(57)【要約】    【課題】美白剤として有用な化合物、それらを含有する食品、医薬組成物及び化粧料を提供することを課題とする。    【解決手段】マンシュウウコギから抽出単離される化合物である3-carboxy-6,7-dihydroxy-1-(3',4'-dihydroxyphenyl)-naphthalene（化合物Ｉ）に強いメラニン生成抑制作用及びチロシナーゼ活性阻害作用を有することを見出し、これを美白剤として用いることにより本発明を完成させた。 【化１】2006182713.tif 000011
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）で表される
3-carboxy-6,7-dihydroxy-1-(3',4'-dihydroxyphenyl)-naphthalene（化合物Ｉ）及び／又はその生理的に許容される塩を含有する美白剤。
【化１】
2006182713.tif 000009
【請求項２】
下記式（Ｉ）で表される3-carboxy-6,7-dihydroxy-1-(3',4'-dihydroxyphenyl)-naphthalene（化合物Ｉ）及び／又はその生理的に許容される塩を含有する植物の乾燥体又は抽出物を含む美白剤。
【化２】
2006182713.tif 000010
【請求項３】
植物が、マンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）である請求項２に記載の美白剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の美白剤を含有する食品。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれかに記載の美白剤を有効成分とする医薬組成物。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれかに記載の美白剤を含有する化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シミ、ソバカスなど、美容上の障害の予防、治療に効果を有する美白剤、メラニン生成抑制剤、チロシナーゼ活性阻害剤、及びそれらを含む食品、医薬組成物、化粧料を提供するものである。
【背景技術】
【０００２】
大気汚染やオゾン層の破壊により表皮に届く紫外線量は、年々増加する傾向にあり、それに伴い、紫外線による肌のシミ、ソバカス、色黒などの肌悩みが大きくなっている。
従来から、日焼け、シミ等に対する美白用化粧料、食品及び医薬は数多く開発されている。色素沈着は、紫外線や炎症から誘導されることが知られており、その色素はメラニンである。このようなメラニン色素の生成を抑制するメカニズムとしては、メラニンを合成する酵素であるチロシナーゼの活性を抑制すること、メラニンを還元して無色化すること、メラニン合成を誘起する炎症を予防したり、活性酸素の生成を抑制すること等があり、このようなメカニズムについて研究が行われてきている。
【０００３】
化粧料では、このような色素沈着を防止、抑制するものとして、ビタミンＣ、ビタミンＥ等の還元剤、コウジ酸やアルブチン等のチロシナーゼ活性阻害剤、プロアントシアニジン等の抗酸化成分、トラネキサム酸等の抗炎症成分を適用することが効果的であることが、一般的に知られている。
それらの中で、例えば、Ｌ-アスコルビン酸及びその誘導体であるＬ-アスコルビン酸のグルコース配糖体を配合した皮膚化粧料（特許文献１参照）、Ｌ-アスコルビン酸のグルコース配糖体とアミノ酸又はその誘導体を組合わせて配合する皮膚外用剤（特許文献２参照）等が提案されている。
【０００４】
医薬としては、システイン、グルタチオン等のSH基製剤、コロイド硫黄、ハイドロキノンを配合したもの、トラネキサム酸とアスコルビン酸を含有せしめた美白用経口医薬（特許文献３参照）等が挙げられる。
【０００５】
食品としては、コウジ酸、ブドウ種子エキスやアスコルビン酸等の水溶性ビタミン、またはその塩類を配合したものが多く開発されており、例えば、コウジ酸及びその脂肪酸エステルを含有せしめた美白用食品（特許文献４参照）が知られている。
【０００６】
しかしながら、これらの美白剤は美白効果が十分に認められないものであったり、美白効果を示す成分を美白効果を認められる濃度に配合しようとすると、安全性や安定性等に問題を生じることが、しばしば認められることがある。
【０００７】
本研究者は美白剤について、鋭意研究を続けており、ウコギ科のマンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）から抽出した3-carboxy-6,7-dihydroxy-1-(3',4'-dihydroxyphenyl)-naphthalene（化合物Ｉ）を有効成分とする抗酸化剤を特許出願した（特許文献５参照）。本発明は、さらに研究開発を続けた結果、新たに化合物Ｉにメラニン生成抑制作用、チロシナーゼ活性阻害作用、すなわち、美白作用を有することを見出したものである。
【特許文献１】特開平４−１８２４１２号公報
【特許文献２】特開平４−１８２４１３号公報
【特許文献３】特開平４−２４３８２５号公報
【特許文献４】特開昭６０−１３７２５３号公報
【特許文献５】特願２００３−４０９９４５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の課題は、日焼けなどによる皮膚の黒色化、シミやソバカスの生成抑制、改善に非常に効果の高い美白剤、メラニン生成抑制剤、あるいはチロシナーゼ活性阻害剤として有用な化合物、さらには、それらを含有する食品、医薬組成物及び化粧料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を進めた結果、マンシュウウコギから抽出単離される化合物である
3-carboxy-6,7-dihydroxy-1-(3',4'-dihydroxyphenyl)-naphthalene（化合物Ｉ）に強いメラニン生成抑制作用及びチロシナーゼ活性阻害作用を有することを見出し、化合物Ｉが美白剤として使用可能であることを見出し、本発明を完成させた。
本発明の主な構成は、次のとおりである。
（１）下記式（Ｉ）で表される
3-carboxy-6,7-dihydroxy-1-(3',4'-dihydroxyphenyl)-naphthalene（化合物Ｉ）及び／又はその生理的に許容される塩を含有する美白剤。
【化３】
2006182713.tif 000002
（２）下記式（Ｉ）で表される3-carboxy-6,7-dihydroxy-1-(3',4'-dihydroxyphenyl)-naphthalene（化合物Ｉ）及び／又はその生理的に許容される塩を含有する植物の乾燥体又は抽出物を含む美白剤。
【化４】
2006182713.tif 000003
（３）  植物が、マンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）である前記（２）に記載の美白剤。
（４）前記（１）〜（３）のいずれかに記載の美白剤を含有する食品。
（５）前記（１）〜（３）のいずれかに記載の美白剤を有効成分とする医薬組成物。
（６）前記（１）〜（３）のいずれかに記載の美白剤を含有する化粧料。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の3-carboxy-6,7-dihydroxy-1-(3',4'-dihydroxyphenyl)-naphthalene（以下、「化合物Ｉ」という）は、強力なメラニン生成抑制作用、チロシナーゼ活性阻害作用を有するという点で優れている。また、化合物Ｉは、天然物であり生薬として用いられているマンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）から得られたものであるため、生体系への影響が少ない点で好ましい。従って、本発明の化合物Ｉ及び／又はその生理的に許容される塩（以下、単に「化合物Ｉ等」ということがある）を含有する美白剤は、食品、医薬組成物、化粧料への応用が可能であり、特に、皮膚の黒色化、シミ、ソバカス等の予防・治療に有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明に用いられる化合物Ｉは、ウコギ科ウコギ属のマンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）の葉から得られるものであるが、これと同一の化合物を含有するのであれば、産地などは特に限定されるものではなく、また、本発明の化合物を含有する植物であれば、植物の種類も特に限定されるものではない。
本発明におけるマンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）とは、五加とも呼ばれ、その根皮は、滋養強壮や疲労回復などの漢方薬の原料として用いられているものである。
【００１２】
本発明において、マンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）は、本発明の化合物Ｉを含む全ての部位が使用可能である。葉、茎、芽、花、木質部、木皮部（樹皮）の地上部及び根、塊茎等の地下部、種子、果実、樹脂等全ての部位である。
【００１３】
また、植物自身を乾燥させた乾燥物、その粉砕物、それら自身を圧搾抽出することにより得られる搾汁、水あるいはエチルアルコール、メチルアルコール、ジエチルエーテル、アセトン等の溶媒による粗抽出物、及び粗抽出物を分配、カラムクロマト等の各種クロマトグラフィー等で段階的に精製して得られた化合物Ｉ等を用いることができる。得られた抽出物画分は、適切な方法で濃縮したり、噴霧乾燥や凍結乾燥しても良い。これらは単独で用いても良く、また２種以上混合して用いても良い。
【００１４】
例えば、マンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）の葉の乾燥物1 kgに99.5 %エタノール3 Lを加え、室温で一晩浸漬することにより得た抽出液を、そのままメラニン生成抑制剤、チロシナーゼ活性阻害剤、あるいは美白剤及びそれらを含有する食品、医薬組成物あるいは化粧料として使用しても良いし、各種クロマトグラフィーを組み合わせて、精製したものを使用しても良い。
化合物Ｉ等を含む抽出物は、望ましくは、マンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）の葉の熱水抽出物を酢酸エチル／水を用いて液−液分配を行って得られる酢酸エチル可溶画分である。
【００１５】
また、化合物Ｉ等は上記の通り、マンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）の植物体から抽出、精製したものを用いて良いが、化学合成により得ることも出来る。例えば、本化合物は、下記参考文献にあるような公知の方法により合成することができる。
参考文献：Phytochemistry, Vol.28, No.3, pp867-869, 1989年。
【００１６】
本発明による化合物Ｉ等が、メラニン生成抑制作用、あるいはチロシナーゼ活性阻害作用を有することは今まで全く知られておらず、本発明により得られた新たな知見である。
また、化合物Ｉ等は、強いメラニン生成抑制作用、あるいはチロシナーゼ活性阻害作用を有しているため、美白剤としての使用が可能である。また、これらを含有する食品、医薬組成物あるいは化粧料を用いることで、皮膚の黒色化、シミ、ソバカス等の予防・治療が可能である。
【００１７】
本発明のメラニン生成抑制剤、チロシナーゼ活性阻害剤、あるいは美白剤には、上記の様にして得られる化合物Ｉの他に、この化合物の生理的に許容される塩を用いることもできる。この場合、化合物Ｉ及びその塩の１種類を単独で用いても、又は２種以上を混合して用いても良い。
【００１８】
また、この様な塩としては、生理的に許容されるものであれば特に限定はされないが、例えば、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、アンモニア、トリエチルアミン、トリエタノールアミン等のアミン類との塩、アルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸類との塩等が例示できる。
【００１９】
また、化合物Ｉの修飾物を医薬品として用いた場合、その修飾物（プロドラッグ）も本発明の医薬組成物の範囲である。このような修飾物としては、化合物Ｉの塩やエステルが挙げられる。
【００２０】
また、本発明のメラニン生成抑制剤、チロシナーゼ活性阻害剤、あるいは美白剤は、化合物Ｉ及び／又はその生理的に許容される塩を含有するメラニン生成抑制剤、チロシナーゼ活性阻害剤、あるいは美白剤であるが、化合物Ｉの代わりに以下の式で表わされる化合物IIのような構造のものを用いることもできる。すなわち、化合物Ｉのナフタレン骨格の３位のカルボキシル基（−COOH）につき、その水素原子を、他の基に置き換えたものである。例えば、Rはアルコール類、フェノール類から水酸基を除いた残基などが挙げられる。特に、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基等の炭素数１０以下の炭化水素基が好ましく、フェニル基であっても良い。
【００２１】
【化５】
2006182713.tif 000004
【００２２】
〔美白剤、メラニン生成抑制剤、チロシナーゼ活性阻害剤、医薬組成物〕
本発明でいう美白とは、本来の肌の色が白くなること、また、日焼けなどによる黒色化した皮膚が白くなること、黒色化が防止されること、シミやソバカスが薄く目立たなくなること、シミやソバカスの生成が抑制されることなどをいう。具体的には、本発明では、チロシナーゼ活性阻害作用及び／又はメラニン生成抑制作用の有無により美白効果を確認した。
本発明でいうメラニン生成抑制とは、メラニン色素の生成を抑制することであり、本発明ではメラニン生成細胞であるメラノーマ細胞に本発明の化合物（Ｉ）を添加し、メラニン色素の生成率を吸光度測定により求め、化合物（Ｉ）を添加しないものとの関係でメラニン生成抑制率を求めることで効果を確認した。
本発明でいうチロシナーゼ活性阻害とは、チロシナーゼの活性を阻害することをいい、本発明ではチロシナーゼおよびL-DOPA（メラニン生合成の中間物質）を含む溶液に化合物（Ｉ）を添加し、化合物（Ｉ）を添加しないものとの関係でチロシナーゼ活性の阻害効果を確認した。
【００２３】
本発明の美白剤、メラニン生成抑制剤、あるいはチロシナーゼ活性阻害剤又はこれらを含有する医薬組成物は、経口投与又は非経口投与のいずれも採用することができる。非経口投与の方法としては、経皮投与、直腸内投与、注射などが挙げられる。経口投与あるいは非経口投与それぞれの投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と、本発明のメラニン生成抑制剤、チロシナーゼ活性阻害剤、あるいは美白剤とを混合して、慣用の医薬製剤の形態で投与することができる。このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などの固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤などの液剤、凍結乾燥製剤などが挙げられ、これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。
【００２４】
上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングルコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水などが挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤などの慣用の添加剤を適宜添加することもできる。
【００２５】
〔食品〕
食品としては、そのまま、又は種々の栄養成分を加えて、若しくは食品で通常用いられる任意成分と共に配合できる。例えば、菓子、ドリンク、パン等に含ませて、肌の黒色化、シミ、ソバカス等の予防・治療に有用な保健用食品又は食品素材として食される。例えば、化合物Ｉ等に適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して食用に供してもよく、また種々の食品、例えば、ハム、ソーセージ等の食肉加工食品、かまぼこ、ちくわ等の水産加工食品、パン、菓子、バター、粉乳、醗酵乳製品に添加して使用したり、水、果汁、牛乳、茶、清涼飲料水等の飲料に添加して使用しても良い。
【００２６】
本発明において、化合物Ｉ等の有効な摂取量は、摂取する者の年齢、体重、症状、投与経路、投与スケジュール、製剤形態、素材の阻害活性の強さ等により、適宜選択・決定される。例えば、経口投与の場合、一般に一日当たり0.001〜1000 mg/kg体重程度とされ、数回に分けて投与してもよい。
【００２７】
本発明の化合物Ｉ等は、毒性が低く、例えば化合物Ｉを毎日1000 mg/kg、100日間という長期間に亘ってラットに経口投与しても死亡例は認められず、体重変化も観察されなかった。
【００２８】
〔化粧料〕
本発明の本発明の美白剤、メラニン生成抑制剤、チロシナーゼ活性阻害剤を含有する化粧料は、肌の黒色化、シミ、ソバカス等を防ぐために用いられる。本発明が適用される化粧料としては、剤型は特に限定されないが、例えば、以下の用途に用いることができる。化粧水、乳液、クリーム、美容液、パック化粧料等の基礎化粧料、ファンデーション、アンダーメークアップ、白粉等のメークアップ化粧料、ハンドクリーム、ヘアトニック、ヘアリキッド、シャンプー、リンス等の頭髪用化粧料等である。これらの化粧料は、上記化合物Ｉを配合する以外は、通常の化粧料と同様の方法で製造することができる。
【００２９】
上記化粧料における本発明の化合物Ｉ等の配合量は特に限定されないが、化粧料全量に対して0.001〜10 重量%の範囲で配合されることが好ましく、更に、0.01〜1 重量%の範囲で配合されることがより好ましい。化合物Ｉの配合量が0.001 重量%未満では、肌の黒色化、シミ、ソバカス等の防止効果が十分に得られない場合があり、10 重量%を越えて配合した場合には、効果が頭打ちになり経済的でない場合が多い。
なお、抽出物の分画物を用いる場合には、上記濃度と同程度の効果が得られるように化合物濃度に換算しておくことで、同様に用いることができる。
【００３０】
また、本発明の化粧料には、化合物Ｉ等を含む美白剤、メラニン生成抑制剤、チロシナーゼ活性阻害剤の他に、化粧料に一般に用いられる各種成分を配合することができる。例えば、ワセリン、流動パラフィン等の炭化水素類、ホホバ油、カルナバワックス等のエステル類、オリーブ油、牛脂等のトリグリセライド類、ステアリルアルコール、ベヘニルアルコール等の高級アルコール類、ステアリン酸、ベヘン酸等の脂肪酸類、グリセリルモノステアレート、ポリオキシエチレンステアリン酸、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンステアリルエーテル等のノニオン界面活性剤、石鹸、硫酸エステル等のアニオン界面活性剤、ステアリルアミン等のカチオン界面活性剤、アルキルベタイン等の両性界面活性剤、グリセリン、プロピレングリコール等の多価アルコール類、各種粉末成分、保湿剤、増粘剤、色剤、香料、pH 調整剤、キレート剤、防腐剤、あるいは紫外線防御剤、抗炎症剤、美白剤等である。
【００３１】
更に、本発明の化粧料には、化合物Ｉ等を含む美白剤、メラニン生成抑制剤、チロシナーゼ活性阻害剤以外に他のこれらと同様な作用を示す物質と組み合せて使用することもできる。
【実施例】
【００３２】
次に実施例を挙げて、具体的に説明するが、これに限定されるものではない。
製造例
マンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）の葉からの抽出
マンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）の葉は、中国 吉林省の長白山より８月中旬から９月上旬にかけて採取したものを使用した。この葉の乾燥体 10 kgに水 80 Lを加え、90 ℃で１時間抽出し、抽出液を得た。この抽出液を60 meshのフィルターを用いてろ過し、60 ℃でBrix（可溶性固形分濃度）が約10になるまで濃縮、250 meshのフィルターにてろ過した。これを130 ℃で30秒間殺菌したものを、噴霧乾燥（入口温度：140 ℃、出口温度：80 ℃）し、30 meshのフィルターにて篩過することにより、マンシュウウコギ葉熱水抽出物2.2 kg（収率：22 %）を得た。
【００３３】
3-carboxy-6,7-dihydroxy-1-(3',4'-dihydroxyphenyl)-naphthalene （化合物Ｉ）の単離
本発明の化合物は、図１に示したように、各種カラムクロマトグラフィー（以下、c.c.と略す）を組み合せることにより得ることができる。
すなわち、上記製造例により得られたマンシュウウコギの葉の熱水抽出物（1630.63 g）を、酢酸エチル及び水を用いて液−液分配を行い、酢酸エチル可溶画分（21.27 g）を得た。この得られた酢酸エチル可溶画分をSephadex LH-20（ファルマシア ファイン ケミカル社製）c.c.に供し、メタノールにて溶出することにより、L-1からL-4の4つの画分（L-1：9.69 g、L-2：5.69 g、L-3：4.63 g、L-4：0.25 g）を得た。次に、L-4画分（0.25 g）をODS（Chromatorex ODS：富士シリシア化学株式会社製）c.c.に供し、0.01 % トリフルオロ酢酸（TFA）を含む50 %（v/v）メタノール溶液を用いて溶出し、O-1からO-9の9つの画分（O-1：13.1 mg、O-2：7.6 mg、O-3：5.0 mg、O-4：117.2 mg、O-5：34.8 mg、O-6：4.1 mg、O-7：34.8 mg、O-8：62.0 mg、O-9：10.6 mg）を得た。さらに、O-4及びO-5を合わせ（152.0 mg）、Silica gel（Kieselgel 60 F254、メルク社製）c.c.に供し、クロロホルム：メタノール：水（80：20：2 v/v/v）混液を用いて溶出することにより、本発明の化合物である3-carboxy-6,7-dihydroxy-1-(3',4'-dihydroxyphenyl)-naphthalene（化合物Ｉ）（68.1 mg、収率：0.0042 %）を得た。
【００３４】
スペクトルデータ
得られた本発明の化合物Ｉのスペクトルデータを測定し、以下に示す結果を得た。
無色（colorless）微結晶性粉末
m.p.：325−327 ℃（分解点）
分子量：312.2
EI-MS（70eV）；
m/z（%）：312（100、M+）、249（11）、221（20）、165（7）、163（8）
HR-FAB-MS（m/z）：313.0690（[M+H]＋：C17H13O6  requires 313.0712）
分子組成：C 65.39、H 3.87、O 30.74
IR スペクトル：図２参照
1H NMR（500 MHz）および13C NMR（125 MHz）：表１参照
【表１】
2006182713.tif 000005
【００３５】
薬理試験
メラニン生成抑制作用の測定
製造例に示した方法で単離した化合物Ｉを用いて以下の試験によってメラニン生成抑制活性を評価した。
メラニンを生成する細胞としてマウス由来の培養B16メラノーマ細胞を、ウシ胎児血清を10%添加したイーグルＭＥＭ培地で培養し、該細胞を2×104cells/wellの濃度で6ウェルプレートの各ウェルに播種し、5日間ＣＯ２インキュベーター内で培養した。その後、サンプルとして本発明の化合物（Ｉ）を0.01、0.03、0.1、0.3 mg/mlの濃度になるように添加した新たな培地と交換し、さらに3日間同条件で培養した。培養した細胞を洗浄後、培養プレートから細胞をスクレーパーで剥がしとり、ドデシル硫酸ナトリウムにより可溶化してメラニン量の指標である475 nm、細胞量の指標である260 nmの吸光度を測定し、S475、S260とした。化合物（Ｉ）を添加しない培地で培養した細胞の475 nm、260 nmにおける吸光度を測定し、C475、C260とした。メラニン生成抑制率を下記式１により算出した。なお、ポジティブコントロールとしてコウジ酸を用いた。本結果から化合物（Ｉ）の添加量とメラニン抑制率の関係を表すグラフを図2に示す。また、この結果より求めた50 %抑制濃度値（IC50値）を表1に示す。
【００３６】
【数１】
2006182713.tif 000006
【００３７】
【表２】
2006182713.tif 000007
【００３８】
チロシナーゼ活性阻害作用の測定
製造例に示した方法で単離した化合物Ｉを用いて以下の試験によってチロシナーゼ阻害活性を評価した。
サンプルとして本発明の化合物（Ｉ）を最終濃度で0.16、0.31、0.63、1.25、2.5、5 mMの濃度になるように添加した溶液0.95 mlに600 units/mlのTyrosinase溶液0.05 mlを加え、30 ℃で10分間インキュベートした。その後、あらかじめ30 ℃に暖めておいた6 mMのL-DOPA溶液0.5 mlを添加し、30 ℃で40分間振とうしながらインキュベートした。サンプル溶液、Tyrosinase、L-DOPAの希釈には100 mMコハク酸緩衝液(pH 5.5)を用いた。振とう後、メラニン量の指標である475 nmの波長で吸光度測定し、この値をS475とした。化合物（Ｉ）無添加の場合をコントロール(C)、この吸光度をC475、L-DOPA無添加の場合をサンプルブランク(SB)、この吸光度をSB475、サンプルとL-DOPA無添加の場合をコントロールブランク(CB)、この吸光度をCB475とし、式2によりチロシナーゼ阻害率を算出した。ポジティブコントロールとしてコウジ酸を用いた。本結果から化合物（Ｉ）の添加量とチロシナーゼ活性阻害率の関係を表すグラフを図4に示す
制され、化合物Ｉが美白作用を示すことがわかる。また、ＩＣ50値はポジティブコントロールとして用いたコウジ酸よりも小さく、化合物Ｉのメラニン生成抑制作用が高いことが示された。
【００３９】
【数２】
2006182713.tif 000008
図3に示したように、化合物Ｉ添加によりチロシナーゼ活性が阻害され、化合物Ｉが美白作用を示すことがわかる。
【００４０】
以下に処方例を示す。
処方例１
［錠剤の製造］
製造例で得られた3-carboxy-6,7-dihydroxy-1-(3',4'-dihydroxyphenyl)-naphthalene（化合物Ｉ）を用いて、常法に従って、下記の組成の錠剤を製造した。
（組      成）                      （配合：重量%）
化合物Ｉ                                      24
乳糖                                          63
コーンスターチ                                12
グァーガム                                     1
【００４１】
処方例２
［ジュースの製造］
製造例で得られた化合物Ｉを用いて、常法に従って、下記の組成のジュースを製造した。
（組       成）                           （配合：重量%）
化合物Ｉ                                        0.2
冷凍濃縮温州みかん果汁                          5.0
果糖ブドウ糖液糖                               11.0
クエン酸                                        0.2
L-アスコルビン酸                                0.02
香料                                            0.2
色素                                            0.1
水                                             83.28
【００４２】
処方例３
［化粧品（ハンドクリーム）の製造］
製造例で得られた化合物Ｉを用いて、常法に従って、下記の組成のハンドクリームを製造した。
（組       成）                           （配合：重量%）
化合物Ｉ                                         0.5
セタノール                                       8.0
ステアリルアルコール                             2.0
ポリオキシエチレンラウリルエーテル               1.5
プロピレングリコール                             6.0
ソルビトール                                     1.0
パラベン                                         0.4
ビタミンE                                        0.5
香料                                             0.1
精製水                                          66.0
【００４３】
処方例４
［化粧品（化粧水）の製造］
製造例で得られた化合物Ｉを用いて、常法に従って、下記の組成の化粧水を製造した。
（組       成）                           （配合：重量%）
化合物Ｉ                                         0.1
1,3−ブチレングリコール                          8.5
グリセリン                                       1.5
L-セリン                                         0.1
混合異性化糖                                     1.0
パセリエキス                                     0.1
ローズマリーエキス                               0.3
精製水                                          88.4
【００４４】
処方例５
［化粧品（乳液）の製造］
製造例で得られた化合物Ｉを用いて、常法に従って、下記の組成の乳液を製造した。
（組       成）                           （配合：重量%）
化合物Ｉ                                         0.2
1,3−ブチレングリコール                          8.0
カルボキシビニルポリマー                         0.12
グリセリン                                       3.0
混合異性化糖                                     0.5
L-トレオニン                                     0.1
ホホバ油                                         1.5
スクワラン                                       1.5
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                   1.0
パセリエキス                                     0.1
水酸化カリウム                                   0.04
精製水                                          83.94
【００４５】
処方例６
［化粧品（美溶液）の製造］
製造例で得られた化合物Ｉを用いて、常法に従って、下記の組成の美溶液を製造した。
（組       成）                           （配合：重量%）
化合物Ｉ                                         0.2
1,3−ブチレングリコール                          8.0
トリメチルグリシン                               2.0
グリセリン                                       5.0
混合異性化糖                                     3.0
カルボキシビニルポリマー                         0.15
水酸化カリウム                                   0.05
ヒアルロン酸ナトリウム（1 %水溶液）              0.5
精製水                                          81.1
【００４６】
処方例７
［化粧品（パック化粧料）の製造］
製造例で得られた化合物Ｉを用いて、常法に従って、下記の組成のパック化粧料を製造した。
（組       成）                           （配合：重量%）
化合物Ｉ                                         0.2
デキストラン                                    11.5
カルボキシビニルポリマー                         0.3
ジグリセリン                                    17.0
トリメチルグリシン                               2.0
L-セリン                                         0.1
混合異性化糖                                     0.5
マルチトール                                     4.0
1,3−ブチレングリコール                         10.0
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                   0.5
カルボキシメチルセルロースナトリウム             1.4
水酸化カリウム                                   0.1
塩類含有カプセル                                 0.1
精製水                                          52.3
【産業上の利用可能性】
【００４７】
本発明の美白剤、メラニン生成抑制剤、チロシナーゼ活性阻害剤は、医薬組成物、食品、化粧料への応用が可能であり、特に、肌の黒色化、シミ、ソバカス等の予防・治療に有効である。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】3-carboxy-6,7-dihydroxy-1-(3',4'-dihydroxyphenyl)-naphthalene（化合物Ｉ）の単離・精製方法を示す図である。
【図２】化合物（Ｉ）のIRスペクトルを示す図である。
【図３】化合物（Ｉ）の添加量とメラニン抑制率の関係を表すグラフである。
【図４】化合物（Ｉ）の添加量とチロシナーゼ活性阻害率の関係を表すグラフである。
【図３】
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【図４】
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【図１】
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【図２】
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