(57)【要約】【課題】  広範囲にわたる植物病害菌に対する抗菌作用を有し、植物病害の防除ができる甘草の油性抽出物由来の植物病害防除剤、これを含む農薬及び肥料を提供する。【解決手段】  甘草の油性抽出物を含有することを特徴とする植物病害防除剤、グラブリジンを有効成分とする植物病害防除剤を提供する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
甘草の油性抽出物を含有することを特徴とする植物病害防除剤。
【請求項２】
グラブリジンを有効成分とする植物病害防除剤。
【請求項３】
請求項１又は２記載の植物病害防除剤を含有してなる農薬。
【請求項４】
請求項１又は２記載の植物病害防除剤を含有してなる肥料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、甘草の油性抽出物、特にグラブリジンを有効成分とする植物病害防除剤、ならびに農薬及び肥料に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
甘草（Ｌｉｃｏｒｉｃｅ）は生薬として知られ、現在では主に食品用甘味料や医薬品・医薬部外品等の原料として使用されている。特に、その水溶性成分であるグリチルリチンには、抗炎症作用、抗潰瘍作用及び抗アレルギー作用等の優れた薬理作用があることから、広く食品、医薬品及び化粧品等に利用されている。甘草及びその成分のグラム陽性菌及び食品の腐敗原因となる一部の真菌類に対する抗菌作用については既に知られている。（非特許文献１〜４参照）。また、甘草抽出物を配合した土壌改良剤（特許文献１参照）及び甘草抽出物を含有する植物生長促進剤及び該植物生長促進剤を使用した肥料（特許文献２参照）が知られている。
しかしながら、甘草抽出物について、特定の植物病原菌に対する抗菌性は確認されていない。
【０００３】
【特許文献１】特開平８−２４５９５９号公報
【特許文献２】特開２０００−３０９５０２号公報
【非特許文献１】築山良一、「食品と開発」、３７巻、２００２年、６号、ｐ５９−６１
【非特許文献２】ケンゾー  オカダ（Ｋｅｎｚｏ  Ｏｋａｄａ）、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．Ｖｏｌ．３７，Ｎｏ．９，ｐ２５２８−２５３０，１９８９
【非特許文献３】サチオ  デミズ（Ｓａｃｈｉｏ  Ｄｅｍｉｚｕ）、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．Ｖｏｌ．３６，Ｎｏ．９，ｐ３４７４−３４７９，１９８８
【非特許文献４】竹中  眞ら、研究成果情報  総合農業  １９９６年、ｐ１９１−１９２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は上記事情に鑑みなされたもので、広範囲にわたる植物病原（害）菌に対する抗菌作用を有し、植物病害の防除ができる甘草の油性抽出物由来の植物病害防除剤、これを含む農薬及び肥料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者は、上記目的を達成するため鋭意検討した結果、農業において問題になっている数種の植物病原菌に対する抗菌作用について鋭意研究を重ねてきた。その結果、甘草の油性抽出物に抗菌作用を見出し、本発明をなすに至ったものである。さらに、抗菌性を有する有効成分が、グラブリジンであることを見出し、本発明をなすに至ったものである。
【０００６】
従って、本発明は、
［１］．甘草の油性抽出物を含有することを特徴とする植物病害防除剤、
［２］．グラブリジンを有効成分とする植物病害防除剤、
［３］．［１］又は［２］記載の植物病害防除剤を含有してなる農薬、
［４］．［１］又は［２］記載の植物病害防除剤を含有してなる肥料を提供する。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、甘草の油性抽出物、グラブリジンを有効成分とする、安全性が高く、優れた植物病害防除効果を有する植物病害防除剤、これを含有してなる農薬及び肥料を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
以下、本発明につきさらに詳細に説明する。
本発明の第１の発明は、甘草の油性抽出物を含有する植物病害防除剤である。
本発明の植物病害防除剤の原料となる甘草は、マメ科Ｇｌｙｃｙｒｒｉｈｉｚａ属に属する植物で、例えば、Ｇ．ｇｌａｂｒａ、Ｇ．ｕｒａｌｅｎｓｉｓ、Ｇ．ｉｎｆｌａｔａ等が挙げられ、本発明においては、Ｇ. ｇｌａｂｒａを使用することが好ましい。また、使用部位は根、根茎、葉、茎のいずれの部位でも原料として使用することができ、根及び／又は根茎を原料として使用することが好ましい。また、これらは、生のものを使用しても乾燥させたものを使用してもよいが、工業的に製造されているグリチルリチンの抽出原料となっている乾燥根及び乾燥根茎、グリチルリチン等を得るために水で抽出した後の水抽出残渣を原料として使用することもできる。なお、甘草は生産地の名前を冠して呼ばれることが多く、例えば、東北甘草、西北甘草、新疆甘草、モンゴル産甘草、ロシア産甘草、アフガニスタン産甘草等を挙げることができる。
【０００９】
また、甘草の水抽出残渣とは、上記の甘草の抽出方法は特に限定されず、冷水、温水又は熱水で、中性又は微アルカリ性で抽出した後の固形残渣が挙げられ、これらを組み合わせ、繰り返して抽出した後の固形残渣でもよい。抽出後の残渣は、含水及び乾燥状態のいずれでもよい。甘草又は甘草水抽出残渣から、本発明に係る甘草油性抽出物を得るためには、各種の有機溶媒を単独あるいは組み合わせて使用して抽出すればよい。
【００１０】
前記有機溶媒としては、例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン、エチルエーテル、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、アセトン、メタノール、エタノール、プロパノール、含水メタノール、含水エタノール、含水プロパノール等が挙げられる。さらには、超臨界流体として二酸化炭素を用いることもできる。これらの有機溶媒の中では、エタノール又は含水エタノールを使用するのが食品衛生法上、問題が少ないため好ましい。
【００１１】
甘草又は甘草水抽出残渣から上述した有機溶媒で甘草の油性抽出物を得るための条件は特に限定されるものではないが、標準的な方法を示すと、抽出原料に対し２〜１０倍質量の有機溶媒を加え、撹拌しながら常温で抽出する方法及び加熱還流して抽出する方法がある。また、これらの方法をそれぞれ単独で、又は組み合わせて繰り返し操作すれば、抽出効率が向上し、より好ましい。
【００１２】
得られた抽出液は、遠心分離及び濾過により不溶物を取り除いた後、甘草油性抽出物として、そのまま使用することもできるし、さらに常法により、濃縮して使用することもできる。これらは、目的とする生理的効果が低下しない範囲で脱臭及び脱色等の精製を適宜行ってもよい。この精製工程には、活性炭、合成吸着樹脂及びイオン交換樹脂等を用いることが一般的である。また、適当な方法で抽出液を乾燥させれば、甘草の油性抽出物として、黄褐色の抽出物粉末を得ることができる。
【００１３】
本発明においては、このようにして得られた液状抽出物をそのまま、又は液状抽出物を濃縮したもの、さらには液状抽出物の粉末、固形の乾燥物が甘草油性抽出物として利用される。また、得られた甘草油性抽出物を有機溶媒及び界面活性剤等で扱いやすい製剤にしてよい。
【００１４】
本発明の植物病害防除剤は、植物病原菌に対する抗菌作用を有するものであり、特に真核生物に属する植物病原菌（一般に糸状菌）に対する抗菌性を有するものである。真核生物に属する病原菌には穀類、いも類、豆類、野菜、果樹、花き、特用作物、飼料作物等多数の農作物を侵し、今まで報告されている病害数（作物と病原菌の組み合わせ）は３，０００以上にのぼる。主要な病原菌としては、イネではいもち病（ピリキュラリ  オリゼ：Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ  ｏｒｙｚａｅ）、苗腐病菌（ピシウム  グラミニコラ：Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ）、紋枯病菌（リゾクトニア  ソラニ：Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ）、ばか苗病菌（ジベレラ  フジクロイ：Ｇｉｂｂｅｒａ  ｆｕｊｉｋｕｒｏｉ）、ごま葉枯病（コクリオボラス  ミヤベナス：Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ  ｍｉｙａｂｅａｎｕｓ）、苗立枯病菌（リゾープス  オリゼ：Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、ムギ類の赤かび病菌（フザリウム  グラミネアルム：Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ）、ダイズの紫斑病菌（サーコスポラ  キクチイ：Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ  ｋｉｋｕｃｈｉｉ）、野菜では各種野菜共通に発生する灰色かび病菌（ボトリチス  シネレア：Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）、うどんこ病菌（一例：スファエロテカ  フリギニア：Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ  ｆｕｌｉｇｉｎｅａ）、菌核病菌（一例：スクレロチニア  スクレロチオルム：Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）、炭疽病菌（一例：コレトトリカム  オルビキュラレ：Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｏｒｂｉｃｕｌａｒｅ）、疫病菌（一例：ファイトフソラ  メロニス：Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｍｅｌｏｎｉｓ）、各種立枯性病害を起疽こすフザリウム病菌（一例：フザリウム  オキシスポラム：Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、個別にはトマトの葉かび病菌（フルビア  フルバ：Ｆｕｌｖｉａ  ｆｕｌｖａ）、輪紋病菌（アルタナリア  ソラニ：Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｏｌａｎｉ）、褐色輪紋病菌（コリネスポラ  カシコラ：Ｃｏｒｙｎｅｓｐｏｒａ  ｃａｓｓｉｉｃｏｌａ）、斑点病菌（ステムフィリウム  リコペルシイシイ：Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍ  ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ）、ナスの褐紋病菌（ホーモプシス  ベサンス：Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｖｅｘａｎｓ）、すすかび病菌（マイコベロシネラ  ナトラシ：Ｍｙｃｏｖｅｌｌｏｓｉｅｌｌａ  ｎａｔｔｒａｓｓｉｉ）、褐色円星病菌（パラサーコスポラ  エゲヌラ：Ｐａｒａｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ  ｅｇｅｎｕｌａ）、キュウリ（スイカ等を含む）のべと病菌（シュードペロノスポラ  キュベンシス：Ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ  ｃｕｂｅｎｓｉｓ）、褐斑病菌（コリネスポラ  カシコラ：Ｃｏｒｙｎｅｓｐｏｒａ  ｃａｓｓｉｉｃｏｌａ）、つる枯病菌（ディディメラ  ブリオネ：Ｄｉｄｙｍｅｌｌａ  ｂｒｙｏｎｉａｅ）、ピーマンの斑点病菌（サーコスポラ  カプシィシィ：Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ  ｃａｐｓｉｃｉ）、ホウレンソウの萎凋病菌（フザリウム  オキシスポラム  フォルマスペシーズ  スピナシエ：Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ  ｆ．ｓｐ．  ｓｐｉｎａｃｉａｅ）、ネギの黒斑病（アルタナリア  ポリ：Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ���ｏｒｉｉ）、果樹では、リンゴの斑点落葉病菌（アルタナリア  マリ：Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｍａｌｉ）、黒星病菌（ベンチュリア  イネクアリス：Ｖｅｎｔｕｒｉａ  ｉｎａｅｑｕａｌｉｓ）、ナシの黒斑病菌（アルタナリア  キクチアナ：Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｋｉｋｕｃｈｉａｎａ）、赤星病菌（ギムノスポランギウム  アシアチウム：Ｇｙｍｎｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ａｓｉａｔｉｕｍ）、カンキツの黒点病菌（ディアポルテ  シトリ：Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ  ｃｉｔｒｉ）、青カビ病菌（ペニシリウム  イタリカム：Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｉｔａｒｉｃｕｍ）、ブドウの晩腐病菌（グロメレラ  シンギュラータ：Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａ  ｃｉｎｇｕｌａｔａ）、べと病菌（プラズモパラ  ビチコラ：Ｐｌａｓｍｏｐａｒａ  ｖｉｔｉｃｏｌａ）、等が挙げられる。この中でも、キュウリの炭疽病及び褐斑病、トマトの葉かび病、褐色輪紋病及び斑点病、ピーマンの斑点病、スイカのつる枯病、ネギの黒斑病の原因菌、イネのいもち病、各種野菜に共通に発生する灰色かび病、ナスのすすかび病、カンキツの青カビ病の病原因菌等に効果的である。
【００１５】
本発明の第２の発明は、グラブリジンを有効成分であることを特徴とする植物病害防除剤である。グラブリジンの取得方法は、特に制限されない。グラブリジンは、精製された市販のものを用いてもよいし、カンゾウ等の植物から抽出してもよい。抽出方法としては、特に限定されず、エタノール等の有機溶媒で、抽出温度及び時間を適宜調整して抽出することができる。グラブリジンは、甘草の油性抽出物を精製して得られるものでもよく、精製は、例えば、液−液分配抽出、各種クロマトグラフィー、膜分離等で行うことができる。
【００１６】
グラブリジンを有効成分であることを特徴とする植物病害防除剤において、植物病害、病原菌は上記と同様のものを挙げることができる。
【００１７】
本発明の植物病害防除剤は、そのまま又は任意の農薬成分や肥料成分と混合し農薬や肥料として用いることができる。その他の成分としては、界面活性剤、乳化剤、増量剤、保湿等が挙げられる。剤型は特に限定されないが、液剤、水溶剤、粉剤、粒剤、水和剤、乳剤、フロアブル剤、マイクロカプセル剤等にすることができる。使用方法としては、これらをそのまま、又は水で希釈し散布する方法が挙げられる。
【００１８】
本発明の植物病害防除剤は、チッソ、リン酸、カリウムの３要素を含む複合肥料と混合して製剤化し、これを圃場に散布することにより、病害防除と施肥を同時に行うことができる。また、葉面散布肥料（液状又は粉末状の複合肥料）等を用いて混合製剤に加工し、これらを水に溶解して作物の葉面に直接散布することにより病害防除と施肥を同時に行うことができる。さらに、マンガン、ホウ素、鉄、銅、亜鉛、モリブデン、塩素、ニッケル等の必要とされる微量要素を含む微量要素肥料と混合して製剤化し、それを散布することにより、病害防除と微量要素欠乏症を同時に解決することができる。このほか、各種有機質肥料と混合して使用することもできる。
【００１９】
農薬や肥料として用いる場合、甘草の油性抽出物を含有する植物病害防除剤の場合の配合量は、農薬全量中の０．１〜９０質量％が好ましく、より好ましくは１〜５０質量％であり、肥料全量中０．１〜９０質量％が好ましく、より好ましく１〜５０質量％である。グラブリジンを有効成分とする植物病害防除剤の場合の配合量は、農薬全量中の０．１〜９０質量％が好ましく、より好ましくは１〜５０質量％であり、肥料全量中０．１〜９０質量％が好ましく、より好ましく１〜５０質量％である。
【００２０】
本発明の植物病害防除剤は、化学合成農薬による薬剤耐性菌の出現や副作用の問題がなく、安心して使用することができる。さらに、薬剤の残留による人体や環境に対する影響がないため、野菜、樹木、花等の植物に対する病害防除に大きく貢献できる。
【実施例】
【００２１】
以下、実施例及び処方例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではない。下記の例において特に明記のない場合は「％」は質量％である。
【００２２】
［実施例１］
甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａ）の根茎を粉砕し、チップ状にした。この甘草チップ１．０ｋｇを１０Ｌのエタノールで一晩抽出した後、固液分離した。得られた抽出濾液を減圧濃縮し、析出したタール状成分をデカンデーションにより除去した。得られた上清液に対し活性炭１０ｇを加えて脱色・消臭し、これを濾過した。得られた濾液を減圧濃縮し、エタノール濃度７０％になるように調製して甘草油性抽出物エキス約１．０Ｌを得た。この甘草油性抽出物エキスの固形分（甘草油性抽出物）濃度は２．０％であった。
【００２３】
［実施例２］
甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａ）の根茎を粉砕し、チップ状にした。この甘草チップ１．０ｋｇを１０Ｌのエタノールで一晩抽出した後、固液分離した。得られた抽出濾液を減圧濃縮し、析出したタール状成分をデカンデーションにより除去した。得られた上清液に対し活性炭１０ｇを加えて脱色・消臭し、これを濾過した。得られた濾液を減圧濃縮し、凍結乾燥させて固形物１９．７ｇを得た。得られた固形物を細かく粉砕し、粉末状の甘草油性抽出物を得た。
【００２４】
［実施例３］
製造例１で得られた甘草油性エキスを固形分として１０質量部相当になるエキス量に、サポニンとしてキラヤ抽出物（丸善製薬（株）製、キラヤニンＣ−１００、固形分２０質量％）を固形分として１５質量部、溶解助剤としてプロピレングリコールを７５質量部加えて６０℃に加温して撹拌し、均一に混合した。この混合液を減圧濃縮し、エキス中に含まれていた水及びエタノールを留去することにより、９％の甘草油性抽出物を含有する甘草油性抽出物製剤１を得た。この甘草油性抽出物製剤１についてＨＰＬＣ分析を行った結果、グラブリジン含量１％であった。
【００２５】
［実施例４］
製造例２で得られた甘草油性抽出物粉末の１０質量部に、適量のエタノールを４０質量部加えて完全に溶解させた。さらにこの溶液にキラヤ抽出物（丸善製薬（株）製、キラヤニンＣ−１００、固形分２０％）を固形分として１５質量部加えて６０℃に加温して撹拌し、均一に混合した。この混合液に水を加えることで、８％の甘草油性抽出物を含有する甘草油性抽出物製剤２を得た。この甘草油性抽出物製剤２についてＨＰＬＣ分析を行った結果、グラブリジン含量１％であった。
【００２６】
下記に、グラブリジン含量のＨＰＬＣ分析条件を示す。
<ＨＰＬＣ分析>
カラム：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ−ＩＩ  ５Ｃ１８  ＨＧ
溶  媒：アセトニトリル：水：酢酸（体積比）：６０：３８：２
流  速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
検  出：２８２ｎｍ
温  度：４０℃
注入量：２０μＬ
【００２７】
実施例１〜４について下記（１）抗菌作用評価、（２）接種試験を行った。
（１）抗菌作用評価
植物病原菌に対する培地上での菌糸伸長抑制率を測定することで評価を行った。
<検定培地の調製>
７０体積％エタノールに溶解した甘草油性抽出物（実施例１）１％溶液を用いて、甘草油性抽出物１０００μｇ／ｍＬの濃度に調製したＰＤＡ培地（ニッスイ製）を調製した（添加区）。比較対照区には、同量の７０体積％エタノールのみを添加したＰＤＡ培地を用いた。
<ディスクの調製>
植物病原菌を、別に用意したＰＤＡ平板培地（培地量１０ｍＬ）を用い、２５℃で数日間前培養し、菌糸先端部分を直径５ｍｍのコルクボーラーで打ち抜き、ディスクとした。
<培養>
ディスクを菌糸の面を下にして検定培地中央に置き、２５℃で培養した。
<菌糸伸長量の測定>
対照区において、菌糸がシャーレの７割程度に伸長した時期に測定した。十字の線が引かれたディスク中央を基準とし、各植物病原菌の菌糸直径を測定した。１サンプルにつきシャーレ２〜４枚を用いて、菌糸直径を１シャーレにつき２ヶ所測定し、これを平均して平均直径を算出した。測定結果から下記式（１）に基づいて菌糸伸長量を算出した。
菌糸伸長量＝［菌糸平均直径（ｍｍ）−ディスクの直径（ｍｍ）］／２    （１）
【００２８】
<菌糸伸長抑制率>
下記式（２）により、菌糸伸長抑制率（％）を算出した。なお、菌糸伸長抑制率がマイナスである場合は、添加区の菌糸が伸長したことを示している。
菌糸伸長抑制率（％）＝
［１−（添加区の菌糸伸長量）／（対照区の菌糸伸長量）］×１００    （２）
【００２９】
植物病原菌株としては、キュウリの炭疽病及び褐斑病、トマトの葉かび病、褐色輪紋病及び斑点病、ピーマンの斑点病、スイカのつる枯病、並びにネギの黒斑病の原因菌を用いた。
【００３０】
【表１】
2006298877.tif 000002
【００３１】
（２）接種試験
発生する病斑数を測定することで病害防除評価を行った。
<対象植物>
キュウリ（品種：つや太郎）、トマト（品種：強力米寿２号）及びピーマン（品種：エース）を用いた。キュウリ、トマト及びピーマンは、素焼き鉢（５寸）に移植して１〜２ヶ月栽培し、草丈が５０ｃｍ程度に伸長した時期に試験に用いた。
<植物病原菌胞子液の調製>
植物病原菌株は、ピーマンでは斑点病、トマトでは褐色輪紋病、キュウリでは炭疽病及び褐斑病の病原菌株を用いた。キュウリ、トマト及びピーマンの病原菌はＰＤＡ培地に移植し２５℃で培養した。この胞子懸濁液１滴（約２０μＬ）をスライドグラスに滴下し、顕微鏡下で検鏡して概ね１０4個／ｍＬの胞子濃度になるように蒸留水で調整し、植物病原菌胞子液を得た。
【００３２】
<試験方法（実施例３の甘草油性抽出物製剤）>
甘草油性抽出物製剤として０．２％（甘草油性抽出物として０．０２％）の水溶液と植物病原菌胞子液とを等量混合し、甘草油性抽出物製剤として０．１％になるように懸濁液を調製した。この懸濁液を小型ガラス製噴霧器とコンプレッサーを用いて、植物１株あたり２０〜６０ｍＬ（葉から散布液が滴り落ちる程度）散布した。１処理につき、３鉢供試した。直ちに恒温接種箱に搬入し、２５℃、湿度１００％で２日間保湿した。その後、ガラス室に移し、約１週間後の病斑数を目視で測定した。対照区は甘草油性抽出物製剤水溶液の代わりに、同量の蒸留水と植物病原菌胞子液とを等量混合した懸濁液を用いた。
<試験方法（実施例４の甘草油性抽出物製剤）>
甘草油性抽出物製剤として０．１％（甘草油性抽出物として０．０１％）の水溶液を植物１株あたり２０〜６０ｍＬ（葉から散布液が滴り落ちる程度）散布した。１処理につき、３鉢供試した。数時間後、葉の表面が乾いた後、植物病原菌胞子液を植物１株当たり１０〜２０ｍＬ噴霧し、直ちに恒温接種箱に搬入し、２５℃、湿度１００％で２日間保湿した。その後、ガラス室に移し、約１週間後の病斑数を目視で測定した。対照区は、甘草油性抽出物製剤水溶液を無散布で、植物病原菌胞子液散布のみとした。
【００３３】
<指数の算出>
各菌株の病斑数から平均病斑数を算出した。甘草油性抽出物製剤を含む懸濁液を散布した区分（添加区）の平均病斑数における、植物病原菌のみを散布した区分（対照区）の平均病斑数を１００としたときの相対数を、指数として下記式（３）により算出した。
指数＝（添加区の平均病斑数／対照区の病斑数）×１００                （３）
【００３４】
【表２】
2006298877.tif 000003
【００３５】
【表３】
2006298877.tif 000004
【００３６】
【表４】
2006298877.tif 000005
【００３７】
【表５】
2006298877.tif 000006
【００３８】
表１より、実施例１の甘草油性抽出物における菌糸伸長抑制率は、対照と比較して有意に高い。また、表２〜５より、実施例３又は４の甘草油性抽出物製剤における病斑数は、対照区（病原菌のみ）における病斑数と比較して有意に少ない。これらの結果より、甘草油性抽出物は強い抗菌作用を有しており、このことに起因して、強い植物病害防除作用が確認された。
【００３９】
［試験例１］
甘草油性抽出物に含まれているフラボノイド類であるグラブリジンについて、トマト褐色輪紋病の原因菌の胞子発芽に対する抑制率（％）を測定し、抗菌作用の評価を行った。グラブリジンについては、実施例１の甘草油性抽出物よりシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製したもの（純度９９％）を用いた。グラブリジンを１００％エタノールに１０ｍｇ／ｍＬの割合で溶かし、それを蒸留水で倍々希釈した。各希釈液と同量のトマト褐色輪紋病菌胞子液（上記（２）接種試験の植物病原菌胞子液の調製法）を混合し、混合液中のグラブリジン濃度を１．６〜２５．０μｇ／ｍＬとした。この混合液をスライドグラスに滴下し、２５℃・１００％湿度条件下に置き、２４時間後に顕微鏡で発芽胞子数を計測した（添加区）。対照区は、グラブリジンを含まない同エタノール濃度の混合液を用いた。下記式（４）により胞子発芽抑制率（％）を算出した。
胞子発芽抑制率（％）＝
［１−（添加区の発芽胞子数）／（対照区の発芽胞子数）］×１００    （４）
【００４０】
【表６】
2006298877.tif 000007
【００４１】
［試験例２］
上記の（２）接種試験と同様の方法で、甘草油性抽出物に含有しているフラボノイド類であるグラブリジンについて、トマト褐色輪紋病の原因菌に対する病斑数及び指数を測定し、病害防除の評価を行った。なお、グラブリジンについては、実施例２の甘草油性抽出物よりシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製したもの（純度９９％）を用いた。
【００４２】
【表７】
2006298877.tif 000008
【００４３】
表６より、グラブリジンにおける高い菌糸伸長抑制率が確認された。表７より、グラブリジンによる強い植物病害防除作用が確認された。
以上の結果より、グラブリジンは、甘草油性抽出物に含有する植物病害防除を示す有効成分であることが確認された。
【００４４】
［処方例１］
下記組成の農薬を常法に基づいて調製した。
実施例３の甘草油性抽出物製剤                                        ５０質量部
エタノール                                                          １０質量部
水                                                                  ４０質量部
計                                                                １００質量部
【００４５】
［処方例２］
下記組成の肥料を常法に基づいて調製した。
実施例２の甘草油性抽出物                                              １質量部
海藻粉末                                                              ５質量部
貝殻粉末                                                            １０質量部
腐葉土                                                              ８４質量部
計                                                                １００質量部