(57)【要約】  【課題】  マルチマーカーシステムにも応用できる、体液を検体とした潰瘍性大腸炎等の炎症性腸疾患の診断方法を提供する。  【解決手段】  体液中におけるマーカー物質の濃度を健常値と比較し、炎症性腸疾患を診断する。該マーカー物質として１５種類のタンパク質の少なくとも１種を使用する。マーカー物質の濃度は、質量分析によって測定することができる。マーカー物質に対する親和性を有する物質を固定化した担体にマーカー物質を捕捉して、マーカー物質の濃度を測定することもできる。マーカー物質に対する親和性を有する物質を固定化した担体を含む炎症性腸疾患の診断用キットによれば、より簡便に炎症性腸疾患の診断を行うことができる。【選択図】  図１９
2006258629.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
体液中の下記マーカー物質（ａ）〜（ｏ）の少なくとも１つの濃度を測定し、その値を健常値と比較することを特徴とする炎症性腸疾患の診断方法。
（ａ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、有機溶媒で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ７．０かつ０．５ＭのＮａＣｌ濃度で銅イオン結合金属キレート体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約４１６０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｂ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、ｐＨ４．０で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約６６４０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｃ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、有機溶媒で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約８８４０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｄ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、有機溶媒で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約８９４０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｅ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、有機溶媒で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ７．０かつ０．５ＭのＮａＣｌ濃度で銅イオン結合金属キレート体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約９４４０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｆ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、有機溶媒で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約１２８８０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｇ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、ｐＨ５．０で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約１３２７００のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｈ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、ｐＨ７．０で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ７．０かつ０．５ＭのＮａＣｌ濃度で銅イオン結合金属キレート体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約１４７９４０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｉ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、ｐＨ４．０で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約６４４０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｊ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、有機溶媒で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約８２２０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｋ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、有機溶媒で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約８７１０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｌ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、有機溶媒で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ７．０かつ０．５ＭのＮａＣｌ濃度で銅イオン結合金属キレート体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約９７３０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｍ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、ｐＨ３．０で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ７．０かつ０．５ＭのＮａＣｌ濃度で銅イオン結合金属キレート体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約１２６４０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｎ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、ｐＨ５．０で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約３９７７０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｏ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、ｐＨ５．０で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約９９８５０のイオンピークを生じるタンパク質。
【請求項２】
前記炎症性腸疾患は、潰瘍性大腸炎であることを特徴とする請求項１に記載の炎症性腸疾患の診断方法。
【請求項３】
前記体液は、血液であることを特徴とする請求項１又は２に記載の炎症性腸疾患の診断方法。
【請求項４】
下記工程（１）〜（３）を包含することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の炎症性腸疾患の診断方法。
（１）体液中の前記マーカー物質（ｏ）の濃度値を健常値と比較する工程、
（２）工程（１）において濃度値が健常値未満である場合に、さらに、体液中の前記マーカー物質（ｅ）の濃度値を健常値と比較する工程、
（３）工程（２）において濃度値が健常値未満である場合に、さらに、体液中の前記マーカー物質（ｈ）の濃度値を健常値と比較して、炎症性腸疾患の有無を判定する工程。
【請求項５】
下記工程（４）〜（６）を包含することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の炎症性腸疾患の診断方法。
（４）体液中の前記マーカー物質（ｏ）の濃度値を健常値と比較する工程、
（５）工程（４）において濃度値が健常値以上である場合に、さらに、体液中の前記マーカー物質（ｄ）の濃度値を健常値と比較して、炎症性腸疾患の有無を判定する工程、
（６）工程（５）において炎症性腸疾患が無と判定された場合に、さらに、体液中の前記マーカー物質（ａ）の濃度値を健常値と比較して、炎症性腸疾患の有無を判定する工程。
【請求項６】
下記工程（７）〜（１１）を包含することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の炎症性腸疾患の診断方法。
（７）体液中の前記マーカー物質（ｏ）の濃度値を健常値と比較する工程、
（８）工程（７）において濃度値が健常値未満である場合に、さらに、体液中の前記マーカー物質（ｅ）の濃度値を健常値と比較する工程、
（９）工程（８）において濃度値が健常値以上である場合に、さらに、体液中の前記マーカー物質（ｍ）の濃度値を健常値と比較して、炎症性腸疾患の有無を判定する工程、
（１０）工程（９）において炎症性腸疾患が無と判定された場合に、さらに、体液中の前記マーカー物質（ｆ）の濃度値を健常値と比較して、炎症性腸疾患の有無を判定する工程、
（１１）工程（１０）において炎症性腸疾患が有と判定された場合に、さらに、体液中の前記マーカー物質（ｅ）の濃度値を、工程（８）で設定した健常値とは異なる基準値と比較して炎症性腸疾患の有無を判定する工程。
【請求項７】
質量分析により体液中における前記マーカー物質の濃度を測定することを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の炎症性腸疾患の診断方法。
【請求項８】
被検者から体液を採取し、該体液又は体液成分を前記マーカー物質に対する親和性を有する物質を固定化した担体に接触させて、前記マーカー物質を捕捉し、前記マーカー物質の濃度を測定することを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の炎症性腸疾患の診断方法。
【請求項９】
前記マーカー物質に対する親和性を有する物質は、イオン交換体又は金属キレート体であることを特徴とする請求項８に記載の炎症性腸疾患の診断方法。
【請求項１０】
前記担体は平面部分を有し、前記マーカー物質に対する親和性を有する物質は、該平面部分の一部に固定化されていることを特徴とする請求項８又は９に記載の炎症性腸疾患の診断方法。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれかに記載の炎症性腸疾患の診断方法に用いるためのキットであって、前記マーカー物質に対する親和性を有する物質を固定化した担体を含むことを特徴とする炎症性腸疾患の診断用キット。
【請求項１２】
前記マーカー物質に対する親和性を有する物質は、イオン交換体又は金属キレート体であることを特徴とする請求項１１に記載の炎症性腸疾患の診断用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は炎症性腸疾患の診断方法及び診断用キットに関し、さらに詳細には、被験者の体液中におけるマーカー物質の濃度を測定し、その値を健常値と比較する炎症性腸疾患の診断方法、及び当該診断方法に用いるための診断用キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
食生活の欧米化に伴い炎症性腸疾患が増加する傾向にあり、特に、潰瘍性大腸炎が若年層を中心に急増している。ここ１０年間の統計によると、潰瘍性大腸炎の患者数が約３倍に増えているとの報告もある。
【０００３】
潰瘍性大腸炎は、大腸の粘膜にびらんや潰瘍ができる炎症性腸疾患である。潰瘍性大腸炎の症状としては、血便、下痢、食欲不振、腹痛があり、重症になると、体重減少、発熱、子供の成長障害が現れることもある。潰瘍性大腸炎は治りにくく、手術を要したり、いったん改善してもまた再発することも多い。また、潰瘍性大腸炎は長期にわたって再発を繰り返すことがあり、患者のＱＯＬ（Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ）の面で多くの問題をもたらしている。よって、潰瘍性大腸炎については治療方法の確立、さらに予防方法と早期診断方法の確立が求められている。潰瘍性大腸炎の原因については不明な点が多いが、自己免疫反応の異常が原因の一つとして指摘されている。
【０００４】
潰瘍性大腸炎の診断方法としては、大腸内視鏡検査や大腸レントゲン検査が行なわれている。また、潰瘍性大腸炎の疾患マーカーもいくつか見出されており、その多くは自己抗体の量を測定するものである。例えば、特許文献１には、血液中等におけるリボソーム蛋白質に結合する抗体の量によって、潰瘍性大腸炎を診断する方法が記載されている。また、特許文献２には、生体試料におけるＣＨＩ３Ｌ２遺伝子等の発現量によって、潰瘍性大腸炎を診断する方法が記載されている。
【特許文献１】特表２００５−５０４３２１号公報
【特許文献２】特開２００４−１３５５４５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、従来の疾患マーカーで潰瘍性大腸炎の診断が十分に行なえるとは言い難く、さらに多くの他の疾患マーカーが求められている。一方、マルチマーカーシステムと称し、複数のマーカー物質を指標にして診断精度を上げる方法がすでに提案されている。したがって、潰瘍性大腸炎のような炎症性腸疾患の診断にもマルチマーカーシステムを適用して診断精度を上げることが考えられる。しかし、マルチマーカーシステムによって炎症性腸疾患の診断を行うには、複数の有用なマーカー物質が必要となるが、現在のところそのような複数のマーカー物質はなく、マルチマーカーシステムによって炎症性腸疾患を診断した例は報告されていない。このように、潰瘍性大腸炎等の炎症性腸疾患の予防や早期発見に有用で、マルチマーカーシステムにも適用可能な炎症性腸疾患の診断方法が求められている。
【０００６】
本発明の目的は、潰瘍性大腸炎等の炎症性腸疾患の新たなマーカー物質を特定し、体液中における当該マーカー物質の濃度を指標とした炎症性腸疾患の診断方法、及び当該診断方法に使用するためのキットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、潰瘍性大腸炎等の炎症性腸疾患の新たなマーカー物質を検索すべく、潰瘍性大腸炎患者と健常者の体液中のタンパク質を質量分析計スペクトルにより網羅的に比較し、特異的なマーカー物質を検索した。その結果、潰瘍性大腸炎患者と健常者との間で、統計的に有意差のある複数のタンパク質を見出した。そして、当該タンパク質の体液中における濃度を指標として、潰瘍性大腸炎等の炎症性腸疾患の診断を行なうことができることを見出した。さらに、当該診断方法を簡便に実施することができる診断用キットを構築し、本発明を完成した。すなわち、本発明の要旨は以下の通りである。
【０００８】
請求項１に記載の発明は、体液中の下記マーカー物質（ａ）〜（ｏ）の少なくとも１つの濃度を測定し、その値を健常値と比較することを特徴とする炎症性腸疾患の診断方法である。
（ａ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、有機溶媒で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ７．０かつ０．５ＭのＮａＣｌ濃度で銅イオン結合金属キレート体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約４１６０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｂ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、ｐＨ４．０で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約６６４０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｃ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、有機溶媒で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約８８４０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｄ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、有機溶媒で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約８９４０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｅ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、有機溶媒で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ７．０かつ０．５ＭのＮａＣｌ濃度で銅イオン結合金属キレート体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約９４４０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｆ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、有機溶媒で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約１２８８０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｇ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、ｐＨ５．０で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約１３２７００のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｈ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、ｐＨ７．０で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ７．０かつ０．５ＭのＮａＣｌ濃度で銅イオン結合金属キレート体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約１４７９４０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｉ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、ｐＨ４．０で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約６４４０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｊ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、有機溶媒で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約８２２０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｋ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、有機溶媒で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約８７１０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｌ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、有機溶媒で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ７．０かつ０．５ＭのＮａＣｌ濃度で銅イオン結合金属キレート体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約９７３０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｍ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、ｐＨ３．０で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ７．０かつ０．５ＭのＮａＣｌ濃度で銅イオン結合金属キレート体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約１２６４０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｎ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、ｐＨ５．０で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約３９７７０のイオンピークを生じるタンパク質、
（ｏ）ｐＨ９．０で強陰イオン交換体に結合し、ｐＨ５．０で強陰イオン交換体に結合せず、ｐＨ４．０で弱陽イオン交換体に結合し、かつ質量分析に供すると質量／電荷比が約９９８５０のイオンピークを生じるタンパク質。
【０００９】
また請求項２に記載の発明は、前記炎症性腸疾患は、潰瘍性大腸炎であることを特徴とする請求項１に記載の炎症性腸疾患の診断方法である。
【００１０】
本発明の炎症性腸疾患の診断方法においては、炎症性腸疾患のマーカー物質として、体液中の上記（ａ）〜（ｏ）の１５種のマーカー物質の少なくとも１種の濃度を測定する。そして、その測定値を健常値と比較することにより、炎症性腸疾患の診断を行う。炎症性腸疾患の例としては、潰瘍性大腸炎、クローン病が挙げられる。ここで、「炎症性腸疾患の診断」とは、炎症性腸疾患に罹患しているか否かを判定することのみではなく、炎症性腸疾患の予防を目的として炎症性腸疾患に罹患するおそれの有無を判定することや、炎症性腸疾患の改善状態や再発のモニタリングを行うことも含む。本発明の炎症性腸疾患の診断方法においては、１５種のマーカー物質の一部だけの濃度を測定してもよいし、１５種全部の濃度を測定してもよい。特に、複数のマーカー物質の濃度を測定する場合は、マルチマーカーシステムを組んで多方面から炎症性腸疾患の診断を行うことができ、診断の精度が高い。また、これら１５種のタンパク質はいずれも健常者の体液中にも存在しているものである。したがって、これらのタンパク質の体液中における濃度の変動をモニタリングすることにより、健常者が潰瘍性大腸炎等の炎症性腸疾患を発病する兆候を検出することもできる。
【００１１】
ここで、質量／電荷比（以下、「Ｍ／Ｚ」と略記することもある。）の「約４１６０」、「約１２８８０」、「約１４７９４０」等の値は、質量分析における測定値の誤差範囲を考慮した値であり、概ね±０．２％の幅を有する。すなわち、約４１６０は概ね４１６０±０．２％、約１２８８０は概ね１２８８０±０．２％、約１４７９４０は概ね１４７９４０±０．２％を表す。他の質量／電荷比についても全く同様に、概ね±０．２％の幅を有する。また、これらのマーカー物質はいずれも主に血液中に存在するタンパク質である。なお、マーカー物質（ａ）、（ｂ）、（ｉ）、（ｍ）及び（ｎ）は、炎症性腸疾患患者の体液において高値を示す。一方、マーカー物質（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｌ）及び（ｏ）は、炎症性腸疾患患者の体液において低値を示す。さらに、マーカー物質（ｅ）は炎症性腸疾患患者の体液において低値と高値の両方を示し、健常者の体液はその間の値を示す。
【００１２】
請求項３に記載の発明は、前記体液は、血液であることを特徴とする請求項１又は２に記載の炎症性腸疾患の診断方法である。
【００１３】
かかる構成により、検査材料を簡単に採取でき、より簡便かつ迅速に炎症性腸疾患の診断を行なうことができる。
【００１４】
請求項４に記載の発明は、下記工程（１）〜（３）を包含することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の炎症性腸疾患の診断方法である。
（１）体液中の前記マーカー物質（ｏ）の濃度値を健常値と比較する工程、
（２）工程（１）において濃度値が健常値未満である場合に、さらに、体液中の前記マーカー物質（ｅ）の濃度値を健常値と比較する工程、
（３）工程（２）において濃度値が健常値未満である場合に、さらに、体液中の前記マーカー物質（ｈ）の濃度値を健常値と比較して、炎症性腸疾患の有無を判定する工程。
【００１５】
また請求項５に記載の発明は、下記工程（４）〜（６）を包含することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の炎症性腸疾患の診断方法である。
（４）体液中の前記マーカー物質（ｏ）の濃度値を健常値と比較する工程、
（５）工程（４）において濃度値が健常値以上である場合に、さらに、体液中の前記マーカー物質（ｄ）の濃度値を健常値と比較して、炎症性腸疾患の有無を判定する工程、
（６）工程（５）において炎症性腸疾患が無と判定された場合に、さらに、体液中の前記マーカー物質（ａ）の濃度値を健常値と比較して、炎症性腸疾患の有無を判定する工程。
【００１６】
本発明の炎症性腸疾患の診断方法はマルチマーカーシステムによるものであり、複数のマーカー物質の濃度を指標として、炎症性腸疾患の診断を多段階で行なう。かかる構成により、炎症性腸疾患の診断をきわめて高精度に行なうことができる。ここで、「炎症性腸疾患の有無」とは、炎症性腸疾患の罹患の有無に加え、炎症性腸疾患に罹患するおそれの有無、炎症性腸疾患の改善の有無、炎症性腸疾患の再発の有無等をいう。
【００１７】
請求項６に記載の発明は、下記工程（７）〜（１１）を包含することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の炎症性腸疾患の診断方法である。
（７）体液中の前記マーカー物質（ｏ）の濃度値を健常値と比較する工程、
（８）工程（７）において濃度値が健常値未満である場合に、さらに、体液中の前記マーカー物質（ｅ）の濃度値を健常値と比較する工程、
（９）工程（８）において濃度値が健常値以上である場合に、さらに、体液中の前記マーカー物質（ｍ）の濃度値を健常値と比較して、炎症性腸疾患の有無を判定する工程、
（１０）工程（９）において炎症性腸疾患が無と判定された場合に、さらに、体液中の前記マーカー物質（ｆ）の濃度値を健常値と比較して、炎症性腸疾患の有無を判定する工程、
（１１）工程（１０）において炎症性腸疾患が有と判定された場合に、さらに、体液中の前記マーカー物質（ｅ）の濃度値を、工程（８）で設定した健常値とは異なる基準値と比較して炎症性腸疾患の有無を判定する工程。
【００１８】
本発明の炎症性腸疾患の診断方法もマルチマーカーシステムによるものであり、複数のマーカー物質の濃度を指標として、炎症性腸疾患の診断を多段階で行なう。さらに、本発明の炎症性腸疾患の診断方法においては、同じマーカー物質について先に設定した健常値とは異なる基準値を別途設定し、複数の工程で使用する。かかる構成により、炎症性腸疾患の診断をきわめて高精度に行なうことができる。
【００１９】
請求項７に記載の発明は、質量分析により体液中における前記マーカー物質の濃度を測定することを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の炎症性腸疾患の診断方法である。
【００２０】
かかる構成により、質量／電荷比のイオンピーク強度によってマーカー物質の濃度を測定することができる。
【００２１】
請求項８に記載の発明は、被検者から体液を採取し、該体液又は体液成分を前記マーカー物質に対する親和性を有する物質を固定化した担体に接触させて、前記マーカー物質を捕捉し、前記マーカー物質の濃度を測定することを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の炎症性腸疾患の診断方法である。
【００２２】
本発明の炎症性腸疾患の診断方法においては、検査材料となる体液又は体液成分をマーカー物質に対する親和性を有する物質を固定化した担体を使用する。そして、該担体に体液又は体液成分を接触させて、体液又は体液成分に含まれるマーカー物質を、マーカー物質に対する親和性を有する物質を介して担体上に捕捉する。そして、担体上に捕捉されたマーカー物質の濃度を測定する。本発明の炎症性腸疾患の診断方法によれば、検査材料の取り扱いが容易である。さらに、本発明の炎症性腸疾患の診断方法は、担体上に捕捉されたマーカー物質を測定対象とするので、より正確にマーカー物質の濃度を測定することができる。なお、体液成分の例としては、体液が血液である場合の血清又は血漿が挙げられる。
【００２３】
請求項９に記載の発明は、前記マーカー物質に対する親和性を有する物質は、イオン交換体又は金属キレート体であることを特徴とする請求項８に記載の炎症性腸疾患の診断方法である。
【００２４】
本発明の炎症性腸疾患の診断方法においては、マーカー物質に対する親和性を有する物質としてイオン交換体又は金属キレート体を用い、イオン交換体又は金属キレート体を介して検査材料中のマーカー物質を担体上に捕捉する。イオン交換体や金属キレート体は各種のものが入手容易である。したがって、本発明の炎症性腸疾患の診断方法においては、マーカー物質を捕捉するための担体を容易に調製することができ、作業が容易である。
【００２５】
請求項１０に記載の発明は、前記担体は平面部分を有し、前記マーカー物質に対する親和性を有する物質は、該平面部分の一部に固定化されていることを特徴とする請求項８又は９に記載の炎症性腸疾患の診断方法である。
【００２６】
本発明の炎症性腸疾患の診断方法では、平面部分を有する担体を用い、マーカー物質に対する親和性を有する物質は該平面部分の一部に固定化されている。かかる構成により、マーカー物質に対する親和性を有する物質を、担体上の複数箇所にスポット的に固定化することができる。その結果、１個の担体で複数の検査材料を処理することができ、作業効率がよい。さらに、各スポットの面積を小さくすることにより、微量の検査材料からでもマーカー物質の濃度を測定することができる。なお、平面部分を有する担体の例としては、チップ等の基板が挙げられる。
【００２７】
請求項１１に記載の発明は、請求項１〜１０のいずれかに記載の炎症性腸疾患の診断方法に用いるためのキットであって、前記マーカー物質に対する親和性を有する物質を固定化した担体を含むことを特徴とする炎症性腸疾患の診断用キットである。
【００２８】
本発明の炎症性腸疾患の診断用キットは、マーカー物質に対する親和性を有する物質を固定化した担体を含む。本発明の炎症性腸疾患の診断用キットによれば、マーカー物質の濃度測定に際して当該担体を別途用意する必要がなく、きわめて簡便にマーカー物質の濃度を測定することができる。
【００２９】
請求項１２に記載の発明は、前記マーカー物質に対する親和性を有する物質は、イオン交換体又は金属キレート体であることを特徴とする請求項１１に記載の炎症性腸疾患の診断用キットである。
【００３０】
かかる構成により、マーカー物質をより確実に担体上に捕捉することができる。
【発明の効果】
【００３１】
本発明の炎症性腸疾患の診断方法によれば、潰瘍性大腸炎等の炎症性腸疾患の診断をより確実かつ精度よく行うことができる。また、複数のマーカー物質を組み合わせることによってマルチマーカーシステムによる炎症性腸疾患の診断を行うことができる。
【００３２】
本発明の炎症性腸疾患の診断用キットによれば、より簡便かつ高精度で炎症性腸疾患の診断を行なうことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】
以下、本発明を実施するための最良の形態について詳細に説明する。
【００３４】
本発明の炎症性腸疾患の診断方法は、患者体液における上記した１５種のマーカー物質（ａ）〜（ｏ）の少なくとも１個の濃度を指標とする。これらのマーカー物質は、いずれも炎症性腸疾患の患者と健常者との間で、体液中における濃度に有意差があるタンパク質である。なお、マーカー物質（ａ）、（ｂ）、（ｉ）、（ｍ）及び（ｎ）は、炎症性腸疾患患者の体液において高値を示す。一方、マーカー物質（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｊ）、（ｋ）、（ｌ）及び（ｏ）は、炎症性腸疾患患者の体液において低値を示す。さらに、マーカー物質（ｅ）は炎症性腸疾患患者の体液において低値と高値の両方を示し、健常者の体液はその間の値を示す。
【００３５】
本発明の炎症性腸疾患の診断方法の対象となる疾患としては、潰瘍性大腸炎、クローン病等が挙げられるが、特に、潰瘍性大腸炎の診断を正確に行なうことができる。
【００３６】
本発明の炎症性腸疾患の診断方法における好ましい実施形態の一つは、マーカー物質を担体上に捕捉し、その捕捉されたマーカー物質を測定対象とすることである。すなわち、マーカー物質に対する親和性を有する物質を担体に固定化し、その親和性を有する物質を介してマーカー物質を担体上に捕捉する。本実施形態によれば、試料中に含まれる夾雑物質の影響を低減させることができ、より高感度かつ高精度でマーカー物質の濃度を測定することができる。本実施形態において用いることができる担体の例としては、ビーズ、金属、ガラス、樹脂等のような一般的なものの他、基板のような、平面部分を有する担体を用いることができる。基板を用いる場合は、その平面部分の一部にマーカー物質に対する親和性を有する物質を固定化することが好ましい。例としては、基板としてチップを用い、その表面の複数箇所にスポット的にマーカー物質に親和性を有する物質を固定化した担体が挙げられる。なお「親和性」の例としては、イオン結合、金属キレート体とタンパク質中のヒスチジン残基等とのアフィニティ、若しくは疎水性相互作用のような化学的な相互作用、さらに、抗原と抗体、酵素と基質、ホルモンとレセプターのようなバイオアフィニティ、が挙げられる。
【００３７】
イオン結合によってマーカー物質を担体に捕捉する場合は、イオン交換体を担体に固定化する。この場合、イオン交換体には陽イオン交換体、陰イオン交換体のいずれも用いることができ、さらに、強陽イオン交換体、弱陽イオン交換体、強陰イオン交換体、弱陰イオン交換体のいずれも用いることができるが、弱陽イオン交換体が好ましく用いられる。弱陽イオン交換体の例としては、カルボキシメチル（ＣＭ）等の弱陽イオン交換基を有するものが挙げられる。また、強陽イオン交換体の例としては、スルホプロピル（ＳＰ）等の強陽イオン交換基を有するものが挙げられる。また、弱陰イオン交換体の例としては、ジメチルアミノエチル（ＤＥ）、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）等の弱陰イオン交換基を有するものが挙げられる。さらに、強陰イオン交換体の例としては、４級アンモニウム（トリメチルアミノメチル）（ＱＡ）、４級アミノエチル（ジエチル，モノ・２−ヒドロキシブチルアミノエチル）（ＱＡＥ）、４級アンモニウム（トリメチルアンモニウム）（ＱＭＡ）等の強陰イオン交換基を有するものが挙げられる。
【００３８】
金属キレート体を介してマーカー物質を捕捉する場合は、例えば、Ｃｕ2+、Ｚｎ2+、Ｎｉ2+、Ｃｏ2+、Ａｌ3+、Ｆｅ3+、Ｇａ3+等の金属キレート体を固定化した担体を用いることができるが、Ｃｕ2+が特に好ましい。
【００３９】
疎水性相互作用によってマーカー物質を担体に捕捉する場合は、担体に疎水基をもつ物質を固定化する。疎水基の例としては、Ｃ４〜Ｃ２０のアルキル基、フェニル基等が挙げられる。
【００４０】
本発明の炎症性腸疾患の診断方法において、体液中のマーカー物質の濃度を測定する方法は、そのマーカー物質の濃度を特異的に測定できる方法であれば特に制限はなく、例えば、質量分析を用いることができる。すなわち、質量分析によって生じる各マーカー物質由来のイオンピークを特定し、そのイオンピーク強度をもって各マーカー物質の量（濃度）を測定することができる。質量分析によってマーカー物質の濃度を測定する場合のイオン化の方法としては、マトリクス支援レーザーイオン化（ｍａｔｒｉｘ−ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｌａｓｅｒ  ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ、ＭＡＬＤＩ）、エレクトロスプレーイオン化（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ  ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ、ＥＳＩ）のいずれも適用可能であるが、多価イオンの生成が少ないＭＡＬＤＩが好ましい。特に、飛行時間質量分析計（ｔｉｍｅ−ｏｆ−ｆｌｉｇｈｔ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｒ、ＴＯＦ）と組み合わせたＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳによれば、より正確にマーカー物質由来のイオンピークを特定することができる。
【００４１】
特に好ましい実施形態では、担体として基板を用い、表面エンハンス型レーザー脱離イオン化（ｓｕｒｆａｃｅ−ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｌａｓｅｒ  ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ）−飛行時間質量分析（ｔｉｍｅ−ｏｆ−ｆｌｉｇｈｔ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）（以下、「ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ」と称する）を行うことにより、マーカー物質の濃度を測定する。本実施形態によれば、マーカー物質の濃度をより正確に測定することができる。使用できる基板の種類としては、陽イオン交換基板、陰イオン交換基板、順相基板、逆相基板、金属イオン基板、抗体基板等を用いることができるが、陽イオン交換基板、特に、弱陽イオン交換基板、並びに、金属イオン基板が好ましく用いられる。
【００４２】
質量分析以外の方法でマーカー物質の濃度を測定する方法としては、タンパク質の定量に一般的に用いられている方法が採用可能であり、各種のイムノアッセイ、液体クロマトグラフィー法、電気泳動法、ウエスタンブロット法等を使用することができる。
【００４３】
本発明の炎症性腸疾患の診断方法において使用する体液としては、血液が好ましく用いられる。すなわち、被験者から採取した血液を検体とし、その血液から調製した血清又は血漿（体液成分）を検査材料とすることが好ましい。血清又は血漿は遠心分離等の公知の方法で血液から調製することができる。
【００４４】
本発明の炎症性腸疾患の診断方法における好ましい実施形態として、上記した（ａ）〜（ｏ）のマーカー物質の複数個を組み合わせたマルチマーカーシステムによる方法が挙げられる。本発明の炎症性腸疾患の診断方法をマルチマーカーシステムに応用する例を、以下に挙げる。
【００４５】
第１の例は、図１に示すフローによって炎症性腸疾患の診断を行なうものであり、３種のマーカー物質（ｅ）、（ｈ）及び（ｏ）を用いる。すなわち、まず、被検者の体液中におけるマーカー物質（ｏ）の濃度値を健常値と比較する（工程（１））。次に、工程（１）において濃度値が健常値未満である場合に、さらに、体液中のマーカー物質（ｅ）の濃度値を健常値と比較する（工程（２））。次に、工程（２）において濃度値が健常値未満である場合に、さらに、体液中のマーカー物質（ｈ）の濃度値を健常値と比較して、炎症性腸疾患の有無を判定する（工程（３））。そして、工程（３）において、マーカー物質（ｈ）の濃度値が健常値未満である場合は、炎症性腸疾患「有」と判定する。一方、マーカー物質（ｈ）の濃度値が健常値以上である場合は、正常（炎症性腸疾患「無」）と判定する。この例では、３種のマーカー物質を用いるが、炎症性腸疾患の有無の判定は１回のみである。
【００４６】
第２の例は、図２に示すフローによって炎症性腸疾患の診断を行なうものであり、３種のマーカー物質（ａ）、（ｄ）及び（ｏ）を用いる。すなわち、まず、体液中のマーカー物質（ｏ）の濃度値を健常値と比較する（工程（４））。次に、工程（４）において濃度値が健常値以上である場合に、さらに、体液中のマーカー物質（ｄ）の濃度値を健常値と比較して、１次判定をする（工程（５））。すなわち、工程（５）でマーカー物質（ｄ）の濃度値が健常値未満である場合は、炎症性腸疾患「有」と判定する。一方、工程（５）において、マーカー物質（ｄ）の濃度値が健常値以上である場合は、さらに、体液中の前記マーカー物質（ａ）の濃度値を健常値と比較して、２次判定をする（工程（６））。すなわち、工程（６）でマーカー物質（ａ）の濃度値が健常値以上である場合は、炎症性腸疾患「有」と判定する。一方、工程（６）でマーカー物質（ａ）の濃度値が健常値未満である場合は、正常（炎症性腸疾患「無」）と判定する。この例では、３種のマーカー物質を用い、炎症性腸疾患の有無の判定を２段階で行なう。
【００４７】
第３の例は、図３に示すフローによって炎症性腸疾患の診断を行なうものであり、４種のマーカー物質（ｅ）、（ｆ）、（ｍ）及び（ｏ）を用いる。さらに、マーカー物質（ｅ）については先の工程で設定した健常値とは異なる基準値を別途設定し、２つの工程で使い分ける。すなわち、まず、体液中のマーカー物質（ｏ）の濃度値を健常値と比較する（工程（７））。次に、工程（７）において濃度値が健常値未満である場合に、さらに、体液中のマーカー物質（ｅ）の濃度値を健常値と比較する（工程（８））。次に、工程（８）において濃度値が健常値以上である場合に、さらに、体液中のマーカー物質（ｍ）の濃度値を健常値と比較して、１次判定をする（工程（９））。すなわち、工程（９）でマーカー物質（ｍ）の濃度値が健常値以上である場合は、炎症性腸疾患「有」と判定する。一方、工程（９）でマーカー物質（ｍ）の濃度値が健常値未満である場合は、さらに、体液中の前記マーカー物質（ｆ）の濃度値を健常値と比較して２次判定をする（工程（１０））。すなわち、工程（１０）でマーカー物質（ｆ）の濃度値が健常値以上である場合は、正常（炎症性腸疾患「無」）と判定する。一方、工程（１０）において、マーカー物質（ｆ）の濃度値が健常値未満である場合は、さらに、体液中の前記マーカー物質（ｅ）の濃度値を、工程（８）の健常値よりも高く設定した基準値と比較して３次判定をする（工程（１１））。すなわち、工程（１１）でマーカー物質（ｅ）の濃度値が基準値以上である場合は、炎症性腸疾患「有」と判定する。一方、工程（１１）でマーカー物質（ｅ）の濃度値が基準値未満である場合は、正常（炎症性腸疾患「無」）と判定する。なお、マーカー物質（ｅ）を使用する場合は、工程（８）で設定した健常値以下の場合、又は、工程（１１）で設定した基準値以上の場合に、炎症性腸疾患「有」と判定する。この例では、４種のマーカー物質を用い、そのうち１種のマーカー物質については、先の工程で設定した健常値とは異なる基準値を別途設定して２つの工程で使い分け、炎症性腸疾患の有無の判定を３段階で行なう。
【００４８】
本発明の炎症性腸疾患の診断方法によって実際に診断を行なう手順の一例を、順を追って説明する。この例では、検査材料として血清を用い、マーカー物質の濃度をＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳによって測定する。ます、被検者から血液を採取し、検査材料となる血清を調製する。次に、この血清をｐＨ９．０の条件でＱＡＥ等の強陰イオン交換樹脂カラムに供する。このとき、上記のマーカー物質（ａ）〜（ｏ）は全て強陰イオン交換樹脂に捕捉される。次に、該強陰イオン交換樹脂カラムを、ｐＨ７．０、ｐＨ５．０、ｐＨ４．０、ｐＨ３．０、及び有機溶媒の条件で順次溶出し、各画分を回収する。
【００４９】
まず、ｐＨ７．０の溶出画分を、銅イオン結合金属キレート基板に接触させ、次いで、ｐＨ７．０かつ０．５Ｍ  ＮａＣｌの条件で洗浄する。このとき、マーカー物質（ｈ）が基板上に捕捉される。また、ｐＨ５．０の溶出画分を、ＣＭ等の弱陽イオン交換基板に接触させ、次いで、ｐＨ４．０の条件で洗浄する。このとき、マーカー物質（ｇ）、（ｎ）及び（ｏ）が基板上に捕捉される。また、ｐＨ４．０の溶出画分を、ＣＭ等の弱陽イオン交換基板に接触させ、次いで、ｐＨ４．０の条件で洗浄する。このとき、マーカー物質（ｂ）及び（ｉ）が基板上に捕捉される。また、ｐＨ３．０の溶出画分を、銅イオン結合金属キレート基板に接触させ、次いで、ｐＨ７．０かつ０．５Ｍ  ＮａＣｌの条件で洗浄する。このとき、マーカー物質（ｍ）が基板上に捕捉される。また、有機溶媒溶出画分を、ＣＭ等の弱陽イオン交換基板に接触させ、次いで、ｐＨ４．０の条件で洗浄する。このとき、マーカー物質（ｃ）、（ｄ）、（ｆ）、（ｊ）及び（ｋ）が基板上に捕捉される。また、有機溶媒溶出画分を、銅イオン結合金属キレート基板に接触させ、次いで、ｐＨ７．０かつ０．５Ｍ  ＮａＣｌの条件で洗浄する。このとき、マーカー物質（ａ）、（ｅ）及び（ｌ）が基板上に捕捉される。次に、各基板をＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳに供し、検出される各マーカー物質のイオンピークの強度を測定する。そして、各イオンピーク強度を健常値と比較し、炎症性腸疾患の有無を判定する。
【００５０】
本発明の炎症性腸疾患の診断用キットは、マーカー物質に対する親和性を有する物質を固定化した担体を含むものである。本発明の炎症性腸疾患の診断用キットにおける好ましい実施形態では、ＣＭ等の弱陽イオン交換体を固定化した基板、及び銅イオン等の金属キレート基板を含む。本実施形態によれば、ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳによるマーカー物質の濃度測定を簡便に行なうことができる。なお、本キット中には他の試薬類、例えば、標準物質、前処理用の各種緩衝液等を含めてもよい。
【００５１】
以下に、実施例をもって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００５２】
１．プロテインチップを用いた候補タンパク質の検索
潰瘍性大腸炎患者３８名分、健常者４４名分、計８２名分の血清サンプルを収集した。各血清サンプル２０μＬに、変性バッファー（９Ｍ  尿素、２％  ＣＨＡＰＳ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ９．０））３０μＬを加えて前処理を行い、タンパク質を変性させた。次に、前処理した各血清サンプルを強陰イオン交換樹脂カラム（Ｑ  Ｃｅｒａｍｉｃ  Ｈｙｐｅｒ  Ｄ、バイオセプラ社）にアプライした。次に、ｐＨ９．０の緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ９．０）、０．１％（ｗ／ｖ）１−ｏ−Ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド（以下、「ＯＧＰ」と称する。））、ｐＨ７．０の緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ（ｐＨ７．０）、０．１％（ｗ／ｖ）ＯＧＰ）、ｐＨ５．０の緩衝液（１００ｍＭ  酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）、０．１％（ｗ／ｖ）ＯＧＰ）、ｐＨ４．０の緩衝液（１００ｍＭ  酢酸ナトリウム（ｐＨ４．０）、０．１％（ｗ／ｖ）ＯＧＰ）、ｐＨ３．０の緩衝液（５０ｍＭ  クエン酸ナトリウム（ｐＨ３．０）、０．１％（ｗ／ｖ）ＯＧＰ）、及び有機溶媒（３３．３％イソプロピルアルコール、１６．７％アセトニトリル、０．１％トリフルオロ酢酸からなる混合液）各２００μＬで順に溶出させ、画分１（ｐＨ９．０で溶出、素通り）、画分２（ｐＨ７．０で溶出）、画分３（ｐＨ５．０で溶出）、画分４（ｐＨ４．０で溶出）、画分５（ｐＨ３．０で溶出）、画分６（有機溶媒）の６つの画分を得た。
【００５３】
得られた各画分１０μＬをｐＨ４．０のプロテインチップ結合バッファー（１００ｍＭ  酢酸ナトリウム）で１０倍希釈した後、陽イオン交換チップＣＭ１０（サイファージェン社）に添加した。同様に、得られた各画分１０μＬをｐＨ７．０のプロテインチップ結合バッファー（１００ｍＭ  リン酸、０．５Ｍ  ＮａＣｌ）で１０倍希釈した後、銅修飾チップＩＭＡＣ３０（サイファージェン社）に添加した。各プロテインチップを各結合バッファーで３回洗浄した後に脱イオン水で１回洗浄し、乾燥させた。次に、エネルギー吸収分子であるシナピン酸（ＳＰＡ）を添加し、プロテインチップリーダーＭｏｄｅｌ  ＰＢＳ  ＩＩｃ（サイファージェン社）を用いて、ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行なった。なお、測定分子量範囲（Ｍ／Ｚ）は、３０００〜２０００００の範囲で行なった。また、測定は２連で行い、Ｍ／Ｚの平均値を算出した。データ解析は、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｉｐ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ＣｉｐｈｅｒｇｅｎＥｘｐｒｅｓｓ  Ｄａｔａ  Ｍａｇｎａｇｅｒ、及びＢｉｏｍａｒｋｅｒ  Ｐａｔｔｅｒｎｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（いずれもサイファージェン社）を用いて行なった。具体的には、ベースライン補正、分子量校正、スペクトルの正規化処理を行なった後、シングルマーカー解析及び数本のマーカーを組み合わせたマルチフロー解析を行なった。その結果、プロテインチップの種類、画分の種類、チップの洗浄条件等の組み合わせによって多数のピークが検出された。これらのピークのうち、潰瘍性大腸炎患者と健常者との間で有意に強度が異なる複数のピークについて、ｐ値、ＲＯＣ面積、及びイオンピーク強度を算出した。その結果から、計１５種のピークをピックアップした。
【００５４】
２．マーカー物質（ａ）の特定
銅修飾チップＩＭＡＣ３０を用い、画分６（有機溶媒）についてＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行なった場合に、質量／電荷比が４１５５（平均値）のイオンピークが検出された。本ピークは、潰瘍性大腸炎患者において高値を示した。図４（ａ）に、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフを示す。また、図４（ｂ）に、図４（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフを示す。さらに、図４（ｃ）に本ピークのＲＯＣ曲線を示す。なお、ＲＯＣ面積が１に近いほど（曲線が左上に寄るほど）その測定系の精度が高いことを示す。その結果、Ｐ値は０．０１３、ＲＯＣ面積は０．６１１であった。このように、血液中のタンパク質でＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳに供すると質量／電荷比が約４１６０のピークを生じるタンパク質（マーカー物質（ａ））の濃度が、潰瘍性大腸炎患者と健常者との間で有意に差があり、当該タンパク質の濃度を指標として潰瘍性大腸炎の診断が可能であることが示された。すなわち、被検者の血清を検査材料として、上記した条件のＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行い、質量／電荷比が約４１６０のピーク強度が健常値より高い場合、その被検者が潰瘍性大腸炎であると診断することができる。
【００５５】
３．マーカー物質（ｂ）の特定
弱陽イオン交換チップＣＭ１０を用い、画分４（ｐＨ４．０）についてＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行なった場合に、質量／電荷比が６６３６（平均値）のイオンピークが検出された。本ピークは、潰瘍性大腸炎患者において高値を示した。図５（ａ）に、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフを示す。また、図５（ｂ）に、図５（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフを示す。さらに、図５（ｃ）に本ピークのＲＯＣ曲線を示す。その結果、Ｐ値は０．０３３、ＲＯＣ面積は０．５９９であった。このように、血液中のタンパク質でＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳに供すると質量／電荷比が約６６４０のピークを生じるタンパク質（マーカー物質（ｂ））の濃度が、潰瘍性大腸炎患者と健常者との間で有意に差があり、当該タンパク質の濃度を指標として潰瘍性大腸炎の診断が可能であることが示された。すなわち、被検者の血清を検査材料として、上記した条件のＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行い、質量／電荷比が約６６４０のピーク強度が健常値より高い場合、その被検者が潰瘍性大腸炎であると診断することができる。
【００５６】
４．マーカー物質（ｃ）の特定
弱陽イオン交換チップＣＭ１０を用い、画分６（有機溶媒）についてＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行なった場合に、質量／電荷比が８８３５（平均値）のイオンピークが検出された。本ピークは、潰瘍性大腸炎患者において低値を示した。図６（ａ）に、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフを示す。また、図６（ｂ）に、図６（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフを示す。さらに、図６（ｃ）に本ピークのＲＯＣ曲線を示す。その結果、Ｐ値は０．０２０、ＲＯＣ面積は０．６６２であった。このように、血液中のタンパク質でＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳに供すると質量／電荷比が約８８４０のピークを生じるタンパク質（マーカー物質（ｃ））の濃度が、潰瘍性大腸炎患者と健常者との間で有意に差があり、当該タンパク質の濃度を指標として潰瘍性大腸炎の診断が可能であることが示された。すなわち、被検者の血清を検査材料として、上記した条件のＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行い、質量／電荷比が約８８４０のピーク強度が健常値より低い場合、その被検者が潰瘍性大腸炎であると診断することができる。
【００５７】
５．マーカー物質（ｄ）の特定
弱陽イオン交換チップＣＭ１０を用い、画分６（有機溶媒）についてＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行なった場合に、質量／電荷比が８９４０（平均値）のイオンピークが検出された。本ピークは、潰瘍性大腸炎患者において低値を示した。図７（ａ）に、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフを示す。また、図７（ｂ）に、図７（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフを示す。さらに、図７（ｃ）に本ピークのＲＯＣ曲線を示す。その結果、Ｐ値は０．０１１、ＲＯＣ面積は０．６３４であった。このように、血液中のタンパク質でＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳに供すると質量／電荷比が約８９４０のピークを生じるタンパク質（マーカー物質（ｄ））の濃度が、潰瘍性大腸炎患者と健常者との間で有意に差があり、当該タンパク質の濃度を指標として潰瘍性大腸炎の診断が可能であることが示された。すなわち、被検者の血清を検査材料として、上記した条件のＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行い、質量／電荷比が約８９４０のピーク強度が健常値より低い場合、その被検者が潰瘍性大腸炎であると診断することができる。
【００５８】
６．マーカー物質（ｅ）の特定
銅修飾チップＩＭＡＣ３０を用い、画分６（有機溶媒）についてＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行なった場合に、質量／電荷比が９４３６（平均値）のイオンピークが検出された。本ピークは、潰瘍性大腸炎患者において低値を示した。図８（ａ）に、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフを示す。また、図８（ｂ）に、図８（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフを示す。さらに、図８（ｃ）に本ピークのＲＯＣ曲線を示す。その結果、Ｐ値は０．００３、ＲＯＣ面積は０．６２７であった。このように、血液中のタンパク質でＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳに供すると質量／電荷比が約９４４０のピークを生じるタンパク質（マーカー物質（ｅ））の濃度が、潰瘍性大腸炎患者と健常者との間で有意に差があり、当該タンパク質の濃度を指標として潰瘍性大腸炎の診断が可能であることが示された。すなわち、被検者の血清を検査材料として、上記した条件のＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行い、質量／電荷比が約９４４０のピーク強度が健常値より低い場合、その被検者が潰瘍性大腸炎であると診断することができる。
【００５９】
７．マーカー物質（ｆ）の特定
弱陽イオン交換チップＣＭ１０を用い、画分６（有機溶媒）についてＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行なった場合に、質量／電荷比が１２８８４（平均値）のイオンピークが検出された。本ピークは、潰瘍性大腸炎患者において低値を示した。図９（ａ）に、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフを示す。また、図９（ｂ）に、図９（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフを示す。さらに、図９（ｃ）に本ピークのＲＯＣ曲線を示す。その結果、Ｐ値は０．０４０、ＲＯＣ面積は０．６３６であった。このように、血液中のタンパク質でＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳに供すると質量／電荷比が約１２８８０のピークを生じるタンパク質（マーカー物質（ｆ））の濃度が、潰瘍性大腸炎患者と健常者との間で有意に差があり、当該タンパク質の濃度を指標として潰瘍性大腸炎の診断が可能であることが示された。すなわち、被検者の血清を検査材料として、上記した条件のＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行い、質量／電荷比が約１２８８０のピーク強度が健常値より低い場合、その被検者が潰瘍性大腸炎であると診断することができる。
【００６０】
８．マーカー物質（ｇ）の特定
弱陽イオン交換チップＣＭ１０を用い、画分３（ｐＨ５．０）についてＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行なった場合に、質量／電荷比が１３２７０１（平均値）のイオンピークが検出された。本ピークは、潰瘍性大腸炎患者において低値を示した。図１０（ａ）に、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフを示す。また、図１０（ｂ）に、図１０（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフを示す。さらに、図１０（ｃ）に本ピークのＲＯＣ曲線を示す。その結果、Ｐ値は０．００８、ＲＯＣ面積は０．６４４であった。このように、血液中のタンパク質でＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳに供すると質量／電荷比が約１３２７００のピークを生じるタンパク質（マーカー物質（ｇ））の濃度が、潰瘍性大腸炎患者と健常者との間で有意に差があり、当該タンパク質の濃度を指標として潰瘍性大腸炎の診断が可能であることが示された。すなわち、被検者の血清を検査材料として、上記した条件のＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行い、質量／電荷比が約１３２７００のピーク強度が健常値より低い場合、その被検者が潰瘍性大腸炎であると診断することができる。
【００６１】
９．マーカー物質（ｈ）の特定
銅修飾チップＩＭＡＣ３０を用い、画分２（ｐＨ７．０）についてＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行なった場合に、質量／電荷比が１４７９３６（平均値）のイオンピークが検出された。本ピークは、潰瘍性大腸炎患者において低値を示した。図１１（ａ）に、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフを示す。また、図１１（ｂ）に、図１１（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフを示す。さらに、図１１（ｃ）に本ピークのＲＯＣ曲線を示す。その結果、Ｐ値は０．００５、ＲＯＣ面積は０．６１４であった。このように、血液中のタンパク質でＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳに供すると質量／電荷比が約１４７９４０のピークを生じるタンパク質（マーカー物質（ｈ））の濃度が、潰瘍性大腸炎患者と健常者との間で有意に差があり、当該タンパク質の濃度を指標として潰瘍性大腸炎の診断が可能であることが示された。すなわち、被検者の血清を検査材料として、上記した条件のＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行い、質量／電荷比が約１４７９４０のピーク強度が健常値より低い場合、その被検者が潰瘍性大腸炎であると診断することができる。
【００６２】
１０．マーカー物質（ｉ）の特定
弱陽イオン交換チップＣＭ１０を用い、画分４（ｐＨ４．０）についてＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行なった場合に、質量／電荷比が６４３６（平均値）のイオンピークが検出された。本ピークは、潰瘍性大腸炎患者において高値を示した。図１２（ａ）に、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフを示す。また、図１２（ｂ）に、図１２（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフを示す。さらに、図１２（ｃ）に本ピークのＲＯＣ曲線を示す。その結果、Ｐ値は０．０１３、ＲＯＣ面積は０．６３８であった。このように、血液中のタンパク質でＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳに供すると質量／電荷比が約６４４０のピークを生じるタンパク質（マーカー物質（ｉ））の濃度が、潰瘍性大腸炎患者と健常者との間で有意に差があり、当該タンパク質の濃度を指標として潰瘍性大腸炎の診断が可能であることが示された。すなわち、被検者の血清を検査材料として、上記した条件のＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行い、質量／電荷比が約６４４０のピーク強度が健常値より高い場合、その被検者が潰瘍性大腸炎であると診断することができる。
【００６３】
１１．マーカー物質（ｊ）の特定
弱陽イオン交換チップＣＭ１０を用い、画分６（有機溶媒）についてＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行なった場合に、質量／電荷比が８２１９（平均値）のイオンピークが検出された。本ピークは、潰瘍性大腸炎患者において低値を示した。図１３（ａ）に、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフを示す。また、図１３（ｂ）に、図１３（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフを示す。さらに、図１３（ｃ）に本ピークのＲＯＣ曲線を示す。その結果、Ｐ値は０．０３２、ＲＯＣ面積は０．６１７であった。このように、血液中のタンパク質でＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳに供すると質量／電荷比が約８２２０のピークを生じるタンパク質（マーカー物質（ｊ））の濃度が、潰瘍性大腸炎患者と健常者との間で有意に差があり、当該タンパク質の濃度を指標として潰瘍性大腸炎の診断が可能であることが示された。すなわち、被検者の血清を検査材料として、上記した条件のＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行い、質量／電荷比が約８２２０のピーク強度が健常値より低い場合、その被検者が潰瘍性大腸炎であると診断することができる。
【００６４】
１２．マーカー物質（ｋ）の特定
弱陽イオン交換チップＣＭ１０を用い、画分６（有機溶媒）についてＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行なった場合に、質量／電荷比が８７０９（平均値）のイオンピークが検出された。本ピークは、潰瘍性大腸炎患者において低値を示した。図１４（ａ）に、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフを示す。また、図１４（ｂ）に、図１４（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフを示す。さらに、図１４（ｃ）に本ピークのＲＯＣ曲線を示す。その結果、Ｐ値は０．０３８、ＲＯＣ面積は０．６０５であった。このように、血液中のタンパク質でＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳに供すると質量／電荷比が約８７１０のピークを生じるタンパク質（マーカー物質（ｋ））の濃度が、潰瘍性大腸炎患者と健常者との間で有意に差があり、当該タンパク質の濃度を指標として潰瘍性大腸炎の診断が可能であることが示された。すなわち、被検者の血清を検査材料として、上記した条件のＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行い、質量／電荷比が約８７１０のピーク強度が健常値より低い場合、その被検者が潰瘍性大腸炎であると診断することができる。
【００６５】
１３．マーカー物質（ｌ）の特定
銅修飾チップＩＭＡＣ３０を用い、画分６（有機溶媒）についてＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行なった場合に、質量／電荷比が９７２７（平均値）のイオンピークが検出された。本ピークは、潰瘍性大腸炎患者において低値を示した。図１５（ａ）に、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフを示す。また、図１５（ｂ）に、図１５（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフを示す。さらに、図１５（ｃ）に本ピークのＲＯＣ曲線を示す。その結果、Ｐ値は０．０３２、ＲＯＣ面積は０．５９９であった。このように、血液中のタンパク質でＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳに供すると質量／電荷比が約９７３０のピークを生じるタンパク質（マーカー物質（ｌ））の濃度が、潰瘍性大腸炎患者と健常者との間で有意に差があり、当該タンパク質の濃度を指標として潰瘍性大腸炎の診断が可能であることが示された。すなわち、被検者の血清を検査材料として、上記した条件のＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行い、質量／電荷比が約９７３０のピーク強度が健常値より低い場合、その被検者が潰瘍性大腸炎であると診断することができる。
【００６６】
１４．マーカー物質（ｍ）の特定
銅修飾チップＩＭＡＣ３０を用い、画分５（ｐＨ３．０）についてＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行なった場合に、質量／電荷比が１２６３８（平均値）のイオンピークが検出された。本ピークは、潰瘍性大腸炎患者において高値を示した。図１６（ａ）に、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフを示す。また、図１６（ｂ）に、図１６（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフを示す。さらに、図１６（ｃ）に本ピークのＲＯＣ曲線を示す。その結果、Ｐ値は０．０２１、ＲＯＣ面積は０．５９１であった。このように、血液中のタンパク質でＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳに供すると質量／電荷比が約１２６４０のピークを生じるタンパク質（マーカー物質（ｍ））の濃度が、潰瘍性大腸炎患者と健常者との間で有意に差があり、当該タンパク質の濃度を指標として潰瘍性大腸炎の診断が可能であることが示された。すなわち、被検者の血清を検査材料として、上記した条件のＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行い、質量／電荷比が約１２６４０のピーク強度が健常値より高い場合、その被検者が潰瘍性大腸炎であると診断することができる。
【００６７】
１５．マーカー物質（ｎ）の特定
弱陽イオン交換チップＣＭ１０を用い、画分３（ｐＨ５．０）についてＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行なった場合に、質量／電荷比が３９７７３（平均値）のイオンピークが検出された。本ピークは、潰瘍性大腸炎患者において高値を示した。図１７（ａ）に、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフを示す。また、図１７（ｂ）に、図１７（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフを示す。さらに、図１７（ｃ）に本ピークのＲＯＣ曲線を示す。その結果、Ｐ値は０．００８、ＲＯＣ面積は０．６４０であった。このように、血液中のタンパク質でＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳに供すると質量／電荷比が約３９７７０のピークを生じるタンパク質（マーカー物質（ｎ））の濃度が、潰瘍性大腸炎患者と健常者との間で有意に差があり、当該タンパク質の濃度を指標として潰瘍性大腸炎の診断が可能であることが示された。すなわち、被検者の血清を検査材料として、上記した条件のＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行い、質量／電荷比が約３９７７０のピーク強度が健常値より高い場合、その被検者が潰瘍性大腸炎であると診断することができる。
【００６８】
１６．マーカー物質（ｏ）の特定
弱陽イオン交換チップＣＭ１０を用い、画分３（ｐＨ５．０）についてＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行なった場合に、質量／電荷比が９９８５３（平均値）のイオンピークが検出された。本ピークは、潰瘍性大腸炎患者において低値を示した。図１８（ａ）に、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフを示す。また、図１８（ｂ）に、図１８（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフを示す。さらに、図１８（ｃ）に本ピークのＲＯＣ曲線を示す。その結果、Ｐ値は０．００４、ＲＯＣ面積は０．６４６であった。このように、血液中のタンパク質でＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳに供すると質量／電荷比が約９９８５０のピークを生じるタンパク質（マーカー物質（ｏ））の濃度が、潰瘍性大腸炎患者と健常者との間で有意に差があり、当該タンパク質の濃度を指標として潰瘍性大腸炎の診断が可能であることが示された。すなわち、被検者の血清を検査材料として、上記した条件のＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳを行い、質量／電荷比が約９９８５０のピーク強度が健常値より低い場合、その被検者が潰瘍性大腸炎であると診断することができる。
【実施例２】
【００６９】
図１９で表されるフローに従い、８１名分（潰瘍性大腸炎患者３８名、健常者４３名）の血清サンプルを振り分けた。図１９の各ｎｏｄｅにおいて、各マーカー物質の濃度がカットオフ値（健常値）未満であった場合は左（ＹＥＳ）に、カットオフ値以上であった場合に右（ＮＯ）に進めた。また、同じマーカー物質（ｅ）を使用するｎｏｄｅ  ２とｎｏｄｅ  ６においては、ｎｏｄｅ  ６におけるカットオフ値は、ｎｏｄｅ  ２におけるカットオフ値よりも高い値に設定した。その結果、ｎｏｄｅ  １→ｎｏｄｅ  ２→ｎｏｄｅ  ３の手順（図１のフローに相当）で振り分けた場合、Ｔｅｒｍｉｎａｌ  Ｎｏｄｅ  １で、２３名のうち２１名（９１％）が潰瘍性大腸炎患者、Ｔｅｒｍｉｎａｌ  Ｎｏｄｅ  ２で６名のうち４名（６７％）が健常者であった。また、ｎｏｄｅ  １→ｎｏｄｅ  ７→ｎｏｄｅ  ８（図２のフローに相当）の手順で振り分けた場合、Ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｎｏｄｅ  ７で２名全員（１００％）が潰瘍性大腸炎患者、Ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｎｏｄｅ  ８で１７名全員（１００％）が健常者、Ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｎｏｄｅ  ９で１名（１００％）が健潰瘍性大腸炎患者であった。また、ｎｏｄｅ  １→ｎｏｄｅ  ２→ｎｏｄｅ  ４→ｎｏｄｅ  ５→ｎｏｄｅ  ６の手順（図３のフローに相当）で振り分けた場合、Ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｎｏｄｅ  ３で６名のうち５名（８０％）が健常者、Ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｎｏｄｅ  ４で４名全員（１００％）が潰瘍性大腸炎患者、Ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｎｏｄｅ  ５で１４名全員（１００％）が健常者、Ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｎｏｄｅ  ６で８名のうち７名（８９％）が潰瘍性大腸炎患者であった。これらのフローによった場合のＲＯＣ面積は０．９６５であり、精度が極めて高かった。以上より、複数のマーカー物質を組み合わせることにより、きわめて正確に潰瘍性大腸炎の有無を判定することができた。
【実施例３】
【００７０】
１枚の弱陽イオン交換チップＣＭ１０、１枚の銅修飾チップＩＭＡＣ３０、５００ｍＬの変性バッファー（ｐＨ９．０）、５００ｍＬの溶出バッファー（ｐＨ７．０）、５００ｍＬの溶出バッファー（ｐＨ４．０）、１ｇのＳＰＡを１セットとして、潰瘍性大腸炎の診断用キットを構築した。本キットは、ＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳによって被検者の体液中のマーカー物質の濃度を測定し、潰瘍性大腸炎の診断を行うためのものである。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１】マルチマーカーシステムにより炎症性腸疾患の診断を行なう第１の例を表すフローチャートである。
【図２】マルチマーカーシステムにより炎症性腸疾患の診断を行なう第２の例を表すフローチャートである。
【図３】マルチマーカーシステムにより炎症性腸疾患の診断を行なう第３の例を表すフローチャートである。
【図４】質量／電荷比が約４１６０のイオンピークについての測定結果を表し、図４（ａ）は、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフであり、図４（ｂ）は、図４（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフであり、図４（ｃ）は、ＲＯＣ曲線を示す。
【図５】質量／電荷比が約６６４０のイオンピークについての測定結果を表し、図５（ａ）は、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフであり、図５（ｂ）は、図５（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフであり、図５（ｃ）は、ＲＯＣ曲線を示す。
【図６】質量／電荷比が約８８４０のイオンピークについての測定結果を表し、図６（ａ）は、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフであり、図６（ｂ）は、図６（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフであり、図６（ｃ）は、ＲＯＣ曲線を示す。
【図７】質量／電荷比が約８９４０のイオンピークについての測定結果を表し、図７（ａ）は、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフであり、図７（ｂ）は、図７（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフであり、図７（ｃ）は、ＲＯＣ曲線を示す。
【図８】質量／電荷比が約９９４０のイオンピークについての測定結果を表し、図８（ａ）は、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフであり、図８（ｂ）は、図８（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフであり、図８（ｃ）は、ＲＯＣ曲線を示す。
【図９】質量／電荷比が約１２８８０のイオンピークについての測定結果を表し、図９（ａ）は、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフであり。図９（ｂ）は、図９（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフであり、図９（ｃ）は、ＲＯＣ曲線を示す。
【図１０】質量／電荷比が約１３２７００のイオンピークについての測定結果を表し、図１０（ａ）は、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフであり。図１０（ｂ）は、図１０（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフであり、図１０（ｃ）は、ＲＯＣ曲線を示す。
【図１１】質量／電荷比が約１４７９４０のイオンピークについての測定結果を表し、図１１（ａ）は、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフであり。図１１（ｂ）は、図１１（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフであり、図１１（ｃ）は、ＲＯＣ曲線を示す。
【図１２】質量／電荷比が約６６４０のイオンピークについての測定結果を表し、図１２（ａ）は、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフであり。図１２（ｂ）は、図１２（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフであり、図１２（ｃ）は、ＲＯＣ曲線を示す。
【図１３】質量／電荷比が約８２２０のイオンピークについての測定結果を表し、図１３（ａ）は、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフであり。図１３（ｂ）は、図１３（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフであり、図１３（ｃ）は、ＲＯＣ曲線を示す。
【図１４】質量／電荷比が約８７１０のイオンピークについての測定結果を表し、図１４（ａ）は、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフであり。図１４（ｂ）は、図１４（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフであり、図１４（ｃ）は、ＲＯＣ曲線を示す。
【図１５】質量／電荷比が約９７３０のイオンピークについての測定結果を表し、図１５（ａ）は、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフであり。図１５（ｂ）は、図１５（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフであり、図１５（ｃ）は、ＲＯＣ曲線を示す。
【図１６】質量／電荷比が約１２６４０のイオンピークについての測定結果を表し、図１６（ａ）は、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフであり。図１６（ｂ）は、図１６（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフであり、図１６（ｃ）は、ＲＯＣ曲線を示す。
【図１７】質量／電荷比が約３９７７０のイオンピークについての測定結果を表し、図１７（ａ）は、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフであり。図１７（ｂ）は、図１７（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフであり、図１７（ｃ）は、ＲＯＣ曲線を示す。
【図１８】質量／電荷比が約９９８５０のイオンピークについての測定結果を表し、図１８（ａ）は、健常者と潰瘍性大腸炎患者とに分けて本ピークのピーク強度をプロットしたグラフであり。図１８（ｂ）は、図１８（ａ）の結果を、最大値、７５％値、中央値、２５％値、及び最小値で示したグラフであり、図１８（ｃ）は、ＲＯＣ曲線を示す。
【図１９】実施例２において、８１名分の血清を振り分けた手順を表すフローチャートである。
【図１】
2006258629.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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