(57)【要約】【課題】下痢・軟便等の病気や発情回数の減少等を予防し、優れた効果を有するプロバイオティクスに有用な微生物を見出すこと。【解決手段】サッカロマイセス（Saccharomyces）属に属し、抗下痢活性を有する新規酵母。この新規酵母を含有する栄養組成物は、家畜に投与すれば下痢・軟便防止、発情再起日数の短縮、妊娠率の向上および肉質改善の効果が認められる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
サッカロマイセス（Saccharomyces）属に属し、抗下痢活性を有する新規酵母。
【請求項２】
以下の窒素源の資化性を有するものである請求項第１項記載の新規酵母。
（窒素源）                    （試験結果）
硝酸塩：                        −
カダベリン：                    ＋
エチルアミン：                  ＋
亜硝酸塩：                      −
Ｌ−リジン：                    ＋
【請求項３】
サッカロマイセスＳＴ１６（ＦＥＲＭ Ｐ−２０１７３）である請求項第１項または第２項記載の新規酵母。
【請求項４】
請求項第１項ないし第３項の何れかの項記載の新規酵母を含有する栄養組成物。
【請求項５】
更に、乳酸菌を含有するものである請求項第４項記載の栄養組成物。
【請求項６】
乳酸菌が、エンテロコッカス（Enterococcus）属、ラクトコッカス（Lactococcus）属およびラクトバチルス（Lactobacillus）属から選ばれる乳酸菌の１種または２種以上である請求項第５項記載の栄養組成物。
【請求項７】
乳酸菌が、エンテロコッカスＳＴ２（ＦＥＲＭ Ｐ−１９５８６）である請求項第５項または第６項記載の栄養組成物。
【請求項８】
更に、β−グルカンを含有するものである請求項第４項ないし第７項の何れかの項記載の栄養組成物。
【請求項９】
β−グルカンが、ビール酵母および／またはキノコ菌糸体由来のものである請求項第８項記載の栄養組成物。
【請求項１０】
下痢・軟便防止用である請求項第４項ないし第９項の何れかの項記載の栄養組成物。
【請求項１１】
発情減退防止用である請求項第４項ないし第９項の何れかの項記載の栄養組成物。
【請求項１２】
家畜用である請求項第４項ないし第９項の何れかの項記載の栄養組成物。
【請求項１３】
家畜に、請求項第４項ないし第９項の何れかの項記載の栄養組成物を投与することを特徴とする家畜の肉質改善方法。
【請求項１４】
家畜に、請求項第４項ないし第９項の何れかの項記載の栄養組成物を投与することを特徴とする家畜の下痢・軟便防止方法。
【請求項１５】
家畜に、請求項第４項ないし第９項の何れかの項記載の栄養組成物を投与することを特徴とする家畜の発情再起日数の短縮方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は抗下痢活性を有する新規酵母およびその利用に関する。
【背景技術】
【０００２】
これまで、豚、羊、馬、牛等は家畜として飼育され、その肉や乳等が人間に摂取され、食生活に貢献してきている。近年では家畜の肉や乳等の需要の増加や食肉の自由化により、更なる家畜の生産性の向上が必要となってきている。
【０００３】
このような家畜の生産性の向上の要求に対し、家畜の品種や飼育法等の改良による多頭数での飼育で対応してきた。
【０００４】
しかしながら、上記のような多頭数での飼育はこれに伴う衛生環境の悪化やストレスにより家畜に家畜の生育に不具合を与え、下痢・軟便等の病気や発情再起日数の増加等が発生し、かえって生産性が低下する場合もあった。
【０００５】
例えば、家畜が病原性微生物等に感染したことによる下痢や軟便等が発生した場合、多頭数で飼育されているときはすぐにその感染が広まり、特に生まれてすぐの幼畜にとっては致命的なものとなることが多い。このような病原性微生物による感染を予防するため、従来、家畜に抗生物質等が投与され、一定の効果が認められていた。しかし、抗生物質は食肉に蓄積し、人間がそのような食肉や魚介類等を摂取することにより抗生物質の影響を受けることが懸念されるため、抗生物質等の使用量や種類が制限されてきている。
【０００６】
そこで、最近では下痢・軟便等の発生や発情再起日数の増加を予防するために、抗生物質等を用いないで病気を予防する試みがなされており、例えば、人間と同様に乳酸菌等の腸内微生物を摂取するプロバイオティクスが行われてきている（非特許文献１〜４）。しかしながら、その効果は不明瞭であったり、優れたものでもなかった。
【０００７】
また、家畜を殖やすためには、家畜が所定の時期に発情し、妊娠、出産することが必要であるが、多頭数飼育では発情しにくいことがあり、特に、夏期には発情再起日数の増加が問題となっていた。このため、発情を促進するホルモン剤の投与も行われているが、ホルモン剤が環境中へ流出し、魚介類等に蓄積することが知られている。そして、人間がそのような魚介類等を摂取することによるホルモン剤等の影響を受けることが懸念され、ホルモン剤等の使用抑制が求められている。
【０００８】
【非特許文献１】lbenおよびLeibetseder, Tieraerztl. Mschr. 76 (1989)、第363-366頁、OstagVienna出版社
【非特許文献２】Kyriakis等、Research in Veterinary Science 1999、67、第223-228頁
【非特許文献３】MaennerおよびSpieler、Microecology and Therapy、第２６巻、243-256頁、1997
【非特許文献４】O. Siomon、G Breves、第６回豚および家禽栄養学会（6th Pig and PoultryNutritionmeeting）、2000、回報、第45-50頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
従って本発明は、通常の家畜飼育環境であっても家畜の下痢・軟便等や発情再起日数の増加を防止でき、プロバイオティクスに有用な優れた効果を有する微生物を見出すことをその課題とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究をした結果、上記効果を有するプロバイオティクスに有用な新規酵母を見出した。そしてこの新規酵母を含有する栄養組成物を家畜に投与することにより、下痢・軟便等が防止されることを見出した。また、前記栄養組成物が投与された家畜は健全に生育し、発情再起日数の短縮、妊娠率の向上および脂身の少ない良質な肉質となることを見出し、本発明を完成した。
【００１１】
すなわち、本発明は抗下痢活性を有し、サッカロマイセス（Saccharomyces）属に属する新規酵母を提供するものである。
【００１２】
また、本発明は上記新規酵母を含有する栄養組成物を提供するものである。
【００１３】
更に、本発明は上記栄養組成物を投与することを特徴とする家畜の肉質改善方法、下痢防止方法および発情再起日数の短縮方法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の新規酵母を含有する栄養組成物を家畜に投与することにより、下痢・軟便等を防止し、また、家畜自体が健全に生育するため発情再起日数の短縮、妊娠率の向上および肉質の改善が認められる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明の新規酵母は、サッカロマイセス（Saccharomyces）属に属し、抗下痢活性を有するものである。
【００１６】
ここで、抗下痢活性とは、新規酵母を１０６〜１０７個／１ｍｌ含む培養液を生後１日以内の豚に１ｍｌ投与し、離乳までに下痢はないものの頭数をパーセンテージを示すものである。本発明の新規酵母の抗下痢活性は８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは１００％である。
【００１７】
上記した本発明の新規酵母の一例としては、次の菌学的性質を示すものが挙げられる。
（１）細胞の形態
卵形（２μｍ×３μｍ）
（２）発酵試験                    （試験結果）
グルコース：                  ＋
シュークロース：              ＋
ラクトース：                  −
トレハロース：                −
ガラクトース：                ＋
マルトース：                  −
ラフィノース：                −
（３）炭素源の資化性              （試験結果）
グルコース：                  ＋
Ｌ−ソルボース：              ＋
マルトース：                  ＋
トレハロース：                ＋
メリビオース：                −
可溶性澱粉：                  −
Ｌ−アラビノース：            −
Ｌ−ラムノース：              ＋
エタノール：                  ＋
ガラクチトール：              −
エリスリトール：              −
α−メチル−Ｄ−グルコシド：  ＋
乳酸：                        ＋
クエン酸：                    −
メレジトース：                ＋
ガラクトース：                ＋
シュークロース：              ＋
セロビオース：                ＋
ラクトース：                  −
ラフィノース：                −
Ｄ−キシロース：              ＋
Ｄ−リボース：                ＋
メタノール：                  −
グリセリン：                  ＋
Ｄ−マンニトール：            ＋
リビトール：                  ＋
サリシン：                    ＋
こはく酸：                    ＋
イノシトール：                −
イヌリン：                    −
（４）窒素源の資化性              （試験結果）
硝酸塩：                      −
カダベリン：                  ＋
エチルアミン：                ＋
亜硝酸塩：                    −
Ｌ−リジン：                  ＋
（５）培養条件（ＹＰＤ培地）      （試験結果）
増殖可能温度：            １０〜５０℃
最適培養温度：                ２６℃
培養可能ｐＨ：              ３〜９.５
最適培養ｐＨ：              ６〜８
（６）耐塩性（ＹＰＤ培地）        （試験結果）
１％の塩化ナトリウム濃度で、塩化ナトリウムを添加しない場合の９４％以上
の生育
【００１８】
なお、この菌学的性質の試験および分類は、下記の文献に従い行った。
文献１：Sneath, P. H. A., Mair, N. S., Sharpe, M. E. and Holt, J. G. :“
Bergey's Mannual of Systematic Bacteriology”, Vol. 2 (1986) Williams 
& Wilkins.
文献２：Holt, J. G., Krieg, N. R., Sneath, P. H. A., Staley, J. T. and 
Williams, S. T. :“Bergey's Mannual of Determinative Bacteriology”, 
Ninth Edition (1994) Williams & Wilkins.
文献３：厚生省生活衛生局監修：“食品衛生検査指針−微生物編−”、(1990)、日本食
品衛生協会．
文献４：Farrow, J. A. E. and Collins, M. D. : Int. J. Syst. Bacteriol., 35, 
73-75(1985).
文献５：Collins, M. D. Farrow, J. A. E., Kilpper-Balz, R and Schleifer, K. H. 
:Int. J. Syst. Bacteriol., 34, 220-223(1984).
文献６：Schleifer, K. H. and Kilpper-Balz, R. : Int. J. Syst. Bacteriol., 34, 
31-34(1984).
【００１９】
上記の菌学的性質は、酵母（サッカロマイセス；Saccharomycs）よりもカンジダ・エスピー（Candida sp）に類似するものである。特に、窒素源の資化性や糖の資化性の一部が従来の酵母と異なっている。しかし一方、本発明の新規酵母のｒＤＮＡのＤ２領域について、アプライドバイオシステム社のＬＳＵ ｒＤＮＡカビ類シーケンシングキットを用いたＰＣＲ法およびサイクルシーケンスで、塩基配列を解析し、この結果をミクロシークＤ２（Ｄ２ Ｆｕｎｇａｌ Ｄａｔａｂａｓｅ ｖ．００５０ｃ）Ｐａｒｔ Ｎｏ．４３１９２４０Ｃを用いてライブラリー検索した結果では、サッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomycs cerevisiae）と１００％一致した（図１）。
【００２０】
そして、本発明の新規酵母は抗下痢活性を有するという特性を有することと、上記のように菌学的性質による分類とｒＤＮＡ解析による分類結果が一致していないが、ｒＤＮＡ解析により客観性があるとの判断から、一応、サッカロマイセス属（Saccharomycs）の新種の酵母であるとし、便宜的にサッカロマイセス・セレビシエと同定した。
【００２１】
本出願人は上記新規酵母をサッカロマイセスＳＴ１６と名付け、２００４年８月２０日に、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（〒305-8566 日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６）へ寄託した（寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−２０１７３）。
【００２２】
上記した本発明の新規酵母はこれを乾燥させた乾燥菌体あるいは当該酵母を常法によりスキムミルクや廃糖蜜等で培養した培養液として豚、羊、馬、牛等の家畜、より好ましくは豚に投与することができる。また、本発明の新規酵母は抗下痢活性を有するため、これを投与することにより下痢・軟便を防止することができる。この場合の新規酵母の投与量は１頭あたり１〜１０ｇ、好ましくは１〜１.５ｇである。また、培養液であれば１頭あたり１ｍｌ当たり酵母を１０６〜１０７個含む培養液を０.１〜１０ｍｌ、好ましくは０.５〜３ｍｌの投与量である。
【００２３】
また、特に本発明の新規酵母は生後１日以内の幼畜に投与することにより、有効に下痢・軟便を防止することができ、その結果、幼畜の生存率を高めることができる。本発明の新規酵母を幼畜に投与する場合には、初乳の授乳期間に１頭あたり１ｍｌ当たり酵母を１０６〜１０７個含む培養液を０.１〜１０ｍｌ、好ましくは０.５〜３ｍｌ投与することが好ましい。
【００２４】
更に、本発明の新規酵母は家畜に継続的に与えることにより家畜が健全に成育するので、規則正しく発情が再起され、発情回数が減少することはほとんどない。例えば、本発明酵母を継続的に摂取していた豚であれば産後４日程度で発情が再起するので、１年間に２〜５回程度発情し、また、妊娠率も併せて向上する。
【００２５】
また更に、本発明の新規酵母は、これを上記と同様に家畜に投与することにより肉質を改善することができる。例えば、豚の場合であれば、これを投与することにより体重が増加するが、脂肪厚は減少する。
【００２６】
更にまた、本発明の新規酵母は上記のようにそのまま家畜に投与してもよいが、他の成分と組み合わせて栄養組成物とすることが好ましい。他の成分としては乳酸菌が挙げられる。この乳酸菌は上記酵母の効果を相乗的に高めるものである。上記栄養組成物における乳酸菌の量は、特に制限されないが、酵母１０６〜１０７個含む培養液１重量に対し１〜２重量部程度である。
【００２７】
上記の乳酸菌としては、特に制限されないが、エンテロコッカス（Enterococcus）属、ラクトコッカス（Lactococcus）属およびラクトバチルス（Lactobacillus）属から選ばれる乳酸菌の１種又は２種以上が好ましく、中でもエンテロコッカス属の乳酸菌が好ましく、特にエンテロコッカス属の乳酸菌の中でも本発明者らが先に見出した（特願２００３−３８７６２２）エンテロコッカスＳＴ２が好ましい。このエンテロコッカスＳＴ２は平成１５年１１月１３日に、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（〒305-8566 日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６）へ寄託している（寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１９５８６）。
【００２８】
このエンテロコッカスＳＴ２は、以下の菌学的性質を有する乳酸菌である。
（試験項目）                                    （試験結果）
１．形態                                    ：  連鎖球菌
２．グラム染色性                            ：  ＋
３．胞子                                    ：  −
４．運動性                                  ：  −
５．酸素に対する態度                        ：  通性嫌気性
６．カタラーゼ                              ：  −
７．グルコースからのガスの生成              ：  −
８．生成乳酸                                ：  Ｌ（＋）
９．１０℃での生育                          ：  ＋
１０．４５℃での生育                          ：  ＋
１１．５０℃での生育                          ：  −
１２．６.５％ＮａＣｌ存在下での生育           ：  ＋
１３．ｐＨ９.６での生育                       ：  ＋
１４．４０％胆汁存在下での生育                ：  ＋
１５．黄色色素の生成                          ：  −
１６．アルギニンジヒドロラーゼ                ：  ＋
１７．馬尿酸の加水分解                        ：  −
１８．エスクリンの加水分解                    ：  ＋
１９．０.１％メチレンブルーミルクでの生育     ：  ＋
２０．酸の生成
Ｄ−キシロース                        ：  −
Ｌ−ラムノース                        ：  −
シュークロース                        ：  ＋
ラクトース                            ：  ＋
メリビオース                          ：  ＋
ラフィノース                          ：  ＋
メレチトース                          ：  −
グリセロール                          ：  −
アドニトール                          ：  −
ソルビトール                          ：  −
マンニトール                          ：  −
２１．菌体内ＤＮＡのＧＣ含量（ＨＰＬＣ法）    ：  ３８ｍｏｌ％
【００２９】
上記エンテロコッカスＳＴ２は、ＤＮＡ分析からエンテロコッカス属に属すると同定されたが、２連球の割合が９０％近くにのぼること、水酸化ナトリウムにてｐＨ１２に調製したＬＢ培地にて僅かな生育が確認され、特に強いアルカリ性耐性を備えていること、５５４ｎｍの光を当てると赤色の蛍光を発生するという他のエンテロコッカス属の微生物にはない性質を有するものである。
【００３０】
また、上記栄養組成物には上記乳酸菌に加えてβ−グルカンを配合することができる。このようなβ−グルカンとしては、ビール酵母、ワイン酵母、清酒酵母、パン酵母または海洋酵母等の酵母、またはアガリクス、メシマコブ、シイタケ等のキノコおよびこれらの菌糸体由来のものが挙げられ、ビール酵母および／またはキノコ菌糸体由来のものが好ましく、特にビール酵母由来のものが好ましい。これらのβ−グルカンを添加することにより解毒作用が発揮される。
【００３１】
これらの栄養組成物は、上記本発明の新規酵母１重量に対して、上記乳酸菌を好ましくは０.１〜５重量部、好ましくは０.５〜２重量部およびβ−グルカンを０.０１〜５０重量部、好ましくは０.１〜２０重量部含有するものである。この栄養組成物の製造方法は、特に限定されないが、例えば本発明の新規酵母をスキムミルク中で１ｍｌ当たり１０６〜１０９個まで培養したものおよび乳酸菌を獣乳中で１ｍｌ当たり１０８〜１０９個まで培養したものを上記分量で混合し、これに乾燥βグルカンを添加し、混合することで製造される。
【００３２】
また、上記栄養組成物には本発明の効果を損なわない程度に米ぬか、ふすま、おから等の賦型剤を配合することができる。更に、これらの栄養組成物は市販の配合試料に添加してもよい。
【実施例】
【００３３】
以下に実施例を挙げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれらに何ら制約されるものではない。
【００３４】
実 施 例  １
栄養組成物の製造：
下記表に記載の組成の栄養組成物を製造した。酵母（サッカロマイセスＳＴ１６）は１０％スキムミルクに植え付け、３７℃で４８時間保温し、更にその中の５％程度を再度１０％スキムミルクに植え付け、３７℃で２４時間保温したものを種菌とした。また、乳酸菌（エンテロコッカスＳＴ２）についても同様に培養し、種菌とした。これらの種菌を乾燥βグルカンに添加して攪拌混合することで液状の栄養組成物を製造した。
【００３５】
【表１】
2006101784.tif 000002
【００３６】
実 施 例  ２
栄養組成物の豚への投与（抗下痢活性）：
実施例１で製造した各栄養組成物を、各区生後１日以内の豚（各区１０頭）に１ｍｌずつ経口投与した。また、その後の飼育はミルクを用い離乳（２０日間）まで行った。ミルクには市販の混合飼料を子豚１頭あたり１ｇ配合したものを使用した。抗下痢活性の測定は下記評価基準で行った。なお、栄養組成物に代えて抗生物質を投与し、その後は同様に飼育した子豚を対照とした。
【００３７】
（抗下痢活性評価基準）
評  価  ：  下 痢 の 状 態
＋＋＋  ：  栄養組成物＊を投与後離乳までに下痢はなかった。
＋＋    ：  栄養組成物＊を投与後離乳までにまれに柔便があったが、再度栄養
組成物＊を投与後離乳までに下痢はなかった。
＋      ：  栄養組成物＊を投与後離乳までにまれに下痢があったが、再度栄養
組成物＊を投与後離乳までに下痢はなかった。
±      ：  栄養組成物＊を投与後離乳までに下痢があり、抗生物質を投与後下
痢はなかった。
−      ：  栄養組成物＊を投与後離乳までに下痢があり、抗生物質を投与後下
痢はとまらないものがあり、死亡した子
豚がいた。
＊対照の場合には抗生物質
【００３８】
【表２】
2006101784.tif 000003
【００３９】
実 施 例  ３
栄養組成物の豚への投与（発情再起）：
実施例１と同様に製造した栄養組成物（実施品１）を市販の配合飼料１０００ｋｇ当たり２ｋｇ添加したものを常用の餌とし、これを豚（５０頭）に自由に摂取させた。栄養組成物を含む餌を投与前３年間と投与後２年間の７〜９月の離乳後７日以内の発情率と、平均妊娠率を求めた。
【００４０】
栄養組成物を含む餌を摂取後２年間の７〜９月の離乳後の発情率は８８〜９４％、平均妊娠率は９５％程度であった。一方、栄養組成物を含む餌を摂取前３年間の７〜９月の離乳後の発情率は６８〜７４％、平均妊娠率は６０％程度であった。
【００４１】
実 施 例  ４
栄養組成物の豚への投与（肉質改善）：
実施例１と同様に製造した栄養組成物（実施品１）を市販の配合飼料１０００ｋｇ当たり２ｋｇ添加したものを常用の餌とし、これを豚（５０頭）に自由に摂取させ、出荷までの間（６〜７ヶ月）生育した。出荷後に各豚の枝肉背脂肪厚を測定した（枝肉重量平均７４ｋｇ）。また、配合飼料のみで生育した豚を対照とした。
【００４２】
その結果、栄養組成物を含む餌を摂取していた豚の枝肉背脂肪厚が２５ｍｍ以上の部分は８％程度であった。一方、配合飼料のみで生育した豚の枝肉背脂肪厚が２５ｍｍ以上の部分は２４〜３０％程度であった。
【００４３】
実 施 例  ５
栄養組成物を含む混合飼料の製造：
実施例１で製造した栄養組成物の２００ｇを米ぬか２０ｋｇと混合した。次いで、これを市販の配合飼料１０００ｋｇと混合し、栄養組成物を含む混合飼料を製造した。
【産業上の利用可能性】
【００４４】
本発明の新規酵母を含有する栄養組成物を家畜に投与することにより、下痢・軟便等を防止することができる。また、前記栄養組成物を投与することにより家畜が健全に生育し、発情再起日数の短縮、妊娠率の向上しおよび肉質の改善が認められる。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】図１は、本発明の新規酵母のｒＤＮＡのＤ２領域の塩基配列に基づく系統樹における分類学的位置を示す図面である。
【図２】図２は、本発明の新規酵母の形態を示す写真である。                                                                 以    上
【図１】
2006101784.tif 000004
【図２】
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