(57)【要約】      （修正有）【課題】新規なポリペプチド、及びこれらのポリペプチドをコードする核酸分子を提供する。【解決手段】新規なポリペプチドをコードする核酸分子をスクリーニングし、これらの核酸配列を含むベクター及び宿主細胞、異種ポリペプチド配列と融合したポリペプチドを含むキメラポリペプチド分子、ポリペプチドに結合する抗体及びポリペプチドを生成するための方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
図 2 (配列番号:2), 図 4 (配列番号:4), 図 6 (配列番号:6), 図 8 (配列番号:8), 図 10 (配列番号:10), 図 12 (配列番号:12), 図 14 (配列番号:14), 図 16 (配列番号:16), 図 18 (配列番号:18), 図 20 (配列番号:20), 図 22 (配列番号:22), 図 24 (配列番号:24), 図 26 (配列番号:26), 図 28 (配列番号:28), 図 30 (配列番号:30), 図 32 (配列番号:32), 図 34 (配列番号:34), 図 36 (配列番号:36), 図 38 (配列番号:38), 図 40 (配列番号:40), 図 42 (配列番号:42), 図 44 (配列番号:44), 図 46 (配列番号:46), 図 48 (配列番号:48), 図 50 (配列番号:50), 図 52 (配列番号:52), 図 54 (配列番号:54), 図 56 (配列番号:56), 図 58 (配列番号:58), 図 60 (配列番号:60), 図 62 (配列番号:62), 図 64 (配列番号:64), 図 66 (配列番号:66), 図 68 (配列番号:68), 図 70 (配列番号:70), 図 72 (配列番号:72), 図 74 (配列番号:74), 図 76 (配列番号:76), 図 78 (配列番号:78), 図 80 (配列番号:80),  図 82 (配列番号:82), 図 84 (配列番号:84), 図 86 (配列番号:86), 図 88 (配列番号:88), 図 90 (配列番号:90), 図 92 (配列番号:92), 図 94 (配列番号:94), 図 96 (配列番号:96), 図 98 (配列番号:98), 図 100 (配列番号:100), 図 102 (配列番号:102), 図 104 (配列番号:104), 図 106 (配列番号:106), 図 108 (配列番号:108), 図 110 (配列番号:110), 図 112 (配列番号:112), 図 114 (配列番号:114), 図 116 (配列番号:116), 図 118 (配列番号:118), 図 120 (配列番号:120), 図 122 (配列番号:122), 図 124 (配列番号:124), 図 126 (配列番号:126), 図 128 (配列番号:128), 図 130 (配列番号:130), 図 132 (配列番号:132), 図 134 (配列番号:134), 図 136 (配列番号:136), 図 138 (配列番号:138), 図 140 (配列番号:140), 図 142 (配列番号:142), 図 144 (配列番号:144), 図 146 (配列番号:146), 図 148 (配列番号:148), 図 150 (配列番号:150), 図 152 (配列番号:152), 図 154 (配列番号:154), 図 156 (配列番号:156), 図 158 (配列番号:158), 図 160 (配列番号:160), 図 162 (配列番号:162), 図 164 (配列番号:164), 図 166 (配列番号:166), 図 168 (配列番号:168), 図 170 (配列番号:170), 図 172 (配列番号:172), 図 174 (配列番号:174), 図 176 (配列番号:176), 図 178 (配列番号:178), 図 180 (配列番号:180),  図 182 (配列番号:182), 図 184 (配列番号:184), 図 186 (配列番号:186), 図 188 (配列番号:188), 図 190 (配列番号:190), 図 192 (配列番号:192), 図 194 (配列番号:194), 図 196 (配列番号:196), 図 198 (配列番号:198), 図 200 (配列番号:200), 図 202 (配列番号:202), 図 204 (配列番号:204), 図 206 (配列番号:206), 図 208 (配列番号:208), 図 210 (配列番号:210), 図 212 (配列番号:212), 図 214 (配列番号:214), 図 216 (配列番号:216), 図 218 (配列番号:218), 図 220 (配列番号:220), 図 222 (配列番号:222), 図 224 (配列番号:224), 図 226 (配列番号:226), 図 228 (配列番号:228), 図 230 (配列番号:230), 図 232 (配列番号:232), 図 234 (配列番号:234), 図 236 (配列番号:236), 図 238 (配列番号:238), 図 240 (配列番号:240), 図 242 (配列番号:242), 図 244 (配列番号:244), 図 246 (配列番号:246), 図 248 (配列番号:248), 図 250 (配列番号:250), 図 252 (配列番号:252), 図 254 (配列番号:254), 図 256 (配列番号:256), 図 258 (配列番号:258), 図 260 (配列番号:260), 図 262 (配列番号:262), 図 264 (配列番号:264), 図 266 (配列番号:266), 図 268 (配列番号:268), 図 272 (配列番号:272), 図 274 (配列番号:274), 図 276 (配列番号:276), 図 278 (配列番号:278), 図 280 (配列番号:280),  図 282 (配列番号:282), 図 284 (配列番号:284), 図 286 (配列番号:286), 図 288 (配列番号:288), 図 290 (配列番号:290), 図 292 (配列番号:292), 図 294 (配列番号:294), 図 296 (配列番号:296), 図 298 (配列番号:298), 図 300 (配列番号:300), 図 302 (配列番号:302), 図 304 (配列番号:304), 図 306 (配列番号:306), 図 308 (配列番号:308), 図 310 (配列番号:310), 図 312 (配列番号:312), 図 314 (配列番号:314), 図 316 (配列番号:316), 図 318 (配列番号:318), 図 320 (配列番号:320), 図 322 (配列番号:322), 図 324 (配列番号:324), 図 326 (配列番号:326), 図 328 (配列番号:328), 図 330 (配列番号:330), 図 332 (配列番号:332), 図 334 (配列番号:334), 図 336 (配列番号:336), 図 338 (配列番号:338), 図 340 (配列番号:340), 図 342 (配列番号:342), 図 344 (配列番号:344), 図 346 (配列番号:346), 図 348 (配列番号:348), 図 350 (配列番号:350), 図 352 (配列番号:352), 図 354 (配列番号:354), 図 356 (配列番号:356), 図 358 (配列番号:358), 図 360 (配列番号:360), 図 362 (配列番号:362), 図 364 (配列番号:364), 図 366 (配列番号:366), 図 368 (配列番号:368), 図 370 (配列番号:370), 図 372 (配列番号:372), 図 374 (配列番号:374), 図 376 (配列番号:376), 図 378 (配列番号:378), 図 380 (配列番号:380),  図 382 (配列番号:382), 図 384 (配列番号:384), 図 386 (配列番号:386), 図 388 (配列番号:388), 図 390 (配列番号:390), 図 392 (配列番号:392), 図 394 (配列番号:394), 図 396 (配列番号:396), 図 398 (配列番号:398), 図 400 (配列番号:400), 図 402 (配列番号:402), 図 404 (配列番号:404), 図 406 (配列番号:406), 図 408 (配列番号:408), 図 410 (配列番号:410), 図 412 (配列番号:412), 図 414 (配列番号:414), 図 416 (配列番号:416), 図 418 (配列番号:418), 図 420 (配列番号:420), 図 422 (配列番号:422), 図 424 (配列番号:424), 図 426 (配列番号:426), 図 428 (配列番号:428), 図 430 (配列番号:430), 図 432 (配列番号:432), 図 434 (配列番号:434), 図 436 (配列番号:436), 図 438 (配列番号:438), 図 440 (配列番号:440), 図 442 (配列番号:442), 図 444 (配列番号:444), 図 446 (配列番号:446), 図 448 (配列番号:448), 図 450 (配列番号:450), 図 452 (配列番号:452), 図 454 (配列番号:454), 図 456 (配列番号:456), 図 458 (配列番号:458), 図 460 (配列番号:460), 図 462 (配列番号:462), 図 464 (配列番号:464), 図 466 (配列番号:466), 図 468 (配列番号:468), 図 470 (配列番号:470), 図 472 (配列番号:472), 図 474 (配列番号:474), 図 476 (配列番号:476), 図 478 (配列番号:478), 図 480 (配列番号:480),  図 482 (配列番号:482), 図 484 (配列番号:484), 図 486 (配列番号:486), 図 488 (配列番号:488), 図 490 (配列番号:490), 図 492 (配列番号:492), 図 494 (配列番号:494), 図 496 (配列番号:496), 図 498 (配列番号:498), 図 500 (配列番号:500), 図 502 (配列番号:502), 図 504 (配列番号:504), 図 506 (配列番号:506), 図 508 (配列番号:508), 図 510 (配列番号:510), 図 512 (配列番号:512), 図 514 (配列番号:514), 図 516 (配列番号:516), 図 518 (配列番号:518), 図 520 (配列番号:520), 図 522 (配列番号:522), 図 524 (配列番号:524), 図 526 (配列番号:526), 図 528 (配列番号:528), 図 530 (配列番号:530), 図 532 (配列番号:532), 図 534 (配列番号:534), 図 536 (配列番号:536), 図 538 (配列番号:538), 図 540 (配列番号:540), 図 542 (配列番号:542), 図 544 (配列番号:544), 図 546 (配列番号:546), 図 548 (配列番号:548), 図 550 (配列番号:550), 図 552 (配列番号:552), 図 554 (配列番号:554), 図 556 (配列番号:556), 図 558 (配列番号:558), 図 560 (配列番号:560), 図 562 (配列番号:562), 図 564 (配列番号:564), 図 566 (配列番号:566), 図 568 (配列番号:568), 図 570 (配列番号:570), 図 572 (配列番号:572), 図 574 (配列番号:574), 図 576 (配列番号:576), 図 578 (配列番号:578), 図 580 (配列番号:580), 図 582 (配列番号:582), 図 584 (配列番号:584), 図 586 (配列番号:586), 図 588 (配列番号:588), 図 590 (配列番号:590), 図 592 (配列番号:592), 図 594 (配列番号:594), 図 596 (配列番号:596), 図 598 (配列番号:598), 図 600 (配列番号:600), 図 602 (配列番号:602), 図 604 (配列番号:604), 図 606 (配列番号:606), 図 608 (配列番号:608), 及び 図 610 (配列番号:610)に示されるアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の核酸配列同一性を有する単離された核酸。
【請求項２】
図 1 (配列番号:1), 図 3 (配列番号:3), 図 5 (配列番号:5), 図 7 (配列番号:7), 図 9 (配列番号:9), 図 11 (配列番号:11), 図 13 (配列番号:13), 図 15 (配列番号:15), 図 17 (配列番号:17), 図 19 (配列番号:19), 図 21 (配列番号:21), 図 23 (配列番号:23), 図 25 (配列番号:25), 図 27 (配列番号:27), 図 29 (配列番号:29), 図 31 (配列番号:31), 図 33 (配列番号:33), 図 35 (配列番号:35), 図 37 (配列番号:37), 図 39 (配列番号:39), 図 41 (配列番号:41), 図 43 (配列番号:43), 図 45 (配列番号:45), 図 47 (配列番号:47), 図 49 (配列番号:49), 図 51 (配列番号:51), 図 53 (配列番号:53), 図 55 (配列番号:55), 図 57 (配列番号:57), 図 59 (配列番号:59), 図 61 (配列番号:61), 図 63 (配列番号:63), 図 65 (配列番号:65), 図 67 (配列番号:67), 図 69 (配列番号:69), 図 71 (配列番号:71), 図 73 (配列番号:73), 図s 75A-75B (配列番号:75), 図 77 (配列番号:77), 図 79 (配列番号:79),  図 81 (配列番号:81), 図 83 (配列番号:83), 図 85 (配列番号:85), 図 87 (配列番号:87), 図 89 (配列番号:89), 図 91 (配列番号:91), 図 93 (配列番号:93), 図 95 (配列番号:95), 図 97 (配列番号:97), 図 99 (配列番号:99), 図 101 (配列番号:101), 図 103 (配列番号:103), 図 105 (配列番号:105), 図 107 (配列番号:107), 図 109 (配列番号:109), 図 111 (配列番号:111), 図 113 (配列番号:113), 図 115 (配列番号:115), 図 117 (配列番号:117), 図 119 (配列番号:119), 図 121 (配列番号:121), 図 123 (配列番号:123), 図 125 (配列番号:125), 図 127 (配列番号:127), 図 129 (配列番号:129), 図 131 (配列番号:131), 図 133 (配列番号:133), 図 135 (配列番号:135), 図 137 (配列番号:137), 図 139 (配列番号:139), 図 141 (配列番号:141), 図 143 (配列番号:143), 図 145 (配列番号:145), 図 147 (配列番号:147), 図 149 (配列番号:149), 図 151 (配列番号:151), 図 153 (配列番号:153), 図 155 (配列番号:155), 図 157 (配列番号:157), 図 159 (配列番号:159), 図 161 (配列番号:161), 図 163 (配列番号:163), 図 165 (配列番号:165), 図 167 (配列番号:167), 図 169 (配列番号:169), 図 171 (配列番号:171), 図 173 (配列番号:173), 図 175 (配列番号:175), 図 177 (配列番号:177), 図 179 (配列番号:179),  図 181 (配列番号:181), 図 183 (配列番号:183), 図 185 (配列番号:185), 図 187 (配列番号:187), 図 189 (配列番号:189), 図 191 (配列番号:191), 図 193 (配列番号:193), 図 195 (配列番号:195), 図 197 (配列番号:197), 図 199 (配列番号:199), 図 201 (配列番号:201), 図 203 (配列番号:203), 図 205 (配列番号:205), 図 207 (配列番号:207), 図 209 (配列番号:209), 図 211 (配列番号:211), 図 213 (配列番号:213), 図 215 (配列番号:215), 図 217 (配列番号:217), 図 219 (配列番号:219), 図 221 (配列番号:221), 図 223 (配列番号:223), 図 225 (配列番号:225), 図 227 (配列番号:227), 図 229 (配列番号:229), 図 231 (配列番号:231), 図 233 (配列番号:233), 図 235 (配列番号:235), 図 237 (配列番号:237), 図 239 (配列番号:239), 図 241 (配列番号:241), 図 243 (配列番号:243), 図 245 (配列番号:245), 図 247 (配列番号:247), 図 249 (配列番号:249), 図 251 (配列番号:251), 図 253 (配列番号:253), 図 255 (配列番号:255), 図 257 (配列番号:257), 図 259 (配列番号:259), 図 261 (配列番号:261), 図 263 (配列番号:263), 図 265 (配列番号:265), 図 267 (配列番号:267), 図 271 (配列番号:271), 図 273 (配列番号:273), 図 275 (配列番号:275), 図 277 (配列番号:277), 図 279 (配列番号:279),  図 281 (配列番号:281), 図 283 (配列番号:283), 図 285 (配列番号:285), 図 287 (配列番号:287), 図s 289A-289B (配列番号:289), 図 291 (配列番号:291), 図 293 (配列番号:293), 図 295 (配列番号:295), 図 297 (配列番号:297), 図 299 (配列番号:299), 図 301 (配列��号:301), 図 303 (配列番号:303), 図 305 (配列番号:305), 図 307 (配列番号:307), 図 309 (配列番号:309), 図s 311A-311B (配列番号:311), 図 313 (配列番号:313), 図 315 (配列番号:315), 図 317 (配列番号:317), 図 319 (配列番号:319), 図 321 (配列番号:321), 図 323 (配列番号:323), 図 325 (配列番号:325), 図 327 (配列番号:327), 図 329 (配列番号:329), 図 331 (配列番号:331), 図 333 (配列番号:333), 図 335 (配列番号:335), 図 337 (配列番号:337), 図 339 (配列番号:339), 図 341 (配列番号:341), 図 343 (配列番号:343), 図 345 (配列番号:345), 図 347 (配列番号:347), 図 349 (配列番号:349), 図s 351A-351B (配列番号:351), 図 353 (配列番号:353), 図 355 (配列番号:355), 図 357 (配列番号:357), 図 359 (配列番号:359), 図 361 (配列番号:361), 図 363 (配列番号:363), 図 365 (配列番号:365), 図 367 (配列番号:367), 図 369 (配列番号:369), 図 371 (配列番号:371), 図 373 (配列番号:373), 図 375 (配列番号:375), 図 377 (配列番号:377), 図 379 (配列番号:379),  図 381 (配列番号:381), 図 383 (配列番号:383), 図 385 (配列番号:385), 図 387 (配列番号:387), 図 389 (配列番号:389), 図 391 (配列番号:391), 図 393 (配列番号:393), 図 395 (配列番号:395), 図 397 (配列番号:397), 図 399 (配列番号:399), 図 401 (配列番号:401), 図 403 (配列番号:403), 図 405 (配列番号:405), 図 407 (配列番号:407), 図 409 (配列番号:409), 図 411 (配列番号:411), 図 413 (配列番号:413), 図 415 (配列番号:415), 図 417 (配列番号:417), 図 419 (配列番号:419), 図 421 (配列番号:421), 図 423 (配列番号:423), 図 425 (配列番号:425), 図 427 (配列番号:427), 図 429 (配列番号:429), 図 431 (配列番号:431), 図 433 (配列番号:433), 図 435 (配列番号:435), 図 437 (配列番号:437), 図 439 (配列番号:439), 図 441 (配列番号:441), 図 443 (配列番号:443), 図 445 (配列番号:445), 図 447 (配列番号:447), 図 449 (配列番号:449), 図 451 (配列番号:451), 図 453 (配列番号:453), 図 455 (配列番号:455), 図 457 (配列番号:457), 図 459 (配列番号:459), 図 461 (配列番号:461), 図 463 (配列番号:463), 図 465 (配列番号:465), 図 467 (配列番号:467), 図 469 (配列番号:469), 図 471 (配列番号:471), 図 473 (配列番号:473), 図 475 (配列番号:475), 図 477 (配列番号:477), 図 479 (配列番号:479),  図 481 (配列番号:481), 図 483 (配列番号:483), 図 485 (配列番号:485), 図 487 (配列番号:487), 図 489 (配列番号:489), 図 491 (配列番号:491), 図 493 (配列番号:493), 図 495 (配列番号:495), 図 497 (配列番号:497), 図 499 (配列番号:499), 図 501 (配列番号:501), 図 503 (配列番号:503), 図 505 (配列番号:505), 図 507 (配列番号:507), 図 509 (配列番号:509), 図 511 (配列番号:511), 図 513 (配列番号:513), 図 515 (配列番号:515), 図 517 (配列番号:517), 図 519 (配列番号:519), 図 521 (配列番号:521), 図 523 (配列番号:523), 図s 525A-525B (配列番号:525), 図 527 (配列番号:527), 図 529 (配列番号:529), 図 531 (配列番号:531), 図 533 (配列番号:533), 図 535 (配列番号:535), 図 537 (配列番号:537), 図 539 (配列番号:539), 図 541 (配列番号:541), 図 543 (配列番号:543), 図 545 (配列番号:545), 図 547 (配列番号:547), 図 549 (配列番号:549), 図 551 (配列番号:551), 図 553 (配列番号:553), 図 555 (配列番号:555), 図 557 (配列番号:557), 図 559 (配列番号:559), 図 561 (配列番号:561), 図 563 (配列番号:563), 図 565 (配列番号:565), 図 567 (配列番号:567), 図 569 (配列番号:569), 図 571 (配列番号:571), 図 573 (配列番号:573), 図 575 (配列番号:575), 図 577 (配列番号:577), 図 579 (配列番号:579), 図 581 (配列番号:581), 図 583 (配列番号:583), 図 585 (配列番号:585) , 図 587 (配列番号:587), 図 589 (配列番号:589), 図 591 (配列番号:591), 図 593 (配列番号:593), 図 595 (配列番号:595), 図 597 (配列番号:597), 図 599 (配列番号:599), 図 601 (配列番号:601), 図 603 (配列番号:603), 図 605 (配列番号:605), 図 607 (配列番号:607), 及び 図 609 (配列番号:609)に示されるヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の核酸配列同一性を有する単離された核酸。
【請求項３】
図 1 (配列番号:1), 図 3 (配列番号:3), 図 5 (配列番号:5), 図 7 (配列番号:7), 図 9 (配列番号:9), 図 11 (配列番号:11), 図 13 (配列番号:13), 図 15 (配列番号:15), 図 17 (配列番号:17), 図 19 (配列番号:19), 図 21 (配列番号:21), 図 23 (配列番号:23), 図 25 (配列番号:25), 図 27 (配列番号:27), 図 29 (配列番号:29), 図 31 (配列番号:31), 図 33 (配列番号:33), 図 35 (配列番号:35), 図 37 (配列番号:37), 図 39 (配列番号:39), 図 41 (配列番号:41), 図 43 (配列番号:43), 図 45 (配列番号:45), 図 47 (配列番号:47), 図 49 (配列番号:49), 図 51 (配列番号:51), 図 53 (配列番号:53), 図 55 (配列番号:55), 図 57 (配列番号:57), 図 59 (配列番号:59), 図 61 (配列番号:61), 図 63 (配列番号:63), 図 65 (配列番号:65), 図 67 (配列番号:67), 図 69 (配列番号:69), 図 71 (配列番号:71), 図 73 (配列番号:73), 図s 75A-75B (配列番号:75), 図 77 (配列番号:77), 図 79 (配列番号:79),  図 81 (配列番号:81), 図 83 (配列番号:83), 図 85 (配列番号:85), 図 87 (配列番号:87), 図 89 (配列番号:89), 図 91 (配列番号:91), 図 93 (配列番号:93), 図 95 (配列番号:95), 図 97 (配列番号:97), 図 99 (配列番号:99), 図 101 (配列番号:101), 図 103 (配列番号:103), 図 105 (配列番号:105), 図 107 (配列番号:107), 図 109 (配列番号:109), 図 111 (配列番号:111), 図 113 (配列番号:113), 図 115 (配列番号:115), 図 117 (配列番号:117), 図 119 (配列番号:119), 図 121 (配列番号:121), 図 123 (配列番号:123), 図 125 (配列番号:125), 図 127 (配列番号:127), 図 129 (配列番号:129), 図 131 (配列番号:131), 図 133 (配列番号:133), 図 135 (配列番号:135), 図 137 (配列番号:137), 図 139 (配列番号:139), 図 141 (配列番号:141), 図 143 (配列番号:143), 図 145 (配列番号:145), 図 147 (配列番号:147), 図 149 (配列番号:149), 図 151 (配列番号:151), 図 153 (配列番号:153), 図 155 (配列番号:155), 図 157 (配列番号:157), 図 159 (配列番号:159), 図 161 (配列番号:161), 図 163 (配列番号:163), 図 165 (配列番号:165), 図 167 (配列番号:167), 図 169 (配列番号:169), 図 171 (配列番号:171), 図 173 (配列番号:173), 図 175 (配列番号:175), 図 177 (配列番号:177), 図 179 (配列番号:179),  図 181 (配列番号:181), 図 183 (配列番号:183), 図 185 (配列番号:185), 図 187 (配列番号:187), 図 189 (配列番号:189), 図 191 (配列番号:191), 図 193 (配列番号:193), 図 195 (配列番号:195), 図 197 (配列番号:197), 図 199 (配列番号:199), 図 201 (配列番号:201), 図 203 (配列番号:203), 図 205 (配列番号:205), 図 207 (配列番号:207), 図 209 (配列番号:209), 図 211 (配列番号:211), 図 213 (配列番号:213), 図 215 (配列番号:215), 図 217 (配列番号:217), 図 219 (配列番号:219), 図 221 (配列番号:221), 図 223 (配列番号:223), 図 225 (配列番号:225), 図 227 (配列番号:227), 図 229 (配列番号:229), 図 231 (配列番号:231), 図 233 (配列番号:233), 図 235 (配列番号:235), 図 237 (配列番号:237), 図 239 (配列番号:239), 図 241 (配列番号:241), 図 243 (配列番号:243), 図 245 (配列番号:245), 図 247 (配列番号:247), 図 249 (配列番号:249), 図 251 (配列番号:251), 図 253 (配列番号:253), 図 255 (配列番号:255), 図 257 (配列番号:257), 図 259 (配列番号:259), 図 261 (配列番号:261), 図 263 (配列番号:263), 図 265 (配列番号:265), 図 267 (配列番号:267), 図 271 (配列番号:271), 図 273 (配列番号:273), 図 275 (配列番号:275), 図 277 (配列番号:277), 図 279 (配列番号:279),  図 281 (配列番号:281), 図 283 (配列番号:283), 図 285 (配列番号:285), 図 287 (配列番号:287), 図s 289A-289B (配列番号:289), 図 291 (配列番号:291), 図 293 (配列番号:293), 図 295 (配列番号:295), 図 297 (配列番号:297), 図 299 (配列番号:299), 図 301 (配列��号:301), 図 303 (配列番号:303), 図 305 (配列番号:305), 図 307 (配列番号:307), 図 309 (配列番号:309), 図s 311A-311B (配列番号:311), 図 313 (配列番号:313), 図 315 (配列番号:315), 図 317 (配列番号:317), 図 319 (配列番号:319), 図 321 (配列番号:321), 図 323 (配列番号:323), 図 325 (配列番号:325), 図 327 (配列番号:327), 図 329 (配列番号:329), 図 331 (配列番号:331), 図 333 (配列番号:333), 図 335 (配列番号:335), 図 337 (配列番号:337), 図 339 (配列番号:339), 図 341 (配列番号:341), 図 343 (配列番号:343), 図 345 (配列番号:345), 図 347 (配列番号:347), 図 349 (配列番号:349), 図s 351A-351B (配列番号:351), 図 353 (配列番号:353), 図 355 (配列番号:355), 図 357 (配列番号:357), 図 359 (配列番号:359), 図 361 (配列番号:361), 図 363 (配列番号:363), 図 365 (配列番号:365), 図 367 (配列番号:367), 図 369 (配列番号:369), 図 371 (配列番号:371), 図 373 (配列番号:373), 図 375 (配列番号:375), 図 377 (配列番号:377), 図 379 (配列番号:379),  図 381 (配列番号:381), 図 383 (配列番号:383), 図 385 (配列番号:385), 図 387 (配列番号:387), 図 389 (配列番号:389), 図 391 (配列番号:391), 図 393 (配列番号:393), 図 395 (配列番号:395), 図 397 (配列番号:397), 図 399 (配列番号:399), 図 401 (配列番号:401), 図 403 (配列番号:403), 図 405 (配列番号:405), 図 407 (配列番号:407), 図 409 (配列番号:409), 図 411 (配列番号:411), 図 413 (配列番号:413), 図 415 (配列番号:415), 図 417 (配列番号:417), 図 419 (配列番号:419), 図 421 (配列番号:421), 図 423 (配列番号:423), 図 425 (配列番号:425), 図 427 (配列番号:427), 図 429 (配列番号:429), 図 431 (配列番号:431), 図 433 (配列番号:433), 図 435 (配列番号:435), 図 437 (配列番号:437), 図 439 (配列番号:439), 図 441 (配列番号:441), 図 443 (配列番号:443), 図 445 (配列番号:445), 図 447 (配列番号:447), 図 449 (配列番号:449), 図 451 (配列番号:451), 図 453 (配列番号:453), 図 455 (配列番号:455), 図 457 (配列番号:457), 図 459 (配列番号:459), 図 461 (配列番号:461), 図 463 (配列番号:463), 図 465 (配列番号:465), 図 467 (配列番号:467), 図 469 (配列番号:469), 図 471 (配列番号:471), 図 473 (配列番号:473), 図 475 (配列番号:475), 図 477 (配列番号:477), 図 479 (配列番号:479),  図 481 (配列番号:481), 図 483 (配列番号:483), 図 485 (配列番号:485), 図 487 (配列番号:487), 図 489 (配列番号:489), 図 491 (配列番号:491), 図 493 (配列番号:493), 図 495 (配列番号:495), 図 497 (配列番号:497), 図 499 (配列番号:499), 図 501 (配列番号:501), 図 503 (配列番号:503), 図 505 (配列番号:505), 図 507 (配列番号:507), 図 509 (配列番号:509), 図 511 (配列番号:511), 図 513 (配列番号:513), 図 515 (配列番号:515), 図 517 (配列番号:517), 図 519 (配列番号:519), 図 521 (配列番号:521), 図 523 (配列番号:523), 図s 525A-525B (配列番号:525), 図 527 (配列番号:527), 図 529 (配列番号:529), 図 531 (配列番号:531), 図 533 (配列番号:533), 図 535 (配列番号:535), 図 537 (配列番号:537), 図 539 (配列番号:539), 図 541 (配列番号:541), 図 543 (配列番号:543), 図 545 (配列番号:545), 図 547 (配列番号:547), 図 549 (配列番号:549), 図 551 (配列番号:551), 図 553 (配列番号:553), 図 555 (配列番号:555), 図 557 (配列番号:557), 図 559 (配列番号:559), 図 561 (配列番号:561), 図 563 (配列番号:563), 図 565 (配列番号:565), 図 567 (配列番号:567), 図 569 (配列番号:569), 図 571 (配列番号:571), 図 573 (配列番号:573), 図 575 (配列番号:575), 図 577 (配列番号:577), 図 579 (配列番号:579), 図 581 (配列番号:581), 図 583 (配列番号:583), 図 585 (配列番号:585) , 図 587 (配列番号:587), 図 589 (配列番号:589), 図 591 (配列番号:591), 図 593 (配列番号:593), 図 595 (配列番号:595), 図 597 (配列番号:597), 図 599 (配列番号:599), 図 601 (配列番号:601), 図 603 (配列番号:603), 図 605 (配列番号:605), 図 607 (配列番号:607), 及び 図 609 (配列番号:609)に示されるヌクレオチド配列の全長コード化配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の核酸配列同一性を有する単離された核酸。
【請求項４】
表７に示される任意のＡＴＣＣ登録番号のもとに寄託されたＤＮＡの全長コード化配列に対して少なくとも８０％の核酸配列同一性を有する単離された核酸。
【請求項５】
請求項１の核酸を含むベクター。
【請求項６】
請求項５のベクターを含む宿主細胞。
【請求項７】
前記細胞がＣＨＯ細胞である請求項６の宿主細胞。
【請求項８】
前記細胞が大腸菌である請求項６の宿主細胞。
【請求項９】
前記細胞が酵母菌である請求項６の宿主細胞。
【請求項１０】
ＰＲＯポリペプチドの発現に適した条件で請求項６の宿主細胞を培養し、細胞培地からＰＲＯポリペプチドを回収することを含むＰＲＯポリペプチドの生成方法。
【請求項１１】
図 2 (配列番号:2), 図 4 (配列番号:4), 図 6 (配列番号:6), 図 8 (配列番号:8), 図 10 (配列番号:10), 図 12 (配列番号:12), 図 14 (配列番号:14), 図 16 (配列番号:16), 図 18 (配列番号:18), 図 20 (配列番号:20), 図 22 (配列番号:22), 図 24 (配列番号:24), 図 26 (配列番号:26), 図 28 (配列番号:28), 図 30 (配列番号:30), 図 32 (配列番号:32), 図 34 (配列番号:34), 図 36 (配列番号:36), 図 38 (配列番号:38), 図 40 (配列番号:40), 図 42 (配列番号:42), 図 44 (配列番号:44), 図 46 (配列番号:46), 図 48 (配列番号:48), 図 50 (配列番号:50), 図 52 (配列番号:52), 図 54 (配列番号:54), 図 56 (配列番号:56), 図 58 (配列番号:58), 図 60 (配列番号:60), 図 62 (配列番号:62), 図 64 (配列番号:64), 図 66 (配列番号:66), 図 68 (配列番号:68), 図 70 (配列番号:70), 図 72 (配列番号:72), 図 74 (配列番号:74), 図 76 (配列番号:76), 図 78 (配列番号:78), 図 80 (配列番号:80),  図 82 (配列番号:82), 図 84 (配列番号:84), 図 86 (配列番号:86), 図 88 (配列番号:88), 図 90 (配列番号:90), 図 92 (配列番号:92), 図 94 (配列番号:94), 図 96 (配列番号:96), 図 98 (配列番号:98), 図 100 (配列番号:100), 図 102 (配列番号:102), 図 104 (配列番号:104), 図 106 (配列番号:106), 図 108 (配列番号:108), 図 110 (配列番号:110), 図 112 (配列番号:112), 図 114 (配列番号:114), 図 116 (配列番号:116), 図 118 (配列番号:118), 図 120 (配列番号:120), 図 122 (配列番号:122), 図 124 (配列番号:124), 図 126 (配列番号:126), 図 128 (配列番号:128), 図 130 (配列番号:130), 図 132 (配列番号:132), 図 134 (配列番号:134), 図 136 (配列番号:136), 図 138 (配列番号:138), 図 140 (配列番号:140), 図 142 (配列番号:142), 図 144 (配列番号:144), 図 146 (配列番号:146), 図 148 (配列番号:148), 図 150 (配列番号:150), 図 152 (配列番号:152), 図 154 (配列番号:154), 図 156 (配列番号:156), 図 158 (配列番号:158), 図 160 (配列番号:160), 図 162 (配列番号:162), 図 164 (配列番号:164), 図 166 (配列番号:166), 図 168 (配列番号:168), 図 170 (配列番号:170), 図 172 (配列番号:172), 図 174 (配列番号:174), 図 176 (配列番号:176), 図 178 (配列番号:178), 図 180 (配列番号:180),  図 182 (配列番号:182), 図 184 (配列番号:184), 図 186 (配列番号:186), 図 188 (配列番号:188), 図 190 (配列番号:190), 図 192 (配列番号:192), 図 194 (配列番号:194), 図 196 (配列番号:196), 図 198 (配列番号:198), 図 200 (配列番号:200), 図 202 (配列番号:202), 図 204 (配列番号:204), 図 206 (配列番号:206), 図 208 (配列番号:208), 図 210 (配列番号:210), 図 212 (配列番号:212), 図 214 (配列番号:214), 図 216 (配列番号:216), 図 218 (配列番号:218), 図 220 (配列番号:220), 図 222 (配列番号:222), 図 224 (配列番号:224), 図 226 (配列番号:226), 図 228 (配列番号:228), 図 230 (配列番号:230), 図 232 (配列番号:232), 図 234 (配列番号:234), 図 236 (配列番号:236), 図 238 (配列番号:238), 図 240 (配列番号:240), 図 242 (配列番号:242), 図 244 (配列番号:244), 図 246 (配列番号:246), 図 248 (配列番号:248), 図 250 (配列番号:250), 図 252 (配列番号:252), 図 254 (配列番号:254), 図 256 (配列番号:256), 図 258 (配列番号:258), 図 260 (配列番号:260), 図 262 (配列番号:262), 図 264 (配列番号:264), 図 266 (配列番号:266), 図 268 (配列番号:268), 図 272 (配列番号:272), 図 274 (配列番号:274), 図 276 (配列番号:276), 図 278 (配列番号:278), 図 280 (配列番号:280),  図 282 (配列番号:282), 図 284 (配列番号:284), 図 286 (配列番号:286), 図 288 (配列番号:288), 図 290 (配列番号:290), 図 292 (配列番号:292), 図 294 (配列番号:294), 図 296 (配列番号:296), 図 298 (配列番号:298), 図 300 (配列番号:300), 図 302 (配列番号:302), 図 304 (配列番号:304), 図 306 (配列番号:306), 図 308 (配列番号:308), 図 310 (配列番号:310), 図 312 (配列番号:312), 図 314 (配列番号:314), 図 316 (配列番号:316), 図 318 (配列番号:318), 図 320 (配列番号:320), 図 322 (配列番号:322), 図 324 (配列番号:324), 図 326 (配列番号:326), 図 328 (配列番号:328), 図 330 (配列番号:330), 図 332 (配列番号:332), 図 334 (配列番号:334), 図 336 (配列番号:336), 図 338 (配列番号:338), 図 340 (配列番号:340), 図 342 (配列番号:342), 図 344 (配列番号:344), 図 346 (配列番号:346), 図 348 (配列番号:348), 図 350 (配列番号:350), 図 352 (配列番号:352), 図 354 (配列番号:354), 図 356 (配列番号:356), 図 358 (配列番号:358), 図 360 (配列番号:360), 図 362 (配列番号:362), 図 364 (配列番号:364), 図 366 (配列番号:366), 図 368 (配列番号:368), 図 370 (配列番号:370), 図 372 (配列番号:372), 図 374 (配列番号:374), 図 376 (配列番号:376), 図 378 (配列番号:378), 図 380 (配列番号:380),  図 382 (配列番号:382), 図 384 (配列番号:384), 図 386 (配列番号:386), 図 388 (配列番号:388), 図 390 (配列番号:390), 図 392 (配列番号:392), 図 394 (配列番号:394), 図 396 (配列番号:396), 図 398 (配列番号:398), 図 400 (配列番号:400), 図 402 (配列番号:402), 図 404 (配列番号:404), 図 406 (配列番号:406), 図 408 (配列番号:408), 図 410 (配列番号:410), 図 412 (配列番号:412), 図 414 (配列番号:414), 図 416 (配列番号:416), 図 418 (配列番号:418), 図 420 (配列番号:420), 図 422 (配列番号:422), 図 424 (配列番号:424), 図 426 (配列番号:426), 図 428 (配列番号:428), 図 430 (配列番号:430), 図 432 (配列番号:432), 図 434 (配列番号:434), 図 436 (配列番号:436), 図 438 (配列番号:438), 図 440 (配列番号:440), 図 442 (配列番号:442), 図 444 (配列番号:444), 図 446 (配列番号:446), 図 448 (配列番号:448), 図 450 (配列番号:450), 図 452 (配列番号:452), 図 454 (配列番号:454), 図 456 (配列番号:456), 図 458 (配列番号:458), 図 460 (配列番号:460), 図 462 (配列番号:462), 図 464 (配列番号:464), 図 466 (配列番号:466), 図 468 (配列番号:468), 図 470 (配列番号:470), 図 472 (配列番号:472), 図 474 (配列番号:474), 図 476 (配列番号:476), 図 478 (配列番号:478), 図 480 (配列番号:480),  図 482 (配列番号:482), 図 484 (配列番号:484), 図 486 (配列番号:486), 図 488 (配列番号:488), 図 490 (配列番号:490), 図 492 (配列番号:492), 図 494 (配列番号:494), 図 496 (配列番号:496), 図 498 (配列番号:498), 図 500 (配列番号:500), 図 502 (配列番号:502), 図 504 (配列番号:504), 図 506 (配列番号:506), 図 508 (配列番号:508), 図 510 (配列番号:510), 図 512 (配列番号:512), 図 514 (配列番号:514), 図 516 (配列番号:516), 図 518 (配列番号:518), 図 520 (配列番号:520), 図 522 (配列番号:522), 図 524 (配列番号:524), 図 526 (配列番号:526), 図 528 (配列番号:528), 図 530 (配列番号:530), 図 532 (配列番号:532), 図 534 (配列番号:534), 図 536 (配列番号:536), 図 538 (配列番号:538), 図 540 (配列番号:540), 図 542 (配列番号:542), 図 544 (配列番号:544), 図 546 (配列番号:546), 図 548 (配列番号:548), 図 550 (配列番号:550), 図 552 (配列番号:552), 図 554 (配列番号:554), 図 556 (配列番号:556), 図 558 (配列番号:558), 図 560 (配列番号:560), 図 562 (配列番号:562), 図 564 (配列番号:564), 図 566 (配列番号:566), 図 568 (配列番号:568), 図 570 (配列番号:570), 図 572 (配列番号:572), 図 574 (配列番号:574), 図 576 (配列番号:576), 図 578 (配列番号:578), 図 580 (配列番号:580), 図 582 (配列番号:582), 図 584 (配列番号:584), 図 586 (配列番号:586), 図 588 (配列番号:588), 図 590 (配列番号:590), 図 592 (配列番号:592), 図 594 (配列番号:594), 図 596 (配列番号:596), 図 598 (配列番号:598), 図 600 (配列番号:600), 図 602 (配列番号:602), 図 604 (配列番号:604), 図 606 (配列番号:606), 図 608 (配列番号:608), 及び 図 610 (配列番号:610)に示されるアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する単離されたポリペプチド。
【請求項１２】
表７に示される任意のＡＴＣＣ登録番号のもとに寄託されたＤＮＡの全長コード化配列によりコードされるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する単離されたポリぺプチド。
【請求項１３】
異種アミノ酸配列に融合した請求項１１に記載のポリペプチドを含むキメラ分子。
【請求項１４】
前記異種アミノ酸配列がエピトープタグ配列である、請求項１３のキメラ分子。
【請求項１５】
前記異種アミノ酸配列が免疫グロブリンのＦｃ領域である、請求項１３のキメラ分子。
【請求項１６】
請求項１１に記載のポリペプチドに特異的に結合する抗体。
【請求項１７】
前記抗体がモノクローナル抗体、ヒト化抗体又は一本鎖抗体である、請求項１６の抗体。
【請求項１８】
(a) 連結するシグナルペプチドを欠く図 2 (配列番号:2), 図 4 (配列番号:4), 図 6 (配列番号:6), 図 8 (配列番号:8), 図 10 (配列番号:10), 図 12 (配列番号:12), 図 14 (配列番号:14), 図 16 (配列番号:16), 図 18 (配列番号:18), 図 20 (配列番号:20), 図 22 (配列番号:22), 図 24 (配列番号:24), 図 26 (配列番号:26), 図 28 (配列番号:28), 図 30 (配列番号:30), 図 32 (配列番号:32), 図 34 (配列番号:34), 図 36 (配列番号:36), 図 38 (配列番号:38), 図 40 (配列番号:40), 図 42 (配列番号:42), 図 44 (配列番号:44), 図 46 (配列番号:46), 図 48 (配列番号:48), 図 50 (配列番号:50), 図 52 (配列番号:52), 図 54 (配列番号:54), 図 56 (配列番号:56), 図 58 (配列番号:58), 図 60 (配列番号:60), 図 62 (配列番号:62), 図 64 (配列番号:64), 図 66 (配列番号:66), 図 68 (配列番号:68), 図 70 (配列番号:70), 図 72 (配列番号:72), 図 74 (配列番号:74), 図 76 (配列番号:76), 図 78 (配列番号:78), 図 80 (配列番号:80),  図 82 (配列番号:82), 図 84 (配列番号:84), 図 86 (配列番号:86), 図 88 (配列番号:88), 図 90 (配列番号:90), 図 92 (配列番号:92), 図 94 (配列番号:94), 図 96 (配列番号:96), 図 98 (配列番号:98), 図 100 (配列番号:100), 図 102 (配列番号:102), 図 104 (配列番号:104), 図 106 (配列番号:106), 図 108 (配列番号:108), 図 110 (配列番号:110), 図 112 (配列番号:112), 図 114 (配列番号:114), 図 116 (配列番号:116), 図 118 (配列番号:118), 図 120 (配列番号:120), 図 122 (配列番号:122), 図 124 (配列番号:124), 図 126 (配列番号:126), 図 128 (配列番号:128), 図 130 (配列番号:130), 図 132 (配列番号:132), 図 134 (配列番号:134), 図 136 (配列番号:136), 図 138 (配列番号:138), 図 140 (配列番号:140), 図 142 (配列番号:142), 図 144 (配列番号:144), 図 146 (配列番号:146), 図 148 (配列番号:148), 図 150 (配列番号:150), 図 152 (配列番号:152), 図 154 (配列番号:154), 図 156 (配列番号:156), 図 158 (配列番号:158), 図 160 (配列番号:160), 図 162 (配列番号:162), 図 164 (配列番号:164), 図 166 (配列番号:166), 図 168 (配列番号:168), 図 170 (配列番号:170), 図 172 (配列番号:172), 図 174 (配列番号:174), 図 176 (配列番号:176), 図 178 (配列番号:178), 図 180 (配列番号:180),  図 182 (配列番号:182), 図 184 (配列番号:184), 図 186 (配列番号:186), 図 188 (配列番号:188), 図 190 (配列番号:190), 図 192 (配列番号:192), 図 194 (配列番号:194), 図 196 (配列番号:196), 図 198 (配列番号:198), 図 200 (配列番号:200), 図 202 (配列番号:202), 図 204 (配列番号:204), 図 206 (配列番号:206), 図 208 (配列番号:208), 図 210 (配列番号:210), 図 212 (配列番号:212), 図 214 (配列番号:214), 図 216 (配列番号:216), 図 218 (配列番号:218), 図 220 (配列番号:220), 図 222 (配列番号:222), 図 224 (配列番号:224), 図 226 (配列番号:226), 図 228 (配列番号:228), 図 230 (配列番号:230), 図 232 (配列番号:232), 図 234 (配列番号:234), 図 236 (配列番号:236), 図 238 (配列番号:238), 図 240 (配列番号:240), 図 242 (配列番号:242), 図 244 (配列番号:244), 図 246 (配列番号:246), 図 248 (配列番号:248), 図 250 (配列番号:250), 図 252 (配列番号:252), 図 254 (配列番号:254), 図 256 (配列番号:256), 図 258 (配列番号:258), 図 260 (配列番号:260), 図 262 (配列番号:262), 図 264 (配列番号:264), 図 266 (配列番号:266), 図 268 (配列番号:268), 図 272 (配列番号:272), 図 274 (配列番号:274), 図 276 (配列番号:276), 図 278 (配列番号:278), 図 280 (配列番号:280),  図 282 (配列番号:282), 図 284 (配列番号:284), 図 286 (配列番号:286), 図 288 (配列番号:288), 図 290 (配列番号:290), 図 292 (配列番号:292), 図 294 (配列番号:294), 図 296 (配列番号:296), 図 298 (配列番号:298), 図 300 (配列番号:300), 図 302 (配列番号:302), 図 304 (配列番号:304), 図 306 (配列番号:306), 図 308 (配列番号:308), 図 310 (配列番号:310), 図 312 (配列番号:312), 図 314 (配列番号:314), 図 316 (配列番号:316), 図 318 (配列番号:318), 図 320 (配列番号:320), 図 322 (配列番号:322), 図 324 (配列番号:324), 図 326 (配列番号:326), 図 328 (配列番号:328), 図 330 (配列番号:330), 図 332 (配列番号:332), 図 334 (配列番号:334), 図 336 (配列番号:336), 図 338 (配列番号:338), 図 340 (配列番号:340), 図 342 (配列番号:342), 図 344 (配列番号:344), 図 346 (配列番号:346), 図 348 (配列番号:348), 図 350 (配列番号:350), 図 352 (配列番号:352), 図 354 (配列番号:354), 図 356 (配列番号:356), 図 358 (配列番号:358), 図 360 (配列番号:360), 図 362 (配列番号:362), 図 364 (配列番号:364), 図 366 (配列番号:366), 図 368 (配列番号:368), 図 370 (配列番号:370), 図 372 (配列番号:372), 図 374 (配列番号:374), 図 376 (配列番号:376), 図 378 (配列番号:378), 図 380 (配列番号:380),  図 382 (配列番号:382), 図 384 (配列番号:384), 図 386 (配列番号:386), 図 388 (配列番号:388), 図 390 (配列番号:390), 図 392 (配列番号:392), 図 394 (配列番号:394), 図 396 (配列番号:396), 図 398 (配列番号:398), 図 400 (配列番号:400), 図 402 (配列番号:402), 図 404 (配列番号:404), 図 406 (配列番号:406), 図 408 (配列番号:408), 図 410 (配列番号:410), 図 412 (配列番号:412), 図 414 (配列番号:414), 図 416 (配列番号:416), 図 418 (配列番号:418), 図 420 (配列番号:420), 図 422 (配列番号:422), 図 424 (配列番号:424), 図 426 (配列番号:426), 図 428 (配列番号:428), 図 430 (配列番号:430), 図 432 (配列番号:432), 図 434 (配列番号:434), 図 436 (配列番号:436), 図 438 (配列番号:438), 図 440 (配列番号:440), 図 442 (配列番号:442), 図 444 (配列番号:444), 図 446 (配列番号:446), 図 448 (配列番号:448), 図 450 (配列番号:450), 図 452 (配列番号:452), 図 454 (配列番号:454), 図 456 (配列番号:456), 図 458 (配列番号:458), 図 460 (配列番号:460), 図 462 (配列番号:462), 図 464 (配列番号:464), 図 466 (配列番号:466), 図 468 (配列番号:468), 図 470 (配列番号:470), 図 472 (配列番号:472), 図 474 (配列番号:474), 図 476 (配列番号:476), 図 478 (配列番号:478), 図 480 (配列番号:480),  図 482 (配列番号:482), 図 484 (配列番号:484), 図 486 (配列番号:486), 図 488 (配列番号:488), 図 490 (配列番号:490), 図 492 (配列番号:492), 図 494 (配列番号:494), 図 496 (配列番号:496), 図 498 (配列番号:498), 図 500 (配列番号:500), 図 502 (配列番号:502), 図 504 (配列番号:504), 図 506 (配列番号:506), 図 508 (配列番号:508), 図 510 (配列番号:510), 図 512 (配列番号:512), 図 514 (配列番号:514), 図 516 (配列番号:516), 図 518 (配列番号:518), 図 520 (配列番号:520), 図 522 (配列番号:522), 図 524 (配列番号:524), 図 526 (配列番号:526), 図 528 (配列番号:528), 図 530 (配列番号:530), 図 532 (配列番号:532), 図 534 (配列番号:534), 図 536 (配列番号:536), 図 538 (配列番号:538), 図 540 (配列番号:540), 図 542 (配列番号:542), 図 544 (配列番号:544), 図 546 (配列番号:546), 図 548 (配列番号:548), 図 550 (配列番号:550), 図 552 (配列番号:552), 図 554 (配列番号:554), 図 556 (配列番号:556), 図 558 (配列番号:558), 図 560 (配列番号:560), 図 562 (配列番号:562), 図 564 (配列番号:564), 図 566 (配列番号:566), 図 568 (配列番号:568), 図 570 (配列番号:570), 図 572 (配列番号:572), 図 574 (配列番号:574), 図 576 (配列番号:576), 図 578 (配列番号:578), 図 580 (配列番号:580), 図 582 (配列番号:582), 図 584 (配列番号:584), 図 586 (配列番号:586), 図 588 (配列番号:588), 図 590 (配列番号:590), 図 592 (���列番号:592), 図 594 (配列番号:594), 図 596 (配列番号:596), 図 598 (配列番号:598), 図 600 (配列番号:600), 図 602 (配列番号:602), 図 604 (配列番号:604), 図 606 (配列番号:606), 図 608 (配列番号:608), 又は 図 610 (配列番号:610)に示されるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
(b)連結するシグナルペプチドを有する図 2 (配列番号:2), 図 4 (配列番号:4), 図 6 (配列番号:6), 図 8 (配列番号:8), 図 10 (配列番号:10), 図 12 (配列番号:12), 図 14 (配列番号:14), 図 16 (配列番号:16), 図 18 (配列番号:18), 図 20 (配列番号:20), 図 22 (配列番号:22), 図 24 (配列番号:24), 図 26 (配列番号:26), 図 28 (配列番号:28), 図 30 (配列番号:30), 図 32 (配列番号:32), 図 34 (配列番号:34), 図 36 (配列番号:36), 図 38 (配列番号:38), 図 40 (配列番号:40), 図 42 (配列番号:42), 図 44 (配列番号:44), 図 46 (配列番号:46), 図 48 (配列番号:48), 図 50 (配列番号:50), 図 52 (配列番号:52), 図 54 (配列番号:54), 図 56 (配列番号:56), 図 58 (配列番号:58), 図 60 (配列番号:60), 図 62 (配列番号:62), 図 64 (配列番号:64), 図 66 (配列番号:66), 図 68 (配列番号:68), 図 70 (配列番号:70), 図 72 (配列番号:72), 図 74 (配列番号:74), 図 76 (配列番号:76), 図 78 (配列番号:78), 図 80 (配列番号:80),  図 82 (配列番号:82), 図 84 (配列番号:84), 図 86 (配列番号:86), 図 88 (配列番号:88), 図 90 (配列番号:90), 図 92 (配列番号:92), 図 94 (配列番号:94), 図 96 (配列番号:96), 図 98 (配列番号:98), 図 100 (配列番号:100), 図 102 (配列番号:102), 図 104 (配列番号:104), 図 106 (配列番号:106), 図 108 (配列番号:108), 図 110 (配列番号:110), 図 112 (配列番号:112), 図 114 (配列番号:114), 図 116 (配列番号:116), 図 118 (配列番号:118), 図 120 (配列番号:120), 図 122 (配列番号:122), 図 124 (配列番号:124), 図 126 (配列番号:126), 図 128 (配列番号:128), 図 130 (配列番号:130), 図 132 (配列番号:132), 図 134 (配列番号:134), 図 136 (配列番号:136), 図 138 (配列番号:138), 図 140 (配列番号:140), 図 142 (配列番号:142), 図 144 (配列番号:144), 図 146 (配列番号:146), 図 148 (配列番号:148), 図 150 (配列番号:150), 図 152 (配列番号:152), 図 154 (配列番号:154), 図 156 (配列番号:156), 図 158 (配列番号:158), 図 160 (配列番号:160), 図 162 (配列番号:162), 図 164 (配列番号:164), 図 166 (配列番号:166), 図 168 (配列番号:168), 図 170 (配列番号:170), 図 172 (配列番号:172), 図 174 (配列番号:174), 図 176 (配列番号:176), 図 178 (配列番号:178), 図 180 (配列番号:180),  図 182 (配列番号:182), 図 184 (配列番号:184), 図 186 (配列番号:186), 図 188 (配列番号:188), 図 190 (配列番号:190), 図 192 (配列番号:192), 図 194 (配列番号:194), 図 196 (配列番号:196), 図 198 (配列番号:198), 図 200 (配列番号:200), 図 202 (配列番号:202), 図 204 (配列番号:204), 図 206 (配列番号:206), 図 208 (配列番号:208), 図 210 (配列番号:210), 図 212 (配列番号:212), 図 214 (配列番号:214), 図 216 (配列番号:216), 図 218 (配列番号:218), 図 220 (配列番号:220), 図 222 (配列番号:222), 図 224 (配列番号:224), 図 226 (配列番号:226), 図 228 (配列番号:228), 図 230 (配列番号:230), 図 232 (配列番号:232), 図 234 (配列番号:234), 図 236 (配列番号:236), 図 238 (配列番号:238), 図 240 (配列番号:240), 図 242 (配列番号:242), 図 244 (配列番号:244), 図 246 (配列番号:246), 図 248 (配列番号:248), 図 250 (配列番号:250), 図 252 (配列番号:252), 図 254 (配列番号:254), 図 256 (配列番号:256), 図 258 (配列番号:258), 図 260 (配列番号:260), 図 262 (配列番号:262), 図 264 (配列番号:264), 図 266 (配列番号:266), 図 268 (配列番号:268), 図 272 (配列番号:272), 図 274 (配列番号:274), 図 276 (配列番号:276), 図 278 (配列番号:278), 図 280 (配列番号:280),  図 282 (配列番号:282), 図 284 (配列番号:284), 図 286 (配列番号:286), 図 288 (配列番号:288), 図 290 (配列番号:290), 図 292 (配列番号:292), 図 294 (配列番号:294), 図 296 (配列番号:296), 図 298 (配列番号:298), 図 300 (配列番号:300), 図 302 (配列番号:302), 図 304 (配列番号:304), 図 306 (配列番号:306), 図 308 (配列番号:308), 図 310 (配列番号:310), 図 312 (配列番号:312), 図 314 (配列番号:314), 図 316 (配列番号:316), 図 318 (配列番号:318), 図 320 (配列番号:320), 図 322 (配列番号:322), 図 324 (配列番号:324), 図 326 (配列番号:326), 図 328 (配列番号:328), 図 330 (配列番号:330), 図 332 (配列番号:332), 図 334 (配列番号:334), 図 336 (配列番号:336), 図 338 (配列番号:338), 図 340 (配列番号:340), 図 342 (配列番号:342), 図 344 (配列番号:344), 図 346 (配列番号:346), 図 348 (配列番号:348), 図 350 (配列番号:350), 図 352 (配列番号:352), 図 354 (配列番号:354), 図 356 (配列番号:356), 図 358 (配列番号:358), 図 360 (配列番号:360), 図 362 (配列番号:362), 図 364 (配列番号:364), 図 366 (配列番号:366), 図 368 (配列番号:368), 図 370 (配列番号:370), 図 372 (配列番号:372), 図 374 (配列番号:374), 図 376 (配列番号:376), 図 378 (配列番号:378), 図 380 (配列番号:380),  図 382 (配列番号:382), 図 384 (配列番号:384), 図 386 (配列番号:386), 図 388 (配列番号:388), 図 390 (配列番号:390), 図 392 (配列番号:392), 図 394 (配列番号:394), 図 396 (配列番号:396), 図 398 (配列番号:398), 図 400 (配列番号:400), 図 402 (配列番号:402), 図 404 (配列番号:404), 図 406 (配列番号:406), 図 408 (配列番号:408), 図 410 (配列番号:410), 図 412 (配列番号:412), 図 414 (配列番号:414), 図 416 (配列番号:416), 図 418 (配列番号:418), 図 420 (配列番号:420), 図 422 (配列番号:422), 図 424 (配列番号:424), 図 426 (配列番号:426), 図 428 (配列番号:428), 図 430 (配列番号:430), 図 432 (配列番号:432), 図 434 (配列番号:434), 図 436 (配列番号:436), 図 438 (配列番号:438), 図 440 (配列番号:440), 図 442 (配列番号:442), 図 444 (配列番号:444), 図 446 (配列番号:446), 図 448 (配列番号:448), 図 450 (配列番号:450), 図 452 (配列番号:452), 図 454 (配列番号:454), 図 456 (配列番号:456), 図 458 (配列番号:458), 図 460 (配列番号:460), 図 462 (配列番号:462), 図 464 (配列番号:464), 図 466 (配列番号:466), 図 468 (配列番号:468), 図 470 (配列番号:470), 図 472 (配列番号:472), 図 474 (配列番号:474), 図 476 (配列番号:476), 図 478 (配列番号:478), 図 480 (配列番号:480),  図 482 (配列番号:482), 図 484 (配列番号:484), 図 486 (配列番号:486), 図 488 (配列番号:488), 図 490 (配列番号:490), 図 492 (配列番号:492), 図 494 (配列番号:494), 図 496 (配列番号:496), 図 498 (配列番号:498), 図 500 (配列番号:500), 図 502 (配列番号:502), 図 504 (配列番号:504), 図 506 (配列番号:506), 図 508 (配列番号:508), 図 510 (配列番号:510), 図 512 (配列番号:512), 図 514 (配列番号:514), 図 516 (配列番号:516), 図 518 (配列番号:518), 図 520 (配列番号:520), 図 522 (配列番号:522), 図 524 (配列番号:524), 図 526 (配列番号:526), 図 528 (配列番号:528), 図 530 (配列番号:530), 図 532 (配列番号:532), 図 534 (配列番号:534), 図 536 (配列番号:536), 図 538 (配列番号:538), 図 540 (配列番号:540), 図 542 (配列番号:542), 図 544 (配列番号:544), 図 546 (配列番号:546), 図 548 (配列番号:548), 図 550 (配列番号:550), 図 552 (配列番号:552), 図 554 (配列番号:554), 図 556 (配列番号:556), 図 558 (配列番号:558), 図 560 (配列番号:560), 図 562 (配列番号:562), 図 564 (配列番号:564), 図 566 (配列番号:566), 図 568 (配列番号:568), 図 570 (配列番号:570), 図 572 (配列番号:572), 図 574 (配列番号:574), 図 576 (配列番号:576), 図 578 (配列番号:578), 図 580 (配列番号:580), 図 582 (配列番号:582), 図 584 (配列番号:584), 図 586 (配列番号:586), 図 588 (配列番号:588), 図 590 (配列番号:590), 図 592 (配列番号:592), 図 594 (配列番号:594), 図 596 (配列番号:596), 図 598 (配列番号:598), 図 600 (配列番号:600), 図 602 (配列番号:602), 図 604 (配列番号:604), 図 606 (配列番号:606), 図 608 (配列番号:608), 又は 図 610 (配列番号:610)に示されるポリペプチドの細胞外ドメインをコードするヌクレオチド配列；又は
(c)連結するシグナルペプチドを欠く図 2 (配列番号:2), 図 4 (配列番号:4), 図 6 (配列番号:6), 図 8 (配列番号:8), 図 10 (配列番号:10), 図 12 (配列番号:12), 図 14 (配列番号:14), 図 16 (配列番号:16), 図 18 (配列番号:18), 図 20 (配列番号:20), 図 22 (配列番号:22), 図 24 (配列番号:24), 図 26 (配列番号:26), 図 28 (配列番号:28), 図 30 (配列番号:30), 図 32 (配列番号:32), 図 34 (配列番号:34), 図 36 (配列番号:36), 図 38 (配列番号:38), 図 40 (配列番号:40), 図 42 (配列番号:42), 図 44 (配列番号:44), 図 46 (配列番号:46), 図 48 (配列番号:48), 図 50 (配列番号:50), 図 52 (配列番号:52), 図 54 (配列番号:54), 図 56 (配列番号:56), 図 58 (配列番号:58), 図 60 (配列番号:60), 図 62 (配列番号:62), 図 64 (配列番号:64), 図 66 (配列番号:66), 図 68 (配列番号:68), 図 70 (配列番号:70), 図 72 (配列番号:72), 図 74 (配列番号:74), 図 76 (配列番号:76), 図 78 (配列番号:78), 図 80 (配列番号:80),  図 82 (配列番号:82), 図 84 (配列番号:84), 図 86 (配列番号:86), 図 88 (配列番号:88), 図 90 (配列番号:90), 図 92 (配列番号:92), 図 94 (配列番号:94), 図 96 (配列番号:96), 図 98 (配列番号:98), 図 100 (配列番号:100), 図 102 (配列番号:102), 図 104 (配列番号:104), 図 106 (配列番号:106), 図 108 (配列番号:108), 図 110 (配列番号:110), 図 112 (配列番号:112), 図 114 (配列番号:114), 図 116 (配列番号:116), 図 118 (配列番号:118), 図 120 (配列番号:120), 図 122 (配列番号:122), 図 124 (配列番号:124), 図 126 (配列番号:126), 図 128 (配列番号:128), 図 130 (配列番号:130), 図 132 (配列番号:132), 図 134 (配列番号:134), 図 136 (配列番号:136), 図 138 (配列番号:138), 図 140 (配列番号:140), 図 142 (配列番号:142), 図 144 (配列番号:144), 図 146 (配列番号:146), 図 148 (配列番号:148), 図 150 (配列番号:150), 図 152 (配列番号:152), 図 154 (配列番号:154), 図 156 (配列番号:156), 図 158 (配列番号:158), 図 160 (配列番号:160), 図 162 (配列番号:162), 図 164 (配列番号:164), 図 166 (配列番号:166), 図 168 (配列番号:168), 図 170 (配列番号:170), 図 172 (配列番号:172), 図 174 (配列番号:174), 図 176 (配列番号:176), 図 178 (配列番号:178), 図 180 (配列番号:180),  図 182 (配列番号:182), 図 184 (配列番号:184), 図 186 (配列番号:186), 図 188 (配列番号:188), 図 190 (配列番号:190), 図 192 (配列番号:192), 図 194 (配列番号:194), 図 196 (配列番号:196), 図 198 (配列番号:198), 図 200 (配列番号:200), 図 202 (配列番号:202), 図 204 (配列番号:204), 図 206 (配列番号:206), 図 208 (配列番号:208), 図 210 (配列番号:210), 図 212 (配列番号:212), 図 214 (配列番号:214), 図 216 (配列番号:216), 図 218 (配列番号:218), 図 220 (配列番号:220), 図 222 (配列番号:222), 図 224 (配列番号:224), 図 226 (配列番号:226), 図 228 (配列番号:228), 図 230 (配列番号:230), 図 232 (配列番号:232), 図 234 (配列番号:234), 図 236 (配列番号:236), 図 238 (配列番号:238), 図 240 (配列番号:240), 図 242 (配列番号:242), 図 244 (配列番号:244), 図 246 (配列番号:246), 図 248 (配列番号:248), 図 250 (配列番号:250), 図 252 (配列番号:252), 図 254 (配列番号:254), 図 256 (配列番号:256), 図 258 (配列番号:258), 図 260 (配列番号:260), 図 262 (配列番号:262), 図 264 (配列番号:264), 図 266 (配列番号:266), 図 268 (配列番号:268), 図 272 (配列番号:272), 図 274 (配列番号:274), 図 276 (配列番号:276), 図 278 (配列番号:278), 図 280 (配列番号:280),  図 282 (配列番号:282), 図 284 (配列番号:284), 図 286 (配列番号:286), 図 288 (配列番号:288), 図 290 (配列番号:290), 図 292 (配列番号:292), 図 294 (配列番号:294), 図 296 (配列番号:296), 図 298 (配列番号:298), 図 300 (配列番号:300), 図 302 (配列番号:302), 図 304 (配列番号:304), 図 306 (配列番号:306), 図 308 (配列番号:308), 図 310 (配列番号:310), 図 312 (配列番号:312), 図 314 (配列番号:314), 図 316 (配列番号:316), 図 318 (配列番号:318), 図 320 (配列番号:320), 図 322 (配列番号:322), 図 324 (配列番号:324), 図 326 (配列番号:326), 図 328 (配列番号:328), 図 330 (配列番号:330), 図 332 (配列番号:332), 図 334 (配列番号:334), 図 336 (配列番号:336), 図 338 (配列番号:338), 図 340 (配列番号:340), 図 342 (配列番号:342), 図 344 (配列番号:344), 図 346 (配列番号:346), 図 348 (配列番号:348), 図 350 (配列番号:350), 図 352 (配列番号:352), 図 354 (配列番号:354), 図 356 (配列番号:356), 図 358 (配列番号:358), 図 360 (配列番号:360), 図 362 (配列番号:362), 図 364 (配列番号:364), 図 366 (配列番号:366), 図 368 (配列番号:368), 図 370 (配列番号:370), 図 372 (配列番号:372), 図 374 (配列番号:374), 図 376 (配列番号:376), 図 378 (配列番号:378), 図 380 (配列番号:380),  図 382 (配列番号:382), 図 384 (配列番号:384), 図 386 (配列番号:386), 図 388 (配列番号:388), 図 390 (配列番号:390), 図 392 (配列番号:392), 図 394 (配列番号:394), 図 396 (配列番号:396), 図 398 (配列番号:398), 図 400 (配列番号:400), 図 402 (配列番号:402), 図 404 (配列番号:404), 図 406 (配列番号:406), 図 408 (配列番号:408), 図 410 (配列番号:410), 図 412 (配列番号:412), 図 414 (配列番号:414), 図 416 (配列番号:416), 図 418 (配列番号:418), 図 420 (配列番号:420), 図 422 (配列番号:422), 図 424 (配列番号:424), 図 426 (配列番号:426), 図 428 (配列番号:428), 図 430 (配列番号:430), 図 432 (配列番号:432), 図 434 (配列番号:434), 図 436 (配列番号:436), 図 438 (配列番号:438), 図 440 (配列番号:440), 図 442 (配列番号:442), 図 444 (配列番号:444), 図 446 (配列番号:446), 図 448 (配列番号:448), 図 450 (配列番号:450), 図 452 (配列番号:452), 図 454 (配列番号:454), 図 456 (配列番号:456), 図 458 (配列番号:458), 図 460 (配列番号:460), 図 462 (配列番号:462), 図 464 (配列番号:464), 図 466 (配列番号:466), 図 468 (配列番号:468), 図 470 (配列番号:470), 図 472 (配列番号:472), 図 474 (配列番号:474), 図 476 (配列番号:476), 図 478 (配列番号:478), 図 480 (配列番号:480),  図 482 (配列番号:482), 図 484 (配列番号:484), 図 486 (配列番号:486), 図 488 (配列番号:488), 図 490 (配列番号:490), 図 492 (配列番号:492), 図 494 (配列番号:494), 図 496 (配列番号:496), 図 498 (配列番号:498), 図 500 (配列番号:500), 図 502 (配列番号:502), 図 504 (配列番号:504), 図 506 (配列番号:506), 図 508 (配列番号:508), 図 510 (配列番号:510), 図 512 (配列番号:512), 図 514 (配列番号:514), 図 516 (配列番号:516), 図 518 (配列番号:518), 図 520 (配列番号:520), 図 522 (配列番号:522), 図 524 (配列番号:524), 図 526 (配列番号:526), 図 528 (配列番号:528), 図 530 (配列番号:530), 図 532 (配列番号:532), 図 534 (配列番号:534), 図 536 (配列番号:536), 図 538 (配列番号:538), 図 540 (配列番号:540), 図 542 (配列番号:542), 図 544 (配列番号:544), 図 546 (配列番号:546), 図 548 (配列番号:548), 図 550 (配列番号:550), 図 552 (配列番号:552), 図 554 (配列番号:554), 図 556 (配列番号:556), 図 558 (配列番号:558), 図 560 (配列番号:560), 図 562 (配列番号:562), 図 564 (配列番号:564), 図 566 (配列番号:566), 図 568 (配列番号:568), 図 570 (配列番号:570), 図 572 (配列番号:572), 図 574 (配列番号:574), 図 576 (配列番号:576), 図 578 (配列番号:578), 図 580 (配列番号:580), 図 582 (配列番号:582), 図 584 (配列番号:584), 図 586 (配列番号:586), 図 588 (配列番号:588), 図 590 (配列番号:590), 図 592 (��列番号:592), 図 594 (配列番号:594), 図 596 (配列番号:596), 図 598 (配列番号:598), 図 600 (配列番号:600), 図 602 (配列番号:602), 図 604 (配列番号:604), 図 606 (配列番号:606), 図 608 (配列番号:608), 又は 図 610 (配列番号:610)に示されるポリペプチドの細胞外ドメインをコードするヌクレオチド配列：
に対して少なくとも８０％の核酸配列同一性を有する単離された核酸。
【請求項１９】
(a)連結するシグナルペプチドを欠く図 2 (配列番号:2), 図 4 (配列番号:4), 図 6 (配列番号:6), 図 8 (配列番号:8), 図 10 (配列番号:10), 図 12 (配列番号:12), 図 14 (配列番号:14), 図 16 (配列番号:16), 図 18 (配列番号:18), 図 20 (配列番号:20), 図 22 (配列番号:22), 図 24 (配列番号:24), 図 26 (配列番号:26), 図 28 (配列番号:28), 図 30 (配列番号:30), 図 32 (配列番号:32), 図 34 (配列番号:34), 図 36 (配列番号:36), 図 38 (配列番号:38), 図 40 (配列番号:40), 図 42 (配列番号:42), 図 44 (配列番号:44), 図 46 (配列番号:46), 図 48 (配列番号:48), 図 50 (配列番号:50), 図 52 (配列番号:52), 図 54 (配列番号:54), 図 56 (配列番号:56), 図 58 (配列番号:58), 図 60 (配列番号:60), 図 62 (配列番号:62), 図 64 (配列番号:64), 図 66 (配列番号:66), 図 68 (配列番号:68), 図 70 (配列番号:70), 図 72 (配列番号:72), 図 74 (配列番号:74), 図 76 (配列番号:76), 図 78 (配列番号:78), 図 80 (配列番号:80),  図 82 (配列番号:82), 図 84 (配列番号:84), 図 86 (配列番号:86), 図 88 (配列番号:88), 図 90 (配列番号:90), 図 92 (配列番号:92), 図 94 (配列番号:94), 図 96 (配列番号:96), 図 98 (配列番号:98), 図 100 (配列番号:100), 図 102 (配列番号:102), 図 104 (配列番号:104), 図 106 (配列番号:106), 図 108 (配列番号:108), 図 110 (配列番号:110), 図 112 (配列番号:112), 図 114 (配列番号:114), 図 116 (配列番号:116), 図 118 (配列番号:118), 図 120 (配列番号:120), 図 122 (配列番号:122), 図 124 (配列番号:124), 図 126 (配列番号:126), 図 128 (配列番号:128), 図 130 (配列番号:130), 図 132 (配列番号:132), 図 134 (配列番号:134), 図 136 (配列番号:136), 図 138 (配列番号:138), 図 140 (配列番号:140), 図 142 (配列番号:142), 図 144 (配列番号:144), 図 146 (配列番号:146), 図 148 (配列番号:148), 図 150 (配列番号:150), 図 152 (配列番号:152), 図 154 (配列番号:154), 図 156 (配列番号:156), 図 158 (配列番号:158), 図 160 (配列番号:160), 図 162 (配列番号:162), 図 164 (配列番号:164), 図 166 (配列番号:166), 図 168 (配列番号:168), 図 170 (配列番号:170), 図 172 (配列番号:172), 図 174 (配列番号:174), 図 176 (配列番号:176), 図 178 (配列番号:178), 図 180 (配列番号:180),  図 182 (配列番号:182), 図 184 (配列番号:184), 図 186 (配列番号:186), 図 188 (配列番号:188), 図 190 (配列番号:190), 図 192 (配列番号:192), 図 194 (配列番号:194), 図 196 (配列番号:196), 図 198 (配列番号:198), 図 200 (配列番号:200), 図 202 (配列番号:202), 図 204 (配列番号:204), 図 206 (配列番号:206), 図 208 (配列番号:208), 図 210 (配列番号:210), 図 212 (配列番号:212), 図 214 (配列番号:214), 図 216 (配列番号:216), 図 218 (配列番号:218), 図 220 (配列番号:220), 図 222 (配列番号:222), 図 224 (配列番号:224), 図 226 (配列番号:226), 図 228 (配列番号:228), 図 230 (配列番号:230), 図 232 (配列番号:232), 図 234 (配列番号:234), 図 236 (配列番号:236), 図 238 (配列番号:238), 図 240 (配列番号:240), 図 242 (配列番号:242), 図 244 (配列番号:244), 図 246 (配列番号:246), 図 248 (配列番号:248), 図 250 (配列番号:250), 図 252 (配列番号:252), 図 254 (配列番号:254), 図 256 (配列番号:256), 図 258 (配列番号:258), 図 260 (配列番号:260), 図 262 (配列番号:262), 図 264 (配列番号:264), 図 266 (配列番号:266), 図 268 (配列番号:268), 図 272 (配列番号:272), 図 274 (配列番号:274), 図 276 (配列番号:276), 図 278 (配列番号:278), 図 280 (配列番号:280),  図 282 (配列番号:282), 図 284 (配列番号:284), 図 286 (配列番号:286), 図 288 (配列番号:288), 図 290 (配列番号:290), 図 292 (配列番号:292), 図 294 (配列番号:294), 図 296 (配列番号:296), 図 298 (配列番号:298), 図 300 (配列番号:300), 図 302 (配列番号:302), 図 304 (配列番号:304), 図 306 (配列番号:306), 図 308 (配列番号:308), 図 310 (配列番号:310), 図 312 (配列番号:312), 図 314 (配列番号:314), 図 316 (配列番号:316), 図 318 (配列番号:318), 図 320 (配列番号:320), 図 322 (配列番号:322), 図 324 (配列番号:324), 図 326 (配列番号:326), 図 328 (配列番号:328), 図 330 (配列番号:330), 図 332 (配列番号:332), 図 334 (配列番号:334), 図 336 (配列番号:336), 図 338 (配列番号:338), 図 340 (配列番号:340), 図 342 (配列番号:342), 図 344 (配列番号:344), 図 346 (配列番号:346), 図 348 (配列番号:348), 図 350 (配列番号:350), 図 352 (配列番号:352), 図 354 (配列番号:354), 図 356 (配列番号:356), 図 358 (配列番号:358), 図 360 (配列番号:360), 図 362 (配列番号:362), 図 364 (配列番号:364), 図 366 (配列番号:366), 図 368 (配列番号:368), 図 370 (配列番号:370), 図 372 (配列番号:372), 図 374 (配列番号:374), 図 376 (配列番号:376), 図 378 (配列番号:378), 図 380 (配列番号:380),  図 382 (配列番号:382), 図 384 (配列番号:384), 図 386 (配列番号:386), 図 388 (配列番号:388), 図 390 (配列番号:390), 図 392 (配列番号:392), 図 394 (配列番号:394), 図 396 (配列番号:396), 図 398 (配列番号:398), 図 400 (配列番号:400), 図 402 (配列番号:402), 図 404 (配列番号:404), 図 406 (配列番号:406), 図 408 (配列番号:408), 図 410 (配列番号:410), 図 412 (配列番号:412), 図 414 (配列番号:414), 図 416 (配列番号:416), 図 418 (配列番号:418), 図 420 (配列番号:420), 図 422 (配列番号:422), 図 424 (配列番号:424), 図 426 (配列番号:426), 図 428 (配列番号:428), 図 430 (配列番号:430), 図 432 (配列番号:432), 図 434 (配列番号:434), 図 436 (配列番号:436), 図 438 (配列番号:438), 図 440 (配列番号:440), 図 442 (配列番号:442), 図 444 (配列番号:444), 図 446 (配列番号:446), 図 448 (配列番号:448), 図 450 (配列番号:450), 図 452 (配列番号:452), 図 454 (配列番号:454), 図 456 (配列番号:456), 図 458 (配列番号:458), 図 460 (配列番号:460), 図 462 (配列番号:462), 図 464 (配列番号:464), 図 466 (配列番号:466), 図 468 (配列番号:468), 図 470 (配列番号:470), 図 472 (配列番号:472), 図 474 (配列番号:474), 図 476 (配列番号:476), 図 478 (配列番号:478), 図 480 (配列番号:480),  図 482 (配列番号:482), 図 484 (配列番号:484), 図 486 (配列番号:486), 図 488 (配列番号:488), 図 490 (配列番号:490), 図 492 (配列番号:492), 図 494 (配列番号:494), 図 496 (配列番号:496), 図 498 (配列番号:498), 図 500 (配列番号:500), 図 502 (配列番号:502), 図 504 (配列番号:504), 図 506 (配列番号:506), 図 508 (配列番号:508), 図 510 (配列番号:510), 図 512 (配列番号:512), 図 514 (配列番号:514), 図 516 (配列番号:516), 図 518 (配列番号:518), 図 520 (配列番号:520), 図 522 (配列番号:522), 図 524 (配列番号:524), 図 526 (配列番号:526), 図 528 (配列番号:528), 図 530 (配列番号:530), 図 532 (配列番号:532), 図 534 (配列番号:534), 図 536 (配列番号:536), 図 538 (配列番号:538), 図 540 (配列番号:540), 図 542 (配列番号:542), 図 544 (配列番号:544), 図 546 (配列番号:546), 図 548 (配列番号:548), 図 550 (配列番号:550), 図 552 (配列番号:552), 図 554 (配列番号:554), 図 556 (配列番号:556), 図 558 (配列番号:558), 図 560 (配列番号:560), 図 562 (配列番号:562), 図 564 (配列番号:564), 図 566 (配列番号:566), 図 568 (配列番号:568), 図 570 (配列番号:570), 図 572 (配列番号:572), 図 574 (配列番号:574), 図 576 (配列番号:576), 図 578 (配列番号:578), 図 580 (配列番号:580), 図 582 (配列番号:582), 図 584 (配列番号:584), 図 586 (配列番号:586), 図 588 (配列番号:588), 図 590 (配列番号:590), 図 592 (��列番号:592), 図 594 (配列番号:594), 図 596 (配列番号:596), 図 598 (配列番号:598), 図 600 (配列番号:600), 図 602 (配列番号:602), 図 604 (配列番号:604), 図 606 (配列番号:606), 図 608 (配列番号:608), 又は 図 610 (配列番号:610)に示されるポリペプチドのアミノ酸配列；
(b)連結するシグナルペプチドを有する図 2 (配列番号:2), 図 4 (配列番号:4), 図 6 (配列番号:6), 図 8 (配列番号:8), 図 10 (配列番号:10), 図 12 (配列番号:12), 図 14 (配列番号:14), 図 16 (配列番号:16), 図 18 (配列番号:18), 図 20 (配列番号:20), 図 22 (配列番号:22), 図 24 (配列番号:24), 図 26 (配列番号:26), 図 28 (配列番号:28), 図 30 (配列番号:30), 図 32 (配列番号:32), 図 34 (配列番号:34), 図 36 (配列番号:36), 図 38 (配列番号:38), 図 40 (配列番号:40), 図 42 (配列番号:42), 図 44 (配列番号:44), 図 46 (配列番号:46), 図 48 (配列番号:48), 図 50 (配列番号:50), 図 52 (配列番号:52), 図 54 (配列番号:54), 図 56 (配列番号:56), 図 58 (配列番号:58), 図 60 (配列番号:60), 図 62 (配列番号:62), 図 64 (配列番号:64), 図 66 (配列番号:66), 図 68 (配列番号:68), 図 70 (配列番号:70), 図 72 (配列番号:72), 図 74 (配列番号:74), 図 76 (配列番号:76), 図 78 (配列番号:78), 図 80 (配列番号:80),  図 82 (配列番号:82), 図 84 (配列番号:84), 図 86 (配列番号:86), 図 88 (配列番号:88), 図 90 (配列番号:90), 図 92 (配列番号:92), 図 94 (配列番号:94), 図 96 (配列番号:96), 図 98 (配列番号:98), 図 100 (配列番号:100), 図 102 (配列番号:102), 図 104 (配列番号:104), 図 106 (配列番号:106), 図 108 (配列番号:108), 図 110 (配列番号:110), 図 112 (配列番号:112), 図 114 (配列番号:114), 図 116 (配列番号:116), 図 118 (配列番号:118), 図 120 (配列番号:120), 図 122 (配列番号:122), 図 124 (配列番号:124), 図 126 (配列番号:126), 図 128 (配列番号:128), 図 130 (配列番号:130), 図 132 (配列番号:132), 図 134 (配列番号:134), 図 136 (配列番号:136), 図 138 (配列番号:138), 図 140 (配列番号:140), 図 142 (配列番号:142), 図 144 (配列番号:144), 図 146 (配列番号:146), 図 148 (配列番号:148), 図 150 (配列番号:150), 図 152 (配列番号:152), 図 154 (配列番号:154), 図 156 (配列番号:156), 図 158 (配列番号:158), 図 160 (配列番号:160), 図 162 (配列番号:162), 図 164 (配列番号:164), 図 166 (配列番号:166), 図 168 (配列番号:168), 図 170 (配列番号:170), 図 172 (配列番号:172), 図 174 (配列番号:174), 図 176 (配列番号:176), 図 178 (配列番号:178), 図 180 (配列番号:180),  図 182 (配列番号:182), 図 184 (配列番号:184), 図 186 (配列番号:186), 図 188 (配列番号:188), 図 190 (配列番号:190), 図 192 (配列番号:192), 図 194 (配列番号:194), 図 196 (配列番号:196), 図 198 (配列番号:198), 図 200 (配列番号:200), 図 202 (配列番号:202), 図 204 (配列番号:204), 図 206 (配列番号:206), 図 208 (配列番号:208), 図 210 (配列番号:210), 図 212 (配列番号:212), 図 214 (配列番号:214), 図 216 (配列番号:216), 図 218 (配列番号:218), 図 220 (配列番号:220), 図 222 (配列番号:222), 図 224 (配列番号:224), 図 226 (配列番号:226), 図 228 (配列番号:228), 図 230 (配列番号:230), 図 232 (配列番号:232), 図 234 (配列番号:234), 図 236 (配列番号:236), 図 238 (配列番号:238), 図 240 (配列番号:240), 図 242 (配列番号:242), 図 244 (配列番号:244), 図 246 (配列番号:246), 図 248 (配列番号:248), 図 250 (配列番号:250), 図 252 (配列番号:252), 図 254 (配列番号:254), 図 256 (配列番号:256), 図 258 (配列番号:258), 図 260 (配列番号:260), 図 262 (配列番号:262), 図 264 (配列番号:264), 図 266 (配列番号:266), 図 268 (配列番号:268), 図 272 (配列番号:272), 図 274 (配列番号:274), 図 276 (配列番号:276), 図 278 (配列番号:278), 図 280 (配列番号:280),  図 282 (配列番号:282), 図 284 (配列番号:284), 図 286 (配列番号:286), 図 288 (配列番号:288), 図 290 (配列番号:290), 図 292 (配列番号:292), 図 294 (配列番号:294), 図 296 (配列番号:296), 図 298 (配列番号:298), 図 300 (配列番号:300), 図 302 (配列番号:302), 図 304 (配列番号:304), 図 306 (配列番号:306), 図 308 (配列番号:308), 図 310 (配列番号:310), 図 312 (配列番号:312), 図 314 (配列番号:314), 図 316 (配列番号:316), 図 318 (配列番号:318), 図 320 (配列番号:320), 図 322 (配列番号:322), 図 324 (配列番号:324), 図 326 (配列番号:326), 図 328 (配列番号:328), 図 330 (配列番号:330), 図 332 (配列番号:332), 図 334 (配列番号:334), 図 336 (配列番号:336), 図 338 (配列番号:338), 図 340 (配列番号:340), 図 342 (配列番号:342), 図 344 (配列番号:344), 図 346 (配列番号:346), 図 348 (配列番号:348), 図 350 (配列番号:350), 図 352 (配列番号:352), 図 354 (配列番号:354), 図 356 (配列番号:356), 図 358 (配列番号:358), 図 360 (配列番号:360), 図 362 (配列番号:362), 図 364 (配列番号:364), 図 366 (配列番号:366), 図 368 (配列番号:368), 図 370 (配列番号:370), 図 372 (配列番号:372), 図 374 (配列番号:374), 図 376 (配列番号:376), 図 378 (配列番号:378), 図 380 (配列番号:380),  図 382 (配列番号:382), 図 384 (配列番号:384), 図 386 (配列番号:386), 図 388 (配列番号:388), 図 390 (配列番号:390), 図 392 (配列番号:392), 図 394 (配列番号:394), 図 396 (配列番号:396), 図 398 (配列番号:398), 図 400 (配列番号:400), 図 402 (配列番号:402), 図 404 (配列番号:404), 図 406 (配列番号:406), 図 408 (配列番号:408), 図 410 (配列番号:410), 図 412 (配列番号:412), 図 414 (配列番号:414), 図 416 (配列番号:416), 図 418 (配列番号:418), 図 420 (配列番号:420), 図 422 (配列番号:422), 図 424 (配列番号:424), 図 426 (配列番号:426), 図 428 (配列番号:428), 図 430 (配列番号:430), 図 432 (配列番号:432), 図 434 (配列番号:434), 図 436 (配列番号:436), 図 438 (配列番号:438), 図 440 (配列番号:440), 図 442 (配列番号:442), 図 444 (配列番号:444), 図 446 (配列番号:446), 図 448 (配列番号:448), 図 450 (配列番号:450), 図 452 (配列番号:452), 図 454 (配列番号:454), 図 456 (配列番号:456), 図 458 (配列番号:458), 図 460 (配列番号:460), 図 462 (配列番号:462), 図 464 (配列番号:464), 図 466 (配列番号:466), 図 468 (配列番号:468), 図 470 (配列番号:470), 図 472 (配列番号:472), 図 474 (配列番号:474), 図 476 (配列番号:476), 図 478 (配列番号:478), 図 480 (配列番号:480),  図 482 (配列番号:482), 図 484 (配列番号:484), 図 486 (配列番号:486), 図 488 (配列番号:488), 図 490 (配列番号:490), 図 492 (配列番号:492), 図 494 (配列番号:494), 図 496 (配列番号:496), 図 498 (配列番号:498), 図 500 (配列番号:500), 図 502 (配列番号:502), 図 504 (配列番号:504), 図 506 (配列番号:506), 図 508 (配列番号:508), 図 510 (配列番号:510), 図 512 (配列番号:512), 図 514 (配列番号:514), 図 516 (配列番号:516), 図 518 (配列番号:518), 図 520 (配列番号:520), 図 522 (配列番号:522), 図 524 (配列番号:524), 図 526 (配列番号:526), 図 528 (配列番号:528), 図 530 (配列番号:530), 図 532 (配列番号:532), 図 534 (配列番号:534), 図 536 (配列番号:536), 図 538 (配列番号:538), 図 540 (配列番号:540), 図 542 (配列番号:542), 図 544 (配列番号:544), 図 546 (配列番号:546), 図 548 (配列番号:548), 図 550 (配列番号:550), 図 552 (配列番号:552), 図 554 (配列番号:554), 図 556 (配列番号:556), 図 558 (配列番号:558), 図 560 (配列番号:560), 図 562 (配列番号:562), 図 564 (配列番号:564), 図 566 (配列番号:566), 図 568 (配列番号:568), 図 570 (配列番号:570), 図 572 (配列番号:572), 図 574 (配列番号:574), 図 576 (配列番号:576), 図 578 (配列番号:578), 図 580 (配列番号:580), 図 582 (配列番号:582), 図 584 (配列番号:584), 図 586 (配列番号:586), 図 588 (配列番号:588), 図 590 (配列番号:590), 図 592 (配列番号:592), 図 594 (配列番号:594), 図 596 (配列番号:596), 図 598 (配列番号:598), 図 600 (配列番号:600), 図 602 (配列番号:602), 図 604 (配列番号:604), 図 606 (配列番号:606), 図 608 (配列番号:608), 又は 図 610 (配列番号:610)に示されるポリペプチドの細胞外ドメインのアミノ酸配列；又は 
(c) 連結するシグナルペプチドを欠く図 2 (配列番号:2), 図 4 (配列番号:4), 図 6 (配列番号:6), 図 8 (配列番号:8), 図 10 (配列番号:10), 図 12 (配列番号:12), 図 14 (配列番号:14), 図 16 (配列番号:16), 図 18 (配列番号:18), 図 20 (配列番号:20), 図 22 (配列番号:22), 図 24 (配列番号:24), 図 26 (配列番号:26), 図 28 (配列番号:28), 図 30 (配列番号:30), 図 32 (配列番号:32), 図 34 (配列番号:34), 図 36 (配列番号:36), 図 38 (配列番号:38), 図 40 (配列番号:40), 図 42 (配列番号:42), 図 44 (配列番号:44), 図 46 (配列番号:46), 図 48 (配列番号:48), 図 50 (配列番号:50), 図 52 (配列番号:52), 図 54 (配列番号:54), 図 56 (配列番号:56), 図 58 (配列番号:58), 図 60 (配列番号:60), 図 62 (配列番号:62), 図 64 (配列番号:64), 図 66 (配列番号:66), 図 68 (配列番号:68), 図 70 (配列番号:70), 図 72 (配列番号:72), 図 74 (配列番号:74), 図 76 (配列番号:76), 図 78 (配列番号:78), 図 80 (配列番号:80),  図 82 (配列番号:82), 図 84 (配列番号:84), 図 86 (配列番号:86), 図 88 (配列番号:88), 図 90 (配列番号:90), 図 92 (配列番号:92), 図 94 (配列番号:94), 図 96 (配列番号:96), 図 98 (配列番号:98), 図 100 (配列番号:100), 図 102 (配列番号:102), 図 104 (配列番号:104), 図 106 (配列番号:106), 図 108 (配列番号:108), 図 110 (配列番号:110), 図 112 (配列番号:112), 図 114 (配列番号:114), 図 116 (配列番号:116), 図 118 (配列番号:118), 図 120 (配列番号:120), 図 122 (配列番号:122), 図 124 (配列番号:124), 図 126 (配列番号:126), 図 128 (配列番号:128), 図 130 (配列番号:130), 図 132 (配列番号:132), 図 134 (配列番号:134), 図 136 (配列番号:136), 図 138 (配列番号:138), 図 140 (配列番号:140), 図 142 (配列番号:142), 図 144 (配列番号:144), 図 146 (配列番号:146), 図 148 (配列番号:148), 図 150 (配列番号:150), 図 152 (配列番号:152), 図 154 (配列番号:154), 図 156 (配列番号:156), 図 158 (配列番号:158), 図 160 (配列番号:160), 図 162 (配列番号:162), 図 164 (配列番号:164), 図 166 (配列番号:166), 図 168 (配列番号:168), 図 170 (配列番号:170), 図 172 (配列番号:172), 図 174 (配列番号:174), 図 176 (配列番号:176), 図 178 (配列番号:178), 図 180 (配列番号:180),  図 182 (配列番号:182), 図 184 (配列番号:184), 図 186 (配列番号:186), 図 188 (配列番号:188), 図 190 (配列番号:190), 図 192 (配列番号:192), 図 194 (配列番号:194), 図 196 (配列番号:196), 図 198 (配列番号:198), 図 200 (配列番号:200), 図 202 (配列番号:202), 図 204 (配列番号:204), 図 206 (配列番号:206), 図 208 (配列番号:208), 図 210 (配列番号:210), 図 212 (配列番号:212), 図 214 (配列番号:214), 図 216 (配列番号:216), 図 218 (配列番号:218), 図 220 (配列番号:220), 図 222 (配列番号:222), 図 224 (配列番号:224), 図 226 (配列番号:226), 図 228 (配列番号:228), 図 230 (配列番号:230), 図 232 (配列番号:232), 図 234 (配列番号:234), 図 236 (配列番号:236), 図 238 (配列番号:238), 図 240 (配列番号:240), 図 242 (配列番号:242), 図 244 (配列番号:244), 図 246 (配列番号:246), 図 248 (配列番号:248), 図 250 (配列番号:250), 図 252 (配列番号:252), 図 254 (配列番号:254), 図 256 (配列番号:256), 図 258 (配列番号:258), 図 260 (配列番号:260), 図 262 (配列番号:262), 図 264 (配列番号:264), 図 266 (配列番号:266), 図 268 (配列番号:268), 図 272 (配列番号:272), 図 274 (配列番号:274), 図 276 (配列番号:276), 図 278 (配列番号:278), 図 280 (配列番号:280),  図 282 (配列番号:282), 図 284 (配列番号:284), 図 286 (配列番号:286), 図 288 (配列番号:288), 図 290 (配列番号:290), 図 292 (配列番号:292), 図 294 (配列番号:294), 図 296 (配列番号:296), 図 298 (配列番号:298), 図 300 (配列番号:300), 図 302 (配列番号:302), 図 304 (配列番号:304), 図 306 (配列番号:306), 図 308 (配列番号:308), 図 310 (配列番号:310), 図 312 (配列番号:312), 図 314 (配列番号:314), 図 316 (配列番号:316), 図 318 (配列番号:318), 図 320 (配列番号:320), 図 322 (配列番号:322), 図 324 (配列番号:324), 図 326 (配列番号:326), 図 328 (配列番号:328), 図 330 (配列番号:330), 図 332 (配列番号:332), 図 334 (配列番号:334), 図 336 (配列番号:336), 図 338 (配列番号:338), 図 340 (配列番号:340), 図 342 (配列番号:342), 図 344 (配列番号:344), 図 346 (配列番号:346), 図 348 (配列番号:348), 図 350 (配列番号:350), 図 352 (配列番号:352), 図 354 (配列番号:354), 図 356 (配列番号:356), 図 358 (配列番号:358), 図 360 (配列番号:360), 図 362 (配列番号:362), 図 364 (配列番号:364), 図 366 (配列番号:366), 図 368 (配列番号:368), 図 370 (配列番号:370), 図 372 (配列番号:372), 図 374 (配列番号:374), 図 376 (配列番号:376), 図 378 (配列番号:378), 図 380 (配列番号:380),  図 382 (配列番号:382), 図 384 (配列番号:384), 図 386 (配列番号:386), 図 388 (配列番号:388), 図 390 (配列番号:390), 図 392 (配列番号:392), 図 394 (配列番号:394), 図 396 (配列番号:396), 図 398 (配列番号:398), 図 400 (配列番号:400), 図 402 (配列番号:402), 図 404 (配列番号:404), 図 406 (配列番号:406), 図 408 (配列番号:408), 図 410 (配列番号:410), 図 412 (配列番号:412), 図 414 (配列番号:414), 図 416 (配列番号:416), 図 418 (配列番号:418), 図 420 (配列番号:420), 図 422 (配列番号:422), 図 424 (配列番号:424), 図 426 (配列番号:426), 図 428 (配列番号:428), 図 430 (配列番号:430), 図 432 (配列番号:432), 図 434 (配列番号:434), 図 436 (配列番号:436), 図 438 (配列番号:438), 図 440 (配列番号:440), 図 442 (配列番号:442), 図 444 (配列番号:444), 図 446 (配列番号:446), 図 448 (配列番号:448), 図 450 (配列番号:450), 図 452 (配列番号:452), 図 454 (配列番号:454), 図 456 (配列番号:456), 図 458 (配列番号:458), 図 460 (配列番号:460), 図 462 (配列番号:462), 図 464 (配列番号:464), 図 466 (配列番号:466), 図 468 (配列番号:468), 図 470 (配列番号:470), 図 472 (配列番号:472), 図 474 (配列番号:474), 図 476 (配列番号:476), 図 478 (配列番号:478), 図 480 (配列番号:480),  図 482 (配列番号:482), 図 484 (配列番号:484), 図 486 (配列番号:486), 図 488 (配列番号:488), 図 490 (配列番号:490), 図 492 (配列番号:492), 図 494 (配列番号:494), 図 496 (配列番号:496), 図 498 (配列番号:498), 図 500 (配列番号:500), 図 502 (配列番号:502), 図 504 (配列番号:504), 図 506 (配列番号:506), 図 508 (配列番号:508), 図 510 (配列番号:510), 図 512 (配列番号:512), 図 514 (配列番号:514), 図 516 (配列番号:516), 図 518 (配列番号:518), 図 520 (配列番号:520), 図 522 (配列番号:522), 図 524 (配列番号:524), 図 526 (配列番号:526), 図 528 (配列番号:528), 図 530 (配列番号:530), 図 532 (配列番号:532), 図 534 (配列番号:534), 図 536 (配列番号:536), 図 538 (配列番号:538), 図 540 (配列番号:540), 図 542 (配列番号:542), 図 544 (配列番号:544), 図 546 (配列番号:546), 図 548 (配列番号:548), 図 550 (配列番号:550), 図 552 (配列番号:552), 図 554 (配列番号:554), 図 556 (配列番号:556), 図 558 (配列番号:558), 図 560 (配列番号:560), 図 562 (配列番号:562), 図 564 (配列番号:564), 図 566 (配列番号:566), 図 568 (配列番号:568), 図 570 (配列番号:570), 図 572 (配列番号:572), 図 574 (配列番号:574), 図 576 (配列番号:576), 図 578 (配列番号:578), 図 580 (配列番号:580), 図 582 (配列番号:582), 図 584 (配列番号:584), 図 586 (配列番号:586), 図 588 (配列番号:588), 図 590 (配列番号:590), 図 592 (���列番号:592), 図 594 (配列番号:594), 図 596 (配列番号:596), 図 598 (配列番号:598), 図 600 (配列番号:600), 図 602 (配列番号:602), 図 604 (配列番号:604), 図 606 (配列番号:606), 図 608 (配列番号:608), 又は 図 610 (配列番号:610)に示されるポリペプチドの細胞外ドメインのアミノ酸配列：
に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する単離されたポリペプチド。
【請求項２０】
ヒトの血液からのＴＮＦ-αの放出を促進するための方法であって、ＰＲＯ１０７９、ＰＲＯ８２７、ＰＲＯ７９１、ＰＲＯ１１３１、ＰＲＯ１３１６、ＰＲＯ１１８３、ＰＲＯ１３４３、ＰＲＯ１７６０、ＰＲＯ１５６７又はＰＲＯ４３３３ポリペプチドと前記血液とを接触させて、前記血液からのＴＮＦ-αの放出を促進することを含む方法。
【請求項２１】
軟骨細胞の増殖又は分化を促進するための方法であって、ＰＲＯ６０２９ポリペプチドと前記細胞とを接触させて、前記細胞の増殖又は分化を促進することを含む方法。
【請求項２２】
哺乳動物における腫瘍の存在を検出する方法であって、(a)前記哺乳動物から得た試験試料及び(b)同細胞型の正常細胞のコントロール試料における表８に示される任意のＰＲＯポリペプチドの発現のレベルを比較することを含み、試験試料の前記ＰＲＯポリペプチドの発現がコントロール試料に比較して高いレベルであることによって前記哺乳動物における腫瘍の存在が示される方法。
【請求項２３】
前記腫瘍が副腎腫瘍、肺腫瘍、大腸腫瘍、乳腫瘍、前立腺腫瘍、直腸腫瘍、頸部腫瘍又は肝腫瘍である、請求項２２の方法。
【請求項２４】
添付図面に示されるヌクレオチド配列の何れかから誘導されるオリゴヌクレオチドプローブ。  
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
(発明の分野)
本発明は、一般的に、新規なＤＮＡの同定及び単離、及び新規なポリペプチドの組換え生産に関する。
【０００２】
(発明の背景)
細胞外タンパク質は、特に、多細胞生物の形成、分化及び維持において重要な役割を担っている。多くの個々の細胞の運命、例えば増殖、遊走、分化又は他の細胞との相互作用は、典型的には、他の細胞及び／又は直近の環境から受け取る情報に支配される。この情報は、しばしば分泌ポリペプチド(例えば、分裂促進因子、生存因子、細胞障害性因子、分化因子、神経ペプチド、及びホルモン)により伝達され、これが、翻って多様な細胞レセプター又は膜結合タンパク質により受け取られ解釈される。これらの分泌ポリペプチド又はシグナル分子は、通常は細胞分泌経路を通過して、細胞外環境におけるその作用部位に到達する。
分泌タンパク質は、製薬、診断、バイオセンサー及びバイオリアクターを含む、様々な産業上の利用性を有している。血栓溶解剤、インターフェロン、インターロイキン、エリスロポエチン、コロニー刺激因子、及び種々の他のサイトカインのような、現在入手可能な大抵のタンパク質薬物は分泌タンパク質である。また、膜タンパク質であるこれらレセプターは、治療又は診断薬剤としての潜在力を有する。新規な未変性分泌タンパク質を同定する努力が産業界及び学術界の両方によってなされている。多くの努力が新規な分泌タンパク質のコード配列を同定するために哺乳類組換えＤＮＡライブラリーのスクリーニングに注がれている。スクリーニング方法及び技術の例は文献に記載されている[例えば、Kleinら, Proc. Natl. Acad. Sci. 93;7108-7113(1996)；米国特許第５，５３６，６３７号を参照されたい]。
【０００３】
膜結合タンパク質及びレセプターは、多細胞生物の形成、分化及び維持において重要な役割を担っている。多くの個々の細胞の運命、例えば増殖、遊走、分化又は他の細胞との相互作用は、典型的には他の細胞及び／又は直近の環境から受け取られる情報に支配される。この情報は、しばしば分泌ポリペプチド(例えば、分裂促進因子、生存因子、細胞障害性因子、分化因子、神経ペプチド、及びホルモン)により伝達され、これが次に多様な細胞レセプター又は膜結合タンパク質により受け取られ解釈される。このような膜結合タンパク質及び細胞レセプターは、これらに限定されるものではないが、サイトカインレセプター、レセプターキナーゼ、レセプターホスファターゼ、細胞-細胞間相互作用に関与するレセプター、及びセレクチン及びインテグリンのような細胞接着分子を含む。例えば、細胞の増殖及び分化を調節するシグナルの伝達は、様々な細胞タンパク質のリン酸化により部分的に調節される。そのプロセスを触媒する酵素であるプロテインチロシンキナーゼはまた成長因子レセプターとしても作用する。具体例には、繊維芽細胞増殖因子及び神経成長因子レセプターが含まれる。
膜結合タンパク質及びレセプター分子は、製薬及び診断薬を含む、様々な産業上の利用性を有している。例えば、レセプターイムノアドヘシンはレセプター-リガンド間相互作用を阻止する治療薬として使用することができる。膜結合タンパク質はまた、関連するレセプター／リガンド間相互作用の可能性のあるペプチド又は小分子インヒビターをスクリーニングするために使用することもできる。
新規な天然のレセプター又は膜結合タンパク質を同定するための努力が産業界と学術界の双方によってなされている。多くの努力が、新規なレセプター又は膜結合タンパク質のコード配列を同定するために、哺乳動物の組換えＤＮＡライブラリーのスクリーニングに注がれている。
【０００４】
(発明の概要)
一実施態様では、本発明は、ＰＲＯポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子を提供する。
一側面では、単離された核酸分子は、（ａ）ここに開示された全長アミノ酸配列、ここに開示されたシグナルペプチドを欠くアミノ酸配列、シグナルペプチドを伴うか伴わないここに開示した膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン又はここに開示された全長アミノ酸配列の任意の他の特に定められた断片を有するＰＲＯポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の補体に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【０００５】
他の側面では、単離された核酸分子は、（ａ）ここに開示された全長ＰＲＯポリペプチドｃＤＮＡのコード配列、ここに開示されたシグナルペプチドを欠くＰＲＯポリペプチドＤＮＡのコード配列、シグナルペプチドを伴うか伴わないここに開示した膜貫通ＰＲＯポリペプチドの細胞外ドメインのコード配列又はここに開示された全長アミノ酸配列の任意の他の特に定められた断片のコード配列を含むＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の補体に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有しているヌクレオチド配列を含んでなる。
【０００６】
さらなる側面では、本発明は、（ａ）ここに開示されたＡＴＴＣに寄託した任意のヒトタンパク質ｃＤＮＡによってコードされている同じ成熟ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の補体に対して、少なくとも約８０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有しているヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子に関する。
【０００７】
本発明の他の側面は、膜貫通ドメインが欠失又は膜貫通ドメインが不活性化のいずれかのＰＲＯポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、或いはそのようなコード化ヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子を提供し、そのようなポリペプチドの膜貫通ドメインはここで開示される。従って、ここで記載されたＰＲＯポリペプチドの可溶性細胞外ドメインが考慮される。
【０００８】
他の実施態様はＰＲＯポリペプチドコード化配列の断片、又はその補体に向けられ、例えば、場合によっては抗ＰＲＯ抗体に対する結合部位を含むポリペプチドをコードするＰＲＯポリペプチドのコード化断片のハイブリダイゼーションプローブとして、又はアンチセンスオリゴヌクレオチドプローブとしての用途が見いだされる。このような核酸断片は、通常は少なくとも約２０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約３０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約４０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約５０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約６０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約７０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約８０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約９０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１１０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１２０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１３０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１４０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１５０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１６０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１７０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１８０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１９０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約２００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約２５０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約３００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約３５０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約４００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約４５０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約５００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約６００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約７００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約８００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約９００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１０００ヌクレオチド長であり、ここで「約」という語の内容は参照する長さのプラス又はマイナス１０％のヌクレオチド配列長を指すことを意味する。ＰＲＯポリペプチドコード化ヌクレオチド配列の新規な断片は、多くの良く知られた配列アラインメントプログラムの任意のものを用いてＰＲＯポリペプチドコード化ヌクレオチド配列と他の公知のヌクレオチド配列とを整列させ、いずれのＰＲＯポリペプチドコード化ヌクレオチド配列断片が新規であるかを決定することにより、日常的な手法で同定してもよい。このようなＰＲＯポリペプチドコード化ヌクレオチド配列は、全てここで考慮される。また、これらのヌクレオチド分子断片、好ましくは抗ＰＲＯ抗体に対する結合部位を含むＰＲＯポリペプチド断片によってコードされるＰＲＯポリペプチド断片も考慮される。
【０００９】
その他の実施態様では、本発明は、上記で特定された単離された核酸配列の任意のものにコードされる単離されたＰＲＯポリペプチドを提供する。
或る側面では、本発明は、ここに開示されている全長アミノ酸配列、ここに開示されているシグナルペプチドを欠くアミノ酸配列、ここに開示されているシグナルペプチド有又は無の膜貫通タンパク質の細胞外ドメイン、又はここに開示されている全長アミノ酸配列の特に同定された他の断片を持つＰＲＯポリペプチドに対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、そして、あるいは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる単離されたＰＲＯポリペプチドに関する。
【００１０】
さらなる態様では、本発明は、ここに開示されているＡＴＣＣに寄託した任意のヒトタンパク質ｃＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、そして、あるいは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる単離されたＰＲＯポリペプチドに関する。
【００１１】
特別な側面では、本発明は、Ｎ-末端シグナル配列及び／又は開始メチオニンを持たず、上記したようなアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列によってコードされる単離されたＰＲＯポリペプチドを提供する。これらを製造する方法もここに記載され、これらの方法は、適当なコード化核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞をＰＲＯポリペプチドの発現に適した条件下で培養し、培養培地からＰＲＯポリペプチドを回収することを含む。
本発明の他の態様は、膜貫通ドメインが欠失又は膜貫通ドメインが不活性化のいずれかの単離されたＰＲＯポリペプチドを提供する。これを製造する方法もここに記載され、その方法は、適当なコード化核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞をＰＲＯポリペプチドの発現に適した条件下で培養し、細胞培地からＰＲＯポリペプチドを回収することを含む。
【００１２】
さらに他の実施態様では、本発明は、ここで同定される天然ＰＲＯポリペプチドのアゴニスト及びアンタゴニストに関する。特別な実施態様では、アゴニスト又はアンタゴニストは抗ＰＲＯ抗体又は小分子である。
さらなる実施態様では、本発明は、ＰＲＯポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストを同定する方法に関し、それは、ＰＲＯポリペプチドを候補分子と接触させ、前記ＰＲＯポリペプチドによって媒介される生物学的活性をモニターすることを含む。好ましくは、ＰＲＯポリペプチドは天然ＰＲＯポリペプチドである。
またさらなる実施態様では、本発明は、ＰＲＯポリペプチド、又はここに記載するＰＲＯポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニスト、又は抗ＰＲＯ抗体を担体と組み合わせて含む組成物に関する。場合によっては、担体は製薬的に許容される担体である。
【００１３】
本発明のその他の実施態様は、ＰＲＯポリペプチド、又は上記したようなそのアゴニスト又はアンタゴニスト、又は抗ＰＲＯ抗体の、ＰＲＯポリペプチド、そのアゴニスト又はアンタゴニスト又は抗ＰＲＯ抗体に反応性のある症状の治療に有用な医薬の調製のための使用に向けられる。
本発明のさらなる実施態様では、本発明は、ここに記載の任意のポリペプチドをコードするＤＮＡを含むベクターを提供する。任意のそのようなベクターを含む宿主細胞も提供される。例としては、宿主細胞はＣＨＯ細胞、大腸菌、又は酵母であってもよい。ここに記載の任意のポリペプチドの製造方法がさらに提供されており、それは、宿主細胞を所望のポリペプチドの発現に適した条件下で培養し、細胞培地から所望のポリペプチドを回収することを含む。
【００１４】
他の実施態様では、本発明は、異種ポリペプチド又はアミノ酸配列に融合した、ここに記載の任意のポリペプチドを含んでなるキメラ分子を提供する。そのようなキメラ分子の例は、エピトープタグ配列又は免疫グロブリンのＦｃ領域に融合したここに記載の任意のポリペプチドを含む。
その他の実施態様では、本発明は、上記又は下記のポリペプチドの任意のものに特異的に結合する抗体を提供する。場合によっては、抗体はモノクローナル抗体、ヒト化抗体、抗体断片又は一本鎖抗体である。
さらに他の実施態様では、本発明は、ゲノム及びｃＤＮＡヌクレオチド配列又はアンチセンスプローブの単離に有用なオリゴヌクレオチドプローブを提供し、それらのプローブは上記又は下記のヌクレオチド配列の任意のものから誘導されうる。
さらに他の実施態様では、本発明は、下記の実施例に示される機能的生物学的アッセイデータに基づく種々の利用についての本発明のＰＲＯポリペプチドの利用方法に関する。
【００１５】
（好適な実施態様の詳細な説明）
Ｉ．定義
ここで使用される際の「ＰＲＯポリペプチド」及び「ＰＲＯ」という用語は、直後に数値符号がある場合に種々のポリペプチドを指し、完全な符号（すなはち、ＰＲＯ／番号）は、ここに記載する特定のポリペプチド配列を意味する。「数字」がここで使用される実際の数値符号である、ここで使用される「ＰＲＯ／番号ポリペプチド」及び「ＰＲＯ／番号」という用語は、天然配列ポリペプチド及び変異体（ここで更に詳細に定義する）を含む。ここで記載されているＰＲＯポリペプチドは、ヒト組織型又は他の供給源といった種々の供給源から単離してもよく、組換え又は合成方法によって調製してもよい。「ＰＲＯポリペプチド」という用語は、ここで開示されている各個々のＰＲＯ／番号ポリペプチドに指す。「ＰＲＯポリペプチド」を指すこの明細書中の全ての開示は、各ポリペプチドを個別にも組み合わせとしても言及する。例えば、調製の、精製の、誘導の、抗体の形成、投与の、含有する組成物、疾患の治療、などの記述は、本発明の各ポリペプチドに個別に関係する。また、「ＰＲＯポリペプチド」という用語は、ここに開示されているＰＲＯ／番号ポリペプチドの変異体を含む。
【００１６】
「天然配列ＰＲＯポリペプチド」は、天然由来の対応するＰＲＯポリペプチドと同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含んでいる。このような天然配列ＰＲＯポリペプチドは、自然から単離することもできるし、組換え又は合成手段により生産することもできる。「天然配列ＰＲＯポリペプチド」という用語には、特に、特定のＰＲＯポリペプチドの自然に生じる切断又は分泌形態(例えば、細胞外ドメイン配列)、自然に生じる変異形態(例えば、選択的にスプライシングされた形態)及びそのポリペプチドの自然に生じる対立遺伝子変異体が含まれる。本発明の種々の実施態様において、ここに開示されている天然配列ＰＲＯポリペプチドは、関連する図に示されている全長アミノ酸配列を含有する成熟又は全長天然配列ポリペプチドである。開始及び終止コドンは、太い書体及び下線で図中に示さている。しかし、関連する図に開示されているＰＲＯポリペプチドがメチオニン残基で開始すると図のアミノ酸位置１において示されている一方で、図のアミノ酸位置１より上流又は下流のいずれかに位置する他のメチオニン残基が、ＰＲＯポリペプチドの開始アミノ酸残基として用いられることが考えられるし可能である。
【００１７】
ＰＲＯポリペプチド「細胞外ドメイン」又は「ＥＣＤ」は、膜貫通及び細胞質ドメインを実質的に有しないＰＲＯポリペプチドの形態を意味する。通常、ＰＲＯポリペプチドＥＣＤは、それらの膜貫通及び／又は細胞質ドメインを１％未満、好ましくはそのようなドメインを０．５％未満しか持たない。本発明のＰＲＯポリペプチドについて同定された任意の膜貫通ドメインは、疎水性ドメインのその型を同定するために当該分野において日常的に使用される基準に従い同定されることが理解されるであろう。膜貫通ドメインの厳密な境界は変わり得るが、最初に同定されたドメインのいずれかの末端から約５アミノ酸を越えない可能性が高い。従って、ＰＲＯポリペプチド細胞外ドメインは、場合によっては、実施例又明細書おいてに同定された膜貫通ドメインのいずれかの末端から約５を越えないアミノ酸を含みうるし、付着のシグナルペプチドを有する又は有しないそのようなポリペプチド及びそれらをコードする核酸は、本発明において考慮される。
【００１８】
ここに開示する種々のＰＲＯポリペプチドの「シグナルペプチド」の適切な位置は、本明細書と添付の図面に示される。しかし、注記するように、シグナルペプチドのＣ-末端境界は変化しうるが、ここで最初に定義したようにシグナルペプチドＣ-末端境界のいずれかの側で約５アミノ酸未満である可能性が最も高く、シグナルペプチドのＣ-末端境界は、そのような型のアミノ酸配列成分を同定するのに日常的に使用される基準に従って同定しうる（例えば、Nielsenら, Prot. Eng. 10: 1-6 (1997)及びvon Heinjeら, Nucl. Acids. Res. 14: 4683-4690 (1986)）。さらに、幾つかの場合には、分泌ポリペプチドからのシグナルペプチドの切断は完全に均一ではなく、１つ以上の分泌種をもたらすことも認められる。シグナルペプチドがここに定義されるシグナルペプチドのＣ-末端境界の何れかの側の約５アミノ酸未満内で切断されるこれらの成熟ポリペプチド、及びそれらをコードするポリヌクレオチドは、本発明で考慮される。
【００１９】
「ＰＲＯポリペプチド変異体」とは、上記又は下記に定義されるように、ここに開示される全長天然配列ＰＲＯポリペプチド、ここに開示されたシグナルペプチドを欠く全長天然配列ＰＲＯポリペプチド配列、シグナルペプチド有無のここに開示されたＰＲＯの細胞外ドメイン又はここに開示された全長ＰＲＯポリペプチドの他の断片と、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する活性ＰＲＯポリペプチドを意味する。このようなＰＲＯポリペプチド変異体には、例えば、全長天然アミノ酸配列のＮ-又はＣ-末端において１つ又は複数のアミノ酸残基が付加、もしくは欠失されたＰＲＯポリペプチドが含まれる。通常、ＰＲＯポリペプチド変異体は、ここに開示される全長天然アミノ酸配列、ここに開示されたシグナルペプチドを欠く全長天然配列ＰＲＯポリペプチド配列、シグナルペプチドを有する又は有しないここに開示されたＰＲＯの細胞外ドメイン又はここに開示された全長ＰＲＯポリペプチドの特に同定された他の断片と、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％のアミノ酸配列同一性、そして、あるいは少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を有している。通常は、ＰＲＯ変異体ポリペプチドは、少なくとも約１０アミノ酸長、あるいは少なくとも約２０アミノ酸長、あるいは少なくとも約３０アミノ酸長、あるいは少なくとも約４０アミノ酸長、あるいは少なくとも約５０アミノ酸長、あるいは少なくとも約６０アミノ酸長、あるいは少なくとも約７０アミノ酸長、あるいは少なくとも約８０アミノ酸長、あるいは少なくとも約９０アミノ酸長、あるいは少なくとも約１００アミノ酸長、あるいは少なくとも約１５０アミノ酸長、あるいは少なくとも約２００アミノ酸長、あるいは少なくとも約３００アミノ酸長、又はそれ以上である。
【００２０】
ここに定義されるＰＲＯポリペプチドに対してここで同定されている「パーセント(％)アミノ酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入し、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした、ＰＲＯポリペプチドのアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある種々の方法、例えばBLAST、BLAST-2、ALIGN又はMegalign(DNASTAR)ソフトウエアのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。しかし、ここでの目的のためには、％アミノ酸配列同一性値は、ALIGN-2プログラム用の完全なソースコードが下記の表１に提供されている配列比較プログラムALIGN-2を使用することによって得られる。ALIGN-2配列比較コンピュータプログラムはジェネンテク社によって作成され、下記の表１に示したソースコードは米国著作権事務所, ワシントンD.C., 20559に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号TXU510087の下で登録されている。ALIGN-2はジェネンテク社、サウス サン フランシスコ, カリフォルニアから好適に入手可能であり、下記の表１に提供されたソースコードからコンパイルしてもよい。ALIGN-2プログラムは、UNIX（登録商標）オペレーティングシステム、好ましくはデジタルUNIX（登録商標） V4.0Dでの使用のためにコンパイルされる。全ての配列比較パラメータは、ALIGN-2プログラムによって設定され変動しない。
【００２１】
アミノ酸配列比較にALIGN-2が用いられる状況では、与えられたアミノ酸配列Ａの、与えられたアミノ酸配列Ｂとの、又はそれに対する％アミノ酸配列同一性（あるいは、与えられたアミノ酸配列Ｂと、又はそれに対して或る程度の％アミノ酸配列同一性を持つ又は含む与えられたアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムALIGN-2のＡ及びＢのアラインメントによって同一であると一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。この方法を用いた％アミノ酸配列同一性の計算の例として、「ＰＲＯ」が対象となる仮説的ＰＲＯポリペプチドのアミノ酸配列を表し、「比較タンパク質」が対象となる「比較」タンパク質が比較されているアミノ酸配列を表し、そして「Ｘ」、「Ｙ」及び「Ｚ」の各々が異なった仮説的アミノ酸残基を表し、表２及び３は、「比較タンパク質」と称されるアミノ酸配列の「ＰＲＯ」と称されるアミノ酸配列に対する％アミノ酸配列同一性の計算方法を示す。
【００２２】
特に断らない限りは、ここでの全ての％アミノ酸配列同一性値は上記のようにALIGN-2配列比較コンピュータプログラムを用いて得られる。しかしながら、％アミノ酸配列同一性値は、WU-BLAST-2コンピュータプログラム（Altschulら, Methods in Enzymology 266: 460-480(1996)）を用いて決定してもよい。さらに、殆どのWU-BLAST-2検索パラメータは初期値に設定される。初期値に設定されない、即ち調節可能なパラメータは以下の値に設定する：オーバーラップスパン＝１、オーバーラップフラクション＝０．１２５、ワード閾値（Ｔ）＝１１、及びスコアリングマトリクス＝BLOSUM62。WU-BLAST2が用いられた場合には、、％アミノ酸配列同一性値は、（ａ）天然ＰＲＯポリペプチドから誘導された配列を有する対象とするＰＲＯポリペプチドのアミノ酸配列と、対象とする比較アミノ酸配列（即ち、対象とするＰＲＯポリペプチドが比較されるＰＲＯポリペプチド変異体であってもよい配列）との間の、WU-BLAST-2によって決定した一致する同一アミノ酸残基の数を、（ｂ）対象とするＰＲＯポリペプチドの残基の総数で除した商によって決定される。例えば、「アミノ酸配列Ｂに対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を持つ又は持っているアミノ酸配列Ａを含んでなるポリペプチド」という表現では、アミノ酸配列Ａが対象である比較アミノ酸配列であり、アミノ酸配列Ｂが対象であるＰＲＯポリペプチドのアミノ酸配列である。
【００２３】
また、％アミノ酸配列同一性は、配列比較プログラムNCBI-BLAST2（Altschulら, Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402 (1997)）を用いて決定してもよい。NCBI-BLAST2配列比較プログラムは、http://www.ncbi.nlm.nih.govからダウンロードでき、又は別な方法で米国国立衛生研究所、ベセスダ、メリーランドから得ることができる。NCBI-BLAST2は幾つかの検索パラメータを使用し、それら検索パラメータの全ては初期値に設定され、例えば、unmask＝可、鎖＝全て、予測される発生＝１０、最小低複合長＝１５／５、マルチパスｅ-値＝０．０１、マルチパスの定数＝２５、最終ギャップアラインメントのドロップオフ＝２５、及びスコアリングマトリクス＝BLOSUM62を含む。
【００２４】
アミノ酸配列比較にNCBI-BLAST2が用いれれる状況では、与えられたアミノ酸配列Ａの、与えられたアミノ酸配列Ｂとの、又はそれに対する％アミノ酸配列同一性（あるいは、与えられたアミノ酸配列Ｂと、又はそれに対して或る程度の％アミノ酸配列同一性を持つ又は含む与えられたアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムNCBI-BLAST2のＡ及びＢのアラインメントによって同一であると一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。
【００２５】
「ＰＲＯ変異体ポリヌクレオチド」又は「ＰＲＯ変異体核酸配列」とは、下記に定義されるように、活性ＰＲＯポリペプチドをコードする核酸分子であり、ここに開示する全長天然配列ＰＲＯポリペプチド配列、ここに開示するシグナルペプチドを欠いた全長天然配列ＰＲＯポリペプチド配列、シグナルペプチドを有する又は有しないここに開示するＰＲＯポリペプチドの細胞外ドメイン、又はここに開示する全長ＰＲＯポリペプチド配列の他の任意の断片をコードする核酸配列と少なくとも約８０％の核酸配列同一性、好ましくはあるいは少なくとも約８１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８８％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約８９％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９０％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９１％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９２％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９３％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９４％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９５％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９６％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９７％の核酸配列同一性、あるいは少なくとも約９８％の核酸配列同一性、そして、あるいは少なくとも約９９％の核酸配列同一性を有している。変異体は、天然ヌクレオチド配列を含まない。
【００２６】
通常は、ＰＲＯ変異体ポリヌクレオチドは、少なくとも約３０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約６０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約９０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１２０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１５０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約１８０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約２１０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約２４０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約２７０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約３００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約４５０ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約６００ヌクレオチド長、あるいは少なくとも約９００ヌクレオチド長、又はそれ以上である。
【００２７】
ここで同定されるＰＲＯコード化核酸配列に対する「パーセント(％)核酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入し、ＰＲＯ配列のヌクレオチドと同一である候補配列中のヌクレオチドのパーセントとして定義される。パーセント核酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の知る範囲にある種々の方法、例えばBLAST、BLAST-2、ALIGN又はMegalign(DNASTAR)ソフトウエアのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより達成可能である。ここでの目的のためには、％アミノ酸配列同一性値は、ALIGN-2プログラム用の完全なソースコードが下記の表１に提供されている配列比較プログラALIGN-2を使用することによって得られる。ALIGN-2配列比較コンピュータプログラムはジェネンテク社によって作成され、下記の表１に示したソースコードは米国著作権事務所,ワシントン D.C.，20559に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号TXU510087の下で登録されている。ALIGN-2はジェネンテク社、サウス サン フランシスコ, カリフォルニアから好適に入手可能であり、下記の表１に提供されたソースコードからコンパイルしてもよい。ALIGN-2プログラムは、UNIX（登録商標）オペレーティングシステム、好ましくはデジタルUNIX（登録商標） V4.0Dでの使用のためにコンパイルされる。全ての配列比較パラメータは、ALIGN-2プログラムによって設定され変動しない。
【００２８】
核酸配列比較にALIGN-2が用いられる状況では、与えられた核酸配列Ｃの、与えられた核酸配列Ｄとの、又はそれに対する％核酸配列同一性（あるいは、与えられたアミノ酸配列Ｄと、又はそれに対して或る程度の％核酸配列同一性を持つ又は含む与えられた核酸配列Ｃと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｗ／Ｚの１００倍
ここで、Ｗは配列アラインメントプログラムALIGN-2のＣ及びＤのアラインメントによって同一であると一致したスコアの核酸残基の数であり、ＺはＤの全核酸残基数である。核酸配列Ｃの長さがアミノ酸配列Ｄの長さと異なる場合、ＣのＤに対する％核酸配列同一性は、ＤのＣに対する％核酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。この方法を用いた％核酸配列同一性の計算の例として、「ＰＲＯ−ＤＮＡ」が対象となる仮説的ＰＲＯコード化核酸配列を表し、「比較ＤＮＡ」が対象となる「ＰＲＯ−ＤＮＡ」核酸分子が比較されている核酸配列を表し、そして「Ｎ」、「Ｌ」及び「Ｖ」の各々が異なった仮説的アミノ酸残基を表し、表４及び５が「比較ＤＮＡ」と称される核酸配列の「ＰＲＯ−ＤＮＡ」と称される核酸配列に対する％核酸配列同一性の計算方法を示す。
【００２９】
特に断らない限りは、ここでの全ての％核酸配列同一性値は、直上のパラグラフに示したようにALIGN-2配列比較コンピュータプログラムを用いて得られる。しかしながら、％核酸配列同一性値は、WU-BLAST-2コンピュータプログラム（Altschulら, Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて決定してもよい。さらに、殆どのWU-BLAST-2検索パラメータは初期値に設定される。初期値に設定されない、即ち調節可能なパラメータは以下の値に設定する：オーバーラップスパン＝１、オーバーラップフラクション＝０．１２５、ワード閾値（Ｔ）＝１１、及びスコアリングマトリクス＝BLOSUM62。WU-BLAST-2が用いられた場合、％核酸配列同一性値は、（ａ）天然配列ＰＲＯポリペプチドコード化核酸から誘導された配列を有する対象とするＰＲＯポリペプチドコード化核酸分子の核酸配列と、対象とする比較核酸配列（即ち、対象とするＰＲＯポリペプチドコード化核酸分子が比較されるＰＲＯポリペプチド変異体であってもよい配列）との間の、WU-BLAST-2によって決定した一致する同一核酸残基の数を、（ｂ）対象とするＰＲＯポリペプチドコード化核酸分子のヌクレオチドの総数で除した商によって決定される。例えば、「核酸配列Ｂに対して少なくとも８０％の核酸配列同一性を持つ又は持っている核酸配列Ａを含んでなるポリペプチド」という表現では、核酸配列Ａが対象とする比較核酸配列であり、核酸配列Ｂが対象とするＰＲＯポリペプチドコード化核酸分子の核酸配列である。
【００３０】
また、％核酸配列同一性は、配列比較プログラムNCBI-BLAST2（Altschulら, Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402 (1997)）を用いて決定してもよい。NCBI-BLAST2配列比較プログラムは、http://www.ncbi.nlm.nih.govからダウンロードでき、又は別な方法で米国国立衛生研究所、ベセスダ、メリーランドから得ることができる。NCBI-BLAST2は幾つかの検索パラメータを使用し、それら検索パラメータの全ては初期値に設定され、例えば、unmask＝可、鎖＝全て、予測される発生＝１０、最小低複合長＝１５／５、マルチパスｅ-値＝０．０１、マルチパスの定数＝２５、最終ギャップアラインメントのドロップオフ＝２５、及びスコアリングマトリクス＝BLOSUM62を含む。
【００３１】
核酸配列比較にNCBI-BLAST2が用いられる状況では、与えられた核酸配列Ｃの、与えられた核酸配列Ｄとの、又はそれに対する％核酸配列同一性（あるいは、与えられた核酸配列Ｄと、又はそれに対して或る程度の％核酸配列同一性を持つ又は含む与えられた核酸配列Ｃと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｗ／Ｚの１００倍
ここで、Ｗは配列アラインメントプログラムNCBI-BLAST2のＣ及びＤのアラインメントによって同一であると一致したスコアの核酸残基の数であり、ＺはＤの全核酸残基数である。核酸配列Ｃの長さが核酸配列Ｄの長さと異なる場合、ＣのＤに対する％核酸配列同一性は、ＤのＣに対する％核酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。
【００３２】
他の実施態様では、ＰＲＯ変異体ポリペプチドヌクレオチドは、活性ＰＲＯポリペプチドをコードし、好ましくは緊縮性ハイブリダイゼーション及び洗浄条件下で、ここに開示する全長ＰＲＯポリペプチドをコードするヌクレオチド配列にハイブリダイゼーションする核酸分子である。ＰＲＯ変異体ポリペプチドは、ＰＲＯ変異体ポリヌクレオチドにコードされるものであってもよい。
「単離された」とは、ここで開示された種々のポリペプチドを記述するために使用するときは、その自然環境の成分から同定され分離され及び／又は回収されたポリペプチドを意味する。その自然環境の汚染成分とは、そのポリペプチドの診断又は治療への使用を典型的には妨害する物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質が含まれる。好ましい実施態様において、ポリペプチドは、(１)スピニングカップシークエネーターを使用することにより、少なくとも１５残基のＮ末端あるいは内部アミノ酸配列を得るのに充分なほど、あるいは、(２)クーマシーブルーあるいは好ましくは銀染色を用いた非還元あるいは還元条件下でのＳＤＳ-ＰＡＧＥによる均一性まで精製される。単離されたポリペプチドには、ＰＲＯポリペプチドの自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換え細胞内のインサイツのタンパク質が含まれる。しかしながら、通常は、単離されたポリペプチドは少なくとも１つの精製工程により調製される。
【００３３】
「単離された」ＰＲＯポリペプチドコード化核酸は、同定され、ＰＲＯポリペプチドをコードする核酸の天然源に通常付随している少なくとも１つの汚染核酸分子から分離された核酸分子である。単離されたＰＲＯポリペプチドコード化核酸分子は、天然に見出される形態あるいは設定以外のものである。ゆえに、単離されたＰＲＯポリペプチドコード化核酸分子は、天然の細胞中に存在するＰＲＯポリペプチドコード化核酸分子とは区別される。しかし、単離されたＰＲＯポリペプチドコード化核酸分子は、例えば、核酸分子が天然細胞のものとは異なった染色体位置にあるＰＲＯポリペプチドを通常発現する細胞に含まれるＰＲＯポリペプチド核酸分子を含む。
「コントロール配列」という表現は、特定の宿主生物において作用可能に結合したコード配列を発現するために必要なＤＮＡ配列を指す。例えば原核生物に好適なコントロール配列は、プロモーター、場合によってはオペレータ配列、及びリボソーム結合部位を含む。真核生物の細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル及びエンハンサーを利用することが知られている。
【００３４】
核酸は、他の核酸配列と機能的な関係にあるときに「作用可能に結合し」ている。例えば、プレ配列あるいは分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に参画するプレタンパク質として発現されているなら、そのポリペプチドのＤＮＡに作用可能に結合している；プロモーター又はエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼすならば、コード配列に作用可能に結合している；又はリボソーム結合部位は、もしそれが翻訳を容易にするような位置にあるなら、コード配列と作用可能に結合している。一般的に、「作用可能に結合している」とは、結合したＤＮＡ配列が近接しており、分泌リーダーの場合には近接していて読みフェーズにあることを意味する。しかし、エンハンサーは必ずしも近接している必要はない。結合は簡便な制限部位でのライゲーションにより達成される。そのような部位が存在しない場合は、従来の手法に従って、合成オリゴヌクレオチドアダプターあるいはリンカーが使用される。
「抗体」という用語は最も広い意味において使用され、例えば、単一の抗ＰＲＯポリペプチドモノクローナル抗体(アゴニスト、アンタゴニスト、及び中和抗体を含む)、多エピトープ特異性を持つ抗ＰＲＯ抗体組成物、一本鎖抗ＰＲＯ抗体、及び抗ＰＲＯ抗体の断片を包含している（下記参照）。ここで使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団、すなわち、構成する個々の抗体が、少量存在しうる自然に生じる可能性のある突然変異を除いて同一である集団から得られる抗体を称する。
【００３５】
ハイブリダイゼーション反応の「緊縮性」は、当業者によって容易に決定され、一般的にプローブ長、洗浄温度、及び塩濃度に依存する経験的な計算である。一般に、プローブが長くなると適切なアニーリングのための温度が高くなり、プローブが短くなると温度は低くなる。ハイブリダイゼーションは、一般的に、相補的鎖がその融点に近いがそれより低い環境に存在する場合における変性ＤＮＡの再アニールする能力に依存する。プローブとハイブリダイゼーション可能な配列との間の所望の相同性の程度が高くなると、使用できる相対温度が高くなる。その結果、より高い相対温度は、反応条件をより緊縮性にするが、低い温度は緊縮性を低下させる。さらに、緊縮性は塩濃度に逆比例する。ハイブリダイゼーション反応の緊縮性の更なる詳細及び説明は、Ausubelら, Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience Publishers, (1995)を参照のこと。
【００３６】
ここで定義される「緊縮性条件」又は「高度の緊縮性条件」は、（１）洗浄のために低イオン強度及び高温度、例えば、５０℃において０．０１５Ｍの塩化ナトリウム／０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム／０．１％のドデシル硫酸ナトリウムを用いるもの；（２）ハイブリダイゼーション中にホルムアミド等の変性剤、例えば、４２℃において５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドと０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％フィコール／０．１％のポリビニルピロリドン／５０ｍＭのｐＨ６．５のリン酸ナトリウムバッファー、及び７５０ｍＭの塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムを用いるもの；（３）４２℃における５０％ホルムアミド、５ｘＳＳＣ（０．７５ＭのＮａＣｌ、０．０７５Ｍのクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％のピロリン酸ナトリウム、５ｘデンハード液、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％ＳＤＳ、及び１０％のデキストラン硫酸と、４２℃における０．２ｘＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中の洗浄及び５５℃での５０％ホルムアミド、次いで５５℃におけるＥＤＴＡを含む０．１ｘＳＳＣからなる高緊縮性洗浄を用いるものによって同定される。
【００３７】
「中程度の緊縮性条件」は、Sambrookら, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (New York: Cold Spring Harbor Press, 1989に記載されているように同定され、上記の緊縮性より低い洗浄溶液及びハイブリダイゼーション条件（例えば、温度、イオン強度及び％ＳＤＳ）の使用を含む。中程度の緊縮性条件は、２０％ホルムアミド、５ｘSSC（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５ｘデンハード液、１０％デキストラン硫酸、及び２０ｍｇ／ｍＬの変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中の３７℃での終夜インキュベーション、次いで１ｘＳＳＣ中３７−５０℃でのフィルターの洗浄といった条件である。当業者であれば、プローブ長などの因子に適合させる必要に応じて、どのようにして温度、イオン強度等を調節するかを認識する。
「エピトープタグ」なる用語は、ここで用いられるときは、「タグポリペプチド」に融合したＰＲＯポリペプチド、又はそれらのドメイン配列を含んでなるキメラポリペプチドを指す。タグポリペプチドは、その抗体が産生され得るエピトープ、又は幾つかの他の試薬によって同定できるエピトープを提供するに十分な数の残基を有しているが、その長さは対象とするＰＲＯポリペプチドの活性を阻害しないよう充分に短い。また、タグポリペプチドは、好ましくは、抗体が他のエピトープと実質的に交差反応をしないようにかなり独特である。適切なタグポリペプチドは、一般に、少なくとも６のアミノ酸残基、通常は約８〜約５０のアミノ酸残基(好ましくは約１０〜約２０の残基)を有する。
【００３８】
ここで用いられる「イムノアドヘシン」なる用語は、異種タンパク質（「アドヘシン」）の結合特異性と免疫グロブリン定常ドメインとを結合した抗体様分子を指す。構造的には、イムノアドヘシンは、所望の結合特異性を持ち、抗体の抗原認識及び結合部位以外である（即ち「異種の」）アミノ酸配列と、免疫グロブリン定常ドメイン配列との融合物を含む。イムノアドヘシン分子のアドへシン部分は、典型的には少なくともレセプター又はリガンドの結合部位を含む隣接アミノ酸配列である。イムノアドヘシンの免疫グロブリン定常ドメイン配列は、ＩｇＧ-１、ＩｇＧ-２、ＩｇＧ-３又はＩｇＧ-４サブタイプ、ＩｇＡ（ＩｇＡ-１及びＩｇＡ-２を含む）、ＩｇＥ、ＩｇＤ又はＩｇＭなどの任意の免疫グロブリンから得ることができる。
ここで意図している「活性な」及び「活性」とは、天然又は天然発生ＰＲＯポリペプチドの生物学的及び／又は免疫学的活性を保持するＰＲＯの形態を意味し、「生物学的」活性とは、天然又は天然発生ＰＲＯによって生ずる（阻害性又は刺激性の）生物学的機能であって、天然又は天然発生ＰＲＯが有する抗原性エピトープに対して抗体を生成する能力を除くものを意味し、「免疫学的」活性とは、天然又は天然発生ＰＲＯが有する抗原性エピトープに対して抗体を生成する能力を意味する。
【００３９】
「アンタゴニスト」なる用語は最も広い意味で用いられ、ここに開示した天然ＰＲＯポリペプチドの生物学的活性を阻止、阻害、又は中和する任意の分子を指す。同様に「アゴニスト」なる用語は最も広い意味で用いられ、ここに開示した天然ＰＲＯポリペプチドの生物学的活性を模倣する任意の分子を指す。好適なアゴニスト又はアンタゴニスト分子は特に、アゴニスト又はアンタゴニスト抗体又は抗体断片、天然ＰＲＯポリペプチドの断片又はアミノ酸配列変異体、ペプチド、有機小分子、などを含む。ＰＲＯポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストの同定方法は、ＰＲＯポリペプチドを候補アンタゴニスト又はアゴニストと接触させ、ＰＲＯポリペプチドに通常は関連している１つ又は複数の生物学的活性の変化を測定することを含みうる。
【００４０】
ここで使用される「治療」とは、治癒的処置、予防的療法及び防止的療法の両方を意味し、患者は標的とする病理学的状態又は疾患を防止又は低下（減少）させられる。治療が必要なものとは、既に疾患に罹っているもの、並びに疾患に罹りやすいもの又は疾患が防止されているものを含む。
「慢性」投与とは、急性様式とは異なり連続的な様式での薬剤を投与し、初期の治療効果（活性）を長時間に渡って維持することを意味する。「間欠」投与とは、中断無く連続的になされるのではなく、むしろ本質的に周期的になされる処理である。
治療の対象のための「哺乳動物」は、ヒト、家庭及び農業用動物、動物園、スポーツ、又はペット動物、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ウサギなどを含む哺乳類に分類される任意の動物を意味する。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
１つ又は複数の治療薬と「組み合わせた」投与とは、同時（同時期）及び任意の順序での連続した投与を含む。
【００４１】
ここで用いられる「担体」は、製薬的に許容されうる担体、賦形剤、又は安定化剤を含み、用いられる用量及び濃度でそれらに暴露される細胞又は哺乳動物に対して非毒性である。生理学的に許容されうる担体は、水性ｐＨ緩衝溶液であることが多い。生理学的に許容されうる担体の例は、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸塩のバッファー；アスコルビン酸を含む酸化防止剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；疎水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリシン；グルコース、マンノース又はデキストランを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；マンニトール又は祖ルビトール等の糖アルコール；ナトリウム等の塩形成対イオン；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えば、TWEEN（商品名)、ポリエチレングリコール（PEG）、及びPLURONICS(商品名)を含む。
【００４２】
「抗体断片」は、無傷の抗体の一部、好ましくは無傷の抗体の抗原結合又は可変領域を含む。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ')２、及びＦｖ断片；ダイアボディ(diabodies)；直鎖状抗体（Zapataら, Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995]）；一本鎖抗体分子；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗体結合断片を生成し、その各々は単一の抗原結合部位を持ち、残りは容易に結晶化する能力を反映して「Ｆｃ」断片と命名される。ペプシン処理はＦ(ａｂ')２断片を生じ、それは２つの抗原結合部位を持ち、抗原を交差結合することができる。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び結合部位を含む最小の抗体断片である。この領域は、密接に非共有結合した１本の重鎖と１本の軽鎖の可変領域の二量体からなる。この配置において各ドメインの３つのＣＤＲが相互作用してＶＨ−ＶＬに量体の表面に抗原結合部位を決定する。正しくは、６つのＣＤＲが抗体に対する抗原結合特異性を与える。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含んでなるＦｖの半分）でさえ、結合部位全体よりは低い親和性であるが、抗原を認識し結合する能力を持つ。
【００４３】
またＦａｂ断片は、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含む。Ｆａｂ断片は、抗体ヒンジ領域からの１つ又は複数のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に幾つかの残基が付加されていることによりＦａｂ’断片と相違する。ここで、Ｆａｂ’-ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離のチオール基を持つＦａｂ’を表す。Ｆ(ａｂ')２抗体断片は、最初はＦａｂ’断片の対として生成され、それらの間にヒンジシステインを有する。抗体断片の他の化学的結合も知られている。
任意の脊椎動物種からの抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ及びラムダと呼ばれる二つの明らかに異なる型の一方に分類される。
それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列によって、免疫グロブリンは異なるクラスに分類できる。免疫グロブリンの五つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがあり、それらの幾つかは更にサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ及びIｇＡ２に分類される。
【００４４】
「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含む抗体断片を含み、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。好ましくは、Ｆｖポリペプチドは、ｓＦｖが抗原結合とって望ましい構造の形成を可能にする、ＶＨ及びＶＬドメイン間のポリペプチドリンカーを更に含む。ｓＦｖの概説については、The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg及びMoore編, Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)のPluckthunを参照のこと。
用語「ダイアボディ(diabodies)」は、二つの抗原結合部位を持つ小型の抗体断片を指し、その断片は同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）内で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に結合した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖の二つのドメイン間に対形成するには短すぎるリンカーを用いることにより、ドメインは強制的に他の鎖の相補的ドメインと対形成して二つの抗原結合部位を生成する。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；及びHollingerら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)により十分に記載されている。
【００４５】
「単離された」抗体は、その自然環境の成分から同定され分離及び／又は回収されたものである。その自然環境の汚染成分とは、その抗体の診断又は治療への使用を妨害する物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質が含まれる。好ましい実施態様において、抗体は、（１）ローリー法で測定した場合９５％を越える抗体、最も好ましくは９９重量％を越えるまで、(２)スピニングカップシークエネーターを使用することにより、少なくとも１５残基のＮ末端あるいは内部アミノ酸配列を得るのに充分なほど、あるいは、(３)クーマシーブルーあるいは好ましくは銀染色を用いた非還元あるいは還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均一性まで精製される。単離された抗体には、抗体の自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換え細胞内のインサイツの抗体が含まれる。しかしながら、通常は、単離された抗体は少なくとも１つの精製工程により調製される。
特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド上のエピトープに「特異的に結合する」、又は「特異的な」抗体とは、他のポリペプチド又はポリペプチドエピトープとは実質的に結合せずに、特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド上のエピトープへ結合するものである。
【００４６】
「標識」なる語は、ここで用いられる場合、「標識」抗体が生成されるように、抗体に直接又は間接的に抱合している検出可能な化合物又は組成物を意味する。標識は、それ自身検出可能でもよく（例えば、放射性標識又は蛍光標識）、又は酵素標識の場合、検出可能な基質化合物又は組成物の化学変換を触媒してもよい。
「固相」とは、本発明の抗体がそれに付着することのできる非水性マトリクスを意味する。ここに意図する固相の例は、部分的又は全体的に、ガラス（例えば、孔制御ガラス）、多糖類（例えばアガロース）、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリビニルアルコール及びシリコーンから形成されたものを含む。或る種の実施態様では、内容に応じて、固相はアッセイプレートのウェルを構成することができ；その他では精製カラム（例えばアフィニティクロマトグラフィーカラム）とすることもできる。また、この用語は、米国特許第４，２７５，１４９号に記載されたような、別個の粒子の不連続な固相も包含する。
「リポソーム」は、種々の型の脂質、リン脂質及び／又は界面活性剤からなる小型の小胞であり、哺乳動物への薬物（ＰＲＯポリペプチド又はその抗体など）の輸送に有用である。リポソームの成分は、通常は生体膜の脂質配列に類似する二層形式に配列させる。
「小分子」とは、ここで、約５００ダルトン未満の分子量を持つと定義される。
ここで開示されたポリペプチドの「有効量」、或いはそのアゴニスト又はアンタゴニストとは、特別に言及された目的を実行するために十分な量のことである。「有効量」とは、言及された目的に関連して、経験的及び常套的方法によって決定することができる。
【００４７】
2006081548.tif 000002
【００４８】
2006081548.tif 000003
【００４９】
2006081548.tif 000004
【００５０】
2006081548.tif 000005
【００５１】
2006081548.tif 000006
【００５２】
2006081548.tif 000007
【００５３】
2006081548.tif 000008
【００５４】
2006081548.tif 000009
【００５５】
2006081548.tif 000010
【００５６】
2006081548.tif 000011
【００５７】
2006081548.tif 000012
【００５８】
2006081548.tif 000013
【００５９】
2006081548.tif 000014
【００６０】
2006081548.tif 000015
【００６１】
2006081548.tif 000016
【００６２】
2006081548.tif 000017
【００６３】
2006081548.tif 000018
【００６４】
2006081548.tif 000019
【００６５】
2006081548.tif 000020
【００６６】
2006081548.tif 000021
【００６７】
2006081548.tif 000022
【００６８】
ＩＩ.  本発明の組成物と方法
Ａ．全長ＰＲＯポリペプチド
本発明は、本出願でＰＲＯポリペプチドと呼ばれるポリペプチドをコードする新規に同定され単離された核酸配列を提供する。特に下記の実施例でさらに詳細に説明するように、種々のＰＲＯポリペプチドをコードするｃＤＮＡが同定され単離された。別々の発現ラウンドで生成されたタンパク質には異なるＰＲＯ番号が与えられるが、ＵＮＱ番号は全ての与えられたＤＮＡ及びコード化タンパク質に独特であり、変わることはないことを記しておく。しかしながら、単純化のために、本明細書において、ここに開示した全長天然核酸分子にコードされるタンパク質並びに上記のＰＲＯの定義に含まれるさらなる天然相同体及び変異体は、それらの起源又は調製形式に関わらず、「ＰＲＯ／番号」で呼称する。
下記の実施例に開示するように、種々のｃＤＮＡクローンがＡＴＣＣに寄託されている。これらのクローンの正確なヌクレオチド配列は、この分野で日常的な方法を用いて寄託されたクローンを配列決定することにより容易に決定することができる。予測されるアミノ酸配列は、ヌクレオチド配列から常套的技量を用いて決定できる。ここに記載したＰＲＯポリペプチド及びコード化核酸について、本出願人は、現時点で入手可能な配列情報と最も良く一致するリーディングフレームであると考えられるものを同定した。
【００６９】
Ｂ．ＰＲＯポリペプチド変異体
ここに記載した全長天然配列ＰＲＯポリペプチドに加えて、ＰＲＯ変異体も調製できると考えられる。ＰＲＯ変異体は、ＰＲＯポリペプチドＤＮＡに適当なヌクレオチド変化を導入することにより、あるいは所望のＰＲＯポリペプチドを合成することにより調製できる。当業者は、グリコシル化部位の数又は位置の変化あるいは膜固着特性の変化などのアミノ酸変化がＰＲＯポリペプチドの翻訳後プロセスを変えうることを理解するであろう。
【００７０】
天然全長配列ＰＲＯ又はここに記載したＰＲＯポリペプチドの種々のドメインにおける変異は、例えば、米国特許第５，３６４，９３４号に記載されている保存的及び非保存的変異についての任意の技術及び指針を用いてなすことができる。変異は、結果として天然配列ＰＲＯと比較してＰＲＯポリペプチドのアミノ酸配列が変化するＰＲＯポリペプチドをコードする１つ又は複数のコドンの置換、欠失又は挿入であってよい。場合によっては、変異は少なくとも１つのアミノ酸のＰＲＯポリペプチドの１つ又は複数のドメインの任意の他のアミノ酸による置換である。いずれのアミノ酸残基が所望の活性に悪影響を与えることなく挿入、置換又は欠失されるかの指針は、ＰＲＯポリペプチドの配列を相同性の知られたタンパク質分子の配列と比較し、相同性の高い領域内でなされるアミノ酸配列変化を最小にすることによって見出される。アミノ酸置換は、１つのアミノ酸の類似した構造及び／又は化学特性を持つ他のアミノ酸での置換、例えばロイシンのセリンでの置換、即ち保存的アミノ酸置換の結果とすることができる。挿入及び欠失は、場合によっては１から５のアミノ酸の範囲内とすることができる。許容される変異は、配列においてアミノ酸の挿入、欠失又は置換を系統的に作成し、得られた変異体を下記の実施例に記載するインビトロアッセイの任意のもので活性について試験することにより決定される。
【００７１】
ＰＲＯポリペプチド断片がここに提供される。このような断片は、例えば、全長天然タンパク質と比較した際に、Ｎ-末端又はＣ-末端で切断されてもよく、又は内部残基を欠いていてもよい。或る種の断片は、ＰＲＯポリペプチドの所望の生物学的活性に必須ではないアミノ酸残基を欠いている。
ＰＲＯ断片は、多くの従来技術の任意のものによって調製してよい。所望のペプチド断片は化学合成してもよい。代替的方法は、酵素的消化、例えば特定のアミノ酸残基によって決定される部位のタンパク質を切断することが知られた酵素でタンパク質を処理することにより、あるいは適当な制限酵素でＤＮＡを消化して所望の断片を単離することによるＰＲＯ断片の生成を含む。さらに他の好適な技術は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により、所望のポリペプチド断片をコードするＤＮＡ断片を単離し増幅することを含む。ＤＮＡ断片の所望の末端を決定するオリゴヌクレオチドは、ＰＣＲの５’及び３’プライマーで用いられる。好ましくは、ＰＲＯポリペプチド断片は、ここに開示した天然ＰＲＯポリペプチドと少なくとも１つの生物学的及び／又は免疫学的活性を共有する。
特別の実施態様では、対象とする保存的置換を、好ましい置換を先頭にして表６に示す。このような置換が生物学的活性の変化をもたらす場合、表６に例示的置換と名前を付けた又は以下にアミノ酸分類でさらに記載するように、より置換的な変化が導入され生成物がスクリーニングされる。
【００７２】
2006081548.tif 000023
【００７３】
ポリペプチドの機能及び免疫学的同一性の置換的修飾は、（ａ）置換領域のポリペプチド骨格の構造、例えばシート又は螺旋配置、（ｂ）標的部位の電荷又は疎水性、又は（ｃ）側鎖の嵩を維持しながら、それらの効果において実質的に異なる置換基を選択することにより達成される。天然発生残基は共通の側鎖特性に基づいてグループに分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン, met, ala, val, leu, ile;
（２）中性の親水性：cys, ser, thr;
（３）酸性：asp, glu;
（４）塩基性：asn, gln, his, lys, arg;
（５）鎖配向に影響する残基：gly, pro; 及び
（６）芳香族：trp, tyr, phe。
【００７４】
非保存的置換は、これらの分類の一つのメンバーを他の分類に交換することを必要とするであろう。また、そのように置換された残基は、保存的置換部位、好ましくは残された（非保存）部位に導入されうる。
変異は、オリゴヌクレオチド媒介（部位特異的）突然変異誘発、アラニンスキャンニング、及びＰＣＲ突然変異誘発［Carterら, Nucl. Acids Res., 13: 4331 (1986); Zollerら, Nucl. Acids Res., 10: 6487 (1987)］、カセット突然変異誘発［Wellsら, Gene, 34: 315 (1985)］、制限的選択突然変異誘発［Wellsら, Philos. Trans. R. Soc. London SerA, 317: 415 (1986)］等のこの分野で知られた方法を用いてなすことができ、又は他の知られた技術をクローニングしたＤＮＡに実施してＰＲＯ変異体ＤＮＡを作成することもできる。
【００７５】
また、隣接配列に沿って１つ又は複数のアミノ酸を同定するのにスキャンニングアミノ酸分析を用いることができる。好ましいスキャンニングアミノ酸は比較的小さく、中性のアミノ酸である。そのようなアミノ酸は、アラニン、グリシン、セリン、及びシステインを含む。アラニンは、ベータ炭素を越える側鎖を排除し変異体の主鎖構造を変化させにくいので、この群の中で典型的に好ましいスキャンニングアミノ酸である［Cunningham及びWells, Science, 244: 1081-1085 (1989)］。また、アラニンは最もありふれたアミノ酸であるため典型的には好ましい。さらに、それは埋もれた及び露出した位置の両方に見られることが多い［Creighton, The Proteins, (W.H. Freeman & Co., N.Y.); Chothia, J. Mol. Biol., 150:1(1976)］。アラニン置換が十分な量の変異体を生じない場合は、アイソテリック(isoteric)アミノ酸を用いることができる。
【００７６】
Ｃ．ＰＲＯの修飾
ＰＲＯポリペプチドの共有結合的修飾は本発明の範囲内に含まれる。共有結合的修飾の１つの型は、ＰＲＯポリペプチドの標的とするアミノ酸残基を、ＰＲＯポリペプチドの選択された側鎖又はＮ又はＣ末端残基と反応できる有機誘導体化試薬と反応させることである。二官能性試薬での誘導体化が、例えばＰＲＯを水不溶性支持体マトリクスあるいは抗ＰＲＯ抗体の精製方法又はその逆で用いるための表面に架橋させるのに有用である。通常用いられる架橋剤は、例えば、１，１-ビス（ジアゾアセチル）-２-フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドエステル、例えば４-アジドサリチル酸とのエステル、３，３’-ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）等のジスクシンイミジルエステルを含むホモ二官能性イミドエステル、ビス-Ｎ-マレイミド-１，８-オクタン等の二官能性マレイミド、及びメチル-３-[(ｐ-アジドフェニル)-ジチオ］プロピオイミダート等の試薬を含む。
【００７７】
他の修飾は、グルタミニル及びアスパラギニル残基の各々対応するグルタミル及びアスパルチル残基への脱アミノ化、プロリン及びリシンのヒドロキシル化、セリル又はトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のα-アミノ基のメチル化[T.E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp.79-86 (1983)]、Ｎ末端アミンのアセチル化、及び任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化を含む。
本発明の範囲内に含まれるＰＲＯポリペプチドの共有結合的修飾の他の型は、ポリペプチドの天然グリコシル化パターンの変更を含む。「天然グリコシル化パターンの変更」とは、ここで意図されるのは、天然配列ＰＲＯに見られる１又は複数の炭水化物部分の欠失（存在するグリコシル化部位の除去又は化学的及び／又は酵素的手段によるグリコシル化の削除のいずれかによる）、及び／又は天然配列ＰＲＯに存在しない１又は複数のグリコシル化部位の付加を意味する。さらに、この文節は、存在する種々の炭水化物部分の性質及び特性の変化を含む、天然タンパク質のグリコシル化における定性的変化を含む。
【００７８】
ＰＲＯポリペプチドへのグリコシル化部位の付加はアミノ酸配列の変更を伴ってもよい。この変更は、例えば、１又は複数のセリン又はトレオニン残基の天然配列ＰＲＯ（Ｏ-結合グリコシル化部位）への付加、又は置換によってなされてもよい。ＰＲＯアミノ酸配列は、場合によっては、ＤＮＡレベルでの変化、特に、ＰＲＯポリペプチドをコードするＤＮＡを予め選択された塩基において変異させ、所望のアミノ酸に翻訳されるコドンを生成させることを通して変更されてもよい。
ＰＲＯポリペプチド上に炭水化物部分の数を増加させる他の手段は、グリコシドのポリペプチドへの化学的又は酵素的結合による。このような方法は、この技術分野において、例えば、１９８７年９月１１日に発行されたＷＯ８７／０５３３０、及びAplin及びWriston, CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306 (1981)に記載されている。
【００７９】
ＰＲＯポリペプチド上に存在する炭水化物部分の除去は、化学的又は酵素的に、あるいはグルコシル化の標的として提示されたアミノ酸残基をコードするコドンの変異的置換によってなすことができる。化学的脱グリコシル化技術は、この分野で知られており、例えば、Hakimuddinら, Arch. Biochem. Biophys., 259:52 (1987)により、及びEdgeら, Anal. Biochem., 118: 131 (1981)により記載されている。ポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断は、Thotakuraら, Meth. Enzymol. 138:350 (1987)に記載されているように、種々のエンド及びエキソグリコシダーゼを用いることにより達成される。
本発明のＰＲＯの共有結合的修飾の他の型は、ＰＲＯポリぺプチドの、種々の非タンパク質様ポリマー、例えばポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレンの一つへの、米国特許第４，６４０，８３５号；第４，４９６，６８９号；第４，３０１，１４４号；第４，６７０，４１７号；第４，７９１，１９２号又は第４，１７９，３３７号に記載された方法での結合を含む。
また、本発明のＰＲＯポリペプチドは、他の異種ポリペプチド又はアミノ酸配列に融合したＰＲＯポリペプチドを含むキメラ分子を形成する方法で修飾してもよい。
【００８０】
一実施態様では、このようなキメラ分子は、抗タグ抗体が選択的に結合できるエピトープを提供するタグポリペプチドとＰＲＯポリペプチドとの融合を含む。エピトープタグは、一般的にはＰＲＯポリペプチドのアミノ又はカルボキシル末端に位置する。このようなＰＲＯポリペプチドのエピトープタグ形態の存在は、タグポリペプチドに対する抗体を用いて検出することができる。また、エピトープタグの提供は、抗タグ抗体又はエピトープタグに結合する他の型の親和性マトリクスを用いたアフィニティ精製によってＰＲＯポリペプチドを容易に精製できるようにする。種々のタグポリペプチド及びそれら各々の抗体はこの分野で良く知られている。例としては、ポリ−ヒスチジン（ポリ-his）又はポリ−ヒスチジン−グリシン（poly-his-gly）タグ；flu HAタグポリペプチド及びその抗体１２ＣＡ５［Fieldら, Mol. Cell. Biol., 8:2159-2165 (1988)］；c-mycタグ及びそれに対する８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７及び９Ｅ１０抗体［Evanら, Molecular and Cellular Biology, 5:3610-3616(1985)］；及び単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ（gD）タグ及びその抗体［Paborskyら, Protein Engineering, 3(6):547-553 (1990)］を含む。他のタグポリペプチドは、フラッグペプチド［Hoppら, BioTechnology, 6:1204-1210(1988)］；ＫＴ３エピトープペプチド［Martinら, Science, 255:192-194 (1992)］；α-チューブリンエピトープペプチド［Skinnerら, J. Biol. Chem., 266:15163-15166 (1991)］；及びＴ７遺伝子１０タンパク質ペプチドタグ［Lutz-Freyermuthら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6393-6397(1990)］を含む。
【００８１】
それに換わる実施態様では、キメラ分子はＰＲＯの免疫グロブリン又は免疫グロブリンの特定領域との融合体を含んでもよい。キメラ分子の二価形態（「イムノアドヘシン」とも呼ばれる）については、そのような融合体はＩｇＧ分子のＦｃ領域であり得る。Ｉｇ融合体は、好ましくはＩｇ分子内の少なくとも１つの可変領域に換えてＰＲＯポリペプチドの可溶化（膜貫通ドメイン欠失又は不活性化）形態を含む。特に好ましい実施態様では、免疫グロブリン融合体は、ＩｇＧ１分子のヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３、又はヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含む。免疫グロブリン融合体の製造については、１９９５年６月２７日発行の米国特許第５，４２８，１３０号を参照のこと。
【００８２】
Ｄ．ＰＲＯの調製
以下の説明は、主として、ＰＲＯ核酸を含むベクターで形質転換又は形質移入された細胞を培養することによりＰＲＯを生産する方法に関する。もちろん、当該分野においてよく知られている他の方法を用いてＰＲＯを調製することができると考えられる。例えば、ＰＲＯ配列、又はその一部は、固相技術を用いた直接ペプチド合成によって生産してもよい［例えば、Stewartら, Solid-Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co., サン フランシスコ, カリフォルニア(1969)；Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85:2149-2154 (1963)参照］。手動技術又は自動によるインビトロタンパク質合成を行ってもよい。自動合成は、例えば、アプライド・バイオシステムズ・ペプチド合成機（フォスター  シティー, カリフォルニア）を用いて、製造者の指示により実施してもよい。ＰＲＯの種々の部分は、別々に化学的に合成され、化学的又は酵素的方法を用いて結合させて全長ＰＲＯを生産してもよい。
【００８３】
１．ＰＲＯをコードするＤＮＡの単離
ＰＲＯをコードするＤＮＡは、ＰＲＯｍＲＮＡを保有していてそれを検出可能なレベルで発現すると考えられる組織から調製されたｃＤＮＡライブラリから得ることができる。従って、ヒトＰＲＯＤＮＡは、実施例に記載されるように、ヒトの組織から調製されたｃＤＮＡライブラリから簡便に得ることができる。またＰＲＯ-コード化遺伝子は、ゲノムライブラリから又は公知の合成方法（例えば、自動化核酸合成）により得ることもできる。
ライブラリは、対象となる遺伝子あるいはその遺伝子によりコードされるタンパク質を同定するために設計されたプローブ(ＰＲＯに対する抗体又は少なくとも約２０−８０塩基のオリゴヌクレオチド等)によってスクリーニングできる。選択されたプローブによるｃＤＮＡ又はゲノムライブラリのスクリーニングは、例えばSambrookら, Molecular Cloning: A Laboratory Manual(New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)に記載されている標準的な手順を使用して実施することができる。所望のＰＲＯポリペプチドをコードする遺伝子を単離する他の方法はＰＣＲ法を使用するものである［Sambrookら,上掲；Dieffenbachら, PCR Primer：A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995)］。
【００８４】
下記の実施例には、ｃＤＮＡライブラリのスクリーニング技術を記載している。プローブとして選択されたオリゴヌクレオチド配列は、充分な長さで、疑陽性が最小化されるよう充分に明瞭でなければならない。オリゴヌクレオチドは、スクリーニングされるライブラリ内のＤＮＡとのハイブリダイゼーション時に検出可能であるように標識されていることが好ましい。標識化の方法は当該分野において良く知られており、３２Ｐ標識されたＡＴＰのような放射線標識、ビオチン化あるいは酵素標識の使用が含まれる。中程度の厳密性及び高度の厳密性を含むハイブリダイゼーション条件は、上掲のSambrookら，に示されている。
このようなライブラリースクリーニング法において同定された配列は、Genbankら，の公共データベース又は個人の配列データベースに寄託され公衆に利用可能とされている周知の配列と比較及びアラインメントすることができる。分子の決定された領域内又は全長に渡っての（アミノ酸又は核酸レベルのいずれかでの）配列同一性は、当該分野で知られた、及びここに記載した方法を用いて決定することができる。
タンパク質コード化配列を有する核酸は、初めてここで開示された推定アミノ酸配列を使用し、また必要ならば、ｃＤＮＡに逆転写されていないｍＲＮＡの生成中間体及び先駆物質を検出する上掲のSambrookら，に記述されているような従来のプライマー伸展法を使用して選択されたｃＤＮＡ又はゲノムライブラリをスクリーニングすることによって得られる。
【００８５】
２．宿主細胞の選択及び形質転換
宿主細胞を、ここに記載したＰＲＯ生産のための発現又はクローニングベクターで形質移入又は形質転換し、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択し、又は所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために適当に変性された常套的栄養培地で培養する。培養条件、例えば培地、温度、ｐＨ等々は、過度の実験をすることなく当業者が選ぶことができる。一般に、細胞培養の生産性を最大にするための原理、プロトコール、及び実用技術は、Mammalian Cell Biotechnology: a Practical Approach, M.Butler編 (IRL Press, 1991)及びSambrookら, 上掲に見出すことができる。
【００８６】
原核生物細胞形質移入及び真核生物細胞形質移入の方法、例えば、ＣａＣｌ２、ＣａＰＯ４、リポソーム媒介及びエレクトロポレーションは当業者に知られている。用いられる宿主細胞に応じて、その細胞に対して適した標準的な方法を用いて形質転換はなされる。前掲のSambrookら，に記載された塩化カルシウムを用いるカルシウム処理又はエレクトロポレーションが、一般的に原核生物に対して用いられる。アグロバクテリウム・トゥメファシエンスによる感染が、Shawら, Gene, 23:315(1983)及び１９８９年６月２９日公開のＷＯ８９／０５８５９に記載されているように、或る種の植物細胞の形質転換に用いられる。このような細胞壁のない哺乳動物の細胞に対しては、Graham及びvan der Eb, Virology, 52:456-457 (1978)のリン酸カルシウム沈降法が好ましい。哺乳動物細胞の宿主系形質転換の一般的な態様は米国特許第４，３９９，２１６号に記載されている。酵母菌中への形質転換は、典型的には、Van Solingenら, J. Bact., 130:946 (1977)及びHsiaoら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76:3829 (1979)の方法に従って実施される。しかしながら、ＤＮＡを細胞中に導入する他の方法、例えば、核マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、無傷の細胞、又はポリカチオン、例えばポリブレン、ポリオルニチン等を用いる細菌プロトプラスト融合もまた用いることもできる。哺乳動物細胞を形質転換するための種々の技術については、Keownら, Methods in Enzymology, 185:527-537 (1990)及び Mansourら, Nature, 336:348-352 (1988)を参照のこと。
【００８７】
ここに記載のベクターにＤＮＡをクローニングあるいは発現するために適切な宿主細胞は、原核生物、酵母菌、又は高等真核生物細胞である。適切な原核生物は、限定するものではないが、真正細菌、例えばグラム陰性又はグラム陽性生物体、例えば大腸菌のような腸内細菌科を含む。種々の大腸菌株が公衆に利用可能であり、例えば、大腸菌Ｋ１２株ＭＭ２９４（ＡＴＣＣ３１，４４６）；大腸菌Ｘ１７７６（ＡＴＣＣ３１，５３７）；大腸菌株Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ２７，３２５）及びＫ５７７２（ＡＴＣＣ５３，６３５）である。他の好ましい原核動物宿主細胞は、大腸菌、例えば、E. coli、エンテロバクター、エルビニア(Erwinia)、クレブシエラ(Klebsiella)、プロテウス(Proteus)、サルモネラ、例えば、ネズミチフス菌、セラチア、例えば、セラチアマルセサンス(Serratia marcescans) 、及び赤痢菌、並びに桿菌、例えばバチルススブチルス(B. subtilis)及びバチルスリチェニフォルミス(B. licheniformis)（例えば、１９８９年４月１２日発行のＤＤ２６６，７１０に記載されたバチルスリチェニフォルミス４１Ｐ）、シュードモナス、例えば緑膿菌及びストレプトマイセスなどの腸内細菌科を含む。これらの例は限定ではなく例示である。株Ｗ３１１０は、組換えＤＮＡ生産発行のための共通の宿主株であるので一つの特に好ましい宿主又は親宿主である。好ましくは、宿主細胞は最小量のタンパク質分解酵素を分泌する。例えば、株Ｗ３１１０は、細胞に外来のタンパク質をコードする遺伝子における遺伝子変異をするように修飾してもよく、そのような宿主の例としては、完全な遺伝子型ｔｏｎＡを有する大腸菌Ｗ３１１０株１Ａ２；完全な遺伝子型ｔｏｎＡ  ｐｔｒ３を有する大腸菌Ｗ３１１０株９Ｅ４；完全な遺伝子型ｔｏｎＡ  ｐｒｔ３  ｐｈｏＡ  Ｅ１５  （ａｒｇＦ−ｌａｃ）１６９  ｄｅｇＰ  ｏｍｐＴ  ｋａｎrを有する大腸菌Ｗ３１１０株２７Ｃ７（ＡＴＣＣ  ５５，２４４）；完全な遺伝子型ｔｏｎＡ  ｐｔｒ３  ｐｈｏＡ  Ｅ１５  (ａｌｇＦ-ｌａｃ)１６９  ｄｅｇＰ  ｏｍｐＴ  ｒｂｓ７  ｉｌｖＧ  ｋａｎrを有する大腸菌Ｗ３１１０株３７Ｄ６；非カナマイシン耐性ｄｅｇＰ欠失変異を持つ３７Ｄ６株である大腸菌Ｗ３１１０株４０Ｂ４；及び１９９０年８月７日発行  米国特許第４，９４６，７８３号に開示された変異周辺質プロテアーゼを有する大腸菌株を含む。あるいは、クローニングのインビトロ法、例えばＰＣＲ又は他の核酸ポリメラーゼ反応が好ましい。
【００８８】
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母菌のような真核微生物は、ＰＲＯポリペプチドコード化ベクターのための適切なクローニング又は発現宿主である。サッカロミセス・セレヴィシアは、通常用いられる下等真核生物宿主微生物である。他に、シゾサッカロミセス・プロンブ(Schizosaccharomyces prombe)（Beach及びNurse, Nature, 290: 140 [1981]; １９８５年５月２日発行のＥＰ１３９，３８３）；クルベロミセス宿主(Kluveromyces hosts)（米国特許第４，９４３，５２９号; Fleerら, Bio/Technology, 9: 968-975 (1991)）、例えばクルベロミセスラクチス(K. lactis)（MW98-8C, CBS683, CBS4574; Louvencourtら, J. Bacteriol.154(2): 737-742 [1983]）、クルベロミセス・フラギリス(K. fragilis)（ＡＴＣＣ  １２，４２４）、クルベロミセスブルガリクス(K. bulgaricus)（ＡＴＣＣ  １６，０４５）、クルベロミセスウィケラミイ(K. wickeramii)（ＡＴＣＣ ２４,１７８）、クルベロミセスワルチイ(K. waltii)（ＡＴＣＣ  ５６，５００）、クルベロミセスドロソフィラルム(K. drosophilarum)（ＡＴＣＣ  ３６，９０６； Van den Bergら, Bio/Technology, 8: 135 (1990)）、クルベロミセス・テモトレランス(K. thermotolerans)及びクルベロミセス・マルキシアナス(K. marxianus)；ヤロウィア(yarrowia)（ＥＰ  ４０２，２２６）；ピチア・パストリス(Pichia pastoris)（ＥＰ  １８３，０７０； Sreekrishnaら, J. Basic Microbiol, 28: 265-278 [1988]）；カンジダ；トリコデルマレーシア(Trichoderma reesia)（ＥＰ  ２４４，２３４）；アカパンカビ（Caseら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76: 5259-5263 [1979]）；シュワニオマイセス(Schwanniomyces)、例えばシュワニオマイセスオクシデンタリス(Schwanniomyces occidentalis)（１９９０年１０月３１日発行のＥＰ３９４，５３８）；及び糸状真菌、例えば、ニューロスポラ、ペニシリウム、トリポクラジウム(Tolypocladium)（１９９１年１月１０日発行のＷＯ９１／００３５７）；及びアスペルギルス宿主、例えばアスペルギルスニダランス（Ballanceら, Biochem. Biophys. Res. Commun., 112: 284-289 [1983]; Tilburnら, Gene, 26: 205-221 [1983]; Yeltonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 1470-1474 [1984]）及びアスペルギルスニガー（Kelly及びHynes, EMBO J., 4: 475-479 [1985]）が含まれる。ここで好ましいメチロトロピック(Ｃ１化合物資化性、Methylotropic)酵母は、これらに限られないが、ハンセヌラ(Hansenula)、カンジダ、クロエケラ(Kloeckera)、ピチア(Pichia)、サッカロミセス、トルロプシス(Torulopsis)、及びロドトルラ(Rhodotorula)からなる属から選択されたメタノールで成長可能な酵母を含む。この酵母の分類の例示である特定の種のリストは、C. Anthony, The Biochemistry of Methylotrophs, 269 (1982)に記載されている。
【００８９】
グリコシル化ＰＲＯの発現に適切な宿主細胞は、多細胞生物から誘導される。無脊椎動物細胞の例としては、ショウジョウバエＳ２及びスポドスペラＳｆ９等の昆虫細胞並びに植物細胞が含まれる。有用な哺乳動物宿主株化細胞の例は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）及びＣＯＳ細胞を含む。より詳細な例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株 (ＣＯＳ-７，ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１);ヒト胚腎臓株（293又は懸濁培養での増殖のためにサブクローン化された293細胞、Grahamら, J. Gen Virol., 36:59 (1977)）;チャイニーズハムスター卵巣細胞／-ＤＨＦＲ(CHO, Urlaub及びChasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980));マウスのセルトリ細胞（TM4, Mather, Biol. Reprod., 23:243-251 (1980)）ヒト肺細胞 (Ｗ１３８，ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５); ヒト肝細胞 (Ｈｅｐ Ｇ２，ＨＢ  ８０６５); 及びマウス乳房腫瘍細胞 （ＭＭＴ ０６０５６２，ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１)を含む。適切な宿主細胞の選択は、この分野の技術常識内にある。
【００９０】
３．複製可能なベクターの選択及び使用
ＰＲＯポリペプチドをコードする核酸(例えば、ｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡ)は、クローニング(ＤＮＡの増幅)又は発現のために複製可能なベクター内に挿入される。様々なベクターが公的に入手可能である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス粒子、又はファージの形態とすることができる。適切な核酸配列が、種々の手法によってベクターに挿入される。一般に、ＤＮＡはこの分野で周知の技術を用いて適当な制限エンドヌクレアーゼ部位に挿入される。ベクター成分としては、一般に、これらに制限されるものではないが、１つ又は複数のシグナル配列、複製開始点、１つ又は複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列を含む。これらの成分の１つ又は複数を含む適当なベクターの作成には、当業者に知られた標準的なライゲーション技術を用いる。
【００９１】
ＰＲＯポリペプチドは直接的に組換え手法によって生産されるだけではなく、シグナル配列あるいは成熟タンパク質あるいはポリペプチドのＮ-末端に特異的切断部位を有する他のポリペプチドである異種性ポリペプチドとの融合ペプチドとしても生産される。一般に、シグナル配列はベクターの成分であるか、ベクターに挿入されるＰＲＯ-コード化ＤＮＡの一部である。シグナル配列は、例えばアルカリフォスファターゼ、ペニシリナーゼ、ｌｐｐあるいは熱安定性エンテロトキシンIIリーダーの群から選択された原核生物シグナル配列であってよい。酵母の分泌に関しては、シグナル配列は、酵母インベルターゼリーダー、アルファ因子リーダー(サッカロミセス(Saccharomyces)及びクルイベロマイシス(Kluyveromyces)α因子リーダーを含み、後者は米国特許第５，０１０，１８２号に記載されている)、又は酸ホスファターゼリーダー、カンジダアルビカンス（C.albicans)グルコアミラーゼリーダー(１９９０年４月４日発行のＥＰ３６２１７９)、又は１９９０年１１月１５日に公開されたＷＯ９０／１３６４６に記載されているシグナルであり得る。哺乳動物細胞の発現においては、哺乳動物シグナル配列は、同一あるいは関連ある種の分泌ポリペプチド由来のシグナル配列並びにウイルス分泌リーダーのようなタンパク質の直接分泌に使用してもよい。
【００９２】
発現及びクローニングベクターは共に１つ又は複数の選択された宿主細胞においてベクターの複製を可能にする核酸配列を含む。そのような配列は多くの細菌、酵母及びウイルスに対してよく知られている。プラスミドｐＢＲ３２２に由来する複製開始点は大部分のグラム陰性細菌に好適であり、２μプラスミド開始点は酵母に適しており、様々なウイルス開始点(ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ又はＢＰＶ)は哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに有用である。
発現及びクローニングベクターは、典型的には、選べるマーカーとも称される選択遺伝子を含む。典型的な選択遺伝子は、(a)アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキセートあるいはテトラサイクリンのような抗生物質あるいは他の毒素に耐性を与え、(b)栄養要求性欠陥を補い、又は(c)例えばバシリに対する遺伝子コードＤ-アラニンラセマーゼのような、複合培地から得られない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。
【００９３】
哺乳動物細胞に適切な選べるマーカーの例は、ＤＨＦＲあるいはチミジンキナーゼのようにＰＲＯ-コード化核酸を取り込むことのできる細胞成分を同定することのできるものである。野生型ＤＨＦＲを用いた場合の好適な宿主細胞は、Urlaubらにより Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980)に記載されているようにして調製され増殖されたＤＨＦＲ活性に欠陥のあるＣＨＯ株化細胞である。酵母菌中での使用に好適な選択遺伝子は酵母プラスミドＹＲｐ７に存在するｔｒｐ１遺伝子である［Stinchcombら, Nature, 282：39(1979)；Kingsmanら, Gene, 7：141(1979)；Tschemperら, Gene, 10：157(1980)］。ｔｒｐ１遺伝子は、例えば、ＡＴＣＣ番号４４０７６あるいはＰＥＰ４-１のようなトリプトファン内で成長する能力を欠く酵母菌の突然変異株に対する選択マーカーを提供する［Jones, Genetics, 85:12 (1977)］。
発現及びクローニングベクターは、通常、ＰＲＯ-コード化核酸配列に作用可能に結合し、ｍＲＮＡ合成を制御するプロモーターを含む。種々の可能な宿主細胞により認識される好適なプロモーターが知られている。原核生物宿主での使用に好適なプロモーターはβ-ラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系［Changら, Nature, 275:615 (1978)； Goeddelら, Nature, 281:544 (1979)］、アルカリフォスファターゼ、トリプトファン(trp)プロモーター系［Goeddel, Nucleic Acids Res., 8:4057 (1980); EP 36,776］、及びハイブリッドプロモーター、例えばｔａｃプロモーター［deBoer ら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80:21-25 (1983)］を含む。細菌系で使用するプロモータもまたＰＲＯポリペプチドをコードするＤＮＡと作用可能に結合したシャイン-ダルガーノ(S.D.)配列を有する。
【００９４】
酵母宿主と共に用いて好適なプロモーター配列の例としては、３-ホスホグリセラートキナーゼ［Hitzeman ら, J. Biol. Chem., 255:2073 (1980)］又は他の糖分解酵素［Hess ら, J. Adv. Enzyme Reg., 7:149 (1968)；Holland, Biochemistry, 17：4900(1987)］、例えばエノラーゼ、グリセルアルデヒド-３-リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース-６-リン酸イソメラーゼ、３-ホスホグリセレートムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオセリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、及びグルコキナーゼが含まれる。
他の酵母プロモーターとしては、成長条件によって転写が制御される付加的効果を有する誘発的プロモーターであり、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソチトクロムＣ、酸フォスファターゼ、窒素代謝と関連する分解性酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド-３-リン酸デヒドロゲナーゼ、及びマルトース及びガラクトースの利用を支配する酵素のプロモーター領域がある。酵母菌での発現に好適に用いられるベクターとプロモータはＥＰ ７３，６５７に更に記載されている。
【００９５】
哺乳動物の宿主細胞におけるベクターからのＰＲＯポリペプチド転写は、例えば、ポリオーマウィルス、伝染性上皮腫ウィルス(１９８９年７月５日公開のＵＫ２，２１１，５０４)、アデノウィルス(例えばアデノウィルス２)、ウシ乳頭腫ウィルス、トリ肉腫ウィルス、サイトメガロウィルス、レトロウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス及びサルウィルス４０(ＳＶ４０)のようなウィルスのゲノムから得られるプロモーター、異種性哺乳動物プロモーター、例えばアクチンプロモーター又は免疫グロブリンプロモーター、及び熱衝撃プロモーターから得られるプロモーターによって、このようなプロモーターが宿主細胞系に適合し得る限り制御される。
より高等の真核生物による所望のＰＲＯポリペプチドをコードするＤＮＡの転写は、ベクター中にエンハンサー配列を挿入することによって増強され得る。エンハンサーは、通常は約１０から３００塩基対で、プロモーターに作用してその転写を増強するＤＮＡのシス作動要素である。哺乳動物遺伝子由来の多くのエンハンサー配列が現在知られている(グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α-フェトプロテイン及びインスリン)。しかしながら、典型的には、真核細胞ウィルス由来のエンハンサーが用いられるであろう。例としては、複製起点の後期側のＳＶ４０エンハンサー(１００−２７０塩基対)、サイトメガロウィルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー及びアデノウィルスエンハンサーが含まれる。エンハンサーは、ＰＲＯコード化配列の５’又は３’位でベクター中にスプライシングされ得るが、好ましくはプロモーターから５’位に位置している。
【００９６】
また真核生物宿主細胞(酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、又は他の多細胞生物由来の有核細胞)に用いられる発現ベクターは、転写の終結及びｍＲＮＡの安定化に必要な配列も含む。このような配列は、真核生物又はウィルスのＤＮＡ又はｃＤＮＡの通常は５’、時には３’の非翻訳領域から取得できる。これらの領域は、ＰＲＯポリペプチドをコードするｍＲＮＡの非翻訳部分にポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含む。
組換え脊椎動物細胞培養でのＰＲＯポリペプチドの合成に適応化するのに適切な他の方法、ベクター及び宿主細胞は、Gethingら, Nature, 293:620-625 (1981); Manteiら, Nature, 281:40-46 (1979)；ＥＰ１１７，０６０；及びＥＰ１１７，０５８に記載されている。
【００９７】
４．遺伝子増幅／発現の検出
遺伝子の増幅及び／又は発現は、ここで提供された配列に基づき、適切に標識されたプローブを用い、例えば、従来よりのサザンブロット法、ｍＲＮＡの転写を定量化するノーザンブロット法［Thomas, Proc. Natl. Acad. Sci. USA,77:5201-5205 (1980)］、ドットブロット法(ＤＮＡ分析)、又はインサイツハイブリダイゼーション法によって、直接的に試料中で測定することができる。あるいは、ＤＮＡ二本鎖、ＲＮＡ二本鎖及びＤＮＡ-ＲＮＡハイブリッド二本鎖又はＤＮＡ-タンパク二本鎖を含む、特異的二本鎖を認識することができる抗体を用いることもできる。次いで、抗体を標識し、アッセイを実施することができ、ここで二本鎖は表面に結合しており、その結果二本鎖の表面での形成の時点でその二本鎖に結合した抗体の存在を検出することができる。
あるいは、遺伝子の発現は、遺伝子産物の発現を直接的に定量する免疫学的な方法、例えば細胞又は組織切片の免疫組織化学的染色及び細胞培養又は体液のアッセイによって、測定することもできる。試料液の免疫組織化学的染色及び／又はアッセイに有用な抗体は、モノクローナルでもポリクローナルでもよく、任意の哺乳動物で調製することができる。簡便には、抗体は、天然配列ＰＲＯポリペプチドに対して、又はここで提供されるＤＮＡ配列をベースとした合成ペプチドに対して、又はＰＲＯ ＤＮＡに融合し特異的抗体エピトープをコードする外因性配列に対して調製され得る。
【００９８】
５．ポリペプチドの精製
ＰＲＯポリペプチドの形態は、培地又は宿主細胞の溶菌液から回収することができる。膜結合性であるならば、適切な洗浄液(例えばトリトン-Ｘ１００)又は酵素的切断を用いて膜から引き離すことができる。ＰＲＯポリペプチドの発現に用いられる細胞は、凍結融解サイクル、超音波処理、機械的破壊、又は細胞溶解剤などの種々の化学的又は物理的手段によって破壊することができる。
ＰＲＯポリペプチドを、組換え細胞タンパク又はポリペプチドから精製することが望ましい。適切な精製手順の例である次の手順により精製される：すなわち、イオン交換カラムでの分画；エタノール沈殿；逆相ＨＰＬＣ；シリカ又はカチオン交換樹脂、例えばＤＥＡＥによるクロマトグラフィー；クロマトフォーカシング；ＳＤＳ-ＰＡＧＥ；硫酸アンモニウム沈殿；例えばセファデックスＧ-７５を用いるゲル濾過;ＩｇＧのような汚染物を除くプロテインＡセファロースカラム；及びＰＲＯポリペプチドのエピトープタグ形態を結合させる金属キレート化カラムである。この分野で知られ、例えば、Deutscher, Methodes in Enzymology, 182(1990)；Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, Springer-Verlag, New York (1982)に記載された多くのタンパク質精製方法を用いることができる。選ばれる精製過程は、例えば、用いられる生産方法及び特に生産される特定のＰＲＯの性質に依存する。
【００９９】
Ｅ．ＰＲＯの用途
ＰＲＯをコードする核酸配列（又はそれらの補体）は、ハイブリダイゼーションプローブとしての使用を含む分子生物学の分野において、染色体及び遺伝子マッピングにおいて、及びアンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡの生成において種々の用途を有している。また、ＰＲＯ核酸も、ここに記載される組換え技術によるＰＲＯポリペプチドの調製に有用である。
【０１００】
全長天然配列ＰＲＯ遺伝子又はその一部は、全長ＰＲＯｃＤＮＡの単離又はここに開示したＰＲＯ配列に対して所望の配列同一性を持つ更に他の遺伝子（例えば、ＰＲＯの天然発生変異体又は他の種からのＰＲＯをコードするもの）の単離のためのｃＤＮＡライブラリ用のハイブリダイゼーションプローブとして使用できる。場合によっては、プローブの長さは約２０〜約５０塩基である。ハイブリダイゼーションプローブは、少なくとも部分的に全長天然ヌクレオチド配列の新規な領域から誘導してもよく、それらの領域は、過度の実験をすることなく、天然配列ＰＲＯのプロモーター、エンハンサー成分及びイントロンを含むゲノム配列から誘導され得る。例えば、スクリーニング法は、ＰＲＯポリペプチド遺伝子のコード化領域を周知のＤＮＡ配列を用いて単離して約４０塩基の選択されたプローブを合成することを含む。ハイブリダイゼーションプローブは、３２Ｐ又は３５Ｓ等の放射性ヌクレオチド、又はアビディン／ビオチン結合系を介してプローブに結合したアルカリホスファターゼ等の酵素標識を含む種々の標識で標識されうる。本発明のＰＲＯポリペプチド遺伝子に相補的な配列を有する標識されたプローブは、ヒトｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ又はｍＲＮＡのライブラリーをスクリーニングし、そのライブラリーの何れのメンバーがプローブにハイブッド形成するかを決定するのに使用できる。ハイブリダイゼーション技術は、以下の実施例において更に詳細に記載する。
【０１０１】
本出願で開示する任意のＥＳＴはプローブと同様に、ここに記載した方法で用いることができる。
ＰＲＯ核酸の他の有用な断片は、標的ＰＲＯ ｍＲＮＡ（センス）又はＰＲＯ ＤＮＡ（アンチセンス）配列に結合できる一本鎖核酸配列（ＲＮＡ又はＤＮＡのいずれか）を含むアンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドを含む、アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは、本発明によると、ＰＲＯ ＤＮＡのコード化領域の断片を含む。このような断片は、一般的には少なくとも約１４ヌクレオチド、好ましくは約１４から３０ヌクレオチドを含む。与えられたタンパク質をコードするｃＤＮＡ配列に基づく、アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドを制御する可能性は、例えば、Stein及びCohen（Cancer Res. 48: 2659: 1988）及び van der Krolら,（BioTechniques 6: 958, 1988）に記載されている。
【０１０２】
アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドの標的核酸配列への結合は二重鎖の形成をもたらし、それは、二重鎖の分解の促進、転写又は翻訳の期外停止を含む幾つかの方法の一つ、又は他の方法により、標的配列の転写又は翻訳を阻止する。よって、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＰＲＯタンパク質の発現を阻止するのに用いられる。アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは、修飾糖−ホスホジエステル骨格（又は他の糖結合、ＷＯ９１／０６６２９に記載のもの等）を有するオリゴヌクレオチドをさらに含み、そのような糖結合は内因性ヌクレアーゼ耐性である。そのような耐性糖結合を持つオリゴヌクレオチドは、インビボで安定であるが（即ち、酵素分解に耐えうるが）、標的ヌクレオチド配列に結合できる配列特異性は保持している。
センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドの他の例は、ＷＯ９０／１００４８に記載されているもののような、有機部分、及びオリゴヌクレオチドの標的核酸配列への親和性を向上させる他の部分、例えばポリ-(Ｌ-リジン)に共有結合したオリゴヌクレオチドを含む。さらにまた、エリプチシン等の挿入剤、アルキル化剤又は金属作体をセンス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドに結合させ、アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドの標的ヌクレオチド配列への結合特異性を改変してもよい。
【０１０３】
アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、ＣａＰＯ４-媒介ＤＮＡ形質移入、エレクトロポレーションを含む任意の遺伝子転換方法により、又はエプスタイン-バーウイルスなどの遺伝子転換ベクターを用いることにより、標的核酸配列を含む細胞に導入される。好ましい方法では、アンチセンス又はセンスオリゴヌクレオチドは、適切なレトロウイルスベクターに挿入される。標的核酸配列を含む細胞は、インビボ又はエキソビボで組換えレトロウイルスベクターに接触させる。好適なレトロウイルスベクターは、これらに限られないが、マウスレトロウイルスＭ-ＭｕＬＶから誘導されるもの、Ｎ２（Ｍ-ＭｕＬＶから誘導されたレトロウイルス）、又はＤＣＴ５Ａ、ＤＣＴ５Ｂ及びＤＣＴ５Ｃと命名されたダブルコピーベクター（ＷＯ９０／１３６４１参照）を含む。
また、センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＷＯ９１／０４７５３に記載されているように、リガンド結合分子との複合体の形成により標的配列を含む細胞に導入してもよい。適切なリガンド結合分子は、これらに限られないが、細胞表面レセプター、成長因子、他のサイトカイン、又は細胞表面レセプターに結合する他のリガンドを含む。好ましくは、リガンド結合分子の複合体形成は、リガンド結合分子がその対応する分子又はレセプターに結合する、あるいはセンス又はアンチセンスオリゴヌクレオチド又はその複合体の細胞への侵入を阻止する能力を実質的に阻害しない。
【０１０４】
あるいは、センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＷＯ９０／１０４４８に記載されたように、オリゴヌクレオチド−脂質複合体の形成により標的核酸配列を含む細胞に導入してもよい。センス又はアンチセンスオリゴヌクレオチド−脂質複合体は、好ましくは内因性リパーゼにより細胞内で分解される。
アンチセンスＲＮＡ又はＤＮＡ分子は一般に少なくとも約５塩基長、約１０塩基長、約１５塩基長、約２０塩基長、約２５塩基長、約３０塩基長、約３５塩基長、約４０塩基長、約４５塩基長、約５０塩基長、約５５塩基長、約６０塩基長、約６５塩基長、約７０塩基長、約７５塩基長、約８０塩基長、約８５塩基長、約９０塩基長、約９５塩基長、約１００塩基長、あるいはそれ以上である。
また、プローブは、ＰＣＲ技術に用いて、密接に関連したＰＲＯコード化配列の同定のための配列のプールを作成することができる。
また、ＰＲＯをコードするヌクレオチド配列は、そのＰＲＯをコードする遺伝子のマッピングのため、及び遺伝子疾患を持つ個体の遺伝子分析のためのハイブリダイゼーションプローブの作成にも用いることができる。ここに提供されるヌクレオチド配列は、インサイツハイブリダイゼーション、既知の染色体マーカーに対する結合分析、及びライブラリーでのハイブリダイゼーションスクリーニング等の周知の技術を用いて、染色体及び染色体の特定領域にマッピングすることができる。
【０１０５】
ＰＲＯのコード化配列が他のタンパク質に結合するタンパク質をコードする場合（例えば、ＰＲＯがレセプターである場合）、ＰＲＯは、そのリガンドを同定するアッセイに用いることができる。このような方法により、レセプター／リガンド結合性相互作用の阻害剤を同定することができる。このような結合性相互作用に含まれるタンパク質も、ペプチド又は小分子阻害剤又は結合性相互作用のアゴニストのスクリーニングに用いることができる。また、レセプターＰＲＯは関連するリガンドの単離にも使用できる。スクリーニングアッセイは、天然ＰＲＯ又はＰＲＯのレセプターの生物学的活性に似たリード化合物の発見のために設計される。このようなスクリーニングアッセイは、化学的ライブラリーの高スループットスクリーニングにも用いられ、小分子候補薬剤の同定に特に適したものとする。考慮される小分子は、合成有機又は無機化合物を含む。アッセイは、この分野で良く知られ特徴付けられているタンパク質−タンパク質結合アッセイ、生物学的スクリーニングアッセイ、免疫検定及び細胞ベースのアッセイを含む種々の型式で実施される。
【０１０６】
また、ＰＲＯ又はその任意の修飾型をコードする核酸は、トランスジェニック動物又は「ノックアウト」動物のいずれかを産生することに使用でき、これらは治療的に有用な試薬の開発やスクリーニングに有用である。トランスジェニック動物(例えばマウス又はラット)とは、出生前、例えば胚段階で、その動物又はその動物の祖先に導入された導入遺伝子を含む細胞を有する動物である。導入遺伝子とは、トランスジェニック動物が発生する細胞のゲノムに組み込まれたＤＮＡである。一実施形態では、ＰＲＯをコードするｃＤＮＡは、ＰＲＯをコードするＤＮＡを発現する細胞を含むトランスジェニック動物を作製するために使用するゲノム配列及び確立された技術に基づいて、ＰＲＯをコードするゲノムＤＮＡをクローン化するために使用することができる。トランスジェニック動物、特にマウス又はラット等の特定の動物を産生する方法は、当該分野において常套的になっており、例えば米国特許第４，７３６，８６６号や第４，８７０，００９号に記述されている。典型的には、特定の細胞を組織特異的エンハンサーでのＰＲＯ導入遺伝子の導入の標的にする。胚段階で動物の生殖系列に導入されたＰＲＯコード化導入遺伝子のコピーを含むトランスジェニック動物はＰＲＯをコードするＤＮＡの増大した発現の影響を調べるために使用できる。このような動物は、例えばその過剰発現を伴う病理学的状態に対して保護をもたらすと思われる試薬のテスター動物として使用できる。本発明のこの態様においては、動物を試薬で治療し、導入遺伝子を有する未治療の動物に比べ病理学的状態の発症率が低ければ、病理学的状態に対する治療上の処置の可能性が示される。
【０１０７】
あるいは、ＰＲＯの非ヒト相同体は、動物の胚性細胞に導入されたＰＲＯをコードする変更ゲノムＤＮＡと、ＰＲＯをコードする内在性遺伝子との間の相同的組換えによって、ＰＲＯをコードする欠陥又は変更遺伝子を有するＰＲＯ「ノックアウト」動物を作成するために使用できる。例えば、ＰＲＯをコードするｃＤＮＡは、確立された技術に従い、ＰＲＯをコードするゲノムＤＮＡのクローニングに使用できる。ＰＲＯをコードするゲノムＤＮＡの一部を欠失したり、組み込みを監視するために使用する選択可能なマーカーをコードする遺伝子等の他の遺伝子で置換することができる。典型的には、ベクターは無変化のフランキングＤＮＡ(５’と３’末端の両方)を数キロベース含む［例えば、相同的組換えベクターについてはThomas及びCapecchi, Cell, 51:503(1987)を参照のこと］。ベクターは胚性幹細胞に(例えばエレクトロポレーションによって)導入し、導入されたＤＮＡが内在性ＤＮＡと相同的に組換えられた細胞が選択された［例えば、Liら, Cell, 69:915(1992)参照］。選択された細胞は次に動物(例えばマウス又はラット)の胚盤胞内に注入されて集合キメラを形成する［例えば、Bradley, Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: A Practical Approach, E. J. Robertson, ed. (IRL, Oxford, 1987), pp. 113-152参照のこと］。その後、キメラ性胚を適切な偽妊娠の雌性乳母に移植し、期間をおいて「ノックアウト」動物を作り出す。胚細胞に相同的に組換えられたＤＮＡを有する子孫は標準的な技術により同定され、それらを利用して動物の全細胞が相同的に組換えられたＤＮＡを含む動物を繁殖させることができる。ノックアウト動物は、ＰＲＯポリペプチドの欠乏によるある種の病理的状態及びその病理的状態の進行に対する防御能力によって特徴付けられる。  
【０１０８】
また、ＰＲＯポリペプチドをコードする核酸は遺伝子治療にも使用できる。遺伝子治療用途においては、例えば欠陥遺伝子を置換するため、治療的有効量の遺伝子産物のインビボ合成を達成するために遺伝子が導入される。「遺伝子治療」とは、１回の処理により継続的効果が達成される従来の遺伝子治療と、治療的に有効なＤＮＡ又はｍＲＮＡの１回又は繰り返し投与を含む遺伝子治療薬の投与の両方を含む。アンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡは、ある種の遺伝子のインビボ発現を阻止する治療薬として用いることができる。短いアンチセンスオリゴヌクレオチドを、細胞膜による制限された取り込みに起因する低い細胞内濃度にもかかわらず、それが阻害剤として作用する細胞中に移入できることは既に示されている（Zamecnikら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 4143-4146 [1986]）。オリゴヌクレオチドは、それらの負に荷電したリン酸ジエステル基を非荷電基で置換することによって取り込みを促進するように修飾してもよい。
【０１０９】
生存可能な細胞に核酸を導入するための種々の技術が存在する。これらの技術は、核酸が培養細胞にインビトロで、あるいは意図する宿主の細胞においてインビボで移入されるかに応じて変わる。核酸を哺乳動物細胞にインビトロで移入するのに適した方法は、リポソーム、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、ＤＥＡＥ-デキストラン、リン酸カルシウム沈殿法などを含む。現在好ましいインビボ遺伝子移入技術は、ウイルス（典型的にはレトロウイルス）ベクターでの形質移入及びウイルス被覆タンパク質-リポソーム媒介形質移入である（Dzauら, Trends  in Biotechnology 11, 205-210(1993)）。幾つかの状況では、核酸供給源を、細胞表面膜タンパク質又は標的細胞に特異的な抗体、標的細胞上のレセプターに対するリガンド等の標的細胞を標的化する薬剤とともに提供するのが望ましい。リポソームを用いる場合、エンドサイトーシスを伴って細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質、例えば、特定の細胞型向性のキャプシドタンパク質又はその断片、サイクルにおいて内部移行を受けるタンパク質に対する抗体、細胞内局在化を標的とし細胞内半減期を向上させるタンパク質が、標的化及び／又は取り込みの促進のために用いられる。レセプター媒介エンドサイトーシスは、例えば、Wuら, J. Biol. Chem. 262, 4429-4432 (1987); 及びWagnerら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 3410-3414 (1990)によって記述されている。遺伝子作成及び遺伝子治療のプロトコールの概説については、Andersonら, Science 256, 808-813 (1992)を参照のこと。
【０１１０】
ここに記載したＰＲＯポリペプチドをタンパク質電気泳動目的の分子量マーカーとして用いてもよく、単離された核酸配列を、これらのマーカーを組み換え発現に用いてもよい。
ここに記載したＰＲＯポリペプチド又はその断片をコードする核酸分子は、染色体の同定に有用である。この点において、実際の配列に基づく染色体マーキング試薬は殆ど利用可能ではないため、新規な染色体マーカーの同定の必要である。本発明の各ＰＲＯ核酸分子は染色体マーカーとして使用できる。
また、本発明のＰＲＯポリペプチド及び核酸分子は組織タイピングに使用でき、本発明のＰＲＯポリペプチドは、好ましくは同じ型の正常組織に比較して疾患性組織において、一方の組織で他方に比較して異なる発現をする。ＰＲＯ核酸分子には、ＰＣＲ、ノーザン分析、サザン分析及びウェスタン分析のプローブ生成のための用途が見出されるであろう。
【０１１１】
ここに記載したＰＲＯポリペプチドは治療薬として用いてもよい。本発明のＰＲＯポリペプチドは、製薬的に有用な組成物を調製するのに知られた方法に従って製剤され、これにより、このＰＲＯ生成物は製薬的に許容される担体媒体と混合される。治療用製剤は、凍結乾燥された製剤又は水性溶液の形態で、任意的な製薬上許容可能なキャリア、賦形剤又は安定剤と、所望の精製度を有する活性成分とを混合することにより(Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, A. Osol, Ed., [1980])、調製され保管される。許容される担体、賦形剤又は安定剤は、用いる投与量及び濃度ではレシピエントに対して無毒性であり、リン酸、クエン酸及び他の有機酸等の緩衝液；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量(残基数１０個未満)ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性重合体；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリシン等のアミノ酸；グルコース、マンノース又はデキストリン等の単糖類、二糖類又は他の炭水化物、EDTA等のキレート剤、マンニトール又はソルビトール等の糖類、ナトリウム等の塩形成対イオン；及び／又はTWEEN(商品名)、PLURONICS(商品名)又はＰＥＧ等の非イオン性界面活性剤を含む。
【０１１２】
インビボ投与に使用される製剤は滅菌されていなくてはならない。これは、凍結乾燥及び再構成の前又は後に、滅菌フィルター膜を通す濾過により容易に達成される。
ここで、本発明の製薬組成物は一般に、無菌のアクセスポートを具備する容器、例えば、皮下注射針で貫通可能なストッパーを持つ静脈内バッグ又はバイアル内に配される。
投与経路は周知の方法、例えば、静脈内、腹膜内、脳内、筋肉内、眼内、動脈内又は病巣内経路での注射又は注入、局所投与、又は徐放系による。
本発明の製薬組成物の用量及び望ましい薬物濃度は、意図する特定の用途に応じて変化する。適切な用量又は投与経路の決定は、通常の内科医の技量の範囲内である。動物実験は、ヒト治療のための有効量の決定についての信頼できるガイダンスを提供する。有効量の種間スケーリングは、Toxicokinetics and New Drug Development, Yacobiら, 編, Pergamon Press, New York 1989, pp. 42-96のMordenti, J. 及びChappell, W. 「The use of interspecies scaling in toxicokinetics」に記載された原理に従って実施できる。
【０１１３】
ＰＲＯポリペプチド又はそのアゴニスト又はアンタゴニストのインビボ投与が用いられる場合、正常な投与量は、投与経路に応じて、哺乳動物の体重当たり１日に約１０ｎｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇまで、好ましくは約１μｇ／ｋｇ／日から１０ｍｇ／ｋｇ／日である。特定の用量及び輸送方法の指針は文献に与えられている；例えば、米国特許第４，６５７，７６０号、第５，２０６，３４４号、又は第５，２２５，２１２号参照。異なる製剤が異なる治療用化合物及び異なる疾患に有効であること、例えば一つの器官又は組織を標的とする投与には、他の器官又は組織とは異なる方式で輸送することが必要であることが予想される。
ＰＲＯポリペプチドの投与を必要とする任意の疾患又は疾病の治療に適した放出特性を持つ製剤でＰＲＯポリペプチドの持続放出が望まれる場合、ＰＲＯポリペプチドのマイクロカプセル化が考えられる。持続放出のための組換えタンパク質のマイクロカプセル化は、ヒト成長ホルモン（rhGH）、インターフェロン-（rhIFN-）、インターロイキン-２、及びMN rgp120で成功裏に実施されている。Johnsonら, Nat. Med., 2: 795-799 (1996); Yasuda, Biomed. Ther., 27: 1221-1223 (1993); Horaら, Bio/Technology, 8: 755-758 (1990); Cleland, 「Design and Production of Single Immunization Vaccines Using Polyactide Polyglycolide Microsphere Systems」Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach, Powell 及び Newman編, (Plenum Press: New York, 1995), p.439-462; ＷＯ９７／０３６９２，ＷＯ９６／４００７２，ＷＯ９６／０７３９９；及び米国特許第５，６５４，０１０号。
【０１１４】
これらのタンパク質の持続放出製剤は、ポリ-乳酸-コグリコール酸（ＰＬＧＡ）ポリマーを用い、その生体適合性及び広範囲の生分解特性に基づいて開発された。ＰＬＧＡの分解生成物である乳酸及びグリコール酸は、ヒト身体内で即座にクリアされる。さらに、このポリマーの分解性は、分子量及び組成に依存して数ヶ月から数年まで調節できる。Lewis, 「Controlled release of bioactive agents from lactide/glycolide polymer」: M. Chasin及び R. Langer (編), Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems (Marcel Dekker: New York, 1990), pp. 1-41。
本発明は、ＰＲＯポリペプチドに類似する（アゴニスト）又はＰＲＯポリペプチドの効果を阻害する（アンタゴニスト）ものを同定するための化合物のスクリーニング方法も包含する。アンタゴニスト候補薬のスクリーニングアッセイは、ここに同定した遺伝子にコードされるＰＲＯポリペプチドと結合又は複合体形成する化合物、又は他にコード化ポリペプチドの他の細胞性タンパク質との相互作用を阻害する化合物を同定するために設計される。このようなスクリーニングアッセイは、それを特に小分子候補薬の同定に適したものにする、化学的ライブラリの高スループットスクリーニングに適用可能なアッセイを含む。
該アッセイは、タンパク質−タンパク質結合アッセイ、生化学的スクリーニングアッセイ、イムノアッセイ、及び細胞ベースのアッセイで、この分野で知られたものを含む種々の方式で実施される。
アンタゴニストについての全てのアッセイは、それらが候補薬をここで同定された核酸にコードされるＰＲＯポリペプチドと、これら２つの成分が相互作用するのに十分な条件下及び時間で接触させることを必要とすることにおいて共通する。
【０１１５】
結合アッセイにおいて、相互作用は結合であり、形成された複合体は単離されるか、又は反応混合物中で検出される。特別な実施態様では、ここに同定された遺伝子にコードされるＰＲＯポリペプチド又は候補薬が、共有又は非共有結合により固相、例えばミクロタイタープレートに固定化される。非共有結合は、一般的に固体表面をＰＲＯポリペプチドの溶液で被覆し乾燥させることにより達成される。あるいは、固定化されるＰＲＯポリペプチドに特異的な固定化抗体、例えばモノクローナル抗体を、それを固体表面に固着させるために用いることができる。アッセイは、固定化成分、例えば固着成分を含む被覆表面に、検出可能な標識で標識されていてもよい非固定化成分を添加することにより実施される。反応が完了したとき、未反応成分を例えば洗浄により除去し、固体表面に固着した複合体を検出する。最初の非固定化成分が検出可能な標識を有している場合、表面に固定化された標識の検出は複合体形成が起こったことを示す。最初の非固定化成分が標識を持たない場合は、複合体形成は、例えば、固定化された複合体に特異的に結合する標識抗体によって検出できる。
【０１１６】
候補化合物が相互作用するがここに同定した遺伝子にコードされる特定のＰＲＯポリペプチに結合しない場合、そのポリペプチドとの相互作用は、タンパク質-タンパク質相互作用を検出するために良く知られている方法によってアッセイすることができる。そのようなアッセイは、架橋、同時免疫沈降、及び勾配又はクロマトグラフィカラムを通す同時精製などの伝統的な手法を含む。さらに、タンパク質-タンパク質相互作用は、Chevray及びNathans［Proc.Natl. Acad. Sci. USA 89, 5789-5793 (1991)］に開示されているように、Fields及び共同研究者ら［Fiels及びSong, Nature(London) 340, 245-246 (1989); Chienら, Proc.Natl. Acad. Sci. USA 88, 9578-9582 (1991)］に記載された酵母ベースの遺伝子系を用いることによってモニターすることができる。酵母ＧＡＬ４などの多くの転写活性化剤は、２つの物理的に別個のモジュラードメインからなり、一方はＤＮＡ結合ドメインとして作用し、他方は転写活性化ドメインとして機能する。前出の文献に記載された酵母発現系（一般に「２-ハイブリッド系」と呼ばれる）は、この特性の長所を利用し、並びに２つのハイブリッドタンパク質を用い、一方では標的タンパク質がＧＡＬ４のＤＮＡ結合ドメインに融合し、他方では候補となる活性化タンパク質が活性化ドメインに融合している。ＧＡＬ１-ｌａｃＺリポーター遺伝子のＧＡＬ４活性化プロモーターの制御下での発現は、タンパク質-タンパク質相互作用を介したＧＡＬ４活性の再構成に依存する。相互作用するポリペプチドを含むコロニーは、β-ガラクトシダーゼに対する色素生産性物質で検出される。２-ハイブリッド技術を用いた２つの特定なタンパク質間のタンパク質-タンパク質相互作用を同定するための完全なキット（MATCHMAKER(商品名)）は、Clontechから商業的に入手可能である。また、この系は、特定のタンパク質相互作用に含まれるタンパク質ドメインのマッピング、並びにこれら相互作用にとって重要なアミノ酸残基の特定へ拡大適用することができる。
【０１１７】
ここで同定されたＰＲＯポリペプチドをコードする遺伝子と細胞内又は細胞外成分との相互作用を阻害する化合物は、次のように試験できる：通常、反応混合物は、遺伝子産物と細胞外又は細胞内成分を、これら２つの生成物の相互作用及び結合が可能な条件下及び時間に渡って含むように調製される。候補化合物が結合を阻害する能力を試験するために、反応は試験化合物の不存在及び存在下で実施される。さらに、プラシーボを第３の反応混合物に添加してポジティブコトロールを提供してもよい。混合物中に存在する試験化合物と細胞内又は細胞外成分との結合（複合体形成）は上記のようにモニターされる。試験化合物を含有する反応混合物ではなく、コントロール反応における複合体の形成は、試験化合物が試験化合物とその結合パートナーとの相互作用を阻害することを示す。
【０１１８】
アンタゴニストをアッセイするためには、特定の活性についてスクリーニングされる化合物とともにＰＲＯポリペプチドを細胞へ添加してもよく、ＰＲＯポリペプチド存在下における対象活性を阻害する化合物の能力は、化合物がＰＲＯポリペプチドのアンタゴニストであることを示す。あるいは、ＰＲＯポリペプチドと膜結合ＰＲＯポリペプチドレセプター又は組換えレセプターを有する潜在的アンタゴニストを競合的阻害アッセイに適した条件下で結合させることによって、アンタゴニストを検出してもよい。放射活性などでＰＲＯポリペプチドを標識することが可能であり、潜在的アンタゴニストの有効性を判断するためにレセプターに結合したＰＲＯポリペプチドの数を利用することができる。レセプターをコードする遺伝子は、当業者に知られた多くの方法、例えばリガンドパンニング及びFACSソートによって同定できる。Coliganら, Current Protocols in Immun., 1(2): 第５章(1991)。好ましくは、発現クローニングが用いられ、ポリアデニル化ＲＮＡがＰＲＯポリペプチドに反応性の細胞から調製され、このＲＮＡから生成されたｃＤＮＡライブラリがプールに分配され、ＣＯＳ細胞又はＰＲＯポリペプチド反応性でない他の細胞の形質移入に使用される。スライドガラスで成長させた形質移入細胞を、標識したＰＲＯポリペプチドで暴露する。このＰＲＯポリペプチドは、ヨウ素化又は部位特異的タンパク質キナーゼの認識部位の封入を含む種々の手段で標識できる。固定及びインキュベーションの後、スライドにオートラジオグラフィ分析を施す。ポジティブプールを同定し、相互作用サブプール化及び再スクリーニング工程を用いてサブプールを調製して再形質移入し、最終的に推定レセプターをコードする単一のクローンを生成する。
【０１１９】
レセプター同定の代替的方法として、標識下ＰＲＯポリペプチドをレセプター分子を発現する細胞膜又は抽出調製物に光親和性結合させることができる。架橋材料をＰＡＧＥで溶解させ、Ｘ線フィルムへ暴露する。レセプターを含む標識複合体を励起し、ペプチド断片へ分解し、タンパク質マイクロ配列決定を施すことができる。マイクロ配列決定から得たアミノ酸配列は、推定レセプターをコードする遺伝子を同定するｃＤＮＡライブラリをスクリーニングする縮重オリゴヌクレオチドプローブの一組の設計に用いられる。
アンタゴニストの他の検定では、レセプターを発現する哺乳動物細胞又は膜調製物を、候補化合物の存在下で標識ＰＲＯポリペプチドとともにインキュベートする。次いで、この相互作用を促進又は阻止する化合物の能力を測定する。
潜在的なアンタゴニストのより特別な例は、免疫グロブリンとＰＲＯポリペプチドとの融合体に結合するオリゴヌクレオチド、特に、限られないが、ポリペプチド-及びモノクローナル抗体及び抗体断片、一本鎖抗体、抗イディオタイプ抗体、及びこれらの抗体又は断片のキメラ又はヒト化形態、並びにヒト抗体及び抗体断片を含む抗体を含んでいる。あるいは、潜在的アンタゴニストは、密接に関連したタンパク質、例えば、レセプターを認識するが効果を与えず、従ってＰＲＯポリペプチドの作用を競合的に阻害するＰＲＯポリペプチドの変異形態であってもよい。
【０１２０】
他の潜在的なＰＲＯポリペプチドアンタゴニストは、アンチセンス技術を用いて調製されたアンチセンスＲＮＡ又はＤＮＡ作成物であり、例えば、アンチセンスＲＮＡ又はＤＮＡは、標的ｍＲＮＡにハイブリッド形成してタンパク質翻訳を妨害することによりｍＲＮＡの翻訳を直接阻止するように作用する。アンチセンス技術は、トリプルへリックス形成又はアンチセンスＤＮＡ又はＲＮＡを通して遺伝子発現を制御するのに使用でき、それらの方法はともに、ポリペプチドヌクレオチドのＤＮＡ又はＲＮＡへの結合に基づく。例えば、ここでの成熟ＰＲＯポリペプチドをコードするポリペプチドヌクレオチド配列の５’コード化部分は、約１０から４０塩基対長のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドの設計に使用される。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、転写に含まれる遺伝子の領域に相補的であるように設計され（トリプルへリックス−Leeら, Nucl, Acid Res., 6: 3073 (1979); Cooneyら, Science, 241: 456 (1988); Dervanら, Science, 251: 1360 (1991)参照）、それによりＰＲＯポリペプチドの転写及び生成を防止する。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドはインビボでｍＲＮＡにハイブリッド形成してｍＲＮＡ分子のＰＲＯポリペプチドへの翻訳を阻止する（アンチセンス−Okano, Neurochem., 56: 560 (1991); Oligodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expression (SRS Press: Boca Raton, FL, 1988)）。上記のオリゴヌクレオチドは、細胞に輸送され、アンチセンスＲＮＡ又はＤＮＡをインビボで発現させて、ＰＲＯポリペプチドの生産を阻害することもできる。アンチセンスＤＮＡが用いられる場合、翻訳開始部位、例えば標的遺伝子ヌクレオチド配列の−１０から＋１０位置の間から誘導されるオリゴデオキシリボヌクレオチドが好ましい。
【０１２１】
潜在的アンタゴニストは、ＰＲＯポリペプチドの活性部位、レセプター結合部位、又は成長因子又は他の関連結合部位に結合し、それによりＰＲＯポリペプチドの正常な生物学的活性を阻止する小分子を含む。小分子の例は、これらに限られないが、小型ペプチド又はペプチド様分子、好ましくは可溶性ペプチド、及び合成非ペプチド有機又は無機化合物を含む。
リボザイムは、ＲＮＡの特異的切断を触媒できる酵素的ＲＮＡ分子である。リボザイムは、相補的標的ＲＮＡへの配列特異的ハイブリッド形成、次いでヌクレオチド鎖切断的切断により作用する。潜在的ＲＮＡ標的内の特異的リボザイム切断部位は、既知の技術で同定できる。更なる詳細は、例えば、Rossi, Current Biology 4: 469-471 (1994)及びＰＣＴ公報、番号ＷＯ９７／３３５５１（１９９７年９月１８日公開）を参照。
【０１２２】
転写阻害に用いられるトリプルヘリックス形成における核酸分子は一本鎖でデオキシヌクレオチドからなる。これらのオリゴヌクレオチドの基本組成は、フーグスチン塩基対則を介するトリプルヘリックス形成を促進するように設計され、それは一般に二重鎖の一方の鎖上のプリン又はピリミジンのサイズ変更可能な伸展を必要とする。さらなる詳細は、例えば、ＰＣＴ公報、番号ＷＯ９７／３３５５１、上掲を参照。
これらの小分子は、上記で検討したスクリーニングアッセイの１つ又は複数の任意のものにより及び／又は当業者に良く知られた他の任意のスクリーニング技術により同定できる。
また、ここで開示されている分子の診断的及び治療的利用は、下記に開示及び記載のポジティブ機能アッセイヒットに基づいている。
【０１２３】
Ｆ．抗ＰＲＯ抗体
本発明は、さらに抗ＰＲＯ抗体を提供するものである。抗体の例としては、ポリクローナル、モノクローナル、ヒト化、二重特異性及びヘテロコンジュゲート抗体が含まれる。
【０１２４】
１．ポリクローナル抗体
抗ＰＲＯ抗体はポリクローナル抗体を含む。ポリクローナル抗体の調製方法は当業者に知られている。哺乳動物においてポリクローナル抗体は、例えば免疫剤、及び所望するのであればアジュバントを、１つ又は複数回注射することで発生させることができる。典型的には、免疫剤及び／又はアジュバントを複数回皮下又は腹腔内注射により、哺乳動物に注射する。免疫剤は、ＰＲＯポリペプチド又はその融合タンパク質を含みうる。免疫剤を免疫化された哺乳動物において免疫原性が知られているタンパク質に抱合させるのが有用である。このような免疫原タンパク質の例は、これらに限られないが、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン及び大豆トリプシンインヒビターが含まれる。使用され得るアジュバントの例には、フロイント完全アジュバント及びMPL-TDMアジュバント(モノホスホリル脂質Ａ、合成トレハロースジコリノミコラート)が含まれる。免疫化プロトコールは、過度の実験なく当業者により選択されるであろう。
【０１２５】
２．モノクローナル抗体
あるいは、抗ＰＲＯ抗体はモノクローナル抗体であってもよい。モノクローナル抗体は、Kohler及びMilstein, Nature, 256:495 (1975)に記載されているようなハイブリドーマ法を使用することで調製することができる。ハイブリドーマ法では、マウス、ハムスター又は他の適切な宿主動物を典型的には免疫剤により免疫化することで、免疫剤に特異的に結合する抗体を生成するか或いは生成可能なリンパ球を誘発する。あるいは、リンパ球をインビトロで免疫化することもできる。
【０１２６】
免疫剤は、典型的には対象とするＰＲＯポリペプチド又はその融合タンパク質を含む。一般にヒト由来の細胞が望まれる場合には末梢血リンパ球(「ＰＢＬｓ」)が使用され、あるいは非ヒト哺乳動物源が望まれている場合は、脾臓細胞又はリンパ節細胞が使用される。次いで、ポリエチレングリコール等の適当な融合剤を用いてリンパ球を不死化株化細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を形成する［Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, (1986) pp. 59-103］。不死化株化細胞は、通常は、形質転換した哺乳動物細胞、特に齧歯動物、ウシ、及びヒト由来の骨髄腫細胞である。通常、ラット又はマウスの骨髄腫株化細胞が使用される。ハイブリドーマ細胞は、好ましくは、未融合の不死化細胞の生存又は成長を阻害する一又は複数の物質を含有する適切な培地で培養される。例えば、親細胞が、酵素のヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ)を欠いていると、ハイブリドーマの培地は、典型的には、ヒポキサチン、アミノプチリン及びチミジンを含み(「ＨＡＴ培地」)、この物質がＨＧＰＲＴ欠乏性細胞の増殖を阻止する。
【０１２７】
好ましい不死化株化細胞は、効率的に融合し、選択された抗体生成細胞による安定した高レベルの抗体発現を支援し、ＨＡＴ培地のような培地に対して感受性である。より好ましい不死化株化細胞はマウス骨髄腫株であり、これは例えばカリフォルニア州サンディエゴのSalk Institute Cell Distribution Centerやメリーランド州ロックビルのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションより入手可能である。ヒトモノクローナル抗体を生成するためのヒト骨髄腫及びマウス-ヒト異種骨髄腫株化細胞も開示されている［Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984)、Brodeurら, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., New York, (1987) pp. 51-63］。
次いでハイブリドーマ細胞が培養される培養培地を、ＰＲＯに対するモノクローナル抗体の存在について検定する。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって生成されたモノクローナル抗体の結合特異性は免疫沈降又はラジオイムノアッセイ(ＲＩＡ)や酵素結合免疫測定法(ＥＬＩＳＡ)等のインビトロ結合検定法によって測定する。このような技術及びアッセイは、当該分野において公知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えばMunson及びPollard, Anal. Biochem., 107:220 (1980)によるスキャッチャード解析法によって測定することができる。
【０１２８】
所望のハイブリドーマ細胞が同定された後、クローンを限界希釈法によりサブクローニングし、標準的な方法で成長させることができる［Goding, 上掲］。この目的のための適当な培地には、例えば、ダルベッコの改変イーグル培地及びＲＰＭＩ−１６４０倍地が含まれる。あるいは、ハイブリドーマ細胞は哺乳動物においてインビボで腹水として成長させることもできる。
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えばプロテインＡ−セファロース法、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー法、ゲル電気泳動法、透析法又はアフィニティークロマトグラフィー等の従来の免疫グロブリン精製方法によって培養培地又は腹水液から単離又は精製される。
【０１２９】
また、モノクローナル抗体は、組換えＤＮＡ法、例えば米国特許第４，８１６，５６７号に記載された方法により作成することができる。本発明のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、常套的な方法を用いて(例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用して)、容易に単離し配列決定することができる。本発明のハイブリドーマ細胞はそのようなＤＮＡの好ましい供給源となる。ひとたび単離されたら、ＤＮＡは発現ベクター内に配することができ、これが宿主細胞、例えばサルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)細胞、あるいは免疫グロブリンタンパク質を生成等しない骨髄腫細胞内に形質移入され、組換え宿主細胞内でモノクローナル抗体の合成をすることができる。また、ＤＮＡは、例えば相同マウス配列に換えてヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインのコード配列を置換することにより［米国特許第４，８１６，５６７号；Morrisonら, 上掲］、又は免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の一部又は全部を共有結合することにより修飾することができる。このような非免疫グロブリンポリペプチドは、本発明の抗体の定常ドメインに置換でき、あるいは本発明の抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインに置換でき、キメラ性二価抗体を生成する。
【０１３０】
抗体は一価抗体であってもよい。一価抗体の調製方法は当該分野においてよく知られてる。例えば、一つの方法は免疫グロブリン軽鎖と修飾重鎖の組換え発現を含む。重鎖は一般的に、重鎖の架橋を防止するようにＦｃ領域の任意の点で切断される。あるいは、関連するシステイン残基を他のアミノ酸残基で置換するか欠失させて架橋を防止する。
一価抗体の調製にはインビトロ法がまた適している。抗体の消化による、その断片、特にＦａｂ断片の生成は、当該分野において知られている慣用的技術を使用して達成できる。
【０１３１】
３．ヒト及びヒト化抗体
本発明の抗ＰＲＯ抗体は、さらにヒト化抗体又はヒト抗体を含む。非ヒト(例えばマウス)抗体のヒト化形とは、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖あるいはその断片(例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ')２あるいは抗体の他の抗原結合サブ配列)であって、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むものである。ヒト化抗体はレシピエントの相補性決定領域(ＣＤＲ)の残基が、マウス、ラット又はウサギのような所望の特異性、親和性及び能力を有する非ヒト種(ドナー抗体)のＣＤＲの残基によって置換されたヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)を含む。幾つかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置換されている。また、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲもしくはフレームワーク配列にも見出されない残基を含んでいてもよい。一般に、ヒト化抗体は、全てあるいはほとんど全てのＣＤＲ領域が非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、全てあるいはほとんど全てのＦＲ領域がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体は、最適には免疫グロブリン定常領域(Ｆｃ)、典型的にはヒトの免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含んでなる［Jonesら, Nature, 321:522-525 (1986); Riechmannら, Nature, 332:323-329 (1988); 及びPresta, Curr. Op Struct. Biol., 2:593-596 (1992)］。
【０１３２】
非ヒト抗体をヒト化する方法はこの分野でよく知られている。一般的に、ヒト化抗体には非ヒト由来の１つ又は複数のアミノ酸残基が導入される。これら非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、典型的には「移入」可変ドメインから得られる「移入」残基と称される。ヒト化は基本的に齧歯動物のＣＤＲ又はＣＤＲ配列でヒト抗体の該当する配列を置換することによりウィンター(Winter)及び共同研究者［Jonesら, Nature, 321:522-525 (1986)；Riechmannら, Nature, 332:323-327 (1988)；Verhoeyenら, Science, 239:1534-1536 (1988)］の方法に従って、齧歯類ＣＤＲ又はＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列に置換することにより実施される。よって、このような「ヒト化」抗体は、無傷のヒト可変ドメインより実質的に少ない分が非ヒト種由来の対応する配列で置換されたキメラ抗体(米国特許第４，８１６，５６７号)である。実際には、ヒト化抗体は典型的には幾つかのＣＤＲ残基及び場合によっては幾つかのＦＲ残基が齧歯類抗体の類似する部位からの残基によって置換されたヒト抗体である。
【０１３３】
また、ヒト抗体は、ファージ表示ライブラリ［Hoogenboom及びWinter, J. Mol. Biol., 227:381(1991)；Marksら, J. Mol. Biol., 222:581 (1991)］を含むこの分野で知られた種々の方法を用いて作成することもできる。また、Coleら及びBoernerらの方法も、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用することができる［Coleら, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss. p.77(1985)及びBoernerら, J. Immunol., 147(1)：86-95(1991) ］。同様に、ヒト抗体はヒト免疫グロブリン座位をトランスジェニック動物、例えば内在性免疫グロブリン遺伝子は部分的又は完全に不活性化されたマウスに導入することにより産生することができる。投与の際に、遺伝子再配列、組立、及び抗体レパートリーを含むあらゆる観点においてヒトに見られるものに非常に類似しているヒト抗体の生産が観察される。このアプローチは、例えば米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６６１，０１６号、及び次の科学文献：Marksら, Bio/Technology 10, 779-783 (1992); Lonbergら, Nature 368 856-859 (1994); Morrison, Nature 368, 812-13 (1994); Fishwildら, Nature Biotechnology 14, 845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14, 826 (1996); Lonberg及びHuszar, Intern. Rev. Immunol. 13 65-93 (1995)に記載されている。
【０１３４】
また、抗体は、上記に記載のような既知の選択及び／又は突然変異誘発法を利用して親和的に成熟している。好ましい親和性成熟抗体は、５倍、より好ましくは１０倍、さらにより好ましくは２０又は３０倍も成熟抗体の調製の元である出発抗体（一般的には、マウス、ヒト化又はヒト）より高い親和性を有する。
【０１３５】
４．二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体、好ましくはヒトもしくはヒト化抗体である。本発明の場合においては、結合特異性の一方はＰＲＯに対してであり、他方は任意の他の抗原、好ましくは細胞表面タンパク質又はレセプター又はレセプターサブユニットに対してである。
二重特異性抗体を作成する方法は当該技術分野において周知である。伝統的には、二重特異性抗体の組換え生産は、二つの重鎖が異なる特異性を持つ二つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の同時発現に基づく［Milstein及びCuello, Nature, 305:537-539 (1983)］。免疫グロブリンの重鎖と軽鎖を無作為に取り揃えるため、これらハイブリドーマ(クアドローマ)は１０種の異なる抗体分子の潜在的混合物を生成し、その内の一種のみが正しい二重特異性構造を有する。正しい分子の精製は、アフィニティークロマトグラフィー工程によって通常達成される。同様の手順が１９９３年５月１３日公開のＷＯ９３／０８８２９、及びTrauneckerら, EMBO J.,10:3655-3659 (1991)に開示されている。
【０１３６】
所望の結合特異性(抗体−抗原結合部位)を有する抗体可変ドメインを免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合できる。融合は、好ましくは少なくともヒンジ部、ＣＨ２及びＣＨ３領域の一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとのものである。少なくとも一つの融合には軽鎖結合に必要な部位を含む第一の重鎖定常領域(ＣＨ１)が存在することが望ましい。免疫グロブリン重鎖融合をコードするＤＮＡ、及び望むのであれば免疫グロブリン軽鎖を、別々の発現ベクターに挿入し、適当な宿主生物に同時形質移入する。二重特異性抗体を作成するための更なる詳細については、例えばSureshら, Methods in Enzymology, 121:210(1986)を参照されたい。
ＷＯ９６／２７０１１に記載された他の方法によれば、一対の抗体分子間の界面を操作して組換え細胞培養から回収される異種二量体の割合を最大にすることができる。好適な界面は抗体定常ドメインのＣＨ３領域の少なくとも一部を含む。この方法では、第１抗体分子の界面からの１つ又は複数の小さいアミノ酸側鎖がより大きな側鎖(例えばチロシン又はトリプトファン)と置き換えられる。大きな側鎖と同じ又は類似のサイズの相補的「キャビティ」を、大きなアミノ酸側鎖を小さいもの(例えばアラニン又はスレオニン)と置き換えることにより第２の抗体分子の界面に作り出す。これにより、ホモダイマーのような不要の他の最終産物に対してヘテロダイマーの収量を増大させるメカニズムが提供される。
【０１３７】
二重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片（例えば、Ｆ(ａｂ’)２二重特異性抗体）として調製できる。抗体断片から二重特異性抗体を産生する技術もまた文献に記載されている。例えば、化学結合を使用して二重特異性抗体を調製することができる。Brennanら,  Science, 229:81 (1985) は無傷の抗体をタンパク分解性に切断してＦ(ａｂ’)２断片を産生する手順を記述している。これらの断片は、ジチオール錯体形成剤亜砒酸ナトリウムの存在下で還元して近接ジチオールを安定化させ、分子間ジスルフィド形成を防止する。産生されたＦａｂ’断片はついでチオニトロベンゾアート(ＴＮＢ)誘導体に転換される。Ｆａｂ’-ＴＮＢ誘導体の一つをついでメルカプトエチルアミンでの還元によりＦａｂ’-チオールに再転換し、他のＦａｂ’-ＴＮＢ誘導体の等モル量と混合して二重特異性抗体を形成する。作られた二重特異性抗体は酵素の選択的固定化用の薬剤として使用することができる。
大腸菌からＦａｂ’フラグメントを直接回収でき、これは化学的に結合して二重特異性抗体を形成することができる。Shalabyら, J. Exp. Med., 175:217-225 (1992)は完全にヒト化された二重特異性抗体Ｆ(ａｂ’)２分子の製造を記述している。各Ｆａｂ’フラグメントは大腸菌から別個に分泌され、インビトロで定方向化学共役を受けて二重特異性抗体を形成する。このようにして形成された二重特異性抗体は、正常なヒトＴ細胞及びＥｒｂＢ２レセプターを過剰発現する細胞に結合可能で、ヒト乳房腫瘍標的に対するヒト細胞障害性リンパ球の細胞溶解活性の誘因となる。
【０１３８】
組換え細胞培養から直接的に二重特異性抗体断片を作成し分離する様々な方法もまた記述されている。例えば、二重特異性抗体はロイシンジッパーを使用して生産されている。Kostelnyら, J.Immunol. 148(5):1547-1553 (1992)。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドを遺伝子融合により二つの異なった抗体のＦａｂ’部分に結合させる。抗体ホモダイマーをヒンジ領域で還元してモノマーを形成し、ついで再酸化して抗体ヘテロダイマーを形成する。この方法はまた抗体ホモダイマーの生産に対して使用することができる。Hollingerら, Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)により記述された「ダイアボディ」技術は二重特異性抗体断片を作成する別のメカニズムを提供した。断片は、同一鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには十分に短いリンカーにより軽鎖可変ドメイン(ＶＬ)に重鎖可変ドメイン(ＶＨ)を結合してなる。従って、一つの断片のＶＨ及びＶＬドメインは他の断片の相補的ＶＬ及びＶＨドメインと強制的に対形成させられ、２つの抗原結合部位を形成する。単鎖Ｆｖ(ｓＦｖ)ダイマーの使用により二重特異性抗体断片を製造する他の方策もまた報告されている。Gruberら, J.Immunol. 152:5368 (1994)を参照されたい。
二価より多い抗体も考えられる。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Tuttら J.Immunol. 147:60(1991)。
【０１３９】
例示的な二重特異性抗体は、ここに与えられたＰＲＯポリペプチドの２つの異なるエピトープに結合しうる。あるいは、抗ＰＲＯポリペプチドのアームは、特定のＰＲＯポリペプチド発現細胞に細胞防御メカニズムを集中させるように、Ｔ細胞レセプター分子(例えばＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ２８、又はＢ７)等の白血球上のトリガー分子又はＦｃγＲI(ＣＤ６４)、ＦｃγＲII(ＣＤ３２)及びＦｃγＲIII(ＣＤ１６)等のＩｇＧ(ＦｃγＲ)に対するＦｃレセプターに結合するアームと結合しうる。また、二重特異性抗体は特定のＰＲＯポリペプチドを発現する細胞に細胞毒性薬を局在化させるためにも使用されうる。これらの抗体はＰＲＯ結合アーム及び細胞毒性薬又は放射性キレート化剤、例えばEOTUBE、DPTA、DOTA、又はTETAと結合するアームを有する。興味の対象となる他の二重特異性抗体はＰＲＯポリペプチドに結合し、そしてさらに組織因子（ＴＦ）に結合する。
【０１４０】
５．ヘテロコンジュゲート抗体
ヘテロコンジュゲート抗体もまた本発明の範囲に入る。ヘテロコンジュゲート抗体は、２つの共有結合した抗体からなる。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を不要な細胞に対してターゲティングさせるため［米国特許第４，６７６，９８０号］及びＨＩＶ感染の治療のために［ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／２００３７３；ＥＰ０３０８９］提案されている。この抗体は、架橋剤に関連したものを含む合成タンパク化学における既知の方法を使用して、インビトロで調製することができると考えられる。例えば、ジスルフィド交換反応を使用するか又はチオエーテル結合を形成することにより、免疫毒素を作成することができる。この目的に対して好適な試薬の例には、イミノチオレート及びメチル-４-メルカプトブチリミデート、及び例えば米国特許第４，６７６，９８０号に開示されたものが含まれる。
【０１４１】
６．エフェクター機能の加工
本発明の抗体をエフェクター機能について改変し、例えば癌治療における抗体の有効性を向上させることが望ましい。例えば、システイン残基をＦｃ領域に導入し、それにより、この領域に鎖間ジスルフィド結合を形成するようにしてもよい。そのようにして生成された同種二量体抗体は、向上した内部移行能力及び／又は増加した補体媒介細胞殺傷及び抗体−依存性細胞性細胞毒性（ADCC）を有する可能性がある。Caronら, J. Exp. Med. 176: 1191-1195 (1992)及びShopes, B. J. Immunol. 148: 2918-2922 (1992)参照。また、向上した抗腫瘍活性を持つ同種二量体抗体は、Wolffら, Cancer research 53: 2560-2565 (1993)に記載されている異種二官能性架橋を用いて調製することができる。あるいは、抗体は、２つのＦｃ領域を有するように加工して、それにより補体溶解及びＡＤＣＣ能力を向上させることもできる。Stevensonら, Anti-Cancer Drug Design 3: 219-230 (1989)参照。
【０１４２】
７．免疫コンジュゲート
また、本発明は、化学治療薬、毒素（例えば、細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素活性毒素、又はその断片）などの細胞毒性薬、あるいは放射性同位体（即ち、放射性コンジュゲート）と抱合している抗体を含む免疫複合体に関する。
このような免疫複合体の生成に有用な化学治療薬を上に記載した。用いることのできる酵素活性毒素及びその断片には、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、（緑膿菌からの）外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシン(modeccin)Ａ鎖、アルファ-サルシン、アレウリテス・フォーディ(Aleurites fordii)タンパク質、ジアンチン(dianthin)タンパク質、フィトラカ・アメリカーナ(Phytolaca americana)タンパク質（PAPI、PAPII、及びPAP-S）、モモルディカ・チャランチア(momordica charantia)インヒビター、クルシン(curcin)、クロチン(crotin)、サパオナリア・オフィシナリス(sapaonaria oficinalis)インヒビター、ゲロニン(gelonin)、ミトゲリン(mitogellin)、レストリクトシン(restrictocin)、フェノマイシン(phenomycin)、エノマイシン(enomycin)及びトリコテセン(tricothecene)が含まれる。放射性コンジュゲート抗体の生成には、様々な放射性ヌクレオチドが利用可能である。例としては、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ及び１８６Ｒｅが含まれる。
【０１４３】
抗体及び細胞毒性薬の複合体は、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ-スクシンイミジル-３-(２-ピリジルジチオール)プロピオネート（SPDP）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミデートHCL等）、活性エステル（ジスクシンイミジルスベレート等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド等）、ビス-アジド化合物（ビス(ｐ-アジドベンゾイル)ヘキサンジアミン等）、ビス-ジアゾニウム誘導体（ビス-(ｐ-ジアゾニウムベンゾイル)-エチレンジアミン等）、ジイソシアネート（トリエン２，６-ジイソシアネート等）、及びビス-活性フッ素化合物（１，５-ジフルオロ-２，４-ジニトロベンゼン等）を用いて作成できる。例えば、リシン免疫毒素は、Vitettaら, Science 238: 1098 (1987)に記載されているように調製することができる。カーボン-１４-標識１-イソチオシアナトベンジル-３-メチルジエチレントリアミン五酢酸（MX-DTPA）は、放射性ヌクレオチドの抗体への抱合のためのキレート剤の例である。ＷＯ９４／１１０２６参照。
他の実施態様では、腫瘍の予備標的化で使用するために、抗体は「レセプター」（ストレプトアビジン等）に抱合されてもよく、抗体-レセプター複合体は患者に投与され、次いで清澄化剤を用いて未結合複合体を循環から除去し、次に細胞毒性薬（例えば、放射性ヌクレオチド等）に抱合された「リガンド」（アビジン等）を投与する。
【０１４４】
８．免疫リポソーム
また、ここに開示する抗体は、免疫リポソームとして調製してもよい。抗体を含むリポソームは、Epsteinら, Proc. Natl. acad. Sci. USA, 82: 3688 (1985)；Hwangら, Proc. natl. Acad. Sci. USA, 77: 4030 (1980); 及び米国特許第４，４８５，０４５号及び第４，５４４，５４５号に記載されたような、この分野で知られた方法で調製される。向上した循環時間を持つリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール及びＰＥＧ-誘導ホスファチジルエタノールアミン（PEG-PE）を含む脂質組成物での逆相蒸発法によって生成される。リポソームは、所定サイズのフィルターを通して押し出され、所望の径を有するリポソームが生成される。本発明の抗体のＦａｂ’断片は、Martinら, J. Biol. Chem. 257: 286-288 (1982)に記載されているように、ジスルフィド交換反応を介してリポソームに抱合され得る。化学治療薬（ドキソルビシン等）は、場合によってはリポソーム内に包含される。Gabizonら, J. National Cancer Inst. 81(19) 1484 (1989)参照。
【０１４５】
９．抗体の製薬組成物
ここで同定されるＰＲＯポリペプチドに特異的に結合する抗体、並びに上記に開示したスクリーニングアッセイによって同定された他の分子は、種々の疾患の治療のために、製薬組成物の形態で投与することができる。
ＰＲＯポリペプチドが細胞内にあり、全抗体が阻害剤として用いられる場合、取り込める抗体が好ましい。しかし、リポフェクション又はリポソームも抗体、又は抗体断片を細胞に導入するのために使用できる。抗体断片が用いられる場合、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小阻害断片が好ましい。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持したペプチド分子が設計できる。このようなペプチドは、化学的に合成でき、又は組換えＤＮＡ技術によって生成できる。例えば、Marascoら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 7889-7893 (1993)参照。ここでの製剤は、治療すべき特定の徴候に必要な場合に１つ以上の活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を持つものも含んでよい。あるいは、又はそれに加えて、組成物は、細胞毒性薬、サイトカイン又は成長阻害剤を含んでもよい。これらの分子は、適切には、意図する目的に有効な量の組み合わせで存在する。
【０１４６】
また、活性成分は、例えばコアセルベーション技術により又は界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、各々ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン-マイクロカプセル及びポリ（メタクリル酸メチル）マイクロカプセル中、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミン小球、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）中、又はマイクロエマルション中に包括されていてもよい。これらの技術は、Remington's Pharmaceutical Science, 上掲に開示されている。
インビボ投与に使用される製剤は無菌でなけらばならない。これは、滅菌濾過膜を通した濾過により容易に達成される。
徐放性製剤を調製してもよい。徐放性製剤の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、このマトリクスは成形された物品、例えばフィルム、又はマイクロカプセルの形状である。除放性マトリクスの例は、ポリエステルヒドロゲル（例えば、ポリ(２-ヒドロキシエチル-メタクリレート)又はポリ(ビニルアルコール））、ポリアクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ-グルタミン酸及びγ-エチル-Ｌ-グルタメート、非分解性エチレン-酢酸ビニル、LUPRON DEPOT(商品名)（乳酸-グリコール酸コポリマーと酢酸リュープロリドの注射可能な小球）などの分解性乳酸-グリコール酸コポリマー、ポリ-(Ｄ)-３-ヒドロキシブチル酸を含む。エチレン-酢酸ビニル及び乳酸-グリコール酸などのポリマーは分子を１００日に渡って放出することができるが、ある種のヒドロゲルはより短時間でタンパク質を放出してしまう。カプセル化された抗体が身体内に長時間残ると、それらは３７℃の水分に露出されることにより変性又は凝集し、その結果、生物学的活性の低下及び起こりうる免疫原性の変化をもたらす。合理的な方法は、含まれる機構に依存する安定化について工夫することができる。例えば、凝集機構がチオ−ジスルフィド交換を通した分子間Ｓ−Ｓ結合形成であると発見された場合、安定化はスルフヒドリル残基の修飾、酸性溶液からの凍結乾燥、水分含有量の制御、適切な添加剤の付加、及び特異的ポリマーマトリクス組成物の開発によって達成されうる。
【０１４７】
Ｇ．抗ＰＲＯ抗体の用途
本発明の抗ＰＲＯ抗体は様々な有用性を有している。例えば、抗ＰＲＯ抗体は、ＰＲＯの診断アッセイ、例えばその特定細胞、組織、又は血清での発現の検出に用いられる。競合的結合アッセイ、直接又は間接サンドウィッチアッセイ及び不均一又は均一相で行われる免疫沈降アッセイ［Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, CRC Press, Inc. (1987) pp. 147-158］等のこの分野で知られた種々の診断アッセイ技術が使用される。診断アッセイで用いられる抗体は、検出可能な部位で標識される。検出可能な部位は、直接又は間接に、検出可能なシグナルを発生しなければならない。例えば、検出可能な部位は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ又は１２５Ｉ等の放射性同位体、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン又はルシフェリン等の蛍光又は化学発光化合物、あるいはアルカリホスファターゼ、ベータ-ガラクトシダーゼ又はセイヨウワサビペルオキシダーゼ等の酵素であってよい。抗体に検出可能な部位を抱合させるためにこの分野で知られた任意の方法が用いられ、それにはHunterら, Nature 144:945 (1962)；Davidら, Biochemistry, 13: 1014 (1974)；Painら, J. Immunol. Meth., 40:219 (1981)；及びNygren, J. Histochem. and Cytochem., 30:407 (1982)に記載された方法が含まれる。
【０１４８】
また、抗ＰＲＯ抗体は、組換え細胞培養又は天然供給源からのＰＲＯのアフィニティー精製にも有用である。この方法においては、ＰＲＯに対する抗体を、当該分野でよく知られている方法を使用して、セファデックス樹脂や濾紙のような適当な支持体に固定化する。次に、固定化された抗体を精製するＰＲＯを含む試料と接触させた後、固定化された抗体に結合したＰＲＯ以外の試料中の物質を実質的に全て除去する適当な溶媒で支持体を洗浄する。最後に、ＰＲＯを抗体から脱離させる他の適当な溶媒で支持体を洗浄する。
以下の実施例は例示するためにのみ提供されるものであって、本発明の範囲を決して限定することを意図するものではない。
本明細書で引用した全ての特許及び参考文献の全体を、出典明示によりここに取り込む。
【０１４９】
（実施例）
実施例で言及されている全ての市販試薬は、特に示さない限りは製造者の使用説明に従い使用した。ＡＴＣＣ登録番号により以下の実施例及び明細書全体を通して特定されている細胞の供給源はアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション、マナッサス、バージニアである。
【０１５０】
実施例１：新規なポリペプチド及びそれをコードするｃＤＮＡを同定するための細胞外ドメイン相同性スクリーニング
Swiss-Prot公的データベースからの約９５０の公知の分泌タンパク質からの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）配列（必要なら、分泌シグナル配列を含む）を、ＥＳＴデータベースの検索に使用した。ＥＳＴデータベースは、公的データベース（例えば、Dayhoff、GenBank）及び独自に開発したデータベース（例えば、LIFESEQ(商品名)、Incyte Pharmaceuticals、Palo Alto,  CA）を含む。検索は、コンピュータプログラムBLAST又はBLAST-2（Altschulら,  Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)）を用いて、ＥＣＤタンパク質配列のＥＳＴ配列の６フレーム翻訳との比較として実施した。公知のタンパク質をコードせず、Blastスコア７０（９０の場合もある）又はそれ以上を持つ比較物は、プログラム「phrap」（Phil Green, University of Washington，Seattle，WA）で集団化してコンセンサスＤＮＡ配列に構築した。
この細胞外ドメイン相同性スクリーニングを用いて、phrapを用いて他の同定されたＥＳＴ配列に対してコンセンサスＤＮＡ配列を構築した。さらに、得られたコンセンサスＤＮＡ配列を、しばしば（全てではない）BLAST又はBLAST-2及びphrapの繰り返しサイクルを用いて伸長し、コンセンサス配列を上で議論したＥＳＴ配列の供給源を用いて可能な限り伸長させた。
【０１５１】
上記のように得られたコンセンサス配列に基づいて、次いでオリゴヌクレオチドを合成し、ＰＣＲにより対象とする配列を含むｃＤＮＡライブラリを同定するため、及びＰＲＯポリペプチドの全長コード化配列のクローンを単離するプローブとして用いるために使用した。正方向及び逆方向ＰＣＲプライマーは一般的に２０から３０ヌクレオチドの範囲であり、しばしば約１００−１０００ｂｐ長のＰＣＲ産物を与えるために設計される。プローブ配列は、典型的に４０−５５ｂｐ長である。或る場合には、コンセンサス配列が約１−１．５ｋｂｐより大きいときに付加的なオリゴヌクレオチドが合成される。全長クローンについて幾つかのライブラリをスクリーニングするために、ライブラリからのＤＮＡを、Ausubelら,  Current Protocols in Molecular Biology, のように、ＰＣＲプライマー対でのＰＣＲによりスクリーニングした。ポジティブライブラリを、次いで、プローブオリゴヌクレオチド及びプライマー対の一方を用いて対象とする遺伝子をコードするクローンを単離するのに使用した。
ｃＤＮＡクローンの単離に用いたｃＤＮＡライブラリは、Invitrogen, San Diego，CAなどの市販試薬を用いる標準的な方法によって作成した。ｃＤＮＡは、NotI部位を有するオリゴｄＴでプライムし、平滑末端でSalIヘミキナーゼアダプターに結合させ、NotIで切断してゲル電気泳動で適切なサイズに分類し、そして適合するクローニングベクター（ｐＲＫＢ又はｐＲＫＤ等；ｐＲＫ５ＢはSfiI部位を含まないｐＲＫ５Ｄの前駆体である；Holmesら, Science, 253: 1278-1280 (1991)参照）の唯一のXhoI及びNotI部位において、所定の方向でクローニングした。
【０１５２】
実施例２：アミラーゼスクリーニングによるｃＤＮＡクローンの単離
１．オリゴｄＴプライムｃＤＮＡライブラリの調製
Invitrogen, San Diego, CAの試薬及びプロトコールを用いて、対象とするヒト組織からｍＲＮＡを単離した（Fast Track 2）。このＲＮＡを、Life Technologies, Gaithersburg, MD(Super Script Plasmid system)の試薬及びプロトコールを利用するベクターｐＲＫ５ＤでのオリゴｄＴプライム化ｃＤＮＡライブラリの生成に用いた。この方法においては、二本鎖ｃＤＮＡを１０００ｂｐを越えるサイズに分類し、SalI／NotIリンカー化ｃＤＮＡをXhoI／NotI切断化ベクターへクローニングした。ｐＲＫ５Ｄは、XhiI／NotIｃＤＮＡクローニング部位の前に位置するSfiI制限酵素部位が後に続くsp6転写開始部位を有するクローニングベクターである。
【０１５３】
２．ランダムプライムｃＤＮＡライブラリの調製
一次ｃＤＮＡクローンの５’末端を好ましく表現するために、二次ｃＤＮＡライブラリを作成した。Sp6ＲＮＡを（上記の）一次ライブラリから生成し、このＲＮＡを、Life Technologies (上で参照したSuper Script Plasmid system)からの試薬及びプロトコールを利用するベクターｐＳＳＴ-ＡＭＹ．０でのランダムプライム化ｃＤＮＡライブラリの生成に用いた。この方法においては、二本鎖ｃＤＮＡを５００−１０００ｂｐへサイズ分類し、平滑末端でNotIアダプターに結合させ、SfiI部位で切断し、そしてSfiI／NotI切断化ベクターへクローニングした。ｐＳＳＴ-ＡＭＹ．０は、ｃＤＮＡクローニング部位の前に酵母アルコールデヒドロゲナーゼプロモータ、並びにアルコールデヒドロゲナーゼ転写終結区が後に続くマウスアミラーゼ配列（分泌シグナルを持たない成熟配列）をクローニング部位の後に有するクローニングベクターである。従って、アミラーゼ配列でフレームに融合するこのベクターへクローニングされたｃＤＮＡは、適切に形質移入された酵母コロニーからのアミラーゼの分泌を導く。
【０１５４】
３．形質転換及び検出
上記のパラグラフ２に記載したライブラリのＤＮＡを氷上で冷却し、それにエレクトロコンピテントＤＨ１０Ｂ細菌（Life Technoligies、２０ｍｌ）を添加した。細菌及びベクターの混合物は、次いで製造者に推奨されているように電気穿孔した。次いで、ＳＯＣ培地（Life Technologies、１ｍｌ）を添加し、この混合物を３７℃で３０分間インキュベートした。形質転換体は、次いでアンピシリンを含む２０標準１５０ｍｍＬＢプレートに蒔き、１６時間インキュベートした（３７℃）。ポジティブコロニーをプレートからこすり取り、この細菌ペレットから標準的な方法、例えばＣｓＣｌ-勾配を用いてＤＮＡを単離した。次に、、以下の酵母プロトコールを精製ＤＮＡへ適用した。
酵母方法は３つの範疇に分けられる：（１）酵母のプラスミド／ｃＤＮＡ結合ベクターでの形質転換；（２）アミラーゼを分泌する酵母クローンの検出及び単離；及び（３）酵母コロニーからの直接的な挿入物のＰＣＲ増幅、並びに配列決定及びさらなる分析のためのＤＮＡの精製。
【０１５５】
用いた酵母菌株はＨＤ５６-５Ａ（ＡＴＣＣ−９０７８５）であった。この株は以下の遺伝子型：MATアルファ、ｕｒａ３-５２、ｌｅｕ２-３、ｌｅｕ２-１１２、ｈｉｓ３-１１、ｈｉｓ３-１５、ＭＡＬ＋、ＳＵＣ＋、ＧＡＬ＋を有する。好ましくは、不完全な翻訳後経路を持つ酵母変異体を用いることができる。このような変異体は、ｓｅｃ７１、ｓｅｃ７２、ｓｅｃ６２に転位不全対立遺伝子を持つが、切断されたｓｅｃ７１が最も好ましい。あるいは、これらの遺伝子の正常な操作を阻害するアンタゴニスト（アンチセンスヌクレオチド及び／又はリガンドを含む）、この翻訳後経路に含まれる他のタンパク質（例えば、ＳＥＣ６１ｐ、ＳＥＣ７２ｐ、ＳＥＣ６２ｐ、ＳＥＣ６３ｐ、ＴＤＪ１ｐ、ＳＳＡ１ｐ-４ｐ）又はこれらのタンパク質の複合体形成も、アミラーゼ発現酵母と組み合わせて好まれて用いられる。
形質転換は、Gietzら, Nucl. Acid. Res., 20: 1425 (1992)によって概略が記されたプロトコールに基づいて実施された。形質転換細胞は、次いで寒天からＹＥＰＤ複合培地ブロス（１００ｍｌ）に播種し、３０℃で終夜成長させた。ＹＥＰＤブロスは、Kaiserら, Methods in Yeast Genetics, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY, p. 207 (1994)に記載のように調製した。終夜培地は、次いで新鮮なＹＥＰＤブロス（５００ｍｌ）中におよそ２ｘ１０６細胞／ｍｌ（約ＯＤ６００＝０．１）に希釈し、１ｘ１０７細胞／ｍｌ（約ＯＤ６００＝０．４−０．５）まで再成長させた。
【０１５６】
次いで細胞を収穫し、５，０００ｒｐｍで５分間のSorval GS3 ローターのＧＳ３ローターボトルに移し、上清を捨て、次いで無菌水に再懸濁することで形質転換のために調製し、そして次に５０ｍｌのファルコン管でBeckman GS-6ＫＲ遠心機において３，５００ｒｐｍで再度遠心分離した。その上清を捨て、続いて細胞をＬｉＡｃ／ＴＥ（１０ｍｌ，１０ｍＭのトリス−ＨＣｌ，１ｍＭのＥＤＴＡ  ｐＨ７．５，１００ｍＭのＬｉ２ＯＯＣＣＨ３）で洗浄し、ＬｉＡｃ／ＴＥ（２．５ｍｌ）中に再懸濁させた。
形質転換は、マイクロチューブ内で、調製した細胞（１００μｌ）を新鮮な変性一本鎖サケ精子ＤＮＡ（Lofstrand Labs, Gaithersburg, MD）及び形質転換ＤＮＡ（１μｇ ｖｏｌ．＜１０μｌ）と混合することにより開始した。混合物はボルテックスにより簡単に混合し、次いで４０％ＰＥＧ／ＴＥ（６００μｌ，４０％のポリエチレングリコール-４０００, １０ｍＭのトリス−ＨＣｌ，１ｍＭのＥＤＴＡ，１００ｍＭのＬｉＯＯＣＣＨ３，ｐＨ７．５）を添加した。この混合物を緩く撹拌し、３０℃で撹拌しながら３０分間インキュベートした。次いで細胞に４２℃で１５分間熱衝撃を与え、反応容器をミクロチューブ内で１２，０００ｒｐｍで５−１０秒間遠心分離し、デカントし、そしてＴＥ（５００μｌ，１０ｍＭのトリス−ＨＣｌ，１ｍＭのＥＤＴＡ，ｐＨ７．５）への再懸濁に次いで遠心分離した。次いで、細胞をＴＥ（１ｍｌ）中に希釈し、一定分量（２００μｌ）を１５０ｍｍ成長プレート（ＶＷＲ）に予め調製した選択培地に広げた。
【０１５７】
もう１つの方法として、複数の少量反応に代わって、試薬の量はしかるべくスケールアップし、形質転換を１回の大規模反応で実施した。
用いた選択培地は、Kaiserら, Methods in Yeast Genetics, Cold Spring Harbor Ｐress, Cold Spring Harbor, NY, p. 208-210 (1994)に記載されているように調製したウラシルを欠く合成完全デキストロース寒天（ＳＣＤ-Ｕｒａ）であった。形質転換体を３０℃で２−３日成長させた。
アミラーゼを分泌するコロニーの検出は、選択成長培地に赤色デンプンを包含することによって実施した。Bielyら, Anal. Biochem., 172: 176-179 (1988)に記載された方法に従って、デンプンを赤色染料（反応性 Red-120, Sigma）に結合させた。結合したデンプンをＳＣＤ-Ｕｒａ寒天プレートへ最終濃度０．１５％（ｗ／ｖ）で組み入れ、リン酸カリウムでｐＨ７．０に緩衝化した（最終濃度５０−１００ｍＭ）。
十分に単離されていて同定可能な単一コロニーを得るために、ポジティブコロニーを拾い、これを新鮮な選択培地（１５０ｍｍプレート）に画線した。アミラーゼ分泌についてポジティブであり、十分に単離されたコロニーの検出は、緩衝化ＳＣＤ-Ｕｒａ寒天への赤色デンプンの直接組み入れによっておこなった。コロニーのデンプンを分解することでポジティブコロニーの周囲に直接目視できる明瞭なハローを形成する能力によって、ポジティブコロニーを決定した。
【０１５８】
４．ＰＣＲ増幅によるＤＮＡの単離
ポジティブコロニーが単離された場合には、その一部を楊枝でひろい、９６ウェルプレートで無菌水（３０μｌ）によって希釈した。この時点では、ポジティブコロニーを凍結して次の分析のために保存するか、或いは即座に増幅するかのいずれかである。細胞の一定分量 （５μｌ）を、０．５μｌのKlentaq（Clontech, Palo Alto, CA）; ４．０μｌの１０ｍＭdNTP（Perkin Elmer-Cetus）；２．５μｌのKentaqバッファー(Clontech)；０．２５μｌの正方向オリゴ１；０．２５μｌの逆方向オリゴ２；１２．５μｌの蒸留水を含有する２５μｌ容量でのＰＣＲ反応のテンプレートとして使用した。
正方向オリゴヌクレオチド１の配列は：
5'-TGTAAAACGACGGCCAGTTAAATAGACCTGCAATTATTAATCT-3'
（配列番号：611）
逆方向オリゴヌクレオチド２の配列は：
5'-CAGGAAACAGCTATGACCACCTGCACACCTGCAAATCCATT -3'
（配列番号：612）
であった。
次いで、ＰＣＲは以下の通り実施した：
ａ．                  変性           92℃、 5分間
ｂ．次の３サイクル    変性           92℃、30秒間
アニール       59℃、30秒間
伸長           72℃、60秒間
ｃ．次の３サイクル    変性           92℃、30秒間
アニール       57℃、30秒間
伸長           72℃、60秒間
ｄ．次の２５サイクル  変性           92℃、30秒間
アニール       55℃、30秒間
伸長           72℃、60秒間
ｅ．                  保持           4℃
【０１５９】
下線を施した領域は、各々ＡＤＨプロモーター領域及びアミラーゼ領域にアニーリングし、挿入物が存在しない場合はベクターｐＳＳＴ-ＡＭＹ．０の３０７ｂｐ領域を増幅する。典型的には、これらのオリゴヌクレオチドの５’末端の最初の１８ヌクレオチドは、配列プライマーのアニーリング部位を含んでいた。従って、空のベクターからのＰＣＲ反応の全生成物は３４３ｂｐであった。しかしながら、シグナル配列融合ｃＤＮＡは、かなり長いヌクレオチド配列をもたらした。
ＰＣＲに続いて、反応の一定分量（５μｌ）を、上記のSambrook等に記載されているように１％アガロースゲル中でトリス−ホウ酸塩−ＥＤＴＡ（ＴＢＥ）緩衝系を用いたアガロースゲル電気泳動によって検討した。４００ｂｐより大きな単一で強いＰＣＲ産物を生じるクローンを、９６ Qiaquick PCR 清浄化カラム（Quagen Inc., Chatsworth, CA）での精製の後にＤＮＡ配列によってさらに分析した。
【０１６０】
実施例３：シグナルアルゴリズム分析を用いたｃＤＮＡクローンの単離
ジェネンテク，インク（サウス サンフランシスコ，カリフォルニア）が独自に開発した配列発見アルゴリズムを、公的（例えば、GenBank）及び／又は個人の（LIFESEQ(登録商標), Incyte Pharmaceuticals, Inc.，Palo Alto, CA）データベースから集団化及び組み立てられたＥＳＴ断片だけでなくＥＳＴｓへ適用することで、種々のポリペプチド-コード化核酸配列を同定した。このシグナル配列アルゴリズムは、検討中の配列又は配列断片の５’末端にある第１、あるいは第２のメチオニンコドン（ＡＴＧ）を取り囲むＤＮＡヌクレオチドの文字に基づく分泌シグナルスコアを計算する。第１のＡＴＧに続くヌクレオチドには、停止コドンを持たない少なくとも３５の明白なアミノ酸がコードされていなければならない。第１のＡＴＧが必須のアミノ酸を有する場合、第２のものは検討しない。何れも要件を満たさない場合、候補配列にスコアをつけない。ＥＳＴ配列が真正のシグナル配列を含むか否かを決定するために、ＡＴＧコドンを取り囲むＤＮＡ及び対応するアミノ酸配列に、分泌シグナルに関連することが知られている７つのセンサー（評価パラメータ）の一組を用いてスコアをつけた。このアルゴリズムを利用することで、多くのポリペプチド-コード化核酸配列の同定がなされた。
【０１６１】
実施例４：ヒトＰＲＯポリペプチドをコードするｃＤＮＡクローンの単離
上記の実施例１から３に記載されている技術を用いて、ここに開示されているように、多くの全長ｃＤＮＡクローンがＰＲＯポリペプチドをコードしているものと同定された。そして、これらのｃＤＮＡは、下記の表７示してあるように、ブダペスト条約の条項に従ってアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション、１０８０１  ユニバーシティ・ブルバード、マナッサス、バージニア  ２０１１０−２２０９米国(ＡＴＣＣ)へ寄託した。
【０１６２】
2006081548.tif 000024
【０１６３】
2006081548.tif 000025
【０１６４】
2006081548.tif 000026
【０１６５】
2006081548.tif 000027
【０１６６】
2006081548.tif 000028
【０１６７】
2006081548.tif 000029
【０１６８】
2006081548.tif 000030
【０１６９】
2006081548.tif 000031
【０１７０】
2006081548.tif 000032
【０１７１】
これらの寄託は、特許手続き上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約及びその規則(ブダペスト条約)の規定に従って行われた。これは、寄託の日付から３０年間、寄託の生存可能な培養が維持されることを保証するものである。寄託物はブダペスト条約の条項に従い、またジェネンテク社とＡＴＣＣとの間の合意に従い、ＡＴＣＣから入手することができ、これは、どれが最初であろうとも、関連した米国特許の発行時又は任意の米国又は外国特許出願の公開時に、寄託培養物の後代を永久かつ非制限的に入手可能とすることを保証し、米国特許法第１２２条及びそれに従う特許庁長官規則(特に参照番号８８６ＯＧ６３８の３７ＣＦＲ第１．１４条を含む)に従って権利を有すると米国特許庁長官が決定した者に子孫を入手可能とすることを保証するものである。
本出願の譲受人は、寄託した培養物が、適切な条件下で培養されていた場合に死亡もしくは損失又は破壊されたならば、材料は通知時に同一の他のものと即座に取り替えることに同意する。寄託物質の入手可能性は、特許法に従いあらゆる政府の権限下で認められた権利に違反して、本発明を実施するライセンスであるとみなされるものではない。
【０１７２】
実施例５：ハイブリダイゼーションプローブとしてのＰＲＯの利用
以下の方法は、ＰＲＯをコードする核酸配列のハイブリダイゼーションプローブとしての利用を示している。
ここに開示されている全長又は成熟ＰＲＯをコード化配列を含むＤＮＡは、ヒト組織ｃＤＮＡライブラリ又はヒト組織ゲノムライブラリの同種ＤＮＡ（ＰＲＯの天然発生変異体をコードするもの等）のスクリーニングのためのプローブとして用いられる。
ハイブリダイゼーション及びいずれかのライブラリＤＮＡを含むフィルターの洗浄を、次の高緊縮性条件下において実施する。放射標識ＰＲＯ誘導プローブのフィルターへのハイブリダイゼーションを、５０％ホルムアミド、５ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．８、２ｘデンハード液、及び１０％デキストラン硫酸の溶液中において４２℃で２０時間実施する。フィルターの洗浄は、０．１ｘＳＳＣ及び０．１％ＳＤＳ水溶液中において４２℃で実施する。
次いで、全長天然配列をコードするＤＮＡと所望の配列同一性を有するＤＮＡは、この分野で知られている標準的技術を用いて同定することができる。
【０１７３】
実施例６：大腸菌におけるＰＲＯの発現
この実施例は、大腸菌中における組み換え発現によるＰＲＯの非グリコシル化型の調製を例証する。
ＤＮＡ配列コード化は選択されたＰＣＲプライマーを利用して最初に増幅される。このプライマーは、選択された発現ベクター上の制限酵素部位に対応する制限酵素部位を含まなければならない。様々な発現ベクターを使用することができる。適したベクターの例としては、アンピシリン及びテトラサイクリン耐性に対する遺伝子を含むｐＢＲ３２２(大腸菌由来；Bolivarら, Gene, 2:95 (1977)を参照のこと)がある。ベクターは制限酵素によって消化され、脱リン酸化される。次いで、ＰＣＲ増幅配列をベクターにライゲーションする。ベクターは好ましくは抗生物質耐性遺伝子、ｔｒｐプロモーター、ポリＨｉｓリーダー（最初の６つのSTIIコドン、ポリHis配列、及びエンテロキナーゼ切断部位を含む）、ＰＲＯコード領域、ラムダ転写集結因子及びａｒｇＵ遺伝子をコードする配列を含む。
次いで、Sambrookら, 上記に記載されている方法を用いて選択された大腸菌株を形質転換するために、このライゲーション混合物を利用した。形質転換体をＬＢプレート上でのその成長能力によって同定し、次いで抗生物質耐性コロニーを選択する。プラスミドＤＮＡを単離し、それを制限分析及びＤＮＡ配列決定によって確認することができる。
選択されたクローンを、抗生物質が補填されたＬＢブロスのような液体培地で一晩かけて成長させることができる。この一晩の培養を、次により大きなスケールでの培養を播種するために使用してもよい。そして、細胞を所望の光学密度になるまで成長させ、その間に発現プロモーターが作用し始める。
更に数時間、細胞を培養した後に、遠心分離によって細胞を収集することが可能である。遠心分離によって得られた細胞ペレットは、当該分野で公知の様々な薬剤を使用して可溶化でき、次いで、この溶解したＰＲＯタンパク質を、タンパク質の堅固な結合を可能にする条件下において金属キレート化カラムを用いて精製すること可能である。
【０１７４】
以下の手法を用いて、ポリ−Ｈｉｓタグ形態でＰＲＯを大腸菌で発現させてもよい。ＰＲＯをコードするＤＮＡを、選択したＰＣＲプライマーを用いて最初に増幅した。このプライマーは、選択された発現ベクターの制限酵素部位に対応する制限酵素部位、及び効率的で信頼性のある翻訳開始、金属キレートカラムでの迅速な精製、及びエンテロキナーゼでのタンパク質分解的除去を与える他の有用な配列を含む。次いで、ＰＣＲ増幅されたポリ-Hisタグ配列を発現ベクターへ結合させ、これを株５２（W3110 fuhA(tonA) lon galE rpoHts(htpRts) clpP(lacIq)）に基づく大腸菌宿主の形質転換に使用した。形質転換体を、最初に５０ｍｇ／ｍｌのカルベニシリンを含有するＬＢ中で、３０℃で振盪しながら３−５のＯ．Ｄ．６００に達するまで成長させた。ついで培養液をＣＲＡＰ培地（３．５７ｇの（ＮＨ４）２ＳＯ４、０．７１ｇのクエン酸ナトリウム・２Ｈ２Ｏ、１．０７ｇのＫＣｌ、５．３６ｇのDifco酵母抽出物、５００ｍＬ水中の５．３６ｇのSheffield hycase SF、並びに１１０ｍＭのＭＰＯＳ、ｐＨ７．３、０．５５％（ｗ／ｖ）のグルコース及び７ｍMのＭｇＳＯ４の混合で調製）中にて５０−１００倍希釈し、３０℃で振盪によって約２０−３０時間成長させた。ＳＤＳ-ＰＡＧＥにより発現を確認するために試料を取り出し、細胞がペレットとなるようにバルク培地を遠心分離した。精製及びリフォールディング（再折りたたみ）まで、細胞ペレットを凍結させた。
０．５から１Ｌの発酵（６−１０ｇペレット）からの大腸菌ペーストを、７Ｍのグアニジン、２０ｍＭのトリス、ｐＨ８バッファー中で１０容量（ｗ／ｖ）で再懸濁させた。固体硫酸ナトリウム及びテトラチオン酸ナトリウムを添加して最終濃度を各々０．１Ｍ及び０．０２Ｍとし、溶液を４℃で終夜撹拌した。この工程により、すべてのシステイン残基が亜硫酸によりブロックされた変性タンパク質が生じる。溶液をBeckman Ultracentifuge中で４０，０００ｒｐｍで３０分間濃縮した。上清を金属キレートカラムバッファー（６Ｍのグアニジン、２０ｍＭのトリス、ｐＨ７．４）の３−５容量で希釈し、透明にするために０．２２ミクロンフィルターを通して濾過する。透明抽出物を、金属キレートカラムバッファーで平衡化させた５ｍｌのQiagen Ｎｉ-ＮＴＡ金属キレートカラムに負荷した。カラムを５０ｍＭのイミダゾール（Calbiochem, Utrol grade）を含む添加バッファー、ｐＨ７．４で洗浄した。タンパク質を２５０ｍＭのイミダゾールを含有するバッファーで溶離した。所望のタンパク質を含有する画分をプールし、４℃で保存した。タンパク質濃度は、そのアミノ酸配列に基づいて計算した吸光係数を用いて２８０ｎｍにおけるその吸収により見積もった。
【０１７５】
試料を２０ｍＭのトリス、ｐＨ８．６、０．３ＭのＮａＣｌ、２．５Ｍの尿素、５ｍＭのシステイン、２０ｍＭのグリシン及び１ｍＭのＥＤＴＡからなる新たに調製した再生バッファー中で徐々に希釈することによって、タンパク質を再生させた。リフォールディング容量は、最終的なタンパク質濃度が５０〜１００マイクログラム／ｍｌとなるように選択した。リフォールディング溶液を４℃で１２−３６時間ゆっくり撹拌した。リフォールディング反応はＴＦＡを採取濃度０．４％（約３のｐＨ）で添加することにより停止させた。タンパク質をさらに精製する前に、溶液を０．２２ミクロンフィルターを通して濾過し、アセトニトリルを最終濃度２−１０％で添加した。再生したタンパク質を、Poros R1／H逆相カラムで、０．１％ＴＦＡの移動バッファーと１０〜８０％のアセトニトリル勾配での溶離を用いてクロマトグラフにかけた。Ａ２８０吸収を持つ画分のアリコートをＳＤＳポリアクリルアミドゲルで分析し、相同な再生タンパク質を含有する画分をプールした。一般的に、殆どの正しく再生したタンパク質種は、これらの種が最もコンパクトであり、その疎水性内面が逆相樹脂との相互作用から遮蔽されているので、アセトニトリルの最低濃度で溶離される。凝集した種は通常、より高いアセトニトリル濃度で溶離される。誤って再生したタンパク質を所望の形態から除くのに加えて、逆相工程は試料からエンドトキシンも除去する。
所望の再生したＰＲＯポリペプチドを含有する画分をプールし、溶液に向けた窒素の弱い気流を用いてアセトニトリルを除去した。タンパク質を、透析又は調製バッファーで平衡化したG25 Superfine（Pharmacia）樹脂でのゲル濾過及び滅菌濾過により、０．１４Ｍの塩化ナトリウム及び４％のマンニトールを含む２０ｍＭのHepes、ｐＨ６．８に調製した。
ここで開示された多くのＰＲＯポリペプチドは、上記の方法によって成功裏に発現した。
【０１７６】
実施例７：哺乳動物細胞におけるＰＲＯの発現
この実施例は、哺乳動物細胞における組み換え発現による潜在的にグリコシル化した形態のＰＲＯの調製を例証する。
発現ベクターとしてベクターｐＲＫ５（１９８９年３月１５日公開のＥＰ３０７，２４７参照）を用いた。場合によっては、ＰＲＯ ＤＮＡを選択した制限酵素を持つｐＲＫ５に結合させ、上記のSambrook等に記載されたようなライゲーション方法を用いてＰＲＯ ＤＮＡを挿入させる。得られたベクターは、ｐＲＫ５-ＰＲＯと呼ばれる。
【０１７７】
一実施態様では、選択された宿主細胞は２９３細胞とすることができる。ヒト２９３細胞（ATCC CCL 1573）は、ウシ胎児血清及び場合によっては滋養成分及び／又は抗生物質を添加したＤＭＥＭなどの培地中で組織培養プレートにおいて成長させて集密化した。約１０μｇのｐＲＫ５-ＰＲＯ ＤＮＡを約１μgのＶＡ ＲＮＡ遺伝子コード化ＤＮＡ［Thimmappayaら, Cell, 31:543 (1982))］と混合し、５００μｌの１ｍＭ トリス-ＨＣｌ、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．２２７Ｍ ＣａＣｌ２に溶解させた。この混合物に、滴状の５００μｌの５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．３５）、２８０ｍＭ ＮａＣｌ、１．５ｍＭ ＮａＰＯ４を添加し、２５℃で１０分間析出物を形成させた。析出物を懸濁し、２９３細胞に加えて３７℃で約４時間定着させた。培地を吸引し、２ｍｌのＰＢＳ中２０％グリセロールを３０秒間添加した。２９３細胞は、次いで無血清培地で洗浄し、新鮮な培地を添加し、細胞を約５日間インキュベートした。
【０１７８】
形質移入の約２４時間後、培地を除去し、培地（のみ）又は２００μＣｉ／ｍｌ３５Ｓ−システイン及び２００μＣｉ／ｍｌ３５Ｓ−メチオニンを含む培地で置換した。１２時間のインキュベーションの後、条件培地を回収し、スピンフィルターで濃縮し、１５％ＳＤＳゲルに添加した。処理したゲルを乾燥させ、ＰＲＯポリペプチドの存在を現す選択された時間にわたってフィルムにさらした。形質転換した細胞を含む培地に、更なるインキュベーションを施し（無血清培地で）、培地を選択されたバイオアッセイで試験した。
【０１７９】
これに換わる技術において、ＰＲＯは、Somparyracら, Proc. Natl. Acad. Sci., 12:7575 (1981)に記載されたデキストラン硫酸法を用いて２９３細胞に一過的に導入されうる。２９３細胞は、スピナーフラスコ内で最大密度まで成長させ、７００μｇのｐＲＫ５-ＰＲＯ ＤＮＡを添加する。細胞を、まずスピナーフラスコから遠心分離によって濃縮し、ＰＢＳで洗浄した。ＤＮＡ-デキストラン沈殿物を細胞ペレット上で４時間インキュベートした。細胞を２０％グリセロールで９０秒間処理し、組織培地で洗浄し、組織培地、５μｇ／ｍｌウシインシュリン及び０．１μｇ／ｍｌウシトランスフェリンを含むスピナーフラスコに再度導入した。約４日後に、条件培地を遠心分離して濾過し、細胞及び細胞片を除去した。次いで発現されたＰＲＯを含む試料を濃縮し、透析及び／又はカラムクロマトグラフィー等の選択した方法によって精製した。
他の実施態様では、ＰＲＯをＣＨＯ細胞で発現させることができる。ｐＲＫ５-ＰＲＯは、ＣａＰＯ４又はＤＥＡＥ−デキストランなどの公知の試薬を用いてＣＨＯ細胞に形質移入することができる。上記したように、細胞培地をインキュベートし、培地を培養培地（のみ）又は３５Ｓ-メチオニン等の放射性標識を含む培地に置換することができる。ＰＲＯポリペプチドの存在を同定した後、培地を無血清培地に置換してもよい。好ましくは、培地を約６日間インキュベートし、次いで条件培地を収集する。次いで、発現されたＰＲＯを含む培地を濃縮して、任意の選択した方法によって精製することができる。
【０１８０】
また、エピトープタグＰＲＯは、宿主ＣＨＯ細胞において発現させてもよい。ＰＲＯはｐＲＫ５ベクターからサブクローニングしてもよい。サブクローン挿入物は、ＰＣＲを施してバキュロウイルス発現ベクター中のポリ-hisタグ等の選択されたエピトープタグを持つ枠に融合できる。ポリ-hisタグＰＲＯ挿入物は、次いで、安定なクローンの選択のためのＤＨＦＲ等の選択マーカーを含むＳＶ４０誘導ベクターにサブクローニングできる。最後に、ＣＨＯ細胞をＳＶ４０誘導ベクターで（上記のように）形質移入した。発現を確認するために、上記のように標識化を行ってもよい。発現されたポリ-hisタグＰＲＯを含む培地は、次いで濃縮し、Ｎｉ２＋-キレートアフィニティクロマトグラフィー等の選択された方法により精製できる。
またＰＲＯは、一過性発現法によりＣＨＯ及び／又はＣＯＳ細胞で、他の安定な発現方法によりＣＨＯ細胞で発現させてもよい。
ＣＨＯ細胞における安定な発現は以下の方法を用いて実施される。タンパク質は、それぞれのタンパク質の可溶化形態のコード配列（例えば、細胞外ドメイン）がＩｇＧ１のヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ２ドメインを含む定常領域配列に融合したＩｇＧ作成物（イムノアドヘシン）、及び／又はポリ-Hisタグ形態として発現される。
【０１８１】
ＰＣＲ増幅に続いて、対応するＤＮＡを、Ausubelら, Current Protocols of Molecular Biology, Unit 3.16, John Wiley and Sons (1997)に記載されたような標準的技術を用いてＣＨＯ発現ベクターにサブクローニングする。ＣＨＯ発現ベクターは、対象とするＤＮＡの５’及び３’に適合する制限部位を有し、ｃＤＮＡの便利なシャトル化ができるように作成される。ベクターは、Lucasら, Nucl. Acids Res. 24: 9, 1774-1779 (1996)に記載されたようにＣＨＯ細胞での発現を用い、対象とするｃＤＮＡ及びジヒドロフォレートレダクターゼ（ＤＨＦＲ）の発現の制御にＳＶ４０初期プロモーター／エンハンサーを用いる。ＤＨＦＲ発現は、形質移入に続くプラスミドの安定な維持のための選択を可能にする。
所望のプラスミドＤＮＡの１２マイクログラムを、市販の形質移入試薬Superfect(登録商標)(Qiagen), Dosper(登録商標)及びFugene(登録商標)（Boehringer Mannheim）約１千万のＣＨＯ細胞に導入する。細胞は、上記のLucas等に記載されているように成長させる。約３ｘ１０７細胞を、下記のような更なる成長及び生産のためにアンプル中で凍結させる。
【０１８２】
プラスミドＤＮＡを含むアンプルを水槽に配して解凍し、ボルテックスにより混合した。内容物を１０ｍＬの媒質を含む遠心管にピペットして、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清を吸引して細胞を１０ｍＬの選択培地（０．２μｍ濾過ＰＳ２０、５％の０．２μｍ透析濾過ウシ胎児血清を添加）中に懸濁させる。次いで細胞を９０ｍＬの選択培地を含む１００ｍＬスピナーに分ける。１−２日後、細胞を１５０ｍＬの選択成長培地を満たした２５０ｍＬスピナーに移し、３７℃でインキュベートする。さらに２−３日後、２５０ｍＬ、５００ｍＬ及び２０００ｍＬのスピナーを３ｘ１０５細胞／ｍＬで播種する。細胞培地を遠心分離により新鮮培地に交換し、生産培地に再懸濁させた。任意の適切なＣＨＯ培地を用いてもよいが、実際には１９９２年６月１６日に発行された米国特許第５，１２２，４６９号に記載された生産培地を使用する。３Ｌの生産スピナーを１．２ｘ１０６細胞／ｍＬで播種した。０日目に、細胞数とｐＨを測定した。１日目に、スピナーをサンプルし、濾過空気での散布を実施した。２日目に、スピナーをサンプルし、温度を３３℃に変え、３０ｍＬの５００ｇ／Ｌのグルコース及び０．６ｍＬの１０％消泡剤（例えば３５％ポリジメチルシロキサンエマルション、Dow Corning 365 Medical Grade Emulsion）をとった。生産を通して、ｐＨは７．２近傍に調節し維持した。１０日後、又は生存率が７０％を下回るまで、細胞培地を遠心分離で回収して０．２２μｍフィルターを通して濾過した。濾過物は、４℃で貯蔵するか、即座に精製用カラムに充填する。
【０１８３】
ポリ-Hisタグ作成物について、タンパク質はＮｉ-ＮＴＡカラム（Qiagen）を用いて精製する。精製の前に、イミダゾールを条件培地に５ｍＭの濃度まで添加する。条件培地を、０．３ＭのＮａＣｌ及び５ｍＭイミダゾールを含む２０ｍＭのHepes，ｐＨ７．４バッファーで平衡化した６ｍｌのＮｉ−ＮＴＡカラムへ４−５ｍｌ／分の流速によって４℃でポンプ供給する。充填後、カラムをさらに平衡バッファーで洗浄し、タンパク質を０．２５Ｍイミダゾールを含む平衡バッファーで溶離する。高度に精製されたタンパク質は、続いて１０ｍＭのHepes、０．１４ＭのＮａＣｌ及び４％のマンニトール，ｐＨ６．８を含む貯蔵バッファー中で２５ｍｌのG25 Superfine（Pharmacia）カラムを用いて脱塩し、−８０℃で貯蔵する。
イムノアドヘシン（Ｆｃ含有）作成物を、以下通りに条件培地から精製する。条件培地を、２０ｍＭのリン酸ナトリウムバッファー，ｐＨ６．８で平衡化した５ｍｌのプロテインＡカラム（Pharmacia）へポンプ注入する。充填後、カラムを平衡バッファーで強く洗浄した後、１００ｍＭのクエン酸，ｐＨ３．５で溶離した。溶離したタンパク質は、１ｍｌの画分を２７５μＬの１Ｍトリスバッファー，ｐＨ９を含む管に回収することにより即座に中性化する。高度に精製されたタンパク質は、続いてポリ−Ｈｉｓタグタンパク質について上記した貯蔵バッファー中で脱塩する。均一性はＳＤＳポリアクリルアミドゲルとエドマン（Edman）分解によるＮ−末端アミノ酸配列決定により評価する。
ここに開示したＰＲＯポリペプチドの多くが上記のようにして成功裏に発現された。
【０１８４】
実施例８：酵母菌でのＰＲＯの発現
以下の方法は、酵母菌中でのＰＲＯの組換え発現を記載する。
第１に、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーターからのＰＲＯの細胞内生産又は分泌のための酵母菌発現ベクターを作成する。ＰＲＯをコードするＤＮＡ及びプロモーターを選択したプラスミドの適当な制限酵素部位に挿入してＰＲＯの細胞内発現を指示する。分泌のために、ＰＲＯをコードするＤＮＡを選択したプラスミドに、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーターをコードするＤＮＡ、天然ＰＲＯシグナルペプチド又は他の哺乳動物シグナルペプチド、又は、例えば酵母菌α因子又はインベルターゼ分泌シグナル／リーダー配列、及び（必要ならば）ＰＲＯの発現のためのリンカー配列とともにクローニングすることができる。
【０１８５】
酵母菌株ＡＢ１１０等の酵母菌は、次いで上記の発現プラスミドで形質転換し、選択された発酵培地中で培養できる。形質転換した酵母菌上清は、１０％トリクロロ酢酸での沈降及びＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分離で分析し、次いでクマシーブルー染色でゲルの染色をすることができる。
続いて組換えＰＲＯは、発酵培地から遠心分離により酵母菌細胞を除去し、次いで選択されたカートリッジフィルターを用いて培地を濃縮することによって単離及び精製できる。ＰＲＯを含む濃縮物は、選択されたカラムクロマトグラフィー樹脂を用いてさらに精製してもよい。
ここに開示したＰＲＯポリペプチドの多くが上記のようにして成功裏に発現された。
【０１８６】
実施例９：バキュロウイルス感染昆虫細胞でのＰＲＯの発現
以下の方法は、バキュロウイルス感染昆虫細胞中におけるＰＲＯの組換え発現を記載する。
ＰＲＯコードする配列を、バキュロウイルス発現ベクターに含まれるエピトープタグの上流に融合させた。このようなエピトープタグは、ポリ-hisタグ及び免疫グロブリンタグ（ＩｇＧのＦｃ領域など）を含む。ｐＶＬ１３９３（Novagen）などの市販されているプラスミドから誘導されるプラスミドを含む種々のプラスミドを用いることができる。簡単には、ＰＲＯ又はＰＲＯコード配列の所定部分、例えば膜貫通タンパク質の細胞外ドメインをコードする配列又はタンパク質が細胞外である場合の成熟タンパク質をコードする配列などが、５’及び３’領域に相補的なプライマーでのＰＣＲにより増幅される。５’プライマーは、隣接する（選択された）制限酵素部位を包含していてもよい。生産物は、次いで、選択された制限酵素で消化され、発現ベクターにサブクローニングされる。
組換えバキュロウイルスは、上記のプラスミド及びBaculoGold(商品名)ウイルスＤＮＡ（Pharmingen）を、Spodoptera frugiperda（「Ｓｆ９」）細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １７１１）中にリポフェクチン（GIBCO-BRLから市販）を用いて同時形質移入することにより作成される。２８℃で４−５日インキュベートした後、放出されたウイルスを回収し、更なる増幅に用いた。ウイルス感染及びタンパク質発現は、O'Reilleyら, Baculovirus expression vectors: A laboratory Manual, Oxford: Oxford University Press (1994)に記載されているように実施した。
【０１８７】
次に、発現されたポリ-hisタグＰＲＯは、例えばＮｉ２＋-キレートアフィニティクロマトグラフィーにより次のように精製される。抽出は、Rupertら, Nature, 362:175-179 (1993)に記載されているように、ウイルス感染した組み換えＳｆ９細胞から調製した。簡単には、Ｓｆ９細胞を洗浄し、超音波処理用バッファー（２５ｍＬのHepes，ｐＨ７．９；１２．５ｍＭのＭｇＣｌ２；０．１ｍＭ ＥＤＴＡ；１０％グリセロール；０．１％のＮＰ−４０；０．４ＭのＫＣｌ）中に再懸濁し、氷上で２回２０秒間超音波処理した。超音波処理物を遠心分離で透明化し、上清を負荷バッファー（５０ｍＭリン酸塩、３００ｍＭのＮａＣｌ、１０％グリセロール、ｐＨ７．８）で５０倍希釈し、０．４５μｍフィルターで濾過した。Ｎｉ２＋-ＮＴＡアガロースカラム（Qiagenから市販）を５ｍＬの総容積で調製し、２５ｍＬの水で洗浄し、２５ｍＬの負荷バッファーで平衡させた。濾過した細胞抽出物は、毎分０．５ｍＬでカラムに負荷した。カラムを、分画回収が始まる点であるＡ２８０のベースラインまで負荷バッファーで洗浄した。次に、カラムを、結合タンパク質を非特異的に溶離する二次洗浄バッファー（５０ｍＭリン酸塩；３００ｍＭのＮａＣｌ、１０％グリセロール、ｐＨ６．０）で洗浄した。Ａ２８０のベースラインに再度到達した後、カラムを二次洗浄バッファー中で０から５００ｍＭイミダゾール勾配で展開した。１ｍＬの分画を回収し、ＳＤＳ-ＰＡＧＥ及び銀染色又はアルカリホスファターゼ（Qiagen）に複合したＮｉ２＋-ＮＴＡでのウェスタンブロットで分析した。溶離したＨｉｓ１０-タグＰＲＯを含む画分をプールして負荷バッファーで透析した。
あるいは、ＩｇＧタグ（又はＦｃタグ）ＰＲＯの精製は、例えば、プロテインＡ又はプロテインＧカラムクロマトグラフィーを含む公知のクロマトグラフィー技術を用いて実施できる。
ここに開示したＰＲＯポリペプチドの多くが上記のようにして成功裏に発現された。
【０１８８】
実施例１０：ＰＲＯに結合する抗体の調製
この実施例は、ＰＲＯに特異的に結合できるモノクローナル抗体の調製を例示する。
モノクローナル抗体の生産のための技術は、この分野で知られており、例えば、上記のGodingに記載されている。用いられ得る免疫原は、精製ＰＲＯ、ＰＲＯを含む融合タンパク質、細胞表面に組換えＰＲＯを発現する細胞を含む。免疫原の選択は、当業者が過度の実験をすることなくなすことができる。
Ｂａｌｂ／ｃ等のマウスを、完全フロイントアジュバントに乳化して皮下又は腹腔内に１−１００マイクログラムで注入したＰＲＯ免疫原で免疫化する。あるいは、免疫原をＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（Ribi Immunochemical Researh, ハミルトン, モンタナ）に乳化し、動物の後足蹠に注入してもよい。免疫化したマウスは、次いで１０から１２日後に、選択したアジュバント中に乳化した付加的免疫源で追加免疫する。その後、数週間、マウスをさらなる免疫化注射で追加免疫する。抗ＰＲＯ抗体の検出のためのＥＬＩＳＡアッセイで試験するために、レトロオービタル出血からの血清試料をマウスから周期的に採取してもよい。
【０１８９】
適当な抗体力価が検出された後、抗体に「ポジティブ（陽性）」な動物に、ＰＲＯ静脈内注射の最後の注入をすることができる。３から４日後、マウスを屠殺し、脾臓細胞を取り出した。次いで脾臓細胞を（３５％ポリエチレングリコールを用いて）、ＡＣＴＴから番号ＣＲＬ１５９７で入手可能なＰ３Ｘ６３ＡｇＵ．１等の選択されたマウス骨髄腫株化細胞に融合させた。融合によりハイブリドーマ細胞が生成され、次いで、ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジン）培地を含む９６ウェル組織培養プレートに蒔き、非融合細胞、骨髄腫ハイブリッド、及び脾臓細胞ハイブリッドの増殖を阻害した。
ハイブリドーマ細胞は、ＰＲＯに対する反応性についてのＥＬＩＳＡでスクリーニングされる。ＰＲＯに対する所望のモノクローナル抗体を分泌する「ポジティブ（陽性）」ハイブリドーマ細胞の決定は、技術常識の範囲内である。
陽性ハイブリドーマ細胞を同系のＢａｌｂ／ｃマウスに腹腔内注入し、抗ＰＲＯモノクローナル抗体を含む腹水を生成させる。あるいは、ハイブリドーマ細胞を、組織培養フラスコ又はローラーボトルで成長させることもできる。腹水中に生成されたモノクローナル抗体の精製は、硫酸アンモニウム沈降、それに続くゲル排除クロマトグラフィ−を用いて行うことができる。あるいは、抗体のプロテインＡ又はプロテインＧへの親和性に基づくアフィニティクロマトグラフィーを用いることもできる。
【０１９０】
実施例１１：特異的抗体を用いたＰＲＯポリペプチドの精製
天然又は組換えＰＲＯポリペプチドは、この分野の種々の標準的なタンパク質精製方法によって精製できる。例えば、プロ-ＰＲＯポリペプチド、成熟ポリペプチド、又はプレ-ＰＲＯポリペプチドは、対象とするＰＲＯポリペプチドに特異的な抗体を用いた免疫親和性クロマトグラフィーによって精製される。一般に、免疫親和性カラムは抗ＰＲＯポリペプチド抗体を活性化クロマトグラフィー樹脂に共有結合させて作成される。
ポリクローナル免疫グロブリンは、硫酸アンモニウムでの沈殿又は固定化プロテインＡ（Pharmacia LKB Biotechnology, Piscataway, N.J.）での精製のいずれかにより免疫血清から調製される。同様に、モノクローナル抗体は、硫酸アンモニウム沈殿又は固定化プロテインＡでのクロマトグラフィーによりマウス腹水液から調製される。部分的に精製された免疫グロブリンは、ＣｎＢｒ-活性化セファロース（商品名）（Pharmacia LKB Biotechnology）等のクロマトグラフィー樹脂に共有結合される。抗体が樹脂に結合され、樹脂がブロックされ、誘導体樹脂は製造者の指示に従って洗浄される。
【０１９１】
このような免疫親和性カラムは、可溶化形態のＰＲＯポリペプチドを含有する細胞からの画分を調製することによるＰＲＯポリペプチドの精製において利用される。この調製物は、洗浄剤の添加又はこの分野で公知の方法により微分遠心分離を介して得られる全細胞又は細胞成分画分の可溶化により誘導される。あるいは、シグナル配列を含む可溶化ＰＲＯポリペプチドは、細胞が成長する培地中に有用な量で分泌される。
可溶化ＰＲＯポリペプチド含有調製物は、免疫親和性カラムを通され、カラムはＰＲＯポリペプチドの好ましい吸着をさせる条件下（例えば、洗浄剤存在下の高イオン強度バッファー）で洗浄される。次いで、カラムは、抗体／ＰＲＯポリペプチド結合を分解する条件下（例えば、約２−３といった低ｐＨ、高濃度の尿素又はチオシアン酸イオン等のカオトロープ）で溶離され、ＰＲＯポリペプチドが回収される。
【０１９２】
実施例１２：薬物スクリーニング
本発明は、ＰＲＯポリペプチド又はその結合断片を種々の薬物スクリーニング技術において使用することによる化合物のスクリーニングにとって特に有用である。そのような試験に用いられるＰＲＯポリペプチド又は断片は、溶液中の自由状態でも、固体支持体に固定されても、細胞表面に担持されていても、或いは細胞内に位置していてもよい。薬剤スクリーニングの１つの方法では、ＰＲＯポリペプチド又は断片を発現する組換え核酸で安定に形質移入される真核生物又は原核生物宿主細胞を利用する。薬剤は、そのような形質移入細胞に対して、競合的結合アッセイによってスクリーニングされる。生存可能又は固定化形態のいずれかによって、このような細胞は標準的な結合アッセイで使用できる。例えば、ＰＲＯポリペプチド又は断片と試験される試薬の間での複合体の形成を測定してよい。あるいは、試験する試薬によって生ずるＰＲＯポリペプチドとその標的細胞との間の複合体形成における減少を試験することもできる。
従って、本発明は、ＰＲＯポリペプチド関連疾患又は障害に影響を与えうる薬剤又は任意の他の試薬のスクリーニング方法を提供する。これらの方法は、その試薬をＰＲＯポリペプチド又は断片に接触させ、(i)試薬とＰＲＯポリペプチド又は断片との間の複合体の存在について、又は(ii)ＰＲＯポリペプチド又は断片と細胞との間の複合体の存在について、検定することを含む。これらの競合結合アッセイでは、ＰＲＯポリペプチド又は断片が典型的には標識される。適切なインキュベーションの後、自由なＰＲＯポリペプチド又は断片を結合形態のものから分離し、自由又は未複合の標識の量が、特定の試薬がＰＲＯポリペプチドに結合する又はＰＲＯポリペプチド／細胞複合体を阻害する能力の尺度となる。
【０１９３】
薬剤スクリーニングのための他の技術は、ポリペプチドに対して適当な結合親和性を持つ化合物についての高スループットスクリーニングを提供し、１９８４年９月１３日に公開されたＷＯ８４／０３５６４に詳細に記載されている。簡単に述べれば、多数の異なる小型ペプチド試験化合物が、プラスチックピン等の固体支持体又は幾つかの他の表面上で合成される。ＰＲＯポリペプチドに適用すると、ペプチド試験化合物はＰＲＯポリペプチドと反応して洗浄される。結合したＰＲＯポリペプチドはこの分野で良く知られた方法により検出される。精製したＰＲＯポリペプチドは、上記の薬剤スクリーニング技術に使用するためにプレート上に直接被覆することもできる。さらに、非中和抗体は、ペプチドを捕捉し、それを固体支持体上に固定化するのに使用できる。
また、本発明は、ＰＲＯポリペプチドに結合可能な中和抗体がＰＲＯポリペプチド又はその断片について試験化合物と特異的に競合する競合薬剤スクリーニングアッセイも考慮する。この方法において、抗体は、ＰＲＯポリペプチドで、１つ又は複数の抗原決定基を持つ任意のペプチドの存在を検出するのに使用できる。
【０１９４】
実施例１３：合理的薬物設計
合理的薬物設計の目的は、対象とする生物学的活性ポリペプチド（例えば、ＰＲＯポリペプチド）又はそれらが相互作用する小分子、例えばアゴニスト、アンタゴニスト、又はインヒビターの構造的類似物を製造することである。これらの例の任意のものが、ＰＲＯポリペプチドのより活性で安定な形態又はインビボでＰＲＯポリペプチドに機能を促進又は阻害する薬物の創作に使用できる（参考、Hodgson, Bio/Technology, 9: 19-21 (1991)）。
【０１９５】
１つの方法において、ＰＲＯポリペプチド、又はＰＲＯポリペプチド-インヒビター複合体の三次元構造が、ｘ線結晶学により、コンピュータモデル化により、最も典型的には２つの方法の組み合わせにより決定される。分子の構造を解明し活性部位を決定するためには、ＰＲＯポリペプチドの形状及び電荷の両方が確認されなければならない。数は少ないが、ＰＲＯポリペプチドの構造に関する有用な情報が相同タンパク質の構造に基づいたモデル化によって得られることもある。両方の場合において、関連する構造情報は、類似ＰＲＯポリペプチド様分子の設計又は効果的なインヒビターの同定に使用される。合理的な薬剤設計の有用な例は、Braxton及びWells, Biochemistry, 31: 7796-7801 (1992)に示されているような向上した活性又は安定性を持つ分子、又はAthaudaら,J. Biochem., 113: 742-746 (1993)に示されているような天然ペプチドのインヒビター、アゴニスト、又はアンタゴニストとして作用する分子を含む。
【０１９６】
また、上記のような機能アッセイによって選択された標的特異的な抗体を単離しその結晶構造を解明することもできる。この方法は、原理的には、それに続く薬剤設計が基礎をおくことのできるファーマコア(pharmacore)を生成する。機能的な薬理学的に活性な抗体に対する抗イディオタイプ抗体（抗ids）を生成することにより、タンパク質結晶学をバイパスすることができる。鏡像の鏡像として、抗idsの結合部位は最初のレセプターの類似物であると予測できる。抗idは、次いで、化学的又は生物学的に製造したペプチドのバンクからペプチドを同定及び単離するのに使用できる。単離されたペプチドは、ファーマコアとして機能するであろう。
本発明によって、Ｘ線結晶学などの分析実験を実施するために十分な量のＰＲＯポリペプチドが入手可能である。さらに、ここに提供したＰＲＯポリペプチドアミノ酸配列の知識は、Ｘ線結晶学に代わる又はそれに加わるコンピュータモデル化技術で用いられるガイダンスを提供する。
【０１９７】
実施例１４：ヒト血液でのＴＮＦ-αの放出を刺激するＰＲＯポリペプチドの同定（アッセイ１２８）
このアッセイは、本発明のあるＰＲＯポリペプチドが、ヒト血液におけるＴＮＦ−αの放出を刺激することを示している。このアッセイでポジティブ（陽性）と検定されたＰＲＯポリペプチドは、他の事例を含めて、ＴＮＦ-αの放出を刺激が所望されている研究目的、及びＴＮＦ-αの放出の増加が有益である症状の治療上の処置にとって有用である。特に、５０ｍＭ Hepesバッファー（ｐＨ７．２）で補充した２００μｌのヒト血液を、９６ウェルテストプレートのウェルへ等分して配する。次いで、各ウェルへは、５０ｍＭ Hepesバッファーに含まれる試験ＰＲＯポリペプチド（種々の濃度）又は５０ｍＭ Hepesバッファーのみ（ネガティブ（負）のコントロール）のいずれかを３００μｌ添加し、このプレートを３７℃で６時間インキュベートした。次に、試料を遠心分離し、各ウェルから５０μｌの血漿を収集し、ＥＬＩＳＡアッセイによってＴＮＦ-αの存在を試験した。アッセイでのポジティブ（陽性）とは、ネガティブ（負）のコントロール試料と比較して、ＰＲＯポリペプチド処理試料中により多量のＴＮＦ-αがあることである。  
以下のＰＲＯポリペプチドが、このアッセイにおいてポジティブ（陽性）であった：
ＰＲＯ１０７９、ＰＲＯ８２７、ＰＲＯ７９１、ＰＲＯ１１３１、ＰＲＯ１３１６、ＰＲＯ１１８３、ＰＲＯ１３４３、ＰＲＯ１７６０、ＰＲＯ１５６７、及びＰＲＯ４３３３。
【０１９８】
実施例１５：軟骨細胞再分化の促進（アッセイ１２９）
このアッセイは、本発明のＰＲＯポリペプチドが、培地で軟骨細胞の増殖及び／又は再分化を誘導する能力を示すか否かを確定するために設計されている。このアッセイにおいてポジティブと評価されるＰＲＯポリペプチドは、例えばスポーツ傷害及び関節炎などの種々の骨及び／又は軟骨組織疾患の治療に有用であると期待される。
ブタ軟骨細胞を、４−６ヶ月の年長雌ブタの中手指節関節の関節軟骨の一晩に渡るコラゲナーゼ消化によって単離する。そして、この単離された細胞を、１０％ＦＢＳ及び４μg/mlゲンタマイシンを含むハムＦ-１２へ２５，０００細胞／ｃｍ２の割合で播種する。培地を３日ごとに交換する。１２日目には、細胞を血清を含まない１００μlの同じ培地へ５，０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートへ播種し、１００μlの無血清培地（ネガティブコントロール）、スタウロスポリン（最終濃度が５nM；ポジティブコントロール）又は試験ＰＲＯポリペプチドのいずれかを添加して最終容量を２００μl/ウェルとする。３７℃での５日間の後、１００μｇ／ｍｌ Hoechst 33342及び５０μｇ／ｍｌ ５-ＣＦＤＡを含む２２μｌの培地を各ウェルへ添加し、さらに１０分間に渡って３７℃でインキュベートする。各ウェルの緑色蛍光を写真に取り、形態計測分析によって軟骨細胞の分化段階を計算する。＞５０％のＰＲＯポリペプチドで処理した細胞が分化している場合には（ネガティブコントロールによって得られたバックグラウンドと比較して）、このアッセイでポジティブな結果が得られていることになる。
このアッセイにおいて、ＰＲＯ６０２９ポリペプチドがポジティブであると評価された。
【０１９９】
実施例１６：癌牲腫瘍でのＰＲＯポリペプチドの過剰発現を検出するためのマイクロアレイ分析
幾千もの遺伝子配列を殆ど場合において含む核酸マイクロアレイは、組織の正常な対応物と比較して、疾患組織において差次的に発現している遺伝子を同定するために有用である。核酸マイクロアッセイを用いると、試験及びコントロール組織試料からの試験及びコントロールｍＲＮＡ試料が逆転写され、ｃＤＮＡプローブを生成するために標識される。次いで、このｃＤＮＡプローブは、固体支持体上に固定化さた多くの核酸とハイブリダイズされる。このアレイは、アレイの各メンバーの配列と位置がわかるように構成されている。例えば、ある疾患段階で発現することが知られている遺伝子から選ばれたものを固体支持体上に整列してもよい。標識プローブとある特定のアレイのメンバーとのハイブリダイゼーションは、プローブが誘導された試料がその遺伝子を発現していることを示す。試験（疾患組織）からのプローブのハイブリダイゼーションシグナルが、コントロール（正常組織）試料からのプローブのハイブリダイゼーションシグナルより大きい場合は、疾患組織において過剰発現している遺伝子又は複数遺伝子が同定される。この結果の意味は、疾患組織で過剰発現しているタンパク質は、疾患症状の存在のための診断的マーカーとしてだけではなく、疾患症状の治療のための治療上の標的としても有用であるということである。
核酸のハイブリダイゼーション及びマイクロアレイ技術の方法論は、当業者には良く知られている。本実施例では、ハイブリダイゼーション及びプローブ、スライドのための核酸の特別な調製、並びにハイブリダイゼーションの条件は、２０００年３月３１日に出願された米国仮出願番号 ６０／１９３，７６７にすべて詳述されており、ここにおいて文献として取り入れられている。
【０２００】
本実施例では、癌牲腫瘍で過剰発現しているＰＲＯポリペプチドを同定するための試みとして、非癌牲ヒト組織に関連するＰＲＯポリペプチドコード化遺伝子発現のために、種々のヒト組織から誘導された癌牲腫瘍が研究された。２セットの実験データーが作成された。１つのセットでは、同じ患者からの癌牲ヒト結腸腫瘍組織、及び適合した非癌牲ヒト結腸腫瘍組織（「適合した直腸コントロール」）を得て、そして上記で記載したマイクロアレイ技術を用いてＰＲＯポリペプチド発現について分析した。二番目のセットのデーターでは、任意の種々の異なるヒト腫瘍を得て、肝臓、腎臓、及び肺を含む上皮由来の非癌牲ヒト組織をプールすることによって調製される「普遍的」上皮コントロール試料と比較した。プールされた組織から単離されたｍＲＮＡは、これら異なる組織での発現遺伝子産物の混合物を示す。プールされたコントロール試料を用いたマイクロアレイハイブリダイゼーション実験は、二色分析において直線的なプロットを生じた。次いで、二色分析において生じたこの線の傾斜を、各実験の（試験：コントロール検出）の比率を標準化するために用いた。次いで、種々の実験の標準化された比率を比較し、そして遺伝子発現の集積牲を同定するために用いた。従って、プール化された「普遍的なコントロール」試料は、単純な二つの試料の比較における有効で相対的遺伝子発現の判定を可能にするだけではなく、幾つかの実験に渡る複数の試料の比較をも可能にする。
本実験では、ここに記載のＰＲＯポリペプチドコード化核酸配列から誘導された核酸プローブをマイクロアレイの作製に用い、上記に列挙した腫瘍組織のＲＮＡをさらにハイブリダイゼーションに用いた。標準化比：実験比に基づく値は、「カットオフ」と命名された。このカットオフを上回る値のみを重要であると判定した。下記の表８は、これらの実験の結果を示しており、本発明の種々のＰＲＯポリペプチドが非癌牲ヒト組織コントロールと比べて種々のヒト腫瘍組織において著しく過剰発現していることを示している。上記にて記載のように、これらのデーターは、本発明のＰＲＯポリペプチドが一つ以上の癌牲腫瘍の存在を示す診断マーカーとしてだけではなく、これら腫瘍の治療のための治療上の標的としての機能も果たすことを示している。
【０２０１】
2006081548.tif 000033
【０２０２】
2006081548.tif 000034
【０２０３】
2006081548.tif 000035
【０２０４】
2006081548.tif 000036
【０２０５】
2006081548.tif 000037
【０２０６】
2006081548.tif 000038
【０２０７】
2006081548.tif 000039
【０２０８】
2006081548.tif 000040
【０２０９】
2006081548.tif 000041
【０２１０】
2006081548.tif 000042
【０２１１】
2006081548.tif 000043
【０２１２】
2006081548.tif 000044
【０２１３】
2006081548.tif 000045
【０２１４】
2006081548.tif 000046
【図面の簡単な説明】
【０２１５】
【図．１】天然配列ＰＲＯ２７６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１）を示す。配列番号：１は、ここで「ＤＮＡ１６４３５−１２０８」と命名されるクローンである。
【図．２】図．１に示した配列番号：１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２）を示す。
【図．３】天然配列ＰＲＯ２８４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３）を示す。配列番号：３は、ここで「ＤＮＡ２３３１８−１２１１」と命名されるクローンである。
【図．４】図．３に示した配列番号：３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４）を示す。
【図．５】天然配列ＰＲＯ１９３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５）を示す。配列番号：５は、ここで「ＤＮＡ２３３２２−１３９３」と命名されるクローンである。
【図．６】図．５に示した配列番号：５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：６）を示す。
【図．７】天然配列ＰＲＯ１９０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：７）を示す。配列番号：７は、ここで「ＤＮＡ２３３３４−１３９２」と命名されるクローンである。
【図．８】図．７に示した配列番号：７コード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：８）を示す。
【図．９】天然配列ＰＲＯ１８０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：９）を示す。配列番号：９は、ここで「ＤＮＡ２６８４３−１３８９」と命名されるクローンである。
【図．１０】図．９に示した配列番号：９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１０）を示す。
【図．１１】天然配列ＰＲＯ１９４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１１）を示す。配列番号：１１は、ここで「ＤＮＡ２６８４４−１３９４」と命名されるクローンである。
【図．１２】図．１１に示した配列番号：１１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１２）を示す。
【図．１３】天然配列ＰＲＯ２１８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１３）を示す。配列番号：１３は、ここで「ＤＮＡ３０８６７−１３３５」と命名されるクローンである。
【図．１４】図．１３に示した配列番号：１３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１４）を示す。
【図．１５】天然配列ＰＲＯ２６０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１５）を示す。配列番号：１５は、ここで「ＤＮＡ３３４７０−１１７５」と命名されるクローンである。
【図．１６】図．１５に示した配列番号：１５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１６）を示す。
【図．１７】天然配列ＰＲＯ２３３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１７）を示す。配列番号：１７は、ここで「ＤＮＡ３４４３６−１２３８」と命名されるクローンである。
【図．１８】図．１７に示した配列番号：１７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１８）を示す。
【図．１９】天然配列ＰＲＯ２３４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１９）を示す。配列番号：１９は、ここで「ＤＮＡ３５５５７−１１３７」と命名されるクローンである。
【図．２０】図．１９に示した配列番号：１９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２０）を示す。
【図．２１】天然配列ＰＲＯ２３６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２１）を示す。配列番号：２１は、ここで「ＤＮＡ３５５９９−１１６８」と命名されるクローンである。
【図．２２】図．２１に示した配列番号：２１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２２）を示す。
【図．２３】天然配列ＰＲＯ２４４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２３）を示す。配列番号：２３は、ここで「ＤＮＡ３５６６８−１１７１」と命名されるクローンである。
【図．２４】図．２３に示した配列番号：２３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２４）を示す。
【図．２５】天然配列ＰＲＯ２６２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２５）を示す。配列番号：２５は、ここで「ＤＮＡ３６９９２−１１６８」と命名されるクローンである。
【図．２６】図．２５に示した配列番号：２５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２６）を示す。
【図．２７】天然配列ＰＲＯ２７１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２７）を示す。配列番号：２７は、ここで「ＤＮＡ３９４２３−１１８２」と命名されるクローンである。
【図．２８】図．２７に示した配列番号：２７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２８）を示す。
【図．２９】天然配列ＰＲＯ２６８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２９）を示す。配列番号：２９は、ここで「ＤＮＡ３９４２７−１１７９」と命名されるクローンである。
【図．３０】図．２９に示した配列番号：２９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３０）を示す。
【図．３１】天然配列ＰＲＯ２７０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３１）を示す。配列番号：３１は、ここで「ＤＮＡ３９５１０−１１８１」と命名されるクローンである。
【図．３２】図．３１に示した配列番号：３１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３２）を示す。
【図．３３】天然配列ＰＲＯ３５５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３３）を示す。配列番号：３３は、ここで「ＤＮＡ３９５１８−１２４７」と命名されるクローンである。
【図．３４】図．３３に示した配列番号：３３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３４）を示す。
【図．３５】天然配列ＰＲＯ２９８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３５）を示す。配列番号：３５は、ここで「ＤＮＡ３９９７５−１２１０」と命名されるクローンである。
【図．３６】図．３５に示した配列番号：３５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３６）を示す。
【図．３７】天然配列ＰＲＯ２９９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３７）を示す。配列番号：３７は、ここで「ＤＮＡ３９９７６−１２１５」と命名されるクローンである。
【図．３８】図．３７した配列番号：３７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３８）を示す。
【図．３９】天然配列ＰＲＯ２９６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３９）を示す。配列番号：３９は、ここで「ＤＮＡ３９９７９−１２１３」と命名されるクローンである。
【図．４０】図．３９に示した配列番号：３９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４０）を示す。
【図．４１】天然配列ＰＲＯ３２９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４１）を示す。配列番号：４１は、ここで「ＤＮＡ４０５９４−１２３３」と命名されるクローンである。
【図．４２】図．４１に示した配列番号：４１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４２）を示す。
【図．４３】天然配列ＰＲＯ３３０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４３）を示す。配列番号：４３は、ここで「ＤＮＡ４０６０３−１２３２」と命名されるクローンである。
【図．４４】図．４３に示した配列番号：４３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４４）を示す。
【図．４５】天然配列ＰＲＯ２９４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４５）を示す。配列番号：４５は、ここで「ＤＮＡ４０６０４−１１８７」と命名されるクローンである。
【図．４６】図．４５に示した配列番号：４５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４６）を示す。
【図．４７】天然配列ＰＲＯ３００ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４７）を示す。配列番号：４７は、ここで「ＤＮＡ４０６２５−１１８９」と命名されるクローンである。
【図．４８】図．４７に示した配列番号：４７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４８）を示す。
【図．４９】天然配列ＰＲＯ３０７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４９）を示す。配列番号：４９は、ここで「ＤＮＡ４１２２５−１２１７」と命名されるクローンである。
【図．５０】図．４９に示した配列番号：４９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５０）を示す。
【図．５１】天然配列ＰＲＯ３３４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５１）を示す。配列番号：５１は、ここで「ＤＮＡ４１３７９−１２３６」と命名されるクローンである。
【図．５２】図．５１に示した配列番号：５１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５２）を示す。
【図．５３】天然配列ＰＲＯ３５２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５３）を示す。配列番号：５３は、ここで「ＤＮＡ４１３８６−１３１６」と命名されるクローンである。
【図．５４】図．５３に示した配列番号：５３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５４）を示す。
【図．５５】天然配列ＰＲＯ７１０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５５）を示す。配列番号：５５は、ここで「ＤＮＡ４４１６１−１４３４」と命名されるクローンである。
【図．５６】図．５５に示した配列番号：５５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５６）を示す。
【図．５７】天然配列ＰＲＯ８７３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５７）を示す。配列番号：５７は、ここで「ＤＮＡ４４１７９−１３６２」と命名されるクローンである。
【図．５８】図．５７に示した配列番号：５７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５８）を示す。
【図．５９】天然配列ＰＲＯ３５４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５９）を示す。配列番号：５９は、ここで「ＤＮＡ４４１９２−１２４６」と命名されるクローンである。
【図．６０】図．５９に示した配列番号：５９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：６０）を示す。
【図．６１】天然配列ＰＲＯ１１５１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：６１）を示す。配列番号：６１は、ここで「ＤＮＡ４４６９４−１５００」と命名されるクローンである。
【図．６２】図．６１に示した配列番号：６１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：６２）を示す。
【図．６３】天然配列ＰＲＯ３８２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：６３）を示す。配列番号：６３は、ここで「ＤＮＡ４５２３４−１２７７」と命名されるクローンである。
【図．６４】図．６３に示した配列番号：６３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：６４）を示す。
【図．６５】天然配列ＰＲＯ１８６４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：６５）を示す。配列番号：６５は、ここで「ＤＮＡ４５４０９−２５１１」と命名されるクローンである。
【図．６６】図．６５に示した配列番号：６５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：６６）を示す。
【図．６７】天然配列ＰＲＯ３８６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：６７）を示す。配列番号：６７は、ここで「ＤＮＡ４５４１５−１３１８」と命名されるクローンである。
【図．６８】図．６７に示した配列番号：６７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：６８）を示す。
【図．６９】天然配列ＰＲＯ５４１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：６９）を示す。配列番号：６９は、ここで「ＤＮＡ４５４１７−１４３２」と命名されるクローンである。
【図．７０】図．６９に示した配列番号：６９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：７０）を示す。
【図．７１】天然配列ＰＲＯ８５２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：７１）を示す。配列番号：７１は、ここで「ＤＮＡ４５４９３−１３４９」と命名されるクローンである。
【図．７２】図．７１に示した配列番号：７１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：７２）を示す。
【図．７３】天然配列ＰＲＯ７００ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：７３）を示す。配列番号：７３は、ここで「ＤＮＡ４６７７６−１２８４」と命名されるクローンである。
【図．７４】図．７３に示した配列番号：７３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：７４）を示す。
【図．７５】天然配列ＰＲＯ７０８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：７５）を示す。配列番号：７５は、ここで「ＤＮＡ４８２９６−１２９２」と命名されるクローンである。
【図．７６】図．７５Ａ-７５Ｂに示した配列番号：７５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：７６）を示す。
【図．７７】天然配列ＰＲＯ７０７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：７７）を示す。配列番号：７７は、ここで「ＤＮＡ４８３０６−１２９１」と命名されるクローンである。
【図．７８】図．７７に示した配列番号：７７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：７８）を示す。
【図．７９】天然配列ＰＲＯ８６４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：７９）を示す。配列番号：７９は、ここで「ＤＮＡ４８３２８−１３５５」と命名されるクローンである。
【図．８０】図．７９に示した配列番号：７９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：８０）を示す。
【図．８１】天然配列ＰＲＯ７０６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：８１）を示す。配列番号：８１は、ここで「ＤＮＡ４８３２９−１２９０」と命名されるクローンである。
【図．８２】図．８１に示した配列番号：８１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：８２）を示す。
【図．８３】天然配列ＰＲＯ７３２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：８３）を示す。配列番号：８３は、ここで「ＤＮＡ４８３３４−１４３５」と命名されるクローンである。
【図．８４】図．８３に示した配列番号：８３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：８４）を示す。
【図．８５】天然配列ＰＲＯ５３７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：８５）を示す。配列番号：８５は、ここで「ＤＮＡ４９１４１−１４３１」と命名されるクローンである。
【図．８６】図．８５に示した配列番号：８５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：８６）を示す。
【図．８７】天然配列ＰＲＯ５４５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：８７）を示す。配列番号：８７は、ここで「ＤＮＡ４９６２４−１２７９」と命名されるクローンである。
【図．８８】図．８７に示した配列番号：８７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：８８）を示す。
【図．８９】天然配列ＰＲＯ７１８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：８９）を示す。配列番号：８９は、ここで「ＤＮＡ４９６４７−１３９８」と命名されるクローンである。
【図．９０】図．８９に示した配列番号：８９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：９０）を示す。
【図．９１】天然配列ＰＲＯ８７２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：９１）を示す。配列番号：９１は、ここで「ＤＮＡ４９８１９−１４３９」と命名されるクローンである。
【図．９２】図．９１に示した配列番号：９１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：９２）を示す。
【図．９３】天然配列ＰＲＯ７０４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：９３）を示す。配列番号：９３は、ここで「ＤＮＡ５０９１１−１２８８」と命名されるクローンである。
【図．９４】図．９３に示した配列番号：９３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：９４）を示す。
【図．９５】天然配列ＰＲＯ７０５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：９５）を示す。配列番号：９５は、ここで「ＤＮＡ５０９１４−１２８９」と命名されるクローンである。
【図．９６】図．９５に示した配列番号：９５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：９６）を示す。
【図．９７】天然配列ＰＲＯ８７１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：９７）を示す。配列番号：９７は、ここで「ＤＮＡ５０９１９−１３６１」と命名されるクローンである。
【図．９８】図．９７に示した配列番号：９７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：９８）を示す。
【図．９９】天然配列ＰＲＯ７０２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：９９）を示す。配列番号：９９は、ここで「ＤＮＡ５０９８０−１２８６」と命名されるクローンである。
【図．１００】図．９９に示した配列番号：９９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１００）を示す。
【図．１０１】天然配列ＰＲＯ９４４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１０１）を示す。配列番号：１０１は、ここで「ＤＮＡ５２１８５−１３７０」と命名されるクローンである。
【図．１０２】図．１０１に示した配列番号：１０１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１０２）を示す。
【図．１０３】天然配列ＰＲＯ７３９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１０３）を示す。配列番号：１０３は、ここで「ＤＮＡ５２７５６」と命名されるクローンである。
【図．１０４】図．１０３に示した配列番号：１０３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１０４）を示す。
【図．１０５】天然配列ＰＲＯ９４１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１０５）を示す。配列番号：１０５は、ここで「ＤＮＡ５３９０６−１３６８」と命名されるクローンである。
【図．１０６】図．１０５に示した配列番号：１０５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１０６）を示す。
【図．１０７】天然配列ＰＲＯ１０８２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１０７）を示す。配列番号：１０７は、ここで「ＤＮＡ５３９１２−１４５７」と命名されるクローンである。
【図．１０８】図．１０７に示した配列番号：１０７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１０８）を示す。
【図．１０９】天然配列ＰＲＯ１１３３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１０９）を示す。配列番号：１０９は、ここで「ＤＮＡ５３９１３−１４９０」と命名されるクローンである。
【図．１１０】図．１０９に示した配列番号：１０９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１１０）を示す。
【図．１１１】天然配列ＰＲＯ９８３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１１１）を示す。配列番号：１１１は、ここで「ＤＮＡ５３９７７−１３７１」と命名されるクローンである。
【図．１１２】図．１１１に示した配列番号：１１１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１１２）を示す。
【図．１１３】天然配列ＰＲＯ７８４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１１３）を示す。配列番号：１１３は、ここで「ＤＮＡ５３９７８−１４４３」と命名されるクローンである。
【図．１１４】図．１１３に示した配列番号：１１３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１１４）を示す。
【図．１１５】天然配列ＰＲＯ７８３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１１５）を示す。配列番号：１１５は、ここで「ＤＮＡ５３９９６−１４４２」と命名されるクローンである。
【図．１１６】図．１１５に示した配列番号：１１５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１１６）を示す。
【図．１１７】天然配列ＰＲＯ９４０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１１７）を示す。配列番号：１１７は、ここで「ＤＮＡ５４００２−１３６７」と命名されるクローンである。
【図．１１８】図．１１７に示した配列番号：１１７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１１８）を示す。
【図．１１９】天然配列ＰＲＯ７６８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１１９）を示す。配列番号：１１９は、ここで「ＤＮＡ５５７３７−１３４５」と命名されるクローンである。
【図．１２０】図．１１９に示した配列番号：１１９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１２０）を示す。
【図．１２１】天然配列ＰＲＯ１０７９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１２１）を示す。配列番号：１２１は、ここで「ＤＮＡ５６０５０−１４５５」と命名されるクローンである。
【図．１２２】図．１２１に示した配列番号：１２１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１２２）を示す。
【図．１２３】天然配列ＰＲＯ１０７８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１２３）を示す。配列番号：１２３は、ここで「ＤＮＡ５６０５２−１４５４」と命名されるクローンである。
【図．１２４】図．１２３に示した配列番号：１２３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１２４）を示す。
【図．１２５】天然配列ＰＲＯ１０１８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１２５）を示す。配列番号：１２５は、ここで「ＤＮＡ５６１０７−１４１５」と命名されるクローンである。
【図．１２６】図．１２５に示した配列番号：１２５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１２６）を示す。
【図．１２７】天然配列ＰＲＯ７９３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１２７）を示す。配列番号：１２７は、ここで「ＤＮＡ５６１１０−１４３７」と命名されるクローンである。
【図．１２８】図．１２７に示した配列番号：１２７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１２８）を示す。
【図．１２９】天然配列ＰＲＯ１７７３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１２９）を示す。配列番号：１２９は、ここで「ＤＮＡ５６４０６−１７０４」と命名されるクローンである。
【図．１３０】図．１２９に示した配列番号：１２９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１３０）を示す。
【図．１３１】天然配列ＰＲＯ１０１４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１３１）を示す。配列番号：１３１は、ここで「ＤＮＡ５６４０９−１３７７」と命名されるクローンである。
【図．１３２】図．１３１に示した配列番号：１３１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１３２）を示す。
【図．１３３】天然配列ＰＲＯ１０１３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１３３）を示す。配列番号：１３３は、ここで「ＤＮＡ５６４１０−１４１４」と命名されるクローンである。
【図．１３４】図．１３３に示した配列番号：１３３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１３４）を示す。
【図．１３５】天然配列ＰＲＯ９３７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１３５）を示す。配列番号：１３５は、ここで「ＤＮＡ５６４３６−１４４８」と命名されるクローンである。
【図．１３６】図．１３５に示した配列番号：１３５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１３６）を示す。
【図．１３７】天然配列ＰＲＯ１４７７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１３７）を示す。配列番号：１３７は、ここで「ＤＮＡ５６５２９−１６４７」と命名されるクローンである。
【図．１３８】図．１３７に示した配列番号：１３７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１３８）を示す。
【図．１３９】天然配列ＰＲＯ８４２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１３９）を示す。配列番号：１３９は、ここで「ＤＮＡ５６８５５−１４４７」と命名されるクローンである。
【図．１４０】図．１３９に示した配列番号：１３９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１４０）を示す。
【図．１４１】天然配列ＰＲＯ８３９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１４１）を示す。配列番号：１４１は、ここで「ＤＮＡ５６８５９−１４４５」と命名されるクローンである。
【図．１４２】図．１４１に示した配列番号：１４１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１４２）を示す。
【図．１４３】天然配列ＰＲＯ１１８０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１４３）を示す。配列番号：１４３は、ここで「ＤＮＡ５６８６０−１５１０」と命名されるクローンである。
【図．１４４】図．１４３に示した配列番号：１４３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１４４）を示す。
【図．１４５】天然配列ＰＲＯ１１３４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１４５）を示す。配列番号：１４５は、ここで「ＤＮＡ５６８６５−１４９１」と命名されるクローンである。
【図．１４６】図．１４５に示した配列番号：１４５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１４６）を示す。
【図．１４７】天然配列ＰＲＯ１１１５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１４７）を示す。配列番号：１４７は、ここで「ＤＮＡ５６８６８−１４７８」と命名されるクローンである。
【図．１４８】図．１４７に示した配列番号：１４７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１４８）を示す。
【図．１４９】天然配列ＰＲＯ１２７７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１４９）を示す。配列番号：１４９は、ここで「ＤＮＡ５６８６９−１５４５」と命名されるクローンである。
【図．１５０】図．１４９に示した配列番号：１４９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１５０）を示す。
【図．１５１】天然配列ＰＲＯ１１３５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１５１）を示す。配列番号：１５１は、ここで「ＤＮＡ５６８７０−１４９２」と命名されるクローンである。
【図．１５２】図．１５１に示した配列番号：１５１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１５２）を示す。
【図．１５３】天然配列ＰＲＯ８２７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１５３）を示す。配列番号：１５３は、ここで「ＤＮＡ５７０３９−１４０２」と命名されるクローンである。
【図．１５４】図．１５３に示した配列番号：１５３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１５４）を示す。
【図．１５５】天然配列ＰＲＯ１０５７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１５５）を示す。配列番号：１５５は、ここで「ＤＮＡ５７２５３−１３８２」と命名されるクローンである。
【図．１５６】図．１５５に示した配列番号：１５５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１５６）を示す。
【図．１５７】天然配列ＰＲＯ１１１３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１５７）を示す。配列番号：１５７は、ここで「ＤＮＡ５７２５４−１４７７」と命名されるクローンである。
【図．１５８】図．１５７に示した配列番号：１５７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１５８）を示す。
【図．１５９】天然配列ＰＲＯ１００６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１５９）を示す。配列番号：１５９は、ここで「ＤＮＡ５７６９９−１４１２」と命名されるクローンである。
【図．１６０】図．１５９に示した配列番号：１５９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１６０）を示す。
【図．１６１】天然配列ＰＲＯ１０７４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１６１）を示す。配列番号：１６１は、ここで「ＤＮＡ５７７０４−１４５２」と命名されるクローンである。
【図．１６２】図．１６１に示した配列番号：１６１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１６２）を示す。
【図．１６３】天然配列ＰＲＯ１０７３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１６３）を示す。配列番号：１６３は、ここで「ＤＮＡ５７７１０−１４５１」と命名されるクローンである。
【図．１６４】図．１６３に示した配列番号：１６３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１６４）を示す。
【図．１６５】天然配列ＰＲＯ１１３６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１６５）を示す。配列番号：１６５は、ここで「ＤＮＡ５７８２７−１４９３」と命名されるクローンである。
【図．１６６】図．１６５に示した配列番号：１６５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１６６）を示す。
【図．１６７】天然配列ＰＲＯ１００４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１６７）を示す。配列番号：１６７は、ここで「ＤＮＡ５７８４４−１４１０」と命名されるクローンである。
【図．１６８】図．１６７に示した配列番号：１６７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１６８）を示す。
【図．１６９】天然配列ＰＲＯ１３４４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１６９）を示す。配列番号：１６９は、ここで「ＤＮＡ５８７２３−１５８８」と命名されるクローンである。
【図．１７０】図．１６９に示した配列番号：１６９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１７０）を示す。
【図．１７１】天然配列ＰＲＯ１１１０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１７１）を示す。配列番号：１７１は、ここで「ＤＮＡ５８７２７−１４７４」と命名されるクローンである。
【図．１７２】図．１７１に示した配列番号：１７１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１７２）を示す。
【図．１７３】天然配列ＰＲＯ１３７８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１７３）を示す。配列番号：１７３は、ここで「ＤＮＡ５８７３０−１６０７」と命名されるクローンである。
【図．１７４】図．１７３に示した配列番号：１７３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１７４）を示す。
【図．１７５】天然配列ＰＲＯ１４８１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１７５）を示す。配列番号：１７５は、ここで「ＤＮＡ５８７３２−１６５０」と命名されるクローンである。
【図．１７６】図．１７５に示した配列番号：１７５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１７６）を示す。
【図．１７７】天然配列ＰＲＯ１１０９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１７７）を示す。配列番号：１７７は、ここで「ＤＮＡ５８７３７−１４７３」と命名されるクローンである。
【図．１７８】図．１７７に示した配列番号：１７７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１７８）を示す。
【図．１７９】天然配列ＰＲＯ１３８３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１７９）を示す。配列番号：１７９は、ここで「ＤＮＡ５８７４３−１６０９」と命名されるクローンである。
【図．１８０】図．１７９に示した配列番号：１７９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１８０）を示す。
【図．１８１】天然配列ＰＲＯ１０７２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１８１）を示す。配列番号：１８１は、ここで「ＤＮＡ５８７４７−１３８４」と命名されるクローンである。
【図．１８２】図．１８１に示した配列番号：１８１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１８２）を示す。
【図．１８３】天然配列ＰＲＯ１１８９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１８３）を示す。配列番号：１８３は、ここで「ＤＮＡ５８８２８−１５１９」と命名されるクローンである。
【図．１８４】図．１８３に示した配列番号：１８３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１８４）を示す。
【図．１８５】天然配列ＰＲＯ１００３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１８５）を示す。配列番号：１８５は、ここで「ＤＮＡ５８８４６−１４０９」と命名されるクローンである。
【図．１８６】図．１８５に示した配列番号：１８５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１８６）を示す。
【図．１８７】天然配列ＰＲＯ１１０８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１８７）を示す。配列番号：１８７は、ここで「ＤＮＡ５８８４８−１４７２」と命名されるクローンである。
【図．１８８】図．１８７に示した配列番号：１８７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１８８）を示す。
【図．１８９】天然配列ＰＲＯ１１３７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１８９）を示す。配列番号：１８９は、ここで「ＤＮＡ５８８４９−１４９４」と命名されるクローンである。
【図．１９０】図．１８９に示した配列番号：１８９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１９０）を示す。
【図．１９１】天然配列ＰＲＯ１１３８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１９１）を示す。配列番号：１９１は、ここで「ＤＮＡ５８８５０−１４９５」と命名されるクローンである。
【図．１９２】図．１９１に示した配列番号：１９１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１９２）を示す。
【図．１９３】天然配列ＰＲＯ１４１５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１９３）を示す。配列番号：１９３は、ここで「ＤＮＡ５８８５２−１６３７」と命名されるクローンである。
【図．１９４】図．１９３に示した配列番号：１９３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１９４）を示す。
【図．１９５】天然配列ＰＲＯ１０５４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１９５）を示す。配列番号：１９５は、ここで「ＤＮＡ５８８５３−１４２３」と命名されるクローンである。
【図．１９６】図．１９５に示した配列番号：１９５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１９６）を示す。
【図．１９７】天然配列ＰＲＯ９９４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１９７）を示す。配列番号：１９７は、ここで「ＤＮＡ５８８５５−１４２２」と命名されるクローンである。
【図．１９８】図．１９７に示した配列番号：１９７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：１９８）を示す。
【図．１９９】天然配列ＰＲＯ１０６９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１９９）を示す。配列番号：１９９は、ここで「ＤＮＡ５９２１１−１４５０」と命名されるクローンである。
【図．２００】図．１９９に示した配列番号：１９９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２００）を示す。
【図．２０１】天然配列ＰＲＯ１４１１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１０１）を示す。配列番号：２０１は、ここで「ＤＮＡ５９２１２−１６２７」と命名されるクローンである。
【図．２０２】図．２０１に示した配列番号：２０１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２０２）を示す。
【図．２０３】天然配列ＰＲＯ１１２９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２０３）を示す。配列番号：２０３は、ここで「ＤＮＡ５９２１３−１４８７」と命名されるクローンである。
【図．２０４】図．２０３に示した配列番号：２０３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２０４）を示す。
【図．２０５】天然配列ＰＲＯ１３５９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２０５）を示す。配列番号：２０５は、ここで「ＤＮＡ５９２１９−１６１３」と命名されるクローンである。
【図．２０６】図．２０５に示した配列番号：２０５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２０６）を示す。
【図．２０７】天然配列ＰＲＯ１１３９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２０７）を示す。配列番号：２０７は、ここで「ＤＮＡ５９４９７−１４９６」と命名されるクローンである。
【図．２０８】図．２０７に示した配列番号：２０７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２０８）を示す。
【図．２０９】天然配列ＰＲＯ１０６５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２０９）を示す。配列番号：２０９は、ここで「ＤＮＡ５９６０２−１４３６」と命名されるクローンである。
【図．２１０】図．２０９に示した配列番号：２０９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２１０）を示す。
【図．２１１】天然配列ＰＲＯ１０２８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２１１）を示す。配列番号：２１１は、ここで「ＤＮＡ５９６０３−１４１９」と命名されるクローンである。
【図．２１２】図．２１１に示した配列番号：２１１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２１２）を示す。
【図．２１３】天然配列ＰＲＯ１０２７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２１３）を示す。配列番号：２１３は、ここで「ＤＮＡ５９６０５−１４１８」と命名されるクローンである。
【図．２１４】図．２１３に示した配列番号：２１３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２１４）を示す。
【図．２１５】天然配列ＰＲＯ１１４０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２１５）を示す。配列番号：２１５は、ここで「ＤＮＡ５９６０７−１４９７」と命名されるクローンである。
【図．２１６】図．２１５に示した配列番号：２１５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２１６）を示す。
【図．２１７】天然配列ＰＲＯ１２９１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２１７）を示す。配列番号：２１７は、ここで「ＤＮＡ５９６１０−１５５６」と命名されるクローンである。
【図．２１８】図．２１７に示した配列番号：２１７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２１８）を示す。
【図．２１９】天然配列ＰＲＯ１１０５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２１９）を示す。配列番号：２１９は、ここで「ＤＮＡ５９６１２−１４６６」と命名されるクローンである。
【図．２２０】図．２１９に示した配列番号：２１９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２２０）を示す。
【図．２２１】天然配列ＰＲＯ１０２６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２２１）を示す。配列番号：２２１は、ここで「ＤＮＡ５９６１３−１４１７」と命名されるクローンである。
【図．２２２】図．２２１に示した配列番号：２２１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２２２）を示す。
【図．２２３】天然配列ＰＲＯ１１０４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２２３）を示す。配列番号：２２３は、ここで「ＤＮＡ５９６１６−１４６５」と命名されるクローンである。
【図．２２４】図．２２３に示した配列番号：２２３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２２４）を示す。
【図．２２５】天然配列ＰＲＯ１１００ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２２５）を示す。配列番号：２２５は、ここで「ＤＮＡ５９６１９−１４６４」と命名されるクローンである。
【図．２２６】図．２２５に示した配列番号：２２５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２２６）を示す。
【図．２２７】天然配列ＰＲＯ１１４１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２２７）を示す。配列番号：２２７は、ここで「ＤＮＡ５９６２５−１４９８」と命名されるクローンである。
【図．２２８】図．２２７に示した配列番号：２２７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２２８）を示す。
【図．２２９】天然配列ＰＲＯ１７７２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２２９）を示す。配列番号：２２９は、ここで「ＤＮＡ５９８１７−１７０３」と命名されるクローンである。
【図．２３０】図．２２９に示した配列番号：２２９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２３０）を示す。
【図．２３１】天然配列ＰＲＯ１０６４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２３１）を示す。配列番号：２３１は、ここで「ＤＮＡ５９８２７−１４２６」と命名されるクローンである。
【図．２３２】図．２３１に示した配列番号：２３１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２３２）を示す。
【図．２３３】天然配列ＰＲＯ１３７９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２３３）を示す。配列番号：２３３は、ここで「ＤＮＡ５９８２８−１６０８」と命名されるクローンである。
【図．２３４】図．２３３に示した配列番号：２３３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２３４）を示す。
【図．２３５】天然配列ＰＲＯ３５７３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２３５）を示す。配列番号：２３５は、ここで「ＤＮＡ５９８３７−２５４５」と命名されるクローンである。
【図．２３６】図．２３５に示した配列番号：２３５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２３６）を示す。
【図．２３７】天然配列ＰＲＯ３５６６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２３７）を示す。配列番号：２３７は、ここで「ＤＮＡ５９８４４−２５４２」と命名されるクローンである。
【図．２３８】図．２３７に示した配列番号：２３７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２３８）を示す。
【図．２３９】天然配列ＰＲＯ１１５６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２３９）を示す。配列番号：２３９は、ここで「ＤＮＡ５９８５３−１５０５」と命名されるクローンである。
【図．２４０】図．２３９に示した配列番号：２３９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２４０）を示す。
【図．２４１】天然配列ＰＲＯ１０９８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２４１）を示す。配列番号：２４１は、ここで「ＤＮＡ５９８５４−１４５９」と命名されるクローンである。
【図．２４２】図．２４１に示した配列番号：２４１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２４２）を示す。
【図．２４３】天然配列ＰＲＯ１１２８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２４３）を示す。配列番号：２４３は、ここで「ＤＮＡ５９８５５−１４８５」と命名されるクローンである。
【図．２４４】図．２４３に示した配列番号：２４３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２４４）を示す。
【図．２４５】天然配列ＰＲＯ１２４８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２４５）を示す。配列番号：２４５は、ここで「ＤＮＡ６０２７８−１５３０」と命名されるクローンである。
【図．２４６】図．２４５に示した配列番号：２４５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２４６）を示す。
【図．２４７】天然配列ＰＲＯ１１２７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２４７）を示す。配列番号：２４７は、ここで「ＤＮＡ６０２８３−１４８４」と命名されるクローンである。
【図．２４８】図．２４７に示した配列番号：２４７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２４８）を示す。
【図．２４９】天然配列ＰＲＯ１３１６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２４９）を示す。配列番号：２４９は、ここで「ＤＮＡ６０６０８−１５７７」と命名されるクローンである。
【図．２５０】図．２４９に示した配列番号：２４９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２５０）を示す。
【図．２５１】天然配列ＰＲＯ１１９７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２５１）を示す。配列番号：２５１は、ここで「ＤＮＡ６０６１１−１５２４」と命名されるクローンである。
【図．２５２】図．２５１に示した配列番号：２５１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２５２）を示す。
【図．２５３】天然配列ＰＲＯ１１２５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２５３）を示す。配列番号：２５３は、ここで「ＤＮＡ６０６１９−１４８２」と命名されるクローンである。
【図．２５４】図．２５３に示した配列番号：２５３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２５４）を示す。
【図．２５５】天然配列ＰＲＯ１１５８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２５５）を示す。配列番号：２５５は、ここで「ＤＮＡ６０６２５−１５０７」と命名されるクローンである。
【図．２５６】図．２５５に示した配列番号：２５５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２５６）を示す。
【図．２５７】天然配列ＰＲＯ１１２４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２５７）を示す。配列番号：２５７は、ここで「ＤＮＡ６０６２９−１４８１」と命名されるクローンである。
【図．２５８】図．２５７に示した配列番号：２５７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２５８）を示す。
【図．２５９】天然配列ＰＲＯ１３８０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２５９）を示す。配列番号：２５９は、ここで「ＤＮＡ６０７４０−１６１５」と命名されるクローンである。
【図．２６０】図．２５９に示した配列番号：２５９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２６０）を示す。
【図．２６１】天然配列ＰＲＯ１３７７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２６１）を示す。配列番号：２６１は、ここで「ＤＮＡ６１６０８−１６０６」と命名されるクローンである。
【図．２６２】図．２６１に示した配列番号：２６１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２６２）を示す。
【図．２６３】天然配列ＰＲＯ１２８７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２６３）を示す。配列番号：２６３は、ここで「ＤＮＡ６１７５５−１５５４」と命名されるクローンである。
【図．２６４】図．２６３に示した配列番号：２６３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２６４）を示す。
【図．２６５】天然配列ＰＲＯ１２４９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２６５）を示す。配列番号：２６５は、ここで「ＤＮＡ６２８０９−１５３１」と命名されるクローンである。
【図．２６６】図．２６５に示した配列番号：２６５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２６６）を示す。
【図．２６７】天然配列ＰＲＯ１３３５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２６７）を示す。配列番号：２６７は、ここで「ＤＮＡ６２８１２−１５９４」と命名されるクローンである。
【図．２６８】図．２６７に示した配列番号：２６７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２６８）を示す。
【図．２６９】天然配列ＰＲＯ３５７２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２６９）を示す。配列番号：２６９は、ここで「ＤＮＡ６２８１３−２５４４」と命名されるクローンである。
【図．２７０】図．２６９に示した配列番号：２６９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２７０）を示す。
【図．２７１】天然配列ＰＲＯ１５９９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２７１）を示す。配列番号：２７１は、ここで「ＤＮＡ６２８４５−１６８４」と命名されるクローンである。
【図．２７２】図．２７１に示した配列番号：２７１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２７２）を示す。
【図．２７３】天然配列ＰＲＯ１３７４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２７３）を示す。配列番号：２７３は、ここで「ＤＮＡ６４８４９−１６０４」と命名されるクローンである。
【図．２７４】図．２７３に示した配列番号：２７３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２７４）を示す。
【図．２７５】天然配列ＰＲＯ１３４５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２７５）を示す。配列番号：２７５は、ここで「ＤＮＡ６４８５２−１５８９」と命名されるクローンである。
【図．２７６】図．２７５に示した配列番号：２７５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２７６）を示す。
【図．２７７】天然配列ＰＲＯ１３１１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２７７）を示す。配列番号：２７７は、ここで「ＤＮＡ６４８６３−１５７３」と命名されるクローンである。
【図．２７８】図．２７７に示した配列番号：２７７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２７８）を示す。
【図．２７９】天然配列ＰＲＯ１３５７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２７９）を示す。配列番号：２７９は、ここで「ＤＮＡ６４８８１−１６０２」と命名されるクローンである。
【図．２８０】図．２７９に示した配列番号：２７９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２８０）を示す。
【図．２８１】天然配列ＰＲＯ１５５７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２８１）を示す。配列番号：２８１は、ここで「ＤＮＡ６４９０２−１６６７」と命名されるクローンである。
【図．２８２】図．２８１に示した配列番号：２８１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２８２）を示す。
【図．２８３】天然配列ＰＲＯ１３０５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２８３）を示す。配列番号：２８３は、ここで「ＤＮＡ６４９５２−１５６８」と命名されるクローンである。
【図．２８４】図．２８３に示した配列番号：２８３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２８４）を示す。
【図．２８５】天然配列ＰＲＯ１３０２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２８５）を示す。配列番号：２８５は、ここで「ＤＮＡ６５４０３−１５６５」と命名されるクローンである。
【図．２８６】図．２８５に示した配列番号：２８５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２８６）を示す。
【図．２８７】天然配列ＰＲＯ１２６６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２８７）を示す。配列番号：２８７は、ここで「ＤＮＡ６５４１３−１５３４」と命名されるクローンである。
【図．２８８】図．２８７に示した配列番号：２８７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２８８）を示す。
【図．２８９】天然配列ＰＲＯ１３３６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２８９）を示す。配列番号：２８９は、ここで「ＤＮＡ６５４２３−１５９５」と命名されるクローンである。
【図．２９０】図．２８９Ａ-２８９Ｂに示した配列番号：２８９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２９０）を示す。
【図．２９１】天然配列ＰＲＯ１２７８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２９１）を示す。配列番号：２９１は、ここで「ＤＮＡ６６３０４−１５４６」と命名されるクローンである。
【図．２９２】図．２９１に示した配列番号：２９１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２９２）を示す。
【図．２９３】天然配列ＰＲＯ１２７０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２９３）を示す。配列番号：２９３は、ここで「ＤＮＡ６６３０８−１５３７」と命名されるクローンである。
【図．２９４】図．２９３に示した配列番号：２９３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２９４）を示す。
【図．２９５】天然配列ＰＲＯ１２９８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２９５）を示す。配列番号：２９５は、ここで「ＤＮＡ６６５１１−１５６３」と命名されるクローンである。
【図．２９６】図．２９５に示した配列番号：２９５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２９６）を示す。
【図．２９７】天然配列ＰＲＯ１３０１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２９７）を示す。配列番号：２９７は、ここで「ＤＮＡ６６５１２−１５６４」と命名されるクローンである。
【図．２９８】図．２９７に示した配列番号：２９７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：２９８）を示す。
【図．２９９】天然配列ＰＲＯ１２６８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：２９９）を示す。配列番号：２９９は、ここで「ＤＮＡ６６５１９−１５３５」と命名されるクローンである。
【図．３００】図．２９９に示した配列番号：２９９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３００）を示す。
【図．３０１】天然配列ＰＲＯ１３２７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１０１）を示す。配列番号：３０１は、ここで「ＤＮＡ６６５２１−１５８３」と命名されるクローンである。
【図．３０２】図．３０１に示した配列番号：３０１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３０２）を示す。
【図．３０３】天然配列ＰＲＯ１３２８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３０３）を示す。配列番号：３０３は、ここで「ＤＮＡ６６６５８−１５８４」と命名されるクローンである。
【図．３０４】図．３０３に示した配列番号：３０３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３０４）を示す。
【図．３０５】天然配列ＰＲＯ１３２９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３０５）を示す。配列番号：３０５は、ここで「ＤＮＡ６６６６０−１５８５」と命名されるクローンである。
【図．３０６】図．３０５に示した配列番号：３０５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３０６）を示す。
【図．３０７】天然配列ＰＲＯ１３３９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３０７）を示す。配列番号：３０７は、ここで「ＤＮＡ６６６６９−１５９７」と命名されるクローンである。
【図．３０８】図．３０７に示した配列番号：３０７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３０８）を示す。
【図．３０９】天然配列ＰＲＯ１３４２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３０９）を示す。配列番号：３０９は、ここで「ＤＮＡ６６６７４−１５９９」と命名されるクローンである。
【図．３１０】図．３０９に示した配列番号：３０９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３１０）を示す。
【図．３１１】天然配列ＰＲＯ１４８７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３１１）を示す。配列番号：３１１は、ここで「ＤＮＡ６８８３６−１６５６」と命名されるクローンである。
【図．３１２】図．３１１Ａ-３１１Ｂに示した配列番号：３１１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３１２）を示す。
【図．３１３】天然配列ＰＲＯ３５７９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３１３）を示す。配列番号：３１３は、ここで「ＤＮＡ６８８６２−２５４６」と命名されるクローンである。
【図．３１４】図．３１３に示した配列番号：３１３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３１４）を示す。
【図．３１５】天然配列ＰＲＯ１４７２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３１５）を示す。配列番号：３１５は、ここで「ＤＮＡ６８８６６−１６４４」と命名されるクローンである。
【図．３１６】図．３１５に示した配列番号：３１５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３１６）を示す。
【図．３１７】天然配列ＰＲＯ１３８５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３１７）を示す。配列番号：３１７は、ここで「ＤＮＡ６８８６９−１６１０」と命名されるクローンである。
【図．３１８】図．３１７に示した配列番号：３１７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３１８）を示す。
【図．３１９】天然配列ＰＲＯ１４６１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３１９）を示す。配列番号：３１９は、ここで「ＤＮＡ６８８７１−１６３８」と命名されるクローンである。
【図．３２０】図．３１９に示した配列番号：３１９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３２０）を示す。
【図．３２１】天然配列ＰＲＯ１４２９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３２１）を示す。配列番号：３２１は、ここで「ＤＮＡ６８８７９−１６３１」と命名されるクローンである。
【図．３２２】図．３２１に示した配列番号：３２１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３２２）を示す。
【図．３２３】天然配列ＰＲＯ１５６８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３２３）を示す。配列番号：３２３は、ここで「ＤＮＡ６８８８０−１６７６」と命名されるクローンである。
【図．３２４】図．３２３に示した配列番号：３２３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３２４）を示す。
【図．３２５】天然配列ＰＲＯ１５６９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３２５）を示す。配列番号：３２５は、ここで「ＤＮＡ６８８８２−１６７７」と命名されるクローンである。
【図．３２６】図．３２５に示した配列番号：３２５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３２６）を示す。
【図．３２７】天然配列ＰＲＯ１７５３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３２７）を示す。配列番号：３２７は、ここで「ＤＮＡ６８８８３−１６９１」と命名されるクローンである。
【図．３２８】図．３２７に示した配列番号：３２７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３２８）を示す。
【図．３２９】天然配列ＰＲＯ１５７０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３２９）を示す。配列番号：３２９は、ここで「ＤＮＡ６８８８５−１６７８」と命名されるクローンである。
【図．３３０】図．３２９に示した配列番号：３２９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３３０）を示す。
【図．３３１】天然配列ＰＲＯ１５５９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３３１）を示す。配列番号：３３１は、ここで「ＤＮＡ６８８８６」と命名されるクローンである。
【図．３３２】図．３３１に示した配列番号：３３１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３３２）を示す。
【図．３３３】天然配列ＰＲＯ１４８６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３３３）を示す。配列番号：３３３は、ここで「ＤＮＡ７１１８０−１６５５」と命名されるクローンである。
【図．３３４】図．３３３に示した配列番号：３３３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３３４）を示す。
【図．３３５】天然配列ＰＲＯ１４３３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３３５）を示す。配列番号：３３５は、ここで「ＤＮＡ７１１８４−１６３４」と命名されるクローンである。
【図．３３６】図．３３５に示した配列番号：３３５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３３６）を示す。
【図．３３７】天然配列ＰＲＯ１４９０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３３７）を示す。配列番号：３３７は、ここで「ＤＮＡ７１２１３−１６５９」と命名されるクローンである。
【図．３３８】図．３３７に示した配列番号：３３７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３３８）を示す。
【図．３３９】天然配列ＰＲＯ１４８２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３３９）を示す。配列番号：３３９は、ここで「ＤＮＡ７１２３４−１６５１」と命名されるクローンである。
【図．３４０】図．３３９に示した配列番号：３３９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３４０）を示す。
【図．３４１】天然配列ＰＲＯ１４０９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３４１）を示す。配列番号：３４１は、ここで「ＤＮＡ７１２６９−１６２１」と命名されるクローンである。
【図．３４２】図．３４１に示した配列番号：３４１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３４２）を示す。
【図．３４３】天然配列ＰＲＯ１４４６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３４３）を示す。配列番号：３４３は、ここで「ＤＮＡ７１２７７−１６３６」と命名されるクローンである。
【図．３４４】図．３４３に示した配列番号：３４３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３４４）を示す。
【図．３４５】天然配列ＰＲＯ１６０４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３４５）を示す。配列番号：３４５は、ここで「ＤＮＡ７１２８６−１６８７」と命名されるクローンである。
【図．３４６】図．３４５に示した配列番号：３４５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３４６）を示す。
【図．３４７】天然配列ＰＲＯ１４９１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３４７）を示す。配列番号：３４７は、ここで「ＤＮＡ７１８８３−１６６０」と命名されるクローンである。
【図．３４８】図．３４７に示した配列番号：３４７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３４８）を示す。
【図．３４９】天然配列ＰＲＯ１４３１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３４９）を示す。配列番号：３４９は、ここで「ＤＮＡ７３４０１−１６３３」と命名されるクローンである。
【図．３５０】図．３４９に示した配列番号：３４９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３５０）を示す。
【図．３５１】天然配列ＰＲＯ１５６３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３５１）を示す。配列番号：３５１は、ここで「ＤＮＡ７３４９２−１６７１」と命名されるクローンである。
【図．３５２】図．３５１Ａ-３５１Ｂに示した配列番号：３５１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３５２）を示す。
【図．３５３】天然配列ＰＲＯ１５７１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３５３）を示す。配列番号：３５３は、ここで「ＤＮＡ７３７３０−１６７９」と命名されるクローンである。
【図．３５４】図．３５３に示した配列番号：３５３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３５４）を示す。
【図．３５５】天然配列ＰＲＯ１５７２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３５５）を示す。配列番号：３５５は、ここで「ＤＮＡ７３７３４−１６８０」と命名されるクローンである。
【図．３５６】図．３５５に示した配列番号：３５５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３５６）を示す。
【図．３５７】天然配列ＰＲＯ１５７３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３５７）を示す。配列番号：３５７は、ここで「ＤＮＡ７３７３５−１６８１」と命名されるクローンである。
【図．３５８】図．３５７に示した配列番号：３５７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３５８）を示す。
【図．３５９】天然配列ＰＲＯ１５０８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３５９）を示す。配列番号：３５９は、ここで「ＤＮＡ７３７４２−１６６２」と命名されるクローンである。
【図．３６０】図．３５９に示した配列番号：３５９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３６０）を示す。
【図．３６１】天然配列ＰＲＯ１４８５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３６１）を示す。配列番号：３６１は、ここで「ＤＮＡ７３７４６−１６５４」と命名されるクローンである。
【図．３６２】図．３６１に示した配列番号：３６１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３６２）を示す。
【図．３６３】天然配列ＰＲＯ１５６４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３６３）を示す。配列番号：３６３は、ここで「ＤＮＡ７３７６０−１６７２」と命名されるクローンである。
【図．３６４】図．３６３に示した配列番号：３６３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３６４）を示す。
【図．３６５】天然配列ＰＲＯ１５５０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３６５）を示す。配列番号：３６５は、ここで「ＤＮＡ７６３９３−１６６４」と命名されるクローンである。
【図．３６６】図．３６５に示した配列番号：３６５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３６６）を示す。
【図．３６７】天然配列ＰＲＯ１７５７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３６７）を示す。配列番号：３６７は、ここで「ＤＮＡ７６３９８−１６９９」と命名されるクローンである。
【図．３６８】図．３６７に示した配列番号：３６７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３６８）を示す。
【図．３６９】天然配列ＰＲＯ１７５８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３６９）を示す。配列番号：３６９は、ここで「ＤＮＡ７６３９９−１７００」と命名されるクローンである。
【図．３７０】図．３６９に示した配列番号：３６９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３７０）を示す。
【図．３７１】天然配列ＰＲＯ１７８１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３７１）を示す。配列番号：３７１は、ここで「ＤＮＡ７６５２２−２５００」と命名されるクローンである。
【図．３７２】図．３７１に示した配列番号：３７１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３７２）を示す。
【図．３７３】天然配列ＰＲＯ１６０６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３７３）を示す。配列番号：３７３は、ここで「ＤＮＡ７６５３３−１６８９」と命名されるクローンである。
【図．３７４】図．３７３に示した配列番号：３７３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３７４）を示す。
【図．３７５】天然配列ＰＲＯ１７８４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３７５）を示す。配列番号：３７５は、ここで「ＤＮＡ７７３０３−２５０２」と命名されるクローンである。
【図．３７６】図．３７５に示した配列番号：３７５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３７６）を示す。
【図．３７７】天然配列ＰＲＯ１７７４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３７７）を示す。配列番号：３７７は、ここで「ＤＮＡ７７６２６−１７０５」と命名されるクローンである。
【図．３７８】図．３７７に示した配列番号：３７７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３７８）を示す。
【図．３７９】天然配列ＰＲＯ１６０５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３７９）を示す。配列番号：３７９は、ここで「ＤＮＡ７７６４８−１６８８」と命名されるクローンである。
【図．３８０】図．３７９に示した配列番号：３７９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３８０）を示す。
【図．３８１】天然配列ＰＲＯ１９２８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３８１）を示す。配列番号：３８１は、ここで「ＤＮＡ８１７５４−２５３２」と命名されるクローンである。
【図．３８２】図．３８１に示した配列番号：３８１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３８２）を示す。
【図．３８３】天然配列ＰＲＯ１８６５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３８３）を示す。配列番号：３８３は、ここで「ＤＮＡ８１７５７−２５１２」と命名されるクローンである。
【図．３８４】図．３８３に示した配列番号：３８３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３８４）を示す。
【図．３８５】天然配列ＰＲＯ１９２５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３８５）を示す。配列番号：３８５は、ここで「ＤＮＡ８２３０２−２５２９」と命名されるクローンである。
【図．３８６】図．３８５に示した配列番号：３８５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３８６）を示す。
【図．３８７】天然配列ＰＲＯ１９２６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３８７）を示す。配列番号：３８７は、ここで「ＤＮＡ８２３４０−２５３０」と命名されるクローンである。
【図．３８８】図．３８７に示した配列番号：３８７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３８８）を示す。
【図．３８９】天然配列ＰＲＯ２６３０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３８９）を示す。配列番号：３８９は、ここで「ＤＮＡ８３５５１」と命名されるクローンである。
【図．３９０】図．３８９に示した配列番号：３８９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３９０）を示す。
【図．３９１】天然配列ＰＲＯ３４４３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３９１）を示す。配列番号：３９１は、ここで「ＤＮＡ８７９９１−２５４０」と命名されるクローンである。
【図．３９２】図．３９１に示した配列番号：３９１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３９２）を示す。
【図．３９３】天然配列ＰＲＯ３３０１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３９３）を示す。配列番号：３９３は、ここで「ＤＮＡ８８００２」と命名されるクローンである。
【図．３９４】図．３９３に示した配列番号：３９３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３９４）を示す。
【図．３９５】天然配列ＰＲＯ３４４２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３９５）を示す。配列番号：３９５は、ここで「ＤＮＡ９２２３８−２５３９」と命名されるクローンである。
【図．３９６】図．３９５に示した配列番号：３９５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３９６）を示す。
【図．３９７】天然配列ＰＲＯ４９７８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３９７）を示す。配列番号：３９７は、ここで「ＤＮＡ９５９３０」と命名されるクローンである。
【図．３９８】図．３９７に示した配列番号：３９７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：３９８）を示す。
【図．３９９】天然配列ＰＲＯ５８０１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３９９）を示す。配列番号：３９９は、ここで「ＤＮＡ１１５２９１−２６８１」と命名されるクローンである。
【図．４００】図．３９９に示した配列番号：３９９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４００）を示す。
【図．４０１】天然配列ＰＲＯ１９６３０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１０１）を示す。配列番号：４０１は、ここで「ＤＮＡ２３３３６−２８６１」と命名されるクローンである。
【図．４０２】図．４０１に示した配列番号：４０１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４０２）を示す。
【図．４０３】天然配列ＰＲＯ２０３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４０３）を示す。配列番号：４０３は、ここで「ＤＮＡ３０８６２−１３９６」と命名されるクローンである。
【図．４０４】図．４０３に示した配列番号：４０３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４０４）を示す。
【図．４０５】天然配列ＰＲＯ２０４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４０５）を示す。配列番号：４０５は、ここで「ＤＮＡ３０８７１−１１５７」と命名されるクローンである。
【図．４０６】図．４０５に示した配列番号：４０５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４０６）を示す。
【図．４０７】天然配列ＰＲＯ２１０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４０７）を示す。配列番号：４０７は、ここで「ＤＮＡ３２２７９−１１３１」と命名されるクローンである。
【図．４０８】図．４０７に示した配列番号：４０７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４０８）を示す。
【図．４０９】天然配列ＰＲＯ２２３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４０９）を示す。配列番号：４０９は、ここで「ＤＮＡ３３２０６−１１６５」と命名されるクローンである。
【図．４１０】図．４０９に示した配列番号：４０９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４１０）を示す。
【図．４１１】天然配列ＰＲＯ２４７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４１１）を示す。配列番号：４１１は、ここで「ＤＮＡ３５６７３−１２０１」と命名されるクローンである。
【図．４１２】図．４１１に示した配列番号：４１１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４１２）を示す。
【図．４１３】天然配列ＰＲＯ３５８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４１３）を示す。配列番号：４１３は、ここで「ＤＮＡ４７３６１−１１５４−２」と命名されるクローンである。
【図．４１４】図．４１３に示した配列番号：４１３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４１４）を示す。
【図．４１５】天然配列ＰＲＯ７２４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４１５）を示す。配列番号：４１５は、ここで「ＤＮＡ４９６３１−１３２８」と命名されるクローンである。
【図．４１６】図．４１５に示した配列番号：４１５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４１６）を示す。
【図．４１７】天然配列ＰＲＯ８６８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４１７）を示す。配列番号：４１７は、ここで「ＤＮＡ５２５９４−１２７０」と命名されるクローンである。
【図．４１８】図．４１７に示した配列番号：４１７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４１８）を示す。
【図．４１９】天然配列ＰＲＯ７４０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４１９）を示す。配列番号：４１９は、ここで「ＤＮＡ５５８００−１２６３」と命名されるクローンである。
【図．４２０】図．４１９に示した配列番号：４１９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４２０）を示す。
【図．４２１】天然配列ＰＲＯ１４７８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４２１）を示す。配列番号：４２１は、ここで「ＤＮＡ５６５３１−１６４８」と命名されるクローンである。
【図．４２２】図．４２１に示した配列番号：４２１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４２２）を示す。
【図．４２３】天然配列ＰＲＯ１６２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４２３）を示す。配列番号：４２３は、ここで「ＤＮＡ５６９６５−１３５６」と命名されるクローンである。
【図．４２４】図．４２３に示した配列番号：４２３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４２４）を示す。
【図．４２５】天然配列ＰＲＯ８２８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４２５）を示す。配列番号：４２５は、ここで「ＤＮＡ５７０３７−１４４４」と命名されるクローンである。
【図．４２６】図．４２５に示した配列番号：４２５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４２６）を示す。
【図．４２７】天然配列ＰＲＯ８１９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４２７）を示す。配列番号：４２７は、ここで「ＤＮＡ５７６９５−１３４０」と命名されるクローンである。
【図．４２８】図．４２７に示した配列番号：４２７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４２８）を示す。
【図．４２９】天然配列ＰＲＯ８１３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４２９）を示す。配列番号：４２９は、ここで「ＤＮＡ５７８３４−１３３９」と命名されるクローンである。
【図．４３０】図．４２９に示した配列番号：４２９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４３０）を示す。
【図．４３１】天然配列ＰＲＯ１１９４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４３１）を示す。配列番号：４３１は、ここで「ＤＮＡ５７８４１−１５２２」と命名されるクローンである。
【図．４３２】図．４３１に示した配列番号：４３１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４３２）を示す。
【図．４３３】天然配列ＰＲＯ８８７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４３３）を示す。配列番号：４３３は、ここで「ＤＮＡ５８１３０」と命名されるクローンである。
【図．４３４】図．４３３に示した配列番号：４３３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４３４）を示す。
【図．４３５】天然配列ＰＲＯ１０７１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４３５）を示す。配列番号：４３５は、ここで「ＤＮＡ５８８４７−１３８３」と命名されるクローンである。
【図．４３６】図．４３５に示した配列番号：４３５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４３６）を示す。
【図．４３７】天然配列ＰＲＯ１０２９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４３７）を示す。配列番号：４３７は、ここで「ＤＮＡ５９４９３−１４２０」と命名されるクローンである。
【図．４３８】図．４３７に示した配列番号：４３７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４３８）を示す。
【図．４３９】天然配列ＰＲＯ１１９０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４３９）を示す。配列番号：４３９は、ここで「ＤＮＡ５９５８６−１５２０」と命名されるクローンである。
【図．４４０】図．４３９に示した配列番号：４３９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４４０）を示す。
【図．４４１】天然配列ＰＲＯ４３３４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４４１）を示す。配列番号：４４１は、ここで「ＤＮＡ５９６０８−２５７７」と命名されるクローンである。
【図．４４２】図．４４１に示した配列番号：４４１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４４２）を示す。
【図．４４３】天然配列ＰＲＯ１１５５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４４３）を示す。配列番号：４４３は、ここで「ＤＮＡ５９８４９−１５０４」と命名されるクローンである。
【図．４４４】図．４４３に示した配列番号：４４３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４４４）を示す。
【図．４４５】天然配列ＰＲＯ１１５７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４４５）を示す。配列番号：４４５は、ここで「ＤＮＡ６０２９２−１５０６」と命名されるクローンである。
【図．４４６】図．４４５に示した配列番号：４４５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４４６）を示す。
【図．４４７】天然配列ＰＲＯ１１２２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４４７）を示す。配列番号：４４７は、ここで「ＤＮＡ６２３７７−１３８１−１」と命名されるクローンである。
【図．４４８】図．４４７に示した配列番号：４４７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４４８）を示す。
【図．４４９】天然配列ＰＲＯ１１８３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４４９）を示す。配列番号：４４９は、ここで「ＤＮＡ６２８８０−１５１３」と命名されるクローンである。
【図．４５０】図．４４９に示した配列番号：４４９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４５０）を示す。
【図．４５１】天然配列ＰＲＯ１３３７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４５１）を示す。配列番号：４５１は、ここで「ＤＮＡ６６６７２−１５８６」と命名されるクローンである。
【図．４５２】図．４５１に示した配列番号：４５１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４５２）を示す。
【図．４５３】天然配列ＰＲＯ１４８０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４５３）を示す。配列番号：４５３は、ここで「ＤＮＡ６７９６２−１６４９」と命名されるクローンである。
【図．４５４】図．４５３に示した配列番号：４５３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４５４）を示す。
【図．４５５】天然配列ＰＲＯ１９６４５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４５５）を示す。配列番号：４５５は、ここで「ＤＮＡ６９５５５−２８６７」と命名されるクローンである。
【図．４５６】図．４５５に示した配列番号：４５５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４５６）を示す。
【図．４５７】天然配列ＰＲＯ９７８２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４５７）を示す。配列番号：４５７は、ここで「ＤＮＡ７１１６２−２７６４」と命名されるクローンである。
【図．４５８】図．４５７に示した配列番号：４５７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４５８）を示す。
【図．４５９】天然配列ＰＲＯ１４１９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４５９）を示す。配列番号：４５９は、ここで「ＤＮＡ７１２９０−１６３０」と命名されるクローンである。
【図．４６０】図．４５９に示した配列番号：４５９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４６０）を示す。
【図．４６１】天然配列ＰＲＯ１５７５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４６１）を示す。配列番号：４６１は、ここで「ＤＮＡ７６４０１−１６８３」と命名されるクローンである。
【図．４６２】図．４６１に示した配列番号：４６１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４６２）を示す。
【図．４６３】天然配列ＰＲＯ１５６７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４６３）を示す。配列番号：４６３は、ここで「ＤＮＡ７６５４１−１６７５」と命名されるクローンである。
【図．４６４】図．４６３に示した配列番号：４６３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４６４）を示す。
【図．４６５】天然配列ＰＲＯ１８９１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４６５）を示す。配列番号：４６５は、ここで「ＤＮＡ７６７８８−２５２６」と命名されるクローンである。
【図．４６６】図．４６５に示した配列番号：４６５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４６６）を示す。
【図．４６７】天然配列ＰＲＯ１８８９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４６７）を示す。配列番号：４６７は、ここで「ＤＮＡ７７６２３−２５２４」と命名されるクローンである。
【図．４６８】図．４６７に示した配列番号：４６７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４６８）を示す。
【図．４６９】天然配列ＰＲＯ１７８５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４６９）を示す。配列番号：４６９は、ここで「ＤＮＡ８０１３６−２５０３」と命名されるクローンである。
【図．４７０】図．４６９に示した配列番号：４６９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４７０）を示す。
【図．４７１】天然配列ＰＲＯ６００３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４７１）を示す。配列番号：４７１は、ここで「ＤＮＡ８３５６８−２６９２」と命名されるクローンである。
【図．４７２】図．４７１に示した配列番号：４７１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４７２）を示す。
【図．４７３】天然配列ＰＲＯ４３３３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４７３）を示す。配列番号：４７３は、ここで「ＤＮＡ８４２１０−２５７６」と命名されるクローンである。
【図．４７４】図．４７３に示した配列番号：４７３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４７４）を示す。
【図．４７５】天然配列ＰＲＯ４３５６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４７５）を示す。配列番号：４７５は、ここで「ＤＮＡ８６５７６−２５９５」と命名されるクローンである。
【図．４７６】図．４７５に示した配列番号：４７５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４７６）を示す。
【図．４７７】天然配列ＰＲＯ４３５２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４７７）を示す。配列番号：４７７は、ここで「ＤＮＡ８７９７６−２５９３」と命名されるクローンである。
【図．４７８】図．４７７に示した配列番号：４７７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４７８）を示す。
【図．４７９】天然配列ＰＲＯ４３５４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４７９）を示す。配列番号：４７９は、ここで「ＤＮＡ９２２５６−２５９６」と命名されるクローンである。
【図．４８０】図．４７９に示した配列番号：４７９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４８０）を示す。
【図．４８１】天然配列ＰＲＯ４３６９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４８１）を示す。配列番号：４８１は、ここで「ＤＮＡ９２２８９−２５９８」と命名されるクローンである。
【図．４８２】図．４８１に示した配列番号：４８１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４８２）を示す。
【図．４８３】天然配列ＰＲＯ６０３０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４８３）を示す。配列番号：４８３は、ここで「ＤＮＡ９６８５０−２７０５」と命名されるクローンである。
【図．４８４】図．４８３に示した配列番号：４８３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４８４）を示す。
【図．４８５】天然配列ＰＲＯ４４３３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４８５）を示す。配列番号：４８５は、ここで「ＤＮＡ９６８５５−２６２９」と命名されるクローンである。
【図．４８６】図．４８５に示した配列番号：４８５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４８６）を示す。
【図．４８７】天然配列ＰＲＯ４４２４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４８７）を示す。配列番号：４８７は、ここで「ＤＮＡ９６８５７−２６３６」と命名されるクローンである。
【図．４８８】図．４８７に示した配列番号：４８７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４８８）を示す。
【図．４８９】天然配列ＰＲＯ６０１７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４８９）を示す。配列番号：４８９は、ここで「ＤＮＡ９６８６０−２７００」と命名されるクローンである。
【図．４９０】図．４８９に示した配列番号：４８９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４９０）を示す。
【図．４９１】天然配列ＰＲＯ１９５６３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４９１）を示す。配列番号：４９１は、ここで「ＤＮＡ９６８６１−２８４４」と命名されるクローンである。
【図．４９２】図．４９１に示した配列番号：４９１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４９２）を示す。
【図．４９３】天然配列ＰＲＯ６０１５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４９３）を示す。配列番号：４９３は、ここで「ＤＮＡ９６８６６−２６９８」と命名されるクローンである。
【図．４９４】図．４９３に示した配列番号：４９３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４９４）を示す。
【図．４９５】天然配列ＰＲＯ５７７９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４９５）を示す。配列番号：４９５は、ここで「ＤＮＡ９６８７０−２６７６」と命名されるクローンである。
【図．４９６】図．４９５に示した配列番号：４９５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４９６）を示す。
【図．４９７】天然配列ＰＲＯ５７７６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４９７）を示す。配列番号：４９７は、ここで「ＤＮＡ９６８７２−２６７４」と命名されるクローンである。
【図．４９８】図．４９７に示した配列番号：４９７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：４９８）を示す。
【図．４９９】天然配列ＰＲＯ４４３０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：４９９）を示す。配列番号：４９９は、ここで「ＤＮＡ９６８７８−２６２６」と命名されるクローンである。
【図．５００】図．４９９に示した配列番号：４９９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５００）を示す。
【図．５０１】天然配列ＰＲＯ４４２１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１０１）を示す。配列番号：５０１は、ここで「ＤＮＡ９６８７９−２６１９」と命名されるクローンである。
【図．５０２】図．５０１に示した配列番号：５０１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５０２）を示す。
【図．５０３】天然配列ＰＲＯ４４９９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５０３）を示す。配列番号：５０３は、ここで「ＤＮＡ９６８８９−２６４１」と命名されるクローンである。
【図．５０４】図．５０３に示した配列番号：５０３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５０４）を示す。
【図．５０５】天然配列ＰＲＯ４４２３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５０５）を示す。配列番号：５０５は、ここで「ＤＮＡ９６８９３−２６２１」と命名されるクローンである。
【図．５０６】図．５０５に示した配列番号：５０５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５０６）を示す。
【図．５０７】天然配列ＰＲＯ５９９８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５０７）を示す。配列番号：５０７は、ここで「ＤＮＡ９６８９７−２６８８」と命名されるクローンである。
【図．５０８】図．５０７に示した配列番号：５０７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５０８）を示す。
【図．５０９】天然配列ＰＲＯ４５０１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５０９）を示す。配列番号：５０９は、ここで「ＤＮＡ９８５６４−２６４３」と命名されるクローンである。
【図．５１０】図．５０９に示した配列番号：５０９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５１０）を示す。
【図．５１１】天然配列ＰＲＯ６２４０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５１１）を示す。配列番号：５１１は、ここで「ＤＮＡ１０７４４３−２７１８」と命名されるクローンである。
【図．５１２】図．５１１に示した配列番号：５１１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５１２）を示す。
【図．５１３】天然配列ＰＲＯ６２４５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５１３）を示す。配列番号：５１３は、ここで「ＤＮＡ１０７７８６−２７２３」と命名されるクローンである。
【図．５１４】図．５１３に示した配列番号：５１３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５１４）を示す。
【図．５１５】天然配列ＰＲＯ６１７５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５１５）を示す。配列番号：５１５は、ここで「ＤＮＡ１０８６８２−２７１２」と命名されるクローンである。
【図．５１６】図．５１５に示した配列番号：５１５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５１６）を示す。
【図．５１７】天然配列ＰＲＯ９７４２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５１７）を示す。配列番号：５１７は、ここで「ＤＮＡ１０８６８４−２７６１」と命名されるクローンである。
【図．５１８】図．５１７に示した配列番号：５１７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５１８）を示す。
【図．５１９】天然配列ＰＲＯ７１７９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５１９）を示す。配列番号：５１９は、ここで「ＤＮＡ１０８７０１−２７４９」と命名されるクローンである。
【図．５２０】図．５１９に示した配列番号：５１９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５２０）を示す。
【図．５２１】天然配列ＰＲＯ６２３９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５２１）を示す。配列番号：５２１は、ここで「ＤＮＡ１０８７２０−２７１７」と命名されるクローンである。
【図．５２２】図．５２１に示した配列番号：５２１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５２２）を示す。
【図．５２３】天然配列ＰＲＯ６４９３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５２３）を示す。配列番号：５２３は、ここで「ＤＮＡ１０８７２６−２７２９」と命名されるクローンである。
【図．５２４】図．５２３に示した配列番号：５２３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５２４）を示す。
【図．５２５】天然配列ＰＲＯ９７４１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５２５）を示す。配列番号：５２５は、ここで「ＤＮＡ１０８７２８−２７６０」と命名されるクローンである。
【図．５２６】図．５２５Ａ-５２５Ｂに示した配列番号：５２５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５２６）を示す。
【図．５２７】天然配列ＰＲＯ９８２２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５２７）を示す。配列番号：５２７は、ここで「ＤＮＡ１０８７３８−２７６７」と命名されるクローンである。
【図．５２８】図．５２７に示した配列番号：５２７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５２８）を示す。
【図．５２９】天然配列ＰＲＯ６２４４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５２９）を示す。配列番号：５２９は、ここで「ＤＮＡ１０８７４３−２７２２」と命名されるクローンである。
【図．５３０】図．５２９に示した配列番号：５２９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５３０）を示す。
【図．５３１】天然配列ＰＲＯ９７４０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５３１）を示す。配列番号：５３１は、ここで「ＤＮＡ１０８７５８−２７５９」と命名されるクローンである。
【図．５３２】図．５３１に示した配列番号：５３１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５３２）を示す。
【図．５３３】天然配列ＰＲＯ９７３９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５３３）を示す。配列番号：５３３は、ここで「ＤＮＡ１０８７６５−２７５８」と命名されるクローンである。
【図．５３４】図．５３３に示した配列番号：５３３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５３４）を示す。
【図．５３５】天然配列ＰＲＯ７１７７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５３５）を示す。配列番号：５３５は、ここで「ＤＮＡ１０８７８３−２７４７」と命名されるクローンである。
【図．５３６】図．５３５に示した配列番号：５３５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５３６）を示す。
【図．５３７】天然配列ＰＲＯ７１７８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５３７）を示す。配列番号：５３７は、ここで「ＤＮＡ１０８７８９−２７４８」と命名されるクローンである。
【図．５３８】図．５３７に示した配列番号：５３７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５３８）を示す。
【図．５３９】天然配列ＰＲＯ６２４６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５３９）を示す。配列番号：５３９は、ここで「ＤＮＡ１０８８０６−２７２４」と命名されるクローンである。
【図．５４０】図．５３９に示した配列番号：５３９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５４０）を示す。
【図．５４１】天然配列ＰＲＯ６２４１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５４１）を示す。配列番号：５４１は、ここで「ＤＮＡ１０８９３６−２７１９」と命名されるクローンである。
【図．５４２】図．５４１に示した配列番号：５４１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５４２）を示す。
【図．５４３】天然配列ＰＲＯ９８３５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５４３）を示す。配列番号：５４３は、ここで「ＤＮＡ１１９５１０−２７７１」と命名されるクローンである。
【図．５４４】図．５４３に示した配列番号：５４３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５４４）を示す。
【図．５４５】天然配列ＰＲＯ９８５７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５４５）を示す。配列番号：５４５は、ここで「ＤＮＡ１１９５１７−２７７８」と命名されるクローンである。
【図．５４６】図．５４５に示した配列番号：５４５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５４６）を示す。
【図．５４７】天然配列ＰＲＯ７４３６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５４７）を示す。配列番号：５４７は、ここで「ＤＮＡ１１９５３５−２７５６」と命名されるクローンである。
【図．５４８】図．５４７に示した配列番号：５４７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５４８）を示す。
【図．５４９】天然配列ＰＲＯ９８５６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５４９）を示す。配列番号：５４９は、ここで「ＤＮＡ１１９５３７−２７７７」と命名されるクローンである。
【図．５５０】図．５４９に示した配列番号：５４９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５５０）を示す。
【図．５５１】天然配列ＰＲＯ１９６０５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５５１）を示す。配列番号：５５１は、ここで「ＤＮＡ１１９７１４−２８５１」と命名されるクローンである。
【図．５５２】図．５５１に示した配列番号：５５１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５５２）を示す。
【図．５５３】天然配列ＰＲＯ９８５９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５５３）を示す。配列番号：５５３は、ここで「ＤＮＡ１２５１７０−２７８０」と命名されるクローンである。
【図．５５４】図．５５３に示した配列番号：５５３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５５４）を示す。
【図．５５５】天然配列ＰＲＯ１２９７０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５５５）を示す。配列番号：５５５は、ここで「ＤＮＡ１２９５９４−２８４１」と命名されるクローンである。
【図．５５６】図．５５５に示した配列番号：５５５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５５６）を示す。
【図．５５７】天然配列ＰＲＯ１９６２６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５５７）を示す。配列番号：５５７は、ここで「ＤＮＡ１２９７９３−２８５７」と命名されるクローンである。
【図．５５８】図．５５７に示した配列番号：５５７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５５８）を示す。
【図．５５９】天然配列ＰＲＯ９８３３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５５９）を示す。配列番号：５５９は、ここで「ＤＮＡ１３０８０９−２７６９」と命名されるクローンである。
【図．５６０】図．５５９に示した配列番号：５５９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５６０）を示す。
【図．５６１】天然配列ＰＲＯ１９６７０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５６１）を示す。配列番号：５６１は、ここで「ＤＮＡ１３１６３９−２８７４」と命名されるクローンである。
【図．５６２】図．５６１に示した配列番号：５６１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５６２）を示す。
【図．５６３】天然配列ＰＲＯ１９６２４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５６３）を示す。配列番号：５６３は、ここで「ＤＮＡ１３１６４９−２８５５」と命名されるクローンである。
【図．５６４】図．５６３に示した配列番号：５６３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５６４）を示す。
【図．５６５】天然配列ＰＲＯ１９６８０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５６５）を示す。配列番号：５６５は、ここで「ＤＮＡ１３１６５２−２８７６」と命名されるクローンである。
【図．５６６】図．５６５に示した配列番号：５６５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５６６）を示す。
【図．５６７】天然配列ＰＲＯ１９６７５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５６７）を示す。配列番号：５６７は、ここで「ＤＮＡ１３１６５８−２８７５」と命名されるクローンである。
【図．５６８】図．５６７に示した配列番号：５６７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５６８）を示す。
【図．５６９】天然配列ＰＲＯ９８３４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５６９）を示す。配列番号：５６９は、ここで「ＤＮＡ１３２１６２−２７７０」と命名されるクローンである。
【図．５７０】図．５６９に示した配列番号：５６９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５７０）を示す。
【図．５７１】天然配列ＰＲＯ９７４４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５７１）を示す。配列番号：５７１は、ここで「ＤＮＡ１３６１１０−２７６３」と命名されるクローンである。
【図．５７２】図．５７１に示した配列番号：５７１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５７２）を示す。
【図．５７３】天然配列ＰＲＯ１９６４４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５７３）を示す。配列番号：５７３は、ここで「ＤＮＡ１３９５９２−２８６６」と命名されるクローンである。
【図．５７４】図．５７３に示した配列番号：５７３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５７４）を示す。
【図．５７５】天然配列ＰＲＯ１９６２５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５７５）を示す。配列番号：５７５は、ここで「ＤＮＡ１３９６０８−２８５６」と命名されるクローンである。
【図．５７６】図．５７５に示した配列番号：５７５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５７６）を示す。
【図．５７７】天然配列ＰＲＯ１９５９７ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５７７）を示す。配列番号：５７７は、ここで「ＤＮＡ１４３２９２−２８４８」と命名されるクローンである。
【図．５７８】図．５７７に示した配列番号：５７７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５７８）を示す。
【図．５７９】天然配列ＰＲＯ１６０９０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５７９）を示す。配列番号：５７９は、ここで「ＤＮＡ１４４８４４−２８４３」と命名されるクローンである。
【図．５８０】図．５７９に示した配列番号：５７９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５８０）を示す。
【図．５８１】天然配列ＰＲＯ１９５７６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５８１）を示す。配列番号：５８１は、ここで「ＤＮＡ１４４８５７−２８４５」と命名されるクローンである。
【図．５８２】図．５８１に示した配列番号：５８１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５８２）を示す。
【図．５８３】天然配列ＰＲＯ１９６４６ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５８３）を示す。配列番号：５８３は、ここで「ＤＮＡ１４５８４１−２８６８」と命名されるクローンである。
【図．５８４】図．５８３に示した配列番号：５８３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５８４）を示す。
【図．５８５】天然配列ＰＲＯ１９８１４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５８５）を示す。配列番号：５８５は、ここで「ＤＮＡ１４８００４−２８８２」と命名されるクローンである。
【図．５８６】図．５８５に示した配列番号：５８５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５８６）を示す。
【図．５８７】天然配列ＰＲＯ１９６６９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５８７）を示す。配列番号：５８７は、ここで「ＤＮＡ１４９８９３−２８７３」と命名されるクローンである。
【図．５８８】図．５８７に示した配列番号：５８７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５８８）を示す。
【図．５８９】天然配列ＰＲＯ１９８１８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５８９）を示す。配列番号：５８９は、ここで「ＤＮＡ１４９９３０−２８８４」と命名されるクローンである。
【図．５９０】図．５８９に示した配列番号：５８９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５９０）を示す。
【図．５９１】天然配列ＰＲＯ２００８８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５９１）を示す。配列番号：５９１は、ここで「ＤＮＡ１５０１５７−２８９８」と命名されるクローンである。
【図．５９２】図．５９１に示した配列番号：５９１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５９２）を示す。
【図．５９３】天然配列ＰＲＯ１６０８９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５９３）を示す。配列番号：５９３は、ここで「ＤＮＡ１５０１６３−２８４２」と命名されるクローンである。
【図．５９４】図．５９３に示した配列番号：５９３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５９４）を示す。
【図．５９５】天然配列ＰＲＯ２００２５ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５９５）を示す。配列番号：５９５は、ここで「ＤＮＡ１５３５７９−２８９４」と命名されるクローンである。
【図．５９６】図．５９５に示した配列番号：５９５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５９６）を示す。
【図．５９７】天然配列ＰＲＯ２００４０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５９７）を示す。配列番号：５９７は、ここで「ＤＮＡ１６４６２５−２８９０」と命名されるクローンである。
【図．５９８】図．５９７に示した配列番号：５９７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：５９８）を示す。
【図．５９９】天然配列ＰＲＯ７９１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：５９９）を示す。配列番号：５９９は、ここで「ＤＮＡ５７８３８−１３３７」と命名されるクローンである。
【図．６００】図．５９９に示した配列番号：５９９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：６００）を示す。
【図．６０１】天然配列ＰＲＯ１１３１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：１０１）を示す。配列番号：６０１は、ここで「ＤＮＡ５９７７７−１４８０」と命名されるクローンである。
【図．６０２】図．６０１に示した配列番号：６０１のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：６０２）を示す。
【図．６０３】天然配列ＰＲＯ１３４３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：６０３）を示す。配列番号：６０３は、ここで「ＤＮＡ６６６７５−１５８７」と命名されるクローンである。
【図．６０４】図．６０３に示した配列番号：６０３のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：６０４）を示す。
【図．６０５】天然配列ＰＲＯ１７６０ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：６０５）を示す。配列番号：６０５は、ここで「ＤＮＡ７６５３２−１７０２」と命名されるクローンである。
【図．６０６】図．６０５に示した配列番号：６０５のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：６０６）を示す。
【図．６０７】天然配列ＰＲＯ６０２９ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：６０７）を示す。配列番号：６０７は、ここで「ＤＮＡ１０５８４９−２７０４」と命名されるクローンである。
【図．６０８】図．６０７に示した配列番号：６０７のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：６０８）を示す。
【図．６０９】天然配列ＰＲＯ１８０１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：６０９）を示す。配列番号：６０９は、ここで「ＤＮＡ８３５００−２５０６」と命名されるクローンである。
【図．６１０】図．６０９に示した配列番号：６０９のコード化配列から誘導されたアミノ酸配列（配列番号：６１０）を示す。
【図．１】
2006081548.tif 000047
【図．２】
2006081548.tif 000048
【図．３】
2006081548.tif 000049
【図．４】
2006081548.tif 000050
【図．５】
2006081548.tif 000051
【図．６】
2006081548.tif 000052
【図．７】
2006081548.tif 000053
【図．８】
2006081548.tif 000054
【図．９】
2006081548.tif 000055
【図．１０】
2006081548.tif 000056
【図．１１】
2006081548.tif 000057
【図．１２】
2006081548.tif 000058
【図．１３】
2006081548.tif 000059
【図．１４】
2006081548.tif 000060
【図．１５】
2006081548.tif 000061
【図．１６】
2006081548.tif 000062
【図．１７】
2006081548.tif 000063
【図．１８】
2006081548.tif 000064
【図．１９】
2006081548.tif 000065
【図．２０】
2006081548.tif 000066
【図．２１】
2006081548.tif 000067
【図．２２】
2006081548.tif 000068
【図．２３】
2006081548.tif 000069
【図．２４】
2006081548.tif 000070
【図．２５】
2006081548.tif 000071
【図．２６】
2006081548.tif 000072
【図．２７】
2006081548.tif 000073
【図．２８】
2006081548.tif 000074
【図．２９】
2006081548.tif 000075
【図．３０】
2006081548.tif 000076
【図．３１】
2006081548.tif 000077
【図．３２】
2006081548.tif 000078
【図．３３】
2006081548.tif 000079
【図．３４】
2006081548.tif 000080
【図．３５】
2006081548.tif 000081
【図．３６】
2006081548.tif 000082
【図．３７】
2006081548.tif 000083
【図．３８】
2006081548.tif 000084
【図．３９】
2006081548.tif 000085
【図．４０】
2006081548.tif 000086
【図．４１】
2006081548.tif 000087
【図．４２】
2006081548.tif 000088
【図．４３】
2006081548.tif 000089
【図．４４】
2006081548.tif 000090
【図．４５】
2006081548.tif 000091
【図．４６】
2006081548.tif 000092
【図．４７】
2006081548.tif 000093
【図．４８】
2006081548.tif 000094
【図．４９】
2006081548.tif 000095
【図．５０】
2006081548.tif 000096
【図．５１】
2006081548.tif 000097
【図．５２】
2006081548.tif 000098
【図．５３】
2006081548.tif 000099
【図．５４】
2006081548.tif 000100
【図．５５】
2006081548.tif 000101
【図．５６】
2006081548.tif 000102
【図．５７】
2006081548.tif 000103
【図．５８】
2006081548.tif 000104
【図．５９】
2006081548.tif 000105
【図．６０】
2006081548.tif 000106
【図．６１】
2006081548.tif 000107
【図．６２】
2006081548.tif 000108
【図．６３】
2006081548.tif 000109
【図．６４】
2006081548.tif 000110
【図．６５】
2006081548.tif 000111
【図．６６】
2006081548.tif 000112
【図．６７】
2006081548.tif 000113
【図．６８】
2006081548.tif 000114
【図．６９】
2006081548.tif 000115
【図．７０】
2006081548.tif 000116
【図．７１】
2006081548.tif 000117
【図．７２】
2006081548.tif 000118
【図．７３】
2006081548.tif 000119
【図．７４】
2006081548.tif 000120
【図．７５】
2006081548.tif 000121
【図．７６】
2006081548.tif 000122
【図．７７】
2006081548.tif 000123
【図．７８】
2006081548.tif 000124
【図．７９】
2006081548.tif 000125
【図．８０】
2006081548.tif 000126
【図．８１】
2006081548.tif 000127
【図．８２】
2006081548.tif 000128
【図．８３】
2006081548.tif 000129
【図．８４】
2006081548.tif 000130
【図．８５】
2006081548.tif 000131
【図．８６】
2006081548.tif 000132
【図．８７】
2006081548.tif 000133
【図．８８】
2006081548.tif 000134
【図．８９】
2006081548.tif 000135
【図．９０】
2006081548.tif 000136
【図．９１】
2006081548.tif 000137
【図．９２】
2006081548.tif 000138
【図．９３】
2006081548.tif 000139
【図．９４】
2006081548.tif 000140
【図．９５】
2006081548.tif 000141
【図．９６】
2006081548.tif 000142
【図．９７】
2006081548.tif 000143
【図．９８】
2006081548.tif 000144
【図．９９】
2006081548.tif 000145
【図．１００】
2006081548.tif 000146
【図．１０１】
2006081548.tif 000147
【図．１０２】
2006081548.tif 000148
【図．１０３】
2006081548.tif 000149
【図．１０４】
2006081548.tif 000150
【図．１０５】
2006081548.tif 000151
【図．１０６】
2006081548.tif 000152
【図．１０７】
2006081548.tif 000153
【図．１０８】
2006081548.tif 000154
【図．１０９】
2006081548.tif 000155
【図．１１０】
2006081548.tif 000156
【図．１１１】
2006081548.tif 000157
【図．１１２】
2006081548.tif 000158
【図．１１３】
2006081548.tif 000159
【図．１１４】
2006081548.tif 000160
【図．１１５】
2006081548.tif 000161
【図．１１６】
2006081548.tif 000162
【図．１１７】
2006081548.tif 000163
【図．１１８】
2006081548.tif 000164
【図．１１９】
2006081548.tif 000165
【図．１２０】
2006081548.tif 000166
【図．１２１】
2006081548.tif 000167
【図．１２２】
2006081548.tif 000168
【図．１２３】
2006081548.tif 000169
【図．１２４】
2006081548.tif 000170
【図．１２５】
2006081548.tif 000171
【図．１２６】
2006081548.tif 000172
【図．１２７】
2006081548.tif 000173
【図．１２８】
2006081548.tif 000174
【図．１２９】
2006081548.tif 000175
【図．１３０】
2006081548.tif 000176
【図．１３１】
2006081548.tif 000177
【図．１３２】
2006081548.tif 000178
【図．１３３】
2006081548.tif 000179
【図．１３４】
2006081548.tif 000180
【図．１３５】
2006081548.tif 000181
【図．１３６】
2006081548.tif 000182
【図．１３７】
2006081548.tif 000183
【図．１３８】
2006081548.tif 000184
【図．１３９】
2006081548.tif 000185
【図．１４０】
2006081548.tif 000186
【図．１４１】
2006081548.tif 000187
【図．１４２】
2006081548.tif 000188
【図．１４３】
2006081548.tif 000189
【図．１４４】
2006081548.tif 000190
【図．１４５】
2006081548.tif 000191
【図．１４６】
2006081548.tif 000192
【図．１４７】
2006081548.tif 000193
【図．１４８】
2006081548.tif 000194
【図．１４９】
2006081548.tif 000195
【図．１５０】
2006081548.tif 000196
【図．１５１】
2006081548.tif 000197
【図．１５２】
2006081548.tif 000198
【図．１５３】
2006081548.tif 000199
【図．１５４】
2006081548.tif 000200
【図．１５５】
2006081548.tif 000201
【図．１５６】
2006081548.tif 000202
【図．１５７】
2006081548.tif 000203
【図．１５８】
2006081548.tif 000204
【図．１５９】
2006081548.tif 000205
【図．１６０】
2006081548.tif 000206
【図．１６１】
2006081548.tif 000207
【図．１６２】
2006081548.tif 000208
【図．１６３】
2006081548.tif 000209
【図．１６４】
2006081548.tif 000210
【図．１６５】
2006081548.tif 000211
【図．１６６】
2006081548.tif 000212
【図．１６７】
2006081548.tif 000213
【図．１６８】
2006081548.tif 000214
【図．１６９】
2006081548.tif 000215
【図．１７０】
2006081548.tif 000216
【図．１７１】
2006081548.tif 000217
【図．１７２】
2006081548.tif 000218
【図．１７３】
2006081548.tif 000219
【図．１７４】
2006081548.tif 000220
【図．１７５】
2006081548.tif 000221
【図．１７６】
2006081548.tif 000222
【図．１７７】
2006081548.tif 000223
【図．１７８】
2006081548.tif 000224
【図．１７９】
2006081548.tif 000225
【図．１８０】
2006081548.tif 000226
【図．１８１】
2006081548.tif 000227
【図．１８２】
2006081548.tif 000228
【図．１８３】
2006081548.tif 000229
【図．１８４】
2006081548.tif 000230
【図．１８５】
2006081548.tif 000231
【図．１８６】
2006081548.tif 000232
【図．１８７】
2006081548.tif 000233
【図．１８８】
2006081548.tif 000234
【図．１８９】
2006081548.tif 000235
【図．１９０】
2006081548.tif 000236
【図．１９１】
2006081548.tif 000237
【図．１９２】
2006081548.tif 000238
【図．１９３】
2006081548.tif 000239
【図．１９４】
2006081548.tif 000240
【図．１９５】
2006081548.tif 000241
【図．１９６】
2006081548.tif 000242
【図．１９７】
2006081548.tif 000243
【図．１９８】
2006081548.tif 000244
【図．１９９】
2006081548.tif 000245
【図．２００】
2006081548.tif 000246
【図．２０１】
2006081548.tif 000247
【図．２０２】
2006081548.tif 000248
【図．２０３】
2006081548.tif 000249
【図．２０４】
2006081548.tif 000250
【図．２０５】
2006081548.tif 000251
【図．２０６】
2006081548.tif 000252
【図．２０７】
2006081548.tif 000253
【図．２０８】
2006081548.tif 000254
【図．２０９】
2006081548.tif 000255
【図．２１０】
2006081548.tif 000256
【図．２１１】
2006081548.tif 000257
【図．２１２】
2006081548.tif 000258
【図．２１３】
2006081548.tif 000259
【図．２１４】
2006081548.tif 000260
【図．２１５】
2006081548.tif 000261
【図．２１６】
2006081548.tif 000262
【図．２１７】
2006081548.tif 000263
【図．２１８】
2006081548.tif 000264
【図．２１９】
2006081548.tif 000265
【図．２２０】
2006081548.tif 000266
【図．２２１】
2006081548.tif 000267
【図．２２２】
2006081548.tif 000268
【図．２２３】
2006081548.tif 000269
【図．２２４】
2006081548.tif 000270
【図．２２５】
2006081548.tif 000271
【図．２２６】
2006081548.tif 000272
【図．２２７】
2006081548.tif 000273
【図．２２８】
2006081548.tif 000274
【図．２２９】
2006081548.tif 000275
【図．２３０】
2006081548.tif 000276
【図．２３１】
2006081548.tif 000277
【図．２３２】
2006081548.tif 000278
【図．２３３】
2006081548.tif 000279
【図．２３４】
2006081548.tif 000280
【図．２３５】
2006081548.tif 000281
【図．２３６】
2006081548.tif 000282
【図．２３７】
2006081548.tif 000283
【図．２３８】
2006081548.tif 000284
【図．２３９】
2006081548.tif 000285
【図．２４０】
2006081548.tif 000286
【図．２４１】
2006081548.tif 000287
【図．２４２】
2006081548.tif 000288
【図．２４３】
2006081548.tif 000289
【図．２４４】
2006081548.tif 000290
【図．２４５】
2006081548.tif 000291
【図．２４６】
2006081548.tif 000292
【図．２４７】
2006081548.tif 000293
【図．２４８】
2006081548.tif 000294
【図．２４９】
2006081548.tif 000295
【図．２５０】
2006081548.tif 000296
【図．２５１】
2006081548.tif 000297
【図．２５２】
2006081548.tif 000298
【図．２５３】
2006081548.tif 000299
【図．２５４】
2006081548.tif 000300
【図．２５５】
2006081548.tif 000301
【図．２５６】
2006081548.tif 000302
【図．２５７】
2006081548.tif 000303
【図．２５８】
2006081548.tif 000304
【図．２５９】
2006081548.tif 000305
【図．２６０】
2006081548.tif 000306
【図．２６１】
2006081548.tif 000307
【図．２６２】
2006081548.tif 000308
【図．２６３】
2006081548.tif 000309
【図．２６４】
2006081548.tif 000310
【図．２６５】
2006081548.tif 000311
【図．２６６】
2006081548.tif 000312
【図．２６７】
2006081548.tif 000313
【図．２６８】
2006081548.tif 000314
【図．２６９】
2006081548.tif 000315
【図．２７０】
2006081548.tif 000316
【図．２７１】
2006081548.tif 000317
【図．２７２】
2006081548.tif 000318
【図．２７３】
2006081548.tif 000319
【図．２７４】
2006081548.tif 000320
【図．２７５】
2006081548.tif 000321
【図．２７６】
2006081548.tif 000322
【図．２７７】
2006081548.tif 000323
【図．２７８】
2006081548.tif 000324
【図．２７９】
2006081548.tif 000325
【図．２８０】
2006081548.tif 000326
【図．２８１】
2006081548.tif 000327
【図．２８２】
2006081548.tif 000328
【図．２８３】
2006081548.tif 000329
【図．２８４】
2006081548.tif 000330
【図．２８５】
2006081548.tif 000331
【図．２８６】
2006081548.tif 000332
【図．２８７】
2006081548.tif 000333
【図．２８８】
2006081548.tif 000334
【図．２８９】
2006081548.tif 000335
【図．２９０】
2006081548.tif 000336
【図．２９１】
2006081548.tif 000337
【図．２９２】
2006081548.tif 000338
【図．２９３】
2006081548.tif 000339
【図．２９４】
2006081548.tif 000340
【図．２９５】
2006081548.tif 000341
【図．２９６】
2006081548.tif 000342
【図．２９７】
2006081548.tif 000343
【図．２９８】
2006081548.tif 000344
【図．２９９】
2006081548.tif 000345
【図．３００】
2006081548.tif 000346
【図．３０１】
2006081548.tif 000347
【図．３０２】
2006081548.tif 000348
【図．３０３】
2006081548.tif 000349
【図．３０４】
2006081548.tif 000350
【図．３０５】
2006081548.tif 000351
【図．３０６】
2006081548.tif 000352
【図．３０７】
2006081548.tif 000353
【図．３０８】
2006081548.tif 000354
【図．３０９】
2006081548.tif 000355
【図．３１０】
2006081548.tif 000356
【図．３１１】
2006081548.tif 000357
【図．３１２】
2006081548.tif 000358
【図．３１３】
2006081548.tif 000359
【図．３１４】
2006081548.tif 000360
【図．３１５】
2006081548.tif 000361
【図．３１６】
2006081548.tif 000362
【図．３１７】
2006081548.tif 000363
【図．３１８】
2006081548.tif 000364
【図．３１９】
2006081548.tif 000365
【図．３２０】
2006081548.tif 000366
【図．３２１】
2006081548.tif 000367
【図．３２２】
2006081548.tif 000368
【図．３２３】
2006081548.tif 000369
【図．３２４】
2006081548.tif 000370
【図．３２５】
2006081548.tif 000371
【図．３２６】
2006081548.tif 000372
【図．３２７】
2006081548.tif 000373
【図．３２８】
2006081548.tif 000374
【図．３２９】
2006081548.tif 000375
【図．３３０】
2006081548.tif 000376
【図．３３１】
2006081548.tif 000377
【図．３３２】
2006081548.tif 000378
【図．３３３】
2006081548.tif 000379
【図．３３４】
2006081548.tif 000380
【図．３３５】
2006081548.tif 000381
【図．３３６】
2006081548.tif 000382
【図．３３７】
2006081548.tif 000383
【図．３３８】
2006081548.tif 000384
【図．３３９】
2006081548.tif 000385
【図．３４０】
2006081548.tif 000386
【図．３４１】
2006081548.tif 000387
【図．３４２】
2006081548.tif 000388
【図．３４３】
2006081548.tif 000389
【図．３４４】
2006081548.tif 000390
【図．３４５】
2006081548.tif 000391
【図．３４６】
2006081548.tif 000392
【図．３４７】
2006081548.tif 000393
【図．３４８】
2006081548.tif 000394
【図．３４９】
2006081548.tif 000395
【図．３５０】
2006081548.tif 000396
【図．３５１】
2006081548.tif 000397
【図．３５２】
2006081548.tif 000398
【図．３５３】
2006081548.tif 000399
【図．３５４】
2006081548.tif 000400
【図．３５５】
2006081548.tif 000401
【図．３５６】
2006081548.tif 000402
【図．３５７】
2006081548.tif 000403
【図．３５８】
2006081548.tif 000404
【図．３５９】
2006081548.tif 000405
【図．３６０】
2006081548.tif 000406
【図．３６１】
2006081548.tif 000407
【図．３６２】
2006081548.tif 000408
【図．３６３】
2006081548.tif 000409
【図．３６４】
2006081548.tif 000410
【図．３６５】
2006081548.tif 000411
【図．３６６】
2006081548.tif 000412
【図．３６７】
2006081548.tif 000413
【図．３６８】
2006081548.tif 000414
【図．３６９】
2006081548.tif 000415
【図．３７０】
2006081548.tif 000416
【図．３７１】
2006081548.tif 000417
【図．３７２】
2006081548.tif 000418
【図．３７３】
2006081548.tif 000419
【図．３７４】
2006081548.tif 000420
【図．３７５】
2006081548.tif 000421
【図．３７６】
2006081548.tif 000422
【図．３７７】
2006081548.tif 000423
【図．３７８】
2006081548.tif 000424
【図．３７９】
2006081548.tif 000425
【図．３８０】
2006081548.tif 000426
【図．３８１】
2006081548.tif 000427
【図．３８２】
2006081548.tif 000428
【図．３８３】
2006081548.tif 000429
【図．３８４】
2006081548.tif 000430
【図．３８５】
2006081548.tif 000431
【図．３８６】
2006081548.tif 000432
【図．３８７】
2006081548.tif 000433
【図．３８８】
2006081548.tif 000434
【図．３８９】
2006081548.tif 000435
【図．３９０】
2006081548.tif 000436
【図．３９１】
2006081548.tif 000437
【図．３９２】
2006081548.tif 000438
【図．３９３】
2006081548.tif 000439
【図．３９４】
2006081548.tif 000440
【図．３９５】
2006081548.tif 000441
【図．３９６】
2006081548.tif 000442
【図．３９７】
2006081548.tif 000443
【図．３９８】
2006081548.tif 000444
【図．３９９】
2006081548.tif 000445
【図．４００】
2006081548.tif 000446
【図．４０１】
2006081548.tif 000447
【図．４０２】
2006081548.tif 000448
【図．４０３】
2006081548.tif 000449
【図．４０４】
2006081548.tif 000450
【図．４０５】
2006081548.tif 000451
【図．４０６】
2006081548.tif 000452
【図．４０７】
2006081548.tif 000453
【図．４０８】
2006081548.tif 000454
【図．４０９】
2006081548.tif 000455
【図．４１０】
2006081548.tif 000456
【図．４１１】
2006081548.tif 000457
【図．４１２】
2006081548.tif 000458
【図．４１３】
2006081548.tif 000459
【図．４１４】
2006081548.tif 000460
【図．４１５】
2006081548.tif 000461
【図．４１６】
2006081548.tif 000462
【図．４１７】
2006081548.tif 000463
【図．４１８】
2006081548.tif 000464
【図．４１９】
2006081548.tif 000465
【図．４２０】
2006081548.tif 000466
【図．４２１】
2006081548.tif 000467
【図．４２２】
2006081548.tif 000468
【図．４２３】
2006081548.tif 000469
【図．４２４】
2006081548.tif 000470
【図．４２５】
2006081548.tif 000471
【図．４２６】
2006081548.tif 000472
【図．４２７】
2006081548.tif 000473
【図．４２８】
2006081548.tif 000474
【図．４２９】
2006081548.tif 000475
【図．４３０】
2006081548.tif 000476
【図．４３１】
2006081548.tif 000477
【図．４３２】
2006081548.tif 000478
【図．４３３】
2006081548.tif 000479
【図．４３４】
2006081548.tif 000480
【図．４３５】
2006081548.tif 000481
【図．４３６】
2006081548.tif 000482
【図．４３７】
2006081548.tif 000483
【図．４３８】
2006081548.tif 000484
【図．４３９】
2006081548.tif 000485
【図．４４０】
2006081548.tif 000486
【図．４４１】
2006081548.tif 000487
【図．４４２】
2006081548.tif 000488
【図．４４３】
2006081548.tif 000489
【図．４４４】
2006081548.tif 000490
【図．４４５】
2006081548.tif 000491
【図．４４６】
2006081548.tif 000492
【図．４４７】
2006081548.tif 000493
【図．４４８】
2006081548.tif 000494
【図．４４９】
2006081548.tif 000495
【図．４５０】
2006081548.tif 000496
【図．４５１】
2006081548.tif 000497
【図．４５２】
2006081548.tif 000498
【図．４５３】
2006081548.tif 000499
【図．４５４】
2006081548.tif 000500
【図．４５５】
2006081548.tif 000501
【図．４５６】
2006081548.tif 000502
【図．４５７】
2006081548.tif 000503
【図．４５８】
2006081548.tif 000504
【図．４５９】
2006081548.tif 000505
【図．４６０】
2006081548.tif 000506
【図．４６１】
2006081548.tif 000507
【図．４６２】
2006081548.tif 000508
【図．４６３】
2006081548.tif 000509
【図．４６４】
2006081548.tif 000510
【図．４６５】
2006081548.tif 000511
【図．４６６】
2006081548.tif 000512
【図．４６７】
2006081548.tif 000513
【図．４６８】
2006081548.tif 000514
【図．４６９】
2006081548.tif 000515
【図．４７０】
2006081548.tif 000516
【図．４７１】
2006081548.tif 000517
【図．４７２】
2006081548.tif 000518
【図．４７３】
2006081548.tif 000519
【図．４７４】
2006081548.tif 000520
【図．４７５】
2006081548.tif 000521
【図．４７６】
2006081548.tif 000522
【図．４７７】
2006081548.tif 000523
【図．４７８】
2006081548.tif 000524
【図．４７９】
2006081548.tif 000525
【図．４８０】
2006081548.tif 000526
【図．４８１】
2006081548.tif 000527
【図．４８２】
2006081548.tif 000528
【図．４８３】
2006081548.tif 000529
【図．４８４】
2006081548.tif 000530
【図．４８５】
2006081548.tif 000531
【図．４８６】
2006081548.tif 000532
【図．４８７】
2006081548.tif 000533
【図．４８８】
2006081548.tif 000534
【図．４８９】
2006081548.tif 000535
【図．４９０】
2006081548.tif 000536
【図．４９１】
2006081548.tif 000537
【図．４９２】
2006081548.tif 000538
【図．４９３】
2006081548.tif 000539
【図．４９４】
2006081548.tif 000540
【図．４９５】
2006081548.tif 000541
【図．４９６】
2006081548.tif 000542
【図．４９７】
2006081548.tif 000543
【図．４９８】
2006081548.tif 000544
【図．４９９】
2006081548.tif 000545
【図．５００】
2006081548.tif 000546
【図．５０１】
2006081548.tif 000547
【図．５０２】
2006081548.tif 000548
【図．５０３】
2006081548.tif 000549
【図．５０４】
2006081548.tif 000550
【図．５０５】
2006081548.tif 000551
【図．５０６】
2006081548.tif 000552
【図．５０７】
2006081548.tif 000553
【図．５０８】
2006081548.tif 000554
【図．５０９】
2006081548.tif 000555
【図．５１０】
2006081548.tif 000556
【図．５１１】
2006081548.tif 000557
【図．５１２】
2006081548.tif 000558
【図．５１３】
2006081548.tif 000559
【図．５１４】
2006081548.tif 000560
【図．５１５】
2006081548.tif 000561
【図．５１６】
2006081548.tif 000562
【図．５１７】
2006081548.tif 000563
【図．５１８】
2006081548.tif 000564
【図．５１９】
2006081548.tif 000565
【図．５２０】
2006081548.tif 000566
【図．５２１】
2006081548.tif 000567
【図．５２２】
2006081548.tif 000568
【図．５２３】
2006081548.tif 000569
【図．５２４】
2006081548.tif 000570
【図．５２５】
2006081548.tif 000571
【図．５２６】
2006081548.tif 000572
【図．５２７】
2006081548.tif 000573
【図．５２８】
2006081548.tif 000574
【図．５２９】
2006081548.tif 000575
【図．５３０】
2006081548.tif 000576
【図．５３１】
2006081548.tif 000577
【図．５３２】
2006081548.tif 000578
【図．５３３】
2006081548.tif 000579
【図．５３４】
2006081548.tif 000580
【図．５３５】
2006081548.tif 000581
【図．５３６】
2006081548.tif 000582
【図．５３７】
2006081548.tif 000583
【図．５３８】
2006081548.tif 000584
【図．５３９】
2006081548.tif 000585
【図．５４０】
2006081548.tif 000586
【図．５４１】
2006081548.tif 000587
【図．５４２】
2006081548.tif 000588
【図．５４３】
2006081548.tif 000589
【図．５４４】
2006081548.tif 000590
【図．５４５】
2006081548.tif 000591
【図．５４６】
2006081548.tif 000592
【図．５４７】
2006081548.tif 000593
【図．５４８】
2006081548.tif 000594
【図．５４９】
2006081548.tif 000595
【図．５５０】
2006081548.tif 000596
【図．５５１】
2006081548.tif 000597
【図．５５２】
2006081548.tif 000598
【図．５５３】
2006081548.tif 000599
【図．５５４】
2006081548.tif 000600
【図．５５５】
2006081548.tif 000601
【図．５５６】
2006081548.tif 000602
【図．５５７】
2006081548.tif 000603
【図．５５８】
2006081548.tif 000604
【図．５５９】
2006081548.tif 000605
【図．５６０】
2006081548.tif 000606
【図．５６１】
2006081548.tif 000607
【図．５６２】
2006081548.tif 000608
【図．５６３】
2006081548.tif 000609
【図．５６４】
2006081548.tif 000610
【図．５６５】
2006081548.tif 000611
【図．５６６】
2006081548.tif 000612
【図．５６７】
2006081548.tif 000613
【図．５６８】
2006081548.tif 000614
【図．５６９】
2006081548.tif 000615
【図．５７０】
2006081548.tif 000616
【図．５７１】
2006081548.tif 000617
【図．５７２】
2006081548.tif 000618
【図．５７３】
2006081548.tif 000619
【図．５７４】
2006081548.tif 000620
【図．５７５】
2006081548.tif 000621
【図．５７６】
2006081548.tif 000622
【図．５７７】
2006081548.tif 000623
【図．５７８】
2006081548.tif 000624
【図．５７９】
2006081548.tif 000625
【図．５８０】
2006081548.tif 000626
【図．５８１】
2006081548.tif 000627
【図．５８２】
2006081548.tif 000628
【図．５８３】
2006081548.tif 000629
【図．５８４】
2006081548.tif 000630
【図．５８５】
2006081548.tif 000631
【図．５８６】
2006081548.tif 000632
【図．５８７】
2006081548.tif 000633
【図．５８８】
2006081548.tif 000634
【図．５８９】
2006081548.tif 000635
【図．５９０】
2006081548.tif 000636
【図．５９１】
2006081548.tif 000637
【図．５９２】
2006081548.tif 000638
【図．５９３】
2006081548.tif 000639
【図．５９４】
2006081548.tif 000640
【図．５９５】
2006081548.tif 000641
【図．５９６】
2006081548.tif 000642
【図．５９７】
2006081548.tif 000643
【図．５９８】
2006081548.tif 000644
【図．５９９】
2006081548.tif 000645
【図．６００】
2006081548.tif 000646
【図．６０１】
2006081548.tif 000647
【図．６０２】
2006081548.tif 000648
【図．６０３】
2006081548.tif 000649
【図．６０４】
2006081548.tif 000650
【図．６０５】
2006081548.tif 000651
【図．６０６】
2006081548.tif 000652
【図．６０７】
2006081548.tif 000653
【図．６０８】
2006081548.tif 000654
【図．６０９】
2006081548.tif 000655
【図．６１０】
2006081548.tif 000656
【配列表】
2006081548000001.app