(57)【要約】【課題】  環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリド（ＤＦＡ）含有量の高い糖組成物及び該糖組成物を効率よく製造する方法を提供すること。【解決手段】  イヌリンに環状イヌロオリゴ糖生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させて得られた反応溶液に、ジフルクトース・ジアンヒドリド生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させることにより環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを高濃度に含有する糖組成物が得られる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
イヌリンに環状イヌロオリゴ糖生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させて得られた反応溶液に、ジフルクトース・ジアンヒドリド生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させることを特徴とする環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを含有してなる糖組成物。
【請求項２】
イヌリンに環状イヌロオリゴ糖生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させて得られた反応溶液に、ジフルクトース・ジアンヒドリド生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させることを特徴とする請求項１記載の環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを含有してなる糖組成物の製造方法。
【請求項３】
イヌリンに環状イヌロオリゴ糖生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させて得られた反応溶液に、ジフルクトース・ジアンヒドリド生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させた後、さらにβ−（２→１）フルクトシド結合を切断する能力を有するエキソ型酵素及びエンド型酵素の混合物またはこれらの酵素を産生する一種或いは二種以上の微生物を作用させることを特徴とする環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを含有してなる糖組成物。
【請求項４】
イヌリンに環状イヌロオリゴ糖生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させて得られた反応溶液に、ジフルクトース・ジアンヒドリド生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させた後、さらにβ−（２→１）フルクトシド結合を切断する能力を有するエキソ型酵素及びエンド型酵素の混合物またはこれらの酵素を産生する一種或いは二種以上の微生物を作用させることを特徴とする環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを含有してなる糖組成物の製造方法。
【請求項５】
β−（２→１）フルクトシド結合を切断する能力を有するエキソ型酵素及びエンド型酵素またはこれらの酵素を産生する一種或いは二種以上微生物の作用により、糖液中のショ糖、直鎖オリゴ糖及びイヌリンが単糖類に分解されることを特徴とする請求項４記載の環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを含有してなる糖組成物の製造方法。
【請求項６】
イヌリンに環状イヌロオリゴ糖生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させて得られた反応溶液に、ジフルクトース・ジアンヒドリド生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させた後、β−（２→１）フルクトシド結合を切断する能力を有するエキソ型酵素及びエンド型酵素の混合物またはこれらの酵素を産生する一種或いは二種以上の微生物を作用させ、ついで得られる糖液から該環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを採取すること特徴とする環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを含有してなる糖組成物の分離・精製方法。
【請求項７】
請求項１或いは３記載の環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを含有してなる糖組成物を配合してなる飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを含有してなる糖組成物、その製造法及び分離・精製方法、並びに該糖組成物を配合してなる飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】  環状イヌロオリゴ糖は、イヌリンからバチルス  サーキュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）ＭＺ  Ｎｏ．３１由来の環状イヌロオリゴ糖生成酵素、サイクロイヌロ−オリゴサッカライド  フラクタノトランスフェラーゼ（以下、「ＣＦＴａｓｅ」と略記する）の作用によりその生産が初めて報告された物質である（下記の特許文献１および特許文献２を参照）。環状イヌロオリゴ糖は、フルクトース分子がβ−（２→１）結合で環状に結合した糖であり、フルクトース残基がそれぞれ６個からなるサイクロイヌロヘキサオース、７個からなるサイクロイヌロヘプタオース、８個からなるサイクロイヌロオクタオースの存在が知られている。【０００３】  環状のオリゴ糖としては、グルコースが６〜８個結合したサイクロデキストリンが知られている。しかしサイクロデキストリンが比較的水に溶けにくい性質を有しているのに対し、環状イヌロオリゴ糖は水に対する溶解性が極めて高い。構造的には、サイクロデキストリンがバケツ型の円筒構造をなしているのに対し、環状イヌロオリゴ糖は分子内空洞も小さく、分子内に形成されたβ−（２→１）フルクトシド結合部分を有したクラウン環を形成している（下記の非特許文献１を参照）。そして、該環状イヌロオリゴ糖がクラウンエーテル様の選択的な金属イオンの捕捉能を有することも明らかになった（下記の非特許文献２を参照）。【０００４】  このように、上記環状イヌロオリゴ糖はサイクロデキストリン様の用途や非常に高価で且つ安全性に問題があるクラウンエーテルに替わるクラウンエーテル様の用途が期待され、新しい機能糖として注目を浴びている。
一方、ジフルクトース・ジアンヒドリド（ＤＦＡ）はフルクトースとフルクトースが２つのグリコシド結合で連結した２糖類で、代表的なＤＦＡを挙げれば、２分子のフルクトースが１、２‘及び２、１’の間で脱水縮合したＤＦＡＩ、２分子のフルクトースが１、２‘及び２、３’の間で脱水縮合したＤＦＡＩＩＩ、２分子のフルクトースが２‘、６及び２、６’の間で脱水縮合したＤＦＡＩＶ、２分子のフルクトースが２、１‘及び２’、６の間で脱水縮合したＤＦＡＶなどである。ＤＦＡの生産方法としては、イヌリンにＤＦＡを生成するイヌリナーゼＩＩ（イヌリンフラクトトランスフェラーゼ）或いは該酵素を生産する微生物を作用させることが一般的である（下記の非特許文献３及び４）。ＤＦＡは、動物体内では代謝されず、また非発酵性の糖であるため低カロリー甘味剤として着目されている。さらに最近では、ＤＦＡＩＩＩ及びＤＦＡＩＶには腸管からのカルシウム吸収促進効果が見出され機能性オリゴ糖として有用であることも示されている（下記の非特許文献３及び４）。
そこで、機能性オリゴ糖として様々な分野への応用が期待される環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡを含有する糖組成物を提供できれば、それらのオリゴ糖の機能性を合わせ持った新たな機能性オリゴ糖組成物を提供することができる。したがって、新たな機能性が期待される環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡを含有する糖組成物の効率的且つ安価な生産方法を確立することも重要な要素になってきている。
従来、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡを含有する糖組成物を生産する方法は全く開示されていないが、敢えて記載するならばイヌリン等にＣＦＴａｓｅ或いは該酵素を生産する微生物を作用させることにより環状イヌロオリゴ糖を製造し、もう一方でイヌリン等にイヌリナーゼＩＩ（イヌリンフラクトトランスフェラーゼ）或いは該酵素を生産する微生物を作用させることによりＤＦＡを製造した後これらのオリゴ糖を混合する方法が考えられる。【０００５】  しかしながら、このような方法では環状イヌロオリゴ糖の製造とＤＦＡの製造を別々に行わなくてはならず非常に効率の悪い方法となってしまう。また、上記の方法で製造した環状イヌロオリゴ糖組成物やＤＦＡ含有組成物中には未反応のイヌリンをはじめ酵素反応で副生する直鎖オリゴ糖や単糖類が多く含まれるため、これらの組成物を混合した場合目的とする環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡの含有量が非常に低くなり、この含有量を高めるためには環状イヌロオリゴ糖組成物、ＤＦＡ組成物或いはこれらの混合組成物をさらに精製する必要がある。【０００６】
【特許文献１】特開平２−２５２７０１号公報
【特許文献２】特開平２−２５５０８５号公報
【非特許文献１】Ｍ．Ｓａｗａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，２１７，７−１７（１９９１）
【非特許文献２】Ｎ．Ｙｏｓｈｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，３５３−３５６（１９９３）
【非特許文献３】冨田房男、Ｆｏｏｄｓ  Ｆｏｏｄ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ  Ｊ．Ｊｐｎ．，Ｖｏｌ．２０８，３３５−３４０（２００３）
【非特許文献４】Ｋ．Ｓａｉｔｏ  ａｎｄ  Ｆ．Ｔｏｍｉｔａ，Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６４，１３２１−１３２７（２０００）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】  そこで本発明は、環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリド（ＤＦＡ）含有量の高い糖組成物及び該糖組成物を効率よく製造する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】  そこで本発明者らは上記の点に鑑みて鋭意研究を進めた結果、イヌリンに環状イヌロオリゴ糖生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させて得られた反応溶液に、ジフルクトース・ジアンヒドリド生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させることにより環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを高濃度に含有する糖組成物が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。【０００９】  即ち、請求項１記載の本発明は、イヌリンに環状イヌロオリゴ糖生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させて得られた反応溶液に、ジフルクトース・ジアンヒドリド生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させることを特徴とする環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを含有してなる糖組成物に関する。請求項２記載の本発明は、イヌリンに環状イヌロオリゴ糖生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させて得られた反応溶液に、ジフルクトース・ジアンヒドリド生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させることを特徴とする請求項１記載の環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを含有してなる糖組成物の製造方法である。請求項３記載の本発明は、イヌリンに環状イヌロオリゴ糖生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させて得られた反応溶液に、ジフルクトース・ジアンヒドリド生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させた後、さらにβ−（２→１）フルクトシド結合を切断する能力を有するエキソ型酵素及びエンド型酵素の混合物またはこれらの酵素を産生する一種或いは二種以上の微生物を作用させることを特徴とする環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを含有してなる糖組成物である。請求項４記載の本発明は、イヌリンに環状イヌロオリゴ糖生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させて得られた反応溶液に、ジフルクトース・ジアンヒドリド生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させた後、さらにβ−（２→１）フルクトシド結合を切断する能力を有するエキソ型酵素及びエンド型酵素の混合物またはこれらの酵素を産生する一種或いは二種以上の微生物を作用させることを特徴とする環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを含有してなる糖組成物の製造方法である。請求項５記載の本発明は、β−（２→１）フルクトシド結合を切断する能力を有するエキソ型酵素及びエンド型酵素またはこれらの酵素を産生する一種或いは二種以上微生物の作用により、糖液中のショ糖、直鎖オリゴ糖及びイヌリンが単糖類に分解されることを特徴とする請求項３記載の環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを含有してなる糖組成物の製造方法である。請求項６記載の本発明は、イヌリンに環状イヌロオリゴ糖生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させて得られた反応溶液に、ジフルクトース・ジアンヒドリド生成酵素または該酵素を産生する微生物を作用させた後、β−（２→１）フルクトシド結合を切断する能力を有するエキソ型酵素及びエンド型酵素の混合物またはこれらの酵素を産生する一種或いは二種以上の微生物を作用させ、ついで得られる糖液から該環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを採取することを特徴とする環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを含有してなる糖組成物の分離・精製方法である。さらに請求項７記載の本発明は、請求項１或いは３記載の環状イヌロオリゴ糖及びジフルクトース・ジアンヒドリドを含有してなる糖組成物を配合してなる飲食品に関する。
【発明の効果】
【００１０】  本発明は、機能性食品素材として期待されている環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物を提供することである。また、本発明によればイヌリンからの環状イヌロオリゴ糖製造時に残存するイヌリン、直鎖オリゴ糖等をＤＦＡに変換するため上記の機能性オリゴ糖含有組成物を簡便且つ効率的に製造することができ、さらにはこれらオリゴ糖組成物から環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡだけを含有する糖組成物を効率よく分離精製することも可能である。得られた環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物は、飲食品に幅広く利用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】  以下、本発明につき詳細に説明する。本発明の環状オリゴ糖とは、サイクロイヌロヘキサオース（フルクトース６分子がβ−（２→１）結合で環状に結合したもの）、サイクロイヌロヘプタオース（フルクトース７分子がβ−（２→１）結合で環状に結合したもの）、サイクロイヌロオクタオース（フルクトース８分子がβ−（２→１）結合で環状に結合したもの）などの、フルクトース分子がβ−（２→１）結合で環状に結合した環状イヌロオリゴ糖である。また、本発明のジフルクトース・ジアンヒドリド（ＤＦＡ）としては、２分子のフルクトースが１、２‘及び２、１’の間で脱水縮合したＤＦＡＩ、２分子のフルクトースが１、２‘及び２、３’の間で脱水縮合したＤＦＡＩＩＩ、２分子のフルクトースが２‘、６及び２、６’の間で脱水縮合したＤＦＡＩＶ、２分子のフルクトースが２、１‘及び２’、６の間で脱水縮合したＤＦＡＶなどを例示することができる。【００１２】  本発明で定義する直鎖オリゴ糖とは、構成糖が３〜１０個程度結合したものであり、末端にグルコースが結合したフルクトースが２〜９程度結合したフラクトオリゴ糖やフルクトースが２〜１０個程度結合したイヌロオリゴ糖或いはフルクトースポリマー等が挙げられる。また２糖としてはシュクロース、イヌロビオース等を挙げることができる。単糖としては、フルクトース、グルコースが挙げられる。なお、イヌリンとは上記の直鎖オリゴ糖よりも鎖長の長いポリマーをさす。【００１３】  環状イヌロオリゴ糖は、キクイモ、ゴボウ、チコリ、ヤーコン等のイヌリン含有量の高い植物の抽出液、該植物抽出物より精製したイヌリン、シュクロースからイヌリン合成酵素により酵素合成したイヌリンなどを含む溶液中で環状イヌロオリゴ糖生成酵素であるサイクロイヌロオリゴサッカライド  フラクタノトランスフェラーゼ（以下、「ＣＦＴａｓｅ」と略記する）、例えばバチルス  ポリミキサＭＧ−ＣＦ６（生命研菌寄第１９１５８号）、バチルス  サーキュランスＭＺ  Ｎｏ．３１（生命研菌寄第９９４３号）、バチルス  サーキュランスＭＣＩ−２５５４（生命研菌寄第１１９４０号）等由来のＣＦＴａｓｅまたはＣＦＴａｓｅを産生する上記の微生物を作用させることにより、得ることができる。その際、該微生物の菌体そのものを作用させてもよいし、また該菌体からＣＦＴａｓｅを抽出し、そのまま、あるいは固定化等を行ってから作用させてもよい。またＣＦＴａｓｅは、遺伝子工学的に製造された組換えＣＦＴａｓｅを用いることもできる。その際、組換えＣＦＴａｓｅは天然物ＣＦＴａｓｅと同様にして反応に供することができ、さらには組換えＣＦＴａｓｅを産生する形質転換体を反応させることもできる。【００１４】  また環状イヌロオリゴ糖は、上記したイヌリン含有量の高い植物の抽出液、該抽出液から精製したイヌリン、及び／またはイヌリンを炭素源として含む培養液で上記菌株を培養し、その培養上清中から得ることもできる。その場合、例えば炭素源としてイヌリンを１〜４０％含有させ、そのほか窒素源として大豆粉、小麦胚芽、コーンスティープリカー、綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、尿素等が使用できる。その他必要に応じて、ナトリウ���、カリウム、カルシウム、マグネシウム、コバルト、塩素、燐酸、硫酸、その他のイオンを生成する無機塩類等を添加した培地に生産菌を接種し、振とう培養を行う。この際、培養温度は２０〜４０℃が、また培養時間は使用する菌に応じた至適時間、すなわちＣＦＴａｓｅを生産させ、その培養上清中に環状イヌロオリゴ糖を生産させるのに至適となる時間培養させれば良い。得られた培養液を遠心分離、限外濾過膜等により除菌し、得られた溶液中の酵素を加熱処理により失活させる。こうして環状イヌロオリゴ糖含有糖組成物を得ることができる。【００１５】  またＣＦＴａｓｅを作用させる場合、例えば前記の方法により培養を行った培養液を遠心分離、限外濾過膜等により除菌し、得られた培養液を作用させてもよいし、あるいは該培養液からさらに精製し、部分精製酵素または精製酵素として作用させてもよい。この培養液、部分精製酵素、精製酵素を作用させる場合、例えばｐＨを６−９に調整した緩衝液中で約０．５％以上の濃度のイヌリンに３０〜７０℃で３０分以上作用させる等によって、所望とする環状イヌロオリゴ糖含有糖組成物が得られる。【００１６】  上記の方法で得られた環状イヌロオリゴ糖含有糖組成物には、未反応のイヌリンや反応によって副生する直鎖のβ−（２→１）フルクトシド結合を有するオリゴ糖類（直鎖オリゴ糖）が含まれている。そこで、環状イヌロオリゴ糖含有糖組成物中に含まれるイヌリン及び直鎖オリゴ糖を基質とし、ＤＦＡを生成するイヌリナーゼＩＩ（イヌリンフラクトトランスフェラーゼ）、例えばＫ．Ｓａｉｔｏ  ａｎｄ  Ｆ．Ｔｏｍｉｔａ，Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６４，１３２１−１３２７（２０００）の文献記載のアースルバクターウレアファシエンス、アースルバクターグロビフォルミスＳ１４−３、アスパラギラスフミガタス、シュウドモナスフルオレッセンスＮｏ．９４９等由来のイヌリナーゼＩＩ或いは該酵素を生産する微生物を作用させることにより得ることができる。その際、該微生物の菌体そのものを作用させてもよいし、また該菌体からイヌリナーゼＩＩを抽出し、そのまま、あるいは固定化等を行ってから作用させてもよい。またイヌリナーゼＩＩは、遺伝子工学的に製造された組換えイヌリナーゼＩＩを用いることもできる。その際、組換えイヌリナーゼＩＩは天然物イヌリナーゼＩＩと同様にして反応に供することができ、さらには組換えイヌリナーゼＩＩを産生する形質転換体を反応させることもできる。【００１７】  またイヌリナーゼＩＩを作用させる場合、例えば前記のイヌリナーゼＩＩ生産微生物の培養液を遠心分離、限外濾過膜等により除菌し、得られた培養液を作用させてもよいし、あるいは該培養液からさらに精製し、部分精製酵素または精製酵素として作用させてもよい。この培養液、部分精製酵素、精製酵素を作用させる場合、例えばｐＨを４−６に調整した緩衝液中で約０．５％以上の濃度の環状イヌロオリゴ糖含有糖組成物に３０〜７０℃で３０分以上作用させる等によって、所望とする環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物が得られる。【００１８】  これらの環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物から環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡだけを分離・精製す��には、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物にβ−（２→１）フルクトシド結合を切断する能力を有するエキソ型及びエンド型酵素の混合物またはこれらの酵素を産生する微生物を作用させて、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖液中の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ以外の成分、具体的には２糖、直鎖オリゴ糖及び未反応のイヌリン等のフルクタンを単糖まで酵素分解する。これらの酵素としては、２糖、直鎖オリゴ糖及びイヌリン等のフルクタンに作用してこれらのβ−（２→１）フルクトシド結合を切断することのできるエキソ型及びエンド型酵素の混合物であれば特に制限はない。このような作用を有するエキソ型酵素の例を上げればβ−フルクトフラノシダーゼ（インベルターゼ、サッカラーゼ）、エキソ型イヌリナーゼ等である。また、エンド型の酵素としてはエンド型イヌリナーゼやエンド型イヌリナーゼ活性を有するレバナーゼを例示することができる。これらの酵素はいずれも由来は問わず、市販されているものでもよく、これらの酵素を生産する菌体または菌体外に分泌された酵素等をそのまま作用させてもよく、あるいは菌体、菌体外に分泌された酵素等を精製して作用させてもよい。たとえばβ−フルクトフラノシダーゼを生産する菌としては、サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｃ）属、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属、ノイロスポラ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、ザイモモナス（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）属に属する微生物等が知られている（Ｔｈｅ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（３ｒｄ  ｅｄ．），５，２９１−３０５（１９７１））。エキソ型イヌリナーゼを生産する菌としては、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属に属する微生物等が知られている（特開昭６２−２０８２７７号）。エンド型酵素生産菌としては、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属に属する微生物等が知られている（特開昭６２−２０８２７７号公報、特開昭６２−２２８２９３号公報、特開平３−８３５８１号公報、特開平３−１９８７７４号公報および特開平４−１９０７８９号公報）。なお、上記のエンド型酵素生産菌の中には、エキソ型酵素を同時に生産する菌も存在するため、これらの生産菌ではエキソ型酵素を添加しなくとも本発明の目的とするエキソ型及びエンド型酵素の混合物として使用できる。【００１９】  環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖液にエキソ型及びエンド型酵素またはこれらの酵素を生産する微生物を作用させる方法としては、オリゴ糖切断酵素、当該酵素を産生する微生物、当該酵素を産生する微生物の培養上清、さらにはこれらを適当な担体に固定化した固定化酵素、固定化菌体等を、例えばｐＨ３〜８．５程度に調整した０．０１−０．３Ｍの緩衝液中で、ブリックス（糖度）約０．５〜７０の濃度の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖液を３０〜８０℃で１０分以上作用させる等により、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖液中の直鎖オリゴ糖、イヌリン等のフルクタンを低分子化することができる。上述したように、エキソ型及びエンド型酵素量と該酵素の反応時間は適宜選択することができるが、酵素量が多すぎたり反応時間が長すぎた場合にはエンド型酵素の作用により環状イヌロオリゴ糖やＤＦＡも分解されてしまうことから、エンド型酵素の添加量は環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物の固形分１ｇ当たり１単位から１０００単位とし、反応時間を１０分から１０時間とすることが好ましい。なお、ここでいう酵素単位１単位は、イヌリンを基質としたとき１分間に１マイクロモルのグルコースに相当する還元力を示す酵素量である。反応温度とｐＨについては、ｐＨ３〜４において５０〜８０℃で長時間酵素反応を行うとイヌリンやオリゴ糖だけでなく環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡの酸加水分解が進んでしまうことから好ましくなく、これらの条件下で酵素反応を行う場合には、５０℃を越えない温度範囲でできる限り短時間の反応（２時間以内）にとどめることが、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡの回収効率の点からも好ましい。【００２０】  目的とする環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物は、上述のエキソ型及びエンド型酵素処理後の反応溶液から公知の手段を用いて分離、精製することができる。例えば、得られた反応溶液を活性炭を充填したカラムに通液し、水で十分に洗浄後エタノール水溶液を用いて溶出することにより、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡを単糖類から簡単に分離することができる。また、得られた反応溶液を適当なゲル型濾過材に接触させることにより、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡと単糖類とを分離することもできる。この場合のゲル型濾過材としては市販のデキストラン系ゲル、ポリスチレン系ゲル、ポリアクリルアミド系ゲル、セルロース系ゲル、カチオン系ゲル型イオン交換体が好適に利用できる。【００２１】  具体的な精製手段としては、例えば以下のような方法を挙げることができる。まず上記した活性炭或いは活性炭とセライトの混合物を脱塩水にてスラリー化し、十分に気泡を除去した後分離カラムに充填する。該カラムに、充填した活性炭重量の１／２〜１／１００、好ましくは１／５〜１／２０重量の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物をエキソ型及びエンド型酵素で処理した溶液（固形分換算）を送入し、次いでカラム容積の２〜１０倍量の水で洗浄後、カラム容積の２〜１０倍量の２０〜５０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液を用いて環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ画分を溶出する。この環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ画分を濃縮後、凍結乾燥機或いはスプレードライヤーなどを用いて粉末化することにより所望の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡだけを含有する糖組成物を得ることができる。さらに、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物をエキソ型及びエンド型酵素で処理した溶液（固形分換算）に対し５〜２０倍重量の活性炭粉末を加えてよく攪拌後、吸引或いは加圧濾過により活性炭を回収し、これを活性炭量の１０倍以上の水で洗浄後、２０〜５０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液に懸濁する。適当な時間攪拌後、濾過により活性炭を除去してろ液を回収する。このろ液を減圧濃縮し、粉末化して環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡだけを含有する糖組成物を得ることも可能である。また、上記に示したゲル濾過材を充填したカラムに、カラム容量の１／１０〜１／１００容量の環状イヌロオリゴ糖及び��ＦＡ含有糖組成物をエキソ型及びエンド型酵素で処理した溶液を送入し、水で溶出することによって環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡだけを含有する画分を単糖類と分離後、濃縮し粉末化することもできる。【００２２】  また分離効率を上げ、溶離水の使用量を減らす目的で、公知の種々のクロマト分離手法や擬似移動床法を用いることにより、更に効果的な分画を行うこともできる。【００２３】  本発明において、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物が配合されうる飲食品とは、口に含むことができるものであれば何でもよいが、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物が腸内に到達することができる、飲食品、医薬品、医薬部外品などを好適に例示することができる。【００２４】  本発明の飲食品は、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物を配合することができるものであればどのような形態であってもよく、例えば、水溶液や混濁物や乳化物などの液状形態であっても、ゲル状やペースト状の半固形状形態であっても、粉末や顆粒やカプセルやタブレットなどの固形状形態であってもよい。【００２５】  本発明における飲食品としては、例えば、即席食品類（即席めん、カップめん、レトルト・調理食品、調理缶詰め、電子レンジ食品、即席味噌汁・吸い物、スープ缶詰め、フリーズドライ食品など）、炭酸飲料、柑橘類（グレープフルーツ、オレンジ、レモンなど）の果汁や果汁飲料や果汁入り清涼飲料、柑橘類の果肉飲料や果粒入り果実飲料、トマト、ピーマン、セロリ、ウリ、ニンジン、ジャガイモ、アスパラガスなどの野菜を含む野菜系飲料、豆乳・豆乳飲料、コーヒー飲料、お茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、スポーツ飲料、栄養飲料、アルコール飲料やタバコなどの嗜好飲料・嗜好品類、パン、マカロニ・スパゲッティ、麺類、ケーキミックス、唐揚げ粉、パン粉、ギョーザの皮などの小麦粉製品、キャラメル・キャンディー、チューイングガム、チョコレート、クッキー・ビスケット、ケーキ・パイ、スナック・クラッカー、和菓子・米菓子・豆菓子、デザート菓子などの菓子類、しょうゆ、みそ、ソース類、トマト加工調味料、みりん類、食酢類、甘味料などの基礎調味料、風味調味料、調理ミックス、カレーの素類、たれ類、ドレッシング類、めんつゆ類、スパイス類などの複合調味料・食品類、バター、マーガリン類、マヨネーズ類、植物油などの油脂類、牛乳・加工乳、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、チーズ、アイスクリーム類、調製粉乳類、クリームなどの乳・乳製品、素材冷凍食品、半調理冷凍食品、調理済み冷凍食品などの冷凍食品、水産缶詰め、果実缶詰め・ペースト類、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品、水産珍味類、水産乾物類、佃煮類などの水産加工品、畜産缶詰め・ペースト類、畜肉缶詰め、果実缶詰め、ジャム・マーマレード類、漬物・煮豆類、農産乾物類、シリアル（穀物加工品）などの農産加工品、ベビーフード、ふりかけ・お茶漬けのりなどの市販食品などが挙げられる。なかでも本発明の飲食品として好ましいのは飲料、更には容器詰された飲料である。
なお、飲料については、上記したような液体飲料の他に、飲料販売時には粉末や濃縮物の形態であって、飲用時に水などで適宜の濃度に溶解または稀釈して利用されるようなタイプの飲料も、本発明に包含される。【００２６】  また、本発明の飲食品のうち、医薬品としては、日本薬局方に収められている医薬品で口に含むことができれば特に限定されるものではなく、その製剤形態としては、例えば、エアゾール剤、液剤、エキス剤、エリキシル剤、カプセル剤、顆粒剤、丸剤、散剤、酒精剤、錠剤、シロップ剤、浸剤・煎剤、トローチ剤、芳香水剤、リモナーゼ剤などが挙げられる。医薬部外品としては、厚生労働大臣が指定した医薬部外品で口に含むことができれば特に限定されるものではなく、例えば、内服液剤、健康飲料、消毒剤、消毒保護剤、ビタミン含有保健剤などが挙げられる。【００２７】  飲食品への本発明の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物の配合方法は特に制限されるものではなく、飲食品の調製段階あるいは調整後において、この分野で通常知られた慣用的な方法を用いて配合することができる。例えば、飲食品の形態が液状形態や半固形状形態である場合には、その調製段階において本発明の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物をそのまま、あるいは水に溶解させた水溶液などとして添加し、均一化することにより行えばよい。また、本発明の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物をアルコール水などの含水有機溶媒やエタノールなどの有機溶媒などに分散させた分散液として添加し、十分に攪拌してこれを分散させることも可能である。なお、このようにして得られた調製物を、噴霧乾燥機や凍結乾燥機などを用いて乾燥することで、粉末状形態としてもよい。また、飲食品の形態が固形状形態である場合には、その調製段階において本発明の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物をそのまま、あるいは水に溶解させた水溶液などとして添加し、均一化することにより行えばよい。また、本発明の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物をアルコール水などの含水有機溶媒やエタノールなどの有機溶媒などに分散させた分散液として添加し、十分に混合してこれを分散させることも可能である。水難溶性の飲食品に本発明の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物を配合する場合、必要に応じて飲食品にアルコール水などの含水有機溶媒やエタノールなどの有機溶媒などを添加してこれを溶解や希釈し、ここに本発明の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物を添加し、十分に攪拌して環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物を分散させるようにしてもよい。【００２８】  飲食品に対する本発明の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物の配合量は、特に制限されないが、対象となる飲食品により配合量を適宜設定することが好ましい。一般的には、最終製品中で０．１〜２０重量％であることが好ましく、１〜１０重量％であることがより好ましい。環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物の配合量が０．１重量％より少ない場合には、機能性オリゴ糖としての効果が期待できない恐れがある。一方、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物の配合量が２０重量％より多い場合には、飲食品本来の味が損なわれることや、ある一定の効果以上は得ることができずに経済的に不利となることがある。【００２９】  本発明の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物は、上記のように飲食品に配合して摂取してもよいが、そのまま単独で摂取することもできる。その摂取量は、摂取形態、年齢、体重などにより異なるが、特に制限されるものではない。本発明の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物を単独で製剤化して摂取する場合における製剤形態は、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物を含んでなるものであればどのような形態であってもよく、例えば、粉末状であってもよいし液状であってもよい。また、本発明の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物は、他の糖類、例えば、フラクトオリゴ糖やイヌリン等と併用して用いても何ら問題は生じない。他の糖類と併用した場合には、より優れた効果を期待することができる。また、本発明の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖組成物を飲食品に配合する際や単独で製剤化する際は、必要に応じて、増量剤、酸化防止剤、着色剤、香料、矯味剤、界面活性剤、溶解補助剤、保存剤、糖類、甘味料、酸味料、ビタミン類などの公知の各種添加剤と適宜組み合わせて用いてもよい。酸化防止剤としては、例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥなどが挙げられる。界面活性剤としては、例えば、ショ糖脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステル、レシチン、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン系非界面活性剤などが挙げられる。糖類としては、グルコース、フラクトースなどの単糖類のほか、マルトース、シュクロースなどの二糖類、ポリデキストロース、ペクチン、キサンタンガム、アラビアガム、アルギン酸などの多糖類、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、シクロデキストリンなどのオリゴ糖、キシリトール、エリスリトール、ソルビトールなどの糖アルコールなどを例示することができる。甘味料としては、天然甘味料（ソーマチン、ステビア抽出物、グリチルリチンなど）、合成甘味料（サッカリン、アスパルテームなど）などを利用できる。酸味料としては、天然成分から抽出した果汁類のほか、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、リン酸が挙げられる。ビタミン類としては、ビタミンＢ類、ビタミンＣ、ナイアシン、パントテン酸、ビオチン、メソイノシトール、葉酸、コリン、ビタミンＵ、ビタミンＰなどの水溶性およびビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫなどの脂溶性ビタミン類が挙げられる。その他の添加剤としては、グレープフルーツ、リンゴ、オレンジ、レモン、パイナップル、バナナ、ナシなどの各種果汁（濃縮果汁）；グルタミン酸、グリシン、アラニン、アスパラギン酸などのアミノ酸；イノシン酸、グアニル酸などの呈味成分；カルシウム、リン、カリウム、ナトリウム、マグネシウム、イオウ、塩素、鉄、亜鉛、マンガン、銅、ヨウ素などのミネラルないし微量元素などが挙げられる。
【実施例】
【００３０】  以下に実施例及び処方例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明は以下の実施例及び処方例に限定されるものではない。【００３１】（実施例１）イヌリン（Ｓｉｇｍａ社製、チコリ由来）４％、イーストエキストラクト０．２％、硝酸ナトリウム０．５％、硫酸マグネシウム０．０５％、塩化カリウム０．０５％、燐酸１カリウム０．０５％、塩化第二鉄０．００１％を含んだ培地２００ｍｌをｐＨ７．５に調整して、１２０℃で１５分間蒸気滅菌した。この滅菌した培地にバチルス  ポリミキサＭＧ−ＣＦ６（生命研菌寄第１９１５８号）を接種し、２００ｒｐｍで３５℃、４８時間振とう培養を行った。培養終了後遠心分離により菌体を除菌し、培養上清液を得た。この培養上清液を沸騰水浴中で１０分間加熱しＣＦＴａｓｅを失活させた。上記の操作を繰り返して培養上清液４０００ｍｌを得、これを減圧濃縮して粗環状イヌロオリゴ糖含有液糖（約５００ｍｌ、固形分として７２ｇ）とした。【００３２】  上記の粗環状イヌロオリゴ糖含有糖液に培養液（ＮａＮＯ３：０．５％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ：０．０５％、ＫＣｌ：０．０５％、ＫＨ２ＰＯ４：０．０５％、Ｙｅａｓｔ  ｅｘｔｒａｃｔ：０．０５％、ｐＨ７．０）を添加後、１２０℃で１５分間蒸気滅菌した。この溶液に５ｍｌの前培養培地（ＮａＮＯ３：０．５％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ：０．０５％、ＫＣｌ：０．０５％、ＫＨ２ＰＯ４：０．０５％、Ｙｅａｓｔ  ｅｘｔｒａｃｔ：０．０５％、Ｉｎｕｌｉｎ：１．０％、ｐＨ７．０）を用いて３５℃で一晩振とう培養したＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．ＭＮＴ−０１株（土壌からＤＦＡＩＩＩ生産菌として分離同定した菌株）を添加して３５℃で２４時間振とう培養した。培養液を９０００ｒｐｍで遠心分離して菌体を除去し、上清液９４０ｍｌを得た。【００３３】  この粗環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ含有糖液のｐＨを１Ｍクエン酸で４．５に調整後、エキソ型及びエンド型イヌリナーゼ混合酵素（商品名Ｆｒｕｃｔｏｚｙｍｅ  Ｌ、Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ社製）を０．４ｍｌ（約８００単位）加え、６０℃で１時間作用させた。これを１００℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、遠心分離により変成蛋白を除いた。得られた溶液を高速液体クロマトグラフィーで分析したところ糖成分としては環状イヌロオリゴ糖、ＤＦＡＩＩＩ、フルクトース及びグルコースのみであった。
高速液体クロマトグラフィー
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ  Ａｓａｈｉｐａｋ  ＮＨ２Ｐ−５０  ４Ｅ
（φ４．６×２５０ｍｍ）
流速：０．８ｍｌ／分
温度：室温
溶媒：７０％（ｖ／ｖ）アセトニトリル水溶液
検出器：Ｓｈｏｄｅｘ  ＲＩ−１０１【００３４】  上記環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ含有酵素処理溶液をそのまま水で平衡化した活性炭カラム（４０ｘ９００ｍｍ）に供した。カラムを６ｌの水で洗浄後、同量の３０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液で溶出した。エタノール水溶液画分を減圧濃縮し、凍結乾燥して環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ混合物約４０ｇを得た。【００３５】（実施例２）イヌリン（Ｓｉｇｍａ社製、チコリ由来）４％、イーストエキストラクト０．２％、硝酸ナトリウム０．５％、硫酸マグネシウム０．０５％、塩化カリウム０．０５％、燐酸１カリウム０．０５％、塩化第二鉄０．００１％を含んだ培地２００ｍｌをｐＨ７．５に調整して、１２０℃で１５分間蒸気滅菌した。この滅菌した培地にバチルス  ポリミキサＭＧ−ＣＦ６（生命研菌寄第１９１５８号）を接種し、２００ｒｐｍで３５℃、４８時間振とう培養を行った。培養終了後遠心分離により菌体を除菌し、培養上清液を得た。得られた培養上清１８０ｍｌを水に対して一晩透析し粗酵素液とした。これに最終濃度が１０％となるように２０％イヌリン（Ｓｉｇｍａ社製、チコリ由来）溶液を加え、３５℃で６０時間反応させた。得られた反応液（３８０ｍｌ）を沸騰湯浴中で１０分間加熱し酵素反応を停止した。この溶液を環状イヌロオリゴ糖含有糖液として次の操作を行った。【００３６】  土壌からＤＦＡＩＩＩ生産菌として分離同定したＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．ＭＮＴ−０１株を５ｍｌの前培養培地（ＮａＮＯ３：０．５％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ：０．０５％、ＫＣｌ：０．０５％、ＫＨ２ＰＯ４：０．０５％、Ｙｅａｓｔ  ｅｘｔｒａｃｔ：０．０５％、Ｉｎｕｌｉｎ：１．０％、ｐＨ７．０）に植菌し、３５℃で一晩前培養した。この培地を５００ｍｌの本培養培地（上記の前培養培地と同様の組成のもの）に移し、３５℃で一晩振とう培養した。培養液を９０００ｒｐｍで遠心分離して菌体を除去し、上清３９５ｍｌを得た。氷水中この上清液に８０％飽和となるように固形硫酸アンモニウムを徐々に加えて攪拌溶解後冷蔵庫で一晩靜置した。生成した沈殿を９０００ｒｐｍで４０分間遠心分離して集めた後、さらにこの沈殿を８０％飽和硫酸アンモニウム水溶液で洗浄した。再び２００００ｒｐｍで２０分間遠心分離し沈殿物を回収した。得られた沈殿に２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）１０ｍｌを加え、氷水中で緩やかに攪拌しながら溶解した。１ｌの２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）中で一晩透析を行い、粗酵素標品を得た。これをＤＦＡＩＩＩ生成酵素溶液（２．７５ユニット／ｍｌ）とした。先に示した環状イヌロオリゴ糖含有液糖（３８０ｍｌ）を０．１Ｎ  ＮａＯＨを用いてｐＨを６．０に合わせた後、上記で調製したＤＦＡＩＩＩ生成酵素溶液３６ユニットを添加し４０℃で２４時間インキュベートし、酵素処理を行った。この反応溶液を沸騰湯浴中で１５分間煮沸して酵素を失活させた後濾過し、ろ液を減圧濃縮後、凍結乾燥して環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ含有糖組成物粉末３４ｇを得た。【００３７】（実施例３）実施例２で得られた環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ含有糖組成物粉末１０ｇを１００ｍｌの蒸留水に溶解後、１Ｍクエン酸でｐＨを４．５���調整し、エキソ型及びエンド型イヌリナーゼ混合酵素（商品名Ｆｒｕｃｔｏｚｙｍｅ  Ｌ、Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ社製）を０．２ｍｌ（約４００単位）加え、６０℃で３０分間作用させた。これを１００℃で１０分間加熱して酵素を失活させた後、遠心分離により変成蛋白を除き、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ含有糖組成物を得た。これを高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、糖成分としては環状イヌロオリゴ糖、フルクトース及びグルコースだけが検出された。【００３８】  上記の環状イヌロオリゴ糖、ＤＦＡＩＩＩ、フルクトース及びグルコース含有糖組成物をそのまま水で平衡化した活性炭カラム（４０×４７５ｍｍ）に供した。カラムを３０００ｌの水で洗浄後、同量の３０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液で溶出した。エタノール水溶液画分を減圧濃縮し、凍結乾燥して環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ混合物約６．５ｇを得た。この粉末の糖組成は環状イヌロオリゴ糖：７３％（サイクロイヌロヘキサオース５２％、サイクロイヌロヘプタオース２１％）、ＤＦＡＩＩＩ：２７％であった。【００３９】（実施例４）イヌリン（商品名：フジＦＦ、フジ日本精糖（株）社製）を用いた以外は実施例２と同様にして環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ含有糖組成物粉末３２ｇを得た。この環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ含有糖組成物粉末１０ｇを精製水１００ｍｌに溶解後１Ｍクエン酸でｐＨを４．５に調整後、エキソ型及びエンド型イヌリナーゼ混合酵素（商品名Ｆｒｕｃｔｏｚｙｍｅ  Ｌ、Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ社製）を０．１ｍｌ（約２００単位）加え、６０℃で３時間作用させた。これを１００℃で１０分間加熱して酵素を失活させた後、遠心分離により変成蛋白を除去し、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ含有糖組成物（固形分として３１．５ｇ）を得た。これを高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、糖成分としては環状イヌロオリゴ糖、ＤＦＡＩＩＩ、フルクトース及びグルコースのみであった。【００４０】（実施例５）上記の実施例４で得られた環状イヌロオリゴ糖、ＤＦＡＩＩＩ、フルクトース及びグルコース含有糖組成物５ｍｌをトーヨーパールＨＷ−４０Ｓ（東ソー社製）カラム（５０×９００ｍｍ）に供した。カラムを水で溶出し示差屈折計で糖を検出した。環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ含有画分及びを集めて高速液体クロマトグラフィーで分析したところ、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩだけが検出された。上記の操作を２０回繰り返して環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩだけを含有する凍結乾燥粉末５．７ｇを得た。【００４１】（処方例１）緑茶飲料
水９００ｍｌを６０℃まで加熱し、これに緑茶葉３０ｇを加え６分間抽出した。これを３０メッシュのストレーナーで茶殻を除去し、３０℃以下まで冷却した後、濾紙濾過（工業用濾紙Ｎｏ．２６：ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製、捕集粒子径＝３□ｍ）により清澄化を行い、抽出液７６０ｍｌを得た。この緑茶抽出液を飲用濃度（カテキン濃度６０ｍｇ％）となるようにイオン交換水で稀釈し、Ｌ−アスコルビン酸を０．０３重量％となるように添加した後、重曹でｐＨ６．１〜６．３の範囲に調整し、調合液とした。この調合液に実施例１で得られた環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ混合物を５重量％添加してよく攪拌した。これらを８０℃以上の温度条件下でホットパック充填を行い、その後、レトルト殺菌にて、１２１℃、１０分間（Ｆ０＝１０以上）の殺菌を行った。これらを室温に冷却後、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ糖組成物を含有する緑茶飲料を得た。【００４２】（処方例２）烏龍茶飲料
水９００ｍｌを８０℃まで加熱し、これに烏龍茶（ウーロンＧ）３０ｇを加え６分間抽出した。処方例１と同様にして茶殻の除去、冷却、清澄化を行い、烏龍茶抽出液８１０ｍｌを得た。この烏龍茶抽出液を飲用濃度（カテキン濃度５０ｍｇ％）となるようにイオン交換水で稀釈し、Ｌ−アスコルビン酸を０．０３重量％となるように添加した後、重曹でｐＨ６．１〜６．３の範囲に調整し、調合液とした。この調合液に実施例２で得られた環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ含有糖組成物粉末を３重量％添加してよく攪拌した。これらを８０℃以上の温度条件下でホットパック充填を行い、その後、レトルト殺菌にて、１２１℃、１０分間（Ｆ０＝１０以上）の殺菌を行った。これらを室温に冷却後、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ糖組成物を含有する烏龍茶飲料を得た。【００４３】（処方例３）紅茶飲料
処方例２における烏龍茶（ウーロンＧ）を紅茶（ヌワヤエリア）に変更した以外は処方例２と同様の方法で調製し、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ糖組成物を含有する紅茶飲料を得た。【００４４】（処方例４）麦茶飲料
水８００ｍｌを９０℃まで加熱し、これに麦茶原料大麦４０ｇを加え３０分間抽出した。これを３０メッシュのストレーナーで茶殻を除去し、３０℃以下まで冷却した後、濾紙濾過（工業用濾紙Ｎｏ．２：ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）により清澄化を行い、抽出液７２０ｍｌを得た。この麦茶抽出液を飲用濃度（Ｂｒｉｘ０．４°）となるようにイオン交換水で稀釈し、Ｌ−アスコルビン酸を０．０３重量％となるように添加した後、重曹でｐＨ６．０の範囲に調整し、調合液とした。この調合液に実施例３で得られた環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ混合物を３重量％添加してよく攪拌した。これらを８０℃以上の温度条件下でホットパック充填を行い、その後、レトルト殺菌にて、１２１℃、２０分間の殺菌を行った。これらを室温に冷却後、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ糖組成物を含有する麦茶飲料を得た。【００４５】（処方例５）混合茶飲料
水９００ｍｌを９０℃まで加熱し、これに混合茶（配合比率：烏龍茶６５％、紅茶２０％、ジャスミン５％、陳皮４％、ハイビスカス４％およびバナバ２％）３０ｇを加え１０分間抽出した。これを３０メッシュのストレーナーで茶殻を除去し、３０℃以下まで冷却した後、濾紙濾過（工業用濾紙Ｎｏ．２：ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）により清澄化を行い、抽出液８２０ｍｌを得た。この混合茶抽出液を飲用濃度（Ｂｒｉｘ０．２°）となるようにイオン交換水で稀釈し、Ｌ−アスコルビン酸を０．０３重量％となるように添加した後、重曹でｐＨ６．０の範囲に調整し、調合液とした。この調合液に実施例２で得られた環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ含有糖組成物粉末を５重量％添加してよく攪拌した。これらを８０℃以上の温度条件下でホットパック充填を行い、その後、レトルト殺菌にて、１２１℃、２０分間の殺菌を行った。これらを室温に冷却後、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ糖組成物を含有する混合茶飲料を得た。【００４６】（処方例６）オレンジ１００％果汁飲料
６倍濃縮オレンジ果汁                                ８４ｇ
果糖ブドウ糖液糖                                      ９．７ｇ
クエン酸                                              ０．０６ｇ
Ｌ−アスコルビン酸                                    ０．０２２ｇ
実施例３の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ混合物  １０ｇ
香料                                                適量
上記記載の成分をイオン交換水に溶解し、全量を１０００ｍｌとした。これを容器に充填し、６５℃で１０分間加熱殺菌して、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ糖組成物を含有するオレンジ１００％果汁飲料を得た。【００４７】（処方例７）ピーチ５０％果汁飲料
１／４濃縮モモ果汁                                １３１ｇ
果糖ブドウ糖液糖                                      ９．７ｇ
クエン酸                                              ０．０６ｇ
Ｌ−アスコルビン酸                                    ０．０２２ｇ
実施例１の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ混合物  １０ｇ
香料                                                適量
上記記載の成分をイオン交換水に溶解し、全量を１０００ｍｌとした。これを容器に充填し、６５℃で１０分間加熱殺菌して、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ糖組成物を含有するピーチ５０％果汁飲料を得た。【００４８】（処方例８）野菜ジュース
市販の野菜ジュース（カゴメ野菜ジュース：カゴメ社の商品名）に本発明の実施例５に記載の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩを含有する凍結乾燥粉末を５重量％添加し、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ糖組成物を含有する野菜ジュースを調製した。【００４９】（処方例９）コーヒー飲料
市販のコーヒー飲料（ブラックボトル無糖：ダイドードリンコ社の商品名）に本発明の実施例５に記載の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩを含有する凍結乾燥粉末を１重量％添加し、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ糖組成物を含有するコーヒー飲料を調製した。【００５０】（処方例１０）スポーツ飲料
実施例３の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ混合物  ２０ｇ
ビタミンＢ１塩酸塩                                    ０．４５ｍｇ
ビタミンＢ２                                          ０．２ｍｇ
ビタミンＣ                                          １０ｍｇ
ナイアシン                                            ０．８ｍｇ
パントテン酸Ｃａ                                      ０．２２ｍｇ
クエン酸鉄アンモニウム                              １２．５７ｍｇ
クエン酸                                          １００ｍｇ
果糖                                                  ２．５ｇ
上記記載の成分にイオン交換水を加え全量を２００ｍｌとし、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ糖組成物を含有するスポーツ飲料を調製した。【００５１】（処方例１１）ドリンクヨーグルト
醸酵脱脂乳（脱脂乳を発酵させて粉砕したもの）              ４０ｇ
砂糖                                                      １３ｇ
安定剤                                                      ０．３５ｇ
香料                                                        ０．０５ｇ
実施例２の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ含有糖組成物  １０ｇ
上記記載の成分にイオン交換水を加え、全量を１００ｇとし、混合溶解した。これをホモジナイザーで均質化して、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ糖組成物を含有するドリンクヨーグルトを調製した。【００５２】（処方例１２）赤ワイン
市販の赤ワイン（デリカメゾン赤・ライトタイプ：サントリー社の商品名）に本発明の実施例４で得られた環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ含有糖組成物粉末を１重量％添加し、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ糖組成物を含有する赤ワインを調製した。【００５３】（処方例１３）豆乳飲料
大豆粉水溶液                                      ５００ｇ
砂糖                                                ９０ｇ
５倍濃縮モモ果汁                                    ２０ｇ
クエン酸                                              ３ｇ
ペクチン                                              ３ｇ
ミルクフレーバー                                      ０．５ｇ
ピーチフレーバー                                      １ｇ
実施例１の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ混合物  １０ｇ
上記記載の成分を混合し、イオン交換水を加え、全量を１０００ｍｌとした。この混合液を９２℃で１〜３秒間殺菌後、８７℃で容器に充填することによって、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ糖組成物を含有する豆乳飲料を調製した。【００５４】（処方例１４）ジャム
オレンジ果皮                                      ２００ｇ
砂糖                                                ８０ｇ
クエン酸                                              ０．４ｇ
実施例１の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ混合物  ４０ｇ
上記記載の成分を常法により煮詰め、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ糖組成物を含有するジャムを調製した。【００５５】（処方例１５）クッキー
薄力粉                                            １００ｇ
澱粉                                                ７４ｇ
水                                                  １４ｇ
実施例３の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ混合物  １５ｇ
ベーキングパウダー                                  小さじ２
塩                                                  小さじ２
卵                                                  １個
バター                                              ８０ｇ
牛乳                                                大さじ２
上記記載のクッキー処方により常法で、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ糖組成物を含有するクッキー３０個を調製した。【００５６】（処方例１６）ハードヨーグルト
脱脂乳                                                  ９１ｇ
砂糖                                                      ５ｇ
実施例４の環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡＩＩＩ含有糖組成物  ５ｇ
ステビオサイド                                            ０．１ｇ
香料                                                      少量
硬化剤                                                    少量
脱脂乳に硬化剤を添加後、スターターを３％接種して酸度が０．７％になったところで冷蔵した。他の原料を攪拌混合し、再度冷蔵して、環状イヌロオリゴ糖及びＤＦＡ糖組成物を含有するハードヨーグルトを調製した。