(57)【要約】【課題】感度や特異性が高く、簡便で非侵襲的に拒絶反応を診断できる診断マーカー及び免疫抑制剤の薬効マーカーとしてのバイオマーカーを提供することを目的とする。【解決手段】脊椎動物に対し、臓器移植後、血液中または腸液中のリゾチーム濃度を測定し、予め決定された、拒絶反応の起こっていないリゾチーム濃度の診断基準値と比較する。また、移植手術された脊椎動物に対し、免疫抑制剤を投与し、上記診断基準値と比較する。【選択図】  図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
リゾチームであることを特徴とする拒絶反応の診断マーカー。
【請求項２】
前記拒絶反応が、小腸移植後に生じる拒絶反応であることを特徴とする請求項１に記載の診断マーカー。
【請求項３】
リゾチームであることを特徴とする免疫抑制剤の薬効マーカー。
【請求項４】
前記免疫抑制剤が、小腸移植後に投与される免疫抑制剤であることを特徴とする請求項３に記載の薬効マーカー。
【請求項５】
ヒト以外の脊椎動物において、血液中または腸液中のリゾチームの量を測定することにより、拒絶反応の程度を診断する方法。
【請求項６】
前記個体が、小腸移植されていることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
免疫抑制剤を投与されたヒト以外の脊椎動物において、血液中または腸液中のリゾチームの量を測定することにより、前記免疫抑制剤の薬効を評価する方法。
【請求項８】
前記脊椎動物が、小腸移植されていることを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項９】
抗リゾチーム抗体を含む拒絶反応診断キット。
【請求項１０】
抗リゾチーム抗体を含む免疫抑制剤の薬効評価キット。
【請求項１１】
免疫抑制剤の投与を必要とするヒト以外の脊椎動物における、有効な免疫抑制剤のスクリーニング方法であって、
リゾチームである、免疫抑制剤の薬効マーカーを用いることを特徴とするスクリーニング方法。
【請求項１２】
請求項１１に記載のスクリーニング方法であって、
前記脊椎動物に属する複数の個体の各々において、異なる免疫抑制剤を投与する前後で、前記個体から血液または腸液を採取し、
前記血液中または腸液のリゾチーム濃度を測定し、
前記異なる免疫抑制剤に関して、前記個体から採取した血液中または腸液中のリゾチーム濃度の前記免疫抑制剤を投与する前後での変化を比較すること、を含むことを特徴とするスクリーニング方法。
【請求項１３】
前記個体が、小腸移植されていることを特徴とする請求項１２に記載のスクリーニング方法。
【請求項１４】
免疫抑制剤の投与を必要とするヒト以外の脊椎動物において、適量の免疫抑制剤の投与量を決定する方法であって、
リゾチームである、免疫抑制剤の薬効マーカーを用いることを特徴とする方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法であって、
前記脊椎動物から血液または腸液を採取し、
前記血液中または腸液中におけるリゾチーム濃度を測定し、
あらかじめ作成した、免疫抑制剤の使用量と前記血液中または腸液中におけるリゾチーム濃度との相関関係を示す検量線を用いて、前記個体の血液中または腸液中におけるリゾチーム濃度を所定の発現量まで減少させるために必要な免疫抑制剤の用量を決定することを特徴とする方法。
【請求項１６】
前記脊椎動物が、小腸移植されていることを特徴とすることを特徴とする請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
ヒト以外の脊椎動物において、血液中または腸液中のＭＲＰ８とＭＲＰ１４のうちの少なくとも一方の量と、リゾチームの量とを測定することにより、拒絶反応の程度を診断する方法。
【請求項１８】
免疫抑制剤を投与されたヒト以外の脊椎動物において、血液中または腸液中のＭＲＰ８とＭＲＰ１４のうちの少なくとも一方の量と、リゾチームの量とを測定することにより、前記免疫抑制剤の薬効を評価する方法。
【請求項１９】
抗ＭＲＰ８抗体と抗ＭＲＰ１４抗体のうちの少なくとも一つと、抗リゾチーム抗体を含む拒絶反応診断キット。
【請求項２０】
抗ＭＲＰ８抗体と抗ＭＲＰ１４抗体のうちの少なくとも一つと、抗リゾチーム抗体を含む免疫抑制剤の薬効評価キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リゾチームであることを特徴とする診断マーカー及び薬効マーカー、並びにそれらの利用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
小腸は臓器自体が重要な免疫機能を営んでいるため、移植後、特に拒絶反応の制御が困難であると言われている。現在、小腸移植後の拒絶反応の程度を診断する方法として、生検や内視鏡による検査が行われているが、生検による組織学的診断は、侵襲性が高く、時間がかかる上に、その診断精度が十分ではなく、部分的拒絶の場合、採取した組織によっては診断が異なることもあり得る。拡大内視鏡による検査は、ストーマ閉鎖後に実施できない点が問題である。
【０００３】
そこで、非侵襲性の急性拒絶反応のバイオマーカーとして、血清中のシトルリン（例えば、非特許文献１参照）や胆汁酸（例えば、非特許文献２参照）が開発されてきたが、感度や特異性が十分ではなかった。
【０００４】
また、最近、ＭＲＰ８／１４複合体（migration inhibitory factor(MIF)-related protein 8/14 complex）が、腎臓や小腸の移植組織の拒絶反応に伴う炎症を検出するためのバイオマーカーになりうることが示されたが、これは炎症時の早期マーカーであり、拒絶特異性については未だ証明されていない（例えば、非特許文献３参照）。
【非特許文献１】Pappas PA, et al. Transplantation 2001;72:1212-6
【非特許文献２】Miyagi K, et al. Transplant Proc 2000;32:1265-6
【非特許文献３】Ikemoto M, et al. Clinical Chemistry 2003;49:594-600
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
そこで、本発明は、感度や特異性が高く、簡便で非侵襲的に拒絶反応を診断できるバイオマーカーを提供することを目的としてなされた。また、簡便で非侵襲的に拒絶反応を診断できるバイオマーカーを用いれば、免疫抑制剤を投与したときにその薬効の評価が迅速に可能となるため、このバイオマーカーは免疫抑制剤の薬効マーカーとしても使用できる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題を解決するため、小腸移植後のラット個体の血漿を用い、プロテインチップシステムを用いて、拒絶反応を示す群の個体のみに特異的に発現している蛋白質をスクリーニングすることにより、拒絶反応群でのみ高い濃度で検出される蛋白質を同定し、その蛋白質がリゾチームであることを確認して、本発明の完成に至った。
【０００７】
本発明にかかる拒絶反応の診断マーカー及び免疫抑制剤の薬効マーカーは、リゾチームであることを特徴とする。前記拒絶反応が、小腸移植後に生じる拒絶反応であることが好ましい。
【０００８】
本発明にかかる拒絶反応の程度を診断する方法及び免疫抑制剤の薬効を評価する方法は、ヒト及びヒト以外の脊椎動物において、血液中または腸液中のリゾチームの量を測定することを含む。前記脊椎動物が、小腸移植されていることが好ましい。
【０００９】
本発明にかかる拒絶反応診断キット及び免疫抑制剤の薬効評価キットは、抗リゾチーム抗体を含む。
【００１０】
本発明にかかる有効な免疫抑制剤のスクリーニング方法は、免疫抑制剤の投与を必要とする脊椎動物におけるスクリーニング方法であって、リゾチームである、免疫抑制剤の薬効マーカーを用いることを特徴とする。このスクリーニング方法は、前記脊椎動物に属する複数の個体の各々において、異なる免疫抑制剤を投与する前後で、前記個体から血液または腸液を採取し、前記血液中または腸液のリゾチーム濃度を測定し、前記異なる免疫抑制剤に関して、前記個体から採取した血液中または腸液中のリゾチーム濃度の前記免疫抑制剤を投与する前後での変化を比較すること、を含んでもよい。なお、前記個体が、小腸移植されていることが好ましい。
【００１１】
また、本発明にかかる適量の免疫抑制剤の投与量を決定する方法は、免疫抑制剤の投与を必要とする脊椎動物個体における方法であって、リゾチームである、免疫抑制剤の薬効マーカーを用いることを特徴とする。このスクリーニング方法は、前記脊椎動物から血液または腸液を採取し、前記血液中または腸液中におけるリゾチーム濃度を測定し、あらかじめ作成した、免疫抑制剤の使用量と前記血液中または腸液中におけるリゾチーム濃度との相関関係を示す検量線を用いて、前記脊椎動物の血液中または腸液中におけるリゾチーム濃度を所定の発現量まで減少させるために必要な免疫抑制剤の用量を決定することを特徴とする。なお、前記脊椎動物が、小腸移植されていることが好ましい。
【００１２】
本発明にかかる拒絶反応の診断方法は、ヒト以外の脊椎動物において、血液中または腸液中のＭＲＰ８とＭＲＰ１４のうちの少なくとも一方の量と、リゾチームの量とを測定することを含む。
【００１３】
また、本発明にかかる免疫抑制剤の薬効を評価する方法は、免疫抑制剤を投与されたヒト以外の脊椎動物において、血液中または腸液中のＭＲＰ８とＭＲＰ１４のうちの少なくとも一方の量と、リゾチームの量とを測定する。
【００１４】
本発明にかかる拒絶反応診断キット及び免疫抑制剤の薬効評価キットは、抗ＭＲＰ８抗体と抗ＭＲＰ１４抗体のうちの少なくとも一つと、抗リゾチーム抗体を含む。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、感度や特異性が高く、簡便で非侵襲的に拒絶反応を診断できる診断マーカー及び免疫抑制剤の薬効マーカーとしてのバイオマーカーを提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、上記知見に基づき完成した本発明の実施の形態を、実施例を挙げながら詳細に説明する。実施の形態及び実施例に特に説明がない場合には、J. Sambrook, E. F. Fritsch & T. Maniatis (Ed.), Molecular cloning, a laboratory manual (3rd edition), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2001); F. M. Ausubel, R. Brent, R. E. Kingston, D. D. Moore, J.G. Seidman, J. A. Smith, K. Struhl (Ed.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Ltd.などの標準的なプロトコール集に記載の方法、あるいはそれを修飾したり、改変した方法を用いる。また、市販の試薬キットや測定装置を用いている場合には、特に説明が無い場合、それらに添付のプロトコルを用いる。
【００１７】
なお、本発明の目的、特徴、利点、及びそのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば、容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的な実施例などは、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図並びに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々な改変並びに修飾ができることは、当業者にとって明らかである。
【００１８】
＝＝バイオマーカーとしてのリゾチーム＝＝
本明細書におけるリゾチーム（EC3.2.1.17）は、Ｎ−アセチルムラミン酸（MurNAc）とＮ−アセチルグルコサミン（GlcNAc）間のβ−1,4結合間を加水分解する酵素を意味する。特にマクロファージで発現しているリゾチームが好ましく、例えば、トリ卵白，哺乳類，魚類，昆虫類など広く生物界に分布しているリゾチームＣが好ましい。下記の実施例では、ラットのリゾチームＣであるLysozyme C, type1 (LYC_RAT)を検出対象とした。
【００１９】
脊椎動物の臓器移植後の拒絶反応時に血漿中のリゾチーム濃度が上昇すること、また、免疫抑制剤投与によって血漿中のリゾチーム濃度の上昇が抑制されることから、ヒト及びヒト以外の脊椎動物において、血漿中のリゾチームは、臓器移植後の拒絶反応の診断マーカーや免疫抑制剤の薬効マーカーなどのバイオマーカーとして有用である。
【００２０】
リゾチームは小腸においてはパネート細胞から分泌され、自然免疫を担っている（Mason & Taylor, J. Clin Pathol 28, 124-132, 1975）。しかし、リゾチームは単球やマクロファージ系細胞からも産出・分泌されることが知られている。炎症性腸疾患のクローン病では著しい血中リゾチームの上昇が認められており、これは腸の炎症部位へマクロファージが滲出しているためであることが明らかになっている（Stamp GWH et al. , Gastroenterology 103, 532-538, 1992）。そのため、臓器移植における拒絶反応の際、血中リゾチーム濃度が上昇するのは、移植臓器へ滲出したマクロファージに起因することが示唆されている。従って、移植臓器に関しては、好適移植臓器として小腸が挙げられるものの、拒絶反応が起きるとマクロファージが滲出する臓器であれば、小腸に限らない。
【００２１】
このような血液中あるいは腸液中のバイオマーカーを用いれば、血液または腸液をサンプルとして利用することができるため、バイオマーカーの濃度を定期的に簡便に測定することができる。また、血液サンプルあるいは腸液サンプルの取得は、針生検に比べて侵襲が少なく、針生検のような高度な技術も必要としないので、簡便に行うことができる。
【００２２】
＝＝拒絶反応の診断マーカーとしてのリゾチーム＝＝
以下、診断マーカーとしてのリゾチームの利用方法について詳細に記述する。
【００２３】
ヒト及びヒト以外の脊椎動物において、小腸などの臓器移植後、血液中または腸液中のリゾチームに対して特異的なポリクローナル抗体やモノクローナル抗体等を用いたウエスタンブロット法やＥＬＩＳＡ法などによってリゾチーム濃度の測定を行うことができるが、リゾチーム濃度の測定は、これらの方法に限定されるものではなく、ＲＩＡ（radioimmunoassay、放射免疫測定法）、ＥＩＡ（enzyme immunoassay、酵素免疫法）等、他の様々な手法を用いて測定してもよい。以下に、血液中のリゾチーム濃度の測定の一例を記述する。
【００２４】
まず，臓器移植した脊椎動物から採取した血液を遠心分離して血清画分を得る。その後、抗リゾチーム抗体を吸着させたＥＬＩＳＡプレート（例えば９６穴プレートを用いたもの）のウエルに血清を入れて、プレートに固着した抗リゾチーム抗体と反応させ、血清を除去後ウエルを洗浄する。引き続き一次抗体（抗リゾチーム抗体）及び二次抗体（例えば、酵素で標識された抗免疫グロブリン抗体など）と反応させた後、ウエルを洗浄する。酵素に対する基質を用いて発色させ、マイクロプレートリーダーにより吸光度を測定し、あらかじめ作成した検量線を用いてリゾチーム濃度を測定する。なお、二次抗体の標識として用いられている酵素としては、例えば、西洋ワサビ由来のペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼなどを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。なお、検量線は、段階希釈したリゾチーム溶液に対し、同時に上記反応を行い、濃度と吸光度の関係をグラフにすることにより作成する。
【００２５】
また、拒絶反応の診断マーカーとして、血液中や腸液中のリゾチーム濃度だけでなく、ＭＲＰ８（ MIF-related protein 8 ）とＭＲＰ１４（ MIF-related protein 14 ）のうち少なくとも一つの濃度を測定し、両方の結果を診断に用いてもよい。ＭＲＰ８／１４は拒絶反応時の炎症の早期マーカーであることから、マーカーとしての特性は、リゾチームと相補的であり、両方のマーカーを調べることにより、より早期から確実に拒絶反応を診断できるようになる。
【００２６】
ＭＲＰ８またはＭＲＰ１４の濃度の測定は、リゾチームと同様、それらに特異的な抗体を用いたＥＬＩＳＡなどで行うのが好ましいが、測定方法は特に限定されない。
【００２７】
このような拒絶反応の診断マーカーを用いれば、例えば、小腸を移植した脊椎動物から採取した血液または腸液における診断マーカーの濃度を定期的に測定し、予め決定された、拒絶反応を起こしていない時の診断基準値と比較することにより、拒絶反応の診断を簡便に行うことが可能になる。
【００２８】
その診断基準値については、拒絶反応以外の要素が診断マーカーの濃度に影響を与えない場合は、例えば、移植前の診断マーカー濃度の正常値を診断基準値とし、その値と比較することにより拒絶反応の程度を評価することができる。しかし、拒絶反応以外の要素、例えば、移植手術それ自体が診断マーカーの濃度に影響を与えるようであれば、予め、診断対象である脊椎動物と同種の脊椎動物に対し、移植は行わないが同じ手順で手術を行い、拒絶反応の程度と、診断マーカーの濃度との相関関係を調べておき、拒絶反応の程度に対し、診断マーカーの濃度を対応付けておく。それらの個体において、診断マーカーの濃度が、移植も手術もしない個体の値（正常値）より高くなれば、移植手術後、拒絶反応を起こしていない個体（移植自体は行われていない個体や、免疫抑制剤で拒絶反応が起こっていない個体など）の診断マーカー濃度を診断基準値とすればよい。
【００２９】
そして、実際の診断対象となる、手術を受けた個体の診断マーカーの濃度より、その動物の拒絶反応の程度を評価する。すなわち、対象となる個体の診断マーカーの濃度が診断基準値であれば、拒絶反応を起こしていないと評価し、診断基準値より大きいほど、拒絶反応が大きいと評価する。
【００３０】
ヒトの場合、移植手術が行われた患者に対し、別のバイオマーカーや組織学的診断、内視鏡による診断など、本発明の方法以外の方法で拒絶反応の評価をする一方、本発明のバイオマーカーの濃度を測定し、それらの相関関係を調べ、予め拒絶反応の程度に対し診断マーカーの濃度を対応付けておくことにより、診断基準値を決定しておく。この場合、拒絶反応の評価は、なるべく多くの方法を用いたり、多面的に解析したりしておくことが好ましい。
【００３１】
＝＝免疫抑制剤の薬効マーカーとしてのリゾチーム＝＝
臓器移植した脊椎動物に免疫抑制剤を投与し、血液中または腸液中のリゾチームの濃度から拒絶反応の抑制度即ち免疫抑制剤の薬効を評価することができる。
【００３２】
まず、上述のように、予め診断基準値を設定する。次に、対象の個体に臓器移植を行った後、免疫抑制剤を投与しながら、上述のように、ＥＬＩＳＡなどにより血液中または腸液中のリゾチーム濃度を測定する。得られた値を、診断基準値と比較することにより、免疫抑制剤の薬効を評価する。
【００３３】
この免疫抑制剤の薬効評価方法を用いることにより、有効な免疫抑制剤のスクリーニングや、適量の免疫抑制剤の投与量の決定を行うことができ、例えば、少ない使用量で効果が得られ、副作用の少ない免疫抑制剤又はその投与方法の選択などを行うことができるようになる。
【００３４】
例えば、臓器移植した脊椎動物個体の各々において、異なる免疫抑制剤を投与する前後で、血液または腸液を採取し、その中のリゾチーム濃度を測定する。その免疫抑制剤を投与する前後でのリゾチーム濃度を比較し、リゾチーム濃度が最も減少した免疫抑制剤を同定するというスクリーニングを行うことができる。
【００３５】
また、臓器移植した脊椎動物個体から血液または腸液を採取し、その中におけるリゾチーム濃度を測定し、あらかじめ作成した、免疫抑制剤の使用量と、血液中または腸液中におけるリゾチーム濃度との相関関係を示す検量線を用いて、血液中または腸液中におけるリゾチーム濃度を所定の発現量まで減少させるために必要な免疫抑制剤の用量を決定することができる。予め拒絶反応の程度をリゾチームの発現量で規定しておけば、このようにして適量の免疫抑制剤の投与量の決定を行うことができる。
【００３６】
＝＝キット＝＝
上記バイオマーカーを、誰もが容易に利用できるようにするためには、キットとして商品化することが好ましい。このキットには、少なくとも血液中または腸液中のリゾチームを検出するための抗リゾチーム抗体が含まれる。また、診断精度を上げるため、抗ＭＲＰ８抗体と抗ＭＲＰ１４抗体の一方または両方を含んでいてもよい。
【実施例】
【００３７】
（１）ラット異所性小腸移植モデルの作製
本実施例では、ヒトなど脊椎動物における小腸移植のモデル動物として、ラット異所性小腸移植モデルを作製した。体重200〜350グラムのBrown Norway（BN）ラットおよびLewis（LEW）ラットを使用し、実験群は次の4群に分類した（各群n=5）：グループI．LEWラットに開腹のみを施したコントロール群（Sham群）；グループII．LEWラットからLEWラットへの同種同系移植群（Syngeneic群）；グループIII．BNラットからLEWラットへの同種異系移植群（Allogeneic群またはAllo群）；グループIV．BNラットからLEWラットへの同種異系移植後，FK506（0.64mg/kg/day, i.m.）を連日投与した群（Allo+FK群）。
【００３８】
ラット異所性小腸移植は、実体顕微鏡を用い、フローセン麻酔下にてMonchik and Russellの方法（Surgery 70, 693-702, 1971）を一部改変して行った。ドナー操作については、まず、正中切開にて開腹後、大腸への腸間膜動静脈を結紮切離した。トライツ靭帯を切断後、脾静脈、胃静脈を剥離し、結紮切離した。門脈を剥離し、露出させ、十二指腸を膵より遊離させた。上腸間膜動脈を末梢側で結紮切離し、回腸末端を盲腸より切断した。右腎動脈を結紮後、腹腔動脈分岐部から左腎動脈分岐部まで，腹部大動脈を全周性に剥離した。０．５ｍｌのヘパリン添加生理食塩水を陰茎背静脈から注射した。腹部大動脈の上腸間膜動脈分岐部に6-0絹糸を２本通し、尾側のみを結紮した。腹部大動脈の腹腔動脈分岐部遠位側で上腸間膜動脈近位側を結紮した。２７Ｇの注射針を腹部大動脈に穿刺し、５ｍｌのヘパリン添加生理食塩水を注入してグラフト小腸が白くなるまで灌流した。肝門部で門脈を切離した。6-0絹糸で腹部大動脈を結紮し、結紮部の遠位側で切離した。上腸間膜動脈分岐部より近位側で腹部大動脈を切離し、グラフト小腸を摘出した。摘出した小腸は、４℃の生理食塩液で腸管内容物を洗浄除去後、同液中に冷保存した。レシピエント操作は、グラフト摘出後ただちに行った。血管吻合は8-0プロリーン糸を用いてドナーの腹部大動脈とレシピエントの腹部大動脈を端側に吻合した。静脈はドナーの門脈をレシピエントの下大動脈に吻合した。グラフト腸管の両端をストーマとして腹壁に固定した。
【００３９】
（２）拒絶反応の組織学的判定
作製したラット異所性小腸移植モデルについて、術後５，７，１０日目に、移植部分の組織切片を作製し、ヘマトキシリン−エオジン（ＨＥ）染色をして、Todoらの報告 (Ann.Surg. 216, 223-234, 1992)に従って判定した。結果を図１に示す。
【００４０】
非拒絶群及び免疫抑制剤投与群では、術後１０日経っても拒絶反応が観察されなかったの対し、拒絶群では、術後５日目に弱い拒絶反応が観察され、次第に拒絶反応が強くなり、術後１０日目には、非常に強い拒絶反応が観察された。
【００４１】
（３） プロテインチップアッセイ
本実施例では、上記ラットから血漿サンプルを得て、プロテインチップによりリゾチーム濃度を測定した。
【００４２】
まず、血漿２０μｌに尿素バッファー（８Ｍ尿素及び１％ＣＨＡＰＳを含有したＰＢＳ  ｐＨ７．４）３０μｌを加え、１５分間氷上に放置した後、ＰＢＳで２０倍に希釈した。５０ｍＭ ＮｉＳＯ４で活性化したＩＭＡＣチップ上で１時間反応させた後、蒸留水４００μｌで洗った。風乾後、マトリックス（sinapinic acid）添加後、ProteinChip Reader(Model PBSII、Ciphergen Biosystems社)を用いて、測定し、結果をProteinChip Software 3.0(Ciphergen Biosystems社)で解析した。結果を図２に示す。
【００４３】
Sham群においては、リゾチーム濃度は１０日目までほとんど上昇しなかったが、Syngeneic群、Allo+FK群、Allo群では、術後１日目から濃度上昇が観察された。しかし、５日を過ぎると、Allo群でのみ急激な濃度上昇が観察され、上述した組織学的判定結果と対応していた。Syngeneic群、Allo+FK群におけるリゾチーム濃度の上昇は、手術それ自体によるものと考えられる。従って、本実施例では、免疫抑制剤を与えて、ピーク強度が約５程度に低下すれば、拒絶反応が抑制されていると考えられ、この結果も組織学的判定結果と一致している。
【００４４】
（４）拒絶反応の診断マーカー及び免疫抑制剤の薬効マーカー
以上のように、小腸移植後、組織学的に検出された拒絶反応の強さと対応して血液中のリゾチーム濃度が上昇し、免疫抑制剤を投与して拒絶反応を抑制すると、それに伴い、血液中のリゾチーム濃度の上昇が抑制される。従って、臓器移植、特に小腸移植後の血液中または腸液中のリゾチームは拒絶反応の診断マーカー及び免疫抑制剤の薬効マーカーとして、有用である。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】本発明の実施例において、作製した異所性小腸移植モデルラットについて、術後５，７，１０日目に薄切し、ヘマトキシリン−エオジン（ＨＥ）染色にて行った組織学的な拒絶判定を示す写真である。
【図２】本発明の実施例において、作製した異所性小腸移植モデルラットから血漿サンプルを得て、プロテインチップにより測定したリゾチーム濃度を示す図である。
【図１】
2006177679.tif 000003
【図２】
2006177679.tif 000004