(57)【要約】【課題】  ＩＴＦなどのＴＦＦペプチドを利用した、消化管粘膜切除後の消化管潰瘍を治癒促進に有効な新規な製剤を提供する。【解決手段】  トレフォイル因子ファミリーから選ばれるペプチドを有効成分として含有する、消化管粘膜切除後の消化管潰瘍治癒促進用のスプレー剤。【選択図】        図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
トレフォイル因子ファミリーから選ばれるペプチドを有効成分として含有する、消化管粘膜切除後の消化管潰瘍治癒促進用のスプレー剤。
【請求項２】
トレフォイル因子ファミリーから選ばれるペプチドがＩＴＦである請求項１に記載のスプレー剤。
【請求項３】
前記ペプチドの濃度が１０〜１０００μｇ／ｍＬである請求項２に記載のスプレー剤。
【請求項４】
溶媒として、エチレンオキサイド−プロピレンオキサイドブロック共重合体を含有する、請求項１〜３のいずれかに記載のスプレー剤。
【請求項５】
内視鏡的粘膜切除後の消化管潰瘍治癒促進に用いられる、請求項１〜４のいずれかに記載のスプレー剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、消化管粘膜切除後の消化管潰瘍を治癒促進し得るスプレー剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
消化管癌治療の現場で遭遇し得る消化管粘膜の恒常性の破綻による病態には、（１）消化管癌手術による臓器の切除と再建、およびそれに引き続く粘膜上皮の創傷治癒不全による縫合不全、（２）早期胃癌病変およびポリープなどの前癌病変に対する内視鏡的粘膜切除（ＥＭＲ：Endoscopic Mucosal Resection）や腹腔鏡的粘膜切除（ＬＭＲ：Laparoscopic Mucosal Resection）による人工潰瘍、（３）癌放射線治療により惹起される粘膜下血管炎、（４）癌化学療法の副作用としての消化管粘膜上皮障害と再生の遅延、（５）長期絶食後に消化管粘膜上皮の透過性の亢進（粘膜の防御機転の破綻）が一要因と考えられる細菌移行（Bacterial Translocation）などが考えられる。しかしながらその多くが医原性のものであるにも関わらず、通常はこれらの病態に対して原因除去や対症療法あるいは自然治癒を期待するのみで、積極的な治療は行われていないのが現状である。
【０００３】
ＬＭＲやＥＭＲによる人工的胃潰瘍においては、切除面積により多少の差はあるものの潰瘍瘢痕が形成されるまでに通常は３〜６週間を要する。その間はプロトンポンプ阻害剤やＨ２ブロッカーなどの制酸剤およびスクラルファートやテプレノンなどの防御因子増強剤などの抗潰瘍剤の服用が必要であり、ある程度の食事制限も必要である。また急性期は出血や穿孔の危険性もあり、切除部位の露出血管に対するクリッピング、トロンビンやアルギン酸ナトリウムの予防的散布が行われているが積極的に創傷治癒を促進する治療は行われていない。なお制酸剤は胃酸分泌という正常の消化管上皮の機能を抑制することで組織修復を促進するものであり、今後その功罪については再検討される可能性も否めない。
【０００４】
さらにＬＭＲやＥＭＲによる切除面積が大きくなる場合には切除後の瘢痕形成を考慮し、適応が制限されることもある。また消化管吻合部に対してはその大半が自然治癒するという概念に基づき、局所製剤としては生体膜形成を目的としたフィブリン製剤がまれに使用されているに過ぎない。
【０００５】
これまでに、創傷治癒促進効果が確認され臨床応用が検討されているものに塩基性線維芽成長因子（Basic fibroblast growth factor）などのサイトカインが挙げられる。しかし、このようなサイトカインをＥＭＲやＬＭＲ後の人工潰瘍の治癒に適用すると、腫瘍細胞の増殖も促進されてしまうという不具合があることが近年判ってきた。
【０００６】
近年、粘膜上皮修復因子としての生理学的活性を有するものとして、ＩＴＦ（Intestinal Trefoil Factors：腸トレフォイル因子）が注目されている。ＩＴＦは、小腸および大腸の粘膜産生細胞により分泌されているペプチドで、ＳＰ（Spasmolytic Peptide：鎮痙ペプチド）、ｐＳ２とともに、ジスルフィド結合により形成されたループ構造を有するペプチドである（図１４に、代表例としてｈＩＴＦの立体構造を示す。）トレフォイル因子ファミリー（ＴＦＦ）として分類される。なお、ＩＴＦは胃においては通常発現されていないが、潰瘍などの損傷を受けた際には迅速に発現され、粘膜上皮の修復に寄与していると報告されている。
【０００７】
ＴＦＦペプチド（中でもＩＴＦ）は、近年の研究で、消化管粘膜のびらん、潰瘍、あるいは消化管手術後の吻合部組織などの傷害を受けた粘膜の治癒再生機転の第一相であるrestitution（傷害を受けた部位に隣接する粘膜上皮細胞の遊走により欠損部位の被覆）を促進すること、ラットのＮＳＡＩＤおよびアルコールによる実験的胃潰瘍に対して予防効果を有すること、ＩＴＦ欠損マウスでは腸粘膜の潰瘍治癒が遅延するなど数々の消化管粘膜上皮細胞の組織修復および創傷治癒に寄与する（たとえば、特許文献１〜５を参照。）ことが判ってきている。ＴＦＦペプチドの粘膜上皮修復因子としての治療学的効果は今後さらなる検討を要するところであるが、その臨床応用の可能性（特には上述したＥＭＲやＬＭＲ後の消化管潰瘍を治癒への適用）が期待されている。
【特許文献１】米国特許第６０６３７５５号明細書
【特許文献２】米国特許第６２２１８４０号明細書
【特許文献３】米国特許第６３１６２１８号明細書
【特許文献４】米国特許第６４２６４０４号明細書
【特許文献５】米国特許第６５２５０１８号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、上記課題を解決するためになされたものであり、その目的とするところは、ＩＴＦなどのＴＦＦペプチドを利用した、消化管粘膜切除後の消化管潰瘍を治癒促進に有効な新規な製剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、トレフォイル因子ファミリーから選ばれるペプチドを有効成分として含有する、消化管粘膜切除後の消化管潰瘍治癒促進用のスプレー剤に関する。
【００１０】
ここにおいて、トレフォイル因子ファミリーから選ばれるペプチドはＩＴＦであるのが、好ましい。
【００１１】
また、本発明のスプレー剤におけるトレフォイル因子ファミリーから選ばれるペプチドの濃度は１０〜１０００μｇ／ｍＬであるのが好ましい。
【００１２】
本発明の消化管粘膜切除後の消化管潰瘍治癒促進用のスプレー剤は、溶媒として、エチレンオキサイド−プロピレンオキサイドブロック共重合体を含有するのが、好ましい。
【００１３】
また本発明のスプレー剤は、内視鏡的粘膜切除（ＥＭＲ）後の消化管潰瘍治癒促進用に用いられるのが、好ましい。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、有効成分として含有されるＴＦＦペプチドが正常消化菅内での防御因子であり、かつ創傷治癒促進因子であるＩＴＦは酸および種々のプロテアーゼ耐性であり、消化管菅腔内においても十分にその生理学的活性を発揮することが可能であることから、上述した粘膜切除後に人工的に形成された消化管潰瘍治癒促進用に適用することで、人工潰瘍の治癒期間を短縮することができる。さらに本発明のスプレー剤によれば、種々の薬剤投与量の減少による医療費の削減の効果も期待される。
【００１５】
また、従来、創傷治癒促進効果が確認され臨床応用が検討されている塩基性繊維芽成長因子などのサイトカインとは異なり、ＴＦＦペプチドには腫瘍細胞の増殖促進効果がなく、また種々の消化管上皮細胞の正常機能を損なうことなく、潰瘍部の再上皮化を促進することにより、瘢痕形成の少ない自然治癒に近い状態の組織修復作用が期待される。また近年その適応が拡大されつつある早期食道癌に対するＥＭＲの大きな問題点である切除後の瘢痕形成による食道狭窄も、粘膜切除後にＩＴＦを散布することによりその発生頻度を減じる可能性が期待できる。
【００１６】
さらに本発明は、スプレー剤の形態で供されることにより、粘膜切除を施した際に露出した患部に噴霧すれば、直接かつ即効的に有効成分であるＴＦＦペプチドを適用することができるという効果がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明のスプレー剤は、トレフォイル因子ファミリー（ＴＦＦ）から選ばれるペプチドを有効成分として含有することを特徴とする。トレフォイル因子ファミリーは、ジスルフィド結合により形成されたループ構造を有するペプチドであり、このようなペプチドとしては、ＩＴＦ（Intestinal Trefoil Factors：腸トレフォイル因子）、ＳＰ（Spasmolytic Peptide：鎮痙ペプチド）およびｐＳ２が挙げられる。ＩＴＦとしては、具体的には、ｈＩＴＦ（human Intestinal Trefoil Factors：ヒト腸トレフォイル因子）、ｒＩＴＦ（rat Intestinal Trefoil Factors：ラット腸トレフォイル因子）、ｍＩＴＦ（mouse Intestinal Trefoil Factors：マウス腸トレフォイル因子）などが例示される。これらはいずれも公知のものであり、当分野における通常の手法を用いて適宜人工的に作製することが可能である。
【００１８】
ここで、本発明に用いられるトレフォイル因子ファミリーから選ばれるペプチドは、天然ペプチド、合成ペプチドのいずれであってもよい。また、対立遺伝子のバリエーション、天然の突然変異体、誘導された突然変異体、天然材料から回収された核酸をコードするトレフォイル因子ファミリーペプチドＩＴＦにストリンジェンシーな条件でハイブリダイズするＤＮＡによりコードされたタンパク、ＩＴＦに対する抗血清により（特にＩＴＦの活性部位または結合ドメインに対する抗血清により）回収されたタンパク、ＩＴＦを含む他のキメラポリペプチドを包含する。
【００１９】
さらに、トレフォイル因子ファミリーから選ばれるペプチドは、実質的に全長のポリペプチドに加えて、ポリペプチドの生物学的に活性なフラグメントも包含する。ここで、「フラグメント」は、１０個以上のアミノ酸（好ましくは２０個以上のアミノ酸、より好ましくは３０個以上のアミノ酸、さらに好ましくは４０個以上、特に好ましくは５０個以上、最も好ましくは６０〜８０個のアミノ酸）で形成されたフラグメントを指す。また「フラグメント」には、ポリペプチドの生物学的活性を要求しない追加的なアミノ酸、または変質したｍＲＮＡスプライシングまたは変質したタンパク処理の結果起こる追加的なアミノ酸を含む、（通常タンパク処理の間に除去される）アミノ酸を含む生物学的に活性なポリペプチドも包含される。
【００２０】
本発明に用いるトレフォイル因子ファミリーから選ばれるペプチドは、上述したＩＴＦ、ＳＰおよびｐＳ２から選ばれる少なくともいずれかであればよいが、トレフォイル因子ファミリーにおいてＩＴＦのみが腫瘍細胞の増殖促進効果をもたないと報告されていることから、ＩＴＦであるのが好ましい。またＩＴＦの中でも、同種タンパク質であるｈＩＴＦ（human Intestinal Trefoil Factors：ヒト腸トレフォイル因子）が特に好ましい。
【００２１】
本発明は、スプレー剤の形態で供される。本発明は、消化管粘膜切除後に人工的に形成された消化管潰瘍治癒促進に用いられるものであるが、スプレー剤の形態とすることで、粘膜切除を施した際に露出した患部に噴霧すれば、直接かつ即効的に有効成分であるＴＦＦペプチド（ＴＦＦペプチドは、消化管菅腔側いわゆる細胞の表層側（apical surface）からの投与でその効果を発揮することがこれまでの実験で確認されている。）を適用することができ、また、患部局所でのＴＦＦペプチドの長時間の停滞を可能ならしめる利点があるためである。ここで、消化管粘膜切除には、内視鏡的粘膜切除（ＥＭＲ：Endoscopic Mucosal Resection）および腹腔鏡的粘膜切除（ＬＭＲ：Laparoscopic Mucosal Resection）が挙げられる。近年胃癌においては診断学的技術の向上に伴い早期胃癌の占める割合は増加し、また早期胃癌でその病変が粘膜固有層内に留まるものに対してはＥＭＲが主たる治療法となりつつあることから、ＥＭＲ後の消化管潰瘍治癒促進に用いられるのが、特に好ましい。
【００２２】
本発明のスプレー剤は、有効成分として含有されるＴＦＦペプチドが正常消化菅内での防御因子であり、かつ創傷治癒促進因子であるＩＴＦは酸および種々のプロテアーゼ耐性であり、消化管菅腔内においても十分にその生理学的活性を発揮することが可能であることから、上述した粘膜切除後に人工的に形成された消化管潰瘍治癒促進用に適用することで、人工潰瘍の治癒期間を短縮することができる。さらに本発明のスプレー剤によれば、種々の薬剤投与量の減少による医療費の削減の効果も期待される。
【００２３】
また、従来、創傷治癒促進効果が確認され臨床応用が検討されている塩基性繊維芽成長因子などのサイトカインとは異なり、ＴＦＦペプチドには腫瘍細胞の増殖促進効果がなく、また種々の消化管上皮細胞の正常機能を損なうことなく、潰瘍部の再上皮化を促進することにより、瘢痕形成の少ない自然治癒に近い状態の組織修復作用が期待される。また近年その適応が拡大されつつある早期食道癌に対するＥＭＲの大きな問題点である切除後の瘢痕形成による食道狭窄も、粘膜切除後にＩＴＦを散布することによりその発生頻度を減じる可能性が期待できる。
【００２４】
本発明のスプレー剤に有効成分として含有されるＴＦＦから選ばれるペプチドの濃度は、１０〜１０００μｇ／ｍＬであるのが好ましく、１０〜１００μｇ／ｍＬであるのがより好ましい。ＴＦＦペプチドの含有量が１０μｇ／ｍＬ未満であると、十分な組織修復作用が得られない傾向にあるためであり、また１０００μｇ／ｍＬを超えると、さらなる組織修復作用は得られないのみならず溶液の粘稠性が増す結果スプレー剤としての操作性が低下するという傾向にあるためである。
【００２５】
本発明のスプレー剤に含有される溶媒は、特に制限されるものではなく、たとえば、エチレンオキサイド−プロピレンオキサイドブロック共重合体、生理的食塩水、ＰＢＳ（Phosphate Buffer Saline：リン酸緩衝液）、蒸留水などが挙げられるが、中でも、低温で液体ではあるが体温ではゲルを形成する徐放性液剤であり、非イオン性の界面活性で、毒性がきわめて少なく、水によく溶け、酸、アルカリ、金属イオンなどに対して安定である性状を示し、また溶質の局所での停滞時間を高めることが期待されることから、エチレンオキサイド−プロピレンオキサイドブロック共重合体を含有するのが好ましい。
【００２６】
エチレンオキサイド−プロピレンオキサイドブロック共重合体としては、具体的には、プルロニックＦ−６８、プルロニックＦ−８８、プルロニックＦ−９８、プルロニックＦ−１０８、プルロニックＦ−１２７などを挙げることができる。エチレンオキサイド−プロピレンオキサイドブロック共重合体は、市販のもの（たとえば、古くは人工皮膚として使用されていたプルロニックＦ−１２７（旭電化工業社製）を用いても、勿論よい。
【００２７】
スプレー剤中の溶媒におけるエチレンオキサイド−プロピレンオキサイドブロック共重合体の濃度としては、特に制限されるものではないが、１０〜２８重量％であるのが好ましく、１５〜１８重量％であるのがより好ましい。溶媒の含有量が１０重量％未満であると、体温下でのゲル形成に時間を要し、また十分にゲル形成がなされていないという傾向にあるためであり、また２８重量％を超えると、体温以下（具体的には２３℃）でゲル形成がなされ、その結果スプレー剤としての操作性が低下する虞があるためである。
【００２８】
本発明のスプレー剤は、上述した有効成分および溶媒以外に、本発明の効果を阻害しない範囲で、適宜の添加剤が添加されていても勿論よい。
【００２９】
本発明のスプレー剤は、その製造方法には特に制限はなく、従来公知のスプレー剤の製法を適宜応用して製造することが可能である。具体的な一例を挙げると、１０〜１０００μｇ／ｍＬのＩＴＦを１５％のプルロニックＦ−１２７に溶解、これをシリンジに吸入し、シリンジの先端には市販のスプレーヘッドを装着、スプレーヘッドに圧縮空気を送気しつつシリンジを適当な速度で押すことにより、ＩＴＦ溶液を局所に散布することができるようになる。また、適宜の容器内に、上述したＩＴＦ、溶剤および任意の添加剤に、従来公知の適宜の噴射剤（プロペラント）を添加して充填することによっても、本発明のスプレー剤を実現することができる。
【００３０】
以下、実施例および実験例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３１】
＜実施例１＞
人工的に作製した、配列表配列番号１に示すアミノ酸配列を有するｈＩＴＦを有効成分として１００μｇ／ｍＬ含有し、溶媒としてプルロニックＦ−１２７（旭電化工業社製）を１５重量％に調整して使用し、さらにＰＢＳを含有する、本発明のスプレー製剤を製造した。
【００３２】
＜実施例２＞
人工的に作製した、配列表配列番号１に示すアミノ酸配列を有するｈＩＴＦを有効成分として１０μｇ／ｍＬ含有し、溶媒としてプルロニックＦ−１２７（旭電化工業社製）を１５重量％に調整して使用し、さらにＰＢＳを含有する、本発明のスプレー製剤を製造した。
【００３３】
＜実験例１＞
種々の消化管吻合部位とＬＭＲやＥＭＲによる人工的胃潰瘍に対するＩＴＦの創傷治癒促進効果と、臨床応用を想定した際の種々の溶媒内におけるＩＴＦの生化学的・生理学的活性の安定性を検討した。
【００３４】
具体的な粘膜切除のモデルとして、ラットを用いた。ラット胃粘膜を開腹・胃切開下に切除し、粘膜欠損部位に上述した実施例１、２のスプレー製剤を１〜２秒間、総量０．１ｍＬ散布し、治癒経過を経時的にコントロール（プルロニックＦ−１２７のみを散布）と比較検討した。
【００３５】
図１は、実施例１を投与した場合の粘膜欠損部位の経日変化を示す写真であり（デジタルカメラ（カシオ社製）にて撮影）、図１２はコントロールの粘膜欠損部位の経日変化を示す写真である（デジタルカメラ（カシオ社製）にて撮影）。なお、図１（ａ）および図１２（ａ）は１日経過後、図１（ｂ）および図１２（ｂ）は３日経過後、図１（ｃ）および図１２（ｃ）は５日経過後、図１（ｄ）および図１２（ｄ）は７日経過後、図１（ｅ）および図１２（ｅ）は１４日経過後の粘膜欠損部位を示している。図１および図１２より、実施例１のスプレー剤を投与した場合、コントロールと比較して、潰瘍の治癒を促進していることが肉眼的に判る。また図２は、実験例１の経日変化（１日目、３日目、５日目、７日目、１４日目）と潰瘍の残存率（％）との関係を示すグラフである。
【００３６】
また図３は、実施例１を投与した場合の粘膜欠損部位の組織学的な経日変化を示す写真であり（オプチフォト（ニコン社製）にて観察、デジタルカメラＤＸＭ１２００（ニコン社製）にて撮影（倍率：４０倍））、図１３はコントロールの粘膜欠損部位の組織学的な経日変化を示す写真である（オプチフォト（ニコン社製）にて観察、デジタルカメラＤＸＭ１２００（ニコン社製）にて撮影（倍率：４０倍））。なお、図３（ａ）および図１３（ａ）は１日経過後、図３（ｂ）および図１３（ｂ）は３日経過後、図３（ｃ）および図１３（ｃ）は５日経過後、図３（ｄ）および図１３（ｄ）は７日経過後の粘膜欠損部位を示している。具体的には、実験例１のうち、実施例１、コントロールの粘膜切除部位を、ラットより胃を摘出、粘膜切除部位をホルマリン固定した後ヘマトキシリン・エオジン染色を施し、本発明の効果について病理組織学的な検討を行った。図３および図１３より、実施例１のスプレー剤を投与した場合、コントロールと比較して、組織学的に潰瘍の治癒を促進していることが判る。
【００３７】
図４は、実施例１とコントロールを投与した場合の経日変化（１日、３日、５日、７日、１４日）と被覆スコア（covering score）（％）との関係を示すグラフである。また、図５は被覆スコアの算出方法を説明するための写真（オプチフォト（ニコン社製）にて観察、デジタルカメラＤＸＭ１２００（ニコン社製）にて撮影）である。被覆スコアは、図５に示すように、ラットの粘膜切除部位において、粘膜切除部位の内側である粘膜筋板欠損部径（潰瘍径）をＡ、粘膜切除部位の開口側である開口部径をＢとする場合に、
被覆スコア＝１−Ｂ／Ａ（％）
の式で算出する。なお、潰瘍径Ａおよび開口部径Ｂは、たとえばオプチフォト（ニコン社製）を用いて測定する。
【００３８】
＜実験例２＞
実験例１における実施例１およびコントロールの粘膜切除部位について、ラットより胃を摘出、粘膜切除部位をホルマリン固定の後ヘマトキシリン・エオジン染色を施行後、二人以上の病理組織学の専門医がオプチフォト（ニコン社製）にて詳細に観察、デジタルカメラＤＸＭ１２００（ニコン社製）にて撮影し、以下のようなスコアで炎症の発生を評価した。
【００３９】
０：なし（炎症細胞の湿潤が殆ど認められないもの）
１：緩やか（炎症細胞の湿潤が軽微で、急性または慢性炎症細胞の湿潤と炎症性浮腫により胃壁が軽度に（１．５倍未満）肥厚しているもの）
２：中程度（炎症細胞の湿潤が中程度で、急性および慢性炎症細胞の湿潤と炎症性浮腫により胃壁が１．５倍以上２倍未満に肥厚しているもの）
３：重篤（炎症細胞の湿潤が高度で、好中球を中心とした急性炎症細胞の湿潤と炎症性浮腫により胃壁が２倍以上に肥厚しているもの）
図６は、実験例２の結果を示すグラフである。
【００４０】
＜実験例３＞
実験例１における実施例１およびコントロールの粘膜切除部位についてラットより胃を摘出、粘膜切除部位をホルマリン固定の後ヘマトキシリン・エオジン染色を施行後、二人以上の病理組織学の専門医がオプチフォト（ニコン社製）にて詳細に観察、デジタルカメラＤＸＭ１２００（ニコン社製）にて撮影し、以下のようなスコアで表面壊死の発生を評価した。
【００４１】
０：なし（表面の壊死が認められないもの）
１：３分の１未満（表面の壊死の範囲が人工的に作製した潰瘍の大きさの３分の１未満のもの）
２：３分の１以上３分の２未満（表面の壊死の範囲が人工的に作製した潰瘍の大きさの３分の１以上３分の２未満のもの）
３：３分の２以上（表面の壊死の範囲が人工的に作製した潰瘍の大きさの３分の２以上のもの）
図７は、実験例３の結果を示すグラフである。
【００４２】
＜実験例４＞
実験例１における実施例１およびコントロールの粘膜切除部位について、ラットより胃を摘出、粘膜切除部位をホルマリン固定の後ヘマトキシリン・エオジン染色を施行後、二人以上の病理組織学の専門医がオプチフォト（ニコン社製）にて詳細に観察、デジタルカメラＤＸＭ１２００（ニコン社製）にて撮影し、以下のようなスコアで炎症細胞湿潤を評価した。
【００４３】
０：なし（炎症がほとんど認められないもの）
１：ｓｍ以下（炎症が粘膜下層にまで認められるもの）
２：ｍｐ以下（炎症が筋層に拡がっているもの）
３：ｓｓ以上（炎症が漿膜にまで達しているもの）
ここで、ｓｍ、ｍｐ、ｓｓは癌の組織学的病期に関する各ステージの壁深達度を指し、ｓｍ、ｍｐ、ｓｓの順に炎症細胞湿潤が進行していることを指す。図８は、実験例４の結果を示すグラフである。
【００４４】
＜実験例５＞
実験例１における実施例１およびコントロールの粘膜切除部位について、ラットより胃を摘出、粘膜切除部位をホルマリン固定の後ヘマトキシリン・エオジン染色を施行後、二人以上の病理組織学の専門医がオプチフォト（ニコン社製）にて詳細に観察、デジタルカメラＤＸＭ１２００（ニコン社製）にて撮影し、以下のようなスコアで線維化の度合を評価した。
【００４５】
０：なし（繊維芽細胞の増殖がほとんど認められないもの）
１：緩やか（繊維芽細胞の増殖が軽微で器質化が人工的に作製した潰瘍の大きさの３分の１未満で認められるもの）
２：中程度（繊維芽細胞の増殖が中程度で器質化が人工的に作製した潰瘍の大きさの３分の１以上３分の２未満で認められるもの）
３：重篤（繊維芽細胞の増殖が高度で器質化が人工的に作製した潰瘍の大きさの３分の２以上で認められるもの）
図９は、実験例５の結果を示すグラフである。
【００４６】
＜実験例６＞
実験例１における実施例１およびコントロールの粘膜切除部位について、ラットより胃を摘出、粘膜切除部位をホルマリン固定の後ヘマトキシリン・エオジン染色を施行後、二人以上の病理組織学の専門医がオプチフォト（ニコン社製）にて詳細に観察、デジタルカメラＤＸＭ１２００（ニコン社製）にて撮影し、以下のようなスコアで上皮細胞再形成（re-epithelization）の度合を評価した。
【００４７】
０：なし（再生上皮が認められないもの）
１：緩やか（再生上皮が人工的に作製した潰瘍の大きさの３分の１未満で認められるもの）
２：中程度（再生上皮が人工的に作製した潰瘍の大きさの３分の１以上３分の２未満で認められるもの）
３：重篤（再生上皮が人工的に作製した潰瘍の大きさの３分の２以上で認められるもの）
図１０は、実験例６の結果を示すグラフである。
【００４８】
＜実験例７＞
実験例１における実施例１およびコントロールの粘膜切除部位について、ラットより胃を摘出、粘膜切除部位をホルマリン固定の後ヘマトキシリン・エオジン染色を施行後、二人以上の病理組織学の専門医がオプチフォト（ニコン社製）にて詳細に観察、デジタルカメラＤＸＭ１２００（ニコン社製）にて撮影し、以下のようなスコアで血管形成の度合を評価した。
【００４９】
０：なし（血管増生がほとんど認められないもの）
１：緩やか（器質化に伴う経度の血管増生により血管数が通常粘膜の１．５倍未満に増しているもの）
２：中程度（器質化に伴う経度の血管増生により血管数が通常粘膜の１．５倍以上２倍未満に増しているもの）
３：重篤（器質化に伴う経度の血管増生により血管数が通常粘膜の２倍以上に増しているもの）
図１１は、実験例７の結果を示すグラフである。
【００５０】
今回開示された実施の形態、実施例および実験例は全ての点で例示であって制限的なものではないと考えられるべきである。本発明の範囲は前記した説明ではなくて特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲と均等の意味および範囲内での全ての変更が含まれることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】実施例１を投与した場合の粘膜欠損部位の経日変化を示す写真である。
【図２】実験例１の経日変化（１日目、３日目、５日目、７日目、１４日目）と潰瘍の残存率（％）との関係を示すグラフである。
【図３】実施例１を投与した場合の粘膜欠損部位の組織学的な経日変化を示す写真である。
【図４】実施例１とコントロールを投与した場合の経日変化（１日、３日、５日、７日、１４日）と被覆スコア（covering score）（％）との関係を示すグラフである。
【図５】被覆スコアの算出方法を説明するための写真（デジタルカメラＤＸＭ１２００（ニコン社製）にて撮影）である。
【図６】実験例２の結果を示すグラフである。
【図７】実験例３の結果を示すグラフである。
【図８】実験例４の結果を示すグラフである。
【図９】実験例５の結果を示すグラフである。
【図１０】実験例６の結果を示すグラフである。
【図１１】実験例７の結果を示すグラフである。
【図１２】コントロールの粘膜欠損部位の経日変化を示す写真である。
【図１３】コントロールの粘膜欠損部位の組織学的な経日変化を示す写真である。
【図１４】ｈＩＴＦの立体構造を模式的に示す図である。
【図１】
2006232754.tif 000003
【図２】
2006232754.tif 000004
【図３】
2006232754.tif 000005
【図４】
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【図５】
2006232754.tif 000007
【図６】
2006232754.tif 000008
【図７】
2006232754.tif 000009
【図８】
2006232754.tif 000010
【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【配列表】
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