(57)【要約】【課題】  生体の唾液、涙液、鼻汁、気道粘液、消化管分泌液、乳汁や腸管の粘膜面には、ウイルスや細菌などの外からの病原菌（抗原）に対して防御するために免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）を主体とする強力な粘膜免疫機構が存在している。本発明は、副作用などの問題が無く、ＩｇＡとｐＩｇＲの産生増強することのできる安全性の高い新規な粘膜免疫賦活組成物を提供することを目的とする。【解決手段】  ガラクトマンナンを含有することにより上記課題を解決する。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガラクトマンナンを含有することを特徴とする粘膜免疫賦活組成物。
【請求項２】
腸管粘膜におけるＩｇＡ産生増強作用を有する請求項１記載の粘膜免疫賦活組成物。
【請求項３】
腸管上皮細胞におけるポリメリックＩｇ受容体（ｐＩｇＲ）の産生増強作用を有する請求項１記載の粘膜免疫賦活組成物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか記載の粘膜免疫賦活組成物を含有する飲食品
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な粘膜免疫賦活組成物に関する。さらに詳しくは、本発明は、ガラクトマンナンを含有する粘膜免疫賦活組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
生体の唾液、涙液、鼻汁、気道粘液、消化管分泌液、乳汁や腸管の粘膜面には、ウイルスや細菌などの外からの病原菌（抗原）に対して防御するために免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）を主体とする強力な粘膜免疫機構が存在している。ＩｇＡは分子量約３９万の糖蛋白で、糖質を８％含み、ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎが２種類（α１、α２）存在してＩｇＡ１、ＩｇＡ２の２つのサブクラスの区別がある。また、血清ＩｇＡと分泌型ＩｇＡに分けられるが、ほとんどが分泌型ＩｇＡで唾液、涙液、鼻汁、気道粘液、消化管分泌液や乳汁などの外分泌液中に高濃度に含まれており、それぞれの局所粘膜における防御機能を行っている。なお、分泌型ＩｇＡは、２量体の形で存在し、分泌成分とＪｏｉｎｉｎｇ  ｃｈａｉｎ（Ｊ鎖）が結合している。また、ＩｇＡは、母乳の中にもたくさん含まれている。これを飲んだ子供は、のどや消化管の表面にＩｇＡ抗体を受取とることで外からの抗原に対して体を守ることができる。
【０００３】
粘膜面には、腸管免疫系と言われる多くのリンパ組織があり、ＩｇＡ産生に強く関係している。腸管の断面図を見ると腸管の消化吸収をつかさどる器官の間に挟まって腸管独特のリンパ節がある。これがパイエル板（Ｐｅｙｅｒ’ｓ  ｐａｔｃｈ）であり、腸管での免疫の中枢的存在となっており、消化管の中でも非常に発違した防御システムを完成している。ＩｇＡが産生される一連の流れは、抗原提示細胞が、抗原の情報を収集し、Ｔ細胞がその情報を受けて、その物質に対して抗体を産生すべきか判断する。そして、実際にＩｇＡを作る細胞がＢ細胞であり刺激を受けた活性化Ｂ細胞が、全身の血液循環により粘膜面に分布した後、ＩｇＡ産生細胞（形質細胞）であるＢ細胞に分化してＩｇＡを産生する。また、ポリメリックＩｇ受容体（ｐＩｇＲ）を介したＩｇＡの上皮内輸送粘膜免疫組織も分泌型ＩｇＡの産生に必要不可欠である。小胞体内でヒトｐＩｇＲはタンパク質として合成され、Ｇｏｌｇｉ装置と呼ばれるところで糖の添加を受けて糖タンパク質になる。その後、胃、腸、肝などの上皮細胞の基底側細胞膜上や涙腺、唾液腺、乳腺などの腺房細胞に分布する。粘膜固有層の形質細胞より産生・分泌されたＪ鎖を含む２量体のＩｇＡはｐＩｇＲに結合した後、細胞内を輸送され、管腔側細胞膜上で切断され、分泌型ＩｇＡとして放出される。このように、局所粘膜面でのＩｇＡの産生増強作用は、生体防御機構（獲得免疫）を増強することが期待される。したがって、効果的にＩｇＡとｐＩｇＲ産生を増強する方法が求められている。ＩｇＡとｐＩｇＲ産生を増強する方法としては、例えば、１）フラクトオリゴ糖及びその組成物の提案（例えば特許文献１参照）しかしながら、１）の方法では、オリゴ糖自体に甘味を有するため添加できる食品が限定される。また、その効果が完全ではない。そこで、ＩｇＡとｐＩｇＲ産生を増強する作用を有する新たな粘膜免疫賦活組成物の開発が望まれている。
【０００４】
【特許文献１】特開２００３−２０１２３９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、副作用などの問題が無く、ＩｇＡとｐＩｇＲの産生増強することのできる安全性の高い新規な粘膜免疫賦活組成物を提供することを目的としてなされたものである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、副作用や摂取困難などの問題が無く、生体防御機構を増強することが期待されるＩｇＡとｐＩｇＲの産生増強のできる安全性の高い新規な粘膜免疫賦活組成物を開発すべく鋭意研究を重ねた結果、ガラクトマンナンを有効成分とするものは、ＩｇＡとｐＩｇＲの産生をより効果的に増強することを新規に見いだし、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、ガラクトマンナンを有効成分として含有することを特徴とする粘膜免疫賦活組成物を提供するものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の粘膜免疫賦活組成物は、ＩｇＡとｐＩｇＲの産生を効果的に増強することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明における前記ガラクトマンナンとしては、ガラクトマンナンを主成分とするグァーガム、ローカストビーンガム、タラガム、カシアガム、セスバニアガム、フェニグリーク、ガラクトマンナン分解物等の天然粘質物があげられる。粘度の面から特に好ましくはガラクトマンナン分解物である。ガラクトマンナン分解物は、前記のガラクトマンナンを加水分解し低分子化することにより得られるものである。加水分解の方法としては、酵素分解法、酸分解法等、特に限定するものではないが、分解物の分子量が揃い易い点から酵素分解法が好ましい。酵素分解法に用いられる酵素は、マンノース直鎖を加水分解する酵素であれば市販のものでも天然由来のものでも特に限定されるものではないが、アスペルギルス属菌やリゾープス属菌等に由来するβ−マンナナーゼが好ましい。
【０００９】
本発明に使用されるガラクトマンナンは、５，０００〜３００，０００の平均分子量を持つことが望ましい。平均分子量５，０００以上であれば本発明の好適なＩｇＡとｐＩｇＲの産生増強効果を有するが、一方、平均分子量が３００，０００を超えると、粘度が高く食品に加工する場合に不都合が生じる場合が多いため、ガラクトマンナンの平均分子量は、５，０００〜３００，０００である事が望ましい。特に好ましくは８，０００〜２０，０００である。平均分子量の測定方法は、特に限定するものではないが、ポリエチレングリコール（分子量；２，０００、２０，０００、２００，０００）をマーカーに高速液体クロマトグラフ法（カラム；ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｄｉｏｌ−１２０（株）ワイエムシィ）を用いて、分子量分布を測定する方法等を用いることにより求めることができる。
【００１０】
ガラクトマンナンは、種々の工業製品に好ましい物性を付与することが知られているが、このものがＩｇＡとｐＩｇＲの産生増強効果を有することは従来知られていなかった。しかし、本発明者らの研究によると、上述のようなガラクトマンナンを食品組成物として摂取をつづけるとき、ＩｇＡとｐＩｇＲの産生増強効果が認められることが見出された。
【００１１】
本発明では、ガラクトマンナンと配合する食品材料は特に限定されるものではなく、他の糖類、食物繊維、脂質、アミノ酸、蛋白質、さらにこれらに必要に応じて、乳酸菌、ビタミン、ミネラルのようなその他の機能性を有する物質を添加して粘膜免疫賦活組成物とすることができる。このようなガラクトマンナンの摂取方法としては、例えば、飲料、クッキー、スナック菓子、乳製品などの種々の食品とすることができるほか、例えば適当な増量剤、賦形剤などを用いて錠剤状、液状、シロップ状、顆粒状などの医薬品や健康食品の形態にすることもできる。ガラクトマンナンは、種々な食品に添加することが可能であることから容易に摂取することが可能であり、効果的にＩｇＡとｐＩｇＲの産生を増強することができる。本発明におけるガラクトマンナンのＩｇＡとｐＩｇＲの産生増強効果を試験例に基づいて詳しく説明する。
【００１２】
以下、調製例及び試験例をあげて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に何ら制約されるものではない。
【００１３】
（調製例１）
水９００ｇに０．１Ｎ塩酸を加えてｐＨ４．５に調整し、これにアスペルギルス属由来のβ−マンナナーゼ（阪急バイオインダストリー製）０．２ｇとグァーガム粉末（Ｌｕｃｉｄ製）１００ｇを添加混合して４０〜４５℃で２１時間酵素を作用させた。反応後９０℃、１５分間加熱して酵素を失活させた。濾過分離（吸引濾過）して、不溶物を除去して得られた透明な溶液を減圧濃縮（エバポレーター；Ｙａｍａｔｏ製）した後（固形分２０％）、噴霧乾燥（大川原化工機（株））し、本発明品の粘膜免疫賦活組成物であるガラクトマンナン分解物（平均分子量  約３０，０００）６５ｇが得られた。
【００１４】
（調製例２）
水９００ｇに０．１Ｎ塩酸を加えてｐＨ３．０に調整し、これにアスペルギルス属由来のβ−マンナナーゼ（阪急バイオインダストリー製）０．１５ｇとグァーガム粉末（Ｌｕｃｉｄ製）１００ｇを添加混合して４０〜４５℃で２３時間酵素を作用させた。反応後９０℃、１５分間加熱して酵素を失活させた。濾過分離（吸引濾過）して、不溶物を除去して得られた透明な溶液を減圧濃縮（エバポレーター；Ｙａｍａｔｏ製）した後（固形分２０％）、噴霧乾燥（大川原化工機（株））し、本発明品の粘膜免疫賦活組成物であるガラクトマンナン分解物（平均分子量  約２０，０００）６８ｇが得られた。
【００１５】
（調製例３）
水９００ｇに０．１Ｎ塩酸を加えてｐＨ４．０に調整した。これにバチルス属由来のβ−マンナナーゼ（阪急バイオインダストリー製）０．２５ｇとグァーガム粉末（Ｌｕｃｉｄ製）１００ｇを添加混合して５０〜５５℃で１８時間酵素を作用させた。反応後９０℃、１５分間加熱して酵素を失活させた。濾過分離（吸引濾過）して、不溶物を除去して得られた透明な溶液を減圧濃縮（エバポレーター；Ｙａｍａｔｏ製）した後（固形分２０％）、噴霧乾燥（大川原化工機（株））し、本発明品の粘膜免疫賦活組成物であるガラクトマンナン分解物（平均分子量  約８，０００）６５ｇが得られた。
【００１６】
（調製例４）
水９００ｇに０．１Ｎ塩酸を加えてｐＨ４．０に調整した。これにバチルス属由来のβ−マンナナーゼ（阪急バイオインダストリー製）０．２５ｇとグァーガム粉末（Ｌｕｃｉｄ製）１００ｇを添加混合して５０〜５５℃で２０時間酵素を作用させた。反応後９０℃、１５分間加熱して酵素を失活させた。濾過分離（吸引濾過）して、不溶物を除去して得られた透明な溶液を減圧濃縮（エバポレーター；Ｙａｍａｔｏ製）した後（固形分２０％）、噴霧乾燥（大川原化工機（株））し、本発明品の粘膜免疫賦活組成物であるガラクトマンナン分解物（平均分子量  約７，０００）７０ｇが得られた。
【実施例１】
【００１７】
実験動物は、３０匹の３週齢の雄性ＢＡＬＢ／ｃマウスを日本クレア社より購入した。ガラクトマンナンは、実施例１〜４を用いた。オリゴ糖群はフラクトオリゴ糖を用いた。
【００１８】
動物は対照群およびガラクトマンナン群（４群）とオリゴ糖群の計６群（１群５匹）に分けた。購入した日から試験終了日（摂取期間２８日間）まで、対照群には基本飼料（表１）を、ガラクトマンナン群には基本飼料にガラクトマンナンを５％（ｗ／ｗ）、オリゴ糖群には、基本飼料にフラクトオリゴ糖を５％（ｗ／ｗ）添加した実験飼料を自由摂取させた。摂取終了後、腸組織よりパイエル板を摘出し、パイエル板リンパ球の分離培養（ＣＯ２存在下３７℃で７日間）を行った後、培養上清を回収し酵素免疫測定法によりＩｇＡ含量を測定した。また、大腸組織中のｐＩｇＲ量もウェスタンブロッティング法により測定した。
【００１９】
【表１】
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【００２０】
【表２】
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【００２１】
ガラクトマンナン摂取群では、パイエル板からのＩｇＡ産生量が対照群とオリゴ糖群に比較して有意に増加した（表２）。
【００２２】
ガラクトマンナン摂取群では、大腸内のｐＩｇＲ産生量が対照群とオリゴ糖に比較して有意に増加した（図１）。
【実施例２】
【００２３】
実験動物は、３０匹の４〜５週齢の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙを日本クレア社より購入し。ガラクトマンナンは、実施例１〜４を用いた。オリゴ糖群はフラクトオリゴ糖（明治乳業（株）製）を用いた。動物は対照群およびガラクトマンナン群（４群）とオリゴ糖群の計６群（１群５匹）に分けた。購入した日から試験終了日（摂取期間１４日間）まで、対照群には基本飼料ＡＩＮ９３Ｇ（表３）を、ガラクトマンナン群には基本飼料にガラクトマンナンを５％（ｗ／ｗ）、オリゴ糖群には、基本飼料にフラクトオリゴ糖を５％（ｗ／ｗ）添加した。摂取終了後、腸組織よりパイエル板を摘出し、パイエル板リンパ球の分離培養（ＣＯ２存在下３７℃で７日間）を行った後、培養上清を回収し酵素免疫測定法によりＩｇＡ含量を測定した。また、大腸組織中のｐＩｇＲ量もウェスタンブロッティング法により測定した。
【００２４】
【表３】
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【００２５】
【表４】
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【００２６】
ガラクトマンナン摂取群では、パイエル板からのＩｇＡ産生量が対照群とオリゴ糖群に比較して有意に増加した（表４）。
【００２７】
ガラクトマンナン摂取群では、大腸内のｐＩｇＲ産生量が対照群とオリゴ糖群に比較して有意に増加した（図２）。
【００２８】
（調製例５）
調製例１のガラクトマンナン分解物５ｇに粉糖９３．５ｇ、アラビアガム１．０ｇ、ステアリン酸マグネシウム０．５ｇ、香料適量の割合で混練して乾燥した後打錠し、ＩｇＡとｐＩｇＲ産生を増強に有用な錠菓の製品１００ｇを得た。なお、味と物性面でガラクトマンナン分解物無添加品と違いは認められなかった。
【００２９】
（調製例６）
調製例１のガラクトマンナン分解物粉末５ｇにローファットミルク９５．０ｇを加えＩｇＡとｐＩｇＲ産生を増強の改善に有用な乳飲料の製品１００ｇを得た。なお、味と物性面でガラクトマンナン分解物無添加品と違いは認められなかった。
【００３０】
（調製例７）
調製例２のガラクトマンナン分解物粉末３．０ｇにピーチピューレ４０．０ｇ、果糖ブドウ糖液糖１０．０ｇ、クエン酸０．１ｇ、ビタミンＣ０．０３ｇ、フレーバー適量、水４６．８ｇを加えＩｇＡとｐＩｇＲ産生を増強に有用な清涼飲料水の製品１００ｇを得た。なお、味と物性面でガラクトマンナン分解物無添加品と違いは認められなかった。
【００３１】
（調製例８）
調製例２のガラクトマンナン分解物粉末５．０ｇに強力粉５１．０ｇ、砂糖１５．０ｇ、食塩７．０ｇ、イースト８．０ｇ、イースト１．０ｇ、バター１０．０ｇ、水３０．０ｇの配合でパン焼き機を利用してＩｇＡとｐＩｇＲ産生を増強に有用な食パンの製品１１０ｇを得た。なお、味と物性面でガラクトマンナン分解物無添加品と違いは認められなかった。
【００３２】
（調製例９）
調製例３のガラクトマンナン分解物粉末４．０ｇにグラニュー糖３０．０ｇ、水あめ３５．０ｇ、ペクチン１．０ｇ、１／５アップル果汁２．０ｇ、水２８．０ｇで混合し８５℃まで加熱した後、５０℃まで冷却しＩｇＡとｐＩｇＲ産生を増強に有用なゼリーの製品１００ｇを得た。なお、味と物性面でガラクトマンナン分解物無添加品と違いは認められなかった。
【００３３】
（調製例１０）
調製例３のガラクトマンナン分解物粉末４．０ｇにグラニュー糖３０．０ｇ、水あめ３５．０ｇ、ペクチン１．０ｇ、１／５アップル果汁２．０ｇ、水２８．０ｇで混合し８５℃まで加熱した後、５０℃まで冷却しＩｇＡとｐＩｇＲ産生を増強に有用なゼリーの製品１００ｇを得た。なお、味と物性面でガラクトマンナン分解物無添加品と違いは認められなかった。
【００３４】
（調製例１１）
調製例４のガラクトマンナン分解物末２．０ｇとアラビノガラクタン２．０ｇにグラニュー糖３０．０ｇ、水あめ３５．０ｇ、ペクチン１．０ｇ、１／５アップル果汁２．０ｇ、水２８．０ｇで混合し８５℃まで加熱した後、５０℃まで冷却しＩｇＡとｐＩｇＲ産生を増強に有用なゼリーの製品１００ｇを得た。なお、味と物性面でガラクトマンナン分解物無添加品と違いは認められなかった。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明の粘膜免疫賦活組成物は、ガラクトマンナンの効果により、効果的にＩｇＡとｐＩｇＲ産生を増強することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】実施例１での大腸内のｐＩｇＲ産生量
【図２】実施例２での大腸内のｐＩｇＲ産生量
【図１】
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【図２】
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