(57)【要約】【課題】真皮線維芽細胞 におけるコラーゲンの産生を促進することにより、シワやハリの低下といった皮膚の老化症状の予防，改善効果に優れた皮膚外用剤に関するものである。【解決手段】アスコルビン酸およびアスコルビン酸誘導体とハイドロキノン配糖体とを組み合わせて配合することにより、真皮線維芽細胞のコラーゲン産生能をたかめ、シワやタルミの改善効果が相乗的に増強された皮膚外用剤を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アスコルビン酸またはアスコルビン酸誘導体とハイドロキノン配糖体とを含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項２】
ハイドロキノンの配糖体がα−アルブチンであることを特徴とする請求項1に記載の皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、真皮線維芽細胞におけるコラーゲンの産生を促進することにより、シワやハリの低下といった皮膚の老化症状の予防，改善効果に優れた皮膚外用剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、線維芽細胞 及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン 等の細胞外マトリックスにより構成されている。中でも、若い皮膚においては、これら皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。  
【０００３】
ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲン
の産生量が減少すると共に架橋による弾力低下を起こす。その結果、皮膚は保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始め、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。
【０００４】
このような皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲン
等の真皮マトリックス成分の減少、変性が関与していることが知られている。このため皮膚の老化防止・改善のために皮膚線維芽細胞のコラーゲン
産生促進作用剤が用いられている。
【０００５】
細胞のコラーゲン産生能を賦活するものとして、アスコルビン酸およびアスコルビン酸の誘導体が知られている。しかしこれらのコラーゲン産生促進剤を用いてもコラーゲン産生量は十分とは言い難いのが現状であった。
【特許文献１】特開２００４−５９４７８号公報
【非特許文献１】Ｙ ＫＵＭＡＮＯ，ｅｔａｌ．；Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２１, ６６２−６６６（１９９８）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は上記のような状況下、アスコルビン酸およびアスコルビン酸誘導体のコラーゲン産生促進効果を相乗的に高める成分を配合し、シワやタルミの改善に優れた効果を発揮する皮膚外用剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は鋭利研究を行った結果、アスコルビン酸およびアスコルビン酸誘導体とハイドロキノン配糖体を組み合わせることにより皮膚線維芽細胞のコラーゲン産生能が相乗的に高められ、シワやタルミの改善にすぐれた効果を示すことを見出し、本発明を完成した。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の皮膚外用剤はアスコルビン酸およびアスコルビン酸誘導体とハイドロキノン配糖体とを組み合わせることにより、真皮線維芽細胞のコラーゲン産生能をたかめ、シワやタルミの改善効果が相乗的に増強されるものである。
【０００９】
以下本発明の構成について説明する。
【００１０】
本発明に用いられるアスコルビン酸 またはその誘導体としては、アスコルビン酸
とその塩（ナトリウム塩，マグネシウム塩，硫酸塩等），アスコルビン酸 リン酸エステルおよび硫酸エステルとその塩（マグネシウム塩，硫酸塩等），ステアリン酸エステル，ジパルミチン酸エステルおよびモノパルミチン酸エステル, アスコルビン酸配糖体等を用いることができる。
【００１１】
アスコルビン酸 またはその誘導体の含有量は、適用する組成物全量を１００として０．００１〜１０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．１〜３重量％である。
【００１２】
本発明に用いられるハイドロキノン配糖体としては、ハイドロキノン−α−Ｄ−グルコピラノシド（α−アルブチン）, ハイドロキノン−β−Ｄ−グルコピラノシド（アルブチン）, ハイドロキノン−α−Ｄ−マルトシド, ハイドロキノン−α−Ｄ−マルトトリオシド,ハイドロキノン−β−Ｄ−マルトシド, ハイドロキノン−β−Ｄ−マルトトリオシド等を用いることができるが、入手の容易さ、安定性、安全性などの面から、この中ではハイドロキノン−α−Ｄ−グルコピラノシドの使用が好ましい。
【００１３】
ハイドロキノン配糖体の含有量は、適用する組成物全量を１００として０．００１〜１０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．１〜３重量％である。
【００１４】
本発明の皮膚外用剤には上記した成分の他に、通常化粧品や医薬品などの皮膚外用剤に用いられる他の成分、例えば油分、酸化防止剤、界面活性剤、保湿剤、湿潤材、香料、水、アルコール、増粘剤、防腐剤、色剤、粉末、薬剤、キレート剤、ｐＨ調整剤などを必要に応じて適宜配合することができるが、これらは本発明の効果を損なわない量的、質的範囲内で使用されなければならない。
【００１５】
また、本発明に係る皮膚外用剤の剤型は任意であり、例えば化粧水、ローションなどの可溶化系、乳液、クリームなどの乳化系、または軟膏、増粘ゲル系、分散液、パウダーなどの任意の剤型を取ることができる。またこれら皮膚外用剤を染み込ませたマスクのような形で使用することもできる。
【実施例】
【００１６】
試験例１：ヒト真皮線維芽細胞のコラーゲン産生促進作用試験。ヒト皮膚由来正常線維芽細胞「NB1RGB」（理研細胞バンクより分譲）を１ウェル当たり４．０×１０4個となるように４８穴マイクロプレートに播種し、牛胎仔血清１０容量％を添加したＭＥＭにて７２時間培養した後、培地を、それぞれα−アルブチンの最終濃度が０．５ｍＭ,１ｍＭ及び２ｍＭとなるように添加した０．２５ｍＭアスコルビン酸ナトリウムおよび牛胎仔血清４容量％含有ＭＥＭに交換し、さらに７２時間培養した。培養終了後培養上清中に含まれるコラーゲン量を、市販の定量用キット（Ｓｉｒｃｏｌ  ｃｏｌｌａｇｅｎ
ａｓｓａｙ ｋｉｔ）を用いて定量した。その際、アスコルビン酸ナトリウムおよびα−アルブチンを添加しないで培養を続けた系を対照とした。結果は、対照におけるコラーゲン産生量を１００として表１に示した。
【００１７】
【表１】
2006063067.tif 000002
表１に示したように、アスコルビン酸ナトリウムを培地に添加することにより細胞のコラーゲン産生率は対照の２３０％に促進された。ところが本発明のアスコルビン酸ナトリウムとα−アルブチンを組み合わせることにより、α−アルブチンの最終濃度が１．０ｍＭで対照の２７０％、２．０ｍＭでは対照の３２０％と、コラーゲン産生が著しく促進されていた。
【００１８】
実施例１：次の処方に従い、常法により乳液を製造した（数字は重量％）。
2006063067.tif 000003
【００１９】
α-アルブチンを除いたものを比較例とし、どちらも２週間繰り返し利用したところ、被験者１０人中８人が実施例1のほうがシワやタルミの改善感に優れていると答えた。
【００２０】
実施例２：次の処方に従い、常法により乳液を製造した（数字は重量％）。
2006063067.tif 000004
【００２１】
アルブチンを除いたものを比較例とし、どちらも１０日間繰り返し利用したところ、被験者１０人中７人が実施例２のほうがシワやタルミの改善感に優れていると答えた。
【００２２】
実施例３：次の処方に従い、常法により乳液を製造した（数字は重量％）。
2006063067.tif 000005
【００２３】
α-アルブチンを除いたものを比較例とし、どちらも１０日間繰り返し利用したところ、被験者１０人中９人が実施例３のほうがシワやタルミの改善感に優れていると答えた。
【００２４】
実施例４：次の処方に従い、常法により乳液を製造した（数字は重量％）。
2006063067.tif 000006
【００２５】
α-アルブチンを除いたものを比較例とし、どちらも１ヶ月間繰り返し利用したところ、被験者１０人中７人が実施例４のほうがシワやタルミの改善感に優れていると答えた。
【００２６】
実施例５：次の処方に従い、常法により化粧水を製造した（数字は重量％）。
2006063067.tif 000007
【００２７】
α-アルブチンを除いたものを比較例とし、どちらも１０日間繰り返し利用したところ、被験者１０人中８人が実施例５のほうがシワやタルミの改善感に優れていると答えた。
【００２８】
実施例６：次の処方に従い、常法により化粧水を製造した（数字は重量％）。
2006063067.tif 000008
【００２９】
α-アルブチンを除いたものを比較例とし、どちらも２週間繰り返し利用したところ、被験者１０人中８人が実施例６のほうがシワやタルミの改善感に優れていると答えた。
【００３０】
実施例７：次の処方に従い、常法により化粧水を製造した（数字は重量％）。
2006063067.tif 000009
【００３１】
α-アルブチンを除いたものを比較例とし、どちらも１０日間繰り返し利用したところ、被験者１０人中７人が実施例７のほうがシワやタルミの改善感に優れていると答えた。
【００３２】
実施例８：次の処方に従い、常法によりクリームを製造した（数字は重量％）。
2006063067.tif 000010
【００３３】
ハイドロキノン−β−マルトシドを除いたものを比較例とし、どちらも３０日間繰り返し利用したところ、被験者１０人中７人が実施例８のほうがシワやタルミの改善感に優れていると答えた。
【００３４】
実施例９：次の処方に従い、常法によりクリームを製造した（数字は重量％）。
2006063067.tif 000011
【００３５】
ハイドロキノン−α−マルトシドを除いたものを比較例とし、どちらも３０日間繰り返し利用したところ、被験者１０人中７人が実施例９のほうがシワやタルミの改善感に優れていると答えた。
【００３６】
実施例１０：次の処方に従い、常法によりクリームを製造した（数字は重量％）。
2006063067.tif 000012
【００３７】
ハイドロキノン−α−マルトトリオシドを除いたものを比較例とし、どちらも１０日間繰り返し利用したところ、被験者１０人中６人が実施例１０のほうがシワやタルミの改善感に優れていると答えた。
【００３８】
実施例１１：次の処方に従い、常法によりクリームを製造した（数字は重量％）。
2006063067.tif 000013
【００３９】
ハイドロキノン−β−マルトトリオシドを除いたものを比較例とし、どちらも３０日間繰り返し利用したところ、被験者１０人中７人が実施例１１のほうがシワやタルミの改善感に優れていると答えた。
【００４０】
実施例１２：次の処方に従い、常法によりクリームを製造した（数字は重量％）。
2006063067.tif 000014
【００４１】
α-アルブチンを除いたものを比較例とし、どちらも１ヶ月間繰り返し利用したところ、被験者１０人中８が実施例１２のほうがシワやタルミの改善感に優れていると答えた。
【００４２】
試験例２：ヒト真皮線維芽細胞のコラーゲン産生促進作用試験。ヒト皮膚由来正常線維芽細胞「NB1RGB」（理研細胞バンクより分譲）を１ウェル当たり２．５×１０5個となるように９６穴マイクロプレートに播種し、牛胎児血清４容量％を添加したＤＭＥＭにて２４時間培養した後、培地を、それぞれα−アルブチンの最終濃度が０．５ｍＭ,
１ｍＭ及び２ｍＭとなるように添加した０．２５ｍＭアスコルビン酸２-グルコシド（ＡＡ２Ｇ）および牛胎児血清４容量％含有ＤＭＥＭに交換し、さらに６日間培養した。途中、培養３日目に培地を回収するとともに新しい培地に交換した。培養３日後、６日後に回収した培養上清中に含まれるコラーゲン量を、市販の定量用キット（Ｓｉｒｃｏｌ
ｃｏｌｌａｇｅｎ ａｓｓａｙ ｋｉｔ）を用いてそれぞれ定量した。その際、α−アルブチンを添加しないで培養を続けた系を対照とした。結果は、培養６日間の産生コラーゲントータル量について対照におけるコラーゲン産生量を１００として表１に示した。
【００４３】
【表２】
2006063067.tif 000015
表２に示したように、α-アルブチンを培地に添加することにより細胞のコラーゲン産生率が濃度依存的に促進された。α−アルブチンの最終濃度が１．０ｍＭで対照の１１０％、２．０ｍＭでは対照の１３０％と、コラーゲン産生が著しく促進されていた。
【００４４】
試験例３：ヒト真皮線維芽細胞のコラーゲン産生促進作用試験。ヒト皮膚由来正常線維芽細胞「NB1RGB」（理研細胞バンクより分譲）を１ウェル当たり２．５×１０5個となるように９６穴マイクロプレートに播種し、牛胎児血清４容量％を添加したＤＭＥＭにて２４時間培養した後、培地を、それぞれα−アルブチンの最終濃度が０．５ｍＭ,
１ｍＭ及び２ｍＭとなるように添加した０．１５容量％アスコルビン酸リン酸マグネシウム（ＡＡ２Ｐ）および牛胎児血清４容量％含有ＤＭＥＭに交換し、さらに６日間培養した。途中、培養３日目に培地を回収するとともに新しい培地に交換した。培養３日後、６日後に回収した培養上清中に含まれるコラーゲン量を、市販の定量用キット（Ｓｉｒｃｏｌ
ｃｏｌｌａｇｅｎ ａｓｓａｙ ｋｉｔ）を用いてそれぞれ定量した。その際、α−アルブチンを添加しないで培養を続けた系を対照とした。結果は、培養６日間の産生コラーゲントータル量について対照におけるコラーゲン産生量を１００として表２に示した。
【００４５】
【表３】
2006063067.tif 000016
表３に示したように、α-アルブチンを培地に添加することにより細胞のコラーゲン産生率が濃度依存的に促進された。α−アルブチンの最終濃度が１．０ｍＭで対照の１２７％、２．０ｍＭでは対照の１３０％と、コラーゲン産生が著しく促進されていた。
【００４６】
試験例４：アスコルビン酸の水溶液中での分解に対するα-アルブチンの抑制効果。０．２５ｍＭアスコルビン酸ナトリウムを溶解した５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）にα-アルブチンを１ｍＭあるいは２ｍＭ濃度で溶解し３７℃で８時間インキュベートした。インキュベート後溶液中のアスコルビン酸量をＨＰＬＣによりそれぞれ定量した。その際、α−アルブチンを添加しないでインキュベートした系を対照とした。結果は、定量値から得られた分解曲線から算出されるインキュベートスタート時のアスコルビン酸の半分量が分解されるまでの時間（半減期）で表した。結果を表３に示す。
【００４７】
【表４】
2006063067.tif 000017
表４に示したように、水溶液中でのアスコルビン酸の半減期は１．０ｍＭα-アルブチン添加で約１．４倍、２．０ｍＭ  α-アルブチン添加で約１．７倍となり、添加したα-アルブチンの濃度依存的にアスコルビン酸の分解が抑制されることが確認された。本試験の結果から、α-アルブチンを組み合わせることによりアスコルビン酸の安定性が増すことが確認された。
【００４８】
実施例１３：次の処方に従い、常法によりクリームを製造した。
2006063067.tif 000018
【００４９】
α−アルブチンを除いたものを比較例とし、どちらも３０日間繰り返し利用したところ、被験者１０人中8人がシワやタルミの改善されたと答えた。
【００５０】
実施例１４：次の処方に従い、常法によりクリームを製造した。
2006063067.tif 000019
【００５１】
α-アルブチンを除いたものを比較例とし、どちらも１ヶ月間繰り返し利用したところ、被験者１０人中6がシワやタルミの改善されたと答えた。
【産業上の利用可能性】
【００５２】
アスコルビン酸およびアスコルビン酸誘導体とハイドロキノン配糖体とを組み合わせて配合することにより、真皮線維芽細胞のコラーゲン産生能をたかめ、シワやタルミの改善効果が相乗的に増強された皮膚外用剤を提供する。