(57)【要約】    【課題】一般的に普及可能であり、かつ、安全に体外循環できる免疫抑制性蛋白質を吸着する材料を充填したカラムを用いて癌の治療を行う    【解決手段】免疫抑制性蛋白質を吸着する材料を充填してなる癌治療用体外循環カラム。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体を含む吸着材であって、潜在型トランスフォーミング・グロウス・ファクター・ベータ吸着能、および白血球吸着能を有する癌治療用吸着材。
【請求項２】
前記親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体が、膜、繊維または粒状物であることを特徴とする請求項１に記載の癌治療用吸着材。
【請求項３】
請求項１または２に記載の癌治療用吸着材を用いた癌治療用体外循環カラム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、担癌患者の癌の進行を抑制したり、癌患者のクオリティ・オブ・ライフ（以下、ＱＯＬ）の向上を図るための癌治療用吸着材及び癌治療用体外循環カラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
医学の発達した今日でも、依然として日本人の主たる死亡原因の一つが癌である。その原因は、転移巣のある進行癌患者では手術で取りきれない癌細胞が残るためであり、かつ、抗癌剤治療や放射線治療を使っても完全に除去できないためである。しかし、本来、生体には癌細胞を排除する免疫機能が備わっているはずであるので、手術で取りきれなかった癌細胞は免疫機能によって除かれるはずであるが、進行癌患者ではこれが起こらない。この理由については古くから免疫機能を抑制する物質が血液中に増えてくるためと考えられていて、以前は悪疫質と呼ばれていた。現在では具体的にトランスフォーミング・グロウス・ファクター・ベータ（以下、ＴＧＦβ）、免疫抑制酸性蛋白、インターロイキン６、腫瘍壊死因子（以下、ＴＮＦ）、プロスタグランジンＥ２などの種々の物質や、Ｂ細胞、マクロファージ等の細胞が免疫を抑制していることが分かってきた（藤原大美著、腫瘍免疫学、ｐ８９−１１２、中外医学社、１９９８年）。
【０００３】
これらの物質は健康な人の血液中にも存在する蛋白質で、本来は免疫作用を調整する有用な物質であるが、癌の進行に伴って異常に増え、癌細胞の増殖を助けていると考えられる。これらの物質が癌特異的キラー細胞の誘導や機能発現を阻害していると考えられるので、これらを除去すれば、患者の免疫力が高まり、腫瘍の退縮や増殖の抑制が期待できる。
【０００４】
プロスタグランジンＥ２、ＴＮＦおよびインターロイキン６は分子量が３万以下の比較的小さな分子であるので、除去しやすく、膜濾過法でも除去できる。一方、ＴＧＦβは単独では分子量２５０００程度の蛋白質であるものの、血中では他の蛋白質と結合（潜在型）して１０万前後の分子量で存在するため、従来の吸着材では吸着除去が困難な物質である。従って、癌患者の血液中から、異常に増えた潜在型ＴＧＦβを効率よく除去できる吸着材は知られていない。
【０００５】
また、免疫抑制酸性蛋白は分子量５万程度の蛋白質で、免疫を抑制すると言われており、癌の悪性度のマーカーとして臨床で利用されている。活性炭カラムでの除去も試みられたが、吸着能力が不十分だったためか治療効果が明確でなかった。また、活性炭は粉が出やすいので、直接、血液と接触する用途には向かない。
【０００６】
これら免疫抑制物質の除去には、理論上、血漿交換も有効であるが、除去効率が低く、感染の危険が避けがたい本質的な欠点がある。このための技術として、ＴＧＦβ（特許文献１，２）、癌胎児性抗原（特許文献３）、免疫抑制酸性蛋白（特許文献４）吸着を目的とした技術が開示されている。
【０００７】
また白血球単独除去については、繊維径を規定したフィルターに関する特許（特許文献５）が開示されているが、やはりＴＧＦβなどの免疫抑制成分の除去については全くそのアイデアさえ見られない。
【非特許文献１】藤原大美著、腫瘍免疫学、ｐ８９−１１２、中外医学社、１９９８年
【特許文献１】特開２００３−３３９８５４号公報
【特許文献２】特開２００４−２４８９５０号公報
【特許文献３】特開２００３−３１０７５１号公報
【特許文献４】特開２００３−１１１８３４号公報
【特許文献５】特開昭６０−１９３４６８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、かかる従来技術の問題点に鑑み、一般的に普及可能であり、体液中から、直接、ＴＧＦβや免疫抑制酸性蛋白などの免疫抑制物質を高い効率で選択的に吸着し、かつ、安全に体外循環できる免疫抑制性蛋白質を吸着する材料を充填したカラムを用いて癌の治療を行うことを目的とする。同時に、体液中の白血球を除去し、正常な白血球バランスに近づけることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、上記目的を達成するため次の構成をとる。
【００１０】
（１）親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体を含む吸着材であって、潜在型トランスフォーミング・グロウス・ファクター・ベータ吸着能、および白血球吸着能を有する癌治療用吸着材。
【００１１】
（２）前記親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体が、膜、繊維または粒状物であることを特徴とする前記（１）に記載の癌治療用吸着材。
【００１２】
（３）前記（１）または（２）に記載の癌治療用吸着材を用いた癌治療用体外循環カラム。
【発明の効果】
【００１３】
本発明により、体液中から、直接、ＴＧＦβや免疫抑制酸性蛋白などの免疫抑制物質を高い効率で選択的に吸着し、同時に、体液中の白血球を除去することできる。したがって、進行癌の治療または患者の延命およびＱＯＬの向上が可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
続いて、本発明についてさらに詳細に説明する。
【００１５】
本発明でいう、免疫機能抑制蛋白質とは哺乳動物の免疫機能を抑制する蛋白質であって血液中に存在するものをいい、例えばＴＧＦβ、免疫抑制酸性蛋白、インターロイキン６、ＴＮＦなどを指す。
【００１６】
本発明の癌治療用吸着材としては、免疫抑制性蛋白質を吸着するものであれば良く、吸着能力が大きいほど体外に出す血液量が少なくて済むので好ましいが、その吸着材の吸着能力の目安として、血中のＴＧＦβである潜在型トランスフォーミング・グロウス・ファクター・ベータ（以下、潜在型ＴＧＦβ）が基準物質になる。癌治療用体外循環カラムの吸着能力が潜在型ＴＧＦβとして、担癌哺乳動物の体重１キログラム当たり１００ｎｇ以上であることが望ましく、さらに進行癌では血中濃度が高くなっているので２５０ｎｇ以上であることが望ましい。吸着材１グラム当たりの潜在型ＴＧＦβ平衡吸着量にカラム充填量グラム数を掛けたものがカラムの吸着能力となる。
【００１７】
本発明における潜在型ＴＧＦβ平衡吸着量とは担癌ラットの血清１ｍＬに癌治療用吸着材３０ｍｇを入れ、３７℃で４時間振とうし、上清中のＴＧＦβ濃度を測定して、吸着前後の濃度差を癌治療用吸着材重量（０．０３ｇ）で除することにより求めた値である。上清中のＴＧＦβ濃度は、検体血清を酸で前処理して、潜在型ＴＧＦβを遊離型のＴＧＦβとした後、抗ＴＧＦβ抗体を用いる酵素免疫分析法によって求めることができる。ＴＧＦβに対しては市販の分析キットが利用できる。ＴＧＦβとしては、ＴＧＦβ1、ＴＧＦβ2、ＴＧＦβ1.2、ＴＧＦβ4、ＴＧＦβ5など、配列の違いでスーパーファミリーがあることが知られている。特にこれらのアミノ酸配列の相同性は高く、吸着材に吸着するときの性質は似通っている。ＴＧＦβの性質は基本的にＴＧＦβ1の性質で代表され、その定量のためには特にＴＧＦβ1の測定キットが汎用されている。
【００１８】
本発明における担癌哺乳動物とは、ヒト、猿、牛、馬、犬、猫、豚、羊などの陸生哺乳動物で、腫瘍が出来たものを意味する。
【００１９】
本発明の癌治療用体外循環カラムに詰める免疫抑制性蛋白質を吸着する癌治療用吸着材の量が少ないほど、体外に出す血液量が少なくて済むので、好ましいが、少なすぎると吸着能力が下がり効果が無くなるし、多すぎると生体への負担が大きくなる。一般に、安全上、体外循環時に体外の回路に回す血液の適正な量は、輸血のための採血が許される２００ｍＬ以下なら良いとされている。体重６０ｋｇのヒトの全血液量は約４．６Ｌであるので、体外に出す血液量が全血液量の４％以下なら許容されると言うことになる。一方、吸着材をカラムに充填した場合、血液を通すためには空隙率が１５％以上必要である。これらの条件から、カラムに詰める免疫抑制性蛋白質を吸着する材料の量は担癌哺乳動物の体重１キログラム当たり０．０５グラム以上、３．５グラム以下が好ましい。
【００２０】
本発明の癌治療用吸着材および癌治療用体外循環カラムは、血中で増加した顆粒球や単球等の白血球の吸着除去を同時に行うことができる。顆粒球や単球については高い除去性能を持つことが望ましく、インビトロでの除去評価で３５％以上が好ましくは、５０％以上の除去率を持つことがさらに好ましい。これら顆粒球や単球を吸着除去させるために、癌治療用吸着材の形態を適宜選択することが好ましい。具体的には癌治療用吸着材の形態を、繊維（複合糸、紡績糸等も含む。また、短繊維でも長繊維でもよい。）、膜、中空糸またはビーズとすることが好ましい。繊維は適宜、繊維構造物（織物、編物、不織布、綿状等）にして使用することができる。特に、顆粒球や単球の吸着除去能向上のためには、繊維、中空糸またはビーズの径を４μｍ以上２０μｍ以下とすることが好ましい。特に４μｍより径が小さくなると、リンパ球の吸着除去が多くなるため、メモリーセルの除去に繋がり好ましくない。さらに、リンパ球の除去率を抑え、顆粒球や単球の除去率低下につながらない５μｍ以上が好ましい。ただし、１０μｍ以上になると顆粒球や単球の除去率が低下してしまうため、２０μｍ以上となるとさらに低下することから、実用上２０μｍ以下であることが好ましい。ただし、血球の除去以外の目的で混合した繊維構造体などの径はこの限りではない。リンパ球の除去は、メモリーセルの低下につながりにくい理由から４０％以下とすることが好ましく、さらに安全性の観点で好ましくは３０％以下である。特に進行癌や末期癌では、血中のリンパ球数が減少しているため、２０％以下がさらに好ましい。
【００２１】
本発明の癌治療用体外循環カラムの調製は、本発明の癌治療用吸着材をカラム容器に充填することで達成される。その際の本発明の癌治療用吸着材の形態は、上記の通り、不織布、織物、編物、綿状、中空糸、ビーズ等の形態を採用することができる。容器の形状は特に限定されず、従来から体外循環カラムに使用されているものを採用することができるが、円筒状が一般的である。
【００２２】
本発明の癌治療用吸着材は、て親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体を含む。親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体の調製は、水不溶性担体と親水性アミンを溶媒中で反応させることにより達成される。
【００２３】
用いる水不溶性担体の具体例としてはポリスチレンで代表されるポリ（芳香族ビニル化合物）、ポリ（ｐ−フェニレンエーテルスルホン）や−｛（ｐ−Ｃ６Ｈ４）−Ｃ（ＣＨ３）２−（ｐ−Ｃ６Ｈ４）−Ｏ−（ｐ−Ｃ６Ｈ４）−ＳＯ２−（ｐ−Ｃ６Ｈ４）−Ｏ−｝ｎ−（ユーデルポリスルホン）などで代表されるポリスルホン系重合体、ポリエーテルイミド、ポリイミド、ポリアミド、ポリエーテル、ポリフェニレンサルファイドなどで、かつ、親水性アミンを固定化するための反応性官能基を有するものがあげられる。親水性アミンを固定化するための反応性官能基としては、ハロメチル基、ハロアセチル基、ハロアセトアミドメチル基、ハロゲン化アルキル基などの活性ハロゲン基、エポキサイド基、カルボキシル基、イソシアン酸基、チオイソシアン酸基、酸無水物基などをあげることができる。水不溶性重合体のさらに具体的な例としては、クロルアセトアミドメチルポリスチレン、クロルアセトアミドメチル化したユーデル・ポリスルホン、クロルアセトアミドメチル化したポリエーテルイミドなどがあげられる。さらに、これらのポリマーは有機溶媒に対し可溶であると、成型しやすい利点がある。
【００２４】
本発明でいう親水性アミン残基とは、単独では水に溶解もしくは水を溶解する親水性アミンがポリマーに化学的に結合した状態のものを意味する。さらに、親水性アミン残基のを形成する親水性アミンとしては、炭素数で言うと、窒素原子１個当たり炭素数１８以下であるものがこれに相当する。
【００２５】
さらに、親水性アミンの中でも、窒素原子１個当たり炭素数３以上１８以下、とりわけ、４以上１４以下のアルキル基を持つ第３級アミンから得られる第４アンモニウム基を結合したものが優れている。そのような第３級アミンの具体例としては、トリメチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ、Ｎ−ジメチルヘキシルアミン、Ｎ、Ｎ−ジメチルオクチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルラウリルアミン、Ｎ−メチル−Ｎ−エチル−ヘキシルアミンなどがあげられる。さらに、親水性アミンを構成するアルキル基が親水性基である水酸基やエーテル基を含むもの、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチル−６−ヒドロキシヘキシルアミンやＮ，Ｎ−ジメチル−４−メトキシブチルアミン等も親水性アミンとして好ましく用いうる。
【００２６】
本発明における親水性アミン残基の結合の密度は、水不溶性重合体の化学構造により異なるが、少なすぎるとその機能が発現しない傾向にあり、一方、多すぎると、固定化後の水不溶重合体の物理的強度が悪くなり、吸着材としての機能も下がる傾向にあるので、該密度は水不溶性重合体の繰り返し単位１モルあたり０．０１〜２．０モル、より好ましくは０．１〜１．０モルが良い。
【００２７】
本発明の癌治療用吸着材の表面積は、吸着材１グラム当たり０．１平方メートル以上であることが好ましく、より好ましくは、０．３平方メートル以上である。ただし無限に大きくはできないので、実際上、限界があり、１０平方メートル以下が好ましい。この表面積は水銀ポロシメトリー法で求めることができる。
【００２８】
本発明の癌治療用吸着材は、親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体を膜、繊維、粒状物等の形態に成型するか、あるいは親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体を、膜、繊維、粒状物等の形態を有する基材に被覆せしめるか、あるいは水不溶性重合体の膜、繊維、粒状物等の成型品に親水性アミン残基を結合させるか等により得ることができる。
【００２９】
親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体の成型品の製造には、水不溶性重合体の成型品に親水性アミンの溶液を接触させる不均一系反応の方法と水不溶性重合体の溶液と親水性アミンの溶液を混合して反応させた後、成型する均一系反応の方法とがある。不均一系反応の方法の一例としては、クロルアセトアミドメチル化ポリスルホンの繊維または中空糸などの成型品をジメチルヘキシルアミンやポリアルキレンイミン等のイソプロパノール溶液中に浸し、０〜１００℃の温度で反応させることにより、容易に達成される。均一系反応による方法の一例を述べると、クロルアセトアミドメチル化ポリスルホンの溶液中に対応したポリアミンを加えて、０〜１００℃の温度で反応させることにより、達成される。その量には特に制限はないが、可溶性のポリマーを得るためにはハロアセトアミドメチル基に対し１倍モル以上用いるのが望ましい。とりわけ、ポリアミンの場合は、可溶性の重合体を得るためには親水性アミンを大過剰用いるのが好ましい。
【００３０】
また、反応溶媒としては、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）などの極性の高い溶媒の方が反応が速く進む利点がある。不均一系反応では、親水性アミンが溶ける溶媒であれば良く、特に制限はない。均一系で反応させる場合には、水不溶性担体と親水性アミンの両方が溶解する溶媒、具体的にはテトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどが好ましく用いられる。また、成型品を表面処理する方法も可能で、そのためには水、メタノール、エタノールなどの、ポリスルホンを溶かさずに親水性アミンを溶かす溶媒が好ましく用いられる。
【００３１】
本発明における親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体をポリエステル繊維、ナイロン繊維、ポリフェニレンサルファイド繊維などの成型品の表面にコーティングすると、簡単且つ安価に表面積の大きな高次の成型品が得られる利点がある。コーティングは、本発明における親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体を塩化メチレンやテトラヒドロフランなどの低沸点溶媒に溶かしたものにナイロンの編み地や織物を浸したのち、溶媒を揮発させることにより容易に達成できる。また、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの溶媒に溶かしたものを水などのポリマーの貧溶媒に入れる湿式コーティング法も利用できる。コーティングされる成型品のポリマーはポリアミド、ポリウレタン、ポリイミド、ポリスルホン、ポリ塩化ビニル、ポリエステルなど、本発明における親水性アミン残基を結合した水不溶性重合体との接着性の良いものであれば何でも良く、その種類には特に制限はないが、ナイロン、ポリエーテルイミドなどのアミド系のポリマーが接着性が特に良いので、好ましく用いられる。
【００３２】
上記の成型や基材への被覆において、成型品や基材の形態に採用する繊維として、中空糸を用いることも好ましい。この場合、濾過の機能を具備した吸着材が作れるので、人工透析器として、あるいは、血漿分離器として使用しながら免疫抑制物質および白血球を除去できる利点がある。
【００３３】
本発明の癌治療用体外循環カラムは癌患者の治療やＱＯＬの向上の目的で、進行癌患者の体外循環治療に用いられる。また、本発明の癌治療用吸着材は、癌切除手術時に出血した血液を返えす際に、免疫抑制性蛋白質を除去しておく目的にも用いることができる。
【実施例】
【００３４】
以下、実験例により本発明をさらに具体的に説明する。
【００３５】
なお、本実施例中の評価方法は、以下に従った。
【００３６】
１．血液中の成分の分析
ＴＧＦβ濃度はゼンザイム・テクネ社のヒトＴＧＦ−β１免疫分析キットを使用して求めた。また免疫抑制酸性蛋白の濃度は、三光純薬社製のラットＩＡＰプレートを使用して求めた。アルブミン濃度はアルブミン分析キットであるアルブミンＢ−テストワコーで求めた。
【００３７】
２．吸着材のＴＧＦβ平衡吸着能
５匹の担癌ラットの血清を集めて担癌ラット血清３０ｍＬを調製した。この血清１ｍＬに吸着材５０ｍｇを入れ、３７℃で４時間振とうした。上清中のＴＧＦβ濃度を測定して、吸着前後の濃度差を吸着材重量（０．０５ｇ）で除した値をＴＧＦβ平衡吸着能とした。
【００３８】
３．吸着材の調製
（水不溶性重合体）
３６島の海島複合繊維であって、島が更に芯鞘複合によりなるものを次の成分を用いて、紡糸速度８００ｍ／分、延伸倍率３倍の製糸条件で得た。
島の芯成分；ポリプロピレン
島の鞘成分；ポリスチレン９０％、ポリプロピレン１０％
海成分；５−ナトリウムスルホイソフタル酸を３％共重合したポリエチレンテレフタレート
複合比率；芯：鞘：海＝４５：４５：１０
この繊維８５％と、直径１７μｍのポリプロピレン１５％からなるシート状物を作製した後、ニードルパンチすることによって不織布を得た。次に、この不織布を９５℃水酸化ナトリウム水溶液で２時間処理して海成分の５−ナトリウムスルホイソフタル酸を３％共重合したポリエチレンテレフタレートを溶解することによって、芯鞘繊維の直径が５μｍで、嵩密度が０．０７ｇ／ｃｍ3（総目付２５０ｇ／ｍ２）の不織布を作製した。
【００３９】
（中間体）
次に、ニトロベンゼン６００ｍＬと硫酸３９０ｍＬの混合液にパラホルムアルデヒド３ｇを２０℃で溶解した後、０℃に冷却し、７５．９ｇのＮ−メチロール−α−クロルアセトアミドを加えて、５℃以下で溶解した。これに５ｇの上記不織布１を浸し、室温で２時間静置した。その後、繊維を取り出し、大過剰の冷メタノール中に入れ、洗浄した。繊維をメタノールで良く洗った後、水洗し、乾燥して、７．０ｇのα−クロルアセトアミドメチル化ポリスチレン繊維（中間体１）を得た。
【００４０】
（吸着体）
Ｎ，Ｎ−ジメチルオクチルアミン５０ｇとヨウ化カリウム８ｇを３６０ｍＬのＤＭＦに溶かした溶液に５ｇの中間体１を浸し、８５℃のバス中で３時間加熱した。繊維をイソプロパノールで洗浄後、１ｍｏｌ／Ｌ濃度の食塩水に浸漬した後、水洗し、真空乾燥して、８．３ｇのジメチルオクチルアンモニウム化繊維（吸着体１）を得た。
【００４１】
また、Ｎ，Ｎ−ジメチルヘキシルアミン５０ｇとヨウ化カリウム８ｇを３６０ｍＬのＤＭＦに溶かした溶液に５ｇの中間体１を浸し、８５℃のバス中で３時間加熱した。繊維をイソプロパノールで洗浄後、１ｍｏｌ／Ｌ濃度の食塩水に浸漬した後、水洗し、真空乾燥して、９．３ｇのジメチルラウリルアンモニウム化繊維（吸着体２）を得た。
【００４２】
（スルホン化繊維：比較繊維）
また、パラホルムアルデヒド５００ｍｇを溶解した硫酸５０ｍＬに、５ｇの不織布１を浸し、９５℃で１時間加熱した後、水洗、１モル／Ｌ濃度の食塩水での洗浄、水洗、乾燥を逐次行って、７．３ｇのスルホン化繊維（比較吸着体１）を得た。
【００４３】
（担癌ラットの調製）
１２週令のＷＫＡＨ：Ｈｋｍラット（雄）の背部皮下に４−ジメチルアミノアゾベンゼン誘発肝癌細胞ＫＤＨ−８｛矢野  諭、北海道医誌、６８巻５号、６５４−６６４（１９９３）｝を２×１０８個接種した。癌細胞は１００％の確率で生着した。（通常接種１週間後から腫瘍が大きくなり、接種後、５．５週間で死亡する。）
（体外循環カラムの作成）
内径１ｃｍ内容積２ｍＬのポリプロピレン製円筒形カラムに吸着体１、吸着体２、比較吸着体１または直径２５μｍのポリエチレンテレフタレート繊維からなる不織布をそれぞれ充填して、癌治療用体外循環カラムを調製した。吸着材を各０．３８ｇ充填したものをそれぞれ実施例１（吸着体１）、実施例２（吸着体２）、比較例１（比較吸着体１）、比較例２（直径２５μｍのポリエチレンテレフタレート繊維）とした。同様に吸着材を各０．１８ｇ充填したものをそれぞれ実施例３（吸着体１）、実施例４（吸着体２）、比較例３（比較吸着体１）比較例４（直径２５μｍのポリエチレンテレフタレート繊維）とした。
【００４４】
（担癌ラットの調製と体外循環）
癌治療用体外循環カラムは体外循環前に１０００単位のヘパリンナトリウムを含む生理食塩水で予備洗浄し、さらに５００ｍＬの生理食塩水で洗浄して用いた。
【００４５】
ＫＤＨ細胞接種２週間後に２ｍＬ／ｍＬの血流で、６０分間、体外循環した。大腿動脈から採血し、吸着材カラムを通した後大腿静脈に返血した。体外循環中はヘパリンナトリウム注射液（武田薬品工業（株））を１００Ｕ／ｈｒの速度で持続注入した。
【００４６】
体外循環前と後のラットの血液を採取し、血清中のＴＧＦβ濃度を測定すると共に、癌細胞接種後の生存日数を観察し表１の結果を得た。
【００４７】
（インビトロ血球除去評価）
健常者ボランティアから２５ｍＬの血液を採取し、直ちに１０Ｕ／ｍＬのヘパリンを付与し、以下の循環を３時間以内に実施する。血液を３７℃に保ち、２ｍＬ／ｍｉｎの流量で、容量２ｍＬのカラム（吸着材を直径１ｃｍに打ち抜き所定量充填）を用いて９０ｍｉｎ循環し、カラム処理後の血液中の白血球を血球計数装置にて分画し、リンパ球数、顆粒球数（好中球）単球の除去率を計算する。基準となる除去率は６０ｍｉｎ時点の値とする。）
【００４８】
【表１】
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【００４９】
実施例１〜４はＴＧＦβの血中濃度が低下しており、比較例に比べ寿命も延びている。実施例１〜４と比較例１では体外循環後のＴＧＦβの血中濃度と癌細胞接種後寿命が反比例することが分かる。また、ＴＧＦβの血中濃度の低下は吸着材の使用量に比例して起きることが分かる。比較例ではＴＧＦβの血中濃度が下がらず、癌細胞接種後寿命も短かかった。また、治療しない場合の寿命は５．５週であるので、比較例１〜４からＴＧＦβの吸着能の低いカラムで体外循環すると、かえって寿命が短くなることがわかった。