(57)【要約】【課題】天然素材由来の食経験豊富な素材、すなわち、天然の本わさび、特に本わさび葉を原料とし、これから抽出された本わさび由来の化合物を提供し、さらに、この化合物を含有する活性酸素消去作用を呈する抗酸化剤、食品、健康食品または食品添加物、さらには活性酸素消去作用、紫外線吸収作用および紫外線障害抑制作用を呈する化粧料を提供する。【解決手段】本わさび由来の化合物、特に本わさびの葉から抽出される特定の構造式を有する化合物から構成される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式  １
【化１】
2006069982.tif 000021
および一般式２
【化２】
2006069982.tif 000022
からなる群より選択される本わさび由来の化合物。
ただし、一般式１において、Ｒ１はＧlc（グルコース）、R２は−Ｏ−Ｇluであって、分子式がＣ３８Ｈ４０Ｏ１９で示され、分子量８０１、紫外線吸収が３２４．５ｎｍ、２７４．０ｎｍ、２１５．０ｎｍに有する。また、一般式２において、Ｒ３はＯＨ、Ｒ４はＯＣＨ３、Ｒ５はシナポイル（sinapoyl）、Ｒ６はＨであって、分子式がＣ３３Ｈ４０Ｏ１９で示され、分子量７４１、紫外線吸収が３２９．０ｎｍ、２３９．４ｎｍに有する。
【請求項２】
請求項１の、一般式１中、Ｒ１はＧlc−Ｇlc−Ｏ−sinapoyl、Ｒ２は−Ｏ−Ｇlcであって、分子式がＣ５５Ｈ６０Ｏ２８で示され、分子量１１６９、紫外線吸収が３２４．５ｎｍ、２７５．０ｎｍ、２０５．０ｎｍに有する本わさび由来の化合物。
【請求項３】
請求項１の、一般式１中、Ｒ１はＧlc、R２はＯＨであって、かつ分子式がＣ３２Ｈ３０Ｏ１４で示され、分子量６３９、紫外線吸収が３２８．０ｎｍ、２７２．０ｎｍ、２１４．０ｎｍに有する本わさび由来の化合物。
【請求項４】
請求項１の、一般式１中、Ｒ１はＧlc、R２は−Ｏ−Ｇlc−sinapoylであって、かつ分子式がＣ４９Ｈ５０Ｏ２３で示され、分子量１００７、紫外線吸収が３２７．５ｎｍ、２７３．０ｎｍ、２０４．０ｎｍに有する本わさび由来の化合物。
【請求項５】
請求項１の、一般式１中、Ｒ１はＧlc−Ｇlc−Ｏ−sinapoyl、Ｒ２はＯＨであって、かつ分子式がＣ４９Ｈ５０Ｏ２３で示され、分子量１００７、紫外線吸収が３２４．５ｎｍ、２７６．０ｎｍ、２０５．０ｎｍに有する本さわび由来の化合物。
【請求項６】
請求項１の、一般式２中、Ｒ３はＯＣＨ３、Ｒ４はＯＣＨ３、Ｒ５はsinapoyl、Ｒ６はＨであって、かつ分子式がＣ３４Ｈ４２Ｏ１９で示され、分子量７５５、紫外線吸収が３３０．８ｎｍ、２３９．０ｎｍに有する本わさび由来の化合物。
【請求項７】
請求項の、一般式２中、Ｒ３はＯＣＨ３、Ｒ４はＨ、Ｒ５はsinapoyl、Ｒ６はＨであって、かつ分子式がＣ３３Ｈ４０Ｏ１８で示され、分子量７２５、紫外線吸収が３２７．２ｎｍ、２３８．２ｎｍに有する本わさび由来の化合物。
【請求項８】
請求項１の、一般式２中、Ｒ３はＯＨ、Ｒ４はＨ、Ｒ５はsinapoyl、Ｒ６はＨであって、かつ分子式がＣ３３Ｈ３８Ｏ１８で示され、分子量７１１、紫外線吸収が３３０．６ｎｍ、２３９．８ｎｍに有する本わさび由来の化合物。
【請求項９】
請求項１の、一般式２中、Ｒ３はＯＨ、Ｒ４はＯＣＨ３、Ｒ５は３，４−dihydroxy−5−methoxycinnamoyl、Ｒ６はＨで、かつ分子式がＣ３２Ｈ３８Ｏ１９で示され、分子量７２７、紫外線吸収が３３１．２ｎｍ、２３８．８ｎｍに有する本わさび由来の化合物。
【請求項１０】
請求項１の、一般式２中、Ｒ３はＯＨ、Ｒ４はＯＣＨ３、Ｒ５はferuloyl、Ｒ６はＨであって、かつ分子式がＣ３２Ｈ３８Ｏ１８で示され、分子量７１１、紫外線吸収が３２８．６ｎｍ、２３４．２ｎｍに有する本わさび由来の化合物。
【請求項１１】
請求項１の、一般式２中、Ｒ３はＯＨ、Ｒ４はＯＣＨ３、Ｒ５はＨ、Ｒ６はＨであって、かつ分子式がＣ２２Ｈ３０Ｏ１５で示され、分子量５３５、紫外線吸収が３３２．２ｎｍ、２３９．４ｎｍに有する本わさび由来の化合物。
【請求項１２】
請求項１の、一般式２中、Ｒ３はＯＣＨ３、Ｒ４はＯＣＨ３、Ｒ５はＨ、Ｒ６はsinapoylであって、かつ分子式がＣ３４Ｈ４２Ｏ１９で示され、分子量７５５、紫外線吸収が３２８．０ｎｍ、２３９．０ｎｍに有する本由来の化合物。
【請求項１３】
請求項１の化合物が本わさび葉から抽出される請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
請求項１の化合物を含有する活性酸素消去作用を呈する抗酸化剤、食品、健康食品または食品添加物。
【請求項１５】
請求項１の化合物を含有する活性酸素消去作用、紫外線吸収作用および紫外線障害抑制作用を呈する化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は本わさびに含有する活性酸素消去作用を有する化合物およびこの化合物を含有する抗酸化剤、食品、健康食品および食品添加物に関する。
【背景技術】
【０００２】
活性酸素は遺伝子や蛋白質を傷害して全身の組織に対して発ガンや様々な疾病の発症または憎悪させるものであり、その体内発生量の抑制や消去は生活の質を高める上で重要なことである。近年、ポリフェノ−ルやカテキン、ビタミンＣ等の素材が活性酸素を消去し、健康を維持する素材として様々な食品素材や化粧品等に使用されているが、まだまだ新たな活性酸素を消去する素材が求められている。また、消費者の安全志向の高まりから、天然素材由来の抗酸化成分、さらには食経験の豊富な素材からの抗酸化成分が望まれている。
【０００３】
活性酸素消去作用を有する化合物、すなわち、抗酸化活性を有する化合物として、従来、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）等の化合物が知られている。
【０００４】
しかし、これらの化合物はいずれも、天然素材由来の抗酸化成分ではないので消費者の安全志向と一致する化合物ではない。
【特許文献１】特開２００１−２００２５０
【特許文献２】特開２００３−１３８２５８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
そこで、本発明の課題は上述の公知技術に存する欠点を改良し、天然素材由来の食経験豊富な素材、すなわち、天然の本わさび、特に本わさび葉から抽出された本わさび由来の化合物を提供し、さらにこの化合物を含有する活性酸素消去作用を呈する抗酸化剤、食品、健康食品または食品添加物、さらには活性酸素消去作用、紫外線吸収作用および紫外線障害抑制作用を呈する化粧料を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上述の課題を解決するため、本発明の抗酸化活性を有する化合物によれば、
一般式１
【化３】
2006069982.tif 000002
および一般式２
【化４】
2006069982.tif 000003
からなる群より選択されることを特徴とする。
【０００７】
上述一般式１において、Ｒ１は〜Ｒ２は、Glu、-ＯＨ、-Glu、-Ｏ-Glu、Glu-Glu-Ｏ-sinapoyl、-Ｏ-Glu-sinapoylであって、分子量６３９〜１１６９、紫外線吸収が２０４．０ｎｍ〜３２８．０ｎｍに有する。また、一般式２において、Ｒ３〜Ｒ６  は、-H、-OH、-OCH３、-sinapoyl、-3,4-dihydroxy-5-methoxycinnamoyl、-feruloyであって、分子量５３５〜７５５、紫外線吸収が２３４．２ｎｍ〜３３２．２ｎｍに有する。
【発明の効果】
【０００８】
本わさびは食経験が長く、かつ活性酸素消去作用が高いことに着目し、その有効成分の分離同定を試みた結果、得られた化合物が強い活性酸素消去作用を有することを確認した。
本発明はこの化合物を含有せしめることにより、活性酸素消去作用を呈する抗酸化剤、食品、健康食品、食品添加物として利用され、さらに、この化合物を含有せしめることにより、活性酸素消去作用、紫外線吸収作用、および紫外線障害抑制作用を呈する化粧料として利用される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下、本発明を実施例により詳述する。
【００１０】
本発明にかかる化合物は本わさびを粉砕し、必要に応じて酵素反応等を行い、水または有機溶媒を用いて抽出し、クロマトグラフィー等により分離することにより得られる。粉砕は本わさびを生のまま、あるいは凍結して粉砕してもよく、さらには水や有機溶媒中で粉砕しても良い。粉砕した本わさびを、例えば２５℃〜４５℃の温度で１０分〜３時間程度保温し、酵素反応を起こさせてから抽出を行っても良い。
【００１１】
抽出に用いる溶媒としては、水、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソ
プロピルアルコール、ブタノール、イソブタノール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、アセトン、ヘキサン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、アセトニトリル等を単独もしくは組み合わせて用いる。また抽出は複数回行っても良い。
【００１２】
分離の手段としては、カラムや薄層等によるクロマトグラフィーや膜分離を用いることができ、さらにゲル浸透、ゲル濾過等のサイズ排除クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー等の方法を用いることができる。
【００１３】
ここで用いられる本わさび（Ｗasabia japonica Matsum）は植物全体を用いることができるが、有効成分の含有量から考えると、葉の部分を用いることが望ましい。
【００１４】
また、本発明の化合物の利用形態として、剤形・形態は任意であり、カプセル、粉末、顆粒、固形、液体、ゲル、乳液、クリーム、軟膏、シート、パック等の形態で利用できる。その利用分野は、食品、健康食品、食品添加物、化粧品、医薬品、医薬部外品、塗装材等、例えば、健康食品としてタブレットやカプセル、食品添加物として酸化防止剤、化粧品として化粧水、美容液、乳液、クリーム、ローション等の基礎化粧品類、洗顔料や皮膚洗浄剤、マッサージ用剤、クレンジング用剤、香水、日焼け止めクリーム、シャンプー、リンス、ボディーソープ、固形石鹸、シェービングクリーム、ヘアートニック、育毛・養毛剤、整髪料、浴用剤、制汗剤、防臭剤、ドリンクや製剤等の医薬部外品や医薬品、さらには塗料等の酸化防止剤としても用いることができる。
【実施例１】
【００１５】
本わさび葉７．０ｋｇを破砕し、これに３６Ｌのメタノールを加えて３時間室温にて攪拌して抽出液を得る操作を３回繰り返し、濾過後減圧濃縮した。得られた濃縮液を凍結真空乾燥することにより、メタノール抽出物３６２．８ｇを得た。
【００１６】
得られたメタノール抽出物をヘキサン、酢酸エチル、水にて順次分配し、ヘキサン抽出物１０７．３ｇ、酢酸エチル抽出物３０．０ｇ、水抽出物１４３．６ｇを得た。
【００１７】
得られた水抽出物をダイアイオンＨＰ−２０オープンカラムクロマトグラフィー（三菱化成社製）に負荷し、０％、２０％、４０％、６０％、８０％、１００％メタノールおよびアセトンで順次溶出し、７つの画分を得た。６０％メタノール溶出画分についてメタノール−水系グラジエント溶媒を用いたＯＤＳカラムクロマトグラフィーを行った。得られた分画について、アセトニトリル−水系溶媒を用いたＲＰ−１８ＨＰＬＣにより精製したところ、化合物１を２２．３ｍｇを得た。化合物１の物性は次のとおりである。
【００１８】
化合物１について
黄色無定形固体、分子式Ｃ３８Ｈ４０Ｏ１９、High-Resolution ESL mass spectrometric analysis（ＨＲ−ＥＳＩＭＳ）m/z ８０１．２２４８〔Ｍ＋Ｈ〕＋、比施光度〔α〕２５Ｄ−１５５．１°（ｃ０．２１、pyridine）、赤外線吸収スペクトルγｍａｘ（ｃｍ−１）３４１５、２９２４、１６９９、１６３０、１５１４、紫外線吸収γｍａｘ  ３２４．５ｎｍ（logε４．６２）、２７４．０ｎｍ（logε４．２８）、２１５．０ｎｍ（logε４．７０）、１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲは表１に示す。
【００１９】
【表１】
2006069982.tif 000004
【００２０】
また、８０％メタノール画分についてメタノール−水系グラジエント溶媒を用いた
Sephadex  ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（ファルマシア社製）およびＯＤＳカラムクロマトグラフィーを行った後、ＲＰ−１８ＨＰＬＣにより生成したところ、化合物１を６０．７ｍｇ、化合物２を２６．３ｍｇ得た。化合物２の物性は次のとおりである。
【００２１】
化合物２について
黄色無定形固体、分子式Ｃ５５Ｈ６０Ｏ２８、ＨＲ−ＥＳＩＭＳ  m/z１１６９．３５８２〔Ｍ＋Ｈ〕＋、比施光度〔α〕２５Ｄ−１０２．５°（ｃ０．３５、pyridine）、赤外線吸収スペクトルγｍａｘ（ｃｍ−１）３４２１、２９２４、１６９９、１６９５、１６４１、１５１０、
紫外線吸収γｍａｘ  ３２４．５ｎｍ（logε４．５６）、２７５．０ｎｍ（logε４．３２）、２０５．０ｎｍ（logε４．６９）、１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲは表２に示す。
【００２２】
【表２】
2006069982.tif 000005
【実施例２】
【００２３】
実施例１で得られた酢酸エチル抽出物をダイアイオンＨＰ−２０オープンカラムクロマトグラフィーに負荷し、４０％、６０％、８０％、１００％メタノールおよび酢酸エチルで順次溶出し、５つの画分を得た。８０％メタノール画分について、クロロホルム−メタノール系グラジエント溶媒を用いたＯＤＳカラムクロマトグラフィー、またメタノール−水系グラジエント溶媒を用いたSephadex  ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィーを行った。得られた分画について、アセトニトリル−水系溶媒を用いたＲＰ−１８  ＨＰＬＣにより精製したところ、化合物３を６３．０ｍｇ、化合物４を５．８ｍｇ、化合物５を２９．３ｍｇ得た。それぞれの化合物の物性は次のとおりである。
【００２４】
化合物３について
黄色無定形固体、分子式Ｃ３２Ｈ３０Ｏ１４、ＨＲ−ＥＳＩＭＳ  m/z６３９．１７０８〔Ｍ＋Ｈ〕＋、比施光度〔α〕２５Ｄ−１８９．７°（ｃ０．１８、pyridine）、赤外線吸収スペクトルγｍａｘ（ｃｍ−１）３４１５、２９２４、１６９９、１６３０、１５１４、紫外線吸収γｍａｘ  ３２８．０ｎｍ（logε４．３５）、２７２．０ｎｍ（logε４．１１）、２１４．０ｎｍ（logε４．４５）、１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲは表３に示す。
【００２５】
【表３】
2006069982.tif 000006
【００２６】
化合物４について
黄色無定形固体、分子式Ｃ４９Ｈ５０Ｏ２３、ＨＲ−ＥＳＩＭＳ  m/z１００７．２７７３〔Ｍ＋Ｈ〕＋、比施光度〔α〕２５Ｄ−１０７．３°（ｃ０．１８、pyridine）、赤外線吸収スペクトルγｍａｘ（ｃｍ−１）３３６７、２９２２、１６９３、１６０６、１５１０、紫外線吸収γｍａｘ  ３２７．５ｎｍ（logε４．６２）、２７３．０ｎｍ（logε４．２８）、２０４．０ｎｍ（logε４．７０）、１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲは表４に示す。
【００２７】
【表４】
2006069982.tif 000007
【００２８】
化合物５について
黄色無定形固体、分子式Ｃ４９Ｈ５０Ｏ２３、ＨＲ−ＥＳＩＭＳ  m/z１００７．２８９９〔Ｍ＋Ｈ〕＋、比施光度〔α〕２５Ｄ−１８３．４°（ｃ０．２７pyridine）、赤外線吸収スペクトルγｍａｘ（ｃｍ−１）３４１７、２９２５、１６９５、１６３０、１５１２、紫外線吸収γｍａｘ  ３２４．５ｎｍ（logε４．５６）、２７６．０ｎｍ（logε４．３１）、２０５．０ｎｍ（logε４．６６）、１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲは表５に示す。
【００２９】
【表５】
2006069982.tif 000008
【実施例３】
【００３０】
本わさび４．６ｋｇを破砕し、これに３６Ｌのメタノールを加えて３時間室温にて攪拌して抽出液を得る操作を３回繰り返し、濾過後減圧濃縮した。得られた濃縮液を凍結真空乾燥することにより、メタノール抽出物１７９．８ｇを得た。
【００３１】
得られたメタノール抽出物をへキサン、酢酸エチル、ｎ−ブタノ−ルおよび水にて順次分配し、へキサン抽出物４２．４ｇ、酢酸エチル抽出物２．３ｇ、ｎ−ブタノ−ル抽出物１４．１ｇ、水抽出物１１０．１ｇを得た。
【００３２】
得られたｎ−ブタノ−ル抽出物をダイアイオンＨＰ−２０カラムクロマトグラフィーに負荷し、０％、２０％、４０％、６０％、８０％、１００％メタノールおよびアセトンで順次溶出し、７つの画分を得た。４０％メタノール溶出画分についてメタノール−水系グラジエント溶媒を用いたＯＤＳカラムクロマトグラフィーを行い、８つの画分を得た。得られた分画について、アセトニトリル−水系溶媒を用いたＲＰ−１８  ＨＰＬＣ（関東化学社製）により精製したところ、化合物６を３２５．４ｍｇ、化合物７を６６．８ｍｇ、
化合物８を４．３ｍｇ、化合物９を８７．２ｍｇ、化合物１０を３７．３ｍｇ、化合物１１を２５．５ｍｇ、化合物１２を２３．２ｍｇ得た。それぞれの化合物の物性は次のとおりである。
【００３３】
化合物６について
黄色無定形固体、分子式Ｃ３３Ｈ４０Ｏ１９、ＨＲ−ＥＳＩＭＳ  m/z７４１．２１８５〔Ｍ＋Ｈ〕＋、比施光度〔α〕２５Ｄ−５．６°（ｃ０．５０メタノール）、赤外線吸収スペクトルγｍａｘ（ｃｍ−１）３４１６、２９２７、１７０４、１５１８、１６３３、紫外線吸収γｍａｘ  ３２９．０ｎｍ（logε４．５０）、２３９．４ｎｍ（logε４．４２）、１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲは表６に示す。
【００３４】
【表６】
2006069982.tif 000009
【００３５】
化合物７について
黄色無定形固体、分子式Ｃ３４Ｈ４２Ｏ１９、ＨＲ−ＥＳＩＭＳ  m/z７５５．２３６２〔Ｍ＋Ｈ〕＋、比施光度〔α〕２５Ｄ−８．６°（ｃ０．５０メタノール）、赤外線吸収スペクトルγｍａｘ（ｃｍ−１）３４５１、２７５９、１６９８、１６３２、１５１７、紫外線吸収γｍａｘ  ３３０．８ｎｍ（logε４．５０）、２３９．０ｎｍ（logε４．４１）、１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲは表７に示す。
【００３６】
【表７】
2006069982.tif 000010
【００３７】
化合物８について
黄色無定形固体、分子式Ｃ３３Ｈ４０Ｏ１８、ＨＲ−ＥＳＩＭＳ  m/z７４７．２１２８〔Ｍ＋Ｎａ〕＋、比施光度〔α〕２５Ｄ−１０．２°（ｃ０．４１メタノール）、赤外線吸収スペクトルγｍａｘ（ｃｍ−１）３４２５、２７８０、１７０２、１６３３、１５１８、紫外線吸収γｍａｘ  ３２７．２ｎｍ（logε４．５１）、２３８．２ｎｍ（logε４．３７）、１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲは表８に示す。
【００３８】
【表８】
2006069982.tif 000011
【００３９】
化合物９について
黄色無定形固体、分子式Ｃ３２Ｈ３８Ｏ１８、ＨＲ−ＥＳＩＭＳ  m/z７３３．２０１１〔Ｍ＋Ｎａ〕＋、比施光度〔α〕２５Ｄ−５．４°（ｃ０．３５メタノール）、赤外線吸収スペクトルγｍａｘ（ｃｍ−１）３４２３、２７０３、１７０３、１６３１、１５１６、紫外線吸収γｍａｘ  ３３０．６ｎｍ（logε４．５０）、２３９．８ｎｍ（logε４．３１）、１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲは表９に示す。
【００４０】
【表９】
2006069982.tif 000012
【００４１】
化合物１０について
黄色無定形固体、分子式Ｃ３２Ｈ３８Ｏ１９、ＨＲ−ＥＳＩＭＳ  m/z７４９．１８８０〔Ｍ＋Ｎａ〕＋、比施光度〔α〕２５Ｄ−７．８°（ｃ０．５５メタノール）、赤外線吸収スペクトルγｍａｘ（ｃｍ−１）３３３５、２９０３、１７０６、１６２７、１５１６、紫外線吸収γｍａｘ  ３３１．２ｎｍ（logε４．４６）、２３８．８ｎｍ（logε４．３８）、１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲは表１０に示す。
【００４２】
【表１０】
2006069982.tif 000013
【００４３】
化合物１１について
黄色無定形固体、分子式Ｃ３２Ｈ３８Ｏ１８、ＨＲ−ＥＳＩＭＳ  m/z７３３．１９５６〔Ｍ＋Ｎａ〕＋、比施光度〔α〕２５Ｄ−９．０°（ｃ０．１５メタノール）、赤外線吸収スペクトルγｍａｘ（ｃｍ−１）３６３３、２９２７、１７０４、１６０２、１５１８、紫外線吸収γｍａｘ  ３２８．６ｎｍ（logε４．４１）、２３４．２ｎｍ（logε４．２８）、１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲは表１１に示す。
【００４４】
【表１１】
2006069982.tif 000014
【００４５】
化合物１２について
黄色無定形固体、分子式Ｃ２２Ｈ３０Ｏ１５、ＨＲ−ＥＳＩＭＳ  m/z５５７．１４９３〔Ｍ＋Ｎａ〕＋、比施光度〔α〕２５Ｄ−１２．３°（ｃ０．７０メタノール）、赤外線吸収スペクトルγｍａｘ（ｃｍ−１）３３７８、２７３３、１７０３、１６３２、１５１７、紫外線吸収γｍａｘ  ３３２．２ｎｍ（logε４．３０１）、２３９．４ｎｍ（logε４．１５）、１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲは表１２に示す。
【００４６】
【表１２】
2006069982.tif 000015
【実施例４】
【００４７】
実施例１で得られた酢酸エチル抽出物３０．０ｇを、ダイアイオンＨＰ−２０カラムクロマトグラフィーに負荷し、４０％、６０％、８０％、１００％メタノールおよび酢酸エチルで順次溶出し、５つの画分を得た。６０％メタノール溶出画分についてメタノール−水系グラジエント溶媒を用いたＯＤＳカラムクロマトグラフィーを行った後、メタノール−水系溶媒を用いたSephadex LH−２０カラムクロマトグラフィーを行った。得られた分画について、アセトニトリル−水系溶媒を用いたＲＰ−１８ＨＰＬＣにより精製したころ、化合物１３を８．８ｍｇ得た。化合物１３の物性は次のとおりである。
【００４８】
化合物１３について
黄色無定形固体、分子式Ｃ３４Ｈ４２Ｏ１９、ＨＲ−ＥＳＩＭＳ  m/z７７７．２３１６〔Ｍ＋Ｎａ〕＋、比施光度〔α〕２５Ｄ−１０．２°（ｃ０．３７メタノール）、赤外線吸収スペクトルγｍａｘ（ｃｍ−１）３４０８、２９２９、１６９５、１６３１、１５１４、紫外線吸収γｍａｘ  ３２８．０ｎｍ（logε４．５２）、２３９．０ｎｍ（logε４．４７）、１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲは表１３に示す。
【００４９】
【表１３】
2006069982.tif 000016
【実施例５】
【００５０】
前述の方法により得られた化合物１〜１３について、スーパーオキシドアニオンラジカル消去活性を電子スピン共鳴（ＥＳＲ）装置ＪＥＳ−ＦＲ３０（日本電子社製）を用いて測定した。側定方法は、５．５ｍＭジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）３５μＬ、９．２Ｍ  ５，５−ジエチル−１−ピロリン−Ｎ−オキシド（ＤＭＰＯ）１５μＬ、２．０ｍＭヒポキサンチン（ＨＰＸ）５０μＬを取り、ジエチルスルフォキシド（ＤＭＳＯ）に溶解させた試料５０μＬを添加した。続いて、０．４Ｕ／ｍＬキサンチンオキシダ−ゼ（ＸＯＤ）を添加し、数秒攪拌した後、試験溶液をＥＳＲ用扁平セルに移し、ＸＯＤを添加した４５秒後に測定を開始した。ＥＳＲの測定条件は、Micro Wave：９．４ＧＨＺ、Power：4mW、C.Fild：３３５．６５４ｍＴ、Sw.Wld:5mT、Sw.Time 1 min. ModWid: 0.1mT、Amplitude : 160, TimeC : 0.1sec, Accum : 1である。
【００５１】
抗酸化活性の強さは、スーパーオキシドラジカルを５０％消去する化合物濃度（ＩＣ５０値）が０．００１ｍＭ〜０．０１ｍＭをＡ、０．０１ｍＭ〜０．１ｍＭをＢ、０．１ｍＭ〜１．０ｍＭをＣ、１．０ｍＭ〜１０ｍＭをＤとして評価した。
【００５２】
その結果を表１４に示す。
【００５３】
【表１４】
2006069982.tif 000017
【００５４】
〔結果〕
表１４より、実施例１〜４より得られた化合物において、アスコルビン酸やカフェ酸等の既知の抗酸化物質と同等以上の強い抗酸化性を有することが明らかとなった。
【実施例６】
【００５５】
紫外線障害に対する作用
表皮細胞をHumedia KG２を用いて９６穴マイクロプレートにほぼ全面に広がるまで播種した。播種後、実施例１〜４で得られた化合物を培地に所定濃度になるように添加し、２４時間培養した。その後、東芝FL−SEランプを光源とするUVBを所定エネルギー細胞に照射した。アルミ箔にてカバーし、UVBを遮蔽したUVB未照射細胞をコントロールとした。照射後、さらに２４時間培養した。次に細胞を２０μｇ／ｍｌ  ニュートラルレッド（NR）含有KG２培地にて２時間培養した。生細胞が取り込んだNRの量を３０％エタノール含有０．１N  HCｌ溶液を用いて溶解した細胞溶解液を５５０ｎｍでの吸光度を測定することにより求めた。細胞の生存率はコントロール細胞の吸光度を１００とした百分率で表した。結果を表１５に示した。
【００５６】
【表１５】
2006069982.tif 000018
【００５７】
〔結果〕
表１５より、化合物１〜１３において、０．０１μｇ／ｍｌ〜１０００μｇ／ｍｌの範囲で、紫外線の照射による障害を抑制する作用を有することが明らかとなった。
【実施例７】
【００５８】
美容液
１．精製水                                            ５２．１５％  (重量％)
２．グリセリン                                        １０．０％
３．ショ糖脂肪酸エステル                                １．３％
４．カルボキシビニルポリマー                          １７．５％
５．アルギン酸ナトリウム                              １５．０％
６．モノラウリン酸ポリグリセリル                        １．０％
７．コラーゲン                                          １．０％
８．化合物７                                            ０．０５％
９．スクワラン                                          １．０％
１０．ミツロウ                                          １．０％
製法：１〜８の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。９、１０の油相成分を７５℃にて加熱溶解させ、両者を混合して予備乳化を行う。その後、ホモミキサーにて均一に乳化させ、冷却して美容液とした。
【実施例８】
【００５９】
クリーム
１．スクワラン                                        １０．０％  (重量％)
２．ステアリン酸                                        ２．０％
３．水素添加パーム油                                    ０．５％
４．親油性モノステアリン酸グリセリン                    ２．０％
５．グリセリン                                        １２．０％
６．パラオキシ安息香酸メチル                            ０．１％
７．ヒアルロン酸                                        ２．０％
８．アルギニン                                        １３．０％
９．精製水                                            ４３．３４％
１０．カルボシキビニルポリマー                        １５．０％
１１．化合物６                                          ０．０１％
製法：１〜４の油相成分を混合し、８０℃にて加熱溶解する。５〜１１の水相成分を７５℃にて加熱溶解させ、両者を混合して予備乳化を行う。その後、ホモミキサーにて均一に乳化させ、冷却してクリームとした。
【実施例９】
【００６０】
本発明の実施例７、８を併用して使用試験を実施した。評価項目はシワ、タルミ、シミ、クスミについて改善効果を自己評価した。比較例として、わさび成分を配合しない美容液とクリームをブラインドで使用した。
【００６１】
本美容液を用いて４０歳〜６０歳のパネラー２４名に１ケ月使用してもらい、使用前後の評価を改善した、やや改善した、変化なしの三段階で評価した。結果を表１６に示す。
【００６２】
【表１６】
2006069982.tif 000019
【００６３】
〔結果〕
表１６より明らかなように、わさび成分を配合した美容液とクリームを使用した場合、シワやタルミ、シミ、クスミといった皮膚老化に関する評価に改善が見られた。
【実施例１０】
【００６４】
実施例３により得た化合物を使用して以下配合で抗酸化性を有する錠剤型の健康食品を作った。
グラニュー糖                                  ８５部
濃縮果汁                                        ６．９９部          
クエン酸                                        ６部
香料                                            ２部
化合物１０                                      ０．０１部
【００６５】
本健康食品の抗酸化作用をESRにより測定した。測定方法は健康食品１０ｇ（５０粒）を乳鉢ですりつぶし、１０倍量の水に溶解させた。遠心分離を行った後、上清を測定試料として用いた。ＥＳＲの測定方法は実施例５と同様である。
【００６６】
〔結果〕
その結果、ＩＣ５０値として１２．８ｍＭの抗酸化力を示した。このことより、化合物１０は食品としての加工適性を有し、健康食品としての加工だけでなく、食品としての利用も可能である。
【実施例１１】
【００６７】
化合物２、３、５、１０を油脂に０．１％添加して分散させ、温度１８０℃で5分間加熱した後の油脂につき、基準油脂分析法２．4．１２〜１７に準拠して油脂の過酸化物価（ＰＯＶ）を測定した。結果を表１７に示した。
【００６８】
【表１７】
2006069982.tif 000020
【００６９】
化合物２、３、５、１０は明らかに油脂の酸化を抑制した。
【産業上の利用可能性】
【００７０】
本発明により、本わさびから強い抗酸化作用を有する化合物を提供することができ、食品や健康食品、食品添加物、化粧品等の幅広い用途への利用が可能となり、これらの分野における産業上の利用性が高い。