(57)【要約】【課題】  安全な食品材料由来である食習慣があり豊富で有効利用されていない材料を由来とした、安全かつ安価な骨代謝改善剤を提供する。【解決手段】  本明細書により、トウモロコシ、ワイルドライスの親水性成分を有効成分とする骨代謝改善剤が提供される。本明細書の上記の剤は、安全であり、骨粗鬆症の予防／又は処置に有効である。本発明は、該骨代謝改善剤の製造方法と、該骨代謝改善剤を含む組成物、カプセル製剤、および濃縮エキスを提供する。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
トウモロコシ（Zea mays）、およびワイルドライス（Zizania latifolia Turcz.）材料からなる群より選択される材料の１種類以上の親水性成分を有効成分とする骨代謝改善剤。
【請求項２】
トウモロコシ（Zea mays）、およびワイルドライス（Zizania  latifolia Turcz.）材料からなる群より選択される材料の１種類以上の親水性成分を有効成分として含有する骨代謝改善用組成物。
【請求項３】
該トウモロコシ（Zea mays）材料がグルテンフィードを含む請求項２の骨代謝改善用組成物。
【請求項４】
飲食用である、請求項２または３の組成物。
【請求項５】
医薬用である、請求項２または３の組成物。
【請求項６】
該親水性成分を、組成物中で少なくとも１．０重量％以上含む、請求項２〜５いずれかの組成物。
【請求項７】
請求項２〜６いずれかの組成物をカプセル内に含む製剤。
【請求項８】
トウモロコシ（Zea mays）、およびワイルドライス（Zizania latifolia Turcz.）材料からなる群より選択される材料の１種類以上の親水性成分を含む濃縮エキス。
【請求項９】
有効量の、請求項２〜６いずれかの組成物、および請求項７の製剤から選ばれる少なくとも１種を、必要とする哺乳動物対象に投与することを含む、哺乳動物の骨代謝関連疾患の処置または予防方法。
【請求項１０】
有効量の、請求項２〜６の組成物および請求項７の製剤から選ばれる少なくとも１種を、必要のあるまたはない哺乳動物対象に投与することを含む、骨損傷の処置又は予防方法。
【請求項１１】
トウモロコシ（Zea mays）、ワイルドライス（Zizania  latifolia Turcz.）材料およびその加工物から選ばれる１種類以上を親水性溶媒に接触させ、その親水性成分を抽出すること、および該抽出物を許容される担体と混合すること、を含む骨代謝改善用組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、骨粗鬆症の予防又は処置に有用である骨代謝改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
哺乳動物の骨は骨吸収と骨形成を繰り返しており、骨形成に関与する細胞が骨芽細胞であり、骨吸収に関与する細胞が破骨細胞である。骨の成長、維持および修復は、これらの細胞の形成と吸収の速度バランスに依存しており、そのバランスが崩れることにより、骨吸収が骨形成を上回り、骨粗鬆症などの骨量が減少する骨代謝関連疾患がもたらされる。よって骨形成が骨吸収を下回らないことが骨量の維持や増強に重要である（非特許文献１）。
【０００３】
骨芽細胞は、生体内の様々な刺激により段階的に分化が進み、骨基質タンパクを分泌し、カルシウムを沈着して最終的に石灰化して骨を形成する細胞である。即ち骨芽細胞の分化段階が進み、石灰化することは骨形成につながる現象である（非特許文献２）。
【０００４】
骨粗鬆症は、骨を形成するカルシウムやコラーゲンの減少による骨量低下と骨組織の退行を引き起こす全身性の骨疾患である。骨粗鬆症は、高齢者の特に閉経後の女性に多く見られ、近年の高齢化に伴い増加し続けている。骨粗鬆症による骨の脆弱化は、疼痛や、骨折のリスク上昇を招くことから、寝たきりの原因となり、高齢者の生活の質に大きく影響を及ぼす問題となっている（非特許文献３）。
【０００５】
骨粗鬆症の原因は、性ホルモンの低下、カルシウムの摂取不足、ビタミンＤ不足、運動不足、カルシウム代謝調節ホルモンのアンバランスなどが挙げられる。その治療には、性ホルモンであるエストロジェン、カルシウム代謝ホルモン、ビタミンＫ2、活性型ビタミンＤ3、ビスフォスフェート化合物などの医薬品が使用されているが、投与量によっては安全性に問題がある場合があり、使用量や使用期間に注意を払う必要がある（非特許文献４）。
【０００６】
そのような状況から近年、食品を原料とした骨粗鬆症改善素材が開発され、食経験があることから、医薬品と比較して安全性が高いと考えられている。代表的な食品の骨粗鬆症などの骨量が減少する骨代謝関連疾患の改善素材に大豆イソフラボン、乳由来塩基性ペプチドなどがあり、近年、安全に日常的に摂取できる骨代謝改善素材として注目されている。また、カゼインフォスフォペプチドをはじめとして、骨の材料として必要なカルシウムの腸管吸収促進作用を持つ物質が知られている。しかし、これらのカルシウム吸収促進作用を有する物質は、消化管から体内へのカルシウム吸収を促進するものであり、骨へのカルシウム沈着を促進するものではない。そのため、骨代謝の改善や骨強化に十分な効果を得られない場合がある。
【０００７】
トウモロコシ（学名Zea mays）の種子は、世界的に古くから食されている。またコーンスターチの原料としても利用されている。トウモロコシからコーンスターチを採る際に副産物としてグルテンフィードが得られる。一般的にグルテンフィードはトウモロコシ種子を０.１%〜０.３％程度の亜硫酸水に浸漬して、胚乳の澱粉粒を包んでいる蛋白質の膜を崩壊させる工程で溶出する可溶成分を濃縮したコーンスティープリカーを、胚芽分離工程の後で研磨により除去された繊維に添加して乾燥させたものであり、コーンスターチの製造の際に得られる副産物である。コーンスティープリカーには糖分、無機成分、アミノ酸などが含まれることが知られている。ただしグルテンフィードは飼料以外の用途が少なく、十分に利用されていないのが現状である。又、トウモロコシ由来のミネラル組成物（特許文献３）は骨粗鬆症など骨量が減少する疾患の予防に有用な用途が見出されているが、ミネラル以外のトウモロコシ由来の親水性成分が骨代謝を改善することは知られていない。
【０００８】
ワイルドライス（学名Zizania  latifolia Turcz.）（日本名  真菰（マコモ））の種子は北アメリカで古くから穀物として食とされており、現在もサラダやスープなどで利用されている。ワイルドライスは皮膚外用剤としての効能が知見されているが（特許文献１）、その親水性成分に骨代謝改善効果があることは全く知られていない。
【特許文献１】特開平９−１４３０８７
【非特許文献１】日本臨床，２００２年，６０巻増刊号３，３４〜３７項
【非特許文献２】Bio clinica，２００１年，１６巻，２１８〜２２２項
【非特許文献３】日本臨床，２００２年，６０巻増刊号３，１２９〜１３８項
【非特許文献４】Bio clinica，２００１年，１６巻，１９６〜１９７項
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
このような状況下、食習慣があり豊富で有効利用されていない材料を由来とした、安全かつ安価な骨代謝改善剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、トウモロコシ、ワイルドライスの種子またはそれを由来とする材料の親水性成分に、骨形成を促進して骨強度を高め得る骨代謝改善作用があることを見出し、それを基に本発明を完成するに至った。
【００１１】
上記のような大量に生産されており、有効利用が十分になされていない穀物素材の親水性成分に骨代謝改善効果があることはこれまで全く知られていなかった。
【００１２】
即ち本発明が提供するのは以下の通りである。
[１]
トウモロコシ（Zea mays）、およびワイルドライス（Zizania  latifolia Turcz.）材料からなる群より選択される材料の１種類以上の親水性成分を有効成分とする骨代謝改善剤。
[２]
トウモロコシ（Zea mays）、およびワイルドライス（Zizania  latifolia Turcz.）材料からなる群より選択される材料の１種類以上の親水性成分を有効成分として含有する骨代謝改善用組成物。
[３]
該トウモロコシ（Zea mays）材料がグルテンフィードを含む骨代謝改善用組成物。
[４]
飲食用である、[２]または[３]の組成物。
[５]
医薬用である、[２]または[３]の組成物。
[６]
該親水性成分を、組成物中で少なくとも１．０重量％以上含む、[２]〜[５]いずれかの組成物。
[７]
[２]〜[６]いずれかの組成物をカプセル内に含む製剤。
[８]
トウモロコシ（Zea mays）、およびワイルドライス（Zizania  latifolia Turcz.）材料からなる群より選択される材料の１種類以上の親水性成分を含む濃縮エキス。
[９]
有効量の、[２]〜[６]の組成物、および[７]の製剤から選ばれる少なくとも１種を、必要とする哺乳動物対象に投与することを含む、哺乳動物の骨代謝の改善方法。
[１０]
有効量の、[２]〜[６]の組成物および[７]の製剤から選ばれる少なくとも１種を、必要のあるまたはない哺乳動物対象に投与することを含む、骨損傷の処置又は予防方法。
[１１]
トウモロコシ（Zea mays）、ワイルドライス（Zizania  latifolia Turcz.）材料およびその加工物から選ばれる１種類以上を親水性溶媒に接触させ、その親水性成分を抽出すること、および該抽出物を、許容される担体と混合すること、を含む、骨代謝改善用組成物の製造方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明品は、骨代謝関連疾患、例えば骨粗鬆症を始めとする骨量が減少する疾患の処置または予防に有効である。また、食経験のある材料を原料とするため、長期間飲食しても安全である。さらに、豊富にある安価な材料を利用できるため、安価で大量に本発明品を製造することが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本明細書の骨代謝改善剤および組成物は、トウモロコシ、およびワイルドライス材料からなる群より選択される材料またはその加工物の１種類以上の親水性成分を骨代謝改善活性が発揮できる範囲の有効量を含んでいればよい。
【００１５】
トウモロコシの使用部位は全草でもよいが、好ましくは種子、さらに好ましくは種子由来の加工物とするほうが良い。本明細書におけるトウモロコシの種子由来物の加工物とは、コーンスティープリカー、グルテンフィードを含む。好ましくは活性成分を多く含有し安価であるグルテンフィードとする方がよい。一般的にグルテンフィードはトウモロコシ種子を０.１%〜０.３％程度の亜硫酸水に浸漬して、胚乳の澱粉粒を包んでいる蛋白質の膜を崩壊させる工程で溶出する可溶成分を濃縮したコーンスティープリカーを、胚芽分離工程の後で研磨により除去された繊維に添加して、乾燥させたものであり、コーンスターチの製造の際に得られる副産物である。一般的にグルテンフィードには様々な成分が含まれているが、特に糖分、無機成分、アミノ酸、食物繊維などが豊富である。
【００１６】
ワイルドライスの使用部位は、全草でもよいが、好ましくは種子を用いた方がよい。一般的にワイルドライスには、様々な成分が含まれているが、特にタンパク質、葉酸、ビタミンＢ２、Ｂ６、ナイアシン、繊維などが豊富に含まれている。
【００１７】
本明細書でいう骨代謝改善とは、骨へのカルシウム沈着促進、とりわけ骨芽細胞に直接作用してその分化を促進し、石灰化させること、即ち骨芽細胞石灰化促進をいう。本明細書の骨代謝改善剤は、骨芽細胞の石灰化を介して、骨組織において骨形成を促進することで、骨代謝関連疾患を予防又は処置することができる。ここにいう骨代謝関連疾患は、骨量が減少する限り任意の疾患を意味する。骨代謝関連疾患の例は、限定されないが骨粗鬆症を含む。
【００１８】
骨代謝改善活性は、骨芽細胞を用いて測定することができる。具体的には、細胞に蓄積されたカルシウムを抽出して測定する方法（特開２００２−１７９５８５）Von Kossa染色（Journal of bone mineral research，１９９５年，１２巻，７７８〜７８５）などが挙げられる。また、骨芽細胞にはリン酸カルシウムの形態でカルシウムが沈着するため、骨代謝改善活性を評価する場合、一般にリン酸の供給源としてグリセロリン酸塩を添加した培地が使用される。さらに、一般的に骨芽細胞の分化促進は、その石灰化の促進につながると考えられている。よって例えばアルカリフォスファターゼ、オステオポンチン、オステオカルシンなどの骨芽細胞が分化する際に産生が亢進するマーカー物質（Endocrine reviews，１９９３年，１４巻，４２４〜４４２）の測定や、その遺伝子発現の測定によって確認してもよい。これらのうち少なくとも１種の測定において、サンプルの活性は一般に溶媒対照と比較し、溶媒対照よりも統計学的に有意に高い値を示すサンプルを「骨代謝改善活性あり」と評価する。さらに、上述の評価方法が妥当であるかを判断する目的で、骨芽細胞の石灰化を促進する既知の物質を用いて、溶媒対照より統計学的に有意に高い値を示すことを確認するほうが好ましい。骨芽細胞の石灰化を促進する既知の物質は限定しないが、ＢＭＰ−２（日本臨床，２００２年，６０巻増刊号３，４０〜４６）などが挙げられる。
【００１９】
本明細書における親水性成分とは、上記材料の親水性溶媒による抽出物を指す。また、本明細書での親水性溶媒とは、水、水に可溶性である溶媒、および両者の混合物を含む。具体的には、親水性溶媒は水、メタール、アセトン、エタノール、およびプロパノールを含む溶媒の１つ以上から選ばれる溶媒を含む。その混合の割合は限定しないが、抽出物が骨代謝改善活性を失わない範囲であればよい。好ましくは５割以上の水の割合がよい。好ましい実施態様では、本発明における骨代謝改善剤は、水のみを抽出溶媒としても好適に得ることができる。ある種の実施態様では、溶媒除去の容易さを考慮すると混合溶媒を用いても良い。その場合は、残留溶媒の安全性の点から水とエタノールの混合溶媒が好ましい。
【００２０】
本明細書における親水性成分の形態は、抽出液の形態でも良いし、溶媒を除去した形態や、溶媒を除去して適切な溶媒に再び溶解、懸濁した形態であっても良い。また、該親水性成分は、所望により飲食用または製薬用に許容される置換基で置換されてもよい。またさらに、該親水性成分は、所望により飲食用または製薬用に許容されるその塩、エステル、または配糖体の形態であってもよい。また、これらの親水性成分の形態は、骨代謝改善活性があり、骨代謝改善活性を失わない範囲であれば、飲食品や医薬品として不適当な物質を含有しない限り、抽出物のまま、精製又は半精製抽出物として使用できる。精製は、各種クロマトグラグラフィー法、例えばアフィニティークロマトグラフィー精製法、ろ過法、沈殿法、および遠心分離法、を使用しても良い。
【００２１】
本明細書における材料から親水性成分を得る方法は、例えば溶媒抽出法が挙げられる。溶媒抽出する場合、例えば、本明細書における材料を、約１〜２０倍量好ましくは約１〜１０倍量の上記溶媒にさらし、攪拌又は放置し、濾過又は遠心分離などにより抽出液を得ることができる。次いで、必要に応じて得られた抽出液を減圧下での濃縮、凍結乾燥法、スプレードライなどの方法により乾燥させても良い。溶媒にさらす際の材料は、生のまま、または乾燥させたものでもよいが、保存の点から乾燥させたものが好ましい。また、上記材料の形態は、原型、粉砕したもの、切断したもの又は粉末のいずれを用いてもよい。溶媒にさらす温度は、一般に約０〜１３０℃、好ましくは約１〜８０℃で行うが、室温つまり約１０〜４０℃で十分に本明細書における親水性成分を得ることができる。溶媒に接触させる時間は、普通約０．１時間〜１ヶ月、好ましくは約０．５時間〜７日間で好適に実施できる。
【００２２】
本発明の組成物は、濃度は限定されないが、上記親水性成分を含有する。好ましくは、該組成物は、上記親水性成分を、組成物基準で１．０重量％以上、１００重量％未満含有し得る。上記濃度の下限値の例は、２．０、３．０、４．０、５．０、１０．０、２０．０、３０．０、４０．０、５０．０重量％である。上記濃度の上限値の例は、９９．９９、９９．９、９９．０、９５．０、９０．０、８０．０重量％である。
【００２３】
本明細書でいう濃縮エキスとは、本明細書で挙げた植物材料、又はその加工物を親水性溶媒に接触させ、濃縮する工程により、単位重量あたりの、骨代謝改善活性のための有効成分含量を増加させているものをいう。濃縮エキスは、材料に含まれる有効成分の含有率が、該材料に含まれる濃度と比較して高いものをいう。具体的には、前記含有率は少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１５倍以上、好ましくは約２０倍以上、より好ましくは２５倍以上、およびもっとも好ましくは約３０倍以上である。濃縮は自然蒸発、蒸煮、減圧濃縮、凍結乾燥などの方法を使用できる。該濃縮エキスは材料中の低濃度の有効成分を濃縮している。よって該濃縮エキスを用いることにより、哺乳動物対象が少量の摂取量で容易に多量の有効成分を摂取することが可能となる。また、飲食物または、医薬組成物担体と混合して用いる場合、必要とする量の有効成分を低い配合比で添加することができるため、担体の持つ味や物性などの性状の変化を最小限にとどめることができる。
【００２４】
本明細書における飲食用組成物とは、本明細書における骨代謝改善剤又は親水性成分を一般的な食品に混合したものである。その用途は限定されず、例えば、一般食品、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）、健康食品、栄養補助食品などとして使用することができる。飲食用に許容される担体として具体的には、飲料、乳製品、発酵乳、乳酸菌飲料、加工乳、コーヒー飲料、ジュース、アイスクリーム、飴、ビスケット、ウェハース、ゼリー、スープ、麺類、を含むがそれに限定されるものではない。好ましくは飲料、乳製品、加工乳、発酵乳、乳酸菌飲料、ウェハース、ゼリーを含む。
【００２５】
本明細書における医薬組成物とは、本明細書における骨代謝改善剤および／又は親水性成分、および所望により医薬的に許容される担体を含有する組成物である。１実施態様では、医薬組成物はＯＴＣなど容易に入手可能な医薬品又は医薬部外品であり得る。その形態は限定されず、例えば、丸薬剤、液剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル錠剤、トローチ剤、シロップ剤、ドライシロップ剤を含む。好ましくはカプセル剤、液剤、エリクシル、錠剤、カシェ、座薬を含む。医薬組成物は、許容される製薬的手法に従って、例えば経腸投与のための組成物とすることができる。そのような本明細書の医薬組成物は、当業界に周知であるように、所望により医薬用に許容される担体と組み合わせた前記親水性成分の有効量を含む。医薬的に許容される担体は、経口、経腸、経皮、皮下、または非経腸投与のため好適な任意の不活性、有機または無機材料であり得、例えば水、ゼラチン、アラビアガム、ラクトース、微結晶性セルロース、スターチ、ナトリウムスターチグリコレート、燐酸水素カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、コロイド性二酸化ケイ素、などであることができる。そのような組成物はまた、発明の目的にあった他の薬理学的活性な作用物質、および慣行の添加物、例えば安定剤、湿潤剤、乳化剤、香味剤、緩衝剤、などを含みうる。発明の組成物は、前記のような経腸投与のためのほか、非経腸投与、例えば注射用溶液剤、スプレー剤、例えば経鼻スプレー剤、伝達可能調製品、例えば塗布剤、パッチなどのための組成物であることもある。
【００２６】
本明細書でいう組成物を含むカプセル製剤とは、上記の組成物を経口摂取に適したカプセルにより抱合したものである。カプセル中には飲食品および医薬品として許容される担体を含んでもよい。ソフトカプセル製剤は、哺乳動物対象にとって服用しやすいため好まれるため、本明細書の目的のために好ましい。
【００２７】
ソフトカプセル製剤は、従来用いられているソフトカプセルの製法により製造できる。例えばロータリー式全自動ソフトカプセル成型機を用いた打ち抜き法、二枚のゼラチンシート間に内容物を入れ金型で両面から圧縮して打ち抜く平板法或いは二重ノズルを用いた滴下法（シームレスカプセル等）等を用いて、カプセル皮膜に充填し、成型および乾燥することにより、ソフトカプセル製剤を製造できる。前記ソフトカプセルの原料は、例えばゼラチン、カラギーナンを含む。前記ソフトカプセルの形状は、各種の形状、例えばフットボール(ｏｖａｌ)型、長楕円型、チューブ型、球形、フィッシュ型、セルフカット型、等が挙げられる。好ましくは形状は、フットボールであり得る。また、前記ソフトカプセルの大きさは、目的に応じて適宜選定することができる。
【００２８】
本明細書における組成物、および製剤は、骨代謝関連疾患、例えば骨粗鬆症をはじめとする骨形成を必要とする症状の予防、処置効果があるとされる食品や食品添加物、例えば大豆、ザクロ等の抽出物、カルシウム、マグネシウム、ビタミンＤ、ビタミンＫ、コラーゲン等と同時に用いても良い。またその形態は限定されず、飲食物、医薬組成物、製剤、およびカプセル製剤を含む。好ましくは飲食物、カプセル製剤を含む。
【００２９】
本明細書における組成物および製剤は、有効量を、必要のある対象に投与することより骨代謝関連疾患、例えば骨粗鬆症の処置又は予防に有用である。本明細書における骨粗鬆症とは、骨量が低下し、骨微細構造が劣化して、骨折の起こりやすくなった全身性疾患のことである。必要とする対象とは、具体的には、上記の骨粗鬆症の症状に当てはまる対象、その予防を必要とするもの、およびその予防を心がけるものを含む。骨粗鬆症の予防を必要とするものとは、高年齢、女性、喫煙、過度のアルコール摂取、カルシウム摂取不足、ビタミンＤ不足、ビタミンＫ不足、卵巣機能不全、副腎皮質ステロイドの服用、および運動不足を含む骨粗鬆症となるリスクが高いとされている事象にあてはまるものである。本発明の骨代謝改善用組成物および製剤は、他の骨代謝関連疾患の処置または予防にも使用しうる。
【００３０】
本明細書における組成物、および製剤は、有効量を、必要のあるまたはない対象に投与することにより、骨損傷の処置又は予防に有用である。本明細書における骨損傷とは、骨量が減少するもしくは、骨の破壊を指す。具体的には、骨折、骨のひび、歯槽膿漏による歯槽骨の減少、運動不足による骨量減少を含む。好ましくは骨折、骨のひびを含む。必要のあるまたはない対象とは、骨損傷患者、その予防を必要とするもの、その予防を心がけるもの、および寝たきり、入院、ギプス固定などによる運動不足により骨量が減少して骨折のリスクの高いものを含む。
【００３１】
本明細書における有効量とは、本発明の剤を対象に投与した場合に、対象の骨代謝が改善される、骨損傷が予防または処置される、または骨粗鬆症が予防または処置される量である。該量は、対象の性別、健康状態、体重、年齢、栄養状態などにより異なるが、当業者は実験的または経験的に決定することができる。
【００３２】
本明細書でいう、トウモロコシ、ワイルドライスまたはその加工物の１種類以上を親水性溶媒に接触させることを含む骨代謝改善用組成物の製造方法とは、上述の材料を上述の親水性溶媒に接触させて、親水性成分、すなわち有効成分を抽出し、許容される担体と混合することを含む製造法である。許容される担体としては、上記飲食用に許容される担体および／又は医薬用に許容される担体があげられる。本発明の骨代謝改善改善用組成物、医薬組成物、飲食用組成物、濃縮エキスまたは製剤は、例えば以下のように製造する。前記植物材料を、所望により粉砕などの加工をし、これを前記の親水性溶媒と接触させ有効成分を抽出する。所望により、濃縮、精製、混合、および製剤化工程を実施する。もっとも、これらの工程は適宜順序を変更して実施できる。
【実施例】
【００３３】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３４】
（実施例１）ワイルドライスの親水性成分の調製
ワイルドライス１重量部に対して水５重量部に浸し常温で２日間、抽出した後、濾過により抽出液を得た。その抽出液を凍結乾燥して溶媒を除去し、粉末抽出物０．０２３５重量部を得た。
【００３５】
（実施例２）グルテンフィードの親水性成分の調製
グルテンフィード１重量部に対して水５重量部に浸し常温で２日間、抽出した後、濾過により抽出液を得た。その抽出液を凍結乾燥して溶媒を除去し、粉末抽出物０．１８重量部を得た。
【００３６】
（実施例３）骨芽細胞石灰化活性測定による骨代謝改善活性の測定
実施例１〜２で得られた各種抽出物について骨芽細胞石灰化活性を評価した。マウス骨芽様細胞（ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞）を９６穴プレートに ５×１０4 ｃｅｌｌｓ／穴播種し、１０％ ＦＢＳを含むα−ＭＥＭ培地で３７℃、５％ＣＯ2−９５％空気で３日間培養した。
【００３７】
３日後、各抽出物を１００μｇ/ｍｌ、又はＢＭＰ−２を０．２μｇ/ｍｌの濃度で添加した１０％のＦＢＳと、２ｍＭのグリセロリン酸２ナトリウムを含むα−ＭＥＭ培地に交換した。抽出物およびＢＭＰ−２は、水に溶解して溶液が培地の０．１％となるように加えた。培地は２〜３日おきに交換し、３７℃、５％ＣＯ2−９５％空気で１４日間培養後、骨芽細胞石灰化促進率（％）を測定した。
【００３８】
骨芽細胞の石灰化は細胞中に蓄積されたカルシウムを計測することにより評価した。培養後の細胞をリン酸生理食塩水（７．４）で１穴につき１００μｌで３回洗浄を行い、２Ｎ塩酸を５０μｌ/穴 添加し、室温で一晩さらしカルシウムを抽出した。この抽出したカルシウムをメチルキシレノールブルー（ＭＸＢ法）に基づくキット（カルシウムE-テストワコー；和光純薬株式会社製）を用いて定量した。骨芽細胞石灰化促進率は、抽出物と平行して石灰化活性を測定した溶媒（水）対照の値を１００％として計算した。
【００３９】
【表１】
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表１の結果から、本明細書の製造例１〜２の抽出物は、ＢＭＰ−２と同様に溶媒対照に比べて高い骨芽細胞石灰化促進活性、即ち骨代謝改善活性を有することを確認した。
【００４０】
（実施例４）ワイルドライス親水性抽出物のタブレットの製造
実施例１のワイルドライス親水性抽出物４５重量部、乳糖３５重量部、結晶セルロース１５重量部、ショ糖脂肪酸エステル５重量部を用い、ロータリー式打錠機により飲食用タブレットを製造した。
【００４１】
（実施例５）グルテンフィード親水性抽出物のタブレットの製造
実施例２のグルテンフィード親水性抽出物４５重量部、乳糖３５重量部、結晶セルロース  １５重量部、ショ糖脂肪酸エステル５重量部を用い、ロータリー式打錠機により飲食用タブレットを製造した。
【００４２】
（実施例６）ワイルドライス親水性抽出物のソフトカプセルの製造
実施例1のワイルドライス親水性抽出物を、４０重量部、オリーブ油５５重量部、グリセリン脂肪酸エステル５重量部の組成で混合、粉砕し、ゼラチン製カプセルに充填して、クコ抽出物を含有する飲食用カプセル剤を製造した。
【００４３】
（実施例７）グルテンフィード親水性抽出物のソフトカプセルの製造
実施例２のグルテンフィード親水性抽出物４０重量部、オリーブ油５５重量部、グリセリン脂肪酸エステル５重量部の組成で混合、粉砕し、ゼラチン製カプセルに充填して、クコ抽出物を含有する飲食用カプセル剤を製造した。
【００４４】
（実施例８）ワイルドライス親水性抽出物含有清涼飲料水の製造
実施例１のワイルドライス親水性抽出物１重量部、液糖３０重量部、クエン酸０．１重量部、香料０．５重量部、水１５０重量部を用い混合して、ワイルドライス親水性抽出物を含有する清涼飲料水を製造した。
【００４５】
（実施例９）グルテンフィード親水性抽出物含有清涼飲料水の製造
実施例２のグルテンフィード親水性抽出物１重量部、液糖３０重量部、クエン酸０．１重量部、香料０．５重量部、水１５０重量部を用い混合して、グルテンフィード親水性抽出物を含有する清涼飲料水を製造した。
【００４６】
（実施例１０）ワイルドライス親水性抽出物含有クラッカーの調製
実施例１のワイルドライス親水性抽出物１重量部、薄力粉１２０重量部、食塩１重量部、ベーキングパウダー２重量部、バター３０重量部の組成で常法によりワイルドライス親水性抽出物含有クラッカーを調製した。
【００４７】
（実施例１１）グルテンフィード親水性抽出物含有クラッカーの調製
実施例２のグルテンフィード親水性抽出物１重量部、薄力粉１２０重量部、食塩１重量部、ベーキングパウダー２重量部、バター３０重量部の組成で常法によりグルテンフィード親水性抽出物含有クラッカーを調製した。