(57)【要約】      （修正有）【課題】疾病や老化を予防する健康食品の提供。【解決手段】下記式を含む特定な５つの抗酸化剤誘導体。2006089661.tif 000020【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式〔化１〕、〔化２〕、〔化３〕、〔化４〕、〔化５〕で示されるキサントン誘導体のうち少なくともいずれかを含有することを特徴とする抗酸化剤。
【化１】
2006089661.tif 000015
【化２】
2006089661.tif 000016
【化３】
2006089661.tif 000017
【化４】
2006089661.tif 000018
【化５】
2006089661.tif 000019
【請求項２】
上記一般式〔化１〕、〔化２〕、〔化３〕、〔化４〕、〔化５〕で示されるキサントン誘導体のうち少なくともいずれかを含有し抗酸化作用を有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項３】
上記一般式〔化１〕、〔化２〕、〔化３〕、〔化４〕、〔化５〕で示されるキサントン誘導体のうち少なくともいずれかを含有し抗酸化作用を有することを特徴とする医薬部外品組成物。
【請求項４】
上記一般式〔化１〕、〔化２〕、〔化３〕、〔化４〕、〔化５〕で示されるキサントン誘導体のうち少なくともいずれかを含有し抗酸化作用を有することを特徴とする化粧品。
【請求項５】
上記一般式〔化１〕、〔化２〕、〔化３〕、〔化４〕、〔化５〕で示されるキサントン誘導体のうち少なくともいずれかを含有し抗酸化作用を有することを特徴とする健康食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は抗酸化剤、医薬組成物、医薬部外品組成物、化粧品、健康食品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
細胞内のミトコンドリアやミクロソームの電子伝達系では、一部の電子はその系より漏出し、近接する鉄などの遷移金属の酸化還元反応サイクルを起こし、酸素分子を還元しスーパーオキシドアニオンを生じる。それは引き続き様々な活性酸素（過酸化水素、ヒドロキシラジカル）を生成する（例えば、非特許文献１参照）。
【０００３】
これらのラジカルは、脂質の連鎖的な過酸化反応を誘発する。脂質の過酸化は連鎖的に進行し、過酸化脂質は膜脂質を次々と破壊するため様々な疾病、発ガン・老化の原因となるという問題があった。
【非特許文献１】財団法人  東京都高齢者研究・福祉振興財団  東京都老人総合研究所ホームページ、“ミトコンドリア遺伝子と長寿”、[online]、 [2003/11/26検索]、インターネット＜ＵＲＬ：http://www.tmig.or.jp/J_TMIG/kouenkai/koza/62koza_3.html＞
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
そこでこの発明は、様々な疾病や老化を予防することができる抗酸化剤、医薬組成物、医薬部外品組成物、化粧品、健康食品を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
前記課題を解決するためこの発明では次のような技術的手段を講じている。
(１) この発明の抗酸化剤は、下記一般式〔化１〕、〔化２〕、〔化３〕、〔化４〕、〔化５〕で示されるキサントン誘導体のうち少なくともいずれかを含有することを特徴とする。
【０００６】
【化１】
2006089661.tif 000002
【０００７】
【化２】
2006089661.tif 000003
【０００８】
【化３】
2006089661.tif 000004
【０００９】
【化４】
2006089661.tif 000005
【００１０】
【化５】
2006089661.tif 000006
この抗酸化剤は前記一般式〔化１〕、〔化２〕、〔化３〕、〔化４〕、〔化５〕で示されるキサントン誘導体のうち少なくともいずれかを含有するものであって、抗酸化作用を有するものであり、様々な疾病や老化を予防する内用剤や外用剤として用いることができる。
【００１１】
(２) この発明の医薬組成物は、上記一般式〔化１〕、〔化２〕、〔化３〕、〔化４〕、〔化５〕で示されるキサントン誘導体のうち少なくともいずれかを含有し抗酸化作用を有することを特徴とする。
【００１２】
この医薬組成物は上記一般式〔化１〕、〔化２〕、〔化３〕、〔化４〕、〔化５〕で示されるキサントン誘導体のうち少なくともいずれかを含有するものであって、抗酸化作用を有するものであり、様々な疾病や老化を予防する内用剤や外用剤として用いることができる。
【００１３】
(３) この発明の医薬部外品組成物は、上記一般式〔化１〕、〔化２〕、〔化３〕、〔化４〕、〔化５〕で示されるキサントン誘導体のうち少なくともいずれかを含有し抗酸化作用を有することを特徴とする。
【００１４】
この医薬部外品組成物は上記一般式〔化１〕、〔化２〕、〔化３〕、〔化４〕、〔化５〕で示されるキサントン誘導体のうち少なくともいずれかを含有するものであって、抗酸化作用を有するものであり、様々な疾病や老化を予防する内用剤や外用剤として用いることができる。
【００１５】
(４) この発明の化粧品は、上記一般式〔化１〕、〔化２〕、〔化３〕、〔化４〕、〔化５〕で示されるキサントン誘導体のうち少なくともいずれかを含有し抗酸化作用を有することを特徴とする。
【００１６】
この化粧品は上記一般式〔化１〕、〔化２〕、〔化３〕、〔化４〕、〔化５〕で示されるキサントン誘導体のうち少なくともいずれかを含有するものであって、抗酸化作用を有するものであり、様々な疾病や老化を予防する外用剤として用いることができる。
【００１７】
(５) この発明の健康食品は、上記一般式〔化１〕、〔化２〕、〔化３〕、〔化４〕、〔化５〕で示されるキサントン誘導体のうち少なくともいずれかを含有し抗酸化作用を有することを特徴とする。
【００１８】
この健康食品は上記一般式〔化１〕、〔化２〕、〔化３〕、〔化４〕、〔化５〕で示されるキサントン誘導体のうち少なくともいずれかを含有するものであって、抗酸化作用を有するものであり、様々な疾病や老化を予防する内用剤として用いることができる。
【発明の効果】
【００１９】
この発明は上述のような構成であり、次の効果を有する。
【００２０】
様々な疾病や老化を予防することができる抗酸化剤、医薬組成物、医薬部外品組成物、化粧品、健康食品を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
この実施形態の抗酸化剤は、下記一般式〔化１〕、〔化２〕、〔化３〕、〔化４〕、〔化５〕で示されるキサントン誘導体のうち少なくともいずれかを含有する。
【００２２】
【化１】
2006089661.tif 000007
Calopyllum inophyllum根皮のアセトン抽出物を展開溶媒としてn-hexane-EtOAc systemを用い、Si gel CCを行うことにより、7つの部分に粗分画を行った。そのn-hexane-EtOAc＝3：1溶出画分より得られた粗結晶をn-hexane-acetoneで再結晶し、前記一般式〔化１〕に示されるキサントン誘導体（Caloxanthone A）を得た。
【００２３】
【化２】
2006089661.tif 000008
Calopyllum inophyllum根皮のアセトン抽出物を展開溶媒としてn-hexane-EtOAc systemを用い、Si gel CCを行うことにより、7つの部分に粗分画を行った。そのn-hexane-EtOAc＝2：1溶出画分より得られた粗結晶をn-hexane-acetoneで再結晶し、前記一般式〔化２〕に示されるキサントン誘導体（macluraxanthone）を得た。
【００２４】
【化３】
2006089661.tif 000009
Calopyllum inophyllum根材のn-ヘキサン抽出物より析出した粗結晶を濾別した後、濾液の濃縮物についてVLCを行い、n-hexane-EtOAc systemで溶出し、6つの分画が得られた。n-hexane-EtOAc＝10：1溶出画分をn-hexaneより再結晶し、前記一般式〔化３〕に示されるキサントン誘導体（6-deoxyjacareubin（antiinflammation））を得た。
【００２５】
【化４】
2006089661.tif 000010
Calopyllum austroindicum心材を乾燥、粉砕し、アセトンを用いて抽出を行った。溶媒を減圧下除去し、その残査を、Si gel CC（benzene-acetone system）に付し、11の分画を得た。そのうち、3：1の分画をさらにVLC（CHCl3-MeOH system）に付し、5：1溶出画分から前記一般式〔化４〕に示されるキサントン誘導体を得た。
【００２６】
【化５】
2006089661.tif 000011
Calopyllum austroindicum心材を乾燥、粉砕し、ベンゼンを用いて抽出を行った。溶媒を減圧下除去し、その残査を、VLC（n-hexane-EtOAc system）に付し、9つの分画を得た。そのうち、5：1溶出分画から前記一般式〔化５〕に示されるキサントン誘導体（Jacareubin）を、再結晶を行うことによりを得た。
【００２７】
この抗酸化剤は前記一般式〔化１〕、〔化２〕、〔化３〕、〔化４〕、〔化５〕で示されるキサントン誘導体のうち少なくともいずれかを含有するものであって、抗酸化作用を有するものであり、様々な疾病や老化を予防する内用剤や外用剤として用いることができ、医薬組成物、医薬部外品組成物、化粧品、健康食品として適用することができる。
【００２８】
ここで、ミトコンドリア及びミクロソームを次のようにして調整した。
【００２９】
ラットをジエチルエーテルで麻酔死させた後、肝臓を取り出し、homogenizing medium（ｐＨ7.4）で血抜きをし、数回洗浄した。肝臓量の９倍量のhomogenizing medium（ｐＨ7.4）に懸濁し、homogenizerで細胞を破砕した。この破砕液を４℃、1,000ｘｇで１０分間遠心した。上澄みを４℃、7,000ｘｇで10分間遠心した後、上澄みからはミクロソーム、沈殿からはミトコンドリアを調整した。
【００３０】
沈殿をhomogenizing medium（ｐＨ7.4）で懸濁して４℃、7,000ｘｇで１０分間遠心した。得られた沈殿を肝重量の０．４倍量のＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨで懸濁し、超音波処理（ＢＲＡＮＳＯＮ  Ｍodel 450 Sonifer）を、５秒行った。この溶液を、submitochondoriaとし、即日使用した。
【００３１】
上澄みを４℃、105,000ｘｇで６０分間遠心し、沈殿をhomogenizing medium（ｐＨ7.4）で懸濁した後、同条件で遠心した。得られた沈殿を、肝重量の0.7倍量の100ｍＭ Tris-ＨＣｌ bufferで懸濁したものをミクロソーム溶液とし、冷凍保存した。
【００３２】
そして、以下の実施例１〜４の各試験を行った。
【００３３】
試験に供したのは図１〜図３に示す１８種類のキサントン誘導体であり、このうち上記〔化１〕は図１のＩＹＣ−２に示すものであり、〔化２〕は図１のＩＹＣ−４に示すものであり、〔化３〕は図１のＩＹＣ−８に示すものであり、〔化４〕は図２のＩＹＣ−10に示すものであり、〔化５〕は図２のＩＹＣ−14に示すものである。
【００３４】
また試験結果を示す表１〜表３においてCompd.１〜Compd.18は、図１〜図３のＩＹＣ−１〜ＩＹＣ−14にそれぞれ対応するものである。
【実施例１】
【００３５】
ミトコンドリアにおける膜脂質過酸化作用の測定を行った。
【００３６】
ミトコンドリアをＮＡＤＨ依存性、ＮＡＤＰＨ依存性、コハク酸依存性、ＡｓＡ−Ｆｅ３＋によりそれぞれ過酸化させ、各キサントン誘導体の脂質過酸化抑制作用をチオルビツール酸(ＴＢＡ)法で測定した。ＮＡＤＨ依存性及びコハク酸依存性の脂質過酸化は電子伝達依存性である。
【００３７】
(1) Ｆｅ３＋―ＡＤＰ存在下でＮＡＤＨに依存するミトコンドリアの膜脂質過酸化
試験管にキサントン溶液(ＤＭＳＯ)10μｌ、100ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ bufferを500μｌ、20ｍＭ ＡＤＰ (終濃度2ｍＭ)を100μｌ、20ｍＭ ＦｅＣｌ３ (終濃度２ｍＭ) を100μｌ、蒸留水を130μｌ、1ｍＭ rotenone (終濃度10μＭ)を10μｌ、submitochondoriaを50μｌを加え37℃で５分間保温した。1ｍＭ ＮＡＤＨ (終濃度100μＭ)を100μl加え反応を開始、37℃で5分間反応させた。２％ＢＨＴ(2,6-Di-t-butyl-4-methylphenol)を90μｌ加え、反応を停止させ、15％ＴＣＡ (trichloroaceticacid)-0.375％ ＴＢＡ（2-thiobarbituric acid）-2.5％ ＨＣｌ solutionを２ｍｌ加え100℃で15分間加熱し、5,000ｒｐｍで10分間遠心し、上清の535ｎｍの吸光を測定した。
【００３８】
５０％抑制濃度（μＭ）の結果を、表１の「（１）ＮＡＤＨ―dependent」の項目に記載する。この表に示されるように、〔化１〕のキサントン誘導体（表中、Compd.２）は2.1、〔化２〕のキサントン誘導体（表中、Compd.４）は0.9、〔化３〕のキサントン誘導体（表中、Compd.８）は27.3、〔化４〕のキサントン誘導体（表中、Compd.10）は0.５、〔化５〕のキサントン誘導体（表中、Compd.14）は4.1であり、他の構造を有するキサントン誘導体に対して非常に優れた数値を示している。
【００３９】
【表１】
2006089661.tif 000012
【００４０】
(2) Ｆｅ３＋―ＡＤＰ存在下でＮＡＤＰＨに依存するミトコンドリアの膜脂質過酸化
試験管にキサントン10μｌ、100ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ bufferを500μｌ、20ｍＭ ＡＤＰ (終濃度2ｍＭ)を100μｌ
、20ｍＭ ＦｅＣｌ３(終濃度2ｍＭ)を100μｌ、蒸留水を140μｌ、submitochondoriaを50μｌ加え37℃で５分間保温した。1ｍＭ ＮＡＤＰＨ(終濃度100μＭ)を100μｌ加え反応を開始、37℃で15分間反応させた。(1)と同様に反応を停止させ、ＴＢＡ法にて535ｎｍの吸光を測定した。
【００４１】
５０％抑制濃度（μＭ）の結果を、表１の「（２）ＮＡＤＰＨ―dependent」の項目に記載する。この表に示されるように、〔化１〕のキサントン誘導体（表中、Compd.２）は4.8、〔化２〕のキサントン誘導体（表中、Compd.４）は1.3、〔化３〕のキサントン誘導体（表中、Compd.８）は57.8、〔化４〕のキサントン誘導体（表中、Compd.10）は1.4、〔化５〕のキサントン誘導体（表中、Compd.14）は2.2であり、他の構造を有するキサントン誘導体に対して非常に優れた数値を示している。
【００４２】
(3) Ｆｅ３＋―ＡＤＰ存在下でコハク酸に依存するミトコンドリアの膜脂質過酸化
試験管にキサントン10μｌ、100ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ bufferを500μｌ、20ｍＭ  ＡＤＰ(終濃度2ｍＭ)を100μｌ、20ｍＭ ＦｅＣｌ３(終濃度2ｍＭ)を100μｌ、蒸留水を130μｌ、１ｍＭ antimycin(終濃度10μＭ)を10μｌ、submitochondoriaを50μｌ加え37℃で５分間保温した。４ｍＭ sodium succinate(終濃度400μＭ)を100μｌ加え反応を開始、37℃で60分間反応させた。(1)と同様に反応を停止させ、ＴＢＡ法にて535ｎｍの吸光を測定した。
【００４３】
５０％抑制濃度（μＭ）の結果を、表１の「（３）Ｓuccinate―dependent」の項目に記載する。この表に示されるように、〔化１〕のキサントン誘導体（表中、Compd.２）は3.7、〔化２〕のキサントン誘導体（表中、Compd.４）は1.3、〔化３〕のキサントン誘導体（表中、Compd.８）は42.8、〔化４〕のキサントン誘導体（表中、Compd.10）は1.0、〔化５〕のキサントン誘導体（表中、Compd.14）は3.0であり、他の構造を有するキサントン誘導体に対して非常に優れた数値を示している。
【００４４】
(4)低濃度のアスコルビン酸及び鉄により生成されるヒドロキシラジカル(・ＯＨ)によるミトコンドリアの膜の脂質過酸化
試験管にキサントン10μｌ、100ｍＭ ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ buffer(ｐＨ7.4)を500μｌ、200ｍＭ ＫＣｌ（終濃度20ｍＭ）を100μｌ、100μＭ ＦｅＳＯ４（終濃度10μＭ）を100μｌ、蒸留水を140μｌ、submitochondoriaを50μｌ加え、反応液とした。37℃で５分間保温後、２ｍＭ ＡｓＡ（ascorbic acid）（終濃度200μＭ）を100μｌ加え37℃で20分間反応させた。（1）と同様に反応を停止させ、ＴＢＡ法にて535ｎｍの吸光を測定した。
【００４５】
５０％抑制濃度（μＭ）の結果を、表１の「（４）Ａscorbate―induced」の項目に記載する。この表に示されるように、〔化１〕のキサントン誘導体（表中、Compd.２）は7.1、〔化２〕のキサントン誘導体（表中、Compd.４）は5.7、〔化３〕のキサントン誘導体（表中、Compd.８）は18.3、〔化４〕のキサントン誘導体（表中、Compd.10）は5.5、〔化５〕のキサントン誘導体（表中、Compd.14）は5.6であり、他の構造を有するキサントン誘導体に対して非常に優れた数値を示している。
【実施例２】
【００４６】
ミクロソームにおける脂質過酸化作用の測定を行った。
【００４７】
ミクロソームをＮＡＤＰＨ依存性、ＮＡＤＨ依存性、ＡｓＡ−Ｆｅ３＋、ｔ−ＢＯＯＨ、ＣＣｌ４により過酸化させ、脂質過酸化抑制作用をＴＢＡ法で測定した。ＮＡＤＰＨ依存性脂質過酸化はＮＡＤＰＨ-cytochrome-P-450 reductase依存性、ＮＡＤＨ依存性はＮＡＤＨ-cytochrome b５reductase依存性、ｔ−ＢＯＯＨ及びＣＣｌ４はＰ−依存性である。
【００４８】
（1）Ｆｅ３＋―ＡＤＰ存在下でＮＡＤＰＨに依存するミクロソームの脂質過酸化
試験管にキサントン10μｌ、100ｍＭ Tris-HCl buffer(ｐＨ7.5)を500μｌ、20ｍＭ ＡＤＰ（終濃度２ｍＭ）を100μｌ、1.2ｍＭ ＦｅＣｌ３（終濃度120μＭ）を100μｌ、蒸留水140μｌ、microsomeを50μｌを加え、反応液とした。37℃で５分間保温後、１ｍＭ ＮＡＤＰＨ（終濃度100μＭ）を100μｌ加え、37℃で15分間反応させた。ミトコンドリアの場合と同様に反応を停止させ、ＴＢＡ法にて535ｎｍの吸光を測定した。
【００４９】
５０％抑制濃度（μＭ）の結果を、表２の「（５）ＮＡＤＰＨ―dependent」の項目に記載する。この表に示されるように、〔化１〕のキサントン誘導体（表中、Compd.２）は18.9、〔化２〕のキサントン誘導体（表中、Compd.４）は6.4、〔化３〕のキサントン誘導体（表中、Compd.８）は64.4、〔化４〕のキサントン誘導体（表中、Compd.10）は0.7、〔化５〕のキサントン誘導体（表中、Compd.14）は1.3であり、他の構造を有するキサントン誘導体に対して非常に優れた数値を示している。
【００５０】
【表２】
2006089661.tif 000013
【００５１】
（2）Ｆｅ３＋―ＡＤＰ存在下でＮＡＤＨに依存するミクロソームの脂質過酸化
試験管にキサントン10μＬ，100ｍＭ Tris-HCl buffer(ｐＨ7.5)を500μｌ、20ｍＭ ＡＤＰ（終濃度２ｍＭ）を100μｌ、1.2ｍＭ ＦｅＣｌ３（終濃度120μＭ）を100μｌ、蒸留水140μｌ、microsomeを50μｌ加え、反応液とした。37℃で５分間保温後、１ｍＭ ＮＡＤＨ（終濃度100μＭ）を100μｌ加え37℃で60分間反応させた。同様に反応を停止させ、ＴＢＡ法にて535ｎｍの吸光を測定した。
【００５２】
結果は、前記（1）項と同様であった。
【００５３】
（3）低濃度のアスコルビン酸及び鉄により生成されるヒドロキシラジカル（・ＯＨ）によるミクロソームの脂質過酸化
試験管にキサントン10μｌ、40ｍＭ phosphate buffer(ｐＨ6.0)を500μｌ、1.2ｍＭ ＦｅＣｌ３（終濃度120μＭ）を100μｌ、900ｍＭ（終濃度90ｍＭ）ＫＣｌを100μｌ、蒸留水を140μｌ、microsomeを50μｌ加え、反応液とした。37℃で５分間保温後５ｍＭ ＡｓＡ（ascorbic acid）（終濃度500μＭ）を100μｌ加え37℃で15分間反応させた。同様に反応を停止させ、ＴＢＡ法にて535ｎｍの吸光を測定した。
【００５４】
５０％抑制濃度（μＭ）の結果を、表２の「（７）Ａscorbate―induced」の項目に記載する。この表に示されるように、〔化１〕のキサントン誘導体（表中、Compd.２）は2.4、〔化２〕のキサントン誘導体（表中、Compd.４）は1.6、〔化３〕のキサントン誘導体（表中、Compd.８）は45.7、〔化４〕のキサントン誘導体（表中、Compd.10）は0.6、〔化５〕のキサントン誘導体（表中、Compd.14）は0.7であり、他の構造を有するキサントン誘導体に対して非常に優れた数値を示している。
【００５５】
（4）ＣＣｌ４によるｐ−450依存性の脂質過酸化
試験管にキサントン10μｌ、２unitsのglucose-6-phosphate-dehydrogenase、0.4ｍＭＥＤＴＡを含む200ｍＭ K phosphate buffer(ｐＨ7.4)を500μｌ、100ｍＭ glucose-6-phosphate,disodiumsalt（終濃度10ｍＭ）を100μｌ、蒸留水を240μｌ、microsomeを50μｌ加え、反応液とした。37℃で２分間保温後、２Ｍ ＣＣｌ４(carbon tetrachloride)／ＥｔＯＨ（終濃度20ｍＭ）を10μｌ加え、さらに37℃で２分間保温後、100ｍＭ（終濃度１ｍＭ）ＮＡＤＰ＋を100μｌ加え37℃で20分間反応させた。同様に反応を停止させ、ＴＢＡ法にて535ｎｍの吸光を測定した。
【００５６】
５０％抑制濃度（μＭ）の結果を、表２の「（８）ＣＣｌ４―induced」の項目に記載する。この表に示されるように、〔化１〕のキサントン誘導体（表中、Compd.２）は3.3、〔化２〕のキサントン誘導体（表中、Compd.４）は2.9、〔化３〕のキサントン誘導体（表中、Compd.８）は13.5、〔化４〕のキサントン誘導体（表中、Compd.10）は3.5、〔化５〕のキサントン誘導体（表中、Compd.14）は2.3であり、他の構造を有するキサントン誘導体に対して非常に優れた数値を示している。
【００５７】
（5）t-ＢＯＯＨによるｐ−450依存性の脂質過酸化
試験管にキサントン10μｌ、200ｍＭ K phosphate buffer(ｐＨ7.4)を500μｌ、蒸留水を430μｌ、microsome を50μｌ加え、反応液とした。37℃で５分間保温後、100ｍＭ t-ＢＯＯＨ(tert-butylhydroperooxide:終濃度10ｍＭ)を100μｌ加え37℃で30分間反応させた。同様に反応を停止させ、ＴＢＡ法にて535ｎｍの吸光を測定した。
【００５８】
５０％抑制濃度（μＭ）の結果を、表２の「（９）t-ＢuＯＯＨ―induced」の項目に記載する。この表に示されるように、〔化１〕のキサントン誘導体（表中、Compd.２）は58.5、〔化２〕のキサントン誘導体（表中、Compd.４）は29.5、〔化４〕のキサントン誘導体（表中、Compd.10）は35.7、〔化５〕のキサントン誘導体（表中、Compd.14）は47.2であり、他の構造を有するキサントン誘導体に対して非常に優れた数値を示している。
【実施例３】
【００５９】
ラジカル除去作用の測定を行った。
【００６０】
（1）ＤＰＰＨ radical除去作用
中性ラジカルであるＤＰＰＨ（diphenyl-p-picrylhydradical）ラジカルを用いて、直接的なラジカル除去作用について測定した。
【００６１】
試験管にキサントン20μｌ、250ｍＭ acetate buffer,ｐＨ5.5を400μｌ、エタノール390μｌ加え、37℃で５分間保温後、250μＭ（終濃度50μＭ）を200μｌ加え30℃で30分間反応させ、517ｎｍで吸光を測定した。測定直後に3,000ｐｐｍ ＢＨＴを30μ加え、30℃で30分間保温し、517ｎｍでの吸光を測定した。
【００６２】
５０％抑制濃度（μＭ）の結果を、表３の「（10）ＣＣｌ４―induced」の項目に記載する。この表に示されるように、〔化１〕のキサントン誘導体（表中、Compd.２）は9.9、〔化２〕のキサントン誘導体（表中、Compd.４）は5.8、〔化４〕のキサントン誘導体（表中、Compd.10）は12.6、〔化５〕のキサントン誘導体（表中、Compd.14）は7.2であり、他の構造を有するキサントン誘導体に対して非常に優れた数値を示している。
【００６３】
【表３】
2006089661.tif 000014
【００６４】
（2）スーパーオキサイドアニオン（Ｏ２−）除去作用
様々な活性酸素のうち特にスーパーオキシドアニオン（Ｏ２−）について、xanthine oxidase（ＸＯＤ）で生じたＯ２−の消去作用を測定した。
【００６５】
試験管にキサントン10μｌに、1.1×10−３ units ＸＯＤ,0.1ｍＭ ＥＤＴＡ，0.1％ＢＳＡ（牛血清アルブミン  脂肪酸フリー）、50μＭ nitroblue tetrazolium（ＮＢＴ）を含む100ｍＭ Ｎａ phospate buffer、ｐＨ7.8を0.5ｍｌ加え反応液とした。37℃で５分間保温後、基質として0.2ｍＭ xanthine（終濃度0.1ｍＭ）を0.5ｍｌ加え、スーパーオキシドアニオンの生成を開始した。反応20分後、６ｍＭ ＣｕＣｌ２（終濃度200μＭ）を35μｌ加え反応を停止させ、還元されたＮＢＴを560ｎｍの吸光で測定した。
【００６６】
５０％抑制濃度（μＭ）の結果を、表３の「（11）ＣＣｌ４―induced」の項目に記載する。この表に示されるように、〔化１〕のキサントン誘導体（表中、Compd.２）は51.8、〔化２〕のキサントン誘導体（表中、Compd.４）は5.7、〔化４〕のキサントン誘導体（表中、Compd.10）は5.2、〔化５〕のキサントン誘導体（表中、Compd.14）は6.3であり、他の構造を有するキサントン誘導体に対して非常に優れた数値を示している。
【実施例４】
【００６７】
Compd.２〔化１〕のキサントン誘導体について、ミトコンドリアの過酸化と酵素活性の測定を行った。
【００６８】
ミトコンドリアではＮＡＤＨ dehydrogenaseやcoenzyme Ｑサイクルで活性酸素が生成し、その結果ＮＡＤＨ dehydrogenaseやcomplexIIIが酸化ストレスにより失活する。非酵素的にdihydroxyfumarate（ＤＨＦ）によりヒドロキシラジカルを生じさせると、ミトコンドリアの酵素活性が低下する。これに対するキサントン誘導体の酵素活性保護作用を調べた。
【００６９】
試験管にキサントン100μｌに、50ｍＭ phosphate buffer(ｐＨ7.4)を7.7ｍｌと１ｍＭ ＦｅＣｌ３（終濃度100μＭ）と10ｍＭ ＡＤＰ（終濃度１ｍＭ）をそれぞれ１ｍｌずつ添加し、37℃でpreincubateした。５分後、30ｍＭ ＤＨＦ（終濃度300μＭ）とミトコンドリアを100μｌずつ加え、反応を開始した。30分ごとに１ｍｌサンプリングし、そのＮＡＤＨ−cytochrome c reductase活性及びsuccinate-cytochrome c活性を測定した。
【００７０】
酵素活性は、１ｍｌのサンプリング溶液に10ｍＭ ＮａＮ３とcytochrome cを50ｍＭ phosphate bufferに加えた溶液950μｌと２ｍＭ ＮＡＤＨまたは200ｍＭ succinateを66μｌ加え、550ｎｍの吸光度で３分間連続測定した。これを反応開始から２時間まで連続して行った。
【００７１】
結果を、図４のジヒドロキシフマル酸によるミトコンドリア呼吸鎖の酸化障害に対する〔化２〕の効果のグラフに示す。図中（Ｘ）のＤＨＦ無添加のcontorolでは酵素は失活しない。図中（Ｙ）にCompd.２〔化１〕のキサントン誘導体を添加すると失活を抑制し、活性が保護される。ＤＨＦで過酸化すると失活する。また、Compd.４〔化２〕のキサントン誘導体、Compd.10〔化４〕のキサントン誘導体、 Compd.14〔化５〕のキサントン誘導体には同様の保護作用が認められた。
【産業上の利用可能性】
【００７２】
様々な疾病や老化を予防することができ、抗酸化剤、医薬組成物、医薬部外品組成物、化粧品、健康食品など種々の用途に適用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１】試験に供したキサントン誘導体（ＩＹＣ−１〜ＩＹＣ−８）の構造を説明する図。
【図２】試験に供したキサントン誘導体（ＩＹＣ−９〜ＩＹＣ−16）の構造を説明する図。
【図３】試験に供したキサントン誘導体（ＩＹＣ−17〜ＩＹＣ−18）の構造を説明する図。
【図４】ジヒドロキシフマル酸によるミトコンドリア呼吸鎖の酸化障害に対する〔化２〕の効果を示すグラフ。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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