(57)【要約】【課題】  安全性の高い天然物の中から、活性酸素消去作用、ラジカル消去作用又は一酸化窒素産生抑制作用を有するものを見出し、それを有効成分として含有した抗酸化剤及び皮膚化粧料を提供することを目的とする。【解決手段】  抗酸化剤及び皮膚化粧料に、ハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物を有効成分として含有せしめる。前記ハイドロコタイル属に属する植物は、チドメグサ（Hydrocotyle sibthorpioides Lam.）であることが好ましい。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗酸化剤。
【請求項２】
前記ハイドロコタイル属に属する植物が、チドメグサ（Hydrocotyle sibthorpioides Lam.）であることを特徴とする請求項１に記載の抗酸化剤。
【請求項３】
前記抽出物が、抽出溶媒として極性溶媒を用いてチドメグサ（Hydrocotyle sibthorpioides Lam.）の地上部及び／又は根部から抽出することにより得られる抽出物であることを特徴とする請求項２に記載の抗酸化剤。
【請求項４】
前記抽出物が、活性酸素消去作用、ラジカル消去作用及び一酸化窒素産生抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の抗酸化剤。
【請求項５】
ハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物を配合したことを特徴とする皮膚化粧料。
【請求項６】
前記ハイドロコタイル属に属する植物が、チドメグサ（Hydrocotyle sibthorpioides Lam.）であることを特徴とする請求項５に記載の皮膚化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、安全性の高い植物抽出物を有効成分として含有する抗酸化剤及び皮膚化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、特に生体成分を酸化させる要因として、活性酸素が注目されており、その生体への悪影響が問題となっている。活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、スーパーオキサイド（すなわち、酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン（・Ｏ２−））、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、一重項酸素（１Ｏ２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）等がある。これら活性酸素は、食細胞の殺菌機構にとって必須でありウイルスや癌細胞の除去に重要な働きを果たしているが、過剰に生成された活性酸素は、生体内の膜や組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。
【０００３】
例えば、活性酸素は、コラーゲン等の生体組織を分解、変性又は架橋したり、油脂類を酸化して、細胞に障害を与える過酸化脂質を生成したりすると考えられており、活性酸素によって引き起こされるこれらの障害が、皮膚のしわ形成・弾力性低下等の皮膚の老化症状の原因になるものと考えられている。
【０００４】
特に、生体内においてフェントン反応（過酸化水素と金属イオンとの反応）により生成されるヒドロキシラジカルは、活性酸素の中でも最も反応性が高く、タンパク質を破壊したり、ＤＮＡを切断したり、過酸化脂質の生成を惹起したりすることが知られている。
【０００５】
また、一酸化窒素は、大気汚染や酸性雨等の要因となる窒素酸化物であるが、近年、血管内皮由来弛緩因子、神経伝達物質、生体防御における微生物や腫瘍細胞の障害因子等、生体内で多彩な機能を示す生理活性物質であることが見出されている。生体防御においては、特にマクロファージから産生される一酸化窒素が細菌やウイルスの感染を防御しているが、一酸化窒素自体が強い化学反応性を有し、生体内分子と反応して細胞毒性を示すこと、一酸化窒素とスーパーオキサイドとの反応により細胞毒性のより強いヒドロキシラジカルやナイトロゲンジオキサイドが生成されること等が、フリーラジカルによる細胞障害の重要なメカニズムとして指摘されている（非特許文献１参照）。
【０００６】
したがって、活性酸素等による皮膚の老化症状を予防又は改善するためには、皮膚における一酸化窒素の産生過剰によりヒドロキシラジカル及びナイトロゲンジオキサイドが生成されるのを阻止し、活性酸素の生成を抑制することが有効であると考えられる。このような考えに基づき、従来から、種々の一酸化窒素産生抑制作用物質が提案されている（特許文献１、非特許文献２参照）。
【０００７】
また、抗酸化作用物質としては、木棉及び／又は黄花倒水蓮からの抽出物（特許文献２参照）、Brassica属に属する植物からの抽出物（特許文献３参照）、甘草の地上部からの抽出物（特許文献４参照）、黄杞からの抽出物（特許文献５参照）、藤茶からの抽出物（特許文献６参照）等が提案されている。
【特許文献１】特開２００２−８７９７５号公報
【特許文献２】特開２００３−２４６７４７号公報
【特許文献３】特開２００３−８１８４８号公報
【特許文献４】特開２００３−８１７４４号公報
【特許文献５】特開平６−６５０７４号公報
【特許文献６】特開２００１−９７８７３号公報
【非特許文献１】「FRAGRANCE JOURNAL 臨時増刊」1995年，No.14，p.156
【非特許文献２】「炎症」1995年，Vol.14，No.3，p.221−227
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、安全性の高い天然物の中から、活性酸素消去作用、ラジカル消去作用又は一酸化窒素産生抑制作用を有するものを見出し、それを有効成分として含有する抗酸化剤及び皮膚化粧料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、第１に、ハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗酸化剤を提供する（請求項１）。
【００１０】
上記発明（請求項１）においては、前記ハイドロコタイル属に属する植物が、チドメグサ（Hydrocotyle sibthorpioides Lam.）であることが好ましい（請求項２）。
【００１１】
また、上記発明（請求項２）においては、前記抽出物が、抽出溶媒として極性溶媒を用いてチドメグサ（Hydrocotyle sibthorpioides Lam.）の地上部及び／又は根部から抽出することにより得られる抽出物であることが好ましい（請求項３）。
【００１２】
さらに、上記発明（請求項１〜３）においては、前記抽出物が、活性酸素消去作用、ラジカル消去作用及び一酸化窒素産生抑制作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有することが好ましい（請求項４）。
【００１３】
本発明は、第２に、ハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物を配合したことを特徴とする皮膚化粧料を提供する（請求項５）。
【００１４】
上記発明（請求項５）においては、前記ハイドロコタイル属に属する植物が、チドメグサ（Hydrocotyle sibthorpioides Lam.）であることが好ましい（請求項６）。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、天然物であるハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物を有効成分とし、安全性が高く、優れた活性酸素消去作用、ラジカル消去作用、一酸化窒素産生抑制作用を有する抗酸化剤及び皮膚化粧料を得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、本発明について詳細に説明する。
〔抗酸化剤〕
本発明の抗酸化剤は、ハイドロコタイル（Hydrocotyle）属に属する植物からの抽出物を有効成分として含有する。
ここで、本発明において、「ハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物」には、ハイドロコタイル属に属する植物を抽出原料として得られる抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１７】
本発明において、抽出原料として用いる植物は、セリ科ハイドロコタイル属に属する植物である。ここで、ハイドロコタイル属に属する植物としては、例えば、チドメグサ（Hydrocotyle sibthorpioides Lam.）、オオバチドメグサ（Hydrocotyle nepalensis）、ノチドメ（Hydrocotyle maritima）、ケチドメグサ（Hydrocotyle delicate）、ミヤマチドメ（Hydrocotyle japonica）、オオチドメ（Hydrocotyle ramiflora）、ヒメチドメ（Hydrocotyle yabei）等が挙げられ、これらのうちチドメグサ（Hydrocotyle sibthorpioides Lam.）又はオオバチドメグサ（Hydrocotyle nepalensis）を抽出原料として用いるのが好ましく、特にチドメグサ（Hydrocotyle sibthorpioides Lam.）を抽出原料として用いるのが好ましい。
【００１８】
上記チドメグサ（Hydrocotyle sibthorpioides Lam.）は、本州、四国、九州、沖縄、中国華東・中南・華南・西南等の各地方に広く分布しており、それらの地域から容易に入手することができる。チドメグサは、清熱利湿（熱を冷まして湿気を追い出す）作用、去痰作用、鎮咳作用等を有することが知られており、急性黄疸型肝炎、感冒、咽喉腫瘍、百日咳、尿路感染症、暑気あたり等の予防、治療又は改善に用いられている。
【００１９】
上記抽出原料として使用し得るハイドロコタイル属に属する植物の部位としては、地上部、根部又はこれらの混合物を使用することができ、これらのうち、地上部を用いるのが、植物抽出物の収率が高い点で好ましい。上記地上部には、例えば、葉部、茎部、花部、種子部等が含まれ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて使用することができる。
【００２０】
ハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物に含有される活性酸素消去作用、ラジカル消去作用又は一酸化窒素産生抑制作用を有する物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によってハイドロコタイル属に属する植物から得ることができる。例えば、抽出原料を乾燥した後、そのまま、又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。この際、抽出原料の乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ハイドロコタイル属に属する植物は、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、ハイドロコタイル属に属する植物からの極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００２１】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用することが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００２２】
抽出溶媒として使用することのできる水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２３】
抽出溶媒として使用することのできる親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００２４】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０質量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０質量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して多価アルコール１〜９０質量部を混合することが好ましい。
【００２５】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００２６】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでも抗酸化剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【００２７】
以上のようにして得られるハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物は、抗酸化作用を有しており、その作用を利用して抗酸化剤として使用することができる。
【００２８】
ハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物が有する抗酸化作用は、例えば、活性酸素消去作用、ラジカル消去作用又は一酸化窒素産生抑制作用に基づいて発揮される。ただし、ハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物が有する抗酸化作用は、上記作用に基づいて発揮される抗酸化作用に限定されるわけではない。ここで、「活性酸素」には、スーパーオキサイド、過酸化水素、ヒドロキシラジカル、一重項酸素等が含まれる。また、「ラジカル」とは、不対電子を１つ又はそれ以上有する分子又は原子を意味し、スーパーオキサイド、ヒドロキシラジカル、ＤＰＰＨ等が含まれる。
【００２９】
本発明の抗酸化剤は、上記ハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物のみからなるものでもよいし、上記抽出物から製剤化したものでもよい。
上記ハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、液状等の任意の剤形に製剤化して提供することができ、他の組成物（例えば、後述する皮膚化粧料等）に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤等として使用することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味・矯臭剤等を用いることができる。
【００３０】
なお、本発明の抗酸化剤は、必要に応じて、活性酸素消去作用、ラジカル消去作用又は一酸化窒素産生抑制作用を有する他の天然抽出物を配合して有効成分として用いることができる。
【００３１】
本発明の抗酸化剤は、有効成分であるハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物が有する活性酸素消去作用、ラジカル消去作用又は一酸化窒素産生抑制作用を通じて、皮膚の老化等を予防・改善することができる。ただし、本発明の抗酸化剤は、これらの用途以外にも、活性酸素消去作用、ラジカル消去作用又は一酸化窒素産生抑制作用を発揮することに意義あるすべての用途に用いることができる。
【００３２】
〔皮膚化粧料〕
上記ハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物は、皮膚に適用した場合の使用感と安全性に優れているため、皮膚化粧料に配合するのに好適である。この場合、ハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物をそのまま配合してもよいし、当該抽出物から製剤化した抗酸化剤を配合してもよい。
【００３３】
上記ハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物を配合し得る皮膚化粧料としては、特に限定されるものではなく、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、リップ、入浴剤、ヘアートニック、ヘアーローション、石鹸、ボディーシャンプー等が挙げられる。
【００３４】
上記ハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物を皮膚化粧料に配合する場合、その配合量は、皮膚化粧料の種類等によって適宜調整することができるが、好適な配合率は、標準的な抽出物に換算して約０．０００１〜１０質量％である。
【００３５】
本発明の皮膚化粧料は、ハイドロコタイル属に属する植物からの抽出物が有する活性酸素消去作用、ラジカル消去作用又は一酸化窒素産生抑制作用を妨げない限り、通常の皮膚化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等を併用することができる。このように併用することにより、より一般性のある製品となり、また、それにより、併用された他の有効成分との間の相乗作用が通常期待される以上の優れた効果をもたらすことがある。
【００３６】
なお、本発明の抗酸化剤及び皮膚化粧料は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００３７】
以下、製造例、試験例及び配合例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。
【００３８】
〔製造例１〕チドメグサ抽出物の製造
細切りにしたチドメグサの地上部（葉部及び茎部）２００ｇに抽出溶媒２０００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃の温度条件下にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣についてさらに同様の抽出処理を行った。得られた各抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、乾燥してチドメグサ抽出物を得た。抽出溶媒として、水、５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）及び９０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：９）を用いたときの各抽出物の収率を表１に示す。
【００３９】
［表１］
試  料           抽出溶媒           抽出物収率（％）
１                 水                 ３０．５
２        ５０質量％エタノール        ２５．３
３        ９０質量％エタノール        ２１．２
【００４０】
〔試験例１〕スーパーオキサイド消去作用試験
製造例１で得られたチドメグサ抽出物について、以下のようにしてスーパーオキサイド消去作用の試験を行った。
【００４１】
３ｍＭのキサンチン、０．０５ＭのＮａ２ＣＯ３緩衝液（ｐＨ１０．２）、３ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液及び０．７５ｍＭのニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）を、試験管に各０．１ｍＬずつ採り、これに製造例１で得られた各試料溶液（試料１〜３）０．１ｍＬを添加し、２５℃で１０分間放置した。
【００４２】
次に、キサンチンオキシダーゼ溶液を加えて素早く攪拌し、２５℃で２０分間静置した。その後、６ｍＭの塩化銅０．１ｍＬを加えて反応を停止させて、波長５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００４３】
同様の操作と吸光度の測定を、酵素溶液を添加せずに行った。さらに、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の操作と吸光度の測定を行った。得られた結果から下記の式よりスーパーオキサイド消去率（％）を算出した。
【００４４】
スーパーオキサイド消去率(％)＝{１−(Ａ−Ｂ)／(Ｃ−Ｄ)}×１００
上記式において、Ａは「酵素溶液添加・試料溶液添加時の吸光度」を、Ｂは「酵素溶液無添加・試料溶液添加時の吸光度」を、Ｃは「酵素溶液添加・試料溶液無添加時の吸光度」を、Ｄは「酵素溶液無添加・試料溶液無添加時の吸光度」を示す。
【００４５】
次に、試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記スーパーオキサイド消去率の測定を行い、スーパーオキサイド消去率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ；ｐｐｍ）を内挿法により求めた。
上記試験の結果を表２に示す。
【００４６】
［表２］
試  料           抽出溶媒           ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）
１                 水                   ３２．５
２        ５０質量％エタノール          ２９．３
３        ９０質量％エタノール          ３８．８
【００４７】
表２に示すように、チドメグサ抽出物は、優れたスーパーオキサイド消去作用を有することが確認された。
【００４８】
〔試験例２〕ラジカル消去作用試験
製造例１で得られたチドメグサ抽出物について、以下のようにしてラジカル消去作用の試験を行った。
【００４９】
１．５×１０−４ＭのＤＰＰＨエタノール溶液３ｍＬに、製造例１で得られた各試料溶液（試料１〜３）３ｍＬを加え、直ちに容器を密栓して振り混ぜ、３０分間静置した後、波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。
【００５０】
コントロールとして、試料溶液の代わりに、試料溶液の溶媒のみを用いて同様の操作をし、波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。また、ブランクとして、エタノールに各試料溶液３ｍＬを加えた後、直ちに波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。測定された各吸光度より、下記の式によりラジカル消去率（％）を算出した。
【００５１】
ラジカル消去率(％)＝{１−(Ｂ−Ｃ)／Ａ}×１００
上記式において、Ａは「コントロールの吸光度」を、Ｂは「試料溶液を添加したときの吸光度」を、Ｃは「ブランクの吸光度」を示す。
【００５２】
次に、試料溶液の濃度を段階的に減少させて、上記ラジカル消去率の測定を行い、ラジカル消去率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ；ｐｐｍ）を内挿法により求めた。
上記試験の結果を表３に示す。
【００５３】
［表３］
試  料           抽出溶媒           ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）
１                 水                   １０２．３
２        ５０質量％エタノール            ９１．５
３        ９０質量％エタノール          １０６．８
【００５４】
表３に示すように、チドメグサ抽出物は、優れたラジカル消去作用を有することが確認された。
【００５５】
〔試験例３〕一酸化窒素産生抑制作用試験
製造例１で得られたチドメグサ抽出物について、以下のようにして一酸化窒素産生抑制作用の試験を行った。
【００５６】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７細胞，大日本製薬社製）を、１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ培地（日水製薬社製）にて前培養後、セルスクレーパーにより細胞を集めた。
【００５７】
１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを含有し、フェノールレッドを含まないＲＰＭＩ−１６４０培地（Sigma社製）を使用し、１ウェルあたり３×１０５ｃｅｌｌｓ／１００μＬの細胞密度で９６穴マイクロプレートに、上記集めた細胞を播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で４時間前培養した。
【００５８】
９６穴プレート中の培地を捨て、新鮮な培養液１００μＬを添加した後、予め２％ＤＭＳＯを含む培養液で溶解した試料溶液５０μＬを添加し、すぐにリポポリサッカライド（ＬＰＳ，終濃度１μｇ／ｍＬ，E.coli0111:B4，DIFCO社製）５０μＬを添加して細胞を刺激した。その後、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で４８時間培養し、それにより産生した二酸化窒素の量を指標として、一酸化窒素の産生量を下記の方法を用いて測定した。
【００５９】
一酸化窒素は、培養上清中に遊離するが、不安定であり、直ちに酸化されて二酸化窒素になるため、実際には一酸化窒素の遊離量を直接測定することは困難である。したがって、下記のように二酸化窒素の量を測定することで、各試料における一酸化窒素の遊離量を対比した。一酸化窒素は、単に二酸化窒素に酸化されるだけであるため、このように二酸化窒素の量を対比することで、各試料における一酸化窒素の遊離量の対比も客観的に行うことができると推定できる。
【００６０】
培養液中に産生した二酸化窒素の量は、培養上清と同量のグリース試薬を培養液に添加して、１０分間室温にて反応させた後、５４０ｎｍの吸光度をマイクロプレートリーダーで測定した。試料無添加時（コントロール）の二酸化窒素産生量を基に、一酸化窒素産生抑制率を下記の式により算出した。
【００６１】
一酸化窒素産生抑制率(％)＝{１−(Ｃ−Ｄ)／(Ａ−Ｂ)}×１００
上記式中、Ａは「試料無添加時の吸光度」を、Ｂは「試料無添加時のブランクの吸光度」を、Ｃは「試料添加時の吸光度」を、Ｄは「試料添加時のブランクの吸光度」を示す。
【００６２】
次に、試料溶液の濃度を段階的に減少させて、上記一酸化窒素産生抑制率を算出し、一酸化窒素産生抑制率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ；ｐｐｍ）の値を内挿法により算出した。
上記試験の結果を表４に示す。
【００６３】
［表４］
試  料           抽出溶媒           ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）
１                 水                   ５２．１
２        ５０質量％エタノール          ４５．７
３        ９０質量％エタノール          ６２．８
【００６４】
表４に示すように、チドメグサ抽出物は、いずれも優れた一酸化窒素産生抑制作用を有することが確認された。
【００６５】
〔配合例１〕
下記に示す組成のクリームを常法により製造した。
チドメグサ５０質量％エタノール抽出物（製造例１）        １ｇ
流動パラフィン                                          ５ｇ
サラシミツロウ                                          ４ｇ
セタノール                                              ３ｇ
スクワラン                                            １０ｇ
ラノリン                                                ２ｇ
ステアリン酸                                            １ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.0）         １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル                              ３ｇ
１，３−ブチレングリコール                              ６ｇ
酵母抽出液                                              ０．１ｇ
シソ抽出液                                              ０．１ｇ
シナノキ抽出液                                          ０．１ｇ
ジユ抽出液                                              ０．１ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                                １．５ｇ
香料                                                    ０．１ｇ
精製水                                残部（全量を１００ｇとする）
【００６６】
〔配合例２〕
下記に示す組成のパックを常法により製造した。
チドメグサ９０質量％エタノール抽出物（製造例１）        ５ｇ
ポリビニルアルコール                                  １５ｇ
ポリエチレングリコール                                  ３ｇ
プロピレングリコール                                    ７ｇ
エタノール                                            １０ｇ
セージ抽出液                                            ０．１ｇ
トウキ抽出液                                            ０．１ｇ
ニンジン抽出液                                          ０．１ｇ
パラオキシ安息香酸エチル                                ０．０５ｇ
香料                                                    ０．０５ｇ
精製水                                残部（全量を１００ｇとする）
【産業上の利用可能性】
【００６７】
本発明の抗酸化剤及び皮膚化粧料は、活性酸素によって引き起こされる皮膚の老化等の予防又は改善に大きく貢献できる。