(57)【要約】      （修正有）【課題】遠心操作によるストレスにより、濾過時に生じる圧力によって白血球除去材料が出口側の容器に密着することなく、血液の流れが阻害される恐れのない、即ち血液の流れが均一で血液処理速度の速い、可撓性の白血球除去フィルターを含む白血球除去システムの遠心方法を提供する。【解決手段】採血バッグ１と、血液入口ノズル５−ｂと血液出口ノズル５−ａとを有する可撓性容器の内部に白血球除去材料が充填され、該白血球除去材料と容器の出口側内面との間にスペーサー１５が設けられている平板状の白血球除去フィルター５と、一つ以上のサテライトバッグ２、３、４と、これらを液密に連結する連結管と、からなる白血球除去システムにおいて該採血バッグ、該サテライトバッグおよび該白血球除去フィルターを積層し、該積層物を立てた状態で遠心カップにセットし、血液出口ノズルが遠心力の反対方向に位置するように遠心カップにセットし、遠心する。【選択図】図７
2006158738.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも採血された血液が充填され血液回路接続部分を有する採血バッグと、
血液入口ノズルと血液出口ノズルとを有する可撓性容器の内部に白血球除去材料が充填され、該白血球除去材料と容器の出口側内面との間にスペーサーが設けられている平板状の白血球除去フィルターと、
一つ以上のサテライトバッグと、
これらを液密に連結する連結管と、
からなる白血球除去システムを、
該採血バッグ、該サテライトバッグおよび該白血球除去フィルターを積層し、該積層物を立てた状態で遠心カップにセットして血液を遠心分離する方法において、
血液出口ノズルが遠心力の反対方向に位置するように遠心カップにセットし、遠心することを特徴とする白血球除去システムの遠心方法。
【請求項２】
さらに、採血バッグに設けた血液回路接続部分が血液出口ノズルと同方向に位置するように遠心カップにセットして遠心分離する請求項１に記載の白血球除去システムの遠心方法。
【請求項３】
採血バッグおよびサテライトバッグのうち、少なくとも液体の入ったバッグが白血球除去フィルターの入口側の面に位置するように積層し、該積層物を立てた状態で遠心カップにセットして遠心分離する請求項１または２に記載の白血球除去システムの遠心方法。
【請求項４】
前記スペーサーがシート状多孔質素材である請求項１〜３に記載の白血球除去システムの遠心方法。
【請求項５】
前記スペーサーが容器の出口側内面に設けられた複数の突起状構造体である請求項１〜３に記載の白血球除去システムの遠心方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液中の微小凝集物、白血球および／または血小板を除去する為の白血球除去フィルターを含む白血球除去システムの遠心方法に関する。特に、輸血用の全血製剤、赤血球製剤、血小板製剤、血漿製剤などから輸血副作用の原因となる微小凝集物や白血球を除去する目的で用いられる白血球除去フィルターを含む白血球除去システムの遠心方法に関するものであり、また、体外循環白血球除去療法に用いられる白血球除去フィルターを含む白血球除去システムの遠心方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
供血者から採取した全血を遠心分離などの方法により、赤血球、血小板、血漿などの医療上有用な必要な各成分に分離採取後貯留し、これを輸血に用いるいわゆる成分輸血が、近年広く行なわれている。また、これらの各血液成分製剤（以下、血液製剤）に含まれる微小凝集物や白血球が種々の輸血副作用の原因となることから、輸血の前にこれらの好ましくない成分を除去してから輸血する方法が普及しつつある。近年は、特に、白血球除去の必要性が広く認識され、欧州では、全ての輸血用血液製剤に白血球除去処理を施した後に輸血に用いることを法制化している国もある。
【０００３】
血液製剤から白血球を除去する為の方法としては、血液製剤を白血球除去フィルターで処理するのが最も一般的である。従来、この白血球除去フィルターによる血液製剤の処理は、輸血操作を行なう際にベッドサイドで行われることが多かった。しかし、近年では白血球除去製剤の品質管理、及び白血球除去処理の安定性向上の為に、血液センターに於いて血液の保存前に処理が行われることが一般的になりつつある（「保存前白血球除去」と呼ばれる）。
【０００４】
ドナーから採血し、複数の血液成分に分離し、各血液成分を貯蔵するために、典型的には２つから４つの可撓性のバッグとこれらを接続する導管、抗凝固剤、赤血球保存液、採血針等から構成される採血分離セットが以前より使われている。そして上記の「保存前白血球除去」に好適に使用されうるシステムとして、これらの採血分離セットに白血球除去フィルターを組み込んだものが広く使われており、「クローズドシステム」または「一体型システム」等の名称で呼ばれている（特許文献１及び特許文献２）。
【０００５】
従来、白血球除去フィルターとしては、不織布や多孔質体からなる白血球除去材料をポリカーボネート等の硬質容器に充填したものが広く使われてきたが、容器の蒸気透過性が低いため、採血分離セットの滅菌工程として広く使われている高圧蒸気滅菌を適用し難いという問題があった。また、「クローズドシステム」には、採血後にまず、全血製剤から白血球を除去し、白血球除去フィルターを切り離してから成分分離のための遠心分離操作を行なうものと、全血を遠心分離によって複数の血液成分に分離した後に白血球去を行なうものとがある。後者の場合には、白血球除去フィルターも採血分離セットと共に遠心されるが、この際、硬質容器がバッグや導管にダメージを与えたり、硬質容器自身が遠心時のストレスに耐えられずに破損するという危険があった。
【０００６】
これらの問題点を解決する方法として、採血分離セットのバッグに使用されているものと同一または類似の可撓性かつ蒸気浸透性に優れる素材を容器に用いた、可撓性の白血球除去フィルターが開発されている。
可撓性の白血球除去フィルターは、白血球除去材料を一旦シート状の可撓性フレームに溶着した後に、該可撓性フレームを可撓性容器に溶着したもの（特許文献３および特許文献４）、白血球除去材料を可撓性容器に直接溶着したもの（特許文献５および特許文献６）とに大別できる（以下、前者をフレーム溶着型、後者を容器溶着型ということがある）。これらの可撓性型白血球除去フィルターは容器の一部に血液の入口と出口とを有し、容器の内部空間は、白血球除去材料によって入口側空間と出口側空間とに仕切られている。
【０００７】
通常、これらの白血球除去フィルターで血液を処理する際は、フィルターの血液入口側に導管を介して接続されている処理されるべき血液製剤が入ったバッグを、フィルターよりも20cmから100cm程高い位置に設置する。そして、重力の作用によって血液製剤をフィルターに通し、フィルターの血液出口側に導管を介して接続された回収バッグに濾過後の血液製剤を収容する。その際、白血球除去材料の抵抗によって流路に圧力損失が生じ、フィルター入口側の空間が陽圧となるため、容器が可撓性の場合は、容器入口側の内面と白血球除去材料との空隙がこの陽圧によって風船状に膨らむと同時に、白血球除去材料が容器の出口側内面に押しつけられる。一方、容器の出口側内面と白血球除去材料との空隙は、出口に接続された導管内の血液が重力によって落下し、通常、白血球除去材料よりも50から100cm低い位置に置かれた濾過後の血液を収納するためのバッグへと移動しようとするため、フィルター出口側の空間は逆に陰圧となり、容器の出口側内面と白血球除去材料とが密着する傾向を示す。即ち、白血球除去材料は入口側の陽圧と出口側の陰圧という二重の力によって容器の出口側内面に密着し、血液の流れが阻害される。
【０００８】
この問題を解決する方法として、白血球除去材料と可撓性容器の血液出口側との間にスペーサーを配置して適切な空間を設け、白血球除去材料と容器の出口側内面との密着を防止する様々な先行技術が開示されている。その一例として、白血球除去材料と容器の出口側内面との間に連接棒と呼ばれる軟質塩ビチューブを挿入して密着を防ぐ方法（特許文献３）、ニットファイバー製のスクリーン等を挿入する方法（特許文献６）、メッシュまたは突起状物等を配置する方法（特許文献７）、軟質容器の出口側内面に高低差が0.2〜2 mmの凹凸をつけて密着を防ぐ方法（特許文献４）、あるいは白血球を除去するためのフィルター要素と出口側容器の間に、厚み1 cmに換算した時の通気度が3 〜 40 cc/cm2/秒である、厚みが0.04 〜 0.25 cmである第三のフィルター要素を配置し、出口側容器がフィルター要素に密着しても、血液の流れが阻害される恐れのない可撓性の血液処理フィルターを提供する方法（特許文献８）等が提案されており、これらは何れも、濾過の際の空間形成という点においては有効であった。
【０００９】
しかしながら、白血球除去フィルターを組み込んだ採血分離セット、すなわち白血球除去システムごと遠心して採血バッグ中の全血を複数の血液成分に分離し、白血球除去を行なう場合は、前記の如くスペーサーを設けた白血球除去フィルターを用いても期待した白血球除去性能が得られない場合があった。これは、スペーサーを用いて予め白血球除去材料と容器の出口側内面との間に形成した空間が遠心処理中に押し潰されてしまい、実際に白血球除去処理を行なう際にスペーサーが有効に機能しないことがその原因と考えられている。このように、スペーサーを設けた白血球除去フィルターを含む白血球除去システムを遠心処理する場合には、白血球除去性能の低下や処理時間の増大という問題が未だ十分に解決されていない。
【特許文献１】特開平1-320064号公報
【特許文献２】国際公開第92/20428号パンフレット
【特許文献３】欧州特許出願公開第0526678号明細書
【特許文献４】特開平11-216179号公報
【特許文献５】特開平7-267871号公報
【特許文献６】国際公開第95/17236号パンフレット
【特許文献７】特開2003-180822号公報
【特許文献８】国際公開第01/05964号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の課題は、白血球除去フィルターを含む白血球除去システムの遠心方法であって、スペーサーによりフィルター内部の出口側に形成した空間が遠心操作によるダメージを受け難く、結果として安定して高い白血球除去性能が得られる遠心方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意研究した結果、スペーサーにより白血球除去材料と容器の出口側内面との間に形成した空間の高さが、遠心処理を行なう際の遠心カップ内への白血球除去システムの配置方法によって変化することを見出した。そして、特定の配置方法に従って遠心すればスペーサー本来の機能が損なわれず、続いて濾過を行なった際に安定して高い白血球除去性能が得られることを見出し、これらを以って本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は、少なくとも採血された血液が充填された採血バッグと、血液入口ノズルと血液出口ノズルとを有する可撓性容器の内部に白血球除去材料が充填され、該白血球除去材料と容器の出口側内面との間にスペーサーが設けられている平板状の白血球除去フィルターと、一つ以上のサテライトバッグと、これらを液密に連結する連結管と、からなる白血球除去システムを、該採血バッグ、該サテライトバッグおよび該白血球除去フィルターを積層し、該積層物を立てた状態で遠心カップにセットして血液を遠心分離する方法において、血液出口ノズルが遠心力の反対方向に位置するように遠心カップにセットし、遠心することを特徴とする白血球除去システムの遠心方法である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の白血球除去システムの遠心方法によれば、白血球除去フィルター内部に設けたスペーサーの機能を損なうことがないので、全血を遠心分離によって複数の血液成分に分離した後に白血球除去を行なう血液製剤調製プロセスにおいて、遠心操作後でも血液の流れが遅くなることなく安定した白血球除去処理を行なうことができる。また、血液の流れが安定となることにより安定した高い白血球除去性能を得ることも可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下、図面を参照しつつ本発明を詳細に説明する。
本発明で言う白血球除去システムとは、少なくとも採血された血液が充填された採血バッグ、可撓性容器に白血球除去材料が充填された白血球除去フィルター、サテライトバッグ、およびこれらを液密に連結する連結管とから構成されるが、より具体的な例として以下の構成をあげることができる。
【００１４】
第一の例としては、図１に示すような白血球除去システムをあげることができる。本システムは、採血された血液が充填された採血バッグ（１）、赤血球保存液が封入されたサテライトバッグ（２）、液体が入っていないサテライトバッグ（３）、液体が入っていないサテライトバッグ（４）および濃厚赤血球製剤用の白血球除去フィルター（５）から構成され、採血バッグ（１）とサテライトバッグ（２）が連結管（６）によって接続され、採血バッグ（１）とサテライトバッグ（３）が連結管（７）により接続され、採血バッグ（１）と白血球除去フィルター（５）の血液入口が連結管（８）により接続され、白血球除去フィルター（５）の血液出口とサテライトバッグ（４）が連結管（９）により接続されていることにより構成される白血球除去システムである。この例には、サテライトバッグ（４）あるいは連結管（９）と連結管（８）との中間に封鎖手段を持つＹ字接続管（１０）で接続する場合もバリエーションの一つとしてあり得る。
【００１５】
第二の例としては、図２に示すような白血球除去システムをあげることができる。本システムは、採血された血液が充填された採血バッグ（１）、赤血球保存液が封入された第一のサテライトバッグ（２）、液体が入っていないサテライトバッグ（３）、液体が入っていないサテライトバッグ（４）および濃厚赤血球製剤用の白血球除去フィルター（５）から構成され、採血バッグ（１）とサテライトバッグ（３）が連結管（６）によって接続され、採血バッグ（１）とサテライトバッグ（４）が連結管（７）により接続され、サテライトバッグ（４）と白血球除去フィルター（５）の血液入口が連結管（８）により接続され、白血球除去フィルター（５）の血液出口とサテライトバッグ（２）が連結管（９）により接続されていることにより構成される白血球除去システムである。
【００１６】
第一の例および第二の例の何れにおいても、使用前、即ち採血を行なう前には、採血バッグ（１）に採血針などの採血手段が連結管により接続されているが、これら採決手段および連結菅は、採血後遠心操作前に、適宜シール後切除されることが安全上好ましい。
なお、上記の第一および第二の具体例は、白血球除去濃厚赤血球製剤および血漿製剤を得るために用いられる一般的な白血球除去システムの構成を示したにすぎず、本発明に用いるシステムはこれらに限定されるものではない。
【００１７】
［白血球除去フィルター］
本発明の白血球除去フィルターは、白血球除去を目的とするフィルターであればいずれも用いることが出来る。例えば、前記白血球除去システムの場合は濃厚赤血球製剤用であるが、それ以外にも、白血球除去濃厚血小板製剤を得る白血球除去システムの場合は、濃厚血小板製剤用あるいは多血小板血漿用の血小板通過型白血球除去フィルターなどがある。
【００１８】
本発明の白血球除去フィルターの構成について説明する。白血球除去フィルターは、可撓性容器に白血球除去材料が充填され、該可撓性容器の上面と下面には、血液入口ノズルと出口ノズルが形成されている。可撓性容器の内部空間は、白血球除去材料によって血液の入口側空間と出口側空間に隔てられ、血液出口側空間にはスペーサーが設けられている。このような白血球除去フィルターにおいて、処理されるべき血液は、血液入口ノズルから入口側空間に流入し、白血球除去材料を通過する際に白血球等の好ましくない成分が除去され、出口側空間へと移動し、出口ノズルから可撓性容器外部へと流出する。このとき、スペーサーは出口側空間において、可撓性容器と白血球除去材料が密着するのを防ぎ、均一で安定した血液の流れを確保するという役割を果たしている。
【００１９】
白血球除去フィルターの形状は特に限定する必要はないが、全体的な形状としては、可撓性容器とその内部に充填された白血球除去材料とが互いに積層可能で、厚さが数ｍｍ〜数ｃｍである略平板状のフィルターが有効である。また、積層可能な略平板状の形状であれば、その輪郭は長方形、正方形、菱形の他、多角形や円形等の何れであっても構わない。
【００２０】
可撓性容器と白血球除去材料とは血液濾過部分の周縁で一体的に溶着されることが好ましく、さらに量産性から可撓性容器、白血球除去材料およびスペーサーが一体的に溶着されていることがより好ましい。これら可撓性容器と白血球除去材料、さらにスペーサーを一体的に溶着する方法としては、高周波溶着、超音波溶着などの方法をあげることができる。
【００２１】
本発明の白血球除去フィルターを構成する可撓性容器は、可撓性の合成樹脂製のシートから形成されるのが好ましく、合成樹脂は熱可塑性樹脂であることが好ましい。
可撓性容器の材質は、白血球除去材料と熱的、電気的性質が類似のものが良く、例えば、軟質ポリ塩化ビニル、ポリウレタン、エチレン酢酸ビニル共重合体、ポリエチレン及びポリプロピレンのようなポリオレフィン、スチレン／ブタジエン／スチレン共重合体の水添物、スチレン／イソプレン／スチレン共重合体またはその水添物等の熱可塑性エラストマー、及び、熱可塑性エラストマーとポリオレフィン、エチレン／エチルアクリレート等の軟化剤との混合物等が好適な材料として挙げられる。好ましくは、軟質ポリ塩化ビニル、ポリウレタン、エチレン／酢酸ビニル共重合体、ポリオレフィン、及び、これらを主成分とする熱可塑性エラストマーであり、更に好ましくは軟質ポリ塩化ビニル、ポリオレフィンである。
【００２２】
可撓性容器は、血液入口側に血液入口ノズルを有し、また血液出口側に血液出口ノズルを有する。これら血液入口および出口ノズルは、気密的に可撓性容器内と各連結管とを接続することができる構造であればいかなる形状でも良いが、容器内容量を最小限に抑えかつより気密性の高い連結部を得るため、可撓性容器外面上に設置されることが好ましい。入口および出口ノズルを可撓性容器外面上に設置するには、あらかじめ射出成型などにより、例えば図３に示すような入口および出口ノズルを作成し、高周波溶着装置などを用いて可撓性容器を形成するシート状材料の上に溶着するなどの方法がある。
【００２３】
白血球除去材料は、不織布や織布などの繊維状の多孔質体や、スポンジ状構造物などの三次元網目状連続細孔を有する多孔質体などの公知の濾過媒体を用いることができる。これらの素材としては、例えば、ポリプロピレン、ポリエチレン、スチレン／イソブチレン／スチレン共重合体、ポリウレタン、ポリエステル、等が挙げられる。生産性の点および入手のしやすさから、ポリエステル不織布は特に好ましい。
【００２４】
白血球除去材料を構成する濾過媒体は、使用条件や使用目的に応じて適宜表面改質されていることが好ましい。たとえば素材表面を親水化することにより濾過媒体の濡れ性を改善することは白血球除去材料内に均一に血液を流すために効果的であり、好適に選択される。また、荷電性官能基を導入することで血液細胞の捕捉性能を向上させることも好適である。親水性官能基を有するヒドロキシエチル（メタ）アクリレートなどのモノマーと塩基性官能基を有するジメチルアミノメチル（メタ）アクリレートやジメチルアミノエチル（メタ）アクリレートとの共重合体などは両方の性質を持ち好適である。好適に用いられる表面改質の方法としては、ポリマーコーティングやグラフト重合法があげられる。
【００２５】
前述の通り、本発明で言う白血球除去フィルターは、白血球除去材料と可撓性容器の出口側内面との間にスペーサーを有しているが、ここで言うスペーサーとは、白血球除去材料と容器の出口側内面との間に空間を持たせるための構造物のことを言い、例示すると、突起状構造体、ニットファイバー製のスクリーン、メッシュ、エンボス加工などにより凹凸状の高低差を形成させたシート状多孔質体および空隙率の高いシート状多孔質体それ自身などが挙げられる。これらは、可撓性容器の出口側空間において、白血球除去材料と可撓性容器内面との間に配置される場合や、また容器の内面に形成される場合、あるいは、白血球除去材料に形成される場合などがある。
【００２６】
本発明の白血球除去システムの遠心方法によれば、例えばスペーサーが容器内面に形成された突起状構造体である場合には、容器内面から白血球除去材料の方向に設置された突起が、遠心の際に可撓性容器にかかる荷重により白血球除去材料にめり込むのを防ぎ、白血球除去材料と可撓性容器の間に形成された空間を潰さずに保持できる。また、スペーサーがニットファイバー製のスクリーンまたはメッシュである場合、ファイバーが遠心の際に受ける荷重により白血球除去材料の中に埋まり込むのを防ぎ、ファイバー間の空間を潰さずに保持できる。さらに、スペーサーが凹凸状の高低差を形成させたシート状多孔質体である場合には、遠心の際にフィルターが受ける荷重により凸部が潰れるのを防ぎ、空間を形成するために十分な高低差を潰さずに保持できる。さらにまた、スペーサーが空隙率の高いシート状多孔質体である場合、遠心の際に受ける荷重によりシート状多孔質体内部に形成される空隙が潰れるのを防ぎ、十分な空間を保持できるというように、何れのケースにおいてもスペーサーの機能を損なわずに保持できる効果がある。
【００２７】
これらの中で本発明の方法が最も有効に機能するのは、スペーサーとしてシート状多孔質体を用いた場合、および容器内面に形成された突起状構造体を用いた場合である。前者の場合、特に開孔率の高いシート状多孔質体の場合は、スペーサーとしての強度が、遠心の際に受ける荷重に対し十分でないため、特に通液用ノズルなど容器外面に突出した部分に荷重が集中した場合に、ノズル部分の埋まり込みなどによるダメージを受けやすいためと考えられる。後者の場合は、白血球除去システムを遠心する際、突起状構造の頂部に荷重が集中し易く、スペーサーの形成する空間の大きさが減じ易いためと考えられる。
【００２８】
スペーサーがシート状多孔質体である場合、入手し易さと加工のし易さから不織布は好適に用いられる。シート状多孔質体の素材は、一体的溶着のし易さから白血球除去材料と熱的、電気的性質が類似のものが好ましく、白血球除去材料と同一であることがより好ましい。ポリエステル不織不は入手のし易さ、白血球除去材料として一般的に用いられる素材であることから好適に用いられる。
【００２９】
スペーサーが凹凸状の高低差を形成させたシート状多孔質体である場合、凹凸状の高低差は０．２ｍｍ以上３．５ｍｍ以下であることが好ましい。これは、この範囲の高さの複数の凹凸により、白血球除去フィルターの入口側空間が陽圧でかつフィルター出口側空間が陰圧の状態であっても、白血球除去材料を通過した血液が出口に向かう際、血液が該凹凸によって保持された空間を流れることができるため、濾過や回収にかかる時間を短縮することができるためである。凹凸の高低差は、より好ましくは０．３ｍｍ以上３．０ｍｍ以下であり、さらに好ましくは０．４ｍｍ以上３．０ｍｍ以下、特に好ましくは０．５ｍｍ以上２．５ｍｍ以下である。
【００３０】
凹凸状の高低差を形成させたシート状多孔質体が有する複数の凹凸の間隔は１〜２０ｍｍであることが好ましい。間隔が１ｍｍより狭いと、白血球除去フィルターの出口側に空間が少なくなるため、濾過や回収の時間を短縮する効果が減じられ好ましくない。また間隔が２０ｍｍより広いと、白血球除去システムを遠心した後に可撓性容器が白血球除去フィルターの出口側の空間に入り込んでしまい、血液が流れる空間がなくなる可能性があるため好ましくない。
【００３１】
凹凸状の高低差を形成させたシート状多孔質体が有する複数の凹凸の形状は、点状でもよいし、線状でもよい。凹凸が点状である場合は、円錐、円柱、多角錐、多角柱、半球、半ドーナツ型などのいずれでもよいし、凹凸が線状である場合は、直線状や曲線状、ジグザグ型、格子型などのいずれでもよいが、血液濾過時に生ずるフィルター入口側の陽圧により、あるいはフィルター出口側の陰圧により生じる白血球除去材料の可撓性容器出口側への圧迫に対し、凹凸の高さを維持できる形状が好ましい。また凹凸は、スペーサーの全体に存在していることが好ましく、またフィルター全体に均等に配置されていることがより好ましい。
【００３２】
スペーサーが容器内面に設けられた複数の突起状構造体からなる場合、突起状構造体の高低差は０．２ｍｍ以上３．５ｍｍ以下であることが好ましい。これは、この範囲の高さの複数の突起状構造体により、白血球除去フィルターの入口側空間が陽圧でかつフィルター出口側空間が陰圧の状態であっても、白血球除去材料を通過した血液が出口に向かう際、血液が該突起状構造体によって保持された空間を流れることができるため、濾過や回収にかかる時間を短縮することができるためである。
【００３３】
複数の突起状構造体の間隔は１〜２０ｍｍであることが好ましい。間隔が１ｍｍより狭いと、白血球除去フィルターの出口側に空間が少なくなるため、濾過や回収の時間を短縮する効果が減じられ好ましくない。また間隔が２０ｍｍより広いと、白血球除去システムを遠心した際に白血球除去材料が突起状構造体の間に形成される空間に入り込んでしまい血液が流れる空間がなくなる可能性があるため好ましくない。
【００３４】
突起状構造体の形状は、点状でもよいし、線状でもよい。突起状構造体が点状である場合は、円錐、円柱、多角錐、多角柱、半球、半ドーナツ型などのいずれでもよいし、突起状構造体が線状である場合は、直線状や曲線状、ジグザグ型、格子型などのいずれでもよいが、血液濾過時に生ずるフィルター入口側の陽圧により、あるいはフィルター出口側の陰圧により生じる白血球除去材料の可撓性容器出口側への圧迫に対し、突起状構造体の高低差を維持できる形状が好ましい。また突起状構造体は、出口側可撓性容器内面の全体に存在していることが好ましく、また全体に均等に配置されていることがより好ましい。
【００３５】
本発明の白血球除去システムは上記の構成を有するものであるが、このようなシステム全体を遠心分離にかける際には、システムを構成する各パーツを遠心分離機内の遠心カップにどのようにセットするかが重要である。
本発明においては、フィルターの血液出口ノズルが遠心力の反対方向に位置するように遠心カップにセットすることが必要である。そうすることにより、スペーサーにより予め白血球除去材料と容器の出口側内面との間に形成された空間、特に血液のフィルターからの出口部分の空間が潰されることなく保持され、続いて濾過する際に血液の流れが遅くなることなく安定した白血球除去処理を行なうことができるからである。また、血液の流れが安定することにより安定した高い白血球除去性能を得ることも可能となる。反対に、フィルターの血液出口ノズルを遠心力の方向に位置するように遠心カップにセットすると、前記空間、特に血液のフィルターからの出口部分の空間が潰れてしまい、スペーサーの機能が発揮されず、安定した白血球除去処理を行うことができなくなる。
また、その際、採血バッグに設けた血液回路接続部分が血液出口ノズルと同方向に位置するように積層し、遠心カップにセットして遠心分離することが好ましい。
【００３６】
さらに、本発明においては、採血バッグおよびサテライトバッグのうち、少なくとも液体の入ったバッグが白血球除去フィルターの入口側の面に位置するように積層すること、すなわち、白血球除去システムを構成する複数のバッグ（以下単に血液バッグということがある）のうち、少なくとも全血などの血液および赤血球保存液などの薬液を貯留しているバッグをまとめて、白血球除去フィルターの血液入口側の面に位置するように重ね、一方、液体の入っていないバッグはまとめて血液出口側の面に位置するように積層し、該積層物を立てた状態で遠心カップにセットして遠心分離することが好ましい。これは、前述のとおり、遠心中に液体の入ったバッグが遠心カップの壁面方向に向かって膨らむような荷重をフィルターに与えるのに対して、スペーサーと液体の入った血液バッグの間に白血球除去材料を配置することにより、直接スペーサーにかかる荷重を小さくすることができるからである。そうすることにより、可撓性容器の血液出口側の面に設けたスペーサー、特に血液出口ノズルが、遠心中に白血球除去材料の方へ圧迫され陥没することにより生じる、血液出口側の空間の減少をより一層少なくすることができる。
採血バッグ、白血球除去フィルター、サテライトバッグをこのように好ましい状態で積層し、該積層物を立てた状態で遠心カップに挿入してセットした状態の例を図７に、遠心分離している状態の例を図８に示す。
【００３７】
遠心時には、遠心カップの上部から底部に向かって荷重が掛かるため、血液バッグ等の液体の入った柔軟なバッグは遠心カップの底方向に向かって大きく膨らみ、遠心カップ内の容積の大半を占めるように変形する。つまり、遠心カップ内に立てた状態でセットされた可撓性の白血球除去フィルターは、バッグ内の液体の移動によりカップの壁面方向に押しやられるように、また同時にカップ底方向に荷重を受ける。遠心カップは通常、遠心機に複数個環状にセットされ、回転手段により回転され遠心分離が行なわれる。この際、遠心により、カップは回転軸から外側に向かって底が向くように、すなわち横向きの状態になる。従って、遠心力はカップの底部にかかることになり、各バッグ内に封入された液体は、遠心カップ内において横方向（図８の矢印方向）に移動しようとする。
【００３８】
本発明でいう、遠心カップとは、遠心分離機用の容器であって、本発明の白血球除去システムをセットできるものであればよい。形状は底部が曲面になっているもの、平面になっているものなどがあり、いずれも使用可能である。
以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明はそれらの例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００３９】
〔白血球除去フィルターの作成〕
長さ１０５ｍｍ、幅８４ｍｍの長方形に裁断した厚み０．４ｍｍの塩化ビニル樹脂シートを２枚用意し、裁断済み樹脂シートとした。これらの裁断済み樹脂シートそれぞれについて、両短辺中央を結んだ直線上でかつ何れかの短辺中央から３１ｍｍの位置に、回路接続口末端がくるように、通液用ノズルを溶着設置し、可撓性容器原材料シートとした。通液用ノズル（１４）は、図３に示すように、高さ７．３ｍｍ、長さ１６．５ｍｍ、幅６．６ｍｍで、内部には折れ曲がった通路（１３）が形成され、外径４ｍｍの血液回路を挿入し固定することができるものである。
平均繊維径１２μm、目付け３０ｇ／ｍ２、厚さ０．２１ｍｍのポリエステル不織布（Ａ）を４枚、その上に平均繊維径１．７μｍ、目付け６６ｇ／ｍ２、厚さ０．４ｍｍのポリエステル不織布（Ｂ）を１枚、その上に平均繊維径１．２μｍ、目付け４０ｇ／ｍ２、厚さ０．２２ｍｍのポリエステル不織布（Ｃ）を２２枚、さらにその上にポリエステル不織布（Ｂ）を１枚積層した不織布積層体から、長さ９１ｍｍ幅７４ｍｍの長方形に切り出して、白血球除去材料とした。白血球除去材料の不織布（Ｂ）が最外層になっている側にエンボスプレスによる高低差１．３６ｍｍの凹凸加工を施した平均繊維径１２μｍ、目付け７０ｇ／ｍ２、厚さ０．３５ｍｍ、長さ９１ｍｍ、幅７４ｍｍのシート状ポリエステル不織布を血液出口側スペーサー（１５）として重ねた。この両側から、前記可撓性容器原材料シートをそれぞれ白血球除去材料が中央に配置され、また、白血球除去材料を挟んで通液用ノズルが点対称に位置するように被せた上で、第一の可撓性容器原材料（１６）、白血球除去フィルター材料、スペーサーおよび第二の可撓性容器原材料（１６）を、外周が長さ８１ｍｍ、幅６４ｍｍ、内周が長さ７４ｍｍ、幅５７ｍｍ、内周と外周の距離が３．５ｍｍである形状の一体化溶着部分（１７）を形成するよう高周波溶着機を用いて溶着した。さらに、高周波溶着機を用いて、第一の可撓性容器原材料と第二の可撓性容器原材料の周縁部分を幅３．５ｍｍに一体化溶着させ、図４に示す断面構造を有する白血球除去フィルターを作成した。
【００４０】
〔白血球除去システムの作成〕
上記の白血球除去フィルターを組み込んだ白血球除去システムを図５に示す。本システムは、以下のように作成した。
白血球除去フィルター容器の出口側の面、すなわち内部にスペーサーが挿入されている側に設置された血液出口ノズルと、容量６００ｍLで空の塩化ビニル樹脂製サテライトバッグ（４）とを接続長が４６１ｍｍになるように外径４ｍｍの血液回路で接続し、白血球除去フィルター容器の入口側の面、すなわちスペーサーが挿入されていない側に設置された血液入口ノズルとＹ字接続管（１１）とを接続長が２２３ｍｍになるように外径４ｍｍの血液回路で接続した。また、Ｙ字接続管（１１）とサテライトバッグ（４）とを接続長が１３８０ｍｍになるように１個のブレイカブルコネクタを含む外径４ｍｍの血液回路で接続した。
採血針（２０）と、７０ｍＬの抗凝固剤ＣＰＤを封入した容量６００ｍLの塩化ビニル樹脂製採血バッグ（１）とを接続長が１７１０ｍｍになるように外径４ｍｍの血液回路で接続し、また採血バッグ（１）に一体接続された１個のブレイカブルコネクタとＹ字接続管（１０）とを接続長が１１２ｍｍになるように外径４ｍｍの血液回路で接続した。Ｙ字接続管（１０）にはさらにＹ字接続管（１２）を接続長２４２ｍｍになるように外径４ｍｍの血液回路で接続し、Ｙ字接続管（１０）とＹ字接続管（１１）とを接続長１５５ｍｍになるように１個のブレイカブルコネクタを含む外径４ｍｍの血液回路で接続した。Ｙ字接続管（１２）の残る２つの接続口には、それぞれ１１０ｍＬの赤血球保存剤ＡＤＳＯＬを封入した容量３００ｍLの塩化ビニル樹脂製サテライトバッグ（２）、および薬剤を封入していない容量３００ｍLの塩化ビニル樹脂製サテライトバッグ（３）を接続長３１０ｍｍになるよう外径４ｍｍの血液回路で接続した。以上によって作成した白血球除去フィルター付き一体型多血液バッグシステムを高圧蒸気滅菌し、白血球除去システムを作成した。
【００４１】
〔採血および遠心分離〕
上記の白血球除去システムの採血針を介して、予め封入されている抗凝固剤ＣＰＤと十分に混和しながら健常供血者の血液を採血バッグ（１）に採取し、これを全血とした。得られた採血バッグ（１）内の全血は５００ｍＬであった。採血針と採血バッグ（１）を接続している血液回路を、採血バッグ（１）との接合部分付近で溶融切断し取り除いた。全血を含む白血球除去システムは４℃にて２０時間保存した。
４℃にて２０時間保存した白血球除去システムを室温２２℃下に取り出した。採血バッグ（１）を横に寝かせ、その上に液体が封入されたサテライトバッグ（２）を重ね、その上に白血球除去フィルター（５）を血液出口ノズル（５−ａ）がサテライトバッグの上側になるように、かつ血液出口ノズル（５−ａ）の血液回路接続口が採血バッグ（１）の血液回路接続部分（１−ａ）と同一方向を向くように重ね、その上に空のサテライトバッグ（３）を重ね、さらにその上に空のサテライトバッグ（４）を重ねて図６に示すように積層した。
この積層物（白血球除去システム）を、白血球除去フィルター（５）の血液出口ノズル（５−ａ）の血液回路接続口側が上を向くように、即ち採血バッグ（１）の血液回路接続部分（１−ａ）が遠心カップの上方にくるように積層物を立てた状態で内径１００ｍｍ深さ１５０ｍｍの円筒状遠心カップに挿入し、この遠心カップを高速遠心機（日立、ｈｉｍａｃ  ＣＲ７Ｂ３）にセットし、回転数４１４０ｒｐｍにて１５分間遠心した。
【００４２】
〔血液成分の採取および白血球除去操作〕
遠心分離の終了後、遠心カップから前記積層物（白血球除去システム）を注意深く取り出した後、Ｙ字接続管（１２）とサテライトバッグ（２）を接続している血液回路を鉗子により閉止し、採血バッグ（１）に一体接続されたブレイカブルコネクタを折り、採血バッグ（１）と血液バッグ（３）を連通させ、血液バッグ（１）の中で分離している全血の上澄み部分すなわち多血小板血漿層を血液バッグ（３）に、採血バッグ（１）をゆっくりと圧迫しながら移送した。
その後、Ｙ字接続管（１２）とサテライトバッグ（３）を接続する血液回路を鉗子にて閉止した後、Ｙ字接続管（１２）とサテライトバッグ（２）の間を閉止していた鉗子を外してサテライトバッグ（２）と採血バッグ（１）の間を連通させた後に、サテライトバッグ（２）に封入されていたＡＤＳＯＬを全量、採血バッグ（１）に残留している遠心後の沈殿層すなわち赤血球濃厚液に加えたところ、採血バッグ（１）内のＡＤＳＯＬ添加赤血球濃厚液（以下、赤血球製剤）は、３４１ｍＬであった。Ｙ字接続管（１２）とＹ字接続管（１０）を接続する血液回路を溶融切断し、サテライトバッグ（２）および（３）の側を取り除いた。赤血球製剤中の白血球濃度を自動血球計数装置（シスメックス社、Ｋ−４５００）を用いて測定したところ、  １１，６００コ／μＬであった。
残った、採血バッグ（１）、Ｙ字接続管（１０）、Ｙ字接続管（１１）、白血球除去フィルター（５）、サテライトバッグ（４）および各々を接続する血液回路からなる白血球除去システム部分を、採血バッグ（１）を一番上として、採血バッグとサテライトバッグとの落差が１５０ｃｍになるように吊るした。赤血球製剤が入っている採血バッグ（１）の表面温度を赤外表面温度計（株式会社コス、ＣＴ−３０）を用いて計測したところ８℃であった。Ｙ字接続管（１０）とＹ字接続管（１１）を接続する血液回路に設置されているブレイカブルコネクタを折り連通させて、採血バッグ（１）の赤血球製剤を白血球除去フィルターに導入し、フィルターによる濾過処理を開始した。ブレイカブルコネクタを折った時点（以下、濾過開始時点）から採血バッグ（１）内の赤血球製剤が実質的に無くなった時点（以下、濾過終了時点）までを濾過時間とし、濾過終了時点から白血球除去フィルターの入口側に実質的に赤血球製剤が無くなった時点までを回収時間とし、濾過時間と回収時間を合計した時間を処理時間とした。本例における濾過時間は４１分、回収時間は３１分、処理時間は７２分であった。
最終的にサテライトバッグ（４）に回収された白血球除去された赤血球製剤を、白除赤血球製剤として計量したところ３００ｍＬであった。また、白除赤血球製剤に含まれる白血球の濃度をフローサイトメーター（ＢＥＣＴＯＮ  ＤＩＣＫＩＮＳＯＮ社、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ）を用いて測定したところ、０．２コ／μＬであった。
以下の式（１）を用いて白血球除去性能を算出したところ、本例における白血球除去性能は４．８２であった（表１参照）。
白血球除去性能＝−ｌｏｇ{（白除赤血球製剤量（ｍＬ））×（白除赤血球製剤中白血球濃度（ｍＬ−１））／（赤血球製剤量（ｍＬ）×赤血球製剤中白血球濃度（ｍＬ−１））}  ．．．（式１）
【実施例２】
【００４３】
白血球除去システムの各血液バッグおよび白血球除去フィルターを積層する際、サテライトバッグ（２）の上に白血球除去フィルターを血液出口ノズル（５−ａ）が下側になるように重ねたこと以外は、実施例１と同じ方法で血液の処理を行なった。
本例における濾過時間は４３分、回収時間は３６分、処理時間は７９分であった。また、白除赤血球製剤に含まれる白血球の濃度を前記の自動血球計数装置を用いて測定したところ、０．３コ／μＬであった。本例における白血球除去性能は４．６４であった（表１）。
【比較例１】
【００４４】
白血球除去システムの各血液バッグおよび白血球除去フィルターを積層する際、血液入口ノズル（５−ｂ）の血液回路接続口が採血バッグ（１）の血液回路接続部分（１−ａ）と同一方向を向くように重ねたこと以外は、実施例１と同じ方法で血液の処理を行なった。
本例における濾過時間は５４分、回収時間は５１分、処理時間は１０５分であった。また、白除赤血球製剤に含まれる白血球の濃度を前記の自動血球計数装置を用いて測定したところ、０．６コ／μＬであった。本例における白血球除去性能は４．３４であった（表１）。
【比較例２】
【００４５】
白血球除去システムの各血液バッグおよび白血球除去フィルターを積層する際、サテライトバッグ（２）の上に白血球除去フィルターを血液出口ノズル（５−ａ）が下側になるように重ねたこと以外は、比較例１と同じ方法で血液の処理を行なった。
本例における濾過時間は６２分、回収時間は６８分、処理時間は１３０分であった。また、白除赤血球製剤に含まれる白血球の濃度を前記の自動血球計数装置を用いて測定したところ、２．４コ／μＬであった。本例における白血球除去性能は３．７４であった（表１）。
【実施例３】
【００４６】
〔白血球除去フィルターの作成〕
可撓性容器原材料シート及び白血球除去材料は実施例１と同様に作成した。該可撓性容器原材料シートの一つの通液用ノズルが設置されていない側の面に、高周波溶着機を用い、高さ１ｍｍ、底面直径２．２ｍｍの半球型の突起状構造が均等に底面間隔２．２ｍｍになるように形成し、スペーサーとした。
該白血球除去材料の両側から、前記可撓性容器原材料シートを、スペーサーを形成したシートが白血球除去材料のポリエステル不織不（Ｂ）が最外層となり、それぞれ白血球除去材料が中央に配置されるよう、また白血球除去材料を挟んで通液用ノズルが点対称に位置するように被せた上で、高周波溶着機を用いて溶着した。溶着は、第一の可撓性容器原材料、白血球除去材料および第二の可撓性容器原材料を外周が長さ８１ｍｍ、幅６４ｍｍ、内周が長さ７４ｍｍ、幅５７ｍｍ、内周と外周の距離が３．５ｍｍである形状の一体化溶着部分を形成するよう溶着した。さらに、第一の可撓性容器用原材料と第二の可撓性容器原材料の周縁部分を幅３．５ｍｍに高周波溶着機を用いて一体化溶着させ、図４に示すような白血球除去フィルターを作成した。
【００４７】
〔白血球除去システムの作成〕
上記の白血球除去フィルターを組み込んだ白血球除去システム（図５）は、実施例１と同様に作成した。
【００４８】
〔採血、遠心分離、血液成分の採取および白血球除去操作〕
実施例１と同様の方法で、採血、遠心分離から赤血球製剤の調製と白血球除去フィルターによる濾過、および処理に関する時間の計測、白血球濃度の計測、白血球除去性能の算出を行なった。
本例における濾過時間は３９分、回収時間は３５分、処理時間は７４分であった。また、白除赤血球製剤に含まれる白血球の濃度を前記の自動血球計数装置を用いて測定したところ、０．３コ／μＬであった。本例における白血球除去性能は４．６４であった（表１）。
【比較例３】
【００４９】
白血球除去システムの各血液バッグおよび白血球除去フィルターを積層する際、白血球除去フィルターの血液出口ノズル（５−ａ）の血液回路接続口が採血バッグ（１）の血液回路接続部分（１−ａ）と反対方向を向くように重ねたこと以外は、実施例３と同じ方法で血液の処理を行なった。
本例における濾過時間は５０分、回収時間は４８分、処理時間は９８分であった。また、白除赤血球製剤に含まれる白血球の濃度を前記の自動血球計数装置を用いて測定したところ、０．６コ／μＬであった。本例における白血球除去性能は４．３４であった（表１）。
【実施例４】
【００５０】
〔白血球除去フィルターの作成〕
血液出口側スペーサー（１５）として、平均繊維径１２μm、目付け３０ｇ／ｍ２、厚さ０．２１ｍｍのポリエステル不織布（Ａ）を４枚積層した不織布層を用いること以外は、実施例１と同じ構成および方法で白血球除去フィルターを作成した。
【００５１】
上記白血球除去フィルターを組み込んだ白血球除去システム（図５）を用いて、実施例１と同様の方法で血液の処理を行なった。
本例における濾過時間は４６分、回収時間は５０分、処理時間は９６分であった。また、白除赤血球製剤に含まれる白血球の濃度を前記の自動血球計数装置を用いて測定したところ、０．１２コ／μＬであった。本例における白血球除去性能は４．５２であった（表１）。
【比較例４】
【００５２】
白血球除去システムの各血液バッグおよび白血球除去フィルターを積層する際、白血球除去フィルターの血液出口ノズル（５−ａ）の血液回路接続口が採血バッグ（１）の血液回路接続部分（１−ａ）と反対方向を向くように重ねたこと以外は、実施例４と同じ方法で血液の処理を行なった。
本例における濾過時間は５８分、回収時間は７０分、処理時間は１２８分であった。また、白除赤血球製剤に含まれる白血球の濃度を前記の自動血球計数装置を用いて測定したところ、２．８コ／μＬであった。本例における白血球除去性能は３．６７であった（表１）。
【００５３】
【表１】
2006158738.tif 000003
【産業上の利用可能性】
【００５４】
本発明の白血球除去システムの遠心方法は、血液の濾過速度を落とすことなく安定して濾過でき、高い白血球除去能力を維持できるという効果を有するので、保存前白血球除去に用いられるクローズドシステムのうち、特に血液を遠心した後に白血球除去操作を行なうタイプのクローズドシステムに好適に利用できる。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】白血球除去システムの構成の一例を示す模式図である。
【図２】白血球除去システムの構成の他の例を示す模式図である。
【図３】血液入口または出口ノズルの構造の例を示す断面模式図である。
【図４】白血球除去フィルターの内部構造を示す断面模式図である。
【図５】実施例および比較例で用いた白血球除去システムの構成を示す模式図である。
【図６】白血球除去システムの各血液バッグおよび白血球除去フィルターを積層した状態の例を示す模式図である。
【図７】白血球除去システムを遠心カップにセットした状態および遠心分離中のカップ内の状態の例を示す模式図である。
【図８】遠心分離中における白血球除去システムのカップ内の状態の例を示す模式図である。
【符合の説明】
【００５６】
１          採血バッグ
１−ａ      血液回路接続部分
２〜４      サテライトバッグ
５          白血球除去フィルター
５−ａ      血液出口ノズル
５−ｂ      血液入口ノズル
６〜９      連結管
１０〜１２  Ｙ字接続管
１３        通路
１４        通液用ノズル
１５        スペーサー
１６        可撓性容器原材料
１７        溶着部分
２０        採血針
【図１】
2006158738.tif 000004
【図２】
2006158738.tif 000005
【図３】
2006158738.tif 000006
【図４】
2006158738.tif 000007
【図５】
2006158738.tif 000008
【図６】
2006158738.tif 000009
【図７】
2006158738.tif 000010
【図８】
2006158738.tif 000011