(57)【要約】【課題】  細胞を、迅速かつ簡便に分離、同定する新規手段を提供する。【解決手段】  細胞を電気泳動によって非破壊の状態で分離し、排出液とマトリックスを含む溶媒とを混和することによりバイオマーカーを抽出し、質量分析を行うことにより、細胞を迅速、簡便に分離、同定する。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞の分離及び同定を行うために用いる装置であって、
ａ)試料液に含まれる細胞を時間軸で分離し、順次排出する電気泳動用キャピラリーと、
ｂ）電気泳動用キャピラリーの開放端から排出する細胞試料液とMALDI-MS法に用いるマトリックス溶液とを接触させて混和する手段と、
ｃ）上記マトリックス溶液と混和した状態で細胞試料液を断続的あるいは連続的に塗布するためのサンプルプレートとを有し、
該サンプルプレートがMALDI質量分析計用のプレートを兼ねるものであることを特徴とする上記装置。
【請求項２】
サンプルプレートが少なくとも表面導電性であることを特徴とする、請求項１に記載の装置。
【請求項３】
サンプルプレートをＸＹの２軸方向あるいはさらにＺ軸方向に位置制御する手段を有していることを特徴とする、請求項１又は２に記載の装置。
【請求項４】
さらに、MALDI質量分析計を備えることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の装置。
【請求項５】
MALDI-MS法に用いるマトリックス溶液導入口を有し、かつ内部に電気泳動用キャピラリーが貫通するコネクタと、コネクタ内部と連通し、該キャピラリー周囲を囲暁するように設けた上記マトリックス溶液供給用チューブを有することを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の装置。
【請求項６】
キャピラリー途中に該キャピラリー中を移動する細胞の検出器を設け、該検出器の検出信号に基づき電気泳動用キャピラリーの開放端から排出する該細胞の排出時間を決定し、該排出時間にあわせてMALDI-MS法に用いるマトリックス溶液を供給する手段を有することを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の装置。
【請求項７】
検出器がUV検出器あるいはLIF検出器であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の装置。
【請求項８】
以下ａ）〜ｃ）の工程を含む細胞の分離方法、
ａ）細胞含有試料液を電気泳動用キャピラリーに導入する工程。
ｂ）電気泳動用キャピラリーの開放端から排出する細胞試料液とMALDI-MS法に用いるマトリックス溶液とを接触させて混和する工程。
ｃ）MALDI質量分析計用プレートを兼ねるサンプルプレートに上記マトリックス溶液と混和された状態で溶出液を断続的あるいは連続的に塗布する工程。
【請求項９】
さらに、請求項８に記載のｃ）工程の後、サンプルプレート上の塗布された試料をMALDI質量分析計により分析する工程を有することを特徴とする、細胞の分離、同定方法。
【請求項１０】
サンプルプレートが少なくとも表面導電性であることを特徴とする、請求項８又は９に記載の方法。
【請求項１１】
サンプルプレートと該電気泳動用キャピラリーの間にマトリックス溶液を送液して液滴を形成することにより、該キャピラリー内の泳動液と該サンプルプレートとを導通させ、電気泳動力により該サンプルプレート上に細胞試料液を連続あるいは断続的に排出させることを特徴とする、請求項６〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
マトリックス溶液の溶媒が、細胞壁又は細胞膜の一部又は全部を破壊し、かつ細胞内バイオマーカーの抽出を行う、単一又は複数種の混合溶媒であることを特徴とする、請求項６〜１１のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は電気泳動法及びマトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析法（MALDI-MS法）による細胞の分離・同定装置及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
キャピラリー電気泳動法（CZE法）は内径が数１０マイクロメートルのキャピラリー（毛細管）中の溶液に電場を印加し、溶液中の試料の大きさや電気的性質によって移動度が異なることを応用して混合された試料を分離する方法である。CZE法は非常に細いキャピラリーを使用するために、分子拡散などによる試料領域の拡散を抑えることができ、非常に高い分解能で試料成分を分離することができる。また内容量が微小であるために微量分析に適している。
【０００３】
この様な電気泳動力で混合物試料から分離された細胞は，泳動電圧を印加しているときに泳動管の一端から細胞ごとに時間差をもって排出される。分離された細胞が泳動管中の特定位置に来たときに紫外線吸収式などの検出器でその時刻を知ることができる（非特許文献１参照）。また、検出器を通過した時刻とその成分が泳動管の一端から排出されるまでの時間（排出時間）は泳動条件ごとにほぼ一定である。CZE法で分離された細胞は、細胞ごとに分析することによって各分離細胞の種類等が解析される。
【０００４】
複数種の細胞を破砕せず流れ系（オンライン）分離する方法としては、流動場分画法（Field-Flow Fractionation法）(非特許文献２参照)や上記CZE法が考えられる。分離能としてはCZE法が高いが、泳動時間により細胞を同定することまでは困難である。
【０００５】
一方、マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析法（MALDI-MS法）はマトリックスと呼ばれる非常によくレーザー光を吸収する分子と試料化合物を混合し、レーザー光によって試料をイオン化し、質量分析する方法である。パルスレーザー照射により、マトリックス分子に大きなエネルギーが与えられて脱離・イオン化され、間接的に試料化合物が脱離・イオン化するため、低分子量から高分子量の幅広い範囲の物質を温和にイオン化することができる。脱離したイオンは質量電荷比の違いに基づいて、飛行時間型、四重極型、イオントラップ型、セクター型、フーリエ変換型、若しくはこれらの複合型からなる質量分離部により、質量分離された後に、検出器で該イオンが検出され、質量数が解析される。これらのうち、飛行時間型の質量分離部を用いる方法は、原理上測定の質量範囲に制限がないため、これらを組み合わせたマトリックス支援レーザー脱離イオン化−飛行時間質量分析法(MALDI-TOFMS法)が高質量の質量分析に汎用される。
【０００６】
細胞の同定に質量分析法を適用する場合はバイオマーカーと呼ばれるタンパク質、ペプチド等、種に特徴的な生体関連物質の分析が行われる。MALDI-MS法は低分子量から高分子量まで迅速に感度よく生体成分の分析を行うことができるため、このようなバイオマーカーの測定に適している（非特許文献３、４参照）。しかし、複数種の細胞が共存する試料の測定は困難である。
【０００７】
これらCZE法とMALDI-MS法を組み合わせることで、CZE法の泳動管の一端から排出される化学物質や生体関連物質を逐次MALDI-MS法のプレートに塗布し、そのプレートについてMALDI測定する物質分離同定法が開発されている（非特許文献５〜７および特許文献１、２参照）。しかし、対象とする複数種の細胞群をそのまま分離しMALDI-MS法で同定することは困難である。
【非特許文献１】M.A. Rodriguez, and D. W. Armstrong: J. Chromatogr. B, 800, 7 (2004).
【非特許文献２】P.Reschiglian, A. Zattoni, L. Cinque, B. Roda, F. D. Piaz, A. Roda, M-H.Moon, andB-R. Min: Anal. Chem., 76, 2103 (2004).
【非特許文献３】C. Fenselau and P. A. Demirev: Mass Spectrom.Rev., 20, 157 (2001).
【非特許文献４】S. Vaidyanathan, C. L. Winder, S. C. Wade,D. B. Kell, and R. Goodacre: Rapid Commun. Mass Spectrom., 16, 1276 (2002).
【非特許文献５】Y. Dai, R. M. Whittal, and L. Li: Anal.Chem., 71, 1087 (1999).
【非特許文献６】N. Ojima, T. Shingaki, T. Yamamoto, and T.Masujima: Electrophoresis, 22, 3478 (2001).
【非特許文献７】D. B. Wall, S. J. Berger, J. W. Finch, S.A. Cohen, K. Richardson, R. Chapman, D. Drabble, J. Brown, and D. Gostick:Electrophoresis, 23, 3193 (2002).
【特許文献１】特開２００２−２３６１０８号公報
【特許文献２】米国特許第５，５８０，４３４号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の課題は、細胞の分離のみならず、さらにその同定をも精度良くしかも迅速に行いうる手段を提供することにあり、より具体的には、細胞分離能の高いCZE法のような電気泳動法と、測定感度の高いMALDI-MS法のような質量分析法の長所をそれぞれ併せて、極めて効率的な細胞の分離、同定手段を新たに開発することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者等は、上記課題を解決するため鋭意研究した結果、細胞を含む試料をCZE法のような電気泳動力によって分離ないし搬送し、MALDI-MSの測定に適した状態でサンプルプレートに塗布する手段を伴う細胞の分離、同定方法及び装置を開発した。これによれば、細胞の分離及び同定を迅速かつ精度良く行うことが可能となる。
【００１０】
すなわち、本発明は以下の（１）〜（１２）に示すとおりである。
（１）細胞の分離及び同定を行うために用いる装置であって、
ａ）試料液に含まれる細胞を時間軸で分離し、順次排出する電気泳動用キャピラリーと、
ｂ）電気泳動用キャピラリーの開放端から排出する細胞試料液とMALDI-MS法に用いるマトリックス溶液とを接触させて混和する手段と、
ｃ）上記マトリックス溶液と混和した状態で細胞試料液を断続的あるいは連続的に塗布するためのサンプルプレートとを有し、
該サンプルプレートがMALDI質量分析計用のプレートを兼ねるものであることを特徴とする上記装置。
（２）サンプルプレートが少なくとも表面導電性であることを特徴とする、上記（１）に記載の装置。
（３）サンプルプレートをＸＹの２軸方向あるいはさらにＺ軸方向に位置制御する手段を有していることを特徴とする、上記（１）又は（２）に記載の装置。
（４）さらに、MALDI質量分析計を備えることを特徴とする、上記（１）〜（３）のいずれかに記載の装置。
（５）MALDI-MS法に用いるマトリックス溶液導入口を有し、かつ内部に電気泳動用キャピラリーが貫通するコネクタと、コネクタ内部と連通し、該キャピラリー周囲を囲暁するように設けた上記マトリックス溶液供給用チューブを有することを特徴とする、（１）〜（４）のいずれかに記載の装置。
（６）キャピラリー途中に該キャピラリー中を移動する細胞の検出器を設け、該検出器の検出信号に基づき電気泳動用キャピラリーの開放端から排出する、該細胞の排出時間を決定し、該排出時間にあわせてMALDI-MS法に用いるマトリックス溶液を供給する手段を有することを特徴とする、上記（１）〜（５）のいずれかに記載の装置。
（７）検出器がUV検出器あるいはLIF検出器であることを特徴とする、上記（１）〜（６）のいずれかに記載の装置。
（８）以下ａ）〜ｃ）の工程を含む細胞の分離方法、
ａ）細胞含有試料液を電気泳動用キャピラリーに導入する工程。
ｂ）電気泳動用キャピラリーの開放端から排出する細胞試料液とMALDI-MS法に用いるマトリックス溶液とを接触させて混和する工程。
ｃ）MALDI質量分析計用プレートを兼ねるサンプルプレートに上記マトリックス溶液と混和された状態で細胞試料液を断続的あるいは連続的に塗布する工程。
（９）さらに、上記（８）のｃ）工程の後、サンプルプレート上の塗布された試料をMALDI質量分析計により分析する工程を有することを特徴とする、細胞の分離、同定方法。
（１０）サンプルプレートが少なくとも表面導電性であることを特徴とする、（８）又は（９）に記載の方法。
（１１）サンプルプレートと該電気泳動用キャピラリーの間にマトリックス溶液を送液して液滴を形成することにより、該キャピラリー内の泳動液と該サンプルプレートとを導通させ、電気泳動力により該サンプルプレート上に溶出液を連続あるいは断続的に排出させることを特徴とする、（６）〜（１０）のいずれかに記載の方法。
（１２）マトリックス溶液の溶媒が、細胞壁又は細胞膜の一部又は全部を破壊し、かつ細胞内バイオマーカーの抽出を行う、単一又は複数種の混合溶媒であることを特徴とする、（６）〜（１１）のいずれかに記載の方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、細胞を非破壊状態で分離又は搬送することが可能であり、キャピラリー末端から排出される細胞試料液とマトリックス溶液を、キャピラリー末端で接触させて混和することにより質量分析への移行が容易に行うことができ、これにより、細胞の迅速簡便な分離及び同定を可能とした。細胞内のバイオマーカーの抽出についてはマトリックス及び溶媒の組成を変更することが容易であるため効果的な組み合わせを選択することができる。また、試料排出液の連続採取を行うことにより、分離能を損なうことなく、同定が可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明は、細胞分析にあたり、電気泳動力により全細胞分離を行った後に、該キャピラリー開放端でマトリックスを含む溶媒と混和することにより、細胞内のバイオマーカーを抽出し、電気泳動の分離能を損なわずに質量分析による細胞同定が行える細胞試料の分取、同定手段を提供するものである。
すなわち、本発明は、以下ａ）〜ｃ）の工程により細胞を分離し、分取した細胞をｄ）の工程により同定する方法、並びにこのために使用する装置に関する。
ａ）細胞含有試料液を電気泳動用キャピラリーに導入する工程。
ｂ）電気泳動用キャピラリーの開放端から排出する細胞試料液とMALDI-MS法に用いるマトリックス溶液とを接触させて混和する工程。
ｃ）MALDI質量分析計用プレートを兼ねるサンプルプレートに上記マトリックス溶液と混和された状態で細胞試料液を断続的あるいは連続的に塗布する工程。
ｄ）サンプルプレート上の塗布された試料をMALDI質量分析計により分析する工程。
本発明は、電気泳動により、分離された細胞をMALDI質量分析計により分析し、同定するが、この同定においては細胞内のバイオマーカー（ペプチド、タンパク質、脂質、糖質など）をMALDI-MS法により質量分析するため、MALDI質量分析に使用するマトリックスを可溶化し、マトリックスが結晶化するために十分な揮発性があることが要求される他、細胞を同定するために、さらに、細胞壁又は細胞膜の一部又は全部を破壊し、また細胞内バイオマーカー（ペプチド、タンパク質、脂質、糖質など）の抽出が可能であることが必要となる。
このような溶媒としては、例えばアセトニトリル、メタノール、エタノール、アセトン、テトラヒドロフラン、イソプロパノール等の溶媒が挙げられる。
本発明においては、単一の溶媒を使用しても良く、また、上記要件を満たすものであれば複数種混合した溶媒を使用しても良い。
【００１３】
前記サンプルプレートはMALDI質量分析装置用のプレートを兼ね、細胞を分取後必要に応じて種々の処理(例えば加熱、プラズマ照射)を行う装置を更に付加してもよい。このような装置を付加することにより、細胞内バイオマーカーを効率よく抽出することが可能となる。
また、該サンプルプレート上にあらかじめ揮発性有機溶媒（例えばアセトン等）に溶解したマトリックスを塗布しておいてもよい。この塗布面上に細胞溶出液を排出させることにより質量分析において感度のよい測定が可能となる。
【００１４】
本発明において使用するサンプルプレートは少なくともその表面が導電性であり、金属，導電性有機若しくは無機材料、または表面を導電性物質でコート若しくはプリントした非導電性材料からなる。電気泳動用キャピラリー末端とサンプルプレートとは、電気泳動用キャピラリーの開放端と導電性のサンプルプレートとを接触させるか、あるいは該キャピラリーとサンプルプレート間に細胞溶液とマトリックス溶液の混和溶液による液滴を形成させることにより導通させ、細胞を電気泳動力によって該サンプルプレート上に細胞別に排出するとともに、マトリックスと混和することでMALDI-MS法に適した試料状態とする。
MALDI-MS法及び装置は、上記したように、マトリックス・試料混合物にパルスレーザー照射し、生じた脱離イオンを、飛行時間型、四重極型、イオントラップ型、セクター型、フーリエ変換型、若しくはこれらの複合型からなる質量分離部により分離するものであり、本発明はこれらのいずれであっても使用できるが、これらの中では，パルスレーザー照射により生じたイオンのほぼ全てを質量分離及び検出し、かつ測定質量範囲に原理上制限のない飛行時間型が好ましい。
【００１５】
また、電気泳動用キャピラリーは、導電性の極めて低い有機または無機材質（例えば、溶融石英キャピラリー）から成り，電界をかける場としては電解質を含む溶液がある。キャピラリーの材質としては、上記溶融石英の他、熱可塑性高分子ポリマー樹脂系材料のフッ素樹脂（ PTFE：ポリテトラフルオロエチレン(４フッ化)、PFA：テトラフルオロエチレン・パーフルオロアルキルビニルエーテル共重合体、FEP：テトラフルオロエチレン・ヘキサフルオロプロピレン共重合体(４．６フッ化)、ETFE：テトラフルオロエチレン・エチレン共重合体)，市販品として、例えばテフロン（登録商標；E.I. du Pont de Nemours and Company）、テフゼル（登録商標；E.I. du Pont de Nemours and Company）等）、ポリエーテルエーテルケトン（例えば、PEEK(TM)（登録商標；Victrex plc）等）あるいは塩化ビニル等が挙げられる。
また、電界を形成する溶液としては、例えばTris緩衝液、HEPES緩衝液、Tris−ホウ酸−EDTA緩衝液、酢酸−酢酸塩緩衝液、リン酸塩緩衝液、ホウ酸緩衝液、アンモニア系緩衝液等がある。
本発明の分離、同定に用いられる細胞の種類は、電気泳動により細胞表層電荷及び細胞表層イオン雰囲気に依存して、電気泳動液の中で、移動度を変えるものがすべて対象となる。細胞の分離は上記泳動用キャピラリー中のそれぞれの細胞の移動度の違いによって定まるため、分取の目的に従って泳動条件を設定し、細胞の移動度の差によりキャピラリー排出末端に泳動される時間を適宜設定して、塗布することができる。
【００１６】
本発明においては、電気泳動用キャピラリーに検出器を備えて、泳動する細胞を検出してもよい。この検出器として特に制限はないが、泳動に影響を及ぼさないという観点から紫外若しくは可視光吸収検出器又は蛍光検出器等が挙げられる。この場合においては、例えば、キャピラリー表面の被覆を一部除去して、光透過性にすればよい。
また、この検出器を備える位置は電気泳動用キャピラリーの排出端に近い側が好ましい。泳動条件により細胞ごとの泳動時間は一定であるので、この検出器で泳動する細胞を検知した後、この成分が排出する時間を正確に予測することができる。例えば、検出器による検出信号に基づき、一定時間後にマトリックス溶液供給手段を作動させて、細胞試料液とマトリックス溶液を接触させて混和することができる。
このようなマトリックス溶液供給手段としては、例えば、マトリックス溶液導入口を有し、かつ内部に電気泳動用キャピラリーが貫通するコネクタと、コネクタ内部と連通し、該キャピラリー周囲を囲暁するように設けた上記マトリックス溶液供給用チューブからなる手段が挙げられる。このような手段によれば、キャピラリー末端から排出される細胞試料溶液は、キャピラリー末端においてマトリックス溶液と接触し混和される。
【００１７】
本発明においては、電気泳動用キャピラリーの一端とサンプルプレートとを垂直方向（Ｚ軸方向）に相対的に移動させることにより、電気泳動用キャピラリーの開放末端とサンプルプレートの接触・離反が可能となる。サンプルプレートが泳動電極の一方を構成しているので、接触ないしは接液時は泳動する細胞がプレートに排出される。電気泳動用キャピラリーとサンプルプレートを離反させると泳動電圧の印加がなくなるので、電気泳動用キャピラリー中の細胞の泳動と排出がとまる。電気泳動用キャピラリーの開放端とプレートとを離反状態で水平方向に移動させ、プレートの相異なる場所において電気泳動用キャピラリー末端をプレートに近接させてこれらの間に液滴を形成させるか、あるいは該末端をプレートに接触させることにより、各細胞試料の分注が可能となる。また、電気泳動用キャピラリーの一端とサンプルプレートの間の垂直方向の距離を一定とし、水平方向（Ｘ、Ｙ軸方向）に移動させることで、連続した塗布も可能である。電気泳動による分離能を損なわないためには連続した塗布が好ましい。
【００１８】
MALDI-MSに通常用いられるレーザーはN2レーザー（波長337 nm）やEr-YAGレーザー（2940 nm）であるが、Nd:YAG(1064 nm)、色素(可視領域で波長可変)、YAG-OPO(630 nm)、CO2(10600 nm)、アレキサンドライト（755 nm）、Ar（488-514 nm）、ホロミウム−YAG（20100 nm）などのレーザーも用いることが可能である。各レーザー光は上記の基本波だけではなく、高調波を用いてもよい。マトリックスとしては励起光源（主に、パルスレーザー）の光を吸収する化合物を用いることができる。例えばN2レーザーにはCHCA（a-cyano-4-hydroxycinnamic acid）、DHBA（2, 5-dihydroxybenzoic acid）、3-HPA（3-hydroxypicolinic acid）、 HABA（2-(4-hydroxyphenylazo)-benzoic acid）、シナピン酸（3, 5-dimethoxy-4-hydroxy-cinnamic acid）、ピコリン酸（picolinic acid）などの有機酸、HARMAN（2-methyl-b-caboline;1-methyl-9H-pyrido[3,4-b]indole）、 HARMINE（2-methyl-b-caboline; 1-methyl-9-acethyl-pyrido[3,4-b]indole）、HARMOL（2-methyl-b-caboline;1-methyl-9-hydroxy-pyrido[3,4-b]indole）等のb-カルボリン、THAP（2, 4, 6-trihydroxyacetophenone monohydrate）、ATT（6-aza-2-thiothymine）などのプリン、ピリミジン類、若しくは無機コバルト微粒子などを用いることができる。また、Er-YAGレーザーにはグリセロール、氷、コハク酸などを用いることができる。
【００１９】
以下、本発明を具体的に例証するが、本発明を制限する意図ではない。本発明の装置の一例を図１に示す。キャピラリー電気泳動において、細胞混合物及び溶媒（泳動液）は試料を入れた容器１からキャピラリー３に導入される。このキャピラリーの内径は通常３０−２００mm程度である。泳動液としては通常揮発性塩の溶液が用いられ、例えば２０mＭ
炭酸アンモニウム−アンモニア緩衝液等が挙げられる。そして、容器１中の正負の電極２と、サンプルプレート電極６の間に電圧が印加される。この電圧は通常１−２０kＶ程度である。キャピラリー３内で混合物が電気泳動することによって、試料である細胞が分離し、各細胞試料が通過したことが検出器４で検出される。その後一定時間の後に細胞試料はキャピラリー３の一端から排出される。このとき、コネクタ８においてマトリックスを含む溶液を送液ポンプ等により送液用チューブ９から導入し、キャピラリー３の末端で混和する。位置制御機構７はプレート５をXYの2軸方向に位置制御する機能を持っており、プレートをＸ、Ｙ軸方向に移動させることにより、プレート上に細胞試料液とマトリックス溶液の混和物が、所定のパターンで断続的あるいは連続的に塗布することが可能となる。計測・制御装置１０は正負の電極間に泳動電圧を供給する。また、検出器４の出力を変換して分離対象細胞の有無と通過時刻を計測し、その排出時間に合わせてマトリックス溶液をキャピラリー排出末端に供給し、細胞試料液と接触させ混和させる。
【００２０】
コネクタ８の末端構造の一例を図２に示す。電気泳動用キャピラリー３はマトリックス供給用チューブ１１の中心を通り、それぞれプレートに対する高さは同一とする。通常キャピラリー３の外径は１５０−４００mmである。また、通常マトリックス供給用チューブ１１の内径は０．１５−１．０ｍｍ、外径は０．５−１mmである。連続的に試料溶液をプレートに排出する場合、プレートに対してキャピラリーの外径は小さい方が狭い範囲に確実に塗布できる。
【００２１】
本発明における試料分取の一例として、MALDI-MS法において生体関連物質（タンパク質、ペプチド等）の測定を感度よく行うために、プレート５にあらかじめ揮発性有機溶媒（例えばアセトン等）に溶解したマトリックスを塗布しておくことが好ましい。また、分離の際の分解能を保持した測定を行うには排出液はスポット状に分取するのではなく、連続的に塗布する方が好ましい。
【００２２】
電気泳動により分離された細胞試料はキャピラリー３の開放末端でマトリックスを含む溶媒と接触して混和され、バイオマーカーが抽出された状態でプレート５に塗布される。このとき、溶媒及びマトリックスは任意に設定することができるが、５０％アセトニトリル及び１％トリフルオロ酢酸溶液とCHCAの組み合わせが好ましい。また、マトリックスと試料が混和状態でプレートに塗布されるため、電気泳動による分離終了後、プレートはMALDI-MS法の測定に適した状態となっており、連続した測定を容易に行うことができる。
【実施例】
【００２３】
〔実施例１〕
酢酸菌（Acetobacter aceti JCM7641とGluconobacter oxydans JCM7642)の同定を行った。20mＭ炭酸アンモニウム−アンモニア緩衝液（pH = 9.1）に各々の酢酸菌（〜1010 cells/mL）を混合分散させ、測定試料とした。試料導入は容器１から落差法で行い、5 cm, 20 sの導入で2.8 nL（プラグ長0.14 cm）の注入量とした。キャピラリー３は全長60 cm、内径 50 mmとした。キャピラリー３の途中にUV検出器４（日本分光社製CE-870、測定波長600 nm)を配し、キャピラリー３の外部から泳動する細胞を検出できるようにした。試料の導入端から検出器４までのキャピラリーの長さは約30cm、検出器４からプレート５までの長さを約30cmとした。容器１を泳動液（２０mＭ 炭酸アンモニウム−アンモニア緩衝液）で満たし、正電極２を差し込み、プレート５を負電極６とし、その両電極間に10.0 kVの電圧を印加した。また,送液用チューブ９から15mg  CHCAを５０％アセトニトリル及び１％トリフルオロ酢酸溶液1.０mLに溶解した溶液を流速0.5mL/minで送液し、マトリックス供給用チューブ末端から、マトリックス溶液を流出させた。図３には電場を印加してからの検出器４による測定結果を示す。また、位置制御機構７は電場印加と同時に作動し、0.17cm/minの速度でX軸方向に移動させた。その結果、１０分間の電位印加による電気泳動の結果をプレート５上に長さ2.3cmで展開した。
【００２４】
〔実施例２〕
実施例１で得た分離試料をMALDI-MSとしてApplied Biosystems社製 Voyager DE-PROを用いて測定した。図３において各々の酢酸菌（Acetobacter aceti JCM7641とGluconobacter oxydans JCM7642)由来と考えられるピークに相当する部分について質量分析を行った結果を図４に示す。その結果、それぞれの部分で各々の酢酸菌のバイオマーカーと思われるマススペクトルが得られた。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】本発明の装置の一例を示す模式図である。
【図２】本発明のキャピラリー末端構造の一例を示す図である。
【図３】泳動細胞の検出器出力の一例を示す図である。
【図４】分離細胞のマススペクトルを示す図である。図中の２つのスペクトルは前者が図３の最初のピーク、後者が図３の２番目のピークに相当する。
【符号の説明】
【００２６】
１  泳動液の入った容器
２  正電極
３  キャピラリー（細管）
４  検出器（UV検出器）
５  プレート
６  負電極
７  位置制御機構
８  コネクタ
９  送液用チューブ
１０  計測・制御装置
１１  マトリックス供給用チューブ
【図１】
2006126039.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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