(57)【要約】【課題】塩基性アミノ酸とトリフルオロ酢酸エステルを水性液中で反応させてＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を製造する方法において、高品質、高収率かつ経済的にＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を商業的規模で有利に製造する方法を提供する。【解決手段】仕込み溶媒の容量に対する塩基性アミノ酸の総重量が約５〜４０％（ｗ／ｖ）になる濃度にて、塩基性アミノ酸と塩基性ｐＨ調整剤を含む塩基性水性液に、該水性液のｐＨを１０．６〜１１．４、温度を２０℃以下に維持しながらトリフルオロ酢酸エステルを逐次添加して反応させ、反応後の水性液よりＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を晶出させ、採取することを特徴とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
塩基性アミノ酸とトリフルオロ酢酸エステルよりＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を製造する方法において、仕込み溶媒の容量に対する塩基性アミノ酸の総重量が約５〜４０％（ｗ／ｖ）になる濃度にて、塩基性アミノ酸と塩基性ｐＨ調整剤を含む塩基性水性液に、該水性液のｐＨを１０．６〜１１．４、温度を２０℃以下に維持しながらトリフルオロ酢酸エステルを逐次添加して反応させ、反応後の水性液よりＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を晶出させ、採取することを特徴とするＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の製造法。
【請求項２】
トリフルオロ酢酸エステルの前記塩基性水性液への逐次添加を、撹拌強度１／１０ｋＷ／ｍ3以上で撹拌しつつ行なう請求項１記載の製造法。
【請求項３】
トリフルオロ酢酸エステルの逐次添加を、１／４〜８時間かけて行なう請求項１または２記載の製造法。
【請求項４】
トリフルオロ酢酸エステルの添加量が塩基性アミノ酸に対しモル比で０．５〜２である請求項１ないし３のいずれかに記載の製造法。  
【請求項５】
塩基性アミノ酸がリジンである請求項１ないし４のいずれかに記載の製造法。
【請求項６】
Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の溶解した水性液から、中性または酸性下、温度４０℃以上で、ｐＨをＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の等電点±３の範囲に調節しつつ、結晶を成長させることを特徴とするＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を水性液から晶出させ、採取する方法。
【請求項７】
Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の結晶の成長を、撹拌強度０．０１〜０．５ｋＷ／ｍ3で撹拌しつつ行なう請求項６記載の方法。
【請求項８】
Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の結晶の成長において、最終的にｐＨを５〜６とする請求項６または７記載の方法。
【請求項９】
Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の結晶の成長後、２０℃以下に冷却してさらに晶出させる請求項６ないし８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の結晶の採取に際し、該結晶をスラリーから分離し、引き続き、湿結晶に含まれる濾液を炭素数１〜３のアルコールを用いて洗浄除去する請求項６ないし９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
水性液が塩基性水性液である請求項６ないし１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
塩基性水性液のｐＨが９．９以上である請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
塩基性水性液のｐＨが１０．８〜１１．２である請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の晶出に際して、水溶液中に無機塩を共存させる請求項６ないし１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
無機塩が塩化ナトリウムである請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
塩化ナトリウムの濃度が１０％（W／W）またはそれ以上である請求項１５記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、塩基性アミノ酸の側鎖アミノ基（Ｎω）にのみ保護基としてのトリフルオロアセチル基を選択的に導入してＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を製造する方法に関し、とりわけ生理活性ペプチドなどの合成原料として有用なオルニチン、リジンおよびホモリジンのＮω−トリフルオロアセチル誘導体を高品質、高収率かつ経済的に商業的規模で有利に製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、塩基性アミノ酸の側鎖アミノ基（Ｎω）にのみ保護基としてのトリフルオロアセチル基を選択的に導入してＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を製造する方法、とりわけ生理活性ペプチドなどの合成原料として有用なリジンおよびオルニチンのＮω−トリフルオロアセチル誘導体を製造する方法としては、特開昭６２−２２６９５２号公報に記載されるように、次の反応式で示される、トリフルオロ酢酸エステルのトランストリフルオロアセチレーションを利用する方法が知られている。
【０００３】
【化１】
2006052233.tif 000002
【０００４】
このトランストリフルオロアセチレーションを利用する方法においては、塩基性アミノ酸とトリフルオロ酢酸エステルを水溶液中で、激しく撹拌しつつ反応させ、反応の進行に伴って析出してきたＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を採取するいわゆる反応晶析法が前記特開昭６２−２２６９５２号公報に示されている。
【０００５】
前記のトランストリフルオロアセチレーションを利用する方法では、反応により生成してくるＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸が次第にスラリー状（ホイップ状またはケーキ状）に析出してくる。このため、反応時の撹拌効率が悪くなり、充分な混合ができずに収量が低下するといった問題がある。
【０００６】
また、反応の進行に伴い生成物が析出し反応液の液性状がホイップ状またはケーキ状となってくるので、激しく撹拌して充分な撹拌効率をうるためには、特殊で高価な反応設備を必要とするとか、反応濃度を高くできないなどの問題がある。
【０００７】
さらに、Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の結晶を採取する方法としては、前記特開昭６２−２２６９５２号公報では、反応後析出したＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の結晶を引き続き採取する反応晶析による採取方法が示されているが、この場合スラリーの流動性がよくなく、缶からの払い出しが非常に難しい、濾過性（結晶分離性）、洗浄性および脱液性が大きく低下し、結晶分離に長時間かかる、湿ケーキ（湿結晶）の乾燥においても収縮性やダマ形成などのために長時間かかるなどの操作性や生産性の面での問題がある。さらに、反応〜晶析時に生成した塩や未反応の塩基性アミノ酸などの不純物を含有する低品質のＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸がえられるため、高品質化のためには再結晶を必要とするなど、生産性、収率や品質の面での問題もある。
【０００８】
反応濃度や晶析濃度を低くすることにより、前記の問題点の一部を改善する（すなわち、ホイップ化やケーキ化を回避して、撹拌効率や反応混合物の流動性を改善する）方法も考えられるが、商業的規模での生産を可能とするためには反応濃度をかなり低くする必要があり、したがって、収量や生産性がいちじるしく低下する、大容量の反応設備が必要になるといった別の問題が生ずる。
【０００９】
前記特開昭６２−２２６９５２号公報の実施例１では、Ｌ−リジンに対して１．５倍モルのトリフルオロ酢酸エチルを反応させてＮω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンを取得する高濃度反応方法が開示されているが、取得収率はＬ−リジンに対して５８ｍｏｌ％、トリフルオロ酢酸エチルに対しては３９ｍｏｌ％であり、濾液および洗浄液の濃縮による二番晶の回収分を含めた場合Ｌ−リジンに対して７７ｍｏｌ％、トリフルオロ酢酸エチルに対しては５２ｍｏｌ％である。このとき、えられるＮω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンは結晶性状が悪いため、生産性が劣り、品質においても無機塩などの混入による品質低下の問題が認められる。高品質のＮω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンを取得するために、再結晶を実施した場合には、総合収率がＬ−リジンに対して５５ｍｏｌ％、トリフルオロ酢酸エチルに対してはわずか３６ｍｏｌ％である。前記特開昭６２−２２６９５２号公報に示された方法において、Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの収量を高めるには、高価なトリフルオロ酢酸エステルを大過剰量使用する必要があり、その場合、含フッ素廃水処理面での負荷が高くなるといった問題もある。
【００１０】
前述の諸問題は、とくに商業的規模での製造法としてＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を大量に取り扱う上では大きな問題となる。
【００１１】
【特許文献１】特開昭６２−２２６９５２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の目的は、塩基性アミノ酸とトリフルオロ酢酸エステルを水性液中で反応させてＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を製造する方法において、前記の問題を克服し、高品質、高収率かつ経済的にＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を商業的規模で有利に製造する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、前記の現状に鑑み、前記の課題を解決するために鋭意研究を行なった結果、塩基性アミノ酸とトリフルオロ酢酸エステルからＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を製造する方法において、塩基性アミノ酸と塩基性ｐＨ調整剤とを含む水性液中に特定の条件下トリフルオロ酢酸エステルを添加して反応を行なえば、高反応濃度でも、スラリー化（ホイップ化またはケーキ化）が抑制され、良好な液性状の反応混合物をうることができ、したがって、撹拌効率面での負荷を大幅に軽減でき、また、高い反応収率を達成できること、さらに、えられた反応混合物を中和または酸性化し、加温状態で良好な結晶を成長させることで、ホイップ化またはケーキ化が抑制され、良好な流動性のスラリーをうることができるとともに、濾過性（結晶分離性）、洗浄性、脱液性および乾燥性のよい良好な結晶性状で高純度のＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を収率よく製造できることを見出し、本発明を完成させた。
【００１４】
すなわち、本発明は、（１）塩基性アミノ酸とトリフルオロ酢酸エステルよりＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を製造する方法において、仕込み溶媒の量に対する塩基性アミノ酸の総重量が約５〜４０％（ｗ／ｖ）になる濃度にて、塩基性アミノ酸と塩基性ｐＨ調整剤を含む塩基性水性液に、該水性液のｐＨを１０．６〜１１．４、温度を２０℃以下に維持しながらトリフルオロ酢酸エステルを逐次添加して反応させ、反応後の水性液よりＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を晶出させ、採取することを特徴とするＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の製造法に関する。
【００１５】
さらに本発明は、（２）トリフルオロ酢酸エステルの前記塩基性水性液への逐次添加を、撹拌強度１／１０ｋＷ／ｍ3以上で撹拌しつつ行なう前記（１）項記載の製造法に関する。
【００１６】
さらに本発明は、（３）トリフルオロ酢酸エステルの逐次添加を、１／４〜８時間かけて行なう前記（１）または（２）項記載の製造法に関する。
【００１７】
さらに本発明は、（４）トリフルオロ酢酸エステルの添加量が塩基性アミノ酸に対しモル比で０．５〜２である前記（１）、（２）または（３）項記載の製造法に関する。
【００１８】
さらに本発明は、（５）Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の溶解した水性液を、中性または酸性下で、温度を４０℃以上に保ちつつ、ｐＨをＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の等電点±３に調整することによりＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の結晶を成長させる前記（１）、（２）、（３）または（４）項記載の製造法に関する。
【００１９】
さらに本発明は、（６）Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の結晶の成長を、撹拌強度０．０１〜０．５ｋＷ／ｍ3で撹拌しつつ行なう前記（５）項記載の製造法に関する。
【００２０】
さらに本発明は、（７）Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の結晶の成長後、２０℃以下に冷却してさらに晶出させる前記（５）または（６）項記載の製造法に関する。
【００２１】
さらに本発明は、（８）塩基性アミノ酸がリジンである前記（１）ないし（７）項のいずれかに記載の製造法に関する。
【００２２】
さらに本発明は、（９）Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の溶解した水性液から、中性または酸性下、温度４０℃以上で、ｐＨをＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の等電点±３の範囲に調節しつつ、結晶を成長させることを特徴とするＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を水性液から晶出させ、採取する方法に関する。
【００２３】
さらに本発明は、（１０）Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の結晶の成長を、撹拌強度０．０１〜０．５ｋＷ／ｍ3で撹拌しつつ行なう前記（９）項記載の方法に関する。
【００２４】
さらに本発明は、（１１）Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の結晶の成長において、最終的にｐＨを５〜６とする前記（９）または（１０）項記載の方法に関する。
【００２５】
さらに本発明は、（１２）Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の結晶の成長後、２０℃以下に冷却してさらに晶出させる前記（９）、（１０）または（１１）項記載の方法に関する。
【００２６】
さらに本発明は、（１３）Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の結晶の採取に際し、該結晶をスラリーから分離し、引き続き、湿結晶に含まれる濾液を炭素数１〜３のアルコールを用いて洗浄除去する前記（９）、（１０）、（１１）または（１２）項記載の方法に関する。
【００２７】
さらに本発明は、（１４）Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の溶解した水性液が、塩基性アミノ酸と塩基性ｐＨ調整剤を含む塩基性水性液に、該塩基性水性液のｐＨを１０．６〜１１．４、温度を２０℃以下に維持しながら、トリフルオロ酢酸エステルを逐次添加して反応させた反応混合物である前記（９）、（１０）、（１１）、（１２）または（１３）項記載の方法に関する。
【００２８】
さらに本発明は、（１５）トリフルオロ酢酸エステルの前記塩基性水性液への逐次添加を、１／４〜８時間かけて行なう前記（１４）項記載の方法に関する。
【００２９】
さらに本発明は、（１６）トリフルオロ酢酸エステルの前記塩基性水性液への逐次添加を、撹拌強度１／１０ｋＷ／ｍ3以上で撹拌しつつ行なう前記（１４）または（１５）項記載の方法に関する。
【００３０】
さらに本発明は、（１７）トリフルオロ酢酸エステルの添加量が塩基性アミノ酸に対しモル比で０．５〜２である前記（１４）、（１５）または（１６）項記載の方法に関する。
【００３１】
さらに本発明は、（１８）塩基性アミノ酸がリジンである前記（９）ないし（１７）項のいずれかに記載の方法に関する。
【発明の効果】
【００３２】
本発明により、高品質、高収率かつ経済的にＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を商業的規模で有利に製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】
本発明においては、トリフルオロ酢酸エステルと塩基性アミノ酸との反応によりＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸が製造されるが、その反応の際、塩基性アミノ酸と塩基性ｐＨ調整剤を含む塩基性水性液中にトリフルオロ酢酸エステルが添加される。
【００３４】
前記トリフルオロ酢酸エステルとしては、たとえば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルなど炭素数１〜８のアルキルエステル、ベンジル、フェネチルなど炭素数７〜１２のアラルキルエステル、またはフェニル、ｐ−ニトロフェニルなど炭素数６〜１０のアリールエステルもしくは置換アリールエステルなど種々使用できるが、操作性などの点で炭素数２〜４のアルキルエステルの使用が好ましく、とりわけ、トリフルオロ酢酸エチルが好ましく用いられる。これらのトリフルオロ酢酸エステルは単独で用いてもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００３５】
前記塩基性アミノ酸は、下記一般式（Ｉ）：
【００３６】
【化２】
2006052233.tif 000003
【００３７】
（式中、ｎは１〜６の整数を表わす）で示される。好ましい代表的なものとしては、オルニチン（ｎ＝３）、リジン（ｎ＝４）、ホモリジン（ｎ＝５）があげられ、とくにリジンが好ましく用いられる。これらはＬ体、Ｄ体またはＤＬ体として使用できるが、産業上の利用面からＬ体またはＤ体の光学活性体が好ましく使用される。また、前記塩基性アミノ酸は、取扱いやすさ、晶析時の塩析効果への寄与などの点から好ましくは、たとえばＬ−リジン−塩酸塩などの塩酸塩のような塩基性アミノ酸の塩（とくに好ましくは強酸の塩）として使用される。
【００３８】
前記塩基性ｐＨ調整剤としては無機塩基があげられる。前記無機塩基としては、アルカリ金属水酸化物、アルカリ金属炭酸塩などがあげられる。前記アルカリ金属水酸化物としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムがあげられる。前記アルカリ金属炭酸塩としては、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸リチウムなどがあげられる。扱いやすさ、中和晶析時に生成する塩の塩析効果による晶出量の増大、反応濃度向上などの総合的観点から、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムが好ましく、水酸化ナトリウムがとくに好ましい。前記無機塩基は、たとえば、約２〜２０Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（取扱いやすさ、収率および反応濃度向上の点から、約９〜１０Ｎの水酸化ナトリウム水溶液がとくに好ましく用いられる）などのように、水溶液として使用するのが操作性などの点から好ましい。前記塩基性ｐＨ調整剤は、単独で用いてもよく、２種以上併用してもよい。また、塩基性ｐＨ調整剤はこれらに限定されず、必要ならば、たとえば、トリエチルアミン、ピリジンなどの有機塩基を使用することもできる。
【００３９】
前記塩基性ｐＨ調整剤の使用量は、塩基性水性液のｐＨを１０．６〜１１．４にするための必要量である。
【００４０】
前記塩基性水性液の溶媒としては、水、水と有機溶剤との混合物があげられる。水のみを溶媒として用いることは、原料であるオルニチン、リジン、ホモリジンなどの塩基性アミノ酸や生成物であるオルニチン、リジン、ホモリジンのＮω−トリフルオロアセチル誘導体などのＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の塩などの溶解度を高く保って高濃度反応を実施できる、晶析時に塩（たとえば、塩化ナトリウム）溶液中での塩析効果による晶出量の増大および高濃度晶析を実施できる、有害な有機溶剤を用いず、廃水処理を含む後処理が容易である、安価であるなどの点から好ましい。
【００４１】
必要に応じ、水と有機溶剤との混合物を用いてもよく、水と有機溶剤との混合物を溶媒として使用するばあい、系は水と混和性の有機溶剤と水とが均一に混合する系であってもよく、また、水と混和しない有機溶剤と水との不均一な２層系であってもよい。
【００４２】
前記有機溶剤としては、たとえば、ジエチルエーテルやテトラヒドロフランなどのエーテル類、塩化メチレンやジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類、トルエン、メチルシクロヘキサン、ｎ−ヘキサンなどの炭化水素類、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどのアルコール類、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチルなどの酢酸エステル類、アセトンやメチルエチルケトンなどのケトン類、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリドンなどの非プロトン性極性溶剤などがあげられるが、これらに限定されるものではない。前記有機溶剤としては、一般に、反応速度向上などの点から、水と混和性の有機溶剤の使用が好ましい。
【００４３】
前記塩基性水性液とは、溶媒である水または水と有機溶剤との混合物に、塩基性アミノ酸とともに加える塩基性ｐＨ調整剤によって塩基性にされた水性液のことであり、特別に水性液を塩基性にするために塩基を加える必要はないが、反応期間中のｐＨの調整を行ないやすくするために、リン酸水素二ナトリウム、塩酸、ホウ酸などを添加して緩衝性のある塩基性水性液にしたものを使用することもできる。また、前記塩基性水性液には、界面活性剤や相間移動触媒などを必要に応じて添加してもよい。
【００４４】
本発明において、トリフルオロ酢酸エステルと塩基性アミノ酸との反応は、反応混合物のｐＨを１０．６〜１１．４、収率、品質の向上などの点から好ましくは１０．８〜１１．２に維持しながら行なう。適切なｐＨ域における反応の実施は、本発明における重要なファクターである。反応ｐＨが１０．６より小さくなると、生成物が析出し、次第に液性状がスラリー状（ホイップ状、さらにはケーキ状）となって、反応時の撹拌効率が悪くなり、充分な混合ができず、反応収率が低下するといった傾向がある。また、反応ｐＨが１１．４より大きくなると、生成物の析出は抑えられるものの、原料のトリフルオロ酢酸エステルや生成物のアルカリ加水分解（脱トリフルオロアセチル化）が進みやすく、反応収率が低下する傾向がある。本発明者らの検討の結果、反応生成率、ω／α位の反応選択性、生成物の安定性、反応混合物の液性状や液量少量化などの総合的観点から選択されるべきｐＨはおよそ１１であることがわかった。
【００４５】
従来、代表的な塩基性アミノ酸であるリジンまたはオルニチンの等電点（ｐＩ）はともに９．７であることが知られており（日本化学会編、「改訂４版  化学便覧  基礎編Ｉ」、１９９３年、丸善、４３１〜４３４頁参照）、したがって、α位のアミノ基を選択的にプロトン化し、ω位のアミノ基を未解離の状態に保つことにより、ω／α位の選択性を高めるためには、ともにｐＨ９．７付近が好ましいｐＨ領域と考えられる。なお、特開昭６２−２２６９５２号公報には、ω／α位の選択性向上のためにはｐＨ８〜１１が好ましいとの記載、一方、ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．）、第５３巻、８３６〜８４４頁、１９８８年には、ω／α位の選択性を高めるためにはｐＨ１１より高いｐＨ領域が好ましいとの記載があるものの、反応生成率、生成物の安定性、反応混合物の液性状や液量少量化、反応濃度を高くするなどの観点からの好ましいｐＨは報告されていない。
【００４６】
塩基性アミノ酸に対するトリフルオロ酢酸エステルのモル比は、通常０．５〜２であるが、本発明の条件によれば、えられる生成物の品質、廃水処理面の負荷、経済性などの観点から最も好ましいほぼ１（通常０．７〜１．２、品質や経済性の点から好ましくは０．８〜１．１、とくに好ましくは０．９〜１．０）に近いモル比で使用することができる。その結果、トリフルオロ酢酸エステル当たりの収率が上がる。
【００４７】
塩基性アミノ酸は最初から全量加えておくのが、高収率を確保する、操作性を簡便にするなどの点から好ましい。
【００４８】
前記トリフルオロ酢酸エステルは、廃水処理の容易さ、反応濃度向上などの点から、そのまま単独で添加するのが好ましい。必要に応じ、たとえば、前記の有機溶剤から好適に選択される反応に悪影響のない液体（たとえば、テトラヒドロフラン、アルコール類）に溶かして添加することもできる。トリフルオロ酢酸エステルまたはその溶液は、商業的規模での高収率を達成するためには、添加してから時間をかけて反応させるのは好ましくなく、逐次添加しつつ反応させるのが好ましい。反応温度などにもよるが、通常、約１／４〜８時間、好ましくは約１／３〜６時間、とくに約１／２〜３時間（約１時間程度が最も好ましい）で全量が添加される程度に逐次添加しつつ反応させるのが収率、品質の向上の点から好ましい。逐次添加する方法としては、一定速度で添加する方法、分割添加する方法などを採用でき、とくに、収率、品質の向上、操作性などの点から、一定速度で添加する方法が好ましい。
【００４９】
反応温度は、通常、約２０℃以下、収率、品質の向上の点から好ましくは約１０℃以下、とくに好ましくは約５℃以下が採用される。下限は反応溶液が氷結しない温度である。反応温度が高すぎると、原料のトリフルオロ酢酸エステルや生成物のアルカリ加水分解（脱トリフルオロアセチル化）が起こりやすくなり、収率が低下する。
【００５０】
反応に際しては、反応試剤が適切に分散されるように撹拌、混合するのが好ましいが、本発明の条件によれば、液性状のよい反応混合物がえられるので、スラリー状（ホイップ状またはケーキ状）の反応混合物を撹拌混合するほどの強撹拌は必要ない。撹拌強度約１／１０ｋＷ／ｍ3以上、収率、品質の向上の点から好ましくは約１／３ｋＷ／ｍ3以上、とくに好ましくは約１／２ｋＷ／ｍ3以上で実施される。上限としては実用面から約５ｋＷ／ｍ3が好ましい。通常、約１／３〜３ｋＷ／ｍ3の範囲内で好ましく選択できる。
【００５１】
仕込濃度は、仕込溶媒の容量に対する塩基性アミノ酸の総重量として、約５〜４０％（ｗ／ｖ）程度であり、生産性の点から、通常、約１０％（ｗ／ｖ）以上、好ましくは約１５％（ｗ／ｖ）以上である。これにより、たとえば、Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの製造を例にあげれば、反応混合物に対して生成物濃度約１０％（ｗ／ｗ）またはそれ以上の流動性の良好な高濃度反応混合物をうることができる。このような流動性の良好な高濃度反応混合物の取得は、操作性向上、液量の少量化などの生産性向上はもちろんのこと、晶析収量の増大に寄与する。
【００５２】
なお、前記のＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の製造における反応収率（生成率）は、約７５ｍｏｌ％以上、好ましくは約８０ｍｏｌ％以上が期待できる。
【００５３】
本発明の反応方法は、不活性雰囲気（たとえば、チッ素またはアルゴンなど）でも実施できる。
【００５４】
本発明により、塩基性アミノ酸に対して大過剰量のトリフルオロ酢酸エステルを用いることなく、反応生成率よく、ω選択性にすぐれ、操作性やそののちの結晶化に適した液性状で高濃度（好ましくは、約０．５ｍｏｌ／ｌ以上）のＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の反応混合水性液がえられる（特公平６−１５５１４号公報の例３を比較参照）。
【００５５】
つぎに、反応後の水性液からのＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の晶出、採取プロセスについて説明する。
【００５６】
反応後の水性液を中和もしくは酸性化する。Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の安定な（すなわち、脱トリフルオロアセチル化を抑制できる）ｐＨ約８以下、好ましくはｐＨ約７以下に中和または酸性化する。
【００５７】
酸性化または中和に使用する酸は、実用性の点から強酸が好ましい。通常、塩酸や硫酸などの鉱酸が好ましい。とくに塩酸が好ましく用いられる（濃塩酸が最も好ましい）。使用する酸は、必ずしもこれらに限定されるものではない。これらは単独で用いてもよく、２種以上併用してもよい。酸の使用量は、Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸結晶の採取にあたって好ましくない（不要な）塩基成分の中和量またはその過剰量である。
【００５８】
つぎに、この水性液中で、以下に述べるように４０℃以上に温度を保ちつつ、ｐＨをＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の等電点付近、すなわち、等電点±３付近に調節しながら、結晶を成長させる。
【００５９】
粒径が大きく、結晶性状の良好な高純度の結晶をうるためには、４０℃以上、通常４０〜１００℃、操作性、より好ましい結晶の取得などの点から好ましくは５０〜９０℃、とくに好ましくは６０〜８０℃に維持しながら結晶を成長させる。
【００６０】
前記の結晶成長は、通常、約１／３時間以上、好ましくは１〜３時間以上かけてゆっくり行なうことにより、より好ましい流動性のよいスラリーが取得できる。
【００６１】
このあいだ、水性液のｐＨが等電点付近のばあいには、そのｐＨを維持しつつ、また、等電点よりも酸性側にあるばあいには、ｐＨを塩基で等電点付近にゆっくり調整しつつ行なう。Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の等電点は、各々多少異なるが、通常ｐＨ約４〜７付近、晶出量増大の点から好ましくは約５〜６付近である。ｐＨ５．５±０．５付近が最も好ましい。このｐＨ域において、晶出量が最大になる。
【００６２】
ｐＨの調節に使用する塩基としては、無機塩基が好ましい。通常、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムなどのアルカリ金属水酸化物、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸リチウムなどのアルカリ金属炭酸塩または炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素リチウムなどのアルカリ金属炭酸水素塩、水酸化アンモニウムなどが用いられる。これらのうちでは、実用性の点で水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムが好ましく、水酸化ナトリウムがとくに好ましい。前記塩基は、たとえば、約２〜２０Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（約９〜１０Ｎの水酸化ナトリウム水溶液がとくに好ましく用いられる）などのように、水溶液として使用するのが操作性などの点から好ましい。使用する塩基は、必ずしもこれらに限定されるものではない。これらは単独で用いてもよく、２種以上併用してもよい。
【００６３】
反応〜晶析における好ましい酸成分および塩基成分の使用は、廃棄しやすい無機塩を生成させるとともに、生成した塩の塩析効果によるＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の収量を増大する上で重要である。塩析効果においては無機塩、とくに塩化ナトリウムがすぐれている。
【００６４】
中和または酸性化に際して、別法としてイオン交換樹脂（ダウエックス５０（Ｄｏｗｅｘ５０）（Ｈ+型）、ダウ  ケミカル社（Ｄｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）製など）を使用することができる。Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の反応混合物をイオン交換樹脂と接触させ、常法にしたがい、最終的にえられる溶液を濃縮することによりＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を晶出させることができる。
【００６５】
結晶成長は、結晶性状、スラリー性状の点から緩やかに撹拌するのが好ましく、スラリーの流動する最低速レベルで撹拌するのがとくに好ましい。通常、撹拌強度約０．０１〜０．５ｋＷ／ｍ3で実施され、とくに約０．０５〜０．２ｋＷ／ｍ3で好ましく実施される。前記結晶成長時の温度は撹拌に適した流動性のよいスラリーを与える。これにより、浮上性結晶の形成やスラリーのホイップ化またはケーキ化の傾向を極力抑制でき、沈降性のある粒径の大きい高品質の好ましい結晶の取得、流動性のよいスラリーの取得が助成される。
【００６６】
Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸結晶の採取に際しては、最終的にスラリーを冷却して晶出量をさらに高めることができる。このばあい、約２０℃以下、通常、約０〜２０℃（とくに約１０℃付近）への冷却が操作性、晶出量増加の点から好ましい。
【００６７】
なお、前記のＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の晶析における晶析収率は、存在するＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸に対し約７５ｍｏｌ％以上、好ましくは約８０ｍｏｌ％以上が期待できる。
【００６８】
本発明の晶析方法は、不活性雰囲気（たとえば、窒素またはアルゴンなど）でも実施できる。
【００６９】
本発明の晶析方法により、晶析液に対し１０％（ｗ／ｖ）またはそれ以上の結晶濃度（スラリー濃度）でも良好な流動性を有するスラリーをうることができる。このような流動性の良好な高濃度スラリーの取得は、操作性向上、液量の少量化などの生産性向上はもちろんのこと、晶析収量の増大に寄与する。
【００７０】
また、本発明の晶析方法により、再結晶することなく、高品質のＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を簡便かつ効率的に取得できる。
【００７１】
以下に、本発明の好ましい基本的な実施態様の例を、Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの製造を例として記載するが、この実施態様に限定されるものではない。
【００７２】
Ｌ−リジン一塩酸塩を約３〜４倍重量の水に加え、約１０Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨをおよそ１１に調整する。この混合物中に、Ｌ−リジン一塩酸塩に対して約０．９倍モルのトリフルオロ酢酸エチルを約１〜２時間かけておよそ一定速度で添加しながら約１ｋＷ／ｍ3の撹拌強度で反応させる。反応中は、反応温度約０〜６℃に維持するとともに、約１０Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を添加して反応混合物のｐＨをおよそ１１（通常、１０．８〜１１．２の範囲）に維持する。トリフルオロ酢酸エチルの添加終了後、反応混合物を酸性化または中和する。
【００７３】
反応混合物（約０〜６℃）を、使用したトリフルオロ酢酸エチルに対して約２倍モルの濃塩酸（約８〜３５℃）中に添加し、これを約６０〜８０℃に加温する。さらに、約１０Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を約１時間かけておよそ一定速度で添加してｐＨ約５．５に調整することにより、Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジン結晶を成長、晶出させる。ついで、約１５℃以下に冷却し、晶出を完了させる。晶出時の撹拌強度は約０．１ｋＷ／ｍ3である。
【００７４】
別法としては、反応混合物（約０℃）を、反応混合物のｐＨを約５．５とする量の濃塩酸（約６０〜８０℃）中に、約１時間かけておよそ一定速度で添加して、ｐＨ約５．５に調整することにより、Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジン結晶を成長、晶出させる。必要により、濃塩酸または約１０Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を用いて、ｐＨを微調整する。ついで、約１５℃以下に冷却し、晶出を完了させる。晶出時の撹拌強度は約０．１ｋＷ／ｍ3である。
【００７５】
えられるスラリー中の塩化ナトリウム濃度は約１０％（ｗ／ｗ）またはそれ以上となり、Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの高い晶出量がえられる。
【００７６】
なお、Ｎω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸の晶出に際しては、必要に応じ、別途、塩析効果のある無機塩（高い塩析効果を有する塩化ナトリウムが最も好ましい）を共存させることができるし、濾液および／または洗浄液中に含まれるＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸を回収、リサイクルすることもできる。これにより、廃水溶液中への生成物ロスを最小化できる。
【００７７】
このようにしてえられるＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸結晶の晶析液（スラリー）は、加圧濾過、減圧濾過、遠心分離などの一般的な結晶分離方法（生産性の点から遠心分離が最も好ましい）を用いて採取できる。さらに、分離ケーキは、水および／または有機溶剤で洗浄することができる。また、洗浄液中への生成物ロスを抑制するために、冷水で洗浄することができる。さらに乾燥を容易にするために、有機溶剤で洗浄することができる。前記有機溶剤としては、無水または含水（通常、水分含量約５〜５０％（ｗ／ｗ）、実用性の点からとくに約５〜１０％（ｗ／ｗ）が好ましく用いられる）のアルコール類が使用できる。前記アルコール類としては実用性の点から無水または含水の炭素数１〜３のアルコール、とくにエタノールを好ましく用いることができる。前記アルコールによる湿結晶中の濾液（母液）の洗浄除去は、生成物ロスを最小化するとともに、乾燥を容易にすることがわかった。本発明の晶析方法では、粒径の大きい結晶性状のよいＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸がえられるので、前記アルコール類による洗浄性もよく、ケーキに含まれる濾液中の塩も効率よく洗浄除去できる。
【００７８】
えられたＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸結晶は最終的に、常圧〜減圧下、乾燥することができる。さらに、必要に応じ、粉砕または造粒することができる。
【００７９】
本発明にしたがい製造されたＮω−トリフルオロアセチル−塩基性アミノ酸はたとえば、特開昭６１−３６２９７号公報に記載の方法にしたがい生理活性ペプチドに導くことができる。
【実施例】
【００８０】
以下に実施例をあげて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明は、これら実施例のみに限定されるものではない。
【００８１】
実施例１
Ｌ−リジン一塩酸塩３５．０５ｇ（１９２ｍｍｏｌ）を水１３５ｍｌに加え、９．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（２１７ｍｍｏｌ）でｐＨ１１．０に調整した。内温約０〜３℃に冷却し、撹拌下、トリフルオロ酢酸エチル２４．３５ｇ（１７１ｍｍｏｌ）を１時間かけてゆっくり滴下した。滴下中は、９．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（１３０ｍｍｏｌ）を滴下しつつ反応混合物をｐＨ１０．８〜１１．２に維持するとともに、内温０〜３℃、撹拌強度１．５ｋＷ／ｍ3に維持した。トリフルオロ酢酸エチルの滴下を終了して、２０分間、同条件下、撹拌を続けた。生成物の沈殿のない良好な液性状の反応混合物（ｐＨ１１．１）がえられた。別実験で取得した二番晶４．０ｇ（１７ｍｍｏｌ）および反応混合物を濃塩酸３５ｇに一括添加し、溶解した。添加後のｐＨは１．０以下であった。水６ｍｌで洗い込んだ。７０℃に加温し、約９．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（１６４ｍｍｏｌ）を１時間かけてほぼ一定速度で添加し、ｐＨを５．５に調整した（なお、撹拌は、スラリーの回る最低速レベル（０．１〜０．２ｋＷ／ｍ3）で実施した。ｐＨ２付近から結晶析出が開始した）。内温１５℃以下に冷却し、結晶を遠心分離し、９３％エタノール２５ｇで洗浄した。分離性は非常によかった。結晶を最高７０℃の加温下、真空乾燥した。Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの取得量は３１．４ｇ（１３０ｍｍｏｌ）、純度は９９％（ｗ／ｗ）以上（Ｎα異性体は不検出、塩化ナトリウム含量０．１％（ｗ／ｗ）以下）であった。濾液および洗浄液中には、７．３ｇ（３０ｍｍｏｌ）のＮω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンが含まれていた。濾液および洗浄液の混合物を、内温約５０〜８０℃の範囲で、１／２重量まで減圧濃縮した。濃縮後、３０℃以下に冷却し、結晶を分離し、水１５ｇで洗浄した。Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの二番晶の取得量は４．０ｇ（１７ｍｍｏｌ）であった。反応収率（生成率）は８４ｍｏｌ％であった。
【００８２】
実施例２
Ｌ−リジン一塩酸塩１８３ｇ（１．００ｍｏｌ）を水７００ｍｌに加え、９Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（１．２ｍｏｌ）でｐＨ１１．０に調整した。内温４℃に冷却し、撹拌下、トリフルオロ酢酸エチル１４２ｇ（１．００ｍｏｌ）を３０分かけてゆっくり滴下した。滴下中は、９Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（０．７ｍｏｌ）を滴下しつつ反応混合物をｐＨ１０．６〜１１．４に維持するとともに、内温４℃、撹拌強度０．５〜１ｋＷ／ｍ3に維持した。トリフルオロ酢酸エチルの滴下を終了したのち、１５分間、同条件下で撹拌を続けた。生成物の沈殿のない良好な液性状の反応混合物（ｐＨ１１．１）がえられた。冷却した反応混合物を７０℃に加温した濃塩酸１００ｇ中に１時間かけて添加した。添加は初期（とくにｐＨ１．３付近まで）は速やかに行ない、徐々に遅くした。添加後のｐＨは約６であった。９Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を極少量添加して、反応混合物のｐＨを５．８に微調整した。塩化ナトリウム１５０ｇ強を添加して、内温７℃まで１時間かけて冷却した。晶析時の撹拌強度は０．１ｋＷ／ｍ3（スラリーの回る最低速付近）に維持した。えられた良好な性状のスラリーから結晶を１５０ｍｍ径のヌッチェを用いて減圧濾過し、９３％エタノール２００ｍｌで洗浄した。分離性は非常によかった。えられた結晶を６０℃で一晩乾燥し、Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジン結晶を取得した。取得量１６５ｇ（取得収率（反応収率（生成率）×晶析収率で示される、以下同様）６８ｍｏｌ％）であった。
【００８３】
実施例３
Ｌ−リジン一塩酸塩２０．０ｇ（１１０ｍｍｏｌ）を水８０ｍｌに加え、９．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ１１．２〜１１．３に調整した。内温０℃に冷却し、撹拌下、トリフルオロ酢酸エチル１５．６ｇ（１１０ｍｍｏｌ）を３０分かけてゆっくり滴下した。滴下中は、９Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を滴下しつつ反応混合物をｐＨ１１．２〜１１．３に維持するとともに、内温０℃、撹拌強度１．５ｋＷ／ｍ3に維持した。トリフルオロ酢酸エチルの滴下を終了して、３０分後に、えられた良好な液性状の反応混合物を室温下で濃塩酸２２ｇ中に一括添加した。添加後のｐＨは１．０以下であった。６５℃に加温し、撹拌強度０．２〜０．５ｋＷ／ｍ3下、９．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を３０分以上かけてほぼ一定速度で添加し、ｐＨを５．８に調整した。内温５℃に冷却し、結晶を遠心分離し、９３％エタノール１９ｍｌで洗浄した。分離性は非常によかった。Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの取得量は１６．５ｇ（６８ｍｍｏｌ）（収率６２ｍｏｌ％）、純度は９９％（ｗ／ｗ）以上（Ｎα異性体は不検出、塩化ナトリウム含量０．１％（ｗ／ｗ）以下）であった。濾液および洗浄液中には、４．５ｇ（１９ｍｍｏｌ）（収率１７ｍｏｌ％）のＮω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンが含まれていた。反応収率（生成率）は７９ｍｏｌ％であった。
【００８４】
実施例４
実施例３でえられた濾液および洗浄液の混合物を反応仕込水のかわりに用いて、実施例３と同様に実施した。なお、濃塩酸は２８ｇ使用した。良好な液性状で反応、晶析が実施でき、Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの取得量は１９．６ｇ（８１ｍｍｏｌ）であった。濾液および洗浄液中には、３．４ｇ（１４ｍｍｏｌ）のＮω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンが含まれていた。
【００８５】
実施例５
Ｌ−リジン一塩酸塩２０．０ｇ（１１０ｍｍｏｌ）を水８０ｍｌに加え、９．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ１０．９〜１１．１に調整した。内温１１℃に冷却し、撹拌下、トリフルオロ酢酸エチル１５．６ｇ（１１０ｍｍｏｌ）を２０分かけてゆっくり滴下した。滴下中は、９Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を滴下しつつ反応混合物をｐＨ１０．９〜１１．２に維持するとともに、内温９〜１４℃、撹拌強度０．５ｋＷ／ｍ3に維持した。トリフルオロ酢酸エチルの滴下を終了して、１０分後に、えられた良好な液性状の反応混合物を室温の濃塩酸２２ｇ中に一括添加した。添加後のｐＨは１．０以下であった。６５℃に加温し、撹拌強度０．２ｋＷ／ｍ3下、９．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を３０分以上かけてほぼ一定速度で添加し、ｐＨを５．５に調整した。内温５℃に冷却し、一晩保持した。結晶を遠心分離し、９３％エタノール１９ｍｌで洗浄した。分離性は非常によかった。Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの取得量は１５．８ｇ（６５ｍｍｏｌ）、純度は９９％（ｗ／ｗ）以上（Ｎα異性体は不検出、塩化ナトリウム含量０．１％（ｗ／ｗ）以下）であった。濾液および洗浄液中には、４．４ｇ（１８ｍｍｏｌ）のＮω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンが含まれていた。反応収率（生成率）は７５ｍｏｌ％であった。
【００８６】
実施例６
実施例３と同様の方法でえられた良好な液性状の反応混合物（ｐＨ１１．０）を５０〜６０℃の水１０ｍｌを入れたフラスコに滴下していった。滴下中は、緩やかに撹拌（０．１ｋＷ／ｍ3前後）しつつ、濃塩酸を同時に０．５時間かけて滴下し、フラスコ内液のｐＨを３〜６、内温を５０〜６０℃に維持した。最終的に若干量の９．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を添加し、ｐＨを５．５に調整し、内温約５℃に冷却した。結晶を遠心分離し、９３％エタノール１９ｍｌで洗浄した。分離性は非常によかった。Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの取得量は１６．３ｇ（６７ｍｍｏｌ）、純度は９９％（ｗ／ｗ）以上（Ｎα異性体は不検出、塩化ナトリウム含量０．１％（ｗ／ｗ）以下）であった。晶析収率は７８ｍｏｌ％であった。取得収率は６１ｍｏｌ％であった。
【００８７】
実施例７
Ｌ−リジン一塩酸塩２０．０ｇ（１１０ｍｍｏｌ）を水８０ｍｌに加え、９．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ１０．０に調整した。内温３℃に冷却し、撹拌下、トリフルオロ酢酸エチル１５．６ｇ（１１０ｍｍｏｌ）を２０分かけてゆっくり滴下した。滴下中は、９Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を滴下しつつ反応混合物をｐＨ９．９〜１０．５に維持するとともに、内温２〜７℃、撹拌強度０．５〜１ｋＷ／ｍ3に維持した。トリフルオロ酢酸エチルの滴下を終了して、１０分後に、ホイップ状の反応混合物に濃塩酸２２ｇを一括添加し溶解させた。添加後のｐＨは１．０以下であった。Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの生成率は６３ｍｏｌ％であった。６５℃に加温し、撹拌強度０．２ｋＷ／ｍ3下、９．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を２０分以上かけてほぼ一定速度で添加し、ｐＨを５．５に調整した。内温５℃に冷却し、一晩保持した。結晶を遠心分離し、９３％エタノール１９ｍｌで洗浄した。分離性は非常によかった。Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの取得量は１３．１ｇ（５４ｍｍｏｌ）、純度は９９％（ｗ／ｗ）以上（Ｎα異性体は不検出、塩化ナトリウム含量０．１％（ｗ／ｗ）以下）であった。晶析収率は７７ｍｏｌ％であった。
【００８８】
本実施例は、Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの生成を、本発明の範囲（ｐＨ１０．６〜１１．４）外のｐＨにて行なったため、反応混合物はホイップ化しＮω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの生成率は低くなっているが、晶出〜採取の操作は本発明にしたがい行なったため、良好な結晶性状のＮω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンを操作性よくえることができたことを示している。
【００８９】
比較例１
１０００ｍｌの円筒状フラスコ（６０ｍｍ径の櫂型撹拌翼使用）中にて、Ｌ−リジン一塩酸塩９１．３ｇ（０．５０ｍｏｌ）を水３５０ｍｌと４Ｎの水酸化ナトリウム水溶液１２５ｍｌ（０．５０ｍｏｌ）に、１０〜２０℃下、溶解させた。この溶液（ｐＨ１０．４）を４℃に冷却し、激しく撹拌（７００ｒｐｍ）下、トリフルオロ酢酸エチル７１．１ｇ（０．５０ｍｏｌ）を速やかに添加した。添加後、内温５℃前後に維持しつつ、そのまま２時間、激しく撹拌を続けた。この過程で、反応混合物から生成物がホイップ状に析出し、撹拌混合は不可能な性状となった（反応開始とともに反応混合物のｐＨは低下し、ｐＨ８．７まで低下した）。最終的に、ｐＨ６の反応混合物を、１５０ｍｍ径のヌッチェを用いて減圧濾過し、水２００ｍｌ、９９．５％エタノール１５０ｍｌで順に洗浄した。結晶性状が悪く、濾過および洗浄に１時間以上要した。えられた結晶を５０℃で一晩真空乾燥し、充分に乾燥させた。ケーキは収縮し、塊状の乾体がえられた。えられた結晶は、純度９３％（ｗ／ｗ）、水およびエタノールの含量は１％（ｗ／ｗ）未満で、純分量として４７．３ｇ（０．２０ｍｏｌ、収率４０ｍｏｌ％）のＮω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンを含んでいた。また、濾液中には１３．７ｇ（０．０６ｍｏｌ、収率１１ｍｏｌ％）、水洗浄液中には９．８ｇ（０．０４ｍｏｌ、収率８ｍｏｌ％）、エタノール洗浄液中には４．７ｇ（０．０２ｍｏｌ、収率４ｍｏｌ％）のＮω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンを含んでいた。反応収率（生成率）は６３ｍｏｌ％であった。
【００９０】
実施例８および比較例２〜４
Ｌ−リジン一塩酸塩９．１３ｇ（５０．０ｍｍｏｌ）を水３７．５ｍｌに加え、４Ｎの水酸化ナトリウム水溶液で所定のｐＨ（ｐＨ１３．０、１２．０、１１．０または１０．０）に調整した。内温４℃に冷却し、撹拌下、トリフルオロ酢酸エチル７．１１ｇ（５０．０ｍｍｏｌ）を３０分かけてゆっくり滴下した。滴下中は、４Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を滴下しつつ反応混合物を所定のｐＨ（ｐＨ１３．０、１２．０、１１．０または１０．０）に維持するとともに、内温４℃、撹拌強度１．５ｋＷ／ｍ3に維持した。トリフルオロ酢酸エチルの滴下を終了して、１５分後に、濃塩酸を添加して反応混合物のｐＨを１にしてクエンチし、ＨＰＬＣ分析し、Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの生成率およびω／α選択性（Ｎω体（ｍｍｏｌ）／Ｎα体（ｍｍｏｌ））を調べた。その結果を表１に示す。
【００９１】
【表１】
2006052233.tif 000004
【００９２】
なお、ｐＨ１０．０では反応時に生成物が析出してホイップ化し、トリフルオロ酢酸エチルの若干の残存が認められた。
【００９３】
比較例５
Ｌ−リジン一塩酸塩９．１３ｇ（５０．０ｍｍｏｌ）を水４７．５ｍｌに加え、炭酸ナトリウム２．６ｇおよび炭酸水素ナトリウム４．２ｇを加えた。内温４℃に冷却し、撹拌下、トリフルオロ酢酸エチル７．１１ｇ（５０．０ｍｍｏｌ）を３０分かけてゆっくり滴下した。滴下中は、４Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を滴下しつつ反応混合物をｐＨ９．０に維持するとともに、内温４℃、撹拌強度１．５ｋＷ／ｍ3に維持した。トリフルオロ酢酸エチルの滴下を終了して、１５分後に、濃塩酸を添加して反応混合物のｐＨを１にしてクエンチし、ＨＰＬＣ分析した結果、Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの生成率は２９ｍｏｌ％、ω／α選択性（Ｎω体（ｍｍｏｌ）／Ｎα体（ｍｍｏｌ））は６５／３５であった。
【００９４】
実施例９〜１１
Ｌ−リジン一塩酸塩９．１３ｇ（５０．０ｍｍｏｌ）を水３７．５ｍｌに加え、表２に示す４Ｎのアルカリ金属水酸化物水溶液でそれぞれｐＨ１１．０に調整した。内温４℃に冷却し、撹拌下、トリフルオロ酢酸エチル７．１１ｇ（５０．０ｍｍｏｌ）を３０分かけてゆっくり滴下した。滴下中は、それぞれ４Ｎのアルカリ金属水酸化物水溶液を滴下しつつ反応混合物をｐＨ１１．０に維持するとともに、内温４℃、撹拌強度１．５ｋＷ／ｍ3に維持した。トリフルオロ酢酸エチルの滴下を終了して、１５分後に、濃塩酸を添加して反応混合物のｐＨを１にし、ＨＰＬＣ分析し、Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの生成率およびω／α選択性（Ｎω体（ｍｍｏｌ）／Ｎα体（ｍｍｏｌ））をしらべた。その結果を表２に示す。
【００９５】
【表２】
2006052233.tif 000005
【００９６】
なお、反応時の生成物の析出はいずれも認められず、良好な液性状であった。
【００９７】
実施例１２
Ｌ−リジン一塩酸塩１８．３ｇ（０．１０ｍｏｌ）を水５０ｍｌに加え、９Ｎの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ１１．０に調整した。内温４℃に冷却し、撹拌下、トリフルオロ酢酸エチル１４．２ｇ（０．１０ｍｏｌ）を３０分かけてゆっくり滴下した。滴下中は、９Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を滴下しつつ反応混合物をｐＨ１１．０に維持するとともに、内温４℃、撹拌強度１．５ｋＷ／ｍ3に維持した。トリフルオロ酢酸エチルの滴下を終了して、１５分後に、濃塩酸を添加して反応混合物のｐＨを１にし、ＨＰＬＣ分析した結果、Ｎω−トリフルオロアセチル−Ｌ−リジンの生成率は７５ｍｏｌ％、ω／α選択性（Ｎω体（ｍｍｏｌ）／Ｎα体（ｍｍｏｌ））は９９／１であった。
【００９８】
実施例１３および比較例６
実施例２と同様の方法で、反応混合物をえた。反応混合物３４０ｇを水７０ｍｌおよび濃塩酸２２ｇの混合物（６５℃）中に緩やかに撹拌下（０．２ｋＷ／ｍ3）、３０分かけて添加したのち、１０℃まで１時間かけて冷却し、ｐＨ６．０のスラリーをえた（スラリーＡ）。また、反応混合物３４０ｇに５〜２５℃の範囲で水７０ｍｌおよび濃塩酸２２ｇを撹拌下（０．２ｋＷ／ｍ3）３０分かけて添加したのち、１０℃まで１時間かけて冷却し、ｐＨ６．０のスラリーをえた（スラリーＢ）。
【００９９】
スラリーＡはきわめて流動性がよいのに対して、スラリーＢはホイップ状であり容器を逆さまにしてもスラリーは落ちなかった。
【０１００】
また、各スラリー全量をそれぞれ１５０ｍｍ径のヌッチェを用いて差圧７３０ｍｍＨｇで濾過したところ、表３に示す濾液通過速度（所定量の濾液をえるための所要時間で表わす）であった。なお、スラリーＢについては、スパテラで掻き取りながらヌッチェ上に払い出してから濾過を開始した。
【０１０１】
【表３】
2006052233.tif 000006
【０１０２】
スラリーＡの濾過性はスラリーＢの濾過性よりも格段によいことがわかった。また、スラリーＢのケーキは収縮性が非常に大きかった。
【０１０３】
えられた結晶を顕微鏡観察した結果、スラリーＡの結晶は約１００〜２００μｍ以上の粒径であるのに対して、スラリーＢの結晶は約２０μｍ以下の粒径であった。