(57)【要約】【目的】アトピー性皮膚炎や乾癬、湿疹などの皮膚疾患によって引き起こされる経皮の水分蒸散を抑制する効果に優れ、皮膚の乾燥を抑制し、荒れ肌改善効果にも優れた皮膚外用剤を提供する【構成】下記一般式（１）で表されるセリンジアミドを含有することを特徴とする皮膚外用剤。【化１】2006008584.tif 000009（但し、式中Ｒ１は炭素数７〜２３の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基であり、飽和、不飽和のどちらでもよく、Ｒ２は炭素数２〜１８の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基であり、飽和、不飽和のどちらでもよい。またこれらのアルキル基はヒドロキシル化されていてもよい。）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で表されるセリンジアミドを含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【化１】
2006008584.tif 000008
（但し、式中Ｒ１は炭素数７〜２３の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基であり、飽和、不飽和のどちらでもよく、Ｒ２は炭素数２〜１８の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基であり、飽和、不飽和のどちらでもよい。またこれらのアルキル基はヒドロキシル化されていてもよい。）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミノ酸、脂肪酸などからなるセリンジアミドを含有する皮膚外用剤に関し、アトピー性皮膚炎や乾癬、湿疹などの皮膚疾患によって引き起こされる経皮の水分蒸散を抑制する効果に優れ、また皮膚の乾燥を抑制し、荒れ肌改善効果にも優れた皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の最外層にある角質層は、全身を被覆して外界からの様々な刺激や乾燥などから生体を保護するバリアの役目を果たしている。肌が健全な状態であれば、この角質層がバリア防御層となって、紫外線や乾燥などのあらゆる外的刺激から肌を保護している。
【０００３】
一方、アトピー性皮膚炎や乾癬、湿疹などの皮膚疾患は、バリア機能の低下、経皮水分蒸散量の増加、さらにサイトカイン産生の促進や炎症の増大などを引き起こし、アレルゲンや刺激物が容易に皮膚へと進入できる肌状態にあると考えられている（非特許文献１参照）。
【０００４】
また生体のバリア機能が何らかの原因で崩れると、紫外線やアレルゲンなどの外的刺激に対してバリア機能が低下し、きめの細やかさやハリ、みずみずしさなどが失われ、乾燥やカサツキなど、いわゆる荒れ肌となる。
【０００５】
バリア機能には、角質層の細胞間脂質が重要な役割を果たしており、その細胞間脂質はセラミド、コレステロール、脂肪酸などの脂質で構成されているが、荒れ肌では、細胞間脂質の分子配列が乱れて分子間に緩みや隙間が生じており、この緩みや隙間から水分が蒸散してしまうことが荒れ肌の原因の１つと考えられている（非特許文献２参照）。
【非特許文献１】濱中  すみ子、「保湿剤−セラミド−」、「皮膚科の臨床」、金原出版社、２００２年１０月３０日発行、第４４巻、第１１号、１２３１−１２３８頁
【非特許文献２】坂  貞徳、八田  一郎、「高輝度Ｘ線回折を用いた角質層の構造解析」、「フレグランスジャーナル」、フレグランス  ジャーナル社、２００２年１月１５日発行、第３０巻、１号、３４−３９頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、アトピー性皮膚炎や乾癬、湿疹などの皮膚疾患によって引き起こされる経皮の水分蒸散を抑制する効果に優れ、また皮膚の乾燥を抑制し、荒れ肌改善効果にも優れる皮膚外用剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記事情に鑑み、鋭意研究を行った結果、種々の脂肪酸やアルキルアミンを用いて容易に製造されるジアミド構造を有するアミノ酸が、優れた水分蒸散抑制効果、かつ荒れ肌改善効果を示すことを確認し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち本発明は、下記一般式（１）で表されるセリンジアミドを含有することを特徴とする皮膚外用剤にある。
【０００９】
【化１】
2006008584.tif 000002
【００１０】
（但し、式中Ｒ１は炭素数７〜２３の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基であり、飽和、不飽和のどちらでもよく、Ｒ２は炭素数２〜１８の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基であり、飽和、不飽和のどちらでもよい。またこれらのアルキル基はヒドロキシル化されていてもよい。）
【発明の効果】
【００１１】
本発明は、アトピー性皮膚炎や乾癬、湿疹などの皮膚疾患によって引き起こされる経皮の水分蒸散を抑制すると共に、紫外線やアレルゲンなどの外的刺激に対してバリア機能が低下することにより起こる荒れ肌を改善する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
以下、本発明の実施の形態を詳述する。
【００１３】
本発明に用いられるセリンジアミドは、生体内の必須アミノ酸の１つであるＬ−セリンと、脂肪酸およびアルキルアミンから、例えば、以下のような定法によって合成することができる。
【００１４】
Ｚ−Ｌ−セリンとアルキルアミンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶媒中、ペプチド縮合剤を用いてアミド化した後、パラジウムを触媒として水素気流下で反応させベンジルオキシカルボニル基（Ｚ基）を除去した。続いてパラジウムの除去、濃縮操作後、適当な溶媒に再溶解し、トリエチルアミン存在下で脂肪酸クロリドと反応させるか、またはペプチド縮合剤を用いて脂肪酸と反応させるとセリンジアミドが得られる。
【００１５】
本発明に用いられるセリンジアミドは、下記一般式（１）で表される。
【００１６】
【化２】
2006008584.tif 000003
【００１７】
一般式（１）中、Ｒ１は炭素数７〜２３（特に好ましくは炭素数１５〜１９）の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基であり、飽和、不飽和のどちらでもよく、当該アルキル基はヒドロキシル化されていてもよい。
【００１８】
またＲ２は炭素数２〜１８（特に好ましくは炭素数４〜８）の直鎖状または分岐鎖状の
アルキル基であり、飽和、不飽和のどちらでもよく、当該アルキル基はヒドロキシル化されていてもよいが、Ｒ２が、−Ｃ６Ｈ１３の場合、本発明の効果が特に優れる。
【００１９】
また具体的には下記構造式（２）から（５）で表されるセリンジアミドを挙げることができる。
【００２０】
【化３】
2006008584.tif 000004
【００２１】
【化４】
2006008584.tif 000005
【００２２】
【化５】
2006008584.tif 000006
【００２３】
【化６】
2006008584.tif 000007
【００２４】
本発明におけるセリンジアミドの配合量は、皮膚外用剤の総量を基準として、０．０１〜５０．０質量％（以下、単に％で示す）が好ましく、特に０．１〜２０％が好ましい。この下限未満の配合量では、本発明の目的とする効果が十分でなく、一方、上限を超えてもその増加分に見合った効果の向上がなく、好ましくない。
【００２５】
本発明の皮膚外用剤は、外用剤として医薬品に適用される他に、医薬部外品や、皮膚化粧料、入浴剤などに適用でき、剤型的には例えばローション類、乳液類、クリーム類、軟膏類、パック類などとすることができる。
【実施例】
【００２６】
以下、実施例および比較例に基づいて本発明を詳説する。尚、本発明は以下の実施例に何ら限定されるものではない。
製造例１
セリンジアミド２［上記構造式（２）］
Ｚ−Ｌ−セリン１．５ｇをＤＭＦ１５ｍＬに溶かし、ｎ−ヘキシルアミン０．９ｍＬおよびペプチド縮合剤として１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）１．３ｇと１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１水和物（ＨＯＢｔ）１．１ｇを加え、室温にて一晩攪拌した。反応終了後、酢酸エチルで抽出し、塩酸洗浄、硫酸ナトリウム上で乾燥後、溶媒を留去し、Ｚ−Ｌ−セリンヘキシルアミドを得た。これをジオキサンとメタノールの混合溶媒４０ｍＬに溶解し、パラジウムカーボン（５％パラジウム）５００ｍｇを加えて、水素雰囲気下（常圧）、常温で５時間攪拌した。不溶物を濾過した後、ろ液を減圧下で濃縮した。さらに濃縮物をトルエン２０ｍＬに再溶解し、トリエチルアミン１．３ｍＬとステアロイルクロリド２ｍＬを加えた。反応終了後、抽出洗浄および濃縮を行い、得られた結晶をヘキサンで洗浄することにより、上記構造式（２）のセリンジアミド２を１．７ｇ得た。
セリンジアミド２の１Ｈ−ＮＭＲ測定結果を示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８６（ｔ，６Ｈ），１．２５（ｓ，３４Ｈ），１．４０−１．４５（ｍ，２Ｈ），１．６０−１．６５（ｍ，２Ｈ），２．２０−２．２５（ｍ，２Ｈ）３．１５−３．２５（ｍ，２Ｈ），３．４０（ｄｄ，２Ｈ），３．５５（ｔ，１Ｈ），４．１４（ｄｄ，１Ｈ），４．３０−４．３５（ｍ，１Ｈ），６．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），６．７８（ｓ，１Ｈ）．
製造例２
セリンジアミド３［上記構造式（３）］
製造例１に従い調製したＺ−Ｌ−セリンヘキシルアミド１ｇをジオキサンとメタノールの混合溶媒２０ｍＬに溶解し、パラジウムカーボン（５％パラジウム）２５０ｍｇを加え
て、水素雰囲気下（常圧）、常温で５時間攪拌した。不溶物を濾過した後、ろ液を減圧下で濃縮した。さらに濃縮物をＤＭＦ５ｍＬに再溶解し、リノール酸１．１ｍＬおよびペプチド縮合剤としてＷＳＣ６５４ｍｇとＨＯＢｔ４７５ｍｇを加えた。反応終了後、抽出洗浄および濃縮を行い、得られた結晶をエーテルとヘキサンで洗浄することにより、上記構造式（３）のセリンジアミド３を０．５４ｇ得た。
セリンジアミド３の１Ｈ−ＮＭＲ測定結果を示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８１（ｔ，６Ｈ），１．２５（ｓ，２０Ｈ），１．３５−１．４０（ｍ，２Ｈ），１．５５−１．６０（ｍ，２Ｈ），１．９５−２．２０（ｍ，４Ｈ），２．１５−２．２０（ｍ，２Ｈ），２．７０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ），３．１５−３．２０（ｍ，２Ｈ），３．３５（ｄｄ，１Ｈ），３．５０−３．５５（ｍ，１Ｈ），４．０８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），４．２５−４．３０（ｍ，１Ｈ），５．２５−５．３０（ｍ，４Ｈ），６．５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），６．７１（ｓ，１Ｈ）．
製造例３
セリンジアミド４［上記構造式（４）］
製造例１に従い調製したＺ−Ｌ−セリンヘキシルアミド１．５ｇをジオキサンとメタノールの混合溶媒３０ｍＬに溶解し、パラジウムカーボン（５％パラジウム）３５０ｍｇを加えて、水素雰囲気下（常圧）、常温で５時間攪拌した。不溶物を濾過した後、ろ液を減圧下で濃縮した。さらに濃縮物をＤＭＦ１５ｍＬに再溶解し、ミリスチン酸１．１ｇおよびペプチド縮合剤としてＷＳＣ８９２ｍｇとＨＯＢｔ７１２ｍｇを加えた。反応終了後、抽出洗浄および濃縮を行い、得られた結晶をエーテルとヘキサンで洗浄することにより、上記構造式（４）のセリンジアミド４を１．２５ｇ得た。
セリンジアミド４の１Ｈ−ＮＭＲ測定結果を示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８７（ｔ，６Ｈ），１．２５（ｓ，２６Ｈ），１．４０−１．４５（ｍ，２Ｈ），１．６０−１．６５（ｍ，２Ｈ），２．２５−２．３０（ｍ，２Ｈ）３．１５−３．２５（ｍ，２Ｈ），３．３５（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝３．３，９．８Ｈｚ），３．５５−３．６０（ｍ，１Ｈ），４．１６（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝３．２，１１．４Ｈｚ），４．３０−４．３５（ｍ，１Ｈ），６．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），６．７３（ｓ，１Ｈ）．
製造例４
セリンジアミド５［上記構造式（５）］
製造例１に従い調製したＺ−Ｌ−セリンヘキシルアミド０．５ｇをジオキサンとメタノールの混合溶媒５ｍＬに溶解し、パラジウムカーボン（５％パラジウム）１５０ｍｇを加えて、水素雰囲気下（常圧）、常温で５時間攪拌した。不溶物を濾過した後、ろ液を減圧下で濃縮した。さらに濃縮物をＤＭＦ５ｍＬに再溶解し、ドデカン酸４８５ｍｇおよびペプチド縮合剤としてＷＳＣ２９７ｍｇとＨＯＢｔ２３７ｍｇを加えた。反応終了後、抽出洗浄および濃縮を行い、得られた結晶をエーテルとヘキサンで洗浄することにより、上記構造式（５）のセリンジアミド５を０．３８ｇ得た。
セリンジアミド５の１Ｈ−ＮＭＲ測定結果を示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８６（ｔ，６Ｈ），１．２６（ｓ，３９Ｈ），１．４０−１．４５（ｍ，２Ｈ），１．５５−１．６０（ｍ，２Ｈ），２．２０−２．３０（ｍ，２Ｈ）３．２０−３．２５（ｍ，２Ｈ），３．５０（ｄｄ，１Ｈ），４．１５（ｄｄ，１Ｈ），４．３０−４．３５（ｍ，１Ｈ），６．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），６．７４（ｓ，１Ｈ）．
実施例１〜４および比較例１
本発明を人工膜に適用したときの水分蒸散量を次の試験方法により調べた。
１．試料と実験方法
脂質溶液（セラミド１．１ｍｇ、コレステロール０．２ｍｇ、パルミチン酸０．４ｍｇ、コレステロール硫酸０．３ｍｇを適当量のクロロホルムとメタノールの混合溶媒に溶解させた溶液）と、この脂質溶液に製造例１の化合物０．２ｍｇ、または製造例２の化合物０．０２ｍｇ、または製造例３あるいは４の化合物をそれぞれ０．４ｍｇを添加し、各セリンジアミドを含む溶液を調製した。次に、脂質溶液および製造例１〜４の化合物を含む脂質溶液を、それぞれ６５℃窒素気流下で乾燥、次いでロータリーポンプ真空下で一晩乾燥後、蒸留水を添加し、脂質懸濁液とした。この脂質懸濁液は、加温処理を施した後、ホットプレート上でメンブレンフィルターＧＳ（ミリポア社製ＧＳＷＰ０２５００）に人工膜を形成させるために数回に分けて塗布した。この時、全てのフィルターに２ｍｇの脂質が含まれるように調製した。最終塗布後、３０分以上放置し乾燥させた。
【００２７】
調製した人工膜の水分蒸散量は、水５ｍＬを添加したフランツセルを用いて３８℃、１８時間放置前後の水分量より算出し、脂質溶液のみの水分蒸散量と相対評価した。
２．結果
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群                                          相対水分蒸散量
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実施例１  セリンジアミド２含有脂質溶液      ０．４３±０．０１
実施例２  セリンジアミド３含有脂質溶液      ０．４８±０．０４
実施例３  セリンジアミド４含有脂質溶液      ０．５４±０．０５
実施例４  セリンジアミド５含有脂質溶液      ０．６６±０．０３
比較例１  脂質溶液のみ                      １．００±０．０８
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値は、平均値±標準偏差、ｎ＝３
本試験の結果から実施例１〜４に係るセリンジアミドは、比較例１と比較して明らかに水分蒸散を抑制する効果を有することがわかる。
【００２８】
尚、製造例１〜４のセリンジアミドを同量（０．２ｍｇ）ずつ脂質溶液に添加して、上記試験を行ったところ、セリンジアミド２は、他のセリンジアミドと比べ、２．３〜２．７倍もの水分蒸散抑制効果を示し、他のセリンジアミドと比べ優れた水分蒸散抑制効果を示すことがわかった。
実施例５および比較例２
本発明を肌荒れした皮膚に適用したときの荒れ肌改善効果を次の試験方法により調べた。
本実施例および比較例で使用した実験動物
試験開始時９週齢のヘアレスマウス１群５匹を用いた。
２．水分蒸散量の測定
２−１．測定装置及び条件
経皮水分蒸散量（以下、ＴＥＷＬと略記する）は、連続発汗測定装置ハイドログラフＡＭＵ−１００（ケイアンドエス社製）を用いて次の通りに測定した。１平方センチメートルのカプセルを皮膚に密着させ、カプセル内に窒素ガスを導入（３００ｍＬ／ｍｉｎ）し、カプセルに送り出す前とカプセルから回収した後の窒素ガス中の水蒸気量を測定した。
この値の差から、１分当たり皮膚１平方センチメートルから蒸散する水分量（ｍｇ／ｃｍ２）を算出し、ＴＥＷＬとした。
２−２．試料と実験方法
基剤（プロピレングリコール：エタノール＝３：７）を用い、製造例１のセリンジアミド２を０．１％、０．３％、１．０％の濃度に調製した。この調製後の試料０．０５ｍＬを予めＴＥＷＬを測定したヘアレスマウスの背部皮膚（直径２．５ｃｍ）に１日１回、１週間に５回の頻度で４週間連続の塗布を行った。その後、事前塗布の最終塗布から３日目に紫外線Ｂ波長（ＵＶＢ）を０．１５Ｊ／ｃｍ２、１回照射した。
【００２９】
その紫外線照射直後から事前塗布と同様の量、頻度で照射後３日まで各試料を塗布した。そして、照射後３日目のＴＥＷＬを測定し、試験開始時のＴＥＷＬを基準にして、ＵＶＢによりＴＥＷＬがどれだけ変動したかを示す相対値であるＴＥＷＬ変動率（＝照射後３日目のＴＥＷＬ値／試験開始時のＴＥＷＬ値）を算出し、基剤群と各群の平均値を比較した。
２−３．結果
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群                                        ＴＥＷＬ変動率
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
実施例５  セリンジアミド２（０．１％）    ４．２５±０．９８
（０．３％）    ３．９０±１．００
（１．０％）    １．８０±０．２７
比較例２  基剤のみ                        ９．１２±２．３２
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
値は、平均値±標準誤差
本試験の結果からセリンジアミド２が、比較例２と比較して明らかに、荒れ肌を改善する効果を有することが分かる。
実施例６、７および比較例３、４
製造例１で製造したセリンジアミド２を下記の調製方法に従いスキンローションおよびスキンクリームを調製し、これを試料として下記の荒れ肌改善試験に従って評価した。
スキンローションの組成
原  料  成  分                    配合量（質量％）
Ａ成分
オリーブ油                                １０．０
ミリスチン酸イソプロピル                    １．０
モノラウリン酸
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン      ０．５
プロピレングリコール                        １．０
グリセリン                                  ２．０
Ｂ成分
メチルパラベン                              ０．１
エタノール                                  ７．０
精製水                                  総量を１００とする残量
Ｃ成分
セリンジアミド２                            １．０  （実施例６）
または０      （比較例３）
調製方法
Ｃ成分のセリンジアミド２をＢ成分に添加して、均一に溶解した後、Ａ成分を添加して混合撹拌分散し、次いで容器に充填する。使用時には内容物を均一に振盪分散して使用する。
スキンクリームの組成
原  料  成  分                配合量（質量％）
Ａ成分
密ロウ                                  ２．０
ステアリン酸                            ５．０
ステアリルアルコール                    ５．０
還元ラノリン                            ２．０
スクワレン                            ２０．０
モノステアレートソルビタン              ３．０
モノステアレート
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン  ３．０
プロピレングリコール                    ５．０
Ｂ成分
メチルパラベン                          ０．２
精製水                              総量を１００とする残量
Ｃ成分
セリンジアミド２                        １．０  （実施例７）
または  ０      （比較例４）
調製方法
Ｃ成分のセリンジアミド２をＢ成分に添加して、Ａ，Ｂ成分を各々８０℃に加熱溶解した後、混合して撹拌しつつ、３０℃まで冷却してスキンクリームを調製した。
荒れ肌改善試験方法
下脚に荒れ肌を有する４０歳から５５歳の被験者２０名を対象として８週間連用後の効果を調べた。被験者の左側下脚試験部位に１日２回約１ｇの皮膚外用剤を試料として塗布し、連用開始前及び終了後の皮膚の乾燥状態を次の基準によって評価した。
右側下脚は試料を塗布せず、対照とした。
＜評価基準＞
−    ：正常
＋−  ：軽微乾燥、落屑なし
＋    ：乾燥、落屑軽度
＋＋  ：乾燥、落屑中程度
＋＋＋：乾燥、落屑顕著
連用前後の試験部位と対照部位の判定結果を比較し、皮膚の乾燥状態が２段階以上改善された場合を（例えば＋から−、＋＋＋から＋のように）「有効」、１段階改善された場合を「やや有効」、変化がなかった場合を「無効」とした。
【００３０】
尚、連用後に皮膚の乾燥が進んだ例はなかった。
荒れ肌改善試験の結果を下記表１に示す。
（表１）
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荒れ肌改善効果    実施例６      実施例７      比較例３    比較例４
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有効            １５          １６            ３          ３
やや有効            ２            ２            ３          ４
無効              ３            ２          １４        １３
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本試験結果から実施例６および実施例７は、比較例３および比較例４と比較して明らかに肌荒れを改善していることが分かる。また、本発明のスキンローションおよびスキンクリームによる刺激やかゆみなどの皮膚の異常は認められなかった。
【産業上の利用可能性】
【００３１】
外用剤として医薬品、医薬部外品や、皮膚化粧料、入浴剤などに適用でき、剤型的には例えばローション類、乳液類、クリーム類、軟膏類、パック類などとすることができ、皮膚の美容の面からも非常に有用である。