(57)【要約】【課題】  均質な機能性を発揮できる診断用及び治療用の磁性粒子含有医薬を再現性良く生成できる磁性粒子含有医薬用原薬を提供する。【解決手段】  平均粒径が５〜３０ｎｍであり、飽和磁化が５０〜９０Ａｍ２／ｋｇ、保磁力が０〜１．６ｋＡ／ｍである磁性酸化鉄微粒子が単分散したコロイド無菌水溶液であることを特徴とする磁性粒子含有医薬用原薬は、微細な磁性酸化鉄粒子を生成した後、反応溶液から反応時に副生した水可溶性副生塩類を常法により水洗除去して超常磁性酸化鉄粒子のコロイド水溶液を精製し、精製したコロイド水溶液の分散媒を超純水で置換することによって得ることができる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
平均粒径が５〜３０ｎｍの磁性酸化鉄微粒子が単分散したコロイド無菌水溶液であることを特徴とする磁性粒子含有医薬用原薬。
【請求項２】
磁性酸化鉄微粒子の飽和磁化が５０〜９０Ａｍ２／ｋｇ、保磁力が０〜１．６ｋＡ／ｍであることを特徴とする請求項１記載の磁性粒子含有医薬用原薬。
【請求項３】
磁性酸化鉄微粒子がスピネル構造の組成物ＭＯＦｅ２Ｏ３（Ｍは２価金属）であることを特徴とする請求項１又は２に記載の磁性粒子含有医薬用原薬。
【請求項４】
組成物ＭＯＦｅ２Ｏ３（Ｍは２価金属）のＭが、Ｆｅ及び／又はＭｇ（但し、ＦｅとＭｇの総和がＦｅ２Ｏ３１モルに対して１モル以下）であることを特徴とする請求項３記載の磁性粒子含有医薬用原薬。
【請求項５】
コロイド無菌水溶液中の磁性酸化鉄微粒子の濃度が５〜５０ｍｇ／ｍｌであることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の磁性粒子含有医薬用原薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医療技術分野において、薬物の送達法であるドラッグデリバリー  システム（以降、ＤＤＳと記す）、レントゲンやＭＲＩ（磁気共鳴）等で用いられるＣＴ（計算断層像法）診断及び温熱治療法などの治療用の磁性粒子含有医薬に用いる原薬に関するものである。
【０００２】
詳述すれば、本発明は、上記磁性粒子含有医薬の病変組織や細胞への送達指向性、ＣＴによる診断時の造影感度及び温熱治療時の発熱性等の性能を向上させることを目的とする磁性粒子含有医薬用原薬である。
【背景技術】
【０００３】
近年、磁性体として磁性酸化鉄微粒子を用い、リン脂質、タンパク質及び水溶性ポリマー等の生体適応性物質と複合化した磁性粒子含有医薬が検討されている（特許文献１〜５等）。
【０００４】
また、磁性酸化鉄微粒子の単分散水溶液を調整するために、界面活性剤等の表面処理剤で粒子表面を被覆する方法（特許文献６）、Ａｌ、Ｓｉ等の無機物を被覆する方法（特許文献７）、または有機金属ポリマーで被覆する方法（特許文献４）等が知られている。
【０００５】
しかし、これらは磁性酸化鉄粒子を利用するものではあるが、磁性粒子に付加する修飾機能を主体とするものであり、磁性酸化鉄微粒子の粒度や磁気特性等の粉体特性と磁性粒子含有医薬特性との特性要因の関係が十分に解明されているとは言い難いものである。
【０００６】
特に、微細な磁性酸化鉄粒子を生体適応性物質に均一に分散・担持させることは、酸化鉄粒子の磁気凝集に起因して容易なことではなく、これまでは大きな粒度の磁性酸化鉄粒子が用いられてきた。
【０００７】
また、粒子サイズが大きな磁性酸化鉄粒子は、治療後に酸化鉄粒子が体内に残留する可能性が高く、使用上の安全性が十分に確保できるとは言い難いものであった。
【０００８】
そこで、均質な機能性、例えば試薬送達性、造影感度、発熱性能等を有するとともに、機能を十分に発揮できる診断用及び治療用の磁性粒子含有医薬を再現性良く生成できる磁性粒子含有医薬用原薬の開発が求められている。
【０００９】
【特許文献１】特開平３−１２８３３１号公報
【特許文献２】特開平４−５２２０２号公報
【特許文献３】特開平７−１２２４１０号公報
【特許文献４】特表平８−５００７００号公報
【特許文献５】特開平１１−１０６３９１号公報
【特許文献６】特開平１−４００２号公報
【特許文献７】特開平５−３１０４２９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
上述したように、均質な特性を有した磁性体含有医薬を再現性良く得るためには、磁性粒子含有医薬の製薬時において、生体適応性物質と磁性酸化鉄微粒子とを均一に分散混合させることが不可欠な条件であり、そのためには原薬中の磁性酸化鉄微粒子は粒度が微細で均一な磁性酸化鉄微粒子からなる単分散コロイド水溶液であることが必要である。
【００１１】
しかし、界面活性剤などの表面処理剤を使用して磁性酸化鉄微粒子を分散させた場合、使用した表面処理剤が残留し、得られる磁性体含有医薬にもこれらの表面処理剤が混入して生体への安全性に影響を及ぼし、また生体適応性物質との混合を阻害する等の問題がある。さらに、表面処理剤を除去するためには複雑な処理が必要であった。
【００１２】
本発明は、上記従来の問題点に鑑みてなされたものであり、表面処理剤を使用しないで、均一な粒度から成る磁性酸化鉄微粒子の単分散コロイド無菌水溶液を提供することを技術的課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者は、前記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、磁性粒子として微細な磁性酸化鉄粒子に着目し、超常磁性酸化鉄粒子からなる単分散コロイド水溶液の分散安定条件を見出した。
【００１４】
即ち、本発明は、平均粒径が５〜３０ｎｍの磁性酸化鉄微粒子が単分散したコロイド無菌水溶液であることを特徴とする磁性粒子含有医薬用原薬である。
【００１５】
また、本発明は、磁性酸化鉄微粒子の飽和磁化が５０〜９０Ａｍ２／ｋｇ、保磁力が０〜１．６ｋＡ／ｍであることを特徴とする請求項１に記載の磁性粒子含有医薬用原薬である。
【００１６】
また、本発明は、磁性酸化鉄微粒子がスピネル構造の組成物ＭＯＦｅ２Ｏ３（Ｍは２価金属）であることを特徴とする前記磁性粒子含有医薬用原薬である。
【００１７】
また、本発明は、組成物ＭＯＦｅ２Ｏ３（Ｍは２価金属）のＭが、Ｆｅ及び／又はＭｇ（但し、ＦｅとＭｇの総和がＦｅ２Ｏ３１モルに対して１モル以下）であることを特徴とする前記磁性粒子含有医薬用原薬である。
【００１８】
また、本発明は、コロイド無菌水溶液中の磁性酸化鉄微粒子の濃度が５〜５０ｍｇ／ｍｌであることを特徴とする前記いずれかの磁性粒子含有医薬用原薬である。
【発明の効果】
【００１９】
本発明に係る磁性体含有医薬用原薬は、微細な磁性酸化鉄粒子の単分散コロイド無菌水溶液であるから、磁性体粒子を生体適合性物質に均質に分散させた複合物から成る医薬を容易に合成することができる。さらに、液媒が界面活性剤などを含有しない原薬であるので、生体への安全性に与える影響は可及的に少ないものである。
また、微細な磁性粒子は製薬造粒工程において、微粒子の集合状態を調整することにより造粒粒子に強磁性体の機能を付与することができる。
また、超微粒子であることで投与後は体内からの排泄を容易にすることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本発明の構成をより詳しく説明すれば次の通りである。
【００２１】
本発明における磁性酸化鉄微粒子の大きさは５ｎｍ〜３０ｎｍである。５ｎｍ以下は非晶質であり、３０ｎｍ以上になると磁気的凝集が生じやすくなる。好ましくは５ｎｍ〜２０ｎｍである。なお、粒子の大きさが１０ｎｍ以下となると超常磁性となり保磁力を有するものではなく、より好ましい。
【００２２】
本発明における磁性酸化鉄微粒子は、スピネル型強磁性体ＭＯＦｅ２Ｏ３（Ｍは２価金属）であり、ＭがＦｅの場合の組成はＦｅｘＯＦｅ２Ｏ３であり、この組成式のｘは２価鉄の含有量を表し、ｘ＝１はＦｅＯＦｅ２Ｏ３でマグネタイト、ｘ＝０はγ−Ｆｅ２Ｏ３でマグヘマイト、その中間（ｘ＝０〜１）のスピネル型酸化鉄も磁性酸化鉄であり、これ等の超常磁性酸化鉄粒子が用いられる。
【００２３】
本発明における磁性酸化鉄微粒子の組成ＭＯＦｅ２Ｏ３（Ｍは２価金属）のＭとして、Ｆｅ以外にＭｇを選択したのは、Ｍｇには生体適応性があるためであるが、他の２価金属でも目的に応じて選択して用いることができる。
【００２４】
本発明における磁性酸化鉄微粒子は保磁力が０〜１．６ｋＡ／ｍであることが好ましい。１．６ｋＡ／ｍ以上の大きな保磁力の場合は残留磁化を生じて磁気凝集し易くなる。より好ましくは０．０５〜１．２ｋＡ／ｍである。飽和磁化は５０〜９０Ａｍ２／ｋｇである。５０Ａｍ２／ｋｇ以下の飽和磁化では磁性が不足しており、９０Ａｍ２／ｋｇ以上はスピネル酸化鉄粒子では得難い。より好ましくは５５〜８５Ａｍ２／ｋｇである。
【００２５】
ここで無菌水溶液とは、毒性検査及びエンドトキシン検査において共に陰性である原薬水溶液である。
【００２６】
ここで単分散コロイドとは、いわゆる磁性酸化鉄微粒子の粒度分布が狭いことを意味し、具体的には、粒子径分布の標準偏差を平均粒子径で割った値に１００を掛けて計算される変動係数が、１５％以下であることを意味する。変動係数が１５％を越える場合には、粒度分布が均斉であるとは言い難い。より好ましくは１２％以下である。
【００２７】
本発明に係る磁性粒子含有医薬用原薬の磁性酸化鉄微粒子の濃度は、５〜５０ｍｇ／ｍｌが好ましい。５０ｍｇ／ｍｌを越える場合には、粒子間に働くファンデアワールス力の影響が大きくなって凝集が生起し易くなり好ましくない。５ｍｇ／ｍｌ未満では濃度が希薄すぎて実用的でない。好ましい濃度は１０〜４０ｍｇ／ｍｌである。
【００２８】
本発明に係る磁性粒子含有医薬用原薬のｐＨ値は７．０以上が好ましく、より好ましくは９．０〜１１．０である。
【００２９】
本発明に係る磁性粒子含有医薬用原薬の電気伝導度は１００μＳ以上であることが好ましい。
【００３０】
次に、本発明に係る磁性粒子医療用原薬の製造方法について述べる。
【００３１】
磁性酸化鉄微粒子の単分散コロイド水溶液は下記３工程により生成することができる。
【００３２】
即ち、（１）磁性酸化鉄微粒子を生成した後、（２）反応母液から反応時に副生した水可溶性副生塩類を常法により水洗除去して磁性酸化鉄微粒子のコロイド水溶液を精製し、（３）精製したコロイド水溶液の分散媒を超純水で置換して得ることができる。
【００３３】
本発明における磁性酸化鉄微粒子は、鉄塩水溶液とアルカリを用いる水溶液反応（湿式法という。）、または、酸化鉄粉を水素等の還元性ガス中で加熱還元する方法（乾式法という）等で合成することができる。
【００３４】
上記磁性酸化鉄微粒子の合成方法において、一般には共沈法や水酸化第一鉄コロイドの酸化反応などと呼ばれる湿式法で合成する。
【００３５】
共沈法とは、第一鉄塩水溶液Ｆｅ（ＩＩ）１モルと第二鉄塩水溶液Ｆｅ（ＩＩＩ）２モルとの混合水溶液にアルカリ水溶液を攪拌しながら加えると、Ｆｅ（ＩＩ）と２Ｆｅ（ＩＩＩ）の共沈反応が生起して黒色スピネル型磁性酸化鉄であるマグネタイト粒子が生成する反応である。この反応においてＦｅ以外の２価金属、例えばＭｇを添加した場合にはＭｇを含有したスピネル型磁性酸化鉄粒子が得られる。また、鉄塩濃度や混合温度などの反応条件により生成粒子の大きさが制御できるので、これらの反応条件を組み合わせることにより磁性酸化鉄微粒子を合成することができる。
【００３６】
水酸化第一鉄コロイドの酸化反応法とは、第一鉄塩水溶液にアルカリ水溶液を添加すると水酸化第一鉄コロイドが生成し、該水酸化第一鉄コロイドを含有する水溶液を加熱攪拌しながら空気等の酸素含有ガスを通気すると水酸化第一鉄コロイドの酸化反応により黒色磁性酸化鉄であるマグネタイト粒子が生成する反応である。上記の共沈法と同様にＦｅ以外の２価金属を添加した場合には添加金属を含有したスピネル酸化鉄粒子が得られる。また、この反応条件を組み合わせて制御することにより磁性酸化鉄微粒子を合成することができる。
【００３７】
磁性酸化鉄微粒子を含有するコロイド溶液の水洗は、常法に従って行えばよい。
【００３８】
また、遠心分離機により固液分離した後、超純水を加えて再分散する方法で実施できる。
【００３９】
そして、コロイド水溶液の濃度を超純水で５〜５０ｍｇ／ｍｌに希釈調整して磁性酸化鉄微粒子が無菌水に単分散している磁性粒子含有医薬用原薬を得ることができる。
【００４０】
本発明に係る医療用原薬は、種々の用途に用いることができ、例えば、薬物の送達法であるＤＤＳ、レントゲンやＭＲＩ（磁気共鳴）等で用いられるＣＴ診断及び温熱治療法などの治療用等である。
【００４１】
本発明に係る医療用原薬中の磁性酸化鉄微粒子を生体適応性物質に均一に分散・担持させて、前記各種用途に用いることができる。
【００４２】
本発明でいう生体適応性物質とは、例えば、リン脂質、タンパク質及び水溶性ポリマー等であり、通常の医薬に用いられている物質である。
【００４３】
＜作用＞
本発明者は、鋭意研究を重ねた結果、磁性粒子として微細な磁性酸化鉄粒子の超常磁性に着目し、超常磁性酸化鉄粒子からなる単分散コロイド水溶液の分散安定条件を見出した。
【００４４】
超常磁性を発現するのは保磁力がゼロの強磁性体である。即ち、強磁性体の粒子が単磁区構造であっても大きな粒子の場合は、外部磁界を印加して磁化した後外部磁界から開放すると残留磁化を生じるが、粒子が極微細になると保磁力が減少して遂にはゼロとなり、外部磁界を印加すると磁化するが外部磁界から開放した後には残留磁化を生じない。この現象は熱擾乱作用によるものであり、このような強磁性微粒子を超常磁性であるという。
【００４５】
本発明に係る医療用原薬は、表面磁束１００ガウスの永久磁石を近付けても凝集せず、長期安定な単分散コロイド水溶液である。これは、磁性酸化鉄粒子の飽和磁化が５０〜９０Ａｍ２／ｋｇの強磁性体であることと矛盾する現象であるように思えるが、飽和磁化値とは磁性酸化鉄粒子を粉末状で測定した時の単位重量当たりの磁化値を表わしたものであるから、これを粒子１個当たりの磁化値に換算すると、微粒子であるほど単位重量当たりの総粒子個数が多くなり、１個当たりの磁化値は小さな値となる。
従って、単分散している超常磁性酸化鉄粒子１個当たりの磁化値は当然小さく、粒子間の磁気凝集も外部磁界の影響も受け難く安定した分散状態を保つことができるのである。
【００４６】
また、磁性粒子として超常磁性酸化鉄を用いるのは、酸化鉄には生体適応性があるからであり、微粒子ほど生体内からの排泄が容易となる。
【００４７】
ところで、原薬である磁性酸化鉄微粒子を生体適応物質に均一に分散しただけでは磁性粒子含有医薬としての磁気特性は不足であるが、製薬工程において、生体適応性物質中に単分散した磁性酸化鉄微粒子は、薬剤として造粒する際に集合して複合粒子となるので強磁性を発現する。この現象は超常磁性粒子でも粒子同士を数珠繋ぎ状にすると形状磁気異方性が生じて保磁力が大きくなり強磁性体化するという周知の現象で説明できる。即ち、超常磁性酸化鉄粒子を生体適応性物質と均一に分散混合して複合体を生成した後に所望の大きさに造粒すると、造粒粒子中の磁性粒子の数や集合形態により造粒粒子の磁気特性が異なるのである、超常磁性粒子を用いても磁性粒子含有医薬として必要な磁気特性を調整することができることを見出した。
【００４８】
本原薬を、例えば、癌の温熱療法における発熱剤の発熱体として磁性酸化鉄微粒子を用いる場合には、磁性酸化鉄微粒子が複数個から成る集合体をコアとし、リン脂質とカチオン性脂質から成る二重膜をシェルとするリポソーム状複合粒子を生成させて、用いることができる。
【実施例】
【００４９】
以下、実施例により本発明を具体的に説明する。但し、本発明は、これらの実施例のみに限定されるものではない。
【００５０】
尚、生成物の構造解析にはＸ線回折装置を用い、平均粒子径はＸ線回折線（３１１）の半値幅からシェラーの式を用いて算出した。
【００５１】
粒度分布は透過型電子顕微鏡ＴＥＭで観測した。さらに、デジタイザー分析により、平均粒子径および標準偏差値を求め、これらの値から、下式により変動係数を求めた。
変動係数（％）＝（標準偏差）×１００／（平均粒子径）
【００５２】
また、Ｆｅ２＋含有量はキレート滴定法により測定した。
【００５３】
磁気特性の測定には振動試料型磁力計ＶＳＭを用い１０ｋ／４πｋＡ／ｍの磁場で測定した。
【００５４】
生成物は無菌検査及び菌の残骸有無に関するエンドトキシン検査を行った。
【００５５】
生成物の電気伝導度は、電気伝導度計を用いて測定した。
【００５６】
磁性粒子含有医薬用原薬は表面磁束１００ガウスの永久磁石を用いて磁気凝集生起の有無を確認する。
【００５７】
実施例１
撹拌装置及び加熱装置を備えた５０００ｍｌの反応容器を用い、原料鉄塩と苛性ソーダは試薬特級を用い、また水はイオン交換水を用いた。
【００５８】
（１）超常磁性酸化鉄粒子の合成工程
水溶液濃度０．５モルの塩化第一鉄水溶液５００ｍｌと、濃度０．５モルの塩化第二鉄水溶液１０００ｍｌを反応容器に投入し、撹拌して第一鉄と第二鉄塩の混合水溶液を調整した後、加熱昇温した。この混合鉄塩水溶液が８０℃に昇温した時、予め準備した濃度１．０モルの苛性ソーダ水溶液２３００ｍｌを該混合水溶液に撹拌しながら添加した。添加が完了してから温度を８０℃に保持して６０分間撹拌をつづけた。生成物は磁石に感応する黒色を呈したコロイド水溶液であった。
ここに得たコロイド水溶液の一部を採取し、水洗ろ過したペーストを凍結乾燥して得られた粉末を分析した結果、平均粒子径が１０ｎｍのスピネル型結晶構造の粒子粉で、粒度分布の変動係数は７％であった。また、Ｆｅ２＋含有量が１７．５モル％の磁性酸化鉄粒子であり、磁気特性は飽和磁化σｓが６８Ａｍ２／ｋｇ、保磁力Ｈｃが０．４ｋＡ／ｍの超常磁性酸化鉄粒子であった。
【００５９】
（２）コロイド粒子の精製工程
生成した黒色コロイド水溶液中には黒色コロイド粒子の合成反応で副生した可溶性塩が混在しているので、イオン交換水を用いてデカンテーション法により、副生塩を水洗除去することにより黒色コロイド水溶液を精製した。
【００６０】
（３）磁性体含有医薬用原薬の精製工程（超純水への置換）
生成物の物性を評価するために採取した残りの黒色コロイド水溶液から１００ｍｌを良く攪拌しながら採取し、該コロイド水溶液を遠心分離機を用いて固液分離して分散媒を除去した。その後、同量の超純水を注入して超音波分散機を用いて再分散した。これを１サイクルとして５サイクル繰り返し行いコロイド水溶液の分散媒を超純水に置換した。次に、該コロイド水溶液に超純水を加えてコロイド粒子濃度を２２ｍｇ／ｍｌに調整して超音波分散機で分散しながら０．１規定の苛性ソーダ水溶液を添加してゼータ電位を−５５ｍｖに調整した。６０分後に超音波分散機を停止してコロイド水溶液を静置し、３６０分間放置した。
得られたコロイド水溶液には沈殿が生じていないこと、さらに表面磁束が１００ガウスの永久磁石を用いて磁気凝集しないことを観測した。このコロイド水溶液は毒性検査及びエンドトキシン検査を行い、何れも陰性であることを確認して、超常磁性酸化鉄粒子の単分散コロイド無菌水溶液１５０ｍｌｌを生成した。
得られたコロイド水溶液のｐＨは９．７、電気伝導度は２１０μＳであった。
【００６１】
実施例２
上記の工程（１）の超常磁性酸化鉄粒子の合成工程において、水溶液濃度が０．５モルの塩化第一鉄水溶液３００ｍｌと０．５モルの硫酸マグネシュウム水溶液２００ｍｌを用いた以外は、（２）及び（３）の各工程は共に実施例１と同じ条件で超常磁性酸化鉄粒子からなる濃度が２０ｍｇ／ｍｌの磁性粒子含有医薬用原薬を生成した。
【００６２】
ここに得たコロイド水溶液の一部を採取し水洗ろ過したペーストを凍結乾燥して得られた粉末を分析した結果、平均粒子径が８ｎｍのスピネル型結晶構造の粒子粉で、粒度分布の変動係数は７％であった。また、Ｆｅ２＋含有量が１４モル％，Ｍｇ２＋含有量が５．５モル％の磁性酸化鉄粒子であり、磁気特性は飽和磁化σｓが６３Ａｍ２／ｋｇ、保磁力Ｈｃが０．２ｋＡ／ｍの超常磁性酸化鉄粒子であった。
【００６３】
また、実施例１と同様にして分散媒液は超純水に置換し、コロイド分散液の濃度を２０ｍｇ／ｍｌに希釈すると同時に０．１規定の苛性ソーダ水溶液を添加してゼータ電位を−４５ｍｖに調整した。さらに表面磁束密度が１００ガウスの永久磁石を用いて磁気凝集しないことを観測した。このコロイド水溶液のエンドトキシン検査を行い陰性であることを確認して超常磁性酸化鉄粒子の単分散コロイド無菌水溶液１５０ｍｌを生成した。
得られたコロイド水溶液のｐＨは９．８、電気伝導度は２４０μＳであった。
【産業上の利用可能性】
【００６４】
本発明に係る磁性体含有医薬用原薬は、磁性酸化鉄微粒子の単分散コロイド無菌水溶液であるから、磁性体微粒子を生体適合性物質に均質に分散させた複合物からなる医薬を容易に合成することができ、しかも、製薬造粒工程においては微粒子の集合状態を調整することにより造粒粒子に強磁性体の機能を付与することができる。
また、液媒が界面活性剤などを含有しない原薬であり、しかも、超微粒子であることで投与後は体内からの排泄を容易にすることができるので、人体に投与後の安全性及び代謝・排泄に関して何ら問題を生じない原薬を提供することができる。