(57)【要約】      （修正有）【課題】菌体内に多量のグルタチオンを保持しうる酵母および該酵母を利用したグルタチオン含有食品を提供すること。【解決手段】バラマイシン等のマクロライド系抗生物質耐性を有し、酸化型および還元型グルタチオンを多量に含有することが可能な酵母変異株（キャンディダ・ユティリス）を好気的に培養して当該酵母菌体内にグルタチオンを高濃度に蓄積させ、その培養物または分画物若しくは該酵母エキスや乾燥酵母菌体を利用する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
マクロライド系抗生物質耐性を有し、グルタチオンを高濃度に含有することが可能な酵母変異株。
【請求項２】
前記酵母変異株のグタチオン菌体内含有量が0.5wt％以上である請求項１記載の酵母変異株。
【請求項３】
前記マクロライド系抗生物質がラパマイシンである請求項１又は２に記載の酵母変異株。
【請求項４】
前記酵母変異株がキャンディダ・ユティリス  ABYC1561（受託番号  FERM P-20095）である請求項１ないし３のいずれか１項に記載の酵母変異株。
【請求項５】
請求項１ないし４のいずれか1項に記載の酵母変異株を好気的に培養して、当該酵母菌体内にグルタチオンを高濃度に蓄積させることを特徴とするグルタチオン高含有酵母の製造方法。
【請求項６】
請求項１ないし４のいずれか１項に記載の酵母変異株を好気的な条件で培養して得られる培養物。
【請求項７】
請求項１ないし４のいずれか１項に記載の酵母変異株を好気的な条件で培養して得られる培養物のグルタチオンを含む分画物。
【請求項８】
請求項１ないし４のいずれか１項に記載の酵母変異株を好気的な条件で培養して得られる培養物を用いて製造された酵母エキス。
【請求項９】
請求項１ないし４のいずれか１項に記載の酵母変異株を好気的な条件で培養して得られる培養物を用いて製造された乾燥酵母菌体。
【請求項１０】
請求項１ないし４のいずれか１項に記載の酵母変異株を好気的な条件で培養して得られる培養物、グルタチオンを含む前記培養物の分画物を含有することを特徴とするグルタチオン含有飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はキャンディダ属の酵母変異株に関する。更に詳しくは、還元型または酸化型グルタチオンを菌体内に多量に含有できるキャンディダ  ユティリスの変異株、当該変異株を培養して得られる培養物、分画物、酵母エキスおよびこれらを利用した飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
グルタチオンはグルタミン酸、グリシン、システインの3つのアミノ酸から構成されるトリペプチドであって、酵母や動物の肝臓、筋肉などの組織中に広く分布し、生体内で解毒作用および酸化還元平衡作用に関与している。この生理活性に着目して、グルタチオンはアルコール性脂肪肝の治療薬など肝臓疾患治療薬として広く用いられてきた。
【０００３】
一方、近年、健康志向の観点より健康機能性食品が脚光を浴びるにつれて、食品分野でもグルタチオンの生理活性に基づき、同物質含有食品が注目されつつある。
【０００４】
グルタチオンの工業的製造方法としては、酵母から抽出する方法が一般的であるが、この場合、グルタチオン含有率の高い酵母の取得が必要条件となる。
【０００５】
従来知られているグルタチオン高含有酵母の製造方法としては、培地にアミノ酸添加する方法（特許文献１）、亜鉛イオンを制限する方法（特許文献２）、通常よりも低い培養温度で培養する方法（特許文献３）などがある。また、また、突然変異剤処理により、エチオニン・亜硫酸塩耐性株（特許分権４）、ポリエン系抗生物質耐性株（特許文献５）の取得などが報告されている。
【０００６】
しかしながら、工業的に安価にグルタチオンを取得するためには、更なるグルタチオン高含有酵母が望まれる。
【特許文献１】特開昭５３−９４０８９号公報
【特許文献２】特開平１−１４１５９１号公報
【特許文献３】特開昭６０−１５６３７９号公報
【特許文献４】特開昭５９−１５１８９４号公報
【特許文献５】特開２００３−２８４５４７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記の技術背景の下に、菌体内に多量のグルタチオンを保持した酵母および同酵母を利用したグルタチオン含有食品を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、マクロライド系抗生物質耐性を有する酵母変異株が、一般的な野生酵母よりも多量のグルタチオンを菌体内に含有しうることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、以下のとおりである。
（１）  マクロライド系抗生物質耐性を有し、グルタチオンを高濃度に含有することが可能な酵母変異株。
（２）  前記酵母変異株のグタチオン菌体内含有量が0.5wt％以上である（１）に記載の酵母変異株。
（３）  前記マクロライド系抗生物質がラパマイシンである（１）又は（２）に記載の酵母変異株。
（４）  前記酵母変異株がキャンディダ・ユティリス  ABYC1561（受託番号  FERM P-20095）である（１）ないし（３）のいずれか１項に記載の酵母変異株。
（５）  （１）ないし（４）のいずれか1項に記載の酵母変異株を好気的に培養して、当該酵母菌体内にグルタチオンを高濃度に蓄積させることを特徴とするグルタチオン高含有酵母の製造方法。
（６）  （１）ないし（４）のいずれか１項に記載の酵母変異株を好気的な条件で培養して得られる培養物。
（７）  （１）ないし（４）のいずれか１項に記載の酵母変異株を好気的な条件で培養して得られる培養物のグルタチオンを含む分画物。
（８）  （１）ないし（４）のいずれか１項に記載の酵母変異株を好気的な条件で培養して得られる培養物を用いて製造された酵母エキス。
（９）  （１）ないし（４）のいずれか１項に記載の酵母変異株を好気的な条件で培養して得られる培養物を用いて製造された乾燥酵母菌体。
（１０）  （１）ないし（４）のいずれか１項に記載の酵母変異株を好気的な条件で培養して得られる培養物、グルタチオンを含む前記培養物の分画物を含有することを特徴とするグルタチオン含有飲食品。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の新規な酵母変異株は菌体内にグルタチオンを高濃度で含有することが可能であり、本発明の新規な酵母変異株を好気的に培養して当該酵母菌体内にグルタチオンを高濃度に蓄積させることができる。
【００１１】
従って、本発明の新規な酵母変異株を好気的な条件で培養して、グルタチオンを高濃度に含有する培養物または分画物を得ることができる。
【００１２】
また、本発明の新規な酵母変異株を好気的な条件で培養して、グルタチオンを高濃度に含有する酵母エキスや乾燥酵母菌体を得ることができる。
【００１３】
さらにまた、本発明の新規な酵母変異株を好気的な条件で培養して得られる培養物、グルタチオンを含む前記培養物の分画物を含有させることによりグルタチオン含有飲食品とすることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１５】
本発明の酵母変異株はマクロライド系抗生物質耐性を有し、更には酸化型および還元型グルタチオンを多量に菌体内に含有できるものであれば、いずれであってもよい。具体的には、キャンディダ・ユティリスABYC1560を親株とし、変異処理によって得られたキャンディダ・ユティリスABYC1561などが挙げられる。
【００１６】
マクロライド系抗生物質とは、大環状ラクトンを有する抗生物質であり、本発明のマクロライド系抗生物質として、例えばラパマイシン、レイナマイシン、ランカシディンC等を挙げることができる。
【００１７】
本発明の酵母変異株を得るには、具体的には、紫外線、電離放射線、亜硝酸、ニトロソグアニジン、メタンスルホン酸エチル（以下、「ＥＭＳ」と略称する）などの変異原を用い、マクロライド系抗生物質を含む寒天培地上で生育が認められた株を選択する。選択した変異株の菌体中に含まれるグルタチオン量を測定し、グルタチオン量が増強した変異株をさらに選択し、グルタチオンを高濃度で含有しうる変異株を探索する。このようにして本発明では、新規な変異株であるキャンディダ・ユティリス  ABYC1561が得られた。
【００１８】
本発明の変異株キャンディダ・ユティリスABYC1561は菌体中に、乾燥重量当たり0.5wt％以上のグルタチオンを蓄積する。本発明におけるグルタチオンとは、還元型および酸化型のグルタチオンの総グルタチオン量を意味するものである。
【００１９】
また、本発明の新規変異キャンディダ・ユティリスABYC1561株の一般的菌学的性質は、マクロライド系抗生物質耐性を除いてはキャンディダ・ユティリスの一般的菌学的性質と全く同一である。本発明の新規変異キャンディダ・ユティリスABYC1561株は、「受託番号  FERM P-20095」として受託された。
【００２０】
本発明では、更に、変異株を好気的に培養するグルタチオン高含有酵母の製造方法が提供される。本発明を実施するには、前述の方法で得られたマクロライド系抗生物質耐性変異株を炭素源、窒素源及び無機塩等を含む培地で好気的に培養すればよい。
【００２１】
これら菌株の培地組成としては、炭素源として通常の微生物の培養に利用されるグルコース、蔗糖、酢酸、エタノール、糖蜜および亜硫酸パルプ廃液等からなる群より選ばれる１種または２種以上が用いられ、窒素源としては、尿素、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウムもしくはリン酸アンモニウム等の無機塩、およびコーンスティプリカー（CSL）、カゼイン、酵母エキスもしくはペプトン等の含窒素有機物等からなる群より選ばれる１種または２種以上が使用される。更に、リン酸成分、カリウム成分、マグネシウム成分を培地に添加してもよく、これらとしては、過リン酸石灰、リン安、塩化カリウム、水酸化カリウム、硫酸マグネシウム、塩酸マグネシウム等の通常の工業用原料でよい。その他、亜鉛、銅、マンガン、鉄イオン等の無機塩を使用してもよい。その他、ビタミン、核酸関連物質等を添加しても良い。
【００２２】
培養形式としては、回分培養、流加培養、あるいは連続培養のいずれでもよいが、工業的には流加培養あるいは連続培養が採用される。
【００２３】
培養温度は、一般的な酵母の培養条件に従えばよく、例えば20〜40℃、好ましくは25〜35℃がよく、pHは3.5〜8.0、特に4.0〜6.0が望ましい。
【００２４】
本発明の方法により高濃度グルタチオンを酵母菌体内に含有する培養物が得られるが、培養物からグルタチオンを含有する分画物を得てもよい。培養物からグルタチオンを含有する分画物を分画する方法としては、通常行われている方法であればいずれの方法でもよいが、熱水抽出、菌体破砕による抽出等を挙げることができる。また、得られた抽出物を担体に担持させることにより、グルタチオンを高濃度に含む画分に濃縮等することが可能となる。
【００２５】
また、上記方法により培養した培養物から酵母エキスを調製してもよい。酵母エキスを調製する方法としては、通常行われている方法であればいずれの方法であってもよいが、自己消化法、酵素分解法あるいはアルカリ抽出法などが工業的に採用される。
【００２６】
また、上記方法により培養した培養物から乾燥酵母菌体を調製してもよい。乾燥酵母菌体を調製する方法としては、通常行われている方法であればいずれの方法であってもよいが、工業的には、凍結乾燥法、スプレードライ法、ドラムドライ法が採用される。
【００２７】
さらに本発明は、上記酵母変異株を好気的な条件で培養して得られる培養物、グルタチオンを含む前記培養物の分画物を含有する飲食品に関するものである。
【００２８】
これらの飲食品としては、通常乾燥酵母、酵母エキスを添加しうる飲食品であれば何れでもよいが、例えばアルコール飲料、清涼飲料、発酵食品調味料、スープ類、一般食品、菓子類等を挙げることができる。
【００２９】
本発明の飲食品を製造するには、飲食品の製造工程において、上記酵母変異株を好気的な条件で培養して得られる培養物、グルタチオンを含む前記培養物の分画物を添加すればよい。
【００３０】
従って、本発明によって、グルタチオンを高濃度で含む飲食品を効率的に製造することができる。
【００３１】
以下、本発明を、実施例を挙げて説明する。本発明は、これら実施例に限定されるものではない。
【００３２】
なお、菌体重量の測定は培養液を遠心分離機で2回水洗後、105℃、5時間乾燥させた後の重量から求めた。還元型及び酸化型グルタチオンを合わせた総グルタチオンの定量はTitzeらの方法（「アナリティカル  バイオケミストリー」第27巻、502ページ、1969年）に従って測定した。乾燥菌体中の総グルタチオン量（％(w/w)）は得られた総グルタチオン量を乾燥菌体重量で割ることにより算出して百分率とした。
【実施例１】
【００３３】
キャンディダ  ユティリスをYPD培地（グルコース2％、ポリペプトン2％、イーストエキス1％）を含む試験管で対数増殖期まで培養した。この菌体を回収し、常法に従いＥＭＳを用いて変異処理を行った。変異処理は死滅率約70％になるような条件で行った。
【００３４】
上記のようにして変異処理を実施したABYC1560株を１μg/mlのラパマイシンを含有するYPD寒天培地に植菌し、30℃で48時間静置培養した。結果、745株のラパマイシン耐性変異株を単離した。これら耐性株について、上述の方法で総グルタチオン量の測定を行い菌体内グルタチオン量が増強したABYC1561株（受託番号  FERM P-20095）を取得した。
【実施例２】
【００３５】
ラパマイシン耐性を獲得したABYC1561株  及びその親株であるABYC1560株をYPD培地で18時間前培養した後、YPD培地に植菌し、18時間  30℃で本培養を行った。培養後の菌体を遠心分離で回収した後、2回水洗後、沸騰水浴中で5分煮沸し、菌体内グルタチオンを抽出し、上述の方法に従って総グルタチオン量の測定を実施した。乾燥菌体中の総グルタチオン量は親株（ABYC1560）が1.00％であるのに対し、ラパマイシン耐性株（ABYC1561（受託番号  FERM P-20095））では1.82％であった。
【産業上の利用可能性】
【００３６】
本発明は、以下の点において、産業上の利用可能性が存在する。
【００３７】
本発明の新規な酵母変異株は菌体内にグルタチオンを高濃度で含有することが可能であり、本発明の新規な酵母変異株を好気的に培養して当該酵母菌体内にグルタチオンを高濃度に蓄積させることができる。
【００３８】
従って、本発明の新規な酵母変異株を好気的な条件で培養して、グルタチオンを高濃度に含有する培養物または分画物を得ることができる。
【００３９】
また、本発明の新規な酵母変異株を好気的な条件で培養して、グルタチオンを高濃度に含有する酵母エキスや乾燥酵母菌体を得ることができる。
【００４０】
さらにまた、本発明の新規な酵母変異株を好気的な条件で培養して得られる培養物、グルタチオンを含む前記培養物の分画物を含有させることによりグルタチオン含有飲食品とすることができる。