(57)【要約】【課題】形状を保持するだけの適度な剛性を有しながら、内溶液の出し入れが容易で細胞を損傷するおそれがなく、細胞種、播種量等に合わせて多種類の容器を準備する必要がなく、かつ培養過程で培養液等の増減も可能で、更に、容器内の残存空気を減少させ、気泡の発生を低減させながら内溶液を容器に注入することができる扁平な密閉系培養容器を提供する。【解決手段】全体として扁平な形状の容器であって、相互に所定の間隔をおいて対向する２つの平面状表面（２、２）と該２つの平面状表面を相互接続する側部（３）を備え、平面状表面（２、２）の少なくとも一つはガス透過膜（５）を有し、側部（３）の変形によって容器の内容積を変えることができる培養容器。【選択図】図１
2006314276.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
全体として扁平な形状の容器であって、相互に所定の間隔をおいて対向する２つの平面状表面と該２つの平面状表面を相互接続する側部を備え、該平面状表面の少なくとも一つはガス透過膜を有し、該側部の変形によって容器の内容積を変えることができることを特徴とする培養容器。
【請求項２】
該側部は屈曲可能であることを特徴とする請求項１記載の培養容器。
【請求項３】
該側部は伸縮可能なであることを特徴とする請求項１記載の培養容器。
【請求項４】
該ガス透過膜を平面状に維持するための補強手段を備えることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の培養容器。
【請求項５】
該ガス透過膜に接して培養ガス封入用空間が形成されていることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の培養容器。
【請求項６】
該容器を、該平面状表面を水平方向に配置して複数個相互に所定の間隔をおいて積載し、これら積載された複数の容器を別の単一の容器内に収容し、該単一の容器内に培養ガスを封入する空間を形成したことを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の培養容器。
【請求項７】
該容器内を多孔質膜または半透膜により複数の部屋に分割したことを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の培養容器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞等の培養容器に関し、特に形状を保持するだけの適度な剛性を有する全体として扁平な形状の密閉系容器であって、相互に離間して対向する２つの平面状表面と該平面状表面の間の側部を備え、該平面状表面の少なくとも一つはガス透過膜を有する培養容器の改良に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来細胞や微生物を培養するための培養容器としては、培養用デイッシュや培養用ボトル等ガラス乃至はプラスチックからなる開放系の容器が知られている。これらの培養用デイッシュや培養用ボトルは、インキュベーターへの出し入れの際など取り扱い時に容器が傾いたり、揺れたりした時に細胞や微生物等を含む内容液をこぼす危険性があるため扱い難いという難点がある。また、取り扱い時に内容液の波打ちなどに起因して播種した細胞や微生物の密度に偏りが生じ、培養効率が不均一となるおそれがある。さらに、容器が開放系であるため水分の蒸発を防止する必要があり、高湿度下で使用しなければならず、カビや細菌、ウィルス等に汚染される危険性がある。
【０００３】
また近年培養用デイッシュや培養用ボトルに代わる培養容器として、剛性を有する材料からなる扁平な密閉系培養容器が種々提案され使用されている。これらの培養容器は、剛性を有する材料からなる全体として扁平な形状の密閉系容器であって、相互に離間して対向する２つの平面状表面と該平面状表面の間の側部を備え、該平面状表面の少なくとも一つはガス透過膜を有するものである。
【０００４】
たとえば、特許文献１には、各処理工程における塵埃や細菌等による汚染を低減し、細胞の効率的な培養を可能にするために、扁平な密閉系容器であって、一部にガス透過膜を備える容器本体と、該容器本体内部に連通して先端を閉鎖された熱溶着可能な材質からなる少なくとも１本のチューブとを備える細胞培養容器が開示されている。
【０００５】
これらの扁平な密閉系培養容器は、密閉状態であるため、取り扱い時に内容液をこぼす危険性がなく、カビや細菌、ウィルス等の汚染が低減されるなどの利点がある。また、内容液が波打ちすることもないので播種した細胞や微生物の密度に偏りが生じ難い。しかしながら、容器が密閉状態であり、かつ内容積が固定されているため、内溶液の出し入れが困難であり、特に、気泡を発生することなく内溶液を容器内に注入することが難しい。すなわち、容器にはその内容積に相当する量の空気が入っているので、容器の一側のチューブから容器の内容積に相当する量の内溶液を注入すると容器はその分膨脹する。そして、容器内に空気が残存すると内溶液を注入した際に気泡が発生し、この気泡によって取り扱い時に内容液が流動して細胞の密度に偏りが生じ、培養効率が不均一となるので、内容液充填後容器から空気を抜かなければならない。しかしながら、実際には、空気を全て除去することは困難であり、容器内に空気が残存し、気泡の発生を防止することが難しい。また、内溶液の出し入れの際に容器内圧が発生し、手順を間違えると細胞を損傷する危険性がある。特に、誤って容器内の空気を抜いた後に内溶液を注入すると、容器内が負圧状態になっているために細胞が損傷しやすい。さらに、容器の内容積が一定であるために、細胞種、播種量、継代期間等に合わせて培養液量を任意に変えることや培養の途中で培養液等を増減することができず、細胞種、播種量、継代期間等によって培養液量が異なる場合は異なる内容積の容器を使用しなければならないから、内容積の異なる多くの種類の容器を準備しておく必要があるという問題点があり、また、培養液等を増減する際には、他の内容積の異なる容器に移し変える必要がある。
【特許文献１】特開２００４−１２９５６８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、前記従来の扁平な密閉系培養容器の問題点にかんがみなされたものであって、密閉系容器でありながら内溶液の出し入れが容易で、内容液の出し入れの際に容器内圧が発生し難く、細胞を損傷する危険性がなく、さらに細胞種、播種量、継代期間等に合わせて培養液量を変える必要がある場合でも、培養液量に合わせて多種類の容器を準備する必要がなく、かつ培養過程で培養液等の増減も可能で、更に、容器内の残存空気を減少させ、気泡の発生を低減させながら内溶液を容器に注入することができる扁平な密閉系培養容器を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
前記目的を達成する本発明の培養容器は、全体として扁平な形状の容器であって、相互に所定の間隔をおいて対向する２つの平面状表面と該２つの平面状表面を相互接続する側部を備え、該平面状表面の少なくとも一つはガス透過膜を有し、該側部の変形によって容器の内容積を変えることを特徴とする。
【０００８】
本発明の一側面において、該側部は屈曲可能である。
【０００９】
本発明の他の側面において、該側部は伸縮可能である。
【００１０】
本発明の他の側面において、培養容器は、該ガス透過膜を平面状に維持するための補強手段を備える。
【００１１】
本発明の他の側面において、培養容器は、該ガス透過膜に接して培養ガス封入用空間が形成されている。
【００１２】
本発明の他の側面においては、該容器を、該平面状表面を水平方向に配置して複数個相互に所定の間隔をおいて積載し、これら積載された複数の容器を別の単一の容器内に収容し、該単一の容器内に培養ガスを封入する空間を形成したことを特徴とする。
【００１３】
本発明のさらに他の側面においては、該容器内を多孔質材料からなる膜または半透膜により複数の部屋に分割したことを特徴とする。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、容器の側部の変形によって内容積を変えることができるので、密閉系容器でありながら内溶液の出し入れが容易であり、かつ、内容液の出し入れの際に容器内圧が発生し難く、細胞を損傷する危険性がない。
【００１５】
また、細胞種、播種量、継代期間等に合わせて培養液量を変える必要がある場合でも、培養液量に合わせて多種類の容器を準備する必要がなく、培養過程で培養液等の増減も可能で、さらに、内容液の注入時の容器内の残存空気を減少させ、気泡の発生を低減した状態で内溶液を容器に注入することができる扁平な密閉系培養容器を提供することができる。
【００１６】
また、本発明の１側面によれば、ガス透過膜に接して培養ガス封入空間が形成されるように構成することにより、ガス組成を調整した培養を行うことが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下添付図面を参照して本発明の実施の形態について説明する。  
図１は本発明に係る培養容器の１実施形態を示すもので、（ａ）は斜視図、（ｂ）は図１（ａ）のA−A断面図、（ｃ）は図１（ａ）の容器の内容積を最小値となるまで減少させた状態の斜視図である。
【００１８】
培養容器１は、全体として扁平な形状の容器であって、ポリエチレン、ポリプロピレン、塩化ビニル等ある程度の可撓性とともに剛性を有するプラスチックからなり、相互に所定の間隔をおいて対向するように配置され２つの長方形の平面状表面２、２と、これら平面状表面２、２の対向する各端縁どうしを相互接続する４つの側部３を備えている。平面状表面２、２は容器の面の中で最も広い面である。平面状表面２、２はそれぞれ長方形の窓部４、４を有し、これらの窓部４、４にはガス透過膜５が貼られている。ガス透過膜５は、培養ガスの通過を許容するが細胞を汚染する微生物等の通過を許容しない材質からなり、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリブテン−１、４−メチル−ペンテン−１、環状ポリオレフィン等のポリオレフィン系樹脂のホモポリマーおよびコポリマー、ポリスチレン、ポリカーボネート、エチレンビニルアセテート、ポリスルフォン、ポリテトラフルオロエチレン、シリコーンポリマー等の中から適宜のものが選択される。容器の平面状表面２、２は水平方向に配置された時容器の天面と底面を形成する。
【００１９】
なお、２つの平面状表面２、２、４つの側部３、ガス透過膜５からなる容器内表面には、必要に応じて、細胞の増殖を促す、あるいは培養液中のタンパク質などの有効成分の吸着や細胞の付着を防止するための公知の表面処理やコーティングが施されてもよい。例えば、ガス透過膜５の内面には、付着依存性細胞の付着と増殖を促すために、コロナ処理、プラズマ放電処理などが施されるのが望ましく、一方、ガス透過膜５以外の内表面には、細胞の付着を阻害する高親水性の公知のグラフト処理が施されるのが望ましい。
【００２０】
２つの平面状表面２、２と４つの側部３によって囲まれる空間６（図１（ｂ））は培養すべき細胞や微生物等を含む内容液を収容するための内溶液充填空間を構成しており、この空間６の容積が容器１の内容積となる。
【００２１】
各側部３は変形可能で内溶液充填空間６、すなわち、容器１の内容積を変えることができる。具体的には、各側部３は、容器１の厚み方向中央部が外側に向けて突出し、容器１の長さ方向および幅方向に沿って折れ線９が形成されており、各側部３は、折れ線９に沿って二つ折りに屈曲した形状、即ち、山折り形状を呈している。そして、各４つの側部３に設けた折れ線９の一方の側の部分３ａと、折れ線９の他方の部分３ｂとは、折れ線９を介して相互に接近、離間することができる。したがって、容器１に圧力を加えて、側部３ａの内面が側部３ｂの内面に接触するまで容器１を押し潰すと、図１（ｃ）に示すように、容器１の内容積は最小値（実質的に０も含む）まで減少し、この容器１に内容物を充填することにより、各側部３が同一平面になるまで側部３ａと側部３ｂを相互に離間させると、容器１の内容積は最大値をとる。したがって、容器１の内容積は最小値とこの最大値との間で可変である。
【００２２】
一方の側部３には、内溶液充填／取出し管７と内容液充填／取出し用栓体８が取付けられている。このような、内溶液充填／取出し管７と内容液充填／取出し用栓体８は必要に応じて設ければよく、その取り付け位置は支障のない限り、側部に限らず任意の位置に設けることができる。
【００２３】
また、内溶液充填／取出し管７の先端には他の容器等と接続するための公知の接続部材１１を設けてもよく、容器内の無菌性を保つために使用前は閉鎖されていることが望ましい。そのため、接続部材部分はプロテクター１２等で被冠してあることが望ましい。更に、チューブを熱溶着可能な材質としてもよく、この場合には他の容器との接続する方法として、公知の無菌的チューブ接合装置（例えば、テルモ無菌接合装置など）を適用することができ、チューブの接続あるいは切断と密封を同時に無菌的に行うことができることと、特別な接続部材等を必要としないことからも特に望ましい。（特許文献１参照）なお、内溶液充填／取出し管７の長さは必要に応じて適宜調整すればよく、チューブの材質としては例えば軟質塩化ビニルなどが好適に用いられる。
【００２４】
内溶液充填／取出し用栓体８は一部がエラストマー材料からなり、注射器などを用いて、栓体に注射針等を刺して、内容液の充填と取出しを行うことができる。また、図１の容器では、側部３の一部にエラストマー材料からなる隔壁を設けて代用することもできる。
【００２５】
次に、この容器１の使用形態の一例について説明する。  
内溶液の充填時には、最初容器１を押し潰して内容積を最小値まで減少した状態とした後、内容液充填／取出し用栓体８から細胞、微生物等と培養液の混合液である内溶液を容器１内に充填する。内溶液の充填が進むにつれて、容器１の各側部３ａと３ｂは、折れ線９を介して相互に接触した状態から離間し、容器１の内容積は次第に増大する。そして内溶液を設定量だけ充填すると、側部３ａと３ｂが、所定の角度だけ相互に離間した形状で充填が終了する。この充填量は、各側部３が平坦面になる量が最大値となる。
【００２６】
したがって、容器１内の残存空気を減少させ、気泡の発生を低減した状態で内溶液を容器に注入することができ、また、内溶液充填中に空気が容器１内に入ることが防止され、充填終了後、容器内に残った空気を抜く必要はない。さらに、容器内に気泡が残った場合でも、気泡を取り除く際に容器内が負圧や陽圧になることがなく、気泡を確実に取り除くことができる。
【００２７】
なお、気泡の発生を確実に防止するためには、内容液の充填に先駆けて容器１内を真空に引いてもよいが、この場合は、細胞や微生物等への負圧の影響を回避するため、充填初期に培養液のみを適量充填するのが好ましい。
【００２８】
次いで、内溶液の充填を終了後、所定の温度、湿度、ガス組成および濃度で所定時間培養を実施する。培養中、培養液の増減が必要となった場合には、充填量が最大、或いは最小となるまで適宜何度でも増減することができる。そして、培養を完了後、浮遊細胞の場合は空気を少し加えて振動させて細胞を分散させ、あるいは付着細胞などの場合は必要に応じてトリプシン等のタンパク分解酵素を加え、細胞を単細胞まで分散させて内溶液を内溶液充填／取出し管７から取出す。
【００２９】
培養後、細胞を凍結保存する場合には、平面状表面２、２に細胞を付着させたまま培養液を抜き、凍結保護剤を加えて密閉し、発泡スチロール等からなる容器に入れて緩慢に−８０℃まで冷却し凍結し、液体窒素下で保存する。なお、この場合、培養容器は耐寒性素材で形成するのが望ましい。
【００３０】
図２は本発明に係る培養容器の他の実施形態を示すもので、（ａ）は斜視図、（ｂ）は図２（ａ）のＢ−Ｂ断面図、（ｃ）は図２（ａ）の容器の内容積を最小値となるまで減少させた状態の斜視図であり、図１と同一部位は同一の符号で示し、その説明は省略する。
【００３１】
図２の培養容器は、先ず、内溶液充填／取出し管７と内容液充填／取出し用栓体８を取付け、折れ線９を設けた側部３とその側部３と相対する側の側部３は、図１の細胞培養容器と同様に、容器１の厚み方向中央部が外側に向けて突出する山折りを呈している。
【００３２】
一方、前記側部３に隣接する各側部３′は、容器１の厚み方向中央部が内側に向けて突出し、容器１の長さ方向および幅方向に沿って折れ線１３が形成されており、各側部３′は折れ線１３に沿って二つ折りに屈曲した形状、即ち、谷折り形状を呈している。そして、各側部３′の折れ線１３の一方の側の部分３ａ′と折れ線１３の他方の部分３ｂ′とは、折れ線１３を介して相互に接近、離間することができる。
【００３３】
したがって、容器１を押し潰すと、図２（ｃ）のように容器１の内容積は最小値まで減少し、容器１に内容物を充填することにより、各側部３、３′が同一平面になるまで側部３ａ、側部３ｂ及び側部３ａ′、側部３ｂ′を相互に離間させると、容器１の内容積は最大値をとる。
【００３４】
さらに、図３〜図６は、前記実施形態に係る容器の側部形状の変更例を示し、図１（ｂ）と同様の断面図である。図３〜図６の変更例においても、図１と同一部位は同一符号で示し、その説明は省略する。
【００３５】
図３の例においては、側部３は、伸長、屈曲可能な柔軟な材質よりなり、容器厚み方向の中央部が外側に向けて円弧状に膨出する形状を有し、容器１を押し潰して容器内容積を最小値に減少した状態から容器１に内溶液を充填すると、容器１は、図３の破線で示すように、各側部３が平坦面になるまで伸長して内容積は最大値となる。
【００３６】
図４の例においては、対向する側部３、３は平面状表面２、２に対して同一方向に傾斜する形状を有し、容器１を押し潰して容器内容積を最小値の減少した状態から容器１に内溶液を充填すると、容器１は、図４の破線で示すように、各側部３が平面状表面２、２に対して直立するまで伸長して内容積は最大値となる。
【００３７】
図５の例においては、各側部３は平面状表面２、２の一方から外側にほぼ直立するようにして突出する折曲部３ｃを備えている。各折曲部３ｃの外側面は側部３の直立部３ｄに連続しており、内側面は平面状表面２に連続している。容器１を押し潰して容器内容積を最小値に減少した状態から容器１に内溶液を充填すると、容器１は、図５の破線で示すように、各折曲部３ｃの内側面が次第にめくれ上がるように反転して内側面と外側面が同一平面となり、また折曲部３ｃが直立部３ｄと同一平面になるまで伸長して内容積は最大値となる。
【００３８】
図６の例においては、各側部３は平面状表面２、２の一方から外側に該平面状表面２に対しほぼ１２０度の角度で斜め方向に突出する折曲部３ｅを備えている。各折曲部３ｅの外側面は側部３の傾斜部３ｆに連続しており、内側面は平面状表面２に連続している。容器１を押し潰して容器内容積を最小値に減少した状態から容器１に内溶液を充填すると、容器１は、各折曲部３ｅの内側面が次第にめくれ上がるように反転して内側面と外側面が同一平面となり、かつ平面状表面２に対して直立状態になるまで伸長して内容積は最大値となる。
【００３９】
尚、図６における破線は、最大内容積に至る途中の過程を示すものである。
【００４０】
以上いずれの変更例においても側部３の形状変化により容器１の内容積を最小値と最大値の間で可変とすることができる。
【００４１】
すなわち、本発明においては、全体として扁平な形状の培養容器の側部によって、容器の内容積を変えることができる構成あれば、前述した例に限定されることはなく、その目的が達成される限り、任意の構成とすることができ、例えば、側部を蛇腹状にしてもよい。
【００４２】
図７は、本発明の培養容器の他の実施形態を示す斜視図で、図７の実施形態及び後述する実施形態において、図１の実施形態と同一部位は同一の符号で示し、その説明は省略する。
【００４３】
図７の実施形態において、容器１０は、全体として扁平な短筒状の形状を有し、円形の平面状表面２、２とこれら表面２、２の各端縁どうしを相互接続する円筒形の蛇腹状の側部３を有する。各平面状表面２の外側端縁部には剛性プラスチックからなる環状補強枠体１４、１４が溶着されており、ガス透過膜５は補強枠体１４の下面に溶着されて平面状態を維持している。１５はキャップ状の内溶液充填・取り出し口である。
【００４４】
この実施形態の動作は図１の実施形態と同様であり、容器１０を押し潰すことにより容器内容積を最小値に減少した状態から容器１０に内溶液を充填すると、容器１０は、側部３が同一平面を形成するまで伸長しきった状態となり、内容積は最大値となる。
【００４５】
図８は、本発明の培養容器の他の実施形態を示すもので、（ａ）は斜視図、（ｂ）は図１（ａ）のＡ−Ａ断面図である。
【００４６】
この実施形態においては、各平面状表面２の外側端縁部には剛性プラスチックからなる長方形の枠状の補強枠体２１、２１が溶着されており、ガス透過膜５は補強枠体２１の下面乃至は上面に溶着されて平面状態を維持している。図８（ｂ）から明らかなように、各補強枠体２１の外側には、ガス透過膜５と所定の間隔をおいて長方形のガス低透過性乃至非透過性のプラスチックからなる培養ガス封入空間形成板２２が貼り付けられており、この培養ガス封入空間形成板２２とガス透過膜５との間に培養ガス封入用空間２４が形成されている。各補強枠体２１には培養ガス封入空間２４内に培養ガスを注入するための培養ガス注入口２３と排気口２５が取り付けられている。培養ガス封入用空間２４はガス透過膜５に接しており、培養ガス注入口２３から注入された炭酸ガス、酸素、窒素ガス、水蒸気等のガスは培養ガス封入空間２４内に蓄えられてガス透過膜５を通して容器内の内溶液充填空間６に充填された内溶液に接触する。したがって、培養ガスの組成を所望の条件に調整して安定した状態で細胞培養を行うことができる。
【００４７】
なお、培養ガスは連続的乃至は間欠的に流し、そのガス組成は培養する細胞や微生物の種類と生体数あるいは代謝量に合わせて、一定組成で乃至は経時的に変化させて流すことができる。例えば、軟骨細胞のように低酸素濃度を好む細胞の場合は低酸素濃度に、肝細胞のように高酸素濃度を好む細胞の場合には高酸素濃度に、更に細胞数が少ない培養初期には低酸素濃度に、細胞数の多い培養後期には高酸素濃度に調節することができる。同様に、培養液のｐHを最適な状態に近づけるように炭酸ガス濃度を変化させることができる。微生物の場合も同様に、好気性であるか嫌気性であるかによって、ガス組成を適宜調整して培養することができる。
【００４８】
図９は、本発明の培養容器の他の実施形態を示し、図８（ｂ）と同一断面における模式的断面図である。
【００４９】
図９の培養容器３０は、図８に示す実施形態の容器２０を、平面状表面２を水平方向に配置して複数個相互に所定の間隔をおいて積載し、これら積載された複数の容器２０を別の単一のプラスチック等からなる容器３１内に収容し、この単一の容器３１内に培養ガスを封入する空間３２を形成したものである。この容器３０によれば、培養ガスの組成を所望の条件に調整して大量に細胞培養を行うことができる。
【００５０】
図１０は、本発明の培養容器の他の実施形態を示し、図８（ｂ）と同一断面における模式的断面図である。
【００５１】
図１０の培養容器４０は、本発明の培養容器を共培養用２室容器に適用したもので、図８に示す実施形態の容器２０を２つ用い、それぞれ片方の平面状表面２、ガス透過膜５、補強枠体２１および培養ガス封入用空間形成板２２を除去し、これらの部材を除去した面を内側に向けるようにして２つの容器２０、２０を重ね合わせ、これら２つの容器２０、２０を多孔質膜または半透膜からなる隔壁４１で仕切ったものである。
【００５２】
なお、図示しないが、培養容器４０の容器２０、２０には必要に応じて、それぞれ注入、取出し口を適宜取り付けることができる。
【００５３】
この容器４０を共培養用２室容器として使用する場合は、隔壁４１として多孔質膜を使用し、図中上方の容器２０の内容液培養空間６において第１の細胞を培養して所望のタンパク質を産生させた後この産生されたタンパク質を多孔質膜からなる隔壁４１を介して図中下方の容器２０の内溶液培養空間６に移動させる。
【００５４】
下方の容器２０には第２の細胞が収容されており、上方の容器２０から供給されたタンパク質を消費して培養される。多孔質膜としてはこれに限定されないがトッラック・エッチング膜が適用でき、例えば、野村マイクロサイエンス（株）のニュクリポアーメンブレン、ミリポア（株）のアイソポアメンブレンなどがある。
【００５５】
また、この容器４０は、前記のような共培養だけでなく、隔壁４１として半透膜を使用することにより、図中上方の容器２０において細胞を培養して所望のタンパク質やモノクローナル抗体を産生させた後半透膜からなる隔壁４１を介してこのタンパク質を下方の容器２０に移動させ、このタンパク質を下方の容器２０内に蓄積させて取り出す場合にも使用することができる。半透膜の主成分は、培養する細胞や微生物などに悪影響を与えない限り特に限定されないが、例えば、酢酸セルロースメンブレンなどがある。
【００５６】
図１１の培養容器５０は、本発明の培養容器を還流用培養容器に適用したもので、図中下方の容器２０は図８に示す実施形態容器２０の一方の平面状表面２、ガス透過膜５、補強枠体２１および培養ガス封入用空間形成板２２を除去し、これらの部材を除去した面を内側に向けるようにして配置し、中央の容器１は、図１に示す実施形態の容器１の両面の平面状表面２およびガス透過膜５を除去し、上方の容器１は図１に示す実施形態の容器１の一方の平面状表面２およびガス透過膜５を除去し、これらの部材を除去した面を内側に向けて配置し、これら３つの容器２０、１、１を重ね合わせ、各容器を多孔質膜または半透膜からなる隔壁５１で仕切ったものである。中央の容器１には細胞が収容されており、細胞培養はこの容器１内で行われる。５２は細胞の注入乃至は取り出し口である。
【００５７】
この還流用培養容器５０においては、内溶液充填管７から内溶液を下方の容器２０に充填すると、内溶液は中央の容器１および上方の容器１内を順次矢印の方向に流れて内溶液取り出し管８から外部に取り出される。このように容器２０、１、１を３層に構成することにより、内溶液の流れが一箇所に偏らず均一な培養を達成することができる。このタイプの培養容器５０においても容器２０の外側に培養ガス封入用空間２４を設けることにより培養ガスの組成を調整することができる。
【００５８】
図１２は、本発明の培養容器を用いて浮遊細胞を継代する例を示し、細胞培養を行った培養容器６０の内容液充填／取出し管６１と、他の空の培養容器７０の内容液充填／取出し管７１のそれぞれを、公知の無菌的チューブ接合装置（例えば、テルモ無菌接合装置など）により接続位置６２において無菌的に接続し、両培養容器６０、７０を相互に連通させる。連通後、培養容器６０を押圧することにより、細胞を懸濁させた培養液の一部を他の培養容器７０に移し替え、その後それぞれの培養容器６０、７０に新しい培養液を追加注入することにより、容易に細胞及び培養液の移し替えと新しい培地のよる希釈を行うことができる。
【００５９】
移し替え後は、同様に前述した無菌的チューブ接合装置を用いて、無菌的にチューブを切断して密封する。なお、この継代操作の例では継代後２つの容器に分割されるが、同様の操作を繰り返えして複数個の容器に分割して継代することができる。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】本発明の１実施形態に係る培養容器を示すもので、（ａ）は斜視図、（ｂ）は図１（ａ）のＡ−Ａ断面図、（ｃ）は図１（ａ）の容器の内容積を最小値となるまで減少させた状態の斜視図である。
【図２】本発明の他の実施形態に係る培養容器を示すもので、（ａ）は斜視図、（ｂ）は図２（ａ）のＢ−Ｂ断面図、（ｃ）は図２（ａ）の容器の内容積を最小値となるまで減少させた状態の斜視図である。
【図３】図１の実施形態の側部の他の変更例を示す断面図である。
【図４】図１の実施形態の側部の他の変更例を示す断面図である。
【図５】図１の実施形態の側部の他の変更例を示す断面図である。
【図６】図１の実施形態の側部の他の変更例を示す断面図である。
【図７】本発明の他の実施形態を示す斜視図である。
【図８】本発明の他の実施形態に係る培養容器を示すもので、（ａ）は斜視図、（ｂ）は図８（ａ）のＡ−Ａ断面図である。
【図９】本発明の他の実施形態に係る培養容器を示す断面図である。
【図１０】本発明の他の実施形態に係る培養容器を示す断面図である。
【図１１】本発明の他の実施形態に係る培養容器を示す断面図である。
【図１２】本発明の培養容器を用いて細胞を継代する例を示す図である。
【符号の説明】
【００６１】
１、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０  培養容器
２    平面状表面
３    側部
５    ガス透過膜
２１  補強枠体
２４  培養ガス封入用空間
【図１】
2006314276.tif 000003
【図２】
2006314276.tif 000004
【図３】
2006314276.tif 000005
【図４】
2006314276.tif 000006
【図５】
2006314276.tif 000007
【図６】
2006314276.tif 000008
【図７】
2006314276.tif 000009
【図８】
2006314276.tif 000010
【図９】
2006314276.tif 000011
【図１０】
2006314276.tif 000012
【図１１】
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【図１２】
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