(57)【要約】【課題】本発明は、梅の抽出物を有効成分として含有するα−グルコシダーゼ阻害剤を提供する。【解決手段】梅の抽出物を有効成分として含有するα−グルコシダーゼ阻害剤等に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
梅の抽出物を有効成分として含有するα−グルコシダーゼ阻害剤。
【請求項２】
上記抽出物が、アルコール類、グリコール類、エーテル類、エステル類及びハロゲン化炭化水素類からなる群から選ばれる少なくとも一種の抽出溶媒を用いて抽出されたものである請求項１に記載のα−グルコシダーゼ阻害剤。
【請求項３】
梅の抽出物を有効成分として含有する糖尿病の予防薬又は治療薬。
【請求項４】
梅の抽出物を有効成分として含有する肥満の予防薬又は治療薬。
【請求項５】
梅の抽出物を有効成分として含有する食品添加剤。
【請求項６】
糖尿病の予防薬又は治療薬の製造のための梅の抽出物の使用。
【請求項７】
肥満の予防薬又は治療薬の製造のための梅の抽出物の使用。
【請求項８】
梅の抽出物を、糖尿病、肥満又はウィルス性感染症の患者に投与して、糖尿病、肥満又はウィルス性感染症を予防又は治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、梅の抽出物を有効成分とするα−グルコシダーゼ阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
α-グルコシダーゼは、小腸上皮上に局在する糖タンパク質プロセシング及びグリコーゲン分解に関与する２糖類分解酵素である。この酵素を特異的に阻害するα-グルコシダーゼ阻害剤は、糖質吸収を直接阻害することが可能となる。
【０００３】
また、糖生物学における最近の進歩により、免疫反応、腫瘍形成、腫瘍の転移、ウイルス性や細菌性感染症および神経細胞の分化等の様々な生物機能においてグルコシダーゼが重要な役割を果たすことが分かってきた。
【０００４】
そのため、α−グルコシダーゼ阻害剤は、例えば、糖尿病、肥満及びウィルス性感染症の治療薬として有用であることが報告されている（非特許文献１〜３）。
【０００５】
近年、ストレスや運動不足による肥満、糖尿病が増加しており、より安全かつ有効なα−グルコシダーゼ阻害剤が強く望まれている。
【０００６】
一方、梅の抽出物がα−グルコシダーゼ活性阻害作用を有することについて、これまでに報告例はない。
【非特許文献１】Eur. J. Clin. Invest. 1994 , 524, 3-10
【非特許文献２】Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000, 10, 1081-1084
【非特許文献３】FEBS Lett. 2001, 501, 84-86
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、梅の抽出物を有効成分として含有するα−グルコシダーゼ阻害剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の発明者らは、梅（Japanese apricot）のアルコール抽出物が極めて高いα−グルコシダーゼ活性阻害作用を有することを見出し、さらに検討を重ねて、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、梅の抽出物を有効成分として含有するα−グルコシダーゼ阻害剤を提供する。
【００１０】
項１．梅の抽出物を有効成分として含有するα−グルコシダーゼ阻害剤。
【００１１】
項２．上記抽出物が、アルコール類、グリコール類、エーテル類、エステル類及びハロゲン化炭化水素類からなる群から選ばれる少なくとも一種の抽出溶媒を用いて抽出されたものである項１に記載のα−グルコシダーゼ阻害剤。
【００１２】
項３．梅の抽出物を有効成分として含有する糖尿病の予防薬又は治療薬。
【００１３】
項４．梅の抽出物を有効成分として含有する肥満の予防薬又は治療薬。
【００１４】
項５．梅の抽出物を有効成分として含有する食品添加剤。
【００１５】
項６．糖尿病の予防薬又は治療薬の製造のための梅の抽出物の使用。
【００１６】
項７．肥満の予防薬又は治療薬の製造のための梅の抽出物の使用。
【００１７】
項８．梅の抽出物を、糖尿病、肥満又はウィルス性感染症の患者に投与して、糖尿病、肥満又はウィルス性感染症を予防又は治療する方法。
【００１８】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００１９】
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は、梅の抽出物を有効成分として含有している。ここで、抽出に用いる梅としては、梅の果実を意味し、青梅（未熟梅果実）、完熟梅はもとより、梅肉エキス、梅干し等の加工した状態のものでもよい。好ましくは青梅である。抽出する梅は、梅の果実部分そのままを用いても、種を除いた果肉だけを用いてもよい。
【００２０】
梅の抽出溶媒としては、特に限定的ではなく、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール等のグリコール類、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル等のエーテル類、酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類、エチルエーテル、プロピルエーテル、イソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル類、ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類等の極性有機溶媒；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の無極性有機溶媒；水等を用いることができる。これらの抽出溶媒は、一種単独又は二種以上混合して用いることができる。
【００２１】
これらの内で、水及び極性有機溶媒からなる群から選ばれた少なくとも一種の溶媒が好ましい。特に、アルコール類（メタノール、エタノール等）、グリコール類、エーテル類、エステル類、ハロゲン化炭化水素類又は水をそれぞれ単独で用いるか、或いは、これらの混合溶液を用いる場合には、取り扱いが容易であり、しかも優れたα−グルコシダーゼ阻害活性を有する抽出物を得ることができる点で好ましい。この場合、特に抽出物を食品添加剤や医薬用途で用いる場合には、アルコールとしては、エタノールを用いることが好ましい。
【００２２】
溶媒を混合して用いる場合には、各溶媒の混合比は、溶媒の種類に応じて適宜調整すればよいが、例えば、水とアルコールとの混合溶液として用いる場合には、水：アルコール（重量比）＝１：１００〜１００：１程度とすれば良く、１：５０〜５０：１程度とすることが好ましく、ほぼ等重量で用いることがより好ましい。
【００２３】
抽出方法については、特に限定されるものではなく、梅或いはその粉砕物に溶媒を加えた後、抽出物のα−グルコシダーゼ阻害活性を失活させない程度に加温加熱する加熱抽出法や、超臨界抽出法等を適宜適用できる。また、一定量の溶媒に梅を浸漬してバッチ処理する浸漬抽出法や連続的に溶媒を送り続ける連続抽出法等、公知の種々の抽出法を適用できる。
【００２４】
具体的な抽出方法の一例を挙げると、例えば、梅の乾燥重量に対して、０．５〜５重量倍程度、好ましくは、０．８〜１．２重量倍程度の抽出溶媒を加えて浸漬して加熱し、３０〜６０分間程度溶媒を還流させることにより、α−グルコシダーゼ阻害活性を有する成分を抽出することができる。或いは、梅の乾燥重量に対して０．５〜５重量倍程度、好ましくは、０．８〜１．２重量倍程度の抽出溶媒を加えて浸漬し、室温で１〜１４日間程度放置するか、或いは４０〜６０℃程度に加熱して１０〜２０時間程度加熱することにより有効成分を抽出することも可能である、
上記した方法によって梅から抽出物を得た後、通常、濾過、遠心分離等の常法によって残渣と固液分離することによって、抽出液を得ることができる。本発明では、得られた抽出液をそのままα−グルコシダーゼ阻害剤として用いることが可能であるが、活性が低い場合もあるため、適宜濃縮又は溶媒を留去して、エキス状や粉末状として用いることもできる。更に、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ジエチルエーテル、クロロホルム、塩化メチレン、酢酸エチル、トルエン、ヘキサン、ベンゼン等の有機溶媒を１種又は２種以上用いた溶媒分画操作により得られた抽出画分から、活性画分を分取したものをα−グルコシダーゼ阻害剤として用いることも可能である。
【００２５】
更に、必要に応じて、アルミナカラムクロマトグラフィーやシリカゲルクロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等の適当な分離精製手段を１種若しくは２種以上組み合わせて、α−グルコシダーゼ阻害活性のある画分を取り出して、α−グルコシダーゼ阻害剤とすることができる。これにより、少量の摂取で優れた活性を発揮させることができる。
【００２６】
好ましい抽出方法としては、梅をアルコール（例、メタノール、エタノール）中で、３〜２４時間程度還流し、アルコールを濃縮すればよい。必要に応じて、無極性有機溶媒（ヘキサン等）、ハロゲン化炭化水素類（ジクロロメタン等）、エーテル類（ジエチルエーテル等）、エステル類（酢酸エチル等）、アルコール類（ブタノール等）、水などで分画してもよく、この場合、ハロゲン化炭化水素類の分画が高いα−グルコシダーゼ阻害活性を有している。さらに、必要に応じて、カラムクロマトグラフィーで分画すれば、より高活性な抽出成分を得ることもできる。
【００２７】
上述の梅の抽出物は、優れたα−グルコシダーゼ阻害作用を有し、人及び動物に対するα−グルコシダーゼ阻害剤として用いることができる。特に、α−グルコシダーゼが関与する疾患、例えば、糖尿病、肥満、ウィルス性感染症等の予防薬又は治療薬として有効に利用することができる。しかも、天然の或いは食用に供される梅からの抽出物であるため、人体に対し安全性が高いという特徴をも有する。
【００２８】
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤の使用形態については、特に限定はなく、経口、非経口の何れも可能である。
【００２９】
経口投与のための固形製剤としては、例えば、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤等が挙げられる。この固形製剤は、例えば、梅の抽出物に少なくとも１種の不活性希釈剤（例えば、スクロース、乳糖、でんぷん等）を混和して調製することができる。この製剤はまた、通常の製剤化において、不活性希釈剤以外に滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム等）等を含んでいても良い。カプセル剤、錠剤、又は丸剤の場合には、緩衝剤を含んでいても良い。これらの固形製剤には、さらに腸溶解性被膜を施すこともできる。
【００３０】
経口投与のための液体製剤としては、水を含む製薬上許容しうる乳剤、溶液、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等が挙げられ、この液体製剤には、当業者間で普通に使用される不活性希釈剤が含まれていても良い。かかる不活性希釈剤に加えて、補助剤（例えば、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味剤、調味剤、香味剤等）等を配合することができる。経直腸投与のための製剤は、好ましくは梅の抽出物に加えて、賦形剤（例えば、カカオ脂、坐剤ワックス等）等を含んでいても良い。
【００３１】
また、本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤を人体に投与する場合の投与方法及び投与量の一例を示すと次の通りである。投与は、種々の方法で行うことができ、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤等による経口投与とすることができる。投与量については、経口投与の場合には、通常、成人において、有効成分（梅の抽出物）量として０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ程度が適当であり、これを１日１回〜数回に分けて投与すればよい。経口投与剤は、通常の製造方法に従って製造することができる。
【００３２】
また、本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤を経口的に摂取する場合には、食品添加剤として食品に添加して摂取することもできる。食品添加剤として用いる場合には、その添加量については、特に限定的ではなく、食品の種類に応じ適宜決めればよい。例えば、清涼飲料、炭酸飲料などの液体食品や菓子類やその他の各種食品等の固形食品に添加して用いることができるが、これらの場合の添加量については、食品の種類に応じて適宜決めればよく、一例としては、上記した抽出物の乾燥重量として、含有量が０．００５重量％〜５重量％程度の範囲内となるように添加すればよい。
【００３３】
また、近年ペットとして飼育される動物（イヌ、ネコ等）も肥満、糖尿病等が増加の傾向にあるが、これらの動物の餌に本願のα−グルコシダーゼ阻害剤を添加することにより、或いは動物にα−グルコシダーゼ阻害剤を薬剤として投与することにより肥満、糖尿病等の予防又は治療が可能となる。
【発明の効果】
【００３４】
本発明では、梅の抽出物が高いα−グルコシダーゼ阻害活性を有することを見出し、これに基づき、梅の抽出物が新規なα−グルコシダーゼ阻害剤として有用であることが明らかとなった。本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は、糖尿病、肥満、ウィルス性感染症等の予防、治療等に有効に利用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３５】
以下、本発明の具体例（実施例）を示すが、これにより本発明が限定されるものではない。
【００３６】
実施例１
（１）α−グルコシダーゼ阻害活性の評価
梅からの抽出物のα−グルコシダーゼ阻害活性の評価は、次のようにして行った。α−グルコシダーゼ（100U/1.2mg）の酵素溶液を蒸留水に溶かし、5 units/mlとし、試料をDMSOに溶解する。1.0Mマルトース溶液を水に溶かし、0.1Mマレイン酸塩バッファ（pH7, マレイン酸1.16gを1N NaOH溶液19.1mlに溶解し、水で100mlに希釈したもの）を調整する。グルコース オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ及び４−アミノアンチピリン0.51μmol/lを含む着色剤を、バッファ溶液75ml（30mMのリン酸塩バッファpH7.4とフェノール10.6μmol/l）に溶解する。
【００３７】
酵素溶液（20μl）、試料（4.0μg/20μl、DMSO溶液）、1.0Mマルトース溶液（500μl）、及び0.1Mマレイン酸塩バッファ（1500μl）を試験管に加えて、37℃で60分インキュベートする。その後、酵素反応を中断するために、素早く90℃にし3分加熱する。
【００３８】
グルコースの確認のため、その溶液20μlを着色剤（3.0ml）と混合し、37℃で20分インキュベートする。酵素活性は、505nmの吸収を測定することにより、定量化する。α−グルコシダーゼ活性は、下記式（I）により得られる。
【００３９】
α−グルコシダーゼ活性（％）＝［（Ｂ−Ｃ）／Ａ］×１００    （I）
Ａ：ポジティブコントロールの吸収（酵素溶液、マレイン酸塩バッファ、DMSO及びマルトース溶液）
Ｂ：試料の吸収（酵素溶液、マレイン酸塩バッファ、試料溶液及びマルトース溶液）
Ｃ：ネガティブコントロール（水、マレイン酸塩バッファ、DMSO及びマルトース溶液）
（２）梅の抽出
梅（50ｋｇ）をエタノールで１２時間還流し、エタノール抽出物（1387ｇ）を得た。この抽出物を水に懸濁させ、ヘキサン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、ブタノール、及び水でそれぞれ抽出した。各画分を減圧下濃縮し、ヘキサン分画3g、ジエチルエーテル分画27g、酢酸エチル分画168g、ブタノール分画504g、及び水分画685gを得た。各分画のα−グルコシダーゼ阻害活性は、上記（１）に従って評価した。これによれば、ジエチルエーテル分画が、高いα−グルコシダーゼ阻害活性を示した（図１）。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】梅抽出画分におけるα−グルコシダーゼ阻害活性を示すグラフである。
【図１】
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