(57)【要約】【課題】薬剤耐性癌細胞に対して有効な新規な抗癌剤。【解決手段】下記式（Ｉ）2006069947.tif 000008で表される生理活性物質ビセライドＡ、若しくは下記式（ＩＩ）2006069947.tif 000009で表される生理活性物質ビセライドＢ、若しくは下記式（ＩＩＩ）2006069947.tif 000010で表される生理活性物質ビセライドＣ、又はそれらの薬理学上許容される塩。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）
【化１】
2006069947.tif 000005
で表される生理活性物質ビセライドＡ、若しくは下記式（ＩＩ）
【化２】
2006069947.tif 000006
で表される生理活性物質ビセライドＢ、若しくは下記式（ＩＩＩ）
【化３】
2006069947.tif 000007
で表される生理活性物質ビセライドＣ、又はそれらの薬理学上許容される塩。
【請求項２】
下記の理化学的性質をもつ生理活性物質ビセライドＡ、若しくはビセライドＢ、若しくはビセライドＣ、又はそれらの薬理学上許容される塩
ａ）ビセライドＡ
１）分子式：Ｃ２５Ｈ３３Ｏ１０Ｃｌ（高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）法により測定）
２）分子量：５２８．９８（ＥＳＩ−ＭＳ法により測定した（Ｍ＋Ｎａ）＋＝５５１．１６５４）
３）水素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＣＤ３ＯＤ）：
δ （ｐｐｍ）： ６.０８ （ｄｄ、J = １０.８、７.１ Ｈｚ、１Ｈ）、５.８４ （ｄｄ、J = １１.１、５.２ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３８ （ｄ、J = ８.６ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３２ （ｍ、１Ｈ）、５.３０ （ｍ、１Ｈ）、４.９６ （ｄ、J = １２.９ Ｈｚ、１Ｈ）、４.７０ （ｄ、J = １２.９ Ｈｚ、１Ｈ）、４.５３ （ｔ、J = ８.６ Ｈｚ、１Ｈ）、３.９４ （ｍ、１Ｈ）、３.９１ （ｄｄ、J = ８.６、３.７ Ｈｚ、１ Ｈ）、３.５５ （ｍ、１Ｈ）、３.０４ （ｓ、２Ｈ）、２.８８ （ｄｄ、J = １２.０、５.２ Ｈｚ、１Ｈ）、２.８３ （ｄｄ、J = １２.０、１１.１ Ｈｚ、１Ｈ）、２.６１ （ｍ、１Ｈ）、２.４５ （ｍ、１Ｈ）、２.３１ （ｍ、１Ｈ）、２.２８ （ｍ、１Ｈ）、２.０９ （ｍ、１Ｈ）、２.０７ （ｓ、３Ｈ）、２.０２ （ｓ、３Ｈ）、１.８２ （ｓ、３Ｈ）、１.５３ （ｍ、１Ｈ）、１.３９ （ｍ、１Ｈ）
４）炭素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＣＤ３ＯＤ）：
δ （ｐｐｍ）： １７５.４、１７２.５、１７１.１、１６９.４、１３５.９、１３５.０、１３４.０、１３３.６、１３０.７、１２５.８、８４.５、７８.１、７６.７、６７.８、６６.５、６５.５、４５.７、３８.８、３８.７、３５.５、２９.０、２７.７、２１.０、２０.９、１７.３
５）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
ｂ）ビセライドＢ
１）分子式：Ｃ３０Ｈ３９Ｏ１１Ｃｌ（高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）法により測定）
２）分子量：６１１．０８（ＥＳＩ−ＭＳ法により測定した（Ｍ＋Ｎａ）＋＝６３３．２０７１）
３）水素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＣＤ３ＯＤ）：
δ （ｐｐｍ）： ６.３１ （ｓ、１Ｈ）、６.１０ （ｓ、１Ｈ）、６.０８ （ｄｄ、J = １０.９、７.３ Ｈｚ、１Ｈ）、５.８３ （ｄｄ、J = １１.２、５.０ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３９ （ｄ、J = ８.７ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３２ （ｍ、１Ｈ）、５.３０ （ｍ、１Ｈ）、４.９６ （ｄ、J = １３.０ Ｈｚ、１Ｈ）、４.８２ （ｄ、J = １３.９ Ｈｚ、１Ｈ）、４.７６ （ｄ、J = １３.９ Ｈｚ、１Ｈ）、４.７０ （ｄ、J = １３.０ Ｈｚ、１Ｈ）、４.５３ （ｔ、J = ８.７ Ｈｚ、１Ｈ）、３.９２ （ｍ、１Ｈ）、３.９０ （ｄｄ、J = ８.７、３.７ Ｈｚ、１Ｈ）、３.５４ （ｍ、１Ｈ）、３.１２ （ｓ、２Ｈ）、２.８８ （ｄｄ、J = １２.５、５.０ Ｈｚ、１Ｈ）、２.８３ （ｄｄ、J = １２.５、１１.２ Ｈｚ、１Ｈ）、２.６１ （ｍ、１Ｈ）、２.４５ （ｍ、１Ｈ）、２.３６ （ｍ、３Ｈ）、２.３０ （ｍ、１Ｈ）、２.２７ （ｍ、１Ｈ）、２.０８ （ｍ、１Ｈ）、２.０７ （ｓ、３Ｈ）、２.０２ （ｓ、３Ｈ）、１.８１ （ｓ、３Ｈ）、１.５３ （ｍ、１Ｈ）、１.３８ （ｍ、１Ｈ）
４）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
ｃ）ビセライドＣ
１）分子式：Ｃ２３Ｈ３１Ｏ９Ｃｌ（高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）法により測定）
２）分子量：４８６．９４（ＥＳＩ−ＭＳ法により測定した（Ｍ＋Ｎａ）＋＝５０９．１５３１）
３）水素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＣＤ３ＯＤ）：
δ （ｐｐｍ）： ６.０４ （ｄｄ、J = １０.８、７.３ Ｈｚ、１Ｈ）、５.８５ （ｄｄ、J = １１.６、４.５ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３８ （ｄ、J = ８.６ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３１ （ｍ、１Ｈ）、５.２９ （ｍ、１Ｈ）、４.５３ （ｔ、J = ８.６ Ｈｚ、１Ｈ）、４.３５ （ｄ、J = １４.５ Ｈｚ、１Ｈ）、４.３１ （ｄ、J = １４.５ Ｈｚ、１Ｈ）、３.９５ （ｍ、１Ｈ）、３.９１ （ｄｄ、J = ８.６、３.７ Ｈｚ、１ Ｈ）、３.５１ （ｍ、１Ｈ）、３.０４ （ｓ、２Ｈ）、２.８５ （ｄｄ、J = １２.０、４.５ Ｈｚ、１Ｈ）、２.７９ （ｄｄ、J = １２.０、１１.６ Ｈｚ、１Ｈ）、２.５９ （ｍ、１Ｈ）、２.４６ （ｍ、１Ｈ）、２.３１ （ｍ、１Ｈ）、２.２８ （ｍ、１Ｈ）、２.０８ （ｍ、１Ｈ）、２.０３ （ｓ、３Ｈ）、１.８３ （ｓ、３Ｈ）、１.５３ （ｍ、１Ｈ）、１.３９ （ｍ、１Ｈ）
４）炭素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＣＤ３ＯＤ）：
δ （ｐｐｍ）： １７５.４、１７１.３、１６９.７、１３７.９、１３５.０、１３３.５、１３０.９、１３０.７、１２６.５、８４.５、７８.１、７６.７、６８.０、６６.５、６２.５、４５.７、３８.８、３８.７、３５.５、２９.０、２７.４、２１.０、１７.３
５）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の生理活性物質ビセライドＡ、若しくはビセライドＢ、若しくはビセライドＣ、又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする医薬。
【請求項４】
請求項１又は２に記載の生理活性物質ビセライドＡ、若しくはビセライドＢ、若しくはビセライドＣ、又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする細胞増殖阻害剤。
【請求項５】
請求項１又は２に記載の生理活性物質ビセライドＡ、若しくはビセライドＢ、若しくはビセライドＣ、又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする抗癌剤。
【請求項６】
請求項１又は２に記載の生理活性物質ビセライドＡ及び／又はビセライドＢ及び／又はビセライドＣを生産する能力を有するホヤより、生理活性物質ビセライドＡ及び／又はビセライドＢ及び／又はビセライドＣを採取することを特徴とする生理活性物質ビセライドＡ及び／又はビセライドＢ及び／又はビセライドＣの製造法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬、特に細胞増殖阻害剤として有用な新規ビセライド誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、抗癌剤としては、非特許文献１に示されているように、アドリアマイシン、シスプラチン、タキソール、ビンクリスチン等が知られている。しかしこれら抗癌剤に対して耐性を示す多剤耐性癌も多く認められており、治療上の問題となっている。
【０００３】
一方、ウニ受精卵の細胞分裂を阻害する物質として海洋生物等より単離されたトリデカノリド誘導体の癌細胞に対する増殖抑制効果が、特許文献１には記載されている。しかしヒト癌細胞、特に固形癌に対して直接増殖抑制作用を示すかはこれまで知られておらず、まして臨床上問題となっている多剤耐性癌細胞に有効であるかは不明であった。
【０００４】
【特許文献１】特開２０００−２２９９７７号公報
【非特許文献１】塚越  茂、癌化学療法の変遷、癌と化学療法  ２６：Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １、２３−３１（１９９９）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、医薬、特に抗癌剤として有用な新規細胞増殖阻害剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、海洋原索動物の一種であるホヤが産生する新規生理活性物質ビセライドＡ、ビセライドＢ及びビセライドＣまたはそれらの薬理学上許容される塩が細胞の増殖を阻害することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
即ち、本発明は
（１）下記式（Ｉ）
【０００８】
【化１】
2006069947.tif 000002
【０００９】
で表される生理活性物質ビセライドＡ、若しくは下記式（ＩＩ）
【００１０】
【化２】
2006069947.tif 000003
【００１１】
で表される生理活性物質ビセライドＢ、若しくは下記式（ＩＩＩ）
【００１２】
【化３】
2006069947.tif 000004
【００１３】
で表される生理活性物質ビセライドＣ、又はそれらの薬理学上許容される塩、
（２）下記の理化学的性質をもつ生理活性物質ビセライドＡ、若しくはビセライドＢ、若しくはビセライドＣ、又はそれらの薬理学上許容される塩
【００１４】
ａ）ビセライドＡ
１）分子式：Ｃ２５Ｈ３３Ｏ１０Ｃｌ（高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）法により測定）
２）分子量：５２８．９８（ＥＳＩ−ＭＳ法により測定した（Ｍ＋Ｎａ）＋＝５５１．１６５４）
３）水素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＣＤ３ＯＤ）：
δ （ｐｐｍ）： ６.０８ （ｄｄ、J = １０.８、７.１ Ｈｚ、１Ｈ）、５.８４ （ｄｄ、J = １１.１、５.２ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３８ （ｄ、J = ８.６ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３２ （ｍ、１Ｈ）、５.３０ （ｍ、１Ｈ）、４.９６ （ｄ、J = １２.９ Ｈｚ、１Ｈ）、４.７０ （ｄ、J = １２.９ Ｈｚ、１Ｈ）、４.５３ （ｔ、J = ８.６ Ｈｚ、１Ｈ）、３.９４ （ｍ、１Ｈ）、３.９１ （ｄｄ、J = ８.６、３.７ Ｈｚ、１ Ｈ）、３.５５ （ｍ、１Ｈ）、３.０４ （ｓ、２Ｈ）、２.８８ （ｄｄ、J = １２.０、５.２ Ｈｚ、１Ｈ）、２.８３ （ｄｄ、J = １２.０、１１.１ Ｈｚ、１Ｈ）、２.６１ （ｍ、１Ｈ）、２.４５ （ｍ、１Ｈ）、２.３１ （ｍ、１Ｈ）、２.２８ （ｍ、１Ｈ）、２.０９ （ｍ、１Ｈ）、２.０７ （ｓ、３Ｈ）、２.０２ （ｓ、３Ｈ）、１.８２ （ｓ、３Ｈ）、１.５３ （ｍ、１Ｈ）、１.３９ （ｍ、１Ｈ）
４）炭素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＣＤ３ＯＤ）：
δ （ｐｐｍ）： １７５.４、１７２.５、１７１.１、１６９.４、１３５.９、１３５.０、１３４.０、１３３.６、１３０.７、１２５.８、８４.５、７８.１、７６.７、６７.８、６６.５、６５.５、４５.７、３８.８、３８.７、３５.５、２９.０、２７.７、２１.０、２０.９、１７.３
５）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性、
【００１５】
ｂ）ビセライドＢ
１）分子式：Ｃ３０Ｈ３９Ｏ１１Ｃｌ（高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）法により測定）
２）分子量：６１１．０８（ＥＳＩ−ＭＳ法により測定した（Ｍ＋Ｎａ）＋＝６３３．２０７１）
３）水素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＣＤ３ＯＤ）：
δ （ｐｐｍ）： ６.３１ （ｓ、１Ｈ）、６.１０ （ｓ、１Ｈ）、６.０８ （ｄｄ、J = １０.９、７.３ Ｈｚ、１Ｈ）、５.８３ （ｄｄ、J = １１.２、５.０ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３９ （ｄ、J = ８.７ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３２ （ｍ、１Ｈ）、５.３０ （ｍ、１Ｈ）、４.９６ （ｄ、J = １３.０ Ｈｚ、１Ｈ）、４.８２ （ｄ、J = １３.９ Ｈｚ、１Ｈ）、４.７６ （ｄ、J = １３.９ Ｈｚ、１Ｈ）、４.７０ （ｄ、J = １３.０ Ｈｚ、１Ｈ）、４.５３ （ｔ、J = ８.７ Ｈｚ、１Ｈ）、３.９２ （ｍ、１Ｈ）、３.９０ （ｄｄ、J = ８.７、３.７ Ｈｚ、１Ｈ）、３.５４ （ｍ、１Ｈ）、３.１２ （ｓ、２Ｈ）、２.８８ （ｄｄ、J = １２.５、５.０ Ｈｚ、１Ｈ）、２.８３ （ｄｄ、J = １２.５、１１.２ Ｈｚ、１Ｈ）、２.６１ （ｍ、１Ｈ）、２.４５ （ｍ、１Ｈ）、２.３６ （ｍ、３Ｈ）、２.３０ （ｍ、１Ｈ）、２.２７ （ｍ、１Ｈ）、２.０８ （ｍ、１Ｈ）、２.０７ （ｓ、３Ｈ）、２.０２ （ｓ、３Ｈ）、１.８１ （ｓ、３Ｈ）、１.５３ （ｍ、１Ｈ）、１.３８ （ｍ、１Ｈ）
４）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性、
【００１６】
ｃ）ビセライドＣ
１）分子式：Ｃ２３Ｈ３１Ｏ９Ｃｌ（高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）法により測定）
２）分子量：４８６．９４（ＥＳＩ−ＭＳ法により測定した（Ｍ＋Ｎａ）＋＝５０９．１５３１）
３）水素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＣＤ３ＯＤ）：
δ （ｐｐｍ）： ６.０４ （ｄｄ、J = １０.８、７.３ Ｈｚ、１Ｈ）、５.８５ （ｄｄ、J = １１.６、４.５ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３８ （ｄ、J = ８.６ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３１ （ｍ、１Ｈ）、５.２９ （ｍ、１Ｈ）、４.５３ （ｔ、J = ８.６ Ｈｚ、１Ｈ）、４.３５ （ｄ、J = １４.５ Ｈｚ、１Ｈ）、４.３１ （ｄ、J = １４.５ Ｈｚ、１Ｈ）、３.９５ （ｍ、１Ｈ）、３.９１ （ｄｄ、J = ８.６、３.７ Ｈｚ、１ Ｈ）、３.５１ （ｍ、１Ｈ）、３.０４ （ｓ、２Ｈ）、２.８５ （ｄｄ、J = １２.０、４.５ Ｈｚ、１Ｈ）、２.７９ （ｄｄ、J = １２.０、１１.６ Ｈｚ、１Ｈ）、２.５９ （ｍ、１Ｈ）、２.４６ （ｍ、１Ｈ）、２.３１ （ｍ、１Ｈ）、２.２８ （ｍ、１Ｈ）、２.０８ （ｍ、１Ｈ）、２.０３ （ｓ、３Ｈ）、１.８３ （ｓ、３Ｈ）、１.５３ （ｍ、１Ｈ）、１.３９ （ｍ、１Ｈ）
４）炭素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＣＤ３ＯＤ）：
δ （ｐｐｍ）： １７５.４、１７１.３、１６９.７、１３７.９、１３５.０、１３３.５、１３０.９、１３０.７、１２６.５、８４.５、７８.１、７６.７、６８.０、６６.５、６２.５、４５.７、３８.８、３８.７、３５.５、２９.０、２７.４、２１.０、１７.３
５）呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性、
【００１７】
（３）（１）又は（２）に記載の生理活性物質ビセライドＡ、若しくはビセライドＢ、若しくはビセライドＣ、又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする医薬、
（４）（１）又は（２）に記載の生理活性物質ビセライドＡ、若しくはビセライドＢ、若しくはビセライドＣ、又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする細胞増殖阻害剤、
（５）（１）又は（２）に記載の生理活性物質ビセライドＡ、若しくはビセライドＢ、若しくはビセライドＣ、又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする抗癌剤、
（６）（１）又は（２）に記載の生理活性物質ビセライドＡ及び／又はビセライドＢ及び／又はビセライドＣを生産する能力を有するホヤより、生理活性物質ビセライドＡ及び／又はビセライドＢ及び／又はビセライドＣを採取することを特徴とする生理活性物質ビセライドＡ及び／又はビセライドＢ及び／又はビセライドＣの製造法、
に関する。
【発明の効果】
【００１８】
本発明のビセライドＡ、ビセライドＢ、若しくはビセライドＣ、又はそれらの薬理学上許容される塩は、細胞増殖抑制作用を示し、抗癌剤、特に多剤耐性能を示す癌に対する化学療法剤等として利用可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下に本発明の詳細について述べる。
【００２０】
本発明のビセライドＡ、ビセライドＢ、若しくはビセライドＣ（以下ビセライド類という）はそれぞれ上記の物理化学的性質を有し、上記式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）で表される。ビセライドＡは、ビセライドＣの一級の水酸基がアセトキシ基に、ビセライドＢはビセライドＡのカルボキシル基がエステル基に変換された構造である。
【００２１】
本発明のビセライド類は、該ビセライド類を生産する海洋動物より採取することが可能である。ビセライド類を生産する海洋動物として、海洋原索動物の一種であるホヤ、好ましくはＤｉｄｅｍｎｉｄａｅ科のホヤが挙げられる。
ビセライド類は、通常物質の採取に用いられる方法、たとえば吸着クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等を適宜組み合わせ、あるいは必要に応じてそれらを繰り返すことによって純粋に単離することができる。
【００２２】
本発明において薬理学上許容される塩とは、通常取り得る塩であれば特に限定されないが、例えばアルカリ金属との塩、即ち、ナトリウム塩、カリウム塩等が好ましい。
【００２３】
本発明のビセライド類または薬理学上許容し得る塩を医薬として使用する場合は、単独または担体、賦形剤、希釈剤、溶解補助剤等の製薬上許容し得る添加剤と混合して粉剤、顆粒剤、錠剤、カブレット剤、カプセル剤、注射剤、座剤、軟膏剤等の製剤形態で、経口または非経口的（全身投与、局所投与等）に安全に投与される。製剤中の本発明化合物または製薬上許容し得る塩の含量は、製剤により種々異なるが、通常０．１〜１００重量％であることが好ましい。投与量は投与経路、患者の年齢並びに予防または治療すべき実際の症状等により異なるが、例えば成人に経口投与する場合、有効成分として１日０．０１ｍｇ〜２０００ｍｇ、好ましくは０．０１ｍｇ〜８００ｍｇとすることができ、１日１〜数回に分けて投与できる。
【００２４】
ビセライド類又はそれらの薬理学上許容される塩に悪影響を与えない限り、医薬用に用いられる種々の医薬用添加剤、すなわち、担体やその他の助剤、例えば安定剤、防腐剤、無痛化剤、乳化剤等を製剤においては使用してもよい。該製剤において、ビセライド類又はそれらの薬理学上許容される塩の含量は製剤形態等により広範囲に変えることが可能であり、一般には０．０１〜１００％（重量）、好ましくは０．１〜７０％（重量）含有する。
【００２５】
ビセライド類又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする医薬品は、好ましくは細胞増殖阻害剤として胃癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝癌、卵巣癌、乳癌、前立腺癌、脳腫瘍、白血病等に用いられる抗癌剤として使用される。
【実施例】
【００２６】
以下に本発明化合物の製造例について、実施例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの例によって何ら制限されるものではない。また、本発明化合物の有効性を示すために、本発明の代表化合物の薬理試験結果を試験例に示す。なお、実施例のＭＳ（ＥＳＩ）は、  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＱＳｔａｒ／Ｐｕｌｓａｒ  ｉ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒを使用し測定した値である。
【００２７】
ビセライドＡ、ビセライドＢ、ビセライドＣの単離
沖縄県本部町備瀬崎で採集したＤｉｄｅｍｎｉｄａｅ科のホヤ１．７ｋｇをミキサーを用いて粉砕し、メタノール ２．０Ｌで５日間浸出した。この混合物を吸引ろ過し、ろ液を１Ｌの水混合物になるまで減圧濃縮した。得られたメタノール抽出物を酢酸エチル（３回×１．０Ｌ）で分配し、酢酸エチル層を減圧濃縮した。水層は５００ｍＬの水混合物になるまで濃縮し、更にｎ-ブタノール（３回×３００ｍＬ）で分配し、ｎ-ブタノール層を減圧濃縮して油状物を得た。酢酸エチル層から得られた油状物をさらに９０％メタノール（５００ｍＬ）とヘキサン（３回×５００ｍＬ）で分配した。
【００２８】
９０％メタノール抽出物（１．５ｇ）について、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１５．０ｇ）を行った。吸着後クロロホルム７５ｍＬでカラムを洗浄し、以降クロロホルム／メタノールが２０／１液７５ｍＬ、１０／１液７５ｍＬ、５／１液７５ｍＬ、２／１液７５ｍＬ、１／１液２００ｍＬで順次溶出分離し、６画分を得た。第２溶出画分（５３６．８ｍｇ）を更に、Ｃｏｓｍｏｓｉｌ  ７５Ｃ１８−ＯＰＮ（１０．０ｇ）を用いて、ＯＤＳシリカゲルカラムクロマトグラフィーを行った。メタノール／水が６０／４０液３０ｍＬ、８０／２０液３０ｍＬ、８０／２０液３０ｍＬ、及びメタノール２００ｍＬにより分離して４画分を得た。
【００２９】
得られた第２溶出画分（２７．０ｍｇ）について、Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ  ＯＤＳ−ＨＧ−５（φ２０ｍｍ×２５０ｍｍ）カラムを用いた高速液体クロマトグラフィーを実施した。溶媒としてメタノール／水／トリフルオロ酢酸（７０／３０／０．１）を用い、流速５．０ｍＬで行い、溶出物をＵＶ２１５ｎｍの吸収で検出した。３回の精製により、ビセライドＡ（溶出時間１８．５分）を１．２ｍｇ、ビセライドＢ（溶出時間２４．５分）を１６０μｇ得た。
【００３０】
ｎ−ブタノール抽出物（１．８ｇ）について、Ｃｏｓｍｏｓｉｌ  ７５Ｃ１８−ＯＰＮ（３３．０ｇ）を用いたＯＤＳシリカゲルカラムクロマトグラフィーを実施した。メタノール／水が６０／４０液１００ｍＬ、８０／２０液１００ｍＬ、８０／２０液１００ｍＬ、及びメタノール２００ｍＬにより分離して、４画分を得た。得られた第１溶出画分（３０１．５ｍｇ）を、更にＣｏｓｍｏｓｉｌ  ７５Ｃ１８−ＯＰＮ（６．０ｇ）によるＯＤＳシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけた。メタノール／水が２０／８０液３０ｍＬ、８０／２０液３０ｍＬ、及びメタノール１００ｍＬにより分離して３画分を得た。得られた第２溶出画分（８０．４ｍｇ）をＤｅｖｅｌｏｓｉｌ  ＯＤＳ−ＨＧ−５（φ２０ｍｍ×２５０ｍｍ）カラムを用いた高速液体クロマトグラフィーにより分離した。溶媒としてメタノール／水／トリフルオロ酢酸（５５／４５／０．１）液を用い、流速５．０ｍＬ／分で行い、溶出物をＵＶ２１５ｎｍの吸収で検出した。精製操作を５回行い、ビセライドＣ（溶出時間３０．１分）を１．９ｍｇ得た。
【００３１】
以下にビセライドＡ、ビセライドＢ、ビセライドＣの理化学的性質を示す。なお、アニスアルデヒドによる呈色反応試験は該ビセライド誘導体をシリカゲルプレートに吸着させ、ｐ−アニスアルデヒド（和光純薬工業株式会社）（９．３ｍＬ）、酢酸（３．８ｍＬ）をエタノール（３４０ｍＬ）に溶かし、濃硫酸（１２．５ｍＬ）を添加したアニスアルデヒド溶液を噴霧し、ホットプレート上で加熱して行った。
【００３２】
ａ）ビセライドＡ
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ （ｐｐｍ）： ６.０８ （ｄｄ、J = １０.８、７.１ Ｈｚ、１Ｈ）、５.８４ （ｄｄ、J = １１.１、５.２ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３８ （ｄ、J = ８.６ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３２ （ｍ、１Ｈ）、５.３０ （ｍ、１Ｈ）、４.９６ （ｄ、J = １２.９ Ｈｚ、１Ｈ）、４.７０ （ｄ、J = １２.９ Ｈｚ、１Ｈ）、４.５３ （ｔ、J = ８.６ Ｈｚ、１Ｈ）、３.９４ （ｍ、１Ｈ）、３.９１ （ｄｄ、J = ８.６、３.７ Ｈｚ、１ Ｈ）、３.５５ （ｍ、１Ｈ）、３.０４ （ｓ、２Ｈ）、２.８８ （ｄｄ、J = １２.０、５.２ Ｈｚ、１Ｈ）、２.８３ （ｄｄ、J = １２.０、１１.１ Ｈｚ、１Ｈ）、２.６１ （ｍ、１Ｈ）、２.４５ （ｍ、１Ｈ）、２.３１ （ｍ、１Ｈ）、２.２８ （ｍ、１Ｈ）、２.０９ （ｍ、１Ｈ）、２.０７ （ｓ、３Ｈ）、２.０２ （ｓ、３Ｈ）、１.８２ （ｓ、３Ｈ）、１.５３ （ｍ、１Ｈ）、１.３９ （ｍ、１Ｈ）
１４Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ （ｐｐｍ）： １７５.４、１７２.５、１７１.１、１６９.４、１３５.９、１３５.０、１３４.０、１３３.６、１３０.７、１２５.８、８４.５、７８.１、７６.７、６７.８、６６.５、６５.５、４５.７、３８.８、３８.７、３５.５、２９.０、２７.７、２１.０、２０.９、１７.３ 
ＭＳ（ＥＳＩ、ＰＯＳ）：
ｍ／ｚ：ｆｏｕｎｄ，５５１．１６５４（Ｍ＋Ｎａ）＋
Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ  Ｃ２５Ｈ３３Ｏ１０Ｃｌ（高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）法により測定），５２８．９８
呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００３３】
ｂ）ビセライドＢ
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ （ｐｐｍ）： ６.３１ （ｓ、１Ｈ）、６.１０ （ｓ、１Ｈ）、６.０８ （ｄｄ、J = １０.９、７.３ Ｈｚ、１Ｈ）、５.８３ （ｄｄ、J = １１.２、５.０ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３９ （ｄ、J = ８.７ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３２ （ｍ、１Ｈ）、５.３０ （ｍ、１Ｈ）、４.９６ （ｄ、J = １３.０ Ｈｚ、１Ｈ）、４.８２ （ｄ、J = １３.９ Ｈｚ、１Ｈ）、４.７６ （ｄ、J = １３.９ Ｈｚ、１Ｈ）、４.７０ （ｄ、J = １３.０ Ｈｚ、１Ｈ）、４.５３ （ｔ、J = ８.７ Ｈｚ、１Ｈ）、３.９２ （ｍ、１Ｈ）、３.９０ （ｄｄ、J = ８.７、３.７ Ｈｚ、１Ｈ）、３.５４ （ｍ、１Ｈ）、３.１２ （ｓ、２Ｈ）、２.８８ （ｄｄ、J = １２.５、５.０ Ｈｚ、１Ｈ）、２.８３ （ｄｄ、J = １２.５、１１.２ Ｈｚ、１Ｈ）、２.６１ （ｍ、１Ｈ）、２.４５ （ｍ、１Ｈ）、２.３６ （ｍ、３Ｈ）、２.３０ （ｍ、１Ｈ）、２.２７ （ｍ、１Ｈ）、２.０８ （ｍ、１Ｈ）、２.０７ （ｓ、３Ｈ）、２.０２ （ｓ、３Ｈ）、１.８１ （ｓ、３Ｈ）、１.５３ （ｍ、１Ｈ）、１.３８ （ｍ、１Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ、ＰＯＳ）：
ｍ／ｚ：ｆｏｕｎｄ，６３３．２０７１（Ｍ＋Ｎａ）＋
Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ  Ｃ３０Ｈ３９Ｏ１１Ｃｌ（高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）法により測定），６１１．０８
呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００３４】
ｃ）ビセライドＣ
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ （ｐｐｍ）： ６.０４ （ｄｄ、J = １０.８、７.３ Ｈｚ、１Ｈ）、５.８５ （ｄｄ、J = １１.６、４.５ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３８ （ｄ、J = ８.６ Ｈｚ、１Ｈ）、５.３１ （ｍ、１Ｈ）、５.２９ （ｍ、１Ｈ）、４.５３ （ｔ、J = ８.６ Ｈｚ、１Ｈ）、４.３５ （ｄ、J = １４.５ Ｈｚ、１Ｈ）、４.３１ （ｄ、J = １４.５ Ｈｚ、１Ｈ）、３.９５ （ｍ、１Ｈ）、３.９１ （ｄｄ、J = ８.６、３.７ Ｈｚ、１ Ｈ）、３.５１ （ｍ、１Ｈ）、３.０４ （ｓ、２Ｈ）、２.８５ （ｄｄ、J = １２.０、４.５ Ｈｚ、１Ｈ）、２.７９ （ｄｄ、J = １２.０、１１.６ Ｈｚ、１Ｈ）、２.５９ （ｍ、１Ｈ）、２.４６ （ｍ、１Ｈ）、２.３１ （ｍ、１Ｈ）、２.２８ （ｍ、１Ｈ）、２.０８ （ｍ、１Ｈ）、２.０３ （ｓ、３Ｈ）、１.８３ （ｓ、３Ｈ）、１.５３ （ｍ、１Ｈ）、１.３９ （ｍ、１Ｈ）
１４Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ （ｐｐｍ）： １７５.４、１７１.３、１６９.７、１３７.９、１３５.０、１３３.５、１３０.９、１３０.７、１２６.５、８４.５、７８.１、７６.７、６８.０、６６.５、６２.５、４５.７、３８.８、３８.７、３５.５、２９.０、２７.４、２１.０、１７.３
ＭＳ（ＥＳＩ、ＰＯＳ）
ｍ／ｚ：ｆｏｕｎｄ，５０９．１５３１（Ｍ＋Ｎａ）＋
Ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ  Ｃ２３Ｈ３１Ｏ９Ｃｌ（高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）法により測定），４８６．９４
呈色反応：アニスアルデヒド−硫酸に陽性。
【００３５】
試験例
以下に本発明のビセライド類の生理活性について述べる。
【００３６】
細胞増殖抑制作用
試験例１
１０％牛胎児血清（Ｍｏｒｅｇａｔｅ社製）を添加したＲＰＭＩ１６４０培地（イワキ社製）を用いて、ヒト乳癌細胞ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（ＡＴＣＣ）、又はヒト肺癌細胞ＮＣＩ−Ｈ４６０（ＡＴＣＣ）を３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。これらの細胞をＭＤＡ−ＭＢ−２３１は１ウェルあたり４０００個、ＮＣＩ−Ｈ４６０は１ウェルあたり１５００個ずつをそれぞれ９６穴プレートへ播種し、１日間培養した後、ビセライドＡ、ビセライドＢ、及びビセライドＣを添加した。また対照としてシスプラチン（日本化薬株式会社）を添加した。更に３日間培養した後、細胞をメタノールで固定し、メチレンブルー色素を用いて染色した。染色後色素を０．３％塩酸水にて抽出し、６６０ｎｍの吸光度を測定し、後述の方法により増殖阻害活性の指標としてＩＣ５０値を求めた。増殖阻害活性は、化合物を添加しない細胞の吸光度に対する化合物添加群の吸光度の減少率で表され、用量−反応曲線からＩＣ５０値を求め、その値を表１に示した。
【００３７】
ＩＣ５０値は薬剤無処理の細胞から得られた吸光度：Ｃ、細胞無添加のウェルから得られた吸光度：Ｂ、薬剤処理の細胞から得られた吸光度：Ｔより以下の数式（Ｉ）を用いて薬剤処理による増殖阻害率を求めた。
【００３８】
薬剤処理による増殖阻害率＝１００−１００×（Ｔ−Ｂ）／（Ｃ−Ｂ）        （Ｉ）
【００３９】
次に、ｌｏｇ（薬剤濃度）をＸ軸、各薬剤濃度における増殖阻害率をＹ軸に、Ｙ軸値が５０を挟み、かつ相関係数が０．９以上となるような複数の点を選択してＹ＝ａＸ＋ｂの式に直線回帰した後、以下の数式（ＩＩ）に値を代入し、ＩＣ５０を求めた。
【００４０】
ＩＣ５０＝１０（５０−ｂ）／ａ                                        （ＩＩ）
【００４１】
結果
表１
ビセライドＡ、ビセライドＢ、ビセライドＣ及びシスプラチンの細胞増殖抑制作用
ＩＣ５０（μＭ）
細胞種
化合物              ＭＤＡ−ＭＢ−２３１      ＮＣＩ−Ｈ４６０
ビセライドＡ            ２．２９                    ２．１２
ビセライドＢ            ０．４４                    １．００
ビセライドＣ          ２０．２３                  １５．５０
シスプラチン            ５．１１                    ０．４４
【００４２】
以上の結果から明らかな様に、ビセライドＡ、ビセライドＢ及びビセライドＣは、哺乳動物の癌細胞に対する細胞増殖抑制作用を示した。
【００４３】
試験例２
１０％牛胎児血清（Ｍｏｒｅｇａｔｅ社製）を添加したＲＰＭＩ１６４０培地（イワキ社製）を用いて、ヒト乳癌細胞ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ヒト肺癌細胞ＨＯＰ１８（ＡＴＣＣ）、ヒト肺癌細胞ＮＣＩ−Ｈ４６０、又はヒト大腸癌細胞ＤＬＤ−１（国立衛生試験所）を３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１及びＮＣＩ−Ｈ４６０は実験１と同数、ＨＯＰ１８は１ウェルあたり５０００個、ＤＬＤ−１は１ウェルあたり２０００個をそれぞれ９６穴プレートへ播種し、１日間培養した後、ビセライドＡ、ビセライドＣ、またはアドリアマイシン（協和発酵株式会社）を添加した。更に３日間培養した後、細胞をメタノールで固定し、メチレンブルー色素を用いて染色した。染色後色素を０．３％塩酸にて抽出し、６６０ｎｍの吸光度を測定し、上記の方法によりＩＣ５０値を求め、その値を表２に示した。
【００４４】
１０％牛胎児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０培地を用いて、マウスリンパ性白血病細胞Ｐ３８８（癌研究所）又はそのアドリアマイシン耐性株Ｐ３８８／ＡＤＲ（癌研究所）を、３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。この細胞を９６穴プレートへ播種し、１日間培養した後、ビセライドＡ、ビセライドＢまたはアドリアマイシンを添加した。更に２日間培養した後、０．１６ｍｇ／ｍＬ  ＷＳＴ−１（同仁化学研究所社製）及び３．３μｇ／ｍＬ  １−ｍｅｔｈｏｘｙ−５−ｍｅｔｈｙｌ  ｐｈｅｎａｚｉｎｉｕｍ  ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ（同仁化学研究所社製）を培養液に加え、４時間培養した。４５０ｎｍの吸光度から６６０ｎｍの吸光度を減じた値を求め、上記の方法によりＩＣ５０値を求め、その値を表２に示した。
【００４５】
結果
表２
ビセライドＡ、ビセライドＣ及びアドリアマイシンの細胞増殖抑制作用
細胞名                                    ＩＣ５０（μＭ）
化合物
細胞種                    ビセライドＡ    ビセライドＣ    アドリアマイシン
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１        ３．７２        ２５．５        ０．１８６
ＨＯＰ１８                  ９．３５        ８２．７        ０．１５９
ＮＣＩ−Ｈ４６０            ３．５４        １８．０        ０．００８２３
ＤＬＤ−１                  ０．５１３      １７．１        ０．１９０
Ｐ３８８                    ３．７２        ２１．２        ０．０２５２
Ｐ３８８／ＡＤＲ            ７．７８        ３４．６        ５．７９
【００４６】
以上の結果から明らかな様に、ビセライドＡ及びビセライドＣは、哺乳動物の癌細胞に対する細胞増殖抑制作用を有し、多剤耐性癌細胞（Ｐ３８８／ＡＤＲ）に対しても感受性細胞（Ｐ３８８）とほぼ同程度の細胞増殖阻害作用を示した。