(57)【要約】【課題】  安全性の高い薬物代謝酵素阻害剤を提供する。【解決手段】  イチゴ由来でシトクロムＰ−４５０  ３Ａ４阻害活性を示す物質を有効成分として含有する薬物代謝酵素阻害剤；イチゴ由来でシトクロムＰ−４５０  ３Ａ４阻害活性を示す新規化合物；及びイチゴを抽出し、得られた抽出物を精製することを特徴とする前記化合物の製造法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
イチゴ由来でシトクロムＰ−４５０  ３Ａ４阻害活性を示す物質を有効成分として含有する薬物代謝酵素阻害剤。
【請求項２】
イチゴ由来でシトクロムＰ−４５０  ３Ａ４阻害活性を示す物質がポリフェノールである請求項１記載の薬物代謝酵素阻害剤。
【請求項３】
ポリフェノールがフラボノイド誘導体である請求項２記載の薬物代謝酵素阻害剤。
【請求項４】
ポリフェノールが次式（１）もしくは（２）：
【化１】
2006111597.tif 000008
で示されるフラボノイド誘導体及び次式（３）：
【化２】
2006111597.tif 000009
で示される化合物から選ばれる少なくとも１種である請求項２記載の薬物代謝酵素阻害剤。
【請求項５】
イチゴの抽出物又はその処理物を有効成分として含有する薬物代謝酵素阻害剤。
【請求項６】
薬物活性調節剤として用いられる請求項１〜５のいずれか１項に記載の薬物代謝酵素阻害剤。
【請求項７】
請求項６記載の薬物代謝酵素阻害剤を含有する医薬組成物。
【請求項８】
次式（２）：
【化３】
2006111597.tif 000010
で示される化合物。
【請求項９】
次式（３）：
【化４】
2006111597.tif 000011
で示される化合物。
【請求項１０】
イチゴを抽出し、得られた抽出物を精製することを特徴とする、次式（１）もしくは（２）：
【化５】
2006111597.tif 000012
又は次式（３）：
【化６】
2006111597.tif 000013
で示されるポリフェノールの製造法。
【請求項１１】
イチゴがトチオトメである請求項１０記載の製造法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イチゴ由来の薬物代謝酵素阻害剤、薬物代謝酵素阻害活性を示す新規ポリフェノール及びその製造法に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、臨床で用いられている医薬品のうち５０％以上のものが、代謝される際に薬物代謝酵素であるシトクロムＰ−４５０  ３Ａ４（以下「ＣＹＰ３Ａ４」という。）により代謝されるといわれている。そして、ヒトが日常摂取する機会の多い食品や生薬・ハーブ類の多くにＣＹＰ３Ａ４阻害作用があるといわれている。しかし、それらの多くは成分が同定されていない。そして、服薬している際にＣＹＰ３Ａ４阻害作用のある食品などを摂取することにより薬物の代謝が阻害され、その結果、薬物の血中濃度が上昇することにより危険な症状や思わぬ副作用を招く可能性がある。そこで、薬物による危険な症状を防止するため、ヒトが日常摂取する食品や生薬・ハーブ類にどのようなＣＹＰ３Ａ４阻害物質が含まれているのかを調べることは非常に重要であると考えられる。
【０００３】
一方、ＣＹＰ３Ａ４阻害物質を薬物と同時に摂取することにより、高価な薬物の摂取量を減らし、患者の医療費を削減することにつながることが期待される。薬物の用量が低い場合にも薬効を長時間維持することが可能になるため、安全域（ＬＤ５０／ＥＤ５０）が狭く使用しにくい薬物の適用範囲が広がり、更に、特殊な製剤技術を利用せずに長時間持続型製剤と同様の目的を達成することも可能になる。
【０００４】
ＣＹＰ３Ａ４阻害物質としては、特許文献１にヒトＣＹＰ３Ａ４に対するモノクローナル抗体が開示されている。
【０００５】
一方、イチゴ抽出物については、特許文献２に抗炎症剤としての用途が、特許文献３に抗アレルギー剤としての用途が開示されているが、イチゴ由来の物質がＣＹＰ３Ａ４阻害活性を示すことは知られていない。
【特許文献１】特表２００３−５０６０８４号公報
【特許文献２】特開２００３−２６１４５４号公報
【特許文献３】特開２００３−２６１４５５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、安全性の高い薬物代謝酵素阻害剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、前記の課題を解決するため、ヒトが日常摂取することにより安全性が既に確認されている食品からのＣＹＰ３Ａ４阻害物質の探索を行った。その結果、イチゴ抽出物がＣＹＰ３Ａ４阻害活性を有することを見出すとともに、イチゴ抽出物からＣＹＰ３Ａ４阻害活性を有するポリフェノールを単離し、構造決定することに成功し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は以下の発明を包含する。
（１）イチゴ由来でシトクロムＰ−４５０  ３Ａ４阻害活性を示す物質を有効成分として含有する薬物代謝酵素阻害剤。
（２）イチゴ由来でシトクロムＰ−４５０  ３Ａ４阻害活性を示す物質がポリフェノールである前記（１）に記載の薬物代謝酵素阻害剤。
（３）ポリフェノールがフラボノイド誘導体である前記（２）に記載の薬物代謝酵素阻害剤。
（４）ポリフェノールが次式（１）もしくは（２）：
【０００９】
【化１】
2006111597.tif 000002
で示されるフラボノイド誘導体及び次式（３）：
【００１０】
【化２】
2006111597.tif 000003
で示される化合物から選ばれる少なくとも１種である前記（２）に記載の薬物代謝酵素阻害剤。
（５）イチゴの抽出物又はその処理物を有効成分として含有する薬物代謝酵素阻害剤。
（６）薬物活性調節剤として用いられる前記（１）〜（５）のいずれかに記載の薬物代謝酵素阻害剤。
（７）前記（６）に記載の薬物代謝酵素阻害剤を含有する医薬組成物。
（８）次式（２）：
【００１１】
【化３】
2006111597.tif 000004
で示される化合物。
（９）次式（３）：
【００１２】
【化４】
2006111597.tif 000005
で示される化合物。
（１０）イチゴを抽出し、得られた抽出物を精製することを特徴とする、次式（１）もしくは（２）：
【００１３】
【化５】
2006111597.tif 000006
又は次式（３）：
【００１４】
【化６】
2006111597.tif 000007
で示されるポリフェノールの製造法。
（１１）イチゴがトチオトメである前記（１０）に記載の製造法。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、薬物と同時に摂取することにより薬物の摂取量を減らすことのできる薬物代謝酵素阻害剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明においては、イチゴは、抽出物又はその処理物として用いられる。抽出原料となるイチゴの種類としては、特に制限はないが、好ましくはオランダイチゴ（学名：Fragaria ananassa、英名：garden strawberry）が挙げられ、その品種としては、例えばトチオトメ、ダナー、豊の香、宝交早生、福羽、女峰、久留米４９号、栃の峰、好ましくはトチオトメが挙げられる。イチゴの部分としては、例えば果実、葉、茎、根、好ましくは果実が挙げられる。
【００１７】
本発明において、イチゴ由来でＣＹＰ３Ａ４阻害活性を示す物質とは、イチゴから得られるものであって、ＣＹＰ３Ａ４の活性を阻害するものであれば、特に制限はなく、例えば、イチゴの抽出物、又はこれに分離、精製、単離等の各種処理の少なくとも１つを施したものであってＣＹＰ３Ａ４阻害活性を保持しているものをいう。
【００１８】
抽出溶媒としては、一般には有機溶媒、好ましくはメタノール、エタノール、アセトン、プロパノールなどの水混和性溶媒が挙げられる。得られた抽出液は、好ましくは、濃縮後、得られた水溶液を酢酸エチル、クロロホルム、ジクロロメタン、エーテルなどの低極性有機溶媒と分配し、有機層を精製することにより目的とする化合物を効率よく得ることができる。
【００１９】
精製は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等を適宜組み合わせることにより行うことができる。
【００２０】
以上のようにして精製することにより、ＣＹＰ３Ａ４阻害活性を有する前記式（１）、（２）又は（３）で示される化合物をそれぞれ得ることができる。これらのうち、前記式（２）又は（３）で示される化合物はいずれも新規化合物である。
【００２１】
前記のようにして得られる抽出物、その処理物及び化合物は、いずれもＣＹＰ３Ａ４阻害活性を有し、薬物と同時に摂取することにより薬物の摂取量を減らすことができる。
【００２２】
本発明の薬物代謝酵素阻害剤及び医薬組成物は、イチゴの抽出物もしくはその処理物、又は前記化合物を公知の食品用担体又は医薬用担体と組合せて製剤化することができる。投与形態としては、特に制限はなく、必要に応じ適宜選択されるが、一般には錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤等の経口剤として使用される。また、本発明の薬物代謝酵素阻害剤及び医薬組成物は、注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、貼付剤、軟膏剤等の非経口剤として使用してもよい。また、本発明の薬物代謝酵素阻害剤は、食品、チューインガム、飲料等に添加して、いわゆる特定保健用食品とすることにより、薬効成分の含量を低下させたり、薬効を持続させることもできる。
【００２３】
本発明の薬物代謝酵素阻害剤及び医薬組成物は、同一製剤中に、摂取量を減らす対象となる薬物を含有してもよく、また、当該薬物を含有した別個の製剤と同時に投与してもよい。また、本発明の薬物代謝酵素阻害剤及び医薬組成物の効果が得られる範囲内で、薬物を含有した別個の製剤の投与時期とずらしてもよい。
【００２４】
本発明の薬物代謝酵素阻害剤及び医薬組成物の投与量は、患者の年令、体重、疾患の程度、投与経路により異なるが、経口投与では、前記式（１）、（２）又は（３）で示される化合物として、通常１日１０〜５０ｍｇであり、投与回数は、通常、経口投与では１日１〜３回である。
【００２５】
経口剤は、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩類等の賦形剤を用いて常法に従って製造される。
【００２６】
この種の製剤には、適宜前記賦形剤の他に、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を使用することができる。
【００２７】
結合剤の具体例としては、結晶セルロース、結晶セルロース・カルメロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、カルメロースナトリウム、エチルセルロース、カルボキシメチルエチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、デキストリン、アルファー化デンプン、部分アルファー化デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、プルラン、ポリビニルピロリドン、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＲＳ、メタクリル酸コポリマーＬ、メタクリル酸コポリマー、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、ポリビニルアルコール、アラビアゴム、アラビアゴム末、寒天、ゼラチン、白色セラック、トラガント、精製白糖、マクロゴールが挙げられる。
【００２８】
崩壊剤の具体例としては、結晶セルロース、メチルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロース、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、部分アルファー化デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルスターチナトリウム、トラガントが挙げられる。
【００２９】
界面活性剤の具体例としては、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸ポリオキシル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、セスキオレイン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、モノステアリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、ポリソルベート、モノステアリン酸グリセリン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウロマクロゴールが挙げられる。
【００３０】
滑沢剤の具体例としては、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、含水二酸化ケイ素、軽質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、乾燥水酸化アルミニウムゲル、タルク、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、リン酸水素カルシウム、無水リン酸水素カルシウム、ショ糖脂肪酸エステル、ロウ類、水素添加植物油、ポリエチレングリコールが挙げられる。
【００３１】
流動性促進剤の具体例としては、含水二酸化ケイ素、軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム。
【００３２】
また、本発明の薬物代謝酵素阻害剤及び医薬組成物は、液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤として投与する場合には、矯味矯臭剤、着色剤を含有してもよい。
【実施例】
【００３３】
以下、実施例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲は、かかる実施例に限定されるものではない。
【００３４】
（実施例１）
１．単離操作
トチオトメの果実（２．０ｋｇ）をメタノール（３Ｌ）で抽出し、濃縮した。その抽出物を酢酸エチルと水で分液した。酢酸エチル可溶部（１８．４ｇ）を、更に、ヘキサンと９０％メタノール−水で分液し、９０％メタノール−水画分を濃縮した。得られた９０％メタノール−水画分（３．３５ｇ）を逆相カラムクロマトグラフィー（４０％メタノール−水、６０％メタノール−水、８０％メタノール−水、メタノール）で分画後、６０％メタノール−水で溶出してきた画分（０．１３ｇ）を、更に、逆相カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー（５０％メタノール−水）で精製した。そして化合物（１）を７．５ｍｇ、化合物（２）を１．０ｍｇ、化合物（３）を２．６ｍｇ単離した。
【００３５】
化合物（１）:  [α]26D  -62°(c 0.28, MeOH), FABMS (positive) m/z 595 [M + H]+; 1H NMR (CD3OD): δ 3.31 (1H, m), 3.44 (1H, m), 3.45 (2H, m), 4.18 (1H, dd, J = 11.6, 6.6 Hz), 4.29 (1H, dd, J = 11.6, 2.2 Hz), 5.22 (1H, d, J = 7.1 Hz), 6.06 (1H, d, J = 16.0 Hz), 6.11 (1H, br s), 6.28 (1H, br s), 6.79 (2x1H's, d, J = 8.8 Hz), 6.80 (2x1H's, d, J = 8.8 Hz), 7.30 (2x1H's, d, J = 8.8 Hz), 7.39 (1H, d, J = 16.0 Hz), 7.98 (2x1H's, d, J = 8.8 Hz); 13C NMR (CD3OD): δ 65.1 (t), 72.5 (d), 76.5 (d), 76.6 (d), 78.8 (d), 95.8 (d), 101.1 (d), 104.9 (d), 106.2 (s), 115.6 (d), 116.8 (d x 2), 117.6 (d x 2), 123.6 (s), 127.9 (s), 132.0 (d x 2), 133.0 (d x 2), 136.0 (s), 147.4 (d), 159.3 (s), 160.1 (s), 162.0 (s), 162.3 (s), 163.7 (s), 167.6 (s), 169.6 (s), 180.1 (s).
【００３６】
化合物（２）:  [α]26D  -57°(c 0.045, MeOH), FABMS (positive) m/z 595 [M + H]+; 1H NMR (CD3OD) : δ 3.27 (1H, t, J =9.9 Hz), 3.39 (1H, m), 3.41 (1H, dd, J =9.9, 7.1), 3.44 (1H, m), 4.15 (1H, dd, J = 12.5, 6.0 Hz), 4.19 (1H, dd, J = 12.5, 2.2 Hz), 5.14 (1H, d, J = 7.1 Hz), 5.51 (1H, d, J =13.2 Hz), 6.14 (1H, d, J = 2.2 Hz), 6.26 (1H, d, J = 2.2 Hz), 6.67 (2x1H's, d, J = 8.8 Hz), 6.71 (1H, d, J = 13.2 Hz), 6.80 (2x1H's, d, J = 8.8 Hz), 7.50 (2x1H's, d, J = 8.8 Hz), 7.95 (2x1H's, d, J = 8.8 Hz) ; 13C NMR (CD3OD): δ 64.9 (t), 72.4 (d), 76.4 (d), 76.5 (d), 78.9 (d), 96.3 (d), 101.7 (d), 105.1 (d), 105.1 (s), 116.5 (d x 2), 116.8 (d x 2), 117.0 (d), 123.6 (s), 128.4 (s), 133.0 (d x 2), 134.5 (d x 2), 135.9 (s), 146.2 (d), 159.5 (s), 159.9 (s), 160.9 (s), 162.3 (s), 163.7 (s), 166.3 (s), 168.6 (s), 179.9 (s).
【００３７】
化合物（３）:  [α]26D  -55°(c 0.14, MeOH); HRFABMS (positive) m/z 373.1508 [M + H]+ (calcd for C17H25O9, Δ +1.0 mmu); UV (MeOH) λmax (log ε) 285.5 (4.2), 225.0 nm (4.0); IR (film) νmax 3400, 1630 cm-1; 1H NMR (CD3OD) : δ 0.92 (1H, d, J =6.8 Hz), 0.96 (1H, d, J =6.8 Hz), 2.24 (1H, heptet, J =6.8 Hz), 2.87 (1H, dd, J =15.6, 6.8 Hz), 3.16 (1H, dd, J =15.6, 6.8 Hz), 3.39 (1H, t, J =9.0 Hz), 3.45 (1H, m), 3.46 (1H, t, J =9.0 Hz), 3.53 (1H, dd, J =9.0, 7.7 Hz), 3.71 (1H, dd, J =12.2, 5.6 Hz), 3.91 (1H, dd, J =12.2, 2.1 Hz), 5.01 (1H, d, J =7.7), 5.93 (1H, d, J =2.1), 6.15 (1H, d, J =2.1 Hz); 13C NMR (CD3OD): δ 23.7 (q), 27.1 (d), 24.2 (q), 54.9 (t), 63.3 (t), 72.0 (d), 75.7 (d), 79.2 (d), 79.4 (d), 96.4 (d), 99.3 (d), 102.7 (d), 107.7 (s), 162.9 (s), 167.3 (s), 168.4 (s), 207.9 (s).
【００３８】
２．構造決定
化合物（１）は、ＮＭＲスペクトルとＦＡＢマススペクトルにより構造決定した結果、既知化合物ケンフェロール−３−β−Ｄ−（６−Ｏ−ｐ−クマリルグルコピラノシド）（Phytochemisty, 1978, 17, 787-791）であると同定した。この化合物のＮＭＲデータは報告されていないので、今回の帰属が初めてのものである。
【００３９】
化合物（２）のスペクトルデータは化合物（１）のものと類似していたが、二重結合がシスになったものであることが明らかとなった。
【００４０】
化合物（３）は、ＮＭＲスペクトルとＦＡＢマススペクトルにより新規物質４，６−ジヒドロキシ−２−Ｏ−（β−Ｄ−グルコピラノシル）イソバレロフェノンであると構造決定した。
【００４１】
３．ＣＹＰ３Ａ４阻害試験
サンプルはＤＭＳＯ溶液として用い、１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）１９２μＬに加えた。前記緩衝液には、基質であるニフェジピン（５０μＭ）の他、グルコース−６−リン酸（５ｍＭ）、β−ＮＡＤＰ＋（０．５ｍＭ）、ＭｇＣｌ２（０．５ｍＭ）、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（４．３μｇ／ｍＬ）が含まれている。その反応液を３７℃で５分間プレインキュベートした後、ＣＹＰ３Ａ４を加え３７℃で１時間反応させた。１００μＬのメタノールを添加して反応を終了させ、内部標準物質として６−メトキシカルボニル−５−メチル−７−（２−ニトロフェニル）−４，７−ジヒドロフロ［３，４−ｂ］ピリジン−１−（３Ｈ）−オンのＤＭＳＯ溶液を添加した。その混合物を１ｍＬのエーテルで抽出し、エーテル層を乾固した。そして、残渣を逆相カラムを用いた高速液体クロマトグラフィーにより分析し、阻害率を計算した。
【００４２】
トチオトメのメタノール抽出物を酢酸エチルと水で分液したものは、０．０１ｗ／ｖ％の濃度における阻害率は、それぞれ７９％及び４８％であった。各化合物のＣＹＰ３Ａ４阻害活性はＩＣ５０値として、化合物（１）０．７μＭ、化合物（２）０．７μＭ、化合物（３）１２０μＭであった。
【００４３】
なお、現在までＣＹＰ３Ａ４阻害活性が強いといわれているフラボノイドとしては以下のものがあるが、化合物（１）及び（２）は、約１５倍ないし約１００倍の強い阻害活性を示した。
ケンフェロール：ＩＣ５０  ５０μＭ
クエルセチン：ＩＣ５０  １０μＭ
ナリンゲニン：ＩＣ５０  ５０μＭ
ナリンギン：ＩＣ５０  ＞１０００μＭ