(57)【要約】【課題】新たなタイプの血小板凝集抑制剤を提供する。【解決手段】１,５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースまたはその一定の誘導体を有効成分とする血小板凝集抑制剤。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
製薬学的に許容されうるキャリヤー、希釈剤または賦形剤と、有効成分として、１,５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースおよび下記の一般式（Ｉ）で表される１,５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースの誘導体からなる群より選ばれる１種またはそれ以上を含んでなる血小板凝集抑制剤：
一般式（Ｉ）：
Ｘ−ＡＦ
上式中、ＡＦは１,５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトース残基を表し；
Ｘは、式Ｇ−(Ｇ)n−またはＲＣＯ−の基を表し、ここで、Ｇはグルコース残基であり、（Ｇ)nは
【化１】
2006016301.tif 000008
であることができ、ｎは０〜２０の整数であり、ｍは０〜３の整数であり、
ＲＣＯは炭素原子２〜２０個の脂肪酸由来の基であり、そして
Ｇ−(Ｇ)n−またはＲＣＯ−は、それぞれ、ＡＦの非還元性部（３位、４位および６位から選ばれるいずれか少なくとも一つの部位のヒドロキシル基を介してグルコシド結合（１→３、１→４および１→６から選ばれる少なくとも一つの結合様式である）またはエステル結合している。
【請求項２】
有効成分が１,５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースである請求項１記載の血小板凝集抑制剤。
【請求項３】
有効成分が、一般式（Ｉ）のＸが式Ｇ−(Ｇ)n−で表される糖誘導体の１種またはそれ以上である請求項１記載の血小板凝集抑制剤。
【請求項４】
式Ｇ−(Ｇ)n−のｎが０〜１１のいずれかであり、（Ｇ)n は非分岐鎖である請求項３記載の血小板凝集抑制剤。
【請求項５】
式ＲＣＯ−が炭素原子２〜２０の飽和または不飽和脂肪酸由来の基であり、そしてＡＦの３位、４位および６位から選ばれるいずれか少なくとも一つの部位のヒドロキシル基を介してエステル結合している請求項１記載の血小板凝集抑制剤。
【請求項６】
血栓の形成を予防または血栓の溶解を促進するための請求項１〜５のいずれかに記載の血小板凝集抑制剤。
【請求項７】
血小板凝集が血栓溶解後の血小板凝集の再梗塞をもたらすものである請求項１〜５のいずれかに記載の血小板凝集抑制剤。
【請求項８】
有効成分として１,５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースおよび請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される１,５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースの誘導体からなる群より選ばれる１種またはそれ以上を含んでなる血小板凝集抑制のための機能性食品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は１,５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースおよびその誘導体の製薬学的なまたは機能性食品上の使用ないしは用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】
１,５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトース［１,５−anhydro-D-fructose（以下、１,５−ＡＦと略記する場合あり）は、澱粉やグリコーゲン等の多糖類からα−１,４−グルカンリアーゼ反応により生成され、哺乳類をはじめ種々の植物に存在し、分子内に二重結合を持つユニークな糖である。生体内ではアンヒドロフルクトース経路によりグリコーゲンからα−１,４−グルカンリアーゼによって１,５−ＡＦが生じ、その後、１,５−ＡＦ特異的レダクターゼにより１,５−アンヒドロ−Ｄ−グルシトール（以下、１,５−ＡＧと略記する）に還元される。１,５−ＡＧは１,５−ＡＦの最終産物とされているが、糖尿病では１,５−ＡＧの血中濃度が下がることが知られており、糖尿病のマーカーとして利用されている。このような変換過程等を考慮し、１,５−ＡＦおよびその類似環状エーテルを耐糖能が障害された患者（例えば糖尿病）の治療に用いることが提案されている（ＷＯ ０１／５１０５８ Ａ１）。
【０００３】
本発明者らの一部は、１,５−ＡＦがラジカルスカベンジャー様の活性を持ち、銅イオンによる低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の酸化反応系で１,５−ＡＦが有意にＬＤＬの酸化を抑制することを明らかにした（Yamaji et al., Antioxidant Effects of・・・・Planta Medica. ２００２；６８：１６−１９）。また、１,５−ＡＦの抗酸化作用を食品を初めとする広範な技術分野で利用することも提案されている（ＷＯ ９８／５０５３２）。
【０００４】
他方、上記のごとき、１,５−ＡＦの機能を保持したアシル誘導体（ＷＯ ００／５６７４５）およびグルコシル化誘導体またはそれらの使用（ＪＰ ２００１−２０４４９０Ａ、ＪＰ ２００１−２１３８９１Ａ、ＪＰ ２００１−３３３７１２Ａ、ＪＰ ２００２−５８４７７Ａ）も提案されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
上記の１,５−ＡＦおよびその誘導体は、上記したような興味深い活性または作用を有することのみならず極めて毒性が低いものである。したがって、本発明はさらなる有用な生理学的活性または作用を奏する製薬学的製剤および食品（ヒトを初めとする哺乳動物へ施用することを意図する）を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上述のＬＤＬ酸化系およびその他の系での１,５−ＡＦのより詳細な作用機序を検討してきたところ、１,５−ＡＦおよびそのある一定の誘導体がヒト血小板の凝集を有意に抑制しうることを見出した。したがって、本発明はこのような知見に基づくものであり、製薬学的に許容されうるキャリヤー、希釈剤または賦形剤と、有効成分として、１,５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトースおよび下記の一般式（Ｉ）で表されるその誘導体からなる群より選ばれる１種またはそれ以上を含んでなる血小板凝集抑制剤を提供する。
【０００７】
一般式（Ｉ）：
Ｘ−ＡＦ
上式中、ＡＦは１,５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトース残基を表し；
Ｘは、式Ｇ−(Ｇ)n−またはＲＣＯ−の基を表し、ここで、Ｇはグルコース残基であり、（Ｇ)nは
【０００８】
【化２】
2006016301.tif 000002
【０００９】
であることができ、ｎは０〜２０の整数であり、ｍは０〜３の整数であり、
ＲＣＯは炭素原子２〜２０個の脂肪酸由来の基であり、そして
Ｇ−(Ｇ)n−またはＲＣＯ−は、それぞれ、ＡＦの非還元性部（３位、４位および６位から選ばれるいずれか少なくとも一つの部位）のヒドロキシル基を介してグルコシド結合（１→３、１→４および１→６から選ばれるいずれか少なくとも一つの結合様式である）またはエステル結合している。
【００１０】
【発明の具体的な態様】
本発明に従う有効成分１,５−ＡＦは、例えば、下記式で示されるとおり、数種の互変異性体として存在することが知られているアンヒドロフルクトースである。
【００１１】
【化３】
2006016301.tif 000003
【００１２】
また、１,５−ＡＦは水溶液中では水和され、次式で示される水和型として存在することも知られている。
【００１３】
【化４】
2006016301.tif 000004
【００１４】
また、非水溶液中では、次式で示される二量体として存在する可能性があることも示唆されている（J. Carbohydrate Chemistry, １９９８，１７，１０２７−１０３５）。
【００１５】
【化５】
2006016301.tif 000005
【００１６】
またさらに、１,５−ＡＦは弱塩基性（例えば、ＮａＨＣＯ3）下で異性化され、次式で示される構造異性体（もしくは位置異性体）となることも知られている。
【００１７】
【化６】
2006016301.tif 000006
【００１８】
なお、上述したとおり、１,５−ＡＦは哺乳類および種々の植物に存在するが、グルコースからの化学的合成法、また酵素を用いる合成法（例えば、J. Appl. Glycosci., Vol.４６．４３９−４４４，１９９９）により製造できる。
【００１９】
本発明に関して、１,５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトース（１,５−ＡＦ）と称する場合は、上記のいずれの形態をもつ異性体、水和物および異性化後の構造異性体をも包含する概念で使用している。
【００２０】
したがって、一般式（Ｉ）：Ｘ−ＡＦにおいて、１,５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトース残基を表すＡＦは、上記の二量体を除く、１,５−ＡＦにおける３位、４位または６位のヒドロキシル基から水素原子または該ヒドロキシルを除去した状態にある糖残基を意味する。
【００２１】
一般式（Ｉ）におけるＸが、Ｇ−(Ｇ)n−を表す１,５−ＡＦ誘導体は、本発明者らの一部によって初めて提供されたものであり（上述の、ＪＰ ２００１−２０４４９０Ａ参照）、またこれらの文献に記載された方法に従って容易に製造することができる。式Ｇ−(Ｇ)n−における、（Ｇ)nは、
【００２２】
【化７】
2006016301.tif 000007
【００２３】
の形態をとる分岐を有してもよい。Ｇ−、−Ｇ−のグルコース残基は、限定されるものでないが、１位ヒドロキシル基および／または４位、６位もしくは３位ヒドロキシル基の１乃至２個のヒドロキシル基から、水酸原子または該ヒドロキシル基が除去された状態にある糖残基であり、これらの残基間またはこれらの残基と１,５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトース残基との間でグルコシド結合（またはエーテル結合）を形成するものである。上式中のｎは理論上、いかなる整数であることもできるが、本発明の用途を考慮すると、０〜２０、好ましくは０〜１１、より好ましくは０〜６、特に好ましくは０〜２であり、ｍは０〜３、好ましくは０［すなわち（Ｇ)nは分岐鎖をもたない］である。
【００２４】
一般式（Ｉ−ａ）：
Ｇ−(Ｇ)n−ＡＦ
［式中、Ｇ、（Ｇ)n、ＡＦおよびｎは、一般式（Ｉ）について定義したのと同義である］
で表される１,５−ＡＦ誘導体の一例としては限定されるものでないが、上述のＪＰ ２００１−２０４４９０Ａに記載された１,５−ＡＦとβ−シクロデキストリンの混合物にシクロデキストリン合成酵素を作用させて取得できる、１個の１,５−ＡＦ残基と１〜１０個のグルコース残基からなる、それぞれ重合度が２〜１１であり、還元末端が１,５−ＡＦ残基で、非還元末端がグルコース残基である１,５−ＡＦの糖誘導体の各単離物、またはいずれか２種以上の重合度をもつ糖誘導体の混合物であることができる。
【００２５】
一般式（Ｉ−ｂ）：
ＲＣＯ−ＡＦ
［式中、ＲＣＯおよびＡＦは一般式（Ｉ）について定義したのと同義である］
で表される１,５−ＡＦ誘導体は、１,５−アンヒドロ−Ｄ−フルクトース残基の３位、４位もしくは６位（好ましくは６位）ヒドロキシル基に炭素原子２〜２０個の脂肪酸由来のアシル基がエステル結合したものである。このようなアシル基としては、直鎖もしくは分岐し、そして飽和もしくは不飽和の脂肪族、カルボン酸由来であることができ、例えば、アセチル、プロピオニル、ブチロイル、デカノイル、ドデカノイル、ヘキサデカノイル、９−ヘキサデセノイル、オクタデカノイル、９,１２−オクタデタジエノイル、９,１２,１５−オクタデカトリエノイル、５,８,１１,１４−イコサテトラエノイル等であることができる。
【００２６】
これらのアシル誘導体は化学的合成法により製造することができるが、高級脂肪酸由来のアシル誘導体は、例えば、ＷＯ ００／５６７４５に記載されているようなリパーゼを用いる合成法により製造することができる。また、そのように製造されたアシル誘導体を本発明の有効成分として使用するのが好ましい場合もある。
【００２７】
本発明にいう、血小板凝集は血餅の形成に必須の事象である。通常、血餅は血管系から血液が漏出するのを防止、すなわち止血する作用を有する。しかし、ある種の疾患状態では、血管内でこの止血機能が作動し、これが重篤な状態（例えば、心筋梗塞、脳梗塞等）に直結する。本発明にいう、血小板凝集は一般に、このような疾患状態に到る過程を、主として意味する。理論により拘束されるものでないが、本発明によれば、血管損傷部位での微量トロンビンが生成され、これにより血小板が活性化され、次いで血小板の凝集が惹起されるのを抑制することが企図されている。かくして本発明によれば、血栓の形成を予防もしくは治療する手段が提供される。かような治療目的では、上述の有効成分を、血餅の溶解に用いられる他の有効成分、例えば、組織プラスミノーゲンアクチベーター等と組み合わせて使用することが好ましい場合もある。また、本発明に従う有効成分は、病的血栓の予防はもちろん、血栓の溶解に続く再梗塞の発生を防止し、血栓溶解の速度を促進するのにも用いることができよう。
【００２８】
本発明の血小板抑制剤は、製薬学的製剤とするとき、有効成分の外に、製薬学的に許容される当該技術分野で既知のキャリヤー、希釈剤または賦形剤を、また当該技術分野で既知の配合方法により含ませ得る。そして、１種またはそれ以上のキャリヤー等を選択することにより、それらを含む製剤は非経口投与（例えば、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与または皮下投与）、経口投与、局所投与、埋植片による投与等による形態をとることができる。また、機能性食品（飲料を含む）の形態をとることもできる。
【００２９】
非経口投与のための製剤は、単位用量形態内（例えば、アンプル内）あるいは保存量が添加されている複数用量容器内に存在してよい。これらの組成物は、懸濁剤、水剤、または油性［特に、一般式（Ｉ−ｂ）で表される化合物の場合］もしくは水性の賦形剤中の乳化剤のような形態をとることができ、かつ必要により、懸濁剤、安定化剤、および／または分散剤のような製剤用試薬を含んでよい。別法では、有効成分は適切な賦形剤（例えば、滅菌された発熱性物質非含有水）での構築のための粉末形態をとってよい。また、ＪＰ ２００１−２０４４９０Ａの実施例に記載されるようにして酵素反応を用いて合成された一般式（Ｉ−ａ）で表される糖誘導体の反応混合物を、それから発熱物質、必要により、例えばシクロデキストリン合成酵素を除去し、必要により等張剤等を添加する、等の簡単な処理を行った後、上記の非経口投与用製剤または後述する経口投与製剤（食品を含む）としてもよい。このような形態の製剤も本発明の範囲内に入る。
【００３０】
該実施例の一部を採録すると、次のとおりである：「１２０ｍｇ／ｍｌの１,５−Ｄ−アンヒドロ−Ｄ−フルクトース１００ｍｌ（水溶液）と５０ｍｇ／ｍｌのβ−シクロデキストリン１００ｍｌ（水溶液）を混合し、ｐＨを５に調整した後、その混合液にシクロデキストリン合成酵素５０Ｕを添加し、３５℃で４８時間反応させた。反応終了後、反応液を９５℃まで加熱し酵素を失活させた。」ちなみに、この反応混合物中には、少なくとも１,５−ＡＦに１〜１０個のグルコース残基が結合した糖誘導体の混合物が含まれることが確認されている。
【００３１】
本発明に従う、経口投与のための製剤は、例えば結合剤（例えば、予めゼラチン化させたデンプン、ポリビニルピロリドン、もしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース）：充填剤（一例では、ラクトース、微細結晶性セルロース、もしくはリン酸カルシウム）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、もしくはケイ素）；崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム）；あるいは湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）のような製薬学的に許容される賦形剤を用いる常法により調製される固形投与用形態（例えば、錠剤もしくはカプセル剤）の形態をとることができる。錠剤は当該技術分野ではよく知られている方法によりコーティングしてもよい。
【００３２】
経口投与のまたは上記の非経口投与のための液体製剤は、例えば水剤、シロップ剤、もしくは懸濁剤の形態をとることができ、あるいはそれらは使用前に水もしくは他の適切な賦形剤での再構成のための乾燥製品として提供できる。このような液体製剤は、例えば懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、もしくは水素化された食用脂肪）；特に、式（Ｉ−ｂ）の誘導体について、乳化剤（一例では、レシチンもしくはアカシア）または非水性賦形剤（例えば、アーモンド油、油状エステル、もしくはエチルアルコール）：ならびに保存剤（例えば、メチルもしくはプロピルｐ−ヒドロキシ安息香酸、またはソルビン酸）のような製薬学的に許容される賦形剤を用いる常法により調製することができる。また、１,５−ＡＦを含有する製剤には、紅藻類［ツルシラモ（Gracilaria chorda、オゴノリ（Gracilaria verrucosa）等］、キノコ（Morchella hortensis）、または定温動物のレバー、等の１,５−ＡＦを含有する物質から、１,５−ＡＦが濃縮された水溶性抽出物それ自体、およびそれらに保存剤等を加えて調製した製剤も、本発明に従う製剤に包含される。また、このような経口投与製剤は、食品または飲料の形態にしてもよい。
【００３３】
本発明の有効成分は、さらに、デポー製剤としてもよい。このような長期作用型製剤は埋植もしくは移植（例えば、皮下移植もしくは脳内移植）によるか、あるいは筋肉内注射により投与することができる。したがって、例えば、これらの化合物は適当な重合性もしくは疎水性の物質（例えば、許容される油中の乳化剤としてのもの）を用いて調製することができる。
【００３４】
本発明の製剤は、剤形または投与経路、または予防もしくは治療しようとする症状によって最適な投与量が変動するので限定されないが、通常、専門医の判断により決定されるのが好ましい。しかしながら、非経口投与および経口投与においては、一般的に、患者の体重１ｋｇ当たり、有効成分換算で、０.０００１〜３０００ｍｇ、好ましくは０.０１〜１００ｍｇ、より好ましくは０.１〜１ｍｇの用量とすることができる。また、このような用量は、適当な投与頻度、例えば１日当たり１〜１０回、好ましくは１〜２回、または適当な間隔（数日毎）に１回で投与してよい。
【００３５】
【実施例】
本発明の作用・効果は、血小板凝集抑制効果を評価する上で当業者に広範に認められている下記の実験により、評価できる（また、Freedman et al., Circulation,１９９６；９４，２４３４−２４４０参照）。
＜実験方法＞
血小板凝集能を正常人の血液から採取した血小板を用いて検討した。３.８％クエン酸ナトリウム採血管に採取した血液を遠心分離し（３５０ｇ、１５分、室温）、多血小板血漿（Platelet rich plasma,ＰＲＰ）を得た。さらに遠心分離して（２０００ｇ、１５分、室温）乏血小板血漿（Platelet poor plasma,ＰＰＰ）を得た。
【００３６】
ＰＲＰを用いて血小板凝集能を検討した。２００μＬのＰＲＰをアデノシン５′−二リン酸（ＡＤＰ）、あるいはトロンビンにより凝集惹起し、その濁度を光学的に血小板凝集測定装置［platelet aggregometer（Hema Tracer TM Model ８０１，Niko Bioscience, Tokyo）］にて測定した。その際に対照としてＰＰＰを用いた。
＜結果＞
ＰＲＰをＡＤＰ（５μｍｏｌ／Ｌ）、トロンビン（０.２Ｕ／ｍＬ）で刺激すると、顕著な血小板凝集が確認された。その反応の系を１,５−ＡＦ（５０μｇ／ｍＬ）で１５分間前処理すると、凝集は有意に抑制された。１,５−ＡＦの生体内最終産物である１,５−ＡＧでは血小板凝集抑制作用は見られなかった。
【００３７】
なお、生体内では、血管損傷部位で微量のトロンビンが生成され、これが血小板を活性化することが心筋梗塞や脳梗塞の大きな原因であるといわれており、血小板の凝集を抑制することで、血栓を予防するという治療法が取られている。しかし現在のところトロンビンで誘発される血小板凝集を抑制する血小板抑制剤は提供されていない。これらの背景、さらには１,５−ＡＦが糖であり、基本的に生体内に存在する物質であることを勘案すると、１,５−ＡＦおよびその誘導体は抗血栓剤として有用であるものとみなせる。
【００３８】
また、１,５−ＡＦの誘導体は、本発明に従って提供される式（Ｉ−ａ）および（Ｉ−ｂ）で表されるとおり、分子全体の、特に、１,５−ＡＦ残基の還元性部位のヒドロキシル基が遊離の状態（すなわち、置換基を有していない）にある限り、一般的に、上記の１,５−ＡＦとほぼ同様の作用効果を示す。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例に記載の実験方法によって測定した１,５−ＡＦの血小板凝集抑制作用を示すグラフである。グラフ中、Thrombin とあるのは、本発明に従う血小板抑制剤を含めない場合の結果であり、＋１,５−ＡＦとあるのは、該血小板抑制剤として、１,５−ＡＦを用いた場合の結果である。
【図１】
2006016301.tif 000009