(57)【要約】 【課題】  優れたＩＬ−４産生抑制作用とメラニン生成抑制作用を有する新規なグリセロ糖脂質を提供すること。【解決手段】  本発明は、ガラクトース残基と不飽和アシル基を有する次の化学式（Ｉ）で表わされる新規グリセロ脂質である。  【化１】 2006117583.tif 000015  インターロイキン４産生抑制剤、抗アレルギー用組成物、抗炎症用組成物、メラニン生成抑制剤、美白剤として有用である。【選択図】        図１
2006117583.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の化学式（Ｉ）で表わされる新規グリセロ糖脂質。
【化１】
2006117583.tif 000012
［ここで、式中Ｒは、次の式（II）
【化２】
2006117583.tif 000013
で示される基、または次の式（III）
【化３】
2006117583.tif 000014
で示される基を表す。］
【請求項２】
前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とするインターロイキン４産生抑制剤。
【請求項３】
前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とする抗アレルギー組成物。
【請求項４】
前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とする抗炎症組成物。
【請求項５】
前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とするメラニン生成抑制剤。
【請求項６】
前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とする美白剤。
【請求項７】
前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とする医薬。
【請求項８】
前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とする食品組成物。
【請求項９】
前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とする化粧料。
【請求項１０】
前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なグリセロ糖脂質と、それを利用したインターロイキン４産生抑制剤、抗アレルギー組成物、抗炎症組成物、メラニン生成抑制剤、美白剤およびこれらの経口用又は皮膚外用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、花粉症や食物アレルギー、気管支喘息、アトピー性皮膚炎といった種々のアレルギーが問題になっている。このような症状の治療には一般に薬理効果の高いホルモン剤が使用されているが、副腎皮質機能不全や消化管潰瘍といった副作用が大きいという問題がある。また、非ステロイド系のヒスタミン、ロイコトリエンの遊離抑制剤やＩｇＥ抗体産生抑制剤なども使用されているが、その効果は必ずしも十分ではない。
【０００３】
インターロイキン４（以下「ＩＬ−４」という。）は、抗原で刺激されたＴリンパ球によって産生される糖蛋白質である。Ｂリンパ球に作用してＩｇＥなどの抗体産生を増強し、炎症部位への炎症細胞の浸潤促進作用を有することが知られている。近年では、このアレルギー性疾患に関連のあるＩＬ−４の産生を抑制することができれば、従来の治療法及び予防法と異なった点で、アレルギー性疾患や炎症を治療できるのではないかと考えられている。
【０００４】
ＩＬ−４産生抑制剤としては、スルホニウム誘導体（例えば、非特許文献１参照）が知られており、ＩＬ−４産生抑制作用を有する植物としては、イラクサやタイム、セイヨウノコギリソウなどの抽出物（例えば、特許文献１参照）やインチンコウ抽出物（例えば、特許文献２参照）が報告されているが、これらの効果は十分ではない。そこで、安定性、安全性に優れ、価格においても問題のないＩＬ−４産生抑制剤が求められている。
【０００５】
これまでに、ブロッコリー、カリフラワー、なずな、すずしろ、キャベツ、りんごなどにＩｇＥ増加抑制作用があることは報告されている（例えば、特許文献３参照）が、野菜類でのＩＬ−４産生抑制作用は知られていない。また、パイナップル等の植物の抽出物、或いは特定の微生物の生産物から得られるグリセロ糖脂質のうち、モノガラクトシルジアシルグリセロール及びジガラクトシルジアシルグリセロールが肥満細胞からのヒスタミン遊離抑制活性を有し、抗アレルギー剤として有用であることが開示されているが（例えば、特許文献４参照）、グリセロ糖脂質のＩＬ−４産生抑制作用は知られていない。
一方、本発明者らは野菜飲料などに使用されているアブラナ科の野菜であるケールまたはそのエタノール抽出物がＩＬ−４産生抑制活性を有することを見出し、既に特許出願を行なった（特許文献５，６参照）。
【０００６】
また、大気汚染やオゾン層の破壊などに起因して、人の表皮に届く紫外線量は年々増加する傾向にあり、それに伴い、紫外線による肌のシミ、ソバカス、色黒などの肌悩みが大きな問題となっている。紫外線が照射されることにより、皮膚内に存在するチロシンがチロシナーゼ酵素の働きにより酸化されてメラニン色素が産生され、これが過剰に産生されると、シミ、ソバカス、色黒などの肌悩みとなって表れる。このメラニン色素の産生を抑制し、シミ、ソバカス、色黒を予防する方法として、従来より、皮膚の美白を目的として、皮膚化粧料にL-アスコルビン酸及びその誘導体であるL-アスコルビン酸グルコース配糖体を配合することが行なわれており（例えば、特許文献７参照）、さらにL-アスコルビン酸グルコース配糖体とアミノ酸又はその誘導体を組み合わせて配合した皮膚外用剤（例えば、特許文献８参照）など多数提案されている。しかしながら、これらの美白剤は美白効果が必ずしも十分に認められないものであったり、美白効果を示す成分を、美白効果を認める濃度で配合すると安全性や安定性に問題を生じることがあった。
一方、本発明者は、このような皮膚の美白を目的としてメラニン生成抑制剤の探索を行っていたが、アブラナ科の野菜であるケールまたはその抽出物が紫外線によるメラニン生成抑制作用を有することを見出し、既に特許出願を行った（特許文献９参照）。
【０００７】
【特許文献１】特開平１０−２７９４９１号公報
【特許文献２】特開平１０−２９８０９０号公報
【特許文献３】特開２０００−１６９３８２号公報
【特許文献４】特開２００３−１４６８８４号公報
【特許文献５】特開２００３−２６７８８０号公報
【特許文献６】特願２００３−３１８０８９号特許出願明細書
【特許文献７】特開平４−１８２４１２号公報
【特許文献８】特開平４−１８２４１３号公報
【特許文献９】特開２００４−９１３９６号公報
【非特許文献１】Ｊａｐａｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，６１巻，２７−３０頁，１９９３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、新規なグリセロ糖脂質、およびこの新規グリセロ糖脂質を含有するＩＬ−４産生抑制剤、抗アレルギー組成物又は抗炎症組成物、あるいは新規グリセロ糖脂質を含有するメラニン生成抑制剤又は美白剤、並びにこれらを利用した医薬、食品組成物、化粧料、皮膚外用剤を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、上記のような課題を解決すべく鋭意研究を重ね、種々の植物抽出物について探索を続けた結果、ケールのエタノール抽出物から分離した新規なグリセロ糖脂質に、特にアレルギー性疾患の原因の一つと考えられているＩＬ−４の産生抑制活性に優れ、更に皮膚のシミ、ソバカスの原因となるメラニンの生成抑制作用があることを見出し、本発明を完成した。
【００１０】
即ち、本発明は、以下の内容をその要旨とするものである。
（１）次の化学式（Ｉ）で表わされる新規グリセロ糖脂質。
【００１１】
【化４】
2006117583.tif 000003
【００１２】
［ここで、式中Ｒは、次の式（II）
【００１３】
【化５】
2006117583.tif 000004
【００１４】
で示される基、または次の式（III）
【００１５】
【化６】
2006117583.tif 000005
【００１６】
で示される基を表す。］
【００１７】
（２）前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とするインターロイキン４産生抑制剤。
（３）前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とする抗アレルギー組成物。
（４）前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とする抗炎症組成物。
（５）前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とするメラニン生成抑制剤。
（６）前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とする美白剤。
（７）前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とする医薬。
（８）前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とする食品組成物。
（９）前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とする化粧料。
（１０）前記化学式（Ｉ）で表わされる化合物を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【発明の効果】
【００１８】
本発明により、ＩＬ−４産生抑制作用並びにメラニン生成抑制作用に優れる新規なグリセロ糖脂質を提供することができる。また、本発明の新規グリセロ糖脂質を含むＩＬ−４産生抑制剤を使用して、これを医薬、食品組成物、皮膚外用剤等に利用することにより、アレルギー性鼻炎や花粉症などのアレルギーや種々の炎症に対して優れた効果を有する、抗アレルギー組成物および抗炎症組成物を提供することができる。
更に、本発明の新規グリセロ糖脂質を含むメラニン抑制剤を使用して、これを医薬、食品組成物、化粧料、皮膚外用剤等に利用することにより、メラニンの生成抑制に優れた効果を有し、美白作用を有する有用な組成物を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明の新規なグリセロ糖脂質、これを含有するＩＬ−４産生抑制剤、抗アレルギー組成物又は抗炎症組成物、或いはこれを含むメラニン生成抑制剤又は美白剤、並びにこれらを利用した医薬、食品組成物、化粧料、皮膚外用剤について説明する。
まず、本発明のグリセロ糖脂質は、前記化学式（Ｉ）で表わされる新規な化合物であり、糖類基としてガラクトース、アシル基として不飽和結合を含む炭素数１８のアシル基を有するグリセロ糖脂質である。
【００２０】
具体的には、本発明の新規なグリセロ糖脂質は、ＩＵＰＡＣ名によって以下のように表記できる前記化学式（Ｉ）で表わされる新規な化合物である。
置換基Ｒが式（II）の場合:
(9Z,12Z,15Z)-2-hydroxy-3-((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)-tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)methyl)-tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)propyl octadeca-9,12,15-trienoate
置換基Ｒが式（III）の場合:
(12Z,15Z)-2-hydroxy-3-((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)-tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)methyl)-tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)propyl octadeca-12,15-dienoate
【００２１】
本発明の前記化学式（Ｉ）で表わされるグリセロ糖脂質は、例えば、アブラナ科植物の野菜であるケールのエタノール抽出物から分離して入手することができる。このケールは、南ヨーロッパ原産のアブラナ科植物の野菜で、キャベツの原種と言われており、その学名は、Brassicca Oleracea L．var．acephala DC.である。このケールには、キッチンケール、マローケール、ブッシュケール、ツリーケール、コラード、緑藻カンランなどの種類があり、これらのいずれでも本発明の新規なグリセロ糖脂質を製造するために使用することができる。本発明の新規なグリセロ糖脂質を得るためのケールの使用部位としては、葉など通常食用に供されているもののほかケールの茎、花、根なども使用することができ、特に制限されるものではなく、その栽培方法や栽培地も特に限定されるものではない。
【００２２】
本発明の前記化学式（Ｉ）で表わされるグリセロ糖脂質は、上述のようなケールの葉、茎、花、根などを濃度５０〜９９．５質量％、好ましくは７０〜８０質量％のエタノールで抽出して得られた抽出物の脂溶性画分に多く含まれている。具体的には、例えば、ケールの葉、茎、花や根などの乾燥物に濃度５０〜９９．５質量％、好ましくは７０〜８０質量％エタノールを加え、室温で数時間ないし数十時間の間浸漬・攪拌することによりその抽出液を得て、この抽出液をおよそ１０〜２０倍程度まで加熱蒸発等によって濃縮し、分液ロートなどによって水溶性画分と脂溶性画分とに分離して得られた脂溶性画分である。ここで得られた脂溶性画分は、さらにその濃度が５０質量％のエタノールを用いて再度抽出を行い、分液ロートによって２層に分離することができる。これらのうちの水溶性画分は主に水溶性の高い糖類や食物繊維などから構成されており、一方、脂溶性画分のうちの５０質量％エタノールに溶解しない画分（脂溶性画分Ｉ）は主としてクロロフィルやフィトステロールなどであり、また、５０質量％エタノールに溶解する画分（脂溶性画分Ｓ）は主としてポリフェノール類などから構成されている。本発明の前記化学式（Ｉ）で表わされるグリセロ糖脂質はこの脂溶性画分Ｓに含まれているので、脂溶性画分Ｓから逆相ＨＰＬＣなどでグリセロ糖脂質を分離精製することによって入手することができる。
【００２３】
次に、本発明のＩＬ−４産生抑制剤、抗アレルギー組成物、抗炎症組成物、メラニン生成抑制剤又は美白剤は、このようにして得られたグリセロ糖脂質をそのままその有効成分として使用してもよいし、或いは上記のようにして得たケールのエタノール抽出物の脂溶性画分をそのままの状態で含有する組成物として使用してもよい。このような組成物としては、本発明の効果を損なわず、悪影響を及ぼさない任意の種々の成分をその助剤、媒体または担体として使用し、これに本発明の新規なグリセロ糖脂質を含有させることによって組成物を構成することができる。
【００２４】
本発明の新規なグリセロ糖脂質はＩＬ−４産生抑制作用を有している。ＩＬ−４は、ＩｇＥやＩｇＧ４という抗体の産生を増強する作用を有すると共に、炎症部位への炎症性細胞の浸潤を促進する作用を有している。さらに、ＩＬ−４は、未成熟なＴリンパ球を成熟Ｔリンパ球に分化させる機能をも有しており、成熟Ｔリンパ球は未成熟Ｔリンパ球よりＩＬ−４の産生量が多い。しかも、ＩＬ−４は皮膚のトラブルにも関与し、特に皮膚の炎症に関与している。即ち，ＩＬ−４の産生を抑制することは、一連のアレルギー反応の初期段階を抑制することであり、有効な薬剤開発につながる。本発明の新規なグリセロ糖脂質は、このようなＩＬ−４の産生抑制に優れた効果を発揮し、アトピー性皮膚炎のようなアレルギー性疾患の予防、治療に有効である。さらに、本発明の新規なグリセロ糖脂質は、ＩＬ−４の関与する皮膚トラブルである、シワ、たるみ、かゆみ等の抑制にも有効に使用することができる。
【００２５】
また、本発明の新規なグリセロ糖脂質は皮膚のメラニン生成抑制作用を有している。紫外線により、皮膚内に存在するチロシンがチロシナーゼ酵素の働きにより酸化されてメラニン色素が産生されるが、これが過剰に産生されると、シミ、ソバカス、色黒などの肌悩みとなる。本発明の新規グリセロ糖脂質を用いることにより、紫外線が照射されたときの皮膚のメラニンの生成が抑制され、このような肌悩みを改善のために有効である。
【００２６】
本発明の新規なグリセロ糖脂質は、ＩＬ−４産生抑制剤、抗アレルギー組成物、抗炎症組成物、メラニン生成抑制剤又は美白剤成分として使用する場合には、その適用量は、摂取者の年齢、体重、症状、適用経路、適用スケジュール、製剤形態などにより、適宜決定することができるが、例えば、経口投与の場合、グリセロ糖脂質の重量基準として、通常成人換算で０．０００１〜０．５ｇ／ｋｇ程度、より好ましくは０．００１〜０．２ｇ／ｋｇ程度で、１日数回に分けて投与してもよい。
また、適当な基剤、担体、媒体や賦形剤とともに本発明の新規なグリセロ糖脂質を配合することによって、ＩＬ−４産生抑制剤、抗アレルギー組成物、抗炎症組成物、メラニン生成抑制剤若又は美白剤とすることができる。
【００２７】
本発明の新規グリセロ糖脂質、ＩＬ−４産生抑制剤、抗アレルギー組成物、抗炎症組成物、メラニン生成抑制剤又は美白剤は、医薬又は食品用の経口組成物として使用することができ、化粧料または医薬として皮膚外用組成物として使用することもできる。
【００２８】
医薬用としての本発明の新規グリセロ糖脂質の適用方法は、経口投与又は非経口投与のいずれも採用することができる。投与に際しては、有効成分を経口投与、直腸内投与、注射などの投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬製剤の形態として投与することができる。このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などの固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤などの液剤、凍結乾燥製剤などが挙げられ、これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水などが挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤などの慣用の添加剤を適宜添加することもできる。
【００２９】
食品用組成物としては、本発明の新規グリセロ糖脂質をそのまま、又は種々の栄養成分を加えて、又は飲食品中に含有せしめて、アレルギー症状の治療及び予防に有用な保健用食品又は食品素材として使用することができる。例えば、澱粉、乳糖、麦芽糖、植物油脂粉末、カカオ脂末、ステアリン酸などの適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、経口用に適した形態、例えば顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して食用に供してもよく、また種々の食品、例えば、ハム、ソーセージなどの食肉加工食品、かまぼこ、ちくわなどの水産加工食品、パン、菓子、バター、粉乳、発酵乳製品に添加して使用してもよい。本発明の新規グリセロ糖脂質の配合量は、当該食品または食品用素材の種類や状態等により適宜設定することができる。
【００３０】
また、本発明の新規グリセロ糖脂質は、これを配合した化粧料素材、化粧料又は皮膚外用剤の形態で製造することができる。例えば、新規グリセロ糖脂質を小麦胚芽油あるいはオリーブ油に添加して、これを化粧料素材として使用することができる。
【００３１】
また、本発明の新規グリセロ糖脂質を、直接化粧料成分として使用し、化粧料を製造することもできる。このような化粧料には、植物油のような油脂類、高級脂肪酸、高級アルコール、シリコーン、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤、防腐剤、糖類、金属イオン封鎖剤、水溶性高分子のような高分子、増粘剤、粉体成分、紫外線吸収剤、紫外線遮断剤、ヒアルロン酸のような保湿剤、香料、ｐＨ調整剤、乾燥剤などを含有させることができる。さらに、ビタミン類、皮膚賦活剤、血行促進剤、常在菌コントロール剤、活性酸素消去剤、抗炎症剤、抗癌剤、美白剤、殺菌剤等のほかの薬効成分、生理活性成分を含有させることもできる。
【００３２】
化粧料の種類としては、化粧水、乳液、クリーム、パック等の皮膚化粧料、メイクアップベースローション、メイクアップクリーム、乳液状又はクリーム状あるいは軟膏型のファンデーション、口紅、アイカラー、チークカラーといったメイクアップ化粧料、ハンドクリーム、レッグクリーム、ボディローション等の身体用化粧料、および入浴剤、口腔化粧料、毛髪化粧料等とすることができる。本発明の新規グリセロ糖脂質を含有せしめた化粧料としては、その機能面からは、例えば乳液、化粧液、フェイスクリーム、ハンドクリーム、ローション、エッセンスなどが好ましい。
【００３３】
このような本発明の新規グリセロ糖脂質を含有する化粧料は、常法に従って製造することができる。化粧料における本発明の新規グリセロ糖脂質の添加量は、特に限定されるものではないが、一例としてあげると、化粧料全重量の０．００１〜２０質量％、好ましくは０．０１〜１０質量％が適当である。
【実施例１】
【００３４】
次に、本発明を実施例によって更に詳しく説明する。以下の製造例、実施例、処方例は本発明の好ましい例を示すものであり、これに限定されるものではない。また、各例中の「％」は質量基準である。
【００３５】
１）新規グリセロ糖脂質の製造
乾燥させたケールの葉を粉砕し、ケール粉砕物１ｋｇを７０％エタノールカラム（カラムサイズ４５ｍｍΦ×４１５ｍｍ）を用いて２０Ｌの７０％エタノールで抽出し、この抽出液をエバポレーターを用いて１Ｌまで濃縮した。得られた濃縮物１Ｌを分液ロートにより、水溶性画分と脂溶性画分に分け、更に、脂溶性画分を５０％エタノール２Ｌに溶解した。このエタノール溶液を、さらに分液ロートで分配して二層に分離し、５０％エタノールに溶解している画分を濃縮乾固させてケールエタノール抽出物の「脂溶性画分Ｓ」として２４ｇを得た。
【００３６】
２）脂溶性画分Ｓ中の成分の中圧液体クロマトグラフィーによる分取
得られた脂溶性画分Ｓの２４ｇのうちの５ｇを用いて、以下の方法と条件によって分離精製した。
・機器構成：
中圧液体クロマトグラフィーシステム：Ｋｒｏｎｌａｂ  ＧｍｂＨ
逆相カラム：Ｐｏｌｙｇｏｐｒｅｐ  ６０−５０  ＲＰ−１８（Ｍａｃｈｅｒｅｙ＆Ｎａｇｅｌ）
・溶離液：
精製水１００％、続いて、精製水１００％→メタノール１００％のグラジエント、続いて、イソプロパノール１００％
・分取物  
溶離液が精製水１００％で溶出した分画Ｐ（０．８９ｇ）を得た。分画ＰをＳＰＥカラム（Ｌｉｃｈｒｏｌｕｔ  ＥＮ-Ｍｅｒｃｋ）で処理し、０．１５ｇの脱塩物を得た。
【００３７】
３）分画Ｐ脱塩物の高速液体クロマトグラフィーによる分離
分画Ｐ脱塩物０．１５ｇを用いて、以下の方法と条件によって分離精製した。
・機器構成：
全自動分画・精製・分取システム：ＳＥＰＢＯＸＬｉｇｈｔ
分取カラム：  Ｍｅｒｃｋ Ｓｅｌｅｃｔ Ｂ  ２５０×１６ｍｍ、１０μｍ
検出器：ＥＬＳＤ（Ｓｅｄｅｘ７５）
ＵＶ（Ｍｅｒｃｋ、２５４ｎｍ）
・溶離液：
流  速：１５ｍＬ／ｍｉｎ
溶離液：Ａ・・・０．５ｍＭギ酸アンモニウム、０．１％ギ酸水溶液
Ｂ・・・０．５ｍＭギ酸アンモニウム、０．１％ギ酸のアセトニトリル：メ
タノール＝１：１溶液
グラジエント：
時間（分）    Ａ（％）    Ｂ（％）
０．０      ６４        ３６
５７．７      １１        ８９
５７．８        ０      １００
６５．８        ０      １００
・分取物
分画Ｐ脱塩物からサンプル（ａ）２．３１ｍｇ、サンプル（ｂ）１．１５ｍｇを分取した。
【００３８】
４）サンプル（ａ）、サンプル（ｂ）の高速液体クロマトグラフィーによる純度確認、並びに保持時間の確認
・機器構成：
ＨＰＬＣシステム：Ｍｅｒｃｋ  Ｈｉｔａｃｈｉ
分析カラム：  Ｍｅｒｃｋ Ｓｅｌｅｃｔ Ｂ  ２５０×４ｍｍ、５μｍ
検出器：ＥＬＳＤ（Ｓｅｄｅｘ７５）
・溶離液：
流  速：１ｍＬ／ｍｉｎ
溶離液：Ａ・・・０．５ｍＭギ酸アンモニウム、０．１％ギ酸水溶液
Ｂ・・・０．５ｍＭギ酸アンモニウム、０．１％ギ酸のアセトニトリル：メ
タノール＝１：１溶液
グラジエント：
時間（分）    Ａ（％）    Ｂ（％）
０．０      ８５        １５
３０．０        ０      １００
４０．０        ０      １００
本分析条件により、サンプル（ａ）、サンプル（ｂ）が単一ピークを示すことを確認した。保持時間はサンプル(ａ)２６．６分、サンプル(ｂ)２７．９分である。
【００３９】
５）グリセロ糖脂質の構造決定
上記の３）で分取したサンプル(ａ)及びサンプル(ｂ)の２個のサンプルについて、ＬＣ／ＭＳ分析装置及びＮＭＲ分析装置を用いて化合物の構造決定を行なった。
ＬＣ／ＭＳ分析の溶離液は４）と同じものを用い、グラジエント条件は適宜調整した。ＭＳシステムはＰＥ-Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ１５０（+/(-)-ＥＳＩ、Ｆａｓｔ-Ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ-Ｍｏｄｅ）を使用した。
１Ｈ−ＮＭＲ、ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ、ＨＨ−ＣＯＳＹは共鳴周波数４００ＭＨｚあるいは５００ＭＨｚで測定した。１３Ｃ−ＮＭＲのスペクトルはＨＭＢＣ、ＨＳＱＣの手法を用いて帰属した。溶媒は重メタノールを用い、化学シフト基準に使用した（１Ｈ−ＮＭＲ３．３０ｐｐｍ、１３Ｃ−ＮＭＲ４９．０ｐｐｍ）。
サンプル（ｂ）については上記４）のクロマト分析条件では単一ピークであるが、２種類の化合物の混合物（以降、「化合物（ｂ１）」、「化合物（ｂ２）」と呼ぶ）であることが判明した。ＭＳ分析、並びにＮＭＲ分析によって化合物（ｂ１）、化合物（ｂ２）個々の構造を決定することができた。化合物（ｂ１）と化合物（ｂ２）は適切なクロマト分離条件を選択するにより分離することができる。
抽出分離した各サンプルのＬＣ／ＭＳ分析、ＮＭＲ分析の結果を以下に示す。表１ないし表３おいて、「Gal」はガラクトース、「FA」は脂肪酸を表す。
【００４０】
(i)サンプル(ａ)：
ＬＣ／ＭＳとＮＭＲのデータを以下に示す。
ＬＣ／ＭＳ
（+)−ＥＳＩ：６９９[Ｍ＋Ｎａ]＋、５１５[Ｍ−Ｇａｌ＋Ｈ]＋、３５３[Ｍ−２Ｇａｌ＋Ｈ]＋、２６１[Ｃ１８Ｈ２９Ｏ]＋
（-)−ＥＳＩ：７２１[Ｍ＋ＨＣＯＯ]−、６７５[Ｍ−Ｈ]−、２７７[Ｃ１８Ｈ29Ｏ２]−
１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ
スペクトルの帰属と化学シフトを表１に示す。
【００４１】
【表１】
2006117583.tif 000006
【００４２】
サンプル(ａ)は前記化学式（Ｉ）において置換基Ｒが前記式（II）で示される基である新規なグリセロ糖脂質であり、上記のようなスペクトルデータを示す。
【００４３】
(ii)サンプル(ｂ)：
サンプル（ｂ）中の化合物（ｂ１）のＬＣ／ＭＳとＮＭＲのデータを以下に示す。
ＬＣ／ＭＳ
（+)−ＥＳＩ：６９６[Ｍ＋ＮＨ４]＋、３５５[Ｍ−２Ｇａｌ＋Ｈ]＋
（-)−ＥＳＩ：６７７[Ｍ−Ｈ]−
１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ
スペクトルの帰属と化学シフトを表２に示す。
【００４４】
【表２】
2006117583.tif 000007
【００４５】
サンプル(ｂ)中の化合物（ｂ１）は前記化学式（Ｉ）において置換基Ｒが前記式（III）で示される基である新規なグリセロ糖脂質であり、上記のようなスペクトルデータを示す。
【００４６】
サンプル（ｂ）中の化合物（ｂ２）のＬＣ／ＭＳとＮＭＲのデータを以下に示す。
ＬＣ／ＭＳ
（+）−ＥＳＩ：５３７[Ｍ＋Ｎａ]＋、５３２[Ｍ＋ＮＨ４]＋、３５３[Ｍ−Ｇａｌ＋Ｈ]＋、２６１[Ｃ１８Ｈ２９Ｏ]＋
（-）−ＥＳＩ：５５９[Ｍ＋ＨＣＯＯ]−、５１３[Ｍ−Ｈ]−、２７７[Ｃ１８Ｈ２９Ｏ２]−
１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ
スペクトルの帰属と化学シフトを表３に示す。
【００４７】
【表３】
2006117583.tif 000008
【００４８】
サンプル(ｂ)中の化合物（ｂ２）は前記化学式（Ｉ）からガラクトシル基が一つはずれた構造において置換基Ｒが前記式（II）で示される基である、下記の化学式（IV）で表わされるグリセロ糖脂質である。この化合物（ｂ２）は既知化合物であった。ＮＭＲ分析の結果、サンプル（ｂ）は主成分である新規化合物（ｂ１）と少量成分である既知化合物（ｂ２）から構成されることがわかった。
【００４９】
【化７】
2006117583.tif 000009
【実施例２】
【００５０】
次に、上記のようにして得たサンプル(ａ)及びサンプル(ｂ)の前記化学式（Ｉ）で表わされる新規なグリセロ糖脂質について、以下に記載する方法によって末梢血単核球（ＰＢＭＣ）によるＩＬ−４産生抑制評価試験を行なった。
【００５１】
１）ＩＬ−４産生抑制評価用培養上清サンプルの作製
ＩＬ−４産生抑制評価試験は、Ｅｎｄｏらの方法を参考にした（Int. arch. Allergy Immunol. Vol.1, p425-430,1993）。ＰＢＭＣ（CAMBREX社製）を、１０％ウシ胎児血清、３００ｍｇ／Ｌグルタミン（ＳＩＧＭＡ社製）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（大日本製薬製）を添加したＲＰＭＩ１６４０培地（大日本製薬製）に懸濁し、９６マイクロプレート（Ｎｕｎｃ社製）に２×１０５細胞／ウェルずつ播種した。播種後、各ウェルにコンカナバリンＡ（ＳＩＧＭＡ社製）を２０μｇ／ｍＬになるように添加し、さらに陽性対照区には強いＩＬ−４産生抑制作用が知られているデキサメタゾン（以下「ＤＸＭ」という）３．９μｇ／ｍＬ（０．０１μＭ）を添加し、陰性対照区には培地のみとし、試験区には５．０μｇ／ｍＬまたは５０μｇ／ｍＬの化学式（Ｉ）で表わされるグリセロ糖脂質のサンプル(ａ)又はサンプル(ｂ)をそれぞれ添加し、引き続き２日間培養した。培養終了後、各ウェルよりＰＢＭＣを含んだ培養液を各々回収し、遠心分離（４００×ｇ、８ｍｉｎ）によって得た培養上清を、ＥＬＩＳＡ法によるＩＬ−４産生抑制評価試験に供した。
【００５２】
２）ＥＬＩＳＡ法によるＩＬ−４産生抑制評価試験
評価試験には、「IL-4 ELISA Kit」（BIO SOURCE社製）を用いた。標準曲線を作成するため、スタンダードサンプルとして、キットに付属したスタンダード希釈液を用いて、ＩＬ−４の濃度がそれぞれ、０、7.8、15.6、31.2、62.5、125、250、500pg/mLになるように希釈調製した。
次に、９８ウェルプレート（Ｎｕｎｃ社製）の各ウェルに、上記１）で得た培養上清サンプルとスタンダードサンプルをそれぞれ１００μＬずつ入れた後、ビオチン標識した抗ヒトＩＬ−４抗体を５０μＬずつ加え、プレートカバーをして室温（２０〜２５℃）にて２時間インキュベートした。各ウェルの底には、あらかじめＩＬ−４と結合する抗ＩＬ−４抗体がコーティングされており、細胞が産生したＩＬ-4と結合し、さらにキットに付属のＩＬ−４抗体が、これとしっかりと結合し、ウェル内に固定される（サンドイッチELISA）。インキュベート終了後、これらのウェル中の液体を吸引除去し、各ウェルを１５０μＬの洗浄用緩衝液にて４回ずつ洗浄した。洗浄後、Streptavidin−Peroxidase(HRP)溶液を１００μＬずつ各ウェルに適用し、プレートカバーをして室温（２０〜２５℃）にて３０分間インキュベートした。インキュベート終了後、ウェル中の液体を吸引除去し、各ウェルを１５０μＬの洗浄用緩衝液にて４回ずつ洗浄した。Tetramethylbenzidine(ＴＭＢ)基質溶液１００μＬを各ウェルに入れ、暗所下、室温（２０〜２５℃）にて３０分間インキュベートした。インキュベート終了後、直ちに反応停止液１００μＬを各ウェルに適用して、マイクロプレートリーダーを用いて、４５０ｎｍ波長における吸光度を測定して、各ウェル内に固定されたＩＬ−４産生量を求めた。即ち、スタンダードサンプルの吸光度とＩＬ−４濃度から得られた標準曲線を基準として、供試各サンプルの吸光度の測定値からＩＬ−４産生量を算出した。
各供試サンプルについて得られた結果を表４および図１に示す。
【００５３】
【表４】
2006117583.tif 000010
【００５４】
これらの結果から、前記化学式（Ｉ）で表わされる新規グリセロ糖脂質は、その置換基Ｒが式(II)のもの（サンプル(ａ)）と式(III)の化合物（ｂ１）を含有するもの（サンプル(ｂ)）のいずれの場合にも、デキサメタゾンとほぼ同等の非常に優れたＩＬ−４産生抑制作用を示すことがわかった。また、サンプル(ａ)又はサンプル(ｂ)を５．０μｇ／ｍＬ添加すると、培地のみのときと比べてＩＬ−４の産生が３０％に抑制され、サンプル(ａ)又はサンプル(ｂ)を５０μｇ／ｍＬ添加すると、培地のみのときと比べてＩＬ−４の産生が約６０〜７０％に抑制される。
【実施例３】
【００５５】
メラニン生成抑制評価試験
メラニンを生成する細胞としてマウス由来の培養Ｂ１６メラノーマ細胞を用いて、ウシ胎児血清を終濃度１０％になるように添加したイーグルＭＥＭ培地で培養し、該細胞を１×１０３細胞／wellで、９６ウェルプレートに播種し、５日間ＣＯ２インキュベーター内で培養した。その後、被検試料を添加した培地に交換し、さらに３日間同条件で培養した。培養終了後細胞を洗浄し、細胞をドデシル硫酸ナトリウム（SDS）により可溶化して４７５ｎｍ、２６０ｎｍの吸光度を測定し、これをＳ４７５、Ｓ２６０とする。メラニン抑制率は、被検試料を添加しない培地で培養した細胞の４７５ｎｍ、２６０ｎｍにおける吸光度をＣ４７５、Ｃ２６０として次式により計算した。
【００５６】
【数１】
2006117583.tif 000011
【００５７】
尚、被検試料としては、前記実施例１で得た化学式（Ｉ）で表わされるグリセロ糖脂質であるサンプル(ａ)又は化学式（Ｉ）で表わされるグリセロ糖脂質である化合物（ｂ１）を含有するサンプル(ｂ)を用い、それぞれ培地に１２．５μｇ／ｍＬ、２５．０μｇ／ｍＬ、及び５０．０μｇ／ｍＬ添加した。陽性対照区としては美白成分として広く使用されているコウジ酸（Kojic acid）を用い、これを培地に１２．５μｇ／ｍＬ、２５．０μｇ／ｍＬ、及び５０．０μｇ／ｍＬ添加した。
これらのメラニン生成抑制評価試験の結果を図２に示す。図２に示したように、本発明の新規グリセロ糖脂質のサンプル（ａ）、サンプル（ｂ）ともに陽性対照区のコウジ酸（Kojic acid）とほぼ同等のメラニン生成抑制効果を示した。
【実施例４】
【００５８】
次に、以下に、本発明の新規グリセロ糖脂質の具体的な使用形態である医薬、食品，化粧品としての処方例を示す。
【００５９】
処方例１: ＩＬ−４産生抑制用組成物（錠剤）
上記の実施例１で得られた化学式（Ｉ）で表わされる新規グリセロ糖脂質（サンプル(a)）を用いて、常法により下記の配合組成のＩＬ−４産生抑制用組成物の錠剤を製造した。
（組  成）                          （質量％）
グリセロ糖脂質（サンプル(ａ)）          ２．０
乳  糖                                ７７．０
コーンスターチ                        ２０．０
グアーガム                              １．０
【００６０】
処方例２:ジュース
上記の実施例１で得られた化学式（Ｉ）で表わされるグリセロ糖脂質を含有するサンプル(ｂ)を用いて、常法により下記の配合組成のジュースを製造した。
（組  成）                          （質量％）
冷凍濃縮温州みかん果汁                ５．０
果糖ブドウ糖液糖                    １１．０
クエン酸                              ０．２
Ｌ−アスコルビン酸                    ０．０２
香  料                                ０．２
色  素                                ０．１
グリセロ糖脂質（サンプル(b））        ０．２
水                                  ８３．２８
【００６１】
処方例３：化粧水
上記の実施例１で得られた化学式（Ｉ）で表わされるグリセロ糖脂質（サンプル(a)）を用いて、常法により下記の配合組成の化粧水を製造した。
（組  成）                          （質量％）
グリセリン                              ８．０
１，３-ブチレングリコール               ２．０
クエン酸                                ０．１
Ｌ−セリン                              ０．０５
パラオキシ安息香酸エステル              ０．２
香料                                    ０．０５
グリセロ糖脂質（サンプル(a））          ０．５
精製水                                ８９．１
【００６２】
処方例４：クリーム
上記の実施例１で得られた新規グリセロ糖脂質を含有するサンプル(b)を用いて、常法により下記の配合組成のクリームを製造した。
（組  成）                          （質量％）
ステアリルアルコール                    ６．０
ステアリン酸                            ２．０
スクワラン                              ９．０
オクチルドデカノール                  １０．０
１，３-ブチレングリコール               ８．０
ポリエチレングリコール１５００          ４．０
POE（25)セチルアルコールエーテル        ３．０
モノステアリン酸グリセリル              ２．０
グリセロ糖脂質（サンプル(b））          １．０
精製水                                  残余
【００６３】
処方例５：化粧パック
上記の実施例１で得られた新規グリセロ糖脂質（サンプル(a)）を用いて、常法により下記の配合組成の化粧パックを製造した。
（組  成）                          （質量％）
ポリビニルアルコール                  １５．０
カルボキシメチルセルロース              ５．０
１，３-ブチレングリコール               ５．０
エタノール                            １２．０
POE(25）オレイルアルコールエーテル      ０．５
クエン酸                                ０．０２
クエン酸ナトリウム                      ０．０４
グリセロ糖脂質（サンプル(a））          １．０
精製水                                  残余
【産業上の利用可能性】
【００６４】
本発明によれば、新規なグリセロ糖脂質である化学式(Ｉ)で表わされるグリセロ糖脂質を提供する。この新規グリセロ糖脂質は、優れたＩＬ−４産生抑制作用を有し、優れた安全性と安定性を有するＩＬ−４産生抑制、抗アレルギー組成物、抗炎症組成物を提供することができ、また、優れたメラニン生成抑制作用を有し、メラニン生成抑制剤又は美白剤を提供することができる。さらに、これらを含んだ食品、医薬、化粧料等の組成物として利用することができる。従って、この新規グリセロ糖脂質を含有する、例えば食品、医薬、化粧料等の組成物とすることができ、抗アレルギー性や抗炎症性、メラニン生成抑制性を持った種々の製品を製造するのに有用である。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】実施例１で得られた各サンプルのＩＬ−４産生抑制の評価試験の結果を示すグラフである。
【図２】実施例３で得られた各サンプルのメラニン生成抑制の評価試験の結果を示すグラフである。
【図１】
2006117583.tif 000016
【図２】
2006117583.tif 000017