(57)【要約】【課題】  本発明の課題は、ＩｇＡ腎症患者の血液中のＩｇＡあるいは糖鎖異常型ＩｇＡを体内から除去する、ＩｇＡ腎症予防食品添加剤およびその治療方法を提供することにある。【解決手段】本発明は、食品による摂取のみでＩｇＡ腎症患者血液中のＩｇＡ濃度を適正値に調節、維持するＩｇＡ腎症予防食品添加剤およびその治療方法を提供する。本発明のＩｇＡ腎症予防食品添加剤は、ＩｇＡと特異的に結合する「ジャカリン及び／又はジャカリン誘導体」を含有する「ジャックフルーツ種子抽出物」によって構成され、本発明の食品はＩｇＡ腎症予防または治療のために好適に用いられる。【選択図】  図６
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩｇＡ腎症患者用の治療用及び／又は予防用食品添加剤であって、ジャカリン及び／又はジャカリン誘導体を主成分とするジャックフルーツ種子の水抽出物。
【請求項２】
前記ジャカリン及び／又はジャカリン誘導体が、ジャカリンの分子数が１〜１０からなるジャカリン複合体であって、その分子量が５０〜５００ＫＤａであることを特徴とする請求項１に記載のジャックフルーツ種子の水抽出物。
【請求項３】
前記ジャカリン及び／又はジャカリン誘導体が、ジャカリン複合体の熱水分解物であって、その分子量が１５〜５０ＫＤａであることを特徴とする請求項１に記載のジャックフルーツ種子の水抽出物。
【請求項４】
前記ジャカリン及び／又はジャカリン誘導体を主成分とするジャックフルーツ種子の水抽出物の形態が粉末状であることを特徴とする請求項１〜３の何れかに記載のジャックフルーツ種子の水抽出物。
【請求項５】
前記ジャカリン及び／又はジャカリン誘導体を主成分とするジャックフルーツ種子の水抽出物の形態が水溶液状であることを特徴とする請求項１〜３の何れかに記載のジャックフルーツ種子の水抽出物。
【請求項６】
請求項１〜請求項５の何れかに記載のジャックフルーツ種子の水抽出物を、ＩｇＡ腎症患者に経口投与することによって、該患者の血液及び／又は組織液中からＩｇＡを除去することを特徴とするＩｇＡ腎症予防方法及び／又は治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液、組織液中の免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）と結合するジャカリン及び／又はその誘導体を含有する新規なＩｇＡ腎症治療用及び／又は予防用食品添加剤およびそれを用いたＩｇＡ腎症治療方法に関するものである。本発明は、食品としての摂取によりＩｇＡ腎症患者の血液又は組織液からＩｇＡを、強制的かつ選択的に除去または失活させることで、ＩｇＡの血液濃度上昇を防ぎ、適正濃度に調節・維持しＩｇＡ腎症の発症または悪化を予防する用途に好適に用いられる。
【背景技術】
【０００２】
現在、日本国内では末期腎不全により人工透析療法を受けている患者の総数が約２３万人を超えている。加えて毎年新規に１万人程の慢性腎不全患者が人工透析治療を導入し、その多くの場合は死亡するまで透析治療を維持することが必要となる。こうした人工透析治療の必要な腎不全患者総数は年々増加する一方で、臓器移植治療以外には根治的治療が無いのが現状である。しかしながら、生体組織の移植には、免疫拒絶およびドナー不足などの多くの重要な医学的、社会的な問題があり今後も大幅な進展は望めない。腎不全に至る主な原因疾患としては、糖尿病性腎症、高血圧性腎障害、多発性嚢胞腎などに加え慢性糸球体腎炎が全体の３５％以上と特に多く、更に慢性糸球体腎炎の４０〜５０％はＩｇＡ腎症で占められている。
【０００３】
ＩｇＡ腎症とは腎糸球体メサンギウム領域へのＩｇＡ（主としてＩｇＡ１）と補体Ｃ３の顆粒状沈着の病理学的所見を特徴とする疾患であり、発症患者の約５０％に血清ＩｇＡ濃度の高値が認められ、血流中にはＩｇＡ型免疫複合体が存在することが報告されている。この状態が長年に渡り続くことでＩｇＡが腎糸球体に沈着し、そのため腎臓機能が消失するとされる（非特許文献１）。
【０００４】
ＩｇＡ腎症は１９６９年Ｂｅｒｇｅｒらにより提唱された疾患概念であるが、その後３０年以上を経た現在でも本疾患の成因は不明な点が多い。臨床的にも蛋白尿、血尿以外には臨床症状に乏しく、病気の進行に気づきにくい疾患でもあり、診断方法も腎生検による方法以外は一般的な方法が無いため、その発見が遅れる場合が多い。
【０００５】
ＩｇＡ腎症の発症機序については十分に解明されていないが、報告されている機序としては体内に進入した外来抗原が契機となり主に上気道、消化管系の粘膜下リンパ球や形質細胞で粘膜免疫に関与するＩｇＡが産生され、メサンギウム細胞表面のＩｇＡ結合関連レセプターへＩｇＡが高選択的に会合し（非特許文献２）、それに伴う炎症の惹起が提案されている。病理学的には、ＩｇＡ沈着後の糸球体傷害の主要なメカニズムとして、メサンギウム細胞の増殖およびそれに引き続く細胞外基質蛋白の糸球体内蓄積に起因する硬化性病変であると考えられており、この過程では血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）と形質転換成長因子（ＴＧＦ−β）の関与も重要と考えられているが詳細は不明である。
【０００６】
ＩｇＡはＩｇＡ１とＩｇＡ２と呼ばれる２つのサブタイプに分類され、ＩｇＡ１はヒンジ部と呼ばれる領域に５つの酸素結合型糖鎖が結合しており、一方、ＩｇＡ２のヒンジ部には、この酸素結合型糖鎖は存在しないことが知られている。
【０００７】
ＩｇＡ腎症患者の糸球体メサンギウム細胞に沈着しているＩｇＡは、主にＩｇＡ１であることが知られている。このＩｇＡ１の由来が上気道、消化管系の粘膜下リンパ球あるいは形質細胞で産生されたものか、骨髄で産生されたものなのかに関しては未だ明確な結論がない。しかしながら体内で生産されるＩｇＡのほとんどは粘膜組織のＩｇＡ型形質細胞で作られる実態から、ＩｇＡ腎症患者のＩｇＡ１も粘膜下での産生の可能性が高いと考えられている。
【０００８】
また正常型のＩｇＡ１には、通常ヒンジ部にシアル酸-ガラクトースβ１−３結合Ｎアセチルガラクトースの糖鎖が存在するが、ＩｇＡ腎症患者血液中のＩｇＡ１は、その先端分子であるシアル酸が存在しないアシアロ型の割合が高いとされる（非特許文献３）。特にこうした糖鎖異常型のＩｇＡ１同士は結合しやすい性質を有していることも報告され、更にはメサンギウム細胞表面レセプターへの高い結合性と、それにより生じる細胞周期への影響も指摘され始めている（非特許文献２））。
【０００９】
こうしたＩｇＡ１の糖鎖異常に関する知見を利用したＩｇＡ腎症の診断方法に関しては、いくつか開発されている。例えば田中、錦戸、比企らによるＩｇＡ腎症患者血漿中のＩｇＡ１のヒンジ部の糖鎖結合数が非ＩｇＡ腎症患者血漿中のＩｇＡ１より多いことを利用したＩｇＡ腎症の診断方法（特許文献１）の発明、比企、田中、錦戸らによるＩｇＡ１分子間の結合能の差を検出することによるＩｇＡ腎症の診断方法（特開平９−３１１１３２）の発明がある。また該公報等における発明の実施例として血清、血液および組織液中からＩｇＡ１を分離する材料として、レクチンの一種である「ジャカリン」をアガロースに固定したジャカリン−アガロースを用いており、その分離方法は、Ｒｏｑｕｅ−Ｂａｒｒｅｒｉａらの「ジャカリン」を用いる方法（非特許文献４）に基づいている。しかしながらこれらの発明は、ＩｇＡ腎症の診断方法およびその診断キットを提供するものであり、食品あるいは薬剤としての摂取によりＩｇＡ腎症の予防または治療方法を提供するものではなかった。
【００１０】
【特許文献１】特開平１０−１１１２９１号公報
【特許文献２】特開平９−３１１１３２号公報
【００１１】
【非特許文献１】Conley,  M.E.ら、Journal  of  Clinical  Investigation、６６巻、１４３２頁、１９８０年
【非特許文献２】Y.Wangら.  Clin  Exp  Immunol,  １３６巻、１６８−１７５頁、２００４年
【非特許文献３】Iwase,  Hitooら、Journal  of  Biochemistry、１２０巻、 ９２頁、１９９６年
【非特許文献４】Journal  of  Immunology、第１３４巻、１７４０−１７４３頁、１９８５年
【００１２】
以上のようにＩｇＡ腎症の成因が今なお明確に解明されていない現状では、ＩｇＡ腎症の予防または治療に関しては特に効果的な方法はないが、抗炎症作用と免疫抑制作用を期する点から主に副腎皮質ステロイド療法が有望と考えられている。しかしながら、蛋白尿が１．０ｇ／日以上の症例でステロイド療法の効果を期待するためには２−３年以上の治療期間が求められ、ＩｇＡ腎症では治療効果の判断に最低でも１０年を要するとされている。加えてステロイド剤には多くの副作用があることも知られている。重篤な副作用として、感染症、消化性潰瘍、糖尿病、精神障害、緑内障、無菌性骨壊死、骨粗鬆症、動脈硬化症、血栓症などがあり、合併症の危険性も大きい。以上から、ステロイド剤以外で副作用の少ないＩｇＡ腎症の予防または治療法が望まれていた。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の課題は、食品による摂取のみでＩｇＡ腎症患者血液中のＩｇＡ濃度を適正値に調節、維持する食品添加剤を提供すること及びＩｇＡ腎症発症の予防法又は治療法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
ＩｇＡ腎症に対するＩｇＡの関与については、上述したようにＩｇＡあるいは糖鎖異常型ＩｇＡ１が、ＩｇＡ腎症患者血液、組織液中に高濃度で存在することで、腎糸球体に沈着し、それが直接または間接原因となり糸球体腎炎を引き起こすと考えられる。
また本発明者らは、血液中のＩｇＡ濃度を調節することで、病気の進行を制御することを目的とする血液浄化用吸着材として、ジャカリン及び／又はその誘導体が水不溶性担体に固定化された材料が好適であることを見いだしている（特願２００３−１２４０３６「ＩｇＡ腎症治療のための血液浄化用吸着材」）。しかしながら、血液浄化材料によるＩｇＡ濃度の調節方法は、人工透析治療に匹敵する血液循環装置が必要な点、および治療に要する患者の時間的拘束を考慮すると、身体的負担の点からも効率的な方法とは言い難い点が課題であった。
【００１５】
そこで、本発明者は上述の発見に基づいて血液中のＩｇＡ濃度調節によりＩｇＡ腎症の予防あるいは治療法を、患者の身体的負担を軽減させ尚かつ効果的に提供する目的で鋭意研究を重ねた結果、ジャックフルーツ種子抽出物あるいはその中に含まれるジャカリン及び／又はその誘導体を含有する食品添加剤が好適であることを見いだし、本発明を完成させた。
【００１６】
すなわち、本発明はＩｇＡ腎症の改善効果を有する食品添加剤であって、ジャカリン及び／又はジャカリン誘導体を主成分とするジャックフルーツの種子の水抽出物である。更には、該ジャカリン及び／又はジャカリン誘導体が、ジャカリンの分子数が１〜１０からなるジャカリン複合体であって、その分子量が５０〜５００ＫＤａであること、及び又は、該ジャカリン及び／又はその誘導体が、ジャカリン複合体の分解物であって、その分子量が１５〜５０ＫＤａであることを特徴とする。
そして、該ジャックフルーツの種子の水抽出物の形態が粉末状又は水溶液状で、他の食品との混合で経口摂取が可能であることを特徴とする。
さらに本発明は、前記のジャックフルーツの種子の水抽出物をＩｇＡ腎症患者に経口投与することによって、該患者の血液及び／又は組織液中からＩｇＡを除去することを特徴とするＩｇＡ腎症予防及び／又は治療方法を提供する。
【発明の効果】
【００１７】
本発明の「ジャックフルーツ種子抽出物」を含有したＩｇＡ腎症予防あるいは治療食品は、血中ＩｇＡ濃度を調節することにより、腎糸球体の炎症を防ぐ効果および炎症の誘発を抑制する効果が得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
以下に本発明の実施形態について詳細に説明するが、本発明の技術的範囲は、下記の実施形態によって限定されるものではなく、その要旨を変更することなく、様々に改変して実施することができる。また、本発明の技術的範囲は、均等の範囲にまで及ぶものである。
【００１９】
本発明に使用する「ジャカリン」とは桑科の果実であるジャックフルーツ（Artocarpus
heterophyllus：和名「波羅蜜（パラミツ）」）の種子に含まれる植物レクチンの一種であり、抽出・精製して得られるものである。ジャックフルーツはインドやタイが原産で熱帯地方に広く分布し、果実自体は大きい物で４０−５０Ｋｇに達する物もある。果実は特に限定されるものではないが、おもにジャックフルーツがその名前の由来であることからも、最も多く含まれ、また抽出も容易である。通常、「ジャカリン」はジャックフルーツの種子タンパク質の５０％以上を占めているとされる（非特許文献６）。同族植物にはパンノキ、コパラミツなどがあり、これらの種子からの抽出も可能である。
【００２０】
「ジャカリン」はＩｇＡの糖鎖を認識するレクチンタンパク質として知られ、その認識糖鎖は１種類に限定されないが、酸素結合型で正常型ＩｇＡ１の糖鎖構造であるシアル酸ガラクトースβ１−３結合Ｎアセチルガラクトース、あるいはガラクトースβ１−３Ｎアセチルガラクトース（異常型糖鎖）が高親和性構造として知られている。（非特許文献７）
【００２１】
【非特許文献５】S.  Kabirら、Comparative  Immunology,  Microbiology  and  Infectious  Diseases,  １６巻、１５３頁、１９９３年
【非特許文献６】S.  KabirらJournal  of  Immunological  Methods  ２１２巻、１９３−２１１頁、１９９８年
【００２２】
ヒト血清タンパク質の中で酸素結合型の糖鎖、すなわちタンパク質分子中のアミノ酸であるセリンまたはトレオニンの水酸基に結合しているガラクトースβ１−３結合Ｎアセチルガラクトース糖鎖を持つものは少なく、そのほとんどはアスパラギンのアミノ基に結合するＮ結合型である。ＩｇＡ１分子は正常型、異常型の何れも酸素結合型の糖鎖を有しており、「ジャカリン」に特異的に認識され結合すると考えられている。
【００２３】
「ジャカリン」は４つのα鎖と呼ばれる分子量約１５ＫＤａのサブユニット構造と４つのβ鎖と呼ばれる分子量約２．１ＫＤａから成り立つ分子量約６５ＫＤａの糖タンパク質である。本発明における「ジャカリン」は、ジャックフルーツの種子を低温で水抽出し、該抽出物を精製することにより得られるが、この際、ジャックフルーツの種子を細かく粉砕後、水抽出する方法が一般的に用いられるが、必ずしもこれに限定されるものではなく、種子を水溶液中で圧搾する方法等も用いられる。
又、精製は、一般的には、水抽出物を濾過することによって水不溶物と分離することによってなされるが、必ずしもこれに限定されるものではない。
このようにして得られるジャックフルーツの種子の抽出・精製物は、ジャカリンを主成分とし、その他、炭水化物、ビタミンＡ及びビタミンＣを含んでいる。
【００２４】
こうした「ジャカリン」は１分子でも良いが、その誘導体（「ジャカリン」が約１〜１０分子且つ分子量が５０〜５００ＫＤａで構成される「ジャカリン複合体」及び／又は、該ジャカリン複合体を熱水処理することにより得られる分子量１０〜５０ＫＤａの「ジャカリン分解物」）であっても良く、またその混合物であっても食品添加剤としての効果に大きな差は見られない。
【００２５】
本発明のジャックフルーツの種子の抽出・精製物は、粉末状又は水溶液状で食品添加剤として供給されるが、粉末状は一般的に該抽出・精製物を凍結・乾燥することによって得られる。又、水溶液状は、ジャックフルーツの種子の抽出・精製物そのものか、或いは、上述の粉末を水溶液に溶かすことによって得られる。
【００２６】
そして、これらの粉末状又は水溶液状の食品添加剤は、様々な食品に添加されて用いられる。具体的には、例えばキャンディ、チューインガム、ゼリー等の菓子やクッキー、菓子パンなど、あるいはミネラル飲料や乳酸菌飲料、アルコール飲料などの飲料があげられる。
本発明品の「ジャックフルーツ種子抽出物」の投与量としては、成人１日あたり１〜１００ｇ好ましくは５〜５０ｇ程度であり、「ジャカリン複合体またはジャカリン分解物」換算では、成人１日あたり０．１〜１０ｇ、好ましくは０．５〜５ｇ程度である。多く投与した場合の効果は見られるものの、投与量に依存したＩｇＡ濃度調節効果は必ずしも期待できないと思われる。また、１日あたりの投与量が少ない場合は、ＩｇＡ濃度調節効果は期待できない恐れがある。
【００２７】
食品に添加、加工する際に用いられるものは、通常医薬品及び食品の分野で使用されるもの等があり、例としては食品成形結合剤としては、白糖、ブドウ糖、ショ糖、デンプン、エチルセルロース、乳糖、カルボキシメチルセルロース、ジェラン、カルボキシメチルジェラン、ジェラン硫酸、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース等があげられる。また界面活性剤としては、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンプロピレングリコールモノ脂肪酸エステル、リン脂質、脂肪酸、エチレングリコール多価アルコール等が好適に用いられる。
【００２８】
ところで、本発明によるジャカリン及び／又はジャカリン誘導体を主成分とするジャックフルーツ種子の水抽出物を、ＩｇＡ腎症患者が摂取することにより、ＩｇＡ腎症患者の血液中および組織からのＩｇＡ濃度上昇が抑制される機序について以下のように考えられる。
（１）消化管内での直接吸着除去効果
血液・体液中の免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）は主に腸管上皮細胞で産生され、その後消化管系あるいは血中に分泌される。ジャックフルーツ種子抽出物を食品として摂取することにより、体内で非吸収・非消化性のジャカリン及び／又はその誘導体が、消化管内の腸管上皮部位でＩｇＡと結合し不活性化あるいは不溶化させることで血液中への分泌・吸収を妨げ、最終的に消化管内から体外に便として排出される。その結果、ＩｇＡの血液濃度上昇を防ぎ、適正濃度に調節・維持しＩｇＡ腎症の発症または悪化を予防する。
（２）循環系内吸収後の間接的効果
一部血液中に吸収されたジャカリン及び／又はその誘導体が血液中のＩｇＡと結合することで、腎糸球体内のメサンギウム細胞表面またはＩｇＡ産生部位である腸管上皮細胞表面部分へのＩｇＡ結合部位構造が失活する。その結果、血液循環系におけるＩｇＡの組織沈着現象を防ぎ、その後に生じる腎炎症反応の惹起を抑え、結果としてＩｇＡ腎症の発症または悪化を予防する。沈着を免れたＩｇＡジャカリン複合体は通常の代謝系（肝臓）により分解・除去される。
【実施例１】
【００２９】
以下実施例をもって本発明を詳細に説明するが、以下によって示される方法は、作用確認において用いたものであり、これに限定されるものではない。
【００３０】
＜ＩｇＡ腎症予防効果評価に用いるＩｇＡ腎症モデル動物＞
本発明の効果を検証するため、ＩｇＡ腎症モデル（ＨＩＧＡ）マウス（日本ＳＬＣマウス社）を用いた。ＨＩＧＡマウスはｄｄｙマウス系の高濃度ＩｇＡが特徴のマウスでＩｇＡ腎症のモデル動物として知られ、ＩｇＡ腎症研究に多く用いられている（例えば、Kidney  Int,  ５０巻，１９４６−１９５７頁、１９９５年）。
【００３１】
＜ＩｇＡ腎症モデルマウス血中ＩｇＡ濃度測定方法＞
ＩｇＡ腎症モデルマウス血清中のＩｇＡ濃度は、ＥＬＩＳＡ法を用いて定量した。１次抗体原液にＧｏａｔ  ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ＩｇＡ  (フナコシ社製)、また２次抗体原液にＧｏａｔ  ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ＩｇＡ  ＨＲＰ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ（フナコシ社製）を用い、濃度決定のための標準溶液にはＨｕｍａｎ  ｓｅｒｕｍ  Ｃａｌｉｂｒａｔｏｒ（ＩｇＡ）（フナコシ社製）を用い、２５０ｎｇ／ｍｌ−７ｎｇ／ｍｌの範囲で７サンプル調製し用いた。１次抗体溶液として抗体原液０．１ｍｌを０．０５Ｍ  ＮａＣＯ３−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ９．６）１０ｍｌに溶解し希釈した後、９６穴ＥＬＩＳＡイムノプレート（ナルジェン  ヌンク社製）に０．１ｍｌずつ添加し９０分静置する。その後溶液を除去し、０．１４Ｍ  ＮａＣｌ、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０を含む０．０５Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８）緩衝液で洗浄し、自然乾燥させ測定用ＥＬＩＳＡプレートとした。
測定するマウス血清試料は０．１４Ｍ  ＮａＣｌ、１％  ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む０．０５Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８）緩衝液を用いて１／２００００に希釈し、測定用プレートの穴に０．１ｍｌ加え、６０分間浸透させる。同時に別な穴に７種類の標準溶液をそれぞれ加える。攪拌後、溶液を除去し０．１４Ｍ  ＮａＣｌ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０を含む０．０５Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８）緩衝液で数回洗浄し、次に１／１００希釈した２次抗体溶液を０．２ｍｌずつ穴に加え更に６０分間浸透させる。２次抗体溶液を除去し、洗浄後、クエン酸緩衝液１２ｍｌに対しＯＰＤ錠（和光純薬社製）を１錠およびＨ２Ｏ２を０．００５ｍｌ加えた溶液を、０．１ｍｌずつ穴に加え１０分間静置して発色させた後、更に１Ｎ硫酸水溶液を０．１ｍｌずつ穴に加え発色を停止させ、４５０ｎｍでの吸光度をプレートリーダー（バイオラッド社製）にて測定し、標準試料から作製した校正曲線に照らして濃度を算出した。
【００３２】
＜ＩｇＡ腎症モデルマウス血中アルブミン濃度測定方法＞
ＩｇＡ腎症モデルマウス血清中のアルブミン濃度は、ＥＬＩＳＡ法（市販のキット：Ｅｘｏｃｅｌｌ社製）を用いて定量した。１次抗体原液にＲａｂｂｉｔ  ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  Ａｌｂｕｍｉｎ（フナコシ社製）、２次抗体原液ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ  ＨＲＰ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ（フナコシ社製）を用い、濃度決定のための標準溶液にはＨｕｍａｎ  ｓｅｒｕｍ  Ｃａｌｉｂｒａｔｏｒ（ＩｇＡ）（フナコシ社製）を用いキットマニュアルに従い測定した。
【００３３】
＜組織標本のＩｇＡ染色方法＞
本発明品による予防効果を評価するため、用いたＨＩＧＡマウスの腎糸球体組織切片および腸管上皮組織を作製し、蛍光免疫染色を用いＩｇＡ沈着状況を確認した。免疫染色方法は公知の方法により行った。染色には１次抗体としてｍｏｕｓｅ  ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ  ＩｇＡ、２次抗体にｍｏｕｓｅ  ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ  ＩｇＡ  ＦＩＴＣ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄを用いた。ＦＩＴＣによる蛍光が検出された箇所ではＩｇＡが存在していることを表している。また、１次抗体処理無しの２次抗体染色（コントロール）から、ＩｇＡ以外の部分では検出されないことを確認した。
【実施例２】
【００３４】
＜「ジャカリン複合体」および「ジャカリン分解物」の調製方法＞
ジャックフルーツの種子（種子1つの大きさが、長軸方向３．５ｃｍ、短軸方向２ｃｍ）を果肉から分離し、種子を覆う皮の部分を除き、フードプロセッサー等で細かく粉砕する。１００ｍＭトリス−塩酸緩衝溶液（ｐＨ７）を加えて、４℃で２４時間撹拌しジャカリン粗精製溶液を得る。不溶部分を濾過により除き、次に遠心分離（３０００ｒｐｍ、３０分）し、上澄み部分のみを回収した。更に孔サイズ０．２２マイクロメートルのメンブレンフィルター（ミリポア社製）で濾過し、溶液を再生セルロース系透析膜からなるチューブにいれ（除去分子量６０００以下：スペクトラポア社製）、脱イオン水に対して４８時間以上透析を行い、その後凍結乾燥して「ジャカリン複合体」を得た。
【００３５】
「ジャカリン分解物」は、上述の方法で作成した「ジャカリン複合体」１ｇに対し、水を１００ｍｌ加え５分間沸騰処理した後、急冷し凍結乾燥することで得られた。
以上のようにして得られた「ジャカリン複合体」および「ジャカリン分解物」の分子量は、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動を用いて確認した。方法は公知の方法で行った。泳動材料条件として、「ジャカリン複合体」に対しては７．５％（ｗ／ｗ）ポリアクリルアミドゲル（バイオラット社製）を用いて行い、「ジャカリン分解物」に対しては１５％（ｗ／ｗ）ポリアクリルアミドゲル（バイオラット社製）を用いて行った。タンパク質バンドはクマシーブリリアントブルー（和光純薬）による染色で検出し、分子量マーカー（バイオラット社製）からの相対移動度より「ジャカリン複合体」および「ジャカリン熱分解物」の分子量を算出した。その結果、「ジャカリン複合体」は「ジャカリン」分子数が１〜１０からなり、その分子量が５０〜５００ＫＤａ、「ジャカリン分解物」は「ジャカリン複合体」に加え、１５〜５０ＫＤａの「ジャカリン」由来分解分子を含む混合物であった。
【実施例３】
【００３６】
＜「ジャックフルーツ種子抽出物」の調製＞
ジャックフルーツの種子（種子１つの大きさが、長軸方向３．５ｃｍ、短軸方向２ｃｍ）を果肉から分離し、種子を覆う皮の部分を除き、脱イオン水を少量加えて、フードプロセッサー等で細かく粉砕する。その後凍結乾燥して「ジャックフルーツ種子」粉末を得た。種子１ｇより３５０ｍｇの乾燥粉末が得られた。「ジャックフルーツ種子」粉末２００ｍｇに対し、脱イオン水を１００ｍｌ加え、１０分間攪拌した後、孔サイズ０．２２マイクロメートルのメンブレンフィルターで濾過し、再度凍結乾燥し「ジャックフルーツ種子抽出物」を得た。「ジャックフルーツ種子」粉末１ｇよりおよそ３００ｍｇの粉末が得られた。以上より、ジャックフルーツ種子は水分約６５％、水抽出物約１０％および水不溶物２５％の組成であることがわかった。「ジャカリン」および「ジャカリン複合体」はこの水抽出物の主成分であり、「ジャックフルーツ種子抽出物」中の他の成分には、炭水化物、ビタミンＡおよびビタミンＣが含まれる。
【実施例４】
【００３７】
＜「ジャカリン分解物」含有「ジャックフルーツ種子抽出物」の調製＞
「ジャックフルーツ種子」粉末２００ｍｇに対し、脱イオン水を１００ｍｌ加え、１００℃に加熱し１０分間攪拌した後、４℃に急冷し、孔サイズ０．２２マイクロメートルのメンブレンフィルターで濾過し凍結乾燥し「ジャカリン分解物」含有「ジャックフルーツ種子抽出物」を得た。「ジャックフルーツ種子」粉末１ｇよりおよそ２５０ｍｇの粉末が得られた。
【実施例５】
【００３８】
（１）粉末状の通常のマウス用飼料１００ｇに対し「ジャックフルーツ種子抽出物」粉末１ｇを加え混合後、脱イオン水を１０ｍｌ加え更に混合し、圧縮成型器を用いて円柱状の固形マウス用飼料形状を作成し、クリーンベンチ内にて無菌的に自然乾燥させる。以上のようにして作成した「ジャックフルーツ種子抽出物」配合飼料を、１１週齢目のＨＩＧＡマウス１２匹に対し、最大２１週齢目まで飼料を投与した（飼料投与群）。なお飼料投与群への飲料水は、「ジャックフルーツ種子抽出物」を含まない水道水を用いた。
【００３９】
（２）脱イオン水１００ｍｌに対し「ジャックフルーツ種子抽出物」粉末１ｇを加え室温で混合後、ペーパーフィルターで不要物を濾去した溶液を、更に０．４５マイクロメートルのフィルターを用いて濾過し、ＨＩＧＡマウス用飲料水とした。以上のようにして作成した「ジャックフルーツ種子抽出物」配合飲料水を、１１週齢目のＨＩＧＡマウス１２匹に対し、最大２１週齢目まで飼料を投与した（飲料水投与群）。なお飲料水投与群への飼料は、「ジャックフルーツ種子抽出物」を含まない通常のマウス用飼料を用いた
【００４０】
（３）対照群として、通常のマウス用飼料および水道水を１１週齢目のＨＩＧＡマウス１２匹に対し、最大２１週齢目まで飼料を投与した（コントロール群）。
評価項目として、各群におけるＨＩＧＡマウスの平均体重、１日あたりの飼料摂取量および飲料水の摂取量を毎日測定した。また各ＨＩＧＡマウスの尻尾より週に一度採血し（１２週齢から採血開始）、血清ＩｇＡ濃度および血清アルブミン濃度を測定した。更に４週間ごとに、３匹ずつ犠牲死させ腎糸球体および腸管上皮組織の組織切片を作成し、ＩｇＡ免疫染色を行いＩｇＡの組織沈着挙動を観察した。
【００４１】
＜結果＞
１１週齢から２１週齢までの６匹の平均体重の推移を図１に示した（○：コントロール群、□：飼料投与群、▲：飲料水投与群）。コントロール群で体重増加の傾向が、他の「ジャックフルーツ種子抽出物」投与群と比較すると若干異なった。「ジャックフルーツ種子抽出物」投与群間では体重の推移はほぼ同等傾向であり、また投与期間を通じて各群とも平均５〜６ｇの増加が見られた。
【００４２】
飼料摂取量の推移を図２に示す（○：コントロール群、□：飼料投与群、▲：飲料水投与群）。飼料摂取に関しては「ジャックフルーツ種子抽出物」配合飼料投与群の摂取量が他の群よりも多いものの投与時間あるいは体重増加との関連は見られない。全ての群において１日あたり平均４〜８ｇの飼料を摂取した。「ジャックフルーツ種子抽出物」配合飼料投与群では一日あたり、約４〜８ｍｇの「ジャカリン」あるいは「ジャカリン誘導体」を摂取したことになる。ＨＩＧＡマウスの平均体重が３０〜４０ｇであることを考慮すると、成人あたり体重で換算すると、４〜１０ｇ程度の摂取に相当すると考えられる。
【００４３】
飲料水摂取量の推移を図３に示す（○：コントロール群、□：飼料投与群、▲：飲料水投与群）。飲料水摂取に関しては全ての群において１日あたり平均４〜８ｇの飲料水を摂取し、「ジャックフルーツ種子抽出物」配合飲料水投与群では一日あたり、約４〜８ｍｇの「ジャカリン」あるいは「ジャカリン誘導体」を摂取したことになる。ＨＩＧＡマウスの平均体重が３０〜４０ｇであることを考慮すると、成人あたり体重で換算すると、４〜１０ｇ程度の摂取に相当すると考えられる。
【００４４】
各群のＨＩＧＡマウスの血液中の平均血清ＩｇＡ濃度の推移を図４に示した（○：コントロール群、□：飼料投与群、▲：飲料水投与群）。各週での濃度測定値を１２週齢での血清濃度で除し、投与開始１週後からの血清濃度増加率（血清ＩｇＡ濃度／１２週齢での血清ＩｇＡ濃度）として評価した。即ち、投与後１週目が１として規格化した。各群における１２週齢での血清ＩｇＡ濃度は、コントロール群で１．１４±０．５７ｍｇ／ｍｌ、飼料投与群で２．３６±０．５４ｍｇ／ｍｌそして飲料水投与群で１．８７±０．４３ｍｇ／ｍｌであった。「ジャックフルーツ種子抽出物」配合飼料および「ジャックフルーツ種子抽出物」飲料水投与群とも、コントロール群と比較すると、明らかに投与開始後２週間程度で血清ＩｇＡ濃度の増加を抑制する効果が見られた。
【００４５】
各群のＨＩＧＡマウスの血液中の平均血清アルブミン濃度の推移を図５に示した（○：コントロール群、□：飼料投与群、▲：飲料水投与群）。各週での濃度測定値を１２週齢での血清濃度で除し、投与開始１週後からの血清濃度増加率（血清アルブミン濃度／１２週齢での血清アルブミン濃度）として評価した。即ち、投与後１週目が１として規格化した。各群における１２週齢での血清アルブミン濃度は、コントロール群で０．５７８±０．０１ｍｇ／ｍｌ、飼料投与群で０．５７４±０．０１ｍｇ／ｍｌそして飲料水投与群で０．５６４±０．０２ｍｇ／ｍｌであった。「ジャックフルーツ種子抽出物」配合飼料、「ジャックフルーツ種子抽出物」飲料水投与群およびコントロール群における有意の差は見られない。即ち、ＩｇＡ腎症予防食品投与においては血清アルブミン濃度変化に対する影響はない。
【００４６】
ＨＩＧＡマウスの腎糸球体組織の組織ＩｇＡ染色像を図６に示した。図６−１にコントロール群の投与開始から４週目（１５週齢）、図６−２にコントロール群の投与開始から８週目（１９週齢）の腎糸球体組織を示す（観察倍率４００倍）。ＩｇＡ染色部分がメサンギウム領域内で週齢を経るに従い増加しているのが観察され、ＩｇＡ沈着現象が生じていることがわかる。図６−３には「ジャックフルーツ種子抽出物」配合飼料投与開始から４週目（１５週齢）、図６−４に「ジャックフルーツ種子抽出物」配合飼料投与開始から８週目（１９週齢）の腎糸球体組織を示す（観察倍率４００倍）。コントロール群に比較して、８週目の沈着量が抑制されているのが観察された。
【００４７】
ＨＩＧＡマウスの腸管上皮組織の組織ＩｇＡ染色像を図７に示した。図７−１にコントロール群の投与開始４週目（１５週齢）、図７−２にコントロール群の投与開始後１２週目（２３週齢）の腸管上皮組織を示す（観察倍率４００倍）。ＩｇＡ染色部分が上皮絨毛組織内のリンパ系細胞周辺で顕著に観察され、週齢を経るに従いＩｇＡ産生・蓄積が増加しているのが観察された。図７−３には「ジャックフルーツ種子抽出物」配合飼料投与開始から４週目（１５週齢）、図７−４に「ジャックフルーツ種子抽出物」配合飼料投与開始から１２週目（２３週齢）の腸管上皮組織を示す（観察倍率４００倍）。コントロール群に比較して、１２週目の検出量が抑制されていることが観察された。
【００４８】
ＨＩＧＡマウスに対する「ジャックフルーツ種子抽出物」配合飼料および配合飲料水としての投与形態の差に関する以上の結果から、飼料および飲料水摂取量に関しての有意差は見られず、血中ＩｇＡ濃度を低下させる効果に関しては、「ジャックフルーツ種子抽出物」投与群血清中でのＩｇＡ濃度の増加率が、コントロール群に比較して明らかに抑制した。血中アルブミン濃度の変化に関しては各群間での差は見られず、即ちＩｇＡ濃度にのみ効果を示した。組織中のＩｇＡ沈着および産生・蓄積等に関しても、コントロール群に比較して投与群では明らかに抑制効果を示した。以上の結果から、本発明品である「ジャックフルーツ種子抽出物」配合食品（飼料あるいは飲料水）は、経口投与することのみで血中ＩｇＡ濃度を選択的に低下させ、組織にＩｇＡが沈着するのを防ぐ、ＩｇＡ腎症予防効果あるいは治療効果が認められると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】ＨＩＧＡマウスの体重変化の推移（○：コントロール群平均、□：飼料投与群、▲：飲料水投与群）を示す図である。
【図２】ＨＩＧＡマウスの飼料摂取量の推移（○：コントロール群平均、□：飼料投与群、▲：飲料水投与群）を示す図である。
【図３】ＨＩＧＡマウスの飲料水摂取量の推移（○：コントロール群平均、□：飼料投与群、▲：飲料水投与群）を示す図である。
【図４】ＨＩＧＡマウスの血液中のＩｇＡ濃度（○：コントロール群平均、□：飼料投与群、▲：飲料水投与群）を示す図である。
【図５】ＨＩＧＡマウスの血清アルブミン濃度（○：コントロール群平均、□：飼料投与群、▲：飲料水投与群）を示す図である。
【図６】ＨＩＧＡマウスの腎糸球体組織の組織ＩｇＡ染色像を示す図である。
【図７】ＨＩＧＡマウスの腸管上皮組織の組織ＩｇＡ染色像を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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