(57)【要約】【課題】  １つの実験で複数の磁化移動パターンを観測し、又夫々の化学シフト展開等の時間変調を同時に観測することで、緩和による感度損失を最小限に抑え測定時間を短縮する。【解決手段】  パルス系列の前半部分では、パルス６１、６２及び７１、７２を用いて、Ａｘ又はＡｙとＢｘ又はＢｙの順位相磁化を反位相磁化の状態へ遷移させ、続く中間部分の90度パルス６３、７３によりそれら反位相磁化の交換を行い、後半部分では、パルス６４、６５及び７４、７５を用いて、交換後の反位相磁化をＢｘ又はＢｙとＡｘ又はＡｙの順位相磁化の状態へ遷移させる。又、核磁化の交換と同時に一定時間展開手法により化学シフト展開を行っているが、前半部分と後半部分ではＡ核もＢ核も磁化が横磁化の状態にあるので化学シフト展開を同時に行うことができる。【選択図】  図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
多次元のＮＭＲ測定方法において、
磁化の励起から観測までに複数の磁化移動の経路が存在する場合、それらの複数の磁化移動経路の時間変調を同時に観測するＮＭＲ測定方法。
【請求項２】
第１の核から第２の核へ磁化移動により至る第１の磁化移動経路と、前記第２の核から前記第１の核へ至る第２の磁化移動経路について、前記第１及び第２の経路の時間変調を同時に観測する請求項１記載のＮＭＲ測定方法。
【請求項３】
前記第１の核はペプチド結合のアミド15Ｎ核、前記第２の核はペプチド結合のアルファ位13Ｃ核であることを特徴とする請求項２記載のＮＭＲ測定方法。
【請求項４】
前記磁化移動は、Ｊ結合、双極子−双極子相互作用の少なくとも一方によることを特徴とする請求項１ないし３のいずれか１項に記載のＮＭＲ測定方法。
【請求項５】
ＮＭＲ測定に用いるＮＭＲパルス系列であって、
磁気的に結合した第１及び第２の核について、前記第２の核と結合した前記第１の核の順位相磁化又は前記第１の核と結合した前記第２の核の順位相磁化を、前記第２の核と結合した前記第１の核の反位相磁化又は前記第１の核と結合した前記第２の核の反位相磁化に遷移させる第１のパルス系列と、
前記第１のパルス系列に続いて、前記第２の核と結合した前記第１の核の反位相磁化又は前記第１の核と結合した前記第２の核の反位相磁化を、前記第１の核と結合した前記第２の核の反位相磁化又は前記第２の核と結合した前記第１の核の反位相磁化に交換する第２のパルス系列と、
前記第２のパルス系列に続いて、前記第１の核と結合した前記第２の核の反位相磁化又は前記第２の核と結合した前記第１の核の反位相磁化を、前記第１の核と結合した前記第２の核の順位相磁化又は前記第２の核と結合した前記第１の核の順位相磁化に遷移させる第３のパルス系列と
を有し、
前記第１及び第３のパルス系列は、一定期間における化学シフト展開を行うＮＭＲパルス系列。
【請求項６】
前記第１の核はペプチド結合のアミド15Ｎ核、前記第２の核はペプチド結合のアルファ位13Ｃ核であることを特徴とする請求項５記載のＮＭＲパルス系列。
【請求項７】
前記第１のパルス系列は、ペプチド結合の測定において、15Ｎの順位相磁化から15Ｎ13Ｃαの反位相磁化に遷移させるのと同時に、13Ｃαの順位相磁化から13Ｃα15Ｎの反位相磁化に遷移させるパルス系列であることを特徴とする請求項５または６記載のＮＭＲパルス系列。ただし、15Ｎはペプチド結合のアミド窒素核、13Ｃαはペプチド結合のアルファ位炭素核。
【請求項８】
前記第２のパルス系列は、ペプチド結合の測定において、15Ｎ13Ｃαの反位相磁化から13Ｃα15Ｎの反位相磁化に遷移させるのと同時に、13Ｃα15Ｎの反位相磁化から15Ｎ13Ｃαの反位相磁化に遷移させるパルス系列であることを特徴とする請求項５または６記載のＮＭＲパルス系列。ただし、15Ｎはペプチド結合のアミド窒素核、13Ｃαはペプチド結合のアルファ位炭素核。
【請求項９】
前記第３のパルス系列は、ペプチド結合の測定において、13Ｃα15Ｎの反位相磁化から13Ｃαの順位相磁化に遷移させるのと同時に、15Ｎ13Ｃαの反位相磁化から15Ｎの順位相磁化に遷移させるパルス系列であることを特徴とする請求項５または６記載のＮＭＲパルス系列。ただし、15Ｎはペプチド結合のアミド窒素核、13Ｃαはペプチド結合のアルファ位炭素核。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）測定方法及びＮＭＲ測定装置に関し、詳しくは多次元ＮＭＲにおける複数の経路、相関を同時に観測するＮＭＲ測定方法及びＮＭＲパルス系列に関する。
【背景技術】
【０００２】
これまで一般的に行われている多次元ＮＭＲ測定は、ある一つの経路を磁化移動させ、その磁化を信号として観測するものがほとんどである。つまり、始めに何らかの核の磁化を励磁し、他の核に磁化を移動していって、最後に観測できる核に磁化をもっていくというものである。
【０００３】
また、測定する磁化の移動経路が何種類かあるという測定もある。このような、複数の経路を磁化移動させた磁化を信号として観測する手法もいくつか報告されており、本発明に最も近いものとしては、パング（Ｐａｎｇ）らによる蛋白質中の二つの経路を磁化移動させた磁化の信号を観測する方法がある（下記非特許文献１参照）。このパルス系列を図９に示すが、この方法は、蛋白質やペプチド主鎖の１ＨＮ，１５Ｎ，１３Ｃα，１３ＣＯ，１Ｈαの５つの核の化学シフトを得ることを目的にしている３次元実験である。
【０００４】
この実験は、蛋白質やペプチド主鎖における二つの磁化移動経路からなるＮＭＲ信号を観測するように設計されている。図１０は二つのアミノ酸残基がペプチド結合して形成された蛋白質やペプチド構造における二つの磁化移動経路を示している。
【０００５】
経路１は、励起した１ＨＮの磁化に対して、１５Ｎでの化学シフト展開（ｔ１），１３ＣＯでの化学シフト展開（ｔ２），１３Ｃαへの磁化移動、１Ｈαで観測（ｔ３）する下記経路である。なお、ここで言う化学シフト展開とは、化学シフト（回転座標系の回転周波数からのずれ周波数）により、磁化の向きがばらける現象のことである。
経路１：  １ＨＮ→１５Ｎ（ｔ１）→１３ＣＯ（ｔ２）→１３Ｃα  →１Ｈα（ｔ３）
経路２は、Ｈαを励起した磁化に対して、１３Ｃαでの化学シフト展開（ｔ１），１３ＣＯでの化学シフト展開（ｔ２），１５Ｎへの磁化移動、最終的に、１ＨＮで観測（ｔ３）する下記経路である。
経路２：  １Ｈα→１３Ｃα（ｔ１）→１３ＣＯ（ｔ２）→１５Ｎ  →１ＨＮ（ｔ３）
この実験の問題点は、複数の化学シフト展開を行うためにパルス系列が長くなり、磁化の緩和の影響から感度が悪くなっている点である。
【０００６】
以降この問題点を説明する。この実験のｔ１期においては、（経路１）の磁化は化学シフト展開しないようにＺ方向を向いた状態になっており、その間に（経路２）の化学シフト展開１３Ｃα（ｔ１）が行われている。その後、（経路２）の磁化を化学シフト展開しないようにＺ方向を向いた状態にし、その間に（経路１）の化学シフト展開１５Ｎ（ｔ１）を行っている。各ｔ１の化学シフト展開、ｔ２の化学シフト展開は、数10msecのように長いパルス系列となっているので、測定までの時間が長くかかってしまうことになる。磁化は、時間の経過とともに定常状態にもどっていく。この場合、Ｚ方向を向いた磁化は化学シフトによる時間変調は受けないが、磁化のスピン-格子緩和が起きるために、実際には、計測はされているが、非常に効率が悪く、感度が低くなり、最終的に得られる信号感度が低下する。
【０００７】
このためパルス系列は一般的に同じ経路の磁化を観測している場合には、よりパルス系列が短い方が緩和の影響が少なく感度よくＮＭＲ信号を観測することができる。
【０００８】
他方、多次元ＮＭＲ法ではコンカテネーションの技術により、順位相磁化と反位相磁化の相互の磁化移動と、化学シフト展開を同時に行うことによりパルス系列を短縮することができる。例えば、一般的に使われるＨＮＣＯ実験の１５Ｎの化学シフト展開期では、１５Ｎの化学シフト展開を行いながら、１５Ｎと１３ＣＯの反位相磁化から１５Ｎの順位相磁化への磁化移動を同時に行うことでパルス系列の短縮を行っている。また、このＨＮＣＯ実験やＣＢＣＡ（ＣＯ）ＮＨ実験などの一般的な３次元以上の多次元ＮＭＲ法では、コンカテネーションの技術が有効的に利用されているが、それぞれ独立した複数の展開期が必要であり、多次元測定の別々の軸として展開するために長時間の測定を行うことになる。
【０００９】
前記パングらによる２方向同時磁化移動実験においては、パルス系列自体が長くなるため緩和による感度損失が大きく、また、パングらの方法を含む一般的な３次元以上の多次元ＮＭＲ法では、複数の間接化学シフト展開期から構成されているため、長時間の測定が必要になる問題点がある。
【００１０】
【非特許文献１】Yuxi Pang et al., "High-resolution of five frequencies in a single 3D spectrum:HNHCACO-a bidirectional coherence transfer experiment", J. of Biomol. NMR, 11, 185-190 (1998)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
以上に説明したように、従来から一般的に使用されてきた１種類の経路の磁化移動からなる測定法では、１種類の経路を通った磁化のシグナルしか測定することができず、複数の経路の情報を得るためには、それぞれの経路について別の実験を行う必要があった。
【００１２】
また前記非特許文献１に記載されているような特殊な測定法による複数の経路を同時に観測する手法では、複数の核の化学シフト展開を別々の展開期で行う必要があり、核磁化の緩和による感度の損失が大きいため、実際に有用な測定結果が得られることは少なかった。
【００１３】
さらに、複数の化学シフトを得るためには、それぞれを別々の軸として測定することが必要であり、そのような多次元測定を行うためには長時間の測定が必要になり、単位時間あたりの測定感度が低かった。
【００１４】
したがって、本発明に係るＮＭＲ測定方法は、１つの実験で複数の磁化移動パターンを観測し、また、それぞれの化学シフト展開等の時間変調を同時に観測することで、緩和による感度損失を最小限に抑え、測定時間を短縮することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
前述の課題を解決するため、本発明に係るＮＭＲ測定方法は、多次元のＮＭＲ測定方法であって、磁化の励起から観測までに複数の磁化移動の経路が存在する場合、それらの経路に対して同時に時間変調を与える。
【００１６】
第１の核から第２の核へ磁化移動により至る第１の磁化移動の経路と、前記第２の核から前記第１の核へ至る第２の磁化移動の経路について、前記第１及び第２の経路に対して同時に時間変調を与えることが好ましい。
【００１７】
前記第１の核はペプチド結合のアミド15Ｎ核、前記第２の核はペプチド結合のアルファ位13Ｃ核である。
【００１８】
前記磁化移動は、Ｊ結合、双極子−双極子相互作用の少なくとも一方によることが好ましい。
【００１９】
本発明に係るＮＭＲパルス系列は、ＮＭＲ測定に用いるＮＭＲパルス系列であって、
磁気的に結合した第１及び第２の核について、前記第２の核と結合した前記第１の核の順位相磁化又は前記第１の核と結合した前記第２の核の順位相磁化を、前記第２の核と結合した前記第１の核の反位相磁化又は前記第１の核と結合した前記第２の核の反位相磁化に遷移させる第１のパルス系列と、
前記第１のパルス系列に続いて、前記第２の核と結合した前記第１の核の反位相磁化又は前記第１の核と結合した前記第２の核の反位相磁化を、前記第１の核と結合した前記第２の核の反位相磁化又は前記第２の核と結合した前記第１の核の反位相磁化に交換する第２のパルス系列と、
前記第２のパルス系列に続いて、前記第１の核と結合した前記第２の核の反位相磁化又は前記第２の核と結合した前記第１の核の反位相磁化を、前記第１の核と結合した前記第２の核の順位相磁化又は前記第２の核と結合した前記第１の核の順位相磁化に遷移させる第３のパルス系列と
を有し、
前記第１及び第３のパルス系列では、一定期間における化学シフト展開を行う。
【００２０】
前記第１の核はペプチド結合のアミド15Ｎ核、前記第２の核はペプチド結合のアルファ位13Ｃ核である。
【００２１】
前記第１のパルス系列は、ペプチド結合の測定において、15Ｎの順位相磁化から15Ｎ13Ｃαの反位相磁化に遷移させるのと同時に、13Ｃαの順位相磁化から13Ｃα15Ｎの反位相磁化に遷移させるパルス系列（ただし、15Ｎはペプチド結合のアミド窒素核、13Ｃαはペプチド結合のアルファ位炭素核）である。
【００２２】
前記第２のパルス系列は、ペプチド結合の測定において、15Ｎ13Ｃαの反位相磁化から13Ｃα15Ｎの反位相磁化に遷移させるのと同時に、13Ｃα15Ｎの反位相磁化から15Ｎ13Ｃαの反位相磁化に遷移させるパルス系列（ただし、15Ｎはペプチド結合のアミド窒素核、13Ｃαはペプチド結合のアルファ位炭素核）である。
【００２３】
前記第３のパルス系列は、ペプチド結合の測定において、13Ｃα15Ｎの反位相磁化から13Ｃαの順位相磁化に遷移させるのと同時に、15Ｎ13Ｃαの反位相磁化から15Ｎの順位相磁化に遷移させるパルス系列（ただし、15Ｎはペプチド結合のアミド窒素核、13Ｃαはペプチド結合のアルファ位炭素核）である。
【発明の効果】
【００２４】
本発明に係るＮＭＲ測定方法は、複数の磁化に同時に時間変調を与えることにより、磁化緩和による感度損失を最小限に抑えることができ、また測定時間を短縮することができる。
【００２５】
本発明に係るＮＭＲパルス系列は、前記ＮＭＲ測定方法にて用い、複数の磁化に同時に時間変調を与えることにより、磁化緩和による感度損失を最小限に抑えることができ、また測定時間を短縮することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
以下、本発明を実施するための最良の形態を説明する。図１は、マルチチャンネル構成のパルスＮＭＲ測定装置１のブロック図である。
【００２７】
このパルスＮＭＲ測定装置１では、蛋白質やペプチドの構造を解析する。具体的には、以下に実施例１〜実施例４として説明する４つの実験を行うことによって、蛋白質やペプチドの構造を決定するための構造情報として、化学シフト、スピン−スピン結合などの情報を得る。
【００２８】
実施例１は、１３Ｃ／１５Ｎで安定同位体標識を施した化合物の相関を求める実験である。実施例２は、１３Ｃ／１５Ｎで安定同位体標識を施した蛋白質やペプチドのアミドプロトン（１ＨＮ）、アミド窒素（１５Ｎ）、アルファ炭素（１３Ｃα）、アルファプロトン（１Ｈα）の相関を求める実験である。実施例３は、１３Ｃ／１５Ｎで安定同位体標識を施した化合物の１３Ｃ―１５Ｎ間の残余双極子カップリングによる相関を求める実験である。実施例４は、１３Ｃ／１５Ｎで安定同位体標識を施した蛋白質やペプチドのアミド窒素（１５Ｎ）―アルファ炭素（１３Ｃα）間の残余双極子カップリングによる相関を求める実験である。
【００２９】
実施例１
１３Ｃ／１５Ｎで安定同位体標識を施した化合物（１３Ｃ／１５Ｎで安定同位体標識を施した測定試料）の相関を求める実験に用いられるとき、パルスＮＭＲ測定装置１は、測定磁場を例えば１４．１Ｔ（プロトン共鳴周波数に換算して６００ＭＨｚ）としている。このパルスＮＭＲ測定装置１は、図１に示すように、超伝導のマグネット部１０と、分光計部２０と、コンピュータ５０とからなる構成をとる。
【００３０】
パルスＮＭＲ測定装置１の分光計部２０は、２種類以上の周波数を同時に発信してマグネット部１０に出力する出力系３０と、マグネット部１０のプローブによって検出された信号にデジタル化された位相検出を施す検出系４０とを有する。
【００３１】
出力系３０は、１３Ｃ（１５０．８ＭＨｚ）、１５Ｎ（６０．８ＭＨｚ）をカバーする２種類以上の周波数を同時に発信する周波数シンセサイザ３１と、周波数シンセサイザ３１の出力を波形成形してパルス制御するトランスミッタ３２と、トランスミッタ出力を電力増幅するパワーアンプ３３とを有する。
【００３２】
検出系４０は、プローブ検出信号を増幅するアンプ４１と、増幅されたプローブ検出信号の位相検出を行う検出部４２と、位相検出出力をデジタル化するＡ／Ｄコンバータ４３とを有する。
【００３３】
マグネット部１０は、例えばＮｂＴｉ及びＮｂ３Ｓｎを材料とする超伝導のコイルによって構成されている。マグネット部内には、試料からの微弱な信号を検出すると共に、試料にパルス電磁波を送る送受信コイルとしてのプローブ１１と、プローブ１１によって検出された信号を前段増幅して前記検出系４０に供給するプリアンプ１２が含まれる。具体的に、プローブ１１は、１３Ｃ（１５０．８ＭＨｚ）、１５Ｎ（６０．８ＭＨｚ）の信号を検出する。
【００３４】
コンピュータ５０は、中央演算処理部（ＣＰＵ）を有し、このＣＰＵに内部バスにてＲＯＭ、ＲＡＭ、ＨＤＤ、Ｉ／Ｏインターフェースを接続している。このコンピュータ５０は、前記分光計部２０の出力系３０及び検出系４０と通信インターフェースを介して接続し、周波数シンセサイザ３１の周波数を制御したり、Ａ／Ｄコンバータ４３からのデジタル位相検出データをデータ処理する。
【００３５】
本実施の形態のＮＭＲ測定方法は、このコンピュータ５０にて、ＮＭＲ測定プログラムとして実行される。ＮＭＲ測定プログラムは例えばＲＯＭ又はＨＤＤに格納され、ＣＰＵによってＲＡＭに読み出され、ＲＡＭをワークエリアにして実行される。
【００３６】
このＮＭＲ測定方法は、磁化の励起から観測までに複数の磁化移動経路が存在する場合、それらの経路に対して同時に時間変調を与える方法である。同時に時間変調を与えることにより、磁化緩和による感度損失を最小限に抑えることができ、また測定時間を短縮することができる。
【００３７】
以下、ＮＭＲ測定装置が前記ＮＭＲ測定方法に基づいたＮＭＲ測定プログラムを実行することによる実施例１の動作について説明する。
【００３８】
Ａ核とＢ核の磁化がＪカップリングしているとき、Ａ核の順位相磁化またはＢ核の順位相磁化はＪカップリングによる変調によりＢ核とカップリングしたＡ核の反位相磁化またはＡ核とカップリングしたＢ核の反位相磁化になる。
【００３９】
このＢ核とカップリングしたＡ核の反位相磁化またはＡ核とカップリングしたＢ核の反位相磁化は、Ａ核に対する90度パルスとＢ核に対する90度パルスを同時に印加することで、それらを交換することが可能である。
【００４０】
さらに、交換された磁化を反位相磁化から順位相磁化へのＪカップリングによる変調を行うことによって、Ｂ核の順位相磁化またはＡ核の順位相磁化を得ることができ、Ａ核とＢ核の磁化の交換を行うことが可能になる。
【００４１】
図２はこれらのＡ核、Ｂ核間の磁化の交換と化学シフト展開を同時に行うためのパルス系列の基本部分である。横軸は時間を表し、Ａ，ＢはそれぞれＡ核、Ｂ核の周波数のＲＦパルス６１〜６５，７１〜７５がどのようなタイミングで出力されるかを表す。また、90度パルスは細い縦線、180度パルスは太い縦線で示してある。なお、位相の記述がないＲＦパルスの位相はｘとする。
【００４２】
具体的に、ＡＺの磁化について、ＲＦパルス６１は位相がＱＤｙＡ１の90度パルスであり、ＲＦパルス６２は位相がx の180度パルスであり、ＲＦパルス６３は位相がφ１の90度パルスであり、RＦパルス６４は位相がx の180度パルスであり、ＲＦパルス６５は位相がＱＤｙＡ２の90度パルスである。
【００４３】
また、ＢＺの磁化について、ＲＦパルス７１は位相がＱＤｙＢ１の90度パルスであり、ＲＦパルス７２は位相がxの180度パルスであり、ＲＦパルス７３は位相がφ２の90度パルスであり、ＲＦパルス７４は位相がxの180度パルスであり、ＲＦパルス７５は位相がＱＤｙＢ２の90度パルスである。
【００４４】
各ＲＦパルス６１，６３，６５，７１，７３，７５の位相回しは、次の通りである。
φ１＝｛x, -x, -x, x｝
φ２＝｛x, x, -x, -x｝
ＱＤｙＡ１*＝｛4(x), 4(y)｝, ｛4(x), 4(y)｝
ＱＤｙＢ１*＝｛4(-x), 4(-y)｝, ｛4(x), 4(-y)｝
ＱＤｙＡ２＝｛4(x), 4(-y)｝, ｛4(-y), 4(x)｝
ＱＤｙＢ２＝｛4(x), 4(-y)｝, ｛4(-y), 4(x)｝
φａｃｑ*＝｛x, -x｝
例えば、φ１＝｛x, -x, -x, x｝とは、（４×ｎ）回の積算を行った際に、それぞれの積算時の位相φ１を、+x, -x, -x, +xを１サイクルとする繰り返しに従ってＲＦパルスを照射することを意味する。φ２についても同様である。また、ＱＤｙＡ１*＝｛4(x), 4(y)｝, ｛4(x), 4(y)｝とは、実数部にx, x, x, x, y, y, y, yの順に計８回の位相を、虚数部にx, x, x, x, y, y, y, yの順に計８回の位相を１サイクルとする位相回し（位相を変えてＲＦパルスを照射すること）であることを意味する。なお、＊'は、各スライスごとにＲＦパルスの位相を180度反転することを意味する。また、間接観測軸の展開はSTATES-TPPI法により行っている。
【００４５】
このパルス系列を他のパルス系列の途中へ適当に挿入することにより、目的とした磁化移動と化学シフト展開を同時に行うことができる。
【００４６】
このパルス系列の基本部分は、前半部分（１）と後半部分（２）、およびその中間部分から構成されており、前半部分（１）では、ＲＦパルス６１、６２及び７１、７２を用いて、ＡｘまたはＡｙとＢｘまたはＢｙの順位相磁化を、２ＡｙＢｚまたは２ＡｘＢｚと２ＢｙＡｚまたは２ＢｘＡｚの反位相磁化の状態へ遷移させ、続く（１）と（２）の間の中間部分の90度ＲＦパルス６３、７３により、それら反位相磁化の交換（２ＡｙＢｚまたは２ＡｘＢｚ→２ＡｚＢｙまたは２ＡｚＢｘと、２ＢｙＡｚまたは２ＢｘＡｚ→２ＢｚＡｙまたは２ＢｚＡｘ）を行い、後半部分（２）では、ＲＦパルス６４、６５及び７４、７５を用いて、２ＡｚＢｙまたは２ＡｚＢｘと２ＢｚＡｙまたは２ＢｚＡｘの反位相磁化を、ＢｘまたはＢｙとＡｘまたはＡｙの順位相磁化の状態へ遷移させている。
【００４７】
また、図２で核磁化の交換と同時に一定時間展開手法により化学シフト展開を行っているが、前半部分（１）、後半部分（２）ではＡ核、Ｂ核の両方の磁化が横磁化の状態にあるので、化学シフト展開を同時に行うことができる。
【００４８】
したがって、このパルス系列による測定を行うことによって、二種類の磁化移動経路を同時に化学シフト展開した結果を得ることができる。
【００４９】
さらに、この実験では２回の積算時にそれぞれＲＦパルスの位相を変えることで、前半部分（１）と後半部分（２）における化学シフト展開を化学シフトの和で展開した信号として直交検波しており、実部のインターフェログラムとして、
（１）のcos変調（Ａ核またはＢ核の化学シフト）×（２）のcos変調（Ｂ核またはＡ核の化学シフト）
−（１）のsin変調（Ａ核またはＢ核の化学シフト）×（２）のsin変調（Ｂ核またはＡ核の化学シフト）
のインターフェログラムを観測し、虚部のインターフェログラムとして
（１）のcos変調（Ａ核またはＢ核の化学シフト）×（２）のsin変調（Ｂ核またはＡ核の化学シフト）
＋（１）のsiｎ変調（Ａ核またはＢ核の化学シフト）×（２）のcos変調（Ｂ核またはＡ核の化学シフト）
のインターフェログラムを観測し、結果として、（１）＋（２）のcos変調（Ａ核の化学シフト＋Ｂ核の化学シフト）と（１）＋（２）のsin変調（Ａ核の化学シフト＋Ｂ核の化学シフト）を得ている。
【００５０】
なお、この実験では、２回目の積算時の位相を反転させることでＡ核の化学シフトとＢ核の化学シフトの差の変調を得ることができるが、２回の積算のデータを別々に観測し、処理時に加算／減算を行うことで、Ａ核の化学シフトとＢ核の化学シフトの和と差の化学シフトの情報を同時に得ることも可能である。
【００５１】
図２には、以上に説明した処理手順をステップＳ１〜ステップＳ４として示す。すなわち、ステップＳ１では、cos[(ωＡ+ωＢ)ｔ１]またはcos[(ωＢ+ωＡ)ｔ１]の変調が得られる。同様にしてsin[(ωＡ+ωＢ)ｔ１]またはsin[(ωＢ+ωＡ)ｔ１]の変調がかかった磁化に対する測定を行うことで、間接観測軸として、Ａ，Ｂの化学シフトの和で展開した信号を得ることができる。
【００５２】
ステップＳ２では、ＱＤｙ１ ＝x，ＱＤｙ２ ＝xでcos(ωＡｔ１)・cos(-ωＢｔ１)またはcos(ωＢｔ１)・cos (-ωＡｔ１)の変調、ＱＤｙ１ ＝y，ＱＤｙ２ ＝-yでsin(ωＡｔ１)・sin(-ωＢｔ１)またはsin(ωＢｔ１)・sin(-ωＡｔ１)の変調が行われる。
【００５３】
ステップＳ３では、ｔ１のインクリメントでcos(ωＡｔ１)またはcos(ωＢｔ１)の変調が行われる。ステップＳ４では、ｔ１のインクリメントでcos(-ωＡｔ１)またはcos(-ωＢｔ１）の変調が行われる。
【００５４】
また、この図２のパルス系列では二つの経路を通したピークの区別がつきやすいように一方が正のピークとして観測された時には、もう一方は負のピークとして観測されるようにＱＤ１の位相をＡ核とＢ核で反転させている。
【００５５】
実施例１の１３Ｃ／１５Ｎで安定同位体標識を施した測定試料の場合は、１３Ｃ核と１５Ｎ核の間にこのようなＪカップリングした状態を作ることができる。
【００５６】
図３は、図２の手法を１３Ｃ／１５Ｎで安定同位体標識を施した試料の測定に応用したパルス系列である。横軸は時間、90度パルスは細い縦線、180度パルスは太い縦線で示してある。なお、位相の記述がないＲＦパルスの位相はxとする。T＝13.8msとする。ＲＦパルスの位相回しは、次の通りである。
φ１＝｛x, -x, -x, x｝
φ２＝｛x, x, -x, -x｝
ＱＤｙＮ１*＝｛4(x), 4(y)｝, ｛4(x), 4(y)｝
ＱＤｙＣ１*＝｛4(-x), 4(-y)｝, ｛4(-x), 4(y)｝
ＱＤｙＮ２＝｛4(x), 4(-y)｝, ｛4(-y), 4(x)｝
ＱＤｙＣ２＝｛4(x), 4(-y)｝, ｛4(-y), 4(x)｝
φａｃｑ*＝｛2（x、-x）, 2（-x、x）｝
＊'は間接観測軸の各スライスごとにSTATES-TPPI法に従って180度位相を反転することを意味する。図中GARPは、デカップリングの一手法である。また、間接観測軸の展開はSTATES-TPPI法により行っている。
【００５７】
このパルス系列では15Ｎ→13Ｃの経路で磁化移動を起こしつつ、間接観測軸として１５Ｎ核の化学シフトと１３Ｃ核の化学シフトの和で展開した情報を得ることができるのと同時に、13Ｃ→15Ｎの経路で磁化移動を起こしつつ、間接観察軸として１５Ｎ核の化学シフトと１３Ｃ核の化学シフトの和で展開した情報を得ることができる。
【００５８】
この図３のパルス系列を用いた測定では、間接観測軸として１５Ｎ核の化学シフトと１３Ｃ核の化学シフトの和、直接観測軸として15Ｎまたは13Ｃの化学シフトを観測することができる。また、化学シフト展開と磁化移動をコンカテネーションの技術により同時に行っているため、緩和による磁化の損失も少ない。この実施例１の場合は、間接観測軸から得られる情報は15Ｎ→13Ｃの経路、13Ｃ→15Ｎの経路で同じものが得られるが、この図２のパルス系列ブロックの前後でその他の磁化移動を行った場合は、観測期に異なる化学シフト情報を持つ磁化が、間接観測軸の情報を参照することで同じ13Ｃ−15Ｎ結合から移動した磁化であることが特定できる。
【００５９】
よって、この図３のパルス系列ブロックを適当な測定に挿入することで、的確に異なる磁化の関連づけができる。つまり、図１に示したパルスＮＭＲ測定装置１にあっては、コンピュータ５０が出力系３０を制御することにより、図２に示すようなパルス系列の基本部分、図３に示すようなパルス系列を周波数シンセサイザ３１、トランスミッタ３２から発生させるので、目的とした磁化移動と化学シフト展開を同時に行うことができ、的確に異なる磁化の関連づけができる。
【００６０】
実施例２
実施例２は、蛋白質やペプチド中の二つの経路を磁化移動させた磁化の信号を観測する実験をパルスＮＭＲ測定装置１'を用いたパルスＮＭＲ測定方法により行う具体例である。図４は、二つのアミノ酸残基がペプチド結合して形成された蛋白質やペプチド構造における二つの磁化移動経路を示している。
【００６１】
特に、実施例２は、１３Ｃ／１５Ｎで安定同位体標識を施した蛋白質やペプチドにおいて、図４に矢印１００で示すアミドプロトン（１ＨＮ）、アミド窒素（１５Ｎ）、アルファ炭素（１３Ｃα）、アルファプロトン（１Ｈα）の相関を求める実験である。
【００６２】
パルスＮＭＲ測定装置１'は、測定磁場を例えば１４．１Ｔ（プロトン周波数に換算して６００ＭＨｚ）としている。この実施例２で用いるパルスＮＭＲ測定装置１'は、前記図１のパルスＮＭＲ測定装置１とほぼ同様の構成であるが、出力系３０'の周波数シンセサイザ３１'と、マグネット部１０'内のプローブ１１'の能力が異なる。
【００６３】
出力系３０'は、１Ｈ（６００．０ＭＨｚ）、１３Ｃ（１５０．８ＭＨｚ）、１５Ｎ（６０．８ＭＨｚ）をカバーする３種類以上の周波数を発信する。
【００６４】
プローブ１１'は、１Ｈ（６００．０ＭＨｚ）、２Ｈ（９２．１ＭＨｚ、周波数ロック用）の信号を検出する。測定試料は、前述したように１３Ｃ／１５Ｎで安定同位体標識を施した蛋白質などである。
【００６５】
実施例２の１３Ｃ／１５Ｎで安定同位体標識を施したタンパク質やペプチド中の図４に示すアミノ酸残基などの場合は、実施例１と同様に１３Ｃα核と１５Ｎ核の間にこのようなＪカップリングした状態を作ることができる。
【００６６】
図５は、図２の手法をタンパク質やペプチドの測定に応用したパルス系列である。横軸は時間、90度パルスは細い縦線、180度パルスは太い縦線で示してある。なお、位相の記述がないＲＦパルスの位相はxとする。
【００６７】
ＲＦパルスの位相回しは、次の通りである。
φ１＝｛x, -x, -x, x｝
φ２＝｛x, x, -x, -x｝
φ３＝｛4(x), 4(y)｝
φ４＝｛4(x), 4(y)｝
ＱＤｙＮ１*＝｛4(x), 4(y)｝, ｛4(x), 4(y)｝
ＱＤｙＣ１*＝｛4(-x), 4(-y)｝, ｛4(-x), 4(y)｝
ＱＤｙＮ２＝｛4(x), 4(-y)｝, ｛4(-y), 4(x)｝
ＱＤｙＣ２＝｛4(x), 4(-y)｝, ｛4(-y), 4(x)｝
φａｃｑ*＝｛x, -x｝.ystep(180%2)
＊'は間接観測軸の各スライスごとにSTATES-TPPI法に従って180度位相を反転する。図中GARPは、デカップリングの一手法である。また、間接観測軸の展開はSTATES-TPPI法により行っている。
【００６８】
また、各ディレイの長さはδＮＨ=2.25ms、δＣＨ=1.7ms、T=13.8ms、τＮＨ=5.4ms、τＣＨ=3.5msである。
【００６９】
このパルス系列は、図５に示すように、全体として、第１（NO.1）〜第４（NO.4）ブロックの４つのブロックからなる。NO.2ブロック及びNO.3ブロックは、定時間展開（CONSTANT TIME EVOLUTION）部である。これら定時間展開部は、前述した図２のパルス系列に対応するものである。
【００７０】
このパルス系列では、図４の矢印１００で示した１ＨＮ（アミドプロトン）→１５Ｎ（アミド窒素）→１３Ｃα（アルファ炭素）→１Ｈα（アルファプロトン）の経路で磁化移動を起こしつつ、間接観測軸として１５Ｎの化学シフトと１３Ｃの化学シフトの和で展開した情報を得ることができる。つまり、カルボニル炭素（13ＣＯ）を励起していない。
【００７１】
さらにこの図５のパルス系列を用いた測定では図４の矢印１０１で示した１Ｈα→１３Ｃα→１５Ｎ  →１ＨＮの経路で磁化移動した信号も負のピークとして観測することができ、単一の測定時間内に二種類の経路を通した磁化の信号を同時に得ている。
【００７２】
つまり、この図５のパルス系列を用いた測定では、観測間接軸として１５Ｎの化学シフトと１３Ｃαの化学シフトの和、直接観測軸として１ＨＮまたは１Ｈαの化学シフトを観測することができ、１３Ｃ／１５Ｎで標識を付けたタンパク質やペプチドの主鎖を構成する核のうち、カルボニル炭素（13ＣＯ）をのぞいた全ての化学シフトの情報を得ることができる。この例でも実施例１と同様にコンカテネーションの技術により、緩和による磁化の損失は少なくなっている。また、実施例１と同様に積算時に位相回しの異なる二つのデータに分けて測定し、加算、減算処理をあとで行うことによって１５Ｎの化学シフトと１３Ｃαの化学シフトの和と差の情報を同時に得ることも可能である。
【００７３】
１３Ｃ／１５Ｎで標識付けされたタンパク質やペプチドの実際の測定では、アミノ酸残基内の１５Ｎ，１３Ｃα間の磁化移動とアミノ酸残基間の１５Ｎ，１３Ｃα間の磁化移動の条件が非常に似ているので、この測定で得られるスペクトルには残基内と残基間の両方のピークが観測され、カルボニル炭素を除く主鎖の化学シフトの連鎖帰属が２次元測定のみで可能である。
【００７４】
以下に、具体例を示す。蛋白質やペプチド中のi番目のアミノ酸残基の１ＨＮから磁化移動が始まった磁化は、図４の矢印１００に示す１ＨＮｉ→１５Ｎｉ→１３Ｃαｉ  →１Ｈαｉの経路の磁化移動と矢印１０２に示す１ＨＮｉ→１５Ｎｉ→１３Ｃαｉ−１  →１Ｈαｉ−１の経路の磁化移動が起こるので、（１Ｈαｉ，１５Ｎｉ＋１３Ｃαｉ）のピークと（１Ｈαｉ−１，１５Ｎｉ＋１３Ｃαｉ−１）のピークが観測される。
【００７５】
さらに、このとき、ｉ番目のアミノ酸残基の１Ｈαから磁化移動が始まった磁化は、矢印１０１で示す１Ｈαｉ→１３Ｃαｉ  →１５Ｎｉ→１ＨＮｉの経路の磁化移動と矢印１０３で示す１Ｈαｉ→１３Ｃαｉ  →１５Ｎｉ＋１→１ＨＮｉ＋１の経路の磁化移動が起き、（１Ｈαｉ，１５Ｎｉ＋１３Ｃαｉ）のピークと（１Ｈαｉ＋１，１５Ｎｉ＋１＋１３Ｃαｉ）のピークが観測される。
【００７６】
この場合、観測されるピークは図６のようになり、２次元測定のみで１３Ｃ／１５Ｎで標識付けられたタンパク質やペプチドのカルボニル炭素を除く主鎖帰属が可能である。
【００７７】
実際に観測されるピークは図６の様に、直接観測軸が１Ｈαｉに対して間接観測軸１５Ｎｉ＋１３Ｃαｉと１５Ｎｉ＋１３Ｃαｉ−１の位置にピークが観測されるのと同時に、直接観測軸が１Ｈαｉに対して間接観測軸１５Ｎｉ＋１３Ｃαｉと１５Ｎｉ＋１＋１３Ｃαｉの位置にピークが観測される。したがって、これらのピークを結ぶことによりカルボニル炭素を除く主鎖中の核の化学シフトの連鎖帰属が可能である。
【００７８】
また、実際にクロレラユビキチンに対してこの測定を行った結果を図７、図８に示す。図７は、前記図５のパルス系列による測定結果である。図８は、図７の下辺部２００の拡大図である。
【００７９】
実施例３
実施例３も、蛋白質やペプチド中の二つの経路を磁化移動させた磁化の信号を観測する実験をパルスＮＭＲ測定装置１を用いたパルスＮＭＲ測定方法により行う具体例である。
【００８０】
特に、実施例３は、１３Ｃ／１５Ｎで安定同位体標識を施した化合物の残余双極子１３Ｃ／１５Ｎ間の残余双極子カップリングによる相関を求める実験に用いられる。この実施例３で用いるパルスＮＭＲ測定装置１は、測定磁場を例えば１４．１Ｔ（プロトン共鳴周波数に換算して６００ＭＨｚ）とし、前記図１のパルスＮＭＲ測定装置１と同様の構成である。すなわち、例えば６００ＭＨｚＮＭＲ装置の場合は、１３Ｃ（１５０．８ＭＨｚ）、１５Ｎ（６０．８ＭＨｚ）をカバーする２式以上からなる独立した出力系（周波数シンセサイザ、トランスミッタ、パワーアンプ）３０、３０'を有し、１３Ｃ（１５０．８ＭＨｚ）、１５Ｎ（６０．８ＭＨｚ）の信号を測定可能な送受信コイル（プローブ）１１を備えている。測定試料は、１３Ｃ／１５Ｎで安定同位体標識を施した測定試料である。
【００８１】
実施例３の動作について説明する。このパルスＮＭＲ装置１を用いて、液晶やファージ存在下で残余双極子カップリング（ＲＤＣ）相関に関する情報を得ることができる。
【００８２】
すなわち、Ａ核とＢ核の磁化が残余双極子カップリングしているとき、Ａ核の順位相磁化またはＢ核の順位相磁化は残余双極子カップリングによる変調によりＢ核と残余双極子カップリングしたＡ核の反位相磁化またはＡ核と残余双極子カップリングしたＢ核の反位相磁化になる。
【００８３】
このＢ核と残余双極子カップリングしたＡ核の反位相磁化またはＡ核と残余双極子カップリングしたＢ核の反位相磁化は、Ａ核に対する９０度パルスとＢ核に対する９０度パルスを同時に印加することで、それらを交換することが可能である。
【００８４】
さらに、交換された磁化を反位相磁化から順位相磁化への残余双極子カップリングによる変調を行うことによって、Ｂ核の順位相磁化またはＡ核の順位相磁化を得ることができ、Ａ核とＢ核の磁化の交換を行うことが可能になる。
【００８５】
これらのＡ核、Ｂ核間の磁化の交換と残余双極子カップリング展開を同時に行うためのパルス系列の基本部分は、前記図２に示したのと同じであり、このパルス系列を他のパルス系列の途中へ適当に挿入することにより、目的とした磁化移動と残余双極子カップリング展開を同時に行うことができる。また、実施例１の場合と異なり、実施例３の実験の場合は間接観測軸として時間Ｔの展開による変調を行う。
【００８６】
このパルス系列の基本部分は、前半部分（１）と後半部分（２）、およびその中間部分から構成されており、前半部分（１）では、ＲＦパルス６１、６２及び７１、７２を用いて、ＡｘまたはＡｙとＢｘまたはＢｙの順位相磁化を、２ＡｙＢｚまたは２ＡｘＢｚと２ＢｙＡｚまたは２ＢｘＡｚの反位相磁化の状態へ遷移させ、続く（１）と（２）の間の中間部分の90度ＲＦパルス６３、７３により、それら反位相磁化の交換（２ＡｙＢｚまたは２ＡｘＢｚ→２ＡｚＢｙまたは２ＡｚＢｘと、２ＢｙＡｚまたは２ＢｘＡｚ→２ＢｚＡｙまたは２ＢｚＡｘ）を行い、後半部分（２）では、ＲＦパルス６４、６５及び７４、７５を用いて、２ＡｚＢｙまたは２ＡｚＢｘと２ＢｚＡｙまたは２ＢｚＡｘの反位相磁化を、ＢｘまたはＢｙとＡｘまたはＡｙの順位相磁化の状態へ遷移させている。
【００８７】
また、図２では核磁化の交換と同時に一定時間展開手法により残余双極子カップリング展開を行っているが、前半部分（１）、後半部分（２）ではＡ核、Ｂ核の両方の磁化が横磁化の状態にあるので、残余双極子カップリング展開を同時に行うことができる。
【００８８】
したがって、このパルス系列による測定を行うことによって、二種類の磁化移動経路を同時に残余双極子カップリング展開した結果を得ることができる。
【００８９】
さらに、この実験では２回の積算時にそれぞれＲＦパルスの位相を変えることで、前半部分（１）と後半部分（２）におけるそれぞれの残余双極子カップリング展開を残余双極子カップリングの和で展開した信号として直交検波しており、実部のインターフェログラムとして
（１）のcos変調（Ａ核またはＢ核の残余双極子カップリング）×（２）のcos変調（Ｂ核またはＡ核の残余双極子カップリング）
−（１）のsin変調（Ａ核またはＢ核の残余双極子カップリング）×（２）のsin変調（Ｂ核またはＡ核の残余双極子カップリング）
のインターフェログラムを観測し、虚部のインターフェログラムとして
（１）のcos変調（Ａ核またはＢ核の残余双極子カップリング）×（２）のsin変調（Ｂ核またはＡ核の残余双極子カップリング）
＋（１）のsin変調（Ａ核またはＢ核の残余双極子カップリング）×（２）のcos変調（Ｂ核またはＡ核の残余双極子カップリング）
のインターフェログラムを観測し、結果として、（１）＋（２）のcos変調（Ａ核の残余双極子カップリング＋Ｂ核の残余双極子カップリング）と（１）＋（２）のsin変調（Ａ核の残余双極子カップリング＋Ｂ核の残余双極子カップリング）を得ている。
【００９０】
なお、この図２のパルス系列では二つの経路を通したピークの区別がつきやすいように一方が正のピークとして観測された時には、もう一方は負のピークとして観測されるようにＱＤ１の位相をＡ核とＢ核で反転させている。
【００９１】
実施例４
１３Ｃ／１５Ｎで安定同位体標識を施した蛋白質やペプチドのアミド窒素（１５Ｎ）、アルファ炭素（１３Ｃα）間の残余双極子カップリングによる相関を求める実験に用いられるとき、パルスＮＭＲ測定装置は、測定磁場を例えば１４．１Ｔ（プロトン共鳴周波数に換算して６００ＭＨｚ）としている。この実施例４で用いるパルスＮＭＲ測定装置１'は、前記図１のパルスＮＭＲ測定装置とほぼ同様の構成であるが、出力系３０'の周波数シンセサイザ３１'と、マグネット部内のプローブ１１'の能力が異なる。
【００９２】
出力系３０'は、１Ｈ（６００．０ＭＨｚ）、１３Ｃ（１５０．８ＭＨｚ）、１５Ｎ（６０．８ＭＨｚ）をカバーする３種類以上の周波数を発振する。
【００９３】
プローブ１１'は、１Ｈ（６００．０ＭＨｚ）、２Ｈ（９２．１ＭＨｚ、周波数ロック用）の信号を検出する。測定試料は、１３Ｃ／１５Ｎで安定同位体標識を施した蛋白質やペプチドなどである。
【００９４】
実施例４の動作について説明する。溶液ＮＭＲ装置を用いて、液晶やファージ存在下で残余双極子カップリング（ＲＤＣ）相関に関する情報を得ることができる。
【００９５】
実施例４の１３Ｃ／１５Ｎで安定同位体標識を施したタンパク質やペプチド中のアミノ酸残基などの場合は、実施例３と同様に１３Ｃα核と１５Ｎ核の間にこのような残余双極子カップリングした状態を作ることができる。
【００９６】
図５のパルス系列中の時間Ｔの展開を間接観測軸として行うことで、１５Ｎ（アミド窒素）→１３Ｃα（アルファ炭素）→１Ｈα（アルファプロトン）の経路で磁化移動を起こしつつ、間接観測軸として１５Ｎの残余双極子カップリングと１３Ｃαの残余双極子カップリングで展開した情報を得ることができる。
【００９７】
さらに図２のパルス系列を用いた測定では１Ｈα→１３Ｃα→１５Ｎ→１ＨＮの経路で磁化移動した信号も負のピークとして観測することができ、単一の測定時間内に二種類の経路を通した磁化の信号を同時に得ている。
【００９８】
以上に説明した実施例１〜実施例４の各実験に用いられる本実施の形態のＮＭＲ測定装置及び測定方法によれば、タンパク質やペプチド等のＮＭＲピーク帰属手続きでは、Ｊカップリングの磁化移動によって多次元化したスペクトルを用いる。このような場合、これまでの手法では、ある特定方向へ磁化の移動を行いながら、単一の核種についての化学シフト展開を行うことによって、磁化移動の特定経路の特定核種の化学シフトの情報を取得してきた。本発明により、異なる間接観測軸として観測していた二種類の化学シフト展開を同時に行うことと、二方向の経路の磁化移動を同時に行うことを１つの実験のなかで可能とし、データ収集に要する時間を大幅に短くすることができた。実施例２で示したように、タンパク質やペプチドに対する測定例では従来法では３次元測定を２種類行うことで同等の情報量を得てきたが、本発明により２次元測定のみで連鎖帰属に必要な情報を収集できるようになった。通常の３次元測定を一種類行うのには数十時間の測定時間を要するが、本発明により測定時間を数時間に短縮できるようになった。
【００９９】
また、複数経路を通った磁化のシグナルを観測する実験で、ピーク間の相関をより次元の少ないスペクトルで簡単に解析できるようになった。
【０１００】
さらに、複数経路を通った磁化のシグナルを観測する実験で、短時間で高感度なシグナルを得ることが可能になった。
【０１０１】
さらにまた、従来法では３次元データをコンピュータによりピーク帰属作業を行うことが必要であったが、本発明により２次元データのみで解析が可能になったので、データの帰属の作業が一枚の紙上でできるようになった。
【図面の簡単な説明】
【０１０２】
【図１】マルチチャンネル構成のパルスＮＭＲ測定装置のブロック図である。
【図２】Ａ核、Ｂ核間の磁化の交換と化学シフト展開を同時に行うためのパルス系列の基本部分を示す図である。
【図３】図２の手法を１３Ｃ／１５Ｎで安定同位体標識を施した試料の測定に応用したパルス系列を示す図である。
【図４】二つのアミノ酸残基がペプチド結合して形成された蛋白質構造における二つの磁化移動経路を示す図である。
【図５】図２の手法をタンパク質やペプチドの測定に応用したパルス系列を示す図である。
【図６】図５のパルス系列により観測されるピークパターン例を示す図である。
【図７】クロレラユビキチンに対して本発明の測定方法に基づいた測定行った結果を示す図である。
【図８】クロレラユビキチンに対して本発明の測定方法に基づいた測定行った結果を示す図（下辺部拡大図）である。
【図９】Ｐａｎｇらによるパルス系列を示す図である。
【図１０】二つのアミノ酸残基がペプチド結合して形成された蛋白質構造やペプチド構造における二つの磁化移動経路を示す図である。
【符号の説明】
【０１０３】
６３，７３  前半部（１）と後半部（２）の間の90度ＲＦパルス（磁化を交換するために同時に印加されるＲＦパルス）、６１，６２及び７１，７２  ＡｘまたはＡｙとＢｘまたはＢｙの順位相磁化を、２ＡｙＢｚまたは２ＡｘＢｚと２ＢｙＡｚまたは２ＢｘＡｚの反位相磁化の状態へ遷移させるＲＦパルス、６４，６５及び７４，７５  ２ＡｚＢｙまたは２ＡｚＢｘと２ＢｚＡｙまたは２ＢｚＡｘの反位相磁化を、ＢｘまたはＢｙとＡｘまたはＡｙの順位相磁化の状態へ遷移させるＲＦパルス
【図１】
2006162594.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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