(57)【要約】【課題】  優れた安全性と抗腫瘍作用を有する抗腫瘍組成物の提供。【解決手段】  ヒメマツタケの熱水抽出物と牛グロブリン濃縮物とを含有することを特徴とする抗腫瘍組成物。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒメマツタケの熱水抽出物と牛グロブリン濃縮物とを含有することを特徴とする抗腫瘍組成物。
【請求項２】
ヒメマツタケの熱水抽出物が、ヒメマツタケの子実体、ヒメマツタケの子実体の細胞壁破壊物、ヒメマツタケ培養物、ヒメマツタケ培養物の細胞壁破壊物、それらの乾燥物の何れか１種以上から得られたものであることを特徴とする請求項１記載の抗腫瘍組成物。
【請求項３】
熱水抽出物が、ヒメマツタケの熱水抽出液を減圧濃縮し、次いでエタノールで沈澱処理し、次いで液体クロマトグラフィーで分画処理し、次いで透析した後、凍結乾燥したものであることを特徴とする請求項１又は２記載の抗腫瘍組成物。
【請求項４】
医薬又は健康食品である請求項１〜３の何れか１項記載の抗腫瘍組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ハラタケ属（Agaricus）のキノコである「学名」Agaricus blazei Murrill「正式和名」ヒメマツタケ（一名、カワリハラタケ）の抽出物と牛グロブリン濃縮物とを必須成分とした抗腫瘍作用に優れた抗腫瘍組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗腫薬は、がん細胞の増殖阻止作用をもつ薬物で、増殖に必要な核酸や蛋白質の合成を直接阻害することで作用を発現する細胞毒性薬と、免疫機構を介して間接的に阻害する生物学的応答調節物質（ＢＲＭ）がある。
【０００３】
ＢＲＭに分類されるヒメマツタケについては、当該本発明者の一人、伊藤均らにより１９８０年日本癌学会総会で報告されたのが契機であり、すでに公的学会・学術誌に６０報余の発表がされている(例えば、特許文献１〜３参照)。
しかし、有害作用のない細胞毒性薬はなく、作用機序の異なる複数の抗腫瘍薬を少量ずつ組合せることにより、有害作用の軽減をはかりつつ、有効性を高める多剤併用療法が行われる。
【０００４】
そこで、いわゆるＢＲＭに属するキノコ類、海藻類、クマ笹、ローヤルゼリー、サメ軟骨、人参、十全大補湯などの漢方方剤の単独及び併用、さらに細胞毒性薬とＢＲＭとの併用が一般的に行なわれる。しかし、安全性と抗腫瘍作用について未だ十分に満足の行くものが得られていなかったのが実状であった。
【特許文献１】特開昭６４−６７１９４号公報
【特許文献２】特開昭６４−６７１９５号公報
【特許文献３】特開平２−７８６３０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、斯かる従来の実状に鑑みてなされたものであり、優れた安全性と抗腫瘍作用を有する組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、ヒメマツタケの熱水抽出物と牛グロブリン濃縮物とを含有することを特徴とする抗腫瘍組成物により上記課題を解決したものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明組成物は、毒性がなく安全性に優れ、しかも高い抗腫瘍作用を有するので、経口投与により腫瘍の抑制、治療を効果的に行なうことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明において、ヒメマツタケの熱水抽出物は、ヒメマツタケの子実体、ヒメマツタケ培養物、ヒメマツタケの子実体の細胞壁破壊物、ヒメマツタケ培養物の細胞壁破壊物、それらの乾燥物の何れか１種以上から得られるが、保存性、取扱性及び抽出効率の点で当該乾燥物から抽出するのが好ましい。
【０００９】
本発明において、熱水抽出に先立ち、ヒメマツタケの子実体やヒメマツタケ培養物、あるいはそれらの細胞壁破壊物やそれらの乾燥物を有機溶媒又は含水有機溶媒で抽出処理して、これらに特有の臭気成分や色素成分を除去しておくのが望ましい。ここに用いる有機溶媒としてはメタノール、エタノール、酢酸エチル、エーテル等があり、また含水有機溶媒としては一般に３０％以下の範囲で水を含有する含水メタノール、含水エタノール等があるが、取扱性及び残留有機溶媒の点で８０％程度のエタノールが好ましい。
【００１０】
また、本発明の熱水抽出物としては、熱水抽出液、その減圧濃縮液あるいはその凍結乾燥物の何れであっても良いが、熱水抽出液を減圧濃縮し、次いでエタノールで沈澱処理し、次いで液体クロマトグラフィーで分画処理し、次いで透析した後、凍結乾燥したものが望ましい。
【００１１】
因に、ヒメマツタケの子実体の細胞壁破壊乾燥物をその倍量の熱水で２時間抽出し、その熱水抽出液を更に減圧濃縮、液体クロマトグラフィーによる分画、透析及び凍結乾燥して得られる抽出物は、その一例を挙げると、次のような化学的組成を有する。粗灰分５．３６％（重量％、以下同じ）、粗蛋白４１．２０％、粗脂質３．５４％、粗繊維６．２０％、糖質４３．５７％、エルゴステロール０．１３％。これらの粗灰分、粗蛋白、粗脂質及び糖質は、更に分析すると、それぞれ表１、表２、表３及び表４の組成を有する。
【００１２】
【表１】
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【００１３】
【表２】
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【００１４】
【表３】
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【００１５】
【表４】
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【００１６】
上記のような組成を有する抽出物は一定の分解点、融点を示さず、強熱により炭化するが、著しく安定である。室温では少なくとも３年間は安定であり、１２０℃×２０分間の滅菌処理を行なっても活性の低下は見られない。
【００１７】
牛グロブリン濃縮物は、アメリカ農務省の指定するＧＭＰ規準に合致した高純度品用施設で、食用牛の血清から精製された１００％天然品であり、保存性が高く安定である。牛グロブリン濃縮物の成分を表５に示す。この数値は、米国プロライアント社のデータである。
【００１８】
【表５】
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【００１９】
本発明組成物中には、上記の如きヒメマツタケの熱水抽出物と牛グロブリン濃縮物が配合されるが、両者の配合割合は、前者１質量部に対し、後者０．５〜２０質量部とするのが好ましい。
【００２０】
また、本発明において、飲食品として供する方法には例えば下記のような方法が挙げられる。
１）前記した組成物をそのままふりかけとして、又はティーパックやカプセルの中に充填して使用する方法。
２）前記したような組成物に糖類、酸類、塩類及び香料類等を調合して使用する方法。
３）前記したような組成物をベイク品、発酵品、練り製品、乳製品、油脂製品、調味料、菓子等の食品、又はコーヒー、ココア、茶、果実ジュース、野菜ジュース、発酵飲料、清涼飲料等の飲料の製造工程で添加して使用する方法。
【実施例】
【００２１】
以下実施例を挙げて本発明を更に説明する。
【００２２】
実施例１
ヒメマツタケ培養物（培養菌糸体及び培養濾液）から以下のようにして抽出物を得た。
まず、ヒメマツタケ菌糸体を、グルコース２０ｇ、酵母エキス５ｇ、水１Ｌから成る液体培地（pH５．５）にて、３０℃で３０日間振盪培養した。遠心分離した菌糸体に７倍量の水を加え、９５℃にて２時間加熱抽出し、抽出濾液にエタノールを加えて多糖を沈澱させた。多糖を遠心分離して集め、アセトン次いでエーテルにて洗浄して、菌糸体１ｇ当り２１mgの熱水抽出物を得た。複合成分は分子量１０5〜１０7（ゲル濾過法）、［α］D＋５７°（ｃ＝２．０、水）、蛋白含量５％、少量のガラクトースとリボースを伴うグルコマンナン蛋白複合体であった。
次に、上で述べた菌糸体を培養して得られた濾液を、１／６容まで減圧濃縮し、これに等容のエタノールを加え、４℃に一夜放置した。生じた沈澱を遠心分離後、アセトンとエーテルで洗浄し、真空乾燥（室温）して、培養濾液１Ｌ当り５７５mgの乾燥物を得た。
乾燥物は分子量１０5〜１０7（ゲル濾過法）、［α］D＋６３°（ｃ＝２．０、水）、微量のグルコース、ガラクトース、リボースを含むマンナン蛋白複合体であった。
このようにヒメマツタケ培養物から分離された成分は、いずれもグルコマンナン蛋白複合体であった。
【００２３】
上記のヒメマツタケ培養物より得られた熱水抽出物は一定の分解点、融点を示さず、強熱により炭化するが、著しく安定である。室温では少なくとも３年間は安定であり、１２０℃×２０分間の滅菌処理を行なっても活性の低下は見られなかった。
【００２４】
次いで、上記で得た熱水抽出物（乾燥物を含む）５０mgと牛グロブリン濃縮物２４０mgを均一に混合して本発明組成物を得た。
【００２５】
実施例２
ヒメマツタケの子実体の細胞壁破壊乾燥物１００ｇに精製水１０００mLを加え、緩やかに撹拌しながら水浴上で２時間、熱水抽出した。同一操作を２回繰り返し、２回の熱水抽出液を合わせた後、２００mLになるまで減圧濃縮液した。減圧濃縮液に最終エタノール濃度が７０％になるまでエタノールを加え、遠心分離して、エタノール沈澱物１３．３ｇを分離した。エタノール沈澱物を固定相としてＤＥＡＥ−トヨパールゲル（商品名、東洋曹達工業社製）を充填したカラムクロマトグラフィーに供し、フェノール硫酸法により糖の発色がなくなるまで溶出して、溶出画分を分画した。溶出画分を透析した後、凍結乾燥して、熱水抽出物５．６ｇを得た。得られた熱水抽出物は前記表１〜表４のような組成及び理化学的性質を有していた。
【００２６】
次いで、上記で得た熱水抽出物１００mgと牛グロブリン濃縮物２４０mgを均一に混合して本発明組成物を得た。
【００２７】
試験例１
実施例１及び２で得た本発明組成物、実施例１及び２で得られた抽出物、牛グロブリン濃縮物のそれぞれについて経口投与による抗腫瘍作用の確認試験を下記のように行なった。
【００２８】
抗腫瘍試験
５週齢のＩＣＲ／Ｓｌｃ系雌性マウス１０匹を１群として用いた。これに、移植後７日目のマウスから採取したSarcoma １８０腫瘍細胞（５×１０6個）を皮下に移植し、２４時間後から各検体の一定量を毎日朝・夕２回連日２０日間、胃ゾンデにて強制的に経口投与を行なった。移植２１日目に腫瘍の体積（cm3）、（４／３πａ2ｂ／２、但し、ａ：短径mm、ｂ：長径mm）を測定し、対照群と比較して腫瘍抑制率（％）＝（１−Ｔ／Ｃ）×１００を算出した。但し、Ｔ：検体投与群の腫瘍の体積、Ｃ：対照群の腫瘍の体積。また、移植２８日目までにおいて腫瘍が完全に消失したマウス数及び当該移植２８日後まで生存したマウス数を確認した。その結果は表６のとおりであった。
【００２９】
尚、マウスに対する経口投与実験では、各投与量とも所定の経口投与量がマウスの体重１０ｇあたり、０．２mLになるように生理食塩水で調整し毎日、朝・夕２回、連日２０日間胃ゾンデにて強制的に経口投与を行なった。
【００３０】
【表６】
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【００３１】
表６から明らかな如く、本発明組成物たる試験群（１）及び（３）では、ヒメマツタケの熱水抽出物単独投与群である（２）及び（４）と比較して、腫瘍の完全消失をともなう顕著な抗腫瘍増強効果が認められた。
【００３２】
動物実験の結果より、人体に薬剤を投与する場合、まず問題になるのはヒトと動物（マウス）との薬剤感受性を考慮する必要がある。そこで本実験では、これまでマウスにおいて抗腫瘍効果の面から有効性が推定された経口投与量に基づき、マウスとヒトの感受性差（Emil J. Freireich et al.：Cancer chemotherapy reports, 50(4), 219, 1966）より、ヒトに対する経口投与量を推測すると、ヒメマツタケの熱水抽出物５０〜１００mg／６０kg（ヒト）に牛グロブリン濃縮物５０〜１０００mg／６０kg（ヒト）の添加するのが好ましい。
【００３３】
試験例２
表６に記載した試験群（１）［併用群］、試験群（２）［単独投与群］を選択して、牛グロブリン濃縮物添加によるヒメマツタケの抗腫瘍増強効果に対するメカニズムについて検討した。
【００３４】
表６記載の全て同一実験条件下において対照群、（１）及び（２）の試験群の各種の免疫担当細胞に対する作用をみることにより、免疫学的メカニズムについて考察した。２０日経口投与し、最終投与２４時間後にマウスを放血致死させ、脾臓中に存在するＬ３Ｔ４−陽性細胞とアシアロＧＭ１−陽性細胞を伊藤均らの方法（Anti-Cancer Drug Design, 8巻, 193〜202頁, 1993年）によりフロウ・サイトメトリで測定した。その結果は表７のとおりであった。
【００３５】
【表７】
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【００３６】
表７の結果から本発明で用いる熱水抽出物は単独投与においてもＬ３Ｔ４−陽性細胞及びアシアロＧＭ１−陽性細胞の産生抑制に対して賦活作用を示すが、さらに牛グロブリン濃縮物の添加により、より顕著な賦活作用が認められ、表６に示される抗腫瘍効果とよく相関することが確認された。
【００３７】
試験例３
実施例１及び２で得た本発明組成物について、経口投与による急性毒性試験を行なったが、マウスに対するＬＤ５０は３０００mg／kg超であり、ラットに対するＬＤ５０は３５００mg／kg超であった。またラットに対する亜急性毒性試験結果及びウサギに対する一般薬理試験結果からも、本発明組成物は毒性に関する問題点を有しなかった。
【００３８】
実施例３
実施例１と同様にして熱水抽出液を得た後、該熱水抽出液１kgに、牛グロブリン濃縮物５kg、砂糖１００ｇ、蜂蜜１５ｇ、カラメル５ｇ、アスコルビン酸０．７５ｇ、クエン酸０．３ｇ及びレモン系香料０．２ｇを添加混合して、本発明健康飲料を得た。
【００３９】
実施例４
実施例１と同様にしてエタノール沈澱物を得た後、該エタノール沈澱物の凍結乾燥物１０ｇに、牛グロブリン濃縮物５０ｇ、アスコルビン酸０．５ｇ及びリンゴ搾汁液２kgを添加混合して、本発明リンゴジュースを得た。
【００４０】
実施例５
実施例１と同様にして凍結乾燥した抽出物を得た後、若干量の塩化カルシウム及び第三リン酸ナトリウムと共に該抽出物５ｇと牛グロブリン濃縮物２５ｇを、採肉して水さらして脱水した後、予冷した魚肉２kgに、そのすりつぶし工程で添加し、凍結して、本発明冷凍すり味を製造した。