(57)【要約】【課題】ＡＩＤＳの予防および治療を目的とした方法および組成物（ワクチン等の免疫学的組成物を含む）を提供すること。【解決手段】免疫不全ウイルス、特にヒトＨＩＶ感染患者から採取した試料中のＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白に対する細胞毒性Ｔ−細胞の存在は、安定な疾病状態およびそれ以上の疾病の進行がないことを示す良好な予後の指標である。免疫不全ウイルス、特にＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白またはＴ−細胞エピトープをコードしたベクターの少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープを含む免疫原性組成物は、対応するＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白に対する特異的細胞毒性Ｔ−細胞反応を宿主に誘導することから、免疫不全ウイルスによって起こる疾病感染の防止に利用することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫不全ウイルスＲｅｖおよびＴａｔ蛋白から選んだ少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープ、または少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピープをコードしたベクターを含み、免疫不全ウイルスの感染により起こる疾病の予防に有効な免疫原組成物。
【請求項２】
前記免疫不全ウイルスがヒト免疫不全ウイルスである請求項１に記載の免疫原組成物。
【請求項３】
細胞毒性Ｔ−細胞エピトープがＲｅｖ蛋白から得られたものである請求項２に記載の免疫原組成物。
【請求項４】
細胞毒性Ｔ−細胞エピトープがＴａｔ蛋白から得られたものである請求項２に記載の免疫原組成物。
【請求項５】
少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープがＲｅｖおよびＴａｔ蛋白から得られたものである請求項２に記載の免疫原組成物。
【請求項６】
前記細胞毒性Ｔ−細胞エピトープがＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白、または基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体であって、薬理学的に許容される担体と混合して提供される請求項２に記載の免疫原組成物。
【請求項７】
前記細胞毒性Ｔ−細胞エピトープが、ＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白をコードした遺伝子組換えベクターまたは核酸分子、あるいは基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体として供給されたものである請求項２に記載の免疫原組成物。
【請求項８】
前記細胞毒性Ｔ−細胞エピトープが、Ｔ−細胞エピトープに対応するアミノ酸配列を有する合成ペプチドまたは基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体として、薬理学的に許容される担体と混合して提供される請求項２に記載の免疫原組成物。
【請求項９】
免疫不全ウイルスの感染により起こる疾病に対する免疫を宿主に誘導する方法であって、免疫不全ウイルスのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白に特異的な細胞毒性Ｔ−細胞反応を宿主に誘導することを特徴とする方法。
【請求項１０】
宿主がヒトであり、前記免疫不全ウイルスがヒト免疫不全ウイルスであることを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記細胞毒性Ｔ−細胞反応がＨＩＶのＲｅｖおよびＴａｔ蛋白または少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープをコードしたベクターから選んだ少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープを宿主に投与することによって誘導することを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
免疫不全ウイルスの感染により起こる疾病に対する免疫を宿主に誘導する方法であって、前記宿主に予防的Ｒｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白特異性細胞毒性Ｔ−細胞反応を選択的に誘導することを特徴とする方法。
【請求項１３】
前記免疫不全ウイルスがヒト免疫不全ウイルスであり、前記宿主がヒトであることを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記選択的誘導がＨＩＶのＲｅｖおよびＴａｔ蛋白から選んだ少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープを宿主に投与することによって行われることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記の少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープがＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白または基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体であって、薬理学的に許容される担体と混合して投与されることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記の少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープがＴ−細胞エピトープに対応するアミノ酸配列を有する合成ペプチドまたは基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体であって、薬理学的に許容される担体と混合して投与されることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記選択的誘導がＨＩＶのＲｅｖおよびＴａｔ蛋白から選んだ少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープをコードしたベクターを宿主に投与することによって行われることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記ベクターがＨＩＶのＲｅｖおよびＴａｔ蛋白またはその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体を表現する遺伝子組換えベクターであることを特徴とする請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
医薬品として使用されるＨＩＶのＲｅｖおよびＴａｔ蛋白または少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープをコードしたベクターから選んだ少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープ。
【請求項２０】
ＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白または基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体を薬理学的に許容される担体と混合して提供されることを特徴とする請求項１９に記載のＴ−細胞エピトープ。
【請求項２１】
遺伝子組換えベクター、またはＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白を表現する核酸分子または基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体として提供されることを特徴とする請求項１９に記載のＴ−細胞エピトープ。
【請求項２２】
Ｔ−細胞エピトープに対応するアミノ酸配列を有する合成ペプチドまたは基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体を薬理学的に許容される担体と混合して提供されることを特徴とする請求項１９に記載のＴ−細胞エピトープ。
【請求項２３】
ＨＩＶにより起こる疾病に対する免疫を宿主に与えるための医薬品の製造に用いるＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白または少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープをコードしたベクターから選んだ少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープ。
【請求項２４】
ＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白に特異的な細胞毒性Ｔ−細胞反応を誘導するために宿主に投与する医薬品の製造に用いるＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白または少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープをコードしたベクターから選んだ少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープ。
【請求項２５】
予防的Ｒｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白特異性細胞毒性Ｔ−細胞反応を選択的に宿主に誘導するための医薬品の製造に用いるＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白または少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープをコードしたベクターから選んだ少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープ。
【請求項２６】
前記細胞毒性Ｔ−細胞エピトープがＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白または基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体を薬理学的に許容される担体と混合して提供されることを特徴とする請求項２３から２５に記載の利用。
【請求項２７】
前記細胞毒性Ｔ−細胞エピトープが遺伝子組換えベクターまたはＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白を表現する核酸分子または基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体として提供されることを特徴とする請求項２３から２５に記載の利用。
【請求項２８】
前記細胞毒性Ｔ−細胞エピトープがＴ−細胞エピトープに対応するアミノ酸配列を有する合成ペプチドまたは基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体であって、薬理学的に許容される担体と混合して提供されることを特徴とする請求項２３から２５に記載の利用。
【請求項２９】
ＨＩＶ陽性被験者における良好な予後を判定する方法であって、前記良好な予後の指標として被験者におけるＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白に対する細胞毒性Ｔ−細胞反応の有無を検出する方法。
【請求項３０】
ヒトにおけるＨＩＶに関連した疾病の安定状態を診断する方法であって、ヒトから末梢血単核細胞を採取し、前記安定な疾病状態の指標として試料中のＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白特異性細胞毒性Ｔ−細胞反応の有無を試験する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は免疫の分野に関し、特にヒト免疫抑制ウイルス（ＨＩＶ）の感染およびＡＩＤＳの予防および治療を目的とした細胞毒性Ｔ−細胞の誘導法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
（関連特許）
本願は、米国特許出願第０８／７３３，７８９号、１９９６年１０月１８日出願の一部継続出願である。
（発明の背景）
ＨＩＶに感染すると、ほとんどの患者が最終的にＡＩＤＳを発症すると信じられている。さらに、臨床的にＡＩＤＳと診断されると、しばしば数カ月または数年以内にＡＩＤＳの合併症により死亡する。ほとんどのＨＩＶ感染患者は、感染にもかかわらず長年にわたって健康を保つ。同様に、臨床的にＡＩＤＳと診断された患者の一部はＡＩＤＳと診断されたときから長年にわたって生産的な生活を送ることができる。
【０００３】
血清転換後の無症徴期間は、ＨＩＶ−１感染患者によって著しく異なる（参考文献１〜３−本明細書では、本発明に関連する従来の技術をできるだけ詳細に記載するため、参考文献を括弧内に示す。参考文献の一覧は後述する。これらの参考文献に開示されている技術は、本発明の参考例として記載する）。長期間生存の機構は、ウイルスの特性ならびに宿主の遺伝的および免疫的要因であると考えられている。しかし、ＡＩＤＳを有さない場合の生存率の免疫学的関連は、明らかにされていない（参考文献１および３）。
【０００４】
ヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ−１）およびそれに関連したレンチウイルスは、典型的なレトロウイルスに比較して複雑なゲノムを有する。レトロウイルスに共通なｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ遺伝子の他に、ＨＩＶ−１はｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｖｐｕおよびｖｐｒ遺伝子もコードしている。ＨＩＶ−１蛋白Ｒｅｖ（ウイルス粒子の表現のレギュレータ）は、複製サイクル中にウイルス遺伝子の表現を一時的に制御する上で重要な役割を果たす。ＨＩＶ−１により表現される遺伝子は、その表現がＲｅｖに依存するか否かによって２群に分けられる。Ｒｅｖ−非依存性または初期の遺伝子は、Ｔａｔ、ＲｅｖおよびＮｅｆをコードしている。Ｒｅｖ−依存性または後期の遺伝子はウイルス粒子の形成に重要な働きをし、構造蛋白Ｇａｇ、ＰｏｌおよびＥｎｖならびに付属産物Ｖｉｆ、ＶｐｕおよびＶｐｒをコードしている。Ｒｅｖは、ＨＩＶ−１の複写に絶対的に必要である。Ｒｅｖ機能を欠くプロウイルスは転写的には活性であるが、新しいウイルス粒子を生成することはできない。Ｒｅｖ蛋白の生物学は、参考文献３０に要約されている。
【０００５】
ＨＩＶ遺伝子の表現を制御するシス-およびトランス-作用性要素が同定されている。ＨＩＶ−１遺伝子の表現およびその後のウイルス複写には、８６アミノ酸ウイルス蛋白Ｔａｔを要求する。Ｔａｔは、ウイルスのトランスアクチベーターのうちでも特異的である。多くのウイルスおよび細胞遺伝子を活性化するＥｌＡおよびＴａｘとは異なって、Ｔａｔによる活性化は比較的ＨＩＶ−１に特異的である。ＲＮＡ開始部位の下流に位置するＨＩＶ−１ ＬＴＲにおけるシス-作用性要素は、高度な遺伝子表現に重要である。ＨＩＶ−１ ＬＴＲの＋１から＋６０まで広がるこの要素は、トランス-作用性反応要素またはＴＡＲと表示されている。ＴＡＲは、Ｔａｔに反応して高度の遺伝子表現を行うに必要な二重鎖ＲＮＡ構造を形成する。Ｔａｔの機能は、参考文献３１に記載されている。
【０００６】
本発明は、ＨＩＶ−１感染患者のＡＩＤＳフリー長期間生存におけるＨＩＶ−１特異性細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の役割に関するものである。さきに行われた試験で、血清陽性患者の少なくとも８０％で構造蛋白ＧａｇおよびＲＴに特異的なＣＴＬが検出され（参考文献４〜９）、一方血清陽性患者の約５０％からはＮｅｆおよびＶｉｆ拮抗ＣＴＬが報告されている（参考文献１０〜１２）。また、これらの試験で、制御蛋白ＲｅｖおよびＴａｔの検出頻度は低いと報告されている（参考文献１０〜１２）。クロスセクション試験で、ＨＩＶ−１特異性ＣＴＬプレカーサー（ＣＴＬｐ）は一般に無症徴段階で存在するが、その頻度は病気の進行につれて低下する傾向が認められている（参考文献１３、１４）。縦断的分析で、ＨＩＶ−１特異性ＣＴＬ反応はウイルス血症の初期防除と関連があり（参考文献１５）、Ｇａｇ特異性ＣＴＬｐは病気の進行にともない、多分ＨＩＶ−１誘導ＣＤ４＊細胞の減少（参考文献１６、１７）およびサイトカイン機能障害（参考文献１７）の結果として減少する。ウイルス負荷量は病気の進行を反映することが知られており、測定法が実用化されている（参考文献１８、１９）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
さらに、ＨＩＶ感染患者の予後を測定するための免疫学的試験法は実用化されていない。
【０００８】
予後が順調で、病気の伸展が遅く、病気が安定している患者と予後が順調でなく、病気が急速に伸展している患者と識別できる試験法が要望されている。
【０００９】
ＨＩＶに感染すると、重度な免疫不全症、ＡＩＤＳに至る。ＡＩＤＳの治療法はなく、感染および疾病に対するワクチンもない。ＡＩＤＳの予防および治療を目的とした方法および組成物（ワクチン等の免疫学的組成物を含む）が望まれている。また、予後が順調な患者および病気の伸展が遅い患者を識別できる試験法および材料も望まれている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明には以下の各態様が含まれる。
１．免疫不全ウイルスＲｅｖおよびＴａｔ蛋白から選んだ少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープ、または少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピープをコードしたベクターを含み、免疫不全ウイルスの感染により起こる疾病の予防に有効な免疫原組成物。
２．前記免疫不全ウイルスがヒト免疫不全ウイルスである上記項目１に記載の免疫原組成物。
３．細胞毒性Ｔ−細胞エピトープがＲｅｖ蛋白から得られたものである上記項目２に記載の免疫原組成物。
４．細胞毒性Ｔ−細胞エピトープがＴａｔ蛋白から得られたものである上記項目２に記載の免疫原組成物。
５．少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープがＲｅｖおよびＴａｔ蛋白から得られたものである上記項目２に記載の免疫原組成物。
６．前記細胞毒性Ｔ−細胞エピトープがＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白、または基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体であって、薬理学的に許容される担体と混合して提供される上記項目２に記載の免疫原組成物。
７．前記細胞毒性Ｔ−細胞エピトープが、ＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白をコードした遺伝子組換えベクターまたは核酸分子、あるいは基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体として供給されたものである上記項目２に記載の免疫原組成物。
８．前記細胞毒性Ｔ−細胞エピトープが、Ｔ−細胞エピトープに対応するアミノ酸配列を有する合成ペプチドまたは基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体として、薬理学的に許容される担体と混合して提供される上記項目２に記載の免疫原組成物。
９．免疫不全ウイルスの感染により起こる疾病に対する免疫を宿主に誘導する方法であって、免疫不全ウイルスのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白に特異的な細胞毒性Ｔ−細胞反応を宿主に誘導することを特徴とする方法。
１０．宿主がヒトであり、前記免疫不全ウイルスがヒト免疫不全ウイルスであることを特徴とする上記項目９に記載の方法。
１１．前記細胞毒性Ｔ−細胞反応がＨＩＶのＲｅｖおよびＴａｔ蛋白または少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープをコードしたベクターから選んだ少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープを宿主に投与することによって誘導することを特徴とする上記項目１０に記載の方法。
１２．免疫不全ウイルスの感染により起こる疾病に対する免疫を宿主に誘導する方法であって、前記宿主に予防的Ｒｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白特異性細胞毒性Ｔ−細胞反応を選択的に誘導することを特徴とする方法。
１３．前記免疫不全ウイルスがヒト免疫不全ウイルスであり、前記宿主がヒトであることを特徴とする上記項目１２に記載の方法。
１４．前記選択的誘導がＨＩＶのＲｅｖおよびＴａｔ蛋白から選んだ少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープを宿主に投与することによって行われることを特徴とする上記項目１３に記載の方法。
１５．前記の少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープがＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白または基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体であって、薬理学的に許容される担体と混合して投与されることを特徴とする上記項目１４に記載の方法。
１６．前記の少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープがＴ−細胞エピトープに対応するアミノ酸配列を有する合成ペプチドまたは基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体であって、薬理学的に許容される担体と混合して投与されることを特徴とする上記項目１４に記載の方法。
１７．前記選択的誘導がＨＩＶのＲｅｖおよびＴａｔ蛋白から選んだ少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープをコードしたベクターを宿主に投与することによって行われることを特徴とする上記項目１３に記載の方法。
１８．前記ベクターがＨＩＶのＲｅｖおよびＴａｔ蛋白またはその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体を表現する遺伝子組換えベクターであることを特徴とする上記項目１７に記載の方法。
１９．医薬品として使用されるＨＩＶのＲｅｖおよびＴａｔ蛋白または少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープをコードしたベクターから選んだ少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープ。
２０．ＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白または基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体を薬理学的に許容される担体と混合して提供されることを特徴とする上記項目１９に記載のＴ−細胞エピトープ。
２１．遺伝子組換えベクター、またはＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白を表現する核酸分子または基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体として提供されることを特徴とする上記項目１９に記載のＴ−細胞エピトープ。
２２．Ｔ−細胞エピトープに対応するアミノ酸配列を有する合成ペプチドまたは基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体を薬理学的に許容される担体と混合して提供されることを特徴とする上記項目１９に記載のＴ−細胞エピトープ。
２３．ＨＩＶにより起こる疾病に対する免疫を宿主に与えるための医薬品の製造に用いるＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白または少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープをコードしたベクターから選んだ少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープ。
２４．ＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白に特異的な細胞毒性Ｔ−細胞反応を誘導するために宿主に投与する医薬品の製造に用いるＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白または少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープをコードしたベクターから選んだ少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープ。
２５．予防的Ｒｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白特異性細胞毒性Ｔ−細胞反応を選択的に宿主に誘導するための医薬品の製造に用いるＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白または少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープをコードしたベクターから選んだ少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープ
２６．前記細胞毒性Ｔ−細胞エピトープがＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白または基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体を薬理学的に許容される担体と混合して提供されることを特徴とする上記項目２３から２５に記載の利用。
２７．前記細胞毒性Ｔ−細胞エピトープが遺伝子組換えベクターまたはＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白を表現する核酸分子または基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体として提供されることを特徴とする上記項目２３から２５に記載の利用。
２８．前記細胞毒性Ｔ−細胞エピトープがＴ−細胞エピトープに対応するアミノ酸配列を有する合成ペプチドまたは基本的にその免疫学的特性を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換されたその類縁体であって、薬理学的に許容される担体と混合して提供されることを特徴とする上記項目２３から２５に記載の利用。
２９．ＨＩＶ陽性被験者における良好な予後を判定する方法であって、前記良好な予後の指標として被験者におけるＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白に対する細胞毒性Ｔ−細胞反応の有無を検出する方法。
３０．ヒトにおけるＨＩＶに関連した疾病の安定状態を診断する方法であって、ヒトから末梢血単核細胞を採取し、前記安定な疾病状態の指標として試料中のＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白特異性細胞毒性Ｔ−細胞反応の有無を試験する方法。
【００１１】
（発明の要約）
本発明は、免疫不全ウイルスに感染した宿主、特にヒト免疫不全ウイルスに感染したヒト、特にＨＩＶ感染後のＡＩＤＳフリー生存率の免疫学的関連を知るための疾病状態の診断に関する。このような関連を明らかにすることは、血清学的にＨＩＶ陽性患者におけるＡＩＤＳへの伸展を防止できる免疫組成物および免疫賦与手順の提供につながる。
【００１２】
本発明者らは、感染の無症徴段階でＲｅｖおよびＴａｔ特異性ＣＴＬプレカーサーが存在することはＡＩＤＳフリー生存率と関連があり、一方Ｇａｇ、ＲＴおよびＮｅｆ等その他のＨＩＶ蛋白のＣＴＬプレカーサーにはそのような関連がなく、Ｒｅｖおよび／またはＴａｔに対するＣＴＬ反応は疾病の進行を防止する上で重要であることを発見した。
【００１３】
本発明は、免疫不全ウイルスのＲｅｖおよびＴａｔ蛋白から選んだ少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープまたは少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープをコードしたベクターからなり、免疫不全ウイルス、特にヒト免疫不全ウイルスの感染により起こる疾病の予防に有効な免疫組成物を提供するものである。
【００１４】
少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープはＲｅｖ蛋白、Ｔａｔ蛋白またはＲｅｖおよびＴａｔ蛋白の両方から得られる。細胞毒性Ｔ−細胞エピトープは、Ｒｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白または基本的に免疫学的性質を損なうことなく、アミノ酸を欠失、挿入または置換したその類縁物質と一般に薬理学的に許容される担体を混合して提供される。
【００１５】
また、少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープは、ＨＩＶまたはその他の免疫不全ウイルスのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白をコードした遺伝子組換えウイルスベクター、遺伝子組換えワクシニアまたはセムリキウイルスまたは少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープをコードした非複写ベクター等の遺伝子組換えベクターまたは基本的に免疫学的性質を損なうことなく、アミノ酸を欠失、挿入または置換したその類縁物質として提供される。
【００１６】
さらに、少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープは、Ｔ−細胞エピトープまたは基本的に免疫学的性質を損なうことなく、アミノ酸を欠失、挿入または置換したその類縁物質に対応するアミノ酸配列を有する合成ペプチドと一般に薬理学的に許容される担体を混合して提供される。
【００１７】
さらに、本発明は免疫不全ウイルス、特にＨＩＶ感染により起こる疾病に対する免疫を宿主に与える方法であって、宿主において免疫不全ウイルスのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白に特異的な細胞毒性Ｔ−細胞反応を刺激する方法を提供する。細胞毒性Ｔ−細胞反応の刺激は、ＨＩＶまたはその他の免疫不全ウイルスまたは少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープをコードしたベクターから選んだ少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープを宿主に投与することによって行う。そのようなＴ−細胞エピトープまたはそれをコードしたベクターは、上記のいずれかの方法で提供される。
【００１８】
さらに、本発明は免疫不全ウイルス、特にヒト免疫不全ウイルスの感染により起こる疾病に対する免疫を宿主に与える方法であって、宿主において予防的Ｒｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白特異性細胞毒性Ｔ−細胞反応を選択的に刺激する方法を提供する。予防的細胞毒性Ｔ−細胞反応の選択的刺激は、ＨＩＶのＲｅｖまたはＴａｔ蛋白から選んだ少なくとも１種類のＴ−細胞エピトープを宿主に投与することによって行う。Ｔ−細胞エピトープの投与は、上記の手順によって行う。
【００１９】
また、本発明によれば、本発明者らによって行われた発見によって、良好な予後の指標として被験者におけるＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白に対する細胞毒性Ｔ−細胞反応の存在を検出することからなるＨＩＶ陽性被験者の良好な予後の測定方法が得られる。
【００２０】
さらに、本発明は、ヒトから末梢血単核細胞を採取し、
安定な疾病状態の指標として、Ｒｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白に特異的な細胞毒性Ｔ−細胞反応の存在を試験することからなるヒトにおけるＨＩＶに関連した安定な疾病状態を診断する方法を提供する。
【００２１】
本発明は、医薬品として使用したとき、ＨＩＶのＲｅｖおよびＴａｔ蛋白または少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープをコードしたベクターから選んだ少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープを包含する。さらに、本発明は医薬品、特にＨＩＶのＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白に特異的な細胞毒性Ｔ−細胞反応を刺激することによって、または宿主における予防的Ｒｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白特異性細胞毒性Ｔ−細胞反応を選択的に刺激することによって、ＨＩＶによって起こる疾病に対する免疫を宿主に与えるための医薬品の製造においてＨＩＶのＲｅｖおよびＴａｔ蛋白または少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープをコードしたベクターから選んだ少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープを利用することを含む。細胞毒性Ｔ−細胞エピトープは、上記のいずれの方法で提供されてもよい。
【００２２】
上記の開示は本発明の一般的な記載であるが、以下の図面を参照してさらに詳細に説明する。
【００２３】
図１は５枚のパネルからなり、７人の長期無症徴患者（ＬＴＡ）および５人の進行患者における無症徴段階のＨＩＶ−１蛋白Ｇａｇ、ＲＴ、Ｎｅｆ、ＲｅｖおよびＴａｔに特異的なＣＴＬプレカーサーの頻度を示す。
【００２４】
図２は、Ｒｅｖ／Ｔａｔ遺伝子組換えウイルスを免疫投与したカニクイザルにおけるウイルス負荷の分離を示す図であり、サルにおける類人猿免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）防御を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
（発明の一般的説明）
本発明は、免疫不全ウイルスのＲｅｖおよびＴａｔ蛋白に特異的な細胞毒性Ｔ−細胞を宿主に誘導することにより宿主における免疫不全ウイルスによる免疫不全疾病を防御する方法を提供するものである。
【００２６】
このようなＲｅｖ−およびＴａｔ−特異性細胞毒性Ｔ−細胞誘導が望ましいことは、ＨＩＶ−感染患者の免疫状態を分析することによって部分的に発見された。ＨＩＶ−１血清陽性患者の特徴は、下表Ｉに示す。全ての進行患者および７人の長期無症徴患者（ＬＴＡ）中４人は、エントリー時に血清が陰性であった。最後に血清が陰性であったときから最初に血清が陽性になるまでの期間（血清転換期間）は短く、これらの時期の中央値を算出することにより血清転換の時期を明瞭に推定することが可能であった。進行患者におけるＡＩＤＳを規定する症状は、カルポシ肉腫（Ｐ４９３）、カンジダアルビカンス  食道炎（Ｐ１２１５，Ｐ４２４，Ｐ０３９）およびニューモシスティスカリニ肺炎（Ｐ３５６）であった。全フォローアップ期間中３カ月ごとに定期的に測定したＣＤ４細胞数から、ＣＤ４細胞の減少率（勾配）を算出した。Ｌ００８およびＰ１２１５（表１参照）については、エントリー後それぞれ１０９および５１カ月時にＡＺＴ治療を開始し、それぞれ１２６および６９カ月時にＤＤＣ治療を開始した。その他の患者には、抗ウイルス治療を行わなかった。ＣＴＬプレカーサー（ＣＴＬｐ）頻度分析のためのＰＢＭＣ試料採取時および対応するＣＤ４カウントを表Ｉに示す。患者のＨＬＡ−Ａおよび−Ｂ表現型は、血清学的に測定した。１２人の血清陽性患者について、無症徴段階のＨＩＶ−１lai蛋白Ｇａｇ、ＲＴ、Ｎｅｆ、ＲｅｖおよびＴａｔに対するＣＴＬｐの頻度を懐古的に測定した。アムステルダムＡＩＤＳコホート試験の被験者は、アムステルダム同性愛（ＡＣＨ）男性コホートから疾病の進行速度およびＨＬＡクラスＩ表現型に基づいて選抜した。これらの被験者のうち７人（ＬＴＡ：Ｌ０９０，Ｌ６５８，Ｌ２１１，Ｌ７０９，Ｌ４３４，Ｌ００８，Ｌ１５７）は、血清転換または試験にエントリーしたのち１０年以上（中央値１２９カ月、範囲１１０〜１４０カ月）もＡＩＤＳフリーであった。残りの５人（Ｐ４９３，Ｐ１２１５，Ｐ３５６，Ｐ４２４，Ｐ０３９）は、血清転換後３〜６年以内（中央値４７ヶ月）にＡＩＤＳに進行した。ＣＴＬ測定結果に対するＨＬＡ−多形成性の影響を最小限にするため、ＨＬＡクラスＩ対立遺伝子が一致する被験者を選んだ。各ＬＴＡ被験者は、Ｌ００８およびＬ１５７を除き、少なくとも１人の進展者のＨＬＡ−Ａまたは−Ｂ対立遺伝子の３つと同じ対立遺伝子を有していた（表１参照）。ＬＴＡのうちＬ０９０は軽度ではあるが１．１細胞／ｍｌ／月の増加が認められたことから、“真の非進展者”と考えた（参考文献１）。Ｌ６５８ではＣＤ４細胞数が徐々に減少し（−１．３）、Ｌ２１１、Ｌ７０９およびＬ４３４では中等度の減少（それぞれ−３．１、−３．５および−３．７）が認められた。Ｌ００８およびＬ１５７では、減少がさらに顕著であった（それぞれ−４．５および−５．６）。それぞれエントリー１３２および１３０カ月後のこれら被験者のＣＤ４細胞数は２００細胞／ｍｌ以下であり、試験終了時まで症状もなく減少が認められた。進展者のうちＰ４９３ではＣＤ４細胞の減少が認められ（−３．１）、Ｐ１２１５およびＰ３５６ではさらに顕著であり（それぞれ−４．４および−７）、Ｐ４２４およびＰ０３９では急速であっ���（それぞれ−１４および−１９）。試験エントリー時に血清陰性であった４人のＬＴＡのうち３人では、血清転換後１年以内に測定した平均ＨＩＶ−１ ＲＮＡ血清レベルが＜１．０×１０3コピー／ｍｌの範囲にあった（表１）。４人目のＬ６５８では、血清転換後３４カ月以内にこれらのレベルが安定レベルの＜１．０×１０3コピー／ｍｌにまで低下した。この間、進展者における平均ＨＩＶ−１ ＲＮＡ血清レベルは１．９×１０4〜４．７×１０5コピー／ｍｌの範囲にあった。
【００２７】
いずれの被験者もまだ無症徴で、ＣＤ４カウントが約４００細胞／ｍｌのときに凍結保存したＰＢＭＣを用い、懐古的ＣＴＬｐ頻度分析を行った（表１参照）。試験エントリー時にＣＤ４カウントが４００細胞／ｍｌ以下であったのは、Ｐ１２１５のみであった。すでに確立されている方法（参考文献１７，２０）にしたがって、ＣＴＬｐ頻度を測定した。ＬＴＡの試料１点以上と比較し、各進展者の試料を試験した。各群内の被験者によって、ＣＴＬｐの頻度は著しく異なっていた（図１参照）。図１は、ＬＴＡ７人および進展者５人について、無症徴段階で検出されたＨＩＶ−１のＧａｇ、ＲＴ、Ｎｅｆ、ＲｅｖおよびＴａｔに対するＣＴＬｐの頻度を示す。
【００２８】
ＬＴＡおよび進展者から各時点に採取し、凍結保存したＰＢＭＣを用い、従来の方法（参考文献１６，１７，２０）に従って培養を行った結果を表Ｉに示す。簡単に述べると、各種濃度のＰＢＭＣをＤｒ．Ｍ．Ｐ．Ｋｉｅｎｙ（Ｔｒａｎｓｇｅｎｅ、Ｓｔｒａｓｂｏｕｒｇ，フランス）から提供を受けた遺伝子組換えワクシニアウイルス感染パラホルムアルデヒド固定自己由来Ｂリンパ芽培養細胞株ＶＶＴＧ１１４４（Ｇａｇ）、ＶＶＴＧ４１６３（ＲＴ）、ＶＶＴＧ１１４７（Nef）、ＶＶＴＧ４１１３（Ｒｅｖ）およびＶＶＴＧ３１９６（Ｔａｔ）中ｉｎ ｖｉｔｒｏで１４〜２０日間刺激した。従来の方法（参考文献１７）を用い、ＣＴＬの検定およびプレカーサー頻度の計算を行った。進展者の試料を少なくとも３点一致ＨＬＡ−Ａおよび−Ｂ対立遺伝子を有するＬＴＡの試料と平行して試験した。Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｗｉｌｃｏｘｓｏｎのランクテストを用い、ＬＴＡと進展者群のＣＴＬｐ頻度の差を解析した。
【００２９】
ＬＴＡでは主としてＲｅｖおよびＴａｔ特異性ＣＴＬｐが認められたが、Ｇａｇ、ＲＴまたはＮｅｆ特異性ＣＴＬｐは両群の被験者でほぼ同じ頻度で認められた。後者の所見から、進展者でＲｅｖおよびＴａｔ特異性ＣＴＬが検出されなかったことはｉｎ ｖｉｖｏにおける一般的なＣＴＬ誘導不能によるものではないと考えられる。
【００３０】
低頻度ではあるがＲｅｖおよびＴａｔ特異性ＣＴＬｐが認められた進展者Ｐ４９３では、ＣＤ４+Ｔ細胞の減少が認められ（−３１）、その減少率は中等度のＣＤ４+Ｔ細胞の減少が認められたＬＴＡの範囲内にあった。最初に入手したＬＡＴおよび進展者の試料で得られた結果（図１の破線）の統計学的解析で、事実ＲｅｖおよびＴａｔ特異性ＣＴＬｐの頻度のみに２群間で有意差が認められた（それぞれＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙの検定でｐ＜０．０１およびｐ＜０．０５）。フォローアップ開始後２４カ月以内に採取した最初の試料のみを比較した場合、すなわちＬ００８およびＬ１５７を除いた場合、ＬＴＡでもＲｅｖ特異性ＣＴＬｐの有意な増加が認められた（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙの検定でｐ＜０．０２）。この結果から、長期ＡＩＤＳフリー生存率では感染後早い時期にＲｅｖ特異性ＣＴＬｐが存在しているものと予測される。Ｔａｔ特異性ＣＴＬｐについても同じことが予想されるが、初期のＴａｔ特異性ＣＴＬｐ測定値には限りがあったので、これを実証することはできなかった。予期せず全てのＬＴＡ患者でＲｅｖおよびＴａｔ特異性ＣＴＬが実証されたことは、別の研究者ら（参考文献１０〜１２）によって認められているように自発的無症徴血清陽性患者における検出率が３０〜４０％であったことと対称的である。
【００３１】
すでに報告されている所見（参考文献９、１６）と同様に、両群のすべての患者でＧａｇ特異性ＣＴＬｐが検出された。興味あることに、全ての患者からＮｅｆ特異性ＣＴＬｐも検出された（参考文献１０）。後者の所見は、ＨＬＡ−Ａ１（６７％）およびＨＬＡ−Ａ２（８３％）表現患者の過剰表現を反映しているものと思われる。これらの分子はＮｅｆエピトープを示すことが知られており（参考文献２１，２２）、アムステルダムの献血者のそれぞれ３３％および５１％で検出される。ＲＴは１１人中１０人のＣＴＬによって識別され、すでに報告されている割合と一致する（参考文献５，９）。
【００３２】
総括すると、これらヒトにおけるデータから、ＲｅｖおよびＴａｔ特異性ＣＴＬは疾病の進展の防御に直接関与し、予防的ＣＴＬ仲介免疫の誘導において主要な標的としてＲｅｖおよびＴａｔの重要性を示している。したがって、無症徴段階で循環系およびリンパ節における感染細胞の割合が高くてもウイルスは生産されない（参考文献２３，２５）。しかし、多くの接合ｍＲＮＡを表現し、それによりＲｅｖおよびＴａｔ蛋白が表現され（参考文献２３〜２５）、ＲｅｖおよびＴａｔ特異性ＣＴＬにより感染休止細胞を除去することが可能である。ウイルス複写の初期にＲｅｖおよびＴａｔが表現されると（参考文献２５，２６）、子孫ウイルスを放出する前に生産性を有する感染細胞を特異的ＣＴＬで殺すことができる（参考文献１２，２７，２８）。
【００３３】
ＬＴＡと進展者の間におけるＨＬＡクラスＩ表現型の一致の程度を考慮し、ウイルスの配列における差は機能的ＨＬＡ−エピトープ複合体の形成に大きな影響を有する。この点に関し、Ｒｅｖに対するＣＴＬ反応には顕著な差があるが、試験したいずれのＨＬＡクラスＩおよびクラスＩＩの対立遺伝子には血清学的に差がないＬＴＡ Ｌ６５８と進展者Ｐ４２４から得たウイルスのＲｅｖ配列に差が認められた（下表２）。Ｌ６５８ではウイルス配列に１個のＨＬＡ−Ａ１ペプチド結合モチーブのアンカー残基が認められたが、Ｐ４２４では認められなかった。
【００３４】
これらはＮｅｆ特異性ＣＴＬでも同じであると思われるが、それらが存在していてもＡＩＤＳフリー生存率とは関係がなく、本発明が容易に想像できないものであることを裏づけている。ＳＩＶｍａｅ感染カニクイサルを用いた試験でえられたデータから、カニクイサルでもＲｅｖ特異性ＣＴＬ反応は疾病の進展と逆の相関のあることが知られている。
【００３５】
（ワクチンの調製および使用）
本発明による免疫調製物は免疫反応、特にＲｅｖおよび／またはＴａｔ ＨＩＶ蛋白に特異的な細胞毒性Ｔ−細胞反応を誘導することが明らかとなった。したがって、本発明が利用できる分野は、本発明に係わる免疫原性組成物からなるＡＩＤＳおよびＡＩＤＳ関連状態を含む免疫不全疾病に対するワクチンの原料である。
【００３６】
ワクチンは注射剤、液剤または乳化液として調製することができる。免疫原を、相容性があり、薬理学的に許容される添加剤と混合する。添加剤は、水、食塩水、デキストロース、グリセロース、エタノールおよびこれらの混合物である。さらに、ワクチンは湿展剤または乳化剤、緩衝剤、またはワクチンの効果を増強するためのアジュバント等の補助剤を含む。ワクチンのアジュバント効果を発揮させるための方法としては、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウム（アルム）等を一般にリン酸緩衝生理食塩水に０．０５〜０．１％添加する方法またはその他のアジュバント、例えばＱＳ２１、ＩＳＣＯＭｓ、Ｑｕｉｌ Ａ、それらの誘導体または混合物、リン酸カルシウム、水酸化カルシウム、水酸化亜鉛、糖脂質誘導体、アミノ酸のオクタデシルエステル、ムラミルジペプチドポリホスファゼア、ＩＳＣＯＰＲＰ、ＤＣ−ｃｈｏｌ、ＤＤＢＡ、およびリポ蛋白、Ｔｈ１反応を誘導するその他のアジュバントならびにＦｒｅｕｎｄの不完全アジュバント等の利用が考えられる。ワクチンは、非経口的、皮下注射または皮内注射により投与することができる。さもなくば、本発明にしたがって形成させた免疫原組成物を粘膜表面に免疫反応を起こさせるように製剤し、投与することもできる。すなわち、免疫原性組成物は、例えば鼻孔または経口的（消化管内）に粘膜表面に投与してもよい。さもなくば、その他の投与方法、例えば坐薬および経口製剤も望ましい。坐薬にはバインダーおよび担体、例えばポリアルカレングリコールまたはトリグリセライド等が含まれる。経口製剤は、薬理学的品質の糖類、セルロースおよび炭酸マグネシウム等の通常使用される添加剤を含む。これらの組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル、除放製剤または粉剤であってもよく、細胞毒性Ｔ−細胞反応を誘導する物質を１０〜９５％含む。
【００３７】
ワクチンは、製剤の用法に応じて、治療的に有効で、予防的で、免疫原性を有する量を投与する。投与量は、例えば個人の免疫系の抗体合成能力、および細胞介在免疫反応誘導能力等処置する患者によって異なる。投与に必要な有効成分の正確な量は、医師の判断にまかせる。しかし、適切な用量範囲は当該分野の専門家であれば容易に決定することができ、免疫原として数マイクログラムの範囲にある。１回目の投与および追加投与の適切な用法も一定ではないが、１回目の投与についで数回の投与を行う。免疫投与の１例をあげると、本発明によれば必要量の免疫原で少なくとも１回の予備免疫を行ってＲｅｖおよび／またはＴａｔ特異性細胞毒性Ｔ−細胞反応を誘導させ、ついで本特許に比較例として含めたヨーロッパ特許公開公報第０ ５７０ ９８０号に記載されている合成ペプチドまたは米国特許第５，４３９，８０９号およびＰＣＴ公開公報ＷＯ ９６／０５２９２号およびＷＯ ９６／０６１７７号に記載されている非感染性レトロウイルス様粒子で少なくとも１回２回目の免疫投与を行う。また、ワクチンの用量は投与経路によっても異なり、宿主の体重によっても異なる。
【００３８】
また、本発明に係わるＲｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白の少なくと１種類の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープをコードした核酸分子を直接免疫投与に用い、核酸分子を直接、例えば宿主に注射することにより投与してもよい。遺伝子免疫投与を目的としてＤＮＡを被験者に直接注射する方法は、例えばＵｌｍｅｒら（参考文献３０）によって記載されている。
【００３９】
さらに、本発明に係わる分子は、ＡＩＤＳおよび関連状態の処置（予防的または治療的）にも使用することができる。
【００４０】
さらに、本発明は、本発明に係わる免疫原性組成物の有効量を投与することからなるＡＩＤＳまたは関連状態の予防または治療法を提供するものである。
【００４１】
（ＲｅｖおよびＴａｔ特異的細胞毒性Ｔ細胞反応の誘導）
細胞毒性Ｔ細胞反応の誘導法は、当該分野の専門家にとっては公知の事実である。この方法は、Ｒｅｖおよび／またはＴａｔ蛋白の少なくとも１種類の細胞毒性Ｔ細胞エピトープをコードした核酸分子を含むワクシニア等のウイルスベクター例えばポックスベクターの構成および投与からなる。このようなベクターは、例えばＭｏｓｓ（参考文献３２）、Ｂａｘｂｙ（参考文献３３）、Ｇｏｎｃｚｏｌ（参考文献３４）に記載されている。その他にも、アデノウイルス（参考文献３５）およびセムリキウイルス（参考文献４７）も利用することができる。さらに、細菌ベクター（参考文献３６）およびマイコバクテリア（ＢＣＧを含む）（参考文献３７）も利用することができる。また、核酸ＤＮＡ免疫投与も利用することができる（参考文献３８）。
【００４２】
さらに、細胞毒性Ｔ−細胞反応は、細胞毒性Ｔ−細胞エピトープを含む免疫原を投与することによっても誘導することができる。このような免疫原は蛋白、その免疫原性フラグメント、またはＴ−細胞エピトープに相当するアミノ酸配列を有するペプチド、またはその免疫学的性質を損なうことなくアミノ酸が欠失、挿入または置換され（参考文献３９）、脂質化された（参考文献４０）当該蛋白またはペプチドの類縁体としての形態を有する。このようなペプチドは、単量体、多量体または２種類以上のペプチドの混合物であってもよい。さらに、このような蛋白、蛋白フラグメント、およびペプチドは、分子抱合体の形態で投与することもできる。さらに、非感染性免疫原性ＨＩＶ−様粒子を利用することもできる（参考文献４６）。
【００４３】
各種のアジュバント、例えばＱＳ２１、Ｑｕｉｌ Ａおよびその成分、ＤＣ ｃｈｏｌ、ＩＳＣＯＭＳ、リポソーム、ビロソームおよびポリホスファゼン等をこれらウイルスベクターとともに使用することができる（参考文献４１，４２，４７）。その他担体として、例えば生分解性ミクロパーティクル（参考文献４４）またはＲｅｖ特異性細胞毒性Ｔ細胞ペプチドを添加した抗原提供細胞（参考文献４５）を用いることができる。さもなくば、抗原提供細胞を上記のように遺伝子組換えベクターを用いてＲｅｖに感染させてもよい。
【００４４】
ＲｅｖおよびＴａｔ特異性細胞毒性Ｔ細胞反応を誘導するために投与する物質は、ＩＦＮγ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＫ−１２を含むサイトキンおよびサイトキン活性化マクロファージとともに投与することもできる。
【００４５】
（関連動物モデルにおける免疫投与−誘発）
類人猿免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）はサルにおいて免疫不全疾患を起こすウイルスと同じレトロウイルスである。ＳＩＶは、遺伝学的にも、生物学的にもＨＩＶと関連が深い。サルにおけるＳＩＶ感染は、ＨＩＶ感染の予防および治療法を開発する上で重要な動物モデルである。
【００４６】
免疫投与−誘発実験は、カニクイサル成獣を用い、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）およびＲｅｖおよびＴａｔの両方を表現するワクシニアアンカラン（ＭＶＡ）遺伝子組換えウイルスを投与して行った。ついで、サルに相同性ＳＩＶを攻撃投与し、攻撃投与後１０週間にわたってウイルス血症の発現を試験した。
【００４７】
週０および週４に、２匹のサルに１．５〜１０×１０8のＳＦＶ−Ｒｅｖ／Ｔａｔ遺伝子組換えウイルスを経口ワクチン投与し、ついで１〜５×１０8のＭＶＡ−Ｒｅｖ／Ｔａｔ遺伝子組換えウイルスを免疫投与した。対照群のサルには、ＳＦＶ Ｌａｃ−Ｚ（１４１）およびＭＶＡ（３３５）対照調製物を同様にワクチン投与した。
【００４８】
週１４に、４匹全てのサルにＭＩＤ５０ ＳＩＶｍａｃ３２Ｈ（Ｊ５）５０細胞を静脈内投与して誘発した。
【００４９】
誘発後週２，４，６および１０に、細胞に関連したウイルス負荷を測定した。ウイルス単離の結果を図２に示す。図２に示すデータから明らかなように、ワクチン投与したサルでは観察期間中に感染細胞は認められなかった。一方、擬似投与したサルでは細胞に関連したウイルス血症が認められた。
【００５０】
（開示の要約）
開示を要約すると、免疫不全ウイルス（特にＨＩＶ）のＲｅｖおよびＴａｔ蛋白に対する細胞毒性Ｔ−細胞反応を誘導することによって免疫不全ウイルス感染またはそれに関連した疾病を予防するための方法および組成物を提供する。また、ＨＩＶ感染患者におけるＲｅｖおよびＴａｔ特異性細胞毒性Ｔ−細胞の有無を測定することにより、当該患者の予後を測定する方法を提供する。本発明の範囲内で、修飾が可能である。
【００５１】
表の凡例
表１．  アムステルダムＡＩＤＳコホート試験被験者のＨＩＶ−１血清陽性者の特性
全ての進展者および７人のＬＴＡのうち４人はエントリー時に血清が陰性であった。最後に血清が陰性であったときから最初に血清が陽性になるまでの期間（血清転換期間）は短く、これらの時期の中央値を算出することにより血清転換の時期を明瞭に推定することが可能であった。進行患者におけるＡＩＤＳを規定する症状は、カルポシ肉腫（Ｐ４９３）、カンジダアルビカンス  食道炎（Ｐ１２１５，Ｐ４２４，Ｐ０３９）およびニューモシスティスカリニ肺炎（Ｐ３５６）であった。全フォローアップ期間中３カ月ごとに定期的に測定したＣＤ４+Ｔ細胞数から、ＣＤ-４細胞の減少率（勾配）を算出した。平均ＨＩＶ−１ ＲＮＡは、ＮＡＳＢＡ法を用いて測定した。Ｌ００８およびＰ１２１５では、エントリー後それぞれ１０９および５１カ月時にＡＺＴ治療を開始し、それぞれ１２６および６９カ月時にＤＤＣ治療を開始した。その他の患者には、抗ウイルス治療を行わなかった。ＣＴＬｐ頻度分析のためのＰＢＭＣ試料採取時および対応するＣＤ４+Ｔ細胞数を表に示す。患者のＨＬＡ−Ａおよび−Ｂ表現型は、Department Transplantation Immunology、ＣＬＢ、アムステルダムで血清学的に測定した。
【００５２】
【表１】
2006265255.tif 000002
【００５３】
表２．  Ｌ６５８およびＰ４２４の非培養ＰＢＭＣから得たＲｅｖ配列のＨＬＡクラスＩモチーフ
これらの患者は、いずれもＨＬＡ−Ａ１、２；−Ｂ８、４０、６１；−Ｃ２、７；＝ＤＲ３、６、１３；−ＤＲ５２；ＤＱ１、２を有していた。われわれは、ＰＣＲ増幅手順を用いて患者から得たそれぞれ２０および１９の遺伝子組換えＰＣＲクローンの配列を測定した。配列の分析は、ＨＬＡ−Ａ１、２およびＢ８、６１ペプチド結合モチーフの有無について行った（参考文献４６）。ＣＴＬの検出に用いたＨＩＶ−１lai Ｒｅｖのモチーフは、参考のために表示する。Ｌ６５８から得たウイルスの２０配列には、いずれもＨＬＡ−Ａ１モチーフが存在していた。Ｐ４２４から得た１９ウイルス配列は、いずれもこの暫定的なエピトープの９位のチロシンアンカー残基をブロックして分析した。両患者のＲｅｖ配列で、２種類のペプチド結合モチーフ、すなわちＨＬＡ−Ａ２およびＨＬＡ−Ｂ８の一方が同定された。ＨＬＡ−Ｂ６１のモチーフは検出されなかった。特に、Ｌ６５８とＰ４２４で全ての暫定的エピトープがアンカー残基（ＨＬＡ−Ａ１）またはこれらアンカー残基の外（ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ｂ８）で異なっていた。
【００５４】
【表２】
2006265255.tif 000003
【００５５】
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46.  Rammensee, H. G., Friede, T. & Stevanoviic, S. (1995). Immunogenetics 41, 178-228. 
47.  Liljestreom, P., Biotechnology, vol. 9 (1991), 1356-1361.
【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１Ａ】７人の長期無症徴患者（ＬＴＡ）および５人の進行患者における無症徴段階のＨＩＶ−１蛋白Ｇａｇに特異的なＣＴＬプレカーサーの頻度を示す図である。
【図１Ｂ】７人の長期無症徴患者（ＬＴＡ）および５人の進行患者における無症徴段階のＨＩＶ−１蛋白ＲＴに特異的なＣＴＬプレカーサーの頻度を示す図である。
【図１Ｃ】７人の長期無症徴患者（ＬＴＡ）および５人の進行患者における無症徴段階のＨＩＶ−１蛋白Ｎｅｆに特異的なＣＴＬプレカーサーの頻度を示す図である。
【図１Ｄ】７人の長期無症徴患者（ＬＴＡ）および５人の進行患者における無症徴段階のＨＩＶ−１蛋白Ｒｅｖに特異的なＣＴＬプレカーサーの頻度を示す図である。
【図１Ｅ】７人の長期無症徴患者（ＬＴＡ）および５人の進行患者における無症徴段階のＨＩＶ−１蛋白Ｔａｔに特異的なＣＴＬプレカーサーの頻度を示す図である。
【図２】Ｒｅｖ／Ｔａｔ遺伝子組換えウイルスを免疫投与したカニクイザルにおけるウイルス負荷の分離を示し、サルにおける類人猿免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）防御を示す図である。
【図１Ａ】
2006265255.tif 000004
【図１Ｂ】
2006265255.tif 000005
【図１Ｃ】
2006265255.tif 000006
【図１Ｄ】
2006265255.tif 000007
【図１Ｅ】
2006265255.tif 000008
【図２】
2006265255.tif 000009
【手続補正書】
【提出日】平成18年5月1日(2006.5.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のＴａｔタンパク質及びＲｅｖタンパク質の両方に対して特異的な宿主における細胞毒性Ｔ−細胞エピトープ反応を刺激するための医薬用としての細胞毒性Ｔ−細胞エピトープをコードするベクターであって、
前記細胞毒性Ｔ−細胞エピトープが、前記Ｔａｔタンパク質から選択された少なくとも１種の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープと、前記Ｒｅｖタンパク質から選択された少なくとも１種の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープと、からなることを特徴とするベクター。
【請求項２】
前記Ｔａｔタンパク質から選択された少なくとも１種の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープが、
（１−１）前記Ｔａｔタンパク質、及び
（１−２）前記Ｔａｔタンパク質に対して前記細胞毒性Ｔ−細胞エピトープ反応を刺激する機能を損なうことなくアミノ酸の欠失、挿入または置換が行なわれた類縁体
からなる群から選択された少なくとも１種によって供給されたものであり、
前記Ｒｅｖタンパク質から選択された少なくとも１種の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープが、
（２−１）前記Ｒｅｖタンパク質、及び
（２−２）前記Ｒｅｖタンパク質に対して前記細胞毒性Ｔ−細胞エピトープ反応を刺激する機能を損なうことなくアミノ酸の欠失、挿入または置換が行なわれた類縁体
からなる群から選択された少なくとも１種によって供給されたものである請求項１に記載のベクター。
【請求項３】
前記細胞毒性Ｔ−細胞エピトープが、
（イ）ＨＩＶのＴａｔタンパク質の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープに対して、該Ｔａｔタンパク質に特異的な細胞毒性Ｔ−細胞エピトープ反応を誘導する機能を損なうことなくアミノ酸の欠失、挿入または置換が行われたアミノ酸配列を有する合成ペプチド、及び
（ロ）ＨＩＶのＲｅｖタンパク質の細胞毒性Ｔ−細胞エピトープに対して、該Ｒｅｖタンパク質に特異的な細胞毒性Ｔ−細胞エピトープ反応を誘導する機能を損なうことなくアミノ酸の欠失、挿入または置換が行われたアミノ酸配列を有する合成ペプチド
の両方から供給されたものである請求項１に記載のベクター。
【請求項４】
ＨＩＶのＴａｔタンパク質及びＲｅｖタンパク質の少なくとも一方に特異的な細胞毒性Ｔ−細胞エピトープ反応の有無を検出するための方法であって、
検査対象のヒトから抹消血単核細胞を採取して試験用サンプルとし、該サンプルにおけるＨＩＶのＴａｔタンパク質及びＲｅｖタンパク質の少なくとも一方に特異的な細胞毒性Ｔ−細胞エピトープ反応を試験する
ことを特徴とする細胞毒性Ｔ−細胞エピトープ反応の有無を検出する方法。