(57)【要約】【課題】  アメリカ腐蛆病の防除にあたり、抗生物質などを用いることによる人体や生態系に与える影響がない、安全な防除剤と防除方法を開発すること。【解決手段】  ツヤ酸及び／又はツヤブリシンを有効成分として含むことを特徴とする蜜蜂のアメリカ腐蛆病の防除剤並びに防除剤を蜜蜂の巣箱及び／又は巣脾面に散布すると共に、餌及び人工花粉に該防除剤の４０〜２４０倍希釈液を添加して蜜蜂に投与することを特徴とする蜜蜂のアメリカ腐蛆病の防除方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ツヤ酸、又はツヤ酸及びツヤブリシンを有効成分として含むことを特徴とする蜜蜂のアメリカ腐蛆病の防除剤。
【請求項２】
ツヤ酸、又はツヤ酸及びツヤブリシンが、ウェスターン・レッドシーダー破砕物の抽出物である請求項１記載の防除剤。
【請求項３】
ウェスターン・レッドシーダー破砕物の抽出物が、精油成分として８００〜２０００μｇ／ｍＬ含有する原液もしくはその１２０倍希釈までの希釈液である請求項１又は２記載の防除剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の防除剤を蜜蜂の巣箱及び／又は巣脾面に散布すると共に、餌及び人工花粉に請求項１又は２記載の防除剤の４０〜２４０倍希釈液を添加して蜜蜂に投与することを特徴とする蜜蜂のアメリカ腐蛆病の防除方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、蜜蜂のアメリカ腐蛆病の防除剤及び防除方法に関し、詳しくは天然物由来の物質を有効成分として含み、蜜蜂に対して悪影響を与えることのないアメリカ腐蛆病の防除剤及び防除方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
蜜蜂のアメリカ腐蛆病は、グラム陽性菌であるバチルス属細菌Bacillus  larvae（別名
Paenibacillus larvae）を原因菌とする細菌性疾患であり、西洋ミツバチに特有の病気である。本病は、伝染力が極めて強く、法定伝染病であることから、発症が確認された蜜蜂は、ただちに焼却処分することが義務づけられている。そのため、養蜂家に与える被害は甚大である。
【０００３】
蜜蜂のアメリカ腐蛆病の防除方法として、これまでに抗生物質（例えば、塩酸クロルテトラサイクリン飲水添加剤ＣＴＣ可溶散「タケダ」、武田薬品工業（株）製、「ミロサマイシン」、ミタカ製薬（株）製）を使用する方法や、サルファ剤を用いる方法が報告されている。後者の方法は、抗菌作用を有するスルファモノメトキシン、スルファジメトキシンなどのサルファ剤を、給餌器により蜜蜂に投与したり、巣脾面へ噴霧、または塗布する方法である（特許文献１参照）。
【０００４】
【特許文献１】特公昭５８−４２８４５号公報
【０００５】
しかし、これらの薬剤の使用は、作業する人の身体に悪影響を与えるおそれがある他、その残留が社会問題となることがある。その上、薬剤を用いて生産された蜂蜜の摂取は消費者の健康を害することが懸念される。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
このように、従来の防除方法では、抗生物質などを用いることによる人体や生態系に与える影響が懸念される。そのため、かかる心配のない防除方法の開発が望まれている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
そこで、本発明者らは天然物由来の成分に着目して、アメリカ腐蛆病の防除に活用するため研究を重ねた。
その結果、ヒノキ科樹木の１種であるスギからの抽出物がアメリカ腐蛆病の原因菌であるバチルス属細菌Bacillus  larvaeに対して高い抗菌作用を有することを見出した。さらに、該抽出物を蜜蜂に投与する場合、幾つかの方法を組み合わせて投与することによって本菌を完全に防除し、投薬後も病原菌が検出されないことを確認した。本発明は、かかる知見に基づいて完成されたものである。
【０００８】
請求項１記載の本発明は、ツヤ酸、又はツヤ酸及びツヤブリシンを有効成分として含むことを特徴とする蜜蜂のアメリカ腐蛆病の防除剤である。
請求項２記載の本発明は、ツヤ酸、又はツヤ酸及びツヤブリシンが、ウェスターン・レッドシーダー破砕物の抽出物である請求項１記載の防除剤である。
請求項３記載の本発明は、ウェスターン・レッドシーダー破砕物の抽出物が、精油成分として８００〜２０００μｇ／ｍＬ含有する原液もしくはその１２０倍希釈までの希釈液である請求項１又は２記載の防除剤である。
請求項４記載の本発明は、請求項１〜３のいずれかに記載の防除剤を蜜蜂の巣箱及び／又は巣脾面に散布すると共に、餌及び人工花粉に請求項１又は２記載の防除剤の４０〜２４０倍希釈液を添加して蜜蜂に投与することを特徴とする蜜蜂のアメリカ腐蛆病の防除方法である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、天然物に由来する物質を有効成分として用いる、蜜蜂のアメリカ腐蛆病の防除剤並びに防除方法が提供される。本発明は、人体や環境などへの影響がない安全なものであり、しかも確実な効果を期待できる。
さらに、本発明に用いる有効成分は、成蜂、蜂児に対して影響を与えない上に、蜂蜜中への残留もほとんど認められない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下に本発明を詳細に説明する。
本発明に用いるツヤ酸やツヤブリシンは、ヒノキ科植物、例えばカナダやアメリカで産出されるスギから抽出される成分であり、抗菌作用、殺菌作用を有していることが知られている。特に、β−ツヤブリシン（ヒノキチオール）は、多くの生理作用や抗菌作用が報告されており、防腐剤、育毛剤、化粧品などに利用されている。
しかし、ヒノキ科植物からの抽出物に関して、蜜蜂のアメリカ腐蛆病の病原菌であるBacillus  larvaeに対する抗菌作用については未だ報告はない。
【００１１】
本発明に用いるツヤ酸、ツヤブリシンは、上記したように、ヒノキ科植物の抽出物に含まれている。ヒノキ科植物としては、スギ、ヒノキ、ユーカリなど様々な樹木を使用できるが、とりわけウェスタン・レッドシーダーが好ましい。その理由は、ツヤ酸、ツヤブリシンの含有量が多いこと、ヤニがなく取り扱いに好都合である上に、おがくずや端材が安定的に入手できること等である。
【００１２】
本発明に用いる有効成分の抽出に用いるヒノキ科植物の部位としては葉、枝、及び材部の各部位を挙げることができるが、好ましいものは用材に利用される際に生じる破砕物、例えばおがくず、端材（チップ）である。
【００１３】
本発明において、ツヤ酸、ツヤブリシンは、ヒノキ科植物から蒸留法、抽出法、圧搾法などの様々な方法で採取でき、具体的には超臨界流体抽出（液化ガス抽出）、熱水蒸留、水蒸気蒸留などの方法により、抽出物を得ることができる。この抽出物には、精油及びアブソリュートが含まれる。これらをアルコールなどに溶解し、必要に応じてさらに水で希釈したもの等が用いられる。なお、抽出方法としては、水蒸気蒸留法が好ましい。この場合、水蒸気蒸留時の留分の水層（留出液）も使用することができる。
本発明の防除剤は、上記抽出物をそのまま用いる他、用時に適当に希釈して用いる。通常は、抽出物を０．１〜２％含む留分の水層（留出液）を原液として使用する。
【００１４】
本発明に係る防除剤の使用方法としては、１）原液または水で５０〜１２０倍程度までに希釈して、月に２、３回噴霧器を用いて１群あたり３００〜４００ｍＬを巣箱内部や巣脾面に直接噴霧する。２）原液を餌（糖液や蜜）で１００〜２４０倍程度に希釈し、給餌器を用いて１群あたり約１．８Ｌを蜜蜂に摂取させる。（流蜜がない蜜切れ時、越冬期に投与）３）原液に対し、４０〜１００倍重量の人工花粉を産卵の活性化に繋がる時期（２月〜３月および７月〜１０月）に蜜蜂に投与もしくは摂取させるなどの方法があり、上記１）から３）の方法を組み合わせて行うことが必要である。
【００１５】
なお、本剤を上記の方法で蜜蜂に投与もしくは摂取させても、前述のように、成蜂、蜂児には全く影響を与えず、蜜中への薬剤の残留もほとんど認められないので、公衆衛生的にも何ら問題をもたらすことはない。
【実施例】
【００１６】
以下に、本発明を実施例等により詳しく説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
【００１７】
（製造例１）
ウエスタン・レッドシーダーのおがくず５０ｇをナス型フラスコに入れ、これに水５００ｍＬを加え、水蒸気蒸留して精油成分を含む留分の水層（樹木抽出液Ａ）４００ｍＬを得た。
得られた樹木抽出液Ａの成分を分析したところ、精油成分含量は１０００μｇ／ｍＬであり、これはツヤ酸を３３％、ヒノキチオールを１１％含んでいた。
【００１８】
（試験例１）Bacillus larvaeに対する抗菌性
（Ａ）製造例１で得た樹木抽出液Ａおよび（Ｂ）市販の天然ヒバ精油（イーストエコ製、ヒノキチオール含有量：２％）を水で希釈し、精油成分含量１０００μｇ／ｍＬとしたもの並びに対照としてヒノキチオール（和光純薬工業製）を少量の９９％エタノールに溶解し、水でヒノキチオール含有量１０００μｇ／ｍＬに調製した水溶液を用いて、Bacillus larvaeに対する抗菌性について試験した。
【００１９】
試験は、寒天平板希釈法により、供試菌のアメリカ腐蛆病に罹患した蜜蜂の巣脾から単離したBacillus larvaeの最小発育阻止濃度を測定することにより実施した。すなわち、上記の薬剤を、１００、５０、１０または１μｇ／ｍＬの各濃度で添加した寒天平板培地（トリプトソイヤブイヨン培地）に、１０８ＣＦＵ/ｍＬとなるように調製した供試菌液を１白金耳画線し、４０℃で２４〜９６時間培養して該菌の発育の有無を調べた。なお、標準菌として大腸菌（NIHJ株）を使用し、同様に試験した。
【００２０】
結果を表１に示す。表から明らかなように、樹木抽出液Ａは、大腸菌に対しては抗菌性を示さなかったが、アメリカ腐蛆病菌に対しては他の薬剤に比べて高い抗菌性を示した。よって、樹木抽出液Ａは、アメリカ腐蛆病菌Bacillus larvaeに特異的な抗菌性を示すことが分かる。
【００２１】
【表１】
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×はその濃度で発育を阻止したことを示す。
○はその濃度で発育がみられたことを示す。
【００２２】
（実施例１）アメリカ腐蛆病の予防と治療
期間：  平成１４年１０月〜平成１５年９月
方法：  蜜蜂１群は巣脾を約８枚群とした。
（1）アメリカ腐蛆病罹患蜜蜂群１群と健康な蜜蜂群５群の計６群を１グループとし、樹木抽出液の散布濃度別に４グループを作り、それぞれ別のビニールハウス内に隔離し、巣箱外で餌（蜜または糖液）を与えて飼育した。
【００２３】
（2）樹木抽出液散布方法は、原液（精油成分含量１０００μｇ／ｍＬ）、水で希釈した５０倍希釈液、１００倍希釈液、および２００倍希釈液の４種類に分けて、巣脾または巣箱内部に十分散布して行った。
なお、薬剤の散布、投与の回数は、月２〜３回とし、散布１回につき１群約３００ｍＬ〜４００ｍＬ程度を投与した。
（3）結果：  原液を散布した区では、７〜９月に各１例ずつの発症が認められたにすぎず、５０倍希釈液を散布した区では、６〜９月に各１例ずつの発症が認められたにすぎなかった。また、１００倍希釈液を散布した区では、５月と６月に１例ずつ、７〜９月に各２例ずつの発症が認められた。２００倍希釈液を散布した区では、１０月を除いて毎月発症が認められ、特に７〜９月には各３例ずつの発症が認められた。
【００２４】
しかし、樹木抽出液の散布を繰り返し行い、直接蜜蜂に散布しても、成蜂、蜂児のいずれに対しても影響は全く見受けられなかった。
また、使用した樹木抽出液はアメリカ腐蛆病において、濃度によって新たな病気の発生が抑えられ、症状も改善していることから、予防剤としての効果が認められる。しかし、薬剤の散布だけでは確実な効果が奏されておらず、改善が必要とされた。
【００２５】
（実施例２）アメリカ腐蛆病の予防と治療
期間：  平成１５年１０月〜平成１６年９月
方法：  蜜蜂１群は巣脾を約８枚群とした。
（1）アメリカ腐蛆病罹患蜜蜂群１群と健康な蜜蜂群５群の計６群を１グループとし、樹木抽出液の散布濃度別に４グループを作り、それぞれ別のビニールハウス内に隔離した。通常飼育の流蜜時期には、巣箱外で蜜または糖液を与えて飼育した。
（2）樹木抽出液散布方法は、実施例１と同じく、原液（精油成分含量１０００μｇ／ｍＬ）、水で希釈した５０倍希釈液、１００倍希釈液、および２００倍希釈液の４種類に分けて、巣脾または巣箱内部に十分散布して行った。
なお、薬剤の散布、投与の回数は、月２〜３回とし、散布１回につき１群約３００ｍＬ〜４００ｍＬ程度を投与した。
【００２６】
（3）給餌は、原液を糖液で１００倍に希釈したものを、１回に１．８Ｌ給餌した。流蜜の状況を見ながら蜜切れ時や流蜜のない時期に、月に１〜３回給餌した。
（4）人工花粉については、原液を５０倍重量の人工花粉に混ぜ合わせ１群１回につき約２５０ｇを、２月〜３月、８月〜１０月に月に２回投与した。
【００２７】
（5）結果：  原液または５０倍希釈液を散布した区においては、発症が全く認められなかった。１００倍希釈液を散布した区では、７〜９月に各１例ずつの発症が認められたにすぎなかった。２００倍希釈液を散布した区では、１０月〜３月の間は発症が認められなかったが、４月以降は僅かずつ発症が認められた。
以上のように、樹木抽出液を使用しての臨床実験では、上記（2）〜（4）の方法を組み合わせて実施したことによって、アメリカ腐蛆病の予防と治療に大きな効果が得られることが分かった。
アメリカ腐蛆病を確実に予防するためには、上記（2）の方法で、原液乃至５０倍希釈までの濃度で薬剤を散布、投与し、（3）と（4）の方法を組み合わせて投与することが必要である。これにより、アメリカ腐蛆病は完全に予防できる。
【００２８】
（実施例３）アメリカ腐蛆病の予防と治療
期間：  平成１５年１０月〜平成１６年９月
方法：
（1）前年の臨床実験においてアメリカ腐蛆病に感染した７群の蜜蜂は別に隔離し、７群の巣箱内でアメリカ腐蛆病の痕跡の有る巣脾を取り除き、新たな空巣と入れ替え、痕跡の無い巣脾はそのまま使用した。なお、取り除いた巣脾はすべて焼却処分した。
蜜蜂群７群は、３群と４群の２グループとし、それぞれ別のビニールハウス内に隔離した。通常飼育の流蜜時期には、巣箱外で蜜または糖液を与えて飼育した。
（2）樹木抽出液散布方法は、実施例１と同じく、原液（精油成分含量１０００μｇ／ｍＬ）を水で希釈した５０倍希釈液を用い、巣脾または巣箱内部に十分散布して行った。
なお、薬剤の散布、投与の回数は、月２〜３回とし、散布１回につき１群約３００ｍＬ〜４００ｍＬ程度を投与した。
【００２９】
（3）給餌は、原液を糖液で１００倍に希釈したものを、１回に１．８Ｌ給餌した。流蜜の状況を見ながら蜜切れ時や流蜜のない時期に、月に１〜３回給餌した。
（4）人工花粉については、一方のグループに原液を５０倍重量の人工花粉に混ぜ合わせ１群１回につき約２５０ｇを、２月〜３月、８月〜１０月に月に２回投与した。他方には与えなかった。
【００３０】
（5）結果：樹木抽出液の５０倍希釈液を散布し、人工花粉も給餌したグループでは、アメリカ腐蛆病の発症が全く認められなかった。しかし、人工花粉を給餌しなかったグループでは７月〜９月に発症が認められた。
以上のように、樹木抽出液を使用しての臨床実験では、上記（2）〜（4）の方法を組み合わせて実施したことによって、アメリカ腐蛆病の予防と治療に大きな効果が得られることが分かった。
【００３１】
以上の結果から、ツヤ酸、又はツヤ酸およびツヤブリシンを含む樹木抽出液は、蜜蜂のアメリカ腐蛆病の病原菌であるBacillus larvaeに対して極めて強い抗菌力を示すとともに、養蜂場においても明らかなアメリカ腐蛆病予防効果を示すことが認められた。
【産業上の利用可能性】
【００３２】
本発明に係る蜜蜂のアメリカ腐蛆病の防除剤並びに防除方法は、天然物に由来する成分を用いているため、直接蜜蜂に散布、投与しても、成蜂、蜂児のいずれに対しても影響は全く見受けられない。そのため、本発明は、養蜂業界においてアメリカ腐蛆病の発症予防に安心して利用することができる。