(57)【要約】【課題】  活性酸素による体内の脂質の酸化を抑制することができる抗酸化組成物およびこれを含む製品を提供する。【解決手段】  ルテインエステルとラクトフェリンとを含む抗酸化組成物であることを特徴とする。ここで、ルテインエステルの質量ＷLとラクトフェリンの質量ＷRとの比ＷL／ＷRが０．００１２以上１２以下であることが好ましい。また、ルテインエステルの質量ＷLとラクトフェリンの質量ＷRとの総和（ＷL＋ＷR）が抗酸化組成物全体の０．１質量％以上５０質量％以下であることが好ましい。【選択図】        図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ルテインエステルとラクトフェリンとを含むことを特徴とする、抗酸化組成物。
【請求項２】
前記ルテインエステルの質量ＷLと前記ラクトフェリンの質量ＷRとの比ＷL／ＷRが０．００１２以上１２以下であることを特徴とする、請求項１に記載の抗酸化組成物。
【請求項３】
前記ルテインエステルの質量ＷLと前記ラクトフェリンの質量ＷRとの総和（ＷL＋ＷR）が前記抗酸化組成物全体の０．１質量％以上５０質量％以下であることを特徴とする、請求項１または２に記載の抗酸化組成物。
【請求項４】
前記ルテインエステルが天然由来のものであることを特徴とする、請求項１から３のいずれかに記載の抗酸化組成物。
【請求項５】
請求項１から４のいずれかに記載の抗酸化組成物を含むことを特徴とする、食品。
【請求項６】
請求項１から４のいずれかに記載の抗酸化組成物を含むことを特徴とする、錠剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は抗酸化組成物およびこれを含む製品に関し、特に活性酸素による体内の脂質の酸化を抑制することができる抗酸化組成物およびこれを含む製品に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から、活性酸素については世界各国において研究が行なわれており、この活性酸素が人間の健康に大きな影響を与えていることが判明している。人間は呼吸することによって空気中から体内に酸素を取り入れており、体内の細胞内でミトコンドリアが酸素の代謝によってエネルギを作り出すときに酸素の一部が還元されて活性酸素（スーパーオキシドアニオン）となる。活性酸素としては、酸素分子が１電子還元されたスーパーオキシドアニオン（・Ｏ2-）の他に、スーパーオキシドアニオンから生成された過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）、過酸化水素の反応によって生成されたヒドロキシラジカル（・ＯＨ-）、光などのエネルギが吸収されて生成した一重項酸素（1Ｏ2）がある。
【０００３】
活性酸素は体内の脂質と反応して過酸化脂質を生成し、過酸化脂質は人体に悪影響を及ぼす原因となる。また、過酸化脂質は体内の細胞の細胞膜を障害して細胞のタンパク質や核酸に損傷を与えることによってがん細胞を発生させ、また動脈硬化などの原因にもなる。また、皮膚には紫外線などが直接照射されるため活性酸素が生成しやすく、これにより過酸化脂質が生成されて皮膚のシミやソバカスなどの原因にもなる。
【０００４】
したがって、人間の健康維持の観点からは、活性酸素による体内の脂質の酸化を抑制する必要性は非常に大きいものと考えられる。
【特許文献１】特開２００３−２６５８９号公報
【特許文献２】特表２００１−８０１７９８号公報
【特許文献３】米国特許第５３８２７１４号明細書
【特許文献４】米国特許第５６４８５６４号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、活性酸素による体内の脂質の酸化を抑制することができる抗酸化組成物およびこれを含む製品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、ルテインエステルとラクトフェリンとを含む抗酸化組成物であることを特徴とする。
【０００７】
ここで、本発明の抗酸化組成物においては、ルテインエステルの質量ＷLとラクトフェリンの質量ＷRとの比ＷL／ＷRが０．００１２以上１２以下であることが好ましい。
【０００８】
また、本発明の抗酸化組成物においては、ルテインエステルの質量ＷLとラクトフェリンの質量ＷRとの総和（ＷL＋ＷR）が抗酸化組成物全体の０．１質量％以上５０質量％以下であることが好ましい。
【０００９】
また、本発明の抗酸化組成物においては、ルテインエステルが天然由来のものであることが好ましい。
【００１０】
また、本発明は、上記のいずれかに記載の抗酸化組成物を含む食品である。
【００１１】
さらに、本発明は、上記のいずれかに記載の抗酸化組成物を含む錠剤である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、活性酸素による体内の脂質の酸化を抑制することができる（以下、「抗酸化作用」ということもある。）抗酸化組成物およびこれを含む食品や錠剤などの製品を提供することができる。また、本発明の抗酸化組成物およびこれを含む食品や錠剤などの製品は体内から活性酸素を除去する効果も有し得る。
【００１３】
また、本発明の効果としては、動脈硬化抑制作用、肝保護作用または抗炎症作用などが考えられる。さらに、本発明は、自律神経失調症、膀胱炎、腎孟炎、結石、生理痛、生理不順、冷え性、吹出物、湿疹、慢性皮膚病、水虫、蓄膿症、気管支炎、喘息、緑内障、白内障、口内炎、中耳炎、耳鳴り、前立腺肥大、甲状腺肥大、貧血、不眠症、メニエール病、頭痛、肩こり、高血圧、肝臓、腎臓、糖尿病、低血圧、動脈硬化、リュウマチ、神経痛、関節炎、椎間板ヘルニア、腰痛、ネフローゼ、脳卒中、胃弱、アレルギー体質（鼻炎、ジンマシン、アトピー性皮膚炎、小児喘息など）、痔、心臓病、更年期障害、各種婦人病、川崎病、ベーチェット病、胃がん、肺がん、腎臓がん、肝臓がん、大腸がん、肺炎、シミ、そばかす、シワまたは肌のトラブルなどの活性酸素が関与する疾患にも効果があるものと考えられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明の抗酸化組成物は、ルテインエステルとラクトフェリンとを含んでいることを特徴としている。これは、本発明者が鋭意検討した結果、ルテインエステルとラクトフェリンとを混合することによりルテインエステルとラクトフェリンの相乗効果が発現して特に優れた抗酸化作用が発揮されることを見い出し、本発明を完成するに至ったものである。
【００１５】
ここで、ルテインエステルはルテイン（Ｃ40Ｈ56Ｏ2）と脂肪酸とのエステルであり、ルテインエステルを構成する脂肪酸としては、たとえばパルミチン酸、ミリスチン酸、アラキドン酸、ステアリン酸、ラウリン酸、リノレン酸、オレイン酸またはリノール酸などがある。これらの脂肪酸がルテインの２つの水酸基とエステル結合することによりルテインエステルが形成される。ルテインエステルはビタミンＡの類縁体から合成することもできるが、本発明の抗酸化組成物を食品として口から体内に取り入れて吸収させ、体内における抗酸化作用を十分に発揮させるためにはたとえば天然物の抽出物のような天然由来のものであることが好ましい。また、ルテインエステルは、たとえば天然物であるホウレンソウ、ケール、キーウィ、卵黄、トウモロコシ、ブロッコリ、グリンピース、インゲンマメ、葉レタス、コラード、ロマインレタス、セロリ、芽キャベツ、ネギ、黄ピーマンまたはサケなどに含まれるがその含有量はマリーゴールドと比較すると格段に小さいため、製造効率および製造コストの観点から、本発明に用いられるルテインエステルはマリーゴールドから抽出されたものであることが好ましい。
【００１６】
また、ラクトフェリンは、一本のポリペプチド鎖にガラクトース、マンノース、シアル酸などの糖類が結合した分子量約８００００の糖タンパク質である。ラクトフェリンは、多くの哺乳動物の乳汁などに含まれている。たとえば、牛乳由来のラクトフェリンは分子量が８３１００程度であって、等電点が８．２〜８．９である強塩基性のタンパク質である。また、牛乳由来のラクトフェリンは６８９個のアミノ酸残基から構成され、その組成は表１に示すとおりである。また、牛乳由来のラクトフェリンの立体構造はＸ線結晶解析により明らかにされており、丸く厚みを持たせた柄のないイチョウの葉のようなＮローブおよびＣローブと呼ばれる互いに類似した構造を有する二つの領域から構成され、各ローブはそれぞれ３価の鉄イオンと強く結合し、牛乳由来のラクトフェリン１分子あたり２原子の鉄と結合し得る。また、牛乳由来のラクトフェリンは１分子あたり４箇所に糖鎖を結合している。また、牛乳由来のラクトフェリンに結合している糖鎖の質量％は１１．２質量％程度である。
【００１７】
【表１】
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【００１８】
本発明の抗酸化組成物中におけるルテインエステルの質量ＷLとラクトフェリンの質量ＷRとの比ＷL／ＷRは０．００１２以上１２以下であることが好ましく、０．０１２以上１．２以下であることがより好ましく、０．０６以上０．２４以下であることがさらに好ましい。ＷL／ＷRが０．００１２未満である場合および１２よりも大きい場合には本発明の抗酸化組成物の抗酸化作用が発揮されにくい傾向にある。また、ＷL／ＷRが０．０１２以上１．２以下である場合、さらに好ましくは０．０６以上０．２４以下である場合には本発明の抗酸化組成物が優れた抗酸化作用を発揮する傾向にある。
【００１９】
また、本発明の抗酸化組成物中におけるルテインエステルの質量ＷLとラクトフェリンの質量ＷRとの総和（ＷL＋ＷR）は抗酸化組成物全体の０．１質量％以上５０質量％以下であることが好ましく、１質量％以上３０質量％以下であることがより好ましく、５質量％以上２０質量％以下であることがさらに好ましい。（ＷL＋ＷR）が抗酸化組成物全体の０．１質量％未満である場合および５０質量％よりも大きい場合には本発明の抗酸化組成物の抗酸化作用が発揮されにくい傾向にある。また、（ＷL＋ＷR）が１質量％以上３０質量％以下である場合、さらに好ましくは５質量％以上２０質量％以下である場合には本発明の抗酸化組成物が優れた抗酸化作用を発揮する傾向にある。
【００２０】
なお、本発明の抗酸化組成物にはルテインエステルとラクトフェリン以外の成分が含まれていてもよい。ルテインエステルとラクトフェリン以外の成分としては、たとえば還元型アスコルビン酸（ビタミンＣ）、ビタミンＥ、還元型グルタチオン、トコトリエノール、ビタミンＡ誘導体、リコピン、β−クリプトキサンチン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、フコキサンチン、尿酸、ユビキノン、コエンザイムＱ１０、葉酸、ニンニクエキス、アリシン、セザミン、リグナン類、カテキン、イソフラボン、カルコン、タンニン類、フラボノイド類、クマリン、イソクマリン類、ブルーベリーエキス、黒米エキス、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＤ、ビタミンＰ、コリン、ナイアシン、パントテン酸、葉酸カルシウム、ＥＰＡ、オリゴ糖、食物繊維、スクアレン、大豆レシチン、タウリン、ドナリエラ、プロテイン、オクタコサノール、ＤＨＡ、卵黄レシチン、リノール酸、マグネシウム、亜鉛、クロム、セレン、カリウム、ヘム鉄、カキ肉エキス、キトサン、ケイヒ、サンザシ、生姜、霊芝、オオバコ、カミツレ、カモミール、セイヨウタンポポ、ハイビスカス、ハチミツ、ボーレン、ローヤルゼリー、ライム、ラベンダー、ローズヒップ、ローズマリー、セージ、ビフィズス菌、フェーカリス菌、ラクリス、小麦胚芽油、ゴマ油、シソ油、大豆油、中鎖脂肪酸、アガリクス、イチョウ葉エキス、ウコン、コンドロイチン、玄米胚芽エキス、タマネギ、ＤＰＡ、茶、冬虫夏草、ニンニク、蜂の子、パパイヤ、プーアル、プロポリス、メグスリの木、ヤブシタケ、ノコギリヤシ、ヒアルロン酸、コラーゲン、ギャバ、ハープシールオイル、サメ軟骨、グルコサミン、レシチン、ホスファチジルセリン、田七ニンジン、桑葉、大豆抽出物、オリーブ葉、オリーブ実、ギムネマ、バナバ、サラシア、ガルシニア、キトサン、セントジョーンズワート、ナツメ、ニンジン、パッションフラワー、ブロッコリ、プラセンタ、ハトムギ、ブドウ種子、ピーナッツ種皮、ビルベリー、ブラックコホシュ、マリアアゼミ、月桂樹、セージ、ラフマ、黒酢、ゴーヤ、マカ、紅花、亜麻、ウーロン茶、カフェイン、カプサイシン、キシロオリゴ糖、グロコサミン、ソバ、シトラス、プルーン、スピルリナ、大麦若葉、核酸、酵母、椎茸、梅肉、アミノ酸、深海鮫抽出物、ノニ、カキ肉、スッポン、シャンピニオン、オオバコ、アセロラ、パイナップル、バナナ、モモ、アンズ、メロン、イチゴ、ラズベリー、オレンジ、フコイダン、メシマコブ、グリシン、ナイアシン、チェストツリー、セラミド、Ｌシステイン、赤ワイン葉、ミレット、ホーステール、ビオチン、センテラアジアティカ、ハスカップ、ピクノジェノール、フキ、ルバーブ、クローブ、プーアル、クエン酸、ビール酵母、メリロート、ブラックジンガー、カジュツ、ナットウキナーゼ、ベニコウジ、シナモン、ダッタンソバまたはココアなどがある。
【００２１】
図１に本発明の抗酸化組成物の製造方法の好ましい一例のフローチャートを示す。まず、ステップＳ１ａにおいて、マリーゴールドの花弁にヘキサンを加えてルテインエステルが抽出される。次に、ステップＳ２ａにおいて、この抽出液をろ過して得られたろ液にヘキサンおよびエタノールを加えてルテインエステルを精製する。続いて、ステップＳ３ａにおいて、ろ液からヘキサンおよびエタノールを除去し、続いてルテインエステルの濃縮を行なう。そして、ステップＳ４ａにおいて、濃縮されたルテインエステルを凍結乾燥し、その後粉砕して粉末状のルテインエステルが得られる。
【００２２】
また、ステップＳ１ｂにおいて、たとえば牛乳などの原料乳を遠心分離することによって得られたホエーまたはチーズホエー中のラクトフェリンを陽イオン交換樹脂に吸着させて抽出する。次に、ステップＳ２ｂにおいて、陽イオン交換樹脂に吸着したラクトフェリンを塩類溶液を用いて脱離させて分離する。続いて、ステップＳ３ｂにおいて、脱離したラクトフェリンを含む液について限外ろ過膜操作を行なうことによってラクトフェリンの脱塩および濃縮を行なう。そして、ステップＳ４ｂにおいて、濃縮されたラクトフェリンを凍結乾燥し、その後粉砕して粉末状のラクトフェリンが得られる。
【００２３】
最後にステップＳ５において、粉末化されたルテインエステルとラクトフェリンとが混合されて本発明の抗酸化組成物が生成される。本発明の抗酸化組成物の形態は、粉末状、固形状または液体状などのいずれであってもよく、ルテインエステルとラクトフェリンとが含まれていればその形態は問わない。また、上記の本発明の抗酸化組成物の製造方法においては、抽出、ろ過または精製などの上記以外の工程が含まれていてもよいことは言うまでもない。
【００２４】
本発明の抗酸化組成物を、たとえばガム、キャンディー、キャラメル、チョコレート、クッキー、ビスケット、スナック菓子、ゼリー、グミ、飴、ケーキ、饅頭、最中などの菓子類、そば、うどん、ラーメンなどの麺類、ミルク、バター、チーズ、プリン、アイスクリーム、ヨーグルトなどの乳製品、味噌、醤油、みりん、ポン酢、酢、ソース、ケチャップ、ジャム、ふりかけなどの調味料類、スープ類、ジュース、コーヒー、紅茶、茶、炭酸飲料、スポーツ飲料などの飲料類、健康食品類または栄養補助食品類などの食品に含ませ
ることができる。また、本発明の抗酸化組成物を従来から公知の賦形剤などと混合して打錠することにより錠剤に含ませることができる。なお、本発明の抗酸化組成物をカプセル中に入れることができることは言うまでもない。
【００２５】
実験例
（試料）
実験例において用いられたルテインエステルは以下のようにして得られた。まず、マリーゴールドの花弁にヘキサンを加えてルテインエステルを抽出した。次に、この抽出液をろ過して得られたろ液にヘキサンおよびエタノールを加えてルテインエステルを精製した。そして、ろ液からヘキサンおよびエタノールを除去し、続いてルテインエステルの濃縮を行なった。最後に、濃縮されたルテインエステルを乾燥し、粉砕して粉末状のルテインエステルを得た。
【００２６】
このルテインエステルは、ルテインとパルミチン酸とのエステルが４４．５％、ルテインとミリスチン酸とのエステルが２３．０％、ルテインとアラキドン酸とのエステルが１２．０％、ルテインとステアリン酸とのエステルが１１．０％、ルテインとラウリン酸とのエステルが２．０％、その他、ルテインとリノレン酸とのエステル、ルテインとオレイン酸とのエステルおよびルテインとリノール酸とのエステルが少量ずつ含まれて構成されていることがガスクロマトグラフィーにより確認された。ここで、「％」は、ルテインエステルを構成するエステル全体の個数に対する個々のエステルの個数の割合を示している。
【００２７】
このルテインエステル１２ｍｇを正確に量り採り、ヘキサンとアセトンとエタノールとトルエンとを体積比で１０：７：６：７の割合で混合した抽出溶媒を約８０ｍｌ加えて２分間超音波処理を行なった後、正確に１００ｍｌとした。この液２０ｍｌを摺り合わせ三角フラスコに正確に量り採り、上記抽出溶媒を１０ｍｌおよび４０ｇの水酸化カリウムをメタノールで溶解し冷却後１００ｍｌとした４０％ＫＯＨ／メタノールを２ｍｌ加えて、５６℃の水浴中で２０分間反応させた。これを冷却した後、ヘキサン３０ｍｌおよび１００ｇの無水硫酸ナトリウムを１０００ｍｌの蒸留水に溶解した１０％Ｎａ2ＳＯ4溶液を４０ｍｌ加えて激しく混合した。そして、暗所で１時間放置した後、２層に分離した上層をメンブランフィルタ（細孔径；０．２〜０．４５μｍ）でろ過を行なって得たろ液をＨＰＬＣ分析用試料とし、以下の条件でＨＰＬＣ分析を行なった。その結果を図２に示す。図２に示すようにＨＰＬＣ分析開始から約１２．７分後にルテインエステルが加水分解して生じたルテインのピークが見られた。
＜ルテインエステルのＨＰＬＣ分析条件＞
検出器：分光光度検出器
カラム：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ  １００−５  （長さ１５０ｍｍ×内径４．６ｍｍ）
カラム温度：２５℃
測定波長：４４７ｎｍ
移動相：ヘキサン／酢酸エチル＝７／３（体積比）
流量：１．５ｍｌ／ｍｉｎ
また、実験例において用いられたラクトフェリンは以下のようにして得られた。牛乳を遠心分離することによって得られたホエー中のラクトフェリンを陽イオン交換樹脂に吸着させて抽出した。次に、陽イオン交換樹脂に吸着したラクトフェリンを塩類溶液を用いて脱離させて分離した。続いて、脱離したラクトフェリンを含む液について限外ろ過膜操作を行なうことによってラクトフェリンの脱塩および濃縮を行なった。そして、濃縮されたラクトフェリンを凍結乾燥し、その後粉砕して粉末状のラクトフェリンを得た。
【００２８】
このラクトフェリンを５０μｇ含む０．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液２５μｌをＨＰＬＣ分析用試料とし、以下の条件でＨＰＬＣ分析を行なった。その結果を図３に示す。図３に示すようにＨＰＬＣ分析開始から約１０．５分後にラクトフェリンの存在を示すピークが見られた。
＜ラクトフェリンのＨＰＬＣ分析条件＞
検出器：紫外分光検出器
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ  Ａｓａｈｉｐａｋ  Ｃ４Ｐ−５０  ４Ｄ
（長さ１５０ｍｍ×内径４．６ｍｍ）
カラム温度：３０℃
測定波長：２８０ｎｍ
移動相：Ａ液（アセトニトリルと０．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液との体積比が１：９である混合液に０．０３％トリフルオロ酢酸を０．１５ｍｌ添加した液）およびＢ液（アセトニトリルと０．５Ｍ塩化ナトリウム水溶液との体積比が１：１である混合液に０．０３％トリフルオロ酢酸を０．３ｍｌ添加した液）
グラジェント条件：Ａ液とＢ液の体積比がＡ液／Ｂ液＝５０／５０でスタートさせ、２５分後にＡ液とＢ液の体積比がＡ液／Ｂ液＝０／１００になるように直線的にＢ液の濃度を上げる。次に、２５．１分後にＡ液とＢ液の体積比がＡ液／Ｂ液＝５０／５０になるように移動相の条件を戻し、その条件で３５分まで保持する。
流速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ
（実験）
２２時間絶食したマウス（ｄｄＹ、雄、５週齢）に後述するサンプル１〜３を経口投与し、その１時間後に１０％四塩化炭素オリーブ油溶液（５ｍｌ／ｋｇ）を背部に皮下投与した。そして、絶食を続けたまま２４時間後に腹部大動脈から採血を行ない、血清の分離後に、ＧＯＴ濃度およびＧＰＴ濃度を和光純薬工業（株）社製のトランスアミナーゼＣＩＩテストワコーを用いて測定した。その結果を表２に示す。
【００２９】
なお、サンプル１としては対照としてオリーブ油と５％アラビアゴム水溶液の体積比１：１のエマルジョンが用いられた。また、サンプル２としては上記のルテインエステル２００ｍｇをオリーブ油５ｍＬに溶解させた液が用いられた。また、サンプル３としては上記のルテインエステル２００ｍｇをオリーブ油５ｍＬに溶解させた液と上記のラクトフェリン１５００ｍｇを５％アラビアゴム水溶液５ｍＬに溶解させた液とを等量混合した液が用いられた。
【００３０】
また、サンプル１は６匹のマウス、サンプル２〜３は５匹のマウスにそれぞれマウスの体重１ｋｇ当たり１０ｍｌが経口投与された。また、表２におけるＧＯＴ濃度およびＧＰＴ濃度の値は、各サンプルごとに測定されたＧＯＴ濃度およびＧＰＴ濃度の平均値を表わしている。
【００３１】
【表２】
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【００３２】
表２に示す結果から、ルテインエステルとラクトフェリンとが混合されたサンプル３においては、サンプル１〜２と比べて明らかにＧＯＴ濃度およびＧＰＴ濃度が低いことが確認された。
【００３３】
なお、上記の実験は四塩化炭素誘発肝炎モデルと言われるものであり、これは四塩化炭素により肝臓内に発生した過酸化物が肝細胞を破壊し、その結果として細胞内のＧＯＴやＧＰＴなどの酵素が血中に逸脱してくるモデルで抗酸化物質のｉｎ  ｖｉｖｏ評価に繁用されているモデルである。
【産業上の利用可能性】
【００３４】
本発明の抗酸化組成物は、ルテインエステルとラクトフェリンとを含んでいるので抗酸化作用に優れている。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】本発明の抗酸化組成物の製造方法の好ましい一例のフローチャートである。
【図２】実験例において用いられたルテインエステルのＨＰＬＣ分析の結果を示すチャートである。
【図３】実験例において用いられたラクトフェリンのＨＰＬＣ分析の結果を示すチャートである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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