(57)【要約】【課題】  様々な医薬品などが痴呆やアルツハイマー病の治療や予防に使用され、開発研究されているが、まだ満足するような医薬品は開発されておらず、また、副作用を誘発することや医療費の削減ため、最近では、医薬品による治療よりは食生活を通じて病気の予防、改善、遅延、又は治療効果のある機能を持った成分又は食品成分に対する研究も注目されるようになってきている。本発明は、幅広い飲食品や医薬品に使用可能な痴呆、アルツハイマー症候群等、の予防、改善、遅延、又は治療する脳機能改善組成物及びそれを含有する飲食品及び医薬品を提供することを目的とする。【解決手段】  アムラーの果実、果汁又はそれらの抽出物を含有させることにより上記課題を解決する。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アムラーの果実、果汁又はそれらの抽出物を含有することを特徴とする脳機能改善組成物。
【請求項２】
アムラー果実又は果汁の抽出物が、アムラー果実又は果汁から水、塩基、酸、親水性溶媒、アセトンのいずれかにより抽出されていることを特徴とする請求項１記載の脳機能改善組成物。
【請求項３】
アムラー果実、果汁又はそれら抽出物を酵素処理したことを特徴とする請求項１又は２記載の脳機能改善組成物。
【請求項４】
親水性溶媒がメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの群より選ばれる1種類以上の低級アルコールであることを特徴とする請求項１又は２記載の脳機能改善組成物。
【請求項５】
アムラー果実又は果汁の抽出物、又は果汁から親水性溶媒もしくは疎水性溶媒のいずれか１種類又は２種類以上により分画されていることを特徴とする請求項１〜３いずれか記載の脳機能改善組成物。
【請求項６】
疎水性溶媒が酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、メチルエーテル、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、又はクロロホルムからなる群より選ばれる少なくともの１種類であることを特徴記載の脳機能改善組成物。
【請求項７】
請求項１〜６いずれか記載の脳機能改善組成物を含有することを特徴とする飲食品。
【請求項８】
請求項１〜６いずれか記載の脳機能改善組成物を含有することを特徴とする医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アムラーの果実、果汁又はそれらの抽出物を含有することを特徴とする脳機能改善組成物及びそれを含有する飲食品及び医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】
高齢化社会となり、身体能力の衰えた老人の介護などあるが、豊か老後を送る上で最も問題となっているのが痴呆症、アルツハイマー病であり、根本的な治療法が確立されていない。そしてこの痴呆には大きく分けると脳梗塞などによる脳血管障害が原因で起こる「脳血管性痴呆」と、まだ原因の不明の、脳が萎縮する「アルツハイマー型痴呆」の二つがあり、この二つの症状を併せ持った「混在型痴呆症」と呼ばれる三つのタイプがある。このうち日本人には脳血管性痴呆が多く、欧米人の痴呆の半数以上はアルツハイマー型である。この違いは食習慣によるもののほか、遺伝的な要因も多いと言われている。いまだその原因が不明なアルツハイマーだが、加齢、遺伝子、環境因子等が働いていると推定されている。正常な脳内にはペプチドの新陳代謝に関係するプロリルエンドペプチダーゼ（ＰＥＰ）が存在する。ＰＥＰ（ＥＣ ３．４．２１．２６）は、プロリンを含むペプチドのプロリンのカルボキシル側を特異的に切断する酵素で、記憶にも関与していると考えられている神経ペプチド、バソプレッシンを分解、不活性化する。脳機能関連ペプチドの分解が異常に亢進されると脳機能に変調を引き起こすことが報告されている。近年、アルツハイマー型痴呆とＰＥＰとの関係が取りざたされ、アルツハイマー型痴呆症の患者の脳内にはＰＥＰが多量に存在することが報告されている。実際、多くの合成ＰＥＰ阻害剤によってラット、マウスを用いた実験で抗健忘作用を示すことが報告されている。そこで、ＰＥＰ阻害剤が抗痴呆活性を有することが期待されている。
【０００３】
現在、抗痴呆薬の根本的な予防治療薬はないが、痴呆によって起こる周辺症状を改善させる薬として、ハロペリドールなどの抗精神病薬、抗痴呆薬として、アセチルコリンを分解する酵素・アセチルコリンエステラーゼの働きを阻害し、アセチルコリンの分解を防ぎ脳内での量を増やすことで、症状を改善するという治療法のアセチルコリンエステラーゼ阻害薬のアリセプトという塩酸ドネペジルとタクリンがある。アセチルコリンエステラーゼ阻害薬以外ではムスカリンＭ１受容体作動薬のタルサクリジン、コリン取り込み促進薬、ソマトスタチン遊離促進薬、ニューロトランスミッター調整薬のネフィラセタム、アセチルコリン・ノルアドレナリン遊離促進薬などの開発が進められている。これら以外にも、アルツハイマー予防、治療薬として記憶にかかわる神経ペプチドに作用するプロリルエンドペプチダーゼ阻害薬、神経成長因子（ＮＧＦ）などの成長因子合成促進薬のネオトロフィン、さらに、ＮＧＦなどの遺伝子を組み込んだ細胞を脳内に投与する遺伝子治療の研究も注目されている。その他、老年斑構成成分であるアミロイドβ蛋白の産生に関与するセクレターゼの阻害薬、アミロイドβ蛋白ワクチン、タウプロテインキナーゼ１阻害薬、エストロゲン、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）−２阻害薬、Ｈ３受容体アンタゴニスト、ＮＭＤＡ受容体モジュレータなどの研究も進められている。
アセチルコリンの減少もアルツハイマーの結果であってアルツハイマーの原因ではなく、アルツハイマー病を根本的に抑制する治療薬ではないため、飲むのをやめると元の症状に戻ってしまうという問題がある。
【０００４】
このような抗痴呆薬などが痴呆やアルツハイマー病の治療や予防に使用され、開発研究されているが、まだ満足するような医薬品は開発されておらず、また、副作用を誘発することや医療費の削減ため、最近では、医薬品による治療よりは食生活を通じて病気の予防、改善、遅延、又は治療効果のある機能を持った成分又は食品成分に対する研究も注目されるようになってきている。
食品成分としては、蕎麦種子の抽出物または、プロポリス又はその抽出物（例えば、特許文献１参照。）、米糠の発酵物（例えば、特許文献２参照。）、コメアルブミンペプチド（例えば、特許文献３参照。）、蕎麦種子抽出物（例えば、特許文献４参照。）等の素材が知られているが、脳機能改善に関する報告は無い。
【０００５】
【特許文献１】特開２００３−３３５６８９号公報（第２−５頁）
【特許文献２】特開２００２−２６５３７７号公報（第３頁）
【特許文献３】特開２００1−６４１９７号公報（第３頁）
【特許文献４】特開２０００−５３５７５号公報（第２頁）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、幅広い飲食品や医薬品に使用可能な痴呆、アルツハイマー症候群等、の予防、改善、遅延、又は治療する脳機能改善組成物及びそれを含有する飲食品及び医薬品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは様々な天然植物を利用して脳機能改善組成物を捜す目的で、多角的に研究検討した結果、多角的に研究検討した結果アムラーの抽出物に優れた脳血管障害の予防をする効果があることを見出し、本発明を完成させた。
【発明の効果】
【０００８】
本発明で得られたアムラーの果実、果汁又はそれらの抽出物を含有する脳機能改善組成物は、ＰＥＰ活性阻害の効果試験結果から、ＰＥＰ活性を阻害する効果が高いことがわかった。
特にアムラーは、昔から人間が日常食生活に使用してきた天然植物由来なので、従来使用していた薬剤とは違い、副作用が無く安全である。
本発明はアムラーの果実、果汁又はそれらの抽出物を含有する脳機能改善組成物を各種飲食品及び医薬品等に利用して、アルツハイマー症の進行を防止することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本願発明に用いるアムラーとは、学名：エンビリカ・オフィシナル（Ｅｍｂｌｉｃａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）又は、フィランサス・エンブリカ（Ｐｈｙｌｌａｎｔｈｕｓ  ｅｍｂｉｌｉｃａ）といい、トウダイグサ科コミカンソウ属に属する落葉の亜高木であり、インドからマレーシア地域及び中国南部にかけて分布しており、インドが原産地と考えられている。また、各地方又は言語により、各々固有の名称があり、余柑子、油甘、奄摩勒、エンブリック・ミロバラン、アーマラキー、マラッカノキ、マラッカツリー、インディアングーズベリー、アロンラ、アミラ、アミラキ、アミラキャトラ、ネリカイ、ネルリ、タシャ、カユラカ、ケムラカ、ナックホンポン等とも称されている。
【００１０】
本発明において、アムラーの部位としては、果実が用いられる。その形態は、特に限定するものではなく、未熟果実、完熟果実、乾燥果実、果汁、果汁粉末等のいずれでも良い。
果汁又は果汁粉末の場合は、そのままでも使用できるが、生果実又は乾燥果実等、水不溶性成分を含む物を使用する場合は、抽出により、水不溶性成分が除去されていることが好ましい。
抽出の際、生果実を使用する場合は、種子を除去した後、水を添加又は無添加で、抽出効率を高めるためにミキサー等により破砕、均質化したものを用いることが好ましい。
乾燥果実を使用する場合は、抽出効率を高めるために４０メッシュ以下の粒度になるように粉砕されていることが好ましい。
【００１１】
抽出方法は、抽出溶媒、抽出温度等、特に限定されるものではなく、抽出溶媒としては、水、塩基、酸、親水性溶媒、アセトンを使うことができる。親水性溶媒はメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールなどの低級アルコール群より選ばれる1種類以上が操作性、抽出効率の点から好ましい。特に好ましくは、水、塩基、酸のいずれかである。
酸又は塩基を抽出溶媒に使用する場合、抽出物を中和させることが好ましい。中和反応によって生成された塩は、透析法やゲル濾過等、公知の方法により、取り除くことができる。水を抽出溶媒として用いた場合には、上記のような中和反応は必要なく、生成された塩を取り除く必要もないため、水を用いることが更に好ましい。
この時使用する酸としては、特に限定するものではなく、大部分の酸を使うことができるが、好ましくは、入手しやすい及び操作性点により塩酸、硫酸より選ばれる１種又は両者の併用である。
また、塩基としては、特に限定するものではなく、大部分の塩基を使うことができるが、好ましくは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムより選ばれる１種又は両者の併用である。
抽出に使用される酸又は塩基の濃度は、抽出物を酵素処理する前であっても後であっても特に限定するものではなく、酸又は塩基の強さによって変化するが、操作性及び抽出効率の点より、０．０１〜０．５モルの濃度を使用することが好ましい。
【００１２】
上記の抽出において、酵素処理することによって収率や風味の改善ができるので、酵素処理をすることは好ましい。酵素処理する時のｐＨは使用する酵素の至摘ｐＨ及びｐＨ安定性を指標に適宜選択できる。また、処理する時の温度に関しても酵素の至摘温度及び温度安定性を指標に適宜選択できる。本発明の酵素処理に使用する酵素は限定するものではないが、食品工業用に用いるものであれば、特に限定するものではなく、ペクチナーゼ、セルラーゼ、へミセルラーゼ、α−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、マルトトリオヒドロラーゼ、β−アミラーゼ、トランスグルコシダーゼ、リパーゼ、プロテアーゼ、グルタミナーゼ、ヌクレアーゼ、デアミナーゼ、デキストラナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ラクターゼ、タンナーゼ、クロロゲン酸エステラーゼ、プルラナーゼ、トリプシン、パパイン、レンネット、ホスホリパーゼＡ２等より選ばれる１種類または２種類を併用することができる。好ましくは、ぺクチナーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、プロテアーゼ、クロロゲン酸エステラーゼ、タンナーゼより選ばれる１種類または２種類を併用することができる。酵素の使用量は特に限定するものではないが、酵素の種類や反応条件によっても異なるが、アムラに対して０．０５〜２％使用するのが好ましい。更に、上記の抽出において、抽出残渣に対して再度抽出工程を１回又はそれ以上繰り返すことで、抽出率が向上し、収率が向上するので、好ましい。この場合の抽出に用いる溶媒は、同じでも良いし、別の溶媒を用いても良い。
【００１３】
上記の果汁又は抽出物は、そのままでも使用できるが、濾過、遠心分離及び分留により、不溶性物質及び溶媒を取り除くことにより、ＰＥＰの活性阻害効果が高くなり、応用範囲も広がるので好ましい。
不溶性物質及び溶媒を取り除いた後、果汁又は抽出液をそのまま又は濃縮した後に親水性溶媒又は疎水性溶媒用いて分配を行い、それぞれの溶媒可溶画分を得る。これら溶媒可溶画分は、更に脳機能改善効果が高くなるので好ましい。親水性溶媒としてはメチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールの低級アルコールが使用でき、疎水性溶媒としては酢酸エチル、酢酸ブチル、ジエチルエーテル、メチルエーテル、メチルイソブチルケトン、ヘキサン、アセトン又はクロロホルムが使用できる。また可溶画分の純度を上げる為には、他の疎水性溶媒による分配を組み合わせることもできる。これら溶媒の濃度としては、特に限定するものではないが、収率及び効果の点より、終濃度として１０〜９０％が好ましく、２０〜８０％が更に好ましい。
さらに純度を高める為に、フェノール系、スチレン系、アクリル酸系、エポキシアミン系、ピリジン系、メタクリル系など母体とした疎水性樹脂を用いることも可能である。その場合、樹脂吸着後の溶離液としては、メチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコールなどの低級アルコール及びアセトンを単独又は水溶液として使用できる。  
抽出物及び画分はそのままでの使用も可能だが、必要であれば噴霧乾燥や凍結乾燥等の手段により乾燥粉末化させて使用することも可能である。
【００１４】
ＰＥＰは通常、大脳の海馬部分に多く存在し、サブスタンスＰやニューロテンシンと呼ばれる神経伝達物質や、学習や記憶に関与しているバソプレッシンという神経ホルモンを分解する作用があり、健忘症患者ではＰＥＰの活性が高く、ＰＥＰが働きすぎてバソプレッシンが少ないことがわかっている。このため、ＰＥＰを阻害することが脳機能改善に有効であるといえる。
本願発明において脳機能改善効果は、例えば、ＰＥＰのエステラーゼ作用により、基質から遊離されるｐ−ＮＡ（パラニトロアニリン）の吸光度を測定することによりＰＥＰ活性阻害率を求める方法を指標とすることができ、ＰＥＰ活性阻害率の増加より、脳機能改善効果を確認することができる。
【００１５】
本願発明の脳機能改善組成物は、飲食品、医薬品、飼料等に応用でき、好ましくは、人が手軽に摂食できる飲食品又は医薬品が好ましい。
本願発明における飲食品とは溶液、懸濁物、粉末、固体成形物等経口摂取可能な形態であれば良く特に限定するものではない。より具体的には、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品等の即席食品類、清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、栄養飲料、アルコール飲料等の飲料類、パン、パスタ、麺、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等の小麦粉製品、飴、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、デザート菓子等の菓子類、ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素類等の調味料、加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズ等の油脂類、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類等の乳製品、冷凍食品、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品等の水産加工品、畜肉ハム・ソーセージ等の畜産加工品、農産缶詰、ジャム・マーマレード類、漬け物、煮豆、シリアル等の農産加工品、栄養食品、錠剤、カプセル等が例示される。
【００１６】
本願発明の脳機能改善組成物の飲食品としての摂取量は、本発明の病気の状態、病人の体重、年齢、体質、体調等によって調整されるべきであるが、一般に１日あたり、脳機能改善組成物として０．０５ｇ〜２０ｇ、好ましくは０．１ｇ〜５ｇの範囲で適宜選択することができる。これを病気の状態や食品等の形態によって１日１ないし数回にわけて摂取することができる。
【００１７】
本願発明において、脳機能改善組成物又は、飲食品等に加工する際に、各種栄養成分を強化することができる。
強化できる栄養成分としては、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ナイアシン（ニコチン酸）、パントテン酸、葉酸等のビタミン類、リジン、スレオニン、トリプトファン等の必須アミノ酸類や、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅等のミネラル類及び、例えば、α−リノレン酸、ＥＰＡ、ＤＨＡ、月見草油、オクタコサノール、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）、カゼインカルシウムペプチド（ＣＣＰ）、水溶性食物繊維、不溶性食物繊維、オリゴ糖等の人の健康に寄与する物質類、その他の食品や食品添加物として認可されている有用物質の１種又は２種以上が使用できる。
【００１８】
本願発明における医薬品とは、経口または非経口投与に適した賦形剤、その他の添加剤を用いて、常法に従って、経口製剤または注射剤として調製することができる。好ましいのは、経口製剤であり、最も好ましいのは、容易に服用でき且つ保存、持ち運びに便利な経口固形製剤である。
経口固形製剤としては、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤等が用いられる。このような固形製剤においては、適宜の薬理学的に許容され得る坦体、賦形剤（例えばデンプン、乳糖、白糖、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムなど）、結合剤（例えばデンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピリドンなど）、滑沢剤（例えばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムなど）、崩壊剤（例えばカルボキシメチルセルロース、タルクなど）、などと混合し、常法により錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤等を調整することが出来る。経口液状製剤は、製薬学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エタノールを含む。この組成物は不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。
非経口投与しての注射剤としては、無菌の水性又は非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤を包含する。水性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩水が含まれる。非水溶性の溶液剤、懸濁剤の希釈剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート８０等がある。このような組成物は、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えばラクトース）、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保管フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。これらはまた無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。
本願発明の脳機能改善組成物の医薬品としての投与量は、投与ルート、疾患の症状、投与対象の年齢、性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定されるが、通常、成人１人当たり有効成分約１〜５００ｍｇ／日、好ましくは１０〜２００ｍｇ／日である。
【００１９】
以下本発明を、実施例にて詳細に説明するが、次の実施例は、本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００２０】
（実施例１）脳機能改善組成物の調製１
アムラー乾燥果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末８０ｇに、蒸留水２Ｌを加え、５５℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その残渣に蒸留水２Ｌを加え、同条件でもう１回繰り返し抽出し、それぞれの抽出液をあわせた後、凍結乾燥し、本願発明の脳機能改善組成物Ａ３５．０ｇを得た。収率は４３．８％であった。  
【００２１】
（実施例２）脳機能改善組成物の調製２
アムラー乾燥果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末８０ｇに、蒸留水２Ｌを入れ、５５℃で３時間抽出した。その後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その残渣に蒸留水２Ｌを入れ、同条件でもう１回繰り返し抽出し、それぞれの抽出液をあわせて、減圧濃縮し、２００ｍＬとした。この濃縮液にエタノールを加え、２５０ｍＬになるように調製（最終エタノール濃度２０％）した後、４℃で２４時間静置後、不溶性成分を沈殿させた。沈澱物を遠心分離で分離除去し、上清を減圧濃縮後、蒸留水１Ｌに再溶解し、濾過して不溶性成分除去後、濾液を凍結乾燥して本願発明の脳機能改善組成物Ｂ１３．６ｇを得た。
同様にして、エタノールの終濃度が４０％、６０％、８０％にして、本願発明の脳機能改善組成物Ｃ２０．８ｇ、Ｄ２１．２g、Ｅ１２．５ｇを得た。
【００２２】
（実施例３）脳機能改善組成物の調製３
アムラー乾燥果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末８０ｇに、蒸留水２Ｌを入れ、５５℃で３時間抽出した。その後、遠心分離し、その上清を濾過し、抽出物と残渣を分離した。その残渣に蒸留水２Ｌを入れ、同条件でもう１回繰り返し抽出し、それぞれの抽出液をあわせて、減圧濃縮し、２００ｍＬとした。この濃縮液に酢酸エチルを加え、５００ｍＬになるように調製（最終酢酸エチル濃度６０％）した後、４℃で２４時間静置後、酢酸エチル層を分離し、減圧濃縮後、濾液を凍結乾燥して本願発明の脳機能改善組成物Ｆ１２．５ｇを得た。
【００２３】
（実施例４）脳機能改善組成物の調製４
アムラー乾燥果実を４０メッシュ以下に粉砕し、その粉末１００ｇに、蒸留水２Ｌペクチナーゼ０．１ｇ及びタンナーゼ０．１ｇを加え、５５℃で２時間抽出した。その後、９０℃で３０分間酵素失活させた。その後、濾過し、濾液をスプレードライし、本願発明の脳機能改善組成物Ｇ４５ｇを得た。
【００２４】
（比較例１）ＰＥＰ活性阻害の確認−１
実施例１で得られた脳機能改善組成物Ａ、実施例２で得られた脳機能改善組成物Ｂ、実施例３で得られた脳機能改善組成物Ｆ、実施例４で得られた脳機能改善組成物Ｇ並びにビタミンＣを蒸留水で希釈して、試料濃度は１．０ｍｇ／ｍＬとした。４０％ジオキサン溶液に溶解した２ｍＭ Ｚ−Ｇly−Ｐro−pＮＡ基質（生化学工業社製）１２５μＬに０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）１．０ｍＬを加え、さらに各濃度調整した試料１２５μＬを加えて３０℃で５分間インキュベーションした。インキュベーション後に、０．０５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液に溶解したフラボバクテリウム属（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｅｐｔｉｃｕｍ）由来のＰＥＰ（０．２Ｕ／ｍＬ、生化学工業社製）１００μＬを加え、３０℃で１０分間インキュベーションした。その後、１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．０）に溶解したＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００溶液２．０ｍＬを加えることにより酵素反応を停止させた。ＰＥＰのエステラーゼ作用により、基質から遊離されるｐ−ＮＡ（パラニトロアニリン）の吸光度を４１０ｎｍの吸光度を測定し、各々の吸光度の測定値を下式に代入することによりＰＥＰ活性阻害率を算出した。尚、コントロールとして試料の代わりに蒸留水を使用した。その結果を図１に示した。
ＰＥＰ活性阻害率＝（コントロールの吸光度の測定値−試料の吸光度の測定値）／（コントロールの吸光度の測定値）×１００
【００２５】
図１の結果により、本願発明の脳機能改善組成物は、ビタミンＣより高いＰＥＰ活性阻害率を示すことが確認できた。
【００２６】
（比較例２）ＰＥＰ活性阻害の確認-２
実施例２で得られた脳機能改善組成物Ｅを蒸留水で希釈して、０（蒸留水のみ）、０．２、０．５、０．７、１．０ｍｇ／ｍｌの試料濃度とし、試験例２と同様方法でＰＥＰ活性阻害効果を確認した。その結果を図２に示した。
【００２７】
図２の結果により、本願発明の脳機能改善組成物の濃度を増加させることによって濃度依存的にＰＥＰ活性の阻害効果も増加することが確認できた。
【００２８】
（実施例４）脳機能改善組成物含有飲料の調製
ブドウ糖５２８ｇ、果糖８５．４ｇ、粉末クエン酸１５．８ｇ、クエン酸ナトリウム１１．２ｇ、乳酸カルシウム１．３ｇ、塩化マグネシウム１．３ｇ、粉末天然香料１３．２ｇ、ビタミンＣおよび実施例１で得られた脳機能改善組成物Ａ５．５ｇに水を加えて１１Ｌとし、乾熱減菌済１１０ｍＬ褐色ビンに１００ｍＬずつ充填、アルミキャップで密封後、１２０℃、３０分間殺菌を脳機能改善組成物含有飲料１００本を得た。
【００２９】
（実施例５）脳機能改善組成物含有野菜果汁混合飲料の調製
実施例２で得られた脳機能改善組成物Ｂ１ｇ及び、グアーガム分解物（サンファイバーＲ；太陽化学株式会社製）３ｇを市販の野菜果汁混合飲料１００ｍＬに添加混合溶解して、本願発明の脳機能改善組成物含有野菜果汁混合飲料を得た。
【００３０】
（実施例６）脳機能改善組成物含有乳酸菌飲料の調製
１５％脱脂乳に３％グルコースを添加し、１２０℃で３秒殺菌した後、ラクトバチルス・カゼイ（L．ｃａｓｅｉ）を１％接種し、３７℃でｐＨ３.６まで培養してヨーグルト２１０ｇを得た。一方、砂糖１００ｇに、実施例２で得られた脳機能改善組成物Ｃ１ｇに水を加えて７９０ｇにし、１１０℃で３秒の殺菌を行ってシロップを得、得られたヨーグルトとシロップを混合し、香料を添加した後、均質化（１５０ｋｇ／ｃｍ２）し、容器に充填して脳機能改善組成物乳酸菌飲料を得た。
【００３１】
（実施例７）脳機能改善組成物含有食品（錠菓）の調製
実施例２で得られた脳機能改善組成物Ｄ５０ｇ、乳糖３０ｇ、ＤＨＡ含有粉末油脂（サンコートＤＹ−５；太陽化学株式会社製）１２ｇ、ショ糖脂肪酸エステル４ｇ、ヨーグルト香料４ｇを混合し、１錠が３００ｍｇになるように打錠して、本願発明の脳機能改善組成物含有飲食品（錠菓）を得た。
【００３２】
（実施例８）脳機能改善組成物含有クッキーの調製
実施例２で得られた脳機能改善組成物Ｅ４ｇ及び、市販のケーキミックス粉２００ｇを容器に入れた後、バター３５ｇを入れ、木杓子で混ぜ合わせた。それに溶き卵２５ｇを加えて、生らかな生地になるまで良く練った。小麦粉を振った台の上に生地を取り出し、さらに小麦粉を振って麺棒で５ｍｍの厚さに伸ばし、丸型で抜き、それを１７０℃のオーブンで１０分間焼いて、１個約５ｇの本願発明の脳機能改善組成物含有クッキーを得た。
【００３３】
（実施例９）脳機能改善組成物含有錠剤の調製
実施例３で得られた脳機能改善組成物Ｆ２０ｇ、結晶セルロース１０ｇ、トウモロコシデンプン２７．５ｇ、乳糖６５ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース６．５ｇを混合し、顆粒化した。この顆粒化物にステアリン酸マグネシウム２．０ｇを加え、均一に混合し、この混合物をロータリー式打錠機を用いて加圧成形して一錠が１３０ｍｇの本願発明の脳機能改善組成物含有錠剤を得た。
【００３４】
本発明の実施態様ならびに目的生成物を挙げれば以下の通りである。
（１）  アムラーの果実、果汁又はそれらの抽出物を含有することを特徴とする脳機能改善組成物。
（２）  アムラー果実又は果汁の抽出物が、アムラー果実又は果汁から水、塩基、酸、親水性溶媒のいずれかにより抽出されていることを特徴とする前記（１）記載の脳機能改善組成物。
（３）  アムラー果実又は果汁の抽出物が、アムラー果実又は果汁から水により抽出されていることを特徴とする前記（１）又は（２）記載の脳機能改善組成物。
（４）  アムラー果実又は果汁の抽出物が、アムラー果実又は果汁から酵素処理により抽出されていることを特徴とする前記（１）〜（３）いずれか記載の脳機能改善組成物。
（５）  アムラー果実又は果汁の抽出物が、アムラー果実又は果汁からぺクチナーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、プロテアーゼ、クロロゲン酸エステラーゼ、タンナーゼより選ばれる１種類または２種類を併用する酵素処理により抽出されていることを特徴とする前記（１）〜（４）いずれか記載の脳機能改善組成物。
（６）  アムラー果実又は果汁の抽出物、又は果汁から、親水性溶媒もしくは疎水性溶媒により分画されていることを特徴とする前記（１）〜（５）いずれか記載の脳機能改善組成物。
（７）  アムラー果実又は果汁の抽出物、又は果汁から、エタノールにより抽出し、エタノール可溶分画を特徴とする前記（１）〜（６）いずれか記載の脳機能改善組成物。
（８）  エタノールで分画する際のエタノール濃度が、終濃度として１０〜９０％であり、そのエタノール可溶化成分であることを特徴とする前記（７）記載の脳機能改善組成物。
（９）  エタノールで分画する際のエタノール濃度が、終濃度として３０〜７５％であり、そのエタノール可溶化成分であることを特徴とする前記（７）又は（８）記載の脳機能改善組成物。
（１０）  アムラー果実又は果汁の抽出物、又は果汁から、酢酸エチルにより抽出し、酢酸エチル可溶分画を特徴とする前記（１）〜（５）いずれか記載の脳機能改善組成物。
（１１）  酢酸エチルで分画する際の酢酸エチル濃度が、終濃度として３０〜９０％であり、その酢酸エチル可溶化成分であることを特徴とする前記（１０）記載の脳機能改善組成物。
（１２）酢酸エチルで分画する際の酢酸エチル濃度が、終濃度として５０〜８０％であり、その酢酸エチル可溶化成分であることを特徴とする前記（１０）又は（１１）記載の脳機能改善組成物。
（１３）脳機能改善効果がＰＥＰ活性阻害であることを特徴とする前記（１）〜（１２）いずれか記載の脳機能改善組成物。
（１４）  前記（１）〜（１３）いずれか記載の脳機能改善組成物を含有することを特徴とする飲食品。
（１５）  前記（１）〜（１３）いずれか記載の脳機能改善組成物を含有することを特徴とする医薬品。
（１６）  前記（１）〜（１３）いずれか記載の脳機能改善組成物を含有することを特徴とする飼料。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明で得られたアムラー抽出物を含有する脳機能改善組成物は、ＰＥＰ活性阻害の試験結果から、ＰＥＰ活性の阻害する効果が高く、各種飲食品及び医薬品等に利用して、アルツハイマー症の進行を抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】脳機能改善組成物Ａ、Ｂ、Ｆ、ＧまたはビタミンＣを１．０ｍｇ／ｍＬ添加した時のＰＥＰ活性阻害率を示す。
【図２】脳機能改善組成物Ｅを０（蒸留水のみ）、０．２、０．５、０．７、１．０ｍｇ／ｍＬに希釈して添加した時のＰＥＰ活性阻害率を示す。
【図１】
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【図２】
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