(57)【要約】      （修正有）【課題】体液中のトキシックショックシンドロームトキシン−１（ＴＳＳＴ−１）を効率よく吸着除去することが可能な吸着剤、該吸着剤の使用および該吸着剤を充填してなる吸着器を提供する。【解決手段】水不溶性担体にｌｏｇＰ（Ｐはオクタノール−水系での分配係数）値が２．５０以上の化合物を固定してなるＴＳＳＴ−１の吸着剤３、前記吸着剤にＴＳＳＴ−１を含む体液を接触させることを特徴とする体液中のＴＳＳＴ−１の吸着除去方法、ならびに体液の入口および出口を有し、かつ吸着剤の容器外への流出防止手段４，５を備えた容器内に前記吸着剤３を充填してなるＴＳＳＴ−１の吸着器７。【選択図】図１
2006320729.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水不溶性担体にｌｏｇＰ（Ｐはオクタノール−水系での分配係数）値が２．５０以上の化合物を固定してなるトキシックショックシンドロームトキシン−１の吸着剤。
【請求項２】
該水不溶性担体が水不溶性多孔質担体であることを特徴とする請求項１記載の吸着剤。
【請求項３】
該水不溶性多孔質担体の球状タンパク質の排除限界分子量が１万以上６０万以下である請求項２記載の吸着剤。
【請求項４】
体液中のトキシックショックシンドロームトキシン−１を吸着除去するための吸着器製造のための請求項１記載のトキシックショックシンドロームトキシン−１の吸着剤の使用。
【請求項５】
体液の入口および出口を有し、かつ吸着剤の容器外への流出防止手段を備えた容器内に、請求項１記載の吸着剤を充填してなるトキシックショックシンドロームトキシン−１の吸着器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トキシックショックシンドロームトキシン−１の吸着剤、該吸着剤の使用および該吸着剤を充填してなる吸着器に関する。
【背景技術】
【０００２】
トキシックショックシンドロームトキシン−１（以下、ＴＳＳＴ−１という）は黄色ブドウ球菌が産生する分子量約２０〜３０ｋＤａの可溶性タンパク質からなるエキソトキシン（外毒素）であり、代表的なスーパー抗原である。
【０００３】
敗血症とは、体内のどこかに感染がありそのために全身的な炎症反応をおこした状態をいう。この炎症症状が亢進していくと、ショック症状がおこり（敗血症性ショック）、また臓器障害がおこり（臓器不全）、さらには多臓器不全といった重篤な状態に陥る。その感染源は主として細菌であり、この細菌はグラム陽性菌とグラム陰性菌とに大別される。
【０００４】
グラム陽性菌の一種である黄色ブドウ球菌に感染したばあい、感染した黄色ブドウ球菌の産生するＴＳＳＴ−１がＴ細胞を増殖・活性化することにより敗血症を惹起する。最近ではメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）感染およびそれに伴う敗血症性ショックは院内感染の重要な起炎菌として注目され、ここ数年社会的大問題となっている（川股知之ら、「集中治療」、７巻、６３１頁（１９９５））。
【０００５】
一方、グラム陰性菌に感染したばあい、その細胞壁に存在するエンドトキシン（内毒素）が血液中に侵入し敗血症を引きおこす。さらに近年、ＴＳＳＴ−１がスーパー抗原として免疫系を賦活化しエンドトキシンの毒性を数千倍にも増強するため、臨床的には敗血症がおきない低濃度のエンドトキシンの存在によっても敗血症が引きおこされることが示されている。すなわち、グラム陽性菌およびグラム陰性菌が複合感染したばあいは敗血症を引きおこす可能性が非常に高くなる。
【０００６】
敗血症の治療には、感染対策としての抗生物質、感染に対する抵抗力を賦活化するためのγ−グロブリンなどが用いられているが、依然高い死亡率を示している。そのため、敗血症の原因となるＴＳＳＴ−１やエンドトキシンを体液中から除去することが医学的見地から望まれている。
【０００７】
エンドトキシンに関しては、体液中から除去するための吸着剤が知られている。たとえば、特公平１−１６３８９号公報では、適当な担体にエンドトキシンの解毒剤として知られているポリミキシンを固定した吸着剤が開示されている。また、本発明者らが、特開平８−１７３８０３号公報で、スルホン酸基を導入したスチレン−ジビニルベンゼン共重合体によりエンドトキシンの吸着が可能であることを開示している。これらの吸着剤はグラム陰性菌の感染に対してはかなりの効果が期待できる。しかし、グラム陽性菌およびグラム陰性菌による複合感染がおこり、ＴＳＳＴ−１およびエンドトキシンが共存するばあいにはその効果は下がる。さらに、グラム陽性菌のみが感染し、ＴＳＳＴ−１が体液中に侵入したばあいには効果は期待できない。エンドトキシンの吸着剤は種々知られているが、ＴＳＳＴ−１の吸着剤は知られていないことからその吸着剤の開発が強く望まれていた。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、体液中のＴＳＳＴ−１を効率よく吸着除去しうる吸着剤、前記吸着剤の使用およびＴＳＳＴ−１吸着器を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、体液中に存在するＴＳＳＴ−１を効率よく吸着除去しうる吸着剤について鋭意検討した。その結果、水不溶性担体にｌｏｇＰ値が２．５０以上の化合物を固定してなる吸着剤が体液中に存在するＴＳＳＴ−１を効率よく吸着除去しうることを見いだし、本発明を完成した。
【００１０】
すなわち、本発明は（１）水不溶性担体にｌｏｇＰ（Ｐはオクタノール−水系での分配係数）値が２．５０以上の化合物を固定してなるＴＳＳＴ−１の吸着剤に関する。
【００１１】
さらに本発明は、（２）前記水不溶性担体が水不溶性多孔質担体であることを特徴とする前記（１）項記載の吸着剤に関する。
【００１２】
さらに本発明は、（３）前記水不溶性多孔質担体の球状タンパク質の排除限界分子量が１万以上６０万以下である前記（２）項記載の吸着剤に関する。
【００１３】
さらに本発明は、（４）体液中のトキシックショックシンドロームトキシン−１を吸着除去するための吸着器製造のための前記（１）記載のトキシックショックシンドロームトキシン−１の吸着剤の使用に関する。
【００１４】
さらに本発明は、（５）体液の入口および出口を有し、かつ吸着剤の容器外への流出防止手段を備えた容器内に、前記（１）項記載の吸着剤を充填してなるＴＳＳＴ−１の吸着器に関する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、水不溶性担体にｌｏｇＰ値が２．５０以上の化合物を固定してなる吸着剤を用いることにより体液中のＴＳＳＴ−１を効率よく吸着除去することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明における「ＴＳＳＴ−１」とは、黄色ブドウ球菌が産生する分子量２０〜３０ｋＤａの可溶性タンパク質からなるエキソトキシンである。
【００１７】
また、体液とは、血液、血漿、血清、腹水、リンパ液、関節内液およびこれらからえられた分画成分、ならびにそのほかの生体由来の液性成分をいう。
【００１８】
ｌｏｇＰ値とは、化合物の疎水性のパラメータであり、代表的なオクタノール−水系での分配係数Ｐは以下のように求められる。まず、化合物をオクタノール（もしくは水）に溶解し、これに等量の水（もしくはオクタノール）を加え、グリッフィン・フラスク・シェイカー（Ｇｒｉｆｆｉｎ  ｆｌａｓｋ  ｓｈａｋｅｒ）（グリッフィン・アンド・ジョージ・リミテッド（Ｇｒｉｆｆｉｎ  ＆  Ｇｅｏｒｇｅ  Ｌｔｄ．）製）で３０分間振盪する。そののち２０００ｒｐｍで１〜２時間遠心分離し、オクタノール層および水層中の化合物の各濃度を分光学的またはＧＬＣなどの種々の方法により測定することにより次式で求められる。
Ｐ＝Ｃｏｃｔ／Ｃｗ
Ｃｏｃｔ：オクタノール層中の化合物濃度
Ｃｗ    ：水層中の化合物濃度
【００１９】
本発明の吸着剤は、前記のようにして求められるｌｏｇＰ値が２．５０以上の化合物を水不溶性担体に固定してなる。
【００２０】
これまでに多くの研究者らにより種々の化合物のｌｏｇＰ値が実測されており、前記ｌｏｇＰの実測値はシー・ハンシュ（Ｃ．Ｈａｎｓｃｈ）らによって整理されている（「パーティション・コエフィシエンツ・アンド・ゼア・ユージズ；ケミカル・レビューズ（ＰＡＲＴＩＴＩＯＮ  ＣＯＥＦＦＩＣＩＥＮＴＳ  ＡＮＤ  ＴＨＥＩＲ  ＵＳＥＳ；Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ）」、７１巻、５２５頁（１９７１））。
【００２１】
また実測値の知られていない化合物については、アール・エフ・レッカー（Ｒ．Ｆ．Ｒｅｋｋｅｒ）がその著書（「ザ・ハイドロフォビック・フラグメンタル・コンスタント（ＴＨＥ  ＨＹＤＲＯＰＨＯＢＩＣ  ＦＲＡＧＭＥＮＴＡＬ  ＣＯＮＳＴＡＮＴ）」、エルセビア・サイエンティフィック・パブリッシング・カンパニー（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉ．Ｐｕｂ．Ｃｏｍ．）、アムステルダム（１９７７））中に示している疎水性フラグメント定数ｆを用いて計算した値（Σｆ）が参考となる。疎水性フラグメント定数とは、数多くのｌｏｇＰ実測値をもとに、統計学的処理を行い決定された種々のフラグメントの疎水性を示す値である。化合物を構成するおのおののフラグメントのｆ値の和はｌｏｇＰ値とほぼ一致する。本発明においてｌｏｇＰ値というとき、ｌｏｇＰ値が知られていない化合物についてはΣｆ値を意味する。
【００２２】
ＴＳＳＴ−１の吸着に有効な化合物の探索にあたり、種々のｌｏｇＰ値を有する化合物を水不溶性担体に固定し、ＴＳＳＴ−１に対する吸着能を検討した。その結果、ｌｏｇＰ値が２．５０以上、好ましくは２．８０以上、さらに好ましくは３．００以上の化合物がＴＳＳＴ−１の吸着に有効であり、ｌｏｇＰ値が２．５０未満の化合物はほとんどＴＳＳＴ−１に対する吸着能を示さないことがわかった。たとえば、化合物としてアルキルアミンを水不溶性担体に固定したばあい、アルキルアミンをｎ−ヘキシルアミン（ｌｏｇＰ＝２．０６）からｎ−オクチルアミン（ｌｏｇＰ＝２．９０）に変えると、このあいだでＴＳＳＴ−１に対する吸着能は飛躍的に高まることがわかった。これらの結果より、本発明の吸着剤によるＴＳＳＴ−１に対する吸着能は、ｌｏｇＰ値が２．５０以上の化合物の固定により担体上に導入された原子団とＴＳＳＴ−１とのあいだの疎水性相互作用によるものと考えられ、ｌｏｇＰ値が２．５０未満の化合物では疎水性が小さすぎるためにＴＳＳＴ−１に対する吸着能を示さないことが考えられる。
【００２３】
本発明において、水不溶性担体に固定される化合物としては、ｌｏｇＰ値が２．５０以上の化合物であれば特別な制限なしに用いることができる。ただし、化学結合法により担体に化合物を固定するばあい、化合物の一部が脱離することが多いが、この脱離基が化合物の疎水性に大きく寄与しているばあい、すなわち脱離により担体上に固定される原子団の疎水性がΣｆ値で示すと２．５０より小さくなるようなばあいには本発明の主旨から考えて、本発明に用いる化合物としては不適当である。その代表例の１つとして、エステル交換により水酸基を有する担体に安息香酸イソペンチルエステル（Σｆ＝４．１５）を固定するばあいがあげられる。このばあい、実際に担体に固定される原子団はＣ6Ｈ5ＣＯ−であり、この原子団のΣｆ値は１以下である。このような化合物が、本発明で用いる化合物として適当かどうかは、脱離基の部分を水素に置き換えた化合物のｌｏｇＰ値が２．５０以上かどうかにより判断すればよい。
【００２４】
ｌｏｇＰ値が２．５０以上の化合物の中でも、不飽和炭化水素、アルコール、アミン、チオール、カルボン酸およびその誘導体、ハロゲン化物、アルデヒド、ヒドラジド、イソシアナート、グリシジルエーテルなどのオキシラン環含有化合物、ならびにハロゲン化シランなどのように担体への結合に利用できる官能基を有する化合物が好ましい。このような化合物の代表例としては、たとえばｎ−ヘプチルアミン、ｎ−オクチルアミン、デシルアミン、ドデシルアミン、ヘキサデシルアミン、オクタデシルアミン、２−アミノオクテン、ナフチルアミン、フェニル−ｎ−プロピルアミン、ジフェニルメチルアミンなどのアミン類、ｎ−ヘプチルアルコール、ｎ−オクチルアルコール、ドデシルアルコール、ヘキサデシルアルコール、１−オクテン−３−オール、ナフトール、ジフェニルメタノール、４−フェニル−２−ブタノールなどのアルコール類およびこれらのアルコールのグリシジルエーテル類、ｎ−オクタン酸、ノナン酸、２−ノネン酸、デカン酸、ドデカン酸、ステアリン酸、アラキドン酸、オレイン酸、ジフェニル酢酸、フェニルプロピオン酸などのカルボン酸類およびこれらの酸ハロゲン化物、エステル、アミドなどのカルボン酸誘導体、塩化オクチル、臭化オクチル、塩化デシル、塩化ドデシルなどのハロゲン化物、オクタンチオール、ドデカンチオールなどのチオール類、ｎ−オクチルトリクロロシラン、オクタデシルトリクロロシランなどのハロゲン化シラン類、ならびにｎ−オクチルアルデヒド、ｎ−カプリンアルデヒド、ドデシルアルデヒドなどのアルデヒド類などがあげられる。
【００２５】
これらのほかにも、前記の例示化合物の炭化水素部分の水素原子がハロゲン、窒素、酸素、イオウなどのヘテロ原子を含有する置換基、ほかのアルキル基などで置換された化合物のうち、ｌｏｇＰ値が２．５０以上の化合物、前述のシー・ハンシュらの総説「パーティション・コエフィシエンツ・アンド・ゼア・ユージズ；ケミカル・レビューズ、７１巻、５２５頁、（１９７１）」中の５５５頁から６１３頁の表に示されているｌｏｇＰ値が２．５０以上の化合物などを用いうるが、本発明においてはこれらのみに限定されるものではない。
【００２６】
なお、これらの化合物はそれぞれ単独で用いてもよいし、任意の２種類以上を組み合わせてもよく、さらにはｌｏｇＰ値が２．５０未満の化合物との組み合わせで用いてもよい。
【００２７】
本発明の吸着剤における水不溶性担体とは、常温常圧で固体であり水不溶性である担体を意味する。
【００２８】
また、本発明における水不溶性担体の形状の例としては、たとえば粒状、板状、繊維状および中空糸状などがあげられるが、これらのみに限定されず、また前記担体の大きさもとくに限定されない。
【００２９】
本発明における水不溶性担体としては、たとえばガラスビーズおよびシリカゲルなどの無機担体、架橋または無架橋のポリビニルアルコール、架橋または無架橋のポリアクリレート、架橋または無架橋のポリアクリルアミドおよび架橋または無架橋のポリスチレンなどの合成高分子ならびに結晶性セルロース、架橋または無架橋のセルロース、架橋または無架橋のアガロースおよび架橋または無架橋のデキストリンなどの多糖類からなる有機担体、さらにはこれらの組み合わせによりえられる有機−有機、有機−無機などの複合担体などが代表例としてあげられる。
【００３０】
なかでも、親水性担体が非特異的吸着が比較的少なくＴＳＳＴ−１の吸着選択性が良好であるため好ましい。ここでいう親水性担体とは、水不溶性担体を構成する化合物を平板状にしたときの水との接触角が６０度以下の担体をいう。このような担体の代表例としては、たとえばセルロース、ポリビニルアルコール、エチレン−酢酸ビニル共重合体けん化物、ポリアクリルアミド、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリメタクリル酸メチル、ポリアクリル酸グラフト化ポリエチレン、ポリアクリルアミドグラフト化ポリエチレンおよびガラスなどからなる担体があげられる。
【００３１】
なかでも、多孔質セルロースゲルは、（１）機械的強度が比較的高く強靭であるため、撹拌などの操作により破壊されたり微粉を生じたりすることが少なく、カラムに充填したばあい体液を高流速で流しても圧密化したり、目詰まりしたりせず、さらに細孔構造が高圧蒸気滅菌などによって変化を受けにくい、（２）ゲルがセルロースで構成されているため親水性であり、リガンドの結合に利用しうる水酸基が多数存在し、非特異的吸着が少ない、（３）空孔容積を大きくしても比較的強度が高いため軟質ゲルに劣らない吸着容量がえられる、および（４）安全性が合成高分子ゲルなどに比べて高いなどのすぐれた特性を有しており、本発明に用いるのに最も適した担体の１つである。本発明において用いられる担体は、好ましくは圧力を増加させても流量が比例して増加しない硬質ゲルである。しかし、本発明においてはこれらのみに限定されるものではない。なお、前記担体はそれぞれ単独で用いてもよいし、任意の２種類以上を混合して用いてもよい。
【００３２】
本発明に用いる水不溶性担体に要求される性質は、適当な大きさの細孔を多数有すること、すなわち多孔質であることである。本発明の吸着剤の吸着対象であるＴＳＳＴ−１は分子量約２０〜３０ｋＤａのタンパク質であり、このタンパク質を効率よく吸着するためにはＴＳＳＴ−１はある程度高い確率で細孔内に侵入しうるが、ほかのタンパク質の侵入はできる限りおこらないことが好ましい。細孔径に侵入可能な物質の分子量の目安として排除限界分子量が一般に用いられている。排除限界分子量とは、成書（たとえば、波多野博行、花井俊彦著、「実験高速液体クロマトグラフ」、化学同人）などに述べられているごとく、ゲル浸透クロマトグラフィーにおいて細孔内に侵入できない（排除される）分子のうち最も小さいものの分子量をいう。排除限界分子量は一般に球状タンパク質、デキストランおよびポリエチレングリコールなどについてよく調べられている。本発明に用いる水不溶性多孔質担体のばあい、球状タンパク質を用いてえられた値を用いるのが適している。
【００３３】
種々の排除限界分子量の担体を用いて検討した結果、ＴＳＳＴ−１の吸着に適した担体の細孔径の範囲は、排除限界分子量が１万以上６０万以下であった。すなわち、１万未満の排除限界分子量を有する担体を用いたばあいは、ＴＳＳＴ−１の吸着量が少なく、そのために実用性が低下する。また６０万を超える排除限界分子量を有する担体を用いたばあいは、ＴＳＳＴ−１以外のタンパク質（主としてアルブミン）の吸着量が多くなり、選択性の点でその実用性が低下する。したがって、本発明に用いる水不溶性担体の好ましい排除限界分子量は１万以上６０万以下、さらに好ましくは１万５千以上４０万以下、とくに好ましくは２万以上３０万以下である。
【００３４】
つぎに担体の多孔構造については、吸着剤の単位体積あたりの吸着能から考えて、表面多孔性よりも全多孔性が好ましく、空孔容積が２０％以上であり、比表面積が３ｍ2／ｇ以上であることが好ましい。
【００３５】
さらに担体はリガンドの固定化反応に用いうる官能基を有することが好ましい。これらの官能基の代表例としては、たとえば水酸基、アミノ基、アルデヒド基、カルボキシル基、チオール基、シラノール基、アミド基、エポキシ基、ハロゲン基、スクシニルイミド基、酸無水物基などがあげられるが、これらに限定されない。
【００３６】
本発明に用いる水不溶性担体としては、硬質担体、軟質担体のいずれも用いうるが、体外循環用の吸着剤として使用するばあいは、カラムに充填し、通液する際などに目詰まりを生じないことが重要であり、そのためには充分な機械的強度が要求される。したがって、本発明に用いる水不溶性担体は硬質担体であることがより好ましい。ここでいう硬質担体とは、たとえば粒状ゲルのばあい、以下の参考例に示すごとく、ゲルを円筒状カラムに均一に充填し、水性流体を流した際の圧力損失ΔＰと流量の関係が０．３ｋｇ／ｃｍ2までの直線関係にあるものをいう。
【００３７】
本発明の吸着剤は、ｌｏｇＰ値が２．５０以上の化合物を水不溶性担体に固定してえられるが、その固定化方法としては、公知の種々の方法を特別な制限なしに用いることができる。しかし、本発明の吸着剤を体外循環治療に供するばあいには、滅菌時あるいは治療時においてのリガンドの脱離溶出を極力抑えることが安全上重要であり、そのためには共有結合法により固定することが好ましい。
【００３８】
また、本発明における吸着剤はｌｏｇＰ値が２．５０以上の化合物を適量固定したものであることが好ましい。該固定量が少なすぎるとＴＳＳＴ−１の吸着がみられず、多すぎると体液として血液を用いたばあいに血小板などの粘着成分の付着が起こりうる。よって、ｌｏｇＰ値が２．５０以上の化合物の固定量は、好ましくは水不溶性担体の単位体積（１ｍｌ）あたり０．１μｍｏｌから１００００μｍｏｌであり、さらに好ましくは１μｍｏｌから２００μｍｏｌであり、最も好ましくは５μｍｏｌから１００μｍｏｌである。
【００３９】
本発明による吸着剤を用いて体液中よりＴＳＳＴ−１を吸着除去する方法には種々の方法がある。最も簡便な方法としては、体液を取り出してバッグなどに貯留し、これに吸着剤を混合してＴＳＳＴ−１を吸着除去したのち、吸着剤を濾別してＴＳＳＴ−１が除去された体液をえる方法があげられる。ほかの方法としては、体液の入口と出口を有し、少なくとも出口には体液は通過するが吸着剤は通過しないフィルターを装着した容器に吸着剤を充填し、これに体液を流す方法がある。いずれの方法も用いうるが、後者の方法は操作も簡便であり、また体外循環回路に組み込むことにより、患者の体液、とくに血液から効率よくオンラインでＴＳＳＴ−１を除去することが可能であり、本発明の吸着剤はこの方法に適している。
【００４０】
ここでいう体外循環回路では、本発明の吸着剤を単独で用いることもできるが、ほかの体外循環治療システムとの併用も可能である。併用の例としては、たとえば人工透析回路などがあげられ、透析療法との組み合わせに用いることもできる。
【００４１】
つぎに、前記ＴＳＳＴ−１吸着剤を用いた本発明のＴＳＳＴ−１吸着器を、その一実施例の概略断面説明図である図１にもとづき説明する。図１において、１は体液の入口、２は体液の出口、３は本発明のＴＳＳＴ−１吸着剤、４および５は体液および体液に含まれる成分は通過できるが前記ＴＳＳＴ−１吸着剤は通過できないフィルター（吸着剤流出防止フィルター）、６はカラム、７はＴＳＳＴ−１吸着器である。しかしながら、ＴＳＳＴ−１吸着器はこのような具体例に限定されるものではなく、体液の入口および出口を有し、かつＴＳＳＴ−１吸着剤の容器外への流出防止手段を備えた容器内に前記吸着剤を充填したものであればよい。
【００４２】
前記流出防止手段としては、たとえばメッシュ、不織布、綿栓などのフィルターがあげられる。また、容器の形状、材質、大きさはとくに限定されないが、好ましい具体例としては、たとえば容量１５０〜４００ｍｌ程度、直径４〜１０ｃｍ程度の透明または半透明の筒状容器などがあげられる。とくに好ましくは耐滅菌性を有する素材であるが、具体的にはシリコンコートされたガラス、ポリプロピレン、塩化ビニル、ポリカーボネート、ポリサルフォン、ポリメチルペンテンなどがあげられる。
【実施例】
【００４３】
以下、実施例にもとづいて本発明をさらに詳細に述べるが、本発明は以下の実施例のみに限定されるものではない。
【００４４】
参考例
両端に孔径１５μｍのフィルターを装着したガラス製円筒カラム（内径９ｍｍ、カラム長１５０ｍｍ）にアガロースゲル（バイオゲル（Ｂｉｏｇｅｌ）Ａ−５ｍ、粒径５０〜１００メッシュ、バイオラッド（ＢＩＯ−ＲＡＤ）社製）、ビニル系ポリマーゲル（トヨパールＨＷ−６５、粒径５０〜１００μｍ、東ソー（株）製）およびセルロースゲル（セルロファインＧＣ−７００ｍ、粒径４５〜１０５μｍ、チッソ（株）製）をそれぞれ均一に充填し、ペリスタポンプにより水を流し、圧力損失ΔＰと流量との関係を求めた。結果を図２に示す。
【００４５】
図２に示すごとく、トヨパールＨＷ−６５およびセルロファインＧＣ−７００ｍが圧力の増加にほぼ比例して流量が増加するのに対し、バイオゲルＡ−５ｍは圧密化を引きおこし、圧力を増加させても流量が増加しないことがわかる。本発明においては前者のごとく、圧力損失ΔＰと流量との関係が０．３ｋｇ／ｃｍ2までの直線関係にあるものを硬質ゲルという。
【００４６】
実施例１
セルロース系多孔質ゲルであるセルロファインＧＣ−２００ｍ（球状タンパク質の排除限界分子量１４万、チッソ（株）製）１７０ｍｌに水を加え全量を３４０ｍｌとしたのち、２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液９０ｍｌを加え４０℃とした。これにエピクロルヒドリン３１ｍｌを加え、４０℃で撹拌下２時間反応させた。反応終了後、充分に水洗し、エポキシ化ゲルをえた。
【００４７】
このエポキシ化ゲル１０ｍｌにｎ−オクチルアミン（ｌｏｇＰ＝２．９０）２００ｍｇを加え、５０（ｖ／ｖ）％エタノール水溶液中、４５℃で静置下、６日間反応させ、固定化した。反応終了後、５０（ｖ／ｖ）％エタノール水溶液、エタノール、５０（ｖ／ｖ）％エタノール水溶液、水の順に充分に洗浄し、ｎ−オクチルアミン固定化ゲルをえた。
【００４８】
前記固定化ゲル（吸着剤）０．２ｍｌに対し、ウシ胎児血清（Ｆｌｏｗ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）にＴＳＳＴ−１（トキシンテクノロジー社製）を加えて調製したＴＳＳＴ−１加血清（ＴＳＳＴ−１濃度５ｎｇ／ｍｌ）１．２ｍｌを加え、３７℃で２時間インキュベートした。吸着剤のかわりに生理食塩水０．２ｍｌについても同様の操作を行った。インキュベート前後の上澄み溶液におけるＴＳＳＴ−１の濃度をＥＬＩＳＡ法により測定し、吸着率を算出した。吸着率は吸着剤が入ったばあいの上澄み濃度を生理食塩水のばあいの濃度で割ることにより求めた（百分率）。
【００４９】
ＴＳＳＴ−１のＥＬＩＳＡ法は以下のようにして行った。一次抗体ウサギ抗ＴＳＳＴ−１  ＩｇＧ（トキシンテクノロジー社製）をコーティング緩衝液で１６００倍に希釈しマイクロプレートに１００μｌずつ分注した。４℃で一晩おいたのち、マイクロプレートを洗浄した。３％ウシ血清アルブミン溶液を２００μｌずつマイクロプレートに分注し、室温で２時間おいたのち、マイクロプレートを洗浄した。そこにＴＳＳＴ−１の標準液およびインキュベート前後の上澄み溶液を１００μｌマイクロプレートに入れた。室温で２時間おいたのち洗浄した。二次抗体ウサギ抗ＴＳＳＴ−１  ＨＲＰＯ（トキシンテクノロジー社製）を１％ウシ血清アルブミン溶液で４００倍に希釈し１００μｌずつ分注した。室温で２時間おいたのち洗浄した。オルトフェニレンジアミン溶液を１００μｌずつ分注し室温で１０分間おいた。４規定硫酸を１００μｌずつ分注し、４９２ｎｍでの吸光度を測定した。標準液の吸光度と比較してインキュベート前後の上澄み溶液のＴＳＳＴ−１濃度を求めた。
【００５０】
実施例２
ｎ−オクチルアミン（ｌｏｇＰ＝２．９０）をセチルアミン（Σｆ＝７．２２）に、固定化反応の溶媒をエタノールに変えたほかは実施例１と同様にしてセチルアミン固定化ゲルをえた。この吸着剤を用いて実施例１と同様にして吸着実験を行い、ＴＳＳＴ−１の濃度を測定し、吸着率を算出した。
【００５１】
実施例３
セルロファインＧＣ−２００ｍをセルロファインＧＣ−７００ｍ（球状タンパク質の排除限界分子量４０万、チッソ（株）製）に変えたほかは実施例２と同様にしてセチルアミン固定化ゲルをえた。この吸着剤を用いて実施例１と同様にして吸着実験を行い、ＴＳＳＴ−１の濃度を測定し、吸着率を算出した。
【００５２】
実施例４
セルロファインＧＣ−２００ｍを１０ｍｌとり、そこにｔ−ブチルアルコール１０ｍｌおよびカリウムブトキシド２．０ｇを加え、４０℃で１時間撹拌した。つぎに臭化セチル（固定化後Σｆ＝９．７１）２．０ｍｌを加え、４時間撹拌した。反応後ゲルを濾別し、エタノールおよび水で洗浄し、セチル基をエーテル結合で固定したセルロースゲルをえた。この吸着剤を用いて実施例１と同様にして吸着実験を行い、ＴＳＳＴ−１の濃度を測定し、吸着率を算出した。
【００５３】
比較例１
ｎ−オクチルアミン（ｌｏｇＰ＝２．９０）をｎ−ブチルアミン（ｌｏｇＰ＝０．９７）に変えたほかは実施例１と同様にしてｎ−ブチルアミン固定化ゲルをえた。この吸着剤を用いて実施例１と同様にして吸着実験を行い、ＴＳＳＴ−１の濃度を測定し、吸着率を算出した。
【００５４】
比較例２
ｎ−オクチルアミン（ｌｏｇＰ＝２．９０）をｎ−ヘキシルアミン（ｌｏｇＰ＝２．０６）に変えたほかは実施例１と同様にしてｎ−ヘキシルアミン固定化ゲルをえた。この吸着剤を用いて実施例１と同様にして吸着実験を行い、ＴＳＳＴ−１の濃度を測定し、吸着率を算出した。
【００５５】
各々の実施例および比較例において用いた化合物のｌｏｇＰ値またはΣｆ値ならびに算出した吸着率（％）を表１に示す。
【００５６】
【表１】
2006320729.tif 000003
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】本発明のＴＳＳＴ−１吸着器の一実施例の概略断面説明図である。
【図２】３種類の水不溶性担体を用いて流量と圧力損失ΔＰとの関係を調べた結果を示すグラフである。
【符号の説明】
【００５８】
１  体液の入口
２  体液の出口
３  ＴＳＳＴ−１吸着剤
４、５  吸着剤流出防止フィルター
６  カラム
７  ＴＳＳＴ−１吸着器
【図１】
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【図２】
2006320729.tif 000005