(57)【要約】【課題】  本発明の目的は、外科的手術、特に消化器系の外科的手術に極めて高率に発生していた手術部位感染（ＳＳＩ）を抑制する方法と、そのためのカラムを提供することである。【解決手段】  本発明によれば、（ａ）手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬の投与工程と（ｂ）外科手術中から手術後２４時間以内に、被手術者から血液を採取して該血液中の好中球を含む白血球を除去した後、該白血球除去血液を被手術者に返血する工程を含む手術部位感染の抑制方法；及び消化器系臓器の外科手術中から手術後２４時間以内に手術部位感染を抑制するために使用する、好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体を充填した血液循環用カラムが提供される。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
消化器系臓器の外科手術に伴う手術部位感染の抑制方法であって、
（ａ）手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬の投与工程；及び
（ｂ）外科手術中から手術後２４時間以内に、被手術者から血液を採取して該血液中の好中球を含む白血球を除去した後、該白血球除去血液を被手術者に返血する工程；
を含む手術部位感染の抑制方法。
【請求項２】
好中球を含む白血球の除去数が、被手術者の体重１ｋｇ当たり６×１０7個以上１×１０9個以下である、請求項１に記載の手術部位感染の抑制方法。
【請求項３】
消化器系臓器が食道、胃、小腸、大腸、直腸、結腸、虫垂、肝臓、膵臓または胆嚢から選択される、請求項１または２に記載の手術部位感染の抑制方法。
【請求項４】
被手術者が炎症性腸疾患または消化器系臓器の癌に罹患した患者である、請求項１〜３の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
【請求項５】
好中球を含む白血球の除去が、外科手術中から手術後２時間以内に実施される、請求項１〜４の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
【請求項６】
手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬が、ペニシリン系抗生物質、セフェム系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、ホスホマイシン系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、またはニューキノロン系抗菌剤から選択される、請求項１〜５の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
【請求項７】
遠心分離機を用いて赤血球と白血球の比重の違いを利用して好中球を含む白血球を除去する方法、または白血球に対して親和性を有する担体を用いて好中球を含む白血球を除去する方法の何れかを用いて好中球を含む白血球を除去する、請求項１〜６の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
【請求項８】
白血球に対して親和性を有する担体が、酢酸セルロースを含むセルロース誘導体、ポリエステル、ポリオレフィン、ポリフッ化ビニリデン、ポリアミド、ポリイミド、ポリウレタン、ポリスルホンまたはポリアクリロニトリルから選択される、請求項７に記載の手術部位感染の抑制方法。
【請求項９】
前記工程（ｂ）における血液流量が２０ｍＬ／分から１００ｍＬ／分である、請求項１〜８の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
【請求項１０】
前記工程（ｂ）において被手術者から採取される血液量が０．９Ｌから３Ｌである、請求項１〜９の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
【請求項１１】
前記工程（ｂ）において抗凝固剤としてメシル酸ナファモスタットを使用する、請求項１〜１０の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
【請求項１２】
消化器系臓器の外科手術で、手術中から手術後２４時間以内に被手術者の血液から好中球を含む白血球を除去する、被手術者の血液処理方法。
【請求項１３】
好中球を含む白血球の除去数が、被手術者の体重１ｋｇ当たり６×１０7個以上１×１０9個以下である、請求項１２に記載の被手術者の血液処理方法。
【請求項１４】
消化器系臓器が食道、胃、小腸、大腸、直腸、結腸、虫垂、肝臓、膵臓または胆嚢から選択される、請求項１２または１３に記載の被手術者の血液処理方法。
【請求項１５】
被手術者が炎症性腸疾患または消化器系臓器の癌に罹患した患者である、請求項１２〜１４の何れかに記載の被手術者の血液処理方法。
【請求項１６】
好中球を含む白血球の除去が、外科手術中から手術後２時間以内に実施される、請求項１２〜１５の何れかに記載の被手術者の血液処理方法。
【請求項１７】
遠心分離機を用いて赤血球と白血球の比重の違いを利用して好中球を含む白血球を除去する方法、または白血球に対して親和性を有する担体を用いて好中球を含む白血球を除去する方法の何れかを用いて好中球を含む白血球を除去する、請求項１２〜１６の何れかに記載の被手術者の血液処理方法。
【請求項１８】
白血球に対して親和性を有する担体が、酢酸セルロースを含むセルロース誘導体、ポリエステル、ポリオレフィン、ポリフッ化ビニリデン、ポリアミド、ポリイミド、ポリウレタン、ポリスルホンまたはポリアクリロニトリルから選択される、請求項１７に記載の被手術者の血液処理方法。
【請求項１９】
請求項１２に記載の血液処理方法と組み合わせて使用される、手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬。
【請求項２０】
化学療法薬が、ペニシリン系抗生物質、セフェム系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、ホスホマイシン系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、またはニューキノロン系抗菌剤から選択される、請求項１９に記載の手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬。
【請求項２１】
消化器系臓器の外科手術中から手術後２４時間以内に手術部位感染を抑制するために使用する、好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体を充填した血液循環用カラム。
【請求項２２】
好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体が、酢酸セルロースを含むセルロース誘導体、ポリエステル、ポリオレフィン、ポリフッ化ビニリデン、ポリアミド、ポリイミド、ポリウレタン、ポリスルホンまたはポリアクリロニトリルから選択される、請求項２１に記載のカラム。
【請求項２３】
消化器系臓器が食道、胃、小腸、大腸、直腸、結腸、虫垂、肝臓、膵臓または胆嚢から選択される、請求項２１または２２に記載のカラム。
【請求項２４】
被手術者が潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患あるいは消化器系臓器の癌に罹患した患者である、請求項２１〜２３の何れかに記載のカラム。
【請求項２５】
好中球を含む白血球の除去が、外科手術中から手術後２時間以内に実施される、請求項２１〜２４の何れかに記載のカラム。
【請求項２６】
消化器系臓器の外科手術中から手術後２４時間以内に、被手術者の血液中の顆粒球エラスターゼ値を低下させ、それにより手術部位感染を抑制するために使用する、好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体を充填した血液循環用カラム。
【請求項２７】
好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体が、酢酸セルロースを含むセルロース誘導体、ポリエステル、ポリオレフィン、ポリフッ化ビニリデン、ポリアミド、ポリイミド、ポリウレタン、ポリスルホンまたはポリアクリロニトリルから選択される、請求項２６に記載のカラム。
【請求項２８】
消化器系臓器が食道、胃、小腸、大腸、直腸、結腸、虫垂、肝臓、膵臓または胆嚢から選択される、請求項２６または２７に記載のカラム。
【請求項２９】
被手術者が潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患または消化器系臓器の癌に罹患した患者である、請求項２６〜２８の何れかに記載のカラム。
【請求項３０】
好中球を含む白血球の除去が、外科手術中から手術後２時間以内に実施される、請求項２６〜２９の何れかに記載のカラム。
【請求項３１】
消化器系臓器の外科手術中から手術後２４時間以内に、被手術者の血液を好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体と接触処理させることにより、血液中の顆粒球エラスターゼ値を低下させることを特徴とする手術部位感染の抑制方法。
【請求項３２】
消化器系臓器が食道、胃、小腸、大腸、直腸、結腸、虫垂、肝臓、膵臓または胆嚢から選択される、請求項３１に記載の手術部位感染の抑制方法。
【請求項３３】
被手術者が潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患または消化器系臓器の癌に罹患した患者である、請求項３１または３２に記載の手術部位感染の抑制方法。
【請求項３４】
好中球を含む白血球の除去が、外科手術中から手術後２時間以内に実施される、請求項３１〜３３の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
【請求項３５】
手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬と併用される、請求項３１〜３４の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
【請求項３６】
手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬が、ペニシリン系抗生物質、セフェム系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、ホスホマイシン系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、またはニューキノロン系抗菌剤から選択される、請求項３５に記載の手術部位感染の抑制方法。
【請求項３７】
消化器系臓器の外科手術後の手術部位感染を抑制するため、手術中から手術後２４時間以内に被手術患者の血液を、好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体と接触処理させ、血液中の顆粒球エラスターゼ値を低下させることを特徴とする血液処理方法。
【請求項３８】
消化器系臓器が食道、胃、小腸、大腸、直腸、結腸、虫垂、肝臓、膵臓または胆嚢から選択される、請求項３７に記載の血液処理方法。
【請求項３９】
被手術者が潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患または消化器系臓器の癌に罹患した患者である、請求項３７または３８に記載の血液処理方法。
【請求項４０】
好中球を含む白血球の除去が、外科手術中から手術後２時間以内に実施される、請求項３７〜３９の何れかに記載の血液処理方法。
【請求項４１】
手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬と併用される、請求項３７〜４０の何れかに記載の血液処理方法。
【請求項４２】
手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬が、ペニシリン系抗生物質、セフェム系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、ホスホマイシン系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、またはニューキノロン系抗菌剤から選択される、請求項４１に記載の血液処理方法。
【請求項４３】
請求項３１から請求項３４の何れかに記載の手術部位感染を抑制する方法または請求項３７から請求項４０の何れかに記載の血液処理方法と組み合わせて使用されることを特徴とする、手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬。
【請求項４４】
手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬が、ペニシリン系抗生物質、セフェム系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、ホスホマイシン系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、またはニューキノロン系抗菌剤から選択される、請求項４３に記載の化学療法薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は消化器系臓器の外科手術後における手術部位感染を抑制する方法に関する。また、本発明は消化器系臓器の外科手術を受けた被手術者の血液処理方法、及びそれに使用するカラム、更には該血液処理方法と組み合わせて使用される、手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
外科的手術を実施した場合に、手術部位の感染による術後合併症の発症が問題とされている。術後感染は、手術部位感染（ＳＳＩ：  ｓｕｒｇｉｃａｌ  ｓｉｔｅ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）と肺炎や尿路感染などの術野外感染（ｒｅｍｏｔｅ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）とに分けられる。手術部位感染とは手術操作の直接及ぶ部位に発生する感染を意味し、術野外感染とは手術操作が直接及ばない部位の感染を意味する。さらにＳＳＩは、切開創（ｉｎｃｉｓｉｏｎａｌ）ＳＳＩと、臓器／体腔（ｏｒｇａｎ／ｓｐａｃｅ）ＳＳＩとに分けられる。切開創ＳＳＩには皮膚および皮下組織に限局する表層切開創（ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌ  ｉｎｃｉｓｉｏｎａｌ）とさらに深い軟部組織に感染の及ぶ深部切開創（ｄｅｅｐ  ｉｎｃｉｓｉｏｎａｌ）とがある。一方、臓器／体腔ＳＳＩとは、切開創以外の手術操作の及んだ全ての臓器・部位の感染を指す（非特許文献１）。
【０００３】
これらの感染の起炎菌をみると、手術部位感染は術野の汚染菌で投与抗菌薬に耐性の細菌で発症し、術野外感染はしばしば緑膿菌やメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）などの院内耐性菌によって発症することが多いと一般に言われている。術後感染症、特に手術部位感染症を予防するためには、一般的に抗生物質などの化学療法薬を予防的に投与するが、この場合に重要なポイントは、術後感染予防においては、術中汚染の可能性のある菌、すなわち術野の常在菌・汚染菌または切除断端の分離菌にターゲットを絞ることである。常在菌叢は臓器により大きな違いがある。上部消化管では胃酸の影響を受けて菌数は一般に少なく１０5個／ｇ程度であるが、下部消化管では細菌数が多く１０11〜１０12個／ｇにも達する。また菌種にも大きな違いがあり、上部消化管や呼吸器ではグラム陽性球菌が、腸内ではグラム陰性菌やバクテロイデスやビフィズス菌など嫌気性菌が優勢菌種である（非特許文献２）。従って、例えば下部消化管の手術等では、第二世代以降のセフェムなど幅広い抗菌スペクトルを持つ薬剤やカルバペネム系抗菌薬、ニューキノロン系抗菌薬が使用される。
【０００４】
消化器系手術におけるＳＳＩは切開創ＳＳＩとして、その発生頻度が極めて高いものである。炎症性腸疾患（ＩＢＤ：inflammatory bowel disease）は消化器系手術の対象疾患であるが、この中には潰瘍性大腸炎（ＵＣ：Ulcerative Colitis）、クローン病（ＣＤ：Crohn's disease）のほか、感染性大腸炎、薬剤起因性大腸炎、虚血性大腸炎、放射線性大腸炎、腸結核、腸梅毒などが含まれる。この中でも潰瘍性大腸炎とクローン病は年々増加傾向にあり、その頻度の点から他のものと区別されている。
【０００５】
潰瘍性大腸炎は原因不明の大腸の炎症であり、主に大腸、すなわち直腸から盲腸までの間にのみ発生するびまん性非特異的炎症疾患であり、連続性の病変を特徴とする疾患である。炎症の発生部位は粘膜および粘膜下層に局限しており、また緩解と増悪を繰り返し、完全治癒が得られない特徴がある。
【０００６】
現在では、潰瘍性大腸炎について、その炎症の増幅機構の解明、その知見に基づいた治療方法、治療薬の開発が積極的に行われており、例えば、セルソーバを用いた白血球除去療法（ＬＣＡＰ）、アダカラムを用いた顆粒球除去療法（ＧＣＡＰ）、あるいは血液成分採取装置を用いた遠心分離による白血球除去療法の有効性が証明され保険適用の治療方法として認められている。さらには、抗ＣＤ４抗体や抗ＴＮＦ−α抗体等の臨床開発試験が進行中である。しかしながら、実際の臨床の場における潰瘍性大腸炎の治療については、古くから用いられているサルファ剤であるスルファサラジン（商品名：サラゾピリン）や、リンデロン坐薬、あるいはステロイド剤の投与が中心に行われており、これらの薬物投与による治療と栄養管理や精神面の管理等を組み合わせた治療を行い、なお無効な場合には外科的療法（外科的手術）を加える治療が主体である。
【０００７】
ところで、前記したように、消化器系の手術は、術後合併症の発症が多いことが問題とされている。例えば、本発明者の所属する医療機関においては、過去３年１０ヶ月におけるＳＳＩの発生状況を検討したところ、胃癌手術においては約２０％、大腸癌手術では約３０％、直腸癌手術では約３３％程度のＳＳＩの発生状況であるのに対し、潰瘍性大腸炎をはじめとする炎症性腸疾患では、ＳＳＩは約６０％の高頻度で発生している。
【０００８】
これは大量のステロイド投与に伴う免疫抑制状態や、疾患の病態に伴う全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ：  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）の異常が関与していると考えられている。事実、ステロイドの投与量と術後合併症の発生率を検討してみると、ステロイド投与量として、総投与量が７，０００ｍｇ以上の場合には６５％の高率で合併症が発生しているのに対し、７，０００ｍｇ以下の投与量では２８％程度の発生率しかみせていない。また、潰瘍性大腸炎手術症例において、総ステロイド投与量とＳＳＩの発生率を対比してみると、ＳＳＩの発生は、ステロイドが総投与量として１５，０００ｍｇ程度を超える場合には高度に認められるが、８，０００ｍｇ未満である場合にはその発生がかなり低い。
【０００９】
【非特許文献１】横山隆他：  手術部位感染（surgical site infection）の防止  救急・集中治療 vol.14 no.6 2002(6):637-644
【非特許文献２】炭山嘉伸、有馬陽一：  手術に対する抗菌薬の予防的投与  救急・集中治療 vol.14 no.6 2002(6):645-650
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、消化器系臓器の外科手術後におけるＳＳＩを抑制する方法、消化器系臓器の外科手術を受けた被手術者の血液処理方法、及びそれに使用するカラム、更には該血液処理方法と組み合わせて使用される、手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬の提供を解決すべき課題とした。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
先に本発明者らは、種々の炎症性サイトカインとの関係に着目しその検討を行なったところ、周術期における炎症性サイトカインのなかでも、ＩＬ−６の血中値は潰瘍性大腸炎の手術後において、異常に高いものであることが判明した（Fukunaga T, Kidokoro A, Fukunaga M et al.,：Kinetics of cytokines and PMN-E in thoracoscopic esophagectomy. Surg Endosc., 2001 Dec;15(12):1484-7；及びKikuchi K, Kurokawa H, Matsumoto F, et al.,:Responses of cytokines, acute phase proteins, and polymorphonuclear cell elastase to surgical stress in the patients with esophageal cancer. Rinsho Byori., 1996 Jun;44(6):579-84）。したがって、手術にあたってこの炎症性サイトカイン（ＩＬ−６）の産生細胞であるリンパ球を含む白血球を除去すること、すなわち周術期白血球除去療法（周術期ＥＬＡＤ：extracorporeal leukocyte apheresis device）で、過剰な炎症反応を抑えれば、結果的に術後のＳＩＲＳを抑えることができることを報告してきた（Medical Tribune vol.36 no.7 2003/02/13:18-19；及びMiki C, Araki T, Yoshiyama S et al., :Pouch related complication -strategies for surgical treatment and a novel concept for prevention. 日本大腸肛門病会誌  第57回総会抄録号vol.55 no.9（2002年9月）。
【００１２】
かかる考え方に従って、これまで消化器系臓器の外科手術、特に潰瘍性大腸炎の外科手術前に、ＬＣＡＰおよびＧＣＡＰを併用し、炎症性サイトカインを除去した後に潰瘍性大腸炎の手術を施行し、その結果、潰瘍性大腸炎の術後に高率でみられる術後合併症の発生を抑えることに成功してきた。周術期ＥＬＡＤの有無による術後炎症反応の比較として、体温変化／心拍数の変化を図１および図２に示した。上記の通り、周術期ＥＬＡＤによる潰瘍性大腸炎手術は潰瘍性大腸炎における術後合併症の発生をある程度抑えてきたものの、いまだ満足するものではなかった。
【００１３】
本発明者らは、上記従前のＥＬＡＤプロトコールを見直すべく、ＩＢＤの周術期における炎症性サイトカインおよび顆粒球エラスターゼの変動に着目した。すなわち、白血球除去療法（ＥＬＡＤ）の有無と、ＳＳＩの発生率との関係を比較するために、白血球除去療法をした場合としなかった場合での炎症性サイトカインおよび顆粒球エラスターゼの変動を検討した結果、除去療法を行なった患者においては、ＳＳＩの発生の有無に拘わらず、血中顆粒球エラスターゼ値は有意に低下していたが、除去療法を行なわなかった患者においては、ＳＳＩ発生患者では血中顆粒球エラスターゼ値が極めて高いものであることが判明した。
【００１４】
この事実は、術後合併症の発生の有無は、手術前の血中顆粒球エラスターゼ値には関係がなく、むしろ術後における血中顆粒球エラスターゼ値を抑えたほうがＳＳＩの抑制につながり、その結果、術後合併症を抑制できることを示していることに他ならない。すなわち、これまで行なわれてきた手術前に白血球の除去を行なうことより、生体の手術侵襲反応が最大となる術後中あるいは手術後に、白血球除去療法（ＥＬＡＤ）を行なえば、過激な炎症反応をより効果的に抑制させ、術後の全身炎症反応を抑えることができることとなる。更に、本発明に用いる白血球除去方法としては体外循環式のフィルター法ばかりでなく、遠心分離法であっても、場合によってはバッチ式であってもよいことになる。更に、本発明の白血球除去方法を化学療法薬と組み合わせれば、両者の相乗効果で治療効果が増し、化学療法薬の投薬量が減るはずである。
【００１５】
また、本発明者らは従前のＥＬＡＤプロトコールを別の側面から再検討した。本発明者等は、消化器系臓器の外科手術対象患者としてＵＣ患者を選択し、ＵＣ患者の末梢血好中球に着目した。健常人とＵＣ患者の末梢血好中球を分離して刺激剤を添加しない状態（ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ）のサイトカイン産生とＬｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＬＰＳ）刺激時のサイトカイン産生を調べると、健常人とＵＣ患者では刺激剤を添加しない状態のサイトカイン産生、特にインターロイキン６（ＩＬ−６）産生に差はないが、ＵＣ患者では健常人と比較して、ＬＰＳ刺激時のサイトカイン産生、特にＩＬ−６あるいは腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）産生が高いことが判明した。具体的には、培養開始後６時間以降、ＵＣ患者好中球のＩＬ−６やＴＮＦ−αの産生量は健常人好中球のそれを上回り、２４時間後、ＵＣ患者好中球のこれらサイトカインの産生量は健常人のそれより有意に高かった。更に、ＬＰＳを認識するＴｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）のｍＲＮＡの発現をＵＣ患者と健常人の好中球で比較すると、ＵＣ患者の方が有意に高かった。このことから本発明者等は、ＵＣ患者の好中球は、既にグラム陰性菌等の細菌によってプライミングされているとの仮説を立てた。
【００１６】
このような好中球の特徴は敗血症時における好中球と類似している。敗血症時における好中球では貪食能が低下し、あるいは貪食後の細胞死がｎｅｃｒｏｓｉｓに傾いているので、感染防御機能が低下していると考えられている（Marsik C, Mayr F, Cardona F et al., Endotoxaemia modulates Toll-like receptors on leucocytes in humans.  British Journal of Haematology, 2003 121:653-656；Hayashi F, Means T.K, Luster A.D et al., Toll-like receptors stimulate human neutrophil function. Blood 2003 102(7):2660-2669；及びAyala A, Chung C-S, Lomas J.L et al., Animal model -Shock-induced neutrophil mediated priming for acute lung injury in mice- American Journal of Pathology 2002:161(6)2283-2294）。通常、微生物を貪食した好中球はａｐｏｐｔｏｓｉｓを起こし、ａｐｏｐｔｏｓｉｓを起こした好中球は顆粒球エラスターゼをはじめとする細胞内の様々なメディエーターを放出することなくマクロファージに貪食、除去され炎症は消退するが、ｎｅｃｒｏｓｉｓを起こした好中球はメディエーターを放出するとともにマクロファージに除去されず肉芽を形成し炎症は遷延する（Matsuda T, Saito H, Fukatsu K et al., Differences in neutrophil death among β-lactam antibiotics after in vitro killing of bacteria. SHOCK 2002 18(1):69-74）。
【００１７】
消化器系臓器の外科手術の対象となるような患者では、敗血症時における好中球のように好中球の感染防御機能が低下しており、それによってＳＳＩが発症しやすくなっているとすると、何らかの手段によって好中球の感染防御機能を正常に戻すことができればＳＳＩを抑制できるはずである。好中球の感染防御機能を正常に戻す手段としては、体外循環式白血球除去フィルターや遠心分離法、あるいはバッチ式による白血球除去や顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）などの医薬品を用いる方法がある。
【００１８】
以上の結果から、（１）消化器系臓器の手術対象となるような患者では敗血症時に見られるような好中球が増加して、好中球の感染防御機能が低下しており、（２）該好中球を白血球除去療法で末梢血から除去すると骨髄から新たな好中球が動員されてサイトカイン産生能などの好中球機能が正常化して、（３）好中球の感染防御機能が回復しＳＳＩを抑制する、と推定された。
【００１９】
このようなＳＳＩ抑制の作用機序を踏まえて、本発明者は従前のＥＬＡＤプロトコールを改善するに当たって、特に白血球除去を行うタイミングに注目した。実施例６に記載した通り、好中球数、ＩＬ−６、ＩＬ−１ｒａは手術中から増加して手術後２時間で最高値に達することが判明した。手術の侵襲によって好中球が増加し、サイトカインの産生が亢進していることが考えられた。これらの結果を総合的に判断すると、ＳＳＩをコントロールするために白血球および、これらから産生されるサイトカインを抑制するために、手術後２時間以内にＬＣＡＰを開始することが好ましいと考えられた。更に、実施例７に記載したＬＰＳ暴露後のサイトカイン産生量の検討結果からもこれを支持する結果が得られた。ＬＰＳ暴露後のサイトカイン産生量は３時間値と６時間値では差がなく、培養開始後６時間から２４時間の間で上昇することを示しており、このことから少なくとも手術後のＥＬＡＤは６時間以内に施行することが望ましいと考えられた。
【００２０】
すなわち、ＳＳＩ発症を最も効果的に抑制するためには、術直後から好中球の感染防御機能を回復させることが最も有効と考えて本発明を完成するに至った。その治療成績の向上には驚くべきものがある。実施例に記載したように、従前のＥＬＡＤプロトコールではＳＳＩ発症率は約３３％であり、ＥＬＡＤ無しの治療成績（ＳＳＩ発症率  約５２％）と比較して十分満足できるものとは言えなかった。しかし、本発明の方法によって治療成績は著しく改善し、驚くべきことにＳＳＩ発症は全く起こらなかった（吉山繁幸、三木誓雄、小池勇樹  他：  潰瘍性大腸炎術後mobidity改善のための周術期白血球除去療法に関するprospective trial.  日本消化器外科学会雑誌  第５９回日本消化器外科学会定期学術総会 vol.37 no.7 2004）。
【００２１】
上記の通り、本発明によれば、生体の手術侵襲反応が最大となる手術中あるいは手術後に患者の末梢血から白血球を除去することにより、より効果的に外科的手術、特に消化器系手術の手術後におけるＳＳＩを抑制することが可能になった。また、本発明によれば、該方法と組み合わせて用いるＳＳＩの治療または予防のための化学療法薬も提供される。
【００２２】
即ち、本発明によれば、以下の（１）〜（４４）が提供される。
（１）  消化器系臓器の外科手術に伴う手術部位感染の抑制方法であって、
（ａ）手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬の投与工程；及び
（ｂ）外科手術中から手術後２４時間以内に、被手術者から血液を採取して該血液中の好中球を含む白血球を除去した後、該白血球除去血液を被手術者に返血する工程；
を含む手術部位感染の抑制方法。
【００２３】
（２）  好中球を含む白血球の除去数が、被手術者の体重１ｋｇ当たり６×１０7個以上１×１０9個以下である、（１）に記載の手術部位感染の抑制方法。
（３）  消化器系臓器が食道、胃、小腸、大腸、直腸、結腸、虫垂、肝臓、膵臓または胆嚢から選択される、（１）または（２）に記載の手術部位感染の抑制方法。
（４）  被手術者が炎症性腸疾患または消化器系臓器の癌に罹患した患者である、（１）〜（３）の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
（５）  好中球を含む白血球の除去が、外科手術中から手術後２時間以内に実施される、（１）〜（４）の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
【００２４】
（６）  手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬が、ペニシリン系抗生物質、セフェム系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、ホスホマイシン系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、またはニューキノロン系抗菌剤から選択される、（１）〜（５）の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
（７）  遠心分離機を用いて赤血球と白血球の比重の違いを利用して好中球を含む白血球を除去する方法、または白血球に対して親和性を有する担体を用いて好中球を含む白血球を除去する方法の何れかを用いて好中球を含む白血球を除去する、（１）〜（６）の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
（８）  白血球に対して親和性を有する担体が、酢酸セルロースを含むセルロース誘導体、ポリエステル、ポリオレフィン、ポリフッ化ビニリデン、ポリアミド、ポリイミド、ポリウレタン、ポリスルホンまたはポリアクリロニトリルから選択される、（７）に記載の手術部位感染の抑制方法。
【００２５】
（９）  前記工程（ｂ）における血液流量が２０ｍＬ／分から１００ｍＬ／分である、（１）〜（８）の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
（１０）  前記工程（ｂ）において被手術者から採取される血液量が０．９Ｌから３Ｌである、（１）〜（９）の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
（１１）  前記工程（ｂ）において抗凝固剤としてメシル酸ナファモスタットを使用する、（１）〜（１０）の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
【００２６】
（１２）  消化器系臓器の外科手術で、手術中から手術後２４時間以内に被手術者の血液から好中球を含む白血球を除去する、被手術者の血液処理方法。
（１３）  好中球を含む白血球の除去数が、被手術者の体重１ｋｇ当たり６×１０7個以上１×１０9個以下である、（１２）に記載の被手術者の血液処理方法。
（１４）  消化器系臓器が食道、胃、小腸、大腸、直腸、結腸、虫垂、肝臓、膵臓または胆嚢から選択される、（１２）または（１３）に記載の被手術者の血液処理方法。
（１５）被手術者が炎症性腸疾患または消化器系臓器の癌に罹患した患者である、（１２）〜（１４）の何れかに記載の被手術者の血液処理方法。
【００２７】
（１６）  好中球を含む白血球の除去が、外科手術中から手術後２時間以内に実施される、（１２）〜（１５）の何れかに記載の被手術者の血液処理方法。
（１７）  遠心分離機を用いて赤血球と白血球の比重の違いを利用して好中球を含む白血球を除去する方法、または白血球に対して親和性を有する担体を用いて好中球を含む白血球を除去する方法の何れかを用いて好中球を含む白血球を除去する、（１２）〜（１６）の何れかに記載の被手術者の血液処理方法。
（１８）  白血球に対して親和性を有する担体が、酢酸セルロースを含むセルロース誘導体、ポリエステル、ポリオレフィン、ポリフッ化ビニリデン、ポリアミド、ポリイミド、ポリウレタン、ポリスルホンまたはポリアクリロニトリルから選択される、（１７）に記載の被手術者の血液処理方法。
【００２８】
（１９）  （１２）に記載の血液処理方法と組み合わせて使用される、手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬。
（２０）  化学療法薬が、ペニシリン系抗生物質、セフェム系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、ホスホマイシン系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、またはニューキノロン系抗菌剤から選択される、（１９）に記載の手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬。
【００２９】
（２１）  消化器系臓器の外科手術中から手術後２４時間以内に手術部位感染を抑制するために使用する、好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体を充填した血液循環用カラム。
（２２）  好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体が、酢酸セルロースを含むセルロース誘導体、ポリエステル、ポリオレフィン、ポリフッ化ビニリデン、ポリアミド、ポリイミド、ポリウレタン、ポリスルホンまたはポリアクリロニトリルから選択される、（２１）に記載のカラム。
【００３０】
（２３）  消化器系臓器が食道、胃、小腸、大腸、直腸、結腸、虫垂、肝臓、膵臓または胆嚢から選択される、（２１）または（２２）に記載のカラム。
（２４）  被手術者が潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患あるいは消化器系臓器の癌に罹患した患者である、（２１）〜（２３）の何れかに記載のカラム。
（２５）  好中球を含む白血球の除去が、外科手術中から手術後２時間以内に実施される、（２１）〜（２４）の何れかに記載のカラム。
【００３１】
（２６）  消化器系臓器の外科手術中から手術後２４時間以内に、被手術者の血液中の顆粒球エラスターゼ値を低下させ、それにより手術部位感染を抑制するために使用する、好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体を充填した血液循環用カラム。
（２７）  好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体が、酢酸セルロースを含むセルロース誘導体、ポリエステル、ポリオレフィン、ポリフッ化ビニリデン、ポリアミド、ポリイミド、ポリウレタン、ポリスルホンまたはポリアクリロニトリルから選択される、（２６）に記載のカラム。
【００３２】
（２８）  消化器系臓器が食道、胃、小腸、大腸、直腸、結腸、虫垂、肝臓、膵臓または胆嚢から選択される、（２６）または（２７）に記載のカラム。
（２９）  被手術者が潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患または消化器系臓器の癌に罹患した患者である、（２６）〜（２８）の何れかに記載のカラム。
（３０）  好中球を含む白血球の除去が、外科手術中から手術後２時間以内に実施される、（２６）〜（２９）の何れかに記載のカラム。
【００３３】
（３１）  消化器系臓器の外科手術中から手術後２４時間以内に、被手術者の血液を好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体と接触処理させることにより、血液中の顆粒球エラスターゼ値を低下させることを特徴とする手術部位感染の抑制方法。
（３２）  消化器系臓器が食道、胃、小腸、大腸、直腸、結腸、虫垂、肝臓、膵臓または胆嚢から選択される、（３１）に記載の手術部位感染の抑制方法。
（３３）  被手術者が潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患または消化器系臓器の癌に罹患した患者である、（３１）または（３２）に記載の手術部位感染の抑制方法。
【００３４】
（３４）  好中球を含む白血球の除去が、外科手術中から手術後２時間以内に実施される、（３１）〜（３３）の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
（３５）  手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬と併用される、（３１）〜（３４）の何れかに記載の手術部位感染の抑制方法。
（３６）  手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬が、ペニシリン系抗生物質、セフェム系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、ホスホマイシン系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、またはニューキノロン系抗菌剤から選択される、（３５）に記載の手術部位感染の抑制方法。
【００３５】
（３７）  消化器系臓器の外科手術後の手術部位感染を抑制するため、手術中から手術後２４時間以内に被手術患者の血液を、好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体と接触処理させ、血液中の顆粒球エラスターゼ値を低下させることを特徴とする血液処理方法。
（３８）  消化器系臓器が食道、胃、小腸、大腸、直腸、結腸、虫垂、肝臓、膵臓または胆嚢から選択される（３７）に記載の血液処理方法。
（３９）  被手術者が潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患または消化器系臓器の癌に罹患した患者である、（３７）または（３８）に記載の血液処理方法。
【００３６】
（４０）  好中球を含む白血球の除去が、外科手術中から手術後２時間以内に実施される、（３７）〜（３９）の何れかに記載の血液処理方法。
（４１）  手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬と併用される、（３７）〜（４０）の何れかに記載の血液処理方法。
（４２）  手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬が、ペニシリン系抗生物質、セフェム系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、ホスホマイシン系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、またはニューキノロン系抗菌剤から選択される、（４１）に記載の血液処理方法。
【００３７】
（４３）  （３１）から（３４）の何れかに記載の手術部位感染を抑制する方法または（３７）から（４０）の何れかに記載の血液処理方法と組み合わせて使用されることを特徴とする、手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬。
（４４）  手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬が、ペニシリン系抗生物質、セフェム系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、ホスホマイシン系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、またはニューキノロン系抗菌剤から選択される、（４３）に記載の化学療法薬。
【発明の効果】
【００３８】
本発明の手術部位感染の抑制方法および血液処理方法により、これまで消化器系臓器の外科手術、特に炎症性腸疾患、なかでも潰瘍性大腸炎の手術後に極めて高率に発生していたＳＳＩを効果的に抑制することができ、また、術後におけるＳＩＲＳからの早期離脱が可能であり、これにより術後合併症を効果的に予防することができる。また、本発明の血液処理方法を化学療法薬と併用すると、両者の相乗効果で著しく治療または予防効果が向上し、化学療法薬の投与量を低くでき、また投与期間も短くできるので、副作用の発生を抑えられ、また薬剤耐性菌の出現も抑えることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３９】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明は、外科的手術中あるいは手術後に、被手術者の末梢血から白血球を除去し、それにより消化器系臓器の外科手術に伴う手術部位感染を抑制する方法に関するものである。
【００４０】
本発明で言う消化器系臓器は特に限定されないが、例えば、食道、胃、小腸、大腸、直腸、結腸、虫垂、肝臓、膵臓または胆嚢などが挙げられる。本発明の方法の対象である被手術者としては、例えば、炎症性腸疾患または消化器系臓器の癌に罹患した患者などを挙げることができる。ここで言う消化器系臓器の癌とは、食道癌、胃癌、小腸癌、大腸癌、結腸癌、直腸癌、肝癌、膵癌、胆嚢癌、胆道癌などを挙げることができる。
【００４１】
白血球には好中球・好酸球・好塩基球・単球・リンパ球の５種類があり、前記好中球・好酸球・好塩基球の３者を合わせて顆粒球という。本発明で言う「好中球を含む白血球」とは、少なくとも好中球を含む顆粒球、単球、リンパ球からなる白血球を意味し、好中球が含まれていればよく、好中球以外の顆粒球、単球、リンパ球は含まれていてもいなくてもよい。血液中における白血球の数と各分画の比率は、小児と老人で若干分画異なるものの、性差は認められず、ほぼ一定である。例えば、成人において、血液中の白血球数は約６７００個／μｌであり、その分画の平均比率は、好中球５５．３％、好酸球３．５％、好塩基球０．５％、単球５．０％、リンパ球３６．６％である。また、顆粒球は、白血球のなかで最も多く、その内部にはエラスターゼが多量に存在する。顆粒球エラスターゼは、顆粒球が食細胞や炎症の刺激あるいは損傷を受けたり、細菌や異物タンパク質が体内へ侵入したりすると、その刺激により放出され、組織の破壊（炎症反応）を起こすと考えられている。顆粒球エラスターゼは中性のセリンプロテアーゼで、基質特異性が低く、エラスチン、コラーゲン、プロテオグリカン、フィブロネクチン等ほとんどすべての生体構成蛋白を容易に分解し得る。また、顆粒球エラスターゼは分子量２９５００で、血漿中及び体組織中ではα１−プラスミンインヒビター、α２−マクログロブリン等のインヒビターと直ちに結合して不活性化される。血漿中のエラスターゼ濃度は、通常、顆粒球中濃度の数百分の１程度である。さらに、顆粒球エラスターゼは、膵臓由来のエラスターゼとは異なるもので、その抗体も膵臓由来エラスターゼと全く交差反応しない。顆粒球エラスターゼの活性測定は、血液から血漿を分離後、この血漿中のエラスターゼ活性をラテックス凝集比濁法（三菱化学ビーシーエル）または顆粒球エラスターゼＥＩＡ（三和化学研究所）等の方法によって行えばよい。本発明の一例においては、消化器系臓器の外科手術中から手術後２４時間以内に、被手術者の血液を好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体と接触処理させることにより、血液中の顆粒球エラスターゼ値を低下させることによって、手術部位感染を抑制することができる。
【００４２】
末梢血から白血球を除去する方法としては、遠心分離機を用いて赤血球と白血球の比重の違いを利用して分離する方法、並びに白血球に対して親和性を有する担体を充填した血液循環用カラムを用いて白血球を除去する方法の２種類がある。本発明においては上記した方法の何れも使用することができる。
【００４３】
遠心分離法では、供血者から全血を採取して遠心分離器内に収集し、高密度、中間密度及び低密度の各成分に分離するいわゆる「ドロー」ステップに始まり、所要血液成分を分取した後、使い捨てシステム内に残った血液成分を供血者に戻すいわゆる「リターン」ステップで終わる。現在では間歇血流方式が主流であり、アフェレーシス中に供血者と装置の間で行われる流体のやりとりは、単一の、例えば採血針のような経路を通して行われる。これまで遠心分離法は種々の手法により改良されてきており、その中には遠心分離器外に分取した低密度成分を遠心分離器に短期間再循環させるいわゆる「ドウェル」ステップや、低密度成分をサージ流量、即ち時間と共に増大する流量で遠心分離器内に再循環させ、中間密度成分から血小板等を優先的に流出させるいわゆる「サージ」ステップ等がある。現在一般には、遠心分離法はこれらの工程を組み合わせて構成される１サイクルを数サイクル繰り返し、所定の血液成分を採取するように行われている。またドローステップにも改良が加えられており、ドローステップ中に遠心分離器内を通過する血漿流速や遠心回転数を供血者に応じて選択し、１サイクル当たりの全血処理量を個々の供血者に最適となるよう制御することが提案されている。１サイクルに要する時間は平均して１５分程度であり、これが複数回繰り返される。体外循環式遠心分離法で用いることができる具体的な装置としては、例えば血液成分採血装置のヘモネティクスコンポーネントコレクションシステムＣＣＳ（Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ，  Ｈａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏ．，  Ｂｒａｉｎｔｒｅｅ，  ＭＡ  ＵＳ）などがある。このシステムでは、抗凝固剤としてはクエン酸デキストロース（ＡＣＤ，  Ａｃｉｄ  Ｃｉｔｒａｔｅ  Ｄｅｘｔｒｏｓｅ）液などを用い、Ｂｌｏｏｄ  ａｃｃｅｓｓは肘静脈などに１本留置し、このルートより脱血・返血を行うことができる。またこのような体外循環式遠心分離機が使用できない場合は、バッチ式遠心分離法を用いることも考えられる。すなわち、患者血液を一端取り出し、遠心分離によって白血球の成分を分離除去したのち、この白血球を除いた血液を再度患者に返血することによっても達成できる。
【００４４】
白血球に対して親和性を有する担体を充填した血液循環用カラムを用いて白血球を除去することもできるが、ここで使用する白血球に親和性を有する担体としては、これまで白血球除去療法に使用されてきた種々の担体をあげることができ、例えば、セルロース、酢酸セルロースを含むセルロース誘導体、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート等のポリエステル；ポリエチレン、ポリプロピレン等のポリオレフィン；ポリフッ化ビニリデン、ポリアミド、ポリイミド、ポリウレタン、ポリスルホン、ポリアクリロニトリル等の高分子材料等を例示することができる。そのなかでも、ポリエステル不織布や、セルロース系ビーズなどが好適に使用される。ここで、「白血球に対し親和性を有する」とは、白血球全体に対し同じ親和性を有していてもよく、白血球サブクラスである顆粒球、単球、リンパ球等に対しそれぞれ異なる親和性を有していてもよいが、少なくとも好中球に対して親和性を有することを意味している。また、「白血球に対し親和性を有する」とは白血球を吸着し得ることを意味する。
【００４５】
担体の白血球除去能を向上させるため、あるいは顆粒球などの白血球サブクラスへの選択的吸着性を付与するため、あるいは血小板などの他の血液成分の付着を防ぐために、担体をコーティング、放射線グラフト等の方法で表面処理を施したり、抗体等のリガンドを固定したりしてもよい。
【００４６】
これらの担体の形状としては、繊維（不織布状、織布状）、多孔質体、粒子（粒状やビーズ状）、フィルム、平膜、中空糸などの形態であってもよく、本発明においては、血液との接触は、好ましくはこれらの担体を充填したカラムを経由することにより行なうことが好ましい。すなわち、血液流入口と、白血球に対する親和性を有する不織布またはビーズ等の担体からなる白血球除去部と、血液流出口からなる除去カラムとして形態を有するものが、好ましく使用される。
【００４７】
このようなカラムとしては、具体的には、すでに種々の白血球除去療法に臨床的に使用されているカラムを挙げることができ、例えば、旭化成メディカル（株）から「セルソーバ（商標）」の販売名で市販されている白血球除去カラム、その他、日本抗体研（株）から「アダカラム（登録商標）」の販売名で市販されている顆粒球除去カラム等を挙げることができる。
【００４８】
消化器系臓器の外科手術中から手術後２４時間以内に手術部位感染を抑制するために使用する、白血球に対して親和性を有する担体を充填した血液循環用カラム自体も本発明の範囲内に含まれるものとする。
【００４９】
本発明にあっては、かかるカラムを使用し、例えば、潰瘍性大腸炎手術を行なった被手術患者の血液を体外循環させることにより、末梢血白血球を除去してＳＳＩ発症を予防することが可能となる。白血球に対して親和性を有する担体は、体外循環式でなくバッチ式で用いてもよい。すなわち、患者血液を一旦取り出し、白血球に対して親和性を有する担体によって白血球の成分を分離除去したのち、この白血球を除いた血液を再度患者に返血することによっても達成できる。
【００５０】
比較的少量の血液を処理する輸血用製剤の分野においては、製剤からの白血球の除去を目的として、不織布を平板上に積層した輸血用白血球除去器が開発され広く実用化されてきた。これら輸血用白血球除去器は、血液の微小凝集物を除去する目的でメインフィルターの上流側にプレフィルターを用いている。これらプレフィルターは、フィルターの入口側から出口側に向かって平均繊維直径を逐次的或いは連続的に小さくすると同時に、フィルターの空孔率を粗から密にすることで目詰まりを防止してライフタイムを長くし、落差による処理時間を短縮する試みがなされている。この用途のフィルターも本発明の用途には使用可能である。このような輸血フィルターとしては、例えば旭化成メディカル（株）の「セパセル（登録商標）」、テルモ（株）の「イムガード（登録商標）III」、ポール（株）の「ピュアセル（商標）」などがある。
【００５１】
体外循環システムとしては、血液浄化療法等に使用されている通常の体外循環システムが採用できる。具体的には、少なくとも採血針、カテーテル等の血液採取手段、血液ポンプ等の血液送液手段、白血球除去カラム、血液採取手段と同じものが例示できる血液返血手段とから構成され、これらがこの順序で被処理血液を流通させるためチューブ等により液密に接続されている。この体外循環システムにおいては、薬剤、あるいは血液の抗凝固を目的に抗凝固剤等を血液に添加する手段を備えていてもよい。体外循環システムにおいて用いることができる抗凝固剤としては、メシル酸ナファモスタットなどを挙げることができる。また、血液の流量や、圧力等を測定する手段を備えていてもよい。
【００５２】
血液の循環処理の条件は、対象者、対象者の疾患の状況等により一概に限定できず種々異なる。一般的に、血液流量２０〜１００ｍＬ／分の条件で、３０分〜２時間程度血液循環することによって実施することができる。対象者から採取される血液量としては、好ましくは０．９Ｌから３Ｌとすることができる。なお、処理条件は、用いる担体の量や、吸着特性によって種々変更することができる。患者血液の脱血は、静脈あるいは動脈のどちらからも行うことができる。
【００５３】
白血球除去は、生体の手術侵襲反応が最大となる外科手術中あるいは手術後に開始する。本発明において外科手術中とは患部を切開している状態を意味し、より好ましくは手術の後半であり、更に好ましくは主たる外科処置が終了して切開部の皮膚を縫合する前である。また本発明において手術後とは、切開部の皮膚縫合が終了して患者に対する外科的侵襲が終了した後を意味し、本発明の実施は手術後７２時間以内、好ましくは手術後４８時間以内、さらに好ましくは手術後２４時間以内である。更に、ＵＣ患者好中球のＩＬ−６やＴＮＦ−αの産生量はＬＰＳ暴露後６時間以降に上昇することから、手術後の白血球除去療法は６時間以内に施行することがより好ましい。更に、手術後のＵＣ患者の好中球数やサイトカイン量の測定から、最も好ましくは手術後２時間以内である。白血球除去の回数は１回でよいが、複数回に分けて実施することも可能である。
【００５４】
下記の実施例２で示すように、ＬＣＡＰ処理群では血液流量５０ｍＬ／分×３０分で合計１５００ｍＬの血液を処理して充分な臨床効果が認められた。この時の白血球除去数は約５×１０9個であり、体重１ｋｇ当たりに換算すれば約１×１０8個であった。更に、実施例４の動物モデル実験から、体重１ｋｇ当たり少なくとも６×１０7個の白血球を除去すればSSI発症を抑制できる。SSI発症抑制の効果は主として好中球除去による好中球の感染防御機能の回復に起因するから、体重１ｋｇ当たり少なくとも６×１０7個の好中球を除去できれば十分臨床効果があるはずであり、これは臨床的には血液流量３０ｍＬ／分×３０分、合計９００ｍＬの血液をＧＣＡＰ処理することに相当する（実施例３）。この処理により、全体としては３×１０9個の顆粒球が除去される。また、白血球除去の方法は遠心分離法であっても白血球除去フィルターであってもよい（実施例４）。
【００５５】
従って、本発明の効果を得るために必要な白血球除去数は３×１０9個以上、より好ましくは５×１０9個以上であり、体重１ｋｇ当たりに換算すれば６×１０7個以上、より好ましくは１×１０8個以上である。一方、白血球除去数の最大量としては、特に制限は無いが、実質的には、末梢血中に存在している白血球の総量を越えて除去することは、副作用等の発生も予想されるので実用的ではない。即ち、体重１ｋｇ当たりおおよそ１×１０9個以上の白血球を除去することは実用的ではない。
【００５６】
本発明では、このような白血球除去を、感染症防止の目的で一般的に用いられている化学療法薬と組み合わせて用いることでＳＳＩを抑制することができる。本発明による手術部位感染を抑制する方法または血液処理方法と組み合わせて使用されることを特徴とする、手術部位感染症の治療および／または予防のための化学療法薬も本発明の範囲内に含まれる。
【００５７】
一般に、化学療法とは病原寄生体（細菌、ウィルス、真菌など）によって起こる疾患に対して、その病原寄生体を殺滅しあるいは発育を阻止する化学物質を与えて治療することをいい、その化学療法に用いる薬剤を化学療法薬という。本発明では、化学療法薬には、種々の微生物の産生代謝物で他の細菌や微生物の発育を抑制するペニシリンなどの抗生物質が含まれる。このような化学療法薬の例としては、ペニシリン系抗生物質、セフェム系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、ホスホマイシン系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、ニューキノロン系抗菌剤などがある。前述のように下部消化管の手術等では、第二世代以降のセフェムなど幅広い抗菌スペクトルを持つ薬剤やカルバペネム系抗菌薬、ニューキノロン系抗菌薬が使用される。第二世代のセフェム系抗生物質としては、例えば塩酸セフォチアム（ＣＴＭ）、セフメタゾールナトリウム（ＣＭＺ）、セフスロジンナトリウム（ＣＦＳ）などがあり、また第三世代のセフェム系抗生物質としては、例えばセフォタキシムナトリウム（ＣＴＸ）、セフチゾキシムナトリウム（ＣＺＸ）、セフォペラゾンナトリウム（ＣＰＺ）、塩酸セフメノキシム（ＣＭＸ）、ラタモキセフナトリウム（ＬＭＯＸ）などがある。更に第三世代以降のセフェム系抗生物質としては、例えばセフミノクルナトリウム（ＣＭＮＸ）、セルトリアキソン（ＣＴＲＸ）、セフブペラゾンナトリウム（ＣＢＰＺ）、セフピミゾールナトリウム（ＣＰＩＺ）、セフゾナムナトリウム（ＣＺＯＮ）、セフタジシム（ＣＡＺ）、セフォペラゾン／スルバクタム（ＣＰＺ／ＳＢＴ）などがある。また、カルバペネム系抗菌薬としては、例えばイミペナム／シラスタチンナトリウム（ＩＰＭ／ＣＳ）、メロペネム三水和物（ＭＥＰＭ）がある。更に、ニューキノロン系抗菌薬としては、例えばエンロフロキサシン（ＥＲＦＸ）、オフロキサシン（ＯＦＬＸ）、シプロフロキサシン（ＣＰＦＸ）などがある。
【００５８】
化学療法薬の投与開始時期に関しては、術野が最も汚染されるときに血中濃度が高いこと、すなわち消化管が開放される時に最も術野が汚染されるので、その１時間前から点滴静注することが理想的である。また手術が血中半減期の２倍（約３時間）を超えるような長時間に及ぶ場合には、術中に追加再投与する。しかし、場合によっては手術後に化学療法薬を投与してもよい。
【００５９】
本発明で化学療法薬の投与工程と白血球除去の工程は、どちらを先に行ってもよいし、あるいは両工程を同時に行ってもよい。化学療法薬の投与は１回または数回に分けて実施してもよいし、白血球除去の工程も１回または数回に分けて行ってもよい。
【実施例】
【００６０】
以下の実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。
[実施例１]
２０００年１２月から２００４年５月までに、本発明者の所属する病院にて手術を受けた潰瘍性大腸炎（Ulcerative Colitis）患者７５名を対象に、検討を行なった。
【００６１】
非ＥＬＡＤ（白血球除去療法）群：５４例
ＥＬＤＡ（白血球除去療法）群：２１例（その療法は、以下のとおり）
（１）術前白血球除去療法（ＬＣＡＰ）群：４例
（２）術前顆粒球除去療法（ＧＣＡＰ）群：８例
（３）手術直後白血球除去療法群「本発明方法」：９例
［その内訳は、手術直後顆粒球除去療法（ＧＣＡＰ）群：７例／手術直後白血球除去療法（ＬＣＡＰ）群：２例］
【００６２】
本発明の方法における血液処理の詳細は、ＧＣＡＰ処理群では、血液流量３０ｍＬ／分×１時間でトータル１８００ｍＬの血液を処理し、カラムに流入する血液中の顆粒球の３５〜７０％と、単球の３５〜６９％が除去されるのに対し、ＬＣＡＰ処理群では、血液流量５０ｍＬ／分×１時間でトータル３０００ｍＬの血液を処理し、還流血液中の顆粒球および単球の９９％、リンパ球の６０〜７９％、血小板の約５０％が除去された。
【００６３】
なお、本来の内科的治療では、ＧＣＡＰ処理よりＬＣＡＰ処理の方が強力な治療であり、その成績もＬＣＡＰ処理の方が若干優れている。しかしながら、本発明においては、術直後ＧＣＡＰ処理でもその臨床効果は十分であり、ＬＣＡＰ処理に関しては、術直後に血小板を吸着するリスク、およびこれだけの収率は必要ないと考えると、血液循環処理は３０分程度で充分であると考えられた。
【００６４】
これらの患者について、周術期の発熱・心拍数・白血球・ＣＲＰについて検討を行なった。また、患者により周術期に末梢血を採取し、ＥＬＩＳＡ法によりＩＬ−１レセプターアンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）、ＩＬ−６および血清ＩＬ−６レセプター（ｓＩＬ−６Ｒ）を測定し、周術期の変動についても検討した。
【００６５】
結果：
ＥＬＡＤ群、非ＥＬＡＤ群の間に年齢・性別・術前ステロイド総投与量・手術時間・出血量に差はなかった。発熱・心拍数・ＣＲＰにおいてＥＬＡＤ群は、非ＥＬＡＤ群に比較して、術後３日目以降で有意に低く、ＳＩＲＳから早期に脱離していた。
【００６６】
術後の合併症の発生率は、ＥＬＡＤ群で有意に低く、手術部位感染（ＳＳＩ）の発生率も減少していた。
ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−６およびｓＩＬ−６Ｒの変動に差は認めなかった。
また、プロトコール間の差をみてみると、術前ＬＣＡＰ群、術前ＧＣＡＰ群に比べ、本発明の術直後ＥＬＡＤ群においては、術直後のＩＬ−６は有意に高値であったが、発熱・心拍数・ＣＲＰはより低い傾向にあった。
【００６７】
これらの結果を、それぞれ図３から図７にまとめて示した。
図３は、周術期の顆粒球エラスターゼの変動を示した図であり、特にＥＬＡＤ（白血球除去療法）群の２１例における（１）術前白血球除去療法（ＬＣＡＰ）群、（２）術前顆粒球除去療法（ＧＣＡＰ）群および（３）手術直後にＥＬＡＤ群：９例［顆粒球除去療法（ＧＣＡＰ）群：７例／白血球除去療法（ＬＣＡＰ）群：２例］の比較を示した図である。なお、図中「ＰＯＤ」との表記は「日目」を意味する。したがって「１ＰＯＤ」とは「術後１日目」を意味する。以下の図において同じ。
【００６８】
図中に示した結果からも判明するように、術前ＬＣＡＰ施行群ならびにＧＣＡＰ施行群に比較して、本発明の手術直後に顆粒球除去療法（ＧＣＡＰ）施行群においては、術後の顆粒球エラスターゼの上昇が有意に抑制されているのが判明する。
【００６９】
図４に、同様ＥＬＤＡ群の２１例における術前ＬＣＡＰ施行群、術前ＧＣＡＰ施行群および本発明の術直後ＧＣＡＰ施行群における血中ＩＬ−６値の変動を示した。本発明の術直後ＧＣＡＰ施行群においては、術直後のＩＬ−６値が高値であったが、第１日以降に差は認められなかった。
【００７０】
図５に、非ＥＬＡＤ群（５４例）と、本発明の術直後ＧＣＡＰ施行群／ＬＣＡＰ施行群（合計９例）における、術後炎症反応の目安となる周術期体温推移を示した。図中から判明するように、本発明の術直後ＧＣＡＰ施行群／ＬＣＡＰ施行群（合計９例）では発熱が抑制され、術後炎症が抑えられていることが判明する。
【００７１】
図６に、非ＥＬＡＤ群（５４例）と、本発明の術直後ＧＣＡＰ施行群／ＬＣＡＰ施行群（合計９例）における、術後炎症反応の目安となる周術期心拍数推移を示した。図中から判明するように、本発明の術直後ＧＣＡＰ施行群／ＬＣＡＰ施行群では、心拍数の低下が認められ、術後炎症が抑えられていることが判明する。
【００７２】
なお、周術期ＩＬ−６値と手術部位感染（ＳＳＩ）の関連を検討したが、両者間には有意な関連性を認めなかった。図７に、ＩＡＡ（回腸肛門吻合）術後の血中ＩＬ−６値と手術部位感染（ＳＳＩ）の関係を示した。図中の結果からも判明するように、手術部位感染のあった群となかった群において、サイトカインの変動に差はみられなかった。
【００７３】
以上の事実から判断すると、実際白血球除去療法（ＥＬＡＤ）によって周術期のサイトカインには差は認められないことから、顆粒球エラスターゼに着目し、術後の顆粒球エラスターゼの上昇を抑制するため、生体の手術侵襲反応が最大となる手術中あるいは手術後に白血球除去療法（ＥＬＡＤ）を行なう本発明の特異性が理解できる。
【００７４】
以上の結果を総合的に判断し、本発明の方法（９症例）と、従前の白血球除去療法（１２症例）および白血球除去療法（ＥＬＡＤ）を行なわない場合（５４症例）の手術後部位感染（ＳＳＩ）の有無を、表１にまとめた（かっこ内は比率を示す）。
【００７５】
【表１】
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【００７６】
以上に示した臨床結果から、本発明の方法を使用することにより、潰瘍性大腸炎手術後の全身炎症反応からの早期離脱が可能であり、術後合併症が有意に抑制されていることが判明した。
【００７７】
[実施例２]
２００４年８月から２００４年９月までに、本発明者の所属する病院にて手術を受けた潰瘍性大腸炎（Ulcerative Colitis）患者５名を対象に、以下の検討を行なった。潰瘍性大腸炎の患者５症例を全身麻酔下で大腸摘出手術を実施した。この５症例中の３症例については、大腸全摘出、Ｊ型回腸嚢肛門吻合および回腸人工肛門造設を実施する手術であり、その他の２症例は、これに類似する手術であった。手術後期における開腹部の吻合期において、下記のＬＣＡＰを実施した。即ち、患者の腕動脈より採血し、抗凝固剤として約０．１ｍｇ／ｍｌのメシル酸ナファモスタットを含む生理食塩水を血液流量の約１２％量を添加しながら、５０ｍｌ／分の血液流量でセルソーバに通した後、患者腕静脈へ返血した。処理血液量はおよそ１．５リットルであり処理時間はおよそ３０分であった。本処理により、患者一人当たり平均７．５×１０9個の白血球が除去され、顆粒球としては平均５．４×１０9個が除去された。体重１ｋｇ当たりに換算すると、白血球数にして平均１．５×１０8個、顆粒球数にして平均１．１×１０8個が除去された計算になる。また、抗生物質として４症例においてはセフメタゾールナトリウム（ＣＭＺ）（商品名：セフメタゾン）各１ｇを、手術直前、手術一日後の午前および午後、２日後の午前および午後、３日後午前に静脈内投与した。他の１症例においては、セフメタゾンの代わりに塩酸セフォチアム（ＣＴＭ）（商品名：パンスポリン）を用いた。本処置により、５症例の患者は全例において術後３０日間にわたりＳＳＩの発症が認められなかった。
【００７８】
[実施例３]
ＵＣ患者における大腸摘出手術において、下記のＧＣＡＰを実施する。即ち、手術後期における開腹部の吻合期において、患者の腕動脈より採血し、抗凝固剤としてヘパリンを投与しながら約３０ｍｌ／分の血液流量でアダカラムに通した後、患者腕静脈へ返血する。処理血液量はおよそ０．９リットル、処理時間はおよそ３０分である。また、術中および術後３日目までは、抗生物質を投与する。ＳＳＩの発症は、本実施例で示すＧＣＡＰを施さない例に比べ有意に抑制される。
【００７９】
[実施例４]
Ａ〜Ｆ群の各群５羽の家兔（体重２．５ｋｇ〜３ｋｇ）に対し、ペントバルビタールによる全身麻酔下に腹部を５ｃｍ開腹した後、大腸部を約３ｃｍ削除して再吻合する開腹術を施す。術後半における閉腹時に、耳静脈より体重１ｋｇあたり１０ｍｌの血液を採血し、直ちに１ｍｌ当たり１０Ｕとなるようにヘパリンを添加する。該血液をＡ群およびＢ群においては、ポリエチレンテレフタレート不織布で作成した白血球除去フィルター（直径４ｃｍの不織布を４枚重ねたもの）で処理して、血液中の白血球成分を除去する。本処理により、処理血液中の約９０％の白血球が除去される。家兔の白血球数は、１ｍｌ当たりおよそ９×１０6個であるので、体重１ｋｇ当たりおよそ８×１０7個の白血球が除去される計算になる。
【００８０】
Ｃ群およびＤ群においては、採血後にヘパリンを添加した１０ｍｌの血液を遠心チューブに入れ、スイング型の遠心機で４００Ｇ、１０分間の遠心分離処理を施す。処理後、徐々に回転数を下げてから、処理済みの遠心管内の、赤血球層と血漿層の中間に出来るバフィーコート（白血球画分）を、マイクロピペットを用いて吸出することで白血球成分を除去する。本処理により、処理血液中のおよそ７０％の白血球が除去される。従って、体重１ｋｇ当たり６×１０7個の白血球が除去される計算になる。
【００８１】
各群の処理済み血液を、採血した家兔に静脈より戻す。Ｅ群およびＦ群については、採血したヘパリン加の血液を１０分放置した後、そのまま採血した家兔に戻す。上記手技の終了後、抗生物質（ペニシリン）を10ＫＵ/kgの容量で術日、術１日後および術２日後に皮下投与し、術後１週間まで経過観察を行う。また、Ａ群、Ｃ群、およびＥ群においては、閉腹前に手術開腹部位に、体重１ｋｇあたり１×１０10個の大腸菌（E.coli, ATCC25922）を塗布する。手術後、各家兔を籠に戻し、手術部位および全身症状を１週間観察する。１週間経過するとＥ群においては死亡例が多数見られ、生存例においても手術部位より排膿が観察される。Ａ群、Ｃ群においては、死亡例はすくなく、生存例のうち数例で排膿が観察される。一方、陰性コントロール群であるＢ群、Ｄ群、Ｆ群においては、死亡例や排膿が観察される例数はほとんどない。
【００８２】
[実施例５]
２００５年３月に、本発明者の所属する病院にて手術を受けた潰瘍性大腸炎（Ulcerative Colitis）患者４名を対象に、以下の検討を行なった。潰瘍性大腸炎の患者４症例を全身麻酔下で大腸摘出手術を実施した。この４症例中の３症例については、大腸全摘出、Ｊ型回腸嚢肛門吻合および回腸人工肛門造設を実施する手術であり、その他の１症例は、これに類似する手術であった。手術後から手術後２時間以内に、下記のＬＣＡＰを開始した。ここで手術後とは、切開部の皮膚縫合が終了して患者に対する外科的侵襲が終了した後を意味する。ＬＣＡＰは、患者の腕静脈より採血し、抗凝固剤として約０．１ｍｇ／ｍｌのメシル酸ナファモスタットを含む生理食塩水を血液流量の約１２％量を添加しながら、５０ｍｌ／分の血液流量でセルソーバに通した後、患者腕静脈へ返血した。処理血液量と処理時間は４症例中３症例についてはおよそ３リットルと６０分であり、その他の１症例はおよそ１．５リットルと３０分であった。また、抗生物質として全例でセフメタゾールナトリウム（ＣＭＺ）（商品名：セフメタゾン）各１ｇを、手術直前、手術開始３時間後、手術日夜、手術一日後の午前および午後、２日後の午前および午後、３日後午前および午後に静脈内投与した。ＳＳＩ評価は、ＣＤＣ（Centers for Disease Control and Prevention）「手術部位感染防止ガイドライン1999」（Alicia J, Teresa C, Michele L et al,. Guideline for Prevention of Surgical Site Infection, 1999. Infection Control and Hospital Epidemiology 1999;20(4):247-278）のＳＳＩの定義に従って行った。本処置により、４症例の患者は全例において術後３０日間にわたりＳＳＩの発症が認められなかった。
【００８３】
[実施例６]
白血球除去療法（ＬＣＡＰ）の最適な施行時期を探るために、手術後の白血球数の変動を調べた。２００４年１２月〜２００５年２月に、本発明者の所属する病院にて大腸摘出手術を受けた潰瘍性大腸炎（Ulcerative Colitis）患者３名と直腸癌患者２名を対象に、検討を行なった。表２に症例の疾患名、年齢、性別、手術時間、麻酔時間、出血量、輸血量を示す。表２のRKとは直腸癌（rectal cancer）、UCとは潰瘍性大腸炎（Ulcerative Colitis）を示す。手術時間の平均は３時間４８分であった。表２で示した５症例について、図８に示したタイミング（手術前（麻酔導入前）、最初の採血から２、４、６、８．１０、１２時間後、手術一日後）に採血を行い、白血球数、白血球分画、血中サイトカイン濃度の測定を行った。白血球数と白血球分画は自動血球分析装置を使用して測定を行なった。血中サイトカインはＥＬＩＳＡ法によりＩＬ−１レセプターアンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）、ＩＬ−６を測定した。その結果、手術中から白血球数は増加し、白血球数の有意な増加は麻酔導入後２時間以内に起こり、手術終了後２時間で最高値に達することが判明した。また、好中球数は手術開始から２４時間後まで手術前より有意に高値を維持しており、白血球数の増加は白血球のうちほぼ好中球数の増加に影響されていることが判明した。血中サイトカインのＩＬ−６は麻酔導入後４時間で最高値に達し、ＩＬ−１ｒａは麻酔導入後４時間で手術前より有意に高値を示し、手術後２時間で最高値に達することが判明した。
【００８４】
これらの結果を、それぞれ図９から図１４に示した。
図９は手術前（麻酔導入前）、最初の採血から２、４、６、８．１０、１２時間後、手術一日後の白血球数の変動を示した図であり、白血球数は手術中から増加して麻酔導入後６時間から１０時間で最高値に達している。手術時間の平均が３時間４８分であることから、白血球数は手術後２時間から６時間で最高値に達している。
【００８５】
図１０は手術前の白血球数を１００としたときの変化率を示した図であり、白血球数の変化率の有意な増加は手術開始２時間以内に起こり、手術終了後２時間から６時間でピークに達し、２４時間後まで有意に増加している。
【００８６】
図１１は好中球数の変動を示した図であり、好中球数は手術中から増加して麻酔導入後６時間から１０時間で最高値に達している。手術時間の平均が３時間４８分であることから、好中球数は手術後２時間から６時間で最高値に達している。
【００８７】
図１２は手術前の好中球数を１００としたときの変化率を示した図であり、好中球数の変化率の有意な増加は手術開始２時間以内に起こり、手術終了後２時間から６時間で最高値に達し、２４時間後まで有意に増加している。
【００８８】
図１３は血中ＩＬ−６の変動を示した図であり、ＩＬ−６は麻酔導入後４時間で最高値に達している。
【００８９】
図１４は血中ＩＬ−１ｒａの変動を示した図であり、ＩＬ−１ｒａは麻酔導入後４時間で手術前より有意に高値を示し、麻酔導入後６時間で最高値に達している。手術時間の平均が３時間４８分であることから、ＩＬ−１ｒａは手術後２時間で最高値に達している。
【００９０】
以上の結果より、好中球数、ＩＬ−６、ＩＬ−１ｒａは手術中から増加して手術後２時間で最高値に達することが判明した。手術の侵襲によって好中球が増加し、サイトカインの産生が亢進していることが考えられる。これらの結果を総合的に判断すると、ＳＳＩをコントロールするために白血球および、これらから産生されるサイトカインを抑制するために、手術後２時間以内にＬＣＡＰを開始することが好ましいといえる。
【００９１】
【表２】
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【００９２】
[実施例７]
手術前のＵＣ患者８人と健常人１５人より末梢血を採取し、それぞれの末梢血から単球と好中球をフィコールを用いた標準的な方法で分離した。分離した単球を２４穴プレートに５×１０5／ｗｅｌｌづつ播種して、コントロール（サイトカインなし）、ＩＬ−１β（１０ｎｇ）、ＬＰＳ（１００ｎｇ）添加の培地中で３７℃  ３時間、６時間、２４時間、４８時間培養した。その培養上精中のサイトカインをＥＬＩＳＡ法にて測定した。また、分離した好中球を２４穴プレートに５ｘ１０5／ｗｅｌｌづつ播種して、コントロール（サイトカインなし）、ＩＬ−１β（１０ｎｇ）、ＬＰＳ（１００ｎｇ）添加の培地中で３７℃  ３時間、６時間、２４時間、４８時間培養した。その培養上精中のサイトカインをＥＬＩＳＡ法にて測定した。また、培養前の好中球の一部からｍＲＮＡを抽出し、サイトカイン、ＰＭＮ−Ｅ（顆粒球エラスターゼ）、ＴＬＲ４等のｍＲＮＡ発現レベルをＰＣＲ法にて半定量した。
【００９３】
図１５に、好中球の培養上精中のサイトカイン産生量及び顆粒球エラスターゼ量をＥＬＩＳＡで測定した結果を示した。単球については、ＵＣ患者群、健常人群でサイトカイン産生量に差を認めなかったので、図示していない。図１５でＵＣ，ＣＯとはＵＣ患者のコントロール群を示し、ＣＯ，ＣＯとは健常人のコントロール群を示す。ＵＣ患者群のＬＰＳ刺激２４時間の好中球は、コントロールと比較してＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦ−αの産生量が顕著に増加している。一方、健常人好中球のサイトカイン産生について見ると、ＬＰＳ刺激によってもＩＬ−６産生は増加しなかった。また、図１６には、ＬＰＳ刺激下で２４時間培養した好中球の培養上精中のサイトカイン産生量の測定結果を示しているが、ＩＬ−６及びＴＮＦ−αなどの炎症性サイトカインの産生量は、ＵＣ患者群では健常人群より有意に高かった。以上の結果から、ＵＣ患者の好中球はグラム陰性菌によりプライミングされているものと推定された。次に、ＬＰＳの受容体であるＴＬＲ４のｍＲＮＡ発現量を末梢血好中球で調べてみると、ＵＣ患者群では健常人群より有意に高く、ＵＣ患者群においてＬＰＳに対する感受性が高い理由の１つは、ＬＰＳ受容体の発現量が多いためであることが示唆された（図１７）。
【００９４】
上記の結果は、ＬＰＳ暴露後のサイトカイン産生量は３時間値と６時間値では差がなく、培養開始後６時間から２４時間の間で上昇することを示しており、このことから少なくとも手術後のＥＬＡＤは６時間以内に施行することが望ましいと考えられた。
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１】図１は、従前の周術期ＥＬＡＤ療法の有無による術後炎症反応の比較として、体温変化を示した図である。
【図２】図２は、従前の周術期ＥＬＡＤ療法の有無による術後炎症反応の比較として、心拍数の変化を示した図である。
【図３】図３は、周術期の顆粒球エラスターゼの変動を示した図であり、ＥＬＡＤ療法群として、術前ＬＣＡＰ施行群および術前ＧＣＡＰ施行群と、術直後ＧＣＡＰ施行群／ＬＣＡＰ施行群（本発明方法）の比較を示した図である。
【図４】図４は、ＥＬＡＤ療法における、術前ＬＣＡＰ施行群および術前ＧＣＡＰ施行群と、術直後ＧＣＡＰ施行群／ＬＣＡＰ施行群（本発明方法）における、血中ＩＬ−６値の変動を示した図である。
【図５】図５は、非ＥＬＡＤ群と、術直後ＧＣＡＰ施行群／ＬＣＡＰ施行群（本発明方法）における、術後炎症反応の目安となる周術期体温推移を示した図である。
【図６】図６は、非ＥＬＡＤ群と、術直後ＧＣＡＰ施行群／ＬＣＡＰ施行群（本発明方法）における、術後炎症反応の目安となる周術期心拍数推移を示した図である。
【図７】図７は、非ＥＬＡＤ群における回腸嚢肛門吻合（ＩＡＡ）術後の血中ＩＬ−６値と手術部位感染（ＳＳＩ）の関係を示した図である。
【図８】図８は、血算測定のための採血時期を示した模式図である。
【図９】図９は、手術における総白血球数の変動をまとめた図である。
【図１０】図１０は、手術における総白血球数の変化率をまとめた図である。
【図１１】図１１は、手術における好中球数の変動をまとめた図である。
【図１２】図１２は、手術における好中球数の変化率をまとめた図である。
【図１３】図１３は、手術における血中ＩＬ−６の変動をまとめた図である。
【図１４】図１４は、手術における血中ＩＬ−１ｒａの変動をまとめた図である。
【図１５】図１５は、末梢血好中球を培養して、培養上精のサイトカイン産生量を経時的に測定した図である。
【図１６】図１６は、末梢血好中球を培養して、２４時間後の培養上精のサイトカイン産生量を比較した図である。
【図１７】図１７は、末梢血好中球におけるＴＬＲ４とＩＬ−８のｍＲＮＡ発現量を比較した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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