(57)【要約】      （修正有）【課題】高血圧症のリスクの評価手段を提供すること。【解決手段】核酸試料について、特定のアミノ酸に対応する残基のミスセンス変異を引き起こす多型、特定の塩基配列における多型の有無を検出し、該多型が存在する場合、高血圧症のリスクがあることの指標として評価することを特徴とする、高血圧症のリスクの評価方法；そのキット；生検試料に含まれる核酸について、該多型の有無を評価し、該多型が検出された試料を選別する、高血圧症のリスクのある個体由来の生検試料の選別方法の提供。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸試料について、
ａ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：２）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：４０８に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｂ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：４）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：３８６に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｃ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：６）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：１３１に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｄ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：８）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：２９０に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｅ）  ＬＩＰＡタンパク質（配列番号：１０）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：１６に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｆ）  ＬＩＰＣタンパク質（配列番号：１２）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：９５に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｇ）  ＳＬＣ４Ａ１タンパク質（配列番号：１４）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：５６に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｈ）  ＴＲＨタンパク質（配列番号：１６）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：８に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｉ）  ＶＷＦタンパク質（配列番号：１８）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：７８９に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｊ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：１１５３６における多型、
ｋ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：７１１９８における多型、
ｌ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：１１０１９０における多型、
ｍ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：１１１５２５における多型、及び
ｎ）  ＨＰＣＡＬ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：２０）の塩基配列の塩基番号：９６５１４における多型、
からなる群より選ばれた少なくとも１種の多型の有無を検出し、該多型が存在する場合、高血圧症のリスクがあることの指標として評価することを特徴とする、高血圧症のリスクの評価方法。
【請求項２】
（１）核酸試料から、下記ａ’）〜ｎ’）：
ａ’）  配列番号：１に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１３３６を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｂ’）  配列番号：３に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１３１１を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｃ’）  配列番号：５に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：４９４を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、及び
ｄ’）  配列番号：７に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１１６５を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｅ’）  配列番号：９に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：８６を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｆ’）  配列番号：１１に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：３４０を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｇ’）  配列番号：１３に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：２８０を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、及び
ｈ’）  配列番号：１５に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１３４を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｉ’）  配列番号：１７に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：２６７５を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｊ’）  配列番号：１９に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１１５３６を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｋ’）  配列番号：１９に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：７１１９８を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｌ’）  配列番号：１９に示される塩基配列中における塩基番号：１１０１９０を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｍ’）  配列番号：１９に示される塩基配列中における塩基番号：１１１５２５を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、及び
ｎ’）  配列番号：２０に示される塩基配列中における塩基番号：９６５１４を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸に対応する核酸を得るステップ、並びに
（２）（Ｉ）前記ステップ（１）で得られた核酸の塩基配列、及び／又は
（ＩＩ）前記ステップ（１）で得られた核酸と該核酸に対応する前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸との間の動態の相違、
に基づき、ａ）〜ｎ）の多型を検出するステップ、
を含む、請求項１記載の評価方法。
【請求項３】
動態が、電気泳動における移動度、質量又はＴｍ値を介して評価される、請求項１又は２記載の評価方法。
【請求項４】
下記ａ’）〜ｎ’）：
ａ’）  配列番号：１に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１３３６を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｂ’）  配列番号：３に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１３１１を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｃ’）  配列番号：５に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：４９４を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、及び
ｄ’）  配列番号：７に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１１６５を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｅ’）  配列番号：９に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：８６を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｆ’）  配列番号：１１に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：３４０を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｇ’）  配列番号：１３に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：２８０を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、及び
ｈ’）  配列番号：１５に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１３４を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｉ’）  配列番号：１７に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：２６７５を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｊ’）  配列番号：１９に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１１５３６を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｋ’）  配列番号：１９に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：７１１９８を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｌ’）  配列番号：１９に示される塩基配列中における塩基番号：１１０１９０を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｍ’）  配列番号：１９に示される塩基配列中における塩基番号：１１１５２５を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、及び
ｎ’）  配列番号：２０に示される塩基配列中における塩基番号：９６５１４を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸を含有してなる、高血圧症のリスクの評価用試薬。
【請求項５】
１）配列番号：２１に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：２２に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
２）配列番号：２３に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：２４に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
３）配列番号：２５に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：２６に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
４）配列番号：２７に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：２８に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
５）配列番号：２９に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：３０に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
６）配列番号：３１に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：３２に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
７）配列番号：３３に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：３４に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
８）配列番号：３５に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：３６に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
９）配列番号：３７に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：３８に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
１０）配列番号：３９に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：４０に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、及び
１１）配列番号：４１に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：４２に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
からなる群より選ばれた少なくとも１種のプライマー対を含有してなる、請求項４記載の評価用試薬。
【請求項６】
下記オリゴヌクレオチド群１’）〜１１’）：
１’）配列番号：２１に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：２２に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：４３に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：４４に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
２’）配列番号：２３に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：２４に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：４５に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：４６に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
３’）配列番号：２５に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：２６に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：４７に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：４８に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
４’）配列番号：２７に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：２８に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：４９に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：５０に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
５’）配列番号：２９に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：３０に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：５１に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：５２に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
６’）配列番号：３１に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：３２に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：５３に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：５４に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
７’）配列番号：３３に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：３４に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：５５に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：５６に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
８’）配列番号：３５に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：３６に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：５７に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：５８に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
９’）配列番号：３７に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：３８に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：５９に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：６０に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
１０’）配列番号：３９に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：４０に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：６１に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：６２に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；及び
１１’）配列番号：４１に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：４２に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：６３に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：６４に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
からなる群より選ばれた少なくとも１種のオリゴヌクレオチド群を含有してなる、請求項４記載の評価用試薬。
【請求項７】
生検試料に含まれる核酸について、
ａ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：２）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：４０８に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｂ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：４）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：３８６に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｃ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：６）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：１３１に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｄ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：８）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：２９０に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｅ）  ＬＩＰＡタンパク質（配列番号：１０）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：１６に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｆ）  ＬＩＰＣタンパク質（配列番号：１２）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：９５に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｇ）  ＳＬＣ４Ａ１タンパク質（配列番号：１４）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：５６に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｈ）  ＴＲＨタンパク質（配列番号：１６）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：８に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｉ）  ＶＷＦタンパク質（配列番号：１８）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：７８９に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｊ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：１１５３６における多型、
ｋ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：７１１９８における多型、
ｌ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：１１０１９０における多型、
ｍ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：１１１５２５における多型、及び
ｎ）  ＨＰＣＡＬ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：２０）の塩基配列の塩基番号：９６５１４における多型
からなる群より選ばれた少なくとも１種の多型の有無を評価し、該多型が検出された試料を選別することを特徴とする、高血圧症のリスクのある個体由来の生検試料の選別方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高血圧症のリスクの評価手段に関する。さらに詳しくは、本発明は、高血圧症のリスクの評価方法、高血圧症のリスクの評価用試薬及び高血圧症のリスクのある個体由来の生検試料の選別方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
生活習慣病の１つである高血圧症は、血圧が正常域を超えている状態であり、動脈硬化性疾患を引き起こしうる最大の危険因子であると考えられている。前記高血圧症のうち、原因疾患が明らかなものを二次性高血圧症といい、明らかでないものを本態性高血圧という。
【０００３】
高血圧関連遺伝子変異動物を用いた研究により、例えば、アンジオテンシノーゲン遺伝子、アンジオテンシン変換酵素遺伝子、α−アデューシン遺伝子等が、高血圧症に関連する可能性が示唆されている。
【０００４】
前記アンジオテンシノーゲン遺伝子について、遺伝子改変動物を用いた研究及びヒトにおける罹患同胞対解析、関連研究等において、遺伝子異常が見られた場合、血中濃度が上昇し、高血圧のリスクの増加を招くことが示されている〔例えば、非特許文献１参照〕。また、前記アンジオテンシン変換酵素遺伝子にコードされるアンジオテンシン変換酵素は、降圧薬の標的とされているものの、アンジオテンシン変換酵素遺伝子の多型と高血圧との相関は、男性においてのみ認められるという報告もされている〔例えば、非特許文献２参照〕。前記α−アデューシン遺伝子は、ミラノ高血圧ラットの原因遺伝子として調べられている〔非特許文献３〕が、日本人における高血圧との関連性はないものと考えられている。
【非特許文献１】ジュネマイトレ(Jeunemaitre,X.)ら、"Molecular basis of human hypertension; role of angiotensinogen."、Cell、71、169-180(1992)
【非特許文献２】オドンネル(O’Donnell, C.J.)ら、"Evidence for association and genetic linkage of the angiotensin-converting enzyme locus with hypertension and blood pressure in men but not women in the Framingham Hert Study."、Circulation、97、1766-1772（1998）
【非特許文献３】クジ(Cusi,D.)ら、"Polymorphisms of alpha-adducin and salt sensitivity in patients with essential hypertension."、Lancet、349、1353-1357(1997)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、１つの側面では、高血圧症のリスクを、簡便に、迅速に判定することを可能にする、高血圧症のリスクの評価方法を提供することにある。また、本発明は、他の側面では、高血圧症のリスクを、簡便に、迅速に評価することを可能にする、高血圧症のリスクの評価用試薬を提供することにある。さらに、本発明は、別の側面では、高血圧症のリスクのある個体由来の生検試料を、簡便に、迅速に選別することを可能にする、高血圧症のリスクのある個体由来の生検試料の選別方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
すなわち、本発明の要旨は、
〔１〕  核酸試料について、
ａ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：２）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：４０８に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｂ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：４）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：３８６に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｃ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：６）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：１３１に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｄ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：８）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：２９０に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｅ）  ＬＩＰＡタンパク質（配列番号：１０）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：１６に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｆ）  ＬＩＰＣタンパク質（配列番号：１２）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：９５に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｇ）  ＳＬＣ４Ａ１タンパク質（配列番号：１４）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：５６に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｈ）  ＴＲＨタンパク質（配列番号：１６）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：８に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｉ）  ＶＷＦタンパク質（配列番号：１８）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：７８９に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｊ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：１１５３６における多型、
ｋ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：７１１９８における多型、
ｌ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：１１０１９０における多型、
ｍ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：１１１５２５における多型、及び
ｎ）  ＨＰＣＡＬ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：２０）の塩基配列の塩基番号：９６５１４における多型、
からなる群より選ばれた少なくとも１種の多型の有無を検出し、該多型が存在する場合、高血圧症のリスクがあることの指標として評価することを特徴とする、高血圧症のリスクの評価方法、
〔２〕  （１）核酸試料から、下記ａ’）〜ｎ’）：
ａ’）  配列番号：１に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１３３６を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｂ’）  配列番号：３に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１３１１を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｃ’）  配列番号：５に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：４９４を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、及び
ｄ’）  配列番号：７に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１１６５を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｅ’）  配列番号：９に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：８６を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｆ’）  配列番号：１１に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：３４０を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｇ’）  配列番号：１３に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：２８０を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、及び
ｈ’）  配列番号：１５に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１３４を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｉ’）  配列番号：１７に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：２６７５を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｊ’）  配列番号：１９に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１１５３６を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｋ’）  配列番号：１９に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：７１１９８を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｌ’）  配列番号：１９に示される塩基配列中における塩基番号：１１０１９０を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｍ’）  配列番号：１９に示される塩基配列中における塩基番号：１１１５２５を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、及び
ｎ’）  配列番号：２０に示される塩基配列中における塩基番号：９６５１４を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸に対応する核酸を得るステップ、並びに
（２）（Ｉ）前記ステップ（１）で得られた核酸の塩基配列、及び／又は
（ＩＩ）前記ステップ（１）で得られた核酸と該核酸に対応する前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸との間の動態の相違、
に基づき、ａ）〜ｎ）の多型を検出するステップ、
を含む、前記〔１〕記載の評価方法、
〔３〕  動態が、電気泳動における移動度、質量又はＴｍ値を介して評価される、前記〔１〕又は〔２〕記載の評価方法、
〔４〕  下記ａ’）〜ｎ’）：
ａ’）  配列番号：１に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１３３６を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｂ’）  配列番号：３に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１３１１を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｃ’）  配列番号：５に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：４９４を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、及び
ｄ’）  配列番号：７に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１１６５を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｅ’）  配列番号：９に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：８６を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｆ’）  配列番号：１１に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：３４０を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｇ’）  配列番号：１３に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：２８０を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、及び
ｈ’）  配列番号：１５に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１３４を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｉ’）  配列番号：１７に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：２６７５を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｊ’）  配列番号：１９に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１１５３６を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｋ’）  配列番号：１９に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：７１１９８を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｌ’）  配列番号：１９に示される塩基配列中における塩基番号：１１０１９０を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
ｍ’）  配列番号：１９に示される塩基配列中における塩基番号：１１１５２５を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、及び
ｎ’）  配列番号：２０に示される塩基配列中における塩基番号：９６５１４を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸を含有してなる、高血圧症のリスクの評価用試薬、
〔５〕  １）配列番号：２１に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：２２に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
２）配列番号：２３に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：２４に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
３）配列番号：２５に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：２６に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
４）配列番号：２７に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：２８に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
５）配列番号：２９に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：３０に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
６）配列番号：３１に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：３２に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
７）配列番号：３３に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：３４に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
８）配列番号：３５に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：３６に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
９）配列番号：３７に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：３８に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
１０）配列番号：３９に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：４０に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、及び
１１）配列番号：４１に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：４２に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
からなる群より選ばれた少なくとも１種のプライマー対を含有してなる、前記〔４〕記載の評価用試薬、
〔６〕  下記オリゴヌクレオチド群１’）〜１１’）：
１’）配列番号：２１に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：２２に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：４３に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：４４に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
２’）配列番号：２３に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：２４に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：４５に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：４６に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
３’）配列番号：２５に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：２６に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：４７に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：４８に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
４’）配列番号：２７に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：２８に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：４９に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：５０に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
５’）配列番号：２９に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：３０に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：５１に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：５２に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
６’）配列番号：３１に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：３２に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：５３に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：５４に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
７’）配列番号：３３に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：３４に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：５５に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：５６に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
８’）配列番号：３５に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：３６に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：５７に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：５８に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
９’）配列番号：３７に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：３８に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：５９に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：６０に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
１０’）配列番号：３９に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：４０に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：６１に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：６２に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；及び
１１’）配列番号：４１に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：４２に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：６３に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：６４に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
からなる群より選ばれた少なくとも１種のオリゴヌクレオチド群を含有してなる、前記〔４〕記載の評価用試薬、
〔７〕  生検試料に含まれる核酸について、
ａ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：２）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：４０８に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｂ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：４）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：３８６に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｃ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：６）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：１３１に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｄ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：８）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：２９０に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｅ）  ＬＩＰＡタンパク質（配列番号：１０）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：１６に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｆ）  ＬＩＰＣタンパク質（配列番号：１２）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：９５に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｇ）  ＳＬＣ４Ａ１タンパク質（配列番号：１４）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：５６に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｈ）  ＴＲＨタンパク質（配列番号：１６）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：８に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｉ）  ＶＷＦタンパク質（配列番号：１８）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：７８９に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｊ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：１１５３６における多型、
ｋ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：７１１９８における多型、
ｌ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：１１０１９０における多型、
ｍ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：１１１５２５における多型、及び
ｎ）  ＨＰＣＡＬ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：２０）の塩基配列の塩基番号：９６５１４における多型
からなる群より選ばれた少なくとも１種の多型の有無を評価し、該多型が検出された試料を選別することを特徴とする、高血圧症のリスクのある個体由来の生検試料の選別方法、
に関する。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の高血圧症のリスクの評価方法によれば、高血圧症のリスクを、簡便に、迅速に判定することができるという優れた効果を奏する。したがって、本発明の評価方法により、高血圧症を迅速に診断し、しいては、脳卒中、虚血性心疾患、腎不全等の発症予防につなげることができるという優れた効果を奏する。本発明の高血圧症のリスクの評価用試薬によれば、高血圧症のリスクを、簡便に、迅速に評価することができるという優れた効果を奏する。したがって、本発明の高血圧症の評価用試薬によれば、高血圧症を迅速に診断し、しいては、脳卒中、虚血性心疾患、腎不全等の発症予防につなげることができるという優れた効果を奏する。さらに、本発明の高血圧症のリスクのある個体由来の生検試料の選別方法によれば、高血圧症のリスクのある個体由来の生検試料を、簡便に、迅速に選別することができるという優れた効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明は、１つの側面では、核酸試料について、
ａ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：２）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：４０８に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｂ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：４）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：３８６に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｃ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：６）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：１３１に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｄ）  ＣＡＳＴタンパク質バリアント（配列番号：８）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：２９０に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｅ）  ＬＩＰＡタンパク質（配列番号：１０）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：１６に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｆ）  ＬＩＰＣタンパク質（配列番号：１２）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：９５に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｇ）  ＳＬＣ４Ａ１タンパク質（配列番号：１４）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：５６に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｈ）  ＴＲＨタンパク質（配列番号：１６）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：８に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｉ）  ＶＷＦタンパク質（配列番号：１８）のアミノ酸配列のアミノ酸番号：７８９に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、
ｊ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：１１５３６における多型、
ｋ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：７１１９８における多型、
ｌ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：１１０１９０における多型、
ｍ）  ＧＲＥＢ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：１９）の塩基配列の塩基番号：１１１５２５における多型、及び
ｎ）  ＨＰＣＡＬ１タンパク質をコードする核酸（配列番号：２０）の塩基配列の塩基番号：９６５１４における多型、
からなる群より選ばれた少なくとも１種の多型の有無を検出し、該多型が存在する場合、高血圧症のリスクがあることの指標として評価することを特徴とする、高血圧症のリスクの評価方法に関する。
【０００９】
本発明の評価方法によれば、前記ａ）〜ｎ）からなる群より選ばれた少なくとも１種の多型の存在を指標とするため、簡便に、迅速に高血圧症のリスクを判定することができるという優れた効果を発揮する。
【００１０】
本明細書において、「高血圧症」とは、収縮期血圧：１４０ｍｍＨｇ以上又は拡張期血圧：９０ｍｍＨｇ以上又は降圧剤服用の状態をいう。また、「正常状態」とは、収縮期血圧：１２０ｍｍＨｇ以下、拡張期血圧：８０ｍｍＨｇ以下の状態をいう。
【００１１】
前記ＣＡＳＴタンパク質は、カルシウム依存性システインプロテアーゼ「カルパイン」の細胞内インヒビターである「カルパスタチン」である。前記ＣＡＳＴタンパク質には、少なくとも４種類のバリアントが存在する。前記ＣＡＳＴタンパク質は、配列番号：２（バリアント１ともいう）、配列番号：４（バリアント２ともいう）、配列番号：６（バリアント３ともいう）及び配列番号：８（バリアント４ともいう）のいずれかのアミノ酸配列を有する。また、前記ＣＡＳＴタンパク質は、ジーンバックアクセッション番号：ＮＴ＿０２３１４８．１２に示される塩基配列によりコードされる。本発明の評価方法においては、バリアント１に関して、配列番号：２のアミノ酸配列のアミノ酸番号：４０８に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、バリアント２に関して、配列番号：４のアミノ酸配列のアミノ酸番号：３８６に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、バリアント３に関して、配列番号：６のアミノ酸配列のアミノ酸番号：１３１に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、バリアント４に関して、配列番号：８のアミノ酸配列のアミノ酸番号：２９０に対応するアミノ酸残基のミスセンス変異を引き起こす多型、すなわち、システイン残基の、セリン残基への置換を引き起こす多型の存在を、高血圧症のリスクを有することの１つの指標とする。前記ミスセンス変異としては、バリアント１に関して、配列番号：１に示される塩基配列の塩基番号：１３３６、バリアント２に関して、配列番号：３に示される塩基配列の塩基番号：１３１１、バリアント３に関して、配列番号：５に示される塩基配列の塩基番号：４９４、バリアント４に関して、配列番号：７に示される塩基配列の塩基番号：１１６５のグアニン残基が、シトシン残基に置換していること等が挙げられる。
【００１２】
前記ＬＩＰＡタンパク質は、細胞内に取り込まれたリポタンパク質のコレステリルエステルやトリグリセリドの分解に関与するリゾリーマル酸リパーゼである。前記ＬＩＰＡタンパク質は、配列番号：１０に示されるアミノ酸配列を有し、ジーンバックアクセッション番号：ＮＴ＿０３３８９０．３に示される塩基配列によりコードされる。本発明の評価方法においては、前記配列番号：１０に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号：１６に対応するミスセンス変異（１６位のスレオニン残基の、プロリン残基への置換）を引き起こす多型の存在を、高血圧症のリスクを有することの１つの指標とする。前記アミノ酸番号：１６に対応するミスセンス変異としては、例えば、配列番号：９に示される塩基配列の塩基番号：８６のアデニン残基が、シトシン残基に置換していること等が挙げられる。なお、前記ミスセンス変異は、リゾリーマル酸リパーゼ前駆体のシグナル配列中に存在し、その産生に影響しうる。
【００１３】
前記ＬＩＰＣタンパク質は、リポタンパク質代謝に関与する肝性リパーゼである。前記ＬＩＰＣタンパク質は、配列番号：１２に示されるアミノ酸配列を有し、ジーンバックアクセッション番号：ＮＴ＿０１０１９４．１６に示される塩基配列によりコードされる。本発明の評価方法においては、前記配列番号：１２に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号：９５に対応するミスセンス変異（９５位のバリンの、メチオニンへの置換）を引き起こす多型の存在を、高血圧症のリスクを有することの１つの指標とする。前記アミノ酸番号：９５に対応するミスセンス変異としては、例えば、配列番号：１１に示される塩基配列の塩基番号：３４０のグアニン残基が、アデニン残基に置換していること等が挙げられる。
【００１４】
前記ＳＬＣ４Ａ１タンパク質は、赤血球の膜に多量に存在するｂａｎｄ  ３と呼ばれるアニオン交換機能を有する膜タンパク質である。前記ＳＬＣ４Ａ１タンパク質は、配列番号：１４に示されるアミノ酸配列を有し、ジーンバックアクセッション番号：ＮＴ＿０１０７８３．１４に示される塩基配列によりコードされる。本発明の評価方法においては、前記配列番号：１４に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号：５６に対応するミスセンス変異（５６位のリジン残基の、グルタミン酸への置換）を引き起こす多型の存在を、高血圧症のリスクを有することの１つの指標とする。前記アミノ酸番号：５６に対応するミスセンス変異としては、例えば、配列番号：１３に示される塩基配列の塩基番号：２８０のアデニン残基が、グアニン残基に置換していること等が挙げられる。
【００１５】
前記ＴＲＨタンパク質は、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンである。前記ＴＲＨタンパク質は、配列番号：１６に示されるアミノ酸配列を有し、ジーンバックアクセッション番号：ＮＴ＿００５６１２．１４に示される塩基配列によりコードされる。本発明の評価方法においては、前記配列番号：１６に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号：８に対応するミスセンス変異（８位のロイシンの、バリンへの置換）を引き起こす多型の存在を、高血圧症のリスクを有することの１つの指標とする。前記アミノ酸番号：８に対応するミスセンス変異としては、例えば、配列番号：１５に示される塩基配列の塩基番号：１３４のグアニン残基が、シトシン残基に置換していること等が挙げられる。
【００１６】
前記ＶＷＦタンパク質は、内皮細胞で産生され分泌され、血小板血栓の形成に重要な役割を果たすｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  ｆａｃｔｏｒである。前記ＶＷＦタンパク質は、配列番号：１８に示されるアミノ酸配列を有し、ジーンバックアクセッション番号：ＮＴ＿００９７５９．１５に示される塩基配列によりコードされる。本発明の評価方法においては、前記配列番号：１８に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号：７８９に対応するミスセンス変異（７８９位のロイシンの、バリンへの置換）を引き起こす多型の存在を、高血圧症のリスクを有することの１つの指標とする。前記アミノ酸番号：７８９に対応するミスセンス変異としては、例えば、配列番号：１７に示される塩基配列の塩基番号：２６７５のアデニン残基が、グアニン残基に置換していること等が挙げられる。
【００１７】
前記ＧＲＥＢ１をコードする核酸は、ホルモン感受性臓器やガン細胞の機能に重要な役割を果たすエストロゲン反応性遺伝子；ｇｅｎｅ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  １であり、ジーンバンクアクセッション番号：ＮＴ＿００５３３４．１４に示される塩基配列を有する。本発明の評価方法においては、ジーンバンクアクセッション番号：ＮＴ＿００５３３４．１４に示される塩基配列の塩基番号：−１３９４５〔配列番号：１９に示される塩基配列の塩基番号：１１５３６〕のアデニン残基が、チミン残基に置換していること、該ジーンバンクアクセッション番号：ＮＴ＿００５３３４．１４に示される塩基配列の塩基番号：４５７１８〔配列番号：１９の塩基番号：７１１９８〕のアデニン残基が、グアニン残基に置換していること、該ジーンバンクアクセッション番号：ＮＴ＿００５３３４．１４に示される塩基配列の塩基番号：８４７１０位〔配列番号：１９の塩基番号：１１０１９０〕のグアニン残基が、シトシン残基に置換していること、該ジーンバンクアクセッション番号：ＮＴ＿００５３３４．１４に示される塩基配列の塩基番号：８６０４５〔配列番号：１９の塩基番号：１１１５２５〕のアデニン残基が、グアニン残基に置換していることが、高血圧症のリスクを有することの１つの指標となる。
【００１８】
前記ＨＰＣＡＬ１をコードする核酸は、カルシウム結合タンパク質であるヒポカルチン様１タンパク質をコードする核酸であり、ジーンバンクアクセッション番号：ＮＴ＿００５３３４．１４に示される塩基配列を有する。本発明の評価方法においては、ジーンバンクアクセッション番号：ＮＴ＿００５３３４．１４に示される塩基配列の塩基番号：−２２１１０位〔配列番号：２０の塩基番号：９６５１４〕のアデニン残基が、シトシン残基に置換していることが、高血圧症のリスクを有することの１つの指標となる。
【００１９】
本発明の評価方法としては、具体的には、
前記ａ）の多型について、ａ’）  配列番号：１に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１３３６を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
前記ｂ）の多型について、ｂ’）  配列番号：３に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１３１１を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
前記ｃ）の多型について、ｃ’）  配列番号：５に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：４９４を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、及び
前記ｄ）の多型について、ｄ’）  配列番号：７に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１１６５を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
前記ｅ）の多型について、ｅ’）  配列番号：９に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：８６を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
前記ｆ）の多型について、ｆ’）  配列番号：１１に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：３４０を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
前記ｇ）の多型について、ｇ’）  配列番号：１３に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：２８０を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、及び
前記ｈ）の多型について、ｈ’）  配列番号：１５に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１３４を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
前記ｉ）の多型について、ｉ’）  配列番号：１７に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：２６７５を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
前記ｊ）の多型について、ｊ’）  配列番号：１９に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：１１５３６を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
前記ｋ）の多型について、ｋ’）  配列番号：１９に示される塩基配列を含有した核酸若しくはそのアンチセンス核酸又は該塩基配列中における塩基番号：７１１９８を含む連続した１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
前記ｌ）の多型について、ｌ’）  配列番号：１９に示される塩基配列中における塩基番号：１１０１９０を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
前記ｍ）の多型について、ｍ’）  配列番号：１９に示される塩基配列中における塩基番号：１１１５２５を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、及び
前記ｎ）の多型について、ｎ’）  配列番号：２０に示される塩基配列中における塩基番号：９６５１４を含む１０〜１００ヌクレオチド長の断片の核酸若しくはそのアンチセンス核酸、
からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸に対応する核酸を得るステップ、並びに
（２）（Ｉ）前記ステップ（１）で得られた核酸の塩基配列、及び／又は
（ＩＩ）前記ステップ（１）で得られた核酸と該核酸に対応する前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸との間の動態の相違、
に基づき、前記ａ）〜ｎ）の多型を検出するステップ、
を含む方法が挙げられる。本発明には、前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸からなり、前記ａ）〜ｎ）のいずれかの多型を検出するためのプローブも含まれる。
【００２０】
前記ステップ（１）において、被検試料である核酸試料から、前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸に対応する核酸を得る。
【００２１】
なお、後述のステップ（２）を、（ＩＩ）前記ステップ（１）で得られた核酸と該核酸に対応する前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸との間の動態の相違に基づき行なう場合において、ハイブリダイゼーション技術又はＰＣＲに基づく評価手段を用いる場合等には、前記ステップ（１）を行なわなくてもよい場合がある。かかる態様も本発明に含まれる。
【００２２】
前記核酸試料は、被検対象の個体由来の生検試料〔例えば、皮膚、血液、毛髪、口腔粘膜、各種組織、細胞等〕落屑から慣用の核酸抽出法により得られうる。
【００２３】
前記ステップ（１）において、前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸に対応する核酸は、例えば、慣用の核酸増幅法（ＲＴ−ＰＣＲ等）等を行なうことにより得られうる。かかる核酸増幅に用いられうるプライマー対としては、Ｔｍ値、二次構造の形成、公知配列等を考慮して、デザインされたオリゴヌクレオチドが用いられうる。前記プライマー対は、前記指標遺伝子の塩基配列と公知データベースに登録された配列とを参照して、慣用のプライマーデザイン用ソフトウェア等によりデザインされうる。前記プライマー対は、適宜、検出に適した標識物質（蛍光物質、放射性物質等）により標識されうる。プライマーの鎖長は、特に限定されないが、例えば、好ましくは、連続した少なくとも１５ヌクレオチド、さらに好ましくは、１５〜４０ヌクレオチド、より好ましくは、１７〜３０ヌクレオチドであることが望ましい。前記プライマー対としては、例えば、
ａ’）〜ｄ’）の核酸について、１）配列番号：２１に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：２２に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
ｅ’）の核酸について、２）配列番号：２３に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：２４に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
ｆ’）の核酸について、３）配列番号：２５に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：２６に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
ｇ’）の核酸について、４）配列番号：２７に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：２８に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
ｈ’）の核酸について、５）配列番号：２９に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：３０に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
ｉ’）の核酸について、６）配列番号：３１に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：３２に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
ｊ’）の核酸について、７）配列番号：３３に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：３４に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
ｋ’）の核酸について、８）配列番号：３５に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：３６に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
ｌ’）の核酸について、９）配列番号：３７に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：３８に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
ｍ’）の核酸について、１０）配列番号：３９に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：４０に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、及び
ｎ’）の核酸について、１１）配列番号：４１に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドと配列番号：４２に示される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドとからなるプライマー対、
等が挙げられる。かかるプライマー対も本発明に含まれる。
【００２４】
ついで、（Ｉ）前記ステップ（１）で得られた核酸の塩基配列、及び／又は
（ＩＩ）前記ステップ（１）で得られた核酸と該核酸に対応する前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸との間の動態の相違、
に基づき、ａ）〜ｎ）の多型を検出する〔ステップ（２）〕。
【００２５】
前記（Ｉ）の塩基配列は、マキサムギルバート法、ＰＣＲを用いたダイレクトシークエンシング等の慣用の配列決定法により決定されうる。
【００２６】
ここで、前記ステップ（１）で得られた核酸において、前記ａ）〜ｎ）の多型の位置に対応する位置において、対応する前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸とは異なる塩基が見出された場合、多型が存在し、核酸試料の供給源の個体が、高血圧症のリスクを有することの指標として判断される。
【００２７】
前記（ＩＩ）の動態は、例えば、電気泳動における移動度、質量、Ｔｍ値等を介して評価される。
【００２８】
電気泳動における移動度は、例えば、一本鎖ＤＮＡ高次構造多型解析等により評価されうる。
【００２９】
具体的には、一本鎖ＤＮＡ高次構造多型解析の場合、ポリアクリルアミドゲル上において、前記ステップ（１）で得られた核酸及び該核酸に対応して前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸を泳動し、移動度を測定し、前記ステップ（１）で得られた核酸と前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸との間で移動度が異なる場合、多型が存在し、核酸試料の供給源の個体が、高血圧症のリスクを有することの指標として判断される。
【００３０】
また、前記電気泳動における移動度は、ＰＣＲに基づく一本鎖ＤＮＡ高次構造多型解析（ＰＣＲ−ＳＳＣＰ）によっても行なうことができる。この場合、前記ステップ（１）を行なわなくてもよい。前記ＰＣＲ−ＳＳＣＰで用いうるプライマー対としては、前記と同様のものが挙げられる。なお、この場合、かかるプライマーは、蛍光物質等の慣用の標識物質で、それぞれのプライマーの末端が標識されたものであってもよい。
【００３１】
前記質量は、例えば、マトリックス支援レーザーイオン化飛行時間質量分析計（ＭＡＬＤＩ  ＴＯＦ  ＭＳ）、四重極質量分析計等により測定されうる。ここで、前記ステップ（１）で得られた核酸及び前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸との間で質量が異なる場合、多型が存在し、核酸試料の供給源の個体が、高血圧症のリスクを有することの指標として判断される。
【００３２】
前記Ｔｍ値は、ＤＮＡアレイを用いたハイブリダイゼーション、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動法等により評価されうる。
【００３３】
前記ＤＮＡアレイを用いたハイブリダイゼーションの場合、前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた核酸を固定化した支持体〔例えば、ガラス（例えば、スライドグラス）、シリコンチップ等〕が用いられうる。前記ＤＮＡアレイを用いたハイブリダイゼーションの場合、前記ステップ（１）において、核酸試料は、該試料中のｍＲＮＡ、該ｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡもしくは該ｃＤＮＡより転写あるいは増幅された核酸を適切な標識物質で標識すればよい。前記標識物質としては、蛍光物質、化学発光物質、発光団を有する物質等が挙げられる。例えば、前記蛍光物質としては、Ｃｙ２、ＦｌｕｏｒＸ、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、イソチオシアン酸フルオレセイン（ＦＩＴＣ）、テキサスレッド、ローダミン等が挙げられる。前記Ｃｙ３及びＣｙ５を標識物質として用いた場合、Ｃｙ３は５３２ｎｍ、Ｃｙ５は６３５ｎｍの波長でスキャンすることにより検出されうる。前記ＤＮＡアレイは、前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた核酸に、支持体表面への固定化を容易にしうる修飾基を導入し、ついで、得られた修飾核酸を、慣用のＤＮＡアレイ作製装置を用いて、ＤＮＡアレイによるハイブリダーゼションを行ないうる範囲の固定化量、固定化密度で、整列、固定化することにより作製されうる。ＤＮＡアレイを用いて、多型を検出する場合、ハイブリダイゼーションにおける条件は、好ましくは、高ストリンジェンシーであることが望ましい。ここで、ＤＮＡアレイ上の前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた核酸に、前記ステップ（１）で得られた核酸がハイブリダイズしない場合又は対照として前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた核酸を用いたハイブリダイゼーションに基づく場合の蛍光強度と比較して、前記ステップ（１）で得られた核酸のハイブリダイゼーションに基づく蛍光強度が減少した場合、多型が存在し、核酸試料の供給源の個体が、高血圧症のリスクを有することの指標として判断される。なお、本発明には、前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた核酸が固定化されたＤＮＡアレイも含まれる。
【００３４】
前記変性剤濃度勾配ゲル電気泳動法の場合、変性剤（例えば、尿素等）の濃度勾配により、Ｔｍ値の差が、電気泳動の移動度の違いとして検出される。したがって、前記ステップ（１）で得られた核酸及び前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸を泳動し、移動度を測定し、前記ステップ（１）で得られた核酸及び前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸との間で移動度が異なる場合、多型が存在し、核酸試料の供給源の個体が、高血圧症のリスクを有することの指標として判断される。
【００３５】
また、前記（ＩＩ）の動態は、ＴａｑＭａｎ法、インベーダー法、ＲＮａｓｅ  Ａミスマッチ切断法等によっても評価されうる。
【００３６】
前記ＴａｑＭａｎ法の場合、前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸をプローブとして用いればよい。ここで、前記プローブは、５’末端側をレポーターとなる蛍光物質で標識し、３’末端側をクエンチャーとなる物質で標識する。この場合、前記ステップ（１）を行なわなくてもよい。また、ＰＣＲの際には、核酸試料を鋳型とし、５’ヌクレアーゼ活性を有するＤＮＡポリメラーゼ、例えば、Ｔａｑ  ＤＮＡポリメラーゼ等を用いて行なわれうる。ＴａｑＭａｎ法に用いられうるプライマー対及びプローブとしては後述の表２に示されるオリゴヌクレオチドが挙げられ、具体的には、例えば、
前記ａ）〜ｄ）の多型について、１’）配列番号：２１に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：２２に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：４３に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：４４に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
前記ｅ）の多型について、２’）配列番号：２３に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：２４に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：４５に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：４６に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
前記ｆ）の多型について、３’）配列番号：２５に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：２６に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：４７に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：４８に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
前記ｇ）の多型について、４’）配列番号：２７に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：２８に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：４９に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：５０に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
前記ｈ）の多型について、５’）配列番号：２９に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：３０に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：５１に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：５２に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
前記ｉ）の多型について、６’）配列番号：３１に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：３２に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：５３に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：５４に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
前記ｊ）の多型について、７’）配列番号：３３に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：３４に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：５５に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：５６に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
前記ｋ）の多型について、８’）配列番号：３５に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：３６に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：５７に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：５８に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
前記ｌ）の多型について、９’）配列番号：３７に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：３８に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：５９に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：６０に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
前記ｍ）の多型について、１０’）配列番号：３９に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：４０に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：６１に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：６２に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；及び
前記ｎ）の多型について、１１’）配列番号：４１に示される塩基配列を含有したプライマーと配列番号：４２に示される塩基配列を含有したプライマーとからなるプライマー対と、配列番号：６３に示される塩基配列を含有したプローブと、配列番号：６４に示される塩基配列を含有したプローブとからなるオリゴヌクレオチド群；
【００３７】
また、インベーダー法の場合、前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸に基づき設計されたインベーダープローブのレポーター蛍光が、多型により生じるミスマッチ部分に侵入することで、ｃｌｅａｖａｓｅが認識する構造が生成され、該ｃｌｅａｖａｓｅによるレポーター蛍光標識部分の切断によって遊離したレポーター蛍光を検出することにより行なわれうる。この場合、蛍光強度が、前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸を対照として用いた場合に比べ、増加した場合、多型が存在し、核酸試料の供給源の個体が、高血圧症のリスクを有することの指標として判断される。
【００３８】
なお、本明細書において、「ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸に対応する核酸」とは、核酸試料中に含まれる核酸において、ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸の塩基配列の他、該塩基配列中、ａ）〜ｎ）の多型を有する核酸、該多型の位置以外の位置における高血圧症に無関係である変異を有する核酸をも含むことを意図する。
【００３９】
なお、本発明においては、前記ａ）〜ｎ）の多型により、翻訳産物の発現に影響を及ぼすものである場合、かかる発現産物を指標として、高血圧症のリスクを評価することもできる。この場合、前記翻訳産物に対する抗体又は抗体断片を用いて、発現量、翻訳産物の構造変化等を評価すればよい。前記抗体は、例えば、カレント・プロトコルズ・イン・イムノロジー〔Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、ジョン・Ｅ・コリガン（Ｊｏｈｎ  Ｅ．  Ｃｏｌｉｇａｎ）編、ジョン・ワイリー＆サンズ社（Ｊｏｈｎ  Ｗｅｉｌｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ）発行、１９９２年〕に記載の方法により、前記多型に応じた翻訳産物を用いて、ウサギやマウス等を免疫することにより、容易に作製され得る。前記抗体は、前記翻訳産物に特異的に結合する能力を有するものであれば、ポリクローナル抗体であってもよく、モノクローナル抗体であってもよい。また、得られた抗体を精製後、ペプチダーゼ等により処理することにより、抗体断片が得られる。前記抗体の特異性は、例えば、前記多型に応じた翻訳産物を用い、オクタロニー法、ＥＬＩＳＡ等により評価されうる。例えば、前記オクタロニー法の場合、前記多型に応じた翻訳産物毎に適切な沈降線の形成を示すことを指標として評価されうる。したがって、前記ミスセンス変異に関する多型の場合、アミノ酸の変化に応じて、抗体を作製すればよく、かかる抗体を用いることにより、ミスセンス変異を検出し、高血圧症のリスクを評価することもできる。
【００４０】
また、本発明においては、前記抗体に代えて、ＤＮＡアプタマーを用いてもよい。前記発現産物に特異的なＤＮＡアプタマーは、ランダムな配列のオリゴ核酸ライブラリーの作製と、標的となる発現産物に対する高い結合性を有するオリゴ核酸の選別と、選別されたオリゴ核酸の増幅とを含むサイクルを繰り返すこととにより得られうる。
【００４１】
また、本発明においては、前記ａ）〜ｎ）の多型により、オルタナティブスプライシング等を介して転写産物の生成に影響を及ぼすものである場合、かかる転写産物を指標として、高血圧症のリスクを評価することもできる。
【００４２】
本発明は、他の側面では、前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸を含有した、本発明の評価方法を行なうための、高血圧症のリスクの評価用試薬（態様１）；前記プライマー対の少なくとも１種を含有した、本発明の評価方法を行なうための、高血圧症のリスクの評価用試薬（態様２）に関する。
【００４３】
本発明の高血圧症のリスクの評価用試薬によれば、前記核酸又はプライマー対を含有しているため、高血圧症のリスクを、簡便に、迅速に評価することができるという優れた効果を発揮する。
【００４４】
なお、本発明の評価用試薬には、前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸と、前記プライマー対の少なくとも１種とを含有した、本発明の評価方法を行なうための、高血圧症のリスクの評価用試薬も含まれる。
【００４５】
本発明の評価用試薬は、適宜、検出用試薬、対照試料等を含有していてもよい。
【００４６】
前記態様１の評価用試薬は、前記ＤＮＡアレイとして、前記ａ’）〜ｎ’）からなる群より選ばれた少なくとも１種の核酸を含有していてもよい。かかる態様の評価用試薬によれば、ハイスループット解析が可能になる。
【００４７】
態様２の評価用試薬においては、例えば、用いられる指標、該指標を評価するための手法に応じて、適切なプライマー対を選択できる。
【００４８】
また、態様２の評価用試薬は、ＤＮＡの可視化用の電気泳動用ゲル、反応容器、説明書等を適宜含有していてもよい。
【００４９】
本発明は、別の側面では、生検試料に含まれる核酸について、前記ａ）〜ｎ）からなる群より選ばれた少なくとも１種の多型の有無を評価し、該多型が検出された試料を選別することを特徴とする、高血圧症のリスクのある個体由来の生検試料の選別方法に関する。
【００５０】
本発明の選別方法は、本発明の評価方法と同様の手順で行なうことができる。したがって、本発明の選別方法によれば、高血圧症のリスクのある個体由来の生検試料を、簡便に、迅速に選別することができる。
【００５１】
かかる選別方法によれば、医師による疾患の診断を必要とする現場の他、分析、研究等の分野において、多数の生検試料のなかから、高血圧症のリスクのある個体由来の生検試料を、簡便に、迅速に選別することができる。
【００５２】
本発明の選別方法により得られた「高血圧症のリスクのある個体由来の生検試料であること」を示す情報は、例えば、電磁的方法〔電気通信回線（単方向、相方向を含む）、電子媒体、書類等を介して、かかる情報を必要とする者、例えば、被検対象の個体、医師等に提供されうる。
【００５３】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明は、かかる実施例により限定されるものではない。
【実施例１】
【００５４】
吹田市在住の市民から、性及び年齢により階層的に選ばれた「吹田研究」の参加者のうち、国立循環器病センター  集団検診部に来診し、遺伝子解析に同意した１８１８人を対象者とした。
【００５５】
各対象者を、座位にて、少なくとも１０分間安静にさせた。その後、水銀血圧計を用いて、各対象者の最高血圧〔収縮期血圧（ＳＢＰ）〕及び最低血圧〔拡張期血圧（ＤＢＰ）〕を、２回測定した。なお、各測定の間には、３分間の間隔を設けた。
【００５６】
また、絶食から１２時間後の対象者の血液試料を、ＥＤＴＡを含む試験管内に回収した。自動分析装置（東芝株式会社製、商品名：ＴＢＡ−８０）を用いて、米国疾病予防管理センターの脂質標準化プログラムに従って総コレステロール値及びＨＤＬコレステロール値を測定した。
【００５７】
かかる測定結果に基づき、対象者を、喫煙者；飲酒者；高血圧症群〔ＳＢＰが１４０ｍｍＨｇ以上であり、かつＤＢＰが９０ｍｍＨｇ以上である状態又は現在、降圧剤を用いている状態の対象者〕；高コレステロール血症群〔総コレステロール値が５．６８ｍｍｏｌ／Ｌ以上（２２０ｍｇ／ｄＬ以上）である状態又は現在、抗高脂血症薬を用いている状態の対象者〕；糖尿病群〔空腹時血漿血糖が７．０ｍｍｏｌ／Ｌ（１２６ｍｇ／ｄＬ）以上若しくは非空腹時血糖が１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ（２００ｍｇ／ｄＬ）以上である状態、ＨｂＡ１Ｃが６．５％を超過している状態又は現在、抗糖尿病薬を用いている状態〕に分類した。肥満度指数（ＢＭＩ）は、体重（ｋｇ）／身長（ｍ）2として算出した。
【００５８】
１８１８人の対象者の特徴を、表１に示す。
【００５９】
【表１】
2006101790.tif 000002
【００６０】
これらの対象者から採血した血液を、商品名：ＮＡ−３０００核酸分離システム（倉敷紡績株式会社）に供して、ゲノムＤＮＡを抽出した。ついで、高血圧に関連する候補遺伝子を選抜し、ダイレクトシークエンス法により、塩基配列を決定し、多型を評価した。
【００６１】
また、得られたゲノムＤＮＡを鋳型として用いて、ＴａｑＭａｎ−ＰＣＲ法により、数十種類の遺伝子における多型のタイピングを行なった。
【００６２】
用いたプライマーの一例を、下記表２に示す。
【００６３】
【表２】
2006101790.tif 000003
【００６４】
商品名：Ｓｅｑｕｅｎｃｈｅｒソフトウェア（Ａｎｎ  ＡｒｂｏｒのＧｅｎｅ  Ｃｏｄｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製）を用いることによって多型を評価した。遺伝子型を特定するための候補を、マイナーアレル頻度が５％よりも大きいＳＮＰとした。ＳＮＰが、連鎖不平衡の状態（決定係数が０．５より大きい）の場合に、代表的なＳＮＰの遺伝子型を特定した。ミスセンス変異を起こすＳＮＰ（以下、ミスセンスＳＮＰという）は、直接高血圧の影響している場合があるため、マイナーアレル頻度が５％未満のミスセンスＳＮＰについても遺伝子型を特定した。
【００６５】
分散分析を用いてグループ間の平均値を比較し、全体の有意性が実証されれば、一般線形モデルを利用してグループ間の差を評価した。χ2分析によって頻度を比較した。
【００６６】
男女別の年齢、ＢＭＩ、現在の病気（高脂血症及び糖尿病）、ライフスタイル（喫煙及び飲酒）及び降圧剤の使用を含むリスクファクターにおける潜在的な交絡因子を考慮したロジスティック回帰分析によって、遺伝子型と血圧との関連解析を行なった。なお、多変量のリスクファクターについて、９５％の信頼区間で調整オッズ比が与えられた。商品名：ＳＡＳ統計学ソフトウェア（ｒｅｌｅａｓｅ  ８．２、ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｉｎｃ製）を用いてすべての分析を行なった。また、商品名：ＳＮＰＡｌｙｚｅ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．１（ＤＹＮＡＣＯＭ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．製）を用いて、連鎖不平衡を計算した。
【００６７】
解析結果を表３に示す。
【００６８】
【表３】
2006101790.tif 000004
【００６９】
その結果、表３に示されるように、ＣＡＳＴ（カルパスタチン）遺伝子、ＬＩＰＡ（リソソーム酸リパーゼ）遺伝子、ＬＩＰＣ（肝性リパーゼ）遺伝子、ＳＬＣ４Ａ１（バンド３）遺伝子、ＴＲＨ（甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン）遺伝子及びＶＷＦ（ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子）遺伝子において、ミスセンス変異を引き起こすＳＮＰ、並びにＧＲＥＢ１遺伝子及びＨＰＣＡＬ１遺伝子において、ＳＮＰが見出された。
【００７０】
ＣＡＳＴ遺伝子のｒｓ７５４６１５は、女性の高血圧症と有意に関連があることが明らかになった（ＧＧ＋ＧＣ対ＣＣ、ｐ＝０．０３４９、オッズ比＝０．１７、９５％の信頼区間：０．０３〜０．８８）。また、ＳＬＣ４Ａ１遺伝子のｒｓ５０３６は、男性の高血圧症と有意に関連があることが明らかになった（ＡＡ対ＡＧ＋ＧＧ、ｐ＝０．０３５３、オッズ比＝０．５７、９５％の信頼区間：０．３４〜０．９６）。さらに、ＶＷＦ遺伝子のｒｓ１０６３８５６は、男性の高血圧症と有意に関連があることが明らかになった（ＡＡ対ＡＧ＋ＧＧ、ｐ＝０．０２５９、オッズ比＝０．５１、９５％の信頼区間：０．２８〜０．９２）。
【００７１】
これらの遺伝子の遺伝子型による血圧の変動は、ＣＡＳＴ遺伝子で、４．４１ｍｍＨｇ、ＬＩＰＡ遺伝子で、１．１２ｍｍＨｇ、ＬＩＰＣ遺伝子で、３．４７ｍｍＨｇ、ＳＬＣ４Ａ１遺伝子で、１．５６ｍｍＨｇ、ＴＲＨ遺伝子で、４．５１ｍｍＨｇ、ＶＷＦ遺伝子で、５．４５ｍｍＨｇであった。
【００７２】
これらの結果から、ＣＡＳＴ遺伝子、ＬＩＰＡ遺伝子、ＬＩＰＣ遺伝子、ＳＬＣ４Ａ１遺伝子、ＴＲＨ遺伝子及びＶＷＦ遺伝子のミスセンス変異は、日本人における本態性高血圧症の原因となる変異であることが示唆された。
【００７３】
また、ＧＲＥＢ１遺伝子において、−１３９４５Ａ＞Ｔ（ＡＡ対ＡＴ＋ＴＴ、ｐ＝０．００６、オッズ比＝２．２８、９５％の信頼区間：１．２７〜４．０８）、４５７１８Ａ＞Ｇ（ＡＡ対ＡＧ＋ＧＧ、ｐ＝０．０１１、オッズ比＝０．６５、９５％の信頼区間：０．４６〜０．９０）は、男性の高血圧症と有意に関連があることが明らかになった。また、ＧＲＥＢ１中の４５７１８Ａ＞Ｇにおいて、ＡＡ＋ＡＧの遺伝子型（Ａ／Ｇのアレル頻度：０．５１２／０．４８８）の男性のＳＢＰは、ＧＧ遺伝子型の男性よりも２．７８ｍｍＨｇ高かった（ｐ＝０．０２６５）。
【００７４】
ＧＲＥＢ１中のＪＳＴ１４９３９０のＡＡ＋ＡＧ遺伝子型（Ａ／Ｇのアレル頻度：０．８０３／０．１９７）の男性のＳＢＰは、ＧＧ遺伝子型の男性よりも９．１９ｍｍＨｇ高かった（ｐ＝０．００７９）。
【００７５】
また、ＳＢＰ  １２０ｍｍＨｇ以下であり、かつＤＢＰ  ８０ｍｍＨｇ以下である状態又は降圧剤を用いていない状態の対象者を、対照群とし、収縮期血圧１６０ｍｍＨｇ以上であり、かつ拡張期血圧１００ｍｍＨｇ以上である状態又は現在、降圧剤を用いている状態の対象者を、高血圧症群とし、年齢、ＢＭＩ、高脂血症、糖尿病、喫煙及び飲酒について補正した結果、４５７１８Ａ＞Ｇは男性の高血圧症と有意な関連があることが明らかとなった（ＡＡ対ＡＧ＋ＧＧ、ｐ＝０．００２、オッズ比＝０．４２、９５％の信頼区間：０．２４〜０．７２）。
【００７６】
ＨＰＣＡＬ１中のＪＳＴ１２６１８６のＡＡ＋ＡＣ遺伝子型（Ａ／Ｃのアレル頻度：０．８８０／０．１２０）の女性のＳＢＰは、ＣＣ遺伝子型の女性よりも１６．６８ｍｍＨｇ高かった（ｐ＝０．００２５）。
【００７７】
以上のように、ＣＡＳＴ遺伝子、ＬＩＰＡ遺伝子、ＬＩＰＣ遺伝子、ＳＬＣ４Ａ１遺伝子、ＴＲＨ遺伝子、ＶＷＦ遺伝子、ＧＲＥＢ１遺伝子及びＨＰＣＡＬ１遺伝子それぞれにおける遺伝子多型により、高血圧症を診断できることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００７８】
本発明により、高血圧症及び関連する循環器疾患の診断を行なうことができ、しいては、脳卒中、虚血性心疾患、腎不全等の発症予防や治療につなげることができる。
【配列表フリーテキスト】
【００７９】
配列番号：１において、１３３６位の「ｓ」は、ＳＮＰの位置である。
【００８０】
配列番号：２において、４０８位の「Ｘａａ」は、Ｃｙｓ又はＳｅｒである。
【００８１】
配列番号：３において、１３１１位の「ｓ」は、ＳＮＰの位置である。
【００８２】
配列番号：４において、３８６位の「Ｘａａ」は、Ｃｙｓ又はＳｅｒである。
【００８３】
配列番号：５において、４９４位の「ｓ」は、ＳＮＰの位置である。
【００８４】
配列番号：６において、１３１位の「Ｘａａ」は、Ｃｙｓ又はＳｅｒである。
【００８５】
配列番号：７において、１１６５位の「ｓ」は、ＳＮＰの位置である。
【００８６】
配列番号：８において、２９０位の「Ｘａａ」は、Ｃｙｓ又はＳｅｒである。
【００８７】
配列番号：９において、８６位の「ｍ」は、ＳＮＰの位置である。
【００８８】
配列番号：１０において、１６位の「Ｘａａ」は、Ｔｈｒ又はＰｒｏである。
【００８９】
配列番号：１１において、３４０位の「ｒ」は、ＳＮＰの位置である。
【００９０】
配列番号：１２において、９５位の「Ｘａａ」は、Ｖａｌ又はＭｅｔである。
【００９１】
配列番号：１３において、２８０位の「ｒ」は、ＳＮＰの位置である。
【００９２】
配列番号：１４において、５６位の「Ｘａａ」は、Ｇｌｕ又はＬｙｓである。
【００９３】
配列番号：１５において、１３４位の「ｓ」は、ＳＮＰの位置である。
【００９４】
配列番号：１６において、８位の「Ｘａａ」は、Ｖａｌ又はＬｅｕである。
【００９５】
配列番号：１７において、２６７５位の「ｒ」は、ＳＮＰの位置である。
【００９６】
配列番号：１８において、７８９位の「Ｘａａ」は、Ａｌａ又はＴｈｒである。
【００９７】
配列番号：１９において、１１５３６位の「ｗ」、７１１９８位の「ｒ」、１１０１９０位の「ｓ」、１１１５２５位の「ｒ」は、ＳＮＰの位置である。
【００９８】
配列番号：２０において、９６５１４位の「ｍ」は、ＳＮＰの位置である。
【００９９】
配列番号：２１は、ＣＡＳＴ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１００】
配列番号：２２は、ＣＡＳＴ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１０１】
配列番号：２３は、ＬＩＰＡ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１０２】
配列番号：２４は、ＬＩＰＡ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１０３】
配列番号：２５は、ＬＩＰＣ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１０４】
配列番号：２６は、ＬＩＰＣ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１０５】
配列番号：２７は、ＳＬＣ４Ａ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１０６】
配列番号：２８は、ＳＬＣ４Ａ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１０７】
配列番号：２９は、ＴＲＨ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１０８】
配列番号：３０は、ＴＲＨ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１０９】
配列番号：３１は、ＶＷＦ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１１０】
配列番号：３２は、遺ＶＷＦ伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１１１】
配列番号：３３は、ＧＲＥＢ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１１２】
配列番号：３４は、ＧＲＥＢ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１１３】
配列番号：３５は、ＧＲＥＢ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１１４】
配列番号：３６は、ＧＲＥＢ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１１５】
配列番号：３７は、ＧＲＥＢ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１１６】
配列番号：３８は、ＧＲＥＢ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１１７】
配列番号：３９は、ＧＲＥＢ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１１８】
配列番号：４０は、ＧＲＥＢ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１１９】
配列番号：４１は、ＨＰＣＡＬ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１２０】
配列番号：４２は、ＨＰＣＡＬ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プライマーの配列である。
【０１２１】
配列番号：４３は、ＣＡＳＴ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１２２】
配列番号：４４は、ＣＡＳＴ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１２３】
配列番号：４５は、ＬＩＰＡ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１２４】
配列番号：４６は、ＬＩＰＡ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１２５】
配列番号：４７は、ＬＩＰＣ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１２６】
配列番号：４８は、ＬＩＰＣ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１２７】
配列番号：４９は、ＳＬＣ４Ａ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１２８】
配列番号：５０は、ＳＬＣ４Ａ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１２９】
配列番号：５１は、ＴＲＨ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１３０】
配列番号：５２は、ＴＲＨ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１３１】
配列番号：５３は、ＶＷＦ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１３２】
配列番号：５４は、ＶＷＦ遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１３３】
配列番号：５５は、ＧＲＥＢ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１３４】
配列番号：５６は、ＧＲＥＢ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１３５】
配列番号：５７は、ＧＲＥＢ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１３６】
配列番号：５８は、ＧＲＥＢ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１３７】
配列番号：５９は、ＧＲＥＢ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１３８】
配列番号：６０は、ＧＲＥＢ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１３９】
配列番号：６１は、ＧＲＥＢ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１４０】
配列番号：６２は、ＧＲＥＢ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１４１】
配列番号：６３は、ＨＰＣＡＬ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【０１４２】
配列番号：６４は、ＨＰＣＡＬ１遺伝子におけるＳＮＰの検出用プローブの配列である。
【配列表】
2006101790000001.app