(57)【要約】【目的】シロキクラゲ科キノコ由来成分の１種または２種以上を含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤を提供する。【構成】本発明は、シロキクラゲ、ハナビラニカワタケ、コガネニカワタケ等のシロキクラゲ科キノコ由来成分を含有することにより、皮膚の老化に大きな影響を与えるコラゲナーゼ等のＭＭＰを阻害し、コラーゲンの変性と退縮を予防、線維の保護、皮膚老化を防止等の効果が期待でき、かつ安全性の高いＭＭＰ阻害剤。【特許請求の範囲】
【請求項１】
シロキクラゲ科キノコ由来成分を含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤。
【請求項２】
シロキクラゲ科キノコがシロキクラゲ、ハナビラニカワタケ、コガネニカワタケから選ばれる１種または２種以上である請求項１のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤。
【請求項３】
シロキクラゲ科キノコ由来成分が子実体からの抽出、または菌体の液体培養により得られた成分である請求項１または２のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シロキクラゲ、ハナビラニカワタケ、コガネニカワタケ等のシロキクラゲ科キノコ由来成分の１種または２種以上を含有することにより、皮膚の老化に大きな影響を与えるコラゲナーゼ、ゼラチナーゼ等のマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）を阻害し、コラーゲンの変性と退縮の予防、線維の保護、皮膚老化防止等の効果が期待でき、かつ安全性の高いＭＭＰ阻害剤を提供するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来より、皮膚の老化に伴う変化、しわ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等に、コラーゲン、エラスチン等の真皮マトリックスの線維減少、変性が起こっていることが知られている。近年研究が進み、この変化を誘導する因子として、特にＭＭＰの関与が指摘されている。また、ＭＭＰの中でも、コラゲナーゼとゼラチナーゼは皮膚の真皮マトリックスの主な構成成分であるコラーゲンを分解する酵素として知られ、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少変性の原因の一つとなり、皮膚のシワの形成等の大きな要因の一つであると考えられている。よって、これらの酵素を阻害することは、コラーゲンを保護し、線維を形成するマトリックスを保護することとなり、皮膚の老化を防ぐうえで重要である。
【０００３】
また、ＭＭＰは、ガン組織中で血管が新生される際、あるいはガンが転移する際に、発現量が上昇したり酵素の活性化が起こることが、下記非特許文献１に記載されている。よって、これらの酵素の発現量の低下や活性を阻害することにより、ガン細胞の浸潤を抑制し、転移を抑えることも可能になると期待できる。
【非特許文献１】「腫よう湿潤およびマトリックスメタロプロティナーゼ合成のレチノイド仲介阻害」（Ｓｃｈｏｅｎｅｒｍａｒｋ  Ｍ  Ｐ等、『Ａｎｎａｌｓ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ』、Ｖｏｌ．８７８、第４６  ６−４８６頁、１９９９年）
【０００４】
さらにＭＭＰは、潰瘍形成、慢性関節リュウマチ、骨粗鬆症、歯周炎等の種々の病態での細胞外基質の分解に中心的な役割を果たすことが、以下の非特許文献２に報告されており、ＭＭＰの発現量の低下や活性を阻害することにより、これらの症状の予防、改善の可能性も期待できる。
【非特許文献２】「組織破壊性プロテアーゼとしてのマトリックスメタロプロテアーゼ」（中田光俊、岡田保典  『呼吸』、Ｖｏｌ．１８、Ｎｏ．４、第３６５−３７１頁、１９９９年）
【０００５】
現在まで、種々のコラゲナーゼ阻害剤やＭＭＰ阻害剤が開発され、以下の特許文献１〜１５等に報告されてきた。しかしながら、これまでのＭＭＰ阻害剤は、効果が必ずしも十分でなく製品への配合では、有効な結果を得るに至っていない。
【特許文献１】特開平９−４０５５２
【特許文献２】特開平１０−１９４９８２
【特許文献３】特開平１１−７１２９４
【特許文献４】特開１１−７９９７０
【特許文献５】特開平１１−１４７８３３
【特許文献６】特開平１１−３１５００８
【特許文献７】特開平１１−７９９７１
【特許文献８】特開平２０００−１５４１３１
【特許文献９】特開平２０００−１５９６３１
【特許文献１０】特開平２０００−１９１５１２
【特許文献１１】特開平２０００−２１２０５８
【特許文献１２】特開平２０００−２５６１７６
【特許文献１３】特開平２０００−１９１４８７
【特許文献１４】特開平２０００−２５６１２２
【特許文献１５】特開平２０００−３１９１５５
【０００６】
一方、シロキクラゲについては、化粧料（特許文献１６）、抗炎症剤（特許文献１７）、粉砕物のスクラブ剤使用（特許文献１８）が知られているが、ＭＭＰの阻害効果については知られていなかった。
【特許文献１６】特開昭６１−２６０００６
【特許文献１７】特開昭６３−１８３５３７
【特許文献１８】特開平３−９９００５
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、シロキクラゲ、ハナビラニカワタケ、コガネニカワタケ等のシロキクラゲ科キノコ由来成分を含有することにより、皮膚の老化に大きな影響を与えるコラーゲナーゼ等のＭＭＰを阻害し、コラーゲンの変性と退縮を予防、線維の保護、皮膚老化を防止等の効果が期待でき、かつ安全性の高いＭＭＰ阻害剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
この様な事情により、本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、シロキクラゲ、ハナビラニカワタケ、コガネニカワタケ等のシロキクラゲ科キノコ由来成分が安全で、優れたＭＭＰ阻害効果を示すことを発見し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明はシロキクラゲ科キノコ由来成分を含有することを特徴とするＭＭＰ阻害剤である。
【００１０】
本発明に用いられる発明で使用するシロキクラゲ科キノコとは、シロキクラゲ（Ｔｒｅｍｅｌｌａ  ｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ  ＢＥＲＫ．）、ハナビラニカワタケ（Ｔｒｅｍｅｌｌａ  ｆｏｌｉａｃｅａ  Ｆｒ．）、及びコガネニカワタケ（Ｔｒｅｍｅｌｌａ    ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃａ  Ｒｅｔｚ．Ｆｒ．）などを用いることができる。本分類は、今関六也・本郷次雄著「原色日本新菌類図鑑２」２３０から２３２頁、１９８９年、保育社発行によるものである
【００１１】
本発明に用いられるシロキクラゲ科キノコは、子実体、菌体、及び培養物などを問わず使用することができる。また、必要に応じてそのままの状態、破砕物、或いは乾燥物などを適宜選択して成分抽出操作に付することができる。
【００１２】
本発明で用いるシロキクラゲ科キノコ由来成分は、シロキクラゲ類の子実体または菌体を、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノールなど）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリンなど）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトンなど）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチルなど）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、石油エーテルなど）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテルなど）などの溶媒を一種または二種以上を混合して得られる液で抽出することにより得られる。好ましくは、低級アルコール、ケトン類、アセトニトリル、エステル類などや、これらの含水溶媒が良い。
【００１３】
本発明で用いるシロキクラゲ科キノコ由来成分は抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、透析、濃縮、希釈、濾過等の処理をして用いても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。
【００１４】
本発明のシロキクラゲ科キノコ由来成分をさらに精製する方法として、互いに混合しない溶媒で液・液分配抽出により溶媒分画精製することもできる。
【００１５】
また、本発明のシロキクラゲ科キノコ由来成分をさらに精製する方法として、シロキクラゲ科キノコの溶媒抽出物または上記の溶媒分画物を吸着剤に吸着させ、溶媒により溶出させることにより、薬効成分を精製することもできる。
【００１６】
上記シロキクラゲ科キノコ由来成分は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈、ろ過、活性炭などによる脱色、脱臭、エタノール沈殿などの処理をして用いても良い。更には、抽出や精製した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥などの処理を行い、乾燥物として用いても良い。
【００１７】
本発明のＭＭＰ阻害剤には、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常の医薬品、医薬部外品、化粧品、食品に用いられる成分である賦形剤、安定剤、保存剤、結合剤、崩壊剤、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、油脂類、ロウ類等の成分を配合することもできる。また、その剤型としては、例えば、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、座剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤等を含む）、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、錠菓、飲料等が挙げられる。
【００１８】
本発明に用いるシロキクラゲ科キノコ由来成分の配合量は、本発明のＭＭＰ阻害剤全量に対し、固形物に換算して０．００１重量％以上、好ましくは０．００５〜２０重量％が良い。０．００１重量％未満では十分な効果は発揮されにくい。２０重量％を越えて配合した場合、効果の増強はみられにくく不経済である。また、添加の方法については、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【発明の効果】
【００１９】
本発明のシロキクラゲ科キノコ由来成分の１種または２種以上を含有することを特徴とするＭＭＰ阻害剤は、安全でかつ優れたＭＭＰ阻害効果を示し、また、優れた老化防止効果等も示した。また、さらに、本発明のＭＭＰ阻害剤は、ガン、潰瘍形成、慢性関節リュウマチ、骨粗鬆症、歯周炎等、ＭＭＰの亢進が原因で起こる各種疾患の予防、抑制、症状の改善に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いるシロキクラゲ科キノコ由来成分の製造例、処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量の部とは重量部をし、％は重量％を示す。
【実施例１】
【００２１】
製造例１  シロキクラゲの熱水抽出物
シロキクラゲ子実体乾燥物５０ｇに１ｋｇの精製水を加えて加熱抽出した後、抽出液を濃縮乾燥して、固形物５ｇを得た。
【００２２】
製造例２  シロキクラゲのエタノール抽出物
シロキクラゲ子実体乾燥物５０ｇに１ｋｇの精製水と１ｋｇのエタノールを加えて常温抽出した後、抽出液を濃縮乾燥して、固形物３ｇを得た。
【００２３】
製造例３  シロキクラゲの１，３−ブチレングリコール抽出物
シロキクラゲ子実体乾燥物５０ｇに１ｋｇの精製水と１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加えて常温抽出した後、ろ過し、抽出液１．９ｇを得た。
【００２４】
製造例４  ハナビラニカワタケの熱水抽出物
ハンビラニカワタケの子実体乾燥物５０ｇに１ｋｇの精製水を加えて加熱抽出した後、抽出液を濃縮乾燥して、固形物４ｇを得た。
【実施例２】
【００２５】
処方例１  クリーム
処方                                                        配合量
１．  シロキクラゲの熱水抽出物（製造例１）                ０．０５部
２．  スクワラン                                          ５．５
３．  オリーブ油                                          ３．０
４．  ステアリン酸                                        ２．０
５．  ミツロウ                                            ２．０
６．  ミリスチン酸オクチルドデシル                        ３．５
７．  ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）    ３．０
８．  ベヘニルアルコール                                  １．５
９．  モノステアリン酸グリセリン                          ２．５
１０．  香料                                                ０．１
１１．  １，３−ブチレングリコール                          ８．５
１２．  パラオキシ安息香酸エチル                            ０．０５
１３．  パラオキシ安息香酸メチル                            ０．２
１４．  精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２６】
比較例１  従来のクリーム
処方例１において、シロキクラゲの熱水抽出物（製造例１）を精製水に置き換えたものを従来のクリームとした。
【００２７】
処方例２  化粧水
処方                                                        配合量
１．  シロキクラゲのエタノール抽出物（製造例２）          ０．０１部
２．  １，３−ブチレングリコール                          ８．０
３．  グリセリン                                          ２．０
４．  キサンタンガム                                      ０．０２
５．  クエン酸                                            ０．０１
６．  クエン酸ナトリウム                                  ０．１
７．  エタノール                                          ５．０
８．  パラオキシ安息香酸メチル                            ０．１
９．  ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）      ０．１
１０．  香料                                                適量
１１．  精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００２８】
処方例３  乳液
処方                                                        配合量
１．  ハナビラニカワタケの熱水抽出物（製造例４）          ０．０５部
２．  スクワラン                                          ５．０
３．  オリーブ油                                          ５．０
４．  ホホバ油                                            ５．０
５．  セタノール                                          １．５
６．  モノステアリン酸グリセリン                          ２．０
７．  ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）    ３．０
８．  ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート          ２．０
９．  香料                                                ０．１
１０．  プロピレングリコール                                １．０
１１．  グリセリン                                          ２．０
１２．  パラオキシ安息香酸メチル                            ０．２
１３．  精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２９】
処方例４  軟膏
処方                                                        配合量
１．  シロキクラゲの熱水抽出物（製造例１）                ０．１部
２．  ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）    ２．０
３．  モノステアリン酸グリセリン                        １０．０
４．  流動パラフィン                                      ５．０
５．  セタノール                                          ６．０
６．  パラオキシ安息香酸メチル                            ０．１
７．  プロピレングリコール                              １０．０
８．  精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び６〜８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３０】
処方例５  飲料
処方                                                        配合量
１．  シロキクラゲの熱水抽出物（製造例１）                １．０部
２．  ステビア                                            ０．０５
３．  リンゴ酸                                            ５．０  
４．  香料                                                ０．１  
５．  水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２及び３を少量の水に溶解する。次いで、成分１及び４、５を加えて混合する。
【００３１】
処方例６  錠剤
処方                                                        配合量
１．    シロキクラゲの熱水抽出物（製造例１）              １．０部
２．    乾燥コーンスターチ                              ２９．０
３．    カルボキシメチルセルロースカルシウム            ２０．０
４．    微結晶セルロース                                ４０．０
５．    ポリビニルピロリドン                              ７．０
６．    タルク                                            ３．０
［製法］成分１〜５を混合し、次いで１０％の水を結合剤として加えて、押出し造粒後乾
燥する。成形した顆粒に成分６を加えて混合し打錠する。１錠０．５２ｇとする。
【実施例３】
【００３２】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【００３３】
実験例１  ＭＭＰ阻害試験
ゼラチンザイモグラフィーを用いて、シロキクラゲ科キノコ由来成分（製造例１〜４）のゼラチナーゼ活性に対する阻害試験を行った。すなわち、０．６ｍｇ／ｍＬのゼラチンを含む１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル（１ｍｍ厚）を作製し、ＮＢ１ＲＧＢ（ヒト繊維芽細胞）の培養上清０．０１５ｍＬを非還元条件下で電気泳動した。その後ゲルを２．５％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００（ＳＩＧＭＡ社製）の溶液にて室温で３０分間２回洗浄してＳＤＳを除去し、２００ｍＭ塩化ナトリウム、５ｍＭ塩化カルシウム、０．０１％ｂｒｉｊ−３５（ＳＩＧＭＡ社製）を含む３０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．６）中にて３７℃で２４時間インキュベートした。この際、ゲルを浸した緩衝液中にシロキクラゲ科キノコ由来成分（製造例１〜４）を添加した。反応終了後ゲルを０．２％クマシーブリリアントブルーＲ（ＳＩＧＭＡ社製）の溶液にて染色し、５％メタノール−７．５％酢酸溶液にて脱色した。青色のゲル上で染色されないバンドとして検出される７２ｋＤａ付近のバンドにおけるゼラチナーゼ活性をデンシトメーター（アトー社製、アトーデンシトグラフ、ＡＥ−６９０５）にて定量化し、阻害率を算出した。阻害率（単位は％）の計算は、この例では、用いたデシントメータの数値を利用して、次式（１）により計算した。その結果、表１に示すように、シロキクラゲ科キノコ由来成分は他の熱水、エタノール抽出物と比べて高いゼラチナーゼ阻害活性が認められた。
【００３４】
阻害率＝｛１−（Ａ／Ｂ）｝×１００      （１）
Ａ：シロキクラゲ科キノコ由来成分を添加した場合のデシントメータの数値
Ｂ：シロキクラゲ科キノコ由来成分を添加しない場合のデシントメータの数値
【００３５】
【表１】
2006182695.tif 000002
【００３６】
以上より、シロキクラゲ科キノコ由来成分は、ＭＭＰ阻害作用に優れていた。
【００３７】
実験例２  使用試験
処方例１のクリーム及び比較例１の従来のクリームを用いて、各々女性３０人（３０〜４５才）を対象に２ヶ月間の使用試験を行った。使用後、しわ、たるみ、肌の弾力についてのアンケート調査を行って、老化防止効果を判定した。アンケートの評価基準は、有効なものを「優」、やや有効なものを「良」、わずかに有効なものを「可」、無効なものを「不可」として評価した。
【００３８】
これらの結果を表２に示した。処方例１のシロキクラゲ由来成分を含有することを特徴とするＭＭＰ阻害剤は優れた老化防止効果を示した。なお、試験期間中皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。
【００３９】
【表２】
2006182695.tif 000003
【００４０】
処方例２の化粧水、処方例３の乳液及び処方例４の軟膏の使用試験、また処方例５の飲料、処方例６の錠剤の飲用試験を行ったところ、いずれも安全で優れた老化防止効果を示した。
【産業上の利用可能性】
【００４１】
シロキクラゲ科キノコ由来成分の１種又は２種以上を含有することを特徴とするＭＭＰ阻害剤は、化粧品、医薬部外品、医薬品又は食品に配合することにより安全で優れた老化防止効果を付与することができる。