(57)【要約】【課題】  重症な肺炎の致死的作用を阻害し、そして同時に、潜在的に重症な副作用を最小限にする処置アプローチを提供すること。【解決手段】  重症な肺炎を処置または予防する方法であって、重症な肺炎を有するか、または重症な肺炎を有する危険性のある患者にＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを投与する工程を包含し、上記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩであり、上記患者が実証可能な感染を有し、上記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、約０．６６ｍｇ／ｋｇ／時間未満の投薬率での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等しい投薬率で連続静脈内注入によって投与される、方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
重症な肺炎を有するか、または重症な肺炎を有する危険性のある患者において重症な肺炎を処置または予防するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを含む、薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２００１年１０月１５日に出願された仮出願番号６０／３２８，８０６に対する優先権を主張し、その全体が、本明細書で参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、重症な肺炎を治療的に処置するための方法に関する。より具体的には、本発明は、重症な肺炎に関連する過増殖の生理学的経路または増幅された生理学的経路を減衰させるための、組織因子経路インヒビタータンパク質の投与に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
肺炎は、肺（肺胞腔および間質組織が挙げられる）の１以上の機能的要素の急性感染から生じる。米国では、毎年約２００万人の人々が、肺炎を発生し、そして、これらの人々のうちの４０，０００〜７０，０００人が死に至る。肺炎は、死因としての全疾患分類のうちの６番にあたり、最も一般的な致死性の院内（病院でかかる）感染である。市中肺炎（ＣＡＰ）は、米国において健康医療費に多大な衝撃を有し、これは概算で毎年１４０億ドルの直接費用および９０億ドルの損失賃金を占める（Ｌｙｎｃｈ  ＪＰ、Ｍａｒｔｉｎｅｚ  ＦＪ．Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ−ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｐｕｌｍ  Ｍｅｄ．１９９８；４：１６２〜１７２）。発展途上国において、下気道感染は、代表的に、主要な死因であるか、または感染性下痢のみでは第２位のいずれかである（Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ、Ｓｅｃ．６、Ｃｈ．７３、Ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、２０００）。
【０００４】
「重症な肺炎」として知られる状態は、種々の機構（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｈｏｒａｃｉｃ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（ＡＴＳ）が挙げられる）によって示される指針に従って特徴付けられる（Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２００１；１６３：１７３０〜１７５４）。例えば、ＡＴＳは、重症な肺炎の診断のための他の基準に加えて、少なくとも１つの主要な基準（例えば、機械的換気の必要性または敗血症ショック）を必要とする。一般的に、重症な肺炎は、例えば、炎症または凝固のような要因に起因する、急性肺疾患、肺炎症性疾患、または肺機能における任意の摂動から生じ得る。重症ＣＡＰの診断は、特に肺炎のためにＩＣＵに収容された患者に基づく。疫学的に、この患者集団は、全ＩＣＵ収容者の約１０％を構成する。肺炎に罹患するＩＣＵにいる患者は、ＣＡＰに罹患する一般の入院患者についての１５％より低い死亡率と比較して、全ＣＡＰ患者の最も高い死亡率（３０％〜４０％）を有する。
【０００５】
米国においては毎年、市中肺炎（ＣＡＰ）は、約４００万人の成人において診断され、そしてそのうちの６００，０００人が入院を必要とする。Ｆｉｎｅら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６、２４３〜５０、１９９７。全体的に、ＣＡＰの発生数は、年齢と共に増加し、そして６５歳以上において最も高い有病率が見出される。Ｍａｒｓｔｏｎら、Ａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．１９９７；１５７：１７０９〜１７１８．発生数はまた、共存症（例えば、慢性閉塞性肺疾患、ぜん息、真性糖尿病、アルコール症、免疫抑制、腎不全、慢性肝疾患、および冠動脈疾患）を有する患者において増加する。Ｍａｒｒｉｅ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｐｕｌｍ  Ｍｅｄ．１９９６；２：１９２〜１９７；Ｎｉｅｄｅｒｍａｎｎら、Ａｍ  Ｒｅｖ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｄｉｓ．１９９３；１４８：１４１８〜１４２６。
【０００６】
肺炎は、米国において感染からの死因では１番目であり、そして全死因の６番目である。肺炎関連死亡率は、１９７９年〜１９９２年で２２％増加し、１９９２年では、全肺炎関連死の８９％が年配（６５歳以上）の患者であった。肺炎死亡率およびインフルエンザ死亡率−米国、１９７９〜１９９４［公開された修正が、ＭＭＷＲ．１９９５；４４：７８２において見られる］．ＭＭＷＲ．１９９５；４４：５３５〜５３７を参照のこと。Ｆｉｎｅおよび共同研究者（１９９７）は、特定の共存疾患（新生物疾患、うっ血性心不全（ＣＨＦ）、脳血管疾患、腎疾患、および肝疾患）および特定の理学的検査の所見（変化した精神状態、増加した心拍数、増加した呼吸数、低下した収縮期血圧、および異常低体温または異常高体温）もまた、ＣＡＰ関連死亡率の増加に関連すると報告した。さらに、ＣＡＰは、米国において健康医療費に多大な衝撃を有し、これは概算で毎年１４０億ドルの直接費用および９０億ドルの損失賃金を占める（ＬｙｎｃｈおよびＭａｒｔｉｎｅｚ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｐｕｌｍ  Ｍｅｄ．１９９８；４：１６２〜１７２）。
【０００７】
組織因子経路インヒビター（ＴＦＰＩ）は、哺乳動物の血漿中に存在するタンパク質であり、そしてセリンプロテアーゼインヒビターである。Ｔｈｏｍａｓ，Ｂｕｌｌ．Ｊｏｈｎｓ  Ｈｏｐｋｉｎｓ  Ｈｏｓｐ．８１、２６（１９４７）；Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１４９、１２３（１９４７）；ＢｒｏｚｅおよびＭｉｌｅｔｉｃｈ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４、１８８６（１９８７）。ＴＦＰＩはまた、組織因子インヒビター、組織トロンボプラスチンインヒビター、第ＩＩＩ因子インヒビター、外因性経路インヒビター（ＥＰＩ）、およびリポタンパク質関連凝固インヒビター（ＬＡＣＩ）として公知である。「組織因子経路インヒビター」（ＴＦＰＩ）との名称は、１９９１年６月３０日に、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ
ｏｎ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓによって採択された。
【０００８】
血液凝固活性化は、流体血液の固体ゲルまたは凝血塊への転換である。さらに、凝固プロテアーゼの消費は、過剰な出血につながる。フィブリン自体は、全凝血塊の０．１５％を形成するに過ぎないが、主要な事象は、溶解性フィブリノーゲンの不溶性フィブリン鎖への転換である。この転換は、複雑な酵素カスケードにおける最終段階である。この成分（因子）は、チモーゲン（タンパク質分解酵素の不活性前駆体）として存在し、これらは、特定の部位でのタンパク質分解切断によって活性酵素に転換される。少量の１つの因子の活性化は、次の因子のより多量の形成などを触媒し、極度に迅速なフィブリンの形成を生じる増幅を生じる。
【０００９】
凝固は、第ＶＩＩａ因子を組織因子（ＴＦ）に曝す脈管損傷によって開始されると考えられ、これは、内皮の下の細胞上で発現される。第ＶＩＩａ因子−ＴＦ複合体は、第Ｘ因子を第Ｘａ因子へと切断し、そして第ＩＸ因子を第ＩＸａ因子へと切断する。ＴＦＰＩは、第ＶＩＩａ因子および第Ｘａ因子の両方に結合する。ＴＦＰＩ、第ＶＩＩａ因子（ＴＦと結合している）と第Ｘａ因子との間に形成された複合体は、維持された恒常性に必要な第Ｘａ因子および第ＩＸａ因子の形成をさらに阻害する。Ｂｒｏｚｅ，Ｊｒ．、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．４６：１０３（１９９５）。
【００１０】
血流に直接導入された、エンドトキシンを含む細菌産物による凝固カスケードの活性化は、動脈表面への過度のフィブリン沈積、ならびに、フィブリノーゲン、プロトロンビン、第Ｖ因子および第ＶＩＩＩ因子、ならびに血小板の枯渇を生じ得る。さらに、フィブリン溶解系が刺激され、フィブリン分解産物のさらなる形成が生じる。
【００１１】
凝固活性化が、細菌産物（例えば、エンドトキシン）によって明らかに開始されると同時に、反対の機構はまた、凝血、すなわち、フィブリン溶解系の活性化によって活性化されるようである。活性化された第ＸＩＩＩ因子は、プラスミノーゲンプロアクチベーターをプラスミノーゲンアクチベーターに転換し、これは次にプラスミノーゲンをプラスミンに転換して、それによって、凝血塊溶解を媒介する。それゆえに、血漿フィブリン溶解系の活性化はまた、出血傾向の一因となる。
【００１２】
内毒血症は、組織プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター（ＰＡＩ）の循環レベルの増加に関連する。このインヒビターは、組織プラスミノーゲンアクチベーター（ＴＡＰ）を迅速に不活化し、それによって、プラスミノーゲンのプラスミンへの転換を介するフィブリン溶解を促進する能力を妨げる。フィブリン溶解を損なうことにより、血管中へのフィブリン沈積を引き起こし得、従って、敗血症ショックに関連するＤＩＣの一因となる。
【００１３】
重症な肺炎および関連凝固障害の予防または処置のための満足のいく介入を同定するための努力が続いている。凝固経路を妨害する薬剤は、重症な肺炎の治療的処置または予防的処置としては、必ずしも効果的ではない。例えば、ヘパリンは、一般的に使用されている抗凝固剤である。しかし、ヘパリンの使用の管理は、困難である。なぜなら、ヘパリンは、過度の出血を誘発し得、そして、凝固異常を減衰させるが、生存利益は提供しないことが見出されているためである。例えば、Ａｏｋｉら、「Ａ  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｄｏｕｂｌｅ−ＢＬＩＮＤ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  Ｔｒｉａｌ  ｏｆ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃ  ａｎｄ  Ｕｎｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ  Ｈｅｐａｒｉｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ  Ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ  Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ」、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．７５、５４０〜４７（２００２）を参照のこと。幾つかの臨床試験では、主に劇症ＤＩＣが顕著な特徴である髄膜炎菌内毒血症において、ヘパリン処置による敗血症における死亡率の減少の実証は失敗に終わっている。例えば、Ｃｏｒｒｉｇａｎら、「Ｈｅｐａｒｉｎ  Ｔｈｒａｐｙ  ｉｎ  Ｓｅｐｔａｃｅｍｉａ  ｗｉｔｈ  Ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ  Ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ  Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｏｎ  Ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ  Ｄｅｆｅｃｔｓ」、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２８３：７７８〜７８２（１９７０）；Ｌａｓｃｈら、「Ｈｅｐａｒｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｄｉｆｆｕｓｅ  Ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ
Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ（ＤＩＣ）」、Ｔｈｒｏｍｂｏｓ．Ｄｉａｔｈｅｓ．Ｈａｅｍｏｒｒｈ．、３３：１０５（１９７４）；Ｓｔｒａｕｂ、「Ａ  Ｃａｓｅ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｈｅｐａｒｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ  Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ」、Ｔｈｒｏｍｂｏｓ．Ｄｉａｔｈｅｓ．Ｈａｅｍｏｒｒｈ．、３３：１０７（１９７４）を参照のこと。
【００１４】
組換えヒトａｌａ−ＴＦＰＩ（ＴＦＰＩアナログ）の投与は、敗血症の動物モデルにおいて生存率の改善を示してきた。例えば、米国特許第６，０６３，７６４号を参照のこと。内因性タンパク質として、ＴＦＰＩは、十分に許容される。静脈内注入または皮下注射によるＴＦＰＩ投与は、凝血能を低下させることが示されており、これは、増加したプロトロンビン時間（ＰＴ）として表わされる。動物およびヒトの研究において、ＰＴの延長は、血漿ＴＦＰＩの増加に対して線形的に関連する。Ａ．Ａ．Ｃｒｅａｓｅｙ、Ｓｅｐｓｉｓ  ３：１７３（１９９９）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
重症な肺炎の致死的作用を阻害し、そして同時に、潜在的に重症な副作用を最小限にする処置アプローチの必要性が、当該分野において存在したままである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
（発明の要旨）
（項目１）  重症な肺炎を処置または予防する方法であって、その方法は、以下：
重症な肺炎を有するか、または重症な肺炎を有する危険性のある患者にＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを投与する工程
を包含する、方法。
（項目２）  上記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩである、項目１に記載の方法。
（項目３）  上記患者が実証可能な感染を有する、項目１に記載の方法。
（項目４）  項目１に記載の方法であって、ここで上記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、約０．６６ｍｇ／ｋｇ／時間未満の投薬率での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等しい投薬率で連続静脈内注入によって投与される、方法。
（項目５）  項目４に記載の方法であって、ここで上記投薬率が、約０．０００２５〜約０．０５０ｍｇ／ｋｇ／時間の投薬率での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等しく、上記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、少なくとも約７２時間投与される、方法。
（項目６）  項目５に記載の方法であって、ここで上記投薬率が、約０．０１０〜約０．０４５ｍｇ／ｋｇ／時間の投薬率での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等しい、方法。
（項目７）  上記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩである、項目６に記載の方法。
（項目８）  項目６に記載の方法であって、ここで上記投薬率が、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時間の投薬率での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等しい、方法。
（項目９）  上記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩである、項目８に記載の方法。
（項目１０）  上記ＴＦＰＩまたは上記ＴＦＰＩアナログが、少なくとも約９６時間投与される、項目１に記載の方法。
（項目１１）  上記ＴＦＰＩアナログは、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩである、項目１０に記載の方法。
（項目１２）  項目１０に記載の方法であって、ここで上記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、約０．０２４〜約４．８ｍｇ／ｋｇの合計投薬量での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等しい合計投薬量を提供するように、連続静脈内注入によって投与される、方法。
（項目１３）  上記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩである、項目１２に記載の方法。
（項目１４）  項目１０に記載の方法であって、ここで上記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時間の投薬率での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等しい投薬率で連続静脈内注入によって投与される、方法。
（項目１５）  上記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩである、項目１４に記載の方法。
（項目１６）  項目１に記載の方法であって、ここで上記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、約０．００６〜約１．２ｍｇ／ｋｇの１日の投薬量での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等しい１日の投薬量を提供するように、連続静脈内注入によって投与される、方法。
（項目１７）  上記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩである、項目１６に記載の方法。
（項目１８）  項目１に記載の方法であって、ここで上記ＴＦＰＩアナログが、配列番号１のアミノ酸１９〜８９からなる第一のＫｕｎｉｔｚドメインを含む、方法。
（項目１９）  項目１８に記載の方法であって、ここで上記ＴＦＰＩアナログが、配列番号１のアミノ酸９０〜１６０からなる第二のＫｕｎｉｔｚドメインをさらに含む、方法。
（項目２０）  項目１に記載の方法であって、ここで上記ＴＦＰＩアナログが、配列番号１のアミノ酸１〜１６０を含む、方法。
（項目２１）  項目１に記載の方法であって、ここで上記ＴＦＰＩアナログが、配列番号１のアミノ酸９０〜１６０からなる第二のＫｕｎｉｔｚドメインを含む、方法。
（項目２２）  上記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩである、項目２１に記載の方法。
（項目２３）  項目１に記載の方法であって、ここで上記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを含む凍結乾燥した組成物から調製される、方法。
（項目２４）  上記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩである、項目２３に記載の方法。
（項目２５）  項目１に記載の方法であって、上記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、アルギニンを含む処方物として投与される、方法。
（項目２６）
上記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩである、項目２５に記載の方法。
（項目２７）  項目１に記載の方法であって、上記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、クエン酸塩を含む処方物として投与される、方法。
（項目２８）  上記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩである、項目２７に記載の方法。
（項目２９）  項目１に記載の方法であって、上記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、約３００ｍＭのアルギニン塩酸塩および約２０ｍＭのクエン酸ナトリウムを含み、かつ約５．５のｐＨを有する処方物中で、約０．１５ｍｇ／ｍｌの濃度を有する、方法。
（項目３０）  上記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩである、項目２９に記載の方法。
（項目３１）  項目１に記載の方法であって、上記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与と同時に、またはその投与の２４時間以内に、さらなる薬剤を投与する工程をさらに包含し、そのさらなる薬剤が、抗生物質、抗体、エンドトキシンアンタゴニスト、抗擬血活性を有する組織因子アナログ、免疫賦活剤、細胞接着ブロッカー、へパリン、ＢＰＩタンパク質、ＩＬ−１アンタゴニスト、ｐａｆアーゼ（ＰＡＦ酵素インヒビター）、ＴＮＦインヒビター、ＩＬ−６インヒビターおよび補体のインヒビターからなる群から選択される、方法。
（項目３２）  上記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩである、項目３１に記載の方法。
（項目３３）  項目３１に記載の方法であって、ここで上記さらなる薬剤が抗体であり、その抗体は、ＴＮＦ、ＩＬ−６およびＭ−ＣＳＦからなる群から選択される抗原に特異的に結合する、方法。
（項目３４）  上記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩである、項目３３に記載の方法。
（項目３５）  重症な肺炎を処置するための方法であって、その方法は、以下：
（ｉ）ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログおよび（ｉｉ）抗生物質、モノクローナル抗体、サイトカインインヒビターおよび補体インヒビターからなる群から選択されるさらなる薬剤を患者に投与する工程
を包含する、方法。
（項目３６）  上記ＴＦＰＩアナログが、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩである、項目３５に記載の方法。
（項目３７）  項目３５に記載の方法であって、上記患者は実証可能な感染を有している、方法。
（項目３８）  項目３５に記載の方法であって、ここで上記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、約０．６６ｍｇ／ｋｇ／時間未満の投薬率での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等しい投薬量で、連続静脈内注入によって投与される、方法。
（項目３９）  項目３８に記載の方法であって、ここで上記投薬率が、約０．０００２５〜約０．０５０ｍｇ／ｋｇ／時間の投薬率での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等しい、方法。
【００１７】
本発明の１つの実施形態は、重症な肺炎に罹患するか、またはその発症の危険性にある患者にＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを投与する工程を包含する、重症な肺炎を予防または処置する方法である。幾つかの実施形態において、患者は、実証可能な感染を有する。
【００１８】
本発明の別の実施形態は、重症な肺炎を処置するための方法であって、ＴＦＰＩまたはＴＦＩアナログからなる群より選択される薬剤の持続的静脈内注入を、患者に投与する工程を包含する。幾つかの実施形態において、患者は、実証可能な感染を有する。
【００１９】
他の実施形態は、上記の実施形態のいずれかを包含し、ここで、このＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは、約０．６６ｍｇ／ｋｇ／時間より低い投薬率での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な投薬率で、持続的静脈内注入によって投与される。好ましい実施形態において、この投薬率は、約０．０００２５〜約０．０５０ｍｇ／ｋｇ／時間の投薬率での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等価である。より好ましい実施形態において、この投薬率は、約０．０１０〜約０．０４５ｍｇ／ｋｇ／時間の投薬率での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等価である。なおより好ましい実施形態において、このＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時間の投薬率での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与と等価な投薬率で投与される。別の好ましい実施形態において、この投薬率は、約０．０２４〜約４．８ｍｇ／ｋｇの合計投薬量での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等価な合計投薬量を提供するように投与される。別の好ましい実施形態において、この投薬率は、少なくとも約０．００６ｍｇ／ｋｇおよび約１．２ｍｇ／ｋｇより低い毎日の投薬量での参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等価な毎日の投薬量を提供するように投与される。
【００２０】
他の実施形態は、上記の実施形態のいずれかを包含し、ここで、このＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは、少なくとも７２時間で投与される。好ましい実施形態において、このＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは、少なくとも９６時間で投与される。
【００２１】
他の実施形態は、上記の任意の実施形態を包含し、ここで、このＴＦＰＩアナログは、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩである。
【００２２】
他の実施形態は、上記の実施形態のいずれかを包含し、ここで、このＴＦＰＩアナログは、配列番号１のアミノ酸１９〜８９からなる第１のＫｕｎｉｔｚドメインを含む。好ましい実施形態において、このＴＦＰＩアナログは、配列番号１のアミノ酸９０〜１６０からなる第２のＫｕｎｉｔｚドメインをさらに含む。
【００２３】
他の実施形態は、上記の実施形態のいずれかを包含し、ここで、このＴＦＰＩアナログは、配列番号１のアミノ酸１〜１６０を含むか、または、このＴＦＰＩアナログは、配列番号１のアミノ酸９０〜１６０からなる第２のＫｕｎｉｔｚドメインを含む。
【００２４】
他の実施形態は、上記の実施形態のいずれかを包含し、ここで、このＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを含む凍結乾燥組成物から調製される。
【００２５】
他の実施形態は、上記の実施形態のいずれかを包含し、ここで、このＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは、アルギニンを含む処方物として投与される。
【００２６】
他の実施形態は、前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、クエン酸を含む処方物として投与される、任意の上記実施形態を包含する。
【００２７】
他の実施形態は、前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、約３００ｍＭ塩酸アルギニンおよび約２０ｍＭクエン酸ナトリウムを含む約５．５のｐＨを有する処方物中において、約０．１５ｍｇ／ｍｌの濃度を有する、任意の上記実施形態を包含する。
【００２８】
他の実施形態は、以下の工程をさらに包含する任意の上記実施形態を含む：前記ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与と同時またはその２４時間以内に、抗生物質、抗体、エンドトキシンアンタゴニスト、抗凝固薬活性を有する組織因子アナログ、免疫刺激薬、細胞接着ブロッカー、ヘパリン、ＢＰＩタンパク質、ＩＬ−１アンタゴニスト、ｐａｆアーゼ（ｐａｆａｓｅ）（ＰＡＦ酵素インヒビター）、ＴＮＦインヒビター、ＩＬ−６インヒビター、および補体のインヒビターからなる群から選択されるさらなる薬剤を投与する工程。好ましい実施形態において、前記さらなる薬剤は、ＴＮＦ、ＩＬ−６、およびＭ−ＣＳＦからなる群から選択される抗原に特異的に結合する抗体である。
【００２９】
本発明のさらなる実施形態は、詳細な説明と共に以下に参照される図面を考慮して明らかである。
【００３０】
（発明の詳細な説明）
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与は、重症な肺炎の予防および処置において有効である。ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの連続的な低投薬量投与（本明細書中以下、「低投薬量ＴＦＰＩ投与」）はまた、重症な肺炎の予防および処置において有効である。ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投与（特に、低投薬量投与）は、急性の炎症または慢性の炎症（特に、重症な肺炎）を抑制するかまたは低減する。低投薬量ＴＦＰＩ投与が少なくとも３日間続く場合、重症な肺炎に由来する死の危険性が、低減する一方、有害な副作用（特に、出血障害）由来の合併症の割合は、最小化され得る。低投薬量ＴＦＰＩ投与のさらなる利点は、十分高い投薬量で、ＴＦＰＩの血漿濃度を低下し得る、寛容効果を回避することである。寛容効果は、約８５０ｎｇ／ｍｌの血漿ＴＦＰＩ濃度で最大の半分で刺激される一方、低投薬量ＴＦＰＩ投与を用いると、血漿レベルは、一般的に５００ｎｇ／ｍｌ未満にとどまる。低投薬量ＴＦＰＩ投与は、一般的に、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの連続的な静脈内注入によって実施される。
【００３１】
（ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログ）
本明細書中で使用される場合、「ＴＦＰＩ」は、配列番号１に示される２７６アミノ酸残基配列を有し、約３８，０００ダルトンの分子量を有する、成熟血清糖タンパク質をいう。このＴＦＰＩは、組織因子活性（従って、凝固活性化）の天然のインヒビターである。米国特許第５，１１０，７３０号は、組織因子（ＴＦ）を記載し、米国特許第５，１０６，８３３号は、ＴＦＰＩを記載する。ＴＦＰＩ  ｃＤＮＡのクローニングは、Ｗｕｎら、米国特許第４，９６６，８５２号に記載される。ＴＦＰＩは、プロテアーゼインヒビターであり、３個のＫｕｎｉｔｚドメインを有し、これらの２つは、それぞれ、第ＶＩＩ因子および第Ｘａ因子と相互作用することが公知である。第３のドメインの機能は、未知のままである。ＴＦＰＩは、不活性の、第Ｘａ因子：ＴＦＰＩ；第ＶＩＩａ因子：組織因子四元複合体を形成することによって、凝固の開始をインビボで制限するように機能すると考えられる。Ｒａｐａｐｏｒｔ，Ｂｌｏｏｄ  ７３：３５９−３６５（１９８９）およびＢｒｏｚｅら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２９：７５３９−７５４６（１９９０）による総説を参照のこと。ＴＦＰＩの多くの構造特徴は、他の良く研究されたプロテアーゼインヒビターとの相同性から推測され得る。ＴＦＰＩは、酵素ではなく、おそらく、化学量論的様式で（すなわち、ＴＦＰＩのＫｕｎｉｔｚドメインの１つが１つのプロテアーゼ分子を阻害する）そのプロテアーゼ標的を阻害する。好ましくは、Ｋｕｎｉｔｚドメイン１および／または２は、本発明のＴＦＰＩ分子中に存在する。Ｋｕｎｉｔｚドメイン３の機能は、未知である。
【００３２】
「ＴＦＰＩアナログ」は、改変がＴＦＰＩ生物学的活性を破壊しない限り、１つ以上のアミノ酸付加もしくは置換（一般的に、天然に保存される）、１つ以上のアミノ酸欠失（例えば、ＴＦＰＩフラグメント）、または１つ以上のアミノ酸に対する１つ以上の化学的部分の付加で、改変されたＴＦＰＩ誘導体である。ポリペプチドアナログの作製方法は、当該分野で公知であり、以下にさらに記載される。好ましいＴＦＰＩアナログは、Ｎ−Ｌ−アラニル−ＴＦＰＩ（ａｌａ−ＴＦＰＩ）であり、このアミノ酸配列は、配列番号２に示される。ＴＦＰＩアナログは、下記されるような生物活性アッセイによって決定されるような、ＴＦＰＩの活性のいくつかの測定法を保持する。ＴＦＰＩおよびアナログに対する好ましい生体活性アッセイは、プロトロンビン時間（ＰＴ）アッセイである（以下を参照のこと）。
【００３３】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログは、グリコシル化されているかグリコシル化されていないかのいずれかであり得る。ＴＦＰＩのアナログは、米国特許第５，１０６，８３３号に記載される。Ａｌａ−ＴＦＰＩは、国際薬物名「ティファコジン（ｔｉｆａｃｏｇｉｎ）」でもまた公知であるＴＦＰＩアナログである。ａｌａ−ＴＦＰＩは、成熟全長ヒトＴＦＰＩの全アミノ酸配列およびそのアミノ末端にさらなるアラニン残基を含む。ａｌａ−ＴＦＰＩのアミノ末端アラニン残基は、Ｅ．ｃｏｌｉ発現を改善し、切断しなければアミノ末端メチオニン残基であるものの切断を実施するように、ＴＦＰＩ配列に遺伝子操作される。米国特許第５，２１２，０９１号を参照のこと。
【００３４】
特に好ましいＴＦＰＩアナログは、性質が保存される置換（すなわち、これらの側鎖に関連するアミノ酸のファミリー内で生じる置換）を含む。具体的には、アミノ酸は、一般的に以下の４つのファミリーに分類される：（１）酸性−−アスパラギン酸およびグルタミン酸；（２）塩基性−−リジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性−−アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；ならびに（４）非荷電性極性−−グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、およびチロシン。フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは、時々、芳香族アミノ酸として分類される。例えば、ロイシンのイソロイシンまたはバリンでの単独置換、アスパラギン酸のグルタミン酸での単独置換、トレオニンのセリンでの単独置換、または１つのアミノ酸の構造的に関連するアミノ酸での同様に保存的な置換は、生物学的活性に対して大きな効果を有さないことが、適度に予測される。例えば、分子の所望の機能がインタクトのままである限り、目的のポリペプチドは、約１〜７０までの保存的アミノ酸置換または非保存的アミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６−５０、１５−２５、５−１０、または１〜７０までの任意の整数）を含み得る。当業者は、本明細書中に記載されるような残存生物学的活性を適度に有する可能性のあるように改変され得る目的の分子の領域を容易に決定し得る。
【００３５】
「相同性」は、２つのポリヌクレオチドまたは２つのポリペプチド部分の間のパーセント類似性をいう。２つのポリペプチド配列は、これらの配列が少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約７５％、より好ましくは少なくとも約８０％−８５％、好ましくは少なくとも約９０％、そして最も好ましくは少なくとも約９５％−９８％の配列相同性、または特定の範囲の間での任意のパーセント相同性を、分子の規定された長さにわたって示す場合、互いに「実質的に相同」である。本明細書中で使用される場合、「実質的に相同」はまた、特定のポリペプチド配列に対して完全な相同性を示す配列をいう。
【００３６】
一般的に、「同一性」は、２つのポリペプチド配列のそれぞれ正確なアミノ酸  対  アミノ酸の一致をいう。パーセント同一性は、配列を整列し、２つの整列された配列の間の一致の正確な数を数え、より短い配列の長さによって除算し、そしてその結果に１００を掛けることによる、２つの分子の間の配列情報の直接比較によって決定され得る。
【００３７】
好ましくは、天然に存在するＴＦＰＩアナログまたは天然に存在しないＴＦＰＩアナログは、配列番号１に由来するＴＦＰＩに対して、少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％または９５％以上相同である、アミノ酸配列を有する。より好ましくは、これらの分子は、９８％または９９％相同である。パーセント相同性は、１２のギャップ開放ペナルティーおよび２のギャップ伸長ペナルティー、ならびに６２のＢＬＯＳＵＭマトリクスを用いたアフィンギャップ検索を使用する、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを使用して決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９（１９８１）に教示される。
【００３８】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログの生物学的活性は、プロトロンビンアッセイによって決定され得る。適切なプロトロンビンアッセイは、米国特許第５，８８８，９６８号およびＷＯ９６／４０７８４に記載される。簡潔には、プロトロンビン時間は、凝固測定器（例えば、Ｏｒｇａｎｏｎ  Ｔｅｋｎｉｋａ製の、Ｃｏａｇ−Ａ−Ｍａｔｅ  ＭＴＸ  ＩＩ）を使用して決定され得る。適切なアッセイ緩衝液は、１ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミンを含み、ｐＨ７．５に調整された、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓである。必要なさらなる試薬は、正常ヒト血漿（例えば、Ｏｒｇａｎｏｎ  Ｔｅｋｎｉｋａ製の「Ｖｅｒｉｆｙ  １」）、トロンボプラスチン試薬（例えば、Ｏｒｇａｎｏｎ  Ｔｅｋｎｉｋａ製の「Ｓｉｍｐｌａｓｔｉｎ  Ｅｘｃｅｌ」）、およびＴＦＰＩ標準試薬（例えば、アッセイ緩衝液１ｍｌ当たり、２０μｇの１００％純粋ａｌａ−ＴＦＰＩ（またはその等価物））である。標準曲線は、一連のＴＦＰＩ標準溶液の希釈（例えば、最終濃度は、１〜５μｇ／ｍｌの範囲にわたる）の凝固時間を分析することによって得られる。凝固時間の決定のために、サンプルまたはＴＦＰＩ標準が、まずアッセイ緩衝液中に希釈される。次いで、正常ヒト血漿が、添加される。凝固反応は、トロンボプラスチン試薬の添加によって開始される。次いで、装置は、凝固時間を記録する。線形ＴＦＰＩ標準曲線は、凝固時間の対数  対  ＴＦＰＩ濃度の対数のプロットから得られる。標準曲線は、１００％純粋な標準の等価なＴＦＰＩ濃度に一致するように、ＴＦＰＩ標準の純度に基づいて調整される。例えば、標準が、９７％生化学的に純粋であるａｌａ−ＴＦＰＩの調製物（すなわち、これは、ＴＦＰＩの生物学的活性を有さない分子種を３重量％含む）である場合、各標準の希釈物の濃度は、実際のＴＦＰＩの濃度を与えるように０．９７を掛けられる。従って、９７％純粋である調製物１ｍｌ当たりの実際の重量に基づいて１．０μｇ／ｍｌである、ＴＦＰＩ標準は、１．０×０．９７の濃度（すなわち、０．９７μｇ／ｍｌ）に等価であり、そのように処理される。
【００３９】
（ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログの入手）
本発明の方法において使用されるＴＦＰＩおよびＴＦＰＩのアナログは、細胞または組織から単離および精製され得るか、化学的に合成され得るか、あるいは原核生物細胞または真核生物細胞のいずれかにおいて組換え産生され得る。
【００４０】
ＴＦＰＩは、いくつかの方法によって単離され得る。例えば、ＴＦＰＩを分泌する細胞としては、老化内皮細胞、約３〜４日間ＴＮＦで処理された若い内皮細胞、肝細胞、および肝癌細胞が挙げられる。ＴＦＰＩは、従来の方法によって精製され得、この方法としては、Ｐｅｄｅｒｓｅｎら、１９９０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５，１６７８６−９３，Ｎｏｖｏｔｎｙら、１９８９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４，１８８３２−３７，Ｎｏｖｏｔｎｙら、１９９１，Ｂｌｏｏｄ  ７８，３９４−４００，Ｗｕｎら、１９９０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５，１６０９６−１０１，およびＢｒｏｚｅら、１９８７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４，１８８６−９０のクロマトグラフィー法が挙げられる。ＴＦＰＩは、血流中に見られ、血液から精製され得る（Ｐｅｄｅｒｓｅｎら、１９９０を参照のこと）。
【００４１】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩ改変体は、アミノ酸配列を合成するための化学的方法を使用して（例えば、固相技術を使用した直接ペプチド合成によって）産生され得る（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４９−２１５４，１９６３；Ｒｏｂｅｒｇｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６９，２０２−２０４，１９９５）。タンパク質合成は、手動技術を使用してかまたは自動制御によって実施され得る。自動合成は、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３１Ａ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して達成され得る。必要に応じて、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩ改変体のフラグメントは、別々に合成され得、化学的方法を使用して合わせられ、全長分子を生成し得る。
【００４２】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログは、米国特許第４，９６６，８５２号に示されるように組換え的に産生され得る。例えば、所望されるタンパク質に関するｃＤＮＡは、原核生物中または真核生物中における発現のためにプラスミドに組込まれ得る。米国特許第４，８４７，２０１号は、微生物の特定のＤＮＡ配列での形質転換およびこれらのＤＮＡ配列の発現について、詳細を提供する。微生物を使用したタンパク質の発現に関する詳細を提供する、当業者に公知の多くの他の参考文献が存在する。これらの多く（例えば、Ｍａｎｉａｔａｓら、１９８２，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ）が、米国特許第４，８４７，２０１号に引用される。
【００４３】
微生物を形質転換し、そして、これらを使用して、ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログを発現するための、種々の技術が公知である。以下は、可能なアプローチの単なる例である。ＴＦＰＩ  ＤＮＡ配列は、単離され、そして適切な制御配列に連結されなければならない。ＴＦＰＩ  ＤＮＡ配列は、米国特許第４，９６６，８５２号に示され、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｈｅｉｍのような企業から市販されるプラスミド、（例えば、ｐＵＮＣ１３またはｐＢＲ３８２２）に組込まれ得る。一旦、ＴＦＰＩ  ＤＮＡが、ベクター中に挿入されると、このＤＮＡは、適切な宿主にクローン化され得る。ＤＮＡは、Ｍｕｌｌｉｓに対する米国特許第４，６８３，２０２号およびＭｕｌｌｉｓらに対する米国特許第４，６８３，１９５号に示されるような技術によって増幅され得る。ＴＦＰＩ  ｃＤＮＡは、細胞（例えば、肝癌細胞（例えば、ＨｅｐＧ２およびＳＫＨｅｐ））を誘導し、ＴＦＰＩ  ｍＲＮＡを作製し、次いでｍＲＮＡを同定および単離し、ＴＦＰＩに対するｃＤＮＡを得るためにこれを逆転写することによって得られ得る。発現ベクターがＥ．ｃｏｌｉのような宿主に形質転換された後、この細菌は、発酵され得、タンパク質が発現され得る。好ましい原核微生物は、細菌であり、Ｅ．ｃｏｌｉは、特に好ましい。本発明で有用な好ましい微生物は、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｋ−１２（Ｂｕｄａｐｅｓｔ条約の条項の下で、１９８４年２月１４日にＡＴＣＣに寄託されたＭＭ２９４株（受託番号３９６０７））である。
【００４４】
もちろん、多細胞生物由来の真核生物宿主細胞培養物において、遺伝子コードポリペプチドを発現することもまた可能である。例えば、Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ，１９７３，ＣｒｕｚおよびＰａｔｔｅｒｓｏｎ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓを参照のこと。有用な哺乳動物細胞株としては、マウス骨髄腫Ｎ５１、ＶＥＲＯ、ＨｅＬａ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ，Ｃ１２７、Ｈｅｐ  Ｇ２、およびＳＫ
Ｈｅｐが挙げられる。ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログはまた、バキュロウイルス感染昆虫細胞において発現され得る（上記に参照される、米国特許第４，８４７，２０１号もまた参照のこと）。Ｐｅｄｅｒｓｅｎら、１９９０，Ｊ．ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２６５：１６７８６−１６７９３もまた参照のこと。真核生物細胞用の発現ベクターは、通常、哺乳動物細胞と適合性のプロモーターおよび制御配列（例えば、Ｓｉｍｉａｎ  Ｖｉｒｕｓ  ４０（ＳＶ４０）由来の通常使用される初期プロモーターおよび後期プロモーター（Ｆｉｅｒｓら、１９７８，Ｎａｔｕｒｅ，２７３：１１３）、または他のウイルスプロモーター（例えば、ポリオーマ、Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  ２、ウシパピローマウイルス、またはトリ肉腫ウイルス由来のようなウイルスプロモーター）、または免疫グロブリンプロモーターおよび熱ショックプロモーター）を含む。哺乳動物宿主系形質転換の一般的な局面は、Ａｘｅｌによって米国特許第４，３９９，２１６号に記載された。「エンハンサー」領域は、発現を最適化することにおいて重要であり、これらは、一般的に、プロモーター領域の上流に見出される配列であることが、ここでまた、明らかになる。複製起点は、必要な場合、ウイルス供給源から得られ得る。しかし、染色体への組み込みは、真核生物におけるＤＮＡ複製のための共通の機構である。ここで、植物細胞もまた、宿主として利用可能であり、植物細胞と適合性の制御配列（ノパリンシンターゼプロモーターおよびポリアデニル化シグナル配列など（Ｄｅｐｉｃｋｅｒ，Ａら、１９８２、Ｊ．Ｍｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎ．，１：５６１））は、入手可能である。植物細胞の形質転換のための方法およびベクターは、ＷＯ８５／０４８９９に開示される。
【００４５】
哺乳動物細胞において発現されるＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログの精製のために使用され得る方法は、ｈｅｐａｒｉｎ−Ｓｅｐａｒｏｓｅ、ＭｏｎｏＱ、ＭｏｎｏＳ、および逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーの連続的適用を含む。Ｐｅｄｅｒｓｅｎら（上述）；Ｎｏｖｏｔｎｙら、１９８９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１８８３２−１８８３７；Ｎｏｖｏｔｎｙら、１９９１，Ｂｌｏｏｄ，７８：３９４−４００；Ｗｕｎら、１９９０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１６０９６−１６１０１；Ｂｒｏｚｅら、１９８７，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ），８４：１８８６−１８９０；米国特許第５，１０６，８３３号；および米国特許第５，４６６，７８３号を参照のこと。これらの参考文献は、哺乳動物産生ＴＦＰＩを精製するための種々の方法を記載する。
【００４６】
ＴＦＰＩはまた、哺乳動物細胞宿主（マウスＣ１２７細胞（Ｄａｙら、Ｂｌｏｏｄ  ７６，１５３８−４５，１９９０）、胎仔ハムスター腎臓細胞（Ｐｅｄｅｒｓｅｎら、１９９０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞、およびヒトＳＫ肝癌細胞など）を使用して組換えグリコシル化型タンパク質として発現され得る。Ｃ１２７  ＴＦＰＩは、動物の研究において使用され、ウサギにおける組織因子誘導性脈管内凝固の阻害（Ｄａｙら（上述））、イヌにおける血栓崩壊後の動脈再閉塞の予防（Ｈａｓｋｅｌら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ８４：８２１−８２７（１９９１））、およびヒヒにおけるＥ．ｃｏｌｉ肺血症モデルにおける死亡率の減少（Ｃｒｅａｓｅｙら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：２８５０（１９９３））において効果的であることが示された。ａｌａ−ＴＦＰＩは、Ｅ．ｃｏｌｉ宿主細胞を使用して組換え非グリコシル化型タンパク質として発現され得る。Ｅ．ｃｏｌｉにおいて産生される組換えタンパク質のインビトロ再折りたたみによって高度に活性なａｌａ−ＴＦＰＩを産生する方法が、記載される。例えば、ＷＯ９６／４０７８４を参照のこと。
【００４７】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログはまた、細菌または酵母において産生され、続いて精製され得る。一般的に米国特許第５，２１２，０９１号；同第６，０６３，７６４号；および同第６，１０３，５００号またはＷＯ９６／４０７８４に示される手順が使用され得る。ａｌａ−ＴＦＰＩおよび他のＴＦＰＩアナログは、ＷＯ９６／４０７８４およびＧｕｓｔａｆｓｏｎら、Ｐｒｏｔ．Ｅｘｐｒｅｓｓ．Ｐｕｒ．５：２３３（１９９４）（これらは、本明細書中に参考として援用される）に従って、精製され、可溶化され、そして再折りたたみされ得る。例えば、ＷＯ９６／４０７８４の実施例９に従って調製される場合、成熟しており、適切に折りたたまれ、生物学的に活性であるａｌａ−ＴＦＰとして、総タンパク質の約８５重量％〜９０重量％のａｌａ−ＴＦＰＩおよび１つ以上の酸化メチオニン残基を有する約１０重量％〜１５重量％のａｌａ−ＴＦＰＩを含む、ａｌａ−ＴＦＰＩの調製物が得られ得る。これらの酸化形態は、プロトロンビンアッセイによって決定される場合、非誘導化ａｌａ−ＴＦＰＩの生物学的活性に等価である生物学的活性を有し、本明細書中において記載される本発明において活性であることが予想される。残存物質は、ａｌａ−ＴＦＰＩの種々の改変形態を含み、この形態としては、二量体化形態、凝集化形態、およびアセチル化形態が挙げられる。
【００４８】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログは、有意な数のシステイン残基を有し、そして米国特許第４，９２９，７００号に示される手順は、ＴＦＰＩ再折りたたみに関連する。ＴＦＰＩおよびアナログは、種々のクロマトグラフィー法（例えば、上記されるクロマトグラフィー法）によって緩衝溶液から精製され得る。所望の場合、米国特許第４，９２９，７００号に示される方法が、使用され得る。任意の方法は、ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログを精製するために使用され得、ヒトへの投与に適切な精製度および活性のレベルを得る。
【００４９】
（治療法および組成物）
一般的に、ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログは、組織因子発現のアップレギュレーションに起因して生じるような疾患を処置または予防するために有用であり、従って、ＴＦ活性は、ＴＮＦ、ＩＬ−１または他のサイトカインによって生じる。ＴＦＰＩ投与（および特に、低投薬量ＴＦＰＩ投与）は、患者において、サイトカイン（例えば、ＩＬ−６）の濃度を低下させ得る。低投薬量ＴＦＰＩ投与は、一般に、炎症異常および凝固異常（急性炎症状態および慢性炎症状態（例えば、重症な肺炎）が挙げられる）を処置するために有用である。
【００５０】
「重症な肺炎」は、Ａｍｅｒｉｃａｌ  Ｔｈｏｒａｃｉｃ  Ｓｏｃｉｅｔｙによって示される指針に従って規定される。具体的には、重症な肺炎は、肺炎の診断およびａ）２つの主要な基準の１つ、ｂ）３つの主要でない基準のうちの２つ、またはｃ）Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｔｈｏｒａｃｉｃ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（Ｔｈｏｒａｘ  ２００１；５６［補遺ＩＶ］：１−６４）からの、４つの基準からの２つの存在を必要とする。主要な基準は、１）機械的な通気の必要性および２）敗血症性ショックまたは４時間を超える間の昇圧の必要性である。主要でない基準は、１）９０ｍｍＨｇ以下の収縮期血圧、２）複数大葉性肺炎、および３）２５０未満の低酸素基準（ＰａＯ２／ＦｉＯ２）である。Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｔｈｏｒａｃｉｃ  Ｓｏｃｉｅｔｙからの基準は、１）３０呼吸／分以下の呼吸速度、２）６０ｍｍＨｇ以下の弛緩期血圧、３）７．０ｍＭを超える（１９．６ｍｇ／ｄＬを超える）血液尿素窒素（ＢＵＮ）および４）錯乱である。当該分野において理解されるように、低酸素基準（ＰａＯ２／ＦｉＯ２）は、吸気酸素フラクションに対する動脈酸素の分圧をいい、ガス交換の障害のレベルを示す。
【００５１】
好ましくは、重症な肺炎を有する患者は、当該分野で公知の任意の手段によって明白な感染を有する。これらの方法としては、例えば、ＧＲＡＭ染色、培養物、組織化学染色、免疫化学アッセイ、または核酸アッセイによって、血液または他の通常滅菌される体液あるいは組織の培養物中の病原生物の検出が挙げられるがこれらに限定されない。明白な感染はまた、全身性抗感染療法および任意の感染の臨床症状（３０／分以上の呼吸速度または２５０未満のＰａＯ２／ＦｉＯ２、血圧の低下、および体温の上昇が挙げられるがこれらに限定されない）に対する原因を構築する肺炎の診断と一致する胸部Ｘ線写真によって示される。
【００５２】
（ＴＦＰＩの処方物およびＴＦＰＩアナログの処方物）
ＴＦＰＩの処方物およびＴＦＰＩアナログの処方物は、好ましくは、静脈内注入によって投与される。本質的に連続的な静脈注入が、好ましい。この投与を達成するための方法は、当業者に公知である。注入は、中心系または末梢系によって実施され得る。投薬速度の大きな変動が避けられるべきであるのに対して、本発明の投薬率からの短期間の偏差は、許容される。但し、投与されたＴＦＰＩの得られる血漿レベルは、本発明の好ましい実施形態に従う一定の投薬率での連続注入から予想されるレベルの２０％以内である。
【００５３】
患者への投与の前に、処方物は、ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログに添加され得る。液体処方物が好ましい。ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログは、種々の濃度で、種々の製剤化剤を使用し、そしてＴＦＰＩタンパク質の投与経路、ＴＦＰＩタンパク質の溶解度、そしてＴＦＰＩタンパク質の安定性に適合性の生理学的に適切なｐＨで処方され得る。静脈内注入のための好ましい処方物は、約０．６ｍｇ／ｍｌまでのａｌａ−ＴＦＰＩ、３００ｍＭまでの塩酸アルギニン、およびｐＨ５．０〜６．０のクエン酸ナトリウム緩衝液を含有する。アルギニン、ＮａＣｌ、スクロース、およびマンニトールのような特定の溶質は、ａｌａ−ＴＦＰＩを可溶化し、そして／または安定化するために提供される。ＷＯ９６／４０７８４を参照のこと。静脈内注入のために特に好ましい処方物は、約０．１５ｍｇ／ｍｌのａｌａ−ＴＦＰＩ、３００ｍＭの塩酸アルギニン、および２０ｍＭ  クエン酸ナトリウム（ｐＨ５．５）を含有する。ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログはまた、１５０ｍＭ
ＮａＣｌおよび２０ｍＭ  リン酸ナトリウムまたは別の緩衝液（ｐＨ５．５〜７．２）中に（必要に応じて０．００５％または０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）を補充して）、約０．１５ｍｇ／ｍｌまでの濃度で処方され得る。他の処方物は、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、８％（ｗ／ｖ）スクロース、または４．５％（ｗ／ｖ）マンニトールを含む、１０ｍＭ  酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５）中に、約０．５ｍｇ／ｍｌまでのＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログを含有する。ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログはまた、高塩を使用して、数ｍｇ／ｍｌまでのより高い濃度で処方され得る。例えば、１つの処方物は、５００ｍＭ  ＮａＣｌおよび２０ｍＭ  リン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）中に、約６．７ｍｇ／ｍｌまでのａｌａ−ＴＦＰＩを含有する。
【００５４】
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログに関する処方物のさらなる例としては、油、ポリマー、ビタミン、炭化水素、アミノ酸、塩類、緩衝剤、アルブミン、界面活性剤、または充填剤が挙げられる。好ましい炭化水素としては、単糖類、二糖類、もしくは多糖類、または水溶性グルカンのような糖類または糖アルコールが挙げられる。糖類またはグルカンは、フルクトース、デキストロース、ラクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、αおよびβシクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、およびカルボキシメチルセルロース、またはそれらの混合物を含み得る。スクロースが最も好ましい。糖アルコールは−ＯＨ基を有するＣ４〜Ｃ８の炭化水素と定義され、そしてガラクチトール（ｇａｌａｃｔｉｔｏｌ）、イノシトール、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、グリセロール、およびアラビトールを含む。マンニトールが最も好ましい。上述のこれらの糖または糖アルコールは、単独でまたは組み合わせて用いられ得る。糖類または糖アルコールが水性調製物中で可溶である限りは、用いられる量に確固たる制限はない。好ましくは、糖類または糖アルコール濃度は１．０ｗ／ｖ％と７．０ｗ／ｖ％との間であり、より好ましくは２．０と６．０ｗ／ｖ％との間である。
【００５５】
好ましくは、アミノ酸は左旋性（Ｌ）体のカルニチン、アルギニン、およびベタインを含む；しかし、他のアミノ酸も加えられ得る。好適なポリマーとしては、平均分子量２，０００と３，０００との間のポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、または平均分子量３，０００と５，０００との間のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。凍結乾燥前または再構成後の溶液のｐＨ変化を最小にする組成の緩衝液を用いることもまた好ましい。ほとんどの任意の生理緩衝液が用いられ得るが、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、コハク酸緩衝液、およびグルタミン酸緩衝液またはそれらの混合物が好ましい。好ましくは、緩衝液の濃度は０．０１〜０．３Ｍである。調剤に添加され得る界面活性剤は、欧州特許第２７０，７９９号および同第２６８，１１０号に示される。
【００５６】
さらに、ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログは、例えば、循環半減期を延長させるために、ポリマーを共有結合することで化学修飾され得る。好適なポリマー、およびペプチドにポリマーを結合させる方法は米国特許第４，７６６，１０６号、同第４，１７９，３３７号、同第４，４９５，２８５号、および同第４，６０９，５４６号に教示される。好適なポリマーはポリオキシエチル化ポリオールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ＰＥＧは室温で水に可溶であり、そして一般式：Ｒ（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎＯ−Ｒ（ここでＲは水素、またはアルキル基もしくはアルカノール基のような保護基であり得る）を有する。好ましくは、保護基は１個と８個との間の炭素を有し、より好ましくは保護基はメチル基である。記号ｎは正の整数であり、好ましくは１と１，０００との間、より好ましくは２と５００との間である。好ましくは、ＰＥＧは１０００と４０，０００との間の平均分子量を有し、より好ましくは２０００と２０，０００との間であり、最も好ましくは３，０００と１２，０００との間である。好ましくは、ＰＥＧは少なくとも１個のヒドロキシ基を有し、より好ましくはそれは１個の末端ヒドロキシ基である。このヒドロキシ基は好ましくは活性化されて、インヒビター上の遊離アミノ基と反応する。しかし、反応基のタイプおよび量は本発明の共有結合ＰＥＧ／ＴＦＰＩを完成させるために変えられ得ることが理解される。
【００５７】
水溶性ポリオキシエチル化ポリオールもまた本発明において有用である。これらポリオキシエチル化ポリオールとしては、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、ポリオキシエチル化グリセロール（ＰＯＧ）などが挙げられる。ＰＯＧが好ましい。１つの理由は、ポリオキシエチル化グリセロールのグリセロール骨格が、モノ、ジ、トリグリセリドにおいて、例えば、動物およびヒトにおいて天然に存在する同様の骨格だからである。それゆえ、この分枝鎖は必ずしも体内で外来因子としてみなされない。ＰＯＧはＰＥＧと同様の範囲の好適な分子量を有する。ＰＯＧの構造はＫｎａｕｆら、１９８８，Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６３：１５０６４−１５０７０に示され、そしてＰＯＧ／タンパク質結合体の説明が米国特許第４，７６６，１０６号に見出される。
【００５８】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの液体薬学的組成物の調製後、それは分解の防止および無菌保存のために、凍結乾燥され得る。液体組成物の凍結乾燥法は当業者に公知である。使用直前に、組成物は添加成分を含み得る滅菌希釈剤（例えば、リンゲル溶液、蒸留水、または滅菌生理食塩水）で再構成され得る。再構成によって、好ましくは、組成物は、連続注射によって被験体に投与される。
【００５９】
（ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログの投薬量）
ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログは、重症な肺炎を処置および予防するための治療的有効な濃度で投与される。このような投薬量はまた、他の急性炎症または慢性炎症、およびサイトカインが組織因子の発現をアップレギュレートする一般的な疾患にとっても有用である。この目的を達成するために、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは、好ましくは、静脈内に投与される。この投与を達成するための方法は、当業者に公知である。一般的に、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは、１μｇ／ｋｇと２０ｍｇ／ｋｇとの間、より好ましくは、２０μｇ／ｋｇと１５ｍｇ／ｋｇとの間、最も好ましくは、１と１０ｍｇ／ｋｇとの間の投薬量で与えられる。
【００６０】
上記の投薬量は、一般的に、単回投与または分割投与において宿主に投与される１日の合計投薬量が、例えば、１日あたり約２〜１５ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約４〜１０ｍｇ／ｋｇの量であり得るように、少なくとも約１日、通常数日の期間にわたって投与される。投薬単位組成物は、１日投薬量で作られるような量またはその約数を含み得る。より低い１日投薬量（例えば、１μｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ）は、予防または他の目的のために有用であり得る。単回投薬形態を生成するためのキャリア物質と組み合わされ得る活性成分の量は、処置される患者および投与の特定様式に依存して変動する。
【００６１】
投薬レジメンは、以下に挙げられる種々の要因に従って選択される：型、年齢、体重、性別、食事および患者の病態（ｍｅｄｉｃａｌ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）、状態の重篤度、投与経路、薬理学的配慮（例えば、活性、有効性、薬物動態学的特性および毒性）、薬物送達系が利用されるか否か、そして化合物が複合薬の一部分として投与されるか否か。従って、実際に使用される投薬レジメンは広範に変化し得、従って上記の好ましい投薬レジメンから逸脱し得る。好ましくは、ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの投薬量は、約０．６６ｍｇ／ｋｇ／時間のａｌａ−ＴＦＰＩの投与率に等しい投与率を超えるべきではない。
【００６２】
（低投薬量投与）
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログが、ａｌａ−ＴＦＰＩの投与（少なくとも約０．０００２５ｍｇ／ｋｇ／時間（０．００４１７μｇ／ｋｇ／分）および約０．０５０ｍｇ／ｋｇ／時間未満（０．８３３μｇ／ｋｇ／分）の投与率）に等しい投与率で与えられる場合、重症な肺炎を処置する有効性は保持され、そして有害な副作用（例えば、出血）は最小化される。組み合わせの有効性および安全性を改善するために、投与率は、好ましくは少なくとも約０．０１０ｍｇ／ｋｇ／時間（０．１６７μｇ／ｋｇ／分）および約０．０４５ｍｇ／ｋｇ／時間（０．８３３μｇ／ｋｇ／分）未満のａｌａ−ＴＦＰＩの投与率に等しいか、または少なくとも約０．０２０ｍｇ／ｋｇ／時間および約０．０４０ｍｇ／ｋｇ／時間未満のａｌａ−ＴＦＰＩの投与率に等しく、そして最も好ましくは、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時間（０．４１７μｇ／ｋｇ／分）のａｌａ−ＴＦＰＩの投与率に等しい。投与経路は、一般的に、静脈内投与（連続静脈内注入が好ましい）による。注入は、少なくとも約７２時間、９６時間、１２０時間、または２４０時間で投与され得る。好ましくは、連続注入は、３〜８日間、より好ましくは３〜６日間、そして最も好ましくは約４日間投与される。
【００６３】
「連続注入（ｉｎｆｕｓｉｏｎ）によって」投与することは、この注入が、処方されたほとんどの持続時間にわたって実質的に中断されずに、ほぼ処方された速度で維持されることを意味する。あるいは、断続的な静脈内注入が使用され得る。断続的な注入が使用される場合、連続注入についての上記の投与率に等しい時間平均投与率が使用されるべきである。さらに、断続注入のプログラムは、連続注入を用いて得られる最大濃度の約２０％以下の最大血清中濃度を得なければならない。患者における有害な反応（特に、出血を含む副作用）を回避するために、投薬率は、ａｌａ−ＴＦＰＩ（約０．０５０ｍｇ／ｋｇ／時間）の連続静脈内注入に等しい投与率未満であるべきである。
【００６４】
本明細書中に記載される全ての投薬量（投与率および全投薬量を含む）は、実際には、プロトロンビンアッセイでのタンパク質濃度および生物学的活性の決定の誤差に起因して、１０％までの変動を生じる。従って、本明細書中に記述される投薬量より１０％まで高いかまたは１０％まで低い、任意の実際に投与される投薬量は、記述された投薬量と等しいとみなされる。この理由のために、全ての投薬量は、「およそ（約）」特定投薬量として記述されている。例えば、「約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時間」と記述される投薬量は、０．０２２５〜０．０２７５ｍｇ／ｋｇ／時間の範囲にわたる任意の実際の投薬量に等しいとみなされる。
【００６５】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログのボーラス注射または短時間のより高い注入速度はまた、後に低投薬量のＴＦＰＩ投与が続く場合に、本発明の実施において使用され得る。例えば、ボーラス注射またはより高い注入速度は、患者の循環における投与されたＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの平衡時間を減少させるために使用され得る。その際に、ＴＦＰＩの最終定常状態の血漿中レベルは、より迅速に達成され得、そしてＴＦＰＩに対するレセプターはより速く飽和され得る。ａｌａ−ＴＦＰＩの約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時間で２時間にわたるヒトへの投与は、ＴＦＰＩ（およびａｌａ−ＴＦＰＩ）の血漿中レベルを約８０ｎｇ／ｍｌ〜約１２５ｎｇ／ｍｌに増加させるか、または約５０％増加させる。注入速度が高められるかまたはボーラス注射が使用される場合、同じレベルはより速く達成される。注入が定常状態を得られるまで続けられる場合、より速い注入速度は、より高いレベルを生じる。敗血症に罹患した患者において、約０．０５０ｍｇ／ｋｇ／時間でのａｌａ−ＴＦＰＩ投与に対する定常状態レベルは、約３００ｎｇ／ｍｌであることが分かっており、そして約０．３３ｍｇ／ｋｇ／ｍｌまたは０．６６ｍｇ／ｋｇ／時間でのａｌａ−ＴＦＰＩ投与に対しては、少なくとも約２μｇ／ｍｌであることが見出された。
【００６６】
単回連続注入投与または分割注入投与で宿主に投与される１日の合計投薬量は、例えば、少なくとも約０．００６ｍｇ／ｋｇ／１日〜約１．２ｍｇ／ｋｇ／１日のａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等しく、より一般的には、約０．２４ｍｇ／ｋｇ／１日〜約１．２ｍｇ／ｋｇ／１日投薬量のａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等しく、そして好ましくは約０．６ｍｇ／ｋｇ／１日のａｌａ−ＴＦＰＩに等しい量であり得る。この範囲内でのより低い量は、予防または他の目的のために使用され得る。本発明の投与プロトコルはまた、患者に投与される合計投薬量としても表され得る。合計投薬量は、注入速度×総注入時間である。例えば、ａｌａ−ＴＦＰＩについての好ましい投与率（約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時間）かつ好ましい注入時間（９６時間）において、合計投薬量は、体重１ｋｇあたり約２．４ｍｇ  ａｌａ−ＴＦＰＩである。本発明に従って投与されるＴＦＰＩの合計投薬量は、少なくとも約０．７５μｇ／ｋｇかつ約４．８ｍｇ／ｋｇ未満のａｌａ−ＴＦＰＩに等しい。好ましくは、合計投薬量は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇかつ約４．８ｍｇ／ｋｇ未満のａｌａ−ＴＦＰＩに等しい。より好ましくは、合計投薬量は、約２．４ｍｇ／ｋｇのａｌａ−ＴＦＰＩに等しい。
【００６７】
投薬レジメンを調整するために使用され得る１つの因子は、個々の患者の凝固機能であり、これは、代表的にはプロトロンビン（ＰＴ）時間アッセイ、すなわち国際標準比（ＩＮＲ）を用いて測定される。ＩＮＲは、ＰＴアッセイの標準化であり、このアッセイは国際参照トロンビン試薬に対して較正される。例えば、Ｒ．Ｓ．Ｒｉｌｅｙら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎａｌ．１４：１０１−１１４（２０００）を参照のこと。健康なヒトボランティアにおけるａｌａ−ＴＦＰＩに対するＩＮＲ応答は、認められる血漿中濃度の範囲にわたってほぼ直線である（図３）。ＩＮＲにおける全体に変化は、血漿ａｌａ−ＴＦＰＩ濃度の１μｇ／ｍｌの増加あたり１．２単位である。
【００６８】
薬力学的モデルにおいて、ａｌａ−ＴＦＰＩに対するＩＮＲ反応は、対数ＩＮＲがａｌａ−ＴＦＰＩの血漿中濃度に比例した、対数線形モデルによって最も説明される。この対応の対数線形特性は、ＩＮＲの高いベースラインを有する被験体が、おそらく、低ベースライン値を有する被験体（同レベルの循環ａｌａ−ＴＦＰＩを有する）よりもより高い抗凝固反応に直面することを意味する。
【００６９】
上記の投与レジメン（ｍｇ／ｋｇ／時間基準に対する投与率および１日の合計投薬量を含む）は、「参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与に等しい」投薬量として表される。このことは、「参照ａｌａ−ＴＦＰＩ」の投薬量に対して正規化することによって定量的に決定されることを意味する。参照ａｌａ−ＴＦＰＩは、成熟した、１００％純粋な（タンパク質を基準）、適切に折り畳まれ、生物学的に活性な、非グリコシル化型ａｌａ−ＴＮＰＩとして規定される。ａｌａ−ＴＦＰＩは、配列番号２に示されるアミノ酸配列のＴＦＰＩのアナログである。ＴＦＰＩの他の形態もまた、本発明において使用され得、これらとしては、成熟した、完全長のＴＦＰＩおよびそのアナログが挙げられる。ａｌａ−ＴＦＰＩ以外のＴＦＰＩの形態および１００％未満純粋なａｌａ−ＴＦＰＩもしくは別のＴＦＰＩアナログの調製物を用いて本発明を実施するために適切な投薬量範囲を決定するために、参照ａｌａ−ＴＦＰＩについて本明細書中に記載される投薬量範囲は、ＴＦＰＩの特定形態の内因的な生物学的活性に基づいて調整され得、そしてさらに調製物の生物学的純度に基づいて調整され得る。
【００７０】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログの内因的な生物学的活性は、成熟、１００％の純度、適切に折り畳まれたＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログのプロトロンビンアッセイによって規定されるような特定の活性をいう。従って、等しい投薬量は、
（参照ａｌａ−ＴＦＰＩ投薬量）／（（相対的な内因性活性）×（生化学的純度））
として算出され、ここで、相対的な内因性活性とは、（アナログの内因性活性）／（参照ａｌａ−ＴＦＰＩの内因性活性）
をいう。例えば、特定のＴＦＰＩアナログが参照ａｌａ−ＴＦＰＩの８０％の内因性生物学的活性を有する場合、特定のＴＦＰＩアナログについて等しい投薬量は、参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投薬量値を０．８で除算することによって得られる。さらに、患者に投与される処方物が、例えば、９０％だけ生物学的に純粋である（すなわち、１０％の、ＴＦＰＩの生物学的活性を欠く分子種を含む）場合、ａｌａ−ＴＦＰＩについての参照投薬量値のさらなる補正は、この投薬量値を０．９で除算することによって実施される。従って、８０％のａｌａ−ＴＦＰＩの内因性活性を有しかつ９０％の生物学的純度を有する仮想上のＴＦＰＩアナログが投与された場合、参照ａｌａ−ＴＦＰＩの投与（０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時間）に等しい投与率は、０．０３４７ｍｇ／ｋｇ／時間（すなわち、０．０２５／（０．８×０．９））である。
【００７１】
等しい投薬量はまた、相対的な生物学的活性を決定することによって、内因性活性もしくは生物学的純度のいずれも知ることなしに決定され得る。相対的生物学的活性は、プロトロンビン時間アッセイを用いて、ＴＦＰＩ生物学的活性標準と特定のＴＦＰＩアナログとを比較することによって決定され得る。例えば、ＷＯ  ９６／４０７８４の実施例９の方法に従って生成されたａｌａ−ＴＦＰＩは（これは、約８５％生物学的に活性なＴＦＰＩ分子種を含む）は、ＴＦＰＩ生物学的活性標準として使用され得る。ＷＯ  ９６／４０７８４の実施例９の方法に従って生成されたａｌａ−ＴＦＰＩは、プロトロンビンアッセイにおいて、参照ａｌａ−ＴＦＰＩの約８５％の活性を有する。プロトロンビン時間標準曲線をプロットする際、凝固時間の対数はＴＦＰＩ濃度の対数に対してプロットされる。ＴＦＰＩ生物学的活性標準が参照ａｌａ−ＴＦＰＩの活性の８５％を有する場合、標準曲線は、ＴＦＰＩ生物学的活性の標準の濃度はプロットする前に０．８５を乗じ場合の参照ａｌａ−ＴＦＰＩに等しくなるように調製され得、その結果、活性プロットは１００％純粋な参照ａｌａ−ＴＦＰＩの活性に等しくなる。特定のＴＦＰＩアナログについての凝固時間が標準曲線と比較される場合、参照ａｌａ−ＴＦＰＩの等濃度は、この曲線から読み取られ得る。あるいは、標準曲線の直線部分のスロープが直線回帰分析によって得られる場合、このスロープは参照ａｌａ−ＴＦＰＩに比例するＴＦＰＩ生物学的活性標準の活性に基づいて補正され得る。従って、特定のＴＦＰＩアナログの相対的生物学的活性は、アナログの活性に対する参照ａｌａ−ＴＦＰＩ活性の割合に等しい。例えば、特定のアナログが、１μｇの参照ａｌａ−ＴＦＰＩと同じプロトロンビン活性を生じるために１．４３μｇを必要とする場合、このアナログの相対的な生物学的活性は、１．００／１．４３、または０．７である。このアナログについて、参照ａｌａ−ＴＦＰＩ投薬量に等しい投薬量は、参照ａｌａ−ＴＦＰＩ投薬量をアナログの相対的な生物学的活性で除することによって得られる。例えば、参照ａｌａ−ＴＦＰＩについての０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時間投薬量は、アナログの０．０３５７ｍｇ／ｋｇ／時間（すなわち、０．０２５／０．７）に等しい。
【００７２】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログは、単独の活性抗凝固薬剤として投与され得るが、これらの分子はまた、重症な（ｓｅｖｅｒ）肺炎の処置のための組み合わせ療法を提供するために、１つ以上のさらなる治療剤と組み合わせて使用され得る。このようなさらなる治療剤としては、例えば、抗エンドトキシンモノクローナル抗体（例えば、エンドトキシン結合Ｍａｂ）および抗ＴＮＦマウスＭａｂのような抗ＴＮＦ生成物のような抗体が挙げられる。ＴＦＰＩおよびＴＦＰＩアナログはまた、インターロイキン−Ｉレセプターアンタゴニスト、殺菌／浸透増進（ＢＰＩ）タンパク質、免疫賦活剤、抗炎症活性を有する化合物（例えば、ＰＡＦアンタゴニスト）、および細胞接着ブロッカー（例えば、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａインヒビターのような抗血小板因子）と組み合わせ得る。組み合わせとして投与される場合、治療剤は、同時または別の時点で与えられる別個の組成物として処方され得る。好ましくは、さらなる治療剤は、同時（すなわち、ＴＦＰＩもしくはＴＦＰＩアナログの投与の間）またはＴＦＰＩもしくはＴＦＰＩアナログの投与期間の２４時間以内（すなわち、ＴＦＰＩもしくはＴＦＰＩアナログの投与期間の開始前２４時間以内、またはＴＦＰＩもしくはＴＦＰＩアナログの投与期間後２４時間以内）のいずれかで与えられる。さらなる治療剤はまた、ＴＦＰＩもしくはＴＦＰＩアナログと一緒に単一組成物としても与えられ得る。
【００７３】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログはまた、重症な（ｓｅｖｅｒ）肺炎の処置に有効である他の薬剤と組み合わせて与えられ得る。例えば、以下のものがＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログと組み合わせて投与され得る：根元的な細菌感染を治療し得る抗生物質；細菌細胞壁成分に対するモノクローナル抗体；重症な肺炎経路に関与するサイトカインと複合体を形成し得るレセプター；および一般に、サイトカインまたは他の活性化もしくは増大された生理学的経路（補体タンパク質を含む）と相互作用し得、重症な肺炎および／もしくはその症状を改善させる任意の因子またはタンパク質。
【００７４】
有用な抗生物質は一般的な部類の内の以下を含む：βラクタム環（ペニシリン）、グリコシド結合におけるアミノ糖類（アミノグリコシド）、大環状ラクトン環（マクロライド）、ナフタセンカルボキサミド（ｎａｐｔｈａｃｅｎｅｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ）の多環式誘導体（テトラサイクリン）、ジクロロ酢酸のニトロベンゼン誘導体、ペプチド（バシトラシン、グラミシジン、およびポリミキシン）、共役二重結合系大環状物（ポリエン）、スルファニルアミド（ｓｕｌｆａｎｉｌａｍｉｄｅ）由来のサルファ剤（スルホンアミド）、５−ニトロ−２−フラニル基（ニトロフラン）、キノロンカルボン酸（ナリジクス酸）、および他多数。他の抗生物質および上記の特定の抗生物質のさらなる改良体は、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、第３版、Ｋｉｒｋ−Ｏｔｈｙｍｅｒ（編）、第２巻、７８２〜１０３６頁（１９７８）および第３巻、１〜７８頁、Ｚｉｎｓｓｅｒ、ＭｉｃｒｏＢｉｏｌｏｇｙ、第１７版、Ｗ．Ｊｏｌｄｉｋら（編）２３５〜２７７頁（１９８０）、またはＤｏｒｌａｎｄ’ｓ  Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ、第２７版、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ  （１９８８）中に見出され得る。
【００７５】
ＴＦＰＩまたはＴＦＰＩアナログと組み合わせられ得る他の薬剤としては、エンドトキシンアンタゴニスト（例えば、Ｅ５５３１（ａ  Ｌｉｐｉｄ  Ａ  ａｎａｌｏｇ、Ａｓａｉら、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２２：４３２（１９９９）を参照のこと）、抗凝固活性を有するＴＦアナログ（例えば、Ｋｅｌｌｅｙら、Ｂｌｏｏｄ  ８９：３２１９（１９９７）およびＬｅｅ  ＆  Ｋｅｌｌｅｙ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：４１４９（１９９８）を参照こと）、サイトカインに特異的なモノクローナル抗体（例えば、ＩＬ−６もしくはＭ−ＣＳＦに対して特異的なモノクローナル抗体（１９８９年１２月１５日に出願された米国特許出願番号０７／４５１，２１８を参照のこと）およびＴＮＦに対して特異的なモノクローナル抗体（Ｃｅｒａｍｉら，米国特許第４，６０３，１０６号を参照のこと）、ＴＮＦプロホルモン産生細胞からの成熟ＴＮＦプロホルモンを切断するタンパク質のインヒビター（１９８９年８月１６日に出願された米国特許出願番号０７／３９５，２５３を参照のこと）、ＩＬ−１のアンタゴニスト（１９９０年５月１日に出願された米国特許出願番号０７／５１７，２７６を参照のこと）、インヒビン（ｉｎｈｉｂｉｎ）のようなＩＬ−６サイトカイン発現のインヒビター（米国特許第５，９４２，２２０号を参照こと）、ならびにＩＬ−１のような種々のサイトカインのレセプターに基づくインヒビターが挙げられる。補体に対する抗体または補体のタンパク質インヒビター（例えば、ＣＲ１、ＤＡＦ、およびＭＣＰ）もまた用いられ得る。
【００７６】
本開示において引用される全ての特許、特許出願および参考文献は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【００７７】
本発明は、ここで以下の実施例に言及することにより例証される。この実施例は特に有益な実施態様を記載する。しかし、これら実施態様は例示であって、いかなるようにも本発明を制限するものとして解釈されるものではないことは留意されるべきである。
【実施例】
【００７８】
（実施例１：重症な肺炎患者のａｌａ−ＴＦＰＩ処置）
重症な肺炎を有する患者を、相対的に同種のグループ内でａｌａ−ＴＦＰＩでの処置の潜在的な効果を探索するために評価した。肺炎患者を、研究者によって考証された敗血症の１つの出所が肺炎としてコードされるかどうか確認した。他の感染部位もまた存在し得た。化学的な後遺症から感染性のものであることを区別することが困難なために、吸引性肺炎を有する患者は、含めなかった。次いで肺炎を有すると同定した患者を、培養陽性（菌またはグラム染色のような感染の任意の証拠）または培養陰性（陰性培養または培養
せず）であるとして分類した。３００ｍＭ  Ｌ−アルギニン、ｐＨ５．５の２０ｍＭクエン酸ナトリウム、浸透圧が５６０±１１０ｍＯｓｍを含む緩衝液中に処方された、Ｅ．ｃｏｌｉ内で発現した非グリコシル化型ａｌａ−ＴＦＰＩの調製物を、０．０２５ｍｇ／ｋｇ／時間の投薬量で、連続静脈内注入（ｃｏｎｆｕｓｉｏｎ）によって、患者を処置した。プラセボは、ａｌａ−ＴＦＰＩを含まない同一の緩衝液からなり、そして治験薬と同一の割合で注入した。これらの分析の結果、培養陽性肺炎を有する患者においてａｌａ−ＴＦＰＩ処置から正の効果があることが実証される（表１）。感染源の証拠のない患者は、負の効果を実証した。
【００７９】
【表１】
2006008706.tif 000002
【００８０】
【表２】
2006008706.tif 000003
【００８１】
肺炎培養陰性の非ヘパリングループにおける被験者数が、比較的少ないことに注意されるべきであるにもかかわらず、高ＩＮＲ培養陰性グループにおける増加した死亡率は、さらにヘパリンを投与した、または投与していない患者集団に存在するようであった（表３）。強い正の処置効果が、培養陽性／非ヘパリンコホートにおいて観察された。
【００８２】
【表３】
2006008706.tif 000004
【００８３】
（実施例２：ベースライン重症度変数の調査）
多くのベースライン重症度変数を、観察された結果を説明し得る、グループの不均衡があるかどうかを決定するために評価した。これらのデータは、培養状態に関連した結果における差違が、ベースラインの不均衡によらないことを示す。したがって、この結果は、感染した患者と感染していない患者との間の生物学的差違によるＴＦＰＩ処置の差次的な効果を表すようである。ＴＦＰＩで処置した肺炎培養陰性グループにおいて、重症度の指標（例えば、ＡＰＡＣＨＥ  ＩＩ値または器官機能障害値）が、プラセボに等しいか、またはより低いかのいずれかであったという事実にもかかわらず、培養陰性グループは、死亡率の中で最も高い値を実証した（表４）。
【００８４】
【表４】
2006008706.tif 000005
【００８５】
ＩＬ−６は、敗血症において早期に上昇し、炎症性応答の強度を反映し、そして結果に関連する、炎症性サイトカインである。ベースライン時では、肺炎を有するが感染の証拠はないと臨床的に同定された患者において、ＩＬ−６レベルが低い（表５）。これは、肺炎の感染源が実証された患者と明らかな感染源のない患者との間に生物学的な差違があることを示唆する。逆説的に、培養陰性ＴＦＰＩグループは、最も低いベースラインＩＬ−６レベルを有するが、最も高い死亡率を有する。敗血症の集団においては、ＩＬ−６レベルは、経時的に減少する。ＩＬ−６の減少率は、ＴＦＰＩで処置した肺炎培養陰性被験者において減少する（表５）。これは、ＴＦＰＩの生物学的効果が、感染している患者と感染していない患者とにおいて異なり得ることを示唆する。
【００８６】
【表５】
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【００８７】
（実施例３：感染の実証の型による重症な肺炎患者の分析）
上で議論したように、ａｌａ−ＴＦＰＩ処置による全体的な利点を、最も高い感染の確実度を有する患者（すなわち、陽性血液培養の患者）において観察した。感染の実証の型による重症な肺炎患者の分析において、ａｌａ−ＴＦＰＩ処置の利点は、陽性血液培養を有する被験者および他の証拠を有する被験者の両方において見られた（表６）。この効果は、菌血症グループ（すなわち、感染の最も高い可能性または最も実証できる感染源を有するグループ）において最も強かった。
【００８８】
【表６】
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【００８９】
前に示したように、感染の実証を有する（血液＋「他」）患者は、ヘパリンの非存在においてＴＦＰＩ処置が有益であった。この結果は、ほぼ、肺炎グループから得られる利点のためである（表７）。この所見は、内因性抗擬血剤の利点が、重症な肺感染症を有する患者において最も大きいということを示すと思われる。
【００９０】
【表７】
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【００９１】
不均一性をさらに限定するために、さらなる治験を市中肺炎（ＣＡＰ）に集中させ得る。入院中の間に肺炎を発症する患者（院内肺炎）は、病原性生物が入植し、他の肺性障害を有する可能性があり、このことは、感染性肺炎の診断をより難しくする。さらに、ＣＡＰを有する患者は、院内肺炎を有する患者よりもヘパリンにさらされた可能性が低い。処置前の病院での滞在の長さによってデータを分析する場合、２日以下の入院の培養陽性患者（市中感染）と２日より長く入院した培養陽性患者（院内感染）とについて、同様の利点であったことが注目された。培養陰性患者における負の効果が、主に院内感染グループにおいて、見られた（表８）。
【００９２】
【表８】
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【００９３】
本発明は、特定の実施形態を参照にして記載されている。しかし、この出願は、添付の特許請求の範囲の意図および範囲から外れずに、当業者によってなされ得る変更および代替を網羅することを意図する。
【配列表】
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