(57)【要約】【課題】  クリーンルームまたはクリーンベンチ等の無菌環境を担保できる施設または装置を用いることなく、簡便な操作により、治療用の細胞／多孔質体複合体を無菌的に作製する器具を提供すること。【解決手段】  密閉することが可能で、内部の圧力を変化させる手段に接続可能なバルブ、および細胞を注入する手段に接続可能なバルブを具備したチャンバーを用いることにより、多孔質体中に細胞を効率的かつ簡便に保持させることができる。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
密閉されたチャンバー内で無菌的に細胞を多孔質体内に播種することができる器具であって、チャンバー内の圧力を変化させる手段、および細胞を注入する手段に接続可能なバルブを有する細胞播種器具。
【請求項２】
チャンバー内の圧力を変化させる手段が、注射筒を用いて達成される請求項１記載の器具。
【請求項３】
チャンバー内の圧力を変化させる手段が、コンプレッサーを用いて達成される請求項１記載の器具。
【請求項４】
細胞を注入する手段が、シリンジに連結されたノズルを用いて達成される請求項１記載の器具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は治療用の細胞と多孔質体との複合体を無菌的に作製することができる装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
再生医療の分野では、治療用の細胞を患者体内に移植するための手段として、細胞を多孔質体に保持させた細胞／多孔質体複合体が用いられることが多い。多孔質体に細胞を注入し、保持させるためには、該多孔質体内部に培地、生理食塩水などの液体を浸透させ、多孔質体に含まれる個々の孔の表面を濡らした後、治療用の細胞を注入することが必要である。多孔質体内部に液体を浸透させ、個々の孔の表面を濡らすためには、該多孔質体を液体に浸した上で、個々の孔内に含まれる空気を脱気する必要がある。上記の操作は、通常デシケーターや注射筒
また該操作は、無菌的な環境下で行うことが必須であり、クリーンルーム、またはクリーンベンチなどの無菌環境を担保する施設、または装置を、手術室等の該複合体を患者に移植する施設の近傍に具備する必要があった。
【０００３】
特開２００４−１６７２３６は、気管片を、非イオン性界面活性剤で処理し、効率的に細胞を播種する方法を開示する。しかし、無菌性を担保する方法は開示されていない。特開平１１−０５６３４３は、リアクター内の培養基材に細胞を播種する方法を開示する。しかし、密閉されたチャンバーを用いることは開示されていない。
【特許文献１】特開２００４−１６７２３６
【特許文献２】特開平１１−０５６３４３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、クリーンルームまたはクリーンベンチ等の無菌環境を担保できる施設または装置を用いることなく、簡便な操作により、治療用の細胞／多孔質体複合体を無菌的に作製する器具を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、密閉することが可能で、内部の圧力を変化させる手段に接続可能なバルブ、および細胞を注入する手段に接続可能なバルブを具備したチャンバーを用いることにより、多孔質体中に細胞を効率的かつ簡便に保持させることができ、さらに手術室内に持ち込むことのできる器具を発明した。
【０００６】
すなわち、本発明が提供するものは、以下の通りである。
（１）密閉されたチャンバー内で無菌的に細胞を多孔質体内に播種することができる器具であって、チャンバー内の圧力を変化させる手段、および細胞を注入する手段に接続可能なバルブを有する細胞播種器具。
（２）チャンバー内の圧力を変化させる手段が、注射筒を用いて達成される（１）記載の器具。
（３）チャンバー内の圧力を変化させる手段が、コンプレッサーを用いて達成される（１）記載の器具。
（４）細胞を注入する手段が、シリンジに連結されたノズルを用いて達成される（１）記載の器具。
【発明の効果】
【０００７】
本発明による器具を用いることにより、クリーンルーム、クリーンベンチ等の施設、装置を用いることなく、手術室内で治療用の細胞／多孔質体複合体を無菌的かつ簡便に作製することができ、細胞／多孔質体複合体を用いた治療が効率的に行えるようになる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
以下、本発明を詳細に説明する。
【０００９】
本発明が対象とする細胞には、特に制限はないが、基本的には再生医療の分野において用いられる治療用細胞である。具体的な細胞としては、間葉系幹細胞が挙げられる。
【００１０】
本発明で言う、多孔質体とは、その内部に治療用細胞を保持させて、患者に移植することにより、移植された該細胞が患者の体内で分散しないようにするための細胞保持担体のことを指す。
【００１１】
本発明で言うチャンバーとは、その内部に多孔質体を収納することによって外部の環境から隔離し、外部の環境の影響を受けない状態を保ちながら、細胞／多孔質体複合体の作製を行うための容器を指す。
【００１２】
本発明で言うチャンバー内の圧力を変化させる手段とは、具体的には、上記のチャンバー内の気圧を上昇させる、あるいは低下させるために要する圧力を生成させる器具、または装置を指す。
【００１３】
本発明で言う細胞を注入する手段とは、具体的には、チャンバー内に収納された多孔質体に、チャンバー外部から細胞を注入する器具、または装置を指す。
【００１４】
本発明が提供する細胞播種器具の構造を図面により説明する。図１および図２は本発明が提供する細胞は細胞播種器具の一態様を示す。図１は、密閉されたチャンバー内の圧力を変化させ、多孔質体内部に含まれる空気を脱気し、多孔質体の個々の孔の表面を濡らす操作を行っている状態を示している。図２は、上記の操作が終了した多孔質体に、細胞を注入している状態を示している。
【００１５】
本発明が提供する細胞播種器具は、密閉可能なチャンバー（１）とチャンバー内の圧力を変化させる手段（３）、および細胞を注入する手段に接続可能なバルブ（２）から構成される。密閉されたチャンバー内の圧力を変化させ、多孔質体内部に含まれる空気を脱気し、多孔質体の個々の孔の表面を濡らす操作を行っている状態（図１）では、該バルブは、チャンバー内の圧力を変化させる手段の一態様である圧力発生器（３）に接続されている。また、多孔質体に細胞を注入している状態（図２）では、該バルブは、細胞を注入する手段の一態様である細胞注入用シリンジ（４）に連結された細胞注入用ノズル（５）に接続されている。チャンバー内には多孔質体（６）が収納されているが、チャンバー内の圧力を変化させる操作、多孔質体に細胞を注入する操作などが容易に行うことができるように、多孔質体をチャンバー内の一定の位置に固定する固定具（７）が具備されていることが好ましい。
【００１６】
本発明が提供する細胞播種器具に含まれる密閉可能なチャンバーは、内部に多孔質体を収納することができ、かつ密閉することができるものであれば、材質に関して特に制限はないが、圧力の変化に対して、またオートクレーブやγ線滅菌などの滅菌操作に耐性を有する必要があるため、好ましくは、金属、陶器、ガラス、あるいはプラスチックなどの合成樹脂などが挙げられる。さらに、外部からの視認性の点から、ガラス、あるいはアクリル樹脂やポリカーボネートなどに代表される透明性のある合成樹脂が挙げられる。また、チャンバーの構造や形状に関しても、特に制限はなく、箱状、筒状、袋状、チューブ状など任意に選ぶことができる。
【００１７】
本播種器具に含まれる、チャンバー内の圧力を変化させる手段の一態様である圧力発生器は、外部の環境をチャンバー内に持ち込むことなく、チャンバー内の圧力を変化させることができるものであれば、いかなるものも使用することができる。好ましい具体例の１つとして、注射筒が挙げられる。注射筒を用いた場合、多孔質体の周囲を液体で覆うために培地や生理食塩水などの液体をチャンバー内に注入する操作も、注射筒を用いて行うことができるため好都合である。また、圧力発生器としてコンプレッサー等の圧力発生装置を適用することも可能である。この場合、注射筒よりも大きな圧力変化をもたらすことができる点が好都合である。一連の操作を通じて無菌性を確保する必要があることから、圧力発生器は、無菌フィルター（８）などを介してバルブと接続されていることが好ましい。また、該圧力発生器は、チャンバー内の圧力を変化させる操作が終了した時など、必要がなくなればバルブから取り外すことができるように、接続部が脱着可能になっていることが好ましい。
【００１８】
本播種器具細胞では、細胞を注入する手段の一態様として細胞注入用ノズルが用いられているが、細胞に負の影響を与えることなく、かつ無菌的に、チャンバー内に収納された多孔質体内部に細胞を注入できるものであれば、いかなるものでも適用できる。細胞注入用ノズルは、細胞に負の影響を与えることなく、かつ無菌的に、チャンバー内に収納された多孔質体内部に細胞を注入できるものであれば、その材質、構造、形状等に特に制限はない。細胞は、細胞注入用ノズルを介して多孔質体上に滴下されるため、該ノズルは多孔質体の真上に配置されている。該ノズルはまた、細胞注入用シリンジに連結されているが、注入量を調節するための調節コック（９）が具備されていることが好ましい。また、該ノズルは、バルブと接続されているが、細胞を注入する操作が終了した時など、必要がなくなればバルブから取り外すことができるように、接続部が脱着可能になっていることが好ましい。
【００１９】
次に本播種器具を用いた細胞／多孔質体複合体の作製法について説明する。まず、多孔質体をチャンバー内に収納する。この場合、多孔質体は開いたバルブを介してチャンバー内に導入されるが、バルブとは別に開口部を設けて多孔質体の出し入れを行ってもよい。チャンバー内に導入された多孔質体は、固定具によりチャンバー内の一定の位置に固定される。続いてチャンバー内に液体が導入される。この時に用いられる液体は、細胞に対して負の影響を与えないことから、細胞培養用培地、あるいは生理食塩水、リン酸緩衝液などが好ましい。液体の導入は、開いたバルブを介して行われるが、この時バルブに接続した注射筒を用いることが、無菌性を確保する点から好都合である。チャンバー内に液体が満たされた後、圧力発生器として用いている注射筒のピストンを上下させることにより、あるいはコンプレッサーを用いることにより、チャンバー内の圧力の上昇（加圧）、下降（減圧）を繰り返す。チャンバー内の圧力を上記のように変化させることにより、多孔質体の内部に含まれる空気が脱気され、個々の孔に液体が満たされる。この後、バルブを介してチャンバー内の液体が排出されるが、この時も注射筒を用いると無菌性を確保する点から好都合である。上記の操作により、個々の孔の表面が濡れた状態の多孔質体が得られる。
【００２０】
上記に示されたように、本発明により提供される細胞播種器具を用いることにより、クリーンルームまたはクリーンベンチ等の無菌環境を担保できる施設または装置を用いることなく、簡便な操作により、治療用の細胞／多孔質体複合体を無菌的に作製することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】本発明の好ましい一態様である細胞播種器具の模式図（圧力変化操作時）
【図２】本発明の好ましい一態様である細胞播種器具の模式図（細胞播種操作時）
【符号の説明】
【００２２】
１：チャンバー
２：バルブ
３：圧力発生器
４：細胞注入用シリンジ
５：細胞注入用ノズル
６：多孔質体
７：固定具
８：無菌フィルター
９：調節用コック
【図１】
2006254704.tif 000002
【図２】
2006254704.tif 000003