(57)【要約】【課題】      本発明は、抗腫瘍効果を増強する医薬組成物を提供する。【解決手段】  ヒアルロン酸合成阻害因子と抗腫瘍物質とを含有することを特徴とする医薬組成物。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒアルロン酸合成阻害因子と抗腫瘍物質とを含有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項２】
ヒアルロン酸合成阻害因子がクマリン誘導体またはその塩である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
クマリン誘導体またはその塩が４−メチルウンベリフェロンまたはその塩である請求項２記載の医薬組成物。
【請求項４】
抗腫瘍剤である請求項１〜３記載の医薬組成物。
【請求項５】
ヒアルロン酸合成阻害因子と組み合わせてなる医薬品組成物製造のための抗腫瘍物質の使用。
【請求項６】
抗腫瘍物質と組み合わせてなる医薬品組成物製造のためのヒアルロン酸合成阻害因子の使用。
【請求項７】
ヒアルロン酸合成阻害因子がクマリン誘導体またはその塩である請求項５あるいは６記載の抗腫瘍物質の使用。
【請求項８】
クマリン誘導体またはその塩が４−メチルウンベリフェロンまたはその塩である請求７記載の抗腫瘍物質の使用。
【請求項９】
ヒアルロン酸合成阻害因子と抗腫瘍物質とを癌の予防剤または治療剤の製造の為に用いること。
【請求項１０】
請求項４に記載の医薬組成物を患者に有効量投与することを特徴とする癌の予防または治療方法。
【請求項１１】
ヒアルロン酸合成阻害因子を患者に投与し、一定時間経過後に、抗腫瘍物質を前記患者に投与することを特徴とする癌の予防または治療方法。
【請求項１２】
ヒアルロン酸合成阻害因子と抗腫瘍物質とを有効量を同時にまたは別々に患者に投与する為の医薬品キット。
【請求項１３】
ヒアルロン酸合成阻害因子と抗腫瘍物質とを組み合わせてなる医薬品製品。
【請求項１４】
ヒアルロン酸合成阻害因子と抗腫瘍物質とを組み合わせてなる組み合わせ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は抗癌剤に関する。詳しくは、ヒアルロン酸合成阻害因子と抗腫瘍物質とを含有する抗癌剤に関する。具体的には、４−メチルウンベリフェロン等のクマリン誘導体と抗腫瘍物質とを含有する抗癌剤に関する。
【背景技術】
【０００２】  癌の化学療法剤として従来用いられているものには、アルキル化剤のサイクロホスファミド、代謝拮抗剤のゲムシタビン、メトトレキセート、フルオロウラシル、抗生物質のドキソルビシン、マイトマイシン、ブレオマイシン、植物由来のビンクリスチン、エトポシド、金属錯体のシスプラチンなど多くの薬剤があるが、いずれもその抗腫瘍効果は不十分であり、新しい抗癌剤の開発が切望されていた。
一方、クマリン誘導体である４−メチルウンベリフェロンは、各種胆道疾患に対する利胆作用ならびに鎮痙作用を有する医薬品として知られている。また、クマリンは、細胞の微小管を安定化させること、さらには、微小管形成または微小管機能を抑制し、妨げ、調節し、減弱させ、安定化させることが知られている（例えば、特許文献１）。
【特許文献１】  特表２００４−５２７４７８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】  本発明の課題は、ヒアルロン酸合成阻害因子と抗腫瘍物質とを含有することを特徴とし、抗腫瘍効果を増強する医薬組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】  本発明は以下の発明に係る。
１．アルロン酸合成阻害因子と抗腫瘍物質とを含有する医薬組成物である。
２．ヒアルロン酸合成阻害因子と抗腫瘍物質とを含有する抗腫瘍剤である。
【発明の効果】
【０００５】  本発明のヒアルロン酸合成阻害因子と抗腫瘍物質とを含有する医薬組成物は、抗腫瘍物質の抗腫瘍効果を増強し、従来の抗腫瘍物質の投与量を減少させ副作用を低減できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】  本発明の医薬組成物は、ヒアルロン酸合成阻害因子と抗腫瘍物質とを含有する医薬組成物である。【０００７】  本発明で使用するヒアルロン酸合成阻害因子としては、クマリン誘導体（Ｃｈｒｏｍｅｎ−２−ｏｎｅ）やケイ皮酸誘導体等を挙げることができる。好ましくは、クマリン誘導体またはその塩がよい。【０００８】  クマリン誘導体またはその塩としては、クマリン、４−メチルクマリン、７−ヒドロキシクマリン（ウンベリフェロン）、４・メチル−７−ヒドロキシクマリン（４−メチルウンベリフェロン）等を挙げることができる。
ケイ皮酸誘導体またはその塩としては、ケイ皮酸、ｐ−ヒドロキシケイ皮酸、ｐ−メトキシケイ皮酸等を挙げることができる。
好ましくは、４−メチルウンベリフェロンまたはその塩がよい。【０００９】  ４−メチルウンベリフェロンは、公知化合物であり、それぞれ公知の方法またはそれに準じた方法によって製造することができる。前記各製造工程における原料化合物・各種試薬は、塩や水和物を形成していてもよく、いずれも出発原料、使用する溶媒等により異なり、また反応を阻害しない限りにおいて特に限定されない。用いる溶媒についても、出発原料、試薬等により異なり、また反応を阻害せず出発物質をある程度溶解するものであれば特に限定されないことは言うまでもない。化合物がフリー体として得られる場合、薬理学的に許容できる塩の状態に常法に従って変換することができる。また、得られる種々の異性体（例えば幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、回転異性体、立体異性体、互変異性体、等）は、通常の分離手段、例えば再結晶、ジアステレオマー塩法、酵素分割法、種々のクロマトグラフィー（例えば薄層クロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー等）を用いることにより精製し、単離することができる。【００１０】  本発明で使用する抗腫瘍物質としては、例えば、塩酸ナイトロジェンマスタード−Ｎ−オキシド、シクロホスファミド、チオテパ、カルボコン、クロラムブシル、塩酸ニムスチン、イホスファミド、メルファラン、ダカルバジン、ウラシルマスタード、マンノムスチン、ドーパン、ＢＣＮＵ、トリエチレンメラミン、アザテパ、トレニモン、イソプロキュオン、ブスルファン、ジメチルミレラン、ピポスルファン、エトグルシド、エポキシプロピジン、エポキシピペラジン、ヘキサメチルメラミン、ジブロモマンニトール、ピポブロマンなどのアルキル化剤、ゲムシタビン、アミノプリテン、メトトレキサート、カルモフール、グアニン、８−アザガニン、メルカプトプリン、チオイノシン、アザチオプリン、ウラシル、フルオロウラシル、テガフール、シタラビン、塩酸アンシタビン、エノシタビン、アザセリン、ジアゾマイシンなどの代謝拮抗剤、アクチノマイシンＤ、サイクロマイシン、マイトマイシンＣ、ダウノマイシン、塩酸ダウノルビシン、塩酸ドキソルビシン、塩酸ブレオマイシン、硫酸ブレオマイシン、ネオカルチノスタチン、硫酸ペプロマイシン、塩酸アクラルビシン、クロモマイシンＡ３、塩酸エピルビシン、アンサマイシン、カルジノフィリン、ピラルビシンなどの抗生物質、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンデシン、エトポシドなどの植物アルカロイド、シスプラチン、カルボプラチンなどの白金錯体、その他Ｈｇ−ヘマトポルフィリン、Ｃｏ−プロトポルフィリン、塩酸プロカルバジン、リン酸エストラムスチンナトリウム、ラニムスチン、ミトキサントロン、ドキシフルリジン、Ｌ−アスパラギナーゼなどが挙げられる。【００１１】  本願明細書において「塩」とは、特に種類は限定されないが、例えば塩酸塩、硫酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩などの無機酸の付加塩；酢酸塩、マレイン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、トリフルオロ酢酸塩などの有機カルボン酸の付加塩；メタンスルホン酸塩、ヒドロキシメタンスルホン酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、タウリン塩などの有機スルホン酸の付加塩；トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ピリジン塩、プロカイン塩、ピコリン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、トリス（ヒドロキシメチルアミノ）メタン塩、フェネチルベンジルアミン塩などのアミンの付加塩；アルギニン塩、リジン塩、セリン塩、グリシン塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩などのアミノ酸の付加塩などを挙げることができる。【００１２】  本願明細書における「抗癌剤」とは、腫瘍、特に悪性腫瘍に対して用いられる薬剤を意味する。本発明にかかる医薬組成物または抗癌剤が治療または予防に有用な癌疾患としては、例えば脳腫瘍、頭頸部癌、食道癌、胃癌、大腸癌、肝癌、膵癌、肺癌、乳癌、皮膚癌、卵巣癌、前立腺癌、腎癌、膀胱癌、リンホーマ、白血病等があげられる。本発明にかかる医薬組成物または抗癌剤は、哺乳類（例えばヒトマウス、ラット、モルモット、ウサギ、イヌ、ウマ、サル等）の癌疾患、特にヒトの癌疾患の治療または予防に有用である。本発明にかかる「含む医薬組成物」とは、それぞれ２種以上の有効成分物質または医薬組成物を組み合わせてなる「医薬組成物」を意味し、かかる「医薬組成物」は、２種以上の有効成分物質を含有してなる単剤として調製して投与してもよいし、２種以上の医薬組成物を別個に調製して同時に併用投侈してもよいし、２種以上の医薬組成物を別個に調製して一方の医薬を投与しその一定時間経過後に他方の医薬を投与する形態の併用投与に付してもよい。これらの投与形態にかかる医薬組成物すべてが本発明にかかる「医薬組成物」に含まれる。また、２種以上の医薬組成物を組み合わせる好適な成分割合は限定されず、適宜行われる。【００１３】  本発明にかかる「医薬組成物」における好適な例の一つは、４−メチルウンベリフェロンまたはその塩と抗腫瘍物質とを組み合わせてなる医薬組成物であり、特に４−メチルウンベリフェロンまたはその塩とゲムシタビンとを組み合わせてなる医薬組成物が好ましい。【００１４】  上記の如き成分で本願発明医薬組成物を構成することができるが、該医薬組成物または抗癌剤の投与に当たっては、同時併用投与に限られず、各成分を一定時間の間隔で投与して相乗効果を上げることもできる。具体的には、４−メチルウンベリフェロンまたはその塩を患者に投与し、一定時間経過後に、抗腫瘍物質を前記患者に投与することを特徴とする癌の予防または治療方法によっても、相乗効果を上げることができ、かかる予防または治療方法も本願発明に含まれる。【００１５】  また、前記予防または治療方法におけるが如く、一定間隔毎に各成分を投与する目的で、４−メチルウンベリフェロンまたはその塩と、抗腫瘍物質とを有効量を同時にまたは別々に患者に投与するための医薬品キットを用いることによっても相乗的な抗癌作用を得ることができ、かかる医薬品キットは本願発明中に含まれる。例えば、各成分を小容器に包装し、全体として１つの箱に装填されたような医薬品のキットが挙げられる。【００１６】  本発明にかかる医薬組成物を医薬として使用する場合は、投与形態は特に限定��れず、経口もしくは非経口的に投与される。哺乳類（例えばヒト、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、イヌ、ウマ、サル、等）、特にヒトにおける治療・予防に有用である。投与量は、症状の程度、患者の年齢、性別、体重、感受性差、投与方法、投与時期、投与間隔、医薬製剤の性質、調剤、種類、有効成分の種類等によって異なり特に限定されない。【００１７】  例えば、４−メチルウンベリフェロンの使用量は、１０μｇ〜２ｇである。好ましくは、５０μｇ〜５００ｍｇが良い。【００１８】  抗腫瘍物質の使用量はその薬理作用に依存し、有効量であればよく、１回の投与量として１０μｇ〜２ｇの中から選ばれるが、特に限定されない。例えば、塩酸ドキソルビシン、シスプラチン、マイトマイシンＣ、塩酸ブレオマイシンなどの一般によく使用される抗腫瘍物質の場合、１回の投与量は０．０１〜５００ｍｇの中から選ばれる。【００１９】  抗腫瘍剤中の抗腫瘍物質の濃度はその薬理効果活性の強さ、水あるいは有機溶媒中での溶解度、粒子成形性などに依存するが、抗腫瘍剤中に０．１〜９０％が望ましい。また、４−メチルウンベリフェロンの濃度は、抗腫瘍物質１ｍｇに対して、０．０１ｍｇから１０ｇが望ましい。【００２０】  本発明にかかる医薬組成物の調製は、有効成分物質をそのまま用いるか、または、自体公知の薬学的に許容できる担体等と混合して慣用される方法による製剤化によってすることができる。好ましい剤形としては注射剤、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、被覆錠剤、カプセル剤、シロップ剤、トローチ剤、吸入剤、坐剤、軟膏剤、眼軟膏剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、パップ剤、ローション剤等があげられる。これら製剤化には通常用いられる賦形剤，結合剤，滑沢剤，着色剤，矯味矯臭剤等，および必要により安定化剤，乳化剤，吸収促進剤，界面活性剤等を使用することができ、一般に医薬品製剤の原料として用いられる成分を配合して常法により製剤化される。【００２１】  前記製剤化成分としては、例えば動植物油（大豆油、牛脂、合成グリセライドなど）、炭化水素（流動パラフィン、スクワラン、固形パラフィンなど）、エステル油（ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピルなど）、高級アルコール（セトステアリルアルコール、ベヘニルアルコールなど）、シリコン樹脂、シリコン油、界面活性剤（ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ひまし油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマーなど）、水溶性高分子（ヒドロキシエチルセルロース、ポリアクリル酸、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロースなど）、アルコール（エタノール、イソプロパノールなど）、多価アルコール（グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ソルビトールなど）、糖（グルコース、ショ糖など）、無機粉体（無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ケイ酸アルミニウムなど）、精製水などが挙げられる。ｐＨ調製のためには無機酸（塩酸、りん酸など）、無機酸のアルカリ金属塩（りん酸ナトリウムなど）、無機塩基���水酸化ナトリウムなど）、有機酸（低級脂肪酸、クエン酸、乳酸など）、有機酸のアルカリ金属塩（クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウムなど）、有機塩基（アルギニン、エタノールアミンなど）などを用いることができる。また、必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤などを添加することができる。【００２２】  例えば経口用固形製剤を調製する場合は、主薬に賦形剤さらに必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤などを加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、カプセル剤等とする。【００２３】  賦形剤としては、例えば乳糖、コーンスターチ、白糖、ぶどう糖、ソルビット、結晶セルロース、二酸化ケイ素などが、結合剤としては、例えばポリビニルアルコール、エチルセルロース、メチルセルロース、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等が、滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ等が、着色剤としては医薬品に添加することが許可されているものが、矯味矯臭剤としては、ココア末、ハッカ脳、芳香酸、ハッカ油、龍脳、桂皮末等が用いられる。これらの錠剤、顆粒剤には糖衣、ゼラチン衣、その他必要により適宜コーティングすることは勿論差し支えない。【００２４】  注射剤を調製する場合には、必要により主薬にｐＨ調整剤、緩衝剤、懸濁化剤、溶解補助剤、安定化剤、等張化剤、保存剤などを添加し、常法により静脈、皮下、筋肉内注射剤とする。その際必要により、常法により凍結乾燥物とすることもある。【００２５】  懸濁化剤としては、例えばメチルセルロース、ポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロース、アラビアゴム、トラガント末、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートなどを挙げることができる。【００２６】  溶解補助剤としては、例えばポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリソルベート８０、ニコチン酸アミド、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、マクロゴール、ヒマシ油脂肪酸エチルエステルなどを挙げることができる。【００２７】  また安定化剤としては、例えば亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸ナトリウム等を、保存剤としては、例えばパラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、ソルビン酸、フェノール、クレゾール、クロロクレゾールなどを挙げることができる。【００２８】  本発明により、従来有効率が十分でなかった癌種にも優れた抗腫瘍活性を示す新規な併用医薬組成物を提供できた。本発明にかかる医薬組成物は、脳腫瘍、頭頸部癌、食道癌、胃癌、大腸癌、肝癌、膵癌、肺癌、乳癌、皮膚癌、卵巣癌、前立腺癌、腎癌、膀胱癌、リンホーマ、白血病、等の治療または予防に有用である。本願組成物を投与することにより、抗腫瘍物質の量を減らすことができ、全体としての副作用も低減でき、さらに高価な薬物の多量長期使用による費用負担を低廉で比較的効果の大きい薬物の併用で軽減することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】  以下に実施例を挙げて説明するが、本発明は何らこれら実施例に限定されるものではない。【００３０】  癌細胞の入手
人間のすい臓癌細胞ＫＰ１−ＮＬは、健康科学研究資源バンク（大阪）から入手した。この細胞は、一般的な培養である、３７℃、５％ＣＯ２、湿度９５％で、１０％ＦＢＳ（胎児牛血清加熱処理した）、Ｌ−グルタミン、アンフォテリシンＢと炭酸ナトリウムを加えたＲＰＭＩ−１６４０中で単層培養した。全ての実験で、８〜１５週間経過した細胞を使用した。【００３１】実施例１
６．２５×１０２個の細胞（ＫＰ１−ＮＬ）を含んだ９０μｌの溶液を９６穴のアレイに種付けし、一晩浸した。そして４−メチルウンベリフェロンの濃度が０．１ｍＭになるように調製し培養した（４８時間）。次いで抗腫瘍物質（Ｇｅｍｉｃｉｔａｂｉｎｅ）を０．１μＭ加え、１４４時間培養した。それぞれのポイントで１０μｌのアロマーブルーを各ウエルに加える。３時間インキューベションした後に、蛍光測定器でマイクロプレートの蛍光強度を測定した（５４４ｎｍ〜５９０ｎｍの蛍光波長を測定する）。【００３２】実施例２
抗腫瘍物質を１．０μＭ加えた以外は実施例１と同様にした。【００３３】実施例３
抗腫瘍物質を１０．０μＭ加えた以外は実施例１と同様にした。【００３４】比較例１
４−メチルウンベリフェロンおよび抗腫瘍物質を加えない以外は実施例１と同様にした。【００３５】比較例２
４−メチルウンベリフェロンを加えない以外は実施例１と同様にした。【００３６】比較例３
４−メチルウンベリフェロンを加えない以外は実施例２と同様にした。【００３７】比較例４
４−メチルウンベリフェロンを加えない以外は実施例３と同様にした。【００３８】  実施例１〜３および比較例１〜４の蛍光強度の測定値において、比較例１の蛍光強度を基準（１００％）とした。【００３９】
【表１】
2006298892.tif 000002
【００４０】  表１より、比較例では、初期活性の３１％から３６％に低下したのに対し、４−メチルウンベリフェロンを加えた実施例では、初期活性の１５％から１９％に低下した。これにより、４−メチルウンベリフェロンによる抗腫瘍効果増強は、明らかである。