(57)【要約】      （修正有）【課題】多量体を形成する蛍光蛋白質を単量体化することにより、分子のラベルを行った際に現われうる不具合を解消することができるアミノ酸配列を有する蛍光蛋白質を提供する。【解決手段】Ａｃｒｏｐｏｒａ  ｓｐ．より単離された青緑蛍光蛋白質に変異を導入することにより、蛍光を有し、かつ単量体で存在する蛋白質を作製した。そのアミノ酸配列又はその１から数個のアミノ酸の欠失、置換及び／又は付加を有するアミノ酸配列を有する蛋白質、それらのアミノ酸配列をコードする塩基配列を有するＤＮＡ、ＤＮＡ又は組換えベクターを有する形質転換体を提供する。また上記蛍光蛋白質と他の蛋白質との融合蛋白質も提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の何れかのアミノ酸配列を有する蛍光蛋白質。
（ａ）配列番号２に記載のアミノ酸配列；又は、
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列において１から数個のアミノ酸の欠失、置換及び／又は付加を有するアミノ酸配列を有し、蛍光を有し、かつ単量体で存在するアミノ酸配列：
【請求項２】
以下の何れかのＤＮＡ。
（ａ）配列番号２に記載のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ；又は、
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列において１から数個のアミノ酸の欠失、置換及び／又は付加を有するアミノ酸配列を有し、単量体で存在する蛍光蛋白質をコードするＤＮＡ：
【請求項３】
以下の何れかの塩基配列を有するＤＮＡ。
（ａ）配列番号１に記載の塩基配列；又は、
（ｂ）配列番号１に記載の塩基配列において１から数個の塩基の欠失、置換及び／又は付加を有する塩基配列を有し、単量体で存在する蛍光蛋白質をコードする塩基配列：
【請求項４】
請求項２又は３に記載のＤＮＡを有する組み換えベクター。
【請求項５】
請求項２又は３に記載のＤＮＡ又は請求項４に記載の組み換えベクターを有する形質転換体。
【請求項６】
請求項１に記載の蛍光蛋白質と他の蛋白質とを融合させて得られる融合蛋白質。
【請求項７】
請求項１に記載の蛍光蛋白質の蛍光スペクトルとＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）を引き起こすのに十分な重なりをもつ吸収スペクトルを示す色素蛋白質と、請求項１に記載の蛍光蛋白質とをリンカー配列を介して連結することにより得られるＦＲＥＴ測定用融合蛋白質。
【請求項８】
色素蛋白質が、以下の何れかのアミノ酸配列を有する色素蛋白質である、請求項７に記載のＦＲＥＴ測定用融合蛋白質。
（ａ）配列番号４に記載のアミノ酸配列；又は、
（ｂ）配列番号４に記載のアミノ酸配列において１から数個のアミノ酸の欠失、置換及び／又は付加を有するアミノ酸配列を有し、配列番号４に記載のアミノ酸配列と同等の吸光特性を有するアミノ酸配列：
【請求項９】
請求項１に記載の蛍光蛋白質、請求項２又は３に記載のＤＮＡ、請求項４に記載の組み換えベクター、請求項５に記載の形質転換体、請求項６に記載の融合蛋白質、又は請求項７若しくは８に記載のＦＲＥＴ測定用融合蛋白質の何れかを含む、蛍光試薬キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な蛍光蛋白質に関する。より詳細には、本発明は、単量体で存在することができる新規な蛍光蛋白質及びその利用に関する。
【背景技術】
【０００２】
クラゲのエクオレア・ビクトリア（Aequorea victoria）に由来する緑色蛍光蛋白質（ＧＦＰ）は、生物系において多くの用途を有する。最近、ランダム突然変異誘発法および半合理的(semi-rational)突然変異誘発法に基づいて、色を変化させたり、折りたたみ特性を改善したり、輝度を高めたり、あるいはｐＨ感受性を改変したといった様々なＧＦＰ変異体が作製されている。遺伝子組み換え技術により他の蛋白質をＧＦＰ等の蛍光蛋白質に融合させて、それらの発現および輸送のモニタリングを行うことが行われている。
【０００３】
最もよく使用されるＧＦＰ変異体の一つとして黄色蛍光蛋白質（ＹＦＰ）が挙げられる。また、ＧＦＰ変異体の他の例として、シアン蛍光蛋白質（ＣＦＰ）があり、ＥＣＦＰ（enhanced cyan fluorescent protein)が知られている。また、イソギンチャク（Discoma sp.）からは赤色蛍光蛋白質（ＲＦＰ）も単離されており、DasRedが知られている。このように蛍光蛋白質は、緑色、黄色、シアン色、赤色の４種が次々と開発されスペクトルの範囲は大幅に広がっている。
【０００４】
一方、イシサンゴ目のミドリイシより単離された青緑色蛍光蛋白質（Midoriishi-Cyan；MiCy）（特願２００３−１７０３２６：国際公開ＷＯ２００４/１１１２３５号公報）は分子量測定の結果、５５ｋＤａ（アミノ酸配列から計算される分子量は２９ｋＤａ）を示し、通常は二量体を形成していると考えられる。近年、蛍光蛋白質を用いて細胞や分子をラベルする需要が急速に高まっている。細胞をラベルする際には蛍光蛋白質が多量体を形成しようと、蛍光蛋白質自身は細胞質中に漂っているだけなので問題は起こらないが、分子をラベルする際には問題が生じてくる。例えば、ラベルしたい分子が多量体を形成する場合、ターゲット分子と蛍光蛋白質分子が互いに多量体を形成し合い、巨大なポリマーを形成してしまう可能性がある。また、どちらかの多量体形成が阻害された時には、その多量体形成できない分子が本来の性質を失うことになる。蛍光蛋白質を複数用いた分子内ＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）のプローブにおいても同じく、多量体形成蛍光蛋白質同士を一本のペプチド鎖として発現させた場合に、互いが多量体形成をしあうためにＦＲＥＴの観測は困難を極める。
【０００５】
【特許文献１】国際公開ＷＯ２００４/１１１２３５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、多量体を形成する蛍光蛋白質を単量体化することにより、分子のラベルを行った際に現われうる不具合を解消することを解決すべき課題とする。即ち、本発明は、蛍光蛋白質が多量体化しようとすることによるターゲットとする融合蛋白質の機能阻害を防止することを解決すべき課題とする。現行のＦＲＥＴ測定系では、蛍光物質又は発光物質をドナーとして使用し、蛍光物質をアクセプターとして使用するのが通常であるが、アクセプターは吸収特性があれば蛍光を発しなくてもＦＲＥＴの測定は可能である。逆に、アクセプターが蛍光を発しなければ、それだけ蛍光取得の波長域に空きができるため、複数のＦＲＥＴ測定が可能となる。また、蛍光寿命を測定するライフタイムイメージングではＦＲＥＴのドナーの蛍光寿命を測定すればＦＲＥＴが起こっているか否かを判別できるため、蛍光を発しない色素蛋白質をアクセプターとして用いたＦＲＥＴ系は同時に複数のＦＲＥＴを測定することができる。本発明は、上記したようなＦＲＥＴ系を構築することを解決すべき課題とした。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決するために本発明者らは鋭意検討し、イシサンゴに属するミドリイシ（Acropora sp.）より単離された青緑蛍光蛋白質MiCyに変異を導入し、単量体として機能するmMiCyを作製することに成功した。さらに、ドナーに蛍光蛋白質（mMiCy）を用い、アクセプターに色素蛋白質（KP）を用いたFRET測定系を構築することにより、同時に複数のFRETを測定可能なFRET系を提供することに成功した。本発明はこれらの知見に基づいて完成したものである。
【０００８】
即ち、本発明によれば、以下の何れかのアミノ酸配列を有する蛍光蛋白質が提供される。
（ａ）配列番号２に記載のアミノ酸配列；又は、
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列において１から数個のアミノ酸の欠失、置換及び／又は付加を有するアミノ酸配列を有し、蛍光を有し、かつ単量体で存在するアミノ酸配列：
【０００９】
本発明の別の側面によれば、以下の何れかのＤＮＡが提供される。
（ａ）配列番号２に記載のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ；又は、
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列において１から数個のアミノ酸の欠失、置換及び／又は付加を有するアミノ酸配列を有し、単量体で存在する蛍光蛋白質をコードするＤＮＡ：
【００１０】
本発明のさらに別の側面によれば、以下の何れかの塩基配列を有するＤＮＡが提供される。
（ａ）配列番号１に記載の塩基配列；又は、
（ｂ）配列番号１に記載の塩基配列において１から数個の塩基の欠失、置換及び／又は付加を有する塩基配列を有し、単量体で存在する蛍光蛋白質をコードする塩基配列：
【００１１】
本発明のさらに別の側面によれば、本発明のＤＮＡを有する組み換えベクターが提供される。
本発明のさらに別の側面によれば、本発明のＤＮＡ又は組み換えベクターを有する形質転換体が提供される。
【００１２】
本発明のさらに別の側面によれば、本発明の蛍光蛋白質と他の蛋白質とを融合させて得られる融合蛋白質が提供される。
本発明のさらに別の側面によれば、本発明の蛍光蛋白質の蛍光スペクトルとＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）を引き起こすのに十分な重なりをもつ吸収スペクトルを示す色素蛋白質と、本発明の蛍光蛋白質とをリンカー配列を介して連結することにより得られるＦＲＥＴ測定用融合蛋白質が提供される。
【００１３】
好ましくは、色素蛋白質は、以下の何れかのアミノ酸配列を有する色素蛋白質である。
（ａ）配列番号４に記載のアミノ酸配列；又は、
（ｂ）配列番号４に記載のアミノ酸配列において１から数個のアミノ酸の欠失、置換及び／又は付加を有するアミノ酸配列を有し、配列番号４に記載のアミノ酸配列と同等の吸光特性を有するアミノ酸配列：
【００１４】
本発明のさらに別の側面によれば、本発明の蛍光蛋白質、ＤＮＡ、組み換えベクター、形質転換体、融合蛋白質、又はＦＲＥＴ測定用融合蛋白質の何れかを含む、蛍光試薬キットが提供される。
【発明の効果】
【００１５】
配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する色素蛋白質KPはコモチイソンギンチャクより単離された赤紫色の色素蛋白質で４量体を形成する。KPの吸収スペクトルとmMiCyの蛍光スペクトルはＦＲＥＴを起こすのに十分な重なり（スペクトラルオーバーラップ）を持った。本発明では、この多量体を形成する色素蛋白質（KP）と蛍光蛋白質（mMiCy）をリンカーでつなぎ、ＦＲＥＴの系を構築した。ドナーに蛍光蛋白質（mMiCy）を用い、アクセプターに色素蛋白質（KP）を用いたＦＲＥＴ測定系の構築を行い、１波長励起１波長測光によるCaspase3の活性測定系を確率した。アクセプターが蛍光を発しなければ、それだけ蛍光取得の波長域に空きができるため、複数のＦＲＥＴ測定が同時に可能となる。また、ライフタイムイメージングでＦＲＥＴのドナーの蛍光寿命を測定すれば、蛍光を発しない色素蛋白質をアクセプターとして用いたＦＲＥＴ系は同時に複数のＦＲＥＴを測定することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。
（１）本発明の蛍光蛋白質
イシサンゴに属するミドリイシ（Acropora sp.）より単離された青緑蛍光蛋白質MiCyは2量体を形成する。細胞をラベルする際には蛍光蛋白質が何量体を形成しようと、蛍光蛋白質自身は細胞質中に漂っているだけなので問題は起こらないが、分子をラベルする際には問題が生じてくる場合が容易に考えられる。例えば、ラベルしたい分子が多量体を形成する場合、ターゲット分子と蛍光蛋白質分子が互いに多量体を形成し合い、巨大なポリマーを形成してしまう可能性がある。また、どちらかの多量体形成が阻害された時には、その多量体形成できない分子が本来の性質を失うことになりかねない。蛍光蛋白質を複数用いた分子内FRET（蛍光エネルギー共鳴移動）のプローブにおいても同じく、多量体形成蛍光蛋白質同士を一本のペプチド鎖として発現させた場合に、互いが多量体形成をしあうためにFRETの観測は困難をきわめる。それらを解決すべく、2量体を形成するMiCyに変異導入し、単量体として機能するmMiCyの作製を行った。
【００１７】
本発明の蛍光蛋白質（mMiCy）は、以下の何れかのアミノ酸配列を有する蛍光蛋白質である。
（ａ）配列番号２に記載のアミノ酸配列；又は、
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列において１から数個のアミノ酸の欠失、置換及び／又は付加を有するアミノ酸配列を有し、蛍光を有し、かつ単量体で存在するアミノ酸配列：
【００１８】
本発明の蛍光蛋白質（mMiCy）の蛍光ピークは496nmであり、吸収及び励起のピークは470nmである。なお、MiCyの蛍光ピークは495nm、吸収及び励起ピークは472nmであり、両者について蛍光、励起および吸収の性質は類似している。
【００１９】
本明細書で言う「１から数個のアミノ酸の欠失、置換及び／又は付加を有するアミノ酸配列」における「１から数個」の範囲は特には限定されないが、例えば、１から２０個、好ましくは１から１０個、より好ましくは１から７個、さらに好ましくは１から５個、特に好ましくは１から３個程度を意味する。
【００２０】
本明細書で言う「蛍光を有する」および「蛍光蛋白質」とは、蛍光を発することができる全ての場合を包含し、蛍光強度、励起波長、蛍光波長、ｐＨ感受性などの諸特性は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有する蛋白質と比較して、変動していてもよいし、同様のままでもよい。
【００２１】
本発明の蛍光蛋白質の取得方法については特に制限はなく、化学合成により合成した蛋白質でもよいし、遺伝子組み換え技術による作製した組み換え蛋白質でもよい。
【００２２】
組み換え蛋白質を作製する場合には、先ず当該蛋白質をコードするＤＮＡを入手することが必要である。本明細書の配列表の配列番号２に記載したアミノ酸配列並びに配列番号１に記載した塩基配列の情報を利用することにより適当なプライマーを設計し、それらを用いてミドリイシ（Acropora sp.）由来のｃＤＮＡライブラリーまたはMiCy遺伝子などを鋳型にしてＰＣＲを行うことにより、本発明の蛍光蛋白質をコードするＤＮＡを取得することができる。本発明の蛍光蛋白質をコードするＤＮＡの一部の断片を上記したＰＣＲにより得た場合には、作製したＤＮＡ断片を順番に遺伝子組み換え技術により連結することにより、所望の蛍光蛋白質をコードするＤＮＡを得ることができる。このＤＮＡを適当な発現系に導入することにより、本発明の蛍光蛋白質を産生することができる。発現系での発現については本明細書中後記する。
【００２３】
（２）本発明のＤＮＡ
本発明の蛍光蛋白質をコードするＤＮＡの具体例としては、以下の何れかのＤＮＡが挙げられる。
（ａ）配列番号２に記載のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ；又は、
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列において１から数個のアミノ酸の欠失、置換及び／又は付加を有するアミノ酸配列を有し、単量体で存在する蛍光蛋白質をコードするＤＮＡ：
【００２４】
本発明の蛍光蛋白質をコードするＤＮＡのさらなる具体例としては、以下の何れかのＤＮＡが挙げられる。
（ａ）配列番号１に記載の塩基配列；又は、
（ｂ）配列番号１に記載の塩基配列において１から数個の塩基の欠失、置換及び／又は付加を有する塩基配列を有し、単量体で存在する蛍光蛋白質をコードする塩基配列：
【００２５】
本発明のＤＮＡは、例えばホスホアミダイト法などにより合成することができるし、特異的プライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって製造することもできる。本発明のＤＮＡ又はその断片の作製方法については、本明細書中上述した通りである。
【００２６】
また、所定の核酸配列に所望の変異を導入する方法は当業者に公知である。例えば、部位特異的変異誘発法、縮重オリゴヌクレオチドを用いるＰＣＲ、核酸を含む細胞の変異誘発剤又は放射線への露出等の公知の技術を適宜使用することによって、変異を有するＤＮＡを構築することができる。このような公知の技術は、例えば、Molecular Cloning: A laboratory Mannual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY.,1989、並びにCurrent Protocols in Molecular Biology, Supplement 1〜38, John Wiley & Sons (1987-1997)に記載されている。
【００２７】
（３）本発明の組み換えベクター
本発明のＤＮＡは適当なベクター中に挿入して使用することができる。本発明で用いるベクターの種類は特に限定されず、例えば、自立的に複製するベクター（例えばプラスミド等）でもよいし、あるいは、宿主細胞に導入された際に宿主細胞のゲノムに組み込まれ、組み込まれた染色体と共に複製されるものであってもよい。
【００２８】
好ましくは、本発明で用いるベクターは発現ベクターである。発現ベクターにおいて本発明のＤＮＡは、転写に必要な要素（例えば、プロモーター等）が機能的に連結されている。プロモータは宿主細胞において転写活性を示すＤＮＡ配列であり、宿主の種類に応じて適宜することができる。
【００２９】
細菌細胞で作動可能なプロモータとしては、バチルス・ステアロテルモフィルス・マルトジェニック・アミラーゼ遺伝子(Bacillusstearothermophilus maltogenic amylase gene)、バチルス・リケニホルミスαアミラーゼ遺伝子(Bacillus licheniformis alpha-amylase gene)、バチルス・アミロリケファチエンス・BANアミラーゼ遺伝子(Bacillus amyloliquefaciens BAN amylase gene)、バチルス・サブチリス・アルカリプロテアーゼ遺伝子(Bacillus Ｓubtilis alkaline protease gene)もしくはバチルス・プミルス・キシロシダーゼ遺伝子(Bacillus pumilus xylosldase gene)のプロモータ、またはファージ・ラムダのＰR若しくはＰLプロモータ、大腸菌の lac、trp若しくはtacプロモータなどが挙げられる。
【００３０】
哺乳動物細胞で作動可能なプロモータの例としては、ＳＶ４０プロモータ、ＭＴ−１（メタロチオネイン遺伝子）プロモータ、またはアデノウイルス２主後期プロモータなどがある。昆虫細胞で作動可能なプロモータの例としては、ポリヘドリンプロモータ、Ｐ１０プロモータ、オートグラファ・カリホルニカ・ポリヘドロシス塩基性タンパクプロモータ、バキュウロウイルス即時型初期遺伝子１プロモータ、またはバキュウロウイルス３９Ｋ遅延型初期遺伝子プロモータ等がある。酵母宿主細胞で作動可能なプロモータの例としては、酵母解糖系遺伝子由来のプロモータ、アルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子プロモータ、ＴＰＩ１プロモータ、ＡＤＨ2-4cプロモータなどが挙げられる。
糸状菌細胞で作動可能なプロモータの例としては、ＡＤＨ３プロモータまたはｔｐｉＡプロモータなどがある。
【００３１】
また、本発明のＤＮＡは必要に応じて、例えばヒト成長ホルモンターミネータまたは真菌宿主についてはＴＰＩ１ターミネータ若しくはＡＤＨ３ターミネータのような適切なターミネータに機能的に結合されてもよい。本発明の組み換えベクターは更に、ポリアデニレーションシグナル(例えばＳＶ４０またはアデノウイルス５Ｅ１ｂ領域由来のもの)、転写エンハンサ配列（例えばＳＶ４０エンハンサ）および翻訳エンハンサ配列（例えばアデノウイルス ＶＡ ＲＮＡ をコードするもの）のような要素を有していてもよい。
本発明の組み換えベクターは更に、該ベクターが宿主細胞内で複製することを可能にするＤＮＡ配列を具備してもよく、その一例としてはＳＶ４０複製起点（宿主細胞が哺乳類細胞のとき）が挙げられる。
【００３２】
本発明の組み換えベクターはさらに選択マーカーを含有してもよい。選択マーカーとしては、例えば、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）またはシゾサッカロマイセス・ポンベＴＰＩ遺伝子等のようなその補体が宿主細胞に欠けている遺伝子、または例えばアンピシリン、カナマイシン、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、ネオマイシン若しくはヒグロマイシンのような薬剤耐性遺伝子を挙げることができる。
本発明のＤＮＡ、プロモータ、および所望によりターミネータおよび／または分泌シグナル配列をそれぞれ連結し、これらを適切なベクターに挿入する方法は当業者に周知である。
【００３３】
（４）本発明の形質転換体
本発明のＤＮＡ又は組み換えベクターを適当な宿主に導入することによって形質転換体を作製することができる。
本発明のＤＮＡまたは組み換えベクターを導入される宿主細胞は、本発明のＤＮＡ構築物を発現できれば任意の細胞でよく、細菌、酵母、真菌および高等真核細胞等が挙げられる。
【００３４】
細菌細胞の例としては、バチルスまたはストレプトマイセス等のグラム陽性菌又は大腸菌等のグラム陰性菌が挙げられる。これら細菌の形質転換は、プロトプラスト法、または公知の方法でコンピテント細胞を用いることにより行なえばよい。
哺乳類細胞の例としては、ＨＥＫ２９３細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＢＨＫ細胞、ＣＨＬ細胞またはＣＨＯ細胞等が挙げられる。哺乳類細胞を形質転換し、該細胞に導入されたＤＮＡ配列を発現させる方法も公知であり、例えば、エレクトロポレーション法、リン酸カルシウム法、リポフェクション法等を用いることができる。
【００３５】
酵母細胞の例としては、サッカロマイセスまたはシゾサッカロマイセスに属する細胞が挙げられ、例えば、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevis1ae)またはサッカロマイセス・クルイベリ(Ｓaccharomyces kluyveri)等が挙げられる。酵母宿主への組み換えベクターの導入方法としては、例えば、エレクトロポレーション法、スフェロブラスト法、酢酸リチウム法等を挙げることができる。
【００３６】
他の真菌細胞の例は、糸状菌、例えばアスペルギルス、ニューロスポラ、フザリウム、またはトリコデルマに属する細胞である。宿主細胞として糸状菌を用いる場合、ＤＮＡ構築物を宿主染色体に組み込んで組換え宿主細胞を得ることにより形質転換を行うことができる。ＤＮＡ構築物の宿主染色体への組み込みは、公知の方法に従い、例えば相同組換えまたは異種組換えにより行うことができる。
【００３７】
昆虫細胞を宿主として用いる場合には、組換え遺伝子導入ベクターおよびバキュロウイルスを昆虫細胞に共導入して昆虫細胞培養上清中に組換えウイルスを得た後、さらに組換えウイルスを昆虫細胞に感染させ、蛋白質を発現させることができる（例えば、Baculovirus Expression Vectors, A Laboratory Manua1；及びカレント・プロトコールズ・イン・モレキュラー・バイオロジー、Bio/Technology, 6, 47(1988)等に記載）。
【００３８】
バキュロウイルスとしては、例えば、ヨトウガ科昆虫に感染するウイルスであるアウトグラファ・カリフォルニカ・ヌクレアー・ポリヘドロシス・ウイルス(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus)等を用いることができる。
昆虫細胞としては、Spodoptera frugiperdaの卵巣細胞であるＳｆ９、Ｓｆ２１〔バキュロウイルス・エクスプレッション・ベクターズ、ア・ラボラトリー・マニュアル、ダブリュー・エイチ・フリーマン・アンド・カンパニー(W. H. Freeman and Company)、ニューヨーク(New York)、(1992)〕、Trichoplusia niの卵巣細胞であるＨｉＦｉｖｅ(インビトロジェン社製)等を用いることができる。
組換えウイルスを調製するための、昆虫細胞への組換え遺伝子導入ベクターと上記バキュロウイルスの共導入方法としては、例えば、リン酸カルシウム法又はリポフェクション法等を挙げることができる。
【００３９】
上記の形質転換体は、導入されたＤＮＡ構築物の発現を可能にする条件下で適切な栄養培地中で培養する。形質転換体の培養物から、本発明の蛍光融合蛋白質を単離精製するには、通常の蛋白質の単離、精製法を用いればよい。
例えば、本発明の蛋白質が、細胞内に溶解状態で発現した場合には、培養終了後、細胞を遠心分離により回収し水系緩衝液に懸濁後、超音波破砕機等により細胞を破砕し、無細胞抽出液を得る。該無細胞抽出液を遠心分離することにより得られた上清から、通常の蛋白質の単離精製法、即ち、溶媒抽出法、硫安等による塩析法、脱塩法、有機溶媒による沈殿法、ジエチルアミノエチル(DEAE)セファロース等のレジンを用いた陰イオン交換クロマトグラフィー法、S-Sepharose FF(ファルマシア社製)等のレジンを用いた陽イオン交換クロマトグラフィー法、ブチルセファロース、フェニルセファロース等のレジンを用いた疎水性クロマトグラフィー法、分子篩を用いたゲルろ過法、アフィニティークロマトグラフィ一法、クロマトフォーカシング法、等電点電気泳動等の電気泳動法等の手法を単独あるいは組み合わせて用い、精製標品を得ることができる。
【００４０】
（５）本発明の蛍光蛋白質及びそれを含む融合蛍光蛋白質の利用
本発明は蛍光蛋白質を他の蛋白質と融合させることにより、融合蛍光蛋白質を構築することができる。
本発明の融合蛍光蛋白質の取得方法については特に制限はなく、化学合成により合成した蛋白質でもよいし、遺伝子組み換え技術による作製した組み換え蛋白質でもよい。
組み換え蛋白質を作製する場合には、先ず当該蛋白質をコードするＤＮＡを入手することが必要である。本明細書の配列表の配列番号２に記載したアミノ酸配列及び配列番号１に記載した塩基配列の情報を利用することにより適当なプライマーを設計し、本発明の蛍光蛋白質の遺伝子を含むＤＮＡ断片を鋳型にしてＰＣＲを行うことにより、本発明の蛍光蛋白質をコードするＤＮＡを構築するのに必要なＤＮＡ断片を作製することができる。また同様に、融合すべき蛋白質をコードするＤＮＡ断片も入手する。
【００４１】
次いで、これらのＤＮＡ断片を順番に遺伝子組み換え技術により連結することにより、所望の融合蛍光蛋白質をコードするＤＮＡを得ることができる。このＤＮＡを適当な発現系に導入することにより、本発明の融合蛍光蛋白質を産生することができる。
【００４２】
本発明の蛍光蛋白質は、特に、標識としての利用価値が高い。即ち、本発明の蛍光蛋白質を被検アミノ酸配列との融合蛋白質として精製し、マイクロインジェクション法などの手法により細胞内に導入し、該融合蛋白質の分布を経時的に観察すれば、被検アミノ酸配列の細胞内におけるターゲッティング活性を検出することが可能である。
【００４３】
本発明の蛍光蛋白質を融合させる他の蛋白質（被検アミノ酸配列）の種類は特に限定されるものではないが、例えば、細胞内に局在する蛋白質、細胞内小器官に特異的な蛋白質、ターゲティングシグナル（例えば、核移行シグナル、ミトコンドリアプレ配列）等が好適である。なお、本発明の蛍光蛋白質は、マイクロインジェクション法などにより細胞内に導入する以外に、細胞内で発現させて用いることも可能である。この場合には、本発明の蛍光蛋白質をコードするＤＮＡが発現可能に挿入されたベクターが宿主細胞に導入される。
【００４４】
また、本発明の蛍光蛋白質は、レポーター蛋白質としてプロモーター活性の測定に用いることも可能である。即ち、被検プロモーターの下流に、本発明の蛍光蛋白質をコードするＤＮＡが配置されたベクターを構築し、これを宿主細胞に導入し、該細胞から発せられる本発明の蛍光蛋白質の蛍光を検出することにより、被検プロモーターの活性を測定することが可能である。被検プロモーターとしては、宿主細胞内で機能するものであれば、特に制限はない。
【００４５】
上記被検アミノ酸配列のターゲティング活性の検出やプロモーター活性の測定において用いられるベクターとしては、特に制限はないが、例えば、動物細胞用ベクターでは、「pNEO」（P. Southern, and P. Berg (1982) J. MOl. Appl. Genet. 1:327）、「pCAGGS」（H.Niwa,K.Yamamura,and J.Miyazaki. Gene 108,193-200(1991)）、「pRc/CMV」（インビトロゲン社製）、「pCDM8」（インビトロゲン社製）などが、酵母用ベクターでは、「pRS303」,「pRS304」,「pRS305」,「pRS306」,「pRS313」,「pRS314」,「pRS315」,[pRS316]（R.S.Sikorski and P.Hieter (1989) Genetics 122: 19-27）、「pRS423」,「pRS424」,「pRS425」,「pRS426」（T.W.Christianson, R.S.Sikorski, M.Dante, J.H.Shero, and P. Hieter (1992) Gene 110: 119-122）などが好適に用いられる。
【００４６】
また、使用可能な細胞の種類も特に限定されず、各種の動物細胞、例えば、L細胞、BalbC-3T3細胞、NIH3T3細胞、CHO(Chinese hamster ovary)細胞、HeLa細胞、NRK(normal rat kidney)細胞、「Saccharomyces cerevisiae」などの酵母細胞や大腸菌（E. coli）細胞などを使用することができる。ベクターの宿主細胞への導入は、例えば、リン酸カルシウム法やエレクトロポレーション法などの常法により行うことができる。
【００４７】
上記のようにして得た、本発明の蛍光蛋白質と他の蛋白質（蛋白質Ｘとする）とを融合させた融合蛍光蛋白質を細胞内で発現させ、発する蛍光をモニターすることにより、細胞内における蛋白質Ｘの局在や動態を分析することが可能になる。即ち、本発明の融合蛍光蛋白質をコードするＤＮＡで形質転換またはトランスフェクトした細胞を蛍光顕微鏡で観察することにより細胞内における蛋白質Ｘの局在や動態を可視化して分析することができる。
【００４８】
例えば、蛋白質Ｘとして細胞内オルガネラに特異的な蛋白質を利用することにより、核、ミトコンドリア、小胞体、ゴルジ体、分泌小胞、ペルオキソームなどの分布や動きを観察できる。
また、例えば、神経細胞の軸索、樹状突起などは発生途中の個体の中で著しく複雑な走向の変化を示すので、こういった部位を蛍光ラベルすることにより動的解析が可能になる。
【００４９】
本発明の蛍光蛋白質の蛍光は、生細胞のまま検出することが可能である。この検出は、例えば、蛍光顕微鏡（カールツァイス社 アキシオフォト フィルターセット09）や画像解析装置（ATTO デジタルイメージアナライザー）などを用いて行うことが可能である。
顕微鏡の種類は目的に応じて適宜選択できる。経時変化を追跡するなど頻回の観察を必要とする場合には、通常の落射型蛍光顕微鏡が好ましい。細胞内の詳細な局在を追及したい場合など、解像度を重視する場合は、共焦点レーザー顕微鏡の方が好ましい。顕微鏡システムとしては、細胞の生理状態を保ち、コンタミネーションを防止する観点から、倒立型顕微鏡が好ましい。正立顕微鏡を使用する場合、高倍率レンズを用いる際には水浸レンズを用いることができる。
【００５０】
フィルターセットは蛍光蛋白質の蛍光波長に応じて適切なものを選択できる。本発明の蛍光蛋白質の場合、励起光４６０〜４８０ｎｍ、蛍光４８０〜５１０ｎｍ程度のフィルターを使用することが好ましい。
【００５１】
また、蛍光顕微鏡を用いた生細胞での経時観察を行う場合には、短時間で撮影を行うべきなので、高感度冷却ＣＣＤカメラを使用する。冷却ＣＣＤカメラは、ＣＣＤを冷却することにより熱雑音を下げ、微弱な蛍光像を短時間露光で鮮明に撮影することができる。
【００５２】
さらに本発明の蛍光蛋白質は、他の色素蛋白質と融合させることにより、融合蛋白質を構築することができる。本発明の蛍光蛋白質に融合させる他の色素蛋白質の種類は特に限定されないが、本発明の蛍光蛋白質の蛍光スペクトルとＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）を引き起こすのに十分な重なりをもつ吸収スペクトルを示す色素蛋白質を用いることが好ましい。
【００５３】
このような色素蛋白質の好ましい具体例としては、以下の何れかのアミノ酸配列を有する色素蛋白質が挙げられる。
（ａ）配列番号４に記載のアミノ酸配列；又は、
（ｂ）配列番号４に記載のアミノ酸配列において１から数個のアミノ酸の欠失、置換及び／又は付加を有するアミノ酸配列を有し、配列番号４に記載のアミノ酸配列と同等の吸光特性を有するアミノ酸配列：
【００５４】
分子間の相互作用を分析する手法の一つとして、ＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー転移）が知られている。ＦＲＥＴでは、例えば、第一の蛍光蛋白質としてのシアン蛍光蛋白質（ＣＦＰ）で標識した第一の分子と、第二の蛍光蛋白質としての黄色蛍光蛋白質（ＹＦＰ）で標識した第二の分子とを共存させることにより、黄色蛍光蛋白質（ＹＦＰ）をアクセプター分子として作用させ、シアン蛍光蛋白質（ＣＦＰ）をドナー分子として作用させ、両者の間でＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー転移）を生じさせることにより、第一の分子と第二の分子との間の相互作用を可視化することができる。即ち、ＦＲＥＴでは２種類の分子にそれぞれ異なる色素を導入し、エネルギーレベルの高い方の色素（ドナー分子）を選択的に励起し、その色素の蛍光を測定し、もう一方の色素（アクセプター分子）からの長波長蛍光も測定して、それらの蛍光変化量によって分子間の相互作用を可視化する。両方の色素が、2種類の分子の相互作用によって近接したときのみドナー分子の蛍光の減少とアクセプター分子の蛍光の増加が1波長励起2波長測光法により観測される。しかし、アクセプター分子に色素蛋白質を用いた場合は、両方の色素が、2種類の分子の相互作用によって近接したときのみドナー分子の蛍光の減少を生じ1波長励起１波長測光法により観測することができる。即ち、測定機器の簡易化が可能となる。配列番号４に記載のアミノ酸配列を有する色素蛋白質（KP）（国際公開ＷＯ０３／１０４４６１号公報）は、上記したようなＦＲＥＴにおけるアクセプター分子としての利用価値が高い。なお、色素蛋白質（KP）をコードする塩基配列を配列番号３に示す。
【００５５】
（６）本発明のキット
本発明によれば、本明細書に記載した蛍光蛋白質、融合蛍光蛋白質、ＤＮＡ、組み換えベクター又は形質転換体から選択される少なくとも1種以上を含むことを特徴とする、蛍光試薬キットが提供される。本発明のキットは、それ自体既知の通常用いられる材料及び手法で調製することができる。
蛍光蛋白質又はＤＮＡなどの試薬は、適当な溶媒に溶解することにより保存に適した形態に調製することができる。溶媒としては、水、エタノール、各種緩衝液などを用いることができる。
以下の実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。
【実施例】
【００５６】
実施例１：単量体青緑蛍光蛋白質（mMiCy）の作製
イシサンゴに属するミドリイシ（Acropora sp.）より単離された青緑蛍光蛋白質MiCyは2量体を形成する。このような2量体を形成する蛍光蛋白質をFRETにおいてそのまま利用すると観測が困難になる等の問題が生じることから、2量体を形成するMiCyに変異導入し、単量体として機能するmMiCyの作製を行った。
【００５７】
（１）変異導入
MiCyのアミノ酸配列（国際公開ＷＯ２００４/１１１２３５号公報）から多量体形成界面を予測し、多量体形成界面のアミノ酸を置換し、なおかつ蛍光特性を保持するようMiCyの単量体化を行った。点変異導入はMiCyを挿入した大腸菌発現ベクター（pRSET B）に点変異導入プライマーをもちいてPCRをかけることにより行った。PCRに用いたプライマーは5’側のリン酸化を行った。
【００５８】
（ａ）プライマーの5'リン酸化
反応液の組成：
100μM  primer                           2μl
10× T4 polynucleotide kinase buffer     5μl
100μM  ATP                            0.5μl
滅菌水                                41.5μl
T4 polynucleotide kinase (10 U/μl)      1μl
【００５９】
上記の混合物を37℃で30分間インキュベートした。用いたプライマーは以下の通りである。
gaagggaaac agacgtccga attagtg  （配列番号５）
gtgatcatca agnnnaaggg aaaacccctt  （配列番号６）
atactgtcaa cannntttca atatggaaac  （配列番号７）
catctttcat ggcacaaact ttcccgctg  （配列番号８）
gggataagtc ctccgaaaaa atgagtg  （配列番号９）
cagagatgcc agttacactc cacttac  （配列番号１０）
(nはa,t,g又はcを示す)
【００６０】
（ｂ）点変異導入PCR
反応液の組成：
5'リン酸化プライマー           4μl
template(MiCy−pRSET B)      100ng
10× polymerase buffer       2.5μl
10× DNA ligase buffer       2.5μl
2.5mM dNTPs                    1μl
polymerase（pfu）2.5U/μl      1μl
Taq DNA ligase   40U/μl     0.5μl
滅菌水で計50μlとする。
【００６１】
プログラム
サーマルサイクラーはGeneAmp PCR system 9700を使用した。
1）65℃  5 min
2）95℃  2 min
3）95℃  20 sec
4）52℃  20 sec
5）65℃  8 min
6）75℃  7 min
7）4℃  hold
３）〜５）を25サイクル
【００６２】
（ｃ）Dpn1処理
PCR後のサンプルにDpn1を1μl加えて37℃に1時間インキュベートしてテンプレートプラスミドを切断した。
【００６３】
（ｄ）大腸菌への形質転換
Dpn1処理後のサンプルを大腸菌JM109(DE3)に形質転換して変異導入後のMiCyを発現させた。
【００６４】
（ｅ)変異導入後のMiCy(mMiCy)の解析
変異導入後のMiCy変異体の塩基配列を解析し、アミノ酸配列を決定した。結果として43番目のメチオニン（M）をトレオニン（T）に、51番目のセリン（S）をプロリン（P）に、66番目のアラニン（A）をバリン（V）に、129番目のバリン（V）をトレオニン（T）に、149番目のフェニルアラニン（F）をセリン（S）に、179番目のフェニルアラニン（F）をロイシン（L）に置換されたmMiCyを得た。mMiCyの塩基配列を配列番号１に示し、アミノ酸配列を配列番号２に示す。
【００６５】
大腸菌JM109(DE3)に発現させたリコンビナントmMiCy蛋白質はNi-NTAで精製した。リコンビナントmMiCy蛋白質の蛍光特性を解析した。mMiCyの蛍光ピークは496nm、吸収及び励起のピークは470nmを示した。MiCyの蛍光ピークは495nm、吸収及び励起ピークは472nmと、ほとんど蛍光、励起および吸収等の性質は変異導入後も変わらなかった。mMiCyの蛍光、励起、吸収及びpH感受性を図に示す（図１〜４）。蛍光ピークおよび吸収ピークのpHによる変動は一致し、量子収率に対するpH感受性は無いことが示された。pH感受性の測定は下記の緩衝液で希釈して蛍光スペクトル及び吸収スペクトルを測定し、ピーク値をプロットした。
【００６６】
各pHの緩衝液は次の通り、
pH4、5    :  酢酸バッファー
pH6       :  MESバッファー
pH7、8    :  HEPESバッファー
pH9、10   :  グリシンバッファー
pH11      :  リン酸バッファー
【００６７】
（２）分子量測定
mMiCyをpRSETBのBamH1―EcoR1サイトにサブクローニングし大腸菌JM109（DE3）に形質転換してリコンビナント蛋白質を発現させた。発現させたリコンビナント蛋白質はNi-NTAで精製した。精製したリコンビナント蛋白質mMiCyの分子量を超遠心分析により求めた。mMiCy蛋白質溶液を150mM KCl、50mM HEPES-KOH pH7.4で調製した。機器は超遠心機XL-1（ベックマン・コールター）を使用した。25000rpmで22時間遠心し、mMiCyの吸収極大（470nm）の吸収値を測定した。その結果、精製用タグ等の配列を含んだその分子量は34.8kDaと算出され、これはアミノ酸配列から予測される29.8kDaとほぼ一致し、mMiCyは多量体を形成しない単量体であることが確認された。2量体を形成するMiCyは超遠心分析から59.7kDaと算出された（図５及び６）。
【００６８】
実施例２：多量体を形成する色素蛋白質KPと蛍光蛋白質mMiCyを用いたFRET測定系構築
現行のFRET測定系では蛍光物質または発光物質をドナーに、蛍光物質にアクセプターを使用するのが通常であるが、アクセプター側は吸収特性があれば蛍光を発しなくてもFRETの測定は可能である。逆にアクセプターが蛍光を発しなければ、それだけ蛍光取得の波長域に空きができるために、複数のFRET測定が可能となる。また、蛍光寿命を測定するライフタイムイメージングではFRETのドナーの蛍光寿命を測定すればFRETが起こっているか否かを判別できるため、同じく、蛍光を発しない色素蛋白質をアクセプターに用いたFRET系は同時に複数のFRETを測定可能とする。そこでドナーに蛍光蛋白質（mMiCy）を用い、アクセプターに色素蛋白質（KP）を用いたFRET測定系の構築を行なった。
【００６９】
色素蛋白質KP（塩基配列を配列番号３に示し、アミノ酸配列を配列番号４に示す）はコモチイソギンチャクより単離された赤紫色の色素蛋白質で4量体を形成した。KPの吸収スペクトルとmMiCyの蛍光スペクトルはFRETをおこすのに十分な重なり（スペクトラルオーバーラップ）をもった（図７）。この多量体を形成する色素蛋白質KPとmMiCyをリンカーでつなぎ、FRETの系を構築した。リンカー配列にはCaspase３またはCaspase７の認識配列であるDEVD（Asp-Glu-Val-Asp）を含み、長さの違うものを８種作製した。Caspase３のリンカー切断に伴うFRETの変化をmMiCyの蛍光シグナル（496nm）から得た。
【００７０】
（ａ）リンカーの設計
以下、８種（3-3〜5-4）のリンカー（アミノ酸配列）を設計し、KPとmMiCyの間に挿入し発現させた。
3-3: SGGDEVDGTG  （配列番号１１）
3-4: SGGDEVDGTGG  （配列番号１２）
3-5: SGGDEVDGTGGS  （配列番号１３）
4-3: GSGGDEVDGTG  （配列番号１４）
4-4: GSGGDEVDGTGG  （配列番号１５）
4-5: GSGGDEVDGTGGS  （配列番号１６）
5-3: GGSGGDEVDGTG  （配列番号１７）
5-4: GGSGGDEVDGTGG  （配列番号１８）
【００７１】
（ｂ）リコンビナント融合蛋白質の作製
設計したリンカーのN末端側にmMiCyを、C末端側にKP（国際公開ＷＯ０３／１０４４６１号公報）をつなぎ、[mMiCy-リンカー-KP]の形でpRSETBのBamH1―EcoR1サイトにサブクローニングし大腸菌JM109（DE3）に形質転換してリコンビナント蛋白質を発現させた。発現させたリコンビナント融合蛋白質はNi-NTAで精製した。精製したリコンビナント融合蛋白質を用いてCaspase3の活性測定を行った。
【００７２】
リンカー3-3、3-4、3-5、4-3、4-4、4-5、5-3、及び5-4をそれぞれ用いた場合のリコンビナント融合蛋白質のアミノ酸配列を、配列番号２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２及び３４に示す、当該アミノ酸配列をコードする塩基配列を配列番号１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１及び３３に示す。
【００７３】
（ｃ）Caspase3の活性測定
Caspase3の活性はFRETの変化としてmMiCyの蛍光値の増加から得た。活性測定にはリコンビナントActive−Caspase３（MBL：BV-1083-9）を用いた。20mM HEPES-KOH pH7.4、100mM NaCl、0.1％CHAPS、10％sucrose溶液中に各リコンビナント融合蛋白質を0.25mg/mlになるようにして、リコンビナントActive−Caspase3を1unit加えて30度で反応させた。反応液を30分ごとにサンプリングし50倍希釈して440nmで励起したときの蛍光の増加を測定した。mMiCyの蛍光ピーク(496nm)をプロットした（図８及び９）。また、蛍光増加の比が高かったリンカー3-4とリンカー4-5を用いたリコンビナント融合蛋白質でCaspase3によるペプチド鎖の切断を行い、12.5％アクリルアミドゲルで電気泳動した。60kDa（融合蛋白質）が約30kDaの2本のバンド（KPとmMiCy（両者のアミノ酸数はほとんど変わらないが、mMiCyの方が3.8kDaの精製用タグ配列等のついた分大きい））として検出され、Caspase3によるペプチド鎖の切断を確認した（図１０）。色素蛋白質KPと蛍光蛋白質mMiCyを用いたFRET測定系で1波長励起1波長測光によるCaspase3の活性測定ができた。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１】図１は、mMiCyの吸収スペクトル（ｐＨ８）を示す。
【図２】図２は、mMiCyの励起スペクトル（EX)と蛍光スペクトル（EM）を示す。
【図３】図３は、mMiCyのｐＨ感受性（蛍光）を示す。
【図４】図４は、mMiCyのｐＨ感受性（吸収）を示す。
【図５】図５は、超遠心分析（mMiCy：３４．８ｋＤａ）を示す。
【図６】図６は、超遠心分析（MiCy：５９．７ｋＤａ）を示す。
【図７】図７は、mMiCyの励起スペクトル（EX)、蛍光スペクトル（EM）およびKPの吸収スペクトル（ａｂｓ）を示す。
【図８】図８は、caspase3によるペプチド切断に伴う蛍光の回復（４９５ｎｍ）を示す。
【図９】図９は、caspase3によるペプチド切断に伴う蛍光増加の割合（切断前を１とする）を示す。
【図１０】図１０は、SDS-PAGEによる切断の確認を示す。
【配列表フリーテキスト】
【００７５】
SEQUENCE LISTING
<110> RIKEN
<120> Fluorescent protein
<130> A41845A
<160> 34
<210>  1
<211>  696
<212>  DNA
<213>  Acropora sp.
<220>
<221>  CDS
<222>  (1)..(696)
<223> 
<400>  1
atg tct tat tca aag caa ggc atc gca caa gaa atg cgg acg aaa tac       48
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
cgt atg gaa ggc agt gtc aat ggc cat gag ttc acg atc gaa ggt gta       96
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
gga act gga aac cct tac gaa ggg aaa cag acg tcc gaa tta gtg atc      144
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
atc aag cct aag gga aaa ccc ctt cca ttc tcc ttt gac ata ctg tca      192
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
aca gtc ttt caa tat gga aac aga tgc ttc aca aag tac cct gca gac      240
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
atg cct gac tat ttc aag caa gca ttc cca gat gga atg tca tat gaa      288
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
agg tca ttt cta ttt gag gat gga gga gtt gct aca gcc agc tgg agc      336
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
att cgt ctc gaa gga aat tgc ttc atc cac aat tcc atc tat cat ggc      384
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
aca aac ttt ccc gct gat gga ccc gta atg aag aag cag aca att ggc      432
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
tgg gat aag tcc tcc gaa aaa atg agt gtg gct aaa gag gtg cta aga      480
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
ggt gat gtg act cag ttt ctt ctg ctc gaa gga ggt ggt tac cag aga      528
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
tgc cag tta cac tcc act tac aaa aca gag aag cca gtc gca atg ccc      576
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
ccg agt cat gtc gta gaa cat caa att gtg agg acc gac ctt ggc caa      624
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
act gca aaa ggc ttc aag gtc aag ctg gaa gaa cat gct gag gct cat      672
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
gtt aac cct ttg aag gtt aaa taa                                      696
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys 
225                 230 
<210>  2
<211>  231
<212>  PRT
<213>  Acropora sp.
<400>  2
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys 
225                 230 
<210> 3
<211> 690
<212> DNA
<213> Cnidopus japonicus
<400> 3
atg gct tca atg att aaa gac gtt atg cgc ttc aag atg aac atg gaa   48
Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys Met Asn Met Glu
1               5                  10                  15
ggg acg gtt aac ggc cac cac ttc aag tgt gaa gct gat gga gag ggc   96
Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala Asp Gly Glu Gly
20                  25                  30
aag cca tat gaa ggg act caa ctc gga aga ata agg gtc acc gaa ggc  144
Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg Val Thr Glu Gly
35                  40                  45
ggg cca ttg ccg ttt tct ttc gac atc ttg tcg act tgc act caa tat  192
Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr Cys Thr Gln Tyr
50                  55                  60
gga agc aag acc atg atc aag cat ttg tcc ggg att cca gac tac ttt  240
Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile Pro Asp Tyr Phe
65                  70                  75                  80
aag cag tct ttt cca gaa gga ttc acc tgg gaa agg aac aca atc tat  288
Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Asn Thr Ile Tyr
85                  90                  95
gag gat ggt ggt cac ctc aca gct cac caa gac act agt ctt aag gga  336
Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr Ser Leu Lys Gly
100                 105                 110
gat tgc ctg atc tat aaa gtg aaa gtc ctt gga ggt aat ttt cct gcc  384
Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly Asn Phe Pro Ala
115                 120                 125
aat ggc cct gtg atg cag aag aag agc aaa gga tgg gaa ccc tgt acc  432
Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp Glu Pro Cys Thr
130                 135                 140
gaa atg ctt tat cca cgt gat gga gtg ctt tgt ggc caa aca ttg atg  480
Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly Gln Thr Leu Met
145                 150                 155                 160
gca ctt aaa tgc gcc aat ggt aaa aat ctg act tgc cag cta aga tct  528
Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys Gln Leu Arg Ser
165                 170                 175
act tac agg tcc aga aaa caa gcc agt gca ttg cag aca cca ggc ttc  576
Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln Thr Pro Gly Phe
180                 185                 190
cat ttc gga gac cat cgt att gag ata ctc aag gaa gca gag ggg ggc  624
His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu Ala Glu Gly Gly
195                 200                 205
aat tac ttt gag cag cac gaa aca tca gtc gcc agg tac tgt gat gtt  672
Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg Tyr Cys Asp Val 
210                 215                 220
gcc ccg tca aag cac tga                                          690
Ala Pro Ser Lys His
225
<210> 4
<211> 229
<212> PRT
<213> Cnidopus japonicus
<400> 4
Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys Met Asn Met Glu
1               5                  10                  15
Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala Asp Gly Glu Gly
20                  25                  30
Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg Val Thr Glu Gly
35                  40                  45
Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr Cys Thr Gln Tyr
50                  55                  60
Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile Pro Asp Tyr Phe
65                  70                  75                  80
Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Asn Thr Ile Tyr
85                  90                  95
Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr Ser Leu Lys Gly
100                 105                 110
Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly Asn Phe Pro Ala
115                 120                 125
Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp Glu Pro Cys Thr
130                 135                 140
Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly Gln Thr Leu Met
145                 150                 155                 160
Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys Gln Leu Arg Ser
165                 170                 175
Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln Thr Pro Gly Phe
180                 185                 190
His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu Ala Glu Gly Gly
195                 200                 205
Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg Tyr Cys Asp Val 
210                 215                 220
Ala Pro Ser Lys His
225
<210> 5
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic DNA
<400> 5
gaagggaaac agacgtccga attagtg                              27
<210> 6
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic DNA
<220>
<222> (13), (14) and (15)
<223> any nucleotide
<400> 6
gtgatcatca agnnnaaggg aaaacccctt                           30
<210> 7
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic DNA
<220>
<222> (13), (14) and (15)
<223> any nucleotide
<400> 7
atactgtcaa cannntttca atatggaaac                           30
<210> 8
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic DNA
<400> 8
catctttcat ggcacaaact ttcccgctg                            29
<210> 9
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic DNA
<400> 9
gggataagtc ctccgaaaaa atgagtg                              27
<210> 10
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic DNA
<400> 10
cagagatgcc agttacactc cacttac                              27
<210> 11
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Linker peptide
<400> 11
Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly Thr Gly
1               5                  10
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Linker peptide
<400> 12
Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly Thr Gly Gly
1               5                  10
<210> 13
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Linker peptide
<400> 13
Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly Thr Gly Gly Ser
1               5                  10
<210> 14
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Linker peptide
<400> 14
Gly Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly Thr Gly
1               5                  10
<210> 15
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Linker peptide
<400> 15
Gly Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly Thr Gly Gly
1               5                  10
<210> 16
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Linker peptide
<400> 16
Gly Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly Thr Gly Gly Ser
1               5                  10
<210> 17
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Linker peptide
<400> 17
Gly Gly Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly Thr Gly
1               5                  10
<210> 18
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Linker peptide
<400> 18
Gly Gly Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly Thr Gly Gly
1               5                  10
<210>  19
<211>  1413
<212>  DNA
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Recombinant fused DNA
<220>
<221>  CDS
<222>  (1)..(1413)
<223> 
<400>  19
atg tct tat tca aag caa ggc atc gca caa gaa atg cgg acg aaa tac       48
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
cgt atg gaa ggc agt gtc aat ggc cat gag ttc acg atc gaa ggt gta       96
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
gga act gga aac cct tac gaa ggg aaa cag acg tcc gaa tta gtg atc      144
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
atc aag cct aag gga aaa ccc ctt cca ttc tcc ttt gac ata ctg tca      192
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
aca gtc ttt caa tat gga aac aga tgc ttc aca aag tac cct gca gac      240
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
atg cct gac tat ttc aag caa gca ttc cca gat gga atg tca tat gaa      288
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
agg tca ttt cta ttt gag gat gga gga gtt gct aca gcc agc tgg agc      336
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
att cgt ctc gaa gga aat tgc ttc atc cac aat tcc atc tat cat ggc      384
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
aca aac ttt ccc gct gat gga ccc gta atg aag aag cag aca att ggc      432
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
tgg gat aag tcc tcc gaa aaa atg agt gtg gct aaa gag gtg cta aga      480
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
ggt gat gtg act cag ttt ctt ctg ctc gaa gga ggt ggt tac cag aga      528
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
tgc cag tta cac tcc act tac aaa aca gag aag cca gtc gca atg ccc      576
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
ccg agt cat gtc gta gaa cat caa att gtg agg acc gac ctt ggc caa      624
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
act gca aaa ggc ttc aag gtc aag ctg gaa gaa cat gct gag gct cat      672
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
gtt aac cct ttg aag gtt aaa agc ggt ggc gac gag gtg gac ggt acc      720
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly Thr 
225                 230                 235                 240 
ggt atg gct tca atg att aaa gac gtt atg cgc ttc aag atg aac atg      768
Gly Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys Met Asn Met 
245                 250                 255 
gaa ggg acg gtt aac ggc cac cac ttc aag tgt gaa gct gat gga gag      816
Glu Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala Asp Gly Glu 
260                 265                 270 
ggc aag cca tat gaa ggg act caa ctc gga aga ata agg gtc acc gaa      864
Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg Val Thr Glu 
275                 280                 285 
ggc ggg cca ttg ccg ttt tct ttc gac atc ttg tcg act tgc act caa      912
Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr Cys Thr Gln 
290                 295                 300 
tat gga agc aag acc atg atc aag cat ttg tcc ggg att cca gac tac      960
Tyr Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile Pro Asp Tyr 
305                 310                 315                 320 
ttt aag cag tct ttt cca gaa gga ttc acc tgg gaa agg aac aca atc     1008
Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Asn Thr Ile 
325                 330                 335 
tat gag gat ggt ggt cac ctc aca gct cac caa gac act agt ctt aag     1056
Tyr Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr Ser Leu Lys 
340                 345                 350 
gga gat tgc ctg atc tat aaa gtg aaa gtc ctt gga ggt aat ttt cct     1104
Gly Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly Asn Phe Pro 
355                 360                 365 
gcc aat ggc cct gtg atg cag aag aag agc aaa gga tgg gaa ccc tgt     1152
Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp Glu Pro Cys 
370                 375                 380 
acc gaa atg ctt tat cca cgt gat gga gtg ctt tgt ggc caa aca ttg     1200
Thr Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly Gln Thr Leu 
385                 390                 395                 400 
atg gca ctt aaa tgc gcc aat ggt aaa aat ctg act tgc cag cta aga     1248
Met Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys Gln Leu Arg 
405                 410                 415 
tct act tac agg tcc aga aaa caa gcc agt gca ttg cag aca cca ggc     1296
Ser Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln Thr Pro Gly 
420                 425                 430 
ttc cat ttc gga gac cat cgt att gag ata ctc aag gaa gca gag ggg     1344
Phe His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu Ala Glu Gly 
435                 440                 445 
ggc aat tac ttt gag cag cac gaa aca tca gtc gcc agg tac tgt gat     1392
Gly Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg Tyr Cys Asp 
450                 455                 460 
gtt gcc ccg tca aag cac tga                                         1413
Val Ala Pro Ser Lys His 
465                 470 
<210>  20
<211>  470
<212>  PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Recombinant fused protein
<400>  20
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly Thr 
225                 230                 235                 240 
Gly Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys Met Asn Met 
245                 250                 255 
Glu Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala Asp Gly Glu 
260                 265                 270 
Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg Val Thr Glu 
275                 280                 285 
Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr Cys Thr Gln 
290                 295                 300 
Tyr Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile Pro Asp Tyr 
305                 310                 315                 320 
Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Asn Thr Ile 
325                 330                 335 
Tyr Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr Ser Leu Lys 
340                 345                 350 
Gly Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly Asn Phe Pro 
355                 360                 365 
Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp Glu Pro Cys 
370                 375                 380 
Thr Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly Gln Thr Leu 
385                 390                 395                 400 
Met Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys Gln Leu Arg 
405                 410                 415 
Ser Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln Thr Pro Gly 
420                 425                 430 
Phe His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu Ala Glu Gly 
435                 440                 445 
Gly Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg Tyr Cys Asp 
450                 455                 460 
Val Ala Pro Ser Lys His 
465                 470 
<210>  21
<211>  1416
<212>  DNA
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Recombinant fused DNA
<220>
<221>  CDS
<222>  (1)..(1416)
<223> 
<400>  21
atg tct tat tca aag caa ggc atc gca caa gaa atg cgg acg aaa tac       48
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
cgt atg gaa ggc agt gtc aat ggc cat gag ttc acg atc gaa ggt gta       96
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
gga act gga aac cct tac gaa ggg aaa cag acg tcc gaa tta gtg atc      144
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
atc aag cct aag gga aaa ccc ctt cca ttc tcc ttt gac ata ctg tca      192
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
aca gtc ttt caa tat gga aac aga tgc ttc aca aag tac cct gca gac      240
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
atg cct gac tat ttc aag caa gca ttc cca gat gga atg tca tat gaa      288
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
agg tca ttt cta ttt gag gat gga gga gtt gct aca gcc agc tgg agc      336
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
att cgt ctc gaa gga aat tgc ttc atc cac aat tcc atc tat cat ggc      384
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
aca aac ttt ccc gct gat gga ccc gta atg aag aag cag aca att ggc      432
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
tgg gat aag tcc tcc gaa aaa atg agt gtg gct aaa gag gtg cta aga      480
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
ggt gat gtg act cag ttt ctt ctg ctc gaa gga ggt ggt tac cag aga      528
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
tgc cag tta cac tcc act tac aaa aca gag aag cca gtc gca atg ccc      576
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
ccg agt cat gtc gta gaa cat caa att gtg agg acc gac ctt ggc caa      624
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
act gca aaa ggc ttc aag gtc aag ctg gaa gaa cat gct gag gct cat      672
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
gtt aac cct ttg aag gtt aaa agc ggt ggc gac gag gtg gac ggt acc      720
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly Thr 
225                 230                 235                 240 
ggt ggc atg gct tca atg att aaa gac gtt atg cgc ttc aag atg aac      768
Gly Gly Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys Met Asn 
245                 250                 255 
atg gaa ggg acg gtt aac ggc cac cac ttc aag tgt gaa gct gat gga      816
Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala Asp Gly 
260                 265                 270 
gag ggc aag cca tat gaa ggg act caa ctc gga aga ata agg gtc acc      864
Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg Val Thr 
275                 280                 285 
gaa ggc ggg cca ttg ccg ttt tct ttc gac atc ttg tcg act tgc act      912
Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr Cys Thr 
290                 295                 300 
caa tat gga agc aag acc atg atc aag cat ttg tcc ggg att cca gac      960
Gln Tyr Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile Pro Asp 
305                 310                 315                 320 
tac ttt aag cag tct ttt cca gaa gga ttc acc tgg gaa agg aac aca     1008
Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Asn Thr 
325                 330                 335 
atc tat gag gat ggt ggt cac ctc aca gct cac caa gac act agt ctt     1056
Ile Tyr Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr Ser Leu 
340                 345                 350 
aag gga gat tgc ctg atc tat aaa gtg aaa gtc ctt gga ggt aat ttt     1104
Lys Gly Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly Asn Phe 
355                 360                 365 
cct gcc aat ggc cct gtg atg cag aag aag agc aaa gga tgg gaa ccc     1152
Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp Glu Pro 
370                 375                 380 
tgt acc gaa atg ctt tat cca cgt gat gga gtg ctt tgt ggc caa aca     1200
Cys Thr Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly Gln Thr 
385                 390                 395                 400 
ttg atg gca ctt aaa tgc gcc aat ggt aaa aat ctg act tgc cag cta     1248
Leu Met Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys Gln Leu 
405                 410                 415 
aga tct act tac agg tcc aga aaa caa gcc agt gca ttg cag aca cca     1296
Arg Ser Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln Thr Pro 
420                 425                 430 
ggc ttc cat ttc gga gac cat cgt att gag ata ctc aag gaa gca gag     1344
Gly Phe His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu Ala Glu 
435                 440                 445 
ggg ggc aat tac ttt gag cag cac gaa aca tca gtc gcc agg tac tgt     1392
Gly Gly Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg Tyr Cys 
450                 455                 460 
gat gtt gcc ccg tca aag cac tga                                     1416
Asp Val Ala Pro Ser Lys His 
465                 470 
<210>  22
<211>  471
<212>  PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Recombinant fused protein
<400>  22
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly Thr 
225                 230                 235                 240 
Gly Gly Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys Met Asn 
245                 250                 255 
Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala Asp Gly 
260                 265                 270 
Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg Val Thr 
275                 280                 285 
Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr Cys Thr 
290                 295                 300 
Gln Tyr Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile Pro Asp 
305                 310                 315                 320 
Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Asn Thr 
325                 330                 335 
Ile Tyr Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr Ser Leu 
340                 345                 350 
Lys Gly Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly Asn Phe 
355                 360                 365 
Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp Glu Pro 
370                 375                 380 
Cys Thr Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly Gln Thr 
385                 390                 395                 400 
Leu Met Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys Gln Leu 
405                 410                 415 
Arg Ser Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln Thr Pro 
420                 425                 430 
Gly Phe His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu Ala Glu 
435                 440                 445 
Gly Gly Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg Tyr Cys 
450                 455                 460 
Asp Val Ala Pro Ser Lys His 
465                 470 
<210>  23
<211>  1419
<212>  DNA
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Recombinant fused DNA
<220>
<221>  CDS
<222>  (1)..(1419)
<223> 
<400>  23
atg tct tat tca aag caa ggc atc gca caa gaa atg cgg acg aaa tac       48
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
cgt atg gaa ggc agt gtc aat ggc cat gag ttc acg atc gaa ggt gta       96
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
gga act gga aac cct tac gaa ggg aaa cag acg tcc gaa tta gtg atc      144
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
atc aag cct aag gga aaa ccc ctt cca ttc tcc ttt gac ata ctg tca      192
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
aca gtc ttt caa tat gga aac aga tgc ttc aca aag tac cct gca gac      240
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
atg cct gac tat ttc aag caa gca ttc cca gat gga atg tca tat gaa      288
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
agg tca ttt cta ttt gag gat gga gga gtt gct aca gcc agc tgg agc      336
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
att cgt ctc gaa gga aat tgc ttc atc cac aat tcc atc tat cat ggc      384
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
aca aac ttt ccc gct gat gga ccc gta atg aag aag cag aca att ggc      432
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
tgg gat aag tcc tcc gaa aaa atg agt gtg gct aaa gag gtg cta aga      480
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
ggt gat gtg act cag ttt ctt ctg ctc gaa gga ggt ggt tac cag aga      528
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
tgc cag tta cac tcc act tac aaa aca gag aag cca gtc gca atg ccc      576
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
ccg agt cat gtc gta gaa cat caa att gtg agg acc gac ctt ggc caa      624
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
act gca aaa ggc ttc aag gtc aag ctg gaa gaa cat gct gag gct cat      672
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
gtt aac cct ttg aag gtt aaa agc ggt ggc gac gag gtg gac ggt acc      720
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly Thr 
225                 230                 235                 240 
ggt ggc agc atg gct tca atg att aaa gac gtt atg cgc ttc aag atg      768
Gly Gly Ser Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys Met 
245                 250                 255 
aac atg gaa ggg acg gtt aac ggc cac cac ttc aag tgt gaa gct gat      816
Asn Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala Asp 
260                 265                 270 
gga gag ggc aag cca tat gaa ggg act caa ctc gga aga ata agg gtc      864
Gly Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg Val 
275                 280                 285 
acc gaa ggc ggg cca ttg ccg ttt tct ttc gac atc ttg tcg act tgc      912
Thr Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr Cys 
290                 295                 300 
act caa tat gga agc aag acc atg atc aag cat ttg tcc ggg att cca      960
Thr Gln Tyr Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile Pro 
305                 310                 315                 320 
gac tac ttt aag cag tct ttt cca gaa gga ttc acc tgg gaa agg aac     1008
Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Asn 
325                 330                 335 
aca atc tat gag gat ggt ggt cac ctc aca gct cac caa gac act agt     1056
Thr Ile Tyr Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr Ser 
340                 345                 350 
ctt aag gga gat tgc ctg atc tat aaa gtg aaa gtc ctt gga ggt aat     1104
Leu Lys Gly Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly Asn 
355                 360                 365 
ttt cct gcc aat ggc cct gtg atg cag aag aag agc aaa gga tgg gaa     1152
Phe Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp Glu 
370                 375                 380 
ccc tgt acc gaa atg ctt tat cca cgt gat gga gtg ctt tgt ggc caa     1200
Pro Cys Thr Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly Gln 
385                 390                 395                 400 
aca ttg atg gca ctt aaa tgc gcc aat ggt aaa aat ctg act tgc cag     1248
Thr Leu Met Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys Gln 
405                 410                 415 
cta aga tct act tac agg tcc aga aaa caa gcc agt gca ttg cag aca     1296
Leu Arg Ser Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln Thr 
420                 425                 430 
cca ggc ttc cat ttc gga gac cat cgt att gag ata ctc aag gaa gca     1344
Pro Gly Phe His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu Ala 
435                 440                 445 
gag ggg ggc aat tac ttt gag cag cac gaa aca tca gtc gcc agg tac     1392
Glu Gly Gly Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg Tyr 
450                 455                 460 
tgt gat gtt gcc ccg tca aag cac tga                                 1419
Cys Asp Val Ala Pro Ser Lys His 
465                 470 
<210>  24
<211>  472
<212>  PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Recombinant fused protein
<400>  24
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly Thr 
225                 230                 235                 240 
Gly Gly Ser Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys Met 
245                 250                 255 
Asn Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala Asp 
260                 265                 270 
Gly Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg Val 
275                 280                 285 
Thr Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr Cys 
290                 295                 300 
Thr Gln Tyr Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile Pro 
305                 310                 315                 320 
Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Asn 
325                 330                 335 
Thr Ile Tyr Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr Ser 
340                 345                 350 
Leu Lys Gly Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly Asn 
355                 360                 365 
Phe Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp Glu 
370                 375                 380 
Pro Cys Thr Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly Gln 
385                 390                 395                 400 
Thr Leu Met Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys Gln 
405                 410                 415 
Leu Arg Ser Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln Thr 
420                 425                 430 
Pro Gly Phe His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu Ala 
435                 440                 445 
Glu Gly Gly Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg Tyr 
450                 455                 460 
Cys Asp Val Ala Pro Ser Lys His 
465                 470 
<210>  25
<211>  1416
<212>  DNA
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Recombinant fused DNA
<220>
<221>  CDS
<222>  (1)..(1416)
<223> 
<400>  25
atg tct tat tca aag caa ggc atc gca caa gaa atg cgg acg aaa tac       48
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
cgt atg gaa ggc agt gtc aat ggc cat gag ttc acg atc gaa ggt gta       96
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
gga act gga aac cct tac gaa ggg aaa cag acg tcc gaa tta gtg atc      144
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
atc aag cct aag gga aaa ccc ctt cca ttc tcc ttt gac ata ctg tca      192
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
aca gtc ttt caa tat gga aac aga tgc ttc aca aag tac cct gca gac      240
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
atg cct gac tat ttc aag caa gca ttc cca gat gga atg tca tat gaa      288
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
agg tca ttt cta ttt gag gat gga gga gtt gct aca gcc agc tgg agc      336
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
att cgt ctc gaa gga aat tgc ttc atc cac aat tcc atc tat cat ggc      384
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
aca aac ttt ccc gct gat gga ccc gta atg aag aag cag aca att ggc      432
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
tgg gat aag tcc tcc gaa aaa atg agt gtg gct aaa gag gtg cta aga      480
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
ggt gat gtg act cag ttt ctt ctg ctc gaa gga ggt ggt tac cag aga      528
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
tgc cag tta cac tcc act tac aaa aca gag aag cca gtc gca atg ccc      576
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
ccg agt cat gtc gta gaa cat caa att gtg agg acc gac ctt ggc caa      624
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
act gca aaa ggc ttc aag gtc aag ctg gaa gaa cat gct gag gct cat      672
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
gtt aac cct ttg aag gtt aaa ggc agc ggt ggc gac gag gtg gac ggt      720
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys Gly Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly 
225                 230                 235                 240 
acc ggt atg gct tca atg att aaa gac gtt atg cgc ttc aag atg aac      768
Thr Gly Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys Met Asn 
245                 250                 255 
atg gaa ggg acg gtt aac ggc cac cac ttc aag tgt gaa gct gat gga      816
Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala Asp Gly 
260                 265                 270 
gag ggc aag cca tat gaa ggg act caa ctc gga aga ata agg gtc acc      864
Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg Val Thr 
275                 280                 285 
gaa ggc ggg cca ttg ccg ttt tct ttc gac atc ttg tcg act tgc act      912
Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr Cys Thr 
290                 295                 300 
caa tat gga agc aag acc atg atc aag cat ttg tcc ggg att cca gac      960
Gln Tyr Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile Pro Asp 
305                 310                 315                 320 
tac ttt aag cag tct ttt cca gaa gga ttc acc tgg gaa agg aac aca     1008
Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Asn Thr 
325                 330                 335 
atc tat gag gat ggt ggt cac ctc aca gct cac caa gac act agt ctt     1056
Ile Tyr Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr Ser Leu 
340                 345                 350 
aag gga gat tgc ctg atc tat aaa gtg aaa gtc ctt gga ggt aat ttt     1104
Lys Gly Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly Asn Phe 
355                 360                 365 
cct gcc aat ggc cct gtg atg cag aag aag agc aaa gga tgg gaa ccc     1152
Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp Glu Pro 
370                 375                 380 
tgt acc gaa atg ctt tat cca cgt gat gga gtg ctt tgt ggc caa aca     1200
Cys Thr Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly Gln Thr 
385                 390                 395                 400 
ttg atg gca ctt aaa tgc gcc aat ggt aaa aat ctg act tgc cag cta     1248
Leu Met Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys Gln Leu 
405                 410                 415 
aga tct act tac agg tcc aga aaa caa gcc agt gca ttg cag aca cca     1296
Arg Ser Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln Thr Pro 
420                 425                 430 
ggc ttc cat ttc gga gac cat cgt att gag ata ctc aag gaa gca gag     1344
Gly Phe His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu Ala Glu 
435                 440                 445 
ggg ggc aat tac ttt gag cag cac gaa aca tca gtc gcc agg tac tgt     1392
Gly Gly Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg Tyr Cys 
450                 455                 460 
gat gtt gcc ccg tca aag cac tga                                     1416
Asp Val Ala Pro Ser Lys His 
465                 470 
<210>  26
<211>  471
<212>  PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Recombinant fused protein
<400>  26
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys Gly Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly 
225                 230                 235                 240 
Thr Gly Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys Met Asn 
245                 250                 255 
Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala Asp Gly 
260                 265                 270 
Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg Val Thr 
275                 280                 285 
Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr Cys Thr 
290                 295                 300 
Gln Tyr Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile Pro Asp 
305                 310                 315                 320 
Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Asn Thr 
325                 330                 335 
Ile Tyr Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr Ser Leu 
340                 345                 350 
Lys Gly Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly Asn Phe 
355                 360                 365 
Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp Glu Pro 
370                 375                 380 
Cys Thr Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly Gln Thr 
385                 390                 395                 400 
Leu Met Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys Gln Leu 
405                 410                 415 
Arg Ser Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln Thr Pro 
420                 425                 430 
Gly Phe His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu Ala Glu 
435                 440                 445 
Gly Gly Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg Tyr Cys 
450                 455                 460 
Asp Val Ala Pro Ser Lys His 
465                 470 
<210>  27
<211>  1419
<212>  DNA
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Recombinant fused DNA
<220>
<221>  CDS
<222>  (1)..(1419)
<223> 
<400>  27
atg tct tat tca aag caa ggc atc gca caa gaa atg cgg acg aaa tac       48
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
cgt atg gaa ggc agt gtc aat ggc cat gag ttc acg atc gaa ggt gta       96
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
gga act gga aac cct tac gaa ggg aaa cag acg tcc gaa tta gtg atc      144
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
atc aag cct aag gga aaa ccc ctt cca ttc tcc ttt gac ata ctg tca      192
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
aca gtc ttt caa tat gga aac aga tgc ttc aca aag tac cct gca gac      240
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
atg cct gac tat ttc aag caa gca ttc cca gat gga atg tca tat gaa      288
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
agg tca ttt cta ttt gag gat gga gga gtt gct aca gcc agc tgg agc      336
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
att cgt ctc gaa gga aat tgc ttc atc cac aat tcc atc tat cat ggc      384
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
aca aac ttt ccc gct gat gga ccc gta atg aag aag cag aca att ggc      432
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
tgg gat aag tcc tcc gaa aaa atg agt gtg gct aaa gag gtg cta aga      480
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
ggt gat gtg act cag ttt ctt ctg ctc gaa gga ggt ggt tac cag aga      528
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
tgc cag tta cac tcc act tac aaa aca gag aag cca gtc gca atg ccc      576
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
ccg agt cat gtc gta gaa cat caa att gtg agg acc gac ctt ggc caa      624
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
act gca aaa ggc ttc aag gtc aag ctg gaa gaa cat gct gag gct cat      672
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
gtt aac cct ttg aag gtt aaa ggc agc ggt ggc gac gag gtg gac ggt      720
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys Gly Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly 
225                 230                 235                 240 
acc ggt ggc atg gct tca atg att aaa gac gtt atg cgc ttc aag atg      768
Thr Gly Gly Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys Met 
245                 250                 255 
aac atg gaa ggg acg gtt aac ggc cac cac ttc aag tgt gaa gct gat      816
Asn Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala Asp 
260                 265                 270 
gga gag ggc aag cca tat gaa ggg act caa ctc gga aga ata agg gtc      864
Gly Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg Val 
275                 280                 285 
acc gaa ggc ggg cca ttg ccg ttt tct ttc gac atc ttg tcg act tgc      912
Thr Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr Cys 
290                 295                 300 
act caa tat gga agc aag acc atg atc aag cat ttg tcc ggg att cca      960
Thr Gln Tyr Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile Pro 
305                 310                 315                 320 
gac tac ttt aag cag tct ttt cca gaa gga ttc acc tgg gaa agg aac     1008
Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Asn 
325                 330                 335 
aca atc tat gag gat ggt ggt cac ctc aca gct cac caa gac act agt     1056
Thr Ile Tyr Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr Ser 
340                 345                 350 
ctt aag gga gat tgc ctg atc tat aaa gtg aaa gtc ctt gga ggt aat     1104
Leu Lys Gly Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly Asn 
355                 360                 365 
ttt cct gcc aat ggc cct gtg atg cag aag aag agc aaa gga tgg gaa     1152
Phe Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp Glu 
370                 375                 380 
ccc tgt acc gaa atg ctt tat cca cgt gat gga gtg ctt tgt ggc caa     1200
Pro Cys Thr Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly Gln 
385                 390                 395                 400 
aca ttg atg gca ctt aaa tgc gcc aat ggt aaa aat ctg act tgc cag     1248
Thr Leu Met Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys Gln 
405                 410                 415 
cta aga tct act tac agg tcc aga aaa caa gcc agt gca ttg cag aca     1296
Leu Arg Ser Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln Thr 
420                 425                 430 
cca ggc ttc cat ttc gga gac cat cgt att gag ata ctc aag gaa gca     1344
Pro Gly Phe His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu Ala 
435                 440                 445 
gag ggg ggc aat tac ttt gag cag cac gaa aca tca gtc gcc agg tac     1392
Glu Gly Gly Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg Tyr 
450                 455                 460 
tgt gat gtt gcc ccg tca aag cac tga                                 1419
Cys Asp Val Ala Pro Ser Lys His 
465                 470 
<210>  28
<211>  472
<212>  PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Recombinant fused protein
<400>  28
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys Gly Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly 
225                 230                 235                 240 
Thr Gly Gly Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys Met 
245                 250                 255 
Asn Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala Asp 
260                 265                 270 
Gly Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg Val 
275                 280                 285 
Thr Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr Cys 
290                 295                 300 
Thr Gln Tyr Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile Pro 
305                 310                 315                 320 
Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Asn 
325                 330                 335 
Thr Ile Tyr Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr Ser 
340                 345                 350 
Leu Lys Gly Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly Asn 
355                 360                 365 
Phe Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp Glu 
370                 375                 380 
Pro Cys Thr Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly Gln 
385                 390                 395                 400 
Thr Leu Met Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys Gln 
405                 410                 415 
Leu Arg Ser Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln Thr 
420                 425                 430 
Pro Gly Phe His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu Ala 
435                 440                 445 
Glu Gly Gly Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg Tyr 
450                 455                 460 
Cys Asp Val Ala Pro Ser Lys His 
465                 470 
<210>  29
<211>  1422
<212>  DNA
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Recombinant fused DNA
<220>
<221>  CDS
<222>  (1)..(1422)
<223> 
<400>  29
atg tct tat tca aag caa ggc atc gca caa gaa atg cgg acg aaa tac       48
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
cgt atg gaa ggc agt gtc aat ggc cat gag ttc acg atc gaa ggt gta       96
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
gga act gga aac cct tac gaa ggg aaa cag acg tcc gaa tta gtg atc      144
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
atc aag cct aag gga aaa ccc ctt cca ttc tcc ttt gac ata ctg tca      192
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
aca gtc ttt caa tat gga aac aga tgc ttc aca aag tac cct gca gac      240
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
atg cct gac tat ttc aag caa gca ttc cca gat gga atg tca tat gaa      288
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
agg tca ttt cta ttt gag gat gga gga gtt gct aca gcc agc tgg agc      336
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
att cgt ctc gaa gga aat tgc ttc atc cac aat tcc atc tat cat ggc      384
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
aca aac ttt ccc gct gat gga ccc gta atg aag aag cag aca att ggc      432
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
tgg gat aag tcc tcc gaa aaa atg agt gtg gct aaa gag gtg cta aga      480
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
ggt gat gtg act cag ttt ctt ctg ctc gaa gga ggt ggt tac cag aga      528
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
tgc cag tta cac tcc act tac aaa aca gag aag cca gtc gca atg ccc      576
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
ccg agt cat gtc gta gaa cat caa att gtg agg acc gac ctt ggc caa      624
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
act gca aaa ggc ttc aag gtc aag ctg gaa gaa cat gct gag gct cat      672
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
gtt aac cct ttg aag gtt aaa ggc agc ggt ggc gac gag gtg gac ggt      720
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys Gly Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly 
225                 230                 235                 240 
acc ggt ggc agc atg gct tca atg att aaa gac gtt atg cgc ttc aag      768
Thr Gly Gly Ser Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys 
245                 250                 255 
atg aac atg gaa ggg acg gtt aac ggc cac cac ttc aag tgt gaa gct      816
Met Asn Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala 
260                 265                 270 
gat gga gag ggc aag cca tat gaa ggg act caa ctc gga aga ata agg      864
Asp Gly Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg 
275                 280                 285 
gtc acc gaa ggc ggg cca ttg ccg ttt tct ttc gac atc ttg tcg act      912
Val Thr Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr 
290                 295                 300 
tgc act caa tat gga agc aag acc atg atc aag cat ttg tcc ggg att      960
Cys Thr Gln Tyr Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile 
305                 310                 315                 320 
cca gac tac ttt aag cag tct ttt cca gaa gga ttc acc tgg gaa agg     1008
Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg 
325                 330                 335 
aac aca atc tat gag gat ggt ggt cac ctc aca gct cac caa gac act     1056
Asn Thr Ile Tyr Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr 
340                 345                 350 
agt ctt aag gga gat tgc ctg atc tat aaa gtg aaa gtc ctt gga ggt     1104
Ser Leu Lys Gly Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly 
355                 360                 365 
aat ttt cct gcc aat ggc cct gtg atg cag aag aag agc aaa gga tgg     1152
Asn Phe Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp 
370                 375                 380 
gaa ccc tgt acc gaa atg ctt tat cca cgt gat gga gtg ctt tgt ggc     1200
Glu Pro Cys Thr Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly 
385                 390                 395                 400 
caa aca ttg atg gca ctt aaa tgc gcc aat ggt aaa aat ctg act tgc     1248
Gln Thr Leu Met Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys 
405                 410                 415 
cag cta aga tct act tac agg tcc aga aaa caa gcc agt gca ttg cag     1296
Gln Leu Arg Ser Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln 
420                 425                 430 
aca cca ggc ttc cat ttc gga gac cat cgt att gag ata ctc aag gaa     1344
Thr Pro Gly Phe His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu 
435                 440                 445 
gca gag ggg ggc aat tac ttt gag cag cac gaa aca tca gtc gcc agg     1392
Ala Glu Gly Gly Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg 
450                 455                 460 
tac tgt gat gtt gcc ccg tca aag cac tga                             1422
Tyr Cys Asp Val Ala Pro Ser Lys His 
465                 470 
<210>  30
<211>  473
<212>  PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Recombinant fused protein
<400>  30
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys Gly Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp Gly 
225                 230                 235                 240 
Thr Gly Gly Ser Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys 
245                 250                 255 
Met Asn Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala 
260                 265                 270 
Asp Gly Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg 
275                 280                 285 
Val Thr Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr 
290                 295                 300 
Cys Thr Gln Tyr Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile 
305                 310                 315                 320 
Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg 
325                 330                 335 
Asn Thr Ile Tyr Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr 
340                 345                 350 
Ser Leu Lys Gly Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly 
355                 360                 365 
Asn Phe Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp 
370                 375                 380 
Glu Pro Cys Thr Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly 
385                 390                 395                 400 
Gln Thr Leu Met Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys 
405                 410                 415 
Gln Leu Arg Ser Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln 
420                 425                 430 
Thr Pro Gly Phe His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu 
435                 440                 445 
Ala Glu Gly Gly Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg 
450                 455                 460 
Tyr Cys Asp Val Ala Pro Ser Lys His 
465                 470 
<210>  31
<211>  1419
<212>  DNA
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Recombinant fused DNA
<220>
<221>  CDS
<222>  (1)..(1419)
<223> 
<400>  31
atg tct tat tca aag caa ggc atc gca caa gaa atg cgg acg aaa tac       48
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
cgt atg gaa ggc agt gtc aat ggc cat gag ttc acg atc gaa ggt gta       96
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
gga act gga aac cct tac gaa ggg aaa cag acg tcc gaa tta gtg atc      144
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
atc aag cct aag gga aaa ccc ctt cca ttc tcc ttt gac ata ctg tca      192
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
aca gtc ttt caa tat gga aac aga tgc ttc aca aag tac cct gca gac      240
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
atg cct gac tat ttc aag caa gca ttc cca gat gga atg tca tat gaa      288
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
agg tca ttt cta ttt gag gat gga gga gtt gct aca gcc agc tgg agc      336
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
att cgt ctc gaa gga aat tgc ttc atc cac aat tcc atc tat cat ggc      384
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
aca aac ttt ccc gct gat gga ccc gta atg aag aag cag aca att ggc      432
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
tgg gat aag tcc tcc gaa aaa atg agt gtg gct aaa gag gtg cta aga      480
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
ggt gat gtg act cag ttt ctt ctg ctc gaa gga ggt ggt tac cag aga      528
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
tgc cag tta cac tcc act tac aaa aca gag aag cca gtc gca atg ccc      576
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
ccg agt cat gtc gta gaa cat caa att gtg agg acc gac ctt ggc caa      624
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
act gca aaa ggc ttc aag gtc aag ctg gaa gaa cat gct gag gct cat      672
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
gtt aac cct ttg aag gtt aaa ggt ggc agc ggt ggc gac gag gtg gac      720
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys Gly Gly Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp 
225                 230                 235                 240 
ggt acc ggt atg gct tca atg att aaa gac gtt atg cgc ttc aag atg      768
Gly Thr Gly Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys Met 
245                 250                 255 
aac atg gaa ggg acg gtt aac ggc cac cac ttc aag tgt gaa gct gat      816
Asn Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala Asp 
260                 265                 270 
gga gag ggc aag cca tat gaa ggg act caa ctc gga aga ata agg gtc      864
Gly Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg Val 
275                 280                 285 
acc gaa ggc ggg cca ttg ccg ttt tct ttc gac atc ttg tcg act tgc      912
Thr Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr Cys 
290                 295                 300 
act caa tat gga agc aag acc atg atc aag cat ttg tcc ggg att cca      960
Thr Gln Tyr Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile Pro 
305                 310                 315                 320 
gac tac ttt aag cag tct ttt cca gaa gga ttc acc tgg gaa agg aac     1008
Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Asn 
325                 330                 335 
aca atc tat gag gat ggt ggt cac ctc aca gct cac caa gac act agt     1056
Thr Ile Tyr Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr Ser 
340                 345                 350 
ctt aag gga gat tgc ctg atc tat aaa gtg aaa gtc ctt gga ggt aat     1104
Leu Lys Gly Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly Asn 
355                 360                 365 
ttt cct gcc aat ggc cct gtg atg cag aag aag agc aaa gga tgg gaa     1152
Phe Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp Glu 
370                 375                 380 
ccc tgt acc gaa atg ctt tat cca cgt gat gga gtg ctt tgt ggc caa     1200
Pro Cys Thr Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly Gln 
385                 390                 395                 400 
aca ttg atg gca ctt aaa tgc gcc aat ggt aaa aat ctg act tgc cag     1248
Thr Leu Met Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys Gln 
405                 410                 415 
cta aga tct act tac agg tcc aga aaa caa gcc agt gca ttg cag aca     1296
Leu Arg Ser Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln Thr 
420                 425                 430 
cca ggc ttc cat ttc gga gac cat cgt att gag ata ctc aag gaa gca     1344
Pro Gly Phe His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu Ala 
435                 440                 445 
gag ggg ggc aat tac ttt gag cag cac gaa aca tca gtc gcc agg tac     1392
Glu Gly Gly Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg Tyr 
450                 455                 460 
tgt gat gtt gcc ccg tca aag cac tga                                 1419
Cys Asp Val Ala Pro Ser Lys His 
465                 470 
<210>  32
<211>  472
<212>  PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Recombinant fused protein
<400>  32
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys Gly Gly Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp 
225                 230                 235                 240 
Gly Thr Gly Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys Met 
245                 250                 255 
Asn Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala Asp 
260                 265                 270 
Gly Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg Val 
275                 280                 285 
Thr Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr Cys 
290                 295                 300 
Thr Gln Tyr Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile Pro 
305                 310                 315                 320 
Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg Asn 
325                 330                 335 
Thr Ile Tyr Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr Ser 
340                 345                 350 
Leu Lys Gly Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly Asn 
355                 360                 365 
Phe Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp Glu 
370                 375                 380 
Pro Cys Thr Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly Gln 
385                 390                 395                 400 
Thr Leu Met Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys Gln 
405                 410                 415 
Leu Arg Ser Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln Thr 
420                 425                 430 
Pro Gly Phe His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu Ala 
435                 440                 445 
Glu Gly Gly Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg Tyr 
450                 455                 460 
Cys Asp Val Ala Pro Ser Lys His 
465                 470 
<210>  33
<211>  1422
<212>  DNA
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Recombinant fused DNA
<220>
<221>  CDS
<222>  (1)..(1422)
<223> 
<400>  33
atg tct tat tca aag caa ggc atc gca caa gaa atg cgg acg aaa tac       48
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
cgt atg gaa ggc agt gtc aat ggc cat gag ttc acg atc gaa ggt gta       96
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
gga act gga aac cct tac gaa ggg aaa cag acg tcc gaa tta gtg atc      144
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
atc aag cct aag gga aaa ccc ctt cca ttc tcc ttt gac ata ctg tca      192
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
aca gtc ttt caa tat gga aac aga tgc ttc aca aag tac cct gca gac      240
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
atg cct gac tat ttc aag caa gca ttc cca gat gga atg tca tat gaa      288
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
agg tca ttt cta ttt gag gat gga gga gtt gct aca gcc agc tgg agc      336
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
att cgt ctc gaa gga aat tgc ttc atc cac aat tcc atc tat cat ggc      384
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
aca aac ttt ccc gct gat gga ccc gta atg aag aag cag aca att ggc      432
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
tgg gat aag tcc tcc gaa aaa atg agt gtg gct aaa gag gtg cta aga      480
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
ggt gat gtg act cag ttt ctt ctg ctc gaa gga ggt ggt tac cag aga      528
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
tgc cag tta cac tcc act tac aaa aca gag aag cca gtc gca atg ccc      576
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
ccg agt cat gtc gta gaa cat caa att gtg agg acc gac ctt ggc caa      624
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
act gca aaa ggc ttc aag gtc aag ctg gaa gaa cat gct gag gct cat      672
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
gtt aac cct ttg aag gtt aaa ggt ggc agc ggt ggc gac gag gtg gac      720
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys Gly Gly Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp 
225                 230                 235                 240 
ggt acc ggt ggc atg gct tca atg att aaa gac gtt atg cgc ttc aag      768
Gly Thr Gly Gly Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys 
245                 250                 255 
atg aac atg gaa ggg acg gtt aac ggc cac cac ttc aag tgt gaa gct      816
Met Asn Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala 
260                 265                 270 
gat gga gag ggc aag cca tat gaa ggg act caa ctc gga aga ata agg      864
Asp Gly Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg 
275                 280                 285 
gtc acc gaa ggc ggg cca ttg ccg ttt tct ttc gac atc ttg tcg act      912
Val Thr Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr 
290                 295                 300 
tgc act caa tat gga agc aag acc atg atc aag cat ttg tcc ggg att      960
Cys Thr Gln Tyr Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile 
305                 310                 315                 320 
cca gac tac ttt aag cag tct ttt cca gaa gga ttc acc tgg gaa agg     1008
Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg 
325                 330                 335 
aac aca atc tat gag gat ggt ggt cac ctc aca gct cac caa gac act     1056
Asn Thr Ile Tyr Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr 
340                 345                 350 
agt ctt aag gga gat tgc ctg atc tat aaa gtg aaa gtc ctt gga ggt     1104
Ser Leu Lys Gly Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly 
355                 360                 365 
aat ttt cct gcc aat ggc cct gtg atg cag aag aag agc aaa gga tgg     1152
Asn Phe Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp 
370                 375                 380 
gaa ccc tgt acc gaa atg ctt tat cca cgt gat gga gtg ctt tgt ggc     1200
Glu Pro Cys Thr Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly 
385                 390                 395                 400 
caa aca ttg atg gca ctt aaa tgc gcc aat ggt aaa aat ctg act tgc     1248
Gln Thr Leu Met Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys 
405                 410                 415 
cag cta aga tct act tac agg tcc aga aaa caa gcc agt gca ttg cag     1296
Gln Leu Arg Ser Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln 
420                 425                 430 
aca cca ggc ttc cat ttc gga gac cat cgt att gag ata ctc aag gaa     1344
Thr Pro Gly Phe His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu 
435                 440                 445 
gca gag ggg ggc aat tac ttt gag cag cac gaa aca tca gtc gcc agg     1392
Ala Glu Gly Gly Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg 
450                 455                 460 
tac tgt gat gtt gcc ccg tca aag cac tga                             1422
Tyr Cys Asp Val Ala Pro Ser Lys His 
465                 470 
<210>  34
<211>  473
<212>  PRT
<213> Artificial Sequence
<220> 
<223> Description of Artificial Sequence: Recombinant fused protein
<400>  34
Met Ser Tyr Ser Lys Gln Gly Ile Ala Gln Glu Met Arg Thr Lys Tyr 
1               5                   10                  15
Arg Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe Thr Ile Glu Gly Val 
20                  25                  30
Gly Thr Gly Asn Pro Tyr Glu Gly Lys Gln Thr Ser Glu Leu Val Ile 
35                  40                  45
Ile Lys Pro Lys Gly Lys Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser 
50                  55                  60
Thr Val Phe Gln Tyr Gly Asn Arg Cys Phe Thr Lys Tyr Pro Ala Asp 
65                  70                  75                  80
Met Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ala Phe Pro Asp Gly Met Ser Tyr Glu 
85                  90                  95
Arg Ser Phe Leu Phe Glu Asp Gly Gly Val Ala Thr Ala Ser Trp Ser 
100                 105                 110 
Ile Arg Leu Glu Gly Asn Cys Phe Ile His Asn Ser Ile Tyr His Gly 
115                 120                 125 
Thr Asn Phe Pro Ala Asp Gly Pro Val Met Lys Lys Gln Thr Ile Gly 
130                 135                 140 
Trp Asp Lys Ser Ser Glu Lys Met Ser Val Ala Lys Glu Val Leu Arg 
145                 150                 155                 160 
Gly Asp Val Thr Gln Phe Leu Leu Leu Glu Gly Gly Gly Tyr Gln Arg 
165                 170                 175 
Cys Gln Leu His Ser Thr Tyr Lys Thr Glu Lys Pro Val Ala Met Pro 
180                 185                 190 
Pro Ser His Val Val Glu His Gln Ile Val Arg Thr Asp Leu Gly Gln 
195                 200                 205 
Thr Ala Lys Gly Phe Lys Val Lys Leu Glu Glu His Ala Glu Ala His 
210                 215                 220 
Val Asn Pro Leu Lys Val Lys Gly Gly Ser Gly Gly Asp Glu Val Asp 
225                 230                 235                 240 
Gly Thr Gly Gly Met Ala Ser Met Ile Lys Asp Val Met Arg Phe Lys 
245                 250                 255 
Met Asn Met Glu Gly Thr Val Asn Gly His His Phe Lys Cys Glu Ala 
260                 265                 270 
Asp Gly Glu Gly Lys Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Leu Gly Arg Ile Arg 
275                 280                 285 
Val Thr Glu Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ser Phe Asp Ile Leu Ser Thr 
290                 295                 300 
Cys Thr Gln Tyr Gly Ser Lys Thr Met Ile Lys His Leu Ser Gly Ile 
305                 310                 315                 320 
Pro Asp Tyr Phe Lys Gln Ser Phe Pro Glu Gly Phe Thr Trp Glu Arg 
325                 330                 335 
Asn Thr Ile Tyr Glu Asp Gly Gly His Leu Thr Ala His Gln Asp Thr 
340                 345                 350 
Ser Leu Lys Gly Asp Cys Leu Ile Tyr Lys Val Lys Val Leu Gly Gly 
355                 360                 365 
Asn Phe Pro Ala Asn Gly Pro Val Met Gln Lys Lys Ser Lys Gly Trp 
370                 375                 380 
Glu Pro Cys Thr Glu Met Leu Tyr Pro Arg Asp Gly Val Leu Cys Gly 
385                 390                 395                 400 
Gln Thr Leu Met Ala Leu Lys Cys Ala Asn Gly Lys Asn Leu Thr Cys 
405                 410                 415 
Gln Leu Arg Ser Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Gln Ala Ser Ala Leu Gln 
420                 425                 430 
Thr Pro Gly Phe His Phe Gly Asp His Arg Ile Glu Ile Leu Lys Glu 
435                 440                 445 
Ala Glu Gly Gly Asn Tyr Phe Glu Gln His Glu Thr Ser Val Ala Arg 
450                 455                 460 
Tyr Cys Asp Val Ala Pro Ser Lys His 
465                 470 
【図１】
2006280232.tif 000002
【図２】
2006280232.tif 000003
【図３】
2006280232.tif 000004
【図４】
2006280232.tif 000005
【図５】
2006280232.tif 000006
【図６】
2006280232.tif 000007
【図７】
2006280232.tif 000008
【図８】
2006280232.tif 000009
【図９】
2006280232.tif 000010
【図１０】
2006280232.tif 000011