(57)【要約】【課題】グルタチオンペルオキシダーゼ活性を増加させる組成物を提供すること。【解決手段】パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有するグルタチオンペルオキシダーゼ活性を増加させるための組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有する、グルタチオンペルオキシダーゼ活性を増加させるための組成物。
【請求項２】
パンテチン又は葉酸を含有する、グルタチオンペルオキシダーゼ活性を増加させるための組成物。
【請求項３】
パンテチン及び葉酸を含有する、グルタチオンペルオキシダーゼ活性を増加させるための組成物。
【請求項４】
パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有する、グルタチオンペルオキシダーゼ活性の低下を引き起こす疾患又は状態を治療又は予防するための組成物。
【請求項５】
グルタチオンペルオキシダーゼ活性の低下を引き起こす疾患又は状態がセレン欠乏症、抗酸化剤の欠乏状態、癌、人工透析を必要とする状態、肝障害又は免疫低下である請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有する、グルタチオンペルオキシダーゼ活性の低下に起因する疾患を治療又は予防するための組成物。
【請求項７】
グルタチオンペルオキシダーゼ活性の低下に起因する疾患が動脈硬化症、冠動脈疾患、脳血管障害、癌、高過酸化脂質血症である請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
パンテチンと葉酸とが配合剤である請求項３に記載の組成物。
【請求項９】
パンテチンと葉酸とがキットである請求項３に記載の組成物。
【請求項１０】
パンテチン及び葉酸を同時に、順次又は別個に投与する方法。
【請求項１１】
パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有する組成物の有効量を哺乳動物に投与する、グルタチオンペルオキシダーゼ活性の低下を引き起こす疾患又は状態の治療方法又は予防方法。
【請求項１２】
パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有する組成物の有効量を哺乳動物に投与する、グルタチオンペルオキシダーゼ活性の低下に起因する疾患の治療方法又は予防方法。
【請求項１３】
パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有する組成物の有効量を哺乳動物に投与する、グルタチオンペルオキシダーゼ活性を増加させる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有するグルタチオンペルオキシダーゼ活性を増加させるための組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトは、呼吸により酸素からエネルギーを得ているが、取り入れた酸素の数％が体内で活性酸素やフリーラジカルに変換される。近年、これら活性酸素種の発生を介した酸化ストレスが生体に障害的に働き、発癌、炎症、動脈硬化、糖尿病、肥満など多くの疾患と関連していることが明らかとなった。種々の酸化ストレスにより組織や細胞内において発生した活性酸素種に対し、生体自身がもっている内因性の抗酸化防御システムと体外から取り入れた外因性の抗酸化物質が作用して、これら活性酸素種を消去し身を守っている。これら活性酸素種としてはスーパーオキシド、ヒドロキシラジカル、過酸化水素、一重項酸素などが挙げられる。スーパーオキシドはスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）によって過酸化水素に分解され、さらに、過酸化水素はグルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰｘ）やカタラーゼによって水にまで分解される（以上、例えば、非特許文献１参照）。
【０００３】
この一連の解毒過程が老化やその他の原因により充分に行われなくなると、スーパーオキシドラジカルや過酸化水素の一部が細胞内の銅や鉄と結合して、活性酸素の中で最も強力な酸化力をもつ生体にとって極めて有害なヒドロキシラジカルが発生する。この解毒はＧＰｘや抗酸化剤が担っている。また、ヒドロキシラジカルは生体内の脂質を酸化して過酸化脂質を産生し、生体膜の変性、老化、発癌や動脈硬化の原因としても知られている。過酸化脂質の解毒もＧＰｘや抗酸化剤が担っている（以上、例えば、非特許文献１参照）。
【０００４】
また、過酸化水素が弱い発癌物質乃至プロモーターであることも知られている（非特許文献２）。
【０００５】
一方、日焼け等の紫外線（ＵＶ）暴露によってもスーパーオキシドや一重項酸素、ＵＶ−Ｂ暴露でヒドロキシラジカル、ＵＶ−Ａ暴露で過酸化水素が発生し、皺、色素沈着、ＤＮＡ損傷、皮膚癌誘発等の皮膚障害を起こす（非特許文献３）。また、ＵＶ−Ａ照射によってカタラーゼが失活することが判明しており（非特許文献４）、紫外線暴露による皮膚障害の抑制においてもＧＰｘの重要な役割が示唆される。
【０００６】
これ以外にも、ＧＰｘと疾患に関して以下の報告がある。
１）冠動脈疾患の疑いがある患者６３６例でＧＰｘとＳＯＤ活性に関連した心血管イベントのリスクを調べた結果、これとＧＰｘ活性とは負の相関を示すが、ＳＯＤ活性とは関連しないことが報告されている（非特許文献５）。
２）ＧＰｘは宿主を活性酸素から直接守るだけでなく、無毒型ウイルス感染でも活性酸素によってウイルスが有毒化するのを防止して宿主を疾病から守る（非特許文献６）。
３）ＧＰｘは、ＳＯＤやカタラーゼよりも酸化障害に対する保護作用が強い。ＧＰｘ遺伝子過剰発現マウスに心筋梗塞を作製すると、リモデリング、心不全が抑制され生存率が改善した（非特許文献７）。
４）セレン欠乏、悪性腫瘍、人工透析、肝障害、免疫の低下時などの状況下でＧＰｘ活性が低下していると言われている（非特許文献８）。
５）癌、虚血性心臓病及び脳血管障害患者は、そうでない人と比べてＧＰｘ活性が低いと言われている（非特許文献９）。
【０００７】
一方、パンテチンの薬効については以下の報告がある。
１）血清コレステロール及び中性脂肪低下作用、ならびに実験的粥状硬化の進展抑制作用が知られている（非特許文献１０）。
２）抗酸化剤としての過酸化脂質低下作用が知られている（非特許文献１１）。
【０００８】
また、葉酸については、血中ホモシステインの低下作用、並びに、この作用とは独立した抗酸化作用（ＬＤＬの酸化抑制作用）が報告されている（非特許文献１２）。
【０００９】
以上、パンテチンには血中脂質低下作用に基づく抗動脈硬化作用が、又、葉酸には血中ホモシステイン低下作用及び過酸化脂質低下作用に基づく抗動脈硬化作用が知られている。さらに、パンテチン及び葉酸いずれも抗酸化ビタミン類としても認識されているようである。
【００１０】
しかしながら、現在のところ、パンテチン又は葉酸がＧＰｘ活性を向上させたという報告は見当たらない。さらに、パンテチン又は葉酸がＧＰｘ様作用である過酸化水素、ヒドロキシラジカル及び過酸化脂質の消去又は抑制に有効であったという報告もなく、示唆もされていない。
【非特許文献１】肝胆膵、Ｖｏｌ．４７、Ｎｏ．４、２００３、ｐ．４６３−４７０
【非特許文献２】日本医事新報、Ｎｏ．３７８９、１９９６、ｐ．１１４
【非特許文献３】ファインケミカル、Ｖｏｌ．３１、Ｎｏ．２０、２００２、ｐ．４５−５３
【非特許文献４】日本化粧品技術者会誌、Ｖｏｌ．３１、Ｎｏ．４、１９９７、ｐ．３９６−４０２
【非特許文献５】Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｖｏｌ．３４９、２００３、ｐ．１６０５−１６１３
【非特許文献６】栄養−評価と治療、Ｖｏｌ．１９、Ｎｏ．１３、２００２、ｐ．３５−４０
【非特許文献７】血圧、Ｖｏｌ．１１、Ｎｏ．９、２００４、ｐ．９５９−９６２
【非特許文献８】日本臨床、Ｖｏｌ．６２、増刊号１１、２００４、ｐ．５５７−５５９
【非特許文献９】“ビタミン・ハーブ・サプリメント百科事典”、［online］、つじた脳外科内科、［平成１８年２月１０日検索］、インターネット、〈URL: http://www.medicosmart.com/supplement_enc/enc_selenium.html〉
【非特許文献１０】医療薬、日本医薬品集、２００４、じほう
【非特許文献１１】弘前医学、Ｖｏｌ．３３、Ｎｏ．３、１９８１、ｐ．３６９−３８５
【非特許文献１２】Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、Ｖｏｌ．８６、２００１、ｐ．６３７−６３９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
生体の抗酸化システムにおいて、グルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰｘ）は、
１）過酸化水素、ヒドロキシラジカル及び過酸化脂質などの活性酸素種の解毒、
２）動脈硬化、心血管疾患イベントの低減、心筋梗塞によるリモデリングの抑制、
３）紫外線暴露による皮膚障害の抑制、
４）セレン欠乏症、悪性腫瘍、肝障害、ウイルス感染における傷害の抑制等
の多岐にわたり重要な役割を担う抗酸化酵素であることが報告されている。更に、ＧＰｘ活性を維持・向上させることは、人工透析を必要とする患者や免疫低下を起こしている患者におけるＧＰｘ活性低下に伴う二次障害の防止にもつながることも報告されており、ＧＰｘは生体防御に極めて重要な役割を担っていることを認識するに至った。
【００１２】
本発明者は、日常的に摂取しても安全性が極めて高いとされるビタミン類又はその類似物質の中から、ＧＰｘ活性の維持・向上を実現する組成物を見出すべく長年にわたり鋭意研究を重ねてきた。その結果、パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有する組成物に優れたＧＰｘ活性を増加させる作用があることを見出し、本発明を完成した。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、（１）パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有する、グルタチオンペルオキシダーゼ活性を増加させるための組成物であり、好適には、
（２）パンテチン又は葉酸を含有する、グルタチオンペルオキシダーゼ活性を増加させるための組成物、
（３）パンテチン及び葉酸を含有する、グルタチオンペルオキシダーゼ活性を増加させるための組成物、
（４）パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有する、グルタチオンペルオキシダーゼ活性の低下を引き起こす疾患又は状態を治療又は予防するための組成物、
（５）グルタチオンペルオキシダーゼ活性の低下を引き起こす疾患又は状態がセレン欠乏症、抗酸化剤の欠乏状態、癌、人工透析を必要とする状態、肝障害又は免疫低下である（４）に記載の組成物、
（６）パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有する、グルタチオンペルオキシダーゼ活性の低下に起因する疾患を治療又は予防するための組成物、
（７）グルタチオンペルオキシダーゼ活性の低下に起因する疾患が動脈硬化症、冠動脈疾患、脳血管障害、癌、高過酸化脂質血症である（６）に記載の組成物、
（８）パンテチンと葉酸とが配合剤である（３）に記載の組成物及び
（９）パンテチンと葉酸とがキットである（３）に記載の組成物である。
また、本発明は、
（１０）パンテチン及び葉酸を同時に、順次又は別個に投与する方法、
（１１）パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有する組成物の有効量を哺乳動物に投与する、グルタチオンペルオキシダーゼ活性の低下を引き起こす疾患又は状態の治療方法又は予防方法、
（１２）パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有する組成物の有効量を哺乳動物に投与する、グルタチオンペルオキシダーゼ活性の低下に起因する疾患の治療方法又は予防方法、
（１３）パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有する組成物の有効量を哺乳動物に投与する、グルタチオンペルオキシダーゼ活性を増加させる方法、
（１４）パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有する組成物の有効量を哺乳動物に投与する、動脈硬化に起因する末梢血行障害による、肩こり、首すじのこり、手足のしびれ、手足の冷えの治療方法又は予防方法、
（１５）パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有する組成物の有効量を哺乳動物に投与する、日焼け又は紫外線に起因する、色素沈着、しみ、そばかすの治療方法又は予防方法及び
（１６）パンテチン及び葉酸から選ばれる１種又は２種を含有する組成物の有効量を哺乳動物に投与する、冠動脈疾患発症リスクの軽減方法を提供する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の組成物は、生体の健康に極めて重要なグルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰｘ）活性を増加させることから有用であり、本発明の組成物の成分は、日常的に摂取しても安全性が極めて高いことが知られていることからも有用である。
【００１５】
本発明の組成物は、優れたＧＰｘ活性の増加作用を有するため、ＧＰｘ活性の低下を引き起こす疾患又は状態の治療又は予防に有用であり、また、ＧＰｘ活性の低下に起因する疾患に有用である。
【００１６】
さらに、本発明は、動脈硬化に起因する末梢血行障害による、肩こり、首すじのこり、手足のしびれ、手足の冷えの治療又は予防、日焼け又は紫外線に起因する、色素沈着、しみ、そばかすの治療又は予防、並びに、冠動脈疾患発症リスクの軽減方法としても有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
（定義）
本発明において「パンテチン」とは、その化学名がビス（２−｛３−［（２Ｒ）−２，４−ジヒドロキシ−３，３−ジメチルブタノイルアミノ］プロパノイルアミノ｝エチル）ジスルフィドであるパントテン酸（ビタミンＢ５）の誘導体である。また、「葉酸」とは、ビタミンＭ、ビタミンＢ９、プテロイルグルタミン酸とも呼ばれ、ビタミンの中で水溶性ビタミンに分類される生理活性物質である。
【００１８】
本発明において「グルタチオンペルオキシダーゼ活性の低下を引き起こす疾患又は状態」とは、グルタチオンペルオキシダーゼ活性の低下を引き起こす疾患又は状態であれば、特に限定されないが、例えば、セレン欠乏症、抗酸化剤の欠乏状態、癌（悪性腫瘍）、人工透析を必要とする状態、肝障害及び免疫低下等を挙げることができる。
【００１９】
本発明において「グルタチオンペルオキシダーゼ活性の低下に起因する疾患」とは、グルタチオンペルオキシダーゼ活性の低下によって引き起こされる疾患であれば特に限定されないが、例えば、動脈硬化、冠動脈疾患、脳血管障害、癌（悪性腫瘍）及び高過酸化脂質血症等を挙げることができる。ここで、癌（悪性腫瘍）は上記両方の疾患に包含される。また、「高過酸化脂質血症」とは血中過酸化脂質が高値を示す疾患である。高過酸化脂質血症は、糖尿病、肝疾患、アルコール性脂肪肝、熱傷、ビタミンＢ２欠乏の妊婦又は高トリグリセライド血症等においてみられる疾患である（日本臨床、Ｖｏｌ．５７  １９９９年増刊号  ｐ．５５−５８）。
【００２０】
本発明において「治療する」とは、病気又は症状を治癒させること又は改善させること或いは症状を抑制させることを意味する。
【００２１】
本発明の成分は、同時に、順次又は別個に投与することができるが、一般に、臨床上は同時に投与するのが便利であり、それゆえ、配合剤として投与することが好ましい。また、製剤技術上、当該両化合物を物理的に混合することが好ましくない場合は、それぞれの成分を同時に、順次又は別個に投与することもできる。  
【００２２】
本発明において「同時に」投与するとは、全く同時に投与することの他、薬理学上許される程度に相前後した時間に投与することも含むものである。その投与形態は、ほぼ同じ時間に投与できる投与形態であれば特に限定はないが、配合剤であることが好ましい。  
【００２３】
本発明において「順次又は別個に」投与するとは、異なった時間に別々に投与できる投与形態であれば特に限定はないが、例えば、１の成分を投与し、次いで、決められた時間後に、他の成分を投与する方法がある。
【００２４】
本発明において「配合剤」とは、複数の成分が混合された単一の組成物をいう。
【００２５】
本発明において「キット」とは、複数の別個の組成物を一式にして用いるものをいう。
（各成分の入手方法、含有量、投与量等）
葉酸及びパンテチンは第１４改正日本薬局方に収載されている。
【００２６】
本発明の組成物が固形製剤の場合において、１日量中に含有する各成分の量は以下の通りである。
【００２７】
葉酸の含有量は、０．００５乃至１００ｍｇ／ｇであり、好適には、０．０５乃至５０ｍｇ／ｇである。また、パンテチンの含有量は、０．２乃至１２００ｍｇ／ｇであり、好適には、２乃至８００ｍｇ／ｇである。
【００２８】
また、本発明の組成物が液剤の場合において含有する各成分の量は以下の通りである。
【００２９】
葉酸の含有量は、０．０００５乃至５ｍｇ／ｍＬであり、好適には、０．００５乃至２ｍｇ／ｍＬである。また、パンテチンの含有量は、０．０１乃至６０ｍｇ／ｍＬであり、好適には、０．２乃至４０ｍｇ／ｍＬである。
【００３０】
本発明の組成物において、各成分の投与量は、その成分の種類、剤形により異なるが、通常以下の通りである。
【００３１】
葉酸の投与量は、０．０００２乃至２ｍｇ／Ｋｇ／ｄａｙであり、好適には、０．００２乃至１ｍｇ／Ｋｇ／ｄａｙである。また、パンテチンの投与量は、０．０１乃至２５ｍｇ／Ｋｇ／ｄａｙであり、好適には、０．１乃至１５ｍｇ／Ｋｇ／ｄａｙである。
【００３２】
本発明の組成物は、所望により、製剤化のための添加物を含有していてもよく、更に、併用作用に悪影響を与えない範囲で他の成分を含有していてもよい。
【００３３】
本発明の組成物に、例えば、ビタミンＢ２、ビタミンＣ、ビタミンＥ等の各種ビタミンを含有させることができる。
【００３４】
本発明の組成物の具体的な剤形としては、例えば、錠剤、顆粒（細粒剤及び散剤を含む）、カプセル、液剤（シロップ剤を含む）等をあげることができ、各剤形に適した添加剤や基材を適宜使用し、日本薬局方等に記載された通常の方法に従い、製造することができる。
【００３５】
上記各剤形において、その剤形に応じ、通常使用される各種添加剤を使用することもできる。
【００３６】
例えば、錠剤の場合、乳糖、結晶セルロース等を賦形剤として、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム又は酸化マグネシウム等を安定化剤として、ヒドロキシプロピルセルロース等をコーテイング剤として、ステアリン酸マグネシウム等を滑沢剤として、使用することができ、細粒剤及びカプセル剤の場合、乳糖又は精製白糖等を賦形剤として、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム又は酸化マグネシウム等を安定化剤として、トウモロコシデンプン等を吸着剤として、ヒドロキシプロピルセルロース等を結合剤として、使用することができる。
【００３７】
上記各剤形において、必要に応じ、クロスポビドン等の崩壊剤；ポリソルベート等の界面活性剤；ケイ酸カルシウム等の吸着剤；三二酸化鉄、カラメル等の着色剤；安息香酸ナトリウム等の安定剤；ｐＨ調節剤；香料；等を添加することもできる。
【実施例】
【００３８】
以下に、実施例等を示し、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。
（実施例１）錠剤
（１）成分
（表１−１）
３錠中（ｍｇ）                    （１−ａ）      （１−ｂ）      （１−ｃ）
――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
葉酸                                  ２０              −            １０
パンテチン                              −          ３００          ２００
酸化マグネシウム                      ３０            ５０            ５０
結晶セルロース                      １００          １００          １００
コーンスターチ                      １２０          １００          １１０
ヒドロキシプロピルセルロース        １３０            ５０            ７０
クロスカルメロースナトリウム          １５            １５            １５
ステアリン酸マグネシウム              ２０            ２０            ２０
乳糖                                  適量            適量            適量。
【００３９】
（表１−２）
６錠中（ｍｇ）                    （１−ｄ）      （１−ｅ）      （１−ｆ）
――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
葉酸                                  ２０              −            １０
パンテチン                              −          ２００          １５０
コハク酸ｄ−α−トコフェロール      ２００          ２００          １５０
アスコルビン酸                      ８００          ８００          ５００
酪酸リボフラビン                      １２            １２              −
酸化マグネシウム                      ３０            ５０            ５０
結晶セルロース                      １００          １００          １００
コーンスターチ                      １２０          １００          １１０
ヒドロキシプロピルセルロース        ２５０          ２５０          ２８０
クロスカルメロースナトリウム          １５            １５            １５
ステアリン酸マグネシウム              ２０            ２０            ２０
乳糖                                  適量            適量            適量。
【００４０】
（２）製法
上記成分及び分量をとり、日局製剤総則「錠剤」の項に準じて錠剤を製造する。
（実施例２）細粒剤
（１）成分
（表２−１）
３包中（ｍｇ）                    （２−ａ）      （２−ｂ）      （２−ｃ）
――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
葉酸                                  ２０              −            １０
パンテチン                              −          ３００          ２００
メタケイ酸アルミン酸マグネシウム      ２０            ４０            ３０
精製白糖                            ３５０          ３５０          ３５０
ステビア抽出生成物                    １０            １０            １０
トウモロコシデンプン                ２５０          ２００          ２１０
ポリソルベート８０                    ４０            ４０            ４０
ヒドロキシプロピルセルロース          ５０            ５０            ５０
乳糖                                  適量            適量            適量。
【００４１】
（表２−２）
３包中（ｍｇ）                    （２−ｄ）      （２−ｅ）      （２−ｆ）
――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
葉酸                                  ２０              −            １０
パンテチン                              −          ３００          ２００
酢酸ｄ−α−トコフェロール          ２００          ２００          １５０
アスコルビン酸                      ８００          ８００          ５００
酪酸リボフラビン                      １２            １２              −
メタケイ酸アルミン酸マグネシウム      ３０            ３０          ２５０
精製白糖                            ８００          ８００          ７５０
ステビア抽出生成物                    １０            １０            １０
トウモロコシデンプン                ２５０          ２００          ２１０
ポリソルベート８０                    ４０            ４０            ４０
ヒドロキシプロピルセルロース          ５０            ５０            ５０
乳糖                                  適量            適量            適量。
【００４２】
（２）製法
上記成分及び分量をとり、日局製剤総則「顆粒剤」の項に準じて細粒剤を製造する。
（実施例３）カプセル剤
（１）成分
（表３）
３Ｃａｐ中（ｍｇ）            （３−ａ）        （３−ｂ）        （３−ｃ）
――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
葉酸                              ２０                −              １０
パンテチン                          −            ３００            ２００
酸化マグネシウム                １００            １００            １００
トウモロコシデンプン            ２５０            １００            １５０
ポリソルベート８０                ２５              ２５              ２５
ステアリン酸マグネシウム          １０              ２０              １０
乳糖                              適量              適量              適量。
Ｃａｐは、「カプセル」の略号である。
【００４３】
（２）製法
上記成分及び分量をとり、日局製剤総則「顆粒剤」の項に準じて細粒剤を製造した後、カプセルに充填して硬カプセル剤を製造する。
（実施例４）シロップ剤
（１）成分
（表４）
６ｍＬ中（ｍｇ）                （４−ａ）        （４−ｂ）        （４−ｃ）
―――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
葉酸                                ２０                −              １０
パンテチン                            −            ３００            ２００
安息香酸ナトリウム                ２１０            ２１０            ２１０
白糖                            １１００          １１００          １１００
濃グリセリン                      ５００            ５００            ５００
ポリビニルアルコール              １２０            １２０            １２０
エタノール（９５％）              １００            １００            １００
塩酸                                適量              適量              適量
精製水                              残部              残部              残部。
【００４４】
（２）製法
上記成分及び分量をとり、日局製剤総則「シロップ剤」の項に準じてシロップ剤を製造した後、褐色ガラス瓶に充填してシロップ剤を製造する。
（試験例）
（１）被験物質
葉酸は金剛化学（株）製造のものを、パンテチンは相互薬工（株）製造のものを使用した。
【００４５】
（２）動物
試験動物としては、Ｃｏｖａｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｉｎｃ．からビーグル犬雄を５箇月齢で購入し、約１箇月間の検疫および馴化飼育後に使用した。
【００４６】
（３）投与剤形、製剤の調整方法および製剤の保存方法
試験動物毎の体重をもとに算出した必要量の被験物質を、ＴＯＲＰＡＣ社のゼラチンカプセル（１／２オンス）に充填した。充填後、カプセルは動物毎に区分されたケースに入れ、投与時まで冷蔵保存した。
【００４７】
（４）投与経路および投与期間
被験物質を充填したカプセルは、１日１回９：００〜１２：３０の間に、試験動物に強制経口投与した。なお、試験動物は投与前２乃至３時間絶食させた。
【００４８】
投与期間は１１日間とした。
【００４９】
（５）被験試料の調製
カプセル投与前１４及び７日（投与開始前第２週及び第１週）、投与後４日、８日及び１２日に、橈側皮静脈から約１０ｍＬ採血した。なお、採血前約１８時間、試験動物は絶食させた。
【００５０】
得られた血液を試験管にとり、室温で３０分から１時間放置後、遠心分離（約１６００×ｇ、１０分間）して得られた血清を測定に用いた。
【００５１】
（６）試験方法
グルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰｘ）活性はＮＡＤＰＨ法を用いて測定した。
【００５２】
（７）試験結果
各試料の投与における測定値は、投与２週間前および１週間前の値の平均を１００として換算して求めた。
【００５３】
結果を表５に示した。なお、各値とも１群５匹の平均値である。
【００５４】
（表５）
血中ＧＰｘの変動率％
被験物質（ｍｇ／Ｋｇ）                投与後４日    投与後８日    投与後１２日
―――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
葉酸（５）                            １０３．０    １３４．５    １２９．５
パンテチン（３０）                    １０５．２    １０６．３    １１６．１
―――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
葉酸及びパンテチンに、優れた血中グルタチオンペルオキシダーゼ活性の増加作用が認められた。