いればよい。
【００２６】
また、本発明の化粧品における栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物の含有量は、各化粧品の種類や目的等に応じて異なるが、好ましくは、化粧品全体重量中０．０１〜５．０重量％に設定することが望ましい。
すなわち、０．０１重量％未満の場合には、抗酸化能効果が得られにくい傾向にある。逆に、５．０重量％を超えて使用しても、配合量に見合った効果が得られにくい傾向にある。
【００２７】
また、本発明の化粧料には、必要に応じて、油脂、保湿剤、顔料、色素、界面活性剤、紫外線吸収剤、防腐剤、水溶性高分子、樹脂等の化粧品原料として公知であるような任意の成分を適宜選択して用いればよい。
【００２８】
本発明の化粧品の一例として、美肌化粧料は例えば次のようにして製造される。
すなわち、まず、上述したように、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つを、水、親水性有機溶媒、多価アルコール等の中から選ばれた少なくとも一つで抽出し、抽出物を得る。そして、常法に従って調製した乳化物中に、上記抽出物を添加混合すれば、本発明の美肌化粧料が得られる。
【実施例】
【００２９】
以下、本発明を実施例に基づき具体的に説明する。
【００３０】
〈実施例１〉
《抗酸化剤の調製》
まず、栗の果肉部（１０ｇ）、渋皮部（４ｇ）、鬼皮部（１０ｇ）を計量後、包丁で約１ｍｍ程度に細かく粉砕し、試料とした。
そして、各試料の１／２量それぞれに蒸留水（９０℃）５０ｍｌを混合し、他方で残りの各試料それぞれにエタノール（４０℃）（和光純薬工業（株）製  試薬特級）５０ｍｌを混合し、それぞれをブレンダーにて１５０００ｒｐｍ、１０分間粉砕した。
次に、水溶性画分については、遠心分離（２５０００×ｇ、２０分間）により、上清を４０ｍｌ抽出し、使用した抽出溶媒で１００ｍｌにメスアップした。エタノール抽出画分については、遠心分離（２５０００×ｇ、２０分間）により、上清を抽出し１〜２ｍｌ程度に濃縮後、蒸留水にて１００ｍｌにメスアップし、抗酸化剤を調製した。
【００３１】
《活性酸素消去能試験》
ＤＰＰＨ（1,1-diphenyl-２-picrylhydrazyl）ラジカルの減少に伴う吸光度の減少量とコントロールの値から活性酸素消去能を測定した。
上記実施例１で得られた栗果肉部、栗の渋皮部、栗の鬼皮部それぞれの抽出液、また対照サンプルとして、一般的に抗酸化能を有する食品素材ニンジン、カボチャ、ホウレンソウの抽出液を２ｍｌ、エタノール２ｍｌ、０．５ｍＭＤＰＰＨ／エタノール溶液１ｍｌを試験管中で混合し、直後（０分後）と３０分後に５１７ｎｍで吸光度測定を行った。また、それぞれの抽出液の色が測定結果に与える影響を考慮し、ＤＰＰＨラジカルの関与しない系として、０．５ｍＭＤＰＰＨ／エタノール溶液の代わりにエタノールを加えたものを用意し、これを各抽出液の色ブランクとした。また、コントロールは、抽出液の代わりに０．１Ｍ酢酸緩衝液を加えた。測定はいずれも３回行い、平均値を用いた。
ラジカル消去能の評価は、以下の式に従って算出した。
【数１】
2006131916.tif 000002
ただし色ブランクがないＢＨＡについては、
【数２】
2006131916.tif 000003
とした。
さらに、ＢＨＡについて濃度とラジカル消去能の関係を検量線に表し、これを用いて各試料のラジカル消去能をＢＨＡ濃度に換算して表１に示す。
【００３２】
【表１】
2006131916.tif 000004
【００３３】
《ロダン鉄法試験》
経時的に生成された過酸化脂質をロダン鉄法で測定することにより、抗酸化活性を評価した。
上記実施例１で得られた抽出液１．０ｍｌを添加した、１．３％リノール酸を含むエタノール（９９．５％）２．５ｍｌ、０．２Mリン酸緩衝液（ｐH７．０）２．５ｍｌ、蒸留水０．５ｍｌ、およびラジカル発生剤として４６．６ｍＭＡＡＰＨ（２,２'-azobis ２-amidinopropane dihydrochloride）０．２５ｍｌをねじ口試験管に取り、よく攪拌後、密栓し、５５℃の恒温器内に遮光保存し、１５時間経過したものをサンプルとした。このとき、コントロールとして実施例１で得られた抽出液の代わりに０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐ
H７．０）を加えた。また、本実験では対照として０．１％ＢＨＡを用いた。
反応終了後、反応液０．１ｍｌ、７５％エタノール４．７ｍｌ、０．０２M塩化第一鉄/３．５％塩酸溶液０．１ｍｌ、３０％チオシアン酸アンモニウム水溶液０．１ｍｌを添加し、３分後５００ｎｍにおける吸光度測定した。測定はいずれも３回行い、平均値を用いた。また、抗酸化活性は、コントロールの吸光度を１００として算出した。算出結果を表２に示す。
【００３４】
【表２】
2006131916.tif 000005
【００３５】
実施例１の栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮より得られた抽出物は、活性酸素消去能試験、ロダン鉄法試験により、抗酸化能を有していた。特に、栗の渋皮抽出物は、より優れた抗酸化能を有していた。
【００３６】
〈実施例２、３〉
《キャンディの調製》
実施例２として、常法に従い、型打ち成型キャンディを得た。すなわち、まず、固形分としてグラニュー糖６０ｇ、酵素水飴４０ｇを混合し、これを１５０℃に煮詰め、１３０℃に冷却した。次いで、該混合物に、実施例１で得られた栗の渋皮の水抽出物１０ｇ、他にクエン酸、香料、色素を少量添加混合し、１００℃に冷却した後、型打ち成型を行い、キャンディを得た。
また、実施例３として、実施例１で得られた栗の渋皮の水抽出物を２０ｇ用いる他は、実施例２と同様にしてキャンディを得た。
また、コントロールとして、実施例１で得られた栗の渋皮の水抽出物を用いないものを使用した。
これらのキャンディを溶解液とし、上述のロダン鉄法試験と同様に抗酸化活性を評価した。算出結果を表３に示す。
【００３７】
【表３】
2006131916.tif 000006
【００３８】
実施例２及び３のキャンディは、栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮から抽出した抽出物が配合されていない市販品（コントロール）のキャンディに比べ、抗酸化能に優れており、かつ苦味等の呈味性や呈色性について何ら遜色のないキャンディであった。
【００３９】
〈実施例４〜６、比較例１〉
《化粧料の調製》
下記表４の組成からなる、化粧料（クリーム）を通常の乳化物の製造方法にて製造し、試料とした。
【００４０】
［表４］
配合成分                              配合量（％）
実施例４  実施例５  実施例６  比較例１    
ステリアリン酸                  ７．０    ７．０    ７．０    ７．０
オレイン酸                      ３．０    ３．０    ３．０    ３．０  
ステアリルアルコール            ４．０    ４．０    ４．０    ４．０  
モノステアリン酸グリセリル      ８．０    ８．０    ８．０    ８．０  
エチルパラベン                  ０．１    ０．１    ０．１    ０．１
ブチルパラベン                  ０．１    ０．１    ０．１    ０．１  
プロピルパラベン                ０．１    ０．１    ０．１    ０．１  
プロピレングリコール            ８．０    ８．０    ８．０    ８．０  
グリセリン                      ２．０    ２．０    ２．０    ２．０  
水酸化カリウム                  ０．４    ０．４    ０．４    ０．４
エデト酸二ナトリウム            ０．０５  ０．０５  ０．０５  ０．０５
実施例１で得た栗果肉水抽出物    ３．０      −        −        −
実施例１で得た栗の渋皮水抽出物    −      ０．１    ０．５      −
実施例１で得た栗の鬼皮水抽出物    −      ０．３      −        −
精製水                          残余      残余      残余      残余
【００４１】
パネル３名の頬に試料０．４ｇを一日２回、一週間連用塗布した。その後、表５に示す
項目について官能評価により、その効果を判定した。
【００４２】
［表５］
官能評価
刺激感                                美肌効果
判定                 評価               判定                評価      全く刺激感を感じなかった        ○         肌がなめらかになった        ○      
やや刺激感を感じた              △       肌がややなめらかになった      △      
刺激感を感じた                  ×         変化なし                    ×
【００４３】
上記実施例４〜６及び比較例１の官能評価結果を表６に示す。
【００４４】
［表６］
パネル１         パネル２            パネル３
刺激感 美肌効果    刺激感  美肌効果   刺激感 美肌効果
実施例４      ○   △         ○      ○          ○      ○
実施例５      ○   ○         ○      ○          ○      ○
実施例６      ○   ○         ○      ○          ○      ○
比較例１      ○   ×         ○      ×          ○      ×
【００４５】
表６に示す如く、実施例４〜６は、表５に示す項目についての官能評価により、安全性が高く優れた美肌効果を有していることが明らかとなった。
【手続補正書】
【提出日】平成18年1月10日(2006.1.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
【請求項２】
栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物が、水、親水性有機溶媒、多価アルコールの中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物である請求項１記載の抗酸化剤。
【請求項３】
栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物を含有することを特徴とする食品。
【請求項４】
抗酸化能を有することを特徴とする請求項３記載の食品。
【請求項５】
栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物を、食品全体重量中０．０１重量％以上含有することを特徴とする請求項３記載の食品。
【請求項６】
栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物を含有することを特徴とする化粧品。
【請求項７】
抗酸化能を有することを特徴とする請求項６記載の化粧品。
【請求項８】
栗果肉、栗の渋皮、栗の鬼皮の中から選ばれた少なくとも一つから抽出した抽出物を、化粧品全体重量中０．０１〜５．０重量％含有することを特徴とする請求項６記載の化粧品。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
〈実施例１〉
《抗酸化剤の調製》
まず、栗の果肉部（１０ｇ）、渋皮部（４ｇ）、鬼皮部（１０ｇ）を計量後、包丁で約１ｍｍ程度に細かく粉砕し、試料とした。
そして、各試料の１／２量それぞれに蒸留水（９０℃）５０ｍｌを混合し、他方で残りの各試料それぞれにエタノール（４０℃）（和光純薬工業（株）製  試薬特級）５０ｍｌを混合し、それぞれをブレンダーにて１５０００ｒｐｍ、１０分間粉砕した。
次に、水溶性画分については、遠心分離（２５０００×ｇ、２０分間）により得た上清４０ｍｌを、使用した抽出溶媒で１００ｍｌにメスアップした。エタノール抽出画分については、遠心分離（２５０００×ｇ、２０分間）により得た上清を１〜２ｍｌ程度に濃縮後、蒸留水にて１００ｍｌにメスアップし、抗酸化剤（抽出液）を調製した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
《ラジカル消去能試験》
ＤＰＰＨ（1，1−dipheny1−2−picrylhydrazyl）ラジカルの減少に伴う吸光度の減少量とコントロールの値からラジカル消去能を測定した。
上記実施例１で得られた栗果肉部、栗の渋皮部、栗の鬼皮部それぞれの抽出液、また対照サンプルとして、一般的に抗酸化能を有する食品素材ニンジン、カボチャ、ホウレンソウの抽出液を２ｍｌ、エタノール２ｍｌ、０．５ｍＭＤＰＰＨ／エタノール溶液１ｍｌを試験管中で混合し、直後（０分後）と３０分後に５１７ｎｍで吸光度測定を行った。また、それぞれの抽出液の色が測定結果に与える影響を考慮し、ＤＰＰＨラジカルの関与しない系として、０．５ｍＭＤＰＰＨ／エタノール溶液の代わりにエタノールを加えたものを用意し、これを各抽出液の色ブランクとした。また、コントロールは、抽出液の代わりに０．１Ｍ酢酸緩衝液を加えた。測定はいずれも３回行い、平均値を用いた。
ラジカル消去能の評価は、以下の式に従って算出した。さらに、ブチルヒドロキシアソニール（以下、ＢＨＡと記す）について濃度とラジカル消去能の関係を検量線に表し、これを用いて各試料のラジカル消去能をＢＨＡ濃度に換算して表１に示す。
【数１】
2006131916.tif 000007
ただし色ブランクがないＢＨＡについては、
【数２】
2006131916.tif 000008
とした。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】
《ロダン鉄法試験》
経時的に生成された過酸化脂質をロダン鉄法で測定することにより、抗酸化活性を評価した。
上記実施例１で得られた抽出液１．０ｍｌを添加した、１．３％リノール酸を含むエタノール（９９．５％）２．５ｍｌ、０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）２．５ｍｌ、蒸留水０．５ｍｌ、およびラジカル発生剤として４６．６ｍＭＡＡＰＨ（2，2’−azobis  2−amidinopropane  dihydrochloride）０．２５ｍｌをねじ口試験管に取り、よく攪拌後、密栓し、５５℃の恒温器内に遮光保存し、１５時間経過したものをサンプルとした。このとき、コントロールとして実施例１で得られた抽出液の代わりに０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を加えた。また、本実験では対照として０．１％ＢＨＡを用いた。
反応終了後、反応液０．１ｍｌ、７５％エタノール４．７ｍｌ、０．０２Ｍ塩化第一鉄／３．５％塩酸溶液０．１ｍｌ、３０％チオシアン酸アンモニウム水溶液０．１ｍｌを添加し、３分後５００ｎｍにおける吸光度測定した。測定はいずれも３回行い、平均値を用いた。また、酸化物の生成率は、コントロールの吸光度を１００として算出した。算出結果を表２に示す。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
【表２】
2006131916.tif 000009
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
【表３】
2006131916.tif 000010