(57)【要約】      （修正有）【課題】心血管性疾患および炎症性疾患を治療するためのプロブコールモノエステル類の使用を提供する。【解決手段】ＶＣＡＭ−１の阻害、具体的には、アテローム性動脈硬化症を含む心血管疾患または炎症性疾患を治療するための、有効量のプロブコールモノエステルの投与を含む方法および組成物である。モノエステルが、ジカルボン酸およびその塩等からなる群から選択され、さらに別の抗炎症剤と組み合わせて使用することで、該モノエステルの効果を増強することができる。【選択図】図１
2006232848.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
モノエステルが、ジカルボン酸およびその塩、アミノカルボン酸およびその塩、アルデヒド含有カルボン酸およびその塩、アミン基、アミン基の塩、アミド基、アミド基の塩、アルデヒド基およびその塩からなる群から選択され、エステルが任意選択で、スルホン酸、スルホン酸エステル、リン酸、リン酸エステル、環状リン酸エステル、ポリヒドロキシアルキル基、炭水化物基、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＳＯ３Ｈ（スペーサーは、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−、−（ＣＨ２Ｏ）−、−（ＯＣＨ２）−、−（ＳＣＨ２）−、−（ＣＨ２Ｓ−）−、−（アリール−Ｏ）−、−（Ｏ−アリール）−、−（アルキル−Ｏ）−、−（Ｏ−アルキル）−で、ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＳＯ３Ｍ（Ｍは、薬剤として許容される塩を形成するために用いられる金属）、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＰＯ３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＰＯ３Ｍ２、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＰＯ３ＨＭ、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＰＯ４Ｈ、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＰＯ４Ｍ、ＳＯ３Ｍ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＰＯ３Ｍ２、−ＰＯ３ＨＭ、環状リン酸エステル、ポリヒドロキシアルキル、炭水化物基、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−［Ｏ（Ｃ１〜３アルキル）ｐ］ｎ（ｎは、前の定義と同じで、ｐは、１、２、または３）、−［Ｏ（Ｃ１〜３アルキル）ｐ］ｎ、カルボキシ低級アルキル、低級アルキルカルボニル低級アルキル、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノ低級アルキル、ピリジル低級アルキル、イミダゾリル低級アルキル、モルホリニル低級アルキル、ピロリジニル低級アルキル、チアゾリニル低級アルキル、ピペリジニル低級アルキル、モルホリニル低級ヒドロキシアルキル、Ｎ−ピリル、ピペラジニル低級アルキル、Ｎ−アルキルピペラジニル低級アルキル、トリアゾリル低級アルキル、テトラゾリル低級アルキル、テトラゾリルアミノ低級アルキル、またはチアゾリル低級アルキルからなる群から選択される基によって置換されていてもよいプロブコールモノエステル（ただし、プロブコールモノコハク酸エステルを除く）の、患者においてＶＣＡＭ−１を抑制するための医薬の製造における使用。
【請求項２】
モノエステルが、ジカルボン酸およびその塩、アミノカルボン酸およびその塩、アルデヒド含有カルボン酸およびその塩、アミン基、アミン基の塩、アミド基、アミド基の塩、アルデヒド基およびその塩からなる群から選択され、エステルが任意選択で、スルホン酸、スルホン酸エステル、リン酸、リン酸エステル、環状リン酸エステル、ポリヒドロキシアルキル基、炭水化物基、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＳＯ３Ｈ（スペーサーは、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−、−（ＣＨ２Ｏ）−、−（ＯＣＨ２）−、−（ＳＣＨ２）−、−（ＣＨ２Ｓ−）−、−（アリール−Ｏ）−、−（Ｏ−アリール）−、−（アルキル−Ｏ）−、−（Ｏ−アルキル）−で、ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＳＯ３Ｍ（Ｍは、薬剤として許容される塩を形成するために用いられる金属）、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＰＯ３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＰＯ３Ｍ２、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＰＯ３ＨＭ、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＰＯ４Ｈ、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＰＯ４Ｍ、ＳＯ３Ｍ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＰＯ３Ｍ２、−ＰＯ３ＨＭ、環状リン酸エステル、ポリヒドロキシアルキル、炭水化物基、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−［Ｏ（Ｃ１〜３アルキル）ｐ］ｎ（ｎは、前の定義と同じで、ｐは、１、２、または３）、−［Ｏ（Ｃ１〜３アルキル）ｐ］ｎ、カルボキシ低級アルキル、低級アルキルカルボニル低級アルキル、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノ低級アルキル、ピリジル低級アルキル、イミダゾリル低級アルキル、モルホリニル低級アルキル、ピロリジニル低級アルキル、チアゾリニル低級アルキル、ピペリジニル低級アルキル、モルホリニル低級ヒドロキシアルキル、Ｎ−ピリル、ピペラジニル低級アルキル、Ｎ−アルキルピペラジニル低級アルキル、トリアゾリル低級アルキル、テトラゾリル低級アルキル、テトラゾリルアミノ低級アルキル、またはチアゾリル低級アルキルからなる群から選択される基によって置換されていてもよいプロブコールモノエステル（ただし、プロブコールモノコハク酸エステルを除く）の、ＶＣＡＭ−１が介在する疾患を治療するための医薬の製造における使用。
【請求項３】
疾患が心血管疾患である、請求項１または２に記載のプロブコールモノエステルの使用。
【請求項４】
心血管疾患が、アテローム性動脈硬化症、血管形成術後の再狭窄、冠状動脈疾患、狭心症、および小動脈疾患からなる群から選択される、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
疾患が炎症性疾患である、請求項１または２に記載のプロブコールモノエステルの使用。
【請求項６】
炎症性疾患が、慢性関節リウマチ、骨関節症、喘息、皮膚炎、多発性硬化症、および乾癬である、請求項５に記載のプロブコールモノエステルの使用。
【請求項７】
前記医薬が脂質低下剤、血小板凝集阻害剤、抗血栓剤、カルシウムチャンネル遮断剤、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤およびβ遮断剤からなる群から選択される別の心血管剤と組み合わせて使用するためのものである、請求項１ないし４のいずれか１項に記載のプロブコールモノエステルの使用。
【請求項８】
前記医薬が脂質低下剤、血小板凝集阻害剤、抗血栓剤、カルシウムチャンネル遮断剤、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤およびβ遮断剤からなる群から選択される別の心血管剤を含有するものである、請求項１ないし４のいずれか1項に記載のプロブコールモノエステルの使用。
【請求項９】
前記医薬が別の抗炎症剤と組み合わせて使用するためのものである、請求項５または６に記載のプロブコールモノエステルの使用。
【請求項１０】
前記医薬が別の抗炎症剤を含有するものである、請求項５または６に記載のプロブコールモノエステルの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＶＣＡＭ−１の阻害、詳細には、アテローム性動脈硬化症を含む心血管疾患および炎症性疾患を治療するための、有効量のプロブコールエステルの投与あるいは含む方法および組成物である。
【背景技術】
【０００２】
今日、心血管疾患は、米国における主要な死因である。現在、心血管疾患の約９０パーセントは、アテローム性動脈硬化症と診断されている。心血管疾患は、高コレステロール血症、高脂質血症、および血管内皮細胞におけるＶＣＡＭ−１の発現を含む様々な原因要素と関連付けられてきた。
【０００３】
高コレステロール血症および高脂質血症
高コレステロール血症は、心血管疾患に関連する重要な危険要素である。血清リポタンパクは、循環における脂質の運搬体である。リポタンパクは、それらの密度に従って、キロミクロン、超低密度リポタンパク（ＶＬＤＬ）、低密度リポタンパク（ＬＤＬ）および高密度リポタンパク（ＨＤＬ）に分類される。キロミクロンは、食事トリグリセリドおよびコレステロールの腸から脂肪組織および肝臓への輸送に関与している。ＶＬＤＬは、内因的に合成されたトリグリセリドを肝臓から脂肪組織および他の組織に輸送する。ＬＤＬは、コレステロールを末梢組織へ運搬し、末梢組織における内因的コレステロール値を調節する。ＨＤＬは、コレステロールを末梢組織から肝臓へ輸送する。動脈壁コレステロールは、ほぼ例外なくＬＤＬに由来する。ＢｒｏｗｎおよびＧｏｌｄｓｔｅｉｎ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、５２巻、２２３ページ、１９８３年；Ｍｉｌｌｅｒ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．、３１巻、９７ページ、１９８０年。ＬＤＬ値が低い患者では、アテローム性動脈硬化症の発症はめったにない。
【０００４】
コレステロール値の上昇は、再狭窄、狭心症、脳アテローム性動脈硬化症、および黄色腫を含む多くの病状と関係している。再狭窄、狭心症、脳動脈硬化症、黄色腫、およびコレステロール値の上昇に関連する他の病状にある患者、またはそれらを発症する危険のある患者においては、血漿コレステロールを減少させるための方法を提供することが望まれる。
【０００５】
高コレステロール血症がＬＤＬの上昇（高脂質血症）によるものであると決定された場合には、食餌療法によってＬＤＬ値を低下させることが試みられる。ＬＤＬ値を低下させるために一般に用いられる薬物には様々な種類があり、胆汁酸金属イオン封鎖剤、ニコチン酸（ナイアシン）、および３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素Ａ（ＨＭＧＣｏＡ）レダクターゼ阻害剤が含まれる。プロブコールおよびフィブラート誘導体は、通常、他の薬剤と併用して、補助療法としてときどき用いられる。ＨＭＧＣｏＡレダクターゼ阻害剤は、スタチン（ｓｔａｔｉｎ）またはバスタチン（ｖａｓｔａｔｉｎ）と名付けられてきた。スタチンは、現在市場に出ている高コレステロール血症に対して最も有効な薬剤の１つであり、プラバスタチン（Ｐｒａｖｃｈｏｌ、Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、アトロバスタチン（ａｔｒｏｖａｓｔａｔｉｎ）（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ／Ｐｆｉｚｅｒ）、シンバスタチン（Ｚｏｃｏｒ、Ｍｅｒｃｋ）、ロバスタチン（Ｍｅｖａｃｏｒ、Ｍｅｒｃｋ）、およびフルバスタチン（ｆｌｕｖａｓｔａｔｉｎ）（Ｌｅｓｃｏｌ）が含まれる。
【０００６】
多くの患者にとって、食餌療法と１種の脂質低下剤で十分である。しかし、初期のＬＤＬコレステロール値が２００ｍｇ／ｄｌを超える患者にとって、ＬＤＬ値を５０％以上低下させる療法が必要である。単一薬剤がこの程度のＬＤＬ低下をもたらすこともときどきあるが、ほんの２０から３０％の低下であることがはるかに一般的である。したがって、２００から４００ｍｇ／ｄｌのＬＤＬコレステロールを有する異種接合家族性高コレステロール血症の患者にとって、１００ｍｇ／ｄｌ未満のＬＤＬコレステロール値を達成するためには、２種、または時に３種の脂質低下剤の併用が必要とされる。胆汁金属イオン封鎖剤樹脂とニコチン酸の併用で４５％から５５％、樹脂とスタチンの併用で５０％から６０％、ニコチン酸とスタチンの併用で約５０％、および胆汁酸結合樹脂、スタチン、およびニコチン酸の併用を用いる３重薬物療法でほぼ７０％、ＬＤＬ値を低下させることができる。
【０００７】
低密度リポプロテイン（ＬＤＬ）のじゅく腫形成作用の一部が、その酸化的変化によるものであることを示唆する証拠がある。プロブコールは、強力な抗酸化特性を有し、ＬＤＬの酸化的変化を阻止することが分かっている。これらの知見と一致するように、Ｃａｒｅｗ他（Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８４巻、７７２５〜７７２９ページ、１９８７年）に論じられているように、プロブコールは、ＬＤＬ受容体欠損ウサギにおけるアテローム性動脈硬化症の進行を確実に遅らせることが分かった。たぶん、プロブコールが高い脂溶性を有し、リポプロテインによって輸送されることにより、脂質を酸化的損傷から守るため、プロブコールが有効であると考えられる。
【０００８】
プロブコールは、広く用いられている食品添加物、２，［３］−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）および２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルフェノール（ＢＨＴ）と化学的に関連している。完全な化学名は、４，４′−（イソプロピリデンジチオ）ビス（２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール）である。
【０００９】
今日、プロブコールは主として、高コレステロール血症患者において血清コレステロール値を低下させるために用いられている。プロブコールは通常、ロレルコ（商標）の商標で市販されている錠剤の形で投与される。残念なことに、プロブコールは水にほとんど溶けないため、静脈内に注射することができない。実際に、プロブコールは緩衝液および細胞培養培地と混和性が乏しいため、細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏでプロブコールを吸収することは困難である。固体のプロブコールは血中にあまり吸収されず、ほとんどが未変化体として排泄される。さらに、錠剤形のプロブコールは、患者毎に著しく異なった速度、異なった量で吸収される。ある研究では（Ｈｅｅｇ他、Ｐｌａｓｍａ  Ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｂｕｃｏｌ  ｉｎ  Ｍａｎ  Ａｆｔｅｒ  Ｓｉｎｇｌｅ  ａｎｄ  Ｒｅｐｅａｔｅｄ  Ｏｒａｌ  Ｄｏｓｅｓ、Ｌａ  Ｎｏｕｖｅｌｌｅ  Ｐｒｅｓｓｅ  Ｍｅｄｉｃａｌｅ、９巻、２９９０〜２９９４ページ、１９８０年）、プロブコールの血清中最高濃度は、患者によって２０倍も異なることが分かった。別の研究において、Ｋａｚｕｙａ他（Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．、３２巻、１９７〜２０４ページ、１９９１年）は、内皮細胞をプロブコール５０μＭとともに２４時間インキュベートすると、１０６個の細胞につきプロブコール約１μｇ未満が取り込まれることを観察している。
【００１０】
Ｐａｒｔｈａｓａｒａｔｈｙの米国特許第５，２６２，４３９号は、ヒドロキシル基の１つまたは両方を、化合物に水溶性を付与するようなエステル基で置換したプロブコールの可溶性類似体を開示している。１つの実施形態において、可溶性誘導体は、プロブコールのモノ−またはジ−コハク酸エステル、グルタル酸エステル、アジピン酸エステル、スベリン酸エステル、セバシン酸エステル、アゼライン酸エステル、またはマレイン酸エステルから選択される。別の実施形態において、プロブコール誘導体はモノ−またはジ−エステルであって、エステルは、カルボン酸基、アミン基、アミン基の塩、アミド基、アミド基、およびアルデヒド基からなる群から選択される官能基を含むアルキルまたはアルケニル基を含む。
【００１１】
一連のフランス特許は、ある種のプロブコール誘導体が、コレステロール低下剤および脂質低下剤であることを開示している。フランス２１６８１３７（ビス４−ヒドロキシフェニルチオアルカンエステル類）、フランス２１４０７７１（プロブコールのテトラリニルフェノキシアルカン酸エステル類）、フランス２１４０７６９（プロブコールのベンゾフリルオキシアルカン酸誘導体類）、フランス２１３４８１０（ビス−（３−アルキル−５−ｔ−アルキル−４−チアゾール−５−カルボキシ）フェニルチオ）アルカン類、フランス２１３３０２４（ビス−（４−ニコチノイルオキシフェニルチオ）プロパン類、およびフランス２１３０９７５（ビス（４−フェノキシアルカノイルオキシ）−フェニルチオ）アルカン類）。
【００１２】
米国特許第５，１５５，２５０号は、２，６−ジアルキル−４−シリルフェノール類が抗アテローム性動脈硬化剤であることを開示している。同一の化合物は、１９９５年６月１５日公告のＰＣＴ公開第９５／１５７６０号に、血清コレステロール低下剤として開示されている。米国特許第５，６０８，０９５号は、アルキル化された４−シリル−フェノール類が、ＬＤＬの過酸化を阻害し、血漿コレステロールを低下させ、ＶＣＡＭ−１の発現を阻害し、したがってアテローム性動脈硬化症の治療に有用であることを開示している。
【００１３】
ＶＣＡＭ−１の発現
白血球の内皮への接着は、心血管疾患、ならびに自己免疫障害、ならびに細菌およびウイルス感染を含む様々な炎症性状態における基本的な初期事象を表している。内皮への白血球集合は、内皮細胞表面上の誘導可能な接着分子受容体が免疫細胞上の対抗受容体（ｃｏｕｎｔｅｒｒｅｃｅｐｔｏｒ）と相互作用するときに開始される。血管内皮細胞は、血管細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）、細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）、およびＥ−セレクチン（ＥＬＡＭ）などの特異的接着分子を選択的に発現することにより、どのタイプの白血球を（単球、リンパ球、または好中球）集合させるかを決定する。アテローム性動脈硬化病変の初期段階においては、内皮に局在化したＶＣＡＭ−１の発現およびインテグリン対抗受容体ＶＬＡ−４を発現する単核白血球の選択的集合が見られる。ＶＬＡ−４は、単球およびリンパ球上に発現し、好中球上では発現しないため、ＶＣＡＭ−１は、単核白血球の選択的接着の媒介に重要である。ＶＣＡＭ−１は、喘息、慢性関節リウマチおよび自己免疫糖尿病などの慢性炎症性障害にメディエータとして関与している。例えば、ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１の発現が、喘息において増加することが知られている。Ｐｉｌｅｗｓｋｉ、Ｊ．Ｍ．、他、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１２巻、１〜３ページ、１９９５年；Ｏｈｋａｗａｒａ、Ｙ．、他、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１２巻、４〜１２ページ、１９９５年。さらに、ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１に対するインテグリン受容体（それぞれ、ＶＬＡ−４およびＬＦＡ−１）を阻害することにより、アレルギー性気道反応のオボアルブミン感作ラットモデルにおける初期相および後期相反応がいずれも抑制された。Ｒａｂｂ、ＩＩ．Ａ．、他、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．、１４９巻、１１８６〜１１９１ページ、１９９４年。リウマチ様滑膜の微小血管系においても、ＶＣＡＭ−１を含む内皮性接着分子の発現の増加が見られる。Ｋｏｃｈ、Ａ．Ｅ．、他、Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．、６４巻、３１３〜３２２ページ、１９９１年；Ｍｏｒａｌｅｓ−Ｄｕｃｒｅｔ、Ｊ．、他、Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４９巻、１４２１〜１４３１ページ、１９９２年。ＶＣＡＭ−１またはその対抗受容体、ＶＩＡ−４を対象とする抗体の中和は、疾患を自然発症するマウスモデル（ＮＯＤマウス）における糖尿病の発症を遅延させることができる。Ｙａｎｇ、Ｘ．Ｄ．、他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、９０巻、１０４９４〜１０４９８ページ、１９９３年；Ｂｕｒｋｌｙ、Ｌ．Ｃ．、他、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、４３巻、５２３〜５３４ページ、１９９４年；Ｂａｒｏｎ、Ｊ．Ｌ．、他、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、９３巻、１７００〜１７０８ページ、１９９４年。ＶＣＡＭ−１に対するモノクローナル抗体も、同種移植片拒否反応の動物モデルにおいて有益な効果を有しており、これは、ＶＣＡＭ−１発現の阻害剤が移植片拒否反応の予防に役立つことを示唆している。Ｏｒｏｅｚ、Ｃ．Ｇ．、他、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．、３２巻、７〜１２ページ、１９９２年。
【００１４】
ＶＣＡＭ−１は、膜結合型および可溶型の両方の型で細胞によって発現する。可溶型のＶＣＡＭ−１は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで血管内皮細胞の化学走性を誘発し、ラット角膜における脈管形成性反応を刺激することが分かった。Ｋｏｃｈ、Ａ．Ｆ．、他、Ｎａｔｕｒｅ、３７６巻、５１７〜５１９ページ、１９９５年。可溶ＶＣＡＭ−１発現の阻害剤は、腫瘍の成長および転移を含む、強力な脈管形成性成分による疾患の治療において潜在的な治療価値を有している。Ｆｏｌｋｍａｎ、Ｊ．、およびＳｈｉｎｇ、Ｙ．、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１０９３１〜１０９３４ページ、１９９２年。
【００１５】
ＶＣＡＭ−１は、リポ多糖（ＬＰＳ）、およびインターロイキン−１（ＩＬ−１）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−ａ）などのサイトカイン類により活性化した後の培養ヒト血管内皮細胞中で発現する。これらの因子は、細胞接着分子発現の活性化にとって選択的ではない。
【００１６】
続いて白血球が泡沫状マクロファージへ変換される結果、様々な炎症性サイトカイン類、成長因子、および白血球および血小板集合の伝播を助ける化学遊走物質の合成、平滑筋細胞増殖、内皮細胞活性化、および成熟したアテローム性動脈硬化プラークに特徴的な細胞外マトリックス合成が行われる。
【００１７】
発現を制御するヒトＶＣＡＭ−１遺伝子上の調節要素の分子分析は、ＶＣＡＭ−１遺伝子発現の酸化−還元−感受性調節における結合タンパクと同様、核因子−ｋＢ（ＮＦ−ｋＢ）、転写調節因子、またはＮＦ−ｋＢに対する重要な役割を示唆している。転写因子は、ＲＮＡ合成が開始される「プロモーター」と呼ばれる遺伝子領域に通常近い、「エンハンサー」と呼ばれる特異的ＤＮＡ配列に結合することにより、細胞核内で遺伝子発現を活性化（または抑制）するタンパクである。
【００１８】
ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１のいずれのプロモーターもクローン化され、特徴づけられている。例えば、両方のプロモーターは転写因子、ＮＦ−ｋＢに結合することができる複数のＤＮＡ配列要素を含んでいる。Ｉａｄｅｍａｒｃｏ、Ｍ．Ｆ．、他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６７巻、１６３２３〜１６３２９ページ、１９９２年。
【００１９】
核因子−ｋＢは、多くの細胞タイプにおいて、ＴＮＦａ、細菌性内毒素、およびＲＮＡウイルスなど多種多様な炎症性作用物質群によって活性化される、偏在的に発現する複数のサブユニットからなる転写因子である。ＮＦ−ｋＢは、炎症性および他のストレス信号を核調節性装置に媒介する際に重要な役割を果たす。ＮＦ−ｋＢを活性化する正確な生化学信号は不明であるが、この転写因子は、高脂質血症、喫煙、高血圧症および糖尿病など、アテローム性動脈硬化症の多くの危険因子および「原因」信号を共通の分子経路に統合していると考えられる。
【００２０】
様々な信号による血管内皮細胞におけるＮＦ−ｋＢの活性化は、Ｎ−アセチルシステインおよびピロリジンジチオカルバメートなどの抗酸化剤によって特異的に阻害することができる。このことから、不確定の酸化−還元機構により、ＮＦ−ｋＢの活性化に酸素ラジカルが重要な役割を果たしているという仮説が導かれた。ＮＦ−ｋＢ様エンハンサーもまた、酸化−還元−感受性の形でＶＣＡＭ−１プロモーターの転写を調節することから、アテローム性動脈硬化病変における酸化的ストレスは、この酸化−還元−感受性転写調節性タンパクによるＶＣＡＭ−１遺伝子発現の調節においてある役割を果たしていると仮定されている。米国特許第５，３８０，７４７号（ＰＣＴ／ＵＳ９３／１０４９６）は、血管内皮細胞におけるＶＣＡＭ−１の発現が、ピロリジンジチオカルバメートを含むある種類のジチオカルバメート類の投与によって阻害できることを開示している。したがって、これらのジチオカルバメートは、心血管性疾患の治療に有用であり、高コレステロール血症ウサギにおけるアテローム性動脈硬化病変の存在を著しく減少させることが分かった。
【００２１】
低密度リポタンパク（ＬＤＬ）が反応性の酸素分子種によって酸化的に修飾されたＬＤＬ（ｏｘ−ＬＤＬ）に変化することが、アテローム性動脈硬化を開始させ進行させる中心的事象であるという仮説もたてられてきた。Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ、他、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３２０巻、９１５〜９２４ページ、１９８９年。酸化されたＬＤＬは、複雑な構造で、少なくとも数種の化学的に異なる酸化物質から構成され、それぞれが単独であるいは組合わさって、サイトカイン活性化接着分子遺伝子発現を変調させると考えられる。リノレイルヒドロペルオキシド（１３−ＨＰＯＤＥ）などの脂肪酸ヒドロペルオキシド類はリポキシゲナーゼによって遊離脂肪酸から生産され、酸化ＬＤＬの重要な成分である。
【００２２】
酸化脂質の生成は、細胞リポキシゲナーゼ系の作用によって生成され、続いて酸化脂質がＬＤＬに運ばれると考えられてきた。その後、遷移金属および／またはスルフヒドリル化合物によって触媒される媒質中のＬＤＬ内の増殖反応がある。これまでの検討から、培養内皮細胞の脂肪酸変化は、酸化剤障害に対する感受性を変化させうることが証明されている。ＰＣＴ／ＵＳ９５／０５８８０は、ポリ不飽和脂肪酸類およびそれらのヒドロペルオキシド類は、サイトカイン類および他の非サイトカイン信号によって媒介されない機構により、ヒト大動脈内皮細胞においてＶＣＡＭ−１の発現を誘発するが、ＩＣＡＭ−１およびＥ−セレクチンの発現は誘発しないことを開示している。これは、ＶＣＡＭ−１媒介性免疫反応における重要かつこれまで未知であった生物学的経路の基本的な発見であった。ＰＣＴ／ＵＳ９５／０５８８０ではまた、ポリ不飽和脂肪酸類およびそれらのヒドロペルオキシド類よるＶＣＡＭ−１の誘発が、ピロリジンジチオカルバメートを含むジチオカルバメート類によって抑制されることが報告された。
【００２３】
心血管性疾患が現在、米国における主要な死因であることを考えると、その治療のための新規な療法を提供することが必要である。高コレステロール血症、高脂質血症を同時に治療し、血管内皮細胞におけるＶＣＡＭ−１の発現を阻害できる新規な薬物を提供することが目標である。
【００２４】
したがって、本発明の１目的は、ＶＣＡＭ−１を抑制するための方法および組成物、具体的には、心血管疾患を治療するための方法を提供することである。
【００２５】
本発明の別の目的は、高コレステロール血症、高脂質血症を同時に治療し、血管内皮細胞におけるＶＣＡＭ−１の発現を阻害できる、心血管疾患を治療するための方法および組成物を提供することである。
【００２６】
概要
プロブコールモノエステル類が、コレステロールの減少、ＬＤＬの低下、およびＶＣＡＭ−１発現の阻害に同時に有効であり、したがって、これらの化合物が、複合心血管用剤として有用であることを発見した。化合物は、３つの重要な血管保護活性を同時に示すことから、複数の薬物を服用するかわりに１つの薬物を服用して同じ効果を得ることができる。治療の一貫性および患者のコンプライアンスを増加させるに違いない。
【００２７】
プロブコール自体は強力な抗酸化剤であるにもかかわらずＶＣＡＭ−１発現に余り影響を与えないことから、プロブコールモノエステルがＶＣＡＭ−１を阻害することを知ったのは意外であった。プロブコールジエステル類もＶＣＡＭ−１発現に顕著な影響を与えず、スタチン類も同様である。
【００２８】
プロブコールモノコハク酸エステルは、ウサギにおいてＨＤＬをわずかに減少させるに過ぎず、マウスおよびサルにおいてはＨＤＬに影響を与えないことも発見した。対照的に、プロブコールは、ＬＤＬをわずかに減少させるに過ぎず、ＨＤＬを顕著に減少させる。スタチン類は、ＬＤＬを減少させ、ＨＤＬに対しては影響を与えることもあり、与えないこともある。
【００２９】
さらに、プロブコールモノエステル類、具体的にプロブコールモノコハク酸エステル（本明細書中では「ＭＳＥ」と呼ぶ）は、ヒト大動脈内皮細胞において、ＴＮＦ誘発ＶＣＡＭ−１およびＭＣＰ−１遺伝子表現を選択的に阻害するが、ＩＣＡＭ−１については阻害しない。ＭＳＥは、ＮＦ−ｋＢ活性化に影響を与えない。本明細書中では、ＭＳＥをプロブコールモノエステル類の具体例として用いる。具体例としてＭＳＥを用いるのは、論議の都合上に過ぎず、本発明の範囲を限定することを意味していない。
【００３０】
プロブコールモノエステル類、具体的にはプロブコールモノコハク酸エステルが、誘発された内皮細胞表面接着分子ＶＣＡＭ−１の発現を阻止するという発見を考えると、アテローム性動脈硬化症、血管形成術後の再狭窄、冠状動脈疾患、狭心症、および他の心血管疾患、ならびにＶＣＡＭ−１が介在する非心血管炎症性疾患を含む、ＶＣＡＭ−１が介在するいずれの疾患の治療にも有用である。前記化合物は、心臓移植拒否反応の治療にも用いることができる。
【００３１】
本明細書中に記載する化合物類は、心血管疾患の主要薬物治療および補助的薬物治療のいずれにも有用である。前記化合物類は、例えば、アテローム性動脈硬化症、血管形成術後の再狭窄、冠状動脈疾患および狭心症を含む冠状動脈疾患状態の主要な治療に用いられる。手術または血管形成術では治療できない小血管疾患、または手術が選択肢にない血管疾患を治療するために前記化合物類を投与することができる。前記化合物は、血管形成療法に先だって患者を安定化するためにも用いることができる。
【００３２】
本明細書中に記載する本発明を適当に用いることは、新しい病変の発生を予防し、既存の病変を退行させることにより、アテローム性動脈硬化症を医学的に「治癒する」可能性をもたらす。
【００３３】
もう１つの実施形態において、本明細書中に記載する化合物類は、ＶＣＡＭ−１が介在する炎症性皮膚疾患、具体的にはＶＣＡＭ−１が介在するヒト内皮性疾患の治療に用いることが可能であり、ヒト内皮性疾患には、喘息、乾癬、湿疹性皮膚炎、カポジ肉腫、多発性硬化症、ならびに平滑筋細胞の増殖性障害が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００３４】
さらに別の実施形態において、本明細書中に記載する化合物類は、単核白血球が介在する炎症性状態を治療するために選択することができる。
【００３５】
図の簡単な説明
第１図は、ＨＡＥＣ細胞におけるＶＣＡＭ−１発現に対するプロブコールモノコハク酸エステルの効果を、２．５μＭ、５μＭ、１０μＭおよび１００μＭでプロブコールと比較した棒グラフである。
第２図は、ＨＡＥＣ細胞におけるＩＣＡＭ−１発現に対するプロブコールモノコハク酸エステルの効果を、２．５μＭ、５μＭ、１０μＭおよび１００μＭでプロブコールと比較した棒チャートグラフである。
第３図は、ヒト大動脈内皮細胞（ＨＡＥＣ）におけるＭＣＰ−１発現に対し、プロブコールモノコハク酸エステル１０μＭ、プロブコール５０μＭおよびＴＮＦを比較した棒グラフである。
第４図は、ＨＡＥＣにおける遺伝子発現に対するプロブコールモノコハク酸エステル（１０および２５μＭ）およびプロブコール（５０μＭ）の効果を図示したものである。
第５図は、脂質食ウサギの血漿コレステロール値に対するプロブコールモノコハク酸エステルおよびプロブコールの効果の棒グラフである。
第６図は、３週間投与したウサギの血漿中プロブコールモノコハク酸エステルおよびプロブコール濃度を比較する棒グラフである。
第７図は、６週間にわたる高コレステロール血症ウサギモデルにおける血清総コレステロールに対するプロブコールモノコハク酸エステルの効果のグラフである。
第８図は、脂質食ウサギにおける６週間後の総コレステロール、ＬＤＬｃ、ＶＬＤＬｃ、ＩＬＤＬｃ、ＨＤＬｃ、およびＴＧに対するプロブコールモノコハク酸エステルの効果の棒グラフである。
第９図は、未処置およびプロブコールモノコハク酸エステルで処置した脂質食ウサギにおいて、病変によって覆われた大動脈表面積百分率のグラフである。
第１０図は、処置日数の関数として、マイクロモルで表されるプロブコールモノコハク酸エステルの血漿濃度のグラフである。
第１１図は、ＡｐｏＥ−ＫＯマウスに、対照と対比してプロブコールモノコハク酸エステルを経口投与して２週間後の総コレステロール、ＶＬＤＬ、ＩＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬ、およびトリグリセリドをｍｇ／ｍｌの単位で表した棒グラフである。
第１２図は、プロブコールモノコハク酸エステルの投与中および投与後の高コレステロール血症サルにおける数日間の血清ＬＤＬ値低下のグラフである。
第１３図は、高コレステロール血症サルの血清ＬＤＬに対するプロブコールモノコハク酸エステルの効果の棒グラフである。
第１４図は、対照と対比して１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄのプロブコールモノコハク酸エステルをラットに２週間経口投与したときの総タンパク、カルシウム、リン酸エステル、グルコース、ｂｕｎ、およびコレステロールに対する効果を、任意の単位で表す棒グラフである。
第１５図は、対照と対比して１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄのプロブコールモノコハク酸エステルをラットに２週間経口投与したときのアルブミン、クレアチニン、尿酸、および総ビリルビンに対する効果を、任意の単位で表す棒グラフである。
【００３６】
Ｉ．定義
本明細書中で用いるように、「プロブコールモノエステル」という用語には、（ｉ）米国特許第５，２６２，４３９号に記載されているプロプコールの任意のモノエステル、例えば、カルボン酸エステルおよびジカルボン酸エステルおよびその塩、（ｉｉ）プロブコールより大きな水溶性を有し、本明細書中に詳細を記載するように血漿コレステロールを低下させ、ＬＤＬを低下させ、さらにＶＣＭ−１の発現を阻害する、任意のプロブコールモノエステルが含まれる。１つの実施形態において、プロブコールモノエステル類には、プロブコールのジカルボン酸エステルが含まれ、ジカルボン酸には、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、スベリン酸、セバシン酸、アゼライン酸、およびマレイン酸エステルが含まれるが、これらに限定されるものではない。別の実施形態において、エステル基は、プロブコールに比べて化合物の溶解性を増加させる官能基を含み、これらの官能基には、飽和または非飽和ジカルボン酸およびその塩、アミノカルボン酸およびその塩、アルデヒド含有カルボン酸およびその塩、アミン基、アミン基の塩、アミド基、アルデヒド基およびその塩が含まれるが、これらに限定されるものではない。さらに別の実施形態において、エステルは、スルホン酸、スルホン酸エステル、リン酸、リン酸エステル、環状リン酸エステル、ポリヒドロキシアルキル基、炭水化物基、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＳＯ３Ｈ（スペーサーは、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−、−（ＣＨ２Ｏ）−、−（ＯＣＨ２）−、−（ＳＣＨ２）−、−（ＣＨ２Ｓ−）−、−（アリール−Ｏ）−、−（Ｏ−アリール）−、−（アルキル−Ｏ）−、−（Ｏ−アルキル）−で、ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＳＯ３Ｍ（Ｍは、薬剤として許容される塩を形成するために用いられる金属、例えば、ナトリウムまたはカリウム）、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＰＯ３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＰＯ３Ｍ２、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＰＯ３ＨＭ、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＰＯ４Ｈ、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−ＰＯ４Ｍ、ＳＯ３Ｍ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＰＯ３Ｍ２、−ＰＯ３ＨＭ、環状リン酸エステル、ポリヒドロキシアルキル、炭水化物基、Ｃ（Ｏ）−スペーサー−［Ｏ（Ｃ１〜３アルキル）ｐ］ｎ（ｎは、前の定義と同じで、ｐは、１、２、または３）、−［Ｏ（Ｃ１〜３アルキル）ｐ］ｎ、カルボキシ低級アルキル、低級アルキルカルボニル低級アルキル、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノ低級アルキル、ピリジル低級アルキル、イミダゾリル低級アルキル、モルホリニル低級アルキル、ピロリジニル低級アルキル、チアゾリニル低級アルキル、ピペリジニル低級アルキル、モルホリニル低級ヒドロキシアルキル、Ｎ−ピリル、ピペラジニル低級アルキル、Ｎ−アルキルピペラジニル低級アルキル、トリアゾリル低級アルキル、テトラゾリル低級アルキル、テトラゾリルアミノ低級アルキル、またはチアゾリル低級アルキルからなる群から選択される官能基を含む。
【００３７】
「薬剤として許容される誘導体」という用語は、被験者に投与することにより、直接的または間接的に親化合物を与える能力を持つか、それ自体で活性を示す、活性化合物の誘導体を意味する。
【００３８】
「生理学的に開裂可能な脱離基」という用語は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、結合する分子から開裂させることができる基を意味し、有機または無機陰イオン、薬剤として許容される陽イオン、アシル（アセチル、プロピオニル、およびブチリルを含む（アルキル）Ｃ（Ｏ）を含むが、これらに限定されるものではない）、アルキル、リン酸エステル、硫酸エステルおよびスルホン酸エステルを含むが、これらに限定されるものではない。
【００３９】
アテローム性動脈硬化症および他の心血管および炎症性疾患の治療においては、患部に局在化するために適切な脂溶性を有するプロブコールモノエステル類を選択しなければならない。脂肪沈着などの低い代謝回転領域で、化合物が区画化されてはならない。心血管疾患を治療するための好ましい実施形態において、化合物の体内動態は、鬱血性心不全または腎不全によって大幅に影響されてはならない。
【００４０】
活性化合物または化合物の混合物は、経口または静脈内を含む全身的、または経皮を含む局所的を含む、任意の適当な方法で投与されるが、これらに限定されるものではない。通常の用量範囲は、１日おきに１回から１日２回から数回にわたる投与計画により、体重１ｋｇあたり０．１から５００ｍｇとする。投与期間は、１回だけ投与する単回投与から２から６カ月にわたる１日２回投与までの範囲とする。
【００４１】
心血管療法においては、冠状または他の動脈血管形成術の後、またはその代わりに、灌流バルーンカテーテルを用い、血管壁に化合物を直接投与することもできる。例えば、化合物または化合物の混合物約１から５００ｍＭを含有する生理学的に許容可能な溶液２〜５ｍＬを、１〜５気圧で投与する。その後、再狭窄の危険が最もある期間中６ヶ月にわたり、他の適当な経路および投与計画で、活性化合物を投与する。
【００４２】
活性化合物による比較的短期の治療は、血管形成術および手術で治療することができない冠状動脈疾患病変の「収縮」をもたらすために用いられる。短期治療の非限定的例は、１日おきに１回から１日３回の範囲で体重１ｋｇあたり０．５から５００ｍｇを２から６カ月投与するものである。
【００４３】
長期治療は、危険度の高い患者において、進行した病変の発生を予防するために用いられる。長期治療は、１日おきに１回から１日３回にわたる間隔で、体重１ｋｇあたり０．５から５００ｍｇにわたる用量を数年間に延長することができる。
【００４４】
活性化合物は、現在、臨床的に重要な再狭窄を生じる異常な増殖および炎症性反応を減少または除去する手段として、冠状動脈血管形成術の直前または直後の期間に投与することができる。
【００４５】
活性化合物は、アスピリンなどの血小板凝集阻害剤；クマジンなどの抗血栓剤；ベラパミル、ジルチアゼム、およびニフェジピンなどのカルシウムチャンネル遮断剤；カプトプリルおよびエナラプリルなどのアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、およびプロパナロール、テルブタロール（ｔｅｒｂｕｔａｌｏｌ）、およびラベタロールなどのβ遮断剤を含む、心血管疾患の治療に用いられる他の薬剤と併せて投与することができる。前記化合物は、イブプロフェン、インドメタシン、フェノプロフェン、メフェナム酸、フルフェナム酸、スリンダクなどの非ステロイド性抗炎症剤と併用して投与することもできる。化合物を、コルチコステロイド類と共に投与することもできる。
【００４６】
皮下に埋め込んだペレットによって投与されたＭＳＥ（１５０ｍｇ／ｋｇ／日の時間放出ペレット）は、マウスモデルの肺におけるＶＣＡＭ−１およびＭＣＰ−１のＬＰＳ−誘発遺伝子表現を阻止する。
【００４７】
６週間のＭＳＥ経口投与（１５０ｍｇ／ｋｇ／日）は、ニュージーランド白色ウサギモデルにおいて、血漿中のＡｐＯ−Ｂ含有およびＨＤＬコレステロール値の総計を低下させる。血漿コレステロールに対する効果は、アテローム性動脈硬化病変形成、マクロファージ蓄積およびＶＣＡＭ−１発現の顕著な阻害を伴った。
【００４８】
２週間のＭＳＥ経口投与は、ＨＤＬに影響を与えることなく、コレステロール食Ｃ５７黒色マウスモデルおよびａｐｏＥノックアウトマウスモデルにおけるａｐｏＢ含有リポタンパクを選択的に低下させた。抗コレステロール血症のアカゲザルモデルにＭＳＥを２週間経口投与すると、ＨＤＬに影響を与えることなく、血漿およびＬＤＬコレステロールの総量が低下する。
【００４９】
ＭＳＥは、細菌によるエームズ試験において突然変異原ではない。１０００／ｍｇ／ｋｇ／日で２週間、ラットにＭＳＥを経口投与すると、死亡例はなく、血清電解質およびヘマトクリット値に対する影響はなかった。血清ＬＤＨ、アルカリホスファターゼ、ＳＧＯＴおよびＳＧＰＴの上昇が認められたが、未処置群に対して統計学的な差はなく、肝臓の形態学的または組織病理学的変化は伴わなかった。
【００５０】
炎症性皮膚障害の治療のために局所塗布するためには、患部に治療効果をもたらすに十分な量が皮膚から吸収されるように、選択した化合物を製剤化しなければならない。プロブコールモノエステルは、生理学的に許容可能でなければならない。通常、少なくとも２、好ましくは少なくとも５または１０の治療係数を有する化合物が許容可能である。治療係数は、ＥＣ５０／ＩＣ５０と定義され、ここでＥＣ５０は、ＶＣＡＭ−１の発現を５０％阻害する化合物濃度であり、ＩＣ５０は、標的細胞の５０％に毒性を示す化合物濃度である。細胞毒性は、当業者に知られているように、直接細胞計数、トリパンブルー排除、または３Ｈ−チミジン取り込みなどの様々な代謝活性試験によって測定することができる。
【００５１】
モデル化合物としてＭＳＥを用いる以下の実施例で本発明をさらに説明する。これは、例示に過ぎず、本発明の範囲を限定することを意図していない。本明細書中に記載する他のいずれの化合物も、実質的に同様の方法で心血管疾患および炎症性障害の治療に用いることができる。
【００５２】
（実施例１）
ヒト大動脈内皮細胞におけるＶＣＡＭ−１発現
第１図は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのヒト大動脈内皮細胞におけるＶＣＡＭ−１発現に対するプロブコールモノコハク酸エステルの効果を、２．５μＭ、５μＭ、１０μＭおよび１００μＭでプロブコールと比較し、ＴＮＦ単独で誘発されたＶＣＡＭ−１発現の百分率として表す棒グラフである。細胞は、組織培養インキュベータ中、摂氏３７度で細胞培地中１６時間インキュベートした。１６時間後、細胞を洗浄し、ＶＣＡＭ−１に対する抗体とともにインキュベートした。細胞に結合した抗体の量は、ＶＣＡＭ−１抗体に対する西洋ワサビペルオキシダーゼ複合抗体を用い、比色ＥＬＩＳＡ定量法によって測定した。示されたように、これらの条件の下でＭＳＥはＶＣＡＭ−１の発現を阻害するが、プロブコールは、ＶＣＡＭに対して感知できるほどの効果は有していなかった。
【００５３】
（実施例２）
ヒト大動脈内皮細胞におけるＩＣＡＭ−１発現
第２図は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのヒト大動脈内皮細胞におけるＩＣＡＭ−１発現に対するプロブコールモノコハク酸エステルの効果を、２．５μＭ、５μＭ、１０μＭおよび１００μＭでプロブコールと比較し、ＴＮＦ単独で誘発されたＩＣＡＭ−１発現の百分率として表す棒グラフである。細胞は、組織培養インキュベータ中、摂氏３７度で細胞培地中１６時間インキュベートした。１６時間後、細胞を洗浄し、ＩＣＡＭ−１に対する抗体とともにインキュベートした。細胞に結合した抗体の量は、ＩＣＡＭ−１抗体に対する西洋ワサビペルオキシダーゼ複合抗体を用い、比色ＥＬＩＳＡ定量法によって測定した。示されたように、ＭＳＥは、ＩＣＡＭ−１の発現に対してわずかな効果を持つに過ぎず、濃度依存性はほとんどない。プロブコールは、ＩＣＡＭ発現に対する効果を有していなかった。
【００５４】
（実施例３）
ヒト大動脈内皮細胞におけるＭＣＰ−１発現
第３図は、ヒト大動脈内皮細胞（ＨＡＥＣ）におけるＭＣＰ−１発現に対し、プロブコールモノコハク酸エステル１０μＭ、プロブコール５０μＭおよびＴＮＦを比較する棒グラフである。細胞は、ＴＮＦ単独、またはプロブコールモノコハク酸エステル１０マイクロモルと共に４時間処理した。細胞培地を採取し、比色ＥＬＩＳＡ定量法を用いてＭＣＰ−１の量を定量するために用いた。示されたように、プロブコールモノコハク酸エステルは、プロブコール自体に比べ、ＭＣＰ−１の発現をかなり阻害した。ＭＣＰ−１は、アテローム性動脈硬化病変に単球を集合させる化学遊走物質タンパクである。
【００５５】
（実施例４）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏのヒト大動脈内皮細胞における遺伝子発現に対するプロブコールモノコハク酸エステルの効果
第４図は、ＬＰＳ−抗原投与ＡｐｏＥノックアウトマウスから単離したＲＮＡの、ＶＣＡＭ−１およびＭＣＰ−１遺伝子発現のノーザンブロット分析である。マウスには、４００ｍｇ９０日−時間放出ペレットにより、ＭＳＥ、プロブコールおよびプラセボを皮下投与した。１週間後、ＬＰＳ１ｍｇ／ｋｇを抗原として腹腔内投与した。２時間後、動物を致死せしめ、ＲＮＡの単離のために肺を冷凍した。ＲＮＡは、変性１．０％アガロースゲル電気泳動によってサイズ分画し、ナイロン膜に移し、マウスＪＥ特異的３２Ｐ標識ｃＤＮＡプローブでハイブリッド形成させた。続いて、膜をはぎ取り、マウスＶＣＡＭ−１特異的ｃＤＮＡと、続いてトリβ−アクチン特異的ｃＤＮＡプローブでハイブリッド形成させた。
【００５６】
（実施例５）
脂質食ウサギの血漿中コレステロールに対するプロブコールモノコハク酸エステルの効果
第５図は、脂質食ウサギの血漿中総コレステロール値およびリポタンパクコレステロール値に対するプロブコールモノコハク酸エステルおよびプロブコールの効果の棒グラフである。ウサギには、０．５％ｗｔ／ｗｔＭＳＥまたはプロブコールを含有する高脂肪食（０．５％コレステロールおよび３％ココヤシ油）を３週間与えた。対照動物には、薬物を加えずに同じ食事を与えた。高速液体クロマトグラフィにより全血からリポタンパク分画を分離し、コレステロール含有量を分析した。ＭＳＥは、全リポタンパク分画で統計学的に有意な減少をもたらし、プロブコールは、ＨＤＬコレステロールで統計学的に有意な減少をもたらしたに過ぎなかった（ｐ＜０．０５）。
【００５７】
（実施例６）
高コレステロール食を３週間与えたウサギの血漿におけるＭＳＥおよびプロブコール薬物濃度の影響の比較
ＭＳＥまたはプロブコールを、０．５％ｗｔ／ｗｔの濃度の高脂肪食（０．５％コレステロールおよび３％ココヤシ油）として、ウサギに３週間投与した。薬物は、エーテルで血漿から抽出し、高速液体クロマトグラフィにより分析した。示されるように、プロブコールおよびＭＳＥの濃度は同じであったが、前記実施例に示したように、前記化合物は、血漿コレステロールおよびリポタンパク値に対し著しく異なる効果を有していた。
【００５８】
（実施例７）
ＮＦ−ｋＢ活性化に対するＭＳＥの効果
ヒト大動脈内皮細胞を、ＴＮＦ単独またはＭＳＥ２５マイクロモルまたはＰＤＴＣと共に、１時間、２時間、または４時間処理した。細胞を洗浄し、核抽出物を調製して、ＶＣＡＭ−１プロモータプローブを用いてゲルシフト分析を行った。ＭＳＥはＮＦ−ｋＢ活性化に影響を与えないが、ＰＤＴＣは、ＮＦ−ｋＢの活性化を阻害することが分かった。
【００５９】
（実施例８）
コレステロール食ウサギのコレステロール値に対する６週間後のＭＳＥの効果
ニュージーランド白色ウサギに、高脂肪高コレステロール（０．５％）食を単独で、またはＡＧＥ−３またはプロブコール０．５重量／重量（約１５０ｍｇ／ｋｇ／日）と一緒に、６週間与えた。第８図は、脂質食ウサギにおける６週間後の総コレステロール、ＬＤＬｃ、ＶＬＤＬｃ、ＩＬＤＬｃ、ＨＤＬｃ、およびトリグリセリド（ＴＧ）に対するプロブコールモノコハク酸エステルの効果の棒グラフである。６週間後、高速液体クロマトグラフィにより、リポタンパク分画を全血から分離し、コレステロールおよびトリグリセリド含有量を分析した。実施例８に示すように、総コレステロール、ならびにＶＬＤＬおよびＩＤＬ中のコレステロールは、プロブコールに比べて、ＡＧＥ−３で処置することによってより低下した。
【００６０】
（実施例９）
高コレステロール血症におけるアテローム性動脈硬化症の進行に対するＡＧＥ−３の効果
実施例８に記載したウサギを致死せしめ、大動脈を得た。大動脈は、ズダン−４で染色し、染色の程度を分析した。第９図は、ＭＳＥ処置および未処置の脂質食ウサギにおいて病変によって覆われた大動脈表面積百分率のグラフである。ＡＧＥ−３を投与されたウサギの大動脈は、あまり染色されず、プロブコールモノコハク酸エステルで処置したウサギにおけるアテローム性動脈硬化症の減少を示している。
【００６１】
大動脈切片を、ＶＣＡＭ−１に対する抗体またはＲａｍ−１１抗原を用い、ＶＣＡＭ−１発現またはマクロファージ蓄積用に免疫染色した。ＡＧＥ−３処置はＶＣＡＭ−１発現およびマクロファージ蓄積を顕著に減少させた（すなわち、約７５％以上）。同様の実験で、同一の投与量でプロブコールは、あまり有効ではなかった（ＶＣＡＭ−１発現およびマクロファージ蓄積で２５％未満の減少）。
【００６２】
（実施例１０）
高コレステロール血症サルにおいて、ＡＧＥ−３は可逆的にＬＤＬを低下させる
ＡＧＥ−３の投与に先だって、アカゲザルに高脂肪コレステロール食を与えて高コレステロール血症にした。次いで、２週間にわたりＡＧＥ−３（１００ｍｇ／ｋｇ／日）を、サルに経口投与した。この期間に、サルの血清ＬＤＬコレステロールのパーセントは、４から６０パーセントの範囲で減少した。次いで、薬物の投与を中止し、血清コレステロールを２９日目にチェックした。コレステロール値は処置前の値に戻り、そのまま維持された。
【００６３】
（実施例１０）
第１０図は、治療日数の関数として、マイクロモルで表されるプロブコールモノコハク酸エステルの血漿濃度のグラフである。図に示されるように、ＭＳＥの血漿濃度はまずまず一定である。
【００６４】
（実施例１１）
第１１図は、対照と対比して、ＡｐｏＥ−ＫＯマウスにプロブコールモノコハク酸エステル（１５０ｍｇ／ｋｇ／日）を経口投与して２週間後の、総コレステロール、ＶＬＤＬ、ＩＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬ、およびトリグリセリドをｍｇ／ｍｌの単位で表した棒グラフである。
【００６５】
（実施例１２）
第１２図は、プロブコールモノコハク酸エステルの投与中および投与後の高コレステロール血症サルにおける日数毎のＬＤＬの可逆的低下のグラフである。
【００６６】
（実施例１３）
第１３図は、高コレステロール血症サルの血清ＬＤＬに対するプロブコールモノコハク酸エステルの効果の棒グラフである。
【００６７】
（実施例１４）
第１４図は、対照と対比して１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄのプロブコールモノコハク酸エステルをラットに２週間経口投与したときの総タンパク、カルシウム、リン酸エステル、グルコース、ｂｕｎ、およびコレステロールに対する効果を、任意の単位で表した棒グラフである。
【００６８】
（実施例１５）
第１５図は、対照と対比して１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄのプロブコールモノコハク酸エステルをラットに２週間経口投与したときのアルブミン、クレアチニン、尿酸、および総ビリルビンに対する効果を、任意の単位で表した棒グラフである。
【００６９】
総コレステロールおよびＬＤＬに対する効果に関して、ウサギおよびサルに対比してマウスにおけるＭＳＥおよびプロブコールの効果に差があることに注意した。ＭＳＥは、マウスに比べると、ウサギおよびサルにおけるコレステロールおよびＬＤＬの減少により効果的である。マウスでは、ＭＳＥはプロブコールと同一の効果を有すると思われるが、あったとしても、これら２つの要素に対して最小の効果である。しかし、ＭＳＥは、試験したすべてに動物種でＶＣＡＭ−１の発現を阻害した。
【００７０】
ＩＩＩ．医薬組成物
心血管疾患、ＶＣＡＭ−１が介在する炎症性状態を含む、本明細書中に記載した疾患状態のいずれかに苦しむヒト、ウマ、イヌ、ウシおよび他の動物、具体的に哺乳動物は、薬剤として許容される担体または希釈剤中の、有効量の１つまたは複数の前述の化合物または薬剤として許容されるその誘導体、またはその塩を患者に投与することによって処置することができる。活性物質は、任意の適当な経路、例えば、経口、非経口、静脈内、皮内、皮下、または局所的に投与することができる。
【００７１】
本明細書中で用いるように、薬剤として許容される塩または複合体という用語は、前記化合物の所望の生物活性を保持し、望ましくない毒性効果を最小限に抑える塩または複合体を意味する。非限定的なこのような塩の例には、（ａ）無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など）で形成される酸付加塩、および酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモ酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、およびポリガラクツロン酸などの有機酸で形成される塩、（ｂ）亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウム、ナトリウム、カリウムなどの多価金属陽イオン、またはＮ，Ｎ−ジベンジルエチレン−ジアミン、Ｄ−グルコサミン、アンモニウム、テトラエチルアンモニウム、またはエチレンジアミンから形成される有機陽イオンで形成される塩基付加塩、または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せ、例えば、タンニン酸亜鉛塩などがある。
【００７２】
活性化合物は、治療される患者において、重篤な毒性効果を引き起こさずに、治療有効量を患者に送達するために十分な量で、薬剤として許容される担体または希釈剤中に含まれる。前述のすべての条件に対して好ましい活性化合物の投与量は、１日あたり約０．１から５００ｍｇ／ｋｇの範囲にあり、１日あたり１から１００ｍｇ／ｋｇが好ましい。薬剤として許容される誘導体の有効用量範囲は、送達される親化合物の重量に基づいて計算することができる。誘導体それ自体が活性を示す場合には、前述のように誘導体の重量を用いるか、当業者に知られている他の手段により、有効用量を推定することができる。
【００７３】
全身投与の場合には、化合物は、いずれの適当な単位剤形によっても好都合に投与することができ、単位剤形あたり活性成分１から３０００ｍｇ、好ましくは５から５００ｍｇを含有する単位剤形が含まれるが、これらに限定されるものではない。通常、２５〜２５０ｍｇの経口用量が好都合である。活性成分は、約０．１から１００ｍＭ、好ましくは約１〜１０ｍＭの活性化合物の最高血漿中濃度が達成されるように投与されなければならない。これは、例えば、溶液、または任意選択で生理食塩水または水性媒質に溶かした活性成分の製剤の静脈注射、または活性成分のボーラスとして投与することにより達成することができる。
【００７４】
薬物組成物中の活性化合物の濃度は、吸収、分布、不活性化、および薬物の排泄速度、ならびに当業者に知られている他の要素によって変化する。用量値は、軽減しようとする状態の重症度によっても変化することに注意されたい。具体的な被験者に対して、個々の必要性および投与する人物、または組成物の投与を管理する人物の判断に従い、具体的な投与計画を調整しなければならないこと、および本明細書中で述べた濃度範囲は、例示に過ぎず、請求の範囲に記載されている組成物の範囲または実施を限定することを意図していないことは、理解されるであろう。活性成分は、一度に投与するか、多数のより少量の投与量に分割して様々な時間間隔で投与することができる。
【００７５】
経口組成物は通常、不活性な希釈剤または食用に適する担体を含む。それらはゼラチンカプセルに封入されるか、錠剤に圧縮される。経口治療投与の場合、活性化合物を、賦形剤と一緒に組み込み、錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤の形で用いることができる。薬剤学的に適合可能な結合剤、および／または補助材料を、組成物の一部として含むことができる。
【００７６】
錠剤、丸剤、トローチ剤などは、以下の成分、または同様の性質を持った化合物を含むことができる。微結晶性セルロース、トラガカントガムまたはゼラチンなどの結合剤；デンプンまたはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）、またはコーンスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムまたはステロテス（Ｓｔｅｒｏｔｅｓ）などの滑沢剤；コロイド二酸化ケイ素などの流動化剤；ショ糖またはサッカリンなどの甘味剤；またはペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ香料などの香味剤。単位剤形がカプセルの場合、前記のタイプの材料に加え、脂肪油などの液体担体を含むことができる。さらに、単位剤形は、用量単位の物理的形を変化させる他の様々な材料、例えば、砂糖のコーティング、セラック、または他の腸溶剤を含むことができる。
【００７７】
活性化合物または薬剤として許容されるその塩またはその誘導体は、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエーハ剤、チューインガムなどの成分として投与することができる。シロップ剤は、活性化合物に加え、甘味剤としてショ糖およびある種の保存剤、染料および着色剤および香料を含むことができる。
【００７８】
活性化合物または薬剤として許容されるその誘導体またはその塩は、抗生物質、抗真菌剤、抗炎症剤、または抗ウイルス化合物などの、所望の作用を損なわない他の活性物質、または所望の作用を補う物質と共に投与することもできる。活性化合物は、プロブコールおよびニコチン酸などの脂質低下剤；アスピリンなどの血小板凝集阻害剤；クマジンなどの抗血栓剤；ベラパミル、ジルチアゼム、およびニフェジピンなどのカルシウムチャンネル遮断剤；カプトプリルおよびエナラプリルなどのアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、およびプロパナロール、テルブタロール、およびラベタロールなどのβ遮断剤と共に投与することができる。化合物は、イブプロフェン、インドメタシン、アスピリン、フェノプロフェン、メフェナム酸、フルフェナム酸、スリンダクなどの非ステロイド性抗炎症剤と併用して投与することもできる。化合物を、コルチコステロイド類と共に投与することもできる。
【００７９】
非経口、皮内、皮下、または局所塗布に用いる水剤または懸濁剤は、以下の成分を含むことができる。注射用の水、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール類、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒などの無菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベン類などの抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート化剤；酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩などの緩衝液および塩化ナトリウムまたはブドウ糖などの張力調整剤。非経口調製物は、アンプル、使い捨て注射器、またはガラスまたはプラスチック製の複数回投与バイアルに封入することができる。
【００８０】
局所塗布に適当な賦形剤または担体は知られており、ローション剤、懸濁剤、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、チンキ剤、スプレー剤、散剤、ペースト剤、徐放性経皮パッチ、喘息用のエアゾール剤、および直腸、膣、鼻、または口腔粘膜に塗布するための坐剤が含まれる。
【００８１】
濃厚剤、皮膚軟化剤、および安定化剤を用いて局所組成物を調製することができる。濃厚剤の例には、ペトロラタム、蜜蝋、キサンタンガム、またはポリエチレングリコール、ソルビトールなどの湿潤剤、鉱油、ラノリンおよびその誘導体、またはスクワレンなどの皮膚軟化剤が含まれる。多くの水剤および軟膏剤が市販されている。
【００８２】
天然または人工の香料または甘味料を添加し、粘膜表面に対する局所効果のために塗布される局所調製物の風味を増すことができる。口腔粘膜表面に塗布するためにデザインされた調製物の場合には、不活性な染料または着色料を用いることができる。
【００８３】
活性化合物は、放出制御製剤などの、急速な放出から化合物を守る担体と共に調製することが可能であり、埋め込みおよびマイクロカプセルに入れた送達システムが含まれる。エチレンビニル酢酸エステル、ポリ無水物類、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル類、およびポリ乳酸などの生体分解性、生体適合性ポリマーを用いることができる。このような製剤を調製するための多くの方法が特許を受けており、当業者に広く知られている。
【００８４】
静注内投与の場合、好ましい担体は、生理食塩水またはリン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。
【００８５】
活性化合物は、経皮パッチによって投与することができる。経皮パッチを調製するための方法は、当業者に知られている。例えば、参照により本明細書中に組み込む、Ｂｒｏｗｎ、Ｌ．、およびＬａｎｇｅｒ、Ｒ．、Ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ、Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３９巻、２２１〜２２９ページ、１９８８年を参照されたい。
【００８６】
別の実施形態において、活性化合物は、放出制御製剤などの、体からの急速な排出から化合物を守る担体と共に調製することができ、埋め込みおよびマイクロカプセルに入れた送達システムが含まれる。エチレンビニル酢酸エステル、ポリ無水物類、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル類、およびポリ乳酸などの生体分解性、生体適合性ポリマーを用いることができる。このような製剤を調製するための多くの方法は、当業者には明らかであろう。前記材料は、Ａｌｚａ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｉｎｃ．からの市販品として入手できる。リポソームの懸濁剤も、薬剤として許容される担体である。これらは、例えば米国特許第４，５２２，８１１号（その全開示を参照により本明細書中に組み込む）に記載されるように、当業者に知られている方法に従って調製することができる。例えば、リポソーム製剤は、無機溶媒に適当な脂質（ステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ステアロイルホスファチジルコリン、アラカドイルホスファチジルコリン、およびコレステロールなど）を溶かし、次いで蒸発させ、容器の表面上に乾燥脂質の薄膜を残すことによって調製することができる。次いで、活性化合物またはそのモノリン酸エステル、ジリン酸エステル、および／またはトリリン酸エステル誘導体の水溶液を容器に導入する。次いで、容器を手で旋回させ、脂質材料を容器の側面から引き離し、脂質集合を懸濁させると、リポソーム懸濁液が生成する。
【００８７】
前記から、本発明の改良および変形形態は、当業者には明らかであろう。これら実施形態はすべて本発明の範囲に含まれると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００８８】
【図１】図１は、ＨＡＥＣ細胞におけるＶＣＡＭ−１発現に対するプロブコールモノコハク酸エステルの効果を、２．５μＭ、５μＭ、１０μＭおよび１００μＭでプロブコールと比較した棒グラフである。
【図２】図２は、ＨＡＥＣ細胞におけるＩＣＡＭ−１発現に対するプロブコールモノコハク酸エステルの効果を、２．５μＭ、５μＭ、１０μＭおよび１００μＭでプロブコールと比較した棒チャートグラフである。
【図３】図３は、ヒト大動脈内皮細胞（ＨＡＥＣ）におけるＭＣＰ−１発現に対し、プロブコールモノコハク酸エステル１０μＭ、プロブコール５０μＭおよびＴＮＦを比較した棒グラフである。
【図４】図４は、ＨＡＥＣにおける遺伝子発現に対するプロブコールモノコハク酸エステル（１０および２５μＭ）およびプロブコール（５０μＭ）の効果を図示したものである。
【図５】図５は、脂質食ウサギの血漿コレステロール値に対するプロブコールモノコハク酸エステルおよびプロブコールの効果の棒グラフである。
【図６】図６は、３週間投与したウサギの血漿中プロブコールモノコハク酸エステルおよびプロブコール濃度を比較する棒グラフである。
【図７】図７は、６週間にわたる高コレステロール血症ウサギモデルにおける血清総コレステロールに対するプロブコールモノコハク酸エステルの効果のグラフである。
【図８】図８は、脂質食ウサギにおける６週間後の総コレステロール、ＬＤＬｃ、ＶＬＤＬｃ、ＩＬＤＬｃ、ＨＤＬｃ、およびＴＧに対するプロブコールモノコハク酸エステルの効果の棒グラフである。
【図９】図９は、未処置およびプロブコールモノコハク酸エステルで処置した脂質食ウサギにおいて、病変によって覆われた大動脈表面積百分率のグラフである。
【図１０】図１０は、処置日数の関数として、マイクロモルで表されるプロブコールモノコハク酸エステルの血漿濃度のグラフである。
【図１１】図１１は、ＡｐｏＥ−ＫＯマウスに、対照と対比してプロブコールモノコハク酸エステルを経口投与して２週間後の総コレステロール、ＶＬＤＬ、ＩＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬ、およびトリグリセリドをｍｇ／ｍｌの単位で表した棒グラフである。
【図１２】図１２は、プロブコールモノコハク酸エステルの投与中および投与後の高コレステロール血症サルにおける数日間の血清ＬＤＬ値低下のグラフである。
【図１３】図１３は、高コレステロール血症サルの血清ＬＤＬに対するプロブコールモノコハク酸エステルの効果の棒グラフである。
【図１４】図１４は、対照と対比して１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄのプロブコールモノコハク酸エステルをラットに２週間経口投与したときの総タンパク、カルシウム、リン酸エステル、グルコース、ｂｕｎ、およびコレステロールに対する効果を、任意の単位で表す棒グラフである。
【図１５】図１５は、対照と対比して１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄのプロブコールモノコハク酸エステルをラットに２週間経口投与したときのアルブミン、クレアチニン、尿酸、および総ビリルビンに対する効果を、任意の単位で表す棒グラフである。
【図１】
2006232848.tif 000003
【図２】
2006232848.tif 000004
【図３】
2006232848.tif 000005
【図４】
2006232848.tif 000006
【図５】
2006232848.tif 000007
【図６】
2006232848.tif 000008
【図７】
2006232848.tif 000009
【図８】
2006232848.tif 000010
【図９】
2006232848.tif 000011
【図１０】
2006232848.tif 000012
【図１１】
2006232848.tif 000013
【図１２】
2006232848.tif 000014
【図１３】
2006232848.tif 000015
【図１４】
2006232848.tif 000016
【図１５】
2006232848.tif 000017