(57)【要約】【課題】優れた肝細胞賦活作用を有する肝細胞賦活剤を提供すること。【解決手段】本発明の肝細胞賦活剤は、葛花粉末または葛花抽出物からなる。この肝細胞賦活剤は、肝細胞における代謝を活性し得る。すなわち肝細胞が賦活されるため、肝炎、肝硬変などの肝機能障害の予防を目的として利用することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
葛花粉末または葛花抽出物からなる、肝細胞賦活剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、葛花粉末または葛花抽出物からなる肝細胞賦活剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
葛は、マメ科の大形蔓性の植物であり、その根から採取される葛澱粉は、古くから和菓子の原料として用いられている。その根および花は、それぞれ葛根および葛花と称し、解熱薬、鎮痛薬、鎮痙薬、発汗などの症状に対する漢方薬の原料として用いられている。特に、葛花は、他のマメ科植物とは異なり、肝障害改善作用、二日酔い予防作用、尿窒素代謝改善作用などの様々な作用を有することが明らかとなってきている（特許文献１〜３）。
【０００３】
葛花は、肝障害改善作用を有することが知られている。肝機能を改善するには、アルコールなどの化学物質による肝障害を抑制すること、あるいは、肝機能自身を向上させる作用、すなわち肝細胞を賦活することのいずれかが必要である。しかし、葛花の肝細胞賦活に対する効果は知られていない。
【特許文献１】特許第３４５４７１８号公報
【特許文献２】特公平８−３２６３２号公報
【特許文献３】特開昭６４−６８３１８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、優れた肝機能向上作用を有する肝細胞賦活剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者は、葛花の機能性を鋭意検討したところ、葛花粉末または葛花抽出物が、優れた肝細胞賦活作用を有することを見出した。
【０００６】
したがって、本発明は、葛花粉末または葛花抽出物からなる、肝細胞賦活剤を提供する。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、優れた肝機能向上効果を発揮し得る肝細胞賦活剤を提供することができる。すなわち、本発明の肝細胞賦活剤を摂取すれば、肝細胞における代謝が活性化され、肝細胞が賦活され得る。このような肝細胞賦活剤を含有する食品は、容易に摂取することができ、日常的に肝臓自身を活性化し得る。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
（葛花）
葛の花部である葛花は、フラボノイド、サポニン、およびトリプトファン配糖体を含有している。本明細書において、「葛花」とは、蕾から全開した花までの段階で採取した花をいう。本発明においては、特に、蕾を用いることが好ましい。
【０００９】
（葛花粉末）
本発明に用いられる葛花粉末は、葛花、好ましくは蕾の段階の葛花を、日干し、熱風乾燥などの方法により乾燥して粉末化することにより得られる。粉末化は、当業者が通常用いる方法、例えば、ボールミル、ハンマーミル、ローラーミルなどを用いて行う。
【００１０】
あるいは、採取した葛花を、マスコロイダー、スライサー、コミトロールなどを用いて破砕して葛花破砕物を得、この葛花破砕物を乾燥することによっても、葛花粉末を得ることができる。
【００１１】
乾燥は、好ましくは、葛花中の水分含有量が１０質量％またはそれ以下となるまで行われる。
【００１２】
こうして葛花から得られた葛花粉末は、優れた肝細胞賦活作用を有する。
【００１３】
（葛花抽出物）
葛花抽出物は、例えば、葛花に溶媒を添加し、必要に応じて加温して抽出を行い、遠心分離または濾過により抽出液を回収することによって得られる。抽出に用い得る葛花としては、例えば、乾燥前の葛花、乾燥後の葛花、未粉砕の葛花、葛花粉末などが挙げられる。
【００１４】
葛花抽出物を得るために用い得る溶媒としては、水、有機溶媒、含水有機溶媒などが挙げられる。有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサン、プロピレングリコール、エチルメチルケトン、グリセリン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、食用油脂、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，１，２−トリクロロエテンなどが挙げられる。これらの中で好ましくは極性有機溶媒、より好ましくはエタノール、ｎ−ブタノール、メタノール、アセトン、プロピレングリコール、および酢酸エチルであり、最も好ましくはエタノールである。
【００１５】
抽出方法としては、加熱還流などの加温抽出法、超臨界抽出法などが挙げられる。これらの抽出方法において、必要に応じて加圧して加温を行ってもよい。加温する場合、葛花に添加した溶媒が揮発するのを防ぐ必要がある。加温する場合、抽出温度は、好ましくは５０℃〜１３０℃、より好ましくは７０℃〜１００℃である。
【００１６】
抽出時間は、葛花から十分に可溶性成分が抽出される時間であればよく、抽出温度などに応じて適宜設定すればよい。好ましくは３０分〜４８時間である。例えば、抽出温度が５０℃未満の場合は、好ましくは６時間〜４８時間であり、５０℃以上の場合は、好ましくは３０分〜２４時間である。
【００１７】
また、得られた抽出液は、必要に応じて、減圧濃縮、凍結乾燥などの当業者が通常用いる方法により、粉末化された抽出物（抽出物粉末）としてもよい。
【００１８】
さらに、得られた抽出物を、合成吸着剤（ダイアイオンＨＰ２０、セファビースＳＰ８２５、アンバーライトＸＡＤ４、ＭＣＩｇｅｌＣＨＰ２０Ｐなど）またはデキストラン樹脂（セファデックスＬＨ−２０など）を用いて、フラボノイドおよびサポニンを高含有する抽出物としてもよい。
【００１９】
このようにして得られた葛花抽出物は、イソフラボン類およびサポニン類を含有し得る。葛花抽出物中に、イソフラボン類は、葛花抽出物の乾燥質量に対し、好ましくは３質量％以上、より好ましくは５質量％〜９０質量％含有される。サポニン類は、葛花抽出物中に、好ましくは１質量％以上、より好ましくは２質量％〜５０質量％含有される。
【００２０】
（肝細胞賦活剤）
本発明の肝細胞賦活剤は、葛花粉末または葛花抽出物からなる。本発明においては、葛花粉末および葛花抽出物のいずれか一方のみを用いてもよく、これらを併用してもよい。本発明の肝細胞賦活剤は、例えば、細胞の活性化を示すミトコンドリア脱水素酵素によるテトラゾリウム塩（ＷＳＴ−１）のホルマザン色素への変換活性（以下、ＷＳＴ−１値という）を向上させる作用を有するので、細胞を賦活し得る。
【００２１】
本発明の肝細胞賦活剤の摂取量は、特に制限されない。葛花粉末を用いる場合、成人一日あたりにおける肝細胞賦活剤の摂取量は、好ましくは０．１ｇ以上であり、好ましくは３０ｇ以下、より好ましくは１０ｇ以下である。葛花抽出物を用いる場合、成人一日あたりにおける肝細胞賦活剤の摂取量（乾燥質量）は、好ましくは１０ｍｇ以上であり、好ましくは３０００ｍｇ以下、より好ましくは１０００ｍｇ以下である。
【００２２】
本発明の肝細胞賦活剤は、そのまま摂取することが好ましい。しかし、本発明の肝細胞賦活剤は、食品原料、医薬品原料、賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、調味料（以下、「食品原料など」という場合がある）などと混合し、食品、医薬品などの形態で摂取することもできる。
【００２３】
このような食品に添加可能な食品原料としては、例えば、ローヤルゼリー、プロポリス、ビタミン類（Ａ、Ｂ群、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、葉酸、パントテン酸、ビオチン、これらの誘導体など）、ミネラル（鉄、マグネシウム、カルシウム、亜鉛、セレンなど）、キチン・キトサン、レシチン、ポリフェノール（カテキン類、アントシアニン類、プロアントシアニジンなどの縮合型タンニン、ガロタンニンなどの加水分解型タンニン、フラボノイド類、これらの誘導体など）、カロテノイド（リコピン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、ルテインなど）、キサンチン誘導体（カフェインなど）、脂肪酸、アミノ酸、タンパク質（コラーゲン、エラスチンなど）、ムコ多糖類（ヒアルロン酸、コンドロイチン、デルマタン、ヘパラン、ヘパリン、ケタラン、これらの塩など）、アミノ糖（グルコサミン、アセチルグルコサミン、ガラクトサミン、アセチルガラクトサミン、ノイラミン酸、アセチルノイラミン酸、ヘキソサミン、それらの塩など）、食物繊維（難消化性デキストリン、アルギン酸、グアガム、ペクチン、グルコマンナンなど）、オリゴ糖（イソマルトオリゴ糖、環状オリゴ糖など）、リン脂質およびその誘導体（ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、セラミドなど）、含硫化合物（アリイン、セパエン、タウリン、グルタチオン、メチルスルホニルメタンなど）、糖アルコール、キノン類（コエンザイムＱ１０など）、リグナン類（セサミンなど）；これらを含有する動植物抽出物、根菜類（ウコン、ショウガなど）、麦若葉末などのイネ科植物の緑葉、ケールなどのアブラナ科植物の緑葉などが挙げられる。
【００２４】
さらに、植物発酵ジュース、野菜ジュース（例えば、人参ジュース）、植物抽出液、果汁などに本発明の肝細胞賦活剤を添加して、飲料形態として利用することも可能である。このような形態にすれば、嗜好性を良くすることが可能であるだけでなく、機能性または栄養価の高い飲料とすることもできる。
【００２５】
調味料としては、例えば、グラニュー糖、蜂蜜、ソルビットなどの甘味料；アルコール；およびクエン酸、リンゴ酸、酒石酸などの酸味料が挙げられる。
【００２６】
本発明の肝細胞賦活剤と上記食品原料などとの混合比は、特に制限されない。例えば、上記食品原料などは、本発明の肝細胞賦活剤１００質量部に対して、好ましくは１質量部以上、より好ましくは５質量部以上とするのがよく、好ましくは２０００質量部以下、より好ましくは１０００質量部以下とするのがよい。
【００２７】
特に、本発明の肝細胞賦活剤を食品の形態で用いる場合、肝臓の機能を強化する植物由来の成分を配合することが好ましい。このような成分を配合することによって、相乗効果が期待し得る。このような肝臓の機能を強化する植物としては、例えば、ウコン、ショウガ、アザミ類（例えばマリアアザミ、オオアザミ、チョウセンアザミなど）、イチョウ（例えばイチョウ葉）、タラノキ、タンポポ（例えばセイヨウタンポポなど）、キンセンソウ、甘草、スピルリナ、クコ（例えばクコの実、クコの葉など）、アーティチョークおよびこれらの抽出物などが挙げられる。これら植物から得られる特徴成分（例えばクルクミン、ジンゲロール類、ジアリールペプタイド、シマリン、グリチルリチン酸など）を用いてもよい。
【００２８】
本発明の肝細胞賦活剤と肝臓の機能を強化する植物由来の成分との混合比は、特に制限されない。例えば、肝臓の機能を強化する植物由来の成分は、本発明の肝細胞賦活剤１００質量部に対して、好ましくは１質量部以上、より好ましくは５質量部以上とするのがよく、好ましくは５０質量部以下、より好ましくは３０質量部以下とするのがよい。
【００２９】
本発明の肝細胞賦活剤を食品または医薬品の形態で用いる場合、用途に応じて、顆粒、錠剤、カプセル剤（ハードカプセル、ソフトカプセルなど）、丸剤、粉末状、液状、ティーバッグ状、飴状などの形態に加工される。このように加工された肝細胞賦活剤は、そのまま食してもよく、あるいは水、湯、牛乳などに溶いて飲んでもよい。粉末などをティーバッグの形態で提供すれば、湯などに浸漬して得られる抽出液を飲料として利用し得る。
【００３０】
飲料の場合、低ｐＨであれば、１２０℃で４分間の完全殺菌をしなくても、１００℃以下の殺菌条件で殺菌し得る。例えば、ｐＨが４．０以下の場合では、６５℃で１０分間相当の殺菌条件で十分に殺菌し得る。
【００３１】
さらに、飲料などの液体を、ゼリー、シャーベット、フローズンヨーグルト、アイスクリームなどの形態に加工することもできる。
【実施例】
【００３２】
以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明がこの実施例により制限されないことはいうまでもない。
【００３３】
（実施例１：肝細胞賦活作用の評価１）
ＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝臓腫瘍細胞）を、９６ウェルプレートに２×１０４ｃｅｌｌｓ／ウェルとなるように播種し、０．１ｍＬの標準培地（５容量％の血清を含むＤＭＥＭ培地）で２４時間培養した。次いで、このうちの３ウェルを、血清とエタノール３００ｍＭとを含み、かつ葛花抽出物（イソフラボン類を１０質量％およびサポニンを１質量％含有：株式会社太田胃散製）を０．００１質量％含有する標準培地に置換して、２４時間培養を行った（試験群１）。
【００３４】
別の３ウェルについては、葛花抽出物を０．００３質量％としたこと以外は、試験群１と同様にして培養した（試験群２）。
【００３５】
対照群１は、置換した培地を標準培地としたこと以外は、試験群１と同様にして培養した。
【００３６】
エタノール対照群１は、置換した培地を、エタノール３００ｍＭを含む標準培地としたこと以外は、試験群１と同様にして培養した。
【００３７】
その後、各群のウェルから培養液を除去し、ＰＢＳ（−）でウェルを洗浄した。次いで、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ（株式会社同仁化学製）で、細胞の活性化を示すマーカーであるミトコンドリア脱水素酵素によるＷＳＴ−１値を測定し、対照群のＷＳＴ−１値の平均値を１００％とした時の割合（％）を算出した。結果を表１に示す。ＷＳＴ−１値が高い程、細胞が活性化していることを示す。
【００３８】
【表１】
2006265236.tif 000002
【００３９】
表１に示すように、エタノール対照群１では、対照群１と比較すると、細胞の活性を示すマーカーであるＷＳＴ−１値が低下しており、エタノールによる障害が生じたことがわかる。一方、葛花抽出物を含む試験群では、対照群１と比べて、試験群１で約１４％、試験群２で約２８％上昇しており、濃度に依存してＷＳＴ−１値が上昇していた。したがって、葛花抽出物は、アルコールによる肝障害を抑制しながら、さらに肝細胞を賦活し得ることがわかる。
【００４０】
（実施例２：肝細胞賦活作用の評価２）
ＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝臓腫瘍細胞）を、２４ウェルプレートに１×１０５ｃｅｌｌｓ／ウェルとなるように播種し、０．５ｍＬの標準培地（５容量％の血清を含むＤＭＥＭ培地）で２４時間培養した。次いで、このうちの３ウェルを、血清とエタノール３００ｍＭとを含み、かつ上記実施例１で用いた葛花抽出物を０．０１質量％含有する標準培地に置換して、２４時間培養を行った（試験群３）。
【００４１】
対照群２は、置換した培地を標準培地としたこと以外は、試験群３と同様にして培養した。
【００４２】
エタノール対照群２は、置換した培地を、エタノール３００ｍＭを含む標準培地としたこと以外は、試験群３と同様にして培養した。
【００４３】
比較群１は、葛花抽出物の代わりにウコン抽出物（ヤスマ株式会社製）を用いたこと以外は、試験群３と同様にして培養した。
【００４４】
次いで、各群のウェルから培養液を除去してＰＢＳ（−）でウェルを洗浄し、各群のウェルに１０ｍＭの塩酸を０．２５ｍＬ添加した。次いで、ウェルを凍結し融解することによって細胞膜を破壊した。次いで、４℃で遠心分離を行い、上清１８０μＬを取り、これに５質量％スルホサリチル酸水溶液（和光純薬工業株式会社製）２０μＬを添加し、再度４℃で遠心分離を行って試料中のタンパク質を除去した。得られた上清を用いて、Ｍ．Ｅ．Ａｎｄｅｒｓｏｎらの方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ，１１３，５４８（１９８５））に基づいて、細胞内の総グルタチオン量を測定した。
【００４５】
なお、タンパク質を除去する前の上清中のタンパク質量を、測定キット（プロテインラピットワコー：和光純薬工業株式会社製）を用いて測定した。次いで、細胞内に含まれるタンパク質量中の総グルタチオン量を求め、対照群の平均値を１００％とした場合の各群の割合を算出した。結果を表２に示す。
【００４６】
【表２】
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【００４７】
表２に示すように、エタノール対照群２の数値から、エタノール負荷の有無による細胞内総グルタチオン量の差は見られないことがわかる。葛花抽出物を用いた試験群３は、ウコン抽出物を用いた比較群１およびエタノール対照群２よりも細胞内の総グルタチオン量が多かった。グルタチオンは、肝臓での解毒作用を促進させる、すなわち肝細胞賦活作用を有することが知られている。したがって、葛花抽出物は、優れた肝細胞賦活作用を有することがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００４８】
本発明の肝細胞賦活剤は、優れた肝細胞賦活作用を有する。したがって、本発明の肝細胞賦活剤は、摂取することにより肝細胞賦効果が発揮され得るので、食品、医薬品などとして有用である。