(57)【要約】【課題】広範囲なビフィズス菌に対して高い増殖促進効果を有する新規なビフィズス菌増殖促進剤、およびこれを含有する飲食品、ならびにこれらを用いてビフィズス菌を増殖させる方法を提供する。【解決手段】スイートバジル、オレガノ、トウガラシ、ニガウリ、カキ、キク、雪白体菜、ミズナ、ルッコラ、オカヒジキ、スカンポ、ソバ、ツルムラサキおよびトウミョウからなる群から選択される１種または２種以上を含有するビフィズス菌増殖促進剤、およびこれを含有する飲食品、ならびにこれらを用いてビフィズス菌を増殖させる方法が提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
スイートバジル、オレガノ、トウガラシ、ニガウリ、カキ、キク、雪白体菜、ミズナ、ルッコラ、オカヒジキ、スカンポ、ソバ、ツルムラサキおよびトウミョウからなる群から選択される１種または２種以上を含有する、ビフィズス菌増殖促進剤。
【請求項２】
スイートバジル、オレガノ、トウガラシ、ニガウリ、カキ、キク、雪白体菜、ミズナ、ルッコラ、オカヒジキ、スカンポ、ソバ、ツルムラサキおよびトウミョウからなる群から選択される２種を含有する、請求項１記載のビフィズス菌増殖促進剤。
【請求項３】
スイートバジル、ニガウリおよびカキからなる群から選択される２種または３種を含有する、請求項１〜２記載のビフィズス菌増殖促進剤。
【請求項４】
請求項１〜３記載のビフィズス菌増殖促進剤に、さらに難消化性糖質を含有する、ビフィズス菌増殖促進剤。
【請求項５】
難消化性糖質が、フラクトオリゴ糖である、請求項４記載のビフィズス菌増殖促進剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のビフィズス菌増殖促進剤を含有する、飲食品。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のビフィズス菌増殖促進剤を含有する、飼料または飼料添加物。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか1項に記載のビフィズス菌増殖促進剤を用いて、ビフィズス菌を増殖させる、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、人の腸管由来の種々のビフィズス菌に対して広い増殖促進効果を有するビフィズス菌増殖促進剤およびこれを含有する飲食品、ならびにこれらを用いてビフィズス菌を増殖させる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
人の腸内には数多くの細菌が生息し、いわゆる腸内細菌叢を形成している。これらの中で、ビフィドバクテリウム属細菌（ビフィズス菌）は、下痢症、便秘症、日和見菌や病原微生物感染の予防、治療効果や、腸内の有害細菌の増殖抑制作用、ビタミンＢ群の産生、乳糖の分解による消化吸収の促進などから、栄養学的にも細菌学的にも腸内の有用細菌であることが知られている。また、最近では宿主腸管免疫系への作用、アレルギー改善作用が注目され、健康維持、改善への効果が期待されている。一方、大腸菌やクロストリジウム属細菌などは、アンモニア、インドール、フェノール類などの腐敗産物や、細菌毒素、発癌物質を産生し、下痢症、便秘症、大腸癌、動脈硬化、高血圧、肝臓障害などの原因となっていると考えられ、有害細菌と考えられている。従って、人が健康を維持、改善するには腸内細菌叢をビフィズス菌に代表される有用細菌を優勢に維持することが重要である。
ビフィズス菌の増殖を促進する物質については、従来よりいくつかの物質が研究され、報告されている。例えば、フラクトオリゴ糖（特許文献1参照）、Ｎ−アセチルグルコサミン（非特許文献1参照）などの難消化性糖類、ニンジンの抽出液（非特許文献２参照）、茶の抽出液（特許文献２参照）、ウコギ科植物の溶媒抽出物（特許文献３参照）、ブロッコリーやカリフラワーなどの抽出液（特許文献４参照）、ガジュツやキジツなどの抽出液（特許文献５参照）、プロピオン酸菌酸性物質（特許文献６参照）、柑橘類の抽出物（特許文献７参照）などが知られている。これら既知のビフィズス菌増殖促進物質の多くは、実際の効果が低かったり、腸内細菌に対する選択性が低く、製造方法が煩雑であり、高価であるなどから、必ずしも満足するものではなかった。
一方、近年の分子生物学的手法を応用した微生物同定法の進展、例えば１６ＳｒＲＮＡ領域を利用した定量ＲＴ−ＰＣＲ法などにより、人腸管由来ビフィズス菌の種レベルでの同定、定量が可能になり、成人の腸管内ではビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium adolescentis）、ビフィドバクテリウム・カテニュラータム（Bifidobacterium catenulatum）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）およびビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）といった菌種が、検出率、占有率の面から優勢であることが明らかにされている（非特許文献３参照）。一方で、これらの菌種の全てが必ずしも全ての人の腸に生息しているわけではなく、またその腸内細菌叢に占める占有率も様々であることも分っている。
したがって、これら４菌種の全てに対して高い増殖促進作用を示す物質を見出すことができれば、広範囲の人に対してビフィズス菌増殖促進効果の発現が期待できる。しかし、既知のビフィズス菌増殖促進物質については特定の菌種への作用を調べた報告しかなく、成人の腸内優勢ビフィズス菌種である４菌種について詳細に検討した報告はない。そのため、これらの物質が実際に人の腸管内でビフィズス菌を増殖できるかは定かではなく、従って人への効果についても不十分であることが懸念された。
そこで、人の腸管内に生息する種々のビフィズス菌に対して広範囲な増殖促進作用を有し、安価、安全で容易に製造できるビフィズス菌増殖促進剤が求められていた。
【特許文献１】特開昭５８−２０１９８０号公報
【特許文献２】特開平１−１９１６８０号公報
【特許文献３】特開平２−２４９４８２号公報
【特許文献４】特開平１１−２６６８６０号公報
【特許文献５】特開２０００−８３６５４号公報
【特許文献６】特開２００２−１９３９０３号公報
【特許文献７】特許第２８８９２７０号公報
【非特許文献１】Ｐｒｏ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ.，９０，２１９，１９５５
【非特許文献２】日本農芸化学会誌，５５，４９９，１９８１
【非特許文献３】Ａｐｐｌ.Ｅｎｖｉｒｏｎ.Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ., ７０（１）, １６７, ２００４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、広範囲かつ高いビフィズス菌増殖促進作用を有し、特にビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・カテニュラータム、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータムおよびビフィドバクテリウム・ロンガムの４菌種に対して高い増殖促進作用を示す新規なビフィズス菌増殖促進剤およびこれを含有する飲食品、ならびにこれらを用いてビフィズス菌を増殖させる方法を提供することを目的とする。即ち、本発明は、人の腸管に生息する種々のビフィズス菌、特に前記のビフィズス菌４菌種に対して高い増殖促進作用を示す物質を、安全性の高い天然の植物から見出してこれを利用することにより、人にとって有益なビフィズス菌を増殖せしめ、腸内細菌叢を維持、改善する効果を有する新規なビフィズス菌増殖促進剤およびこれを含有する飲食品、ならびにこれらを用いてビフィズス菌を増殖させる方法を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者は前記課題を解決する為に、長い食経験があり、安全性が高いと考えられる野菜、ハーブなどの天然物を探索源とし、人の腸管に生息する種々のビフィズス菌、特に腸管内優勢ビフィズス菌であるビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・カテニュラータム、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータムおよびビフィドバクテリウム・ロンガムの４菌種に対して高い増殖促進作用を有する物質を見出すため、炭素源の存在下における増殖促進作用試験用の培地を用いて探索を行った。その結果、スイートバジル、オレガノ、トウガラシ、ニガウリ、カキ、キク、雪白体菜（ツマミナ）、ミズナ、ルッコラ、オカヒジキ、スカンポ、ソバ、ツルムラサキおよびトウミョウからなる群から選択される１種または２種以上の植物が、炭素源存在下において、人の腸管内優勢ビフィズス菌であるビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・カテニュラータム、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータムおよびビフィドバクテリウム・ロンガムの４菌種に対して高いビフィズス菌増殖促進作用を有することを見出した。
さらに本発明者らは、本発明に係わる植物のビフィズス菌増殖促進作用が、対象とするビフィズス菌の菌種、菌株によって異なることに注目し、広範囲なビフィズス菌種に対して高い増殖促進作用を発現し得る植物の組み合わせを見出した。即ち、本発明に係わる植物を、２種以上組み合わせて使用することにより、人の腸管内優勢ビフィズス菌であるビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・カテニュラータム、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータムおよびビフィドバクテリウム・ロンガムの４菌種に対して広範囲かつ高い増殖促進作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００５】
すなわち、本発明は以下の発明を包含するものである。
（１）スイートバジル、オレガノ、トウガラシ、ニガウリ、カキ、キク、雪白体菜、ミズナ、ルッコラ、オカヒジキ、スカンポ、ソバ、ツルムラサキおよびトウミョウからなる群から選択される１種または２種以上を含有するビフィズス菌増殖促進剤。
（２）スイートバジル、オレガノ、トウガラシ、ニガウリ、カキ、キク、雪白体菜、ミズナ、ルッコラ、オカヒジキ、スカンポ、ソバ、ツルムラサキおよびトウミョウからなる群から選択される２種を含有する（１）記載のビフィズス菌増殖促進剤。
（３）スイートバジル、ニガウリおよびカキからなる群から選択される２種または３種を含有する（１）〜（２）記載のビフィズス菌増殖促進剤。
（４）（１）〜（３）記載のビフィズス菌増殖促進剤に、さらに難消化性糖質を含有するビフィズス菌増殖促進剤。
（５）難消化性糖質が、フラクトオリゴ糖である（４）記載のビフィズス菌増殖促進剤。
（６）（１）〜（５）のいずれか１に記載のビフィズス菌増殖促進剤を含有する飲食品。
（７）（１）〜（５）のいずれか１に記載のビフィズス菌増殖促進組成剤を含有する飼料または飼料添加物。
（８）（１）〜（５）のいずれか1に記載のビフィズス菌増殖促進剤を用いてビフィズス菌を増殖させる方法
【発明の効果】
【０００６】
本発明により、広範囲かつ高い増殖促進作用を有するビフィズス菌増殖促進剤を提供することが出来る。特に、人の腸管内における優勢ビフィズス菌種であるビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・カテニュラータム、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータムおよびビフィドバクテリウム・ロンガムの４菌種に対して高い増殖促進作用を示す新規なビフィズス菌増殖促進剤を提供することが出来る。即ち、本発明により、安全性の高い天然の植物由来物を有効成分とし、人の腸管に生息する種々のビフィズス菌、特に前記のビフィズス菌４菌種に対して高い増殖促進作用を示す物質を提供することにより、人にとって有益なビフィズス菌を増殖せしめ、腸内細菌叢を維持、改善する効果を有する新規なビフィズス菌増殖促進剤およびこれを含有する飲食品、ならびにこれらを用いてビフィズス菌を増殖させる方法を提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明のビフィズス菌増殖促進剤は、スイートバジル、オレガノ、トウガラシ、ニガウリ、カキ、キク、雪白体菜、ミズナ、ルッコラ、オカヒジキ、スカンポ、ソバ、ツルムラサキおよびトウミョウなどから得ることができる。具体的には、本発明のビフィズス菌増殖促進剤はこれらの植物から調製物または抽出物として得ることができる。本発明における調製物とは、本発明に係わる植物の破砕物、搾汁または搾汁濃縮液などをいう。また、破砕物、搾汁または搾汁濃縮液は乾燥させて、粉末状、顆粒状などの形状に加工して利用できる。また、本発明における抽出物とは、方法については特に限定しないが、水またはメタノール、エタノールなどの低級アルコールを用いて抽出したものをいう。さらにはこれらの抽出物を有機溶剤、カラムクロマトグラフィーなどを用いて分画精製した画分を利用することも出来る。しかし、本発明のビフィズス菌増殖促進剤は、経口摂取され、大腸内で作用することを考慮すると、安全性の面から水および／またはエタノールを用いて抽出することが好ましい。
【０００８】
本発明のビフィズス菌増殖促進剤は、単独で用いても良く、あるいは、前記の群から２種以上組み合わせて用いることも出来る。即ち、スイートバジル、オレガノ、トウガラシ、ニガウリ、カキ、キク、雪白体菜、ミズナ、ルッコラ、オカヒジキ、スカンポ、ソバ、ツルムラサキおよびトウミョウから２種以上を組み合わせて使用することにより、より好適なビフィズス菌増殖促進作用が期待できる。
【０００９】
また、本発明のビフィズス菌増殖促進剤を用いることにより、人の腸管に生息する種々のビフィズス菌、特に、腸管内優勢ビフィズス菌種であるビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・カテニュラータム、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータムおよびビフィドバクテリウム・ロンガムの４種に対して高い増殖促進作用が期待できる。
特にスイートバジル、ニガウリおよびカキを組み合わせて使用することにより、人の腸管内における優勢ビフィズス菌種であるビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・カテニュラータム、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータムおよびビフィドバクテリウム・ロンガムの４菌種に対して広範囲かつ高い増殖促進作用が期待できる。
【００１０】
また、本発明のビフィズス菌増殖促進剤は、より効果的にビフィズス菌増殖促進作用を発現させるために、さらにビフィズス菌の炭素源として増殖促進をなし得る難消化性糖質を含有するのが好ましい。ここで、ビフィズス菌の炭素源として増殖促進をなし得る難消化性糖質としてはフラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、ラクチュロース、ラフィノース、スタキオース、マルトトリオース、セアンデロース、シクロデキストリン、コンニャクマンナンおよびＮ-アセチルグルコサミンなどを用いることが出来る。
【００１１】
さらに、本発明のビフィズス菌増殖促進剤は、ビフィズス菌、乳酸菌など、人に有用な菌として知られている種々の菌と共に使用することが出来る。好ましくは、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス、ビフィドバクテリウム・カテニュラータム、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラータムおよびビフィドバクテリウム・ロンガムなどと共に用いることにより、腸管内での更なるビフィズス菌増殖促進効果が期待できる。
また、本発明の飲食品としては、チョコレート、ビスケット、スナック、キャンデー、錠菓、ガム、グミ、ゼリー、羊かん、アイスクリーム、シャーベット、飲料、乳製品、パン、ソーセージおよびハムなどがあげられる。
【００１２】
なお、本発明のビフィズス菌増殖促進剤を含有することを特徴とする飲食品、飼料または飼料添加物に含まれるビフィズス菌増殖促進剤の添加量としては、効能・効果、呈味性、嗜好性およびコストなどを勘案し、最終製品の形態によって適宜配合すればよい。
【００１３】
以下に実施例を記載するが、本発明の範囲はこれに限定されるものではない。
【実施例１】
【００１４】
植物抽出物の調製
野菜もしくは生薬を水洗いした後、-80℃もしくは液体窒素中で凍結し、凍結乾燥した。凍結乾燥したサンプルを粉砕した後、1gを量り取り20mlのエタノールに懸濁させた。これを遮光下、室温で振とうしながら3日間抽出した後、3500回転で30分間遠心分離し、上清を分離した。抽出上清をロータリーエバポレーターを用いて濃縮した後、濃縮物を回収しエタノール1mlに再度溶解させ、植物抽出物とした。この様にして、合計177種類の植物抽出物を得た。
【実施例２】
【００１５】
ビフィズス菌増殖促進作用評価試験
試験菌株として、Bifidobacterium（以下Bif.と記載） adolescentis ATCC 17503、Bif. adolescentis ATCC 15704、Bif. adolescentis ATCC 15705、Bif. adolescentis ATCC15706、Bif. catenulatum ATCC 27539、Bif. pseudocatenulatum DSM 20438およびBif. longum ATCC 15707を各々GAMブイヨン培地（日水製薬）に植菌し、37℃で20時間、嫌気的（H2：10％、CO2：10％、N2：80％）に培養した後、GAMブイヨン培地を対照として600nmの吸光度を測定し、吸光度に250を乗じた値を希釈倍率としてGAMブイヨン培地を用いて希釈し、前培養液とした。
試験培地の組成は、Trypticase Peptone（BBL）0.4％、Phytone Peptone（BBL）0.15％、Yeast Extract（Difco）0.25％、K2HPO4 0.2％、KH2PO4 0.3％、MgCl2・6H2O 0.025％、L-cystein・HCl・H2O 0.028％、FeSO4・7H2O 0.0005％、Sodium Ascorbate 0.5％およびFructooligosaccharide（メイオリゴ-P、明治製菓）0.5％であり、Sodium AscorbateおよびFructooligosaccharide以外の成分を121℃、15分間加熱滅菌処理した後、0.2μmフィルター滅菌したSodium AscorbateおよびFructooligosaccharideを添加した。なお、培地中のFructooligosaccharideは炭素源して添加するものである。
前記試験培地に実施例１で得た植物抽出物0.1％及び前記のビフィズス菌前培養液1％を添加し、嫌気的に37℃、12〜20時間培養した後、培養液の吸光度（600nm）を測定した。対照として、1)前記の植物抽出物の代わりにエタノールを試験培地に加えた以外は前記と同様にしたもの、2)前記の前培養液の代わりにGAMブイヨン培地を試験培地に加えた以外は前記と同様にしたもの、3)前記の植物抽出物及び前培養液の代わりにエタノール及びGAMブイヨン培地を加え、前記と同様にしたものを各々調製し、培養液の吸光度（600nm）を測定した。
上記の培養液の測定結果から、各々の植物抽出サンプルについての試験菌株に対する増殖促進率を算出した。
増殖促進率（％）＝｛（ODS − ODB2）／ （ODB1 − ODB3）｝× 100
ODS：植物抽出物添加試験培養液の吸光度（600nm）
ODB1：対照1)の吸光度
ODB2：対照2)の吸光度
ODB3：対照3)の吸光度
増殖促進作用の判定は、増殖促進率200％以上を非常に強い効果あり（＋＋＋）、150％以上200％未満を強い効果あり（＋＋）、130％以上150％未満を効果あり（＋）、110％以上130％未満を弱い効果あり（±）、110％未満を効果なし（−）とした。
試験の結果を、表１に示す（抜粋）。本発明の植物抽出物は人の腸管優勢ビフィズス菌４菌種に対して広範囲な増殖促進作用を示した。
【００１６】
【表１】
2006333837.tif 000002
1)試験菌株  1:Bif.adolescentis ATCC 15703、2:Bif.adolescentis ATCC 15704、3:Bif.adolescentis ATCC 15705、4:Bif.adolescentis ATCC 15706、5:Bif.catenulatum ATCC 27539、6:Bif.pseudocatenulatum DSM 20438、7:Bif.longum ATCC 15707
【実施例３】
【００１７】
植物抽出物の組み合わせによるビフィズス菌増殖促進作用の効果
実施例１で得た植物抽出物の組み合わせによるビフィズス菌増殖促進作用を調べた。植物抽出物は、スイートバジル、ニガウリおよびカキを各々組み合わせ、各0.1％となるように試験培地に添加した。試験菌株、試験培地、培養条件などは実施例２と同様に行った。
試験の結果を表２に示した。本発明の植物抽出物を組み合わせることにより、より広範囲で、かつ高いビフィズス菌増殖促進効果が示された。
【００１８】
【表２】
2006333837.tif 000003
【実施例４】
【００１９】
本発明の植物抽出物（スイートバジル抽出物）、フラクトオリゴ糖の一成分である結晶性ケストース（メイオリゴCR、明治製菓）およびビフィズス菌を組み合わせ、機能性錠菓を製造した。
【表３】
2006333837.tif 000004