(57)【要約】      （修正有） 【課題】  食品、化粧品、医薬品、医薬部外品等の分野等で有用な新規ショウガオール類縁化合物を提供する。【解決手段】  下記一般式［Ａ］で示されるショウガオール類縁化合物である。2006188444.tif 000020【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式［Ａ］で示されるショウガオール類縁化合物。
【化１】
2006188444.tif 000019
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、食品、医薬品、又は医薬部外品に有用な、転写因子NF-E2 related factor 2依存遺伝子の転写を活性化するショウガオール類縁化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、細胞抗酸化システムなどの生体防御機構において、核内転写因子（NF-E2 related factor 2：以下、Ｎｒｆ２と略記する）が重要な役割を果たしていることが示されている。Ｎｒｆ２は、非ストレス条件下ではＫｅａｐ１(Kelch-like ECH-associated protein 1)と複合体を形成した状態で細胞質に局在する。細胞質に、親電子性物質、活性酸素、重金属などが存在すると、Ｎｒｆ２とＫｅａｐ１との結合が解除され、遊離したＮｒｆ２はキナーゼによるリン酸化を受け核内へ移行する。核内移行したＮｒｆ２はsmall Mafとヘテロ二量体を形成し、ＤＮＡ上の抗酸化剤応答配列（Antioxidant Response Element；ＡＲＥ）に結合し、該ＤＮＡにおける転写を活性化して、一連の抗酸化酵素や異物代謝系第二相酵素などの発現を誘導する（非特許文献１）。
【０００３】
フリーラジカルや活性酸素は、生体内の構成成分である脂質、タンパク質、ＤＮＡなどと容易に反応するため、その障害が種々の疾病を誘起すると言われている。Ｎｒｆ２依存遺伝子は、活性酸素に応答して、抗酸化酵素の転写を活性化する。活性酸素を消去する抗酸化酵素群は生体の防御機能として非常に重要である。活性酸素が関与している疾病としては、癌、炎症、動脈硬化、高血圧症、肝機能障害、糖尿病、虚血再潅流障害、潰瘍、シミ・シワなどが挙げられる（非特許文献２及び３）。
【０００４】
また、Ｎｒｆ２の活性は、加齢とともに低下することが動物実験で示されている。加齢とともに生体の抗酸化システムが低下するのは、Ｎｒｆ２の活性低下が関与していることを示唆している。例えば、還元型グルタチオン量（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ）とＮｒｆ２の活性には強い相関性があることがわかっている（非特許文献４）。
【０００５】
薬剤や環境化学物質などの生体にとって異物となる化学物質は、暴露された後吸収され、異物代謝系酵素群による代謝を受けた後排泄される。この異物代謝系は、転写因子ＡｈＲによって制御される第一相酵素群と、Ｎｒｆ２によって制御される第二酵素群による反応から構成されている。一般的に、生体内に取込まれた化学物質は、上記異物代謝系の第一相酵素群でオキソ中間体に変換され、引き続いて第二相酵素群でより水溶性の高い誘導体に変換され、尿中から排泄される。
環境化学物質の中には、第一相反応後のオキソ中間体がより強い毒性物質である場合がある。また第二相反応が阻害されると、第一相反応で生成したオキソ中間体が蓄積され、発癌や他の疾病に繋がる。例えば、発ガン性物質として知られるベンゾ［ａ］ピレンやアフラトキシンＢ１は、第一相反応により、それぞれ癌原性の高いオキソ中間体に変換されるが、なんらかの原因でＮｒｆ２による転写の活性化が起こらないと、第二相酵素が発現しないため、オキソ中間体が蓄積し発癌につながる（非特許文献５）。
【０００６】
Ｎｒｆ２／ＡＲＥ系により発現が誘導される抗酸化酵素や異物代謝系第二相酵素としては、glutamate-cysteine ligase（ＧＣＬＭ）、heme oxygenase-1（ＨＯ−１）、thioredoxin reductase-1（ＴＸＮＲＤ１）、thioredoxin、ferritin、superoxide dismutase（ＳＯＤ）、catalase、glutathione reductase、gulutathione S-transferase（ＧＳＴ）、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：quinone oxidoreductase（ＮＱＯ１）、UDP-glycosyltransferase 1A6などが知られている（非特許文献６〜９等）。
【０００７】
上記のように、転写因子Ｎｒｆ２により制御される遺伝子群は、内在性及び外来性の環境ストレスに対する防御機能として非常に重要な役割を果たしている。従って生体に対して安全性の高い薬剤をもって、Ｎｒｆ２やこの転写因子に依存する遺伝子の発現を活性化することは、活性酸素や化学物質が原因の疾病を予防・治療するのに非常に有用である。
【０００８】
抗酸化剤として使用されるブチルヒドロキシトルエンや、わさび、キャベツに含まれるスルフォランなどのイソチアネート系化合物は、異物代謝第二相酵素の発現を活性化することが知られている（非特許文献１０及び１１）。
【０００９】
一方、ショウガオールは、ジンゲロールと並び生姜抽出物の主要成分であり、例えば、血行促進作用（特許文献１）、体臭抑制効果（特許文献２）、抗酸化効果（非特許文献１２）、保湿効果（非特許文献１３）等を有することが知られている。また、ショウガオール及びジンゲロールの生体内での代謝経路も研究されており、代謝産物の構造が報告されている（非特許文献１４及び１５）。
本発明者らは、ショウガオールを大量生産する製造方法について報告している（特許文献３）。またショウガオールと類似構造の化合物について、チロシナーゼ活性阻害作用及び抗酸化作用も見出している（特許文献４）。
【００１０】
【特許文献１】特開平６−１８３９５９号公報（発明の詳細な説明）
【特許文献２】米国特許６２６４９２８号（発明を実施するための最良の形態）
【特許文献３】特開２００３−３２７５７４（発明の詳細な説明）
【特許文献４】特願２００３−０８６８１８（発明の詳細な説明）
【非特許文献１】Dinova,A.T.et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.,99,11908-11913(2002)
【非特許文献２】吉川敏一ら、季刊化学総説「活性酸素種の化学」、Ｎｏ．７、ｐ．１６３−１７５（１９９０）
【非特許文献３】福沢健治、「フリーラジカル防御の薬理学と薬物開発の展望」、４６巻、１０号、日本臨床、ｐ．２２６９−２２７６（１９８８）
【非特許文献４】Suh,J.H.et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.,101,3381-3386(2004)
【非特許文献５】Chausseaud,L.F.,Adv.Can.Res.29,175-274(1979)
【非特許文献６】Chen,X.L.et al.,Curr.Pharm.Des.,10,879-891(2004)
【非特許文献７】Lee,J.M.et al.,J.Bio.Chem.,278,12029-12038(2003)
【非特許文献８】Itoh,K.et al.,Free Rad.Biol.Med.,36,1208-1213(2004)
【非特許文献９】Wakabayashi N.et al.,Nat.Genetic.,35,238-245(2003)
【非特許文献１０】Butler,T.M.et al.,Toxicol.Appl.Pharmacol.,135,45-47(1995)
【非特許文献１１】Talalay P.et al.,J.Med.Chem.37,170-176(1994)
【非特許文献１２】Kikuzaki,H.et al.,J.Food Sci.,58,6,1407-1410(1993)
【非特許文献１３】鈴木正人  監修、「新しい化粧品機能素材３００  上巻」、３１１−３１２頁、シーエムシー出版（２００２）
【非特許文献１４】Takahashi,H.et al.,Phytochemistry,34,1497-1500(1993)
【非特許文献１５】Lee,S.S.,Arch.Pharm.Res.,18,136-137(1995)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、食品、医薬品、又は医薬部外品等に用いることができる、ショウガオール類縁化合物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記のような課題に対して鋭意研究を行った結果、新規なショウガオール類縁化合物を見出し本発明を完成させるに至った。
【発明の効果】
【００１３】
本発明のショウガオール類縁化合物は、転写因子Ｎｒｆ２依存遺伝子の転写活性を有する。転写因子Ｎｒｆ２により制御される遺伝子群が環境ストレスに対する防御機能として寄与することから、これに関連する活性酸素や化学物質が原因の疾病を予防・治療するのに非常に有用な、食品、医薬品、又は医薬部外品等に用いることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
すなわち、本発明は、下記一般式［Ａ］で示されるショウガオール類縁化合物である。
【化１】
2006188444.tif 000002
【００１５】
本明細書において、「Ｎｒｆ２依存遺伝子」とは、転写因子Ｎｒｆ２によって転写活性化などの影響を受けるか、又は制御される遺伝子を示す。その具体例としては、ＨＯ−１(decycling)、ＧＣＬＭ、ＧＣＬＣ、ＴＸＮＲＤ１、ferritin、ＮＱＯ１、ＧＳＴ、UDP-glycosyltransferase 1A6、Aldehyde dehydrogenase、solute carrier family、sequestsome 1などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００１６】
本発明の一般式［Ａ］で表わされるショウガオール類縁化合物（以下、化合物［Ａ］ともいう）は、例えば、化学合成及び／又は天然由来のものを原料として製造することができる。
【００１７】
化合物［Ａ］の製造法について説明する。
化合物［Ａ］は、後記する式［Ｂ］で表わされる化合物（以下、化合物［Ｂ］ともいう、その他の式で表わされる化合物についても同様に略記する。）から、必要により水酸基上の置換基の除去及び／又はエステルの加水分解をすることで合成することができる。
【００１８】
【化２】
2006188444.tif 000003
【００１９】
式［Ｂ］中のＲ８、Ｒ１１及びＲ１２は水素原子である。式［Ｂ］中のＲ９及びＲ１０は共に水素原子、もしくは共にメトキシ基である。式［Ｂ］中のＲ１３は水素原子、低級アルコキシ基、炭素数１〜１５のアシロキシ基、または、ＣＯＯＲ１４（但し、ＣＯＯＲ１４中のＲ１４は、炭素数１〜８までの直鎖または分枝鎖アルキル基を示す。）を示す。ｎは１〜２０の整数を示す。
【００２０】
本発明において、低級アルコキシ基は、炭素数１〜４の直鎖または分枝鎖アルキルが酸素原子に結合した基を示し、例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、及び−ＯＣＨ２ＯＣＨ３基などを挙げることができ、好適にはメトキシ、エトキシ、又は−ＯＣＨ２ＯＣＨ３基である。
【００２１】
本発明において、炭素数１〜１５のアシロキシ基は、炭素数１〜１５の直鎖または分枝鎖アシル基が酸素原子に結合した基を示す。炭素数１〜１５の直鎖または分枝鎖アシル基は、たとえばアセチル、ベンゾイル、ブチロイル、イソブチロイル、及びピヴァロイル基などを挙げることができ、好適にはアセチル基である。      
【００２２】
本発明において、炭素数１〜８までの直鎖または分枝鎖アルキル基は、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、およびｎ−オクチル基などを挙げることができ、好適にはメチル、又はエチル基である。
【００２３】
水酸基上の置換基の除去及び／又はエステルの加水分解が必要である場合、その方法は一般に有機合成化学の分野において周知の方法、例えばT.W.Greene.,「Protective Groups in Organic Synthesis」,John Wiley&Sonsに記載の方法に準じて行うことができる。  
【００２４】
化合物［Ｂ］は、下記化合物［Ｃ］からＨＸを脱離させることで製造することができる。
【００２５】
【化３】
2006188444.tif 000004
【００２６】
式［Ｃ］中のＲ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、およびｎは化合物［Ｂ］で定義したとおりである。Ｘはベンゼンスルホニル基またはトルエンスルホニル基を示す。
【００２７】
本発明における化合物［Ｂ］は、π−アリル錯体を形成する金属触媒の存在下で、化合物［Ｃ］と塩基性化合物を作用させることにより合成することができる。
【００２８】
π−アリル錯体を形成する金属触媒としては、パラジウム錯体を好適に使用することができ、具体的には、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）クロロホルム付加物、塩化パラジウム（II）／トリフェニルホスフィン混合物、酢酸パラジウム（II）／トリフェニルホスフィン混合物、および酢酸パラジウム（II）／トリブチルホスフィン混合物等が例示される。当該金属触媒の使用量は、化合物［Ｃ］１ｍｏｌに対して０．０００１〜１ｍｏｌが好ましく、さらに好ましくは０．００１〜０．１ｍｏｌである。
【００２９】
上記塩基性化合物としては、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、およびＮ−メチルイミダゾール、ピリジン等の第三級アミン類が好適であり、使用量は、化合物［Ｃ］１ｍｏｌに対して０．９ｍｏｌ以上であり、１．０ｍｏｌから１０ｍｏｌの範囲が好適である。なお、かかる塩基性化合物を溶媒として使用しても良い。
【００３０】
上記反応は溶媒の存在下で実施することが好ましく、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、アセトニトリル、クロロホルム、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、ヘキサメチルホスホリックトリアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルプロピレンウレア、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、エチレングリコール、グリセリンおよびこれらの混合溶媒等を使用することができ、中でも、１，２−ジクロロエタンとアルコール類との混合溶媒が好適である。
【００３１】
この反応温度は室温から１５０℃、好ましくは、５０℃から１２０℃の範囲が好適である。
この反応時間としては数時間から数１０時間が適当である。
この反応終了後は、溶媒抽出、カラムクロマトグラフィー等の公知の方法により、化合物［Ｂ］を得ることができる。
【００３２】
前述の化合物［Ｃ］は、化合物［Ｄ］と化合物［Ｅ］から合成できる。
【００３３】
【化４】
2006188444.tif 000005
【００３４】
式［Ｄ］中のＲ１３、ｎは化合物［Ｂ］で定義したとおりである。Ｘは化合物［Ｃ］で定義した通りである。
【００３５】
【化５】
2006188444.tif 000006
【００３６】
式［Ｅ］中のＲ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、および、Ｒ１２は化合物［Ｂ］で定義したとおりである。
【００３７】
化合物［Ｃ］は、化合物［Ｄ］とアルキル金属化合物とを反応させ、引き続いて化合物［Ｅ］を反応させることにより製造できる。
【００３８】
このアルキル金属化合物としては、ｔ−ブチルリチウム、リチウムジイソプロピルアミド、またはリチウムビス（トリメチルシリル）アミドが好ましく使用できる。
このアルキル金属化合物の使用量は、基本的には化合物［Ｄ］に対し、０．７から１．３化学当量が好ましく、さらに好ましくは、０．９から１．１化学当量である。
【００３９】
上記反応は、非プロトン性の溶媒中で行うことが好ましく、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、ヘキサメチルホスホリックトリアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルプロピレンウレアおよびこれらの混合溶媒等を好適に使用することができる。
化合物［Ｄ］とアルキル金属化合物との反応温度は、−８０℃から２５℃が好ましく、より好ましくは−５０℃から０℃である。反応時間通常数分から数時間である。
【００４０】
上述のごとく化合物［Ｄ］とアルキル金属化合物とを反応させたものに、引き続いて、化合物［Ｅ］を反応させることにより、化合物［Ｃ］を製造できる。
化合物［Ｅ］を前記反応物に加える際の反応系の温度は、−１００℃から２５℃が好ましく、−８０℃から０℃が好適である。反応時間は通常数分から数時間が適当である。
この反応終了後は、溶媒抽出、カラムクロマトグラフィー等の公知の方法により、化合物［Ｃ］を単離精製することができる。
【００４１】
化合物［Ｄ］は、化合物［Ｆ］のＸ基の転位反応を行うことにより製造することができる。
【００４２】
【化６】
2006188444.tif 000007
【００４３】
式［Ｆ］中のＲ１３、ｎは化合物［Ｂ］で定義したとおりである。Ｘは化合物［Ｃ］で定義した通りである。
【００４４】
化合物［Ｆ］中のＸ基を転位させることにより、化合物［Ｄ］を得ることができる。
この転位反応の好ましい触媒としては、パラジウム触媒を例示することができ、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）クロロホルム付加物、塩化パラジウム（II）／トリフェニルホスフィン混合物、酢酸パラジウム（II）／トリフェニルホスフィン混合物、酢酸パラジウム（II）／トリブチルホスフィン混合物等が好適に使用される。当該金属触媒の使用量は、化合物［Ｆ］１ｍｏｌに対して０．０００１〜１ｍｏｌが好ましく、さらに好ましくは０．００１〜０．１ｍｏｌである。当該金属触媒の使用量が少なすぎる場合は反応の進行が遅く、使用量が多すぎる場合は触媒の除去に労力を要することとなる。
【００４５】
本転位反応は溶媒の存在下で実施することが好ましく、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、トルエン、アセトニトリル、クロロホルム、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、ヘキサメチルホスホリックトリアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルプロピレンウレア、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、エチレングリコール、グリセリンおよびこれらの混合溶媒等を使用することができ、中でも、テトラヒドロフランとメタノールとの混合溶媒が好適である。
【００４６】
本転位反応の反応温度は０℃から１２０℃、好ましくは、２０℃から１００℃の範囲が好適である。この反応時間は条件により異なるが、通常、数時間から数１０時間である。
反応終了後は、溶媒抽出、カラムクロマトグラフィー等の公知の方法により、化合物［Ｄ］を得ることができる。
【００４７】
化合物［Ｆ］は、化合物［Ｇ］にアルキル金属化合物を反応させた後、下記化合物［Ｈ］を反応させることで調整できる。
【００４８】
【化７】
2006188444.tif 000008
式［Ｇ］中のＸは化合物［Ｃ］で定義したとおりである。
【００４９】
【化８】
2006188444.tif 000009
式［Ｈ］中のＲ１３、およびｎは式［Ｂ］で定義した通りである。
【００５０】
化合物［Ｇ］とアルキル金属化合物の反応においては、化合物［Ｇ］に対して、アルキル金属化合物の割合が、０．７から１．３化学当量であることが好ましく、さらに好ましくは、０．９から１．１化学当量である。
上記反応の温度は、−１００℃から０℃が好ましく、より好ましくは−８０℃から−２０℃である。この反応温度が低すぎる場合は温度維持にコストがかかり、また、反応温度が高すぎる場合は副反応が進行する場合がある。
化合物［Ｇ］とアルキル金属化合物との反応は、非プロトン性の溶媒中で行うことが好ましく、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、ヘキサメチルホスホリックトリアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルプロピレンウレア及びこれらの混合溶媒等を好適に使用することができる。
反応時間は条件により異なるが、通常、数分から数１０分である。
【００５１】
アルキル金属化合物としては、ｎ−ブチルリチウム、ｓ−ブチルリチウム、ｔ−ブチルリチウム、フェニルリチウム等のアルキルリチウム化合物、ｎ−ブチルマグネシウムクロリド、ｓ−ブチルマグネシウムクロリド、ｔ−ブチルマグネシウムクロリド、ｎ−ブチルマグネシウムブロミド、ｓ−ブチルマグネシウムブロミド、ｔ−ブチルマグネシウムブロミド等のグリニャール化合物を例示することができ、ｎ−ブチルリチウム、ｎ−ブチルマグネシウムクロリド、ｎ−ブチルマグネシウムブロミドを好適に使用することができる。またアルキル金属化合物に代えて金属リチウム、金属ナトリウム等のアルカリ金属類を使用してもよい。
【００５２】
上述のごとく化合物［Ｇ］とアルキル金属化合物とを反応させたものに、引き続いて、上記化合物［Ｈ］を反応させることにより、化合物［Ｆ］が得られる。
化合物［Ｈ］を前記反応物に加える際の反応系の温度は、−１００℃から０℃が好ましく、−８０℃から−２０℃が好適である。この反応温度が低すぎる場合は温度維持にコストがかかり、また、反応温度が高すぎる場合は副反応が進行する場合がある。
反応時間は条件により異なるが、通常、数分から数１０分である。
反応終了後は、溶媒抽出、カラムクロマトグラフィー等の公知の方法により、化合物［Ｆ］を単離精製することができる。
【００５３】
化合物［Ｅ］は、G.Solladie,et al.,J.Org.Chem.,58,2181(1993)等の文献に記載の方法により合成することができる。
【００５４】
本発明の化合物［Ａ］は、Ｎｒｆ２依存遺伝子の転写を活性化することから、Ｎｒｆ２依存遺伝子の欠損が原因の疾病の治療剤、症状改善剤、および抑制剤等として有用である。また活性酸素や生体異物が原因となる疾病の治療剤、症状改善剤、および抑制剤等としても有用である。
【００５５】
医薬品として用いる場合は、本発明の化合物を単独か或いは製薬上受け入れられる賦形剤又は担体や他の添加剤と共に各種の製剤形態に調合され使用される。その割合および性質は選ばれる化合物の溶解度及び化学的性質、選ばれた投与経路、及び標準の製剤学的慣用法によって決定される。賦形剤又は担体は固体、半固体、又は液体物質であることができ、これらは活性成分のビヒクル又は担体としての役目をすることができる。適当な賦形剤又は担体は製剤学の分野で一般的なものである。製剤組成物は経口又は非経口の使用のために適合化することができ、錠剤、カプセル、座薬、溶液、懸濁液などの形態で患者に投与することができる。
【実施例】
【００５６】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、Ｔｓはｐ−トルエンスルホニル基を示す。
【００５７】
（合成例１）
本発明の化合物［Ａ］を合成するための原料として、化合物１を出発物質とし、化合物２、化合物３を経由して、化合物５を調製した。
【００５８】
はじめに、６−ブロモヘキサン酸エチルの６−ヨードヘキサン酸エチルへの変換反応を行った。
すなわち、アセトン２５０ｍｌに、６−ブロモヘキサン酸エチル３９．１ｇ（１７５ｍｍｏｌ）を溶解し、ヨウ化カリウム２９．１ｇ（１７５ｍｍｏｌ）を加えて、２０時間にわたって加熱還流した。つぎに、反応溶液を室温まで放冷した後、溶媒を留去し、残渣を酢酸エチルエステル１５０ｍｌで抽出した。得られた有機層を蒸留水５０ｍｌで洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去し、減圧乾燥することにより、４７．４ｇの粗生成物を得た。１Ｈ−ＮＭＲ分析を行った結果、本粗生成物はモル分率で９０％の６−ヨードヘキサン酸エチルを含有することがわかった。本粗生成物をそのまま次工程に使用した。
【００５９】
・化合物１の構造式
【化９】
2006188444.tif 000010
【００６０】
つぎに、テトラヒドロフラン４５０ｍｌに、化合物１の３０．５ｇ（１５５ｍｍｏｌ）を溶かした溶液を、ドライアイス／アセトンで−７８℃に冷却した。この溶液に、１．５６Ｍのｎ−ブチルリチウム／ｎ−ヘキサン溶液１００ｍｌ（１５６ｍｍｏｌ）を滴下した。そして同温度で４５分間攪拌後、上述のごとく調製した６−ヨードヘキサン酸エチルの粗生成物をテトラヒドロフラン５０ｍｌに溶かした溶液を滴下した。滴下後、同温度で１０分間攪拌後、徐々に昇温した。反応溶液の温度が−１０℃になったところで、５％クエン酸水溶液５０ｍｌを加えて反応を停止させた。この反応混合物に、１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液１００ｍｌ、飽和食塩水１５０ｍｌおよび酢酸エチルエステル５０ｍｌを加えて分配した。有機層を分取し、水層を酢酸エチルエステル５０ｍｌで抽出した。合わせた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行い、淡黄色の低粘度液状の化合物４９．５ｇ（収率９４％）を得た。
【００６１】
本品の重クロロホルム中で測定した１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのケミカルシフト値は、1.20-1.70(9H,m)、2.03-2.15(2H,m)、2.23-2.35(2H,m)、2.44(3H,s)、3.43-3.55(1H,m)、4.11(2H,q)、5.04(1H,d)、5.25-5.35(1H,m)、5.53-5.68(1H,m)、7.32(2H,d)、7.70(2H,d)であった。
また、赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒペレット法）で吸収があった波数(cm-1)は、2930,2860,1730,1600,1300,1290,1180,1140,940,670であった。
さらに、元素分析の結果は、炭素６４．０９％、水素７．８７％であった。
以上の分析により、得られた化合物が化合物２であることを確認した。
【００６２】
・化合物２の構造式
【化１０】
2006188444.tif 000011
【００６３】
つぎに、化合物２から化合物３への変換を行った。
化合物２の４９．５ｇ（１４６ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン３６０ｍｌおよびメタノール１２０ｍｌに溶かし、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム３．３８ｇ（２．９２ｍｍｏｌ）を加えた。この反応溶液を１６時間にわたって加熱還流した。つぎに、反応溶液を室温まで放冷した後、溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行い、淡褐色の低粘度液状の化合物４７．１ｇ（９５％）を得た。下記に示した１Ｈ−ＮＭＲ分析、赤外線吸収スペクトル分析、および、元素分析の結果、本品は、モル分率で７３％の化合物３を含有し、残りの２７％は化合物３中の炭素−炭素二重結合がシス型に配置した幾何異性体であることを確認した。
【００６４】
化合物３の重クロロホルム中で測定した１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのケミカルシフト値は、1.20-1.33(7H,m)、1.50-1.60(2H,m)、1.99(2H,t)、2.20-2.30(2H,m)、2.45(3H,s)、3.73(2H,d)、4.08-4.15(2H,q)、5.35-5.55(2H,m)、7.34(2H,d)、7.72(2H,d)であった。
また、赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒペレット法）で吸収があった波数(cm-1)は、2930,2860,1730,1600,1320,1150,1090,1030,820,740であった。
さらに、元素分析の結果は、炭素６４．０３％、水素７．５７％であった。
【００６５】
・化合物３の構造式
【化１１】
2006188444.tif 000012
【００６６】
（合成例２）
化合物［Ａ］を得るための原料として、化合物３および３−フェニルプロパナールを原料とし、化合物４を調製した。
すなわち、化合物３の１５．０ｇ（４４．３ｍｍｏｌ）およびトリス［２−（２−メトキシエトキシ）エチル］アミン２．２０ｍｌ（６．８８ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン１００ｍｌに溶解した溶液に、−７８℃で１．０Ｍのリチウムヘキサメチルジシラザン／テトラヒドロフラン溶液４６．０ｍｌを滴下した。同温で６０分間攪拌後、３−フェニルプルパナール５．８０ｍｌ（４４．０ｍｍｏｌ）を加えた。同温で５分間攪拌後、徐々に昇温した。−１０℃で、２０％クエン酸水溶液５０ｍｌを加えて反応を停止した。飽和食塩水１００ｍｌを加え、分配後、有機層を分取した。水層を酢酸エチル５０ｍｌで抽出し、合わせた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、淡黄色中粘度液状の化合物１４．２ｇ（収率６８％）を得た。
【００６７】
本品の重クロロホルム中で測定した１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのケミカルシフト値は、1.25-1.30(7H,m),1.40-1.72(4H,m),1.78-2.03(2H,m),2.17-2.29(2H,m),  2.44(3H,s),2.58-2.99(2H,m),3.35-3.80(1H,m),4.12(2H,q),4.23-4.48(1H,m),  5.00-5.77(1H,m),7.10-7.35(7H,m),7.66(2H,d)であった。
また、赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒペレット法）で吸収があった波数(cm-1)は、3520,2940,1730,1600,1450,1290,1140,1090,700,670,580であった。
さらに、元素分析の結果は、炭素６８．６１％、水素７．６８％であった。
以上の分析により、得られた化合物が化合物４であることを確認した。
【００６８】
・化合物４の構造式
【化１２】
2006188444.tif 000013
【００６９】
＜実施例１＞
合成例２で得た化合物４を原料として、本発明の化合物５を調製した。
すなわち、化合物４の１３．８ｇ（２９．２ｍｍｏｌ）を１，２−ジクロロエタン３００ｇ、イソプロピルアルコール１００ｇ、及びグリセリン１００ｇに溶解した溶液に、トリエチルアミン６．２０ｍｌ（４４．５ｍｍｏｌ）、及びテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム１．６９ｇ（１．４６ｍｍｏｌ）を加えて、バス温１００℃で８時間攪拌した。放冷後、蒸留水４００ｍｌ、および酢酸エチル２００ｍｌを加えて分配し、有機層を回収した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。得られた反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、淡黄色中粘度液状の化合物３．８３ｇ（４１％）を得た。
【００７０】
本品の重クロロホルム中で測定した１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのケミカルシフト値は、1.20-1.48(9H,m),1.58-1.68(2H,m),2.19(2H,q),2.27(2H,t),2.82-2.98(4H,m),4.11(2H,q),6.08(1H,d),6.80(1H,dt),7.15-7.21(3H,m),7.25-7.30(2H,m)であった。
また、赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒペレット法）で吸収があった波数(cm-1)は、2930,2860,1730,1700,1670,1630,1450,1370,1180,1030,700であった。
さらに、元素分析の結果は、炭素７５．９１％、水素８．９２％であった。
以上の分析により、得られた化合物が化合物５であることを確認した。
【００７１】
○化合物５の構造式
【化１３】
2006188444.tif 000014
【００７２】
＜実施例２＞
実施例１で得た化合物５を原料として、本発明の化合物６を調製した。
すなわち、化合物５の１．０６ｇ（３．３５ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン１２ｍｌに溶解した溶液に、２Ｎ塩酸１．８ｍｌを加え、５５℃で攪拌した。１６時間後、放冷し、濃縮残渣をシリカゲルカラケクロマトグラフィーに供し、淡黄色の中粘度液状の化合物７６１ｍｇ（７９％）を得た。
【００７３】
本品の重クロロホルム中で測定した１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのケミカルシフト値は、1.30-1.48(6H,m),1.60-1.68(2H,m),2.19(2H.q),2.34(2H,t),2.84-2.98 (4H,m),6.09(1H,d),6.80(1H,dt),7.16-7.21(3H.m),7.25-7.30(1H,m)であった。
また、赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒペレット法）で吸収があった波数(cm-1)は、3450,2930,2850,1710,1630,1410,1290,1230,1200,750,700であった。
さらに、元素分析の結果は、炭素７４．９７％、水素８．３９％であった。
以上の分析により、得られた化合物が化合物６であることを確認した。
【００７４】
○化合物６の構造式
【化１４】
2006188444.tif 000015
【００７５】
（合成例３）
化合物［Ａ］を得るための原料として、化合物３および化合物７を原料とし、化合物８を調製した。
すなわち、化合物３の１７．３ｇ（５１．１ｍｍｏｌ）およびトリス［２−（２−メトキシエトキシ）エチル］アミン１．７０ｍｌ（５．３１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン１５０ｍｌに溶解した溶液に、−７８℃で１．０Ｍのリチウムヘキサメチルジシラザン／テトラヒドロフラン溶液５２．０ｍｌを滴下した。同温で６０分間攪拌後、１０．０ｇ（５１．５ｍｍｏｌ）の化合物７を３０ｍｌのテトラヒドロフランに溶解した溶液を加えた。同温で５分間攪拌後、徐々に昇温した。−１０℃で、２０％クエン酸水溶液５０ｍｌを加えて反応を停止した。
【００７６】
・化合物７の構造式
【化１５】
2006188444.tif 000016
【００７７】
その後、残渣に飽和食塩水２００ｍｌを加え、分配後、有機層を分取した。水層を酢酸エチル５０ｍｌで抽出し、合わせた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、淡黄色中粘度液状の化合物１９．４ｇ（収率７１％）を得た。
【００７８】
本品の重クロロホルム中で測定した１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのケミカルシフト値は、1.17-1.30(7H,m),1.40-1.98(6H,m),2.18-2.28(2H,m),2.45(3H,s),2.55-2.95(2H,m),3.32-3.60(1H,m),3.86(6H,s),4.12(2H,q),4.21-4.58(1H,m),5.05-5.78(2H,m),6.67-6.80(3H,m),7.33(2H,d),7.66(2H,d)であった。
また、赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒペレット法）で吸収があった波数(cm-1)は、2940,1730,1590,1520,1470,1260,1240,1140,1030,670であった。
さらに、元素分析の結果は、炭素６５．３９％、水素７．５７％であった。
以上の分析により、得られた化合物が化合物８であることを確認した。
【００７９】
・化合物８の構造式
【化１６】
2006188444.tif 000017
【００８０】
＜実施例３＞
合成例３で得た化合物８を原料として、本発明の化合物９を調製した。
すなわち、化合物８の１９．０ｇ（３５．７ｍｍｏｌ）を１，２−ジクロロエタン４００ｇ、イソプロピルアルコール５０ｇ、及びグリセリン５０ｇに溶解した溶液に、トリエチルアミン１０．０ｍｌ（７１．７ｍｍｏｌ）、およびテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム２．０６ｇ（１．７８ｍｍｏｌ）を加えて、バス温１００℃で８時間攪拌した。放冷後、蒸留水４００ｍｌを加えて分配し、有機層を回収した。水層をクロロホルム１００ｍｌで２回抽出し、合わせた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。得られた反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、淡黄色中粘度液状の化合物  ３．２０ｇ（２４％）を得た。
【００８１】
本品の重クロロホルム中で測定した１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのケミカルシフト値は、1.23-1.50(11H,m),1.58-1.68(2H, m),2.18-2.33(4H,m),2.81-2,95(4H,m),  3.85(3H,s),3.87(3H,s),4.12(2H,q),6.09(1H,d),6.70-6.88(4H,m)であった。
また、赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒペレット法）で吸収があった波数(cm-1)は、2930,1730,1670,1630,1520,1260,1160,1030,810,760であった。
さらに、元素分析の結果は、炭素７０．１８％、水素８．５７％であった。
以上の分析により、得られた化合物が化合物９であることを確認した。
【００８２】
○化合物９の構造式
【化１７】
2006188444.tif 000018
【００８３】
以下に、本発明のショウガオール類縁化合物について、その用途の一例として、転写因子Ｎｒｆ２依存遺伝子の転写に対する影響を参考例として示す。
【００８４】
＜参考例１＞
〇Ｎｒｆ２依存遺伝子の転写に対する化合物５及び化合物９の影響
化合物５及び化合物９を処理した場合としていない場合のＮｒｆ２依存遺伝子の転写量を調べるために、ＲＴ−ＰＣＲを使ってＮｒｆ２依存遺伝子の発現量を定量した。測定した遺伝子は、Ｎｒｆ２により転写が制御されている、ＨＯ−１、ＧＣＬＭ、ＮＱＯ１、ferritin、ＳＬＣ７Ａ１１、sequestsome 1である。
【００８５】
［ＲＮＡ回収方法］
ヒト臍帯静脈血管内皮細胞（ＨＵＶＥＣｓ；クロネチックス社製） を２％ Fetal Bovine Serum（ＦＢＳ；クロネチックス社製） 入りEndothelial cell growth factor containing medium-2（ＥＧＭ−２；クロネチックス社製） 中で培養した。１０ｃｍディッシュに５×１０５細胞を培養し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で４８時間インキュベートした。
コンフルエント後、２％ＦＢＳ入りEndothelial cell basal medium-2（ＥＢＭ−２；クロネチックス社製）に培地を交換した。２時間後にエタノールに溶解した本発明の化合物をＥＢＭ−２に最終濃度５μＭになるように調製し、細胞に添加した。
試薬添加してから６時間後に、全ＲＮＡをＩＳＯＧＥＮ（和光純薬社製）を用いて抽出した。
コントロールとして、エタノールを使い同様の操作を行った。
【００８６】
［ＲＴ−ＰＣＲ解析］
上記方法で抽出した全ＲＮＡ１μｇを、ＲＮＡ  ＰＣＲ  Ｃｏｒｅ  ｋｉｔ（アプライドバイオシステムス社製）を製造者の指示に従い使用して逆転写反応を行った。ＲＴ−ＰＣＲ条件は９５℃で３分、及び９５℃で１５秒、６０℃で６０秒の４０サイクルであった。ＰＣＲ産物はＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７９００ＨＴシークエンス検出システム（アプライドバイオシステムス社製）により、解析を行った。各サンプルに対する相対的なＲＮＡ当量をＧＡＰＤＨレベルに規格化することによって得た。
【００８７】
なお前述のＰＣＲ反応において、ＨＯ−１のＲＴ−ＰＣＲのプライマーには、フォワードプライマー；５‘−ＣＧＧＧＣＣＡＧＣＡＡＣＡＡＡＧＴＧ（配列番号１）、及びリバースプライマー；５’−ＡＣＴＧＴＣＧＣＣＡＣＣＡＧＡＡＡＣＴ（配列番号２）を使用し、ＧＣＬＭのＲＴ−ＰＣＲのプライマーには、フォワードプライマー；５‘−ＣＡＧＣＣＧＡＧＧＡＧＣＴＴＣＡＴＧＡＴＴＧ（配列番号３）、及びリバースプライマー；５’−ＴＧＣＡＴＴＣＣＡＡＧＡＣＡＴＣＴＧＧＡＡＡ（配列番号４）を使用し、ＮＱＯ１のＲＴ−ＰＣＲのプライマーには、フォワードプライマー；５'-ＣＣＴＧＧＡＡＧＧＡＴＧＧＡＡＧＡＡＡＣＧ（配列番号５）、及びリバースプライマー；５'-ＡＧＡＡＴＣＣＴＧＣＣＴＧＧＡＡＧＴＴＴＡＧＧ（配列番号６）を使用し、ferritinのＲＴ−ＰＣＲのプライマーには、フォワードプライマー；５'-ＡＣＴＧＣＡＣＡＡＡＣＴＧＧＣＣＡＣＴＧＡ（配列番号７）、及びリバースプライマー；５'-ＣＡＣＣＣＡＡＴＴＣＴＴＴＧＡＴＧＧＣＴＴＴ（配列番号８）を使用し、ＳＬＣ７Ａ１１のＲＴ−ＰＣＲのプライマーには、フォワードプライマー；５'-ＡＣＧＧＴＧＧＴＧＴＧＴＴＴＧＣＴＧＴＣＴ（配列番号９）、及びリバースｔライマー；５'-ＡＧＧＡＧＴＧＴＧＣＴＴＧＣＧＧＡＣＡＴ（配列番号１０）を使用し、sequestsome 1のＲＴ−ＰＣＲのプライマーには、フォワードプライマー；５'-ＣＴＧＧＧＣＣＴＣＴＧＧＴＴＣＴＧＡＣＡ（配列番号１１）、及びリバースプライマー；５'-ＡＧＧＴＧＧＡＡＧＧＣＡＴＴＴＡＴＴＴＧＣＴＴ（配列番号１２）を使用した。
【００８８】
図１は、化合物５及び化合物９を適用したときの、各種Ｎｒｆ２依存遺伝子（ＨＯ−１遺伝子、ＧＣＬＭ遺伝子、ＮＱＯ１遺伝子、ferritin遺伝子、ＳＬＣ７Ａ１１遺伝子及びsequestsome 1遺伝子）の発現を示すグラフである。各ｍＲＮＡの発現量は、コントロール（エタノール）での値を１として、相対値を示した。
図１に見られる様に、化合物５及び化合物９で処理した場合には、コントロールに比べて、ＨＯ−１、ＧＣＬＭ、ＮＱＯ１、ferritin、ＳＬＣ７Ａ１１、およびsequestsome 1の発現が亢進されることがわかった。
【００８９】
＜参考例２＞
〇Ｎｒｆ２依存遺伝子の転写に対する化合物６の影響
参考例１の方法に従って、化合物６を処理した場合としていない場合のＮｒｆ２依存遺伝子の転写量を調べた。コントロールとしてエタノールを用いた。化合物６の最終濃度は５μＭになるように調整した。
【００９０】
図２は、化合物６を適用したときの、各種Ｎｒｆ２依存遺伝子（ＨＯ−１遺伝子、ＧＣＬＭ遺伝子、ＮＱＯ１遺伝子、ferritin遺伝子、ＳＬＣ７Ａ１１遺伝子及びsequestsome 1遺伝子）の発現を示すグラフである。各ｍＲＮＡの発現量は、コントロール（エタノール）での値を１として、相対値を示した。
図２に見られるように、化合物６で処理した場合には、コントロールに比べて、ＨＯ−１、ＧＣＬＭ、ＮＱＯ１、ferritin、ＳＬＣ７Ａ１１、およびsequestsome 1の発現が亢進されることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００９１】
本発明のショウガオール類縁化合物は、転写因子Ｎｒｆ２依存遺伝子の転写活性を有し、食品、医薬品、医薬部外品等の分野に利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００９２】
【図１】図１は、化合物５及び化合物９の、各種Ｎｒｆ２依存遺伝子（ＨＯ−１遺伝子、ＧＣＬＭ遺伝子、ＮＱＯ１遺伝子、ferritin遺伝子、ＳＬＣ７Ａ１１遺伝子及びsequestsome 1遺伝子）の発現に関する影響を示した図面である。
【図２】図２は、化合物６の各種Ｎｒｆ２依存遺伝子（ＨＯ−１遺伝子、ＧＣＬＭ遺伝子、ＮＱＯ１遺伝子、ferritin遺伝子、ＳＬＣ７Ａ１１遺伝子及びsequestsome 1遺伝子）の発現に関する影響を示した図面である。
【配列表フリーテキスト】
【００９３】
配列番号１  ＨＯ−１に対するＲＴ−ＰＣＲ用のフォワードプライマー
配列番号２  ＨＯ−１に対するＲＴ−ＰＣＲ用のリバースプライマー
配列番号３  ＧＣＬＭに対するＲＴ−ＰＣＲ用のフォワードプライマー
配列番号４  ＧＣＬＭに対するＲＴ−ＰＣＲ用のリバースプライマー
配列番号５  ＮＱＯ１に対するＲＴ−ＰＣＲ用のフォワードプライマー
配列番号６  ＮＱＯ１に対するＲＴ−ＰＣＲ用のリバースプライマー
配列番号７  ferritinに対するＲＴ−ＰＣＲ用のフォワードプライマー
配列番号８  ferritinに対するＲＴ−ＰＣＲ用のリバースプライマー
配列番号９  ＳＬＣ７Ａ１１に対するＲＴ−ＰＣＲ用のフォワードプライマー
配列番号１０  ＳＬＣ７Ａ１１に対するＲＴ−ＰＣＲ用のリバースプライマー
配列番号１１  sequestsome １に対するＲＴ−ＰＣＲ用のフォワードプライマー
配列番号１２  sequestsome １に対するＲＴ−ＰＣＲ用のリバースプライマー
【図１】
2006188444.tif 000021
【図２】
2006188444.tif 000022
【配列表】
2006188444000001.app