(57)【要約】【課題】  従来は溶離液にアルカリ性水溶液を用いた場合、保持時間に経時的な変化があり、更に、検出に低波長紫外線を使用することができず、糖類および有機酸の分離分析が困難であった。【解決手段】  溶離液槽、デガッサー、ポンプ、インジェクター、分離用カラム、サプレッサー、紫外線吸収検出器、データ処理機および廃液槽からなる液体クロマトグラフ装置にポンプとインジェクター間に炭酸吸着カラムを、更に、カラムと紫外線吸収検出器の間にサプレッサーを挿入した。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
溶離液槽、デガッサー、ポンプ、インジェクター、分離用カラム、サプレッサー、紫外線吸収検出器、データ処理機および廃液槽からなる液体クロマトグラフ装置にポンプとインジェクター間に炭酸吸着カラムを、更に、分離用カラムと紫外線吸収検出器の間にサプレッサーを挿入して行う糖類および有機酸の分析方法。
【請求項２】
請求項１の炭酸吸着カラムは高圧用クロマト管に強陰イオン交換樹脂を充填したものからなり、これを使用する糖類および有機酸の分析方法。
【請求項３】
請求項１のサプレッサーは陽イオン交換膜あるいは陽イオン交換樹脂を充填したカラムを用いたものであり、これを使用する糖類および有機酸の分析方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は液体クロマトグラフィーによる糖類および有機酸の分析方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】  液体クロマトグラフィーによる糖類の分析方法は種々あるが、多く使われる方法は溶離液にアルカリ溶液、分離用カラムの充填剤に陰イオン交換樹脂を用い、検出器にパルスドアンペロメトリー検出器を用いる方法である。液体クロマトグラフィーによる有機酸の分析方法も種々あるが、本発明と類似するものとして溶離液にアルカリ性水溶液、分離用カラムの充填剤に低交換容量の陰イオン交換樹脂を用い、検出器に電気伝導度検出器を用いた方法、いわゆるイオンクロマトグラフィーと呼ばれる方法がある。
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】  しかしながら、どちらの方法においても測定中にアルカリ性である溶離液に空気中の炭酸ガスが溶け込み、測定目的の成分の保持時間が徐々に小さくなり、終には正確な測定が困難となる。更に、糖類の分析においては高価なパルスドアンペロメトリー検出器が必要になるし、有機酸の分析においては電気伝導度検出器を使用するため無機陰イオンの妨害を受ける。更に、多くの糖類および食品等に含まれる代表的な有機酸の紫外線吸収検出器による検出においては低波長紫外線を用いなければならないが、アルカリ性溶離液を用いるとこれ自身に紫外線吸収があり測定が困難になる。
【課題を解決するための手段】
【０００４】  本発明は、多くの場合溶離液として用いる水酸化ナトリウムの水溶液の調製の過程で、また使用中に空気中から溶け込んでくる炭酸ガスを除くため、ポンプとインジェクターの間に高圧用クロマト管に陰イオン交換樹脂を充填した炭酸吸着カラムを挿入し、分離用カラムに炭酸イオンが流れ込まないようにし、測定目的の成分の保持時間の変化を防ぎ、上記課題を解決したものである。
【０００５】  本発明は、また、分離用カラムと紫外線吸収検出器の間に陽イオン交換膜あるいは陽イオン交換樹脂を充填したカラムを用いたサプレッサーを挿入し、これにより溶出液のアルカリイオンを除き、糖類および有機酸の検出に多く用いられる波長１９０ｎｍ〜２１０ｎｍを用いての測定を可能とし、上記課題を解決したものである。このことにより、高価なパルスドアンペロメトリー検出器、あるいは無機陰イオンによる測定の妨害が大きい電気伝導度検出器を使用する必要がなく、通常よく使用される紫外線吸収検出器を用いた最も一般的な液体クロマトグラフィー装置で糖類および有機酸の測定が可能となる。
【実施例】
【０００６】  （実施例１）強陰イオン交換樹脂を内径４．６ｍｍ、長さ５０ｍｍのステンレス製カラムに充填しこれを炭酸吸着カラムとした。これを用い、溶離液槽、デガッサー、ポンプ、炭酸吸着カラム、インジェクター、分離用カラム、サプレッサー、紫外線吸収検出器、データ処理機および廃液槽からなる液体クロマトグラフ装置を組み、溶離液に１００ｍＭの水酸化ナトリウム水溶液を用い、分離用カラムとして内径４．６ｍｍ、長さ５０ｍｍのステンレスカラムに平均粒径５μｍの強陰イオン交換樹脂を充填したものを用い、サンプルにマルトースを用い、その保持時間を測定した。測定条件として、溶離液の流速は１ｍｌ／ｍｉｎ，カラム温度は４０℃、紫外線吸収検出器の波長は１９５ｎｍに設定した。【０００７】  測定結果を図１に示す。縦軸はマルトースの保持時間（分）で、横軸は分離用カラムへの通液時間である。プロットＡは炭酸吸着カラムを用いなかったときのマルトースの保持時間をプロットしたものである。分離カラムに徐々に炭酸イオンが蓄積し保持時間が通液時間と共に小さくなっている。一方、プロットＢは上記の炭酸吸着カラムを用いた場合で、約８０分程マルトースの保持時間は一定である。それまで炭酸イオンは炭酸吸着カラムに蓄積し、分離用カラムに届いておらず、その結果としてマルトースの保持時間は一定であり、炭酸吸着カラムの効果が現れている。【０００８】  （実施例２）実施例１に示した液体クロマトグラフ装置を用い糖類の分離測定を行った。炭酸吸着カラムは内径７．８ｍｍ、長さ７５ｍｍのステンレスカラムに強陰イオン交換樹脂を充填したものを用いた。分離用カラムには内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍのステンレスカラムに平均粒径５μｍの強陰イオン交換樹脂を充填したものを用いた。サプレッサーにはＳｅＱｕａｎｔ社製１１２０−１００を用いた。溶離液には１００ｍＭの水酸化ナトリウム水溶液を用いた。溶離液の流速は１ｍｌ／ｍｉｎ，カラム温度は３０℃、紫外線吸収検出器の波長は１９５ｎｍに設定した。  図２にその結果としての１０種類の糖類のクロマトグラムを示す。【０００９】  （実施例３）実施例１に示した液体クロマトグラフ装置を用い糖類の分離測定を行った。炭酸吸着カラムは内径７．８ｍｍ、長さ７５ｍｍのステンレスカラムに強陰イオン交換樹脂を充填したものを用いた。分離用カラムには内径４．６ｍｍ、長さ５０ｍｍのステンレスカラムに平均粒径５μｍの比較的低交換容量の強陰イオン交換樹脂を充填したものを用いた。サプレッサーにはＳｅＱｕａｎｔ社製１１２０−１００を用いた。溶離液には２ｍＭの水酸化ナトリウム水溶液を用いた。溶離液の流速は１ｍｌ／ｍｉｎ，カラム温度は４０℃、紫外線吸収検出器の波長は１９５ｎｍに設定した。  図３にその結果としての４種類の有機酸のクロマトグラムを示す。
【発明の効果】
【００１０】  以上述べたように、本発明は、通常よく用いられる液体クロマトグラフ装置に、高圧用クロマト管に強陰イオン交換樹脂を充填したものからなる炭酸吸着カラムをポンプとインジェクター間に、陽イオン交換膜あるいは陽イオン交換樹脂を充填したカラムを用いたサプレッサーを分離用カラムと紫外線吸収検出器間に挿入し、溶離液にアルカリ性水溶液を、検出に低波長紫外線を用いて、糖類および有機酸の保持時間の変化を抑え、他成分の妨害を少なくし、安定した測定を可能とした効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【図１】  本発明方法による炭酸吸着カラムの炭酸吸着の効果を示した通液時間とマルトースの保持時間の関係図である。
【図２】  本発明方法によって得た標準水溶液中の糖類のクロマトグラムである
【図３】  本発明方法によって得た標準水溶液中の有機酸のクロマトグラムである
【図１】
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【図２】
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【図３】
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