(57)【要約】【課題】薬剤送達システムとして使用可能なリソソーム病治療用医薬品の提供。【解決手段】  下記一般式（１）で表され、かつＩＶ／ＯＶ値が０．６５〜０．９２の範囲である少なくとも１種の両親媒性化合物、及び水もしくは水性溶媒を含有することを特徴とするキュービック液晶組成物に、リソソーム酵素を包埋した複合体。【化１】2006117553.tif 000047（式中、Ｒは親水基であり、Ｘ及びＹはそれぞれ水素原子を表すか又は一緒になって酸素原子を表し、ｎは０〜４の整数を表し、ｍは０〜３の整数を表す。）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で表され、かつＩＶ／ＯＶ値が０．６５〜０．９２の範囲である少なくとも１種の両親媒性化合物、及び水もしくは水性溶媒を含有することを特徴とするキュービック液晶組成物に、リソソーム酵素を包埋した複合体。
【化１】
2006117553.tif 000043
（式中、Ｒは親水基であり、Ｘ及びＹはそれぞれ水素原子を表すか又は一緒になって酸素原子を表し、ｎは０〜４の整数を表し、ｍは０〜３の整数を表す。）
【請求項２】
下記一般式（１）で表され、かつクラフト温度が１０℃未満である少なくとも１種の両親媒性化合物、及び水もしくは水性溶媒を含有することを特徴とするキュービック液晶組成物に、リソソーム酵素を包埋した複合体。
【化２】
2006117553.tif 000044
（式中、Ｒは親水基であり、Ｘ及びＹはそれぞれ水素原子を表すか又は一緒になって酸素原子を表し、ｎは０〜４の整数を表し、ｍは０〜３の整数を表す。）
【請求項３】
前記両親媒性化合物が、下記式（２）〜（１２）から選ばれる少なくとも１種である、請求項１又は２に記載の複合体。
【化３】
2006117553.tif 000045
【請求項４】
キュービック液晶組成物が、前記両親媒性化合物とは異なる両親媒性脂質をさらに含有することを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５】
キュービック液晶組成物が、下記式（２）〜（１２）から選ばれる少なくとも１種の両親媒性化合物及び下記式（２）〜（１２）とは異なる少なくとも１種の両親媒性脂質、並びに水もしくは水性溶媒を含有することを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の複合体。
【化４】
2006117553.tif 000046
【請求項６】
リソソーム酵素が、α−ガラクトシダーゼ、α−グルコシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、アリールスルファターゼ、Ｎ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、イズロネート２−スルファターゼ、セラミダーゼ、ガラクトセレブロシダーゼ、β−グルクロニダーゼ、ヘパランＮ−スルファターゼ、Ｎ−アセチル−α−グルコサミニダーゼ、アセチルＣｏＡ−α−グルコサミニドＮ−アセチルトランスフェラーゼ、Ｎ−アセチル−グルコサミン−６スルファターゼ、ガラクトース６−スルファターゼ、アリールスルファターゼＡ、ＢおよびＣ、アリールスルファターゼＡセレブロシド、ガングリオシド、酸性β−ガラクトシダーゼＧＭ１ガルグリオシド、酸性β−ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼＡ、ヘキソサミニダーゼＢ、α−フコシダーゼ、α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、糖タンパク質ノイラミニダーゼ、アスパルチルグルコサミンアミダーゼ、酸性リパーゼ、酸性セラミダーゼ、及びリソソームスフィンゴミエリナーゼからなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の複合体を含む、医薬組成物。
【請求項８】
リソソーム病治療用である、請求項７に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＩＩ型キュービック液晶組成物にリソソーム酵素を包埋した複合体及び該複合体を含有する医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
脂質の多くは同一分子中に親水基と疎水基を合わせ持つ両親媒性の物質（以下、「両親媒性脂質」と称する。）であり、水中で様々な形態の分子会合体を自発的に形成する。代表的な両親媒性脂質としては、例えば合成界面活性剤、石けん、レシチン等の天然複合脂質；疎水鎖と親水鎖を持つブロックコポリマーなどが挙げられる。
【０００３】
両親媒性脂質は、その種類や濃度に応じて決まるクラフト温度（ＴＫ；Krafft eutectic temperature、クラフト点などとも呼ばれる。）以上の温度では、水中で様々な分子会合体を形成する（非特許文献１参照）。そのような分子会合体には、親水基が外側に向いて閉じられたミセル（球状ミセル、棒状ミセルなど）、疎水基が外側に向いて閉じられた逆ミセル、両親媒性脂質の疎水基同士又は親水基同士が向かい合って配列した二分子膜がランダムに連続したスポンジ相のほか、各種のリオトロピック液晶相などがある。該リオトロピック液晶相としては、無限長のシリンダー状会合体が二次元六方格子を形成するヘキサゴナル液晶及び逆ヘキサゴナル液晶、二分子膜シートがＺ軸方向に一定間隔で層状に積み重なったラメラ液晶、三次元格子構造を持つキュービック液晶などが知られている。
【０００４】
これらの分子会合体は、化粧品分野、医薬品分野などで様々な用途に利用されている。例えば、両親媒性脂質を用いた薬物送達システム（ＤＤＳ）の開発は非常に盛んであり、ラメラ液晶から作られるリポソーム内水相や脂質二重膜に薬剤を包埋した薬物送達システム（非特許文献２参照）を始めとして、多種多様な形態の薬物送達担体が製造されている（特許文献１及び２参照）。
【０００５】
分子会合体のうちバイコンティニュアス型（１−（１）で後述）のキュービック液晶は、ナノメートルオーダーの直径を持つ外部に繋がった水（または水性溶媒）部分（以下水チャネルと呼ぶ）と湾曲した脂質二重膜からなる独特な液晶構造をもつ。そのためリポソームやミセルと比較して、脂溶性薬剤と水溶性薬剤の両方をより多く包埋することが可能であり、かつより安定な構造をしており、機械的強度もより大きい。さらにキュービック液晶は、水チャネル内に水溶性蛋白質を、脂質二重膜中に疎水性の膜蛋白質を取り込むことができる。このためキュービック液晶は、リポソームやミセルとは違った新しい薬物送達担体として注目されてきた（非特許文献３〜５参照）。
【０００６】
ところで、薬物送達システムが有用と考えられる治療法形態の１つに酵素補充療法がある。酵素補充療法は、先天的又は後天的な障害によって生体内で正常な酵素を産生できないことに起因する疾患を治療するために、その正常な酵素を患者の体内に補充することに基づく治療法である。一般に酵素は生体内で分解されやすいことから、酵素補充療法では、正常酵素を比較的短い時間間隔で継続的に投与することが必要になる。このため酵素補充療法で使用する酵素について、薬物の保持及び徐放又は標的部位への特異的送達を特徴とする薬物送達システムを利用できれば非常に有用と思われる。しかしながら、分子量の大きい酵素に適した薬物送達システムはこれまで開発があまり進んでこなかった。
【０００７】
「リソソーム病」は、リソソーム酵素、リソソーム酵素へのリン酸基の付加反応に関与する酵素、又はリソソーム酵素の活性化および安定化に関与する因子の遺伝的欠陥により、リソソーム酵素による反応が進行せず、その結果、細胞内に基質が蓄積することによって引き起こされる一連の疾患群である（非特許文献６）。ヒトでは30種類以上のリソソーム病が知られており、小児科や内科領域で重要な疾患群のひとつとなっている。これらの疾患に対する根本的治療法として、これまでは骨髄移植、遺伝子治療等により正常酵素を補充する試みが行われてきた。しかし、患者への負担がより少なくかつ有効性の高い治療法の開発が、今なお望まれている。
【０００８】
【特許文献１】特表２００２−５０５３０７号公報
【特許文献２】特開２００１−２３１８４５号公報
【非特許文献１】Laughlin, R. G., "The Aqueous Phase Behavior of Surfactants" (1994年) Academic Press London, p.106-117
【非特許文献２】Lasic D. D., TIBTECH 16, (1998年) p.307-321
【非特許文献３】Engstrom, S., Lipid Technol. 2, (1990年) p.42-45
【非特許文献４】Shah, J.C., et al., Adv. Drug Delivery Reviews 47 (2001年) p.229-250
【非特許文献５】Ganem-Quintanar, A., Quintanar-Guerrero, D., and Buri, P., Drug Development and Industrial Pharmacy, 26(8), (2000年) p.809-820
【非特許文献６】Leroy and DeMars, Science, 157, p.804-806 (1967)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、リソソーム病の治療のための酵素補充療法において有利に使用可能な、リソソーム酵素を含む医薬組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を行なった結果、ある特定の両親媒性脂質又はその混合物と水又は水性媒体とによって製造されるキュービック液晶組成物中にリソソーム酵素を包埋した複合体を用いることにより、冷蔵庫若しくは冷凍庫内のような低温条件又は生体内でも、そのリソソーム酵素を長期間活性を保った状態で保持することができ、さらにそのリソソーム酵素を長期間かけてその組成物中から徐放させることができることを見出した。本発明は、この知見に基づいて完成されたものであり、すなわち以下の通りである。
【００１１】
［１］  下記一般式（１）で表され、かつＩＶ／ＯＶ値が０．６５〜０．９２の範囲である少なくとも１種の両親媒性化合物、及び水もしくは水性溶媒を含有することを特徴とするキュービック液晶組成物に、リソソーム酵素を包埋した複合体。
【００１２】
【化１】
2006117553.tif 000002
（式中、Ｒは親水基であり、Ｘ及びＹはそれぞれ水素原子を表すか又は一緒になって酸素原子を表し、ｎは０〜４の整数を表し、ｍは０〜３の整数を表す。）
【００１３】
［２］  上記一般式（１）で表され、かつクラフト温度が１０℃未満である少なくとも１種の両親媒性化合物、及び水もしくは水性溶媒を含有することを特徴とするキュービック液晶組成物に、リソソーム酵素を包埋した複合体（式中、Ｒは親水基であり、Ｘ及びＹはそれぞれ水素原子を表すか又は一緒になって酸素原子を表し、ｎは０〜４の整数を表し、ｍは０〜３の整数を表す）。
［３］  上記両親媒性化合物が、下記式（２）〜（１２）から選ばれる少なくとも１種である、上記［１］又は［２］に記載の複合体。
【００１４】
【化２】
2006117553.tif 000003
【００１５】
［４］  キュービック液晶組成物が、前記両親媒性化合物とは異なる両親媒性脂質をさらに含有することを特徴とする、上記［１］〜［３］に記載の複合体。
［５］  キュービック液晶組成物が、上記式（２）〜（１２）から選ばれる少なくとも１種の両親媒性化合物及び上記式（２）〜（１２）とは異なる少なくとも１種の両親媒性脂質、並びに水もしくは水性溶媒を含有することを特徴とする、上記［１］〜［４］に記載の複合体。
［６］  リソソーム酵素が、α−ガラクトシダーゼ、α−グルコシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、アリールスルファターゼ、Ｎ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、イズロネート２−スルファターゼ、セラミダーゼ、ガラクトセレブロシダーゼ、β−グルクロニダーゼ、ヘパランＮ−スルファターゼ、Ｎ−アセチル−α−グルコサミニダーゼ、アセチルＣｏＡ−α−グルコサミニドＮ−アセチルトランスフェラーゼ、Ｎ−アセチル−グルコサミン−６スルファターゼ、ガラクトース６−スルファターゼ、アリールスルファターゼＡ、ＢおよびＣ、アリールスルファターゼＡセレブロシド、ガングリオシド、酸性β−ガラクトシダーゼＧＭ１ガルグリオシド、酸性β−ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼＡ、ヘキソサミニダーゼＢ、α−フコシダーゼ、α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、糖タンパク質ノイラミニダーゼ、アスパルチルグルコサミンアミダーゼ、酸性リパーゼ、酸性セラミダーゼ、及びリソソームスフィンゴミエリナーゼからなる群から選択される少なくとも１つである、上記［１］〜［５］に記載の複合体。
［７］  上記［１］〜［６］に記載の複合体を含む、医薬組成物。
［８］  リソソーム病治療用である、上記［７］に記載の医薬組成物。
【００１６】
なお本明細書では、一般式（１）で表される化合物を両親媒性化合物と呼び、この両親媒性化合物を包含するがそれに限定されない広義の両親媒性脂質を両親媒性脂質と呼ぶ。
【発明の効果】
【００１７】
キュービック液晶組成物にリソソーム酵素を包埋した本発明の複合体は、そのリソソーム酵素を保持し、溶液中に遊離して存在する場合よりもその活性を長期間高濃度で維持することができる。本発明の複合体は、１０℃未満、例えば−１０℃〜４℃のような低温でも安定に保存することができる。本発明の複合体はまた、包埋したリソソーム酵素を分解酵素などによる破壊から保護することができる。さらに本発明の複合体は、包埋したリソソーム酵素を徐放させることができる。
【００１８】
本発明の複合体を含む医薬組成物は、包埋したリソソーム酵素を長期間にわたり安定して作用させることができるだけでなく、４℃などの低温下でも安定的に保存することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
本発明の、リソソーム酵素をキュービック液晶組成物に包埋した複合体は、キュービック液晶組成物（後述）中に形成されるキュービック液晶構造内に、リソソーム酵素を含有するものである。以下、本発明で用いるキュービック液晶組成物について説明し、次にリソソーム酵素を含む本発明の複合体について述べる。
【００２０】
１．キュービック液晶組成物
（１）キュービック液晶の一般的な構造及び特徴
キュービック液晶は、両親媒性脂質が形成する様々な形態の分子会合体（球状、ロッド状、あるいは二分子膜など）が構造単位となり、規則的な三次元構造をとっている。キュービック液晶は、光学的に透明で複屈折性をもたない性質（光学的等方性）を有するため、偏光顕微鏡により直行ニコル条件で観察すると均一に暗く見え、何らのテクスチャーを示さない（等方性テクスチャー）。
【００２１】
キュービック液晶は、液晶構造ユニットにおける疎水性領域及び親水性領域の連続性の相違から、バイコンティニュアス型とディスコンティニュアス型に分類される。かかる「バイコンティニュアス型」とは、液晶構造ユニット中の疎水性領域と親水性領域（両親媒性脂質の親水性基と水又は水性溶媒を含む）がそれぞれ連続した（つながった）領域からなっているものである。また、「ディスコンティニュアス型」とは、液晶構造ユニット中の疎水性領域と親水性領域のうち、一方の領域が連続的な構造をとっているが、もう一方は不連続な構造（例えば球状に閉じた構造）となっているものである。
【００２２】
また、キュービック液晶構造は、Ｉ型とＩＩ型に分類される。液晶構造ユニットを形成する脂質分子膜が疎水基側に湾曲し、“水中油型”構造をとる場合をＩ型キュービック液晶、逆に脂質分子の親水基及び水（又は水性溶媒）側に湾曲して、“油中水型”構造をとる場合をＩＩ型キュービック液晶と称する。Ｉ型とＩＩ型は、両親媒性脂質／水系の相挙動から判定することが出来る。例えば、Ｉ型の場合、両親媒性脂質／水系の水含有量を増加させてゆくと、液晶構造は他の液晶構造（例えばラメラ液晶）から、さらにはミセルへと転移し、最終的には均一な水溶液となる。これに対し、ＩＩ型液晶では、ある一定以上の水量となると、飽和量の水を含んだ液晶と過剰な水が共存する“液晶＋過剰水”の二相となり、水量を増しても均一な水溶液となることはない。
【００２３】
図面に記載の図１には、結晶学的空間群Ｉｍ３ｍに属するキュービック液晶の構造モデル（Evans, F., Wennerstrom, H., “The Colloidal Domain” VHC (1994年)）を示している。
【００２４】
ところで、両親媒性脂質によって形成されるキュービック液晶などの液晶は、両親媒性脂質の種類と濃度によって決まるクラフト温度（ＴＫ）以上の温度でなければ形成されない。さらに液晶は、通常、両親媒性脂質の濃度や温度の変化に伴って相転移を起こすため、特定の液晶構造が安定して存在できる最高温度（Ｔｍａｘ）も脂質の種類や両親媒性脂質濃度に応じて決まってくる。従ってある両親媒性脂質によって形成される液晶構造は、ＴＫ−Ｔｍａｘの範囲で安定的に形成される。このようなＴＫ−Ｔｍａｘと両親媒性脂質濃度の関係は、通常、両親媒性脂質／水系の「濃度−温度依存性相図」として示される。両親媒性脂質のクラフト温度は、このような相図を作製することによる方法などの、当業者に周知の方法により、定めることができる（例えば非特許文献１を参照）。２種以上の両親媒性脂質の混合物についても、同様の方法でクラフト温度を定めることができる。
【００２５】
一般にキュービック液晶は、狭い両親媒性脂質濃度範囲でしか形成されないことが多い。このため、ほんの少しの濃度変化でも液晶構造が転移してしまい、キュービック液晶の構造を利用することは、通常、非常に困難である。
【００２６】
（２）本発明で用いるキュービック液晶組成物中のキュービック液晶の構造及び特徴
本発明で用いるキュービック液晶組成物中では、本発明に係る１種又は複数種の両親媒性脂質（これについての詳細は「（３）キュービック液晶組成物の製造」にて後述）によって、バイコンティニュアス型でありかつＩＩ型の構造を有するキュービック液晶が形成される。
【００２７】
本発明におけるキュービック液晶は、図１に例示された様に湾曲した両親媒性脂質二重膜部分と、通常２〜２０ｎｍ程度（特にこの範囲に限定されるものではない）の直径を有する連続した水チャネルとから構成される３次元的な規則構造を有している。
【００２８】
本発明で用いるキュービック液晶組成物中のキュービック液晶は、広範な温度範囲及び両親媒性脂質濃度範囲で安定的に形成される。特に、ＩＩ型である本発明のキュービック液晶においては、両親媒性脂質／水系の水量が増加して液晶構造中に含有され得る最大水量を超えた場合でも、過剰の水（正確には極微量の両親媒性脂質分子が溶解している希薄水溶液）が液晶構造から分離して水相を形成して、水を飽和したキュービック液晶と過剰の水からなる二相共存状態となり、その液晶構造は保持される。過剰水の存在下でも液晶構造が保持されるというこの特徴は、水含量の多い医薬品や化粧品を製造する際に有利であるだけでなく、例えばキュービック液晶組成物を薬物送達システム用担体等として用いる上でも非常に都合が良い。本発明のキュービック液晶組成物中の両親媒性脂質濃度に特に制限はないが、通常、０．１〜９０質量％の範囲であり、両親媒性脂質の種類や温度等に応じて、８０質量％以下であることもあり、７０質量％以下であることもあり、又は５０質量％以下であることもある。
【００２９】
本発明のキュービック液晶組成物は、例えば１０℃未満のような低温でも安定なバイコンティニュアス型ＩＩ型キュービック液晶である。本発明の液晶組成物は、通常、−１０〜８０℃の範囲で安定なバイコンティニュアス型ＩＩ型キュービック液晶が形成され、好ましくは０〜５０℃、より好ましくは０〜４０℃の範囲でより安定なキュービック液晶が形成されうる。両親媒性脂質のクラフト温度は、例えば、１質量％〜５０質量％の両親媒性脂質を含む水溶液のＤＳＣ測定、あるいは（偏光）顕微鏡下で両親媒性脂質の融解挙動を観察すれば容易に求めることが出来る。また、厳密には相図を作製することによる慣用手法によって決定すればよい（例えば非特許文献１参照）。
【００３０】
なお本発明のキュービック液晶組成物は、典型的には透明なゲル状形態であるが、適切な分散剤を添加する事により粒子の平均直径で５０ｎｍ〜５μｍ程度の液晶微粒子とすることもできる。
【００３１】
（３）キュービック液晶組成物の製造
本発明において使用するキュービック液晶組成物は、本発明に係る両親媒性脂質と、水又は水性溶媒とを混合することによって製造することができる。
【００３２】
キュービック液晶組成物の製造には、本発明に係る両親媒性脂質として、下記一般式（１）で表されるイソプレノイド型疎水鎖を有する両親媒性化合物（以下、両親媒性化合物（１）と略称することがある。）を用いることができる。
【００３３】
【化３】
2006117553.tif 000004
【００３４】
上記式中、Ｒは親水基であり、Ｘ及びＹはそれぞれ水素原子を表すか又は一緒になって酸素原子を表し、ｎは０〜４の整数を表し、ｍは０〜３の整数を表す。Ｒが表す親水基としては、例えばグリセロール（２個の水酸基を持つ）；エリスリトール、ペンタエリスリトール、トレイトール、ジグリセロール、キシロース、リボース、アラビノース、リキソース、アスコルビン酸（いずれも３個の水酸基を持つ）；グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース、アルトロース、グロース、イドース、タロース、トリグリセロール（いずれも４個の水酸基を持つ）などから１つの水酸基を除いた残基が挙げられる。
【００３５】
これらの両親媒性化合物（１）は、当業者であれば、後述の実施例等の記載を参考にすることにより、周知の有機化学合成法や生化学的製造法を利用して容易に製造することができる（例えば特開平８−２４５６８２号公報及び特開２００２−２２６４９７号公報を参照）。
【００３６】
また、キュービック液晶組成物の製造では、両親媒性化合物（１）の中でも、バイコンティニュアス型ＩＩ型キュービック液晶を形成し、かつクラフト温度が低くなる傾向の強い０．６５〜０．９２の範囲のＩＶ／ＯＶ値を有する両親媒性化合物を少なくとも１種使用することが好ましい。ここで、本明細書で用いる「ＩＶ／ＯＶ値」は、有機化合物（本発明においては両親媒性化合物）の無機性値（ＩＶ）と有機性値（ＯＶ）の比率（ＩＶ／ＯＶ）として算出される値であり、有機化合物の物性と化学構造の相関を示す指標として利用されている。
【００３７】
本発明で用いるＩＶ／ＯＶ値のＩＶ、ＯＶそれぞれの算出方法を以下に簡単に説明する。まず、ＯＶ（organic value又はorganic property value）は、両親媒性化合物中の全炭素数に２０を掛け、直鎖に枝分かれがある場合は、枝分かれ１つ毎に１０を減じることにより求められる。そして、ＩＶ（inorganic value又はinorganic property value）は、両親媒性化合物中の水酸基を１００、エーテル酸素を２０（特に環状糖のエーテル酸素は７５）、エステル基を６０とし、両親媒性化合物中の該当する全ての基の値を足し合わせて求められる。ＩＶ／ＯＶ値は、界面活性剤分野で多用されるＨＬＢ値と近似的に以下の関係が成り立つことが知られている：ＨＬＢ＝（ＩＶ／ＯＶ）×１０。これらのＯＶ、ＩＶ及びＩＶ／ＯＶ値についての詳細は、Fujita, A., "Prediction of Organic Compounds by a Conceptional Diagram" Chem. Pharm. Bull. (Tokyo), 2, 163-173 (1954); "Formulation Design with Organic Conception Diagram" Nihon Emulsion Co., LTD (2001)[この文献は以下で入手可能である: http://www.nihon-emulsion.co.jp/pdf/ocdbook_e.pdf]; 甲田善生 著「有機概念図 -基礎と応用-」三共出版 (1984); Hanqing Wu, "Chemical Property Calculation through JavaScript and Applications in QSAR" Molecules (1999) 4, p.16-27 [この文献は以下で入手可能である: http://fr.mdpi.net/molecules/papers/40100016.pdf] などに記載されている。
【００３８】
キュービック液晶組成物の製造では、クラフト温度（ＴＫ）が１０℃未満である両親媒性化合物（１）を少なくとも１種使用することも好ましい。
【００３９】
０．６５〜０．９２の範囲のＩＶ／ＯＶ値を有するか又はクラフト温度が１０℃未満である両親媒性化合物（１）の具体例として、例えば上記式（２）〜（１２）などが挙げられる。
【００４０】
本発明のキュービック液晶組成物の製造においては、両親媒性化合物（１）（好ましくは０．６５〜０．９２の範囲のＩＶ／ＯＶ値を有するか又はクラフト温度が１０℃未満である両親媒性化合物（１））を１種使用してもよいし、２種以上を混合して使用してもよい。また、上記両親媒性化合物（１）以外の両親媒性脂質をさらに混合してもよい。
【００４１】
キュービック液晶組成物の製造において、両親媒性脂質を２種以上混合する場合には、特に限定するものではないが、上記式（２）〜（１２）の両親媒性化合物を少なくとも１種と、それ以外の両親媒性脂質（好ましくは両親媒性化合物（１））の少なくとも１種とを混合することが好ましい。ここで、式（２）〜（１２）の両親媒性化合物とは異なる種類であってそれと混合して用いるのに好適な上記式（１）の両親媒性化合物としては、例えば下記式（１３）
【化４】
2006117553.tif 000005
で表される１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシドがある。また、式（２）〜（１２）の両親媒性化合物と混合して用いるのに好適な両親媒性脂質として、モノオレイン、モノワクセニン、３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル−１，２，３−トリオール（フィタントリオール）、３，７，１１−トリメチルドデカン−１，２，３−トリオール（後述する式（１４））などが挙げられる。両親媒性脂質を２種以上混合する場合、混合比率は当業者が適宜定めることができるが、上記式（２）〜（１２）の両親媒性化合物の総量が、それとは異なる両親媒性脂質の総量に対して１質量％以上であるのが好ましく、５〜９９質量％であることがより好ましく、２０〜９９質量％であるのがさらに好ましい。
【００４２】
また両親媒性脂質を２種類以上混合する場合（一例としては、両親媒性化合物（１）と、両親媒性化合物（１）以外の両親媒性脂質とを混合する場合）、混合物としての両親媒性脂質のクラフト温度が１０℃未満となるような両親媒性脂質の組み合わせ及び濃度比を用いることが好ましい。この場合に、両親媒性脂質の１つとして、式（１３）の両親媒性化合物を混合することも好ましい。
【００４３】
なお４℃程の低温で使用するキュービック液晶組成物を製造する場合、安定性の点からは、上記式（１３）の両親媒性化合物を１種類のみで使用するのは避けることが好ましい。
【００４４】
キュービック液晶を形成するために両親媒性脂質と混合する水又は水性溶媒としては、特に限定するものではないが、滅菌水、精製水、蒸留水、イオン交換水、超純水などの水；生理的食塩水、塩化ナトリウム水溶液、塩化カルシウム水溶液、塩化マグネシウム水溶液、硫酸ナトリウム水溶液、硫酸カリウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液等の電解質水溶液；リン酸緩衝溶液やトリス塩酸緩衝溶液などの緩衝溶液；グリセリン、エチレングリコール、エタノール等の水溶性有機物を含有する水溶液；グルコース、シュークロース、マルトース等の糖分子を含有する水溶液；ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール等の水溶性高分子を含む水溶液；キュービック液晶を形成する両親媒性脂質に対してモル比が２０％以下のオクチルグルコシド、プルロニック（ポリエチレングリコール／ポリプロピレングリコール／ポリエチレングリコール共重合体）等の界面活性剤を含む水溶液；細胞内液、細胞外液、リンパ液、髄液、血液、胃液、血清、唾液、尿などの体液などが挙げられる。
【００４５】
両親媒性脂質と混合する水又は水性溶媒の使用量は、当業者であれば各両親媒性脂質／水系の相図から容易に決定出来るが、一般には、両親媒性脂質の２０質量％以上であることが好ましい。
【００４６】
本発明のキュービック液晶組成物を製造するためには、両親媒性脂質と水又は水性溶媒とを、十分に混合することが好ましい。特に限定するものではないが、本発明の両親媒性脂質と水又は水性溶媒は、例えば１時間〜５０時間かけて混合することが好ましい。
【００４７】
本発明の両親媒性脂質に過剰量の水又は水性溶媒を混合しても、キュービック液晶組成物を製造することが可能である。ここで「過剰量」とは、形成されるキュービック液晶構造中に含有されうる最大水量を超えた水量を意味する。
【００４８】
本発明のキュービック液晶組成物を製造するためには、両親媒性脂質を水又は水性溶媒中に混合する際又は混合した後、その混合液を、キュービック液晶を形成しうる温度範囲で保温する。キュービック液晶を形成し得る温度範囲は、各両親媒性脂質の種類や濃度によっても異なるが、当業者であれば、各両親媒性脂質について決定され得る液晶の相図に基づいて、適切な温度範囲を設定することが可能である。本発明のキュービック液晶組成物の場合、キュービック液晶を形成し得る温度範囲は典型的には室温を含む比較的広い範囲に及び、特に限定するものではないが、例えば、通常、０．１〜８０質量％の両親媒性脂質濃度であれば、−１０〜８０℃、好ましくは０〜４０℃の温度範囲で混合又は保温すれば、安定に生成することができる。
【００４９】
本発明のキュービック液晶組成物の製造において、両親媒性脂質を２種以上、好ましくは物性の異なる両親媒性脂質を２種以上用いることにより、形成されるキュービック液晶の構造や物性を好適に変化させることができる。例えば、クラフト温度が０℃以下であるが高温域での安定性が劣る両親媒性脂質と、クラフト温度が高い両親媒性脂質の２種を混合して用いることにより、低温域から高温域まで安定にキュービック液晶を形成する組成物を製造することができる。また両親媒性脂質を２種以上用いることにより、形成されるキュービック液晶の水チャネルの直径も同時に変化させることができる。さらに、両親媒性脂質を２種以上用いることによりキュービック液晶の構造や特性を変化させることができることを利用すれば、キュービック液晶の構造を制御することが可能である。つまり、キュービック液晶組成物の使用目的に応じてその特性（例えば、格子定数、キュービック液晶の水チャネルの直径、クラフト温度、Ｔｍａｘ値、粘度など）を最適化することもできる。例えば、後述のように特定の高分子化合物をキュービック液晶に取り込ませる場合に、キュービック液晶の水チャネルの直径をその高分子化合物の分子量に合わせて、広げたり縮小したりすることにより、徐放速度の最適化を行なうことができる。本発明のキュービック液晶組成物は、かなり広範囲の両親媒性脂質群から任意に選択した両親媒性脂質を用いて製造できるため、キュービック液晶の物性を制御する上で自由度が高い。
【００５０】
一例として、単独で同じ結晶学的空間群に属すキュービック液晶を形成する２種の両親媒性脂質を用いてキュービック液晶の水チャネルの直径の制御を行なう場合を例に取り、キュービック液晶構造を制御するための計算式を以下に述べる。
【００５１】
混合する２種の両親媒性脂質の作るキュービック液晶の水チャネルの直径を各々、Ｄ１，Ｄ２（Ｄ１＞Ｄ２）とする場合、両親媒性脂質を各々、Ｘ１、Ｘ２（Ｘ１＋Ｘ２＝１）のモル分率で混合した両親媒性脂質から形成されたキュービック液晶の水チャネルの直径Ｄ３は、近似的に以下の数式（ｉ）で表される。
Ｄ３＝（Ｘ１＊Ｄ１＋Ｘ２＊Ｄ２）      （ｉ）
【００５２】
この式（ｉ）を利用すれば、当業者であれば容易に目的とする水チャネルの直径を持ったキュービック液晶をデザイン出来る。
【００５３】
（４）キュービック液晶構造の解析
上記（３）の方法により製造される本発明のキュービック液晶組成物については、以下の方法でキュービック液晶を形成していること、バイコンティニュアス型であること、ＩＩ型であることを確認することができる。
【００５４】
（ａ）偏光顕微鏡による観察
両親媒性脂質／水系がキュービック液晶を形成するか否か、また、Ｉ型かＩＩ型かを簡便に判定する方法として、ペネトレイション法が利用出来る。少量（数ｍｇ）の両親媒性脂質を顕微鏡用スライドグラス上に置き、カバーグラスでそっと圧力を加え、スライドグラスとカバーグラスの間の間隙に１０ミクロン程度の厚さの両親媒性脂質薄膜（直径１〜５ｍｍ位）を形成する。スライドグラスとカバーグラス間隙側面から毛管現象で水あるいは水性溶媒を加えると、水は両親媒性脂質薄膜の外縁部から除々に内部に浸透し、両親媒性脂質薄膜／水界面から両親媒性脂質薄膜内部に向かって水含有量の勾配を形成する。これを偏光顕微鏡で観察すると、両親媒性脂質／水系の濃度に依存してどのような相が出来るのかが判定出来る。図２にペネトレイション法による両親媒性脂質／水系の偏光顕微鏡写真を示した。図２の写真には４つの領域が観察される。写真の最右領域は水領域であり、それ以外の部分は水を含んだ両親媒性脂質領域である。写真右から左に行くにつれ水含有量が減少し、最左領域は未だ水が浸透していない両親媒性脂質部である。水領域と接して水領域と同じ等方性のテクスチャーを与える領域（キュービック液晶）、明るいテクスチャーを与える領域（ラメラ液晶）、等方性のテクスチャーを与える領域（ドライの両親媒性脂質）が観察される。これにより、この脂質がキュービック液晶を形成する事が示唆される。また、キュービック液晶が過剰の水と両親媒性脂質部の界面部に安定に形成されている事からＩＩ型である事が分かる。
【００５５】
（ｂ）エックス線小角散乱（ＳＡＸＳ）測定によるキュービック液晶の確認
キュービック液晶は偏光顕微鏡下で等方性のテクスチャーを与えるが、等方性のテクスチャーを示す領域がキュービック液晶であると結論するためにはさらなる確認をすることが好ましい。その確認のためには、エックス線小角散乱（ＳＡＸＳ）法により、液晶構造が立方格子を有することを調べればよい。この手順としては、所定の濃度の両親媒性脂質／水系サンプルを石英製エックス線キャピラリーチューブに入れた後、キャピラリーを酸素バーナーで封じ、ＳＡＸＳ測定に供すればよい。
【００５６】
本発明のキュービック液晶組成物においては、特に限定するものではないが、典型的には結晶学的空間群Ｉａ３ｄ（以下、Ｉａ３ｄキュービック液晶と呼ぶ）あるいはＰｎ３ｍに属するキュービック液晶（以下、Ｐｎ３ｍキュービック液晶と呼ぶ）または、結晶学的空間群Ｉｍ３ｍに属するキュービック液晶（以下、Ｉｍ３ｍキュービック液晶と呼ぶ）が形成される。Ｉａ３ｄキュービック液晶は、以下の比
【数１】
2006117553.tif 000006
Ｐｎ３ｍキュービック液晶は、以下の比
【数２】
2006117553.tif 000007
Ｉｍ３ｍキュービック液晶は、以下の比
【数３】
2006117553.tif 000008
を示す面間隔を与えることによって、確認することができる。また当業者に周知の方法に従って、Ｘ線小角散乱データからピーク値を算出し、さらにそれらの逆数の比を求めれば容易に空間群と格子定数を決める事ができる。過剰の水性溶媒と共存状態にあるキュービック液晶のＸ線小角散乱ピーク値あるいはキュービック格子の大きさは、脂質濃度によらず一定となる。従って、キュービック液晶が過剰の水性溶媒と共存状態にあることは、ＳＡＸＳ測定によって確認できるので、キュービック液晶がＩＩ型であるか否かを判定することも容易に可能である。
【００５７】
（ｃ）「バイコンティニュアス型」の確認
バイコンティニュアス型のキュービック液晶構造を形成する湾曲した両親媒性脂質二重膜の疎水鎖の末端メチル基が接する曲面は、無限周期最小曲率表面（infinite periodic minimal surface：ＩＰＭＳ）と呼ばれる曲面で記述出来る事が分かっている（Hyde, S.T.; Andersson, S.; Ericsson, B.; Larsson K. Z. Kristallogr. 1984年, 168, p.213-219. Longley, W.; McIntosh, T. J. Nature 1983年, 303, p.612-614.）。例えば、Ｉａ３ｄキュービック液晶の両親媒性脂質二重膜はジャイロイド曲面（gyroid surface）と呼ばれる曲面によって、Ｐｎ３ｍキュービック液晶の両親媒性脂質二重膜はダイアモンド曲面（diamond surface）と呼ばれる曲面によって良く記述できる。このモデルによれば、キュービック液晶中の両親媒性脂質分子の疎水鎖部の容積分率φhcは下式（ｉｉ）で表される。
【００５８】
【数４】
2006117553.tif 000009
【００５９】
式中、ωは、曲面の型によって決まる無次元の常数でジャイロイド曲面の場合は３．０９１、ダイアモンド曲面の場合、１．９１９である。ｄｈｃは両親媒性脂質二重膜疎水部の長さ、ａｃはキュービック液晶の格子定数を表す。χｕＥはオイラー常数でジャイロイド曲面の場合は−８、ダイアモンド曲面の場合は−２（Anderson, D. M.; Gruner, S. M.; Leibler, S. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988年, 85, 5364-5368.）。
このφhcは下式（ｉｉｉ）によって計算出来る。
【００６０】
【数５】
2006117553.tif 000010
【００６１】
式（ｉｉｉ）中、Ｍｈｃは両親媒性脂質分子の疎水鎖部の分子量、Ｍｈｅａｄは両親媒性脂質分子の親水基部の分子量、Ｍｗは水の分子量である。ｎＬ、ｎＷはキュービック液晶中の両親媒性脂質と水のモル数、ρｗ、ρｈｃ、ρｈｅａｄはそれぞれ水、両親媒性脂質の疎水鎖部、両親媒性脂質の親水基部の密度である。ρｈｃは密度計で測定した両親媒性脂質の疎水鎖部に対応するアルコールの密度に等しい値と仮定した。
【００６２】
式中、ｎＬ、ｎＷは実測可能であり、ａｃはＳＡＸＳ実験から測定出来るので、式（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）から、上記ｄｈｃ値を計算できる。キュービック液晶がバイコンティニュアス構造であれば、計算されたｄｈｃ値は、同じ両親媒性脂質が作るラメラ液晶の両親媒性脂質二重膜の疎水基部の厚さと等しくなる。この比較から、キュービック液晶がバイコンティニュアス構造であるか否かが判定できる。
【００６３】
２．キュービック液晶組成物にリソソーム酵素を包埋した複合体とその製造方法
上記キュービック液晶組成物は、そのキュービック液晶構造の水チャネル中に水溶性薬物を、一方で両親媒性脂質二重膜部分には膜蛋白質のような疎水性の薬物を包埋することができる。本発明では、このようなキュービック液晶組成物の性質を利用して、リソソーム酵素を包埋した複合体を製造する。すなわち本発明は、上記キュービック液晶組成物にリソソーム酵素を包埋した複合体に関する。
【００６４】
本発明の複合体は、予め製造しておいたキュービック液晶組成物にリソソーム酵素を加えて混合することにより、製造することができる。あるいは、本発明の複合体は、キュービック液晶組成物の構成要素である両親媒性脂質と、水又は水性溶媒と、リソソーム酵素とを混合することによって、製造することもできる。
【００６５】
本発明の複合体の製造において、リソソーム酵素は、限定するものではないが、例えば両親媒性脂質に対して0.005〜0.5質量％となるように混合すればよい。
【００６６】
本発明の複合体を形成させるためには、リソソーム酵素を含む上記混合溶液を、十分に混合することが好ましい。限定するものではないが、上記溶液を、例えば1時間〜3時間かけて静かに混合することが好ましい。混合する際の温度は、上述のキュービック液晶を形成しうる温度範囲であることが好ましい。
【００６７】
本発明においてリソソーム酵素とは、リソソーム病の原因となる酵素の平常型（機能又は活性を有する野生型若しくは変異型）であってリソソーム病の患者における酵素補充療法に利用できる可能性があるものを言う。リソソーム酵素としては、特に限定するものではないが、例えば、α−ガラクトシダーゼ、α−グルコシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、アリールスルファターゼ、Ｎ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、イズロネート２−スルファターゼ、セラミダーゼ、ガラクトセレブロシダーゼ、β−グルクロニダーゼ、ヘパランＮ−スルファターゼ、Ｎ−アセチル−α−グルコサミニダーゼ、アセチルＣｏＡ−α−グルコサミニドＮ−アセチルトランスフェラーゼ、Ｎ−アセチル−グルコサミン−６スルファターゼ、ガラクトース６−スルファターゼ、アリールスルファターゼＡ、ＢおよびＣ、アリールスルファターゼＡセレブロシド、ガングリオシド、酸性β−ガラクトシダーゼＧＭ１ガルグリオシド、酸性β−ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼＡ、ヘキソサミニダーゼＢ、α−フコシダーゼ、α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、糖タンパク質ノイラミニダーゼ、アスパルチルグルコサミンアミダーゼ、酸性リパーゼ、酸性セラミダーゼ、及びリソソームスフィンゴミエリナーゼなどが挙げられる。
【００６８】
本発明において用いるリソソーム酵素は、天然のアミノ酸配列を有するものであってもよいし、突然変異により又は遺伝子工学的にそのアミノ酸配列に変化が生じたものであってもよい。
【００６９】
本発明において用いるリソソーム酵素は、ヒト由来のものであってもよいし、ヒト以外の他の哺乳動物（例えば、ゴリラ、チンパンジーなどの霊長類、ブタなどの家畜、又はマウス、ラットなどのげっ歯類）由来のものでもよい。本発明において用いるリソソーム酵素は、ヒトから単離精製してもよいし、ヒト以外のそれら哺乳動物から単離精製してもよい。本発明において用いるリソソーム酵素はまた、遺伝子工学的手法により組換え生産したものでもよい。
【００７０】
本発明において用いるリソソーム酵素は、糖鎖付加、リン酸化などのタンパク質修飾がされたものでもよい。そのタンパク質修飾は、天然の翻訳後修飾によるものであっても良いし、突然変異や環境変化によって変化したものであってもよいし、人工的に改変されたものであってもよい。
【００７１】
限定されるものではないが、本発明のリソソーム酵素は、ヒトにおけるリソソームへの輸送シグナルであるマンノース−６−リン酸を非還元末端に有する糖鎖が付加されたものであることが好ましい。従って一実施形態では、本発明のリソソーム酵素は、マンノース−６−リン酸含有酸性糖鎖が付加されたリソソーム酵素である。そのような本発明のリソソーム酵素は、哺乳動物細胞中で組換え生産することによって製造可能である。あるいは本発明のリソソーム酵素は、そのようなリン酸含有酸性糖鎖を酵母での組換え生産法により付加したリソソーム酵素であってもよい。酵母を用いたそのような製造方法としては、例えば国際公開ＷＯ ０２／１０３０２７に開示されている方法を用いることができる。簡単に説明すると、この国際公開ＷＯ ０２／１０３０２７に開示された方法は、以下の１）及び２）の工程を含むものである：
【００７２】
１）リン酸化コア糖鎖を産生する糖鎖生合成変異酵母株を用いて、これに目的のリソソーム酵素をコードする遺伝子を導入し、マンノース−１−リン酸付加酸性糖鎖含有糖蛋白質を発現させる工程、
２）得られたマンノース−１−リン酸付加酸性糖鎖含有糖蛋白質をα−マンノシダーゼ処理してそのマンノース部分を切除し、マンノース−６−リン酸含有糖鎖含有糖蛋白質を生成させる工程。
【００７３】
本発明で用いるキュービック液晶組成物は、キュービック液晶構造内に高濃度のリソソーム酵素を包埋することができる。例えばキュービック液晶組成物を構成する両親媒性脂質１ｇ当たり、０．０５ｍｇ〜２０ｍｇのリソソーム酵素が含有されうる。
【００７４】
本発明の複合体は、リソソーム酵素を単量体又は多量体（例えば二量体〜四量体）の形態で包埋することができる。本発明の複合体は、複数のサブユニットからなる多量体として生体内で活性を示すリソソーム酵素を多量体形態で包埋することができるため、当該リソソーム酵素の生体内活性を保持することが可能である。なお多量体の状態で包埋されるリソソーム酵素の分子量は、多量体全体として算出するものとする。
【００７５】
本発明の複合体では、限定するものではないが、通常、そのキュービック液晶構造の水チャネル中にリソソーム酵素を包埋することができる。本発明の複合体中で形成されるキュービック液晶構造はかなり強固であり、その構造内に取り込んだリソソーム酵素を物理的にも生物学的にも外部環境から非常によく保護することができる。一方、本発明の複合体はまた、ゲル、微粒子などの様々な形態へと容易に成形することが可能である。
【００７６】
本発明の複合体は、リソソーム酵素を包埋し、それを徐放することができるため、リソソーム病の治療に使用する薬物送達システム（Drug Delivery System；DDS）用の製剤にも有利に使用することができる。例えば、本発明のキュービック液晶組成物にリソソーム酵素を包埋した複合体を製造し、その複合体をリソソーム病で特に大きな障害が認められる体内組織中に埋め込めば、リソソーム酵素をその組織に集中的に投与することができる。また本発明の複合体を患者に注射すれば、長期にわたってリソソーム酵素を徐放させることができる。
【００７７】
本発明は、上記キュービック液晶組成物にリソソーム酵素を包埋させた複合体を製造し、それを利用することによって、リソソーム酵素をキュービック液晶構造中に保持及び／又はそこから徐放させる方法にも関する。
【００７８】
３．キュービック液晶組成物にリソソーム酵素を包埋した複合体を用いた医薬組成物
本発明は、上記複合体を含有する医薬組成物にも関する。本発明の医薬組成物には、本発明の複合体に加えて、医薬製剤上許容される担体、希釈剤及び／又は添加剤などを配合することができる。それらの例としては、例えば水、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ペクチン、キサンタンガム、アラビアゴム、カゼイン、ゼラチン、寒天、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン、マンニトール、ソルビトール、ラクトースなどが挙げられる。該担体、添加剤、希釈剤は、剤形に応じて適宜選択される。
【００７９】
本発明の医薬組成物は、経口経路又は非経口経路のいずれでも投与することができるが、特に非経口経路により全身的に又は局所的に投与することが好ましい。本発明の医薬組成物の経口投与用剤形としては、限定するものではないが、例えばカプセル剤、ジェル剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤などが挙げられる。本発明の医薬組成物の非経口投与用剤形としては、限定するものではないが、例えば皮下注射剤、筋肉内注射剤、静脈注射剤及び輸液剤などの液剤、坐剤、点鼻薬、うがい薬、皮下又は組織内などへの体内埋込型製剤などが挙げられる。
【００８０】
本発明の医薬組成物には、製剤上一般的に使用される結合剤、賦形剤、滑沢剤、崩壊剤、湿潤剤、安定剤、緩衝剤、矯味剤、保存剤、香料、着色剤などを配合して製剤化してもよい。
【００８１】
本発明の医薬組成物は、限定するものではないが、特にリソソーム病治療用製剤として有用である。本発明の医薬組成物を投与する対象は、主としてヒト、家畜、愛玩動物、実験（試験）動物等を含む哺乳動物であり、中でも、リソソーム病を発症しているか又はリソソーム病を発症する危険性が高い哺乳動物患者（より好ましくはヒト患者）が好適である。リソソーム病としては、例えば、限定するものではないが、ファブリー病（α−ガラクトシダーゼＡ欠損）、ポンペ病（α−グルコシダーゼ欠損）、ゴーシェ病（β−グルコシダーゼ欠損）、フルラー症候群（α−Ｌ−イズロニダーゼ欠損）、マロトー・ラミー症候群（アリールスルファターゼ欠損）、モルキオ症候群（Ｎ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ欠損またはβ−ガラクトシダーゼ欠損）、ハンター症候群（イズロネート２−スルファターゼ欠損）、ファーバー病（セラミダーゼ欠損）、クラッベ病（ガラクトセレブロシダーゼ欠損）、スライ症候群（β−グルクロニダーゼ欠損）、サンフィリポ症候群Ａ（ヘパランＮ−スルファターゼ欠損）、サンフィリポ症候群Ｂ（Ｎ−アセチル−α−グルコサミニダーゼ欠損）、サンフィリポ症候群Ｄ（アセチルＣｏＡ−α−グルコサミニドＮ−アセチルトランスフェラーゼ欠損又はＮ−アセチル−グルコサミン−６スルファターゼ欠損）、モルキオＡ（ガラクトース６−スルファターゼ欠損）、多発性スルファターゼ欠損症（アリールスルファターゼＡ、ＢおよびＣの欠損）、異染性白質萎縮症（アリールスルファターゼＡセレブロシド欠損）、ムコリピドーシスＩＶ（ガングリオシド欠損）、ＧＭ１ガングリオシドーシス（酸性β−ガラクトシダーゼＧＭ１ガルグリオシド欠損）、ガラクトシアリドーシス（酸性β−ガラクトシダーゼ欠損）、テイ・サックス病およびその変異種（ヘキソサミニダーゼＡ欠損）、ザンドホフ病（ヘキソサミニダーゼＢ欠損）、フクシドーシス（α−フコシダーゼ欠損）、シンドラー病（α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ欠損）、シアリドーシス（糖タンパク質ノイラミニダーゼ欠損）、アスパルチルグルコサミン尿症（アスパルチルグルコサミンアミダーゼ欠損）、ウォルマン病（酸性リパーゼ欠損）、ファーバー脂肪肉芽腫症（酸性セラミダーゼ欠損）、ニーマン・ピック病（リソソームスフィンゴミエリナーゼ欠損、及びその他のスフィンゴミエリナーゼ欠損）が挙げられる。
【００８２】
本発明の医薬組成物の投与量は、その有効成分である薬物の含有量に基づき、投与対象の年齢及び体重、病状、投与経路、投与頻度などを考慮して決定すればよい。当業者であれば、そのような決定及び変更は通常の手法に従って行うことができる。一例としては、本発明の医薬組成物を０．０５〜１ｇ使用して、体内埋込型製剤として投与することが考えられるが、特にこれに限定するものではない。
【００８３】
本発明は、本発明の医薬組成物を、リソソーム病を発症しているか又はリソソーム病を発症する危険性が高い哺乳動物患者（より好ましくはヒト患者）に投与することを含む、リソソーム病の治療又は予防方法にも関する。
【００８４】
本発明の医薬組成物を投与すると、有効成分であるリソソーム酵素は、キュービック液晶構造中に保持された状態でその基質と反応することができる。リソソーム酵素がキュービック液晶内の水チャネル部に選択的に包埋される場合、水チャネルの直径が数ナノメートルであり、分子サイズに近いため、チャネル壁による空間制限効果により、リソソーム酵素の構造変性を防ぐ効果がある。本発明の医薬組成物中のキュービック液晶構造内に保持されたリソソーム酵素は、体内環境中の分解酵素や細胞の作用を受けにくいため、長期間にわたり安定的に活性を維持することができる。また本発明の医薬組成物は、リソソーム酵素をキュービック液晶構造内に高濃度で保持することができるので、少量でも高い活性を有する。さらに本発明の医薬組成物は、そのキュービック液晶構造中に包埋したリソソーム酵素が徐々に外部へと放出されるため、徐放性製剤としても用いることができる。このため本発明の医薬組成物は、血中濃度の急激な上昇が望ましくないリソソーム酵素を投与するために有利に使用することができる。また本発明の医薬組成物を用いれば、長期間にわたって一定量のリソソーム酵素の投与を必要とするリソソーム病患者に対し、比較的低い投与頻度で十分量のリソソーム酵素を継続的に投与することができる。従って本発明の医薬組成物は、患者やその家族におけるクオリティ・オブ・ライフの向上の面でも、非常に有用である。
【００８５】
本発明の医薬組成物では、生体親和性の高い両親媒性脂質分子から構成された液晶組成物を薬物送達用担体として使用するため、投与された患者にもたらす副作用もごくわずかと思われる。
【実施例】
【００８６】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。但し、本発明はこれら実施例にその技術的範囲が限定されるものではない。
【００８７】
［参考例１］  両親媒性化合物の合成
１−Ｏ−（３，７，１１−トリメチルドデシル）エリスリトール［式（２）］の合成
【化５】
2006117553.tif 000011
【００８８】
窒素雰囲気下、ｐ−トルエンスルホニルクロライド２０．９６ｇ（１１０ｍｍｏｌ）の乾燥塩化メチレン１００ｍｌ溶液に、３，７，１１−トリメチルドデカノール２２．８ｇ（１００ｍｍｏｌ）とピリジン９．４８ｇ（１２０ｍｍｏｌ）を乾燥塩化メチレン２００ｍｌに溶解した溶液を氷冷下（１〜２℃）で滴下した。滴下後、室温で一晩攪拌した後、得られた反応液を水２００ｍｌ、２Ｎ塩酸２００ｍｌ、飽和重曹水２００ｍｌで順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後濃縮して、粗製３，７，１１−トリメチルドデシルトシレート４１．６ｇを得た。
【００８９】
窒素雰囲気下、エスリトール１６．０ｇ（１３１ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ４００ｍｌに溶解した。氷冷下（２〜４℃）、ヘキサンにて油分を除去した後の５０〜７０％ＮａＨ２．６２ｇ（６０％として６５．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ約５０ｍｌに懸濁した溶液を、数回に分けて添加した。添加後、室温で１時間攪拌した後、約５０℃に昇温し、上記で得られた粗製３，７，１１−トリメチルドデシルトシレート１３．１ｇ（３４ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下装置付着分をＤＭＦ５５ｍｌで洗い込み、８０℃に加温してから４時間攪拌した。得られた反応液を濃縮し、残渣にジクロロメタン３００ｍｌと飽和食塩水１，０００ｍｌを加えて、有機層を分取した。水層をジクロロメタン１５０ｍｌで抽出し、有機層計５００ｍｌを飽和食塩水３００ｍｌ×２回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、濃縮し、褐色油状物７．７ｇを得た。これを、シリカゲル４００ｇを用いてカラム精製［ＣＨ２Ｃｌ２→ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（９８：２）→ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（９５：５）］し、１−Ｏ−（３，７，１１−トリメチルドデシル）エリスリトール０．６６ｇを得た。ＨＰＬＣ純度は１００．０％であった。またＮＭＲ測定の結果は以下の通りであった。
【００９０】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）δ：０．８３−０．９（ｍ，１２Ｈ），１．０−１．７（ｍ，１７Ｈ），２．３１（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），２．６５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），２．７７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），３．５−３．７（ｍ，４Ｈ），３．７−３．９（ｍ，４Ｈ）
【００９１】
１−Ｏ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）エリスリトール［式（３）］の合成
【化６】
2006117553.tif 000012
【００９２】
窒素雰囲気下、ｐ−トルエンスルホニルクロリド２２．１ｇ（０．１２ｍｏｌ）の乾燥塩化メチレン１００ｍｌ溶液に、５，９，１３−トリメチル−１−テトラデカノール２７ｇ（０．１１ｍｏｌ）とピリジン１０ｇ（０．１３ｍｏｌ）を乾燥塩化メチレン２００ｍｌに溶解した溶液を氷冷下に滴下した。滴下後、室温で一夜攪拌した後、得られた反応液を水２００ｍｌ、２Ｎ塩酸２００ｍｌ、飽和重曹水２００ｍｌで順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、減圧下に濃縮して（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）トシレートを３４．４ｇ得た。
【００９３】
窒素気流下、エリスリトール２５．８ｇ（０．２１ｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ２００ｍｌに溶解し、氷冷しながら６０％ＮａＨ４．２ｇ（０．１１ｍｏｌ）を数回に分けて添加した。添加後、室温で１時間攪拌した後、５０℃に昇温し、上記で得られた（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）トシレートの半量１７．２ｇを滴下し、ＤＭＦ５５ｍｌで洗浄した。８０℃に加温してから４時間攪拌し、得られた反応液を減圧下に濃縮し、残液にエーテル５００ｍｌを加えて２回抽出溶解し、飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有する１−Ｏ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）エリスリトールを２．３ｇ得た。ＨＰＬＣ分析による本品の純度は、１−Ｏ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）エリスリトール７６．９％、２−Ｏ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）エリスリトール２３．１％であった。またＮＭＲ測定の結果は以下の通りであった。
【００９４】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）δ：０．８４５，０．８６７（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６．６Ｈｚ，１２Ｈ），１．０−１．６（ｍ，２１Ｈ），３．５１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．５５−３．８５（ｍ，６Ｈ）
【００９５】
１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデカノイル）エリスリトール［１−Ｏ−（フィタノイル）エリスリトール；式（４）］の合成
【化７】
2006117553.tif 000013
【００９６】
窒素雰囲気下、フィタン酸２．５ｇ、塩化メチレン１２．５ｍｌにピリジンを１滴加え、室温で塩化チオニル１．４３ｇを滴下した。滴下終了後、１時間還流し、減圧下に濃縮してフィタン酸クロリド約２．６ｇを得た。
【００９７】
窒素雰囲気下、エリスリトール１．３３ｇ、ピリジン１．１５ｇ、乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド４０ｍｌを混合し、加熱溶解させた。室温まで冷却し、上記で得られたフィタン酸クロリド２．４０ｇを塩化メチレン７ｍｌに溶解した溶液を滴下し、滴下後１時間室温で攪拌した。塩化メチレン１００ｍｌを加え、飽和食塩水３００ｍｌで洗浄、続いて２００ｍｌで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過、減圧濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、透明半固体状の１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデカノイル）エリスリトールを１．４ｇ得た。キャリア溶媒として、アセトニトリル：水（４：１）、カラムとしてＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ  ＳＧ−１２０（５μｍ）を用いたＨＰＬＣ分析の結果、本品は、１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデカノイル）エリスリトール９１．１％、２−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデカノイル）エリスリトール８．５％であった。またＮＭＲ測定の結果は以下の通りであった。
【００９８】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）δ：０．８−０．９（ｍ，１２Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，３Ｈ），１．０−１．６（ｍ，２２Ｈ），１．９５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），２．１３（ｄｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，９Ｈｚ，１Ｈ），  ２．３７（ｄｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，６Ｈｚ，１Ｈ），３．３３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），３．４３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），３．５８−３．９２（ｍ，４Ｈ），４．２７（ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，１Ｈ）
【００９９】
モノＯ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）ペンタエリスリトール［モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール；式（５）］の合成
【化８】
2006117553.tif 000014
【０１００】
窒素雰囲気下、フィタノール２９．１６ｇ（９７．６７ｍｍｏｌ）とピリジン９．２７ｇ（１１７．２ｍｍｏｌ）を乾燥塩化メチレン２２０ｍｌに溶解し、氷冷下、液温が１０℃を超えないようｐ−トルエンスルホニルクロリド２０．４８ｇ（１０７．４ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。添加終了後、フィタノールが消失するまで１２時間攪拌し、得られた反応液を水２００ｍｌ、２Ｎ塩酸２００ｍｌ、飽和重曹水２００ｍｌで順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、減圧下に濃縮してフィタニルトシレートを６１．３１ｇ得た。
【０１０１】
窒素気流下、ペンタエリスリトール３６．０９ｇ（２６５．１ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ２１０ｍｌに溶解し、氷冷しながら６０％ＮａＨ５．３ｇ（１３２．５ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。室温まで昇温し、１時間攪拌後、フィタニルトシレート３０．０ｇ（６６．２６ｍｍｏｌ）を滴下し、ＤＭＦ５５ｍｌで洗浄した。８０℃に加温してから４時間攪拌し、得られた反応液を減圧下に濃縮し、残液にエーテル５００ｍｌを加えて２回抽出溶解し、飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、無色透明でやや粘稠な液体状のモノＯ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）ペンタエリスリトールを６．３ｇ得た。ＨＰＬＣ分析による本品の純度は９９．５％以上であった。またＮＭＲ測定の結果は以下の通りであった。
【０１０２】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）δ：０．８−１．７（ｍ，３９Ｈ），２．６８（ｂｒ．ｓ，３Ｈ），３．４４（ｂｒ，４Ｈ），３．６９（ｂｒ．ｓ，６Ｈ）
【０１０３】
モノＯ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデカノイル）ペンタエリスリトール  ［モノＯ−（フィタノイル）ペンタエリスリトール；式（６）］の合成
【化９】
2006117553.tif 000015
【０１０４】
窒素雰囲気下、フィタン酸２．０ｇ、塩化メチレン１０ｍｌにピリジンを１滴加え、室温で塩化チオニル１．１４ｇを滴下した。滴下終了後、１時間還流し、減圧下に濃縮してフィタン酸クロリド約２ｇを得た。
【０１０５】
ペンタエリスリトール０．８８ｇ、ピリジン０．６９ｇ、乾燥１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン２５ｍｌを混合し、加熱溶解させた。室温まで冷却し、上記で得られたフィタン酸クロリド１．３２ｇを塩化メチレン５ｍｌに溶解した溶液を滴下し、滴下後１時間室温で攪拌した。得られた反応液に塩化メチレン１００ｍｌを加え、飽和食塩水１００ｍｌで５回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過及び減圧濃縮した。残存ジメチルイミダゾリジノンを除去してから、濃縮液をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、透明半固体状のモノＯ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデカノイル）ペンタエリスリトールを０．６４ｇ得た。ＨＰＬＣ分析による本品の純度は９９．４％であった。またＮＭＲ測定の結果は以下の通りであった。
【０１０６】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）δ：０．７−０．９（ｍ，１２Ｈ），０．９５（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．０−１．６（ｍ，２２Ｈ），１．９（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），２．１５（ｄｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，９Ｈｚ），２．３８（ｄｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，７Ｈｚ，１Ｈ），３．１７（ｂｒ．ｓ，２Ｈ），３．６２（ｓ，６Ｈ），４．１６（ｓ，２Ｈ）
【０１０７】
１−Ｏ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）エリスリトール［式（７）］の合成
【化１０】
2006117553.tif 000016
【０１０８】
窒素雰囲気下、５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカン酸１０ｇ、塩化メチレン２０ｍｌにピリジンを１滴加え、室温で塩化チオニル５．２ｇを滴下した。滴下終了後、１時間還流し、減圧下に濃縮して５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカン酸クロリドを１０．５ｇ得た。
【０１０９】
エリスリトール２．５６ｇ、ピリジン２．２１ｇ、乾燥ＤＭＦ７０ｍｌを混合し加熱溶解させた。室温まで冷却し、上記で得られた５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカン酸クロリド５ｇを塩化メチレン１０ｍｌに溶解した溶液を滴下し、滴下後１時間室温で攪拌した。得られた反応液に塩化メチレン１００ｍｌを加え、飽和食塩水で３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過、減圧濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、透明半固体状の１−Ｏ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）エリスリトールを２．８３ｇ得た。ＨＰＬＣ分析による本品の純度は、１−Ｏ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）エリスリトール９１．６％、２−Ｏ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）エリスリトール８．４％であった。またＮＭＲ測定の結果は以下の通りであった。
【０１１０】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）δ：０．８−０．９（ｍ，１５Ｈ），１．０−１．７（ｍ，２６Ｈ），２．１１（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），２．３３（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），２．６６（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），２．７５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），３．６−３．９（ｍ，４Ｈ），４．２９−４．３６（ｍ，２Ｈ）
【０１１１】
モノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデシル）ペンタエリスリトール［式（８）］の合成
【化１１】
2006117553.tif 000017
【０１１２】
窒素雰囲気下、ｐ−トルエンスルホニルクロリド１９．３ｇ（０．１０ｍｏｌ）の乾燥塩化メチレン１００ｍｌ溶液に５，９，１３，１７−テトラメチル−１−オクタデカノール３０ｇ（０．０９ｍｏｌ）とピリジン８．７２ｇ（０．１１ｍｏｌ）を乾燥塩化メチレン２００ｍｌに溶解した溶液を氷冷下に滴下した。滴下後、室温で一夜攪拌した後、得られた反応液を水２００ｍｌ、２Ｎ塩酸２００ｍｌ、飽和重曹水２００ｍｌで順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、減圧下に濃縮して（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデシル）トシレートを４２ｇ得た。
【０１１３】
窒素気流下、ペンタエリスリトール２５ｇ（０．１８ｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ２００ｍｌに溶解し、氷冷しながら６０％ＮａＨ３．７ｇ（０．０９ｍｏｌ）を数回に分けて添加した。添加後、室温で１時間攪拌してから５０℃に昇温し、上記で得られた（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデシル）トシレートの半量２１ｇを滴下し、ＤＭＦ５５ｍｌで洗浄した。８０℃に加温してから４時間攪拌し、得られた反応液を減圧下に濃縮し、残液にエーテル５００ｍｌを加えて２回抽出溶解し、飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、透明粘稠な液体状のモノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデシル）ペンタエリスリトールを７．３ｇ得た。ＨＰＬＣ分析による本品の純度は、９９．５％以上であった。またＮＭＲ測定の結果は以下の通りであった。
【０１１４】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）δ：０．８３−０．８８（ｍ，１５Ｈ），１．０−１．６（ｍ，２８Ｈ），２．８８（ｂｒ．ｓ，３Ｈ），３．３９−３．５２（ｍ，４Ｈ），３．７１（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，６Ｈ）
【０１１５】
モノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）ペンタエリスリトール［式（９）］の合成
【化１２】
2006117553.tif 000018
【０１１６】
ペンタエリスリトール３．８１ｇ、ピリジン２．２１ｇ、乾燥ＤＭＦ１２０ｍｌを混合し加熱溶解させた。室温まで冷却し、１−Ｏ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）エリスリトール［式（７）］の合成工程において得られた５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカン酸クロリド５ｇを塩化メチレン５ｍｌに溶解した溶液を滴下し、滴下後１時間室温で攪拌した。得られた反応液に塩化メチレン１００ｍｌを加え、飽和食塩水で３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過、減圧濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、下記の物性を有するモノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）ペンタエリスリトールを２．５０ｇ得た。ＨＰＬＣ分析による本品の純度は、９９．５％以上であった。またＮＭＲ測定の結果は以下の通りであった。
【０１１７】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）δ：０．８−０．９（ｍ，１５Ｈ），１．０−１．７（ｍ，２６Ｈ），２．３４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），３．０６（ｂｒ．ｓ，３Ｈ），３．６３（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，６Ｈ），４．１７（ｓ，２Ｈ）
【０１１８】
１−Ｏ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシド［略称：β−ＸｙｌＣ２２；式（１０）］の合成
【化１３】
2006117553.tif 000019
【０１１９】
１）アルゴン雰囲気下、β−キシローステトラアセテート３１８ｍｇを乾燥塩化メチレン６ｍｌに溶解し、０℃に冷却した。そこに四塩化スズ０．１２ｍｌを塩化メチレン１ｍｌに溶解した溶液を滴下し、室温で２０分間攪拌した後、−１０℃に冷却した。５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノール３２６．６ｍｇを塩化メチレン１ｍｌに溶解した溶液を滴下し、４時間攪拌した。反応液に重曹水を加え、塩化メチレンで３回抽出した。抽出液を水洗し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過後、濃縮し、カラムクロマトグラフィで精製することにより１−Ｏ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシドトリアセテートを９３ｍｇ得た。
【０１２０】
２）アルゴン雰囲気下、１−Ｏ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシドトリアセテート５８４．８ｍｇを乾燥メタノール５ｍｌに溶解し、ナトリウムメチラート５４ｍｇを加え、攪拌した。室温下、一夜攪拌した後、冷却して１Ｎ−塩酸１ｍｌを滴下した。反応液を減圧濃縮し、得られた残留物をクロロホルムに溶解してスラリー溶液とし、シリカゲルカラムクロマトグラフィで精製することにより、ワックス状の半固体として１−Ｏ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシドを４１３ｍｇ得た。また、１−Ｏ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシドを無水酢酸−ピリジン混合溶媒に溶解し、６０℃で２時間処理後、ガスクロマトグラフィーで純度を検定したところ、純度９６％であった。またＮＭＲ測定の結果は以下の通りであった。
【０１２１】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）δ：０．８４，０．８６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１５Ｈ），１．０−１．７（ｍ，３１Ｈ），３．２−３．７（ｍ，５Ｈ），３．８２（ｄｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，７．７Ｈｚ，１Ｈ），３．９４（ｄｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，５Ｈｚ，１Ｈ），４．２５（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）
【０１２２】
１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−α−Ｄ−キシロピラノシド［式（１１）］の合成
【化１４】
2006117553.tif 000020
【０１２３】
アルゴン雰囲気下、乾燥させたモレキュラーシーブ４Ａ（２ｇ）に、３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデカノール（５．１６ｇ、１７．３ｍＭ）を加え、２時間攪拌した後、減圧乾燥したテトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−キシロシド（５ｇ、１５．７ｍＭ）にアルゴン雰囲気下、１００ｍｌの塩化メチレンを加え、１０〜３０分攪拌した。１Ｍ塩化スズの塩化メチレン溶液１５．８ｍｌを滴下し室温で２０分撹拌した。次いで反応系を５℃まで冷却した後、３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデカノール（５．１６ｇ、１７．３ｍＭ）の２０ｍｌ塩化メチレン溶液を３０分程かけて滴下し、そのまま室温で４時間攪拌を続けた。この溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に注ぎ、塩化メチレン１００ｍｌで３回抽出した後に、水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濾過し、濃縮した。次いで混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した（溶出溶媒：ヘキサン−酢酸エチル混合溶媒）。
【０１２４】
得られたテトラアセテートをメタノール５．５ｍｌに溶解し、これに０．０５Ｍのナトリウムメチラート２．５ｍｌを加えた。室温で４．５時間攪拌した後、等量の１Ｎ塩酸を加えて中和した。溶液を濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製（溶出溶媒：クロロホルム−メタノール混合溶媒）した後、減圧乾燥し、無色透明で粘稠な液体を得た。
【０１２５】
この液体について純度測定を行なった。Ｃ，Ｈについての元素分析結果は、Ｃ：７０．１％（計算値６９．７％）Ｈ：１１．９％（計算値１１．８％）であり、分子構造からの計算値と良く一致した。また、ＮＭＲ測定の結果、α体純度は少なくとも９７％以上であり、β体のシグナルは観察されなかった。またＮＭＲ測定の結果は以下の通りであった。
【０１２６】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）δ：４．７８（１Ｈ，  ｄ，Ｊ＝３．７８Ｈｚ，Ｈ１），４．３８（１Ｈ，Ｈ５ａ），３．８３（１Ｈ，Ｈ４），３．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，Ｈ３），３．７（２Ｈ，Ｈ’１），３．４−３．８（５Ｈ，Ｈ２，Ｈ５ｂ，３＊ＯＨ）
【０１２７】
モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）ペンタエリスリトール［式（１２）］の合成
【化１５】
2006117553.tif 000021
【０１２８】
窒素気流下、ペンタエリスリトール２８．７ｇ（０．２１ｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ２００ｍｌに溶解し、氷冷しながら６０％ＮａＨ４．２２ｇ（０．１１ｍｏｌ）を数回に分けて添加した。添加後、室温で１時間攪拌した後、５０℃に昇温し、１−Ｏ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）エリスリトール［式（３）］の合成工程において得られた（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）トシレートの半量１７．２ｇを滴下し、ＤＭＦ５５ｍｌで洗浄した。８０℃に加温してから４時間攪拌し、得られた反応液を減圧下に濃縮し、残液にエーテル５００ｍｌを加えて２回抽出溶解し、飽和食塩水で２回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィで精製することにより、下記の物性を有するモノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）ペンタエリスリトールを５．８ｇ得た。
【０１２９】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）δ：０．８４６，０．８６７（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６．３Ｈｚ，１２Ｈ），１．０−１．６（ｍ，２１Ｈ），１．７２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），２．６８（ｂｒ．ｓ，２Ｈ），３．４２５（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．４７（ｓ，２Ｈ），３．７２（ｓ，６Ｈ）
【０１３０】
１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシド［Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）；式（１３）］の合成
【化１６】
2006117553.tif 000022
【０１３１】
アルゴン雰囲気下、乾燥させたモレキュラーシーブ４Ａ（２ｇ）に、減圧乾燥したテトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−キシロピラノシド（５ｇ、１５．７ｍＭ）、１００ｍｌの塩化メチレンを加え、１０〜３０分攪拌した。５〜８℃に冷却後、１Ｍ塩化スズの塩化メチレン溶液１６ｍｌを滴下し、室温で２０分撹拌した。−１０℃まで冷却した後、３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデカノール（４．６９ｇ、１５．７ｍＭ）の１６ｍｌ塩化メチレン溶液を３０分程かけて滴下し、そのまま４時間攪拌を続けた。この溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に注ぎ、塩化メチレン１００ｍｌで３回抽出した後に、水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濾過し、濃縮した。次いで混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した（溶出溶媒：ヘキサン−酢酸エチル混合溶媒）。
【０１３２】
得られた１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシドトリアセテートをメタノール５．５ｍｌに溶解し、これに０．０５Ｍのナトリウムメチラート２．５ｍｌを加えた。室温で４．５時間攪拌した後、等量の１Ｎ塩酸を加えて中和した。溶液を濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製（溶出溶媒：クロロホルム−メタノール混合溶媒）した後、減圧乾燥し、式（１３）（白色ワックス状の固体）を得た。ＮＭＲ測定により、１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−α−Ｄ−キシロピラノシドは混入していないことがわかった。
【０１３３】
［参考例２]
本発明において好適に使用できる両親媒性化合物について、下記表の通りＩＶ／ＯＶ値を算出した。
【０１３４】
【表１】
2006117553.tif 000023
2006117553.tif 000024
【０１３５】
また、それらの両親媒性化合物及びその混合物について後述の各解析で決定したクラフト温度を、それぞれ表２−１及び表２−２に示す。
【０１３６】
【表２】
2006117553.tif 000025
2006117553.tif 000026
2006117553.tif 000027
【０１３７】
［実施例１］  ＩＩ型キュービック液晶の形成及び解析−１
モノＯ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）ペンタエリスリトール［以下、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール；上記式（５）］と純水を混合デバイス中に加え、室温（２３℃）で４８時間かけて１００回以上の混合操作を行いながらインキュベートした。これにより均一に混合されたモノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール／水系サンプルを得た。このモノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール／水系サンプルは、外観上は透明のゲル状組成物であった。
【０１３８】
次に、このように調製したモノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール／水系サンプル（両親媒性化合物の濃度：７４．６質量％）について、偏光顕微鏡による観察を行なったところ、脂質部全領域においてキュービック液晶特有の光学等方性のテクスチャーが観察された（図３）。図３中、右領域は水であり、左領域は、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール／水系サンプルである。左領域は、水と同様に光学的に等方的であるが粘度の高い領域であった。この観察結果は、キュービック液晶の生成を示唆している。さらに、スライドグラスとカバーグラスの間に挟まれた上記サンプルに水を加えても、水と脂質部の光学等方性のテクスチャー領域は安定な界面を形成し、長時間放置しても脂質部の光学等方性テクスチャーは変化しなかった。これは、このキュービック液晶が過剰の水が存在する条件下でも安定であることを示す。この結果、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトールが形成するキュービック液晶はＩＩ型であることが示された。
【０１３９】
続いて、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール／水系サンプルについて、−４５℃から７０℃までの温度範囲で示差走査熱量分析（ＤＳＣ）を行なった。ＤＳＣ分析には、Ｓｅｉｋｏ  ＳＳＣ／５６０Ｕ示差走査熱量計（セイコー電子工業製）を使用した。上記方法で調製した７２．４質量％のモノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール／水系サンプルをＤＳＣセルに封入し、−４５℃で３時間にわたり冷却しながらインキュベートして、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトールの水和固体（以下水和個体と略す）を十分に形成させた。次にこの水和固体を０．５℃／分の昇温速度で加熱しながら、水和固体の融解挙動をＤＳＣ分析法によって調べた。その結果、図４に示すように−４０℃付近から始まり−２７℃付近で終了する水和固体の融解による吸熱ピークと、−１０〜１℃の温度範囲に観測される氷の融解による吸熱ピークが観察された。図４中、左のピークが水和固体の融解による吸熱ピーク、右のピークが氷の融解ピークである。７０℃まで測定したが他の熱転移は観察されなかった。また他の濃度においても本質的に同じ結果が得られた。これより、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトールのＴＫは０℃以下であると結論できた。
【０１４０】
次に、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール／水系サンプルについて、エックス線小角散乱（ＳＡＸＳ）によりキュービック液晶であることの確認を行なった。モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール／水系サンプルを石英製エックス線キャピラリーチューブに入れた後、キャピラリーの先端を酸素バーナーで封じ、ＳＡＸＳ測定に供した。ＳＡＸＳ測定は、ＲＵ−２００Ｘ線発生装置（Ｒｉｇａｋｕ製）を使用して波長０．１５４ｎｍで行なった。エックス線キャピラリーチューブに封入されたサンプルは、各測定温度で少なくとも１５時間以上インキュベートし熱平衡に到達した後、エックス線照射時間３０〜４５分でＳＡＸＳ測定を行なった。インキュベート時間を７２時間から最大５日まで延長してもＳＡＸＳ測定結果は変化しなかったので本実験条件は平衡状態のキュービック液晶を測定していることが確認できた。
【０１４１】
ＳＡＸＳ測定の結果、少なくとも１℃から４０℃までの温度範囲で、６本のシャープな散乱ピークが観察された。ピーク値の比は、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール濃度と温度により、結晶学的空間群Ｐｎ３ｍに属するキュービック液晶に特有の比
【数６】
2006117553.tif 000028
を示す場合（図５−Ａ）と、結晶学的空間群Ｉａ３ｄに属するキュービック液晶に特有の比
【数７】
2006117553.tif 000029
を与える場合（図５−Ｂ）があった。これより、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール／水系サンプルは結晶学的空間群Ｐｎ３ｍと結晶学的空間群Ｉａ３ｄに属するキュービック液晶を形成することが確認できた。なお、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール濃度が７３〜７４質量％（温度により値が異なる）以下の過剰の水が存在する条件で観測されるキュービック液晶の格子定数がモノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール濃度によらず一定になることから、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトールが形成するキュービック液晶は、水過剰条件でも安定な「ＩＩ型」のキュービック液晶であることが示された。
【０１４２】
図５には、１℃でのモノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール／水系サンプルのＳＡＸＳ測定結果を示した。１℃では、−５０℃で観察された水和固体のピークが消失しており、キュービック液晶に特有の比を示す６本のピークのみが観察された。
図５−Ａ：５６．７質量％；Ｐｎ３ｍキュービック液晶；格子定数＝８．２ｎｍ
図５−Ｂ：７４．６質量％；Ｉａ３ｄキュービック液晶；格子定数＝１２．３ｎｍ
【０１４３】
さらに、ＳＡＸＳ測定結果に基づいてモノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール／水系サンプルにおけるキュービック液晶構造のモノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトールの二重膜のｄｈｃ値を算出したところ、１．１７±０．１ｎｍであった。この値は、Ｏ−フィタニル鎖を疎水鎖とする両親媒性脂質が作る両親媒性脂質二分子膜のｄｈｃ値が、１．２±０．１ｎｍであること［Hato, M. Minamikawa, H., Tamada, K., Baba, T., and Y. Tanabe, Adv. Colloid Interface Sci., 80, 233-270 (1999年)］と矛盾しない。これにより、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトールが形成するキュービック液晶がバイコンティニュアス型であることが確認できた。
【０１４４】
以上の実験でキュービック液晶の形成が確認されたサンプル例（両親媒性脂質の濃度別）は以下の表３の通りであった。
【０１４５】
【表３】
2006117553.tif 000030
【０１４６】
図６には、以上の測定結果をもとに決定したモノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール／水系の濃度−温度依存性部分相図を示した。
【０１４７】
なお本明細書における相図中の記号の意味は以下の通りである。
Ｗ          ：  水相（微量の両親媒性化合物が溶解した希薄水溶液）
ＨＩＩ        ：  逆ヘキサゴナル液晶
Ｐｎ３ｍ    ：  Ｐｎ３ｍキュービック液晶
Ｉａ３ｄ    ：  Ｉａ３ｄキュービック液晶
Ｌα         ：  ラメラ液晶
ＬＣ        ：  構造が特定出来ない液晶
ＦＩ        ：  等方的液体相（キュービック液晶ではない）
（但し、２種の記号を記載している部分は、それらの共存領域である。）
【０１４８】
［実施例２］  ＩＩ型キュービック液晶の形成及び解析−２
モノＯ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデカノイル）ペンタエリスリトール［以下、モノＯ−（フィタノイル）ペンタエリスリトール；上記式（６）］と純水を、実施例１と同様の手順に従って均一に混合し、モノＯ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデカノイル）ペンタエリスリトール／水系サンプルを得た。このモノＯ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデカノイル）ペンタエリスリトール／水系サンプルについて実施例１と同様にして偏光顕微鏡下でのペネトレイション実験、ＳＡＸＳ測定及びＳＡＸＳ測定結果に基づくｄｈｃ値の算出を行なった結果、少なくとも１〜６５℃の温度範囲においてバイコンティニュアス型でありＩＩ型のＰｎ３ｍキュービック液晶が安定に形成されることが確認された。５８．９質量％のモノＯ−（フィタノイル）ペンタエリスリトール／水系におけるキュービック液晶の格子定数は、１０．６ｎｍ（２５℃）〜８．３ｎｍ（５５℃）であった。
【０１４９】
このモノＯ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデカノイル）ペンタエリスリトール／水系サンプルについて示差走査熱量分析（ＤＳＣ）を行なったところ、−８℃付近から始まり−２．５℃で終了するモノＯ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデカノイル）ペンタエリスリトールの水和固体の融解によるピークと０℃付近における氷の融解ピーク以外の熱転移は観察されなかった。この結果は調べた全ての両親媒性化合物濃度において本質的に同じであった。従ってモノＯ−（フィタノイル）ペンタエリスリトールのＴＫは０℃以下であると結論された。
【０１５０】
本実施例でキュービック液晶の形成が確認されたサンプルは以下の通りであった。
【０１５１】
【表４】
2006117553.tif 000031
【０１５２】
［実施例３］  ＩＩ型キュービック液晶の形成及び解析−３
１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデカノイル）エリスリトール［以下、１−Ｏ−（フィタノイル）エリスリトール；上記式（４）］と純水を、実施例１の手順に従って混合し、１−Ｏ−（フィタノイル）エリスリトール／水系サンプルを得た。この１−Ｏ−（フィタノイル）エリスリトール／水系サンプルについて実施例１と同様にして偏光顕微鏡下でのペネトレイション実験、ＳＡＸＳ測定及びＳＡＸＳ測定結果に基づくｄｈｃ値の算出を行なった結果、少なくとも１℃から６０℃までの温度範囲で、バイコンティニュアス型でありＩＩ型のＰｎ３ｍキュービック液晶又はＩａ３ｄキュービック液晶が安定に形成されることが確認された。５２．３質量％の１−Ｏ−（フィタノイル）エリスリトールによって形成されたＰｎ３ｍキュービック液晶の格子定数は、１１．４ｎｍ（１℃）、１１．３ｎｍ（２５℃）、１０．１ｎｍ（４５℃）であった。
【０１５３】
この１−Ｏ−（フィタノイル）エリスリトール／水系サンプルについて示差走査熱量分析（ＤＳＣ）を行なったところ、０℃付近の氷の融解による吸熱ピークと、それに重なった−０．６℃付近の１−Ｏ−（フィタノイル）エリスリトール水和個体の融解による吸熱ピークが観察された。これより、１−Ｏ−（フィタノイル）エリスリトールのＴＫは０℃以下であることが結論された。
【０１５４】
以上の実験でキュービック液晶の形成が確認されたサンプルは以下の通りであった。
【０１５５】
【表５】
2006117553.tif 000032
【０１５６】
［実施例４］  ＩＩ型キュービック液晶の形成及び解析−４
１−Ｏ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）エリスリトール［上記式（３）］と純水を、実施例１の手順に従って混合し、１−Ｏ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）エリスリトール／水系サンプルを得た。この１−Ｏ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）エリスリトール／水系サンプルについて実施例１と同様にして偏光顕微鏡下でのペネトレイション実験、ＳＡＸＳ測定及びＳＡＸＳ測定結果に基づくｄｈｃ値の算出を行なった結果、少なくとも１℃から７５℃までの温度範囲で、バイコンティニュアス型でありＩＩ型のＰｎ３ｍキュービック液晶又はＩａ３ｄキュービック液晶が安定に形成されることが確認された。５３．７質量％の１−Ｏ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）エリスリトール／水系におけるＩａ３ｄキュービック液晶の格子定数は、１７．３ｎｍ（２０℃）、１７．２ｎｍ（３５℃）、１７．１ｎｍ（４０℃）であった。
【０１５７】
この１−Ｏ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）エリスリトール／水系サンプルの示差走査熱量分析（ＤＳＣ）を実施例１と同様に行なったところ、０℃付近の氷の融解による吸熱ピークのみが観察された。これより、１−Ｏ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）エリスリトールのＴＫは０℃以下であることが強く示唆された。
【０１５８】
以上の実験でキュービック液晶の形成が確認されたサンプルは以下の通りであった
【０１５９】
【表６】
2006117553.tif 000033
【０１６０】
［実施例５］  ＩＩ型キュービック液晶の形成及び解析−５
１−Ｏ−（３，７，１１−トリメチルドデシル）エリスリトール［上記式（２）］と純水を、実施例１と同様の手順に従って混合し、１−Ｏ−（３，７，１１−トリメチルドデシル）エリスリトール／水系サンプルを得た。この１−Ｏ−（３，７，１１−トリメチルドデシル）エリスリトール／水系サンプルについて実施例１と同様にして偏光顕微鏡下でのペネトレイション実験、ＳＡＸＳ測定及びＳＡＸＳ測定結果に基づくｄｈｃ値の算出を行なった結果、少なくとも１℃から６０℃までの温度範囲で、バイコンティニュアス型でありＩＩ型のＰｎ３ｍキュービック液晶が安定に形成されることが確認された。
【０１６１】
上記実験でキュービック液晶の形成が確認されたサンプル例は以下の通りであった。
【０１６２】
【表７】
2006117553.tif 000034
【０１６３】
［実施例６］  ＩＩ型キュービック液晶の形成及び解析−６
１−Ｏ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）エリスリトール［上記式（７）］と純水を、実施例１と同様な方法で均一に混合して、１−Ｏ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）エリスリトール／水系サンプルを得た。この１−Ｏ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）エリスリトール／水系サンプルについて実施例１と同様にして偏光顕微鏡下でのペネトレイション実験、ＳＡＸＳ測定及びＳＡＸＳ測定結果に基づくｄｈｃ値の算出を行なった結果、少なくとも１℃から６０℃までの温度範囲においてバイコンティニュアス型でありＩＩ型のＰｎ３ｍキュービック液晶が安定に形成されることが確認された。
【０１６４】
この１−Ｏ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）エリスリトール／水系サンプルについて示差走査熱量分析（ＤＳＣ）を行なったが、０℃付近の氷の融解に基づく吸熱ピーク以外の熱転移は観察されなかった。また、実施例１と同様に低温度で形成された１−Ｏ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）エリスリトール水和固体を１℃でインキュベートしたところ、キュービック液晶へと転移したことから、１−Ｏ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）エリスリトールのＴＫは０℃以下であると結論できた。
【０１６５】
以上の実験でキュービック液晶の形成が確認されたサンプル例は以下の通りであった。
【０１６６】
【表８】
2006117553.tif 000035
【０１６７】
［実施例７］  ＩＩ型キュービック液晶の形成及び解析−７
モノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデシル）ペンタエリスリトール［上記式（８）］と純水を、実施例１と同様な方法で均一に混合したモノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデシル）ペンタエリスリトール／水系サンプルを得た。このモノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデシル）ペンタエリスリトール脂質／水系サンプルについて実施例１と同様にして偏光顕微鏡下でのペネトレイション実験、ＳＡＸＳ測定及びＳＡＸＳ測定結果に基づくｄｈｃ値の算出を行なった結果、バイコンティニュアス型でありＩＩ型のＰｎ３ｍキュービック液晶が安定に形成されることが確認された。
【０１６８】
このモノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデシル）ペンタエリスリトール／水系サンプルについて示差走査熱量分析（ＤＳＣ）を行なったところ、０℃付近の氷の融解に基づく吸熱ピーク以外の熱転移は観察されなかった。また、実施例１と同様に低温度で形成したモノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデシル）ペンタエリスリトールの水和固体を１℃でインキュベートしたところ、キュービック液晶へと転移したことから、モノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデシル）ペンタエリスリトールのＴＫは０℃以下であると結論できた。
【０１６９】
以上の実験でキュービック液晶の形成が確認されたサンプル例は以下の通りであった。
【０１７０】
【表９】
2006117553.tif 000036
【０１７１】
［実施例８］  ＩＩ型キュービック液晶の形成及び解析−８
モノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）ペンタエリスリトール［上記式（９）］と純水を、実施例１と同様の手順に従って均一に混合し、モノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）ペンタエリスリトール／水系サンプルを得た。このモノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）ペンタエリスリトール／水系サンプルについて実施例１と同様にして偏光顕微鏡下でのペネトレイション実験、ＳＡＸＳ測定及びＳＡＸＳ測定結果に基づくｄｈｃ値の算出を行なった結果、バイコンティニュアス型でありＩＩ型のＰｎ３ｍキュービック液晶が安定に形成されることが確認された。
【０１７２】
このモノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）ペンタエリスリトール／水系サンプルについて示差走査熱量分析（ＤＳＣ）を行なったところ、脂質水和固体の融解による吸熱ピークは−２０℃付近から始まり−１５℃で終了した。それ以上の温度では、０℃付近の氷の融解に基づく吸熱ピーク以外の熱転移は観察されなかった。これにより、モノＯ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデカノイル）ペンタエリスリトールのＴＫは０℃以下であると結論できた。
【０１７３】
上記実験でキュービック液晶の形成が確認されたサンプル例は以下の通りであった。
【０１７４】
【表１０】
2006117553.tif 000037
【０１７５】
［実施例９］  ＩＩ型キュービック液晶の形成及び解析−９
１−Ｏ−（５，９，１３，１７−テトラメチルオクタデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシド［以下、β−ＸｙｌＣ２２；上記式（１０）］と純水を、実施例１と同様の手順に従って均一に混合し、β−ＸｙｌＣ２２／水系サンプルを得た。このβ−ＸｙｌＣ２２／水系サンプルについて実施例１と同様にして偏光顕微鏡下でのペネトレイション実験、ＳＡＸＳ測定及びＳＡＸＳ測定結果に基づくｄｈｃ値の算出を行なった結果、少なくとも１℃から４５℃までの温度範囲においてバイコンティニュアス型でありＩＩ型のＰｎ３ｍキュービック液晶及びＩａ３ｄキュービック液晶が安定に形成されることが確認された。またピーク値から算出した６１．５質量％のβ−ＸｙｌＣ２２濃度のキュービック液晶における格子定数は、１０．１ｎｍ（１℃）、９．９ｎｍ（３０℃）、９．５ｎｍ（４０℃）であった。
【０１７６】
このβ−ＸｙｌＣ２２／水系サンプルについて、実施例１と同様に示差走査熱量分析（ＤＳＣ）を行なったところ、β−ＸｙｌＣ２２水和固体の融解による吸熱ピークは、−１３℃付近から始まり−９℃で終了した。それ以上の温度では、０℃付近の氷の融解に基づく吸熱ピーク以外の一切の熱転移は観察されなかった。これにより、β−ＸｙｌＣ２２のＴＫは０℃以下であると結論できた。
【０１７７】
以上の実験によりキュービック液晶の形成が確認されたサンプルは以下の通りである。
【０１７８】
【表１１】
2006117553.tif 000038
【０１７９】
［実施例１０］  ＩＩ型キュービック液晶の形成及び解析−１０
１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−α−Ｄ−キシロピラノシド［以下、α−Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）；上記式（１１）］と純水を、実施例１の手順に従って混合し、α−Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）／水系サンプルを得た。
【０１８０】
このように調製したα−Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）／水系サンプルについて偏光顕微鏡による観察を行なった結果、水との界面には逆ヘキサゴナル液晶が形成されるが、その内部の両親媒性化合物濃度の高い領域にはキュービック液晶が形成されることが示された。またα−Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）／水系サンプルで水との界面に形成されるのが逆ヘキサゴナル液晶であることから、α−Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）が形成するキュービック液晶はＩＩ型であることが示された。さらにこのα−Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）／水系サンプルについて実施例１と同様にＳＡＸＳ測定及びＳＡＸＳ測定結果に基づくｄｈｃ値の算出を行なったところ、少なくとも７８〜８４質量％の濃度範囲、少なくとも１℃から４５℃までの温度範囲において、バイコンティニュアス型のＩａ３ｄキュービック液晶が形成されることが確認された。α−Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）濃度８４．２質量％のα−Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）／水系におけるキュービック液晶の格子定数は、９．８ｎｍ（１℃）、９．７ｎｍ（２５℃）、９．６ｎｍ（４０℃）であった。
【０１８１】
α−Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）／水系サンプルの示差走査熱量分析（ＤＳＣ）を行なったところ、−１０℃付近から始まり−１℃付近のα−Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）の転移による吸熱ピークとそれに重なった０℃における水の融解ピークのみが観測された。これより、α−Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）のＴＫは０℃以下であると結論できた。
【０１８２】
以上の実験でキュービック液晶の形成が確認されたサンプルは以下の通りであった。
【０１８３】
【表１２】
2006117553.tif 000039
【０１８４】
図７に、以上の測定結果をもとに決定した、α−Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）／水系の濃度−温度依存性部分相図を示した。
【０１８５】
［実施例１１］  ＩＩ型キュービック液晶の形成及び解析−１１
モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）ペンタエリスリトール［上記式（１２）］と純水を、実施例１と同様の手順に従って均一に混合し、モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）ペンタエリスリトール／水系サンプルを得た。このモノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）ペンタエリスリトール／水系サンプルについて実施例１と同様にして偏光顕微鏡下でのペネトレイション実験、ＳＡＸＳ測定及びＳＡＸＳ測定結果に基づくｄｈｃ値の算出を行なった結果、少なくとも１℃〜４℃の温度範囲及びモノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）ペンタエリスリトール濃度５５．３質量％において、バイコンティニュアス型でありＩＩ型のＰｎ３ｍキュービック液晶が安定に形成されることが確認された。
【０１８６】
このモノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）ペンタエリスリトール／水系サンプルについて示差走査熱量分析（ＤＳＣ）を実施例１と同様に行なったところ、−１０℃付近から始まり１℃で終了する吸熱ピークのみが観察された。これより、モノＯ−（５，９，１３−トリメチルテトラデシル）ペンタエリスリトールのＴＫは０℃以下であると結論された。
【０１８７】
［比較例１］  ＩＩ型ヘキサゴナル液晶の形成及び解析
１−Ｏ−（３，７，１１−１５−テトラメチルヘキサデシル）グリセロール［ＩＶ／ＯＶ＝０．５２３８］と純水を、実施例１と同様の手順に従って均一に混合し、１−Ｏ−（３，７，１１−１５−テトラメチルヘキサデシル）グリセロール／水系サンプルを得た。この１−Ｏ−（３，７，１１−１５−テトラメチルヘキサデシル）グリセロール／水系サンプルについて偏光顕微鏡観察を行なったところ、１−Ｏ−（３，７，１１−１５−テトラメチルヘキサデシル）グリセロール／水界面にはＩＩ型ヘキサゴナル液晶に特有のテクスチャーが観察され、キュービック液晶特有の光学等方性テクスチャーは全く観察されなかった。このことから、これらの１−Ｏ−（３，７，１１−１５−テトラメチルヘキサデシル）グリセロールがキュービック液晶ではなくＩＩ型ヘキサゴナル液晶を形成することが示された。
【０１８８】
［比較例２］  ラメラ液晶の形成及び解析
３，７，１１−トリメチルドデカン−１，２，３−トリオール  ［ＩＶ／ＯＶ＝１．１５３９］（下記式（１４））  と純水を、実施例１と同様の手順に従って均一に混合し、３，７，１１−トリメチルドデカン−１，２，３−トリオール／水系サンプルを得た。
【０１８９】
【化１７】
2006117553.tif 000040
【０１９０】
１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド［ＩＶ／ＯＶ＝１．０５２］と純水を、実施例１と同様の手順に従って均一に混合し、１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド／水系サンプルを得た。
【０１９１】
１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−マルトシド［ＩＶ／ＯＶ＝１．５１６７］と純水を、実施例１と同様の手順に従って均一に混合し、１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−マルトシド／水系サンプルを得た。
【０１９２】
このようにして調製した両親媒性脂質／水系サンプルのそれぞれについて、偏光顕微鏡観察を行なったところ、いずれのサンプルでも両親媒性脂質／水界面からラメラ液晶特有のミエリン形の成長が観察された。一方、キュービック液晶特有の等方性テクスチャーは全く観察されなかった。従って、これらの両親媒性脂質がラメラ液晶を形成することが示された。
【０１９３】
［実施例１２］  二成分混合系のＩＩ型キュービック液晶の形成及び解析−１
総両親媒性化合物濃度が６０質量％（水過剰条件）となるように、１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−α−Ｄ−キシロピラノシド（上記式（１１）；以下、α体と略称する。ＴＫは０℃以下。）と１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシド（上記式（１３）；以下、β体と略称する。ＴＫは約１０℃。）を、実施例１と同様の手順に従って純水中に均一に混合して、両親媒性化合物／水系サンプルを得た。この両親媒性化合物／水系サンプルについて実施例１と同様に調べたところ、α体とβ体の混合系によってＰｎ３ｍキュービック液晶が形成されることが示された。
【０１９４】
サンプルの温度−両親媒性化合物組成と形成されるキュービック液晶構造との関係を図８に示した。図８の二つの線に挟まれた領域（Ｐｎ３ｍ）においてＰｎ３ｍキュービック液晶が形成された。
【０１９５】
図８に示される通り、両親媒性化合物総量に対するα体の割合が増加するにつれて、Ｐｎ３ｍキュービック液晶が安定に存在できる最低温度（すなわちクラフト温度（ＴＫ））と最高温度はほぼ同じ傾きで低下した。両親媒性化合物総量に対してα体のモル分率が０．２の場合は４〜６５℃の範囲、０．３５の場合は０〜５８℃の範囲、０．６の場合は少なくとも−６〜４７℃の範囲で、安定なＰｎ３ｍキュービック液晶が形成された。この結果から、α体のモル分率が０．２以上のα体とβ体の混合系である１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−Ｄ−キシロピラノシドによって形成されるキュービック液晶は、４℃でも熱力学的に安定に形成されることが示された。また、β体とα体とを混合することによって、β体単独の場合のＴＫよりも低い温度でキュービック液晶を形成させることができることも示された。
【０１９６】
［実施例１３］  二成分混合系のＩＩ型キュービック液晶の形成及び解析−２
モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール［上記式（５）］は、室温において、１質量％〜７５質量％（１相領域は７３〜７５質量％）の濃度範囲ではバイコンティニュアス型でありＩＩ型のＰｎ３ｍキュービック液晶を形成し、７６質量％から少なくとも８５質量％まではＩａ３ｄキュービック液晶を形成する。モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトールの場合、ＴＫは０℃以下であるが、キュービック液晶が形成される最高温度は４０℃であり、高温域での安定性が低めであると同時に、そのキュービック液晶構造は柔らかく、水性溶媒中の塩や蛋白質等により比較的壊れやすい。
【０１９７】
一方、１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシド［上記式（１３）］は、過剰の水存在下でバイコンティニュアス型でありＩＩ型のＰｎ３ｍキュービック液晶を形成することができ、その液晶構造が形成される最高温度は７５℃であって高温域でも安定性が高い。さらにキシロース部の強い相互作用のためキュービック液晶構造も強固で、水性溶媒中の塩やタンパク質等が存在してもキュービック液晶構造は安定に保たれる。一方で、ＴＫは約１０℃であり、低温域で液晶が形成されない。
【０１９８】
かかる物性の異なる２種類の両親媒性化合物を用いて、二成分混合系のＩＩ型キュービック液晶を以下の様にして形成させた。
【０１９９】
まず、総両親媒性化合物濃度が６０質量％（水過剰条件）となるように、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトールと、１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシドを、実施例１と同様の手順に従って純水中に均一に混合して、両親媒性化合物同士の量比を変えた複数の両親媒性化合物／水系サンプルを得た。それらの両親媒性化合物／水系サンプルについて実施例１と同様に調べたところ、二成分混合系によってＰｎ３ｍキュービック液晶が形成されることが示された。
【０２００】
得られたサンプルの温度−両親媒性化合物組成と形成されるキュービック液晶構造との関係を図９に示した。二つの曲線に挟まれた領域（Ｐｎ３ｍ）においてＰｎ３ｍキュービック液晶が形成された。
【０２０１】
図９に示される通り、両親媒性化合物総量に対するモノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトールの割合が増加するにつれて、キュービック液晶が安定に存在できる最低温度と最高温度はほぼ同じ傾きで低下した。モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトールのモル分率が０．２の場合は４〜７２℃の範囲、０．４の場合は０〜７０℃の範囲、０．８の場合は少なくとも０〜６０℃の範囲で、バイコンティニュアス型でありＩＩ型のＰｎ３ｍキュービック液晶が安定に形成された。このように、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトールを、モル分率が０．２以上となる様に１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシドと混合することにより、低温（例えば４℃）でも熱力学的に安定なキュービック液晶が形成された。
【０２０２】
格子定数は、１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシドのみから形成されるキュービック液晶では９．２ｎｍであったが、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトールの混合比率の増加に伴って連続的に７．０６ｎｍ（モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトールが１００質量％）まで少なくなった。またこれに伴ってキュービック液晶の水チャネルの直径は、３．８ｎｍから２．５ｎｍまで変化した。この結果から、複数の両親媒性化合物を混合して用いることにより、キュービック液晶の微細構造を意図的に変化させることができることが示された。
【０２０３】
［実施例１４］  三成分混合系のＩＩ型キュービック液晶の形成及び解析−３
５質量％のα体を含む１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシド（β体）に、ラメラ液晶を形成する３，７，１１−トリメチルドデカン−１，２，３−トリオール（以下、第二成分と呼ぶ）を表１３に記載の割合で、実施例１と同様の手順に従って純水中に均一に混合し、両親媒性脂質／水系サンプルを得た。この両親媒性脂質／水系サンプルについて実施例１と同様に調べたところ、少なくとも第二成分の含有量が５０質量％に達するまでは、三成分混合系によってＰｎ３ｍキュービック液晶が形成されることが確認できた。また、実施例１と同様のＤＳＣ測定により、この三成分両親媒性脂質／水系サンプルにおいて、ＴＫは第二成分の含有量の増加に伴って低下し、第二成分が２０質量％以上になるとＴＫは０℃以下になることが示された。結果を表１３に示す。
【０２０４】
【表１３】
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【０２０５】
［実施例１５］  リソソーム酵素を包埋したキュービック液晶組成物の製造、及びリソソーム酵素の徐放性試験
ヒトα−ガラクトシダーゼＡ（α−ＧＡＬＡ）及びヒトβガラクトシダーゼ（β−ＧＡＬ）を、国際公開ＷＯ ０２／１０３０２７に開示されている、酵母細胞を用いてマンノース−６−リン酸含有酸性糖鎖が付加された組換えタンパク質を製造する方法により、それぞれ製造した。
【０２０６】
得られたα−ガラクトシダーゼＡ（α−ＧＡＬＡ）及びβガラクトシダーゼ（β−ＧＡＬ）を、酵素濃度が１ｍｇ／ｍｌとなるようにそれぞれＰＢＳ（Phosphate Buffered Saline）に溶解した。次いでこのα−ＧＡＬＡ溶液又はβ−ＧＡＬ溶液を、１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシド［β−Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）と略す］との質量比が３５：６５となるように添加して、よく混合することにより、β−Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）キュービック液晶組成物にα−ＧＡＬＡ又はβ−ＧＡＬを包埋させた複合体を作製した。
【０２０７】
このキュービック液晶に包埋したα−ＧＡＬＡ、β−ＧＡＬの酵素活性については、α−ＧＡＬＡの基質として４−メチルウンベリフェリルα−Ｄ−ガラクトピラノシド、β−ＧＡＬの基質として４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−ガラクトピラノシドを使用し、反応産物である４−メチルウンベリフェロンを蛍光顕微鏡観察することによって検出した。
【０２０８】
まずキュービック液晶組成物にα−ＧＡＬＡ又はβ−ＧＡＬを包埋した複合体をスライドガラス上に約１ｍｇ載せ、その上からカバーガラスをかぶせて軽く押さえ、伸展させた。そこに、上記基質を０．１５Ｍ酢酸ナトリウム溶液（ｐＨ４．６）に溶解した基質溶液（１．７ｍｇ／ｍｌ）を１０μｌ添加した後蛍光顕微鏡で経時的に観察を行なった。
【０２０９】
観察の結果、キュービック液晶組成物にα−ＧＡＬＡ又はβ−ＧＡＬを包埋した複合体のいずれにおいても、液晶内部で反応産物に由来する蛍光が認められたため（図１０）、包埋されたα−ＧＡＬＡ又はβ−ＧＡＬがキュービック液晶中で活性を有することが示された。分子量４８０００のα−ＧＡＬＡは二量体、分子量１１６４００のβ−ＧＡＬは四量体を形成して機能することが分かっていることから、このキュービック液晶は少なくとも分子量９６０００〜４６５６００の蛋白質を活性を維持した状態で包埋できることが立証された。
【０２１０】
さらに、キュービック液晶に包埋したα−ＧＡＬＡの徐放性について調べた。血中での徐放性を想定した実験系とするため、上記と同様にして製造したα−ＧＡＬＡ（使用酵素濃度：２ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ）を包埋するキュービック液晶組成物１０ｍｇをウシ血清１ｍｌに添加し、１０℃のインキュベーター内で振盪した。振盪開始後、０、２、６、２４、４８時間目に１０μｌずつサンプルを採取してα−ＧＡＬＡ活性を測定した。
【０２１１】
検出には、採取したサンプル１０μｌに、４−メチルウンベリフェリルα−Ｄ−ガラクトピラノシド基質溶液（２６ｍｇ／ｍｌ）を６０μｌ添加して３７℃で３０分間反応させた後、７００μｌの０．２Ｍグリシン（ｐＨ１０．７）ＮａＯＨ溶液を加えて反応を停止させた。反応産物４−メチルウンベリフェロンを、蛍光分光器で励起波長３６５ｎｍ、蛍光波長４５０ｎｍにて測定した。２ｍｇ／ｍｌ及び０．２ｍｇ／ｍｌの濃度でα−ＧＡＬＡを包埋させたキュービック液晶組成物における徐放性試験の結果を、図１１のＡ及びＢにそれぞれ示す。
【０２１２】
図１１に示される通り、２ｍｇ／ｍｌの濃度でα−ＧＡＬＡを包埋させたキュービック液晶組成物では、振盪開始直後から徐々にα−ＧＡＬＡ活性の上昇が認められ、２４時間後には包埋量の約４％に相当する酵素活性が示された。また０．２ｍｇ／ｍｌの濃度でα−ＧＡＬＡを包埋させたキュービック液晶組成物では、同様に振盪開始直後から徐々にα−ＧＡＬＡ活性の上昇が認められ、４８時間後には包埋量の約５０％に相当する酵素活性が示された。
【０２１３】
［実施例１６］  酵素が包埋されたキュービック液晶を投与したマウスの血中動態
３匹を１群とする９群の９週齢の雄マウスＳｌｃ：ＩＣＲ系統（ＳＰＦ）に、実施例１５と同様にして製造したヒトα−ＧＡＬＡを包埋するキュービック液晶組成物（１匹当たり３０ｍｇ）を腹腔内投与した。投与の０、２、４、６、１２、２４、３２、４８、７２時間後、９群のうち１群のマウスから、エーテル麻酔下で腹部大動脈より少なくとも０．４ｍＬを採血した。対照としては、キュービック液晶組成物の代わりにα−ＧＡＬＡを生理的食塩水で希釈した溶液を同系統のマウスに腹腔内投与し、投与の２、６、２４時間後に採血を行なった。
【０２１４】
採取した血液は直ちに氷水中に３０分以上置いた後、３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、上澄（血清）を半量ずつ２本に分けて分取し、次の試験まで−２０℃で保存した。この血清１０μｌに４−メチルウンベリフェリルα−Ｄ−ガラクトピラノシド基質溶液を６０μｌ添加して３７℃で３０分間反応させた後、７００μｌの０．２Ｍグリシン（ｐＨ１０．７）ＮａＯＨ溶液を加えて反応を停止させた。反応産物４−メチルウンベリフェロンを、蛍光分光器で励起波長３６５ｎｍ、蛍光波長４５０ｎｍにて測定した。結果を図１２に示す。図１２中、黒塗りの三角（▲）はキュービック液晶組成物投与群、白抜きの丸（○）は対照サンプル投与群を表す。
【０２１５】
この結果、α−ＧＡＬＡを包埋するキュービック液晶組成物を投与したマウスの血中では、投与後１２時間目のころからα−ＧＡＬＡ活性が上昇した。このα−ＧＡＬＡ活性は投与後４８時間目にピークに達し、さらに投与後７２時間目においても同じレベルで維持されていた。ピーク時の上昇の割合は投与直前（０時間）に対して約１１３％であった。対照サンプルを投与したマウスの血中では、投与後６時間目にα−ＧＡＬＡ活性はピークに達し（投与直前に対し約１９７％）、投与後１２時間目以降には激減した。
【０２１６】
α−ＧＡＬＡを包埋するキュービック液晶組成物から投与された場合、投与直後の血中α−ＧＡＬＡの急上昇が抑制されるため、血中α−ＧＡＬＡの急上昇による副作用の抑制効果が期待出来る。さらに、α−ＧＡＬＡの血中濃度が、長時間にわたって一定濃度に保持出来るため、投与頻度の低減ひいては患者のQOL向上が期待出来る。
【０２１７】
［参考例３］  単回急性経口毒性試験
α−体を５％含有する１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−キシロシド［β−Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）］２．１ｇおよびプルロニックＦ１２７  ０．２２ｇをアセトンに均一に溶解させた後、減圧下でアセトンを除去してβ−Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）とプルロニックＦ−１２７（［ＰＥＧ］９９−［ＰＰＯ］６７−［ＰＥＯ］９９）との混合固体を得た。この混合固体に９．４７ｇの水を加え、マグネチックスターラーで攪拌しキュービック液晶分散液を得た。これを６週齢の雌性ＳＤ系ラット（５匹を１群とした）に体重１ｋｇ当たり２０００ｍｇの投与量で投与（濃度２０質量％のキュービック液晶分散液を体重１ｋｇ当たり投与液量約１０ｍＬで投与）し、投与後１４日間経過観察を行なった。その結果、３例／５例において投与後３０分以内に呼吸緩除が認められ、投与後２時間以内に軟便又は粘液便が観察された。しかし呼吸緩除は投与後４時間までに、軟便又は粘液便は投与後５時間までにそれぞれ消失が確認され、投与翌日以降の観察期間中に異常は認められなかった。さらに、観察期間中正常な体重増加を示した。また、死亡は認められず、観察期間終了後の剖検所見でもいずれの個体にも異常は認められなかった。
この結果から、当該化合物の急性経口毒性はない、あるいは極めて小さいと結論出来る。
【０２１８】
［参考例４］  キュービック液晶組成物を含む注射剤の調製
１ｍｌの生理的食塩水に１．９ｇの１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−α−Ｄ−キシロピラノシド［５質量％］と１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシド［９５質量％］の二成分の両親媒性化合物を実施例１２と同様な方法で混合し、透明なゲル状キュービック液晶組成物を得た。得られたキュービック液晶組成物１ｇに、１．２質量％のプルロニックＦ１２７（［ＰＥＧ］９９−［ＰＰＯ］６７−［ＰＥＯ］９９）を含む生理的食塩水を全体として１０ｇとなる量まで添加し、マグネチックスターラーで３時間撹拌することにより混合して、平均粒子径３２０ｎｍのキュービック液晶微粒子を含む乳白色の液晶分散液を得た。この液晶分散液を１．２質量％プルロニックＦ１２７（［ＰＥＧ］９９−［ＰＰＯ］６７−［ＰＥＯ］９９）含有生理的食塩水で希釈して５質量％と２質量％のキュービック液晶分散液を調製し、それをさらに孔径０．４５μｍのフィルターで濾過した。これらのキュービック液晶分散液を、３匹を一群としたマウス（雄、５週齢）の尾静脈内に、２７Ｇ翼状針およびシリンジポンプを用いて０．１ｍｌ／分の速度で投与した。使用したキュービック液晶分散液の投与量及び濃度は、１個体当たり０．２ｍｌ（２質量％）、０．４ｍｌ（２質量％）、０．１ｍｌ（５質量％）、０．２ｍｌ（５質量％）、０．４ｍｌ（５質量％）とした。投与日を０日と起算し、２８日間にわたり全例（動物番号１〜１５）について一般状態、生死、体重変化を観察し、最後に剖検を行った。結果を表１４に示す。表１４より、少なくとも２質量％のキュービック液晶分散液において０．４ｍｌの投与量までは特に副作用もなく静脈注射することが可能であることが示された。また、２質量％のキュービック液晶分散体を０．２ｍｌ又は０．４ｍｌ投与された群では順調な体重増加を示した。
【０２１９】
【表１４】
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【産業上の利用可能性】
【０２２０】
本発明のキュービック液晶組成物にリソソーム酵素を包埋した複合体は、リソソーム酵素を低温（１０℃未満）でも液晶構造中に取込んで長期にわたり安定的に保持することができるため、リソソーム酵素の保存（特に低温（１０℃未満）下での保存）のために使用できる。本発明の複合体はまた、リソソーム酵素を液晶構造中に保持し、分解酵素などによる破壊から保護することによって、溶液中に遊離して存在する場合よりもその活性を長期間維持したり、それを液晶構造から徐放させたりするために使用することができる。
【０２２１】
本発明の複合体を含有する医薬組成物は、例えば、リソソーム酵素を１回の投与で長期間作用させたり、投与後のリソソーム酵素の血中濃度を一定に保ったりすることができるリソソーム病治療用の持続性製剤を製造するために有利に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【０２２２】
【図１】図１は、キュービック液晶の構造モデルを示す図である。
【図２】図２は、ペネトレイション法による両親媒性化合物／水系の偏光顕微鏡写真を示す。
【図３】図３は、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール／水系サンプルの偏光顕微鏡写真である。
【図４】図４は、モノＯ−フィタニルペンタエリスリトールのＤＳＣカーブを示す図である。
【図５】図５は、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール／水系サンプルのＳＡＸＳ測定結果（１℃）を示す図である。
【図６】図６は、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトール／水系の濃度−温度依存性部分相図を示す図である。
【図７】図７は、α−Ｘｙｌ（Ｐｈｙｔ）／水系における濃度−温度依存性部分相図を示す図である。
【図８】図８は、総両親媒性化合物濃度６０±３質量％の、１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−α−Ｄ−キシロピラノシドと１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシド／水系における相図を示す図である。Ｘαは、両親媒性化合物総量に対するα体のモル分率を表す。
【図９】図９は、総両親媒性化合物濃度６０±３質量％の、モノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトールと１−Ｏ−（３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデシル）−β−Ｄ−キシロピラノシドの二成分両親媒性化合物／水系における相図を示す図である。Ｘは、両親媒性化合物総量に対するモノＯ−（フィタニル）ペンタエリスリトールのモル分率を表す。
【図１０】図１０は、キュービック液晶中に包埋されたα−ＧＡＬＡ、β−ＧＡＬが活性を有することを示した写真である。
【図１１】図１１は、α−ＧＡＬＡを包埋させたキュービック液晶組成物における徐放性試験の結果を示す図である。
【図１２】図１２は、α−ＧＡＬＡを包埋するキュービック液晶組成物を投与したマウスにおける血中のα−ＧＡＬＡ活性の推移を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
2006117553.tif 000055
【図９】
2006117553.tif 000056
【図１０】
2006117553.tif 000057
【図１１】
2006117553.tif 000058
【図１２】
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